SK13262002A3 - Inhibítory proteínkináz na báze pyrolom substituovaného 2-indolinónu - Google Patents

Inhibítory proteínkináz na báze pyrolom substituovaného 2-indolinónu Download PDF

Info

Publication number
SK13262002A3
SK13262002A3 SK1326-2002A SK13262002A SK13262002A3 SK 13262002 A3 SK13262002 A3 SK 13262002A3 SK 13262002 A SK13262002 A SK 13262002A SK 13262002 A3 SK13262002 A3 SK 13262002A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
hydrogen
group
alkyl
compound
aryl
Prior art date
Application number
SK1326-2002A
Other languages
English (en)
Other versions
SK287142B6 (sk
Inventor
Peng Cho Tang
Todd Miller
Xiaoyuan Li
Li Sun
Chung Chen Wei
Shahrzad Shirazian
Congxin Liang
Tomas Vojkovsky
Asaad S. Nematalla
Original Assignee
Sugen, Inc.
Pharmacia & Upjohn Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27391578&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK13262002(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sugen, Inc., Pharmacia & Upjohn Company filed Critical Sugen, Inc.
Publication of SK13262002A3 publication Critical patent/SK13262002A3/sk
Publication of SK287142B6 publication Critical patent/SK287142B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Description

Inhibítory proteínkináz na báze pyrolom substituovaného 2-indolinónu
Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka určitých 3-pyrolom substituovaných 2-'indolinónov, ktoré modulujú aktivitu proteínkináz („PK“). Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú preto účinné pri ošetrení porúch spojených s abnormálnou aktivitou PK. Ďalej sa predložený vynález týka farmaceutických prípravkov zahrnujúcich tieto zlúčeniny, spôsobov ošetrenia ochorení pomocou farmaceutických prípravkov zahrnujúcich tieto zlúčeniny a spôsobov ich prípravy.
Doterajší stav techniky
Nasledujúci opis má iba informatívny charakter a nekladie si za cieľ byť známym stavom techniky predloženého vynálezu.
PK sú enzýmy, ktoré katalyzujú fosforyláciu hydroxyskupín na tyrozínových, serínových a treonínových zvyškoch proteínov. Dôsledky tejto zdanlivo jednoduchej aktivity sú ohromné; bunkový rast, diferenciácia a proliferácia, tzn. prakticky všetky aspekty života bunky tým či oným spôsobom závisia na aktivite PK. Okrem toho abnormálna aktivita PK súvisí z množstvom porúch siahajúcich od relatívne život neohrozujúcich ochorení, ako je psoriáza, až po extrémne virulentné ochorenia, ako je glioblastóm (rakovina mozgu).
PK je možné výhodne rozdeliť do dvoch skupín, na proteínové tyrozínkinázy (PTK) a serín-treonínkinázy (STK).
Jedným z hlavných aspektov aktivity PTK je ich účasť na receptoroch rastového faktora. Receptory rastového faktora sú proteíny bunkového povrchu. Pokiaľ sa na ne naviaže ligand rastového faktoru, prechádzajú receptory rastového faktora na aktívnu formu, ktorá interaguje s proteínmi na vnútornom povrchu bunkovej membrány. To vedie k fosforylácii na tyrozínových zvyškoch receptora a ďalších proteínoch a k tvorbe komplexov s rôznymi cytoplazmatic2 kými signálnymi molekulami vo vnútri bunky, ktoré potom ovplyvňujú veľký počet bunkových odpovedí, ako je bunkové delenie (proliferácia), bunková diferenciácia, bunkový rast, expresia metabolických efektov do extracelulárneho mikroprostredia atď. Kvôli detailnejším informáciám viď Schlessinger and Ullrich, Neurón, 9:303 - 391 (1992), na ktorých práci je tu odkazované, vrátane všetkých obrázkov, ako by úplne boli uvedené tu.
Receptory rastového faktora s aktivitou PTK sú známe ako receptorové tyrozínkinázy („RTK“). Zahrnujú veľkú rodinu transmembránových receptorov s rozličnými biologickými aktivitami. Doteraz bolo identifikovaných aspoň 19 rôznych podskupín RTK. Príklad týchto RTK zahrnuje podskupinu označovanú ako „HER“ RTK, ktorá zahrnuje EGFR (receptor epiteliálneho rastového faktoru), HER2, HER3 a HER4. Tieto RTK pozostávajú z extracelulárnej glykozylovanej väzbovej domény ligandu, transmembránovej domény a intracelulárnej cytoplazmatickej katalytickej domény, ktorá môže fosforylovať tyrozínové zvyšky na proteínoch.
Ďalšia podrodina RTK pozostáva z receptoru inzulínu (IR), receptoru inzulínového typu rastového faktoru I (IGF-1R) a príbuzného receptoru receptora inzulínu (IR). IR a IGF-1F interagujú s inzulínom, IGF-I a IGF-II za vzniku heterotetrameru dvoch úplne extracelulárne glykozylovaných a podjednotiek a dvoch β podjednotiek, ktoré pretínajú bunkovú membránu a obsahujú tyrozínkinázovú doménu.
Tretia podrodina RTK sa označuje ako skupina receptorov rastového faktoru odvodeného od doštičiek („PDGF“), ktorá zahrnuje PDGFRa, ΡϋΰΡΚβ, CSFIR, c-kit a c-fms. Tieto receptory pozostávajú z glykozylovaných extracelulárnych domén zložených z rôzneho počtu slučiek imunoglobulínového typu a intracelulárne domény, kde tyrozínkinázová doména je prerušená nepríbuznými aminokyselinovými sekvenciami.
Ďalšou skupinou, ktorá v dôsledku svojej podobnosti s podrodinou PDGFR je niekedy zahrnovaná do naposledy uvedenej skupiny, je podrodina receptorov fetálnej pečeňovej kinázy („flk“). Predpokladá sa, že túto skupinu tvorí receptor obsahujúci doménu kinázového inzertu pre fetálnu pečeňovú ki3 názu-1 (KDR/FLK-1, VEGF-R2), flk-lR, flk-4 a tyrozínkinázu 1 typu fms (flt1).
Ďalším členom rodiny tyrozínkinázového receptoru rastového faktoru je podskupina receptorov fibroblastového rastového faktoru („FGF“). Táto skupina pozostáva zo štyroch receptorov, FGFR1-4, a siedmich ligandov, FGF1-7. Aj keď nie sú ešte plne definované, je možné povedať, že sa receptory skladajú z glykozylovanej extracelulárnej domény obsahujúcej rôzny počet slučiek imunoglobulínového typu, a intracelulárnej domény, v ktorej je tyrozínkinázová sekvencia prerušená oblasťami nepríbuzných aminokyselinových sekvencii.
Ešte ďalším členom podskupiny tyrozínkinázového receptoru rastového faktoru je podskupina receptoru rastového faktoru vaskulárnych endotelových buniek („VEGF“). VEGF je dimérny glykoproteín podobný PDGF, avšak má iné biologické funkcie a cieľovo bunkovú špecifitu in vivo. Konkrétne sa v súčasnej dobe predpokladá, že má dôležitú úlohu pri vaskulogenéze a angiogenéze.
Úplný zoznam známych podrodín RTK je opísaný v Plowman et al., DN&P, 7(6): 334 - 339 (1994), na ktorých prácu je tu odkazované, vrátane ktorýchkoľvek obrázkov, ako by úplne boli uvedené tu.
Okrem RTK tiež existuje rodina úplne intracelulárnych PTK označovaná nereceptorové tyrozínkinázy („non-receptor tyrosin kinases“) alebo tiež „bunkové tyrozínkinázy“. Ďalej bude v opise používaná skratka tohto druhého označenia, tzn. CTK. CTK neobsahujú extracelulárne a transmembránové domény. Do súčasnosti bolo identifikovaných 24 jednotlivých CTK zahrnujúcich (11) podrodín (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes, Fps, Fak, Ako a Ack). Podrodina Src je v súčasnosti tvorená najväčším počtom CTK a zahrnuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr a Yrk. Podrobnejšiu diskusiu CTK poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025 - 2031, na ktorých prácu je tu odkazované, vrátane ktorýchkoľvek obrázkov, ako by úplne bolo uvedené tu.
Serín/treonínkinázy, STK, typu STK, sú prevažne intracelulárne, aj keď existuje niekoľko receptorových kináz typu STK. STK sú najčastejšie cytozolové kinázy, tzn. kinázy, ktoré vykonávajú svoju funkciu v inej časti cytoplazmy než sa nachádzajú cytoplazmatické organely a cytoskelet. Cytozól je oblasť v bunke, v ktorej sa vyskytuje veľké množstvo bunkovej intermediárnej metabolickej a biosyntetickej aktivity, napr. syntéza proteínov na ribozómoch prebieha v cytozóle.
Zistilo sa, že mnohé RTK, CTK a STK sa podieľajú na mnohých patogénnych stavoch hostiteľa, vrátane, výrazne, na rakovine. Ďalšie patogénne stavy súvisiace s PTK zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, psoriázu, hepatickú cirhózu, diabetes, angiogenézu, restenózu, očné ochorenie, reumatoidnú artritídu a ďalšie zápalové poruchy, imunologické poruchy, napr. autoimunitná choroba, kardiovaskulárne ochorenie, napr. ateroskleróza a rôzne renálne poruchy.
Čo sa týka rakoviny, uvádzajú sa dve hlavné zdokonalené hypotézy, ktoré vysvetľujú nadmernú bunkovú proliferáciu, ktorá riadi vznik nádoru súvisiaceho s funkciami, o ktorých je známe, že sú regulované PK. Predpokladá sa, že malígny bunkový rast je výsledkom poruchy mechanizmu, ktorá riadi bunkové delenie a/alebo diferenciáciu. Zistilo sa, že proteínové produkty mnohých pretoonkogénov sa podieľajú na transdukčných dráhach signálu, ktoré regulujú bunkový rast a diferenciáciu. Tieto proteínové produkty pretoonkogénov zahrnujú extracelulárne rastové faktory, transmembránové receptory rastového faktoru PTK (RTK), cytoplazmatické PTK (CTK) a cytozólové STK, všetko je opisované vyššie.
Vzhľadom na zrejmý vzťah medzi bunkovými aktivitami súvisiacimi s PK a širokou škálou ľudský porúch, nie je prekvapením, že je vynakladané veľké úsilie identifikovať spôsoby modulácie aktivity PK. Niektoré z týchto zámerov tiež zahrnovali biomimetické postupy využívajúce veľké molekuly na identifikáciu PD podieľajúcich sa na konkrétnych bunkových procesoch (napr. mutantných ligandov, U.S. patentová prihláška č. 4,966,849), rozpustných receptoroch a protilátkach (prihláška č. WO 94/10202; Kendall & Thomas, 1994, Proc. NaCl. Acad. Sci 90: 10705 - 09; Kim et al., 1993, Náture 362: 841 - 844), RNA ligandov (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 1045056; Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Celí 4: 358A; Kinsella, et al. 1992, Exp. Celí Res. 199: 56 - 62; Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448 - 57) a inhibítoroch tyrozínkináz (WO
94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; U.S. patent č.
5,330,992; Mariani, et al., 1994, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 35: 2268).
Okrem vyššie uvedeného boli v poslednej dobe vykonané pokusy identifikovať malé molekuly, ktoré pôsobia ako inhibítory PK. Napríklad bismonocyklické, bic'yklické alebo heterocyklické arylové zlúčeniny (PCT WO 92/20642) a vinylén-azaindolové deriváty (PCT WO 94/14808) a 1-cyklopropyI-4-pyridylchinolóny (U.S. č. 5,330,992) sa všeobecne opisujú ako tyrozínkinázové inhibítory. Styrylové zlúčeniny (U.S. patent č. 5,217,999), styrylsubstituované pyridylové zlúčeniny (U.S. patent č. 5,302,606), niektoré chinazolínové deriváty (EP č. 0 566 266 Al), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03427), tricyklické polyhydroxylické zlúčeniny (PCT WO 92/21660) a zlúčeniny benzylfosfónovej kyseliny (PCT WO 91/15495) sa opisujú ako zlúčeniny na použitie ako inhibítory PTK na použitie pri liečbe rakoviny.
Podstata vynálezu
Predložený vynález sa týka určitých 3-pyrolom substituovaných 2-indolinónových zlúčenín, ktoré vykazujú PK modulačnú schopnosť, a teda sú použiteľné pri ošetrení porúch súvisiacich s abnormálnou aktivitou PK.
V rámci jedného aspektu sa teda predložený vynález týka 3-pyrolom substituovaných 2-indolinónov všeobecného vzorca (I):
kde substituent R* je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej, cykloalkylovej, arylovej, heteroarylovej a heteroalicyklickej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, -(CH2)r 16 a -C(O)NR8R9;
substituent R je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, kyanoskupiny, -NR13R14, -NRI3C(O)R14, -C(O)R15, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -S(O)2NR13R14 a -SO2R2 (kde substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová, heteroarylová a heteroaralkylová skupina);
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, (CO)R15, NR13R14, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, -NR,3C(O)OR14 a -SO2R2 (kde substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová, heteroarylová a heteroaralkylová skupina);
substituent R4 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NRI3R14;
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10; alebo substituenty R a R môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívajúcou v tom, že aspoň jeden zo substituentov R5, R6 alebo R7 musí byť -C(O)R10;
substituenty R8 a R9 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a arylovej skupiny;
substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(R’‘)(CH2)nR12 a -NRI3R14;
substituent R11 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny;
substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -NRI3R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -N+(O')R13R14, -N(OH)R13 a -NHC(O)Ra (kde substituent Ra je nesubstituovaná alkylová, halogénalkylová alebo aralkylová skupina);
substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, kyanoalkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny; alebo substituenty R13 a R14 môžu byť spojené dohromady za vzniku a heterocykloskupiny;
substituent R15 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
substituent R16 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14 a -C(O)NR13R14;
substituent R17 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny;
substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová alebo heteroarylová skupina; a n a r sú nezávisle 1, 2, 3 alebo 4 ;
alebo ich farmaceutický prijateľných solí.
Výhodne je substituent R1 vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej, cykloalkylovej, arylovej, heteroarylovej, heteroalicyklickej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -C(O)R1:>, -NR13R14,
-(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -NRi3R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -S(O)2NRI3R14;
I substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14 a -NR13C(O)OR14;
substituent R4 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NRI3R14;
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10;
substituenty R6 a R7 môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívajúcou v tom, že aspoň jeden zo substituentov R5, R6 alebo R7 musí byť -C(O)R‘°;
substituenty R8 a R9 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a arylovej skupiny;
substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(R*’)(CH2)nR12 a -NRI3R14;
substituent R11 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny;
substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -NRI3R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylovej a heteroarylovej skupiny;
substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, cykloalkylovej skupiny, arylovej a heteroarylovej skupiny;
substituenty R13 a R14 môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej z -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- a (CH2)2N(CH3)(CH2)2-;
substituent R15 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
substituent R16 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14 a -C(O)NR13R14;
substituent R17 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej sa z alkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny; a n a r sú nezávisle 1, 2, 3, alebo 4 ;
alebo ich farmaceutický prijateľných solí.
Druhý aspekt predloženého vynálezu sa týka farmaceutického prípravku obsahujúceho jednu alebo viac zlúčenín všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ a farmaceutický prijateľný excipient.
Tretí aspekt predloženého vynálezu sa týka spôsobu ošetrenia ochorení sprostredkovaných abnormálnou aktivitou proteínkináz, konkrétne receptorových tyrozínkináz (RTK), nereceptorových proteínových tyrozínkináz (CTK) a proteínových serín/treonínkináz (STK), v organizme, najmä ľudskom, ktorý zahrnuje podanie farmaceutického prípravku obsahujúceho zlúčeninu všeobecného vzorca (I) do uvedeného organizmu. Takéto ochorenia zahrnujú, ale neobmedzujú sa na ne, napríklad rakovinu, diabetes, hepatickú cirhózu, kardiovaskulárne ochorenie, napr. aterosklerózu, angiogenézu, imunologické ochorenie, napr. autoimunitné ochorenie, a renálne ochorenie.
Štvrtý aspekt predloženého vynálezu sa týka spôsobov modulácie katalytickej aktivity PK, najmä receptorových tyrozíkináz (RTK), nereceptorových proteínových tyrozínkináz (CTK) a proteínových serín/treonínkináz (STK), zlúčeninami podľa predloženého vynálezu, ktoré môžu byť vykonávané in vitro alebo in vivo. Konkrétne je receptorová proteínkináza, ktorej katalytická aktivita je modulovaná zlúčeninou podľa predloženého vynálezu, vybraná zo skupiny pozostávajúcej z EGF, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1R, IR, PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, C-Kit, C-fms, Flk-IR, Flk4, KDR/Flk-1, Flt-1, FGFR-1R, FGFR-2R, FGFR-3R a FGFR-4R. Bunková tyrozínkináza, ktorej katalytická aktivita je modulovaná zlúčeninou podľa predloženého vynálezu, je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP70, Fes/Fps, Fak, Ako, Ack, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr a Yrk. Proteínová serín-treonínkináza, ktorej katalytická aktivita je modulovaná zlúčeninou podľa predloženého vynálezu je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z CDK2 a Raf.
I
Piaty aspekt predloženého vynálezu sa týka použitia zlúčeniny všeobecného vzorca (I) pri príprave liečivého prípravku, ktorý je použiteľný pri ošetrení ochorení sprostredkovaného abnormálnou aktivitou PK.
Šiesty aspekt predloženého vynálezu sa týka medziproduktu všeobecného vzorca (II):
(II) v ktorom substituent R? je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej sa z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10;
substituenty R6 a R7 môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej sa z -(CH2)4-, -(Cthjs- a -(CH2)6-; s výhradou spočívajúcou v tom, že aspoň jeden zo substituentov R5, R6 alebo R7 musí byť -C(O)R10;
substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(R*')(CH2)nR12 a -NR13R14;
substituent R11 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny;
substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -NR13R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylovej a heteroarylovej skupiny;
substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, kyanoalkylovej skupiny, cykloalkylovej skupiny,' arylovej a heteroarylovej skupiny; alebo substituent R13 a R14 môžu byť spojené dohromady za vzniku heterocyklovej skupiny;
substituent R15 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej sa z atómu vodíka, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny'a aryloxyskupiny;
substituent R17 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylovej skupiny, cykloalkylovej skupiny, arylovej skupiny a heteroarylovej skupiny; a n je 1, 2, 3 alebo 4.
Výhodne sú substituenty R5 alebo R6 v zlúčenine všeobecného vzorca (II) -C(O)R10;
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, a alkylovej skupiny, výhodnejšie atómu vodíka alebo metylu;
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny, výhodnejšie atómu vodíka alebo metylu, pokiaľ substituent R6 je-COR10;
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny, výhodnejšie atómu vodíka alebo metylu, pokiaľ substituent R5 je -COR10;
substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a arylovej skupiny, výhodnejšie atómu vodíka, metylu alebo fenylu;
substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -N(R‘')(CH2)nR12 a -NRI3R14;
substituent R11 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny, výhodnejšie atómu vodíka alebo metylu;
substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -NR13R14;
substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo alkylovej skupiny; alebo substituenty R13 a R14 môžu byť spojené dohromady za vzniku heterocykloskupiny; a n je 1, 2 alebo 3.
V rámci vyššie uvedených výhodných skupín zahrnujú výhodnejšie skupiny medziproduktov, v ktorých substituenty R5, R6, R11, R12, R13 alebo R14 sú nezávisle skupiny opísané v sekcii označenej „výhodné skupiny“ uvedenej nižšie.
Siedmy aspekt predloženého vynálezu sa týka spôsobov prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I).
Na záver sa predložený vynález tiež týka identifikácie chemickej zlúčeniny, ktorá moduluje katalytickú aktivitu proteínkinázy uvedením buniek exprimujúcich uvedenú proteínkinázu do kontaktu so zlúčeninou alebo soľou podľa predloženého vynálezu a následne monitorovanie účinku na uvedené bunky.
Detailný opis vynálezu
Definícia
Pokiaľ nie je uvedené inak, majú nasledujúce termíny používané pri opise a v patentových nárokoch tento význam:
Termín „alkylová skupina“ sa vzťahuje na nasýtený alifatický uhľovodíkový radikál zahrnujúci skupiny s lineárnym alebo rozvetveným reťazcom majúci 1 až 20 atómov uhlíka (zakaždým keď je uvedené číselné rozmedzie, napr. „1 - 20“, znamená to, že skupina, v tomto prípade alkylová skupina, môže obsahovať 1 atóm uhlíka, 2 atómy uhlíka, 3 atómy uhlíka, atď. až 20 atómov uhlíka vrátane). Alkylové skupiny s 1 až 4 atómami uhlíka sú označené nižšie alkylové skupiny. Pokiaľ uvedené nižšie alkylové skupiny nemajú substituenty, potom sú označované ako nesubstituované nižšie alkylové skupiny. Výhodnejšie je alkylová skupina, alkylová skupina strednej veľkosti s 1 až 10 atómami uhlíka, napr. metyl, etyl, propyl, 2-propyl, «-butyl, z'zo-butyl, ŕerc-butyl, pentyl, atď. Najvýhodnejšie má nižšia alkylová skupina 1 až 4 atómy uhlíka, napr. metyl, etyl, propyl, 2-propyl, «-butyl, z'zo-butyl alebo ierc-butyl, atď. Alkylová skupina môže byť substituovaná alebo nesubstituovaná. Pokiaľ je substituovaná, je substituent(y) výhodne jeden alebo viac, výhodnejšie jeden až tri, najvýhodnejšie jeden alebo dva substituent(y) nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, hydroxyskupiny, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, arylovej skupiny prípadne substituovanej jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkylová skupina, aryloxyskupina prípadne substituovaná jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina majúca 1 až 3 atómy dusíka v kruhu, pričom uhlíky v kruhu sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, 5-členná heteroarylová skupina majúca 1 až 3 heteroatómy vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómov dusíka, kyslíka a síry, pričom atómy dusíka a uhlíka v skupine sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, 5- alebo 6-členná heteroalicyklická skupina majúca 1 až 3 heteroatómy vybrané zo skupiny pozostávajúcej z dusíka, kyslíku a síry, pričom atómy uhlíka a dusíka (pokiaľ je prítomný) v skupine sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, merkaptoskupina, (nesubstituovaná nižšia alkyl)tioskupina, aryltioskupina prípadne substituovaná jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, kyanoskupina, acylová skupina, tioacylová skupina, <9-karbamylová skupina, (V-karbamylová skupina, O-tiokarbamylová skupina, JV-tiokarbamylová skupina, C-amidoskupina, N-amidoskupina, nitroskupina, N-sulfón-amidoskupina, S-sulfónamidoskupina, RI8S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R1? a R19 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, nesubstituovanej (C3-C6) cykloalkylovej skupiny, nesubstituovanej nižšej alkenylovej skupiny, nesubstituovanej nižšej alkinylovej a arylovej skupiny prípadne substituovanej jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina.
Výhodne je alkylová skupina substituovaná jedným alebo dvoma substituentami nezávisle vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, 5alebo 6-člennej heteroalicyklovej skupiny majúcej 1 až 3 heteroatómy vybrané zo skupiny pozostávajúcej z dusíka, kyslíka a síry, pričom atómy uhlíka a dusíka (pokiaľ je prítomný) v skupine sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, 5-členná heteroarylová skupina majúca 1 až 3 heteroatómy vybrané zo skupiny pozostávajúcej z dusíka, kyslíka a síry, pričom atómy uhlíka a dusíka v skupine sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina majúca 1 až 3 atómy dusíka v kruhu, pričom uhlíky v kruhu sú prípadne substituované jednou alebo viacerými skupinami, výhodne jednou, dvoma alebo tromi skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, alebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny. Ešte výhodnejšie je alkylová skupina substituovaná jedným alebo dvoma substituentami, ktoré sú nezávisle jeden na druhom hydroxyskupina, dimetylaminoskupina, etylaminoskupina, dietylaminoskupina, dipropylaminoskupina, pyrolidinoskupina, piperidinoskupina, morfolinoskupina, piperazinoskupina, 4-nižšia alkylpiperazinoskupina, fenyl, imidazolyl, pyridinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, oxazolyl, triazinyl apod.
Termín „cykloalkylová skupina“ sa vzťahuje na 3 až 8 členný čisto uhlíkový monocyklický kruh, čisto uhlíkový 5/6 členný alebo 6/6 členný kondenzovaný bicyklický kruh alebo multicyklický kondenzovaný kruh („kondenzovaný“ kruhový systém znamená, že každý kruh v systému zdieľa dvojicu susedných atómov uhlíka s iným kruhom v systému), kde jeden alebo viacero kruhov môže obsahovať jednu alebo viac dvojných väzieb, ale žiadny z kruhov nemá kompletne konjugovaný π elektrónový systém.
Príklady, ale neobmedzujúce, cykloalkylových skupín zahrnujú cyklopropán, cyklobután, cyklopentán, cyklopentén, cyklohexán, cyklohexadién, adamantán, cykloheptán, cykloheptatrién apod. Cykloalkylovú skupina môže byť substituovaná alebo nesubstituovaná. Pokiaľ je substituovaná, je substituent(y) výhodne jeden alebo viac, výhodnejšie jeden alebo dva,substituenty, nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, halogénu, hydroxyskupiny, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, arylovej skupiny prípadne substituovanej jednou alebo viacerými, výhodne jednou alebo dvoma, skupinami, ktorá nezávisle jedna na druhej je halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, aryloxyskupina prípadne substituovaná jednou alebo viacerými, výhodne jednou alebo dvoma, skupinami, ktorá nezávisle jedna na druhej je halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina majúca 1 až 3 atómy dusíka v kruhu, pričom uhlíky v kruhu sú prípadne substituované jednou alebo viacerými, výhodne jednou alebo dvoma, skupinami, ktoré sú nezávisle jedna na druhej halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina,
5-členná heteroarylová skupina majúca 1 až 3 heteroatómy vybrané zo skupiny pozostávajúcej z dusíka, kyslíka a síry, pričom atómy uhlíka a dusíka skupiny sú prípadne substituované jednou alebo viacerými, výhodne jednou alebo dvoma, skupinami, kde nezávisle jedna na druhej je halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, 5 alebo 6 členná heteroalicyklická skupina majúca 1 až 3 heteroatómy vybrané zo skupiny pozostávajúcej z dusíka, kyslíka a síry, atómy uhlíka a dusíka (pokiaľ je prítomný) v skupine sú prípadne substituované jednou alebo viacerými, výhodne jednou alebo dvoma skupinami, kde nezávisle jedna na druhej je halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, merkaptoskupina, (nesubstituovaná nižšia alkyl) tioskupina, aryltioskupina prípadne substituovaná jednou alebo viacerými, výhodne jednou alebo dvoma, skupinami, kde nezávisle jedna na druhej je halogén, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo nesubstituovaná nižšia alkoxyskupina, kyanoskupina, acylová skupina, tioacylová skupina, O-karbamyl, N-karbamyl, 0-tiokarbamyl, TV-tiokarbamyl,
C-amidoskupina, W-amidoskupina, nitroskupina, A-sulfón-amidoskupina, 5-sulfón-amidoskupina, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, a
-NR18R19 majú význam definovaný vyššie.
Termín „alkenylová skupina“ sa vzťahuje na nižšiu alkylovú skupinu definovanú v predloženom vynáleze pozostávajúcu z aspoň dvoch atómov uhlíka a aspoň jednej dvojnej väzby uhlík-uhlík. Reprezentatívne príklady zahrnujú, ale neobmedzujú sa na ne, etenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-, 2- alebo 3-butenyl apod.
Termín „alkinylová skupina“ sa vzťahuje na nižšiu alkylovú skupinu definovanú v predloženom vynáleze pozostávajúcu z aspoň dvoch atómov uhlíka a aspoň jednej trojitej väzby typu uhlík-uhlík. Reprezentatívne príklady zahrnujú, ale neobmedzujú sa na ne, etinyl, 1-propinyl, 2-propinyl, 1-, 2- alebo 3-butinyl apod.
Termín „arylová skupina“ sa vzťahuje na čisto uhlíkaté monocyklické alebo kondenzované polycyklické (tzn. kruhy, ktoré zdieľajú susedné páry atómov uhlíka) skupiny majúce 1 až 12 atómov uhlíka s kompletne konjugovaným π elektrónovým systémom. Príklady arylových skupín, bez toho aby sa na ne obmedzovali, zahrnujú fenyl, naftalenyl a antracenyl. Arylové skupiny môžu byť substituované alebo nesubstituované. Pokiaľ sú substituované, je substituovaná skupina(y) výhodne jedna alebo viac, výhodnejšie jedna, dve alebo tri, ešte výhodnejšie jedna alebo dve, nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, halogénu, hydroxyskupiny, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituovanej nižšej alkyl)tioskupiny, kyanoskupiny, acylovej skupiny, tioacylovej skupiny, č)-karbamylu, V-karbamylu, O-tiokarbamylu, /V-tiokarbamylu, C-amidoskupiny, jV-amidoskupiny, nitroskupiny, V-sulfón-amidoskupiny, S-sulfón-amidoskupiny, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 majú vyššie definovaný význam. Výhodne je arylová skupina prípadne substituovaná jedným alebo dvoma substituentami nezávisle vybranými z halogénu, nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny,
TV-amidoskupiny, mono alebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny alebo Nsulfón-amidoskupiny.
Termín „heteroarylová skupina“ sa vzťahuje na monocyklickú alebo kondenzovanú kruhovú (tzn. kruhy, ktoré spoločne zdieľajú susediace páry atómov uhlíka) skupinu majúcu 5 až 12 atómov v kruhu a obsahujúcu jeden, dva alebo tri heteroatómy v kruhu vybrané z N, O alebo S a zvyšné atómy v kruhu sú C a navyše majúcu kompletne konjugovaný π elektrónový systém. Príklady nesubstituovaných heteroarylových skupín zahrnujú, ale nie je to na ne obmedzené, pyrol, furán, tiofén, imidazol, oxazol, tiazol, pyrazol, pyridín, pyrimidín, chinolín, izochinolín, purín a karbazol. Heteroarylové skupiny môžu byť substituované alebo nesubstituované. Pokiaľ sú substituované, potom substituovaná skupina(y) je výhodne jedna alebo viac, výhodnejšie jedna, dve alebo tri, ešte výhodnejšie jedna alebo dve, nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, halogénu, hydroxyskupiny, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituovanej nižšej alkyl)tioskupiny, kyanoskupiny, acylovej skupiny, tioacylovej skupiny, č?-karbamylu, TV-karbamylu, O-tiokarbamylu, /V-tiokarbamylu, C-amidoskupiny, V-amidoskupiny, nitroskupiny, V-sulfón-amidoskupiny, 5-sulfón-amidoskupiny, RI8S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, RI8C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 majú vyššie definovaný význam. Výhodne je heteroarylová skupina prípadne substituovaná jedným alebo dvoma substituentami nezávisle vybranými z halogénu, nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, hydroxyskupiny, merkaptosku-piny, kyanoskupiny, 7V-amidoskupiny, mono alebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny alebo TV-sulfón-amidoskupiny.
Termín „heteroalicyklický“ sa vzťahuje na skupinu monocyklického kruhu alebo kondenzovaného kruhu(ov) majúcu 5 až 9 atómov v kruhu, kde jeden alebo dva atómy v kruhu sú heteroatómy vybrané z N, O alebo S(O)n (kde n je celé číslo od 0 do 2) a zvyšné atómy v kruhu sú C. Kruhy môžu mať tiež jednu alebo viac dvojných väzieb. Avšak kruhy nemajú kompletne konjugovaný π eIektrónový systém. Príklady nesubstituovaných heteroalicyklických skupín zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, pyrolidinoskupinu, piperidinoskupinu, piperazinoskupinu, morfolinoskupinu, tiomorfolinoskupinu, homopiperazinoskupinu, atď. Heteroalicyklický kruh môže byť substituovaný alebo nesubstituovaný. Pokiaľ je substituovaný, potom substituovaná skupina(y) je výhodne jedna alebo viac, výhodnejšie jedna, dve alebo tri, ešte výhodnejšie jedna alebo dve, nezávisle vybraná zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, halogénu, hydroxyskupiny, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny) tioskupiny, kyanoskupiny, acylovej skupiny, tioacylovej skupiny, 0-karbamylu, V-karbamylu, O-tiokarbamylu, V-tiokarbamylu, C-amidoskupiny, V-amidoskupiny, nitroskupiny, jV-sulfón-amidoskupiny, 5-sulfónamidoskupiny, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, RI8C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 majú vyššie definovaný význam.
Výhodne je heteroalicyklická skupina prípadne substituovaná jedným alebo dvoma substituentami nezávisle vybranými z halogénu, nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny, /V-amidoskupiny, mono alebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny alebo jV-sulfón-amidoskupiny.
Termín „heterocyklus“ znamená nasýtený cyklický radikál majúci 3 až 8 atómov v kruhu, kde jeden alebo dva atómy v kruhu sú heteroatómy vybrané z N, O alebo S(O)n (kde n je celé číslo od 0 do 2), zvyšné atómy v kruhu sú C, kde jeden alebo dva atómy uhlíka môžu byť prípadne nahradené karbonylovou skupinou. Heterocyklylový kruh môže byť prípadne substituovaný jedným, dvoma alebo tromi substituentami vybranými z prípadne substituovanej nižšej alkylovej skupiny (substituovaná jedným alebo dvoma substituentami nezávisle vybranými z karboxyskupiny alebo esteru), halogénalkylovej skupiny, kyanoalkylovej skupiny, halogénu, nitroskupiny, kyanoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aminoskupiny, monoalkylaminoskupiny, dialkylaminoskupiny, aralkylovej skupiny, heteroaralkylovej skupiny, -COR (kde substituent R je alkylová skupina) alebo COOR, kde substituent R je (atóm vodíka alebo alkylová skupina).
Podrobnejšie termín heterocyklyl zahrnuje, ale nie je to nijako limitované, tetrahydropyranyl, 2,2-dimetyl-1,3-dioxolán, piperidinoskupina, N20 metylpipe-ridin-3-yl, piperazinoskupina, TV-metylpyrolidin-3-yI, 3pyrolidinoskupina, morfolinoskupina, tiomorfolinoskupina, tiomorfolino-1 oxid, tiomorfolino-1,1 -dioxid, 4-etyloxykarbonylpiperazinoskupina, 3-oxopiperazinoskupina, 2-imidazolidón, 2-pyrolidinón, 2-oxohomopiperazinoskupina, tetrahydropyrimidin-2-ón a ich deriváty.
Výhodne je heterocyklylová skupina prípadne substituovaná jedným alebo dvoma substituentami nezávisle vybranými z halogénu, nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, nižšej alkylovej skupiny substituovanej karboxyskupinou, esterom hydroxyskupiny, mono alebo dialkylaminoskupinou.
Termín „hydroxyskupina“ sa vzťahuje na skupinu -OH.
Termín „alkoxyskupina“ sa vzťahuje na skupinu -O- (nesubstituovaná alkylová skupina) a -O- (nesubstituovaná cykloalkylová skupina). Reprezentatívne príklady zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, napr. metoxyskupinu, etoxyskupinu, propoxyskupinu, butoxyskupinu, cyklopropyloxyskupinu, cyklobutyloxyskupinu, cyklopentyloxyskupinu, cyklohexyloxyskupinu, atď.
Termín „aryloxyskupina“ sa vzťahuje na -O-arylovú skupinu a -O-heteroarylovú skupinu definovanú v predloženom vynáleze. Reprezentatívne príklady zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, fenoxyskupinu, pyridinyloxyskupinu, furanyloxyskupinu, tienyloxyskupinu, pyrimidinyloxyskupinu, pyrazinyloxyskupinu, atď. a ich deriváty.
Termín „merkaptoskupina“ sa vzťahuje na skupinu -SH.
Termín alkyltioskupina sa vzťahuje na skupinu -S- (nesubstituovaná alkylová skupina) aj -S-(nesubstituovaná cykloalkylová skupina). Reprezentatívne príklady zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, napr. metyltioskupinu, etyltioskupinu, propyltioskupinu, butyltioskupinu, cyklopropyltioskupinu, cyklobutyltioskupinu, cyklopentyltioskupinu, cyklohexyltioskupinu, atď.
Termín aryltioskupina sa vzťahuje na -S-arylovú skupinu i -Sheteroarylovú skupinu definovanú v predloženom vynáleze. Reprezentatívne príklady zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, fenyltioskupinu, pyridinyltioskupinu, furanyltioskupinu, tientyltioskupinu, pyrimidinyltioskupinu, atď. a ich deriváty.
Termín acylová skupina sa vzťahuje na skupinu -C(O)-R, kde substituent R je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nesubstituovänej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, nesubstituovanej cykloalkylovej skupiny, arylovej skupiny prípadne substituovanej jednou alebo viacerými, výhodne jednou, dvoma alebo tromi, substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, halogénu a skupín -NRI8R19, heteroarylovej skupiny (viazaná cez uhlíkový atóm v kruhu) prípadne substituovanej jednou alebo viacerými, výhodne jedným, dvoma alebo tromi, substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, halogénu a skupiny -NR18R19 a heteroalicyklickej skupiny (viazaná cez uhlíkové atómy v kruhu) prípadne substituovanej jednou alebo viacerými, výhodne jednou, dvoma alebo tromi, substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, trihalogénalkylovej skupiny, nesubstituovanej nižšej alkoxyskupiny, halogénu a skupín -NR18R19. Reprezentatívne acy skupiny zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, acetyl, trifluóracetyl, benzoyl, atď.
Termín aldehyd sa vzťahuje na acylovú skupinu, v ktorej substituent R je atóm vodíka.
Termín tioacylová skupina sa vzťahuje na skupinu -C(S)-R, kde substituent R je definovaný v predloženom vynáleze.
Termín ester sa vzťahuje na skupinu -C(O)O-R, kde substituent R je definovaný v predloženom vynáleze bez toho, že substituent R nemôže byť atóm vodíka.
Termín acetylová skupina sa vzťahuje na skupinu -C(O)CH3.
Termín halogén sa vzťahuje na fluór, chlór, bróm alebo jód, výhodne fluór alebo chlór.
Termín trihalogénmetyl sa vzťahuje na skupinu -CX3, kde X je halogén definovaný v predloženom vynáleze.
Termín trihalogénmetánsulfonyl sa vzťahuje na skupiny XjCS(=O)2-, kde X má vyššie definovaný význam.
Termín kyanoskupina sa vzťahuje na skupinu -C=N.
Termín metyléndioxyskupina sa vzťahuje na skupinu -OCH2O-, kde dva atómy kyslíka sú viazané na susediace atómy uhlíka.
Termín etyléndioxyskupina sa vzťahuje na -OCH2CH2O-, kde atómy kyslíka sú viazané k susediacim atómom uhlíka.
Termín S-sulfón-amidoskupina sa vzťahuje na skupinu -S(O)2NRI8R19, kde substituenty R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín ŕV-sulfón-amidoskupina sa vzťahuje na skupinu -NR18S(O)2R19, kde substituent R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín 0-karbamyl sa vzťahuje na skupinu -OC(O)NRI8R19, kde substituenty R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín ľV-karbamyl sa vzťahuje na skupinu RI8OC(O)NR19-, kde substituenty R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín O-tiokarbamyl sa vzťahuje na skupinu -OC(S)NR18R19, kde substituenty R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín TV-tiokarbamyl sa vzťahuje na skupinu Rl8OC(S)NR19-? kde substituenty R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín aminoskupina sa vzťahuje na skupinu -NRI8R19, kde substituenty R18 a R19 sú obidva atómy vodíka.
Termín C-amidoskupina sa vzťahuje na skupinu -C(O)NR18R19, kde substituenty R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín JV-amidoskupina sa vzťahuje na skupinu R18C(O)NR19-, kde substituenty R18 a R19 sú definované v predloženom vynáleze.
Termín nitroskupina sa vzťahuje na skupinu -NO2.
Termín halogénalkylová skupina sa vzťahuje na nesubstituovanú alkylovú skupinu, výhodne nesubstituovanú nižšiu alkylovú skupina, majúcu význam definovaný vyššie, ktorá je substituovaná jedným alebo viacerými rovnakými ' alebo rozdielnymi atómami halogénu, napr. -CH2CI, -:CF3, -CH2CF3, -CH2CCI3, atď.
Termín aralkylová skupina sa vzťahuje na nesubstituovanú alkylovú skupinu, výhodne nesubstituovanú nižšiu alkylovú skupina, majúcu význam definovaný v predloženom vynáleze, ktorá je substituovaná arylovou skupinou majúcou význam definovaný vyššie, napr. -CfUfenyl, -(CFU^fenyl, -(CH2)3fenyl, CH3CH(CH3)CH2fenyl, atď. a ich deriváty.
Termín heteroaralkylová skupina sa vzťahuje na nesubstituovanú alkylovú skupinu, výhodne nesubstituovanú nižšiu alkylovú skupina, majúcu význam definovaný vyššie, ktorá je substituovaná heteroarylovou skupinou, napr. -CH2-pyridinyl, -(CH2)2-pyrimidinyl, -(CH2)3imidazolyl, atď. a ich deriváty.
Termín monoalkylaminoskupina sa vzťahuje na radikál -NHR, kde substituent R je nesubstituovaná alkylová skupina alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina majúca význam definovaný vyššie, napr. metylaminoskupina, (l-metyl-etyl)aminoskupina, cyklohexylaminoskupina, atď.
Termín dialkylaminoskupina sa vzťahuje na radikál -NR, kde každý substituent R je nezávisle nesubstituovaná alkylová skupina alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina majúca význam definovaný vyššie, napr. dimetylaminoskupina, dietylaminoskupina, (l-metyl-etyl)-etylaminoskupina, cyklohexylmetyl-aminoskupina, cyklopentylmetylaminoskupina, atď.
Termín kyanoalkylová skupina sa vzťahuje na nesubstituovanú alkylovú skupinu, výhodne nesubstituovanú nižšiu alkylovú skupina majúcu význam definovaný vyššie, ktorá je substituovaná jednou alebo dvoma kyanoskupinami.
Termín voliteľný alebo prípadne znamená, že následne opísaný prípad alebo okolnosť sa môže, ale nemusí, vyskytovať, a že opis zahrnuje situácie, v ktorých sa prípad alebo okolnosť vyskytuje, a situácie, v ktorých sa prípad alebo okolnosť nevyskytujú. Napríklad „heterocyklová skupina prípadne substituovaná alkylovou skupinou“ znamená, že alkylová skupina môže, ale nemusí, byť prítomná a opis zahrnuje situácie, v ktorých heterocyklová skupina je substituovaná alkylovou skupinou, a situácie, v ktorých heterocyklová skupina nie je substituovaná alkylovou skupinou.
Termín 2-indolinón, indolin-2-ón a 2-oxindol sú použiteľné zameniteľným spôsobom a vzťahujú sa na molekulu majúcu chemickú štruktúru
Termín „pyrol“ sa vzťahuje na molekulu majúcu chemickú štruktúru:
Termíny „pyrolom substituovaný 2-indolinón“ a „3-pyrolidenyl-2-indolinón“ sú tu zameniteľné a vzťahujú sa na chemickú zlúčeninu majúcu všeobecnú štruktúru zobrazenú všeobecným vzorcom (I).
Zlúčeniny, ktoré majú rovnaký molekulový vzorec, ale sú odlišné v charaktere a sekvencií väzieb svojich atómov alebo usporiadaní svojich atómov v priestore sa nazývajú „izoméry“. Izoméry, ktoré sú rozdielne v usporiadaní svojich atómov v priestore sa nazývajú „stereoizoméry“. Stereoizoméry, ktoré nie sú zrkadlovým obrazom jeden druhého, sa nazývajú „diastereoizoméry“, a tie ktoré sú jeden druhému nekryjúcim sa zrkadlovým obrazom, sa nazývajú „enantioméry“. Pokiaľ sa v molekule zlúčeniny nachádza asymetrické centrum, napr. k tomuto centru sú pripojené štyri rozdielne skupiny, môže táto, molekula existovať v dvoch enantiomérnych formách. Enantiomér môže byť charakterizovaný absolútnou konfiguráciou svojho asymetrického centra a je opísaný Cahnovým-Prelogovým pravidlom ako R a S alebo podľa toho akým spôsobom molekula stáča rovinu polarizovaného svetla (označenie ako pravotočivá alebo ľavotočivá, (+)-izomér, resp. (-)-izomér). Chirálna zlúčenina môže existovať buď ako jednotlivý enantiomér alebo ako zmés enantiomérov. Zmes obsahujúca rovnaké množstvo enantiomérov je nazývaná „racemická zmes“.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu mať jedno alebo viac asymetrických centier, preto môžu byť takéto zlúčeniny pripravené ako jednotlivé (R)- a (S)- stereoizoméry alebo ako ich zmesi. Napríklad pokiaľ substituent R6 v zlúčenine všeobecného vzorca (I) je 2-hydroxyetyl, potom uhlík, ku ktorému je hydroxy skupina pripojená, tvorí asymetrické centrum, a teda zlúčenina všeobecného vzorca (I) môže existovať ako (R)- alebo (S)-stereoizomér. Pokiaľ nie je uvedené inak, potom’ opis alebo označenie jednotlivých zlúčenín v opisnej časti a patentových nárokoch bude zahrnovať oba enantioméry a ich zmesi, racemické alebo iné. Spôsoby stanovenia stereochémie a separácie stereoizomérov sú štandardne dobre známe (viď podrobnejšia diskusia v kapitole 4 of „AdvancedOrganic Chemistry“, 4th edition J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992).
Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu vykazovať tautomériu a štruktúrnu izomériu. Napríklad zlúčeniny opisované tu môžu byť označené ako E alebo Z konfigurácie na dvojnej väzbe spojujúcej 2-indolinónovú časť s pyrolovou časťou alebo môžu byť zmes E a Z konfigurácie. Predložený vynález zahrnuje akúkoľvek tautomérnu alebo štruktúrnu izomérnu formu a ich zmesi, ktoré majú schopnosť modulácie aktivity RTK, CTK a/alebo STK, a nie je nijako obmedzený na akúkoľvek tautomérnu alebo štruktúrnu izomérnu formu.
Termín „farmaceutický prípravok“ sa vzťahuje na zmes jednej alebo viacerých tu opisovaných zlúčenín alebo ich fyziologicky/farmaceuticky prijateľnej soli alebo proliečiva spoločne s ďalšími chemickými komponentmi, napr. fyziologicky/farmaceuticky prijateľnými nosičmi a excipientami. Účel farmaceutického prípravku je uľahčiť podanie zlúčeniny do organizmu.
Zlúčenina všeobecného vzorca (I) môže tiež účinkovať ako proliečivo. Termín „proliečivo“ sa vzťahuje na látku, ktorá sa in vivo premieňa na vlastné liečivo. Proliečiva sú často výhodné, pretože v niektorých prípadoch môžu byť ľahšie podávané než vlastné liečivo. Môžu byť napr. biologicky dostupné perorálnym podaním, zatiaľ čo vlastné liečivo nie. Vo farmaceutických prípravkoch môže mať proliečivo tiež zlepšenú rozpustnosť než vlastné liečivo. Príkladom, ale bez obmedzenia, proliečiva by bola zlúčenina podľa predloženého vynálezu, ktorá je podávaná ako ester („proliečivo“) na uľahčenie prenosu cez bunkovú membránu, kde rozpustnosť vo vode je na škodu mobilite, ale potom je metabolický hydrolyzovaná na karboxylovú kyselinu, vlastnou účinnou zlúčeninou, ledva je vo vnútri bunky, kde je rozpustnosť vo vode výhodná.
Ďalším príkladom proliečiva môže byť krátky polypeptid, napríklad, bez obmedzenia, polypeptid s 2 - 10 aminokyselinami, viazaný cez terminálnu aminoskupinu ku karboxyskupine zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, kde polypeptid je hydrolyzovaný alebo metabolizovaný in vivo na uvoľnenie aktívnej molekuly. Proliečiva zlúčeniny podľa predloženého vynálezu (I) spadajú do rozsahu predloženého vynálezu.
Navyše sa uvažuje, že zlúčenina všeobecného vzorca (I) by bola metabolizovaná enzýmami v organizme, napr. ľudskom, na metabolit, ktorý môže modulovať aktivitu proteínkináz. Tieto metabolity spadajú tiež do rozsahu predloženého vynálezu.
Termín „fyziologicky/farmaceuticky prijateľný nosič“ sa vzťahuje na nosič alebo riedidlo, ktoré nespôsobuje významné podráždenie organizmu a nenarušuje biologickú aktivitu a vlastnosti podávanej zlúčeniny.
Termín „farmaceutický prijateľný excipient“ sa vzťahuje na inertnú látku pridávanú do farmaceutického prípravku na ďalšie uľahčenie podania zlúčení27 ny. Príklady excipientov, bez obmedzenia, zahrnujú uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, rôzne cukry a typy škrobov, deriváty celulózy, želatínu, rastlinné oleje a polyetylénglykoly.
Termín „farmaceutický prijateľná soľ“, ako je používaný v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na tie soli, ktoré si uchovávajú biologickú účinnosť a vlastnosti materskej zlúčeniny. Tieto soli zahrnujú:
(i) adičné soli s kyselinou, ktoré sú pripravené reakciou voľnej bázy materskej zlúčeniny s anorganickými kyselinami, napr: s chlorovodíkovou kyselinou, bromovodíkovou kyselinou, dusičnou kyselinou, fosforečnou kyselinou, kyselinou sírovou a kyselinou chloristou, atď., alebo s organickými kyselinami, napr. s octovou kyselinou, šťaveľovou kyselinou, (D) alebo (L) jablčnou kyselinou, maleínovou kyselinou, metánsulfónovou kyselinou, etánsulfónovou kyselinou, p-toluénsulfónovou kyselinou, salicylovou kyselinou, vínnou kyselinou, citrónovou kyselinou, jantárovou kyselinou alebo malónovou kyselinou, atď., výhodne kyselinou chlorovodíkovou alebo (L)-jablčnou kyselinou, napr. ako L-malátová soľ (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-l,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny; alebo (2) soli pripravené buď nahradením kyslého protónu prítomného v materskej zlúčenine iónom kovu, napr. ión alkalického kovu, ión alkalických zemín alebo hlinitý ión; alebo koordináciou s organickou bázou, napr. etanolamínom, dietanolamínom, trietanolamínom, trimetanolamínom, A-metylglukamínom, atď.
Termín „PK“ sa vzťahuje na receptorovú proteínovú tyrozínkinázu (RTK), nereceptorovú alebo „bunkovú“ tyrozínkinázu (CTK) a seríntreonínkinázy (STK).
Termín „spôsob“ sa vzťahuje na spôsoby, prostriedky, techniky a procedúry na dosiahnutie uvedeného zámeru, vrátane, ale nie je to nijako limitované, spôsobov, prostriedkov, techník a procedúr buď známych alebo ľahko vyvinuteľných zo známych spôsobov, prostriedkov, techník a procedúr odborníkmi v chemických, farmaceutických, biologických, biochemických a lekárskych odboroch.
Termín „modulácia“ alebo „modulujúci“ sa vzťahuje na zmenu katalytickej aktivity RTK, CTK a STK. Konkrétne sa modulácia vzťahuje na aktiváciu katalytickej aktivity RTK, CTK a STK, výhodne aktiváciu alebo inhibíciu katalytickej aktivity RTK, CTK a STK, v závislosti na koncentrácii zlúčeniny alebo soli, ktoré sú RTK, CTK alebo STK vystavené alebo, výhodnejšie, inhibícii katalytickej aktivity, RTK, CTK a STK.
Termín „katalytická aktivita“ sa vzťahuje na mieru fosforylácie tyrozínu za vplyvu, priameho či nepriameho, RTK a/alebo CTK alebo fosforylácie serínu a treonínu za vplyvu, priameho či nepriameho, STK.
Termín „uvedenie do kontaktu“ sa vzťahuje na uvedenie zlúčeniny podľa predloženého vynálezu a cieľovej PK do kontaktu takým spôsobom, aby zlúčenina mohla ovplyvniť katalytickú aktivitu PK, buď priamo, tzn. interakciou so samotnou kinázou, alebo nepriamo, tzn. interakciou s ďalšou molekulou, na ktorej je katalytická aktivita kinázy závislá. Takéto „uvedenie do kontaktu“ môže byť dosiahnuté „in vitro“, tzn. v skúmavke, petriho miske, atď. V skúmavke môže uvedenie do kontaktu zahrnovať iba zlúčeniny a PK podľa výberu alebo môže zahrnovať celé bunky. Bunky môžu byť tiež udržiavané alebo pestované v miskách na kultiváciu buniek a uvedené do kontaktu so zlúčeninou v tomto prostredí. V tejto súvislosti môže byť schopnosť jednotlivej zlúčeniny ovplyvňovať poruchy súvisiace s PK, tzn. hodnota IC50 zlúčeniny, definovaná nižšie, stanovená pred použitím zlúčenín in vivo s komplexnejšími živými organizmami. Pre bunky mimo organizmus existuje mnoho spôsobov, a sú dobre známe odbornej verejnosti, vrátane toho, ako uviesť zlúčeniny do kontaktu, vrátane, ale nie je to nijako limitované, priamej bunkovej mikroinjekcie a mnoho techník s transmembránovým nosičom.
Termín „in vitro“ sa vzťahuje na spôsoby vykonávané v umelom prostredí, napríklad, ale nie je to nijako limitované, v skúmavke alebo kultivačnom médiu.
Termín „in vivo“ sa vzťahuje na spôsoby vykonávané v živom organizme, napríklad, ale nie je to nijako limitované, v myšom, králičom alebo v organizme potkanov.
Termíny „ porucha súvisiaca s PK“, „ porucha riadená PK“ a „abnormálna aktivita PK“ sa všetky vzťahujú na stav charakterizovaný neprimeranou, tzn. zníženou alebo väčšinou zvýšenou katalytickou aktivitou PK, kde jednotlivé PK môžu byť RTK, CTK alebo STK. Neprimeraná katalytická aktivita môže vznikať ako výsledok buď: (1) expresie PK v bunkách, ktoré normálne neexprimujú PK, (2) zvýšenej expresie PK, ktorá vedie k nežiaducej bunkovej proliferácii, diferenciácii a/alebo rastu, alebo (3) zníženej expresie PK, ktorá vedie k nežiaducim redukciám v bunkovej proliferácii, diferenciácii a/alebo rastu. Nadmerná aktivita PK poukazuje na buď amplifikáciu génu kódujúceho konkrétne PK alebo produkciu hladiny aktivity PK, ktorá môže korelovať s bunkovou proliferáciou, diferenciáciou a/alebo rastovou poruchou (tzn. zvyšovaním hladiny PK sa zvyšuje sila jedného alebo viacerých symptómov bunkovej poruchy). Znížená aktivita samozrejme znamená opak, t.j. sila jedného alebo viacerých symptómov bunkovej poruchy sa zvyšuje so znižujúcou sa hladinou aktivity PK.
Termín „ošetrenie“ sa vzťahuje na spôsob zmiernenia alebo odstránenia bunkovej poruchy sprostredkovanej PK a/aiebo ich sprievodných symptómov. Konkrétne, čo sa týka rakoviny, znamenajú tieto jednoduché termíny, že dĺžka života pacienta ovplyvnená rakovinou bude predĺžená, alebo že jeden alebo viac symptómov ochorení bude redukovaný.
Termín „organizmus“ sa vzťahuje na živú entitu pozostávajúcu z aspoň jednej bunky. Živý organizmus môže byť tak jednoduchý ako napr. jednoduchá eukariotická bunka alebo tak komplexný ako cicavec, vrátane ľudí.
Termín „terapeuticky účinné množstvo“ sa vzťahuje na také množstvo podávanej zlúčeniny, ktoré zmierňuje jeden alebo viac symptómov ošetrovanej poruchy. Čo sa týka rakoviny, tak terapeuticky účinné množstvo sa vzťahuje na množstvo, ktoré má nasledujúci účinok:
(1) znižuje veľkosť nádoru;
(2) inhibuje (tzn. spomaľuje do určitej miery, výhodne zastavuje) metastázy nádoru;
(3) inhibuje (tzn. spomaľuje do určitej miery, výhodne zastavuje) rast nádoru a/alebo , I (4) zmierňuje do určitej miery (alebo výhodne eliminuje) jeden alebo viac symptómov súvisiacich s rakovinou.
Termín „monitorovanie“ znamená sledovanie alebo detekciu účinku po uvedení zlúčeniny do kontaktu s bunkou exprimujúcou konkrétne PK. Pozorovaný či detegovaný účinok môže byť zmena bunkového fenotypu, katalytickej aktivity PK alebo zmena interakcie PK s prirodzeným väzbovým partnerom. Techniky pozorovania alebo detekcie takých účinkov sú známe v odbore.
Vyššie citovaný účinok je vybraný zo zmeny alebo absencie zmeny bunkového fenotypu, zmeny alebo absencie zmeny katalytickej aktivity uvedenej proteínkinázy alebo zmeny alebo absencie zmeny interakcie uvedenej proteínkinázy s prirodzeným väzbovým partnerom v konečnom aspekte predloženého vynálezu.
Termín „bunkový fenotyp“ sa vzťahuje na vonkajší prejav bunky alebo tkaniva alebo biologickej funkcie bunky alebo tkaniva.,Príklady bunkového fenotypu zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, veľkosť bunky, jej rast, proliferáciu, diferenciáciu, prežitie, apoptózu a nutričný príjem a použitie. Tieto fenotypové charakteristiky sú merateľné technikami známych v odbore.
Termín „prirodzený väzbový partner“ sa vzťahuje na polypeptid, ktorý sa viaže na konkrétne PK v bunke. Prirodzení väzboví partneri môžu hrať dôležitú úlohu pri propagácii signálu pri procesoch signálnej transdukcie sprostredkovanej PK. Samotná zmena interakcie prirodzeného väzbového partnera s PK sa môže prejavovať ako zvýšená alebo znížená koncentrácia komplexu PK/pŕirodzeného väzbového partnera a v dôsledku toho ako pozorovateľná zmena schopnosti PK sprostredkovávať signálnu transdukciu.
Názorné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú uvedené v tabuľke I nižšie.
Tabuľka 1
Príklad štruktúra Názov
1 o=< o x 4-metyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-2-karboxylová kyselina
2 4-metyl-5-(l-metyl-2-oxo-l,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-2-karboxylová kyselina
3 o / metylester 4-metyl-5-(2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-2karboxylovej kyseliny
4 Cl N Ύ ° . <sŕ’*'N H etylester 5-(5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-4-metyl-l//-pyrol-2- karboxylovej kyseliny
5 z— ΰ Ä 5-(5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-4-metyl-l//-pyrol-2karboxylová kyselina
6 c*·“ (3-pyrolidin-1 -y 1-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
7 (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
8 (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l //-pyrol2-karboxylovej kyseliny
9 (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(2-oxo-6-fenyll,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol2-karboxylovej kyseliny
10 < (2-dietylamino-etyl)-metyl-amid 5-(5-bróm2-οχο-1,2-d ihydro-indo 1-3-y lidénmety 1)-1 Ηpyrol-2-karboxylovej kyseliny
11 (2-dietylamino-etyl)metylamid 5-(2-oxo-6fenyl-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmety 1)-1//pyrol-2-karboxylovej kyseliny
12 ο/'- (3-dietylamino-propyl)-amid 3-mety 1-5-(2oxo-1,2-d ihydro-indo 1-3-y lidénmety 1)-1//pyrol-2-karboxylovej kyseliny
13 / Ν»Χ (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indo 1-3-y lidénmety lamety 1-1/Z-p y rol-2-karboxylovej kyseliny
14 (3-dietylamino-propyl)-amid 3-metyl-5-(2οχο-6-fenyl-l ,2-dihydro-indolľ3ylidénmetyl)-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
15 r Ν-Χ (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-methoxy2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
16 -aG^'^ Η (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(6-methoxy2-oxo-l ,2-dihydro-indo 1-3-y lidénmety lamety l-l//-pyro 1-2-karboxylovej kyseliny
17 < (2-dietylamino-etyl)-amid 3-(5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-3-y 1 i dénme t y 1)-4,5,6,7tetrahydro-2//-izoindol-l -karboxylovej kyseliny
18 Η^^ρ Λι (3-dietylamino-propyl)-amid 3-(5-bróm-2oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol -1 karboxylovej kyseliny
19 “'Ό^ρ Ď (3-pyrolidín-1 -yl-propyl)-amid 3-(5-bróm-2oxo-1,2-d ihydro-indo 1-3-y lidénmetyl)4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol -1 karboxylovej kyseliny
20 N ~N (2-dietylamino-etyl)-amid 3-(2-oxo-6pyridin-3-yl-l ,2-dihydro-indol-3y lidénmety 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol1-karboxylovej kyseliny
21 “Ί > > -na (3-dietylamino-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmety l)-3-metyl-l/í-pyrol-2karboxylovej kyseliny
22 “'T > r? (3-morfolin-4yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl-l//-pyrol-2karboxylovej kyseliny
23 < nj3 (3-pyrolidín-1 - yl-propyl)-amid 4-benzoyl-3metyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
24 Br^, > (3-pyrolidín-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3y lidénmetyl)-3-mety 1-1 //-pyrol-2karboxylovej kyseliny
25 _ j κί: n>ď ° H (3-pyrolidin-1 -y 1-propyl)-amid 4-benzoyl-3metyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
26 Ό' > H (3-pyrolidín-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5(6-methoxy-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl-1 //-pyrol-2karboxylovej kyseliny
27 4x > sjd (3-pyrolidin-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5(5-methoxy-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3y lidénmetyl)-3-metyl-1//-p y rol-2karboxylovej kyseliny
28 Ί > 'Jd (3-pyrolidin-1 - yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5(5-fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl -1 //-pyrol-2karboxylovej kyseliny
29 (3-dietyIamino-propyl)-amid 4-acetyl-5-(5bróm-2-οχο-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl-1 //-pyrol-2karboxylovej kyseliny
30 YVW ° (3-pyrolidin-l-yl-propyl)-amid 4-acetyl-5(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl-1//-pyrol-2karboxylovej kyseliny
31 up ° H (3-morfolin-4-yl-propyl)-amid 4-acetyl-5-(5bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3yl idénmetyl)-3-metyl-1 //-pyrol-2karboxylovej kyseliny
32 X O xz v ?° ojť2Ió . ^v^zx m (3-hydroxypropyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm- 2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
33 uá^“ (2-hydroxy-etyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyI)-3metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
34 o (2-morfolin-4yl-etyl)-amid 4-acetyl-5-(5bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl- l//-pyrol-2karboxylovej kyseliny
35 o (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 4-acetyl-5-(5bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl- 1//-pyrol-2karboxylovej kyseliny
36 0 [2-(4-hydroxy-fenyl)etyl]-amid 4-acetyl-5(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3y lidénmetyl)-3-mety 1-1 //-pyr o 1-2karboxylovej kyseliny
37 (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indoI-3-ylidénmetyl)-2izopropyl-4-fenyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
38 Ο ° (3-pyrolidin-1 -yl-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2izopropyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
39 χχδ^ (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2izopropyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
40 ζ~) ο ~/-ν''·' >-Λη Ν**''*|,*'Ζ LYď [3-(4-metylpiperazin-l -yl)propyl]-amid 5-(5bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3y lidénmet y l)-2-izopropyl-4-fenyl-l //-pyro 13-karboxylovej kyseliny
41 05» 5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3yl idénmetyl)-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyro 13-karboxylová kyselina
42 Η (2-pyrolidin-l -yl-etyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2metyl-4-fenyl- 1/Z-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
43 (2-pyrolidin-l-y 1-etyl)-amid 5-[6-(2methoxy-fenyl)-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3yl idénmetyl]-2-mety 1-4-fenyl-1//-p y rol-3karboxylovej kyseliny
44 dd (2-dimetylamino-etyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-2metyl-4-fenyl-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
45 ,> t (2-dimetylamino-etyl)-amid 5-[6-(2methoxy-fenyl)-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2-metyl-4-fenyl-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny
46 •4^ etylester 5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-2-metyl-4-fenyl-1 //-pyro 1-3karboxylovej kyseliny
47 (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2οχο-1,2-dihydro-i ndol-3-y lidénmety lamety 1-4-fény 1-1 //-p y rol-3-karboxylovej kyseliny
48 Ό w \Λν (2-dimetylamino-etyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4dimetyl- l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
49 (2-dimetylamino-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5(2-oxo-6-fenyl-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
50 (2-dimetylamino-etyl)-amid 5-(5-chlór-2oxo-1,2-dihydro-i ndo 1-3-ylidénmety 1)-2,4dimetyl - 1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
51 ° Η XXW '-'ΤΙ (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-3-ylidénmety 1)-2,4dimety 1-1//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
52 γΛΚ (2-pyrolidin-l -yl-etyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmety 1)-2,4dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
53 β·Ό<ΓΧ- (3-imidazol-1 -y 1 -propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmety 1)-2,4dimetyl -1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
54 ο Μ ο?/· 1 (2-dimetylamino-etyl)-amid 5-(6-(2methoxy-fenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny
55 Ο Μ \>ν ο/'· .0 (2-dimetylamino-etyl)-amid 5-(6-(3methoxy-fenyl)-2-oxo-l ,2-dihydro-indoI-3 y lidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3 karboxylovej kyseliny
56 H (2-dietylamino-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
57 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
58 ° B H (3-imidazol-1 -yl-propyl)-amid 2,4-dimetyl5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
59 (2-dietylamino-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2oxo-6-fény 1-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
60 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
61 O M (3-imidazol-l-yl-propyl)-amid 2,4-dimetyl-5(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
62 0 „ f Cl (2-dietylamino-etyl)-amid 5-[6-(3,5dichlórfenyl)-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny
63 ° v°/‘ (2-dietylamino-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
64 O p®#’ (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5(2-oxo-6-pyridin-3-yl -1,2-dihydro-indol-3y 1 idénmety 1)-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
65 Zr° zz !> (3-dimetylamino-propyl)-amid 2,4-dimetyl- 5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-\H-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
66 R λ-/·ν' \_A~n ' °ΐ#' H (3-dimetylamino-propyl)-amid 2,4-dimetyl5-(2-oxo-5-fenyl -1,2-dihydro-indol-3ylidénmety 1)-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
67 Λο/Γν H (3-dietylamino-propyl)-amid 2,4-dimetyl-5(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3yl i dénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyse- , liny
68 Ó u \_/-W O°Í^V (3-dietylamino-propy 1)-amid 2,4-dimetyl-5(2-oxo-6-fenyl-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
69 “φ vK. ΧρΛ G>° (3-chlór-4-metoxy-fenyl)-amid 3-[4-(3dietylamino-propylkarbamoy 1)-3,5-dimety 1l//-pyrol-2-ylmetylén]-2-oxo-2,3-dihydrol//-indol-4-karboxylovej kyseliny
70 yJ^n ►χχ^-V (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmety 1)-2,4dimetyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
71 (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-3-yIidénmetyl)-2,4diizopropyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
72 O-B ‘Xqp’^'V H (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4diizopropyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
73 “'-Crá^ H (3-pyrolidin-l -yl-propyl)-amid 5-(5-bróm-2oxo-1,2-d i h ydro-i ndo 1-3-y lidénmety 1)-2,4diizopropyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
74 (pyridin-4-ylmetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
75 (2-pyrolidin- 1-y 1-etyl)-amid 5-(6-(4butylfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2,4-dimetyl- l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny
76 O J? (2-pyrolidin-1 -y l-etyl)-amid 5-(6-(5izopropyl-2-metoxy-fenyl)-2-oxo-l,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
77 o JP J3°^' (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 5-(6-(4etylfenyl)-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny
78 o P (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 5-(6-(2,4dimetoxy-fenyl)-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2,4-dimetyl- 17/-pyrol-3karboxylovej kyseliny
79 o o N-' (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 5-(6-(3izopropyl fenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny
80 <, o _ (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4dimet y 1- 177-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
81 c o N-< OH 3-[4-(2-dietylamino-etylkarbamoyl)-3,5dimetyl-l//-pyrol-2-ylmetylen]-2-oxo-2,3dihydro-l//-indol-6-karboxylová kyselina
82 <,o /C o-sWO ° (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 5-(5dimetylsulfamoyl-2-oxo-l ,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny
83 (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 5-[5-(3chlórfenylsulfamoyl)-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol3-karboxylovej kyseliny
84 0 w (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5[2-oxo-5-(pyridin-3-ylsulfamoyl)-1,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl]-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny
85 3-[3,5-dimetyl-4-(4-metylpiperazin-lkarbonyl)-l//-pyr ol-2-ylmety lén]-4-(2hydroxyetyl)-1,3-dihydro-indol-2-ón
86 fenyl-amid 3-[3,5-dimetyl-4-(4metylpiperazin-l-karbonyl)-l//-pyrol-2ylmetylén]-2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5sulfónovej kyseliny
87 O N-7 V_Ž~n' (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5dimetylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyI-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny
88 Cl r, nJ (2-dietylamino-etyl)-amid 5-[5-(3chlórfenylsulfamoyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol3-karboxylovej kyseliny
89 1 (2-dimetylamino-etyl)-amid 3-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol -1 karboxylovej kyseliny
90 cÄ etylester 3-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol1-karboxylovej kyseliny
91 etylester 3-(4-mety 1-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidénmet y 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2/7izoindol-l-karboxylovej kyseliny
92 -’C Λ etylester 3-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//izoindol-1 -karboxylovej kyseliny
93 °V Λ 1 3-(3-etoxykarbonyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//izoindol-1 -ylmetylén)-2-oxo-2,3-dihydrol//-indol-5-karboxylová kyselina
94 Ä etylester 3-(5-metoxy-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-y lidénmety 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2//izoindol-l-karboxylovej kyseliny
95 Ou /nU° ^T>° i A~n 1 etylester 3-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2Hizoindol-1 -karboxylovej kyseliny
96 □ Ό i—C JO^O / N l^ O“° Λ etylester 3-(2-oxo-5-sulfamoyl-l ,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl)-4 ,5 6,7-tetrahydro-2Hizoindol-1-karboxylovej kyseliny
97 U Ä etylester 3-(5-metylsulfamoyl-2-oxo-l ,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4 ,5, 6,7tetrahydro-2H-izoindol-l -karboxylovej kyseliny
98 ' J N**^I Xľ>° °Ί ^*N l etylester 3-(5-dimetylsulfamoyl-2-oxo-l ,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4 ,5,6,7tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylovej kyseliny
99 o*s>r 3Ä etylester 3-(2-oxo-5-fenylsulfamoyl-l ,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4 ,5, 6,7tetrahydro-2H-izoindol-l-karboxylovej kyseliny
100 ►-Í etylester 3-(6-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-4 ,5, 6,7-tetrahydro-2//izoindol-1-karboxylovej kyseliny
101 etylester 3-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-4 ,5, 6,7-tetrahydro-2//izoindol-1-karboxylovej kyseliny
102 3-(3-etoxykarbonyl-4,5, 6,7-tetrahydro-2tfizoindol-1 -ylmetylén)-2-oxo-2,3-dihydrol//-indol-6-karboxylová kyselina
103 etylester 3-(6-metoxy-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidénmety 1)-4,5, 6,7-tetrahydro-2ŕŕizoindol-l-karboxylovej kyseliny
104 A,o I Λ. °T etylester 3-(5-izopropylsulfamoyl-2-oxo-l ,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4,5, 6,7tetrahydro-2/7-izoindol-l-karboxylovej kyseliny
105 L· rK° 3 (YVo N 3-(3-metylkarbamoyl-4,5, 6,7-tetrahydro-2//izoindol-l-ylmetylén)-2-oxo-2,3-dihydrol//-indol-5-karboxylová kyselina
106 0 /»Λνο οΑΟζ< 3-(3-dimetylkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydro2//-izoindol-l-ylmetylén)-2-oxo-2,3dihydro-l//-indo 1-5-karboxylová kyselina
107 °w% 2-oxo-3-[3-(pyrolidín-1 -karbony 1)-4,5, 6,7tetrahydro-2//-izoindol-l-ylmetylén]-2,3dihydro-17/-indol-5-kar boxy lová kyselina
108 °W% 3-[3-(morfolín-4-karbonyl)-4,5, 6,7tetrahydro-2//-izoindol -1 -ylmetylén]-2-oxo2,3-dihydro-1 //-indol-5-karboxylová kyselina
109 3-[3-(morfolín-4-karbonyl)-4,5, 6,7tetrahydro-2//-izoindol -1 -ylmetylén]-2-oxo2,3-dihydro-1 //-indo 1-6-karboxylová kyselina
110 •oÄ metyl-amid 3-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-y lidénmety 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2//izoindol-1-karboxylovej kyseliny
111 dimetyl-amid 3-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-y lidénmety 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2/7izoindol-1-karboxylovej kyseliny
112 “vÄ 5-bróm-3 - [3-(py rol idin-1 -karbony 1)-4,5,6,7tetrahydro-2//-izoindol-l -ylmetylén]-l ,3dihydro-indol-2-ón
113 5-bróm-3-[3-(pyrolidin-4-karbonyl)-4,5,6,7tetrahydro-2//-izoindol-l-ylmetylén]-l ,3dihydro-indol-2-ón
114 o jľX^° 3-(3-dimetylkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydro2//-izoindol-l-ylmetylén)-2-oxo-2,3di hydro-l//-indol-6-karboxylo vej kyseliny
115 O \ Λο o * ô T T >=o 4-metyl-5-(5-metylsulfamoyl-2-oxo-l ,2dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny
116 Yl N ° etylester {[4-metyl-5-(4-metyl-5metylsulfamoyl-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3y lidénmetyl)-l//-pyrol-3-karbonyl]-ami no}octovej kyseliny
117 o \_/~N n 1 O r—<5 '“'í N <P j! n o ósyyVo ( etylester {[4-metyl-5-(5-metylsulfamoyl-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l //pyrol-3-karbonyl]-amino}-octovej kyseliny
118 {[4-metyl-5-(5-metylsulfamoyl-2-oxo-l ,2dihydro-indoI-3-ylidémnetyl)- l//-pyrol-3karbonyl]-amino}-octová kyselina
119 \3> 1 o Pt, o T T>o ^^5*-N metyl-amid 3-[3-metyl-4-(piperidin-1 karbonyl)-1 //-pyrol-2-ylmetylén]-2-oxo-2,3dihydro-1//-indol-5-sul iónovej kyseliny
120 ° O 5-metyl-2-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-17/-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
121 o etylester 5-metyl-2-(2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl)-1 //-pyrol-3 karboxylovej kyseliny
122 o Ia>° etylester 2-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol3-ylidénmetyl)-5-metyl- l//-pyroI-3karboxylovej kyseliny
123 o o=< T JL>o 2-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-5-metyl-l//-pyro 1-3karboxylovej kyseliny
124 •oŕ (2-pyrolidin-l -yl-etyl)-amid 2-(5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-5metyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
125 /— y—n N_Z u- “O^ (2-dietylamino-etyl)-amid 2-(5-bróm-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-5-metyll//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
126 0 ~ N PrCr CHl H (2-dietylamino-etyl)-amid 2,4dimetyl-5-[2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-l//-pyrol3-karboxyIovej kyseliny 381 [M + U
127 rCH, Q N H’C>—Äk'— '~CH* cwylcH' (2-dietylamino-etyl)-amid 5-[5chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny 415 [M + H
128 ►Se fl Ν' í JZ. >=° Η 0 H ^CH, (2-pyrolidin-l-etyl)-amid 2,4dimetyl-5-[2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-l//-pyrol3-karboxylovej kyseliny 379 [M + i]
129 Η.c 0 (2-pyrolidin-l -y 1-etyl )-ami d 5-[5- 397 [M
fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol- + i]
[1 [ >=ο CH, (3 Z)-ylidénme tyl]-2,4-dimetyl-l//-
^~R pyrol-3-karboxylovej kyseliny
130 «č Vz^rO (2-pyrolidin-l -y l-etyl)-amid 5-[5- 413 [M
í chlór-2-οχο-1,2-dihydro-indol- + U
ΙΧ>=ο (3Z)-ylidénmetyl]-l//-pyrol-3-
R karboxylovej kyseliny
131 CM. 1 (2-dimetylamino-etyl)-amid 2,4- 353 [M
H,C \\ r—* » Λκ dimety 1-5-[2-oxo-1,2-dihydro- + 1]
‘-CM, indol-(3Z)-ylidénmetyl]-l//-pyrol-
3-karboxylovej kyseliny
132 H,C 0 ,CH> -N (2-dimetylamino-etyl)-amid 5-[5- 371 [M
CHj fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol- + i]
Fxy> H 0 CH, (3 Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-
O-N H pyrol-3-karboxylovej kyseliny
133 HX 0 -y' (2-acetylamino-etyl)-amid 5-[5- 399 [M
JT 0 chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol- - i]
'‘CH, (3 Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-
y j >=θ pyrol-3-karboxylovej kyseliny
134 HX 0 Λ“1 (2-acetylamino-etyl)-amid 5-[5- 383 [M
JT ZN \ H 0 fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol- - i]
fwO '-CH, (3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl- \H-
I z^o pyrol-3-karboxylovej kyseliny
135 HX D R CH, lí (2-acetylamino-etyl)-amid 2,4- 365 [M
JT 0 dimetyl-5-[2-oxo-1,2-dihydro- -1]
Γ u K^>r^\ H -CH, indol-(3Z)-ylidénmetyl]-l//-pyrol-
3-karboxylovej kyseliny
136 0 _/-Λι [3-(2-oxotetra-pyrimidin- 1-yl)- 500 [M
H.C ^2“- S propyl]-am i d 5-[5-bróm-2-oxo-l,2- + U
R -‘-CH, dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-
Í. Á. ^R 2,4-dimetyl-l //-pyrol-3- 502 [M
karboxylovej kyseliny + 1]
137 η·χλβ X τ ινθ Μ [3-(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-l propyl]-amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 454 [M - H
138 ο ~-Λ» X» ’γ^-C» “* W” [3-(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-l propyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 438 [M - i]
139 • „X Χ« α>» [3-(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-l propyl]-amid 2,4-dimetyl-5-[2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl - \Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny 422 [M + i]
140 0 0 ~Χ-Λ>ί HjWR ΎΎΧ ^Β [3-(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-lpropyl]-amid 5-[5-kyano-2-oxo1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl- IHpyrol-3-karboxylovej kyseliny 447 [M + H
141 0 Č; Ο Ν-_Λ Br, /ϊ CH» ° Ό> trifluóracetát-4-[2-({5-[5-bróm-2oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1H- pyrol-3-karbonyl} -amino)-etyl]-2oxo-piperazín-1 -i um 486 [M + i] 488 [M + 1]
142 Χ£ Η ‘Vrt * “* 1 1 >=ο Χί^Ν Η [3-(2-oxo-pyrolidin-1 -yl)-propyl]amid 5-[5-kyano-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-17/-pyrol-3karboxylovej kyseliny 430 [M - U
143 ΝΗ ο χ ° *υυΟ “ [2-(2-oxo-imidazol idin-1 -yl)-etyl]amid 5-[5-bróm-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny 470 [M - U 472 [M - i]
144 Ó'nh 0 N-c ° I Γ >° [2-(2-oxo-imidazolidin-l -yl)-etyl]amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 428 [M + H
145 r™ ο__ν4 %Λη 0 ΐ I /=ο [2-(2-oxo-imidazolidin-l -yl)-etyl]amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4di metyl-lH-pyrol-3-karboxylovej kyseliny 412 [M + 1]
146 Γ,ΝΗ 0 ν-7 V# 0 [2-(2-oxo-imidazolidin-l-yl)-etyl]amid 2,4-dimetyl-5-[2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]- l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny 392 [M - i]
147 r^NH Tb Λ coP Η [2-(2-oxo-imidazolidin-l -yl)-etyl]amid 5-[5-kyano-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-di metyl- l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 419 [M + 1]
148 -Λ C Mi/r° „,<= ° B'Y'^-CΓεΜΧ^Ι-μ ° H etylester {4-[2-({5-[5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//pyrol-3-karbonyl }-amino)-etyl]piperazin-l-yl}-octovej kyseliny 558 [M + 1] 560 [M + H
149 Tí m β Jf N^CH» γν>οΜ H etylester {4-[2-({5-[5-chlór-2-oxo1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//pyrol-3-karbonyl}-amino)-etyl]piperazin-l-yl}-octovej kyseliny 514 [M + 1]
150 .C C>>7r° 0 N j n S ° li ľ z=o etylester {4-[2-({5-[5-fluór-2-oxo1,2-dihydro-indol-(3Z)y lidénmetyl]-2,4-di mety 1-1/ΖργΓοΙ^-karbonyl}-ami no)-etyl]piperazin-l-yl}-octovej kyseliny 498 [M + 1]
153 4' 0 NH u ΖΓ /=° H [2-(kyanometylamino)-etyl]-amid 2,4-dimetyl-5-[2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-l 77-pyrol3-karboxylovej kyseliny 362 [M -1]
154 X<b Bv'v/V'0' T TVo [3-(2-oxo-azepan-l-yl)-propyl]amid 5-[5-bróm-2-oxo-l ,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl- 1//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 511 [M, -1] 513 [M - i]
155 o^JR CH· I x vo ^R [3-(2-oxo-azepan-1 -yl)-propyl]amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 469 [M + 1]
156 X^b υΧΊ ch· 1 TVo vah [3-(2-oxo-azepan-l -yl)-propyl]amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny 453 [M + 1]
157 X»—b xUY* [i [ Vo [3-(2-oxo-azepan-l -y l)-propy 1 ]amid 2,4-dimetyl-5-[2-oxo-l ,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny 435 [M + 1]
158 X^b ’ CÚ '' H [3-(2-oxo-azepan-1 -yl)-propyl]amid 5-[5-kyano-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-di metyl-1 //-pyrol-3karboxylovej kyseliny 460 [M + i]
159 H ru 0 N CH, vj-r 3Í H %/s-O CH> i I L Vo | (2-acetylamino-etyl)-amid 5-[5bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl- ΪΗpyrol-3-karboxylovej kyseliny 443 [M - i] 445 [M - i]
160 0 d H C ° trCM· I JL >° F i Trifluóracetát-4-[2-({5-[5-fluór-2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l //- pyro 1-3-karbonyl} -am i no)-etyl]-2- 426 [M + 1]
oxo-piperazín-1 -ium;
161 0 Č5 o n-/ í T>=° F X O-Jj ,Υ^ΟΗ tri fluóracetát-4-[2-((2,4-dimetyl-5[2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-l //-pyrol-3karbonyl}-amino)-etyl]-2-oxopiperazín-l-ium; 408 [M + 1]
162 0' CH, ’ trifluóracetát-4-[2-({5-[5-kyano-2- oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//- pyrol-3-karbonyl}-ami no)-etyl]-2oxo-piperazín-1 -ium; 433 [M + i]
163 . . J ’V-Ah'—' tCCH· í X>° H [2-(2-kyano-etylamino)-etyl]-amid 5-[5-bróm-2-oxo-1,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4- dimetyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny 454 [M -1] 456 [M -1]
164 o bJ ícch> T £ >=o H [2-(2-kyano-etylamino)-etyl]-amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4- dimetyl-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny 410 [M - i]
165 o 3 Vvó' ch· T I ž=° H [2-(2-kyano-etylamino)-etyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro- . indol-(3Z)-ylidénmetýl]-2,4- dimetyl-l//-pyro 1-3-karboxyl ovej kyseliny 394 [M - H
166 o bJ HO-~ Y H r—<Ch CM’ [i Γ >=o H [2-(2-kyano-etylamino)-etyl]-amid 2,4-dimetyl-5-[2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-l//-pyrol3-karboxylovej kyseliny 376 [M -1]
167 H h 5 O Hiy/~s— x\z%X H * 0 i /=° O-N H [2-(2-kyano-etylamino)-etyl]-amid 5-[5-kyano-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4- di mety l-l//-pyrol-3-karboxylo vej kyseliny 401 [M - i]
168 0 d O N--Z ^yJ'íP' /X H F trifluóracetát-4-[2-({5-[5-chlór-2- oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-lH- pyrol-3-karbonyl }-amino)-etyl]-2oxo-piperazín-l-ium; 440 [M -1]
168 ° O'CHl /Λ H Λ N CHJ fv^<Lh T T >=° ^R [2-(4-metyl-piperazin-l-yl)-etyl]amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny 424 [M -1]
169 o r'N·^ h.cY-/n--n^ TV s < N CH, 0.^7' H T L ^=° H [2-(4-metyl-piperazin-l-yl)-etyl]amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl- l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 440 [M -1]
170 0 h,c^Ln^n^J Jt 1 H K CH> T L /=o H [2-(4-metyl-piperazí n-l -yl)-etyl]amid 5-[5-bróm-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l/ŕ-pyrol-3karboxylovej kyseliny 484 [M -1] 486 [M - i]
171 O f~N-CH> TV H N CH, H y i>=o H [2-(4-metyl-piperazin- l-yl)-etyl]amid 2,4-dimetyl-5-[5-bróm-2-oxo1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny 406 [M - H
172 T O T'NH “·γΛ~^·”·. R CH· í jŕ>=o H [2-(3,5-dimetyl-piperazin-l -yl)etyl]-amid 2,4-dimetyl-5-[2-oxo1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-l H-pyrol-3karboxylovej kyseliny 422 [M + 1]
173 £> 0 T^NH H,C <A M N yv b ch> £ N CM» F .^7' H T l>=o H [2-(3,5-dimetyl-piperazín-1 -yl)etyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-1,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3karboxylovej kyseliny 438 [M - Π
174 0 tt %. H ’ CH‘ P ]>=o [2-(3,5-dimetyl-piperazin-l -yl)etyl]-amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl- l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 456 [M + i]
175 1 A* í? r ľM Kí n CH> in N CH, M IX>=o H [2-(3,5-dimetyl-piperazin-l -yl)etyl]-amid 5-[5-bróm-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 498 [M -1] 500 [M -1]
176 0 /~·ΝΖ \ «λ A-n— <A'CH> R ä~CM’ ( T ^=° H [3-(4-mety 1-piperazin-l -yl)propyl]-amid 2,4-dimetyl-5-[2oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)ylidénmetyl]-l //-pyrol-3karboxylovej kyseliny 422 [M + 1]
.177 - Ά'“, ttCH· 11 >=° [3-(4-metyl-piperazin-l-yl)propyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-17/-pyrol-3karboxylovej kyseliny 438 [M -1]
178 0 /~N M H,C K N- <^N'CH, X~ť K °VvO CH> Ti T >=o . H [3-(4-metyl-piperazin-l-yl)propyl]-amid 5-[5-chlór-2-oxo-l ,2dihy dro-indol-(3 Z)-y lidénmety 1]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 454 [M -1]
179 O y—N> H1C<yN'CH, ^^/ΓεΗ· y L /=o [3-(4-mety 1-piperazin-l -y 1)propyl]-amid 5-[5-bróm-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 498 [M - i] 500 [M -1]
180 rfO o N-Z ’Ύ/κ' rrCo” CM> K [2-(4-benzyl-piperazin-l-yl)-etyl]amid 2,4-dimetyl-5-[2-oxo-1,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny 482 [M -1]
181 o m-y [2-(4-benzyl-piperazin-l -yl)-etyl]amid 5-[5-fluór-2-oxo-1,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4dimetyl-lŕ/-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny 500 [M -1]
182 cf& o N—< [2-(4-benzyl-piperazin-l -yl)-etyl]amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl- l/í-pyrol-3karboxylovej kyseliny 517 [M -1]
183 rf® O H~y Μ\-Λ-[Γ^ M CM> yZľ/®0 [2-(4-benzyl-piperazin-l -yl)-etyl]amid 5-[5-bróm-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl - l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny 560 [M - Π 562 [M -1]
184 y»i O Ι^'Ν'^ΊΤ0 .C-x-Tn^N/I 0 x. H a CM· í 70=·° (3-pyrolidin-l-yl-2-ón)-amid 5-[5chlór-2-οχο-1,2-dihydro-indol(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny 480 [M + 1]
185 o 0 f^N M1C N $L M CH' XXf0 cf.co.h H trinuóracetát-4-[2-({5-[5-chlór-2- oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-17/- pyrol-3-karbonyl}-amino)-etyl]-2- oxo-piperazín-l-ium; 440 [M -1]
186 n ° X«—ú Ä N CH. Clx/xJ^ H T L z=° H (3-pyrolidin-l-yl-2-ón)-amid 5-[5chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny
187 rvr->° /ΤοΗ, L./ F-x-^T7 H t i r (3-pyrolidin-l-yl-2-ón)-amid 5-[5fluór-2-οχο-1,2-dihydro-indol(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny
188 Η.ΟχΑ^.,ν’ fv O H ch’ íl |)=o (3-pyrolidin-l -y 1-2-ón)-amid 5-[2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l H- pyrol-3-karboxylovej kyseliny
189 h c JL jO ' Μ/H N f/'n CH. c,'Tr^C_H CFjCO,H (2-pyridin-2-yl-etyl)-amid 5-[5chlór-2-oxo-l,2-dihydro-indol(3 Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny
190 /Τ'U CH. H T £ >=O CF,CO,H Trifluóroctová soľ (2-pyridin-2-yletyl)-amidu 5-[5-fluór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl- lZ/-pyrol-3karboxylovej kyseliny
191 _Zr CM* ° CIH H hydrochlorid (2-pyridin-2-yl-etyl)amidu 5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl- 1Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny
192 λϊ b n Br._/R CH’ MV=° OFjCOjH H Trifluóroctová soľ (2-pyridin-2-yletyl)-amidu 5-[5-bróm-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-l//-pyrol-3 karboxylovej kyseliny
193 Xí^N H (2-etylamino-etyl)-amid 5-[5-fluór2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyI- \Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny
194 0 NK V~B *γγ0' 041 H (2-amino-etyl)-amid 5-[5-fluór-2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)yl idén metyl]-2,4-dimetyl- \Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny
195 0 < JhCh 0 Fr^rC^K CM‘ ΐΛη >0 (2-dietyl-?/-oxo-amino-etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4- dimety 1-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3 karboxylovej kyseliny
196 OH FwVR CH’ (2-etyl-7V-hydroxy-amino-etyl)amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydroi ndol-( 3 Z)-y lidénme tyl]-2,4dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
197 ο í Η CH fyyQ Η (2-dietylamino-2-hydroxyetyl)amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
198 r Ón <* ν/ Η [2-etyl-2-(2-hydroxyetyl)-aminoetyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-1//-pyrol-3 karboxylovej kyseliny
199 πακΤ VvO t X >=° [2-etyl-2-(1 -hydroxyetyl)-aminoetyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]2,4-dimetyl-1//-pyrol-3karboxylovej kyseliny
200 2/ η ° NC ~ /7 Η <ν\· Η 1 /=ο \>-Ν Η (2-/V-acetylamino-etyl)-amid 5-[5kyano-2-oxo-1,2-dihydro-indol(3 Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl- \Hpyrol-3-karboxylovej kyseliny
201 0 Uf° (karboxymetyl)-amid 5-[5-fluór-2oxo-1,2-dihydro-i ndol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//pyrol-3-karboxylovej kyseliny
202 Ο Η πΟ-ρ^οΗ tTCK> 1 J >=ο \ŕ^N Η [2-(2-hydroxyetylamino)etyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]- l//-pyrol3-karboxylovej kyseliny
203 0 ϊΉ W>C' CM‘ CF,CO,H trifluóracetát (2-pyridin-2-yl-etyl)amidu 5-[5-kyano-2-oxo-1,2dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
204 o P A Λ- N N \ dd H o Br^, J/ S CH> T Γ /=° H trifluóracetát (3-pyrolidin-l -y 1-2ón-propyl)-amidu 5-[5-bróm-2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-l //-pyrol-3 karboxylovej kyseliny
Čísla zlúčenín zodpovedajú číslam príkladov v príkladoch uskutočnení vynálezu, t.j. syntéza zlúčeniny 1 v tabuľke 1 je opísaná v príklade 1. Zlúčeniny uvedené v tabuľke 1 majú iba ilustratívny charakter a nemajú nijako limitovať akýmkoľvek spôsobom rozsah predloženého vynálezu.
Výhodné uskutočnenia
Zatiaľ čo najširšia definícia bola podaná v podstate vynálezu, výhodné sú určité zlúčeniny všeobecného vzorca (I)uvedené nižšie.
(1) Výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R1, R3 a R4 sú atóm vodíka.
(2) Ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R1, R2 a R4 sú atóm vodíka.
(3) Ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R1, R2 a R3 sú atóm vodíka.
(4) Ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R2, R3 a R4 sú atóm vodíka.
(5) Ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R1, R2, R3 a R4 sú atóm vodíka.
(6) Ešte ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R5, R6 alebo substituent R7, výhodne substituent R5 * alebo
R6, výhodnejšie substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je
-NR(CH2)nR12, kde:
substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina, výhodne atóm vodíka alebo metyl;
n je 2, 3 alebo 4, výhodne 2 alebo 3; a substituent R12 je -NRI3R14, kde substituenty R13 a R14 sú nezávisle alkylová skupina, výhodnejšie nižšia nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo substituenty R13 a R14 spojené dohromady tvoria skupinu vybranú z -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- alebo
-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-, výhodne substituenty R13 a R14 sú nezávisle atóm vodíka, metyl, etyl alebo spojené dohromady tvoria morfolin-4-yl, pyrolidin-l-yl, piperazin-1-yl alebo 4-metylpiperazin-l-yl.
Výhodnejšie je substituent R5 alebo R6 v bode (6) vyššie 77-(2-dimetylamino-etyl-)-aminokarbonyl, /7-(2-etylamino-etyl)-jV-metylami- nokarbonyl, 7V-(3-di metyl amino-propyl)-aminokarbonyl, N-(2-diéty laminoetyl)aminokarbonyl, V-(3-etylamino-propyl)-aminokarbonyl, /7-(3-dietylamino-propyl)-aminokarbonyl, 3-pyrolidin-l -yl-propylami- nokarbonyl, 3-morfolin-4-yl-propyl-aminokarbonyl, 2-pyrolidin-l-yletylaminokarbonyl, 2-morfolin-4-yletylaminokarbonyl, 2-(4-metylpiperazin-1 -yl)-etylaminokarbonyl, 2-(4-metylpiperazin-1 -yl)propylami- nokarbonyl, 2-(3,5-dimety 1 piperazin-1-yl)etylaminokarbonyl alebo 2-(3,5-dimetylpiperazinl-yl)propylaminokarbonyl, ešte výhodnejšie /7-(2-dietylamino-etyl)aminokarbonyl alebo V-(2-etylamino-etyl)-amino-karbonyl.
(7) Ešte ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R5, R6 alebo R7 * *, výhodne substituenty R5 alebo R6, výhodnejšie substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13RI4T kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je alkylová skupina, výhodne nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, arylová, heteroarylová, heteroalicyklická skupina alebo karboxyskupina, výhodnejšie metyl, etyl, propyl alebo butyl substituovaný hydroxyskupinou, arylová skupina, heteroalicyklická skupina, napr. piperidin, piperazín, morfolín, atď., heteroarylová skupina alebo karboxyskupina. Ešte výhodnejšie v rámci tejto skupiny (7) je substituent R5 alebo R6 2-etoxykarbonylmetyl-aminokarbonyl, karboxymetylamino-karbonyl, 3-hydroxypropyl-aminokarbonyl, 2-hydroxy etyl am i nokarbonyl, 3-triazin-l -y 1-propylamino-karbonyl, triazin-1 -yletylaminokarbonyl, 4-hydroxy-fény 1 e tylaminokarbonyl, 3-imidazol-l -y 1-propyl-aminokarbonyl, pyr id i n-4-yl mety laminokarbonyl, 2-pyridin-2-yletylaminokarbonyl alebo 2-imidazol-l-yletyl am i nokarbonyl.
(8) Ešte ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituenty R5, R6 alebo R7, výhodne substituent R5 alebo R6, výhodnejšie substituent R6 je -COR9 10, kde substituent R10 je -NR1 ‘(CEhjnR12, kde:
substituent R11 je atóm vodíka alebo alkylová skupina, výhodne atóm vodíka alebo metyl;
n je 2, 3 alebo 4, výhodne 2 alebo 3; a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 spojené dohromady tvoria heterocyklus, výhodne a 5, 6 alebo 7 členný heterocyklus obsahujúci karbonylovú skupinu a 1 alebo 2 atómy dusíka. Výhodne substituent R5 alebo R6 je 2-(3-etoxykarbonylmetylpiperazin-1-yl)-etylaminokarbonyl, 2-(3-oxopiperazin-l-yl)-etylaminokarbonyl, 2-(imidazolidin1 -yl-2-ón)-etylaminokarbonyl, 2-(tetrahydropyrimidin-l-yl-2-ón)etylaminokarbonyl, 2-(2-oxopyrolidin-l-yl)etylamino'karbonyl, 3-(4-metylpiperazin-l-yl)-propylaminokarbonyl, 3-(3-etoxykarbonyl mety lp iperazin-1 -yl)propylaminokarbonyl, 3-(3-oxopiperazin-l -yl)propylaminokarbonyl, 3-(imidazolidin-l -yl-2-ón)propylaminokarbonyl, 3-(tetrahydropyrimidinl-yl-2-ón)-propylaminokarbonyl, 3-(2-oxopyrolidin-l-yl)propylaminokarbonyl, 2-(2-oxohomopiperidin-l-yl)-etylaminokarbonyl alebo 3-(2-oxohomopiperidin-l-yl)propylaminokarbonyl.
(9) Ešte ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R5, R6 alebo R7, výhodne substituent R5 alebo R6, výhodnejšie substituent R6 je-COR10, kde:
(a) substituent R10 je -NR1'(CHjjnR12, kde:
substituetn R11 je atóm vodíka alebo alkylová skupina, výhodne atóm vodíka alebo metyl;
n je 2, 3 alebo 4, výhodne 2 alebo 3; a substituent R12 je -NR13R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je kyanoalkyl alebo -NHCOR“, kde substituent R“ je alkylová skupina; alebo (b) substituent R10 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 spojené dohromady tvoria heterocyklus neobsahujúci karbonylovú skupinu v rámci kruhu. Výhodne substituent R5 alebo R6 je 2-(2-kyanoetylamino)-etylaminokarbonyl, 2-(acetylamino)-etylaminokarbonyl, morfolinokarbonyl, piperidin-1 -yl-karbonyl, 2-kyanometylamino-etylaminokarbonyl alebo piperidin-1 -ylkarbonyl.
(10) Ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NRI3R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina alebo -NRI8R19, kde substituenty R18 a R19 sú nezávisle atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina, výhodnejšie substituent R5 je 2-[(dietylamino)-2-hydroxyetylj-aminokarbonyl, 2-(?/-etyl-yV-2-hydroxyetylamino)-etylaminokarbonyl, karboxymetylaminokarbonyl, alebo 2-(2-hydroxyetylamino)etylaminokarbonyl.
(11) Ešte ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRI3R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina alebo -NRI8R19, kde substituenty R18 a R19 sú nezávisle atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina; výhodnejšie substituent R6 je [2-(dietylamino)-2-hydroxy]-etyl am i no karbonyl, 2-(?/-etyl-?/-2-hydroxyetyl-amino)-etylaminokarbonyl, karboxymetylaminokarbonyl alebo 2-(2-hydroxyetylamino)etylaminokarbonyl.
(12) Ešte ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je NR1 '(CEUKR12, kde substituent R12 je -N+(O)'NRi3R14 alebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a
R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, výhodne substituent R5 je 2-(N59
-hydroxy-yV-etylamino)-e tyl aminokarbonyl alebo 2-[N+(O)'(C2H5)2]etylaminokarbonyl.
(13) Ešte ďalšia výhodná skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je NR1 '(CtUKR12, kde substituent R12 je -N+(O)'NR13R14 alebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny, výhodne substituent R6 je 2-(N-hydroxy-jV-etylamino)-etyIaminokarbonyl alebo 2-[N+(O')(C2H5)2]-etylaminokarbonyl.
(14) Vo vyššie uvedených výhodných skupinách (6)-(13), pokiaľ substituent R5 je -COR10, potom výhodnejšia skupina zlúčenín je taká, kde:
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny, výhodne atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, rerc-butyl, izobutyl alebo n-butyl, výhodnejšie atóm vodíka alebo metyl; a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová alebo arylová skupina, výhodnejšie atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, izo alebo /erc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl alebo karboxyskupina, ešte výhodnejšie metyl, atóm vodíka alebo fenyl.
(15) Vo vyššie uvedených výhodných skupinách (6)-(13), pokiaľ substituent R5 je -COR10, potom ďalšia výhodnejšia skupina zlúčenín je taká, kde substituenty R6 a R7 spojené dohromady tvoria -(ΟΗ2)4-(16) Vo vyššie uvedených výhodných skupinách (6)-(13), pokiaľ substituent R6 je -COR10, potom výhodnejšia skupina zlúčenín je taká, kde:
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny, výhodne atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, /erc-butyl, izobutyl alebo π-butyl, výhodnejšie atóm vodíka alebo metyl; a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová alebo arylová skupina, výhodnejšie atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, n-izo alebo ŕerc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl alebo karboxyskupina, ešte výhodnejšie metyl, atóm vodíka alebo fenyl.
(17) V rámci vyššie uvedených výhodných skupín a výhodnejších skupín (6) (16) je ešte výhodnejšia skupina zlúčenín, taká, kde substituent R1 je atóm vodíka, alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová alebo arylová skupina, výhodne atóm vodíka, fenyl, 3,4-dimetoxy-fenylaminokarbonyl, 4-metoxy-3-chlórfenylaminokarbonyl, ešte výhodnejšie atóm vodíka alebo metyl, najvýhodnejšie atóm vodíka;
substituent R2 je kyanoskupina, atóm vodíka, halogén, nižšia alkoxyskupina, arylová skupina alebo S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je atóm vodíka, arylová alebo alkylová skupina, výhodne substituent R2 je atóm vodíka, chlór, bróm, fluór, metoxyskupina, etoxyskupina, fenyl, dimetylaminosulfonyl, 3-chlórfenylaminosulfonyl, karboxyskupina, metoxyskupina, aminosulfonyl, metylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-aminosulfonyl, dimetylaminosulfonyl, izopropylamino-sulfonyl, výhodnejšie atóm vodíka, fluór alebo bróm;
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15, NRI3C(O)R14, arylovej skupiny výhodne aryl prípadne substituovaný jedným alebo dvoma substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nižšej alkylovej skupiny, halogénu alebo nižšej alkoxyskupiny a heteroarylovej skupiny, výhodne heteroarylovej skupiny prípadne substituovanej jedným alebo dvoma substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nižšej alkylovej skupiny, halogénu alebo nižšej alkoxyskupiny; výhodne atóm vodíka, metoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl, 3,4-dichlórfenyl, 2-metoxy-5-izopropylfenyl, 4-n-butylfenyl, 3-izopropylfenyl, výhodnejšie atóm vodíka alebo fenyl; a substituent R4 je atóm vodíka.
(18) Ďalšia výhodnejšia skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde:
substituent R1 je atóm vodíka, alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová alebo arylová skupina, výhodne atóm vodíka, 3,4-dimetoxyfenylaminokarbonyl, 4-metoxy-3-chlórfenylaminokarbonyl, ešte výhodnejšie atóm vodíka alebo metyl, konkrétne atóm vodíka;
substituent R2 je kyanoskupina, atóm vodíka, halogén, nižšia alkoxyskupina, arylová skupina alebo S(O)2NRI3R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je atóm vodíka, arylová alebo alkylová skupina, výhodne substituent R2 je atóm vodíka, chlór, bróm, fluór, metoxyskupina, etoxyskupina, fenyl, dimetylaminosulfonyl, 3-chlórfenylaminosulfonyl, karboxyskupina, metoxyskupina-aminosulfonyl, metylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-aminosulfonyl, dimetylam'inosulfonyl, izopropylamino-sulfonyl, výhodnejšie atóm vodíka, fluór, alebo bróm;
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NRI3C(O)R14, arylovej skupiny, výhodne arylovej skupiny prípadne substituovanej jedným alebo dvoma substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nižšej alkylovej skupiny, halogénu alebo nižšej alkoxyskupiny a heteroarylovej skupiny, výhodne heteroarylovej skupiny prípadne substituovanej jedným alebo dvoma substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nižšej alkylovej skupiny, halogénu alebo nižšej alkoxyskupiny; výhodne atóm vodíka, metoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl, 3,4-dichlórfenyl, 2-metoxy-5-izopropylfenyl, 4-n-butylfenyl, 3-izopropylfenyl, výhodnejšie atóm vodíka alebo fenyl; a substituent R4 je atóm vodíka.
V rámci vyššie uvedenej výhodnej skupiny (18) je výhodnejšia skupina zlúčenín taká, kde :
substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je definovaný v podstate vynálezu, výhodne -NR1 ‘(CFhjnR12 alebo -NR13R14 definovaný v podstate vynálezu.
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny, výhodne atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, /erc-butyl, izobutyl alebo «-butyl, výhodnejšie atóm vodíka alebo metyl; a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová alebo arylová skupina, výhodnejšie atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, n-, izo alebo /erc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl alebo karboxyskupina, ešte výhodnejšie metyl, atóm vodíka alebo fenyl.
Vo vyššie uvedenej výhodnej skupine (18) je ďalšia výhodnejšia skupina zlúčenín taká, kde:
substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je definovaný v podstate vynálezu, výhodne -NR1 '(CfhjnR12 alebo -NR13R14 definovaný v podstate vynálezu.
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny, výhodne atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, Zerc-butyl, izobutyl alebo «-butyl, výhodnejšie atóm vodíka alebo metyl; a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová alebo arylová skupina, výhodnejšie atóm vodíka, metyl, etyl, izopropyl, «-, izo alebo Zerc-butyl, fenyl, ben63 zoyl, acetyl alebo karboxyskupina, ešte výhodnejšie metyl, atóm vodíka alebo fenyl.
(19) Ďalšia výhodnejšia skupina zlúčenín všeobecného vzorca (I) je taká, kde: substituenty R1 a R4 sú atóm vodíka;
substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15 a -S(O)2NR13R14;
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodí-. ka, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15, -S(O)2NRI3R14, arylovej skupiny a heteroarylovej skupiny;
substituent R5 je -C(O)R10;
substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nižšej alkylovej skupiny; a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny a -C(O)R17.
Ďalším výhodným uskutočnením podľa predloženého vynálezu je to, v ktorom zlúčenina majúca štruktúru opísanú v bode (15) je:
substituent R10 vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, nižšej alkoxyskupiny a -NR1 *(CH2)nR12, kde n je 2 alebo 3;
substituent R11 vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nižšej alkylovej skupiny; a substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z arylovej skupiny a -NRI3R14
Ďalším výhodným uskutočnením podľa predloženého vynálezu je to, v ktorom zlúčenina majúca štruktúru opísanú v predošlých dvoch odstavcoch obsahuje substituenty R13 a R14 nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny a spojené substituenty, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- alebo
-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(20) Ďalšie výhodné uskutočnenie podľa predloženého vynálezu je zlúčenina, v ktorej:
substituent R1 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny, -(CH2)r 16 a -C(O)NR8R9;
substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, arylovej skupiny a -S(O)2NRI3R14;
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny, nižšej alkoxyskupiny, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 je atóm vodíka;
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nižšej alkylovej skupiny;
substituent R6 je -C(O)R10;
i n substituent R je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej a arylovej skupiny;
substituent R16 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 alebo 3.
Ďalším výhodným uskutočnením podľa predloženého vynálezu je zlúčenina majúca štruktúru opísanú v priamo predchádzajúcom odseku, v ktorej substituent R3 je arylová skupina prípadne substituovaná jednou alebo viacerými skupinami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z nižšej alkylovej skupiny, nižšej alkoxyskupiny a halogénu.
(21) Taktiež ďalšie výhodné uskutočnenie podľa predloženého vynálezu je zlúčenina, v ktorej:
substituent R1 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny, -(CFh)/6 a -C(O)NR8R9;
substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, arylovej skupiny a -S(O)2NR13R14;
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny, nižšej alkoxyskupiny, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 je atóm vodíka ;
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nižšej alkylovej skupiny;
substituent R6 je -C(O)R10;
substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej a arylovej skupiny;
substituent R16 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 alebo 3, substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, nižšej alkoxyskupiny, -NR13R14 a -NR1’(CH2)nR12, kde n je 1, 2 alebo 3, substituent R11 je atóm vodíka a substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15, heteroarylovej skupiny a -nr13r14.
(22) Ďalším výhodným uskutočnením podľa predloženého vynálezu je zlúčenina majúca štruktúru opísanú v priamo predchádzajúcom odseku, v ktorej substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a spojených substituentov, -(CH2)4-, -(CH2)s-, -(CH2)2-O-(CH2)2-, alebo
-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(23) Ďalšie výhodné uskutočnenie podľa predloženého vynálezu je zlúčenina, v ktorej:
substituent R1 je -C(O)NR8R9, kde substituent R8 je atóm vodíka a substituent R9 je arylová skupina prípadne substituovaná jednou alebo viacerými skupinami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, hydroxyskupiny a nižšej alkoxyskupiny;
substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, arylovej skupiny a -S(O)2NR13R14;
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny, nižšej alkoxyskupiny, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 je atóm vodíka;
substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nižšej alkylovej skupiny;
substituent R6 je -C(O)R10;
substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej a arylovej skupiny;
substituent R16 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 alebo 3, (24) Ďalšie výhodné uskutočnenie podľa predloženého vynálezu je zlúčenina, v ktorej:
substituent R1 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nižšej alkylovej skupiny;
substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, nižšej alkoxyskupiny, arylovej skupiny, -C(O)R15 a -S(O)2NRI3R14;
substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 je atóm vodíka; substituent R5 je -C(O)R10; a substituenty R6 a R7 spojené dohromady tvoria skupinu -(CH2)4-.
V zlúčenine majúcej štruktúru opísanú v práve predošlom odstavci je výhodné uskutočnenie také, kde substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -NRI3R14 a -NH(CH2)nNR13R14, kde n je 2 alebo 3.
Ďalším výhodným uskutočnením podľa predloženého vynálezu je to, v ktorom zlúčenina majúca štruktúru opísanú v predošlých dvoch odstavcoch obsahuje substituenty R13 a R14 nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkylovej skupiny a spojených substituentov, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- alebo
-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
Detailný opis
PK, ktorých katalytická účinnosť je modulovaná zlúčeninami podľa predloženého vynálezu, zahrnujú tyrozínkinázy, ktoré môžu byť rozdelené na dva typy, receptorové tyrozínkinázy (RTK) a vedú k vytvoreniu komplexov so spektrom cytoplazmatických signálnych molekúl, ktoré uľahčujú adekvátnu bunkovú odpoveď (napríklad bunkové delenie, metabolické účinky na extracelulárne mikroprostredie), viď Schlessinger a Ullrich, 1992, Neurón 9: 303 - 391.
Dokázalo sa, že fosforylačné miesta tyrozínu na receptoroch rastového faktoru fungujú ako vysoko afinitné väzbová miesta pre domény SH2 (src homológia) na signálnych molekulách. Fantl et al., 1992, Celí 69: 413 - 423; Songyang et al., 1994, Mol.Celí. Biol. 14: 2777 - 2785; Songyang et al., 1993, Celí T2\ 767 - 778; a Koch et al., 1991, Science 252: 668 - 678. Identifikovalo sa niekoľko intracelulárnych substrátových proteínov, ktoré sa asociujú s receptorovými tyrozínkinázami (RTK). Môžu byť rozdelené do dvoch hlavných skupín: (1) substráty, ktoré majú katalytickú doménu, a (2) substráty, ktoré takú doménu nemajú, ale slúžia ako adaptéry a asociujú sa s katalytický aktívnymi molekulami (Songyang et al., 1993, Celí 72: 767 - 778). Špecificita interakcií medzi receptormi a doménami SH2 ich substrátov je určovaná aminokyselinovými zvyškami, bezprostredne obklopujúcimi fosforylovaný tyrozínový zvyšok. Rozdiely vo väzbových afinitách medzi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvenciami obklopujúcimi fosfotyrozínové zvyšky na konkrétnych receptoroch korelujú s pozorovanými rozdielmi v ich substrátových fosforylačných profiloch (Songyang et al., 1993, Celí 72: 767 - 778). Z pozorovaní vyplýva, že funkcia každej receptorovej tyrozínkinázy je určovaná nie len profilom jej expresie a dostupnosťou ligandov, ale aj radom „downstreamových“ transdukčných dráh signálu, ktoré sú aktivované konkrétnym receptorom. Fosforylácia teda poskytuje významný regulačný stupeň, ktorý určuje selektivitu signálnych dráh vyvolávaných konkrétnymi receptormi rastového faktoru, ako aj receptory diferenciačného faktoru.
STK, primárne cytozólové, ovplyvňujú vnútornú biochémiu bunky často ako zavádzaciu odpoveď na výskyt PTK. STK sa podieľajú na signálnom procese, ktorý iniciuje syntézu DNA a následnú mitózu, ktorá vedie k bunkovej proliferácii.
PK signálna transdukcia má teda za následok, medzi ďalšími odpoveďami, bunkovú proliferáciu, diferenciáciu, rast a metabolizmus. Abnormálna bun69 ková proliferácia môže viesť k širokému spektru porúch a ochorení, vrátane vývoja neoplázie, napr. karcinómu, sarkómu, glioblastómu a hemangiómu, porúch, napr. leukémie, psoriázy, artériosklerózy, artritídy a diabetickej retinopatie a ďalších porúch súvisiacich s nekontrolovanou angiogenézou a/alebo vaskulogenézou.
Presné pochopenie mechanizmu, ktorým zlúčeniny podľa predloženého vynálezu inhibujú PK, nie je treba poznať na využívanie predloženého vynálezu. Avšak predpokladá sa, aj keď to neznamená obmedzenie na určitý konkrétny mechanizmus alebo teóriu, že tieto zlúčeniny interagujú s aminokyselinami v katalytickej oblasti PK. PK majú typicky bilobátovú štruktúru, kde ATP sa zrejme viaže v štrbine medzi dvoma lalokmi v oblasti, v ktorej sú aminokyseliny medzi PK konzervatívne. Ďalej sa predpokladá, že inhibítory PK sa viažu nekovalentnými interakciami, napr. vodíkovou väzbou, van der Waalsovými silami a iónovými interakciami v rovnakej všeobecnej oblasti ako sa vyššie spomínaný ATP viaže na PK, Konkrétnejšie sa dá povedať, že 2-indolinónová zložka zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa viaže vo všeobecnej medzere normálne obsadenej adenínovým kruhom ATP. Špecifičnosť konkrétnej molekuly pre príslušné PK môže potom vznikať ako výsledok ďalších interakcií medzi rôznymi substituentami na 2-indolinónovom jadre a aminokyselinovými doménami špecifickými voči konkrétnym PK. Rôzne substituenty indolinónu teda môžu prispievať k preferenčnej väzbe na konkrétne PK. Možnosť výberu zlúčeniny, ktorá bude aktívna v rôznych väzbových miestach ATP (alebo iného nukleotidu), umožňuje, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú použiteľné na zacielenie akéhokoľvek proteínu na také miesto. Zlúčeniny uvedené v predloženom vynáleze teda sú použiteľné pri in vitro testoch s týmito proteínmi a tiež vykazujú in vivo terapeutické účinky vplyvom interakcií s takými proteínmi.
Ďalej poskytujú zlúčeniny podľa predloženého vynálezu terapeutický spôsob ošetrenia rôznych druhov pevných nádorov, vrátane, ale nie je to na ne, karcinómov, sarkómov, vrátane Kaposiho sarkómu, erytroblastómu, glioblastómu, meningiómu, astrocytómu, melanómu a myoblastómu. Ošetrenie alebo prevencia nepevných nádorov, napr. leukémia, tiež spadá do predloženého vynále70 zu. Indikácie môžu zahrnovať, ale bez obmedzenia, rakoviny mozgu, rakoviny močového mechúra, ovariálne rakoviny, rakoviny žalúdku, rakoviny pankreasu, rakoviny hrubého čreva, rakoviny krvi, rakoviny pľúc a rakoviny kostí.
Dalšie príklady typov porúch súvisiacich s neprimeranou aktivitou PK, kde môžu byť zlúčeniny podľa predloženého vynálezu použiteľné pri prevencii, ošetrení a štúdiu, zahrnujú, ale bez obmedzenia, bunkové proliferatívne poruchy, fibrotické poruchy a metabolické poruchy.
Bunkové proliferatívne poruchy, u ktorých je možná prevencia, ošetrenie alebo ďalšia štúdia podľa predloženého vynálezu zahrnujú rakovinu, proliferatívne poruchy krvných ciev a proliferatívne poruchy mezangiálnych buniek.
Proliferatívne poruchy krvných ciev sa týkajú porúch súvisiacich s abnormálnou vaskulogenézou (tvorba krvných ciev) a angiogenézou (šírenie krvných ciev). Zatiaľ čo vaskulogenéza a angiogenéza hrajú dôležitú úlohu pri rôznych normálnych fyziologických procesoch, napr. vývoji embrya, tvorby žltého telieska, hojení rán a regenerácie orgánu, môžu tieto poruchy hrať kľúčovú úlohu pri vývoji rakoviny, a tým viesť k tvorbe nových kapilár potrebných na udržanie aktivity nádoru. Dalšie príklady proliferatívnych porúch krvných ciev zahrnujú artritídu, kde nové kapilárne krvné cievy napádajú kĺby a ničia chrupavku, a očné ochorenie ako napr. diabetickú retinopatiu, kde nové kapiláry na sietnici napádajú sklovec, spôsobujú krvácanie a slepotu.
Zistilo sa, že dve štruktúrne príbuzné RTK viažu VEGF s vysokou afinitou: receptor tyrozínu 1 typu fms (fit-1) (Shibuya et al., Oncogene 5: 519 524,1990; DeVries et al. Science 255; 989 - 991,1992) a receptor KDR/FLK-1 tiež známy ako VEGF-R2. Publikovalo sa, že rastový faktor vaskulárnych endotelových buniek je špecifický mitogén endoteliálnych buniek s in vitro promotornou aktivitou k rastu endoteliálnych buniek. Ferara & Henzel, 1989, Biochein. Biophys. Res. Comtn., 161: 851 - 858; Vaisman et al., 1990, J. Biol. Chem., 265: 19461 - 19566. Údaje uvedené v prihláške vynálezu U.S. č. 08/193,829, 08/038,596 a 07/975,750, dôrazne poukazujú na to, že VEGF nie je zodpovedný iba za proliferáciu endoteliálnych buniek, ale tiež za prvotnú reguláciu normálnych a patologických angiogenézii. Všeobecne viď Klagsburn &
Soker, 1993, Curent Biology, 3(10) 699 - 702; Houck, et al., 1992, J. Biol. Chem., 267: 26031 - 26037.
Normálna vaskulogenéza a angiogenéza hrá dôležitú úlohu pri rôznych fyziologických procesoch, napr. embryonálnym vývoji, hojení rán, regenerácii orgánu a ženských reproduktívnych procesoch, napr. vývoji folikúl v žltom teliesku počas ovulácie a rastu placenty počas tehotenstva. Folkman & Shing, 1992, J. Biological Chem., 267 (16):10931 - 34. Nekontrolovateľná vaskulogenéza a/alebo angiogenéza býva spojená s ochoreniami, napr. s cukrovkou, ako aj s malignými pevnými nádormi, ktoré sú na vaskularizácii závislé z hľadiska rastu. Klagsburn & Soker, 1993, Curent Biology, 3(10) 699 - 702; Folkham, 1991, J. Natl. Cancer. Inst., 82: 4-6; Weidner, et al., 1991, New Engl. J. Med., 324: 1 - 5.
Predpokladaná úloha VEGF pri proliferácii a migrácii endoteliálnych buniek počas angiogenézy a vaskulogenézy indikuje dôležitú úlohu receptora KDR/FLK-1 pri týchto procesoch. Ochorenie, napr. diabetes mellitus (Folkman, 198, in Xlth Congress of Thrombosis and Haemostasis (Verstraeta, et al., eds.), pp. 583 - 596. Leuven University Press, Leuven) a artritída, ako aj rast malígneho nádoru, môžu vyplývať z nekontrolovateľnej angiogenézy. Viď napr. Folkman, 1971, N. Engl. J. Med., 285: 1 182 - 1 186. Receptory, na ktoré sa VEGF špecificky viažu, sú dôležité a účinné ciele regulácie a modulácie vaskulogenézy a/alebo angiogenézy a rôznych závažných ochorení, ktoré zahrnujú abnormálny bunkových rast spôsobený týmito procesmi. Plowman, et al., 1994, DN&P, 7(6):334 - 339. Detailnejšie hrá receptor pre KDR/FLK-1 vysoko špecifickú úlohu pri neovaskularizácii vytvárajúci vybraný cieľ pre terapeutické prístupy k ošetreniu rakoviny a ďalších ochorení zahrnujúcich nekontrolovateľnú tvorbu krvných ciev.
Predložený vynález teda poskytuje zlúčeniny schopné regulácie a/alebo modulácie tyrozínkinázovej transdukcie signálu, vrátane transdukcie signálu receptora KDR/FLK-1 za účelom inhibície alebo podpory angiogenézy a/alebo vaskulogenézy, tzn. zlúčeniny inhibujú, zabraňujú alebo interferujú so signálom transdukovaným KDR/FLK-1 za predpokladu, že je aktivovaný ligandom napr. VEGF. Aj keď sa predpokladá, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu pôsobia na receptor alebo ďalší komponent spoločne s transdukčnou signálnou drahou tyrozínkinázy, môžu tiež pôsobiť priamo na nádorové bunky vznikajúce v dôsledku nekontrolovateľnej angiogenézy.
Aj keď názvoslovie ľudských a myších náprotivkov generického receptoru „flk-I“ je rozdielne, v mnohých ohľadoch sú zameniteľné. Myší receptor, Flk-1, a jeho ľudský náprotivok, KDR, majú sekvenčnú homológiu z 93,4% v intracelulárnej doméne. Myší Flk-1 sa tiež viaže na ľudský receptor VEGF s rovnakou afinitou ako myšia VEGF, a teda je aktivovaný ligandom odvodeným od ktorékoľvek druhu. Millauer et al., 1993, Celí, 72: 835 - 846; Quinn et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 90: 7533 - 7537. FLK-1 sa tiež asociuje a následne tyrozín fosforyluje ľudské substráty RTK (napr. PLC-γ alebo p85), pokiaľ sú koexprimované v bunkách 293 (ľudské embryonálne obličkové fibroblasty).
Preto modely, ktoré sa opierajú o receptor FLK-1, sú priamo aplikovateľné na pochopenie funkcie receptoru KDR. Napríklad použitie myšieho receptora FLK-1 v spôsoboch, ktoré identifikujú zlúčeniny, ktoré regulujú myšiu dráhu signálnej transdukcie, sú priamo aplikovateľné na identifikáciu zlúčenín, ktoré môžu byť používané na reguláciu ľudskej dráhy transdukcie signálu, tzn. regulujú aktivitu spojenú s receptorom KDR. Chemické zlúčeniny identifikované ako inhibítory KDR/FLK-1 in vitro teda môžu byť potvrdené na vhodných in vivo modeloch. Myšie aj potkanie in vivo zvieracie modely boli potvrdené ako excelentné spôsoby skúmania klinickej účinnosti agens pôsobiacich na KDRFLK-1 indukovanú dráhu transdukcie signálu.
Predložený vynález teda poskytuje zlúčeniny, ktoré regulujú, modulujú a/alebo inhibujú vaskulogenézu a/alebo angiogenézu ovplyvnením enzymatickej aktivity receptora KDR/FLK-1 a interferencie so signálom transdukovaným KDR/FLK-1. Predložený vynález teda poskytuje terapeutický prístup k ošetreniu mnohých druhov pevných nádorov, vrátane, ale nie je to nijako limitované, glioblastómu, melanómu a Kaposiho sarkómu, a karcinómu vaječníku, pľúc, prsníka, prostaty, pankreasu, hrubého čreva a epidermoidného karcinómu. Navyše z dostupných údajov je možné povedať, že podanie zlúčenín, ktoré inhibujú dráhu transdukcie signálu sprostredkovanú KDR/Flk-1, môže byť tiež používané pri ošetrení hemangiómu, restenózy a diabetickej retinopatie.
Ďalej ešte sa tento vynález týka inhibície vaskulogenézy a angiogenézy ďalšími dráhami sprostredkovanými receptorom, vrátane dráhy zahrnujúcej receptor flt-1.
Transdukcia signálu sprostredkovaná receptorovou tyrozínkinázou je pritom zahájená extracelulárnou interakciou so špecifickým rastovým faktorom (ligandom), po ktorej typicky nasleduje dimerizácia receptora, tranzitná stimulácia vnútornej aktivity proteínovej tyrozínkinázy a autofosforylácie. Vytvoria sa tak väzbové miesta pre molekuly intracelulárnej signálnej transdukcie a vedú k vytvoreniu komplexov so spektrom cytoplazmatických signálnych molekúl, ktoré uľahčujú adekvátnu bunkovú odpoveď (napríklad bunkové delenie, diferenciácia, metabolické efekty, zmeny extracelulárneho mikroprostredia), viď Schlessinger a Ullrich, 1992, Neurón 9: 1 - 20.
Blízka homológia intracelulárnych oblastí KDR/FLK-1 s receptorom PDGF-β (50,3% homológie) a/alebo príbuzným receptorom flk-1 ukazuje na indukciu dráhy transdukcie signálu. Napríklad bolo pre receptor PDGF-β publikované, že členovia rodiny src (Twamley et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 : 7696 - 7700), fosfatidylinozitol-3'-kináza (Hu et al., 1992, Mol. Celí. Biol., 12 : 981 - 990), fosfolipáza cy (Kashishian & Cooper, 1993, Mol. Celí. Biol., 4 : 49 - 51), ras-GTPázu-aktivujúci proteín, (Kashishian et al., 1992, EMBO J., 1 1 : 1373 - 1382), PTP-ID/syp (Kazlauskas et al., 1993, Proc: Natl. Acad. Sci. USA, 10 90 : 6939 - 6943), Grb2 (Arvidsson et al., 1994, Mol. Celí. Biol., 14: 6715 - 6726) a adaptérové molekuly Shc a Nck (Nishimura et al., 1993, Mol. Celí. Biol., 13: 6889 - 6896) sa viažu na oblasti zahrnujúce rôzne autofosforylačné miesta. Všeobecnejšie viď Claesson-Welsh, 1994, Prog. Growth Factor Res., 5:37 - 54. Teda pravdepodobne dráhy transdukcie signálu aktivované KDR/FLK-1 zahrnujú dráhu ras (Rozakis et al., 1992, Náture, 360 : 689 - 692), PI-3'-kinázu, dráhy sprostredkované src a plcy. Každá z týchto dráh môže hrať kruciálnu úlohu pri angiogénnom a/alebo vaskulogénnom účinku KDR/FLK-1 v endoteliálnych bunkách. Teda sa ďalší aspekt predloženého vy74 nálezu týka použitia tu opísaných organických zlúčenín na moduláciu angiogenézy a vaskulogenézy, pretože tieto procesy sú riadené týmito dráhami.
Naopak sú zahrnuté aj poruchy súvisiace so zmrštením, kontrakciou alebo zavieraním krvných ciev, ako je restenóza, a môžu byť ošetrované alebo môže byť im zabránené spôsobmi podľa predloženého vynálezu.
Fibrotické poruchy sa týkajú abnormálnej tvorby extracelulárnych matríc. Príklady fibrotických porúch zahrnujú hepatickú cirhózu a proliferatívne poruchy mesangiálnych buniek. Hepatická cirhóza je charakterizovaná prírastkom konstituentov extracelulárnej matrice, čo vedie k tvorbe hepatických jaziev. Zväčšená extracelulárna matrica majúca za následok hepatické jazvy môže byť tiež spôsobená vírusovou infekciou, napr. hepatitídou. Zdá sa, že pri hepatickej cirhóze hrajú hlavnú úlohu lipocyty. Ďalšie implikované fibrotické poruchy zahrnujú aterosklerózu.
Proliferatívne poruchy mesangiálnych buniek sa vzťahujú k poruchám spôsobeným abnormálnou proliferáciou mesangiálnych buniek. Mesangiálne proliferatívne poruchy zahrnujú rôzne ľudské renálne ochorenia, napr. glómerulonefritídu, diabetickú nefropatiu a malígnu nefrosklerózu, ako aj poruchy ako trombotické mikroangiopatické syndrómy, odhojovanie transplantátu a glomerulopatiu. RTK PDGFR sa podieľajú na udržaní proliferácie mesangiálnych buniek. Floge et al., 1993, Kidney International 43:47S - 54S.
Mnoho druhov rakovín zahrnuje poruchy proliferácie buniek a, ako je uvedené vyššie, súvisí PK s bunkovými proliferatívnymi poruchami. Teda nie je prekvapujúce, že PK, napr. členovia rodiny RTK, súvisia so vznikom rakoviny. Niektoré z týchto receptorov, ako EGFR (Tuzi et al., 1991, Br. J. Cancer 63 : 227-233, Torp et al., 1992, APMIS 100 : 713 - 719) HER2/neu (Slamon et al., 1989, Science 244 : 707 - 712) a PDGF-R (Kumabe et al., 1992, Oncogene, 7 : 627 - 633) sú pri mnohých nádoroch exprimované v nadmernom množstve a/alebo perzistentne aktivované autokrínnymi slučkami. Pri najbežnejších a najvážnejších rakovinách bola totiž zistená nadmerná expresia týchto receptorov (Akbasak and Suner-Akbasak et al., 1992, J. Neurol. Sci., 111 : 119 - 133, Dickson et al., 1992, Cancer Treatment Res. 61 : 249 - 273, Korc et al., 1992,
J. Clin. Invest. 90 : 1352 - 1360) a autokrínnej slučky (Lee and Donoghue, 1992, J. Celí. Biol., 1 18 : 1057 - 1070, Korc et al., supra, Akbasak and SunerAkbasak et al., supra). Napríklad EGFR súvisí s karcinómom skvamóznych buniek, astrocytomom, glioblastómom, rakovinou hlavy a krku, rakovinou pľúc a rakovinou močového mechúra. HER2 súvisí s rakovinou prsníka, ovariálnou rakovinou, rakovinou žalúdku, rakovinou pľúc, rakovinou slinivky a močového mechúra. PDGFR súvisí s glioblastómom a melanómom, ako aj rakovinou pľúc, ovariálnou rakovinou a rakovinou prostaty. RTK c-met tiež súvisí s tvorbou malígneho nádoru. Napríklad c-met súvisí, medzi inými rakovinami, tiež s kolorektálnymi, tyreoidálnymi, pankreatickými, gastrickými a hepatocelulárnymi karcinómami a lymfómami. Navyše c-met je spojený tiež s leukémiou. Expresia génu c-met vo veľkom množstve bola tiež zistená u pacientov s Hodgkinsovou a Burkittsovou chorobou.
IGF-IR, okrem toho, že sa podieľa na nutričnej podpore a cukrovke 2.typu, súvisí tiež s niekoľkými typmi rakovín. Napríklad IGF-I sa tiež podieľa ako autokrínny rastový stimulátor na niekoľkých typoch nádorov, napr. karcinómu buniek pri ľudskej rakovine prsníka (Arteaga et al., 1989, J. Clin. Invest. 84 : 141 8 - 1423) a malobunkového nádoru pľúc (Macauley et al., 1990, Cancer Res., 50 : 251 1 - 2517). IGF-I, zatiaľ čo sa celkovo podieľa na normálnom raste a diferenciácii nervového systému, predpokladá sa, že je autokrínnym stimulátorom ľudského gliómu. Sandberg-Nordqvist et al., 1993, Cancer Res. 53 : 2475 - 2478. Význam IGF-IR a jeho ligandov pri proliferácii buniek je ďalej podporený faktom, že mnoho typov buniek v kultúre (fibroblasty, epiteliálne bunky, bunky hladkého svalstva, T-lymfocyty, myeloidné bunky, chondrocyty a osteoblasty (kmeňové bunky kostnej drene)) sú stimulované k rastu práve IGF-I. Goldring and Goldring, 1991, Eukaryotic Gene Expression, 1 : 301 - 326. Baserga a Coppola sa domnievajú, že IGF-IR hrá najdôležitejšiu úlohu pri mechanizme transformácie a ako taký by mohol byť preferovaným cieľom pre terapeutické intervencie širokého spektra ľudských zhubných bujnení. Baserga, 1995, Cancer Res., 55 : 249 - 252, Baserga, 1994, Celí 79 : 927 - 930, Coppola et al., 1994, Mol. Celí. Biol., 14 : 4588 - 4595.
STK sa podieľajú na mnohých typoch rakoviny, vrátane, a to najmä, rakoviny prsníka (Cance, et al., Int. J. Cancer, 54 : 571 - 77 (1993)).
Vzťah medzi abnormálnou aktivitou PK a ochorením nie je obmedzený len na rakovinu. Napríklad RTK súvisí s ochoreniami, napr. psoriázou, diabetes mellitus, endometriózou, angiogenézou, vznikom ateromatózneho plaku, Alzheimerovou chorobou, restenózou, von Hippelovým-Lindauovým ochorením, epidermálnou hyperproliferáciou, neurodegeneratívnymi ochoreniami, makulárnou degeneráciou spojenou s vekom a hemangiómami. Napríklad EGFR bol zistený pri korneálnym a dermálnym hojení rán. Vady v inzulín-R a IGF-1R sú indikované pri diabetes mellitus 2.typu. Plnejšiu koreláciu medzi špecifickými RTK a ich terapeutickými indikáciami je možné nájsť v Plowman et al., 1994, DN&P 7: 334 - 339.
Ako je uvedené vyššie, nie len RTK, ale aj CTK, vrátane, ale nie je to nijako limitované, src, abl, fps, yes, fyn, lyn, lck, blk, hck, fgr a yrk (Bolen et al., 1992, FASEB J., 6 : 3403 - 3409) sa podieľajú na proliferatívnej a metabolickej dráhe transdukcie signálu, a je možné teda očakávať, a bolo to tiež tak uvedené, že sa podieľajú na mnohých poruchách sprostredkovaných PTK, na ktoré je predložený vynález zameraný. Napríklad sa zistilo, že mutovaný src (v-src) je onkoproteín (pp60v'yc) u kurčiat. Navyše jeho bunkový homológ, proto-onkogén pp60c‘src prenáša onkogénne signály mnohých receptorov. Nadmerná expresia EGFR alebo HER2/neu pri nádoroch vedie k konštitutívnej aktivácii pp60c’src, čo je charakteristické pre malígne bunky, ale pre normálne bunky nie (úplne chýba). Na druhú stranu myši s nedostatkom expresie c-src vykazujú osteopetrotický fenotyp, indikujúci kľúčový podiel c-src na funkciu osteoklastov a možnú účasť na príbuzných poruchách.
Podobne sa Zap70 podieľa na signalizácii T-buniek, ktoré sa podieľajú na autoimunitných poruchách.
STK súvisí so zápalom, autoimunitnou poruchou, imunoodpoveďami a hyperproliferatívnymi poruchami, ako je restenóza, fibróza, psoriáza, osteoartritída a reumatoidná artritída.
PK. sa tiež podieľajú na uhniezdení embrya. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu teda môžu poskytovať účinný spôsob prevencie takého uhniezdenia embrya, a teda byť použiteľné ako ochranný prostriedok proti počatiu. Ďalšie poruchy, ktoré môžu byť ošetrované alebo môže byť im zamedzené zlúčeninami podľa predloženého vynálezu, zahrnujú imunologické poruchy, napr. autoimunitné choroby, napr. autoimunitné ochorenie, AIDS a kardiovaskulárne poruchy, napr. ateroskleróza.
Konečne v súčasnej dobe existuje podozrenie, že RTK i CTK sa podieľajú na hyperimunitných poruchách.
Príklady účinkov mnohých názorných zlúčenín podľa predloženého vynálezu na niekoľko PTK je uvedené v tabuľke 2 nižšie. Prezentované zlúčeniny a údaje nemajú nijako limitovať rozsah vynálezu.
Dávky a farmaceutický prípravok
Zlúčenina podľa predloženého vynálezu alebo jej farmaceutický prijateľná soľ môžu byť ako také podávané ľudským pacientom alebo môžu byť podávané vo farmaceutických prípravkoch, v ktorých sú vyššie uvedené látky zmiešané s vhodnými nosičmi alebo excipientom(mi). Techniky prípravy a podanie liečiv môžu byť nájdené v „Remington's Pharmacological Sciences,“ Mack Publishing Co., Easton, PA., posledné vydanie.
Termín „podanie“, ako je používaný v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na podanie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli alebo farmaceutického prípravku obsahujúceho zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ podľa predloženého vynálezu do organizmu za účelom prevencie alebo ošetrenia porúch súvisiacich s PK.
Vhodné spôsoby podania zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, perorálne, rektálne, transmukózne alebo intestinálne podanie alebo intramuskulárne, subkutánne, intramedulárne, intratekálne, priame intraventrikulárne, intra78 venózne, intravitreálne, intraperitoneálne, intranazálne alebo intraokulárne injekcie. Výhodnými spôsobmi podania sú perorálne a parenterálne.
Alebo je možné podávať zlúčeninu skôr miestnym než systémovým spôsobom, napr. injekciou zlúčeniny priamo do miesta nádoru, často v depotnej alebo trvalo uvoľňujúcej sa formulácii.
Ďalej je možné liečivo podávať ako systém cieľovo špecifického podania, napr. v lipozóme potiahnutom protilátkou špecifickou na určitý nádor. Lipozómy budú zamerané a vychytávané nádorom.
Farmaceutické prípravky podľa predloženého vynálezu môžu byť vyrábané štandardným spôsobom, napr. štandardným miešaním, rozpustením, granuláciou, prípravou dražé, rozdrobovaním, emulgáciou, enkapsuláciou, zachytávaním alebo lyofilizáciou.
Farmaceutické prípravky na použitie podľa predloženého vynálezu tak môžu byť pripravené štandardným spôsobom za použitia jedného alebo viacerých fyziologicky prijateľných nosičov obsahujúcich excipienty a pomocné látky, ktoré uľahčujú spracovanie aktívnych zlúčenín do preparátov, ktoré môžu byť používané farmaceutickým spôsobom. Vlastná príprava je závislá na vybranom spôsobe podania.
Pre injekcie môžu byť zlúčeniny podľa predloženého vynálezu pripravené vo vodných roztokoch, výhodne vo fyziologicky kompatibilných pufroch, napr. Hanksov roztok, Ringerov roztok alebo pufry na báze fyziologického roztoku. Na transmukózne podanie sú vo formulácii používané tiež penetrátory, ktoré sú vhodné na prekonanie danej bariéry. Tieto penetrátory sú všeobecne známe.
Na perorálne podanie môžu byť zlúčeniny ľahko pripravené spojením aktívnych zlúčenín so štandardnými farmaceutický prijateľnými nosičmi. Tieto nosiče umožňujú pripraviť zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vo forme tabliet, pilúl, dražé, kapsúl, roztokov, gélov, sirupov, kašovitých zmesí, suspenzií, atd’., na perorálne požitie lieku pacientom, ktorý má byť ošetrovaný. Farmaceutické preparáty na perorálne použitie môžu byť pripravené spojením aktívnej zlúčeniny s pevným excipientom, prípadne rozomletím výslednej zrne79 si, a po pridaní vhodných pomocných látok, pokiaľ je treba, spracovaním zmesi granúl, čím je možné získať tablety alebo dražé. Vhodné excipienty sú najmä plnivá, napr. cukry, vrátane laktózy, sacharózy, manitolu alebo sorbitolu; celulózovej prípravky, napr. kukuričný škrob, pšeničný škrob, ryžový škrob, zemiakový škrob a ďalšie látky, napr. želatína, tragant, metyl-celulóza, hydroxypropylmetyl-celulóza, sodná soľ karboxymetylcelulózy a/alebo polyvinylpyrolidón (PVP). Pokiaľ je treba, môžu byť pridané prostriedky zaisťujúce rozpad tablety po požití, napr. zosietený polyvinylpyrolidón, agar alebo kyselina algínová alebo ich soli, napr·. alginát sodný.
Jadra dražé sú vybavené vhodnými povrchovými vrstvami. Na tento účel môžu byť používané koncentrované roztoky cukrov, ktoré môžu prípadne obsahovať arabskú gumu, mastenec, polyvinylpyrolidón, karbopólový gél, polyetylénglykol a/alebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodné organické rozpúšťadla alebo zmesi rozpúšťadiel. Organické farbivá alebo pigmenty môžu byť pridané do tabliet alebo poťahových vrstiev dražé na identifikáciu alebo charakterizáciu rozdielnych kombinácií dávok aktívnej zlúčeniny.
Farmaceutické preparáty, ktoré môžu byť používané perorálne, zahrnujú kapsule typu „push-fit“ vyrobené zo želatíny, ako aj mäkké, uzavreté kapsule vyrobené zo želatíny a zmäkčovadla, ako je glycerol alebo sorbitol. Kapsule typu „push-fit“ môžu obsahovať aktívne zložky v prímesi s fillermi, napr. laktózou, spojivami, napr. škrobmi, a/alebo lubrikantmi, napr. mastenec alebo stearát horečnatý, a prípadne stabilizátormi. V mäkkých kapsliach môžu byť aktívne zlúčeniny rozpustené alebo suspendované vo vhodných roztokoch, napr. mastných olejoch, minerálnom oleji alebo tekutých polyetylénglykoloch. Navyše môžu byť pridávané stabilizátory.
Farmaceutické prípravky, ktoré môžu byť tiež používané, zahrnujú pevné želatínové kapsule. Nijako nelimitujúcim príkladom môže byť uvedená formulácia aktívnej zlúčeniny vo forme perorálneho liečiva ako dve rôzne silné dávky 50 a 200 mg (kódy formulácie J-01 1248-AA-00 a J-01 1248-AA-01). Tieto dve rôzne silné dávky sú pripravené z rovnakých granúl naplnením do tuhých želatínových kapsúl rôznych veľkostí 3 pre 50 mg a veľkostí 0 pre 200 mg kapsule. Skladba formulácie môže byť napr. podľa tabuľky 2.
Tabulka 2
komponent názov/kvalita kone. v granulácii (% hmôt./hmôt.) • I množstvo v 50 mg kapsule (mg) množstvo v 200 mg kapsule (mg)
kód formulácie J-01 1248-AA J-01 1248-AA-00 J-01 1248-AA-01
aktívna zlúčenina NF 65,0 50,0 200,0
Manitol NF 23,5 18,1 72,4
kroskarmelóza sodná NF 6,0 4,6 18,4
Povidone K 30 NF 5,0 3,8 15,2
stearát horečnatý NF 0,5 0,38 1,52
kapsule, švédska žltá NF veľkosť 3 veľkosť 0
Kapsule môžu byť balené do fľašiek z hnedého skla alebo plastu za účelom ochrany aktívnej zlúčeniny proti svetlu. Nádobky obsahujúce formuláciu aktívnej zlúčeniny vo forme kapsúl musia byť skladované pri kontrolovanej teplote (15 až 30 °C).
Na podanie inhalácii sú zlúčeniny podľa predloženého vynálezu štandardne podávané vo forme aerosólového spreja v aerosólovom balení alebo v rozprašovači ä s vhodným propelentom, napr., bez obmedzenia, dichlórdifluórmetánom, trichlórfluórmetánom, dichlórtetrafluóretánom alebo oxidom uhličitým. V prípade stlačeného aerosólu môže byť na dávkovanie využitý ventil, ktorý umožní uvoľnenie presného množstva látky. Kapsule a patróny, napr. zo želatíny, na použitie v inhalačnom prístroji alebo insuflátory môžu byť pripravené spôsobom, pri ktorom je spojená prášková zmes zlúčeniny a vhodná prášková báza, napr. laktóza alebo škrob.
Zlúčeniny môžu byť pripravené na parenterálne podanie injekciou, napr. injekciou bolusu alebo kontinuálnou infúziou. Formulácie pre injekcie môžu byť v jednotkových dávkovacích formách, napr. v ampulách alebo v obaloch pre viac dávok, s pridanou konzervačnou látkou. Prípravky môžu byť tiež vo formách suspenzie, roztokov alebo emulzií v olejových alebo vodných nosičoch a môžu obsahovať pomocné agens, napr. suspendačné, stabilizačné a/alebo dispergačné prostriedky.
Farmaceutické formulácie na parenterálne podanie zahrnujú vodné roztoky aktívnych zlúčenín vo forme, ktorá je rozpustná vo vode. Ďalej môžu byť suspenzie aktívnych zlúčenín pripravené ako príslušné olejovité injekčné suspenzie. Vhodné lipofilné nosiče zahrnujú mastné oleje, napr. sezamový olej, estery syntetických mastných kyselín, napr. etyl-oleát alebo triglyceridy alebo látky ako Iipozómy. Vodné injekčné suspenzie môžu obsahovať látky, ktoré zvyšujú viskozitu suspenzie, napr. sodná soľ karboxymetyl-celulózy, sorbitol alebo dextrán. Prípadne suspenzie môžu tiež obsahovať vhodné stabilizátory a/alebo agens, ktoré zvyšujú rozpustnosť zlúčenín, čím umožňujú pripraviť vysoko koncentrované roztoky.
Alternatívne môže byť aktívna zložka vo forme prášku určeného na spojenie s vhodným nosičom pred použitím, napr. so sterilnou apyrogénnou vodou.
Zlúčeniny môžu byť tiež pripravené ako rektálne prípravky, napr. čapíky alebo retenčné klyzmy, pomocou napr. štandardných čapíkových báz, ako je kakaové maslo alebo iné glyceridy.
Okrem vyššie uvedených formulácií, môžu byť tiež pripravené zlúčeniny vo forme depotných preparátov. Tieto formulácie s dlhou dobou účinku môžu byť podávané implantáciou (napr. subkutánne alebo intramuskulárne podanie alebo intramuskulárne injekcie). Týmto spôsobom môžu byť pripravené zlúčeniny s vhodnými polymérnymi alebo hydrofóbnymi materiálmi (napr. v emulzii s farmaceutický prijateľným olejom) alebo iónexmi alebo ako zle rozpustné deriváty, napr. zle rozpustné soli.
Príkladom, avšak neobmedzujúcim, farmaceutického nosiča pre hydrofóbne zlúčeniny podľa predloženého vynálezu je systém spolurozpúšťadiel ob82 sahujúci benzylalkohol, nepolárny surfaktant, organický polymér miešateľný s vodou a vodnou fázou, napr. spolurozpúšťadlový systém VPD. VPD je roztok 3 % obj. benzylalkoholu, 8 % obj. nepolárneho surfaktantu Polysorbát 80 a 65 % obj. polyetylénglykolu 300, doplnený na konečný objem absolútnym etanolom. Systém spolurozpúšťadiel VPD (VPD:5W) pozostáva z VPD zriedeného 1 : 1 5% dextrózou vo vodnom roztoku. Tento systém spolurozpúšťadiel dobre rozpúšťa hydrofóbne zlúčeniny a sám má po systémovom podaní nízku toxicitu. Prirodzene môžu byť podiely systému spolurozpúšťadiel značne menené, avšak tak, aby sa zachovali charakteristické rysy jeho rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé zložky systému spolurozpúšťadiel môžu byť menené: napr. miesto polysorbátu 80 môžu byť používané ďalšie nepoláme surfaktanty s nízkou toxicitou; veľkosťou častíc polyetylénglykolu môže byť rôzna; polyetylénglykol môže byť nahradený ďalšími biokompatibilnými polymérmi, napr. polyvinylpyrolidónom; a ďalšie cukry alebo polysacharidy môžu nahradiť dextrózu.
Alebo môže byť použitý iný dávkový systém pre hydrofóbne farmaceutické zlúčeniny. Pre hydrofóbne liečiva sú štandardnými príkladmi prenášačov a nosičov využívaných pri tomto spôsobe lipozómy a emulzie. Navyše môžu byť používané určité organické rozpúšťadla, napr. dimetylsulfoxid, avšak často za cenu väčšej toxicity.
Navyše zlúčeniny môžu byť podávané systémom trvalého, t.j. postupného uvoľňovania, napr. semipermeabilnými matricami pevných hydrofóbnych polymérov obsahujúcich terapeutické činidlo. V odbore sú zavedené a odborníkom známe rôzne materiály na postupné uvoľňovanie. Kapsule s postupným uvoľňovaním môžu v závislosti na svojom chemickom charaktere uvoľňovať zlúčeniny po dobu niekoľkých týždňov až viac než 100 dní. V závislosti na chemickom charaktere a biologickej stabilite terapeutického reagens môžu byť používané ďalšie stratégie stabilizácie proteínu.
Farmaceutické prípravky tiež môžu obsahovať vhodné nosiče alebo excipienty v pevnej alebo gélovej fázy. Príklady takých nosičov alebo excipientov zahrnujú, ale nie je to na ne obmedzené, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, rôzne cukry, škroby, deriváty celulózy, želatínu a polyméry, napr. polyetylénglykoly.
Mnoho zlúčenín podľa predloženého vynálezu modulujúcich PK môže byť vo forme fyziologicky prijateľných solí, kde nárokovaná zlúčenina môže tvoriť negatívne alebo pozitívne nabitú zložku. Príklady solí, v ktorých zlúčenina vytvára pozitívne nabitú časť, zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, kvartérne amónne soli (definované tu na inom mieste), napr. hydrochlorid, sulfát, uhličitan, laktát, tartrát, malát, maleát, sukcinát, kde atóm dusíka kvartérnej amónnej skupiny je dusík vybranej zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktorý zreagoval s príslušnou kyselinou. Soli, v ktorých zlúčenina podľa predloženého vynálezu vytvára negatívne nabitú časť, zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, vápenaté a horečnaté soli vytvorené reakciou skupiny karboxylovej kyseliny v zlúčenine s príslušnou bázou (ako je hydroxid sodný (NaOH), hydroxid draselný (KOH), hydroxid vápenatý (Ca(0H)2), atď.).
Farmaceutické prípravky vhodné na použitie v predloženom vynáleze zahrnujú prípravky, v ktorých sú aktívne zložky obsiahnuté v množstve, ktoré je dostatočné na dosiahnutie zamýšľaného zámeru, napr. modulácia aktivity PK alebo ošetrenie alebo prevencia porúch spojených s PK.
Konkrétnejšie, terapeuticky účinné množstvo znamená množstvo zlúčeniny, ktoré je účinné pri prevencii, zmiernení alebo zlepšení symptómov ochorení alebo pri predĺžení prežívania subjektu, ktorý je ošetrovaný.
Stanovenie terapeuticky účinného množstva môže vykonať pracovník skúsený v odbore, najmä na základe tu uvedených informácií.
Pre akúkoľvek zlúčeninu používanú v spôsobe podľa predloženého vynálezu môže byť terapeuticky účinná dávka najprv stanovená podľa testov na bunkových kultúrach. Potom môže byť dávka testovaná na bunkových a zvieracích modeloch na získanie rozmedzia obehovej koncentrácie, ktoré zahrnuje IC50 stanovenú podľa testov na bunkových kultúrach (tzn. koncentrácia testovanej zlúčeniny, ktorá je potrebná na dosiahnutie 50% inhibície aktivity danej PK). Tieto informácie môžu byť používané u ľudských subjektov na presnejšie stanovenie účinných dávok.
Toxicita a terapeutická účinnosť tu opísaných zlúčenín môže byť stanovená štandardnými farmaceutickými postupmi na bunkových kultúrach alebo experimentálnych zvieratách, napr. stanovením IC50 a LD50 (obe sú diskutované v inej časti textu) pre danú zlúčeninu. Dáta získané z testov na bunkových kultúrach a štúdiách na zvieratách môžu byť použité na stanovenie rozpätia dávky pre použitie u ľudí. Dávkovanie môže byť v tomto rozmedzí rôzne v závislosti na používanej dávkovej forme a spôsobu podania. Presná formulácia, spôsob podania a dávkovania môžu byť vybrané jednotlivým lekárom v závislosti na stave pacienta (viď Fingl et al., 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, Ch. 1 pl).
Množstvo a interval dávky môžu byť upravené individuálne na získanie plazmových koncentrácií účinnej látky, ktoré stačia na udržanie modulačných účinkov kinázy. Tieto plazmové koncentrácie sa označujú ako minimálne účinné koncentrácie (MEC). Hodnota MEC bude pre každú zlúčeninu iná, ale môže byť stanovená z in vitro dát; napr. koncentrácia potrebná na dosiahnutie 50 až 90% inhibície kinázy môže byť stanovená s použitím tu opísaných testov. Dávky potrebné na dosiahnutie MEC budú závisieť na individuálnych charakteristikách a spôsobu podania. Na stanovenie plazmových koncentrácií môže byť používaná HPLC alebo bioanalýza.
Intervaly medzi dávkami môžu byť tiež stanovené pomocou hodnoty MEC. Zlúčeniny by mali byť podávané podľa režimu, ktorým sa udržujú plazmové hladiny nad hodnotou MEC v priebehu 10 - 90% doby, výhodne medzi 30 - 90% a najvýhodnejšie 50 - 90%.
V súčasnej dobe sa pohybujú terapeuticky účinné množstvá zlúčenín všeobecného vzorca (I) v rozmedzí približne od 25 mg/m2 do 1500 mg/m2 denne; výhodne asi 3 mg/m2 denne. Výhodnejšie od 50 mg/qd do 400 mg/qd.
V prípadoch lokálneho podania alebo selektívnej absorpcie nemôže účinná miestna koncentrácia liečiva odpovedať plazmovej koncentrácii a ďalším štandardným spôsobom používaným na stanovenie presného množstva dávky a intervalu.
Množstvo podávaného prípravku bude samozrejme závisieť na ošetrovanom subjekte, závažnosti jeho stavu, spôsobu podania, posúdenia ošetrujúceho lekára atď.
Prípravky, pokiaľ je treba, môžu byť vo forme balenia alebo zásobníku, ako je kit schválený FDA, ktorý môže óbsahovať jednu alebo viac jednotkových dávkovacích foriem obsahujúcich aktívnu zložku. Balenie môže napr. obsahovať kovovú alebo plastovú fóliu, napr. mäkké priehľadné balenie. Balenie alebo zásobník môže byť distribuovaný spoločne s návodom na podanie. K baleniu alebo zásobníku môže byť pripojené upozornenie súvisiace s obsahom vo forme predpísaného orgánom štátnej správy regulujúcim výrobu, použitie alebo predaj farmaceutických prostriedkov, ktorým sa schvaľuje forma alebo zloženie prípravkov pre ľudské alebo veterinárne aplikácie. Upozornením tohto typu môže byť napríklad nálepka schválená U.S. Food and Drug Administration pre lieky na predpis alebo schválený príbalový leták. Tiež môžu byť pripravené prípravky obsahujúce zlúčeninu podľa vynálezu formulované v kompatibilnom farmaceutickom nosiči umiestnené vo vhodnej nádobke a označené pre ošetrenie indikovaného stavu. Vhodné indikované stavy uvedené na nálepke môžu zahrnovať ošetrenie nádoru, inhibíciu angiogénezy, ošetrenie fibrózy, cukrovky atď.
Ďalší aspekt predloženého vynálezu zahrnuje to, že zlúčenina podľa predloženého vynálezu alebo jej soľ alebo proliečivo môže byť kombinovaná s ďalšími chemoterapeutikami na ošetrenie ochorení a porúch uvedených vyššie. Napríklad môže byť zlúčenina, soľ alebo proliečivo podľa predloženého vynálezu kombinovaná s alkylačnými činidlami, ako je fluórouracil (5-FU) samotný alebo v ďalšej kombinácii s leukovorínom; alebo ďalšie alkylačné činidla, napríklad, ale nie je to nijako limitované, iné pyrimidínové analógy, napr. UFT, capecitabin, gemcitabin a cytarabin, alkylsulfonáty, napr. busulfán (používaný pri ošetrení chronickej granulocytovej leukémie), improsulfán a piposulfán; aziridíny, napr. benzodepa, karboquón, meturedepa a uredepa; etylénimíny a metylmelamíny, napr. altretamín, trietylénmelamín, trietylénfosforamid, trietyléntiofosforamid a trimetylolmelamín; a dusíkaté nosiče, napr. chlórambucil (používaný pri ošetrení chronickej lymfocytárnej leukémie, primárnej makro86 globulinémie a nehodgkinovho lymfómu), cyklofosf-amid (používaný pri ošetrení Hodgkinovej choroby, mnoho početného myelómu, neuroblastómu, rakoviny prsníka, ovariálnej rakoviny, rakoviny pľúc, Wilmovho nádoru a rabdomyosarkómu), estramustín, ifosfamid, novembrichín, prednimustín a uracilovej horčice (používanej pri ošetrení primárnej trombocytózy, nehodgkinovho lymfómu, Hodgkinovej choroby a ovariálnej rakoviny); a triazíny, napr. dakarbazín (používaný pri ošetrení sarkómu mäkkého tkaniva).
Zlúčenina, soľ alebo proliečivo podľa predloženého vynálezu môže byť tiež používané v kombinácii s ďalšími antimetabolitovými chemoterapeutikami, napríklad, ale nie je to nijako limitované, analóg kyseliny listovej skupiny, napr. metotrexát (používaný pri ošetrení akútnej lymfocytárnej leukémie, choriokarcinómu, mycosis fungiodes rakoviny prsníka, rakoviny hlavy a krku a osteogénneho sarkómu) a pteropterín; a purínový analóg, napr. merkaptopurín a tioguanín, ktorý našiel použitie pri ošetrení akútnej granulocytárnej, akútnej lymfocytárnej a chronickej granulocytárnej leukémie.
Tiež sa uvažuje, že zlúčenina, soľ alebo proliečivo podľa predloženého vynálezu môže byť tiež používané v kombinácii s chemoterapeutikami na prírodnej bázy, napríklad, ale nie je to nijako limitované, vinkové alkaloidy, napr. vinblastin (používaný pri ošetrení rakoviny prsníka a rakoviny prostaty), vinkristín a vindezín; epipodofylotoxíny, napríklad etopozid a tenipozid, obe sú použiteľné pri ošetrení rakoviny prostaty a Kaposiho sarkómu; antibiotické chemoterapeutiká, napríklad daunorubicin, doxorubicin, epirubicín, mitomycin (používaný na ošetrenie rakoviny žalúdka, kŕčku, hrubého čreva, prsníka, močového mechúra a pankreasu), daktinomycín, temozolomid, plikamycín, bleomycín (používaný pri ošetrení rakoviny kože, pažeráku a genitourinárneho traktu); a enzymatické chemoterapeutiká, napr. L-asparagináza.
Okrem vyššie uvedených môžu byť tiež zlúčeniny, soli alebo proliečivá podľa predloženého vynálezu používané v kombinácii s koordinačnými komplexami na báze platiny (cisplatina, atď.); substituovanými močovinami, napr.
hydroxymočovina; deriváty metylhydrazínu, napr. prokarbazín; adrenokortikálnymi supresívami, napr. mitotan, aminoglutetimid; a hormóny a antagonisty hormónov, napr. adrenokortikosteriody (napr. prednizón), progestíny (napr. kapronát hydroxyprogesterónu); estrogény (napr. dietylstilbesterol); antiestrogény, napr. tamoxifén; androgény, napr. propionát testosterónu; a inhibítory aromatáz, napr. anastrozol.
I
Tiež sa predpokladá, že kombinácia zlúčeniny podľa predloženého vynálezu bude účinná v kombinácii s mitoxantrónom alebo paclitaxelom na ošetrenie pevných nádorov alebo leukémií, napríklad, ale nie je to nijako limitované, akútnej myeloidnej leukémie (nelymfocytárny).
Všeobecný syntetický postup
Na prípravu zlúčenín podľa predloženého vynálezu je možné použiť tieto všeobecné metódy:
Príslušne substituovaný 2-oxoindol (1 ekviv.), príslušne substituovaný aldehyd (1,2 ekviv.) a báza (0,1 ekviv.) sa zmiešajú v rozpúšťadle (1-2 ml/mmol 2-oxoindolu) a zmes sa potom zahrieva po dobu asi 2 až asi 12 hodín. Po ochladení sa vzniknutý precipitát filtruje, premyje studeným etanolom alebo éterom a suší za vákua, čím sa získa produkt v pevnej forme. Pokiaľ nevznikne precipitát, reakčná zmes sa koncentruje a zvyšok sa trituruje zmesou dichlórmetánu a éteru, výsledná pevná látka sa zhromaždi filtráciou a suší. Produkt môže byť prípadne ďalej čistený chromatografiou.
Báza môže byť organická alebo anorganická báza. Ak je používaná organická báza, potom je ňou výhodne dusíkatá báza. Príklady organickej dusíkatej bázy zahrnujú, ale bez obmedzenia, diizopropylamín, trimetylamín, trietylamín, anilín, pyridín, l,8-diazabicyklo[5,4,l]undek-7-én, pyrolidín a piperidín.
Príklady anorganických báz zahrnujú, ale bez obmedzenia, amoniak, hydroxidy alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín, fosforečnany, uhličitany, hydrogenuhličitany, hydrogensírany a amidy. Alkalické kovy zahrnujú lítium, sodík a draslík, zatiaľ čo alkalické zeminy zahrnujú vápnik, horčík a báryum.
Vo výhodnom uskutočnení predloženého vynálezu, za predpokladu, že rozpúšťadlo je protické, napr. voda alebo alkohol, je báza anorganická báza alkalického kovu alebo alkalickej zeminy, výhodne hydroxid alkalického kovu alebo alkalickej zeminy.
Odbornej verejnosti, a to na základe všeobecných princípov organickej syntézy a doterajšieho opisu, nebude činiť ťažkosti zvoliť pre príslušnú reakciu najvhodnejšiu bázu.
Rozpúšťadlo, v ktorom reakcia prebieha, môže byť buď protické alebo aprotické, výhodne protické.
Termín „protické rozpúšťadlo“ sa vzťahuje na rozpúšťadlo, ktoré má atóm(y) vodíka kovalentne viazaný k atómom kyslíka alebo dusíka, čo činí vodíkové atómy značne kyslými, a tým schopnými podieľať sa solutom na vodíkových väzbách. Príklady protických rozpúšťadiel zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, vodu a alkoholy.
Termín „aprotické rozpúšťadlo“ sa vzťahuje na rozpúšťadlo, ktoré môže byť polárne i nepoláme, ale neobsahuje kyslé vodíky, a teda nie je schopné podieľať sa solutom na vodíkových väzbách. Príklady nepolárnych aprotických rozpúšťadiel zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, pentán, hexán, benzén, toluén, metylénchlorid a tetrachlórmetán. Príklady polárnych aprotických rozpúšťadiel zahrnujú chloroform, tetrahydrofurán, dimetylsulfoxid a dimetylformamid.
Vo výhodnom uskutočnení podľa predloženého vynálezu je rozpúšťadlo protické, výhodne voda alebo alkohol, napr. etanol.
Reakcia je vykonávaná pri teplotách, ktoré sú vyššie než izbová teplota. Teplota sa všeobecne pohybuje od asi 30 °C do asi 150 °C, výhodne od asi 80 °C do asi 100 °C, najvýhodnejšie od asi 75 °C do asi 85 “C, Čo je asi teplota varu etanolu. Termín „asi“ znamená, že teplota sa výhodne pohybuje v rozmedzí 10 stupňov Celzia uvedenej teploty, najvýhodnejšie v rozmedzí 2 stupňov Celzia uvedenej teploty. Teda napríklad „asi 75 °C“ znamená 75 °C ± 10 °C, výhodne 75 °C ± 5°C a najvýhodnejšie 75 °C ± 2 °C.
2-Oxoindoly a aldehydy môžu byť ľahko syntetizované štandardnými chemickými spôsobmi. Z textu by malo byť odbornej verejnosti zrozumiteľné, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu je možné pripraviť aj inými syntetickými spôsobmi a nasledujúce príklady slúžia ako návrh spôsobu prípravy, ktorý nemá byť nijako limitujúci.
Prikiadv uskutočnenia vynálezu
Nasledujúce prípravy a príklady šú tu pre ľahšie pochopenie predloženého vynálezu a nemajú nijako limitovať rozsah vynálezu, ale iba ho ilustrovať a reprezentovať.
Syntetické príklady
Spôsob A: Formylácia pyrolov
POCI3 (1,1 ekviv.) sa pridá po kvapkách do dimetylformamidu (3 ekviv.) pri teplote -10 °C, potom sa pridá príslušný pyrol rozpustený v dimetylformamide. Po miešaní počas dvoch hodín sa reakčná zmes zriedi H2O a alkalizuje na pH 11 s 10N KOH. Vzniknutý precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou a suší vo vákuovej sušiarni, čím sa získa požadovaný aldehyd.
Spôsob B: Saponifikácia esterov pyrolkarboxylovej kyseliny
Zmes esteru pyrolkarboxylovej kyseliny a KOH (2-4 ekviv.) v EtOH sa refluxuje, dokiaľ reakcia neskončí (podľa TLC). Ochladená reakčná zmes sa 0kyslí na pH 3 IN HCI. Vzniknutý precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou a suší vo vákuovej sušiarni, čím sa získa pyrolkarboxylová kyselina.
Spôsob C: Amidácia
Do miešaného roztoku pyrolkarboxylovej kyseliny rozpustenej v dimetylformamide (0,3 M) sa pridá 1 -etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid (1,2 ekviv.), 1-hydroxybenzotriazol (1,2 ekviv.) a trietylamín (2 ekviv.). Pridá sa príslušný amín (1 ekviv.) a reakcia sa mieša do tej doby, dokiaľ nedobehne, a sleduje sa na TLC. Potom sa do reakčnej zmesi pridá etylacetát a roztok sa premyje nasýteným roztokom NaHCO3 a soľankou (s dodatočnou soľou), suší nad bezvodým MgSO4 a koncentruje, čím sa získa požadovaný amid.
Spôsob D: Kondenzácia aldehydov a oxindolov obsahujúcich substituenty karboxylovej kyseliny
Zmes oxindolu (1 ekviv.), 1 ekviv. aldehydu a 1 - 3 ekviv. piperidínu (alebo pyrolidínu) v etanole (0,4 M) sa mieša pri teplote 90 - 100 °C do tej doby, dokiaľ reakcia nedobehne, a sleduje sa na TLC. Zmes sa potom koncentruje a zvyšok sa okyslí 2N HCI. Vzniknutý precipitát sa premyje vodou a etanolom a suší vo vákuovej sušiarni, čím sa získa produkt.
Spôsob E: Kondenzácia aldehydov a oxindolov neobsahujúcich substituenty karboxylovej kyseliny
Zmes oxindolu (1 ekviv.), 1 ekviv. aldehydu a 1 - 3 ekviv. piperidínu (alebo pyrolidínu) v etanole (0,4 M) sa mieša pri teplote 90 - 100 °C do tej doby, dokiaľ reakcia nedobehne, a sleduje na TLC. Zmes sa potom ochladí na izbovú teplotu a vzniknutý pevný podiel sa spojí vákuovou filtráciou, premyje etanolom a suší, čím sa získa produkt. Pokiaľ sa po ochladení reakčnej zmesi nevytvorí precipitát, zmes sa koncentruje a čistí stĺpcovou chromatografiou.
C. Príklady syntéz oxindolov
Nasledujúce príklady syntézy reprezentatívnych oxindolov nemajú nijako limitovať rozsah predloženého vynálezu. Na základe nasledujúceho opisu budú odbornej verejnosti jasné alternatívne spôsoby prípravy uvedených oxindolov, ako aj ďalších oxindolov používaných na prípravu zlúčenín podľa predloženého vynálezu. Tieto syntézy a oxindoly spadajú takisto do rozsahu a charakteru tohto vynálezu.
5-amino-2-oxindol
5-Nitro-2-oxindol (6,3 g) sa hydrogenuje v metanole nad 10% paládiom na aktívnom uhlí, čím sa získa 3,0 g (60% výťažok) požadovanej zlúčeniny vo forme pevnej bielej látky.
5-Bróm-2-oxindol
2-Oxindol (1,3 g) v 20 ml acetonitrilu sa ochladí na teplotu -10 °C a do reakčnej zmesi sa za intenzívneho miešania pomaly pridajú 2,0 g W-brómsukcínimidu. Reakčná zmes sa mieša po dobu 1 hodiny pri teplote -10 °C a 2 hodiny pri teplote 0 °C. Precipitát sa spojí, premyje vodou a suší, čím sa získa 1,9 g (90% výťažok) požadovanej zlúčeniny.
4-Metyí-2-oxindol
Dietyloxalát (30 ml) v 20 ml suchého éteru sa pridá za stáleho miešania do 19 g etoxidu draselného suspendovaného v 50 ml suchého éteru. Zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a pomaly sa pridá 20 ml 3-nitro-oxylénu v 20 ml suchého éteru. Hustá tmavá červená zmes sa zahrieva pri refluxe po dobu 0,5 hodiny, koncentruje na tmavo červenú pevnú látku a nechá reagovať s 10% roztokom hydroxidu sodného, dokiaľ sa nerozpustí takmer všetok pevný podiel. Tmavo červená zmes sa nechá reagovať s 30% peroxidom vodíka, dokiaľ sa červená farba zmesi nezmení na žltú. Alternatívne sa zmes nechá reagovať s 10% roztokom hydroxidu sodného a 30% peroxidom vodíka, dokiaľ tmavo červená farba roztoku nezmizne. Pevný podiel sa odfiltruje a filtrát okyslí 6N kyselinou chlorovodíkovou. Výsledný precipitát sa spojí vákuovou filtráciou, premyje vodou a suší za vákua, čím sa získa 9,8 g (45% výťažok) 2-metyl-6-nitrofenyloctovej kyseliny vo forme belavej pevnej látky. Pevný podiel sa hydrogenuje v metanole nad 10% paládiom na aktívnom uhlí, čím sa získa 9,04 g požadovanej zlúčeniny vo forme bielej pevnej látky.
7-bróm-5-chlór-2-oxindol
5-Chlór-2-oxindol (16,8 g) a 19,6 g jY-brómsukcínimidu sa suspenduje v 140 ml acetonitrilu a refluxuje po dobu 3 hodín. Po 2 hodinách refluxu bol na
TLC (silikagél, etylacetát) vidieť 5-chlór-2-oxindol alebo /V-brómsukcínimid (Rf 0,8), produkt (Rf 0,85) a druhý produkt (Rf 0,9), ktorých podiely sa nezmenili ani po ďalšej hodine pri refluxe. Zmes sa ochladí na teplotu 10 °C, precipitát sa spojí vákuovou filtráciou, premyje 25 ml etanolu a suší po dobu 20 minút v nálevke, čím sa získa 14,1 g vlhkého produktu (56% výťažok). Pevný po, l diel sa suspenduje v 200 ml denaturovaného etanolu a kašovitá zmes sa mieša a refluxuje po dobu 10 minút. Zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli na teplotu 10 °C. Pevný produkt sa spojí vákuovou filtráciou, premyje 25 ml etanolu a suší za vákua pri teplote 40 °C, čím sa získa 12,7 g (51% výťažok) 7-bróm-5-chlór-2-oxindolu.
5-Fluór-2-oxindol
5-Fluórisatín (8,2 g) sa rozpustí v 50 ml hydrátu hydrazínu a refluxuje po dobu 1,0 hodiny. Reakčná zmes sa naleje do ľadovej vody. Precipitát sa potom filtruje, premyje vodou a suší vo vákuovej sušiarni, čím sa získa požadovaná zlúčenina.
5-Nitro-2-oxindol
2-Oxindol (6,5 g) sa rozpustí v 25 ml koncentrovanej kyseliny sírovej a zmes sa udržuje pri teplote -10 až -15 °C, zatiaľ čo sa po kvapkách pridáva 2,1 ml dymovej kyseliny dusičnej. Po pridaní kyseliny dusičnej sa reakčná zmes mieša pri teplote 0 °C po dobu 0,5 hodiny a naleje do ľadovej vody. Precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou a kryštalizuje z 50% kyseliny octovej. Kryštalický produkt sa potom filtruje, premyje vodou a suší za vákua, čím sa získa 6,3 g (70 %) 5-nitro-2-oxindolu.
5-Aminosulfonyl-2-oxindol
Do 100 ml banky naplnenej 27 ml chlórsulfónovej kyseliny sa pomaly pridá 13,3 g 2-oxindolu. Reakčná teplota sa počas pridávania udržuje pod 30 °C. Po pridaní sa reakčná zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 1,5 hodiny, zahrieva pri teplote 68 °C po dobu 1 hodiny, ochladí a naleje do vody. Precipitát sa premyje vodou a suší vo vákuovej sušiarni, čím sa získa 11,0 g 5chlór-sulfonyl-2-oxindolu (50% výťažok), ktorý sa ďalej používa bez čistenia.
5-Chlórsulfonyl-2-oxindol (2,1 g) sa pridá do 10 ml hydroxidu amónneho v 10 ml etanolu a mieša pri izbovej teplote cez noc. Zmes sa koncentruje a pevný podiel sa spojí vákuovou filtráciou, čím sa získa 0,4 g (20% výťažok) požadovanej zlúčeniny vo forme belavej pevnej látky.
5-Izop ropy laminosulfony 1-2-oxindol
Do 100 ml banky naplnenej 27 ml chlórsulfónovej kyseliny sa pomaly pridá 13,3 g 2-oxindolu. Reakčná teplota sa počas pridávania udržuje pod 30 °C. Po pridaní sa reakčná zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 1,5 hodiny, zahrieva pri teplote 68 °C po dobu 1 hodiny, ochladí a naleje do vody. Precipitát sa premyje vodou a suší vo vákuovej sušiarni, čím sa získa 11,0 g 5-chlór-sulfonyl-2-oxindolu (50% výťažok), ktorý sa ďalej používa bez čistenia.
Suspenzia 3 g 5-chlórsulfonyl-2-oxindolu, 11,5 g izopropylamínu a 1,2 ml pyridínu v 50 ml dichlórmetáne sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín, počas ktorých sa vytvorí pevný podiel, ktorý sa spojí vákuovou filtráciou, kašovitá zmes sa premyje horúcim etanolom, ochladí, spojí vákuovou filtráciou a suší za vákua pri teplote 40 °C cez noc, čím sa získa 1,5 g (45 %) 5-izopropylaminosulfonyl-2-oxindolu.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6)ô 10,69 (s, br, 1H, NH) δ 7, 63 (dd, J = 2 a 8 Hz, ΙΗ) δ 7, 59 (d, J = 2 Hz, ΙΗ) δ 7,32 (d, J = 7 Hz, 1H, NH-SO2-) δ 6, 93. (d, J = 8 Hz, ΙΗ) δ 3, 57 (s, 2H) δ 3, 14-3,23 (m, 1H, CH-(CH3)2 δ 0,94 (d, J = 7 Hz, 6H, 2 x CH3),
5-Feny laminosulfony 1-2-oxindol
Suspenzia 5-chlórsulfonyl-2-oxindolu (1,62 g, 7 mmol), anilínu (0,782 ml, 8, 4 mmol) a pyridínu (1 ml) v dichlórmetáne (20 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom (300 ml) a okyslí IN kyselinou chlorovodíkovou (16 ml). Organická vrstva sa premyje hydrogenuhličitan sodným a soľankou, suší a koncentruje. Zvyšok sa premyje etanolom (3 ml) a potom chromatografuje na stĺpci silikagélu v zmesi metanolu a dich94 lórmetánu (1 : 9) ako v mobilnej fáze, čím sa získa 5-fenylaminosulfonyl-2-oxindol.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10, 71 (s, br, 1H, NH) 10, 10 (s, br, 1H, NH) 7,57-7,61 (m, 2H) 7,17-7,22 (m, 2H) 7,06-7,09 (m, 2H) 6,97-7,0 (m, 1 H) 6, 88 (d, J = 8, 4 Hz, 1 H) 3, 52 (s, 2H).
Pyridin-3-ylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfónovej kyseliny
Roztok 5-chlórsufonyl-2-oxindolu (3 g) a 3-aminopyridínu (1,46 g) v pyridíne (15 ml) sa mieša pri izbovej teplote cez noc, kedy sa objaví hnedá pevná látka. Pevný podiel sa filtruje, premyje etanolom a suší za vákua, čím sa získa 1,4 g (38%) pyridin-3-ylamidu 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfónovej kyseliny.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,74 (s, 1H, NH) 8,39' (s, 1H, SO2NH) 8,27-8,28 (d, 1H) 8,21-8, 23 (m, 1H) 7,59-7, 62 (m, 2H) 7,44-7,68 (m, 1H) 7, 24-7,28 (m, 1H) 6,69-6,71 (d, 1H), 3,54 (s, 2H).
MS m/z (APCI+) 290,2.
5-Fenyloxindol
5-Bróm-2-oxindol (5 g, 23,5 mmol) sa za stáleho miešania prileje a za malého záhrevu rozpustí v 110 ml toluéne a 110 ml etanolu. Pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (1,9 g 1,6 mmol), potom 40 ml (80 mmol) 2M vodného uhličitanu sodného. Do tejto zmesi sa pridá benzén-boritá kyselina (3,7 g, 30,6 mmol) a zmes sa zahrieva pri teplote olejového kúpeľa 100°C po dobu 12 hodín. Reakčná zmes sa ochladí, zriedi etylacetátom (500 ml), premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (200 ml), vodou (200 ml), IN HCI (200 ml) a soľankou (200 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a koncentruje, čím sa získa hnedá pevná látka. Trituráciou dichlórmetánom sa získa 3,8 g (77%) 5-fenyl-2-oxindolu ako hnedej pevnej látky.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,4 (br s, 1H, NH) 7,57 (dd, J = 1,8 a 7,2 Hz, 1H)7, 5 až 7,35 (m, 5H) 7, 29 (m, 1H) 6,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H) 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 209 [M]\
Podobným spôsobom môžu byť pripravené nasledujúce oxindoly:
6-(3,5-dichlórfenyl)-l,3-dihydro-indoI-2-ón 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10, 46 (br, ΙΗ,'ΝΗ) 7,64 (d, J = 1,8 Hz, 2H) 7,57 (m, 1H) 7,27 (m, 2H) 7,05 (d, J = 1,1 Hz, 1H) 3,5 (s, 2H).
MS-EI m/z 277/279 [M]+.
6-(4-Butylfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-ón 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (s, 1H, NH) 7,49 (d, J = 8,0 Hz, 2H) 7,25 (d, J = 8 Hz, 3H) 7,17 (dd, J = 1,5 a 7,8 Hz, 1H) 6,99 (d, J = 1,5 Hz, 1H) 3, 48 (s, 2H, CH2CO) 2,60 (t, J = 7,5 Hz, 2Hz, CH2CH3) 1,57 (m, 2H, CH2) 1,32 (m, 2H, CH2) 0, 9 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH3).
6-(5-IzopropyI-2-metoxyfenyI)-l,3-dihydro-indoI-2-ón 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10, 29 (br s, 1H, NH) 7,167, 21 (m, 2H) 7, 08 (d, J = 2,4 Hz, 1H) 6,97-7,01 (m, 2H) 6,89 (d, J = 0,8 Hz, 1H) 3, 71 (s, 3H, OCH3) 3,47 (s, 2H, CH2CO) 2,86 (m, 1H, CH(CH3)2) 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 281 [M]+.
6-(4-EtylfenyI)-l,3-dihydro-indol-2-ón 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (br s, 1H, NH) 7, 50 (d, J = 8,2 Hz, 2H) 7,28 (d, J = 8,2 Hz, 2H) 7, 25 (d, J = 7,5 Hz, 1H) 7,17 (dd, J = 1,6 & 7,5 Hz, 1H) 6, 99 (d, J = 1,6 Hz, 1H) 3,48 (s, 2H, CH2CO) 2,63 (q, J = 7,6 Hz, 2H, CH2CH3) 1,20 (t, J = 7,6 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 237 [M] + .
6-(3-Izopropylfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-ón ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) Ô 10, 37 (br s, IH, NH) 7,43 (m, IH) 7, 357,39 (m, 1 H) 7,17-7,27 (m, 3H) 7, 01 (d, J = 1,8 Hz, IH) 3,49 (s, 2H, CH2CO) 2,95 (m, IH, CH(CH3)2) 1, 24(d, J = 6, 8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 251 [M] + .
6-(2,4-Dimetoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-ón ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10, 28 (br s, IH, NH) 7,17 (m, 2H) 6, 93 (dd, J = 1,6 & 7,6 Hz, 1 H) 6, 86 (d, J = 1,6 Hz, 1 H) 6,63 (d, J = 2,4 Hz, 1 H) 6,58 (dd, J = 2,4 & 8,5 Hz, IH) 3,79 (s, 3H, OCH3) 3,74 (s, 3H, OCH3) 345 (s, 2H, CHO).
MS-EI m/z 269 [M]+.
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydro-indol-2-ón ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10, 51 (s, IH, NH) 8,81 (d, J = 2,5 Hz, 1H)8, 55 (dd, J - 1,8 a 5,7 Hz, IH), 8 (m, IH) 7,45 (dd, J = 5,7 a 9,3 Hz, IH) 7, 3 (m, 2H) 7,05 (s, IH) 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 210 [M]+.
(3-chlór-4-etoxyfenyl)-amid 2-oxo-2,3-dihydro-lí/-indol-4-karboxylová kyselina
Do roztoku 4-karboxy-2-oxindolu (200 mg 1,13 mmol) a 3-chlór-4-metoxyfenylamínu (178 mg, 1,13 mmol) v dimetylformamide (15 ml) pri izbovej teplote sa pridá benzotriazol-1 -yloxytris(dimetylamino)fosfónium-hexafluórfosfát (BOP činidlo, 997 mg 2, 26 mmol), potom 4-dimetylaminopyridín (206 mg, 1, 69 mmol), zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 72 hodín. Reakcia sa potom zriedi etylacetátom (300 ml), premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou, 2N kyselinou chlorovodíkovou (100 ml), vodou (3 x 200 ml) a soľankou. Potom sa suší nad síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa trituruje etylacetátom, čím sa získa (3-chlór-4-metoxyfenyl)-amid 2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol-4-karboxylovej kyseliny vo forme ru97 žovej pevnej látky. ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10, 50 (s, br, 1H, NH) 10, 12 (s, br, 1H, NH) 7, 9 (s, J = 2,5 Hz, 1H) 7, 62 (dd, J = 2,5 & 9 Hz, 1H) 7,38 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 7, 32 (t, J = 7,6 Hz, 1H) 7, 13 (d, J, = 9 Hz, 1H) 6,98 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 3, 83 (s, 3H, OCH3) 3, 69 (s, 2H, CH2).
MS-EI m/z 316 [M]+.
4-Karboxy-2-oxindol
Roztok trimetylsilyldiazometánu v hexáne (2 M) sa pridáva po kvapkách do roztoku 2,01 g 2-chlór-3-karboxynitrobenzénu v 20 ml metanolu pri izbovej teplote, dokiaľ sa neprestane uvoľňovať plyn. Na zhášanie prebytku trimetylsilyldiazometanu sa pridá kyselina octová a zvyšok sa suší v sušiarni cez noc. Získaný 2-chlór-3-metoxykarbonylenitrobenzén je dostatočne čistý do nasledujúcej reakcii.
Dimetyl-malonát (6,0 ml) sa pridá do ľadovej studenej suspenzie 2,1 g hydridu sodného v 15 ml DMSO. Reakčná zmes sa mieša pri teplote 100 °C po dobu 1 hodiny, potom sa ochladí na izbovú teplotu a po častiach sa pridá 2chlór-3-metoxykarbonylenitrobenzén (2,15 g) a zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa potom ochladí na izbovú teplotu, naleje do ľadovej vody, okyslí na pH = 5 a extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje, čím sa získajú 3,0 g dimetyl-2-metoxykarbonyl-6-nitrofenyl-malonátu.
Dimetyl-2-metoxykarbonyl-6-nitrofenylmalonát (3, 0 g) sa refluxuje v 50 ml 6N kyseliny chlorovodíkovej cez noc. Zmes sa koncentruje do sucha, pridá sa 20 ml etanolu a 1,1 g chloridu cínatého a zmes sa refluxuje po dobu 2 hodín. Zmes sa filtruje cez Celit, koncentruje a chromatografuje na stĺpci silikagélu v zmesi etylacetátu, hexánu a octovej kyseliny ako mobilnej fázy, čím sa získa 0,65 g (37 %) 4-karboxy-2-oxindolu ako bielej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12,96 (s, br, 1H, COOH) 10, 74 (s, br, 1H, NH) 7,53 (d, J = 8Hz, 1H) 7, 39 (t, J = 8Hz, 1H) 7,12 (d, J = 8Hz, 1H) 3,67 (s, 2H).
D. Syntéza pyrolom substituovaných 2-indolinónov
Príklad 1
4-mety 1-5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-l //-pyrol-2-karboxy lová kyselina
I
Etylester 4-metyl-2-pyrolkarboxylovej kyseliny (komerčne dostupný) sa formyluje podľa spôsobu A, čím sa získa (73%) etylester 5-formyl-4-metyl-2pyrolkarboxylovej kyseliny, ktorá sa potom hydrolyzuje podľa spôsobu B, čím sa získa 5-formyl-4-metyl-l//-pyrol-2-karboxylová kyselina (58%).
Oxindol (133 mg, 1 mmol) sa kondenzuje 5-formyl-4-metyl-l//-pyrol-2karboxylovou kyselinou (153 mg) podľa spôsobu D, čím sa získa 268 mg (100%) požadovanej zlúčeniny ako oranžovo-červenej pevnej látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,84 (s, br, 1H, NH), 12,84 (s, br, 1H, COOH) 10, 98 (s, br, 1H, NH) 7,82 (d, J = 7,5 Hz, 1H) 7,67 (s, 1H, H-vinyl) 7,18 (t, J = 7,5 Hz, 1H) 7,01 (t, J = 7,5 Hz, 1H) $88 (d, J = 7,5 Hz, 1H) 6,71 (d, J = 2,2 Hz, 1H) 2,32 (s, 3H, CH3).
MS (negatívny mód) 266, 8 [M-l]+.
Príklad 2
4-Mety 1-5-(1 -metyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-l //-pyrol-2karboxylová kyselina l-Metyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (147 mg, 1 mmol) sa kondenzuje s 5formyl-4-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovou kyselinou (153 mg) podľa spôsobu D, čím sa získa 250 mg (86%) požadovanej zlúčeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13, 82 (s, br, 1H, NH), 12,88 (s, br, 1H 7, 83 (d, J = 7,5 Hz, 1H) 7,65 (s, 1H, H-vinyl) 7,26 (t, J = 7,5 Hz, 1H) 7,027,09 (m, 2H) 6,70 (d, J = 2,2 Hz, 1H) 2,32 (s, 3H, CH3).
MS m/z 283, O [M+lf.
Príklad 3 metylester 4-metýl-5-(2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)- l//-pyroI-2karboxylovej kyseliny
Oxindol (105 mg 0, 79 mmol) sa kondenzuje s metylesterom 5-formyl-4metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny (110 mg 0, 67 mmol) podľa spôsobu E, čím sa získa 153,2 mg (81%) požadovanej zlúčeniny.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, br, 1H, NH) 10, 97 (s, br, 1H, NH) 7,82 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 7,67 (s, 1H, H vinyl) 7, 2 (dt, J = 1, 2 & 7, 7 Hz, 1H) 7, 01 (dt, J = 1,2, 7,7 Hz, 1 H) 6,90 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 6,77 (d, J = 2 Hz, 1H).
MS (ES) m/z 283 [M++l].
Príklad 4 etylester 5-(5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4-metyl-l//-pyrol2-karboxylovej kyseliny
5-Chlór-l,3-dihydro-indol-2-ón (2, 22 g, 13, 2 mmol) sa kondenzuje s etylesterom 5-formyl-4-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny (2, 43 g) podľa spôsobu E, čím sa získa 4,1 g (94%) požadovanej zlúčeniny ako oranžovej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,95 (s, br, 1H, NH) 7, 98 (d, J = 2, 2 Hz, 1H, H-4) 7,78 (s, 1H, H-vinyl) 7,18 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, 1H, H-6) 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7) 7,34 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-3’) 4,27 (q, J = 7,2 Hz, 2H, OCH2CH3) 2,33 (s, 3H, CH3) 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 330 [M+].
100
Príklad 5
5-(5-chlór-2-oxo-1,2-dihydro-indo 1-3-y lidénmety l)-4-mety 1-1//-pyrol-2-karboxylová kyselina
Zmes etylesteru 5-(5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-y 1 i dénmetyl)-4-metyl-1//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny (1,3 g, 4 mmol) a hydroxidu draselného v metanole (25 ml) a etanole (25 ml) sa zahrievajú pri refluxe cez noc. Nerozpustné látky sa odstránia filtráciou a zmes sa neutralizuje 6N kyselinou chlorovodíkovou, čím sa získa 0,876 g (70%) požadovanej zlúčeniny.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,80 (s, br, IH, NH), 12,90, (s, br, IH, COOH), 11,06 (s, br, IH, NH) 8,02 (d, J = 1,8 Hz, IH, H-4) 7,81 (s, IH, Hvinyl) 7,20 (dd, J = 1,8 & 8,3 Hz, IH, H-6) 6,89 (d, J = 8,3 Hz, IH, H-7) 6,72 (d, J = 1,8 Hz, IH, H-3') 2,35 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 302 [M+].
Príklad 6 (3-pyrolidin-l-yl-propyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4-metyl-l//-pyroI-2-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (0,16 g 0,76 mmol) sa kondenzuje s (3pyrolidin-1 -yl-propyl)-amidom 5-formy 1-4-mety 1-1 //-pyro 1-2-karboxylovej kyseliny (0,2 g, pripravený podľa spôsobu C), čím sa získa 60 mg (17%) požadovanej zlúčeniny ako oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, IH, NH), 11,02 (s, br, IH, NH) 8,42 (t, J = 5,8 Hz, IH, CONCH2) 8,12 (d, J = 1,8 Hz, IH, H-4) 7,78 (s, IH, H-vinyl) 7,30 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, IH, H-6) 6, 82 (d, J = 8,4 Hz, IH, H-7) 6,77 (d, J = 2,4 Hz, IH, H-3') 3,22-3,31 (m, 2H, CH2) 2,38-2,4-3 (m, 6H, 3 x CH2) 2,35 (s, 3H, CH3) 1, 62-1,71 (m, 6H, 3 x CH2).
MS-EI m/z 456 a 458 [M+-l a M + + 2],
101
Príklad Ί (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4-metyl-l /Y-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indoI-2-ón (0,16 g 0, 75 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formy l-4-metyl-l//-pyrol-2-karboxy lovej kyseliny (0,2 g, pripravený podľa spôsobu C), čím sa získa 30 mg (8%) požadovanej zlúčeniny ako oranžovej pevnej látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH) 8,40 (m, 1H, CONCH2) 8,12 (d, J = 1,5 Hz, 1H, H-4) 7,78 (s, 1H, Hvinyl) 7, 30 (dd, J = 1,5 «& 8,2 Hz, 1H, H-6) 6,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7) ¢78 (d, J = 2,4 Hz, 1H, H-3’) 3,23 (m, 2H, CH2) 2,38-2,4-5 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2) 2,35 (s, 3H, CH3) 1,61 (m, 2H, CH2) 0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l a M++2],
Príklad 8 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (212 mg, 1 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny (pripravený z etyl-pyrol-2-karboxylátu podľa spôsobu A, B a potom C), čím sa získa 162 mg (38%) požadovanej zlúčeniny.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,53 (s, br, 1H, NH), 11,06 (s, br, 1H, NH) 8,37 (t, 1H, CONCH2) 7,89 (m, 2H) 7,32 (dd, J = 2,0 Hz, 1H) 6,96 (s, 1H) 6,80-6,84 (m, 2H) 3,3 (m, 2H, CH2) 2,45-2,55 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2) 0,95 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 430 a 432 [M+-l a M++l],
102
Príklad 9 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)17/-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (209 mg, 1 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny, čím sa získa 182 mg (42%) požadovanej zlúčeniny.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (s, br, 1H, NH), 11,06 (s, br, 1H, NH) 8, 36 (t, 1H, CONCH2) Ί, 77 (s, 1H, H-vinyl) 7, 73 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7, 64 (d, J = 7,2 Hz, 2H) 7, 46 (m, 2H) 7,32 (m, 2H) 7,11 (s, 1 H) 6, 96 (m, 1 H) 6,80 (m, 1H) 3,31-3,32 (m, 2H, CH2) 2,46-2,53 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2) 0, 96 (t, J = 6,9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 428 [M+j.
Príklad 10 (2-dietylaminoetyl)-metylamid 5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmety 1)-1 H-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (212 mg, 1 mmol) sa kondenzuje s (2dietylaminoetyl)metylamidom 5-formyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny, čím sa získa 246 mg (55 %) požadovanej zlúčeniny.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 1.3,54 (s, br, 1H, NH), 11,06 (s, br, 1H, NH) 7,90 (m, 2H) 7,33 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, 1H) 6,82-6,85 (m, 3H) 3, 55 (s, br, 2H, CH2) 3,25 (s, br, 3H, NCH3) 2,57 (t, J - 6,5 Hz, 2H, CH2) 2,45 (m, 4H, N(CH2CH3)2) 0, 91 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 444 a 446 [M+-1 a M++lj.
103
Príklad 11 (2-di ety lamí noetyljmetyl amid 5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
6-Fenyl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (209 mg, 1 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)metylamidom 5-formyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny, čím sa získa 277 mg (63%) požadovanej zlúčeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, br, 1H, NH), 11,04 (s, br, 1H, NH) 7, 78 (s, 1H, H-vinyl) 7, 73 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7, 64 (d, J = 7,5 Hz, 2H) 7, 46 (m, 2H) 7, 33-7,36 (m, 2H) 7, 11 (s, 1H) 6, 84 (m, 1H) 6, 78 (m, 1H) 3, 55 (s, br, 2H, CH2) 3,25 (s, br, 3H, NCH3) 2,58 (t, 2H, CH2) 2,44 (m, 4H, N(CH2CH3)2) 0, 92 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
Príklad 12 (3-dietylaminopropyl)-amid 3-metyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
Oxindol (66, 5 mg 0, 5 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)amidom 5-formyl-3-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny (pripraveným z etylesteru 3-formyl-3-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny podľa spôsobu B potom C), čím sa získa 39 mg (21%) požadovanej zlúčeniny.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,34 (s, br, 1H, NH) 10, 88 (s, br, 1H, NH) 7,62-7,67 (m, 3H) 7, 17 (m, lH),-6,99 (m, 1 H) 6,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 6,63 (d, J = 1 Hz, 1H) 3,26-3,32 (m, 2H, CH2) 2,41-2,4-8 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2) 2,29 (s, 3H, CH3) 1,63 (m, 2H, CH2) 0,93 (t, J - 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 380 [M+],
104
Príklad 13 (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyI-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (106 mg 0, 5 mmol) sa kondenzuje s (3dietylaminopropyl)-amidom 5-formyl-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny, čím sa získa 35 mg (15%) požadovanej zlúčeniny.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,35 (s, br, IH, NH), 11,00 (s, br, IH, NH) 7,89 (d, J = 1,9 Hz, IH, H-4) 7, 80 (s, IH, H-vinyl) 7, 74 (t, J = 5,3 Hz, IH, CONCH2) 7,31 (dd, J - 1,9 & 8,4 Hz, IH, H-6) 6, 83 (d, J = 8,4 Hz, IH, H7)6,63 (s, IH, H-3') 3,26 (m, 2H, CH2) 2,41-2,4-8 (m, 6H, CH2 &
N(CH2CH3)2) 2,29 (s, 3H, CH3) 1,63 (m, 2H, CH2) 0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l a M++l]
Príklad 14 (3-dietylaminopropyl)-amid 3-metyl-5-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (105 mg 0, 5 mmol) sa kondenzuje s (3dietylaminopropyl)-amidom 5-formy 1-3-mety l- l//-pyrol-2-karboxylo vej kyseliny, čím sa získa 67, 8 (30 %) požadovanej zlúčeniny.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,37 (s, br, IH, NH), 11,02 (s, br, IH, NH) 7,23-7,73 (m, 11 H) 3,29 (m, 2H, CH2) 2,41-2,48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2) 2,29 (s, 3H, CH3) 1,64 (m, 2H, CH2) 0, 94 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 456 [M+].
105
Príklad 15 (3-diétylamíno-propyl)-amid 5-(5-metoxy-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-l //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
I
5-Metoxy-l ,3-dihydro-indol-2-ón (82,5 mg 0,5 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formy 1-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny, čím sa získa 80 mg (39%) požadovanej zlúčeniny.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,45 (s, br, 1H, NH) 10,70 (s, br, 1H, NH) 7,68-7,70 (m, 2H) 7,32 (d, J = 1,8 Hz, 1H) 6,72-6,79 (m, 2H) 6,60 (s, 1H)3,73 (s, 3H, OCH3) 3,28 (m, 2H, CH2) 2,41-2,4-8 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2) 2,29 (s, 3H, CH3) 1,63 (m, 2H, CH2) 0,93 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 410 [M+],
Príklad 16 (3-dietylamino-propyl)-amid 5-(6-metoxy-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3 -metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
6-Metoxy-l,3-dihydro-indol-2-ón (82, 5 mg 0, 5 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formy 1-3-metyl -1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny, čím sa získa 63 mg (31%) požadovanej zlúčeniny.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,22 (s, br, 1H, NH) 10, 86 (s, br, 1H, NH) 7,39-7,63 a 6, 37-6,55 (m, 6H) 3, 73 (s, 3H, OCH3) 3, 3 (m, 2H, CH2) #5 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2) 2,28 (s, 3H, CH3) 1,63 (m, 2H, CH2) 0, 93 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 410 [M+],
106
Príklad 1 7 (2-dietylaminoetyl)-amid 3-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 -karboxylovej kyseliny
Etylester 4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylovej kyseliny (May, Donald A.; Lash, Timoty D.; J.Org.Chem., 1992, 57 : 18, 4820-4828) sa formyluje podľa spôsobu A, potom B, čím sa získa 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro2H-izoindol-1 -karboxylová kyselina.
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (1,43 g 6,8 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l -karboxylovej kyseliny (1,97 g), čím sa získa 2,2 g (67%) zlúčeniny ako žltooranžovej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,47 (s, 1H, NH), 11,0 (s, 1H, NH) 8, 0 (d, 1H, NH) 7, 70 (s, 1H, CH) 7, 28 (dd, J = 2,1 a 8,2 Hz, 1H, ArH) 7, 16 (m, 1H, ArH) 6,8 (d, J = 8,3 Hz, 1H, ArH) 3,3 (s, 2H, CONH) 2,5 (m, 6H, 3 x NCH2) 2, 78 (br m, 2H, pyrol CH2) 2,72 (br m, 2H, pyrol CH2) 1, 7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2) 1,74 (br s, 4H, CH2CH2CH2CH2) 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 a 486 [M+-l a M++l].
Príklad 18 (3-dietylaminopropyl)-amid 3-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l -karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (20 mg 0,1 mmol) sa kondenzuje s (3dietylaminopropyl)-amidom 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylovej kyseliny (30 mg), čím sa získa 33 mg (46%) požadovanej zlúčeniny ako oranžovej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ10, 9 (s, 1H, NH) 8,0 (m, 1H, NH) 7,68 (m, 1H, ArH) 7, 4(m, 1H, ArH) 7,29 (d, J = 1,9 a 8,5Hz, 1H, ArH) 6,8 (d, J = 8
107
Hz, 1H, ArH) 2,7 (br m, 4H, 2 x NCH2) 2,4 (m, 8H, 4xNCH2) 1,7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2) 1,6 (br m, 2H, CH2CH2CH2) 0, 93 (t, J - 7,4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 499 a 501 [M+ a M++2].
Príklad 19 (3-pyrolidin-1 -yl-propyl)-amid 3-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmety 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (80 mg 0, 4 mmol) sa kondenzuje s (3pyrolidin-l-yl-propyl)-amidom 3-formy 1-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1-karboxylovej kyseliny (120 mg), čím sa získa 43 mg (22%) požadovanej zlúčeniny ako hnedo-oranžovej pevnej látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,4 (s, 1H, NH)10, 9 (s, 1H, NH) 8,0 (m, 1H, NH) 7,69 (m, 1H, ArH) 7,49 (m, 1H, ArH) 7,28 (d, J = 1,7 a 7,8 Hz, 1H, ArH) 6,8 (d, J = 8 Hz, 1H, ArH) 3,3 (br m, 2H, 2 x NCH2) 2,8 (m, 4H, 2 x pyrolCH2) 2,5 (br m, 4H, N(CH2CH3)2) 1, 6 (br m, 8H, 2 x pyrolCH2CH2,
CH2CH2CH2 a CONHCH2).
MS-EI m/z 497 a 499 [M+ a M++2],
Príklad 20 (2-dietylaminoetyl)-amid 3-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 -karboxylovej kyseliny
6-Pyridin-3-yl-1,3-dihydro-indol-2-ón (60 mg 0, 4mmol) sa kondenzuje s (2-dietyIaminoetyl)-amidom 3-formy 1-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izo indol-1 -karboxylovej kyseliny (80 mg), čím sa získa 50 mg (38%) požadovanej zlúčeniny ako červenkastej pevnej látky.
108 *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,4 (s, 1H, NH), 11 (s, 1H, NH) 8, 9(d, 1H, NH) 8, 7 (dd, 1H, ArH) 8,1 (dd, 1H, ArH) 7,9 (d, 1H, ArH) 7,6 (s, 1H, CH) 7,5 (dd, 1H, ArH) 7,3 (dd, 1H, ArH) 7,1 (m, 2H, ArH) 3,35 (m, 2H, CONHCH2) 2,8 (m, 4H, 2 x pyrolCHz) 2,5 (br m, 6H, N(CH2CH3)2 a NCH2) 175 (br s, 4H, 2 x pyrolCH2CH2) 0, 9(t, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 [M+],
Príklad 21 (3-dietylaminopropyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
Do zmesi benzoylchloridu (1 ekviv.) a chloridu hlinitého (1 ekviv.) v dichlóretáne pri teplote 0 °C sa pridá etyl-3,5-dimetyl-2-pyrolkarboxylát (1 ekviv.). Zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 4 hodín. Zmes sa potom extrahuje etylacetátom (EtOAc) a Η2Ο, spojené organické extrakty sa premyjú nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia a koncentrujú, čím sa získa (51%) 4-benzoyl-3,5-dimetyl-l//-pyrol-2-karboxylová kyselina.
Zmes etylesteru 4-benzoyl-3,5-dimetyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny (4,13 g, 15,2 mmol) a dusičnanu ceričito-amónneho (33 g, 4 ekviv.) v 50 ml zmesi tetrahydrofuránu (TF), kyseliny octovej (HOAc) a H20 (1:1:1) sa refluxuje cez noc. Reakčná zmes sa potom ochladí, extrahuje EtOAc a potom alkalizuje na pH 9 uhličitanom sodným. Organická vrstva sa potom premyje soľankou, suší (MgSOzJ a koncentruje, potom čistí stĺpcovou chromatografiou, čím sa získa 3,25 g (75%) etylesteru 4-benzoyl-5-formyl-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny ako žltej pevnej látky.
5-Bróm-1,3-dihydro-indol-2-ón sa kondenzuje s 4-benzoyl-5-formyl-3-metyl-1 /7-pyrol-2-karboxylovou kyselinou podľa spôsobu D, čím sa získa 4-benzoyl-5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl- lH-pyrol-2-karboxylová kyselina. Táto karboxylová kyselina sa potom kondenzuje s
109
M/V-dietyl-1,3-propándiamínom podľa spôsobu C, čím sa získa požadovaná zlúčenina.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 7,96 (m, 1H, CONCH2) 7, 76 (d, J = 7,0 Hz, 2H) 7, 68 (t, 1H) 7, 56 (m, 2H) 7, 40 (s, 2H) 7,33 (dd, J = 1,6 & 8,3 Hz, 1H, H-6) 6,84 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7) 3,33 (m, 2H, CH2) 2,42-2,4-6 (m, 6H, 3 x CH2) 2,10 (s, 3H, CH3) 1,65 (m, 2H, CH2) 0, 94 (t, J = 7, 0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 564 [M++l].
Príklad 22 (3-morfolin-4-yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-1//-pyro 1-2-karboxylovej kyseliny ‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,10 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH) 7,92 (m, 1H, CONCH2) 7,75 (m, 2H) 7,69 (t, 1H) 7, 56 (m, 2H) 7,42 (m, 2H) 7, 33 (dd, J = 1,9 & 8,3 Hz, 1H, H 6) 6,85 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7) 3,56 (m, 4H, 2 x CH2) 3,33 (m, 2H, CH2) 2,35 (m, 6H, 3 x CH2) 2,10 (s, 3H, CH3) 170 (m, 2H, CH2).
Príklad 23 (3-pyrolidin-l -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-3-metyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny 'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,18 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH) 8,01 (m, 1H, CONCH2) 7,74 (m, 1H) 7,67 (m, 1H) 7,55 (m, 1H) 7,32 (s, 1H, H-vinyl) 7,17 (m, 1 H) 6,92 (m, 1H) 3,36 (m, 2H, CH2) 2,44 (m, 6 H, 3 x CH2) 2,11 (s, 3H, CH3) 1, 65-1,75 (m, 6H, 3 x CH2).
MS-EI m/z 482 [M+]·
110
Príklad 24 (3-pyrolidin-l -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-y 1 i dénme ty l)-3-metyl-l//-pyro 1-2-karboxylovej kyseliny ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,01 (s, 1H, NH), 11,18 (br ,s, 1H, NH) 7,98 (m, 1H, CONCH2) 7,75 (m, 2H) 7,68 (m, 1H) 7,55 (m, 2H) 7, 40 (m, 2H) 7,33 (dd, J = 2,0 & 8,2 Hz, 1H, H6) 6,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7) 3,34 (m, 2H, CH2) 2,42-2,4-7 (m, 6 H, 3 x CH2) 2,09 (s, 3H, CH3) 1, 70 (m, 2H, CH2) 164 (m, 4H, 2 x CH2).
Príklad 25 (3-pyrolidin-l-yl-propyl)-amid 4-benzoyl-3-metyl-5-(2-oxo-6-fenyl-1,2di hyďro-indol-3-y 1 idénmety 1) -1 //-pyro 1-2-karboxylovej kyseliny ’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,15 (s, 1H, NH), 11,16 (br s, 1H, NH) 7, 98 (m, 1H, CONCH2) 7,77 (d, J = 7,7 Hz, 2H) 7,69 (m, 1H) 7, 53-7,63 (m, 4H) 7,44 (m, 2H) 7,33-7,37 (m, 2H) 7,24 (s, 2H) 7,12 (s, 1H) 3,36 (m, 2H, CH2) 2,43-2,4-8 (m, 6 H, 3 x CH2) 2,12 (s, 3H, CH3) 1, 74 (m, 2H, CH2) (69 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 558 [M+],
Príklad 26 (3-pyrolidin-l -y l-propyl)-am i d 4-benzoyl-5-(6-metoxy-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny ’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,99 (s, 1H, NH), 11,05 (br s, 1H, NH) 7,93 (m, 1H, CONCH2) 7,72 (m, 2H) 7,65 (m, 1H), 7,54 (m, 2H) 7,15 (s, 1H, H-vinyl) 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-4) ¢51 (dd, J = 2,3 & 8,4 Hz, 1H, H5) 6,44 (d, J = 2,3 Hz, 1H, H-7) 3,74 (s, 3H, OCH3) 3,35 (m, 2H, CH2) 242-2,46 (m, 6 H, 3 x CH2) 2,10 (s, 3H, CH3) 1,72 (m, 2H, CH2) 1, 65 (m, 4H, 2 x CH2).
111
MS-EI m/z 512 [M+].
Príklad 27 (3-pyrolidin-l -y l-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-metoxy-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-y lidénmetyl)-3-mety 1-1//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,24 (s, 1H, NH)10, 90 (br s, 1H, NH) 7,97 (m, 1H, CONCH2) 7,75 (d, J = 7,2 Hz, 2H) 7,69 (m, 1H) 7,56 (m, 2H) 7,24 (s, 1H, H-vinyl) 6,79 (m, 2H) 6,66 (m, 1H) 3,67 (s, 3H, OCH3) £4 (m, 2H, CH2) 2,43- 2,48 (m, 6 H, 3 x CH2) 2,14 (s, 3H, CH3) 1,71 (m, 2H, CH2) 1,66 (m, 4H, 2 x CH2),
MS-EI m/z 512 [M+],
Príklad 28 (3-pyrolidin-l-y 1-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny 'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,20 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH) 8, 03 (m, 1H, CONCH2) 7,75 (m, 2H) 7,68 (m, 1H) 7, 55 (m, 2H) 7,38 (s, 1H, H-vinyl) 7,08 (m, 1H) 7,01 (m, 1H) 6,87 (m, 1H) 3,34 (m, 2H, CH2) ^2-2,4-8 (m, 6 H, 3 x CH2) 2,09 (s, 3H, CH3) 1,70 (m, 2H, CH2) 1,65 (m, 4H, 2 x CH2),
MS-EI m/z 500 [M+], i
Príklad 29 (3-dietylaminopropyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
112
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)amidom 4-acetyl-5-formyl-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny (pripraveným z etylesteru 4-acetyl-5-formyl-3-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny podľa spôsobu B potom C), čím sa získa požadovaná zlúčenina.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,19 (s, 1H, NH), 11,19 (br s, 1H, NH) 8,15 (m, 1H, CONCH2) 8,11 (s, 1H, H-vinyl) 7,72 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H4) 7,38 (dd, J = 1,8 & 8,2 Hz, 1H, H6) 6,87 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7) 3,27 (m, 2H, CH2) 2,57 (s, 3H, CH3CO) 2,46 (m, 9 H, CH3 & 3 x CH2) 1, 64 (m, 2H, CH2) 0, 93 (t, J = 7, 1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
Príklad 30 (3-pyrolidin-1 -y 1-propyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-mety 1-l/7-pyrol-2-karboxylovej kyseliny 'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,14 (m, 1H, CONCH2) 8,10 (s, 1H, Hvinyl) 7,70 (d, 1H, H-4) 7,36 (dd, J = 1,6 & 8,1 Hz, 1H, H-6) 6,85 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-7) 3,32 (m, 2H, CH2) 2,57 (s, 3H, CH3CO) 2,44 (s, 3H, CH3) 232,4-8 (m, 6H, 3 x CH3) 1,65-1,71 (m, 6H, 3 x CH2).
MS m/z 499 & 501 [M+] & [M++2],
Príklad 31 (3-morfolin-4-yl-propyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl -1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny ‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,20 (s, 1H, NH), 11,26 (br s, 1H, NH) 8,09 (m, 2H, H-vinyl & CONHCH2) 7,73 (d, J = 1,5 Hz, 1H, H-4) 7,38 (dd, J = 1,5 & 8,3 Hz, 1H, H-6) 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7) 3,55 (m, 4H, 2 x CH2) 3,26 (m, 2H, CH2) 2,57 (s, 3H, CH3CO) 2,44 (s, 3H, CH3) 2,35 (m, 6H, 3 x CH3) 1,68 (m, 2H, CH2).
113
MS-EI m/z 514 & 516 [M+-l] & [M++l],
Príklad 32 (3-hydroxypropyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) 14,17 (s, 1H, NH), 11,25 (br s, 1H, NH) 10 (s, 1H, H-vinyl) 03 (m, 1H, CONCH2) 71 (br s, 1H, H-4) 37 (br d, J = 8,4 Hz, 1H, H-6) 87 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-7) 51 (br s, 1H, OH) 51 (br s, 2H, CH2) 36 (m, 2H, CH2) 57 (s, 3H, CH3CO) 43 (s, 3H, CH3) 70 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 445 & 447 [M+-l] & [M++1 ].
Príklad 34 (2-morfolin-4-yl-etyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,19 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH) 8, 10 (s, 1H, H-vinyl) 7,84 (m, 1H, CONCH2) 7,71 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H4) 7,38 (dd, J = 1,8 & 8,2 Hz, 1H, H6) 6,87 (d, J = ,8,2 Hz, 1H, H-7) 3,58 (m, 4H, 2 x CH2) 3,40 (m, 2H, CH2) 2,57 (s, 3H, CH3CO) 2,49 (m, 4H, 2 x CH2) %5 (m, CH3 & CH2).
MS-EI m/z 500 & 502 [M+-l] & [M++l],
Príklad 35 (2-pyrolidin-l -y 1-etyl)-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-3-metyl-1 //-pyrol-2-karboxylovej kyseliny
114 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,17 (s, IH, NH), 11,23 (s, IH, NH) 8,11 (s, IH, H-vinyl) 7,91 (m, IH, CONCH2) 7,73 (d, J = 1,9 Hz, IH, H4) 7, 39 (dd, J = 1,9 & 8,3 Hz, IH, H-6) 6,88 (d, J = 8,3 Hz, IH, H-7) 3,40 (m, 2H, CH2) 2,62 (m, 2H, CH2) 2,57 (s, 3H, CH3CO) 2,49 (m, 4H, 2 x CH2) 244(s, 3H, CH3) 1,69 (m, 4H, 2 x CH2).
Príklad 36 [2-(4-hydroxyfenyl)etyl]-amid 4-acetyl-5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl)-3-metyl-l//-pyrol-2-karboxylovej kyseliny ’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,21 (s, IH, NH), 11,18 (s, IH, OH) 9, 09 (s, IH, NH) 8,06-8,10 (m, 2H) 7,73 (s, IH) 7,38 (d, J = 7,8 Hz, IH) 7,04 (d, J = 7,1 Hz, 2H) 6,88 (d, J = 7,8 Hz, IH) 6,67 (d, J = 7,1 Hz, 2H) 3,42 (m, 2H, CH2) 272 (m, 2H, CH2) 2,56 (s, 3H, CH3CO) 2,37 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 507 & 509 [M+-l] 8c [M++l],
Príklad 37 (3-dietylaminopropyl)-ami d 5-(5-bróm-2-oxo-l ^-dihydro-indol-B-ylidénmetyl)^ -izopropyl-4-feny 1-1 H-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
Zmes 2-aminoacetofenón-hydrochloridu (1 ekviv.), etyl-izobutyrylacetátu (1,2 ekviv.) a octanu sodného (2,4 ekviv.) v H2O sa mieša pri teplote 100°C po dobu 18 hodín a potom ochladí na izbovú teplotu, vodná vrstva sa oddekantuje a olej sa rozpustí v etylacetáte, premyje vodou a soľankou a suší, čím sa získa (93%) etylester 2-izopropyl-4-fenyl-lH-pyrol-3-karboxylovej kyseliny vo forme červeno hnedého oleja.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,21 (s, br, IH, NH) 7,14-7,27 (m, 5H) 6, 70 (d, J = 2,7 Hz, IH) 4,02 (q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3) 365 (m, IH, CH(CH3)2) 1,22 (d, J = 7,5 Hz, 6H, CH(CH3)2) 1,04 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
115
MS-EI m/z 257 [M+]·
Tento pyrol sa formyluje podľa spôsobu A, čím sa získa (41%) etylester 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny ako červenkastá pevná látka.
. i 'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,35 (s, br, IH, NH) 9,14 (s, IH, CHO) 7,36 (s, 5H) 3,96 (q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3) 3,74 (m, IH, CH(CH3)2) 1,29 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2) 0,90 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 285 [M+j.
Ester pyrolkarboxylovej kyseliny sa hydrolyzuje podľa spôsobu B, čím sa získa (57%) 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-1 //-pyrol-3-karboxyIovej kyseliny vo forme béžovej pevnej látky.
‘H NMR, (300 MHz, DMSO-d6) 12,28 (s, br, IH, COOH), 12,02 (s, br, IH, NH) 10 (s, IH, CHO) 35 (s, 5H) 81 (m, IH, CH(CH3)2) 28 (d, J = 6,9
Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 257 [M+]·
5-Bróm-l ,3-dihydro-indol-2-ón (120 mg 31 mmol) sa kondenzuje s (3dietylaminopropyl)-amidom 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (pripravený podľa spôsobu C), čím sa získa 120 mg (71%) zlúčeniny.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 14,23 (s, br, IH, NH), 11,08 (s, br, IH, NH) 38-7,55 (m, 7H, Ar-H & CONCH2) 30 (s, 1 H, H-vinyl) 26 (dd, J =1,8 & 7,8 Hz, IH) 85 (d, J = 8,7 Hz, IH) 36 (m, IH, CH(CH3)2) 07 (m, 2H,
CH2) 34 (q, J = 7, 1 Hz, 4H, N(CH2CH3)2) 22 (t, J = 6, 9 Hz, 2H, CH2) 40 (m, 2H, CH2) 31 (d, J = 6, 9 Hz, 6H, CH(CH3)2) 86 (t, J = 7, 1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 565, 1 [M++l].
116
Príklad 38 (3-pyrolidin-l -yl-propyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2-izopropy 1-4-fenyl -1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-(5-Bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2-izopropyl-4-fenyll//-pyrol-3-karboxylová kyselina (127 mg 0, 2 mmol) sa kondenzuje s 3pyrolidin-l-yl-propylamínom (43 mg 0, 336 mmol), čím sa získa 140 mg (66%) zlúčeniny.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,40 (s, br, 1H, NH) 7, 38-7,47 (m, 7H) 7, 23-7,27 (m, 2H) 6,84 (d, J = 8,1 Hz, 1H) 3,36 (m, 1H, CH(CH3)2) 308 (m, 2H, CH2) 2,30 (m, 4H, 2 x CH2) 2,20 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2) '1,62 (m, 4H, 2 x CH2) 1,42 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2) 1,31 (d, J = 7,2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 560 a 562 [M+-l a M++l],
Príklad 39 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (57 g 0,27 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (120 mg), čím sa získa 78 mg (53%) požadovanej zlúčeniny ako žltá pevná látka.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,23 (s, br, 1H, NH), 11,09 (s, br, 1H, NH) 7,38-7,51 (m, 6H) 7,25-7,28 (m, 2H) 7,19 (t, 1H, CONHCH2) $5 (d, J =
7,8 Hz, 1H) 3,43 (m, 1H, CH(CH3)2) 3,11 (m, 2H, CH2) 2,28-2,39 (m, 6H, N(CH2CH3) 2 & CH2, 1, 31 (d, J = 6,9 Hz, CH(CH3)2) 0, 85 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2.
MS-EI m/z 548 a 550 [M+-l a M++l].
117
Príklad 40 [3-(4-metylpiperazin-l -yl)propyl]-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2-izopropyl-4-fenyI-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (53 mg 0, 25 mmol) sa kondenzuje s [3(4-metylpiperazin-l -yl)propyl]-amidom 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (300 mg), čím sa získa 65 mg požadovanej zlúčeniny.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,22 (s, br, 1H, NH), 11,08 (s, br, 1H, NH) 7,23-7,50 (m, 9H) 6,85 (d, J = 8 , 7 Hz, 1H) 3,37 (m, 1H, CH(CH3)2) 305 (m, 2H, CH2) 2,24 (m, 8H, 4xCH2) 2,11 (m, 5H, CH2 & CH3) 1,42 (m, 2H, CH2) 1,31 (d, J = 7,2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 589 a 591 [M+-l a M++l].
Príklad 41
5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2-izopropyl-4-fenyl -1 H-pyrol-3-karboxylová kyselina
5-Bróm-1,3-dihyďro-indol-2-ón (170 mg 0,8mmol) sa kondenzuje s 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-1//-pyrol-3-karboxylovou kyselinou (205 mg) podľa spôsobu D, čím sa získa 210 mg (58%) zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,31 (s, br, 1H, NH), 11,16 (s, br, 1H, NH) 7,26-7,44 (m, 7H) 7,11 (s, IH, H-vinyl), 6,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 3,78 (m, 1H, CH(CH3)2) 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 452 [M++l].
118
Príklad 42 (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 5-( 5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-y 1 i dénmety l)-2-metyl-4-feny 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (44 mg 0, 21 mmol) sa kondenzuje s (2pyrolidin-1-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2-metyl-4-fenyl-1 //-pyrol-3-karboxy- lovej kyseliny (70 mg, pripravený rovnakým spôsobom ako izopropylový analóg vyššie), čím sa získa 0,03 g (27%) zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,87 (s, br, 1H, NH), 11,11 (s, br, 1H, NH) 7, 36-7,51 (m, 6H) 7, 26 (dd, J = 1,8 & 8,1 Hz, 1 H) 7, 2 (s, 1 H, H-vinyl) 7,09 (m, 1H, CONCH2) 6,83 (d, J = 8,1 Hz, 1H) 3,17 (m, 2H, NCH2) 2,48 (m, CH3) 2,29-2,35 (m, 6H, 3 x NCH2) 1,59 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 518 a 520 [M+-l a M++l]
Príklad 43 (2-pyrolidin-l -y 1-etyl )-amid 5-[6-(2-metoxyfenyl)-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-y 1 idénmety 1]-2-metyI-4-feny 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-(2-Metoxyfenyl)-1,3-dihydro-indol-2-ón (50 mg 0,21 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2-metyl-4-fenyl-l/Z-pyrol3-karboxylovej kyseliny (70 mg), čím sa získa 0,04 g (35%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,82 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH) 7,48 (m, 2H) 7,43 (m, 1H) 7,38 (m, 2H) 7, 32 (m, 1H) 7, 24 (m, 2H) 7,16 (s, 1H, H-vinyl) 7,08 (m, 2H) 7, 03 (m, 1H) 7,0 (m, 2H) 3,74 (s, 3H, OCH3) 319 (m, 2H, NCH2) 2,49 (m, CH3) 2,32-2, 38 (m, 6H, 3 x NCH2) 1, 59 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 546 [M+],
119
Príklad 44 (2-dimetylaminoetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2-metyl-4-fenyl-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (46 mg 0, 22 mmol) sa kondenzuje s (2dimetylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2-metyl-4-fenyl-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (65 mg), čím sa získa 60 mg (55%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,86 (s, br, 1H, NH), 11,09 (s, br, 1H, NH) 7,47-7,49 (m, 2H) 7,38-7,41 (m, 4H) 7,26 (dd, J = 2,2 8c 8,3 Hz, 1H) 7,21 (s, 1H, H-vinyl) 7,04 (m, 1H, CONCH2) 6,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H) 3,15 (m, 2H, NCH2) 2,48 (m, CH3) 2, 16 (t, J = 6,8 Hz, 2H, 3 x NCH2) 2,02 (s, 6H, 2 x NCH3).
MS m/z 493 a 494, 8 [M+a M++2],
Príklad 45 (2-dimetylaminoetyl)-amid 5-[6-(2-metoxyfenyI)-2-oxo-1,2-dihydro-indoI-3-ylidénmetyl]-2-mety 1-4-fény 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-(2-Metoxyfenyl)-1,3-dihydro-indol-2-ón (53 mg 0,22 mmol) sa kondenzuje s (2-dimetylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2-metyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (65 mg), čím sa získa 0,05 g (44%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej gumy.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,82 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH) 7,37-7,52 (m, 5H) 7,32 (m, 1H) 7,22-7,27 (m, 2H) 7,16 (s, 1H)7, 08 (m, 2H) 7,03 (m, 1H) 7,0 (m, 2H) 3,74 (s, 3H, OCH3) 3,15 (m, 2H, NCH2) 249 (m, CH3) 2,16 (t, J = 6, 5 Hz, 2H, NCH2) 2,02 (s, 6H, 2 x NCH3).
MS m/z 521 [M++l],
120
Príklad 46 etylester 5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2-metyl-4-fenyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indoI-2-ón (60 mg 0, 29 mmol) sa kondenzuje s etylesterom 5-formyl-2-metyl-4-fenyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (75 mg), čím sa získa 78 mg (60%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
’H NMR (360 MHz; DMSO-d6) δ 14,01 (s, br, IH, NH), 11,13 (s, br, IH, NH) 7,42-7,46 (m, 3H) 7,27-7,34 (m, 4H) 7, 12 (s, IH) 6,84 (dd, J = 2,2 «fe 8,3 Hz, IH) 3,99-4,03 (m, 2H, OCH2CH3) 2,61 (s, 3H, CH3) 0,98-1,03 (m, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 450 a 452 [M+-l a M++l].
Príklad 47 (3-dietylaminopropyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmety l)-2-mety 1-4-fény 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (0, 47 g 2,2 mmol) sa kondenzuje s (3dietylaminopropyl)-amidom 5-formy 1-2-mety 1-4-fény 1-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (0, 75 g), čím sa získa 0,11 g (42%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,86 (s, br, IH, NH) 7,42-7,46 (m, 3H) 7, 37-7,50 (m, 7H) 7, 24-7,28 (m, 2H) 6, 83 (d, J = 8,1 Hz, IH) 3, 09 (m, 2H, NCH2) 2, 45 (s, 3H, CH3) 2, 38 (q, J = 7,1 Hz, 4H, 2 x NCH2CH3) 226 (t, J = 6,9 Hz, 2H, NCH2) 1,42 (m, 2H, NCH2)0, 87 (t, J = 7,1 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 535, 0 a 537 [M+ a M++2],
121
Príklad 48 (2-dimetylaminoetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
Zmes /erc-butyl-3-oxobutyrátu a dusičnanu sodného (1 ekviv.) v octovej kyseline sa mieša pri izbovej teplote, čím sa získa /erc-butyl-2-hydroximino-3oxobutyrát.
Etyl-3-oxobutyrát (1 ekviv.), zinkový prach (3,8 ekviv.) a surový tercbutyl-2-hydroximino-3-oxobutyrát v octovej kyseline sa mieša pri teplote 60 °C po dobu 1 hodiny. Reakčná zmes sa naleje do H2O a filtrát sa spojí, čím ša získa (65%) 2-ferc-butyloxykarbonyl-3,5-dimetyl-4-etoxykarbonylpyrol.
Zmes 2-/erc-butyloxykarbonyl-3,5-dimetyl-4-etoxykarbonylpyrolu a trietylortoformiátu (1,5 ekviv.) v trifluóroctovej kyseline sa mieša pri teplote 15 °C po dobu 1 hodiny. Reakcia sa koncentruje a zvyšok čistí, čím sa získa (64%) 2,4-dimetyl-3-etoxykarbonyl-5-formylpyrol vo forme žltých ihličiek.
2,4-Dimetyl-3-etoxykarbonyl-5-formylpyrol sa hydrolyzuje podľa spôsobu B, čím sa získa (90%) 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylová kyselina.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12 (br s, 2H, NH a CO2H) 9,58 (s, 1H, CHO) 2,44 (s, 3H, C13) 2,40 (s, 3H, CH3).
MS m/z 267 [M+],
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (0, 17 g 0, 8 mmol) sa kondenzuje s (2dimetylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyroI-3-karboxylovej kyseliny (0,2 g, pripravený podľa spôsobu C) podľa spôsobu B, čím sa získa 0,3 g (83%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, br, 1H, NH) 10, 94 (s, br, 1H,
NH) 9,07 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-4) 7, 75 (s, 1H, H-vinyl) 7, 44 (t, J - 5,2 Hz, 1H,
CONCH2) 7,24 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, IH, H-6) 6, 82 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H122
7) 3,26-3,33 (m, 2H, NCH2) 2,42 (s, 3H, CH3) 2,41 (s, 3H, CH3) 2,38 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2) 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 430 a 432 [M+-l a M++l].
Príklad 49 (2-dimetylaminoetyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (0,17 g 0,8 mmol) sa kondenzuje s (2dimetylaminoetyl)-amidom 5-formy 1-2,4-dimety 1-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (0,2 g), čím sa získa 0,13 g (36%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltooranžovej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, br, 1H, NH)10, 93 (, br, 1H, NH) 7,85 (d, J = 7,92 Hz, 1H, H-4) 7, 63-7,65 (m, 3H) 7,40-7,47 (m, 3H,) 7, 327,36 (m, 1H, Ar-H) 7,30 (dd, J = 1,6 & 7,9 Hz, 1H, H-5) 7,11 (d, J = 1,6 Hz, 1H, H-7) 3, 28-3,34 (m, 2H, NCH2) 2,43 (s, 3H, CH3) 2,41 (s, 3H, CH3) 238 (t, J =
6,8 Hz, 2H, NCH2) 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 428 [M+].
Príklad 50 (2-dimety laminoetyl)-amid 5-(5-chlór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimety 1-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Chlór-1,3-dihydro-indol-2-ón (0,1 g 0,6 mmol) sa kondenzuje s (2dimetylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (0,15 g), čím sa získa 0,22 g (90%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
123 ‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, IH, NH) 10, 98 (, br, IH, NH) 7,96 (d, J = 2, 0 Hz, IH, H-4) 7,75 (s, IH, H-vinyl) 7, 50 (t, J = 5,5 Hz, IH, CONCH2) 7,12 (dd, J = 2,0 & 8,3 Hz, IH, H-6) 6,86 (d, J = 8,3 Hz, IH, H7) 3,26-3,3 1 (m, 2H, NCH2) 2, 42 (s, 3H, CH3) 2, 40 (s, 3H, CH3) 236 (t, J = 6,6 Nz, 2H, NCH2) 2,17 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 386 [M+],
Príklad 51 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (0,17 g 0,8 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formy 1-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (0,2 g), čím sa získa 0,09 g (26%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, IH, NH) 10, 98 (, br, IH, NH) 8,09 (d, J = 1,7 Hz, IH, H-4) 7, 76 (s, IH, H-vinyl) 7, 42 (t, J = 5,5 Hz, IH, CONCH2) 7,24 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, IH, H-6) 6,82 (d, J = 8,0 Hz, IH, H7) 3, 23-3,32 (m, 2H, NCH2) 2, 46-2,55 (m, 6H, 3 x NCH2) 2,43 (s, 3H, CH3)
2, 42 (s, 3H, CH3) 0, 96 (t, J = 7,2 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3),
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l a M++l].
Príklad 52 (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-y 1 i dénmetyl)-2,4-dimetyl-l //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-1,3-dihydro-indol-2-ón (0, 09 g 0, 4 mmol) sa kondenzuje s (2pyrolidin-1 -yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej
124 kyseliny (O, 1 g), čím sa získa 0,14 g (81%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH) 10,98 (, br, 1H, NH) 8,09 (d, J = 1,9 Hz, 1H, H-4) 7,76 (s, 1H, H-vinyl) 7,53 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONCH2) 7,24 (dd, J = 1,9 & 8,5 Hz, 1H, H-6) 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H, H7) 3,29-3,35 (m, 2H, NCH2) 2,54 (t, J = 6,9 Hz, 2H, NCH2) 2,47 (m, pod DMSO) 2,42 (s, 3H, CH3) 2, 40 (s, 3H, CH3) 1, 66-1, 69 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-ÉI m/z 456 a 458 [M+-l a M++l],
Príklad 53 (3-imidazol-1 -yl-propyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (0,09 g 0, 4 mmol) sa kondenzuje s (3imidazol- l-yl-propyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (0, 1 g), čím sa získa 0,1 g (59%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, br, 1H, NH) 10, 99 ( br, 1H, NH) 8,09 (d, J = 2,2 Hz, 1H, H-4) 7, 77 (s, 1H, H-vinyl) 7,71 (t, J = 5,7 Hz, 1H, CONCH2) 7,65 (s, 1H, Ar-H) 7, 25 (dd, J = 2,2 & 8,4 Hz, 1H, H-6) 7,20 (s, 1H, Ar-H) 6,89 (s, 1H, Ar-H) 6, 81 (d, J = 8, 4 Hz, 1H, H-7) 4, 02 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2) 3,18 (q, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2) 2,43 (s, 3H, CH3) 2,41 (s, 3H, CH3) 193 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 467 a 469 [M+-l a M++l],
Príklad 54 (2-dimetylaminoetyl)-amid 5-[6-(2-metoxyfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyI-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
125
6-(2-Metoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-ón (30 mg 0,13 mmol) sa kondenzuje s (2-dimetylamino'etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (30 mg), čím sa získa 0,06 g (100%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej gumy.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, br, 1H, NH) 10, 89 (s; br, 1H, NH) 7,79 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 7,63 (s, 1H, H-vinyl) 7,46 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONCH2) 7, 28-7,35 (m, 2H) 6,99-7,11 (m, 4H) 3,76 (s, 3H, OCH3) 327-3,31 (m, 2H, NCH2) 2, 43 (s, 3H, CH3) 2,39 (s, 3H, CH3) 2,37 (m, 2H, NCH2) 28 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M+],
Príklad 55 (2-dimetylaminoetyl)-amid 5-[6-(3-metoxyfenyl)-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
6-(3-Metoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-ón (30 mg 0, 13 mmol) sa kondenzuje s (2-dimetylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyroI-3-karboxylovej kyseliny (30 mg), čím sa získa 8 mg (14%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, br, 1H, NH) 10, 92 (s, br, 1H, NH) 7,84 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 7,65 (s, 1H, H-vinyl) 7,42 (m, 1H, CONCH2) 756 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,29 (dd, J = 1,6 & 7,6 Hz, 1H) 7,20 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,14 (d, J = 2,8 Hz, 1H) 7,11 (d, J = 1,6 Hz, 1H) 6,91 (dd, J = 2,8 & 7,8 Hz, 1H) 3,82 (s, 3H, OCH3) 3,21-3,33 (m, 2H, NCH2) 2,43 (s, 3H, CH3) 2,40 (s, 3H, CH3) 2, 36-2,40 (m, 2H, NCH2) 2, 18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M+]
126
Príklad 56 (2-dietylaminoetyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-lí/-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
5-Fenyl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (80 mg 0,4 mmol) sa kondenzuje.s (2dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (0,1 g) podľa spôsobu B, čím sa získa 79 mg (46%) požadovanej zlúčeniny.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, br, IH, NH) 10, 95 ( br, IH, NH) 8,15 (d, J = 1,2 Hz, IH) 7,81 (s, IH, H-vinyl) 7,71 (d, J = 7,5 Hz, IH) 7,407,47 (m, 4H) 7,31 (m, 1 H) 6,95 (d, J = 8,1 Hz, IH) 3,2-3,31 (m, 2H, NCH2) 2,46-2,55 (m, 6H, 3 x NCH2) 2,44 (s, 6H, 2 x CH3) 0, 96 (t, J = 7,4 Hz, 6H, 2 x ,NCH2CH3).
MS-EI m/z 456 [M+],
Príklad 57 (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Fenyl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (0, 04 g 0, 2 mmol) sa kondenzuje s (2pyrolidin-1 -yl-etyl)-amidom 5 - formy 1-2,4-di mety l-l//-py rol-3-karboxylovej kyseliny (0,04 g), čím sa získa požadovaná zlúčenina vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, br, IH, NH) 10, 96 (, br, IH, NH) 8,15 (d, J = 1,0 Hz, IH) 7, 80 (s, IH, H-vinyl) 7,71 (d, J = 7,2 Hz, 2H) 7,49 (t, J = 6,3 Hz, IH, CONCH2) 7,41-7,46 (m, 3H) 7,31 (m, IH) 6,95 (d, J = 7,8 Hz, IH) 4, 08 (m, 4H, 2 x NCH2) 3,32 (m, 2H, NCH2) 2,55 (t, J = 7,1 Hz, 2H, NCH2) 2,47 (m, pod DMSO) 2, 43 (s, 6H, 2 x CH3) 1,66 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 454 [M+],
127
Príklad 58 (3-imidazol-l -yl-propyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
5- Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (8 mg 0,04 mmol) sa kondenzuje s (3imidazol-l-yl-propyl)-amidom 5-formy 1-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (10 mg), čím sa získa 10 mg (59%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,67 (s, br, 1H, NH) 10,96 (br, 1H, NH) 8,16 (d, J = 1,2 Hz, 1H) 7,81 (s, 1H, H-vinyl) 7,65-7,72 (m, 4H) 7,44 (m, 3H) 7,31 (m, 1H, CONCH2) 7,21 (s, 1H, Ar-H) 4,02 (t, J = 6,5 Hz, 2H, NCH2) 3,19 (q, J = 6,5 Hz, 2H, CONCH2) 2,44 (s, 6H, 2 x CH3), 93 (m, 2H, CH2CH2 CH2).
MS-EI m/z 465 [M+].
Príklad 59 (2-dietylaminoetyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6- Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (0,08 g 0, 4 mmol) sa kondenzuje s (2dietylaminoetyl)-amidom 5-formy 1-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (0,1 g), čím sa získa 65 mg (38%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH) 10, 99 ( br, 1H, NH) 7,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,62-7,66 (m, 3H) 7,40-7,47 (m, 3H) 7,28-7,36 (m, 2H) 7,10 (d, J = 1,2 Hz,' 1H) 3, 26 (m, 2H, NCH2) 2,46-2,55 (m, 6H, 3 x NCH2) 2,44 (s, 3H, CH3) 2,41 (s, 3H, CH3) 0, 97 (t, J = 7,2 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 456 [M+],
128
Príklad 60 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-Fenyl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (30 mg 0,15 mmol) sa kondenzuje s (2pyrolidin- l-yl-etyl)-amidom 5-formy 1-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (40 mg), čím sa získa 5,9 mg (8,5%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, br, 1H, NH) 10, 99 ( br, 1H, NH) 7,86 (d, J = 7, 8 Hz, 1H) 7,63-7,66 (m, 3H) 7,51 (m, 1H, CONHCH2) ?45 (m, 2H) 7,28-7,36 (m, 2H) 7,10 (d, J = 1,5 Hz, 1H) 3,31 (m, 6H, 3 x NCH2) £5 (t, J = 6,6 Hz, 2H, NCH2) 2, 43 (s, 3H, CH3) Z 40 (s, 3H, CH3) 1,67 (m, 4H, 2 x CH2),
MS-EI m/z 454 [M+],
Príklad 61 (3-imidazol-1-yl-propyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (8 mg 0,04 mmol) sa kondenzuje s (3imidazol -1 -yl-propyl)-amidom 5-formy 1 -2,4-dimet y l-l//-pyro 1-3-kar boxylovej kyseliny (10 mg), čím sa získa 7,3 mg (43%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH) 10, 99 ( br, 1H, NH) 7,86 (d, J = 8,2 Hz, 1H) 7,62-7,70 (m, 5H) 7,45 (m 2H)7, 35 (m, 1H) 7,30 (dd, J = 1,4 & 8,2 Hz, 1H) 7,21 (s, 1H) 7,10 (d, J - 1,4 Hz, 1H) 6,89 (s,
1H)4, 02 (t, J = 6,9 Hz, 2H, CH2) 3,19 (m, 2H, NCH2 CH2) Z 43 (s, 3H,
CH3) 2,41 (s, 3H, CH3) 1, 93 (t, J = 6,9 Hz, 2H, NCH2).
MS-EI m/z 465 [M+],
129
Príklad 62 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-[6-(3,5-dichlórfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-y 1 i dé nmety 1]-2,4-di me ty l-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
6-(3,5-Dichlórfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-ón (64 mg 0,23 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (60 mg), čím sa získa 53 mg (44%) požadovanej zlúčeniny vo forme svetlo hnedej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH) 10, 99 (s, 1H, NH) 7,89 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-4) 7,69-7,71 (m, 3H) 7,55 (m, 1H,
CONCH2) 7,37 (m, 2H) 7,14 (d, J = 1,4 Hz, 1H, H-7) 3,27 (m, 2H, NCH2) 3482,58 (m, 6H, 3 x NCH2) 2,45 (s, 3H, CH3) 2,42 (s, 3H, CH3) 0, 97 (t, J = 6,8 Hz, 6H, 3 x NCH2CH3),
MS m/z 526, 9 [M++l],
Príklad 63 (2-dietylaminoetyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-1,2-dihydroindol-3-y 1 idénmetyl)-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-Pyridin-3-yl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (40 mg 0, 19 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyI-l 7/-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (50 mg), čím sa získa 29 mg (33%) požadovanej zlúčeniny vo forme svetlo oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH), 11,05 (s, br, 1H,
NH) 8,86 (s, br, 1H) 8,53 (d, J = 5,8 Hz, 1H) 8,04 (m, 1H) 7,91 (d, J = 8,1 Hz,
1H) 7,70 (s, 1H, H-vinyl) 7,40-7,48 (m, 2H) 7,35 (d, J = 7,5 Hz, 1H) 7,14 (s,
1H) 3, 26 (m, 2H, NCH2) 2,48-2,55 (m, 3 x NCH2) 2,42 (s, 3H, CH3) 238 (s, 3H,
CH3) 0, 96 (t, J = 6,9 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 457 [M+].
130
Príklad 64 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydroindol-3-y lidénmetyl)-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
6-Pyridin-3-yl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (60 mg 0, 28 mmôl) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-y 1-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (75 mg), čím sa získa 90 mg (71%) požadovanej zlúčeniny vo forme svetlo oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, IH, NH), 11,05 (s, br, IH, NH) 8, 86 (d, J = 1,5 Hz, IH) 8, 54 (dd, J = 1,5 & 4,8 Hz, IH) 8, 05 (m, IH) 7, 91 (d, J = 7,8 Hz, IH) 7, 70 (s, IH, H-vinyl) 7, 44-7,53 (m, 2H) 7, 36 (dd, J = 1,5 & 8,1 Hz, IH) 7, 15 (d, J = 1,2 Hz, IH) 3,33 (m, 2H, NCH2) 2,47-2,57 (m, 6H, 3 x NCH2) 2, 43 (s, 3H, CH3) 2, 41 (s, 3H, CH3) 1, 67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 455 [M+],
Príklad 65 (3-dimetylaminopropyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l ,2-dihydroindol-3-y 1 idénmety 1)-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydro-indol-2-ón (42 mg 0, 2 mmol) sa kondenzuje s (3-dimetylaminopropyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (50 mg), čím sa získa 67 mg (75%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto hnedej pevnej látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, IH, NH), 11,00 (s, br, IH, NH) 8,86 (s, br, 1 H) 8,54 (s, br, 1 H) 8, 04 (m, 1 H) 7, 90 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) 7,69 (s, IH, H-vinyl) 7,63 (m, IH) 7,45-7,48 (m, IH) 7,35 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, IH) 7, 15 (d, J = 1,7 Hz, IH) 3,21-3,27 (m, 2H, NCH2) 2,43 (s, 3H, CH3) £1 (s, 3H, CH3) 2,28 (m, 2H, NCH2) 2,14 (s, 6H, 2 x NCH3) 1,64 (m, 2H, CHO).
MS-EI m/z 443 [M+].
131
Príklad 66 (3-dimetylaminopropyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Fenyl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (67 mg 0,32 mmol) sa kondenzuje s (3-dimetylaminopropyl)-amidom 5-formy 1-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (81 mg), čím sa získa 40 mg (28 %) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, br, 1H, NH) 10, 92 (s, br, 1H, NH) 8,14 (s, 1H) 7,79 (s, 1H) 7,71 (m, 2H) 7,62 (m, 1H) 7,44 (m, 3H) 7,32 (m, 1H)6, 95 (m, 1H) 3,33 (m, 2H, NCH2) 2,43 (s, 6H, 2 x CH3) 2,27 (m, 2H, NCH2) 2,13 (s, 6H, 2 x NCH3)1,63 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 442 [M+].
Príklad 67 (3-dietylaminopropyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-ón (1,5 g 7,16 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (2 g), čím sa získa 1,3 g (40%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltooranžovej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s, 1H, NH) 10, 91 (s, 1H,
NH) 8,14 (d, J = 1,4 Hz, 1H, ArH) 7,8 (s, 1H, ArH) 7,7 (dd, J = 1,2 a 8,5 Hz,
2H, ArH) 7, 6 (t, J = 5,3 Hz, 1H, CONCH2) 7,4 (m, 3H, ArH) 7,3 (t, J = 7,4 Hz,
1H, ArH) 6, 9 (d, J = 8,0 Hz, 1H, ArH) 3,2 (m, 2H, CONCH2) 2,5 (m, 12H, 3 x
NCH2 a 2 x CH3) 1, 61 (m, 2H, CH2CH2CH2) 0, 93 (t, J = 6,7 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 470 [M+],
132
Príklad 68 (3-dietylaminopropyl)-amid 2,4-dimety 1-5-(2-oxo-6-fény 1-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
I
6-Fenyl-l ,3-dihydro-indol-2-ón (1, 5 g 7,16 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (2 g), čím sa získa 1,9 g (57%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, IH, NH)10, 94 (s, IH, NH) 7,8 (d, J = 7,9 Hz, 1 H, ArH) 7, 6 (m, 4H, ArH) 7, 4 (t, J = 7,5 Hz, 2H, ArH) 7, 3 (m, 2H) 7, 1 (d, J = 1,4 Hz, IH, ArH) 3, 2 (m, 2H, CONHCH2) 2, 5 (m, 12H, 3 x NCH2 a 2 x CH3) 1, 61 (m, 2H, CH2CH2CH2) 0,93 (t, J = 6,7 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 470 [M+],
Príklad 69 (3-chlór-4-metoxyfenyl)-amid 3-[4-(3-diétylaminopropylkarbamoy 1)-3,5-dimety 1-1//-pyrol-2-ylmetylén]-2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol-4-karboxylo vej kyseliny (3-Chlór-4-metoxyfenyl)-amid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-4-kar boxy lovej kyseliny (1 g, 3,16 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (1 g 3,58 mmol), čím sa získa 1,7 g (85%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
MS-EI m/z 578, 2 [M+j.
133
Príklad 70 (3-dietylaminopropyl)-amid 5-(5-bróm-2-οχο-1,2-dihydro-indo 1-3-ylidénmety l)-2,4-di mety 1-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (0,5 g, 2,36 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (0,51 g), čím sa získa 0,84 g požadovanej zlúčeniny vo forme červenooranžovej pevnej látky.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, 1H, NH) 10, 99 (s, 1H, NH) 8,09 (d, J = 1,8 Hz, 1H, ArH) 7,7 (m, 4H) 7,2 (dd, J = 1,8 a 8,3 Hz, 2H, ArH) 6,8 (d, J = 7,8 Hz, 1H, ArH) 3,3 (br s, 4H, 2 x NCH2) 3,2 (m, 2H, CONCH2) 2,6 (br s, 2H, NCH2 a 2 x CH3) 2, 4 (s, 6H, 2 x CH3) 1,66 (m, 2H, CH2CH2CH2) 0, 98 (t, J = 7,1 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 472 a 474 [M+-l a M++l],
Príklad 71 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-yl i dénmety 1)-2,4-diizopropyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (100 mg 0, 47 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-diizopropyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (150 mg), čím sa získa 0,15 g (62%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,97 (s, 1H, NH)10, 95 (s, 1H, NH) 8,09 (d, J = 1,3 Hz, 1H, ArH) 7,84 (m, 1H) 7,79 (s, 1H) 7,23 (dd, J = 1,3 a 8,1 Hz, 1H, ArH) 6,8 (d, J = 8,1 Hz, 1H, ArH) 3, 5 (m, 1H, CH) 3, 3 (m, 3H, CH a NHCH2) 2, 5 (br m, 6H, 3 x NCH2) 1,28 (d, J = 6, 9 Hz, 6H, 2 x CH3) J23 (d, J = 6, 6 Hz, 6H, 2 x CH3) 0, 96 (m, 6H, 2 x CH2CH3).
MS-EI m/z 514 a 516 [M+-l a M++l].
134
Príklad 72 (3-dietylaminopropyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-diizopropyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (90 mg 0, 42 mmol) sa kondenzuje s (3-dietylaminopropyl)-amidom 5-formyl-2,4-diizopropyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (140 mg), čím sa získa 54 mg (25%) požadovanej zlúčeniny vo forme červeno-hnedej pevnej látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, 1H, NH)10, 96 (s, 1H, NH) 8,09 (d, J = 1,7 Hz, 2H) 7, 78 (s, 1H, H-vinyl) 7, 23 (dd, J = 1,7 a 8, 1 Hz,
1H, ArH) 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 1H, ArH) 3,5 (m, 1H, CH) 3,25 (m, 2H,
NHCH2) 3,15 (m, 1H, CH) 2,7 (br s, 6H, 3 x NCH2) 1,7 (br m, 2H,
CH2CH2CH2) 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H, 2 x CH3) 1,24 (d, J = 5,9 Hz, 6H, 2 x
CH3) 1,06 (m, 6H, 2 x CH2CH3).
MS-EI m/z 528 a 530 [M+-l a M++l].
Príklad 73 (3-pyrolidin-l-yl-propyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-d i izopropyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-1,3-dihydro-indol-2-ón (130 mg 0, 6 mmol) sa kondenzuje s (3pyrolidin-l-yl-propyl)-amidom 5-formy 1-2,4-diizopropy 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (150 mg 0, 45 mmol), čím sa získa 36 mg (15%) požadovanej zlúčeniny vo forme hnedo-oranžovej pevnej látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, 1H, NH)10, 97 (s, 1H, NH) 8,10 (d, J = 1,6 Hz, 2H) 7,78 (s, 1H, H-vinyl) 7, 23 (dd, J = 1,6 a 7,6 Hz, 1H, ArH) 6, 82 (d, J = 7,6 Hz, 1H, ArH) 3, 5 (m, 1H, CH) 3,25 (m, 2H, NHCH2) 3,15 (m, 1H, CH) 2,7 (br s, 6H, 3 x NCH2) 1,7 (br m, 6H, 3 x NCH2CH2) 1, 28 (d, J = 5,6 Hz, 6H, 2 x CH3) 1, 24 (d, J = 5,7 Hz, 6H, 2 x CH3).
MS-EI m/z 526 a 528 [M+-l a M++l],
135
Príklad 74 (pyridin-4-ylmetyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Bróm-l,3-dihydro-indol-2-ón (170 mg 0, 8 mmol) sa kondenzuje s (pyridin-4-ylmetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-lH-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (200 mg), čím sa získa 14 mg (4%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
lH NMR (300 MHz/DMSO-dó) δ 13,67 (s, 1H, NH), 11,01 (s, br, 1H, NH) 8, 51 (dd, J = 1,6 & 4,3 Hz, 2H) 8, 23 (t, J = 6,0 Hz, 1H, CONCH2) 8 H (d, J = 1,9 Hz, 1H) 7, 78 (s, 1H, H-vinyl) 7,31 (d, J = 6,0 Hz, 2H) 7,25 (dd, J = 1,9 & 8,1 Hz, 1H) 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 1H) 4,45 (d, J = 6,0 Hz, 2H, NCH2) 346 (s, 6H, 2 x CH3).
MS-EI, m/z 450 a 452 [M+-l a M++l].
Príklad 75 (2-pyrolidin-l -yl-etyl)-amid 5-[6-(4-butylfenyl)-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-[6-(4-Butylfenyl)]-l,3-dihydro-indol-2-ón (50 mg 0,19 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom ' 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny (50 mg), čím sa získa 74 mg (76%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, IH, NH) 10,93 (s, br, 1H, NH) 7, 82 (d, J = 7,9 Hz, IH) 7, 63 (s, IH, H-vinyl) 7,54 (d, J = 7,9 Hz, 2H) 7, 46 (m, IH, CONH) 7, 26 (m, 3H) 7,09 (s, IH) 3, 30 (m-, 2H, CH2) 2,52-2,63 (m, 4H, 2 x CH2) 2,49 (m, 4H, 2 x CH2) 2,43 (s, 3H, CH3) 2,40 (s, 3H, CH3) 1,68 (m, 4H, 2 x CH2) 1,58 (m, 2H, CH2) 1,34 (m, 2H, CH2)0, 91 (t, J = 7, 2 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 510 [M+],
136
Príklad 76 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 5-[6-(5-izopropyl-2-metoxyfenyl)-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-(5-Izopropyl-2-metoxyfenyl)-l ,3-dihydro-indol-2-ón (50 mg 0,17 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyll//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (45 mg), čím sa získa 67 mg (75%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H, NH) 10,82 (s, br, 1H, NH) 7,77 (d, J = 7,9 Hz, 1H) 7,61 (s, 1H, H-vinyl) 7,45 (m, 1H, CONH) 7, 0-7,19 (m, 5H) 3, 73 (s, 3H, OCH3) 3,32 (m, 2H, CH2) 2,87 (m, 1H, CH(CH3)2) 256 (m, 2H, CH2) 2,48 (m, 4H, 2 x CH2) 2,43 (s, 3H, CH3) 2, 40 (s, 3H, CH3) 168 (m, 4H, 2 x CH2) 1,21 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS m/z 527, 2 [M++l].
Príklad 77 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 5-[6-(4-etylfenyl)-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
6-(4-Etylfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-ón (45 mg 0,19 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l/ŕ-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (50 mg), čím sa získa 60 mg (65%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, 1H, NH) 10,96 (s, br, 1H, NH) 7,83 (d, J = 8, 4 Hz, 1H) 7,64 (s, 1H, H-vinyl) 7,51-7,56 (m, 3H) 7,25-7,30 (m, 3H) 7,08 (d, J = 1 Hz, 1H) 3,31 (m, 2H, CH2) 2,63 (m, 2H, CH2CH3) 255 (m, 2H, CH2) 2,49 (m, 4H, 2 x CH2) 2,42 (s, 3H, CH3) 2,40 (s, 3H, CH3) 1,67 (m, 4H, 2 x CH2) 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 482 [M+],
137
Príklad 78 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 5-[6-(2,4-dimetoxyfenyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
I
6-(2,4-Dimetoxyfenyl)-l ,3-dihydro-indol-2-ón (51 mg 0,19 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-lŕ/-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (50 mg), čím sa získa 30 mg (31%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, 1H, NH) 10,86 (s, br, 1H, NH) 7,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,60 (s, 1H, H-vinyl), 7,49 (m, 1H, CONH) 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 7,03 (m; 1H) 6,97 (s, 1H) 6,58-6,65 (m, 2H) 3,79 (s, 3H, OCH3) 3,76 (s, 3H, OCH3) 3, 33 (m, 2H, CH2) 2, 55 (m, 2H, CH2) 250 (m, 4H, 2 x CH2) 2, 42 (s, 3H, CH3) 2,39 (s, 3H, CH3) 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 514 [M+].
Príklad 79 (2-pyrolidin-l-y 1 -etyl)-amid 5-[6-(3-izopropylfenyl)-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimety 1-1 H-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
6-(3-Izopropylfenyl)-1,3-dihydro-indol-2-ón (48 mg 0, 19 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (50 mg), čím sa získa 59 mg (63%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, 1H, NH) 10, 97 (s, br, 1H, NH) 7,87 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,68 (s, 1H, H-vinyl) 7,24-7,55 (m, 6H) 7,13 (s, 1H) 3,34 (m, 2H, CH2) 3,30 (m, 1H, CH(CH3)2) 2,60 (m, 2H, CH2) 250 (m, 4H, 2 x CH2) 2, 45 (s, 3H, CH3) 2, 43 (s, 3H, CH3) 1, 70 (m, 4H, 2 x CH2) 1,27 (d, J =
6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 496 [M+],
138
Príklad 80 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Fluór-l,3-dihydro-indol-2-ón (0,54 g 3,8 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, čím sa získa 0,83 g (55%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-zelenej pevnej látky.
lH NMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,66 (s, IH, NH) 10, 83 (s, br, IH, NH) 7,73 (dd, J = 2,5 & 9, 4 Hz, IH) 7,69 (s, IH, H-vinyl) 7,37 (t, IH, CONHCH2CH2) 6,91 (m, IH) 6,81-6,85 (m, IH) 3,27 (m, 2H, CH2) 251 (m, 6H, 3 x CH2) 2,43 (s, 3H, CH3) 2,41 (s, 3H, CH3) 0, 96 (t, J = 6,9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 398 [M+]·
Príklad 80 (alternatívna syntéza) (2-dietylamino-etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxyl o vej kyseliny
Hydrát hydrazínu (55 %, 3000 ml) a 5-fluórisatín (300 g) sa zahrievajú pri teplote 100 °C. V priebehu 120 minút sa za stáleho miešania pridáva po častiach (100 g) ďalší 5-fluórisatín (500 g), zmes sa zahrieva pri teplote 110 °C a mieša po dobu 4 hodín, ochladí na izbovú teplotu a pevné látky sa spoja vákuovou filtráciou, čím sa získa surový hydrazid (2-amino-5-fluór-fenyl)octovej kyseliny (748 g), hydrazid sa suspenduje vo vode (700 ml) a pH zmesi sa upraví na < pH 3 pomocou 12 N kyseliny chlorovodíkovej. Zmes sa mieša po dobu 12 hodín pri izbovej teplote, pevný podiel sa spojí vákuovou filtráciou a premyje (2 x ) vodou, produkt sa suší za vákua, čím sa získa 5-fluór-l,3dihydro-indol-2-ón (600 g, 73 % výťažok) vo forme hnedého prášku. ’H-NMR (dimetylsulfoxid-dó) δ 3,46 (s, 2H, CH2) 6,75, 6,95 7,05 (3 x m, 3H, aromatické) 10, 35 (s, IH, NH).
139
MS m/z 152 [M+l].
2-7erc-butyIester 4-etylesteru 3,5-dimetyl-l//-pyrol-2,4-dikarboxylovej kyseliny (2 600 g) a etanol (7 800 ml) sa intenzívne miešajú, zatiaľ čo sa pomaly pridáva 10 N kyselina chlorovodíková (3 650 ml), teplota sa zvýši z 25 °C na 35 °C, čím sa začne uvoľňovať plyn. Zmes sa ohreje na teplotu 54 °C a mieša za ďalšieho zahrievania po dobu jednej hodiny na teplotu 67 °C. Zmes sa ochladí na teplotu 5 °C a za stáleho miešania sa pomaly pridáva 32 1 vody. Pevná látka sa spojí vákuovou filtráciou a premyje (3 x ) vodou, pevná látka sa suší na vzduchu na konštantnú hmotnosť, čím ša získa etylester 2,4-dimetyll//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (1418 g, 87 % výťažok) vo forme ružovkastej pevnej látky.
‘η-NMR (dimetylsulfoxid-d6) δ 2,10, 2, 35 (2 x s, 2 x 3H, 2 x CH3) 413 (q, 2H, CH2) 6,37 (s, 1H, CH) 10, 85 (s, 1H, NH).
MS m/z 167 [M+l],
Dimetylformamid (322 g) a dichlórmetán (3700 ml) sa ochladia v ľadovom kúpeli na teplotu 4°C a za stáleho miešania sa pridá oxychlorid fosforečný (684 g). Pevný etylester 2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (670 g) sa pomaly pridáva v alikvotných podieloch v priebehu 15 minút. Maximálna teplota sa pohybuje okolo 18 PC. Zmes sa zahrieva pri refluxe po dobu jednej hodiny, ochladí na teplotu 10 °C v ľadovom kúpeli a naraz sa za intenzívneho stáleho miešania pridá 1,6 1 ľadovej vody. Teplota sa zvýši na 15 °C. Za intenzívneho stáleho miešania sa pridá 10 N kyselina chlorovodíková (1,6 1). Teplota sa zvýši na 22 °C. Zmes sa nechá stáť po dobu 30 minút a vrstvy sa nechajú separovať, pričom maximum teploty je 40 °C. Vodná vrstva sa upraví na pH 12 - 13 pomocou 10 N hydroxidu draselného (3,8 1) tak, aby teplota počas pridávania nepresiahla 55 °C.
Po pridaní sa zmes ochladí na teplotu 10 °C a mieša po dobu 1 hodiny, pevná látka sa spojí vákuovou filtráciou a premyje (4x) vodou, čím sa získa etylester 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (778 g, 100 % výťažok) vo forme žltej pevnej látky. 'H-NMR (DMSO-dô) δ 1,25 (t, 3H,
140
CH3) 2,44 , 2,48 (2 x s, 2 x 3H, 2 x CH3) 4,16 (q, 2H, CH2), 9,59 (s, 1H, CHO), 12,15 (br s, 1H, NH).
MS m/z 195 [M+1],
Etylester 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (806 g), hydroxid draselný (548 g), voda (2400 ml) a metanol (300 ml) sa refluxujú po dobu 2 hodín za stáleho miešania a ochladí na teplotu 8 °C. Zmes sa extrahuje (2 x ) dichlórmetánom, vodná vrstva sa upraví na pH 4 pomocou 1000 ml 10 N kyseliny chlorovodíkovej, pričom teplota sa udržuje pod 15 °C. Kvôli miešania sa pridá voda a pevná látka sa spojí vákuovou filtráciou, premyje (3 x ) vodou a suší za vákua pri teplote 50 °C, čím sa získa 5-formyl-2,4-dimetyll//-pyrol-3-karboxylová (645 g, 93,5 % výťažok) kyselina vo forme žltej pevnej látky. 'H NMR (DMSO-d6) δ 2,40 , 2,43 (2 x s, 2 x 3H, 2 x CH3) 257 (s, 1H, CHO), 12,07 (br s, 2H, NH+COOH).
MS m/z 168 [M+1],
5-Formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylová kyselina (1 204 g) a 6 020 ml dimetylformamidu sa mieša pri izbovej teplote, zatiaľ čo sa pridáva hydrochlorid 1 -(3-dimetyl-aminopropyl-3-etylkarbodiimidu (2 071 g), hydroxybenzotriazol (1 460 g), trietylamín (2 016 ml) a dietyletyléndiamín (1 215 ml). Zmes sa mieša po dobu 20 hodín pri izbovej teplote, zriedi 3 000 ml vody, 2 000 ml soľanky a 3 000 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a pH sa upraví na > 10 pomocou 10 N hydroxidu sodného. Zmes.sa zakaždým extrahuje (2 x ) 5 000 ml s 10 % metanolom v dichlórmetáne a spojené extrakty sa sušia nad bezvodým síranom horečnatým a zahusťujú na rotačnej odparke do sucha. Zmes sa zriedi 1 950 ml toluénu a znovu zahusťuje do sucha na rotačnej odparke. Zvyšok sa trituruje zmesou hexánov a dietyléteru (4 000 ml) (3:1), pevný podiel sa spojí vákuovou filtráciou, premyje (2 x ) 400 ml etylacetátu a suší za vákua pri teplote 34 °C po dobu 21 hodín, čím sa získa (2-dietylaminoetyl)-amid 5-formyl-2,4-dimetyl-17/-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (819 g, 43 % výťažok) vo forme svetlo hnedej pevnej látky.
141 'H NMR (dimetylsulfoxid-dó) δ 0,96 (t, 6H, 2 x CH3) 2,31-2,38 (2 x s,'2 x CH3) 2,51 (m, 6H 3 x CH2) 3,28 (m, 2H, CH2) 7, 34 (m, 1H, amid NH) 9,56 (s, 1H, CHO), 11, 86 (s, 1H, pyrol NH).
MS m/z 266 [M+l].
(2-Dietylaminoetyl)-amid 5-fo rmy 1-2,4-d imetyl-1//-pyr o 1-3-karboxylovej kyseliny (809 g), 5-fluór-l,3-dihydro-indol-2-ón (438 g), etanol (8 000 ml) a pyrolidín (13 ml) sa zahrievajú pri teplote 78 °C po dobu 3 hodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pevné látky sa spoja vákuovou filtráciou a premyjú etanolom. Pevné látky sa miešajú s etanolom (5 900 ml) pri teplote 72 °C po dobu 30 minút, ochladí na izbovú teplotu, pevné látky sa spoja vákuovou filtráciou, premyjú etanolom a sušia za vákua pri teplote 54 °C po dobu 130 hodín, čím sa získa (2-dietylamino-etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (1 013 g,
88% výťažok) vo forme oranžovej pevnej látky.
'H-NMR (dimetylsulfoxid-d6) δ 0,98 (t, 6H, 2 x CH3) 2,43,2, 44 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,50 (m, 6H, 3 x CH2) 3,28 (q, 2H, CH2) 6,84, 6,92, 7,42, 7, 71, 7,50 (5xm, 5H, aromatické, vinyl, CONH) 10, 88 (s, 1H, CONH), 13,68 (s, 1H, pyrol NH).
MS m/z 397 [M-l].
Príklad 81
3-[4-(2-dietylaminoetylkarbamoyl)-3,5-dimetyl-l//-pyrol-2-ylmetylén]-2-oxo2,3-dihy dro-1 //-indo 1-6-karboxy lová kyselina
2-Oxo-2,3-dihydro-lŕ/-indol-6-karboxylová kyselina (80 mg 0,45 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3karboxylovej kyseliny, čím sa získa 210 mg (92%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
142 *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, 1H, NH) 7, 76 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 7,66 (s, 1H, H-vinyl) 7,57 (dd, J = 1,5 & 8,0 Hz, 1H) 7,40-7 , 42 (m, 2H) 3,28 (m, 2H, CH2) 2,88 (m, Hpiperidin) 2, 54 (m, 6H, 3 x CH2) ?44 (s, 3H, CH3) 2,40 (s, 3H, CH3) 1,56 (m, H-piperidin) 0,97 (t, J = 6,98 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 424 [M+]·
Príklad 82 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 5-(5-dimetylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Dimetylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfónovej kyseliny (90 mg 0, 38 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (100 mg), čím sa získa 100 mg (54%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, 1H, NH), 11,30 (s, br, 1H, NH) 8,25 (d, 1H) 7,92 (s, 1H, H-vinyl) 7,48-7,53 (m, 2H) 7,07 (d, J = 8,2 Hz, 1H) 3, 33 (m, 2H, CH2) 2,61 (s, 6H, N(CH3)2) 2,56 (t, 2H, CH2) 2,49 (m, 4H, 2 x CH2) 2,45 (s, 3H, CH3) 2,44 (s, 3H, CH3) 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 485 [M+],
Príklad 83 (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amid 5-[5-(3-chlórfenylsulfamoyl)-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-lŕ/-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (3-Chlór fenyl)-am i d 2-oxo-2,3-d ihydro - l//-indo 1-5-sulfónovej kyseliny (120 mg, 0,38 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyroI-3-karboxylovej kyseliny (100 mg), čím sa získa 150 mg (69%) požadovanej zlúčeniny vo forme žlto-oranžovej pevnej látky.
143 *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,55 (s, 1H, NH), 11,26 (br s, 1H, NH) 10, 30 (br s, 1H, NH) 8,26 (d, 1H) 7,79 (s, 1H, H-vinyl) 7,51-7,57 (m, 2H) 7,22 (t, J = 8,1 Hz, 1H) 7,15 (m, 1H) 7,07 (m, 1H) 7, 0 (m, 2H) 3,44 (m, 2H, CH2) 2, 57 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2) 2,49 (m, 4H, 2 x CH2) 2,44 (s, 3H, CH3) #3 (s, 3H, CH3) 1,68 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 568 [M+],
Príklad 84 (2-pyrolidin-l-y 1-etyl)-amid 2,4-dimetyl-5-[2-oxo-5-(pyridin-3-ylsulfamoyl)-1,2-dihydro-indo 1-3-ylidénmetyl]-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Pyridin-3-ylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfónová kyselina (110 mg 38 mmol) sa kondenzuje s (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (100 mg), čím sa získa 150 mg (74%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, 1H, NH) 8,21 (d, J = 2,0 Hz, 2H) 8,04 (m, 1H) 7, 76 (s, 1H, H-vinyl) 7,49-7,54 (m, 2H) 7,41 (m, 1H) 7, 14 (m, 1H) 6,94 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 3,33 (m, 2H, CH2) 2,56 (t, J = 7,06 Hz, 2H, CH2) 2,49 (m, 4H, 2 x CH2) 2,43 (s, 6H, 2 x CH3) 1, 68 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 535 [M+j.
Príklad 85
-[3,5-di metyl-4-(4-metylpipe razin-l-karbony l)-l//-py rol-2-y 1 mety lén]-4-(2-hydroxyetyl)-1,3-dihydro-indol-2-ón
4-(2-Hydroxyetyl)-1,3-dihydro-indol-2-ón (71 mg 0, 4 mmol) sa kondenzuje s 3,5-dimetyl-4-(4-metyl-piperazin- l-karbonyl)-l //-pyrol-2-karbaldehydom, čím sa získa 90 mg (55%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
144 ‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14, 25 (s, 1H, NH) 10,88 (s, 1H, NH) 7,57 (s, 1H, H-vinyl) 7, 03 (m, 1H) 6,75-6,82 (m, 2H) 4, 86 (m, 1H, OH) 3,70 (m, 2H, CH2) 3,04 (m, 2H, CH2) 2,48 (m, 4H, 2 x CH2) ?28 (br s, 7H) 2, 19 (s, 3H, CH3) 2,18 (s, 3H, CH3).
MS m/z (+ve) 4, 09, 3 [M+j.
Príklad 86 fenylamid 3-[3,5-dimetyl-4-(4-metylpiperazin-l-karbonyl)-l//-pyrol-2-ylmetylén]-2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol-5-sulfónovej kyseliny
Fenylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfónovej kyseliny (110 mg 0,4 mmol) sa kondenzuje s 3,5-dimetyl-4-(4-metylpiperazin-l-karbonyl)-l/7-pyrol-2-karbaldehyd (100 mg), čím sa získa 50 mg (24%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,52 (s, 1H, NH), 11,26 (s, 1H,
NH) 10, 08 (s, 1H, NH) 8,21 (d, J = 1,6 Hz, 1H) 7, 75 (s, 1H, H-vinyl) 7, 50 (dd, J = 1,6 & 8,3 Hz, 1H) 7, 19 (m, 2H) 7, 10 (m, 2H) 6,97 (m, 2H) 2,49 (m, 4H, 2 x
CH2) 2, 28 (m, 10H, 2 x CH3 & 2 x CH2) 2,18 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 519 [M+].
Príklad 87 (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-dimetylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-1 TY-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
Dimetylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indoI-5-sulfónovej kyseliny (90 mg 0,38 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-1 H-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (100 mg), čím sa získa 80 mg (43%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
145 ‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ'11,30 (s, 1H, NH) 8, 27 (d, J = 1,7 Hz, 1H) 7,94 (s, 1H, H-vinyl) 7,49 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, 1H) 7,44 (m, 1H, CONHCH2CH2) 7,07 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,26 (m, 2H, CH2) 2,60 (s, 6H, N(CH3)2) 2, 53 (m, 2H, CH2), 2,45-2,50 (m, 10H, 2 x CH3 & N(CH2CH3)2 Q96 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 487 [M+],
Príklad 88 (2-diétylaminoetyl)-amid 5-[5-(3-chlórfenylsulfamoyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-y lidénmetyl]-2,4-dimetyl-lŕ/-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (3-chlór-fenyl)-amid 2-Oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfónovej kyseliny (120 mg 3, 8 mmol) sa kondenzuje s (2-dietylaminoetyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (100 mg), čím sa získa 80 mg (37%) požadovanej zlúčeniny vo forme žltej pevnej látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13, 55 (s, 1H, NH), 11,24 (s, 1H, NH) 10, 29 (s, 1H, NH) 8,25 (d, J = 1,87 Hz, 1H) 7, 79 (s, 1H, H-vinyl) 7, 52 (dd, J = 1,87 & 8,3 Hz, 1H) 7,42 (m, 1H, CONHCH2CH2). 7,22 (t, J = 8,02 Hz, 1H) 7, 15 (t, J = 2 Hz, 1H) 7,08 (m, 1H) 7, 0 (m, 2H) 3,27 (m, 2H, CH2) 248-2,57 (m, 6H, 3 x CH2) 2,45 (s, 3H, CH3), 0,44 (s, 3H, CH3) 0, 97 (t, J - 7, 0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 570,1 [M+].
Príklad 95 etylester3-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylovej kyseliny ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,74 (s, 1H, NH), 11,00 (s, 1H, NH) 8,13 (d, J = 1,7 Hz, 1H) 7,74 (s, 1H, H-vinyl) 7,70 (d, J = 7,7 Hz, 2H) 7,49
146 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz,-1H) 7,44 (t, J = 7,7 Hz, 2H) 7,32 (m, 1H) $96 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 4,26 (q, J = 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3) 2,79 (m, 2H, CH2) 2,72 (m, 2H, CH2)1,73 (m, 4H, 2 x CH2) 1,30 (t, J = 7, 0 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 412 [M+].
Príklad 99 etylester 3-(2-oxo-5-fenylsulfamoyl-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-4 5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylovej kyseliny 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s, 1H, NH), 11,33 (s, 1H, NHjlO, 07 (s, 1H, NH) 8,24 (d, J = 1,8 Hz, 1H) 7,74 (s, 1H, H-vinyl) 7,57 (dd, J = 1,8 & 8,0 Hz, 1H) 7,21 (t, J - 7,6 Hz, 2H) 7,11 (d, J = 7,6 Hz, 2H) 6,99 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 6,98 (d, J = 7,6 Hz, 1H) 4,27 (q, J = 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3) 280 (m, 2H, CH2) 2,73 (m, 2H, CH2) 1,73 (m, 4H, 2 x CH2) [30 (t, J = 7, 0 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 491 [M+].
Príklad 109
3-[3-(morfolin-4-karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-ylmetylén]-2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-6-karboxylová kyselina ‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H, NH), 12,75 (br s, 1H, COOH), 11,08 (s, 1H, NH) 7,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,71 (s, 1H, H-vinyl) 7,62 (dd, J = 1,4 «fe 7,8 Hz, 1H) 7,41 (d, J = 1,4 Hz, 1H) 3,65 (m, 4H, 2 x CH2) 355 (m, 4H, 2 x CH2) 2,81 (m, 2H, CH2) 2,54 (m, 2H, CH2) 1,73 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 421 [M+],
147
Príklad 112
5-bróm-3 -[3-(pyrolidín-1 -karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l -ylm etylén] -1 ,3-dihydro-indol-2-ón ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (s, 1H, NH), 11,00 (s, 1H, NH) 8,05 (d, J = 1,8 Hz, 1H) 7, 74 (s, 1H, H-vinyl) 7,28 (dd, J = 1,3 & 8,3 Hz, 1H) 6,83 (d, J = 8,3 Hz, 1H) 3,57 (m, 4H, 2 x CH2) 2, 79 (m, 2H, CH2) ?65 (m, 2H, CH2) 1,88 (m, 4H, 2 x CH2) 1, 71 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 439 & 441 [M+-l] & [M++l],
Príklad 114
3- (3-dimetylkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydroľ2//-izoindol-l-ylmetylén)-2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol-6-karboxylová kyselina ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H, NH), 12,72 (br s, 1H, COOH), 11,05 (s, 1H, NH) 7,85 (d, J = 7,9 Hz, 1H) 7,72 (s, 1H, H-vinyl) 7,62 (dd, J = 1,3 & 7,9 Hz, 1H) 7, 42 (d, J = 1,3 Hz, 1H) 3, 03 (s, 6H, N(CH3)2) 281 (m, 2H, CH2) 2,55 (m, 2H, CH2) 1,73 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 379 [M+],
Príklad 115
4- mety 1-5-(5-mety lsulfamoy 1-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//pyrol-3-karboxylová kyselina ’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (br s, 1H, NH) 8,24 (d, J = 1,5 Hz, 1H) 7,86 (s, 1H, H-vinyl) 7, 74 (d, J = 2,96 Hz, 1H) 7,56 (dd, J = 1,5 & 8,1 Hz, 1H) 7,20 (br m, 1H, NHCHj) 7,03 (d, J = 8,1 Hz, 1H) 2, 57 (s, 3H, CH3) 241 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 361 [M'].
148
Príklad 116 etylester {[4-metyl-5-(4-metyl-5-metylsulfamoyl-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-y 1 idénmetyl)-1//-pyro 1-3-karbonyl]-am i no} -octovej kyseliny
Etylester 4-metyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (viď D.O. Cheng, T. L. Bowman a E. LeGoff; J.Heterocyclic Chem. ·, 1976 ; 13 ; 1145-1147) sa formyluje podľa spôsobu A, hydrolyzuje podľa spôsobu B, potom amiduje (spôsob C), čím sa získa etylester [(5-formyl-4-metyl-l//-pyrol-3-karbonyl)-aminojoctovej kyseliny.
4-Metyl-5-metylaminosulfonyl-2-oxindol (50 mg 0, 21 mmol) sa kondenzuje s etylesterom [(5-formyl-4-metyl-1//-pyrol-3-karbonyl)-amino]-octovej kyseliny (100 mg 0, 42 mmol) a piperidínom (0, 1 ml) v etanole (2 ml), čím sa získa 50 mg (52%) požadovanej zlúčeniny.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, IH, NH), 11,29 (v, br, s, IH, NH-CO) 8,33 (t, J = 5,8 Hz, IH, CONCH2) 7,83 (d, J = 3,11 Hz, IH) 7,80 (s, IH, H-vinyl) 7,71 (d, J = 8,5 Hz, IH) 7,34 (br m, IH, NHCH3) Ú89 (d, J = 8,5 Hz, 1H)4, 11 ( q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3) 3,92 (d, J = 5,8 Hz, 2H, GlyCH2) 2,86 (s, 3H, CH3) 2,48 (s, 3H, CH3) 2,42 (d, J = 4,71 Hz, 3H, HNCH3) 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 460 [M+],
Príklad 117 .
etylester {[4-metyl-5-(5-metylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karbonyl]-amino}-octovej kyseliny
Zmes 5-metylaminosulfonyl-2-oxindolu (0,06 g, 0,22 mmol), etylesteru [(5-formyl-4-metyl-l//-pyrol-3-karbonyl)-amino]-octovej kyseliny (0,075 g 0, 27 mmol) a piperidínu (2 kvapky) v etanole (5 ml) sa zahrieva v uzavretej banke pri teplote 90 °C po dobu 12 hodín. Po ochladení sa precipitát spojí vákuovou filtráciou, premyje etanolom, trituruje zmesou dichlórmetánu a éteru a
149 suší, čím sa získa 0,035 g (36%) požadovanej zlúčeniny vo forme nažltlej hnedej pevnej látky.
’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, 1H, NH), 11 (v, br, s, 1H, NHCO) 8,30 (t, J = 5,7 Hz, 1H, CONCH2) 8, 25 (d, J = 1,2 Hz, 1H) 7, 88 (s, 1H, Hvinyl) 7,84 (d, J = 3,3 Hz, 1H) 7, 57 (dd, J = 1,9 & 8,5 Hz, 1H) 7, 14 (br m, 1H, NHCH3), 7,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H) 4,11 (q, J = 6,7 Hz, 2H, OCH2CH, 3) 3, 92 (d, J = 5,7 Hz, 2H, GlyCH2) 2,55 (s, 3H, CH3) 2,41 (m, 3H, NCH3) 1,20 (t, J = 6,7 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS m/z 446 [M+],
Príklad 118 {[4-metyl-5-(5-metylsulfamoyl-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyI)-177-pyrol-3-karbonyl]-amino}-octová kyselina
Zmes etylesteru [(5-formyl-4-mety 1-1/í-pyrol-3-karbonyl)-amino]-octovej kyseliny (0, 142 g 0, 59 mmol) a IN NaOH (1, 2 ml) v metanole (10 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny. Reakcia sa koncentruje a zvyšok sa kondenzuje s 5-metylaminosulfonyl-2-oxindolom (0,13 g 0, 48 mmol) a piperidínom (0, 12 ml) v etanole (12 ml), čím sa získa 0,11 g (52%) požadovanej zlúčeniny.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-dó) δ 13,98 (br s, 1H, NH) 8,17 (s, 1H) 7,80 (s, 1H) 7,75 (d, J = 3,1 Hz, 1H) 7,51 (dd, J = 2 & 8,2 Hz, 1H) 7,21 (m na br, s, 2H) 6, 97 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,41 (d, J = 4,2 Hz, 2H, CH2NH) 2,54 (s, 3H, pyrol-CH3), 2,39 (s, 3H, ArCH3).
MS m/z 417 [M-l]+.
150
Príklad 120
5-met y 1-2-(2-οχο-1,2-d ihydro-indo 1-3-y lidénme ty l)-l//-pyro 1-3-karboxylová kyselina *H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,77 (br s, 1H, NH), 12,49 (s, 1H, COOH), 11,07 (s, 1H, NH) 8,39 (s, 1H, H-vinyl) 7,43 (d, J = 7,47 Hz, 1H) 7,20 (t, J = 7,47 Hz, 1H) 7,03 (t, J = 7,47 Hz, 1H) 6,91 (d, J = 7,47 Hz, 1H) 6, 49 (d, J = 1,53 Hz, 1H) 2,34 (s, 3H, CH3).
MS m/z 269 [M+H]+.
Príklad 121 etylester 5-metyl-2-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny ’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,79 (s, 1H, NH), 11,08 (s, 1H, NH) 8,31 (s, 1H, H-vinyl) 7,45 (d, J = 7,52 Hz, 1H) 7,20 (t, J = 7,52 Hz, 1H) 7,03 (t, J = 7,52 Hz, 1H) 6,91 (d, J = 7,52 Hz, 1H) 6,50 (d, J = 2,1 Hz, 1H) 4, 26 (q, J = 7,2 Hz, 2H, OCH2CH3) 2,33 (s, 3H, CH3) 1, 32 (t, J = 7,2 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS m/z 297,1 [M+H]+.
Príklad 122 etylester 2-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-5-metyl-l//-pyrol 3-karboxylovej kyseliny 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,72 (s, 1H, NH), 11,16 (s,'lH, NH) 8,29 (s, 1H, H-vinyl) 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) 7,35 (dd, J = 2,0 & 8,05 Hz, 1H) 6, 87 (t, J = 8,05 Hz, 1H) 6,53 (d, J = 2,4 Hz, 1H) 4,28 (q, J = 7,03 Hz, 2H, OCH2CH3) 2,35 (s, 3H, CH3) 1,33 (t, J = 7,03 Hz, 3H, OCH2CH3).
151
MS m/z 375 & 377 [M+H] + .
Príklad 123
2-(5-bróm-2-oxo-1 ;2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-5-metyl-1 //-pyrol-3-karboxylová kyselina *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,72 (s, 1H, NH), 12,57 (s, 1H, COOH), 11,19 (s, 1H, NH) 8,36 (s, 1H, H-vinyl) 7,51 (d, J = 1,4 Hz, 1H) 7,34 (dd, J = 1,4 & 8,17 Hz, 1H) 6,87 (t, J = 8,17 Hz, 1H) 6,52 (d, J = 2,5 Hz, 1H) 2, 35 (s, 3H, CH3).
MS m/z 347 & 349 [M+H]+.
Príklad 124 (2-pyrolidin-l-yl-etyl)-amid 2-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-5-metyl-l //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
Do roztoku 2-formyl-5-metyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (250 mg 1,63 mmol) v dimetylformamide (3 ml) sa pridá 1 -etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid (376 mg 1, 2 ekviv.), 1-hydroxybenzotriazol (265 mg 1,2 ekviv.), trietylamín (0, 45 ml, 2 ekviv.) a 1 -(2-aminoetyl)pyrolidín (0,23 ml 1,1 ekviv.). Po miešaní pri izbovej teplote cez noc sa reakcia zriedi nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou (s extra soľou) a extrahuje 10% metanolom v dichlórmetáne. Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, sušia nad bezvodým síranom sodným a koncentrujú, čím sa získa 130 mg (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amidu 2-formyl-5metyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Zmes 5-bróm-2-oxindolu (106 mg 0,5 mmol), (2-pyrolidin-1-yl-etyl)amidu 2-formyl-5-metyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (125 mg, 1 ekviv.) a piperidínu (0,2 ml) v etanole (2 ml) sa zahrieva v uzavretej banke pri teplote 80 °C po dobu 1 hodiny, potom sa ochladí, vzniknutý precipitát sa spojí vákuo152 vou filtráciou, premyje etanolom a etylacetátom a suší, čím sa získa požadovaná zlúčenina vo forme oranžovej pevnej látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, 1H, NH), 11,06 (br s, 1H, NH) 8,56 (s, 1H, H-vinyl) 8,15 (m, 1H, CONCH2) 7,48 (d, J = 1,8 Hz, 1H) 7, 31 (dd, J = 1,8 & 7,9 Hz, 1H) 6,86 (d, J = 7,9 Hz, 1H) 6,60 (d, J = 2,3 Hz, 1H) 3,35 (m, 2H, HNCH2CH2) 2,56 (t, J = 6,91 Hz, 2H, HNCH2CH2) 2,35 (s, 3H, CH3) 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 443/445 [M+ a M++2].
Príklad 125 (2-dietylaminoetyl)-amid 2-(5-bróm-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-yIi dénmety lamety 1-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Do roztoku 2-formyl-5-metyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (320 mg 2,1 mmol) v dimetylformamide (3 ml) sa pridá 1 -etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid (483 mg 1,2 ekviv.), 1-hydroxybenzotriazol (340 mg 1,2 ekviv.), trietylamín (0, 59 ml, 2 ekviv.) a M/V-dietyl-etyléndiamín (0,32 ml 1,1 ekviv.). Po miešaní pri izbovej teplote cez noc sa reakcia zriedi nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou (s extra soľou) a extrahuje 10% metanolom v dichlórmetáne. Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, sušia nad bezvodým síranom sodným a koncentrujú, čím sa získa (2-dietylaminoetyl)-amid 2-formyl-5-metyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Zmes 5-bróm-2-oxindolu (106 mg 0, 5 mmol), (2-dietylaminoetyl)-amidu 2-formyl-5-metyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (126 mg, 1 ekviv.) a piperidínu (0,2 ml) v etanole (2 ml) sa zahrieva v uzavretej banke pri teplote 80 °C po dobu 1 hodiny, potom sa ochladí, precipitát sa spojí vákuovou filtráciou, premyje etanolom a etylacetátom a suší, čím sa získa požadovaná zlúčenina vo forme oranžovej pevnej látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, 1H, NH), 11,11 (br s, 1H, NH) 8,54 (s, 1H, H-vinyl) 8,1 (m, 1H, CONCH2) 7,49 (d, J = 2,2 Hz, 1H) 7,31
153 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, IH) 6,86 (d, J = 8,3 Hz, IH) 6,58 (d, J = 2,24 Hz, IH) 3,31 (m, 2H, HNCH2CH2) 2,59 (m, 6H, 3 x CH2) 2,36 (s, 3H, CH3) O, 99 (t, J = 6,8 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 445/447 [M+ a M++2],
Príklad 126 (2-dietylamino-etyl)-amid 2,4-dimety 1-5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Zmes 1,3-dihydro-indol-2-ónu (266 mg, 2 mmol), (2-dietylamino-etyl)amidu 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (530 mg, 2 mmol) a piperidánu (1 kvapka) v etanole sa zahrieva pri teplote 90 °C po dobu 2 hodín. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu, výsledný precipitát sa spojí vákuovou filtráciou, premyje etanolom a suší, čím sa získa 422 mg (55%) požadovanej zlúčeniny vo forme svetlo žltej pevnej látky.
'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,7 (s, IH, NH) 10, 9 (s, IH, NH) 7,88 (d, J = 7,6 Hz, IH) 7, 64 (s, IH, H-vinyl) 7,41 (t, J = 5,4 Hz, IH, NH) 7, 13 (dt, J = 1,2 & 7,6 Hz, IH) 6,99 (dt, J = 1,2 & 7,6 Hz, IH) 6,88 (d, J = 7,6 Hz, IH) 3,28 (m, 2H) 2,48-2,55 (m, 6H) 2,44 (s, 3H, CH3) 2,41 (s, 3H, CH3) 0, 97 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 381 [M+ + 1].
Príklad 127 (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl -1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Zmes 5-chlór-1,3-dihydro-indol-2-ónu (335 mg, 2 mmol), (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (530 mg, 2 mmol) a piperidínu (1 kvapka) v etanole sa zahrieva pri teplote 90 °C po
154 dobu 2 hodín. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu, výsledný precipitát sa spojí vákuovou filtráciou, premyje etanolom a suší, čím sa získa 565 mg (68%) požadovanej zlúčeniny vo forme oranžovej pevnej látky.
'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, IH, NH), 11,0 (s, IH, NH) 7,98 (d, J = 2,1 Hz, IH) 7,77 (s, IH H-vinyl) 7,44 (t, NH) 7, 13 (dd, J = 2,1 & 8,4 Hz, IH) 6,87 (d, J = 8,4 Hz, IH) 3,28 (g, 2H) 2,48-2,53 (m, 6H) 2,44 (s, 3H, CH3) 2,43 (s, 3H, CH3) 0, 97 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2)
MS + ve APCI 415 [M+ + 1].
Príklad 128 (2-pyrolidin-l -ety l)-ami d 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
1,3-Dihydro-indol-2-ón sa kondenzuje s (2-pyrolidin-1 -yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, čím sa získa požadovaná zlúčenina.
MS + ve APCI 379 [M+ + 1].
Príklad 129 (2-pyrolidin-l -y 1-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej, kyseliny
5-Fluór-1,3-dihydro-indol-2-ón sa kondenzuje s (2-pyrolidin-1-yl-etyl)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, čím sa získa požadovaná zlúčenina.
MS + ve APCI 397 [M+ + 1],
Zväčšenie merítka:
155
5-Formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylová kyselina (61 g), 5-fluór-1,3-dihydro-indol-2-ón (79 g), etanol (300 ml) a pyrolidín (32 ml) sa refluxuje po dobu 4,5 hodiny. Do zmesi sa pridá octová kyselina (24 ml) a v refluxe sa pokračuje po dobu 30 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pevné látky sa spoja vákuovou filtráciou a premyjú (2 x) etanolom. Pevné látky sa miešajú po dobu 130 minút v 40 % acetóne vo vode (400 ml) obsahujúcej 12 N kyselinu chlorovodíkovú (6,5 ml). Pevné látky sa spoja vákuovou filtráciou a premyjú (2 x ) 40 % acetónom vo vode. Pevné látky sa sušia za vákua, čím sa získa 5-[5fluór-2-oxo-l ,2-d ihydro-indol-(3 Z)-y lidénmety 1]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylová kyselina (86 g, 79 % výťažok) vo forme oranžovej pevnej látky. ’HNMR (dimetylsulfoxid-de) 2,48 ,2,50 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 6,80,6,88,7,68,7,72 (4xm, 4H, aromatová a vinyl) 10,88 (s, IH, CONH), 12,12 (s, IH, COOH), 13,82 (s, IH, pyrol NH), MS m/z 299 [M-lj.
. 5-[5-Fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l H-pyrol-3-karboxylová kyselina (100 g) a dimetylformamid (500 ml) sa miešajú a pridá sa benzotriazol-1-yloxytris(dimetylamino)fosfónium-hexafluórfosfát (221 g), 1-(2-aminoetyl)pyrolidín (45,6 g) a trietylamín (93 ml). Zmes sa mieša po dobu 2 hodín pri izbovej teplote, pevný produkt sa spojí vákuovou filtráciou a premyje etanolom. Pevné látky sa premývajú za miešania v etanole (500 ml) po dobu jednej hodiny pri teplote 64 °C a ochladia na izbovú teplotu. Pevné látky sa spoja vákuovou filtráciou, premyjú etanolom a sušia z;a vákua, čím sa získa (2-pyrolidin- 1-y 1-etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (101,5 g, 77 % výťažok). ’H-NMR (dimetylsulfoxid-dô) δ 1,60 (m, 4H, 2 x CH2) 2,40, 2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,50 (m, 4H, 2 x CH2) 2,57,3,35 (2 x m, 4H, 2 x CH2) 7,53,7,70,7, 73,7,76 (4xm, 4H, aromatický a vinyl)10, 88 (s, IH, CONH), 13,67 (s, IH, pyrol NH), MS m/z 396 [M+1],
Príklad 130 (2-pyrolidin-1 - yl-etyl)-amid 5-(5-chlór-2-oxo-l ,2-d i hyd ro-i ndo 1-3-y lidénmety l)-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
156
5-Chlór-1,3-dihydro-indol-2-ón sa kondenzuje s (2-pyrolidin-1-yl-etyl)amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, čím sa získa požadovaná zlúčenina.
MS + ve APCI 413 [M+ + 1].
Príklad 131 (2-dimetylaminoetyl)-amid 2,4-dimetyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
1,3-Dihydro-indol-2-ón sa kondenzuje s (2-dimetylaminoetyI)-amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, čím sa získa požadovaná zlúčenina.
’H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, 1H, NH) 10,90 (s, 1H, NH) 7,78 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 7,63 (s, 1H H-vinyl) 7,48 (t, 1H, NH) 7,13 (dt, 1H) 6,98 (dt, 1H) 6,88 (d, J = 7,7 Hz, 1H) 3,31 (q, J = 6,6 Hz, 2H) 2,43 (s, 3H, CH3) 2,40 (s, 3H, CH3) 2,38 (t, J = 6,6 Hz, 2H) 2,19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 353 [M+ + 1],
Príklad 132 (2-dimetylaminoetyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyI)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
5-Fluór-1,3-dihydro-indol-2-ón sa kondenzuje s (2-dimetylaminoetyl)amidom 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, čím sa získa požadovaná zlúčenina.
’H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,68 (s, 1H, NH) 10, 90 (s, 1H, NH) 7,76 (dd, J = 2,4 & 9,4 Hz, 1H) 7,71 (s, 1H H-vinyl) 7,51 (t, 1H, NH) 6,93
157 (m, IH) 6,84 (dd, J = 4,6 & 8,4 Hz, IH) 3,31 (q, J = 6,6 Hz, 2H) 2,43 (s, 3H, CH) 2,41 (s, 3H, CH3) 2,38 (t, J - 6,6 Hz, 2H) 2,19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 371 [M+ + 1],
Príklad 193 (2-etylamino-etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimety 1-1 H-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (2-Etylamino-etyl)-amid 5-formy 1-2,4-di met y 1-1/7-py r ol-3-karboxylovej kyseliny (99 g), etanol (400 ml), 5-fluór-2-oxindol (32 g) a pyrolidín (1, 5 g) sa refluxujú po dobu 3 hodín za stáleho miešania, zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pevné látky sa spoja vákuovou filtráciou, miešajú v etanole pri teplote 60 °C, ochladia na izbovú teplotu a spoja vákuovou filtráciou. Produkt sa suší za vákua, čím sa získa (2-etylamino-etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (75 g, 95% výťažok). ’H-NMR (dimetylsulfoxid-d6) δ 1,03 (t, 3H, CH3) 242, 2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,56 (q, 2H, CH2) 2,70, 3,30 (2 x t, 4H, 2 x CH2) <585, 6,92, 7,58, 7,72 , 7,76 (5xm, 5H, aromatický, vinyl a CONH) 10, 90 (br s, IH, CONH), 13,65 (br s, IH, pyrol NH).
MS m/z 369 [M-l].
Príklad 1 95 (2-dietyl-7V-oxoaminoetyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
Spôsob A:
(2-Dietylaminoetyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1 ŕ/-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (598 mg) a dichlórmetán (60 ml) v ľadovom kúpeli sa nechajú reagovať s 3-chlórperbenzoovou
158 kyselinou (336 mg) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, rozpúšťadlo sa odparuje na rotačnej odparke a zvyšok sa suspenduje v metanole (20 ml). Pridá sa voda (20 ml) obsahujúca hydroxid sodný (240 mg) a zmes sa mieša po dobu jednej hodiny, precipitát sa spojí vákuovou filtráciou, premyje 5 ml vody a suší za vákua, čím sa získa (2-dietyl-N-oxoamino-etyI)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3 Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimety 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (510 mg, 82% výťažok) vo forme oranžovej pevnej látky. ’H-NMR (DMSOd6) δ 13,72 (br s, 1H, NH), 11,02 (br s, 1H, CONH) 9,81 (br s, 1H, CONH) 7,75 (dd, 1H, aromatické) 7,70 (s, 1H, aromatické) 6,93 (td, 1H, aromatické), 6,84 (m, 1H, aromatické) 3,63 (m, 2H, CH2) 3,29 (m, 2H, CH2) 3,14 (m, 4H, 2 x CH2) 2,47 (s, 1H, CH3) 2,45 (s, 3H, CH3) 1,64 (t, 6H, 2 x CH3).
MS m/z 415 [M+l],
Spôsob B :
(2-Dietylamino-etyl)-amid 5 - formy 1-2,4-dimetyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (10 g) sa suspenduje v dichlórmetáne (100 ml) a ochladí v ľadovom kúpeli. 3-Chlórperoxybenzoová kyselina (13,1 g) sa pridá za stáleho miešania a zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša cez noc. Zmes sa zahusťuje'na rotačnej odparke do sucha a chromatografuje na stĺpci silikagélu v 20 % metanole v dichlórmetáne ako mobilnej fázy. Frakcie obsahujúce produkt sa spoja a zahusťujú na rotačnej odparke do sucha, čím sa získa (2-dietyl-TV-oxoamino-etyl)-amid 5-formyl-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (9 g, 83% výťažok).
(2-Dietyl-/V-oxoamino-etyl)-amid 5-formy 1-2,4-dimety 1-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (9 g), 5-fluór-l,3-dihydro-indol-2-ón ( (9 g, 83 % výťažok)) a pyrolidin ((9 g, 83 % výťažok (0,1 g) sa refluxujú v etanole (30 ml) po dobu 4 hodín. Zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a precipitát sa spojí vákuovou filtráciou a premyje etanolom. Pevné látky sa miešajú v etylacetáte (30 ml), spoja vákuovou filtráciou, premyjú etylacetátom a sušia za vákua, čím sa získa (2dietyl-/V-oxoamino-etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (10,3 g 80 % výťažok)
159 vo forme oranžovej pevnej látky. *H-NMR (DMSO-dô) δ 13,72 (br s, 1H, NH), 11,02 (br s, 1H, CONH) 9,81 (br s, 1H, CONH) 7,75 (dd, 1H, aromatické) 7,70 (s, 1H, aromatické) 6,93 (td, 1H, aromatické), 6,84 (m, 1H, aromatické) 3,63 (m, 2H, CH2) 3,29 (m, 2H, CH2), 3,14 (m, 4H, 2 x CH2) 2,47 (s, 1H, CH3) &5 (s, 3H, CH3) 1,64 (t, 6H, 2 x CH3). MS m/z 415 [M+1],
Príklad 190 [2-(pyridin-l -yl)etyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
5-[5-Fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3 Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimety 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (120 mg, 0, 4 mmol) sa pretrepáva s EDC a podrobí HCI (96 mg 0, 5 mmol), bezvodému 1-hydroxy-benztriazolu (68 mg 0,5 mmol) a 2-(2-aminoetylpyridínu zakúpenému u firmy Aldrich v bezvodom DMF (3 ml) po dobu 2-3 dní pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa zriedi s 1 M NaHCO3 (1,5 ml), potom 8 ml vody. Surový precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou, suší a čistí kryštalizáciou alebo chromatografiou, čím sa získa [2(pyridin-l-yl)-etyl]-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimety 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Príklad 189 [2-(pyridin-l -yl)etyl]-amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade vyššie, ale nahradí sa 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3' -karboxylová kyselina 5-[5-chlór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovou kyselinou (127 mg), čím sa získa [2-(pyridin-l yl)etyl]-amid 5-[5-chlór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
160
Príklad 192 [2-(pyridin-l-yl)etyl]-amid 5-[5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmety 1]-2,4-dimety 1-1//-pyrol-3-karboxylo vej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 190 vyššie, ale nahradí sa 5-[5-fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylová kyselina 5-[5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovou kyselinou (145 mg), čím sa získa [2-(pyridin-lyl)etyl]-amid 5-[5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Príklad 191 [2-(pyridin-l-yl)etyl]-amid 5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 190 vyššie, ale nahradí sa 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny 5-[2-oxo-l ,2-dihydro-i ndol-(3 Z)-y lidénmetyl]-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovou kyselinou (113 mg), čím sa získa [2-(pyridin-1 -yl)etyl]-amid 5-[2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Príklad 203 [2-(pyridin-l -yl)etyl]-amid 5-[5-kyano-2-oxo-l ,2-d i hydro-i ndol-( 3 Z)-y lidénmetyl ]-2,4-d i metyl-1//-pyrol-3-karboxylo vej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 190 vyššie, ale nahradí sa 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl -1 //-pyrol-3-karboxylová kyselina 5-[5-kyano-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovou kyselinou (123 mg), čím sa získa
161 [2-(pyridin-l yl)etyl]-amid 5-[5-kyano-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Príklady 142, 186, 187, 188 a 204
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príkladoch 190, 189, 191, 192 a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín 1 -(2-aminoetyl)pyrolidínom zakúpeným u firmy Aldrich Chemical Company, Inc., čím sa získajú požadované zlúčeniny
Príklady 143 - 147
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príkladoch 190, 189, 191, 192, a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín 1 -(2-aminoetyl)imidazolin-2-ónom (pripraveným zahrievaním dimetylkarbonátu s bis(2-aminoetyl)amínom (2 ekvivalenty) v uzavretej banke pri teplote 150 °C po dobu 30 minút. Potom sa postupuje podľa spôsobu opísaného v patente U. S. č. 2613212 (1950) udeleného Rohm & Haas Co. Surový produkt sa čistí na silikagély v zmesi chloroformu, metanolu, vodného amoniaku (80:25:2) ako mobilnou fázou, čím sa získajú požadované zlúčeniny.
Príklady 148 - 151 a 184
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 190, 189, 191, 192, a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín etylesterom 4-(2-aminoetyl)piperazin-l-octovej kyseliny (pripravený nasledujúcim spôsobom: etylester piperazin-l-octovej kyseliny (11,22 g) sa nechá reagovať s jódacetonitrilom (5,0 ml) v prítomnosti uhličitanu draselného (6,9 g) v etylacetáte (260 ml) pri teplote 0 °C. Po pridaní jódacetonitrilu (45 min) sa reakčná zmes následne mieša pri izbovej teplote po dobu 11 hodín. Reakčná zmes sa filtruje a filtráty sa odparujú. Zvyšok sa hydrogenuje v prítomnosti boridu kobaltu (pripraveného
162 z C0CI2 a borohydridu sodného) pri izbovej teplote pri tlaku 50 psi po dobu 2 dní v etanole. Filtráciou, odparovaním a chromatografickou purifikáciou v zmesi chloroformu, metanolu a vodného amoniaku (80:25:2) ako mobilnej fázy sa získa požadovaný amín (3,306 g) vo forme svetlo žltého oleja), čím sa získajú požadované zlúčeniny.
Príklad 152 - 153
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príkladoch 190, 189, 191, 192 a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín 2-[(2-aminoetylamino)]acetonitrilom (pripraveným nasledujúcim spôsobom: roztok jódacetonitrilu (50 mmol) v etylalkohole (80 ml) sa pridáva do roztoku etyléndiamínu (150 ml) v etylalkohole (60 ml) pri teplote 0 °C po dobu 30 minút. V miešaní sa pokračuje ďalšiu 1 hodinu pri teplote 0°C, potom pri izbovej teplote po dobu 14 hodín. Pridá sa 55 mmol uhličitanu draselného, mieša po dobu 30 minút. Zmes sa filtruje a filtrát sa koncentruje pri izbovej teplote. Zvyšok sa čistí na stĺpci silikagélu v zmesi chloroformu, metanolu a vodného amoniaku (80:15:1,5), čím sa získa 2-[(2-aminoetylamino)]-acetonitril (3,550 g), ktorý sa ihneď používa), čím sa získajú požadované zlúčeniny.
Príklad 154 - 158
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príkladoch 190, 189, 191, 192 a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín 1 -(3-aminopropyl)-azepin-2-ónom (pripraveným podľa spôsobu publikovaného v Kraft A.: J.Chem. Soc. PerkinTrans. 1, 6, 1999, 705 - 14, okrem hydrolýzy pomocou DBU, ktorá sa vykonáva pri teplote 145 °C v prítomnosti čistého hydroxidu lítneho (1 hodina, 5 ml DBU, 2 ml vody, 420 mg hydrátu hydroxidu lítneho).
Purifikáciou surového produktu na stĺpci silikagélu v zmesi chloroformu, metanolu, vodného amoniaku (80:40:4) ako mobilnej fázy sa získa l-(3163
-aminopropyl)azepin-2-ón (4,973 g, 87 % výťažok)), čím sa získajú požadované zlúčeniny.
Príklady 133 - 135, 159 a 200
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 190, 189, 191, 192, a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín jV-acetyl-etyléndiamínom, (pripraveným zahrievaním zmesi etylacetátu s etyléndiamínom (1,5 ekviv.) pri teplote 160 °C po dobu 1 hodiny v uzavretej banke a vákuovou destiláciou.’ Produkt sa získa v 56% výťažku. TV-acetyl-etyléndiamín je tiež dostupný u firmy Aldrich), čím sa získajú požadované zlúčeniny.
Príklady 146 - 140
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 190, 189, 191, 192 a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín 1-(3-aminopropyl)-tetrahydro-pyrimidin-2-ónom (pripravený rovnakým spôsobom ako 1-(3-aminopropyl)-azepin-2-ón podľa spôsobu publikovaného v Kraft A.: J.Chem.Soc. PerkinTrans. 1, 6, 1999, 705-14: 1, 3,4, 6,7, 8-hexahydro-2//-pyrimido[l ,2-a]pyrimidín (4,939 g), hydrát hydroxidu lítneho (918 mg) a 2 ml vody sa zahrievajú bez rozpúšťadla v uzavretej nádobe pri teplote 145 °C po dobu 1 hodiny. Surový produkt sa čistí na stĺpci silikagélu v zmesi chloroformu, metanolu a vodného amoniaku (80:40:44) ako mobilnej fázy, čím sa získa čistý amin (5,265 g, 94% výťažok).
Príklady 141, 160 - 162 a 185
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príkladoch 190, 189, 191, 192 a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín 1 -(2-aminoetyl)-piperazin-2-ónom (pripraveným nasledujúcim spôsobom: čistý ŕerc-butyldifenylsilylchlorid (25 ml, 97,7 mmol) sa pridáva po kvapkách do roztoku DBU (19,5 ml, 130
164 mmol) a bis(2-aminoetyl)amínu (4,32 ml, 40 mmol) v bezvodom dimetylacetamidu (80 ml) pri izbovej teplote po ochladení vo vodnom kúpeli v priebehu 5 minút. Po ochladení na izbovú teplotu sa pridá etylester bromoctovej kyseliny (6,70 ml, 60 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 25 minút, potom sa odparuje za vysokého vákua a zvyšok sa rozpustí v metanole (200 .ml). Pridá ša
K.HCO3 (10 g) a KF (12 g, 200 mmol) a zmes sa mieša pri teplote 60 °C po dobu 5 hodín. Pridá sa 10 g Na2CO3 a zmes sa mieša po dobu 10 minút, ochladí a filtruje, filtráty sa odparujú. Zvyšok sa extrahuje hexánmi (2 x 250 ml), látky nerozpustné v hexánoch sa rozpustí v etanole (60ml), filtrujú a odparujú. Zvyšok sa čistí na stĺpci silikagélu v zmesi chloroformu, metanolu a vodného amoniaku (80:40:4) ako mobilnej fázy, čím sa získa čistý amín (4,245 g, 74% výťažok), čím sa získajú požadované zlúčeniny.
Príklady 163 - 167
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príkladoch 190, 189, 191, 192 a 203 vyššie, ale nahradí sa 2-(2-aminoetyl)pyridín 3-[(2-aminoetyl)amino]propionitrilom (pripraveným z etyléndiamínu (150 mmol) a akrylonitrilu (50 mmol) v TF pri izbovej teplote podľa spôsobu publikovaného v Israel, M. et al·. J.Med.Chem. 7, 1964, 710-16, čím sa získa požadovaný amín (4, 294 g)), čím sa získajú požadované zlúčeniny.
Príklad 168 [2-(4-metylpiperazin-l-yl)-etyl]-amid 5-(5-fluór-2-oxo-1, 2-d i hydro-indol-3-yl i dénmetyl)-2,4-dimetyl-1 /7-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Do miešanej žltej kalnej zmesi 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-yIidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (90 mg), DMF (0, 8 ml) a TEA (0, 084 ml) v 20 ml banke sa pridá BOP činidlo (199 mg). Zmes sa v priebehu 5 minút vyčerí, do čírej zmesi sa pridá 2-(4-metylpiperazin-l-yljetylamín1 (51 mg) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote cez
165 noc. Žlté produkty v pevnej forme z reakčného systému vyprecipitujú. Podľa TLC (10% metanol v metylénchloride) by sa všetka východisková látka mala konvertovať na produkt. Pevný podiel izolovaný vákuovou filtráciou sa raz premyje etanolom (1 ml), pevný podiel sa sonikuje v dietylétere (2 ml) po dobu
I minút a spojí vákuovou filtráciou. Po sušení za vákua sa získa (4-metylpiperazin-l-yl-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (79 mg, 62% výťažok).
’H NMR (DMSO-dé) δ 2,13 (s, 3H, CH3) 2, 40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,41 (m, 2H, CH2) 2, 47 (m, 8H, 4xCH2) 3,30 (m, 2H, CH2) 6^82 (dd, J = 4 ,5, 8, 7Hz, 1H) 6,91 (td, 2J = 2, 4, 3J - 8,8Hz, 1H) 713 (t, J = 5,6Hz, 1H) 7,70 (s, 1H) 7,75 (dd, J = 2,8, 9,6Hz, 1 H) (aromatický a vinyl)10, 88 (s, 1H, CONH), 13,67 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 424, 4 (M-l).
Príklad 169 (4-metylpiperazin-l -yl-etyl)-amid 5-(5-chlór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmety 1)-2,4-dimety 1-1 //-py rol-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 168 vyššie, ale nahradí sa 5-[5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimety 1-1 //-pyrol-3-karboxylová kyselina 5-[5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovou kyselinou (95 mg 0,3 mmol), čím sa získa (4-metylpiperazin-l-y 1-etyl)-amid 5-(5-chlór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmétyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (76 mg, 58%).
*H NMR (DMSO-dô) δ 2,13 (s, 3H, CH3) 2,41, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,42 (m, 2H, CH2) 2,48 (m, 8H, 4xCH2) 3,30 (m, 2H, CH2) 6,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 7,11 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H) 7,44 (t, J = 5,6Hz, 1H) 7,76 (s, 1H) 7,97 (d, J = 2, 0Hz, 1H) (aromatické a vinyl) 10,98 (s, 1H, CONH), 13,62 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 440,2 (M-l).
166
Príklad 170 (4-metylpiperazin-l -yl-etyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 168, ale nahradí sa 5(5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylová kyselina 5-(5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l/Z-pyrol-3-karboxylovou kyselinou, čím sa získa (4-metylpiperazin-l -yl-etyl)-amid 5-(5-bróm-2-oxo-l ,2-dihydro-indol -3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (39 mg, 54%) z SU01 1670 (54 mg 0, 15 mmol).
’H NMR (DMSO-dô) δ 2,14 (s, 3H, CH3) 2, 41,2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,42 (m, 2H, CH2) 2,48 (m, 8H, 4 x CH2) 3,31 (m, 2H, CH2) 680 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 7,23 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H) 7,44 (t, J - 5,6 Hz, 1H) 7,76 (s, 1H) 8,09 (d, J = 2,0 Hz, 1H) (aromatický a vinyl) 10, 99 (s, 1H, CONH), 13,61 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 486,6 (M).
Príklad 172 (4-metylpiperazin-l -y l-etyl)-amid 5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 168 vyššie, ale nahradí sa 5-(5 - fluór-2-οχο-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylová kyselina SU014900 5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovou kyselinou, čím sa získa (4-metylpiperazin-1 - y 1-etyl)-amid 5-(2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, SU014903 (136 mg, 84%) z SU012120 (112,8 mg, 0,4 mmol).
167 ’H-NMR (DMSO-d6) δ 2,13 (s, 3H, CH3) 2,39, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,42 (m, 2H, CH2) 2,48 (m, 8H, 4xCH2) 3,30 (t, 2H, CH2) 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 6,96 (t, J = 7,4 Hz, 1H) 7,10 (t, J = 7,8 Hz, 1H) 7,41 (t, J = 5,4 Hz, 1H) 7,62 (s, 1H) 7,76 (d, J = 7,6 Hz, 1H) (aromatické a vinyl)10, 88 (s, 1H, CONH), 13,61 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 406,6 (M-l).
Príklad 171 [2-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)etyl]amid 5-[2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénme ty 1]-2,4-di metyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Do miešanej žltej kalnej zmesi 5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (112,8 mg 0, 4 mmol), DMF (0,5 ml) a trietylamínu (0,111 ml) v 20 ml reakčnej banke sa pridá BOP činidlo (265 mg). Zmes sa po 5 minútach vyčerí. Do čírej zmesi sa pridá 2(2,6-dimetylpiperazin-l-yl)etylamín (68,6 mg) (viď, Tapia, L. Alonso-Cires, P. Lopez-Tudanca, R., Mosquera, L. Labeaga, A ., Innrarity, A. Orjals, J. Med. Chem., 1999, 42, 2870-2880) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Podľa TLC (10% metanol v metylénchloride) by mala všetka východisková látka zreagovať na produkt. Reakčná zmes sa zahusťuje do sucha a čistí zrýchlenou chromatografiou (CH2C12/CH3OH=20/1-15/1), potom rekryštalizuje, čím sa získa [2-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)etyl)-amid 5-[2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (83 mg, 50% výťažok).
*H NMR (DMSO-dô) δ 1,15,1,16 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 1,95 (t, J = 11,6 Hz, 2H, CH2) 2,41, 2,47 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,50 (m, 2H, CH2) 3,03 (d, J = 10 Hz, 2H) 3,19 (m, 2H) 3,30 (m, 2H, CH2) 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 6,97 (t, J = 7,2 Hz, 1H) 7,11 (t, J = 7,8 Hz, 1H) 7,48 (t, J = 5,6 Hz, 1H) 151 (s, 1H) 7,75 (d, J = 7,6
Hz, 1H) (aromatické a vinyl) 10, 88 (s, 1H, CONH), 13,62 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 422,2 (M+1).
168
Príklad 173 [2-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)etyl)-amid 5-[5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmety l]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 168 vyššie, čím sa získa požadovaná zlúčenina (60 mg 0, 2 mmol).
'H NMR (DMSO-dô) δ 0,891, 0, 907 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 1, 49 (t, J = 10,4 Hz, 2H) 2, 40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,41 (m, 2H, CH2) 2,74 (m, 4H) 3,30 (m, 2H) 6, 82 (dd, J = 4,5, 8,7 Hz, 1H) 6, 90 (td, 2J = 2, 4, 3 J = 8,4 Hz, 1H) 7,42 (t, J = 5,6 Hz, 1H) 7,70 (s, 1H) 7,74 (dd, J = 4,6,8,4Hz, 1H) (aromatické a vinyl)l0, 88 (s, 1H, CONH), 13,65 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 438,4 (M-l).
Príklad 174 [2-(3,5-dimetylpiperazín-1 -yl)etyl)-amid 5-[5-chlór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu uvedeného v príklade 171 vyššie, čím sa získa požadovaná zlúčenina (31,2 mg, 34%) z 5-[5-chlór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (63 mg 0, 2 mmol).
Ή NMR (DMSO-d6) δ 1,15,1, 16 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 1,95 (t, J - 11,6 Hz, 2H, CH2) 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,50 (m, 2H, CH2) 3, 03 (d, J = 11,2 Hz, 2H) 3,19 (m, 2H) 3,30 (m, 2H, CH2) 6, 85 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 7,11 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H) 7,52 (t, J = 5,6 Hz, 1H) 7,76 (s, 1H) 7,97 (d, J = 2,0 Hz, 1H) (aromatické a vinyl) 10, 99 (s, 1H, CONH), 13,63 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 456,2 (M+1).
169
Príklad 175 [2-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)etyl)-amid 5-[5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-1//-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny
Postupuje sa podľa spôsobu.uvedeného v príklade 171, čím sa získa požadovaná zlúčenina (40 mg, 40%) z 5-[5-bróm-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidénmetyl]-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (74 mg 0,2 mmol).
'H NMR (DMSO-d6) δ 1,15, 1, 16 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 1,95 (t, J = 11,6 Hz, 2H, CH2) 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3) 2,50 (m, 2H, CH2) 3,03 (d, J = 10,4 Hz, 2H) 3, 19 (m, 2H) 3,30 (m, 2H, CH2), 6,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 7,24 (dd, J = 2,0, 8,4 Hz, 1H) 7,51 (t, J = 5,6 Hz, 1H) 7,76 (s, 1H) 8,10 (d, J = 2,0 Hz, 1H) (aromatické a vinyl) 10, 99 (s, 1H, CONH), 13,62 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 498,4 (M-l).
Biologické príklady
Nasledujúce testy sa používali na nájdenie takých zlúčenín, ktoré majú optimálny stupeň požadovanej aktivity.
Postupy testov
Nasledujúce testy môžu byť používané na stanovenie miery aktivity a účinku rôznych zlúčenín podľa predloženého vynálezu na jednu alebo viac PK. Podobné testy, môžu byť navrhnuté spoločne podľa rovnakých zásad pre ktorékoľvek PK pomocou štandardných a známych techník.
Niekoľko testov opísaných v predloženom vynáleze je vykonávaných technikou ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Sandwich Assay) (Voliér, et al., 1980, „Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,“ Manual of Clinical Immunology, 2d ed., Rose and Friedman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., 359-371). Všeobecný postup je nasledujúci: zlúčenina je zavedená do buniek exprimujúcich testovanú kinázu, buď prírodnú alebo rekombinantnú, počas
170 vybraného časového intervalu, po ktorom, pokiaľ testovaná kináza je receptor, je pridaný ligand aktivujúci receptor. Bunky sa lyžujú a lyzát sa prevedie do jamiek doštičky pre ELISA techniku vopred potiahnutých špecifickou protilátkou rozpoznávajúcou substrát enzymatickej fosforylačnej reakcie. Nesubstrátové komponenty bunkového lyzátu sa obmyjú a miera fosforylácie substrátu sa deteguje protilátkou špecificky rozpoznávajúcou fosfotyrozín v porovnaní s bunkami, ktoré neprišli do kontaktu s testovanou zlúčeninou.
Tieto výhodné postupy vykonávania ELISA experimentov pre špecifické PK sú uvedené nižšie. Avšak úprava týchto postupov určených na stanovenie aktivity zlúčenín proti ďalším RTK, ako aj pre CTK a STK, je odbornej verejnosti zrejmé. Ďalšie testy opísané v predloženom vynáleze merajú množstvo DNA vytvorenej v rámci odpovedi na aktiváciu testovanej kinázy, ktorá je všeobecným merítkom proliferatívnej odpovedi. Všeobecný spôsob tohto testu je nasledujúci: zlúčenina je zavedená do buniek exprimujúcich testovanú kinázu, buď prírodnú alebo rekombinantnú, po vybraný časový interval, po ktorom, pokiaľ testovaná kináza je receptor, je pridaný ligand aktivujúci receptor. Po inkubácii (aspoň cez noc) sa pridá činidlo značiace DNA, napr. 5-brómdeoxyuridín (BrdU) alebo H3-tymidín. Množstvo značenej DNA sa deteguje buď antiBrdU protilátkou alebo meraním rádioaktivity a je porovnávané s kontrolnými bunkami, ktoré neprišli do kontaktu s testovanou zlúčeninou.
GST-FLK-1 biologický test
Tento test analyzuje aktivitu tyrozínkinázy GST-Flkl na poly(glu, tyr) peptidoch.
Materiály a činidlá:
1. Corning doštičky ELISA s 96 jamkami (Corning Catalog No. 580596).
2. poly (glu, tyr) 4:1, lyofilizát (Sigma Catalog # P0275).
3. Príprava doštičiek na test potiahnutých poly (glu, tyr) (pEY): potiahnutie 2 pg/jamka látkou poly (glu, tyr) (pEY) v 100 μΐ PBS,
171 skladovanie pri izbovej teplote po dobu 2 hodín alebo pri teplote 4 °C cez noc. Prikrytie doštičiek kvôli odparovaniu.
4. PBS pufer: pre 1 1, zmiešanie 0,2 g KH2PO4 15 g Na2HPO4, 0,2 g KC1 a 8 g NaCl v približne 900 ml dH2O. Po rozpustení všetkých činidiel sa pH upraví na 7,2 pomocou HCI. Upravenie objemu na celkový 1 1 pomocou dH2O.
5. PBST pufer: na 1 1 PBS pufru sa pridá 1,0 ml Tween-20.
6. TBB-Blokujúci pufer: pre 1 1, zmiešanie 1,21 g TRIS, 8,77 g NaCl, 1 ml TWEEN-20 v približne 900 ml dH2O, pH sa upraví na 7,2 pomocou HCI, pridanie 10 g BSA, miešanie na úplné rozpustenie, objem sa doplní na celkový 1 1 pomocou dH2O, filtrovanie na odstránenie pevných častíc.
7. 1% BSA v PBS: na vytvorenie 1 x pracovného roztoku sa pridá 10 g BSA do približne 990 ml PBS pufru, miešanie na úplné rozpustenie, objem sa doplní na celkový 1 1 pomocou PBS pufru, filtrovanie na odstránenie pevných častíc.
8. 50 mM Hepes pH 7, 5.
9. GST-Flklcd purifikovaný od transformácie sf9 rekombinantného bakulovírusu (SUGEN, Inc.).
10. 4% DMSO v dH2O.
11. 10 mM ATP v dH2O.
12. 40 mM MnCl2
13. Kinázový riediaci pufer (KDB): zmiešanie 10 ml Hepes (pH 7,5), 1 ml 5M NaCl, 40 μΐ 100 mM ortovanadátu sodného a 0,4 ml 5% BSA v dH2O s 88,56 ml dH2O.
14. polypropylénové doštičky NUNC s 96 jamkami s dnom do V, Applied Scientific Catalog # AS-72092.
172
15. EDTA: pridanie 14,12 g etyléndiamíntetraoctovej kyseliny (EDTA) do približne 70 ml dH2O, pridanie 10 N NaOH, dokiaľ sa EDTA nerozpustí, upravenie pH na 8,0, upravenie na celkový objem 100 ml pomocou dH2O.
. . ι
16. 1° protilátkový riediaci pufer: zmiešania 10 ml 5% BSA v PBS pufry s 89,5 ml TBST.
17. Anti-fosfotyrozínová monoklonálna protilátka konjugovaná s peroxidázou z chrenu dedinského (PY99 HRP, Santa Cruz Biotech).
18. 2,2'-Azinobis (3-etylbenztiazolín-6-sulfónová kyselina (ABTS, Moss, Cat. No. ABST).
19. 10% SDS.
Postup:
1. Corning doštičky ELISA s 96 jamkami potiahnuté 2 pg polyEY peptidu v sterilnom PBS podľa kroku 3 z oddielu materiály a činidlá.
2. odstránenie nenaviazanej tekutiny z jamiek invertujúcou doštičkou. Premytie TBST (1 x ). Pretrepanie doštičky na papierovej páske na odstránenie prebytku tekutiny.
3. Do každej jamky sa pridá 100 μΐ 1% BSA v PBS, inkubácia za trepania po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote.
4. Opakovanie kroku 2.
5. Presýtenie jamiek 50 mM HEPES (pH 7,5) (150 μΙ/jamka).
6. Zriedenie testovanej zlúčeniny pomocou dH2O/4% DMSO na štvor násobnú požadovanú finálnu testovaciu koncentráciu v polypropylénových doštičkách s 96 jamkami.
173
Ί. Pridanie 25 μΐ zriedenej testovanej zlúčeniny do ELISA doštičky v kontrolných jamkách, zavedenie 25 μΐ dH2O/4% DMSO.
8. Pridanie 25 μΐ 40 mM MnCl2 s 4x ATP (2 μΜ) do každej jamky.
9. Pridanie 25 μΐ 0,5M EDTA do negatívnych kontrolných jamiek.,
10. Zriedenie GST-Flkl na 0,005 μg (5 ng)/jamiek pomocou KDB.
11. Pridanie 50 μΐ zriedeného enzýmu do každej jamky.
12. Inkubácia za trepania po dobu 15 minút pri izbovej teplote.
13. Zastavenie reakcie pridaním 50 μΐ 250 mM EDTA (pH 8,0).
14. Premytie 3 x TBST a pretrepanie doštičky na papierovej páske na odstránenie tekutiny.
15. Pridanie 100 μΐ anti-fosfotyrozínového HRP konjugátu na jamku, 1 : 5 000 zriedenie v protilátkovom riediacom pufry. Inkubácia za trepania po dobu 90 minút pri izbovej teplote.
16. Premývanie podľa kroku 14.
17. Pridanie 100 μΐ ABTS roztoku pri izbovej teplote do každej jamky.
18. Inkubácia za trepania po dobu 10 až 15 minút. Odstránenie akýchkoľvek bubliniek.
19. Zastavenie reakcie pridaním 20 μΐ 10% SDS do každej jamky.
20. Meranie na prístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrom pri 410 nM a referenčným filtrom pri 630 nM.
PYK2 biologické testy
Tento test sa používa na meranie in vitro aktivity kinázy HA epitopom označenej pyk2 s úplnou dĺžkou (FL.pyk2-HA) pri teste ELISA technikou.
174
Materiály a činidlá:
1. Corning Elisa doštičky s 96 jamkami.
2. 12CA5 monoklonálna anti-HA protilátka (SUGEN, Inc.)
3. PBS (fosfátom pufrovaný fyziologický roztok Dulbecco (Gibco Catalog # 450-1300EB))
4. TBST pufer: pre 1 1, zmiešanie 8,766 g NaCl 6,057 g TRIS a 1 ml 0,1% Triton X-100 v približne 900 ml dH2O. Upravenie pH na 7,2 a doplnenie objemu na 1 1.
5. Blokujúci pufer: pre 1 1, zmiešanie 100 g 10% BSA, 12,1 g 100 mM TRIS, 58,44 g 1 M NaCl a 10 ml 1% TWEEN-20.
6. FL.pyk2-HA z sf9 bunkového lyzátu (SUGEN, Inc.).
7. 4% DMSO v MilliQue H2O.
8. 10 mM ATP v dH2O.
9. 1 M MnCl2.
10. 1 M MgCI2.
11. 1 M Ditiotreitol (DTT).
12. 10X fosforylácia kinázového pufru: zmiešanie 5,0 ml 1 M Hepes
(pH 7,5) 0, 2ml 1 M MnCl2 Oml 1 M MgCl2, 1,0 ml 10% Triton X100 v 2,8 ml dH2O. Tesne pred použitím pridania 0,1 ml 1 M DTT.
13. NUNC propylénové doštičky s 96 jamkami s V dnom.
14. 500 mM EDTA v dH2O.
15. Protilátkový riediaci pufer: pre 100 ml, 1 ml 5% BSA/PBS a 1 ml 10% Tween-20 v 88 ml TBS.
16. HRP-konjugovaná anti-Ptyr PY99), Santa Cruz Biotech
175
Cat. No. SC-7020.
17. ABTS, Moss, Cat. No. ABST-2000.
18. 10% SDS.
Postup: . '
1. Corning ELISA doštičky s 96 jamkami potiahnuté 0,5 pg na jamku 12CA5 protilátkou anti-HA v 100 μΐ PBS. Skladovanie cez noc pri teplote 4°C.
2. Odstránenie nenaviazanej HA protilátky z jamiek invertujúcej doštičkou. Premytie doštičiek dH2O. Pretrepanie doštičky na papierovej páske na odstránenia prebytku tekutiny.
3. Pridanie 150 μΐ blokujúceho pufru do každej jamky. Inkubácia za trepania po dobu 30 minút pri izbovej teplote.
4. Premytie doštičiek 4x TBS-T.
5. Zriedenie lyzátu v PBS (1,5 pg lyzát/100 μΐ PBS).
6. Pridanie 100 μΐ zriedeného lyzátu do každej jamky. Pretrepávanie pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny.
7. Premytie podľa kroku 4.
8. Pridanie 50 μΐ 2 X kinázového pufru do ELISA doštičky obsahujúcej zachytenú pyk2-HA.
9. Pridanie 25 μΐ 400 μΜ testovanej zlúčeniny v 4% DMSO do každej jamky. Na kontrolné jamky použitie samotného 4% DMSO.
10. Pridanie 25 pl 0,5 M EDTA do negatívnych kontrolných jamiek.
11. Pridanie 25 μΐ 20 μΜ ATP do všetkých jamiek. Inkubácia za trepania po dobu 10 minút.
176
12. Zastavenie reakcie pridaním 25 μΐ 500 mM EDTA (pH 8,0) do všetkých jamiek.
13. Premytie podľa kroku 4.
14. Pridanie 100 μΐ HRP konjugovanej anti-Ptyr zriedenej 1:6 000 v protilátkovom riediacom pufry do každej jamky. Inkubácia za trepania po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote.
15. Premytie doštičiek 3 x s TBST a 1 x s PBS.
16. Pridanie 100 μΐ ABST roztoku do každej jamky.
17. Pokiaľ je treba zastavenie reakcie pridaním 20 μΐ 10% SDS do každej jamky.
18. Meranie na prístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrom pri 410 nM a referenčným filtrom pri 630 nM.
FGFR1 biologické testy
Tento test je používaný nameranie in vitro kinázovej aktivity FGF1-R pri ELISA teste. Materiály a činidlá:
1. Elisa doštičky Costar s 96 jamkami (Corning Catalog # 3369).
2. Poly (Glu-Tyr) (Sigma Catalog # P0275).
3. PBS (Gibko Catalog # 450-1300EB)
4. 50 mM Hepes pufrovací roztok.
5. Blokujúci pufer (5% BSA/PBS).
6. Purifíkovaná GST-FGFR1 (SUGEN, Inc.)
7. Kinázový riediaci pufer. Zmiešanie 500 μΐ 1 M Hepes (GIBCO), 20 μΐ 5% BSA/PBS, 10 μΐ lOOmM ortovanadátu sodného a 50 μΐ 5M NaCl.
177
8.
9.
Postup:
1.
2.
3.
4.
mM ATP.
ATP/MnCb fosforylačná zmes: zmiešanie 20 μΐ ATP, 400 μΐ 1 M MnCl2 a 9,56 ml dH2O.
NUNC polypropylénové doštičky s 96 jamkami s dnom do V (Applied Scientific Catalog # AS-72092).
0,5M EDTA.
0,05% TBST. Pridanie 500 μΐ TWEEN do 1 litra TBS.
Králičie polyklonálne anti-fosfotyrozínové sérum (SUGEN, Inc.).
Kozí proti-králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource, Catalog # ALI0404).
ABTS roztok.
ABTS/H2O2 roztok.
ELISA doštičky Costar s 96 jamkami potiahnuté poly(Glu, Tyr) v 100 μΐ PBS v množstve 1 pg na jamku. Skladovanie cez noc pri teplote 4°C.
Premytie potiahnutých doštičiek PBS (1 x ).
Pridanie 150 μΐ 5% BSA/PBS blokujúceho pufru do každej jamky. Inkubácia za trepania po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote.
Premytie doštičiek 2 x s PBS, potom s 50mM Hepes (1 x ). Pretrepanie doštičiek na papierovej páske na odstránenie prebytku tekutiny a bubliniek.
Pridanie 25 μΐ 0,4 mM testovanej zlúčeniny v 4% DMSO alebo samotnom 4% DMSO (kontrolná) do doštičiek.
5.
178
6. Zriedenie purifikovanej GST-FGFR1 v kinázovom riediacom pufry (5 ng kináza/50 μΐ KDB/jamka).
7. Pridanie 50 μΐ zriedenej kinázy do každej jamky.
8. Naštartovanie kinázovej reakcie pridaním 25 μΐ/jamka čerstvo pripraveného ATP/Mn++ (0,4 ml 1 M MnCl2, 40 μΐ 10 mM ATP, 9,56 ml dH2O), čerstvo pripravený).
9. Toto je rýchla kinázová reakcia a musí byť zastavená pomocou 25 μΐ 0,5M EDTA spôsobom, ktorý je podobný pridaniu ATP.
10. Premytie doštičiek 4x čerstvým TBST.
11. Vytvorenie protilátkového riediaceho pufru: na 50 ml: zmiešanie 5 ml 5% BSA, 250 μΐ 5% mlieka a 50 μΐ lOOmM vanadátu sodného, doplnenie na konečný objem pomocou 0,05% TBST.
12. Pridanie 100 μΐ na jamku anti-fosfotyrozín (1 : 10 000 zriedenie v ADB). Inkubácia za trepania po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote.
13. Premytie podľa kroku 10.
14. Pridanie Biosource kozieho proti-králičieho IgG peroxidázového konjugátu (1 : 6 000 zriedenie v ADB) 100 μΐ na jamku. Inkubácia za trepania po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote.
15. Premytie podľa kroku 10 a potom s PBS na odstránenie bubliniek a prebytku TWEEN.
16. Pridanie 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každej jamky.
17. Inkubácia za trepania po dobu 10 až 20 minút.
Odstránenie akýchkoľvek bubliniek.
18. Meranie na prístroji Dynatech MR7000 pre techniku elisa: testovací filter pri 410 nM, referenčný filter pri 630 nM.
179
EGFR biologické testy
Tento test je používaný nameranie in vitro kinázovej aktivity FGF1-R pri ELISA testu.
Materiály a činidlá:
1. ELISA doštičky Corning s 96 jamkami.
2. SUM01 monoklonálna protilátka proti-EGFR (SUGEN, Inc.).
3. PBS.
4. TBST pufer.
5. Blokujúci pufer: pre 100 ml, zmiešanie 5,0 g Carnation Instant Non-fat Milk® 100 ml PBS.
6. A431 bunkový lyzát (SUGEN, Inc.).
7. TBS pufer:
8. TBS + 10% DMSO: pre 1 1, zmiešanie 1,514 g TRIS 2,192 g NaCI a 25 ml DMSO; doplnenie na 1 liter celkového objemu pomocou dH2O.
9. ATP (Adenozín-5'-trifosfát, z konského svalu, Sigma Cat. No. A5394), 1,0 mM roztok v dH2O. Toto činidlo by malo byť pripravené tesne pred použitím a skladované v ľade.
10. l,0mMMnCl2.
11. ATP/MnCl2 fosforylačná zmes: na vytvorenie 10 ml, zmiešanie 300 μΐ 1 mM ATP, 500 μΐ MnCl2 a 9,2 ml dH2O. Pripravenie tesne pred použitím a skladovanie v ľade.
12. polypropylénové doštičky NUNC s 96 jamkami s dnom do V.
13. EDTA.
180
Králičie polyklonálne anti-fosfotyrozínové sérum (SUGEN, Inc.).
Kozí proti-králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource Cat. No. ALI0404).
i ABTS.
30% peroxid vodíka.
ABTS/H2O2.
0,2 M HCI.
ELISA doštičky Corning s 96 jamkami potiahnuté 0,5 pg SUMO1 v 100 pl PBS na jamku. Skladovanie cez noc pri teplote 4°C.
Odstránenie nenaviazanej SUMO1 z jamiek invertujúcou doštičkou kvôli eliminácii tekutiny. Premytie 1 x dH2O. Pretrepanie doštičky na papierovom obrúsku na odstránenie prebytku tekutiny.
Pridanie 150 μΐ blokujúceho pufru do každej jamky. Inkubácia za trepania po dobu 30 minút pri izbovej teplote.
Premytie doštičiek 3 x deionizovanou vodou, potom 1 x TBST. Pretrepanie doštičky na papierovom rúšku na odstránenie prebytku tekutiny a bubliniek.
Zriedenie lyzátu v PBS (7 pg lyzát/100 pl PBS).
Pridanie 100 pl zriedeného lyzátu do každej jamky. Pretrepávanie pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny.
Premytie doštičiek podľa bodu 4 vyššie.
Pridanie 120 pl TBS do ELISA doštičky obsahujúcej zachytenú
181
9. Zriedenie testovanej zlúčeniny 1:10 v TBS, zavedenie do jamiek
Pridanie 13,5 μΐ zriedenej testovanej zlúčeniny do ELISA doštičky. Pridanie 13,5 μΐ TBS v 10% DMSO do kontrolných jamiek.
11. Inkubácia za trepania po dobu 30 minút pri izbovej teploté.
12. Pridanie 15 μΐ fosforylačnej zmesi do všetkých jamiek okrem negatívnych kontrolných jamiek. Konečný objem v jamkách by mal byť približne 150 μΐ s 3 M ATP/5 mM MnCl2 konečnej koncentrácie v každej jamke. Inkubácia za trepania po dobu 5 minút.
13. Zastavenie reakcie za trepania pridaním 16,5 μΐ EDTA roztoku. Pretrepávanie ďalšiu 1 minútu.
14. Premytie 4x deionizovanou vodou, 2 x s TBST.
15. Pridanie 100 μΐ anti-fosfotyrozínu (1:3000 zriedenie v TBST) na jamku. Inkubácia za trepania po dobu 30-45 minút pri izbovej teplote.
16. Premytie podľa bodu 4 vyššie.
17. Pridanie 100 μΙ Biosource kozieho proti-králičieho IgG peroxidázového konjugátu (1:2000 zriedenie v TBST) do každej jamky. Inkubácia za trepania po dobu 30 minút pri izbovej teplote.
18. Premytie podľa 4 vyššie.
19. Pridanie 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každej jamky.
20. Inkubácia 5 až 10 minút za trepania. Odstránenie akýchkoľvek bubliniek.
21. Pokiaľ je treba, zastavenie reakcie pridaním 100 μΐ 0,2 M HCl na jamku.
182
22. Meranie na prístroji Dynatech MR7000 ELISA: testovací filter pri 410 nM, referenčný filter pri 630 nM.
PDGFR biologické testy
Tento test sa používa na meranie in vitro kinázovej aktivity FGfl-R pri ELISA teste.
Materiály a činidlá:
1. Elisa doštičky Corning s 96 jamkami.
2. 28D4C10 monoklonálna proti-PDGFR protilátka (SUGEN, Inc.).
3. PBS.
4. TBST pufer.
5. Blokujúci pufer (rovnaký ako pre EGFR biologické testy).
6. NIH 3T3 bunkový lyzát exprimujúci PDGFR-β (SUGEN, Inc.).
7. TBS pufer.
8. TBS+ 10% DMSO.
9. ATP.
10. MnCl2.
11. Kinázová pufrovacia zmes na fosforyláciu: pre 10 ml, zmiešanie 250 μΐ 1 M TRIS, 200 μΐ 5M NaCl, 100 μΐ 1 M MnCl2 a 50 μΐ 100 mM Triton X-100 v dostatočnom množstve dH2O na pripravenie 10 ml.
12. polypropylénové doštičky NUNC s 96 jamkami s dnom do V.
13. EDTA.
14. Králičie polyklonálne anti-fosfotyrozínové sérum (SUGEN, Inc.).
183
15. Kozí proti-králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource Cat. No. ALI0404).
16. ABTS.
17. 30% roztok peroxidu vodíka.
18. ABTS/H2O2.
19. 0.2MHC1.
Postup:
1. ELISA doštičky Corning s 96 jamkami potiahnuté 0,5 pg 28D4C10 v 100 pl PBS na jamku. Skladovanie cez noc pri teplote 4°C.
2. Odstránenie nenaviazanej 28D4C10 z jamiek invertujúcou doštičkou kvôli sfarbeniu sa tekutiny. Premytie 1 x s dH2O. Pretrepanie doštičky na papierovej páske na odstránenie prebytku tekutiny.
3. Pridanie 150 pl blokujúceho pufru do každej jamky. Inkubácia po dobu 30 minút pri izbovej teplote za trepania.
4. Premytie doštičiek 3 x s deionizovanou vodou, potom 1 x TBST. Pretrepanie doštičky na papierovom rúšku na odstránenie prebytku tekutiny a bublinek.
5. Zriedenie lyzátu v HNTG (10 pg lyzát/100 pl HNTG).
6. Pridanie 100 pl zriedeného lyzátu do každej jamky. Pretrepávanie pri izbovej teplote po dobu 60 minút.
7. Premytie doštičky podľa kroku 4.
8. Pridanie 80 pl pracovnej zmesi kinázového pufru do ELISA doštičiek obsahujúcich zachytený PDGFR.
9. Zriedenie testovanej zlúčeniny 1:10 v TBS v polypropylénových doštičkách s 96 jamkami.
184
10. Pridanie 10 μΐ zriedenej testovanej zlúčeniny do ELISA doštičky. Pridanie 10 μΐ TBS + 10% DMSO do kontrolných jamiek. Inkubácia za trepania po dobu 30 minút pri izbovej teplote.
11. Pridanie 10 μΐ ATP priamo do všetkých jamiek okrem negatívnych kontrolných jamiek (konečný objem v jamke by mal byť približne 100 μΐ s 20 μΜ ATP v každej jamke). Inkubácia 30 minút za trepania.
12. Zastavenie reakcie pridaním 10 μΐ EDTA roztoku do každej jamky.
13. Premytie 4x deionizovanou vodou, (2 x ) s TBST.
14. Pridanie 100 μΙ anti-fosfotyrozínu (1:3000 zriedenie v TBST) na jamku. Inkubácia za trepania po dobu 30-45 minút pri izbovej teplote.
15. Premytie podľa kroku 4.
16. Pridanie 100 μΐ Biosource kozieho proti-králičieho IgG peroxidázového konjugátu (1:2000 zriedenie v TBST) do každej jamky. Inkubácia za trepania po dobu 30 minút pri izbovej teplote.
17. Premytie podľa kroku 4.
18. Pridanie 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každej jamky.
19. Inkubácia 10 až 30 minút za trepania. Odstránenie akýchkoľvek bubliniek.
20. Pokiaľ je treba, zastavenie reakcie pridaním 100 μΐ 0,2 M HCI na jamku.
21. Meranie na prístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrom pri 410 nM a referenčnom filtrom pri 630 nM.
Testy s bunkovou HER-2 kinázou
185
Tento test je používaný na meranie aktivity HER-2 kinázy v celých bunkách pri ELISA teste.
Materiály a činidlá:
1. DMEM (GIBCO Catalog #11965-092).
2. Fetálne bovinné sérum (FBS, GIBCO Catalog #16000-044), tepelná iňaktivácia vo vodnom kúpeli po dobu 30 minút pri teplote 56°C.
3. Trypsín (GIBCO Catalog #25200-056).
4. L-Glutamín (GIBCO Catalog #25030-081).
5. HEPES (GIBCO Catalog #15630-080).
6. Rastové médium
Zmiešanie 500 ml DMEM, 55 ml teplom inaktivovaného FBS, 10 ml HEPES a 5,5 ml L-Glutamínu.
7. „Starve“ médium
Zmiešanie 500 ml DMEM 2,5 ml teplom inaktivovaného FBS, 10 ml HEPES a 5,5 ml L-Glutamínu.
8. PBS.
9. Mikrotitračné doštičky s 96 jamkami s plochým dnom určeným pre tkanivovú kultúru (Corning Catalog # 25860).
10. 15 cm misky na tkanivovú kultúru (Corning Catalog #08757148).
11. ELISA doštičky Corning s 96 jamkami.
12. polypropylénové doštičky NUNC s 96 jamkami s dnom do V.
13. Prenosné catridge Costar pre Transtar 96 (Costar Catalog #7610).
14. SUMO 1: monoklonálna proti-EGFR protilátka (SUGEN, Inc.).
186
15. TBST pufer.
16. Blokujúci pufer: 5% Carnation Instant Milk® v PBS.
17. EGF ligand: EGF-201, Shinko American, Japan. Suspendovaný prášok v 100 μΐ 10 mM HCI. Pridanie 100 μΐ 10 mM NaOH. Pridanie 800 μΐ PBS a prevedenie do Eppendorfovej banky. Skladovanie pri teplote -20°C do tej doby, dokiaľ sa nepoužije.
18. HNTG Lyzovací pufer. Pre zásobný roztok 5X HNTG, zmiešanie 23,83 g Hepes, 43,83 g NaCl, 500 ml glycerolu a 100 ml Triton X100 a dostatočné množstvo dH2O na vytvorenie 1 1 celkového roztoku.
Pre 1 x HNTG*, mix 2 ml HNTG, 100 μΐ 0,1 M Na3VO4, 250 μΐ 0,2M Na4P2O7 a 100 1 EDTA.
19. EDTA.
20. Na3VO4. Na vytvorenie zásobného roztoku sa zmieša 1,84 g Na3VO4 s 90 ml dH2O. Upravenie pH na 10. Varenie v mikrovlnke po dobu jednej minúty (roztok sa vyčerí). Ochladení na izbovú teplotu. Upravenie pH na 10. Opakovanie cyklu zahrievanie/chladenie, dokiaľ pH nezostane na 10.
21. 200 mM Na4P2O7.
22. Králičie polyklonálne antisérum špecifické pre fosfotyrozín (protiPtyr protilátka, SUGEN, Inc.).
23. Afinitne purifikované antisérum, kozia proti-králičia IgG protilátka, peroxidázový konjugát (Biosource Cat # ALI0404).
24. ABTS roztok.
25. 30 % roztok peroxidu vodíka.
26. ABTS/H2O2.
187
27. 0,2 M HCl.
Postup:
1. Corning ELISA doštičky s 96 jamkami potiahnuté SUM01 v koncentrácii 1,0 pg na jamku v PBS, 100 μΐ finálneho objemu na!jamku. Skladovanie cez noc pri teplote 4°C.
2. V deň použitia sa odstráni poťahovací pufer a doštičky sa premyjú 3 x dH2O a raz TBST pufrom. Pokiaľ nie je stanovené inak, malo by byť premývanie vykonané týmto spôsobom.
3. Pridanie 100 μΐ blokujúceho pufru do každej jamky. Inkubácia doštičiek za trepania po dobu 30 minút pri izbovej teplote. Tesne pred použitím premytia doštičiek.
4. Použitie EGFr/HER-2 chiméra/3T3-C7 bunkových línii pri tomto testu.
5. Vybrané misky majúce 80-90 % konfluenciu. Zbieranie buniek trypsinizáciou a centrifugáciou pri 1000 rpm za izbovej teploty po dobu 5 minút.
6. Resuspendovanie buniek v „starve“ médiu a meranie s trypanovou modrou. Je vyžadovaná životnosť vyššia než 90%. Naočkovanie buniek v smrtiacom médiu pri hustote 2500 buniek na jamku, 90 μΐ na jamku, v mikrotitračnej doštičke s 96 jamkami. Inkubácia naočkovaných buniek cez noc pri teplote 37°C pod 5% CO2.
7. Štart s testom po dvoch dňoch od naočkovania.
8. Testované zlúčeniny sa rozpustia v 4% DMSO. Vzorky sú potom ďalej zriedené priamo na doštičkách „starve“ médiom DMEM. Typicky bude toto zriedenie 1:10 alebo väčšie. Všetky jamky sú potom prevedené do bunkových doštičiek v ďalšom zriedení 1:10 (10 μΐ vzorky a média do 90 μΐ „starve“ média. Finálna
188 koncentrácia DMSO by mala byť 1% alebo nižšia. Môže byť tiež používané štandardné sériové zriedenie.
9. Inkubácia pod 5% CO2 pri teplote 37°C po dobu 2 hodín.
i
10. Pripravenie EGF ligandu zriedením zásobného roztoku EGF (16,5 μΜ) v horúcom DMEM na 150 nM.
11. Pripravenie čerstvého HNTG* v dostatočnom množstve pre 100 μΐ na jamku; skladovanie na ľade.
12. Po 2 hodinách inkubácie s testovanou zlúčeninou sa pridá pripravený EGF ligand do buniek, 50 μΐ na jamku, na konečnú koncentráciu 50 nM. Pozitívne kontrolné jamky obdržia rovnaké množstvo EGF. Do negatívnych kontrolných jamiek sa nepridá EGF. Inkubácia pri teplote 37°C po dobu 10 minút.
13. Odstránenie testovanej zlúčeniny, EGF a DMEM. Premytie buniek 1 x PBS.
14. Prevedenie HNTG* do buniek, 100 μΐ na jamku. Umiestnenie do ľadu na dobu 5 minút a medzitým odstránenie blokujúceho pufru z ELISA doštičiek a premytie.
15. Zoškrabanie buniek z doštičky mikropipetou a homogenizácia bunkového materiálu opakovaným nasávaním a dispenzáciou HNTG* lyzovacieho pufru. Prevedenie lyzátu do potiahnutej, blokovanej, premytej ELISA doštičky. Alebo na prevedenie lyzátu do doštičky použitím prevádzacieho cartridge Costar.
16. Inkubácia, za trepania, pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny.
17. Odstránenie lyzátu, premytie, prevedenie čerstvo zriedenej antiPtyr protilátky (1 : 3000 v TBST) do ELISA doštičiek, 100 μΐ na jamku.
18. Inkubácia, za trepania, pri izbovej teplote, po dobu 30 minút.
189
19. Odstránenie anti-Ptyr protilátky, premytie, prevedenie čerstvo zriedenej BIOSOURCE protilátky do ELISA doštičky (1 : 8 000 v TBST, 100 μΐ na jamku).
20. Inkubácia, za trepania, pri izbovej teplote po dobu 30 minút.
21. Odstránenie BIOSOURCE protilátky, premytie, prevedenie čerstvo pripraveného ABTS/H2O2 roztoku do ELISA doštičky, 100 μΐ na jamku.
22. Inkubácia, za trepania, po dobu 5-10 minút, odstránenie akýchkoľvek bublinek.
23. Zastavenie reakcie pridaním 100 μΐ 0,2M HCI na jamku.
24. Meranie na prístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrom nastaveným na 410 nM a referenčným filtrom na 630 nM.
Testy cdk2/cyklín A
Tento test je používaný na meranie in vitro aktivity serín/treonínkinázy ľudskej cdk2/cyklín A pri „Scintillation Proximity Assay“ (SPA).
Materiály a činidlá:
1. Polyetylénové tereftalátové (flexi) doštičky Wallac s 96 jamkami (Wallac Catalog # 1450-401).
2. Amersham Redivue [γ33Ρ] ATP (Amersham catalog #AH 9968).
3. Polyvinyltoluénové SPA guličky potiahnuté Amersham streptavidínom (Amersham catalog #RPNQ0007), guľôčky by mali byť reaktivované v PBS bez horčíka alebo vápnika pri 20 mg/ml.
4. aktivovaný cdk2/cyklín A enzýmový komplex purifikovaný od Sf9 buniek (SUGEN, Inc.).
5. Biotinylovaný peptidový substrát (Debtide). Peptid biotín-XPKTPK.K.AKK.L sa rozpustí v dH2O pri koncentrácii 5 mg/ml.
190
6. Peptid/ATP zmes: pre 10 ml, zmiešanie 9,979 ml dH2O, 0,00125 ml studeného ATP, 0,010 ml Debtide a 0,010 ml γ33Ρ ATP. Medzná koncentrácia na jamku bude 0,5 M studeného ATP 0, 1 pg Debtide a 0,2 pCi γ33Ρ ATP.
I
7. Kinázový pufer: pre 10 ml, zmiešanie 8,85 ml dH2O 0, 625 ml TRIS (pH 7,4) 0, 25 ml 1 M MgCl2 0, 25 ml 10% NP40 a 0,025 ml 1 M DTT. Pridanie čerstvého množstva tesne pred použitím.
8. 10 mM ATP v dH2O.
9. 1 M Tris, upravenie pH na 7,4 s HC1.
10. 1 M,MgCl2.
11. IM DTT.
12. PBS (Gibko Catalog # 14190-144).
13. 0,5 M EDTA.
14. Zastavovací roztok: pre 10 ml, zmiešanie 9,25 ml PBS 0, 005 ml 100 mM ATP 0, 1 ml 0,5 M EDTA 0, 1 ml 10% Triton X 100 a 1,25 ml 20 mg/ml SPA guličiek.
Postup:
í. Pripravenie roztokov testovaných zlúčenín v 5 x požadovaných konečných koncentrácií v 5% DMSO. Pridanie 10 μΐ do každej jamky. Na negatívnu kontrolu použitie samotného 10 μΐ 5% DMSO v jamkách.
2. Zriedenie 5 μΐ roztoku cdk2/cyklín A s 2,1 ml 2 x kinázovým pufrom.
3. Pridanie 20 μΐ enzýmu do každej jamky.
4. Pridanie 10 μΐ 0,5 M EDTA do negatívnych kontrolných jamiek.
191
5. Na naštartovanie kinázovej reakcie sa pridá 20 μΐ zmesi peptid/ATP do každej jamky. Inkubácia po dobu 1 hodiny bez trepania.
6. Pridanie 200 μΙ zastavovacieho roztoku do každej jamky.
7. Ponechanie v pokoji po dobu aspoň 10 minút.
8. Centrifugácia doštičiek približne pri 2 300 rpm po dobu 3-5 minút.
9. Meranie pomocou Triluxu alebo podobného prístroja.
Test transfosforylácie MET
Tento test sa používa na meranie hladín fosfotyrozínu na poly(glutámová kyselina:tyrozín (4 : 1)) substrátu ako spôsobu identifikácie agonistov/antagonistov met transfosforylácie substrátu.
Materiály a činidlá:
1. Corning Elisa doštičky s 96 jamkami, Corning Catalog # 25805-96.
2. Poly (glu, tyr) 4:1, Sigma, Cat. No.; P 0275.
3. PBS, Gibco Catalog # 450-1300EB
4. 50 mM HEPES
5. Blokujúci pufer: rozpustenie 25 g hovädzieho sérumalbumínu, Sigma Cat. No. A-7888, v 500 ml PBS, filtrovanie cez 4 pm filter.
6. Purifikovanie GST fúzneho proteínu obsahujúceho Met kinázovú doménu, Sugen, Inc.
7. TBST pufer.
8. 10% vodný (MilliQue H2O) DMSO.
9. 10 mM vodný (dH2O) adenozín-5'-trifosfát, Sigma Cat. No. A5394.
192
10. 2 x kinázový riediaci pufer: pre 100 ml, zmiešanie 10 ml 1 M HEPES pri pH 7,5 s 0,4 ml 5% BSA/PBS 0, 2 ml 0,1 M ortovanadátu sodného a 1 ml 5M chloridu sodného v 88,4 ml dH2O.
11. 4 X ATP reakčná zmes: pre 10 ml, zmiešanie 0,4 ml 1 M chloridu manganatého a 0,02 ml 0,1 M ATP v 9,56 ml dH2O.
12. 4 X negatívna kontrolná zmes: pre 10 ml, zmiešanie 0,4 ml 1 M chloridu manganatého v 9,6 ml dH2O.
13. Polypropylénové doštičky NUNC s 96 jamkami s dnom do V, Applied Scientific Catalog # S-72092.
14. 500 mM EDTA.
15. Protilátkový riediaci pufer: pre 100 ml, zmiešanie 10 ml 5% BSA/PBS 0, 5 ml 5% Carnation Instant Milk® v PBS a 0,1 ml 0,1 M ortovanadátu sodného v 88,4 ml TBST.
16. Králičia polyklonálna antofosfotyrozínová protilátka, Sugen, Inc.
17. Kozia proti-králičia protilátka konjugovaná s chrenovou peroxidázou, Biosource, Inc.
18. ABTS roztok: pre 1 1, zmiešanie 19,21 g kyseliny citrónovej, 35,49 g Na2HPO4 a 500 mg ABTS s dostatočným množstvom dH2O na vytvorenie 1 1.
19. ABTS/H2O2: zmiešanie 15 ml ABST roztoku s 2 μΐ H2O2 päť minút pred použitím.
20. 0,2 M HCl.
Postup:
1. ELISA doštičky potiahnuté 2 pg Poly (Glu-Tyr) v 100 μΐ PBS. Skladovanie cez noc pri teplote 4°C.
2. Blokovanie doštičiek s 150 μΐ 5% BSA/PBS po dobu 60 minút.
193
3. Premytie doštičiek (2 x ) s PBS, 1 x s 50 mM Hepes pufrom pH
7,4.
4. Pridanie 50 μΐ zriedenej kinázy do všetkých jamiek. (Purifikovaná kináza sa zriedi s kinázovým riediacim pufrom. Finálna koncentrácia by mala byť 10 ng/jamku.
5. Pridanie 25 μΐ testovanej zlúčeniny (v 4% DMSO) alebo samotnom DMSO (4% v dH2O) na kontrolu doštičiek.
6. Inkubácia kinázy/zlúčeniny zmesi po dobu 15 minút.
7. Pridanie 25 μΐ 40 mM MnCl2 do negatívnych kontrolných jamiek.
8. Pridanie 25 μΐ ATP/MnCl2 zmesi do všetkých ďalších jamiek (okrem negatívnej kontroly). Inkubácia po dobu 5 minút.
9. Pridanie 25 μΐ 500 mM EDTA na zastavenie reakcie.
10. Premytie doštičiek 3 x TBST.
11. Pridanie 100 μΐ králičej polyklonálnej anti-Ptyr zriedenej 1 : 10000 v protilátkovom riediacom pufry do každej jamky. Inkubácia, za trepania, pri izbovej teplote po dobu jednej hodiny.
12. Premytie doštičiek 3 x TBST.
13. Zriedenie Biosource HRP konjugovanej anti-králičej protilátky 1 : 6 000 v protilátkovom riediacom pufry. Pridanie 100 μΐ na jamku a inkubácia pri izbovej teplote, za trepania, po dobu jednej hodiny.
14. Premytie doštičiek 1 x s PBS.
15. Pridanie 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každej jamky.
16. Pokiaľ je treba, zastavenie reakcie pridaním 100 μΐ 0,2 M HCl na jamku.
194
17. Meranie doštičiek na prístroji Dynatech MR7000 s testovacím filtrom pri 410 nM a referenčným filtrom pri 630 nM.
IGF-1 transfoforylačný test
Tento test sa používa na meranie hladiny fosfotyrozínu v poly (glutámovej kyseline : tyrozíne) (4 : 1) kvôli identifikácii agonistov a/alebo antagonistov gst-IGF-1 transfosforylácie substrátu.
Materiály a činidlá:
1. Corning Elisa doštičky s 96 jamkami.
2. Poly (Glu-tyr) (4:1), Sigma Cat. No. P 0275.
3. PBS, Gibko Catalog # 450-1300EB.
4. 50 mM HEPES
5. TBB blokujúci pufer: pre 1 1, zmiešanie 100 g BSA, 12,1 g TRIS (pH 7,5), 58,44 g chloridu sodného a 10 ml 1% TWEEN-20.
6. Purifikovaný GST fúzny protein obsahujúci IGF-1 kinázovú doménu (Sugen, Inc.)
7. TBST pufer: pre 1 1, zmiešanie 6,057 g Tris 6,766 g chloridu sodného a 0,5 ml TWEEN-20 s dostatočným množstvom dH2O na vytvorenie 1 litra.
8. 4% DMSO v Milli-Q H2O.
9. lOmM ATPvdH2O.
10. 2 X kinázový riediaci pufer: pre 100 ml, zmiešanie 10 ml 1 M HEPES (pH 7,5) 0, 4 ml 5% BSA v dH2O 0, 2 ml 0,1 M ortovanadátu sodného a 1 ml 5 M chloridu sodného s dostatočným množstvom dH2O na vytvorenie 100 ml.
195
11. 4 X ATP reakčná zmes: pre 10 ml, zmiešanie 0,4 ml 1 M MnCl2 a 0,008 ml 0,01 M ATP a 9,56 ml dH2O.
12. 4 X negatívna kontrolná zmes: zmiešanie 0,4 ml 1 M chloridu manganatého v 9,60 ml dH2O. i
13. Polypropylénové doštičky NUNC s 96 jamkami s dnom do V.
14. 500 mM EDTA v dH2O.
15. Protilátkový riediaci pufer: pre 100 ml, zmiešanie 10 ml 5% BSA v PBS 0, 5 ml 5% Carnation Instant Non-fat Milk v PBS a 0,1 ml 0,1 M ortovanadátu sodného v 88,4 ml TBST.
16. Králičia polyklonálna antifosfotyrozínová protilátka, Sugen, Inc.
17. Kozia proti-králičia HRP konjugovaná protilátka, Biosource.
18. ABTS roztok.
20. ABTS/H2O2: zmiešanie 15 ml ABTS s 2 μΐ H2O2 5 minút pred použitím.
21. 0,2 M HCI v dH2O.
Postup:
1. ELISA doštičky potiahnuté 2,0 pg/jamku Poly (Glu, Tyr) 4:1 (Sigma P0275) v 100 μΐ PBS. Skladovanie doštičky cez noc pri teplote 4°C.
2. Premytie doštičky 1 x s PBS.
3. Pridanie 100 μΐ TBB blokujúceho pufru do každej jamky. Inkubácia doštičky po dobu 1 hodiny za trepania pri izbovej teplote.
4. Premytie doštičiek 1 x PBS, potom (2 x ) s 50 mM Hepes pufra pH
7,5.
196
5. Pridanie 25 μΐ testovanej zlúčeniny v 4% DMSO (pripravenej zriedením zásobného roztoku 10 mM testovanej zlúčeniny v 100% DMSO s dH2O) do doštičky.
6. Pridanie 10,0 ng gst-IGF-1 kinázy v 50 μΐ kinázovom riediacom pufry) do všetkých jamiek.
7. Naštartovanie kinázovej reakcie pridaním 25 μΐ 4 X ATP reakčnej zmesi do všetkých jamiek na testovanie a na pozitívnu kontrolu. Pridanie 25 μΐ 4 X negatívnej kontrolnej zmesi do všetkých jamiek k negatívnej kontrole. Inkubácia po dobu 10 minút za trepania pri izbovej teplote.
8. Pridanie 25 μΐ 0,5 M EDTA (pH 8,0) do všetkých jamiek.
9. Premytie doštičiek 4 x s TBST pufrom.
10. Pridanie králičieho polyklonálneho anti-fosfotyrozínového antiséra v zriedení 1: 10000 v 100 μΐ protilátkovom riediacom pufry do všetkých jamiek. Inkubácia, za trepania, pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny.
11. Premytie doštičiek podľa kroku 9.
12. Pridanie 100 μΐ Biosource proti-králičej HRP v zriedení 1:10000 v protilátkovom riediacom pufry do všetkých jamiek. Inkubácia, za trepania, pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny.
13. Premytie doštičiek podľa kroku 9, následne jedno premytie s PBS na zníženie bubliniek a prebytku Tween-20.
14. Vyvolanie pridaním 100 μΐ na jamku ABTS/H2O2 do každej jamky.
15. Po asi 5 minútach meranie na prístroji na meranie ELISA doštičiek s testovacím filtrom pri 410 nm a referenčným filtrom pri 630 nm.
197
Testy inkorporácie BrdU
Pri nasledujúcich testoch sa využíva buniek upravených na expresiu vybraného receptoru a následné stanovenie účinku vybranej zlúčeniny na aktivitu DNA syntézy indukovanej ligandom stanovením inkorporácie BrdU do DNA.
Nasledujúce materiály, činidla a postup sú všeobecným spôsobom pri každom nasledujúcom teste inkorporácie BrdU.
Zmeny v špecifických testoch sú uvedené.
Materiály a činidlá:
L Príslušný ligand.
2. Príslušné upravené bunky.
3. BrdU značiace činidlo: 10 mM, v PBS (pH 7,4) (Boehringer Mannheim, Germany).
4. FixDenat: fixačný roztok (hotový na použitie) (Boehringer Mannheim, Germany).
5. Anti-BrdU-POD: myššia monoklonálna protilátka konjugovaná s peroxidázou (Boehringer Mannheim, Germany).
6. TMB substrátový roztok: tetrametylbenzidín (TMB, Boehringer Mannheim, Germany).
7. PBS premývací roztok: 1 x PBS, pH 7,4.
8. Albumín, hovädzí (BSA), frakcia V prášková (Sigma Chemical Co., USA).
Všeobecný postup:
1. Bunky sa naočkujú v množstve 8 000 buniek na jamku v 10% CS, 2 mM
Gin v DMEM na doštičku s 96 jamkami. Bunky sa inkubujú cez noc pri teplote 37 °C v 5% CO2.
198
2. Po 24 hodinách sa bunky premyjú s PBS a potom sú vystavené prostrediu bez séra zavedením do média neobsahujúceho sérum (0% CS DMEM s 0,1% BSA) po dobu 24 hodín.
3. Tretí deň sa príslušný ligand a testovaná zlúčenina naraz pridajú do buniek. Do negatívnych kontrolných jamiek sa pridá DMEM bez séra iba s 0,1% BSA; K pozitívnym kontrolným bunkám sa pridá ligand bez testovanej zlúčeniny. Testované zlúčeniny sa pripravia v DMEM bez séra s ligandom v doštičke s 96 jamkami a sériovo sa zriedia na 7 testovacích koncentrácií.
4. Po 18 hodinách aktivácie ligandu sa zriedené BrdU značiace činidlo (1:100 v DMEM 0, 1% BSA) a bunky inkubujú s BrdU (finálna koncentrácia = 10 μΜ) po dobu 1,5 hodiny.
5. Po inkubácii so značiacim činidlom sa médium odstráni dekantáciou a poklepaním prevrátenej doštičky na papierovej utierke. Pridá sa roztok FixDenatu (50 μΐ na jamku) a doštičky sa inkubujú pri izbovej teplote po dobu 45 minút na doštičkovom trepači.
6. Roztok FixDenatu sa riadne odstráni dekantáciou a poklepaním prevrátenej doštičky na papierovej utierke. Pridá sa mlieko (5% dehydrované mlieko v PBS, 200 μΐ na jamku) ako blokovací roztok a doštička sa inkubuje po dobu 30 minút pri izbovej teplote na doštičkovom trepači.
7. Blokovací roztok sa odstráni dekantáciou a jamky sa premyjú 1 x s PBS. Pridá sa anti-BrdU-POD roztok (1 : 200 zriedenie v PBS, 1% BSA) (50 μΐ na jamku) a doštičky sa inkubujú po dobu 90 minút pri izbovej teplote na doštičkovom trepači.
8. Protilátkový konjugát sa riadne odstráni dekantáciou a premývaním jamiek 5 x s PBS a doštička sa suší invertovaním a poklepaním na papierovej utierke.
199
9. Pridá sa TMB substrátový roztok (100 μΐ na jamku) a inkubuje sa po dobu 20 minút pri izbovej teplote na doštičkovom trepači, dokiaľ sa nevyvinie sfarbenie, ktoré je dostatočné na fotometrickú detekciu.
10. Absorbancia vzoriek sa meria pri 410 nm (v móde „dúálne vlnové dĺžky“ 1 s filtrom pri 490 nm ako referenčnou vlnovou dĺžkou) na prístroji Dynatech na meranie ELISA doštičiek.
Testy inkorporácie BrdU indukovanej EGF
Materiály a činidlá:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFRc7.
Testy inkorporácie BrdU riadené Her-2 a indukované EGF
Materiály a činidlá:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFr/Her2/EGFr (EGFr s Her-2 kinázovou doménou).
Testy inkorporácie BrdU riadené Her-4 a indukované EGF
Materiály a činidlá:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFr/Her4/EGFr (EGFr s Her-4 kinázovou doménou).
Testy inkorporácie BrdU indukovanej PDGF
Materiály a činidlá:
1. Ľudské PDGF B/B (Boehringer Mannheim, Nemecko).
2.
3T3/EGFRc7.
200
Testy inkorporácie BrdU indukovanej FGF
Materiály a činidlá:
1. Ľudská FGF2/bFGF (Gibco BRL, USA).
2. 3T3c7/EGFr
Testy inkorporácie BrdU indukovanej IGF1
Materiály a činidlá:
1. Ľudská rekombinantná (G511, Promega Corp., USA)
2. 3T3/IGFlr.
Testy inkorporácie BrdU indukovanej inzulínom
Materiály a činidlá:
1. Inzulín, kryštalický, hovädzí, zinok (13007, Gibco BRL, USA).
2. 3T3/H25.
Testy inkorporácie BrdU indukovanej HGF
Materiály a činidlá:
1. Rekombinantná ľudská HGF (Cat. No. 249-HG, R & D Systems, Inc. USA).
2. BxPC-3 bunky (ATCC CRL-1687).
Postup:
1. Bunky sa naočkujú v množstve 9000 buniek na jamku v RPMI 10% FBS na doštičku s 96 jamkami. Bunky sa inkubujú cez noc pri teplote 37 °C v 5% CO2.
201
2. Po 24 hodinách sa bunky premyjú s PBS a následne sú podrobené bez sérového prostredia v 100 pl média bez séra (RPMI s 0,1% BSA) po dobu 24 hodín.
3. Tretí deň sa k bunkám pridá 25 μΐ obsahujúcich ligand (pripravený
I v koncentrácii 1 μ/ml v RPMI s 0,1% BSA; finálna koncentrácia HGF je 200 ng/ml) a testované zlúčeniny. Do negatívnych kontrolných jamiek sa pridá 25 μΐ RPMI iba s 0,1% BSA bez séra; k pozitívnym kontrolným bunkám sa pridá ligand (HGF), ale bez testovanej zlúčeniny. Testované zlúčeniny sa pripravia v 5 svojich finálnych koncentráciách v RPMI s ligandom bez séra v doštičke s 96 jamkami a sériovo zriedi na 7 testovacích koncentrácií. Typicky je najvyššia finálna koncentrácia testovanej zlúčeniny 100 μΜ a sú používané 1 : 3 zriedenia (tzn. rozmedzie finálnej koncentrácie testovanej zlúčeniny je 0,137 - 100 μΜ).
4. Po 18 hodinách aktivácie ligandu sa do každej jamky pridá 12,5 μΙ zriedeného BrdU značiaceho činidla (1 : 100 v RPMI, 0,1% BSA) a bunky sú inkubované s BrdU (finálna koncentrácia je 10 μΜ) po dobu 1 hodiny.
5. Rovnaké ako vo všeobecnom postupe.
6. Rovnaké ako vo všeobecnom postupe.
7. Blokovací roztok sa odstráni dekantáciou a jamky sa premyjú raz s PBS. Pridá sa anti-BrdU-POD (1 : 100 zriedenie v PBS, 1% BSA) (100 μΐ na jamku) a doštička sa inkubuje po dobu 90 minút pri izbovej teplote na doštičkovom trepači.
8. Rovnaké ako vo všeobecnom postupe.
9. Rovnaké ako vo všeobecnom postupe.
10. Rovnaké ako vo všeobecnom postupe.
202
Testy s HUV-EC-C
Tento test sa používa na meranie aktivity zlúčenín proti PDGF-R, FGF-R, VEGF aFGF alebo Flk-1/KDR, pričom všetky sú prirodzene exprimované bunkami HUV-EC.
I
Deň 0
1. Premytie a trypsinizácia HUV-EC-C buniek (ľudské endoteliálne bunky pupočníkovej žily, (American Type Culture Collection catalogue no. 1730 CRL)) Premytie fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom Dulbecco (D-PBS, zakúpený u Gibco BRL, catalogue no. 14190-029) dvakrát pri asi 1 ml na 10 cm banky s tkanivovou kultúrou. Trypsinizácia s 0,05% trypsín-EDTA v neenzymatickom bunkovom disociačnom roztoku (Sigma Chemical Company, catalogue no. C-1544). 0,05% Trypsín sa pripraví zriedením 0,25% trypsínu na 1 mM EDTA (Gibco, catalogue no. 25200-049) v bunkovom disociačnom roztoku. Trypsinizácia s asi 1 ml na 25 - 30 cm2 banky s tkanivovou kultúrou po dobu asi 5 minút pri teplote 37 °C. Po uvoľnení buniek z banky sa pridá ekvivalentný objem testovacieho média a prevedie sa do 50 ml sterilnej centrifugačnej skúmavky (Fisher Scientific, catalogue no. 05-539-6).
2. Premytie buniek s asi 35 ml testovacieho média v 50 ml sterilnej centrifugačnej skúmavky pridaním testovacieho média, centrifugácia po dobu 10 minút pri približne 200 x g, ašpirácia supernatantu a resuspendácie s 35 ml D-PBS. Opakuje sa premytie (2 x ) s D-PBS, resuspendácia buniek v asi 1 ml testovacieho média na 15 cm2 banky s tkanivovou kultúrou. Testovacie médium pozostáva z F12K média (Gibco BRL, catalogue no. 21127-014) a 0,5% záhrevom inaktivovaného fetálneho hovädzieho séra. Počítanie buniek pomocou Coulter Counter® (Coulter Electronics, Inc.) a pridanie testovacieho média do buniek za vzniku koncentrácie 0,8-1,0 x 105 buniek na ml.
3. Pridanie buniek do doštičiek s plochým dnom s 96 jamkami pri koncentrácii 100 μΐ na jamku alebo 0,8-1,0 x 104 buniek na jamku, inkubácia približne 24 hodín pri teplote 37 °C, 5% CO2.
203
Deň 1
1. Pripravenie dvojnásobných titrácií testovanej zlúčeniny v separovaných doštičkách s 96 jamkami, všeobecne 50 μΜ až do 0 μΜ. Použitie rovnakého testovacieho média, ako je, uvedené v dni 0, krok 2 vyššie. Titrácie sa vykonajú pridaním 90 μΐ na jamku testovanej zlúčeniny pri koncentrácii 200 μΜ (4 X finálna koncentrácia v jamke) na vrch jamky príslušného stĺpca doštičky. Keďže zásobná testovacia zlúčenina je obvykle 20 mM v DMSO, obsahuje 200 μΜ koncentrácie liečiva 2% DMSO.
Ako riediaci roztok pre titrácie testovanej zlúčeniny za účelom zriedenia testovanej zlúčeniny, a zároveň udržania konštantnej koncentrácie DMSO, sa používa zriedenie až 2 % DMSO v testovacom médiu (F12K + 0,5% fetálneho hovädzieho séra). Pridanie tohto riediaceho roztoku do zvyšných jamiek v stĺpci pri koncentrácii 60 μΐ na jamku. Odoberanie 60μ1 zo 120 μΐ 200 μΜ zriedenej testovanej zlúčeniny v najvyššej jamke stĺpca a zmiešanie s 60 μΐ v druhej jamke stĺpca. Odohranie 60 μΐ z tejto jamky a zmiešanie s 60 μΙ v tretej jamke stĺpca a tak ďalej, dokiaľ nie sú kompletné dvojnásobné titrácie. Keď je predposledná jamka zmiešaná, odoberie sa 60 μΐ zo 120 μΐ v tejto jamke a odstráni sa. V poslednej jamke sa nechá 60 μΐ riediaceho roztoku DMSO a média ako kontrola obsahujúca netestovanú zlúčeninu. Pripravenie 9 stĺpcov titrovanej testovanej zlúčeniny v dostatočnom množstve pre strojnásobenie jamiek, kde každá obsahuje: (1) VEGF (zakúpené u Pero Tech Inc., catalogue no- 100-200, (2) rastový faktor endoteliálnych buniek (ECGF) (tiež známy ako kyslý fibroblastový rastový faktor alebo aFGF) (zakúpený u Boehringer Mannheim Biochemica, catalogue no. 1439 600) alebo (3) ľudská PDGF B/B (1276-956, Boehringer Mannheim, Germany) a kontrolu testovacieho média. ECGF sa pripraví so sodnou soľou heparínu.
2. Prevedenie 50 μΐ na jamku zriedenej testovanej zlúčeniny do testovacích doštičiek s 96 jamkami obsahujúcimi 0,8 - 1,0 x 104 buniek v 100 μΐ na jamku HUV-EC-C buniek zo dňa 0 a inkubácia približne 2 hodiny pri teplote 37 °C, 5% CO2.
204
3. Vykonané trikrát, pridanie 50 μΐ na jamku 80 μΐ na ml VEGF, 20 ng na ml ECGF alebo kontrolného média ku každej testovanej zlúčenine, ako u testovaných zlúčenín sú koncentrácia rastového faktoru 4 X požadovanej finálnej koncentrácie. Použitie testovacieho média zo dňa 0, kroku 2, na pripravenie koncentrácií rastových faktorov. Inkubácia približne 24 hodín pri teplote 37 °C, 5% CO2· Každá jamka bude obsahovať 50 μΐ zriedenej testovanej zlúčeniny, 50 μΐ rastového faktoru alebo média a 100 μΐ buniek, ktoré sú v celkovom množstve 200 μΐ na jamku. Teda 4X koncentrácia testovanej zlúčeniny a rastových faktorov sa zriedi na 1 X a pridajú sa do jamiek.
Deň 2
1. Pridá sa 3H-tymidín (Amersham, catalogue no. TRK-686) pri 1 pCi na jamku (10 μΐ na jamku 100 pCi na ml roztoku pripraveného v RPMI médiu + 10% záhrevom inaktivované fetálne hovädzie sérum) a inkubácia približne 24 hodín pri teplote 37 °C, 5% CO2. RPMI sa zakúpi u Gibco BRL, catalogue no. 11875-051.
Deň 3
1. Vymrazenie doštičiek cez noc pri teplote -20 °C.
Deň 4
Rozmrazenie doštičiek a ich odber pomocou harvesteru na 96 jamkové doštičky (Tomtec Harvester ®) na filtračné plachetky (Wallac, catalogue no. 1205-401), meranie na tekutom scintilačnom počítači Wallas Betaplate™.
V tabuľke 3 sú uvedené výsledky biologického testovania niektorých exemplárnych zlúčenín podľa predloženého vynálezu. Výsledky sú vyjadrené v hodnotách IC50, mikromolárna (μΜ) koncentrácia testovanej zlúčeniny, ktorá spôsobuje 50% zmenu aktivity cieľových PKT v porovnaní s aktivitou PTK kontrolnej skupiny, ktorej nebola podávaná testovaná zlúčenina. Presnejšie uvedené výsledky indikujú koncentráciu testovanej zlúčeniny potrebnej na 50% redukciu aktivity cieľovej PTK. Biologické testy, ktoré boli alebo môžu byť používané na stanovenie zlúčenín, sú opísané detailnejšie nižšie.
205
Tabuľka 3
Príklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 ICSO (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) bunky EGF IC50 (μΜ) Her2 kináza ICSO (μΜ) cdk2sp& eso (μΜ) bio pyk2 ICSO (μΜ)
1 57,68 15,16 >100 >100 >100 >100
2 >100 >100 >100 >100
3 9,85 9,62 >100 >100 >100 >100
4 3,57 >20 >100 >100 >100 >100
5 8,3 16,06 >100 >100 >100 >100
6 4 ,04 >100 3,26 7,82 2,43
1 7,74 >100 5,07 9,8 4,24
8 12,1 >100 51,34 20,08 5,5
9 0, 96 >100 >100 >100 16,38
10 5,72 >100 94,04 15,86 8,06
206
Príklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) bunky EGF IC50 (μΜ) Her2 kináza IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
11 9,77 >100 >100 >100 >100
12 >20 21,46 >100 27,73
. 13 >20 81,92 8,17 2,66
14 13,01 42,41 >100 66,02
15 >20 >100 >100 98,61
16 >20 98,06 >100 23,32
17 8,25 2,47 94,35 0,83 11,47 15,94 >10
18 2,67 2,57 9,23 4,99
19 7,5 6,86 34,18 8,37
20 11,53 >100 41,16 8
21 7,18 >100 40,34 27,69
22 >20 >100 >100 87,67
23 >20 >100 36,64 4,05
24 >100 16,84 5,31
25 12,55 >100 23,48 7,9
26 16,03 66,87 34,67 10,04
27 >100 26,5 3',91
28 4,5 71,27 53,66 2,67
29 10,12 >100 26,72 3,98
30 9,4 >100 18,69 4,1
31 >50 >100 9,83 47,19
32 45,74 5,94 >100 >100
34 >50 >100 >100 >100
35 >20 >100 80,4 54,14
36 >20 >100 >100 >100
37 0,22 3,06 10,78 9,84 1,4
38 4,17 3,06 6,04 8,97 2,16
39 3,38 4,69 3,67 14,54 3,53
40 4 ,5 7,9 6,52 6,27
42 0,1 0,12 11,95 74,55 20,43
43 1,12 8,38 >100 37,33 53, 37
44 <0,05 0,02 20,73 67,46 6,99
45 1,71 >100 >100 29,95 >100
46 30,62 6,18 >100 >100 >100
47 0,08 1,56 0,06 11,42 41,54 θ,4 >20 1,05
48 0.006 0,3 <0,78 17,88 21,58 7,93 0,09
49 <0,78 >100 43,86 >100
50 <0,78 >100 20.34 >100
207
Príklad bio flkGST IC50 (μΜ) biO FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF ICSO (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) bunky EGF XC50 (μΜ) Her2 kináza IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
51 0,006 1,66 0,01 18,1 21,61 23 ,24 16,69 0,35
52 0,08 1,26 <0,78 12,53 >100 >100 10,66 0,45
53 <0,78 >100 >100 >100
54 ' 1,98 <0,78 23,88 9,76 7,02
55 0,27 0,53 6.03 35,99 77,82
56 2,32 3,19 >100 10,03 7,11
57 0,06 7,98 >100 9,97 6, 94
58 21,14 >100 >100 >100
59 <0,78 >100 >100 >100
60 <0,78 >100 >100 >100
61 <0,78 >100 >100 >100
62 8,00 8,32 >100 >100 >100
63 0, 21 <0,78 8,59 >100 >100
64 0,55 <0,78 30,49 >100 >100
65 0,37 <0,05 >100 74,36 15,97
66 <0,05 >100 11,84 2,76
67 0,39 24,77 31,38 19,79 2, 56
68 1,16 0 ,03 >100 23, 52 34,13
69 0,3 56,55 >100 97,54 >100
70 0,09 1,50 0,0030 10,57 6,42 7,99 12,62 0,63
71 15,21 22,5 >100 9, 91
72 6,06 10,54 >100 39,94 9,65
73 5,95 14,12 >100- 39,5 8,59
74 '1,2 0,09 46,75 >100
75 2,7 61,55 >100 >100
76 3,33 19,18 5,11 3,01
77 0,49 25,01 >100 >100
78 1,94 70,62 9,33 4,25
79 1,49 >100 27,39 >100
80 0,13 4,29 0,001 >100 50,19 17,19 0,28
81 0,21 0,18 >100 >100
82 2,03 7,69 6,88 >100 >100 0,31
83 0,34 0,41 9,46 2,18 86,9 0,008
84 1,38 12,51 67,2 5,86 0,006
85 0,2 O CO 2,59 >100 3,76
86 1,45 1,3 19, 6 41,8 >100 3,58
87 3,27 7,56 6,46 >100 9,1 0,17
88 0,35 1,18 8 ,06 2,36 >100 0,09
208
Príklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC5O (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF XC50 (μΜ) bunky EGF IC50 (μΜ) Her2 kináza IC50 (μΜ) cdk2spa C5O (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
89 7,84 47,58 8,53 9, 67 15,97
115 7,3 7,48 >100 >100 0,006
116. >20 >100 >100 >100 <0,0005
117 0,91 12,9 >100 >100 0,006
118 1,93 1,2 >100 >100 0,002
119 1,38 61, 63 >100 >100 <0,0005
In vivo zvieracie modely
Zvieracie modely xenoimplantátu
Schopnosť ľudských nádorov rásť ako xenoimplantáty v atymickej myši (napr. Balb/c, nu/nu) poskytuje užitočný in vivo model na štúdium biologických odpovedí na terapie ľudských nádorov. Od prvej úspešnej xenotransplantácie ľudských nádorov do atymickej myši, (Rygaard and Povlsen, 1969, Acta Patol. Microbial. Scand. 77: 758 - 760), bolo transplantovaných mnoho rôznych bunkových línií ľudského nádoru (napr. mamárne, pľúcne, genitourinárne, gastrointestinálne, hlavy a krku, glioblastóm, kostné a malígne melanómy) a úspešne rástli u nahých myší. Nasledujúce testy môžu byť používané na stanovenie hladiny aktivity, špecificity a účinku rôznych zlúčenín podľa predloženého vynálezu. Na stanovenie zlúčenín sú použiteľné tri všeobecné typy testov: bunkové/katalytické, bunkové/biologické a in vivo. Zmyslom bunkových/katalytický testov je stanoviť vplyv zlúčeniny na schopnosť TK k fosforylácii tyrozínových zvyškov na známom substráte v bunke. Zmyslom bunkových/biologických testov je stanoviť vplyv zlúčeniny na biologickú odpoveď stimulovanú TK v bunke. Zmyslom in vivo testov je stanoviť účinok zlúčeniny vo zvieracom modely na príslušnú poruchu, napr. rakoviny.
Vhodné bunkové línie pre subkutánne xenoimplantátové experimenty zahrnujú C6 bunky (glióm, ATCC # CCL 107), A375 bunky (melanóm, ATCC # CRL 1619), A431 bunky (epidermoidný karcinóm, ATCC # CRL 1555), Calu 6 bunky (pľúcne, ATCC # HTB 56), PC3 bunky (prostaty, ATCC # CRL 1435), SCOV3TP5 bunky a NIH 3T3 fibroblasty geneticky upravené k nadmernej ex209 presii EGFR, PDGFR, IGF-1R alebo ktorejkoľvek inej testovanej kinázy. Nasledujúci postup môže byť používaný na vykonanie xenoimplantátových experimentov:
Samičie atymické myši (BALB/c, nu/nu) sa zakúpia u Simonsen Laboratories (Gilroy, CA). Všetky zvieratá boli chované v čistote v mikroizolačných klietkach s Alpha-dri podostieľkou. Bolo im poskytnuté sterilné žrádlo pre hlodavce a voda podľa potreby.
Bunkové linie boli pestované v príslušnom médiu (napr. MEM, DMEM, Ham's F10 alebo Ham's F12 plus 5% - 10% fetálne hovädzie sérum (FBS) a 2 mM glutamín (GLN)). Všetky bunkové kultivačné média, glutamín a fetálne hovädzie sérum boli zakúpené u firmy Gibco Life Technologies (Grand Island, NY), pokiaľ nie je uvedené inak. Všetky bunky boli kultivované v prostredí s vlhkosťou 90 - 95% a 5 - 10% CO2 pri teplote 37 °C. Všetky bunkové línie boli rutihne subkultivované dvakrát týždne a boli negatívne na mykoplazmu, čo bolo stanovené metódou Mycotect (Gibco).
Bunky boli zbierané pri alebo takmer pri konfluency s 0,05% TrypsínEDTA a peletované pri 450 x g po dobu 10 minút. Pelety boli resuspendované v sterilnom PBS alebo médiu (bez FBS) na príslušnú koncentráciu a bunky boli implantované do zadného boku myši (8-10 myší na skupinu, 2 - 10 x 106 buniek na zviera). Rast nádoru bol meraný po dobu 3 až 6 týždňov pomocou venierových kaliperov. Objemy nádorov boli vypočítané ako dĺžka x šírka x výška, pokiaľ nie je uvedené inak. Hodnoty P boli vypočítané pomocou Študentovho t-testu. Testované zlúčeniny v 50 - 100 μΐ excipientu (DMSO alebo VPD:D5W) môžu byť podané IP injekciou v rôznych koncentráciách všeobecne počínajúc dňom jedna po implantácii
Model invázie nádoru
Bol vyvinutý nasledujúci model invázie nádoru a môže byť používaný na stanovenie terapeutickej hodnoty a účinnosti zlúčenín vykazujúcich selektívnu inhibíciu receptora K.DR/FLK-1.
210
Postup
Ako experimentálne zvieratá boli používané osem týždňov staré nahé myši (samice) (Simonsen Inc.). Implantácia nádorových buniek môže byť vykonaná pri odťahu s laminárnym prúdom. Pri anestézii bol koktajl z látky Xylat zín/Ketamín (100 mg na kg ketamínu a 5 mg na kg Xylazínu) podávaný intraperitoneálne. Bola vykonaná incízia vedená stredom k odhaleniu dutiny brušnej (približne 1,5 cm dĺžky) na injektovanie 107 nádorových buniek v objeme 100 μΐ média. Bunky boli injektované buď do duodenálneho laloku pankreasu alebo pod serózu hrubého čreva. Peritoneum a svaly boli zašité 6-0 hodvábnym kontinuálnym stehom a koža bola stiahnutá pomocou svoriek. Zvieratá boli denne sledované.
Analýza
Po 2 - 6 týždňoch v závislosti na makroskopických pozorovaniach zvierat boli myši usmrtené a lokálne metastázy nádoru do rôznych orgánov (pľúca, pečeň, mozog, žalúdok, slezina, srdce, svaly) boli excidované a analyzované (meranie veľkosti nádoru, stupne invázie, imunochémie, stanovenie hybridizácie in situ, atď.)
C-kit test
Tento test sa používa na detekciu miery fosforylácie c-kit tyrozínu
MO7E (ľudská akútna myeloidná leukémia) bunky boli sérom starované („starved“) cez noc v 0,1% séru. Bunky boli ďalej pred stimuláciou ligandom vopred ošetrené zlúčeninou (súbežne so sérovou starváciou), stimulované 250 ng na ml rh-SCF po dobu 15 minút. Po stimulácii boli bunky lyzované a imunoprecipitované protilátkou anti-c-kit. Hladiny fosfotyrozínu a proteínu boli stanovené technikou Western blotting.
Test MTT proliferácie
Bunky MO7E boli starvované sérom a vopred ošetrené zlúčeninou podľa spôsobu uvedeného pre fosforylačné experimenty. Bunky boli nanášané v množstve 4 X 105 buniek na jamku do misky s 96 jamkami v 100 μΐ RPMI +
211
10% séru. Bol pridaný rh-SCF (100 ng na ml) a doštička bola inkubovaná po dobu 48 hodín. Po 48 hodinách sa pridalo 10 μΐ 5 mg na ml MTT [3-(4,5dimetytiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium-bromid) a po dobu 4 hodín sa nechala prebiehať inkubácia. Pridal sa kyslý izopropanol (100 μΐ z 0,04N HCI v izopropanole) a bola meraná optická hustota pri vlnovej dĺžke 550 nm.
Apoptózový test
Bunky MO7E sa inkubovali +/- SCF a +/- zlúčenina v 10% FBS s rh-GMCSF (10 ng na ml) a rh-IL-3 (10 ng na ml). Vzorky sa testovali v 24 a 48 hodinách. Na meranie aktivovanej kaspázy-3 sa vzorky premývali s PBS a permeabilizovali s ľadovo studeným 70% etanolom. Bunky sa potom zafarbili s Pekonjugovanou polyklonálnou králičou anti-aktívnou kaspázou-3 a analyzovali FACS. Na meranie štiepanej PARP sa vzorky lyžovali a analyzovali technikou Western blotting s protilátkou anti-PARP.
Dodatočné testy
Dodatočné testy, ktoré môžu byť používané na stanovenie zlúčenín podľa predloženého vynálezu zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, bio-flk-1 test, EGF receptor-HER2 chiméricky receptorový test na celých bunkách, bio-src test, bio-lck test a test merajúci funkciu fosforylácie raf. Postupy vykonávania jednotlivých testov môžu byť nájdené v U. S. Application Ser. No. 09/099,842, tuje uvedené ako odkaz, vrátane ktorýchkoľvek obrázkov.
Meranie bunkovej toxicity
Terapeutické zlúčeniny by mali byť účinnejšie pri inhibícii aktivity receptorovej tyrozínkinázy než pri prejavoch cytotoxického účinku. Meranie účinnosti a bunkovej toxicity zlúčeniny môže byť vykonávané stanovením terapeutického indexu, tzn. ICjo/LDjo· Hodnota IC50, dávka, ktorou sa dosiahne 50% inhibícia, môže byť meraná štandardnými technikami, napr. opísanými v predloženom vynáleze. Hodnota LD50. t.j. dávka, ktorá vedie k 50% toxicite, môže byť tiež meraná štandardnými technikami (Mossman, 1983, J. Immunol. Metods, 65: 55-63), meranie množstva uvoľneného LDH (Korzeniewski a Callwaert, 1983, J. Immunol. Metods, 64: 313, Decker a Lohmann-Mattes, 1988,
212
J.Immunol.Metods, 115: 61) alebo meranie letálnej dávky na zvieracích modeloch. Zlúčeniny s veľkým terapeutickým indexom sú výhodné. Terapeutický index by mal byť väčší než 2, výhodne aspoň 10, výhodnejšie aspoň 50.
B. Príklad výsledkov z bunkových testov za použitia (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Na potvrdenie účinnosti (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimety 1-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) detekovaného pri biochemických testoch (vide infra) bola vyhodnocovaná jeho schopnosť inhibovať ligand-dependentnej fosforylácie RTK pri testoch na bunkách pomocou NIH-3T3 myších buniek upravených na nadmernú expresiu Flk-1 alebo ľudských PDGFRp. (2-Dietylamino-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-1,2-di hydro-indo 1-3-y lidénmet y l)-2,4-dimetyl-l//-pyr o 1-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhiboval VEGF-dependentnú fosforyláciu Flk-1 tyrozínu s hodnotou IC50 približne 0,03 μΜ. Táto hodnota je podobná 0,009 μΜ K.j hodnote stanovenej pre inhibíciu Flk-1 (2-dietylamino-etyl)-amidom 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-y lidénmet y l)-2,4-di metyl - \H-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) determinovanej pri biochemických testoch, čo indikuje, že (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) sa ľahko penetruje do buniek. V súlade s biochemickými údajmi {vide infra) indikujúcimi, že (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-fluór-2oxo-l,2dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) mal porovnateľnú aktivitu proti Flk-1 a PDGFR, bolo tiež zistené, že inhibuje PDGF-dependentnú fosforyláciu receptora v bunkách s hodnotou IC50 približne 0,03 μΜ. Schopnosť (2-dietyIamino-etyl)-amidu 5(5-fl uór-2-οχο-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-2,4-dimetyl-1 //-pyr o 1-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhibovať c-kit, úzko príbuznej s RTK, ktorá viaže faktor kmeňových buniek (SDF), bola stanovená použitím M07E buniek, ktoré exprimujú tento receptor. V týchto bunkách (2-dietylamino-etyl)-amid 5(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhiboval SCF-dependentný c-kit fosforylá213 ciou s hodnotou IC50 0,01 - 0,1 μΜ. Táto zlúčenina tiež inhibovala SCFstimulovanú c-kit fosforyláciu u akútnej myeloidnej leukémie (AML) blastov izolovaných z periférnej krvi pacientov.
Okrem testovania schopnosti (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) na inhibíciu ligand-dependentnej fosforylácie receptoru v bunkách bol tiež pozorovaný vplyv na ligand-dependentnú proliferatívnu odpoveď buniek in vitro (viď tabuľka 4). Pri týchto štúdiách boli bunky cez noc uvedené do stavu pokoja sérom a indukované k DNA syntéze po pridaní príslušného mitogénneho ligandu. Ako je uvedené v tabuľke 4, (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-y lidénmety l)-2,4-d i mety 1-1//pyroI-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhiboval PDGF-indukovanú proliferáciu NIH-3T3 buniek exprimujúcich nadmerné množstvo PDGFR3 alebo PDGFRa s hodnotou IC50 0,031 a 0,069 μΜ a SCF-indukovanú proliferáciu MO7E buniek s hodnotou IC50 0,007 μΜ.
Tabuľka 4
biochemické bunkové IC50
receptor Ki‘ (μΜ) fosforylácia receptora (μΜ) ligand-dependentná proliferácia (μΜ)
Flk-1/KDR 0,009 0,032 0,0043
PDGFRa 0,008 0,034 0,03i4
PDGFRp ND ND 0,0693
FGFR 0,83 ND QfP
c-kit ND 0,01 - 0,1 0,007b
ND = nebolo stanovené stanovené pomocou rekombinantného enzýmu 2 stanovené pomocou NIH-3T3 buniek exprimujúcich Flk-1 bez prísunu séra 3 stanovené pomocou HUVEC bez prísunu séra 4 stanovené pomocou NIH-3T3 buniek exprimujúcich PDGFRD bez prísunu séra 3 stanovené pomocou NIH-3T3 buniek exprimujúcich PDGFRD bez prísunu séra 6 stanovené pomocou MO7E buniek bez prísunu séra
Ako vyplýva z tabuľky 4, existuje všeobecná zhoda medzi biochemickou a bunkovou aktivitou (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-1,2-dihydro214 indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-1 //-pyro 1-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) čo podporuje záver, že táto zlúčenina prekračuje bunkové membrány. Ďalej je možné vyvodiť, že bunkové odpovede sú výsledkom aktivity zlúčeniny 80 proti naznačenému cieľu. Naproti tomu, pri testovaní v prítomnosti kompletného rastového média in vitro, boli treba podstatne vyššie koncentrácie (2dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) (> 10 μΜ) na inhibíciu rastu rôznych ľudských nádorových buniek (viď tabuľka 5). To ukazuje, že zlúčenina priamo neinhibovala rast týchto buniek v koncentráciách nutných na inhibíciu fosforylácie receptoru závislej na ligandu a proliferácie buniek.
Tabuľka 5
bunková línia pôvod IC50 (μΜ) ť-7 LD50 (μΜ)
HT29 karcinóm hrubého čreva 10 22
A549 pľúcny karcinóm 9,5 22
NCI-H460 NSC pľúcny karcinóm 8,9 20
SF767T glióm 7,9 14
A431 epidermoidný karcinóm 6,0 18
Výsledky uvedené v tabuľke 5 boli získané inkubáciou buniek po dobu 48 hodín v kompletnom rastovom médiu v prítomnosti sériových zriedení (2dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny. Na konci rastovej periódy bolo stanovené relatívne množstvo buniek. Hodnoty IC50 boli vypočítané ako koncentrácia zlúčeniny, ktorá inhibovala rast buniek z 50% vzhľadom k neošetrovaným bunkám. Hodnoty LD50 boli vypočítané ako koncentrácie na zlúčeninu, ktorá spôsobí 50% zníženie počtu buniek vzhľadom na východiskový stav experimentu.
215
Relevantnejší test na báze buniek, v ktorom sa vyhodnocuje antiangiogénna schopnosť (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl -1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80), zahrnuje in vitro test mitogenézy použitím ľudských endoteliálnych buniek pupočníkovej žily (HUVEC) ako modelového systému pre proliferáciu endoteliálnych buniek rozhodujúcu pre angiogénny proces. Pri tomto teste je mitogénna odpoveď, meraná ako prírastok DNA syntézy, indukovaná v HUVEC bez prísunu séra po pridaní VEGF alebo FGF. V týchto bunkách (2-dietylaminoetyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhiboval VEGF- a FGFindukovánú mitogénnu odpoveď na dávke závislým spôsobom s hodnotami IC50 0,004 μΜ, resp. 0,7 μΜ, za predpokladu, že zlúčenina bola prítomná v priebehu 48 hodinového testu.
Vyššie uvedené výsledky boli získané s použitím HUVEC bez prísunu séra, ktoré boli inkubované s mitogénnymi koncentráciami VEGF (100 ng/ml) alebo FGF (30 ng/ml) v prítomnosti sériových zriedení (2-dietylamino-etyl)amidu 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl - l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) po dobu 24 hodín. Mitogénna odpoveď počas nasledujúcich 24 hodín v prítomnosti ligandu a inhibítora bola kvantifikovaná meraním DNA syntézy na báze inkorporácie brómdeoxyuridínu do bunkovej DNA.
V oddelených experimentoch inhibovala zlúčenina 80 VEGF-dependentnú fosforyláciu ERK 1/2 (p42/44MAP kinázy), prvotný downstreamový cieľ Flk1/KDR, na dávke závislým spôsobom. Tiež sa zistilo, že v tomto systéme je inhibičná aktivita zlúčeniny 80 dlhodobá; inhibuje VEGF-dependentnú fosforyláciu ERK /2 aj 48 hodín po odstránení (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2oxo-1,2-dihydro-indo 1-3-y lidénmetyl)-2,4-di mety 1-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) z média a po krátkej expozícii (2 hodiny) voči mikromolárnym koncentráciám zlúčeniny.
Zistilo sa, že VEGF je dôležitý faktor prežitia pre endoteliálne bunky. Keďže (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-1, 2-d i hydro-indol-3-y 1 i dénmetyl)-2,4-dimetyI-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhibuje
216
VEGF-dependentnú mitogénnu odpoveď HUVEC, bol skúmaný účinok zlúčeniny na prežitie HUVEC. V týchto experimentoch bolo používané štiepenie substrátu kaspázy 3 poly-ADP-ribozyl polymerázy (PARP) ako indikácia apoptózy. HUVEC kultivované za bez sérových podmienok po dobu 24 hodín vykazovali výraznú mieru štiepenia PARP, čo bolo detekované akumuláciou štiepenia 23 kDa PARP fragementu. Tomu bolo do veľkej miery zabránené pridaním VEGF do bunkového média, a tým sa v tomto teste ukázalo, že VEGF pôsobí ako faktor prežitia. Zistilo sa, že (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indo 1-3-y lidénmetyl)-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhibuje KDR signalizáciu. Teda (2-dietylamino-etyl)-amid 5(5-fluór-2-οχο-1,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhibuje VEGF-sprostredkované prežitie HUVEC na dávke závislým spôsobom. Tieto údaje teda indikujú, že zlúčenina 80 indukuje apoptózu v endoteliálnych bunkách v kultúre v prítomnosti VEGF.
C. In vivo štúdie účinnosti
i. Účinnosť proti stabilizovaným nádorovým xenoimplantátom
In vivo účinnosť (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-y lidénmetyl)-2,4-dimetyl-1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) bola študovaná na subkutánnych (SC) modeloch xenoimplantátu použitím ľudských nádorových buniek implantovaných do oblasti zadnej časti boku atymickej myši. Po implantácii sa pred započatím perorálneho ošetrovania zlúčeninou nádory nechali stabilizovať na veľkosť 100 - 550 cm3.
Denné perorálne podanie zlúčeniny 80 spôsobovalo na dávke závislú inhibíciu rastu A431 nádoru, za predpokladu, že ošetrenie bolo započaté po náraste nádorov do veľkosti 400 mm3. Bola pozorovaná štatisticky významná (P < 0,05) inhibícia rastu nádoru pri dávkach 40 mg na kg denne (74% inhibícia) a 80 mg na kg denne (84% inhibícia) (viď tabuľka 6). V predchádzajúcich experimentoch nebola vyššia (160 mg na kg denne) dávka zlúčeniny účinnejšia proti stabilizovaným nádorom A431 než dávka 80 mg na kg denne. Navyše myši ošetrované dávkou 160 mg zlúčeniny na kg denne strácali telesnú váhu, čo indikuje, že vyššia dávka nebola tiež tolerovaná. Podobné výsledky boli získané pri
217 experimente, v ktorom boli nádory A431 ponechané narásť iba do veľkosti 100 mm3 (viď tabuľka 5). Pri tomto druhom experimente bola pozorovaná kompletná regresia nádorov u šiestich z ôsmich zvierat ošetrovaných dávkou 80 mg na kg denne po dobu 21 dní. U týchto šiestich zvierat nebol pozorovaný nový nárast nádorov počas 110 dní pozorovania po skončení ošetrenia. U dvoch zvierat, v ktorých nádory znovu narástli do veľkej veľkosti (2 000 - 3 000 mm3), nádory ustúpili ako reakcia na druhé kolo ošetrenia zlúčeninou 80. Dôležité je, že vo všetkých experimentoch, pri ktorých sa testovala účinnosť zlúčenín, bola dávka (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) v množstve 80 mg na kg denne dobre znášaná, aj keď bola podávaná kontinuálne po dobu viac než 100 dní.
Tabuľka 6
počiatočný objem nádoru 400 zlúčenina1 (mg/kg denne) 80 % inhibícia (denná)_ 84 (36) Hodnota P 0,001
40 74 (36) 0,003
20 51 (36) 0,130
100 80 93 (40) 0,002
40 75 (40) 0,015
10 61 (40) 0,059
1 zlúčenina 80
Výsledky v tabuľke 6 boli získané s bunkami A431 (0,5 x 106 buniek na myš), ktoré boli implantované SC do oblasti zadného boku atymickej myši. Denné perorálne podanie (2-dietylamino-etyl)-amidu 5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indoI-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl -1 //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) v nosiči na báze Cremophore alebo kontrolného nosiča sa začalo v dobe, kedy nádory dosiahli indikovaného priemerného objemu. Nádory boli merané vernierovými kaliperami a objem nádoru bol spočítaný ako dĺžka x šírka x výška. Hodnoty P boli vypočítané porovnaním veľkosti nádorov u zvierat,
218 ktoré boli ošetrované zlúčeninou 80 (n = 8), s tými zvieratami, ktoré boli ošetrované nosičom (n = 16), v posledný deň experimentu pomocou dvojstranného Študentovho t-testu.
Účinnosť zlúčeniny 80 proti etablovaným ľudským nádorom rôzneho pôvodu 'bola stanovená pomocou Colo205 (karcinóm hrubého čreva), SF763T (glióm) a NCI-H460 (nemalobunkový pľúcny karcinóm) xenoimplantátov (viď tabuľka 7). Tieto experimenty boli vykonávané s (2-dietylamino-etyl)-amidom 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l //-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) podávaným peorálne v množstve 80 mg na kg denne; dávka, ktorá bola účinná a dobre tolerovaná.
Tabuľka 7
typ nádoru Počiatočný objem nádoru % inhibície (denne) Hodnota P
A4311 epidermoidný 100 93 (40) 0,002
A4311 epidermoidný 400 84 (36) 0,001
Colo205 hrubého čreva 370 77 (54) 0,028
NCI-H460 pľúcny 300 61 (54) 0,003
SF763T glióm 550 53 (30) 0,001
1 údaje získané z experimentu uvedeného v tabuľke 5
Vo vyššie spomínaných experimentoch, akonáhle nádory dosiahli indikovanej veľkosti, bola zlúčenina 80 podávaná raz denne v množstve 80 mg na kg v nosiči na báze Cremophoru. Percentuálna inhibícia v porovnaní s kontrolnou skupinou ošetrovanou nosičom bola vypočítaná na konci experimentov. Hodnoty P boli vypočítané porovnaním veľkosti nádorov u zvierat, ktoré boli ošetrované zlúčeninou, s tými zvieratami, ktoré boli ošetrované nosičom, pomocou dvojstranného Študentovho t-testu.
Aj keď (2-dietylamino-etyl)-amid 5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-1//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny (zlúčenina 80) inhiboval rast všetkých typov nádoru uvedených v tabuľke 7, bol pozorovaný rozdiel v odpovediach rôznych modelov xenoimplantátu. Konkrétne rast NCI219
Η460 a SF763T nádorov bol zastavený alebo vo veľkej miere spomalený, keďže nádory Colo205, ako napríklad nádory A431, ustúpili po ošetrení (2-dietylamino-etyl)-amidom 5-(5-fluór-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny.
Kvôli stanoveniu molekulárnej bázy rozdielov v odpovedi u modelov xenoimplantátu boli študované nádory. Boli vyhodnocované nádory SF763T, ktoré boli pri molekulárnej hladine menej responzívne na ošetrenie (2-dietylamino-etyl)-amidom 5-(5-fluór-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-ylidénmetyl)-2,4-dimetyl-l//-pyrol-3-karboxylovej kyseliny, pomocou imunohistologických techník na stanovenie účinku ošetrenia zlúčeninou. Tieto štúdie boli pôvodne vykonávané na tomto type nádoru, pretože nádory SF763T sú vysoko vaskularizované mikrocievami, ktoré silne exprimujú endoteliálny bunkový marker CD31, a sú teda veľmi vhodné pre štúdie hustoty nádorových mikrociev (MVD). Imunohistologické stanovenie nádorov SF763T ukazuje, že nádory z ošetrovaných zvierat mali zníženú MVD v porovnaní s kontrolnými skupinami ošetrovanými nosičom, čo je v súlade s antiangiogénnym mechanizmom účinku zlúčeniny 80; MVD bola 24,2 ± 4,1 u zvierat ošetrovaných zlúčeninou 80, v porovnaní s 39,3 + 5,7 u tých, ktoré boli ošetrované len nosičom. Ako sa predpokladá na základe zastavenia sprievodného rastu nádoru, vyložená inhibícia proliferácie nádorových buniek bola evidentná u nádorov, ktoré boli ošetrované zlúčeninou 80. Tieto nádory mali polovičný mitotický index nádorov, ktoré boli ošetrované nosičom (údaje nie sú uvedené). Účinok zlúčeniny 80 na MVD a proliferáciu nádorových buniek indikuje, že zlúčeniny majú výrazné antiangiogénne a protinádorové účinky, aj za podmienok, pri ktorých nádory neustupujú.
Schopnosť zlúčeniny 80 inhibovať fosforyláciu PDGFR a následnú signalizáciu in vivo bola tiež vyhodnocovaná na nádoroch SF763T, ktoré exprimujú vysoké hladiny PDGFRp. Ošetrením SF763T nádorov zlúčeninou 80 dochádzalo k silnej inhibícii. Silne sa inhibovala fosforylácia PDGFRp tyrozínu v etablovaných SF763T nádoroch. Zlúčenina 80 tiež znižovala hladiny fosforylovanej (aktivovanej) fosfolipázy C gamma (PLC-γ), okamžitý downstreamový indikátor aktivácie PDGFR. Tieto údaje demonštrujú, že perorálne podanie
220 zlúčeniny 80 spôsobuje priamy účinok na cieľovú aktivitu (PDGFR) v nádoroch in vivo.
Na základe dôkazu, že schopnosť zlúčeniny 80 inhibovať VEGFdependentnú signalizáciu v HUVEC in vitro jc dlhodobá (vide supra), účinnosť zlúčeniny bola stanovená po nečastom podaní zlúčeniny do modelu Colo205 nádoru. Ako je uvedené v tabuľke 8, bolo 80 mg na kg (91% inhibícia) a 40 mg na kg (84% inhibícia) účinných, za predpokladu, že dávka bola podávaná denne, niekoľko krát týždne. Na rozdiel od vyšších dávok zlúčeniny 80 (160 mg na kg), ktoré inhibovali (52% inhibícia) rast etablovaných nádorov Colo205 pri podaní 2 x týždne, z čoho je možné usudzovať, že táto zlúčenina môže byť účinná pri nefrekventovanom podaní vo vyšších dávkach. Malo by byť uvedené, že dávkovacie režimy môžu byť stanovené odbornou verejnosťou bez náležitého skúšania.
Tabuľka 8
dávka (mg/kg) frekvencia inhibícia % hodnota P
160 2 x týždne 52 0,085
1 x týždne 17 NS
80 denne 91 0,039
2 x týždne 19 NS
1 x týždne 0 NS
40 denne 84 0,028
2 x týždne 36 NS
NS: nevýznamná hodnota (P > 0,05 )
Výsledky z tabuľky 8 boli získané z buniek Colo205 (0,5 x 106 buniek na myš), ktoré boli implantované SC do oblasti zadného boku atymickej myši. Perorálne podanie zlúčeniny 80 podľa indikovaného režimu bolo započaté v dobe, kedy nádory dosiahli objemu 400 mm3. Nádory boli merané vernierovými kaliperami a objem nádoru bol vypočítaný ako dĺžka x šírka x výška produktu. Hodnoty P boli vypočítané porovnaním veľkosti nádorov u zvierat, ktoré boli ošetrované zlúčeninou 80, so zvieratami, ktoré boli ošetrované nosičom, v poslední deň experimentu pomocou dvojstranného Študentovho t-testu.
221 ii. Účinnosť zlúčeniny 80 na modely diseminovaného ochorenia
Okrem podpory trvalého rastu pevných primárnych nádorov, je angiogenéza tiež esenciálna zložka podporujúca vznik diseminovaného ochorenia v dôsledku metastázy z primárneho nádoru. Účinok zlúčeniny 80 na vznik diseminovaného ochorenia bol skúmaný na modely kolonizácie pľúcneho melanómu B16-F1 myši. Pri tomto modely kolonizujú B16-F1 bunky inokulované intravenózne via chvostovú žilu atymickej myši pľúca a vytvárajú nádory. Ako je uvedené v tabuľke 8, podľa vyhodnotenia merania celkovej hmotnosti pľúc účinne znižuje perorálne podanie zlúčeniny 80 v množstve 80 mg na kg denne hmotnosť B16-F1 buniek v pľúcach. Tieto údaje naznačujú, že zlúčenina 80 môže inhibovať diseminované ochorenie in vivo.
Tabuľka 9
hmotnosť pľúc (g) % inhibície hodnota P
nosič 0,83 ± 0,07 - -
zlúčenina1 0,41 ± 0,04 50 < 0,001
1 zlúčenina 80
Výsledky z tabuľky 9 boli získané z atymickej myši, ktorá bola inokulovaná B16-F1 nádorovými bunkami (5 x 105 buniek na myš). Myši boli ošetrené denne perorálnou dávkou zlúčeniny 80 v množstve 80 mg na kg denne (n = 10) alebo nosičom (n = 18) po dobu 24 dní po inokulácii nádoru. Na konci doby ošetrovania boli myši usmrtené a ich pľúca boli izolované a zvážené. Percentuálna inhibícia bola vypočítaná porovnaním hmotnosti pľúc u zvierat, ktoré boli ošetrované zlúčeninou 80, so zvieratami, ktoré boli ošetrované iba nosičom. Hodnoty P boli stanovené pomocou dvojstranného Študentovho t-testu.
D. Príklady biologickej aktivity
Príklady in vivo účinnosti zlúčenín podľa predloženého vynálezu sú uvedené v tabuľke 2.
222
Záver
Pri štúdiách zameraných na výskum farmakokinetických charakteristík zlúčenín z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu, bolo dokázané, že perorálne podanie jednotlivej dávky uvedených zlúčeniny vedie k vysokej biologickej dostupnosti u myší. Dobrá perorálna biologická dostupnosť a lineárna farmakokinetika ukazujú, že zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu majú priaznivé farmakokinetické charakteristiky.
Navyše zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu sú účinnými inhibítormi aktivity tyrozínkinázy z delenej kinázovej domény RTK Flk-1/KDR a PDGFR, ktoré sa podieľajú na angiogenéze, a RTK c-kit, receptoru pre faktor kmeňových buniek (SCF), ktorý sa podieľa na určitých hematologických rakovinách. Vo vysokých koncentráciách zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu tiež inhibujú aktivitu tyrozínkinázy FGFR-1, tretej RTK podieľajúcej sa na angiogenéze. V súlade s ich biochemickou aktivitou inhibujú zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu ligand-dependentnú fosforyláciu tyrozínu cieľových RTK a in vitro mitogénnu odpoveď ľudských endoteliálnych buniek pupočníkovej žily (HUVEC) stimulovanej VEGF alebo FGF, PDGFR-exprimujúcich NIH-3T3 buniek stimulovaných PDGF, a M07E buniek akútnej myeloidnej leukémie stimulovaných SCF. Naproti tomu zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu priamo neinhibujú proliferáciu nádorových buniek v kompletnom rastovom médiu okrem koncentrácií vyšších o 2 až 3 rády než sú koncentrácie nutné k inhibícii ligand-dependentných mitogénnych odpovedí. Pri štúdiách xenoimplantátu na myšiach inhibovali zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu rast etablovaných ľudských nádorov rôzneho pôvodu spôsobom závislým na dávke á v koncentráciách, ktoré boli dobre znášané aj po predĺžení dávkovania ( > 100 dní). Pri dávke 80 mg na kg denne indukovali zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu regresiu veľkých etablovaných A431 a Colo205 nádorov a spôsobovali značnú inhibíciu rastu alebo stagnáciu SF763T a NCI-H460 nádorov. U myší majúcich SF763T nádory spôsobovali zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu redukcie hustoty mikrociev. fosforyláciu PDGFR v nádoroch a mito223 tický index v nádorových bunkách. Pri tejto dávke tiež zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu inhibovali pľúcnu kolonizáciu nádorovými buniek B16-F1 v modely metastázy nádoru. Štúdie režimov ukázali, že zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu sú najúčinnejšie, pokiaľ sú podávané denne. Priamy dôkaz antiangiogénnej aktivity zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu bol vykonaný na SF763T nádoroch, v ktorých bola hustota mikrociev redukovaná. Priamy dôkaz, že zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu inhibovali fosforyláciu PDGFR a signalizáciu in yivo, bol tiež vykonaný na SF763T nádoroch.
Keď sa všetko spojí, podporujú tieto údaje názor, že perorálne podávané zlúčeniny z výhodných uskutočnení podľa predloženého vynálezu sú antiangiogénne prostriedky na ošetrenie rakovín, vrátane pevných nádorov a hematologických zhubných bujnení, v ktorých angiogenéza a/alebo signalizácia cez c-kit sú dôležité z hľadiska patológie ochorenia.
Je zrejmé, že zlúčeniny, postupy a farmaceutické prípravky podľa predloženého vynálezu sú účinné pri modulácii aktivity PK, a teda sa predpokladá ich účinnosť ako terapeutických prostriedkov pri poruchách súvisiacich s RTK, CTK a STK.
Odborník tiež ľahko ocení, že predkladaný vynález je dobre uspôsobený na uskutočňovanie opísaných aspektov a dosahovanie uvedených cieľov a výhod, rovnako ako tých, ktoré sú mu inherentne vlastné. Molekulárne komplexy a tu opisované metódy, postupy, terapie, molekuly a konkrétne zlúčeniny predstavujú výhodné uskutočnenia a sú iba príklady, ktoré nijako neobmedzujú rozsah vynálezu. Odborníkovi sú zrejmé ich obmeny a ďalšie použitie, ktoré sú zahrnuté v predmete vynálezu, ako je definovaný pripojenými patentovými nárokmi.
Odborníkovi je tiež zrejmé, že je možné vykonávať rôzne náhrady a modifikácie predkladaného vynálezu, bez toho aby sa prekročil rozsah a myšlienka vynálezu.
224
Všetky patenty a publikácie spomínané v texte sú ukazovateľom úrovne odborníkov, ktorých sa vynález týka. Všetky patenty, publikácie sú tu zahrnuté formou odkazu, ako by bolo pre každú jednotlivú publikáciu konkrétne a jednotlivo uvedené, že je tu zahrnutá ako odkaz.
Vynález, tu ilustratívne opísaný, môže byť výhodne vykonávaný za absencie akéhokoľvek prvku alebo prvkov alebo obmedzení, ktoré tu nie sú konkrétne uvedené. Tak napríklad v každom prípade tu môže byť ktorýkoľvek z výrazov „zahrnujúci“, „pozostávajúci v podstate z“ a „pozostávajúci z“ nahradený ktorýmkoľvek zo zvyšných dvoch. Termíny a výrazy, ktoré tu boli použité, sú používané ako výrazy opisné a nie obmedzujúce a pri ich použití neexistuje vylúčenie akýchkoľvek ekvivalentov uvedených a opísaných znakov alebo ich častí, ale potvrdzuje sa, že v rozsahu nárokovaného vynálezu sú možné rôzne modifikácie. Je teda nutné zdôrazniť, že aj keď je vynález opísaný konkrétne pomocou výhodných uskutočnení a voliteľných znakov, môže sa odborník uchýliť k modifikáciám a variáciám tu uvedených konceptov a tieto modifikácie a variácie sa považujú za spadajúce do rozsahu vynálezu, definovaného pripojenými patentovými nárokmi.
Tam, kde sú znaky alebo predmety vynálezu opisované pomocou Markushových definícii, je navyše odborníkovi zrejmé, že vynález je tým tiež definovaný pomocou každého jednotlivého člena alebo podskupiny takej Markushovej skupiny. Napríklad ak je význam symbolu X definovaný ako vybraný zo skupiny pozostávajúcej z brómu, chlóru a jódu, sú tým plne opísané nárokmi pre X znamenajúce bróm aj nárokmi pre X znamenajúce chlór.
Ďalšie uskutočnenia spadajú do rozsahu pripojených patentových nárokov.

Claims (60)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Zlúčenina všeobecného vzorca (I):
    kde substituent R1 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej, cykloalkylovej, arylovej, heteroarylovej a heteroalicyklovej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NRI3R14, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
    substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, kyanoskupiny, -NRI3R14, -NRI3C(O)R14, -C(O)R15, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -S(O)2NRl3R14;
    substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, -NR13C(O)OR'4 a -SO2R2 (kde substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová, heteroarylová a heteroaralkylová skupina);
    substituent R4 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NR13R14;
    226 substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)Rl°;
    substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
    substituent R je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10; alebo substituenty R6 a R7 môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívajúcou v tom, že aspoň jeden zo substituentov R5, R6 alebo R7 musí byť -C(O)R*°;
    substituenty R8 a R9 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a arylovej skupiny;
    substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupíny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(R* *)(CH2)nR12 a -NRI3R14;
    substituent R11 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny;
    substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -NRI3R14, hydroxyskupíny, -C(O)R15, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -N+(O')R13R14, -N(OH)R13 a -NHC(O)Ra (kde substituent Ra je nesubstituovaná alkylová, halogénalkylová alebo aralkylová skupina);
    substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, nižšej alkylovej skupiny substituovanej hydroxyalkylaminoskupinou, kyanoalkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny; alebo substituenty R13 a R14 môžu byť spojené dohromady za vzniku heterocykloskupiny;
    substituent R13 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, hydroxyskupíny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
    227 substituent R16 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NRI3R14 a -C(O)NR13R14;
    substituent R17 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny;
    I substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová alebo heteroarylová skupina a n a r sú nezávisle 1, 2, 3 alebo 4 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ.
  2. 2. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde:
    je substituent R1 vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej, cykloalkylovej, arylovej, heteroarylovej, heteroalicyklickej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
    substituent R2 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -S(O)2NR13R14;
    substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, trihalogénmetylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NRI3R14, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -NR,3S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NRI3C(O)Ri4 a -NR13C(O)OR14;
    substituent R4 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, alkylovej skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NR13R14;
    substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
    228 substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
    substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, arylovej skupiny, heteroarylovej skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10; , substituenty R6 a R7 môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)ó-; s výhradou spočívajúcou v tom, že aspoň jeden zo substituentov R5, R6 alebo R7 musí byť -C(O)R10;
    substituenty R8 a R9 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a arylovej skupiny;
    substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(R*')(CH2)nR12 a -NR13R14;
    substituent R11 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny;
    substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -NR13R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylovej a heteroarylovej skupiny;
    substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, cykloalkylovej skupiny, arylovej a heteroarylovej skupiny;
    substituenty R13 a R14 môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej z -(CH2)4-, -(CH2)5-,
    -(CH2)2O(CH2)2- a -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-;
    substituent R15 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
    substituent R16 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14 a -C(O)NR13R14;
    229 substituent R17 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a n a r sú nezávisle 1, 2, 3, alebo 4 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ.
  3. 3. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 * * je -COR10, kde substituent R10 je-NR11(CH2)nR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina; , n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 sú nezávisle nesubstituovaná nižšia alkylová skupina.
  4. 4. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 *(CH2)nR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina;
    n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 sú spojené dohromady a tvoria skupinu vybranú z -(CH2)4-, -(CH2)5-,
    -(CH2)2-O-(CH2)2- alebo -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
  5. 5. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R5 je A-(2-dimetylaminoetyl)aminokarbonyl, ?/-(2-dÍetylaminoetyl)-//-metyl-aminokarbonyl, N(3-dimetylaminopropyl)aminokarbonyl, /V-(2-dietylaminoetyl)aminokar230 bonyl, N-(3-ety laminopropyl)-aminokarbonyl, N-(2-etylaminoetyl)aminokarbonyl alebo 7V-(3-dietylaminopropyl)aminokarbonyl.
  6. 6. Zlúčenina , podľa nároku 1, kde substituent R5 je N-(2dietyl amino ety l)aminokarbonyl alebo 7V-(2-etylaminoetyl)aminokarbonyl.
  7. 7. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R5 je 3-pyrolidin-l-ylpropylaminokarbonyl, 3-morfolin-4-yl-propylamino karbonyl, 2pyrolidin-1 -yl-etylaminokarbonyl, 2-morfolin-4-yl-etylaminokarbonyl, 2(4-metylpiperazin-l-yl)etyl-aminokarbonyl, 2-(3,5-dimetylpiperazin-lyl)etylaminokarbonyl, 3-(4-metylpiperazin-l-yl)propylaminokarbonyl alebo 3-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)propylaminokarbonyl.
  8. 8. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 '(CtUjnR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina, n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 sú nezávisle nesubstituovaná nižšia alkylová skupina.
  9. 9. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 '(CľhjnR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná álkylová skupina, n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 sú spojené dohromady a tvoria skupinu vybranú z -(CH2)4-, -(CH2)j-, -(CľI2)2-O-(CH2)2- alebo (CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
  10. 10. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je N-(2dimetylamino-etyl)-aminokarbonyl, N-(2-dietyl-aminoetyl)-N-metylami231 nokarbonyl, N-(3-dimety 1 amino-propyl)-aminokarbonyl, ?/-(2-dietylaminoetyl)-aminokarbonyl, N-(2-etylaminoetyl)-ami nokarbonyl, V-(3-etylaminopropyl)-aminokarbonyl alebo V-(3-dietylamino-propyl) aminokarbonyl.
  11. 11. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je 7V-(2-dietyIaminoetyl)aminokarbonyl alebo V-(2-etylamino-etyl)aminokarbonyl.
  12. 12. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je 3-pyrolidin-l -yl-propyl amino karbonyl, 3-morfolin-4-yl-propylamino-karbonyl, 2-pyrolidin-1 -yl-etylamino-karbonyl, 2-morfolin-4-yl-etylaminokarbonyl, 2-(4-metylpiperazin-l-yl)etyl-aminokarbonyl, 2-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)etyl-aminokarbonyl, 3-(4-metylpiperazin-l-yl)propylamino-karbonyl alebo 3-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)propylamino-karbonyl.
  13. 13. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NRI3R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, arylová skupina, heteroalicyklická skupina, heteroarylová skupina alebo karboxyskupina.
  14. 14. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je 3-triazin-l-yl-propylam i no karbonyl, 2-tr i azin-l-y 1-etyl am i nokarbonyl, 3-imidazol-1 -yl-propylaminokarbonyl, pyridin-4-ylmetyl aminokarbonyl, 2-pyridin-2-yl-etylaminokarbonyl alebo 2 imidazol-1-yl etylaminokarbonyl.
  15. 15. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRI3R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a subsi232 tuent R14 je nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, arylová skupina, heteroalicyklická skupina, heteroarylová skupina alebo karboxyskupina.
  16. 16. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je 2-triazin-l-yl-propylaminokarbonyl, 2-triazin-l-yl-etylaminokarbonyl, 3-imidazol-l-yl-propy laminokarbonyl, pyridin-4-ylmetyl-aminokarbonyl, 2-pyridin-2-yl-etylaminokarbonyl alebo 2 imidazol-1-yl-etylaminokarbonyl.
  17. 17. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1'(CH2)nR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina; n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 sú spojené dohromady a tvoria heterocyklus.
  18. 18. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 ‘(CbhjnR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina; n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 sú spojené dohromady a tvoria a 5, 6 alebo 7 atómový heterocyklus obsahujúci karbonylovú skupinu a jeden alebo dva atómy dusíka v kruhu.
  19. 19. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je 2-(3-oxopiperazin-l-yl)ety laminokarbonyl, 2-( imidazol idin-l-y 1-2-ón)e ty laminokarbonyl, 2-(tetrahydropyrimidin-l-yl-2-ón)etylaminokarbonyl, 2-(2-oxopyrol idin- 1-y 1)-e ty laminokarbonyl, 3-(3-oxopiperazin-1-yl)propy laminokarbonyl, 3-(imidazol idin-1 -y l-2-ón)propy laminokarbonyl, 3-(tetrahyd ropyr i m idin- 1 -y 1-2-ó n)-propy laminokarbonyl alebo 3-(2-oxopyroli233 propylaminokarbonyl alebo 3-(2-oxopyroli-din-l-yl)propylaminokarbonyl.
  20. 20. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 '(CFhjnR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina, n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NRI3R14, kde substituenty R13 a R14 sú spojené dohromady a tvoria heterocyklus.
  21. 21. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 '(ClhjnR12, kde substituent R11 je atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina, n je 2 alebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 sú spojené dohromady a tvoria a 5, 6 alebo 7 atómový heterocyklus obsahujúci karbonylovú skupinu a jeden alebo dva atómy dusíka v kruhu.
  22. 22. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je 2-(3-oxopiperazin-l-yl)etylaminokarbonyl, 2-(imidazolidin-l-yl-2-ón)etylaminokarbonyl, 2-(tetrahydropyrimidin-l -yl-2-ón)etylaminokarbonyl, 2-(2-oxopyrolidin-1 -yl)-etylaminokarbonyl, 3-(3-oxopiperazin-l -yl)propyl-aminokarbonyl, 3-(imidazolidin-1 -yl-2-ón)propylaminokarbonyl, 3-(tetrahydropyrimidin-1 -yl-2-ón)-propyl-aminokarbonyl alebo 3-(2-oxopyrolidin-l -yl)propylaminokarbonyl.
  23. 23. Zlúčenina alebo soľ podľa ktoréhokoľvek z nárokov 3 - 7, 13 - 14 alebo 17 - 19, kde substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nižšej nesubstituovanej alkylovej skupiny a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny, a234 rylovej skupiny, heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo arylová skupina.
  24. 24. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 23, kde substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a metylu a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z metylu, atómu vodíka a fenylu.
  25. 25. Zlúčenina alebo soľ podľa ktoréhokoľvek z nárokov 8 - 12, 15, 16 alebo 20 - 22, kde substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo arylová skupina.
  26. 26. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 25, kde substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo metylu a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z metylu, atómu vodíka alebo fenylu.
  27. 27. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 23, kde substituent R1 je atóm vodíka, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina, -C(O)NR R , nesubstituovaná cykloalkylová alebo arylová skupina; substituent R2 je atóm vodíka, halogén, nižšia alkoxyskupina, kyanoskupina, arylová skupina alebo -S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je atóm vodíka, arylová alebo alkylová skupina; substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NRI3C(O)R14, arylovej skupiny prípadne substituovanej jedným alebo dvoma substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z
    235 nižšej alkylovej skupiny, halogénu alebo nižšej alkoxyskupiny a heteroarylovej skupiny a substituent R4 je atóm vodíka.
  28. 28. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 23, kde substituent R* je atóm vodíka alebo fenyl; substituent R2 je atóm vodíka, chlór, bróm, fluór, metoxyskupina, etoxyskupina, fenyl, kyanoskupina, dimetylaminosulfonyl, 3-chlórfenyl-aminosulfonyl, karboxyskupina, metoxyskupina, aminosulfonyl, metylaminosulfonyl, metylsulfonyl, etylsulfonyl, benzylsulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-amino sul fonyl, dimetylaminosulfonyl alebo izopropylamino-sulfonyl;
    substituent R3 je atóm vodíka, metoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl 4-dichlórfenyl, 2-metoxy-5-izopropylfenyl, 4-n-butylfenyl alebo 3-izopropylfenyl a substituent R4 je atóm vodíka.
  29. 29. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 23, kde substituent R1 je atóm vodíka; substituent R2 je atóm vodíka, kyanoskupina, fluór, chlór alebo bróm; substituent R3 je atóm vodíka a substituent R4 je atóm vodíka.
  30. 30. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 25, kde substituent R1 je atóm vodíka, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina, -C(O)NR R , nesubstituovaná cykloalkylová skupina alebo arylová skupina, substituent R2 je atóm vodíka, halogén, nižšia alkoxyskupina, kyanoskupina, arylová skupina, -SO2R20 alebo -S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je atóm vodíka, arylová alebo alkylová skupina, substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NRI3C(O)R14, arylovej a heteroarylovej skupiny a substituent R4 je atóm vodíka.
    236
  31. 31. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 25, kde substituent R1 je atóm vodíka alebo fenyl, substituent R2 je atóm vodíka, chlór, bróm, fluór, metoxyskupina, etoxyskupina, fenyl, dimetylaminosulfonyl, kyanoskupina, metylsulfonyl, etylsulfonyl, benzylsulfonyl, 3-chlórfenyl-aminosulfonyl, karboxyskupina, metoxyskupina, aminosulfonyl, metylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-aminosulfonyl, dimetylaminosulfonyl alebo izopropylamino-sulfonyl, substituent R3 je atóm vodíka, metoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl,3,4-dichlórfenyl, 2-metoxy-5-izopropylfenyl, 4-n-butylfenyl, 3-izopropylfenyl a substituent R4 je atóm vodíka.
  32. 32. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 25, kde substituent R1 je atóm vodíka; substituent R2 je atóm vodíka, kyanoskupina, fluór, chlór alebo bróm; substituent R3 je fenyl a substituent R4 je atóm vodíka.
  33. 33. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R1 je atóm vodíka, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová alebo arylová skupina, substituent R2 je atóm vodíka, halogén, nižšia alkoxyskupina, kyanoskupina, arylová skupina alebo S(O)2NRI3R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je atóm vodíka, arylová alebo alkylová skupina, substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, nižšej alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, arylovej skupiny a heteroarylovej skupiny a substituent R4 je atóm vodíka.
  34. 34. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R1 je atóm vodíka alebo metyl, substituent R2 je atóm vodíka, kyanoskupina, chlór, fluór alebo bróm, substituent R3 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo fenylu a substituent R4 je atóm vodíka.
    237
  35. 35. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 33 alebo 34, kde substituent R5 je -COR10, substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo arylová skupina.
  36. 36. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 33 alebo 34, kde substituent R6 je
    I
    -COR10, substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižšia alkylová skupina alebo arylová skupina.
  37. 37. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NRl3R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina alebo -NRl8R19, kde substituenty R18 a R19 sú nezávisle atóm vodíka alebo nižšia nesubstitúovaná alkylová skupina.
  38. 38. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R5 je 2-[(dietylamino)-2-hydroxyetyl]aminokarbonyl, 2-(/V-etyl-/V-2-hydroxyetylamino)etylaminokarbonyl, karboxymetylaminokarbonyl alebo 2-hydroxyetylaminokarbonyl.
  39. 39. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atóm vodíka a substituent R14 je nižšia alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, níž238 šia alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina alebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 sú nezávisle atóm vodíka alebo nižšia nesubstituovaná alkylová skupina.
  40. 40. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde substituent R6 je [2-(dietylamino)-2-hydroxy]etylaminokarbonyl, 2-(jV-etyl-Aľ-2-hydroxyetylamino)etylaminokarbonyl, karboxymetylaminokarbonyl alebo 2-hydroxyetylaminokarbonyl.
  41. 41. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1'(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O')NR13R14 alebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny.
  42. 42. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R5 je 2-(jV-hydroxy-?V-etylamino)etylaminokarbonyl alebo 2-[N+(O')(C2H5)2]etyl-aminokarbonyl.
  43. 43. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 '(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O')NR13R14 alebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nesubstituovanej nižšej alkylovej skupiny.
  44. 44. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R6 je 2-(V-hydroxy-N-etylaminojetylaminokarbonyl alebo 2-[N+(O')(C2H5)2]etylaminokarbonyl.
  45. 45. Zlúčenina alebo soľ podľa nárokov 37, 38, 41 alebo 42, kde substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo metylu a
    239 substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z metylu, atómu vodíka alebo fenylu.
  46. 46. Zlúčenina alebo soľ podľa ktoréhokoľvek z nárokov 39, 40, 43, 44 alebo 20 - 22, kde substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo metylu a substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z metylu, atómu vodíka alebo fenylu.
  47. 47. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 45, kde substituent R1 je atóm vodíka, substituent R2 je atóm vodíka, kyanoskupina, chlór, fluór alebo bróm, substituent R3 je atóm vodíka a substituent R4 je atóm vodíka.
  48. 48. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 46, kde substituent R1 je atóm vodíka, substituent R2 je kyanoskupina, chlór, fluór alebo bróm, substituent R3 je atóm vodíka a substituent R4 je atóm vodíka.
  49. 49. Zlúčenina alebo soľ podľa nároku 1, kde zlúčenina je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z
    240 alebo jej L-malátová soľ.
  50. 50. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje zlúčeninu alebo soľ podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič alebo excipient.
  51. 51. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje zlúčeninu alebo soľ podľa nároku 49 a farmaceutický prijateľný nosič alebo excipient.
  52. 52. Spôsob modulácie katalytickej aktivity proteínkinázy, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje uvedenie tejto proteínkinázy do kontaktu so zlúčeninou alebo soľou podľa nároku 1 alebo 49.
    241
  53. 53. Spôsob podľa nároku 52, vyznačujúci sa tým, že uvedená proteínkináza je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z receptorovej tyrozínkinázy, nereceptorovej tyrozínkinázy a serín-treonínkinázy.
    1 ' ·
  54. 54. Spôsob ošetrenia alebo prevencie poruchy súvisiacej s proteínkinázou v organizme, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva farmaceutického prípravku obsahujúceho zlúčeninu alebo soľ podľa nároku 50 alebo nároku 51 a farmaceutický prijateľný nosič alebo excipient do uvedeného organizmu.
  55. 55. Spôsob podľa nároku 54, vyznačujúci sa tým, že uvedená porucha súvisiaca s proteínkinázou je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z poruchy súvisiacej s receptorovou tyrozínkinázou, poruchy súvisiace s nereceptorovou tyrozínkinázou a poruchy súvisiace zo serín-treonínkinázou.
  56. 56. Spôsob podľa nároku 54, vyznačujúci sa tým, že porucha súvisiaca s uvedenou proteínkinázou je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z poruchy súvisiace s EGFR, poruchy súvisiace s PDGFR, poruchy súvisiace s IGFR a poruchy súvisiace s flk.
  57. 57. Spôsob podľa nároku 54, vyznačujúci sa tým, že uvedená porucha súvisiaca s proteínkinázou je rakovina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z karcinómu skvamóznych buniek, astrocytómu, Kaposiho sarkómu, glioblastómu, pľúcnej rakoviny, rakoviny močového mechúra, rakoviny hlavy a krku, melanómu, ovariálnej rakoviny, rakoviny prostaty, rakoviny prsníka, malobunkovej rakoviny pľúc, gliómu, kolorektálnej rakoviny, genitourinárnej rakoviny a gastrointestinálnej rakoviny.
    242
  58. 58. Spôsob podľa nároku 54, vyznačujúci sa tým, že uvedená porucha súvisiaca s proteínkinázou je rakovina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z cukrovky, autoimunitnej poruchy, hyperproliferatívnej poruchy, restenózy, fibrózy, psoriázy, von Hippelovej-Linadauovej choroby, osteoartritídy, reumatoidnej artritídy, angiogenézy, zápalovej poruchy, imunologickej poruchy a kardiovaskulárnej poruchy.
  59. 59- Spôsob podľa nároku 54, vyznačujúci sa tým, že uvedený organizmus je ľudský.
  60. 60. Medziprodukt všeobecného vzorca (II):
    kde substituent R5 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
    substituent R6 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej skupiny a -C(O)R10;
    substituent R7 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10;
    substituenty R6 a R7 môžu byť spojené dohromady za vzniku skupiny vybranej zo skupiny pozostávajúcej z -(CH2)4-, -(CH2)j- a -(CH2)6-; za
    243 predpokladu, že aspoň jeden zo substituentov R5, R6 alebo R7 musí byť -C(O)R10;
    substituent R10 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(Rl ’)(CH2)nR12 a -NR13R14;
    i . 1 substituent R11 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka a alkylovej skupiny;
    substituent R12 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -NRI3R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylovej a heteroarylovej skupiny;
    substituenty R13 a R14 sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, alkylovej, kyanoalkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny; alebo substituenty R13 a R14 môžu byť spojené dohromady za vzniku heterocykloskupiny;
    substituent R15 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
    substituent R17 je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylovej, cykloalkylovej, arylovej a heteroarylovej skupiny a n je 1, 2, 3 alebo 4.
SK1326-2002A 2000-02-15 2001-02-15 Inhibítory proteínkináz na báze pyrolom substituovaného 2-indolinónu, farmaceutický prípravok s ich obsahom a ich použitie SK287142B6 (sk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18271000P 2000-02-15 2000-02-15
US21642200P 2000-07-06 2000-07-06
US24353200P 2000-10-27 2000-10-27
PCT/US2001/004813 WO2001060814A2 (en) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK13262002A3 true SK13262002A3 (sk) 2003-03-04
SK287142B6 SK287142B6 (sk) 2010-01-07

Family

ID=27391578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1326-2002A SK287142B6 (sk) 2000-02-15 2001-02-15 Inhibítory proteínkináz na báze pyrolom substituovaného 2-indolinónu, farmaceutický prípravok s ich obsahom a ich použitie

Country Status (43)

Country Link
US (4) US6573293B2 (sk)
EP (1) EP1255752B1 (sk)
JP (1) JP3663382B2 (sk)
KR (1) KR100713960B1 (sk)
CN (1) CN1329390C (sk)
AR (1) AR034118A1 (sk)
AT (1) ATE369359T1 (sk)
AU (2) AU2001239770B2 (sk)
BE (1) BE2010C009I2 (sk)
BG (1) BG65764B1 (sk)
BR (2) BRPI0108394B8 (sk)
CA (1) CA2399358C (sk)
CO (1) CO5280092A1 (sk)
CR (2) CR20120007A (sk)
CY (3) CY1108032T1 (sk)
CZ (1) CZ303705B6 (sk)
DE (3) DE122008000002I1 (sk)
DK (1) DK1255752T3 (sk)
EA (1) EA005996B1 (sk)
ES (1) ES2290117T3 (sk)
FR (1) FR08C0002I2 (sk)
HK (1) HK1051188A1 (sk)
HR (1) HRP20020751B1 (sk)
HU (1) HU228979B1 (sk)
IL (1) IL151127A0 (sk)
IS (1) IS2491B (sk)
LT (1) LTC1255752I2 (sk)
LU (2) LU91407I2 (sk)
ME (1) ME00415B (sk)
MX (1) MXPA02008021A (sk)
MY (1) MY130363A (sk)
NL (2) NL300332I2 (sk)
NO (4) NO325532B1 (sk)
NZ (1) NZ520640A (sk)
PE (1) PE20011083A1 (sk)
PL (1) PL211834B1 (sk)
PT (1) PT1255752E (sk)
RS (1) RS50444B (sk)
SI (1) SI1255752T1 (sk)
SK (1) SK287142B6 (sk)
TW (1) TWI306860B (sk)
UA (1) UA73976C2 (sk)
WO (1) WO2001060814A2 (sk)

Families Citing this family (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6569868B2 (en) 1998-04-16 2003-05-27 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US20040226056A1 (en) * 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
MXPA01007099A (es) 1999-01-13 2002-03-27 Univ New York State Res Found Metodo novedoso para disenar inhibidores de la proteina cinasa.
AR034118A1 (es) * 2000-02-15 2004-02-04 Sugen Inc Compuestos de 2-indolinonas sustituidas con pirroles inhibidoras de proteinquinasas; sus composiciones farmaceuticas e intermediarios de sintesis
US7030219B2 (en) 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
WO2001094312A2 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Sugen, Inc. Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors
CA2414468A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
EP1506962B1 (en) 2000-10-20 2008-07-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Nitrogen-containing aromatic heterocycles
EP1349852A2 (en) * 2000-12-20 2003-10-08 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones
AR042586A1 (es) * 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
EP1247809A3 (en) * 2001-03-30 2003-12-17 Pfizer Products Inc. Triazine compounds useful as sorbitol dehydrogenase inhibitors
US6599902B2 (en) 2001-05-30 2003-07-29 Sugen, Inc. 5-aralkysufonyl-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
WO2003002109A2 (en) * 2001-06-29 2003-01-09 Ab Science Use of tyrosine kinase inhibitors for treating autoimmune diseases
AR038957A1 (es) * 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
DK3168218T3 (en) 2001-08-15 2019-01-14 Pharmacia & Upjohn Co Llc Crystalline comprising an L-malic acid salt of N- [2- (DIETHYLAMINO) ETHYL] -5 - [(5-FLUOR-1,2-DIHYDRO-2-OXO-3H-INDOL-3-YLIDE) METHYL] -2,4 -DIMETHYL-1H-PYRROL-3-CARBOXAMIDE FOR USE AS A MEDICINE
JP2005506982A (ja) 2001-09-10 2005-03-10 スージェン・インコーポレーテッド キナーゼ阻害剤としての３−（４，５，６，７−テトラヒドロインドール−２−イルメチリデン）−２−インドリノン誘導体
CA2462950A1 (en) * 2001-10-10 2003-04-17 Sugen, Inc. 3-[4-(substituted heterocyclyl)-pyrrol-2-ylmethylidene]-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
WO2003035621A1 (en) * 2001-10-22 2003-05-01 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors, methods for designing them, and methods of using them
US20030080191A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Allen Lubow Method and apparatus for applying bar code information to products during production
TWI259081B (en) * 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
US6797825B2 (en) 2001-12-13 2004-09-28 Abbott Laboratories Protein kinase inhibitors
AU2002366245A1 (en) * 2001-12-17 2003-06-30 International Barcode Corporation Double-sided bar code doubling as a single bar code
US20050131733A1 (en) * 2001-12-17 2005-06-16 Allen Lubow Sealable individual bar coded packets
CA2470480C (en) 2001-12-27 2010-12-14 Theravance, Inc. Indolinone derivatives useful as protein kinase inhibitors
AU2003216282A1 (en) 2002-02-15 2003-09-09 Pharmacia And Upjohn Company Llc Process for preparing indolinone derivatives
AU2003233576A1 (en) * 2002-05-17 2003-12-02 Sugen, Inc. Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals
ITMI20021620A1 (it) * 2002-07-23 2004-01-23 Novuspharma Spa Composto ad ativita' antitumorale
WO2004016211A2 (en) * 2002-08-08 2004-02-26 Vanderbilt University Pi3k antagonists as radiosensitizers
AU2003259713A1 (en) * 2002-08-09 2004-02-25 Theravance, Inc. Oncokinase fusion polypeptides associated with hyperproliferative and related disorders, nucleic acids encoding the same and methods for detecting and identifying the same
US20040121407A1 (en) * 2002-09-06 2004-06-24 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis
HN2003000272A (es) * 2002-09-10 2008-07-29 Pharmacia Italia Spa Formulaciones que comprenden un compuesto de indolinona
CA2506546A1 (en) * 2002-11-15 2004-06-17 Exelixis, Inc. Kinase modulators
AR042042A1 (es) * 2002-11-15 2005-06-08 Sugen Inc Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular
US7452913B2 (en) * 2003-02-24 2008-11-18 Pharmacia & Upjohn Company Polymorphs of pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US20040209937A1 (en) * 2003-02-24 2004-10-21 Sugen, Inc. Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds
EA010727B1 (ru) 2003-02-26 2008-10-30 Суджен, Инк. Аминогетероарильные соединения в качестве ингибиторов протеинкиназ
US20040266843A1 (en) * 2003-03-07 2004-12-30 Sugen, Inc. Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)
US7157577B2 (en) * 2003-03-07 2007-01-02 Sugen Inc. 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors
EP1604665B1 (en) * 2003-03-10 2011-05-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. C-kit kinase inhibitor
US20050043233A1 (en) 2003-04-29 2005-02-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combinations for the treatment of diseases involving cell proliferation, migration or apoptosis of myeloma cells or angiogenesis
DE10334582A1 (de) * 2003-07-28 2005-02-24 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid
WO2005023765A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method for catalyzing amidation reactions by the presence of co2
RU2319702C2 (ru) * 2003-10-02 2008-03-20 Фармация Энд Апджон Компани Ллс Негигроскопическая кристаллическая малеатная соль 5-[(z)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3h-индол-3-илиден)метил]-n-[(2s)-2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил]-2,4-диметил-1h-пиррол-3-карбоксамида, фармацевтическая композиция и способ лечения рака
PL1680140T3 (pl) * 2003-10-16 2011-11-30 Imclone Llc Inhibitory receptora-1 czynnika wzrostu fibroblastów i związane z nim sposoby leczenia
JP4890255B2 (ja) 2003-11-07 2012-03-07 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 改良された薬物特性を有するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩
CN100450998C (zh) 2003-11-11 2009-01-14 卫材R&D管理有限公司 脲衍生物的制备方法
CA2547066A1 (en) * 2003-11-26 2005-06-16 The Scripps Research Institute Advanced indolinone based protein kinase inhibitors
US20050171182A1 (en) * 2003-12-11 2005-08-04 Roger Briesewitz Methods and compositions for use in the treatment of mutant receptor tyrosine kinase driven cellular proliferative diseases
US20050152943A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Medtronic Vascular, Inc. Medical devices to treat or inhibit restenosis
WO2005118543A1 (ja) * 2004-06-03 2005-12-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. キナーゼ阻害薬およびその用途
EP1765313A2 (en) 2004-06-24 2007-03-28 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Compounds for immunopotentiation
SE0401790D0 (sv) * 2004-07-07 2004-07-07 Forskarpatent I Syd Ab Tamoxifen response in pre- and postmenopausal breast cancer patients
US20060009510A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method of synthesizing indolinone compounds
CA2578066C (en) * 2004-08-26 2011-10-11 Pfizer Inc. Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
WO2006030826A1 (ja) 2004-09-17 2006-03-23 Eisai R & D Management Co., Ltd. 医薬組成物
CN100432071C (zh) * 2004-11-05 2008-11-12 中国科学院上海药物研究所 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途
GT200500321A (es) 2004-11-09 2006-09-04 Compuestos y composiciones como inhibidores de proteina kinase.
NZ561138A (en) * 2005-03-23 2009-06-26 Pfizer Prod Inc Anti-CTLA4 antibody and indolinone combination therapy for treatment of cancer
EP2444419A1 (en) 2005-04-26 2012-04-25 Pfizer Inc. P-Cadherin antibodies
MX2007014087A (es) * 2005-05-12 2008-02-07 Pfizer Combinaciones y procedimientos para usar un compuesto de indolinona.
DK1922307T3 (da) 2005-05-18 2012-04-02 Array Biopharma Inc Heterocykliske inhibitorer af MEK og fremgangsmåder til anvendelse heraf
CA2609353C (en) 2005-05-23 2015-04-28 Novartis Ag Crystalline and other forms of 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-quinolin-2-one lactic acid salts
BRPI0611419A2 (pt) * 2005-05-26 2010-09-08 Scripps Research Inst composto, sal, tautÈmero ou pró-fármaco, método para a modulação da atividade catalìtica de uma proteìna cinase e processo para a sìntese de uma pirrolil-indolinona
US20100105031A1 (en) * 2005-08-01 2010-04-29 Esai R & D Management Co., Ltd. Method for prediction of the efficacy of vascularization inhibitor
WO2007015578A1 (ja) 2005-08-02 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を検定する方法
JP5161777B2 (ja) 2005-09-07 2013-03-13 アムジェン フレモント インク． アクチビン受容体様キナーゼ−１に対するヒトモノクローナル抗体
US20080275101A1 (en) 2005-09-19 2008-11-06 Pfizer Inc. Solid Salt Forms Of A Pyrrole Substituted 2-Indolinone
JPWO2007052849A1 (ja) 2005-11-07 2009-04-30 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質とｃ−ｋｉｔキナーゼ阻害物質との併用
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
CN101389331A (zh) * 2005-12-29 2009-03-18 斯克里普斯研究学院 基于吲哚满酮的氨基酸衍生物的蛋白激酶抑制剂
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101007801A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的2－二氢吲哚酮衍生物、其制法与医药上的用途
AR060358A1 (es) 2006-04-06 2008-06-11 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolinas para la inhibicion de pdk 1
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
WO2007124288A1 (en) 2006-04-19 2007-11-01 Novartis Ag Indazole compounds and methods for inhibition of cdc7
UA91129C2 (ru) 2006-05-09 2010-06-25 Пфайзер Продактс Инк. Производные циклоалкиламинокислот и фармацевтическая композиция, которая их содержит
CN101443009A (zh) * 2006-05-18 2009-05-27 卫材R&D管理有限公司 针对甲状腺癌的抗肿瘤剂
DE102006024834B4 (de) * 2006-05-24 2010-07-01 Schebo Biotech Ag Neue Indol-Pyrrol-Derivate und deren Verwendungen
US20090203693A1 (en) * 2006-06-29 2009-08-13 Eisai R & D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for liver fibrosis
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
CA2656836A1 (en) 2006-07-13 2008-01-17 Zymogenetics, Inc. Interleukin 21 and tyrosine kinase inhibitor combination therapy
CL2007002225A1 (es) 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
AR062207A1 (es) 2006-08-04 2008-10-22 Takeda Pharmaceutical Derivados de imidazopiridazina inhibidores de quinasas utiles para prevenir y/o tratar el cancer.
RU2445312C2 (ru) 2006-08-23 2012-03-20 Кудос Фармасьютиклз Лимитед ПРОИЗВОДНЫЕ 2-МЕТИЛМОРФОЛИН ПИРИДО-, ПИРАЗО- И ПИРИМИДО-ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ mTOR
CN101511793B (zh) * 2006-08-28 2011-08-03 卫材R&D管理有限公司 针对未分化型胃癌的抗肿瘤剂
AU2007294686B2 (en) 2006-09-15 2013-10-31 Equinox Sciences, Llc Kinase inhibitor compounds
BRPI0718029A2 (pt) 2006-11-06 2013-11-26 Supergen Inc Derivados de imidazo(1,2-b)piridazina e pirazolo(1,5-a)pirimidina e seu uso como inibidores da proteína cinase
CN101535302A (zh) * 2006-11-06 2009-09-16 株式会社泰丽巴镠斯 新型羟基吲哚衍生物
ATE547411T1 (de) 2006-12-04 2012-03-15 Jiangsu Simcere Pharmaceutical R & D Co Ltd 3-pyrrolo-cyclohexylen-2-dihydroindolinonderiva e und anwendungen davon
JP5319306B2 (ja) 2007-01-29 2013-10-16 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 未分化型胃癌治療用組成物
MX2009008386A (es) 2007-02-06 2009-10-16 Pfizer Derivados de 2-amino-5,7-dihidro-6h-pirrolo[3,4-d] pirimidina como inhibidores de proteinas de choque termico-90 para tratar cancer.
US8044056B2 (en) 2007-03-20 2011-10-25 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Adenine compound
US20090004213A1 (en) * 2007-03-26 2009-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Combination therapy using active immunotherapy
US20090042906A1 (en) * 2007-04-26 2009-02-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods for treating cancers associated with constitutive egfr signaling
WO2008138184A1 (fr) 2007-05-14 2008-11-20 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co.Ltd. Dérivés de pyrrolo-azacycles, leur procédé de fabrication et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinases
WO2008145398A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Pfizer Italia S.R.L. 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors
JP5352476B2 (ja) 2007-06-05 2013-11-27 武田薬品工業株式会社 キナーゼ阻害剤としての二環式複素環化合物
US8324395B2 (en) 2007-08-23 2012-12-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound and use thereof
US20090062368A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Protia, Llc Deuterium-enriched sunitinib
US8299106B2 (en) * 2007-09-06 2012-10-30 Boston Biomedical, Inc. Compositions of kinase inhibitors and their use for treatment of cancer and other diseases related to kinases
CA2701057C (en) 2007-10-11 2015-03-24 Astrazeneca Ab Pyrrolo[2,3-d]pyrimidin derivatives as protein kinase b inhibitors
CN101848895B (zh) 2007-11-09 2013-10-23 卫材R&D管理有限公司 血管新生抑制物质和抗肿瘤性铂络合物的组合使用
CA2699306A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib hemi-l-malate, polymorphs and preparation thereof, polymorphs of racemic sunitinib malate, compositins containing sunitinib base and malic acid and preparation thereof
US20100256392A1 (en) * 2007-11-21 2010-10-07 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
WO2009074862A1 (en) * 2007-12-12 2009-06-18 Medichem S.A. Polymorphic forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone
MX2010006800A (es) 2007-12-19 2010-10-05 Genentech Inc 5-anilinoimidazopiridinas y metodos de uso de las mismas.
JP2011506560A (ja) 2007-12-20 2011-03-03 ノバルティス アーゲー Ｐｉ３キナーゼ阻害剤として用いられるチアゾール誘導体
NZ586575A (en) 2007-12-21 2012-03-30 Genentech Inc Azaindolizines and methods of use
MX2010008187A (es) * 2008-01-29 2010-08-10 Eisai R&D Man Co Ltd Uso combinado de inhibidor de angiogenesis y taxano.
EP2113248A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2-,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US20100310668A1 (en) * 2008-02-13 2010-12-09 Ratiopharm Gmbh Pharmaceutical compositions comprising n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide
EP2090306A1 (en) 2008-02-13 2009-08-19 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
CN101255154B (zh) * 2008-02-18 2011-09-07 靳广毅 一种取代的2-吲哚啉酮衍生物和制备方法及其应用
WO2009104021A2 (en) * 2008-02-21 2009-08-27 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs and processes for their preparation
EP2098521A1 (en) 2008-03-06 2009-09-09 Ratiopharm GmbH Crystal forms of N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrolle-3-carboxamide and methods for their prepparation
US20090247767A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-01 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Processes for preparing sunitinib and salts thereof
WO2009128083A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Natco Pharma Limited Novel polymorphic forms of sunitinib base
US8158656B2 (en) * 2008-05-16 2012-04-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
WO2009140928A1 (zh) * 2008-05-23 2009-11-26 上海医药工业研究院 二氢吲哚酮衍生物
WO2009154697A2 (en) * 2008-05-28 2009-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Disc-1 pathway activators in the control of neurogenesis
EP2313371B1 (en) * 2008-06-13 2012-08-15 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
KR20110036055A (ko) * 2008-06-23 2011-04-06 낫코 파마 리미티드 고순도의 수니티닙 및 이의 약학적으로 허용가능한 염의 개선된 제조 방법
EP2138167A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
WO2009156837A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Medichem, S.A. Amorphous form of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
CN102137866A (zh) * 2008-06-30 2011-07-27 赛林药物股份有限公司 羟吲哚化合物
AU2009269149B2 (en) 2008-06-30 2016-03-17 Mesoblast, Inc. Treatment of eye diseases and excessive neovascularization using a combined therapy
DE102008031038A1 (de) 2008-06-30 2009-12-31 Alexander Priv.-Doz. Dr. Dömling Sutent zur Anwendung in der Organtransplantation
EP2318364A2 (en) * 2008-07-02 2011-05-11 Generics [UK] Limited Preparation of 3-pyrrole substituted 2-indolinone derivatives
US20110257237A1 (en) * 2008-07-10 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Process for the preparation of crystalline forms of sunitinib malate
KR20110036588A (ko) 2008-07-24 2011-04-07 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 수니티닙 아세테이트 및 이의 다형을 통한 수니티닙 말레이트의 제조 방법
EP2342195B1 (en) 2008-07-24 2014-09-10 Medichem, S.A. Crystalline forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
WO2010017541A2 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
AU2009288730B2 (en) 2008-08-25 2013-06-20 Amplimmune, Inc. Compositions of PD-1 antagonists and methods of use
AU2009286521A1 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs of sunitinib and processes for their preparation
US20110223188A1 (en) * 2008-08-25 2011-09-15 Solomon Langermann Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer
WO2010023473A2 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel crystalline form and processes for its preparation
KR20110066927A (ko) * 2008-09-05 2011-06-17 임페리얼 이노베이션스 리미티드 생체 내 영상화제로서 사용하기 위한 이사틴 유도체
KR20110057244A (ko) 2008-09-19 2011-05-31 메디뮨 엘엘씨 Ｄｌｌ4에 대한 항체 및 이의 용도
EP2350056A1 (en) * 2008-10-10 2011-08-03 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole subsituted 2-indolinone malate salt
EP2181991A1 (en) * 2008-10-28 2010-05-05 LEK Pharmaceuticals D.D. Novel salts of sunitinib
EP2186809A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-19 LEK Pharmaceuticals D.D. New crystal form of sunitinib malate
US20100222371A1 (en) * 2008-11-20 2010-09-02 Children's Medical Center Corporation Prevention of surgical adhesions
JP5579619B2 (ja) 2008-12-01 2014-08-27 武田薬品工業株式会社 複素環化合物およびその用途
JO3101B1 (ar) 2008-12-02 2017-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات بنزوثيازول كعوامل مضادة للسرطان
UY32351A (es) 2008-12-22 2010-07-30 Astrazeneca Ab Compuestos de pirimidinil indol para uso como inhibidores de atr
EP2379595A2 (en) 2008-12-23 2011-10-26 AstraZeneca AB Targeted binding agents directed to 5 1 and uses thereof
EP2373643A4 (en) 2009-01-02 2013-08-07 Hetero Research Foundation NEW SUNITINIB MALATE POLYMORPHS
PL2387563T5 (pl) 2009-01-16 2023-03-13 Exelixis, Inc. Sól jabłczanowa N-(4-{[6,7-bis(metyloksy)chinolin-4-ylo]oksy}fenylo-N′-(4-fluorofenylo)cykloproano-1,1-dikarboksyamidu oraz jej krystaliczne postaci do leczenia raka
SG2014009138A (en) 2009-02-05 2014-03-28 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
CN102307875A (zh) 2009-02-09 2012-01-04 苏伯俭股份有限公司 吡咯并嘧啶基axl激酶抑制剂
US9265764B2 (en) * 2009-02-27 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Uses of chemicals to modulate GSK-3 signaling for treatment of bipolar disorder and other brain disorders
TW201035088A (en) 2009-02-27 2010-10-01 Supergen Inc Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene DNA methyltransferase inhibitors
ES2529205T3 (es) 2009-03-13 2015-02-17 Cellzome Limited Derivados de pirimidina como inhibidores de mTOR
WO2010108503A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Life & Brain Gmbh Promotion of neuronal integration in neural stem cell grafts
WO2010118986A1 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Cellzome Limited Fluoro substituted pyrimidine compounds as jak3 inhibitors
WO2010120386A1 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
EP2255792A1 (en) 2009-05-20 2010-12-01 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions for N-[2-(Diethylamino)ethyl]5-[(fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indole-3-ylidene) methyl]-2,4-dimenthyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8211901B2 (en) 2009-05-22 2012-07-03 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2264027A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-22 Ratiopharm GmbH Process for the preparation of N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8389580B2 (en) 2009-06-02 2013-03-05 Duke University Arylcyclopropylamines and methods of use
CN101906076B (zh) 2009-06-04 2013-03-13 深圳微芯生物科技有限责任公司 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
WO2011004200A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Generics [Uk] Limited Novel pyrrole derivatives
FR2948940B1 (fr) * 2009-08-04 2011-07-22 Servier Lab Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2011029807A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Cellzome Limited Ortho substituted pyrimidine compounds as jak inhibitors
CA2774634A1 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Ranbaxy Laboratories Limited Salts of sunitinib
WO2011048082A1 (en) 2009-10-20 2011-04-28 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as jak inhibitors
US20120271056A1 (en) 2009-11-12 2012-10-25 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form i of l-malic acid salt of sunitinib
US8916716B2 (en) 2009-11-19 2014-12-23 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form II of L-malic acid salt of sunitinib
SI3279215T1 (sl) 2009-11-24 2020-07-31 Medimmune Limited Usmerjena vezavna sredstva proti B7-H1
WO2011068233A1 (en) 2009-12-03 2011-06-09 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Imidazoquinolines which act via toll - like receptors (tlr)
WO2011095802A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Generics [Uk] Limited Hplc method for analyzing sunitinib
WO2011100325A2 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Sicor Inc. Polymorphs of sunitinib salts
AU2011215900A1 (en) 2010-02-10 2012-07-26 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
JP5770751B2 (ja) 2010-02-22 2015-08-26 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン系のＰＩ３Ｋデルタ阻害化合物および使用方法
WO2011104555A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Generics [Uk] Limited Novel process
EP2542536B1 (en) 2010-03-04 2015-01-21 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mtor inhibitors
EP2542550A1 (en) 2010-03-04 2013-01-09 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the direct preparation of malic acid salt of sunitinib
CN102858739A (zh) * 2010-03-10 2013-01-02 斯索恩有限公司 酰胺化吡咯甲酸酯化合物的方法
AU2011228765A1 (en) 2010-03-18 2012-10-11 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of malic acid salt of sunitinib
US9162981B2 (en) 2010-03-23 2015-10-20 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
WO2011128699A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Novel process
MX2012012328A (es) 2010-04-30 2013-05-06 Cellzome Ltd Compuestos pirazol como inhibidores de jak.
WO2011138565A1 (fr) 2010-05-05 2011-11-10 Biorebus Association pharmaceutique contenant l'acide lipoïque, l'acide hydroxycitrique et une somatostatine a titre de principes actifs
EP2392324A1 (en) 2010-06-01 2011-12-07 Societe De Coordination De Recherches Therapeutiques Rhenium complexes and their pharmaceutical use
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
US9012458B2 (en) 2010-06-25 2015-04-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
WO2012000970A1 (en) 2010-07-01 2012-01-05 Cellzome Limited Triazolopyridines as tyk2 inhibitors
WO2012006503A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
US9040545B2 (en) 2010-08-20 2015-05-26 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as selective JAK inhibitors
US8426418B2 (en) 2010-08-27 2013-04-23 CollabRx Inc. Method to treat melanoma in BRAF inhibitor-resistant subjects
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
WO2012058780A1 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Scinopharm (Kunshan) Biochemical Technology Co., Ltd. Processes for the preparation of 3-(pyrrol-2-yl)methylene)-2-pyrrolones using 2-silyloxy-pyrroles
WO2012059941A1 (en) * 2010-11-04 2012-05-10 Ind-Swift Laboratories Limited Process for preparation of sunitinib malate and salts thereof
EP2638018A1 (en) 2010-11-09 2013-09-18 Cellzome Limited Pyridine compounds and aza analogues thereof as tyk2 inhibitors
JP2014503500A (ja) 2010-11-18 2014-02-13 シンタ ファーマスーティカルズ コーポレーション 低酸素状態に基づく酸素感受性薬剤による治療に適した被験体の事前選択
CA2818612C (en) 2010-11-19 2020-12-29 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
TWI410425B (zh) 2010-12-03 2013-10-01 Lilly Co Eli 唑并［５，４－ｂ］吡啶－５－基化合物
US9827326B2 (en) 2010-12-23 2017-11-28 Nektar Therapeutics Polymer-sunitinib conjugates
JP6009457B2 (ja) 2010-12-23 2016-10-19 ネクター セラピューティクス ポリマー−デスエチルスニチニブコンジュゲート
AP2013007043A0 (en) 2011-01-31 2013-08-31 Novartis Ag Novel heterocyclic derivatives
SG191965A1 (en) 2011-02-15 2013-08-30 Immunogen Inc Methods of preparation of conjugates
CA2827171C (en) 2011-02-17 2019-04-09 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Fak inhibitors
EP2675794B1 (en) 2011-02-17 2019-02-13 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Selective fak inhibitors
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
US8630703B2 (en) 2011-03-09 2014-01-14 Technion Research & Development Foundation Limited Treatment utilizing hydrophobic weak bases chemotherapeutic agents and illumination
CN102115469A (zh) * 2011-03-21 2011-07-06 浙江大学 吲哚啉-2-酮类衍生物的制备和用途
JP2014510122A (ja) 2011-04-04 2014-04-24 セルゾーム リミテッド ｍＴＯＲ阻害剤としてのジヒドロピロロピリミジン誘導体
SG193527A1 (en) 2011-04-08 2013-10-30 Beta Pharma Inc New indolinone protein kinase inhibitors
CA2828946C (en) 2011-04-18 2016-06-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012143320A1 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Cellzome Limited (7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-yl)amine compounds as jak3 inhibitors
CN102898402B (zh) * 2011-04-26 2016-01-20 北京大学 一种苯并异硒唑酮修饰的吡咯甲酸酯取代的吲哚酮类化合物及其应用
EP3444363B1 (en) 2011-06-03 2020-11-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for prediciting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
EP3812387A1 (en) 2011-07-21 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
US20140179664A1 (en) 2011-07-28 2014-06-26 Cellzome Limited Heterocyclyl Pyrimidine Analogues As JAK Inhibitors
WO2013017479A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013017480A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
EP2739252A4 (en) 2011-08-05 2015-08-12 Forsight Vision4 Inc SMALL MOLECULE ADMINISTRATION USING AN IMPLANTABLE THERAPEUTIC DEVICE
EP2760863A1 (en) 2011-09-20 2014-08-06 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as kinase inhibitors
US9175011B2 (en) 2011-09-21 2015-11-03 Cellzone Limited Morpholino substituted urea or carbamate derivatives as MTOR inhibitors
ES2592219T3 (es) 2011-10-07 2016-11-28 Cellzome Limited Derivados de {(4-(4-morfolino-dihidrotieno[3,4-d]pirimidin-2-il)aril}urea o carbamato como inhibidores de mTOR
CN102499917B (zh) 2011-10-25 2014-12-17 澳门大学 吲哚酮类化合物在制备神经保护药物中的应用
JP6059731B2 (ja) 2011-10-28 2017-01-11 ノバルティス アーゲー 新規プリン誘導体および疾患の処置におけるその使用
CN103130774B (zh) * 2011-11-22 2016-06-22 齐鲁制药有限公司 具有酪氨酸激酶抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN103127096B (zh) * 2011-12-02 2015-11-25 杨子娇 吡咯基取代的吲哚类化合物在治疗青光眼病的应用
US20130178520A1 (en) 2011-12-23 2013-07-11 Duke University Methods of treatment using arylcyclopropylamine compounds
AU2012357038B2 (en) 2011-12-23 2016-05-12 Cellzome Limited Pyrimidine-2,4-diamine derivatives as kinase inhibitors
CN102491932A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 天津科技大学 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用
ES2709110T3 (es) 2012-03-23 2019-04-15 Laurus Labs Ltd Un proceso mejorado para la preparación de sunitinib y sus sales de adición de ácido
WO2013158367A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Annji Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclopropanecarboxylate esters of purine analogues
PL399027A1 (pl) 2012-04-27 2013-10-28 Instytut Farmaceutyczny Sposób otrzymywania N-[2-(dietylamino)etylo]-5-formylo-2,4-dimetylo-1H-pirolo-3-karboksyamidu o wysokiej czystosci i jego zastosowanie do wytwarzania sunitynibu
CN102653521B (zh) * 2012-04-27 2014-08-06 首都师范大学 吲哚-2-酮的哌嗪硫代甲酰肼衍生物及其制备方法和用途
EP3563865A3 (en) 2012-05-04 2019-12-04 Pfizer Inc Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
CA2872526A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Novartis Ag Dosage regimen for a pi-3 kinase inhibitor
BR112014030278A2 (pt) 2012-06-08 2017-06-27 Sutro Biopharma Inc anticorpo, e, composição.
EP3135690A1 (en) 2012-06-26 2017-03-01 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
US9238644B2 (en) 2012-08-17 2016-01-19 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited VEGFR3 inhibitors
EP2887965A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
KR102182800B1 (ko) 2012-08-31 2020-11-25 서트로 바이오파마, 인크. 아지도 기를 포함하는 변형된 아미노산
WO2014041349A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Tetrahydropyran-4-ylethylamino- or tetrahydropyranyl-4-ethyloxy-pyrimidines or -pyridazines as isoprenylcysteincarboxymethyl transferase inhibitors
WO2014045101A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Cellzome Gmbh Tetrazolo quinoxaline derivatives as tankyrase inhibitors
JP6243918B2 (ja) 2012-10-16 2017-12-06 トレロ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｐｋｍ２調節因子およびそれらの使用方法
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
CA2889866A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Eisai R&D Management Co., Ltd. Amorphous form of quinoline derivative, and method for producing same
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
EP2961435B1 (en) 2013-02-28 2019-05-01 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
EP2970206A1 (en) * 2013-03-13 2016-01-20 Boston Biomedical, Inc. 3-(aryl or heteroaryl) methyleneindolin-2-one derivatives as inhibitors of cancer stem cell pathway kinases for the treatment of cancer
US9968603B2 (en) 2013-03-14 2018-05-15 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
CA2905993C (en) 2013-03-14 2022-12-06 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Substituted 4-amino-pyrimidinyl-2-amino-phenyl derivatives and pharmaceutical compositions thereof for use as jak2 and alk2 inhibitors
AR095443A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Fundación Centro Nac De Investig Oncológicas Carlos Iii Heterociclos condensados con acción sobre atr
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
CN104119321B (zh) * 2013-04-28 2017-09-08 齐鲁制药有限公司 二氢吲哚酮衍生物的二马来酸盐及其多晶型物
NZ714049A (en) 2013-05-14 2020-05-29 Eisai R&D Man Co Ltd Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of endometrial cancer subjects to lenvatinib compounds
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
FR3008411B1 (fr) * 2013-07-12 2015-07-03 Servier Lab Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent
DK3039424T3 (da) 2013-08-28 2020-08-31 Crown Bioscience Inc Taicang Genekspressionssignaturer, der er prædiktive for et individs respons på en multikinaseinhibitor, og fremgangsmåder til anvendelse af disse
EP3055298B1 (en) 2013-10-11 2020-04-29 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CA2838585A1 (en) 2013-10-18 2015-04-18 Hari Babu Matta An ascorbic acid salt of sunitinib
US9604968B2 (en) 2013-10-18 2017-03-28 Sun Pharmaceutical Industries Limited Pure crystalline Form II of L-malic acid salt of sunitinib and processes for its preparation
PE20171142A1 (es) 2013-11-01 2017-08-10 Pfizer Vectores para expresion de antigenos asociados a prostata
US20170000778A1 (en) 2013-12-06 2017-01-05 Emmanuelle di Tomaso Dosage regimen for an alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
CN104829596B (zh) * 2014-02-10 2017-02-01 石家庄以岭药业股份有限公司 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
CN103923014A (zh) * 2014-05-05 2014-07-16 宁夏宝马药业有限公司 环肌酸制备方法
EP3177289A4 (en) 2014-08-08 2018-03-21 Forsight Vision4, Inc. Stable and soluble formulations of receptor tyrosine kinase inhibitors, and methods of preparation thereof
CN106660964B (zh) 2014-08-28 2021-09-03 卫材R&D管理有限公司 高纯度喹啉衍生物及其生产方法
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
WO2016114322A1 (ja) 2015-01-13 2016-07-21 国立大学法人京都大学 筋萎縮性側索硬化症の予防及び／又は治療剤
US20180028662A1 (en) 2015-02-25 2018-02-01 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for Suppressing Bitterness of Quinoline Derivative
KR20170122809A (ko) 2015-03-04 2017-11-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
EP3611506B1 (en) 2015-04-20 2021-11-17 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling
WO2016184793A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating a patient with vegfr inhibitor-resistant metastatic renal cell carcinoma
CA2985804A1 (en) 2015-05-18 2016-11-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs having increased bioavailability
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
RU2729936C2 (ru) 2015-06-16 2020-08-13 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Противораковое средство
US10568887B2 (en) 2015-08-03 2020-02-25 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies for treatment of cancer
EA037327B1 (ru) 2015-09-22 2021-03-12 Грейбуг Вижн, Инк. Соединения и композиции для лечения глазных расстройств
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
JP2018532750A (ja) 2015-11-02 2018-11-08 ノバルティス アーゲー ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤の投薬レジメン
CA3004886A1 (en) 2015-11-12 2017-05-18 Graybug Vision, Inc. Aggregating microparticles for medical therapy
CN109069664B (zh) 2016-01-27 2022-05-13 苏特罗生物制药公司 抗cd74抗体偶联物，包含抗cd74抗体偶联物的组合物以及抗cd74抗体偶联物的使用方法
JP2019508405A (ja) 2016-02-08 2019-03-28 ヴィトリサ セラピューティクス， インコーポレイテッド 改良された硝子体内半減期を有する組成物およびその使用
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
CN107459519A (zh) 2016-06-06 2017-12-12 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶哌啶环衍生物及其制备方法和应用
US10870694B2 (en) 2016-09-02 2020-12-22 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating B cell disorders
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
EA201991071A1 (ru) 2016-10-28 2019-11-29 Композиции и способы для лечения ezh2-опосредованного рака
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
KR102495436B1 (ko) 2016-12-05 2023-02-02 에이프로스 테라퓨틱스, 인크. 산성 기를 함유하는 피리미딘 화합물
US10786502B2 (en) 2016-12-05 2020-09-29 Apros Therapeutics, Inc. Substituted pyrimidines containing acidic groups as TLR7 modulators
EP3551185A4 (en) 2016-12-08 2021-07-14 Icahn School of Medicine at Mount Sinai COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF CDK4 / 6 MEDIATED CANCER
CA3047557A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Profiling peptides and methods for sensitivity profiling
CN106916143B (zh) * 2017-03-14 2019-09-27 哈尔滨医科大学 一种预防和治疗冠心病的药物及其应用
CA3056923A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Graybug Vision, Inc. Drugs and compositions for the treatment of ocular disorders
EP3621654A4 (en) 2017-05-10 2021-02-17 Graybug Vision, Inc. PROLONGED-RELEASE MICROPARTICLES AND SUSPENSIONS OF THESE INTENDED FOR MEDICAL THERAPY
US20200207859A1 (en) 2017-07-26 2020-07-02 Sutro Biopharma, Inc. Methods of using anti-cd74 antibodies and antibody conjugates in treatment of t-cell lymphoma
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
WO2019055909A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 Sutro Biopharma, Inc. ALPHA ANTI-FOLATE ANTIBODY-RECEPTOR CONJUGATES AND USES THEREOF
WO2019075367A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Tolero Pharmaceuticals, Inc. PKM2 ACTIVATORS IN COMBINATION WITH OXYGEN REACTIVE SPECIES FOR THE TREATMENT OF CANCER
NL2019801B1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Univ Leiden Delivery vectors
EP3762381A4 (en) 2018-03-06 2022-01-05 Icahn School of Medicine at Mount Sinai SERINE THREONINE KINASE (AKT) DEGRADATION / INTERRUPTION COMPOUNDS AND METHODS OF USE
EP3539536A1 (en) 2018-03-15 2019-09-18 MH10 Spolka z ograniczona odpowiedzialnoscia A pharmaceutical composition of sunitinib or its salt thereof in its polymorphic form i
WO2020216450A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising amorphous sunitinib
CN112513031A (zh) 2018-06-04 2021-03-16 阿普罗斯治疗公司 可用于治疗与tlr7调节相关的疾病的含酸性基团的嘧啶化合物
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
GB201810581D0 (en) 2018-06-28 2018-08-15 Ctxt Pty Ltd Compounds
CN112512597A (zh) 2018-07-26 2021-03-16 大日本住友制药肿瘤公司 用于治疗与acvr1表达异常相关的疾病的方法以及用于此的acvr1抑制剂
US20220047716A1 (en) 2018-09-17 2022-02-17 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
AU2019391097A1 (en) 2018-12-04 2021-05-20 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. CDK9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
AU2019407426A1 (en) 2018-12-21 2021-07-22 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and kinase inhibitor
KR20210146290A (ko) 2019-02-12 2021-12-03 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 헤테로시클릭 단백질 키나제 억제제를 포함하는 제제
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
CN114364798A (zh) 2019-03-21 2022-04-15 欧恩科斯欧公司 用于治疗癌症的Dbait分子与激酶抑制剂的组合
US11712433B2 (en) 2019-03-22 2023-08-01 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising PKM2 modulators and methods of treatment using the same
EP3962951A1 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
CA3137916A1 (en) 2019-05-06 2020-11-12 Ichan School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of hpk1
CA3152674A1 (en) 2019-08-31 2021-03-04 Etern Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. Pyrazole derivatives for fgfr inhibitor and preparation method thereof
CN114761006A (zh) 2019-11-08 2022-07-15 Inserm(法国国家健康医学研究院) 对激酶抑制剂产生耐药性的癌症的治疗方法
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN111233841A (zh) * 2020-03-17 2020-06-05 湖北扬信医药科技有限公司 一种舒尼替尼有关物质及其制备方法和用途
WO2023278424A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 The Regents Of The University Of California Methods for treating and ameliorating t cell related diseases
CN113717159A (zh) * 2021-09-16 2021-11-30 中国药科大学 吲哚酮类化合物及其药物组合物、制备方法及用途
WO2023081923A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Frequency Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024017372A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种吲哚酮衍生物及其应用

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL230368A (sk) 1957-08-19
DE878539C (de) 1939-08-17 1953-06-05 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen
BE507136A (sk) 1950-11-18
BE553661A (sk) 1955-12-23
NL96047C (sk) 1956-06-08
NL251055A (sk) 1959-04-29
FR1398224A (fr) 1964-05-06 1965-05-07 Ici Ltd Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile
US3308134A (en) 1965-10-22 1967-03-07 Mcneilab Inc Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones
US3551571A (en) 1967-05-19 1970-12-29 Endo Lab Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones
US3564016A (en) 1968-03-07 1971-02-16 Endo Lab Method of decarbonylation
US4070366A (en) 1968-06-12 1978-01-24 Canadian Patents & Development Limited Alkylation process
FR1599772A (sk) 1968-09-17 1970-07-20
US3922163A (en) 1970-01-30 1975-11-25 Upjohn Co Organic compounds and process
US3715364A (en) 1970-12-28 1973-02-06 Merck & Co Inc Nitroimidazole carboxamides
DE2159361A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159362A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159360A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159363A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Antimikrobielle mittel
GB1384599A (en) 1972-05-04 1975-02-19 Colgate Palmolive Co Coloured detergent compositions
US3880871A (en) 1973-09-27 1975-04-29 Squibb & Sons Inc Isothiocyanophenyl substituted imidazoles
US4002643A (en) 1975-06-27 1977-01-11 Mcneil Laboratories, Inc. Preparation of β-acyl pyrroles
US4002749A (en) 1975-08-12 1977-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Substituted indolinones
US4053613A (en) 1975-09-17 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones
DE2855306A1 (de) 1978-12-21 1980-07-10 Boehringer Sohn Ingelheim Mittel zur senkung der herzfrequenz
GR73560B (sk) 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4343923A (en) 1980-08-07 1982-08-10 Armstrong World Industries, Inc. Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound
CH646956A5 (de) 1981-12-15 1984-12-28 Ciba Geigy Ag Imidazolide.
EP0095285A1 (en) 1982-05-21 1983-11-30 Sumitomo Chemical Company, Limited N-acylimidazoles, their production and use
US4493642A (en) 1982-12-27 1985-01-15 Bogdon Glendon J Orthodontic device and associated orthodontic method
DE3310891A1 (de) 1983-03-25 1984-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4489089A (en) 1983-04-06 1984-12-18 American Cyanamid Company Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides
EP0124482B1 (de) 1983-04-29 1989-11-08 Ciba-Geigy Ag Neue Imidazolide und deren Verwendung als Härter für Polyepoxidverbindungen
DE3415138A1 (de) 1984-04-21 1985-10-31 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide
DE3426419A1 (de) 1984-07-18 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4560700A (en) 1985-02-08 1985-12-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents
JPH078851B2 (ja) 1985-07-29 1995-02-01 鐘淵化学工業株式会社 ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
WO1993012786A1 (en) 1986-07-10 1993-07-08 Howard Harry R Jr Indolinone derivatives
US4853404A (en) 1986-10-13 1989-08-01 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Phenoxyacetic acid derivatives composition and use
JP2539504B2 (ja) 1987-03-11 1996-10-02 鐘淵化学工業株式会社 ヒドロキシスチレン誘導体
US5202341A (en) 1987-03-11 1993-04-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity
US5089516A (en) 1987-03-11 1992-02-18 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity
US5043348A (en) 1987-04-24 1991-08-27 Cassella Aktiengesellschaft Pyrrolealdehydes, their preparation and their use
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
DE3808071A1 (de) 1988-03-11 1989-09-21 Basf Ag Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen
US4868304A (en) 1988-05-27 1989-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Synthesis of nitrogen heterocycles
CA1339784C (en) 1988-06-23 1998-03-31 Shinya Inoue Pyrrolecarboxylic acid derivatives
JPH06104658B2 (ja) 1988-06-23 1994-12-21 三菱化成株式会社 ピロールカルボン酸誘導体
GB8816944D0 (en) 1988-07-15 1988-08-17 Sobio Lab Compounds
DE3824658A1 (de) 1988-07-15 1990-01-18 Schering Ag N-hetaryl-imidazolderivate
US5084280A (en) 1988-12-15 1992-01-28 Chapman Chemical Company Wood preservation composition and method
DE3902439A1 (de) 1989-01-27 1990-08-02 Basf Ag Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern
US5047554A (en) 1989-04-18 1991-09-10 Pfizer Inc. 3-substituted-2-oxindole derivatives
DE69031649T2 (de) 1989-07-25 1998-02-26 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Oxoindolderivate
US5258357A (en) 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
CA2032421A1 (en) 1989-12-20 1991-06-21 Mitsubishi Chemical Corporation Pyrrolealdehyde derivative
GB9004483D0 (en) 1990-02-28 1990-04-25 Erba Carlo Spa New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation
CA2012634A1 (en) 1990-03-20 1991-09-20 Hassan Salari Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5196446A (en) 1990-04-16 1993-03-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
US5480883A (en) 1991-05-10 1996-01-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase
ES2108120T3 (es) 1991-05-10 1997-12-16 Rhone Poulenc Rorer Int Compuestos bis arilicos y heteroarilicos mono- y biciclicos que inhiben tirosina quinasa receptora de egf y/o pdgf.
GB9115160D0 (en) 1991-07-12 1991-08-28 Erba Carlo Spa Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation
US5124347A (en) 1991-07-31 1992-06-23 Warner-Lambert Co. 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents
HU219131B (hu) 1991-10-18 2001-02-28 Monsanto Co. Módszer és fungicid készítmény növények torsgombabetegségének gátlására és a hatóanyagok
US5389661A (en) 1991-12-05 1995-02-14 Warner-Lambert Company Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties
US5322950A (en) 1991-12-05 1994-06-21 Warner-Lambert Company Imidazole with angiotensin II antagonist properties
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
FR2689397A1 (fr) 1992-04-01 1993-10-08 Adir Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments.
DE4211531A1 (de) 1992-04-06 1993-10-07 Cassella Ag Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten
FR2694004B1 (fr) 1992-07-21 1994-08-26 Adir Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5565324A (en) 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
JP3507124B2 (ja) 1993-05-26 2004-03-15 塩野義製薬株式会社 ベンジリデン誘導体の製造法
DE59402281D1 (de) 1993-06-28 1997-05-07 Bayer Ag Massefärben von Kunststoffen
US5332736A (en) 1993-11-01 1994-07-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles
US5610173A (en) 1994-01-07 1997-03-11 Sugen, Inc. Formulations for lipophilic compounds
GB9507298D0 (en) 1995-04-07 1995-05-31 Pharmacia Spa Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
US5786488A (en) 1996-11-13 1998-07-28 Sugen, Inc. Synthetic methods for the preparation of indolyquinones
JP3246712B2 (ja) 1995-11-15 2002-01-15 株式会社トクヤマ エテニルアミド化合物の製造方法
EP0788890A1 (en) 1996-02-06 1997-08-13 Agfa-Gevaert N.V. Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording
CA2206201A1 (en) 1996-05-29 1997-11-29 Yoshiaki Isobe Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use
ES2208935T3 (es) 1996-08-01 2004-06-16 Merckle Gmbh Acidos acil-pirrol-dicarboxilicos y acidos acil-indol-dicarboxilicos, asi como sus derivados como inhibidores de la fosfolipasa a2 citosolica.
ES2239393T3 (es) * 1997-05-07 2005-09-16 Sugen, Inc. Derivados de 2-indolinona utilizados como moduladores de la actividad de la proteina-quinasa.
US6133305A (en) 1997-09-26 2000-10-17 Sugen, Inc. 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity
CA2314156C (en) * 1998-05-29 2010-05-25 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US6462072B1 (en) 1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives
CN1526448A (zh) 1998-12-14 2004-09-08 ���ռ�ҩ��ɷ����޹�˾ 用于治疗***直肠病的药物和方法
TR200101860T2 (tr) * 1998-12-17 2001-12-21 F.Hoffmann-La Roche Ag Sikline bağlı kinaz inhibitörleri olarak 4-alkenil (ve alkinil) oksidoller
US6284894B1 (en) 1998-12-18 2001-09-04 Nycomed Imaging As Preparation of allylic aromatic compounds
AU760964B2 (en) * 1998-12-31 2003-05-22 Sugen, Inc. 3-heteroarylidenyl-2-indolinone compounds for modulating protein kinase activityand for use in cancer chemotherapy
JP5336686B2 (ja) * 1999-11-24 2013-11-06 スージェン， インク． 遊離酸または遊離塩基としてイオン化可能な医薬品のための処方
MXPA02006263A (es) * 1999-12-22 2004-02-26 Sugen Inc Metodos de modulacion de la funcion de la cinasa de tirosina c-kit de la proteina con compuestos de indolinona.
AR034118A1 (es) * 2000-02-15 2004-02-04 Sugen Inc Compuestos de 2-indolinonas sustituidas con pirroles inhibidoras de proteinquinasas; sus composiciones farmaceuticas e intermediarios de sintesis
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
CA2414468A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
EP1349852A2 (en) * 2000-12-20 2003-10-08 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones

Also Published As

Publication number Publication date
DK1255752T3 (da) 2007-11-26
HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
DE122010000004I1 (de) 2010-04-15
KR100713960B1 (ko) 2007-05-02
HRP20020751B1 (en) 2011-01-31
NO20023831L (no) 2002-10-15
YU61402A (sh) 2005-07-19
CN1439005A (zh) 2003-08-27
ATE369359T1 (de) 2007-08-15
CR20120007A (es) 2012-02-24
BRPI0117360A2 (pt) 2012-01-24
HRP20020751A2 (en) 2004-12-31
NO2010002I1 (no) 2010-03-08
EA005996B1 (ru) 2005-08-25
BG107078A (bg) 2003-04-30
NO2019005I1 (no) 2019-02-11
DE60129794T2 (de) 2007-12-06
TWI306860B (en) 2009-03-01
PE20011083A1 (es) 2001-10-26
JP2003523340A (ja) 2003-08-05
LTPA2008002I1 (lt) 2019-02-25
ME00415B (me) 2011-10-10
CA2399358C (en) 2006-03-21
UA73976C2 (uk) 2005-10-17
LU91407I9 (sk) 2018-12-28
KR20030003229A (ko) 2003-01-09
NL300332I1 (nl) 2008-03-03
NO20023831D0 (no) 2002-08-13
BRPI0117360B1 (pt) 2018-11-13
CA2399358A1 (en) 2001-08-23
MXPA02008021A (es) 2004-04-05
LU91657I2 (fr) 2010-05-03
NO325532B1 (no) 2008-06-09
EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
NO2008019I2 (no) 2011-10-17
AU2001239770B2 (en) 2006-01-05
CR20120009A (es) 2012-02-07
IL151127A0 (en) 2003-04-10
LTC1255752I2 (lt) 2019-08-26
AU3977001A (en) 2001-08-27
JP3663382B2 (ja) 2005-06-22
MY130363A (en) 2007-06-29
NO2010002I2 (no) 2010-12-06
NL300332I2 (nl) 2008-04-01
US20050176802A1 (en) 2005-08-11
LU91407I2 (fr) 2008-03-10
HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
NO2008019I1 (no) 2009-01-12
US7572924B2 (en) 2009-08-11
BRPI0108394B8 (pt) 2021-05-25
SI1255752T1 (sl) 2007-12-31
RS50444B (sr) 2010-03-02
WO2001060814A2 (en) 2001-08-23
BRPI0117360B8 (pt) 2021-07-06
HU228979B1 (en) 2013-07-29
US7125905B2 (en) 2006-10-24
EP1255752A2 (en) 2002-11-13
CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
FR08C0002I1 (sk) 2008-03-21
PT1255752E (pt) 2007-10-17
CZ303705B6 (cs) 2013-03-27
US20020156292A1 (en) 2002-10-24
ES2290117T3 (es) 2008-02-16
CN1329390C (zh) 2007-08-01
NL300430I1 (nl) 2010-03-01
HK1051188A1 (en) 2003-07-25
CY2008004I1 (el) 2009-11-04
DE60129794D1 (de) 2007-09-20
IS2491B (is) 2009-01-15
AR034118A1 (es) 2004-02-04
PL211834B1 (pl) 2012-06-29
BG65764B1 (bg) 2009-10-30
NL300430I2 (nl) 2010-04-01
BR0108394A (pt) 2004-06-22
BE2010C009I2 (sk) 2020-01-30
CY2010004I1 (el) 2012-01-25
US20070010569A1 (en) 2007-01-11
BRPI0108394B1 (pt) 2018-12-11
WO2001060814A3 (en) 2002-01-24
US20040063773A1 (en) 2004-04-01
CY2010004I2 (el) 2012-01-25
DE122008000002I1 (de) 2008-04-17
CY1108032T1 (el) 2011-04-06
FR08C0002I2 (fr) 2009-01-02
EP1255752B1 (en) 2007-08-08
IS6501A (is) 2002-08-13
CY2008004I2 (el) 2009-11-04
SK287142B6 (sk) 2010-01-07
NZ520640A (en) 2005-04-29
PL361209A1 (en) 2004-09-20
CO5280092A1 (es) 2003-05-30
US6573293B2 (en) 2003-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6573293B2 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
KR100884858B1 (ko) 단백질 키나제 억제제로서의3-(4-아미도피롤-2-일메틸리덴)-2-인돌리논 유도체
AU2001239770A1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
AU2002247133A1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
US6797725B2 (en) Prodrugs of a 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
JP2003534323A (ja) ３−（ピロール−２−イルメチリデン）−２−インドリノン誘導体のマンニッヒ塩基プロドラッグ

Legal Events

Date Code Title Description
SPCF Filing of an spc

Free format text: PRODUCT NAME: SUNITINIB MALAT; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/06/347/001 - EU/1/06/347/003 20060719

Spc suppl protection certif: 86 5004-2010

Filing date: 20100409

Free format text: PRODUCT NAME: TOCERANIB; REGISTRATION NO/DATE: EU/2/09/100/001 - EU/2/09/100/003 20090923

Spc suppl protection certif: 84 5005-2010

Filing date: 20100409

SPCG Grant of an spc

Free format text: PRODUCT NAME: SUNITINIB MALAT; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/06/347/001 - EU/1/06/347/003 20060719

Spc suppl protection certif: 86 5004-2010

Filing date: 20100409

Expiry date: 20210216

Extension date: 20210719

Free format text: PRODUCT NAME: TOCERANIB; REGISTRATION NO/DATE: EU/2/09/100/001 - EU/2/09/100/003 20090923

Spc suppl protection certif: 84 5005-2010

Filing date: 20100409

Expiry date: 20210216

Extension date: 20240923

SPCY Application to extend an spc

Free format text: PRODUCT NAME: SUNITINIB MALAT; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/06/347/001 - EU/1/06/347/003 20060724

Spc suppl protection certif: 86 5004-2010

Filing date: 20190212

SPCZ Extension of validity of an spc

Free format text: PRODUCT NAME: SUNITINIB MALAT; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/06/347/001 - EU/1/06/347/003 20060724

Spc suppl protection certif: 86 5004-2010

Filing date: 20190212

Extension date: 20220124

TC4A Change of owner's name

Owner name: PHARMACIA & UPJOHN COMPANY, KALAMAZOO, MI, US

Effective date: 20200807

Owner name: SUGEN LLC, NEW YORK, NEW YORK, US

Effective date: 20200807

MK4A Patent expired

Expiry date: 20210215

SPCE Expiry of an spc

Spc suppl protection certif: 86 5004-2010

Effective date: 20220124