CZ20023081A3 - Inhibitory proteinkináz na bázi pyrrolem substituovaného 2-indolinonu - Google Patents

Inhibitory proteinkináz na bázi pyrrolem substituovaného 2-indolinonu Download PDF

Info

Publication number
CZ20023081A3
CZ20023081A3 CZ20023081A CZ20023081A CZ20023081A3 CZ 20023081 A3 CZ20023081 A3 CZ 20023081A3 CZ 20023081 A CZ20023081 A CZ 20023081A CZ 20023081 A CZ20023081 A CZ 20023081A CZ 20023081 A3 CZ20023081 A3 CZ 20023081A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hydrogen
group
alkyl
compound
aryl
Prior art date
Application number
CZ20023081A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ303705B6 (cs
Inventor
Peng Cho Tang
Todd Miller
Xiaoyuan Li
Li Sun
Chung Chen Wei
Shahrzad Shirazian
Congxin Liang
Tomas Vojkovsky
Asaad S. Nematalla
Michael Hawley
Original Assignee
Sugen, Inc.
Pharmacia & Upjohn Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27391578&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ20023081(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sugen, Inc., Pharmacia & Upjohn Company filed Critical Sugen, Inc.
Publication of CZ20023081A3 publication Critical patent/CZ20023081A3/cs
Publication of CZ303705B6 publication Critical patent/CZ303705B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Description

Oblast techniky
Předložený vynález se týká určitých 3-pyrrolem substituovaných 2-indolinonů, které modulují aktivitu proteinkináz („PK“). Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou proto účinné při ošetření poruch spojených s abnormální aktivitou PK. Dále se předložený vynález týká farmaceutických přípravků zahrnujících tyto sloučeniny, způsobů ošetření onemocnění pomocí farmaceutických přípravků zahrnujících tyto sloučeniny a způsobů jejich přípravy.
Dosavadní stav techniky
Následující popis má pouze informativní charakter a neklade si za cíl být známým stavem techniky předloženého vynálezu.
PK jsou enzymy, které katalyzují fosforylaci hydroxyskupin na tyrosinových, serinových a threoninových zbytcích proteinů. Důsledky této zdánlivě jednoduché aktivity jsou ohromné; buněčný růst, diferenciace a proliferace, tzn. prakticky všechny aspekty života buňky tím či oním způsobem závisejí na aktivitě PK. Mimoto abnormální aktivita PK souvisí se spoustou poruch sahajícícch od relativně život neohrožujících onemocnění, jako je psoriáza, až po exterémně virulentní onemocnění, jako je glioblastom (rakovina mozku).
PK je možno výhodně rozdělit do dvou skupin, na proteinové tyrosinkinázy (PTK) a serin-threoninkinázy (STK).
Jedním z hlavních aspektů aktivity PTK je jejich účast na receptorech růstového faktoru. Receptory růstového faktoru jsou proteiny buněčného povrchu. Pokud se na ně naváže ligand růstového faktoru, přecházejí receptory růstového faktoru na aktivní formu, která interaguje s proteiny na vnitřním povrchu buněčné membrány. To vede k fosforylaci na tyrosinových zbytcích receptoru a dalších proteinech a k tvorbě komplexů s různými cytoplazmatickými signálními molekulami uvnitř buňky, které pak ovlivňují velký počet buněčných odpovědí, jako je buněčné dělení (proliferace), buněčná diferenciace, buněčný růst, exprese metabolických efektů do extracelulárního mikroprostředí atd. Pro detailnější • · « · informace viz Schlessinger and Ullrich, Neuron, 9:303 - 391 (1992), na jejichž práci je zde odkazováno, včetně veškerých obrázků, jako by plně byla uvedena zde.
Receptory růstového faktoru s aktivitou PTK jsou známy jako receptorové tyrosinkinázy („RTK“). Zahrnují velkou rodinu transmembránových receptorů s rozličnými biologickými aktivitami. Dosud bylo identifikováno alespoň 19 různých podskupin RTK. Příklad těchto RTK zahrnuje podskupinu označovanou jako „HER“ RTK, která zahrnuje EGFR (receptorů epiteliálního růstového faktoru), HER2, HER3 a HER4. Tyto RTK se sestávají z extracelulární glykosylované vazebné domény ligandu, transmembránové domény a intracelulámí cytoplazmatické katalytické domény, která může fosforylovat tyrosinové zbytky na proteinech.
Další podrodina RTK se sestává z receptorů inzulínu (IR), receptorů inzulínového typu růstového faktoru I (IGF-IR) a příbuzného receptorů receptorů inzulínu (IRR). IR a IGF-1F interagují s inzulínem, IGF-I a IGF-II za vzniku heterotetrameru dvou zcela extracelulárně glykosylovaných a podjednotek a dvou β podjednotek, které protínají buněčnou membránu a obsahují tyrosinkinázovou doménu.
Třetí podrodina RTK se označuje jako skupina receptorů růstového faktoru odvozeného od destiček („PDGF“), která zahrnuje PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, c-kit a cfms. Tyto receptory se sestávají z glykosylovaných extracelulárních domén složených z různého počtu kliček imunoglobulinového typu a intracelulámí domény, kde tyrosinkinázová doména je přerušena nepříbuznými aminokyselinovými sekvencemi.
Další skupinou, která v důsledku své podobnosti s podrodinou PDGFR je někdy zahrnována do posledně uvedené skupiny, je podrodina receptorů fetální jaterní kinázy („flk“). Předpokládá se, že tuto skupinu tvoří receptor obsahující doménu kinázového insertu pro fetální jaterní kinázu-1 (KDR/FLK-1, VEGF-R2), flk-IR, flk-4 a tyrosinkináza 1 typu fms (flt-1).
Dalším členem rodiny tyrosinkinázového receptorů růstového faktoru je podskupina receptorů fibroblastového růstového faktoru („FGF“). Tato skupina se sestává ze čtyř receptorů, FGFR1-4, a sedmi ligandů, FGF 1-7.1 když nejsou ještě plně definovány, lze říci, že se receptory skládají z glykosylované extracelulární domény obsahující různý počet kliček imunoglobulinového typu, a intracelulámí domény, ve které je tyrosinkinázová sekvence přerušena oblastmi nepříbuzných aminokyselinových sekvencí.
• · • 9 ·
Ještě dalším členem podskupiny tyrosinkinázového receptoru růstového faktoru je podskupina receptoru růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk („VEGF“). VEGF je dimemí glykoprotein podobný PDGF, nicméně má jiné biologické funkce a cílově buněčnou specifitu in vivo. Konkrétně se v současné době předpokládá, že má důležitou roli při vaskulogenezi a angiogenezi.
Úplný seznam známých podrodin RTK je popsán vPlowman et al., DN&P, 7(6): 334 - 339 (1994), na jejichž práci je zde odkazováno, včetně kterýchkoliv obrázků, jako by plně bylo uvedeno zde.
Kromě RTK také existuje rodina zcela intracelulámích PTK označovaná nereceptorové tyrosinkinázy („non-receptor tyrosin kinases“) nebo také „buněčné tyrosinkinázy“. Dále bude v popisu používána zkratka tohoto druhého označení, tzn. CTK. CTK neobsahují extracelulámí a transmembránové domény. Do současnosti bylo identifikováno 24 jednotlivých CTK zahrnujících (11) podrodin (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes, Fps, Fak, Jak a Ack). Podrodina Src je v současnosti tvořena největším počtem CTK a zahrnuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Lek, Blk, Hek, Fgr a Yrk. Podrobnější diskusi CTK poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025 - 2031, na jejichž práci je zde odkazováno, včetně kterýchkoliv obrázků, jako by plně bylo uvedeno zde.
Serin/threoninkinázy, STK, typu STK, jsou převážně intracelulámí, ačkoliv existuje několik receptorových kináz typu STK. STK jsou nejčastěji cytosolové kinázy, tzn. kinázy, které vykonávají svoji funkci v jiné části cytoplazmy než se nacházejí cytoplazmatické organely a cytoskelet. Cytosol je oblast v buňce, ve které se vyskytuje velké množství buněčné intermediámí metabolické a biosyntetické aktivity, např. syntéza proteinů na ribozómech probíhá v cytosolu.
Bylo zjištěno, že mnohé RTK, CTK a STK se podílejí se na četných patogenních stavech hostitele, včetně, výrazně, na rakovině. Další patogenní stavy související s PTK zahrnují, ale není to nikterak limitováno, psoriázu, hepatickou cirhózu, diabetes, angiogenezi, restenózu, oční onemocnění, revmatoidní artritidu a další zánětlivé poruchy, imunologické poruchy, např. autoimunnní choroba, kardiovaskulární onemocnění, např. ateroskleróza a různé renální poruchy.
Co se týče rakoviny, uvádějí se dvě hlavní zdokonalené hypotézy, jenž vysvětlují nadměrnou buněčnou proliferaci, která řídí vznik nádoru souvisejícího s funkcemi, o kterých je známo, že jsou regulovány PK. Předpokládá se, že maligní buněčný růst je výsledkem poruchy mechanizmu, která řídí buněčné dělení a/nebo diferenciaci. Bylo • · ·· · «· ·· ··· • · ·· 1 · · · · ••i. · ····· ··· * · · · ·
·..· ...............
zjištěno, že proteinové produkty mnoha protoonkogenů se podílejí na transdukčních dráhách signálu, které regulují buněčný růst a diferenciaci. Tyto proteinové produkty protoonkogenů zahrnují extracelulámí růstové faktory, transmembránové receptory růstového faktoru PTK (RTK), cytoplazmatické PTK (CTK) a cytosolové STK, vše je popisováno výše.
Vzhledem ke zřejmému vztahu mezi buněčnými aktivitami souvisejícími s PK a širokou škálou lidský poruch, není překvapením, že je vynakládáno velké úsilí identifikovat způsoby modulace aktivity PK. Některé z těchto záměrů také zahrnovaly biomimetické postupy využívající velké molekuly k identifikaci PD podílejících se na konkrétních buněčných procesech (např. mutantních ligandů, U.S. patentová přihláška č. 4,966,849), rozpustných receptorech a protilátkách (přihláška č. WO 94/10202; Kendall & Thomas, 1994, Proč. Naťl. Acad. Sci 90: 10705 - 09; Kim et al., 1993, Nátuře 362: 841 844), RNA ligandů (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 1045056; Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Cell 4: 358A; Kinsella, et al. 1992, Exp. Cell Res. 199: 56 - 62; Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448 - 57) a inhibitorech tyrosinkináz (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; U.S. patent č. 5,330,992; Mariani, et al., 1994, Proč. Am. Assoc. Cancer Res. 35:2268).
Kromě výše uvedeného byly v poslední době činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako inhibitory PK. Například bismonocyklické, bicyklické nebo heterocyklické arylové sloučeniny (PCT WO 92/20642) a vinylen-azaindolové deriváty (PCT WO 94/14808) a l-cyklopropyl-4-pyridylchinolony (U.S. č. 5,330,992) se obecně popisují jako tyrosinkinázové inhibitory. Styrylové sloučeniny (U.S. patent č. 5,217,999), styryl-substituované pyridylové sloučeniny (U.S. patent č. 5,302,606), některé chinazolinové deriváty (EP č. 0 566 266 Al), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03427), tricyklické polyhydroxylické sloučeniny (PCT WO 92/21660) a sloučeniny benzylfosfonové kyseliny (PCT WO 91/15495) se popisují jako sloučeniny pro použití jako inhibitory PTK pro použití při léčbě rakoviny.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se týká určitých 3-pyrrolem substituovaných 2-indolinonových sloučenin, které vykazují PK modulační schopnost, a tudíž jsou použitelné při ošetření poruch souvisejících s abnormální aktivitou PK.
V rámci jednoho aspektu se tedy předložený vynález týká 3-pyrrolem substituovaných 2-indolinonů obecného vzorce (I):
kde substituent R1 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové, cykloalkylové, arylové, heteroarylové a heteroalicyklické skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, kyanoskupiny, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arylové skupiny, heteroarylové skupiny,
-S(O)2NR13R14 a -SO2R2 (kde substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová, heteroarylová a heteroaralkylová skupina);
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, NR13R14, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, -NR13C(O)OR14 a -SO2R2 (kde substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová, heteroarylová a heteroaralkylová skupina);
substituent R4 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NR13R14;
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny, -C(O)R17 a-C(O)R10; nebo substituenty R6 a R7 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající se z -(Cld/h-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívající v tom, že alespoň jeden ze substituentů R5, R6 nebo R7 musí být -C(O)R10;
o Q substituenty R a R jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a arylové skupiny;
substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(Rn)(CH2)nR12 a -NR13R14;
substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny;
substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z -NR13R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -N^CfjR^R14, -N(OH)R13 a -NHC(O)Ra (kde substituent Ra je nesubstituovaná alkylová, halogenalkylová nebo aralkylová skupina);
substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, kyanoalkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylovéskupiny; nebo substituenty R13 a R14 mohou být spojeny dohromady za vzniku a heterocykloskupiny;
substituent R15 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14 a -C(O)NR13R14;
substituent R17 je vybrán ze skupiny sestávající se z alkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové skupiny;
substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová nebo heteroarylová skupina; a n a r jsou nezávisle 1,2, 3 nebo 4 ;
nebo nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.
Výhodně je substituent R1 vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové, cyclkoalkylové, arylové, heteroarylové, heteroalicyklické skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14-(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -S(O)2NR13R14;
• · substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14 a -NR13C(O)OR14;
substituent R4 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NR13R14;
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a-C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10;
substituenty R6 a R7 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající se z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívající v tom, že alespoň jeden ze substituentů R5, R6 nebo R7 musí být -C(O)R10;
substituenty R8 a R9 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a arylové skupiny;
substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(Rn)(CH2)nR12 a -NR13R14;
substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny;
substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z -NR13R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylové a heteroarylové skupiny;
substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny, cykloalkylové skupiny, arylové a heteroarylové skupiny;
substituenty R13 a R14 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající se z -(CH2)4-, -(CFfejs-, -(CIL^OÍCKbh- a (CH2)2N(CH3)(CH2)2-;
substituent R15 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14 a -C(O)NR13R14;
substituent R17 je vybrán ze skupiny sestávající se z alkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové skupiny; a : : i · :
·..· .i..........
n a r jsou nezávisle 1, 2, 3, nebo 4 ; nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.
Druhý aspekt předloženého vynálezu se týká farmaceutického přípravku obsahujícího jednu nebo více sloučenin obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přijatelný excipient.
Třetí aspekt předloženého vynálezu se týká způsobu ošetření onemocnění zprostředkovaných abnormální aktivitou proteinkináz, konkrétně receptorových tyrosinkináz (RTK), nereceptorových proteinových tyrosinkináz (CTK) a proteinových serin/threoninkináz (STK), v organizmu, zejména lidském, který zahrnuje podání farmaceutického přípravku obsahujícího sloučeninu obecného vzorce (I) do uvedeného organizmu. Taková onemocnění zahrnují, ale neomezují se na ně, například rakovinu, diabetes, hepatickou cirhózu, kardiovaskulární onemocnění, např. atherosklerózu, angiogenezi, imunologické onemocnění, např. autoimunitní onemocnění, a renální onemocnění.
Čtvrtý aspekt předloženého vynálezu se týká způsobů modulace katalytické aktivity PK, zejména receptorových tyrosinkináz (RTK), nereceptorových nereceptorových proteinových tyrosinkináz (CTK) a proteinových serin/threoninkináz (STK), sloučeninami podle předloženého vynálezu, které mohou být prováděny in viíro nebo in vivo. Konkrétně je receptorová proteinkináza, jejíž katalytická aktivita je modulována sloučeninou podle předloženého vynálezu, vybrána ze skupiny sestávající se z EGF, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1R, IRR, PDGFRa, PDGFR3, CSFIR, C-Kit, C-fms, Flk-IR, Flk4, KDR/Flk-1, Flt-1, FGFR-1R, FGFR-2R, FGFR-3R a FGFR-4R Buněčná tyrosinkináza, jejíž katalytická aktivita je modulována sloučeninou podle předloženého vynálezu, je vybrána ze skupiny sestávající se z Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack, Yes, Fyn, Lyn, Lek, Blk, Hek, Fgr a Yrk. Proteinová serin-threoninkináza, jejíž katalytická aktivita je modulována sloučeninou podle předloženého vynálezu je vybrána ze skupiny sestávající se z CDK2 a Raf.
Pátý aspekt předloženého vynálezu se týká použití sloučeniny obecného vzorce (I) při přípravě léčivého přípravku, který je použitelný při ošetření onemocnění zprostředkovaného abnormální aktivitou PK.
Šestý aspekt předloženého vynálezu se týká meziproduktu obecného vzorce (II):
*
ve kterém substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny, aryiové skupiny, heteroarylové skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10;
substituenty R6 a R7 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající se z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívající v tom, že alespoň jeden ze substituentů R5, R6 nebo R7 musí být -C(O)R10;
substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(Rn)(CH2)nR12 a -NR13R14;
substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny;
substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z -NR13R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, aryiové a heteroarylové skupiny;
substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny, kyanoalkylové skupiny, cykloalkylové skupiny, aryiové a heteroarylové skupiny; nebo substituent R13 a R14 mohou být spojeny dohromady za vzniku heterocyklové skupiny;
substituent R15 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
substituent R17 je vybrán ze skupiny sestávající se z alkylové skupiny, cykloalkylové skupiny, aryiové skupiny a heteroarylové skupiny; a nje 1,2, 3 nebo 4.
Výhodně jsou substituenty R5 nebo R6 ve sloučenině obecného vzorce (II) -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu;
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu, pokud substituent R6 je -COR10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu, pokud substituent R5 je -COR10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a arylové skupiny, výhodněji atomu vodíku, methylu nebo fenylu;
substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -N(Rn)(CH2)nR12 a -NR13R14;
substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu;
substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z -NR13R14;
substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku nebo alkylové skupiny; nebo substituenty R13 a R14 mohou být spojeny dohromady za vzniku heterocykloskupiny; a nje 1,2 nebo 3.
V rámci výše uvedených výhodných skupin zahrnují výhodnější skupiny meziproduktů, ve kterých substituenty R5, R6, R11, R12, R13 nebo R14 jsou nezávisle skupiny popsané ve sekci označené „výhodné skupiny“ uvedené níže.
Sedmý aspekt předloženého vynálezu se týká způsobů přípravy sloučenin obecného vzorce (I).
Na závěr se předložený vynález také týká indentifikace chemické sloučeniny, která moduluje katalytickou aktivitu proteinkinázy uvedením buněk exprimujících uvedenou proteinkinázu v kontakt se sloučeninou nebo solí podle předloženého vynálezu a následné monitorování účinku na uvedené buňky.
• · v
Detailní popis vynálezu
Definice
Pokud není uvedeno jinak, mají následující termíny používané při popisu a v patentových nárocích tento význam:
Termín „alkylová skupina“ se vztahuje na nasycený alifatický uhlovodíkový radikál zahrnující skupiny s lineárním nebo rozvětveným řetězcem mající 1 až 20 atomů uhlíku (pokaždé když je uvedeno číselné rozmezí, např. „1-20“, znamená to, že skupina, v tomto případě alkylová skupina, může obsahovat 1 atom uhlíku, 2 atomy uhlíku, 3 atomy uhlíku, atd. až 20 atomů uhlíku včetně). Alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku jsou označeny nižší alkylové skupiny. Pokud uvedené nižší alkylové skupiny nemají substituenty, pak jsou označovány jako nesubstituované nižší alkylové skupiny. Výhodněji je alkylová skupina alkylová skupina střední velikosti s 1 až 10 atomy uhlíku, např. methyl, ethyl, propyl, 2-propyl, «-butyl, zzo-butyl, ferc-butyl, pentyl, atd. Nejvýhodněji má nižší alkylová skupina 1 až 4 atomy uhlíku, např. methyl, ethyl, propyl, 2-propyl, «-butyl, zzo-butyl nebo ferc-butyl, atd. Alkylová skupina může být substituovaná nebo nesubstituovaná. Pokud je substituována, je substituent(y) výhodně jeden nebo více, výhodněji jeden až tři, nejvýhodněji jeden nebo dva substituent(y) nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkylová skupina, aryloxyskupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 atomy dusíku v kruhu, přičemž uhlíky v kruhu jsou případně substituovány jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5-ělenná heteroarylová skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z atomů dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy dusíku a uhlíku ve skupině jsou případně substituovány jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou • » ·· ·· • · · · · · ·
nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5- nebo 6-členná heteroalicyklická skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy uhlíku a dusíku (pokud je přítomen) ve skupině jsou případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, merkaptoskupina, (nesubstituovaná nižší alkyl)thioskupina, arylthioskupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, kyanoskupina, acylová skupina, thioacylová skupina, O-karbamylová skupina, 7V-karbamylová skupina, O-thiokarbamylová skupina, jV-thiokarbamylová skupina, C-amidoskupina, JV-amidoskupina, nitroskupina, JV-sulfon-amidoskupina, Ssulfon-amidoskupina, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nesubstituovaná nižší alkylové skupiny, trihalogenmethylu, nesubstituovaná (C3-C6) cykloalkylové skupiny, nesubstituované nižší alkenylové skupiny, nesubstituované nižší alkynylové a arylové skupiny případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina.
Výhodně je alkylová skupina substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, 5- nebo 6-členné heteroalicyklové skupiny mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy uhlíku a dusíku (pokud je přítomen) ve skupině jsou případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy uhlíku a dusíku ve skupině jsou případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 atomy dusíku v kruhu, přičemž uhlíky v kruhu jsou případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupiny, nebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nesubstituované nižší alkylové skupiny. Ještě výhodněji je alkylová skupina substituovaná jedním nebo dvěma substituenty, které jsou nezávisle jeden na druhém hydroxyskupina, dimethylaminoskupina, ethylaminoskupina, diethylaminoskupina, dipropylaminoskupina, pyrrolidinoskupina, piperidinoskupina, morfolinoskupina, piperazinoskupina, 4-nižší alkylpiperazinoskupina, fenyl, imidazolyl, pyridinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, oxazolyl, triazinyl apod.
Termín „cykloalkylová skupina“ se vztahuje na 3 až 8 členný čistě uhlíkatý monocyklický kruh, čistě uhlíkatý 5-ti/6-ti členný nebo 6-ti/6-ti členný kondenzovaný bicyklický kruh nebo multicyklický kondenzovaný kruh („kondenzovaný“ kruhový systém znamená, že každý kruh v systému sdílí dvojici sousedních atomů uhlíku s jiným kruhem v systému), kde jeden nebo více kruhů může obsahovat jednu nebo více dvojných vazeb, ale žádný z kruhů nemá kompletně konjugovaný π elektronový systém.
Příklady, ale neomezující, cykloalkylových skupin zahrnují cyklopropan, cyklobutan, cyklopentan, cyklopenten, cyklohexan, cyklohexadien, adamantan, cykloheptan, cykloheptatrien apod. Cykloalkylová skupina může být substituovaná nebo nesubstituovaná. Pokud je substituovaná, je substituent(y) výhodně jeden nebo více, výhodněji jeden nebo dva substituenty, nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, která nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, aryloxyskupina případně substituovaná jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, která nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 atomy dusíku v kruhu, přičemž uhlíky v kruhu jsou případně substituovány jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, ·
nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy uhlíku a dusíku skupiny jsou případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, kde nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5-ti nebo 6-ti členná heteroalicyklická skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, atomy uhlíku a dusíku (pokud je přítomen) ve skupině jsou případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma skupinami, kde nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, merkaptoskupina, (nesubstituovaná nižší alkyl)thioskupina, arylthioskupina případně substituovaná jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, kde nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, kyanoskupina, acylová skupina, thioacylová skupina, O-karbamyl, ÝV-karbamyl, O-thiokarbamyl, TV-thiokarbamyl, C-amidoskupina, TV-amidoskupina, nitroskupina, TV-sulfon-amidoskupina, ů-sulfon-amidoskupina, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O-, a -NR18R19 mají význam definovaný výše.
Termín „alkenylová skupina“ se vztahuje na nižší alkylovou skupinu definovanou v předloženém vynálezu sestávající se z alespoň dvou atomů uhlíku a alespoň jedné dvojné vazby uhlík-uhlík. Reprezentativní příklady zahrnují, ale neomezují se na ně, ethenyl, 1propenyl, 2-propenyl, 1-, 2- nebo 3-butenyl apod.
Termín „alkynylová skupina“ se vztahuje na nižší alkylovou skupinou definovanou v předloženém vynálezu sestávající se z alespoň dvou atomů uhlíku a alespoň jedné trojné vazby typu uhlík-uhlík. Reprezentativní příklady zahrnují, ale neomezují se na ně, ethynyl,
1-propynyl, 2-propynyl, 1-, 2- nebo 3-butynyl apod.
Termín „arylová skupina“ se vztahuje na čistě uhlíkaté monocyklické nebo kondenzované polycyklické (tzn. ktruhy, které sdílejí sousední páry atomů uhlíku) skupiny mající 1 až 12 atomů uhlíku s kompletně konjugovaným π elektronovým systémem. Příklady arylových skupin, aniž se na ně omezují, zahrnují fenyl, naftalenyl a anthracenyl. Arylové skupiny mohou být substituované nebo nesubstituované. Pokud jsou substituované, je substituovaná skupina(y) výhodně jedna nebo více, výhodněji jedna, dvě nebo tři, ještě výhodněji jedna nebo dvě, nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituované nižší alkyl)thioskupiny, kyanoskupiny, acylové skupiny, thioacylové skupiny, Okarbamylu, TV-karbamylu, C-thiokarbamylu, JV-thiokarbamylu, C-amidoskupiny, Namidoskupiny, nitroskupiny, V-sulfon-amidoskupiny, ú-sulfon-amidoskupiny, RlsS(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, RI8C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 mají shora definovaný význam. Výhodně je arylová skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny, V-amidoskupiny, mono nebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny nebo TV-sulfonamidoskupiny.
Termín „heteroarylová skupina“ se vztahuje na monocyklou nebo kondenzovanou klruhovou (tzn. kruhy, jež společně sdílejí sousedící páry atomů uhlíku) skupinu mající 5 až 12 atomů v kruhu a obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy v kruhu vybrané z N, O nebo S a zbývající atomy v kruhu jsou C a navíc mající a kompletně konjugovaný π elektronový systém. Příklady nesubstituovaných heteroarylových skupin zahrnují, ale není to na ně omezeno, pyrrol, furan, thiofen, imidazol, oxazol, thiazol, pyrazol, pyridin, pyrimidin, chinolin, izochinolin, purin a karbazol. Heteroarylové skupiny mohou být substituované nebo nesubstituované. Pokud jsou substituované, pak substituovaná skupina(y) je výhodně jedna nebo více, výhodněji jedna, dvě nebo tři, ještě výhodněji jedna nebo dvě, nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituované nižší alkyl)thioskupiny, kyanoskupiny, acylové skupiny, thioacylové skupiny, O-karbamylu, TV-karbamylu, Othiokarbamylu, V-thiokarbamylu, C-amidoskupiny, V-amidoskupiny, nitroskupiny, Nsulfon-amidoskupiny, ú-sulfon-amidoskupiny, R18S(O)-, R18S(O)2-,
-C(O)OR18, R18C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 mají shora definovaný význam. Výhodně je heteroarylová skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny, ŤV-amidoskupiny, mono nebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny nebo V-sulfon-amidoskupiny.
• · «· » · · · · · * a · · · » · · e · · · * · · «· ··· «· · « ·· · · ·
Termín „heteroalicyklický“ se vztahuje na skupinu monocyklického kruhu nebo kondenzovaného kruhu(ů) mající 5 až 9 atomů v kruhu, kde jeden nebo dva atomy v kruhu jsou heteroatomy vybrané z N, O nebo S(O)n (kde n je celé číslo od 0 do 2) a zbývající atomy v kruhu jsou C. Kruhy mohou mít také jednu nebo více dvojných vazeb. Nicméně kruhy nemají kompletně konjugovaný π elektronový systém. Příklady nesubstituovaných heteroalicyklických skupin zahrnují, ale není to nikterak limitováno, pyrrolidinoskupinu, piperidinoskupinu, piperazinoskupinu, morfolinoskupinu, thiomorfolinoskupinu, homopiperazinoskupinu, atd. Heteroalicyklický kruh může být substituovaný nebo nesubstituovaný. Pokud je substituovaný, pak substituovaná skupina(y) je výhodně jedna nebo více, výhodněji jedna, dvě nebo tři, ještě výhodněji jedna nebo dvě, nezávisle vybrána ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituované nižší alkylové skupiny) thioskupiny, kyanoskupiny, acylové skupiny, thioacylové skupiny, O-karbamylu, JV-karbamylu, Othiokarbamylu,
JV-thiokarbamylu, C-amidoskupiny, V-amidoskupiny, nitroskupiny,
V-sulfon-amidoskupiny, 5-sulfon-amidoskupiny, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18,
R18C(O)O- a -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 mají shora definovaný význam.
Výhodně je heteroalicyklická skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny, V-amidoskupiny, mono nebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny nebo JV-sulfon-amidoskupiny.
Termín „heterocykl“ znamená nasycený cyklický radikál mající 3 až 8 atomů v kruhu, kde jeden nebo dva atomy v kruhu jsou heteroatomy vybrané z N, O nebo S(O)n (kde n je celé číslo od 0 do 2), zbývající atomy v kruhu jsou C, kde jeden nebo dva atomy uhlíku mohou být případně nahrazeny karbonylovou skupinou. Heterocyklylový kruh může být případně substituován jedním, dvěma nebo třemi substituenty vybranými z případně substituované nižší alkylové skupiny (substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z karboxyskupiny nebo esteru), halogenalkylové skupiny, kyanoalkylové skupiny, halogenu, nitroskupiny, kyanoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aminoskupina, monoalkylaminoskupiny, dialkylaminoskupiny, aralkylové · · · · · * « · · 9 · · · · » « · 9 · · · » « · « · β · · · ·»· · · skupiny, heteroaralkylové skupiny, -COR (kde substituent R je alkylová skupina) nebo COOR, kde substituent R je (atom vodíku nebo alkylová skupina).
Podrobněji termín heterocyklyl zahrnuje, ale není to nikterak limitováno, tetrahydropyranyl, 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan, piperidinoskupina, 7V-methylpiperidin-3-yl, piperazinoskupina, 7V-methylpyrrolidin-3-yl, 3-pyrrolidinoskupina, morfolinoskupina, thiomorfolinoskupina, thiomorfolino-1 -oxid, thiomorfolino-1,1 -dioxid,
4-ethyloxykarbonylpiperazinoskupina, 3 -oxopiperazinoskupina, 2-imidazolidon,
2-pyrrolidinon, 2-oxohomopiperazinoskupina, tetrahydropyrimidin-2-on a jejich deriváty.
Výhodně je heterocyklylová skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, nižší alkylové skupiny substituované karboxyskupinou, esterem hydroxyskupiny, mono nebo dialkylaminoskupinou.
Termín „hydroxy skupina“ se vztahuje na skupinu -OH.
Termín „alkoxy skupina“ se vztahuje na skupinu -O- (nesubstituovaná alkylová skupina) a -O- (nesubstituovaná cykloalkylová skupina). Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limitováno, např. methoxyskupinu, ethoxyskupinu, propoxyskupinu, butoxyskupinu, cyklopropyloxyskupinu, cyklobutyloxyskupinu, cyklopentyloxyskupinu, cyklohexyloxyskupinu, atd.
Termín „aryloxyskupina“ se vzť^jpe na -O-arylovou skupinu a -O-heteroarylovou skupinu definovanou v předloženém vynálezu. Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limitováno, fenoxyskupinu, pyridinyloxyskupinu, furanyloxyskupinu, thienyloxyskupinu, pyrimidinyloxyskupinu, pyrazinyloxyskupinu, atd. a jejich deriváty.
Termín „merkaptoskupina“ se vztahuje na skupinu -SH.
Termín alkylthioskupina se vztahuje na skupinu -S- (nesubstituovaná alkylová skupina) i -S-(nesubstituovaná cykloalkylová skupina). Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limitováno, např. methylthioskupinu, ethylthioskupinu, propylthioskupinu, butylthioskupinu, cyklopropylthioskupinu, cyklobutylthioskupinu, cyklopentylthioskupinu, cyklohexylthioskupinu, atd.
Termín arylthioskupina se vztahuje na -S-arylovou skupinu i -S-heteroarylovou skupinu definovanou v předloženém vynálezu. Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limitováno, fenylthioskupinu, pyridinylthioskupinu, furanylthioskupinu, thientylthioskupinu, pyrimidinylthioskupinu, atd. a jejich deriváty.
Termín acylová skupina se vztahuje na skupinu -C(O)-R, kde substituent R je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenmethylu, nesubstituované cykloalkylové skupiny, arylové skupiny případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou, dvěma nebo třemi, substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenmethylu, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, halogenu a skupin -NR18R19, heteroarylové skupiny (vázaná přes uhlíkové atom v kruhu) případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou, dvěma nebo třemi, substitutenty vybranými ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, halogenu a skupiny -NR18R19 a heteroalicyklické skupiny (vázaná přes uhlíkové atomy v kruhu) případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou, dvěma nebo třemi, substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, halogenu a skupin -NR18R19. Reprezenativní acy skupiny zahrnují, ale není to nikterak limitováno, acetyl, trifluoracetyl, benzoyl, atd.
Termín aldehyd se vztahuje na acylovou skupinu, ve které substituent R je atom vodíku.
Termín thioacylová skupina se vztahuje na skupinu -C(S)-R, kde substituent R je definován v předloženém vynálezu.
Termín ester se vztahuje na skupinu -C(O)O-R, kde substituent R je definován v předloženém vynálezu vyjma toho, že subtituent R nemůže být atom vodíku.
Termín acetylová skupina se vztahuje na skupinu -C(O)CH3.
Termín halogen se vztahuje na fluor, chlor, brom nebo jod, výhodně fluor nebo chlor.
Termín trihalogenmethyl se vztahuje na skupinu -CX3, kde X je halogen definovaný v předloženém vynálezu.
Termín trihalogenmethansulfonyl se vztahuje na skupiny X3CS(=O)2-, kde X mý shora definovaný význam.
Termín kyanoskupina se vztahuje na skupinu -C=N.
Termín methylendioxyskupina se vztahuje na skupinu -0CH20-, kde dva atomy kyslíku jsou vázány na sousedící atomy uhlíku.
Termín ethylendioxyskupina se vztahuje na -OCH2CH2O-, kde atomy kyslíku jsou vázány k sousedícím atomům uhlíku.
« · · · · · • · · · · · · • · · · · • · · · · <?
· · · · ·*· ··· ·· ··· ·
Termín S-sulfon-amidoskupina se vztahuje na skupinu -S(O)2NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín TV-sulfon-amidoskupina se vztahuje na skupinu -NR18S(O)2R19, kde substituent R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín O-karbamyl se vztahuje na skupinu -OC(O)NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín 'W-karbamyl se vztahuje na skupinu R18OC(O)NR19-, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín č>-thiokarbamyl se vztahuje na skupinu -OC(S)NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín 'W-thiokarbamyl se vztahuje na skupinu R18OC(S)NR19-, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín aminoskupina se vztahuje na skupinu -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou oba atomy vodíku.
Termín C-amidoskupina se vztahuje na skupinu -C(O)NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín W-amidoskupina se vztahuje na skupinu R18C(O)NR19-, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín nitroskupina se vztahuje na skupinu -NO2.
Termín halogenalkylová skupina se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituovaná nižší alkylová skupina, mající význam definovaný výše, která je substituovaná jedním nebo více stejnými nebo rozdílými atomy halogenu, např. -CH2C1, -CF3, -CH2CF3, -CH2CC13, atd.
Termín aralkylová skupina se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituovaná nižší alkylová skupina, mající význam definovaný v předloženém vynálezu, která je substituovaná arylovou skupinou mající význam definovaný výše, např. -CH2fenyl, -(CH2)2fenyl, -(CH2)3fenyl, CH3CH(CH3)CH2fenyl, atd. a jejich deriváty.
Termín heteroaralkylová skupina se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituovaná nižší alkylová skupina, mající význam definovaný výše, která je substituovaná heteroarylovou skupinou, např. -CH2-pyridinyl, -(CH2)2pyrimidinyl, -(CH2)3imidazolyl, atd. a jejich deriváty.
Termín monoalkylamínoskupina se vztahuje na radikál -NHR, kde substituent R je nesubstituovaná alkylová skupina nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina mající význam definovaný výše, např. methylaminoskupina, (l-methyl-ethyl)aminoskupina, cyklohexylaminoskupina, atd.
Termín dialkylaminoskupina se vztahuje na radikál -NRR, kde každý substituent R je nezávisle nesubstituovaná alkylová skupina nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina mající význam definovaný výše, např. dimethylaminoskupina, diethylaminoskupina, (1 -methyl-ethyl)-ethylaminoskupina, cyklohexylmethylaminoskupina, cyklopentylmethylaminoskupina, atd.
Termín kyanoalkylová skupina se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituovaná nižší alkylová skupina mající význam definovaný výše, která je substituovaná jednou nebo dvěma kyanoskupinami.
Termín volitelný nebo případně znamená, že následně popsaný případ nebo okolnost se může, ale nemusí, vyskytovat, a že popis zahrnuje situace, ve kterých se případ nebo okolnost vyskytuje, a situace, ve kterých se případ nebo okolnost nevyskytují. Například „heterocyklová skupina případně substituovaná alkylovou skupinou“ znamená, že alkylová skupina může, ale nemusí, být přítomná a popis zahrnuje situace, ve kterých heterocyklová skupina je substituovaná alkylovou skupinou, a situace, ve kterých heterocyklová skupina není substituovaná alkylovou skupinou.
Termín 2-indolinon, indolin-2-on a 2-oxindol jsou použitelné zaměnitelným způsobem a vztahují se na molekulu mající chemickou strukturu
Termín „pyrrol“ se vztahuje na molekulu mající chemickou strukturu:
H
Termíny „pyrrolem substituovaný 2-indolinon“ a „3-pyrrolidenyl-2-indolinon“ jsou zde zaměnitelné a vztahují se na chemickou sloučeninu mající obecnou strukturu zobrazenou obecným vzorcem (I).
Sloučeniny, které mají stejný molekulový vzorec, ale jsou odlišné v charakteru a sekvenci vazeb svých atomů nebo uspořádání svých atomů v prostoru se nazývají „izomery“. Izomery, které jsou rozdílné v uspořádání svých atomů v prostoru se nazývají „stereoizomery“ Stereoizomery, které nejsou zrcadlovým obrazem jeden druhého, se nazývají „diastereoizomery“, a ty jež jsou jeden druhému nekryjícím se zrcadlovým obrazem, se nazývají „enantiomery“. Pokud se v molekule sloučeniny nachází asymetrické centrum, např. k tomuto centru jsou připojeny čtyři rozdílné skupiny, může tato molekula existovat ve dvou enantiomemích formách. Enantiomer může být charakterizován absolutní konfigurací svého asymetrického centra a je popsán Cahnovým-Prelogovým pravidlem jako R a S nebo podle toho jakým způsobem molekula stáčí rovinu polarizovaného světla (označení jako pravotočivá nebo levotočivá, (+)-izomer, resp. (-)izomer). Chirální sloučenia může existovat buď jako jednotlivý enantiomer nebo jako směs enantiomerů. Směs obsahující stejná množství enantiomerů je nazývána „racemická směs“.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou mít jedno nebo více asymetrických center, proto mohou být takové sloučeniny připraveny jako jednotlivé (R)- a (S)- stereoizomery nebo jako jejich směsi. Například pokud substituent R6 ve sloučenině obecného vzorce (I) je 2-hydroxyethyl, pak uhlík, ke kterému je hydroxy skupina připojena, tvoří asymetrické centrum, a tudíž sloučenina obecného vzorce (I) může existovat jako (R)- nebo (S)-stereoÍzomer. Pokud není uvedeno jinak, pak popis nebo označení jednotlivých sloučenin v popisné části a patentových nárocích bude zahrnovat oba enantiomery a jejich směsi, racemické nebo jiné. Způsoby stanovení stereochemie a separace stereoizomerů jsou standardně dobře známy (viz podrobnější diskuze v Chapter 4 of „Advanced Organic Chemistry“, 4th edition J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992).
Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou vykazovat tautomerii a strukturní izomerii. Například sloučeniny popisované zde mohou být označeny jako E nebo Z konfigurace na dvojné vazbě spojující 2-indolinonovou část s pyrrolovou částí nebo mohou být směs E a Z konfigurace. Předložený vynález zahrnuje jakoukoliv tautomemí nebo strukturní izomerní formu a jejich směsi, které mají schopnost modulace aktivity RTK, CTK a/nebo STK, a není nikterak omezen na jakoukoliv tautomerní nebo strukturní izomerní formu.
♦ · • · · · « · · * «· «a* ··· ··* ·· ···
Termín „farmaceutický přípravek“ se vztahuje na směs jedné nebo více zde popisovaných sloučenin nebo jejich fyziologicky/farmaceuticky přijatelné soli nebo proléčiva společně s dalšími chemickými komponentami, např. fyziologicky/farmaceuticky přijatelnými nosiči a excipienty. Účel farmaceutického přípravku je usnadnit podání sloučeniny do organizmu.
Sloučenina obecného vzorce (I) může také účinkovat jako proléčivo. Termín „proléčivo“ se vztahuje na látku, která se in vivo přeměňuje na vlstní léčivo. Proléčiva jsou často výhodná, protože v některých případech mohou být snadněji podávána než vlastní léčivo. Mohou být např. biologicky dostupné perorálním podáním, zatímco vlastní léčivo nikoliv. Ve farmaceutických přípravcích může mít proléčivo také zlepšenou rozpustnost než vlastní léčivo. Příkladem, ale bez omezení, proléčiva by byla sloučenina podle předloženého vynálezu, která je podávána jako ester („proléčivo“) k usnadnění přenosu přes buněčnou membránu, kde rozpustnost ve vodě je na škodu mobilitě, ale pak je metabolicky hydrolyzována na karboxylovou kyselinu, vlastní účinnou sloučeninu, jakmile je uvnitř buňky, kde je rozpustnost ve vodě prospěšná.
Dalším příkladem proléčiva může být krátký polypeptid, například, bez omezení, polypeptid o 2-10 aminokyselinách, vázaný přes terminální aminoskupinu ke karboxyskupině sloučeniny podle předloženého vynálezu, kde polypeptid je hydrolyzován nebo metabolizován in vivo k uvolnění aktivní molekuly. Proléčiva sloučeniny podle předloženého vynálezu (I) spadají do rozsahu předloženého vynálezu.
Navíc se uvažuje, že sloučenina obecného vzorce (I) by byla metabolizována enzymy v organizmu, např. lidském, na metabolit, který může modulovat aktivitu proteinkináz. Tyto metabolity spadají rovněž do rozsahu předloženého vynálezu.
Termín „fyziologicky/farmaceuticky přijatelný nosič“ se vztahuje na nosič nebo ředidlo, které nezpůsobuje významné podráždění organizmu a nenarušuje biologickou aktivitu a vlastnosti podávané sloučeniny.
Termín „farmaceuticky přijatelný excipient“ se vztahuje na inertní látku přidávanou do farmaceutického přípravku k dalšímu usnadnění podání sloučeniny. Příklady excipientů, bez omezení, zahrnují uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, různé cukry a typy škrobů, deriváty celulosy, želatinu, rostlinné oleje a polyethylenglykoly.
Termín „farmaceuticky přijatelná sůl“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na ty soli, které si uchovávají biologickou účinnost a vlastnosti mateřské sloučeniny. Tyto soli zahrnují:
Μ · * · ·· • » ·· ♦· ·« · * ♦ • · · · 4 · * (1) adiční soli s kyselinou, které jsou připraveny reakcí volné báze mateřské sloučeniny s anorganickými kyselinami, např. s chlorovodíkovou kyselinou, bromovodíkovou kyselinou, dusičnou kyselinou, fosforečnou kyselinou, kyselinou sírovou a kyselinou chloristou, atp., nebo s organickými kyselinami, např. s octovou kyselinou, šťavelovou kyselinou, (D) nebo (L) jablečnou kyselinou, maleinovou kyselinou, methansulfonovou kyselinou, ethansulfonovou kyselinou, />-toluensulfonovovou kyselinou, salicylovou kyselinou, vinnou kyselinou, citrónovou kyselinou, jantarovou kyselinou nebo malonovou kyselinou, atp., výhodně kyselinou chlorovodíkovou nebo (L)-jablečnou kyselinou, např. jako L-malátová sůl (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny; nebo (2) soli připravené buď nahrazením kyselého protonu přítomného v mateřské sloučenině iontem kovu, např. iont alkalického kovu, iont alkalických zemin nebo hlinitý iont; anebo koordinací s organickou bází, např. ethanolaminem, diethanolaminem, triethanolaminem, tromethaminem, 77-methylglukaminem, atd.
Termín „PK“ se vztahuje na receptorovou proteinovou tyrosinkinázu (RTK), nereceptorovou nebo „buněčnou“ tyrosinkinázu (CTK) a serin-threoninkinázy (STK).
Termín „způsob“ se vztahuje na způsoby, prostředky, techniky a procedury pro dosažení uvedeného záměru, včetně, ale není to nikterak limitováno, způsobů, prostředků, technik a procedur buď známých nebo snadno vyvinutelných ze známých způsobů, prostředků, technik a procedur odborníky v chemických, farmaceutických, bilogických, biochemických a lékařských oborech.
Termín „modulace“ nebo „modulující“ se vztahuje na změnu katalytické aktivity RTK, CTK a STK. Konkrétně se modulace vztahuje na aktivaci katalytické aktivity RTK, CTK a STK, výhodně aktivaci nebo inhibici katalytické aktivity RTK, CTK a STK, v závislosti na koncentraci sloučeniny nebo soli, které jsou RTK, CTK nebo STK vystaveny nebo, výhodněji, inhibici katalytické aktivity, RTK, CTK a STK.
Termín „katalytická aktivita“ se vztahuje na míru fosforylace tyrosinu za vlivu, přímého či nepřímého, RTK a/nebo CTK nebo fosforylace šeřinu a threoninu za vlivu, přímého či nepřímého, STK.
Termín „uvedení v kontakt“ se vztahuje na uvedení sloučeniny podle předloženého vynálezu a cílové PK v kontakt takovým způsobem, aby sloučenina mohla ovlivnit katalytickou aktivitu PK, buď přímo, tzn. interakcí se samotnou kinázou, nebo nepřímo, tzn. interakcí s další molekulou, na které je katalytická aktivita kinázy závislá. Takové
„uvedení v kontakt“ může být dosaženo „in vitro“, tzn. ve zkumavce, petriho misce, atd. Ve zkumavce může uvedení v kontakt zahrnovat pouze sloučeniny a PK dle výběru nebo může zahrnovat celé buňky. Buňky mohou být také udržovány nebo pěstovány v miskách ke kultivaci buněk a uvedeny v kontakt se sloučeninou v tomto prostředí. V této souvislosti může být schopnost jednotlivé sloučeniny ovlivňovat poruchy související sPK, tzn. hodnota IC50 sloučeniny, definovaná níže, stanovena před použitím sloučenin in vivo s komplexnějšími živými organizmy. Pro buňky mimo organizmus existuje mnoho způsobů, a jsou dobře známy odborné veřejnosti, včetně toho, jak uvést sloučeniny v kontakt, včetně, ale není to nikterak limitováno, přímé buněčné mikroinjekce a mnoho technik s transmembránovým nosičem.
Termín „in vitro“ se vztahuje na způsoby prováděné v umělém prostředí, například, ale není to nikterak limitováno, ve zkumavce nebo kultivačním médiu.
Termín „in vivo“ se vztahuje na způsoby prováděné v živém organizmu, například, ale není to nikterak limitováno, v myším, potkaním nebo králičím.
Termíny „ porucha související s PK“, „ porucha řízená PK“ a „abnormální aktivita PK“ se všechny vztahují na stav charakterizovaný nepřiměřenou, tzn. sníženou nebo většinou zvýšenou katalytickou aktivitou PK, kde jednotlivé PK mohou být RTK, CTK nebo STK. Nepřiměřené katalytická aktivita může vznikat jako výsledek buď: (1) exprese PK v buňkách, které normálně neexprimují PK, (2) zvýšené exprese PK, která vede k nežádoucí buněčné proliferaci, diferenciaci a/nebo růstu, nebo (3) snížené exprese PK, která vede k nežádoucím redukcím v buněčné proliferaci, diferenciaci a/nebo růstu. Nadměrná aktivita PK poukazuje na buď amplifikaci genu kódujícího konkrétní PK nebo produkci hladiny aktivity PK, které může korelovat s buněčnou proliferaci, diferenciací a/nebo růstovou poruchou (tzn. zvyšováním hladiny PK se zvyšuje síla jednoho nebo více symptomů buněčné poruchy). Snížená aktivita samozřejmě znamená opak, tj. síla jednoho nebo více symptomů buněčné poruchy se zvyšuje se snižující se hladinou aktivity PK.
Termín „ošetření“ se vztahuje na způsob zmírnění nebo odstranění buněčné poruchy zprostředkované PK a/nebo jejích doprovodných symtomů. Konkrétně, co se týče rakoviny, znamenají tyto jednoduché termíny, že délka života pacienta ovlivněná rakovinou bude prodloužena, nebo že jeden nebo více symtomů onemocnění bude redukován.
• * • • 99 • 9
• • • * • · ♦ « 9 9 9
• • • • 9 9 9
9
• • • • • 9 9 9
·· • · » ··· • 9 9 9· 9999
Termín „organizmus“ se vztahuje na živou entitu sestávající se z alespoň z jedné buňky. Živý organizmus může být tak jednoduchý jako např. jednoduchá eukariotická buňka nebo tak komplexní jako savec, včetně lidí.
Termín „terapeuticky účinné množství“ se vztahuje na takové množství podávané sloučeniny, které zmírňuje jeden nebo více symptomů ošetřované poruchy. Co se týče rakoviny, tak terapeuticky účinné množství se vztahuje na množství, která má následující účinek:
(1) snižuj e velikost nádoru;
(2) inhibuje (tzn. zpomaluje do určité míry, výhodně zastavuje) metastázy nádoru;
(3) inhibuje (tzn. zpomaluje do určité míry, výhodně zastavuje) růst nádoru a/nebo (4) zmírňuje do určité míry (nebo výhodně eliminuje) jeden nebo více symptomů souvisejících s rakovinou.
Termín „monitorování“ znamená sledování nebo detekci účinku po uvedení sloučeniny v kontakt s buňkou exprimující konkrétní PK. Pozorováný či delegovaný účinek může být změna buněčného fenotypu, katalytické aktivity PK nebo změna interakce PK s přirozeným vazebným partnerem. Techniky pozorování nebo detekce takových účinků jsou známy v oboru.
Výše citovaný účinek je vybrán ze změny nebo absence změny buněčného fenotypu, změny nebo absence změny katalytické aktivity uvedené proteinkinázy nebo změny nebo absence změny interakce uvedené proteinkinázy s přirozeným vazebným partnerem v konečném aspektu předloženého vynálezu.
Termín „buněčný fenotyp“ se vztahuje na vnější projev buňky nebo tkáně nebo biologické funkce buňky nebo tkáně. Příklady buněčného fenotypu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, velikost buňky, její růst, proliferaci, diferenciaci, přežití, apoptózu a nutriční příjem a použití. Tyto fenotypické charakteristiky jsou měřitelné techniky známých v oboru.
Termín „přirozený vazebný partner“ se vztahuje na polypeptid, který se váže na konkrétní PK v buňce. Přirozené vazebné partnery mohou hrát důležitou roli při propagaci signálu při procesech signální transdukce zprostředkované PK. Samotná změna interakce přirozeného vazebného partnera s PK může projevovat jako zvýšená nebo snížená
koncentrace komplexu PK/přirozeného vazebného partnera a v důsledku toho jako pozorovatelná změna schopnosti PK zprostředkovávat signální transdukci.
Názorné sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou uvedeny v tabulce I níže.
Tabulka 1
Příklad Struktura Název
1 cfň 4-methyl-5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-1 í/-pyrrol-2-karboxylová kyselina
2 4-methyl-5 -(1 -methyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 - ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-2-karboxylová kyselina
3 o t methylester 4-methyl-5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-1 í/-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
4 H ethylester 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-4-methyl-17/-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
5 r, JT N Tf ° 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)- 4-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylová kyselina
6 •oáV''0 (3-pyrrolidin-l-yl-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4-methyl-1H- pyrrol-2-karboxylové kyseliny
7 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4-methyl-lH-pyrrol- 2-karboxylové kyseliny
8 (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1 H-pyrrol-2- karboxylové kyseliny
9 0^'·° (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(2-oxo-6-fenyl-1,2- dihydro-mdol-3-ylidenmethyl)-l/f-pyrrol-2- karbnxvlové kvselinv
• 9 • • • 9 • 9
• • ♦ 9 99 9« 9 • 9
• • • « 9 • •
•
• • • 9 • 9 •
99 • · · ·· · • · · 99 9999
karboxylové kyseliny
10 (2-diethylamino-ethyl)-methyl-amid 5-(5-brom-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)- l/í-pyrrol-2karboxylové kyseliny
11 Orní (2-diethylamino-ethyl)methyl-amid 5-(2-oxo-6- fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1 77-pyrrol- 2-karboxylové kyseliny
12 Crý·^ (3-diethylamino-propyl)-amid 3-methyl-5-(2-oxo1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-2karboxylové kyseliny
13 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-Lflr-pyrrol- 2-karboxylové kyseliny
14 ° (3 -diethylamino-propyl)-amid 3 -methyl-5 -(2-oxo-6- fenyl-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)- 1/7-pyrrol- 2-karboxylové kyseliny
15 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-methoxy-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3-methyl- 1H- pyrrol-2-karboxylové kyseliny
16 . ů/Y'' (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(6-methoxy-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methyl-1/7- pyrrol-2-karboxylové kyseliny
17 H kN~- (2-diethylamino-ethyl)-amid 3-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro- 277-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
18 B'Xxp*) í”l (3 -diethy lamino-propyl)-amid 3 -(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro- 2H-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
19 Ď (3-pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 3-(5-brom-2-oxo- l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7- tetrahydro-2//-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
9··· ··· 9·· 9··
20 (2-diethylamino-ethyl)-amid3-(2-oxo-6-pyridin-3- yl-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7- tetrahydro-2/7-izoindol-l-karboxylové kyseliny
21 (3-diethylamino-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-brom- 2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3-methyl- l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
22 (3-morfolin-4yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-brom- 2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methy 1- 17í-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
23 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoy 1-3 -methyl- 5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1H- pyrrol-2-karboxylové kyseliny
24 ΒΓγγΟ^ (3-pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5- brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 - methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
25 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 4-benzoyl-3 -methyl- 5 -(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)- l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
26 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(6- methoxy-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)- 3-methyl-177-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
27 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 4-benzoyl-5-(5- methoxy-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)- 3 -methyl-1 Tř-pyrrol-2-karboxylo vé kyseliny
28 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 4-benzoy 1-5 -(5 - fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3- methyl-17/-pyrrol-2-karboxy lové kyseliny
29 (3 -diethylamino-propyl)-amid 4-acetyl-5 -(5 -brom-2- oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methy 1- l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
30 8,γγΟ^ (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 4-acetyl-5 -(5 -brom- 2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methyl- l/ř-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
• · · · 9 · · 9 · ·
9* · · · 9 9 • 9 999 999 999 9· 9999
l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
31 (3 -morfolin-4-yl-propy l)-amid 4-acety 1-5 -(5 -brom-2- oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methy 1- l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
32 Η . (3-hydroxypropyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo- l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-l//- pyrrol-2-karboxylové kyseliny
33 (2-hydroxy-ethyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methyl-1H- pyrrol-2-karboxylové kyseliny
34 (2-morfolin-4yl-ethyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2- oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methy 1- l/ř-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
35 0 (2-pyrrolidin-l -yl-ethyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2- oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methy 1- 177-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
36 Β'Ό^^° ^Ό-οη [2-(4-hydroxy-fenyl)ethyl] -amid 4-acety 1-5 -(5 -brom- 2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3 -methyl- l/í-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
37 (3 -diethy lamino-propyl)-amid 5-(5 -brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-fenyl- 17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
38 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 5 -(5 -brom-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2-izopropyl-4- fenyl-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
39 (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-fenyl- 177-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
40 VfÍF [3-(4-methylpiperazin-l -yl)propyl]-amid 5-(5-brom- 2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2- izopropyl-4-fenyl- l/ř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
···· · · » · * • * · · · · · · ·· ··< *·· ··· ·· >·«·
41 ^~\_Λοη BřY'V-O> 5 -(5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)- 2-izopropyl-4-fenyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylová kyselina
42 Q>„~0 •O# Η (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3 -y lidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
43 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5- [6-(2-methoxy- fenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl] -2- methyl-4-fenyl- lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
44 (2-dimethylamino-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2dihydro-indol-3 -y lidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
45 (2-dimethylamino-ethyl)-amid 5-[6-(2-methoxy- fenyl)-2-oxo-1,2-dÍhydro-indol-3 -ylidenmethyl] -2methyl-4-fenyl- l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
46 q_3-o~ ”0^ ethylester 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-1 H-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
47 r# H (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2dihydro-indol-3 -y lidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
48 (2-dimethylamino-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2- dihydro-indol-3 -y lidenmethyl)-2,4-dimethy 1-1Hpyrrol-3-karboxylové kyseliny
49 (2-dimethylamino-ethyl)-amid2,4-dimethyl-5-(2- oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-ΪΗ- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
50 (2-dimethylamino-ethyl)-amid 5-(5-chlor-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3 -y lidenmethyl)-2,4-dimethy 1-1Hpyrrol-3-karboxylové kyseliny
·· ·4 a a • · • a • · »· ·*«· • · · ·· ♦ «►· ·»·
51 Ό (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2- dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
52 Ό y>H /¾ (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
53 “Ό yjH n (3-imidazol-1 -yl-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
54 \5h (2-dimethylamino-ethy l)-amid 5 - [6-(2-methoxy- feny l)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl] -2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxy lové kyseliny
55 (/ ,0 V/-B (2-dimethylamino-ethy l)-amid 5 - [6-(3 -methoxy- fenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylove kyseliny
56 (2-diethylamino-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo- 5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-l//- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
57 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-5-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
58 \_^Ίί (3 -imidazol-1 -yl-propy l)-amid 2,4-dimethyl- 5 -(2- oxo-5-fenyl-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-1H- pyrrol-3-karboxylove kyseliny
59 yJ-H Χ^>Λ (2-diethylamino-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo- 6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
60 9 H (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
v ·· ··
9 99 99 ·· ·· 9 9 9
9 9 9 9
9 9 9 9 9 * · · · «·« ··· ···»
61 0 Η v>H (3-imidazol-l-yl-propyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-l/7- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
62 <»φΧ2θ·° Cl (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-[6-(3,5-dichlorfenyl)- 2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl] -2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
63 0 ^N-/ SN* (2-diethylamino-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo- 6-pyridin-3-yl-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)- l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
64 O \_An c^ N (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-6-pyridin-3-yl-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)- ÍH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
65 0- ~^-N' VÁN ' 'rr (3-dimethylamino-propyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-6-pyridin-3 -yl-1,2-dihydro-indol-3 - ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
66 °O^ (3-dimethylamino-propyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-5 -fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
67 0 β (3-diethylamino-propyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-5 -fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
68 9 H \>-H x^v (3 -diethylamino-propyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
69 Ý J-. (3 -chlor-4-methoxy-fenyl)-amid 3 - [4-(3 - diethylamino-propylkarbamoyl)-3,5-dimethyl-l//- pyrrol-2-ylmethylen] -2-oxo-2,3 -dihydro-1 //-indol-4- karboxylové kyseliny
70 ‘'Όζέ*' ^7 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2- dihydro-indol-3 -y lidenmethyl)-2,4-dimethyl-1Hpyrrol-3-karboxylové kyseliny
71 •-ofřV (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2- dihydro-indol-3 -y lidenmethyl)-2,4-diizopropyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
72 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2- dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-diizopropyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
73 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 5 -(5 -brom-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-diizopropyl- l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
74 Λ~Ο Ό<^ (pyridin-4-ylmethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2- dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
75 q (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5 - [6-(4-butylfenyl)-2- oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 Tř-pyrrol-3 -karboxy lové kyseliny
76 ο 0 ^n-' (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5 - [6-(5-izopropyl-2- methoxy-fenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
77 ο 0 y-^Nw/ (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 5-[6-(4-ethylfenyl)-2- oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
78 ο Ο I (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5- [6-(2,4-dimethoxy- fenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
79 ρ Ο (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5- [6-(3 - izopropylfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 - ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
• · · · · · · ·
C· ··· ··· ··· ·· ····
80 0 n-A (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
81 o N-Z OH M 3-[4-(2-diethylamino-ethylkarbamoyl)-3,5-dimethyl- 177-pyrrol-2-ylmethylen] -2-oxo-2,3-dihydro-1H- indol-6-karboxylová kyselina
82 O Λ-ν^Ν J °” x5v“° (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5 -(5 - dimethylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 - ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-177-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
83 ΆΧΗ (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-(5-(3- chlorfenylsulfamoyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
84 o tN\ -¾^ (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-[2- oxo-5-(pyridin-3 -ylsulfamoyl)-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl] -1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
85 3 - [3,5 -dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l-karbonyl)- l//-pyrrol-2-ylmethylen]-4-(2-hydroxyethyl)-1,3- dihydro-indol-2-on
86 •V& fenyl-amid 3-[3,5-dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l- karbonyl)-l//-pyrrol-2-ylmethylen]-2-oxo-2,3- dihydro-1 //-indol-5 -sulfonové kyseliny
87 0 \~TN‘ (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5- dimethylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
88 0 y/' (2-diethy lamino-ethyl)-amid 5-(5-(3- chlorfenylsulfamoyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
• ·· ·· ·· · · · • · · * • · · · · <· · · · ··· ··· · · ····
89 Ό (2-dimethylamino-ethyl)-amid 3-(5-brom-2-oxo-l ,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro- 2//-izoindol- 1 -karboxylové kyseliny
‘Ν V 1
90 Q ethylester 3-(2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-
-ΑΑ> >=o ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2/7-izoindol-1 -
karboxylové kyseliny
91 o ethylester 3-(4-methyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-
ς ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2Z/-izoindol-1 -
karboxylové kyseliny
92 f ) ethylester 3-(5-brom-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-
Ό Λ ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 -
karboxylové kyseliny
93 Q ) 3-(3-ethoxykarbonyl-4,5,6,7-tetrahydro-2/7-izoindol-
í s 1 -ylmethylen)-2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol-5-
karboxylová kyselina
94 c > ethylester 3-(5-methoxy-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3-
ÓOl í? ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 -
N karboxylové kyseliny
95 j ethylester 3 -(2-oxo-5 -fenyl-1,2-dihydro-indol-3 -
□γ. χ£ ří ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2H-izoindol-1 -
karboxylové kyseliny
96 ethylester 3-(2-oxo-5-sulfamoyl-1,2-dihydro-indol-3-
X° ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2H-izoindol-1 -
Χ*“Ν -0 s karboxylové kyseliny
97 p ethylester 3-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-l ,2-dihydro-
X- X ín s> indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2H-
A*n Ί izoindol-1-karboxylové kyseliny
98 ethylester 3 -(5 -dimethylsulfamoyl-2-oxo-1,2-
Χ.ω·Χ* ' χ ✓° dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-
X^N -0 °Ί 2/7-Ízoindol-1 -karboxylové kyseliny
99 ethylester 3-(2-oxo-5-fenylsulfamoyl-l ,2-dihydro- indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2H- izoindol-1-karboxylové kyseliny
100 ethylester 3-(6-brom-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-277-izoindol-1 - karboxylové kyseliny
101 ethylester 3 -(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 - ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2/Z-izoindol-l- karboxylové kyseliny
102 ./53¾ 3-(3-ethoxykarbonyl-4,5,6,7-tetrahydro-2/7-izoindol- 1 -ylmethylen)-2-oxo-2,3-dihydro- l//-indol-6- karboxylová kyselina
103 —t o ethylester 3-(6-methoxy-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2Z/-izoindol-l- karboxylové kyseliny
104 °* O>° °t ethylester 3 -(5 -izopropylsulfamoyl-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro- 2Z/-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
105 3 -(3 -methylkarbamoy 1-4,5,6,7-tetrahydro-27Y- izoindol-1 -y lmethylen)-2-oxo-2,3 -dihydro-177-indol- 5-karboxylové kyselina
106 0 O ° tXr 3 -(3 -dimethylkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//- izoindol-1 -y lmethylen)-2-oxo-2,3 -dihydro-177-indol- 5-karboxylové kyselina
107 -½^¾ 2-oxo-3-[3-(pyrrolidin-l-karbonyl)-4,5,6,7- tetrahydro-2/7-izoindol-l-ylmethylen]-2,3-dihydro- l/7-indol-5 -karboxylové kyselina
108 °Vx£on m-h y 3-[3-(morfolin-4-karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//- izoindol-1 -ylmethylen]-2-oxo-2,3 -dihydro-177-indol- 5-karboxylová kyselina
109 . JT N^f Χ>0 γνΊ Λν V 3 - [3 -(morfolin-4-karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//- izoindol-1 -ylmethylen]-2-oxo-2,3-dihydro-1//-indol- 6-karboxylová kyselina
110 Βχ χ$° methyl-amid 3-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 -
karboxylové kyseliny
111 “Ό dimethyl-amid 3-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol- 3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-
karboxylové kyseliny
112 *TC Λ- 5-brom-3-[3-(pyrrolidin-l-karbonyl)-4,5,6,7- tetrahydro-2//-izoindol-1 -ylmethylen]-1,3-dihydro- indol-2-on
113 Βίτ 5-brom-3 - [3 -(pyrrolidin-4-karbonyl)-4,5,6,7 - tetrahydro-2//-izoindol-1 -ylmethylen] -1,3 -dihydro-
indol-2-on
114 Ο jf Υ>ο Α- 3 -(3 -dimethy lkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydro-2Z/- izoindol-1 -ylmethylen)-2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol-
ο 6-karboxylové kyseliny
115 ο \Λο 4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-
0 ο 5 Ν 1 ΐ\ο indol-3 -ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové
<^-Ν kyseliny
116 Ο. ,ο-Χ ν/ιΑ ethylester {[4-methyl-5-(4-methyl-5-
uy methylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-
0 κ ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3-karbony 1] -amino} -octové kyseliny
117 Ζ. ο 1 ο \ η Jl Η° ^jT Ν ° ethylester {[4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)- l//-pyrrol-3- karbonyl]-amino}-octové kyseliny
118 °' τ 0 νΛη θ ^_JT Ν ° [)=0 {[4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -
karbonyl]-amino}-octová kyselina
119 Ν ·° Sv ο 1 N J>O ^~N methyl-amid 3-[3-methyl-4-(piperidin-l-karbonyl)- l//-pyrrol-2-ylmethylen]-2-oxo-2,3-dihydro-l//- indol-5-sulfonové kyseliny
120 O r ίγ>ο 5-methyl-2-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylo vé kyseliny
121 Q-S ° ethylester 5-methyl-2-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
122 “X o-^ QsaC_ ií/ ethylester 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3- ylidenmethyl)-5-methyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylo vé kyseliny
123 Br^> (f o o=< N Λ>° 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)- 5-methyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
124 X NvO Λ ζ>° (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 2-(5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-5-methyl-l//-pyrrol- 3-karboxylové kyseliny
125 Bx !— /-Ν N-7 & (2-diethy lamino-ethyl)-amid 2-(5 -brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-5-methyl-l//-pyrrol- 3-karboxylové kyseliny
126 z-ch, 0 -N y JL ž=o (2-diethylamino-ethyl)-amid 2,4- dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl] -1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 381 [M+ 1]
127 r-CH> N h,cv_/~H'- ^CH> N CH* (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-[5- chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 415 [M+ 1]
128 «•O- 0 (2-pyrrolÍdin-l-ethyl)-amid 2,4- dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl] -1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 379 [M+l]
129 H*3 CH> Μ-χι 0 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-[5- fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 397 [M+l]
130 ULjf° (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-[5- chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -1 Zř-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 413 [M + l]
131 CH, 1 HC 0 ___,n-ch, iTvCo CH> (2-dimethylamino-ethyl)-amid 2,4- dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl] -1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 353 [M + l]
132 9« CH, Η’°ν_Λ< TY CH, fyyQcHi M-f50 (2-dimethylamino-ethyl)-amid 5 -[5 - fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 371 [M+l]
133 0 fl CH, H’VAíl & CI^JpK CH> IJZ /=° (2-acetylamino-ethyl)-amid 5-[5- chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 399 [Μ -1]
134 o tívCH, JI CH’ l JZ /=° (2-acetylamino-ethyl)-amid 5-[5- fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 383 [Μ -1]
135 0 Rch, « CHí O (2-acetylamino-ethyl)-amid 2,4- dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 365 [M-l]
136 er.^jf^írCH'· I ,1>° [3-(2-oxoteetra-pyrimidin-1 -yl)- propyl]-amid 5-[5-brom-2-oxo-1,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 500 [M+ 1] 502 [M + 1]
137 I JO0 o [3 -(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-1 - propyl]-amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl- 177-pyrrol-3- karboxylové kyseliny 454 [Μ -1]
138 ϋ o h> Oij'— rrcH> I x>=° H [3-(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-1 - propyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl- 17/-pyrrol-3- karboxylové kyseliny 438 [M-l]
139 ch. 00=ο [3 -(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-1 - propyl]-amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo- 1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 422 [M+ 1]
140 .0 ^N°K« </Ί| V Xi KvX ft CH‘ XX^0 [3-(2-oxo-tetrahydro-pyrimidin-1 - propyl]-amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 447 [M+ 1]
• ·
141 0 Č5 0 N-X ‘Ojf'' Vy-Γ» r J I '°h 7 trifluor-acetát-4-[2-( {5 -[5-brom-2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3 -karbonyl} -amino)-ethyl] -2- oxo-piperazin-1 -ium 486 [M+l] 488 [M+l]
142 y-c h CH· ΎΤ>ο [3 -(2-oxo-pyrrolidin-1 -yl)-propyl]- amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-177-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 430 [Μ -1]
143 .r> n, q H»c^ z~~N 0 ΒΤγ^Α T T>=o [2-(2-oxo-imidazolidin-1 -yl)-ethyl]- amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 470 [Μ -1] 472 [M-l]
144 W.NH q .N-2 hÁ_Ť~N 0 αγ-^O CH‘ I JL Y° [2-(2-oxo-imidazolidin-1 -yl)-ethyl]- amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 428 [M+l]
145 HC X —Λ M,C)—f H ° T Γ >° [2-(2-oxo-imidazolidin-1 -y l)-ethy 1] - amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 412 [M+l]
146 f>H o >N^ kČ ° GcO * o-f, [2-(2-oxo-imidazolidin-1 -y l)-ethy 1] - amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl] - l/T-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 392 [Μ -1]
• 4 · · · ··· · · 4 ·4·4
147 0__,Ν-Ζ Η ” Ογγ/^Η CHl Η [2-(2-oxo-imidazolidin-1 -y l)-ethy 1] - amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 H-pyrrol-3 -karboxy love kyseliny 419 [M+l]
148 HjC HiRq Wp ethylester {4-[2-({5-[5-brom-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3 -karbonyl} -amino)-ethyl] - piperazin-l-yl}-octové kyseliny 558 [M+l] 560 [M+ 1]
149 ΜΛ Γ'Ν'ν-ο' HC Ο νΛ-Ν aYvC” Μ-;, ethylester {4-[2-({5-[5-chlor-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karbonyl}-amino)-ethyl]- piperazin-l-yl} -octové kyseliny 514 [M+ 1]
150 HjC í-Yy° „0 1 0 ?*< Β ρ'ρΛ/0Η· U-jf0 ethylester {4-[2-( {5-[5-fluor-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3 -karbonyl} -amino)-ethyl]- piperazin-l-yl}-octové kyseliny 498 [M + 1]
153 ο 0 ΝΗ η I >ο [2-(kyanomethyl-amino)-ethyl]~ amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- l//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 362 [Μ -1]
154 “W+^b W” [3-(2-oxo-azepan-1 -yl)-propyl]-amid 5-[5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 511 [Μ -1] 513 [Μ -1]
155 V+r^b •I Τ>=ο [3-(2-oxo-azepan-1 -yl)-propyl]-amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- 469 [M + 1]
·· · · · ·* ·· • · ·· ·· »· 9 9 9 ··· * · · « · « · · · 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9
999 999 999 99 9999
pyrrol-3-karboxylové kyseliny
156 w· [3-(2-oxo-azepan-1 -yl)-propyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 453 [M+l]
157 f>-C“ “ 0 Γ >° [3-(2-oxo-azepan-1 -yl)-propyl]-amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-l/7-pyrrol- 3-karboxylové kyseliny 435 [M+l]
158 [3 -(2-oxo-azepan-1 -y l)-propyl] -amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-177- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 460 [M +1]
159 0 Í1 C^S i CHj LI-*3 H (2-acetylamino-ethyl)-amid 5-[5- brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 443 [M-l] 445 [M-l]
160 . fa FY^<I* CH’ S 0 Trifluor-acetát-4-[2-({5-[5-fluor-2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3 -karbonyl} -amino)-ethyl] -2- oxo-piperazin-1 -ium; 426 [M+l]
161 u Č5 O N^/ O/-0 É=A” trifluor-acetát-4-[2-( {2,4-dimethyl-5 - [2-oxo-l ,2-dihydro-indol-(3Z)~ ylidenmethyl] -1 H-pyrrol-3 - karbonyl} -amino)-ethyl] -2-oxo- piperazin-l-ium; 408 [M+l]
162 óH 0 zn—/ ‘Υ'γ-ό’ eM> U> >A,„ H trifluor-acetát-4- [2-({5 - [5 -kyano-2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3 -karbonyl} -amino)-ethyl]-2- 433 [M + 1]
• · · ·· ····
oxo-piperazin-1 -ium;
163 o 3 Br—t-C« CH’ [2-(2-kyano-ethylamino)-ethyl]-amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 454 [Μ -1] 456 [Μ -1]
164 Ϊ I >=0 ^B [2-(2-kyano-ethylamino)-ethyl]-amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-177- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 410 [M-l]
165 O K-J η5-Λβ 1JL /=° H [2-(2-kyano-ethylamino)-ethyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 394 [M-l]
166 , »5 Η,οχ_Λ^ h CH’ ( X >=0 [2-(2-kyano-ethylamino)-ethyl]-ainid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl] -1 //-pyrrol- 3-karboxylové kyseliny 376 [M-l]
167 H o kJ I T>=0 ^B [2-(2-kyano-ethylamino)-ethyl]-amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-177- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 401 [M-l]
168 O ' <J 0 H-S ’Ά-Λβ o.Y-v/jrcH· c ? W“ trifluor-acetát-4-[2-( {5 -[5-chlor-2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karbonyl}-amino)-ethyl]-2- oxo-piperazin-1 -ium; 440 [M-l]
168 o r-N-™· Wb^^ ( T >0 [2-(4-methyl-piperazin-1 -yl)-ethyl]- amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 H-pyrrol-3 -karboxy love kyseliny 424 [M-l]
4»
169 íTn CH, Cl H 1 T >o [2-(4-methyl-piperazin-1 -yl)-ethy 1] - amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1//-pyrrol-3 -karboxy lové kyseliny 440 [Μ -1]
170 o r'™·0· ν»~ν CH“ I X^=o H [2-(4-methyl-piperazin-1 -yl)-ethyl]- amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxy lové kyseliny 484 [Μ -1] 486 [Μ -1]
171 o r-N-CHj a CH’ Γ 20=o [2-(4-methyl-piperazin-1 -yl)-ethyl]- amid 2,4-dimethyl-5-[5-brom-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-1 //-pyrrol-3- karboxylové kyseliny 406 [Μ -1]
172 CH, o rSH n^Ach> í jO=° [2-(3,5-dimethyl-piperazin-1 -yl)- ethyl] -amid 2,4-dimethyl-5 - [2-oxo- 1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 422 [M + 1]
173 CHi YX>° [2-(3,5-dimethyl-piperazin-1 -yl)- ethyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny 438 [Μ -1]
174 A’ « CH’ ΥΓΑ ^B [2-(3,5 -dimethyl-piperazin-1 -y 1)- ethyl]-amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3- karboxylové kyseliny 456 [M+l]
• · ·» ·♦ ·· «♦ · · · ··· · * · · * • · ·· · · * · · · • » · · « · · · ·· ·<· V·· ··· »4 ····
175 cn, 0 CHi I T>=° [2-(3,5-dimethyl-piperazin-1 -yl)- ethyl]-amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl] - 2,4-dimethyl- l//-pyrrol-3- karboxylové kyseliny 498 [Μ -1] 500 [Μ -1]
176 H1c5-j;|Z~~Z'NC?N'CH, í T >° [3 -(4-methyl-piperazin-1 -yl)-propyl] - amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 422 [M + 1]
177 H,C V --/^V/N-CH3 fv^<Ch CHl I T >=° [3-(4-methyl-piperazin-1 -yl)-propyl] - amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyI]-2,4- dimethyl-1//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 438 [Μ -1]
178 0 /ν' ' H,C \_xN-CH, Jrť k CH’ TI >=° • H [3-(4-methyl-piperazin-1 -yl)-propyl]- amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3 Z)-ylidenmethyl] -2,4- dimethyl- 1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 454 [Μ -1]
179 H,C V N-- VZ N'CH3 Jk I T >=° [3 -(4-methyl-piperazin-1 -yl)-propyl] - amid 5-[5-brom-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 498 [Μ -1] 500 [Μ -1]
180 ^~<O o N~Z vr rrC” CHl [2-(4-benzyl-piperazin-1 -yl)-ethyl]- amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 482 [Μ -1]
181 ('•'fO o *__/N-X FyYQ’ CM- [2-(4-benzyl-piperazin-1 -y l)-ethy 1] - amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- 500 [Μ -1]
dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
182 Ο N-wZ •νΛκ αχχΗ [2-(4-benzyl-piperazin-1 -yl)-ethyl]- amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 517 [M-l]
183 . 0~° CH> 1 Τ >° ^Β [2-(4-benzyl-piperazin-1 -yl)-ethy 1] - amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 560 [M-l] 562 [Μ -1]
184 CH, ο <-Ν->Ι-0 ΤΧ Β Β 0Η· ί ΖΓ>° (3 -pyrrolidin-1 -yl-2 -on)-amid 5 - [ 5 - chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny 480 [M+ 1]
185 β Ó JTV Η Λ Ν CH, τ JL >=ο cf3co2h 3 2 Η trifluor-acetát-4-[2-( { 5-[5-chlor-2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1//- pyrrol-3 -karbonyl} -amino)-ethyl]-2- oxo-piperazin-1 -ium; 440 [M-l]
186 5? ο HVr--ó cvU a CHj XX>=0 H (3-pyrrolidin-l-yl-2-on)-amid 5-[5- chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl- 1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
187 CH> ΪΤ>° (3-pyrrolidin-l-yl-2-on)-amid 5-[5- fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl- 1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
188 9 o B CH· O-Jj (3-pyrrolidin-1 -yl-2-on)-amid 5-[2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
189 0 CH· VL>=0 CF,C02H (2-pyridin-2-yl-ethyl)-amid 5-[5- chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
190 0 ^>1 'W CMl y l>=o cFjCOjH Trifluoroctová sůl (2-pyridin-2-yl- ethyl)-amidu 5 - [5 -fluor-2-oxo-1,2- dihydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl] - 2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
191 Ů ΓΊ „ CH’ Oj ° CIH hydrochlorid (2-pyridin-2-yl-ethyl)- amidu 5-[2-oxo-l,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
192 HC 1 jO « CH’ ΧΡΟ=° CFjCOjH H Trifluoroctová sůl (2-pyridin-2-yl- ethyl)-amidu 5-[5-brom-2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
193 '-CH, FrvC” XX*^M H (2-ethylamino-ethyl)-amid 5-[5- fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
194 H.C l~NHl Tj>o (2-amino-ethyl)-amid 5-[5-fluor-2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)- ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
195 h-cv_5-n'— Υ-ζ Η 0 CM· LA>=0 (2-diethyl-iV-oxo-amino-ethyl)-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxy lové kyseliny
196 OH H c °A ____.N^ •γΛι FY^1-Co« CHl (2-ethyl-jV-hydroxy-amino-ethyl)- amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
197 o ^νΛ-Ν^γΝ'7 Zí ri OH FyyQ (2-diethylamino-2-hydroxyethyl)- amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
198 •X~' [2-ethyl-2-(2-hydroxyethyl)-amino- ethyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl- l//-pyrrol-3- karboxylové kyseliny
199 9 r r-O. OH [2-ethyl-2-( 1 -hydroxyethyl)-amino- ethyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2- dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
200 z-X Λ//* <T >1 H ° N ch3 τχ/θ H (2-/V-acetylamino-ethyl)-amid 5-[5- kyano-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- pyrrol-3-karboxylové kyseliny
r ·
201 h,c 'VU h CH) (karboxymethyl)-amid 5-[5-fluor-2- oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl- lJf- pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
202 HaC. CHi H [2-(2-hydroxyethylamino)ethyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol- (3Z)-ylidenmethyl]- l/í-pyrrol-3 - karboxylové kyseliny
203 O jýjl NCrrC^CH' 'ČA-ij 0 ορ,οο,η trifluoracetát (2-pyridin-2-yl-ethyl)- amidu 5-[5-kyano-2-oxo-l,2- díhydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl] - 177-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
204 trifluoracetát (3 -pyrrolidin-1 -yl-2- onpropyl)-amidu 5-[5-brom-2-oxo- 1,2-dihydro-indol-(3Z)- ylidenmethyl]- l/Z-pyrrol-3- karboxylové kyseliny
Čísla sloučenin odpovídají číslům příkladů v příkladech provedení vynálezu, tj. syntéza sloučeniny 1 v tabulce 1 je popsána v příkladu 1. Sloučeniny uvedené v tabulce 1 mají pouze ilustrativní charakter a nemají nikterak limitovat jakýmkoliv způsobem rozsah předloženého vynálezu.
Výhodná provedení
Zatímco nejširší definice byl podána v podstatě vynálezu, výhodné jsou určité sloučeniny obecného vzorce (I)uvedené níže.
(1) Výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty R1, R3 a R4 jsou atom vodíku.
(2) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty
R1, R2 a R4 jsou atom vodíku.
• · .
Λ * · • · « · • · • · (3) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty R1, R2 a R3 jsou atom vodíku.
(4) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty R2, R3 a R4 jsou atom vodíku.
(5) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty R1, R2, R3 a R4 jsou atom vodíku.
(6) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty R5, R6 nebo substituent R7 *, výhodně substituent Rs nebo R6, výhodněji substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRn(CH2)„R12, kde:
substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, výhodně atom vodíku nebo methyl; n je 2, 3 nebo 4, výhodně 2 nebo 3; a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle alkylová skupina, výhodněji nižší nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo substituenty R13 a R14 spojeny dohromady tvoří skupinu vybranou z -(CH2)4-, »(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- nebo -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-, výhodně substituenty R13 a R14 jsou nezávisle atom vodíku, methyl, ethyl nebo spojeny dohromady tvoří morfolin-4-yl, pyrrolidin-l-yl, piperazin-l-yl nebo 4-methylpiperazin-l-yl.
Výhodněji je substituent R5 nebo R6 v bodě (6) výše 2V-(2-dimethylamino-ethyl-)aminokarbony 1, V-(2-ethylamino-ethyl)-V-methy laminokarbonyl, N-(3 dimethylamino-propyl)-aminokarbonyl, V-(2-diethylamino-ethyl)-aminokarbonyl, V-(3 -ethylamino-propyl)-aminokarbonyl, N-(3 -diethylamino-propyl)aminokarbonyl, 3-pyrrolidin-1 -yl-propylaminokarbonyl, 3-morfolin-4-yl-propylaminokarbonyl, 2-pyrrolidin-1-ylethylaminokarbonyl, 2-morfolin-4ylethylaminokarbonyl, 2-(4-methylpiperazin-l-yl)-ethylaminokarbonyl, 2-(4methylpiperazin-l-yl)propylaminokarbonyl, 2-(3,5-dimethylpiperazin-lyl)ethylaminokarbonyl nebo 2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)propylaminokarbonyl, ještě výhodněji V-(2-diethyl-amino-ethyl)-aminokarbonyl nebo 7V-(2-ethylaminoethyl)-amino-karbonyl.
(7) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty R5, R6 nebo R7, výhodně substituenty R5 nebo R6, výhodněji
substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je alkylová skupina, výhodně nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, arylová, heteroarylová, heteroalicyklická skupina nebo karboxyskupina, výhodněji methyl, ethyl, propyl nebo butyl substituovaný hydroxyskupinou, arylová skupina, heteroalicyklická skupina, např. piperidin, piperazin, morfolin, atd., heteroarylová skupina nebo karboxyskupina. Ještě výhodněji v rámci této skupiny (7) je substituent R5 nebo R6 2ethoxykarbonylmethyl-aminokarbonyl, karboxymethylamino-karbonyl, 3hydroxypropyl-aminokarbonyl, 2-hydroxyethylaminokarbony 1, 3 -triazin-1 -ylpropylamino-karbonyl, triazin-1-ylethylaminokarbonyl, 4-hydroxyfenylethylaminokarbonyl, 3-imidazol-1 -yl-propyl-aminokarbonyl, pyridin-4ylmethylaminokarbonyl, 2-pyridin-2-ylethylaminokarbonyl nebo 2-imidazol-lylethylaminokarbonyl.
(8) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituenty R5, R6 nebo R7, výhodně substituent R5 nebo R6, výhodněji substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRn(CH2)„R12, kde:
substituent R11 je atom vodíku nebo alkylová skupina, výhodně atom vodíku nebo methyl;
nje 2, 3 nebo 4, výhodně 2 nebo 3; a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 spojeny dohromady tvoří heterocykl, výhodně a 5, 6 nebo 7 členný heterocykl obsahující karbonylovou skupinu a 1 nebo 2 atomy dusíku. Výhodně substituent R5 nebo R6 je 2-(3ethoxykarbonylmethylpiperazin-l-yl)-ethylaminokarbonyl, 2-(3-oxopiperazin-lyl)-ethylaminokarbonyl, 2-(imidazolidin-1 -yl-2-on)-ethylaminokarbonyl, 2(tetrahydro-pyrimidin-l-yl-2-on)-ethylaminokarbonyl, 2-(2-oxopyrrolidin-1 -y 1) ethylaminokarbonyl, 3-(4-methylpiperazin-l-yl)- propylaminokarbonyl, 3-(3ethoxykarbonylmethy lpiperazin-1 -yl)-propylaminokarbonyl, 3 -(3 -oxopiperazin-1 yl)propyl-aminokarbonyl, 3 -(imidazolidin-1 -yl-2-on)propyl-aminokarbonyl, 3(tetrahydropyrimidin-1 -yl-2-on)-propylaminokarbonyl, 3 -(2-oxopyrrolidin-1 yl)propyl-aminokarbonyl, 2-(2-oxohomopiperidin-1 -yl)-ethylamino-karbonyl nebo
3-(2-oxohomopiperidin-1 -yl)propylaminokarbonyl.
• · (9) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R5, R6 nebo R7, výhodně substituent R5 nebo R6, výhodněji substituent R6 je -COR10, kde:
(a) substituent R10 je -NRu(CH2)nR12, kde:
substituetn R11 je atom vodíku nebo alkylová skupina, výhodně atom vodíku nebo methyl;
nje 2, 3 nebo 4, výhodně 2 nebo 3; a substituent R12 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je kyanoalkyl nebo -NHCOR®, kde substituent Ra je alkylová skupina; nebo (b) substituent R10 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 spojeny dohromady tvoří heterocykl neobsahující karbonylovou skupinu v rámci kruhu. Výhodně substituent R5 nebo R6 je 2-(2-kyanoethylamino)-ethylaminokarbonyl, 2-(acetylamino)ethylaminokarbonyl, morfolinokarbonyl, piperidin-l-yl-karbonyl, 2-kyanomethylamino-ethylaminokarbonyl nebo piperidin-l-ylkarbonyl.
(10) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina nebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, výhodněji substituent R5 je 2-[(diethylamino)-2hydroxyethylj-aminokarbonyl, 2-(V-ethyl-V-2-hydroxyethylamino)ethylaminokarbonyl, karboxymethylamino-karbonyl, nebo 2-(2hydroxyethylaminoj-ethylamino-karbonyl.
(11) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, substituent kde R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina nebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina; výhodněji substituent R6 je [2-(diethylamino)-2hydroxyj-ethylaminokarbonyl, 2-(jV-ethyl-7V-2-hydroxyethyl-amino)• · ethylaminokarbonyl, karboxymethylaminokarbonyl nebo 2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino-karbonyl.
(12) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je NRu(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O)NR13R14 nebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nesubstituované nižší alkylové skupiny, výhodně substituent R5 je 2-(V-hydroxy-V-ethylamino)ethylaminokarbonyl nebo 2-[N+(O)'(C2H5)2]ethyl-aminokarbonyl.
(13) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je NRu(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O)'NR13R14 nebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nesubstituované nižší alkylové skupiny, výhodně substituent R6 je 2-(ŤV-hydroxy-V-ethylamino)ethylaminokarbonyl nebo 2-[N+(O')(C2H5)2]-ethyl-aminokarbonyl.
(14) Ve výše výhodných skupinách (6)-(13), pokud substituent R5 je -COR10, pak výhodnější skupina sloučenin je taková, kde:
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, terc-butyl, izobutyl nebo n-butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, η-, izo nebo férc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenyl.
(15) Ve výše výhodných skupinách (6)-(13), pokud substituent R5 je -COR10, pak další výhodnější skupina sloučenin je taková, kde substituenty Ra. R spojeny dohromady tvoří-(CH2)4-.
(16) Ve výše výhodných skupinách (6)-(13), pokud substituent R6 je -COR10, pak výhodnější skupina sloučenin je taková, kde:
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, tórc-butyl, izobutyl nebo n-butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a ··· substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, η-, izo nebo řerc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenyl.
(17) V rámci výše uvedených výhodných skupin a výhodnějších skupin (6) - (16) je ještě výhodnější skupina sloučenin, taková, kde substituent R je atom vodíku, alkylová skupina, -C(O)NR R, nesubstituovaná cykloalkylová nebo arylová skupina, výhodně atom vodíku, fenyl,
3,4-dimethoxy-feny lamino karbonyl, 4-methoxy-3 -chlorfenyl-aminokarbonyl, j eště výhodněji atom vodíku nebo methyl, nej výhodněji atom vodíku;
substituent R2 je kyanoskupina, atom vodíku, halogen, nižší alkoxyskupina, arylová skupina nebo S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je atom vodíku, arylová nebo alkylová skupina, výhodně substituent R2 je atom vodíku, chlor, brom, fluor, methoxyskupina, ethoxyskupina, fenyl, dimethylaminosulfonyl, 3 -chlorfenyl-aminosulfonyl, karboxyskupina, methoxyskupina, aminosulfonyl, methylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-aminosulfonyl, dimethylaminosulfonyl, izopropylamino-sulfonyl, výhodněji atom vodíku, fluor nebo brom;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, NR13C(O)R14, arylové skupiny výhodně aryl případně substituovaný jedním nebo dvěma substitutenty vybranými ze skupiny sestávajícími se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny a heteroarylové skupiny, výhodně heteroarylové skupiny případně substituované jedním nebo dvěma substitutenty vybranými ze skupiny sestávající se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny; výhodně atom vodíku, methoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl, 3,4-dichlorfenyl, 2-methoxy-5-izopropylfenyl,
4-n-butylfenyl, 3-izopropylfenyl, výhodněji atom vodíku nebo fenyl; a substituent R4 je atom vodíku.
(18) Další výhodnější skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde:
substituent R1 je atom vodíku, alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová nebo arylová skupina, výhodně atom vodíku, 3,4-
dimethoxy-fenyl-aminokarbony 1, 4-methoxy-3 -chlorfenylaminokarbony 1, j eště výhodněji atom vodíku nebo methyl, konkrétně atom vodíku;
substituent R2 je kyanoskupina, atom vodíku, halogen, nižší alkoxyskupina, arylová skupina nebo S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je atom vodíku, arylová nebo alkylová skupina, výhodně substituent
A
R je atom vodíku, chlor, brom, fluor, methoxyskupina, ethoxyskupina, fenyl, dimethylaminosulfonyl, 3-chlorfenyl-aminosulfonyl, karboxyskupina, methoxyskupina-aminosulfonyl, methylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-aminosulfonyl, dimethylaminosulfonyl, izopropylamino-sulfonyl, výhodněji atom vodíku, fluor, nebo brom;
o substituent R je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, arylové skupiny, výhodně arylové skupiny případně substituované jedním nebo dvěma substitutenty vybranými ze skupiny sestávající se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny a heteroarylové skupiny, výhodně heteroarylové skupiny případně substituované jedním nebo dvěma substitutenty vybranými ze skupiny sestávající se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny; výhodně atom vodíku, methoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl, 3,4-dichlorfenyl, 2-methoxy5-izopropylfenyl, 4-n-butylfenyl, 3-izopropylfenyl, výhodněji atom vodíku nebo fenyl; a substituent R4 je atom vodíku.
V rámci výše uvedené výhodné skupiny (18) je výhodnější skupina sloučenin taková, kde:
substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je definován v podstatě vynálezu, výhodně -NRu(CH2)nR12 nebo -NR13R14 definovaný v podstatě vynálezu.
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, /erc-butyl, izobutyl nebo n-butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R , kde substituent R je hydroxyskupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, η-, izo nebo fórc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenyl.
0 0 ·· 0
Ve výše uvedené výhodné skupině (18) je další výhodnější skupina sloučenin taková, kde:
substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je definován v podstatě vynálezu, výhodně -NRn(CH2)nR12 nebo -NR13R14 definován v podstatě vynálezu.
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, ferc-butyl, izobutyl nebo «-butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a substituent R je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxy skupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, «-, izo nebo terc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenyl.
(19) Další výhodnější skupina sloučenin obecného vzorce (I) je taková, kde : substituenty R1 a R4 jsou atom vodíku;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15 a -S(O)2NR13R14;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, -S(O)2NR13R14, arylové skupiny a heteroarylové skupiny;
substituent R5 je -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny a -C(O)R17.
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je to, ve kterém sloučenina mající strukturu popsanou v bodě (15) je:
substituent R10 vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, nižší alkoxyskupiny a -NR1 ýCH^nR12, kde nje 2 nebo 3;
substituent R11 vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny; a substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z arylové skupiny a -NR13R14
0001
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je to, ve kterém sloučenina mající strukturu popsanou v předešlých dvou odstavcích obsahuje substituenty R13 a R14 nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny a spojené substituenty, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O-(CH2)2- nebo
-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(20) Další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které:
substituent R1 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, arylové skupiny a -S(O)2NR13R14;
□ substituent R je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 je atom vodíku;
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny;
substituent R6 je -C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové a arylové skupiny;
substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 nebo 3.
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je sloučenina mající strukturu popsanou v přímo předchozím odstavci, ve které substituent R3 je arylová skupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami vybranými ze skupiny sestávající se z nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny a halogenu.
(21) Taktéž další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které:
substituent R1 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, arylové skupiny a -S(O)2NR13R14;
• • · • • • * • • • · • ·· • » • ft ·· •
• • • •
• • • • • 9 · •
• · • · · • · · ·· · • · ···
o substituent R je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 je atom vodíku ;
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny;
substituent R6 je -C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové a arylové skupiny;
substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 nebo 3, substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, nižší alkoxyskupiny, -NR13R14 a -NRn(CH2)nR12, kde n je 1,2 nebo 3, substituent R11 je atom vodíku a substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, heteroarylové skupiny a -NR13R14.
(22) Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je sloučenina mající strukturu popsanou v přímo předchozím odstavci, ve které substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, heteroarylové skupiny a spojených substituentů, -(CH2)4-, -(CH2)5-, (CH2)2-O-(CH2)2-, nebo -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(23) Další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které;
substituent R1 je -C(O)NR8R9, kde substituent R8 je atom vodíku a substituent R9 je arylová skupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami vybranými ze skupiny sestávající se z halogenu, hydroxyskupiny a nižší alkoxyskupiny;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, arylové skupiny a -S(O)2NR13R14;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 je atom vodíku;
• · ·· · substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny;
substituent R6 je -C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové a arylové skupiny;
substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 nebo 3, (24) Další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které:
substituent R1 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny, -C(O)R15 a -S(O)2NR13R14;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R15;
substituent R4 j e atom vodíku; substituent R5 je -C(O)R10; a substituenty R6 a R7 spojeny dohromady tvoří skupinu -(CH2)4-.
Ve sloučenině mající strukturu popsanou v právě předešlém odstavci je výhodné výhodné provedení takové, kde substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -NR13R14 a -NH(CH2)nNR13R14, kde n je 2 nebo 3.
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je to, ve kterém sloučenina mající strukturu popsanou v předešlých dvou odstavcích obsahuje substituenty R13 a R14 nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny a spojených substituentů, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- nebo -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
Detailní popis
PK, jejichž katalytická je modulována sloučeninami podle předloženého vynálezu, zahrnují tyrosinkinázy, jenž mohou být rozděleny na dva typy, receptorové tyrosinkinázy (RTK) a buněčné tyrosinkinázy (CTK) a serin-threoninkinázy (STK). Přenos signálu
zprostředkovaný RTK je přitom zahájen extracelulární interakcí se specifickým růstovým faktorem (ligandem), po níž následuje dimerizace receptoru, přechodná stimulace vlastní aktivity proteinové tyrosinkinázy a fosforylace. Vytvoří se tak vazebná místa pro molekuly intracelulární signální transdukce a vedou k vytvoření komplexů se spektrem cytoplasmatických signálních molekul, které usnadňují adekvátní buněčnou odpověď (například buněčné dělení, metabolické účinky na extracelulární mikroprostředí), viz Schlessinger a Ullrich, 1992, Neuron 9: 303 - 391.
Bylo prokázáno, že fosforylační místa tyrosinu na receptorech růstového faktoru fungují jako vysoce afinní vazebná místa pro domény SH2 (src homologie) na signálních molekulách. Fantl et al., 1992, Cell 69: 413 - 423; Songyang et al., 1994, Mol.Cell. Biol. 14: 2777 - 2785; Songyang et al., 1993, Cell 72: 767 - 778; a Koch et al., 1991, Science 252: 668 - 678. Bylo identifikováno několik intracelulárních substrátových proteinů, které se asociují s receptorovými tyrosinkinázami (RTK). Mohou být rozděleny do dvou hlavních skupin: (1) substráty, které mají katalytickou doménu, a (2) substráty, které takovou doménu nemají, ale slouží jako adaptéry a asociují se s katalyticky aktivními molekulami (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767 - 778). Specificita interakcí mezi receptory a doménami SH2 jejich substrátů je určována aminokyselinovými zbytky, bezprostředně obklopujícími fosforylovaný tyrosinový zbytek. Rozdíly ve vazebných afinitách mezi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvencemi obklopujícími fosfotyrosinové zbytky na konkrétních receptorech korelují s pozorovanými rozdíly v jejich substrátových fosforylačních profilech (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767 - 778). Zpozorování vyplývá, že funkce každé receptorové tyrosinkinázy je určována nejen profilem její exprese a dostupností ligandů, ale i řadou „downstreamových“ transdukčních drah signálu, které jsou aktivovány konkrétním receptorem. Fosforylace tedy poskytuje významný regulační stupeň, který určuje selektivitu signálních drah vyvolávaných konkrétními receptory růstového faktoru, jakož i receptory diferenciačního faktoru.
STK, primárně cytosolové, ovlivňují vnitřní biochemii buňky často jako zaváděcí odpověď na výskyt PTK. STK se podílejí na signálním procesu, který iniciuje syntézu DNA a následnou mitózu, která vede k buněčné proliferaci.
PK signální transdukce má tedy za následek, mezi dalšími odpověďmi, buněčnou proliferaci, diferenciaci, růst a metabolizmus. Abnormální buněčná proliferace může vést k širokému spektru poruch a onemocnění, včetně vývoje neoplazie, např. karcinomu, • 9
9 • 9
9 sarkomu, glioblastomu a hemangiomu, poruch, např. leukémie, psoriázy, arteriosklerózy, artritidy a diabetické retinopatie a dalších poruch souvisejících s nekontrolovanou angiogenezi a/nebo vaskulogenezí.
Přesné pochopení mechanizmu, kterým sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují PK, není třeba znát k využívání předloženého vynálezu. Avšak předpokládá se, i když to neznamená omezení na určitý konkrétí mechanzmus nebo teorii, že tyto sloučeniny interagují s aminokyselinami v katalytické oblasti PK. PK mají typicky bilobátovou strukturu, kde ATP se zřejmě váže ve štěrbině mezi dvěma laloky v oblasti, ve které jsou aminokyseliny mezi PK konzervativní. Dále se předpokládá, že inhibitory PK se váží nekovalentními interakcemi, např. vodíkovou vazbou, van der Waalsovými silami a iontovými interakcemi ve stejné obecné oblasti jako se výše zmíněný ATP váže na PK. Konkrétněji se dá říci, že 2-indolinonová složka sloučenin podle předloženého vynálezu se váže v obecné mezeře normálně obsazené adeninovým kruhem ATP. Specifita konkrétní molekuly pro příslušné PK může pak vznikat jako výsledek dalších interakcí mezi různými substituenty na 2-indolinonovém jádře a aminokyselinovými doménami specifickými vůči konkrétním PK. Různé substituenty indolinonu tedy mohou přispívat k preferenční vazbě na konkrétní PK. Možnost výběru sloučeniny, která bude aktivní v různých vazebných místech ATP (nebo jiného nukleotidu), umožňuje, že sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou použitelné pro zacílení jakéhokoliv proteinu na takové místo. Sloučeniny uvedené v předloženém vynálezu tedy jsou použitelné při in vitro testech s těmito proteiny a rovněž vykazují in vivo terapeutické účinky vlivem interakcí s takovými proteiny.
Dále poskytují sloučeniny podle předloženého vynálezu terapeutický způsob ošetření různých druhů pevných nádorů, včetně, ale není to na ně, karcinomů, sarkomů, včetně Kaposiho sarkomu, erythroblastomu, glioblastomu, meningiomu, astrocytomu, melanomu a myoblastomu. Ošetření nebo prevence nepevných nádorů, např. leukémie, rovněž spadá do předloženého vynálezu. Indikace mohou zahrnovat, ale bez omezení, rakoviny mozku, rakoviny močového měchýře, ovariální rakoviny, rakoviny žaludku, rakoviny pankreatu, rakoviny tlustého střeva, rakoviny krve, rakoviny plic a rakoviny kostí.
Další příklady typů poruch souvisejících s nepřiměřenou aktivitou PK, kde mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu použitelné při prevenci, ošetření a studiu, zahrnují, ale bez omezení, buněčné proliferativní poruchy, fibrotické poruchy a metabolické poruchy.
99 » · ·
I 9
I · · » · · ·· 999 • · 63
Buněčné proliferativní poruchy, u kterých je možná prevence, ošetření nebo další studie podle předloženého vynálezu zahrnují rakovinu, proliferativní poruchy krevních cév a proliferativní poruchy mesangiálních buněk.
Proliferativní poruchy krevních cév se týkají poruch souvisejících s abnormální vaskulogenezí (tvorba krevních cév) a angiogenezí (šíření krevních cév). Zatímco vaskulogeneze a angiogeneze hraje důležitou roli při různých normálních fyziologických procesech, např. vývoji embrya, tvorby žlutého tělíska, hojení ran a regenerace orgánu, mohou tyto poruchy hrát klíčovou roli při vývoji rakoviny, a tím vést k tvorbě nových kapilár potřebných k udržení aktivity nádoru. Další příklady proliferativních poruch krevních cév zahrnují artritidu, kde nové kapilární krevní cévy napadají klouby a ničí chrupavku, a oční onemocnění jako třeba diabetickou retinopatii, kde nové kapiláry na sítnici napadají sklivec, způsobují krvácení a slepotu.
Bylo zjištěno, že dvě strukturně příbuzné RTK vážou VEGF s vysokou afinitou: receptor tyrosinu 1 typu fms (fit-1) (Shibuya et al., Oncogene 5:519- 524,1990; DeVries et al. Science 255; 989 - 991,1992) a receptor KDR/FLK-1 také známý jako VEGF-R2. Bylo publikováno, že růstový faktor vaskulámích endothelových buněk je specifický mitogen endotheliálních buněk s in vitro promotomí aktivitou k růstu endotheliálních buněk. Ferrara & Henzel, 1989, Biochein. Biophys. Res. Comm., 161: 851 - 858; Vaisman et al., 1990, J. Biol. Chem., 265: 19461 - 19566. Údaje uvedené v přihlášce vynálezu U.S. č. 08/193,829, 08/038,596 a 07/975,750, důrazně poukazují na to, že VEGF není odpovědný pouze za proliferaci endotheliálních buněk, ale také za prvotní regulaci normálních a patologických angiogenezí. Obecně viz Klagsbum & Soker, 1993, Current Biology, 3(10) 699 - 702; Houck, et al., 1992, J. Biol. Chem., 267: 26031 - 26037.
Normální vaskulogeneze a angiogeneze hraje důležitou roli při různých fyziologických procesech, např. embryonálním vývoji, hojení ran, regeneraci orgánu a ženských reproduktivních procesech, např. vývoji folikul ve žlutém tělísku během ovulace a růstu placenty po těhotenství. Folkman & Shing, 1992, J. Biological Chem., 26Ί (16):10931 - 34. Nekontrolovatelná vaskulogeneze a/nebo angiogeneze bývá spojena s onemocněními, např. diabetem, jakož i s maligními pevnými nádory, které jsou na vaskularizaci závislé z hlediska růstu. Klagsbum & Soker, 1993, Current Biology, 3(10) 699 - 702; Folkham, 1991, J. Nati. Cancer. Inst., 82: 4 - 6; Weidner, et al., 1991, New Engl. J. Med., 324: 1 - 5.
*> · • · ·· ·* ·» * · · • « * · · • · » ·· ·**
Předpokládaná role VEGF při proliferaci a migraci endotheliálních buněk během angiogeneze a vaskulogeneze indikuje důležitou roli receptoru KDR/FLK-1 při těchto procesech. Onemocnění, např. diabetes mellitus (Folkman, 198, in Xlth Congress of Thrombosis and Haemostasis (Verstraeta, et al., eds.), pp. 583 - 596. Leuven University Press, Leuven) a artritida, jakož i růst maligního nádoru, mohou vyplývat z nekontrolovatelné angiogeneze. Viz např. Folkman, 1971, V. Engl. J. Med., 285: 1182 1186. Receptory, na které se VEGF specificky vážou, jsou důležité a účinné cíle regulace a modulace vaskulogeneze a/nebo angiogeneze a různých závažných onemocnění, která zahrnují abnormální buněčných růst způsobený těmito procesy. Plowman, et al., 1994, DN&P, 7(6):334 - 339. Detailněji hraje receptor pro KDR/FLK-1 vysoce specifickou roli při neovaskularizaci vytvářející vybraný cíl pro terapeutické přístupy k ošetření rakoviny a dalších onemocnění zahrnujících nekontrolovatelnou tvorbu krevních cév.
Předložený vynález tedy poskytuje sloučeniny schopné regulace a/nebo modulace tyrosinkinázové transdukce signálu, včetně transdukce signálu receptoru KDR/FLK-1 za účelem inhibice nebo podpory angiogeneze a/nebo vaskulogeneze, tzn. sloučeniny inhibují, zabraňují nebo interferují se signálem transdukovaným KDR/FLK-1 za předpokladu, že je aktivován ligandem např. VEGF. Ačkoliv se předpokládá, že sloučeniny podle předloženého vynálezu působí na receptor nebo další komponentu společně s transdukční signální drahou tyrosinkinázy, mohou také působit přímo na nádorové buňky vznikající v důsledku nekontrolovatelné angiogeneze.
Ačkoliv názvosloví lidských a myších protějšků generického receptoru „flk-I“ je rozdílné, v mnoha ohledech jsou zaměnitelné. Myšší receptor, Flk-1, a jeho lidský protějšek, KDR, mají sekvenční homologii z 93,4% v intracelulámí doméně. Myšší Flk-1 se rovněž váže na lidský receptor VEGF se stejnou afinitou jako myšší VEGF, a tudíž je aktivován ligandem odvozeným od kterékoliv species. Millauer et al., 1993, Cell, 72: 835 846; Quinn et al., 1993, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90: 7533 - 7537. FLK-1 se také asociuje s a následně tyrosin fosforyluje lidské substráty RTK (např. PLC-γ nebo p85), pokud jsou koexprimovány v buňkách 293 (lidské embryonální ledvinové fibroblasty).
Proto modely, které se opírají o receptor FLK-1, jsou přímo aplikovatelné k pochopení funkce receptoru KDR. Například použití myššího receptoru FLK-1 ve způsobech, které indentifikují sloučeniny, jenž regulují myšší dráhu signální transdukce, jsou přímo aplikovatelné k identifikaci sloučenin, které mohou být používány k regulaci lidské dráhy transdukce signálu, tzn. regulují aktivitu spojenou sreceptorem KDR.
* * «
N · ·· • ♦ · « · » · • · · »· ♦»· #·« ·» *·
Chemické sloučeniny identifikované jako inhibitory KDR/FLK-1 in vitro tedy mohou být potvrzeny na vhodných in vivo modelech. Myší i potkaní in vivo zvířecí modely byly potvrzeny jako excelentní způsoby zkoumání klinické účinnosti agens působících na KDRFLK-1 indukovanou dráhu transdukce signálu.
Předložený vynález tedy poskytuje sloučeniny, které regulují, modulují a/nebo inhibují vaskulogenezi a/nebo angiogenezi ovlivněním enzymatické aktivity receptoru KDR/FLK-1 a interference se signálem transdukovaným KDR/FLK-1. Předložený vynález tedy poskytuje terapeutický přístup k ošetření mnoha druhů pevných nádorů, včetně, ale není to nikterak limitováno, glioblastomu, melanomu a Kaposiho sarkomu, a karcinomu vaječníku, plic, prsu, prostaty, pankreatu, tlustého střeva a epidermoidního karcinomu. Navíc z dostupných údajů lze říci, že podání sloučenin, které inhibují dráhu transdukce signálu zprostředkovanou KDR/Flk-1, může být také používáno při ošetření hemangiomu, restenózy a diabetické retinopatie.
Dále ještě se tento vynález týká inhibice vaskulogeneze a angiogeneze dalšími dráhami zprostředkovanými receptorem, včetně dráhy zahrnující receptor flt-1.
Transdukce signálu zprostředkovaná receptorovou tyrosinkinázou je přitom zahájena extracelulární interakcí se specifickým růstovým faktorem (ligandem), po níž typicky následuje dimerizace receptoru, tranzitní stimulace vnitřní aktivity proteinové tyrosinkinázy a autofosforylace. Vytvoří se tak vazebná místa pro molekuly íntracelulární signální transdukce a vedou k vytvoření komplexů se spektrem cytoplasmatických signálních molekul, které usnadňují adekvátní buněčnou odpověď (například buněčné dělení, diferenciaci, metabolické efekty, změny extracelulárního mikropro středí), viz Schlessinger a Ullrich, 1992, Neuron 9: 1 - 20.
Blízká homologie intracelulámích oblastí KDR/FLK-1 s receptorem PDGF-β (50,3% homologie) a/nebo příbuzným receptorem flk-1 ukazuje na indukci dráhy transdukce signálu. Například bylo pro receptor PDGF-β publikováno, že členové rodiny src (Twamley et al, 1993, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90 : 7696 - 7700), fosfatidylinositol-3'-kináza (Hu etal., 1992, Mol. Cell. Biol., 12 : 981 - 990), fosfolipáza cy (Kashishian & Cooper, 1993, Mol. Cell. Biol., 4 : 49 - 51), ras-GTPázu-aktivující protein, (Kashishian et al., 1992, EMBO J., 11 : 1373 - 1382), PTP-ED/syp (Kazlauskas et al, 1993, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 10 90 : 6939 - 6943), Grb2 (Arvidsson et al., 1994, Mol. Cell. Biol., 14: 6715 - 6726) a adaptérové molekuly Shc a Nck (Nishimura et al., 1993, Mol. Cell. Biol., 13: 6889 - 6896) se vážou na oblasti zahrnující různá autofosforylační místa.
*4
9
9 • 9
9
99
9 9
9
9 9
9 9
999
Obecněji viz Claesson-Welsh, 1994, Prog. Growth Factor Res., 5:37 - 54. Tudíž pravděpodobně dráhy transdukce signálu aktivované KDR/FLK-1 zahrnují dráhu ras (Rozakis et al., 1992, Nátuře, 360 : 689 - 692), PI-3'-kinázu, dráhy zprostředkované src a plcy. Každá z těchto dráh může hrát kruciální roli při angiogenním a/nebo vaskulogenním účinku KDR/FLK-1 v endotheliálních buňkách. Tudíž se další aspekt předloženého vynálezu týká použití zde popsaných organických sloučenin k modulaci angiogeneze a vaskulogeneze, protože tyto procesy jsou řízeny těmito dráhami.
Naopak jsou zahrnuty i poruchy související se smrštěním, kontrakcí nebo zavíráním krevních cév, jako je restenóza, a mohou být ošetřovány nebo může být jim zabráněno způsoby podle předloženého vynálezu.
Fibrotické poruchy se týkají abnormální tvorby extracelulárních matricí. Příklady fibrotických poruch zahrnují hepatickou cirhózu a proliferativní poruchy mesangiálních buněk. Hepatická cirhóza je charakterizována přírůstkem konstituentů extracelulární matrice, což vede k tvorbě hepatických jizev. Zvětšená extracelulární matrice mající za následek hepatické jizvy může být také způsobena virovou infekcí, např. hepatitidou. Zdá se, že při hepatické cirhóze hrají hlavní roli lipocyty. Další implikované fibrotické poruchy zahrnují aterosklerózu.
Proliferativní poruchy mesangiálních buněk se vztahují k poruchám způsobeným abnormální proliferací mesangiálních buněk. Mesangiální proliferativní poruchy zahrnují různá lidská renální onemocnění, např. glomerulonefritidu, diabetickou nefropatii a maligní nefrosklerózu, jakož i poruchy jako trombotické mikroangiopatické syndromy, odhojování transplantátu a glomerulopatie. RTK PDGFR se podílí na udržení proliferace mesangiálních buněk. Floge etal., 1993, Kidney International 43:47S - 54S.
Mnoho druhů rakovin zahrnuje poruchy proliferace buněk a, jak je uvedeno výše, souvisí PK s buněčnými proliferativními poruchami. Tudíž není překvapující, že PK, např. členové rodiny RTK, souvisejí se vznikem rakoviny. Některé z těchto receptorů, jako EGFR (Tuzí et al., 1991, Br. J. Cancer 63 : 227-233, Torp et al., 1992, APMIS 100 : 713 719) HER2/neu (Slamon et al., 1989, Science 244 : 707 - 712) a PDGF-R (Kumabe et al., 1992, Oncogene, 7 : 627 - 633) jsou při mnoha nádorech exprimovány v nadměrném množství a/nebo perzistentně aktivovány autokrinními kličkami. Při nejběžnějších a nejvážnějších rakovinách byla totiž zjištěna nadměrná exprese těchto receptorů (Akbasak and Suner-Akbasak et al., 1992, J. Neurol. Sci., 111 : 119- 133, Dickson et al., 1992, Cancer TreatmentRes. 61 : 249 - 273, Korc etal., 1992,7 Clin. Invest. 90 : 1352 - 1360) a
autokrinní kličky (Lee andDonoghue, 1992, J. Cell. Biol., 118 : 1057 - 1070, Korc etal., supra, Akbasak and Suner-Akbasak et al., supra). Například EGFR souvisí s karcinomem skvamózních buněk, astrocytomem, glioblastomem, rakovinou hlavy a krku, rakovinou plic a rakovinou močového měchýře. HER2 souvisí s rakovinou prsu, ovariální rakovinou, rakovinou žaludku, rakovinou plic, rakovinou slinivky a močového měchýře. PDGFR souvisí s glioblastomem a melanomem, jakož i rakovinou plic, ovariální rakovinou a rakovinou prostaty. RTK c-met také souvisí s tvorbou maligního nádoru. Například c-met souvisí, mezi jinými rakovinami, také s kolorektálními, tyreoidálními, pankreatickými, gastrickými a hepatocelulámími karcinomy a lymfomy. Navíc c-met je spojen také s leukémií. Exprese genu c-met ve velkém množství byla také zjištěna u pacientů s Hodgkinsovou a Burkittsovou nemocí.
IGF-IR, kromě toho, že se podílí na nutriční podpoře a diabetů 2.typu, souvisí také s několika typy rakovin. Například IGF-I se také podílí jako autokrinní růstový stimulátor na několika typech nádorů, např. karcinomu buněk při lidské rakovině prsu (Arteaga et al.,
1989, J. Clin. Invest. 84 : 1418 - 1423) a malobuněčného nádoru plic (Macauley et al.,
1990, Cancer Res., 50 : 2511 - 2517). IGF-I, zatímco se celkově podílí na normálním růstu a diferenciaci nervového systému, předpokládá se, že je autokrinmm stimulátorem lidského gliomu. Sandberg-Nordqvist et al., 1993, Cancer Res. 53 : 2475 - 2478. Význam IGF-IR a jeho ligandů při proliferaci buněk je dále podpořen faktem, že mnoho typů buněk v kultuře (fibroblasty, epitheliální buňky, buňky hladkého svalstva, T-lymfocyty, myeloidní buňky, chondrocyty a osteoblasty (kmenové buňky kostní dřeně)) jsou stimulovány k růstu právě IGF-I. Goldring and Goldring, 1991, Eukaryotic Gene Expression, 1 : 301 - 326. Baserga a Coppola se domnívají, že IGF-IR hraje nej důležitější roli při mechanismu transformace a jako takový by mohl být preferovaným cílem pro terapeutické intervence širokého spektra lidských zhoubných bujení. Baserga, 1995, Cancer Res., 55 ; 249 - 252, Baserga, 1994, Cell 79 : 927 - 930, Coppola et al., 1994, Mol. Cell. Biol., 14 : 4588 - 4595.
STK se podílejí na mnoha typech rakoviny, včetně, a to zejména, rakoviny prsu (Cance, etal.,Int. J. Cancer, 54 : 571 - 77 (1993)).
Vztah mezi abnormální aktivitou PK a onemocněním není omezen jenom na rakovinu. Například RTK souvisí s onemocněními, např. psoriázou, diabetes mellitus, endometriózou, angiogenezí, vznikem ateromatózního plaku, Alzheimerovou nemocí, restenózou, von Hippelovým-Lindauovým onemocněním, epidermální hyperproliferací, neurodegenerativními onemocněními, makulámí degenerací spojeni s věkem a • · • · · ♦ · • · · « • · · · · • · · · ··· ·· ···· hemangiomy. Například EGFR byl zjištěn při korneálním a dermálním hojeni ran. Vady vinzulin-R a IGF-1R jsou indikovány při diabetes mellitus 2.typu. Úplnější korelace mezi specifickými RTK a jejich terapeutickými indikacemi lze nalézt vPlowman et al., 1994,
DN&P 7: 334 - 339.
Jak je uvedeno výše, nejen RTK, ale i CTK, včetně, ale není to nikterak limitováno, src, abl, fps, yes, fyn, lyn, lek, blk, hek, fgr a yrk (Bolen et al., 1992, FASEB J., 6 : 3403 3409) se podílejí na proliferativní a metabolické dráze transdukce signálu, a lze tedy očekávat, a bylo to také tak uvedeno, že se podílejí na mnoha poruchách zprostředkovaných PTK, na které je předložený vynález zaměřen. Například bylo zjištěno, že mutovaný src (v-src) je onkoprotein (pp60v'src) u kuřat. Navíc jeho buněčný homolog, proto-onkogen pp60c'src přenáší onkogenní signály mnoha receptorů. Nadměrná exprese EGFR nebo HER2/neu při nádorech vede ke konstitutivní aktivaci pp60c'src, což je charakteristické pro maligní buňky, ale pro normální buňky nikoliv (zcela chybí). Na druhou stranu myši s nedostatkem exprese c-src vykazují osteopetrotický fenotyp, indikující klíčový podíl c-src na funkci osteoklastů a možnou účast na příbuzných poruchách.
Podobně se Zap70 podílí na signalizaci T-buněk, které se podílejí na autoimunních poruchách.
STK souvisí se zánětem, autoimunitní poruchou, imunoodpověďmi a hyperproliferativními poruchami, jako je restenóza, fibróza, psoriáza, osteoartritida a revmatoidní artritida.
PK se také podílejí na uhnízdění embrya. Sloučeniny podle předloženého vynálezu tedy mohou poskytovat účinný způsob prevence takového uhnízdění embrya, a tudíž být použitelné jako ochranný prostředek proti početí. Další poruchy, které mohou být ošetřovány nebo může být jím zamezeno sloučeninami podle předloženého vynálezu, zahrnují imunologické poruchy, např. autoimunitní choroby, např. autoimunitní onemocnění, AIDS a kardiovaskulární poruchy, např. atheroskleróza.
Konečně v současné době existuje podezření, že RTK i CTK se podílejí na hyperimunitních poruchách.
Příklady účinků mnoha názorných sloučenin podle předloženého vynálezu na několik PTK je uvedeno v tabulce 2 níže. Prezentované sloučeniny a data nemají nikterak limitovat rozsah vynálezu.
··♦ · · ··· ·· ··· ··· ··· ·* ····
Dávky a farmaceutický přípravek
Sloučenina podle předloženého vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelná sůl mohou být jako takové podávány lidským pacientům nebo mohou být podávány ve farmaceutických přípravcích, ve kterých jsou výše uvedené látky smíchány s vhodnými nosiči nebo excipientem(y). Techniky přípravy a podání léčiv mohou být nalezeny v „Remingtonů Pharmacological Sciences,“ Mack Publishing Co., Easton, PA., poslední vydání.
Termín „podání“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na podání sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo farmaceutického přípravku obsahujícího sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl podle předloženého vynálezu do organizmu za účelem prevence nebo ošetření poruch souvisejících s PK.
Vhodné způsoby podání zahrnují, ale není to nikterak limitováno, perorální, rektální, transmukózní nebo intestinální podání nebo intramuskulámí, subkutánní, intramedulámí, intratekální, přímé intraventrikulámí, intravenózní, intravitreální, intraperitoneální, intranazální nebo intraokulámí injekce. Výhodnými způsoby podání jsou perorální a parenterální.
Nebo lze podávat sloučeninu spíše místním než systémovým způsobem, např. injekcí sloučeniny přímo do místa nádoru, často vdepotní nebo trvale uvolňující se formulaci.
Dále lze léčivo podávat jako systém cílově specifického podání, např. v lipozómu potaženém protilátkou specifickou na určitý nádor. Lipozómy budou zaměřeny a vychytávány nádorem.
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu mohou být vyráběny standardním způsobem, např. standardními mícháním, rozpuštěním, granulací, přípravou dražé, rozmělňováním, emulgací, enkapsulací, zachytáváním nebo lyofilizací.
Farmaceutické přípravky pro použití podle předloženého vynálezu tak mohou být připraveny standardním způsobem za použití jednoho nebo více fyziologicky přijatelných nosičů obsahujících excipienty a pomocné látky, které usnadňují zpracování aktivních sloučenin do preparátů, které mohou být používány používaných farmaceutickým způsobem. Vlastní příprava je závislá na vybraném způsobu podání.
Pro injekce mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu připraveny ve vodných roztocích, výhodně ve fyziologicky kompatibilních pufrech, např. Hanksův roztok, Ringerův roztok nebo pufru na bázi fyziologického roztoku. Pro transmukózní podání jsou ve formulaci používány takové penetrátory, které jsou vhodné pro překonání dané bariéry. Tyto penetrátory jsou obecně známy.
Pro perorální podání mohou být sloučeniny snadno připraveny spojením aktivních sloučenin se standardními farmaceuticky přijatelnými nosiči. Tyto nosiče umožňují připravit sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě tablet, pilulí, dražé, kapslí, roztoků, gelů, sirupů, kašovitých směsí, suspenzí, atd., pro perorální požití léku pacientem, který má být ošetřován. Farmaceutické preparáty pro perorální použití mohou být připraveny spojením aktivní sloučeniny s pevným excipientem, případně rozemletím výsledné směsi, a po přidání vhodných pomocných látek, pokud je třeba, zpracováním směsi granulí, čímž lze získat tablety nebo dražé. Vhodné excipienty jsou zejména plniva, např. cukry, včetně laktosy, sacharosy, mannitolu nebo sorbitolu; celulosové přípravky, např. kukuřičný škrob, pšeničný škrob, rýžový škrob, bramborový škrob a další látky, např. želatina, tragant, methyl-celulosa, hydroxypropylmethyl-celulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidon (PVP). Pokud je třeba, mohou být přidány prostředky zajišťující rozpad tablety po požití, např. zesítěný polyvinylpyrrolidon, agar nebo kyselina alginová nebo jejich soli, např. alginát sodný.
Jádra dražé jsou opatřena vhodnými povrchovými vrstvami. Pro tento účel mohou být používány koncentrované roztoky cukrů, které mohou případně obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidon, karbopolový gel, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodná organická rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel. Organická barviva nebo pigmenty mohou být přidány do tablet nebo potahových vrstev dražé k identifikaci nebo charakterizaci rozdílných kombinací dávek aktivní sloučeniny.
Farmaceutické preparáty, které mohou být používány perorálně, zahrnují kapsle typu „push-fit“ vyrobené ze želatiny, jakož i měkké, uzavřené kapsle vyrobené ze želatiny a změkčovadla, jako je glycerol nebo sorbitol. Kapsle typu „push-fit“ mohou obsahovat aktivní složky v příměsi s fillery, např. laktosou, pojivý, např. škroby, a/nebo lubrikanty, např. talek nebo stearát hořečnatý, a případně stabilizátory. V měkkých kapslích mohou být aktivní sloučeniny rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných roztocích, např. mastných olejích, minerálním oleji nebo tekutých polyethylenglykolech. Navíc mohou být přidávány stabilizátory.
Farmaceutické přípravky, které mohou být také používány, zahrnují pevné želatinové kapsle. Nikterak nelimitujícím příkladem může být uvedena formulace aktivní sloučeniny ve formě perorálního léčiva jako dvě různě silné dávky 50 a 200 mg (kódy formulace J-011248-AA-00 a J-011248-AA-01). Tyto dvě různě silné dávky jsou připraveny ze stejných granulí naplněním do tuhých želatinových kapslích o různých velikostech, velikost 3 pro 50 mg a velikost 0 pro 200 mg kapsli. Skladba formulace může být např. podle tabulky 2.
Tabulka 2
komponenta název/kvalita konc. vgranulaci (% hmotn./hmotn.) množství v 50 mg kapsle (mg) množství ve 200 mg kapsle (mg)
kód formulace J-011248-AA J-011248-AA-00 J-011248-AA-01
aktivní sloučenina NF 65,0 50,0 200,0
Mannitol NF 23,5 18,1 72,4
croscarmellosa sodná NF 6,0 4,6 18,4
Povidone K 30 NF 5,0 3,8 15,2
stearát hořečnatý NF 0,5 0,38 1,52
kapsle, švédská žluť NF velikost 3 velikost 0
Kapsle mohou být baleny do lahviček z hnědého skla nebo plastu za účelem ochrany aktivní sloučeniny proti světlu. Nádobky obsahující formulaci aktivní sloučeniny ve formě kapsle musí být skladovány při kontrolované teplotě (15 až 30 °C).
Pro podání inhalací jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu standardně podávány ve formě aerosolového spreje v aerosolovém balení nebo v rozprašovači a s vhodným propelentem, např., bez omezení, dichiordifluormethanem, trichlorfluormethanem, dichlortetrafluorethanem nebo oxidem uhličitým. V případě stlačeného aerosolu může být pro dávkování využit ventil, který umožní uvolnění přesného množství látky. Kapsle a patrony, např. ze želatiny, pro použití v inhalačním přístroji nebo insuflátoru mohou být připraveny způsobem, při kterém je spojena prášková směs sloučeniny a vhodná prášková báze, např. laktosa nebo škrob.
• · · ·
Sloučeniny mohou být připraveny pro parenterální podání injekcí, např. injekcí bolusu nebo kontinuální infuzí. Formulace pro injekce mohou být v jednotkových dávkovačích formách, např. v ampulích nebo v obalech pro více dávek, s přidanou konzervační látkou. Přípravky mohou být také ve formách suspenze, roztoků nebo emulzí v olejových nebo vodných nosičích a mohou obsahovat pomocné agens, např. suspendační, stabilizační a/nebo dispergační prostředky.
Farmaceutické formulace pro parenterální podání zahrnují vodné roztoky aktivních sloučenin ve formě, která je rozpustná ve vodě. Dále mohou být suspenze aktivních sloučenin připraveny jako příslušné olejovité injekční supenze. Vhodné lipofilní nosiče zahrnují mastné oleje, např. sezamový olej, estery syntetických mastných kyselin, např. ethyl-oleát nebo triglyceridy nebo látky jako lipozómy. Vodné injekční suspenze mohou obsahovat látky, které zvyšují viskozitu suspenze, např. sodná sůl karboxymethyl-celulosy, sorbitol nebo dextran. Případně suspenze mohou také obsahovat vhodné stabilizátory a/nebo agens, která zvyšují rozpustnost sloučenin, čímž umožňují připravit vysoce koncentrované roztoky.
Alternativně může být aktivní složka ve formě prášku určeného ke spojení s vhodným nosičem před použitím, např.se sterilní apyrogenní vodou.
Sloučeniny mohou být také připraveny jako rektální přípravky, např. čípky nebo retenční klyzma, pomocí např. standardních čípkových baží, jako je kakaové máslo nebo jiné glyceridy.
Kromě výše uvedených formulací, mohou být také připraveny sloučeniny ve formě depotních preparátů. Tyto formulace s dlouhou dobou účinku mohou být podávány implantací (např. subkutánní nebo intramuskulární podání nebo intramuskulární injekcí). Tímto způsobem mohou být připraveny sloučeniny s vhodnými polymerními nebo hydrofóbními materiály (např. v emulzi s farmaceuticky přijatelným olejem) nebo ionexy nebo jako špatně rozpustné deriváty, např. špatně rozpustné soli.
Příkladem, avšak neomezujícím, farmaceutického nosiče pro hydrofóbní sloučeniny podle předloženého vynálezu je systém spolurozpouštědel obsahující benzylalkohol, nepolární surfaktant, organický polymer mísitelný s vodou a vodnou fázi, např. spolurozpouštědlový systém VPD. VPD je roztok 3 % obj. benzylalkoholu, 8 % obj. nepolárního surfaktantu Polysorbát 80 a 65 % obj, polyetbylenglykolu 300, doplněný na konečný objem absolutním ethanolem. Systém spolurozpouštědel VPD (VPD:5W) se sestává z VPD zředěného 1:1 5% dextrosou ve vodném roztoku. Tento systém spolurozpouštědel dobře rozpouští hydrofóbní sloučeniny a sám má po systémovém podání nízkou toxicitu. Přirozeně mohou být podíly systému spolurozpouštědel značně měněny, nicméně tak, aby se zachovaly charakteristické rysy jeho rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé složky systému spolurozpouštědel mohou být měněny: např. místo polysorbátu 80 mohou být používány další nepolární surfaktanty o nízké toxicitě; velikost částic polyethylenglykolu může být různá; polyethylenglykol může být nahrazen dalšími biokompatibilní polymery, např. polyvinylpyrrolidonem; a další cukry nebo polysacharidy mohou nahradit dextrosu.
Nebo může být použit jiný dávkový systém pro hydrofóbní farmaceutické sloučeniny. Pro hydrofóbní léčiva jsou standardními příklady přenašečů a nosičů využívaných při tomto způsobu lipozómy a emulze. Navíc mohou být používána určitá organická rozpouštědla, např. dimethylsulfoxid, nicméně často za cenu větší toxicity.
Navíc sloučeniny mohou být podávány systémem trvalého, tj. postupného uvolňování, např. semipermeabilními matricemi pevných hydrofóbních polymerů obsahujících terapeutické činidlo. V oboru jsou zavedeny a odborníkům známy různé materiály pro postupné uvolňování. Kapsle s postupným uvolňováním mohou v závislosti na svém chemickém charakteru uvolňovat sloučeniny po dobu několika týdnů až více než 100 dnů. V závislosti na chemickém charakteru a biologické stabilitě terapeutického reagens mohou být používány další strategie stabilizace proteinu.
Farmaceutické přípravky také mohou obsahovat vhodné nosiče nebo excipienty v pevné nebo gelové fázi. Příklady takových nosičů nebo excipientů zahrnují, ale není to na ně omezeno, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, různé cukry, škroby, deriváty celulosy, želatinu a polymery, např. polyethylenglykoly.
Mnoho sloučenin podle předloženého vynálezu modulujících PK může být ve formě fyziologicky přijatelných solí, kde nárokovaná sloučenina může tvořit negativně nebo pozitivně nabitou složku. Příklady solí, ve kterých sloučenina vytváří pozitivně nabitou část, zahrnují, ale není to nikterak limitováno, kvarterní amonné soli (definované zde na jiném místě), např. hydrochlorid, sulfát, uhličitan, laktát, tartrát, malát, maleát, sukcinát, kde atom dusíku kvarterní amonné skupiny je dusík vybrané sloučeniny podle předloženého vynálezu, který zreagoval s příslušnou kyselinou. Soli, ve kterých sloučenina podle předloženého vynálezu vytváří negativně nabitou část, zahrnují, ale není to nikterak limitováno, vápenaté a hořečnaté soli vytvořené reakcí skupiny karboxylové kyseliny ve • 9 ··· · · ··· _ . ·· ··♦ ·»· ··· ·* ···· sloučenině s příslušnou bází (jako je hydroxid sodný (NaOH), hydroxid draselný (KOH), hydroxid vápenatý (Ca(0H)2), atd.).
Farmaceutické přípravky vhodné pro použití v předloženém vynálezu zahrnují přípravky, ve kterých jsou aktivní složky obsaženy v množství, které je dostatečné k dosažení zamýšleného záměru, např. modulace aktivity PK nebo ošetření nebo prevence poruch spojených s PK.
Konkrétněji, terapeuticky účinné množství znamená množství sloučeniny, které je účinné k prevenci, zmírnění nebo zlepšení symptomů onemocnění nebo k prodloužení přežívání subjektu, který je ošetřován.
Stanovení terapeuticky účinného množství může provést pracovník zkušený v oboru, zejména na základě zde uvedených informací.
Pro jakoukoliv sloučeninu používanou ve způsobu podle předloženého vynálezu může být terapeuticky účinná dávka nejprve stanovena podle testů na buněčných kulturách.
Pak může být dávka testována na buněčných a zvířecích modelech k získání rozmezí oběhové koncentrace, které zahrnuje IC50 stanovenou podle testů na buněčných kulturách (tzn. koncentrace testované sloučeniny, která je potřebná k dosažení 50% inhibice aktivity dané PK). Tyto informace mohou být používány u lidských subjektů k přesnějšímu stanovení účinných dávek.
Toxicita a terapeutická účinnost zde popsaných sloučenin může být stanovena standardními farmaceutickými postupy na buněčných kulturách nebo experimentálních zvířatech, např. stanovením IC50 a LD50 (obě jsou diskutovány v jiné části textu) pro danou sloučeninu. Data získaná z testů na buněčných kulturách a studií na zvířatech mohou být použita ke stanovení rozpětí dávky pro použití u lidí. Dávkování může být v tomto rozmezí různé v závislosti na používané dávkové formě a způsobu podání. Přesná formulace, způsob podání a dávkování mohou být vybrány jednotlivým lékařem v závislosti na stavu pacienta (viz Fingl et al., 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, Ch. 1 pl).
Množství a interval dávky mohou být upraveny individuálně k získání plasmových koncentrací účinné látky, které stačí k udržení modulačních účinků kinázy. Tyto plasmové koncentrace se označují jako minimální účinné koncentrace (MEC. Hodnota MEC bude pro každou sloučeninu jiná, ale může být stanovena z in vitro dat; např. koncentrace potřebná k dosažení 50 až 90% inhibice kinázy může býr stanovena s použitím zde popsaných testů. Dávky potřebné k dosažení MEC budou záviset na individuálních ·75 charakteristickách a způsobu podání. Ke stanovení plazmových koncentrací může být používána HPLC nebo bioanalýzy.
Intervaly mezi dávkami mohou být také stanoveny pomocí hodnoty MEC. Sloučeniny by měly být podávány podle režimu, kterým se udržují plazmové hladiny nad hodnotou MEC v průběhu 10-90% doby, výhodně mezi 30-90% a nejvýhodněji 50-90%.
V současné době se pohybují terapeuticky účinná množství sloučenin obecného vzorce (I) v rozmezí přibližně od 25 mg/m2 do 1500 mg/m2 denně; výhodně asi 3 mg/m2 denně. Výhodněji od 50 mg/qd do 400 mg/qd.
V případech lokálního podání nebo selektivní absorpce nemůže účinná místní koncentrace léčiva odpovídat plazmové koncentraci a dalším standardním způsobům používaným ke stanovení přesného množství dávky a intervalu.
Množství podávaného přípravku bude samozřejmě záviset na ošetřovaném subjektu, závažnosti jeho stavu, způsobu podání, posouzení ošetřujícího lékaře atd.
Přípravky, pokud je třeba, mohou být ve formě balení nebo zásobníku, jako je kit schválený FD A, který může obsahovat jednu nebo více jednotkových dávkovačích forem obsahujících aktivní složku. Balení může např. obsahovat kovovou nebo plastovou fólii, např. měkké průhledné balení. Bálem nebo zásobník může být distribuován společně s návodem k podání. K balení nebo zásobníku může být připojeno upozornění související s obsahem ve formě předepsaného orgánem státní správy regulujícím výrobu, použití nebo prodej farmaceutických prostředků, kterým se schvaluje forma nebo složení přípravků pro lidské nebo veterinární aplikace. Upozorněním tohoto typu může být například nálepka schválená U.S. Food and Drug Administration pro léky na předpis nebo scvhálený příbalový leták. Také mohou být připraveny přípravky obsahující sloučeninu podle vynálezu formulovanou v kompatibilním farmaceutickém nosiči umístěny ve vhodné nádobce a označeny pro ošetření indikovaného stavu. Vhodné indikované stavy uvedené na nálepce mohou zahrnovat ošetření nádoru, inhibici angiogeneze, ošetření fibrózy, diabetů atd.
Další aspekt předloženého vynálezu zahrnuje to, že sloučenina podle předloženého vynálezu nebo její sůl nebo proléčivo může být kombinována s dalšími chemoterapeutiky pro ošetření onemocnění a poruch uvedených výše. Například může být sloučenina, sůl nebo proléčivo podle předloženého vynálezu kombinována s alkylačními činidly, jako je fluorouracil (5-FU) samotný nebo v další kombinaci s leukovorinem; nebo další alkylační činidla, například, ale není to nikterak limitováno, jiná pyrimidinová * · • · • · · ····· ···· · · · · · « • · · · ♦ . · · · ·· ··· ··· ··· ·· ···· analoga, např. UFT, capecitabin, gemcitabin a cytarabin, alkylsulfonáty, např. busulfan (používaný při ošetření chronické granulocytové leukémie), improsulfan a piposulfan;
aziridiny, např. benzodepa, karboquon, meturedepa a uredepa; ethyleniminy a methylmelaminy, např. altretamin, triethylenmelamin, triethylenfosfor-amid, triethylenthiofosfor-amid a trimethylolmelamin; a dusíkaté hořčice, např. chlorambucil (používaný při ošetření chronické lymfocytámí leukémie, primární makroglobulinémie a nehodgkinova lymfomu), cyklofosf-amid (používaný při ošetření Hodgkinovy nemoci, mnohačetného myelomu, neuroblastomu, rakoviny prsu, ovariální rakoviny, rakoviny plic,
Wilmova nádoru a rabdomyosarkomu), estramustin, ifosf-amid, novembrichin, prednimustin a uracilové hořčice (používané při ošetření primární trombocytózy, nehodgkinova lymfomu, Hodgkinovy nemoci a ovariální rakoviny); a triaziny, např.
dacarbazin (používaný při ošetření sarkomu měkké tkáně).
Sloučenina, sůl nebo proléčivo podle předloženého vynálezu může být také používáno v kombinaci s dalšími antimetabolitovými chemoterapeutiky, například, ale není to nikterak limitováno, analoga kyseliny listové skupiny, např. methotrexát (používaný při ošetření akutní lymfocytámí leukémie, choriokarcinomu, mycosis fungiodes rakoviny prsu, rakoviny hlavy a krku a osteogenního sarkomu) a pteropterin; a purinová analoga, např. merkaptopurin a thioguanin, který nalezl použiti při ošetření akutní granulocytámí, akutní lymfocytámí a chronické granulocytámí leukémie.
Také se uvažuje, že sloučenina, sůl nebo proléčivo podle předloženého vynálezu může být také používáno v kombinaci s chemoterapeutiky na přírodní bázi, například, ale není to nikterak limitováno, vínkové alkaloidy, např. vinblastin (používaný při ošetření rakoviny prsu a rakoviny varlete), vinkristin a vindesin; epipodofylotoxiny, například etoposid a teniposid, obě jsou použitelné při ošetření rakoviny varlete a Kaposiho sarkomu; antibiotická chemoterapeutika, například daunorubicin, doxorubicin, epirubicin, mitomycin (používaný k ošetření rakoviny žaludku, čípku, tlustého střeva, prsu, močového měchýře a pankreatu), daktinomycin, temozolomid, plikamycin, bleomycin (používaný při ošetření rakoviny kůže, jícnu a genitourinámího traktu); a enzymatická chemoterapeutika, např. L-asparagináza.
Kromě výše uvedených mohou být také sloučeniny, soli nebo proléčiva podle předloženého vynálezu používány v kombinaci s koordinačními komplexy na bázi platiny (cisplatina, atd.); substituovanými močovinami, např. hydroxymočovina; deriváty » · · ·· ···· methylhydrazinu, např. prokarbazin; adrenokortikálními supresivy, např. mitotan, aminoglutethimid; a hormony a antagonisty hormonů, např. adrenokortikosteriody (např. prednison), progestiny (např. kapronát hydroxyprogesteronu); estrogeny (např. diethylstilbesterol); antiestrogeny, např. tamoxifen; androgeny, např. propionát testosteronu; a inhibitory aromatáz, např. anastrozol.
Také se předpokládá, že kombinace sloučeniny podle předloženého vynálezu bude účinná v kombinaci s mitoxantronem nebo paclitaxelem pro ošetření pevných nádorů nebo leukémií, například, ale není to nikterak limitováno, akutní myeloidní leukémie (nelymfocytární).
Obecný syntetický postup
K přípravě sloučenin podle předloženého vynálezu je možno použít této obecné metody:
Příslušně substituovaný 2-oxoindol (1 ekviv.), příslušně substituovaný aldehyd (1,2 ekviv.) a báze (0,1 ekviv.) se smíchají v rozpouštědle (1-2 ml/mmol 2-oxoindolu) a směs se pak zahřívá po dobu asi 2 až asi 12 hodin. Po ochlazení se vzniklý precipitát filtruje, promyje studeným ethanolem nebo etherem a suší za vakua, čímž se získá produkt v pevné formě. Pokud nevznikne precipitát, reakční směs se koncentruje a zbytek se trituruje směsí dichlormethanu a etheru, výsledná pevná látka se shromáždí filtrací a suší. Produkt může být případně dále čištěň chromatografií.
Báze může být organická nebo anorganická báze. Je-li používána organická báze, pak je jí výhodně dusíkatá báze. Příklady organický dusíkatých báze zahrnují, ale bez omezení, diizopropylamin, trimethylamin, triethylamin, anilin, pyridin, 1,8diazabicyklo [5.4.1 ]undec-7-en, pyrrolidin a piperidin.
Příklady anorganických bází zahrnují, ale bez omezení, amoniak, hydroxidy alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, fosforečnany, uhličitany, hydrogenuhličitany, hydrogensírany a amidy. Alkalické kovy zahrnují lithium, sodík a draslík, zatímco alkalické zeminy zahrnují vápník, hořčík a baryum.
Ve výhodném provedení předloženého vynálezu, za předpokladu, že rozpouštědlo je protické, např. voda nebo alkohol, je báze anorganická báze alkalického kovu nebo alkalické zeminy, výhodně hydroxid alkalického kovu nebo alkalické zeminy.
4 4 4 ·· ·· ···· 4 4 ·· 4·· • 44 4 4 4 4 *4
444* 4 4 444 ·· 444 44· 444 44 4444
Odborné veřejnosti, a to na základě obecných principů organické syntézy a dosavadního popisu, nebude činit potíže zvolit pro příslušnou reakci nejvhodnější bázi.
Rozpouštědlo, ve kterém reakce probíhá, může být buď protické nebo aprotické, výhodně protické.
Termín „protické rozpouštědlo“ se vztahuje na rozpouštědlo, která má atom(y) vodíku kovalentně vázaný k atomům kyslíku nebo dusíku, což činí vodíkové atomy značné kyselými, a tím schopnými podílet se solutem na vodíkových vazbách. Příklady protických rozpouštědel zahrnují, ale není to nikterak limitováno, vodu a alkoholy.
Termín „aprotické rozpouštědlo“ se vztahuje na rozpouštědlo, které může být polární i nepolární, ale neobsahuje kyselé vodíky, a tudíž není schopné podílet se solutem na vodíkových vazbách. Příklady nepolárních aprotických rozpouštědel zahrnují, ale není to nikterak limitováno, pentan, hexan, benzen, toluen, methylenchlorid a tetrachlormethan.
Příklady polárních aprotických rozpouštědel zahrnují chloroform, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxid a dimethylform-amid.
Ve výhodném provedení podle předloženého vynálezu je rozpouštědlo protické, výhodně voda nebo alkohol, např. ethanol.
Reakce je prováděna při teplotách, které jsou vyšší než pokojová teplota. Teplota se obecně pohybuje od asi 30°C do asi 150°C, výhodně od asi 80°C do asi 100°C, nejvýhodněji od asi 75°C do asi 85°C, což je asi teplota varu ethanolu. Termín „asi“ znamená, že teplota se výhodně pohybuje v rozmezí 10 stupňů Celsia uvedené teploty, nejvýhodněji v rozmezí 2 stupňů Celsia uvedené teploty. Tudíž například „asi 75°C“ znamená 75°C ± 10°C, výhodně 75°C ± 5°C a nej výhodněji 75°C ± 2°C.
2-Oxoindoly a aldehydy mohou být snadno syntetizovány standardními chemickými způsoby. Z textu by mělo být odborné veřejnosti srozumitelné, že sloučeniny podle předloženého vynálezu lze připravit i jinými syntetickými způsoby a následující příklady slouží jako návrh způsobu přípravy, který nemá být nikterak limitující.
» 9 ·· »· · ·♦· · ··
Příklady provedení vynálezu
Následující přípravy a příklady jsou zde pro snazší pochopení předloženého vynálezu a nemají nikterak limitovat rozsah vynálezu, ale pouze ho ilustrovat a reprezentovat.
Syntetické příklady
Způsob A: Formylace pyrrolů
POCI3 (1,1 ekviv.) se přidá po kapkách do dimethylformamidu (3 ekviv.) při teplotě -10°C, poté se přidá příslušný pyrrol rozpuštěný v dimethylformamidu. Po míchání po dobu dvou hodin se reakční směs zředí H2O a alkalizuje na pH 11 s ION KOH. Vzniklý precipitát se spojí filtrací, promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá požadovaná aldehyd.
Způsob B: Saponifikace esterů pyrrolkarboxylové kyseliny
Směs esteru pyrrolkarboxylové kyseliny a KOH (2-4 ekviv.) v EtOH se refluxuje, dokud reakce neskončí (podle TLC). Ochlazená reakční směs se okyselí na pH 3 1N HC1. Vzniklý precipitát se spojí filtrací, promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá pyrrolkarboxylová kyselina.
Způsob C: Amidace
Do míchaného roztoku pyrrolkarboxylové kyseliny rozpuštěné v dimethylformamidu (0,3 M) se přidá l-ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl)karbodiimid (1,2 ekviv.), 1-hydroxybenzotriazol (1,2 ekviv.) a triethylamin (2 ekviv.). Přidá se příslušný amin (1 ekviv.) a reakce se míchá do té doby, dokud nedoběhne, a sleduje se na TLC. Pak se do reakční směsi přidá ethylacetát a roztok se promyje nasyceným roztokem NaHCO3 a solankou (s dodatečnou solí), suší nad bezvodým MgSCU a koncentruje, čímž se získá požadovaný amid.
• 9 99 • · w • 99 • 9 9 • 9 99 9 ·
«9
9 » 9
9
9Γ» 999 »9
9 9 • 9 9
9 9
9 9
9999
Způsob D: Kondenzace aldehydů a oxindolů obsahujících substituenty karboxylové kyseliny
Směs oxindolu (1 ekviv.), 1 ekviv. aldehydu a 1 - 3 ekviv. piperidinu (nebo pyrrolidinu) v ethanolu (0,4 M) se míchá při teplotě 90 - 100°C do té doby, dokud reakce nedoběhne, a sleduje se na TLC. Směs se pak koncentruje a zbytek okyselí 2N HC1. Vzniklý precipitát se promyje vodou a ethanolem a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá produkt.
Způsob E: Kondenzace aldehydů a oxindolů neobsahujících substituenty karboxylové kyseliny
Směs oxindolu (1 ekviv.), 1 ekviv. aldehydu a 1 - 3 ekviv. piperidinu (nebo pyrrolidinu) v ethanolu (0,4 M) se míchá při teplotě 90 - 100°C do té doby, dokud reakce nedoběhne, a sleduje na TLC. Směs se pak ochladí na pokojovou teplotu a vzniklý pevný podíl se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a suší, čímž se získá produkt. Pokud se po ochlazení reakční směsi nevytvoří precipitát, směs se koncentruje a čistí sloupcovou chromatografií.
C. Příklady syntéz oxindolů
Následující příklady syntézy reprezentativních oxindolů nemají nikterak limitovat rozsah předloženého vynálezu. Na základě následujícího popisu budou odborné veřejnosti jasné alternativní způsoby přípravy uvedených oxindolů, jakož i dalších oxindolů používaných k přípravě sloučenin podle předloženého vynálezu. Tyto syntézy a oxindoly spadají rovněž do rozsahu a charakteru tohoto vynálezu.
5-amino-2-oxindol
5-Nitro-2-oxindol (6,3 g) se hydrogenuje v methanolu nad 10% palladiem na aktivním uhlí, čímž se získá 3,0 g (60% výtěžek) požadované sloučeniny ve formě pevné bílé látky.
ft ft*· · ft ft « « ftft »· ·· • ftft · · • · ft « * · ft · · · · • ft ftftft ·<· ··· ftft ftft ft· • ft • ft • ft ft ft • ftftft
5-Brom-2-oxindol
2-Oxindol (1,3 g) ve 20 ml acetonitrilu se ochladí na teplotu -10°C a do reakční směsi se za intenzivního míchání pomalu přidá 2,0 g V-bromsukcinimidu. Reakění směs se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě -10°C a 2 hodiny při teplotě 0°C. Precipitát se spojí, promyje vodou a suší, čímž se získá 1,9 g (90% výtěžek) požadované sloučeniny.
4-MethyI-2-oxindoI
Diethyloxalát (30 ml) ve 20 ml suchého etheru se přidá za stálého míchání do 19 g ethoxidu draselného suspendovaného v 50 ml suchého etheru. Směs se ochladí v ledové lázni a pomalu se přidá 20 ml 3-nitro-o-xylenu ve 20 ml suchého etheru. Hustá tmavá červená směs se zahřívá při refluxu po dobu 0,5 hodiny, koncentruje na tmavě červenou pevnou látku a nechá reagovat s 10% roztokem hydroxidu sodného, dokud se nerozpustí téměř veškerý pevný podíl. Tmavě červená směs se nechá reagovat s 30% peroxidem vodíku, dokud se červená barva směsi nezmění na žlutou. Alternativně se směs nechá reagovat s 10% roztokem hydroxidu sodného a 30% peroxidem vodíku, dokud tmavě červená barva roztoku nezmizí. Pevný podíl se odfiltruje a filtrát okyselí 6N kyselinou chlorovodíkovou. Výsledný precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje vodou a suší za vakua, čímž se získá 9,8 g (45% výtěžek) 2-methyl-6-nitrofenyloctové kyseliny ve formě bělavé pevné látky. Pevný podíl se hydrogenuje vmethanolu nad 10% palladiem na aktivním uhlí, čímž se získá 9,04 g požadované sloučeniny ve formě bílé pevné látky.
7-brom-5-chlor-2-oxindol
5-Chlor-2-oxindol (16,8 g) a 19,6 g V-bromsukcinimidu se suspenduje ve 140 ml acetonitrilu a refluxuje po dobu 3 hodin. Po 2 hodinách refluxu byl na TLC (silikagel, ethylacetát) vidět 5-chlor-2-oxindol nebo V-bromsukcinimid (Rf 0,8), produkt (Rf 0,85) a druhý produkt (Rf 0,9), jejichž podíly se nezměnily ani po další hodině při refluxu. Směs se ochladí na teplotu 10°C, precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje 25 ml ethanolu a suší odsazením po dobu 20 minut v nálevce, čímž se získá 14,1 g vlhkého produktu (56% výtěžek). Pevný podíl se suspenduje ve 200 ml denaturo váného ethanolu a kašovitá směs se míchá a refluxuje po dobu 10 minut. Směs se ochladí v ledové lázni na teplotu 10°C.
• ·
Pevný produkt se spojí vakuovou filtrací, promyje 25 ml ethanolu a suší za vakua při teplotě 40°C, čímž se získá 12,7 g (51% výtěžek) 7-brom-5-chlor-2-oxindolu.
5-Fluor-2-oxindol
5-Fluorisatin (8,2 g) se rozpustí v 50 ml hydrátu hydrazinu a refluxuje po dobu 1,0 hodiny. Reakční směs se nalije do ledové vody. Precipitát se pak filtruje, promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá požadovaná sloučenina.
5-Nitro-2-oxindol
2-Oxindol (6,5 g) se rozpustí v 25 ml koncentrované kyseliny sírové a směs se udržuje při teplotě -10 až -15°C, zatímco se po kapkách přidává 2,1 ml dýmavé kyseliny dusičné. Po přidání kyseliny dusičné se reakční směs míchá při teplotě 0°C po dobu 0,5 hodiny a nalije do ledové vody. Precipitát se spojí filtrací, promyje vodou a krystalizuje z 50% kyseliny octové. Krystalický produkt se pak filtruje, promyje vodou a suší za vakua, čímž se získá 6,3 g (70%) 5-nitro-2-oxindolu.
5-Aminosulfonyl-2-oxindol
Do 100 ml baňka naplněné 27 ml chlorsulfonové kyseliny se pomalu přidá 13,3 g
2-oxindolu. Reakční teplota se během přidávání udržuje pod 30°C. Po přidání se reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny, zahřívá při teplotě 68°C po dobu 1 hodiny, ochladí a nalije do vody. Precipitát se promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá 11,0 g 5-chlorsulfonyl-2-oxindolu (50% výtěžek), který se dále používá bez čištění.
5-Chlorsulfonyl-2-oxindol (2,1 g) se přidá do 10 ml hydroxidu amonného v 10 ml ethanolu a míchá při pokojové teplotě přes noc. Směs se koncentruje a pevný podíl se spojí vakuovou filtrací, čímž se získá 0,4 g (20% výtěžek) požadované sloučeniny ve formě bělavé pevné látky.
• ·
5-Isopropylaminosulfonyl-2-oxindol
Do 100 ml baňky naplněné 27 ml chlorsulfonové kyseliny se pomalu přidá 13,3 g
2-oxindolu. Reakční teplota se během přidávání udržuje pod 30°C. Po přidání se reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny, zahřívá při teplotě 68°C po dobu 1 hodiny, ochladí a nalije do vody. Precipitát se promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá 11,0 g 5-chlorsulfonyl-2-oxindolu (50% výtěžek), který se dále používá bez čištění.
Suspenze 3 g 5-chlorsulfonyl-2-oxindolu, 11,5 g izopropylaminu a 1,2 ml pyridinu v 50 ml dichlormethanu se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin, během kterých se vytvoří pevný podíl, jenž se spojí vakuovou filtrací, kašovitá směs se promyje horkým ethanolem, ochladí, spojí vakuovou filtrací a suší za vakua při teplotě 40°C přes noc, čímž se získá 1,5 g (45%) 5-izopropylaminosulfonyl-2-oxindolu.
!H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,69 (s, br, 1H, NH), 7,63 (dd, J = 2 a 8 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 7 Hz, 1H, NH-SO2-), 6,93 (d, J = 8 Hz, 1H), 3,57 (s, 2H), 3,14-3,23 (m, 1H, CH-(CH3)2), 0,94 (d, J = 7 Hz, 6H, 2 x CH3),
5-F enylaminosulfony 1-2-oxindol
Suspenze 5-chlorsulfonyl-2-oxindolu (1,62 g, 7 mmol), anilinu (0,782 ml, 8,4 mmol) a pyridinu (1 ml) v dichlormethanu (20 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Reakční směs se zředí ethylacetátem (300 ml) a okyselí 1N kyselinou chlorovodíkovou (16 ml). Organická vrstva se promyje hydrogenuhličitanem sodným a solankou, suší a koncentruje. Zbytek se promyje ethanolem (3 ml) a pak chromatografuje na sloupci silikagelu ve směsi methanolu a dichlormethanu (1:9) jako mobilní fázi, čímž se získá 5-fenylaminosulfonyl-2-oxindol.
!H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,71 (s, br, 1H, NH), 10,10 (s, br, 1H, NH), 7,57-7,61 (m, 2H), 7,17-7,22 (m, 2H), 7,06-7,09 (m, 2H), 6,97-7,0 (m, 1H), 6,88 (d, J = 8, 4 Hz, 1H), 3,52 (s, 2H).
• ·
Pyridm-3-yIamid 2-oxo-2,3-dihydro-lH-indol-5-sulfonové kyseliny
Roztok 5-chlorsufonyl-2-oxindolu (3 g) a 3-aminopyridinu (1,46 g) v pyridinu (15 ml) se míchá při pokojové teplotě přes noc, kdy se objeví hnědá pevná látka. Pevný podíl se filtruje, promyje ethanolem a suší za vakua, čímž se získá 1,4 g (38%) pyridin-3ylamidu
2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonové kyseliny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,74 (s, 1H, NH), 10,39 (s, 1H, SO2NH), 8,278,28 (d, 1H), 8,21-8, 23 (m, 1H), 7,59-7, 62 (m, 2H), 7,44-7,68 (m, 1H), 7,24-7,28 (m, 1H), 6,69-6,71 (d, 1H), 3,54 (s, 2H).
MS m/z (APCI+) 290,2.
5- Fenyloxindol
5-Brom-2-oxindol (5 g, 23,5 mmol) se za stálého míchání a malého záhřevu rozpustí v 110 ml toluenu a 110 ml ethanolu. Přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (1,9 g, 1,6 mmol), poté 40 ml (80 mmol) 2M vodného uhličitanu sodného. Do této směsi se přidá benzen-boritá kyselina (3,7 g, 30,6 mmol) a směs se zahřívá při teplotě olejové lázně 100°C po dobu 12 hodin. Reakční směs se ochladí, zředí ethylacetátem (500 ml), promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (200 ml), vodou (200 ml), IN HC1 (200 ml) a solankou (200 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a koncentruje, čímž se získá hnědá pevná látka. Triturací dichlormethanem se získá 3,8 g (77%) 5-fenyl2-oxindolu jako hnědé pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,4 (br s, 1H, NH), 7,57 (dd, J = 1,8 a 7,2 Hz, 1H), 7,5 až 7,35 (m, 5H), 7,29 (m, 1H), 6,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 209 [M]+.
Podobným způsobem mohou být připraveny následující oxindoly:
6- (3,5-dichlorfenyI)-l,3-dihydro-indol-2-on *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,46 (br, 1H, NH), 7,64 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 7,57 (m, 1H), 7,27 (m, 2H), 7,05 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 3,5 (s, 2H).
MS-EI m/z 277/279 [M]+.
6-(4-Butylfenyl)-1,3 -dihydro-indol-2-on *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (s, 1H, NH), 7,49 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8 Hz, 3H), 7,17 (dd, J = 1,5 a 7,8 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 3,48 (s, 2H, CH2CO), 2,60 (t, J = 7,5 Hz, 2Hz, CH2CH3), 1,57 (m, 2H, CH2), 1,32 (m, 2H, CH2), 0,9 (t, J = 7,5Hz, 3H, CH3).
6-(5-Izopropy 1-2-methoxyfenyl)-1,3 -dihydro-indol-2-on *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,29 (br s, 1H, NH), 7,167, 21 (m, 2H), 7,08 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,97-7,01 (m, 2H), 6,89 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H, OCH3), 3,47 (s, 2H, CH2CO), 2,86 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 281 [M]+.
6-(4-Ethylfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on ‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (br s, 1H, NH), 7,50 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 1,6 & 7,5 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 3,48 (s, 2H, CH2CO), 2,63 (q, J = 7,6 Hz, 2H, CH2CH3), 1,20 (t, J = 7,6 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 237 [M]+.
6-(3-Izopropylfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,37 (br s, 1H, NH), 7,43 (m, 1H), 7,35-7, 39 (m, 1H), 7,17-7, 27 (m, 3H), 7,01 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 3,49 (s, 2H, CH2CO), 2,95 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,24 (d, J = 6, 8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 251 [M]+.
6-(2,4-Dim ethoxy feny l)-l,3-d ihydro-indol-2-on ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (br s, 1H, NH), 7,17 (m, 2H), 6,93 (dd, J =
1,6 & 7,6 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,58 (dd, J = 2,4 &
8,5 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H, OCH3), 3,74 (s, 3H, OCH3), 3,45 (s, 2H, CHO).
MS-EI m/z 269 [M]+.
6-Pyridin-3-yI-l,3-dihydro-indol-2-on ‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,51 (s, 1H, NH), 8,81 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,55 (dd, J = 1,8 a 5,7 Hz, 1H), 8 (m, 1H), 7,45 (dd, J = 5,7 a 9,3 Hz, 1H), 7,3 (m, 2H), 7,05 (s, 1H), 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 210 [M]+.
(3-chlor-4-ethoxy fenvl)-amid 2-oxo-2,3-dihy dro- l/f-mdol-4-karboxyIové kyseliny
Do roztoku 4-karboxy-2-oxindolu (200 mg, 1,13 mmol) a 3-chlor-4methoxy feny laminu (178 mg, 1,13 mmol) v dimethylformamidu (15 ml) při pokojové teplotě se přidá benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorfosfát (BOP činidlo, 997 mg, 2,26 mmol), poté 4-dimethylaminopyridin (206 mg, 1,69 mmol), směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 72 hodin. Reakce se pak zředí ethylacetátem (300 ml), promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou, 2N kyselinou chlorovodíkovou (100 ml), vodou (3 x 200 ml) a solankou. Pak se suší nad síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se trituruje ethylacetátem, čímž se získá (3-chlor-4methoxyfenyl)-amid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-4-karboxylové kyseliny ve formě růžové pevné látky. *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,50 (s, br, 1H, NH), 10,12 (s, br, 1H, NH), 7,9 (s, J = 2,5 Hz, 1H), 7,62 (dd, J = 2,5 & 9 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,32 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,13 (d, J, - 9 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H, OCH3), 3,69 (s, 2H, CH2).
MS-EI m/z 316 [M]+.
4-Karboxy-2-oxindol
Roztok trimethylsilyldiazomethanu v hexanu (2 M) se přidává po kapkách do roztoku 2,01 g 2-chlor-3-karboxynitrobenzenu v 20 ml methanolu při pokojové teplotě, dokud se nepřestane uvolňovat plyn. Ke zhášení přebytku trimethylsilyldiazomethanu se přidá kyselina octová a zbytek se suší v sušárně přes noc. Získaný 2-chlor-3methoxykarbonylenitrobenzen je dostatečně čistý k následující reakci.
Dimethyl-malonát (6,0 ml) se přidá do ledově studené suspenze 2,1 g hydridu sodného v 15 ml DMSO. Reakční směs se míchá při teplotě 100°C po dobu 1 hodiny, pak se ochladí na pokojovou teplotu a po částech se přidá 2-chlor-3methoxykarbonylenitrobenzen (2,15 g) a směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se pak ochladí na pokojovou teplotu, nalije do ledové vody, okyselí na pH = 5 a extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje solankou, suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje, čímž se získají 3,0 g dimethyl-2methoxykarbonyl-6-nitrofenyl-malonátu.
Dimethyl-2-methoxykarbonyl-6-nitrofenylmalonát (3, 0 g) se refluxuje v 50 ml 6N kyseliny chlorovodíkové přes noc. Směs se koncentruje do sucha, přidá se 20 ml ethanolu a
1,1 g chloridu cínatého a směs se refluxuje po dobu 2 hodin. Směs se filtruje přes Celit, koncentruje a chromatografuje na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu, hexanu a octové kyseliny jako mobilní fázi, čímž se získá 0,65 g (37%) 4-karboxy-2-oxindolu jako bílé pevné látky.
!H NMR (360 MHz, DMSO-dg) δ 12,96 (s, br, 1H, COOH), 10,74 (s, br, 1H, NH), 7,53 (d, J = 8Hz, 1H), 7,39 (t, J = 8Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8Hz, 1H), 3,67 (s, 2H).
D. Syntéza pyrrolem substituovaných 2-indolinonů
Příklad 1
4-methyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-l/7-pyrrol-2-karboxylová kyselina
Ethylester 4-methyl-2-pyrrolkarboxylové kyseliny (komerčně dostupný) se formyluje podle způsobu A, čímž se získá (73%) ethylester 5-formyl-4-methyl-2pyrrolkarboxylové kyseliny, která se pak hydrolyzuje podle způsobu B, čímž se získá 5formyl-4-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylová kyselina (58%).
Oxindol (133 mg, 1 mmol) se kondenzuje 5-fbrmyl-4-methyl-l//-pyrrol-2karboxylovou kyselinou (153 mg) podle způsobu D, čímž se získá 268 mg (100%) požadované sloučeniny jako oranžovo-červené pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,84 (s, br, 1H, NH), 12,84 (s, br, 1H, COOH), 10,98 (s, br, 1H, NH), 7,82 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H, H-vinyl), 7,18 (t, J =
7,5 Hz, 1H), 7,01 (t, J = 7,5 Hz, 1H),6,88 (d, J - 7,5 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H, CH3).
MS (negativní mód) 266, 8 [M-l]+.
Příklad 2
4-Methyl-5-( 1 -methyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-177-pyrrol-2-karboxylová kyselina
-Methyl-l,3-dihydro-indol-2-on (147 mg, 1 mmol) se kondenzuje s 5-formyl-4methyl-l//-pyrrol-2-karboxylovou kyselinou (153 mg) podle způsobu D, čímž se získá 250 mg (86%) požadované sloučeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13, 82 (s, br, 1H, NH), 12, 88 (s, br, 1H, 7,83 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H, H-vinyl), 7,26 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,02-7,09 (m, 2H), 6,70 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H, CH3).
MS m/z 283, 0 [M+l]+.
Příklad 3 methylester 4-methyl-5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-2karboxylové kyseliny
Oxindol (105 mg, 0,79 mmol) se kondenzuje s methylesterem 5-formyl-4-methyll//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (110 mg, 0,67 mmol) podle způsobu E, čímž se získá
153,2 mg (81%) požadované sloučeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, br, 1H, NH), 10,97 (s, br, 1H, NH), 7,82 (d, J - 7,6 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H, H vinyl), 7,2 (dt, J = 1, 2 & 7, 7 Hz, 1H), 7,01 (dt, J = 1, 2, 7,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2 Hz, 1H).
MS (ES) m/z 283 [M++l],
Příklad 4 ethylester 5-(5 -chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-4-methyl-1//-pyrrol-2karboxylové kyseliny
5-Chlor-l,3-dihydro-indol-2-on (2, 22 g, 13, 2 mmol) se kondenzuje s ethylesterem
5-formyl-4-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (2, 43 g) podle způsobu E, čímž se získá 4,1 g (94%) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,95 (s, br, 1H, NH), 7,98 (d, J = 2, 2 Hz, 1H, H-4), 7,78 (s, 1H, H-vinyl), 7,18 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, 1H, H-6), 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 7,34 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-3'), 4,27 (q, J = 7,2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,33 (s, 3H, CH3), 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 330 [M+].
Příklad 5
-(5 -chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-4-methyl-lř/-pyrrol-2-karboxy lo vá kyselina
Směs ethylesteru 5-(5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4-methyll/f-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (1,3 g, 4 mmol) a hydroxidu draselného v methanolu (25 ml) a ethanolu (25 ml) se zahřívají při refluxu přes noc. Nerozpustné látky se odstraní filtrací a směs se neutralizuje 6N kyselinou chlorovodíkovou, čímž se získá 0,876 g (70%) požadované sloučeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,80 (s, br, 1H, NH), 12,90, (s, br, 1H, COOH), 11,06 (s, br, 1H, NH), 8,02 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-4), 7,81 (s, 1H, H-vinyl), 7,20 (dd, J =
1,8 & 8,3 Hz, 1H, H-6), 6,89 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 6,72 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-3'), 2,35 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 302 [M+].
Příklad 6 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 5 -(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-4methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylově kyseliny * ť 99 • 9 · «99 • · ·
9* ·99 • · • 9 ·
•9» 999
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0, 16 g, 0,76 mmol) se kondenzuje s (3-pyrrolidinl-yl-propyl)-amidem 5-formyl-4-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (0,2 g, připravený podle způsobu C), čímž se získá 60 mg (17%) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH), 8,42 (t, J = 5,8 Hz, 1H, CONCH2), 8,12 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-4), 7,78 (s, 1H, Hvinyl), 7,30 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, 1H, H-6), 6,82 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-7), 6,77 (d, J = 2,4 Hz, 1H, H-3'), 3,22-3,31 (m, 2H, CH2), 2,38-2,4-3 (m, 6H, 3 x CH2), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,62-1, 71 (m, 6H, 3 x CH2).
MS-EI m/z 456 a 458 [M+-l a M++2],
Příklad 7 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0,16 g, 0,75 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-4-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (0,2 g, připravený podle způsobu C), čímž se získá 30 mg (8%) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH), 8,40 (m, 1H, CONCH2), 8,12 (d, J = 1,5 Hz, 1H, H-4), 7,78 (s, 1H, H-vinyl), 7,30 (dd, J = 1,5 & 8,2 Hz, 1H, H-6), 6,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7), 6,78 (d, J = 2,4 Hz, 1H, H3'), 3,23 (m, 2H, CH2), 2,38-2,4-5 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,61 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l a M++2j.
Příklad 8 (2-diethylaminoethyl)-amid 5-(5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1Hpyrrol-2-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (212 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (připravený r * 4 » · ·· • · » • · · • · · • t ··· z ethyl-pyrrol-2-karboxylátu podle způsobu A, B a pak C), čímž se získá 162 mg (38%) požadované sloučeniny.
!H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,53 (s, br, 1H, NH), 11,06 (s, br, 1H, NH), 8,37 (t, 1H, CONCH2), 7,89 (m, 2H), 7,32 (dd, J = 2,0 Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,806,84 (m, 2H), 3,3 (m, 2H, CH2), 2,45-2,55 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2) 0,95 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 430 a 432 [M+-l a M++l],
Příklad 9 (2-diethylaminoethyl)-amid 5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmcthyl)-177pyrrol-2-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (209 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 182 mg (42%) požadované sloučeniny.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (s, br, 1H, NH), 11,06 (s, br, 1H, NH), 8,36 (t, 1H, CONCH2), 7,77 (s, 1H, H-vinyl), 7,73 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,64 (d, J =
7,2 Hz, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,32 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,96 (m, 1H), 6,80 (m, 1H), 3,313,32 (m, 2H, CH2), 2,46-2,53 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2), 0,96 (t, J = 6,9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 428 [M+].
Příklad 10 (2-diethylaminoethyl)-methyl-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (212 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)methylamidem 5 -formyl-l/Z-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 246 mg (55%) požadované sloučeniny.
rH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,54 (s, br, 1H, NH), 11,06 (s, br, 1H, NH), 7,90 (m, 2H), 7,33 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, 1H), 6,82-6,85 (m, 3H), 3,55 (s, br, 2H, CH2), 3,25 (s, br, 3H, NCH3),2,57 (t, J = 6,5 Hz, 2H, CH2), 2,45 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 0,91 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
·· ·· • · · • · · • · · • · · · · ·
MS-EI m/z 444 a 446 [M+-1 a M++l],
Příklad 11 (2-diethylaminoethyl)methylamid 5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-l//pyrrol-2-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (209 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)methylamidem 5-formyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 277 mg (63%) požadované sloučeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, br, 1H, NH), 11,04 (s, br, 1H, NH), 7,78 (s, 1H, H-vinyl), 7,73 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,33-7,36 (m, 2H),7,11 (s, 1H),6,84 (m, 1H),6,78 (m, 1H),3,55 (s, br, 2H, CH2), 3,25 (s, br, 3H, NCH3), 2,58 (t, 2H, CH2), 2,44 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 0,92 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
Příklad 12 í
(3-diethylaminopropyl)-amid 3-methyl-5-(2-oxo- l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-\Hpyrrol-2-karboxylové kyseliny
Oxindol (66, 5 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-3-methyl-lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (připraveným z ethylesteru 3formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny podle způsobu B pak C), čímž se získá 39 mg (21%) požadované sloučeniny.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,34 (s, br, 1H, NH), 10,88 (s, br, 1H, NH), 7,62-7,67 (m, 3H), 7,17 (m, lH),-6,99 (m, 1H), 6,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,63 (d, J 1 Hz, 1H), 3,26-3,32 (m, 2H, CH2), 2,41-2,4-8 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 380 [M+],
Příklad 13 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny • ·
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (106 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-3-methyl-l/ř-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 35 mg (15%) požadované sloučeniny.
*H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,35 (s, br, 1H, NH), 11,00 (s, br, 1H, NH), 7,89 (d, J = 1,9 Hz, 1H, H-4), 7,80 (s, 1H, H-vinyl), 7,74 (t, J = 5,3 Hz, 1H, CONCH2), 7,31 (dd, J = 1,9 & 8,4 Hz, 1H, H-6), 6,83 (d, J - 8,4 Hz, 1H, H-7), 6,63 (s, 1H, H-3'), 3,26 (m, 2H, CH2), 2,41-2,4-8 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l a M++l]
Příklad 14 (3-diethy laminopropyl)-amid 3-methyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (105 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-3-methyl-l/ř-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 67, 8 (30%) požadované sloučeniny.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,37 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH), 7,23-7,73 (m, 11H), 3,29 (m, 2H, CH2), 2,41-2,48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,64 (m, 2H, CH2), 0,94 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 456 [M+].
Příklad 15 (3-diethylamino-propyl)-amid 5-(5-methoxy-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-3methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
5-Methoxy-l,3-dihydro-indol-2-on (82,5 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3 -diethy laminopropyl)-amidem 5 -formyl-3 -methyl-1 /f-pyrrol-2 -karboxylové kyseliny, čímž se získá 80 mg (39%) požadované sloučeniny.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,45 (s, br, 1H, NH), 10,70 (s, br, 1H, NH), 7,68-7,70 (m, 2H), 7,32 (d, J - 1,8 Hz, 1H), 6,72-6,79 (m, 2H), 6,60 (s, 1H), 3,73 (s, 3H, OCH3), 3,28 (m, 2H, CH2), 2,41-2,4-8 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 410 [M+].
Příklad 16 (3 -diethylamino-propyl)-amid 5 -(6-methoxy-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 methyl-lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
6-Methoxy-l,3-dihydro-indol-2-on (82, 5 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 63 mg (31%) požadované sloučeniny.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,22 (s, br, 1H, NH), 10,86 (s, br, 1H, NH), 7,39-7,63 a 6, 37-6,55 (m, 6H), 3,73 (s, 3H, OCH3), 3,3 (m, 2H, CH2), 2,45 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,28 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 410 [M+].
Příklad 17 (2-diethylaminoethyl)-amid 3-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7tetrahydro-277-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
Ethylester 4,5,6,7-tetrahydro-2Z/-izoindol-l-karboxylové kyseliny (May, Donald
A.; Lash, Timothy D.; J.Org.Chem., 1992, 57:18,4820-4828) se formyluje podle způsobu A, pak B, čímž se získá 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylová kyselina.
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (1,43 g, 6,8 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)-amidem 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2/í-izoindol-l-karboxylové kyseliny (1,97 g), čímž se získá 2,2 g (67%) požadované sloučeniny jako žluto-oranžové pevné látky.
’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,47 (s, 1H, NH), 11,0 (s, 1H, NH), 8,0 (d, 1H, NH), 7,70 (s, 1H, CH), 7,28 (dd, J = 2,1 a 8,2 Hz, 1H, ArH), 7,16 (m, 1H, ArH), 6,8 (d, J =
8,3 Hz, 1H, ArH), 3,3 (s, 2H, CONH), 2,5 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,78 (br m, 2H, pyrrol CH2), 2,72 (br m, 2H, pyrrol CH2), 1,7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1,74 (br s, 4H, CH2CH2CH2CH2), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 a 486 [M+-l a M++l].
• ·
Příklad 18 (3-diethylaminopropyl)-amid 3-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7tetrahydro-27/-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (20 mg, 0,1 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylové kyseliny (30 mg), čímž se získá 33 mg (46%) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,9 (s, 1H, NH), 8,0 (m, 1H, NH), 7,68 (m, 1H, ArH), 7,4 (m, 1H, ArH), 7,29 (d, J = 1,9 a 8,5Hz, 1H, ArH), 6,8 (d, J = 8 Hz, 1H, ArH), 2,7 (br m, 4H, 2 x NCH2), 2,4 (m, 8H, 4xNCH2), 1,7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1,6 (br m, 2H, CH2CH2CH2), 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 499 a 501 [M+ a M++2],
Příklad 19 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 3 -(5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)4.5.6.7- tetrahydro-27/-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
5- Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (80 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s (3-pyrrolidin-1yl-propyl)-amidem 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylové kyseliny (120 mg), čímž se získá 43 mg (22%) požadované sloučeniny jako hnědo-oranžové pevné látky.
'li NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,4 (s, 1H, NH), 10,9 (s, 1H, NH), 8,0 (m, 1H, NH), 7,69 (m, 1H, ArH), 7,49 (m, 1H, ArH), 7,28 (d, J = 1,7 a 7,8 Hz, 1H, ArH), 6,8 (d, J = 8 Hz, 1H, ArH), 3,3 (br m, 2H, 2 x NCH2), 2,8 (m, 4H, 2 x pyrrolCH2), 2,5 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1,6 (br m, 8H, 2 x pyrrolCH2CH2, CH2CH2CH2 a CONHCH2).
MS-EI m/z 497 a 499 [M+ a M++2].
Příklad 20 (2-diethylaminoethyl)-amid 3 -(2-oxo-6-pyridin-3 -yl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)4.5.6.7- tetrahydro-2Z/-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
6- Pyridin-3-yl-l,3-dihydro-indol-2-on (60 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)-amidem 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2Z/-izoindol-1 -karboxylové
kyseliny (80 mg), čímž se získá 50 mg (38%) požadované sloučeniny jako načervenalé pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,4 (s, 1H, NH), 11 (s, 1H, NH), 8,9 (d, 1H, NH), 8,7 (dd, 1H, ArH), 8,1 (dd, 1H, ArH), 7,9 (d, 1H, ArH), 7,6 (s, 1H, CH), 7,5 (dd, 1H, ArH), 7,3 (dd, 1H, ArH), 7,1 (m, 2H, ArH), 3,35 (m, 2H, CONHCH2), 2,8 (m, 4H, 2 x pyrrolCH2), 2,5 (br m, 6H, N(CH2CH3)2 a NCH2), 1,75 (br s, 4H, 2 x pyrrolCH2CH2), 0,9 (t, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 [Μ*].
Příklad 21 (3-diethylaminopropyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3 -methyl- l/Z-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
Do směsi benzoylchloridu (1 ekviv.) a chloridu hlinitého (1 ekviv.) v dichlorethanu při teplotě 0°C se přidá ethyl-3,5-dimethyl-2-pyrrolkarboxylát (1 ekviv.). Směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 4 hodin. Směs se pak extrahuje ethylacetátem (EtOAc) a H2O, spojené organické extrakty se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší a koncentrují, čímž se získá (51%) 4-benzoyl-3,5-dimethyl-l/7-pyrrol-2karboxylová kyselina.
Směs ethylesteru 4-benzoyl-3,5-dimethyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (4,13 g, 15,2 mmol) a dusičnanu ceričito-amonného (33 g, 4 ekviv.) v 50 ml směsi tetrahydrofuranu (THF), kyseliny octové (HOAc) a H2O (1:1:1) se refluxuje přes noc. Reakční směs se pak ochladí, extrahuje EtOAc a pak alkalizuje na pH 9 uhličitanem sodným. Organická vrstva se pak promyje solankou, suší (MgSO4) a koncentruje, poté čistí sloupcovou chromatografií, čímž se získá 3,25 g (75%) ethylesteru 4-benzoyl-5-formyl-3methyl- l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny jako žluté pevné látky.
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on se kondenzuje s 4-benzoyl-5-formyl-3-methyl-\Hpyrrol-2-karboxylovou kyselinou podle způsobu D, čímž se získá 4-benzoyl-5-(5-brom-2oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-3 -methyl- l//-pyrrol-2-karboxylová kyselina. Tato karboxylová kyselina se pak kondenzuje s TýA-diethyl-l^-propandiaminem podle způsobu C, čímž se získá požadovaná sloučenina.
Ή NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 7,96 (m, 1H, CONCH2), 7,76 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,68 (t, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,40 (s, 2H) 7,33 (dd, J = 1,6 & 8,3 Hz, 1H, H-6), 6,84 (d,
J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,42-2,4-6 (m, 6H, 3 x CH2),2,10 (s, 3H, CH3), 1,65 (m, 2H, CH2), 0,94 (t, J = 7, 0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 564 [M++l],
Příklad 22 (3-morfolin-4-yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3 -methyl-1 //-pyrrol-2 -karboxylové kyseliny lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,10 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH), 7,92 (m, 1H, CONCH2), 7,75 (m, 2H), 7,69 (t, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,33 (dd, J =
1,9 & 8,3 Hz, 1H, H 6), 6,85 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 3,56 (m, 4H, 2 x CH2), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,35 (m, 6H, 3 x CH2), 2,10 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 2H, CH2).
Příklad 23 (3-pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-3-methyl-5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 H-pyrrol-2 -karboxylové kyseliny ’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,18 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH), 8,01 (m, 1H, CONCH2), 7,74 (m, 1H), 7,67 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,32 (s, 1H, H-vinyl), 7,17 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 3,36 (m, 2H, CH2), 2,44 (m, 6 H, 3 x CH2), 2,11 (s, 3H, CH3), 1,651, 75 (m, 6H, 3 x CH2).
MS-EI m/z 482 [M+].
Příklad 24 (3-pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3 -methyl-1 H-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,01 (s, 1H, NH), 11,18 (br s, 1H, NH), 7,98 (m, 1H, CONCH2), 7,75 (m, 2H), 7,68 (m, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,33 (dd, J = 2,0 & 8,2 Hz, 1H, H6), 6,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7), 3,34 (m, 2H, CH2), 2,42-2,4-7 (m, 6 H, 3 x CH2), 2,09 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 2H, CH2), 1,64 (m, 4H, 2 x CH2).
♦ ♦
Příklad 25 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 4-benzoyl-3 -methyl-5-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-1 H-pyrrol-2-karboxylové kyseliny ‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,15 (s, 1H, NH), 11,16 (br s, 1H, NH), 7,98 (m, 1H, CONCH2), 7,77 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,69 (m, 1H), 7,53-7,63 (m, 4H), 7,44 (m, 2H), 7,33-7,37 (m, 2H), 7,24 (s, 2H), 7,12 (s, 1H), 3,36 (m, 2H, CH2), 2,43-2,4-8 (m, 6 H, 3 x CH2), 2,12 (s, 3H, CH3), 1,74 (m, 2H, CH2), 1,69 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 558 [M+],
Příklad 26 (3-pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 4-benzoyl-5-(6-methoxy-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3 -methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,99 (s, 1H, NH), 11,05 (br s, 1H, NH), 7,93 (m, 1H, CONCH2), 7,72 (m, 2H), 7,65 (m, 1H), 7, 54 (m, 2H), 7,15 (s, 1H, H-vinyl), 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-4), 6,51 (dd, J = 2,3 & 8,4 Hz, 1H, H-5), 6,44 (d, J = 2,3 Hz, 1H, H7),3,74 (s, 3H, OCH3), 3,35 (m, 2H, CH2), 2,42-2,4-6 (m, 6 H, 3 x CH2),2,10 (s, 3H, CH3), 1,72 (m, 2H, CH2), 1,65 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 512 [M+].
Příklad 27 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 4-benzoy 1-5 -(5 -methoxy-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-3 -methyl-1//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,24 (s, 1H, NH), 10,90 (br s, 1H, NH), 7,97 (m, 1H, CONCH2), 7,75 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,69 (m, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,24 (s, 1H, Hvinyl), 6,79 (m, 2H), 6,66 (m, 1H), 3,67 (s, 3H, OCH3), 3,34 (m, 2H, CH2), 2,43- 2,48 (m, 6 H, 3 x CH2), 2,14 (s, 3H, CH3), 1,71 (m, 2H, CH2), 1,66 (m, 4H, 2 x CH2),
MS-EI m/z 512 [M+].
• · · · · ·
Příklad 28 (3 -pyrrolidin-1 -yl-propy l)-amid 4-benzoy 1-5 -(5 -fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-3-methyl- l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,20 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH), 8,03 (m, 1H, CONCH2), 7,75 (m, 2H), 7,68 (m, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,38 (s, 1H, H-vinyl), 7,08 (m, 1H), 7,01 (m, 1H), 6,87 (m, 1H), 3,34 (m, 2H, CH2), 2,42-2,4-8 (m, 6 H, 3 x CH2), 2,09 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 2H, CH2), 1,65 (m, 4H, 2 x CH2),
MS-EI m/z 500 [M+j.
Příklad 29 (3-diethylaminopropyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3 -methyl- l/Z-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)-amidem
4-acetyl-5-formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (připraveným z ethylesteru 4-acetyl-5-formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny podle způsobu B pak C), čímž se získá požadovaná sloučenina.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,19 (s, 1H, NH), 11,19 (br s, 1H, NH), 8,15 (m, 1H, CONCH2), 8,11 (s, 1H, H-vinyl), 7,72 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-4), 7,38 (dd, J = 1,8 &
8,2 Hz, 1H, H6), 6,87 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7),3,27 (m, 2H, CH2),2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,46 (m, 9 H, CH3 & 3 x CH2), 1,64 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7, 1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
Příklad 30 (3-pyrrolidin-l-yl-propy l)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3 -methyl-17/-pyrrol-2-karboxylo vé kyseliny ‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,14 (m, 1H, CONCH2), 8,10 (s, 1H, Hvinyl), 7,70 (d, 1H, H-4), 7,36 (dd, J = 1,6 & 8,1 Hz, 1H, H-6), 6,85 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H7), 3,32 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,35-2,4-8 (m, 6H, 3 x CH3), 1,65-1,71 (m, 6H, 3 x CH2).
MS m/z 499 & 501 [M+] & [M++2],
L
100
Příklad 31 (3-morfolin-4-yl-propyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3 -methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 14,20 (s, 1H, NH), 11,26 (br s, 1H, NH), 8,09 (m, 2H, H-vinyl & CONHCH2), 7,73 (d, J = 1,5 Hz, 1H, H-4), 7,38 (dd, J = 1,5 & 8,3 Hz, 1H, H-6), 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 3,55 (m, 4H, 2 x CH2), 3,26 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,35 (m, 6H, 3 x CH3), 1,68 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 514 & 516 [ΝΓ-1] & [M++l].
Příklad 32 (3 -hydroxypropyl)-amid 4-acetyl-5-(5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmeťhyl)-3 methyl-1 //-pyrrol-2-karboxy lové kyseliny
Ή NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,17 (s, 1H, NH), 11,25 (br s, 1H, NH), 8,10 (s, 1H, H-vinyl), 8,03 (m, 1H, CONCH2), 7,71 (br s, 1H, H-4), 7,37 (br d, J = 8,4 Hz, 1H, H6), 6,87 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-7), 4,51 (br s, 1H, OH), 3,51 (br s, 2H, CH2), 3,36 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,43 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 445 & 447 [M+-l] & [M++l].
Příklad 34 (2-morfolin-4-yl-ethyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3-methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,19 (s, 1H, NH), 11,14 (br s, 1H, NH), 8,10 (s, 1H, H-vinyl), 7,84 (m, 1H, CONCH2), 7,71 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-4), 7,38 (dd, J = 1,8 &
8,2 Hz, 1H, H6), 6,87 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7), 3,58 (m, 4H, 2 x CH2), 3,40 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,45 (m, CH3 & CH2).
MS-EI m/z 500 & 502 [M+-1] & [M++1].
L í
♦ 99
·· 99
101
Příklad 35 (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3y lidenmethy l)-3-methy 1-1//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,17 (s, 1H, NH), 11,23 (s, 1H, NH), 8,11 (s, 1H, H-vinyl), 7,91 (m, 1H, CONCH2), 7,73 (d, J = 1,9 Hz, 1H, H-4), 7,39 (dd, J = 1,9 &
8,3 Hz, 1H, H-6), 6,88 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 3,40 (m, 2H, CH2), 2,62 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 1,69 (m, 4H, 2 x CH2).
Příklad 36 [2-(4-hydroxyfenyl)ethyl]-amid4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-3-methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,21 (s, 1H, NH), 11,18 (s, 1H, OH), 9,09 (s, 1H, NH), 8,06-8,10 (m, 2H), 7,73 (s, 1H), 7,38 (d, J - 7,8 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 3,42 (m, 2H, CH2), 2,72 (m, 2H, CH2), 2,56 (s, 3H, CH3CO), 2,37 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 507 & 509 [M+-1] & [M++l].
Příklad 37 (3-diethylaminopropyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2izopropyl-4-fenyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Směs 2-aminoacetofenon-hydrochloridu (1 ekviv.), ethyl-izobutyrylacetátu (1,2 ekviv.) a octanu sodného (2,4 ekviv.) v H2O se míchá při teplotě 100°C po dobu 18 hodin a pak ochladí na pokojovou teplotu, vodná vrstva se oddekantuje a olej se rozpustí v ethylacetátu, promyje vodou a solankou a suší, čímž se získá (93%) ethylester 2-izopropyl4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny ve formě červeno hnědého oleje.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,21 (s, br, 1H, NH), 7,14-7,27 (m, 5H), 6,70 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,02 (q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3), 3,65 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,22 (d, J = 7,5 Hz, 6H, CH(CH3)2), 1,04 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 257 [M+].
-ť ·· • ··· »
44
4 • · 4 4 • 4
4· 44··
102
Tento pyrrol se formyluje podle způsobu A, čímž se získá (41%) ethylester
5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny jako načervenalá pevná látka.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,35 (s, br, 1H, NH), 9,14 (s, 1H, CHO), 7,36 (s, 5H), 3,96 (q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3), 3,74 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,29 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2), 0,90 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 285 [M+j.
Ester pyrrolkarboxylové kyseliny se hydrolyzuje podle způsobu B, čímž se získá (57%) 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny ve formě béžové pevné látky.
‘H NMR, (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,28 (s, br, 1H, COOH), 12,02 (s, br, 1H, NH), 9,10 (s, 1H, CHO), 7,35 (s, 5H), 3,81 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 257 [M+].
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (120 mg, 0,31 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-177-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (připravený podle způsobu C), čímž se získá 120 mg (71%) požadované sloučeniny.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,23 (s, br, 1H, NH), 11,08 (s, br, 1H, NH), 7,38-7,55 (m, 7H, Ar-H & CONCH2), 7,30 (s, 1H, H-vinyl), 7,26 (dd, J = 1,8 & 7,8 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,36 (m, 1H, CH(CH3)2), 3,07 (m, 2H, CH2), 2,34 (q, J = 7, 1 Hz, 4H, N(CH2CH3)2), 2,22 (t, J = 6, 9 Hz, 2H, CH2), 1,40 (m, 2H, CH2), 1,31 (d, J = 6, 9 Hz, 6H, CH(CH3)2), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 565,1 [M++l].
Příklad 38 (3-pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2izopropy 1-4-fenyl-177-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-(5-Brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-fenyl-1Hpyrrol-3-karboxylová kyselina (127 mg, 0,28 mmol) se kondenzuje s 3-pyrrolidin-l-ylpropylaminem (43 mg, 0,336 mmol), čímž se získá 140 mg (66%) požadované sloučeniny.
· ·· ·99·
103 *Η NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,40 (s, br, 1H, NH), 7,38-7,47 (m, 7H), 7,237,27 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,36 (m, 1H, CH(CH3)2), 3,08 (m, 2H, CH2), 2,30 (m, 4H, 2 x CH2), 2,20 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2), 1,62 (m, 4H, 2 x CH2), 1,42 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2), 1,31 (d, J = 7,2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 560 a 562 [M+-l a M++l].
Příklad 39 (2-diethy laminoethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2izopropy 1-4-feny 1-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (57, g, 0,27 mmol) se kondenzuje s (2-diethy laminoethy l)-amidem 5 -formyl-2-izopropyl-4-fenyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (120 mg), čímž se získá 78 mg (53%) požadované sloučeniny jako žlutá pevná látka.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,23 (s, br, 1H, NH), 11,09 (s, br, 1H, NH), 7,38-7,51 (m, 6H), 7,25-7,28 (m, 2H), 7,19 (t, 1H, CONHCH2), 6,85 (d, J - 7,8 Hz, 1H), 3,43 (m, 1H, CH(CH3)2), 3,11 (m, 2H, CH2), 2,28-2, 39 (m, 6H, N(CH2CH3) 2 & CH2, 1,31 (d, J = 6,9 Hz, CH(CH3)2), 0,85 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2.
MS-EI m/z 548 a 550 [M+-1 a M++l],
Příklad 40 [3 -(4-methylpiperazin-1 -yl)propyl] -amid 5-(5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (53 mg, 0,25 mmol) se kondenzuje s [3-(4methylpiperazin-1 -yl)propyl] -amidem 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-1 //-pyrrol-3 karboxylové kyseliny (300 mg), čímž se získá 65 mg požadované sloučeniny.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,22 (s, br, 1H, NH), 11,08 (s, br, 1H, NH), 7,23-7,50 (m, 9H), 6,85 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,37 (m, 1H, CH(CH3)2), 3,05 (m, 2H, CH2), 2,24 (m, 8H, 4xCH2), 2,11 (m, 5H, CH2 & CH3), 1,42 (m, 2H, CH2), 1,31 (d, J = 7,2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 589 a 591 [M+-l a M++l].
104
Příklad 41
5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3karboxylová kyselina
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (170 mg, 0,8 mmol) se kondenzuje s 5-formyl-2izopropyl-4-fenyl-lH-pyrrol-3-karboxylovou kyselinou (205 mg) podle způsobu D, čímž se získá 210 mg (58%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,31 (s, br, 1H, NH), 11,16 (s, br, 1H, NH), 7,26-7,44 (m, 7H), 7,11 (s, 1H, H-vinyl), 6,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,78 (m, 1H, CH(CH3)2), 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 452 [M++l].
Příklad 42 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2methyl-4-fenyl-lí/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5- Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (44 mg, 0,21 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidinl-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2-methyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (70 mg, připravený stejným způsobem jako izopropylový analog výše), čímž se získá 0,03 g (27%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,87 (s, br, 1H, NH), 11,11 (s, br, 1H, NH), 7,36-7,51 (m, 6H), 7,26 (dd, J = 1,8 & 8,1 Hz, 1H), 7,2 (s, 1H, H-vinyl), 7,09 (m, 1H, CONCH2), 6,83 (d, J - 8,1 Hz, 1H), 3,17 (m, 2H, NCH2),2,48 (m, CH3), 2,29-2,35 (m, 6H, 3 x NCH2), 1,59 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 518 a 520 [M+-l a M++l]
Příklad 43 (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 5-[6-(2-methoxyfenyl)-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl] -2-methyl-4-fenyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6- (2-Methoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (50 mg, 0,21 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2-methyl-4-fenyl-17f-pyrrol-3-karboxylové • ·
105 kyseliny (70 mg), čímž se získá 0,04 g (35%) požadované sloučeniny ve formě žlutooranžové pevné látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,82 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH), 7,48 (m, 2H), 7,43 (m, 1H), 7,38 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,24 (m, 2H), 7,16 (s, 1H, Hvinyl), 7,08 (m, 2H), 7,03 (m, 1H), 7,0 (m, 2H), 3,74 (s, 3H, OCH3),3,19 (m, 2H, NCH2), 2,49 (m, CH3), 2,32-2, 38 (m, 6H, 3 x NCH2), 1,59 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 546 [M+],
Příklad 44 (2-dimethylaminoethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2methyl-4-fenyl-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (46 mg, 0,22 mmol) se kondenzuje s (2dimethylaminoethy l)-amidem 5 -formyl-2-methyl-4-fenyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (65 mg), čímž se získá 60 mg (55%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'Η NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,86 (s, br, 1H, NH), 11,09 (s, br, 1H, NH), 7,47-7,49 (m, 2H), 7,38-7,41 (m, 4H), 7,26 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H, H-vinyl), 7,04 (m, 1H, CONCH2), 6,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,15 (m, 2H, NCH2), 2,48 (m, CH3), 2,16 (t, J = 6,8 Hz, 2H, 3 x NCH2), 2,02 (s, 6H, 2 x NCH3).
MS m/z 493 a 494, 8 [M+ a M++2],
Příklad 45 (2-dimethylaminoethyl)-amid 5-[6-(2-methoxyfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl] -2-methy 1-4-fenyl-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-(2-Methoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (53 mg, 0,22 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2-methyl-4-fenyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (65 mg), čímž se získá 0,05 g (44%) požadované sloučeniny ve formě oranžové gumy.
!H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,82 (s, br, 1H, NH), 11,02 (s, br, 1H, NH), 7,37-7,52 (m, 5H), 7,32 (m, 1H), 7,22-7,27 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 7,08 (m, 2H), 7,03 • ·
106 (m, 1H), 7,0 (m, 2H), 3,74 (s, 3H, OCH3), 3,15 (m, 2H, NCH2), 2,49 (m, CH3), 2,16 (t, J = 6, 5 Hz, 2H, NCH2), 2,02 (s, 6H, 2 x NCH3).
MS m/z 521 [M++l].
Příklad 46 ethylester 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-l//pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (60 mg, 0,29 mmol) se kondenzuje s ethylesterem 5 -formyl-2-methyl-4-fenyl-l //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (75 mg), čímž se získá 78 mg (60%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz; DMSO-d6) δ 14,01 (s, br, 1H, NH), 11,13 (s, br, 1H, NH), 7,42-7,46 (m, 3H), 7,27-7,34 (m, 4H),7,12 (s, 1H),6,84 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, 1H), 3,99-4,03 (m, 2H, OCH2CH3), 2,61 (s, 3H, CH3), 0,98-1,03 (m, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 450 a 452 [M+-l a M++l].
Příklad 47 (3-diethylaminopropyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2methyl-4-fenyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0, 47 g, 2,2 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2-methyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0, 75 g), čímž se získá 0,11 g (42%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,86 (s, br, 1H, NH), 7,42-7,46 (m, 3H), 7,377,50 (m, 7H), 7,24-7,28 (m, 2H), 6,83 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,09 (m, 2H, NCH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,38 (q, J = 7,1 Hz, 4H, 2 x NCH2CH3), 2,26 (t, J = 6,9 Hz, 2H, NCH2), 1,42 (m, 2H, NCH2), 0,87 (t, J = 7,1 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 535, 0 a 537 [M+ a M++2].
• ·
107
Příklad 48 (2-dimethylaminoethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Směs terc-butyl-3-oxobutyrátu a dusičnanu sodného (1 ekviv.) v octové kyselině se míchá při pokojové teplotě, čímž se získá fórobutyl-2-hydroximino-3-oxobutyrát.
Ethyl-3-oxobutyrát (1 ekviv.), zinkový prach (3,8 ekviv.) a surový fórc-butyl-2hydroximino-3-oxobutyrát v octové kyselině se míchá při teplotě 60°C po dobu 1 hodiny. Reakční směs se nalije do H2O a filtrát se spojí, čímž se získá (65%) 2-fercbutyloxykarbonyl-3,5-dimethyl-4-ethoxykarbonylpyrrol.
Směs 2-terc-butyloxykarbonyl-3,5 -dimethyl-4-ethoxykarbonylpyrrolu a triethylorthoformiátu (1,5 ekviv.) v trifluoroctové kyselině se míchá při teplotě 15°C po dobu 1 hodiny. Reakce se koncentruje a zbytek čistí, čímž se získá (64%) 2,4-dimethyl-3ethoxykarbonyl-5-formylpyrrol ve formě žlutých jehliček.
2,4-Dimethyl-3-ethoxykarbonyl-5-formylpyrrol se hydrolyzuje podle způsobu B, čímž se získá (90%) 5 -formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina.
NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12 (br s, 2H, NH a CO2H), 9,58 (s, 1H, CHO), 2,44 (s, 3H, C13), 2,40 (s, 3H, CH3).
MS m/z 267 [M+].
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0, 17 g, 0,8 mmol) se kondenzuje s (2dimethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,2 g, připravený podle způsobu C) podle způsobu B, čímž se získá 0,3 g (83%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, br, 1H, NH), 10,94 (s, br, 1H, NH), 8,07 (d, J = 1,8 Hz, 1H, H-4), 7,75 (s, 1H, H-vinyl), 7,44 (t, J = 5,2 Hz, 1H, CONCH2), 7,24 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, 1H, H-6), 6,82 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-7), 3,26-3,33 (m, 2H, NCH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2), 2,18 (s,6H,N(CH3)2).
MS-EI m/z 430 a 432 [M+-l a M++l], * · i
I
108
Příklad 49 (2-dimethylaminoethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (0,17 g, 0,8 mmol) se kondenzuje s (2dimethylaminoethyl)-amidem 5 -formy 1-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (0,2 g), čímž se získá 0,13 g (36%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, br, 1H, NH), 10,93 (, br, 1H, NH), 7,85 (d, J = 7,92 Hz, 1H, H-4), 7,63-7,65 (m, 3H), 7,40-7,47 (m, 3H,), 7,32-7,36 (m, 1H, ArH), 7,30 (dd, J = 1,6 & 7,9 Hz, 1H, H-5), 7,11 (d, J = 1,6 Hz, 1H, H-7), 3,28-3,34 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J = 6,8 Hz, 2H, NCH2), 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 428 [M+],
Příklad 50 (2-dimethylaminoethyl)-amid 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Chlor-l,3-dihydro-indol-2-on (0,1 g, 0,6 mmol) se kondenzuje s (2dimethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl- l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,15 g), čímž se získá 0,22 g (90%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
Tí NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 10,98 (, br, 1H, NH), 7,96 (d, J = 2, 0 Hz, 1H, H-4), 7,75 (s, 1H, Hvinyl), 7,50 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONCH2), 7,12 (dd, J - 2,0 & 8,3 Hz, 1H, H-6), 6,86 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-7), 3,26-3,31 (m, 2H, NČH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,36 (t, J = 6,6 Hz, 2H, NCH2), 2,17 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 386 [M+].
Příklad 51 (2-diethylaminoethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 /7-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
109
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0,17 g, 0,8 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,2
g), čímž se získá 0,09 g (26%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 10,98 (, br, 1H, NH), 8,09 (d, J = 1,7 Hz, 1H, H-4), 7,76 (s, 1H, H-vinyl), 7,42 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONCH2), 7,24 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, 1H, H-6), 6,82 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H-7), 3,23-3,32 (m, 2H, NCH2), 2,46-2,55 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,42 (s, 3H, CH3), 0,96 (t, J = 7,2 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3),
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l a M++l].
Příklad 52 (2-pyiTolidin-l-yl-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0, 09 g, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidinl-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0, 1 g), čímž se získá 0,14 g (81%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 10,98 (, br, 1H, NH), 8,09 (d, J = 1,9 Hz, 1H, H-4), 7,76 (s, 1H, H-vinyl), 7,53 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONCH2), 7,24 (dd, J = 1,9 & 8,5 Hz, 1H, H-6), 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H, H-7), 3,29-3,35 (m, 2H, NCH2), 2,54 (t, J = 6,9 Hz, 2H, NCH2), 2,47 (m, pod DMSO), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,66-1, 69 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 456 a 458 [M+-l a M++l].
Příklad 53 (3-imidazol-1 -yl-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0,09 g, 0,4 mmol) se kondenzuje s (3-imidazol-lyl-propyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-lZ/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0, 1 g), čímž se získá 0,1 g (59%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
110
Ή NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, br, 1H, NH), 10,99 (br, 1H, NH), 8,09 (d, J = 2,2 Hz, 1H, H-4), 7,77 (s, 1H, H-vinyl), 7,71 (t, J = 5,7 Hz, 1H, CONCH2), 7,65 (s, 1H, Ar-H), 7,25 (dd, J = 2,2 & 8,4 Hz, 1H, H-6), 7,20 (s, 1H, Ar-H), 6,89 (s, 1H, ArH), 6,81 (d, J = 8, 4 Hz, 1H, H-7), 4,02 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2), 3,18 (q, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 1,93 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 467 a 469 [M+-l a M++l].
Příklad 54 (2-dimethylaminoethyl)-amid 5-[6-(2-methoxyfenyl)-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-(2-Methoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (30 mg, 0,13 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)-amidem 5-formy 1-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (30 mg), čímž se získá 0,06 g (100%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové gumy.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, br, 1H, NH), 10,89 (s, br, 1H, NH), 7,79 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H, H-vinyl), 7,46 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONCH2), 7,28-7,35 (m, 2H), 6,99-7,11 (m, 4H), 3,76 (s, 3H, OCH3), 3,27-3,31 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,39 (s, 3H, CH3), 2,37 (m, 2H, NCH2), 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M4].
Příklad 55 (2-dimethylaminoethyl)-amid 5-[6-(3-methoxyfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-(3-Methoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (30 mg, 0,13 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (30 mg), čímž se získá 8 mg (14%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, br, 1H, NH), 10,92 (s, br, 1H, NH), 7,84 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H, H-vinyl), 7,42 (m, 1H, CONCH2), 7,36 (d, J =
7,8 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 1,6 & 7,6 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,91 (dd, J = 2,8 & 7,8 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H, OCH3), 3,21-
111
3,33 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,36-2,40 (m, 2H, NCH2), 2,18 (s,6H,N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M+]
Příklad 56 (2-diethylaminoethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-5-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (80 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,1
g) podle způsobu B, čímž se získá 79 mg (46%) požadované sloučeniny.
‘íl NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, br, 1H, NH), 10,95 (br, 1H, NH), 8,15 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H, H-vinyl), 7,71 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,40-7,47 (m, 4H), 7,31 (m, 1H), 6,95 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,2-3,31 (m, 2H, NCH2), 2,46-2,55 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,44 (s, 6H, 2 x CH3), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 456 [M+].
Příklad 57 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-5-fenyl-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (0, 04 g, 0,2 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidinl-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,04 g), čímž se získá požadovaná sloučenina ve formě žluto-oranžové pevné látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, br, 1H, NH), 10,96 (, br, 1H, NH), 8,15 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H, H-vinyl), 7,71 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,49 (t, J = 6,3 Hz, 1H, CONCH2), 7,41-7,46 (m, 3H), 7,31 (m, 1H), 6,95 (d, J - 7,8 Hz, 1H),4,O8 (m, 4H, 2 x NCH2), 3,32 (m, 2H, NCH2), 2,55 (t, J = 7,1 Hz, 2H, NCH2), 2,47 (m, pod DMSO), 2,43 (s, 6H, 2 x CH3), 1,66 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 454 [M+].
·· ·· • ·- * • · *
112
Příklad 58 (3-imidazol-l-yl-propyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethy 1)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5- Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (8 mg, 0,04 mmol) se kondenzuje s (3-imidazol-lyl-propyl)-amidem 5-formy 1-2,4-dimethy 1-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (10 mg), čímž se získá 10 mg (59%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,67 (s, br, 1H, NH), 10,96 (br, 1H, NH), 8,16 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H, H-vinyl), 7,65-7,72 (m, 4H), 7,44 (m, 3H), 7,31 (m, 1H, CONCH2), 7,21 (s, 1H, Ar-H), 4,02 (t, J = 6,5 Hz, 2H, NCH2), 3,19 (q, J = 6,5 Hz, 2H, CONCH2), 2,44 (s, 6H, 2 x CH3), 93 (m, 2H, CH2CH2 CH2).
MS-EI m/z 465 [M+].
Příklad 59 (2-diethylaminoethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6- Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (0,08 g, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,1 g), čímž se získá 65 mg (38%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
‘li NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 10,99 (br, 1H, NH), 7,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,62-7,66 (m, 3H), 7,40-7,47 (m, 3H), 7,28-7,36 (m, 2H), 7,10 (d, J =
1,2 Hz,' 1H), 3,26 (m, 2H, NCH2), 2,46-2,55 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 456 [M+].
Příklad 60 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (30 mg, 0,15 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidinl-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (40 mg), čímž se získá 5,9 mg (8,5%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
·· ··♦
113 *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, br, 1H, NH), 10,99 ( br, 1H, NH), 7,86 (d, J = 7, 8 Hz, 1H), 7,63-7,66 (m, 3H), 7,51 (m, 1H, CONHCH2), 7,45 (m, 2H), 7,28-7,36 (m, 2H), 7,10 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 3,31 (m, 6H, 3 x NCH2),2,55 (t, J - 6,6 Hz, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2),
MS-EI m/z 454 [M+].
Příklad 61 (3-imidazol-l-yl-propyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (8 mg, 0,04 mmol) se kondenzuje s (3-imidazol-lyl-propyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (10 mg), čímž se získá 7,3 mg (43%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH), 10,99 ( br, 1H, NH), 7,86 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,62-7,70 (m, 5H), 7,45 (m, 2,H), 7,35 (m, 1H), 7,30 (dd, J = 1,4 & 8,2 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,10 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 4,02 (t, J = 6,9 Hz, 2H, CH2), 3,19 (m, 2H, NCH2 CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 1,93 (t, J = 6,9 Hz, 2H, NCH2).
MS-EI m/z 465 [M+],
Příklad 62 (2-diethylaminoethyl)-amid 5- [6-(3,5 -dichlorfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-(3,5-Dichlorfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (64 mg, 0,23 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (60 mg), čímž se získá 53 mg (44%) požadované sloučeniny ve formě světle hnědé pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH), 10,99 (s, 1H, NH), 7,89 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-4), 7,69-7,71 (m, 3H), 7,55 (m, 1H, CONCH2), 7,37 (m, 2H), 7,14 (d, J = 1,4 Hz, 1H, H-7), 3,27 (m, 2H, NCH2), 2,48-2,58 (m, 6H, 3 x NCH2),2,45 (s, 3H, CH3), 2,42 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 6,8 Hz, 6H, 3 x NCH2CH3),
MS m/z 526,9 [M++l], ·· ··*
114 ·· ·· ♦ · • · • · • · φ · ··· ·
Příklad 63 (2-diethylaminoethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 řř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydro-indol-2-on (40 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-lřř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 29 mg (33%) požadované sloučeniny ve formě světle oranžové pevné látky.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, br, 1H, NH), 11,05 (s, br, 1H, NH), 8,86 (s, br, 1H), 8,53 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 8,04 (m, 1H), 7,91 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H, H-vinyl), 7,40-7,48 (m, 2H), 7,35 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 3,26 (m, 2H, NCH2), 2,48-2,55 (m, 3 x NCH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,38 (s, 3H, CH3), 0,96 (t, J - 6,9 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 457 [M+]·
Příklad 64 (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 řř-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydro-indol-2-on (60 mg, 0,28 mmol) se kondenzuje s (2pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-lřř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (75 mg), čímž se získá 90 mg (71%) požadované sloučeniny ve formě světle oranžové pevné látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 11,05 (s, br, 1H, NH), 8,86 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,54 (dd, J = 1,5 & 4,8 Hz, 1H), 8,05 (m, 1H), 7,91 (d, J =
7,8 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H, H-vinyl), 7,44-7,53 (m, 2H), 7,36 (dd, J = 1,5 & 8,1 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,33 (m, 2H, NCH2), 2,47-2,57 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 455 [M+]·
• · ····
115
Příklad 65 (3-dimethylaminopropyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 H-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydro-indol-2-on (42 mg, 0,2 mmol) se kondenzuje s (3dimethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 67 mg (75%) požadované sloučeniny ve formě žluto hnědé pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, 1H, NH), 11,00 (s, br, 1H, NH), 8,86 (s, br, 1H), 8,54 (s, br, 1H), 8,04 (m, 1H), 7,90 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H, H-vinyl), 7,63 (m, 1H), 7,45-7,48 (m, 1H), 7,35 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 3,21-3,27 (m, 2H, NCH2),2,43 (s, 3H, CH3),2,41 (s, 3H, CH3),2,28 (m, 2H, NCH2), 2,14 (s, 6H, 2 x NCH3), 1,64 (m, 2H, CHO).
MS-EI m/z 443 [M+],
Příklad 66 (3-dimethylaminopropyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (67 mg, 0,32 mmol) se kondenzuje s (3dimethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (81 mg), čímž se získá 40 mg (28 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
’ίΐ NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, br, 1H, NH), 10,92 (s, br, 1H, NH), 8,14 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,62 (m, 1H), 7,44 (m, 3H), 7,32 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 3,33 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 6H, 2 x CH3), 2,27 (m, 2H, NCH2), 2,13 (s, 6H, 2 x NCH3), 1,63 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 442 [M+].
Příklad 67 (3-diethylaminopropyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
116 • 4
4
4 ·
• ·
4«
5- Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (1,5 g, 7,16 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (2 g), čímž se získá 1,3 g (40%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s, 1H, NH), 10,91 (s, 1H, NH), 8,14 (d, J = 1,4 Hz, 1H, ArH), 7,8 (s, 1H, ArH), 7,7 (dd, J = 1,2 a 8,5 Hz, 2H, ArH), 7,6 (t, J = 5,3 Hz, 1H, CONCH2), 7,4 (m, 3H, ArH), 7,3 (t, J = 7,4 Hz, 1H, ArH), 6,9 (d, J = 8,0 Hz, 1H, ArH), 3,2 (m, 2H, CONCH2), 2,5 (m, 12H, 3 x NCH2 a 2 x CH3), 1,61 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0,93 (t, J - 6,7 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 470 [M+],
Příklad 68 (3-diethylaminopropyl)-amid2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6- Fenyl-l,3-dihydro-indol-2-on (1, 5 g, 7,16 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (2 g), čímž se získá 1,9 g (57%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,58 (s, 1H, NH), 10,94 (s, 1H, NH), 7,8 (d, J =
7,9 Hz, 1H, ArH), 7,6 (m, 4H, ArH), 7,4 (t, J = 7,5 Hz, 2H, ArH), 7,3 (m, 2H), 7,1 (d, J =
1,4 Hz, 1H, ArH), 3,2 (m, 2H, CONHCH2), 2,5 (m, 12H, 3 x NCH2 a 2 x CH3), 1,61 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0,93 (t, J = 6,7 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 470 [M+].
Příklad 69 (3 -chlor-4-methoxyfenyl)-amid 3 - [4-(3 -diethylaminopropylkarbamoyl)-3,5-dimethyl-1Hpyrrol-2-ylmethylen]-2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-4-karboxylové kyseliny (3-Chlor4-methoxyfenyl)-amid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-4-karboxylové kyseliny (1 g, 3,16 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (1 g, 3,58 mmol), čímž se získá 1,7 g (85%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
MS-EI m/z 578,2 [M+].
* ♦
117
Příklad 70 (3-diethylaminopropyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (0, 5 g, 2,36 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,51 g), čímž se získá 0,84 g požadované sloučeniny ve formě červeno-oranžové pevné látky.
NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, 1H, NH), 10,99 (s, 1H, NH), 8,09 (d, J = 1,8 Hz, 1H, ArH), 7,7 (m, 4H), 7,2 (dd, J = 1,8 a 8,3 Hz, 2H, ArH), 6,8 (d, J = 7,8 Hz, 1H, ArH), 3,3 (br s, 4H, 2 x NCH2), 3,2 (m, 2H, CONCH2), 2,6 (br s, 2H, NCH2 a 2 x CH3), 2,4 (s, 6H, 2 x CH3), 1,66 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0,98 (t, J = 7,1 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 472 a 474 [M+-l a M++l].
Příklad 71 (2-diethylaminoethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4diizopropyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (100 mg, 0,47 mmol) se kondenzuje s (2diethylaminoethyl)-amidem 5 -formyl-2,4-diizopropyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (150 mg), čímž se získá 0,15 g (62%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,97 (s, 1H, NH), 10,95 (s, 1H, NH), 8,09 (d, J - 1,3 Hz, 1H, ArH), 7,84 (m, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,23 (dd, J = 1,3 a 8,1 Hz, 1H, ArH), 6,8 (d, J = 8,1 Hz, 1H, ArH), 3,5 (m, 1H, CH), 3,3 (m, 3H, CH a NHCH2), 2,5 (br m, 6H, 3 x NCH2), 1,28 (d, J = 6, 9 Hz, 6H, 2 x CH3), 1,23 (d, J = 6, 6 Hz, 6H, 2 x CH3), 0,96 (m, 6H, 2 x CH2CH3).
MS-EI m/z 514 a 516 [M+-l aM++l],
Příklad 72 (3-diethylaminopropyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4diizopropyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny ·· ·· ·
'
0· ···
118
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (90 mg, 0,42 mmol) se kondenzuje s (3diethylaminopropyl)-amidem 5-formyl-2,4-diizopropyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (140 mg), čímž se získá 54 mg (25%) požadované sloučeniny ve červeno-hnědé pevné látky.
]H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, 1H, NH), 10,96 (s, 1H, NH), 8,09 (d, J = 1,7 Hz, 2H), 7,78 (s, 1H, H-vinyl), 7,23 (dd, J = 1,7 a 8,1 Hz, 1H, ArH), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 1H, ArH), 3,5 (m, 1H, CH), 3,25 (m, 2H, NHCH2), 3,15 (m, 1H, CH), 2,7 (br s, 6H, 3 x NCH2), 1,7 (br m, 2H, CH2CH2CH2), 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H, 2 x CH3), 1,24 (d, J = 5,9 Hz, 6H, 2 x CH3), 1,06 (m, 6H, 2 x CH2CH3).
MS-EI m/z 528 a 530 [M+-l a M++l].
Příklad 73 (3-pyrrolidin-1 -yl-propyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4diizopropyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (130 mg, 0,6 mmol) se kondenzuje s (3-pyrrolidinl-yl-propyl)-amidem 5-formyl-2,4-diizopropyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (150 mg, 0,45 mmol), čímž se získá 36 mg (15%) požadované sloučeniny ve formě hnědooranžové pevné látky.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, 1H, NH), 10,97 (s, 1H, NH), 8,10 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 7,78 (s, 1H, H-vinyl), 7,23 (dd, J = 1,6 a 7,6 Hz, 1H, ArH), 6,82 (d, J - 7,6 Hz, 1H, ArH), 3,5 (m, 1H, CH), 3,25 (m, 2H, NHCH2), 3,15 (m, 1H, CH), 2,7 (br s, 6H, 3 x NCH2), 1,7 (br m, 6H, 3 x NCH2CH2), 1,28 (d, J = 5,6 Hz, 6H, 2 x CH3), 1,24 (d, J = 5,7 Hz, 6H, 2 x CH3).
MS-EI m/z 526 a 528 [M+-l a M++l].
Příklad 74 (pyridin-4-ylmethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydro-indol-2-on (170 mg, 0,8 mmol) se kondenzuje s (pyridin-4ylmethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (200 mg), čímž se získá 14 mg (4%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
• 4 ·* a » a a 4 · • 44 4
4 4
4*44
119 'H NMR (300 MHz,'DMSO-d6) δ 13,67 (s, 1H, NH), 11,01 (s, br, 1H, NH), 8,51 (dd, J = 1,6 & 4,3 Hz, 2H),8,23 (t, J = 6,0 Hz, 1H, CONCH2),8,11 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H, H-vinyl), 7,31 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7,25 (dd, J = 1,9 & 8,1 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 6,0 Hz, 2H, NCH2), 2,46 (s, 6H, 2 x CH3).
MS-EI, m/z 450 a 452 [M+-l a M++l].
Příklad 75 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-[6-(4-butylfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl]- 2,4-dimethyl-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5- [6-(4-Butylfenyl)]-l,3-dihydro-indol-2-on (50 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 74 mg (76%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, 1H, NH), 10,93 (s, br, 1H, NH), 7,82 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H, H-vinyl), 7,54 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,46 (m, 1H, CONH), 7,26 (m, 3H), 7,09 (s, 1H), 3,30 (m-, 2H, CH2), 2,52-2,63 (m, 4H, 2 x CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,68 (m, 4H, 2 x CH2), 1,58 (m, 2H, CH2), 1,34 (m, 2H, CH2), 0,91 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 510 [M+].
Příklad 76 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-[6-(5-izopropyl-2-methoxyfenyl)-2-oxo-1,2-dihydroindol-3 -ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6- (5-Izopropyl-2-methoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (50 mg, 0,17 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin- l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pynOl-3karboxylové kyseliny (45 mg), čímž se získá 67 mg (75%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H, NH), 10,82 (s, br, 1H, NH), 7,77 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H, H-vinyl), 7,45 (m, 1H, CONH), 7,0-7,19 (m, 5H), 3,73 (s, 3H, OCH3), 3,32 (m, 2H, CH2), 2,87 (m, 1H, CH(CH3)2), 2,56 (m, 2H, CH2), 2,48 (m, 4H, • 4 *
• · • · ♦ ·
9 ·* • 4 • · • 4 4
4· ♦*·«
120 x CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,68 (m, 4H, 2 x CH2), 1,21 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS m/z 527,2 [M++l].
Příklad 77 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-[6-(4-ethylfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-(4-Ethylfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (45 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 60 mg (65%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-dó) δ 13,59 (s, 1H, NH), 10,96 (s, br, 1H, NH), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H, H-vinyl), 7,51-7,56 (m, 3H), 7,25-7,30 (m, 3H), 7,08 (d, J = 1 Hz, 1H), 3,31 (m, 2H, CH2), 2,63 (m, 2H, CH2CH3), 2,55 (m, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2), 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 482 [M+].
Příklad 78 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5- [6-(2,4-dimethoxyfeny l)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
6-(2,4-Dimethoxyfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (51 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amidem 5 -formyl-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 30 mg (31%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, 1H, NH), 10,86 (s, br, 1H, NH), 7,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H, H-vinyl), 749 (m, 1H, CONH), 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,03 (m, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,58-6,65 (m, 2H),3,79 (s, 3H, OCH3), 3,76 (s, 3H, OCH3), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,55 (m, 2H, CH2), 2,50 (m, 4H, 2 x CH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,39 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 514 [M+].
121
Příklad 79 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-[6-(3 -izopropylfenyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-(3-Izopropylfenyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (48 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 59 mg (63%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, 1H, NH), 10,97 (s, br, 1H, NH), 7,87 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H, H-vinyl), 7,24-7,55 (m, 6H), 7,13 (s, 1H), 3,34 (m, 2H, CH2), 3,30 (m, 1H, CH(CH3)2), 2,60 (m, 2H, CH2), 2,50 (m, 4H, 2 x CH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,43 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 4H, 2 x CH2), 1,27 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 496 [M+],
Příklad 80 (2-diethylaminoethyl)-amid 5-(5-ťluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Fluor-l,3-dihydro-indol-2-on (0,54 g, 3,8 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá 0,83 g (55%) požadované sloučeniny ve formě žluto-zeleno pevné látky.
!H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, 1H, NH), 10,83 (s, br, 1H, NH), 7,73 (dd, J = 2,5 & 9, 4 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H, H-vinyl), 7,37 (t, 1H, CONHCH2CH2), 6,91 (m, 1H), 6,81-6,85 (m, 1H), 3,27 (m, 2H, CH2), 2,51 (m, 6H, 3 x CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 0,96 (t, J = 6,9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 398 [M+].
Příklad 80 (alternativní syntéza) (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Hydrát hydrazinu (55 %, 3000 ml) a 5-fluorisatin (300 g) se zahřívají při teplotě 100°C. V průběhu 120 minut se za stálého míchání přidává po částech (100 g) další • 4 • · • 4 ·* • 4 *
♦ • ·
4> ·»··
122
5-ťluor-isatin (500 g), směs se zahřívá při teplotě 110°C a míchá po dobu 4 hodin, ochladí na pokojovou teplotu a pevné látky se spojí vakuovou filtrací, čímž se získá surový hydrazid (2-amino-5-fluor-fenyl)-octové kyseliny (748 g), hydrazid se suspenduje ve vodě (700 ml) a pH směsi se upraví na < pH 3 pomocí 12 N kyseliny chlorovodíkové. Směs se míchá po dobu 12 hodin při pokojové teplotě, pevný podíl se spojí vakuovou filtrací a promyje (2 x) vodou, produkt se suší za vakua, čímž se získá 5-fluor-l,3-dihydro-indol-2on (600 g, 73 % výtěžek) ve formě hnědého prášku. 1 H-NMR (dimethylsulfoxid-dó) δ 3,46 (s, 2H, CH2), 6,75, 6,95, 7,05 (3 x m, 3H, aromatické), 10,35 (s, 1H, NH).
MS m/z 152 [M+l].
2-7erc-butylester 4-ethylesteru 3,5-dimethyl-l//-pyrrol-2,4-dikarboxylové kyseliny (2600 g) a ethanol (7800 ml) se intenzivně míchají, zatímco se pomalu přidává 10 N kyselina chlorovodíková (3650 ml), teplota se zvýší z25°C na 35°C, čímž se začne uvolňovat plyn. Směs se ohřeje na teplotu 54°C a míchá za dalšího zahřívání po dobu jedné hodiny na teplotu 67°C. Směs se ochladí na teplotu 5°C a za stálého míchání se pomalu přidává 32 1 vody. Pevná látka se spojí vakuovou filtrací a promyje (3 x ) vodou, pevná látka se suší na vzduchu na konstantní hmotnost, čímž se získá ethylester 2,4-dimethyl- \Hpyrrol-3-karboxylové kyseliny (1418 g, 87 % výtěžek) ve formě narůžovělé pevné látky.
1 H-NMR (dimethylsulfoxid-dó) δ 2,10, 2,35 (2 x s, 2 x 3H, 2 x CH3), 4,13 (q, 2H, CH2), 6,37 (s, 1H, CH), 10,85 (s, 1H, NH).
MS m/z 167 [M+l].
Dimethylformamid (322 g) a dichlormethan (3700 ml) se ochladí v ledové lázni na teplotu 4°C a za stálého míchání se přidá oxychlorid fosforečný (684 g). Pevný ethylester
2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (670 g) se pomalu přidává v alikvótních podílech v průběhu 15 minut. Maximální teplota se pohybuje kolem 18°C. Směs se zahřívá při refluxu po dobu jedné hodiny, ochladí na teplotu 10°C v ledové lázni a najednou se za intenzivního stálého míchání přidá 1,6 1 ledové vody. Teplota se zvýší na 15°C. Za intenzivního stálého míchání se přidá 10 N kyselina chlorovodíková (1,6 1). Teplota se zvýší na 22°C. Směs se nechá stát po dobu 30 minut a vrstvy se nechají separovat, přičemž maximum teploty je 40°C. Vodná vrstva se upraví na pH 12-13 pomocí 10N hydroxidu draselného (3,8 1) tak, aby teplota během přidávání nepřesáhla 55°C.
Po přidání se směs ochladí na teplotu 10°C a míchá po dobu 1 hodiny, pevná látka se spojí vakuovou filtrací a promyje (4x) vodou, čímž se získá ethylester 5-formyl-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (778 g, 100 % výtěžek) ve formě žluté pevné
123
4* w * • 4
4 • 4 • 4 ···
444
4
4 • 444 látky. ‘H-NMR (DMSO-d6) δ 1, 25 (t, 3H, CH3), 2,44,2,48 (2 x s, 2 x 3H, 2 x CH3), 4,16 (q, 2H, CH2), 9, 59 (s, 1H, CHO), 12,15 (br s, 1H, NH).
MS m/z 195 [M+l].
Ethylester 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (806 g), hydroxid draselný (548 g), voda (2400 ml) a methanol (300 ml) se refluxují po dobu 2 hodin za stálého míchání a ochladí na teplotu 8°C. Směs se extrahuje (2 x ) dichlormethanem, vodná vrstva se úpravní na pH 4 pomocí 1000 ml 10 N kyseliny chlorovodíkové, přičemž teplota se udržuje pod 15°C. Kvůli míchání se přidá voda a pevná látka se spojí vakuovou filtrací, promyje (3 x ) vodou a suší za vakua při teplotě 50°C, čímž se získá 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová (645 g, 93,5 % výtěžek) kyselina ve formě žluté pevné látky. 'H NMR (DMSO-dó) δ 2,40,2,43 (2 x s, 2 x 3H, 2 x CH3), 9,57 (s, 1H, CHO), 12,07 (br s, 2H, NH+COOH).
MS m/z 168 [M+l].
5-Formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina (1204 g) a 6020 ml dimethylformamidu se míchá při pokojové teplotě, zatímco se přidává hydrochlorid l-(3dimethyl-aminopropyl-3-ethylkarbodiimidu (2071 g), hydroxybenzotriazol (1460 g), triethylamin (2016 ml) a diethyl-ethylendiamin (1215 ml). Směs se míchá po dobu 20 hodin při pokojové teplotě, zředí 3000 ml vody, 2000 ml solanky a 3000 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a pH se upraví na > 10 pomocí 10 N hydroxidu sodného. Směs se pokaždé extrahuje (2 x) 5000 mls 10 % methanolem v dichlormethanu a spojené extrakty se suší nad bezvodým síranem hořečnatým a zahušťují na rotační odparce do sucha. Směs se zředí 1950 ml toluenu a znovu zahušťuje do sucha na rotační odparce. Zbytek se trituruje směsí hexanů a diethyletheru (4000 ml) (3:1), pevný podíl se spojí vakuovou filtrací, promyje (2 x) 400 ml ethylacetátu a suší za vakua při teplotě 34°C po dobu 21 hodin, čímž se získá (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l//pyrrol-3-karboxylové kyseliny (819 g, 43 % výtěžek) ve formě světle hnědé pevné látky.
]H NMR (dimethylsulfoxid-dé) δ 0,96 (t, 6H, 2 x CH3), 2,31-2,38 (2 x s, 2 x CH3), 2,51 (m, 6H 3 x CH2), 3,28 (m, 2H, CH2), 7,34 (m, 1H, amid NH),9,56 (s, 1H, CHO), 11, 86 (s, 1H, pyrrol NH).
MS m/z 266 [M+l].
(2-Diethylaminoethyl)-amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (809 g), 5-fluor-l,3-dihydro-indol-2-on (438 g), ethanol (8000 ml) a pyrrolidin (13 ml) se zahřívají při teplotě 78°C po dobu 3 hodin. Směs se ochladí na pokojovou
124 teplotu a pevné látky se spojí vakuovou filtrací a promyjí ethanolem. Pevné látky se míchají s ethanolem (5900 ml) při teplotě 72°C po dobu 30 minut, ochladí na pokojovou teplotu, pevné látky se spojí vakuovou filtrací, promyjí ethanolem a suší za vakua při teplotě 54°C po dobu 130 hodin, čímž se získá (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-[5-fluor-2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (1013 g, 88% výtěžek) as oranžové pevné látky.
’Η-NMR (dimethylsulfoxid-d6) δ 0,98 (t, 6H, 2 x CH3), 2,43, 2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 6H, 3 x CH2), 3,28 (q, 2H, CH2), 6,84, 6,92, 7,42, 7,71, 7,50 (5xm, 5H, aromatické, vinyl, CONH), 10,88 (s, 1H, CONH), 13,68 (s, 1H, pyrrol NH).
MS m/z 397 [M-l].
Příklad 81
3-[4-(2-diethylaminoethylkarbamoyl)-3,5-dimethyl-l//-pyrrol-2-ylmethylen]-2-oxo-2,3dihydro-1 //-indol-6-karboxy lová kyselina
2-Oxo-2,3-dihydro-l//-indol-6-karboxylová kyselina (80 mg, 0,45 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3karboxylové kyseliny, čímž se získá 210 mg (92%) požadované sloučeniny ve formě žlutooranžové pevné látky.
’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, 1H, NH), 7,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H, H-vinyl), 7,57 (dd, J = 1,5 & 8,0 Hz, 1H), 7,40-7, 42 (m, 2H), 3,28 (m, 2H, CH2), 2,88 (m, Hpiperidin), 2,54 (m, 6H, 3 x CH2),2,44 (s, 3H, CH3),2,40 (s, 3H, CH3), 1,56 (m, H-piperidin), 0,97 (t, J = 6,98 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 424 [M+].
Příklad 82 (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 5-(5-dimethylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Dimethylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonové kyseliny (90 mg, 0,38 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 100 mg (54%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
125 *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, 1H, NH), 11,30 (s, br, 1H, NH), 8,25 (d, 1H), 7,92 (s, 1H, H-vinyl), 7,48-7,53 (m, 2H), 7,07 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,61 (s, 6H, N(CH3)2), 2,56 (t, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,44 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 485 [M+].
Příklad 83 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5- [5 -(3 -clorfenylsulfamoyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (3-Chlorfenyl)-amid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonové kyseliny (120 mg, 0,38 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyll//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 150 mg (69%) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-de) δ 13,55 (s, 1H, NH), 11,26 (br s, 1H, NH), 10,30 (br s, 1H, NH), 8,26 (d, 1H), 7,79 (s, 1H, H-vinyl), 7,51-7,57 (m, 2H), 7,22 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 7,0 (m, 2H), 3,44 (m, 2H, CH2), 2,57 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,43 (s, 3H, CH3), 1,68 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 568 [M+].
Příklad 84 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-5-(pyridin-3-ylsulfamoyl)-l ,2dihydro-indol-3-ylidenmethyl]- l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Pyridin-3-ylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonová kyselina (110 mg, 0,38 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-lZ/pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 150 mg (74%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, 1H, NH), 8,21 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 8,04 (m, 1H), 7,76 (s, 1H, H-vinyl), 7,49-7,54 (m, 2H), 7,41 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 6,94 (d, J =
8,5 Hz, 1H), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,56 (t, J = 7,06 Hz, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,43 (s, 6H, 2 x CH3), 1,68 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 535 [M+].
126
Příklad 85
- [3,5 -dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l-karbonyl)-1//-pyrrol-2-y lmethylen] -4-(2hydroxyethyl)-1,3-dihydro-indol-2-on
4-(2-Hydroxyethyl)-l,3-dihydro-indol-2-on (71 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s 3,5dimethyl-4-(4-methyl-piperazin-l -karbonyl)-l//-pyrrol-2-karbaldehydem, čímž se získá 90 mg (55%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14, 25 (s, 1H, NH), 10,88 (s, 1H, NH), 7,57 (s, 1H, H-vinyl), 7,03 (m, 1H), 6,75-6,82 (m, 2H), 4,86 (m, 1H, OH), 3,70 (m, 2H, CH2), 3,04 (m, 2H, CH2), 2,48 (m, 4H, 2 x CH2), 2,28 (br s, 7H), 2,19 (s, 3H, CH3), 2,18 (s, 3H, CH3).
MS m/z (+ve) 4, 09, 3 [M+],
Příklad 86 feny lamid 3 - [3,5 -dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l-karbonyl)-1//-pyrrol-2-ylmethylen] -2oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonové kyseliny
Fenylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonové kyseliny (110 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s 3,5-dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l-karbonyl)-l//-pyrrol-2-karbaldehyd (100 mg), čímž se získá 50 mg (24%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,52 (s, 1H, NH), 11,26 (s, 1H, NH), 10,08 (s, 1H, NH), 8,21 (d, J - 1,6 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H, H-vinyl), 7,50 (dd, J = 1,6 & 8,3 Hz, 1H), 7,19 (m, 2H), 7,10 (m, 2H), 6,97 (m, 2H), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,28 (m, 10H, 2 x CH3 & 2 x CH2), 2,18 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 519 [M+],
Příklad 87 (2-diethylaminoethyl)-amid 5-(5-dimethylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Dimethylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonové kyseliny (90 mg, 0,38 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 80 mg (43%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
127 ]H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,30 (s, 1H, NH), 8,27 (d, J - 1,7 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H, H-vinyl), 7,49 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, 1H), 7,44 (m, 1H, CONHCH2CH2), 7,07 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,26 (m, 2H, CH2), 2,60 (s, 6H, N(CH3)2), 2,53 (m, 2H, CH2), 2, 45-2,50 (m, 10H, 2 x CH3 & N(CH2CH3)2, 0,96 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 487 [M+],
Příklad 88 (2-diethylaminoethyl)-amid 5-[5-(3-chlorfenylsulfamoyl)-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (3-chlor-fenyl)-amid 2-Oxo-2,3-dihydro-l/7-indol-5-sulfbnové kyseliny (120 mg, 3,8 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 80 mg (37%) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
!H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13, 55 (s, 1H, NH), 11,24 (s, 1H, NH), 10,29 (s, 1H, NH), 8,25 (d, J = 1,87 Hz, 1H), 7,79 (s, 1H, H-vinyl), 7,52 (dd, J = 1,87 & 8,3 Hz, 1H), 7,42 (m, 1H, CONHCH2CH2), 7,22 (t, J = 8,02 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 2 Hz, 1H), 7,08 (m, 1H), 7,0 (m, 2H), 3,27 (m, 2H, CH2), 2,48-2,57 (m, 6H, 3 x CH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 44 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 7, 0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 570,1 [M+].
Příklad 95 ethylester 3-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//izoindol-1-karboxylové kyseliny *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,74 (s, 1H, NH), 11,00 (s, 1H, NH), 8,13 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H, H-vinyl), 7,70 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,49 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz,1H), 7,44 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,32 (m, 1H), 6,96 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,26 (q, J = 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,79 (m, 2H, CH2), 2,72 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 x CH2), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 412 [M+],
128
Příklad 99 ethylester 3 -(2-oxo- 5 -fenylsulfamoyl-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-4,5,6,7tetrahydro-2/Z-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
Ή NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s, 1H, NH), 11, 33 (s, 1H, NH), 10,07 (s,
IH, NH), 8,24 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H, H-vinyl), 7,57 (dd, J = 1,8 & 8,0 Hz, 1H), 7,21 (t, J - 7,6 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,98 (d, J =
7,6 Hz, 1H), 4,27 (q, J = 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,80 (m, 2H, CH2), 2,73 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 x CH2), 1,30 (t, J = 7, 0 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 491 [M+],
Příklad 109
3-[3-(morfolin-4-karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-ylmethylen]-2-oxo-2,3dihydro- l//-indol-6-karboxylová kyselina
Ή NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H, NH), 12,75 (br s, 1H, COOH),
II, 08 (s, 1H, NH), 7,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H, H-vinyl), 7,62 (dd, J = 1,4 & 7,8 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,65 (m, 4H, 2 x CH2), 3,55 (m, 4H, 2 x CH2), 2,81 (m, 2H, CH2), 2,54 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 421 [M*].
Příklad 112
-brom-3 -[3 -(pyrrolidin-1 -karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2/7-izoindol-1 -ylmethylen] -1,3dihydro-indol-2-on
Ή NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (s, 1H, NH), 11,00 (s, 1H, NH), 8,05 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H, H-vinyl), 7,28 (dd, J = 1,3 & 8,3 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,57 (m, 4H, 2 x CH2), 2,79 (m, 2H, CH2), 2,65 (m, 2H, CH2), 1,88 (m, 4H, 2 x CH2), 1,71 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 439 & 441 [M+-1] & [M++l],
129
Příklad 114
-(3 -dimethylkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 -ylmethylen)-2-oxo-2,3 -dihydrol//-indol-6-karboxylová kyselina
Ή NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, 1H, NH), 12,72 (br s, 1H, COOH), 11,05 (s, 1H, NH), 7,85 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H, H-vinyl), 7,62 (dd, J = 1,3 & 7,9 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 3,03 (s, 6H, N(CH3)2), 2,81 (m, 2H, CH2), 2,55 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 379 [M+],
Příklad 115
4-methyl-5 -(5 -methylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3 karboxylová kyselina *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (br s, 1H, NH), 8,24 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H, H-vinyl), 7,74 (d, J = 2,96 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 1,5 & 8,1 Hz, 1H), 7,20 (br m, 1H, NHCH3), 7,03 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,57 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 361 [M+],
Příklad 116 ethylester {[4-methyl-5-(4-methyl-5-methylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-l//-pyrrol-3-karbonyl]-amino}-octové kyseliny
Ethylester 4-methyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (viz D.O. Cheng, T. L. Bowman a E. LeGoff; J.Heterocyclic Chem.\ 1976 ; 13 ; 1145-1147) se formyluje podle způsobu A, hydrolyzuje podle způsobu B, poté amiduje (způsob C), čímž se získá ethylester [(5-formyl-4-methyl-l//-pyrrol-3-karbonyl)-amino]-octové kyseliny.
4-Methyl-5-methylaminosulfonyl-2-oxindol (50 mg, 0,21 mmol) se kondenzuje s ethylesterem [(5-formyl-4-methyl-l//-pyrrol-3-karbonyl)-amino]-octové kyseliny (100 mg, 0,42 mmol) a piperidinem (0, 1 ml) v ethanolu (2 ml), čímž se získá 50 mg (52%) požadované sloučeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, 1H, NH), 11,29 (v, br, s, 1H, NHCO), 8,33 (t, J = 5,8 Hz, 1H, CONCH2), 7,83 (d, J = 3,11 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H, H• 9 · · <
» · ·· 9 9
130 vinyl), 7,71 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,34 (br m, 1H, NHCH3), 6,89 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,11 ( q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3), 3,92 (d, J = 5,8 Hz, 2H, GlyCH2), 2,86 (s, 3H, CH3), 2,48 (s, 3H, CH3), 2,42 (d, J = 4,71 Hz, 3H, HNCH3), 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 460 [M*].
Příklad 117 ethylester {[4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1Hpyrrol-3 -karbonyl] -amino} -octové kyseliny
Směs 5-methylaminosulfonyl-2-oxindolu (0,06 g, 0,22 mmol), ethylesteru [(5formyl-4-methyl-l//-pyrrol-3-karbonyl)-amino]-octové kyseliny (0,075 g, 0,27 mmol) a piperidinu (2 kapky) v ethanolu (5 ml) se zahřívá v uzavřené baňce při teplotě 90°C po dobu 12 hodin. Po ochlazení se precipitát spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem, trituruje směsí dichlormethanu a etheru a suší, čímž se získá 0,035 g (36%) požadované sloučeniny ve formě nažluté hnědé pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, 1H, NH), 11 (v, br, s, 1H, NH-CO), 8,30 (t, J - 5,7 Hz, 1H, CONCH2), 8,25 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H, H-vinyl), 7,84 (d, J =
3,3 Hz, 1H), 7,57 (dd, J = 1,9 & 8,5 Hz, 1H), 7,14 (br m, 1H, NHCH3), 7,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,11 (q, J = 6,7 Hz, 2H, OCH2CH, 3), 3,92 (d, J = 5,7 Hz, 2H, GlyCH2), 2,55 (s, 3H, CH3), 2,41 (m, 3H, NCH3), 1,20 (t, J = 6,7 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS m/z 446 [M+].
Příklad 118 {[4-methy 1-5 -(5-methylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3karbonylj-amino}-octová kyselina
Směs ethylesteru [(5-formyl-4-methyl-1 //-pyrrol-3 -karbonyl)-amino]-octové kyseliny (0, 142 g, 0,59 mmol) a IN NaOH (1, 2 ml) v methanolu (10 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Reakce se koncentruje a zbytek se kondenzuje s
5-methylaminosulfonyl-2-oxindolem (0,13 g, 0,48 mmol) a piperidinem (0, 12 ml) v ethanolu (12 ml), čímž se získá 0,11 g (52%) požadované sloučeniny.
’H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (br s, 1H, NH), 8,17 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,75 (d, J - 3,1 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 2 & 8,2 Hz, 1H), 7,21 (m na br, s, 2H), 6,97 (d,
131
J = 8,1 Hz, 1H), 3,41 (d, J = 4,2 Hz, 2H, CH2NH), 2,54 (s, 3H, pyrrol-CH3), 2,39 (s, 3H, ArCH3).
MS m/z 417 [M-l]+.
Příklad 120
-methyl-2-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)- 177-pyrrol-3 -karboxylová kyselina
Ή NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,77 (br s, 1H, NH), 12,49 (s, 1H, COOH), 11,07 (s, 1H, NH), 8,39 (s, 1H, H-vinyl), 7,43 (d, J - 7,47 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 7,47 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,47 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 7,47 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 1,53 Hz, 1H), 2,34 (s, 3H, CH3).
MS m/z 269 [M+H]+.
Příklad 121 ethylester 5 -methyl-2-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1/7-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,79 (s, 1H, NH), 11,08 (s, 1H, NH), 8,31 (s, 1H, H-vinyl), 7,45 (d, J = 7,52 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 7,52 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,52 Hz, 1H), 6,91 (d, J - 7,52 Hz, 1H), 6,50 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,26 (q, J = 7,2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,33 (s, 3H, CH3), 1,32 (t, J = 7,2 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS m/z 297,1 [M+H]+.
Příklad 122 ethylester 2-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-5-methyl- 177-pyrrol-3 karboxylové kyseliny *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,72 (s, 1H, NH), 11,16 (s,'lH, NH), 8,29 (s, 1H, H-vinyl), 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 2,0 & 8,05 Hz, 1H), 6,87 (t, J = 8,05 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,28 (q, J = 7,03 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,33 (t, J = 7,03 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS m/z 375 & 377 [M+H]+.
132
Příklad 123
2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylÍdenmethyl)-5-methyl-l/ř-pyrrol-3-karboxylová kyselina *H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,72 (s, 1H, NH), 12,57 (s, 1H,
COOH), 11,19 (s, 1H, NH), 8,36 (s, 1H, H-vinyl), 7,51 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,34 (dd, J =
1,4 & 8,17 Hz, 1H), 6,87 (t, J = 8,17 Hz, 1H), 6,52 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H, CH3).
MS m/z 347 & 349 [M+H]+.
Příklad 124 (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-5methyl- l/ř-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Do roztoku 2-formyl-5-methyl-lřř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (250 mg, 1,63 mmol) v dimethylformamidu (3 ml) se přidá l-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimid (376 mg, 1,2 ekviv.), 1-hydroxybenzotriazol (265 mg, 1,2 ekviv.), triethylamin (0, 45 ml, 2 ekviv.) a l-(2-aminoethyl)pyrrolidin (0,23 ml, 1,1 ekviv.). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se reakce zředí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou (s extra solí) a extrahuje 10% methanolem v dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší nad bezvodým síranem sodným a koncentrují, čímž se získá 130 mg (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidu 2formyl-5methyl- lřř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Směs 5-brom-2-oxindolu (106 mg, 0,5 mmol), (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidu 2formyl-5-methyl-lř/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (125 mg, 1 ekviv.) a piperidinu (0,2 ml) v ethanol (2 ml) se zahřívá v uzavřené baňce při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny, pak se ochladí, vzniklý precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a ethylacetátem a suší, čímž se získá požadovaná sloučenina ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, 1H, NH), 11,06 (br s, 1H, NH), 8,56 (s, 1H, H-vinyl), 8,15 (m, 1H, CONCH2), 7,48 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 1,8 & 7,9 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 3,35 (m, 2H, HNCH2CH2), 2,56 (t, J = 6,91 Hz, 2H, HNCH2CH2), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 443/445 [M+ a M++2], ·· ·· · ··« · 4
133
Příklad 125 (2-diethylaminoethyl)-amid 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-5-methyll//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Do roztoku 2-formyl-5-methyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (320 mg, 2,1 mmol) v dimethylformamidu (3 ml) se přidá l-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimid (483 mg, 1,2 ekviv.), 1-hydroxybenzotriazol (340 mg, 1,2 ekviv.), triethylamin (0, 59 ml, 2 ekviv.) a ΛζΥ-diethyl-ethylendiamin (0,32 ml, 1,1 ekviv.). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se reakce zředí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou (s extra solí) a extrahuje 10% methanolem v dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší nad bezvodým síranem sodným a koncentrují, čímž se získá (2-diethylaminoethyl)-amid 2-formyl-5methyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny.
Směs 5-brom-2-oxindolu (106 mg, 0,5 mmol), (2-diethylaminoethyl)-amidu 2formyl-5-methyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (126 mg, 1 ekviv.) a piperidinu (0,2 ml) v ethanolu (2 ml) se zahřívá v uzavřené baňce při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny, pak se ochladí, precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a ethylacetátem a suší, čímž se získá požadovaná sloučenina ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, 1H, NH), 11,11 (br s, 1H, NH), 8,54 (s, 1H, H-vinyl), 8,1 (m, 1H, CONCH2), 7,49 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 2,24 Hz, 1H), 3,31 (m, 2H, HNCH2CH2), 2,59 (m, 6H, 3 x CH2), 2,36 (s, 3H, CH3), 0,99 (t, J = 6,8 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 445/447 [M+ a M++2],
Příklad 126 (2-diethylamino-ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Směs l,3-dihydro-indol-2-onu (266 mg, 2 mmol), (2-diethylamino-ethyl)-amidu
5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (530 mg, 2 mmol) a piperidinu (1 kapka) v ethanolu se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 2 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu, výsledný precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a
134 suší, čímž se získá 422 mg (55%) požadované sloučeniny ve formě světle žluté pevné látky.
[H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,7 (s, 1H, NH), 10,9 (s, 1H, NH), 7,88 (d, J =
7,6 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H, H-vinyl), 7,41 (t, J = 5,4 Hz, 1H, NH), 7,13 (dt, J = 1,2 & 7,6 Hz, 1H), 6,99 (dt, J = 1,2 & 7,6 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,28 (m, 2H), 2,48-2,55 (m, 6H), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI381 [M++1].
Příklad 127 (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Směs 5-chlor-l,3-dihydro-indol-2-onu (335 mg, 2 mmol), (2-diethylamino-ethyl)amidu 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (530 mg, 2 mmol) a piperidinu (1 kapka) v ethanolu se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 2 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu, výsledný precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a suší, čímž se získá 565 mg (68%) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
*H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, 1H, NH), 11,0 (s, 1H, NH), 7,98 (d, J =
2,1 Hz, 1H) 7,77 (s, 1H H-vinyl), 7,44 (t, NH), 7,13 (dd, J = 2,1 & 8,4 Hz, 1H) 6,87 (d, J =
8,4 Hz, 1H), 3,28 (g, 2H), 2,48-2,53 (m, 6H), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,43 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2)
MS + ve APCI415 [M+ + 1],
Příklad 128 (2-pyrrolidin-1 -ethyl)-amid 2,4-dimethyl-5 -(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-1Hpyrrol-3-karboxylové kyseliny l,3-Dihydro-indol-2-on se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
MS + ve APCI 379 [M+ + 1].
135 • 0 00 • · 0 • · ·
0 · «00 ·0 00 0 0 0 0 0
0 0 0 • · 0 0 ·
0 0 0
000 00 0000
Příklad 129 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Fluor-l,3-dihydro-indol-2-on se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
MS + ve APCI397 [M+ + 1].
Zvětšení měřítka:
5-Formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina (61 g), 5-fluor-l,3dihydro-indol-2-on (79 g), ethanol (300 ml) a pyrrolidin (32 ml) se refluxuje po dobu 4,5 hodiny. Do směsi se přidá octová kyselina (24 ml) a v refluxu se pokračuje po dobu 30 minut. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a pevné látky se spojí vakuovou filtrací a promyjí (2 x ) ethanolem. Pevné látky se míchají po dobu 130 minut v 40 % acetonu ve vodě (400 ml) obsahující 12 N kyselinu chlorovodíkovou (6,5 ml). Pevné látky se spojí vakuovou filtrací a promyjí (2 x ) 40 % acetonem ve vodě. Pevné látky se suší za vakua, čímž se získá 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//pyrrol-3-karboxylové kyseliny (86 g, 79 % výtěžek) ve formě oranžové pevné látky. *HNMR (dimethylsulfoxid-de) 2,48,2,50 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 6,80,6,88,7,68, 7,72 (4xm, 4H, aromatová a vinyl), 10,88 (s, 1H, CONH), 12,12 (s, 1H, COOH), 13,82 (s, 1H, pyrrol NH), MS m/z 299 [M-l],
5-[5-Fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3karboxylová kyselina (100 g) a dimethylformamid (500 ml) se míchají a přidá se benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorfosfát (221 g), l-(2aminoethyl)pyrrolidin (45,6 g) a triethylamin (93 ml). Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě, pevný produkt se spojí vakuovou filtrací a promyje ethanolem. Pevné látky se promývá za míchání v ethanolu (500 ml) po dobu jedné hodiny při teplotě 64°C a ochladí na pokojovou teplotu. Pevné látky se spojí vakuovou filtrací, promyjí ethanolem a suší za vakua, čímž se získá (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (101,5 g, 77 % výtěžek). *H-NMR (dimethylsulfoxid-de) δ 1,60 (m, 4H, 2 x CH2), 2,40,2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 4H, 2 x CH2), 2,57, 3,35 (2 x m, 4H, 2 x CH2), 7,53, 7,70, 7,73, 7,76 • « ·· ·« ·· ·· · 9 9 • · · » « • · · ·· **·
136 • · 9 9 9 ··· ··· 99 9999 (4xm, 4H, aromatický a vinyl), 10,88 (s, 1H, CONH), 13,67 (s, 1H, pyrrol NH), MS m/z 396 [M+l].
Příklad 130 (2-pyrrolidin-1 -yl-ethyl)-amid 5-(5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Chlor-l,3-dihydro-indol-2-on se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
MS + ve APCI 413 [M4 + 1],
Příklad 131 (2-dimethylaminoethyl)-amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny l,3-Dihydro-indol-2-on se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)-amidem 5-formyl2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
*H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, 1H, NH), 10,90 (s, 1H, NH), 7,78 (d, J - 7,8 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H H-vinyl), 7,48 (t, 1H, NH), 7,13 (dt, 1H), 6,98 (dt, 1H), 6,88 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,31 (q, J = 6,6 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J =
6,6 Hz, 2H), 2,19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + veAPCI353 [Ν/Γ +1].
Příklad 132 (2-dimethylaminoethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Fluor-l,3-dihydro-indol-2-on se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)-amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
*H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,68 (s, 1H, NH), 10,90 (s, 1H, NH), 7,76 (dd, J = 2,4 & 9,4 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H H-vinyl), 7,51 (t, 1H, NH), 6,93 (m, 1H), 6,84 (dd, J = 4,6
• · · •» »·4
137
4 *>4 4«
4 4 4 4 4 4 « 4 4 4 4 • 4 4 4 4
44« 444 44 4«44 & 8,4 Hz, 1H), 3,31 (q, J = 6,6 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H, CH), 2,41 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J =
6,6 Hz, 2H), 2,19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + veAPCI371 [M++ 1].
Příklad 193 (2-ethylamino-ethyl)-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (2-Ethylamino-ethyl)-amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (99 g), ethanol (400 ml), 5-fluor-2oxindol (32 g) a pyrrolidin (1, 5 g) se refluxují po dobu 3 hodin za stálého míchání, směs se ochladí na pokojovou teplotu a pevné látky spojí vakuovou filtrací, míchají v ethanolu při teplotě 60°C, ochladí na pokojovou teplotu a spojí vakuovou filtrací. Produkt se suší za vakua, čímž se získá (2-ethylamino-ethyl)-amid 5- [5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 karboxylové kyseliny (75 g, 95 % výtěžek). ^-NMR (dimethylsulfoxid-dg) δ 1,03 (t, 3H, CH3), 2,42,2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,56 (q, 2H, CH2), 2,70, 3,30 (2 x t, 4H, 2 x CH2), 6,85, 6,92, 7,58, 7,72, 7,76 (5xm, 5H, aromatický, vinyl a CONH), 10,90 (br s, 1H, CONH), 13,65 (br s, 1H, pyrrol NH).
MS m/z 369 [M-l].
Příklad 195 (2-diethyl-7V-oxoaminoethyl)-amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Způsob A:
(2-Diethylaminoethyl)-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (598 mg) a dichlormethan (60 ml) v ledové lázni se nechají reagovat s 3-chlorperbenzoovou kyselinou (336 mg) a směs míchá při pokojové teplotě přes noc, rozpouštědlo se odpařuje na rotační odparce a zbytek se suspenduje v methanolu (20 ml). Přidá se voda (20 ml) obsahující hydroxid sodný (240 mg) a směs se míchá po dobu jedné hodiny, precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje 5 ml vody a suší za vakua, čímž se získá (2-diethyl-N-oxoamino-ethyl)-amid 5-[5-fluor-2oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)-y lidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny ♦ · »· »· ·· * · w * ♦ · ·*'»»· • · * · · ·««·· • · · · 4 « · · ·· ··· ··· *·* *· ··*·
138 (510 mg, 82 % výtěžek) ve formě oranžové pevné látky. ’H-NMR (DMSO-cU) δ 13,72 (br s, 1H, NH), 11,02 (br s, 1H, CONH), 9,81 (br s, 1H, CONH), 7,75 (dd, 1H, aromatické), 7,70 (s, 1H, aromatické), 6,93 (td, 1H, aromatické), 6,84 (m, 1H, aromatické), 3,63 (m, 2H, CH2), 3,29 (m, 2H, CH2), 3,14 (m, 4H, 2 x CH2), 2,47 (s, 1H,
CH3), 2,45 (s, 3H, CH3), 1,64 (t, 6H, 2 x CH3).
MS m/z 415 [M+l].
Způsob B :
(2-Diethylamino-ethyl)-amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (10 g) se suspenduje v dichlormethanu (100 ml) a ochladí v ledové lázni.
3-Chlorperoxybenzoová kyselina (13,1 g) se přidá za stálého míchání a směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá přes noc. Směs se zahušťuje na rotační odparce do sucha a chromatografuje na sloupci silikagelu v 20 % methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi. Frakce obsahující produkt se spojí a zahušťují na rotační odparce do sucha, čímž se získá (2-diethyl-W-oxoamino-ethyl)-amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3karboxylové kyseliny (9 g, 83 % výtěžek).
(2-Diethyl-7V-oxoamino-ethyl)-amid 5 -formyl-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3 karboxylové kyseliny (9 g), 5-fluor-l,3-dihydro-indol-2-on ( (9 g, 83 % výtěžek)) a pyrrolidin ((9 g, 83 % výtěžek (0,1 g) se refluxují v ethanolu (30 ml) po dobu 4 hodin.
Směs se ochladí v ledové lázni a precipitát se spojí vakuovou filtrací a promyje ethanolem.
Pevné látky se míchají v ethylacetátu (30 ml), spojí vakuovou filtrací, promyjí ethylacetátem a suší za vakua, čímž se získá (2-diethyl-/V-oxoamino-ethyl)-amid 5-[5fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (10,3 g 80 % výtěžek) ve formě oranžové pevné látky. 'H-NMR (DMSO-dé) δ 13,72 (br s, 1H, NH), 11,02 (br s, 1H, CONH), 9,81 (br s, 1H, CONH), 7,75 (dd, 1H, aromatické), 7,70 (s, 1H, aromatické), 6,93 (td, 1H, aromatické), 6,84 (m, 1H, aromatické), 3,63 (m, 2H, CH2), 3,29 (m, 2H, CH2), 3,14 (m, 4H, 2 x CH2), 2,47 (s, 1H,
CH3), 2,45 (s, 3H, CH3), 1,64 (t, 6H, 2 x CH3). MS m/z 415 [M+l].
Příklad 190 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethy 1-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny • · · ·
139
5-[5-Fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3karboxylové kyseliny (120 mg, 0,4 mmol) se protřepává s EDC a podrobí HC1 (96 mg, 0,5 mmol), bezvodému 1-hydroxy-benztriazolu (68 mg, 0,5 mmol) a 2-(2-aminoethylpyridinu zakoupenému u firmy Aldrich v bezvodém DMF (3 ml) po dobu 2-3 dnů při pokojové teplotě. Reakční směs se zředí s 1 M NaHCO3 (1,5 ml), pak 8 ml vody. Surový precipitát se spojí filtrací, promyje vodou, suší a čistí krystalizací nebo chromatografií, čímž se získá [2-(pyridin-1 -yl)-ethyl]-amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny.
Příklad 189 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]-amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu výše, ale nahradí se 5-[5-fluor-2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3karboxylovou kyselinou (127 mg), čímž se získá [2-(pyridin-lyl)ethyl]-amid 5-[5-chlor-2oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny.
Příklad 192 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]-amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190 výše, ale nahradí se 5-[5fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxy lová kyselina 5 - [5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol3-karboxylovou kyselinou (145 mg), čímž se získá [2-(pyridin-lyl)ethyl]-amid 5-[5-brom2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
• ·
140
Příklad 191 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]-amid 5-[2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190 výše, ale nahradí se 5-[5fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-yliden-methyl]-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 5 - [2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 karboxylovou kyselinou (113 mg), čímž se získá [2-(pyridin-l-yl)ethyl]-amid 5-[2-oxol,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Příklad 203 [2-(pyridin-1 -yl)ethyl]-amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190 výše, ale nahradí se 5-[5fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3 Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylová kyselina 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol3-karboxylovou kyselinou (123 mg), čímž se získá [2-(pyridin-lyl)ethyl]-amid 5-[5-kyano2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Příklady 142,186,187,188 a 204
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin l-(2-aminoethyl)pyrrolidinem zakoupeným u firmy Aldrich Chemical Company, lne., čímž se získají požadované sloučeniny
Příklady 143-147
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190,189,191,192, a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin l-(2-aminoethyl)imidazolin-2-onem (připraveným zahříváním dimethylkarbonátu s bis(2-aminoethyl)aminem (2 ekvivalenty) v uzavřené baňce při teplotě 150°C po dobu 30 minut. Poté se postupuje podle způsobu popsaného v patentu U. S. ě. 2613212 (1950) uděleného Rohm & Haas Co. Surový produkt se čistí na • ·
141 silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu, vodného amoniaku (80:25:2) jako mobilní fázi, čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklady 148-151 a 184
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190, 189, 191, 192, a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin ethylesterem 4-(2-aminoethyl)piperazin-l-octové kyseliny (připravený následujícím způsobem: ethylester piperazin-1-octové kyseliny (11,22 g) se nechá reagovat s jodacetonitrilem (5,0 ml) v přítomnosti uhličitanu draselného (6,9 g) v ethylacetátu (260 ml) při teplotě 0°C. Po přidání jodacetonitrilu (45 min) se reakční směs následně míchá při pokojové teplotě po dobu 11 hodin. Reakční směs se filtruje a filtráty se odpařují. Zbytek se hydrogenuje v přítomnosti boridu kobaltu (připraveného z CoCl2 a borohydridu sodného) při pokojové teplotě při tlaku 50 psi po dobu 2 dnů v ethanolu. Filtrací, odpařováním a chromatografickou purifikací ve směsi chloroformu, methanolu a vodného amoniaku (80:25:2) jako mobilní fázi se získá požadovaný amin (3,306 g) ve formě světle žlutého oleje), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklad 152-153
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin 2-[(2-aminoethylamino)]acetonitrilem (připraveným následujícím způsobem: roztok jodacetonitrilu (50 mmol) v ethylalkoholu (80 ml) se přidává do roztoku ethylendiaminu (150 ml) v ethylalkoholu (60 ml) při teplotě 0°C po dobu 30 minut. V míchání se pokračuje po další 1 hodinu při teplotě 0°C, pak při pokojové teplotě po dobu 14 hodin. Přidá se 55 mmol uhličitanu draselného, míchá po dobu 30 minut. Směs se filtruje a filtrát se koncentruje při pokojové teplotě. Zbytek se čistí na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu a vodného amoniaku (80:15:1,5), čímž se získá 2-[(2-aminoethylamino)]-acetonitril (3,550 g), který se ihned používá), čímž se získají požadované sloučeniny.
142
Příklad 154-158
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin l-(3-aminopropyl)-azepin-2-onem (připraveným podle způsobu publikovaného v Kraft A.: J.Chem.Soc.PerkinTrans, 1,6, 1999, 705-14, kromě hydrolýzy pomocí DBU, která se provádí při teplotě 145°C v přítomnosti čistého hydroxidu lithného (1 hodina, 5 ml DBU, 2 ml vody, 420 mg hydrátu hydroxidu lithného).
Purifikací surového produktu na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu, vodného amoniaku (80:40:4) jako mobilní fázi se získá l-(3aminopropyl)azepin-2-on (4,973 g, 87 % výtěžek)), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklady 133-135,159 a 200
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190, 189, 191, 192, a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin A-acetyl-ethylendiaminem, (připraveným zahříváním směsi ethylacetátem s ethylendiaminem (1,5 ekviv.) při teplotě 160°C po dobu 1 hodiny v uzavřené baňce a vakuovou destilací. Produkt se získá v 56% výtěžku. A-acetyl-ethylendiamin je také dostupný u firmy Aldrich), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklady 146-140
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin l-(3-aminopropyl)-tetrahydro-pyrimidin-2-onem (připravený stejným způsobem jako l-(3-aminopropyl)-azepin-2-on podle způsobu publikovaného v Kraft A.: J.Chem.Soc.PerkinTrans, 1,6, 1999, 705-14: 1,3,4,6,7,8hexahydro-2A-pyrimido[l,2-a]pyrimidin (4,939 g), hydrát hydroxidu lithného (918 mg) a 2 ml vody se zahřívají bez rozpouštědla v uzavřené nádobě při teplotě 145°C po dobu 1 hodiny. Surový produkt se čistí na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu a vodného amoniaku (80:40:44) jako mobilní fázi, čímž se získá čistý amin (5,265 g, 94% výtěžek).
• ·
143
Příklady 141,160-162 a 185
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190,189,191,192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin l-(2-aminoethyl)-piperazin-2-onem (připraveným následujícím způsobem: čistý fórc-butyldifenylsilylchlorid (25 ml, 97,7 mmol) se přidává po kapkách do roztoku DBU (19,5 ml, 130 mmol) a bis(2-aminoethyl)aminu (4,32 ml, 40 mmol) v bezvodém dimethylacetamidu (80 ml) při pokojové teplotě po ochlazení ve vodní lázni v průběhu 5 minut. Po ochlazení na pokojovou teplotu se přidá ethylester bromoctové kyseliny (6,70 ml, 60 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 25 minut, pak se odpařuje za vysokého vakua a zbytek se rozpustí v methanolu (200 ml). Přidá se KHCO3 (10 g) a KF (12 g, 200 mmol) a směs se míchá při teplotě 60°C po dobu 5 hodin. Přidá se 10 g Na2CO3 a směs se míchá po dobu 10 minut, ochladí a filtruje, filtráty se odpařují. Zbytek se extrahuje hexany (2 x 250 ml), látky nerozpustné v hexanech se rozpustí v ethanolu (60ml), filtrují a odpařují. Zbytek se čistí na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu a vodného amoniaku (80:40:4) jako mobilní fázi, čímž se získá čistý amin (4,245 g, 74% výtěžek), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklady 163-167
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin 3-[(2-aminoethyl)amino]propionitrilem (připraveným z ethylendiaminu (150 mmol) a akrylonitrilu (50 mmol) v THF při pokojové teplotě podle způsobu publikovaného v Israel, M. et al·. J.Med.Chem. 7, 1964, 710-16, čímž se získá požadovaný amin (4,294 g)), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklad 168 [2-(4-methylpiperazin-l-yl)-ethyl]-amid 5-(5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Do míchané žluté kalné směsi 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (90 mg), DMF (0, 8 ml) a TEA (0, 084 ml) v 20 ml baňce se přidá BOP činidlo (199 mg). Směs se v průběhu 5 minut vyčeří, do čiré směsi se přidá 2-(4-methylpiperazin-l-yl)ethylamin1 (51 mg) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě přes noc. Žluté produkty v pevné formě z reakčního
144 systému vyprecipitují. Podle TLC (10% methanol v methylenchloridu) by se veškerá výchozí látka měla konvertovat na produkt. Pevný podíl izolovaný vakuovou filtrací se jednou promyje ethanolem (1 ml), pevný podíl se sonikuje v diethyletheru (2 ml) po dobu 20 minut a spojí vakuovou filtrací. Po sušení za vakua se získá (4-methylpiperazin-l-ylethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol3-karboxylové kyseliny (79 mg, 62% výtěžek).
’H NMR (DMSO-d6) δ 2,13 (s, 3H, CH3), 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,41 (m, 2H, CH2), 2,47 (m, 8H, 4xCH2), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,82 (dd, J = 4, 5,8, 7Hz, 1H), 6,91 (td, 2J - 2,4,3J = 8,8Hz, 1H), 7,43 (t, J = 5,6Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 2, 8,9,6Hz, 1H) (aromatický a vinyl), 10,88 (s, 1H, CONH), 13,67 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 424,4 (M-l).
Příklad 169 (4-methylpiperazin-l-yl-ethyl)-amid 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168 výše, ale nahradí se 5-[5fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol3-karboxylovou kyselinou (95 mg, 0,3 mmol), čímž se získá (4-methylpiperazin-l-ylethyl)-amid 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pynOl3-karboxylové kyseliny (76 mg, 58%).
*H NMR (DMSO-dé) δ 2,13 (s, 3H, CH3), 2,41,2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,42 (m, 2H, CH2), 2,48 (m, 8H, 4xCH2), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,11 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 5,6Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,97 (d, J = 2, 0Hz, 1H) (aromatické a vinyl), 10,98 (s, 1H, CONH), 13,62 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 440,2 (M-l).
Příklad 170 (4-methylpiperazin-l-yl-ethyl)-amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny • ·
145
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168, ale nahradí se 5-(5-chlor-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl- 1//-pyrrol-3-karboxylová kyselina
-(5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3 karboxylovou kyselinou, čímž se získá (4-methylpiperazin-l-yl-ethyl)-amid 5-(5-brom-2oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (39 mg, 54%) z SUO11670 (54 mg, 0,15 mmol).
‘H NMR (DMSO-dó) δ 2,14 (s, 3H, CH3), 2,41, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,42 (m, 2H, CH2), 2,48 (m, 8H, 4 x CH2), 3,31 (m, 2H, CH2), 6,80 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 2, 0, 8,0 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 8,09 (d, J = 2,0 Hz, 1H) (aromatický a vinyl), 10,99 (s, 1H, CONH), 13,61 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 486,6 (M).
Příklad 172 (4-methylpiperazin-l-yl-ethyl)-amid 5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168 výše, ale nahradí se 5-(5fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina SU014900 5-(2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol3-karboxylovou kyselinou, čímž se získá (4-methylpiperazin-l-yl-ethyl)-amid 5-(2-oxo1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny,
SU014903 (136 mg, 84%) z SU012120 (112,8 mg, 0,4 mmol).
'H-NMR (DMSO-de) δ 2,13 (s, 3H, CH3), 2,39,2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,42 (m, 2H, CH2), 2,48 (m, 8H, 4xCH2), 3,30 (t, 2H, CH2), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,10 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,41 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,76 (d, J = 7,6 Hz, 1H) (aromatické a vinyl), 10,88 (s, 1H, CONH), 13,61 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 406,6 (M-l).
Příklad 171 [2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl]amid 5-[2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethylj2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
• · ·· ··· ·
146
Do míchané žluté kalné směsi 5-[2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (112,8 mg, 0,4 mmol), DMF (0,5 ml) a triethylaminu (0,111 ml) v 20 ml reakční baňce se přidá BOP činidlo (265 mg). Směs se po 5 minutách vyěeří. Do čiré směsi se přidá 2-(2,6-dimethylpiperazin-l-yl)ethylamin (68,6 mg) (viz, Tapia, L. Alonso-Cires, P. Lopez-Tudanca, R., Mosquera, L. Labeaga, A ., Innrarity, A. Orjals, J.Med.Chem., 1999, 42, 2870-2880) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě přes noc. Podle TLC (10% methanol v methylenchloridu) by měla veškerá výchozí látka zreagovat na produkt. Reakční směs se zahušťuje do sucha a čistí zrychlenou chromatografií (CH2C12/CH3OH=20/1-15/1), poté rekrystalizuje, čímž se získá [2-(3,5-dimethylpiperazin-1 -yl)ethyl)-amid 5-[2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (83 mg, 50% výtěžek).
’H NMR (DMSO-dó) δ 1,15,1,16 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 1,95 (t, J = 11,6 Hz, 2H, CH2), 2,41,2,47 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 2H, CH2), 3,03 (d, J = 10 Hz, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,11 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,48 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,75 (d, J = 7,6 Hz, 1H) (aromatické a vinyl), 10,88 (s, 1H, CONH), 13,62 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 422,2 (M+l).
Příklad 173 [2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl)-amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168 výše, čímž se získá požadovaná sloučenina (60 mg, 0,2 mmol).
*H NMR (DMSO-de) δ 0,891,0,907 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 1,49 (t, J = 10,4 Hz, 2H), 2,40,2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,41 (m, 2H, CH2), 2,74 (m, 4H), 3,30 (m, 2H), 6,82 (dd, J = 4,5, 8,7 Hz, 1H), 6,90 (td, 2J = 2,4,3 J = 8,4 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,74 (dd, J = 4,6, 8,4Hz, 1H) (aromatické a vinyl), 10,88 (s, 1H, CONH), 13,65 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 438,4 (M-l).
* ·
147
Příklad 174 [2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl)-amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 171 výše, čímž se získá požadovaná sloučenina (31,2 mg, 34%) z 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (63 mg, 0,2 mmol).
NMR (DMSO-de) δ 1,15,1,16 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 1,95 (t, J - 11,6 Hz, 2H, CH2), 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 2H, CH2), 3,03 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,11 (dd, J = 2,0,8,0 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,97 (d, J = 2,0 Hz, 1H) (aromatické a vinyl), 10,99 (s, 1H, CONH), 13,63 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 456,2 (M+l).
Příklad 175 [2-(3,5 -dimethylpiperazin-1 -yl)ethyl)-amid 5 - [5 -brom-2-oxo-1,2-dihydro-indol-(3Z)ylidenmethyl] -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 171, čímž se získá požadovaná sloučenina (40 mg, 40%) z 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydro-indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (74 mg, 0,2 mmol).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,15,1,16 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 1,95 (t, J = 11,6 Hz, 2H, CH2), 2,40,2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 2H, CH2), 3,03 (d, J = 10,4 Hz, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,30 (m, 2H, CH2), 6, 81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,24 (dd, J = 2,0, 8,4 Hz, 1H), 7,51 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 8,10 (d, J = 2,0 Hz, 1H) (aromatické a vinyl), 10,99 (s, 1H, CONH), 13,62 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 498,4 (M-l).
Biologické příklady
Následující testy byly používány k nalezení takových sloučenin, které mají optimální stupeň požadované aktivity.
• ·
148
Postupy testů
Následující testy mohou být používány ke stanovení míry aktivity a účinku různých sloučenin podle předloženého vynálezu na jednu nebo více PK. Obdobné testy mohou být navrženy společně podle stejných zásad pro kterékoliv PK pomocí standardních a známých technik.
Několik testů popsaných v předloženém vynálezu je prováděno technikou ELIS A (Enzyme-Linked Immunosorbent Sandwich Assay) (Voliér, et al., 1980, „Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,“ Manual of Clinical Immunology, 2d ed., Rose and Friedman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., 359-371). Obecný postup je následující: sloučenina je zavedena do buněk exprimujících testovanou kinázu, buď přírodní nebo rekombinantní, po vybraný časový interval, po kterém, pokud testovaná kináza je receptor, je přidán ligand aktivující receptor. Buňky se lyžují a lyzát se převede do jamek destičky pro ELISA techniku předem potažených specifickou protilátkou rozpoznávající substrát enzymatické fosforylační reakce. Nesubstrátové komponenty buněčného lyzátu se odmyjí a míra fosforylace substrátu se deteguje protilátkou specificky rozpoznávající fosfotyrosin v porovnání s buňkami, které nepřišly v kontakt s testovanou sloučeninou.
Tyto výhodné postupy provádění ELISA experimentů pro specifické PK jsou uvedeny níže. Nicméně úprava těchto postupů určených pro stanovení aktivity sloučenin proti dalším RTK, jakož i pro CTK a STK, je odborné veřejnosti zřejmá. Další testy popsané v předloženém vynálezu měří množství DNA vytvořené v rámci odpovědi na aktivaci testované kinázy, jenž je obecným měřítkem proliferativní odpovědi. Obecný způsob tohoto testu je následující: sloučenina je zavedena do buněk exprimujících testovanou kinázu, buď přírodní nebo rekombinantní, po vybraný časový interval, po kterém, pokud testovaná kináza je receptor, je přidán ligand aktivující receptor. Po inkubaci (alespoň přes noc) se přidá činidlo značící DNA, např. 5-bromdeoxyuridin (BrdU) nebo H3-thymidin. Množství značené DNA se deteguje buď anti-BrdU protilátkou nebo měřením radioaktivity a je srovnáváno s kontrolními buňkami, které nepřišly v kontakt s testovanou sloučeninou.
GST-FLK-1 biologický test
Tento test analyzuje aktivitu tyrosinkinázy GST-Flkl na poly(glu, tyr) peptidech. Materiály a činidla:
149 » ·
·· ·· 1 * · ‘ ♦ <
·· ··«
1. Corning destičky ELISA o 96 jamkách (Corning Catalog No.
5805-96).
2. póly (glu, tyr) 4:1, lyofilizát (Sigma Catalog # P0275).
3. Příprava destiček k testu potažených póly (glu, tyr) (pEY): potažení 2 pg/jamka látkou póly (glu, tyr) (pEY) v 100 μΐ PBS, skladování při pokojové teplotě po dobu 2 hodin nebo při teplotě 4°C přes noc. Přikrytí destiček kvůli odpařování.
4. PBS pufr: pro 1 1, smíchání 0,2 g KH2PO4,1,15 g Na2HPO4, 0,2 g KC1 a 8 g NaCl v přibližně 900 ml dH2O. Po rozpuštění veškerých činidel se pH upraví na 7,2 pomocí HC1. Upravení objemu na celkový 11 pomocí dH2O.
5. PBST pufr: na 1 1 PBS pufiru se přidá 1,0 ml Tween-20.
6. TBB-Blokující pufir: pro 1 1, smíchání 1,21 g TRIS, 8,77 g NaCl, 1 ml TWEEN-20 v přibližně 900 ml dH2O, pH se upraví na 7,2 pomocí HC1, přidání 10 g BSA, míchání k úplnému rozpuštění, objem se doplní na celkový 11 pomocí dH2O, filtrování se k odstranění pevných částic.
7. 1% BSA v PBS: k vytvoření 1 x pracovního roztoku se přidá 10 g BSA do přibližně 990 ml PBS pufřu, míchání k úplnému rozpuštění, objem se doplní na celkový 11 pomocí PBS pufru, filtrování k odstranění pevných částic.
8. 50 mM Hepes pH 7, 5.
9. GST-Flklcd purifikovaný od transformace sf9 rekombinantního baculoviru (SUGEN, lne.).
10. 4%DMSOvdH2O.
11. lOmM ATPvdH2O.
12. 40mMMnCl2
13. Kinázový ředící pufr (KDB): smíchání 10 ml Hepes (pH 7,5), 1 ml 5M NaCl, 40 μΐ 100 mM orthovanadátu sodnéh a 0,4 ml 5% BSA v dH2O s 88,56 ml dH2O.
14. polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V, Applied Scientific Catalog # AS-72092.
15. EDTA: přidání 14,12 g ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA) do přibližně 70 ml dH2O, přidání 10 N NaOH, dokud se EDTA nerozpustí, upravení pH na 8,0, upravení na celkový objem 100 ml pomocí dH2O.
♦· »« * ♦ · * · <
150
16. 1° protilátkový ředící pufr: smíchání 10 ml 5% BSA v PBS pufru s 89,5 ml TBST.
17. Anti-fosfotyrosinová monoklonální protilátka konjugovaná speroxidázou z křenu Selského (PY99 HRP, Santa Cruz Biotech).
18. 2,2'-Azinobis (3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonová kyselina (ABTS, Moss, Cat. No. ABST).
19. 10% SDS.
Postup:
1. Corning destičky ELISA o 96 jamkách potažené 2 pg polyEY peptidu ve sterilním PBS podle kroku 3 z oddílu materiály a činidla.
2. odstranění nenavázané tekutiny z jamek invertující destičkou. Promytí TBST (1 x ). Protřepání destičky na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Do každé jamky se přidá 100 μΐ 1% BSA v PBS, inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
4. Opakování kroku 2.
5. Prosycení jamek 50 mM HEPES (pH 7,5) (150 μΐ/jamka).
6. Zředění testované sloučeniny pomocí dH2O/4% DMSO na čtyř násobnou požadovanou finální testovací koncentraci v polypropylenových destičkách o 96 jamkách.
7. Přidání 25 μΐ zředění testované sloučeniny do ELISA destičky v kontrolních jamkách, zavedení 25 μΐ dH2O/4% DMSO.
8. Přidání 25 μΐ 40 mM MnCl2 s 4x ATP (2 μΜ) do každé jamky.
9. Přidání 25 μΐ 0,5M EDTA do negativních kontrolních jamek.
10. Zředění GST-Flkl na 0,005 μg (5 ng)/jamek pomocí KDB.
11. Přidání 50 μΐ zředěného enzymu do každé jamky.
12. Inkubace za třepání po dobu 15 minut při pokojové teplotě.
13. Zastavení reakce přidáním 50 μΐ 250 mM EDTA (pH 8,0).
14. Promytí 3 x TBST a protřepání destičky na papírové pásce k odstranění tekutiny.
• · · • · • · • · ·· ·►·«
151
15. Přidání 100 μΐ anti-fosfotyrosinového HRP konjugátu na jamku, 1:5000 zředění v protilátkovém ředícím pufru. Inkubace za třepání po dobu 90 minut při pokojové teplotě.
16. Promývání podle kroku 14.
17. Přidání 100 μΐ ABTS roztok o pokojové teplotě do každé jamky.
18. Inkubace za třepání po dobu 10 až 15 minut. Odstranění jakýchkoliv bublinek.
19. Zástavem reakce přidáním 20 μΐ 10% SDS do každé jamky.
20. Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrem při 410 nM a referenčním filtrem při 630 nM.
PYK2 biologické testy
Tento test se používá k měření in vitro aktivity kinázy HA epitopem značené pyk2 o plné délce (FL.pyk2-HA) při testu ELISA technikou.
Materiály a činidla:
1. Corning Elisa destičky o 96 j amkách.
2. 12CA5 monoklonální anti-HA protilátka (SUGEN, lne.)
3. PBS (fosfátem pufrovaný fyziologický roztok Dulbecco (Gibco Catalog # 450-1300EB))
4. TBST pufr: pro 1 1, smíchání 8,766 g NaCl, 6,057 g TRIS a 1 ml 0,1% Triton X-100 v přibližně 900 ml dH2O. Upravení pH na 7,2 a doplnění objemu na 11.
5. Blokující pufr: pro 1 1, smíchání 100 g 10% BSA, 12,1 g 100 mM TRIS, 58,44 g 1 M NaCl a 10 ml 1% TWEEN-20.
6. FL.pyk2-HA z sf9 buněčného lyzátu (SUGEN, lne.).
7. 4% DMSO v MilliQue H2O.
8. 10 mM ATP v dH2O.
9. 1 M MnCl2.
10. lMMgCl2.
11. 1 M Dithiothreitol (DTT).
9
9 ·
• · ·*♦·
152
12. 10X fosforylace kinázového pufru: smíchání 5,0 ml 1 M Hepes (pH 7,5), 0,2 ml 1 M MnCl2,1,0 ml 1 M MgCl2, 1,0 ml 10% Triton X-100 v 2,8 ml dH2O. Těsně před použitím přidání 0,1 ml 1 M DTT.
13. NUNC propylenové destičky o 96 jamkách s V dnem.
14. 500 mM EDTA v dH2O.
15. Protilátkový ředící pufr: pro 100 ml, 1 ml 5% BSA/PBS a 1 ml 10% Tween20 v 88 ml TBS.
16. HKP-konjugovaná anti-Ptyr PY99), Santa Cruz Biotech Cat. No. SC-7020.
17. ABTS, Moss, Cat. No. ABST-2000.
18. 10%SDS.
Postup:
1. Corning ELISA destičky o 96 jamkách potažené 0,5 pg na jamku 12CA5 protilátkou anti-HA v 100 μΐ PBS. Skladování přes noc při teplotě 4°C.
2. Odstranění nenavázané HA protilátky z jamek invertující destičkou. Promytí destiček dH2O. Protřepání destičky na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Přidání 150 μΐ blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 4x TBS-T.
5. Zředění lyzátu v PBS (1,5 pg lyzát/100 μΐ PBS).
6. Přidání 100 μΐ zředěného lyzátu do každé jamky. Protřepávání při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
7. Promytí podle kroku 4.
8. Přidání 50 μΐ 2 X kinázového pufru do ELISA destičky obsahující zachycenou pyk2-HA.
9. Přidání 25 μΐ 400 μΜ testované sloučeniny v 4% DMSO do každé jamky. Pro kontrolní jamky použití samotného 4% DMSO.
10. Přidání 25 μΐ 0,5 M EDTA do negativních kontrolních jamek.
11. Přidání 25 μΐ 20 μΜ ATP do všech jamek. Inkubace za třepání po dobu 10 minut.
12. Zastavení reakce přidáním 25 μΐ 500 mM EDTA (pH 8,0) do všech jamek.
• t
153 *·· ·*· • >
«·· ·· • 9 • 9 • · • · • ♦ ··«.·
13. Promytí podle kroku 4.
14. Přidání 100 μΐ HRP konjugované anti-Ptyr zředěné 1:6000 v protilátkovém ředícím pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
15. Promytí destiček 3 x s TBST a 1 x s PBS.
16. Přidání 100 μΐ ABST roztoku do každé jamky.
17. Pokud je třeba zastavení reakce přidáním 20 μί 10% SDS do každé jamky.
18. Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrem při 410 nM a referenčním filtrem při 630 nM.
FGFR1 biologické testy
Tento test je používán k měření in vitro kinázové aktivity FGF1-R při ELISA testu. Materiály a činidla:
1. Elisa destičky Costar o 96 jamkách (Corning Catalog # 3369).
2. Póly (Glu-Tyr) (Sigma Catalog # P0275).
3. PBS (Gibko Catalog # 450-1300EB)
4. 50 mM Hepes pufrovací roztok.
5. Blokující pufr (5% BSA/PBS).
6. Purifikovaná GST-FGFR1 (SUGEN, lne.)
7. Kinázový ředící pufr. Smíchání 500 μί 1 M Hepes (GIBCO), 20 μί 5% BSA/PBS, 10 μί lOOmM orthovanadátu sodného a 50 μί 5M NaCl.
8. lOmMATP.
9. ATP/MnCL fosforylační směs: smíchání 20 μί ATP, 400 μί 1 M MnCl2 a 9,56 ml dH2O.
10. NUNC polypropylenové destičky o 96 jamkách s dnem do V (Applied Scientific Catalog # AS-72092).
11. 0,5MEDTA.
12. 0,05% TBST. Přidání 500 μί TWEEN do 1 litru TBS.
13. Králičí polyklonální anti-fosfotyrosinové sérum (SUGEN, lne.).
14. Kozí proti-králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource, Catalog # ALI0404).
15. ABTS roztok.
16. ABTS/H2O2 roztok.
154
Postup:
1. ELISA destičky Costar o 96 jamkách potažené poly(Glu, Tyr) v 100 μΐ PBS v množství 1 pg na jamku. Skladovém přes noc při teplotě 4°C.
2. Promytí potažených destiček PBS (1 x).
3. Přidání 150 μΐ 5% BSA/PBS blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 2 x s PBS, pak s 50mM Hepes (1 x ). Protřepání destičeek na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny a bublinek.
5. Přidání 25 μΐ 0,4 mM testované sloučeniny v 4% DMSO nebo samotném 4% DMSO (kontrolní) do destiček.
6. Zředění purifikované GST-FGFR1 v kinázovém ředícím pufru (5 ng kináza/50 μΐ KDB/jamka).
7. Přidání 50 μΐ zředěné kinázy do každé jamky.
8. Nastartování kinázové reakce přidáním 25 μΐ/jamka čerstvě připraveného ATP/Mn++ (0,4 ml 1 M MnCl2, 40 μΐ 10 mM ATP, 9,56 ml dH2O), čerstvě připravený).
9. Toto je rychlá kinázová reakce a musí být zastavena pomocí 25 μΐ 0,5M EDTA způsobem, který je podobný přidání ATP.
10. Promytí destiček 4x čerstvým TBST.
11. Vytvoření protilátkového ředícího pufru: na 50 ml: smíchání 5 ml 5% BSA, 250 μΐ 5% mléka a 50 μΐ lOOmM vanadátu sodného, doplnění na konečný objem pomocí 0,05% TBST.
12. Přidání 100 μΐ na jamku anti-fosfotyrosin (1:10000 zředění v ADB). Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
13. Promytí podle kroku 10.
14. Přidání Biosource kozího proti-králičího IgG peroxidázového konjugátu (1:6000 zředění v ADB) 100 μΐ na jamku. Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
15. Promytí podle kroku 10 a pak s PBS k odstranění bublinek a přebytku TWEEN.
16. Přidání 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
17. Inkubace za třepání po dobu 10 až 20 minut.
155
Odstranění jakýchkoliv bublinek.
18. Měření na přístroji Dynatech MR7000 pro techniku elisa: testovací filter při 410 nM, referenční filtr při 630 nM.
EGFR biologické testy
Tento test je používán k měření in vitro kinázové aktivity FGF1-R při ELISA testu. Materiály a činidla:
1. ELISA destičky Corning o 96 jamkách.
2. SUMO1 monoklonální protilátka proti-EGFR (SUGEN, lne.).
3. PBS.
4. TBST pufr.
5. Blokující pufr: pro 100 ml, smíchání 5,0 g Camation Instant Non-fat Milk® 100 ml PBS.
6. A431 buněčný lyzát (SUGEN, lne.).
7. TBS pufr:
8. TBS + 10% DMSO: pro 1 1, smíchání 1,514 g TRIS, 2,192 g NaCl a 25 ml DMSO; doplnění na 1 litr celkového objemu pomocí dH2O.
9. ATP (Adenosin-5'-trifosfát, z koňského svalu, Sigma Cat. No. A-5394), 1,0 mM roztok vdH2O. Toto činidlo by mělo být připraveno těsně před použitím a skladováno v ledu.
10. l,0mMMnCl2.
11. ATP/MnCl2 fosfory lační směs: k vytvoření 10 ml, smíchání 300 μΐ 1 mM ATP, 500 μΐ MnCl2 a 9,2 ml dH2O. Připravení těsně před použitím a skladovém v ledu.
12. polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
13. EDTA.
14. Králičí polyklonální anti-fosfotyrosinové sérum (SUGEN, lne.).
15. Kozí proti-králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource Cat. No. ALI0404).
16. ABTS.
17. 3 0% peroxid vodíku.
18. ABTS/H2O2.
156
19. 0,2 MHC1.
Postup:
1. ELISA destičky Corning o 96 jamkách potažené 0,5 pg SUMO1 v 100 μΐ PBS na jamka. Skladování přes noc při teplotě 4°C.
2. Odstranění nenavázané SUMO1 z jamek invertující destičkou kvůli eliminaci tekutiny. Promytí 1 x dH2O. Protřepání destičky na papírové roušce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Přidání 150 μΐ blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 3 x deionizovanou vodou, pak 1 x TBST. Protřepání destičky na papírové roušce k odstranění přebytku tekutiny a bublinek.
5. Zředění lyzátu v PBS (7 pg lyzát/100 μΐ PBS).
6. Přidání 100 μΐ zředěného lyzátu do každé jamky. Protřepávání při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
7. Promytí destiček podle bodu 4 výše.
8. Přidání 120 μΐ TBS do ELISA destičky obsahující zachycenou EGFR.
9. Zředění testované sloučenina 1:10 v TBS, zavedení do jamek
10. Přidání 13,5 μΐ zředěné testované sloučeniny do ELISA destičky. Přidání
13,5 μΐ TBS v 10% DMSO do kontrolních jamek.
11. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
12. Přidání 15 μΐ fosforylační směsi do všech jamek kromě negativních kontrolních jamek. Konečný objem v jamkách by měl být přibližně 150 μΐ s 3 Μ ATP/5 mM MnCl2 konečné koncentrace v každé jamce. Inkubace za třepání po dobu 5 minut.
13. Zastavení reakce za třepání přidáním 16,5 μΐ EDTA roztoku. Protřepávání další 1 minutu.
14. Promytí 4x deionizovanou vodou, 2 x s TBST.
15. Přidání 100 μΐ anti-fosfotyrosinu (1:3000 zředění v TBST) na jamku. Inkubace za třepání po dobu 30-45 minut při pokojové teplotě.
16. Promytí podle bodu 4 výše.
157
17. Přidání 100 μΐ Biosource kozího proti-králičího IgG peroxidázového konjugátu (1:2000 zředění v TBST) do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
18. Promytí podle 4 výše.
19. Přidání 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
20. Inkubace 5 až 10 minut za třepání. Odstranění jakýchkoliv bublinek.
21. Pokud je třeba, zastavení reakce přidáním 100 μΐ 0,2 M HC1 na jamku.
22. Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA: testovací filter při 410 nM, referenční filtr při 630 nM.
PDGFR biologické testy
Tento test se používá k měření in vitro kinázové aktivity FGF1-R při ELISA testu. Materiály a činidla:
1. Elisa destičky Corning o 96 jamkách.
2. 28D4C10 monoklonální proti-PDGFR protilátka (SUGEN, lne.).
3. PBS.
4. TBST pufr.
5. Blokující pufr (stejný jako pro EGFR biologické testy).
6. NIH 3T3 buněčný lyzát exprimující PDGFR-β (SUGEN, lne.).
7. TBS pufr.
8. TBS+10% DMSO.
9. ATP.
10. MnCl2.
11. Kinázová pufrovací směs k fosforylaci: pro 10 ml, smíchání 250 μΐ 1 M TRIS, 200 μΐ 5M NaCl, 100 μΐ 1 M MnCl2 a 50 μΐ 100 mM Triton X-100 v dostatečném množství dH2O k připravení 10 ml.
12. polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
13. EDTA.
14. Králičí polyklonální anti-fosfotyrosinové sérum (SUGEN, lne.).
15. Kozí proti-králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource Cat. No. ALI0404).
16. ABTS.
17. 3 0% roztok peroxidu vodíku.
18. ABTS/H2O2.
• ·
158
19. 0,2 MHC1.
Postup:
1. ELISA destičky Corning o 96 jamkách potažené 0,5 pg 28D4C10 v 100 μΐ PBS na jamku. Skladování přes noc při teplotě 4°C.
2. Odstranění nenavázané 28D4C10 z jamek invertující destičkou kvůli zbavení se tekutiny. Promytí 1 x s dH2O. Protřepání destičky na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Přidání 150 μΐ blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace po dobu 30 minut při pokojové teplotě za třepání.
4. Promytí destiček 3 x s deionizovanou vodou, pak 1 x TBST. Protřepání destičky na papírové roušce k odstranění přebytku tekutiny a bublinek.
5. Zředění lyzátu v HNTG (10 pg lyzát/100 μΐ HNTG).
6. Přidání 100 μΐ zředěného lyzátu do každé jamky. Protřepávání při pokojové teplotě po dobu 60 minut.
7. Promytí destičky podle kroku 4.
8. Přidání 80 μΐ pracovní směsi kinázového pufru do ELISA destičky obsahujících zachycený PDGFR.
9. Zředění testované sloučeniny 1:10 v TBS v polypropylenových destičkách o 96 jamkách.
10. Přidání 10 μΐ zředěné testované sloučeniny do ELISA destičky. Přidání 10 μΐ TBS + 10% DMSO do kontrolních jamek. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
11. Přidání 10 μΐ ATP přímo do všech jamek kromě negativních kontrolních jamek (konečný objem v jamce by měl být přibližně 100 μΐ s 20 μΜ ATP v každé jamce). Inkubace 30 minut za třepání.
12. Zastavení reakce přidáním 10 μΐ EDTA roztoku do každé jamky.
13. Promytí 4x deionizovanou vodou, (2 x) s TBST.
14. Přidání 100 μΐ anti-fosfotyrosinu (1:3000 zředění v TBST) na jamku. Inkubace za třepání po dobu 30-45 minut při pokojové teplotě.
15. Promytí podle kroku 4.
159
• ·
9* 9999
16. Přidání 100 μΐ Biosource kozího proti-králičího IgG peroxidázového konjugátu (1:2000 zředění v TBST) do každé jamky. Inkubace za třepám po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
17. Promytí podle kroku 4.
18. Přidání 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
19. Inkubace 10 až 30 minut za třepání. Odstranění jakýchkoliv bublinek.
20. Pokud je třeba, zastavení reakce přidáním 100 μΐ 0,2 M HC1 na jamku.
21. Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrem při 410 nM a referenčním filtrem při 630 nM.
Testy s buněčnou HER-2 kinázou
Tento test je používán k měření aktivity HER-2 kinázy v celých buňkách při ELISA testu.
Materiály a činidla:
1. DMEM (GIBCO Catalog #11965-092).
2. Fetální bovinní sérum (FBS, GIBCO Catalog #16000-044), tepelná inaktivace ve vodní lázni po dobu 30 minut při teplotě 56°C.
3. Trypsin (GIBCO Catalog #25200-056).
4. L-Glutamin (GIBCO Catalog #25030-081).
5. HEPES (GIBCO Catalog #15630-080).
6. Růstové médium
Smíchání 500 ml DMEM, 55 ml teplem inaktivovaného FBS, 10 ml HEPES a 5,5 ml L-Glutaminu.
7. „Starve“ médium
Smíchání 500 ml DMEM, 2,5 ml teplem inaktivovaného FBS, 10 ml HEPES a 5,5 ml L-Glutaminu.
8. PBS.
9. Mikrotitrační destičky o 96 jamkách s plochým dnem určeným pro tkáňovou kulturu (Corning Catalog # 25860).
10. 15 cm misky na tkáňovou kulturu (Corning Catalog #08757148).
11. ELISA destičky Corning o 96 jamkách.
12. polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
13. Přenosné catridge Costar pro Transtar 96 (Costar Catalog #7610).
14. SUMO 1: monoklonální proti-EGFR protilátka (SUGEN, lne.).
• ·
160
15. TBSTpuíř.
16. Blokující pufr: 5% Camation Instant Milk® v PBS.
17. EGF ligand: EGF-201, Shinko American, Japan. Suspendovaný prášek v 100 μΐ 10 mM HC1. Přidání 100 μΐ 10 mM NaOH. Přidání 800 μΐ PBS a převedení do Eppendorfovy baňky. Skladování při teplotě -20°C do té doby, dokud se nepoužije.
18. HNTG Lyzovací pufru. Pro zásobní roztok 5X HNTG, smíchání 23,83 g Hepes, 43,83 g NaCl, 500 ml glycerolu a 100 ml Triton X-100 a dostatečné množství dH2O k vytvoření 11 celkového roztoku.
Pro 1 x HNTG*, mix 2 ml HNTG, 100 μΐ 0,1 M Na3VO4, 250 μΐ 0,2M Na4P2O7 a 1001 EDTA.
19. EDTA.
20. Na3VO4. K vytvoření zásobního roztoku se smíchá 1,84 g Na3VO4 s 90 ml dH2O. Upravení pH na 10. Vaření vmikrovlnce po dobu jedné minuty (roztok se vyčeří). Ochlazení na pokojovou teplotu. Upravení pH na 10. Opakování cyklu zahřívání/chlazení, dokud pH nezůstane na 10.
21. 200mMNa4P2O7.
22. Králičí polyklonální antisérum specifické pro fosfotyrosin (proti-Ptyr protilátka, SUGEN, lne.).
23. Afinitně purifikované antisérum, kozí proti-králičí IgG protilátka, peroxidázový konjugát (Biosource Cat # ALI0404).
24. ABTS roztok.
25. 30 % roztok peroxidu vodíku.
26. ABTS/H2O2.
27. 0,2 M HC1.
Postup:
1. Corning ELIS A destičky o 96 jamkách potažené SUM01 v koncentraci 1,0 pg na jamku v PBS, 100 μΐ finálního objemu na jamku. Skladování přes noc při teplotě 4°C.
2. V den použití se odstraní potahovací pufr a destičky se promyjí 3 x dH2O a jednou TBST pufrem. Pokud není stanoveno jinak, mělo by být promývání provedeno tímto způsobem.
• 4 4 4 4 ··· ·· 444 ··· 4·· 44 4444
161
3. Přidání 100 μΐ blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace destiček za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Těsně před použitím promytí destiček.
4. Použití EGFr/HER-2 chimera/3T3-C7 buněčných linií při tomto testu.
5. Vybrané misky mající 80-90 % konfluenci. Sbírání buněk trypsinizací a centrifugací při 1000 rpm za pokojové teploty po dobu 5 minut.
6. Resuspendování buněk v „starve“ médiu a měření s trypanovou modří. Je vyžadována životnost vyšší než 90%. Naočkování buněk ve smrtícím médiu při hustotě 2500 buněk na jamku, 90 μΐ na jamku, v mikrotitrační destičce o 96 jamkách. Inkubace naočkovaných buněk přes noc při teplotě 37°C pod 5% CO2.
7. Start s testem po dvou dnech od naočkování.
8. Testované sloučeniny se rozpustí v 4% DMSO. Vzorky jsou pak dále zředěny přímo na destičkách „starve“ médiem DMEM. Typicky bude toto zředění 1:10 nebo větší. Všechny jamky jsou pak převedeny do buněčných destiček v dalším zředěním 1:10 (10 μΐ vzorku a média do 90 μΐ „starve“ média. Finální koncentrace DMSO by měla být 1% nebo nižší. Může být také používáno standardní sériové zředění.
9. Inkubace pod 5% CO2 při teplotě 37°C po dobu 2 hodin.
10. Připravení EGF ligand zředěním zásobního roztoku EGF (16,5 μΜ) v horkém DMEM na 150 nM.
11. Připravení čerstvého HNTG* v dostatečném množství pro 100 μΐ na jamku; skladování na ledu.
12. Po 2 hodinách inkubace s testovanou sloučeninou se přidá připravený EGF ligand do buněk, 50 μΐ na jamku, na konečnou koncentraci 50 nM. Pozitivní kontrolní jamky obdrží stejné množství EGF. Do negativních kontrolních jamek se nepřidá EGF. Inkubace při teplotě 37°C po dobu 10 minut.
13. Odstranění testované sloučeniny, EGF a DMEM. Promytí buněk 1 x PBS.
14. Převedení HNTG* do buněk, 100 μΐ na jamku. Umístnění do ledu na dobu 5 minut a mezitím odstranění blokujícího pufru z ELIS A destiček a promytí.
15. Seškrábání buněk z destičky mikropipetou a homogenizace buněčného materiálu opakovaným nasáváním a dispenzací HNTG* lyzovacího pufru.
162
19
21.
22.
23.
24.
Převedení lyzátu do potažené, blokované, promyté ELISA destičky. Nebo k převedení lyzátu do destičky použití převáděcího cartridge Costar. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
Odstranění lyzátu, promytí, převedení čerstvě-zředěné anti-Ptyr protilátky (1 : 3000 v TBST) do ELISA destiček, 100 μΐ na jamku.
Inkubace, za třepám, při pokojové teplotě, po dobu 30 minut.
Odstranění anti-Ptyr protilátky, promytí, převedení čerstvě zředěné BIOSOURCE protilátky do ELISA destičky (1 : 8000 v TBST, 100 μΐ na jamku).
Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu 30 minut.
Odstranění BIOSOURCE protilátky, promytí, převedení čerstvě připraveného ABTS/H2O2 roztoku do ELISA destičky, 100 μΐ na jamku. Inkubace, za třepání, po dobu 5-10 minut, odstranění jakýchkoliv bublinek. Zastavení reakce přidáním 100 μΐ 0,2M HC1 na jamku.
Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrem nastaveným na 410 nM a referenčním filtrem na 630 nM.
Testy cdk2/cyklin A
Tento test je používán k měření in vitro aktivity serin/threoninkinázy lidské cdk2/cyklin A při „Scintillation Proximity Assay“ (SPA).
Materiály a činidla:
1. Polyethylenové tereftalátové (flexi) destičky Wallac o 96 jamkách (Wallac Catalog# 1450-401).
2. Amersham Redivue [γ33Ρ] ATP (Amersham catalog #AH 9968).
3. Polyvinyltoluenové SPA kuličky potažené Amersham streptavidinem (Amersham catalog #RPNQ0007), kuličky by měly být reaktivovány v PBS bez hořčíku nebo vápníku při 20 mg/ml.
4. aktivovaný cdk2/cyclin A enzymový komplex purifikovaný od Sf9 buněk (SUGEN, lne.).
5. Biotinylovaný peptidový substrát (Debtide). Peptid biotin-XPKTPKKAKKL se rozpustí v dH2O při koncentraci 5 mg/ml.
163
6. Peptid/ATP směs: pro 10 ml, smíchání 9,979 ml dH2O, 0,00125 ml studeného ATP, 0,010 ml Debtide a 0,010 ml γ33Ρ ATP. Mezní koncentrace na jamku bude 0,5 M studeného ATP, 0,1 pg Debtide a 0,2 pCi γ33Ρ ATP.
7. Kinázový pufr: pro 10 ml, smíchání 8,85 ml dH20,0,625 ml TRIS (pH 7,4), 0,25 ml 1 M MgCl2, 0,25 ml 10% NP40 a 0,025 ml 1 M DTT. Přidání čerstvého množství těsně před použitím.
8. 10 mM ATP v dH2O.
9. 1 M Tris, upravení pH na 7,4 s HCl.
10. lMMgCl2.
11. 1MDTT.
12. PBS (Gibko Catalog # 14190-144).
13. 0,5 M EDTA.
14. Zastavovací roztok: pro 10 ml, smíchání 9,25 ml PBS, 0,005 ml 100 mM ATP, 0,1 ml 0,5 M EDTA, 0,1 ml 10% Triton X 100 a 1,25 ml 20 mg/ml SPA kuliček.
Postup:
1. Připraveni roztoků testovaných sloučenin v 5 x požadovaných konečných koncentrací v 5% DMSO. Přidání 10 μΐ do každé jamky. Pro negativní kontroly použití samotného 10 μΐ 5% DMSO v jamkách.
2. Zředění 5 μΐ roztoku cdk2/cyclin A s 2,1 ml 2 x kinázovým pufrem.
3. Přidání 20 μΐ enzymu do každé jamky.
4. Přidání 10 μΐ 0,5 M EDTA do negativních kontrolních jamek.
5. K nastartování kinázové reakce se přidá 20 μΐ směsi peptid/ATP do každé jamky. Inkubace po dobu 1 hodiny bez třepání.
6. Přidání 200 μΐ zastavovacího roztoku do každé jamky.
7. Ponechání v klidu po dobu alespoň 10 minut.
8. Centrifugace destiček přibližně při 2300 rpm po dobu 3-5 minut.
9. Měření pomocí Triluxu nebo podobného přístroje.
Test transfosforylace MET ·« · · · ·♦ ·· • · ·· 9 9 · · · 9 · • · · 9 9 9 9 9 • · ·· · 9 · 9 · 9
9 9 9 9 9 9 9
999 999 999 99 9999
164
Tento test se používá k měření hladin fosfotyrosinu na poly(glutamová kyselina:tyrosin (4:1)) substrátu jako způsobu identifikace agonistů/antagonistů met transfosforylace substrátu.
Materiály a činidla:
1. Corning Elisa destičky o 96 jamkách, Corning Catalog # 25805-96.
2. Póly (glu, tyr) 4:1, Sigma, Cat. No.; P 0275.
3. PBS, Gibco Catalog # 450-1300EB
4. 50 mM HEPES
5. Blokující pufr: rozpuštění 25 g bovinního sérumalbuminu, Sigma Cat. No.
A-7888, v 500 ml PBS, filtrování přes 4 pm filtr.
6. Purifikování GST íuzního proteinu obsahujícího Met kinázovou doménu,
Sugen, lne.
7. TBST pufr.
8. 10% vodný (MilliQue H2O) DMSO.
9. 10 mM vodný (dH2O) adenosin-5'-trifosfát, Sigma Cat. No. A-5394.
10. 2 x kinázový ředící pufru: pro 100 ml, smíchání 10 ml 1 M HEPES při pH
7,5 s 0,4 ml 5% BSA/PBS, 0,2 ml 0,1 M orthovanadátu sodného a 1 ml 5M chloridu sodného v 88,4 ml dH2O.
11. 4 X ATP reakční směs: pro 10 ml, smíchání 0,4 ml 1 M chloridu manganatého a 0,02 ml 0,1 M ATP v 9,56 ml dH2O.
12. 4 X negativní kontrolní směs: pro 10 ml, smíchání 0,4 ml 1 M chloridu manganatého v 9,6 ml dH2O.
13. Polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V, Applied Scientific Catalog # S-72092,
14. 500 mM EDTA.
15. Protilátkový ředící pufr: pro 100 ml, smíchání 10 ml 5% BSA/PBS, 0,5 ml 5% Carnation Instant Milk® v PBS a 0,1 ml 0,1 M orthovanadátu sodného v
88,4 ml TBST.
16. Králičí polyklonální antofosfotyrosinová protilátka, Sugen, lne.
17. Kozí proti-králičí protilátka konjugovaná s křenovou peroxidázou,
Biosource, lne.
18. ABTS roztok: pro 1 1, smíchání 19,21 g kyseliny citrónové, 35,49 g Na2HPO4 a 500 mg ABTS s dostatečným množstvím dH2O k vytvoření 11.
44 44
44 4 44
4 4 4 4 • 4 4 4 4 9
4 4 4 4
444 444 44 4444
165
19. ABTS/H2O2: smíchání 15 ml ABST roztoku s2 μΐ H2O2 pět minut před použitím.
20. 0,2 MHC1.
Postup:
1. ELIS A destičky potažené 2 pg Póly (Glu-Tyr) v 100 μΐ PBS. Skladování přes noc při teplotě 4°C.
2. Blokování destiček se 150 μΐ 5% BSA/PBS po dobu 60 minut.
3. Promytí destiček (2 x) s PBS, 1 x s 50 mM Hepes pufrem pH 7,4.
4. Přidání 50 μΐ zředěné kinázy do všech jamek. (Purifikovaná kináza se zředí s kinázovým ředícím pufrem. Finální koncentrace by měla být 10 ng/jamku.
5. Přidání 25 μΐ testované sloučeniny (v 4% DMSO) nebo samotném DMSO (4% v dH2O) pro kontrolu destiček.
6. Inkubace kinázy/slouěeniny směsi po dobu 15 minut.
7. Přidání 25 μΐ 40 mM MnCl2 do negativních kontrolních jamek.
8. Přidání 25 μΐ ATP/MnCl2 směsi do všech dalších jamek (kromě negativní kontroly). Inkubace po dobu 5 minut.
9. Přidání 25 μΐ 500 mM EDTA k zastavení reakce.
10. Promytí destiček 3 x TBST.
11. Přidání 100 μΐ králičí polyklonální anti-Ptyr zředěné 1:10000 v protilátkovém ředícím pufru do každé jamky. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu jedné hodiny.
12. Promytí destiček 3 x TBST.
13. Zředění Biosource HRP konjugované anti-králičí protilátky 1:6000 v protilátko vém ředícím pufru. Přidání 100 μΐ na jamku a inkubace při pokojové teplotě, za třepání, po dobu jedné hodiny.
14. Promytí destiček 1 x s PBS.
15. Přidání 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
16. Pokud je třeba, zastavení reakce přidáním 100 μΐ 0,2 M HC1 na jamku.
17. Měření destiček na přístroji Dynatech MR7000 s testovacím filtrem při 410 nM a referenčním filtrem při 630 nM.
0 00 0 0
166
IGF-1 transfoforylační test
Tento test se používá k měření hladiny fosfotyrosinu v póly (glutamové kyselině : tyrosinu) (4:1) kvůli identifikaci agonistů a/nebo antagonistů gst-IGF-1 transfosforylace substrátu.
Materiály a činidla:
1. Corning Elisa destičky o 96 jamkách.
2. Póly (Glu-tyr) (4:1), Sigma Cat. No. P 0275.
3. PBS, Gibko Catalog # 450-1300EB.
4. 50 mM HEPES
5. TBB blokující pufr: pro 1 1, smíchání 100 g BSA, 12,1 g TRIS (pH 7,5), 58,44 g chloridu sodného a 10 ml 1% TWEEN-20.
6. Purifikovaný GST fuzní protein obsahující IGF-1 kinázovou doménu (Sugen, lne.)
7. TBST pufr: pro 1 1, smíchání 6,057 g Tris, 8,766 g chloridu sodného a 0,5 ml TWEEN-20 s dostatečným množstvím dH2O k vytvoření 1 litru.
8. 4% DMSO v Milli-Q H2O.
9. 10 mM ATP v dH2O.
10. 2 X kinázový ředící pufr: pro 100 ml, smíchání 10 ml 1 M HEPES (pH 7,5), 0,4 ml 5% BSA v dH2O, 0,2 ml 0,1 M orthovanadátu sodného a 1 ml 5 M chloridu sodného s dostatečným množstvím dH2O k vytvoření 100 ml.
11. 4 X ATP reakční směs: pro 10 ml, smíchání 0,4 ml 1 M MnCl2 a 0,008 ml 0,01 M ATP a 9,56 ml dH2O.
12. 4 X negativní kontrolní směs: smíchání 0,4 ml 1 M chloridu manganatého v 9,60 ml dH2O.
13. Polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
14. 500 mM EDTA v dH2O.
15. Protilátkový ředící pufr: pro 100 ml, smíchání 10 ml 5% BSA v PBS, 0,5 ml 5% Camation Instant Non-fat Milk v PBS a 0,1 ml 0,1 M orthovanadátu sodného v 88,4 ml TBST.
16. Králičí polyklonální antifosfotyrosinová protilátka, Sugen, lne.
17. Kozí proti-králičí HRP konjugovaná protilátka, Biosource.
18. ABTS roztok.
• 9 ··· ft·»· ·»·
167 • ft ··
9 9
9 9
9 9
9999
20. ABTS/H2O2: smíchání 15 ml ABTS s 2 μΐ H2O2 5 minut před použitím.
21. 0,2 M HC1 v dH2O.
Postup:
1. ELISA destičky potažené 2,0 pg/jamku Póly (Glu, Tyr) 4:1 (Sigma P0275) v 100 μΐ PBS. Skladování destičky přes noc při teplotě 4°C.
2. Promytí destičky 1 x s PBS.
3. Přidání 100 μΐ TBB blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace destičky po dobu 1 hodiny za třepání při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 1 x PBS, pak (2 x) s 50 mM Hepes pufr pH 7,5.
5. Přidání 25 μΐ testované sloučeniny v 4% DMSO (připravené zředěním zásobního roztoku 10 mM testované sloučeniny v 100% DMSO s dH2O) do destičky.
6. Přidání 10,0 ng gst-IGF-1 kinázy v 50 μΐ kinázovém ředícím pufru) do všech jamek.
7. Nastartování kinázové reakce přidáním 25 μΐ 4 X ATP reakění směsi do všech jamek k testování a k pozitivní kontrole. Přidání 25 μ4 X negativní kontrolní směsi do všech jamek k negativní kontrole. Inkubace po dobu 10 minut za třepání při pokojové teplotě.
8. Přidání 25 μΐ 0,5 M EDTA (pH 8,0) do všech jamek.
9. Promytí destiček 4 x s TBST pufrem.
10. Přidání králičího polyklonálního anti-fosfotyrosinového antiséra v zředění 1: 10000 v 100 μΐ protilátkovém ředícím pufru do všech jamek. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
11. Promytí destiček podle kroku 9.
12. Přidání 100 μΐ Biosource proti-králičí HRP v zředění 1:10000 v protilátkovém ředícím pufru do všech jamek. Inkubace, za třepám, při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
13. Promytí destiček podle kroku 9, následně jedno promytí s PBS ke snížení bublinek a přebytku Tween-20.
14. Vyvolání přidáním 100 μΐ na jamku ABTS/H2O2 do každé jamky.
15. Po asi 5 minutách měření na přístroji k měření ELISA destiček s testovacím filtrem při 410 nm a referenčním filtrem při 630 nm.
168 • v » 0 • 0 • · • « • 0 * 00 *♦ • · 00 0 1 ♦ • 9 9 9 9 • · « « · · · > 0 » · 0 «»· ·»· 00 9999
Testy inkorporace BrdU
Při následujících testech se využívá buněk upravených k expresi vybraného receptoru a následně stanovení účinku vybrané sloučeniny na aktivitu DNA syntézy indukované ligandem stanovením inkorporace BrdU do DNA.
Následující materiály, činidla a postup jsou obecným způsobem při každém následujícím testu inkorporace BrdU.
Změny ve specifických testech jsou uvedeny.
Materiály a činidla:
1. Příslušný ligand.
2. Příslušné upravené buňky.
3. BrdU značící činidlo: 10 mM, v PBS (pH 7,4) (Boehringer Mannheim, Germany).
4. FixDenat: fixační roztok (hotový k použití) (Boehringer Mannheim, Germany).
5. Anti-BrdU-POD: myšší monoklonální protilátka konjugovaná s peroxidázou (Boehringer Mannheim, Germany).
6. TMB substrátový roztok: tetramethylbenzidin (TMB, Boehringer Mannheim, Germany).
7. PBS promývací roztok: 1 x PBS, pH 7,4.
8. Albumin, hovězí (BSA), frakce V prášková (Sigma Chemical Co., USA). Obecný postup:
1. Buňky se naočkují v množství 8000 buněk na jamku v 10% CS, 2 mM Gin v DMEM na destičku o 96 jamkách. Buňky se inkubují přes noc při teplotě 37°C v 5% CO2.
2. Po 24 hodinách se buňky promyjí s PBS a pak jsou vystaveny prostředí bez séra zavedením do média neobsahujícího sérum (0% CS DMEM s 0,1% BSA) po dobu 24 hodin.
3. Třetí den se příslušný ligand a testovaná sloučenina najednou přidají do buněk. Do negativních kontrolních jamek se přidá DMEM bez séra pouze s0,l% BSA; K pozitivním kontrolním buňkám se přidá ligand bez testované sloučeniny. Testované sloučeniny se připraví v DMEM bez séra s ligandem v destičce o 96 jamkách a sériově zředí na 7 testovacích koncentrací.
169 • · i
9 9 9 9
9 · * • ·· ···· (1:100 v « 9 * • · · • β · ·· 999
4. Po 18 hodinách aktivace ligandu se zředěné BrdU značící činidlo
DMEM, 0,1% BSA) a buňky inkubují s BrdU (finální koncentrace = 10 μΜ) po dobu 1,5 hodiny.
5. Po inkubaci se značícím činidlem se médium odstraní dekantací a poklepáním převrácené destičky na papírové útěrce. Přidá se roztok FixDenatu (50 μΐ na jamku) a destičky se inkubují při pokojové teplotě po dobu 45 minut na destičkovém třepači.
6. Roztok FixDenatu se řádně odstraní dekantací a poklepáním převrácené destičky na papírové utěrce. Přidá se mléko (5% dehydrované mléko v PBS, 200 μί na jamku) jako blokovací roztok a destička se inkubuje po dobu 30 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači.
7. Blokovací roztok se odstraní dekantací a jamky se promyjí 1 x s PBS. Přidá se antiBrdU-POD roztok (1 : 200 zředění v PBS, 1% BSA) (50 μί na jamku) a destičky se inkubují po dobu 90 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači.
8. Protilátkový konjugát se řádně odstraní dekantací a promýváním jamek 5 x s PBS a destička se suší invertováním a poklepáním na papírové útěrce.
9. Přidá se TMB substrátový roztok (100 μί na jamku) a inkubuje se po dobu 20 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači, dokud se nevyvine zbarvení, které je dostatečné k fotometrické detekci.
10. Absorbance vzorků se měří při 410 nm (v módu „duální vlnové délky“ s filtrem při 490 nm jako referenční vlnovou délkou) na přístroji Dynatech k měření ELISA destiček.
Testy inkorporace BrdU indukované EGF
Materiály a činidla:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFRc7.
Testy inkorporace BrdU řízené Her-2 a indukované EGF
Materiály a činidla:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
170
2. 3T3/EGFr/Her2/EGFr (EGFr s Her-2 kinázovou doménou).
Testy inkorporace BrdU řízené Her-4 a indukované EGF
Materiály a činidla:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFr/Her4/EGFr (EGFr s Her-4 kinázovou doménou).
Testy inkorporace BrdU indukované PDGF
Materiály a činidla:
1. Lidské PDGF B/B (Boehringer Mannheim, Německo).
2. 3T3/EGFRc7.
Testy inkorporace BrdU indukované FGF
Materiály a činidla:
1. Lidská FGF2/bFGF (Gibco BRL, USA).
2. 3T3c7/EGFr
Testy inkorporace BrdU indukované IGF1
Materiály a činidla:
1. Lidská rekombinantní (G511, Promega Corp., US A)
2. 3T3/IGFlr.
Testy inkorporace BrdU indukované inzulínem
Materiály a činidla:
1. Inzulín, krystalický, bovinní, zinek (13007, Gibco BRL, USA).
2. 3T3/H25.
Testy inkorporace BrdU indukované HGF
Materiály a činidla:
171
1. Rekombinantní lidská HGF (Cat. No. 249-HG, R & D Systems, lne. USA).
2. BxPC-3 buňky (ATCCCRL-1687).
Postup:
1. Buňky se naočkují v množství 9000 buněk na jamku v RPMI 10% FBS na destičku o 96 jamkách. Buňky se inkubují přes noc při teplotě 37°C v 5% CO2.
2. Po 24 hodinách se brníky promyjí s PBS a následně jsou podrobeny bez sérovému prostředí ve 100 μΐ média bez séra (RPMI s 0,1% BSA) po dobu hodin.
3. Třetí den se k buňkám přidá 25 μΐ obsahujících ligand (připravený v koncentraci 1 μ/ml v RPMI s 0,1% BSA; finální koncentrace HGF je 200 ng/ml) a testované sloučeniny. Do negativních kontrolních jamek se přidá μΐ RPMI pouze s 0,1% BSA bez séra; k pozitivním kontrolním buňkám se přidá ligand (HGF), ale bez testované sloučeniny. Testované sloučeniny se připraví v 5 svých finálních koncentraci v RPMI s ligandem bez séra v destičce o 96 jamkách a sériově zředí na 7 testovacích koncentrací. Typicky je nejvyšší finální koncentrace testované sloučeniny 100 μΜ a jsou používána 1:3 zředění (tzn. rozmezí finální koncentrace testované sloučeniny je 0,137-100 μΜ).
4. Po 18 hodinách aktivace ligandu se do každé jamky přidá 12,5 μΐ zředěného BrdU značícího činidla (1:100 v RPMI, 0,1% BSA) a buňky jsou inkubovány s BrdU (finální koncentrací je 10 μΜ) po dobu 1 hodiny.
5. Stejné jako v obecném postupu.
6. Stejné jako v obecném postupu.
7. Blokovací roztok se odstraní dekantací a jamky se promyjí jednou s PBS. Přidá se anti-BrdU-POD (1:100 zředění v PBS, 1% BSA) (100 μΐ na jamku) a destička se inkubuje po dobu 90 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači.
8. Stejné jako v obecném postupu.
9. Stejné jako v obecném postupu.
10. Stejné jako v obecném postupu.
« 9 • · ·
172
Testy s HUV-EC-C
Tento test se používá k měření aktivity sloučenin proti PDGF-R, FGF-R, VEGF aFGF nebo Flk-1/KDR, přičemž všechny jsou přirozeně exprimovány buňkami HUV-EC. DenO
1. Promytí a trypsinizace HUV-EC-C buněk (lidské endotheliální buňky žíly pupeěníkové, (American Type Culture Collection catalogue no. 1730 CRL)) Promytí fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem Dulbecco (D-PBS, zakoupený u Gibco BRL, catalogue no. 14190-029) dvakrát při asi 1 ml na 10 cm2 baňky s tkáňovou kulturou. Trypsinizace s 0,05% trypsin-EDTA v neenzymatickém buněčném disociačním roztoku (Sigma Chemical Company, catalogue no. C-1544). 0,05% Trypsin se připraví zředěním 0,25% trypsinu na 1 mM EDTA (Gibco, catalogue no. 25200-049) v buněčném disociačním roztoku. Trypsinizace s asi 1 ml na 25 - 30 cm baňky s tkáňovou kulturou po dobu asi 5 minut při teplotě 37°C. Po uvolnění buněk z baňky se přidá ekvivalentní objem testovacího média a převede se do 50 ml sterilní centrifugační zkumavky (Fisher Scientific, catalogue no. 05-539-6).
2. Promytí buněk s asi 35 ml testovacího média v 50 ml sterilní centrifugační zkumavky přidáním testovacího média, centrifugace po dobu 10 minut při přibližně 200 x g, aspirace supematantu a resuspendace s 35 ml D-PBS. Opakuje se promytí (2 x ) s DPBS, resuspendace buněk vaši 1 ml testovacího média na 15 cm2 baňky stkáňovou kulturou. Testovací médium se sestává z F12K média (Gibco BRL, catalogue no. 21127014) a 0,5% záhřevem inaktivovaného fetálního bovinní séra. Počítání buněk pomocí Coulter Counter® (Coulter Electronics, lne.) a přidání testovacího média do buněk za vzniku koncentrace 0,8-1,0 x 105 buněk na ml.
3. Přidání buněk do destiček s plochým dnem o 96 jamkách při koncentraci 100 μΐ na jamku nebo 0,8-1,0 x 104 buněk na jamku, inkubace přibližně 24 hodiny při teplotě 37°C, 5% CO2.
Den 1
1. Připravení dvojnásobných titrací testované sloučeniny v separovaných destičkách o 96 jamkách, obecně 50 μΜ až do 0 μΜ. Použití stejného testovacího média, jak je uvedeno v dni 0, krok 2 výše. Titrace se provedou přidáním 90 μΐ na jamku testované sloučeniny při koncentraci 200 μΜ (4 X finální koncentrace v jamce) na vrch
• « 4¼ • 9 9·
• « 9 9 • · • 9 • ♦ •
• * 9 9 • • •
•
• • • 9 • • • •
9 9 9 9· 99 9 • 9 9 • · • 9 9
173 jamky příslušného sloupce destičky. Poněvadž zásobní testovací sloučenina je obvykle 20 mM v DMSO, obsahuje 200 μΜ koncentrace léčiva 2% DMSO.
Jako ředící roztok pro titrace testované sloučeniny za účelem zředění testované sloučeniny, a zároveň udržení konstantní koncentrace DMSO, se používá zředění až 2 % DMSO v testovacím médiu (F12K + 0,5% fetálního bovinního séra). Přidání tohoto ředícího roztoku do zbývajících jamek ve sloupci při koncentraci 60 μΐ na jamku. Odebrání 60μ1 ze 120 μΐ 200 μΜ zředění testované sloučeniny v nej vyšší jamce sloupce a smíchání s 60 μΐ v druhé jamce sloupce. Odebrání 60 μΐ z této jamky a smíchání s 60 μΐ ve třetí jamce sloupce a tak dále, dokud nejsou kompletní dvojnásobné titrace. Když je předposlední jamka smíchána, odebere se 60 μΐ ze 120 μΐ v této jamce a odstraní se. V poslední jamce se nechá 60 μΐ ředícího roztoku DMSO a média jako kontrola obsahující netestovanou sloučeninu. Připravení 9 sloupců titrované testované sloučeniny v dostatečné množství pro ztrojnásobení jamek, kde každá obsahuje: (1) VEGF (zakoupené u Pero Tech lne., catalogue no- 100-200, (2) růstový faktor endotheliálních buněk (ECGF) (také známý jako kyselý fibroblastový růstový faktor nebo aFGF) (zakoupený u Boehringer Mannheim Biochemica, catalogue no. 1439 600) nebo (3) lidská PDGF B/B (1276-956, Boehringer Mannheim, Germany) a kontrolu testovacího média. ECGF se připraví se sodnou solí heparinu.
2. Převedení 50 μΐ na jamku zředění testované sloučeniny do testovacích destiček o 96 jamkách obsahujících 0,8 - 1,0 x 104 buněk v 100 μΐ na jamku HUV-EC-C buněk ze dne 0 a inkubace přibližně 2 hodiny při teplotě 37°C, 5% CO2.
3. Provedeno třikrát, přidání 50 μΐ na jamku 80 μΐ na ml VEGF, 20 ng na ml ECGF nebo kontrolního média ke každé testované sloučenině. Jako u testovaných sloučenin jsou koncentrace růstového faktoru 4 X požadované finální koncentrace. Použití testovacího média ze dne 0, kroku 2, k připravení koncentrací růstových faktorů. Inkubace přibližně 24 hodin při teplotě 37°C, 5% CO2. Každá jamka bude obsahovat 50 μΐ zředění testované sloučeniny, 50 μΐ růstového faktoru nebo média a 100 μΐ buněk, které jsou v celkovém množství 200 μΐ na jamku. Tudíž 4X koncentrace testované sloučeniny a růstových faktorů se zředí na 1 X a přidají se do jamek.
174 • · · · · · • · · ··· ··· ·· · · ·
Den 2
1. Přidá se 3H-thymidin (Amersham, catalogue no. TRK-686) při 1 pCi na jamku (10 μΐ na jamku 100 pCi na ml roztoku připraveného v RPMI médiu + 10% záhřevem inaktivované fetální bovinní sérum) a inkubace přibližně 24 hodin při teplotě 37°C, 5% CO2. RPMI se zakoupí u Gibco BRL, catalogue no. 11875-051.
Den 3
1. Vymražení destiček přes noc při teplotě -20°C.
Den 4
Rozmražení destiček a jejich odběr pomocí harvesteru na 96 jamkové destičky (Tomtec Harvester ®) na filtrační plachetky (Wallac, catalogue no. 1205-401), měření na tekutém scintilačním počítači Wallas Betaplate™.
V tabulce 3 jsou uvedeny výsledky biologického testování některých exemplárních sloučenin podle předloženého vynálezu. Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách IC50, mikromolární (μΜ) koncentrace testované sloučeniny, jenž způsobuje 50% změnu aktivity cílových PKT v porovnání s aktivitou PTK kontrolní skupiny, které nebyla podávána testovaná sloučenina. Přesněji uvedené výsledky indikují koncentraci testované sloučeniny potřebné k 50% redukci aktivity cílové PTK. Biologické testy, které byly nebo mohou být používány ke stanovení sloučenin, jsou popsány detailněji níže.
• ·
175
Tabulka 3
Příklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) buňky EGF IC50 (μΜ) Her2 kináza ICSO (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
1 57,68 15,16 >100 >100 >100 >100
2 >100 >100 >100 >100
3 9,85 9,62 >100 >100 >100 >100
4 3,57 >20 >100 >100 >100 >100
5 8,3 16,06 >100 >100 >100 >100
6 4 ,04 >100 3,26 7,82 2,43
7 7,74 >100 5,07 9,3 4,24
8 12)1 >100 51,34 20,08 5,5
9 0,96 >100 >100 >100 16,38
10 5,72 >100 94,04 15,86 8,06
176
Příklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 1C50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) buňky EGF IC50 (μΜ) Her2 kináza IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
11 9,77 >100 >100 >100 >100
12 >20 21,46 >100 27,73
13 >20 81,92 8,17 2,66
14 13,01 42,41 >100 66,02
15 >20 >100 >100 98,61
16 >20 98,06 >100 23,32
17 8,25 2,47 94,35 0,83 11,47 15,94 >10
18 2,67 2,57 9,23 4,99
19 7,5 6,86 34,18 8,37
20 11,53 >100 41,16 8
21 7,18 >100 40,34 27,69
22 >20 >100 >100 87,67
23 >20 >100 36,64 4,05
24 >100 16,84 5,31
25 12,55 >100 23,48 7,9
26 16,03 66,87 34,67 10,04
27 >100 26,5 3', 91
28 4,5 71,27 53,66 2,67
29 10,12 >100 26,72 3,98
30 9,4 >100 18,69 4,1
31 >50 >100 9,83 47,19
32 45,74 5,94 >100 >100
34 >50 >100 >100 >100
35 >20 >100 80,4 54,14
36 >20 >100 >100 >100
37 0,22 3,06 10,78 9,84 1,4
38 4,17 3,06 6,04 8,97 2,16
39 3,38 4,69 3,67 14,54 3,53
40 4,5 7,9 6,52 6,27
42 0,1 0,12 11,95 74,55 20,43
43 1,12 8,38 >100 37,33 53,37
44 <0,05 0,02 20,73 67,46 6,99
45 1,71 >100 >100 29,95 >100
46 30,62 6,18 >100 >100 >100
47 0,08 1,56 0,06 11,42 41,54 θ,4 >20 1,05
48 0.006 0,3 <0,78 17,88 21,58 7,93 0,09
49 <0,78 >100 43,86 >100
50 <0,78 >100 20.34 >100
«
177
Příklad bio flkGST IC50 (MM, bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF ICSO (μΜ, buňky EGF IC50 (μΜ, Hec2 kináza IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ, bio pyk2 IC50 (μΜ,
51 0,006 1,66 0,01 18,1 21, 61 23,24 16,69 0,35
52 0,08 1,26 <0,78 12,53 >100 >100 10,66 0,45
53 <0,78 >100 >100 >100
54 1,98 <0,78 23,88 9,76 7,02
55 0,27 0,53 6.03 35,99 77,82
56 2,32 3,19 >100 10,03 7,11
57 0,06 7,98 >100 9,97 6, 94
58 21,14 >100 >100 >100
59 <0,78 >100 >100 >100
60 ' <0,78 >100 >100 >100
61 <0,78 >100 >100 >100
62 8,00 8,32 >100 >100 >100
63 0,21 <0,78 8,59 >100 >100
64 0,55 <0,78 30,49 >100 >100
65 0,37 <0,05 >100 74,36 15,97
66 <0,05 >100 11,84 2,76
67 0,39 24,77 31,38 19,79 2,56
68 1,16 0,03 >100 23,52 34,13
69 0,3 56,55 >100 97,54 >100
70 0,09 1,50 0,0030 10,57 6,42 7,99 12,62 0,63
71 15,21 22,5 >100 9,91
72 6,06 10,54 >100 39,94 9,65
73 5,95 14,12 >100· 39,5 8,59
74 1,2 0,09 46,75 >100
75 2,7 61,55 >100 >100
76 3,33 19,18 5,11 3,01
77 0,49 25,01 >100 >100
78 1,94 70, 62 9,33 4,25
79 1,49 >100 27,39 >100
80 0,13 4,29 0,001 >100 50,19 17,19 0,28
81 0,21 0,18 >100 >100
82 2,03 7,69 6,88 >100 >100 0,31
83 0,34 0,41 9,46 2,18 86,9 0,008
84 1,38 12,51 67,2 5,86 0,006
85 0,2 0,8 2,59 >100 3,76
86 1,45 1,3 19,6 41,8 >100 3,58
87 3,27 7,56 6,46 >100 9,1 0,17
88 0,35 1,18 8,06 2,36 >100 0,09
·
178
Příklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF xcso (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) buňky EGF IC50 (μΜ) Hec2 kináza IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 XC50 (μΜ)
89 7,84 47,58 8,53 9,67 15,97
115 7,3 7,48 >100 >100 0,006
116. >20 >100 >100 >100 <0,0005
117 0,91 12,9 >100 >100 0,006
118 1,93 1,2 >100 >100 0,002
119 1,38 61, 63 >100 >100 <0,0005
In vivo zvířecí modely
Zvířecí modely xenoimplantátu
Schopnost lidských nádorů růst jako xenoimplantáty vathymické myši (např. Balb/c, nu/nu) poskytuje užitečný in vivo model pro studium biologických odpovědí na terapie lidských nádorů. Od první úspěšné xenotransplantace lidských nádorů do athymické myši, (Rygaard and Povlsen, 1969, Acta Pathol. Microbial. Scand. 77: 758 760), bylo transplantováno mnoho různých buněčných linií lidského nádoru (např. mamámí, plicní, genitourinámí, gastrointestinální, hlavy a krku, glioblastom, kostní a maligní melanomy) a úspěšně rostly W nahých myší. Následující testy mohou být používány ke stanovení hladiny aktivity, specificity a účinku různých sloučenin podle předloženého vynálezu. Ke stanovení sloučenin jsou použitelné tři obecné typy testů: buněčné/katalytické, buněčné/biologické a in vivo. Smyslem buněčných/katalytický testů je stanovit vliv sloučeniny na schopnost TK k fosforylaci tyrosinových zbytků na známém substrátu v buňce. Smyslem buněčných/biologických testů je stanovit vliv sloučeniny na biologickou odpověď stimulovanou TK v buňce. Smyslem in vivo testů je stanovit účinek sloučeniny ve zvířecím modelu na příslušnou poruchu, např. rakoviny.
Vhodné buněčné linie pro subkutánní xenoimplantátové experimenty zahrnují C6 buňky (gliom, ATCC # CCL 107), A375 buňky (melanom, ATCC # CRL 1619), A431 buňky (epidermoidní karcinom, ATCC # CRL 1555), Calu 6 buňky (plicní, ATCC # HTB 56), PC3 buňky (prostaty, ATCC # CRL 1435), SCOV3TP5 buňky a NIH 3T3 fibroblasty
179 ♦ · « · • · • » • · • · · « · · • · · · • 9 ·
9 • · 9 • · 9 • · 999 geneticky upravené k nadměrné expresy EGFR, PDGFR, IGF-IR nebo kterékoliv jiné testované kinázy. Následující postup může být používán k provedení xenoimplantátových experimentů:
Samičí athymické myši (BALB/c, nu/nu) se zakoupí u Simonsen Laboratories (Gilroy, CA). Všechna zvířata byla chována v čistotě v mikroizolacních klecích s Alphadri podestýlkou. Byla jim poskytnuto sterilní žrádlo pro hlodavce a voda dle potřeby.
Buněčné linie byly pěstovány v příslušném médiu (např. MEM, DMEM, Hanfs F10 nebo Hanfs F12 plus 5% - 10% fetální bovinní sérum (FBS) a 2 mM glutamin (GLN)). Všechna buněčná kultivační média, glutamin a fetální bovinní sérum byla zakoupena u firmy Gibco Life Technologies (Grand Island, NY), pokud není uvedeno jinak. Všechny buňky byly kultivovány v prostředí o vlhkosti 90 - 95% a 5 - 10% CO2 při teplotě 37°C. Všechny buněčné linie byly rutinně subkultivovány dvakrát týdně a byly negativní na mykoplazmu, což bylo stanoveno metodou Mycotect (Gibco).
Buňky byly sbírány při nebo téměři při konfluency s 0,05% Trypsin-EDTA a peletovány při 450 x g po dobu 10 minut. Pelety byly resuspendovány ve sterilním PBS nebo médiu (bez FBS) na příslušnou koncentrací a buňky byly implantovány do zadního boku myši (8-10 myší na skupinu, 2 - 10 x 106 buněk na zvíře). Růst nádoru byl měřen po dobu 3 až 6 týdnů pomocí venierových kaliperů. Objemy nádorů byly vypočteny jako délka x šířka x výška, pokud není uvedeno jinak. Hodnoty P byly vypočteny pomocí Studentova t-testu. Testované sloučeniny v 50 - 100 μΐ excipientu (DMSO nebo VPD:D5W) mohou být podány IP injekcí v různých koncentracích obecně počínaje dnem jedna po implantaci
Model invaze nádoru
Byl vyvinut následující model invaze nádoru a může být používán ke stanovení terapeutické hodnoty a účinnosti sloučenin vykazujících selektivní inhibici receptoru KDR/FLK-1.
Postup
Jako experimentální zvířata byly používány osm týdnů staré nahé myši (samice) (Simonsen lne.). Implantace nádorových buněk může být provedena při odtahu s laminámím proudem. Při anestézii byl koktejl z látky Xylazin/Ketamin (100 mg na kg ketaminu a 5 mg na kg Xylazinu) podáván intraperitoneálně. Byla provedena incize vedená * »
4 4 • 44
4 ·
4· 4444
180 středem k odhalení dutiny břišní (přibližně 1,5 cm délky) kinjektování 107 nádorových buněk v objemu 100 μΐ média. Buňky byly injektovány buď do duodenálního lalůčku pankreatu anebo pod serózu tlustého střeva. Peritoneum a svaly byly zašity 6-0 hedvábným kontinuálním stehem a kůže byla stažena pomocí svorek. Zvířata byla denně sledována.
Analýza
Po 2 - 6 týdnech v závisloti na makroskopických pozorováních zvířat byly myši usmrceny a lokální metastáze nádoru do různých orgánů (plíce, játra, mozek, žaludek, slezina, srdce, svaly) byly excidovány a analyzovány (měření velikosti nádoru, stupně invaze, imunochemie, stanovení hybridizace in šitu, atd.)
C-kit test
Tento test se používá k detekci míry fosforylace c-kit tyrosinu
MO7E (lidská akutní myeloidm leukémie) buňky byly sérem starovány („starved“) přes noc v 0,1% séru. Buňky byly dále před stimulací ligandem předem ošetřeny sloučeninou (souběžně se sérovou starvací), stimulovány 250 ng na ml rh-SCF po dobu 15 minut. Po stimulaci byly buňky lyžovány a imunoprecipitovány protilátkou anti-c-kit. Hladiny fosfotyrosinu a proteinu byly stanoveny technikou Western blotting.
Test MTT proliferace
Buňky MO7E byly starvovány sérem a předem ošetřeny sloučeninou podle způsobu uvedeného pro fosforylační experimenty. Buňky byly nanášen v množství 4 X 105 buněk na jamku do misky o 96 jamkách v 100 μΐ RPMI + 10% séru. Byl přidán rh-SCF (100 ng na ml) a destička byla inkubována po dobu 48 hodin. Po 48 hodinách bylo přidáno 10 μΐ 5 mg na ml MTT [3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium-bromid) a po dobu 4 hodin se nechala běžet inkubace. Byl přidán kyselý izopropanol (100 μΐ z0,04N HC1 v izopropanolu) a byla měřena optická hustota při vlnové délce 550 nm.
Apoptózový test
Buňky MO7E byly inkubovány +/- SCF a +/- sloučenina v 10% FBS s rh-GM-CSF (10 ng na ml) a rh-IL-3 (10 ng na ml). Vzorky byly testovány v 24 a 48 hodinách.
4« * 9 · 44 44 • 4 44 44 44 ♦ « « • · 4 · 4 · 4 9 • 4 4 · 4 *444 4 ··· 4 4 4 *4 ·* ·4· ··· ·4* 44 44*9
181
Κ měření aktivované kaspázy-3 byly vzorky promývány sPBS a permeabilizovány š ledově studeným 70% ethanolem. Buňky byly pak barveny s Pe-konjugovanou polyklonální králičí anti-aktivní kaspázou-3 a analyzovány FACS. K měření štěpené PARP byly vzorky lyžovány a analyzovány technikou western blotting s protilátkou anti-PARP.
Dodatečné testy
Dodatečné testy, které mohou být používány ke stanovení sloučenin podle předloženého vynálezu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, bio-flk-1 test, EGF receptor-HER2 chimérický receptorový test na celých buňkách, bio-src test, bio-lck test a test měřící funkci fosforylace raf. Postupy provádění jednotlivých testů mohou být nalezeny v U. S. Application Ser. No. 09/099,842, zde je uvedeno jako odkaz, včetně kterýchkoliv obrázků.
Měření buněčné toxicity
Terapeutické sloučeniny by měly být účinnější při inhibici aktivity receptorové tyrosikinázy než při projevech cytotoxického účinku. Měření účinnosti a buněčné toxicity sloučeniny může být provedeno stanovením terapeutického indexu, tzn. IC50/LD50.
Hodnota IC50, dávka, kterou se dosáhne 50% inhibice, může být měřena standardními technikami, např. popsanými v předloženém vynálezu. Hodnota LD50, tj. dávka, která vede k 50% toxicitě, může být také měřena standardními technikami (Mossman, 1983, J.
Immunol. Methods, 65: 55-63), měřením množství uvolněného LDH (Korzeniewski a Callwaert, 1983, J. Immunol. Methods, 64: 313, Decker a Lohmann-Matthes, 1988,
J. Immunol.Methods, 115: 61) nebo měření letální dávky na zvířecích modelech.
Sloučeniny s velkým terapeutickým indexem jsou výhodné. Terapeutický index by měl být větší než 2, výhodně alespoň 10, výhodněji alespoň 50.
B. Příklad výsledků z buněčných testů za použití (2-diethylamino-ethyl)-amidu
5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indoI-3-yIidenmethyl)-2,4-dimethyl-l/ř-pyrrol-3karboxylové kyseliny.
K potvrzení účinnosti (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80)
182 detekované při biochemických testech {vide infra) byla vyhodnocována její schopnost inhibovat ligand-dependentní fosforylaci RTK při testech na buňkách pomocí NIH-3T3 myších buněk upravených k nadměrné expresi Flk-1 nebo lidských PDGFRfl. (2-Diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval VEGF-dependentní fosforylaci Flk-1 tyrosinu s hodnotou IC50 přibližně 0,03 μΜ. Tato hodnota je podobná 0,009 μΜ Kj hodnotě stanovené pro inhibici Flk-1 (2-diethylamino-ethyl)-amidem 5-(5fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (sloučenina 80) determinované při biochemických testech, což indikuje, že (2diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) se snadno penetruje do buněk. V souladu s biochemickými údaji {vide infra) indikujícími, že (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) měl srovnatelnou aktivitu proti Flk-1 a PDGFR, bylo také zjištěno, že inhibuje PDGF-dependentní fosforylaci receptoru v buňkách s hodnotou IC50 přibližně 0,03 μΜ. Schopnost (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibovat c-kit, úzce příbuzné s RTK, která váže faktor kmenových buněk (SDF), byla stanovena použitím MO7E buněk, které exprimují tento receptor. V těchto buňkách (2diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval SCF-dependentní ckit fosforylaci s hodnotou IC50 0,01 - 0,1 μΜ. Tato sloučenina také inhibovala SCFstimulovanou c-kit fosforylaci u akutní myeloidní leukémie (AML) blastů izolovaných z periferní krve pacientů.
Kromě testování schopnosti (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) na inhibici ligand-dependentní fosforylace receptoru v buňkách byl také pozorován vliv na ligand-dependentní proliferativní odpověď buněk in vitro (viz tabulka
4). Při těchto studiích byly buňky přes noc uvedené do stavu klidu starvací sérem a indukovány k DNA syntéze po přidání příslušné mitogenního ligandu. Jak je uvedeno v tabulce 4, (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval PDGF-indukovanou proliferaci NIH-3T3 buněk exprimujících nadměrné množství
* 4
4
4 • 444
183
PDGFR3 nebo PDGFRa s hodnotou IC50 0,031 a 0,069 μΜ a SCF-indukovanou proliferaci M07E buněk s hodnotou IC50 0,007 μΜ.
Tabulka 4
biochemické buněčné IC50
receptor Ki1 (μΜ) fosforylace receptoru (μΜ) ligand-dependentní proliferace (μΜ)
Flk-1/KDR 0,009 0,032 0,0043
PDGFRa 0,008 0,034 0,0314
PDGFRP ND ND 0,0695
FGFR 0,83 ND OJ3
c-kit ND 0,01-0,1 0,0076
ND = nebylo stanoveno 1 stanoveno pomocí rekombinantního enzymu 2 stanoveno pomocí NIH-3T3 buněk exprimujících Flk-1 bez přísunu séra 3 stanoveno pomocí HUVEC bez přísunu séra 4 stanoveno pomocí NIH-3T3 buněk exprimujících PDGFRD bez přísunu séra 5 stanoveno pomocí NIH-3T3 buněk exprimujících PDGFRD bez přísunu séra 6 stanoveno pomocí MO7E buněk bez přísunu séra
Jak vyplývá z tabulky 4, existuje obecná shoda mezi biochemickou a buněčnou aktivitou (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5 -(5 -fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) což podporuje závěr, že tato sloučenina překračuje buněčné membrány. Dále lze vyvodit, že buněčné odpovědi jsou výsledkem aktivity sloučeniny 80 proti naznačenému cíli. Naproti tumu, při testování v přítomnosti kompletního růstového média in vitro, byly třeba podstatně vyšší koncentrace (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) ( > 10 μΜ) k inhibici růstu různých lidských nádorových buněk (viz tabulka 5). To ukazuje, že • · • · ·· ·«··
184 sloučenina přímo neinhibovala růst těchto buněk v koncentracích nutných k inhibici fosforylace receptoru závislé na ligandu a proliferace buněk.
Tabulka 5
buněčná linie původ IC50 (μΜ) LD5o (μΜ)
HT29 karcinom tlustého střeva 10 22
A549 pliní karcinom 9,5 22
NCI-H460 NSC plicní karcinom 8,9 20
SF767T gliom 7,9 14
A431 epidermoidní karcinom 6,0 18
Výsledky uvedené v tabulce 5 byly získány inkubací buněk po dobu 48 hodin v kompletním růstovém médiu v přítomnosti sériových zředění (2-diethylamino-ethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3karboxylové kyseliny. Na konci růstové periody bylo stanoveno relativní množství buněk. Hodnoty IC50 byly vypočteny jako koncentrace sloučeniny, která inhibovala růst buněk z 50% vzhledem k neošetřovaným buňkám. Hodnoty LD50 byly vypočteny jako koncentrace sloučeniny, která způsobí 50% snížení počtu buněk vhledem k výchozímu stavu experimentu.
Relevantnější test na bázi buněk, ve kterém se vyhodnocuje antiangiogenní schopnost (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80), zahrnuje in vitro test mitogeneze použitím lidských endotheliálních buněk žíly pupečníkové (HUVEC) jako modelového systému pro proliferaci endotheliálních buněk rozhodující pro angiogenní proces. Při tomto testu je mitogenní odpověď, měřená jako přírůstek DNA syntézy, indukována v HUVEC bez přísunu séra po přidání VEGF nebo FGF. V těchto buňkách (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval VEGF- a FGFindukovanou mitogenní odpověď na dávce závislým způsobem s hodnotami IC50 0,004 μΜ, resp. 0,7 μΜ, za předpokladu, že sloučenina byla přítomna v průběhu 48 hodinového testu.
185
• · * ·
9 9 « • · · 9 9
9 9 9
99 9999
Výše uvedené výsledky byly získány s použitím HUVEC bez přísunu séra, které byly inkubovány smitogenními koncentracemi VEGF (100 ng/ml) nebo FGF (30 ng/ml) v přítomnosti sériových zředění (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-dimethyl- l//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (sloučenina 80) po dobu 24 hodin. Mitogenní odpověď během následujících 24 hodin v přítomnosti ligandu a inhibitoru byla kvantifikována měřením DNA syntézy na bázi inkorporace bromdeoxyuridinu do buněčné DNA.
V oddělených experimentech inhibovala sloučenina 80 VEGF-dependentní fosforylaci ERK 1/2 (p42/44MAP kinázy), prvotní downstreamový cíl Flk-1/KDR, na dávce závislým způsobem. Bylo také zjištěno, že v tomto systému je inhibiční aktivita sloučeniny 80 dlouhodobá; inhibuje VEGF-dependentní fosforylaci ERK % i 48 hodin po odstranění (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5 -fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3 ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) z média a po krátké expozici (2 hodiny) vůči mikromolámím koncentracím sloučeniny.
Bylo zjištěno, že VEGF je důležitý faktor přežití pro endotheliální buňky. Poněvadž (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibuje VEGF-dependentní mitogenní odpovědi HUVEC, byl zkoumán účinek sloučeniny na přežití HUVEC. V těchto experimentech bylo používáno štěpení substrátu kaspázy 3 poly-ADP-ribosyl polymerázy (PARP) jako indikace apoptózy. HUVEC kultivované za bez sérových podmínek po dobu 24 hodiny vykazovaly výraznou míru štěpení PARP, což bylo detekováno akumulací štěpení 23 kDa PARP fřagementu. Tomu bylo do velké míry zabráněno přidáním VEGF do buněčného média, a tím se v tomto testu ukázalo, že VEGF působí jako faktor přežití. Bylo zjištěno, že (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibuje KDR signalizaci. Tudíž (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibuje VEGF-zprostředkované přežití HUVEC na dávce závislým způsobem. Tato data tedy indikují, že sloučenina 80 indukuje apoptózu v endotheliálních buňkách v kultuře v přítomnosti VEGF.
186 ·· • ♦ · • · 9 • · · *· ·«··
C. In vivo studie účinnosti
i. Účinnost proti stabilizovaným nádorovým xenoimplantátům
In vivo účinnost (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dÍhydro-indol3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-lZ/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) byla studována na subkutánních (SC) modelech xenoimplantátu použitím lidských nádorových buněk implantovaných do oblasti zadní části boku athymické myši. Po implantaci se před započetím perorálního ošetřování sloučeninou nádory nechaly stabilizovat na velikost 100550 cm3.
Denní perorální podání sloučeniny 80 způsobovalo na dávce závislou inhibici růstu A431 nádoru, za předpokladu, že ošetření bylo započato po nárůstu nádorů do velikosti 400 mm3. Byla pozorována statisticky významná (P < 0,05) inhibice růstu nádoru při dávkách 40 mg na kg denně (74% inhibice) a 80 mg na kg denně (84% inhibice) (viz tabulka 6). V předchozích experimentech nebyla vyšší (160 mg na kg denně) dávka sloučeniny účinnější proti stabilizovaným nádorům A431 než dávka 80 mg na kg denně. Navíc myši ošetřované dávkou 160 mg sloučeniny na kg denně ztrácely tělesnou váhu, což indikuje, že vyšší dávka nebyla také tolerována. Podobné výsledky byly získány při experimentu, ve kterém byly nádory A431 ponechány narůst pouze do velikosti 100 mm3 (viz tabulka 5). Při tomto druhém experimentu byla pozorována kompletní regrese nádorů u šesti z osmi zvířat ošetřovaných dávkou 80 mg na kg denně po dobu 21 dnů. U těchto šesti zvířat nebyl pozorován nový nárůst nádorů během 110 dnů pozorování po skončení ošetření. U dvou zvířat, ve kterých nádory znovu narostly do velké velikost (2000 - 3000 mm3), nádory ustoupily jako reakce na druhé kolo ošetření sloučeninou 80. Důležité je, že ve všech experimentech, při kterých se testovala účinnosti sloučenin, byla dávka (2diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimetbyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) v množství 80 mg na kg denně dobře snášena, i když byla podávána kontinuálně po dobu více než 100 dnů.
187
Tabulka 6
počáteční objem nádoru sloučenina1 (mg/kg denně) % inhibice (denní) Hodnota P
400 80 84 (36) 0,001
40 74 (36) 0,003
20 51 (36) 0,130
100 80 93 (40) 0,002
40 75 (40) 0,015
10 61 (40) 0,059
1 sloučenina 80
Výsledky v tabulce 6 byly získány s buňkami A431 (0,5 x 106 buněk na myš), které byly implantovány SC do oblasti zadního boku athymické myši. Denní perorální podání (2-diethylamino-ethyl)-amidu 5-(5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3-ylidenmethyl)-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) v nosiči na bázi Cremophore nebo kontrolním nosiči se započalo v době, kdy nádory dosáhly indikovaného průměrného objemu. Nádory byly měřeny vemierovými kaliperami a objem nádoru byl spočten jako délka x šířka x výška. Hodnoty P byly vypočteny srovnáním velikosti nádorů u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou 80 (n = 8), s těmi zvířaty, která byla ošetřována nosičem (n = 16), v poslední den experimentu pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
Účinnost sloučeniny 80 proti etablovaným lidským nádorům různého původu byla stanovena pomocí Colo205 (karcinom tlustého střeva), SF763T (gliom) a NCI-H460 (nemalobuněčný plicní karcinom) xenoimplantátů (viz tabulka 7). Tyto experimenty byly provedeny s (2-diethylamino-ethyl)-amidem 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) podávaným peorálně v množství 80 mg na kg denně; dávka, která byla účinná a dobře tolerována.
« 4 *« 44 • * 4
4 • 4 ·
4 4
444
188
Tabulka Ί
typ nádoru Počáteční objem nádoru % inhibice (denní) Hodnota P
A4311 epidermoidní 100 93 (40) 0,002
A4311 epidermoidní 400 84 (36) 0,001
Colo205 tlustého střeva 370 77 (54) 0,028
NCI-H460 plicní 300 61(54) 0,003
SF763T gliom 550 53 (30) 0,001
1 údaje získané z experimentu uvedeného v tabulce 5
Nq výše zmíněných experimentech, jakmile nádory dosáhly indikované velikosti, byla sloučenina 80 podávána jednou denně v množství 80 mg na kg v nosiči na bázi Cremophoru. Procentuální inhibice v porovnání s kontrolní skupinou ošetřovanou nosičem byla vypočtena na konci experimentů. Hodnoty P byly spočteny srovnáním velikosti nádorů u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou, s těmi zvířaty, která byla ošetřována nosičem, pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
Ačkoliv (2-diethylamino-ethyl)-amid 5-(5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval růst všech typů nádoru uvedených v tabulce 7, byl pozorován rozdíl v odpovědích různých modelů xenoimplantátu. Konkrétně růst NCI-H460 a SF763T nádorů byla zastaven nebo ve velké míře zpomalen, jelikož nádory Colo205, jako třeba nádory A431, ustoupily po ošetření (2-diethylamino-ethyl)-amidem 5-(5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydro-indol-3ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny.
Kvůli stanovení molekulární báze rozdílů v odpovědi u modelů xenoimplantátu byly studovány nádory. Byly vyhodnocovány nádory SF763T, které byly při molekulární hladině méně responzivní na ošetření (2-diethylamino-ethyl)-amidem 5-(5-fluor-2-oxo-l,2dihydro-indol-3 -ylidenmethyl)-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny, pomocí imunohistologických technik k stanovení účinku ošetření sloučeninou. Tyto studie byly původně prováděny na tomto typu nádoru, protože nádory SF763T jsou vysoce vaskularizovány mikrocévami, jenž silně exprimují endotheliální buněčný markér CD31, a ·♦ 99 • · 9 • · ·· 9« 9 < e » · • · 9 · 9
9 9 9 9 999 *** ·*· U99 999 99 «99
189 jsou tudíž velmi vhodné pro studie hustoty nádorových mikrocév (MVD).
Imunohistologické stanovení nádorů SF763T ukazuje, že nádory z ošetřovaných zvířat měly sníženou MVD v porovnání s kontrolními skupinami ošetřovanými nosičem, což je v souladu s antiangiogenním mechanizmem účinku sloučeniny 80; MVD byla 24,2 ±4,1 u zvířat ošetřovaných sloučeninou 80, v pórování s 39,3 ± 5,7 u těch, které byly ošetřovány jen nosičem. Jak se předpokládá na základě zastavení doprovodného růstu nádoru, vyložená inhibice proliferace nádorových buněk byla evidentní u nádorů, které byly ošetřované sloučeninou 80. Tyto nádory měly poloviční mitotický index nádorů, které byly ošetřovány nosičem (data nejsou uvedena). Účinek sloučeniny 80 na MVD a proliferaci nádorových buněk indikuje, že sloučeniny mají výrazné antiangiogenní a protinádorové účinky, i za podmínek, při kterých nádory neustupují.
Schopnost sloučeniny 80 inhibovat fosforylaci PDGFR a následnou signalizaci in vivo byla také vyhodnocována na nádorech SF763T, které exprimují vysoké hladiny PDGFRp. Ošetření SF763T nádorů sloučeninou 80 docházelo k silné inhibici silně inhibovalo fosforylace PDGFRp tyrosinu v etablovaných SF763T nádorech. Sloučenina 80 také snižovala hladiny fosforylované (aktivované) fosfolipázy C gamma (PLC-γ), okamžitý downstreamový indikátor aktivace PDGFR. Tato data demonstrují, že perorální podání sloučeniny 80 způsobuje přímý účinek na cílovou aktivitu (PDGFR) v nádorech in vivo.
Na základě důkazu, že schopnost sloučeniny 80 inhibovat VEGF-dependentní signalizaci vHUVEC in vitro je dlouhodobá {vide supra), účinnost sloučeniny byla stanovena po nečastém podání sloučeniny do modelu Colo205 nádoru. Jak je uvedeno v tabulce 8, bylo 80 mg na kg (91% inhibice) a 40 mg na kg (84% inhibice) účinných, za předpokladu, že dávka byla podávána denně, nikoliv týdně. Na rozdíl od vyšších dávek sloučeniny 80 (160 mg na kg), které inhibovaly (52% inhibice) růst etablovaných nádorů Colo205 při podání 2 x týdně, z čehož lze usuzovat, že tato sloučenina může být účinná při nefrekventovaném podání ve vyšších dávkách. Mělo by být uvedeno, že dávkovači režimy mohou být stanoveny odbornou veřejností bez náležitého zkoušení.
190
• 0 • • • • • • 0 • ♦ ·· • • 00 • • i 00 «
0 0 • 0
• • • 0 • 0 0 •
• 0 000 «·· 000 00 0··
Tabulka 8
dávka (mg/kg) frekvence inhibice % hodnota P
160 2 x týdně 52 0,085
1 x týdně 17 NS
80 denně 91 0,039
2 x týdně 19 NS
1 x týdně 0 NS
40 denně 84 0,028
2 x týdně 36 NS
NS: nevýznamná hodnota (P > 0,05 )
Výsledky z tabulky 8 byly získány z buněk Colo205 (0,5 x 106 buněk na myš), které byly implantovány SC do oblasti zadního boku athymické myši. Perorální podání sloučeniny 80 podle indikovaného režimu bylo započato v době, kdy nádory dosáhly o
objemu 400 mm . Nádory byly měřeny vemierovými kalipery a objem nádoru byl vypočten jako délka x šířka x výška produktu. Hodnoty P byly vypočteny srovnáním velikosti nádorů u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou 80, se zvířaty, která byla ošetřována nosičem, v poslední den experimentu pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
ii. Účinnost sloučeniny 80 na modelu diseminovaného onemocnění
Kromě podpory trvalého růstu pevných primárních nádorů, je angiogeneze také esenciální složka podporující vznik diseminovaného onemocnění v důsledku metastáze z primárního nádoru. Účinek sloučeniny 80 na vznik diseminovaného onemocnění byl zkoumán na modelu kolonizace plicního melanomu B16-F1 myší. Při tomto modelu kolonizují B16-F1 buňky inokulované intravenózně via ocasní žílu athymické myši plíce a vytvářejí nádory. Jak je uvedeno v tabulce 8, podle vyhodnocení měření celkové hmotnosti plic účinně snižuje perorální podání sloučeniny 80 v množství 80 mg na kg denně
191 hmotnost B16-F1 buněk v plicích. Tato data naznačují, že sloučenina 80 může inhibovat diseminované onemocnění in vivo.
Tabulka 9
hmotnost plic (g) % inhibice hodnota P
nosič 0,83 ± 0,07 - -
sloučenina1 0,41 ± 0,04 50 <0,001
1 sloučenina 80
Výsledky z tabulky 9 byly získány z athymické myši, která byla inokulována B16F1 nádorovými buňkami (5 x 105 buněk na myš). Myši byly ošetřeny denně perorální dávkou sloučeniny 80 v množství 80 mg na kg denně (n = 10) nebo nosičem (n = 18) po dobu 24 dnů po inokulaci nádoru. Na konci doby ošetřování byla myši usmrceny a jejich plíce byly izolovány a zváženy. Procentuální inhibice byly vypočtena srovnáním hmotnosti plic u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou 80, se zvířaty, které byly ošetřována pouze nosičem. Hodnoty P byly stanoveny pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
D. Příklady biologické aktivity
Příklady in vivo účinnosti sloučenin podle předloženého vynálezu jsou uvedeny v tabulce 2.
Závěr
Při studiích zaměřených na výzkum farmakokinetických charakteristik sloučenin z výhodných provedení podle předloženého vynálezu, bylo prokázáno, že perorální podání jednotlivé dávky uvedených sloučeniny vede k vysoké biologické dostupnosti u myší. Dobrá perorální biologická dostupnost a lineární farmakokinetika ukazují, že sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu mají příznivé farmakokinetické charakteristiky.
Navíc sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu jsou účinnými inhibitory aktivity tyrosinkinázy z dělené kinázové domény RTK Flk-1/KDR a .1
192
PDGFR, které se podílejí na angiogenezi, a RTK c-kit, receptoru pro faktor kmenových buněk (SCF), který se podílí na určitých hematologických rakovinách. Ve vysokých koncentracích sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu také inhibují aktivitu tyrosinkinázy FGFR-1, třetí RTK podílející se na angiogenezi. V souladu s jejich biochemickou aktivitou inhibují sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu ligand-dependentní fosforylaci tyrosinu cílových RTK a in vitro mitogenní odpověď lidských endotheliálních buněk žíly pupečníkové (HUVEC) stimulované VEGF nebo FGF, PDGFR-exprimujících NIH-3T3 buněk stimulovaných PDGF, a M07E buněk akutní myeloidní leukémie stimulovaných SCF. Naproti tomu sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu přímo neinhibují proliferaci nádorových buněk v kompletním růstovém médiu kromě koncentrací vyšších o 2 až 3 řády než jsou koncentrace nutné kinhibici ligand-dependentních mitogenních odpovědí. Při studiích xenoimplantátu na myších inhibovaly sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu růst etablovaných lidských nádorů různého původu způsobem závislým na dávce a v koncentracích, které byly dobře snášeny i po prodloužení dávkování ( > 100 dnů). Při dávce 80 mg na kg denně indukovaly sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu regresi velkých etablovaných A431 a Colo205 nádorů a způsobovaly značnou inhibici růstu nebo stagnaci SF763T a NCIH460 nádorů. U myší majících SF763T nádory způsobovaly sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu redukce hustoty mikrocév, fosforylaci PDGFR v nádorech a mitotický index v nádorových buňkách. Při této dávce také sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu inhibovaly plicní kolonizaci nádorovými buněk B16-F1 v modelu metastázy nádoru. Studie režimů ukázaly, že sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu jsou nejúčinnější, pokud jsou podávány denně. Přímý důkaz antiangiogenní aktivity sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu byl proveden na SF763T nádorech, ve kterých byla hustota mikrocév redukována. Přímý důkaz, že sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu inhibovaly fosforylaci PDGFR a signalizaci in vivo, byl také proveden na SF763T nádorech.
Když se vše spojí, podporují tato data názor, že perorálně podávané sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu jsou antiangiogenní prostředky pro ošetření rakovin, včetně pevných nádorů a hematologických zhoubných bujení, ve kterých angiogeneze a/nebo signalizace přes c-kit jsou důležité z hlediska patologie onemocnění.
193
Je zřejmé, že sloučeniny, postupy a farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou účinné při modulaci aktivity PK, a tudíž se předpokládá jejich účinnost jako terapeutických prostředků při poruchách souvisejících s RTK, CTK a STK.
Odborník též snadno ocení, že předkládaný vynález je dobře uzpůsoben k uskutečňování popsaných aspektů a dosahování uvedených cílů a výhod, stejně jako těch, které jsou mu inherentně vlastní. Molekulární komplexy a zde popisované metody, postupy, terapie, molekuly a konkrétní sloučeniny představují výhodná provedení a jsou pouze příklady, které nijak neomezují rozsah vynálezu. Odborníkovi jsou zřejmé jejich obměny a další použití, která jsou zahrnuta v duchu vynálezu, jak je definován připojenými patentovými nároky.
Odborníkovi je rovněž zřejmé, že je možno provádět různé náhrady a modifikace předkládaného vynálezu, aniž by se překročil rozsah a myšlenka vynálezu.
Všechny patenty a publikace zmíněné v textu jsou ukazatelem úrovně odborníků, kterých se vynález týká. Všechny patenty publikace jsou zde zahrnuty formou odkazu, jako by bylo pro každou jednotlivou publikaci konkrétně a jednotlivě uvedeno, že je zde zahrnuta jako odkaz.
Vynález, zde ilustrativně popsaný, může být výhodně prováděn za absence jakéhokoli prvku nebo prvků nebo omezení, která zde nejsou konkrétně uvedena. Tak například v každém případě zde může být kterýkoli z výrazů „zahrnující“, „sestávající v podstatě z“ a „sestávající z“ nahrazen kterýmkoli ze zbývajících dvou. Termíny a výrazy, které zde byly použity, jsou používány jako výrazy popisné a nikoli omezující a při jejich použití neexistuje vyloučení jakýchkoli ekvivalentů uvedených a popsaných znaků nebo jejich částí, ale potvrzuje se, že v rozsahu nárokovaného vynálezu jsou možné různé modifikace. Je tedy nutno zdůraznit, že ačkoliv je vynález popsán konkrétně pomocí výhodných provedení a volitelných znaků, může se odborník uchýlit k modifikacím a variacím zde uvedených konceptů a tyto modifikace a variace se považují za spadající do rozsahu vynálezu, definovaného připojenými patentovými nároky.
Tam, kde jsou znaky nebo předměty vynálezu popisovány pomocí Markushových definic, je navíc odborníkovi zřejmé, že vynález je tím také definován pomocí každého jednotlivého člena nebo podskupiny takové Markushovy skupiny. Například je-li význam symbolu X definován jako vybraný ze skupiny sestávající z bromu, chloru a jodu, jsou tím plně popsány nároky pro X znamenající brom i nároky pro X znamenající chlor.
Další provedení spadají do rozsahu připojených patentových nároků.

Claims (60)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Sloučenina obecného vzorce (I):
    kde substituent R1 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové, cyclkoalkylové, arylové, heteroarylové a heteroalicyklové skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
    substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, kyanoskupiny, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a
    -S(O)2NR13R14;
    substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14,
    -NR13C(O)OR14 a -SO2R2 (kde substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová, heteroarylová a heteroaralkylová skupina);
    substituent R4 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NR13R14;
    substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
    substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
    substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10; nebo
    195 substituenty R6 a R7 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívající v tom, že alespoň jeden ze substituentů R5, R6 nebo R7 musí být -C(O)R10;
    substituenty R8 a R9 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny a arylové skupiny;
    substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(Ru)(CH2)nR12 a -NR13R14;
    substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku a alkylové skupiny; substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající z -NR13R14, hydroxyskupiny,
    -C(O)R15, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -N+(O')R13R14, -N(OH)R13 a -NHC(O)Ra (kde substituent Ra je nesubstituovaná alkylová, halogenalkylová nebo aralkylová skupina);
    substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny, nižší alkylové skupiny substituované hydroxyalkylaminoskupinou, kyanoalkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové skupiny; nebo substituenty R13 a R14 mohou být spojeny dohromady za vzniku heterocykloskupiny;
    substituent R15 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
    substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14 a -C(O)NR13R14;
    substituent R17 je vybrán ze skupiny sestávající z alkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové skupiny;
    substituent R20 je alkylová, arylová, aralkylová nebo heteroarylová skupina a n a r jsou nezávisle 1, 2, 3 nebo 4 nebo nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
  2. 2. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde:
    je substituent R1 vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové, cykloalkylové, arylové, heteroarylové, heteroalicyklické skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -C(O)R15 *, -NR13R14, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
    196 ·· ·· substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -S(O)2NR13R14;
    substituent R je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, trihalogenmethylu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -(CO)R15, -NR13R14, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14 a -NR13C(O)OR14;
    substituent R4 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, halogenu, alkylové skupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a -NR13R14;
    substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
    substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
    substituent R je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10;
    substituenty R6 a R7 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající z -(CH2)4-, -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívající v tom, že alespoň jeden ze substituentů R5, R6 nebo R7 musí být -C(O)R10;
    substituenty R8 a R9 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny a arylové skupiny;
    substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(R11)(CH2)nR12 a-NR13R14;
    substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku a alkylové skupiny; substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající z -NR13R14, hydroxyskupiny,
    -C(O)R15, arylové a heteroarylové skupiny;
    substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny, cykloalkylové skupiny, arylové a heteroarylové skupiny;
    substituenty R13 a R14 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající z -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- a -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-;
    substituent R15 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
    substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající z hydroxyskupiny, -C(O)R15, -NR13R14 a -C(O)NR13R14;
    197 substituent R je vybrán ze skupiny sestávající z alkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové skupiny a n a r jsou nezávisle 1, 2, 3, nebo 4 nebo nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
  3. 3. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 ’(CH2)nR12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina; nje 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle nesubstituovaná nižší alkylová skupina.
  4. 4. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR11(CH2)nR12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina; nje 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou spojeny dohromady a tvoří skupinu vybranou z -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- nebo
    -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
  5. 5. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R5 je JV-(2-dimethylaminoethyl)aminokarbonyl, 7V-(2-diethylaminoethyl)-Az-methyl-aminokarbonyl,
    7V-(3-dimethylaminopropyl)aminokarbonyl, 2V-(2-diethylaminoethyl)aminokarbonyl, jV-(3-ethylaminopropyl)-aminokarbonyl, Ar-(2-ethylaminoethyl)aminokarbonyl nebo N-(3diethylaminopropyl)aminokarbonyl.
  6. 6. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R5 je N-(2diethylaminoethyl)aminokarbonyl nebo 7V-(2-ethylaminoethyl)aminokarbonyl.
  7. 7. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R5 je 3-pyrrolidin-l-ylpropylaminokarbonyl, 3-morfolin-4-yl-propylamino karbonyl, 2-pyrrolidin-1-ylethylaminokarbonyl, 2-morfolin-4-yl-ethylaminokarbonyl, 2-(4-methylpiperazin-l-yl)ethyl198 aminokarbonyl, 2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl-aminokarbonyl, 3-(4-methylpiperazinl-yl)propylamino-karbonyl nebo 3-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)propylamino-karbonyl.
  8. 8. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRn(CH2)nR12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, n je 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle nesubstituovaná nižší alkylová skupina.
  9. 9. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRn(CH2)nR12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, n je 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou spojeny dohromady a tvoří skupinu vybranou z -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2nebo -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
  10. 10. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je 7V-(2-dimethylaminoethyl)-aminokarbonyl, A-(2-diethyl-aminoethyl)-jV-methylaminokarbonyl, jV-(3 dimethylamino-propyl)-aminokarbonyl, 7V-(2-diethylaminoethyl)-aminokarbonyl, //-(2ethylaminoethyl)-aminokarbonyl, 7V-(3-ethylaminopropyl)-aminokarbonyl nebo N-(3diethylamino-propyl) aminokarbonyl.
  11. 11. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je 7V-(2-diethylaminoethyl)aminokarbonyl nebo 2/-(2-ethylamino-ethyl)aminokarbonyl.
  12. 12. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je 3-pyrrolidin-1-ylpropylaminokarbonyl, 3 -morfolin-4-yl-propylamino-karbonyl, 2-pyrrolidin-1 -ylethylamino-karbonyl, 2-morfolin-4-yl-ethylaminokarbonyl, 2-(4-methylpiperazin-lyl)ethyl-aminokarbonyl, 2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl-aminokarbonyl, 3 -(4methylpiperazin-l-yl)propylamino-karbonyl nebo 3 -(3,5-dimethylpiperazin-lyl)propylamino-karbonyl.
  13. 13. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent
    R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je nižší alkylová
    199 skupina substituovaná hydroxyskupinou, arylová skupina, heteroalicyklická skupina, heteroarylová skupina nebo karboxyskupina.
  14. 14. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je 3-triazin-l-ylpropylaminokarbonyl, 2-triazin-l-yl-ethylaminokarbonyl, 3-imidazol-1 -ylpropylaminokarbonyl, pyridin-4-ylmethyl aminokarbonyl, 2-pyridin-2-ylethylaminokarbonyl nebo 2 imidazol-l-yl ethylaminokarbonyl.
  15. 15. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a subsituent R14 je nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, arylová skupina, heteroalicyklická skupina, heteroarylová skupina nebo karboxyskupina.
  16. 16. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je 2-triazin-l-ylpropylaminokarbonyl, 2-triazin-l-yl-ethylaminokarbonyl, 3-imidazol-1 -ylpropylaminokarbonyl, pyridin-4-ylmethyl-aminokarbonyl, 2-pyridin-2-ylethylaminokarbonyl nebo 2 imidazol-l-yl ethylaminokarbonyl.
  17. 17. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NRn(CH2)nR12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina; n je 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou spojeny dohromady a tvoří heterocykl.
  18. 18. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NRu(CH2)nR12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina; n je 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou spojeny dohromady a tvoří a 5, 6 nebo 7 atomový heterocykl obsahující karbonylovou skupinu a jeden nebo dva atomy dusíku v kruhu.
  19. 19. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je 2-(3-oxopiperazin-lyl)ethylaminokarbonyl, 2-(imidazolidin-l-yl-2-on)ethylaminokarbonyl,
    2-(tetrabydropyrimidin-l-yl-2-on)ethylaminokarbonyl, 2-(2-oxopyrrolidin-1 -yl)ethylaminokarbonyl, 3 -(3 -oxopiperazin-1 -yl)propylaminokarbonyl, 3 -(imidazolidin-1 -yl-2200 on)propylaminokarbonyl, 3-(tetrahydropyrimidin- l-yl-2-on)-propylaminokarbonyl nebo
    3 -(2-oxopyrrolidin-1 -yl)propylaminokarbonyl.
  20. 20. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRn(CH2)„R12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, n je 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou spojeny dohromady a tvoří heterocykl.
  21. 21. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRn(CH2)nR12, kde substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, n je 2 nebo 3 a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou spojeny dohromady a tvoří a 5, 6 nebo 7 atomový heterocykl obsahující karbonylovou skupinu a jeden nebo dva atomy dusíku v kruhu.
  22. 22. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je 2-(3-oxopiperazin-lyl)etbylaminokarbonyl, 2-(imidazolidin-l-yl-2-on)ethylaminokarbonyl,
    2-(tetrahydropyrimidin-1 -yl-2-on)ethylaminokarbonyl, 2-(2-oxopyrrolidin-1 -yl)ethylaminokarbonyl, 3 -(3 -oxopiperazin-1 -yl)propyl-aminokarbonyl, 3 -(imidazolidin-1 -yl2-on)propylaminokarbonyl, 3-(tetrahydropyrimidin-1 -yl-2-on)-propyl-aminokarbonyl nebo 3 -(2-oxopyrrolidin-1 -yl)propylaminokarbonyl.
  23. 23. Sloučenina nebo sůl podle kteréhokoliv z nároků 3-7, 13-14 nebo 17-19, kde substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku a nižší nesubstituované alkylové skupiny a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z atom vodíku, alkylové skupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo arylová skupina.
  24. 24. Sloučenina nebo sůl podle nároku 23, kde substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atom vodíku a methylu a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z methylu, atomu vodíku a fenylu.
  25. 25. Sloučenina nebo sůl podle kteréhokoliv z nároků 8-12, 15, 16 nebo 20-22, kde substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku a nesubstituované nižší
    201 alkylové skupiny a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo arylová skupina.
  26. 26. Sloučenina nebo sůl podle nároku 25, kde substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku nebo methylu a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z methylu, atomu vodíku nebo fenylu.
  27. 27. Sloučenina nebo sůl podle nároku 23, kde substituent R1 je atom vodíku, nesubstituovaná nižší alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová nebo arylová skupina; substituent R2 je atom vodíku, halogen, nižší alkoxyskupina, kyanoskupina, arylová skupina nebo -S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je atom vodíku, arylová nebo alkylová skupina; substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, arylové skupiny případně substituované jedním nebo dvěma substituenty vybranými ze skupiny sestávající z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny a heteroarylové skupiny a substituent R4 je atom vodíku.
  28. 28. Sloučenina nebo sůl podle nároku 23, kde substituent Rl je atom vodíku nebo fenyl; substituent R2 je atom vodíku, chlor, brom, fluor, methoxyskupina, ethoxyskupina, fenyl, kyanoskupina, dimethylaminosulfonyl, 3-chlorfenyl-aminosulfonyl, karboxyskupina, methoxyskupina, aminosulfonyl, methylaminosulfonyl, methylsulfonyl, ethylsulfonyl, benzylsulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-aminosulfonyl, dimethylaminosulfonyl nebo izopropylamino-sulfonyl;
    substituent R3 je atom vodíku, methoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl, 3,4dichlorfenyl, 2-methoxy-5-izopropylfenyl, 4-n-butylfenyl nebo 3-izopropylfenyl a substituent R4 je atom vodíku.
  29. 29. Sloučenina nebo sůl podle nároku 23, kde substituent R1 je atom vodíku; substituent R2 je atom vodíku, kyanoskupina, fluor, chlor nebo brom; substituent R3 je atom vodíku a substituent R4 je atom vodíku.
    202 ·· 99 9·
  30. 30. Sloučenina nebo sůl podle nároku 25, kde substituent R1 je atom vodíku, nesubstituovaná nižší alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová skupina nebo arylová skupina, substituent R2 je atom vodíku, halogen, nižší alkoxyskupina, kyanoskupina, arylová skupina, -SO2R20 nebo -S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je atom vodíku, arylová nebo alkylová skupina, substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, arylové a heteroarylové skupiny a substituent R4 je atom vodíku.
  31. 31. Sloučenina nebo sůl podle nároku 25, kde substituent R1 je atom vodíku nebo fenyl, substituent R2 je atom vodíku, chlor, brom, fluor, methoxyskupina, ethoxyskupina, fenyl, dimethylaminosulfonyl, kyanoskupina, methylsulfonyl, ethylsulfonyl, benzylsulfonyl,
    3-chlorfenyl-aminosulfonyl, karboxyskupina, methoxyskupina, aminosulfonyl, methylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-yl-aminosulfonyl, dimethylaminosulfonyl nebo izopropylamino-sulfonyl, substituent R3 je atom vodíku, methoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl, 3,4-dichlorfenyl, 2-methoxy-5izopropylfenyl, 4-n-butylfenyl, 3-izopropylfenyl a substituent R4 je atom vodíku.
  32. 32. Sloučenina nebo sůl podle nároku 25, kde substituent R1 je atom vodíku; substituent R2 je atom vodíku, kyanoskupina, fluor, chlor nebo brom; substituent R3 je fenyl a substituent R4 je atom vodíku.
  33. 33. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R1 je atom vodíku, nesubstituovaná nižší alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová nebo arylová skupina, substituent R2 je atom vodíku, halogen, nižší alkoxyskupina, kyanoskupina, arylová skupina nebo S(O)2NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je atom vodíku, arylová nebo alkylová skupina, substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, arylové skupiny a heteroarylové skupiny a substituent R4 je atom vodíku.
  34. 34. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R1 je atom vodíku nebo methyl, substituent R2 je atom vodíku, kyanoskupina, chlor, fluor nebo brom, substituent
    203 • 9 «9 9 9 9
    R3 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku nebo fenylu a substituent R4 je atom vodíku.
  35. 35. Sloučenina nebo sůl podle nároku 33 nebo 34, kde substituent R5 je -COR10, substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku a nesubstituované nižší alkylové skupiny a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo arylová skupina.
  36. 36. Sloučenina nebo sůl podle nároku 33 nebo 34, kde substituent R6 je -COR10, substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku a nesubstituované nižší alkylové skupiny a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo arylová skupina.
  37. 37. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina nebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina.
  38. 38. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R5 je 2-[(diethylamino)-2hydroxyethyljaminokarbonyl, 2-(A-ethyl-A-2-hydroxyethylamino)ethylaminokarbonyl, karboxymethyl-amino-karbonyl nebo 2-hydroxyethylamino-karbonyl.
  39. 39. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxyskupina nebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina.
    204
  40. 40. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituent R6 je [2-(diethylamino)-2hydroxyjethylaminokarbonyl, 2-(/V-ethyl-/V-2-hydroxyethylamino)ethylaminokarbonyl, karboxymethylaminokarbonyl nebo 2-hydroxyethylaminokarbonyl.
  41. 41. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je -NR11(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O’)NR13R14 nebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z nesubstituované nižší alkylové skupiny.
  42. 42. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R5 je 2-(2V-hydroxy-7Vethylamino)ethylaminokarbonyl nebo 2-[N+(O‘)(C2H5)2]ethyl-aminokarbonyl.
  43. 43. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR11(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O)NR13R14 nebo -N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z nesubstituované nižší alkylové skupiny.
  44. 44. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R6 je 2-(7V-hydroxy-7Vethylamino)ethylaminokarbonyl nebo 2-[N+(O')(C2H5)2]ethylaminokarbonyl.
  45. 45. Sloučenina nebo sůl podle nároků 37, 38, 41 nebo 42, kde substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku nebo methylu a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z methylu, atomu vodíku nebo fenylu.
  46. 46. Sloučenina nebo sůl podle kteréhokoliv z nároků 39, 40, 43, 44 nebo 20-22, kde substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku nebo methylu a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z methylu, atomu vodíku nebo fenylu.
  47. 47. Sloučenina nebo sůl podle nároku 45, kde substituent R1 je atom vodíku, substituent R2 je atom vodíku, kyanoskupina, chlor, fluor nebo brom, substituent R3 je atom vodíku a substituent R4 je atom vodíku.
    205
  48. 48. Sloučenina nebo sůl podle nároku 46, kde substituent R1 je atom vodíku, substituent R2 je kyanoskupina, chlor, fluor nebo brom, substituent R3 je atom vodíku a substituent R4 je atom vodíku.
  49. 49. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde sloučenina je vybrána ze skupiny sestávající z nebo její L-malátová sůl.
  50. 50. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu nebo sůl podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo excipient.
  51. 51. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu nebo sůl podle nároku 49 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo excipient.
  52. 52. Způsob modulace katalytické aktivity proteinkinázy, vyznačující se tím, že zahrnuje uvedení této proteinkinázy v kontakt se sloučeninou nebo solí podle nároku 1 nebo 49.
    206
  53. 53. Způsob podle nároku 52, vyznačující se tím, že uvedená proteinkináza je vybrána ze skupiny sestávající se z receptorové tyrosinkinázy, nereceptorové tyrosinkinázy a serinthreoninkinázy.
  54. 54. Způsob ošetření nebo prevence poruchy související s proteinkinázou v organizmu, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství farmaceutického přípravku obsahujícího sloučeninu nebo sůl podle nároku 50 nebo nároku 51 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo excipient do uvedeného organizmu.
  55. 55. Způsob podle nároku 54, vyznačující se tím, že uvedená porucha související s proteinkinázou je vybrána ze skupiny sestávající se z poruchy související s receptorovou tyrosinkinázou, poruchy související s nereceptorovou tyrosinkinázou a poruchy související ze serin-threoninkinázou.
  56. 56. Způsob podle nároku 54, vyznačující se tím, že porucha související s uvedenou proteinkinázou je vybrána ze skupiny sestávající se z poruchy související s EGFR, poruchy související s PDGFR, poruchy související s IGFR a poruchy související s flk.
  57. 57. Způsob podle nároku 54, vyznačující se tím, že uvedená porucha související s proteinkinázou je rakovina vybraná ze skupiny sestávající z karcinomu skvamózních buněk, astrocytomu, Kaposiho sarkomu, glioblastomu, plicní rakoviny, rakoviny močového měchýře, rakoviny hlavy a krku, melanomu, ovariální rakoviny, rakoviny prostaty, rakoviny prsu, malobuněčné rakoviny plic, gliomu, kolorektální rakoviny, genitourinární rakoviny a gastrointestinální rakoviny.
  58. 58. Způsob podle nároku 54, vyznačující se tím, že uvedená porucha související s proteinkinázou je rakovina vybraná ze skupiny sestávající z diabetů, autoimunitní poruchy, hyperproliferativní poruchy, restenózy, fibrózy, psoriázy, von HippelovyLinadauovy nemoci, osteoartritidy, revmatoidní artritidy, angiogeneze, zánětlivé poruchy, imunologické poruchy a kardiovaskulární poruchy.
  59. 59. Způsob podle nároku 54, vyznačující se tím, že uvedený organizmus je lidský.
    207
    «· ·· ·« • • • · • · • · • • • • • 9 • • • 9 • • ·· • · · ··· • · · ·· ···
  60. 60, Meziprodukt obecného vzorce (II):
    kde substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
    substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající z atom vodíku, alkylové skupiny a -C(O)Rl°;
    substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10;
    substituenty R6 a R7 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající z -(CH2)4-> -(CH2)5- a -(CH2)6-; za předpokladu, že alespoň jeden ze substituentů R5, R6 nebo R7 musí být -C(O)R10;
    substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(Rr ^(CHfejnR12 a -NR13R14;
    substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku a alkylové skupiny; substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající z -NR13R14, hydroxyskupiny,
    -C(O)R15, arylové a heteroarylové skupiny;
    substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylové, kyanoalkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové skupiny; nebo substituenty R13 a R14 mohou být spojeny dohromady za vzniku heterocykloskupiny;
    substituent R15 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
    substituent R17 je vybrán ze skupiny sestávající z alkylové, cykloalkylové, arylové a heteroarylové skupiny a n je 1, 2, 3 nebo 4.
CZ20023081A 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloucenina pro pouzití jako inhibitor proteinkináz a farmaceutická kompozice s jejím obsahem CZ303705B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18271000P 2000-02-15 2000-02-15
US21642200P 2000-07-06 2000-07-06
US24353200P 2000-10-27 2000-10-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20023081A3 true CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
CZ303705B6 CZ303705B6 (cs) 2013-03-27

Family

ID=27391578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20023081A CZ303705B6 (cs) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloucenina pro pouzití jako inhibitor proteinkináz a farmaceutická kompozice s jejím obsahem

Country Status (43)

Country Link
US (4) US6573293B2 (cs)
EP (1) EP1255752B1 (cs)
JP (1) JP3663382B2 (cs)
KR (1) KR100713960B1 (cs)
CN (1) CN1329390C (cs)
AR (1) AR034118A1 (cs)
AT (1) ATE369359T1 (cs)
AU (2) AU2001239770B2 (cs)
BE (1) BE2010C009I2 (cs)
BG (1) BG65764B1 (cs)
BR (2) BRPI0108394B8 (cs)
CA (1) CA2399358C (cs)
CO (1) CO5280092A1 (cs)
CR (2) CR20120007A (cs)
CY (3) CY1108032T1 (cs)
CZ (1) CZ303705B6 (cs)
DE (3) DE122008000002I1 (cs)
DK (1) DK1255752T3 (cs)
EA (1) EA005996B1 (cs)
ES (1) ES2290117T3 (cs)
FR (1) FR08C0002I2 (cs)
HK (1) HK1051188A1 (cs)
HR (1) HRP20020751B1 (cs)
HU (1) HU228979B1 (cs)
IL (1) IL151127A0 (cs)
IS (1) IS2491B (cs)
LT (1) LTC1255752I2 (cs)
LU (2) LU91407I2 (cs)
ME (1) ME00415B (cs)
MX (1) MXPA02008021A (cs)
MY (1) MY130363A (cs)
NL (2) NL300332I2 (cs)
NO (4) NO325532B1 (cs)
NZ (1) NZ520640A (cs)
PE (1) PE20011083A1 (cs)
PL (1) PL211834B1 (cs)
PT (1) PT1255752E (cs)
RS (1) RS50444B (cs)
SI (1) SI1255752T1 (cs)
SK (1) SK287142B6 (cs)
TW (1) TWI306860B (cs)
UA (1) UA73976C2 (cs)
WO (1) WO2001060814A2 (cs)

Families Citing this family (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6569868B2 (en) 1998-04-16 2003-05-27 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US20040226056A1 (en) * 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
MXPA01007099A (es) 1999-01-13 2002-03-27 Univ New York State Res Found Metodo novedoso para disenar inhibidores de la proteina cinasa.
AR034118A1 (es) * 2000-02-15 2004-02-04 Sugen Inc Compuestos de 2-indolinonas sustituidas con pirroles inhibidoras de proteinquinasas; sus composiciones farmaceuticas e intermediarios de sintesis
US7030219B2 (en) 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
WO2001094312A2 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Sugen, Inc. Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors
CA2414468A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
EP1506962B1 (en) 2000-10-20 2008-07-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Nitrogen-containing aromatic heterocycles
EP1349852A2 (en) * 2000-12-20 2003-10-08 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones
AR042586A1 (es) * 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
EP1247809A3 (en) * 2001-03-30 2003-12-17 Pfizer Products Inc. Triazine compounds useful as sorbitol dehydrogenase inhibitors
US6599902B2 (en) 2001-05-30 2003-07-29 Sugen, Inc. 5-aralkysufonyl-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
WO2003002109A2 (en) * 2001-06-29 2003-01-09 Ab Science Use of tyrosine kinase inhibitors for treating autoimmune diseases
AR038957A1 (es) * 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
DK3168218T3 (en) 2001-08-15 2019-01-14 Pharmacia & Upjohn Co Llc Crystalline comprising an L-malic acid salt of N- [2- (DIETHYLAMINO) ETHYL] -5 - [(5-FLUOR-1,2-DIHYDRO-2-OXO-3H-INDOL-3-YLIDE) METHYL] -2,4 -DIMETHYL-1H-PYRROL-3-CARBOXAMIDE FOR USE AS A MEDICINE
JP2005506982A (ja) 2001-09-10 2005-03-10 スージェン・インコーポレーテッド キナーゼ阻害剤としての３−（４，５，６，７−テトラヒドロインドール−２−イルメチリデン）−２−インドリノン誘導体
CA2462950A1 (en) * 2001-10-10 2003-04-17 Sugen, Inc. 3-[4-(substituted heterocyclyl)-pyrrol-2-ylmethylidene]-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
WO2003035621A1 (en) * 2001-10-22 2003-05-01 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors, methods for designing them, and methods of using them
US20030080191A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Allen Lubow Method and apparatus for applying bar code information to products during production
TWI259081B (en) * 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
US6797825B2 (en) 2001-12-13 2004-09-28 Abbott Laboratories Protein kinase inhibitors
AU2002366245A1 (en) * 2001-12-17 2003-06-30 International Barcode Corporation Double-sided bar code doubling as a single bar code
US20050131733A1 (en) * 2001-12-17 2005-06-16 Allen Lubow Sealable individual bar coded packets
CA2470480C (en) 2001-12-27 2010-12-14 Theravance, Inc. Indolinone derivatives useful as protein kinase inhibitors
AU2003216282A1 (en) 2002-02-15 2003-09-09 Pharmacia And Upjohn Company Llc Process for preparing indolinone derivatives
AU2003233576A1 (en) * 2002-05-17 2003-12-02 Sugen, Inc. Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals
ITMI20021620A1 (it) * 2002-07-23 2004-01-23 Novuspharma Spa Composto ad ativita' antitumorale
WO2004016211A2 (en) * 2002-08-08 2004-02-26 Vanderbilt University Pi3k antagonists as radiosensitizers
AU2003259713A1 (en) * 2002-08-09 2004-02-25 Theravance, Inc. Oncokinase fusion polypeptides associated with hyperproliferative and related disorders, nucleic acids encoding the same and methods for detecting and identifying the same
US20040121407A1 (en) * 2002-09-06 2004-06-24 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis
HN2003000272A (es) * 2002-09-10 2008-07-29 Pharmacia Italia Spa Formulaciones que comprenden un compuesto de indolinona
CA2506546A1 (en) * 2002-11-15 2004-06-17 Exelixis, Inc. Kinase modulators
AR042042A1 (es) * 2002-11-15 2005-06-08 Sugen Inc Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular
US7452913B2 (en) * 2003-02-24 2008-11-18 Pharmacia & Upjohn Company Polymorphs of pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US20040209937A1 (en) * 2003-02-24 2004-10-21 Sugen, Inc. Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds
EA010727B1 (ru) 2003-02-26 2008-10-30 Суджен, Инк. Аминогетероарильные соединения в качестве ингибиторов протеинкиназ
US20040266843A1 (en) * 2003-03-07 2004-12-30 Sugen, Inc. Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)
US7157577B2 (en) * 2003-03-07 2007-01-02 Sugen Inc. 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors
EP1604665B1 (en) * 2003-03-10 2011-05-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. C-kit kinase inhibitor
US20050043233A1 (en) 2003-04-29 2005-02-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combinations for the treatment of diseases involving cell proliferation, migration or apoptosis of myeloma cells or angiogenesis
DE10334582A1 (de) * 2003-07-28 2005-02-24 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid
WO2005023765A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method for catalyzing amidation reactions by the presence of co2
RU2319702C2 (ru) * 2003-10-02 2008-03-20 Фармация Энд Апджон Компани Ллс Негигроскопическая кристаллическая малеатная соль 5-[(z)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3h-индол-3-илиден)метил]-n-[(2s)-2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил]-2,4-диметил-1h-пиррол-3-карбоксамида, фармацевтическая композиция и способ лечения рака
PL1680140T3 (pl) * 2003-10-16 2011-11-30 Imclone Llc Inhibitory receptora-1 czynnika wzrostu fibroblastów i związane z nim sposoby leczenia
JP4890255B2 (ja) 2003-11-07 2012-03-07 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 改良された薬物特性を有するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩
CN100450998C (zh) 2003-11-11 2009-01-14 卫材R&D管理有限公司 脲衍生物的制备方法
CA2547066A1 (en) * 2003-11-26 2005-06-16 The Scripps Research Institute Advanced indolinone based protein kinase inhibitors
US20050171182A1 (en) * 2003-12-11 2005-08-04 Roger Briesewitz Methods and compositions for use in the treatment of mutant receptor tyrosine kinase driven cellular proliferative diseases
US20050152943A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Medtronic Vascular, Inc. Medical devices to treat or inhibit restenosis
WO2005118543A1 (ja) * 2004-06-03 2005-12-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. キナーゼ阻害薬およびその用途
EP1765313A2 (en) 2004-06-24 2007-03-28 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Compounds for immunopotentiation
SE0401790D0 (sv) * 2004-07-07 2004-07-07 Forskarpatent I Syd Ab Tamoxifen response in pre- and postmenopausal breast cancer patients
US20060009510A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method of synthesizing indolinone compounds
CA2578066C (en) * 2004-08-26 2011-10-11 Pfizer Inc. Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
WO2006030826A1 (ja) 2004-09-17 2006-03-23 Eisai R & D Management Co., Ltd. 医薬組成物
CN100432071C (zh) * 2004-11-05 2008-11-12 中国科学院上海药物研究所 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途
GT200500321A (es) 2004-11-09 2006-09-04 Compuestos y composiciones como inhibidores de proteina kinase.
NZ561138A (en) * 2005-03-23 2009-06-26 Pfizer Prod Inc Anti-CTLA4 antibody and indolinone combination therapy for treatment of cancer
EP2444419A1 (en) 2005-04-26 2012-04-25 Pfizer Inc. P-Cadherin antibodies
MX2007014087A (es) * 2005-05-12 2008-02-07 Pfizer Combinaciones y procedimientos para usar un compuesto de indolinona.
DK1922307T3 (da) 2005-05-18 2012-04-02 Array Biopharma Inc Heterocykliske inhibitorer af MEK og fremgangsmåder til anvendelse heraf
CA2609353C (en) 2005-05-23 2015-04-28 Novartis Ag Crystalline and other forms of 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-quinolin-2-one lactic acid salts
BRPI0611419A2 (pt) * 2005-05-26 2010-09-08 Scripps Research Inst composto, sal, tautÈmero ou pró-fármaco, método para a modulação da atividade catalìtica de uma proteìna cinase e processo para a sìntese de uma pirrolil-indolinona
US20100105031A1 (en) * 2005-08-01 2010-04-29 Esai R & D Management Co., Ltd. Method for prediction of the efficacy of vascularization inhibitor
WO2007015578A1 (ja) 2005-08-02 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を検定する方法
JP5161777B2 (ja) 2005-09-07 2013-03-13 アムジェン フレモント インク． アクチビン受容体様キナーゼ−１に対するヒトモノクローナル抗体
US20080275101A1 (en) 2005-09-19 2008-11-06 Pfizer Inc. Solid Salt Forms Of A Pyrrole Substituted 2-Indolinone
JPWO2007052849A1 (ja) 2005-11-07 2009-04-30 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質とｃ−ｋｉｔキナーゼ阻害物質との併用
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
CN101389331A (zh) * 2005-12-29 2009-03-18 斯克里普斯研究学院 基于吲哚满酮的氨基酸衍生物的蛋白激酶抑制剂
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101007801A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的2－二氢吲哚酮衍生物、其制法与医药上的用途
AR060358A1 (es) 2006-04-06 2008-06-11 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolinas para la inhibicion de pdk 1
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
WO2007124288A1 (en) 2006-04-19 2007-11-01 Novartis Ag Indazole compounds and methods for inhibition of cdc7
UA91129C2 (ru) 2006-05-09 2010-06-25 Пфайзер Продактс Инк. Производные циклоалкиламинокислот и фармацевтическая композиция, которая их содержит
CN101443009A (zh) * 2006-05-18 2009-05-27 卫材R&D管理有限公司 针对甲状腺癌的抗肿瘤剂
DE102006024834B4 (de) * 2006-05-24 2010-07-01 Schebo Biotech Ag Neue Indol-Pyrrol-Derivate und deren Verwendungen
US20090203693A1 (en) * 2006-06-29 2009-08-13 Eisai R & D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for liver fibrosis
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
CA2656836A1 (en) 2006-07-13 2008-01-17 Zymogenetics, Inc. Interleukin 21 and tyrosine kinase inhibitor combination therapy
CL2007002225A1 (es) 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
AR062207A1 (es) 2006-08-04 2008-10-22 Takeda Pharmaceutical Derivados de imidazopiridazina inhibidores de quinasas utiles para prevenir y/o tratar el cancer.
RU2445312C2 (ru) 2006-08-23 2012-03-20 Кудос Фармасьютиклз Лимитед ПРОИЗВОДНЫЕ 2-МЕТИЛМОРФОЛИН ПИРИДО-, ПИРАЗО- И ПИРИМИДО-ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ mTOR
CN101511793B (zh) * 2006-08-28 2011-08-03 卫材R&D管理有限公司 针对未分化型胃癌的抗肿瘤剂
AU2007294686B2 (en) 2006-09-15 2013-10-31 Equinox Sciences, Llc Kinase inhibitor compounds
BRPI0718029A2 (pt) 2006-11-06 2013-11-26 Supergen Inc Derivados de imidazo(1,2-b)piridazina e pirazolo(1,5-a)pirimidina e seu uso como inibidores da proteína cinase
CN101535302A (zh) * 2006-11-06 2009-09-16 株式会社泰丽巴镠斯 新型羟基吲哚衍生物
ATE547411T1 (de) 2006-12-04 2012-03-15 Jiangsu Simcere Pharmaceutical R & D Co Ltd 3-pyrrolo-cyclohexylen-2-dihydroindolinonderiva e und anwendungen davon
JP5319306B2 (ja) 2007-01-29 2013-10-16 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 未分化型胃癌治療用組成物
MX2009008386A (es) 2007-02-06 2009-10-16 Pfizer Derivados de 2-amino-5,7-dihidro-6h-pirrolo[3,4-d] pirimidina como inhibidores de proteinas de choque termico-90 para tratar cancer.
US8044056B2 (en) 2007-03-20 2011-10-25 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Adenine compound
US20090004213A1 (en) * 2007-03-26 2009-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Combination therapy using active immunotherapy
US20090042906A1 (en) * 2007-04-26 2009-02-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods for treating cancers associated with constitutive egfr signaling
WO2008138184A1 (fr) 2007-05-14 2008-11-20 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co.Ltd. Dérivés de pyrrolo-azacycles, leur procédé de fabrication et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinases
WO2008145398A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Pfizer Italia S.R.L. 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors
JP5352476B2 (ja) 2007-06-05 2013-11-27 武田薬品工業株式会社 キナーゼ阻害剤としての二環式複素環化合物
US8324395B2 (en) 2007-08-23 2012-12-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound and use thereof
US20090062368A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Protia, Llc Deuterium-enriched sunitinib
US8299106B2 (en) * 2007-09-06 2012-10-30 Boston Biomedical, Inc. Compositions of kinase inhibitors and their use for treatment of cancer and other diseases related to kinases
CA2701057C (en) 2007-10-11 2015-03-24 Astrazeneca Ab Pyrrolo[2,3-d]pyrimidin derivatives as protein kinase b inhibitors
CN101848895B (zh) 2007-11-09 2013-10-23 卫材R&D管理有限公司 血管新生抑制物质和抗肿瘤性铂络合物的组合使用
CA2699306A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib hemi-l-malate, polymorphs and preparation thereof, polymorphs of racemic sunitinib malate, compositins containing sunitinib base and malic acid and preparation thereof
US20100256392A1 (en) * 2007-11-21 2010-10-07 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
WO2009074862A1 (en) * 2007-12-12 2009-06-18 Medichem S.A. Polymorphic forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone
MX2010006800A (es) 2007-12-19 2010-10-05 Genentech Inc 5-anilinoimidazopiridinas y metodos de uso de las mismas.
JP2011506560A (ja) 2007-12-20 2011-03-03 ノバルティス アーゲー Ｐｉ３キナーゼ阻害剤として用いられるチアゾール誘導体
NZ586575A (en) 2007-12-21 2012-03-30 Genentech Inc Azaindolizines and methods of use
MX2010008187A (es) * 2008-01-29 2010-08-10 Eisai R&D Man Co Ltd Uso combinado de inhibidor de angiogenesis y taxano.
EP2113248A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2-,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US20100310668A1 (en) * 2008-02-13 2010-12-09 Ratiopharm Gmbh Pharmaceutical compositions comprising n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide
EP2090306A1 (en) 2008-02-13 2009-08-19 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
CN101255154B (zh) * 2008-02-18 2011-09-07 靳广毅 一种取代的2-吲哚啉酮衍生物和制备方法及其应用
WO2009104021A2 (en) * 2008-02-21 2009-08-27 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs and processes for their preparation
EP2098521A1 (en) 2008-03-06 2009-09-09 Ratiopharm GmbH Crystal forms of N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrolle-3-carboxamide and methods for their prepparation
US20090247767A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-01 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Processes for preparing sunitinib and salts thereof
WO2009128083A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Natco Pharma Limited Novel polymorphic forms of sunitinib base
US8158656B2 (en) * 2008-05-16 2012-04-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
WO2009140928A1 (zh) * 2008-05-23 2009-11-26 上海医药工业研究院 二氢吲哚酮衍生物
WO2009154697A2 (en) * 2008-05-28 2009-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Disc-1 pathway activators in the control of neurogenesis
EP2313371B1 (en) * 2008-06-13 2012-08-15 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
KR20110036055A (ko) * 2008-06-23 2011-04-06 낫코 파마 리미티드 고순도의 수니티닙 및 이의 약학적으로 허용가능한 염의 개선된 제조 방법
EP2138167A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
WO2009156837A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Medichem, S.A. Amorphous form of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
CN102137866A (zh) * 2008-06-30 2011-07-27 赛林药物股份有限公司 羟吲哚化合物
AU2009269149B2 (en) 2008-06-30 2016-03-17 Mesoblast, Inc. Treatment of eye diseases and excessive neovascularization using a combined therapy
DE102008031038A1 (de) 2008-06-30 2009-12-31 Alexander Priv.-Doz. Dr. Dömling Sutent zur Anwendung in der Organtransplantation
EP2318364A2 (en) * 2008-07-02 2011-05-11 Generics [UK] Limited Preparation of 3-pyrrole substituted 2-indolinone derivatives
US20110257237A1 (en) * 2008-07-10 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Process for the preparation of crystalline forms of sunitinib malate
KR20110036588A (ko) 2008-07-24 2011-04-07 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 수니티닙 아세테이트 및 이의 다형을 통한 수니티닙 말레이트의 제조 방법
EP2342195B1 (en) 2008-07-24 2014-09-10 Medichem, S.A. Crystalline forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
WO2010017541A2 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
AU2009288730B2 (en) 2008-08-25 2013-06-20 Amplimmune, Inc. Compositions of PD-1 antagonists and methods of use
AU2009286521A1 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs of sunitinib and processes for their preparation
US20110223188A1 (en) * 2008-08-25 2011-09-15 Solomon Langermann Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer
WO2010023473A2 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel crystalline form and processes for its preparation
KR20110066927A (ko) * 2008-09-05 2011-06-17 임페리얼 이노베이션스 리미티드 생체 내 영상화제로서 사용하기 위한 이사틴 유도체
KR20110057244A (ko) 2008-09-19 2011-05-31 메디뮨 엘엘씨 Ｄｌｌ4에 대한 항체 및 이의 용도
EP2350056A1 (en) * 2008-10-10 2011-08-03 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole subsituted 2-indolinone malate salt
EP2181991A1 (en) * 2008-10-28 2010-05-05 LEK Pharmaceuticals D.D. Novel salts of sunitinib
EP2186809A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-19 LEK Pharmaceuticals D.D. New crystal form of sunitinib malate
US20100222371A1 (en) * 2008-11-20 2010-09-02 Children's Medical Center Corporation Prevention of surgical adhesions
JP5579619B2 (ja) 2008-12-01 2014-08-27 武田薬品工業株式会社 複素環化合物およびその用途
JO3101B1 (ar) 2008-12-02 2017-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات بنزوثيازول كعوامل مضادة للسرطان
UY32351A (es) 2008-12-22 2010-07-30 Astrazeneca Ab Compuestos de pirimidinil indol para uso como inhibidores de atr
EP2379595A2 (en) 2008-12-23 2011-10-26 AstraZeneca AB Targeted binding agents directed to 5 1 and uses thereof
EP2373643A4 (en) 2009-01-02 2013-08-07 Hetero Research Foundation NEW SUNITINIB MALATE POLYMORPHS
PL2387563T5 (pl) 2009-01-16 2023-03-13 Exelixis, Inc. Sól jabłczanowa N-(4-{[6,7-bis(metyloksy)chinolin-4-ylo]oksy}fenylo-N′-(4-fluorofenylo)cykloproano-1,1-dikarboksyamidu oraz jej krystaliczne postaci do leczenia raka
SG2014009138A (en) 2009-02-05 2014-03-28 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
CN102307875A (zh) 2009-02-09 2012-01-04 苏伯俭股份有限公司 吡咯并嘧啶基axl激酶抑制剂
US9265764B2 (en) * 2009-02-27 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Uses of chemicals to modulate GSK-3 signaling for treatment of bipolar disorder and other brain disorders
TW201035088A (en) 2009-02-27 2010-10-01 Supergen Inc Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene DNA methyltransferase inhibitors
ES2529205T3 (es) 2009-03-13 2015-02-17 Cellzome Limited Derivados de pirimidina como inhibidores de mTOR
WO2010108503A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Life & Brain Gmbh Promotion of neuronal integration in neural stem cell grafts
WO2010118986A1 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Cellzome Limited Fluoro substituted pyrimidine compounds as jak3 inhibitors
WO2010120386A1 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
EP2255792A1 (en) 2009-05-20 2010-12-01 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions for N-[2-(Diethylamino)ethyl]5-[(fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indole-3-ylidene) methyl]-2,4-dimenthyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8211901B2 (en) 2009-05-22 2012-07-03 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2264027A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-22 Ratiopharm GmbH Process for the preparation of N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8389580B2 (en) 2009-06-02 2013-03-05 Duke University Arylcyclopropylamines and methods of use
CN101906076B (zh) 2009-06-04 2013-03-13 深圳微芯生物科技有限责任公司 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
WO2011004200A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Generics [Uk] Limited Novel pyrrole derivatives
FR2948940B1 (fr) * 2009-08-04 2011-07-22 Servier Lab Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2011029807A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Cellzome Limited Ortho substituted pyrimidine compounds as jak inhibitors
CA2774634A1 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Ranbaxy Laboratories Limited Salts of sunitinib
WO2011048082A1 (en) 2009-10-20 2011-04-28 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as jak inhibitors
US20120271056A1 (en) 2009-11-12 2012-10-25 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form i of l-malic acid salt of sunitinib
US8916716B2 (en) 2009-11-19 2014-12-23 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form II of L-malic acid salt of sunitinib
SI3279215T1 (sl) 2009-11-24 2020-07-31 Medimmune Limited Usmerjena vezavna sredstva proti B7-H1
WO2011068233A1 (en) 2009-12-03 2011-06-09 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Imidazoquinolines which act via toll - like receptors (tlr)
WO2011095802A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Generics [Uk] Limited Hplc method for analyzing sunitinib
WO2011100325A2 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Sicor Inc. Polymorphs of sunitinib salts
AU2011215900A1 (en) 2010-02-10 2012-07-26 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
JP5770751B2 (ja) 2010-02-22 2015-08-26 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン系のＰＩ３Ｋデルタ阻害化合物および使用方法
WO2011104555A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Generics [Uk] Limited Novel process
EP2542536B1 (en) 2010-03-04 2015-01-21 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mtor inhibitors
EP2542550A1 (en) 2010-03-04 2013-01-09 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the direct preparation of malic acid salt of sunitinib
CN102858739A (zh) * 2010-03-10 2013-01-02 斯索恩有限公司 酰胺化吡咯甲酸酯化合物的方法
AU2011228765A1 (en) 2010-03-18 2012-10-11 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of malic acid salt of sunitinib
US9162981B2 (en) 2010-03-23 2015-10-20 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
WO2011128699A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Novel process
MX2012012328A (es) 2010-04-30 2013-05-06 Cellzome Ltd Compuestos pirazol como inhibidores de jak.
WO2011138565A1 (fr) 2010-05-05 2011-11-10 Biorebus Association pharmaceutique contenant l'acide lipoïque, l'acide hydroxycitrique et une somatostatine a titre de principes actifs
EP2392324A1 (en) 2010-06-01 2011-12-07 Societe De Coordination De Recherches Therapeutiques Rhenium complexes and their pharmaceutical use
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
US9012458B2 (en) 2010-06-25 2015-04-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
WO2012000970A1 (en) 2010-07-01 2012-01-05 Cellzome Limited Triazolopyridines as tyk2 inhibitors
WO2012006503A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
US9040545B2 (en) 2010-08-20 2015-05-26 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as selective JAK inhibitors
US8426418B2 (en) 2010-08-27 2013-04-23 CollabRx Inc. Method to treat melanoma in BRAF inhibitor-resistant subjects
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
WO2012058780A1 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Scinopharm (Kunshan) Biochemical Technology Co., Ltd. Processes for the preparation of 3-(pyrrol-2-yl)methylene)-2-pyrrolones using 2-silyloxy-pyrroles
WO2012059941A1 (en) * 2010-11-04 2012-05-10 Ind-Swift Laboratories Limited Process for preparation of sunitinib malate and salts thereof
EP2638018A1 (en) 2010-11-09 2013-09-18 Cellzome Limited Pyridine compounds and aza analogues thereof as tyk2 inhibitors
JP2014503500A (ja) 2010-11-18 2014-02-13 シンタ ファーマスーティカルズ コーポレーション 低酸素状態に基づく酸素感受性薬剤による治療に適した被験体の事前選択
CA2818612C (en) 2010-11-19 2020-12-29 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
TWI410425B (zh) 2010-12-03 2013-10-01 Lilly Co Eli 唑并［５，４－ｂ］吡啶－５－基化合物
US9827326B2 (en) 2010-12-23 2017-11-28 Nektar Therapeutics Polymer-sunitinib conjugates
JP6009457B2 (ja) 2010-12-23 2016-10-19 ネクター セラピューティクス ポリマー−デスエチルスニチニブコンジュゲート
AP2013007043A0 (en) 2011-01-31 2013-08-31 Novartis Ag Novel heterocyclic derivatives
SG191965A1 (en) 2011-02-15 2013-08-30 Immunogen Inc Methods of preparation of conjugates
CA2827171C (en) 2011-02-17 2019-04-09 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Fak inhibitors
EP2675794B1 (en) 2011-02-17 2019-02-13 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Selective fak inhibitors
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
US8630703B2 (en) 2011-03-09 2014-01-14 Technion Research & Development Foundation Limited Treatment utilizing hydrophobic weak bases chemotherapeutic agents and illumination
CN102115469A (zh) * 2011-03-21 2011-07-06 浙江大学 吲哚啉-2-酮类衍生物的制备和用途
JP2014510122A (ja) 2011-04-04 2014-04-24 セルゾーム リミテッド ｍＴＯＲ阻害剤としてのジヒドロピロロピリミジン誘導体
SG193527A1 (en) 2011-04-08 2013-10-30 Beta Pharma Inc New indolinone protein kinase inhibitors
CA2828946C (en) 2011-04-18 2016-06-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012143320A1 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Cellzome Limited (7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-yl)amine compounds as jak3 inhibitors
CN102898402B (zh) * 2011-04-26 2016-01-20 北京大学 一种苯并异硒唑酮修饰的吡咯甲酸酯取代的吲哚酮类化合物及其应用
EP3444363B1 (en) 2011-06-03 2020-11-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for prediciting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
EP3812387A1 (en) 2011-07-21 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
US20140179664A1 (en) 2011-07-28 2014-06-26 Cellzome Limited Heterocyclyl Pyrimidine Analogues As JAK Inhibitors
WO2013017479A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013017480A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
EP2739252A4 (en) 2011-08-05 2015-08-12 Forsight Vision4 Inc SMALL MOLECULE ADMINISTRATION USING AN IMPLANTABLE THERAPEUTIC DEVICE
EP2760863A1 (en) 2011-09-20 2014-08-06 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as kinase inhibitors
US9175011B2 (en) 2011-09-21 2015-11-03 Cellzone Limited Morpholino substituted urea or carbamate derivatives as MTOR inhibitors
ES2592219T3 (es) 2011-10-07 2016-11-28 Cellzome Limited Derivados de {(4-(4-morfolino-dihidrotieno[3,4-d]pirimidin-2-il)aril}urea o carbamato como inhibidores de mTOR
CN102499917B (zh) 2011-10-25 2014-12-17 澳门大学 吲哚酮类化合物在制备神经保护药物中的应用
JP6059731B2 (ja) 2011-10-28 2017-01-11 ノバルティス アーゲー 新規プリン誘導体および疾患の処置におけるその使用
CN103130774B (zh) * 2011-11-22 2016-06-22 齐鲁制药有限公司 具有酪氨酸激酶抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN103127096B (zh) * 2011-12-02 2015-11-25 杨子娇 吡咯基取代的吲哚类化合物在治疗青光眼病的应用
US20130178520A1 (en) 2011-12-23 2013-07-11 Duke University Methods of treatment using arylcyclopropylamine compounds
AU2012357038B2 (en) 2011-12-23 2016-05-12 Cellzome Limited Pyrimidine-2,4-diamine derivatives as kinase inhibitors
CN102491932A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 天津科技大学 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用
ES2709110T3 (es) 2012-03-23 2019-04-15 Laurus Labs Ltd Un proceso mejorado para la preparación de sunitinib y sus sales de adición de ácido
WO2013158367A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Annji Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclopropanecarboxylate esters of purine analogues
PL399027A1 (pl) 2012-04-27 2013-10-28 Instytut Farmaceutyczny Sposób otrzymywania N-[2-(dietylamino)etylo]-5-formylo-2,4-dimetylo-1H-pirolo-3-karboksyamidu o wysokiej czystosci i jego zastosowanie do wytwarzania sunitynibu
CN102653521B (zh) * 2012-04-27 2014-08-06 首都师范大学 吲哚-2-酮的哌嗪硫代甲酰肼衍生物及其制备方法和用途
EP3563865A3 (en) 2012-05-04 2019-12-04 Pfizer Inc Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
CA2872526A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Novartis Ag Dosage regimen for a pi-3 kinase inhibitor
BR112014030278A2 (pt) 2012-06-08 2017-06-27 Sutro Biopharma Inc anticorpo, e, composição.
EP3135690A1 (en) 2012-06-26 2017-03-01 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
US9238644B2 (en) 2012-08-17 2016-01-19 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited VEGFR3 inhibitors
EP2887965A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
KR102182800B1 (ko) 2012-08-31 2020-11-25 서트로 바이오파마, 인크. 아지도 기를 포함하는 변형된 아미노산
WO2014041349A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Tetrahydropyran-4-ylethylamino- or tetrahydropyranyl-4-ethyloxy-pyrimidines or -pyridazines as isoprenylcysteincarboxymethyl transferase inhibitors
WO2014045101A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Cellzome Gmbh Tetrazolo quinoxaline derivatives as tankyrase inhibitors
JP6243918B2 (ja) 2012-10-16 2017-12-06 トレロ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｐｋｍ２調節因子およびそれらの使用方法
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
CA2889866A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Eisai R&D Management Co., Ltd. Amorphous form of quinoline derivative, and method for producing same
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
EP2961435B1 (en) 2013-02-28 2019-05-01 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
EP2970206A1 (en) * 2013-03-13 2016-01-20 Boston Biomedical, Inc. 3-(aryl or heteroaryl) methyleneindolin-2-one derivatives as inhibitors of cancer stem cell pathway kinases for the treatment of cancer
US9968603B2 (en) 2013-03-14 2018-05-15 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
CA2905993C (en) 2013-03-14 2022-12-06 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Substituted 4-amino-pyrimidinyl-2-amino-phenyl derivatives and pharmaceutical compositions thereof for use as jak2 and alk2 inhibitors
AR095443A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Fundación Centro Nac De Investig Oncológicas Carlos Iii Heterociclos condensados con acción sobre atr
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
CN104119321B (zh) * 2013-04-28 2017-09-08 齐鲁制药有限公司 二氢吲哚酮衍生物的二马来酸盐及其多晶型物
NZ714049A (en) 2013-05-14 2020-05-29 Eisai R&D Man Co Ltd Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of endometrial cancer subjects to lenvatinib compounds
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
FR3008411B1 (fr) * 2013-07-12 2015-07-03 Servier Lab Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent
DK3039424T3 (da) 2013-08-28 2020-08-31 Crown Bioscience Inc Taicang Genekspressionssignaturer, der er prædiktive for et individs respons på en multikinaseinhibitor, og fremgangsmåder til anvendelse af disse
EP3055298B1 (en) 2013-10-11 2020-04-29 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CA2838585A1 (en) 2013-10-18 2015-04-18 Hari Babu Matta An ascorbic acid salt of sunitinib
US9604968B2 (en) 2013-10-18 2017-03-28 Sun Pharmaceutical Industries Limited Pure crystalline Form II of L-malic acid salt of sunitinib and processes for its preparation
PE20171142A1 (es) 2013-11-01 2017-08-10 Pfizer Vectores para expresion de antigenos asociados a prostata
US20170000778A1 (en) 2013-12-06 2017-01-05 Emmanuelle di Tomaso Dosage regimen for an alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
CN104829596B (zh) * 2014-02-10 2017-02-01 石家庄以岭药业股份有限公司 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
CN103923014A (zh) * 2014-05-05 2014-07-16 宁夏宝马药业有限公司 环肌酸制备方法
EP3177289A4 (en) 2014-08-08 2018-03-21 Forsight Vision4, Inc. Stable and soluble formulations of receptor tyrosine kinase inhibitors, and methods of preparation thereof
CN106660964B (zh) 2014-08-28 2021-09-03 卫材R&D管理有限公司 高纯度喹啉衍生物及其生产方法
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
WO2016114322A1 (ja) 2015-01-13 2016-07-21 国立大学法人京都大学 筋萎縮性側索硬化症の予防及び／又は治療剤
US20180028662A1 (en) 2015-02-25 2018-02-01 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for Suppressing Bitterness of Quinoline Derivative
KR20170122809A (ko) 2015-03-04 2017-11-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
EP3611506B1 (en) 2015-04-20 2021-11-17 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling
WO2016184793A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating a patient with vegfr inhibitor-resistant metastatic renal cell carcinoma
CA2985804A1 (en) 2015-05-18 2016-11-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs having increased bioavailability
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
RU2729936C2 (ru) 2015-06-16 2020-08-13 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Противораковое средство
US10568887B2 (en) 2015-08-03 2020-02-25 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies for treatment of cancer
EA037327B1 (ru) 2015-09-22 2021-03-12 Грейбуг Вижн, Инк. Соединения и композиции для лечения глазных расстройств
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
JP2018532750A (ja) 2015-11-02 2018-11-08 ノバルティス アーゲー ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤の投薬レジメン
CA3004886A1 (en) 2015-11-12 2017-05-18 Graybug Vision, Inc. Aggregating microparticles for medical therapy
CN109069664B (zh) 2016-01-27 2022-05-13 苏特罗生物制药公司 抗cd74抗体偶联物，包含抗cd74抗体偶联物的组合物以及抗cd74抗体偶联物的使用方法
JP2019508405A (ja) 2016-02-08 2019-03-28 ヴィトリサ セラピューティクス， インコーポレイテッド 改良された硝子体内半減期を有する組成物およびその使用
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
CN107459519A (zh) 2016-06-06 2017-12-12 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶哌啶环衍生物及其制备方法和应用
US10870694B2 (en) 2016-09-02 2020-12-22 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating B cell disorders
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
EA201991071A1 (ru) 2016-10-28 2019-11-29 Композиции и способы для лечения ezh2-опосредованного рака
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
KR102495436B1 (ko) 2016-12-05 2023-02-02 에이프로스 테라퓨틱스, 인크. 산성 기를 함유하는 피리미딘 화합물
US10786502B2 (en) 2016-12-05 2020-09-29 Apros Therapeutics, Inc. Substituted pyrimidines containing acidic groups as TLR7 modulators
EP3551185A4 (en) 2016-12-08 2021-07-14 Icahn School of Medicine at Mount Sinai COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF CDK4 / 6 MEDIATED CANCER
CA3047557A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Profiling peptides and methods for sensitivity profiling
CN106916143B (zh) * 2017-03-14 2019-09-27 哈尔滨医科大学 一种预防和治疗冠心病的药物及其应用
CA3056923A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Graybug Vision, Inc. Drugs and compositions for the treatment of ocular disorders
EP3621654A4 (en) 2017-05-10 2021-02-17 Graybug Vision, Inc. PROLONGED-RELEASE MICROPARTICLES AND SUSPENSIONS OF THESE INTENDED FOR MEDICAL THERAPY
US20200207859A1 (en) 2017-07-26 2020-07-02 Sutro Biopharma, Inc. Methods of using anti-cd74 antibodies and antibody conjugates in treatment of t-cell lymphoma
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
WO2019055909A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 Sutro Biopharma, Inc. ALPHA ANTI-FOLATE ANTIBODY-RECEPTOR CONJUGATES AND USES THEREOF
WO2019075367A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Tolero Pharmaceuticals, Inc. PKM2 ACTIVATORS IN COMBINATION WITH OXYGEN REACTIVE SPECIES FOR THE TREATMENT OF CANCER
NL2019801B1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Univ Leiden Delivery vectors
EP3762381A4 (en) 2018-03-06 2022-01-05 Icahn School of Medicine at Mount Sinai SERINE THREONINE KINASE (AKT) DEGRADATION / INTERRUPTION COMPOUNDS AND METHODS OF USE
EP3539536A1 (en) 2018-03-15 2019-09-18 MH10 Spolka z ograniczona odpowiedzialnoscia A pharmaceutical composition of sunitinib or its salt thereof in its polymorphic form i
WO2020216450A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising amorphous sunitinib
CN112513031A (zh) 2018-06-04 2021-03-16 阿普罗斯治疗公司 可用于治疗与tlr7调节相关的疾病的含酸性基团的嘧啶化合物
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
GB201810581D0 (en) 2018-06-28 2018-08-15 Ctxt Pty Ltd Compounds
CN112512597A (zh) 2018-07-26 2021-03-16 大日本住友制药肿瘤公司 用于治疗与acvr1表达异常相关的疾病的方法以及用于此的acvr1抑制剂
US20220047716A1 (en) 2018-09-17 2022-02-17 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
AU2019391097A1 (en) 2018-12-04 2021-05-20 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. CDK9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
AU2019407426A1 (en) 2018-12-21 2021-07-22 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and kinase inhibitor
KR20210146290A (ko) 2019-02-12 2021-12-03 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 헤테로시클릭 단백질 키나제 억제제를 포함하는 제제
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
CN114364798A (zh) 2019-03-21 2022-04-15 欧恩科斯欧公司 用于治疗癌症的Dbait分子与激酶抑制剂的组合
US11712433B2 (en) 2019-03-22 2023-08-01 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising PKM2 modulators and methods of treatment using the same
EP3962951A1 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
CA3137916A1 (en) 2019-05-06 2020-11-12 Ichan School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of hpk1
CA3152674A1 (en) 2019-08-31 2021-03-04 Etern Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. Pyrazole derivatives for fgfr inhibitor and preparation method thereof
CN114761006A (zh) 2019-11-08 2022-07-15 Inserm(法国国家健康医学研究院) 对激酶抑制剂产生耐药性的癌症的治疗方法
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN111233841A (zh) * 2020-03-17 2020-06-05 湖北扬信医药科技有限公司 一种舒尼替尼有关物质及其制备方法和用途
WO2023278424A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 The Regents Of The University Of California Methods for treating and ameliorating t cell related diseases
CN113717159A (zh) * 2021-09-16 2021-11-30 中国药科大学 吲哚酮类化合物及其药物组合物、制备方法及用途
WO2023081923A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Frequency Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024017372A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种吲哚酮衍生物及其应用

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL230368A (cs) 1957-08-19
DE878539C (de) 1939-08-17 1953-06-05 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen
BE507136A (cs) 1950-11-18
BE553661A (cs) 1955-12-23
NL96047C (cs) 1956-06-08
NL251055A (cs) 1959-04-29
FR1398224A (fr) 1964-05-06 1965-05-07 Ici Ltd Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile
US3308134A (en) 1965-10-22 1967-03-07 Mcneilab Inc Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones
US3551571A (en) 1967-05-19 1970-12-29 Endo Lab Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones
US3564016A (en) 1968-03-07 1971-02-16 Endo Lab Method of decarbonylation
US4070366A (en) 1968-06-12 1978-01-24 Canadian Patents & Development Limited Alkylation process
FR1599772A (cs) 1968-09-17 1970-07-20
US3922163A (en) 1970-01-30 1975-11-25 Upjohn Co Organic compounds and process
US3715364A (en) 1970-12-28 1973-02-06 Merck & Co Inc Nitroimidazole carboxamides
DE2159361A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159362A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159360A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159363A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Antimikrobielle mittel
GB1384599A (en) 1972-05-04 1975-02-19 Colgate Palmolive Co Coloured detergent compositions
US3880871A (en) 1973-09-27 1975-04-29 Squibb & Sons Inc Isothiocyanophenyl substituted imidazoles
US4002643A (en) 1975-06-27 1977-01-11 Mcneil Laboratories, Inc. Preparation of β-acyl pyrroles
US4002749A (en) 1975-08-12 1977-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Substituted indolinones
US4053613A (en) 1975-09-17 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones
DE2855306A1 (de) 1978-12-21 1980-07-10 Boehringer Sohn Ingelheim Mittel zur senkung der herzfrequenz
GR73560B (cs) 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4343923A (en) 1980-08-07 1982-08-10 Armstrong World Industries, Inc. Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound
CH646956A5 (de) 1981-12-15 1984-12-28 Ciba Geigy Ag Imidazolide.
EP0095285A1 (en) 1982-05-21 1983-11-30 Sumitomo Chemical Company, Limited N-acylimidazoles, their production and use
US4493642A (en) 1982-12-27 1985-01-15 Bogdon Glendon J Orthodontic device and associated orthodontic method
DE3310891A1 (de) 1983-03-25 1984-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4489089A (en) 1983-04-06 1984-12-18 American Cyanamid Company Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides
EP0124482B1 (de) 1983-04-29 1989-11-08 Ciba-Geigy Ag Neue Imidazolide und deren Verwendung als Härter für Polyepoxidverbindungen
DE3415138A1 (de) 1984-04-21 1985-10-31 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide
DE3426419A1 (de) 1984-07-18 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4560700A (en) 1985-02-08 1985-12-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents
JPH078851B2 (ja) 1985-07-29 1995-02-01 鐘淵化学工業株式会社 ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
WO1993012786A1 (en) 1986-07-10 1993-07-08 Howard Harry R Jr Indolinone derivatives
US4853404A (en) 1986-10-13 1989-08-01 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Phenoxyacetic acid derivatives composition and use
JP2539504B2 (ja) 1987-03-11 1996-10-02 鐘淵化学工業株式会社 ヒドロキシスチレン誘導体
US5202341A (en) 1987-03-11 1993-04-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity
US5089516A (en) 1987-03-11 1992-02-18 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity
US5043348A (en) 1987-04-24 1991-08-27 Cassella Aktiengesellschaft Pyrrolealdehydes, their preparation and their use
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
DE3808071A1 (de) 1988-03-11 1989-09-21 Basf Ag Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen
US4868304A (en) 1988-05-27 1989-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Synthesis of nitrogen heterocycles
CA1339784C (en) 1988-06-23 1998-03-31 Shinya Inoue Pyrrolecarboxylic acid derivatives
JPH06104658B2 (ja) 1988-06-23 1994-12-21 三菱化成株式会社 ピロールカルボン酸誘導体
GB8816944D0 (en) 1988-07-15 1988-08-17 Sobio Lab Compounds
DE3824658A1 (de) 1988-07-15 1990-01-18 Schering Ag N-hetaryl-imidazolderivate
US5084280A (en) 1988-12-15 1992-01-28 Chapman Chemical Company Wood preservation composition and method
DE3902439A1 (de) 1989-01-27 1990-08-02 Basf Ag Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern
US5047554A (en) 1989-04-18 1991-09-10 Pfizer Inc. 3-substituted-2-oxindole derivatives
DE69031649T2 (de) 1989-07-25 1998-02-26 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Oxoindolderivate
US5258357A (en) 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
CA2032421A1 (en) 1989-12-20 1991-06-21 Mitsubishi Chemical Corporation Pyrrolealdehyde derivative
GB9004483D0 (en) 1990-02-28 1990-04-25 Erba Carlo Spa New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation
CA2012634A1 (en) 1990-03-20 1991-09-20 Hassan Salari Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5196446A (en) 1990-04-16 1993-03-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
US5480883A (en) 1991-05-10 1996-01-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase
ES2108120T3 (es) 1991-05-10 1997-12-16 Rhone Poulenc Rorer Int Compuestos bis arilicos y heteroarilicos mono- y biciclicos que inhiben tirosina quinasa receptora de egf y/o pdgf.
GB9115160D0 (en) 1991-07-12 1991-08-28 Erba Carlo Spa Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation
US5124347A (en) 1991-07-31 1992-06-23 Warner-Lambert Co. 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents
HU219131B (hu) 1991-10-18 2001-02-28 Monsanto Co. Módszer és fungicid készítmény növények torsgombabetegségének gátlására és a hatóanyagok
US5389661A (en) 1991-12-05 1995-02-14 Warner-Lambert Company Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties
US5322950A (en) 1991-12-05 1994-06-21 Warner-Lambert Company Imidazole with angiotensin II antagonist properties
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
FR2689397A1 (fr) 1992-04-01 1993-10-08 Adir Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments.
DE4211531A1 (de) 1992-04-06 1993-10-07 Cassella Ag Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten
FR2694004B1 (fr) 1992-07-21 1994-08-26 Adir Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5565324A (en) 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
JP3507124B2 (ja) 1993-05-26 2004-03-15 塩野義製薬株式会社 ベンジリデン誘導体の製造法
DE59402281D1 (de) 1993-06-28 1997-05-07 Bayer Ag Massefärben von Kunststoffen
US5332736A (en) 1993-11-01 1994-07-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles
US5610173A (en) 1994-01-07 1997-03-11 Sugen, Inc. Formulations for lipophilic compounds
GB9507298D0 (en) 1995-04-07 1995-05-31 Pharmacia Spa Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
US5786488A (en) 1996-11-13 1998-07-28 Sugen, Inc. Synthetic methods for the preparation of indolyquinones
JP3246712B2 (ja) 1995-11-15 2002-01-15 株式会社トクヤマ エテニルアミド化合物の製造方法
EP0788890A1 (en) 1996-02-06 1997-08-13 Agfa-Gevaert N.V. Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording
CA2206201A1 (en) 1996-05-29 1997-11-29 Yoshiaki Isobe Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use
ES2208935T3 (es) 1996-08-01 2004-06-16 Merckle Gmbh Acidos acil-pirrol-dicarboxilicos y acidos acil-indol-dicarboxilicos, asi como sus derivados como inhibidores de la fosfolipasa a2 citosolica.
ES2239393T3 (es) * 1997-05-07 2005-09-16 Sugen, Inc. Derivados de 2-indolinona utilizados como moduladores de la actividad de la proteina-quinasa.
US6133305A (en) 1997-09-26 2000-10-17 Sugen, Inc. 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity
CA2314156C (en) * 1998-05-29 2010-05-25 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US6462072B1 (en) 1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives
CN1526448A (zh) 1998-12-14 2004-09-08 ���ռ�ҩ��ɷ����޹�˾ 用于治疗***直肠病的药物和方法
TR200101860T2 (tr) * 1998-12-17 2001-12-21 F.Hoffmann-La Roche Ag Sikline bağlı kinaz inhibitörleri olarak 4-alkenil (ve alkinil) oksidoller
US6284894B1 (en) 1998-12-18 2001-09-04 Nycomed Imaging As Preparation of allylic aromatic compounds
AU760964B2 (en) * 1998-12-31 2003-05-22 Sugen, Inc. 3-heteroarylidenyl-2-indolinone compounds for modulating protein kinase activityand for use in cancer chemotherapy
JP5336686B2 (ja) * 1999-11-24 2013-11-06 スージェン， インク． 遊離酸または遊離塩基としてイオン化可能な医薬品のための処方
MXPA02006263A (es) * 1999-12-22 2004-02-26 Sugen Inc Metodos de modulacion de la funcion de la cinasa de tirosina c-kit de la proteina con compuestos de indolinona.
AR034118A1 (es) * 2000-02-15 2004-02-04 Sugen Inc Compuestos de 2-indolinonas sustituidas con pirroles inhibidoras de proteinquinasas; sus composiciones farmaceuticas e intermediarios de sintesis
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
CA2414468A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
EP1349852A2 (en) * 2000-12-20 2003-10-08 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones

Also Published As

Publication number Publication date
DK1255752T3 (da) 2007-11-26
HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
DE122010000004I1 (de) 2010-04-15
KR100713960B1 (ko) 2007-05-02
HRP20020751B1 (en) 2011-01-31
NO20023831L (no) 2002-10-15
YU61402A (sh) 2005-07-19
CN1439005A (zh) 2003-08-27
ATE369359T1 (de) 2007-08-15
CR20120007A (es) 2012-02-24
BRPI0117360A2 (pt) 2012-01-24
HRP20020751A2 (en) 2004-12-31
NO2010002I1 (no) 2010-03-08
EA005996B1 (ru) 2005-08-25
BG107078A (bg) 2003-04-30
NO2019005I1 (no) 2019-02-11
DE60129794T2 (de) 2007-12-06
TWI306860B (en) 2009-03-01
PE20011083A1 (es) 2001-10-26
SK13262002A3 (sk) 2003-03-04
JP2003523340A (ja) 2003-08-05
LTPA2008002I1 (lt) 2019-02-25
ME00415B (me) 2011-10-10
CA2399358C (en) 2006-03-21
UA73976C2 (uk) 2005-10-17
LU91407I9 (cs) 2018-12-28
KR20030003229A (ko) 2003-01-09
NL300332I1 (nl) 2008-03-03
NO20023831D0 (no) 2002-08-13
BRPI0117360B1 (pt) 2018-11-13
CA2399358A1 (en) 2001-08-23
MXPA02008021A (es) 2004-04-05
LU91657I2 (fr) 2010-05-03
NO325532B1 (no) 2008-06-09
EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
NO2008019I2 (no) 2011-10-17
AU2001239770B2 (en) 2006-01-05
CR20120009A (es) 2012-02-07
IL151127A0 (en) 2003-04-10
LTC1255752I2 (lt) 2019-08-26
AU3977001A (en) 2001-08-27
JP3663382B2 (ja) 2005-06-22
MY130363A (en) 2007-06-29
NO2010002I2 (no) 2010-12-06
NL300332I2 (nl) 2008-04-01
US20050176802A1 (en) 2005-08-11
LU91407I2 (fr) 2008-03-10
HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
NO2008019I1 (no) 2009-01-12
US7572924B2 (en) 2009-08-11
BRPI0108394B8 (pt) 2021-05-25
SI1255752T1 (sl) 2007-12-31
RS50444B (sr) 2010-03-02
WO2001060814A2 (en) 2001-08-23
BRPI0117360B8 (pt) 2021-07-06
HU228979B1 (en) 2013-07-29
US7125905B2 (en) 2006-10-24
EP1255752A2 (en) 2002-11-13
FR08C0002I1 (cs) 2008-03-21
PT1255752E (pt) 2007-10-17
CZ303705B6 (cs) 2013-03-27
US20020156292A1 (en) 2002-10-24
ES2290117T3 (es) 2008-02-16
CN1329390C (zh) 2007-08-01
NL300430I1 (nl) 2010-03-01
HK1051188A1 (en) 2003-07-25
CY2008004I1 (el) 2009-11-04
DE60129794D1 (de) 2007-09-20
IS2491B (is) 2009-01-15
AR034118A1 (es) 2004-02-04
PL211834B1 (pl) 2012-06-29
BG65764B1 (bg) 2009-10-30
NL300430I2 (nl) 2010-04-01
BR0108394A (pt) 2004-06-22
BE2010C009I2 (cs) 2020-01-30
CY2010004I1 (el) 2012-01-25
US20070010569A1 (en) 2007-01-11
BRPI0108394B1 (pt) 2018-12-11
WO2001060814A3 (en) 2002-01-24
US20040063773A1 (en) 2004-04-01
CY2010004I2 (el) 2012-01-25
DE122008000002I1 (de) 2008-04-17
CY1108032T1 (el) 2011-04-06
FR08C0002I2 (fr) 2009-01-02
EP1255752B1 (en) 2007-08-08
IS6501A (is) 2002-08-13
CY2008004I2 (el) 2009-11-04
SK287142B6 (sk) 2010-01-07
NZ520640A (en) 2005-04-29
PL361209A1 (en) 2004-09-20
CO5280092A1 (es) 2003-05-30
US6573293B2 (en) 2003-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6573293B2 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
KR100884858B1 (ko) 단백질 키나제 억제제로서의3-(4-아미도피롤-2-일메틸리덴)-2-인돌리논 유도체
AU2001239770A1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
AU2002247133A1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
US6797725B2 (en) Prodrugs of a 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
EP1299355A2 (en) (2-oxindol-3-ylidenyl)acetic acid derivatives and their use as protein kinase inhibitors