KR20030003229A - 피롤 치환 2-인돌리논 단백질 인산화 효소 저해제 - Google Patents

피롤 치환 2-인돌리논 단백질 인산화 효소 저해제 Download PDF

Info

Publication number
KR20030003229A
KR20030003229A KR1020027010706A KR20027010706A KR20030003229A KR 20030003229 A KR20030003229 A KR 20030003229A KR 1020027010706 A KR1020027010706 A KR 1020027010706A KR 20027010706 A KR20027010706 A KR 20027010706A KR 20030003229 A KR20030003229 A KR 20030003229A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
hydrogen
group
compound
salt
alkyl
Prior art date
Application number
KR1020027010706A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100713960B1 (ko
Inventor
펭 조 탕
토드 밀러
시아오이얀 리
리 선
청 첸 웨이
샤자드 쉬라지안
콩신 리앙
토마스 보즈코프스키
에스. 네마탈라 아사드
마이클 홀리
Original Assignee
수젠, 인크.
파마시아 앤드 업존 캄파니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27391578&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20030003229(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 수젠, 인크., 파마시아 앤드 업존 캄파니 filed Critical 수젠, 인크.
Publication of KR20030003229A publication Critical patent/KR20030003229A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100713960B1 publication Critical patent/KR100713960B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Abstract

본 발명은 단백질 인산화 효소의 활동도를 조절함으로써, 암과 같은 세포 질환에 관련된 단백질 인산화 효소의 치료와 예방에 유용할 것으로 예상되어지는 피롤 치환 2-인돌리논 화합물과 그들의 약학적으로 수용가능한 염에 대한 것이다.

Description

피롤 치환 2-인돌리논 단백질 인산화 효소 저해제{Pyrrole Substituted 2-Indolinone Protein Kinase Inhibitors}
기술의 설명(State of the Art)
이하의 내용은 단순한 배경 기술로서 제공되는 것이며, 본 발명의 선행기술은 아니다.
단백질 인산화 효소는 단백질의 티로신, 세린 및 트레오닌 잔기의 히드록시기를 인산화하는 촉매 효소들이다. 겉보기에는 간단한 이러한 작용에 따른 효과는 매우 대단하다; 세포의 성장, 분화 및 증식, 즉, 사실상 세포 일생의 모든 측면들이 하나의 경로 또는 또 다른 경로를 통하여 단백질 인산화 효소의 작용에 의하여 좌우된다. 또한, 비정상적인 단백질 인산화 효소의 활성은 건선과 같이 상대적으로 생명에 지장이 없는 질병에서부터 교아세포종(뇌종양)과 같은 치명적인 질병에 이르는 다수의 질병들에 관여한다.
단백질 인산화 효소는 단백질 티로신 인산화 효소와 세린-트레오닌 인산화 효소의 두 가지 종류로 구분된다.
단백질 인산화 효소의 주요 작용의 하나는 성장인자 수용체에 관여하는 것이다. 성장인자 수용체는 세포 표면 단백질이다. 성장인자 수용체는 성장인자 리간드에 결합되는 경우, 세포막의 내면 단백질과 상호 작용을 하는 활성 상태로 전환된다. 이는 수용체 및 기타 다른 단백질의 티로신 잔기를 인산화시키며, 세포분열, 세포 분화, 세포 성장 또는 세포의 미세 환경에 대한 대사 효과의 발현 등과 같은 수많은 세포 반응을 순차적으로 일으키는 다양한 세포질 신호 전달 물질들과의 세포내 복합체의 형성을 유도한다. 이에 대한 보다 상세한 사항은, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 도면을 포함한 내용 전부가 참고자료로 인용되고 있는 뉴런(Neuron)지 1992년판 제9호 303에서 309페이지에 실린 슈레싱거(Schlessinger)와 율리히(Ullrich)의 논문의 내용에 설명되어 있다.
단백질 인산화 효소의 작용을 갖는 성장인자 수용체들은 수용체 티로신 인산화 효소라고 알려져 있다. 이들은 다양한 생물 활성을 갖는 거대한 군의 막 투과성 수용체들을 포함한다. 현재까지는 최소한 19가지의 수용체 티로신 인산화 효소의 특이 아군들이 규명되어 있다. 이들의 예를 들면, "HER" 수용체 티로신 인산화 효소라고 구분된 아군이 있으며, 이는 상피 성장인자 수용체(EGFR), HER2, HER3 그리고 HER4를 포함한다. 이러한 수용체 티로신 인산화 효소는 세포외 당이 결합된 리간드 결합 부위, 막 투과 부위 및 세포 내에서 단백질의 티로신 잔기를 인산화시키는 반응의 세포질 촉매로 작용하는 부위로 이루어진다.
또 다른 수용체 단백질 티로신 인산화 효소의 아군은 인슐린 수용체(IR), 인슐린 유사 성장 인자 I 수용체(IGF-IR) 및 인슐린 수용체 관련 수용체(IRR)로 이루어져 있다. 인슐린 수용체 및 인슐린 유사 성장 인자 I 수용체는 인슐린, 인슐린 유사 성장 인자 I 및 인슐린 유사 성장 인자 II와 상호 작용하여 하나의 이형 사중합체를 형성한다. 이 사중합체는, 당이 결합되어 완전히 세포외부에 위치하는 2개의 α아단위와, 티로신 인산화 효소 부위가 포함되고 세포막을 가로지르는 2개의 β아단위로 이루어져 있다.
세번째의 수용체 단백질 티로신 인산화 효소 아군은 혈소판 유래 성장인자 수용체("PDGFR")군을 의미한다. 이 군에는 혈소판 유래 성장 인자 수용체 α, 혈소판 유래 성장 인자 수용체 β, 콜로니 강화인자-I 수용체(CSFIR, colony-stimulating factor I receptor), 씨-키트(c-kit) 및 씨-에프엠에스(c-fms)가 포함된다. 이러한 수용체들은 다양한 면역 글로빈 유사 고리로 당이 결합된 세포의 부위들과 티로신 인산화 효소 부위가 인산화 효소와 관계가 없는 아미노산 서열들로 중간 중간에 끊어져 있는 구조로 이루어진 하나의 세포내 부위로 이루어져 있다.
또 다른 아군은, 태아 간 인산화 효소("flk") 수용체 아군으로, 이 아군은 혈소판 유래 성장 인자 수용체 아군과 유사하여 혈소판 유래 성장 인자 수용체 아군에 포함시키기도 한다. 이 아군은 인산화 효소 삽입 부위-수용체 태아 간 인산화 효소 1(KDR/FLK-1, VEGF-R2), flk-1R, flk-4 및 fms 유사 티로신 인산화 효소-1(fit-1)으로 이루어져 있다.
티로신 인산화 효소 성장 인자 수용체 군의 또 다른 구성원은 섬유 아세포 성장 인자("FGF") 수용체 군이 있다. 상기 섬유 아세포 성장 인자 수용체 군은 섬유 아세포 성장 인자 수용체 1 내지 4의 네 개의 수용체와 섬유 아세포 성장 인자 1 내지 7의 일곱 개의 리간드로 이루어져 있다. 아직 확실하게 밝혀진 것은 아니지만, 이 수용체들은 다양한 개수의 면역글로빈-유사 고리들을 가지면서 당이 결합되어 있는 세포외 부위 한 개와, 티로신 인산화 효소 서열이 이 서열과 관계 없는 아미노산 서열로 중간 중간에 끊겨져 있는 구조의 세포 내 부위 한 개로 이루어져 있는 것으로 보인다.
또한, 티로신 인산화 효소 성장 인자 수용체 군의 또 다른 구성원으로 혈관 내피 성장 인자("VEGF") 수용체 아군이 있다. 혈관 내피 성장 인자는 혈소판 유래 성장인자와 유사한 2량체 당단백질이지만, 생체 내에서 상이한 생물학적 작용 및 표적 세포 선택성을 나타낸다. 상세하게는, 혈관 내피 성장 인자는 현재 혈관 신생(angiogenesis) 및 혈관 형성(vasculogenesis)에 중요한 역할을 담당하는 것으로생각된다.
현재 알려져 있는 수용체 단백질 티로신 인산화 효소 아군들에 대한 조금 더 완전한 목록은 플라와먼 등의디엔 앤 피의 1994년판 제7(6)호의 334 내지 339페이지에(Plaowman et al.,DN&P7(6):334-339(1994) 기재되어 있다. 이 문헌은 완전한 도면을 포함하여 본 명세서에 전문이 인용된다.
수용체 티로신 단백질 인산화 효소 이외에도, "비 수용체 티로신 인산화 효소" 또는 "세포질 티로신 단백질 인산화 효소"라 불리는, 완전히 세포 내에 존재하는 티로신 인산화 효소들로 이루어진 군도 존재한다. 본 명세서에서는 "세포질 티로신 단백질 인산화 효소"는 이하 "CTK"라 약칭한다. 세포질 티로신 단백질 인산화 효소는 세포 외 부위와 세포막 관통 부위를 포함하고 있지 않다. 현재까지 11아군(Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap, Fes, Fps, Fak, Jak 및 Ack) 중에서 24개 이상의 세포질 티로신 인산화 효소가 동정되어 왔다. Src 아군은 현재 세포질 티로신 인산화 효소 중 가장 큰 군을 형성하고 있는 것으로 보이며, 이 아군에는 Src, Tes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr 및 Trk가 포함되어 있다. 세포질 티로신 인산화 효소에 대한 좀 더 자세한 내용은 볼렌 옹코진 1993년 제8호의 2025 내지 2031페이지(Bolen, Oncogene, 8:2025-2031(1993))에 기재되어 있다. 이 문헌은 완전한 도면을 포함하여 본 명세서에 전문이 인용된다.
소수의 세린/트레오닌 인산화 효소의 형태를 갖는 수용체 인산화 효소가 존재한다고 하더라도, 세린/트레오닌 인산화 효소(STK)들은 세포질 티로신 인산화 효소들과 마찬가지로 대부분 세포 내에 존재한다. 세린/트레오닌 인산화 효소는 세포질 인산화 효소들; 즉, 세포질 소기관이나 세포 골격이 아닌 세포질에서 작용하는 인산화 효소들 중 가장 흔한 형태이다. 세포질은 세포 내에서 일어나는 대사 활동과 생합성 활동의 중간 단계 중 많은 부분이 이루어지는 지역이다; 예를 들면, 리보솜에 의하여 단백질이 합성되는 곳도 세포질이다.
수용체 티로신 인산화 효소, 세포질 티로신 인산화 효소 및 세린/트레오닌 인산화 효소는 특히 암을 포함하는 많은 질병과 관련되어 있다. 단백질 인산화 효소와 관련되어 있는 다른 질병으로는 건선, 간경화, 당뇨, 혈관 형성이상, 혈관신생, 협착증, 안과 질환들, 류머티스 관절염과 기타 염증성 질환, 자가 면역 질환과 같은 면역 질환, 동맥 경화증과 같은 심혈관계 질환 및 다양한 신장질환들이 있다.
암과 관련된 내용에서 볼 때, 종양의 성장을 일으키는 과도한 세포 증식을 설명하기 위하여 제출된 가설들 중, 두 개의 주요한 가설이 단백질 인산 효소에 의하여 조절되는 것으로 알려진 작용과 관련되어 있다. 즉, 악성 세포 성장은 세포 분열 및/또는 세포 분화를 조절하는 기작의 붕괴로부터 일어난다는 것이다. 몇 가지의 원시 종양 유전자들의 단백질 산물이 세포 성장과 분화를 조절하는 신호 전달 경로에 관련되어 있다는 것이 밝혀져 있다. 이들 원시 종양 유전자에서 발현된 단백질에는 이상에서 논의된 세포외 성장인자, 세포관통 성장인자 단백질 티로신 인산화 효소 수용체(RTK), 세포질 단백질 티로신 인산화 효소(CTK) 및 세포질 세린/트레오닌 인산화 효소(STK)들이 포함되어 있다.
단백질 인산화 효소와 관련된 세포 활동과 인간의 다양한 종류의 질환들 사이에 나타나는 명백한 연관성을 볼 때, 단백질 인산화 효소의 활성 조절 방법을 규명하기 위하여 많은 노력이 경주되고 있음은 전혀 놀라운 일이 아니다. 이러한 노력들 중의 몇몇은 실제 세포 과정에 관련된 분자를 모방한 고분자들을 사용하는 생물학적 모방 시도(biomimetic approaches)와 관련되어 있다(예를 들면, 변이 리간드(미합중국 특허출원 제4,966,849호); 수용성 수용체 및 항체들(App. No. WO 94/10202, Kendall and Thomas,Proc. Nat'l Acad. Sci., 90:10705-09(1994), Kim, et al.,Nature, 362:841-844(1993)); 알엔에이 리간즈(RNA ligands)(Jelinek, et al.,Biochemistry, 33:10450-56); Takano, et al.,Mol. Biol. Cell4:358A(1993); Kinsella, et al.,Exp. Cell Res. 199:56-62(1992); Wright, et al.,J. Cellular Phys., 152:448-57) 및 티로신 인산화 효소 억제제(WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; 미합중국 특허 제5,330,992호; Mariani, et al,Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 35:2268(1994)).
상기한 바와 함께, 단백질 인산화 효소 억제제로 작용하는 저분자 물질들을 규명하기 위한 시도들이 있었다. 예를 들면, 비스-모노사이클릭, 바이사이클릭 및 헤테로사이클릭 아릴 화합물들(PCT WO 92/20642), 비닐렌아자인돌 유도체들(PCT WO 94/14808) 및 1-사이클로프로필-4-피리딜퀴놀론(미합중국 특허 제5,330,992호)이 티로신 인산화 효소 억제제로 설명되었다. 스티릴 화합물들(미합중국 특허 제5,217,999호), 스티릴-치환 피리딜 화합물들(미합중국 특허 제5,302,606호), 퀴나졸린 유도체들(유럽 특허출원 제0 566 266 A1호), 셀레나인돌 및 셀레나이드(PCT WO 94/03427), 트리사이클릭 폴리히드록실릭 화합물들(PCT WO 92/21660) 및 벤질포스포닉 산 화합물들(PCT WO 91/15495)이 모두 암 치료에 유용한 단백질 티로신 인산화 효소 억제제로서 기재되어 있다.
상호 참조 정보(CROSS-REFERENCE INFORMATION)
본 출원은 2000년 2월 15일에 출원된 미합중국 가출원 제60/182,710호, 2000년 7월 6일에 출원된 제60/216,422호, 2000년 10월 27일에 출원된 제60/243,532호 및 상기 출원들에서 참조문헌으로 인용된 개시 내용에 대하여 35 U.S.C. 119(e)에 따른 우선권을 주장한다.
발명의 배경(BACKGROUND OF THE INVENTION)
본 발명이 속하는 기술분야(Field of Invention)
본 발명은 단백질 인산화 효소(PKs)의 활성을 조절하는 특정한 3-피롤 치환 2-인돌리논 화합물에 관한 것이다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 비정상적인 단백질 인산화 효소 활성과 관련된 질환의 치료에 유용하다. 이러한 화합물을 포함하는 약학 조성물, 이러한 화합물을 포함하는 약학 조성물을 이용하여 질병을 치료하는 방법 및 이러한 약학 조성물의 제조방법이 개시된다.
발명의 요약(SUMMARY OF INVENTION)
본 발명은 단백질 인산화 효소 조절 능력이 있어서 비정상적인 단백질 인산화 효소 활성과 관련된 질환을 치료하는 데 유용한, 특정한 3-피롤 치환 2-인돌리논 화합물들에 대한 것이다.
따라서, 한쪽 측면에서, 본 발명은 화학식(I)을 갖는 3-피롤 치환 2-인돌리논들:
상기 화학식에서:
R1은 수소, 할로, 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알리사이클릭, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, (CH2)rR16및 -C(O)NR8R9로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R2는 수소, 할로, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, 시아노, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, 아릴, 헤테로아릴, -S(O)2NR13R14및 -SO2R20(여기에서 R20은 알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아르알킬을 말한다)로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R3은 수소, 할로겐, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, 아릴, 헤테로아릴, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, -NR13C(O)OR14및 -SO2R20(여기에서 R20은 알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아르알킬)로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R4는 수소, 할로겐, 알킬, 히드록시, 알콕시 및 -NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R5는 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6은 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R17및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다; 또는
R6과 R7은 R5, R6또는 R7중 적어도 하나가 -C(O)R10이라는 조건 하에서; 결합하여 -(CH2)4-. -(CH2)5- 및 -(CH2)6-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 군을 형성할 수 있다;
R8및 R9는 수소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다;
R10은 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, -N(R11)(CH2)nR12및 NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R11은 수소 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R12는 -NR13R14, 히드록시, -C(O)R15, 아릴, 헤테로아릴, -N+(O-)R13R14, -N(OH)R13및 -NHC(O)Ra(여기에서 Ra는 치환되지 아니한 알킬, 할로알킬 또는 아르알킬을 말한다)로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R13및 R14는 수소, 알킬, 시아노알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다; 또는
R13및 R14는 결합하여 헤테로사이클릭기를 형성할 수 있다;
R15는 수소, 히드록시, 알콕시 및 아릴옥시로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R16은 히드록시, -C(O)R15, -NR13R14및 -C(O)NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R17은 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R20은 알킬, 아릴, 아르알킬 또는 헤테로아릴을 의미한다; 그리고 n과 r은 각각 1,2,3 또는 4를 의미한다; 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다.
바람직하게는, R1은 수소, 할로, 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알리사이클릭, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, (CH2)rR16및 -C(O)NR8R9로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R2는 수소, 할로, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, 아릴, 헤테로아릴 및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R3은 수소, 할로겐, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, 아릴, 헤테로아릴, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14및 -NR13C(O)OR14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R4는 수소, 할로겐, 알킬, 히드록시, 알콕시 및 -NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R5는 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6은 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R17및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6과 R7은 R5, R6또는 R7중 적어도 하나가 -C(O)R10이라는 조건 하에서; 결합하여 -(CH2)4-. -(CH2)5- 및 -(CH2)6-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 군을 형성할 수 있다;
R8및 R9는 수소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다;
R10은 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, -N(R11)(CH2)nR12및 NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R11은 수소 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R12는 -NR13R14, 히드록시, -C(O)R15, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R13및 R14는 수소, 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다;
R13및 R14는 결합하여 -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- 및 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 군을 형성할 수 있다;
R15는 수소, 히드록시, 알콕시 및 아릴옥시로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R16은 히드록시, -C(O)R15, -NR13R14및 -C(O)NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R17은 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다; 그리고 n과 r은 각각 1,2,3 또는 4를 의미한다; 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 의미한다.
두번째 측면에서 본 발명은 화학식 (I)을 갖는 하나 또는 그 이상의 화합물(들)을 함유하는 약학 조성물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 부형제에 관한 것이다.
세번째 측면에서, 본 발명은 생물, 특히 인간에서, 비정상적인 활성을 나타내는 단백질 인산화 효소, 보다 상세하게는, 수용체 티로신 인산화 효소(RTKs), 비 수용체 단백질 티로신 인산화 효소(CTKs) 및 세린/트레오닌 단백질 인산화 효소(STKs)을 매개로 하는 질환들을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 화학식(I)을 갖는 화합물을 함유하는 약학 조성물을 상기 생물에 투여하는 방법을 포함한다. 이러한 질환들은 예를 들면, 암, 당뇨병, 간경화증, 동맥경화증과 같은 심혈관계 질환, 혈관신생, 자가면역질환과 같은 면역 질환 및 신장 질환을 포함하지만, 이에한정되지는 아니한다.
네번째 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 이용하여 시험관 내 또는 생체 내에서 수행될 수 있는, 단백질 인산화 효소, 보다 상세하게는, 수용체 티로신 인산화 효소(RTKs), 비 수용체 단백질 티로신 인산화 효소(CTKs) 및 세린/트레오닌 단백질 인산화 효소(STKs)의 촉매 활성을 조절하는 방법에 대한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명의 화합물에 의하여 촉매 활성이 조절되는 수용체 단백질 인산화 효소는 EGF, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1R, IRR, PDGFRα, PDGFRβ, CSFIR, C-Kit, C-fms, Flk-1R, Flk4, KDR/FLk-1, Flt-1, FGFR-1R, FGFR-2R, FGFR-3R 및 FGFR-4R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 화합물에 의하여 촉매 활성이 조절되는 세포질 티로신 인산화 효소는 Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr 및 Yrk로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 화합물에 의하여 촉매 활성이 조절되는 세린-트레오닌 단백질 인산화 효소는 CDK2와 Raf로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다섯번째 측면에서, 본 발명은 비정상적인 단백질 인산화 효소 활성을 매개로 하는 질환의 치료에 유용한 약제의 조제시 화학식(I)을 갖는 화합물의 사용에 대한 것이다.
여섯번째 측면에서, 본 발명은 화학식 (II)를 갖는 중간 생성물에 대한 것이다:
상기 화학식에서:
R5는 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6은 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R17및 -C(O)R10으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6과 R7은 R5, R6또는 R7중 적어도 하나가 -C(O)R10이라는 조건 하에서; 결합하여 -(CH2)4-. -(CH2)5- 및 -(CH2)6-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 군을 형성할 수 있다;
R10은 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, -N(R11)(CH2)nR12및 NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R11은 수소 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R12는 -NR13R14, 히드록시, -C(O)R15, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R13및 R14는 수소, 알킬, 시아노알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다;
R13및 R14는 결합하여 헤테로사이클로기를 형성할 수 있다;
R15는 수소, 히드록시, 알콕시 및 아릴옥시로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R17은 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다; 그리고 n과 r은 각각 1,2,3 또는 4를 의미한다.
바람직하게는, 화학식 II를 갖는 화합물에서, R5또는 R6는 C(O)R10이다;
R6은 수소 및 알킬, 보다 바람직하게는 수소 또는 메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R5는 수소 및 알킬, 보다 바람직하게는 R6이 COR10인 경우 수소 또는 메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6은 수소 및 알킬, 보다 바람직하게는 R5가 COR10인 경우 수소 또는 메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R7은 수소, 알킬, 아릴, 보다 바람직하게는 수소, 메틸 또는 페닐로 이루어진군으로부터 선택된다;
R10은 히드록시, 알콕시, -N(R11)(CH2)nR12및 NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R11은 수소 및 알킬, 보다 바람직하게는 수소 또는 메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R12는 -NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R13및 R14는 수소 또는 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다; 또는
R13및 R14는 결합하여 헤테로사이클로기를 형성할 수 있다; 그리고 n과 r은 각각 1,2,3 또는 4를 의미한다.
상기 바람직한 기들 내에서, 중간 생성 화합물의 보다 바람직한 기들은 R5, R6, R11, R12, R13또는 R14가 각각 이하, "바람직한 실시예들"의 제목을 갖는 단락에서 기술된 기들인 경우에 그것들이다.
일곱번째 측면에서, 본 발명은 화학식(I)를 갖는 화합물을 조제하는 방법에 대한 것이다.
마지막으로, 본 발명은 또한 단백질 인산화 효소가 발현된 세포를 본 발명의 화합물 또는 염과 접촉하고 상기 세포에 미치는 영향을 모니터링함으로써 단백질인산화 효소의 촉매 활성을 조절하는 화학적 화합물을 동정하는 것에 대한 것이다.
발명의 상세한 설명(DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION)
정의 규정(Definitions)
본 명세서와 청구항에서 사용되는 하기의 용어들은 다른 언급이 없는 경우 다음과 같은 의미를 갖는다:
"알킬"은 탄소수 1 내지 20의 직쇄 및 분지쇄기들을 포함하는 포화된 지방족 탄화수소 라디칼을 말한다(수치 범위; 예를 들어, "1-20"이 여기에서 언급될 때는 알킬기가 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자들, 3개의 탄소 원자들 등 20개의 탄소 원자들 이하로 포함할 수 있을 때 그 기를 의미한다). 1 내지 4개의 탄소 원자를 포함하는 알킬기들을 저급 알킬기(lower alkyl groups)라고 한다. 상기 저급 알킬기에 치환기가 없을 때, 이들을 비치환(unsubstituted) 저급 알킬기라고 한다. 보다 바람직하게는, 알킬기는 1 내지 10개의 탄소 원자, 예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 2-프로필, n-부틸, iso-부틸, tert-부틸, 펜틸 등을 갖는 중간 크기 알킬기이다. 가장 바람직하게는, 알킬기는 1 내지 4개의 탄소 원자, 예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필, 2-프로필, n-부틸, iso-부틸 또는 tert-부틸 등을 갖는 저급 알킬기이다. 알킬기는 치환되거나 치환되지 아니할 수 있다. 알킬기가 치환될 때, 치환기는 할로, 히드록시, 비치환 저급 알콕시, 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상의 기들, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 아릴, 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상의 기들, 보다 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 아릴옥시, 고리 내에 1 내지 3개의 질소 원소를 갖고 고리 내의 탄소들이 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 6-원소 헤테로아릴, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 내지 3개의 헤테로원소들을 갖고 상기 군에서 탄소와 질소 원자가 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 5-원소 헤테로아릴, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 내지 3개의 헤테로원자들을 갖고 상기 군에서 탄소와 질소가(만약 존재한다면) 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 5- 또는 6-원소 헤테로알리사이클릭기, 머캅토, (비치환 저급 알킬)치오, 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 아릴치오, 시아노, 아실, 치오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-치오카바밀, N-치오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- 및 -NR18R19로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 또는 그 이상, 보다 바람직하게는 1개 내지 3개 , 더욱 더 바람직하게는 1개 또는 2개의 치환기인데, 여기에서 R18및 R19는 독립적으로 수소, 비치환 저급 알킬, 트리할로메틸, 비치환 (C3-C6)시클로알킬, 비치환 저급 알케닐, 비치환 저급 알키닐 및 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 아릴이다.
바람직하게는, 알킬기는 히드록시, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 내지 3개의 헤테로원자들을 갖고 상기 군에서 탄소 및 질소가(만약 존재한다면) 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 5- 또는 6-원소 헤테로알리시클릭기, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 내지 3개의 헤테로원자들을 갖고 상기 군에서 탄소 및 질소 원자가 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 5-원소 헤테로아릴, 고리 내에 1 내지 3개의 질소 원소를 갖고 고리 내의 탄소들이 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 6-원소 헤테로아릴 또는 -NR18R19로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 치환되는데, 여기에서 R18및 R19는 수소, 비치환 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 더욱 더 바람직하게는 알킬기는 각각 독립적으로 히드록시, 디메틸아미노, 에틸아미노, 디에틸아미노, 디프로필아미노, 피롤리디노, 피페리디노, 모르폴리노, 피페라지노, 4-저급 알킬피페라지노, 페닐, 이미다졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 옥사졸릴, 트리아지닐 등인 1개 또는 2개의 치환기로 치환된다.
"시클로알킬"은 고리의 하나 또는 그이상이 하나 또는 그 이상의 이중 결합을 포함할 수 있지만, 고리들 중 어떤 것도 완전한 공핵 파이-전자 시스템을 갖지 아니하는, 3개 내지 8개의 원소를 갖는 모든 원소가 탄소인 모노사이클릭 고리, 모든 원소가 탄소인 5-원소/6-원소 또는 6-원소/6-원소 융합 바이사이클릭 고리 또는 멀티사이클릭 융합 고리기("융합" 고리 시스템은 시스템 내의 각 고리가 시스템 내의 고리와 서로 탄소 원자들의 인접한 쌍을 공유하고 있는 것을 의미한다)를 말한다.
시클로알킬기의 예로 시클로프로판, 시클로부탄, 시클로펜탄, 시클로펜텐, 시클로헥산, 시클로헥사디엔, 아다만탄, 시클로헵탄, 시클로헵타트리엔 등을 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 시클로알킬기는 치환되거나 치환되지 아니할 수 있다. 시클로알킬기가 치환될 때, 치환기는 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 할로, 히드록시, 비치환 저급 알콕시, 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상의 기들, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 기들로 선택적으로 치환된 아릴옥시, 고리 내에 1 내지 3개의 질소 원소를 갖고 고리 내의 탄소들이 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1개 또는 2개의 기로 선택적으로 치환된 6-원소 헤테로아릴, 질소, 산소 및 황으로 이루어진군으로부터 선택된 1개 내지 3개의 헤테로원소들을 갖고 상기 군에서 탄소와 질소 원자가 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상, 바람직하게는 1개 또는 2개의 기로 선택적으로 치환된 5-원소 헤테로아릴, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 내지 3개의 헤테로원자들을 갖고 상기 군에서 탄소와 질소가(만약 존재한다면) 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1개 또는 2개의 기로 선택적으로 치환된 5- 또는 6-원소 헤테로알리사이클릭기, 머캅토, (비치환 저급 알킬)치오, 각각 독립적으로 할로, 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 비치환 저급 알콕시기인 하나 또는 그이상, 바람직하게는 1개 또는 2개의 기로 선택적으로 치환된 아릴치오, 시아노, 아실, 치오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-치오카바밀, N-치오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, 이상에서 정의한 바와 같은 R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- 및 -NR18R19로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 또는 그 이상, 보다 바람직하게는 1개 또는 2개의 치환기이다.
"알케닐"은 여기에서 정의된 바와 같이, 적어도 두개의 탄소완자와 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합으로 이루어진 저급 알킬기를 말한다. 대표적인 예들로는 에테닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-, 2- 또는 3-부테닐 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"알키닐"은 여기에서 정의된 바와 같이, 적어도 두개의 탄소원자와 적어도하나의 탄소-탄소 삼중 결합으로 이루어진 저급 알킬기를 말한다. 대표적인 예들로는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-, 2- 또는 3-부티닐 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"아릴"은 완전한 공핵 파이-전자 시스템을 이루는 1개 내지 12개의 탄소원자로 이루어진, 원소가 모두 탄소로 이루어진 모노사이클릭 또는 융합-고리 폴리사이클릭(즉, 탄소 원자의 인접한 쌍을 공유하는 고리들)기들을 말한다. 아릴기의 예들로는 페닐, 나프탈레닐 및 안트라씨닐이 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 아릴기는 치환되거나 치환되지 아니할 수 있다. 아릴기가 치환될 때, 치환기는 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 할로, 히드록시, 비치환 저급 알콕시, 머캅토, (비치환 저급 알킬)치오, 시아노, 아실, 치오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-치오카바밀, N-치오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, 이상에서 정의한 바와 같은 R18및 R19를 갖는 R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- 및 -NR18R19로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 또는 그 이상, 보다 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개, 더욱 더 바람직하게는 1개 또는 2개의 치환기이다. 바람직하게는, 아릴기는 할로, 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 히드록시, 머캅토, 시아노, N-아미도, 모노 또는 디알킬아미노, 카르복시 또는 N-설폰아미도로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.
"헤테로아릴"은 N, O 또는 S로부터 선택된 1개, 2개 또는 3개의 고리 헤테로원자와 나머지 고리 원자로는 탄소를 갖고 또한, 완전한 공핵 파이-전자 시스템을갖는 5개 내지 12개의 고리 원자를 갖는 모노사이클릭 또는 융합 고리(즉, 원자의 인접 쌍을 공유하는 고리)를 말한다. 비치환 헤테로아릴기의 예들로는 피롤, 퓨란, 치오펜, 이미다졸, 옥사졸, 치아졸, 피라졸, 피리딘, 피리미딘, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퓨린 및 카바졸이 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 헤테로아릴기는 치환되거나 치환되지 아니할 수 있다. 헤테로아릴기가 치환될 때, 치환기는 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 할로, 히드록시, 비치환 저급 알콕시, 머캅토, (비치환 저급 알킬)치오, 시아노, 아실, 치오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-치오카바밀, N-치오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, 이상에서 정의한 바와 같은 R18및 R19를 갖는 R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- 및 -NR18R19로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 또는 그 이상, 보다 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개, 더욱 더 바람직하게는 1개 또는 2개의 치환기이다. 바람직하게는, 헤테로아릴기는 할로, 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 히드록시, 머캅토, 시아노, N-아미도, 모노 또는 디알킬아미노, 카르복시 또는 N-설폰아미도로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.
"헤테로알리사이클릭"은 1개 또는 2개의 고리 원자가 N, O 또는 S(O)n(n은 0 내지 2의 정수)로부터 선택된 헤테로원자이고 나머지 고리 원자는 탄소인, 고리(들)내에 5개 내지 9개의 고리 원자를 갖는, 모노사이클릭 또는 융합 고리기를 말한다. 또한, 상기 고리들은 하나 또는 그 이상의 이중 결합을 가질 수 있다. 그러나, 이러한 고리들은 완전한 공핵 파이-전자 시스템을 이루지는 아니한다. 비치환 헤테로알리사이클릭기의 예들로는 피롤리디노, 피페리디노, 피페라지노, 모르폴리노, 치오모르폴리노, 호모피페라지노 등이 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 헤테로알리사이클릭기는 치환되거나 치환되지 아니할 수 있다. 헤테로알리사이클릭기가 치환될 때, 치환기는 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 할로, 히드록시, 비치환 저급 알콕시, 머캅토, (비치환 저급 알킬)치오, 시아노, 아실, 치오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-치오카바밀, N-치오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, 이상에서 정의한 바와 같은 R18및 R19를 갖는 R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- 및 -NR18R19로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 또는 그 이상, 보다 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개, 더욱 더 바람직하게는 1개 또는 2개의 치환기이다.
바람직하게는, 헤테로알리사이클릭기는 할로, 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 히드록시, 머캅토, 시아노, N-아미도, 모노 또는 디알킬아미노, 카르복시 또는 N-설폰아미도로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.
"헤테로사이클"은 고리 원자들 중 1개 또는 2개의 고리 원자가 N, O 또는 S(O)n(n은 0 내지 2의 정수)로부터 선택된 헤테로원자이고 나머지 고리 원자는 탄소인데 1개 또는 2개의 탄소 원자가 선택적으로 카르보닐기로 대체될 수 있는, 3개 내지 8개의 고리 원자를 갖는, 포화 사이클릭 라디칼을 의미한다. 헤테로사이클릴고리는 선택적으로 치환된 저급 알킬(카르복시 또는 에스테르로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 치환된), 할로알킬, 시아노알킬, 할로, 니트로, 시아노, 히드록시, 알콕시, 아미노, 모노알킬아미노, 디알킬아미노, 아르알킬, 헤테로아르알킬, -COR(R은 알킬) 또는 COOR(R은 수소 또는 알킬)로부터 선택된 독립적인 1개, 2개 또는 3개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다. 보다 구체적으로는, 헤테로사이클릴이라는 용어는 테트라히드로피라닐, 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란, 피페리디노, N-메틸피페리딘-3-일, 피페라지노, N-메틸피롤리딘-3-일, 3-피롤리디노, 모르폴리노, 치오모르폴리노, 치오모르폴리노-1-옥사이드, 치오모르폴리노-1,1-디옥사이드, 4-에틸옥시카르보닐피페라지노, 3-옥소피페라지노, 2-이미다졸리돈, 2-피롤리디논, 2-옥소호모피페라지노, 테트라히드로피리미딘-2-온 및 이들의 유도체들을 포함하지만 이에 한정되지는 아니한다. 바람직하게는, 헤테로사이클릴기는 할로, 비치환 저급 알킬, 카르복시, 에스테르 히드록시, 모노 또는 디알킬아미노로 치환된 저급 알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.
"히드록시" 는 -OH기를 말한다.
"알콕시"는 -O-(비치환 알킬)과 -O-(비치환 사이클로알킬)기 모두를 말한다. 대표적인 예들로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 사이클로프로필옥시, 사이클로부틸옥시, 사이클로펜틸옥시, 사이클로헥실옥시 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"아릴옥시"는 여기에서 정의된 바에 따르면, -O-아릴과 -O-헤테로아릴기 모두를 말한다. 대표적인 예들로는 페녹시, 피리딜옥시, 퓨라닐옥시, 치에닐옥시, 피리미디닐옥시, 피라지닐옥시 등과 이들의 유도체들을 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"머캅토"는 -SH기를 말한다.
"알킬치오"는 -S-(비치환 알킬)과 -S-(비치환 사이클로알킬)기 모두를 말한다. 대표적인 예들로는 메틸치오, 에틸치오, 프로필치오, 부틸치오, 사이클로프로필치오, 사이클로부틸치오, 사이클로펜틸치오, 사이클로헥실치오등을 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"아릴치오"는 여기에서 정의된 바에 따르면, -S-아릴과 -S-헤테로아릴기 모두를 말한다. 대표적인 예들로는 페닐치오, 피리디닐치오, 퓨라닐치오, 치에닐치오, 피리미디닐치오 등과 이들의 유도체를 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"아실"은 -C(O)-R"기를 말하는데, R"는 수소, 비치환 저급 알킬, 트리할로메틸, 비치환 사이클로알킬, 비치환 저급 알킬, 트리할로메틸, 비치환 저급 알콕시, 할로 및 -NR18R19기들로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 치환기들로 선택적으로 치환된 아릴, 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 비치환 저급 알콕시, 할로 및 -NR18R19기들로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 치환기들로 선택적으로 치환된 헤테로아릴(고리 탄소를 통하여 결합된) 및 비치환 저급 알킬, 트리할로알킬, 비치환 저급 알콕시, 할로 및 -NR18R19기들로 이루어진 군으로부터 선택된 하나또는 그이상, 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개의 치환기들로 선택적으로 치환된 헤테로알리사이클릭(고리 탄소를 통하여 결합된)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 대표적인 아실기들로는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"알데히드"는 R"가 수소인 아실기를 말한다.
"치오아실"은 여기에서 정의된 R"를 갖는 -C(S)R"기를 말한다.
"에스테르"는 R"가 수소인 경우를 제외하고 여기에서 정의된 R"를 갖는 -C(O)OR"기를 말한다.
"아세틸"기는 -C(O)CH3기를 말한다.
"할로"기는 플루오린, 클로린, 브로민 또는 요오딘을 말하며, 바람직하게는 플루오린 또는 클로린이다.
"트리할로메틸"기는 여기에서 정의된 바에 따르면, X가 할로기인 -CX3기를 말한다.
"트리할로메탄설포닐"기는 이상에서 정의된 바와 같은 X를 갖는 X3CS(=O2)-기를 말한다.
"시아노"는 -C≡N기를 말한다.
"메틸렌디옥시"는 두개의 산소 원자가 인접한 탄소 원자에 결합되어 있는 -OCH2O-기를 말한다.
"에틸렌디옥시"기는 두개의 산소 원자가 인접한 탄소 원자에 결합되어 있는-OCH2CH2O-를 말한다.
"S-설폰아미도"는 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 -S(O)2NR18R19기를 말한다.
"N-설폰아미도"는 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 -NR18S(O)2NR19기를 말한다.
"O-카바밀"기는 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 -OC(O)NR18R19기를 말한다.
"N-카바밀"은 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 R18OC(O)NR19-기를 말한다.
"O-치오카바밀"은 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 -OC(S)NR18R19기를 말한다.
"N-치오카바밀"은 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 R18OC(S)NR19-기를 말한다.
"아미노"는 R18및 R19가 모두 수소인 -NR18R19기를 말한다.
"C-아미도"는 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 -C(O)NR18R19기를 말한다.
"N-아미도"는 여기에서 정의된 바와 같은 R18및 R19를 갖는 R18C(O)NR19-기를 말한다.
"니트로"는 -NO2기를 말한다.
"할로알킬"은 예를 들면, -CH2Cl, -CF3, -CH2CCl3등과 같이, 하나 또는 그 이상의 동일 또는 상이한 할로 원자들로 치환된 이상에서 정의된 바와 같은 비치환 알킬, 바람직하게는 비치환 저급 알킬을 의미한다.
"아르알킬"은 예를 들면, CH2페닐, -(CH2)2페닐, -(CH2)3페닐, CH3CH(CH3)CH2페닐 등과 이들의 유도체와 같이, 이상에서 정의된 바와 같은 아릴기로 치환된 이상에서 정의된 바와 같은 비치환 알킬, 바람직하게는 비치환 저급 알킬을 의미한다.
"헤테로아르알킬"기는 예를 들면, CH2피리디닐, -(CH2)2피리미디닐, -(CH2)3이미다졸릴 등과 이들의 유도체와 같이, 헤테로아릴기로 치환된 이상에서 정의된 바와 같은 비치환 알킬, 바람직하게는 비치환 저급 알킬을 의미한다.
"모노알킬아미노"는 예를 들면, 메틸아미노, (1-메틸에틸)아미노, 사이클로헥실아미노 등과 같이, R이 이상에서 정의된 바와 같은 비치환 알킬, 바람직하게는 비치환 시클로알킬기인 라디칼 -NHR을 의미한다.
"디알킬아미노"는 예를 들면, 디메틸아미노, 디에틸아미노, (1-메틸에틸)-에틸아미노, 사이클로헥실메틸아미노, 사이클로펜틸메틸아미노등과 같이, 각 R이 독립적으로 이상에서 정의된 바와 같은 비치환 알킬 또는 비치환 사이클로알킬기인라디칼 -NRR을 의미한다.
"시아노알킬"은 1개 또는 2개의 시아노기로 치환된, 이상에서 정의된 바와 같은 비치환 알킬, 바람직하게는 비치환 저급 알킬을 의미한다.
"선택적인" 또는 "선택적으로"는 이어서 설명되는 사건 또는 상황이 반드시 발생할 필요는 없고, 상기 설명이 그 사건 또는 상황이 발생하는 경우와 발생하지 아니하는 경우를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들면, "알킬기로 선택적으로 치환된 헤테로사이클기"는 알킬이 반드시 존재할 필요는 없고, 상기 기재가 헤테로사이클기가 알킬기로 치환되는 경우와 헤테로사이클기가 알킬기로 치환되지 아니하는 경우를 포함하는 것을 의미한다.
"2-인돌리논", "인돌린-2-온" 및 "2-옥스인돌"이라는 용어는 여기에서 다음의 화학 구조를 갖는 분자를 지칭하는 것으로써 서로 교환하여 사용될 수 있다:
"피롤"이라는 용어는 다음의 화학 구조를 갖는 분자를 지칭한다:
"피롤 치환 2-인돌리논" 및 "3-피롤리데닐-2-인돌리논"은 여기에서 화힉식(I)의 일반 구조를 갖는 화학적 화합물을 지칭하는 것으로써 서로 교환하여 사용될 수 있다.
동일한 분자식을 갖지만, 속성 또는 원자들의 결합 순서 또는 원자들의 공간 배치가 다른 화합물들을 "이성질체"라고 한다. 원자들의 공간 배치가 다른 이성질체를 "입체이성질체"라고 한다. 서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 "디아스테레오머(diastereomers)"라고 하며, 서로 포개질 수 없는 거울상인 입체이성질체를 "에난티오머(enantiomers)"라고 한다. 화합물이 비대칭 중심을 갖는 경우, 예를 들면, 4개의 상이한 기들과 결합된 경우, 한 쌍의 에난티오머가 가능하다. 에난티오머는 그것의 비대칭 중심의 완전한 공간 배열에 의해 그 특징을 나타낼 수 있으며, 칸 및 프리로그(Cahn and Prelog)의 R- 및 S-순서 법칙 또는 분자가 편광면을 회전시켜서 우회전성 또는 좌회전성(즉, 각각 (+) 또는 (-)-이성질체)으로 나타나는 방식에 의하여 설명된다. 키랄(chiral)화합물은 각각의 에난티오머 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 상기 에난티오머들을 동일 비율로 함유하는 혼합물을 "라세믹 혼합물(racemic mixture)"이라 한다.
본 발명의 화합물은 하나 또는 그 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있다; 그러므로, 이러한 화합물들은 각각 (R)- 또는 (S)-입체이성질체 또는 이들의 혼합물로 생산될 수 있다. 예를 들면, 화학식(I)을 갖는 화합물에서 R6치환기가 2-히드록시에틸인 경우, 히드록시기가 결합된 탄소는 비대칭 중심이 되고, 따라서 화학식 (I)을 갖는 화합물은 (R)- 또는 (S)-입체이성질체로 존재할 수 있다. 달리 지시된 바가 없는 경우, 본 명세서와 청구항들에서 특정 화합물의 설명 또는 명칭은 각각의 에난티오머와 이들의 라세믹 또는 다른 비율의 혼합물을 포함하는 것으로 의도된다. 입체이성질체의 입체화학의 결정 및 분리를 위한 방법은 종래의 기술로 널리 알려져 있다("Advanced Organic Chemistry"의 제4장 참조, 제4판, J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992).
화학식(I)을 갖는 화합물은 토토머리즘(tautomerism) 현상 및 구조적 이성화현상을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 여기에서 설명된 화합물들은 2-인돌리논 부분을 피롤 부분에 연결하는 이중결합에 대하여 E 또는 Z 공간 배열을 취하거나, 이들이 E 및 Z의 혼합물일 수 있다. 본 발명은 수용체 티로신 인산화 효소(RTK), 비 수용체 단백질 티로신 인산화 효소(CTK) 및/또는 세린/트레오닌 단백질 인산화 효소(STK) 활성의 조절 능력을 갖는 모든 토토메릭 또는 구조적 이성질체의 형태 및 이들의 혼합물들을 포함하고, 어떤 하나의 토토메릭 또는 구조적 이성질체의 형태에 한정되지 아니한다.
"약학 조성물(pharmaceutical composition)"은 생리학적/약학적으로 허용가능한 운반체 및 부형제와 같은 다른 화학 성분과 함께, 여기에서 설명된 화합물 또는 생리학적/약학적으로 허용가능한 염들 또는 이들의 전구약물의 하나 또는 그 이상의 혼합물을 말한다. 약학 조성물의 목적은 화합물을 생물체에 용이하게 투여하는 것이다.
또한, 화학식(I)을 갖는 화합물은 전구약물으로 작용할 수 있다. "전구약물"은 체내에서 모 약물(parent drug)로 전환되는 물질을 말한다. 전구약물은 몇 가지 경우 모 약물보다 투여하기가 쉽기 때문에, 종종 유용하다. 예를 들면, 모 약물이 경구 투여시 생체이용가능(bioavailable)하지 아니하더라도, 전구약물은 경구 투여시 생체이용가능할 수 있다. 또한, 전구약물은 약학 조성물에서 모 약물보다 개선된 용해도를 나타낼 수 있다. 전구약물의 예로는, 수용성이 이동에 방해가 되는 세포막의 통과를 용이하게 하기 위하여 에스테르("전구약물")로 투여된 다음, 수용성이 유용한 세포 내에서는 대사에 의하여 활성부분인 카르복실 산으로 가수분해되는 본 발명의 화합물을 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다.
전구약물의 또 다른 예는 체내에서 가수분해 또는 대사에 의하여 활성 분자를 방출하는, 말단 아미노기에 의하여 본 발명에 따른 화합물의 카르복시기에 결합한, 예를 들어, 2 내지 10개의 아미노산을 갖는 짧은 폴리펩티드를 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 화학식(I)을 갖는 화합물의 전구약물은 본 발명의 범위에 속한다.
또한, 화학식(I)을 갖는 화합물이 인간과 같은 생물체 내에서 효소에 의하여 대사되어 단백질 인산화 효소의 활성을 조절할 수 있는 대사산물을 생성하는 경우도 생각해 볼 수 있다. 이러한 대사산물은 본 발명의 범위에 속한다.
여기에서 사용되는 바에 따르면, "생리적/약학적으로 허용가능한 운반체"는 생물에 유의성있는 자극을 야기하지 아니하고 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 제거하지 아니하는 운반체 또는 희석제를 말한다.
"생리적/약학적으로 허용가능한 부형제"는 화합물의 투여를 보다 용이하게하기 위하여 첨가되는 안정한 물질을 말한다. 부형제의 예로는 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당 및 전분 종류들, 셀룰로스 유도체들, 젤라틴, 식물성 기름 및 폴리에틸렌 글리콜을 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다.
여기에서 사용되는 바에 따르면, "약학적으로 허용가능한 염"은 모 화합물의 생물학적 유효성 및 특성이 유지된 이들의 염을 말한다. 이러한 염들은 다음을 포함한다:
(1) 모 약물의 자유 염기를 염산, 브롬화수소산, 질산, 인산, 황산, 과염소산 등과 같은 무기산 또는 아세트산, 옥살산, (D) 또는 (L) 말산, 말레산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산, 타타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산 등과 같은 유기산, 바람직하게는 염산 또는 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디에틸아미노에틸)아미드의 L-말레이트 염과 같은 (L)-말산과 반응시켜 얻은 산 첨가 염; 또는
(2) 모 약물에 존재하는 산성 전자가 금속 이온, 예를 들면, 알칼리 금속 이온, 알칼리 토금속 이온(alkaline earth ion) 또는 알루미늄 이온으로 대체되거나; 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민 등과 같은 유기 염기와 배위결합을 함으로써 형성되는 염.
"단백질 인산화 효소(PK)"는 수용체 단백질 티로신 인산화 효소(RTKs), 비 수용체 또는 "세포질(cellular)" 티로신 인산화 효소(CTKs) 및 세린-트레오닌 인산화 효소(STKs)를 말한다.
'방법'이란 어떤 과제를 완수하기 위한 방식, 수단, 기술, 그리고 절차를의미하며, 여기에는 (기술된 것으로한정하는 것은 아님) 화학, 제약, 생물학, 생화학, 그리고 의학에 종사하는 사람들에게 알려져 있거나 또는 이 종사자들이 알려진 방식, 수단, 기술, 그리고 절차로부터 쉽게 개발해 낼 수 있는 방식, 수단, 기술, 그리고 절차가 포함된다.
"조절(modulation)" 또는 "조절하는 것(modulating)"은 수용체 단백질 티로신 인산화 효소, 비수용체 티로신 인산화 효소 및 세린-트레오닌 인산화 효소의 촉매 활성의 변화를 말한다. 보다 상세하게는, 조절하는 것은 수용체 단백질 티로신 인산화 효소, 비수용체 티로신 인산화 효소 및 세린-트레오닌 인산화 효소가 노출되는 화합물 또는 염의 농도에 따른, 수용체 단백질 티로신 인산화 효소, 비수용체 티로신 인산화 효소 및 세린-트레오닌 인산화 효소의 촉매 활성의 활성화, 바람직하게는 수용체 단백질 티로신 인산화 효소, 비수용체 티로신 인산화 효소 및 세린-트레오닌 인산화 효소의 활성화 또는 억제, 보다 바람직하게는 수용체 단백질 티로신 인산화 효소, 비수용체 티로신 인산화 효소 및 세린-트레오닌 인산화 효소들의 촉매 활성의 억제를 말한다.
"촉매 활성"은 수용체 단백질 티로신 인산화 효소, 비수용체 티로신 인산화 효소의 직접 또는 간접적인 영향 하에서의 티로신의 인산화 또는 세린-트레오닌 인산화 효소의 직접 또는 간접적인 영향 하에서의 세린 및 트레오닌의 인산화 비율을 말한다.
"접촉(contacting)"은 본 발명의 화합물과 표적 단백질 인산화 효소가 함께, 화합물이 인산화 효소 자체와 상호작용하여 직접적으로, 또는 인산화 효소의 촉매활성에 영향을 미치는 다른 분자와 상호작용하여 간접적으로 단백질 인산화 효소의 촉매 활성에 영향을 미칠 수 있는 상태가 되도록 하는 것이다. 이러한 "접촉"은 "시험관 내(in vitro)" 즉, 시험관(test tube), 페트리 디쉬(petri dish) 등에서 이루어질 수 있다. 시험관에서, 접촉은 단지 화합물과 관계된 단백질 인산화 효소만 을 포함하거나 전체 세포들을 포함할 수 있다. 또한, 세포들은 세포 배양 접시에서 유지 또는 성장되고 그러한 환경에서 화합물과 접촉될 수 있다. 이와 관련하여, 특정 화합물이 단백질 인산화 효소 관련 질환에 영향을 미치는 능력, 즉, 이하 정의된 화합물의 IC50이 보다 복합적인 생물체 내에서 상기 화합물들을 사용하고자 하기 전에 측정될 수 있다. 생물체 밖의 세포에서, 단백질 인산화 효소를 상기 화합물들과 접촉시키기 위한 다수의 방법들이 존재하며, 당업자에게 잘 알려져 있는데, 직접적인 세포 미세주입 및 다수의 막통과 담체 기술을 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"시험관 내에서(in vitro)"라 함은 인공적인 환경에서 수행되는 절차를 말하며, 시험관 또는 배양 배지의 예를 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"생체 내에서(in vivo)"라 함은 생물체 내에서 수행되는 절차를 말하며, 마우스, 래트 또는 래빗의 예를 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다.
"단백질 인산화 효소 관련 질환", "단백질 인산화 효소 유도 질환" 및 "비정상적인 단백질 인산화 효소 활성"은 모두 단백질 인산화 효소의 촉매 활성이 부적절한, 즉, 보통보다 강하거나 약한 것을 특징으로 하는 경우를 말하며, 특정 단백질 인산화 효소는 수용체 단백질 티로신 인산화 효소, 비수용체 티로신 인산화 효소 또는 세린-트레오닌 인산화 효소일 수 있다. 부적절한 촉매 활성은 다음의 결과 중 하나를 일으킬 수 있다: (1) 정상적으로는 단백질 인산화 효소가 발현되지 아니하는 세포에서의 단백질 인산화 효소 발현, (2) 바람직하지 아니한 세포 증식, 분화 및/또는 성장을 야기하는 증가된 단백질 인산화 효소의 발현, 또는 (3) 세포 증식, 분화 및/또는 성장의 바람직하지 아니한 감소를 야기하는 감소된 단백질 인산화 효소의 발현. 단백질 인산화 효소의 활성 과잉은 특정 단백질 인산화 효소를 암호하는 유전자의 증폭 또는 세포 증식, 분화 및/또는 성장 질환과 연관될 수 있는 단백질 인산화 효소 수준의 생산을 말한다(즉, 단백질 인산화 효소의 수준이 증가될수록, 하나 또는 그 이상의 세포성 질환의 증상이 심해진다). 물론, 반대로 활성 부족은 단백질 인산화 효소의 활성 수준이 감소할수록 하나 또는 그이상의 세포성 질환의 증상이 심해지는 경우를 말한다.
"치료하다(treat)", "치료하는 것(treating)" 및 "치료(treatment)"는 단백질 인산화 효소가 매개하는 세포성 질환 또는 이에 수반되는 증상들을 경감 또는 제거하는 방법을 말한다. 특히 암에 대하여, 이러한 용어들은 단지 암에 걸린 개체의 생존율을 증가시키거나 질병의 하나 또는 그 이상의 증상들을 감소시키는 것을 의미한다.
"생물체(Organism)"는 적어도 하나 이상의 세포로 이루어진 모든 살아있는 것을 의미한다. 살아 있는 생물체는 예를 들면, 진핵 단세포 정도로 간단한 것 또는 인간을 포함한 포유동물 정도로 복잡한 것일 수 있다.
"치료 유효량(Therapeutically effective amount)"은 치료되는 질환의 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도까지 경감시키는 투여 화합물의 양을 말한다. 암의 치료에 대하여는, 치료 유효량은 다음의 효과를 갖는 양을 말한다:
(1) 종양의 크기 감소;
(2) 종양의 전이 억제(즉, 어느 정도까지 늦추거나, 바람직하게는 중단시키는 것);
(3) 종양의 성장을 어느 정도까지 억제(즉, 어느 정도까지 늦추거나, 바람직하게는 중단시키는 것); 및/또는
(4) 암과 관련된 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도까지 경감(또는, 바람직하게는 제거).
"모니터링(Monitoring)"은 화합물이 특정 단백질 인산화 효소를 발현하고 있는 세포와 접촉한 효과를 관찰 또는 감지하는 것을 의미한다. 관찰 또는 감지된 효과는 세포 형질의 변화, 단백질 인산화 효소의 촉매 활성의 변화 또는 단백질 인산화 효소와 자연적인 결합 상대와의 상호 작용의 변화일 수 있다. 이러한 효과를 관찰 또는 감지하기 위한 기술들이 당해 기술분야에 널리 알려져 있다.
이상에서 언급한 효과는 본 발명의 마지막 측면에서, 세포 형질 변화의 변화 또는 부재, 상기한 단백질 인산화 효소가 갖는 촉매 활성 변화의 변화 또는 부재 또는 상기 단백질 인산화 효소와 자연적인 결합 상대와의 상호작용 변화의 변화 또는 부재로부터 선택된다.
'세포 형질'이란 세포나 조직 또는 세포나 조직의 생물학적인 기능의 겉으로드러난 형태를 뜻한다. 세포형질의 예를 들면(이것으로 한정하는 것은 아님), 세포의 크기, 세포의 성장, 세포의 증식, 세포의 분화, 세포의 생존, 세포고사(apoptosis), 그리고 영양분의 섭취와 사용이 있다. 이런 형질적 특징은 이 기술분야에서 잘 알려진 기술들을 사용하여측정할 수 있다.
'자연적인 결합대상'이란 세포에서 특정한 단백질 인산화효소와 결합하는 폴리펩타이드를 의미한다. 자연적인 결합대상은 단백질 인산화효소에 의해 매개되는 신호전달과정에서 신호를 전파시키는 역할을 할 수 있다. 자연적인 결합대상과단백질 인산화효소의 상호작용의 변화는 단백질 인산화효소/자연적인 결합대상 복합체의 농도의 증가 또는 감소로 나타날수도 있고, 그 결과로 그 단백질 인산화효소가 신호전달을 매개하는 능력이 관찰 가능하게 변화하는 것으로 나타날 수도 있다.
본 발명의 대표적인 화합물들을 하기의 표 1에 도시하였다.
표 1
화합물의 번호는 실시예 부분의 실시예 번호에 대응한다. 즉, 표 1의 화합물1의 합성은 실시예 1에 설명되어 있다. 표 1에 제시된 화합물은 단지 예시일 뿐, 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되지 아니한다.
바람직한 실시예들(PREFFERED EMBODIMENTS)
발명의 요약에서 가장 광범위한 정의가 제시되었지만, 이하 제시된 화학식(I)을 갖는 특정 화합물들이 바람직하다.
(1) 화학식 (I)을 갖는 화합물의 바람직한 군은 R1, R3및 R4가 수소인 것이다.
(2) 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R1, R2및 R4가 수소인 것이다.
(3) 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R1, R2및 R3이 수소인 것이다.
(4) 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R2, R3및 R4가 수소인 것이다.
(5) 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R1, R2, R3및 R4가 수소인 것이다.
(6) 또한, 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R5, R6또는 R7, 바람직하게는 R5또는 R6, 보다 바람직하게는 R6이 -COR10인데, 여기에서 R10은 -NR11(CH2)nR12인 것이다:
R11은 수소 또는 저급 비치환 알킬, 바람직하게는 수소 또는 메틸이다;
n은 2, 3 또는 4, 바람직하게는 2 또는 3이다; 그리고
R12는 -NR13R14인데, 여기에서 R13및 R14는 독립적으로 알킬, 보다 바람직하게는 저급 비치환 알킬이거나 R13및 R14가 결합하여 -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- 또는 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-을 형성하며, 바람직하게는 R13및 R14는 독립적으로 수소, 메틸, 에틸이거나 결합하여 모르폴린-4-일, 피롤리딘-1-일, 피페라진-1-일 또는 4-메틸피페라진-1-일을 형성한다.
보다 바람직하게는, 상기한 (6)에서 R5또는 R6은 N-(2-디메틸아미노에틸-)아미노카보닐, N-(2-에틸아미노에틸)-N-메틸아미노카보닐, N-(3-디메틸아미노프로필)-아미노카보닐, N-(2-디에틸아미노에틸)아미노카보닐, N-(3-에틸아미노프로필)아미노카보닐, N-(3-디에틸아미노프로필)아미노카보닐, 3-피롤리딘-1일-프로필아미노카보닐, 3-모르폴린-4-일프로필-아미노카보닐, 2-피롤리딘-1-일에틸아미노카보닐, 2-모르폴린-4-일에틸아미노카보닐, 2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸아미노카보닐, 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로필아미노카보닐, 2-(3,5-디메틸피페라진-1-일)에틸아미노카보닐 또는 2-(3,5-디메틸피페라진-1-일)프로필아미노카보닐이고, 더욱 더 바람직하게는 N-(2-디에틸-아미노에틸)아미노카보닐 또는 N-(2-에틸아미노에틸)아미노-카보닐이다.
(7) 또한, 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R5, R6또는 R7, 바람직하게는 R5또는 R6, 보다 바람직하게는 R6이 -COR10인 것으로, R10은 -NR13R14이며, 여기에서 R13은 수소이고 R14는 알킬, 바람직하게는 히드록시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알리사이클릭 또는 카르복시로 치환된 저급 알킬, 보다 바람직하게는 히드록시, 아릴, 피페리딘, 피페라진, 모르폴린 등과 같은 헤테로알리사이클릭메틸, 헤테로아릴 또는 카르복시로 치환된 에틸, 프로필 또는 부틸이다. 상기한 (7)에서 더욱 더 바람직하게는, R5또는 R6이 2-에톡시카보닐메틸-아미노카보닐, 카르복시메틸아미노-카보닐, 3-히드록시프로필-아미노카보닐- 2-히드록시에틸아미노카보닐, 3-트리아진-1-일프로필아미노-카보닐, 트리아진-1-일에틸아미노카보닐, 4-히드록시-페닐에틸아미노카보닐, 3-이미다졸-1-일프로필-아미노카보닐, 피리딘-4-일메틸아미노카보닐, 2-피리딘-2-일에틸아미노카보닐 또는 2-이미다졸-1-일에틸아미노카보닐이다.
(8) 또한, 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R5, R6또는 R7, 바람직하게는 R5또는 R6, 보다 바람직하게는 R6이 -COR10이고, 여기에서 R10이 -NR11(CH2)nR12인 것으로:
R11은 수소 또는 알킬, 바람직하게는 수소 또는 메틸이다;
n은 2, 3 또는 4, 바람직하게는 2 또는 3이다; 그리고
R12는 -NR13R14이며, R13및 R14는 함께 결합하여 카보닐기와 1 또는 2개의 질소 원자를 포함하는 헤테로사이클, 바람직하게는 5, 6 또는 7원소 헤테로사이클을 형성한다. 바람직하게는, R5또는 R6은 2-(3-에톡시카보닐메틸피페라진-1-일)에틸아미노카보닐, 2-(3-옥소피페라진-1-일)에틸아미노카보닐, 2-(이미다졸리딘-1-일-2-온)에틸아미노카보닐, 2-(테트라히드로피리미딘-1-일-2-온)에틸아미노카보닐, 2-(2-옥소피롤리딘-1-일)-에틸아미노카보닐, 3-(4-메틸피페라진-1-일)-프로필아미노카보닐, 3-(3-에톡시카보닐메틸피페라진-1-일)-프로필아미노카보닐, 3-(3-옥소피페라진-1-일)프로필-아미노카보닐, 3-(이미다졸리딘-1-일-2-온)프로필-아미노카보닐, 3-(테트라히드로피리미딘-1-일-2-온)-프로필아미노카보닐, 3-(2-옥소피롤리딘-1-일)프로필-아미노카보닐, 2-(2-옥소호모피페리딘-1-일)에틸아미노-카보닐 또는 3-(2-옥소호모피페리딘-1-일)프로필아미노카보닐이다.
(9) 또한, 화학식(I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R5, R6또는 R7, 바람직하게는 R5또는 R6, 보다 바람직하게는 R6이 -COR10인 것으로:
(a) R10이 -NR11(CH2)nR12이고:
R11이 수소 또는 알킬, 바람직하게는 수소 또는 메틸이다;
n은 2, 3 또는 4, 바람직하게는 2 또는 3이다; 그리고
R12는 -NR13R14이고, 여기에서 R13은 수소이며 R14는 시아노알킬 또는 -NHCORa(Ra는 알킬)이다; 또는
(b) R10은 -NR13R14이고, 여기에서 R13및 R14는 함께 결합하여 고리 내에 카보닐기를 함유하지 아니하는 헤테로사이클을 형성한다. 바람직하게는, R5또는 R6은 2-(2-시아노에틸아미노)에틸아미노카보닐, 3-(아세틸아미노)-에틸아미노카보닐, 모르폴리노카보닐, 피페리딘-1-일-카보닐, 2-시아노메틸아미노에틸아미노카보닐 또는 피페리딘-1-일카보닐이다.
(10) 화학식(I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R5가 -COR10(R10은 -NR13R14)으로, 여기에서 R13은 수소이고 R14는 히드록시로 치환된 저급 알킬, 히드록시알킬아미노, 카르복시 또는 -NR18R19로 치환된 저급 알킬(R18및 R19는 독립적으로 수소 또는 저급 비치환 알킬)이며, 보다 바람직하게는 R5가 2-[(디에틸아미노)-2-히드록시에틸]아미노카보닐, 2-(N-에틸-N-2-히드록시에틸아미노)에틸아미노카보닐, 카르복시메틸아미노-카보닐 또는 2-(2-히드록시에틸아미노)에틸아미노-카보닐인 것이다.
(11) 또한, 화학식(I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R6이 -COR10(R10은 -NR13R14)으로, 여기에서 R13은 수소이고 R14는 히드록시로 치환된 저급 알킬, 히드록시알킬아미노, 카르복시 또는 -NR18R19로 치환된 저급 알킬(R18및 R19는 독립적으로 수소 또는 저급 비치환 알킬)이며, 보다 바람직하게는 R6이 2-[(디에틸아미노)-2-히드록시]에틸아미노카보닐, 2-(N-에틸-N-2-히드록시에틸-아미노)에틸아미노카보닐, 카르복시메틸아미노카보닐 또는 2-(2-히드록시에틸아미노)에틸아미노-카보닐인 것이다.
(12) 또한, 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R5가 -COR10(R10은 -NR11(CH2)nR12)으로, 여기에서 R12는 -N+(O-)-NR13R14또는 -N(OH)R13이고 R13및 R14는 독립적으로 수소 및 비치환 저급 알킬로 이루어진 군에서 선택된 것이며, 바람직하게는, R5가 2-(N-히드록시-N-에틸아미노)-에틸아미노카보닐 또는 2-[N+(O-)(C2H5)2]에틸-아미노카보닐인 것이다.
(13) 또한, 화학식 (I)을 갖는 화합물의 또 다른 바람직한 군은 R6가 -COR10(R10은 -NR11(CH2)nR12)으로, 여기에서 R12는 -N+(O-)-NR13R14또는 -N(OH)R13이고 R13및 R14는 독립적으로 수소 및 비치환 저급 알킬로 이루어진 군에서 선택된 것이며, 바람직하게는, R5가 2-(N-히드록시-N-에틸아미노)-에틸아미노카보닐 또는 2-[N+(O-)(C2H5)2]에틸-아미노카보닐인 것이다.
(14) 상기한 바람직한 군 (6) 내지 (13)에서 R5가 -COR10이면, 화합물의 보다 바람직한 군은:
R6가 수소 및 알킬, 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 터트-부틸, 이소부틸 또는 n-부틸, 보다 바람직하게는 수소 또는 메틸로 이루어진 군에서 선택된다; 그리고
R7이 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군에서 선택되는데, R17이 히드록시, 알킬 또는 아릴, 보다 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, n-, 이소 또는 터트-부틸, 페닐, 벤조일, 아세틸 또는 카르복시, 더욱 더 바람직하게는 메틸, 수소 또는 페닐이다.
(15) 상기한 바람직한 군 (6) 내지 (13)에서 R5가 -COR10이면, 화합물의 또 다른 보다 바람직한 군은 R6과 R7이 결합하여 -(CH2)4-를 형성한 것이다.
(16) 상기한 바람직한 군 (6) 내지 (13)에서 R6이 -COR10이면, 화합물의 보다 바람직한 군은:
R5가 수소 및 알킬, 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 터트-부틸, 이소부틸 또는 n-부틸, 보다 바람직하게는 수소 또는 메틸로 이루어진 군에서 선택된다; 그리고
R7이 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군에서 선택되는데, R17이 히드록시, 알킬 또는 아릴, 보다 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, n-, 이소 또는 터트-부틸, 페닐, 벤조일, 아세틸 또는 카르복시, 더욱 더 바람직하게는 메틸, 수소 또는 페닐이다.
(17) 상기한 바람직한 군 및 보다 바람직한 군 (6) 내지 (16)에서, 화합물의 더욱 더 바람직한 군은:
R1이 수소, 알킬, -C(O)NR8R9, 비치환 사이클로알킬 또는 아릴, 바람직하게는 수소, 페닐, 3,4-디메톡시페닐아미노카보닐, 4-메톡시-3-클로로페닐-아미노카보닐, 더욱 더 바람직하게는 수소 또는 메틸, 가장 바람직하게는 수소이다;
R2이 시아노, 수소, 할로, 저급 알콕시, 아릴 또는 -S(O)2NR13R14인데, R13이 수소이고 R14이 수소, 아릴 또는 알킬, 바람직하게는 R2이 수소, 클로로, 브로모, 프루오로, 메톡시, 에톡시, 페닐, 디메틸아미노설포닐, 3-클로로페닐-아미노설포닐, 카르복시, 메톡시, 아미노설포닐, 메틸아미노설포닐, 페닐아미노설포닐, 피리딘-3-일-아미노설포닐, 디메틸아미노설포닐, 이소프로필아미노-설포닐, 더욱 바람직하게는 수소, 플루오로 또는 브로모이다;
R3은 수소, 저급 알콕시, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, 아릴, 바람직하게는 저급 알킬, 할로 또는 저급 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된 아릴 및 헤테로아릴, 바람직하게는 저급 알킬, 할로 또는 저급 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된 헤테로아릴; 바람직하게는 수소, 메톡시, 카르복시, 페닐, 피리딘-3-일, 3,4-디클로로페닐, 2-메톡시-5-이소프로필페닐, 4-n-부틸페닐, 3-이소프로필페닐, 보다 바람직하게는 수소 또는 페닐이다; 그리고
R4이 수소이다.
(18) 화학식(I)을 갖는 화합물의 또 다른 보다 바람직한 군은:
R1이 수소, 알킬, -C(O)NR8R9, 비치환 사이클로알킬 또는 아릴, 바람직하게는 수소, 3,4-디메톡시-페닐-아미노카보닐, 4-메톡시-3-클로로페닐아미노카보닐, 더욱 더 바람직하게는 수소 또는 메틸, 특히 수소이다;
R2은 시아노, 수소, 할로, 저급 알콕시, 아릴 또는 -S(O)2NR13R14(R13은 수소, R14은 수소, 아릴 또는 알킬)이며, 바람직하게는 R2이 수소, 클로로, 브로모, 플루오로, 메톡시, 에톡시, 페닐, 디메틸아미노설포닐, 3-클로로페닐-아미노설포닐, 카르복시, 메톡시, 아미노설포닐, 메틸아미노설포닐, 페닐아미노설포닐, 피리딘-3-일-아미노설포닐, 디메틸아미노설포닐, 이소프로필아미노-설포닐, 보다 마람직하게는 수소, 플루오로 또는 브로모이다;
R3은 수소, 저급 알콕시, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, 아릴, 바람직하게는 저급 알킬, 할로 또는 저급 알콕시, 바람직하게는 저급 알킬, 할로 또는 저급 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된 아릴 및 헤테로아릴, 바람직하게는 저급 알킬, 할로 또는 저급 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된 헤테로아릴; 바람직하게는 수소, 메톡시, 카르복시, 페닐, 피리딘-3-일, 3,4-디클로로페닐, 2-메톡시-5-이소프로필페닐, 4-n-부틸페닐, 3-이소프로필페닐, 보다 바람직하게는 수소 또는 페닐이다; 그리고
R4이 수소이다.
상기한 바람직한 군 (18)에서, 화합물의 보다 바람직한 군은:
R5이 -COR10으로, R10은 발명의 요약에서 정의된 바에 따르며, 바람직하게는발명의 요약에서 정의된 바대로 -NR11(CH2)nR12또는 -NR13R14이다.
R6은 수소 및 알킬, 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, 터트-부틸, 이소부틸 또는 n-부틸, 보다 바람직하게는 수소 또는 메틸이다; 그리고
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군으로부터 선택되는데, R17은 히드록시, 알킬 또는 아릴, 보다 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, n-, 이소 또는 터트-부틸, 페닐, 벤조일, 아세틸 또는 카르복시, 더욱 더 바람직하게는 메틸, 수소 또는 페닐이다.
상기한 바람직한 군 (18)에서, 화합물의 또 다른 보다 바람직한 군은:
R6이 -COR10으로, R10은 발명의 요약에서 정의된 바에 따르며, 바람직하게는 발명의 요약에서 정의된 바대로 -NR11(CH2)nR12또는 -NR13R14이다.
R6은 수소 및 알킬, 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, 터트-부틸, 이소부틸 또는 n-부틸, 보다 바람직하게는 수소 또는 메틸이다; 그리고
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군으로부터 선택되는데, R17은 히드록시, 알킬 또는 아릴, 보다 바람직하게는 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, n-, 이소 또는 터트-부틸, 페닐, 벤조일, 아세틸 또는 카르복시, 더욱 더 바람직하게는 메틸, 수소 또는 페닐이다.
(19) 화학식(I)을 갖는 화합물의 또 다른 보다 더 바람직한 군은:
R1및 R4이 수소이다;
R2이 수소, 할로, 저급 알콕시, -C(O)R15및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R3이 수소, 저급 알콕시, -C(O)R15, -S(O)2NR13R14, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R5이 -C(O)R10이다;
R6이 수소 및 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다; 그리고
R7이 수소, 저급 알킬 및 -C(O)R17로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 현재 바람직한 실시예는 (15)에서 설명된 구조를 갖는 화합물에서:
R10이 히드록시, 저급 알콕시 및 -NR11(CH2)nR12로 이루어진 군으로부터 선택되는데,
n은 2 또는 3이다;
R11은 수소 및 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다; 그리고,
R12은 아릴 및 -NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 현재 바람직한 실시예는, 이상의 두 문단에서 설명된 구조를 갖는 화합물에서, R13및 R14가 독립적으로 수소, 저급 알킬 및 결합된 -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- 또는 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-로 이루어진 군으로부터 선택된다.
(20) 본 발명의 또 다른 현재 바람직한 실시예는:
R1이 수소, 저급 알킬, -(CH2)rR16및 -C(O)NR8R9로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R2이 수소, 할로겐, 아릴 및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R3이 수소, 저급 알킬, 저급 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R15로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R4이 수소이다;
R5이 수소 및 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6이 -C(O)R10이다;
R7이 수소, 저급 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R16이 히드록시 및 -C(O)R15로 이루어진 군으로부터 선택된다; 그리고,
r이 2 또는 3인 화합물이다.
본 발명의 현재 바람직한 실시예는 바로 위의 문단에서 설명된 구조를 갖는 화합물로, R3이 저급 알킬, 저급 알콕시 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 기로 선택적으로 치환된 아릴인 화합물이다.
(21) 마찬가지로, 본 발명의 현재 바람직한 실시예는 화합물에서:
R1이 수소, 저급 알킬, -(CH2)rR16및 -C(O)NR8R9으로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R2이 수소, 할로겐, 아릴 및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R3이 수소, 저급 알킬, 저급 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R15로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R4이 수소이다;
R5이 수소 및 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6이 -C(O)R10이다;
R7이 수소, 저급 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R16이 히드록시 및 -C(O)R15로 이루어진 군으로부터 선택된다; 그리고,
r이 2 또는 3이다,
R10이 히드록시, 저급 알콕시, -NR13R14및 -NR11(CH2)nR12로 이루어진 군으로부터 선택되는데, n은 1, 2 또는 3이고, R11은 수소이며, R12는 히드록시, 저급 알콕시, -C(O)R15, 헤테로아릴 및 -NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다.
(22) 본 발명의 또 다른 현재 바람직한 실시예는 바로 위의 문단에서 설명된 구조를 갖는 화합물로서, R13및 R14가 독립적으로 수소, 저급 알킬, 헤테로아릴 및 결합된 -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- 또는 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-로 이루어진 군으로부터 선택된다.
(23) 본 발명의 또 다른 현재 바람직한 실시예는:
R1이 -C(O)NR8R9인데, R8이 수소이고, R9이 할로, 히드록시 및 저급 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 군으로 선택적으로 치환된 아릴이다;
R2이 수소, 할로겐, 아릴 및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R3이 수소, 저급 알킬, 저급 알콕시, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R15로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R4이 수소이다;
R5이 수소 및 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R6이 -C(O)R10이다;
R7이 수소, 저급 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R16이 히드록시 및 -C(O)R15로 이루어진 군으로부터 선택된다; 그리고,
r이 2 또는 3이다,
(24) 또한, 본 발명의 다른 현재 바람직한 실시예는:
R1이 수소 및 저급 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R2이 수소, 할로, 저급 알콕시, 아릴, -C(O)R15및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R3이 수소, 할로, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R15로 이루어진 군으로부터 선택된다;
R4이 수소이다;
R5이 -C(O)R10이다; 그리고,
R6및 R7은 결합하여 -(CH2)4-기를 형성한다.
바로 위의 문단에서 설명된 구조를 갖는 화합물에서, 현재 바람직한 실시예는 R10이 히드록시, 알콕시, -NR13R14및 -NH(CH2)nNR13R14(n은 2 또는 3)로 이루어진군으로부터 선택된 것이다.
본 발명의 현재 바람직한 실시예는 바로 위의 두 문단에서 설명된 구조를 갖는 화합물에서, R13및 R14가 독립적으로 수소, 저급 알킬 및 결합된 -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- 또는 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-로 이루어진 군으로부터 선택된다.
이용(Utility)
본 발명의 화합물에 의해 그 촉매 활성이 조절되는 단백질 인산화효소(PKs)에는 단백질 티로신 인산화효소(수용체 티로신 인산화효소(RTKs)와 세포질 인산화효소(CTKs)의 두가지 형이 포함됨)와 세린/트레오닌 인산화효소가 포함된다. 수용체 티로신 인산화효소에 의해 매개되는 신호 전달은 특정한 성장 인자(리간드)와의 세포외적인 상호 작용에 의해 개시된 후, 수용체의 이량체화가 일어나고, 내부의 단백질 티로신 인산화 효소의 일시적인 촉진과 자기인산화(autophosphorylation)가 일어난다. 이에 의하여, 세포내 신호 전달 분자들을 위한 결합 부위가 만들어지고, 적절한 세포질 반응(예를 들면, 세포 분열, 세포 외부의 미소 환경에의 대사적인 영향등)을 촉진하는 다양한 세포질성 신호 분자들과의 복합체가 형성된다(Schlessinger and Ullrich, 1992, Neuron 9: 303-391 참조).
성장 인자 수용체의 티로신 인산화 부위들은 신호 분자들의 SH2(src 유사)영역을 위한 높은 친화도의 결합 부위로 작용한다는 것이 밝혀져 있다(Fantl et al.,1992,Cell69:413-423, Songyang et al., 1994,Mol. Cell. Biol.14:2777-2785, Songyang et al., 1993,Cell72:767-778, and Koch et al., 1991,Science252:668-678). 수용체 티로신 단백질 인산화효소들과 결합하는 다수의 세포내 기질 단백질들이 밝혀져 있다. 이들은 (1)촉매 부위를 갖는 기질들과 (2)이러한 부위는 없지만 촉매 작용을 활발히 하는 분자들과 결합할 수 있는 어댑터로 작용할 수 있는 부위를 갖는 기질들의 두가지 주요군으로 나눌 수 있다 (Songyang et al., 1993,Cell. 72:767-778). 수용체와 그 기질의 SH2부위간의 상호 작용의 특이성은 인산화되는 티로신 잔기 주변의 아미노산 잔기들에 의해 결정된다. SH2부위들과 특정 수용체들의 인산화된 티로신 잔기들 주위의 아미노산 서열들간의 결합 강도의 차이들은, 이들이 기질을 인산화하는 능력에 관해서 관찰된 차이들과 일치한다(Songyang et al., 1993,Cell. 72:767-778). 이러한 관찰들은, 각 수용체 티로신 인산화효소의 작용이 그 발현 패턴과 리간드의 가용성뿐만 아니라 특정 수용체에 의해 활성화되는 하부 신호 전달 경로들에 의해서도 결정된다는 것을 암시하고 있다. 따라서, 인산화는 분화 인자 수용체들과 함께 특정 성장 인자 수용체들에 의해서도 모집되는 신호 전달 경로들의 선택도를 결정하는 하나의 중요한 조절 단계를 제공한다.
주로 세포질에 존재하는 세린/트레오닌 인산화효소들은, 흔히 단백질 티로신 인산화효소에 의해 일어나는 사건의 하부 반응으로 세포 내부의 생화학적 관계에 영향을 미친다. 세린/트레오닌 인산화효소들은 DNA 합성과 이후의 세포 증식으로 이어지는 유사분열을 개시하는 신호전달 과정에 관여되어 있는 것으로 간주되어 왔다.
따라서, 단백질 인산화효소를 거치는 신호 전달에는 다른 반응들 중에서, 세포 증식, 세포 분화, 세포 성장, 그리고 대사 작용을 일으킨다. 비정상적인 세포 증식은 다양한 종류의 질병과 질환을 일으킬 수 있는데, 여기에는 암종, 육종, 신경교아세포종, 그리고 혈관종과 같은 신형성(neoplasia), 백혈병, 건선, 동맥경화증, 관절염, 그리고 당뇨병성 망막증등과 같은 질병과 조절이 안되는 혈관형성 및/또는 혈관 신생과 관련되어 있는 다른 질병들이 포함된다.
본 발명을 실제에 적용하는 데에는 본 발명의 화합물이 단백질 인산화효소들을 억제하는 기전에 대한 정확한 이해는 필요하지 않다. 그러나, 여기에서 어떤 특정한 기전이나 이론에 얽매여 있지는 않지만, 화합물들은 단백질 인산화효소들의 촉매 부위의 아미노산들과 상호작용하는 것으로 생각된다. 단백질 인산화효소들은 전형적으로 이열편적인 구조를 가지고 있는데, 이 구조 내에서 ATP가 두 개의 열편들 사이에 존재하는 틈의 단백질 인산화효소들 사이에 아미노산 서열이 보존되어 있는 지역에 결합하는 것으로 보인다. 단백질 인산화효소들의 억제제들은 수소결합, 반 데르 발스 결합, 그리고 이온 결합과 같은 비공유결합적인 상호작용을 이용하여 앞서 말한 ATP가 단백질 인산화효소들과 결합하는 데에 사용된 동일한 지역에 결합하는 것으로 생각되고 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 화합물들의 2-인돌리논 성분이 ATP의 아데닌 고리에 의해 보통 점유되는 일반적인 공간에 결합하는 것으로 생각되고 있다. 그렇다면 특정 단백질 인산화효소에 대한 특정 분자의 특이성은, 그 단백질 인산화효소에 특이적인 아미노산 부위들과, 2-인돌리논 핵의 다양한 치환기들간의 추가적인 상호작용에 의해 일어나는 결과일 것이다. 따라서, 서로 다른 인돌리논 치환기들은 서로 다른 특정한 단백질 인산화효소들에 대한 선택적인 결합에 기여할 것이다. 서로 다른 ATP (또는 다른 뉴클레오티드) 결합 부위들에서 반응성이 있는 화합물들을 선택할 수 있는 능력은 본 발명의 화합물들이 그런 부위를 가진 어떤 단백질도 표적화할 수 있도록 한다. 따라서, 본 발명에 의해 개시되는 화합물들은 이러한 단백질들을 위한 생체외 분석에 유용할 뿐만 아니라 이러한 단백질들과의 상호 작용을 통해 생체내 치료 효과를 보이는 데에도 유용할 것이다.
또한, 본 발명의 화합물은, 암종, 카포시 육종을 포함한 육종, 적아구종, 교아세포종, 수막종, 신경교성상세포종, 흑색종, 근원세포종을 포함하지만 이들에 한정되지는 아니하는, 많은 종류의 고형암의 치료에 대하여 치료적 접근 방법을 제공한다. 또한, 백혈병과 같은 비고형암의 치료 및 예방도 본 발명에 의하여 시도될 수 있다. 적응증은 뇌암, 방광암, 난소암, 위암, 췌장암, 대장암, 혈액암, 폐암 및 골암을 포함하지만 이에 한정되지는 아니한다.
여기에 기술된 화합물들이 그 예방, 치료, 그리고 연구에 도움이 될 수 있는, 비정상적인 단백질 인산화효소 활성과 관련된 질병들의 또 다른 유형들로는 세포 증식 질환, 섬유성 질환, 그리고 대사 질환들이 있다.
본 발명에 의해 예방, 치료, 또는 더 연구될 수 있는 세포 증식 질환들은 혈관세포 증식 질환들과 맥관막세포 증식 질환을 포함한다.
혈관 세포 증식 질환들은 비정상적인 혈관신생(새로운 혈관의 형성)과 비정상적인 혈관형성(기존의 혈관의 확장)을 의미한다. 혈관신생과 혈관형성이 배아 발생, 황체 형성, 상처 치유, 그리고 기관 재생과 같은 다양한 정상적인 생리 작용에서 중요한 역할을 담당하고 있는 반면에, 이들은 또한 종양이 계속 살아있게 만드는 데 필요한 새로운 모세혈관들을 형성함으로써 암의 발달에 중추적인 역할을 한다. 혈관 증식 질환의 다른 예들에는, 새로운 모세혈관이 관절로 침투하여 연골을 파괴하는 관절염과 새로운 모세혈관이 망막으로 침투하여 출혈을 일으키고 눈을 멀게하는 당뇨성 망막증과 같은 눈 질환이 포함된다.
두 개의 구조적으로 관련된 수용체 티로신 인산화 효소가 혈관 내피 성장 인자(VEGF)와 높은 친화도로 결합하는 것이 확인되었다: fms유사 티로신 1(fit-1) 수용체(Shibuya et al., 1990,Oncogenes, 5:519-524; De Vries et al., 1992,Science, 255:989-991) 및 또한 VEGF-R2로 알려진 KDR/FLK-1 수용체. 혈관 내피 성장 인자(VEGF)는 시험관 내에서 내피 세포 성장을 촉진하는 활성을 갖는 내피 세포 특이적인 유사분열물질이다(Ferrara & Henzel, 1989, Biochein. Biophys. Res. Comm., 161:851-858; Vaisman et al., 1990, J. Biol. Chem., 265:19461-19566. Information). 미합중국 특허출원 제08/193,829, 08/038,596 및 07/975,750호에서 제시된 정보는 혈관 내피 성장 인자가 내피 세포의 증식을 일으킬 뿐만 아니라, 정상적 및 병적인 혈관신생의 주요한 조절 인자라는 것을 강력히 제시하고 있다(일반적으로는, Klagsburn & Soker, 1993,Current Biology, 3(10)699-702; Houck, et al., 1992,J. Biol. Chem., 267:26031-26037 참조).
정상적인 혈관 형성 및 혈관 신생은 태아 발달, 상처 치유, 기관 재생 그리고 배란시 황체에서 난포의 발달 및 임신 후 태반 성장과 같은 여성의 생식 과정과 같은 다양한 생리학적 과정에서 중요한 역할을 한다(Folkman & Shing, 1992, J. Biological Chem., 267(16):10931-34). 조절되지 아니한 혈관 형성 및/또는 혈관 신생은 성장하기 위하여 혈관화(vascularization)에 의존하는 악성 고형암 뿐만 아니라, 당뇨와 같은 질환과도 연관되어 있다(Klagsburn & Soker, 1993,Current Biology, 3(10):699-702; Folkham, 1991,J. Natl. Cancer Inst., 82:4-6; Weidner, et al., 1991,New Engl. J. Med., 324:1-5).
혈관 신생 및 혈관 형성시 내피 세포 증식 및 전이에서 혈관 내피 성장 인자는 이러한 과정들에서 KDR/FLK-1 수용체를 위하여 중요한 역할을 하는 것으로 예상된다. 악성 종양의 성장 뿐만 아니라, 당뇨(Folkman, 198, inXIth Congress of Thrombosis and Haemostasis(Verstraeta, et al., eds.), pp.583-596, Leuven University Press, Leuven) 및 관절염과 같은 질환도 조절되지 아니한 혈관 신생에 기인할 수 있다(예, Folkman, 1971, N. Engl. J. Med., 285:1182-1186). 혈관 내피 성장 인자가 특이적으로 결합하는 수용체는 혈관 형성 및/또는 혈관 신생 및 상기한 과정들에 의하여 야기되는 비정상적인 세포 성장과 관련된 다양한 종류의 심각한 질환의 조절 및 완화를 위한 중요하고도 강력한 치료 표적이다(Plowman, et al., 1994,DN&P, 7(6):334-339). 보다 상세하게는, 신혈관화 (neovascularization)에서 KDR/FLK-1 수용체의 매우 특이적인 역할로 인하여, 이것은 암 및 조절되지 아니한 혈관의 형성과 관련된 다른 질환들의 치료적 접근 방식의 최고 표적이 된다.
그러므로, 본 발명은, 혈관 신생 및/또는 혈관 형성을 억제 또는 촉진하기 위하여 KDR/FLK-1 수용체 신호 전달을 포함한 티로신 인산화 효소 신호 전달을 규율 및/또는 조절할 수 있는 화합물, 즉 혈관 내피 세포 인자처럼 리간드에 의하여 활성화되는 KDR/FLK-1로 전달되는 신호를 방해, 예방 또는 억제하는 화합물을 제공한다. 본 발명의 화합물이 티로신 인산화 효소 신호 전달 경로를 따라 수용체 또는 다른 요소에 작용하지만, 이들은 또한 조절되지 아니하는 혈관 신생에 기인하는 종양 세포에 직접적으로 작용할 수도 있다.
인간 및 쥐의 일반적인 "flk-I" 수용체의 명칭은 서로 상이하지만, 이들은 많은 측면에서 상호 교환적이다. 쥐의 수용체인 Flk-1 및 인간의 대응 수용체인 KDR은 세포내 부분에서 93.4%의 서열 유사성을 보인다. 또한, 쥐의 FLK-I은 쥐의 혈관 내피 성장 인자와 동등한 친화도로 인간의 혈관 내피 성장 인자에 결합하고, 따라서 두 종 중 어떤 종으로부터 유래한 리간드에 의하여도 활성화된다(Millauer et al., 1993, Cell, 72: 835-846; Quinn et al., 1993,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:7533-7537). 또한, 293개의 세포들(인간 태아 신장 섬유아세포)에 함께 발현될 때, FLK-1은 인간의 수용체 티로신 인산화 효소의 기질과 결합하여 티로신을 인산화한다(예, PLC-γ 또는 p85).
그러므로, FLK-1 수용체에 의존하는 모델은 직접적으로 KDR 수용체를 이해하기 위하여 이용될 수 있다. 예를 들면, 쥐의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물을 확인하기 위한 방법에서 쥐의 FLK-1 수용체의 사용은, 인간의 신호 전달 경로의 조절, 즉 KDR 수용체와 관련된 활성을 조절하는 데 사용될 수 있는 화합물의 확인에 직접 적용된다. 그러므로, 시험관 내에서 KDR/FLK-1의 억제제로 확인된 화학적 화합물을 생체 모델에서 적절하게 확인할 수 있다. 마우스 및 래트의 생체 동물 모델은 모두 신호 전달 경로로 유도되는 KDR/FLK-1에 작용하는 약물의 임상 적용가능성을 조사하는 데 매우 가치 있는 수단으로 증명되었다.
그러므로, 본 발명은 KDR/FLK-1 수용체의 효소 활성에 영향을 미쳐서 KDR/FLK-1에 의하여 전달되는 신호를 차단함으로써, 혈관 형성 및/또는 혈관 신생을 규율, 조절 및/또는 억제하는 화합물을 제공한다. 그러므로, 본 발명은 교아세포종, 흑색종 및 카포시 육종, 그리고 난소암, 폐암, 유방암, 고환암, 췌장암, 대장암 및 유표피암을 포함하지만 이에 한정되지 아니하는 많은 종류의 고형암의 치료를 위한 치료적 접근 방법을 제공한다. 또한, 자료는 KDR/Flk-1이 매개하는 신호 전달 경로를 억제하는 화합물의 투여가 혈관종, 심판막 협착증 및 당뇨병성 망막증의 치료에 사용될 수 있음을 보여준다.
또한, 본 발명은 flt-1 수용체를 포함하는 경로를 포함하여, 다른 수용체-매개 경로에 의한 혈관 형성 및 혈관 신생의 억제에 관한 것이다.
수용체 티로신 인산화효소에 의해 매개되는 신호 전달은 특정한 성장 인자(리간드)와의 세포외적인 상호 작용에 의해 개시된 후, 수용체의 이량체화가 일어나고, 내부의 단백질 티로신 인산화 효소의 일시적인 촉진과 자기인산화가 일어난다. 이에 의하여, 세포내 신호 전달 분자들을 위한 결합 부위가 만들어지고, 적절한 세포질 반응(예를 들면, 세포 분열, 세포 외부의 미소 환경에의 대사적인 영향등)을 촉진하는 다양한 세포질성 신호 분자들과의 복합체가 형성된다(Schlessinger andUllrich, 1992,Neuron9:1-20 참조).
KDR/FLK-1의 세포내 부분과 PDGF-β수용체 및/또는 관련된 flt-1 수용체의 그것(50.3%의 상동관계)과의 밀접한 상동관계는 중복되는 신호 전달 경로들의 유도를 나타낸다. 예를 들면, PDGF-β수용체에서, src 족의 구성원들(Twamley et al., 1993,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:7696-7700), 포스파티딜이노시톨-3'-인산화 효소(Hu et al., 1992,Mol. Cell. Biol., 12:981-990), 포스포리파제 cγ(Kashishian & Cooper, 1993,Mol. Cell. Biol., 4:49-51), ras-GTPase-활성화 단백질(Kashishian et al., 1992,EMBO J., 11:1373-1382), PTP-ID/syp(Kazlauskas et al., 1993,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 10 90:6939-6943), Grb2(Arvidsson et al., 1994, Mol. Cell. Biol., 14:6715-6726) 및 수용체 분자 Shc 및 Nck(Nishimura et al., 1993,Mol. Cell. Biol., 13:6889-6896)이 상이한 자기인산화 부위와 관련된 영역에 결합하는 것으로 나타났다(일반적으로 Claesson-Welsh, 1994,Prog. Growth Factor Res., 5:37-54 참조). 그러므로, KDR/FLK-1에 의하여 활성화되는 신호 전달 경로는 ras 경로(Rozakis et al., 1992,Nature, 360:680-692), PI-3'-인산화 효소, src-매개 및 Plcγ-매개 경로를 포함하는 것으로 보인다. 이들 각각의 경로는 내피 세포에서의 KDR/FLK-1의 혈관 신생 및/또는 혈관 형성 효과에 결정적인 역할을 담당한다. 결과적으로, 본 발명의 또 다른 측면은 이러한 경로에 의하여 조절되는 혈관 신생 및 혈관 형성을 조절하기 위하여, 여기에서 설명된 유기 화합물을 사용하는 것에 관한 것이다.
반대로, 심판막 협착증(restenosis)과 같은 혈관의 수축, 위축 또는 막힘과관련된 질환 역시 본 발명의 방법에 의해서 치료 또는 예방될 수 있다.
섬유성 질환은 세포외 기질의 비정상적인 형성을 의미한다. 섬유성 질환의 예는 간경변 및 맥관막 세포 증식 질환을 포함한다. 간경변은 간반흔의 형성을 야기하는 세포외 기질의 구성 성분의 증가에 의해 특징지어진다. 간반흔의 형성을 야기하는 세포외 기질의 증가는 간염과 같은 세균성 감염에 의해 일어날 수 있다. 지방 세포들은 간경변에 있어서 중요한 역활을 하는 것처럼 보인다. 관련된 다른 섬유성 질환은 동맥 경화증(atherosclerosis)을 포함한다.
맥관막 세포 증식 질환은 맥관막 세포의 비정상적인 증상에 의해 야기되는 질환을 의미한다. 맥관막 세포 증식 질환은 혈정 세관이상 증후군(thrombotic microangiopathy sndromes), 이식조직 거부반응 또는 사구체병증(glomerul opathies)과 같은 질환 뿐만 아니라, 사구체 신염, 당뇨성 신장병증(nephropathy) 또는 악성 위축신 경화증(nephrosclerosis)과 같은 다양한 인간의 신장 관련 질환을 포함한다. RTK PDGER은 맥관막 세포 증식의 유지와 관련되어 있었다(Folege et al., 1993,Kidney International, 43:47S-54S).
많은 암들은 세포 증식성 질환이며, 앞에서 설명한 바와 같이, 단백질 인산화효소(PKs)는 세포 증식성 질환과 관련이 있어 왔다. 따라서, 예를 들어, 수용체 티로신 인산화효소 족(RTK family)의 구성 요소와 같은 단백질 인산화효소는 암의 발달과 관련이 있어 왔다. EGFR(Tuzi et al.,Br. J. Cancer, 1992, 63:227-233; Torp et al., 1992,APMIS100:713-719), HER2/neu(Slamon et al.,Science, 1989, 244:707-712) 및 PDGF-R(Kumabe et al.,Oncogene, 1992, 7:627-633)과 같은 수용체중 몇몇은 많은 종양에 있어서 과도하게 발현되거나 오토크린 (autocrine) 고리에 의하여 지속적으로 활성화된다. 사실은 대부분의 일반적이고 심각한 암에 있어서, 이러한 수용체의 과도한 발현(Akbasak and Suner-Akbasak et al.,J. Neurol. Sci., 1992, 111:119-133; Dickson et al.,Cancer Treatment Res., 1992, 61:249-273, Korc et al.,J. Clin. Invest., 1992, 90:1352-1360)과 오토크린 고리(Lee and Donoghue,J. Cell. Biol., 1992, 118:1057-1070, Korc et al.,supra,Akbasak and Suner-Akbasak et al.,supra)는 증명되었다. 예를 들면, EGFR는 편평세포암(squamous cell carcinoma), 신경교성 성상세포증 (astrocytoma), 교아세포종(glioblstoma), 두경부암, 폐암 및 방광암과 관련이 있었다. HER2은 유방암, 난소암, 위암, 폐암, 췌장암 및 방광암과 관련이 있다. PDGER은 폐암, 난소암, 전립선암 뿐 만 아니라 신경교아세포증, 흑색종과 연관된다. RTK c-met은 악성종양형성에 연관되어 왔다. 예를 들어, c-met은 다른 암중에서, 결장/직장(colorectal)암, 갑상선암, 췌장암, 위암 또는 간세포암 및 임파종과 관련이 있었다. 또한, c-met은 백혈병과 관련이 있다. 또한, c-met유전자의 과도한 발현 증상은 호지킨 병 또는 버키트 병(burkitts disease)의 환자들에게서 발견되었다.
형태-II 당뇨병과 영양 공급에 수행됨과 더불어, IGF-IR은 또한 다양한 형태의 암과 관련되어 있다. 예를 들어, IGF-I은 사람 유방암 암 세포(breast cancer carcinoma cell)(Arteaga et al.,J. Clin. Invest., 1989, 84:1418-1423)와 작은 폐 종양 세포(small lung tumor cell)(Macauley et al.,Cancer Res., 1989, 50:2511-2517) 같은 여러 종양 형태에 대한 오토크린 성장 강화제(autocrinegrowth stimulator)로 여겨졌다. 또한, IGF-I은 신경계의 정상적인 성장과 분화에 필수적으로 관련되어 있으면서, 인간의 신경교종의 오토크린 강화제로 보인다(Sandberg-Nordqvist et al.,Cancer Res., 1993, 53:2511-2517). 세포 증식에 있어서 IGF-I과 그의 리간드의 중요성은 배양시 많은 세포 형태(섬유아세포, 상피세포, 평활근 세포, T-림프구, 골수세포, 연골세포, 조골세포(골수의 간세포(stem cell)))가 IGF-I에 의해 성장이 강화된다는 사실에 의하여 뒷받침된다(Goldring and Goldring,Eukaryotic Gene Expression, 1991, 1:301-326). 바세르가(Baserga)와 코폴라(Coppola)는 IGF-I이 변형 기전에 주요 역할을 하며, 넓은 범위의 인간 악성(malignancies)종양의 치료적 개입을 위한 바람직한 표적이 될 수 있다고 제시한다(Baserga,Cancer Res., 1995, 55:249-252; Baserga,Cell, 1994, 79:927-930; Coppola et al.,Mol. Cell Biol., 1994, 14: 4588-4595).
세린 트레오닌 인산화 효소는 명백하게 유방암(Cance, et al.,Int. J. Cancer, 54:571-77 (1993))을 포함하여, 많은 종류의 암에 관련이 있다.
비정상적인 단백질 인산화 효소 활성과 질병 간의 연관성은 암에만 한정되지는 아니한다. 예를 들어, 수용체 티로신 인산화효소는 건선, 당뇨병(diabetes mellitus), 자궁내막증식증(endometriosis), 혈관 신생, 죽종반 발생(atheromatous plaque development), 알츠하이머 병, 심판막 협착증, 폰 히펠-린다우 병(von Hippel-Lindau disease), 표피세포 과증식(epidermal hyperproliferation), 신경퇴행성 질환(neurodegenerative disease), 연령-관련 반점 퇴행(age-related maculardegeneration) 및 혈관종 같은 질병과 관련되어 있다. 예를 들어, EGFR은 각막과 피부 상처 치료에 사용되어 왔다. 인슐린-R과 IGF-IR의 결함은 형태-II 당뇨병에서 나타난다. 특정 수용체 티로신 인산화효소와 이들의 치료적 적응증 간의 보다 완벽한 상호관계는 플로우만 등(Plowman et al.,DN&P, 1994, 7:334-339)이 명시한다.
앞에서 언급한 것처럼, 수용체 티로신 인산화효소뿐만 아니라, src, abl, fps, yes, fym, lyn, lck, blk, hck, fgr 및 yrk(Bolen et al.,FASEB J., 1993, 6:3404-3409에서 검토된)를 포함하지만 이에 한정되지 아니하는 세포질 티로신 인산화효소는 대사와 증식 신호 전달과 연관되어 있으며, 따라서 본 발명에 대한 많은 단백질 티로신 인산화효소-관련 질환들과 관련이 있을 것이라 생각되고 나타났다. 예를 들어, 변형된 src(V-src)는 닭에서 종양단백질(PP60V-src)이 된다고 나타났다. 또한, 이것의 세포 유사체인 프로토-종양유전자(proto-oncogene) PP60c-src은 많은 수용체의 종양발생 신호를 전달한다. 종양에서 EGFR 또는 HER2/neu의 과발현은 PP60c-src의 연속적인 활성을 야기하고, 이것은 정상적인 세포에서는 존재하지 아니하는 악성 세포의 특징이다. 반면에, c-src의 발현이 부족한 생쥐는 골화석 형질(osteopetrotic phynotype)을 나타내고, 이것은 c-src가 파골세포 기능에 주로 참여하며, 관련 질환과 연관될 수 있음을 의미한다.
이와 비슷하게, Zap70은 자가면역 질환과 관련된 T-세포 신호전달에 관련되어 있다.
세린-트레오닌 인산화효소는 염증, 자가면역 질환, 면역반응 및 심판막 호발(restenosis), 섬유증, 건선, 골관절염, 그리고 류마티스성 관절염과 같은 과증식 질환과 관련되어 있다.
단백질 인산화효소는 또한 태아의 착상과 관련이 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 이러한 태아의 착상을 방지하는 효과적인 방법을 제공하며, 그 결과 산아 조절 약물로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 사용하여 치료 또는 예방될 수 있는 추가 질환들로는 자가 면역 질환과 같은 면역 질환, 에이즈, 동맥경화증과 같은 심혈관계 질환을 들 수 있다.
마지막으로, 현재 수용체 티로신 인산화 효소 및 세포질 티로신 인산화 효소는 모두 과면역 질환과 관련된 것으로 생각된다.
본 발명의 다수의 예시 화합물이 다수의 단백질 티로신 인산화 효소에 미치는 영향의 예들을 이하 표 2에 나타내었다. 제시된 화합물 및 자료는 어떠한 방식으로든지 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 아니된다.
투여 및 약학 조성물(Administration and Pharmaceutical Composition)
본 발명의 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염은 환자에게 그 자체로 투여될 수 있거나, 상기 물질이 적당한 담체 또는 부형제와 혼합된 약학 조성물로 투여될 수 있다. 약물의 제형과 투여의 기술들은 "Remington's Pharmacological Science," Mack Publishing Co., Easton, PA, 최신판에서 찾을 수 있다.
여기에서 사용되는 바에 따르면, "투여" 또는 "투여한다"는 단백질 인산화 효소 관련 질환의 치료 또는 예방을 위하여, 본 발명에서 화학식(I)을 갖는 화합물 또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 화학식(I)을 갖는 화합물을 포함하는 약학 조성물 또는 그것의 약학적으로 허용가능한 염을 생물체에 전달하는 것을 말한다.
투여의 적당한 경로는 구강, 직장, 점막 또는 장관 투여 또는 근육 내, 피하, 수질 내, 포막 내, 직접적인 심실 내, 혈관 내, 안구의 유리체내, 복막 내, 비강 내, 또는 눈으로의 주입을 포함한다. 투여의 바람직한 경로는 구강 및 비경구투여이다.
대안으로, 전신투여보다는 국소투여로 화합물을 투여할 수 있는데, 예를 들면, 종종 데포(depo) 또는 서방제형으로 고형암에 직접 화합물을 주입할 수 있다.
또한, 종양 특이적 항체로 피복된 리포좀과 같은 표적 약물 송달 시스템(targeted drug delivery system)으로 약물을 투여할 수 있다. 리포좀은 종양을 표적으로 하여 종양에 의해서 선택적으로 받아들여진다.
본 발명의 약학 조성물은 이 분야, 즉, 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정화(dragee-making), 분말화(levigating), 유제화, 캡슐화, 인트래핑(entrapping)과 동결건조 공정 등의 잘 알려진 공정으로 제조할 수 있다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 악학 조성물은 하나 혹은 그 이상의, 활성 화합물을 약학적으로 사용될 수 있는 제제로 용이하게 만들기 위한 부형제 또는 보조제를 포함하는, 생리학적으로 허용되는 담체를 통상적인 방법으로 사용하여 제형화할 수 있다. 적합한 제제는 투여 경로의 선택에 따라 달라진다.
주사로 사용하기 위하여, 본 발명의 화합물은 수용액, 바람직하게는 행크스 용액(Hank's solution), 링거 용액이나 생리 식염수 같은 생리학적으로 적합한 완충액으로 제제화된다. 비점막을 통하여 투여하기 위해서, 장벽을 투과할 수 있게 하는 표면투과제가 제제 내에 사용된다. 이러한 표면투과제는 이 분야에서 일반적으로 알려진 것이다.
경구 투여를 위해서, 화합물은 약학으로 허용되는 담체를 이 분야에서 잘 알려진 활성 화합물과 결합하여 제제화할 수 있다. 담체는 환자가 구강을 통하여 복용할 수 있도록, 본 발명의 화합물을 정제, 필(pills), 함당정제(lozenge), 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리(slurries), 현탁액 등으로 제제화한다. 경구투여를 위한 약학 제제는 정제 또는 함당 정제의 중심부를 만들기 위하여, 필요하다면 다른 적당한 보조제를 첨가한 후, 고형 부형제를 사용하여 만들 수 있는데, 선택적으로는 만들어진 혼합물을 분쇄하고 혼합물을 과립으로 만들 수도 있다. 유용한 부형제로서 특히, 젖당(lactose), 설탕(sucrose), 만니톨(mannitol)이나 솔비톨(solbitol)을 포함하는 당류와 예를 들어, 옥수수 전분, 밀전분, 쌀전분과 감자전분 같은 섬유질 제제와 젤라틴, 검류, 고무수액, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 및/또는 폴리비닐-피롤리돈(PVP)같은 충진제들이다. 필요하다면, 가교결합한 폴리비닐-피롤리돈, 한천 혹은 알긴산 같은 분해제를 첨가할 수도 있다. 또한, 알긴산 나트륨같은 염을 첨가할 수도 있다.
당의정의 중심부위는 적절히 코팅하여 만든다. 이러한 목적으로, 선택적으로 아라비안 검, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 티타늄 디옥시드, 라커 용액을 함유하는 농축한 당용액과 적절한 유기용매 혹은 유기용매 혼합물을 사용한다. 염료 혹은 색소를 활성 화합물 1회 분량의 상이한 조합을 특징짓거나 구별하기 위하여 정제나 당의정 코팅물에 첨가할 수 있다.
경구적으로 사용할 수 있는 약학 조성물은 젤라틴과 글리세롤아나 솔비톨 같은 가소제로 만든 연질 밀봉캡슐뿐만 아니라, 젤라틴으로 만든 푸쉬-피트(push-fit)캡슐을 포함한다. 푸쉬-피트 캡슐은 젖당과 같은 충진제, 활성성분과 전분같은 교결제 및/또는 탈크나 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제 및 선택적으로는 안정제를 함유하는 혼합물에 활성 화합물을 함유한다. 연질 캡슐에서 활성 화합물은 패티 오일(fatty oil), 액체 파라핀이나 액체 폴리에틸렌 글리콜 같은 적절한 용액에 용해되거나 현탁될 수 있다. 또한, 안정제가 이러한 조성물에 첨가될 수 있다.
사용될 수 있는 약학 조성물은 경질 젤라틴 캡슐을 포함한다. 한정되지 아니하는 예들로, 활성 화합물 캡슐의 경구 투여 제형은 50 및 200mg 투여량 역가(dose strengths)(제제 코드는 각각 J-011248-AA-00 및 J-011248-AA-01)일 수 있다. 두 가지의 투여량 역가는 50mg 캡슐은 사이즈 3, 200mg 캡슐은 사이즈 0의 서로 상이한 크기의 경질 젤라틴 캡슐에 충진한 동일한 과립으로 제조된다. 제제의 조성물의 예를 표 2에 나타내었다.
표 2
성분이름/등급 과립시 농도(% w/w) 50mg 캡슐에서의양(mg) 200mg 캡슐에서의양(mg)
제제 코드 J-011248-AA J-011248-AA-00 J-011248-AA-01
활성 화합물 NF 65.0 50.0 200.0
만니톨 NF 23.5 18.1 72.4
크로스카멜로스 소디움 NF 6.0 4.6 18.4
포비돈 K 30 NF 5.0 3.8 15.2
마그네슘 스테아레이트 NF 0.5 0.38 1.52
캡슐, 스웨디쉬 옐로우 NF 사이즈 3 사이즈 0
캡슐들은 광선으로부터 활성 화합물을 보호하기 위하여, 갈색 유리 또는 플라스틱 병에 충진된다. 활성 화합물 캡슐 제제를 담은 용기는 조절된 실온(15-30℃)에서 보관되어야 한다.
흡입으로 투여되기 위하여, 본 발명에 따른 화합물은 압축 용기, 네뷸라이저(nebulizer) 및 디클로로디플루오로메탄, 트리크로로플루오로메탄, 디클로로테트라-플루오로에탄과 이산화탄소(이에 한정되지는 아니함)와 같은 적절한 추진제(propellant)를 사용한 에어로졸 스프레이의 형태로 용이하게 투여될 수 있다.
압축된 에어로졸의 경우, 1회 투여량은 계량된 분량을 투여하기 위한 밸브를 제공하여 조절할 수 있다. 예를 들어, 흡입기나 취분기(insufflator)에서 사용하기 위한 젤라틴의 캡슐과 카트리지(catridge)는 화합물의 분말 혼합물과 젖당 또는 전분같은 적절한 분말 베이스를 함유하여 제제화할 수 있다.
또한, 화합물은 예를 들어, 일시 주입(bolus injection) 또는 연속적 정맥 주입에 의하여 비경구적으로 투여되도록 제제화될 수 있다. 주입하기 위한 제제는, 예를 들면 앰플(ampoules) 또는 다용량 용기와 같은 보존제가 첨가된 단위 투여 용량의 형태로 제공될 수 있다. 조성물은 유상이나 수상인 담체(vehicles)로서현탁액, 용액 또는 애멀젼의 형태를 취하고, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제제화 물질을 포함할 수 있다.
비경구 투여를 위한 약학 조성물은 수용성의 수용액 형태를 포함하는데, 예를 들어 염과 같은(이에 한정되지는 아니함) 활성 화합물의 수용성의 수용액 형태를 포함한다. 또한, 활성 화합물의 현탁액은 친유성 담체로 조제될 수 있다. 적절한 친유성 담체는 참기름과 같은 패티 오일(fatty oil), 에틸 올레이트 및 트리글세라이드와 같은 합성 지방산 에스테르, 리포좀과 같은 물질을 포함한다. 수용성 주사 현탁액은 소디움 카르복시 메틸 셀룰로스, 솔비톨 혹은 덱스트란 같은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 또한, 선택적으로, 현탁액은 적절한 안정제 및/또는 화합물의 용해도를 증가시켜 고농도의 용액을 조제할 수 있도록 하는 물질을 함유할 수 있다.
대안으로, 활성 요소는 사용하기 전에, 멸균되고 파이로젠이 없는 물과 같은 적절한 담체와 사용할 수 있는 분말 형태일 수 있다.
또한, 화합물은 코코아 버터나 다른 글리세리드와 같이 통상적인 좌약의 베이스를 사용한 좌약 또는 보유 관장제와 같은 직장 투여 화합물로 제제화될 수 있다.
또한, 상기한 제제에 추가하여, 화합물은 데포(depot)제제의 형태로 제제화될 수 있다. 이러한 장시간 작용하는 제제는 이식(예를 들어, 피하나 근육내로) 또는 근육 주사로 투여한다. 본 발명의 화합물은 적절한 중합성 또는 소수성 물질(예를 들어, 약학적으로 허용가능한 오일로 만든 에멀젼), 이온 교환 수지 또는 물에 아주 녹지 않는 염(이에 한정되지는 아니함)과 같은 물에 아주 녹지 않은 유도체로 이러한 경로의 투여를 위하여 제제화할 수 있다.
본 발명의 소수성 화합물을 위한 약학적 운반체의 비제한적 예는 벤질 알콜, 비극성 계면활성제, 물과 혼합할 수 있는 유기성 중합체를 포함하는 공용매와 VPD 공용매계의 수용상을 포함한다. VPD는 3% w/v 벤질 알콜, 8%의 w/v의 비극성 계면활성제 폴리솔베이트 80 및 65% w/v 폴리에틸렌글리콜 300의 용액이며, 에탄올로 부피를 벌충한다. VPD 공용매계(VPD:D5W)는 5% 덱스트로스 수용액에 1:1로 희석한 VPD로 구성된다. 이 공용매계는 소수성 화합물을 용해하며, 이 자체로서 전신 투여에 대해 낮은 독성을 나타낸다. 자연적으로, 이 자체의 특유한 용해도와 독성을 파괴하지 아니하고 사용하는 이러한 공용매계의 비율은 아주 다양하다. 또한, 공용매 구성요소의 동일성(identity)은 변경될 수 있다; 예를 들면, 낮은 독성을 가진 다른 비극성 계면활성제는 폴리솔베이트 80 대신 사용할 수 있고, 폴리에틸렌 글리콜의 분획 크기가 변경될 수 있으며, 생물학적으로 동화될 수 있는(biocompatible) 다른 중합체는 예를 들어, 폴리비닐 피롤리돈과 같은 폴리에틸렌 글리콜로 대체할 수 있고, 다른 당류나 다당류는 덱스트로스로 치환할 수 있다.
대안으로, 소수성 의약 화합물의 다른 송달 시스템을 사용할 수 있다. 리포좀과 에멀젼은 소수성 약제를 전달하는 담체 혹은 운반체의 잘 알려진 예들이다. 또한, 종종 높은 독성을 나타내더라도 디메틸설폭시드 같은 유기 용매를 사용할 수도 있다.
또한, 약제를 포함하는 고형 소수성 중합체의 반 투과성 기질 같은 서방형 시스템을 사용하여 화합물을 전달할 수 있다. 다양한 서방 물질들이 밝혀졌으며, 이 분야의 숙련자들에게 잘 알려져 있다. 서방형 캡슐은 이들의 화학적 특성에 따라 달라지며, 수 주 내지 100일 이상 동안 화합물을 분비할 수 있다. 치료 물질의 화학적 특성과 생물학적 안정성에 따라 단백질을 안정화하는 추가적인 방법이 사용될 수 있다.
또한, 여기에서의 약학 조성물은 적절한 고형 혹은 겔(gel) 상의 운반체나 부형제를 함유한다. 이러한 운반체나 부형제의 예는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당류, 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 폴리에틸렌 글리콜 같은 중합체를 포함하지만, 이에 한정되지는 아니한다.
다수의 본 발명의 단백질 인산화 효소 조절 화합물은 생리학적으로 허용가능한 염으로 제공될 수 있는데, 청구항의 화합물은 - 또는 + 전하를 띤 종류가 될 수 있다. 화합물이 + 전하를 띤 부분을 형성하는 염의 예들로는 4급 암모늄(여기의 다른 곳에서 정의된), 히드로클로라이드, 설페이트, 카보네이트, 락테이트, 타트레이트, 말레이트(malate), 말레에이트(maleate), 석시네이트를 포함하지만, 이에 한정되지는 아니하는데, 여기에서 4급 암모늄의 질소 원자는 적절한 산과 반응한 본 발명에서 선택된 화합물의 질소이다. 본 발명의 화합물이 - 전하를 띄는 종류가 되는 염은, 상기 화합물에서 카르복실 산기를 적절한 염기(예, 수산화 나트륨(NaOH), 수산화 칼륨(KOH), 수산화 칼슘(Ca(OH)2) 등)로 반응시킨 소디움, 포타슘, 칼슘 및 마그네슘염을 포함하지만 이에 한정되지는 아니한다.
본 발명에 적절히 사용되기 위한 약학 조성물은, 예를 들면, 단백질 인산화 효소 활성의 조절 또는 단백질 인산화 효소 관련질환의 예방 또는 치료와 같은 의도한 목적을 달성하기에 충분한 양의 활성 요소가 포함된 조성물을 포함한다.
더욱 특이적으로는, 치료 유효량이란 질병의 증후를 예방, 완화 또는 개선하거나, 처방된 환자의 생존을 연장할 수 있는 용량을 의미한다.
치료 유효량의 결정은 당업자의 능력범위내에서 특히, 여기에서 상세히 개시된 바에 비추어 잘 알려져 있다.
본 발명의 방법에서 사용된 모든 화합물의 치료 유효량 혹은 투여량은 세포 배양 분석으로 초기에 추정할 수 있다. 그 후, 1회 투여량을, 세포 배양에서 결정되는 IC50(즉, 단백질 인산화효소 활성의 최대치를 반으로 저해하는 실험용 화합물의 농도)를 포함한, 혈장 농도 범위를 결정하기 위한 동물 모델에 사용하기 위하여 제제화할 수 있다. 이러한 정보는 이후 인간에게 유용한 투여량을 더욱 정확하게 결정하기 위해서 사용될 수 있다.
본 명세서에서 설명한 화합물의 독성과 치료적 효과는, 예를 들면, 목적한 화합물의 IC50과 LD50(양자 모두 여기의 다른 곳에서 검토되었다)의 결정과 같은 세포 배양이나 실험 동물에서의 표준적인 약학 절차에 의하여 결정될 수 있다. 세포 배양 분석과 동물 연구에 의해 얻어진 자료는 인간에게 사용하기 위한 투여량의 범위를 결정할 때 사용될 수 있다. 1회 투여량은 투여하는 형태와 이용하는 투여 경로에 따라서 다양하다. 정확한 제제, 투여 경로 및 1회 투여량은 환자의 상태에 대한 각 내과의사의 견해에 따라 선택될 수 있다(예를 들면, Fingl, et al., 1975, in"The Pharmacological Basis of Terapeutics", Ch. 1 p. 1 참조).
1회 투여량과 투여 간격은 인산화 효소 조절 효과를 유지하기에 충분한 활성 종의 혈장 농도에 따라 각각 조정된다. 이러한 혈장 농도는 최소 효과 농도(MECs)로 나타낸다. 최소 효과 농도는 각각의 화합물에 따라 다양하며 시험관 내 실험 자료, 예를 들면, 여기에서 설명한 분석방법을 이용하여 정할 수 있는, 인산화 효소를 50-90% 저해하기 위해 필요한 농도에 의하여 추정할 수 있다. 최소 효과 농도에 도달하기 위한 1회 투여량은 개인의 특성과 투여 경로에 따라 달라진다. HPLC 분석이나 생물학적 분석(bioassays)는 혈장 농도를 결정하기 위해 사용될 수 있다.
또한, 투여 간격은 최소 효과 농도 수치를 사용하여 결정할 수 있다. 화합물은 투여 시간의 10-90% 동안, 바람직하게는 30 내지 90% 동안, 가장 바람직하게는 50 내지 90% 동안을 최소 효과 농도 수치 이상의 혈장 농도를 유지하는 요법을 사용하여 투여하여야 한다.
현재, 화학식(I)을 갖는 화합물의 치료 유효량은 약 일일 25mg/m2내지 1500mg/m2; 바람직하게는 약 일일 3mg/m2; 더욱 더 바람직하게는 일일 50mg/qm(일일 400mg까지)이다.
국소 투여나 선택적 사용의 경우, 약물의 국소적인 효과 농도는 혈장 농도와관계가 없을 수 있으며, 이 분야에서 알려진 다른 절차가 정확한 투여량과 투여간격을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
물론, 투여할 조성물의 분량은 치료받을 환자, 고통의 심각성, 투여방법, 처방하는 내과 의사의 판단 등에 따라 달라진다.
필요한 경우, 조성물은 FDA가 승인한 키트 같은, 활성 요소를 포함하는 하나 또는 그 이상의 단위 투여 용량을 포함하는, 팩 또는 조제 용기로 제공될 수 있다. 팩은 예를 들면, 발포 팩(blister pack)과 같은 금속이나 플라스틱 호일을 포함한다. 팩 또는 조제 용기는 투여 지시가 동봉될 수 있다. 또한, 팩 또는 조제 용기는, 제조자, 약물의 사용 또는 판매를 규율하는 정부 기관이 규정한 형태로 용기와 관련된 주의사항을 동봉할 수 있는데, 이러한 주의사항은 인간 또는 동물에 투여하는 화합물의 형태에 대한 기관의 승인을 반영한다. 이러한 주의사항은 예를 들어, 표지(labelling)에서 미합중국 식품 의약품 관리국(FDA)에 의하여 처방 약물 또는 승인된 제품의 첨가를 승인받을 수 있다. 또한, 적합한 약학적 운반체에 의하여 제제화된 본 발명의 화합물이 포함된 조성물을, 조제하고 적절한 용기에 담아 적응증을 표시한다. 표지에 표시된 적절한 적응증은 종양의 치료, 혈관 신생의 억제, 섬유증, 당뇨 등의 치료를 포함한다.
또한 본 발명의 한 측면은, 여기에서 설명된 화합물 또는 그것의 염 또는 전구약물이 이상에서 검토된 질병 및 질환의 치료를 위하여 다른 화학요법제와 조합되는 것이다. 예를 들면, 본 발명의 화합물, 염 또는 전구약물이, 플루오로우라실(5-FU)을 단독 또는 류코보린(leukovorine)을 추가한 것과 같은 알킬화 약물; UFT, 카페시타빈, 겜시타빈 및 시타라빈과 같은 다른 피리미딘 유사체들; 예를 들면, 부설판(만성 과립구 백혈병의 치료에 사용됨), 임프로설판 및 피포설판과 같은 알킬 설포네이트; 예를 들어, 벤조데파, 카보쿠온, 메투레데파 및 유레데파와 같은 아지리딘들; 예를 들어, 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌치오포시포라미드 및 트리메틸올멜라민과 같은 에텔렌이민 및 메틸멜라민; 그리고 예를 들어, 클로람부실(만성 과립구 백혈병, 1차성 고분자글로불린혈증 및 비-호치킨 림프종의 치료에 사용됨), 사이클로포스파미드(호지친 병, 다발성 골수종, 신경아세포종, 유방암, 난소암, 폐암, 빌름스 종양 및 횡문근육종의 치료에 사용됨), 에스트라무스틴, 이포스파미드, 노벰브리친, 프레드니무스틴 및 우라실 머스타드(1차성 혈소판 증가증, 비-호치킨 림프종, 호치킨 병 및 난소암에 사용됨)과 같은 질소 머스타드; 그리고, 다카바진(연성 조직 육종에 사용됨)과 같은 트리아진들과 조합될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물, 염 또는 전구 약물은, 예를 들면, 메토트렉세이트(급성 림프성 백혈병, 융모막암, 균상식육증 유방암, 두경부암 및 골형성 육종의 치료에 사용됨) 및 프테로프테린과 같은 엽산 유사체; 급성 과립구, 급성 림프 및 만성 과립구 백혈병의 치료에 사용되는 머캅토퓨린 및 치오구아닌과 같은 퓨린 유사체와 같은 다른 대사 길항성 화합요법제(이에 한정되지 아니함)들과 조합하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물, 염 또는 전구약물은, 예를 들면, 빈블라스틴(유방암 및 고환암의 치료에 사용됨), 빈크리스틴 및 빈데신과 같은 빈카 알칼로이드;예를 들면, 에토포시드 및 테니포시드(양자 모두 고환암 및 카포시 육종의 치료에 유용함)와 같은 에피포도필로톡신; 예를 들면, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 미토마이신(위암, 자궁경부암, 대장암, 유방암, 방광암 및 췌장암에 사용됨), 닥티노마이신, 테모졸로마이드, 플리카마이신, 블레오마이신(피부암, 식도암 및 비뇨생식기 관암에 사용됨)과 같은 항생물질 화학요법제들; 그리고 L-아스파라기나제와 같은 효소적 화학요법제들과 같은(이에 한정되지 아니함), 천연물질에 기초한 화학요법제와 조합하여 사용될 수 있다.
또한, 상기한 바와 함께, 본 발명의 화합물, 염 또는 전구약물은 백금 배위 화합물(시스플라틴 등); 히드록시우레아와 같은 치환 우레아; 프로카바진과 같은 메틸히드라진 유도체; 미토탄, 아미노글루테티미드와 같은 부신 피질 억제제; 그리고, 부신피질호르몬(예, 프레드니솔론), 프로게스틴(예, 히드록시프로게시테론 카프로에이트), 에스트로젠(예, 디에틸스틸베스테롤), 에스트로젠 길항제(예, 타목시펜), 안드로겐(예, 테스토스테론 프로피오네이트) 및 아로마타제 억제제(예, 아나스트로졸)과 같은 호르몬 및 호르몬 길항제들과 조합하여 사용될 수 있다.
마지막으로, 본발명의 화합물이 미토잔트론 또는 파클리탁셀과 조합하여
고형암 또는 급성 골수성(비-림프구) 백혈병(이에 한정되지 아니함)과 같은 백혈병의 치료에 효과적임을 생각해볼 수 있다.
일반적인 합성 과정(General Synthetic Procedure)
이사의 일반적인 방법론은 본 발명의 화합물을 조제하는데 적용될 수 있다.
적절하게 치환된 2-옥신돌(1 당량), 적절하게 치환된 알데히드(1.2당량) 및 염기(0.1당량)를 용매(1-2ml/mmol 2-옥신돌)에 혼합한 후, 혼합물을 약 2 내지 12시간 동안 가열한다. 냉각 후, 형성된 침전을 거르고 차가운 에탄올 또는 에테르로 세척한 후, 진공 건조시켜 고형 산출물을 얻는다. 침전이 형성되지 아니한 경우, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 디클로로메탄/에테르로 연화하고, 그 결과 얻은 고체를 여과하여 모은 다음 건조시켰다. 산출물은 선택적으로는, 크로마토그래피에 의하여 추가로 정제될 수 있다.
염기는 유기 또는 무기 염기일 수 있다. 유기 염기가 사용되는 경우, 바람직한 염기는 질소 염기이다. 유기 질소 염기의 예로는 디이소프로필아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 아닐린, 피리딘, 1,8-디아자바이사이클로[5.4.1]운데스-7-엔, 피롤리딘 및 피페리딘를 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다.
무기염기의 예로는 암모니아, 알칼리 금속 또는 알카리 토금속의 수산화물, 인산염, 탄산염, 중탄산염, 중황산염 그리고 아미드를 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 알칼리 금속은 리튬, 소디움 및 포타슘을 포함하며, 알칼리 토류 금속은 칼슘, 마그네슘 및 바륨을 포함한다.
본 발명의 현재 바람직한 실시예에서, 용매는 물 또는 알코올과 같은 수소 이온 제공(protic) 용매이며, 염기는 알카리 금속이나 알칼리 토금속 무기 염기, 바람직하게는 알칼리 금속이나 알칼리 토류 금속 수산화물이다.
당업자라면, 유기합성의 일반적인 원칙과 본 명세서의 개시 내용에 기초하여 어떠한 염기가 본 반응에 적합한 염기인지 쉽게 알 수 있을 것이다.
본 반응이 수행되는 용매는 수소 이온 제공(protic)용매 또는 수소 이온 비제공(aprotic) 용매, 바람직하게는 수소 이온 제공 용매이다.
'수소 이온 제공(protic)용매'는 수소 원자를 상당한 산성기로 만들어 주고수소결합을 통하여 용질과 수소 이온을 공유할 수 있는, 산소 원자 또는 질소 원자에 공유 결합된 수소 이온을 가지는 용매이다. 예를 들면, 수소 이온 제공 용매는 물과 알코홀을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
'수소 이온 비제공(aprotic)용매'는 극성일 수도 있고 비극성일 수도 있으나 어느 경우이든 모두 산성인 수소를 포함하지 않으므로 그 결과 용질과 수소 결합을 할 수가 없다. 비극성 수소 이온 비제공 용매들의 예로는 펜탄, 헥산, 벤젠, 톨루엔, 메틸렌 클로라이드 및 사염화탄소를 들 수 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 극성 수소 이온 비제공 용매들의 예로는 클로로포름, 테트라하이드로퓨란, 디메틸설폭시드 및 디메틸포름아미드가 있다.
본 발명의 현재 바람직한 실시예에서, 용매는 수소 이온 제공 용매, 바람직하게는 물 또는 에탄올과 같은 알코올이다.
반응은 상온보다 높은 온도에서 수행된다. 반응 온도는 일반적으로 약 30℃에서 약 150℃까지이며, 바람직하게는 약 80℃에서 약 100℃, 가장 바람직하게는 에탄올의 끓는점인 약 75℃에서 약 85℃이다. '약'이라는 것은 바람직하게는 표시된 온도에서 섭씨 10℃ 내외의 범위를 말하며, 보다 바람직하게는 표시된 온도에서섭씨 5℃ 내외의 범위, 가장 바람직하게는 표시된 온도에서 섭씨 2도의 범위를 말한다. 따라서, 예를 들어 '약 75℃'는 75℃±10℃, 바람직하게는 75℃±5℃, 보다바람직하게는 75℃±2℃를 의미한다.
2-옥신돌 및 알데히드는 화학 분야에서 잘 알려진 기술을 사용하여 쉽게 합성할 수 있다. 당업자라면, 본 발명의 화합물을 만들기 위한 다른 합성 경로를 사용할 수 있다는 것을 알 것이며, 이하 제시된 것은 예시일 뿐 본 발명이 이에 한정되지는 아니한다.
실시예들(Examples)
이하의 조제와 실시예들은 당업자가 본 발명을 보다 명확하게 이해하고 실시할 수 있도록 주어진 것이다. 이들은 발명의 범위를 제한하는 것이 아니라, 단순한 예시와 대표적인 예로서 고려되어야 한다.
합성 실시예들(Synthetic Examples)
방법 A: 피롤의 포르밀화
POCl3(1.1 당량)을 -10℃에서 한 방울씩 디메틸포름아미드(3당량)에 가한 후, 디메틸포름아미드에 용해된 적절한 피롤을 가한다. 2시간 동안 혼합한 후, 반응 혼합물을 H2O로 희석하고, 10N KOH로 pH11까지 염기화한다. 형성된 침전을 여과하여 모으고, H2O로 세척한 다음, 진공 오븐에서 건조시켜서 원하는 알데히드를 얻는다.
방법 B: 피롤카르복실 산 에스테르의 비누화
EtOH에서 피롤카르복실 산 에스테르와 KOH(2-4 당량)의 혼합물을 박층 크로마토그래피(TLC)로 반응 완료를 확인할 때까지 환류한다. 냉각된 반응 혼합물은 1N HCl로 pH3까지 산성화한다. 형성된 침전을 여과하여 모으고, H2O로 세척한 다음, 진공 오븐에서 건조시켜서 원하는 피롤카르복실 산을 얻는다.
방법 C: 아미드화
디메틸포름아미드(0.3M)에 용해된 피롤카르복실 산의 혼합된 용액에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노-프로필)카보디이미드(1.2당량), 1-히드록시벤조트리아졸(1.2당량) 및 트리에틸아민(2당량)을 가한다. 적절한 아민(1당량)을 가하고, 반응 완료를 TLC로 확인할 때까지 반응물을 혼합한다. 그 다음, 에틸 아세테이트를 반응 혼합물에 가하고, 용액을 포화 NaHCO3및 함수(brine, 과량의 염을 갖는)로 세척한 다음, 무수 MgSO4로 건조하고 농축하여 원하는 아미드를 얻는다.
방법 D: 카르복실 산 성분을 포함하는 알데히드 및 옥신돌의 농축
에탄올(0.4M)에서 옥신돌(1당량), 1 당량의 알데히드 및 1 내지 3당량의 피페리딘(또는 피롤리딘)의 혼합물을90-100℃에서 반응 완료를 TLC로 확인할 때까지 혼합한다. 그 다음, 혼합물을 농축하고 잔여물을 2N HCl로 산성화한다. 형성된 침전물을 H2O 및 EtOH로 세척하고, 진공 오븐에서 건조하여 결과물을 얻는다.
방법 E: 카르복실 산 성분을 포함하지 아니하는 알데히드 및 옥신돌의 농축
에탄올(0.4M)에서 옥신돌(1당량), 1 당량의 알데히드 및 1 내지 3당량의 피페리딘(또는 피롤리딘)의 혼합물을 90-100℃에서 반응 완료를 TLC로 확인할 때까지 혼합한다. 혼합물을 실온에서 냉각시키고, 형성된 고체를 진공 여과로 모은 다음, 에탄올로 세척하고 건조시켜 결과물을 얻는다. 반응 혼합물을 냉각시킬 때 침전물이 형성되지 아니하는 경우, 혼합물은 농축되고 칼럼 크로마토그래피로 정제된다.
C. 옥신돌 합성예들
이하의 대표적인 옥신돌의 합성예는 어떠한 방식으로든지 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니된다. 본 발명의 화합물을 만들기 위하여 사용되는 다른 옥신돌 뿐만 아니라, 나타낸 옥신돌의 대체 경로들은 이하의 개시내용에 기초할 때 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 합성과 옥신돌은 본 발명의 범위에 속한다.
5-아미노-2-옥신돌
5-니트로-2-옥신돌(6.3g)을 메탄올 하에서 탄소에 10%이상의 팔라듐으로 수소화하여 흰색 고체의 목적 화합물 3.0g(60% 수율)을 얻었다.
5-브로모-2-옥신돌
20ml의 아세토니트릴내에서 2-옥신돌(1.3g)을 10℃까지 냉각한 후, 2.0g N-브로모석시니미드를 천천히 혼합하면서 가하였다. 혼합물은 -10℃에서 1시간 동안 및 0℃에서 2시간 동안 혼합되었다. 침전물을 모으고, 물로 세척한 다음, 건조하여 1.9g(90% 수율)의 목적 화합물을 얻었다.
4-메틸-2-옥신돌
건조 에테르 20ml를 용매로 한 디에틸 옥살레이트(30ml)에 건조 에테르 50ml에 현탁된 포타슘 에톡시드 19g을 저으면서 가하였다. 혼합물을 얼음 욕조에서 냉각시키고 건조 에테르 20ml를 용매로 한 3-니트로-o-자일렌 20ml를 천천히 가하였다. 탁한 암적색 혼합물을 0.5시간동안 환류하며 가열하고, 암적색 고체로 농축시킨 후 10% 소디움 히드록시드로 거의 모든 고체가 용해될 때까지 처리하였다. 암적색 혼합물을 30% 히드로겐 퍼옥시드로 적색이 황색으로 바뀔 때까지 처리하였다. 혼합물을 암적색이 더이상 존재하지 아니할 때까지 10% 소디움 히드록시드와 30% 히드로겐 퍼옥시드로 번갈아 처리하였다. 고체를 여과하여 제거하고 여과액을 6N 염산으로 산성화 하였다. 그 결과 얻은 침전물을 진공 여과로 모으고, 물로 세척한 다음, 진공에서 건조하여 회색 또는 황색이 도는 흰색의 고체로 9.8g(45% 수율)의 2-메틸-6-니트로페닐아세트 산을 얻었다.
7-브로모-5-클로로-2-옥신돌
5-클로로-2-옥신돌(16.8g)과 19.6g의 N-브로모석시니미드를 140ml의 아세토니트릴에 현탁하고 3시간 동안 환류하였다. 환류 2시간 후, 박층 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트)는 5-클로로-2-옥신돌 또는 N-브로모석시니미드(Rf 0.8), 결과물(Rf 0.85) 및 두번째 결과물(Rf 0.9)을 나타내었는데, 이러한 비율은 또 한 시간의 환류 후에도 변화하지 아니하였다. 혼합물을 10℃에서 냉각시키고, 침전물을 진공여과하여 모은 다음, 25ml의 에탄올로 세척하고 깔대기에서 20분동안 흡입 건조하여 14.1g의 젖은 결과물(56%의 수율)을 얻었다. 고체를 200ml의 변성 에탄올에 현탁시키고, 10분동안 환류하고 저어서 슬러리(slurry)처럼 세척하였다. 혼합물을 얼음 욕조에서 10℃까지 냉각시켰다. 고체 결과물을 진공 여과로 모은 다음, 25ml의 에탄올로 세척하고 40℃ 진공하에서 건조하여 12.7g(51%의 수율)의 7-브로모-5-클로로-2-옥신돌을 얻었다.
5-플루오로-2-옥신돌
5-플루오로이자틴(8.2g)을 50ml의 히드라진 하이드레이트에 녹이고 1.0시간동안 환류하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 얼음물에 부었다. 이어서, 침전물을 여과하고, 물로 세척한 다음, 진공 오븐에서 건조하여 목적 화합물을 얻었다.
5-니트로-2-옥신돌
2-옥신돌(6.5g)을 25ml의 농황산에 용해시키고, 발연 질산 2.1ml를 한 방울씩 가하는 동안 혼합물을 -10 내지 -15℃로 유지하였다. 질산을 가한 후, 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 혼합시키고, 얼음물에 부었다. 침전물을 여과하여 모으고, 물로 세척한 다음, 50% 아세트 산으로 결정화하였다. 그 다음, 결정 결과물을 여과하고, 물로 세척한 다음, 진공에서 건조하여 6.3g(70%)의 5-니트로-2-옥신돌을 얻었다.
5-아미노설포닐-2-옥신돌
100ml 플라스크에 27ml의 클로로설폰 산을 담고 13.3g의 2-옥신돌을 천천히 가하였다. 옥신돌을 가하는 동안 반응 온도는 30℃ 이하로 유지하였다. 상기 첨가 과정 후, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간동안 혼합하고, 68℃에서 1시간동안 가열한 다음 물에 부었다. 침전물을 물로 세척하고 진공 오븐에서 건조하여 추가적인 정제 없이 사용할 수 있는 11.0g의 5-클로로설포닐-2-옥신돌(50% 수율)을 얻었다.
5-클로로설포닐-2-옥신돌(2.1g)을 10ml 에탄올을 용매로 한 10ml의 암모늄 히드록시드에 가하고, 실온에서 24시간 혼합하였다. 혼합물을 농축시키고, 진공 여과하여 고체를 모아서, 회색 또는 황색이 도는 고체로 0.4g(20% 수율)의 목적 화합물을 얻었다.
5-이소프로필아미노설포닐-2-옥신돌
100ml 플라스크에 27ml의 클로로설폰산을 담고 13.3g의 2-옥신돌을 천천히 가하였다. 옥신돌을 가하는 동안 반응 온도는 30℃ 이하로 유지하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 혼합하고, 68℃에서 1시간 동안 가열한 다음 냉각시키고 물에 부었다. 형성된 침전물을 여과하고, 침전물을 물로 세척한 다음, 진공 오븐에서 건조하여 추가적인 정제 없이 사용할 수 있는 11.0g(50% 수율)의 5-클로로설포닐-2-옥신돌을 얻었다.
디클로로메탄 50ml에 3g의 5-클로로설포닐-2-옥신돌, 1.15g의 이소프로필아민 및 1.2ml의 피리딘을 현탁시키고 흰색 고체가 형성되는 4시간 동안 실온에서 혼합하였다. 고체를 진공 여과하여 모으고, 뜨거운 에탄올로 슬러리처럼 세척한 다음, 냉각시키고 진공여과하여 모으고, 40℃에서 24시간 진공 건조하여 1.5g(45%)의5-이소프로필아미노설포닐-2-옥신돌을 얻었다.
5-페닐아미노설포닐-2-옥신돌
디클로로메탄(20ml)에 5-클로로설포닐-2-옥신돌(1.62g, 7mmol), 아닐린(0.782ml, 8.4mmol) 및 피리딘(1ml)를 현탁시키고, 실온에서 4시간 동안 혼합시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(300ml)로 희석하고 1N 염산(16ml)로 산성화하였다. 유기물 층을 소디움 바이카보네이트 및 함수(brine)으로 세척하고, 건조하여 농축하였다. 잔여물을 에탄올(3ml)로 세척한 다음, 실리카 겔에서 메탄올/디클로로메탄 1:9액을 전개액으로 하여 크로마토그래피를 실행하여 5-페닐아미노설포닐-2-옥신돌을 얻었다.
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰 산 피리딘-3-일아미드
5-클로로설포닐-2-옥신돌(3g) 및 3-아미노피리딘(1.46g)을 피리딘(15ml)에 녹인 용액을 갈색 고체가 생길 때까지 24시간 동안 실온에서 혼합하였다. 고체를 여과하고 에탄올로 세척한 다음, 진공에서 건조하여 1.4g(38%)의 2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰 산 피리딘-3-일아미드를 얻었다.
5-페닐옥신돌
5-브로모-2-옥신돌(5g, 23.5mmol)을 젓고 약간의 열을 가하여 110ml의 톨루엔 및 110ml의 에탄올에 용해시켰다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(1.9g, 1.6mmol)을 가한 다음, 40ml(80mmol)의 2M 수용성 소디움 카보네이트를 가하였다. 상기 혼합물에 벤젠 보론 산(3.7g, 30.6mmol)을 가하고, 혼합물을 100℃ 오일 욕조에서 12시간 동안 가열하였다. 반응물을 냉각시키고, 에틸 아세테이트(500ml)로 희석시킨 다음, 포화 소디움 바이카보네이트(200ml), 물(200ml), 1N HCl(200ml) 및 함수(200ml)로 세척하였다. 유기층을 마그네슘 설페이트를 통해 건조시키고, 농축하여 갈색 고체를 얻었다. 디클로로메탄과 연화하여 담갈색의 고체로 3.8g(77%)의 5-페닐-2-옥신돌을 얻었다.
유사한 방식으로, 후술하는 옥신돌을 얻을 수 있다:
6-(3,5-디클로로페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온
6-(4-부틸페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온
6-(5-이소프로필-2-메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온
6-(4-에틸페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온
6-(3-이소프로필페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온
6-(2,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온
6-피리딘-3-일-1,3-디히드로인돌-2-온
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-4-카르복실 산(3-클로로-4-에톡시페닐)-아미드
디메틸포름아미드(15ml)에 녹인 4-카르복시-2-옥신돌(200mg, 1.13mmol) 및 3-클로로-4-메톡시페닐아민(178mg, 1.13mmol) 용액에 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포니움 헥사플루오로포스페이트(BOP 시약, 997mg, 2.26mmol)을 실온에서 가하고, 4-디메틸아미노피리딘(206mg, 1.69mmol)을가하였다. 혼합물을 실온에서 72시간동안 혼합하였다. 이어서, 혼합물을 에틸 아세테이트(300ml)로 희석하고, 포화 소디움 바이카보네이트(100ml), 물, 2N 염산(100ml), 물(3×200ml) 및 함수로 세척하였다. 그 후, 마그네슘 설페이트로 건조시키고 농축시켰다. 잔여물을 에틸 아세테이트와 연화하여 분홍색 고체로 2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-4-카르복실 산(3-클로로-2-메톡시페닐)-아미드를 얻었다.
4-카르복시-2-옥신돌
20ml 메탄올에 녹인 2.01g 2-클로로-3-카르복시-니트로벤젠 용액에 헥산(2M)에 녹인 트리메틸실릴디아조메탄 용액을 한 방울씩 실온에서 더이상의 가스가 발생하지 아니할 때까지 가하였다. 그 후, 아세트 산을 가하여 과량의 트리메틸실릴디아조메탄을 제거하였다. 반응 혼합물을 진공하에서 증발시키고 잔여물을 오븐에서 24시간 건조시켰다. 얻어진 2-클로로-3-메톡시카보닐니트로벤젠은 이후의 반응에 사용되기에 충분할 정도의 순도를 가졌다.
디메틸 말로네이트(6.0ml)를, 2.1g 소디움 히드라이드를 15ml DMSO에 현탁시킨 얼음같이 찬 현탁액에 가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1시간동안 혼합한 다음, 실온까지 냉각시켰다. 2-클로로-3-메톡시카보닐니트로벤젠(2.15g)을 일부분으로 가하였고, 혼합물을 1.5시간 동안 100℃에서 가열하였다. 그 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음 물에 부은 다음, pH5까지 산성화하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 함수로 세척하고, 무수 소디움 설페이트로 건조시킨다음, 농축하여 3.0g의 디메틸 2-메톡시카보닐-6-니트로페닐-말로네이트를 얻었다.
디메틸 2-메톡시카보닐-6-니트로페닐말로네이트(3.0g)을 50ml의 6N 염산에서 24시간동안 환류시켰다. 혼합물을 농축시켜 건조시키고 20ml 에탄올 및 1.1g의 주석(II) 클로라이드를 가한 다음, 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 셀라이트(Celite)를 통해 여과하고, 농축시킨 다음, 실리카 겔에 에틸 아세테이트:헥산:아세트 산 용액을 전개액으로사용하여 크로마토그래피를 시행하여 흰색 고체로 0.65g(37%)의 4-카르복시-2-옥신돌을 얻었다.
D. 피롤 치환 2-인돌리논의 합성
실시예 1
4-메틸-5-(2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산
4-메틸-2-피롤카르복실 산 에틸 에스테르(상업적으로 이용가능)을 방법A를 사용하여 포르밀화하여 5-포르밀-4-메틸-2-피롤카르복실 산 에틸 에스테르(73%)를 얻었다. 그 후, 방법B를 사용하여 가수분해하여 5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산(58%)을 얻었다.
옥신돌(133mg, 1mmol)을 방법D를 사용하여 5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산(153mg)으로 축합하여, 오렌지-적색의 고체로 268mg(100%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 2
4-메틸-5-(1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산
1-메틸-1,3-디히드로인돌-2-온(147mg. 1mmol)을 5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산(153mg)으로 방법D를 사용하여 축합시켜서 250mg(86%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 3
4-메틸-5-(2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 메틸 에스테르
옥신돌(105mg, 0.79mmol)을 방법 E를 사용하여 5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 메틸 에스테르(110mg, 0.67mmol)로 축합시켜서 153.2mg(81%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 4
5-(5-클로로-2-옥소-1,2,-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 에틸 에스테르
5-클로로-1,3-디히드로인돌-2-온(2.22g, 13.2mmol)을 방법E를 사용하여 5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 에틸 에스테르(2.43g)으로 축합시켜서 오렌지색 고체로 4.1g(94%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 5
5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3=일리덴메틸)-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산
메탄올(25ml)와 에탄올(25ml)를 용매로 한 5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 에틸 에스테르(1.3g, 4mmol)과 포타슘 히드록시드의 혼합물을 가열하면서 24시간 동안 환류시켰다. 불용성 물질을 여과로 제거하고 혼합물을 6N 염산으로 중성화하여 0.876g(70%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 6
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일-프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(0.16g, 0.76mmol)을 5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산(3-피롤리딘-1-일프로필)아미드(0.2g, 방법C로 준비됨)로 축합시켜 오렌지색 고체로 60mg(17%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 7
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노-프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(0.16g, 0.75mmol)을 5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드(0.2g, 방법C로 준비됨)와 축합시켜서 오렌지색 고체로 30mg(8%)의 목적화합물을 얻었다.
실시예 8
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(212mg, 1mmol)을 5-포르밀-1H-피롤-2-카르복실 산(2-디에틸아미노에틸)아미드(방법A,B및C에 의하여 에틸 피롤-2-카르복실레이트로부터 준비됨)로 축합하여 162mg(38%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 9
5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온(209mg, 1mmol)을 5-포르밀-1H-피롤-2-카르복실 산(2-디에틸아미노에틸)아미드와 축합시켜서 182mg(42%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 10
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)-메틸-아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(212mg, 1mmol)을 5-포르밀-1H-피롤-2-카르복실 산(2-디에틸아미노에틸)메틸아미드와 축합시켜 246mg(55%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 11
5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)메틸아미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온(209mg, 1mmol)을 5-포르밀-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)메틸아미드와 축합시켜서 277mg(63%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 12
3-메틸-5-(2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
옥신돌(66.5mg, 0.5mmol)을 5-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드(방법 B, 이어서 방법 C에 의하여 3-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 에틸 에스테르로부터 준비됨)와 축합시켜서 39mg(21%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 13
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노-프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(106mg, 0.5mmol)을 5-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드로 축합시켜서 35mg(15%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 14
3-메틸-5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온(105mg, 0.5mmol)을 5-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드와 축합시켜 67.8g(30%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 15
5-(5-메톡시-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노-프로필)아미드
5-메톡시-1,3-디히드로인돌-2-온(82.5mg, 0.5mmol)을 5-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드와 축합시켜 80mg(39%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 16
5-(6-메톡시-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노-프로필)아미드
6-메톡시-1,3-디히드로인돌-2-온 (82.5mg, 0.5mmol)을 5-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드와 축합시켜 63mg(31%)의 목적 화합물을 얻었다.
실시예 17
3-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)아미드
4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 에틸 에스테르(May, Donald A.; Lash, Timothy D.;J. Org. Chem., 1992, 57:18, 4820-4828)를 방법 B, 이어서 방법 C를 이용하여 포르밀화하여 3-포르밀-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산을 얻었다.
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(1.43g, 6.8mmol)을 3-포르밀-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드(1.97g)과 축합시켜서 2.2g(67%)의 목적 화합물을 황색-오렌지색 고체로 얻었다.
실시예 18
3-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (3-디에틸아미노-프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(20mg, 0.1mmol)을 3-포르밀-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드(30mg)와 축합시켜 33mg(46%)의 목적 화합물을 오렌지색 고체로 얻었다.
실시예 19
3-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(80mg, 0.4mmol)을 3-포르밀-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드(120mg)과 축합시켜서 43mg(22%)의 목적 화합물을 담갈색-오렌지색 고체로 얻었다.
실시예 20
3-(2-옥소-6-피리딘-3-일-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (3-디에틸아미노에틸)아미드
6-피리딘-3-일-1,3-디히드로인돌-2-온(60mg, 0.4mmol)을 3-포르밀-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드(80mg)과 축합시켜 50mg(38%)의 목적 화합물을 적색이 도는 고체로 얻었다.
실시예 21
4-벤조일-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
0℃에서 디클로로에탄에 녹인 벤조일 클로라이드(1당량)과 알루미늄 클로라이드(1당량)의 혼합물에 에틸-3,5-디메틸-2-피롤카르복실레이트(1당량)을 가하였다. 혼합물을 80℃에서 4시간동안 혼합하였다. 그 후, 혼합물을 에틸 아세테이트(EtOAc)와 H2O로 추출하였다. 복합 유기 추출물을 포화 소디움 바이카보네이트와 브라인으로 세척하고, 건조 및 농축하여 4-벤조일-3,5-디메틸-1H-피롤-2-카르복실 산(51%)를 얻었다.
50ml의 테트라히드로퓨란(THF):아세트 산(HOAc):H2O 1:1:1에 녹인 4-벤조일-3,5-디메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 에틸 에스테르(4.13g, 15.2mmol)과 세릭 암모늄 니트레이트(33g, 4당량)의 혼합물을 24시간 동안 환류시켰다. 그 후, 반응 혼합물을 냉각 시키고, EtOA로 추출한 다음, 소디움 카보네이트로 pH9까지 염기화 하였다. 이어서, 염기층을 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하고 농축시킨 후, 칼럼 크로마토그래피를 시행하여 3.25g(75%)의 4-벤조일-5-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 에틸 에스테르를 황색 고체로 얻었다.
5-브로모-1,3-디히드로-인돌-2-온을 4-벤조일-5-포르밀-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산과 방법 D를 사용하여 축합시켜서 4-벤조일-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산을 얻었다.
그 후, 상기한 카르복실 산을 N,N-디에틸-1,3-프로판디아민과 방법 C를 사용하여 결합시켜 목적 화합물을 얻었다.
실시예 22
4-벤조일-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-모르폴린-4-일프로필)아미드
실시예 23
4-벤조일-3-메틸-5-(2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
실시예 24
4-벤조일-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
실시예 25
4-벤조일-3-메틸-5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
실시예 26
4-벤조일-5-(6-메톡시-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
실시예 27
4-벤조일-5-(5-메톡시-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일메틸)아미드
실시예 28
4-벤조일-5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
실시예 29
4-아세틸-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
실시예 30
4-아세틸-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
실시예 31
4-아세틸-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-모르폴린-4-일프로필)아미드
실시예 32
4-아세틸-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (3-히드록시프로필)아미드
실시예 34
4-아세틸-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-모르폴린-4-일에틸)아미드
실시예 35
4-아세틸-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
실시예 36
4-아세틸-5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 [2-(4-히드록시페닐)에틸]아미드
실시예 37
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
H2O에서 2-아미노아세토페논 히드로클로라이드(1당량), 에틸 이소부티릴아세테이트(1.2당량) 그리고 소디움 아세테이트(2.4당량)의 혼합물을 100℃에서 18시간동안 섞은 다음 실온으로 냉각시켰다. 수용층은 잘 따라내고 지용층은 에틸 아세테이트에 용해시켰다. 물과 브라인으로 씻어낸 후, 건조시켜 적갈색의 오일(oil), 2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에테르(93%)를 얻었다.
방법A를 이용하여 상기된 피롤을 포르밀화시켜서, 붉은색을 띤 고체로 5-포밀-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에테르(41%)를 얻었다.
방법B를 이용하여 피롤 카르복실 산 에테르를 가수분해시켜서, 베이지색을 띤 고체로 5-포밀-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산을 얻었다.
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(120mg, 0.31 mmol)을 5-포밀-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(3-디에틸아미노프로필)아미드(방법C에 의해 준비된)로 축합시켜서 목적화합물 120mg(71%)를 얻었다.
실시예 38
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 (127 mg, 0.28mmol)을 3-피롤리딘-1-일-프로필아민(43mg, 0.336mmol)을 축합시켜 140 mg의 목적화합물(66%)을 얻었다.
실시예 39
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (57mg, 0.27mmol)을 5-포밀-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드(120mg)로 축합시켜 황색 고체로 목적화합물 78mg(53%)을 얻었다.
실시예 40
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 [3-(4-메틸피퍼라진-1-일)프로필]아미드
5--브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(53 mg, 0.25 mmol)을 5-포밀-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 [3-(4-메틸피퍼라진-1-일)프로필]아미드(300mg)로 축합시켜서 목적화합물 65mg을 얻었다.
실시예 41
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산
방법D를 이용하여 5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(170mg, 0.8 mmol)을 5-포르밀-2-이소프로필-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(205mg)로 축합시켜서 황색 고체로 목적화합물 210mg(58%)을 얻었다.
실시예 42
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(44mg, 0.21mmol)을 5-포르밀-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(2-피롤리딘-1-일에틸)아미드(70mg, 상기된 이소프로필 유사체와 같은 방식으로 준비된)로 축합시켜 노란색을 띤 목적화합물 0.03g(27%)을 얻었다.
실시예 43
5-[6-(2-메톡시페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
6-(2-메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온(50mg, 0.21mmol)을 5-포르밀-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(2-피롤리딘-1-일에틸)아미드(70mg)로 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 0.04g(35%)을 얻었다.
실시예 44
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디메틸아미노에틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(46mg, 0.22mmol)을 5-포르밀-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디메틸아미노에틸)아미드(65mg)로 축합시켜서 황색고체로 목적화합물 60mg(55%)을 얻었다.
실시예 45
5-[6-(2-메톡시페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-2-일리덴메틸]-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디메티아미노에틸)아미드
6-(2-메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온(53mg, 0.22mmol)을 5-포르밀-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디메틸아미노에틸)아미드(65mg)로 축합시켜서 오렌지색의 고무와 같은 목적 화합물 0.05g(44%)를 얻었다.
실시예 46
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리제네메틸)-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(60mg, 0.29mmol)을 5-포르밀-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르(75mg)로 축합시켜서 오렌지색 고체로 목적화합물 78mg(60%)를 얻었다.
실시예 47
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(3-디에틸아미노프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(0.47mg,2.2mmol)을 5-포르밀-2-메틸-4-페닐-1H-피롤-3-카르복실 산(3-디에틸아미노프로필)아미드(0.75 g)로 축합시켜서 오렌지색 고체로 목적화합물 0.11g(42%)을 얻을 수 있다.
실시예 48
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노-에틸)아미드
아세트산에서 터트-부틸 3-옥소부티레이트와 소디움 니트리트(1당량)를 실온에서 혼합하여 터트-부틸-2-히드록시미노-3-옥소부티레이트를 얻었다.
에틸-3-옥소부티레이트(1당량), 아연 분말(3.8당량)과 정제되지 아니한터트-부틸-2-히드록시미노-3-옥소부티레이트를 아세트산에서 1시간 동안 60℃의 온도에서 혼합하였다. 반응혼합물을 H2O에 붓고 그 여과액을 여과시켜서 2-터트-부틸옥시카르보닐-3,5-디메틸-4-에톡시카르보닐피롤(65%)를 얻었다.
트리플루오로아세트 산에서 2-터트-부틸옥시카르보닐-3,5-디메틸-4-에톡시카르보닐피롤과 트리에틸 오르토포메이트(1.5당량)을 1시간동안 15℃에서 혼합하였다. 이 반응을 농축시킨 후 그 잔여물을 정제하여 노란색의 바늘 모양의 2,4-디메틸-3-에톡시카르보닐-5-포르밀피롤(64%)을 얻었다.
방법 B를 이용하여 2,4-디메틸-3-에톡시카르보닐-5-포르밀피롤을 가수분해시켜서 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(90%)를 얻었다.
방법 B를 사용하여 5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온(0.17 g, 0.8 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-2,4-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드 (0.2 g, 방법C에 의해 준비된)과 축합시켜서 노란색을 고체로 목적화합물0.3 g을 얻었다.
실시예 49
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미로에틸)아미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온- (0.17g, 0.8mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디메틸아미노에틸)아미드 (0.2g)로 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 0.13g(36%)을 얻었다.
실시예 50
5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드
5-클로로-1,3-디히드로인돌-2-온 (0.1g, 0.6mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드 (0.15g)로 축합시켜서 황색 고체로 목적화합물 0.22g(90%)를 얻었다.
실시예 51
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-키르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (0.17 g, 0.8 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드 (0.2g)로 축합시켜서 황색의 고체로 목적화합물 0.09g(26%)를 얻었다.
실시예 52
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리데테메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (0.09 g, 0.4 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (0.1g)로 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 0.14g(81%)을 얻었다.
실시예 53
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-이미다졸-1-일프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온- (0.09 g, 0.4 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(3-이미다졸-1-일프로필)아미드 (0.1g)을 축합하여 오랜지색 고체로 목적화합물 0.1g (59%)를 얻을 수 있다.
실시예 54
5-[6-(2-메톡시페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드
6-(2-메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-one (30 mg, 0.3mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디메틸아미노에틸)아미드 (30mg)과 축합하여 황색-오렌지색 고무의 목적화합물 0.06g(100%)를 얻었다.
실시예 55
5-[6-[3-메톡시페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드
6-(3-메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온 (30mg, 0.13mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드 (30mg)과 축합하여 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 8 mg(14%)를 얻었다.
실시예 56
2,4-디메틸-5-(2-옥소-5-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
방법 B를 이용하여 5-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온 (80 mg, 0.4mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드 (0.1g)과 축합하면 목적화합물 79mg(46%)를 얻었다.
실시예 57
2,4-디메틸-5-(2-옥소-5-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
5-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온 (0.04g, 0.2mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (0.04g)와 축합하여 황색-오렌지색 고체로 목적화합물을 얻었다.
실시예 58
2,4-디메틸-5-(2-옥소-5-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-이미다졸-1-일프로필)아미드
5-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온(8 mg, 0.04 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-이미다졸-1-일프로필)아미드 (10mg)와 축합하여 오렌지색 고체로 목적화합물 10mg(59%)를 얻었다.
실시예 59
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온- (0.08 g, 0.4mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디에틸아미노에틸)아미드 (0.1g)와 축합하여 황색고체로 목적화합물 65mg(38%)를 얻었다.
실시예 60
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)이미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온 (30 mg, 0.15mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (40mg)와 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 5.9g(8.5%)를 얻었다.
실시예 61
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-이미다졸-1-일프로필)아미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온 (8 mg, 0.04 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-이미다졸-1-일프로필)아미드 (10mg)과 축합시켜서 오렌지색 고체로 목적화합물 7.3mg(43%)를 얻었다.
실시예 62
5-[6-(3,5-디클로로페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
6-(3,5-디클로로페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온 (64 mg, 0.23mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드 (60mg)와 축합시켜서 밝은 갈색의 고체 목적화합물 53mg(44%)을 얻었다.
실시예 63
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-피리딘-3-일-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
6-피리딘-3-일-1,3-디히드로인돌-2-온 (40mg, 0.19mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드 (50mg)와 축합시켜서 밝은 오렌지색 고체로 목적화합물 29mg(33%)을 얻었다.
실시예 64
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-피리딘-3-일-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
6-피리딘-3-일-1,3-디히드로인돌-2-온 (60 mg, 0.28 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피폴리딘-1-일에틸)아미드 (75mg)와 축합시켜서 밝은 오렌지색 고체로 목적화합물 90mg (71%)를 얻었다.
실시예 65
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-피리딘-3-일-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디메틸아미노프로필)아미드
6-피리딘-3-일-1,3-디히드로인돌-2-온 (42 mg, 0.2 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디메틸아미노프로필)아미드 (50mg)와 축합시켜서 황색-갈색 고체로 화합물 67mg(75%)를 얻었다.
실시예 66
2,4-디메틸-5-(2-옥소-5-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디메틸아미노프로필)아미드
5-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온 (67mg, 0.32mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디메틸아미노프로필)아미드 (81mg)와 축합시켜서 오렌지색의 고체로 목적화합물 40mg(28%)를 얻었다.
실시예 67
2,4-디메틸-5-(2-옥소-5-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
5-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온 (1.5g, 7,16mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드(2g)와 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 1.3g(40%)를 얻었다.
실시예 68
2,4-디메틸-5-(2-옥소-6-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
6-페닐-1,3-디히드로인돌-2-온 (1.5g, 7,16 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드 (2g)와 축합시켜서오렌지색 고체로 목적화합물 1,9g(57%)를 얻었다.
실시예 69
3-[4-(3-디에틸아미노프로필카바모일)-3,5-디메틸-1H-피롤-2-일메틸렌]-2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-4-카르복실 산 (3-클로로-4-메톡시페닐)아미드
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-4-카르복실 산 (3-클로로-4-메톡시페닐)아미드 (1g, 3.16mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드 (1g, 3.58mmol)와 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 1.7g(85%)를 얻었다.
실시예 70
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (0.5g, 2.36mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드 (0.51g)과 축합시켜서 적색-오렌지색의 고체 목적화합물 0.84g을 얻었다.
실시예 71
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디이소프로필-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (100ng, 0.47mmol)을 5-포르밀-2,4-디이소프로필-1H-피롤-3-카르복신 산(2-디에틸아미노에틸)아미드(150ng)와 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 0.15g(62%)를 얻었다.
실시예 72
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디이소프로필-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (90mg, 0.42mmol)을 5-포르밀-2,4-디이소프로필-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-디에틸아미노프로필)아미드 (140mg)와 축합시켜서
적색-갈색 고체로 목적화합물 54mg(25%)를 얻었다.
실시예 73
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디이소프로필-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-피롤리딘-1-일프로필)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (130 mg, 0.6 mmol)을 5-포르밀-2,4-디이소프로필-1H-피롤-3-카르복실 산 (3-피롤피딘-1-일프로필)아미드 (150mg, 0.45mmol)와 축합시켜서 담갈색-오렌지색 고체로 목적화합물 36mg (15%)을 얻었다.
실시예 74
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (피리딘-4-일메틸)아미드
5-브로모-1,3-디히드로인돌-2-온 (170 mg, 0.8mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (피리딘-4-일메틸)아미드 (200mg)과 축합시켜서 황색 고체로 목적화합물 14mg (4%)를 얻었다.
실시예 75
5-[6-(4-부틸페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
5-[6-(4-부틸페닐)]-1,3-디히드로인돌-2-온 (50mg, 0.19mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (50mg)과 축합하여 오렌지색 고체로 목적화합물 74mg (76%)를 얻었다.
실시예 76
5-[6-(5-이소프로필-2-메톡시페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
6-(5-이소프로필-2-메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온 (50mg, 0.17mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)아미드 (45mg)과 축합하여 오렌지색 고체로 목적화합물 67mg (75%)를 얻었다.
실시예 77
5-[6-(4-에틸페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
6-(4-에틸페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온 (45mg, 0.19mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (50mg)와 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 60mg(65%)를 얻었다.
실시예 78
5-[6-(2,4-디메톡시페닐)2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
6-(2,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온 (51mg, 0.19mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (50mg)와 축합시켜서 오렌지색의 고체 목적화합물 30mg (31%)를 얻었다.
실시예 79
5-[6-(3-이소프로필페닐)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
6-(3-이소프로필페닐)-1,3-디히드로인돌-2-온 (48mg, 0.19mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (50mg)로 축합시켜서 오렌지색 고체로 59mg(63%)의 목적화합물을 얻었다.
실시예 80
5-(5-플루오르-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
5-플루오르-1,3-디히드로인돌-2-온 (0.54g, 3.8mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드로 축합시켜서 황녹색 고체로 0.83g(55%)의 목적화합물을 얻었다.
실시예 80(대체 합성)
5-[5-플루오르-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)아미드
히드라진 히드레이트 (55%, 3000mL)와 5-플루오로이사틴(300g)을 100℃에서 가열한다. 이 중 100g을 취하여 5-플루오르이사틴(500g)을 첨가시킨 후 120분 이상 혼합시켰다. 혼합물을 110℃에서 가열하면서 4시간 동안 혼합시키었다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후 진공 여과기로 고체를 여과시켜서 정제되지 아니한(2-아미노-5-플루오로-페닐)-아세트 산 히드라지드 (748p)를 얻었다. 히드라지드를 물(700mL)에 용해시켜서 혼합물의 pH를 2N의 하이드로클로릭 산으로 pH 3이하로 조절하였다. 혼합물을 12시간동안 실온에서 혼합하였다. 고체를 진공여과기에서 거른 후, 물로 두번 씻어내었다. 생성물을 진공에서 건조시켜서 갈색의 분말로 5-플루오로-1,3-디히드로-인돌-2-온 (600g, 73% 수율)을 얻었다.1H-NMR (dimethyl sulfoxide-d6) δ3.46 (s, 2H, CH2), 6.75, 6.95, 7.05 (3 x m, 3H, aromatic), 10.35 (s, 1H, NH). MS m/z 152 [M+1]
3,5-디메틸-1H-피롤-2,4-디카르복실 산 2-3차-부틸 에스테르 4-에틸 에스테르 (2600g)와 에탄올 (7800mL)를 10N의 염산(3650mL)를 천천히 첨가시켜서서 격렬하게 혼합시켰다. 온도가 25℃에서 35℃로 상승하면서 가스가 방출되기 시작하였다. 혼합물을 54℃까지 가열한 후 한시간동안 가열하면서 온도가 67℃가 될 때까지 계속 혼합하였다. 혼합물에 32L의 물과 얼음으로 천천히 5℃까지 냉각시켰다. 진공 여과기로 여과된 고체를 물로 세번 씻어내었다. 공기로 일정한 무게가 될 때까지 건조시켜 분홍색 고체 2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르(1418g, 87% yield)를 얻었다.1H-NMR (dimethylsulfoxide-d6) δ2.10, 2.35 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 4.13 (q, 2H, CH2), 6.37 (s, 1H, CH), 10.85 (s, 1H, NH). MS m/z 167 [M+1].
디메틸포름아미드(322g)과 디클로로메탄(3700mL)을 얼음 욕조에서 포스포러스 옥시클로라이드(684g)와 혼합시켜서서 4℃까지 온도를 낮춘다. 고체 2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르(670g)을 한 방울씩 15분이상 천천히 첨가하였다. 최고 온도는 18℃까지 도달하였다. 혼합물을 가열하고 얼음욕조에서 다시 냉각시키는 과정을 1시간동안 한다음 1.6L의 얼음물을 빠르게 첨가시켜서서 격렬하게 혼합하였더니 온도가 22℃까지 상승하였다. 혼합물을 30분동안 stand for 하여 층이 분리되도록 하였다. 이때 온도는 최고 40℃까지 증가하였다. 55℃로 온도를 유지시키면서 10N의 포타슘 히드록사이드 (3.8L)를 첨가하여 수용액층을 pH 12-13으로 조절하였다. 첨가가 끝난 후에 혼합물을 10℃까지 냉가시키면서 한시간동안 혼합한다. 진공여과기로 여과한 고체를 물로 4번 씻어내면 황색의 고체로 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르 (778g, 100% yield)를 얻었다.1H-NMR (DMSO-d6) δ1.25 (t, 3H, CH3), 2.44, 2.48 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 4.16 (q, 2H, CH2), 9.59 (s, 1H, CHO), 12.15 (br s, 1H, NH). MS m/z 195 [M+1].
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르 (806g), 포타슘히도록사이드 (548g), 물(2400mL) 및 메탄올(300mL)들을 두시간동안 혼합하면서
8℃으로 냉각시켰다. 혼합물을 디클로로메탄으로 두번 추출하였다. 수용액층을 15℃이하로 유지하면서 10N 염산 1000mL로 pH 4로 조절하였다. 혼합을 촉진하기위해서 물을 첨가하였다. 진공여과기로 여과한 고체를 물로 세번 세척한 다음 50℃, 진공상태에서 건조하여 황색의 고체로 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (645g, 93,5% 수율)을 얻었다. NMR (DMSO-d6) δ2.40, 2.43 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 9.57 (s, 1H, CHO), 12.07 (br s, 2H, NH+COOH). MS m/z 168 [M+1].
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (1204g)과 6020mL의 디메틸포름아미드에 1-(3-디메틸-아미노프로필-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (2071g), 히드록시벤조트리아졸(1460g), 트리에틸아민 (2016mL) 및 디에틸에틸렌디아민(1215mL)을 첨가하면서 실온에서 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 30시간동안 혼합하였다. 혼합물을 3000mL의 물, 2000mL 브라인 및 3000mL의 포화된 소디움 비카보네이트로 희석시킨다음, 10N의 소디움 히드록사이드로 pH를 10이상으로 조절하였다. 혼합물을 디클로로메탄에서 10%의 메탄올 5000mL로 각각 두번 추출한다음 톨루엔 1950mL로 희석시키고 회전하면서 증발시켜서 건조시켰다. 잔여물은 3:1 헥산:디에틸에테르 (4000mL)로 연화하였다. 진공여과기에서 여과된 고체를 400mL의 에틸아세테이트로 세척한 다음 34℃에서 21시간동안 진공상태에서 건조하여 밝은 갈색의 고체 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드(819g, 43% 수율)를 얻었다.1H-NMR (dimethylsulfoxide-d6) δ0.96(t, 6H, 2xCH3), 2.31, 2.38 (2xs, 2 x CH3), 2.51 (m, 6H 3xCH2), 3.28 (m, 2H, CH2), 7.34 (m, 1H, amide NH), 9.56 (s, 1H, CHO), 11.86 (s, 1H, pyrrole NH). MS m/z 266 [M+1].
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)-아미드 (809g), 5-플루오로-1,3-디히드로-인돌-2-온(438g), 에탄올(8000mL) 및 피롤리딘 (13mL)들을 시간동안 78℃에서 가열한다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, 진공여과기에서 여과한 고체를 다시 에탄올로 세척한다. 고체를 30분동안 72℃에서 에탄올(5900mL)과 혼합하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 진공여과기에서 여과된 고체를 에탄올로 세척한 다음 54℃에서 130시간동안 진공상태에서 건조시켜 오렌지색의 고체 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복신 산(2-디에틸아미노에틸)-아미드 (1013g, 88% 수율)를 얻었다.1H-NMR (dimethylsulfoxide-d6) δ0.98 (t, 6H, 2xCH3), 2.43, 2.44 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 6H, 3xCH2), 3.28 (q, 2H, CH2), 6.84, 6.92, 7.42, 7.71, 7.50 (5xm, 5H, aromatic, vinyl, CONH), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.68 (s, 1H, pyrrole NH). MS m/z 397 [M-1].
실시예 81
3-[4-(2-디에틸아미노에틸카바모일)-3,5-디메틸-1H-피롤-2-일메틸렌]-2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-6-카르복실 산
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-6-카르복실 산 (80mg, 0.45mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2--디에틸아미노에틸)아미드로 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 210mg(92%)을 얻었다.
실시예 82
5-(5-디메틸술파모일-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-피롤리딘-1-이에틸)아미드
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰 산 디메틸아미드(90mg, 0.38mmol)을
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)아미드(100mg)로 축합시켜서 황색 고체로 목적화합물 100mg(54%)를 얻었다.
실시예 83
5-[5-(3-클로로페닐술파모일)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸-)아미드
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰 산 (3-클로로-페닐)아미드 (120mg, 0.38 mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-피롤리딘-1-일에틸)아미드 (100mg)로 축합시켜서 황색-오렌지색 고체로 목적화합물 150mg(69%)를 얻었다.
실시예 84
2,4-디메틸-5-[2-옥소-5-(피리딘-3-일설파모일)-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-1H-피롤-3-카르복실 산(2-피롤리딘-1-일에틸)아미드
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰 산 피리딘-3-일아미드(110mg, 0.38mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일에틸)
아미드 (100mg)로 축합시켜서 오렌지색 고체로 목적화합물 150mg(74%)를 얻었다.
실시예 85
3-[3,5-디메틸-4-(4-메틸피퍼라진-1-카르보닐)-1H-피롤-2-일메틸렌]-4-(2-히드록시에틸)-1,3-디히드로인돌-2-온
4-(2-히드록시에틸)-1,3-디히드로인돌-2-온 (71mg, 0.4mmol)을 3,5-디메틸-4-(4-메틸-피퍼라진-1-카바모일)-1H-피롤-2-카르바알데히드로 축합시켜서 오렌지색 고체로 목적화합물 90mg(55%)를 얻었다.
실시예 86
3-[3,5-디메틸-4-(4-메틸피퍼라진-1-카르보닐)-1H-피롤-2-일메틸렌]-2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰산 페닐아미드
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰산 페닐아미드(110mg, 0.4mmol)을 3,5-디메틸-4-(4-메틸피퍼라진-1-카르보닐)-1H-피롤-2-카르바알데히드 (100mg)로 축합시켜서 황색 고체로 목적화합물 50mg(24%)를 얻었다.
실시예 87
5-(5-디메틸설파모일-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰산 디메틸아미드(90mg, 0.38mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드 (100mg)로 축합시켜서 황색 고체로 목적화합물 80mg(43%)를 얻었다.
실시예 88
5-[5-(3-클로로페닐설파모일)-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드
2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-5-설폰산 (-클로로-페닐)아미드 (120mg,3.8mmol)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)아미드 (100mg)로 축합시켜서 황색 고체로 목적화합물 80mg(37%)를 얻었다.
실시예 95
3-(2-옥소-페닐-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 에틸 에스테르
실시예 99
3-(2-옥소-5-페닐설파모일-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-카르복실 산 에틸 에스테르
실시예 109
3-[3-(모르폴린-4-카르보닐)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-일메틸렌]2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-6-카르복실 산
실시예 112
5-브로모-3-[3-(피롤리딘-1-카르보닐)-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-일메틸렌]-1,3-디히드로-인돌-2-온
실시예 114
3-(3-디메틸카르보닐-4,5,6,7-테트라히드로-2H-이소인돌-1-일메틸렌)-2-옥소-2,3-디히드로-1H-인돌-6-카르복실 산
실시예 115
4-메틸-5-(5-메틸설파모일-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산
실시예 116
{[4-메틸-5-(4-메틸-5-메틸설파모일-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르보닐]-아미노}-아세트산 에틸 에스테르
4-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르 (lit. ref. D.O. Cheng, T.L. Bowman and E. LeGoff; J. Heterocyclic Chem.; 1976; 13; 1145-1147)를 방법 A를 사용하여 포르밀화 시키고, 아미드화에 이어(방법C) 방법B를 사용하여 가수분해시켜서 [(5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-3-카르보닐)-아미노]-아세트산 에틸 에스테르를얻었다.
에탄올(2mL)에서 4-메틸-5-메틸아미노설포닐-2-옥신돌 (50mg, 0.21mmol)을 [(5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-3-카르보닐)-아미노-아세트산 에틸 에스테르 (100mg, 0.42mmol)와 피퍼리딘 (0.1mL)로 축합시켜서 목적화합물 50mg(52%)를 얻었다.
실시예 117
{[4-메틸-5-(5-메틸설파모일-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르보닐]-아미노}-아세트산 에틸 에스테르
5-메틸아미노설포닐-2-옥신돌 (0.06g, 0.22 mmol), [(5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-3-카르보닐)-아미노]-아세트산 에틸 에스테르 (0.075g, 0.27 mmol)와 피퍼리딘(2방울)을 에탄올(5mL)과 혼합하여 12시간동안 90℃로 밀봉된 튜브에서 가열시켰다. 냉각시킨후, 침전물을 진공여과기로 여과시킨 후, 에탄올로 세척하여 디클로로메탄/에테르로 분말화시키고, 건조시켜서 황색-갈색 고체로 목적화합물 0.035g(36%)을 얻었다.
실시예 118
{[4-메틸-5-(5-메틸설파모일-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르보닐]-아미노}-아세트산
[(5-포르밀-4-메틸-1H-피롤-3-카르보닐)-아미노]-아세트산 에틸 에스테르 (0.142g, 0.59mmol)와 1N의 NaOH (1.2mL)를 메탄올 (10mL)에서 실온에서 1시간동안 혼합하였다. 이 반응물을 농축시킨후 그 잔여물을 5-메틸아미노설포닐-2-옥신돌 (0.13g, 0.48mmol)와 피퍼리딘 (0.12mL)을 에탄올 (12mL)에서 축합시켜서 목적화합물 0.11g(52%)를 얻었다.
실시예 120
5-메틸-2-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸-1H-피롤-3-카르복실 산
실시예 121
5-메틸-2-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르
실시예 122
2-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히로인돌-3-일리덴메틸)-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 에틸 에스테르
실시예 123
2-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산
실시예 124
2-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피로리딘-1-일에틸)-아미드
디메틸포름아미드(3mL)에서 2-포르밀-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (250mg, 1.63mmol) 용액에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드(376mg, 1.2당량), 1-히드록시벤조트리아졸(265mg, 1.2당량), 트리에틸아민 (0.45mL, 2당량) 및 1-(2-아미노에틸)피롤리딘 (0.23mL, 1.1당량)들을 가한다. 24시간 동안 실온에서 진탕한 다음, 이 반응을 포화된 소디움 비카르보네이트와 브라인(with extra salt)으로 희석시킨 후, 디클로메탄에서 10%메탄올로 추출한다. 화합된 유기층을 브라인으로 세척시킨후, 무수 소디움 설페이트로 건조시키고, 농축시켜서 2-포르밀-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드 130mg을 얻었다.
5-브로모-2-옥신돌 (106mg, 0.5mmol), 2-포르밀-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드 (125mg, 1당량) 및 피퍼리딘 (0.2mL)의 혼합물을 에탄올 (2mL)과 함께 밀봉된 튜브에서 한시간동안 가열하였다, 생성된 침전물을진공 여과기로 여과시킨다음 에탄올과 에틸 아세테이트로 세척하여 오렌지색 고체로 목적화합물을 얻기 위해 건조시킨다.
실시예 125
2-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)-아미드
디메틸포름아미드 (3mL)에서 2-포르밀-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (320mg, 2.1당량)의 용액에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보이미드(483mg, 1.2당량), 1-히드록시벤조트리아졸 (340mg, 1.2당량), 트리에틸아민 (0.59mL, 2당량) 및 N,N-디에틸에틸렌디아민(0.32mL, 1.1당량)을 가한다. 24시간 동안 실온에서 진탕한다음 포화된 소디움 비카르보네이트와 브라인(with extra salt)로 희석시킨다음 디클로로메탄에서 10% 메탄올로 추출하였다. 화합한 유기층들을 브라인으로 세척하고, 무수 소디움 설페이트로 건조시킨 후 농축시켜서 2-포르밀-5-메틸-1H-피롤-2-카르복실 산 (2-디에틸아미노에틸)-아미드를 얻었다.
5-브로모-2-옥신돌 (106mg, 0.5mmol), 2-포르밀-5-메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드 (126mg, 1당량) 및 피퍼리딘 (-.2mL)읜 혼합물을에탄올(2mL)와 함께 밀봉된 튜브에서 한시간 동안 80℃에서 가열한 후 냉각시킨다, 침전물을 진공 여과기로 여과시킨 후, 에탄올과 에틸 아세테이트로 세척한 후 건조시켜 오렌지색 고체로 목적화합물을 얻었다.
실시예 126
2,4-디메틸-5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드
1,3-디히드로-인돌-2-온 (266mg, 2mmol), 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드 (530mg, 2mmol) 및 피퍼리딘 (1방울)을 에탄올과 함께 90℃에서 한시간동안 가열하였다. 반응을 실온으로 냉각시킨 후, 생성된 침전물을 진공 여과기로 여과시킨다음 에탄올로 세척하고, 건조시켜 밝은 황색 고체로 목적화합물 422mg(55%)를 얻었다.
실시예 127
5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드
에탄올에서 5-클로로-1,3-디히드로-인돌-2-온 (335mg, 2mmol), 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디에틸아미노-에틸)-아미드 (530mg, 2 mmol) 및 피퍼리딘(1방울)을 2시간동안 90℃로 가열하였다. 반응을 실온으로 냉각시킨 후, 생성된 침전물을 진공 여과기로 여과시켜서 에탄올로 2번 세척하고, 건조시켜서 오렌지색을 띤 고체로 목적화합물을 565mg (68%)얻었다.
실시예 128
2,4-디메틸-5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-에틸)-아미드
1,3-디히드로-인돌-2-온을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드로 축합시켜서 목적화합물을 얻었다.
MS + ve APCI 379 [M++ 1].
실시예 129
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드
5-플루오로-1,3-디히드로-인돌-2-온을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드로 축합시켜서 목적화합물을 얻었다.
MS + ve APCI 397 [M++ 1].
스케일-업 과정(Scale -up procedure)
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (61g), 5-플루오로-1,3-디히드로-인돌-2-온 (79g), 에탄올 (300mL) 및 피롤리딘 (32mL)를 4.5시간동안 환류시킨다.아세트산 (24mL)을 혼합물에 가하고 계속하여 30분동안 환류시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨다음, 고체를 진공여과기로 여과시켜서 에탄올로 두번 세척하였다. 고체를 12N의 염산 (6.5mL)을 포함하는 물 (400mL)에서 40%의 아세톤과 함께 130분동안 진탕하였다. 고체를 진공여과기로 여과시킨 후 물에서 40% 아세톤으로 세척하였다. 고체를 진공상태에서 건조시켜 오렌지색의 고체로 5-[5-플루올-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (86g, 79%)을 얻었다.1H-NMR (dimethylsulfoxide-d6) δ2.48, 2.50 (2xs, 6H, 2xCH3), 6.80, 6.88, 7.68, 7.72 (4xm, 4H, aromatic and vinyl), 10.88 (s, 1H, CONH), 12.12 (s, 1H, COOH), 13.82 (s, 1H, pyrrole NH). MS m/z 299 [M-1]
5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (100g) 및 디메틸포름아미드(500mL)을 혼합시킨 후, 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(221g), 1-(2-
아미노에틸)피롤리딘 (45.6g) 및 트리에틸아민(93mL)을 가하였다. 혼합물을 2시간동안 실온에서(ambient temperature)에서 진탕하였다. 고체 생성물을 진공 여과기로 여과시켜서 에탄올로 두번 세척하였다. 고체를 에탄올 (500mL)과 혼합하면서 한시간동안 64℃에서 슬러리(slurry)하게 세척하였다. 고체를 진공여과기로 여과시킨 다음, 에탄올로 두번 세척하고 진공에서 건조시켜 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드 (101.5g, 77%)를 얻었다.1H-NMR (dimethylsulfoxide-d6) δ1.60, (m, 4H, 2xCH2), 2.40, 2.44 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 4H, 2xCH2), 2.57, 3.35 (2xm, 4H, 2XCH2), 7.53, 7.70, 7.73, 7.76(4xm, 4H, aromatic and vinyl), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.67 (s, 1H, pyrrole NH). MS m/z 396 [M+1].
실시예 130
5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드
5-클로로-1,3-디히드로-인돌-2-온 을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-피로리딘-1-일-에틸)-아미드로 축합시켜서 목적화합물을 얻었다.
MS + ve APCI 413 [M++ 1]
실시예 131
2,4-디메틸-5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)-아미드
1,3-디히드로-인돌-2-온을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노-에틸)-아미드로 축합시켜서 목적화합물을 얻었다.
실시예 132
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-마르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)-아미드
5-플루오로-1,3-디히드로-인돌-2-온을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디메틸아미노에틸)아미드로 축합시켜서 목적화합물을 얻었다.
실시예 193
5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)-아미드
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)-아미드 (99g), 에탄올 (400mL), 5-플루오로-2-옥신동 (32g) 및 피롤리딘(1.5g)을 시간동안혼합시키면서 환류시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시켜서 진공여과기로 여과시켰다. 생성물을 진공에서 건조시켜 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)-아미드 (75g, 95%)를 얻었다.1H-NMR (dimethylsulfoxide-d6) δ1.03 (t, 3H, CH3), 2.42, 2.44 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.56 (q, 2H, CH2), 2.70, 3.30 (2xt, 4H, 2xCH2), 6.85, 6.92, 7.58, 7.72, 7.76 (5xm, 5H, aromatic, vinyl and CONH), 10.90 (br s, 1H, CONH), 13.65 (br s, 1H, pyrrole NH). MS m/z 369 [M-1].
실시예 195
5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸-N-옥소아미노-에틸)-아미드
5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드 (598mg) 및 디클로로메탄 (60mL)을 얼음욕조에서 3-클로로퍼벤조산 (336mg)으로 처리하고 혼합물을 24시간동안 실온에서 진탕하였다. 용매를 회전 증발시키고 그 잔여물을 메탄올 (20mL)에 suspend 시킨다. 소디움 히도록시드 (240mg)을 포함하는 물 (20mL)을 가하여 혼한물을 한시간동안 진탕한다. 그 침전물을 진공여과기로 여과시킨 후, 5mL의 물로 세척하고 진공에서 건조시켜 오렌지색의 고체로 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸-N-옥소아미노-에틸)-아미드 (510mg, 82% 수율)을 얻었다.1H-NMR (DMSO-d6) δ13.72 (br s, 1H, NH), 11.02 (br s, 1H, CONH), 9.81 (br s, 1H, CONH), 7.75 (dd, 1H, aromatic), 7.70 (s, 1H, aromatic), 6.93 (td, 1H, aromatic), 6.84 (m, 1H, aromatic), 3.63 (m, 2H, CH2), 3.29 (m, 2H, CH2), 3.14 (m, 4H, 2xCH2), 2.47 (s, 1H, CH3), 2.45 (s, 3H, CH3), 1.64 (t, 6H, 2xCH3). MS m/z 415 [M+1].
방법 B:
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드 (10g)을 디클로로메탄 (100mL)에 혼합(suspend)시킨후, 얼음욕조에서 냉각시켰다. 3-클로로-퍼옥시벤조 산 (13.1g)을 혼합하면서 가하고 그 혼합물을 실온이 되도록 놓아둔 다음 24시간동안 진탕하였다. 그 혼합물을 회전 증발하여 건조시키고, 디클로로메탄에서 20%의 메탄올로 용리하는 실리카겔 컬럼에서 크로마토그래프 법을 시행하였다. 생성물을 함유하는 소량의 시료를 결합하여 화전증발로 건조시켜서 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(2-디에틸-N-옥소아미노-에틸)-아미드 (9g, 83%수율)을 얻었다.
5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸-N-옥소아미노-에틸)-아미드 (9g), 5-플루오로-1,3-디히드로-인돌-2-온 (9g, 83%) 및 피롤리딘 ((9g, 83% 수율 (0.1g)을 에탄올 (30mL)에서 4시간동안 환류시켰다.
혼합물을 얼음욕조에서 냉각시틴 후, 침전물을 진공여과기로 여과시키고 에탄올로 세척하였다. 고체를 에틸 아세테이트(30mL)와 혼합시켜, 진공여과기로 여과시키고,에틸 아세테이트로 세척한 후, 진공에서 건조시켜 오렌지색의 고체로 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸-N-옥소아미노-에틸)-아미드 (10. 3g 80% 수율)를 얻었다.1H-NMR (DMSO-d6) δ13.72 (br s, 1H, NH), 11.02 (br s, 1H, CONH), 9.81 (br s, 1H, CONH), 7.75 (dd, 1H, aromatic), 7.70 (s, 1H, aromatic), 6.93 (td, 1H, aromatic), 6.84 (m, 1H, aromatic), 3.63 (m, 2H, CH2), 3.29 (m, 2H, CH2), 3.14 (m, 4H, 2xCH2), 2.47 (s, 1H, CH3), 2.45 (s, 3H, CH3), 1.64 (t, 6H, 2xCH3). MS m/z 415 [M+1].
실시예 190
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (120mg, 0.4mmol)을 알드리히(Aldrich)에서 구입한, EDC, 염산(96mg, 0.5mmol), 무수 1-히드록시-벤즈트리아졸(68mg, 0.5mmol) 및 2-(2-아미노에틸피리딘과 무수 DMF(3ml)에서 2-3일 동안 실온에서 흔들어 혼합하였다. 반응 혼합물은 1M NaHCO3(1.5ml), 이어서 8ml의 물로 희석하였다. 침전된 조 생성물을 여과하여 모으고, 물로 세척한 다음, 건조하고 결정화 또는 크로마토그래피로 정제하여 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드를 얻었다.
실시예 189
5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드
이전의 실시예에서 설명한 절차에서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산을 5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(127mg)으로 치환하여 5-(5-클로로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드를 얻었다.
실시예 192
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드
위의 실시예 190에서 설명한 절차에서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산을 5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(145mg)으로 치환하여 5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드를 얻었다.
실시예 191
5-[2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]아미드
위의 실시예 190에서 설명한 절차에서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산을 5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(113mg)으로 치환하여 5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드를 얻었다.
실시예 203
5-[5-시아노-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]아미드
위의 실시예 190에서 설명한 절차에서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산을 5-(5-시아노-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(123mg)으로 치환하여 5-(5-시아노-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(피리딘-1-일)에틸]-아미드를 얻었다.
실시예 142, 186, 187, 188 및 204
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서, 2-(2-아미노에틸)피리딘을 알드리히 케미컬 컴퍼니, Inc.로부터 구입한 1-(2-아미노에틸)피롤리딘으로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 143-147
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서 2-(2-아미노에틸)피리딘을 1-(2-아미노에틸)이미다졸린-2-온(디메틸 카보네이트를 비스(2-아미노에틸) 아민(2당량)과 밀봉 플라스크에서 150℃ 30분간 가열하고, 이어서 미합중국특허 제2613212호(1950)에서 설명된 절차를 거쳐서 롬 앤드 하스 Co.(Rohm & Haas Co. 에서 조제되었다. 조 산출물은 전개 혼합액으로 클로로포름-메탄올-수용성 암모니아 80:25:2를 사용하여 실리카 상에서 정제되었다)으로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 148-151 및 184
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서 2-(2-아미노에틸)피리딘을 4-(2-아미노에틸)피페라진-1-아세트 산 에틸 에스테르(다음과 같이 조제되었다: 피페라진-1-아세트 산 에틸 에스테르(11.22g)을 포타슘 카보네이트(6.9g) 존재하에 0℃ 에틸 아세테이트(260ml)에서 요오도아세토니트릴(5.0ml)로 처리하였다. 요오도아세토니트릴 첨가를 완료한 후(45분), 이어서 반응 혼합물을 실온에서 11시간 동안 혼합하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 증발건조시켰다. 잔여물을 코발트 보라이드(CoCl2와 소디움 보로하이드라이드로부터 조제된) 존재하에 에탄올상에서 실온, 50psi로 2일동안 수소화하였다. 여과, 증발 및 전개 혼합액으로 클로로포름-메탄올-수용성 암모니아 80:25:2를 사용한 크로마토그래피에 의한 정제를 통하여 원하는 아민(3.306g)을 연한 황색 오일로 얻었다)로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 152-153
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서 2-(2-아미노에틸)피리딘을 2-[(2-아미노에틸아미노)]아세토니트릴(다음과 같이 조제되었다: 0℃에서 30분 동안 요오도아세토니트릴(50mmol)을 에틸 알코올(80ml)에 녹인 용액을에틸 알코올(60ml)에 녹인 에틸렌 디아민(150ml) 용액에 가하였다. 0℃에서 추가로 1시간 동안, 이어서 실온에서 14시간 동안 계속 혼합하였다. 55mmol의 포타슘 카보네이트를 가하고, 30분간 혼합한 다음, 여과하고 여과액을 실온에서 농축시켰다. 전개 혼합액으로 클로로포름-메탄올-수용성 암모니아 80:15:1.5를 사용하여 실리카 상에서 잔여물을 정제하여 즉시 사용되는 2-[(2-아미노에틸아미노)]-아세토니트릴(3.550g)을 얻었다)로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 154-158
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서 2-(2-아미노에틸)피리딘을 1-(3-아미노프로필)-아제핀-2-온(DBU의 가수분해를 리튬 히드록시드 존재하에 145℃에서 수행하였다(1시간, 5ml의 DBU, 2ml의 물, 420ml의 리튬 히드록시드 수화물)는 점을 제외하고는, Kraft A.:J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 6, 1999, 705-14에 설명된 절차에 따라 조제되었다. 전개 혼합액으로 클로로포름-메탄올-수용성 암모니아 80:40:4를 사용하여 실리카 상에서 조 생성물을 정제하여 1-(3-아미노프로필)아제핀-2-온(4.973g, 87% 수율)을 얻었다)으로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 133-135, 159 및 200
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서 2-(2-아미노에틸)피리딘을 N-아세틸 에틸렌 디아민(에틸 아세테이트를 에틸렌 디아민(1.5 당량)과 혼합하여 밀봉 용기에서 1시간 동안 160℃로 가열하여 조제하였다. 진공 증류를 통하여 원하는 생성물을 56% 수율로 얻었다. 또한, N-아세틸에틸렌 디아민은알드리히로부터 얻을 수 있다)으로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 146-140
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서 2-(2-아미노에틸)피리딘을 1-(3-아미노프로필)-테트라히드로-피리미딘-2-온(Kraft A.:J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 6, 1999, 705-14에 설명된 절차에 따라 1-(3-아미노프로필)-아제핀-2-온과 동일한 방식으로 조제하였다: 간략하게, 1,3,4,6,7,8-헥사히드로-2H-피리미도[1,2-a]피리미딘(4.969g), 리튬 히드록시드 수화물(918mg) 및 2ml의 물을 밀봉 용기에서 용매 없이 145℃ 1시간 동안 가열하였다. 클로로포름-메탄올-수용성 암모니아 80:40:4로 실리카 칼럼에서 조 생성물을 정제하여 순수한 아민을 얻었다(5.265g, 94%))으로 치환하였다.
실시예 141, 160-162 및 185
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명한 절차에서 2-(2-아미노에틸)피리딘을 1-(2-아미노에틸)-피페라진-2-온(다음과 같이 조제하였다: 5분 이내로 수욕상에서 냉각시키면서, 실온에서 순수한 터트-부틸디페닐실릴 클로라이드(25ml, 97.7mmol)을 한 방울씩 무수 디메틸 아세타미드(80ml)에 녹인 DBU(19.5ml, 130mmol) 및 비스(2-아미노에틸)아민(4.32ml, 40mmol)의 용액에 가하였다. 혼합물을 5시간 동안 혼합하였다. 브로모아세트 산 에틸 에스테르(6.70ml, 60mmol)을 실온으로 냉각시키면서 가하였다. 반응물을 25분 동안 혼합한 다음, 강한 진공 상태에서 증발시켰다. 잔여물을 메탄올(200ml)에 녹이고, KHCO3(10g) 및 KF(12g,200mmol)을 가한 다음 혼합물을 60℃에서 5시간 동안 혼합하였다. 10g의 Na2CO3를 가하고, 10분간 혼합한 다음 냉각시키고 여과하였다. 여과액을 증발시켰다. 잔여물을 헥산으로 추출하였다(250ml씩 2회). 헥산-불용성 물질은 에탄올(60ml)에 녹여서 여과하고 증발시켰다. 클로로포름-메탄올-수용성 암모니아 80:40:4로 실리카 칼럼 상에서 잔여물을 정제하여 순수한 아민(4.245g, 74% 수율)을 얻었다)으로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 163-167
위의 실시예 190, 189, 191, 192 및 203에서 설명된 절차에서, 2-(2-아미노에틸)피리딘을 3-[(2-아미노에틸)아미노]프로피오니트릴(THF에 녹인 에틸렌 디아민(150mmol)과 아크릴로니트릴(50mmol)로부터 Israel, M. et al:J. Med Chem.7, 1964, 710-16에 설명된 바에 따라 조제하여 원하는 아민(4.294g)을 얻었다)로 치환하여 원하는 화합물을 얻었다.
실시예 168
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(4-메틸피퍼라진-1-일)-에틸-아미드
20mL의 반응 튜브(tube)에서 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (90mg), DMF (0.8mL) 및 TEA(0.084mL)의 황색의 불투명 혼합물에 BOP 시약(199mg)을 가하였다. 혼합물을 5분동안 투명하게 될 때까지 놓아두었다. 2-(4-메틸피퍼라진-1-일)에틸아민1(51mg)을 투명한 혼합물에 가하였다. 그 결과 생성되는 용액을 24시간동안 실온에서 진탕하였다. 황색의 고체 생성물을 반응계에서 침전시켰다. 얇은층 크로마토그래피 (10% 메탄올 in 메틸렌 클로라이드)는 모든 시작 물질이 생성물로 전환되었다는 것을 나타낸다. 고체를 진공여과기로 분리하여 에탄올(1mL)로 한번 세척하였다. 그 고체를 디에틸에테르(2mL)에서 20분동안 초음파처리를 하고 진공 여과기로 여과시켰다. 진공상태에서 건조시킨 후, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (4-메틸피퍼라진-1-일-에틸)-아미드 (79g, 62%)를 얻었다.
실시예 169
5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히으로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (4-메틸피퍼라진-1-일-에틸)-아미드
상기 실시예 168의 과정과 동일하나 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산을 5-[5-클로로-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (95mg, 0.3mmol)로 치환시켜 5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (4-메틸피퍼라진-1-일
-에틸)-아미드 (76mg, 58%)를 얻었다.
실시예 170
5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (4-메틸피퍼라진-1-일-에틸)-아미드
실시예 168에서 서술한 과정과 동일하나 5-(5-클로로-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산을 5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산으로 치환시켜 5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (4-메틸피퍼라진-1-일-에틸)-아미드 (39mg, 54%)를 SU011670 (54mg, 0.15mmol)로 부터 얻었다.
실시예 172
5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산(4-메틸피퍼라진-1-일-에틸)-아미드
상기 실시예 168에서 서술한 과정과 동일하나 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 SU14900을 5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산으로 치환시켜서 5-(2-옥소-1,2-디히드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (4-메틸피퍼라진-1-일-에틸)-아미드를 얻었고, SU012120(112,8mg, 0.4mmol)로부터 SU014903(136mg, 84%)를 얻었다.
실시예 171
5-[2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(3,5-디메틸피퍼라진-1-일)에틸)아미드
20mL의 반응 튜브에서 5-[2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (112.8g, 0.4mmol), DMF (0.5mL) 및 트리에틸아민 (0.111mL)의 황색 불투명 혼합물에 BOP 시약 (265mL)을 가하였다. 혼합물을 투명하게 될 때까지 5분동안 놓아두었다. 2-(2,6-디메틸피퍼라진-1-일)에틸아민 (68.6mg)(see., Tapia, L. Alonso-Cires, P. Lopez-Tudanca, R. Mosquera, L. Labeaga, A. Innerarity, A. Orjales, J. Med. Chem., 1999, 42, 2870-2880)을 투명한 혼합물에 가하였다. 그 결과 생성되는 용액을 실온에서 24시간동안 진탕하였다. 얇은층 크로마토그래피는 (메틸렌 클로라이드에서 10% 메탄올) 모든 시작물질이 생성물로 전환되었다는 것을 보여준다. 반응 화합물을 증발시켜 건조시키고, 재결정을 한 후에 플래시(flash) 크로마토그래피 (CH2Cl2/CH3OH=20/1-15/1)로 정제시키면 5-[2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(3,5-디메틸피퍼라진-1-일)에틸)아미드 (83mg, 50%수율)을 얻었다.
실시예 173
5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(3,5-디메틸피퍼라진-1-일)에틸)아미드
실시예 168에서 서술한 과정과 동일하나, 상기된 목적화합물(desired)을 (60mg, 0.2mmol)을 얻었다.
실시예 174
5-[5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(3,5-디메틸피퍼라진-1-일)에틸)아미드
실시예 171의 과정과 동일하며, 상기된 목적화합물 (31.2mg, 34%)을 5-[5-클로로-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (63mg, 0.2mmol)로부터 얻었다.
실시예 175
5-[5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 [2-(3,5-디메틸피퍼라진-1-일)에틸)아미드
실시예 171에서 서술한 것과 같은 과정이며, 상기된 목적화합물 (40mg, 40%)을 5-[5-브로모-2-옥소-1,2-디히드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (74mg, 0.2mmol)으로부터 얻었다.
생물학적 실시예
원하는 활동도의 최적도를 명시하는 목적화합물들을 발견하기 위하여 다음과 같은 분석 평가를 이용하였다.
A. 분석평가 과정
다음의 분석평가는 하나 또는 그 이상의 PKs에서 본 발명의 서로다른 화합물들의 활동도 및 효과의 수준을 결정하기 위하여 사용될 수 있다.
이 기술 분야에서 알려진 기술을 사용하여 어떠한 PKs에 대하여도 같은 방법(lines)을 따라 비슷한 분석평가가 고안될 수 있다.
여기에 서술된 몇가지 분석평가는 ELISA(Enzyme-Linked-Immunosorbent Sandwich Assay) 형식(Voller, et al., 1980, " Enzyme-Linked-Immunosorbent Assay,"Manual of Clinical Immunology, 2d ed, Rose and Frieman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., pp. 359-371)에서 수행된다.
일반적인 과정은 다음과 같다: 자연적으로 또는 재조합적으로 시험 인산화 효소를 발현시키는 세포에 일정한 기간동안 화합물을 넣는다. 그 후에, 만약 테스트 키나아제가 수용체라면, 그 수용체를 활성화시키는 것으로 알려진 리간드를 첨가한다. 세포는 용해되고 그 용해물을 효소의 인산화 반응의 기질을 인식하는 특정한 항체로 미리 코팅된 ELISA 플레이트(plate)의 월(well)으로 이동시킨다. 세포용해물의비-기질성 구성물을 세척해내고, 테스트 화합물과 접촉시키지 아니한 대조(controll) 세포와 비교하기 위하여 포스포티로신(phosphotyrosine)을 특정하게 인식하는 항체로 기질 위의 인산화의 정도를 탐지한다.
현재 특정 PKs을 위한 ELISA 실험을 수행하기위한 프로토콜(protocol)은 다음과 같다. 그러나, CTKs 및 STKs와 마찬가지로, 다른 RTKs에 대한 화합물의 활동도를 결정하기 위한 이러한 프로토콜(protocol)의 이용은 이 기술분야에서 알려진 기술의 범위에로 한정된다. 여기에 서술된 다른 분석평가들은 테스트 키나제의 활동도에 대한 반응에서 만들어진 DNA의 양을 측정하는데, 이것은 증식 반응의 일반적인 측정이다. 이 분석평가에 대한 일반적인 과정은 다음과 같다: 자연적으로 또는 재조합적으로 시험 인산화 효소를 발현시키는 세포에 일정한 기간동안 화합물을 넣는다. 그 후에, 만약 시험 인산화 효소가 수용체라면, 그 수용체를 활성화시키는 것으로 알려진 리간드를 첨가한다.
적어도 24시간동안 인큐베이션(incubation)한 후에, 5-브로모디옥시우리딘(BrdU) 또는 H3-티미딘과 같은 DNA 표지 시약을 가한다. 표지된 DNA의 양은 안티-BrdU 항체 또는 방사능 측정에 의하여 탐지할 수 있고, 테스트 화합물과 접촉하지 않은 대조(control) 세포와 비교할 수 있다.
GST-FLK-1 바이오에세이(BIOASSAY)
이 분석평가는 폴리 펩타이드(glu, tyr)에서 GST-Flkl의 티로신 인산화 효소의 활동도를 분석한다.
성분 및 시약:
1. 코닝 96-웰(well) ELISA 플레이트 (코닝 카타로그 No. 5805-96).
2. 폴리(glu, tyr) 4:1, lyophilizate (시그마 카타로그. #P0275).
3. 폴리(glu, tyr)(pEY)로 코팅된 에세이 플레이트의 준비: 폴리(glu, tyr)(pEY)의 2ug/웰을 100㎕ PBS에서 코팅하고, 두시간동안 실온에 놓아 두거나, 4℃에서 24시간 놓아둔다. 증발을 방지하기 위하여 플레이트 웰을 닫아놓는다.
4, PBS 완충용액(buffer): 1L에 대하여 대략 900ml의 dH2O에서의 0.2g의 KH2PO4, 1.15g Na2HPO4, 0.2g KCl 및 8g NaCl. 모든 시약이 용해될 때, HCl로 pH 7.2로 조절. dH2O로 총 부피를 1L가 되게 한다.
5. PBST 완충용액(buffe)r: 1L의 PBS Buffer에 1.0ml의 트윈-20(Tween-20)을 가한다.
6. TBB- 블로킹 완충용액(Buffer): 1L에 대해 1,21g의 트리스(TRIS), 8.77 NaCl, 1ml 트윈-20을 약 900ml의 dH2O에서 혼합한다. HCl로 pH를 7.2로 조절한다. 10g의 BSA를 가하고 녹을 때까지 혼합한다. dH2O로 1L가 될 때까지 부피를 조정한 다음, 분진을 제거하기 위하여 여과한다.
7. 완충용액에서의 1% BSA: 1x working 용액을 만들기위하여 대략 100g의 BSA를 가한다. 990ml PBS용액에서 녹을 때까지 혼합한다. 총 부피가 1L가 되도록 PBS를 가하고, 분진을 제거하기 위하여 여과시킨다.
8. 50mL 헤페스(Hepes) pH 7.5
9. sf9 재조합 바큘로바이러스(baculovirus) 변형(transformation) 에서 정제한 GST-Flklcd (SUGEN, Inc.)
10. dH2O에서의 4% DMSO
11. dH2O에서의 10mM ATP
12. 40mM MnCl2
13. 인산화 효소 희석 완충용액 (KDB): 10ml의 헤페스(pH 7.5), 1ml 5M NaCl, 40μL 100mM 소디움 오르토바나데이트(orthovanadate)와 dH2O에서의 5% BSA 0,4ml을 88.56ml dH2O에서 혼합한다.
14. NUNC 96-웰 V 보톰(bottom) 폴리프로필렌 플레이트, Scientific catalog # AS- 72092
15. EDTA: 14.12g의 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)를 대략 70ml의 dH2O에 혼합한다, 10N의 NaOH를 EDTA가 녹을때까지 가한다. pH를 8.0으로 조절한다. dH2O로 총부피를 100ml가 되도록 한다.
16. 10항체 완충용액: 10ml의 5% BSA를 89.5ml의 TBST로 PBS완충용액에서 혼합한다.
17. 호스 라디쉬 퍼옥시다제(horse raddish peroxydase)에 결합된 항-포스포티로신 단일 항체 (PY99 HRP, 산타크루즈바이오텍)
18, 2,2'-아지노비스(3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰 산(ABTS, Moss, Cat, No. ABST).
19. 10%SDS
과정:
1. 코닝 96-웰 ELISA 플레이트를 성분과 시약 스텝3에서 서슬한 대로 2㎍의 폴리EY 펩타이드로 살균한 PBS에서 코팅한다.
2. 전화한 플레이트로 결합되지 않은 용액을 웰에서 제거한다. TBST로 한번 세척한다. 과도한 용액을 제거하기위해 페이퍼 타올 위에서 플레이트를 가볍게 두드려 준다.
3. PBS에서 100㎕의 1% BSA를 각 웰에 가하여 준 후, 실온에서 1 시간동안 흔들면서 인큐베이트한다.
4. 스텝2를 되풀이 한다.
5. 웰을 50mM의 헤페스(pH7.5)로 적신다(150㎕/웰).
6. 테스트 화합물을 dH2O/4% DMSO
7. ELISA 플레이트에서 희석된 데스트 화합물을 가한다. 대조 웰(control well)에 25㎕의 dH2O/4% DMSO를 넣어준다.
8. 각 웰(well)에 4x ATP (2μM)과 함께 25㎕의 40mM MnCl2을 가한다.
9. 음성 대조 웰에 25㎕dml 0.5M EDTA를 가한다.
10. GST-Flkl을 KDB로 0.005㎍(5ng)/웰까지 희석시킨다.
11. 각 웰에 50㎕의 희석된 효소를 가한다.
12. 흔들면서 실온에서 15분 동안 인큐베이트 한다.
13. 250mM의 EDTA(pH8.0) 50㎕를 가하여 반응을 정지시킨다.
14. 3X를 TBST로 세척하고, 과도한 용액을 제거하기위해 플레이트를 페이퍼타올 위에서 가볍게 두드려준다.
15. 각 웰당 100㎕의 항체 희석 완충용액에서 1:5,000 희석 항-포스포티로신 HRP 콘쥬게이트를 가하고, 실온에서 90분동안 흔들면서 인큐베이트한다.
16. 과정 14에서와 같이 세척한다.
17. 100㎕ 실온 ABTS 용액을 각 웰에 가한다.
18. 10분에서 15분 동안 흔들면서 인큐베이트하고 거품을 제거한다.
19. 각 웰에 10% SDS 20㎕를 가하여 반응을 정지시킨다.
20. 시험 필터는 410nM에서, 기준 필터는 630nM에서 다이나테크 MR7000 ELISA 리더로 결과를 판독한다.
PYK2 생물학적 분석
본 분석는 HA 에피토프로 표지된 전장 pyk2(FL.pyk2-HA)의 시험관 내 인산화 효소 활성을 ELISA 분석로 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약:
1. 코닝(Corning) 96-웰 ELISA 플레이트.
2. 12CA5 단클론 안티-HA 항체(SUGEN, Inc.)
3. PBS(둘베코(Dulbecco's) 인산 완충 식염수(깁코(Gibco) 카탈로그 번호 #450-1300EB)
4. TBST 완충액: 1L당, 8.766g NaCl, 6.057g TRIS 및 1ml의 0.1% 트리톤X-100을 약 900ml의 H2O에서 혼합한다. pH를 7.2로 맞추고, 부피를 1L로 맞춘다.
5. 차단 완충액: 1L당, 100g의 10% BSA, 12.1g의 100mM TRIS, 58.44g의 1M NaCl 및 10ml의 1% 트윈(TWEEN)-20을 혼합한다.
6. sf9 세포 용해물질(lysate)로부터 얻은 FL.pyk2-HA(SUGEN, Inc.)
7. 밀리크(MilliQue H2O)를 용매로 한 4% DMSO
8. dH2O를 용매로 한 10mM ATP
9. 1M MnCl2
10. 1M MgCl2
11. 1M 디치오트레이톨(DTT)
12. 10×인산화 효소 완충 인산화: 2.8ml dH2O에 5.0ml의 1M Hepes(pH 7.5), 0.2ml 1M MnCl2, 1.0ml의 1M MgCl2, 1.0ml의 10% 트리톤 X-100을 혼합한 다. 사용 직전에 0.1ml 1M DTT를 가한다.
13. NUNC 96 웰-V 바닥 폴리프로필렌 플레이트
14. dH2O를 용매로 한 500mM EDTA
15. 항체 희석 완충액: 100ml당, 88ml의 TBS를 용매로 한 1ml의 5% BSA/PBS 와 1ml의 10% 트윈-20
16. HRP-결합 안티-Ptyr PY99, 산타 크로즈 바이오텍(Santa Cruz Biotech)카탈로그 번호 SC-7020
17. ABTS, 모스(Moss), 카탈로그 번호 ABST-2000
18. 10% SDS
과정:
1. 코닝 96 웰 ELISA 플레이트를 각 웰당 100㎕의 PBS에 녹인 0.5㎍의 12CA5 안티-HA 항체로 도포한다. 4℃에서 24시간 방치한다.
2. 플레이트를 뒤집어서 웰로부터 결합되지 아니한 HA 항체를 제거한다. dH2O로 플레이트를 세척한다. 플레이트를 종이 수건에서 두들겨서 과량의 액체를 제거한다.
3. 각 웰에 150㎕의 차단 완충액을 가한다. 실온에서 30분간 진탕배양한다.
4. TBS-T로 4회 플레이트를 세척한다.
5. 용해물질을 PBS에 희석한다(1.5㎍ 용해물질/100㎕ PBS).
6. 100㎕의 희석된 용해물질을 각 웰에 가한다. 실온에서 1시간동안 흔든다.
7. 단계 4에서와 같이 세척한다.
8. 50㎕의 2X 인산화 효소 완충액을 포획된 pyk2-HA를 포함한 ELISA 플레이 트에 가한다.
9. 4% DMSO를 용매로 한 25㎕의 400μM 시험 화합물을 각 웰에 가한다. 대 조 웰을 위하여 4%의 DMSO 단독을 사용한다.
10. 25㎕의 0.5M EDTA를 음성 대조 웰에 가한다.
11. 모든 웰에 25㎕의 20μM ATP를 가한다. 10분간 진탕 배양한다.
12. 25㎕의 500mM EDTA(pH8.0)을 모든 웰에 가하여 반응을 정지시킨다.
13. 단계 4에서와 같이 세척한다.
14. 항체 희석 완충액으로 1:6000배 희석된 100㎕의 HRP 결합 안티-Ptyr을 각 웰에 가한다. 1시간 동안 실온에서 진탕 배양한다.
15. TBST로 3회, PBS로 1회 플레이트를 세척한다.
16. 100㎕의 ABST용액을 각 웰에 가한다.
17. 필요하다면, 20㎕의 10% SDS를 각 웰에 가하여 진전 반응을 정지시킨다.
18. 시험 filter는 410nm에서, 기준 필터는 630nm에서 ELISA 판독기로 플레 이트를 판독한다.
FGFR1 생물학적 분석
본 분석은 FGF1-R의 시험관 내 인산화 효소의 활성을 ELISA 분석으로 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약:
1. 코스타르(Costar) 96-웰 ELISA 플레이트(코닝 카탈로그 #3369)
2. 폴리(Glu-Try) (시그마(Sigma) 카탈로그 #PO275)
3. PBS(깁코 카탈로그 #450-1300EB)
4. 50mM Hepes 완충 용액
5. 차단 완충액(5% BSA/PBS)
6. 정제된 GST-FGFR1(SUGEN, Inc.)
7. 인산화 효소 희석 완충액
500㎕의 1M Hepes(GIBCO), 20㎕의 5% BSA/PBS, 10㎕의 100mM 소디움 오르 토바나데이트 및 50㎕의 5M NaCl을 혼합한다.
8. 10mM ATP
9. ATP/MnCl2인산화 혼합: 20㎕의 ATP, 400㎕의 1M MnCl2및 9.56ml의 dH2O를 혼합한다.
10. NUNC 96-웰 V 바닥 폴리프로필렌 플레이트(Applied Scientific 카탈로그 # AS-72092)
11. 0.5M EDTA
12. 0.05% TBST
500㎕의 트윈을 1L의 TBS에 가한다.
13. 래빗 다클론 안티-포스포티로신 혈청(SUGEN, Inc.)
14. 고우트 안티-래빗 IgG 퍼옥시다제 결합물(Biosource. 카탈로그 #ALI0404)
15. ABTS 용액
16. ABTS/H2O2용액
과정:
1. 코스타르 96 웰 ELISA 플레이트에 각 웰당 100㎕의 PBS에 녹인 1㎍의 폴리(Glu, Tyr)를 도포한다.
2. PBS로 1회 도포된 플레이트를 세척한다.
3. 150㎕의 5% BSA/PBS 차단 완충액을 각 웰에 가한다. 실온에서 1시간 동 안 진탕 배양한다.
4. PBS로 2회, 50mM Hepes로 1회 플레이트를 세척한다. 플레이트를 종이 수 건에서 두들겨 과량의 액체와 거품을 제거한다.
5. 4% DMSO를 용매로 한 25㎕의 0.4mM 시험 화합물 또는 4% DMSO 단독(대조 군)을 플레이트에 가한다.
6. 정제한 GST-FGFR1을 인산화 효소 희석 완충액에 희석한다(5ng 인산화 효 소/50㎕ KDB/웰).
7. 50㎕의 희석된 인산화 효소를 각 웰에 가한다.
8. 웰당 바로 조제한 ATP/Mn++25㎕를 가하여 인산화 반응을 개시한다(0.4ml 1M MnCl2, 40㎕ 10mM ATP, 9.56ml H2O, 바로 조제함).
9. 이는 빠른 인산화 효소 반응이며, ATP의 첨가와 유사한 방식으로 0.5M EDTA 25㎕로 중지시켜야 한다.
10. 바로 조제한 TBST로 플레이트를 4회 세척한다.
11. 항체 희석 완충액의 조제: 50ml당, 5ml의 5% BSA, 250㎕의 5% 밀크 (Milk) 및 50㎕의 100mM 소디움 바나데이트를 혼합하고, 0.05% TBST로 최종 부피까지 맞춘다.
12. 안티-포스포티로신(ADB로 1:10000배 희석)을 각 웰당 100㎕씩 가한다. 실온에서 1시간 동안 진탕 배양한다.
13. 단계 10에서와 같이 세척한다.
14. 각 웰당 100㎕의 바이오소스 고우트 안티-래빗 IgG 퍼옥시다제 결합물(ADB로 1:6000배 희석)을 가한다. 실온에서 1시간 동안 진탕 배 양한다.
15. 거품 및 과량의 트윈을 제거하기 위하여 단계 10에서와 같이, 그 다음에 PBS로 세척한다.
16. 100㎕의 ABTS/H2O2용액을 각 웰마다 가한다.
17. 10 내지 20분간 진탕배양한다. 모든 거품을 제거한다.
18. 다이나테크(Dynatech) MR7000 ELISA 판독기로 분석결과를 판독한다: 시 험 필터는 410nm, 기준 필터는 630nm.
EGFR 생물학적 분석
본 분석은 FGF1-R의 시험관 내 인산화 효소 활성을 ELISA 분석으로 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약:
1. 코닝 96-웰 ELISA 플레이트
2. SUMO1 단클론 안티-EGFR 항체(SUGEN, Inc.)
3. PBS
4. TBST 완충액
5. 차단 완충액: 100ml당, 100ml의 PBS에 5.0g의 카르네이션 인스탄트 논-패 트 밀크®(Carnation Instant Non-fat Milk®)를 혼합한다.
6. A431 세포 용해물질(SUGEN, Inc.)
7. TBS 완충액:
8. TBS + 10% DMSO : 1L당, 1.514g TRIS, 2.192g NaCl 및 25ml DMSO를 혼합 한다; dH2O로 전체 부피를 1L로 맞춘다.
9. ATP (아데노신-5'-트리포스페이트, 말의 근육에서 얻음, 시그마 카탈로그 No. A-5394), dH2O를 용매로 한 1.0mM 용액
본 시약은 사용하기 직전에 조제하여 얼음에 보관하여야 한다.
10. 1.0mM MnCl2
11. ATP/MnCl2인산화 혼합 : 10ml를 만들기 위하여, 300㎕의 1mM ATP, 500㎕ 의 MnCl2및 9.2ml의 dH2O를 혼합한다.
사용하기 직전에 조제하여 얼음에 보관한다.
12. NUNC 96-웰 V 바닥 폴리프로필렌 플레이트
13. EDTA
14. 래빗 다클론 안티-포스포티로신 혈청(SUGEN Inc.)
15. 고우트 안티-래빗 IgG 퍼옥시다제 결합물(바이오소스 카탈로그 No.ALI0404)
16. ABTS
17. 30% 히드로겐 퍼옥시드
18. ABTS/H2O2
19. 0.2M HCl
과정:
1. 코팅 96 웰 ELISA 플레이트를 각 웰당 100㎕ PBS를 용매로 한 0.5㎍의 SUMO1으로 도포하고, 4℃에서 24시간 방치한다.
2. 액체를 제거하기 위하여 플레이트를 뒤집어 웰로부터 결합되지 아니한 SUMO1을 제거한다. dH2O로 1회 세척한다. 플레이트를 종이 수건에 두들 겨 과량의 액체를 제거한다.
3. 150㎕의 차단 완충액을 각 웰에 가한다. 실온에서 30분간 진탕배양한다.
4. 탈이온수로 3회, TBST로 1회 플레이트를 세척한다. 플레이트를 종이 수 건에 두들겨 과량의 액체와 거품을 제거한다.
5. 용해 물질을 PBS에 희석한다(7㎍ 용해물질/100㎕ PBS).
6. 각 웰당 100㎕의 희석된 용해 물질을 가한다. 실온에서 1시간 동안 흔든 다.
7. 상기한 4에서와 같이 플레이트를 세척한다.
8. 120㎕의 TBS를 포획된 EGFR을 포함하는 ELISA 플레이트에 가한다.
9. 시험 화합물을 PBS로 1:10배 희석하여 웰에 놓는다.
10. 13.5㎕의 희석된 시험 화합물을 ELISA 플레이트에 가한다. 대조 웰에, 10% DMSO를 용매로 한 13.5㎕의 TBS를 가한다.
11. 실온에서 30분간 진탕 배양한다.
12. 15㎕의 인산화 혼합물을 음성 대조 웰을 제외한 모든 웰에 가한다. 웰 의 최종 부피는 3μM ATP/5mM MnCl2의 최종농도를 갖는, 약 150㎕이어야 한다. 5분간 흔들며 배양한다.
13. 흔들면서, 16.5㎕의 EDTA 용액을 가하여 반응을 정지시킨다. 추가로 1 분간 더 흔든다.
14. 탈이온수로 4회, TBST로 2회 세척한다.
15. 100㎕ 안티-포스포티로신(TBST로 1:3000배 희석됨)을 각 웰에 가한다. 실온에서 30 내지 45분간 흔들면서 배양한다.
16. 상기한 4에서와 같이 세척한다.
17. 100㎕의 바이오소스 고우트 안티-래빗 IgG 퍼옥시다제 결합물(TBST로 1:2000배 희석됨)을 각 웰에 가한다. 실온에서 30분간 진탕 배양한다.
18. 상기한 4에서와 같이 세척한다.
19. 100㎕의 ABTS/H2O2용액을 각 웰에 가한다.
20. 5 내지 10분간 흔들면서 배양한다. 모든 거품을 제거한다.
21. 필요하다면 각 웰당 100㎕의 0.2M HCl을 가하여 반응을 중지시킨다.
22. 다이나테크 MR7000 ELISA 판독기로 분석결과를 판독하였다: 시험 필터는 410nm, 기준 필터는 630nm.
PDGFR 생물학적 분석
본 분석은 FGF1-R의 시험관 내 인산화 효소 활성을 ELISA 분석으로 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약:
1. 코닝 96-웰 ELISA 플레이트
2. 28D4C10 단클론 안티-PDGFR 항체(SUGEN, Inc.)
3. PBS
4. TBST 완충액
5. 차단 완충액(EGFR 생물학적 분석에서와 동일)
6. PDGFR-β발현 NIH 3T3 세포 용해 물질(SUGEN, Inc.)
7. TBS 완충액
8. TBS + 10% DMSO
9. ATP
10. MnCl2
11. 인산화 효소 완충 인산화 혼합: 10ml당, 250㎕의 1M TRIS, 200㎕의 5M NaCl, 100㎕의 1M MnCl2및 50㎕의 100mM 트리톤-X 100을 충분한 dH2O에 녹여서 10ml로 만든다.
12. NUNC 96-웰 V 바닥 폴리프로필렌 플레이트
13. EDTA
14. 래빗 다클론 안티-포스포티로신 혈청(SUGEN, Inc.)
15. 고우트 안티-래빗 IgG 퍼옥시다제 결합물(바이오소스 카탈로그 No. ALI0404)
16. ABTS
17. 히드로겐 퍼옥시드, 30% 용액
18. ABTS/H2O2
19. 0.2M HCl
과정:
1. 코닝 96 웰 ELISA 플레이트에 각 웰당 100㎕에 녹인 0.5㎍의 28D4C10을 도포한다. 4℃에서 24시간 방치한다.
2. 액체를 제거하기 위하여 플레이트를 뒤집어 웰로부터 결합되지 아니한 28D4C10을 제거한다. dH2O로 1회 세척한다. 플레이트를 종이 수건에 두 들겨 과량의 액체를 제거한다.
3. 150㎕의 차단 완충액을 각 웰에 가한다. 실온에서 30분간 진탕배양한다.
4. 탈이온수로 3회, TBST로 1회 플레이트를 세척한다. 플레이트를 종이 수 건에 두들겨 과량의 액체와 거품을 제거한다.
5. 용해 물질을 HNTG에 희석한다(10㎍ 용해물질/100㎕ HNTG).
6. 각 웰당 100㎕의 희석된 용해 물질을 가한다. 실온에서 60분간 흔든다.
7. 상기한 4에서와 같이 플레이트를 세척한다.
8. 80㎕의 작용 인산화 효소 완충 혼합액을 포획된 PDGFR을 포함하는 ELISA 플레이트에 가한다.
9. 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 시험 화합물을 TBS로 1:10배 희석한다.
10. 10㎕의 희석된 시험 화합물을 ELISA 플레이트에 가한다. 대조 웰에, 10㎕ TBS + 10% DMSO를 가한다. 실온에서 30분간 진탕 배양한다.
11. 10㎕ ATP를 직접 음성 대조 웰을 제외한 모든 웰에 가한다(최종 부피는 각 웰당 20μM ATP를 갖는, 약 150㎕이어야 한다). 30분간 흔들며 배양 한다.
12. 10㎕의 EDTA 용액을 각 웰에 가하여 반응을 정지시킨다.
13. 탈이온수로 4회, TBST로 2회 세척한다.
14. 100㎕ 안티-포스포티로신(TBST로 1:3000배 희석됨)을 각 웰에 가한다. 실온에서 30 내지 45분간 흔들면서 배양한다.
15. 상기한 4에서와 같이 세척한다.
16. 100㎕의 바이오소스 고우트 안티-래빗 IgG 퍼옥시다제 결합물(TBST로 1:2000배 희석됨)을 각 웰에 가한다. 실온에서 30분간 진탕 배양한다.
17. 상기한 4에서와 같이 세척한다.
18. 100㎕의 ABTS/H2O2용액을 각 웰에 가한다.
19. 10 내지 30분간 흔들면서 배양한다. 모든 거품을 제거한다.
20. 필요하다면 각 웰당 100㎕의 0.2M HCl을 가하여 반응을 중지시킨다.
21. 다이나테크 MR7000 ELISA 판독기로 분석결과를 판독하였다: 시험 필터는 410nm, 기준 필터는 630nm.
세포질 HER-2 인산화 효소 분석
본 분석은 전체 세포에서 HER-2 인산화 효소의 활성을 ELISA의 형식으로 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약:
1. DMEM (깁코 카탈로그 #11965-092)
2. 소 태아 혈청 (FBS, 깁코 카탈로그 #16000-044), 30분간 56℃ 수욕상에 서 열로 불활성화됨.
3. 트립신(깁코 카탈로그 #25200-056)
4. L-글루타민(깁코 카탈로그 #25030-081)
5. HEPES(깁코 카탈로그 #15630-080)
6. 성장 배지
500ml의 DMEM, 55ml의 열로 불활성화된 FBS, 10ml의 HEPES 및 5.5ml의 L- 글루타민을 혼합한다.
7. 기아 배지
500ml의 DMEM, 2.5ml의 열로 불활성화된 FBS, 10ml의 HEPES 및 5.5ml의 L-글루타민을 혼합한다.
8. PBS
9. 편평 바닥(Flat Bottom) 96-웰 조직 배양 마이크로 타이터 플레이트(코닝 카탈로그 #25860)
10. 15cm 조직 배양 접시(코닝 카탈로그 #08757148)
11. 코닝 96-웰 ELISA 플레이트
12. NUNC 96-웰 V 바닥 폴리프로필렌 플레이트
13. 트랜스타르(Transtar) 96을 위한 코스타르 운반 카트리지(코스타르 카탈 로그 #7610)
14. SUMO 1: 단클론 안티-EGFR 항체(SUGEN, Inc.)
15. TBST 완충액
16. 차단 완충액: PBS를 용매로 한 5% 카르네이션 인스탄트 밀크®
17. EGF 리간드: EGF-201, 신코 아메리칸, 저팬(Shinko American, Japan).
분말을 100㎕의 10mM HCl에 현탁시킨다. 100㎕의 10mM NaOH를 가한다. 800㎕의 PBS를 가하고, 에펜도르프 튜브에 옮긴 후, 사용되기까지 -20℃ 에 보관한다.
18. HNTG 용해 완충액
원액(stock) 5X HNTG를 위하여, 23.83g Hepes, 43.83g NaCl, 500ml 글리 세롤 및 100ml 트리톤 X-100 및 충분한 양의 dH2O를 혼합하여 전체 용액 을 1L로 맞춘다.
1X HNTG*를 위하여, 2ml의 HNTG, 100㎕의 0.1M Na3VO4, 250㎕의 0.2M Na4P2O7및 100㎕의 EDTA를 혼합한다.
19. EDTA
20. Na3VO4. 원액을 조제하기 위하여, 1.84g의 Na3VO4를 90ml의 dH2O와 혼 합한다. pH를 10으로 맞춘다. 1분간 초단파로 끓인다(용액이 맑아진다). 실온에서 냉각한다. pH를 10으로 맞춘다. pH가 10으로 유 지될 때까지 가열/냉각 단계를 반복한다.
21. 200mM Na4P2O7
22. 포스포티로신 특이적 래빗 다클론 항혈청(anti-Ptyr 항체, SUGEN, Inc.)
23. 친화도로 정제된 항혈청, 고우트 안티-래빗 IgG 항체, 퍼옥시다제 결합 물(바이오소스 카탈로그 #ALI0404)
24. ABTS 용액
25. 30% 히드로겐 퍼옥시드 용액
26. ABTS/H2O2
27. 0.2M HCl
과정:
1. 코닝 96 웰 ELISA 플레이트에 각 웰당 PBS에 녹인 SUMO1 1.0㎍을 도포하 여, 최종 부피를 각 웰당 100㎕로 한다. 4℃에서 24시간 방치한다.
2. 사용하는 날, 도포한 완충액을 제거하고 플레이트를 dH2O로 3회, TBST 완 충액으로 1회 세척한다. 본 분석에서 모든 세척은 다른 설명이 없는 한, 이러한 방식으로 행해져야 한다.
3. 각 웰에 100㎕의 차단 완충액을 가한다. 플레이트를 실온에서 30분간 진 탕 배양한다. 사용하기 직전에 플레이트를 세척한다.
4. 본 분석을 위하여 EGFr/HER-2 chimera/3T3-C7 세포주를 사용한다.
5. 80 내지 90%의 융합도(confluence)를 갖는 접시를 선택한다. 항트립 신성을 파괴하여 세포를 모으고, 5분간 실온에서 1000rpm으로 원심분리한 다.
6. 세포를 기아 배지에 재현탁하고 트립판 블루(trypan blue)로 수를 측정한 다. 90%이상의 생존율이 요구된다. 세포를 기아 배지에, 각 웰당 2,500 세포. 90㎕의 밀도를 갖도록 96 웰 마이크로타이터 플레이트에 분배한다. 분배된 세포를 5% CO2, 37℃에서 24시간 배양한다.
7. 세포를 분배하고 2일 후에 분석을 시작한다.
8. 시험 화합물을 4% DMSO에 용해시킨다. 그 후, 시료를 기아-DMEM을 담은 플레이트에서 직접 희석시킨다. 전형적으로는, 이러한 희석은 1:10 또는 그 이상으로 이루어진다. 그 후, 추가로 1:10배로 희석하면서 모든 웰을 세포 플레이트로 옮긴다(10㎕의 시료 및 배지를 90㎕의 기아 배지에 넣는 다). 최종 DMSO의 농도는 1% 이하이어야 한다. 표준적인 연속 희석법이사용될 수 있다.
9. 5% CO237℃에서 2시간 동안 배양한다.
10. 원액 EGF(16.5μM)를 따뜻한 DMEM으로 150nM로 희석하여 EGF 리간드를 조제한다.
11. 각 웰당 100㎕가 되기에 충분한 바로 조제된 HNTG*를 준비한다; 얼음에 보관한다.
12. 시험 화합물을 2시간 동안 배양한 후, 준비된 EGF 리간드를 각 웰당 50 ㎕씩 최종 농도가 50nM가 되도록 세포에 가한다. 양성 대조 웰은 동일 한 양의 EGF를 담는다. 음성 대조 웰은 EGF를 담지 아니한다. 37℃에 서 10분간 배양한다.
13. 시험 화합물, EGF 및 DMEM을 제거한다. PBS로 1회 세포를 세척한다.
14. HNTG*를 각 웰당 100㎕씩 세포에 옮긴다. 얼음에 5분간 담근다. 한편, ELISA 플레이트에서 차단 완충액을 제거하고 세척한다.
15. 마이크로피페터(micropipettor)로 플레이트로부터 세포를 분리하고, HNTG* 용해 완충액을 반복적으로 흡입 및 분배하여 세포 물질을 균질화 한다. 용해 물질을 도포되고, 차단되었으며, 세척된 ELISA 플레이트에 옮긴다. 또는, 용해물질을 플레이트에 옮기기 위하여 코스타르 운반 카 트리지를 사용한다.
16. 실온에서 1시간 동안 흔들면서 배양한다.
17. 용해 물질을 제거하고, 세척한다. 바로 조제된 희석 안티-Ptyr 항체(TBST로 1:3000배 희석)를 ELISA 플레이트에 각 웰당 100㎕씩 옮긴 다.
18. 실온에서 30분간 흔들면서 배양한다.
19. 안티-Ptyr 항체를 제거하고, 세척한다. 바로 조제한 희석 바이오소스 항체를 ELISA 플레이트(TBST로 1:8000희석, 웰당 100㎕)에 옮긴다.
20. 실온에서 30분간 흔들면서 배양한다.
21. 바이오소스 항체를 제거하고, 세척한다. 바로 조제한 ABTS/H2O2용액을 ELISA 플레이트에 각 웰당 100㎕씩 옮긴다.
22. 5-10분간 흔들면서 배양한다. 모든 거품을 제거한다.
23. 각 웰당 0.2M HCl 100㎕를 가하여 반응을 중지시킨다.
24. 시험 필터는 410nm로, 기준 필터는 630nm로 다이나테크 MR7000 ELISA 판 독기로 분석 결과를 판독한다.
CDK2/사이클린(CYCLIN) A 분석
본 분석은 인간의 cdk2/사이클린 A의 시험관 내 세린/트레오닌 인산화 효소 활성을 섬광 근접 분석(Scintillation Proximity Assay(SPA)으로 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약
1. 월락(Wallac) 96-웰 폴리에틸렌 테레프탈레이트(플렉시) 플레이트(월락카탈로그 #1450-401).
2. 아머샴 레디뷰(Amersham Redivue)(γ33P) ATP(아머샴 카탈로그 #AH9968)
3. 폴리비닐톨루엔 SPA 비드(beads)로 도포된 아머샴 스트렙타비딘(Amersham streptavidin)(아머샴 카탈로그 #RPNQ0007). 상기 비드는 마그네슘 또는 칼슘이 없이 PBS에서 20mg/ml로 재조제되어야 한다.
4. Sf9 세포로부터 정제된 활성 cdk2/사이클린 A 효소 복합체(SUGEN, Inc.)
5. 비오틴화된 펩티드 기질(데브티드(Debtide)). 펩티드 비오틴-X- PKTPKKAKKKL을 5mg/ml의 농도로 dH2O에 용해시킨다.
6. 펩티드/ATP 혼합물: 10ml당, 9.979ml dH2O, 0.00125ml "냉(cold)" ATP, 0.010ml 데브티드 및 0.010ml γ33P APT를 혼합한다. 각 웰당 최종 농도 는 0.5μM "냉" ATP, 0.1㎍ 데브티드 및 0.2μCi γ33P APT이다.
7. 인산화 효소 완충액: 10ml당, 8.85ml의 dH2O, 0.625ml의 TRIS(pH 7.4), 0.25ml의 1M MgCl2, 0.25ml의 10% NP40 및 0.025ml 1M DTT를 사용 직전에 바로 가하여 혼합한다.
8. dH2O를 용매로 한 10mM ATP
9. HCl로 pH를 7.4로 맞춘 1M Tris
10. 1M MgCl2
11. 1M DTT
12. PBS(깁코 카탈로그 #14190-144)
13. 0.5M EDTA
14. 정지 용액: 10ml당, 9.25ml의 PBS, 0.005ml의 100mM ATP, 0.1ml의 0.5M EDTA, 0.1ml의 10% 트리톤 X-100 및 1.25ml의 20mg/ml SPA 비드
과정:
1. 5% DMSO를 용매로 하여 원하는 최종 농도의 5배 농도를 갖는 시험 화합물 용액을 조제한다. 각 웰에 10㎕씩 가한다. 음성 대조군을 위하여 10㎕ 의 5% DMSO 단독을 사용한다.
2. 5㎕의 cdk2/사이클린 A 용액을 2.1ml의 2X 인산화 효소 완충액으로 희석 한다.
3. 20㎕의 효소를 각 웰에 가한다.
4. 10㎕의 0.5M EDTA를 음성 대조 웰에 가한다.
5. 인산화 반응을 개시하기 위하여, 20㎕의 펩티드/ATP 혼합물을 각 웰에 가 한다. 1시간 동안 흔들지 아니하고 배양한다.
6. 200㎕의 정지 용액을 각 웰에 가한다.
7. 적어도 10분간 방치한다.
8. 약 2300rpm으로 3-5분간 플레이트를 회전시킨다.
9. 트릴룩스(Trilux) 또는 비슷한 판독기를 사용하여 플레이트를 판독한다.
MET 인산전환작용(Transphosphorylation) 분석
본 분석은 기질의 met 인산 전환작용의 작용제/길항제를 확인하기 위한 수단으로, 폴리(글루타민 산:티로신 (4:1)) 기질에서 포스포티로신 농도를 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약:
1. 코닝 96-웰 ELISA 플레이트, 코닝 카탈로그 #25805-96
2. 폴리(glu, tyr) 4:1, 시그마 카탈로그 No. P0275
3. PBS, 깁코 카탈로그 #450-1300EB
4. 50mM HEPES
5. 차단 완충액: 25g의 소 혈청 알부민, 시그마 카탈로그 No. A-7888를 500ml PBS에 녹여서 4μm 필터로 여과한다.
6. Met 인산화 효소 부분을 포함하는 정제된 GST 융합 단백질, SUGEN, Inc.
7. TBST 완충액
8. 10% 수용성(밀리크 H2O) DMSO
9. 10mM 수용성(dH2O) 아데노신-5'-트리포스페이트, 시그마 카탈로그 No. A-5394
10. 2X 인산화 효소 희석 완충액: 100ml당, 10ml의 1M HEPES를 pH 7.5에서, 88.4ml의 dH2O를 용매로 한 0.4ml의 5% BSA/PBS, 0.2ml의 0.1M 소디움 오 르토바나데이트 및 1ml의 5M 소디움 클로라이드와 혼합한다.
11. 4X ATP 반응 혼합물: 10ml당, 0.4ml의 1M 망간 클로라이드 및 0.02ml의0.1M ATP를 9.56ml의 dH2O에서 혼합한다.
12. 4X 음성 대조군 혼합물: 10ml당, 0.4ml의 1M 망간 클로라이드를 9.6ml의 dH2O에 혼합한다.
13. NUNC 96-웰 V 바닥 폴리프로필렌 플레이트, 어플라이드 사이언티픽 카 탈로그 #S-72092
14. 500mM EDTA
15. 항체 희석 완충액: 100ml당, 10ml의 5% BSA/PBS, PBS를 용매로 한 0.5ml 의 5% 카르네이션 인스탄트 밀크®와 0.1ml의 0.1M 소디움 오르토바나데 이트를 88.4ml의 TBST를 용매로 하여 혼합한다.
16. 래빗 다클론 안티포스포티로신 항체, Sugen, Inc.
17. 고우트 안티-래빗 호스라디쉬 퍼옥시다제 결합 항체, 바이오소스, Inc.
18. ABTS 용액: 1L당, 19.21g의 시트르 산, 35.49g의 Na2HPO4및 500mg의 ABTS를 충분한 양의 dH2O와 혼합하여 1L가 되도록 한다.
19. ABTS/H2O2: 사용하기 5분 전에, 15ml의 ABTS 용액을 2㎕의 H2O2와 혼합한 다.
20. 0.2M HCl
과정:
1. ELISA 플레이트를 100㎕의 PBS에 녹인 2㎍의 폴리(Glu-Tyr)로 도포하고,4℃에서 24시간 방치한다.
2. 플레이트를 150㎕의 5% BSA/PBS로 60분간 차단한다.
3. 플레이트를 PBS로 2회, 50mM Hepes 완충액(pH 7.4)으로 1회 세척한다.
4. 희석된 인산화 효소 50㎕를 각 웰에 가한다(정제된 인산화 효소를 인산화 효소 희석 완충액으로 희석한다. 최종 농도는 10ng/웰이어야 한다).
5. 시험 화합물 25㎕(4% DMSO를 용매로 함) 또는 대조군으로는 DMSO 단독(4% in dH2O)을 플레이트에 가한다.
6. 인산화 효소/화합물의 혼합물을 15분간 배양한다.
7. 25㎕의 40mM MnCl2를 음성 대조 웰에 가한다.
8. 25㎕의 ATP/MnCl2혼합물을 음성 대조군을 제외한 모든 웰에 가한다. 5분 간 배양한다.
9. 25㎕의 500mM EDTA를 반응을 정지시키기 위하여 가한다.
10. 플레이트를 TBST로 3회 세척한다.
11. 항체 희석 완충액으로 1:10,000배 희석한 100㎕의 래빗 다클론 안티-Ptyr을 각 웰에 가한다. 실온에서 1시간 동안 흔들면서 배양한다.
12. TBST로 3회 플레이트를 세척한다.
13. 항체 희석 완충액에 바이오소스 HRP 결합 안티-래빗 항체를 1:6,000배 희석한다. 각 웰당 100㎕를 가하여 실온에서 흔들면서 1시간 동안 배양 한다.
14. 플레이트를 PBS로 1회 세척한다.
15. 100㎕의 ABTS/H2O2용액을 각 웰에 가한다.
16. 필요하다면, 각 웰당 100㎕의 0.2M HCl을 가하여 진전 반응을 정지시킨 다.
17. 다이나테크 MR7000 ELISA 판독기를 사용하여, 시험 필터는 410nm 로, 기 준 필터는 630nm로 플레이트를 판독한다.
IGF-1 인산전환작용 분석
본 분석은 기질의 gst-IGF-1 인산전환작용의 작용제/길항제를 확인하기 위하여 폴리(글루타민 산:티로신)(4:1)에서 포스포티로신의 농도를 측정하기 위하여 사용된다.
물질 및 시약:
1. 코닝 96-웰 ELISA 플레이트
2. 폴리(Glu-Tyr)(4:1), 시그마 카탈로그 No. P 0275
3. PBS, 깁코 카탈로그 # 450-1300EB
4. 50mM HEPES
5. TBB 차단 완충액: 1L당, 100g의 BSA, 12.1g의 TRIS(pH 7.5), 58.44g의 소 디움 클로라이드 및 10ml의 1% 트윈-20을 혼합한다.
6. IGF-1 인산화 효소 부분을 포함하는 정제된 GST 융합 단백질(SUGEN, Inc)
7. TBST 완충액: 1L당, 6.057g의 Tris, 8.766g의 소디움 클로라이드 및0.5ml의 트윈-20을 충분한 양의 dH2O와 혼합하여 1L가 되도록 한다.
8. 밀리크 H2O를 용매로 한 4% DMSO
9. dH2O를 용매로 한 10mM ATP
10. 2X 인산화 효소 희석 완충액: 100ml당, 10ml의 1M HEPES(pH7.5), dH2O를 용매로 한 0.4ml의 5% BSA, 0.2ml의 0.1M 소디움 오르토바나데이트 및 1ml의 5M 소디움 클로라이드를 충분한 양의 dH2O와 혼합하여 100ml로 만 든다.
11. 4X ATP 반응 혼합물: 10ml당, 0.4ml의 1M MnCl2와 0.008ml의 0.01M ATP와 9.56ml의 dH2O를 혼합한다.
12. 4X 음성 대조군 혼합물: 0.4ml의 1M 망간 클로라이드를 9.60ml의 dH2O와 혼합한다.
13. NUNC 96-웰 V 바닥 폴리프로필렌 플레이트
14. dH2O를 용매로 한 500mM EDTA
15. 항체 희석 완충액: 100ml당, PBS를 용매로 한 10ml의 5% BSA, PBS를 용 매로 한 0.5ml의 5% 카르네이션 인스탄트 논-패트 밀크®및 0.1ml의 0.1M 소디움 오르토바나데이트를 88.4ml의 TBST에서 혼합한다.
16. 래빗 다클론 안티포스포티로신 항체, SUGEN, Inc.
17. 고우트 안티-래빗 HRP 결합 항체, 바이오소스
18. ABTS 용액
20. ABTS/H2O2: 사용하기 5분 전에 2㎕의 H2O2와 15ml의 ABTS를 혼합한다.
21. dH2O를 용매로 한 0.2M HCl
과정:
1. 100㎕의 PBS에 각 웰당 2.0㎍의 폴리(Glu, Tyr) 4:1(시그마 PO275)를 녹 여서 ELISA 플레이트에 도포한다. 플레이트를 4℃에서 24시간동안 배양 한다.
2. PBS로 1회 플레이트를 세척한다.
3. 각 웰에 100㎕의 TBB 차단 완충액을 가한다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 흔들면서 배양한다.
4. PBS로 1회, 50mM Hepes 완충액(pH 7.5)으로 2회 플레이트를 세척한다.
5. 4% DMSO를 용매로 한 25㎕의 시험 화합물(100% DMSO를 용매로 한 10mM 시 험화합물의 원액을 dH2O로 희석하여 얻은)을 플레이트에 가한다.
6. 50㎕ 인산화 효소 희석 완충액을 용매로 한 10.0ng의 gst-IGF-1 인산화 효소를 모든 웰에 가한다.
7. 25㎕의 4X ATP 반응 혼합물을 모든 시험 웰과 양성 대조 웰에 가하여 인 산화 반응을 개시한다. 25㎕의 4X 음성 대조군 혼합물을 모든 음성 대조 웰에 가한다. 실온에서 10분 동안 흔들면서 배양한다.
8. 25㎕의 0.5M EDTA(pH 8.0)을 모든 웰에 가한다.
9. TBST 완충액으로 플레이트를 4회 세척한다.
10. 100㎕의 항체 희석 완충액으로 1:10,000배 희석된 래빗 다클론 안티-포 스포티로신 항혈청을 모든 웰에 가한다. 실온에서 1시간동안 흔들면서 배양한다.
11. 단계 9에서와 같이 플레이트를 세척한다.
12. 항체 희석 완충액으로 1:10,000배 희석된 100㎕의 바이오소스 안티-래빗 HRP를 모든 웰에 가한다. 실온에서 1시간 동안 흔들면서 배양한다.
13. 플레이트를 단계 9에서와 같이 세척한 다음 PBS로 1회 세척하여 거품과 과량의 트윈-20을 제거한다.
14. 각 웰당 100㎕의 ABTS/H2O2를 각 웰에 가하여 반응을 진행시킨다.
15. 약 5분 후에, 시험 필터는 410nm에서, 기준 필터는 630nm에서 ELISA 판 독기로 판독한다.
BRDU 혼입(incorporation) 분석
하기 분석은 선택 수용체를 발현도록 설계된 세포를 사용하여, DNA로의 BrdU 혼입을 측정하여 목적 화합물이 리간드-유도 DNA 합성의 활성에 미치는 영향을 평가한다.
하기 물질, 시약 및 과정은 각각의 하기 BrdU 혼입 분석에 일반적인 것이다. 특정 분석에서의 변수들을 표시하였다.
물질 및 시약:
1. 적절한 리간드
2. 적절하게 설계된 세포
3. BrdU 표지 시약 : PBS를 용매로 농도 10mM(pH 7.4)(베링거 만하임, 독일(Boehringer Mannheim, Germany)
4. 픽스디네이트(FixDenat): 고정 용액(바로 사용 가능)(베링거 만하임, 독 일)
5. 항-BrdU-POD: 마우스 단일클론 퍼옥시다제 결합 항체(베링거 만하임, 독 일)
6. TMB 기질 용액: 테트라메틸벤지딘(TMB, 베링거 만하임, 독일)
7. PBS 세척 용액: 1X PBS, pH 7.4
8. 소의 알부민(BSA), 분획 V 분말(시그마 케미컬 Co., USA)
일반적인 과정:
1. 96 웰 플레이트에 10% CS, 2mM Gln을 갖는 각 웰당 8000개의 세포를 담는 다.
2. 24시간 후에, 세포들을 PBS로 세척하고, 혈청이 없는 배지에서 24시간 동 안 혈청 부족 상태를 만든다(0.1%의 BSA를 갖는 0% CS DMEM)
3. 3일째 되는 날, 적절한 리간드와 시험 화합물을 상기 세포들에 동시에 가 한다. 음성 대조 웰에는 0.1% BSA를 갖는 혈청이 없는 DMEM만을 담는다; 양성 대조 웰에는 시험 화합물 없이 리간드를 담는다. 시험 화합물은 96 웰 플레이트상에서, 리간드와 함께 혈청이 없는 배지에서 조제되어, 7개의 시험 농도로 연속적으로 희석된다.
4. 리간드가 활성화된지 18시간 후, 희석된 BrdU 표지 시약(0.1% BSA를 갖는 DMEM으로 1:100배 희석된)을 가하고, 상기 세포들을 1.5시간 동안 BrdU( 최종 농도=10μM)와 함께 배양한다.
5. 표지 시약과 함께 배양 후, 플레이트를 종이 수건 위에 뒤집어 비우고 두 들겨서 배지를 제거한다. 픽스디네이트 용액을 가하고(50㎕/웰), 플레이 트를 플레이트 쉐이커(plate shaker)상에서 45분 동안 실온 배양한다.
6. 플레이트를 종이 수건 위에 뒤집어 비우고 두들겨서 픽스디네이트 용액을 완전히 제거한다. 차단 용액으로 밀크를 가하고(PBS를 용매로 한 5% 탈 수 밀크), 플레이트를 플레이트 쉐이커 상에서 30분 동안 실온 배양한다.
7. 차단 용액을 비워서 제거하고 웰을 PBS로 1회 세척한다. 안티-BrdU-POD 용액(PBS를 용매로하여 1:200배 희석, 1% BSA)을 가하고(50㎕/웰), 플레 이트를 플레이트 쉐이커 상에서 90분 동안 실온 배양한다.
8. 항체 결합물을 비워서 완전히 제거하고, 웰을 PBS로 5회 세척한 다음, 플 레이트를 종이 수건 위에 뒤집어 두들겨서 건조시킨다.
9. TMB 기질 용액을 가하고(100㎕/웰), 광도 측정에 충분한 색깔이 나타날 때까지 플레이트 쉐이커 상에서 20분 동안 실온 배양한다.
10. 시료의 흡광도를 다이나테크 ELISA 플레이트 판독기로 410nm(기준 파장 으로 490nm에서 판독하는 필터를 갖는 "이중 파장"방식으로)에서 측정한 다.
EGF-유도 BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 마우스 EGF, 201(토요보(Toyobo) Co., Ltd., 일본)
2. 3T3/EGFRc7
EGF-유도 Her-2-유발(EGF-Induced Her-2-driven) BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 마우스 EGF, 201(토요보 Co., Ltd., 일본)
2. 3T3/EGFr/Her2/EGFr(Her-2 인산화 효소 부분을 갖는 EGFr)
EGF-유도 Her-4-유발 BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 마우스 EGF, 201(토요보 Co., Ltd., 일본)
2. 3T3/EGFr/Her4/EGFr (Her-4 인산화 효소 부분을 갖는 EGFr)
PDGF-유도 BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 인간의 PDGF B/B (베링거 만하임, 독일)
2. 3T3/EGFRc7
FGF-유도 BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 인간의 FGF2/bFGF(깁코 BRL, USA)
2. 3T3c7/EGFr
IGF1-유도 BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 인간의 재조합 (G511, 프로메가(Promega) Corp., USA)
2. 3T3/IGF1r
인슐린-유도 BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 소의 결정 아연 인슐린(13007, 깁코 BRL, USA)
2. 3T3/H25
HGF-유도 BrdU 혼입 분석
물질 및 시약:
1. 재조합 인간 HGF(카탈로그 No. 249-HG, R&D 시스템스, Inc. USA)
2. BxPC-3 세포(ATCC CRL-1687)
과정:
1. 96 웰 플레이트 상에서 RPMI 10% FBS에 각 웰당 9000개의 세포를 담는다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 배양한다.
2. 24시간 후, 세포를 PBS로 세척하고, 100㎕의 혈청이 없는 배지(0.1% 의 BSA를 갖는 RPMI)에서 24시간 동안 혈청 부족 상태를 만든다.
3. 3일째 되는 날, 리간드(0.1% BSA를 갖는 RPMI를 용매로 하여 1㎍/ml의 농 도로 조제; 최종 HGF 농도는 200ng/ml이다)와 시험 화합물을 포함하는 25㎕를 각 웰에 가한다. 음성 대조 웰에는 25㎕의 0.1% BSA를 갖고 혈청이 없는 RPMI를 담는다; 양성 대조 세포에는 시험 화합물 없이 리간드(HGF)를 담는다. 시험 화합물은, 96 웰 플레이트 상에서 리간드를 갖는 혈청이 없 는 RPMI로 최종 농도의 5배가 되도록 조제되어, 7개의 시험 농도가 되도록 연속적으로 희석된다. 전형적으로, 시험 화합물의 가장 높은 최종 농도는 100μM이고, 1:3 희석이 사용된다(즉, 최종 화합물 농도의 범위는 0.137-100μM다).
4. 리간드가 활성화된 지 18시간 후에, 12.5㎕의 희석된 BrdU 표지 시약(RPMI로 1:100배 희석, 0.1% BSA)을 각 웰에 가하고, 상기 세포들을 BrdU(최종 농도는 10μM)와 함께 1시간 동안 배양한다.
5. 일반적인 과정과 동일하다.
6. 일반적인 과정과 동일하다.
7. 차단 용액을 비워서 제거하고, 웰을 PBS로 1회 세척한다. 안티-BrdU-POD 용액(PBS로 1:100배 희석, 1% BSA)을 가하고(100㎕/웰), 플레이트를 플레 이트 쉐이커 상에서 90분간 실온 배양한다.
8. 일반적인 과정과 동일하다.
9. 일반적인 과정과 동일하다.
10. 일반적인 과정과 동일하다.
HUV-EC-C 분석
본 분석은 모두 HUV-EC 세포에서 자연적으로 발현되는, PDGF-R, FGF-R,VEGF, aFGF 또는 Flk-1/KDR에 대한 화합물의 활성을 측정하기 위하여 사용된다.
0일
1. HUV-EC-C(인간의 제대 정맥 내피 세포, Human umbilical vein endothelial cells, American Type Culture Collection 카탈로그 No. 1730 CRL) 세포를 세척하고 항트립신성을 파괴한다. 조직 배양 플라스크에서 10㎠당 1ml가 되도록 둘베코 인산 완충 식염수(D-PBS, 깁코 BRL로부터 구입, 카탈로그 No. 14190-029)로 2회 세척한다. 비효소적 세포 분리 용액(시그마 케미컬 컴퍼니, 카탈로그 No. C-1544)에서 0.05% 트립신-EDTA로 항트립신성을 파괴한다. 0.05% 트립신은 0.25% 트립신/1mM EDTA(깁코, 카탈로그 No. 25200-049)를 세포 분리 용액으로 희석하여 조제한다. 조직 배양 플라스크에 약 1ml/25-30㎠로 37℃에서 5분 동안 항 트립신성을 파괴한다. 세포를 플라스크에서 분리시킨 후, 동일한 부피의 분석 배지를 가하고, 50ml 멸균 원심분리 관(피셔 사이언티픽, 카탈로그 No. 05-539-6)에 옮겨 담았다.
2. 50ml 멸균 원심분리 관에서 약 35ml의 분석 배지를 가하여 세포를 세척하고, 약 200x g에서 10분 동안 원심분리하고, 상층액을 취한 다음 35ml의 D-PBS에 재현탁시켰다. D-PBS로 2회 이상 세척을 반복하고, 세포들을 15㎠의 조직 배양 플라스크 당 1ml의 분석배지로 재현탁시켰다. 분석 배지는 F12K 배지(깁코 BRL, 카탈로그 No. 21127-014)와 0.5% 열로 불활성화된 소 태아 혈청으로 구성된다. 코울터 계수기(Coulter Counter)®(코울터 일렉트로닉스, Inc.)로 세포수를 측정하고,분석 배지를 세포에 가하여 0.8-1.0x 105세포/ml의 농도가 되도록 한다.
3. 96-웰 편평 바닥 플레이트에 웰당 100㎕씩 또는 웰당 0.8-1.0x 104세포씩세포를 가하고, 37℃ 5% CO2에서 24시간 동안 배양한다.
1일
1. 별도의 96-웰 플레이트에, 시험 화합물의 타이트레이션(titrations)을 50μM에서 0μM까지의 농도로 2쌍 만든다. 0일과 동일한 분석 배지와 상기한 단계 2를 사용한다. 각 플레이트 칼럼의 가장 위의 웰에 200μM(4x 최종 웰의 농도) 시험 화합물을 각 웰당 90㎕씩 가하여 타이트레이션을 만든다. 시험 화합물의 원액이 대개 DMSO를 용매로 20mM의 농도이기 때문에, 200μM의 약물 농도는 2%의 DMSO를 함유한다.
DMSO 농도를 일정하게 유지하면서 시험 화합물을 희석하기 위하여, 분석 배지(F12K + 0.5% 소 태아 혈청)에서 2% DMSO까지 희석된 희석제가 시험 화합물의 타이트레이션을 위한 희석제로 사용된다. 이러한 희석제를 각 웰당 60㎕씩 칼럼의 나머지 웰에 가한다. 칼럼의 가장 위의 웰에서 200μM의 시험 화합물 120㎕로부터 60㎕를 취하여, 칼럼의 두번째 웰에 있는 60㎕와 혼합한다. 상기 웰에서 60㎕를 취하여 칼럼의 세번째 웰에 있는 60㎕와 혼합하고, 같은 과정을 2개의 타이트레이션을 완성할 때까지 반복한다. 끝에서 두번째 있는 웰에 혼합될 때, 이 웰에 있는 120㎕ 중에서 60㎕를 취하여 이를 버린다. 마지막 웰은 시험 화합물을 포함하지 아니한 대조군으로 60㎕의 DMSO/배지 희석액이 있는 채로 둔다. 타이트레이션된시험 화합물의 9개의 칼럼을 다음의 각각을 위하여 3쌍으로 만든다: (1) VEGF(펩프로 테크 Inc.로부터 구입, 카탈로그 No. 100-200, (2) 내피 세포 성장 인자(ECGF)
(또한, 산성 섬유아세포 성장 인자 또는 aFGF로 알려짐)(베링거 만하임 바이오케미카, 카탈로그 No. 1439 600) 또는 (3) 인간 PDGF B/B (1276-956, 베링거 만하임, 독일) 및 분석 배지 대조군. ECGF는 소디움 헤파린과의 제제로 얻는다.
2. 각 웰당 50㎕의 시험 화합물 희석액을, 0일에서 각 웰당 0.8-1.0x 104세포/100㎕의 HUV-EC-C세포를 담고 있는 96-웰 분석 플레이트에 옮겨 담고, 37℃, 5% CO2에서 2시간 동안 배양한다.
3. 3쌍의 칼럼에서, 각 웰당 50㎕의 80㎍/ml VGEF, 20ng/ml ECGF 또는 배지 대조군을 각 농도의 시험 화합물에 가한다. 시험 화합물과 같이 성장 인자 농도도 4X 원하는 최종 농도이다. 0일의 단계 2의 분석 배지를 성장 인자의 농도를 조절하기 위하여 사용한다. 37℃, 5% CO2에서 약 24시간 동안 배양한다. 각 웰은 50㎕의 시험 화합물 희석액, 50㎕의 성장인자 또는 배지, 그리고 100㎕의 세포를 포함하여, 각 웰당 전체 200㎕를 포함한다. 그러므로, 시험 화합물과 성장 인자의 4X 농도는 모든 것이 웰에 가해지면, 1X가 된다.
2일
1. 3H-티미딘(아머샴, 카탈로그 No. TRK-686)를 각 웰당 1μCi씩(RPMI 배지와 10% 열로 불활성화된 소 태아 혈청으로 구성된 100μCi/ml 용액을 각 웰당 10㎕씩) 가하고, 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 배양한다. RPMI는 깁코 BRL, 카탈로그No. 11875-051로부터 구입한다.
3일
1. 플레이트를 -20℃에서 24시간 냉동시킨다.
4일
1. 플레이트를 녹이고 96-웰 플레이트 수확기(톰텍 하베스터 96®)를 사용하여 필터 매트(월락, 카탈로그 No. 1205-401)에 수확하여, 월락 베타플레이트(Wallac Betaplate)TM액체 섬광 계수기로 숫자를 판독한다.
표 3은 본 발명의 몇몇 예시 화합물의 생물학적 시험의 결과를 보여준다. 결과들은 IC50, 어떤 시험 화합물도 가해지지 아니한 대조군에서의 단백질 인산화 효소의 활성과 비교하여 표적 단백질 인산화 효소의 활성을 50% 변화시킬 수 있는 시험 화합물의 μM 농도로 나타내었다. 상세하게는, 나타낸 결과는 표적 단백질 인산화 효소의 활성을 50% 감소시킬 데 필요한 시험 화합물의 농도를 가리킨다. 화합물을 평가하기 위하여 사용된 또는 사용될 수 있는 생물학적 분석을 이하에서 자세하게 설명하였다.
표 3
예 바이오flkGSTIC50(μM) 바이오 FGFR1IC50(μM) 바이오 PDGFIC50(μM) 바이오EGFIC50(μM) 세포질EGFIC50(μM) Her2인산화 효소 IC50(μM) cdk2spaIC50(μM) 바이오 pyk2IC50(μM)
1 57.68 15.16 >100 >100 >100 >100
2 >100 >100 >100 >100
3 9.85 9.62 >100 >100 >100 >100
4 3.57 >20 >100 >100 >100 >100
5 8.3 16.06 >100 >100 >100 >100
6 4.04 >100 3.26 7.82 2.43
7 7.74 >100 5.07 9.8 4.24
8 12.1 >100 51.34 20.08 5.5
9 0.96 >100 >100 >100 16.38
10 5.72 >100 94.04 15.86 8.06
11 9.77 >100 >100 >100 >100
12 >20 21.46 >100 27.73
13 >20 81.92 8.17 2.66
14 13.01 42.41 >100 66.02
15 >20 >100 >100 98.61
16 >20 98.06 >100 23.32
17 8.25 2.47 94.35 0.83 11.47 15.94 >10
18 2.67 2.57 9.23 4.99
19 7.5 6.86 34.18 8.37
20 11.53 >100 41.16 8
21 7.18 >100 40.34 27.69
22 >20 >100 >100 87.67
23 >20 >100 36.64 4.05
24 >100 16.84 5.31
25 12.55 >100 23.48 7.9
26 16.03 66.87 34.67 10.04
27 >100 26.5 3.91
28 4.5 71.27 53.66 2.67
29 10.12 >100 26.72 3.98
30 9.4 >100 18.69 4.1
31 >50 >100 9.83 47.19
32 45.74 5.94 >100 >100
34 >50 >100 >100 >100
35 >20 >100 80.4 54.14
36 >20 >100 >100 >100
37 0.22 3.06 10.78 9.84 1.4
38 4.17 3.06 6.04 8.97 2.16
39 3.38 4.69 3.67 14.54 3.53
40 4.5 7.9 6.52 6.27
예 바이오flkGSTIC50(μM) 바이오FGFR1IC50(μM) 바이오PDGFIC50(μM) 바이오EGFIC50(μM) 세포질EGFIC50(μM) Her2인산화 효소 IC50(μM) cdk2spaIC50(μM) 바이오pyk2IC50(μM)
42 0.1 0.12 11.95 74.55 20.43
43 1.12 8.38 >100 37.33 53.37
44 <0.05 0.02 20.73 67.46 6.99
45 1.71 >100 >100 29.95 >100
46 30.62 6.18 >100 >100 >100
47 0.08 1.56 0.06 11.42 41.54 8.4 >20 1.05
48 0.006 0.3 <0.78 17.88 21.58 7.93 0.09
49 <0.78 >100 43.86 >100
50 <0.78 >100 20.34 >100
51 0.006 1.66 0.01 18.1 21.61 23.24 16.69 0.35
52 0.08 1.26 <0.78 12.53 >100 >100 10.66 0.45
53 <0.78 >100 >100 >100
54 1.98 <0.78 23.88 9.76 7.02
55 0.27 0.53 6.03 35.99 77.82
56 2.32 3.19 >100 10.03 7.11
57 0.06 7.98 >100 9.97 6.94
58 21.14 >100 >100 >100
59 <0.78 >100 >100 >100
60 <0.78 >100 >100 >100
61 <0.78 >100 >100 >100
62 8.00 8.32 >100 >100 >100
63 0.21 <0.78 8.59 >100 >100
64 0.55 <0.78 30.49 >100 >100
65 0.37 <0.05 >100 74.36 15.97
66 <0.05 >100 11.84 2.76
67 0.39 24.77 31.38 19.79 2.56
68 1.16 0.03 >100 23.52 34.13
69 0.3 56.55 >100 97.54 >100
70 0.09 1.50 0.0030 10.57 6.42 7.99 12.62 0.63
71 15.21 22.5 >100 9.91
72 6.06 10.54 >100 39.94 9.65
73 5.95 14.12 >100 39.5 8.59
74 1.2 0.09 46.75 >100
75 2.7 61.55 >100 >100
76 3.33 19.18 5.11 3.01
77 0.49 25.01 >100 >100
78 1.94 70.62 9.33 4.25
79 1.49 >100 27.39 >100
80 0.13 4.29 0.001 >100 50.19 17.19 0.28
예 바이오flkGSTIC50(μM) 바이오FGFR1IC50(μM) 바이오PDGFIC50(μM) 바이오EGFIC50(μM) 세포질EGFIC50(μM) Her2인산화 효소 IC50(μM) cdk2spaIC50(μM) 바이오pyk2IC50(μM)
81 0.21 0.18 >100 >100
82 2.03 7.69 6.88 >100 >100 0.31
83 0.34 0.41 9.46 2.18 86.9 0.008
84 1.38 12.51 67.2 5.86 0.006
85 0.2 0.8 2.59 >100 3.76
86 1.45 1.3 19.6 41.8 >100 3.58
87 3.27 7.56 6.46 >100 9.1 0.17
88 0.35 1.18 8.06 2.36 >100 0.09
89 7.84 47.58 8.53 9.67 15.97
115 7.3 7.48 >100 >100 0.006
116 >20 >100 >100 >100 <0.0005
117 0.91 12.9 >100 >100 0.006
118 1.93 1.2 >100 >100 0.002
119 1.38 61.63 >100 >100 <0.0005
생체 내 동물 모델
이종이식 동물 모델
흉선이 없는 마이스(예를 들면, Balb/c, nu/nu)에서 이종이식으로 성장할 수 있는 인간 종양의 능력은 인간 종양의 치료에 대한 생물학적 반응을 연구하기 위한 유용한 생체 내 모델을 제공한다. 인간의 종양을 흉선이 없는 마이스에 처음 성공적으로 이종이식한 이래(Rygaard and Povlsen, 1969,Acta Pathol. Microbial. Scand.77:758-760), 다수의 상이한 인간 종양 세포주(예를 들면, 유방, 폐, 비뇨생식기, 위장관, 두경부, 교아세포종, 뼈 및 악성 흑색종)가 누드 마이스(nude mice)에 이식되었고 성공적으로 성장하였다. 이하의 분석은 본 발명의 상이한 화합물들의 활성 정도, 특이성 및 효과를 결정하는 데 사용될 수 있다. 분석의 세가지 일반적인 형태, 세포질/촉매성, 세포질/생물학적 및 생체내 분석이 화합물을 평가하는 데 유용하다. 세포질/촉매성 분석의 목표는 세포 내에서 공지 기질의 티로신을 인산화하는 티로신 인산화 효소의 능력에 대한 화합물의 영향을 결정하는 것이다. 세포질/생물학적 분석의 목표는 세포 내에서 티로신 인산화 효소에 의하여 자극되는 생물학적 반응에 대한 화합물의 영향을 결정하는 것이다. 생체 내 분석의 목표는 암과 같은 특정 질환의 동물 모델에서의 화합물의 영향을 결정하는 것이다.
피하 이종이식 실험을 위하여 적절한 세포주로는, EGFR, PDGFR, IGF-1R 또는 다른 조직 인산화 효소를 과도하게 발현하도록 유전적으로 설계된, C6 세포((신경)교종, ATCC # CCL 107), A375 세포(흑색종, ATCC # CRL 1619), A431 세포(유표피암, ATCC # CRL 1555), Calu 6 세포(폐, ATCC # HTB 56), PC3 세포(전립선, ATCC # CRL 1435), SKOV3TP5 세포 및 NIH 3T3 섬유아세포를 포함한다. 하기의 절차는 이종이식 실험을 수행하기 위하여 사용될 수 있다:
흉선이 없는 암컷 마이스(BALB/c, nu/nu)를 시몬센 연구소(Simonsen Laboratories(Gilroy, CA))로부터 얻는다. 모든 동물들은 알파-드라이 베딩(Alpha-dri bedding)이 있는 미소 격리 우리(Micro-isolator cages)에서 무균실 조건을 유지한다. 동물들에게는 임의로 멸균 설치류 음식과 물이 주어진다.
세포주는 적절한 배지(예를 들면, 5%-10%dml 소 태아 혈청(FBS)와 2mM 글루타민(GLN)이 첨가된 MEM, DMEM, Ham's F10 또는 Ham's F12)에서 배양한다. 모든 세포 배양 배지, 글루타민 및 소 태아 혈청은 깁코 라이프 테크놀로지스(Gibco Life Technologies(Grand Island, NY))에서 구입한다. 모든 세포들을 37℃, 90-95%의 공기 및 5-10%의 CO2로 이루어진 습한 대기에서 배양한다. 모든 세포주는 일주일에 2번씩 일정하게 2차 배양하며, 마이코텍트 방법(Mycotect method, 깁코)에 의하여 측정된 바에 따르면 마이코플라스마 음성이다.
세포들은 0.05% 트립신-EDTA로 융합(confluency)이 거의 다 되었을 때 수확하여 450x g에서 10분간 펠렛(pellet)화된다. 펠렛을 특정 농도로 멸균 PBS 또는 배지(FBS가 없는)에 재현탁시키고, 세포들을 마이스(그룹당 8-10마리, 2-10x 106세포/1마리)의 뒷쪽 대퇴부에 이식한다. 종양의 성장을 베니어 캘리퍼(venier calipers)를 사용하여 3-6주동안 측정한다. 종양의 부피는 다른 지시가 없다면, 길이x폭x높이로 계산한다. P 값은 스튜던트 t-테스트(Students t-test)를 사용하여 계산한다. 50-100㎕의 부형제(DMSO 또는 VPD:D5W)에 녹인 시험 화합물은, 일반적으로 이식후 1일째 되는 날부터 상이한 농도로 복강 내 투약될 수 있다.
종양 침윤 모델
이하의 종양 침윤 모델은 KDR/FLK-1 수용체를 선택적으로 저해하는 것으로 확인된 화합물의 효과 및 치료적 가치를 평가하기 위하여 개발되었으며, 사용될 수 있다.
과정
8주된 누드 마이스(암컷)(시몬센 Inc.)를 실험동물로 사용한다. 종양 세포의 이식은 층류 후드(Laminar flow hood)에서 수행될 수 있다. 마취를 위하여, 질라진/케타민 칵테일(Xylazine/Ketamine Cocktail)(100mg/kg 케타민 및 5mg/kg 질라진)이 복강내로 투여된다. 복강을 노출시키기 위하여 중앙선 절개를 하여(약1.5cm의 길이), 100㎕의 배지 내의 107개의 종양 세포를 주입한다. 세포는 췌장의 십이지장엽 내로 또는 대장의 장막 아래로 주입된다. 복막 및 근육은 6-0 실크 연속 봉합사로 봉합하고 피부는 상처용 클립(wound clips)으로 봉합한다. 동물들을 매일 관찰한다.
분석
2-6주 후에, 상기 동물들의 전체적 관찰에 따라, 마이스를 처치하고, 다양한 기관(폐, 간, 뇌, 위, 비장, 심장, 근육)에서의 국소 종양 전이 부분을 잘라내어 분석한다(종양의 크기, 침윤의 정도, 면역화학의 측정, 원위치에서의 혼성화 측정 등).
C-KIT 분석
본 분석은 c-kit 티로신 인산화의 수준을 측정하기 위하여 사용된다.
MO7E(인간 급성 골수성 백혈병) 세포를 0.1% 혈청에서 24시간 혈청 부족 상태를 만들었다. 세포를 리간드로 자극하기 전에, 화합물로 전처리하였다(혈청 부족과 동시에). 세포들을 250ng/ml의 rh-SCF로 15분간 자극하였다. 자극 후, 세포를 용해시키고 안티-c-kit 항체로 면역학적으로 침전시켰다. 포스포티로신 및 단백질 수준을 웨스턴 블롯(Western blotting)으로 측정하였다.
MTT 증식 분석
MO7E 세포를 혈청 부족 상태로 만들고 인산화 실험에서 설명한 바와 같이 화합물로 전처리하였다. 세포들을 100㎕ RPMI + 10% 혈청에서 96 웰 접시에 웰당4*105세포씩 담았다. rh-SCF(100ng/ml)을 가하고, 플레이트를 48시간 동안 배양하였다. 48시간 후, 10㎕의 5mg/ml MTT(3-(4,5-디메틸치아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리움 브로미드)를 가하고 4시간 동안 배양하였다. 산 이소프로판올(이소프로판올을 용매로 한 100㎕의 0.04N HCl)을 가하고 광학 밀도를 550nm의 파장에서 측정하였다.
세포고사 분석
M07E 세포를 rh-GM-CSF(10ng/ml) 및 rh-IL-3(10ng/ml)가 있는 10% FBS에서 SCF 존재/부재 및 화합물 존재/부재 상태로 각각 배양하였다. 시료들을 24시간 및 48시간에 분석하였다. 활성화된 카스파제-3(caspase-3)를 측정하기 위하여, 시료들을 PBS로 세척하고, 얼음과 같이 차가운 70% 에탄올로 투과가 자유롭게 만들었다. 그 후, 세포들을 PE-결합 다클론 래빗 안티-활성 카스파제-3 로 염색하고, FACS로 분석하였다. 절단된 PARP를 측정하기 위하여, 시료들을 용해시키고 안티-PARP 항체를 사용하여 웨스턴 블롯으로 분석하였다.
추가적인 분석들
본 발명의 화합물을 평가하기 위하여 사용될 수 있는 추가적인 분석들로는 바이오-flk-1 분석, 전체 세포에서 EGF 수용체-HER2 키메라 수용체 분석, 바이오-src 분석, 바이오-lck 분석 및 raf의 인산화 기능을 측정하는 분석이 있지만, 이에 한정되지는 아니한다. 이들 분석 각각을 위한 절차는 본 명세서에 모든 도면을 포함하여 참조 문헌으로 편입되는 미합중국 특허출원 제09/099,842에서 찾을 수 있다.
세포 독성의 측정
치료 화합물은 세포 독성 발현보다 수용체 티로신 인산화 효소 활성의 억제에 보다 강력한 효과를 가져야 한다. 화합물의 유효성과 세포 독성은 치료 지수, 즉 IC50/LD50를 결정함으로써 측정할 수 있다. IC50, 50% 억제 효과를 얻기 위하여 필요한 용량은 본 명세서에서 설명된 것들과 같은 표준적인 기술을 사용하여 측정할 수 있다. 또한, LD50, 50%의 독성을 일으키는 용량은 마찬가지로 표준적인 기술에 의하여(Mossman, 1983,J. Immunol. Methods, 65:55-63), 유리된 LDH 양을 측정하여(Korzeniewski and Callewaert, 1983,J. Immunol. Methods, 64:313, Decker and Lohmann-Mattes, 1988,J. Immunol. Methods, 115:61) 또는 동물 모델에서 치사량을 측정하여 측정할 수 있다. 치료 지수가 큰 화합물이 바람직하다. 치료지수는 2보다 크며, 바람직하게는 적어도 10, 보다 바람직하게는 적어도 50이어야 한다.
B. 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드를 사용한 세포질 분석 결과의 예
생화학적 분석(아래를 보라)으로 감지되는 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-디에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)의 역가를 확인하기 위하여, 리간드-의존성 수용체 티로신 인산화 효소의 인산화를 억제하는 상기 화합물의 능력을, Flk-1 또는 인간의 PDGFRβ를 과도하게 발현하도록 설계된 NIH-3T3 마우스 세포를 사용한 세포 기초 분석으로 평가하였다. 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)은 약 0.03μM의 IC50수치로 VEGF-의존성 Flk-1 티로신 인산화를 억제하였다. 이러한 수치는 생화학적 분석에서 측정된, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)의 Flk-1의 억제 정도인 0.009μM Ki 수치와 유사하다. 이러한 점은 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)이 쉽게 세포 내로 투과됨을 가리킨다. 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)가 Flk-1 및 PDGFRβ에 대항하여 상당한 활성을 가짐을 보여주는 생화학적 자료(아래를 보라)와 함께, 상기 화합물이 약 0.03μM의 IC50 수치로 세포 내에서 PDGF-의존성 수용체 인산화를 억제한다는 것을 알 수 있다. 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)이, 간세포 인자(Stem cell factor, SCF)와 결합하는 밀접하게 관련된 수용체 티로신 인산화 요소인 c-kit을 억제하는 능력을 상기 수용체를 발현하는 M07E 세포를 사용하여 측정하였다. 이러한 세포에서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)은 0.01-0.1μM의 IC50수치로 SCF-의존성 c-kit 인산화를 억제하였다. 또한, 이러한 화합물은 환자의 말초 혈액으로부터 분리된 급성 골수성 백혈병(AML) 아세포에서 SCF로 야기되는 c-kit 인산화를 억제하였다.
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)의 세포 내 리간드-의존성 수용체 인산화 억제 능력을 시험하면서 함께, 세포의 리간드-의존성 증식 반응도 생체 내에서 검사하였다(표 4 참조). 이러한 연구들에서, 24시간 혈청 부족 상태로 처리한 세포는 적절한 유사분열유도 리간드를 첨가하면, DNA 합성을 행하도록 유도된다. 표 4에 나타낸 바와 같이, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)은 각각 0.031 및 0.069μM의 IC50 수치로 PDGFRβ 또는 PDGFRα를 과도하게 발현하는 NIH-3T3 세포의 PDGF-유도 증식을 억제하였으며, 0.007μM의 IC50수치로 MO7E 세포의 SCF-유도 증식을 억제하였다.
표 4
생화학적 세포내 IC50
수용체 Ki1(μM) 수용체 인산화(μM) 리간드-의존성 증식(μM)
Flk-1/KDR 0.009 0.032 0.0043
PDGFRα 0.008 0.034 0.0314
PDGFRβ ND ND 0.0695
FGFR 0.83 ND 0.73
c-kit ND 0.01-0.16 0.0076
ND = 측정되지 아니함1= 재조합 효소를 사용하여 측정됨2= Flk-1을 발현하는 혈청 부족 상태의 NIH-3T3 세포를 사용하여 측정됨3= 혈청 부족상태의 HUVECs를 사용하여 측정됨4= PDGFRα를 발현하는 혈청 부족 상태의 NIH-3T3 세포를 사용하여 측정됨5= PDGFRβ를 발현하는 혈청 부족 상태의 NIH-3T3 세포를 사용하여 측정됨6= 혈청 부족 상태의 MO7E 세포를 사용하여 측정됨
표 4에서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)의 생화학적 활성 및 세포 내 활성이 일반적으로 일치하여, 본 화합물이 세포막을 통과한다는 결론을 뒷받침한다. 또한, 세포내 반응이 화합물 80의 표지된 표적에 대한 활성의 결과라고 결론내릴 수 있다. 반대로, 시험관 내에서 완전한 성장 배지의 존재 하에 실험하였을 때, 다양한 인간 종양 세포의 성장을 억제하기 위하여 실질적으로 보다 높은 농도의 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)(>10μM)가 필요하였다(표 5 참조). 이러한 결과는 리간드-의존성 수용체 인산화와 세포 증식을 억제하는 데 필요한 농도에서 이들 세포의 성장을 직접적으로 억제하지 아니한다는 것을 나타낸다.
표 5
세포주 기원 IC50(μM) LD50(μM)
HT29 대장암 10 22
A549 폐암 9.5 22
NCI-H460 NSC 폐암 8.9 20
SF767T (신경)교종 7.9 14
A431 유표피암 6.0 18
간략하게, 표 5에 나타낸 결과들은 연속적으로 희석한 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드의 존재 하에 완전한 성장 배지에서 세포들을 48시간 동안 배양하여 얻었다. 성장 기간의 마지막에서, 세포들의 상대적인 숫자를 측정하였다. 처리되지 아니한 세포와 비교하여 상대적으로 50%의 세포 성장을 억제하는 화합물의 농도로 IC50수치를 계산하였다. 실험 시작 시의 세포 수와 비교하여 상대적으로 50%의 세포 수 감소를 일으키는 화합물의 농도로 LD50수치를 계산하였다.
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)의 혈관 신생 억제 효과를 평가하기에 더욱 적절한 세포 기초 분석은, 혈관 신생 과정에서 결정적인 내피 세포 증식을 위한 모델 시스템으로서 인간의 제대 정맥 내피 세포(HUVECs)를 사용하는 시험관내 유사분열 분석이다. 이러한 분석에서 DNA 합성의 증가로 측정되는 유사분열 반응은 혈청 부족 상태의 HUVECs에서 VEGF 또는 FGF를 첨가할 때 유도된다. 이러한 세포들에서 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)은 48시간의 분석에 걸쳐 화합물이 존재할 때, 각각 0.004μM 및 0.7μM의 IC50수치를 보이며 용량의존적으로 VEGF 및 FGF-유도 유사분열 반응을 억제하였다.
간략하게는, 앞서 언급한 결과들은 24시간 동안 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)의 연속적인 희석액의 존재하에 유사분열 유도 농도의 VEGF(100ng/ml) 또는 FGF(30ng/ml)와 함께 배양된, 혈청 부족 상태의 HUVECs를 사용하여 얻었다. 리간드 및 억제제의 존재 하에 이후 24시간 동안의 유사분열 반응을 브로모디옥시유리딘의 세포 DNA로의 혼입에 기초한 DNA 합성 측정으로 정량하였다.
별개의 실험에서, 화합물 80은 Flk-1/KER의 초기 하부 표적인 ERK 1/2 (p42/44MAP 인산화 효소)의 VEGF-의존성 인산화를 용량의존적으로 억제하였다. 또한, 화합물 80의 억제 효과는 이러한 시스템에서 장시간 지속되는 것으로 나타났다; 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)을 배지로부터 제거하고 μM단위의 화합물에 2시간 동안 노출시킨 후 48시간까지 ERK 1/2의 VEGF-의존성 인산화를 억제함.
VEGF는 내피 세포의 중요한 생존 인자로 알려져 있다. 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)이 HUVECs의 VEGF-의존성 유사분열 반응을 억제하기 때문에, HUVEC 생존에 미치는 화합물의 영향을 조사하였다. 이러한 실험에서, 카스파제 3 기질 폴리-ADP-리보실 중합효소(PARP)의 절단이 세포고사의 해독정보로 사용되었다. 혈청 부족 상태에서 24시간 동안 배양된 HUVECs는 23kDa PARP 절단 절편의 축적으로 측정된 바와 같이, 실질적인 정도의 PARP절단을 나타내었다. 이러한 절단은 VEGF를 세포 배지에 가하여 광범위하게 예방되었는데, 이는 VEGF가 이러한 분석에서 생존 인자로 작용함을 나타낸다. 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)은 KDR 신호를 억제하는 것으로 나타났다. 따라서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)은 VEGF-매개 HUVEC의 생존을 용량의존적으로 억제하였다. 그러므로, 이러한 자료로부터 화합물 80이 VEGF 존재하에서 배양된 내피 세포의 세포고사를 유도하였음을 알 수 있다.
C. 생체 내 유효성 실험
i. 확립된 종양 이종이식에 대한 유효성
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)의 생체 내 유효성을, 흉선이 없는 마이스의 뒤쪽 대퇴부에 이식된 인간 종양 세포를 사용한 피하 이종이식 모델로 연구하였다. 이식에 이어서, 화합물의 경구 투약을 시작하기에 앞서 종양은 100-550mm3의 크기로 확정되었다.
종양이 400mm3까지 성장한 후 치료를 시작하였을 때, 화합물을 매일 경구 투여하면 A431 종양 성장을 용량의존적으로 억제하였다. 통계적으로 유의성 있는 종양 성장 억제가 40mg/kg/day(74% 억제) 및 80mg/kg/day(84% 억제)의 용량에서 나타났다(표 6 참조). 예비 실험에서, 보다 고용량(160mg/kg/day)의 화합물은 확립된 A431 종양에 대하여 80mg/kg/day의 용량보다 더 효과적이지는 아니하였다. 또한, 160mg/kg/day의 화합물로 처리된 마이스는 체중이 감소하였는데, 이는 보다 고용량도 마찬가지로 견딜 수 없음을 가리킨다. A431 종양의 크기가 단지 100mm3에 도달한 경우의 실험에서도 유사한 결과를 얻었다(표 5 참조). 이러한 두번째 실험에서, 80mg/kg/day의 용량으로 21일간 처리된 8마리의 동물 중 6마리에서 종양의 완전한 퇴행이 일어났다. 이러한 6마리의 동물에서, 투약이 끝난 후 110일간 관찰하는 동안 종양은 다시 자라지 아니하였다. 종양이 크게(2000-3000mm3) 다시 자란 2마리의 동물에서, 화합물 80의 두번째 치료에 반응하여 종양이 퇴행하였다. 중요한 점은, 모든 유효성 실험에서 80mg/kg/day 용량의5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)을 100일 이상 연속적으로 투여하였음에도 잘 견디었다는 것이다.
표 6
초기 종양 부피(mm3) 화합물1(mg/kg/day) % 억제(day) P값
400 80 84(36) 0.001
40 74(36) 0.003
20 51(36) 0.130
100 80 93(40) 0.002
40 75(40) 0.015
10 61(40) 0.059
1화합물 80
간략하게, 표 6에 나타낸 결과는 흉선이 없는 마이스의 뒤쪽 대퇴부에 피하로 이식한 A431 세포(0.5x 106세포/마우스)를 사용하여 얻었다. 크레모포어 (Cremophore)-기초 담체에 담은 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80) 또는 담체 대조군을, 종양이 지시된 평균 부피에 도달하였을 때부터 매일 투약하였다. 베니어 캘리퍼를 사용하여 종양을 측정하였고, 종양의 부피는 길이x폭x높이로 계산하였다. P값은 실험의 마지막 날에 화합물 80으로 처리한 동물(n=8)에서의 종양 크기를 담체로 처리한 동물에서의 그것과 비교하여 양측 스튜던트 t-테스트(two-tailed Student's t-test)로 계산하였다.
상이한 기원을 갖는 확립된 인간 종양에 대한 화합물 80의 유효성을 Colo205(대장암), SF763T(신경교종) 및 NCI-H460(비-소세포 폐암) 이종이식을 사용하여 측정하였다(표 7 참조). 이러한 실험은 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)을 80mg/kg/day의 용량(효과적이고 잘 견디었던 용량)으로 경구투여하여 수행하였다.
표 7
종양의 종류 초기 종양 부피(mm3) % 억제 (day) P 값
A4311 유표피 100 93(40) 0.002
A4311 유표피 400 84(36) 0.001
Colo205 대장 370 77(54) 0.028
NCI-H460 폐 300 61(54) 0.003
SF763T 신경교종 550 53(30) 0.001
1자료는 표 5에 나타낸 실험으로부터 얻었다.
이상에서 언급한 실험들에서, 종양이 지시된 크기에 도달하면, 크레모포어-기초 담체로 화합물 80을 80mg/kg의 용량으로 일일 1회 투여하였다. 담체로 처리된 대조군과 비교한 억제 백분율을 실험 종료시에 계산하였다. P-값은 화합물로 처리한 동물에서의 종양의 크기를 담체로 처리한 동물에서의 종양의 크기와 비교하여 양측 스튜던트 t-테스트를 사용하여 계산하였다.
5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드(화합물 80)이 표 7에 나타낸 모든 종류의 종양의 성장을 억제하였지만, 상이한 이종이식 모델에서 반응에 차이가 있었다. 상세하게는, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드로 처리하였을 때, A431 종양과 같이 Colo205 종양은 퇴행한 반면, NCI-H460 및 SF763T 종양은 성장이 정지 또는 크게 감소하였다.
이종이식 모델 간의 반응에서 나타난 차이를 분자 수준에서 측정하기 위하여, SF763T 종양을 연구하였다. 따라서, 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실 산 (2-에틸아미노-에틸)아미드의 처리에 반응이 적었던 SF763T 종양을, 화합물의 처리 효과를 측정하기 위하여 면역조직학적 기술을 사용하여 분자 수준에서 평가하였다. 이러한 연구들은 상기 한 종류의 종양에서 먼저 수행되었는데, 이는 SF763T 종양이 내피 세포 표지 CD31을 강력하게 발현하는 미세혈관에 의하여 고도로 혈관화되어 있으므로 종양 미세혈관 밀도(MVD)를 연구하기에 적합하기 때문이다. SF763T 종양의 면역조직학적 평가에서, 화합물 80의 혈관신생 억제 작용 기전과 일치하여, 치료받은 동물의 종양에서 담체 처리된 대조군과 비교하였을 때 상대적으로 MVD가 감소하였음이 나타났다; MVD는 단지 담체로 처리한 동물에서의 39.3±5.7과 비교하여, 화합물 80으로 처리한 동물에서 24.2±4.1로 나타났다. 관련된 종양 성장의 정지로부터 예견되는 것과 같이, 화합물 80으로 처리된 종양에서 종양 세포 증식이 크게 억제되는 것은 명백하였다. 이러한 종양은 담체로 처리된 종양의 절반에 해당하는 유사분열 지수를 나타내었다(자료는 나타내지 아니함). 화합물 80이 MVD 및 종양 세포 증식에 미치는 영향은, 심지어 종양이 퇴행하지 아니하는 상태에서도 상기 화합물이 강력한 혈관 신생 억제 및 항종양 효과를 갖는다는 점을 나타낸다.
또한, 화합물 80의 생체 내에서 PDGFR 인산화 및 이후의 신호를 억제하는 능력을 PDGFRβ를 고도로 발현하는 SF763T 종양에서 평가하였다. SF763T 종양을 화합물 80으로 처리하였을 때, 확립된 SF763T 종양에서 PDGFRβ티로신 인산화가 강력히 억제되었다. 또한 화합물 80은 PDGFR 활성화의 즉각적인 하부 지시자인 인산화된(활성화된) 포스포리파제 C 감마(PLC-γ)의 양을 감소시켰다. 이러한 자료는 화합물 80의 경구투여가 생체 내 종양에서 표적(PDGFR)의 활성에 직접적인 영향을 미침을 증명한다.
화합물 80의 시험관 내 HUVECs에서 VEGF-의존성 신호를 억제하는 능력이 장시간 지속된다는 실례에 기초하여(아래를 보라), 화합물을 Colo205 종양 모델에 시간 간격을 늘려서 투여하였을 때의 화합물의 유효성을 평가하였다. 표 8에 나타낸 것과 같이, 80mg/kg(91% 억제) 및 40mg/kg(84% 억제)는 매일 투여하였을 때 유효하였지만, 일주일에 2회 투여하였을 때는 그러하지 아니하였다. 반대로, 화합물 80(160mg/kg)의 고용량은 일주일에 2회 투여하였을 때 확립된 Colo205 종양의 성장을 억제하여(52% 억제), 상기 화합물이 고용량으로 시간 간격을 늘려서 투여하였을 때 유효성을 나타낼 수 있음을 알 수 있었다. 당업자가 과도한 실험 없이 투약 일정을 정할 수 있음을 주목하여야 한다.
표 8
용량(mg/kg) 빈도 % 억제 P 값
160 일주일에 2회 52 0.085
일주일에 1회 17 NS
80 매일 91 0.039
일주일에 2회 19 NS
일주일에 1회 0 NS
40 매일 84 0.028
일주일에 2회 36 NS
NS : 유의성 없음(P>0.5)
간략하게는, 표 8에 나타낸 결과는 흉선이 없는 마이스의 뒷쪽 대퇴부에 피하로 이식된 Colo205 세포를 사용하여 얻었다. 종양이 400mm3이 되었을 때, 지시된 계획에 따라 화합물 80의 경구 투여를 시작하였다. 베니어 캘리퍼를 사용하여 종양을 측정하였고, 종양의 부피는 길이x폭x높이로 계산하였다. P값은 실험의 마지막 날에 화합물 80으로 처리한 동물에서의 종양 크기를 담체로 처리한 동물에서의 그것과 비교하여 양측 스튜던트 t-테스트(two-tailed Student's t-test)로 계산하였다.
ii. 파종성 질환 모델에서 화합물 80의 유효성
고형 1차 종양의 확인된 성장을 뒷받침함과 함께, 혈관신생은 또한 1차 종양으로부터의 전이로 인한 파종성 질환의 진전을 뒷받침하는 중요한 요소이다. 파종성 질환의 진전에 미치는 화합물 80의 영향을 폐에 군락을 형성한 B16-F1 마우스 흑색종 모델에서 조사하였다. 상기 모델에서, 흉선이 없는 마이스의 꼬리 정맥을 통하여 정맥으로 주입된 B16-F1 세포는 폐에 군락을 형성하여 종양을 형성한다. 표 8에 나타낸 것과 같이, 80mg/kg/day의 화합물 80 경구투여는 전체 폐 무게로 측정한 폐에서의 B16-F1 세포의 부담을 효과적으로 감소시켰다. 이러한 자료는 화합물 80이 생체 내에서 파종성 질환을 억제할 수 있음을 나타낸다.
표 9
폐의 무게(g) % 억제 P-값
담체 0.83±0.07 - -
화합물1 0.41±0.04 50 <0.001
1화합물 80
간략하게는, 표 9에 나타낸 결과들은 꼬리 정맥으로 B16-F1 종양세포(5x 105세포/마우스)를 주입한 흉선이 없는 마이스를 사용하여 얻었다. 마이스에 80mg/kg/day의 화합물 80(n=10) 또는 담체(n=18)를 종양 세포 주입 후 24일 동안 경구 투여하였다. 투여 기간의 마지막에, 마이스를 처치하고 폐를 제거하여 무게를 측정하였다. 화합물 80으로 처리한 동물에서의 폐의 무게를 담체만으로 처리한 동물에서의 폐의 무게와 비교하여 억제 백분율을 계산하였다. P-값은 양측 스튜던트 t-테스트를 사용하여 계산하였다.
D. 생물학적 활성의 실시예
본 발명의 화합물의 시험관 내 역가의 예들을 표 2에 나타내었다.
결론
본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들의 약동학적 특성을 조사하기 위한 연구들에서, 상기 화합물의 1회 투여량을 경구 투여할 때 마이스에서 높은 경구 생체이용가능성(bioavailability)이 나타났다. 양호한 경구 생체이용가능성과 직선적인 약동학으로부터 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물이 선호되는 약동학적 특성을 가짐을 알 수 있다.
또한, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은, 혈관신생과 관련된 스플릿-인산화 효소 부분 수용체 티로신 인산화 효소인 Flk-1/KDR 및 PDGFR과 특정 혈액암과 관련된 간세포 인자(SCF) 수용체인 수용체 티로신 인산화 효소 c-kit의 티로신 인산화 효소 활성을 강력하게 억제한다. 또한, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은 고농도에서 혈관신생과 관련된 세번째 수용체 티로신 인산화 효소인 FGFR-1의 티로신 인산화 효소 활성도 억제한다. 이들의 생화학적 활성과 일치하여, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은 표적 수용체 티로신 인산화 효소의 리간드-의존성 티로신 인산화를 억제하고, VEGF 또는 FGF로 자극되는 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVECs), PDGF로 자극되는 PDGFR-발현 NIH-3T3세포 및 SCF로 자극되는 MO7E 급성 골수성 백혈병 세포의 시험관 내 유사분열 반응을 억제한다. 반대로, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은 리간드-의존성 유사분열 반응을 억제하는 데 필요한 용량보다 2 내지 3차수 높은 농도를 제외하고는 완전한 성장 배지에서 종양 세포의 증식을 직접적으로 억제하지는 아니한다. 마우스 이종이식 연구에서, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은 장기간 투약에도(>100일) 잘 견딜수 있는 농도에서 다양한 기원의 확립된 인간 종양의 성장을 용량의존적으로 억제하였다. 80mg/kg/day의 용량에서 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은 확립된 대형 A431 및 Colo205 종양의 퇴행을 야기하고, SF763T 및 NCI-H460 종양의 실질적인 성장을 억제 또는 정지시켰다. SF763T 종양을 가진 마이스에서, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은 미세혈관 밀도, 종양에서의 PDGFR의 인산화 및 종양세포에서의 유사분열 지수를 감소시켰다. 또한, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들은
상기 용량에서 종양 전이 모델에서 B16-F1 종양 세포에 의한 폐의 군락 형성을 억제하였다. 투여 계획에 대한 연구는 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들이 매일 투여되었을 때 가장 효과적임을 보여주었다. 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들이 갖는 혈관신생 억제 활성의 직접적인 증거는 미세혈관 밀도가 감소된 SF763T 종양에서 발견되었다. 또한, 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들이 생체 내에서 PDGFR 인산화 및 신호를 억제한다는 직접적인 증거를 SF763T 종양에서 얻었다.
전체적으로 고려할 때, 이러한 자료는 경구 투여된 본 발명의 바람직한 실시예에서 제시한 화합물들이, 혈관 신생 및/또는 c-kit을 통한 신호가 질병 병리학에서 중요한 역할을 하는 고형암 및 혈액암들을 포함한 암들의 치료를 위한 혈관신생 억제 약물이다라는 인식을 뒷받침한다.
본 발명의 화합물, 방법 및 약학 조성물은 단백질 인산화 효소의 활성을 조절하는 데 효과적이며, 따라서 수용체 티로신 인산화 효소, 세포질 티로신 인산화 효소 및 세린/트레오닌 인산화 효소와 관련된 질환의 치료 약물로 효과가 기대된다는 것을 알 수 있을 것이다.
또한, 당업자라면, 본 발명의 목적을 달성하기 위해 본 발명을 용이하게 변경하여 이상에서 언급된 효과나 결과뿐만 아니라 이들에 내재된 사항들을 얻어낼 수 있음을 쉽게 이해할 수 있을 것이다. 본 명세서에 기재된 분자 복합체와 그 방법, 과정, 처리, 분자, 구체적인 화합물을 현재까지의 바람직한 실시예로 나타내지만, 이것은 하나의 예시일 뿐이고 본 발명의 범위를 이들로 한정하기 위한 것은 아니다. 당업자에게 인식되는 본 발명의 변경과 또 다른 용도는 특허 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 요지 내에 포함된다.
본 발명의 범위와 요지를 벗어나지 아니하고도 여기에 개시된 본 발명에 대한 변경 및 대체 수단의 변화가 당업자에게는 용이할 것이다.
명세서에 언급된 모든 특허들과 문헌들은 본 발명이 속하는 분야의 당업자 기술의 수준을 나타낸다. 본 명세서에 인용된 모든 특허들과 문헌들은 각각의 출판물들이 개별적으로, 구체적으로 명시하고 있는 것과 동일 정도로 참조로 인용된다.
본 명세서에서 실례를 들어 설명한 본 발명은, 본 명세서에서 구체적으로 개시되지 아니한 어떠한 요소 또는 요소들, 제한 또는 제한들이 없이도 적절하게 실행될 수 있다. 그러므로, 예를 들어, 본 명세서의 각 예에서 "포함하는", "필수적으로 구성되는" 및 "구성되는" 중 어떠한 용어도 다른 두 용어 중 하나로 대체될 수 있다. 여기에서 사용된 용어와 표현들은 설명을 위한 것일 뿐이며 어떠한 제한을 하려는 것은 아니므로 그러한 용어와 표현들을 사용한 것은 설명하고 입증한 특성등의 균등물 또는 이들의 일부를 본 발명에서 배제하고자 하는 것은 아니며, 오히려 본 발명의 특허 청구 범위 내에서 다양한 변형이 가능하다는 점을 알 수 있다. 따라서, 본 발명이 바람직한 실시예와 선택적 특징들에 의해 아주 구체적으로 기재되었다 하더라도, 당업자라면 본 명세서에 기재된 개념을 변형하거나 변화시킬 수 있으나 그러한 변화와 변형은 첨부된 특허 청구 범위에 나타낸 본 발명의 범위에 속하는 것임을 인식해야 할 것이다.
또한, 본 발명의 특징과 요소를 마쿠쉬 형식으로 기재한 부분에 대하여는 당업자라면 마쿠쉬 형식의 아군 요소 또는 각각의 요소들에 의하여 본 발명이 설명되는 내용을 알 수 있을 것이다. 예를 들면, X가 브롬, 염소 및 요오드로 이루어진 군에서 선택되는 것으로 기술되었다면, X가 브롬으로 구성되어 있는 청구항들과 X가 브롬과 염소로 구성된 청구항들을 모두 기재하는 것이다.
기타 실시예들도 다음의 특허 청구 범위 내에 속한다.

Claims (60)

1. 화학식 (I)의 화합물
여기에서:
R1은 수소, 할로, 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알리사이클릭, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, (CH2)rR16및 -C(O)NR8R9로 이루어진 군에서 선택되고;
R2는 수소, 할로, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, 시아노, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, 아릴, 헤테로아릴 및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R3은 수소, 할로겐, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, 아릴, 헤테로아릴, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14, -NR13C(O)OR14및 -SO2R20(여기에서, R20은 알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아르알킬이다)로 이루어진 군에서 선택되고;
R4는 수소, 할로겐, 알킬, 히드록시, 알콕시 및 -NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R5는 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되고;
R6은 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되며;
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R17및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되고; 또는
R5, R6또는 R7중 적어도 하나가 -C(O)R10이라는 조건 하에서, R6과 R7은 결합하여 -(CH2)4-. -(CH2)5- 및 -(CH2)6-로 이루어진 군에서 선택되는 하나의 기를 형성하며;
R8및 R9는 수소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되고;
R10은 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, -N(R11)(CH2)nR12및 NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R11은 수소 및 알킬로 이루어진 군에서 선택되고;
R12는 -NR13R14, 히드록시, -C(O)R15, 아릴, 헤테로아릴, -N+(O-)R13R14, -N(OH)R13및 -NHC(O)Ra(여기에서, Ra는 치환되지 아니한 알킬, 할로알킬 또는 아르알킬이다)로 이루어진 군에서 선택되며;
R13및 R14는 수소, 알킬, 히드록시알킬아미노로 치환된 저급 알킬, 시아노알킬, 시클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되고; 또는
R13및 R14는 결합하여 헤테로사이클로 기를 형성하며;
R15는 수소, 히드록시, 알콕시 및 아릴옥시로 이루어진 군에서 선택되고;
R16은 히드록시, -C(O)R15, -NR13R14및 -C(O)NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R17은 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되고;
R20은 알킬, 아릴, 아르알킬 또는 헤테로아릴이다; 그리고
n과 r은 각각 1,2,3 또는 4이다;
또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1은 수소, 할로, 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알리사이클릭, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, (CH2)rR16및 -C(O)NR8R9로 이루어진 군에서 선택되고;
R2는 수소, 할로, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, -NR13R14, -NR13C(O)R14, -C(O)R15, 아릴, 헤테로아릴 및 -S(O)2NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R3은 수소, 할로겐, 알킬, 트리할로메틸, 히드록시, 알콕시, -(CO)R15, -NR13R14, 아릴, 헤테로아릴, -NR13S(O)2R14, -S(O)2NR13R14, -NR13C(O)R14및 -NR13C(O)OR14로 이루어진 군에서 선택되고;
R4는 수소, 할로겐, 알킬, 히드록시, 알콕시 및 -NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R5는 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되고;
R6은 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되며;
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R17및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되고;
R6과 R7은, R5, R6또는 R7중 적어도 하나가 -C(O)R10이라는 조건 하에서, 결합하여 -(CH2)4-. -(CH2)5- 및 -(CH2)6-로 이루어진 군에서 선택된 하나의 기를 형성하며;
R8및 R9는 수소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되고;
R10은 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, -N(R11)(CH2)nR12및 NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R11은 수소 및 알킬로 이루어진 군에서 선택되고;
R12는 -NR13R14, 히드록시, -C(O)R15, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되며;
R13및 R14는 수소, 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되고;
R13및 R14는 결합하여 -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2O(CH2)2- 및 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-로 이루어진 군에서 선택된 하나의 기를 형성하며;
R15는 수소, 히드록시, 알콕시 및 아릴옥시로 이루어진 군에서 선택되고;
R16은 히드록시, -C(O)R15, -NR13R14및 -C(O)NR13R14로 이루어진 군에서 선택하며;
R17은 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된다; 그리고
n과 r은 각각 1,2,3 또는 4이다;
또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12이며,
여기에서, R11이 수소 또는 저급 비치환 알킬이고;
n이 2 또는 3이며; 그리고
R12이 -NR13R14이고,
여기에서 R13및 R14는 독립적으로 비치환 저급 알킬이다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12이며,
여기에서, R11이 수소 또는 저급 비치환 알킬이고;
n이 2 또는 3이며; 그리고
R12이 -NR13R14이고,
여기에서 R13및 R14는 결합하여 -(CH2)4-, -(CH2)5-,-(CH2)2-O-(CH2)2- 또는 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-로 이루어진 군에서 선택된 하나의 기를 형성한다.
제1항의 화합물에 있어서, R5이 N-(2-디메틸아미노-에틸)아미노카보닐, N-(2-디에틸아미노에틸)-N-메틸-아미노카보닐, N-(3-디메틸아미노프로필)아미노카보닐, N-(2-디에틸아미노에틸)아미노카보닐, N-(3-에틸아미노프로필)-아미노카보닐, N-(2-에틸아미노에틸)아미노카보닐 또는 N-(3-디에틸아미노프로필)아미노카보닐인 화합물.
제1항의 화합물에 있어서, R5이 N-(2-디에틸-아미노에틸)아미노카보닐 또는 N-(2-에틸아미노에틸)아미노-카보닐인 화합물.
제1항의 화합물에 있어서, R5이 3-피롤리딘-1-일프로필아미노카보닐, 3-모르폴린-4-일프로필아미노-카보닐, 2-피롤리딘-1-일에틸아미노카보닐, 2-모르폴린-4-일-에틸아미노카보닐, 2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸-아미노카보닐, 2-(3,5-디메틸피페라진-1-일)에틸-아미노카보닐, 3-(4-메틸피페라진-1-일)프로필아미노-카보닐 또는 3-(3,5-디메틸피페라진-1-일)프로필아미노-카보닐인 화합물.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12이며,
여기에서, R11은 수소 또는 저급 비치환 알킬이고;
n이 2 또는 3이며; 그리고
R12이 -NR13R14이고,
여기에서, R13및 R14은 각각 비치환 저급 알킬이다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12이며,
여기에서, R11이 수소 또는 저급 비치환 알킬이고;
n이 2 또는 3이며; 그리고
R12이 -NR13R14이고,
여기에서, R13및 R14이 결합하여 -(CH2)4-, -(CH2)5-,-(CH2)2-O-(CH2)2- 또는 -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-로 이루어진 군에서 선택된 하나의 기를 형성한다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 N-(2-디메틸아미노-에틸)아미노카보닐, N-(2-디에틸-아미노에틸)-N-메틸아미노카보닐, N-(3-디메틸아미노-프로필)-아미노카보닐, N-(2-디에틸아미노에틸)-아미노카보닐, N-(2-에틸아미노에틸)-아미노카보닐, N-(3-에틸아미노프로필)-아미노카보닐 또는 N-(3-디에틸아미노-프로필)아미노카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 N-(2-디에틸아미노에틸)아미노카보닐 또는 N-(2-에틸아미노-에틸)아미노카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 3-피롤리딘-1-일프로필아미노카보닐, 3-모르폴린-4-일프로필아미노-카보닐, 2-피롤리딘-1-일에틸아미노카보닐, 2-모르폴린-4-일-에틸아미노카보닐, 2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸-아미노카보닐, 2-(3,5-디메틸피페라진-1-일)에틸-아미노카보닐, 3-(4-메틸피페라진-1-일)프로필아미노-카보닐 또는 3-(3,5-디메틸피페라진-1-일)프로필아미노-카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 NR13R14이고,
여기에서 R13은 수소이고 R14는 히드록시, 아릴, 헤테로알리사이클릭, 헤테로아릴 또는 카르복시로 치환된 저급 알킬이다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 3-트리아진-1-일프로필아미노카보닐, 2-트리아진-1-일에틸아미노카보닐, 3-이미다졸-1-일프로필아미노카보닐, 피리딘-4-일메틸-아미노카보닐, 2-피리딘-2-일에틸아미노카보닐 또는 2-이미다졸-1-일 에틸아미노카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 NR13R14이고,
여기에서 R13은 수소이고 R14는 히드록시, 아릴, 헤테로알리사이클릭, 헤테로아릴 또는 카르복시로 치환된 저급 알킬이다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 2-트리아진-1-일프로필아미노카보닐, 2-트리아진-1-일에틸아미노카보닐, 3-이미다졸-1-일프로필아미노카보닐, 피리딘-4-일메틸-아미노카보닐, 2-피리딘-2-일에틸아미노카보닐 또는 2-이미다졸-1-일 에틸아미노카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12)이고,
여기에서, R11이 수소 또는 저급 비치환 알킬이고;
n이 2 또는 3이며; 그리고
R12이 -NR13R14이고,
여기에서, R13및 R14이 함께 결합하여 헤테로사이클을 형성한다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12이고,
여기에서, R11이 수소 또는 저급 비치환 알킬이며;
n이 2 또는 3이고; 그리고
R12이 -NR13R14이며,
여기에서, R13및 R14이 함께 결합하여 고리 내에 하나의 카보닐기 및 1개 또는 2개의 질소 원자를 포함하는 5,6 또는 7 원자 헤테로사이클을 형성한다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 2-(3-옥소피페라진-1-일)에틸아미노카보닐, 2-(이미다졸리딘-1-일-2-온)에틸아미노카보닐, 2-(테트라히드로피리미딘 -1-일-2-온)에틸아미노카보닐, 2-(2-옥소피롤리딘-1-일)-에틸아미노카보닐, 3-(3-옥소피페라진-1-일)프로필-아미노카보닐, 3-(이미다졸리딘-1-일-2-온)프로필-아미노카보닐, 3-(테트라히드로피리미딘-1-일-2-온)-프로필아미노카보닐 또는 3-(2-옥소피롤리딘-1-일)프로필-아미노카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12)이고,
여기에서, R11이 수소 또는 저급 비치환 알킬이며;
n이 2 또는 3이고; 그리고
R12이 -NR13R14이며,
여기에서, R13및 R14이 함께 결합하여 헤테로사이클을 형성한다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10은 -NR11(CH2)nR12)이고,
여기에서, R11이 수소 또는 저급 비치환 알킬이며;
n이 2 또는 3이고; 그리고
R12이 -NR13R14이며,
여기에서, R13및 R14이 함께 결합하여 고리 내에 하나의 카보닐기 및 1개 또는 2개의 질소 원자를 포함하는 5,6 또는 7 원자 헤테로사이클을 형성한다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 2-(3-옥소피페라진-1-일)에틸아미노카보닐, 2-(이미다졸리딘-1-일-2-온)에틸아미노카보닐, 2-(테트라히드로피리미딘 -1-일-2-온)에틸아미노카보닐, 2-(2-옥소피롤리딘-1-일)-에틸아미노카보닐, 3-(3-옥소피페라진-1-일)프로필-아미노카보닐, 3-(이미다졸리딘-1-일-2-온)프로필-아미노카보닐, 3-(테트라히드로피리미딘-1-일-2-온)-프로필아미노카보닐 또는 3-(2-옥소피롤리딘-1-일)프로필-아미노카보닐인 화합물 또는 염.
제3-7항, 13-14항 또는 17-19항 중 어느 한 항의 화합물 또는 염에 있어서:
R6이 수소 및 저급 비치환 알킬로 이루어진 군에서 선택되고; 그리고
R7이 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군에서 선택되며,
여기에서, R17이 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 아릴인 화합물 또는 염.
제23항의 화합물 또는 염에 있어서:
R6이 수소 및 메틸로 이루어진 군에서 선택되고; 그리고
R7이 메틸, 수소 및 페닐로 이루어진 군에서 선택되는 화합물 또는 염.
제8-12항, 제15항, 제16항 또는 제20-22항 중 어느 한 항의 화합물 또는 염에 있어서:
R5이 수소 및 저급 비치환 알킬로 이루어진 군에서 선택되고; 그리고
R7이 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군에서 선택되며,
여기에서, R17이 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 아릴인 화합물 또는 염.
제25항의 화합물 또는 염에 있어서:
R6이 수소 및 메틸로 이루어진 군에서 선택되고; 그리고
R7이 메틸, 수소 및 페닐로 이루어진 군에서 선택되는 화합물 또는 염.
제23항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소, 비치환 저급 알킬, -C(O)NR8R9, 비치환 시클로알킬 또는 아릴이고;
R2이 수소, 할로, 저급 알콕시, 시아노, 아릴 또는 -S(O)2NR13R14이며,
여기에서, R13이 수소이고 R14이 수소, 아릴 또는 알킬이고;
R3이 수소, 저급 알콕시, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, 저급 알킬, 할로 또는 저급 알콕시로 이루어진 군에서 선택된 1개 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되며; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제23항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소 또는 페닐이고;
R2이 수소, 클로로, 브로모, 플루오로, 메톡시, 에톡시, 페닐, 시아노, 디메틸아미노설포닐, 3-클로로페닐-아미노설포닐, 카르복시, 메톡시, 아미노설포닐, 메틸아미노설포닐, 메틸설포닐, 에틸설포닐, 벤질설포닐, 페닐아미노설포닐, 피리딘-3-일-아미노설포닐, 디메틸아미노설포닐 또는 이소프로필아미노-설포닐이며;
R3이 수소, 메톡시, 카르복시, 페닐, 피리딘-3-일, 3,4-디클로로페닐, 2-메톡시-5-이소프로필페닐, 4-n-부틸페닐, 3-이소프로필페닐이고; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제23항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소이고;
R2이 수소, 시아노, 플루오로, 클로로 또는 브로모이며;
R3이 수소이고; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제25항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소, 비치환 저급 알킬, -C(O)NR8R9, 비치환 시클로알킬 또는 아릴이고;
R2이 수소, 할로, 저급 알콕시, 시아노, 아릴, -SO2R20 또는 -S(O)2NR13R14이며,
여기에서 R13이 수소이고 R14이 수소, 아릴 또는 알킬이고;
R3이 수소, 저급 알콕시, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되며; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제25항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소 또는 페닐이고;
R2이 수소, 클로로, 브로모, 플루오로, 메톡시, 에톡시, 페닐, 디메틸아미노설포닐, 시아노, 메틸설포닐, 에틸설포닐, 벤질설포닐, 3-클로로페닐-아미노설포닐, 카르복시, 메톡시, 아미노설포닐, 메틸아미노설포닐, 페닐아미노설포닐, 피리딘-3-일-아미노설포닐, 디메틸아미노설포닐 또는 이소프로필아미노-설포닐이며;
R3이 수소, 메톡시, 카르복시, 페닐, 피리딘-3-일, 3,4-디클로로페닐, 2-메톡시-5-이소프로필페닐, 4-n-부틸페닐, 3-이소프로필페닐이고; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제25항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소이고;
R2이 수소, 시아노, 플루오로, 클로로 또는 브로모이며;
R3이 페닐이고; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소, 비치환 저급 알킬, -C(O)NR8R9, 비치환 시클로알킬 또는 아릴이고;
R2이 수소, 할로, 저급 알콕시, 시아노, 아릴 또는 -S(O)2NR13R14이며,
여기에서 R13이 수소이고 R14이 수소, 아릴 또는 알킬이고;
R3이 수소, 저급 알콕시, -C(O)R15, -NR13C(O)R14, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되며; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소 또는 메틸이고;
R2이 수소, 시아노, 클로로, 플루오로 또는 브로모이며;
R3이 수소 또는 페닐로 이루어진 군에서 선택되고; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제33항 또는 제34항의 화합물 또는 염에 있어서:
R5이 -COR10이고;
R6이 수소 및 비치환 저급 알킬로 이루어진 군에서 선택되며; 그리고
R7이 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군에서 선택되고,
여기에서, R17이 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 아릴인 화합물 또는 염.
제33항 또는 제34항의 화합물 또는 염에 있어서:
R6이 -COR10이고;
R5이 수소 및 비치환 저급 알킬로 이루어진 군에서 선택되며; 그리고
R7이 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 -C(O)R17로 이루어진 군에서 선택되고,
여기에서 R17이 히드록시, 비치환 저급 알킬 또는 아릴인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10이 -NR13R14이고,
여기에서 R13이 수소이고 R14이 히드록시로 치환된 저급 알킬, 히드록시알킬아미노, 카르복시 또는 -NR18R19로 치환된 저급 알킬이며,
여기에서 R18및 R19은 독립적으로 수소 또는 저급 비치환 알킬이다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R5이 2-[(디에틸아미노)-2-히드록시에틸]아미노카보닐, 2-(N-에틸-N-2-히드록시에틸아미노)에틸아미노카보닐, 카르복시메틸아미노-카보닐 또는 2-히드록시에틸아미노-카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물 또는 염:
여기에서, R10이 -NR13R14이고,
여기에서 R13이 수소이고 R14이 히드록시로 치환된 저급 알킬, 히드록시알킬아미노, 카르복시 또는 -NR18R19로 치환된 저급 알킬이며,
여기에서 R18및 R19은 독립적으로 수소 또는 저급 비치환 알킬이다.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, R6이 2-[(디에틸아미노)-2-히드록시]에틸아미노카보닐, 2-(N-에틸-N-2-히드록시에틸아미노)에틸아미노카보닐, 카르복시메틸아미노카보닐 또는 2-히드록시에틸-아미노카보닐인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물에 있어서, R5이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물:
여기에서, R10이 -NR11(CH2)nR12이고,
여기에서 R12은 -N+(O-)NR13R14또는 -N(OH)R13이며,
여기에서 R13및 R14은 비치환 저급 알킬로 이루어진 군에서 독립적으로 선택된다.
제1항의 화합물에 있어서, R5이 2-(N-히드록시-N-에틸아미노)에틸아미노카보닐 또는 2-[N+(O-)(C2H5)2]에틸-아미노카보닐인 화합물.
제1항의 화합물에 있어서, R6이 -COR10임을 특징으로 하는 화합물:
여기에서, R10이 -NR11(CH2)nR12이고,
여기에서 R12은 -N+(O-)NR13R14또는 -N(OH)R13이며,
여기에서 R13및 R14은 비치환 저급 알킬로 이루어진 군에서 독립적으로 선택된다.
제1항의 화합물에 있어서, R6이 2-(N-히드록시-N-에틸아미노)에틸아미노카보닐 또는 2-[N+(O-)(C2H5)2]에틸-아미노카보닐인 화합물.
제37항, 제38항, 제41항 또는 제42항의 화합물 또는 염에 있어서:
R6이 수소 또는 메틸로 이루어진 군에서 선택되고; 그리고
R7이 메틸, 수소 또는 페닐로 이루어진 군에서 선택되는 화합물 또는 염.
제39항, 제40항, 제43항, 제44항 또는 제20-22항 중 어느 한 항의 화합물 또는 염에 있어서:
R5이 수소 또는 메틸로 이루어진 군에서 선택되고; 그리고
R7이 메틸, 수소 또는 페닐로 이루어진 군에서 선택되는 화합물 또는 염.
제45항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소이고;
R2이 수소, 시아노, 클로로, 플루오로 또는 브로모이며;
R3이 수소이고 ; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제46항의 화합물 또는 염에 있어서:
R1이 수소이고;
R2이 수소, 시아노, 클로로, 플루오로 또는 브로모이며;
R3이 수소이고 ; 그리고
R4이 수소인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염에 있어서, 상기 화합물이:
으로 이루어진 군에서 선택되거나 이들의 L-말레이트(malate) 염인 화합물 또는 염.
제1항의 화합물 또는 염 그리고 약학적으로 허용가능한 운반체 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
제49항의 화합물 또는 염 그리고 약학적으로 허용가능한 운반체 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
제1항 또는 제49항의 화합물 또는 염을 단백질 인산화 효소와 접촉시키는 것을 포함하는, 단백질 인산화 효소의 촉매 활성을 조절하는 방법.
제52항의 방법에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소가 수용체 티로신 인산화 효소, 비-수용체 티로신 인산화 효소 및 세린-트레오닌 인산화 효소로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
제50항 또는 제51항의 화합물 또는 염 그리고 약학적으로 허용가능한 운반체 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물의 치료 유효량을 생물체에 투여하는 것을 포함하는, 생물체에서 단백질 인산화 효소 관련 질환을 치료 또는 예방하기 위한 방법.
제54항의 방법에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소 관련 질환이 수용체 티로신 인산화 효소 관련 질환, 비-수용체 티로신 인산화 효소 관련 질환 및 세린-트레오닌 인산화 효소 관련질환으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
제54항의 방법에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소 관련 질환이 EGFR 관련 질환, PDGFR 관련 질환, IGFR 관련 질환 및 flk 관련 질환으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
제54항의 방법에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소 관련 질환이 편평세포암, 신경교성상세포종, 카포시 육종, 신경교아세포종, 폐암, 방광암, 두경부암, 흑색종, 난소암, 전립선암, 유방암, 소세포 폐암, 신경교종, 결장직장암, 비뇨생식기 암 및 위장관 암으로 이루어진 군에서 선택된 암인 것을 특징으로 하는 방법.
제54항의 방법에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소 관련 질환이 당뇨병, 자가 면역 질환, 과증식 질환, 심판막 협착증, 섬유증, 건선, 폰 헤펠-린다우 병(von Heppel-Lindau disease), 골관절염, 류마티스성 관절염, 혈관 신생, 염증성 질환, 면역 질환 및 심혈관계 질환으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
제54항의 방법에 있어서, 상기 생물체가 인간인 것을 특징으로 하는 방법.
화학식(II)의 중간 생성물
여기에서:
R5는 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되고;
R6은 수소, 알킬 및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되며;
R7은 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R17및 -C(O)R10으로 이루어진 군에서 선택되고;
R5, R6또는 R7중 적어도 하나가 -C(O)R10이라는 조건 하에서, R6과 R7은 결합하여 -(CH2)4-. -(CH2)5- 및 -(CH2)6-로 이루어진 군에서 선택된 하나의 기를 형성하며;
R10은 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, -N(R11)(CH2)nR12및 -NR13R14로 이루어진 군에서 선택되며;
R11은 수소 및 알킬로 이루어진 군에서 선택되고;
R12는 -NR13R14, 히드록시, -C(O)R15, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되며;
R13및 R14는 수소, 알킬, 시아노알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되고; 또는
R13및 R14는 결합하여 헤테로사이클로 기를 형성하며;
R15는 수소, 히드록시, 알콕시 및 아릴옥시로 이루어진 군에서 선택되고;
R17은 알킬, 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되며; 그리고,
n은 1,2,3 또는 4이다.
KR1020027010706A 2000-02-15 2001-02-15 피롤 치환 2-인돌리논 단백질 인산화 효소 저해제 KR100713960B1 (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18271000P 2000-02-15 2000-02-15
US60/182,710 2000-02-15
US21642200P 2000-07-06 2000-07-06
US60/216,422 2000-07-06
US24353200P 2000-10-27 2000-10-27
US60/243,532 2000-10-27
PCT/US2001/004813 WO2001060814A2 (en) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20030003229A true KR20030003229A (ko) 2003-01-09
KR100713960B1 KR100713960B1 (ko) 2007-05-02

Family

ID=27391578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020027010706A KR100713960B1 (ko) 2000-02-15 2001-02-15 피롤 치환 2-인돌리논 단백질 인산화 효소 저해제

Country Status (43)

Country Link
US (4) US6573293B2 (ko)
EP (1) EP1255752B1 (ko)
JP (1) JP3663382B2 (ko)
KR (1) KR100713960B1 (ko)
CN (1) CN1329390C (ko)
AR (1) AR034118A1 (ko)
AT (1) ATE369359T1 (ko)
AU (2) AU3977001A (ko)
BE (1) BE2010C009I2 (ko)
BG (1) BG65764B1 (ko)
BR (2) BRPI0117360B8 (ko)
CA (1) CA2399358C (ko)
CO (1) CO5280092A1 (ko)
CR (2) CR20120009A (ko)
CY (3) CY1108032T1 (ko)
CZ (1) CZ303705B6 (ko)
DE (3) DE60129794T2 (ko)
DK (1) DK1255752T3 (ko)
EA (1) EA005996B1 (ko)
ES (1) ES2290117T3 (ko)
FR (1) FR08C0002I2 (ko)
HK (1) HK1051188A1 (ko)
HR (1) HRP20020751B1 (ko)
HU (1) HU228979B1 (ko)
IL (1) IL151127A0 (ko)
IS (1) IS2491B (ko)
LT (1) LTC1255752I2 (ko)
LU (2) LU91407I2 (ko)
ME (1) ME00415B (ko)
MX (1) MXPA02008021A (ko)
MY (1) MY130363A (ko)
NL (2) NL300332I2 (ko)
NO (4) NO325532B1 (ko)
NZ (1) NZ520640A (ko)
PE (1) PE20011083A1 (ko)
PL (1) PL211834B1 (ko)
PT (1) PT1255752E (ko)
RS (1) RS50444B (ko)
SI (1) SI1255752T1 (ko)
SK (1) SK287142B6 (ko)
TW (1) TWI306860B (ko)
UA (1) UA73976C2 (ko)
WO (1) WO2001060814A2 (ko)

Families Citing this family (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6569868B2 (en) 1998-04-16 2003-05-27 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US20040226056A1 (en) * 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
JP4865129B2 (ja) 1999-01-13 2012-02-01 ザ・リサーチ・ファウンデーション・オブ・ステイト・ユニバーシティ・オブ・ニューヨーク タンパク質キナーゼ阻害剤を設計するための新規の方法
ME00415B (me) * 2000-02-15 2011-10-10 Pharmacia & Upjohn Co Llc Pirol supstituisani 2-indol protein kinazni inhibitori
US7030219B2 (en) 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
AU2001268154A1 (en) 2000-06-02 2001-12-17 Sugen, Inc. Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors
WO2002002551A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
DE60126997T2 (de) 2000-10-20 2007-10-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Stickstoff-enthaltende aromatische ringverbindungen zur behandlung von tumorerkrankungen
JP2004518669A (ja) * 2000-12-20 2004-06-24 スージェン・インコーポレーテッド ４−アリール置換インドリノン
AR042586A1 (es) * 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
EP1247809A3 (en) * 2001-03-30 2003-12-17 Pfizer Products Inc. Triazine compounds useful as sorbitol dehydrogenase inhibitors
AU2002303892A1 (en) 2001-05-30 2002-12-09 Jingrong Cui 5-aralkylsulfonyl-3- (pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
CA2452361A1 (en) * 2001-06-29 2003-01-09 Ab Science Use of tyrosine kinase inhibitors for treating autoimmune diseases
AR038957A1 (es) * 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
EA006445B9 (ru) * 2001-08-15 2017-02-28 Фармация Энд Апджон Компани Кристаллы, содержащие соль яблочной кислоты n-[2-(диэтиламино)этил]-5-[(5-фторо-2-оксо-1,2-дигидро-3h-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1h-пиррол-3-карбоксамида, способы их получения и их композиции
BR0212435A (pt) 2001-09-10 2004-08-17 Sugen Inc Derivados de 3-(4,5,6,7-tetraidroindol-2-ilmetilideno)-2-indolinona como inibidores de cinase
WO2003031438A1 (en) * 2001-10-10 2003-04-17 Sugen, Inc. 3-[4-(substituted heterocyclyl)-pyrrol-2-ylmethylidene]-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
EP1444204A4 (en) * 2001-10-22 2009-11-04 Univ New York State Res Found INHIBITORS OF PROTEIN KINASES AND PROTEINS PHOSPHATASES, METHODS OF IDENTIFICATION AND METHODS OF USE THEREOF
TWI259081B (en) * 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
US20030080191A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Allen Lubow Method and apparatus for applying bar code information to products during production
US6797825B2 (en) 2001-12-13 2004-09-28 Abbott Laboratories Protein kinase inhibitors
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
AU2002366245A1 (en) * 2001-12-17 2003-06-30 International Barcode Corporation Double-sided bar code doubling as a single bar code
US20050131733A1 (en) * 2001-12-17 2005-06-16 Allen Lubow Sealable individual bar coded packets
EP1458713B1 (en) 2001-12-27 2005-08-24 Theravance, Inc. Indolinone derivatives useful as protein kinase inhibitors
CA2475455A1 (en) * 2002-02-15 2003-08-28 Pharmacia & Upjohn Company Process for preparing indolinone derivatives
WO2003097854A2 (en) * 2002-05-17 2003-11-27 Sugen, Inc. Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals
ITMI20021620A1 (it) * 2002-07-23 2004-01-23 Novuspharma Spa Composto ad ativita' antitumorale
WO2004016211A2 (en) * 2002-08-08 2004-02-26 Vanderbilt University Pi3k antagonists as radiosensitizers
AU2003259713A1 (en) * 2002-08-09 2004-02-25 Theravance, Inc. Oncokinase fusion polypeptides associated with hyperproliferative and related disorders, nucleic acids encoding the same and methods for detecting and identifying the same
US20040121407A1 (en) * 2002-09-06 2004-06-24 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis
HN2003000272A (es) * 2002-09-10 2008-07-29 Pharmacia Italia Spa Formulaciones que comprenden un compuesto de indolinona
AR042042A1 (es) * 2002-11-15 2005-06-08 Sugen Inc Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular
AU2003302665B2 (en) * 2002-11-15 2009-12-24 Symphony Evolution, Inc. Kinase modulators
US20040209937A1 (en) * 2003-02-24 2004-10-21 Sugen, Inc. Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds
US7452913B2 (en) * 2003-02-24 2008-11-18 Pharmacia & Upjohn Company Polymorphs of pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
BRPI0407827B8 (pt) 2003-02-26 2021-05-25 Sugen Inc compostos de aminoeteroarila como inibidores de proteína cinase e respectivos usos
US20040266843A1 (en) * 2003-03-07 2004-12-30 Sugen, Inc. Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)
US7157577B2 (en) * 2003-03-07 2007-01-02 Sugen Inc. 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors
JPWO2004080462A1 (ja) * 2003-03-10 2006-06-08 エーザイ株式会社 ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤
US20050043233A1 (en) 2003-04-29 2005-02-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combinations for the treatment of diseases involving cell proliferation, migration or apoptosis of myeloma cells or angiogenesis
DE10334582A1 (de) * 2003-07-28 2005-02-24 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid
WO2005023765A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method for catalyzing amidation reactions by the presence of co2
KR20080007520A (ko) * 2003-10-02 2008-01-21 파마시아 앤드 업존 캄파니 엘엘씨 피롤-치환된 인돌리논 화합물의 염 및 다형체
SI1680140T1 (sl) * 2003-10-16 2011-08-31 Imclone Llc Inhibitorji receptorja-1 za fibroblastni rastni faktor in metode za zdravljenje z le-temi
JP4890255B2 (ja) 2003-11-07 2012-03-07 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 改良された薬物特性を有するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩
WO2005044788A1 (ja) 2003-11-11 2005-05-19 Eisai Co., Ltd. ウレア誘導体およびその製造方法
EP1686987A4 (en) * 2003-11-26 2009-02-25 Scripps Research Inst ADVANCED PROTEIN KINASE HEMMER ON INDOLINO BASIS
EP1699477A2 (en) * 2003-12-11 2006-09-13 Theravance, Inc. Compositions for use in the treatment of mutant receptor tyrosine kinase driven cellular proliferative diseases
US20050152943A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Medtronic Vascular, Inc. Medical devices to treat or inhibit restenosis
WO2005118543A1 (ja) * 2004-06-03 2005-12-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. キナーゼ阻害薬およびその用途
WO2006002422A2 (en) 2004-06-24 2006-01-05 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Compounds for immunopotentiation
SE0401790D0 (sv) * 2004-07-07 2004-07-07 Forskarpatent I Syd Ab Tamoxifen response in pre- and postmenopausal breast cancer patients
US20060009510A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method of synthesizing indolinone compounds
PL1786785T3 (pl) * 2004-08-26 2010-08-31 Pfizer Enancjomerycznie czyste związki aminoheteroarylowe jako kinazy białkowe
KR20070053205A (ko) 2004-09-17 2007-05-23 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 의약 조성물
CN100432071C (zh) * 2004-11-05 2008-11-12 中国科学院上海药物研究所 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途
GT200500321A (es) 2004-11-09 2006-09-04 Compuestos y composiciones como inhibidores de proteina kinase.
BRPI0607579A2 (pt) * 2005-03-23 2009-09-15 Pfizer Prod Inc uso de anticorpo anti-ctla4 e indolinona para a preparação de medicamentos para o tratamento de cáncer
KR100990027B1 (ko) 2005-04-26 2010-10-26 화이자 인코포레이티드 Ｐ-카드헤린 항체
RU2007141654A (ru) * 2005-05-12 2009-05-20 Пфайзер Инк. (US) Противоопухолевая комбинированная терапия, в которой используется сунитиниб-малат
CN102304086B (zh) 2005-05-18 2013-12-04 阵列生物制药公司 Mek的杂环抑制剂及其使用方法
MX2007014782A (es) 2005-05-23 2008-02-19 Novartis Ag Formas cristalinas y otras formas de las sales de acido lactico de 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-metilpiperazin-1-il)-1h-bencimidazol-2 -il]-1h quinolin-2-ona.
JP2008542294A (ja) * 2005-05-26 2008-11-27 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート 向上したインドリノン系プロテインキナーゼ阻害剤
US20100105031A1 (en) * 2005-08-01 2010-04-29 Esai R & D Management Co., Ltd. Method for prediction of the efficacy of vascularization inhibitor
WO2007015578A1 (ja) 2005-08-02 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を検定する方法
RS54393B1 (en) 2005-09-07 2016-04-28 Amgen Fremont Inc. HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES ON KINASE-1 SIMILAR TO ACTIVE RECEPTOR
ES2328407T3 (es) * 2005-09-19 2009-11-12 Pfizer Products Incorporated Formas salinas solidas de una 2-indolinona sustituida con pirrol.
US20090053236A1 (en) * 2005-11-07 2009-02-26 Eisai R & D Management Co., Ltd. USE OF COMBINATION OF ANTI-ANGIOGENIC SUBSTANCE AND c-kit KINASE INHIBITOR
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
CN101389331A (zh) * 2005-12-29 2009-03-18 斯克里普斯研究学院 基于吲哚满酮的氨基酸衍生物的蛋白激酶抑制剂
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101007801A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的2－二氢吲哚酮衍生物、其制法与医药上的用途
TW200808739A (en) 2006-04-06 2008-02-16 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolines for PDK1 inhibition
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
WO2007124288A1 (en) 2006-04-19 2007-11-01 Novartis Ag Indazole compounds and methods for inhibition of cdc7
JP4383525B2 (ja) 2006-05-09 2009-12-16 ファイザー・プロダクツ・インク シクロアルキルアミノ酸誘導体およびその医薬組成物
RU2448708C3 (ru) * 2006-05-18 2017-09-28 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Противоопухолевое средство против рака щитовидной железы
DE102006024834B4 (de) * 2006-05-24 2010-07-01 Schebo Biotech Ag Neue Indol-Pyrrol-Derivate und deren Verwendungen
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
WO2008001956A1 (fr) * 2006-06-29 2008-01-03 Eisai R & D Management Co., Ltd. Agent thérapeutique contre la fibrose hépatique
AU2007272330A1 (en) 2006-07-13 2008-01-17 Zymogenetics, Inc. Interleukin 21 and tyrosine kinase inhibitor combination therapy
CL2007002225A1 (es) 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
CL2007002261A1 (es) 2006-08-04 2008-05-02 Takeda Pharmaceutical Compuestos derivados de imidazo[1,2-b]piridazina, inhibidores de quinasa; composicion farmaceutica; y uso en el tratamiento o prevencion del cancer.
PL2057156T3 (pl) 2006-08-23 2017-08-31 Kudos Pharmaceuticals Limited Pochodne 2-metylomorfolinowe pirydo-, pirazo- i pirymido-pirymidyny jako inhibitory mTOR
WO2008026748A1 (fr) 2006-08-28 2008-03-06 Eisai R & D Management Co., Ltd. Agent antitumoral pour cancer gastrique non différencié
ES2565683T3 (es) 2006-09-15 2016-04-06 Xcovery, Inc. Compuestos inhibidores de quinasa
WO2008056634A1 (fr) * 2006-11-06 2008-05-15 Theravalues Corporation Nouveau dérivé d'hydroxyindole
MY146474A (en) 2006-11-06 2012-08-15 Supergen Inc Imidazo[1,2-b]pyridazine and pyrazolo[1,5-a]pyrimidine derivatives and their use as protein kinase inhibitors
WO2008067756A1 (fr) 2006-12-04 2008-06-12 Jiangsu Simcere Pharmaceutical R & D Co., Ltd. Dérivés de 3-pyrrolo-cyclohexylène-2-dihydro-indolinone et utilisations de ceux-ci
CN101600694A (zh) 2007-01-29 2009-12-09 卫材R&D管理有限公司 未分化型胃癌治疗用组合物
JP4523073B2 (ja) 2007-02-06 2010-08-11 ファイザー・インク 癌を治療するためのＨＳＰ−９０阻害剤としての２−アミノ−５，７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体
JPWO2008114819A1 (ja) 2007-03-20 2010-07-08 大日本住友製薬株式会社 新規アデニン化合物
US20090004213A1 (en) * 2007-03-26 2009-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Combination therapy using active immunotherapy
US20090042906A1 (en) * 2007-04-26 2009-02-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods for treating cancers associated with constitutive egfr signaling
WO2008138184A1 (fr) 2007-05-14 2008-11-20 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co.Ltd. Dérivés de pyrrolo-azacycles, leur procédé de fabrication et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinases
WO2008145398A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Pfizer Italia S.R.L. 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors
CL2008001626A1 (es) 2007-06-05 2009-06-05 Takeda Pharmaceuticals Co Compuestos derivados de heterociclos fusionados, agente farmaceutico que los comprende y su uso en la profilaxis y tratamiento del cancer.
US8324395B2 (en) 2007-08-23 2012-12-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound and use thereof
US20090062368A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Protia, Llc Deuterium-enriched sunitinib
HUE030774T2 (hu) * 2007-09-06 2017-05-29 Boston Biomedical Inc Kinázinhibitorokból álló készítmények és felhasználásuk a rák és a kinázokhoz kapcsolódó más betegségek kezelésére
KR101494734B1 (ko) 2007-10-11 2015-02-26 아스트라제네카 아베 단백질 키나제 ｂ 억제제로서 피롤로[2,3-ｄ]피리미딘 유도체
JP5638244B2 (ja) 2007-11-09 2014-12-10 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質と抗腫瘍性白金錯体との併用
US20100256392A1 (en) * 2007-11-21 2010-10-07 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
WO2009067686A2 (en) * 2007-11-21 2009-05-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib hemi-l-malate, polymorphs and preparation thereof, polymorphs of racemic sunitinib malate, compositins containing sunitinib base and malic acid and preparation thereof
CA2709083A1 (en) * 2007-12-12 2009-06-18 Medichem S.A. Polymorphic forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone
DK2222675T3 (da) 2007-12-19 2013-11-04 Genentech Inc 5-anilinoimidazopyridiner og fremgangsmåder til deres anvendelse
EP2240475B1 (en) 2007-12-20 2013-09-25 Novartis AG Thiazole derivatives used as pi 3 kinase inhibitors
JP5710269B2 (ja) 2007-12-21 2015-04-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド アザインドリジン類と使用方法
JP5399926B2 (ja) * 2008-01-29 2014-01-29 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管阻害物質とタキサンとの併用
EP2113248A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2-,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
EP2090306A1 (en) 2008-02-13 2009-08-19 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US20100310668A1 (en) * 2008-02-13 2010-12-09 Ratiopharm Gmbh Pharmaceutical compositions comprising n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide
CN101255154B (zh) * 2008-02-18 2011-09-07 靳广毅 一种取代的2-吲哚啉酮衍生物和制备方法及其应用
US20110112164A1 (en) * 2008-02-21 2011-05-12 Generics (Uk) Limited Novel polymorphs and processes for their preparation
EP2098521A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-09 Ratiopharm GmbH Crystal forms of N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrolle-3-carboxamide and methods for their prepparation
ES2391501T3 (es) * 2008-03-31 2012-11-27 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Procedimientos para preparar sunitinib y sales del mismo
WO2009128083A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Natco Pharma Limited Novel polymorphic forms of sunitinib base
US8158656B2 (en) * 2008-05-16 2012-04-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
CN102066362B (zh) * 2008-05-23 2014-07-30 上海医药工业研究院 二氢吲哚酮衍生物
WO2009154697A2 (en) 2008-05-28 2009-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Disc-1 pathway activators in the control of neurogenesis
SI2313371T1 (sl) * 2008-06-13 2013-02-28 Medichem, S.A. Postopek za pripravo soli 3-pirol substituirane 2-indolinonske jabolčne kisline
WO2009157011A1 (en) * 2008-06-23 2009-12-30 Natco Pharma Limited Process for the preparation of high purity sunitinib and its pharmaceutically acceptable salt
EP2138167A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
WO2009156837A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Medichem, S.A. Amorphous form of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
DE102008031038A1 (de) 2008-06-30 2009-12-31 Alexander Priv.-Doz. Dr. Dömling Sutent zur Anwendung in der Organtransplantation
MX2011000150A (es) * 2008-06-30 2011-04-05 Cylene Pharmaceuticals Inc Compuestos de oxoindol.
KR20110036101A (ko) 2008-06-30 2011-04-06 안지오블라스트 시스템스 인코퍼레이티드 조합된 치료를 사용한 안과질환 및 과도한 혈관신생의 치료
AU2009265360A1 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Generics [Uk] Limited Preparation of 3-pyrrole substituted 2-indolinone derivatives
WO2010004339A1 (en) * 2008-07-10 2010-01-14 Generics [Uk] Limited Processes for the preparation of crystalline forms of sunitinib malate
EP2342195B1 (en) 2008-07-24 2014-09-10 Medichem, S.A. Crystalline forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
CA2731605A1 (en) * 2008-07-24 2010-01-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib and salts thereof and their polymorphs
WO2010017541A2 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
WO2010027828A2 (en) * 2008-08-25 2010-03-11 Amplimmune, Inc. Pd-1 antagonists and methods of use thereof
PL2350129T3 (pl) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc Kompozycje antagonistów PD-1 i sposoby stosowania
US20110263670A1 (en) * 2008-08-25 2011-10-27 Vinayak Gore Novel polymorphs of sunitinib and processes for their preparation
WO2010023473A2 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel crystalline form and processes for its preparation
WO2010026388A1 (en) * 2008-09-05 2010-03-11 Imperial Innovations Limited Isatin derivatives for use as in vivo imaging agents
JP5778577B2 (ja) 2008-09-19 2015-09-16 メディミューン，エルエルシー Ｄｌｌ４に対する抗体およびその使用
AR073807A1 (es) * 2008-10-10 2010-12-01 Medichem Sa Proceso para preparar el malato de sunitinib, sal de un acido mas debil que el malato como compuesto intermediario, y proceso para preparar dicha sal intermediaria.
EP2181991A1 (en) * 2008-10-28 2010-05-05 LEK Pharmaceuticals D.D. Novel salts of sunitinib
EP2186809A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-19 LEK Pharmaceuticals D.D. New crystal form of sunitinib malate
US20100222371A1 (en) * 2008-11-20 2010-09-02 Children's Medical Center Corporation Prevention of surgical adhesions
JP5579619B2 (ja) 2008-12-01 2014-08-27 武田薬品工業株式会社 複素環化合物およびその用途
JO3101B1 (ar) 2008-12-02 2017-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات بنزوثيازول كعوامل مضادة للسرطان
TW201028410A (en) 2008-12-22 2010-08-01 Astrazeneca Ab Chemical compounds 610
CA2748158A1 (en) 2008-12-23 2010-07-01 Astrazeneca Ab Targeted binding agents directed to .alpha.5.beta.1 and uses thereof
EP2373643A4 (en) 2009-01-02 2013-08-07 Hetero Research Foundation NEW SUNITINIB MALATE POLYMORPHS
KR20240011244A (ko) 2009-01-16 2024-01-25 엑셀리시스, 인코포레이티드 암의 치료를 위한 ｎ-（４-｛〔６，７-비스（메틸옥시）퀴놀린-4-일〕옥시｝페닐）-ｎ＇-（４-플루오로페닐）사이클로프로판-1,1-디카르복사미드의 말산염 및 그 결정형
NZ594177A (en) 2009-02-05 2014-02-28 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
EP2393814A1 (en) 2009-02-09 2011-12-14 SuperGen, Inc. Pyrrolopyrimidinyl axl kinase inhibitors
TW201035088A (en) 2009-02-27 2010-10-01 Supergen Inc Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene DNA methyltransferase inhibitors
US9265764B2 (en) * 2009-02-27 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Uses of chemicals to modulate GSK-3 signaling for treatment of bipolar disorder and other brain disorders
CA2755061A1 (en) 2009-03-13 2010-09-16 Cellzome Limited Pyrimidine derivatives as mtor inhibitors
WO2010108503A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Life & Brain Gmbh Promotion of neuronal integration in neural stem cell grafts
CA2758614A1 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Cellzome Limited Fluoro substituted pyrimidine compounds as jak3 inhibitors
US8530492B2 (en) 2009-04-17 2013-09-10 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
EP2255792A1 (en) 2009-05-20 2010-12-01 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions for N-[2-(Diethylamino)ethyl]5-[(fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indole-3-ylidene) methyl]-2,4-dimenthyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8211901B2 (en) 2009-05-22 2012-07-03 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2264027A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-22 Ratiopharm GmbH Process for the preparation of N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8389580B2 (en) 2009-06-02 2013-03-05 Duke University Arylcyclopropylamines and methods of use
CN101906076B (zh) 2009-06-04 2013-03-13 深圳微芯生物科技有限责任公司 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
WO2011004200A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Generics [Uk] Limited Novel pyrrole derivatives
FR2948940B1 (fr) * 2009-08-04 2011-07-22 Servier Lab Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2011029807A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Cellzome Limited Ortho substituted pyrimidine compounds as jak inhibitors
AU2010296849A1 (en) 2009-09-16 2012-05-03 Ranbaxy Laboratories Limited Salts of sunitinib
TW201125867A (en) 2009-10-20 2011-08-01 Cellzome Ltd Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as JAK inhibitors
EP2499133A2 (en) 2009-11-12 2012-09-19 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form i of l-malic acid salt of sunitinib
US8916716B2 (en) 2009-11-19 2014-12-23 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form II of L-malic acid salt of sunitinib
CA2778714C (en) 2009-11-24 2018-02-27 Medimmune Limited Targeted binding agents against b7-h1
WO2011068233A1 (en) 2009-12-03 2011-06-09 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Imidazoquinolines which act via toll - like receptors (tlr)
WO2013022801A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Forsight Vision4, Inc. Small molecule delivery with implantable therapeutic device
WO2011095802A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Generics [Uk] Limited Hplc method for analyzing sunitinib
WO2011100325A2 (en) * 2010-02-09 2011-08-18 Sicor Inc. Polymorphs of sunitinib salts
AU2011215900A1 (en) 2010-02-10 2012-07-26 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
RU2012139182A (ru) 2010-02-22 2014-03-27 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг ПИРИДО[3,2-d]ПИРИМИДИНЫ - ИНГИБИТОРЫ PI3К ДЕЛЬТА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
WO2011104555A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Generics [Uk] Limited Novel process
ES2535116T3 (es) 2010-03-04 2015-05-05 Cellzome Limited Derivados de urea sustituida con morfolino como inhibidores de mtor
AU2011222470A1 (en) 2010-03-04 2012-09-27 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the direct preparation of malic acid salt of sunitinib
CN102858739A (zh) * 2010-03-10 2013-01-02 斯索恩有限公司 酰胺化吡咯甲酸酯化合物的方法
AU2011228765A1 (en) 2010-03-18 2012-10-11 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of malic acid salt of sunitinib
EP2550263A4 (en) 2010-03-23 2013-07-24 Univ Johns Hopkins COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISEASE
WO2011128699A2 (en) * 2010-04-16 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Novel process
SG184989A1 (en) 2010-04-30 2012-11-29 Cellzome Ltd Pyrazole compounds as jak inhibitors
WO2011138565A1 (fr) 2010-05-05 2011-11-10 Biorebus Association pharmaceutique contenant l'acide lipoïque, l'acide hydroxycitrique et une somatostatine a titre de principes actifs
EP2392324A1 (en) 2010-06-01 2011-12-07 Societe De Coordination De Recherches Therapeutiques Rhenium complexes and their pharmaceutical use
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
CA2802644C (en) 2010-06-25 2017-02-21 Eisai R & D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
EP2588105A1 (en) 2010-07-01 2013-05-08 Cellzome Limited Triazolopyridines as tyk2 inhibitors
WO2012006503A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
US9040545B2 (en) 2010-08-20 2015-05-26 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as selective JAK inhibitors
WO2012027716A1 (en) 2010-08-27 2012-03-01 Collabrx, Inc. Method to treat melanoma in braf inhibitor-resistant subjects
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
EP2635568B1 (en) 2010-11-01 2017-08-16 Scinopharm (Kunshan) Biochemical Technology Co., Ltd. Processes for the preparation of 3-(pyrrol-2-yl)methylene)-2-pyrrolones using 2-silyloxy-pyrroles
WO2012059941A1 (en) * 2010-11-04 2012-05-10 Ind-Swift Laboratories Limited Process for preparation of sunitinib malate and salts thereof
EP2638018A1 (en) 2010-11-09 2013-09-18 Cellzome Limited Pyridine compounds and aza analogues thereof as tyk2 inhibitors
EP2640384A1 (en) 2010-11-18 2013-09-25 Synta Pharmaceuticals Corp. Preselection of subjects for therapeutic treatment with oxygen sensitive agents based on hypoxic status
EP2640360A2 (en) 2010-11-19 2013-09-25 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
AR083868A1 (es) 2010-12-03 2013-03-27 Lilly Co Eli Compuestos de oxazol[5,4-b]piridin-5-ilo
JP6009457B2 (ja) 2010-12-23 2016-10-19 ネクター セラピューティクス ポリマー−デスエチルスニチニブコンジュゲート
JP6002149B2 (ja) 2010-12-23 2016-10-05 ネクター セラピューティクス ポリマー−スニチニブコンジュゲート
UY33883A (es) 2011-01-31 2012-08-31 Novartis Ag Novedosos derivados heterocíclicos
US9353127B2 (en) 2011-02-15 2016-05-31 Immunogen, Inc. Methods of preparation of conjugates
JP5937112B2 (ja) 2011-02-17 2016-06-22 カンサー・セラピューティクス・シーアールシー・プロプライエタリー・リミテッドＣａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｃｒｃ Ｐｔｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ 選択的ｆａｋ阻害剤
WO2012110773A1 (en) 2011-02-17 2012-08-23 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Fak inhibitors
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
US8630703B2 (en) 2011-03-09 2014-01-14 Technion Research & Development Foundation Limited Treatment utilizing hydrophobic weak bases chemotherapeutic agents and illumination
CN102115469A (zh) * 2011-03-21 2011-07-06 浙江大学 吲哚啉-2-酮类衍生物的制备和用途
JP2014510122A (ja) 2011-04-04 2014-04-24 セルゾーム リミテッド ｍＴＯＲ阻害剤としてのジヒドロピロロピリミジン誘導体
CN103945696B (zh) * 2011-04-08 2016-06-29 贝达医药公司 新颖吲哚啉酮蛋白激酶抑制剂
CA2828946C (en) 2011-04-18 2016-06-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012143320A1 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Cellzome Limited (7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-yl)amine compounds as jak3 inhibitors
CN102898402B (zh) * 2011-04-26 2016-01-20 北京大学 一种苯并异硒唑酮修饰的吡咯甲酸酯取代的吲哚酮类化合物及其应用
WO2012166899A2 (en) 2011-06-03 2012-12-06 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
PL3409278T3 (pl) 2011-07-21 2021-02-22 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Heterocykliczne inhibitory kinazy białkowej
KR20140047092A (ko) 2011-07-28 2014-04-21 셀좀 리미티드 Jak 억제제로서의 헤테로시클릴 피리미딘 유사체
WO2013017479A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013017480A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
JP2014531449A (ja) 2011-09-20 2014-11-27 セルゾーム リミティッド キナーゼ阻害剤としてのピラゾロ［４，３―ｃ］ピリジン誘導体
US9175011B2 (en) 2011-09-21 2015-11-03 Cellzone Limited Morpholino substituted urea or carbamate derivatives as MTOR inhibitors
KR20140084130A (ko) 2011-10-07 2014-07-04 셀좀 리미티드 Mtor 억제제로서의 모르폴리노 치환된 바이사이클릭 피리미딘 우레아 또는 카르바메이트 유도체
CN102499917B (zh) 2011-10-25 2014-12-17 澳门大学 吲哚酮类化合物在制备神经保护药物中的应用
AP2014007601A0 (en) 2011-10-28 2014-04-30 Novartis Ag Novel purine derivatives and their use in the treatment of disease
CN103130774B (zh) * 2011-11-22 2016-06-22 齐鲁制药有限公司 具有酪氨酸激酶抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN103127096B (zh) * 2011-12-02 2015-11-25 杨子娇 吡咯基取代的吲哚类化合物在治疗青光眼病的应用
US20130178520A1 (en) 2011-12-23 2013-07-11 Duke University Methods of treatment using arylcyclopropylamine compounds
KR20140114344A (ko) 2011-12-23 2014-09-26 셀좀 리미티드 키나제 억제제로서의 피리미딘-2,4-디아민 유도체
CN102491932A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 天津科技大学 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用
US9206163B2 (en) 2012-03-23 2015-12-08 Laurus Labs Private Ltd. Process for the preparation of sunitinib and its acid addition salts thereof
EP2838538B1 (en) 2012-04-20 2017-03-15 Annji Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclopropanecarboxylate esters of purine analogues
PL399027A1 (pl) 2012-04-27 2013-10-28 Instytut Farmaceutyczny Sposób otrzymywania N-[2-(dietylamino)etylo]-5-formylo-2,4-dimetylo-1H-pirolo-3-karboksyamidu o wysokiej czystosci i jego zastosowanie do wytwarzania sunitynibu
CN102653521B (zh) * 2012-04-27 2014-08-06 首都师范大学 吲哚-2-酮的哌嗪硫代甲酰肼衍生物及其制备方法和用途
WO2013164754A2 (en) 2012-05-04 2013-11-07 Pfizer Inc. Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
US10213432B2 (en) 2012-05-16 2019-02-26 Novartis Ag Dosage regimen for a PI-3 kinase inhibitor
EP3505534A1 (en) 2012-06-08 2019-07-03 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising sitespecific nonnatural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9732161B2 (en) 2012-06-26 2017-08-15 Sutro Biopharma, Inc. Modified Fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
WO2014026243A1 (en) 2012-08-17 2014-02-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Vegfr3 inhibitors
WO2014031566A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
PL3584255T3 (pl) 2012-08-31 2022-05-16 Sutro Biopharma, Inc. Modyfikowane aminokwasy zawierające grupę azydkową
WO2014041349A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Tetrahydropyran-4-ylethylamino- or tetrahydropyranyl-4-ethyloxy-pyrimidines or -pyridazines as isoprenylcysteincarboxymethyl transferase inhibitors
WO2014045101A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Cellzome Gmbh Tetrazolo quinoxaline derivatives as tankyrase inhibitors
ES2644758T3 (es) 2012-10-16 2017-11-30 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Moduladores de PKM2 y métodos para su uso
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
BR112015009004A8 (pt) 2012-12-21 2021-07-20 Eisai R&D Man Co Ltd forma amorfa de derivado de quinolina e método de produção da mesma
WO2014134486A2 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9999680B2 (en) 2013-02-28 2018-06-19 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and maytansinoids as cytotoxic agents
RU2015143526A (ru) * 2013-03-13 2017-04-19 Бостон Байомедикал, Инк. Производные 3-(арил или гетероарил)метилениндолин-2-она в качестве ингибиторов киназного пути раковых стволовых клеток для лечения рака
EP2968113B8 (en) 2013-03-14 2020-10-28 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
ES2738493T3 (es) 2013-03-14 2020-01-23 Tolero Pharmaceuticals Inc Inhibidores de JAK2 y ALK2 y métodos para su uso
AR095443A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Fundación Centro Nac De Investig Oncológicas Carlos Iii Heterociclos condensados con acción sobre atr
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
CN104119321B (zh) * 2013-04-28 2017-09-08 齐鲁制药有限公司 二氢吲哚酮衍生物的二马来酸盐及其多晶型物
CA2912219C (en) 2013-05-14 2021-11-16 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of endometrial cancer subjects to lenvatinib compounds
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
FR3008411B1 (fr) * 2013-07-12 2015-07-03 Servier Lab Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent
PT3039424T (pt) 2013-08-28 2020-09-03 Crown Bioscience Inc Taicang Assinaturas de expressão genética que permitem prever a resposta de um sujeito a um inibidor multiquinase e métodos de utilização do mesmo
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CA2838585A1 (en) 2013-10-18 2015-04-18 Hari Babu Matta An ascorbic acid salt of sunitinib
CA2838587A1 (en) 2013-10-18 2015-04-18 Hari Babu Matta Pure crystalline form ii of l-malic acid salt of sunitinib and processes for its preparation
MY182168A (en) 2013-11-01 2021-01-18 Pfizer Vectors for expression of prostate-associated antigens
CN105979947A (zh) 2013-12-06 2016-09-28 诺华股份有限公司 α-同工型选择性磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂的剂量方案
CN104829596B (zh) 2014-02-10 2017-02-01 石家庄以岭药业股份有限公司 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
CN103923014A (zh) * 2014-05-05 2014-07-16 宁夏宝马药业有限公司 环肌酸制备方法
US9474756B2 (en) 2014-08-08 2016-10-25 Forsight Vision4, Inc. Stable and soluble formulations of receptor tyrosine kinase inhibitors, and methods of preparation thereof
KR20230043234A (ko) 2014-08-28 2023-03-30 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 고순도의 퀴놀린 유도체 및 이를 제조하는 방법
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EP3246046A4 (en) 2015-01-13 2018-12-05 Kyoto University Agent for preventing and/or treating amyotrophic lateral sclerosis
AU2016224583B2 (en) 2015-02-25 2021-06-03 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for suppressing bitterness of quinoline derivative
KR20170122809A (ko) 2015-03-04 2017-11-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
WO2016172214A1 (en) 2015-04-20 2016-10-27 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling
WO2016184793A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating a patient with vegfr inhibitor-resistant metastatic renal cell carcinoma
KR102608921B1 (ko) 2015-05-18 2023-12-01 스미토모 파마 온콜로지, 인크. 생체 이용률이 증가된 알보시딥 프로드러그
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
CA2988707C (en) 2015-06-16 2023-10-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Combination of cbp/catenin inhibitor and immune checkpoint inhibitor for treating cancer
KR20180034538A (ko) 2015-08-03 2018-04-04 톨레로 파마수티컬스, 인크. 암의 치료를 위한 병행 요법
MX2018003462A (es) 2015-09-22 2018-09-06 Graybug Vision Inc Compuestos y composiciones para el tratamiento de trastornos oculares.
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
CN108472289A (zh) 2015-11-02 2018-08-31 诺华股份有限公司 磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂的给药方案
SG11201803663XA (en) 2015-11-12 2018-05-30 Graybug Vision Inc Aggregating microparticles for therapy
CA3011455A1 (en) 2016-01-27 2017-08-03 Sutro Biopharma, Inc. Anti-cd74 antibody conjugates, compositions comprising anti-cd74 antibody conjugates and methods of using anti-cd74 antibody conjugates
WO2017139417A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Vitrisa Therapeutics, Inc. Compositions with improved intravitreal half-life and uses thereof
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
CN107459519A (zh) 2016-06-06 2017-12-12 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶哌啶环衍生物及其制备方法和应用
CA3035081A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
JP2019537585A (ja) 2016-10-28 2019-12-26 アイカーン スクール オブ メディスン アット マウント シナイ Ｅｚｈ２媒介性がんを治療するための組成物および方法
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
MX2019006333A (es) 2016-12-05 2019-09-26 Apros Therapeutics Inc Compuestos de pirimidina que contienen grupos ácidos.
US10786502B2 (en) 2016-12-05 2020-09-29 Apros Therapeutics, Inc. Substituted pyrimidines containing acidic groups as TLR7 modulators
WO2018106870A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Compositions and methods for treating cdk4/6-mediated cancer
US10132797B2 (en) 2016-12-19 2018-11-20 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Profiling peptides and methods for sensitivity profiling
CN106916143B (zh) * 2017-03-14 2019-09-27 哈尔滨医科大学 一种预防和治疗冠心病的药物及其应用
BR112019019452A2 (pt) 2017-03-23 2020-04-14 Graybug Vision Inc composto, e, uso de um composto
CN111201040A (zh) 2017-05-10 2020-05-26 灰色视觉公司 用于医学疗法的缓释微粒及其悬浮液
US20200207859A1 (en) 2017-07-26 2020-07-02 Sutro Biopharma, Inc. Methods of using anti-cd74 antibodies and antibody conjugates in treatment of t-cell lymphoma
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
EP3684814A1 (en) 2017-09-18 2020-07-29 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor alpha antibody conjugates and their uses
WO2019075367A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Tolero Pharmaceuticals, Inc. PKM2 ACTIVATORS IN COMBINATION WITH OXYGEN REACTIVE SPECIES FOR THE TREATMENT OF CANCER
NL2019801B1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Univ Leiden Delivery vectors
CN112154146A (zh) 2018-03-06 2020-12-29 西奈山伊坎医学院 丝氨酸苏氨酸激酶(akt)降解/破坏化合物和使用方法
EP3539536A1 (en) 2018-03-15 2019-09-18 MH10 Spolka z ograniczona odpowiedzialnoscia A pharmaceutical composition of sunitinib or its salt thereof in its polymorphic form i
EP3802519A1 (en) 2018-06-04 2021-04-14 Apros Therapeutics, Inc. Pyrimidine compounds containing acidic groups useful to treat diseases connected to the modulation of tlr7
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
GB201810581D0 (en) 2018-06-28 2018-08-15 Ctxt Pty Ltd Compounds
CA3103995A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Methods for treating diseases associated with abnormal acvr1 expression and acvr1 inhibitors for use in the same
WO2020060944A1 (en) 2018-09-17 2020-03-26 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
EP3890749A4 (en) 2018-12-04 2022-08-03 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. CDK9 INHIBITORS AND POLYMORPHS THEREOF FOR USE AS CANCER TREATMENT AGENT
JPWO2020130125A1 (ja) 2018-12-21 2021-11-04 第一三共株式会社 抗体−薬物コンジュゲートとキナーゼ阻害剤の組み合わせ
WO2020167990A1 (en) 2019-02-12 2020-08-20 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Formulations comprising heterocyclic protein kinase inhibitors
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
CN114364798A (zh) 2019-03-21 2022-04-15 欧恩科斯欧公司 用于治疗癌症的Dbait分子与激酶抑制剂的组合
EP3941463A1 (en) 2019-03-22 2022-01-26 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising pkm2 modulators and methods of treatment using the same
EP3958845A1 (en) 2019-04-25 2022-03-02 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising amorphous sunitinib
US20220362394A1 (en) 2019-05-03 2022-11-17 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
WO2020227325A1 (en) 2019-05-06 2020-11-12 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of hpk1
KR20220054840A (ko) 2019-08-31 2022-05-03 이턴 바이오파마 (상하이) 코., 엘티디. Fgfr 억제제용 피라졸류 유도체 및 이의 제조방법
AU2020378630A1 (en) 2019-11-08 2022-05-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of cancers that have acquired resistance to kinase inhibitors
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
EP4114852A1 (en) 2020-03-03 2023-01-11 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN111233841A (zh) * 2020-03-17 2020-06-05 湖北扬信医药科技有限公司 一种舒尼替尼有关物质及其制备方法和用途
WO2023278424A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 The Regents Of The University Of California Methods for treating and ameliorating t cell related diseases
CN113717159A (zh) * 2021-09-16 2021-11-30 中国药科大学 吲哚酮类化合物及其药物组合物、制备方法及用途
WO2023081923A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Frequency Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024017372A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种吲哚酮衍生物及其应用

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL104796C (ko) 1957-08-19
DE878539C (de) 1939-08-17 1953-06-05 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen
BE507136A (ko) 1950-11-18
BE553661A (ko) 1955-12-23
NL96047C (ko) 1956-06-08
NL251055A (ko) 1959-04-29
FR1398224A (fr) 1964-05-06 1965-05-07 Ici Ltd Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile
US3308134A (en) 1965-10-22 1967-03-07 Mcneilab Inc Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones
US3551571A (en) 1967-05-19 1970-12-29 Endo Lab Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones
US3564016A (en) 1968-03-07 1971-02-16 Endo Lab Method of decarbonylation
US4070366A (en) 1968-06-12 1978-01-24 Canadian Patents & Development Limited Alkylation process
FR1599772A (ko) 1968-09-17 1970-07-20
US3922163A (en) 1970-01-30 1975-11-25 Upjohn Co Organic compounds and process
US3715364A (en) 1970-12-28 1973-02-06 Merck & Co Inc Nitroimidazole carboxamides
DE2159361A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159363A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Antimikrobielle mittel
DE2159360A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159362A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
GB1384599A (en) 1972-05-04 1975-02-19 Colgate Palmolive Co Coloured detergent compositions
US3880871A (en) 1973-09-27 1975-04-29 Squibb & Sons Inc Isothiocyanophenyl substituted imidazoles
US4002643A (en) 1975-06-27 1977-01-11 Mcneil Laboratories, Inc. Preparation of β-acyl pyrroles
US4002749A (en) 1975-08-12 1977-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Substituted indolinones
US4053613A (en) 1975-09-17 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones
DE2855306A1 (de) 1978-12-21 1980-07-10 Boehringer Sohn Ingelheim Mittel zur senkung der herzfrequenz
GR73560B (ko) 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4343923A (en) 1980-08-07 1982-08-10 Armstrong World Industries, Inc. Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound
CH646956A5 (de) 1981-12-15 1984-12-28 Ciba Geigy Ag Imidazolide.
EP0095285A1 (en) 1982-05-21 1983-11-30 Sumitomo Chemical Company, Limited N-acylimidazoles, their production and use
US4493642A (en) 1982-12-27 1985-01-15 Bogdon Glendon J Orthodontic device and associated orthodontic method
DE3310891A1 (de) 1983-03-25 1984-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4489089A (en) 1983-04-06 1984-12-18 American Cyanamid Company Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides
DE3480392D1 (en) 1983-04-29 1989-12-14 Ciba Geigy Ag Imidazolides and their use as curing agents for polyepoxides
DE3415138A1 (de) 1984-04-21 1985-10-31 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide
DE3426419A1 (de) 1984-07-18 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4560700A (en) 1985-02-08 1985-12-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents
JPH078851B2 (ja) 1985-07-29 1995-02-01 鐘淵化学工業株式会社 ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
WO1993012786A1 (en) 1986-07-10 1993-07-08 Howard Harry R Jr Indolinone derivatives
US4853404A (en) 1986-10-13 1989-08-01 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Phenoxyacetic acid derivatives composition and use
US5202341A (en) 1987-03-11 1993-04-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity
DE3874257T2 (de) 1987-03-11 1993-02-11 Kanegafuchi Chemical Ind Hydroxystyren-derivate.
US5089516A (en) 1987-03-11 1992-02-18 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity
US5043348A (en) 1987-04-24 1991-08-27 Cassella Aktiengesellschaft Pyrrolealdehydes, their preparation and their use
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
DE3808071A1 (de) 1988-03-11 1989-09-21 Basf Ag Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen
US4868304A (en) 1988-05-27 1989-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Synthesis of nitrogen heterocycles
CA1339784C (en) 1988-06-23 1998-03-31 Shinya Inoue Pyrrolecarboxylic acid derivatives
JPH06104658B2 (ja) 1988-06-23 1994-12-21 三菱化成株式会社 ピロールカルボン酸誘導体
DE3824658A1 (de) 1988-07-15 1990-01-18 Schering Ag N-hetaryl-imidazolderivate
GB8816944D0 (en) 1988-07-15 1988-08-17 Sobio Lab Compounds
US5084280A (en) 1988-12-15 1992-01-28 Chapman Chemical Company Wood preservation composition and method
DE3902439A1 (de) 1989-01-27 1990-08-02 Basf Ag Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern
US5047554A (en) 1989-04-18 1991-09-10 Pfizer Inc. 3-substituted-2-oxindole derivatives
WO1991001306A1 (fr) 1989-07-25 1991-02-07 Taiho Pharmaceutical Company, Limited Derive oxoindole
US5258357A (en) 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
CA2032421A1 (en) 1989-12-20 1991-06-21 Mitsubishi Chemical Corporation Pyrrolealdehyde derivative
GB9004483D0 (en) 1990-02-28 1990-04-25 Erba Carlo Spa New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation
CA2012634A1 (en) 1990-03-20 1991-09-20 Hassan Salari Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases
US5196446A (en) 1990-04-16 1993-03-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
ATE159009T1 (de) 1991-05-10 1997-10-15 Rhone Poulenc Rorer Int Bis mono- und bicyclische aryl- und heteroarylderivate mit inhibierender wirkung auf die egf und/oder pdgf-rezeptor tyrosinkinase
US5480883A (en) 1991-05-10 1996-01-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase
GB9115160D0 (en) 1991-07-12 1991-08-28 Erba Carlo Spa Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation
US5124347A (en) 1991-07-31 1992-06-23 Warner-Lambert Co. 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents
AU664392B2 (en) 1991-10-18 1995-11-16 Monsanto Technology Llc Fungicides for the control of take-all disease of plants
US5389661A (en) 1991-12-05 1995-02-14 Warner-Lambert Company Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties
US5322950A (en) 1991-12-05 1994-06-21 Warner-Lambert Company Imidazole with angiotensin II antagonist properties
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
FR2689397A1 (fr) 1992-04-01 1993-10-08 Adir Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments.
DE4211531A1 (de) 1992-04-06 1993-10-07 Cassella Ag Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten
FR2694004B1 (fr) 1992-07-21 1994-08-26 Adir Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5565324A (en) 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
JP3507124B2 (ja) 1993-05-26 2004-03-15 塩野義製薬株式会社 ベンジリデン誘導体の製造法
DE59402281D1 (de) 1993-06-28 1997-05-07 Bayer Ag Massefärben von Kunststoffen
US5332736A (en) 1993-11-01 1994-07-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles
US5610173A (en) 1994-01-07 1997-03-11 Sugen, Inc. Formulations for lipophilic compounds
GB9507298D0 (en) 1995-04-07 1995-05-31 Pharmacia Spa Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors
US5786488A (en) 1996-11-13 1998-07-28 Sugen, Inc. Synthetic methods for the preparation of indolyquinones
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
JP3246712B2 (ja) 1995-11-15 2002-01-15 株式会社トクヤマ エテニルアミド化合物の製造方法
EP0788890A1 (en) 1996-02-06 1997-08-13 Agfa-Gevaert N.V. Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording
CA2206201A1 (en) 1996-05-29 1997-11-29 Yoshiaki Isobe Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use
KR100482268B1 (ko) 1996-08-01 2005-04-14 메르클레 게엠베하 세포질 포스포리파제 ａ2의 저해제로서의 아실피롤디카르복실산
JP2002511852A (ja) * 1997-05-07 2002-04-16 スージェン・インコーポレーテッド 蛋白質キナーゼ活性の調節剤としての２−インドリノン誘導体
US6133305A (en) 1997-09-26 2000-10-17 Sugen, Inc. 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity
TR200003514T2 (tr) * 1998-05-29 2002-05-21 Sugen Inc. Pirol ikame edilmiş 2-indolinon protein kinaz inhibitörleri
US6462072B1 (en) 1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives
CN1149983C (zh) 1998-12-14 2004-05-19 赛勒吉药物股份有限公司 用于治疗***直肠病的组合物和方法
JP2002532492A (ja) * 1998-12-17 2002-10-02 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー サイクリン−依存性キナーゼ、特にｃｄｋ２のインヒビターとしての４−アルケニル（及びアルキニル）オキシドール
US6284894B1 (en) 1998-12-18 2001-09-04 Nycomed Imaging As Preparation of allylic aromatic compounds
AU760964B2 (en) * 1998-12-31 2003-05-22 Sugen, Inc. 3-heteroarylidenyl-2-indolinone compounds for modulating protein kinase activityand for use in cancer chemotherapy
ATE514676T1 (de) * 1999-11-24 2011-07-15 Sugen Inc Ionisierbare indolinon derivate und deren verwendung als ptk liganden
MXPA02006263A (es) * 1999-12-22 2004-02-26 Sugen Inc Metodos de modulacion de la funcion de la cinasa de tirosina c-kit de la proteina con compuestos de indolinona.
ME00415B (me) * 2000-02-15 2011-10-10 Pharmacia & Upjohn Co Llc Pirol supstituisani 2-indol protein kinazni inhibitori
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
WO2002002551A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
JP2004518669A (ja) * 2000-12-20 2004-06-24 スージェン・インコーポレーテッド ４−アリール置換インドリノン

Also Published As

Publication number Publication date
NO2019005I1 (no) 2019-02-11
BRPI0108394B1 (pt) 2018-12-11
LU91407I9 (ko) 2018-12-28
ES2290117T3 (es) 2008-02-16
EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
SK287142B6 (sk) 2010-01-07
CN1439005A (zh) 2003-08-27
NL300332I1 (nl) 2008-03-03
NO20023831D0 (no) 2002-08-13
HRP20020751A2 (en) 2004-12-31
BRPI0117360B1 (pt) 2018-11-13
EP1255752B1 (en) 2007-08-08
EP1255752A2 (en) 2002-11-13
NZ520640A (en) 2005-04-29
AU2001239770B2 (en) 2006-01-05
KR100713960B1 (ko) 2007-05-02
TWI306860B (en) 2009-03-01
MXPA02008021A (es) 2004-04-05
LU91407I2 (fr) 2008-03-10
DE60129794D1 (de) 2007-09-20
BG107078A (bg) 2003-04-30
CZ303705B6 (cs) 2013-03-27
BRPI0108394B8 (pt) 2021-05-25
BE2010C009I2 (ko) 2020-01-30
NO2010002I1 (no) 2010-03-08
JP2003523340A (ja) 2003-08-05
NO20023831L (no) 2002-10-15
US20070010569A1 (en) 2007-01-11
US20040063773A1 (en) 2004-04-01
NL300332I2 (nl) 2008-04-01
LTPA2008002I1 (lt) 2019-02-25
NL300430I1 (nl) 2010-03-01
US7572924B2 (en) 2009-08-11
NL300430I2 (nl) 2010-04-01
YU61402A (sh) 2005-07-19
CY1108032T1 (el) 2011-04-06
DK1255752T3 (da) 2007-11-26
US7125905B2 (en) 2006-10-24
WO2001060814A2 (en) 2001-08-23
NO2008019I1 (no) 2009-01-12
NO325532B1 (no) 2008-06-09
CY2008004I1 (el) 2009-11-04
BR0108394A (pt) 2004-06-22
FR08C0002I1 (ko) 2008-03-21
IL151127A0 (en) 2003-04-10
LU91657I2 (fr) 2010-05-03
DE60129794T2 (de) 2007-12-06
CY2008004I2 (el) 2009-11-04
BG65764B1 (bg) 2009-10-30
HU228979B1 (en) 2013-07-29
US6573293B2 (en) 2003-06-03
NO2008019I2 (no) 2011-10-17
HK1051188A1 (en) 2003-07-25
CA2399358A1 (en) 2001-08-23
CR20120009A (es) 2012-02-07
FR08C0002I2 (fr) 2009-01-02
EA005996B1 (ru) 2005-08-25
SI1255752T1 (sl) 2007-12-31
HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
CN1329390C (zh) 2007-08-01
CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
BRPI0117360A2 (pt) 2012-01-24
DE122008000002I1 (de) 2008-04-17
ATE369359T1 (de) 2007-08-15
CY2010004I1 (el) 2012-01-25
CO5280092A1 (es) 2003-05-30
UA73976C2 (uk) 2005-10-17
DE122010000004I1 (de) 2010-04-15
CA2399358C (en) 2006-03-21
PL211834B1 (pl) 2012-06-29
IS2491B (is) 2009-01-15
JP3663382B2 (ja) 2005-06-22
IS6501A (is) 2002-08-13
SK13262002A3 (sk) 2003-03-04
CR20120007A (es) 2012-02-24
WO2001060814A3 (en) 2002-01-24
MY130363A (en) 2007-06-29
NO2010002I2 (no) 2010-12-06
HRP20020751B1 (en) 2011-01-31
AR034118A1 (es) 2004-02-04
LTC1255752I2 (lt) 2019-08-26
CY2010004I2 (el) 2012-01-25
PE20011083A1 (es) 2001-10-26
US20050176802A1 (en) 2005-08-11
BRPI0117360B8 (pt) 2021-07-06
AU3977001A (en) 2001-08-27
PL361209A1 (en) 2004-09-20
RS50444B (sr) 2010-03-02
US20020156292A1 (en) 2002-10-24
ME00415B (me) 2011-10-10
HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
PT1255752E (pt) 2007-10-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100713960B1 (ko) 피롤 치환 2-인돌리논 단백질 인산화 효소 저해제
KR100884858B1 (ko) 단백질 키나제 억제제로서의3-(4-아미도피롤-2-일메틸리덴)-2-인돌리논 유도체
AU2001239770A1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US20040138269A1 (en) Substituted pyrroles as kinase inhibitors
AU2002247133A1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
US7053114B2 (en) Prodrugs of a 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment
FPAY Annual fee payment
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160330

Year of fee payment: 10

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170330

Year of fee payment: 11

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180329

Year of fee payment: 12

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190327

Year of fee payment: 13