CZ303705B6 - Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloucenina pro pouzití jako inhibitor proteinkináz a farmaceutická kompozice s jejím obsahem - Google Patents

Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloucenina pro pouzití jako inhibitor proteinkináz a farmaceutická kompozice s jejím obsahem Download PDF

Info

Publication number
CZ303705B6
CZ303705B6 CZ20023081A CZ20023081A CZ303705B6 CZ 303705 B6 CZ303705 B6 CZ 303705B6 CZ 20023081 A CZ20023081 A CZ 20023081A CZ 20023081 A CZ20023081 A CZ 20023081A CZ 303705 B6 CZ303705 B6 CZ 303705B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
pyrrole
oxo
ylidenemethyl
carboxylic acid
amide
Prior art date
Application number
CZ20023081A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20023081A3 (cs
Inventor
Cho Tang@Peng
Miller@Todd
Li@Xiaoyuan
Sun@Li
Chen Wei@Chung
Shirazian@Shahrzad
Liang@Congxin
Vojkovsky@Tomas
S. Nematalla@Asaad
Hawley@Michael
Original Assignee
Sugen, Inc.
Pharmacia & Upjohn Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27391578&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ303705(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sugen, Inc., Pharmacia & Upjohn Company filed Critical Sugen, Inc.
Publication of CZ20023081A3 publication Critical patent/CZ20023081A3/cs
Publication of CZ303705B6 publication Critical patent/CZ303705B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Abstract

Pyrrolem substituované 2-indolinonové slouceniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky prijatelné soli, které modulují aktivitu proteinkináz, jejich pouzití pro výrobu léciva pro prevenci a lécbu bunecných poruch souvisejících s proteinkinázou, jako je rakovina.

Description

Předložený vynález se týká určitých 3-pyrrolem substituovaných 2-indolinonů, které modulují aktivitu proteinkináz („PK“). Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou proto účinné při ošetření poruch spojených s abnormální aktivitou PK. Dále se předložený vynález týká farmaceutických přípravků zahrnujících tyto sloučeniny, způsobů ošetření onemocnění pomocí farmaceutických přípravků zahrnujících tyto sloučeniny a způsobů jejich přípravy.
Dosavadní stav techniky
Následující popis má pouze informativní charakter a neklade si za cíl být známým stavem techniky předloženého vynálezu.
PK jsou enzymy, které katalyzují fosforylaci hydroxyskupin na tyrosinových, serinových a threoninových zbytcích proteinů. Důsledky této zdánlivě jednoduché aktivity jsou ohromné; buněčný růst, diferenciace a proliferace, tzn. prakticky všechny aspekty života buňky tím či oním způsobem závisejí na aktivitě PK. Mimoto abnormální aktivita PK souvisí se spoustou poruch sahajících od relativně život neohrožujících onemocnění, jako je psoriáza, až po extrémně virulentní onemocnění, jako je glioblastom (rakovina mozku).
PK je možno výhodně rozdělit do dvou skupin, na proteinové tyrosinkinázy (PTK) a serin-threoninkinázy (STK).
Jedním z hlavních aspektů aktivity PTK je jejich účast na receptorech růstového faktoru. Receptory růstového faktoru jsou proteiny buněčného povrchu. Pokud se na ně naváže ligand růstového faktoru, přecházejí receptory růstového faktoru na aktivní formu, která interaguje s proteiny na vnitřním povrchu buněčné membrány. To vede k fosforylaci na tyrosinových zbytcích receptoru a dalších proteinech a k tvorbě komplexů s různými cytoplazmatickými signálními molekulami uvnitř buňky, které pak ovlivňují velký počet buněčných odpovědí, jako je buněčné dělení (proliferace), buněčná diferenciace, buněčný růst, exprese metabolických efektů do extracelulárního mí kro pro středí atd. Pro detailnější informace viz Schlessinger and Ullrích, Neuron, 9: 303 - 391 (1992), na jejichž práci je zde odkazováno, včetně veškerých obrázkům jako by plně byla uvedena zde.
Receptory růstového faktoru s aktivitou PTK jsou známy jako receptorové tyrosinkinázy („RTK“). Zahrnují velkou rodinu transmembránových receptorů s rozličnými biologickými aktivitami. Dosud bylo identifikováno alespoň 19 různých podskupin RTK. Příklad těchto RTK zahrnuje podskupinu označovanou jako „HER“ RTK, která zahrnuje EGFR (receptor epiteliálního růstového faktoru), HER2, HER3 a HER4. Tyto RTK se sestávají z extracelulámí gly kosy lované vazebné domény ligandu, transmembránové domény a intracelulámí cytoplazmatické katalytické domény, která může fosforylovat tyrosinové zbytky na proteinech.
Další podrod i na RTK se sestává z receptoru inzulínu (IR), receptoru inzulínového typu růstového faktoru 1 (IGF-1R) a příbuzného receptoru inzulínu (IRR). IR a IGF-1F interagují s inzulínem, 1GF-I a IGF—II za vzniku heterotertameru dvou zcela extracelulárně glykosylovaných a. podjednotek a dvou β podjednotek, které protínají buněčnou membránu a obsahují tyrosinkinázovou doménu.
Třetí podrodína RTK se označuje jako skupina receptorů růstového faktoru odvozeného od destiček („PDGF), která zahrnuje PDGFRa, PDGFRp, CSF1R, c-kit a c-fms. Tyto receptory se sestávají z gly kosy Iovaných extracelulámích domén složených z různého počtu kliček imunoglobulinového typu a intracelulámí domény, kde tyrosinkínázová doména je přerušena nepříbuznými aminokyselinovými sekvencemi.
Další skupinou, která v důsledku své podobnosti s podrodinou PDGFR je někdy zahrnována do posledně uvedené skupiny, je podrodina receptorů fetální jatemí kinázy („flk“). Předpokládá se, že tuto skupinu tvoří receptor obsahující doménu kinázového insertu pro fetální jatemí kinázu-1 (KDR/FLK-1, VEGF-R2), flk-1R, flk—4 a tyrosinkináza 1 typu fms (fit—1).
Dalším členem rodiny tyrosinkinázového receptoru růstového faktoru je podskupina receptorů fibroblastového růstového faktoru („FGF“). Tato skupina se sestává ze čtyř receptorů, FGFR1-4, a sedmi ligandů, FGF1-7. I když nejsou ještě plně definovány, lze říci, že se receptory skládají z glykosylované extracelulámí domény obsahující různý počet kliček imunoglobulinového typu, a intracelulámí domény, ve které je tyrosinkínázová sekvence přerušena oblastmi nepříbuzných aminokyselinových sekvencí.
Ještě dalším členem podskupiny tyrosinkinázového receptoru růstového faktoru je podskupina receptoru růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk („VEGF“). VEGF je dimemí glykoprotein podobný PDGF, nicméně má jiné biologické funkce a cílově buněčnou specifitu in vivo. Konkrétně se v současné době předpokládá, že má důležitou roli při vaskulogenezi a angiogenezi.
Úplný seznam známých podrodin RTK je popsán v Plowman et al, DN&P, 7(6): 334 — 339 (1994), na jejichž práci je zde odkazováno, včetně kterýchkoliv obrázků, jako by plně bylo uvedeno zde.
Kromě RTK také existuje rodina zcela intracelulámích PTK označovaná nereceptorové tyrosinkinázy („non-receptor tyrosin kinases“) nebo také „buněčné tyrosinkinázy“. Dále bude v popisu používána zkratka tohoto druhého označení, tzn. CTK. CTK neobsahují extracelulámí a trans mem brán ové domény. Do současnosti bylo identifikováno 24 jednotlivých CTK zahrnujících (11) podrodin (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes, Fps, Fak, Jak a Ack). Podrodina Src je v současnosti tvořena největším počtem CTK a zahrnuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Lek, Blk, Hek, Fgr a Yrk. Podrobnější diskusi CTK poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025 - 2031, na jejichž práci je zde odkazováno, včetně kterýchkoliv obrázkům jako by plně bylo uvedeno zde.
Serin/threoninkinázy, STK, typu STK, jsou převážně intracelulámí, ačkoliv existuje několik receptorových kináztypu STK. STK jsou nejčastěji cytosolové kinázy, tzn. kinázy, které vykonávají svoji funkci v jiné části cytoplazmy, než se nacházejí cytoplazmatické organely a cytoskelet. Cyto sol je oblast v buňce, ve které se vyskytuje velké množství buněčné interrnediámí metabolieké a biosyntetické aktivity, např. syntéza proteinů na ribozómech probíhá v cytosolu.
Bylo zjištěno, že mnohé RTK, CTK a STK se podílejí se na četných patogenních stavech hostitele, včetně, výrazně, na rakovině. Další patogenní stavy související s PTK zahrnují, ale není to nikterak limitováno, psoriázu, hepatickou cirhózu, diabetes, angiogenezi, restenózu, oční onemocnění, revmatoidní artritidu a další zánětlivé poruchy, imunologické poruchy, např. autoimunitní choroba, kardiovaskulární onemocnění, např. ateroskleróza a různé renální poruchy.
Co se týče rakoviny, uvádějí se dvě hlavní zdokonalené hypotézy, jež vysvětlují nadměrnou buněčnou proliferaci, která řídí vznik nádoru souvisejícího s funkcemi, o kterých je známo, že jsou regulovány PK. Předpokládá se, že maligní buněčný růst je výsledkem poruchy mechanizmu, která řídí buněčné dělení a/nebo diferenciaci. Bylo zjištěno, že proteinové produkty mnoha protoonkogenů se podílejí na transdukčních dráhách signálu, které regulují buněčný růst a diferenciaci. Tyto proteinové produkty protoonkogenů zahrnují extracelulámí růstové faktory, transmembránové receptory růstového faktoru PTK (RTK), cytoplazmatické PTK (CTK) a cytosolové STK, vseje popisováno výše.
-2 CZ 303705 B6
Vzhledem ke zřejmému vztahu mezi buněčnými aktivitami souvisejícími sPK a širokou škálou lidských poruch, není překvapením, zeje vynakládáno velké úsilí identifikovat způsoby modulace aktivity PK. Některé z těchto záměrů také zahrnovaly biomimetické postupy využívající velké molekuly k identifikaci PD podílejících se na konkrétních buněčných procesech (např. mutantních ligandů, U.S. patentová přihláška 4 966 849), rozpustných receptorech a protilátkách (přihláška WO 94/10 202; Kendall & Thomas, 1994, Proč. Nati. Acad. Sci. 90: 10705 - 09; Kim et al., 1993, Nátuře 362: 841 - 844), RNA ligandů (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 1045056; Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Cell 4: 358A; Kinsella, et al. 1992, Exp. Cell Res. 199: 56 - 62; io Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448 - 57) a inhibitorech tyrosinkináz (WO 94/03 427; WO 92/21 660; WO 91/15 495; WO 94/14 808; U.S. patent 5 330 992; Mariani, et al. 1994,
Proč. Am. Assoc. Cancer Res. 35: 2268).
Kromě výše uvedeného byly v poslední době činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako inhibitory PK. Například bismonocyklické, bicyklické nebo heterocyklické arylové sloučeniny (PCT WO 92/02 642) a vinylen—azaindolové deriváty (PCT WO 94/14 808) a I cyklopropyl—4 pyridylchinolony (U.S. 5 330 992) se obecně popisují jako tyrosinkinázové inhibitory. Styrylové sloučeniny (U.S. patent 5 217 999), styryl-substituované pyridylové sloučeniny (U.S. patent 5 302 606), některé chinazolinové deriváty (EP 0 566 266 Al), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03 427), tricyklické polyhydroxylické sloučeniny (PCT WO 92/21 660) a sloučeniny benzylfosfonové kyseliny (PCT WO 91/15 495) se popisují jako sloučeniny pro použití jako inhibitory PTK pro použití při léčbě rakoviny.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se týká určitých 3-pyrrolem substituovaných 2-indolinonových sloučenin, které vykazují PK modulační schopnost, a tudíž jsou použitelné při ošetření poruch souvisejících s abnormální aktivitou PK.
Předmětem vynálezu je pyrrolem substituovaná 2-índolinonová sloučenina obecného vzorce I:
nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde:
R1 má význam vybraný z vodíku, (C]-C4)alkylu, -(CH2)rR1Ř a-C(O)NR8R9,
R2 má význam vybraný z vodíku, halogenu, (C|-CI2)arylu a -S(O)2NR13R14,
R3 má význam vybraný z vodíku, (C]-C4)alkylu, (Ci~C4)alkoxy, (C]-C4)arylu, heteroarylu 40 a-C(O)R15,
R4 je vodík,
-3CZ 303705 B6
R5 má význam vybraný z vodíku a (C]-C4)alkylu,
R6 je-C(O)R'°,
R7 má význam vybraný z vodíku, (Ci-C4)alkylu a (C)-C4)arylu,
R8 a R9 mají význam nezávisle vybraný z vodíku, (Ci-C4)alkylu a (Ci-C4)arylu,
R10 je -N(RH)(CH2)nR12, kde n je 1, 2 nebo 3, R11 je vodík a Rt2 má význam vybraný z hydroxy, (C|-C4)alkoxy, -C(O)R15, heteroarylu a-NR13R14,
R13 a R14 mají význam nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z vodíku, (Cj—C4)alkylu, (C3-Cg)cykloalkylu, (Ci-C]2)arylu a heteroarylu, nebo
R13 a Rt4 mohou být spojeny a tvořit heterocykloskupinu,
R15 má význam vybraný z vodíku, hydroxy, (Ci-C4)alkoxy a aryloxy,
R16 má význam vybraný z hydroxy a -C(O)Rlř a r je 2 nebo 3, a kde:
alkoxy označuje O-alkyl nebo O-cykloalkyl, aryloxy označuje O-(Ci-Ct2)aryl nebo O-heteroaryl, heteroaryl označuje monocyklickou nebo kondenzovanou kruhovou skupinu s 5 až 12 členy kruhu, obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané zN, O nebo Sa zbylé atomy kruhu jsou C, heterocykloskupina označuje nasycený kruhový zbytek se 3 až 8 atomy kruhu, kde jeden nebo dva atomy kruhu jsou tvořeny heteroatomy vybranými zN, O nebo S(O)n, kde n je celé číslo od 0 do 2, a zbylé atomy kruhu jsou C, kde jeden nebo dva C atomy jsou případně nahrazeny karbonyiovou skupinou, alkyly, alkoxyskupiny a cykloalkylové skupiny jsou nesubstituované, arylové a heteroarylové skupiny jsou případně substituované jedním nebo dvěma substituenty, nezávisle vybranými z halogenu, (Ci~C4)alkylu, trihalogen(Ci-C4)alkylu, hydroxy, merkapto, kyano, Λ-amido. mono- nebo di(Ci-C4)alkylamino, karboxy a V-sulfonamido, heterocykloskupina je případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, (Ci-C4)alkylu, -(C]-jC4)alkyl-karboxy, -(C|-C4)alkyl-esteru, hydroxy lu a mono- nebo di(C|-C4)alkylaminoskupiny.
Výhodně mají R13 a R14 význam nezávisle vybraný z vodíku, (C]-C4)alkylu, heteroarylu, a jsou-li spojeny, -(CH2)4- -(CH2)5-, 4CH2)HHCH2)2- a -XCH2)2N(CH3)(CH2)2-.
Výhodně je n rovno 2 nebo 3 a R12 je -NR13R14, kde R13 a Rie jsou nezávisle (Cj-C4)alkyl.
Výhodné je, jestliže n je 2 nebo 3 a R12 je -NR13R14, kde R,s a R14 jsou spojeny do skupiny vybrané z 4CH2)4-, -(CH2)5-, ~(CH2)2-CHCH2)2- nebo -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
-4CZ 303705 B6
Výhodné jsou sloučeniny, kde Rl je -C(O)NR8R9, kde R8 je vodík a R9 je aryl.
Předmětem předloženého vynálezu je rovněž farmaceutická kompozice obsahující jednu nebo více sloučenin obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přija5 telný excipient.
Předmětem předloženého vynálezu je dále použití sloučenin podle vynálezu pro výrobu léčiva pro ošetření onemocnění zprostředkovaných abnormální aktivitou proteinkináz, konkrétně reccptorových tyrosinkináz (RTK), nereceptorových proteinových tyrosinkináz (CTK) a proteinových serin/threoninkináz (STK), v organizmu, zejména lidském, které zahrnuje podání farmaceutického přípravku obsahujícího sloučeninu obecného vzorce I do uvedeného organizmu. Taková onemocnění zahrnují, ale neomezují se na ně, například rakovinu, diabetes, hepatickou cirhózu, kardiovaskulární onemocnění, např. aterosklerózu, angiogenezi, imunologické onemocnění, např. autoímunítní onemocnění, a renální onemocnění.
15
Účinek sloučenin podle vynálezu je založen na modulaci katalytické aktivity PK, zejména receptorových tyrosinkináz (RTK), nereceptorových proteinových tyrosinkináz (CTK) a proteinových serin/threoninkináz (STK), sloučeninami podle předloženého vynálezu, která může být prováděna in vitro nebo in vivo. Konkrétně je receptorová proteinkináza, jejíž katalytická aktivita je modulována sloučeninou podle předloženého vynálezu, vybrána ze skupiny sestávající se zEGF, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1R, IRR, PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, C-Kít, C-fms, Flk-IR, Flk4, KDR/Flk-1, FIt-1, FGFR1R. FGFR-2R, FGFR-3R a FGFR-4R. Buněčná tyrosinkináza, jejíž katalytická aktivita je modulována sloučeninou podle předloženého vynálezu, je vybrána ze skupiny sestávající se z Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack,
Yes, Fyn, Lyn, Blk, Hek, Fgr a Yrk. Proteinová serin-threoninkináza, jejíž katalytická aktivita je modulována sloučeninou podle předloženého vynálezu, je vybrána ze skupiny sestávající se z CDK2 a Raf.
Pro přípravu sloučenin podle vynálezu je možno použít meziproduktu obecného vzorce II:
ve kterém substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a -C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny, -C(O)R17 a -C(O)R10 substituenty R6 a R7 mohou být spojeny dohromady za vzniku skupiny vybrané ze skupiny sestávající se z -(CH2)4- -(CH2)5- a -(CH2)6-; s výhradou spočívající v tom, že alespoň jeden ze substituentů R5, R6 nebo R7 musí být -C(O)R,!t:
-5CZ 303705 B6 substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aryloxyskupiny, -N(R* f)(CH2)nR12 a -NRI3R14;
substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny;
substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z -NR13R14, hydroxyskupiny, -C(O)R15, arylové a heteroarylové skupiny;
substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny, kyanoalkylové skupiny, cykloalkylové skupiny, arylové a heteroarylové skupiny; nebo substituent, R13 a Rt4 mohou být spojeny dohromady za vzniku heterocyklové skupiny;
substituent R15 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny a aryloxyskupiny;
substituent Ri7 je vybrán ze skupiny sestávající se z alkylové skupiny, cykloalkylové skupiny, arylové skupiny a heteroarylové skupiny; a n je 1,2, 3 nebo 4.
Výhodně jsou substituenty R5 nebo R6 ve sloučenině obecného vzorce II -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu;
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu, pokud substituent R6je -COR10;
substituent Ró je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu, pokud substituent R5 je -COR10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové skupiny a arylové skupiny, výhodněji atomu vodíku, methylu nebo fenylu;
substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -N(R,l)(CH2)nR12a-NR,3R14;
substituent R11 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodněji atomu vodíku nebo methylu;
substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z-NR1JR14;
substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku nebo alkylové skupiny; nebo substituenty Rn a R'4 mohou být spojeny dohromady za vzniku heterocykloskupiny; a n je 1,2 nebo 3.
V rámci výše uvedených výhodných skupin zahrnují výhodnější skupiny meziproduktů, ve kterých substituenty R5, R6, R11, R12, R' nebo Rlč jsou nezávisle skupiny popsané v sekci označené „výhodné skupiny“ uvedené níže.
Pomocí sloučenin podle vynálezu je možná identifikace chemické sloučeniny, která moduluje katalytickou aktivitu proteinkinázy, uvedením buněk exprimujících uvedenou proteinkinázu
-6-I v kontakt se sloučeninou nebo solí podle předloženého vynálezu a následným monitorováním účinku na uvedené buňky.
Detailní popis vynálezu
Definice
Pokud není uvedeno jinak, mají následující termíny používané při popisu a v patentových náro10 cích tento význam:
Termín „alkylová skupina“ se vztahuje na nasycený alifatický uhlovodíkový radikál zahrnující skupiny s lineárním nebo rozvětveným řetězcem mající 1 až 20 atomů uhlíku (pokaždé když je uvedeno číselné rozmezí, např. „1-20“, znamená to, že skupina, v tomto případě alkylová skupi15 na, může obsahovat 1 atom uhlíku, 2 atomy uhlíku, 3 atomy uhlíku, atd. až 20 atomů uhlíku včetně). Alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku jsou označeny nižší alkylové skupiny. Pokud uvedené nižší alkylové skupiny nemají substituenty, pak jsou označovány jako nesubstituované nižší alkylové skupiny. Výhodněji je alkylová skupina alkylová skupina střední velikosti s 1 až 10 atomy uhlíku, např. methyl, ethyl, propyl, 2-propyl, «-butyl, zzo-butyl, /erc-butyl, pentyl, atd. Nej výhodněji má nižší alkylová skupina 1 až 4 atomy uhlíku, např. methyl, ethyl, propyl,
2-propyl, «—butyl, zzo-butyl nebo fórc-butyl, atd. Alkylová skupina může být substituovaná nebo nesubstituovaná. Pokud je substituována, je substituent(y) výhodně jeden nebo více, výhodněji jeden až tří, nejvýhodněji jeden nebo dva substituent(y) nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkylová skupina, aryloxyskupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami, výhodné jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 atomy dusíku v kruhu, přičemž uhlíky v kruhu jsou případně substituovány jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z atomů dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy dusíku a uhlíku ve skupině jsou případně substituovány jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, kteréjsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5- nebo 6-členná heteroalicyklická skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síiy, přičemž an»nv uhlíku a Juříku (pokud je přítomen) ve skupině jsou případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, merkaptoskupina, (nesubstituovaná nižší alkyl)thioskupina, arylthioskupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, kyanoskupina, acylová skupina, thioacylová skupina, ČX-karbamylová skupina, A-karbamylová skupina, O thiokarbamylová skupina, A-thiokarbamylová skupina, C-amidoskupina, Λ-arnidoskupina, nitroskupina, A-sulíonamidoskupina. 5sulfonamidoskupina, R!8S(O)-, RI8S(O)2-, -C(O)ORts, R,8C(O)O- a-NRtsR19, kde substituenty
R18 a RIV jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenmethylu, nesubstituované (C3-CĎ)cykloa Iky lové skupiny, nesubstituované nižší alkenylové skupiny, nesubstituované nižší alkynylové a arylové skupiny případně substituované jednou nebo více skupinami výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina.
-7 CZ 303705 B6
Výhodně je alkylová skupina substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, 5- nebo 6-ělenné heterocyklické skupiny mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síiy, přičemž atomy uhlíku a dusíku (pokud je přítomen) ve skupině jsou případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy uhlíku a dusíku ve skupině jsou případně io substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 atomy dusíku v kruhu, přičemž uhlíky v kruhu jsou případně substituované jednou nebo více skupinami, výhodně jednou, dvěma nebo třemi skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, nebo -MR18Ri9, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nesubstituované nižší alkylové skupiny. Ještě výhodněji je alkylová skupina substituovaná jedním nebo dvěma substituenty, které jsou nezávisle jeden na druhém hydroxyskupina, dimethylaminoskupina, ethyl aminoskupina, diethylaminoskupina, dipropylaminoskupi20 na, pyrrolidinoskupina, piperidinoskupina, morfolinoskupina, piperazinoskupina, 4—nižší alkylpiperazinoskupina, fenyl, imidazolyl, pyridinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, oxazolyl, triazinyl apod.
Termín „cykloalkylová skupina“ se vztahuje na 3 až 8členný čistě uhlíkatý monocyklický kruh, čistě uhlíkatý 5-ti/6-ti členný nebo 6—ti/6—ti členný kondenzovaný bicyklický kruh nebo multicyklický kondenzovaný kruh („kondenzovaný“ kruhový systém v systému), kde jeden nebo více kruhů může obsahovat jednu nebo více dvojných vazeb, ale žádný z kruhů nemá kompletně konjugovaný π-elektronový systém.
Příklady, ale neomezující, cykloalkýlových skupin zahrnují cyklopropan, cyklobutan, cyklopentan, cyklopenten, cyklohexan, cyklohexadien, adamantan, cykloheptan, cykloheptatrien apod. Cykloalkylová skupina může být substituovaná nebo nesubstituovaná. Pokud je substituovaná, je substituent(y) výhodně jeden nebo více, výhodněji jeden nebo dva substituenty, nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, které nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, aryloxyskupina případně substituovaná jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, která nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 6-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 atomy dusíku v kruhu, přičemž uhlíky v kruhu jsou případně substituovány jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, které jsou nezávisle jedna na druhé halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5-členná heteroarylová skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybra45 né ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, přičemž atomy uhlíku a dusíku skupiny jsou případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, kde nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, 5-ti nebo 6-ti členná heterocyklická skupina mající 1 až 3 heteroatomy vybrané ze skupiny sestávající se z dusíku, kyslíku a síry, atomy uhlíku a dusíku (pokud je přítomen) ve skupině jsou případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma skupinami, kde nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxyskupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina, merkaptoskupina, (nesubstituovaná nižší alkyl)thioskupina, arylthioskupina případně substituovaná jednou nebo více, výhodně jednou nebo dvěma, skupinami, kde nezávisle jedna na druhé je halogen, hydroxy55 skupina, nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo nesubstituovaná nižší alkoxyskupina,
-8CZ 303705 R6 kyanoskupina, acylová skupina, thioacylová skupina, C-karbamyL A—karhamyl. C-thiokarbamyl, A-thiokarbamyl, C-amidoskupina, A-amidoskupina, nitroskupina, Asulfonainidoskupina, S-sulfonamidoskupina, R18S(O)-, R18S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- a -NR,8R19 mají význam definovaný výše.
Termín „alkenylová skupina“ se vztahuje na nižší alkylovou skupinu definovanou v předloženém vynálezu sestávající se z alespoň dvou atomů uhlíku a alespoň jedné dvojné vazby uhlík—uhlík. Reprezentativní příklady zahrnují, ale neomezují se na ně, ethenyl, 1-propeny 1, 2-propenyl, 1-,
2- nebo 3-butenyl apod.
Termín „alkynylová skupina“ se vztahuje na nižší alkylovou skupinou definovanou v předloženém vynálezu sestávající se z alespoň dvou atomů uhlíku a alespoň jedné trojné vazby typu uhlík—uhlík. Reprezentativní příklady zahrnují, ale neomezují se na ně, ethynyl, 1-propynyl, 2propynyl, 1-, 2- nebo 3-bu ty nyl apod.
Termín „arylová skupina“ se vztahuje na čistě uhlíkaté monocyklické nebo kondenzované polycyklické (tzn. kruhy, které sdílejí sousední páry atomů uhlíku) skupiny mající 1 až 12 atomů uhlíku s kompletně konjugovaným π-elektronovým systémem. Příklady arylových skupin, aniž se na ně omezují, zahrnují fenyl, naftalenyl a anthracenyl. Arylové skupiny mohou být substituované nebo nesubstituované. Pokud jsou substituované, je substituovaná skupina(y) výhodně jedna nebo více, výhodněji jedna, dvě nebo tři, ještě výhodněji jedna nebo dvě, nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z substituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituované nižší alkyl)thioskupiny, kyanoskupiny, acylové skupiny, thioacylové skupiny, C-karbamylu, Λ-karbamylu, O-thiokarbamylu, A-thiokarbamylu, C-amidoskupiny, A-amidoskupiny, nitroskupiny, A-sulfonamidoskupiny, A-sulfonamidoskupiny, R18S(O)-, R18$(O)2 . -C(O)OR18, R18C(O)O- a -NRl8R19, kde substituenty R18 a R19 mají shora definovaný význam. Výhodně je arylová skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny, A-amidoskupiny, mono nebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny nebo A-sulfonamidoskupiny.
Termín „heteroarylová skupina“ se vztahuje na monocyklickou nebo kondenzovanou kruhovou (tzn. kruhy, jež společně sdílejí sousedící páry atomů uhlíku) skupinu mající 5 až 12 atomů v kruhu a obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy v kruhu vybrané zN, O nebo S a zbývající atomy v kruhu jsou C a navíc mající kompletně konjugovaný π-elektronový systém. Příklady nesubstituovaných heteroarylových skupin zahrnují, ale není to na ně omezeno, pyrrol, furan, thiofen, imidazol, oxazol, thiazol, pyrazol, pyridin, pyrimidin, chinolin, izochinolin, purin a karbazol. Heteroarylové skupiny mohou být substituované nebo nesubstituované. Pokud jsou substituované, pak substituovaná skupina(y) je výhodně jedna nebo více, výhodněji jedna, dvě nebo tři, ještě výhodněji jedna nebo dvě, nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituované nižší alkyl)thioskupiny, kyanoskupiny, acylové skupiny, thioacylové skupiny, C-karbamylu, A—karbamylu, C-thiokarbamylu, A-thiokarbamylu, C-amidoskupiny, A-amidoskupiny, nitroskupiny, A-sulfonamidoskupiny, 5sulfonamidoskupiny, Rl8S(O)-, R1ŠS(O)2-, -C(O)OR18, R,8C(O)O-a-NR,8R19, kde substituenty R18 a R19 mají shora definovaný význam. Výhodně je heteroarylová skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny, A-amidoskupiny, mono nebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny nebo A-sulfonamidoskupiny·
Termín „heteocyklický“ se vztahuje na skupinu monocyklického kruhu nebo kondenzovaného kruhu(ů) mající 5 až 9 atomů v kruhu, kde jeden nebo dva atomy v kruhu jsou heteroatomy vybrané zN, O nebo S(O)n (kde n je celé číslo od 0 do 2) a zbývající atomy v kruhu jsou C.
-9CZ 303705 B6
Kruhy mohou mít také jednu nebo více dvojných vazeb. Nicméně kruhy nemají kompletně konjugovaný π elektronový systém. Příklady nesubstituovaných heteroalicyklických skupin zahrnují, ale není to nikterak limitováno, pyrrolidinoskupinu, piperidinoskupinu, piperazinoskupinu, morfolinoskupinu, thiomorfolinoskupinu, homopiperazinoskupinu, atd. Heterocyklický kruh může být substituovaný nebo nesubstituovaný. Pokud je substituovaný, pak substituovaná skupina(y) je výhodně jedna nebo více, výhodněji jedna, dvě nebo tři, ještě výhodněji jedna nebo dvě, nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, halogenu, hydroxyskupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, (nesubstituované nižší alkyl )th ioskup iny, kyanoskupiny, acylové skupiny, thioacylové skupiny, O-karbamylu, Λ-karbamylu, ČMhiokarbamylu, Λ-thiokarbamylu, C-amidoskupiny, 7V_amidoskupiny, nitroskupiny, Λ-sulfonamidoskupiny, S-sulfonamidoskupiny, R'*S(O)-, R,8S(O)2-, -C(O)OR18, R18C(O)O- a -NR18R19, kde substítuenty R,s a R19 mají shora definovaný význam.
Výhodně je heteroalicyklická skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substítuenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenalkylové skupiny, hydroxyskupiny, merkaptoskupiny, kyanoskupiny, Λ-amidoskupiny, mono nebo dialkylaminoskupiny, karboxyskupiny nebo Λ-sulfonam i došku piny.
Termín „heterocykl“ znamená nasycený cyklický radikál mající 3 až 8 atomů v kruhu, kde jeden nebo dva atomy v kruhu jsou heteroatomy vybrané z N, O nebo S(O)n (kde n je celé číslo od 0 do 2), zbývající atomy v kruhu jsou C, kde jeden nebo dva atomy uhlíku mohou být případně nahrazeny karbonylovou skupinou. Heterocyklylový kruh může být případně substituován jedním, dvěma nebo třemi substítuenty vybranými z případně substituované nižší alkylové skupiny (substituovaná jedním nebo dvěma substítuenty nezávisle vybranými z karboxyskupiny nebo esteru), halogenalkylová skupiny, kyanoalkylové skupiny, halogenu, nitroskupiny, kyanoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, aminoskupina, monoalkylaminoskupiny, dialkylaminoskupiny, aralkylové skupiny, heteroaralkylové skupiny, -COR (kde substituent R je alkylová skupina) nebo COOR, kde substituent Rje atom vodíku nebo alkylová skupina.
Podrobněji termín heterocyklyl zahrnuje, ale není to nikterak limitováno, tetrahydropyranyl, 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan, piperidinoskupina, V-methylpiperidin-3-yl, piperazinoskupina, Nmethylpyrrolidin-3-yl, 3-pyrrolidinoskupina, morfolinoskupina, thiomorfolinoskupina, thiomorfolino- 1-oxid, thiomorfolino-l,l-dioxid, 4-ethyloxykarbonylpiperazinoskupina, 3-oxopiperazinoskupina, 2-imidazolidon, 2-pyrrolidinon, 2-oxohomopiperazinoskupina, tetrahydropyrimidin2-on ajejich deriváty.
Výhodně je heterocyklylová skupina případně substituovaná jedním nebo dvěma substítuenty nezávisle vybranými z halogenu, nesubstituované nižší alkylové skupiny, nižší alkylové skupiny substituované karboxyskupiny, esterem hydroxyskupiny, mono nebo dialkylaminoskupinou. Termín „hydroxyskupina“ se vztahuje na skupinu -OH.
Termín „alkoxyskupina“ se vztahuje na skupinu -O- (nesubstituovaná alkylová skupina) a -O- (nesubstituovaná nebo cykloalkylová skupina). Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limitováno, např, methoxyskupinu, ethoxyskupinu, propoxyskupinu, butoxyskupinu, cyklopropyloxyskupinu, cyklobutyloxyskupinu, cyklopentyloxyskupinu, cyklohexyloxyskupinu, atd.
Termín „aryloxyskupina“ se vztahuje na-O-arylovou skupinu, -O-heteroarylovou skupinu definovanou v předloženém vynálezu. Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limitováno, fenoxyskupinu, pyridinyloxyskupinu, furanyloxyskupinu, thienyloxyskupinu, pyrimidinyloxyskupinu, pyrazinyloxyskupinu, atd. ajejich deriváty.
Termín „merkaptoskupina“ se vztahuje na skupinu -SH,
- 10CZ 303705 B6
Termín „alkylthioskupina“ se vztahuje na skupinu -S- (nesubstituovaná alkylová skupina) i -S(nesubstituovaná cykloalkýlová skupina). Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limitováno, např. methylthioskupinu, ethylthioskupinu, propyIthioskupinu, butylthioskupinu, cyklopropylthioskupinu, cyklobutylthioskupinu, cyklopentylthioskupinu, cyklohexylthioskupinu. atd.
Termín „arylthioskupina“ se vztahuje na —S—arylovou skupinu i S- heteroary lovou skupinu definovanou v předloženém vynálezu. Reprezentativní příklady zahrnují, ale není to nikterak limito10 váno, fenylthioskupinu, pyridinylthioskupinu, furanylthioskupinu, thienylthioskupinu. pyrimidinylthioskupinu, atd. ajejich deriváty.
Termín „acylová skupina“ se vztahuje na skupinu -C(O)-R'', kde substítuent R je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogen15 methylu, nesubstituované cykloalkylové skupiny, arylové skupiny, případně substituované jednou nebo více, výhodně jednou, dvěma nebo třemi, substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogenmethylu, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, halogenu a skupin —NR18R19, heteroarylové skupiny (vázaná přes uhlíkové atomy v kruhu) případně substituované jedním nebo více, výhodně jedním dvěma nebo třemi, substitu20 enty vybranými ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, tríhalogenalkylové skupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, halogenu a skupiny -NR1SR19 a heterocyklické skupiny (vázaná přes uhlíkové atomy v kruhu), případně substituované jedním nebo více, výhodně jedním, dvěma nebo třemi, substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z nesubstituované nižší alkylové skupiny, trihalogen alky lové skupiny, nesubstituované nižší alkoxyskupiny, halogenu a skupin -NR,SR19. Reprezentativní acylové skupiny zahrnují, ale není to nikterak limitováno, acetyl, trifluoracetyl, benzoyl, atd.
Termín „aldehyd“ se vztahuje na acylovou skupinu, ve které substítuent R je atom vodíku.
Termín „thioacylóvá skupina“ se vztahuje na skupinu -C(S)-R, kde substítuent R je definován v předloženém vynálezu.
Termín „ester“ se vztahuje na skupinu -C(O)O-R, kde substítuent R je definován v předloženém vynálezu vyjma toho, že substítuent R nemůže být atom vodíku.
Termín „acetylová skupina“ se vztahuje na skupinu -C(O)CH3.
Termín „halogen“ se vztahuje na fluor, chlor, brom nebo jod, výhodně fluor nebo chlor.
Termín „trihalogenmethyl“ se vztahuje na skupinu -CX3, kde Xje halogen definovaný v předloženém vynálezu.
Termín „trihalogenmethansulfonyl“ se vztahuje na skupiny X3CS(=O)2~, kde X má shora definovaný význam.
Termín „kyanoskupina“ se vztahuje na skupinu -C=N.
Termín „methylendioxyskupina“ se vztahuje na skupinu -OC1TO -. kde dva atomy kyslíku jsou vázány na sousedící atomy uhlíku.
Termín „ethylendíoxyskupina“ se vztahuje na -OCH2CH20-, kde atomy kyslíku jsou vázány k sousedícím atomům uhlíku.
Termín „S-sulfonamidoskupina“ se vztahuje na skupinu -S(O)2NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín „Ύ-sulfonamidoskupina“ se vztahuje na skupinu -NRI8S(O)2R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín „0-karbamyl“ se vztahuje na skupinu -0C(O)NRI8R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín ,jV-karbamyl“ se vztahuje na skupinu -R18OC(O)NR19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín „(9-thiokarbamyl“ se vztahuje na skupinu ~OC(S)NRI8R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín ,gV-thiokarbamyl“ se vztahuje na skupinu -R,8OC(S)NR19- kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín „aminoskupina“ se vztahuje na skupinu -NR18R19, kde substituenty R18 a R19jsou oba atomy vodíku.
Termín „C-amidoskupina“ se vztahuje na skupinu -C(O)NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín .JV-amidoskupina“ se vztahuje na skupinu RÍSC(O)NR19, kde substituenty R18 a R19 jsou definovány v předloženém vynálezu.
Termín „nitroskupina“ se vztahuje na skupinu -NO2.
Termín „halogenalkylová skupina“ se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituovaná nižší alkylová skupina, mající význam definovaný výše, kteráje substituovaná jedním nebo více stejnými nebo rozdílnými atomy halogenu, např. -CH2C1, -CF3, -CH2CF3, -ClTCCh. atd.
Termín „aralkylová skupina“ se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituovaná nižší alkylová skupina, mající význam definovaný v předloženém vynálezu, která je substituovaná arylovou skupinou mající význam definovaný výše, např. -CH2fenyl, 4CH2)2fenyl, -(CH2)3fenyl, Ctí3CH(CH,)CH2fenyl, atd. ajejich deriváty.
Termín „heteroaralkylová skupina“ se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituovaná nižší alkylová skupina, mající význam definovaný výše, která je substituovaná heteroarylovou skupinou, např. -CH2-pyridinyl, -(CH2)2-pyrimidinyl, -(CH2)3Ímidazolyl, atd. a jejich deriváty.
Termín „monoalkylaminoskupina“ se vztahuje na radikál -NHR, kde substituent Rje nesubstituovaná alkylová skupina nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina mající význam definovaný výše, např. methylaminoskupina, (1-methy lethyljaminoskupina, cyklohexylaminoskupina, atd.
Termín „dialkylaminoskupina“ se vztahuje na radikál -NRR, kde každý substituent R je nezávisle nesubstituovaná alkylová skupina nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina mající význam definovaný výše, např. dimethylaminoskupina, diethylaminoskupina, (1-methy lethy 1)ethylaminoskupina, cyklohexylmethylaminoskupina, cyklopentylmethylaminoskupina, atd.
- 12CZ 303705 B6
Termín „kyanoalkylová skupina“ se vztahuje na nesubstituovanou alkylovou skupinu, výhodně nesubstituované nižší alkylová skupina mající význam definovaný výše, která je nesubstituované jednou nebo dvěma kyanoskupinami.
Termín „volitelný“ nebo „případně“ znamená, že následně popsaný případ nebo okolnost sc může, ale nemusí, vyskytovat, a že popis zahrnuje situace, ve kterých se případ nebo okolnost vyskytuje, a situace, ve kterých se případ nebo okolnost nevyskytují. Například „heterocyklová skupina případně substituovaná alkylovou skupinou“ znamená, že alkylová skupina může, ale nemusí, být přítomná a popis zahrnuje situace, ve kterých heterocyklová skupina je substituovaná io alkylovou skupinou, a situace, ve kterých heterocyklová skupina není substituovaná alkylovou skupinou.
Termín „2-indolinon“, „indolin—2-on“ a „2-oxindol“ jsou použitelné zaměnitelným způsobem a vztahují se na molekulu mající chemickou strukturu
Termín „pyrrol“ se vztahuje na molekulu mající chemickou strukturu:
Termíny „pyrrolem substituovaný 2-indolinon“ a „3-pyrrolidenyl-2-indolinon“ jsou zde zaměnitelné a vztahují se na chemickou sloučeninu mající obecnou strukturu zobrazenou obecným vzorcem I.
Sloučeniny, které mají stejný molekulová vzorec, ale jsou odlišné v charakteru a sekvenci vazeb svých atomů nebo uspořádání svých atomů v prostoru, se nazývají „izomery“. Izomery, které jsou rozdílné v uspořádání svých atomů v prostoru, se nazývají „stereo izomery“. Stereo izomery,
1MV1V 1IVJOVU Z.1 VUU1M lil VU1UZ.VIII JVUVII U1UI1V11V, IIIU.JVUJJ WlllVl J , Í4 VJ JVJL JOVU JVMVH druhému nekryjícím se zrcadlovým obrazem, se nazývají „enantiomery“. Pokud se v molekule sloučeniny nachází asymetrické centrum, např. k tomuto centru jsou připojeny čtyři rozdílné skupiny, může tato molekula existovat ve dvou enantiomemích formách. Enantiomer může být charakterizován absolutní konfigurací svého asymetrického centra a je popsán Cahnovým30 Prelogovým pravidlem jako R a S nebo podle toho, jakým způsobem molekula stáčí rovinu polarizovaného světla (označení jako pravotočivá nebo levotočivá (+)-ízomer, resp. (-)—izomer). Chirální sloučenina může existovat buď jako jednotlivý enantiomer, nebo jako směs enantiomerů. Směs obsahující stejná množství enantiomerů je nazývána „racemická směs“.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou mít jedno nebo více asymetrických center, potom mohou být takové sloučeniny připraveny jako jednotlivé (R)~ a (5)- stereo izomery nebo jako jejich směsi. Například pokud substituent R6 ve sloučenině obecného vzorce I je
2-hydroxyethyl, pak uhlík, ke kterému je hydroxy skupina připojena, tvoří asymetrické centrum, a tudíž sloučenina obecného vzorce I může existovat jako (Rj- nebo (5j-stereoizomer. Pokud není uvedeno jinak, pak popis nebo označení jednotlivých sloučenin v popisné části a patentových nárocích bude zahrnovat oba enantiomery a jejich směsi, racemické nebo jiné. Způsoby
- 13CZ 303705 B6 stanovení stereochemie a separace stereoizomerů jsou standardně dobře známy (viz podrobnější diskuze v Chapter 4 of „Advanced Organic Chemistry“, 4th edition J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992).
Sloučeniny obecného vzorce I mohou vykazovat tautomerii a strukturní izomerii. Například sloučeniny popisované zde mohou být označeny jako E nebo Z konfigurace na dvojné vazbě spojující 2-indolinonovou část spyrrolovou částí nebo mohou být směs E a Z konfigurace. Předložený vynález zahrnuje jakoukoliv tautomemí nebo strukturní izomemí formu a jejich směsi, které mají schopnost modulace aktivity RTK, CTK a/nebo STK, a není nikterak omezen na jakoukoliv tautomemí nebo strukturní izomemí formu.
Termín „farmaceutický přípravek“ se vztahuje na směs jedné nebo více zde popisovaných sloučenin nebo jejich fyziologicky/farmaceuticky přijatelné soli nebo proléčiva společně s dalšími chemickými komponentami, např. fyziologicky/farmaceuticky přijatelnými nosiči a excipien15 ty. Účel farmaceutického přípravku je usnadnit podání sloučeniny do organizmu.
Sloučenina obecného vzorce I může také účinkovat jako proléčivo. Termín „proléčivo“ se vztahuje na látku, která se in vivo přeměňuje na vlastní léčivo. Proléčiva jsou často výhodná, protože v některých případech mohou být snadněji podávána než vlastní léčivo. Mohou být např. biolo20 gícky dostupné perorálním podáním, zatímco vlastní léčivo nikoliv. Ve farmaceutických přípravcích může mít proléčivo také zlepšenou rozpustnost než vlastní léčivo. Příkladem, ale bez omezení, proléčiva by byla sloučenina podle předloženého vynálezu, která je podávána jako ester („proléčivo“) k usnadnění přenosu přes buněčnou membránu, kde rozpustnost ve vodě je na škodu mobilitě, ale pak je metabolicky hydrolyzována na karboxylovou kyselinu, vlastní účinnou slou25 čeninu, jakmile je uvnitř buňky, kde je rozpustnost ve vodě prospěšná.
Dalším příkladem proléčiva může být krátký polypeptid, například, bez omezení, polypeptid o 2 až 10 aminokyselinových, vázaný přes terminální aminoskupinu ke karboxyskupině sloučeniny podle předloženého vynálezu, kde polypeptid je hydrolyzován nebo metabolizován in vivo k uvolnění aktivní molekuly. Proléčiva sloučeniny podle předloženého vynálezu I spadají do rozsahu předloženého vynálezu.
Navíc se uvažuje, že sloučenina obecného vzorce 1 by byla metabolizována enzymy v organizmu, např. lidském, na metabo lit, který může modulovat aktivitu proteinkináz. Tyto metabo lity spadají rovněž do rozsahu předloženého vynálezu.
Termín „fyziologicky/farmaceuticky přijatelný nosič“ se vztahuje na nosič nebo ředidlo, které nezpůsobuje významné podráždění organizmu a nenarušuje biologickou aktivitu a vlastnosti podávané sloučeniny.
Termín „farmaceuticky přijatelná excipient“ se vztahuje na inertní látku přidávanou do farmaceutického přípravku k dalšímu usnadnění podání sloučeniny. Příklady excipientů, bez omezení, zahrnují uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, různé cukry a typy škrobů, deriváty celulózy, želatinu, rostlinné oleje a polyethylenglykoly.
Termín „farmaceuticky přijatelná sůl“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na ty soli, které si uchovávají biologickou účinnost a vlastnosti mateřské sloučeniny. Tyto soli zahrnují:
(1) adiční soli s kyselinou, které jsou připraveny reakcí volné báze mateřské sloučeniny s anorganickými kyselinami, např. s kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou dusičnou, kyselinou fosforečnou, kyselinou sírovou a kyselinou ch lori stou, atp., nebo s organickými kyselinami, např. s kyselinou octovou, kyselinou šťavelovou, (D) nebo (L) kyselinou jablečnou, kyselinou maleinovou, kyselinou methansulfonovou, kyselinou ethansulfonovou, kyselinou /?-toluensulfonovou, kyselinou salicylovou, kyselinou vinnou, kyselinou citrónovou,
- 14CZ 303705 B6 kyselinou jantarovou nebo kyselinou malonovou, atp., výhodně kyselinou chlorovodíkovou nebo kyselinou (L)-jabléčnou, např. jako L-malátová sůl (2-diethylaminoethyl)amidu 5-{5-fluor-2oxo-1,2--dihydroindol-3-ylidenmethyl) 2,4 dimethyl-1/7-pyrro!-3-karboxylové kyseliny; nebo (2) soli připravené buď nahrazením kyselého protonu přítomného v mateřské sloučenině iontem kovu, např. ion alkalického kovu, ion alkalických zemin nebo hlinitý ion; anebo koordinací s organickou bází, např. ethanolaminem, díethanolaminem, triethanolaminem, tromethaminem, ýV-methylglukaminem, atd.
Termín „PK“ se vztahuje na receptorovou proteinovou tyrosinkinázu (RTK), nereceptorovou nebo „buněčnou“ tyrosinkinázu (CTK) a serin-threoninkinázy (STK).
Termín „způsob“ se vztahuje na způsoby, prostředky, techniky a procedury pro dosažení uvedeného záměru, včetně, ale není to nikterak limitováno, způsobů, prostředků, technik a procedur buď známých, nebo snadno vyvinutelných ze známých způsobů, prostředků, technik a procedur odborníky v chemických, farmaceutických, biologických, biochemických a lékařských oborech.
Termín „modulace“ nebo „modulující“ se vztahuje na změnu katalytické aktivity RTK, CTK a STK. Konkrétně se modulace vztahuje na aktivaci katalytické aktivity RTK, CTK a STK, výhodně aktivaci nebo inhibici katalytické aktivity RTK, CTK a STK, v závislosti na koncentraci sloučeniny nebo soli, které jsou RTK, CTK nebo STK vystaveny nebo, výhodněji inhibici katalytické aktivity, RTK, CTK a STK.
Termín „katalytická aktivita“ se vztahuje na míru fosforylace tyrosinu za vlivu, přímého či nepřímého, RTK a/nebo CTK nebo fosforylace šeřinu a threoninu za vlivu, přímého či nepřímého, STK.
Termín „uvedení v kontakt“ se vztahuje na uvedení sloučeniny podle předloženého vynálezu a cílové PK v kontakt takovým způsobem, aby sloučenina mohla ovlivnit katalytickou aktivitu PK, buď přímo, tzn. interakcí se samotnou kinázou, nebo nepřímo, tzn. interakcí s další molekulou, na které je katalytická aktivita kinázy závislá. Takové „uvedení v kontakt“ může být dosaženo „in vitro“, tzn. ve zkumavce, petriho misce, atd. Ve zkumavce může uvedení v kontakt zahrnovat pouze sloučeniny a PK dle výběru nebo může zahrnovat celé buňky. Buňky mohou být také udržovány nebo pěstovány v miskách ke kultivaci buněk a uvedeny v kontakt se sloučeninou v tomto prostředí. V této souvislosti může být schopnost jednotlivé sloučeniny ovlivňovat poruchy související s PK, tzn. hodnota IC50 sloučeniny, definovaná níže, stanovena před použitím sloučenin in vivo s komplexnějšími živými organizmy. Pro buňky mimo organizmus existuje mnoho způsobů, a jsou dobře známy odborné veřejnosti, včetně toho, jak uvést sloučeniny v kontakt, včemě, aie není to nikterak Íimitováno, přímé buněčné mikiuiujekoe a niuolio iceinnk s transmembránovým nosičem.
Termín „in vitro“ se vztahuje na způsoby prováděné v umělém prostředí, například, ale není to nikterak limitováno, ve zkumavce nebo kultivačním médiu.
Termín „in vivo“ se vztahuje na způsoby prováděné v živém organizmu, například, ale není to nikterak limitováno, v myším potkaním nebo králičím.
Termíny „porucha související s PK“, „porucha řízená PK“ a „abnormální aktivita PK“ se všechny vztahují na stav charakterizovaný nepřiměřenou, tzn. sníženou nebo většinou zvýšenou katalytickou aktivitou PK, kde jednotlivé PK mohou být RTK, CTK nebo STK. Nepřiměřená katalytická aktivita může vznikat jako výsledek buď: (1) exprese PK v buňkách, které normálně neexprimují PK, (2) zvýšené exprese PK, která vede k nežádoucí buněčné proliferaci, diferenciaci a/nebo růstu, nebo (3) snížené exprese PK, která vede k nežádoucím redukcím v buněčné proliferaci, diferenciaci a/nebo růstu. Nadměrná aktivita PK poukazuje na buď amplifikací genu kódujícího konkrétní PK, nebo produkci hladiny aktivity PK, které může korelovat s buněčnou proliferaci,
- 15 CZ 303705 B6 diferenciací a/nebo růstovou poruchou (tzn. zvyšováním hladiny PK se zvyšuje síla jednoho nebo více symptomů buněčné poruchy). Snížená aktivita samozřejmě znamená opak, tj. síla jednoho nebo více symptomů buněčné poruchy se zvyšuje se snižující se hladinou aktivity PK.
Termín „ošetření“ se vztahuje na způsob zmírněné nebo odstranění buněčné poruchy zprostředkované PK a/nebo jejích doprovodných symptomů. Konkrétně, co se týče rakoviny, znamenají tyto jednoduché termíny, že délka života pacienta ovlivněná rakovinou bude prodloužena, nebo že jeden nebo více symptomů onemocnění bude redukován.
Termín „organizmus“ se vztahuje na živou entitu sestávající se z alespoň zjedné buňky. Živý organizmus může být tak jednoduchý jako např. jednoduchá eukaryotická buňka, nebo tak komplexní jako savec, včetně lidí.
Termín „terapeuticky účinné množství“ se vztahuje na takové množství podávané sloučeniny, které zmírňuje jeden nebo více symptomů ošetřované poruchy. Co se týče rakoviny, tak terapeuticky účinné množství se vztahuje na množství, která má následující účinek:
(1) snižuje velikost nádoru;
(2) inhibuje (tzn, zpomaluje do určité míry, výhodně zastavuje) metastázy nádoru;
(3) inhibuje (tzn. zpomaluje do určité míry, výhodně zastavuje) růst nádoru a/nebo (4) zmírňuje do určité míry (nebo výhodně eliminuje) jeden nebo více symptomů souvisejících s rakovinou.
Termín „monitorování“ znamená sledování nebo detekci účinku po uvedení sloučeniny v kontakt s buňkou exprimující konkrétní PK. Pozorovaný či detegovaný účinek může být změna buněčného fenotypu, katalytické aktivity PK nebo změna interakce PK s přirozeným vazebným partne30 rem. Techniky pozorování nebo detekce takových účinků jsou známy v oboru.
Výše citovaný účinek je vybrán ze změny nebo absence změny buněčného fenotypu, změny nebo absence změny katalytické aktivity uvedené proteinkinázy nebo změny nebo absence změny interakce uvedené proteinkinázy s přirozeným vazebným partnerem v konečném aspektu předlo35 ženého vynálezu.
Termín „buněčný fenotyp“ se vztahuje na vnější projev buňky nebo tkáně nebo biologické funkce buňky nebo tkáně. Příklady buněčného fenotypu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, velikost buňky, její růst, proliferaci, diferenciaci, přežití, apoptózu a nutriční příjem a použití. Tyto fenotypícké charakteristiky jsou měřitelné technikami známými v oboru.
Termín „přirozený vazebný partner“ se vztahuje na polypeptid, který se váže na konkrétní PK v buňce. Přirozené vazebné partnery mohou hrát důležitou roli při propagaci signálu při procesech signální transdukce zprostředkované PK. Samotná změna interakce přirozeného vazebného partnera s PK může projevovat jako zvýšená nebo snížená koncentrace komplexu PK/přirozeného vazebného partnera a v důsledku toho jako pozorovatelná změna schopnosti PK zprostředkovávat signální transdukci.
Názorné sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou uvedeny v tabulce I níže.
- 16CZ 303705 B6
Tabulka 1
Příklad Struktura Název
1 4-methyl-5-(2-oxo- 1,2-dihydroindoí-3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-2-karboxylová kyselina
2 4-meťhyl-5-(l-methyl-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-! Z/-pyrrol-2-karboxylová kyselina
3 X” methylester 4-methyl-5-(2-oxo-1,2-dihydrcindol-3- -ylidenmethyl)-1 H-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
4 H ethyiester 5-(5-chlor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylÍdenmethyl)-4-methy 1-1 //-pyrrol-2 -karboxylové kyseliny
5 H 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroíndol-3-ylidenmethyl)-4-methyl-lH-pYrrol-2-karboxylová kyselina
6 (3-pyrrolidin-1 -ylpropy l)amid 5-(5-brom-2-oxo- -l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4-mcthyl-l H- -pyrrol-2-karboxylové kyseliny
7 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- -dÍhydroindol-3-ylidenmethyl)-4-methyl-1 H-pyrrol- -2-karboxylové kyseliny
8 (2-diethy laminocthyl )ami d 5-(5-brom-2-oxo-1,2- -dihvdroindol-3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-2- -karboxylové kyseliny
9 (2-diethy laminoethyl )amid 5-(2-oxo-6-fenyl-1,2- -dihydroindol -3-yIidenmethyl)-1 H-pyrrol-2- -karhox ví ové kyse1 ΐ nv
- 17CZ 303705 B6
10 (2-diethylaminoethyl)methylamid 5-(5-brom-2- -oxo-1,2-dihydroindol-3-vlidenmethyl)-1 tf-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
11 (2-diethylaminoethy 1 )methy lamid 5-(2-oxo-6- -fenyl-l,2-dÍhydroindol-3-ylidenmethyl)4H“pyrrol- -2-karboxylové kyseliny
12 (3-dieťbylaminopropy í)am id 3 -methy 1-5-(2 -oxo- -1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-2- -karboxylové kyseliny
13 H (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-1.2- -dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-Lř/-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
14 (3-diethylaminopropyl )am id 3 -methyl-5-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydroindol- 3-yUdenmethyl)-líř-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
15 (3-diethylaminopropy í)amid 5-(5-meťhoxy-2-oxo- -1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-3-methyl-l ff- -pyrrol-2-karboxylové kyseliny
16 (3-diethylaminopropy l)amid 5-(6-methoxy-2-oxo- -1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-3-methyl-l/7- -pyrrol-2-karboxylové kyseliny
17 < (2-diethylaminoethy 1 )amid 3-(5-brom-2-oxo-1,2- -dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4,5J6,7-tetrahydro- -277-izoíndol-l -karboxylové kyseliny
18 rT (3-diethylaminopropyl )am id 3-(5-brom-2-oxo-l ,2- -dÍhydroindol-3-ylidenmethyl)-4}5,6í7-tetrahydro- -277-izoindo 1-1 -karboxylové kyseliny
19 “'όΤ^Ρ ů (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 3-(5-brom-2-oxo- -1,2-dihy droindol - 3-ylidenmethy 1)-4,5,6,7- -tetrahydro-2/Z-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
- 18CZ 303705 B6
20 (2-diethylaminoethyl )ami d 3-(2-oxo-6-pyridin-3 - -yM^-dihydroindol-S-ylidenmethyl)^^^,?- -tetrahydro-2//-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
21 (3-diethylam.mcpropyl)amid 4-benzoyl-5-(5-brom-2-oxo-1 t2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyl- -l//-py rro 1-2-kar boxy love kyseliny
22 (3-morfolin-4ylpropyl)amid 4-benzoyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methvl- -l/í-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
23 (3-pyrrolidin-l-yl propy l)amid 4-benzoy 1-3-methy 1- -5-(2-oxo-1,2-dihvdroindol-3-ylidenmeťhyl)-l/Y- -pyiTol-2-karboxylové kyseliny
24 ^”~D (3-pyrrolidin-1 -ylpropy 1 )am id 4-benzoy 1-5-(5- -brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylÍdenmethyí)-3- -methyl-1 fř-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
25 (3-pyrrolidin-1 -y Ipropy 1 )am id 4-benzoyl-3 -methyl- -5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)- -1/7-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
26 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 4-benzoyl-5-(6- -methoxy-2-oxo-l,2-dihydrcindol-3-yIÍdenmethyl·)- -3-methyl-177-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
27 (3 -pyrrolidin-1 -ylp ropy 1 )amid 4-benzoy 1- 5 -(5 - -methoxy-2 -oxo-1.2-dihydroindol-3-ylidenmcthy 1)- -3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
28 OC .. ΓΛ •cxp^-·' (3-pyrrolidin-l-yIpropybamid 4-benzoyl-5-(5- -fluor-2-oxo-l,2-dihydroindoí-3-ylidenmethyl)-3- -methyl-17/-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
29 (3-diethylaminopropyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2- -oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
30 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 4-acetyl-5-(5-brora- -2-oxo-l,2-dihydroÍndol-3-ylidenmethyl)-3-methyI- -1//-pyrrol-2-karboxy lové kyseliny
- 19CZ 303705 B6
31 τ ~c? (3-morfolin~4-ylpropyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmeťhyl)-3-methyI- -l/í-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
32 Η Ζ^,ΟΗ (3-hydroxypropyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo- í ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-17f- -pyrrol-2-karboxylové kyseliny
33 Τ J9- (2-hydroxyethyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo- -1,2-dihydroindol-3-ylidenrnethyl)-3-methyl-l//-
pyrrol-2-karboxylové kyseliny
34 Ο (2“inorfolm-4ylethyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-
-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-
-1/í-pyrrol-2-karboxy lové kyseliny
35 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-
X νΟΥ-ο -oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-3 -methy 1-
Η -l//-pyrrol-2-karboxy lové kyseliny
36 0 [2-(4-hydroxyfeny l)ethy 1] am id 4-acety 1-5-(5 -brom-
'X VQňrxx. -2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-
a -lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
37 β(„ (3 -diethylaminopropy l)am id 5-(5-brom-2-oxo-1,2- -dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2-Í70propyl-4-fenyl-
ΐ Η i-l/í-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 1
38 *γ (3-pyrrolidin-l -ylpropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo- -1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-
-fenyl- 1/Z-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
39 ‘X > (2-diethy laminoethy 1 )am i d 5-(5-brom-2-oxo-l ,2 - -dihydroindol-3-ylidemnethyl)-2-izopropyl-4-fenyl- -l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
40 Q 5.^0- [3-(4-methylpiperazin-l -yl)propyljamid 5-(5-brom-
βΎ -2-oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-2-
Η -izopropyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
-20CZ 303705 B6
41 & 5-(5-brom-2-oxo-l,2-ďihydroindol-3-vlidenmcthyl)- -2-izopropy 1-4-těnyl-1/Apyrrol-3-karboxy lová kyselina
42 “'Ό ? P (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amíd 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol’3-ylidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
43 of z (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amÍd 5-[6-(2-methoxy- fenyl)-2-oxo-1,2-dihydro i ndol -3-y 1 i denmcthy l]-2 - -methyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
44 ‘G .S hr (2-dimethylaminoethy1)aniíd 5-(5-brom-2-oxo-l,2- -dihydrotndol-3-ylidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-líř- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
45 hr (2-dimethy 1 aminoethy 1 jam i d 5 - [6-(2 -methoxy- fenyl)-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ilidenmethy 1 ]-2-methyl-4-feny 1-1//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny
46 1 1 Ι’Ό O~ ethylester 5-(5-brom-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-177-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny
47 *Ό '8 r1- (3-diethylaminopropyl)am id 5-(5-brom-2-oxo-l ,2- -dihydroindol -3-ylidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-1H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
48 g Ϊ-Κ (2-dimethylaminoetliy 1 )amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2- -dihydroindol-3-ylidenmeťhyl)-2,4-dimethyl-l//- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
49 o H (2-dimethy laminoethy 1 )amid 2,4-dimethyl-5-(2- -oxo-6-fenyl-l,2-dihydroíndol-3-ylidenmethyl)-lH -pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
50 Ό (2-dimethylaminoethy 1 )amid 5-(5-chlor-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l/ř- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny i
-21 CZ 303705 B6
51 vJ·» (2-diethylaminoethyl )amid 5-(5-brom-2-oxo~l ,2-dÍhydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l/f- -pyiTol-3-karboxyIové kyseliny
52 (2-pyrrolidin-l -y lethy l)amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l/ř-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
53 vl-M (3-imidazol-l -ylpropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydroindo1-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l/T-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
54 (2-dimethylaminoethyl )amíd 5-[6-(2-methoxy- fenyl)-2-oxo-1,2-dihydroindo1-3-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
55 (2-dimethylaminoethyl )amid 5-[6-(3-methoxyienyl)-2-oxo-ls2-dihydroindol-3-yIidenmethylj-2,4- -dimethyl-l/ř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
56 (2-diethylaminoethy 1 )amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo- -5-fenyl-l,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
57 %/o (2-pyrrolidin-l -ylethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2- -oxo-5 - feny 1-1,2-dihydro indol -3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-3-karboxyl ové kyseliny
58 H (3-imidazol-l -ylpropy 1 )am id 2,4-dimethy 1-5-(2- -oxo-5-fenyl-l ,2-dihydroindol-3-yIidenm ethyl)-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
59 (2-diethylaminoethy 1 )ami d 2,4-dimethy l-5-(2-oxo-6-feny I-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)- ltf•pyrrol-3-karboxylové kyseliny
60 X^= (2-pyrrolidin-1 -yl ethy I)amid 2,4-dimethyl-5-(2-οχο-6-fenyl-1,2-dihydroindol -3-yIidenmethyl)-l/í- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
-22 CZ 303705 B6
61 (3-imidazol-l-ylpropyl)amid 2,4-d im ethy 1-5-(2- 1 i -oxo-6-feny 1-1,2-dihydroindol-3-v lidenmethy 1)-1H- jpyrrol-3-karboxylové kyseliny
62 Cl (2-diethylaminoethyí)amid 5-[6-(3,5-dichlorfenyl)- -2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]-2,4- -dimethy 1-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
63 ''Η* (2-diethylaminoethyl )amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo- 6-pyridin-3-yl-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethy 1)- -l/f-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
64 Ο Ο Ν (2-pyrrolidin-1 -ylethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2- oxo-6-pyridin- 3 -yl-1,2-di hydro indol -3- -ylidenmethyl)-1 //-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny
65 (3 -dimethylaminopropy l )atn id 2,4-dimethy 1-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydroíndol-3-ylidemnethyl)-1 //-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny
66 %# Η (3-dimethylaminopropyl)amid 2,4-dimethy1-5-(2-oxo-5-fenyl-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l H- -pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
67 (3-diethylaminopropyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2- -oxo-5-fenyl-1,2-dihydroindol-3-y lidenmethy 1)-1 H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
68 (3-diethylammopropyl)amid 2,4-dimelhyI-5-(2-oxo-6-fenyl-1,2-dihydroindol-3-i lidenmethy 1)-1H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
69 (3-chl or-4-methoxyfe n y 1) am i d 3 - [4-(3 -diethylaminopropylkarbainoyl)-3,5-dmiethyl-l//-pyrrol-2~ylmethylen]-2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol-4- 4<arboxylové kyseliny
70 (3-diethylaminopropyl )amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2-dihydroindoí -3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
-23CZ 303705 B6
71 (2-diethylaminoethyt)amid 5-(5-brom-2-cxo-l,2-dihydroÍndol-3-ylidenmethyl)-2,4-diizopropyl-l//- -pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
72 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-2,4-diizopropyl- IH-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
73 (3-pyrrolidin-1 -ylpropy í)am id 5 -(5-brom-2-oxo- -l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-diizopropyl- -l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
74 ^c- (pyridin-4-ylmethyl)am id 5-(5-brom-2-oxo-1,2- -dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyI-l//- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
75 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-[6-(4-butylfenyl)-2- -oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmeíhyl]-2,4- -dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
76 (2-pyrrolidin-1-yl ethyl)amid 5-[6-(5-izopropyl-2- -methoxy feny 1) -2-oxo-1,2-dihydroAÍndol-3- -ylidenmethyl]-2,4-dimethvl-l//-pyrrol-3 - -karboxylové kyseliny
77 o o N-ř (2-pyrrolidin-1 -y lethyl )amid 5-[6-(4-ethylfenyI)-2- -oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl]-2,4dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny
78 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-(6-(2,4-dimethoxy- fenyl)-2“Oxo-l>2-dihydroindol-3-ylidenmethyI]-2,4- -dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
79 o P (2-pyrrolidin-1 -y lethyl )am i d 5-(6-(3 - -izopropylfenyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny
-24CZ 303705 B6
80 q n-Z (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dίπleιhyl-l//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
81 OH 3-(4-(2-diethylaminoethylkarbamoyl)-315-dimethyl-1 //-pyrro 1-2-y Imethy len | -2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-6-karboxylová kyselina
82 y>.~O (2-pyrrolidin-l-y lethyl )amid 5-(5- -dimethyísulfamoyl-2-oxo-lí2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-2,4-dímethyl-1 //-pyrrol-3 - -karboxylové kyseliny
83 (2-pyrrolidin-l-ylethyl )amid 5-(5-(3-chlorfenylsulfamoyl)-2-oxo-1,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-I//-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny
84 O JT (2-pyrrolidin-l -ylethyl)amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-5-(pyridin-3-ylsulfamoyl)-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethy]]-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
85 3-[3,5-dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l-karbonyl)-1 //-pyrroí-2-y Imethy len]-4-(2-hydroxyethyl)-1,3- -dihydroindoi-2-on
86 fenylamid 3-[3,5-dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l-karbonyl)-1 //-pyrrol-2-y lmethylen]-2-oxo-2,3 -dihydro-l//-indol-5-sulfonové kyseliny
87 G r> H-Z (2-diethylammoethy|)amid 5-(5- -dimethylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydroindol-3- -ylidenmethy l)-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny
88 » s Jj Q >Υ (2-diethylaminocthyl)amid 5-(5-(3- -chlorfenylsulfamoyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol -ylidenmethyl]-2.4-dimethyl- l//-pyrrol-3 - -karboxylové kyseliny
-25CZ 303705 B6
89 (2-dimethylaminoethy 1 )amid 3-(5-brorn-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izo indol-1-karboxylové kyseliny
90 ethylester 3-(2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)~4,5,6,?-tetrabydro-2Z/-izoindol-l-karboxylové kyseliny
91 ethylester 3-(4-methy 1-2-oxo-1,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-27/-izoindol-1 - -karboxylové kyseliny
92 ethylester 3-(5-brom-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 - -karboxylové kyseliny
93 3-(3-fcthoxykarbonyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol- - 1-y Imethy len)-2-oxo-2,3-dihydro-l/7-indol-5- -karboxylová kyselina
94 ethylester 3-(5-methoxy-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-4,5?6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 - karboxylové kyseliny
95 ethylester 3-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydroindol-3- -ylidenmethy 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2 H-izoindol-1 - -karboxylové kyseliny
96 ethylester 3-(2-oxo-5-sulfamoyl-1,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2H-izoindol-l- -karboxylové kyseliny
97 ethylester 3-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-l ,2-dihydro- indol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-teřrahydro-277- -izoindol-l-karboxylové kyseliny
98 ethylester 3 -(5 -dimethy lsulfamoyl-2-oxo-1,2- -dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4,5A7-tetrahydro- -2//-izoindol-1 -karboxylové kyseliny
-26CZ 303705 B6
99 ethylester 3-(2-oxo-5-tenylsulfanioyl-1,2-dihydro- indol-3-ylidenjmethyI)-4,5,6,7-tetrahydro-2H- -izoindol-l-karboxylové kyseliny
100 ethylester 3-(6-brom-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-4,5,6í7-tetrahydro-2//-izoindol-1 - -karboxylové kyseliny
101 ethylester 3-(2-oxo-ó-fenyl-l,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-4,5>6,7-tetrahydro-2//'-izoindol-l- -karboxylové kyseliny
102 3- (3-ethoxykarbonyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindoÍ- 4- ybnethylen)-2-oxo-2,3-dihydro-1/í-mdol-6- -karboxylová kyselina
103 ethylester 3-(6-methoxy-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyI)-4,5,6,7-tetrahydro-27Z-izoindol-1 - -karboxylové kyseliny
104 ethylester 3-(5-izopropylsulfamoyl-2-oxo-l ,2- -dÍhydroindoí-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro- -27/-izoindol-l-karboxylové kyseliny
105 3-(3 -methy lkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydro -2H- -izoindol-1 -ylmethylen)-2-oxo-2,3-dihydro-1 JT-indol- -5-karboxylová kyselina
106 3-(3-dimethylkarbamoyl-4,5,6,7-tetrahydro-27f- -izoindol-1 -ylmethylen)-2-oxo-2,3-dihydro-177-indol- -5-karboxylová kyselina
107 ? rVý“ ° Ó 2-oxo-3- [3 -(pyrrolidin-1 -karbony 1)-4,5,6,7- -tetrahydro-2//-izoindol-1 -ylmethylen]-2,3-dihydrO- -l/ř-indol-5-karboxylová kyselina
108 3-[3-(morfolin-4-karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2H- -izoindol-l-yImethylen]-2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol- -5-karboxylová kyselina
-27CZ 303705 B6
109 3-[3-(morfolin-4-karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//- -izoindol-1 -ylmethylen]-2-oxo-2,3-dihydro-1 //-indol- -6-karboxylová kyselina
110 methytamid 3-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4,5,ó,7-tetrahydro-2//-Í7.omdol-1 - -karboxylové kyseliny
111 dimethylamid 3-(5-brom-2-oxo-l ,2-dihydroindoí-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l- -karboxylové kyseliny
112 5-brom-3-j 3 -(pyrrolidin-1 -karbony 1)-4,5,6,7 - -tetrahydro-2//-izoindol-1 -y Imethyl en]-1,3-dihydro- indol-2-on
113 5-brom-3-(3-(pyrrolidin-4-karbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-1 -ylmethylen]-1,3 -dihydro- indol-2-on
114 •1°^' 3-(3-dimethylkarbarnoyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//- -Ízoindol-l-ylmethylen)-2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol- -6-karboxylové kyseliny
115 -σ- 4-methyI-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro- indol-3 -ylidenměthyl)-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
116 ethylester {[4-methyl-5-(4-methyl-5 - -methylsulfamoyl-2-oxo-1,2-dihydro indol-3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-3-karbonyl]amino jodové kyseliny
117 ethylester {[4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo- -1,2 -d i hy dro i ndo 1-3 -y lidenmethy 1)-1 //-pyrrol-3 - -karbonyl] amino jodové kyseliny
118 {[4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-l,2- -dihydroindol-3-ylidenmethyl)-ltf-pyrrol-3- -karbonyl jam i no jodová kyselina
-28CZ 303705 B6
119 z 'τ0 0 methylamid 3-[3-methyl-4-(pipendin-l -karbonyl)- -17í-pyrrol-2-ylmethylen]-2-oxo-2>3-dihydro-1 fí- -indol-5-sulfónové kyseliny
120 5-methyl-2-(2-oxo-l ,2-dihydro indol -3- -ylidenmethyl)-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
121 C# ethylester 5-methyl-2-(2-oxo-1,2-dihydroindol-3- -ylidenmethyl)-l/í“pyrrol-3-karboxylové kyseliny
122 ethylester 2-(5-brom-2-oxo-1,2-dihydreindol-3- -y lidenmethyl)-5-methy 1-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
123 8Ί 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-5-methyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
124 *X (2-pyrrolidin-1 -y 1 ethy l )am i d 2-(5-brom-2-oxo-1.2- -dihydroindol-3-ylidenmeťhyl)-5-methyl-l//-pyrrol- 3-karboxylové kyseliny
125 Β'ΐ Λ“ yd (2-diethylaminoethyl )amid 2-(5-brom-2-oxo-l,2- -dihydrotndol-3-ylidenmethyl)-5-methyl-l//-pynol-3-karboxylové kyseliny
126 y— CH, H,C CH, rvC/CNl ' í(2-diethylaminoethyl )amid 2,4- -dimethy l-5-[2-oxo-1,2-dihydroindol- 43Zj-yiiúenmetnyij-1 Ή-pyrrol-> -karboxylové kyseliny 381 [M + l]
127 (2-diethylaminoethyl )amid 5-[5- -chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethy l]-2,4-dimethyl-1H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 415 [M+ 1]
-29CZ 303705 B6
128 H C JJ r'****—'“ N (2-pyrrolidin-l-ethyl)amid 2,4- -dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydroindoI- -(3 Z> ylidenme±yl]-l//-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 379 [M+l]
129 2>Λ«— ’^β 0 (2-pyrrolÍdin-1 -ylethyl)amid 5-[5- -fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl J -2,4-diineťhyl-177- 4>yrrol-3-karboxylové kyseliny 397 [M+l]
130 •x# (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-[5- <hlor-2-oxo-1,2-dihydrG indo1-(3Z)- -ylidenmethy 1]-1 77-pyrrol-3 - -karboxylové kyseliny 413 [M+l]
131 CH, (2-dimethylaminoethyI)amid 2,4- dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydroindol- (3Z)-ylídenmethyl]-l/ř-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 353 [M + l]
132 H C 1 -C 3 H»\ Z-N. CH’ ργν>ο^ CHl VL>° (2-dimethylaminoethyl)amíd 5-[5- fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)- -yl idenmethyl] -2,4-dimethyl -1H- .pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 371 [M + l]
133 o avCH, (2-acetylaminoethyl)amid 5-[5- -chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)- -y 1 idenmethyl] -2,4-dimethy 1 -177- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 399 [Μ - 1]
134 (2-acety'laminoethyl)amid 5-[5- -fluor-2-oxo-1,2-dihydro indol -(3Z)- ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-177- .pyrrol-3-karboxylové kyseliny 383 [Μ - 1]
-30CZ 303705 B6
135 o -/V (20=° B ΐ (2-acetylaminoethyl)amid 2,4- -dimethyl-5-[2-oxo-l,2“dihydroindol- <3Z)-ylidenmethylJ“ 1 tf-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 365 [Μ - 1]
136 0 *γγζθ«Χ(:Η·' 0 M [3-(2-oxoteírapyrimidin-1 -y 1 )- propyljamid 5-[5-brom-2-oxo-l,2- -d ihydroindol -(3Z)-ylidenmethyl|-2,4-dimethyl- l//-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 500 [M + 1] 502 [M i 1]
137 Ví °xxp ^v [3-(2-oxotetrahvdro pyrimidin-1 - -propyl] am id 5-[5-chlor-2-oxo-1,2- -dihydroindol -(3Z)-ylidenmethyl]- -2,4-dim ethyl-1 /Y-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 454 [Μ - 1]
138 u-2·*5 o [3-(2-oxotetrahydropyrimidin-1 - -propyl] amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2- -dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]- -2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 438 [M-l]
139 o λ5 [3-(2-oxotetrahydropyrimidÍn-1- -propyl]amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo- -1,2-dihydroindol-(3 Z)- -y lidenmethyl]“2,4-dimethy T1H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 422 [M+l]
140 o [3-(2-oxotetrahydropyrimidÍn-1 - -propyl] am id 5-[5-kyano-2-oxo-1,2- -d ihy dro indol-(3 Z)-y Udenmethyl]- -2,4-dimethy I-1 /í-pvrrol-3 - -karboxylové kyseliny 447 [M+l] 1 1 1 1
-31 CZ 303705 B6
141 trifluoracetát-4-[2-({5-[5-brom-2- -oxo-1,2-dihy droindol-( 3Z)- -ylidenmethyl]-2s4-dimethyl-ltf- .pyrrol-3-karbonyl} am Íno)ethy í ]-2- -oxopiperazin-1 -ium 486 [M+l] 488 [M+l]
142 [3-(2-oxopyrrolidin-1 -yl)propyl]- amid 5-[5-kyano -2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl}-2,4- -dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 430 [M-l]
143 r,™ o -of- [2-(2-oxoimidazolidin-l-yl)ethylJ- amid 5-[5-brom-2-oxo-l ,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- dimethy 1-1 H-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 470 [Μ -1] 472 [Μ - 1]
144 o Q Λ-Λη ° [2-(2-oxo imidazolidin-1 -y l)ethy 1 j- amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- -dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 428 [M+ 1]
145 <> [2-(2-oxcimidazolidin-1 -y l)ethy í ]- amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- -dimethy 1-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 412 [M + 1]
146 I Op (2-(2-oxoimidazolidin-l-yl)ethyIj- amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-1,2- -dihydroindok(3Z>ylidenmethylJ- 1 -l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 392 [Μ - 1] i 1
-32CZ 303705 B6
147 ry o + CZ jHZ O NC ~ T^T>-OH H [2-(2-oxoÍmídazolidin-1 -yl)ethy 1]- amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dÍhydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- -dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 419 [M+1]
148 ° ó »yvC« ethylester {4- [2- ({5 -[5 -brom-2 -oxo- 1,2-dihydro indol -(3/)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-\H- -pyrrol-3-karbonyl}amino)ethyl]- piperazin-l-yl}octové kyseliny 558 [NH 1] 560 [M+l]
149 Λ A>o KC 1 '-'O o H ethylester {4-[2-({5-[5-chlor-2-oxo- -1,2-dihydro indol-(3Z)~ -ylidenmethy 1 ]-2,4-d imethyl-1H- -pyrrol- 3 -karbonyl Jaminojethyl)- piperazin-l-yl}octovtí kyseliny 514 [M+l]
150 HjÚ „ , J4?’ ,x>fi. o;-' ethyleste r {4-[2-({5-[ 5 -fluor-2-o xo- -l,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//- -pyrrol-3-karbonyl}amino)cthyl]- piperazin-l-yl}octové kyseliny 498 [M + 1]
153 -,c · [2-(kyanomethylamino)ethyl]- amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-l,2- -dihydroíndol -(3Z)-ylidenmeíthyl]- -1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 362 [Μ -1]
154 [3-(2-oxoazepan-1 -yl)propyl Jamid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindoi- -(3Z)-y lidenmethy l]-2,4-di methyl-1 //- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 511 [Μ -1] 513 [Μ -1]
155 O cVufT+ y j >o ^8 [3 -(2-oxo azepan-1 -y l)propy 1 ] am id 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol- 4 3 Z)-y 1 idenw ethyl )-2,4-di methyl-1H- 469 [M+l]
-33 CZ 303705 B6
-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
156 JC'b [3-(2-oxoazepan-l-yl)propyl]amíd 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro indol (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1/7- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 453 [M+l]
157 [3-(2-oxoazepan-l-yl)propyl]amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-l ,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-l/7-pyrrol- -3-karboxylové kyseliny 435 [M+l]
158 [3-(2-oxoazepan-l-yl)propyl]amid 5-[5-kyano-2-oxo-1,2-dihydro indol- -(3Z)-ylidenmethylJ-2,4-dimethyl-1H- -pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 460 [M + 1]
159 o JI“, y jí «•yyQí “ (2-acetyIamine ethy 1 )amid 5-[5- -brom-2-oxo-l ,2-dihydro indol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l/7- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 443 [Μ- 1] 445 [Μ - 1]
160 O o 73 V 'Op “ -A, Trifluoracetát-4-[2-({5-[5-fluor-2- -oxo-1,2-dihydro indol -(3Z)- -ylidentnethyl]-2,4-dimethyl-1/7- -pyrrol-3-karbonyl}amino)ethyI]-2- -oxo piperazin-1 -ium; 426 [M + 1]
161 CQ-» řA trifíuoracetát-4-[2-({2,4-dimethyl-5- -[2-oxo-1,2-dihydroindol-( 3Z)- -ylidenmethy 1]-1 /7-pyrrol-3 - -karbony 1} amino)ethy 1] -2-oxo- piperazin-l-ium; 408 [M+l]
162 ... · Oy”° :y^ trifluor acetát -4-[2-({5-[5-kyano-2- -oxo-1,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l/7- 4>yrrol-3-karbonyl}amino)ethyl]-2- 433 [M+l] i
-34CZ 303705 B6
oxopiperazin-1 -ium;
163 Η „ Ί 0 Ν^Χ Χ-Λη CM> Τ jTVo [2-(2-kyanoethylamino)ethyl]amid 5-[5-brom-2-oxo-1,2-dihydroindol- -(3Z)-ylidenniethyl]-2,4-dimethyl-l//- -pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 454 [M-l] 456 [M-1J
164 0 ΗνΛκ a-^XpEí CM* fl I >=Q O-Jj [2-(2-kyanoethylamino)ethyl]amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihvdroindol- -(3Z)-ylidenniethyI]-2t4-di methyl-1H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 410 [M- l]
165 ° J Fxx^^'Ch’ M [2-(2-kyanoethylamino)ethyl]amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydroindol- -(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1//- -pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 394 [M-l]
166 . 3 “αλΡ JTCK’ ff T >° H [2-(2-kyanoethylamino)ethyl]amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethy 1] -1 //-pyrrol- -3-karboxylové kyseliny 376 [M-l]
167 o ΰ X 'Xp “· [2-(2-kyanoethylamÍno)ethyl]amid 5-[5-kyano-2-oxo-l ,2-dihydroindol· (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethvi-1H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny 401 [M-l]
168 o d o W >r« ^x-v-0 ř 5 l XX 3< O' t4 ' ř trifluoracetát-4-[2-({5-[5-chlor-2- -oxo-1,2-dihydrc indol-(3Z)- -y1idenmethyl]-2.4-dimethvl-1 /7- -pyrrol~3-karbonyl}amino)ethyI]-2- -oxopiperazin-1-ium; 440 [Μ -1]
168 ϊ X Η.ε^ΛΝ'.-Ν~3 C0=° H [2-(4-methylpiperazin-l -y I )ethyl]- amid 5-[5-fIuor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3z)-y!idenmethyl]-2,4- -dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 424 [M-l]
-35CZ 303705 B6
169 -š— [2-(4-methylpiperazin-1 -y í)ethyl ]- amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenniethyl]-2,4- -dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 440 [M-l]
170 .UU/* H [2-(4-methylpiperazin-1 -y l)ethyl|- amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- -dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny 484 [M-l] 486 [M-l]
171 e H'0· r^rV ULjj [2-(4-methylpÍperazin-l-yl)ethyl]- amid 2,4-dimethyl-5-[5-brom-2-oxo- 4,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-1 //-pyrrol-3 - -karboxylové kyseliny 406 [Μ -1]
172 i & n ' - [2-(3,5-dimeťhylpiperazin-1 -yl)- ethyl]amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo- -1,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-l//-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 422 [M+l]
173 r fl <>» T T>o M H [2-(3,5-dimethylpiperazin-1 -yi)- ethyl] am id 5-[5-fluor-2-oxo-1,2- -dihydroindol <3Z)-ylidenmethylJ-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 438 [Μ - 1]
174 Τ- ο °w° [2-(3,5-dimethylp i perazin-1 -y 1)- ethyl]amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2- -dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]- -2,4-dimethyI-1 //-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny 456 [M+ 1]
-36CZ 303705 B6
175 0 M,cró M Τ JL /=° X — ^CH, [2-(3,5-dimethylpiperazin-1 -yl)- ethyl]amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2- -díhydroindol-(3Z)-y]idenmethyl]- -2,4-dimethy 1-1 //-pyrro 1-3- karboxylové kyseliny 498 [M-l] 500 [Μ -1]
176 ~-O-o, [3-(4-methylpiperazin~l-yl)propyl]- amid 2,4-dimethy 1-5-[2-oxo-1,2- -dihydro indol -(3Z)-ylidenmethyl]- -1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 422 [M + 1]
177 a H,C i 1 JC >=° ^'-^'CVch, H CH, [3-(4-methylpiperazin-1 -yl)propyl]- amid 5-[5-fluor-2-oxo-I,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- -dimethy 1-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 438 [Μ - 1]
178 /-ΖΛ CM, [3-(4-mcthylpiperazin-1 -y l)propy 1]- amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylÍdenmethyl]-2,4- -dimethyl- 1//-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny 454 [Μ - 1]
179 0 Λ tí Jl z”° -íf CH, [3-(4-methylpiperazin-1 -y l)propy 1]- amid 5-[5-brom-2 -oxo-l, 2-dihydro- indol-(3Z )-ylidenmethy l]-2,4- -dimethv 1-1 //-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny 498 [M-l] 500 [Μ - 1]
180 cf® [2-(4-benzylpiperazin-l-yl)ethyl]- amid 2,4-dimethyl-5 - [2-oxo-1,2- -dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]- -1//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny 482 [Μ - 1]
181 cf® [2-(4-benzylpiperazin-1 -y í)ethyl]- amid 5-[5-flúor-2-oxo-l,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- 500 [M-l]
-37CZ 303705 B6
dimethyl-l/Apyrrol-3-karboxylové kyseliny
182 rf® [2-(4-benzylpiperazin-1 -y l)ethyl]- amid 5-[5-chlor-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3 2)-ylidenmethyl]-2,4- dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 517 [M-l]
183 » d'° [2-(4-benzyl p i perazin -1 -yl)ethy!}- amid 5 -[5-brom-2-oxo-1,2-dihydro- indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- -dimethy 1-1 //-pyrrol -3 -karboxylové kyseliny 560 [M-l] 562 [Μ - 1]
184 ° CnV rt.e^JU N,> 0 ZQ cep (3-pyrrolidin-l-yl-2-on) amid 5-[5- -chlor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- 5)ynol-3-karboxylové kyseliny 480 [M+ 1]
185 = A, ZT H f H CH, C)^ J! « XT>0 cf,co3h K trifluoracetát -4-[2-({5-[5-chlor-2- -oxo-1,2-dihydroindoí-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-\H- -pyrrol-3 -karbonyl }am i no)ethy 1 ]-2 - -oxopiperazin-1 -ium; 440 [Μ - 1]
186 «Y^Q1 w' H (3-pyrrolidin-1 -yl-2-on)amid 5-[ 5 - -chlor-2-oxo-I,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
187 p^/h CH- T jC>o (3-pyrrolidin-l-yl-2-on) amid 5-[5- -fluor-2-oxo-1,2-dihydro indol-(3Z)- -ylidenmethyl] -2.4-dimethy 1-1HLpyrrol-3-karboxylové kyseliny
-38CZ 303705 B6
188 -5 o CH> ^‘B (3-pyrrolidin-l-yl-2-on\unid 5-[2- -oxo-l,2-dihydroindo!-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
189 c.^_O CH’ UQ“° cf3co2h H (2-pyridin-2-ylethyl)amid 5-[5- -chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l H- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
190 r^N CH, ΤΎ>Ο CF^CQjH H Trifluoroctová sůl (2-pyridin-2-yl- ethyl)amidu 5-[5-fluor-2-oxo-l,2- -d ihydro indol-(3Z)-ylidenmethyl j- -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3- karboxylové kyseliny
191 n-V^ČÍt^1^ JT^M CH’ CX^^° CIH H hydrochlorid (2-pyridin-2-ylethyI)- amidu 5-[2-oxo-1,2-dihydroindol- .(3Z)-ylidenmethyll-2,4-dimethyl-111- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
192 r> ZTU CH, Br H XjQ=o ΟΡ,ΟΟ,Η H Trifluoroctová sůl (2-pyridin-2-yl- ethyl)amidu 5-[5-brom-2-oxo-1,2- -dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]- -2,4-dimethyM H-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny
193 q .13 fO.pthyfamir nethv 1 taní id 5-Γ5- -fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-177- -pyrrol’3-karboxylové kyseliny
194 £ _ VZfT y (2-aminoethyl)amid 5-[5-fluor-2- rOxo-l,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-111- pyrroI-3-karboxylové kyseliny
-39CZ 303705 B6
195 i Z=° Λν ^CH, — 0 (2-diethy 1-A-oxoam i noethy l)am id 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol- -(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
196 F v £r ?H (2-etbyl-vV-hydroxyam inoethy 1)- amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydro-
X indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
197 *Λ rA X (2-diethylamino-2-hydroxyethyl)-
Ύ OH amid 5-[5-íluor-2-oxo-1,2-dihydro-
I ól indol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4- -dimethyl- l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
198 v* -A 3H [2-ethyl-2-(2-hydroxyethyl)amino- ethyljamid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-
€ -dihydroindol-(3Z)-ylÍdenmethyl]- -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3 - -karboxylové kyseliny
199 o “U < [2-ethyl-2-(l - hydroxyethyl)am ino-
Ύ ethyljamid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-
s**^H H -d ihydroi ndo 1 -(3Z)-y 1 idenmethy 1]- -2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny
200 NC lj HA ύΒ >0 ^-a o hr ^CH, Ř ' K o (2-A-acetylaminoethyl)amid 5-[5- -kyano-2-oxo-1,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l/ř- -pyrrol-3-karboxylové kyseliny
-40CZ 303705 B6
201 oř“ (karboxymethyl) am id 5 -[5 -fluor-2- -oxo-1,2-dihydro indol-(3Z)- -ylidenmethyl]-2,4-dimethyl- 1H.pyrrol-3’karboxylové kyseliny
202 o H ν-^ΟΗ [2-(2-hydroxyethylarnino)ethyl] am id 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroÍndol- X3Z)-ylidenmethyl]-l//-pyrrol-3- -karboxylové kyseliny
203 trifluoracetát (2-pyridin-2-y1 ethyl )- amidu 5-[5-kyano-2-oxo-l,2- -dihydroindok(32)-ylidenmethyl]- -l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
204 □ p •'ř 7- Τ 7Γ trifluoracetát (3 -pyrrolidin-1 -y 1-2- Onpropyl)amidu 5-[5-brom-2-oxo- -1,2-dihydroindol-(3Z)- -ylidenmethyl]-1 //-pyrrol-3 - -karboxylové kyseliny
Čísla sloučenin odpovídají číslům příkladů v příkladech provedení vynálezu, tj. syntéza sloučeniny 1 v tabulce 1 je popsána v příkladu 1. Sloučeniny uvedené v tabulce 1 mají pouze ilustrativní charakter a nemají nikterak limitovat jakýmkoliv způsobem rozsah předloženého vynálezu.
Výhodná provedení
Zatímco nejširší definice byla podána v podstatě vynálezu, výhodné jsou určité sloučeniny obeciu ného vz.oiuc I uvedené níže.
(1) Výhodná skupina sloučenin obecného vzorce Ije taková, kde substituenty R’, R2 a R4jsou atom vodíku.
(2) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce Ije taková, kde substituenty R1, R2 a R4 jsou atom vodíku.
(3) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituenty R1, R2 a R3 jsou atom vodíku.
(4) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituenty R2, Ra R4 jsou atom vodíku. 5 * (5) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituenty R1, R2, R3 a R4 jsou atom vodíku.
-41 CZ 303705 B6 (6) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituenty R5, R6 nebo substituent R7, výhodně substituent R5 nebo R6, výhodněji substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NRH(CH2)nR12, kde:
substituent R11 je atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, výhodně 5 atom vodíku nebo methyl;
n je 2, 3 nebo 4, výhodně 2 nebo 3; a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle alkylová skupina, výhodněji nižší nesubstituovaná nižší alkylová skupina nebo substituenty R13 a R14 spojeny dohromady tvoří skupinu vybranou z -ýCH2)4- -(CFbfy-, -(CH2)2-O-(CH2)2- nebo ío -CCH2)2N(CH3)(CH2)2-, výhodně substituenty R13 a R14 jsou nezávisle atom vodíku, methyl, ethyl nebo spojeny dohromady tvoří morfolin—4-yl, pyrrolidin-l-yl, piperazin-l-yl nebo
4-methylpiperazin-l-yl.
Výhodněji je substituent R5 nebo R6 v bodě (6) výše V-(2-dimethylaminoethyl)amino15 karbonyl, V-(2-ethylaminoethyl)-7V-methylaminokarbonyl, ;V-(3-dimethylaminopropyl)aminokarbonyl, A-(2-diethylaminoethyl)aminokarbonyl, Λ—(3-ethvlaminopropyl)aminokarbonyl, ;V{3-diethylaminopropyl)aminokarbonyl, 3-pyrrolidin-l-ylpropylaminokarbonyl, 3-morfo 1 i n—4-y Ipropy lam i nokarbony 1, 2-pyrrolidin-l-ylethylaminokarbonyl, 2-morfolin—4-ylethylaminokarbonyl. 2-{4-methylpiperazin-l-yl)ethylaminokarbonyl, 2-(420 methylpiperazin-1-yl)propylaminokarbonyl, 2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethylaminokarbonyl nebo 2-(3.5-dimethylpiperazin-l-yl)propylaminokarbonyk ještě výhodněji 7V-(2diethylaminoethyl)aminokarbonyl nebo 7V-(2-ethylaminoethyl)aminokarbonyl.
(7) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituenty R5, R6 nebo R7, výhodně substituenty R5 nebo R6, výhodněji substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je alkylová skupina, výhodně nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, ary lová, heteroarylová, heteroalicyklická skupina nebo karboxyskupina, výhodněji methyl, ethyl, propyl nebo butyl substituovaný hydroxyskupinou, arylová skupina, heteroalicyklická skupina, např. piperidin, piperazin, morfolin, atd., heteroarylová skupina nebo karboxyskupina. Ještě výhodněji v rámci této skupiny (7) je substituent R5 nebo R6 2-ethoxykarbonylmethylaminokarbonyl, karboxymethylaminokarbonyl, 3-hydroxypropylaminokarbonyl, 2hydroxyethylaminokarbonyl, 3-triazin-l-ylpropylaminokarbonyl, triazin-l-ylethylaminokarbonyl, 4-hydroxyfenylethylaminokarbonyl, 3-imidazol-l-ylpropylaminokarbonyl, pyridin—t-y lmethyl aminokarbonyl, 2-pyridin-2—ylethyl aminokarbonyl nebo 2-imidazol-ly 1 ethy lam i nokarbony 1.
(8) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituenty R5, R6 nebo R', výhodně substituenty R5 nebo R6, výhodněji substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR1 ’(CH2)nR12, kde:
substituent R11 je atom vodíku nebo alkylová skupina, výhodně atom vodíku nebo methyl;
n je 2, 3 nebo 4, výhodně 2 nebo 3; a substituent R12 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 spojeny dohromady tvoří heterocykl, výhodně 5, 6 nebo 7 členný heterocykl obsahující karbony lovou skupinu a 1 nebo 2 atomy dusíku. Výhodně substituent R5 nebo R6 je 2-(3-ethoxykarbonylmethylpiperazin-l-yl)ethylaminokarbonyl, 2-(3-oxopiperazin-l-yl)ethylaminokarbonyl, 2-(imidazolidin— 1—yl—
2-on)ethy (aminokarbonyl, 2-(tetrahydropynmidin-l-yl-2-on)ethylaminokarbonyl, 2-(2oxopyrrolidin-l-yl)ethylaminokarbonyl, 3-(4-methylpiperazin-l-yl)propylaminokarbonyl,
3--(3-ethoxykarbonylmethylpiperazin-l-yl)propylaminokarbonyl, 3-(3-oxopiperazin-lyl)propylaminokarbonyl, 3-(imÍdazolidin-l-yl—2-on)propylaminokarbonyl, 3-(tetrahydropyrimidin-l-yl-2-on)propylaminokarbonyl, 3-(2-oxopynOlidin-l-yl)propylaminokarbo-42CZ 303705 B6 nyl, 2-(2 oxohomopiperidin -l-yl)ethylaminokarbonyl nebo 3-(2-oxohomopiperidin-lyl)propylamínokarbonyl.
(9) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituent R5, R6 nebo R7, výhodně substituent R5 nebo R6, výhodněji substituent R6 je -COR10, kde:
(a) substituent R10je-NR,,(CH2)nR12, kde:
substituent R11 je atom vodíku nebo alkylová skupina, výhodně atom vodíku nebo methyl;
n je 2, 3 nebo 4, výhodně 2 nebo 3; a io substituent R12 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je kyanoalkyl nebo -NHCORa, kde substituent Ra je alkylová skupina;
nebo (b) substituent R10 je -NR13R14, kde substituenty R13 a R14 spojeny dohromady tvoří heterocykl neobsahující karbonylovou skupinu v rámci kruhu. Výhodně substituent R3 nebo R6 je 2-(2-kyanoethylamino)ethylaminokarbonyl, 2-(acetylamino)ethylaminokarbonyl, morfolinokarbonyl, piperidin-l-ylkarbonyl, 2-kyanomethylaminoethylaminokarbonyl nebo piperidin-1-ylkarbonyl.
(10) Další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce lje taková, kde substituent R5 je COR10. kde substituent R10 je -NR13R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxy skup ina nebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, výhodněji substituent R5 je 2-[(d i ethy lam i no)-2-hydroxyethyl]am i nokarbonyl, 2-(A~ethyl-A'-2-hydr(ixyethylamino)ethylaminokarbonyl, karboxy methy lam i nokarbonyl, nebo 2-(2—hydroxy ethyl amino)ethylaminokarbonyl.
(11) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, substituent kde R6 je
-COR10, kde substituent R10 je -NR,3R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyskupinou, nižší alkylová skupina substituovaná hydroxyalkylaminoskupinou, karboxy skupina nebo -NR18R19, kde substituenty R18 a R19 jsou nezávisle atom vodíku nebo nižší nesubstituovaná alkylová skupina, výhodněji substituent R6 je [2-(diethylamino)-2-hydroxy]ethylaminokarbonyl, 2-(JV-ethyl-W-2hydroxyethylamino)ethylaminokarbonyl, karboxymethyl am i nokarbonyl nebo 2-(2hydroxyethylam i no)ethylam i nokarbonyl.
(12) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituent R5 je
-COR10, kde substituent R10 je -NR1 '(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O)“NR,3R14 nebo
-N(OH)R13, kde substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nesubstituované nižší alkylové skupiny, výhodně substituent R5 je 2-<A-hydroxy-V-ethylamino)ethylaminokarbonyl nebo 2-[NT(O) ^HsLJethylaminokarbonyl.
(13) Ještě další výhodná skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde substituent R6 je -COR10, kde substituent R10 je -NR11(CH2)nR12, kde substituent R12 je -N+(O) NR13R14 nebo -N(OH)Rk\ kde substituenty R1’ a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nesubstituované nižší alkylové skupiny, výhodně substituent R6 je
2-( A'-hy droxy-V—ethy lam i no)ethy lam i nokarbonyl nebo 2-[N+(O)“(C2H5)2]ethy lam i nokarbonyl.
(14) Ve výše uvedených skupinách (6) až (13), pokud substituent R5 je -COR10,pak výhodnější skupina sloučenin je taková, kde:
-43 CZ 303705 B6 substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, rerc-butyl, izobutyl nebo n-butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R , kde substituent Rt7 je hydroxyskupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, «-, izo nebo terc-butyl, feny, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenyl.
(15) Ve výše uvedených skupinách (6) až (13), pokud substituent R5 je -COR10, pak další výhodnější skupina sloučenin je taková, kde substituenty R6 a R7 spojeny dohromady tvoří 4CH2)4-.
(16) Ve výše výhodných skupinách (6) až (13), pokud substituent R6 je -COR10,pak výhodnější skupina sloučenin je taková, kde:
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, řerc-butyl, izobutyl nebo «-butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, «-, izo nebo Zerc-butyl, feny, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenyl.
(17) V rámci výše uvedených výhodných skupin a výhodnějších skupin (6) až (16) je ještě výhodnější skupina sloučenin, taková, kde substituent R’ je atom vodíku, alkylová skupina, -C(O)NRSR9, nesubstituovaná cykloalkylová nebo arylová skupina, výhodně atom vodíku, fenyl, 3,4—dimethoxyfenylaminokarbonyl, 4-rnethoxy-3-chlorfenylaminokarbonyl, ještě výhodněji atom vodíku nebo methyl, nejvýhodněji atom vodíku;
substituent R2 je kyanoskupina, atom vodíku, halogen, nižší alkoxyskupina, arylová skupina nebo S(O)2NRl3R, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je atom vodíku, arylová nebo alkylová skupina, výhodně substituent R2 je atom vodíku, chlor, brom, fluor, methoxyskupina, ethoxyskupina, fenyl, dimethylaminosulfonyl, 3-chlorfenylaminosulfonyl, karboxyskupina, methoxyskupina, aminosulfonyl, methylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin-3-ylaminosulfonyl, dimethylaminosulfonyl, izopropylaminosulfonyl, výhodněji atom vodíku, fluor nebo brom;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, NRL3C(O)R14, arylové skupiny, výhodně aryl případně substituovaný jedním nebo dvěma substituenty vybranými ze skupiny sestávajícími se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny a heteroarylové skupiny, výhodně heteroarylové skupiny případně substituované jedním nebo dvěma substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny; výhodně atom vodíku, methoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin—3—yl, 3,4-dichlorfenyl, 2-methoxy-5-izopropylfenyl, 4-«-butylfenyl, 3-izopropylfeny 1, výhodněji atom vodíku nebo fenyl; a substituent R4 je atom vodíku.
(18) Další výhodnější skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde:
substituent R1 je atom vodíku, alkylová skupina, -C(O)NR8R9, nesubstituovaná cykloalkylová nebo arylová skupina, výhodně atom vodíku, 3,4-dimethoxyfenylaminokarbonyl, 4-methoxy-3-chlorfenylaminokarbonyl, ještě výhodněji atom vodíku nebo methyl, konkrétně atom vodíku;
substituent R2 je kyanoskupina, atom vodíku, halogen, nižší alkoxyskupina, arylová skupina nebo S(O)2NR’3R14, kde substituent R13 je atom vodíku a substituent R14 je atom vodíku,
-44 CZ 303705 B6 arylová nebo alkylová skupina, výhodně substituent R2 je atom vodíku, chlor, brom, fluor, methoxyskupina, ethoxyskupin a, fenyl, dimethylamínosulfonyl, 3-chlorfenylaminosulfonyl, karboxyskupina, methoxyskupina, aminosulfonyl, methylaminosulfonyl, fenylaminosulfonyl, pyridin—3-yl aminosulfonyl, dimethylamínosulfonyl, izopropylaminosulfonyl, výhodněji atom vodíku, fluor nebo brom;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, NRI3C(O)R14, arylové skupiny, výhodně aryl případně substituovaný jedním nebo dvěma substítuenty vybranými ze skupiny sestávajícími se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny a heteroarylové skupiny, výhodně heteroarylové skupiny případně substituované jedním nebo dvěma substítuenty vybranými ze skupiny sestávající se z nižší alkylové skupiny, halogenu nebo nižší alkoxyskupiny; výhodně atom vodíku, methoxyskupina, karboxyskupina, fenyl, pyridin-3-yl, 3,4-dichlorfenyl, 2-methoxy-5-izopropylfenyl, 4-«-bu tyl fenyl, 3-izopropyl fenyl, výhodněji atom vodíku nebo fenyl; a substituent R4 je atom vodíku.
V rámci výše uvedené výhodné skupiny (18) je výhodnější skupina sloučenin taková, kde:
substituent R5 je -COR10, kde substituent R10 je definován v podstatě vynálezu, výhodně -NRH(CH2)nR 2 nebo -NR13R14 definovaný v podstatě vynálezu.
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, /erc-butyl, izobutyl nebo «—butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroaiylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, «-, izo nebo fórc-butyl, feny, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenyl. Ve výše uvedené výhodné skupině (18) je další výhodnější skupina sloučenin taková, kde:
substituent R6 -COR10, kde substituent R10 je definován v podstatě vynálezu, výhodně -NRH(CH2)nR12, nebo-NR13R14 definován v podstatě vynálezu.
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a alkylové skupiny, výhodně atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, íerc-butyl, izobutyl nebo «-butyl, výhodněji atom vodíku nebo methyl; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, alkylové, arylové a heteroarylové skupiny a -C(O)R17, kde substituent R17 je hydroxyskupina, alkylová nebo arylová skupina, výhodněji atom vodíku, methyl, ethyl, izopropyl, «-, izo nebo fórc-butyl, fenyl, benzoyl, acetyl nebo karboxyskupina, ještě výhodněji methyl, atom vodíku nebo fenvl.
(19) Další výhodnější skupina sloučenin obecného vzorce I je taková, kde: substítuenty R1 a R4 jsou atom vodíku;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15 a -S(O)2NRl3R14;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, NR13C(O)R14, arylové skupiny a heteroarylové skupiny; substituent R5 je -C(O)R10;
substituent R6 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny; a substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny a-C(O)R17.
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je to, ve kterém sloučenina mající strukturu popsanou v bode (15) je:
-45 CZ 303705 B6 substítuent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, nižší alkoxyskupiny a-NR11(CH2)nR12, kde n je 2 nebo 3;
substítuent R11 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny; a substítuent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z arylové skupiny a -NR13R14.
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je to, ve kterém sloučenina mající strukturu popsanou v předešlých dvou odstavcích obsahuje substituenty R13 a R14 nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny a spojené substituenty -(CH2)4- -(CH2)5- -<CH2)2-O-(CH2)2- nebo -<CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(20) Další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které:
substítuent R1 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, -(CH2)rR,&aC(O)NR8R9;
substítuent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, arylové skupiny a-S(O)2NR13R14;
substítuent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R15; substítuent R4 je atom vodíku;
substítuent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny; substítuent R6 je -C(O)R10;
substítuent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové a arylové skupiny;
substítuent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 nebo 3.
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je sloučenina mající strukturu popsanou v přímo předchozím odstavci, ve které substítuent R3 je arylová skupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami vybranými ze skupiny sestávající se z nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny a halogenu.
(21) Taktéž další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které:
substítuent R1 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9;
substítuent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, aiylové skupiny a -S(O)2NRI3R14;
substítuent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R15; substítuent R4 je atom vodíku;
substítuent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny; substítuent R6 je -C(O)R10;
substítuent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové a arylové skupiny;
substítuent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny a-C(O)R15; a r je 2 nebo 3,
-46CZ 303705 B6 substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, nižší alkoxyskupiny a -NRhR!4 a -NR(CH2)„R'2, kde n je 1,2 nebo 3, substituent R11 je atom vodíku a substituent R12 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, nižší alkoxyskupiny, -C(O)R15, heteroarylové skupiny a -NR13R14.
(22) Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je sloučenina mající strukturu popsanou v přímo předchozím odstavci, ve které substituenty R13 a R14 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, heteroarylové skupiny a spojených substituentu -(CH2)4- -(CHjjs- -(CH2)2-O-(CH2)2-, nebo 4CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
(23) Další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které:
substituent R1 je -C(O)NR8R9, kde substituent R8 je atom vodíku a substituent R9 je arylová skupina případně substituovaná jednou nebo více skupinami vybranými ze skupiny sestávající se z halogenu, hydroxyskupiny a nižší alkoxyskupiny;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, arylové skupiny a-S(O)2NR,3R14;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a-C(O)R15; substituent R4 je atom vodíku;
substituent R5 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku a nižší alkylové skupiny; substituent R6je-C(O)R10;
substituent R7 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové a arylové skupiny;
substituent R16 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny a -C(O)R15; a r je 2 nebo 3, (24) Další výhodné provedení podle předloženého vynálezu je sloučenina, ve které: substituent R* je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny;
substituent R2 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, nižší alkoxyskupiny, arylové skupiny a -C(O)R15 a S(O) NRl3R14;
substituent R3 je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, halogenu, arylové skupiny, heteroarylové skupiny a -C(O)R15; substituent R4 je atom vodíku;
substituent R5 je -C(O)R10; a substituent R6 a R7 spojeny dohromady tvoří skupinu -(CH2)4-.
Ve sloučenině mající strukturu popsanou v právě předešlém odstavci je výhodné provedení takové, kde substituent R10 je vybrán ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, -NR13R14 a-NH(CH2)nNRl3R14, kde n je 2 nebo 3.
Dalším výhodným provedením podle předloženého vynálezu je to, ve kterém sloučenina mající strukturu popsanou v předešlých dvou odstavcích obsahuje substituenty R1 ’ a Ri4 nezávisle vybrané ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, nižší alkylové skupiny a spojených substituentů -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)2-O-(CH2)2- nebo -(CH2)2N(CH3)(CH2)2-47CZ 303705 B6
Detailní popis
PK, jejichž katalytická je modulována sloučeninami podle předloženého vynálezu, zahrnují tyrosinkinázy, jenž mohou být rozděleny na dva typy, receptorové tyrosinkinázy (RTK) a buněčné tyrosinkinázy (CTK), a serin-threoninkinázy (STK). Přenos signálu zprostředkovaný RTK je přitom zahájen extracelulámí interakcí se specifickým růstovým faktorem (ligandem), po nižší následuje dimerizace receptoru, přechodná stimulace vlastní aktivity proteinové tyrosinkinázy a fosforylace. Vytvoří se tak vazebná místa pro molekuly intracelulámí signální transdukce a vedou k vytvoření komplexů se spektrem cytoplasmatických signálních molekul, které usnadňují adekvátní buněčnou odpověď (například buněčné dělení, metabolické účinky na extracelulámí mikroprostředí), viz Schlessinger a Ullrich, 1992, Neuron 9: 303 - 391.
Bylo prokázáno, že fosforylační místa tyrosinu na receptorech růstového faktoru fungují jako vysoce afinní vazebná místa pro domény SH2 (src homologie) na signálních molekulách. Fantl etal., 1992, Cell 69: 413 - 423; Songyang et aí, 1994, Mol Cell Biol. 14: 2777 - 2785; Songyang et al, 1993, Cell 72: 767 - 778; a Koch et al., 1991, Science 252: 668 - 678. Bylo identifikováno několik intracelulámích substrátových proteinů, které se asociují s receptorovými tyrosinkinázami (RTK). Mohou být rozděleny do dvou hlavních skupin: (1) substráty, které mají katalytickou doménu, a (2) substráty, které takovou doménu nemají, ale slouží jako adaptéry a asociují se s katalyticky aktivními molekulami (Songyang et al, 1993, Cell 72: 767 - 778). Specificita interakcí mezi receptory a doménami SH2 jejich substrátů je určována aminokyselinovými zbytky, bezprostředně obklopujícími fosforylovaný tyrosinový zbytek. Rozdíly ve vazebných afinitách mezi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvencemi obklopujícími fosfotyrosinové zbytky na konkrétních receptorech korelují s pozorovanými rozdíly v jejich substrátových fosforylačních profilech (Songyang et al 1993, Cell 72: 767 - 778). Z pozorování vyplývá, že funkce každé receptorové tyrosinkinázy je určována nejen profilem její exprese a dostupnosti ligandů, ale i řadou „downstreamových“ transdukčních drah signálu, kteréjsou aktivovány konkrétním receptore. Fosforylace tedy poskytuje významný regulační stupeň, který určuje selektivitu signálních drah vyvolávaných konkrétními receptory růstového faktoru, jakož i receptory diferenciačního faktoru.
STK, primárně cyto so lově, ovlivňují vnitřní biochemii buňky často jako zaváděcí odpověď na výskyt PTK. STK se podílení na signálním procesu, který iniciuje syntézu DNA a následnou mitózu, která vede k buněčné proliferaci.
PK signální transdukce má tedy za následek, mezi dalšími odpověďmi, buněčnou proliferaci, diferenciaci, růst a metabolizmus. Abnormální buněčná proliferace může vést k širokému spektru poruch a onemocnění, včetně vývoje neoplazie, např. karcinomu, sarkomu, glioblastomu a hemangiomu, poruch, např. leukémie, psoriázy, arteriosklerózy, artritidy a diabetické retinopatie a dalších poruch souvisejících s nekontrolovanou angiogenezi a/nebo vaskulogenezí.
Přesné pochopení mechanizmu, kterým sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují PK, není třeba znát k využívání předloženého vynálezu. Avšak předpokládá se, i když to neznamená omezení na určitý konkrétní mechanizmus nebo teorii, že tyto sloučeniny interagují s aminokyselinami v katalytické oblasti PK. PK mají typicky bilobátovou strukturu, kde ATP se zřejmě váže ve štěrbině mezi dvěma laloky v oblasti, ve kteréjsou aminokyseliny mezi PK konzervativní. Dále se předpokládá, že inhibitory PK se váží nekovalentními interakcemi, např. vodíkovou vazbou, van der Waalsovými silami a iontovými interakcemi ve stejné obecné oblasti, jako se výše zmíněný ATP váže na PK. Konkrétněji se dá říci, že 2-indolinonová složka sloučenin podle předloženého vynálezu se váže v obecné mezeře normálně obsazené adeninovým kruhem ATP. Specifita konkrétní molekuly pro příslušné PK může pak vznikat jako výsledek dalších interakcí mezi různými substituenty na 2-indolinonovém jádře a aminokyselinovými doménami specifickými vůči konkrétním PK. Různé substituenty indolinonu tedy mohou přispívat k preferenční vazbě na konkrétní PK. Možnost výběru sloučeniny, která bude aktivní v různých vazebných místech ATP (nebo jiného nukleotidu), umožňuje, že sloučeniny podle předloženého vynálezu
-48CZ 303705 B6 jsou použitelné pro zacílení jakéhokoliv proteinu na takové místo. Sloučeniny uvedené v předloženém vynálezu tedy jsou použitelné při in vitro testech s těmito proteiny a rovněž vykazují in vivo terapeutické účinky vlivem interakcí s takovými proteiny.
Dále poskytují sloučeniny podle předloženého vynálezu terapeutický způsob ošetření různých druhů pevných nádorů, včetně, ale není to na ně omezeno, karcinomů, sarkomů, včetně Kaposiho sarkomu, erythroblastomu, glioblastomu, meningiomu, astrocytomu, melanomu a myoblastomu. Ošetření nebo prevence nepevných nádorů, např. leukémie, rovněž spadá do předloženého vynálezu. Indikace mohou zahrnovat, ale bez omezení, rakoviny mozku, rakoviny močového měchý10 ře, ovariální rakoviny, rakoviny žaludku, rakoviny pankreatu, rakoviny tlustého střeva, rakoviny krve, rakoviny plic a rakoviny kostí.
Další příklady typů poruch souvisejících s nepřiměřenou aktivitou PK, kde mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu použitelné při prevenci, ošetření a studiu, zahrnují, ale bez omeze15 ní, buněčné proliferativní poruchy, fibrotické poruchy a metabolické poruchy.
Buněčné proliferativní poruchy, u kterých je možná prevence, ošetření nebo další studie podle předloženého vynálezu, zahrnují rakovinu, proliferativní poruchy krevních cév a proliferativní poruchy mesangiálních buněk.
Proliferativní poruchy krevních cév se týkají poruch souvisejících s abnormální vaskulogenezí (tvorba krevních cév) a angiogenezi (šíření krevních cév). Zatímco vaskulogeneze a angiogeneze hraje důležitou roli při různých normálních fyziologických procesech, např. vývoji embrya, tvorby žlutého tělíska, hojení ran a regenerace orgánu, mohou tyto poruchy hrát klíčovou roli při vývoji rakoviny, a tím vést k tvorbě nových kapilár potřebných k udržení aktivity nádoru. Další příklady proliferativních poruch krevních cév zahrnují artritidu, kde nové kapilární krevní cévy napadají klouby a ničí chrupavku, a oční onemocnění jako třeba diabetickou retinopatii, kde nové kapiláry na sítnici napadají sklivec, způsobují krvácení a slepotu.
Bylo zjištěno, že dvě strukturně příbuzné RTK vážou VEGF s vysokou afinitou: receptor tyrosinu 1 typu fms (fit-1) (Shibuya et al., Oncogene 5: 519 - 524, 1990; De Vries et al., Science 255; 989 - 991, 1992) a receptor KDR/FLK-1 také známý jako VEGF-R2. Bylo publikováno, že růstový faktor vaskulámích endothelových buněk je specifický mitogen endotheliálních buněk s in vitro promotomí aktivitou k růstu endothe liálních buněk. Ferrara & Henzel, 1989, Biochein.
Biophys. Res. Comm., 161: 851 - 858; Vaisman et al., 1990,7 Biol. Chem. 265: 19461 - 19566. Údaje uvedené v přihlášce vynálezu U.S. č. 08/193 829, 08/038 596 a 07/975 750 důrazně poukazují na to, že VEGF není odpovědný pouze za proliferaci endotheliálních buněk, ale také za prvotní regulaci normálních a patologických angiogenezi. Obecně víz Klagsburn & Soker, 1993, Current Biology, 3(10) 699 - 702; Houck, et aí, 1992,7 Biol. Chem., 267: 26031 - 26037.
Normální vaskulogeneze a angiogeneze hraje důležitou roli při různých fyziologických procesech, např. embryonálním vývoji, hojení ran, regeneraci orgánu a ženských reproduktívních procesech, např. vývoji folikul ve žlutém tělísku během ovulace a růstu placenty po těhotenství. Folkman & Shing, 1992, 7 Biological Chem., 267 (16): 1093 1 - 34. Nekontrolovatelná vaskulo45 geneze a/nebo angiogeneze bývá spojena s onemocněními, např. diabetem, jakož i s maligními pevnými nádory, které jsou na vaskularizaci závislé z hlediska růstu. Klagsburn & Soker, 1993, Current Biology, 3(10) 699 - 702; Folkham, 1991, 7. Natí Cancer. Inst., 82: 4-6; Weídner, et al., 1991, New Engí 7 Med, 324: 1 - 5.
Předpokládaná role VEGF při proliferaci a migraci endotheliálních buněk během angiogeneze a vaskulogeneze indikuje důležitou roli receptorů KDR/FLK-1 při těchto procesech. Onemocnění, např. diabetes mellitus (Folkman, 198, in Xlth Congress of Thrombosis and Haemostasis (Verstraeta, et aí, eds.), pp. 583 - 596. Leuven Univesity Press, Leuven) a artritida, jakož i růst maligního nádoru, mohou vyplývat z nekontrolovatelné angiogeneze. Viz např. Folkman, 1971,
N. Engí 7. Med., 285: 1182 - 1186. Receptory, na které se VEGF specificky vázou, jsou důležité
-49CZ 303705 B6 a účinné cíle regulace a modulace vaskulogeneze a/nebo angiogeneze a různých závažných onemocnění, která zahrnují abnormální buněčných růst způsobený těmito procesy. Plowman, et al., 1994, DN&P, 7(6): 334 - 339. Detailněji hraje receptor pro KDR/FLK-1 vysoce specifickou roli při neovaskularizaci vytvářející vybraný cíl pro terapeutické přístupy k ošetření rakoviny a dalších onemocnění zahrnujících nekontrolovatelnou tvorbu krevních cév.
Předložený vynález tedy poskytuje sloučeniny schopné regulace a/nebo modulace tyrosinkinázové transdukce signálu, včetně transdukce signálu receptoru KDR/FLK-1 za účelem inhibice nebo podpory angiogeneze a/nebo vaskulogeneze, tzn. sloučeniny inhibují, zabraňují nebo interferují se signálem transdukovaným KDR/FL-1 za předpokladu, že je aktivován ligandem, např. VEGF. Ačkoliv se předpokládá, že sloučeniny podle předloženého vynálezu působí na receptor nebo další komponentu společně stransdukční signální drahou tyrosinkinázy, mohou také působit přímo na nádorové buňky vznikající v důsledku nekontrolovatelné angiogeneze.
Ačkoliv názvosloví lidských a myších protějšků generického receptoru ,,flk-1„ je rozdílné, v mnoha ohledech jsou zaměnitelné. Myší receptor, Flk-1, ajeho lidský protějšek, KDR, mají sekvenční homologii z 93,4 % v intracelulámí doméně. Myší Flk-1 se rovněž váže na lidský receptor VEGF se stejnou afinitou jako myší VEGF, a tudíž je aktivován ligandem odvozených od kterékoliv species. Millauer et al., 1993, Cell, 72: 83ř - 846; Quinn et al., 1993, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 90: 7533 -7537. FLK-1 se také asociuje s a následně tyrosin fosforyluje lidské substráty RTK (např. PLC-γ nebo p85), pokud jsou koexprimovány v buňkách 293 (lidské embryonální ledvinové fibroblasty).
Proto modely, které se opírají o receptor FLK-1, jsou přímo aplikovatelné k pochopení funkce receptoru KDR. Například použití myšího receptoru FLK-1 ve způsobech, které identifikují sloučeniny, jež regulují myší dráhu signální transdukce, jsou přímo aplikovatelné k identifikaci sloučenin, které mohou být používány k regulaci lidské dráhy transdukce signálu, tzn. regulují aktivitu spojenou s receptorem KDR. Chemické sloučeniny identifikované jako inhibitory KDR/FLK-1 in vitro tedy mohou být potvrzeny na vhodných in vivo modelech. Myší i potkaní in vivo zvířecí modely byly potvrzeny jako excelentní způsoby zkoumání klinické účinnosti agens působících na KDR-FLK-1 indukovanou dráhu transdukce signálu.
Předložený vynález tedy poskytuje sloučeniny, které regulují, modulují a/nebo inhibují vaskulogenezi a/nebo angiogenezí ovlivněním enzymatické aktivity receptoru KDR/FLK-1 a interference se signálem transdukováným KDR/FLK-1. Předložený vynález tedy poskytuje terapeutický přístup k ošetření mnoha druhů pevných nádorů, včetně, ale není to nikterak limitováno, glioblastomu, melanomu a Kaposiho sarkomu, a karcinomu vaječníků, plic, prsu, prostaty, pankreatu, tlustého střeva a epidermoidního karcinomu. Navíc z dostupných údajů lze říci, že podání sloučenin, které inhibují dráhu transdukce signálu zprostředkovanou KDR/Flk-1, může být také používáno při ošetření hemangiomu, restenózy a diabetické retinopatie.
Dále ještě se tento vynález týká inhibice vaskulogeneze a angiogeneze dalšími dráhami zprostředkovanými receptorem, včetně dráhy zahrnující receptor fit-1.
Transdukce signálu zprostředkovaná receptorovou tyrosinkinázu je přitom zahájena extracelulární interakcí se specifickým růstovým faktorem (ligandem), po níž typicky následuje dimerizace receptoru, tranzitní stimulace vnitřní aktivity proteinové tyrosinkinázy a autofosforylace. Vytvoří se tak vazebná místa pro molekuly intracelulámí signální transdukce a vedou k vytvoření komplexů se spektrem cytoplasmatických signálních molekul, které usnadňují adekvátní buněčnou odpověd1 (například buněčné dělení, diferenciaci, metabolické efekty, změny extracelulárního mikroprostředí), viz Schlessinger a Ullrich, 1992, Neuron 9: 1 - 20.
Blízká homologie intracelulámích oblastí KDR/FLK-1 s receptorem PDGF-β (50,3% homologie) a/nebo příbuzným receptorem flk-1 ukazuje na indukci dráhy transdukce signálu. Například bylo pro receptor PDGF-β publikováno, že členové rodiny src (Twamtey et aí, 1993, Proč.
-50CZ 303705 B6
Natí Acad Sci. USA, 90 : 7696 - 7700), fosfatidylinositol-3-kináza (Hu et aí, 1992. Mol. Celí Bioí, 12 : 981 - 990), fosfolipáza cy (Kashishian & Cooper, 1993, Mol. Celí Biol., 4 : 49-51), ras-GTPázu-aktivující protein (Kashishian et aí, 1992, EMBO J., 11 : 1373 - 1382), PTP-ID/syp (Kazlauskas et aí, 1993, Proč. Natí Acad. Sci. USA, 10 90 : 6939 - 6943), Grb2 (Arvidsson et aí, 1994, Mol. Celí Bioí, 14: 6715 - 6726) a adaptérové molekuly Shc a Nck (Nishimura et aí, 1993, Mol. Celí Bioí, 13: 6889 -6896) se vážou na oblasti zahrnující různá autofosforylační místa. Obecněji viz Claesson-Welsh, 1994, Prog. Growth Factor Res., 5: 37 - 54. Tudíž pravděpodobně dráhy transdukce signálu aktivované KDR/FLK-1 zahrnují dráhu ras (Rozakis et aí, 1992, Nátuře, 360 : 689 - 692), PI-3-kinázu, dráhy zprostředkované src aplcy. Každá z těchto dráh může hrát kruciální roli při angiogenním a/nebo vaskulogenním účinku KDR/FLK-1 v endotheliálních buňkách. Tudíž se další aspekt předloženého vynálezu týká použití zde popsaných organických sloučenin k modulaci angiogeneze a vaskulogeneze, protože tyto procesy jsou řízeny těmito dráhami.
Naopak jsou zahrnuty i poruchy související se smrštěním, kontrakcí nebo zavíráním krevních cév, jako je restenóza, a mohou být ošetřovány nebo může být jim zabráněno způsoby podle předloženého vynálezu.
Fibrotické poruchy se týkají abnormální tvorby extracelulámích matricí. Příklady fibrotických poruch zahrnují hepatickou cirhózu a proliterativní poruchy mesangiálních buněk. Hepatická cirhóza je charakterizována přírůstkem konstituentů extracelulámí matrice, což vede k tvorbě hepatických jizev. Zvětšená extracelulámí matrice mající za následek hepatické jizvy může být také způsobena virovou infekcí, např. hepatitidou. Zdá se, že při hepatické cirhóze hrají hlavní roli lipocyty. Další implikované fibrotické poruchy zahrnují aterosklerózu.
Proliferativní poruchy mesangiálních buněk se vztahují k poruchám způsobených abnormální proliferaci mesangiálních buněk. Mesangiální proliferativní poruchy zahrnují různá lidská renální onemocnění, např. glomerulonefrítidu, diabetickou nefropatii a maligní nefrosklerózu, jakož i poruchy jako trombotické mikroangiopatické syndromy, odhojování transplantátu aglomerulopatie. RTK PDGFR se podílí na udržení proliferace mesangiálních buněk. Floge et aí, 1993, Kidney International 43: 47S - 54S.
Mnoho druhů rakovin zahrnuje poruchy proliferace buněk a, jak je uvedeno výše, souvisí PK s buněčnými proliferativními poruchami. Tudíž není překvapující, že PK, např. členové rodiny RTK, souvisejí se vznikem rakoviny. Některé z těchto receptorů, jako EGFR (Tuzí et aí, 1991, Br. J. Cancer 63 : 227 -233, Torp et aí, 1992, APMIS 100 : 713 - 719), HER2/neu (Slamon et aí, 1989, Science 244 : 707 - 712) a PDGF-R (Kumabe et ai, 1992, Oncogene, 7 : 627 - 633) jsou při mnoha nádorech exprimovány v nadměrném množství a/nebo perzistentně aktivovány autokrinními kličkami. Při nej běžnějších a nej vážnějších rakovinách byla totiž zjištěna nadměrná exprese těchto receptorů (Akbasak and Suner-Akbasak et aí, 1992, J. Neurol. Sci, 111-119133, Dickson et ai, 1992, Cancer Treatment Res. 61 : 249 - 273, Koře et ai, 1992, J. Clin. Invest. 90 : 1352 - 1360) a autokrinní kličky (Lee and Donoghue, 1992, J. Celí Bioí, 118: 1057 - 1070, Konc et aí, supra, Akbasak and Sune-Akbasak et aí, supra). Například EGFR souvisí s karcinomem skvamózních buněk, astrocytomem, glioblastomem, rakovinou hlavy a krku, rakovinou plic a rakovinou močového měchýře. HER2 souvisí s rakovinou prsu, ovaríální rakovinou, rakovinou žaludku, rakovinou plic, rakovinou slinivky a močového měchýře. PDGFR souvisí s glioblastomem a melanomem, jakož i rakovinou plic, ovaríální rakovinou a rakovinou prostaty. RTK c-met také souvisí s tvorbou maligního nádoru. Například c-met souvisí, mezi jinými rakovinami, také s kolorektálními, tyreoidálními, pankreatickými, gastrickými a hepatocelulárními karcinomy a lymfomy. Navíc c-met je spojen také s leukémií. Exprese genu c-met ve velkém množství byla také zjištěna u pacientů s Hodgkinsovou a Burkittsovou nemocí.
IGF-IR, kromě toho, že se podílí na nutriční podpoře a diabetů 2. typu, souvisí také s několika typy rakovin. Například IGF-I se také podílí jako autokrinní růstový stimulátor na několika typech nádorů, např. karcinomu buněk při lidské rakovině prsu (Arteaga et aí, 1989, J. Clon.
•51 CZ 303705 B6
Invest. 84 : 1418 - 1423) a malobuněčného nádoru plic (Macauley et al., 1990, Cancer Res., 50 : 2511 - 2517). IFG-I, zatímco se celkově podílí na normálním růstu a diferenciaci nervového systému, předpokládá se, že je autokrinním stimulátorem lidského gliomu. Sandberg-Nordqvist etal., 1993, Cancer Res. 53 : 2475 - 2478. Význam IGF-IR ajeho ligandů při proliferaci buněk je dále podpořen faktem, že mnoho typů buněk v kultuře (fibroblasty, epitheliální buňky, buňky hladkého svalstva, T-lymfocyty, myeloidní buňky, chondrocyty a osteoblasty (kmenové buňky kostní dřeně)) jsou stimulovány k růstu právě IGF-I. Goldring and Goldring, 1991, Eukaryotic Gene Expression, 1 : 301 - 326. Baserga a Coppola se domnívají, že IGF-IR hraje nejdůležitější roli při mechanismu transformace a jako takový by mohl být preferovaným cílem pro terapeutické intervence širokého spektra lidských zhoubných bujení. Baserga, 1995, Cancer Res., 55 : 249 - 252, Baserga, 1994, Cell 79 : 927 - 930, Coppola et al., 1994, Mol. Cell. Biol., 14 : 4588 4595.
STK se podílejí na mnoha typech rakoviny, včetně, a to zejména, rakoviny prsu (Cance, et al., Int. J. Cancer, 54 : 571 - 77 (1993)).
Vztah mezi abnormální aktivitou PK a onemocněním není omezen jenom na rakovinu. Například RTK souvisí s onemocněními, např. psoriázou, diabetes mellitus, endometriózu, angiogenezí, vznikem ateromatózního plaku, Alzheimerovou nemocí, restenózou, von Hippelovým-Lindauovým onemocněním, epidermální hyperproliferací, neurodegenerativní onemocněními, makulámí degenerací spojenou s věkem a hemangiomy. Například EGFR byl zjištěn při korneálním a dermálním hojení ran. Vady v inzulin-R a IGF-IR jsou indikovány při diabetes mellitus 2. typu. Úplnější korelace mezi specifickými RTK ajejich terapeutickými indikacemi lze nalézt v Plowman et al., 1994, DN&P 7: 334 - 339.
Jak je uvedeno výše, nejen RTK, ale i CTK, včetně, ale není to nikterak limitováno, src, abl, fps, yes, fyn, lyn, lek, blk, hek, fgr a yrk (Bolen et al., 1992, FASEBJ., 6 : 3403 - 3409) se podílejí na proliferativní a metabolické dráze transdukce signálu, a lze tedy očekávat, a bylo to také tak uvedeno, že se podílejí na mnoha poruchách zprostředkovaných PTK, na které je předložený vynález zaměřen. Například bylo zjištěno, že mutovaný src (v-src) je onkoprotein (pp60v src) u kuřat. Navíc jeho buněčný homolog, proto-onkogen pp60c src. přenáší onkogenní signály mnoha receptorů. Nadměrná exprese EGFR nebo HER2/neu při nádorech vede ke konstitutivní aktivaci pp60c_src, cožje charakteristické pro maligní buňky, ale pro normální buňky nikoliv (zcela chybí). Na druhou stranu myši s nedostatkem exprese c-src vykazují osteopetrotický fenotyp, indikující klíčový podíl c—src na funkci osteoklastů a možnou účast na příbuzných poruchách.
Podobně se Zap70 podílí na signalizaci T-buněk, které se podílejí na autoimunitních poruchách.
STK souvisí se zánětem, autoimunítní poruchou, imunoodpověďmi a hyperprol iterativním i poruchami, jako je restenóza, fibróza, psoriáza, osteoartritida a revmatoidní artritida.
PK se také podílejí na uhnízdění embrya. Sloučeniny podle předloženého vynálezu tedy mohou poskytovat účinný způsob prevence takového uhnízdění embrya, a tudíž být použitelné jako ochranný prostředek proti početí. Další poruchy, které mohou být ošetřovány nebo může být jím zamezeno sloučeninami podle předloženého vynálezu, zahrnují imunologické poruchy, např. autoimunítní choroby, např. autoimunítní onemocnění, AIDS a kardiovaskulární poruchy, např. ateroskleróza.
Konečně v současné době existuje podezření, že RTK i CTK se podílejí na hyperimunitních poruchách.
Příklady účinků mnoha názorných sloučenin podle předloženého vynálezu na několik PTK je uvedeno v tabulce 2 níže. Prezentované sloučeniny a data nemají nikterak limitovat rozsah vynálezu.
- 52CZ 303705 B6
Dávky a farmaceutický přípravek
Sloučenina podle předloženého vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelná sůl mohou být jako takové podávány lidským pacientům nebo mohou být podávány ve farmaceutických přípravcích, ve kterých jsou výše uvedené látky smíchány s vhodnými nosiči nebo excipíentem(y). Techniky přípravy a podání léčiv mohou být nalezeny v „Remingtonů Pharmaceutical Sciences,“ Mack Publishing Co., Easton, PA., poslední vydání.
Termín „podání“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na podání sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo farmaceutického přípravku obsahujícího sloučeninu obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl podle předloženého vynálezu do organizmu za účelem prevence nebo ošetření poruch souvisejících s PK.
Vhodné způsoby podání zahrnují, ale není to nikterak limitováno, perorální, rektální, transmukózní nebo intestinální podání nebo intramuskulámí, subkutánní, intramedulámí, intratekální, přímé intraventrikulámí, intravenózní, intravitreální, intraperitoneální, intranazální nebo intraokulární injekce. Výhodnými způsoby podání jsou perorální a parenterální.
Nebo lze podávat sloučeninu spíše místním než systémovým způsobem, např. injekcí sloučeniny přímo do místa nádoru, často v depotní nebo trvale uvolňující se formulaci.
Dále lze léčivo podávat jako systém cílově specifického podání, např. v lipozómu potaženém protilátkou specifickou na určitý nádor. Lipozómy budou zaměřeny a vychytávány nádorem.
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu mohou být vyráběny standardním způsobem, např. standardním mícháním, rozpuštěním, granulací, přípravou dražé, rozmělňováním, emulgací, enkapsulací, zachytáváním nebo lyofilizací.
Farmaceutické přípravky pro použití podle předloženého vynálezu tak mohou být připraveny standardním způsobem za použití jednoho nebo více fyziologicky přijatelných nosičů obsahujících excipienty a pomocné látky, které usnadňují zpracování aktivních sloučenin do preparátů, které mohou být používány farmaceutickým způsobem. Vlastní příprava je závislá na vybraném způsobu podání.
Pro injekce mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu připraveny ve vodných roztocích, výhodně ve fyziologicky kompatibilních pufrech, např. Hanksův roztok, Ringerův roztok nebo pufru na bázi fyziologického roztoku. Pro transmukózní podání jsou ve formulaci používány takové penetrátory, které jsou vhodné pro překonání dané bariéry. Tyto penetrátory jsou obecně známy.
Pro perorální podání mohou být sloučeniny snadno připraveny spojením aktivních sloučenin se standardními farmaceuticky přijatelnými nosiči. Tyto nosiče umožňují připravit sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě tablet, pilulí, dražé, kapslí, roztoků, gelů, sirupů, kašovitých směsí, suspenzí, atd., pro perorální požití léku pacientem, který má být ošetřován. Farmaceutické preparáty pro perorální použití mohou být připraveny spojením aktivní sloučeniny s pevným excipientem, případně rozemletím výsledné směsi, a po přidání vhodných pomocných látek, pokud je třeba, zpracováním směsi granulí, čímž lze získat tablety nebo dražé. Vhodné excipienty jsou zejména plniva, např. cukry, včetně laktosy, sacharosy, mannitolu nebo sorbitolu; celulózové přípravky, např. kukuřičný škrob, pšeničný škrob, rýžový škrob, bramborový škrob a další látky, např. želatina, tragant, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy a/nebo polyvinylpyrrolidon (PVP). Pokud je třeba, mohou být přidány prostředky zajišťující rozpad tablety po požití, např. zesítěný polyvinylpyrrolidon, agar nebo kyselina alginová nebo jejich soli, např. alginát sodný.
-53 CZ 303705 B6
Jádra dražé jsou opatřena vhodnými povrchovými vrstvami. Pro tento účel mohou být používány koncentrované roztoky cukrů, které mohou případně obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidon, karbopolový gel, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodná organická rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel. Organická barviva nebo pigmenty mohou být přidány do tablet nebo potahových vrstev dražé k identifikaci nebo charakterizaci rozdílných kombinací dávek aktivní sloučeniny.
Farmaceutické preparáty, které mohou být používány perorálně, zahrnují kapsle typu „flash-fit“ vyrobené ze želatiny, jakož i měkké, uzavřené kapsle vyrobené ze želatiny a změkčovadla, jako je glycerol nebo sorbitol. Kapsle typu „push-fit“ mohou obsahovat aktivní složky v příměsi s fillery, např. laktosou, pojivý, např. škroby, a/nebo lubrikanty, např. talek nebo stearát hořečnatý, a případně stabilizátory. V měkkých kapslích mohou být aktivní sloučeniny rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných roztocích, např. mastných olejích, minerálním oleji nebo tekutých polyethylenglykol ech. Navíc mohou být přidávány stabilizátory.
Farmaceutické přípravky, které mohou být také používány, zahrnují pevné želatinové kapsle. Nikterak nelimitujícím příkladem může být uvedena formulace aktivní sloučeniny ve formě perorálního léčiva jako dvě různě silné dávky 50 a 200 mg (kódy formulace J-01 1248-AA-00 a J-011248-AA-01). Tyto dvě různě silné dávky jsou připraveny ze stejných granulí naplněním do tuhých želatinových kapslí o různých velikostech, velikost 3 pro 50mg a velikost 0 pro 200mg kapsli. Skladba formulace může být např. podle tabulky 2.
Tabulka 2
komponenta název/kvalita konc. v granulaci (% hmotn./hmotn.) množství v 50 mg kapsle (mg) množství ve 200 mg kapsle (mg)
kód formulace J-011248-AA J-011248-AA-00 J-011248-AA-01
aktivní sloučenina NF 65,0 50,0 200,0
Mannitol NF 23,5 18,1 72,4
kroskarmelosa sodná NF 6,0 4,6 18,4
Povidone K 30 NF 5,0 3,8 15,2
stearát horečnatý NF 0,5 0,38 1,52
kapsle, švédská žluť NF velikost 3 velikost 0
Kapsle mohou být baleny do lahviček z hnědého skla nebo plastu za účelem ochrany aktivní sloučeniny proti světlu. Nádobky obsahující formulaci aktivní sloučeniny ve formě kapsle musí být skladovány při kontrolované teplotě (15 až 30 °C).
Pro podání inhalací jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu standardně podávány ve formě aerosolového spreje v aerosolovém balení nebo v rozprašovači a s vhodným propelentem, např., bez omezení, dichlordifluormethanem, trichlorfluormethanem, dichlortetrafluorethanem nebo oxidem uhličitým. V případě stlačeného aerosolu může být pro dávkování využit ventil, který umožní uvolnění přesného množství látky. Kapsle a patrony, např. ze želatiny, pro použití v inhalačním přístroji nebo insuflátoru mohou být připraveny způsobem, při kterém je spojena prášková směs sloučeniny a vhodná prášková báze, např. laktosa nebo škrob.
-54 CZ 303705 B6
Sloučeniny mohou být připraveny pro parenterální podání injekcí, např. injekcí bolusu nebo kontinuální infuzí. Formulace pro injekce mohou být v jednotkových dávkovačích formách, např. v ampulích nebo v obalech pro více dávek, s přidanou konzervační látkou. Přípravky mohou být také ve formách suspenze, roztoků nebo emulzí v olejových nebo vodných nosičích a mohou obsahovat pomocné agens, např. suspendační, stabilizační a/nebo dispergační prostředky.
Farmaceutické formulace pro parenterální podání zahrnují vodné roztoky aktivních sloučenin ve formě, která je rozpustná ve vodě. Dále mohou být suspenze aktivních sloučenin připraveny jako příslušné olej ovité injekční suspenze. Vhodné lipofilní nosiče zahrnují mastné oleje, např. sezamový olej, estery syntetických mastných kyselin, např. ethyl-oleát nebo triglyceridy nebo látky jako lipozómy. Vodné injekční suspenze mohou obsahovat látky, které zvyšují viskozitu suspenze, např. sodná sůl karboxymethylcelulózy, sorbitol nebo dextran. Případně suspenze mohou také obsahovat vhodné stabilizátory a/nebo agens, která zvyšují rozpustnost sloučenin, čímž umožňují připravit vysoce koncentrované roztoky.
Alternativně může být aktivní složka ve formě prášku určeného ke spojení s vhodným nosičem před použitím, např. se sterilní apyrogenní vodou.
Sloučeniny mohou být také připraveny jako rektální přípravky, např. čípky nebo retenční klyzma, pomocí např. standardních čípkových bází, jako je kakaové máslo nebo jiné glyceridy.
Kromě výše uvedených formulací, mohou být také připraveny sloučeniny ve formě depotních preparátů. Tyto formulace s dlouhou dobou účinku mohou být podávány implantací (např. subkutánní nebo intramuskulámí podání nebo intramuskulámí injekcí). Tímto způsobem mohou být připraveny sloučeniny s vhodnými polymemím i nebo hydrofóbními materiály (např. v emulzi s farmaceuticky přijatelným olejem) nebo ionexy nebo jako špatně rozpustné deriváty, např. špatně rozpustné soli.
Příkladem, avšak neomezujícím, farmaceutického nosiče pro hydrofóbní sloučeniny podle předloženého vynálezu je systém spolurozpouštědel obsahující benzylalkohol, nepolární surfaktant, organický polymer mísitelný s vodou a vodnou fázi, např. spolurozpouštědlový systém VPD. VPD je roztok 3 % obj. benzylalkoholu, 8 % obj. nepolární surfaktantu Polysorbát 80 a 65 % obj. polyethylenglykolu 300, doplněný na konečný objem absolutním ethanolem. Systém spolurozpouštědel VPD (VPD:5W) se sestává z VPD zředěného 1:1 5% dextrózou ve vodném roztoku. Tento systém spolurozpouštědel dobře rozpouští hydrofóbní sloučeniny a sám má po systémovém podání nízkou toxicitu. Přirozeně mohou být podíly systému spolurozpouštědel značně měněny, nicméně tak, aby se zachovaly charakteristické rysy jako rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé složky systému spolurozpouštědel mohou být měněny: např. místo polysorbátu 80 mohou být používány další nepolární surfaktanty o nízké toxicitě; velikost částic polyethylenglykolu může být různá; polyethylenglykol může být nahrazen dalšími biokompatibilní polymery, např. póly vinyl pyrrolidonem; a další cukry nebo polysacharidy mohou nahradit dextrózu.
Nebo může být použit jiný dávkový systém pro hydrofóbní farmaceutické sloučeniny. Pro hydrofóbní léčiva jsou standardními příklady přenašečů a nosičů využívaných při tomto způsobu lipozómy a emulze. Navíc mohou být používána určitá organická rozpouštědla, např. dimethylsulfoxid, nicméně často za cenu větší toxicity.
Navíc sloučeniny mohou být podávány systémem trvalého, tj. postupného uvolňování, např. semipermeabilními matricemi pevných hydrofobních polymerů obsahujících terapeutické činidlo. V obou jsou zavedeny a odborníkům známy různé materiály pro postupné uvolňování. Kapsle s postupným uvolňováním mohou v závislosti na svém chemickém charakteru uvolňovat sloučeniny po dobu několika týdnů až více než 100 dnů. V závislosti na chemickém charakteru a biologické stabilitě terapeutického reagens mohou být používány další strategie stabilizace proteinu.
-55CZ 303705 B6
Farmaceutické přípravky také mohou obsahovat vhodné nosiče nebo excipienty v pevné nebo gelové fázi. Příklady takových nosičů nebo excipientů zahrnují, ale není to na ně omezeno, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, různé cukry, škroby, deriváty celulózy, želatinu a polymery, např. polyethylenglykoly.
Mnoho sloučenin podle předloženého vynálezu modulujících PK může být ve formě fyziologicky přijatelných solí, kde nárokovaná sloučenina může tvořit negativně nebo pozitivně nabitou složku. Příklady solí, ve kterých sloučenina vytváří pozitivně nabitou část, zahrnují, ale není to nikterak limitováno, kvartémí amoniové soli (definované zde na jiném místě), např. hydrochlorid, sulfát, uhličitan, laktát, tartrát, malát, maleát, sukcinát, kde atom dusíku kvartémí amonné skupiny je dusík vybrané sloučeniny podle předloženého vynálezu, který zreagoval s příslušnou kyselinou. Soli, ve kterých sloučenina podle předloženého vynálezu vytváří negativně nabitou část, zahrnují, ale není to nikterak limitováno, vápenaté a horečnaté soli vytvořené reakcí skupiny karboxylové kyseliny ve sloučenině s příslušnou bází (jako je hydroxid sodný (NaOH), hydroxid draselný (KOH), hydroxid vápenatý (Ca(OH)2), atd.).
Farmaceutické přípravky vhodné pro použití v předloženém vynálezu zahrnují přípravky, ve kterých jsou aktivní složky obsaženy v množství, které je dostatečné k dosažení zamýšleného záměru, napr. modulace aktivity PK nebo ošetření nebo prevence poruch spojených s PK.
Konkrétněji, terapeuticky účinné množství znamená množství sloučeniny, které je účinné k prevenci, zmírnění nebo zlepšení symptomů onemocnění nebo k prodloužení přežívání subjektu, který je ošetřován.
Stanovení terapeuticky účinného množství může provést pracovník zkušený v oboru, zejména na základě zde uvedených informací.
Pro jakoukoliv sloučeninu používanou ve způsobu podle předloženého vynálezu může být terapeuticky účinná dávka nejprve stanovena podle testů na buněčných kulturách. Pak může být dávka testována na buněčných a zvířecích modelech k získání rozmezí oběhové koncentrace, které zahrnuje IC50 stanovenou podle testů na buněčných kulturách (tzn. koncentrace testované sloučeniny, která je potřebná k dosažení 50% inhibice aktivity dané PK). Tyto informace mohou být používány u lidských subjektů k přesnějšímu stanovení účinných dávek.
Toxicita a terapeutická účinnost zde popsaných sloučenin může být stanovena standardními farmaceutickými postupy na buněčných kulturách nebo experimentálních zvířatech, napr. stanovením IC50 a LD50 (obě jsou diskutovány v jiné části textu) pro danou sloučeninu. Data získaná z testů na buněčných kulturách a studií na zvířatech mohou být použita ke stanovení rozpětí dávky pro použití u lidí. Dávkování může být v tomto rozmezí různé v závislosti na používané dávkové formě a způsobu podání. Přesná formulace, způsob podání a dávkování mohou být vybrány jednotlivým lékařem v závislosti na stavu pacienta (viz Fingel et aí, 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, Ch. 1 pl).
Množství a interval dávky mohou být upraveny individuálně k získání plazmových koncentrací účinné látky, které stačí k udržení modulačních účinků kinázy. Tyto plazmové koncentrace se označují jako minimální účinné koncentrace (MEC). Hodnota MEC bude pro každou sloučeninu jiná, ale může být stanovena z/« vitro dat; např. koncentrace potřebná k dosažení 50 až 90% inhibice kinázy může být stanovena s použitím zde popsaných testů. Dávky potřebné k dosažení MEC budou záviset na individuálních charakteristikách a způsobu podání. Ke stanovení plazmových koncentrací může být používána HPLC nebo bioanalýzy.
intervaly mezi dávkami mohou být také stanoveny pomocí hodnoty MEC. Sloučeniny by měly být podávány podle režimu, kterým se udržují plazmové hladiny nad hodnotou MEC v průběhu 10 až 90 % doby, výhodně mezi 30 až 90 % a nejvýhodněji 50 až 90 %.
-56CZ 303705 B6
V současné době se pohybují terapeuticky účinná množství sloučenin obecného vzorce 1 v rozmezí přibližně od 25 mg/m2 do 1 500 mg/trf denně; výhodné asi 3 mg/m' denně. Výhodněji od 50 mg/qd do 400 mg/qd.
V případech lokálního podání nebo selektivní absorpce nemůže účinná místní koncentrace léčiva odpovídat plazmové koncentraci a dalším standardním způsobům používaným ke stanovení přesného množství dávky a intervalu.
Množství podávaného přípravku bude samozřejmě záviset na ošetřovaném subjektu, závažnosti io jeho stavu, způsobu podání, posouzení ošetřujícího lékaře atd.
Přípravky, pokud je třeba, mohou být ve formě balení nebo zásobníku, jako je kit schválený FD A, který může obsahovat jednu nebo více jednotkových dávkovačích forem obsahujících aktivní složku. Balení může např. obsahovat kovovou nebo plastovou fólii, např. měkké průhled15 né balení. Balení nebo zásobník může být distribuován společně s návodem k podání. K balení nebo zásobníku může být připojeno upozornění související s obsahem ve formě předepsaného orgánem státní správy regulujícím výrobu, použití nebo prodej farmaceutických prostředků, kterým se schvaluje forma nebo složení přípravků pro lidské nebo veterinární aplikace. Upozorněním tohoto typu může být například nálepka schválená U.S. Food and Drug Administration pro léky na předpis nebo schválený příbalový leták. Také mohou být připraveny přípravky obsahující sloučeninu podle vynálezu formulovanou v kompatibilním farmaceutickém nosiči umístěné ve vhodné nádobce a označené pro ošetření indikovaného stavu. Vhodné indikované stavy uvedené na nálepce mohou zahrnovat ošetření nádoru, inhibici angiogeneze, ošetření fíbrózy, diabetů atd.
Další aspekt předloženého vynálezu zahrnuje to, že sloučenina podle předloženého vynálezu nebo její sůl nebo prolécivo může být kombinována s dalšími chemoterapeutiky pro ošetření onemocnění a poruch uvedených výše. Například může být sloučenina, sůl nebo proléčivo podle předloženého vynálezu kombinována s alkylačními činidly, jako je fluorouracil (5-FU) samotný nebo v další kombinaci s leukovorinem; nebo další alkylační činidla, například, ale není to nikte30 rak limitováno, jiná pyrimidinová analoga, např. Tegafur-uracil (UFT), kapecitabin, gemcitabin a cytarabin, alkylsulfonáty, např. busulfan (používaný při ošetření chronické granulocytové leukémie), improsulfan a piposulfan; aziridiny, např. benzodepa, karboquon, meturedepa a uredepa; ethyleniminy a methylmelaminy, např. altretamin, triethylenmelamin, triethylenfosforamid, triethylenthíofosforamid a trimethylolmelamin; a dusíkaté yperity, např. chlorambucil (používaný při ošetření chronické lymfocytámí leukémie, primární makroglobulinémie a nehodgkinova lymfomu), cyklofosfamid (používaný při ošetření Hodgkinovy nemoci, mnohačetného myelomu, neuroblastomu, rakoviny prsu, ovariální rakoviny, rakoviny plic, Wilmova nádoru a rabdomyosarkomu), estramustin, ifosfamid, novembrichin, prednimustin a uracilové yperity používané při ošetření primární trombocytózy, nehodgkinova lymfomu, Hodgkinovy nemoci a ovariální rako40 viny); a triaziny, např. dacarbazin (používaný při ošetření sarkomu měkké tkáně).
Sloučenina, sůl nebo proléčivo předloženého vynálezu může být také používáno v kombinaci s dalšími antimetabolitovými chemoterapeutiky, například, ale není to nikterak limitováno, analoga kyseliny listové skupiny, např. methotrexát (používaný při ošetření akutní lymfocytámí leuké45 mie, choriokarcinomu, mycosis fungiodes rakoviny prsu, rakoviny hlavy a krku a osteogenního sarkomu) a pteropterin; a purinová analoga, např. merkaptopurin a thioguanin, který nalezl použití při ošetření akutní granulocytární, akutní lymfocytámí a chronické granulocytámí leukémie.
Také se uvažuje, že sloučenina, sůl nebo proléčivo podle předloženého vynálezu může být také používáno v kombinaci s chemoterapeutiky na přírodní bázi, například, ale není to nikterak limitováno, vínkové alkaloidy, např. vinblastin (používaný při ošetření rakoviny prsu a rakoviny varlete), vinkristin a vindesin; epipodofylotoxiny, například etoposid a teniposid, obě jsou použitelné při ošetření rakoviny varlete a Kaposiho sarkomu; antibiotická chemoterapeutika, například daunorubicin, doxorubicin, epirubicin, mitomycin (používaný k ošetření rakoviny žaludku, čípku,
-57CZ 303705 B6 tlustého střeva, prsu, močového měchýře a pankreatu), daktinomycin, temozolomid, plikamycin, bleomycin (používaný při ošetření rakoviny kůže, jícnu a genitourinámího traktu); a enzymatická chemoterapeutika, např, L-asparagináza.
Kromě výše uvedených mohou být také sloučeniny, soli nebo proléčiva podle předloženého vynálezu používány v kombinaci s koordinačními komplexy na bázi platiny (cisplatina, atd.); substituovanými močovinami, např, hydroxy močovin a; deriváty methy Ihydrazinu, např. prokarbazin; adrenokortikálními supresivy, např. mitotan, aminoglutethimid; a hormony a antagonisty hormonů, např. adrenokortikosteroidy (např. prednison), progestiny (např. kapronát hydroxypro10 gesteronu); estrogeny (např. diethylstilbesterol); antiestrogeny, např. tamoxifen; androgeny, např. propionát testosteronu; a inhibitory aromatáz, např. anastrozol.
Také se předpokládá, že kombinace sloučeniny podle předloženého vynálezu bude účinná v kombinaci s mitoxantronem nebo paclitaxelem pro ošetření pevných nádorů nebo leukémií, například, ale není to nikterak limitováno, akutní myeloidní leukémie (nelymfocytámí).
Obecný syntetický postup
K přípravě sloučenin podle předloženého vynálezu je možno použít této obecné metody:
Příslušně substituovaný 2-oxoindol (1 ekviv.), příslušně substituovaný aldehyd (1,2 ekviv.) a báze (0,1 ekviv.) se smíchají v rozpouštědle (1 až 2 ml/mmol 2-oxoindolu) a směs se pak zahřívá po dobu asi 2 až asi 12 hodin. Po ochlazení se vzniklý precipitát filtruje, promyje studeným ethanolem nebo etherem a suší za vakua, ěímž se získá produkt v pevné formě. Pokud nevznikne pre25 cipitát, reakční směs se koncentruje a zbytek se trituruje směsí dichlormethanu a etheru, výsledná pevná látka se shromáždí filtrací a suší. Produkt může být případně dále čištěn chromatografií.
Báze může být organická nebo anorganická báze. Je-li používána organická báze, pak je jí výhodně dusíkatá báze. Příklady organický dusíkatých báze zahrnují, ale bez omezení, diizo30 propylamin, trimethylamin, triethylamin, anilin, pyridin, l,8-diazabicyklo[5.4.1]undec—7-en, pyrrolidin a piperidin.
Příklady anorganických bází zahrnují, ale bez omezení, amoniak, hydroxidy alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, fosforečnany, uhličitany, hydrogenuhličitany, hydrogensírany a amidy. Alkalické kovy zahrnují lithium, sodík a draslík, zatímco alkalické zeminy zahrnují vápník, hořčík a baryum.
Ve výhodném provedení předloženého vynálezu, za předpokladu, že rozpouštědlo je protické, např. voda nebo alkohol, je báze anorganická báze alkalického kovu nebo alkalické zeminy, výhodně hydroxid alkalického kovu nebo alkalické zeminy.
Odborné veřejnosti, a to na základě obecných principů organické syntézy a dosavadního popisu, nebude činit potíže zvolit pro příslušnou reakci nej vhodnější bázi.
Rozpouštědlo, ve kterém reakce probíhá, může být buď protické, nebo aprotické, výhodně protické.
Termín „protické rozpouštědlo“ se vztahuje na rozpouštědlo, která má atom(y) vodíku kovalentně vázaný k atomům kyslíku nebo dusíku, což činí vodíkové atomy značné kyselými, a tím schopnými podílet se solutem na vodíkových vazbách. Příklady protických rozpouštědel zahrnují, ale není to nikterak limitováno, vodu a alkoholy.
Termín „aprotické rozpouštědlo“ se vztahuje na rozpouštědlo, které může být polární i nepolární, ale neobsahuje kyselé vodíky, a tudíž není schopné podílet se solutem na vodíkových vazbách.
Příklady nepolárních aprotických rozpouštědel zahrnují, ale není to nikterak limitováno, pentan,
-58 CZ 303705 B6 hexan, benzen, toluen, methylenchlorid a tetrachlormethan. Příklady polárních aprotických rozpouštědel zahrnují chloroform, tetrahydrofuran, dimethylsulfoxid a dimethylformamid.
Ve výhodném provedení podle předloženého vynálezu je rozpouštědlo protické, výhodně voda nebo alkohol, např. ethanol.
Reakce je prováděna při teplotách, které jsou vyšší než pokojová teplota. Teplota se obecně pohybuje od asi 30 °C do asi 150 °C, výhodně od asi 80 °C do asi 100 °C, nejvýhodněji od asi 75 °C do asi 85 °C, což je asi teplota varu ethanolu. Termín „asi“ znamená, že teplota se výhodně io pohybuje v rozmezí 10 stupňů Celsia uvedené teploty, nejvýhodněji v rozmezí 2 stupňů Celsia uvedené teploty. Tudíž například „asi“ 75 °C znamená 75 °C ± 10 °C, výhodně 75 °C ± 5 °C a nej výhodněji 75 °C ± 2 °C.
2-Oxoindoly a aldehydy mohou být snadno syntetizovány standardními chemickými způsoby.
Z textu by mělo být odborné veřejnosti srozumitelné, že sloučeniny podle předloženého vynálezu lze připravit i jinými syntetickými způsoby a následující příklady slouží jako návrh způsobu přípravy, který nemá být nikterak limitující.
Příklady provedení vynálezu
Následující přípravy a příklady jsou zde pro snazší pochopení předloženého vynálezu a nemají nikterak limitovat rozsah vynálezu, ale pouze ho ilustrovat a reprezentovat.
Syntetické příklady Způsob A: Formylace pyrrolů
POCI3 (1,1 ekviv.) se přidá po kapkách do dimethylformamidu (3 ekviv.) při teplotě -10 °C, poté se přidá příslušný pyrrol rozpuštěný v dimethylformamidu. Po míchání po dobu dvou hodin se reakční směs zředí H2O a alkalízuje na pH 11 s 10N KOH. Vzniklý precipitát se spojí filtrací, promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá požadovaný aldehyd.
Způsob B: Saponifíkace esterů pyrrolkarboxylové kyseliny
Směs esteru pyrrolkarboxylové kyseliny a KOH (2 až 4 ekviv.) v EtOH se refluxuje, dokud reakce neskončí (podle TLC). Ochlazená reakční směs se okyselí na pH 3 IN HC1. Vzniklý precipitát se spojí filtrací, promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá pyrrol40 karboxylová kyselina.
Způsob C: Amidace
Do míchaného roztoku pyrrolkarboxylové kyseliny rozpuštěné v dimethylformamidu (0,3M) se přidá l-ethyl-3-(3-dÍmethylaminopropyl)karbodiimid (1,2 ekviv.), 1-hydroxybenzotriazol (1,2 ekviv.) a triethylamin (2 ekviv.). Přidá se příslušný amin (1 ekviv.) a reakce se míchá do té doby, dokud nedoběhne, a sleduje se na TLC. Pak se do reakční směsi přidá ethylacetát a roztok se promyje nasyceným roztokem NaHCO3 a solankou (s dostatečnou solí), suší nad bezvodým MgSO4 a koncentruje, čímž se získá požadovaný amid.
Způsob D: Kondenzace aldehydů a oxindolů obsahujících substituenty karboxylové kyseliny
Směs oxindolu (1 ekviv.), 1 ekviv. aldehydu a 1 až 3 ekviv. piperidinu (nebo pyrrolidinu) v ethanolu (0,4M) se míchá při teplotě 90 až 100 °C do té doby, dokud reakce nedoběhne, a sleduje se
-59CZ 303705 B6 na TLC. Směs se pak koncentruje a zbytek okyselí 2N HCl, Vzniklý precipitát se promyje vodou a ethanolem a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá produkt.
Způsob E: Kondenzace aldehydů a oxindolů neobsahujících substituenty karboxylové kyseliny
Směs oxindolů (1 ekviv.), 1 ekviv. aldehydu a 1 až 3 ekviv. piperidinu (nebo pyrrolidinu) v ethanolu (0,4M) se míchá při teplotě 90 až 100 °C do té doby, dokud reakce nedoběhne, a sleduje se na TLC. Směs se pak ochladí na pokojovou teplotu a vzniklý pevný podíl se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a suší, čímž se získá produkt. Pokud se po ochlazení reakční směsi io nevytvoří precipitát, směs se koncentruje a čistí sloupcovou chromatografii.
C. Příklady syntéz oxiondolů
Následující příklady syntézy reprezentativních oxiondolů nemají nikterak limitovat rozsah předloženého vynálezu. Na základě následujícího popisu budou odborné veřejnosti jasné alternativní způsoby přípravy uvedených oxindolů, jakož i dalších oxindolů používaných k přípravě sloučenin podle předloženého vynálezu. Tyto syntézy a oxindoly spadají rovněž do rozsahu a charakteru tohoto vynálezu.
5-am ino-2-oxi ndol
5--Nitro-2-oxindol (6,3 g) se hydrogenuje v methanolu nad 10% palladiem na aktivním uhlí, čímž se získá 3,0 g (60% výtěžek) požadované sloučeniny ve formě pevné bílé látky.
5-Brom-2-oxindol
2-Oxindol (1,3 g) ve 20 ml acetonitrilu se ochladí na teplotu -10 °C a do reakční směsi se za intenzivního míchání pomalu přidá 2,0 g A—bromsukcinimidu. Reakční směs se míchá po dobu
1 hodiny při teplotě -10 °C a 2 hodiny při teplotě 0 °C. Precipitát se spojí, promyje vodou a suší, čímž se získá 1,9 g (90% výtěžek) požadované sloučeniny.
4- M ethy 1-2-oxi ndol
Diethyloxalát (30 ml) ve 20 ml suchého etheru se přidá za stálého míchání do 19 g ethoxidu draselného suspendovaného v 50 ml suchého etheru. Směs se ochladí v ledové lázni a pomalu se přidá 20 ml 3-nitroaxylenu ve 20 ml suchého etheru. Hustá tmavá červená směs se zahřívá při refluxu po dobu 0,5 hodiny, koncentruje na tmavě červenou pevnou látku a nechá reagovat s 10% roztokem hydroxidu sodného, dokud se nerozpustí téměř veškerý pevný podíl. Tmavě červená směs se nechá reagovat s 30% peroxidem vodíku, dokud se červená barva směsi nezmění na žlutou. Alternativně se směs nechá reagovat s 10% roztokem hydroxidu sodného a 30% peroxidem vodíku, dokud tmavě červená barva roztoku nezmizí. Pevný podíl se odfiltruje a filtrát okyselí 6N kyselinou chlorovodíkovou. Výsledný precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje vodou a suší za vakua, čímž se získá 9,8 g (45% výtěžek) 2-methy 1—6-nitrofenyloctové kyseliny ve formě bělavé pevné látky. Pevný podíl se hydrogenuje v methanolu nad 10% palladiem na aktivním uhlí, čímž se získá 9,04 g požadované sloučeniny ve formě bílé pevné látky.
7-brom-5-chlor-2-oxindol
5-Chlor-2-oxindol (16,8 g) a 19,6 g Λ- bromsukcinirnidu se suspenduje ve 140 ml acetonitrilu a refluxuje po dobu 3 hodin. Po 2 hodinách refluxu byl na TLC (silikagel, ethylacetát) vidět
5- chlor-2-oxindol nebo A-bromsukcinimid (Rf 0,8), produkt (Rf 0,85) a druhý produkt (Rf 0,9), jejichž podíly se nezměnily ani po další hodině při refluxu. Směs se ochladí na teplotu 10°C, precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje 25 ml ethanolu a suší odsazením po dobu 20 minut v nálevce, čímž se získá 14,1 g vlhkého produktu (56% výtěžek). Pevný podíl se suspenduje ve
-60 CZ 303705 B6
200 ml denaturovaného ethanolu a kašovitá směs se míchá a refluxuje po dobu 10 minut. Směs se ochladí v ledové lázni na teplotu 10 °C. Pevný produkt se spojí vakuovou filtrací, promyje 25 ml ethanolu a suší za vakua při teplotě 40 °C, čímž se získá 12,7 g (51% výtěžek) 7-hrom 5 chlor2-oxindolu.
5-Fluor-2-oxindol
5-Fluorisatin (8,2 g) se rozpustí v 50 ml hydrátu hydrazinu a refluxuje po dobu 1,0 hodiny. Reakční směs se nalije do ledové vody. Precipitát se pak filtruje, promyje vodou a suší ve io vakuové sušárně, čímž se získá požadovaná sloučenina.
5-N itro-2-oxi n do 1
2-Oxindol (6,5 g) se rozpustí v 25 ml koncentrované kyseliny sírové a směs se udržuje při teplotě
-10 až -15 °C, zatímco se po kapkách přidává 2,1 ml dýmavé kyseliny dusičné. Po přidání kyseliny dusičné se reakční směs míchá při teplotě 0 °C po dobu 0,5 hodiny a nalije do ledové vody. Precipitát se spojí filtrací, promyje vodou a krystalizuje z 50% kyseliny octové. Krystalický produkt se pak filtruje, promyje vodou a suší za vakua, čímž se získá 6,3 g (70 %) 5-nitro-2oxindolu.
5-AminosuIfonyl-2-oxindol
Do lOOml baňky naplněné 27 ml chlorsulfonové kyseliny se pomalu přidá 13,3 g 2-oxindolu. Reakční teplota se během přidávání udržuje pod 30 °C. Po přidání se reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny, zahřívá při teplotě 68 °C po dobu 1 hodiny, ochladí a nalije do vody, Precipitát se promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá 11,0 g 5—chlorsulfonyl-2-oxíndolu (50% výtěžek), který se dále používá bez Čištění.
5-Chlorsulfonyl-2-oxindol (2,1 g) se přidá do 10 ml hydroxidu amonného v 10 ml ethanolu a míchá pří pokojové teplotě přes noc. Směs se koncentruje a pevný podíl se spojí vakuovou filtrací, čímž se získá 0,4 g (20% výtěžek) požadované sloučeniny ve formě bělavé pevné látky. 5-Isopropylaminosulfonyl-2-oxindol
Do lOOml baňky naplněné 27 ml chlorsulfonové kyseliny se pomalu přidá 13,3 g 2-oxindolu. Reakční teplota se během přidávání udržuje pod 30 °C. Po přidání se reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny, zahřívá při teplotě 68 °C po dobu 1 hodiny, ochladí a nalije do vody. Precipitát se promyje vodou a suší ve vakuové sušárně, čímž se získá 11,0 g 5-chlorsulfonyl-2-oxindolu (50% výtěžek), který se dále používá bez čištění.
Suspenze 3 g 5-chlorsulfonyl-2-oxindol 11,5 g izopropylaminu a 1,2 ml pyridinu v 50 ml dichlormethanu se míchá pří pokojové po dobu 4 hodin, během kterých se vytvoří pevný podíl, jenž se spojí vakuovou filtrací, kašovitá směs se promyje horkým ethanolem, ochladí, spojí vakuovou filtrací a suší za vakua pri teplotě 40 °C přes noc, čímž se získá 1,5 g (45 %)
5-izopropylamínosulfonyl-2-oxindolu.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6; DMSO=dimethylsulfoxid) 8 10,69 (s, br, IH, NH), 7,63 (dd, J = 2 a 8 Hz, IH), 7,59 (d, J =2 Hz, IH), 7,32 (d, J = 7 Hz, IH, NH-SO2-), 6,93 (d, J - 8 Hz, 1H), 3,57 (s, 2H), 3,14- 3,23 (m, 1H, CH4CH3)2, 0,94 (d, J = 7 Hz, 6H, 2 x CH,).
5-FenyIaminosulfonyl-2-oxindol
Suspenze 5-chlorsulfonyl-2-oxindolu (1,62 g, 7 mmol), anilinu (0,782 ml, 8,4 mmol) a pyridinu (I ml) v dichlormethanu (20 ml) se míchá při pokojové po dobu 4 hodin. Reakční směs se zředí ethylacetátem (300 ml) a okyselí IN kyselinou chlorovodíkovou (16 ml). Organická vrstva se
-61 CZ 303705 B6 promyje hydrogenuhličitanem sodným a solankou, suší a koncentruje. Zbytek se promyje ethanolem (3 ml) a pak chromatografuje na sloupci silikagelu ve směsi methanolu a dichlormethanu (1:9) jako mobilní fázi, čímž se získá 5-feny lamí nosu lfonyí-2-oxindol.
*H NMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 10,71 (s, br, IH, NH), 10,10 (s, br, IH, NH), 7,57 - 7,61 (m, 2H), 7,17 - 7,22 (m, 2H), 7,06 - 7,09 (m, 2H), 6,97 - 7,0 (m, IH), 6,88 (d, J = 8,4 Hz, IH), 3,52 (s, 2H).
Pyridin-3-ylamid 2-oxo-2,3-dihydro-17í-indol-5-sulfonové kyseliny
Roztok 5-chlorsulfonyl-2-oxindolu (3 g) a 3-aminopyridinu (1,46 g) v pyridinu (15 ml) se míchá při pokojové teplotě přes noc, kdy se objeví hnědá pevná látka. Pevný podíl se filtruje, promyje ethanolem a suší za vakua, čímž se získá 1,4 g (38 %) pyridin-3-ylaminu 2-oxo-2,3-dihydro-17/-indol-5-sulfonové kyseliny, *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,74 (s, IH, NH), 10,39 (s, IH, SO2NH), 8,27 - 8,28 (d, IH), 8,21 - 8,23 (m, IH), 7,59 - 7,62 (m, 2H), 7,44 - 7,68 (m, IH), 7,24 - 7,28 (m, IH), 6,69 - 6,71 (d, lH),3,54(s, 2H).
MS m/z (APCI+) 290,2.
5-Fenyloxindol
5- Brom-2-oxindol (5 g, 23,5 mmol) se za stálého míchání a malého záhřevu rozpustí v 100 ml toluenu a 110 ml ethanolu. Přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (1,9 g, 1,6 mol), poté 40 ml ( 80 mmol) 2M vodného uhličitanu sodného. Do této směsi se přidá benzenboronová kyselina (3,7 g, 30,6 mmol) a směs se zahřívá při teplotě olejové lázně 100 °C po dobu 12 hodin. Reakční směs se ochladí, zředí ethylacetátem (500 ml), promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (200 ml), vodou (200 ml), IN HCl (200 ml) a solankou (200 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a koncentruje, čímž se získá hnědá pevná látka. Triturací dichlor30 methanem se získá 3,8 g (77 %) 5-fenyl-2-oxindolu jako hnědé pevné látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO—d6) δ 10,4 (br s, IH, NH), 7,57 (dd, J = 1,8 a 7,2 Hz, 1H), 7,5 až 7,35 (m, 5H), 7,29 (m, IH), 6,89 (d, J - 8,2 Ηζ,ΙΗ), 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z 209 [M]\
Podobným způsobem mohou být připraveny následující oxindoly:
6- (3,5-dichlorfenyl)-1,3-dihydroindol-2-on 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,46 (br, IH, NH), 7,64 (d, J - 1,8 Hz, 2H), 7,57 (m, IH), 7,27 (m, 2H), 7,05 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 3,5 (s, 2H).
MS-EI m/z 277/279 [M]+.
ó-(4Butyl fenyl)-1,3-dihydroindol-2-on ’H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (s, IH, NH), 7,49 (d, J “ 8,0 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8 Hz, 3H), 7,17 (dd, J - 1,5 a 7,8 Hz, IH), 6,99 (d, J - 1,5 Hz, IH), 3,48 (s, 2H, CH2CO), 2,60 (t, J = 7,5 Hz, 2Hz, CH2CH3), l,57(m,2H,CH2), 1,32 (m, 2H, CH2), 0,9 (t, J = 7,5 Hz,3H, CH3).
-62CZ 303705 B6
-(5-Izopropyl-2 methoxyfenyl)-1.3 dihydroindol-2—on 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,29 (br s, 1H, NH), 7,16 - 7,21 (m, 2H), 7,08 (d, J - 2,4 Hz, IH), 6,97 - 7,01 (m, 2H), 6,89 (d, J = 0,8 Hz, IH), 3,71 (s, 3H, OCH3), 3,47 (s, 2H, CH2CO),
2,86 (m, 1H,CH(CH3)2), 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 281 [M]\
6{4--Ethylfenyl)-].3-dihydroindol2 on *H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (br s, IH, NH), 7,50 (d, J - 8,2 Hz, 2H), 7,28 (d, J - 8,2 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 7,5, IH), 7,17 (dd, J = 1,6 & 7,5 Hz, IH), 6,99 (d, J - 1,6 Hz, IH), 3,48 (s, 2H, CH2CO), 2,63 (q, J = 7,6 Hz, 2H, CH2CH3), 1,20 (t, J = 7,6 Hz, 3H, CH2CH3).
MS-EI m/z 237 [M] + .
6—(3-lzopropylťenyl)-! .3-dihydroindol-2-on ’H NMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 10,37(brs, IH, NH), 7,43 (m, IH), 7,35-7,39 (m, 1 H), 7,17 -7,27 (m, 3H), 7,01 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 3,49 (s, 2H, CH2CO), 2,95 (m, IH, CH(CH3)2), 1,24 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 251 [M]+.
6(2,4-Dimethoxyfenyl)—l .3—dihydroindol-2—on lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (br s, IH, NH), 7,17 (m, 2H), 6,93 (dd, J = 1,6 &
7,6 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,58 (dd, J = 2,4 & 8,5 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H, OCH3), 3,74 (s, 3H, OCH3), 3,45 (s, 2H, CHO).
MS-EI m/z 269 [M]+.
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydroindol-2-on ‘H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,51 (s, IH, NH), 8,81 (d, J = 2,5 Hz, IH), 8,55 (dd, J = 1,8 a 5,7 Hz, IH), 8 (m, IH), 7,45 (dd, J = 5,7 a 9,3 Hz, IH), 7,3 (m, 2H), 7,05 (s, IH), 3,51 (s, 2H, CH2CO).
MS m/z210[M]+.
(3—chlor—4—ethoxyfenyl)amid 2—oxo-2.3-dihydro-l//-indol-4-karboxylové kyseliny
Do roztoku 4-karboxy-2-oxindolu (200 mg, 1,13 mmol) a 3-chlor-4-methoxyfenylaminu (178 mg, 1,13 mmol) v dimethylformamidu (15 ml) při pokojové teplotě se přidá benzotriazol-1yloxytris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorfosfát (BOP činidlo, 997 mg, 2,26 mmol), poté 4dimethylaminopyridin (206 mg, 1,69 mmol), směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 72 hodin. Reakce se pak zředí ethylacetátem (300 ml), promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou, 2N kyselinou chlorovodíkovou (100 ml), vodou (3 x 200 ml) a solankou. Pak se suší nad síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se trituruje ethylacetátem, čímž se získá (3-chlor—4-methoxyfenyl)amid 2—oxo-2.3-dihydro- 1//-indol 4 karboxylové kyseliny ve formě růžové pevné látky. lH NMR (360 MHz, DMSO—d6) δ 10,50(sbr, IH, NH), 10,12 (s, br, IH, NH), 7,9 (s, J - 2,5 Hz, IH), 7,62 (dd, J = 2,5 & 9 Hz, IH), 7,38 (d. J “ 7,6 Hz, IH), 7,32 (t, J = 7,6 Hz, IH), 7,13 (d, J = 9 Hz, IH), 6,98 (d, J = 7,6 Hz, IH), 3,83 (s, 3H, OCH3), 3,69 (s, 2H, CH2).
-63 CZ 303705 86
MS-E1 m/z 316 [M]+.
4-Karboxy-2-oxindol
Roztok trimethylsilyldiazomethanu v hexanu (2M) se přidává po kapkách do roztoku 2,01 g 2-chlor-3-karboxynitrobenzenu v 20 ml methanolu při pokojové teplotě, dokud se nepřesáhne uvolňovat plyn. Ke zhášení přebytku trimethylsilyldiazomethanu se přidá kyselina octová a zbytek se suší v sušárně přes noc. Získaný 2-chlor-3-methoxykarbonylenitrobenzen je dostatečně čistý k následující reakci.
Dimethy 1-malonát (6,0 ml) se přidá do ledově studené suspenze 2,1 g hydridu sodného v 15 ml DMSO. Reakční směs se míchá při teplotě 100 °C po dobu 1 hodiny, pak se ochladí na pokojovou teplotu a po částech se přidá 2-chlor-3-methoxykarbonylenitrobenzen (2,15 g) a směs se zahřívá při teplotě 100 °C po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se pak ochladí na pokojovou teplotu, nalije do ledové vody, okyselí na pH = 5 a extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje solankou, suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje, čímž se získají 3,0 g d i methy 1-2-meth oxy karbony 1-6-n itrofeny lmalonátu.
Dimethyl-2 -methoxykarbonyl-6-nitrofenylmalonát (3,0 g) se refluxuje v 50 ml 6N kyseliny chlorovodíkové přes noc. Směs se koncentruje do sucha, přidá se 20 ml ethanolu a 1,1 g chloridu cínatého a směs se refluxuje po dobu 2 hodin. Směs se filtruje přes Celit, koncentruje a chromatografuje na sloupci silikagelu ve směsi ethylacetátu, hexanu a octové kyseliny jako mobilní fázi, čímž se získá 0,65 g (37 %) 4-karboxy-2 oxindolu jako bílé pevné látky.
lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12,96 (s br, IH, COOH), 10,74 (s, br, IH, NH), 7,53 (d, J = 8 Hz, IH), 7,39 (t, J - 8 Hz. IH), 7,12 (d, J - 8 Hz, 1H),3,67 (s, 2H).
D. Syntéza pyrrolem substituovaných 2-indolinonů
Příklad 1
4-methyl-5-(2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-2-karboxylová kyselina
Ethylester 4-m ethy 1-2-pyrrol karboxy lové kyseliny (komerčně dostupný) se formyluje podle způsobu A, čímž se získá (73 %) ethylester 5-formyM-methyl 2-pyrrolkarboxylové kyseliny, která se pak hydrolyzuje podle způsobu B, čímž se získá 5-fbrmy!-4-methyl-l//-pyrrol-2 karboxylová kyselina (58 %).
Oxindol (133 mg, 1 mmol) se kondenzuje s 5-formyl-4-methyl--1 H-pyrrol-2-karboxylovou kyselinou (153 mg) podle způsobu D, čímž se získá 268 mg (100 %) požadované sloučeniny jako oranžovo-červené pevné látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,84 (s, br, IH, NH), 12,84 (s, br, IH, COOH), 10,98 (s, br, IH, NH), 7,82 (d, J = 7,5 Hz, IH), 7,67 (s, IH, H-vinyl), 7,18 (t, J = 7,5 Hz, IH), 7,01 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 6,88 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 6,71 (d, J = 2,2 Hz, IH), 2,32 (s, 3H, CH3).
MS (negativní mód) 266,8 [M-l]*.
Příklad 2
4-M ethy 1-5-( l -methy 1-2-oxo-l ,2-d i hydro i nd o 1-3-y li den methy l)-l //-pyrrol-2-karboxy lová kyselina
-64CZ 303705 B6
1-Methy l-l,3-dihydroindol-2-on (147mg, 1 mmol) se kondenzuje s 5-ťormyl-4-methyl-l//pyrrol-2-karboxylovou kyselinou (153 mg) podle způsobu D, čímž se získá 250 mg (86%) požadované sloučeniny.
*H NMR (360 MHz, DMSO-dň) δ 13,82 (s, br, IH, NH), 12,88 (s, br, IH), 7,83 (d, J = 7,5 Hz. 1H), 7,65 (s, 1H, H-vinyl), 7,26 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,02 - 7,09 (m, 2H), 6,70 (d, J = 2,2 Hz, 1H),
2,32 (s,3H, CH3).
io MS m/z 283,0 [M+l]+.
Příklad 3 methylester 4-methy 1- 5 (2 oxo—1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-2-karboxylovč kyseliny
Oxoindol (105 mg, 0,79 mmol) se kondenzuje s methylesterem 5-formyl—4-methyl -1//-pyrro 12-karboxylové kyseliny (110 mg, 0,67 mmol) podle způsobu E, čímž se získá 153,2 mg (81 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, br, IH, NH), 10,97 (s, br, IH), NH), 7,82 (d, J = 7,6 Hz, IH), 7,67 (s, IH, H vinyl), 7,2 (dt, J = 1,2 & 7,7 Hz, IH), 7,01 (dt, J = 1,2, 7,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2 Hz, 1H).
MS (ES) m/z 283 [M++l].
Příklad 4 ethyiester 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-lH-py rro 1-2-kar boxy lové kyseliny
5-ChIor-l,3-dihydroindol-2-on (2,22 g, 13,2 mmol) se kondenzuje s ethylesterem 5-formy 14 methyl-17/-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (2,43 g) podle způsobu E, čímž se získá 4,1 mg (94 %) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,95 (s, br, IH, NH), 7,98 (d, J = 2,2 Hz, IH, H-4), 7,78 (s, IH, H-vinyl), 7,18 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, IH, H-6), 6,87 (d, J= 8,3 Hz, IH, H-7), 7,34 (d, J= 1,8 Hz, IH, H-3'), 4,27 (q, J = 7,2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,33 (s, 3H, CH3), 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS (ES) m/z 330 [M+].
Příklad 5
5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroÍndol-3-ylidenmethyl)—4-methyl-17/-pyrrol-2-karboxylová kyselina
Směs ethylesteru 5-(5-chlor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4-methyl-1/7 pyrrol2-karboxylové kyseliny (1,3 mg, 4 mmol) a hydroxidu draselného v methanolu (25 ml) a ethanolu (25 ml) se zahřívají při refluxu přes noc. Nerozpustné látky se odstraní filtrací a směs se neutralizuje 6N kyselinou chlorovodíkovou, čímž se získá 0,876 g (70 %) požadované sloučeniny.
-65 CZ 303705 B6 *HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,80 (s, br, IH, NH), 12,90 (s, br, IH, COOH), 1,06 (s, br, IH, NH), 8,02 (d, J = 1,8 Hz, IH, H-4), 7,81 (s, IH, H-vinyl), 7,20 (dd, J = 1,8 & 8,3 Hz, IH, H-6), 6,89 (d, J = 8,3 Hz, IH, H-7), 6,72 (d, J = 1,8 Hz, IH, H-3'), 2,35 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 302 [M+].
Příklad 6 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 5-{5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4methy 1-1 H-py rrol-2-karboxy lové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (0,16 g, 0,76 mmol) se kondenzuje s (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)15 amidem 5-formyl-4-methyl-lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (0,2 g, připravený podle způsobu C), čímž se získá 60 mg (17 %) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
‘HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, IH, NH), 11,02 (s, br, IH, NH), 8,42 (t, J = 5,8 Hz, IH, CONCH2), 8,12 (d, J = 1,8 Hz, IH, H^l), 7,78 (s, IH, H-vinyl), 7,30 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, IH, H-6), 6,82 (d, J = 8,4, IH, H-7), 6,77 (d, J = 2,4 Hz, IH, H-3'), 3,22-3,31 (m,2H, CH2), 2,38 - 2,43 (m, 6H, 3 x CH2), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,62- 1,71 (m, 6H, 3 x CH2).
MS-EI m/z 456 a 458 [M+-l a M+-2].
Příklad 7 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl}4-methyI30 1 H-py rrol-2-karboxy lové kysel iny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (0,16 g, 0,75 mmol) se kondenzuje s (3-dimethylaminopropyl)amidem 5-formyM-methyl-lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (0,2 g, připravený podle způsobu C), čímž se získá 30 mg (8 %) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s, br, IH, NH), 11,02 (s, br, IH, NH), 8,40 (m, IH, CONCH2), 8,12 (d, J = 1,5 Hz, IH, H-4), 7,78 (s, IH, H-vinyl), 7,30 (dd, J = 1,5 & 8,2 Hz, IH, H-6), 6,82 (d, J = 8,2 Hz, IH, H-7), 6,78 (d, J = 2,4 Hz, IH, H-3'), 3,23 (m, 2H, CH2), 2,38- 2,45 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,61 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-] a M++2].
Příklad 8 (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-lH-pyrroI~ 2-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (212 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-lH-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (připravený z ethyl-pyrrol-2-karboxylátu podle způsobu A, B a pak C), čímž se získá 162 mg (38 %) požadované sloučeniny.
-66CZ 303705 B6 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,53 (s, br, IH, NH), 11,06 (s, br, IH, NH), 8,37 (t, IH, CONCH2), 7,89 (m, 2H), 7,32 (dd, J = 2,0 Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,80 - 6,84 (m, 2H), 3,3 (ni, 2H. CH2), 2,45 - 2,55 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2), 0,95 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 430 a 432 [M+-l aJVf+l].
Příklad 9 io (2-diethylaminoethyl)amid 5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol2-karboxylové kyseliny
6-Feny 1-1,3-dihydroindoI-2-on (209 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 182 mg (42 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO-dó) δ 13,56 (s, br, IH, NH), 11,06 (s, br, IH, NH), 8,36 (t, IH, CONCH2), 7,77 (s, IH, H-vinyl), 7,73 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,64 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,46 (m, 2H),
7,32 (m, 2H), 7,11 (s, IH), 6,96 (m, IH), 6,80 (m, IH), 3,31 - 3,32 (m, 2H, CH2), 2,46 - 2,53 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2), 0,96 (t, J - 6,9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 428 [Mj.
Příklad 10 (2-diethylaminoethyl)amid 5-( 5-brom-2-oxo-l,2-dihy dro i ndol-3-yliden methy 1)-1 //-pyrro 12-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (212 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)methylamidem 5-formyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 246 mg (55 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,54 (s, br, IH, NH), 11,06 (s, br, IH, NH), 7,90 (m, 2H),
7,33 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, IH), 6,82 - 6,85 (m, 3H), 3,55 (s, br, 2H, CH2), 3,25 (s, br, 3H,
NCH3), 2,57 (t, J - 6,5 Hz, 2H, CH2), 2,45 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 0,91 (m, 6H, N(CH2CH3)2). MS-EI m/z 444 a 446 [M+-l a M+-l].
Příklad 11 (2-diethy lam i noethyl)methy lam id 5-(2-oxo—6-feny 1-1,2^d i hydroindol-3-yl idenmethyl)-l Zipy rro 1-2-karboxy lové kyseliny
6-Feny l-l,3-dihydroindol-2-on (209 mg, 1 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)methylamidem 5-formyl-l//-pyrro 1-2-karboxy lové kyseliny, čímž se získá 277 mg (63 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,58 (s, br, IH, NH), 11,04 (s, br, IH, NH), 7,78 (s, IH, H-vinyl), 7,73 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,64 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,33 - 7,36 (m, 2H),
7,11 (s, IH), 6,84 (m, IH), 6,78 (m, IH), 3,55 (s, br, 2H, CH2), 3,25 (s, br, 3H, NCH3), 2,58 (t, 2H, CH2), 2,44 (m, 4H, N(CH2CH3)2), 0,92 (tn, 6H, N(CH2CH3)2).
-67CZ 303705 B6
Příklad 12 (3-diethylaminopropyl)amid 3-methyl-5-(2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l Hpyrrol-2-karboxylové kyseliny
Oxindol (66,5 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3—diethylaminopropyl)amidem 5-formyl-3methyl-1//-pyrro 1-2-karboxy lové kyseliny (připraveným z ethylesteru 3-formy 1-3--methy 1-1Hpyrrol-2-karboxylové kyseliny podle způsobu B, pak C), Čímž se získá 39 mg (21 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (360 MHz, DMSO-+d6) 8 13,34 (s, br, IH, NH), 10,88 (s, br, IH, NH), 7,62 -7,67 (m,3H), 7,17 (m, IH), 6,99 (m, IH), 6,87 (d, J = 7,6 Hz, IH), 6,63 (d, J = 1 Hz, IH), 3,26-3,32 (m, 2H, CH2), 2,41 - 2,48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 380 [M+].
Příklad 13 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2—dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyll//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (106 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3-diethylamínopropyl)amidem 5-formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 35 mg (15 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO-JÓ) 8 13,35 (s, br, IH, NH), 11,00 (s, br, IH, NH), 7,89 (d, J-1,9 Hz, IH, IH4), 7,80 (s, IH, H-vinyl), 7,74 (t, J= 5,3 Hz, IH, CONCH2), 7,31 (dd, J = 1,9 & 8,4 Hz, IH, H-6), 6,83 (d, J = 8,4 Hz, IH, H-7), 6,63 (s, IH, H-3'), 3,26 (m, 2H, CH2), 2,41 - 2,48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l aM++l].
Příklad 14 (3-dÍethylaminopropyl)amid 3—methy 1-5-(2-oxo—6-fenyl— 1.2—dihydroindol- 3-y lidenmethy 1)1//-pyrrol 2-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydroÍndol-2-on (105 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 5-formy]-3-rnethyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 67,8 mg (30 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMS()-dó) 8 13,37 (s, br, IH, NH), 11,02 (s, br, IH, NH), 7,23 -7,73 (m, 1 IH), 3,29 (m, 2H, CH2), 2,41 - 2,48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,64 (m, 2H, CH2), 0,94 (t, J - 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
Příklad 15 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-methoxy-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3methy 1-1H— pyrro 1-2-karboxylové kysel iny
-68 CZ 303705 B6
-Methoxy-l J-<lihydroindol-2-on (82,5 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 5-formyl-3-methyl- l// pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 80 mg (39 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,45 (s, br, IH, NH), 10,70 (s, br, IH, NH), 7,68 - 7,70 (m, 2H), 7,32 (d, J - 1,8 Hz, 1), 6,72 - 6,79 (m, 2H), 6,60 (s, IH), 3,73 (s, 3H, OCH3), 3,28 (m, 2H, CH2), 2,41 - 2,48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2,29 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 410 [M+].
Příklad 16 15 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(6-methoxy-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
6-Methoxy—1,3—dihydroindol -2-on (82,5 mg, 0,5 mmol) se kondenzuje s (3-diethylamino20 propyl)amidem 5-formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny, čímž se získá 63 mg (31 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,22 (s, br, IH, NH), 10,86 (s, br, IH, NH), 7,39 - 7,63 a 6,37 - 6,55 (m, 6H), 3,73 (s, 3H, OCH3), 3,3 (m, 2H, CH2), 2,45 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2),
2,28 (s, 3H, CH3), 1,63 (m, 2H, CH2), 0,93 (m, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 410 [M+].
Příklad 17 (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethv!)-4,5,6.7 tetrahydro-2//-izoÍndol-l-karboxylové kyseliny
Ethylester 4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylové kyseliny (May, Donald A.; Lash, Timothy D.; J. Org. Chem., 1992, 57 : 18, 4820 - 4828) se formyluje podle způsobu A, pak B, čímž se získá 3-formy 1-4,5,6,7-tetrahydro-277-izoindol-l -karboxylová kyselina.
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (1,43 g, 6,8 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)40 amidem 3-formyl-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylové kyseliny (1,97 g), čímž se získá 2,2 g (67 %) požadované sloučeniny jako žluto—oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO <16) δ 13,47 (s, IH, NH), 11,0 (s, IH, NH), 8,0 (d, IH, NH), 7,70 (s, IH, CH), 7,28 (dd, J = 2,1 a 8,2 Hz, IH, ArH), 7,16 (m, IH, ArH), 6,8 (d, J = 8,3 Ηζ,ΙΗ,
ArH), 3,3 (s, 2H, CONH), 2,5 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,78 (br m, 2H, pyrrol CH2), 2,72 (br m, 2H, pyrrol CH2), 1,7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1,74 (br s, 4H, CH2CH2CH2CH2), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 a 486 [M+-l a M’-l].
Příklad 18 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,755 tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylové kyseliny
-69CZ 303705 B6
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (20 mg, 0,1 mmol) se kondenzuje s (3-diethy lam inopropyl)amidem 3-formyM,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-í-karboxylové kyseliny (30 mg), čímž se získá 33 mg (46 %) požadované sloučeniny jako oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10,9 (s, IH, NH), 8,0 (m, IH, NH), 7,68 (m, IH, ArH), 7,4 (m, IH, ArH), 7,29 (d, J = 1,9 a 8,5 Hz, IH, ArH), 6,8 (d, J = 8 Hz, IH, ArH), 2,7 (br m, 4H, 2 x NCH2), 2,4 (m, 8H, 4xNCH2), 1,7 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1,6 (br m, 2H, CH2CH2CH2), 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 499 a 501 [M+ a M+-2].
Příklad 19 (3-pyrrolidin~l -yl propy l)amid 3-{5~brom-2-oxo-l,2-d i hydroindol-3-yl idenmethy 1)-4,5,6,7tetrahydro-2/Y-izoindol-l-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-díhydroindol-2-on (80 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)20 amidem 3-formyl—4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l -karboxylové kyseliny (120 mg), čímž se získá 43 mg (22 %) požadované sloučeniny jako hnědo-oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,4 (s, IH, NH), 10,9 (s, IH, NH), 8,0 (m, IH, NH), 7,69 (m, 1H, ArH), 7,49 (m, 1H, ArH), 7,28 (d, J = 1,7 a 7,8 Hz, 1H, ArH), 6,8 (d, J = 8 Hz, 1H, ArH),
3,3 (br m, 2H, 2 x NCH2), 2,8 (m, 4H, 2 x pyrrolCH2), 2,5 (br m, 4H, N(CH2CH3)2), 1,6 (br m,
8H, 2 x pyrrolCH2CH2, CH2CH2CH2 a CONHCH2).
MS-EI m/z 407 a 499 [M+ + M+-2],
Příklad 20 (2-diethylaminoethyl)amid 3-(2-oxo-6-pyridin-3-yl—l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-A5,6,7 tetrahydro—27/ izoindol-1 -karboxylové kyseliny
6-Pyridin-3-yl— 1,3-dihydroindol-2-on (60 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 3-formyl-4,5,6,7—tetrahydro-2//—izoindol—1 —karboxylové kyseliny (80 mg), čímž se získá 50 mg (38 %) požadované sloučeniny jako načervenalé pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO_d6) δ 13,4 (s, IH, NH), 11 (s, IH, NH), 8,9 (d, IH, NH), 8,7 (dd, IH, ArH), 8,1 (dd, IH, ArH), 7,9 (d, IH, ArH), 7,6 (s, IH, CH), 7,5 (dd, IH, ArH), 7,3 (dd, IH, ArH), 7,1 (m, 2H, ArH), 3,35 (m, 2H, CONHCH2), 2,8 (m, 4H, 2 x pyrrolCH2), 2,5 (br m, 6H, N(CH2CH3)2 a NCH2), 1,75 (br s, 4H, 2 x pyrro!CH2CH2), 0,9 (t, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 484 [M+]Příklad 21 (3-diethylaminopropyl)amid 4-benzoyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)3-methyl-17/-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
Do směsi benzoylchloridu (1 ekviv.) a chloridu hlinitého (1 ekviv.) v dichlorethanu při teplotě 80 °C po dobu 4 hodin. Směs se pak extrahuje ethylacetátem (EtOAc) a H2O, spojené organické
- 70CZ 303705 B6 extrakty se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší a koncentrují, čímž se získá 51%) 4-benzoy 1-3,5-d i methy 1-17/-pyrrol-2-kar boxy lová kyselina.
Směs ethylesteru 4 benzoyl-3.5—dímethyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (4,13 g.
15,2 mmol) a dusičnanu ceričito-amonného (33 g, 4 ekviv.) v 50 ml směsi tetrahydrofuranu (THF), kyseliny octové (HOAc) a H2O (1:1:1) se refluxuje přes noc. Reakční směs se pak ochladí, extrahuje EtOAc a pak alkalizuje na pH 9 uhličitanem sodným. Organická vrstva se pak promyje solankou, suší (MgSO4) a koncentruje, poté čistí sloupcovou chromatografíi, čímž se získá 3,25 g (75 %) ethylesteru 4-benzoyl-5-formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyselo líny jako žluté pevné látky.
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on se kondenzuje s 4-benzoyl-5-formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2karboxylovou kyselinou podle způsobu D, čímž se získá 4-benzoyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dÍhydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-l Z/-pyrrol-2-karboxylová kyselina. Tato karboxylová kyselina se pak kondenzuje s A,A-diethyl-l,3-propandiaminem podle způsobu C, čímž se získá požadovaná sloučenina.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 7,96 (m, 1H, CONCH2), 7,76 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,68 (t, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,40 (s, 2H), 7,33 (dd, J = 1,6 & 8,3 Hz, IH, H-6), 6,84 (d, J - 8,3 Hz, IH, H-7),
3,33 (m, 2H, CH2), 2,42 - 2,46 (m, 6H, 3 x CH2), 2,10 (s, 3H, CH-,), 1,65 (m, 2H, CH2), 0,94 (t, J - 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 564 [M++l].
Příklad 22 (3-morfolin 4 ylpropyl)amid 4-ben zoy 1-5-( 5-br o m-2-oxo-l,2-d i hydro i ndo 1-3-yl idenmethy l}-3-methy 1-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny ‘HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,10 (s, IH, NH), 11,14 (br, s, IH, NH), 7,92 (m, IH, CONCH2), 7,75 (m, 2H), 7,69 (t, IH), 7,56 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,33 (dd, J - 1,9 & 8,3 Hz, IH, H6), 6,85 (d, J = 8,3 Hz, IH, H-7), 3,56 (m, 4H, 2 x CH2), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,35 (m, 6H, 3 x CH2), 2,10 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 2H, CH2).
Příklad 23 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 4-benzyo1-3-methyI-5-(2-oxo-l,2-dihydroindol-3-yliden40 methyl)-! // pyrrol-2-karboxylové kyseliny 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,18 (s, IH, NH), 11,14 (br, s, IH, NH), 8,01 (m, IH, CONCH2), 7,74 (m, IH), 7,67 (m, IH), 7,55 (m, IH), 7,32 (s, IH, H-vinyl), 7,17 (m, IH), 6,92 (m, IH), 3,36 (m, 211, CH2), 2,44 (m, 6 H, 3 x CH2), 2,11 (s, 3H, CH3), 1,65 - 1,75 (m, 6H, 3 x
CH2).
MS-EI m/z 482 [M+].
Příklad 24 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 4-benzyol-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmcthvl)-'3 methyl-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny
-71 CZ 303705 B6 ‘HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,01 (s, IH, NH), 11,18 (br, s, IH, NH), 7,98 (m, IH, CONCH2), 7,75 (τη, 2H), 7,68 (m, IH), 7,55 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,33 (dd, J = 2,0 & 8,2 Hz, IH, H6), 6,84 (d, J = 8,2 Hz, IH, H-7), 3,34 (m, 2H, CH2), 2,42 - 2,47 (m, 6H, 3 x C|H2), 2,09 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 2H, CH2), 1,64 (m, 4H, 2 x CH2).
Příklad 25 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 4—benzyol-3-methyl-5-(2-oxo-ó-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny ‘HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,15 (s, IH, NH), 11,16 (br, s, IH, NH), 7,98 (m, IH, CONCH2), 7,77 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,69 (m, IH), 7,53 - 7,63 (m, 4H), 7,44 (m, 2H), 7,33 - 7,37 (m, 2H), 7,24 (s, 2H), 7,12 (s, IH), 3,36 (m, 2H, CH2), 2,43 - 2,48 (m, 6 H, 3 x CH2), 2,12 (s, H, CH3), 1,74 (m, 2H, CH2), 1,69 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 558 [M+].
Příklad 26 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 4-benzyol-5-(6-methoxy-2—oxo- l?2—dihydroindol 3-ylidenmethyl)-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny ‘HNMR (300 MHz, DMSO—dó) δ 13,99 (s, IH, NH), 11,05 (br, s, IH, NH), 7,93 (m, IH, CONCH2), 7,72 (m, 2H), 7,65 (m, IH), 7,54 (m, 2H), 7,15 (s, IH, H-vinyl), 7,04 (d, J = 8,4 Hz, IH, H-4), 6,51 (dd, J = 2,3 & 8,4 Hz, IH, H-5), 6,44 (d, J - 2,3 Hz, IH, H-7), 3,74 (s, 3H, OCH3, 3,35 (m, 2H, CH2), 2,42 až 2,46 (m, 6 H 3 x CH2), 2,10 (s, 3H, CH3), 1,72 (m, 2H, CH2), 1,65 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 512 [M+],
Příklad 27 (3-py rro 1 id ín-1 -yl propyl )amid 4-benzyol-5-(5-methoxy-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyí)-3-methy 1-1 //-pyrro 1-2-karboxylové kyseliny 'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,24 (s, IH, NH), 10,90 (br, s, IH, NH), 7,97 (m, IH, CONCH2), 7,75 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,69 (m, IH), 7,56 (m, 2H), 7,24 (s, IH, H-vinyl), 6,79 (m, 2H), 6,66 (m, IH), 3,67 (s, 3H, OCH3, 3,34 (m, 2H, CH2), 2,43 až 2,48 (m, 6 H 3 x CH2), 2,14 (s,3H, CH3), 1,71 (m,2H,CH2), 1,66 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 512 [M+].
Příklad 28 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 4-ben?y ol-5- (5 íliior-2-oxo -L2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3-methyl-l //-pyrro 1-2-karboxy lové kyseliny 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,20 (s, IH, NH), 11,14 (br, s, IH, NH), 8,03 (m, IH, CONCH2), 7,75 (m, 2H), 7,68 (m, IH), 7,55 (m, 2H), 7,38 (s, IH, H-vinyl), 7,08 (m, IH), 7,01
- 72CZ 303705 B6 (m, 1H), 6,87 (m, 1H), 3,34 (m, 2H, CH2), 2,42 až 2,48 (m, 6 H 3 x CH2), 2,09 (s, 3H, CH3). 1,70 (m, 2H, CH2), 1,65 (m, 4H, 2 x CH2).
MS—El m/z 512 [M*].
Příklad 29 (3-diethylaminopropyl)amid 4--aeet\15 -(5 -brom-2—oxo-1.2-dihydroindol-3-ylidenme{h\I) 3 io methyl-1 //-pyrrol-2-karboxvlové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 4-acetyl-5formyl—3—methyl—1//—pyrrol-2—karboxylové kyseliny (připraveným z ethylesteru 4-acetyl-5formyl-3-methyl-l//-pyrrol-2-karboxylové kyseliny podle způsobu B pak C), čímž se získá požadovaná sloučenina.
'HNMR (300 MHz, DMSCA6) δ 14,19 (s, IH, NH), 11,19 (br, s, IH, NH), 8,15 (m, IH, CONCH2), 8,11 (s, IH, H-vinyl), 7,72 (d, J = 1,8 Hz, IH, 11-4), 7,38 (dd, J = 1,8 & 8,2 Hz, IH, H6), 6,87 (d, J = 8,2 Hz, IH, H-7), 3,27 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,46 (m, 9 H, CH3 & 3 x CH2), 1,64 (m, 2H, CH2), 0,93 (t, J - 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2),
Příklad 30 (3—pyrrolidin—l-ylpropyl)amid 4—acety!-5-(5—brom—2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylídenmethyl)3—methyl-1 Hpyrrol-2—karboxylové kyseliny 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,14 (m, IH, CONCH2), 8,10 (s, IH, H-vinyl), 7,70 (d, IH, HA), 7,36 (dd, J = 1,6 & 8,1 Hz, IH, H-6), 6,85 (d, J = 8,1 Hz, IH, H-7), 3,32 (m, 2H, CH2),
2,57 (s, 3H, CH3C1), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,35 - 2,48 (m, 6H, 3 x CH3), 1,65-1,71 (m, 6H, 3 x
CH2).
MS m/z 499 & 501 [M+] & [M+-2].
Příklad 31 (3-morfolin—4-ylpropyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)3—methyl-1 H— pyrrol-2-karboxylové kyseliny ‘HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,20 (s, IH, NH), 11,26 (br, s, IH, NH), 8,09 (m, 2H, H-vinyl & CONHCH2), 7,73 (d, J = 1,5 Hz, IIA), 7,38 (dd, J - 1,5 & 8,3 Hz, IH, H-6), 6,87 (d, J = 8,3 Hz, IH, H-7), 3,55 (m, 4H, 2 x CH2), 3,26 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,35 (m, 6H, 3 x CH3), 1,68 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 514 & 516 [M-l ] & [M++l],
Příklad 32 (3-hydroxypropyl)amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dÍhydrotndol-3-ylÍdenmethyl)-3methyI-1H— pyrrol-2-karboxylové kysel iny
-73 CZ 303705 B6 ‘HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,17 (s, IH, NH), 11,25 (br, s, IH, NH), 8,10 (s, IH, H-vinyl), 8,03 (m, IH, CONCH2), 7,71 (br s, IH, H-4), 7,37 (br d, J = 8,4 Hz, IH, H-6), 6,87 (d, J — 8,4 Hz, IH, H-7), 4,51 (br s, IH, OH), 3,51 (br s, 2H, CH2), 3,36 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,43 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 445 & 447 [M+-l] & [M++l].
Příklad 34 10 (2-morfolin—4-ylethyl)amid 4-acetyl5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-3methyl-177-pyrrol-2-karboxylové kyseliny 'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,19 (s, IH, NH), 11,14 (br, s, IH, NH), 8,10 (s, IH, 15 H-vinyl), 7,84 (m, IH, CONCH2), 7,71 (d, J = 1,8 Hz, IH, H-4), 7,38 (dd, J - 1,8 & 8,2 Hz, IH,
H-6), 6,87 (d, J = 8,2 Hz, IH, H-7), 3,58 (m, 4H, 2 x CH2), 3,40 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,45 (m, CH3 & CH2).
MS-EI m/z 500 & 502 [M+~l] & [M++l].
Příklad 35 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 4—acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-yIidenmethyl)25 3-methyl-17/-pyrrol-2-karboxylové kyseliny 'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14,17 (s, IH, NH), 11,23 (s, IH, NH), 8,11 (s, IH, H-vinyl), 7,91 (m, IH, CONCH2), 7,73 (d, J = 1,9 Hz, IH, H^l), 7,39 (dd, J = 1,9 & 8,3 Hz, IH, H-6), 6,88 (d, J = 8,3 Hz, IH, H-7), 3,40 (m, 2H, CH2), 2,62 (m, 2H, CH2), 2,57 (s, 3H, CH3CO), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 1,69 (tn, 4H, 2 x CH2).
Příklad 36 [2-(4-hydroxyfenyl)ethyl]amid 4-acetyl-5-(5-brom-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl )-3-methy 1-17/-py rro I-2-karboxy lové kyseliny 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,21 (s, IH, NH), 11,18 (s, IH, OH), 9,09 (s, IH, NH), 8,06 - 8,10 (m, 2H), 7,73 (s, IH), 7,38 (d, J= 7,8 Hz, IH), 7,04 (d, J= 7,1 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 7,8 Hz, IH), 6,67 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 3,42 (m, 2H, CH2), 2,72 (m, 2H, CH2), 2,56 (s, 3H,
CH3CO), 2,37 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 507 & 509 [M+-l] & [M++l].
Příklad 37 (3-diethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl—4-fěnyl-l//-pyrrol- 3-karboxylové kyseliny
Směs 2-aminoacetofenon-hydrochloridu (1 ekviv.), ethyl-izobutyrylacetátu (1,2 ekviv.) a octanu sodného (2,4 ekviv.) v H2O se míchá při teplotě 100 °C po dobu 18 hodin a pak ochladí na pokojovou teplotu, vodná vrstva se oddekantuje a olej se rozpustí v ethylacetátu, promyje vodou
-74CZ 303705 B6 a solankou a suší, čímž se získá (93 %) ethylester 2izopropyl-4—feny 1-1 H-pyrro 1-3-karboxylové kyseliny ve formě červeno-hnědeho oleje.
'HNMR (300 MHz, DMSO-46) δ 11,21 (s, br, 1H, NH), 7,14 - 7,27 (m, 5H), 6,70 (d, J = 2,7 Hz, 5 IH), 4,02 (q, J= 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3), 3,65 (m, IH, CH(CH3)2), 1,22 (d, J= 7,5 Hz, 6H,
CH(CH3)2), 1,04 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 257 [M+], io Tento pyrrol se formyluje podle způsobu A, čímž se získá (41 %) ethylester 5-fomnyl-2-izopropyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny jako načervenalá pevná látka.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,35 (s, br, IH, NH), 9,14 (s, IH, CHO), 7,36 (s, 5H), 3,96 (q, J = 7,1 Hz, 2H, OCH2CH3), 3,74 (m, IH, CH(CH3)2), 1,29 (d, J - 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
0,90 (t, J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 285 [M ],
Ester pyrrot karboxy lové kyseliny se hydrolyzuje podle způsobu B, čímž se získá (57 %) 5-for20 myl 2-izopropvl—f-fenyl-! 7/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny ve formě béžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,28 (s, br, IH, COOH), 12,02 (s, br, ΙΗ,ΝΗ), 9,10 (s, IH, CHO), 7,35 (s, 5H), 3,81 (m, IH, CH(CH3)2), 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 257 [M+],
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (120 mg, 0,31 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 5-formyl-2-izopropyI-4-feny 1-1 //-pyrrol-2-karboxylové kyseliny (připravený podie způsobu C), čímž se získá 120 mg (71 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO-ď6) δ 14,23 (s, br, IH, NH), 11,08 (s br, IH, NH), 7,38 - 7,55 (m, 7H, Ar-H & CONHCH2), 7,30 (s, IH, H-vinyl), 7,26 (dd, J= 1,8 & 7,8 Ηζ,ΙΗ), 6,85 (d, J = 8,7 Hz, IH), 3,36 (m, IH, CH(CH3)2), 3,07 (m, 2H, CH2), 2,34 (q, J = 7,1 Hz, 4H, N(CH2CH3)2), 2,22 (t, J = 6,9 Hz, 2H, CH2), 1,40 (m, 2H, CH2), 1,31 (d, J = 6,9 Hz, 6H,
CH(CH3)2), 0,86 (t, J - 7,1 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 565,1 [M++l].
Příklad 38 (3-pyrrolidin-l-ylpropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-fényll//-pyrrol3-karboxylové kyseliny
5-(5-Brom-2-oxo-l,2-díhydroindol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl-4-feny 1-1//-pyrrol-3karboxylová kyselina (127 mg, 0,28 mmol) se kondenzuje s 3-pyrrolidin-l-ylpropylaminem (43 mg, 0,336 mmol), čímž se získá 140 mg (66 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d,,) δ 14,40 (s br, IH, NH), 7,38 - 7,47 (m, 7H), 7,23 - 7,27 (m, 2H), 6,84 (d, J = 8,1 Hz, IH), 3,36 (m, IH, CH(CH3)2), 3,08 (m, 2H, CH2), 2,30 (m, 4H, x CH2), 2,20 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2), 1,62 (m, 4H, 2 x CH2), 1,42 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2), 1,31 (d, J = 7,2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 560 a 562 [M+-1 aM‘+l].
-75CZ 303705 B6
Příklad 39 (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl5 4-fenyl-1 H-py rrol-3-karboxy lové kyseliny
5-Brom-l ,3-dÍhydroindol-2-on (57 g, 0,27 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2-izopropyM—feny 1-1 H-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny (120 mg), čímž se získá 78 mg (53 %) požadované sloučeniny jako žlutá pevná látka.
o 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,23 (s br, 1H, NH), 11,09 (s, br, 1H, NH), 7,38 - 7,51 (m, 6H), 7,25 - 7,28 (m, 2H), 7,19 (t, IH, CONHCH2), 6,85 (d, J = 7,8 Hz, IH), 3,43 (m, IH, CH(CH3)2), 3,11 (m, 2H, CH2), 2,28 - 2,39 (m, 6H, N(CH2CH3)2 & CH2), 1,31 (d, J = 6,9 Hz, CH(CH3)2), 0,85 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2.
MS-EI m/z 548 a 550 [M+-l a M++l].
Příklad 40 [3-(4-methylpiperazin-l-ylpropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-L2-dihydroindol-3-ylidenmethy 1)2-izopropyl-4-fenyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroíndol-2-on (53 mg, 0,25 mmol) se kondenzuje s [3-(4-methylpiperazin-l25 yl)propyl]amidem 5-formyl-2-izopropyl-4-fenyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (300 mg), čímž se získá 65 mg požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,22 (s br, IH, NH), 11,08 (s, br, IH, NH), 7,23 - 7,50 (tn, 9H), 6,85 (d, J = 8,7 Hz, IH), 3,37 (m, IH, CH(CH3)2), 3,05 (m, 2H, CH2), 2,24 (m, 8H,
4xCH2), 2,11 (m, 5H, CH2 & CH3), 1,42 (m, 2H, CH2), 1,31 (d, J - 7,2 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 589 a 591 [M -l a M'+l].
Příklad 41
5-{5-brom-2-oxo-L2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2izopropyl-4-fenyl-l H-pyrrol-3karboxylová kyselina
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (170 mg, 0,8 mmol) se kondenzuje s 5-formyl-2-izopropyl-4feny 1-1 H-py rro 1-3-karboxy lovou kyselinou (205 mg) podle způsobu D, čímž se získá 210 mg (58 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-dó) δ 14,31 (s br, IH, NH), 11,16 (s, br, IH, NH), 7,26 - 7,44 (m,
7H), 7,11 (s, IH, H-vinyl), 6,85 (d, J = 7,8 Hz, lH),3,78(m, IH, CH(CH3)2), 1,34 (d, J = 6,9 Hz,
6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 452 [M++l],
Příklad 42 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroíndol-3-ylidenmethyl)-2-izopropyl-4- feny 1-1 Hpyrro 1-3-karboxy lová kyselina
-76CZ 303705 B6
5- Brom-l.3-dihvdroindol 2-on (44 mg, 0,21 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-1--ylethyl)amidem 5--lormyl-2-methyl-4-ťeny!- !// pyrrol-3 karboxylové kyseliny (70 mg) připravený stejným způsobem jako izopopylový analog výše), čímž se získá 0,03 g (27 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,87 (s br, IH, NH), 11,11 (s, br, IH, NH), 7,36 - 7,51 (m,6H), 7,26 (dd, J ~ 1,8 & 8,1 Hz, IH), 7,2 (s, IH, H-vinyl), 7,09 (m, IH, CONCH2), 6,83 (d,J= 8,1 Hz, IH), 3,17 (m, 2H, NCH2), 2,48 (m, CH3), 2,29 - 2,35 (m, 6H, 3 x NCH2), 1,59 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 518 a 520 [M+-l a M++l].
Příklad 43 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-[6~(2-methoxyfenyl)-2-oxo-l,2-dihydroÍndol-3-ylidenmethyl)-2-methyl- 4-fenyl -l/Z-pyrrol-3-karboxyIové kyseliny
6-(2-Methoxyfenyl)-l,3-dihydroindol-2-on (50 mg, 0,21 mmol) se kondenzuje s (2-pyrroI20 Ídin— 1-y lethy l)amt dem 5—formy 1—2-m ethy 1—4—fenyl— l//-py rro 1—3-karboxy lové kyseliny (70 mg), čímž se získá 0,04 g (35 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,82 (s br, IH, NH), 11,02 (s, br, IH, NH), 7,48 (m, 2H), 25 7,43 (m, 2H), 7,32 (m, IH), 7,24 (m, 2H), 7,16 (s, IH, H-vinyl), 7,08 (m, 2H), 7,03 (m, IH), 7,0 (m, 2H), 3,74 (s, 3H, OCH3), 3,19 (m, 2H, NCH2), 2,49 (m, CH0, 2,32 - 2,38 (m, 6H, 3 x NCH2), 1,59 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 546 [M+],
Příklad 44 (2-dimethyIaminoethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2-methyl35 4-fenyI -l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroÍndol-2-on (46 mg, 0,22 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2-methyl-4-fenyI-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (65 mg), čímž se získá 60 mg (55 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'H NMR (360 MHz, DMSC^d6) δ 13,86 (s br, IH, NH), 11,909 (s, br, IH, NH), 7,47 - 7,49 (m, 2H), 7,38 - 7,41 ((m, 4H), 7,26 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, IH), 7,21 (s, IH, H-vinyl), 7,04 (m, IH, CONCH2), 6,77 (d, J= 8,3 Hz, IH), 3,15 (m, 2H, NCH2), 2,48 (m, CH3), 2,16 (t, J = 6,8 Hz, 2H, 3 x NCH2), 2,02 (s, 6H, 2 x NCH3).
MS m/z 493 a 494,8 [M+ a M++2],
Příklad 45 (2-dímethylaminoethyl)amid 5-[6-(2-methoxyfenyl)-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]-2-methyl 4-fenyl l7/-pyrrol-3-karbo.\yIové kyseliny
-77 CZ 303705 B6
6-(2-Methoxyfenyl)-l,3-dihydroindol-2-on (53 mg, 0,22 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2-methyl-4-fenyl-l 77-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (65 mg), čímž se získá 0,05 mg (44 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové gumy.
‘HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,82 (s br, IH, NH), 11,02 (s, br, IH, NH), 7,37 - 7,52 (m, 5H), 7,32 (m, IH), 7,22 - 7,27 (m, 2H), 7,16 (s, IH), 7,08 (m, 2H), 7,03 (m, IH), 7,0 (m, 2H), 3,74 (s, 3H, OCH3), 3,15 (m, 2H, NCH2), 2,49 (m, CH3), 2,16 (t, J = 6,5 Hz, 2H, NCH2), 2,02 (s, 6H,2xNCH3).
MS m/z 521 [M++l],
Příklad 46 ethylester 5-(5-brom-2-oxo-l,2 dihydroindol-3-yIidenmethyl)-2-methyl-4-fenyl-l//-pyrrol3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l ,3-dihydroindol-2-on (60 mg, 0,29 mmol) se kondenzuje s ethylesterem 5-formyl-2methyl-4-fenyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (75 mg), čímž se získá 78 mg (60 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
‘HNMR (360 MHz, DMSCM6) δ 14,01 (s br, IH, NH), 11,13 (s, br, IH, NH), 7,42 - 7,46 (m, 3H), 7,27 - 7,34 ((m, 4H), 7,12 (s, 1H), 6,84 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, IH), 3,99 - 4,03 (m, 2H, OCH2CH3), 2,61 (s, 3H, CH3), 0,98 - 1,03 (m, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 450 a 452 [M+-l aM++l].
Příklad 47 (3-diethyfaminopropyl)amid 5 (5- brom- 2-oxo l .2 dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2-methyl4- fenyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5- Brom-l,3-dihydroindol-2-on (0,47 g, 2,2 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 5-formyl-2-methyl-4-fenyl-l //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,75 mg), čímž se získá 0,11 g (42 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
‘HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,86 (s br, IH, NH), 7,42 - 7,46 (m, 3H), 7,38 - 7,50 (m, 7H), 7,24 - 7,28 (m, 2H), 6,83 (d, J = 8,1 Hz, IH), 3,09 (m, 2H, NCH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,38 (q, J = 7,1 Hz, 4H, 2 x NCH2CH3), 2,26 (t, J - 6,9 Hz, 2H, NCH2), 1,42 (m, 2H, NCH2), 0,87 (t, J = 7,1 Hz, 6H, 2 xNCH2CH3).
MS m/z 535,0 a 537 [M+a M*+2],
Příklad 48 (2-dimethylaminoethyl)amÍd 5—(5-brom-2—oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)—2,4—dimethy 1-1 //—pyrrol-3-karboxylové kysel iny
Směs Zerc-butyl-3-oxobutyrátu a dusičnanu sodného (1 ekviv.) v octové kyselině se míchá při pokojové teplotě, čímž se získá /erc-butyl-2-hydroxyimino-3-oxobutyrát.
Ethyl-3-oxobutyrát (1 ekviv.), zinkový prach (3,8 ekviv.) a surový Zerc-butyl-2-hydroxyimino3-oxobutyrát v octové kyselině se míchá při teplotě 60 °C po dobu 1 hodiny. Reakční směs se
-78 CZ 303705 B6 nalije do H2O a filtrát se spojí, čímž se získá (65 %) 2-terc-buty loxy karbony 1-3,5 -dimethy 1-4ethoxykarbonylpyrrol.
Směs 2-/erc-butyloxykarbonyl-3,5-dimethyl-4-ethoxykarbonylpyrrolu a triethylorthoformiátu 5 (1,5 ekviv.) v trifluoroctové kyselině se míchá při teplotě 15 °C po dobu I hodiny. Reakce se koncentruje a zbytek čistí, čímž se získá (64 %) 2,4-dimethyl-3-ethoxykarbonyl-5-formylpyrrol ve formě žlutých jehliček.
2,4—Dimethy 1-3-ethoxy karbony 1-5-formyl pyrrol se hydrolyzuje podle způsobu B, čímž se získá ío 90 %) 5-formyl-2,4-dÍmethyl-l//-pynOl-3-karboxylová kyselina.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12 (br s, 2H, NH a CO2H), 9,58 (s, IH, CHO), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3).
MS m/z 267 [M+],
5-Brom-1,3—dihydroindol-2-on (0,17 g, 0,8 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,2 g, připravený podle způsobu C) podle způsobu B, čímž se získá 0,3 g (83 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s br, IH, NH), 10,94 (s, br, IH, NH), 8,07 (d, J- 1,8 Hz, IH, H—4), 7,75 (s, IH, H-vinyl), 7,44 (t, J = 5,2 Hz, IH, CONCH2, 7,24 (dd, J = 1,8 & 8,4 Hz, 1 Η, H-6), 6,82 (d, J = 8,4 Hz, 1 Η, H-7), 3,26 - 3,33 (m, 2H, NCH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J - 6,7 Hz, 2H, NCH2), 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 430 a 432 [M*-l aM-1],
Příklad 49 (2-dimethylaminoethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydroindol-2-on (0,17 g, 0,8 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,2 g), čímž se získá 0,13 g (36 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s br, ΙΗ,ΝΗ), 10,93 (br, ΙΗ,ΝΗ), 7,85 (d J - 7.92 Hz,
IH, H-4), 7,63 - 7,65 (m, 3H), 7,40 - 7,47 (m, 3H), 7,32 -7,36 (m, IH, Ar-H), 7,30 (dd, J = ,6 & 7,9 Hz, IH, H-5), 7,11 (d, J - 1,6 Hz, IH, H-7), 3,28 - 3,34 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J = 6,8 Hz, 2H, NCH2), 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 428 [M+].
Příklad 50 (2-dimethylaminoethyl)amid 5-(5-chlor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-di50 methyl-1 //—pyrro 1-3-karboxylové kyseliny
5-Chlor-l,3-dihydroindol-2-on (0,1 g, 0,6 mmol) se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l/í-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,15 g), čímž se získá 0,22 g (90 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
-79CZ 303705 B6 ‘HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s br, ΙΗ,ΝΗ), 10,98 (br, ΙΗ,ΝΗ), 7,96 (d, J - 2,0 Hz, IH, H-4), 7,75 (s, IH, H-vinyl), 7,50 (t, J = 5,5 Hz, IH, CONCH2), 7,12 (dd, J = 2,0 & 8,3 Hz, IH, H-6), 6,86 (d, J = 8,3 Hz, IH, H-7), 3,26 - 3,31 (m, 2H, NCH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,36 (t, J = 6,6 Hz, 2H, NCH2), 2,17 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 386 [M+].
Příklad 51 io (2-dimethylaminoethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindoI-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethy 1-1//-pyrro 1-3-karboxylove kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2_on (0,17g, 0,8 mmol) se kondenzuje s (2-diethy lam i noethyl)am i15 dem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrro 1-3-karboxylové kyseliny (0,2 g), čímž se získá 0,09 g (26 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
lH NMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,61 (s br, IH, NH), 10,98 (br, IH, NH), 8,09 (d, J = 1,7 Hz, 1H, H-4). 7,76 (s, 1H, H-vinyl), 7,42 (t, J = 5,5 Hz, 1H, CONCH2), 7,24 (dd, J 1,7 & 8,0 Hz, 1H,
H-6), 6,82 (d, J = 8,0 Hz, IH, H-7), 3,23 - 3,32 (m, 2H, NCH2), 2,46 - 2,55 (m, 6H, 3 x NCH2),
2,43 (s, 3H, CH3), 2,42 (s, 3H, CH3), 0,96 (t, J = 7,2 Hz, 6H, 2 xNCH2CH3).
MS-EI m/z 458 a 460 [M+-l a M+-l].
Příklad 52 (2-pyrrolidin-l-ylethy1)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethy1)-2,4-dimethyl— \H—py rro 1-3-kar boxy love kyseliny
5-Brom-l.3-dihydroindol 2 on (0,09 g, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2—pyrrolidin—l—ylethyl)atnidem 5-formyl-2,4—dimethy 1-1//-pyrrol-3—karboxylové kyseliny (0,1 g), čímž se získá 0,14 g (81 %) požadované sloučeniny ve formě žluto—oranžové pevné látky.
1H NMR (300 MHz, DMSO—dň) δ 13,61 (s br, ΙΗ,ΝΗ), 10,98 (br, 1H, NH), 8,09 (d, J - 1,9 Hz,
IH, H-4), 7,76 (s, IH, H-vinyl), 7,53 (t, J - 5,5 Hz, IH, CONCH2), 7,24 (dd, J = 1,9 & 8,5 Hz, IH, H-6), 6,81 (d, J= 8,5 Hz, IH, H-7) 3,29 - 3,35 (m, 2H, NCH2), 2,54 (t, J= 6,9 Hz, 2H, NCH2), 2,47 (m, pod DMSO), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,66 - 1,69 (m, 4H, 2 xCH2).
MS-EI m/z 456 a 458 [M+-l a M++1],
Příklad 53 45 (3-imidazol-l-ylpropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4—dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (0,09 g, 0,4 mmol) se kondenzuje s (3-imidazol-l-ylpropyl)50 amidem 5-formyl-2,4-d i methyl-1 //-pyrro 1-3-karboxy love kyseliny (0,1 g), čímž se získá 0,1 g (59 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-dĎ) δ 13,63 (s br, IH, NH), 10,99 (br, 1Η, NH), 8,09 (d, J = 2,2 Hz, IH, H-4), 7,77 (s, IH, H-vinyl), 7,71 (t, J - 5,7 Hz, 1H,CONCH2), 7,65 (s, 1Η, Ar-H), 7,25 (dd,
-80CZ 303705 B6
J = 2,2 & 8,4 Hz, IH, H-6), 7,20 (s, IH, Ar-H), 6,89 (s, IH, Ar-H), 6,81 (d, J - 8,4 Hz. IH, H-7), 4,02 (t, J = 6,7 Hz, 2H, NCII2), 3,18 (q, J = 6,7 Hz, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 1,93 (m, 2H, CH2).
MS-EI m/z 467 a 469 [M+-l aM+1],
Příklad 54 io (2-dimethylaminoetliyl)amid 5-[6-(2-methoxyfenyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-(2-Methoxyfenyl)-l,3-dihydroindol-2-on (30 mg, 0,13 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (30 mg), čímž se získá 0,06 g (100 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové gumy.
‘HNMR (300 MHz, DMSO—dů) δ 13,60 (s br, IH, NH), 10,98 (br, IH, NH), 7,79 (d, J = 8,4 Hz, IH), 7,63 (s, IH, H-vinyl), 7,46 (t, J = 5,5 Hz, IH, CONCH2), 7,28 - 7,35 (m, 2H), 6,99 - 7,1 1 (m, 4H), 3,76 (s, 3H, OCH3), 3,27 - 3,31 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH0, 2,39 (s, 3H, CH3),
2,37 (m, 3H, NCH2), 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M+].
Příklad 55 (2—dímethylaminoethyljamid 5-|6—(3-methoxyfenyl)2-oxo—1.2—dihydroindol-3-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6—(3-Methoxyfenyl)-l ,3-dihydroindol-2--on (30 mg, 0,13 mmol) se kondenzuje s (2—diethvlaminoethyl)amidem 5-formy 1-2,4 dimethyl-l//-pyrrol--3-kar boxy lové kyseliny (30 mg), čímž se získá 8 mg (14 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO d6) δ 13,59 (s br, IH, NH), 10,92 (s br, IH, NH), 7,84 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H, H-vinyl), 7,42 (m, 1H, CONCH2), 7,36 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,29 (dd,J= 1,6 & 7,6 Hz, IH), 7,20 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,14 (d, J = 2,8 Hz, IH), 7,11 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,91 (dd, J = 2,8 & 7,8 Hz, IH), 3,82 (s, 3H, OCH3), 3,21 - 3,33 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,36 - 2,40 (m, 2H, NCH2), 2,18 (s, 6H, N(CH3)2).
MS-EI m/z 458 [M'J.
Příklad 56 (2-diethylaminoethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethy 1]-1 //-pyrrol-3-karboxy lové kysel iny
5-Fenyl-l,3-dihydroindol-2-on (80 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethy!-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,1 g) podle způsobu B, čímž se získá 79 mg (46 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ 13,66 (s br, ΙΗ,ΝΗ), 10,95 (br, IH, NH), 8,15 (d, J = 1,2 Hz, IH), 7,81 (s, IH, H-vinyl), 7,71 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,40-7,47 (m, 4H), 7,31 (m, IH), 6,95 (d,
-81 CZ 303705 B6
J = 8,1 Hz, IH), 3,2 - 3,31 (m, 2H, NCH2), 2,46 - 2,55 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,44 (s, 6H, 2 x CH3), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS-EI m/z 456 [M+].
Příklad 57 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 2,4-d i met hyl-5-(2-oxo—5-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenío methyl]-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny
5-Fenyl-l,3-dihydroindol-2-on (0,04 g, 0,2 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-ťormy 1-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny (0,04 g), čímž se získá požadovaná sloučenina ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s br, IH, NH), 10,96 (br, IH, NH), 8,15 (d, J = 1,0 Hz, IH), 7,80 (s, IH, H-vinyl), 7,71 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,49 (t, J= 6,3 Hz, IH, CONCH2), 7,41 - 7,46 (m, 3H), 7,31 (m, IH), 6,95 (d, J= 7,8 Hz, IH), 4,08 (m, 4H, 2 x NCH2), 3,32 (m, 2H, NCH2, 2,55 (t, J - 7,1 Hz, 2H, NCH2), 2,47 (m, pod DMSO), 2,43 (s, 6H, 2 x CH3), 1,66 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 454 [M+].
Příklad 58 (3-imidazol-l-ylpropyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]-l 7/-pyrro 1-3-karboxylové kyseliny
5-Fenyl-l,3-dihydroindol-2-on (8 mg, 0,04 mmol) se kondenzuje s (3-imidazol-l-ylpropyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (10 mg), čímž se získá 10 mg (59 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSOA6) δ 13,67 (s br, IH, NH), 10,96 (br, IH, NH), 8,16 (d, J - 1,2 Hz,
IH), 7,81 (s, IH, H-vinyl), 7,65 - 7,72 (m, 4H), 7,44 (m, 4H), 7,31 (m, IH, CONCH2), 7,21 (s, IH, Ar-H), 4,02 (t, J = 6,5 Hz, 2H, NCH2), 3,19 (q, J = 6,5 Hz, 2H, CONCH2), 2,44 (s, 6H, 2 x CH3), 1,93 (m, 2H, CH2CH2CH2).
MS-EI m/z 465 [M+].
Příklad 59 (2-diethylaminoetbyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydroindol-3-yliden45 methyl]-1//-pvrrol-3-karboxy lové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydroindol~2-on (0,08 g, 0,4 mmol) se kondenzuje s (2-diethylamínoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,1 g), čímž se získá 65 mg (38 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-dó) δ 13,61 (s br, IH, NH), 10,99 (br, IH, NH), 7,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,62 - 7,66 (m, 3H), 7,40 - 7,47 (m, 3H), 7,28 - 7,36 (m, 2H), 7,10 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,26 (m, 2H, NCH2), 2,46 - 2,55 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,44 (s, 3H, 2 x CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
-82CZ 303705 B6
MS-EI m/z 456 [M+].
Příklad 60 (2-pyrrolidin-1-ylethyl)amid 2,4-dimethyl-5~(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]-!H-pyrroI-3-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydroindol-2-on (30 mg, 0,15 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-yl10 ethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l/Y-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (40 mg), čímž se získá 5,9 mg (8,5 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s br, IH, NH), 10,99 (br, IH, NH), 7,86 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,63 - 7,66 (m, 3H), 7,51 (m, IH, CONHCH2), 7,45 (m, 2H), 7,28 -7,36 (m, 2H), 7,10 (d, J = 1,5 Hz, IH), 3,31 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,55 (t, J - 6,6 Hz, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3),
2,40 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 454 [M+],
Příklad 61 (3-imidazol-l-ylpropyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dÍhydroindol-3-ylidenmethyl]-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-Fenyl-l,3-dihydroindol-2-on (8 mg, 0,04 mmol) se kondenzuje s (3-imidazol-l-yIpropyI)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (10 mg), čímž se získá
7,3 mg (43 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
!H NMR (300 MHz, DMSO-dé) δ 13,62(sbr, ΙΗ,ΝΗ), 10,99 (br, 1H, NH), 7,86 (d, J - 8,2 Hz, IH), 7,62 - 7,70 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,35 (m, IH), 7,30 (dd, J- 1,4 & 8,2 Hz, IH), 7,21 (s, IH), 7,10 (d, J = 1,4 Hz, IH), 6,89 (s, IH), 4,02 (t, J = 6,9 Hz, 2H, CH2), 3,19 (m, 2H, NCH2 CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 1,93 (t, J = 6,9 Hz, 2H, NCH2).
MS-EI m/z 465 [M+].
Příklad 62 (2-diethylammoethyl)amid 5-[6~(3,5-dichlorfenyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]2,4-dimethyl-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-(3,5-Dichlorfenyl)-l,3-dÍhydroindol-2-on (64 mg, 0,23 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//—pyrrol-3-karboxylové kyseliny (60 mg), čímž se získá 53 mg (44 %) požadované sloučeniny ve formě světle hnědé pevné látky.
‘HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s br, IH, NH), 10,99 (s, IH, NH), 7,89 (d, J = 7,9 Hz, IH, 1M), 7,69 - 7,71 (m, 3H), 7,55 (m, IH, CONCH2), 7,37 (m, 2H), 7,14 (d, J= 1,4 Hz, IH, H-7), 3,27 (m, 2H, NCH2), 2,48 - 2,58 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,42 (s, 3H, CH3),
0,97 (t, J = 6,8 Hz, 6H, 3 x NCH2CH3).
MS m/z 526,9 [M -1J.
-83CZ 303705 B6
Příklad 63 (2-diethylaminoethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l//-pyrro 1-3-karboxy lové kyseliny
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydroindol-2-on (40 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-d i ethy lamin oethyl)amidem 5-formy 1-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny (50 mg), čímž se získá 29 mg (33 %) požadované sloučeniny ve formě světle oranžové pevné látky.
‘HNMR (300 MHz, DMSO-d^) δ 13,62 (s br, IH, NH), 11,05 (s br, IH, NH), 8,86 (s, br, IH), 8,53 (d, J= 5,8 Hz, IH), 8,04 (m, IH), 7,91 (d, J= 8,1 Hz, IH), 7,70 (s, IH, H-vinyl), 7,40 - 7,48 (m, 2H), 7,35 (d, J = 7,5 Hz, IH), 7,14 (s, IH), 3,26 (m, 2H, NCH2), 2,48 - 2,55 (m, 3 x NCH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,38 (s, 3H, CH3), 0,96 (t, J = 6,9 Hz, 6H, 2 x NCH2CH3).
MS m/z457 [M++l].
Příklad 64 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2~dihydroindol-3-ylidenmethy 1)-1 //-pyrro 1-3-karboxy lové kysel iny
6-Pyridin-3-yl-l,3-dihydroindol-2-on (60 mg, 0,28 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-lylethyl)amidem 5-formyl-2,4-dÍmethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (75 mg), čímž se získá 90 mg (71 %) požadované sloučeniny ve formě světle oranžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s br, IH, NH), 11,05 (s, br, IH, NH), 8,86 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,54 (dd, J = 1,5 & 4,8 Hz, IH), 8,05 (m, IH), 7,91 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,70 (s, IH, H-vinyl), 7,44-7,53 (m, 2H), 7,36 (dd, J = 1,5 & 8,1 Hz, IH), 7,15 (d, J = 1,2 Hz, IH), 3,33 (m, 2H, NCH2), 2,47 - 2,57 (m, 6H, 3 x NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2xCH2).
MS-EI m/z 455 [M‘J.
Příklad 65 (3-dimethylaminopropyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-pyridin-3-yl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-PyrÍdin-3-yl-l,3-dihydroindol-2-on (42 mg, 0,2 mmol) se kondenzuje s (3-d i methy lam i nopropyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 67 mg (75 %) požadované sloučeniny ve formě žlutohnědé pevné látky.
'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,61 (s br, IH, NH), 11,00 (s, br, IH, NH), 8,86 (s, br, IH), 8,54 (s, br, IH), 8,04 (m, IH), 7,90 (d, J = 8,0 Hz, IH), 7,69 (s, IH, H-vinyl), 7,63 (m, IH), 7,45 - 7,48 (m, IH), 7,35 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, IH), 7,15 (d, J = 1,7 Hz, IH), 3,21 - 3,27 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 2,28 (m, 2H, NCH2), 2,14 (s, 6H, 2 x NCH3), 1,64 (m, 2H, CHO).
MS-EI m/z 443 [M+].
-84CZ 303705 B6
Příklad 66 (3—dimethylaminopropyl)amid 2,4-dimethy 1-5 (2 -oxo-5-těnyl--1.2-dihydroindol-3ylidenmethyl)-l//-pynOl-3-karboxylové kyseliny
5-Fenyl-l ,3—dihydroindol-2—on (67 mg, 0,32 mmol) se kondenzuje s (3-dimethylamÍnopropyl)amidem 5-formy 1-2,4-d i methy 1-1//-pyrro 1-3-karboxy lové kyseliny (81 mg), čímž se získá 40 mg (28 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,66(sbr, ΙΗ,ΝΗ), 10,92 (s, br, ΙΗ,ΝΗ), 8,14 (s, 1 H), 7,79 (s, IH), 7,71 (m, 2H), 7,62 (m, IH), 7,44 (m, 3H), 7,32 (m, IH), 6,95 (m, 1H), 3,33 (m, 2H, NCH2), 2,43 (s, 6H, 2 x CH3), 2,27 (m, 2H, NCH2), 2,13 (s, 6H, 2 x NCH3), 1,63 (m, 2H, CH2). MS-EI m/z 442 [M+].
Příklad 67 (3-diethylaminopropyl)amid 2,4—dimethy 1-5-(2-oxo-5-feny 1-1,2-dÍhydroÍndol-3-ylídenmethyl)-! //-pyrrol-3—karboxylové kyseliny
5-Fenyl—1,3—d i hydro indol—2-on (1,5 g, 7,16 mmol) se kondenzuje s (3—diethylaminopropyl)amidem 5-formy 1-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny (2 g), čímž se získá 1,3 g (40 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,64 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,91 (s, ΙΗ,ΝΗ), 8,14 (d, J= 1,4 Hz, IH, ArH), 7,8 (s, IH, ArH), 7.7 (dd, J = 1,2 a 8,5 Hz, 2H, ArH), 7,6 (t, J = 5,3 Hz, IH, CONCH2),
2,5 (m, 12H, 3 x NCH2 a 2 x CH3), 1,61 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0,93 (t, J - 6,7 Hz, 6H, NCH2CH3)
MS-EI m/z 470 [M*].
Příklad 68 (3-diethylaminopropyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-6-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-lH— pyrro 1-3-karboxylové kyseliny
Fenyl l.3 dihydroindol-2—on (1,5 g, 7,16 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 5-formy 1-2,4—dimethyl·-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (2 g), čímž se získá 1,9 g (57 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,94 (s, ΙΗ,ΝΗ), 7,8 (d, J = 7,9 Hz, IH, ArH), 7,6 (s, 4H, ArH), 7,4 (t, J - 7,5 Hz, 2H, ArH), 7,3 (m, 2H), 7,1 (d. J - 1,4 Hz, IH, ArH),
3,2 (m, 2H, CONHCH2), 2,5 (m, 12H, 3 x NCH2 a 2 x CH3), 1,63 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0,93 (t, J = 6,7 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 470 [M+].
Příklad 69 (3-chlor—4-methoxyfenyl)amid 3-[4-(3-diethylaminopropylkarbamoy1)-3,5-dimethyl-l//pyrrol2-ylmethylcn]-2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol^l-karboxylové kyseliny
-85 CZ 303705 B6 (3-Chlor-4-methoxyfenyl)amid 2-oxo-2,3-dihydro-l/7-pyrrol^-karboxylové kyseliny (1 g, 3,16 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol_3_karboxylové kyseliny (1 g 3,58 mmol), čímž se získá 1,7 g (85 %) požadované sloučeniny ve formě žluto—oranžové pevné látky.
MS-EI m/z 578,2 [M+].
Příklad 70 (3-dÍethylaminopropyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrro1-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-1.3-dihydroindol-2-on (0,5 g, 2,36 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminopropyl)amidem 5-formy1-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (0,51 g), čímž se získá 0,84 g požadované sloučeniny ve formě červeno-oranžové pevné látky.
'HNMR(360 MHz, DMSO-A)S 13,61 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,99 (s, IH, NH), 8,09 (d, J= 1,8 Hz, IH, ArH), 7,7 (m, 4H), 7,2 (dd, J = 1,8 a 8,3 Hz, 2H, ArH), 6,8 (d, J = 7,8 Hz, IH, ArH), 3,3 (br s, 4H, 2 x NCH2), 3,2 (m, 2H, CONCH2), 2,6 (br s, 2H, NCH2 a 2 x CH3), 2,4 (s, 6H, 2 x CH3), 1,66 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0,98 (t, J = 7,1 Hz, 6H, NCH2CH3).
MS-EI m/z 472 a 474 [M-l,aM-l].
Příklad 71 (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-1,3-dihydroindol-2-on (100 mg, 0,47 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-diizopropyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (150 mg), čímž se získá 0,15 g (62 %) požadované sloučeniny ve formě žluto oranžové pevné látky.
'H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,97 (s, IH, NH), 10,95 (s, IH, NH), 8,09 (d, J - 1,3 Hz, IH, ArH), 7,84 (m, IH), 7,79 (s, IH), 7,23 (dd, J = 1,3 a 8,1 Hz, ArH), 6,8 (d, J = 8,1 Hz, IH, ArH), 3,5 (m, IH, CH), 3,3 (m, 3H, CH a NHCH2), 2,5 (br m, 6H, 3 x NCH2), 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H, 2 x CH3), 1,23 (d, J - 6,6 Hz, 6H, 2 x CH,), 0,96 (m, 6H, 2 x CH2CH3).
MS-EI m/z 514 a 516 [M+-l, a M++l].
Příklad 72 (3-diethylaminoethyl)amid 5-(5-brom-2-oxo-L2 dihydroindol-3-y 1 idenmethyl)-2,4-diizopropy I-1 /í-py rrol-3-karboxy lové kyše I i ny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (90 mg, 0,42 mmol) se kondenzuje s (3-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-diizopropyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (140 mg), čímž se získá 54 mg (25 %) požadované sloučeniny ve červeno-hnědé pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, IH, NH), 10,96 (s, IH, NH), 8,09 (d, J- 1,7 Hz, 2H), 7,78 (s, IH, H-vinyl), 7,23 (dd, J - 1,7 a 8,1 Hz, ArH), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, IH, ArH), 3,5 (m, IH, CH), 3,25 (m, 2H, NHCH2), 3,15 (m, IH, CH), 2,7 (br s, 6H, 3 x NCH2), 1,7 (br m, 2H,
-86CZ 303705 B6
CH2CH2CH2), 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H, 2 x CH0, 1,24 (d, J = 5,9 Hz, 6H, 2 x CH3), 1,06 (m, 6H, 2 x CH2CH3).
MS-EI m/z 528 a 530 [M+-l a M++l],
Příklad 73 (3-py rro 1 í d i η-1 -y 1 propy 1 )am i d 5-( 5 -brom-2-oxo— 1,2-d i hydro i ndol-3 -y 1 iden methy l )-2,4 d i ío izopropyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (130 mg, 0,6 mmol) se kondenzuje s (3-pyrrolidin- 1-ylpropyl)amidem 5-formyl-2,4-diizopropyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (150 mg. 0,45 mmol), čímž se získá 36 mg (15 %) požadované sloučeniny ve formě hnědo-oranžové pev15 né látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (s, IH, NH), 10,97 (s, IH, NH), 8,10 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 7,78 (s, IH, H-vinyl), 7,23 (dd, J = 1,6 a 7,6 Hz, ArH), 6,82 (d, J = 7,6 Hz, IH, ArH), 3,5 (m, IH, CH), 3,25 (m, 2H, NHCH2), 3,15 (m, IH, CH), 2,7 (br s, 6H, 3 x NCH2), 1,7 (br m, 6H,
3 x NCH2CH2), 1,28 (d. J = 5,6 Hz, 6H, 2 x CH3), 1,24 (d, J = 5,7 Hz, 6H, 2 x CH3).
MS-EI m/z 526 a 528 [M4-l a M4+l].
Příklad 74 (pyridin—4-ylmethyl)amid 5-f5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyll//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
5-Brom-l,3-dihydroindol-2-on (170 mg, 0,8 mmol) se kondenzuje s (pyridin—4-ylmethyl)amidem 5-formyl-2,4-diizopropyl-lH-pyrrol-3—karboxylové kyseliny (200 mg), čímž se získá 14 mg (4 %) požadované sloučeniny ve formě žlutě pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,67 (s, IH, NH), 11,01 (s, br, ΙΗ,ΝΗ), 8,51 (dd, J = 1,6 &
4,3 Hz, 2H), 8,23 (t, J = 6,0 Hz, IH, CONCH2), 8,11 (d, J = 1,9 Hz, IH), 7,78 (s, IH, H-vinyl),
7,31 (d, J= 6,0 Hz, 2H), 7,25 (dd, J = 1,9 & 8,1 Hz, IH), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, IH), 4,45 (d, J = 6,0 Hz, 2H, NCH2), 2,46 (s, 6H, 2 x CH3).
MS-EI m/z 450 a 452 [M+-l a M++l],
Příklad 75 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-[6-(4-butylfenyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylÍdenmethyl]45 2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny
5-[6-(4-Butylfenyl)]-l,3-dihydroindol-2-on (50 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-1 H-pyrro 1-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 74 mg (76 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,58 (s, IH, NH), 10,93 (s br, IH, NH), 7,82 (d, J = 7,9 Hz, IH), 7,63 (s, IH, H-vinyl), 7,54 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,46 (m, IH, CONH), 7,26 (m, 3H), 7,09 (s, IH), 3,30 (m, 2H, CH2), 2,52 - 2,64 (m, 4H, 2 x CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH0, 1,68 (m, 4H, 2 x CH2), 1,58 (m, 2H, CH2), 1,34 (m, 2H, CH2), 0,91 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH2CH0.
-87CZ 303705 B6
MS-EI m/z 510 [M+].
Příklad 76 (2-pyrrol idin-1 -ylethyl)amid 5-[6-(5-izopropyl-2-methoxyfeny1)-2-oxo-l ,2—dihydroindol-3ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny io 6-(5-Izopropyl-2-methoxyfenyl)]-l ,3-dihydroindol-2-on (50 mg, 0,17 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (45 mg), čímž se získá 67 mg (75 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
‘HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, IH, NH), 10,82 (s br, IH, NH), 7,77 (d, J = 7,9 Hz,
IH), 7,61 (s, IH, H-vinyl), 7,45 (m, IH, CONH), 7,0-7,19 (m, 5H), 3,73 (s, 3H, OCH3), 3,32 (m, 2H, CH2), 2,87 (m, IH, CH(CH3)2), 2,56 (m, 2H, CH2), 2,48 (m, 4H, 2 x CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,68 (m, 4H, 2 x CH2), 1,21 (d, J = 6,8 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS m/z 527,2 [M4 + l].
Příklad 77 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-[6-(4-ethy Ifeny l)-2-oxo-l, 2-d i hydro i ndo 1-3-y li den methy 1]25 2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-(4-Ethylfenyl)-l,3-dihydroindol-2-on (45 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-lylethyl)amidem 5-formy 1-2,4—dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 60 mg (65 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,59 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,96 (s br, ΙΗ,ΝΗ), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, IH), 7,64 (s, IH, H-vinyl), 7,51 - 7,56 (m, 3H), 7,25 - 7,30 (m, 3H), 7,08 (d, J = 1 Hz, IH), 3,31 (m, 2H, CH2), 2,63 (m, 2H, CH2CH3), 2,55 (m, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2), 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH2CH3).
MS m/z 482 [M+].
Příklad 78 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-[6-(2,4-dimethoxyfenyl)-2-oxo-l,2-dihydroÍndol-3-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
6-(2,4-Dimethoxyfenyl)]-l,3-dihydroindol-2-on (51 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-pyrro45 lidin-1-ylethyl)amidem 5-formyl-2,4-dtmethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 30 mg (31 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
‘H NMR (300 MHz, DMSO d6) δ 13,59 (s, IH, NH), 10,86 (s br, IH, NH), 7,75 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,60 (s, IH, H-vinyl), 7,49 (m, IH, CONH), 7,22 (d, J = 8,4 Hz, IH), 7,03 (m, IH), 6,97 (s, IH), 6,58 - 6,65 (m, 2H), 3,79 (s, 3H, OCH3), 3,76 (s, 32H, OCH3), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,55 (m, 2H, CH2), 2,50 (m, 4H, 2 x CH2), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,39 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2xCH2).
MSm/z514[M*+1].
-88CZ 303705 B6
Příklad 79 (2-pyrrolidin l -ylethyl)amid 5-[6 <3 -izopropylfenyl)-2-oxoL2-dihydroindol-3-ylidenmethyl|-2,4—dimethyl-17/-pyrTol 3 -karboxylové kyseliny
6—(3-ízopropylfenyl)]-L3—dihydroindol -2-on (48 mg, 0,19 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyljamidem 5-formy 1-2,4—dimethy 1-4/7-pyrrol-3-karbo\ylové kyseliny (50 mg), čímž se získá 59 mg (63 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (s, IH, NH), 10,97 (s br, IH, NH), 7,87 (d, J “ 7,8 Hz, IH), 7,68 (s, IH, H-vinyl), 7,24 - 7,55 (m, 6H), 7,13 (s, IH), 3,34 (m, 2H, CH2), 3,30 (m, IH, CH(CH3)2), 2,60 (m, 2H, CH2), 2,50 (m, 4H, 2 x CH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,43 (s, 3H, CH3), 1,70 (m, 4H, 2 x CH2), 1,27 (d, J = 6,9 Hz, 6H, CH(CH3)2).
MS-EI m/z 496 [M++l].
Příklad 80 (2-diethylaminoethyl)amid 5~(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-1 //—pyrrol—3—karboxy lové kyseliny
5-Fluor-l,3-dihydroindol-2-on (0,54 g, 3,8 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá 0,83 g (55 %) požadované sloučeniny ve formě žluto—zelené pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, IH, NH), 10,83 (s br, IH, NH), 7,73 (dd, J = 2,5 &
9,4 Hz, IH), 7,69 (s, IH, H-vinyl), 7,37 (t, IH, CONHCH2CH2), 6,91 (m, IH), 6,81 - 6,85 (m, IH), 3,27 (m, 2H, CH2), 2,51 (m, 6H, 3 x CH2), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 0,96 (t, J = 6,9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 398 [M+].
Příklad 80 (alternativní syntéza) (2-diethylaminoethyl)amÍd 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-3-ylÍdenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //—pyrro 1-3-karboxylové kyseliny
Hydrát hydrazinu (55%, 3000 ml) a 5-fluorisatin (300 g) se zahřívají při teplotě 100 °C. V průběhu 120 minut se za stálého míchání přidává po částech (100 g) další 5-fluorisatin (500 g), směs se zahřívá při teplotě 110°C a míchá po dobu 4 hodin, ochladí na pokojovou teplotu a pevné látky se spojí vakuovou filtrací, čímž se získá surový hydrazid (2 amino—5-fluorfenyl)octové kyseliny (748 g), hydrazid se suspenduje ve vodě (700 ml) a pH směsi se upraví na < pH 3 pomocí 12N kyseliny chlorovodíkové. Směs se míchá po dob u!2 hodin při pokojové teplotě, pevný podíl se spojí vakuovou filtrací a promyje (2x) vodou, produkt se suší za vakua, čímž se získá 5-fluor-l,3-dihydroindol-2-on (600 mg, 73 % výtěžek) ve formě hnědého prášku.
'HNMR (dimethylsulfoxid-dé) δ 3,46 (s, 2H, CH2), 6,75, 6,95, 7,05 (3 x m, 3H, aromatické),
10,35 (s, IH,NH).
MS m/z 152 [M+1].
-89CZ 303705 B6
2-7erc-butylester 4-ethylesteru 3,5-dimethyl-l//-pyrrol-2,4-dikarboxyIové kyseliny (2600 g) a ethanol (7800 ml) se intenzivně míchají, zatímco se pomalu přidává ION kyselina chlorovodíková (3650 ml), teplota se zvýší z 25 °C na 35 °C, čímž se začne uvolňovat plyn. Směs se ohřeje na teplotu 54 °C a míchá za dalšího zahřívání po dobu jedné hodiny na teplotu 67 °C. Směs se ochladí na teplotu 5 °C a za stálého míchání se pomalu přidává 32 1 vody. Pevná látka se spojí vakuovou filtrací a promyje (3 x) vodou, pevná látka se suší na vzduchu na konstantní hmotnost, čímž se získá ethylester 2,4-d i methy I-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny (1418 g, 87% výtěžek) ve formě narůžovělé pevné látky.
'HNMR (dimethylsulfoxidu) δ 2,10, 2,35 (2 x s, 2 χ 3H, 2 x CH3), 4,13 (q, 2H, CH2), 6,37 (s, IH, CH), 10,85 (s, ΙΗ,ΝΗ).
MS m/z 167 [M+l].
D i methyl formám id (322 g) a dichlormethan (3700 ml) se ochladí v ledové lázni na teplotu 4 °C a za stálého míchání se přidá oxidchlorid fosforečný (684 g). Pevný ethylester 2,4-dimethyl-l//pyrro 1-3-karboxylové kyseliny (670 g) se pomalu přidává v alíkvotních podílech v průběhu 15 minut. Maximální teplota se pohybuje kolem 18 °C. Směs se zahřívá při refluxu po dobu jedné hodiny, ochladí na teplotu 10°C v ledové lázni a najednou se za intenzivního stálého míchán přidá 1,6 I ledové vody. Teplota se zvýší na 15 °C. Za intenzivního stálého míchání se přidá 10N kyselina chlorovodíková (1,6 1). Teplota se zvýší na 22 °C. Směs se nechá stát po dobu 30 minut a vrstvy se nechají separovat, přičemž maximum teploty je 40 °C. Vodná vrstva se upraví na pH 12 až 13 pomocí 10N hydroxidu draselného (3,8 1) tak, aby teplota během přidávání nepřesáhla 55 °C.
Po přidání se směs ochladí na teplotu 10 °C a míchá po dobu 1 hodiny, pevná látka se spojí vakuovou filtrací a promyje (4x) vodou, čímž se získá ethylester 5-formyl-2,4-dimethyl-l/7pyrrol-3-karboxylové kyseliny (778 g, 100% výtěžek) ve formě žluté pevné látky.
'HNMR (DMSO-46) δ 1,25 (t, 3H, CH3), 2,44, 2,48 (2 x s, 2 χ 3H, 2 x CH3), 4,16 (q, 2H, CH2), 9,59 (s, IH, CHO), 12,15 (br s, ΙΗ,ΝΗ),
MS m/z 195 [M+l].
Ethylester 5-formyl-2,4-dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (806 g), hydroxid draselný (548 g), voda (2400 ml) a methanol (300 ml) se refluxují po dobu 2 hodin za stálého míchání a ochladí na teplotu 8 °C, Směs se extrahuje (2x) dichlormethanem, vodná vrstva se upraví na pH 4 pomocí 1000 ml 10N kyseliny chlorovodíkové, přičemž teplota se udržuje pod 15 °C. Kvůli míchání se přidá voda a pevná látka se spojí vakuovou filtrací, promyje (3x) vodou a suší za vakua při teplotě 50 °C, čímž se získá 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina (645 g, 93,5 % výtěžek) ve formě žluté pevné látky.
‘HNMR (DMSO-dň) δ 2,40, 2,43 (2 x s, 2 χ 3H, 2 x CH3), 9,57 (s, IH, CHO), 12,07 (br s, 2H, NH+COOH).
MS m/z 168 [M+l].
5-Formyl-2,4-dimethyl-lí/-pyrrol-3-karboxylová kyselina (1204 g) a 6020 ml dimethylformamidu se míchá při pokojové teplotě, zatímco se přidává hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl-3-ethylkarbodiimidu (2071 g), hydroxybenzotriazol (1460 g), triethylamin (2016 ml) a diethylethylendiamin (1215 ml). Směs se míchá po dobu 20 hodin při pokojové teplotě, zředí 3000 ml vody, 2000 ml solanky a 3000 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a pH se upraví na > 10 pomocí 10N hydroxidu sodného. Směs se pokaždé extrahuje (2x) 5000 ml s 10% methanolem v dichlormethanu a spojené extrakty se suší nad bezvodým síranem hořečnatým a zahušťují na rotační odparce do sucha. Směs se zředí 1950 ml toluenu a znovu zahušťuje
-90 CZ 303705 B6 do sucha na rotační odparce. Zbytek se trituruje směsí hexanů a diethyletheru (4 000 ml) (3:1), pevný podíl se spojí vakuovou filtrací, promyje (2x) 400 ml ethylacetátu a suší za vakua při teplotě 34 °C po dobu 21 hodin, čímž se získá (2-dÍethylaminoethyl)amid 5-í'ormyl-2,4-dimethy 1 1 /Y-pyrrol-3 -karboxylové kyseliny (819 g, 43% výtěžek) ve formě světle žluté pevné látky.
'HNMR (dimethylsulfoxid-d6) δ 0,96 (t, 6H, 2 x CH3), 2,31 - 2,38 (2 x s, 2 x CH0, 2,51 (m, 6H 3 x CH2), 3,28 (m, 2H, CH2), 7,34 (m, IH, amid NH), 9,56 (s, IH, CHO), 11,86 (s, IH, pyrrol NH).
MS m/z 266 [M+l].
(2-Diethylaminoethyl)amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l H-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (809 g), 5-fluor-l,3-dihydroindol-2-on (438 g), ethanol (8000 ml) a pyrrolidin (13 ml) se zahřívají při teplotě 78 °C po dobu 3 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a pevné látky se spojí vakuovou filtrací a promyjí ethanolem. Pevné látky se míchají s ethanolem (5900 ml) při teplotě 72 °C po dobu 30 minut, ochladí na pokojovou teplotu, pevné látky se spojí vakuovou filtrací, promyjí ethanolem a suší za vakua při teplotě 54 °C po dobu 130 hodin, čímž se získá (2-diethylaminoethyl)amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1//—pyrrol-3-karboxylové kyseliny (1013 g, 88 % výtěžek) jako oranžová pevná látka.
'HNMR (dimethylsulfoxid-dó) δ 0,98 (t, 6H, 2 x CH3), 2,43, 2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 6H, 3 x CH2), 3,28 (q, 2H, CH2, 6,84, 6,92, 7,42, 7,71, 7,50 (5xm, 5H, aromatické, vinyl CONH), 10,88(s, IH, CONH), 13,68 (s, IH, pyrrol NH).
MS m/z 397 [M-l].
Příklad 81
3-[4-(2-diethylaminoethylkarbamoyl)-3,5-dimethyl-lÁ/-pyrrol-2-ylmethy[en]-2-oxo-2,3-dÍhydro-17/-indol-6-karboxylová kyselina
2-Oxo-2,3—dihydro-1//-indol ó-karboxylová kyselina (80 g, 0,45 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá 210 mg (92 %) požadované sloučeniny ve formě žluto-oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,6 (s, IH, NH), 7,76 (d, J- 8,0 Hz, IH), 7,66 (s, IH, H-vinyl), 7,57 (dd, J = 1,5 & 8,0 Hz, IH), 7,40 - 7,42 (m, 2H), 3,28 (m, 2H, CH2), 2,88 (m, H-piperidin), 2,54 (m, 6H, 3 x CH2), 2,44 (s, 3H, CH0, 2,40 (s, 3H, CH3), 1,56 (m, H-piperidin), 0,97 (t, J - 6,98 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 424 [M+],
Příklad 82 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-(5-dimethylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-177-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Dimethylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonylové kyseliny (90 g, 0,38 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 100 mg (54 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
-91 CZ 303705 B6 lH NMR (360 MHz, DMSO-Λ) δ 13,65 (s, IH, NH), 11,30 (s, br, IH, NH), 8,25 (d, IH), 7,92 (s, IH, H-vinyl), 7,48 - 7,53 (m, 2H), 7,07 (d, J = 8,2 Hz, IH), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,61 (s, 6H, N(CH3)2), 2,56 (t, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,44 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 485 [M+].
Příklad 83 (2-pyrrolidin_l-ylethyl)amid 5-[5-(3-chlorfenylsulfamoyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (3-Chlorfenyl)amid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonylové kyseliny (120 mg, 0,38 mmol) 15 se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-formy 1-2,4-dimethyl-l//_pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 150 mg (69 %) požadované sloučeniny ve formě žlutooranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,55 (s, IH, NH), 11,26 (s, br, IH, NH), 10,30 (br s, IH, 20 NH), 8,26 (d, IH), 7,79 (s, IH, H-vinyl), 7,51 -7,57 (m, 2H), 7,22 (t, J = 8,1 Hz, IH), 7,15 (m, IH), 7,07 (m, IH), 7,0 (m, 2H), 3,44 (m, 2H, CH2), 2,57 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,43 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 568 [M+],
Příklad 84 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 2,4-dimethyl-5-[2-oxo-5-(pyridin-3-ylsulfamoyl)-l,2~di30 hydroindol-3-ylidenmethyl) l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Pyridin-3-ylamid 2-oxo-2,3-dihydro-l//-indol-5-sulfonová kyselina (110 mg, 0,38 mmol) se kondenzuje s (2-pyrrolidÍn-l-ylethyl)amidem 5-formy 1-2,4 dimethyl-l//-pyrrol-3--karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 150 mg (74 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,58 (s, IH, NH), 8,21 (d,J = 2,0 Hz, 2H), 8,04 (m, IH), 7,76 (s, IH, H-vinyl), 7,49-7,54 (m, 2H), 7,41 (m, IH), 7,14 (m, IH), 6,94 (d, J - 8,5 Hz, IH), 3,33 (m, 2H, CH2), 2,56 (t, J = 7,06 Hz, 2H, CH2), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,43 (s, 6H, CH2), 2,43 (s, 6H, 2 x CH3), 1,68 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 535 [M+].
Příklad 85
3-[3,5-dimethyl-4-(4-methylpiperazÍn-l-karbonyl)-l//-pyrrol-2-ylmethyl]—4-(2-hydroxyethyl)-l,3-dihydroindol-2-on
4-(2-Hydroxyethyl)-l,3-dÍhydroindol-2-on (71 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s 3,5-dimethyl4 -(4- methylpiperazin-1 -karbonyl)-l//-pyrrol-2-karbaldehydem, Čímž se získá 90 mg (55 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
-92CZ 303705 B6 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,25 (s, IH, NH), 10,88 (s, IH, NH), 7,57 (s, IH, H-vinyl), 7,03 (m, IH), 6,75 -6,82 (tn, 2H), 4,86 (m, IH, OH), 3,70 (m, 2H, CH2), 3,04 (m, 211, CIL), 2,48 (m, 4H, 2 x CH2), 2,28 (br s, 7H), 2,19 (s, 3H, CH3), 2,18 (s, 3H, CH3).
MS m/z (+ve) 409,3 [M'b
Příklad 86 io feny lamid 3—[3,5-dimethyl-4-(4-methylpiperazin-l-karbonyl)-lH-pyrrol-2-ylmethylen]-2oxo—2,3-dÍhydro—lH—indol—5—sulfonové kyseliny
Fenylamid 2—oxo—2,3—dihydro— 1 H-indol—5-sulfonové kyseliny (110 mg, 0,4 mmol) se kondenzuje s 3.5-dimethyí4(4methylpiperazin-l -karbony!)-! H-pyrrol-2-karbaldehydem, (100 mg), čímž se získá 50 mg (24 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,52 (s, ΙΗ,ΝΗ), 11,26 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,08(s, ΙΗ,ΝΗ), 8,21 (d, J = I,6 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H, H-vinyl), 7,50 (dd, J = 1,6 & 8,3 Hz, 1H), 7,19 (m, 2H), 7,10 (m, 2H), 6,97 (m, 2H), 2,49 (m, 4H, 2 x CH2), 2,28 (m, 10H, 2 x CH3 & 2 x CH2), 2,18 (s, 3H, CH3),
MS-EI m/z 519 [M+].
Příklad 87 (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-dimethylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-y1idenmethyl)2,4-dimethyl-l //-pyrro 1-3-karboxy lové kyseliny
Dimethylamid 2—oxo-2,3-dihydro-lH-indoI—5—sulfonové kyseliny (90 mg, 0,38 mmol) se kon30 denzuje s (2-diethylaminoethy l)amidem 5-formyl-2,4-dÍmethyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 80 mg (43 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'HNMR (300MHz, DMSO-xlJ δ 11,30 (s, IH, NH), 8,27 (d, J = 1,7 Hz, IH), 7,94 (s, IH, 35 H-vinyl), 7,49 (dd, J = 1,7 & 8,0 Hz, IH), 7,44 (m, IH, CONHCH2CH2), 7,07 (d, J - 8,0 Hz,
IH), 3,26 (m, 2H, CH2), 2,60 (s, 6H, N(CH3)2), 2,53 (m, 2H, CH2), 2,45 - 2,50 (m, 10H, 2 x CH3 & N(CH2CH3)2), 0,96 (t, J - 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 487 [M+].
Příklad 88 (2-dÍethylaminoethyl)amid 5-[5-(3-chlorfenylsulfamoyl)-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-yliden45 methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (3—chlorfenyl)amid 2-Oxo-2,3-dihydro-lH-indol-5-sulfonové kyseliny (120 mg, 3,8 mmol) se kondenzuje s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyt-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (100 mg), čímž se získá 80 mg (37 %) požadované sloučeniny ve formě žluté pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSOdJ δ 13,55 (s, ΙΗ,ΝΗ), 11,24 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,29 (s, ΙΗ,ΝΗ), 8,25 (d, J = 1,87 Hz, IH), 7,79 (s, IH, H-vinyl), 7,52 (dd, J = 1,87 & 8,3 Hz, IH), 7,42 (m, IH, CONHCH2CH2), 7,22 (t, J = 8,02 Hz, IH), 7,15 (t, J = 2 Hz, IH), 7,08 (m, IH), 7,0 (m, 2H), 3,27
-93 CZ 303705 B6 (m, 2H, CH2), 2,48 - 2,57 (m, 6H, 3 x CH2), 2,45 (s, 3H, CH3), 2,44 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 7,0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS-EI m/z 570,1 [M+].
Příklad 95 ethyiester 3~(2-oxo-5-fenyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-karboxylové kyseliny 'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,74 (s, IH, NH), 11,00 (s, IH, NH), 8,13 (d, J = 1,7 Hz, IH), 7,74 (s, IH, H-vinyl), 7,70 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,49 (dd, J = 1,7 Hz & 8,0 Hz, IH), 7,44 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,32 (m, IH), 6,96 (d, J = 8,0 Hz, IH), 4,25 (q, J = 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,79 (m, 2H, CH2), 2,72 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 x CH2), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H, OCH2CH3). MS-EI m/z 412 [M+].
Příklad 99 ethyiester 3-(2-oxo-5-fenylsulfamoyl-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-4,5,6,7-tetrahydro2/ř-i zo i n do 1-1 -karboxy 1 o vé kyše 1 i ny
Ή NMR (360 MHz, DMSO+U δ 13,64 (s, ΙΗ,ΝΗ), 11,33 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,07(s, ΙΗ,ΝΗ), 8,24 (d, J = 1,8 Hz, IH), 7,74 (s, IH, H-vinyl), 7,57 (dd, J = 1,8 & 8,0 Hz, IH), 7,21 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 8,0 Hz, IH), 6,98 (d, J= 7,6 Hz, IH), 4,27 (q, J = 7,0 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,80 (m, 2H, CH2), 2,73 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 x CH2), 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 491 [M+].
Příklad 109
3-[3-(morfolin—4-karbony 1)-4,5,6,7-tetrahydro-2/í—izo indol-1-yl methy len]-2-en-2,3-d ihvdrc^ 1// indol -6 -karboxylová kyselina 'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, IH, NH), 12,75 (br s, IH, COOH), 11,08 (s, IH, NH), 7,85 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,71 (s, IH, H-vinyl), 7,62 (dd, J = 1,4 & 7,8 Hz, IH), 7,41 (d, J = 1,4 Hz, IH), 3,65 (m, 4H, 2 x CH2), 3,55 (dd, J - 1,4 & 7,8 Hz, IH), 7,41 (d, J = 1,4 Hz, IH), 3,65 (m, 4H, 2 x CH2), 3,55 (m, 4H, 2 x CH2), 2,81 (m, 2H, CH2), 2,54 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 x CH2).
MS-EI m/z 421 [M4].
Příklad 112
5-brom-3-[3-(pyrrolidin-l-karbonyl)—4,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-ylmethylen]-l, 3-dihydroindol-2-on 'H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (s, IH, NH), 11,00 (s, IH, NH), 8,05 (d, J = 1,8 Hz, IH), 7,74 (s, IH, H-vinyl), 7,28 (dd, J = 1,3 & 8,3 Hz, IH), 6,83 (d, J= 8,3 Hz, IH), 3,57
-94CZ 303705 B6 (m, 4H, 2 x CH2), 2,79 (m, 2H, CH2), 2,65 (m, 2H, CH2), 1,88 (m, 4H, 2 x CH2), 1,71 (m, 411. 2xCH2).
MS-EI m/z 439 & 441 [M+-l] & [M++l],
Příklad 114
3-(3-dimethylkarbamoylA,5,6,7-tetrahydro-2//-izoindol-l-ylmethylen]-2-oxo-2,3-dihydroίο 1//—indol—6—karboxylové kyselina 'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,60 (s, IH, NH), 12,72 (br s, IH, COOH), 11,05 (s, IH, NH), 7,85 (d, J = 7,9 Hz, IH), 7,72 (s, IH, H-vinyl), 7,62 (dd, J = 1,3 & 7,9 Hz, IH), 7,42 (d, J = 1,3 Hz, IH), 3,03 (s, 6H, N(CH3)2), 2,81 (m, 2H, CH2), 2,55 (m, 2H, CH2), 1,73 (m, 4H, 2 xCH2).
MS-EI m/z 379 [M + ],
Příklad 115
4-methyl-5—(5-methylsulfamoyl-2—oxo-1,2-dihydroindol-3-yl idenmethyl)-1 H-pyrrol-3karboxylová kyselina 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,56 (br s, IH, NH), 8,24 (d, J = 1,5 Hz, IH), 7,86 (s, IH, H-vinyl), 7,74 (d, J = 2,96 Hz, IH), 7,56 (dd, J - 1,5 & 8,1 Hz, IH), 7,20 (br m, IH, NHCH), 7,03 (d, J = 8,1 Hz, IH), 2,57 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 361 [M1].
Příklad 116 ethylester {[4-methyl-5-(4-methyl-5-methylsulfamoyl-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-yliden35 methy[)-l//-pyrrol-3-karbonyl]amino}octové kyseliny
Ethylester 4-methyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (viz D. O. Cheng, T. L. Bowman a E. LeGoff; J. Heterocyclic Chem.-, 1976; 13; 1145-1 147) se formyluje podle způsobu A, hydrolyzuje podle způsobu B, poté amiduje (způsob C), čímž se získá ethylester [(5-formyl-4-methyl-l//40 pyrrol-3-karbonyl)amino]octové kyseliny.
4-Methyl-5-methyIaminosulfonyl-2-oxindol (50 mg, 0,21 mmol) se kondenzuje s ethyl esterem [(5-formylA-methyl-l//-pyrrol-3-karbonyl)amino]octové kyseliny (100 mg, 0,42 mmol) a piperidinem (0,1 ml) v ethanolu (2 ml), čímž se získá 50 mg (52 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,59 (s, IH, NH), 11,29 (v, br, s, IH NH-CO), 8,33 (t, J = 5,8 Hz, IH, CONCH2), 7,83 (d, J = 3,11 Hz, IH), 7,80 (s, IH, H-vinyl), 7,71 (d, J = 8,5 Hz, IH), 7?34 (br m, IH, NHCH3), 6,89 (d, J = 8,5 Hz, IH), 4,11 (q, J - 7,1 Hz, 2, OCH2CH3), 3,92 (d, J = 5,8 Hz, 2H, GlyCH2), 2,86 (s, 3H, CH3), 2,48 (s, 3H, CH3), 2,42 (d, J = 4,71 Hz, 3H, HNCH3), 1,20 (t,J = 7,1 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 460 [M+],
-95CZ 303705 B6
Příklad 117 ethylester {[4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo— l,2-dihydroindol-3-yIidenmethyl)-lHpyrrol-3-karbonyl]amino}octové kyseliny
Směs 5-methy lam i nosulfonyl-2-oxindolu (0,06 g, 0,22 mmol), ethylesteru [(5-formyl-4methyl-l//-pyrrol-3-karbonyl)amino]octové kyseliny (0,075 g, 0,27 mmol) a piperidinu (2 kapky) v ethanolu (5 ml) se zahřívá v uzavřené baňce při teplotě 90 °C po dobu 12 hodin. Po ochlazení se precipitát spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem, trituruje směsí dichlor10 methanu a etheru a suší, ěímž se získá 0,035 g (36 %) požadované sloučeniny ve formě nažloutlé hnědé pevné látky.
]HNMR(360 MHz, DMSOX6) δ 13,6 (s, ΙΗ,ΝΗ), 11 (v, br, s, 1HNH-CO), 8,30 (t, J - 5,7 Hz, IH, CONCH2), 8,25 (d, J = 1,2 Hz, IH), 7,88 (s, IH, H-vinyl), 7,84 (d, J = 3,3 Hz, IH), 7,57 (dd, J= 1,9 & 8,5 Hz, IH), 7,14 (br m, IH, NHCH3), 7,04 (d, J = 8,5 Hz, IH), 4,11 (q, J = 6,7 Hz, 2H, OCH2CH3), 3,92 (d, J = 5,7 Hz, 2H, GlyCH2), 2,55 (s, 3H, CH3), 2,41 (m, 3H, NCH3), 1,20 (t, J = 6,7 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS-EI m/z 446 [M+].
Příklad 118 {[4-methyl-5-(5-methylsulfamoyl-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)~l //-pyrrol-325 karbonyl]amino}octová kyselina
Směs ethylesteru [(5-formyl-4-methyl-l//-pyrrol-3—karbony l)am i no] octové kyseliny (0,142 g, 0,59 mmol) a IH NaOH (1,2 ml) v methanolu (10 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Reakce se koncentruje a zbytek se kondenzuje s 5-methy lam i nos ulfonyl-2-ox indolem (0,13 g, 0,48 mmol) a piperidinem (0,12 ml) v ethanolu (12 ml), čímž se získá 0,11 g (52 %) požadované sloučeniny.
'HNMR (300MHz, DMSO-d6) δ 13,98 (br s, IH, NH), 8,17 (s, IH), 7,80 (s, IH), 7,75 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,51 (dd, J - 2 & 8,2 Hz, 1H), 7,21 (m na br, s, 2H), 6,97 (d, J = 8,1 Hz, 1H),
3,41 (d, J - 4,2 Hz, 2H, CH2NH), 2,54 (s, 3H, pyrroIXdf), 2,39 (s, 3H, ArCH3).
MS m/z 417 [M+-l].
Příklad 120
5-methy 1-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-17/ -pyrrol-3-karboxylová kyselina ‘HNMR (300 MHz, DMSO-xi6) δ 13,77 (br s, IH, NH), 12,49 (s, COOH), 11,07 (s, IH, NH), 45 8,39 (s, IH, H-vinyl), 7,43 (d, J = 7,47 Hz, IH), 7,20 (t, J = 7,47 Hz, IH), 7,03 (t, J= 7,47 Hz,
IH), 6,91 (d, J = 7,47 Hz, IH), 6,49 (d, J - 1,53 Hz, IH), 2,34 (s, 3H, CH3).
MS-EI m/z 269 [M+H]'.
Příklad 121 ethylester 5-methy l-2-(2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethy!)-l //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
-96 CZ 303705 B6 *H NMR (300 MHz, DMSO dó) δ 13,79 (s, ΙΗ,ΝΗ), 11,08 (s, IH, NH), 8,31 (s, IH, H-vinyl),
7,45 (d, J- 7,52 Hz, IH), 7,20 (t, J = 7,52 Hz, IH), 7,03 (t, J 7,52 Hz, IH), 6,91 (d, J = 7,52 Hz, IH), 6,50 (d, J = 2,1 Hz, IH), 4,26 (q, J = 7,2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,33 (s, 3H, CH3), 1,32 (t, J = 7,2 3H, 3H, OCH2CH3).
MS m/z 297,1 [M+lf.
Příklad 122 io ethylester 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-5-methyl-l//-pyrrol-3karboxylové kyseliny 'HNMR (360 MHz, DMSO-dó) δ 13,72 (s, ΙΗ,ΝΗ), 11,16 (s, IH, NH), 8,29 (s, IH, H-vinyl), 15 7,53 (d, J= 2,0 Hz, IH), 7,35 (dd, J = 2,0 & 8,05 Hz, IH), 6,87 (t, J = 8,05 Hz, IH), 6,53 (d, J - 2,4 Hz, IH), 4,28 (q, J = 7,03 Hz, 2H, OCH2CH3), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,33 (t, J = 7,03 Hz, 3H, OCH2CH3).
MS m/z 375 & 377 [M+H]+.
Příklad 123
2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl>-5-niethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová 25 kyselina 'HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,72 (s, ΙΗ,ΝΗ), 12,57 (s, IH, COOH), 11,10 (s, ΙΗ,ΝΗ), 8,36 (s, IH, H-vinyl), 7,51 (d, J = 1,4 Hz, IH). 7,34 (dd, J = 1,4 & 8,17 Hz, IH), 6,87 (t, J - 8,17 Hz, IH), 6,52 (d, J = 2,5 Hz, IH), 2,35 (s, 3H, CH3).
MS m/z 347 & 349 [M+H]1.
Příklad 124 (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-5“methyll/ř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Do roztoku 2-formyl-5-methyl-l//-pyrro 1-3-karboxylové kyseliny (250 mg, 1,63 mmol) v di40 methylformamidu (3 m) se přidá l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid (376 mg, 1,2 ekviv.) 1-hydroxybenzotriazol (265 mg, 1,2 ekviv.), triethylamin (0,45 ml, 2 ekviv.), 1hydroxybenzotriazol (265 mg, 1,2 ekviv.), triethylamin (0,45 ml, 2 ekviv.) a I-(2-aminoethyl)pyrrolidin (0,23 ml, 1,1 ekviv.). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se reakce zředí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou (s extra solí) a extrahuje 10% methanolem v dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší nad bezvodým síranem sodným a koncentrují, čímž se získá 130 mg (2-pyrrolidin-l-yl)ethyl)amidu 2formyl-5-methyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Směs 5-brom-2-oxindolu (106 mg, 0,5 mmol), (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidu 2-formyl-550 methyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (125 mg, 1 ekviv.) a piperidinu (0,2 ml) v ethanol (2 ml) se zahřívá v uzavřené baňce při teplotě 80 °C po dobu 1 hodiny, pak se ochladí, vzniklý precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a ethylacetátem a suší, Čímž se získá požadovaná sloučenina ve formě oranžové pevné látky.
-97CZ 303705 B6 ‘HNMR (300MHz, DMSO-+dó) δ 13,62 (s, IH, NH), 11,06 (br s, IH, NH), 8,56 (s, IH, H-vinyl), 8,15 (m, IH, CONCH2), 7,48 (d, J = 1,8 Hz, IH), 7,31 (dd, J = 1,8 & 7,9 Hz, IH), 6,86 (d, J = 7,9 Hz, IH), 6,60 (d, J = 2,3 Hz, IH), 3,35 (m, 2H, HNCH2CH2), 2,56 (t, J = 6,91 Hz, 2H, HNCH2CH2), 2,35 (s, 3H, CH3), 1,67 (m, 4H, 2 x CH2).
MS m/z 443/445 [M+ a M++2].
Příklad 125 (2—diethylaminoethyl)amid 2-(5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-5-methyl17/-py rrol-3-karboxy lové kyseliny
Do roztoku 2-formyl-5-methyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (320 mg, 2,1 mmol) v dimethylformamidu (3 ml) se přidá 1 -ethyl-3-(3-dimethylaminopropylkarbodiimid (483 mg, 1,2 ekviv.) 1-hydroxybenzotriazol (340 mg, 1,2 ekviv.), triethylamin (0,59ml, 2 ekviv.) a N,Ndiethylethylendiamin(0,32 ml, 1,1 ekviv.). Po míchání při pokojové teplotě přes noc se reakce zředí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou (s extra solí) a extrahuje 10% methanolem v dichlormethanu. Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší se bezvodým síranem sodným a koncentrují, čímž se získá (2-diethylaminoethyl)amid 2-formyl-5-methyll//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Směs 5-brom-2-oxindolu (106 mg, 0,5 mmol), (2-diethylaminoethyl)amidu 2-formyl-5methyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (126 mg, 1 ekviv.) a piperidinu (0,2 ml) v ethanolu (2 ml) se zahřívá v uzavřené baňce při teplotě 80 °C po dobu 1 hodiny, pak se ochladí, precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a ethylacetátem a suší, čímž se získá požadovaná sloučenina ve formě oranžové pevné látky.
'HNMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13,62 (s, IH, NH), 11,11 (br s, IH, NH), 8,54 (s, IH,
H-vinyl), 8,1 (m, IH, CONCH2), 7,49 (d, J = 2,2 Hz, IH), 7,31 (dd, J = 2,2 & 8,3 Hz, IH), 6,86 (d, J = 8,3 Hz, IH), 6,58 (d, J - 2,24 Hz, 1H), 3,31 (m, 2H, HNCH2CH2), 2,59 (m, 6H, 3 x CH2), 2,36 (s, 3H, CH3), 0,99 (t, J = 6,8 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS m/z 445/447 [M+a M++2].
Příklad 126 (2-diethylaminoethyl)amid 2,4-d i methy l-5-(2oxo-1,2-d i hydro i ndo 1-3-y lidenmethy!)- \fí40 pyrro 1-3-karboxylové kyseliny
Směs 1 J-dihydroindol-2onu (266 mg, 2 mmol), (2 -diethylaminoethyl)amidu 5-formyl-2,4-dimethyl-I//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (530 mg, 2 mmol) a piperidinu (1 kapka) v ethanolu se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 2 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu, výsledný precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a suší, čímž se získá 422 mg (55 %) požadované sloučeniny ve formě světle žluté pevné látky.
‘H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,7 (s, IH, NH), 10,9 (s, IH, NH), 7,88 (d, J = 7,6 Hz, IH), 7,64 (s, IH, H-vinyl), 7,41 (t, J - 5,4 Hz, IH, NH), 7,13 (dt, J = 1,2 & 7,6 Hz, 1H), 6,99 (dt, J = 1,2 & 7,6 Hz, IH), 6,88 (d, J = 7,6 Hz, IH), 3,28 (m, 2H), 2,48 - 2,55 (m, 6H), 2,44 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J - 7,2 Hz, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 381 [M++ 1],
-98CZ 303705 B6
Příklad 127 (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2.4-dí5 methyl-1 /7 - pyrro 1-3-karboxylové kysel iny
Směs 5-chlor-l,3-dihydroindol-2-onu (335 mg, 2 mmol), (2-diethy!aminoethyl)amidu 5-formy 1-2,4-d i methyl-1//-py rro 1-3-karboxy lové kyseliny (530 mg, 2 mmol) a piperidinu (1 kapka) v ethanolu se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 2 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu, to výsledný precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje ethanolem a suší, čímž se získá 565 mg (68 %) požadované sloučeniny ve formě oranžové pevné látky.
'HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,65 (s, ΙΗ,ΝΗ), 11,0 (s, ΙΗ,ΝΗ), 7,98 (d, J = 2,l Hz, 1 H),
7,77 (s, IH, H-vinyl), 7,44 (t, NH), 7,13 (dd, J = 2,1 & 8,4 Hz, IH), 6,87 (d, J = 8,4 Hz, IH), 15 3,28 (g, 2H), 2,48 - 2,53 (m, 6H), 2,44 (s, 3H, CH0, 2,43 (s, 3H, CH3), 0,97 (t, J = 7,0 Hz, 6H,
N(CH2CH3)2)
MS + ve APCI 415 [M++ I].
Příklad 128 (2-pyrrolidin-l-ethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-l,2-dihydroindoI-3-ylÍdenmethyl)-l/Zpyrrol-3-karboxylové kyseliny
1.3- Dihydroindol-2 on se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-formyl-2,4-dimethyl-l/Y-pyrro 1-3-karboxy lové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
MS + ve APCI 379 [M* + 1].
Příklad 129 (2-pyrrolidin-l-yl-ethvl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-di35 methy l-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny
5-Fluor-l,3-dihydroindol-2-on se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-formyl2.4- d i methyl-177 pyrrol-3-karboxy lové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
MS + ve APCI 397 [M+ + 1 ].
Zvětšení měřítka:
5-Formy 1-2,4 dimethyl-17/ pyrrol-3-karboxylová kyselina (61 g), 5-fluor-l,3-dihydroindol45 2-on (79 g), ethanol (300 ml) a pyrrolidin (32 ml) se refluxuje po dobu 4,5 hodiny. Do směsi se přidá octová kyselina (24 ml) a v refluxu se pokračuje po dobu 30 minut. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a pevné látky se spojí vakuovou filtrací a promyjí (2x) ethanolem. Pevné látky se míchají po dobu 130 minut v 40% acetonu ve vodě (400 ml) obsahující 12N kyselinou chlorovodíkovou (6,5 ml). Pevné látky se spojí vakuovou filtrací a promyjí (2x) 40% acetonem ve vodě.
Pevné látky se suší za vakua, čímž se získá 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylÍdenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (86 g, 79 % výtěžek) ve formě oranžové pevné látky. 'H-NMR (dimethylsulfoxid-dó) 2,48, 2,50 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 6,80, 6,88, 7,68, 7,72 (4xm, 4H, aromátová a vinyl), 10,88 (s, IH, CONH), 12,12 (s, IH, COOH), 13,82 (s, IH, pyrrol NH), MS m/z 299 [M-l],
-99CZ 303705 B6
5-[5-Fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyroI-3-karboxylová kyselina (100 g) a dimethylformamid (500 ml) se míchají a přidá se benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorfosfát (221 g), l-(2-aminoethyl)pyrrolidin (45,6 g) a triethylamin (93 ml). Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě, pevný produkt se spojí vakuovou filtrací a promyje ethanolem. Pevné látky se promývají za míchání v ethanolu (500 ml) po dobu jedné hodiny při teplotě 64 °C a ochladí na pokojovou teplotu. Pevné látky se spojí vakuovou filtrací, promyjí ethanolem a suší za vakua, čímž se získá (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-[5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol3-karboxylové kyseliny (101,5 g, 77% výtěžek). ’H NMR (dimethylsulfoxid-dů) δ 1,60 (m, 4H,
2 x CH2), 2,40, 2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 4H, 2 x CH2), 2,57, 3,35 (2 x m, 4H, 2 x CH2),
7,53, 7,70, 7,73, 7,76 (4xm, 4H, aromatický a vinyl), 10788 (s, IH, CONH), 13,67 (s, IH, pyrrol NH), MS m/z 396 [M+l].
Příklad 130 (2-pyrrolidin-l- yl-ethvl)amid 5-(5-chlor-2-oxo-1,2-dihydroindol -3-ylidenmethyl)-2,4—dimethyl-l//-py rro 1-3-kar boxy lové kyseliny
5-Chlor-l,3-dihydroindol-2-on se kondenzuje s (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amidem 5-formyl2,4-dimethyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
MS + ve APCI 417 [M+ + lj.
Příklad 131 (2-dimethylaminoethyl)amid 2,4-dimethyl-5-(2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-l//pyrrol-3-karboxylové kyseliny
1,3-Dihydroindol-2-on se kondenzuje s (2-dimethylaminoethyl)amidem 5-formy 1-2,4—dimethyl—1 //—pyrrol—3—karboxylové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
lHNMR(400 MHz, DMSOd6) δ 13,63 (s, ΙΗ,ΝΗ), 10,90 (s, ΙΗ,ΝΗ), 7,78 (d, J = 7,8 Hz, IH), 35 7,63 (s, 1H, H-vinyl), 7,48 (t, 1H, NH), 7,13 (dt, 1H), 6,98 (dt, 1H), 6,88 (d, J = 7,7 Hz, 1H),
3,31 (q, J = 6,6 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 353 [M+ + 1],
Příklad 132 (2-dimethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dÍ45 methyI I// pyrrol-3 -karboxylové kyseliny
5-Fluor-l,3-dihydroindol-2-on se kondenzuje s (2—diinethylaminoethyl)amidem 5-formyl-2,4_ di methyl-l//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny, čímž se získá požadovaná sloučenina.
'H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ 13,68 (s, IH, NH), 10,90 (s, IH, NH), 7,76 (dd, J = 2,4 &
9,4 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H, H-vinyl), 7,51 (t, 1H, NH), 6,93 (m, IH), 6,84 (dd, J = 4,6 & 8,4 Hz, IH), 3,31 (q, J - 6,6 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 2,38 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,19 (s, 6H, N(CH2CH3)2).
MS + ve APCI 371 [Μ* + 1],
- 100CZ 303705 B6
Příklad 193 (2-ethylaminoethyl)amid 5-[5-fluor-2-oxo-1,2-dihydroindol-(3Z)-ylÍdenmethyl)-2,4_dí5 methy 1-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (2-Ethylaminoethyl)amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (99 g), ethanol (400 ml), 5-fluor-2-oxoindol (32 g) a pyrrolidin (1,5 g) se refluxují po dobu 3 hodin za stálého míchán, směs se ochladí na pokojovou teplotu a pevné látky spojí vakuovou filtrací, io míchají v ethanolu při teplotě 60 °C, ochladí na pokojovou teplotu a spojí vakuovou filtrací.
Produkt se suší za vakua, čímž se získá (2—ethylaminoethyl)amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol—(3Zý-y lidenmethyl]-2,4—dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (75 g, 95% výtěžek). ]H NMR (dimethylsulfoxid-d6) δ 1,03 (t, 3H, CH3), 2,42, 2,44 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,56 (q, 2H, CH2), 2,70, 3,30 (2 x t, 4H, 2 x CH2), 6,85, 6,92, 7,58, 7,72, 7,76 (5xm, 5H, aromatický, vinyl aCONH), 10,90 (brs, 1H,CONH), 13,65(brs, IH, pyrrol NH).
MS m/z 369 [M-l].
Příklad 195 (2-diethyl-7V-oxoamÍnoethyl)amÍd 5—[5—fluor—2—oxo—1,2—dihydroindol—(3Z)—vlidenmethyl)
2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 25 Způsob A:
(2-DÍethylamínoethyl)amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylideninethyl]-2,4-dimethyl-1//—pyrrol-3-karboxylové kyseliny (598 mg) a dichlormethan (60 ml) v ledové lázni se nechají reagovat s 3-chlorperbenzoovou kyselinou (336 mg) a směs míchá při pokojové teplotě přes noc, rozpouštědlo se odpařuje na rotační odparce a zbytek se suspenduje v methanolu (20 ml). Přidá se voda (20 ml) obsahující hydroxid sodný (240 mg) a směs se míchá po dobu jedné hodiny, precipitát se spojí vakuovou filtrací, promyje 5 ml vody a suší za vakua, čímž se získá (2-diethyl-N-oxoaminoethyl)amid 5-[ 5-ťluor-2—oxo—1,2—dihvdroindol(3Z)-y!idenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (510 mg, 82% výtěžek) ve formě oranžové pevné látky. ]H NMR (DMSO-ds) δ 13,72 (br s, IH, NH), 11,02 (br s, IH, CONH),
9,81 (br s, IH, CONH), 7,75 (dd, IH, aromatické), 7,70 (s, IH, aromatické), 6,93 (td, IH, aromatické), 6,84 (m, IH, aromatické), 3,63 (m, 2H, CH2), 3,29 (m, 2H, CH2), 3,14 (m, 4H, 2 x CH2), 2,47 (s, 1H, CH3), 2,45 (s, 3H, CH3), 1,64 (t, 6H, 2 x CH3).
MS m/z 415 [M+l].
Způsob B:
(2-Diethylaminoethyl)amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (10 g) 45 se suspenduje v dichlormethanu (lOOml) a ochladí v ledové lázni. 3-Chlorperoxybenzoová kyselina (13,1 g) se přidá za stálého míchání a směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá přes noc. Směs se zahušťuje na rotační odparce do sucha a chromatografuje na sloupci silikagelu v 20% methanolu v dichlormethanu jako mobilní fázi. Frakce obsahující produkt se spojí a zahušťují na rotační odparce do sucha, čímž se získá (2-diethyl-A-oxoaminoethyl)amid
5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (9 g, 83% výtěžek).
(2-Diethyl—3V-oxoamÍnoethyl)amid 5-formyl-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (9 g), 5-fluor-l,3-dihydroindol-2-on (9 g, 83% výtěžek) a pyrrolidin (9 g, 83 % výtěžek) (0,1 g) se refluxují v ethanolu (30 ml) po dobu 4 hodin. Směs se ochladí v ledové lázni a precipitát se spojí vakuovou filtrací a promyje ethanolem. Pevné látky se míchají v ethylacetátu (30 ml), spojí
- 101 CZ 303705 B6 vakuovou filtrací, promyjí ethylacetátem a suší za vakua, čímž se získá (2-diethy 1-A-oxoaminoethyl )amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dimethylindol (3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol3-karboxylové kyseliny (10,3 g, 80% výtěžek) ve formě oranžové pevné látky.
’H NMR (DMSO-d6) δ 13,72 (br s, IH, NH), 11,02 (br s, IH, CONH), 9,81 (br s, IH, CONH), 7,75 (dd, IH, aromatické), 7,70 (s, IH, aromatické), 6,93 (td, IH, aromatické), 6,84 (m, IH, aromatické), 3,63 (m, 2H, CH2), 3,29 (m, 2H, CH2), 3,14 (m, 4H, 2 x CH2), 2,47 (s, IH, CH3), 2,45 (s, 3H, CH3), 1,64 (t, 6H, 2 x CH3). MS m/z 415 [M+l].
Příklad 190 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z} -ylidenmethylj-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3 -karboxy 1 ové kyše 1 iny
5-[5-Fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2.4-dimethyl-l //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (120 mg, 0,4 mmol) se protřepává s l-ethyl~3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidem (EDC) a podrobí HCl (96 mg, 0,5 mmol), bezvodému 1-hydroxybenztriazolu (68 mg, 0,5 mmol) a 2-(2-aminoethyIpyridinu zakoupenému u firmy Aldrich v bezvodém dimethyl20 formamidu (DMF; 3 ml) po dobu 2 až 3 dnů při pokojové teplotě. Reakční směs se zředí s 1 M NaHCO3 (1,5 mt), pak 8 ml vody. Surový precipitát se spojí filtrací, promyje vodou, suší a čistí krystalizaci nebo chromatografíi, čímž se získá [2-(pyridin-l-yl)ethyI]amid 5-[5-fluor-2-oxol,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//”pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Příklad 189 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[5- chlor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyI-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu výše, ale nahradí se 5-[5-fluor-2—oxo-1,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyÍ]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina 5-[5-chlor2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylovou kyselinou (127 mg), čímž se získá [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2—díhydroindol35 (3Z)-yl idenmethy l]-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Příklad 192 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4—dimethy 1-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190 výše, ale nahradí se 5-[5-fluor-2-oxol,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina 5-[545 brom-2-oxo-l ,2-d ihydroindol-(3Z)-ylÍdenmethyl]-2,4-d i methyl-1 //-pyrrol-3-karboxylovou kyselinou (145 mg), čímž se získá [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethy]-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Příklad 191 [2~(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4~dimethyll//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
- 102CZ 303705 B6
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190 výše, ale nahradí se 5-['5—fluor- 2 o\ol,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmcthyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny 5 [2 oxo-1.2-dihydroindol-(3Z) ylidenmethyl [-2,4-dimethyl 1//-pyrrol-3 karboxy lovou kyselinou (113 mg), čímž se získá [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5[2-oxo-l .2-dihydroindol-(3Z)—yiidenmethy 1)-2.4-dimethy 1-1 //-pyrro 1-3-karboxylové kyseliny.
Příklad 203 [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-kvano-2—oxo-1.2-dihydroindol—(3Z)-ylidcnmethylj2.4-dimethyl-1 //-pyrro 1-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190 výše, ale nahradí se 5-[5-fluor-2-oxo1,2—dihvdroindol (3Z)-ylidenmethvl]-2,4—dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylová kyselina 5-[5kyano—2-oxo- l,2-dihydroindol-(3Z)“ylidenmethyl]-2,4-dimethy l-l //-pyrro 1-3-karboxy lovou kyselinou (123 mg), čímž se získá [2-(pyridin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-kyano-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl}-2,4-dimethyl-l//-pyrroÍ-3-karboxylové kyseliny.
Příklad 142, 186, 187, 188 a 204
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridÍn l-(2-amÍnoethyl)pyrrolidinem zakoupeným u firmy Aldrich Chemical Company, lne., čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklad 143 až 147
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyI)pyridin l-(2-aminoethyl)imidazolin-2-oněm (připraveným zahříváním dimethylkarbonátu s bis(2-aminoethyl)aminem (2 ekvivalenty) v uzavřené baňce při teplotě 150 °C po dobu 30 minut. Poté se postupuje podle způsobu popsaného v patentu US č. 2 613 212 (1950) uděleného Rohm & Haas Co. Surový produkt se Čistí na silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu, vodného amoniaku (80:25:2) jako mobilní fázi, čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklad 148 až 151 a 184
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-{2-aminoethyl)pyridin ethylesterem 4-(2-aminoethyl)piperazin-l-octové kyseliny (připravený následujícím způsobem: ethylester piperazin-1 octové kyseliny (11,22 g) se nechá reagovat s jodacetonitrilem (5,0 ml) v přítomnosti uhličitanu draselného (6,9g) v ethylacetátu (260 ml) při teplotě 0 °C. Po přidání jodacetonitrilu (45 min) se reakční směs následně míchá při pokojové teplotě po dobu 11 hodin. Reakční směs se filtruje a filtráty se odpařují. Zbytek se hydrogenuje v přítomnosti boridu kobaltu (připraveného z CoCl2 a tetrahydridoboritanu sodného) při pokojové teplotě při tlaku 50 psí (344,74 kPa) po dobu 2 dnů v ethanolu. Filtrací, odpařováním a chromatografickou purifikací ve směsi chloroformu, methanolu a vodného amoniaku (80:25:2) jako mobilní fázi se získá požadovaný amin (3,306 g) ve formě světle žlutého oleje), čímž se získají požadované sloučeniny.
- 103CZ 303705 B6
Příklad 152 a 153
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin 2-[(2-aminoethylamino)]acetonitrilem (připraveným následujícím způ5 sobem: roztok jodacetonitrilu (50 mmol) v ethylalkoholu (80 ml) se přidává do roztoku ethylendiaminu (150 ml) v ethylalkoholu (60 ml) při teplotě 0°C po dobu 30 minut V míchání se pokračuje po další 1 hodinu při teplotě 0 °C, pak při pokojové teplotě po dobu 14 hodin. Přidá se 55 mmol uhličitanu draselného, míchá po dobu 30 minut. Směs se filtruje a filtrát se koncentruje při pokojové teplotě. Zbytek se čistí na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu io a vodného amoniaku (80:15:1,5), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklad 154 až 158
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-{2-aminoethyl)pyridin l-(3-aminopropyl)azepin-2-onem (připraveným podle způsobu publikovaného v Kraft A.: 7 Chem. Soc. Perkin Trans, 1, 6, 1999, 705-14, kromě hydrolýzy pomocí DBU, která se provádí při teplotě 145 °C v přítomnosti čistého hydroxidu lithného (1 hodina, 5 ml l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-enu - DBU, 2 ml vody, 420 mg hydrátu hydroxidu lithné20 ho).
Purifíkaci surového produktu na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu, vodného amoniaku (80:40:4) jako mobilní fázi se získá l-(3-amí nopropy l)azepin-2-on (4,973 g, 87% výtěžek)), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklady 133 až 135, 159 a 200
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se
2-(2-aminoethyl)pyridin A-acetylethylendiaminem, (připraveným zahříváním směsi ethylacetátu s ethylendiaminem (1,5 ekviv.) při teplotě 160 °C po dobu 1 hodiny v uzavřené baňce a vakuovou destilací. Produkt se získá v 56% výtěžku. A-acety lethy lend i amin je také dostupný u firmy Aldrich), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklady 146 až 140
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin l-(3-aminopropyl)tetrahydropyrimidin-2-onem (připravený stejným způsobem jako l-(3-aminopropyl)azepin-2-on podle způsobu publikovaného v Kraft A.:
J. Chem. Soc. Perkin Trans, 1, 6, 1999, 705-14: 1,3,4,6,7,8-hexahydro-2//-pyrimido[l,2-a]pyrimidin (4,939 g), hydrát hydroxidu lithného (918 mg) a 2 ml vody se zahřívají bez rozpouštědla v uzavřené nádobě při teplotě 145 °C po dobu 1 hodiny. Surový produkt se čistí na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu a vodného amoniaku (80:40:44) jako mobilní fázi, čímž se získá čistý amin (5,265 g, 94% výtěžek).
Příklady 141, 160 až 162 a 185
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin l-(2-aminoethyl)piperazin-2-onem (připraveným následujícím způsobem: čistý /erc-butyldifenylsilylchlorid (25 ml, 97,7 mmol) se přidává po kapkách do roztoku DBU (19,5 ml, 130 mmol) a bis(2-aminoethyl)aminu (4,32 ml, 40 mmol) v bezvodém dimethylacetamidu (80 ml) při pokojové teplotě po ochlazení ve vodní lázni v průběhu 5 minut. Po ochla55 zení na pokojovou teplotu se přidá ethylester bromoctové kyseliny (6,70 ml, 60 mmol). Reakční
- 104CZ 303705 B6 směs se míchá po dobu 25 minut, pak se odpařuje za vysokého vakua a zbytek se rozpustí v methanolu (200 ml). Přidá se KHCO3 (10 g) a KF (12 g, 200 mmol) a směs se míchá při teplotě 60 °C po dobu 5 hodin. Přidá se 10 g Na2CO3 a směs se míchá po dobu 10 minut, ochladí a filtruje, filtráty se odpařují. Zbytek se extrahuje hexany (2 x 250 ml), látky nerozpustné v hexanech se rozpustí v ethanolu (60 ml), filtruji a odpařují. Zbytek se čistí na sloupci silikagelu ve směsi chloroformu, methanolu a vodného amoniaku (80:40:4) jako mobilní fázi, čímž se získá čistý amin (4,245 g, 74% výtěžek), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklady 163 až 167
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladech 190, 189, 191, 192 a 203 výše, ale nahradí se 2-(2-aminoethyl)pyridin 3-[(21-aminoethyl)amino]propionÍtrilem (připraveným z ethylendiaminu (150 mmol) a akrylonitrilu (50 mmol) v THF při pokojové teplotě podle způsobu publiko15 váného v Israet, M. et al: J. Med. Chem. 7, 1964, 710-16, čímž se získá požadovaný amin (4,294 g)), čímž se získají požadované sloučeniny.
Příklad 168 [2-(4-methy1píperazin-l-yl)ethyl]amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dÍhydroindol-3-ylidenmethyl)2,4-d imethy 1-1 //-pyrro 1-3-karboxy lové kyseliny
Do míchané žluté kalné směsi 5-[5-fluor-2-oxo—l,2-dihydroíndol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-di25 methyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (90 mg), DMF (0,8 ml) a triethylaminu (TEA:
0,084 ml) v 20ml baňce se přidá benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluorfosfát - BOP činidlo (199 mg). Směs se v průběhu 5 minut vyčerí, do čiré směsi se přidá 2-(4methylpiperazin-l-yl)ethylamin! (51 mg) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě přes noc. Žluté produkty v pevné formě z reakčního systému vyprecipitují. Podle TLC (10% methanol v methylenchloridu) by se veškerá výchozí látka měla konvertovat na produkt. Pevný podíl izolovaný vakuovou filtrací se jednou promyje ethanolem (1 ml), pevný podíl se sonikuje v diethyletheru (2 ml) po dobu 20 minut a spojí vakuovou filtrací. Po sušení za vakua se získá (4-methylpiperazin-l-ylethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl1//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (79 mg, 62% výtěžek).
'H NMR (DMSO d6) δ 2,13 (s, 3H, CH3), 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,41 (m, 2H, CH2), 2,47 (m, 8H, 4xCH2), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,82 (dd, J = 4,5, 8,7 Hz, IH), 6,91 (td, 2J = 2,4, 3J - 8,8 Hz, 1H), 7,43 (t, J 5,6 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 2,8, 9,6 Hz, 1H) (aromatický a vinyl), 10,88 (s, IH, CONH), 13,67 (s, ΙΗ,ΝΗ).
LC-MS (m/z 424,4 (M-l).
Příklad 169 (4-methylpiperazin-l-yl)ethyl]amid 5-(5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)2,4—dimethy 1-1 //-pyrro l-3-karboxy lové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168 výše, ale nahradí se 5-[5-f1uor-2-oxo50 1,2-dihydroindol-(3Z)-y lidenmethyl]-2,4-dimethyl-l //-pyrro 1-3-kar boxy lová kyselina 5-[5chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyÍ]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylovou kyselinou (95 mg, 0,3 mmol), čímž se získá (4-methylpiperazin-l-ylethyl)amid 5-(5-chlor-2oxo-l,2-dÍhydroindol-3-ylídenmethyl )-2,4—dimethy 1-1//-pyrrol-3-karboxy1ové kyseliny (76 mg, 58% výtěžek).
- 105CZ 303705 B6 lH NMR (DMSO-dé) δ 2,13 (s, 3H, CH3), 2,41, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,42 (m, 2H, CH2),
2,48 (m, 8H, 4xCH2), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,84 (d, J = 8,0 Hz, IH), 7,11 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, IH), 7,44 (t, J = 5,6 Hz, IH), 7,76 (s, IH), 7,97 (d, J = 2,0 Hz, IH) (aromatické a vinyl), 10,98 (s, IH, CONH), 13,62 (s, IH, NH).
LC-MS (m/z) 440,2 (M-l).
Příklad 170 io (4—methy Ipiperazín-1-v l)ethyl]amid 5-(5-brom-2—oxo—l,2—dihydroindoL-3-ylidenmethyl)—
2,4-d i methy 1-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168 výše, ale nahradí se 5-(5—chlor-2—oxo15 1,2-díhydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-1 //-pyrrol-3~karboxylová kyselina 5-(5brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl]-2,4—dimethyl-1//-pyrrol-3-karboxylovou kyselinou, Čímž se získá (4—methylpiperazin-l-ylethyl)amid 5—(5-brom-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-yIidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (39 mg, 54%) z SU011670 (54 mg, 0,15 mmol).
'H NMR (DMSO-d6) δ 2,14 (s, 3H, CH3), 2,41, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,42 (m, 2H, CH2),
2,48 (m, 8H, 4 x CH2), 3,31 (m, 2H, CH2), 6,80 (d, J = 8,0 Hz, IH), 7,23 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, IH), 7,44 (t, J = 5,6 Hz, IH), 7,76 (s, IH), 8,09 (d, J = 2,0 Hz, IH) (aromatický a vinyl), 10,99 (s, IH, CONH), 13,61 (s, IH, NH).
LC-MS (m/z) 486,6 (M).
Příklad 172 (4-methylpiperazin-l-y])ethyl]amid 5 <2-oxo 1.2 dihydromdol--3-ylidenmethyl)-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3-karboxy lové kysel iny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168 výše, ale nahradí se 5-(5-fluor-2 oxo 35 1,2-d i hydro indo 1-3-y lidenmethyl)-2,4-d i methy 1-1 //-pyrrol-3-karboxy lová kyselina SU014900
5-(2-oxo-1.2—dihydroindol-3-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylovou kyselinou, čímž se získá (4-methylpiperazin-l-ylethyl)amid 5-(2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dÍmethy]-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny SU0146903 (136 mg, 84 %) z SU012120(112,8 mg, 0,4 mmol).
'H NMR (DMSO-dó) δ 2,13 (s, 3H, CH3), 2,39, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,42 (m, 2H, CH2),
2,48 (m, 8H, 4xCH2), 3,30 (t, 2H, CH2), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, IH), 6,96 (t, J = 7,4 Hz, IH), 7,10 (t, J - 7,8 Hz, IH), 7,41 (t, J = 5,4 Hz, IH) 7,62 (s, IH), 7,76 (d, J = 7,6 Hz, IH) (aromatické a vinyl), 10,88 (s, IH, CONH), 13,61 (s, IH, NH).
LC-MS (m/z) 406,6 (M-l).
Příklad 171 [2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl]amid 5—[2—oxo-1,2-dihydroíndol-(3Z)-ylidenmethyI]2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Do míchané žluté kalné směsi 5-[2-oxo-1,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl55 l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (112,8 mg, 0,4 mmol), DMF (0,5 ml) a triethylaminu
- 106CZ 303705 B6 (0,111 ml) v 20 ml reakční baňce se přidá BOP činidlo (265 mg). Směs se po 5 minutách vyčeří. Do čiré směsi se přidá 2-(2,6-dimethylpiperazin-I-yl)ethylamin (68,6 mg) (viz Tapia, L. Alonso-Cires, P. LopezTudanca, R., Mosquera, L. Labeaga, A., Innrarity, A. Orjals, J. Med. Chem., 1999, 42, 2870-2880) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě přes noc. Podle TLC (10% methanol v methylenchloridu) by měla veškerá výchozí látka zreagovat na produkt. Reakční směs se zahušťuje do sucha a čistí zrychlenou chromatografií (CH2C12/CH3OH=20/1--15/1), poté rekrystalizuje, čímž se získá [2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl)amid 5-[2-oxo-l,2dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (83 mg,
50% výtěžek).
ío *H NMR (DMSO-d6) 8 1,15, 1,16 (2 xs, 6H,2xCH3), 1,95 (t, J = 11,6 Hz, 2H, CH2), 2,41,2,47 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 2H, CH2), 3,03 (d, J = 10 Hz, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, IH), 6,97 (t, J= 7,2 Hz, IH), 7,11 (t, J = 7,8 Hz, IH), 7,48 (t, J = 5,6 Hz, IH), 7,61 (s, IH), 7,75 (d, J = 7,6 Hz, IH) (aromatické a vinyl), 10,88 (s, IH,
CONH), 13,62 (s, ΙΗ,ΝΗ).
LC-MS (m/z) 422,2 (M).
Příklad 173 [2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4—dimethy 1-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 168 výše, čímž se získá požadovaná sloučenina (60 mg, 0,2 mmol).
lH NMR (DMSO-d6) δ 0,891, 0,907 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 1,49 (t, J = 10,4 Hz, 2H), 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,41 (m, 2H, CH2), 2,74 (m, 4H), 3,30 (m, 2H), 6,82 (dd, J = 4,5, 8,7 Hz,
1H), 6,90 (td, 2J - 2,4, 3 J = 8,4 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,74 (dd, J = 4,6,
8,4 Hz, IH) (aromatické a vinyl), 10,88 (s, IH, CONH), 13,65 (s, IH, NH).
LC-MS (m/z) 438,4 (M-l).
Příklad 174 [2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)ethyl]amid 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4—dimethyl-177-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 171 výše, čímž se získá požadovaná sloučenina (31,2 mg, 34 %) z 5-[5-chlor-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ytidenmethyl]-2,4-dimethyl177-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (63 mg, 0,2 mmol).
*H NMR (DMSO-d6) δ 1,15, 1,16 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 1,95 (t, J = 11,6 Hz, 2H, CH2), 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 2H, CH2), 3,03 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,85 (d, J = 8,4 Hz, IH), 7,11 (dd, J - 2,0, 8,0 Hz, IH), 7,52 (t, J= 5,6 Hz, IH), 7,76 (s, 1H), 7,97 (d, J = 2,0 Hz, 1H) (aromatické a vinyl), 10,99 (s, 1H, CONH), 13,63 (s, 1H, NH).
LC-MS (m/z) 456,2 (M+l).
- 107CZ 303705 B6
Příklad 175 [2-(3,5-dimethy lpiperazin-1 -yl)ethyl]amid 5-[5-brom-2-oxo-l ,2-dihydroíndol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4-di methy 1-1TY-pyrrol-3-karboxylové kyseliny
Postupuje se podle způsobu uvedeného v příkladu 171 výše, čímž se získá požadovaná sloučenina (40 mg, 40%) z 5-[5-brom-2-oxo-l,2-dihydroindol-(3Z)-ylidenmethyl]-2,4~dimethyl-l/ř-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (74 mg, 0,2 mmol).
*H NMR (DMSO-d$) δ 1,15, 1,16 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 1,95 (t,J= 11,6 Hz, 2H, CH2), 2,40, 2,42 (2 x s, 6H, 2 x CH3), 2,50 (m, 2H, CH2), 3,03 (d, J - 10,4 Hz, 2H), 3,49 (m, 2H), 3,30 (m, 2H, CH2), 6,81 (d, J = 8,4 Hz, IH), 7,24 (dd, J = 2,0, 8,4 Hz, IH), 7,51 (t, J= 5,6 Hz, IH), 7,76 (s, IH), 8,10 (d, J = 2,0 Hz, IH) (aromatické a vinyl), 10,99 (s, IH, CONH), 13,62 (s, IH, NH).
LC-MS (m/z) 498,4 (M+l).
Biologické příklady
Následující testy byly používány k nalezení takových sloučenin, které mají optimální stupeň požadované aktivity.
Postupy testů
Následující testy mohou být používány ke stanovení míry aktivity a účinku různých sloučenin podle předloženého vynálezu na jednu nebo více PK. Obdobné testy mohou být navrženy společně podle stejných zásad pro kterékoliv PK pomocí standardních a známých technik.
Několik testů popsaných v předloženém vynálezu je prováděno technikou ELISA (EnzymeLinked Immunosorbent Sandwich Assay) (Voliér, et al., 1980, „Enzyme-Linked Immunosorbent Assay“, Manual of Clinical Immunology, 2d ed., Rose and Friedman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., 359-371). Obecný postup je následující: sloučenina je zavedena do buněk exprimujících testovanou kinázu, buď přírodní nebo rekombinantní, po vybraný časový interval, po kterém, pokud testovaná kináza je receptor, je přidán ligand aktivující receptor. Buňky se lyžují a lyzát se převede do jamek destičky pro ELISA techniku předem potažených specifickou protilátkou rozpoznávající substrát enzymatické fosforylační reakce. Nesubstrátové komponenty buněčného lyzátu se odmyjí a míra fosforylace substrátu se deteguje protilátkou specificky rozpoznávající fosfotyrosin v porovnání s buňkami, které nepřišly v kontakt s testovanou sloučeni40 nou.
Tyto výhodné postupy provádění ELISA experimentů pro specifické PK jsou uvedeny níže. Nicméně úprava těchto postupů určených pro stanovení aktivity sloučenin proti dalším RTK, jakož i pro CTK a STK, je odborné veřejnosti zřejmá. Další testy popsané v předloženém vynále45 zu měří množství DNA vytvořené v rámci odpovědi na aktivaci testované kinázy, jenž je obecným měřítkem proliferativní odpovědi. Obecný způsob tohoto testuje následující: sloučenina je zavedena do buněk exprimujících testovanou kinázu, buď přírodní, nebo rekombinantní, po vybraný časový interval, po kterém, pokud testovaná kináza je receptor, je přidán ligand aktivující receptor. Po inkubaci (alespoň přes noc) se přidá činidlo značící DNA, např. 5-romdeoxy50 uridin (BrdU) nebo H3-thymidin. Množství značené DNA se deteguje buď anti-BrdU protilátkou nebo měřením radioaktivity a je srovnáváno s kontrolními buňkami, které nepřišly v kontakt s testovanou sloučeninou.
-108 CZ 303705 B6
GST-FLK-1 biologický test
Tento test analyzuje aktivitu tyrosinkinázy GST-Flkl na poly(glu, tyr) peptidech. Materiály a činidla:
1. Corning destičky ELISA o 96 jamkách (Corning Catalog No. 5805-96).
2. poly(glu, tyr) 4:1, lyofilizát (Sigma Catalog # P0275),
3. Příprava destiček k testu potažených poly(glu, tyr) (pEY): potažení 2 pg/jamka látkou poly(glu, tyr) (pEY) v 100 μΐ PBS, skladování při pokojové teplotě po dobu 2 hodin nebo při teplotě 4 °C přes noc. Přikrytí destiček kvůli odpařování.
4. PBS pufr: pro 1 1, smíchání 0,2 g KH2PO4, 1,15 g Na2HPO4, 0,2 g KCl a 8 g NaCl a přibližně 900 ml dH2O. Po rozpuštění veškerých činidel se pH upraví na 7,2 pomocí HCI. Upravení objemu na celkový 1 1 pomocí dH2O.
5. PBST pufr: na 1 1 PBS pufru se přidá 1,0 ml Tween-20.
6. TBB-Blokující pufr: pro 1 1, smíchání 1,21 g TRIS (pufru na bázi tris(hydroxymethyl)aminomethanu), 8,77 gNaCl, 1 ml TWEEN-20 v přibližně 900 ml dH2O, pH se upraví na 7,2 pomocí HCI, přidání 10 g BSA, míchání k úplnému rozpuštění, objem se doplní na celkový 1 1 pomocí dH2O, filtrování k odstranění pevných Částic.
7. 1% BSA v PBS: k vytvoření 1 x pracovního roztoku se přidá 10 g BSA do přibližně 990 ml PBS pufru, míchání k úplnému rozpuštění, objem se doplní na celkový 1 I pomocí PBS pufru, filtrování k odstranění pevných částic.
8. 50mM Hepes pH 7,5,
9. GST-Flkl cd purifikovaný od transformace sf9 rekombinantního baculoviru (SUGEN, Inc.).
10. 4% DMSO v dH2O.
11. lOmM ATP v dH2O.
12. 40mM MnCl2.
13. Kinázový ředicí pufr (KDB): smíchání 10 ml Hepes (pH 7,5), 1 ml 5M NaCl, 40 pl lOOmM orthovanadičnanu sodného a 0,4 ml 5% BSA v dH2O s 88,56 ml dH2O.
14. polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách sdnem do V, Applied Scientific Catalog # AS-72092.
15. EDTA: přidání 14,12 g ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA) do přibližně 70 ml dH2O, přidání 10N NaOH, dokud se EDTA nerozpustí, upravení pH na 8,0, upravení na celkový objem 100 ml pomocí dH2O.
16. 1° protilátkový ředicí pufr: smíchání 10 ml 5% BAS v PBS pufru s 89,5 ml TBST.
17. A nti-fosfotyro sinová monoklonáíní protilátka konjugovaná s peroxidázou z křenu selského (PY99 HRP, Santa Cruz Biotech).
18. 2,2'-Azonobis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonová kyselina) (ABTS, Moss, Cat. No. ABST).
19. 10% SDS.
Postup:
1. Corning destičky ELISA o 96 jamkách potažené 2 pg polyEY peptidu ve sterilním PBS podle kroku 3 z oddílu materiály a činidla.
-109CZ 303705 B6
2. odstranění nenavázané tekutiny z jamek invertující destičkou. Promytí TBST (1 x). Protřepání destičky na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Do každé jamky se přidá 100 μΐ 1% BSA v PBS, inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
4. Opakování kroku 2,
5. Prosycení jamek 50mM HEPES (pufru na bázi 4—(2-hydroxyethyl)- 1-piperazinethansulfonové kyseliny; pH 7,5) (150 μΙ/jamka).
6. Zředění testované sloučeniny pomocí dH2O/4% DMSO na čtyř násobnou požadovanou finální testovací koncentraci v polypropylenových destičkách o 96 jamkách.
7. Přidání 25 μΐ zředění testované sloučeniny do ELISA destičky v kontrolním jamkách, zavedení 25 μΙ dH2O/4% DMSO.
8. Přidání 25 μΐ 40mM MnCl2 s 4x ATP (2μΜ) do každé jamky.
9. Přidání 25 μΐ 0,5M EDZA do negativních kontrolních jamek.
10. Zředění GST-Flkl na 0,005 gg (5 ng)/jamek pomocí KDB.
11. Přidání 50 μΐ zředěného enzymu do každé jamky.
12. Inkubace za třepání po dobu 15 minut při pokojové teplotě.
13. Zastavení reakce přidáním 50 μΐ 250mM EDTA (pH 8,0).
14. Promytí 3 x TBST a protřepání destičky na papírové pásce k odstranění tekutiny.
15. Přidání 100 μΙ anti-fosfotyros i nového HRP konjugátu na jamku, 1:5000 zředění v prot i látkovém ředicím pufru. Inkubace za třepání po dobu 90 minut při pokojové teplotě.
16. Promývání podle kroku 14.
17. Přidání 100 μΐ ABTS roztok o pokojové teplotě do každé jamky.
18. Inkubace za třepání po dobu 10 až 15 minut. Odstranění jakýchkoliv bublinek.
19. Zastavení reakce přidáním 20 μΐ 10% dodecyl sul fátu sodného (SDS) do každé jamky.
20. Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím Filtrem při 410 nM a referenčním filtrem při 630 nM.
PYK.2 biologické testy
Tento test se používá k měření in vitro aktivity kinázy HA epitopem značené pyk2 o plné délce (FL.pyk2-HA) při testu ELISA technikou.
Materiály a činidla:
1. Corning Elisa destičky o 96 jamkách.
2. 12CA5 monoklonální anti-HA protilátka (SUGEN, lne.)
3. PBS (fosfátem pufrovaný fyziologický roztok Dulbecco (Gibco Catalog # 4501300EB))
4. TBST pufr: pro 1 I, smíchání 8,766 g NaCl, 6,057 g TRIS a 1 mi 0,1% Triton X-100 v přibližně 900 ml dH2O. Upravení pH na 7,2 a doplnění objemu na 1 1.
5. Blokující pufr: pro 1 I, smíchání 100 g 10% BSA, 12,1 g lOOmM TRIS, 58,44 g 1M NaCl a 10 ml 1% TWEEN-20.
-110CZ 303705 B6
6. FL.pyk2-HA z sf9 buněčného lyzátu (SUGEN, lne.).
7. 4% DMSO v MilliQue H2O.
8. lOmM ATP v dH2O.
9. lMMnCI2.
10. ÍM MgCI2.
11. ÍM Dithiothreito! (DTT).
12. 10X fosforylace kinázového pufru: smíchání 5,0 ml ÍM Hepes (pH 7,5), 0,2 ml ÍM MnCl2, 1,0 ml ÍM MgCl2, 1,0 ml 10% Triton X-100 v 2,8 ml dH2O. Těsně před použitím přidání 0,1 ml ÍM DTT.
13. NUNC propy lenové destičky o 96 jamkách s V dnem.
14. 500mM EDTA v dH2O.
15. Protilátkový ředicí pufr: pro 100 ml, 1 ml 5% BSA/PBS a 1 ml 10% Tween-20 v 88 ml TBS.
16. HRP-konjugovaná anti-Ptyr P99), Santa Cruz Biotech Cat. No. SC-7020.
17. ABTS, Moss. Cat. No. ABST-2000.
18. 10% SDS.
Postup:
1. Corning ELISA destičky o 96 jamkách potažené 0,5 Bg na jamku 12CA5 protilátkou anti-HA v 100 μΐ PBS. Skladování přes noc při teplotě 4 °C.
2. Odstranění nenavázané HA protilátky z jamek invertující destičkou. Promytí destiček dH2O. Protřepání destičky na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Přidání 150 μΐ blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 4x TBS-T.
5. Zředění lyzátu v PBS (1,5 μg Iyzát/100 μΐ PBS).
6. Přidání 100 μΐ zředěného lyzátu do každé jamky. Protřepávání při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
7. Promytí podle kroku 4.
8. Přidání 50 μΐ 2 X kinázového pufru do ELISA destičky obsahující zachycenou pyk2-HA.
9. Přidání 25 μΐ 400μΜ testované sloučeniny v 4% DMSO do každé jamky. Pro kontrolní jamky použití samotného 4% DMSO.
10. Přidání 25 μΐ 0,5M EDTA do negativních kontrolních jamek.
11. Přidání 25 μΙ 20μΜ ATP do všech jamek. Inkubace za třepání po dobu 10 minut.
12. Zastavení reakce přidáním 25 μΐ 500mM EDTA (pH 8,0) do všech jamek.
13. Promytí podle kroku 4.
14. Přidání 100 μΐ HRP konjugované anti-Pyr zředěné 1 : 6000 v protilátkovém ředicím pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
15. Promytí destiček 3 x s TBST a 1 x s PBS.
-111 CZ 303705 B6
16. Přidání 100 μΐ ABST roztoku do každé jamky.
17. Pokud je třeba zastavení reakce přidáním 20 μΐ 10% SDS do každé jamky.
18. Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrem při 410 nM a referenčním Filtrem při 630 nM.
FGFR1 biologické testy
Tento test je používán k měření in vitro kinázové aktivity FGF1-R při ELISA testu.
Materiály a činidla:
1. Elisa destičky Costar o 96 jamkách (Corning Catalog # 3369).
2. Poly(Glu-Tyr) (Sigma Catalog # P0275).
3. PBS (Gibko Catalog # 450-1300EB)
4. 5OmM Hepes pufrovací roztok.
5. Blokující pufr (5% BSA/PBS),
6. Purifikovaná GST-FGFR1 (SUGEN, lne.)
7. Kinázový ředicí pufr. Smíchání 500 μΐ 1M Hepes (GIBCO), 20 μΐ 5% BSA/PBS, 10 μΐ lOOmM orthovanadiěnanu sodného a 50 μΐ 5M NaCl.
8. 1 OmM ATP.
9. ATP/MnCl2 fosforylační směs: smíchání 20 μΐ ATP, 400 μΐ 1M MnCl2 a 9,56 ml dH2O.
10. NUNC polypropylenové destičky o 96 jamkách sdnem do V (Applied Scientifíc Catalog # AS-72092).
11. 0,5M EDTA.
12. 0,05% TBST. Přidání 500 μΙ TWEEN do 1 litru TBS.
13. Králičí polyklonální anti-fosfotyrosinové sérum (SUGEN, lne.).
14. Kozí proti—králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource, Catalog # ALI0404).
15. ABTS roztok.
16. ABTS/H2O2 roztok.
Postup:
1. ELISA destičky Costar o 96 jamkách potažené poly(Glu, Tyr) v 100 μΐ PBS v množství 1 pg na jamku. Skladování přes noc při teplotě 4 °C.
2. Promytí potažených destiček PBS (1 x).
3. Přidání 150 μΐ 5% BSA/PBS blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 2 x s PBS, pak s 50mM Hepes (1 x). Protřepání destiček na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny a bublinek.
5. Přidání 25 μΙ 0,4mM testované sloučeniny v 4% DMSO nebo samotného 4% DMSO (kontrolní) do destiček.
6. Zředění purifíkované GST-FGFR1 v kinázovém ředicím pufru (5 ng kináza/50 μΐ KDB/jamka).
-112CZ 303705 B6
Ί. Přidání 50 μΐ zředěné kinázy do každé jamky.
8. Nastartování kinázové reakce přidáním 25 μΙ/jamka čerstvě připraveného ATP/Mn” (0,4 ml 1M MnCl2, 40 μΐ lOmM ATP, 9,56 ml dH2O), čerstvě připravený).
9. Toto je rychlá kinázová reakce a musí být zastavena pomocí 25 μΐ 0,5M EDTA způsobem, který je podobný přidání ATP.
10. Promytí destiček 4x čerstvým TBST.
11. Vytvoření protilátkového ředicího pufru: na 50 ml: smíchání 5 ml 5% BSA, 250 μΐ 5% mléka a 50 μΐ lOOmM vanadičnanu sodného, doplnění na konečný objem pomocí 0,05% TBST.
12. Přidání 100 μΙ na jamku anti-fosfotyrosin (1 : 10000 zředění v ADB). Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
13. Promytí podle kroku 10.
14. Přidání Biosource kozího proti—králičího IgG peroxidázového konjugátu (1:6000 zředění v ADB) 100 μΐ na jamku. Inkubace za třepání po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě.
15. Promytí podle kroku 10 a pak s PBS k odstranění bublinek a přebytku TWEEN.
16. Přidání 100 μΐ ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
17. Inkubace za třepání po dobu 10 až 20 minut.
Odstranění jakýchkoliv bublinek.
18. Měření na přístroji Dynatech MR7000 pro techniku elisa: testovací filter při 410 nM, referenční filtr při 630 nM.
EGFR biologické testy
Tento test je používán k měření in vitro kinázové aktivity FGF1-R při ELISA testu. 25 Materiály a činidla:
1. ELISA destičky Corning o 96 jamkách.
2. SUMO1 monoklonální protilátka proti-EGFR (SUGEN, lne.).
3. PBS.
4. TBST pufr.
5. Blokující pufr: pro 100 ml, smíchání 5,0 g Camation Instant Non-fat Milk® 100 ml PBS.
6. A431 buněčný lyzát (SUGEN, lne.),
7. TBS pufr:
8. TBS + 10% DMSO: pro 1 1, smíchání 1,514 g TRIS, 2,192 g NaCI a 25 ml DMSO; doplnění na 1 litr celkového objemu pomocí dH2O.
9. ATP (Adenosin-5 ' -tr i fosfát, z koňského svalu, Sigma Cat. No. A-5394), l,0mM roztok v dH2O. Toto činidlo by mělo být připraveno těsně před použitím a skladování v ledu.
10. 1,0mMMnCl2.
11. ATP/MnCl2 fosforylační směs: k vytvoření 10 ml, smíchání 300 μΐ lmM ATP, 500 μΐ MnCl2 a 9,2 ml dH2O. Připravení těsně před použitím a skladování v ledu.
12. polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
-113 CZ 303705 B6
13. EDTA.
14. Králičí polyklonální anti-fosfotyrosinové sérum (SUGEN, lne.).
15. Kozí proti—králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource Cat. No. ALI0404).
16. ABTS.
17. 30% peroxid vodíku.
18. ABTS/H2O2.
19. 0,2M HCl.
Postup:
1. ELISA destičky Corning o 96 jamkách potažené 0,5 gg SUMOl v 100 μΐ PBS na jamku. Skladování přes noc při teplotě 4 °C.
2. Odstranění nenavázané SUMOl z jamek invertuj ící destičkou kvůli eliminaci tekutiny. Promytí 1 x dH2O. Protřepání destičky na papírové roušce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Přidání 150 μϊ blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 3 x deionizovanou vodou, pak 1 x TBST. Protřepání destičky na papírové roušce k odstranění přebytku tekutiny a bublinek.
5. Zředění lyzátu v PBS (7 pg lyzát/100 μϊ PBS).
6. Přidání 100 μϊ zředěného lyzátu do každé jamky. Protřepávání při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
7. Promytí destiček podle bodu 4 výše.
8. Přidání 120 μϊ TBS do ELISA destičky obsahující zachycenou EGFR.
9. Zředění testované sloučeniny 1 : 10 v TBS, zavedení do jamek.
10. Přidání 13,5 μϊ zředěné testované sloučeniny do ELISA destičky. Přidání 13,5 μϊ TBS v 10% DMSO do kontrolních jamek.
11. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
12. Přidání 15 μϊ fosforylační směsi do všech jamek kromě negativních kontrolních jamek. Konečný objem v jamkách by měl být přibližně 150 μϊ s 3M ATP/5 mM MnCl2 konečné koncentrace v každé jamce. Inkubace za třepání po dobu 5 minut.
13. Zastavení reakce za třepání přidáním 16,5 μΐ EDTA roztoku. Protřepávání další 1 minutu.
14. Promytí 4x deionizovanou vodou, 2 x s TBST.
15. Přidání 100 μΐ anti-fosfotyrosinu (1:3000 zředění v TBST) na jamku. Inkubace za třepání po dobu 30 až 45 minut při pokojové teplotě.
16. Promytí podle bodu 4 výše.
17. Přidání 100 μϊ Biosource kozího proti—králičího IgG peroxidázového konjugátu (1:2000 zředění v TBST) do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
18. Promytí podle 4 výše.
19. Přidání 100 μϊ ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
-114CZ 303705 B6
20. Inkubace 5 až 10 minut za třepání. Odstranění jakýchkoliv bublinek.
21. Pokud je třeba, zastavení reakce přidáním 100 μΐ 0,2M HC1 na jamku.
22. Měření na přístroji Dynatech MR.7000 ELISA: testovací fílter při 410 nM, referenční filtr při 630 nM.
PDGFR biologické testy
Tento test se používá k měření in vitro kinázové aktivity FGF1-R při ELISA testu.
io
Materiály a činidla:
1. Elisa destičky Corning o 96 jamkách.
2. 28D4C10 monoklonální protí-PDGFR protilátka (SUGEN, lne.).
3. PBS.
4. TBST pufr.
5. Blokující pufr (stejný jako pro EGFR biologické testy).
6. NIH 3T3 buněčný lyzát exprimující PDGFR-β (SUGEN, lne.).
7. TBS pufr.
8. TBS + 10% DMSO.
9. ATP.
10. MnCl2.
11. Kinázová pufrovací směs k fosforylaci: pro 10 ml, smíchání 250 μΐ 1M TRIS, 200 μΐ 5M NaCl, 100 μΐ 1M MnCl2 a 50 μΐ lOOmM Triton X-100 v dostatečném množství dH2O k připravení 10 ml.
12. Polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
13. EDTA.
14. Králičí polyklonální anti-fosfotyrosinové sérum (SUGEN, lne.).
15. Kozí proti—králičí IgG peroxidázový konjugát (Biosource Cat. No. ALI0404).
16. ABTS.
17. 30% roztok peroxidu vodíku.
18. ABTS/H2O2.
19. 0,2M HCl.
Postup:
1. ELISA destičky Corning o 96 jamkách potažené 0,5 pg 28D4C10 v 100 μΐ PBS najam35 ku. Skladování přes noc při teplotě 4 °C.
2. Odstranění nenavázané 24D4C10 z jamek invertující destičkou kvůli zbavení se tekutiny. Promytí 1 x dH2O. Protřepání destičky na papírové pásce k odstranění přebytku tekutiny.
3. Přidání 150 pl blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace po dobu 30 minut při poko40 jové teplotě za třepání.
4. Promytí destiček 3 x s de ion izo vanou vodou, pak 1 x TBST. Protřepání destičky na papírové roušce k odstranění přebytku tekutiny a bublinek.
-115CZ 303705 B6
5. Zředění lyzátu v HNTG (10 pg lyzát/100 pl HNTG).
6. Přidání 100 pl zředěného lyzátu do každé jamky. Protřepávání při pokojové teplotě po dobu 60 minut.
7. Promytí destičky podle kroku 4.
8. Přidání 80 pl pracovní směsi kinázového pufru do ELISA destičky obsahujících zachycený PDGFR.
9. Zředění testované sloučeniny 1 : 10 v TBS, v polypropylenových destičkách o 96 jamkách.
10. Přidání 10 pl zředěné testované sloučeniny do ELISA destičky. Přidání 10 pl TBS + 10% DMSO do kontrolních jamek. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě,
11. Přidání 10 pl ATP přímo do všech jamek kromě negativních kontrolních jamek (konečný objem v jamce by měl být přibližně 100 pl s 20pM ATP v každé jamce). Inkubace 30 minut za třepání.
12. Zastavení reakce přidáním 10 pl EDTA roztoku do každé jamky.
13. Promytí 4x deionizovanou vodou, (2x) s TBST.
14. Přidání 100 pl anti-fosfotyrosinu (1:3000 zředění v TBST) na jamku. Inkubace za třepání po dobu 30 až 45 minut při pokojové teplotě.
15. Promytí podle kroku 4.
16. Přidání 100 pl Biosource kozího proti-králiěího IgG peroxidázového konjugátu (1:2000 zředění v TBST) do každé jamky. Inkubace za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě.
17. Promytí podle kroku 4.
18. Přidání 100 pl ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
19. Inkubace 10 až 30 minut za třepání. Odstranění jakýchkoliv bublinek.
20. Pokud je třeba, zastavení reakce přidáním 100 pl 0,2M HCI na jamku.
21. Měření na přístroji Dynatech MR7000 ELISA s testovacím filtrem při 410 nM a referenčním filtrem při 630 nM.
Testy s buněčnou HER-2 kinázou
Tento test je používán k měření aktivity HER-2 kinázy v celých buňkách při ELISA testu.
Materiály a činidla:
1. DMEM (GIBCO Catalog #11965-092).
2. Fetální bovinní sérum (FBS, GIBCO Catalog #16000-044), tepelná inaktivace ve vodní lázni po dobu 30 minut při teplotě 56 °C.
3. Trypsin (GIBCO Catalog #25200-056).
4. I-Glutamin (GIBCO Catalog #25030-081).
5. HEPES (GIBCO Catalog #15630-080).
6. Růstové médium
-116CZ 303705 B6
Smíchání 500 ml DMEM, 55 ml teplem inaktivovaného FBS, 10 ml HEPES a 5.5 ml L-Giutatninu.
7. „Starve“ médium
Smíchání 500 ml DMEM, 2,5 ml teplem ínaktívovancho FBS, 10 ml HEPES a 5,5 ml L-Glutaminu.
8. PBS.
9. Mikrotitrační destičky o 96 jamkách s plochým dnem určeným pro tkáňovou kulturu (Corning Catalog # 25860).
10. 15 cm misky na tkáňovou kulturu (Corning Catalog #08757148).
11. ELISA destičky Corning o 96 jamkách.
12. polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
13. Přenosné catridge Costar pro T ran stár 96 (Costar Catalog #7610).
14. SUMO 1: monoklonální proti-EGFR protilátka (SUGEN, lne.).
15. TBST pufr.
16. Blokující pufr: 5% Camation Instant Milk® v PBS.
17. EGF ligand: EGF-201, Shinko, American, Japan. Suspendovaný prášek v 100 μΙ lOmM HCI. Přidání 100 μΐ lOmM NaOH. Přidání 800 μΐ PBS a převedení do Eppendorfovy baňky. Skladování při teplotě -20 °C do té doby, dokud se nepoužije.
18. HNTG Lyzovací pufr. Pro zásobní roztok 5X HNTG, smíchání 23,83 g Hepes, 43,83 g NaCl, 500 ml glycerolu a 100 ml Triton X-100 a dostatečné množství dH2O k vytvoření 1 1 celkového roztoku.
Pro 1 x HNTG*, smísení 2 ml HNTG, 100 μΐ 0,1Μ Na3VO4, 250 μΐ 0,2M Na4P2O7 a 100 1 EDTA.
19. EDTA.
20. Na3VO4. K vytvoření zásobního roztoku se smíchá 1,84 g Na3VO4 s 90 ml dH2O. Upravení pH na 10. Vaření v mikrovlnce po dobu jedné minuty (roztok se vyčeří). Ochlazení na pokojovou teplotu. Upravení pH na 10. Opakování cyklu zahřívání/chlazení, dokud pH nezůstane na 10.
21. 200mM Na4P2O7.
22. Králičí polyklonální antisérum specifické pro fosfotyrosin (proti-Ptyr protilátka, SUGEN, lne.).
23. Afinitně purifikované antisérum, kozí proti—králičí IgG protilátka, peroxidázový konjugát (Biosource Cat # ALI0404).
24. ABTS roztok.
25. 30% roztok peroxidu vodíku.
26. ABTS/H2O2.
27. 0,2M HCI.
Postup:
Corning ELISA destičky o 96 jamkách potažené SUM01 v koncentraci 1,0 μΐ na jamku v PBS, 100 μΐ finálního objemu na jamku. .Skladování přes noc při teplotě 4 °C.
-117CZ 303705 B6
2. V den použití se odstraní potahovací pufr a destičky se promyjí 3 x dH2O a jednou TBST pufrem. Pokud není stanoveno jinak, mělo by být promývání provedeno tímto způsobem.
3. Přidání 100 μΐ blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace destiček za třepání po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Těsně před použitím pomytí destiček.
4. Použití EGFr/HER-2 chimea/3T3-C7 buněčných linií při tomto testu.
5. Vybrané misky mající 80 až 90% konfluenci. Sbírání buněk trypsinizací a centrifugaci při 1000 rpm za pokojové teploty po dobu 5 minut.
6. Resu spěn dován i buněk v „starve“ médiu a měření s trypanovou modří. Je vyžadována životnost vyšší než 90 %. Naočkování buněk ve smrtícím médiu při hustotě 2500 buněk na jamku, 90 μΐ na jamku, v mikrotitrační destičce o 96 jamkách. Inkubace naočkovaných buněk přes noc při teplotě 37 °C pod 5% CO2.
7. Start s testem po dvou dnech od naočkování.
8. Testované sloučeniny se rozpustí v 4% DMSO. Vzorky jsou pak dále zředěny přímo na destičkách „starve“ médiem DMEM. Typicky bude toto zředění 1:10 nebo větší. Všechny jamky jsou pak převedeny do buněčných destiček v dalším zředěním 1:10 (10 μΐ vzorku a média do 90 μΐ „starve“ média. Finální koncentrace DMSO by měla být 1% nebo nižší. Může být také používáno standardní sériové zředění.
9. Inkubace pod 5% CO2 při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin.
10. Připravení EGF ligand zředěním zásobního roztoku EGF (16,5 μΜ) v horkém DMEM na 150nM.
11. Připravení čerstvého HNTG* v dostatečném množství pro 100 μΐ na jamku; skladování na ledu.
12. Po 2 hodinách inkubace s testovanou sloučeninou se přidá připravený EGF ligand do buněk, 50 μΙ na jamku, na konečnou koncentraci 50nM. Pozitivní kontrolní jamky obdrží stejné množství EGF. Do negativních kontrolních jamek se nepřidá EGF. Inkubace při teplotě 37 °C po dobu 10 minut.
13. Odstranění testované sloučeniny, EGF a DMEM. Promytí buněk 1 x PBS.
14. Převedení HNTG* do buněk, 100 μΐ na jamku. Umístnění do ledu na dobu 5 minut a mezitím odstranění blokujícího pufru z ELISA destiček a promytí.
15. Seškrabání buněk z destičky mikropipetou a homogenizace buněčného materiálu opakovaným nasáváním a disperzací HNTG* lyzovacího pufru. Převedení lyzátu do potažené, blokované, promyté ELISA destičky. Nebo k převedení lyzátu do destičky použití převáděcího cartridge Costar.
16. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
17. Odstranění lyzátu, promytí, převedení čerstvě zředěné anti-Ptyr protilátky (1 : 3000 v TBST) do ELISA destiček, 100 μΐ na jamku.
18. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě, po dobu 30 minut.
19. Odstranění anti-Ptyr protilátky, promytí, převedení čerstvě zředěné BIOSOURCE protilátky do ELISA destičky (1 : 8000 v TBST, 100 μΙ na jamku).
20. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu 30 minut.
21. Odstranění BIOSOURCE protilátky, promytí, převedení čerstvě připraveného ABTS/H2O2 roztoku do ELISA destičky, 100 μΐ na jamku.
22. Inkubace, za třepání, po dobu 5 až 10 minut, odstranění jakýchkoliv bublinek.
- 118 CZ 303705 B6
23. Zastavení reakce přidáním 100 μΐ 0,2M HCl na jamku.
24. Měření na přístroji Dynatech MR7000 El JSA s testovacím filtrem nastaveným na 410 nM a referenčním filtrem na 630 nM.
Testy cdk2/cyklin A
Tento test je používán k měření in vitro aktivity serin/threoninkinázy lidské cdk2/cykiin A při „Scintillation Proximity Assay“ (SPA).
io
Materiály a činidla:
1. Polyethylenové tereftalátové (flexi) destičky Wallac o 96 jamkách (Wallac Catalog # 1450-401).
2. Amersham Redivue [γ33Ρ] ATP (Amersham catalog #AH 9968).
3. Polyvinyltoluenové SPA kuličky potažené Amersham streptavidinem (Amersham catalog #RPNQ0007), kuličky by měly být reaktivovány v PBS bez hořčíku nebo vápníku při 20 mg/ml.
4. aktivovaný cdk2/cyclin A enzymový komplex purifikovaný od Sft9 buněk (SUGEN, lne.).
5. Biotinylovaný peptidový substrát (Debtide). Peptid biotin-X-PKTPKKAKKL se rozpustí v dH2O při koncentraci 5 mg/ml.
6. Peptid/ATP směs: pro 10 ml, smíchání 9,979 ml dH2O, 0,00125 ml „studeného“ ATP, 0,010 ml Debtide a 0,010 ml γ33Ρ ATP. Mezní koncentrace na jamku bude 0,5M „studeného“ ATP, 0,1 pg Debtide a 0,2 pCi γ33Ρ ATP.
7. Kinázový pufr: pro 10 ml, smíchání 8,85 ml dH2O, 0,625 ml TRIS (pH 7,4), 0,25 ml ÍM MgCl2, 0,25 ml 10% NP40 a 0,025 ml 1M DTT. Přidání čerstvého množství těsně před použitím.
8. lOmM ATPvdH2O.
9. 1M Tris, upravení pH na 7,4 s HCl.
10. lMMgCl2.
11. 1MDTT.
12. PBS (Gibko Catalog# 14190-144).
13. 0,5M EDTA.
14. Zastavovací roztok: pro 10 ml, smíchání 9,25 ml PBS, 0,005 ml lOOmM ATP, 0,1 ml 0,5M EDTA, 0,1 ml 10% Triton X 100 a 1,25 ml 20 mg/ml SPA kuliček.
Postup:
1. Připravení roztoků testovaných sloučenin v 5 x požadovaných konečných koncentrací v 5% DMSO. Přidání 10 μΐ do každé jamky. Pro negativní kontroly použití samotného 10 μΐ 5% DMSO v jamkách.
2. Zředění 5 μΐ roztoku cdk2/cyclin A s 2,1 ml 2 x kinázovým pufrem,
3. Přidání 20 μΙ enzymu do každé jamky.
4. Přidání 10 μΐ 0,5M EDTA do negativních kontrolních jamek.
5. K nastartování kinázové reakce se přidá 20 μΙ směsi peptid/ATP do každé jamky. Inkubace po dobu 1 hodiny bez třepání.
-119CZ 303705 B6
6. Přidání 200 μΐ zastavovacího roztoku do každé jamky.
7. Ponechání v klidu po dobu alespoň 10 minut.
8. Centrifugace destiček přibližně při 2300 rpm po dobu 3 až 5 minut.
9. Měření pomocí Triluxu nebo podobného přístroje.
Test transfosforylace MET
Tento test se používá k měření hladin fosfotyrosinu na poly(glutamová kyselina:tyrosin (4:1)) substrátu jako způsobu identifikace agonistů/antagonistů met transfosforylace substrátu.
io Materiály a činidla:
1. Corning Elisa destičky o 96 jamkách, Corning Catalog # 25805-96.
2. Poly(glu, tyr) 4:1, Sigma, Cat. No.; P 0275.
3. PBS, Gibco Catalog # 450-1300EB
4. 50mM HEPES.
5. Blokující pufr: rozpuštění 25 g bovinního sérumalbuminu, Sigma Cat. No. A-7888, v 500 ml PBS, filtrování přes 4 μΐ filtr.
6. Purifikování GST fúzního proteinu obsahujícího Met kinázovou doménu, Sugen, lne.
7. TBST pufr.
8. 10% vodný (MilliQue H2O) DMSO.
9. lOmM vodný (dH2O) adenosin-5-trifosfát, Sigma Cat. No. A-5394.
10. 2 x kinázový ředicí pufr: pro 100 ml, smíchání 10 ml 1M HEPES při pH 7,5 s 0,4 ml 5% BSA/PBS, 0,2 ml 0,lM orthovanadičnanu sodného a 1 ml 5M chloridu sodného v 88,4 ml dH2O.
11. 4 X ATP reakční směs: pro 10 ml, smíchání 0,4 ml 1M chloridu manganatého a 0,02 ml 0,lM ATP v 9,56 ml dH2O.
12. 4 X negativní kontrolní směs: pro 10 ml, smíchání 0,4 ml 1M chloridu manganatého v 9,6 ml dH2O.
13. Polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V, Applied Scientific Catalog #5-72092.
14. 500mM EDTA.
15. Protilátkový ředicí pufr: pro 100 ml, smíchání 10 ml 5% BSA/PBS, 0,5 ml 5% Camation Instant Milk® a 0,1 ml 0,lM orthovanadičnanu sodného v 88,4 ml TBST.
16. Králičí polyklonální antofosfotyrosinová protilátka, Sugen, lne.
17. Kozí proti—králičí protilátka konjugovaná s křenovou peroxidázou, Biosource, lne.
18. ABTS roztok: pro 1 1, smíchání 19,21 g kyseliny citrónové, 35,49 g Na2HPO4 a 500 mg ABTS s dostatečným množstvím dH2O k vytvoření 1 1.
19. ABTS/H2O2: smíchání 15 ml ABST roztoku s 2 μΐ H2O2 pět minut před použitím.
20. 0,2M HCI.
- 120CZ 303705 B6
Postup:
1. ELISA destičky potažené 2 pg Poly(Glu-Tyr) v 100 μϊ PBS. Skladování přes noc při teplotě 4 °C.
2. Blokování destiček se 150 μϊ 5% BSA/PBS po dobu 60 minut.
3. Promytí destiček (2x) s PBS, 1 x s 50 mM Hepes pufrem pH 7,4.
4. Přidání 50 μϊ zředěné kinázy do všech jamek. (Purifikovaná kináza se zředí s kinázovým ředicím pufrem. Finální koncentrace by měla být 10 ng/jamku.
5. Přidání 25 μϊ testované sloučeniny (v 4% DMSO) nebo samotného DMSO (4% v dH2O) pro kontrolu destiček.
6. Inkubace kinázy/s louče ni ny směsi po dobu 15 minut.
7. Přidání 25 μϊ 40mM MnCl2 do negativních kontrolních jamek.
8. Přidání 25 μϊ ATP/MnCl2 směsi do všech dalších jamek (kromě negativní kontroly). Inkubace po dobu 5 minut.
9. Přidání 25 μϊ 500mM EDTA k zastavení reakce.
10. Promytí destiček 3 x TBST.
11. Přidání 100 μϊ králičí polyklonální anti-Ptyr zředěné 1 : 10000 v protilátkovém ředicím pufru do každé jamky. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu jedné hodiny.
12. Promytí destiček 3 x TBST.
13. Zředění Biosource HRP konjugované anti—králičí protilátky 1:6000 v protilátkovém ředicím pufru. Přidání 100 μϊ na jamku a inkubace při pokojové teplotě, za třepání, po dobu jedné hodiny.
14. Promytí destiček 1 x s PBS.
15. Přidání 100 μϊ ABTS/H2O2 roztoku do každé jamky.
16. Pokud je třeba, zastavení reakce přidáním 100 μϊ 0,2M HCl na jamku.
17. Měření destiček na přístroji Dynatech MR7000 s testovacím filtrem při 410 nM a referenčním filtrem při 630 nM.
IGF-1 transfosfory lační test
Tento test se používá k měření hladiny fosfotyrosinu v poly(glutamové kyselině : tyrosinu) (4:1) kvůli identifikaci agonistů a/nebo antagonistů gst-IGF-1 transfosforylace substrátu.
Materiály a činidla:
1. Corning Elisa destičky o 96 jamkách.
2. Poly(Glu-tyr) (4:1), Sigma Cat. No. P 0275.
3. PBS, Gibko Catalog# 450-13O0EB.
4. 50mM HEPES
5. TBB blokující pufr: pro 1 1, smíchání 100 g BSA, 12,1 g TRIS (pH 7,5), 58,44g chloridu sodného a 10 ml 1% TWEEN-20.
6. Purifikovaný GST fúzní protein obsahující IGF— 1 kinázovou doménu (Sugen, lne.)
7. TBST pufr: pro 1 1, smíchání 6,057 g Tris, 8,766 g chloridu sodného a 0,5 ml TWEEN-20 s dostatečným množstvím dH2O k vytvoření 1 litru.
- 121 CZ 303705 B6
8. 4% DMSO v Milli-Q H2O.
9. lOmM ATP v dH2O.
10. 2 X kinázový ředicí pufr: pro 100 ml, smíchání 10 ml 1M HEPES (pH 7,5), 0,4 ml 5% BSA v dH2O, 0,2 ml 0,1 M orthovanadiěnanu sodného a 1 ml 5M chloridu sodného s dostatečným množstvím dH2O k vytvoření 100 ml.
11. 4 X ATP reakční směs: pro 10 ml, smíchání 0,4 ml ÍM MnCl2 a 0,008 ml 0,01 M ATP a 9,56 ml dH2O.
12. 4 X negativní kontrolní směs: smíchání 0,4 ml 1M chloridu manganatého v 9,60 ml dH2O.
13. Polypropylenové destičky NUNC o 96 jamkách s dnem do V.
14. 500mM EDTA v dH2O.
15. Protilátkový ředicí pufr: pro 100 ml, smíchání 10 ml 5% BSA v PBS, 0,5 ml 5% Carnation Instant Non-fat Milk v PBS a 0,1 ml 0,1 M orthovanadiěnanu sodného v 88,4 ml TBST.
16. Králičí polyklonální antifosfotyrosinová protilátka, Sugen, lne.
17. Kozí proti-králičí HRP konjugovaná protilátka, Biosource.
18. ABTS roztok.
20. ABTS/H2O2: smíchání 15 ml ABTS s 2 μΐ H2O2 5 minut před použitím.
21. 0,2M HCI v dH2O.
Postup:
1. ELISA destičky potažené 2,0 pg/jamku Poly(Glu, Tyr) 4:1 (Sigma P0275) v 100 μΐ PBS. Skladování destičky přes noc při teplotě 4 °C,
2. Promytí destičky 1 x s PBS.
3. Přidání 100 μΐ TBB blokujícího pufru do každé jamky. Inkubace destičky po dobu 1 hodiny za třepání při pokojové teplotě.
4. Promytí destiček 1 x PBS, pak (2 x) s 50mM Hepes pufr pH 7,5.
5. Přidání 25 μΐ testované sloučeniny v 4% DMSO (připravené zředěním zásobního roztoku lOmM testované sloučeniny v 100% DMSO s dH2O) do destičky.
6. Přidání 10,0 ng gst-IGF-1 kinázy v 50 μΐ kinázovém ředicím pufru do všech jamek.
7. Nastartování kinázové reakce přidáním 25 μΐ 4 X ATP reakční směsi do všech jamek k testování a k pozitivní kontrole. Přidání 25 μ4 X negativní kontrolní směsi do všech jamek k negativní kontrole. Inkubace po dobu 10 minut za třepání při pokojové teplotě.
8. Přidání 25 μΐ 0,5M EDTA (pH 8,0) do všech jamek.
9. Promytí destiček 4 x s TBST pufrem.
10. Přidání králičího polyklonálního anti-fosfotyros i nového antiséra v zředění 1 : 10000 v 100 μΐ protilátkovém ředicím pufru do všech jamek. Inkubace, zatřepání, při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
11. Promytí destiček podle kroku 9.
12. Přidání 100 μΐ Biosource proti—králičí HRP v zředění 1 : 10000 v protilátkovém ředicím pufru do všech jamek. Inkubace, za třepání, při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny.
- 122CZ 303705 B6
13. Promytí destiček podle kroku 9, následně jedno promytí v PBS ke snížení bublinek a přebytku Tween-20.
14. Vyvolání přidáním 100 μΙ na jamku ABTS/H2O2 do každé jamky.
15. Po asi 5 minutách měření na přístroji k měření ELISA destiček s testovacím filtrem při
410 nm a referenčním filtrem při 630 nm.
Testy inkorporace BrdU
Pri následujících testech se využívá buněk upravených k expresi vybraného receptorů a následně stanovení účinku vybrané sloučeniny na aktivitu DNA syntézy indukované ligandem stanovením io inkorporace BrdU do DNA.
Následující materiály, činidla a postup jsou obecným způsobem při každém následujícím testu inkorporace BrdU.
Změny ve specifických testech jsou uvedeny.
Materiály a činidla:
1. Příslušný ligand.
2. Příslušné upravené buňky.
3. BrdU značící činidlo: lOmM, v PBS (pH 7,4) (Boehringer Mannheim, Germany).
4. FixDenat: fixační roztok (hotový k použití) (Boehringer Mannheim, Germany).
5. Anti-BrdU-POD: myší monoklonáíní protilátka konjugovaná s peroxidázou (Boehringer Mannheim, Germany).
6. TMB substrátový roztok: tetramethylbenzidin (TMB, Boehringer Mannheim, Germany).
7. PBS promývací roztok: 1 x PBS, pH 7,4.
8. Albumin, hovězí (BSA), frakce V prášková (Sigma Chemical Co., USA).
Obecný postup:
1. Buňky se naočkují v množství 8000 buněk na jamku v 10% CS, 2mM Gin v DMEM na destičku o 96 jamkách. Buňky se inkubují přes noc při teplotě 37 °C v 5% CO2.
2. Po 24 hodinách se buňky promyjí s PBS a pak jsou vystaveny prostředí bez séra zavedením do média neobsahujícího sérum (0% CS DMEM s 0,1% BSA) po dobu 24 hodin.
3. Třetí den se příslušný ligand a testovaná sloučenina najednou přidají do buněk. Do negativních kontrolních jamek se přidá DMEM bez séra pouze s 0,1% BSA; K pozitivním kontrolním buňkám se přidá ligand bez testované sloučeniny. Testované sloučeniny se při40 praví v DMEM bez séra s ligandem v destičce o 96 jamkách a sériově zředí na 7 testovacích koncentrací.
4. Po 18 hodinách aktivace ligandů se zředěné BrdU značící činidlo (1:100 v DMEM, 0,1% BSA) a buňky inkubují s BrdU (finální koncentrace = 10 μΜ) po dobu 1,5 hodiny.
5. Po inkubaci se značícím činidlem se médium odstraní dekantací a poklepáním převrácené destičky na papírové utěrce. Přidá se roztok FixDenatu (50 μΐ na jamku) a destičky se inkubují při pokojové teplotě po dobu 45 minut na destičkovém třepači.
- 123CZ 303705 B6
6. Roztok FixDenatu se řádně odstraní dekantací a poklepáním převrácené destičky na papírové utěrce. Přidá se mléko (5% dehydrované mléko v PBS, 200 μί na jamku) jako blokovací roztok a destička se inkubuje po dobu 30 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači.
7. Blokovací roztok se odstraní dekantací a jamky se promyjí 1 x s PBS. Přidá se anti-BrdUPOD roztok (1 : 200 zředění v PBS, 1% BSA) (50 μΙ na jamku) a destičky se inkubují po dobu 90 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači.
8. Protilátkový konjugát se řádně odstraní dekantací a promýváním jamek 5 x s PBS a destička se suší invertováním a poklepáním na papírové utěrce.
9. Přidá se TMB substrátový roztok (100 μί na jamku) a inkubuje se po dobu 20 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači, dokud se nevyvine zbarvení, které je dostatečné k fotometrické detekci.
10. Absorbance vzorků se měří při 410 nm (v módu „duální vlnové délky“ s filtrem při 490 nm jako referenční vlnovou délkou) na přístroji Dynatech k měření ELISA destiček.
Testy inkorporace BrdU indukované EGF
Materiály a činidla:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFRc7.
Testy inkorporace BrdU řízené Her-2 a indukované EGF Materiály a činidla:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFr/Her2/EGFr (EGFr s Her-2 kinázovou doménou).
Testy inkorporace BrdU řízené Her-4 a indukované EGF 35 Materiály a činidla:
1. Myší EGF, 201 (Toyobo Co., Ltd., Japonsko).
2. 3T3/EGFr/Her4/EGFr (EGFr s Her-4 kinázovou doménou).
Testy inkorporace BrdU indukované PDGF
Materiály a činidla:
1. Lidské PDGF B/B (Boehringer Mannheim, Německo)45 2. 3T3/EGFRc7.
Testy inkorporace BrdU indukované FGF
Materiály a činidla:
1. Lidská FGF2/bFGF (Gibco BRL, USA)2. 3T3c7/EGFr
-124CZ 303705 B6
Testy inkorporace BrdU indukované IGF 1 Materiály a činidla:
1. Lidská rekombinantní (G511, Promega Corp., USA)
2. 3T3/IGFlr.
Testy inkorporace BrdU indukované inzulínem io Materiály a činidla:
1. Inzulín, krystalický, bovinní, zinek (13007, Gibco BRL, USA).
2. 3T3/H25.
Testy inkorporace BrdU indukované HGF Materiály a činidla:
1. Rekombinantní lidská HGF (Cat. No. 249-HF, R & D Systems, lne. USA). 20 2. BxPC 3 buňky (ATCC CRL-1687).
Postup:
1. Buňky se naočkují v množství 9000 buněk na jamku v RPMI 10% FBS na destičku o 96 jamkách. Buňky se inkubují přes noc při teplotě 37 °C v 5% CO2.
2. Po 24 hodinách se buňky promyjí s PBS a následně jsou podrobeny bezsérovému prostředí ve 100 μΐ média bez séra (RPMI s 0,1% BSA) po dobu 24 hodin.
3. Třetí den se k buňkám přidá 25 μΐ obsahujících ligand (připravený v koncentraci 1 μ/ml v RPMI s 0,1% BSA; finální koncentrace HGF je 200 ng/ml) a testované sloučeniny. Do negativních kontrolních jamek se přidá 25 μΐ RPMI pouze s 0,1% BSA bez séra; k pozitivním kontrolním buňkám se přidá ligand (HGF), ale bez testované sloučeniny. Testované sloučeniny se připraví v 5 svých finálních koncentracích v RPMI s ligandem bez séra v destičce o 96 jamkách a sériově zředí na 7 testovacích koncentrací. Typicky je nejvyšší finální koncentrace testované sloučeniny 100 μΜ ajsou používána 1 : 3 zředění (tzn. rozmezí finální koncentrace testované sloučeniny je 0,137-100μΜ).
4. Po 18 hodinách aktivace ligandu se do každé jamky přidá 12,5 μΐ zředěného BrdU značícího činidla (1 : 100 v RPMI, 0,1% BSA) a buňky jsou inkubovány s BrdU (finální koncentrací je 10μΜ) podobu 1 hodiny.
5. Stejné jako v obecném postupu.
6. Stejnéjako v obecném postupu.
7. Blokovací roztok se odstraní dekantací a jamky se promyjí jednou s PBS. Přidá se anti- BrdU-POD (1 : 100 zředění v PBS, 1% BSA) (100 μΙ na jamku) a destička se inkubuje po dobu 90 minut při pokojové teplotě na destičkovém třepači.
8. Stejnéjako v obecném postupu.
9. Stejnéjako v obecném postupu.
10. Stejnéjako v obecném postupu.
- 125CZ 303705 B6
Testy s HUV-EC-C
Tento test se používá k měření aktivity sloučenin proti PDGF-R, FGF-R, VEGF a FGF nebo Flk-1/KDR, přičemž všechny jsou přirozeně exprimovány buňkami HUV-EC. Den 0
1. Promytí a trypsinizace HUV-EC-C buněk (lidské endotheliální buňky žíly pupečníkové (American Type Culture Collection catalogue no. 1730 CRL)) Promytí fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem Dulbecco (D-PBS, zakoupený u Gibco BRL, catalogue no. 14190-029) dvakrát při asi l ml na 10 cm2 buňky s tkáňovou kulturou. Trypsinizace s 0,05% trypsin-EDTA v neenzy matickém buněčném disociačním roztoku (Sigma Chemical Company, catalogue no.
C-l544). 0,05% Trypsin se připraví zředěním 0,25% trypsinu na lmM EDTA (Gibco, catalogue no. 25200-049) v buněčném disociačním roztoku. Trypsinizace s asi 1 ml na 25 až 30 cm2 buňky s tkáňovou kulturou po dobu asi 5 minut při teplotě 37 °C. Po uvolnění buněk z baňky se přidá ekvivalentní objem testovacího média a převede se do 50ml sterilní centrifugaění zkumavky (Fisher Scientifíc, catalogue no. 05-539-6).
2. Promytí buněk s asi 35 ml testovacího média v 50ml sterilní centrifugaění zkumavku přidáním testovacího média, centrifugace po dobu 10 minut při přibližně 200 x g, aspirace supematantu a resuspendace s 35 ml D-PBS. Opakuje se promytí (2x) s D-PBS, resuspendace buněk v asi
1 ml testovacího média na 15 cm2 baňky s tkáňovou kulturou. Testovací médium se sestává z F12K média (Gibco BRL, catalogue no. 21127-014) a 0,5 % záhřevem inaktivovaného fetální ho bovinního séra. Počítání buněk pomocí Coulter Counter® (Coulter Electronics, lne.) a přidání testovacího média do buněk za vzniku koncentrace 0,8 až 1,0 x 105 buněk na ml.
3. Přidání buněk do destiček s plochým dnem o 96 jamkách při koncentraci 100 μΐ na jamku nebo 0,8 až 1,0 x 104 buněk na jamku, inkubace přibližně 24 hodiny při teplotě 37 °C, 5% CO2.
Den 1
1. Připravení dvojnásobných titrací testované sloučeniny v separovaných destičkách o 96 jamkách, obecně 50μΜ až do ΟμΜ. Použití stejného testovacího média, jak je uvedeno v dni 0, krok 2 výše. Titrace se provedou přidáním 90 μΐ na jamku testované sloučeniny při koncentraci 200μΜ (4 X finální koncentrace v jamce) na vrch jamky příslušného sloupce destičky. Poněvadž zásobní testovací sloučenina je obvykle 20mM v DMSO, obsahuje 200μΜ koncentrace léčiva
2% DMSO.
Jako ředicí roztok pro titrace testované sloučeniny za účelem zředění testované sloučeniny, a zároveň udržení konstantní koncentrace DMSO, se používá zředění až 2 % DMSO v testovacím médiu (F12K + 0,5 % fetálního bovinního séra). Přidání tohoto ředicího roztoku do zbývajících jamek ve sloupci při koncentraci 60 μΙ na jamku. Odebrání 60 μΐ ze 120 μΙ 200μΜ zředění testované sloučeniny v nejvyšší jamce sloupce a smíchání s 60 μΐ v druhé jamce sloupce. Odebrání 60 μΙ z této jamky a smíchání s 60 μΐ ve třetí jamce sloupce a tak dále, dokud nejsou kompletní dvojnásobné titrace. Když je předposlední jamka smíchána, odebere se 60 μΐ ze 120 μΐ v této jamce a odstraní se. V poslední jamce se nechá 60 μΐ ředicího roztoku DMSO a média jako kon45 trola obsahující netestovanou sloučeninu. Připravení 9 sloupců titrované testované sloučeniny v dostatečné množství pro ztrojnásobení jamek, kde každá obsahuje: (1) VEGF (zakoupení u Pero Tech lne, catalogue no- 100-200, (2) růstový faktor endotheliálních buněk (ECGF) (také známý jako kyselý fibroblastový růstový faktor nebo aFGF) (zakoupený u Boehringer Mannheim Biochemica, catalogue no. 1439 600) nebo (3) lidská PDGF B/B (1276-956, Boehringer
Mannheim, Germany) a kontrolu testovacího média, ECGF se připraví se sodnou solí heparinu,
2. Převedení 50 μΙ na jamku zředění testované sloučeniny do testovacích destiček o 96 jamkách obsahujících 0,8 až 1,0 x 104 buněk v 100 μΐ na jamku HUV-EC-C buněk ze dne 0 a inkubace přibližně 2 hodiny při teplotě 37 °C, 5% CO2.
- 126CZ 303705 B6
3. Provedeno třikrát, přidání 50 μΐ na jamku 80 μΙ na ml VEGF, 20 ng na mi ECGF nebo kontrolního média ke každé testované sloučenině. Jako u testovaných sloučenin jsou koncentrace růstového faktoru 4 X požadované finální koncentrace. Použití testovacího média ze dne 0, kroku
2, k připravení koncentrací růstových faktorů. Inkubace přibližně 24 hodin při teplotě 37 °C, 5%
CO2. Každá jamka bude obsahovat 50μ1 zředění testované sloučeniny, 50 μΐ růstového faktoru nebo média a 100 μΙ buněk, kteréjsou v celkovém množství 200 μΐ na jamku. Tudíž 4X koncentrace testované sloučeniny a růstových faktorů se zředí na 1 X a přidají se do jamek.
to Den 2
1. Přidá se 3H-thymidin (Amersham, catalogue no. TRK-686) při 1 pCi na jamku (10 μΐ na jamku 100 μίΊ na ml roztoku připraveného v RPMI médiu + 10% záhřevem inaktivované fetální bovinní sérum) a inkubace přibližně 24 hodin při teplotě 37 °C, 5% CO2. RPMI se zakoupí u Gibco BRL, catalogue no. 11875-051.
Den 3
1. Vy mražení destiček přes noc při teplotě -20 °C.
Den 4
Rozmražení destiček a jejich odběr pomocí harvesteru na 96 jamkové destičky (Tomtec Harverster ®) na filtrační plachetky (Wallac, catalogue no. 1205-401), měření na tekutém scinti25 lačním počítači Wallas Betaplate™.
V tabulce 3 jsou uvedeny výsledky biologického testování některých exemplárních sloučenin podle předloženého vynálezu. Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách IC50, mikromolámí (μΜ) koncentrace testované sloučeniny, jenž způsobuje 50% změnu aktivity cílových PKT v porovnání s aktivitou PTK kontrolní skupiny, které nebyla podávána testovaná sloučenina. Přesněji uvedené výsledky indikují koncentraci testované sloučeniny potřebné k 50% redukci aktivity cílové PTK. Biologické testy, které byly nebo mohou být používány ke stanovení sloučenin, jsou popsány detailněji níže.
Tabulka 3
Příklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGrftl IC50 (μΜ) bio PDGF ICSO (μΜ) bio BGF XC50 (μΜ) buňky BG7 XC50 (μΜ) Her 2 kináza ICSO (μΜ) cdk2ípa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ)
1 57,68 15,16 >100 >100 >100 >100
2 >100 >100 >100 >100
3 9,85 9,62 >100 >100 >100 >100
4 3,5? >20 >100 >100 >100 >100
5 8,3 16,06 >100 >100 >100 >100
6 4 ,04 >100 3,26 7,82 2,43
7 7,74 >100 5,07 9,8 4,24
8 12,1 >100 51,34 20,08 5,5
9 0,96 >100 >100 >100 16,38
10 5,72 >100 94,04 15,86 8,06
- 127CZ 303705 B6
Přiklad bio flkGST XC50 (μΜ) bio FGFRl IC50 (μΜ) bio PDGF ICSO (μΜ) bio egf ICSO (μΜ) buňky IGF ICSO (μΜ) Hert kiniza IC50 (μΜ) Ctlkžep* eso (μΜ) bio pyk2 ICSO (MM)
11 9,77 >100 >100 >100 >100
12 >20 21,46 >100 27,73
13 >20 81,92 8,17 2,66
14 13,01 42,41 >100 66,02
15 >20 >100 >100 98,61
16 >20 98,06 >100 23,32
13 8,25 2,47 94,35 0,83 11,47 15,94 >10
18 2,67 2,57 9,23 4,99
19 7,5 6,86 34,18 8,37
20 11,53 >100 41,16 8
21 7,18 >100 40,34 27,69
22 >20 >100 >100 87,67
23 >20 >100 36,64 4,05
24 >100 16,84 5,31
25 12,55 >100 23,48 7,9
26 16,03 66,87 34,67 10,04
27 >100 26,5 3,91
28 4,5 71,27 53,66 2,67
29 10,12 >100 26,72 3,98
30 9,4 >100 18,69 4,1
31 >50 >100 9,83 47,19
32 45,74 5,94 >100 >100
34 >50 >100 >100 >100
35 >20 >100 80,4 54,14
36 >20 >100 >100 >100
3? 0,22 3,06 10,78 9,84 1,4
38 4,17 3,06 6,04 8,97 2,16
39 3,38 4,69 3,67 14,54 3,53
40 4,5 7,9 6,52 6,27
42 0,1 0,12 11,95 74 ,55 20,43
43 1,12 8,38 >100 37,33 53,37
44 <0,05 0,02 20,73 67,4 6 6,99
45 1,71 >100 >100 29,95 >100
46 30,62 6,18 >100 >100 >100
47 0,08 1,56 0,06 11,42 41,54 θ,4 >20 1,05
48 0,006 0,3 <0,78 17,88 21,58 7,93 0,09
49 <0,78 >100 Á3,86 >100
50 <0,78 >100 20j34 >100
- 128CZ 303705 B6
Příklad bio flkGST IC50 (μΜ) bio fGFRl ICSO (μΜ) biú PDC7 ICSO (μΜ) bio BGF ICSO (μΜ) buňky EOF ICSO (μΜ) Her 2 kináza ICSO (μΜ) cdk2spa bio pyk2
C50 (μΜ> IC5O (μΜ)
51 0,006 1,66 0,01 18,1 21, 61 23,24 16,69 0,35
52 0,08 1,26 <0,78 12,53 >100 >100 10,66 0,45
53 <0,78 >100 >100 >100
54 1,98 <0,78 23,88 9,76 7,02
55 0,27 0,53 6,03 35,99 77,82
56 2,32 3,19 >100 10,03 7,11
57 0,06 7,99 >100 9,97 6, 94
58 21,14 >100 >100 >100
59 <Q,7B >100 >100 >100
60 <0,78 >100 >100 >100
61 <0,78 >100 >100 >100
62 8,00 8 ,32 >100 >100 >100
63 0,21 <0,78 8,59 >100 >100
64 0,55 <0,78 30,49 >100 >100
65 0,37 <0,05 >100 74,36 15,97
66 <0,05 >100 11,84 2,76
67 0,39 24,77 31,38 19,79 2,56
€8 1,16 0 ,03 >100 23,52 34,13
69 0,3 56,55 >100 97,54 >100
70 0,09 1,50 I 0,0030 10,57 6, 42 7,99 12,62 0,63
71 15,21 l 22,5 >100 9,91
72 6,06 10,54 >100 39,94 9,65
73 5,95 14,12 >100 39,5 8,59
74 1,2 0,09 46,75 >100
75 2,7 61,55 >100 >100
76 3,33 19,18 5,11 3,01
77 0,49 25,01 >100 >100
78 1, 94 70, 62 9,33 4,25
79 1,49 >100 27, 39 >100
80 0,13 4,29 0,001 >100 50,19 17,19 0,28
81 0,21 0,18 >100 >100
82 2,03 7,69 6,8B >100 >100 0,31
83 0,34 0,41 9,46 2,18 86,9 0,008
84 1,38 12,51 67,2 5, B6 0,006
85 0,2 0,8 2,59 >100 3,76
86 1,45 1,3 19,6 41,8 >100 3,58
87 3,27 7,56 6,46 >100 9,1 0,17
88 0,35 1 ,18 8 ,06 2,36 , >100 0,09
- 129 CZ 303705 B6
Příklad bio flkGST XC50 (μΜ) bio FGFR1 IC5O (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio IGF XC50 (μΜ) buňky 8GF I«0 (μΜ) Her2 kináza XC50 (μΜ) cdk2epa C5O (μΜ) bio pyb2 IC50 (μΜ)
89 7,84 47,58 8,53 9,67 15,97
115 7,3 7,48 >100 >100 0,006
116. >20 >100 >100 >100 <0,0005
117 0,91 12,9 >100 >100 0,006
110 1,93 1,2 >100 >100 0,002
119 1,38 61,63 >100 >100 <0,0005
In vivo zvířecí modely
Zvířecí modely xenoimplantátu
Schopnost lidských nádorů růst jako xenoimplantáty v athymické myši (např. Balb/c, nu/nu) poskytuje užitečný in vivo model pro studium biologických odpovědí na terapie lidských nádorů. Od první úspěšné xenotransplantace lidských nádorů do athymické myši, (Ryggard and Poví sen,
1969, Acta Pathol. Microbial. Scand. 77: 758-760), bylo transplantováno mnoho různých buněčných linií lidského nádoru (např. mamární, plicní, genotourinámí, gastrointestinální, hlavy a krku, glioblastom, kostní a maligní melanomy) a úspěšně rostly u nahých myší. Následující testy mohou být používány ke stanovení hladiny aktivity, specificity a účinku různých sloučenin podle předloženého vynálezu. Ke stanovení sloučenin jsou použitelné tři obecné typy testů:
buněčné/katalytické, buněčné/biologické a in vivo. Smyslem buněčných/katalytických testů je stanovit vliv sloučeniny na schopnost TK k fosforylaci tyrosinových zbytků na známém substrátu v buňce. Smyslem buněčných/biologických testů je stanovit vliv sloučeniny na biologickou odpověď stimulovanou TK v buňce. Smyslem in vivo testů je stanovit účinek sloučeniny ve zvířecím modelu na příslušnou poruchu, např. rakoviny.
Vhodné buněčné linie pro subkutánní xenoimplantátové experimenty zahrnují C6 buňky (gliom, ATCC # CCL 107), A375 buňky (melanom, ATCC # CRL 1619), A431 buňky (epidermoidní karcinom, ATCC # CRL 1555), Calu 6 buňky (plicní, ATCC # HTB 56), PC3 buňky (prostaty, ATCC # CRL 1435), SCOV3TP5 buňky a NIH 3T3 fibroblasty geneticky upravené k nadměrné expresi EGFR, PDFGR, IGF-IR nebo kterékoliv jiné testované kinázy. Následující postup může být používán k provedení xenoimplan táto vých experimentů:
Samčí athymické myši (BALB/c, nu/nu) se zakoupí u Simonson Laboratories (Gilroy, CA). Všechna zvířata byla chována v čistotě v mikron izolačních klecích s Alpha—dri podestýlkou.
Byla jim poskytnuto sterilní žrádlo pro hlodavce a voda dle potřeby.
Buněčné linie byly pěstovány v příslušném médiu (např. MEM, DMEM, Ham's F10 nebo Ham's F12 plus 5% až 10% fetální bovinní sérum (FBS) a 2mM glutamin (GLN)). Všechna buněčná kultivační média, glutamin a fetální bovinní sérum byla zakoupena u firmy Gibco Life
Technologies (Grand Island, NY), pokud není uvedeno jinak. Všechny buňky byly kultivovány v prostředí o vlhkosti 90 až 95 a 5 až 10% CO2 při teplotě 37 °C. Všechny buněčné linie byly rutinně subkultivovány dvakrát týdně a byly negativní na mykoplazmu, což bylo stanoveno metodou Mycotest (Gibco).
Buňky byly sbírány při nebo téměř pri konfluenci s 0,05% Trypsin-EDTA a peletovány při 450 x g po dobu 10 minut. Pelety byly resuspendovány ve sterilním PBS nebo médiu (bez FBS) na příslušnou koncentrací a buňky byly implantovány do zadního boku myši (8 až 10 myší na skupinu, 2 až 10 x 106 buněk na zvíře). Růst nádoru byl měřen po dobu 3 až 6 týdnů pomocí
- 130CZ 303705 B6 venierových kaliperů. Objemy nádorů byly vypočteny jako délka x šířka x výška, pokud není uvedeno jinak. Hodnoty P byly vypočteny pomocí Studentova t-tcstu. Testované sloučeniny v 50 až 100 μΐ excipíentu (DMSO nebo VPD:D5W) mohou být podány IP injekcí v různých koncentracích obecně počínaje dnem jedna po implantaci.
Model invaze nádoru
Byl vyvinut následující model invaze nádoru a může být používán ke stanovení terapeutické hodnoty a účinnosti sloučenin vykazujících selektivní inhibici receptoru KDR/FLK-1.
io
Postup
Jako experimentální zvířata byly používány osm týdnů staré nahé myši (samice) (Simonsen lne.). Implantace nádorových buněk může být provedena při odtahu s laminámím proudem. Při anestézii byl koktejl z látky Xylazin/Ketamin (100 mg na kg ketaminu a 5 mg na kg Xylazinu) podáván íntraperitoneálně. Byla provedena incize vedená středem k odhalení dutiny břišní (přibližně 1,5 cm délky) k injektování 107 nádorových buněk v objemu 100 μΙ média. Buňky byly injektovány buď do duodenálního lalůčku pankreatu, anebo pod serózu tlustého střeva. Peritoneum a svaly byly zašity 6-0 hedvábným kontinuálním stehem a kůže byla stažena pomocí svo20 rek. Zvířata byla denně sledována.
Analýza
Po 2 až 6 týdnech v závislosti na makroskopických pozorováních zvířat byly myši usmrceny a lokální metastáze nádoru do různých orgánů (plíce, játra, mozek, žaludek, slezina, srdce, svaly) byly excidovány a analyzovány (měření velikosti nádoru, stupně invaze, imunochemíe, stanovení hybridizace in šitu, atd.).
C-kit test
Tento test se používá k detekci míry fosforylace c-kit tyrosinu
MO7E (lidská akutní myeloidní leukémie) buňky byly sérem starvovány („starved“) přes noc v 0,1% séru. Buňky byly dále před stimulací ligandem předem ošetřeny sloučeninou (souběžně se sérovou starvací), stimulovány 250 ng na ml rh-SCF po dobu 15 minut. Po stimulaci byly buňky lyžovány a imunoprecipitovány protilátkou anti—c-kit. Hladiny fosfotyrosinu a proteinu byly stanoveny technikou Western blotting.
Test MTT proliferace
Buňky MO7E byly starvovány sérem a předem ošetřeny sloučeninou podle způsobu uvedeného pro fosforylační experimenty. Buňky byly nanášeny v množství 4 X 105 buněk na jamku do misky o 96 jamkách v 100 μΐ RPMI + 10% séru. Byl přidán rh-SCF (100 ng na ml) a destička byla inkubována po dobu 48 hodin. Po 48 hodinách bylo přidáno 10 μΐ 5 mg na ml MTT [3-(4,5-dimethy IthiazoI-2-yI)-2,5-difenyltetrazolÍum-bromid) a po dobu 4 hodin se nechala běžet inkubace. Byl přidán kyselý izopropanol (100 μΐ z 0,04N HCI v izopropanolu) a byla měřena optická hustota při vlnové délce 550 nm.
Apoptózový test
Buňky MO7E byly inkubovány +/- SCF a +/- sloučenina v 10% FBS s rh-GM-CSF (10 ng na ml) a rh-IL—3 (10 ng na ml). Vzorky byly testovány v 24 a 48 hodinách. K měření aktivované kaspázy-3 byly vzorky promývány s PBS a permeabilizovány s ledově studeným 70% ethanolem. Buňky byly pak barveny s Pe-konjugovanou polyklonální králičí anti-aktivní kaspázou-3 a
- 131 CZ 303705 B6 analyzovány FACS. K měření štěpené PARP byly vzorky lyžovány a analyzovány technikou western blotting s protilátkou anti-PARP.
Dodatečné testy
Dodatečné testy, které mohou být používány ke stanovení sloučenin podle předloženého vynálezu, zahrnují, ale není to nikterak limitováno, bio-flk-1 test, EGF receptor-HER2 chimérický receptorový test na celých buňkách, bio-src test, bio-lck test a test měřicí funkci fosforylace raf. Postupy provádění jednotlivých testů mohou být nalezeny v US patentu č. 6 130238, zde je uveio děno jako odkaz, včetně kterýchkoliv obrázků.
Měření buněčné toxicity
Terapeutické sloučeniny by měly být účinnější při inhibici aktivity receptorové tyrosinkinázy než při projevech cytotoxického účinku. Měření účinnosti a buněčné toxicity sloučeniny může být provedeno stanovením terapeutického indexu, tzn. IC50/LD50. Hodnota IC50, dávka, kterou se dosáhne 50% inhibice, může být měřena standardními technikami, např. popsanými v předloženém vynálezu. Hodnota LDS0, tj. dávka, která vede k 50% toxicitě, může být také měřena standardními technikami (Mossman, 1983, J. Immunol. Methods, 65: 55-63), měřením množství uvolněného LDH (Korzeniewski a Callwaert, 1983, J. Immunol. Methods. 64: 313, Decker a Lohmann-Matthes, 1988, J. Immunol. Methods, 115: 61) nebo měření letální dávky na zvířecích modelech. Sloučeniny s velkým terapeutickým indexem jsou výhodné. Terapeutický index by měl být větší než 2, výhodně alespoň 10, výhodněji alespoň 50.
B. Příklad výsledků z buněčných testů za použití (2-diethy lam i noethyl)amidu 5-(5-fluor-2oxo-1,2-d i hy droindol-3 -y 1 iden methy l)-2,4-d i methy 1-1 //-py rrol-3-karboxy lové kyseliny.
K potvrzení účinnosti (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-yl30 idenmethyl)-2,4-dimethyl-l/7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) detekované při biochemických testech (vide infra) byla vyhodnocována její schopnost inhibovat ligand—dependentní fosforylaci RTK při testech na buňkách pomocí NIH-3T3 myších buněk upravených k nadměrné expresi Flk—1 nebo lidských PDGFRp. (2-Diethylaminoethyl)amid
5-(5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l 7/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval VEGF-dependentní fosforylaci Flk—1 tyrosinu s hodnotou IC50 přibližně 0,03μΜ. Tato hodnota je podobná 0,009μΜ Kj hodnotě stanovené pro inhibici Flk—1 (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethy 1)-2,4dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) determinované při biochemických testech, což indikuje, že (2-ůiethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylideninethy!)—2,4—dimethyl-1//-pyrrol-3karboxylové kyseliny (sloučenina 80) se snadno penetruje do buněk. V souladu s biochemickými údaji (vide infra) indikujícími, že (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-d ihvdroindol3-yl iden methyl )-2.4-d imethy 1-1//-pyrrol-3-karboxy lové kyseliny (sloučenina 80) měl srovnatelnou aktivitu proti Flk—1 a PDGFR, bylo také zjištěno, že inhibuje PDGF-dependentní fosforylaci receptoru v buňkách s hodnotou IC50 přibližně 0,03μΜ. Schopnost (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fIuor-2-oxo-l,2-dihydroindol3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibovat ckit, úzce příbuzné s RTK, která váže faktor kmenových buněk (SDF), byla stanovena použitím MO7E buněk, které exprimují tento receptor. V těchto buňkách (2-diethylaminoethyl)amid 5—(5— fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval SCF-dependentní c-kit fosforylaci s hodnotou IC50 0,01 až 0,1 μΜ. Tato sloučenina také inhibovala SCF-stimulovanou c-kit fosforylaci u akutní myeloidní leukémie (AML) blastů izolovaných z periferní krve pacientů.
- 132CZ 303705 B6
Kromě testování schopnosti (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-díhydroindol3-y!idenmethy!ý-2,4-dimethyl-17/-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) na inhibici lígand-dependentní fosfory láce receptoru v buňkách byl také pozorován vliv na ligand-dependentní proliferativní odpověď buněk in vitro (viz tabulka 4). Při těchto studiích byly buňky přes noc uvedené do stavu klidu starvací sérem a indukovány k DNA syntéze po přidání příslušné mitogenního ligandů. Jakje uvedeno v tabulce 4, (2-diethylaminoethyl)amid 5~(5-fluor-2-oxo1,2 ~dihydroindol-3-ylidenmethyl) 2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval PDGF-indukovanou proliferací NIH-3T3 buněk exprimujících nadměrné množství PDGFRp nebo PDGFRa s hodnotou IC50 0,031 a 0,069μΜ a SCF-indukovanou proliferací ίο MO7E buněk s hodnotou IC50 0,007μΜ.
Tabulka 4
biochemické buněčné IC50
receptor Ki* 1 (μΜ) fosforylace receptoru (μΜ) hgand-dependentní proliferace (μΜ)
Flk-1/KDR 0,009 0,032 0,004’
PDGFRa 0,008 0,034 * 0,031’
PDGFRJJ ND ND 0,069’
FGFR 0,83 ND oj3
c-kit ND 0,01až0,l d’0076 ’
ND = nebylo stanoveno 1 stanoveno pomocí rekombinantního enzymu 2 stanoveno pomocí NIH-3T3 buněk exprimujících Flk-1 bez přísunu séra 3 stanoveno pomocí HUVEC bez přísunu séra 4 stanoveno pomocí ΝΪΗ-3Τ3 buněk exprimujících PDGFR bez přísunu séra 5 stanoveno pomocí NIH-3T3 buněk exprimujících PDGFR bez přísunu séra 6 stanoveno pomocí MO7E buněk bez přísunu séra
Jak vyplývá z tabulky 4, existuje obecná shoda mezi biochemickou a buněčnou aktivitou (2diethylaminoethyl)amidu 5-(5fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenrnetliyl)-2,4-dimethyl1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80), což podporuje závěr, že tato sloučenina překračuje buněčné membrány. Dále lze vyvodit, že buněčné odpovědi jsou výsledkem aktivity sloučeniny 80 proti naznačenému cíli. Naproti tomu, při testování v přítomnosti kompletního růs20 toého média in vitro, byly třeba podstatně vyšší koncentrace (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) (> 10μΜ) k inhibici růstu různých lidských nádorových buněk (viz tabulka
5). To ukazuje, že sloučenina přímo neinhibovala růst těchto buněk v koncentracích nutných k inhibici fosforylace receptoru závislé na ligandů a proliferace buněk.
- 133 CZ 303705 B6
Tabulka 5
buněčná linie původ ICso (μΜ) LDjo (μΜ)
HT29 karcinom tlustého střeva 10 22
A549 pliní karcinom 9,5 22
NCI-H460 NSC plicní karcinom 8,9 20
SF767T gliom 7,9 14
A431 epidermoidní karcinom 6,0 18
Výsledky uvedené v tabulce 5 byly získány inkubací buněk po dobu 48 hodin v kompletním růstovém médiu v přítomnosti sériových zředění (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo5 l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l/í-pynOl-3-karboxylové kyseliny. Na konci růstové periody bylo stanoveno relativní množství buněk. Hodnoty IC5o byly vypočteny jako koncentrace sloučeniny, která inhibovala růst buněk z 50 % vzhledem k neošetřeným buňkám. Hodnoty LD50 byly vypočteny jako koncentrace sloučeniny, která způsobí 50% snížení počtu buněk vzhledem k výchozímu stavu experimentu.
io
Relevantnější test na bázi buněk, ve kterém se vyhodnocuje antiangiogenní schopnost (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2—oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l /ř-pyrrol -3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80), zahrnuje in vitro test mitogeneze použitím lidských endothelial nich buněk žíly pupečníkové (HUVEC) jako modelového systému pro proliferaci endotheliálních buněk rozhodující pro angiogenní proces. Při tomto testuje mitogenní odpověď, měřená jako přírůstek DNA syntézy, indukována v HUVEC bez přísunu séra po přidání VEGF nebo FGF. V těchto buňkách (2-díethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-díhydroindol3-ylidenmethyl)-2,4-dÍmethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval VEGF- a FGF-indukovanou mitogenní odpověď na dávce závislým způsobem s hodnotami IC50
0,004 μΜ, resp. 0,7 μΜ, za předpokladu, že sloučenina byla přítomna v průběhu 48hodinového testu.
Výše uvedené výsledky byly získány s použitím HUVEC bez přísunu séra, které byly inkubovány s mitogenními koncentracemi VEGF (100 ng/ml) nebo FGF (30 ng/ml) v přítomnosti sériových zředění (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2~dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrroI-3-karboxyIové kyseliny (sloučenina 80) po dobu 24 hodin. Mitogenní odpověď během následujících 24 hodin v přítomnosti ligandu a inhibitoru byla kvantifikována měřením DNA syntézy na bázi inkorporace bromdeoxyuridinu do buněčné DNA.
V oddělených experimentech inhibovala sloučenina 80 VEGF-dependentní fosforylaci ERK 1 /2 (p42/44MAP kinázy), prvotní downstreamový cíl Flk-l/KDR, na dávce závislým způsobem. Bylo také zjištěno, že v tomto systému je inhibiční aktivita sloučeniny 80 dlouhodobá; inhibuje VEGF-dependentní fosforylaci ERK % ί 48 hodin po odstranění (2-diethylamÍnoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l H-py rro 1-3-karboxy lové kyseliny (sloučenina 80) z média a po krátké expozici (2 hodiny) vůči mikromolámím koncentracím sloučeniny.
Bylo zjištěno, že VEGF je důležitý faktor přežití pro endotheliální buňky. Poněvadž (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2Oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dÍmethyl-l//-pyr40 rol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibuje VEGF-dependentní mitogenní odpovědi HUVEC, byl zkoumán účinek sloučeniny na přežití HUVEC. V těchto experimentech bylo používáno štěpení substrátu kaspázy 3 poly-ADP-ribosyl polymerázy (PARP) jako indikace apoptózy. HUVEC kultivované za bez sérových podmínek po dobu 24 hodin vykazovaly výraznou míru štěpení PAPR, což bylo detekováno akumulací štěpení 23 kDa PARP fragmentu.
- 134CZ 303705 B6
Tomu bylo do velké míry zabráněno přidáním VEGF do buněčného média, a tím se v tomto testu ukázalo, že VEGF působí jako faktor přežití. Bylo zjištěno, že (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibuje KDR signalizaci. Tudíž (2-diethylaminoethyl)amid 5-(55 fluor-2--oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhibuje VEGF-zprostředkované přežití HUVEC na dávce závislým způsobem. Tato data tedy indikují, že sloučenina 80 indukuje apoptózu v endotheliálních buňkách v kultuře v přítomnosti VEGF.
io C. In vivo studie účinnosti
i. Účinnost proti stabilizovaným nádorovým xenoimplantátům
In vivo účinnost (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l .2-dihydroindol-3-y!iden15 methyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) byla studována na ubkutánních (SC) modelech xenoimplantátu použitím lidských nádorových buněk implantovaných do oblasti zadní části boku athymické myši. Po implantaci se před započetím perorálního ošetřování sloučeninou nádory nechaly stabilizovat na velikost 100 až 550 cm3.
Denní perorální podání sloučeniny 80 způsobovalo na dávce závislou inhibici růstu A431 nádoru, za předpokladu, že ošetření bylo započato po nárůstu nádorů do velikosti 400 mm3. Byla pozorována statisticky významná (P < 0,05) inhibice růstu nádoru při dávkách 40 mg na kg denně (74% inhibice) a 80 mg na kg denně (84% inhibice) (viz tabulka 6). V předchozích experimentech nebyla vyšší (160 mg na kg denně) dávka sloučeniny účinnější proti stabilizovaným nádorům
A431 než dávka 80 mg na kg denně. Navíc myši ošetřované dávkou 160 mg sloučeniny na kg denně ztrácely tělesnou váhu, což indikuje, že vyšší dávka nebyla také tolerována. Podobné výsledky byly získány při experimentu, ve kterém byly nádory A431 ponechány narůst pouze do velikosti 100 mm3 (viz tabulka 5). Při tomto druhém experimentu byla pozorována kompletní regrese nádorů u šesti z osmi zvířat ošetřovaných dávkou 80 mg na kg denně po dobu 21 dnů.
U těchto šesti zvířat nebyl pozorován nový nárůst nádorů během 110 dnů pozorování po skončení ošetření. U dvou zvířat, ve kterých nádory znovu narostly do velké velikosti (2000 až 3000mm3), nádory ustoupily jako reakce na druhé kolo ošetření sloučeninou 80. Důležité je, že ve všech experimentech, při kterých se testovala účinnost sloučenin, byla dávka (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethy 1-1 //-pyrrol-335 karboxylové kyseliny (sloučenina 80) v množství 80 mg na kg denně dobře snášena, i když byla podávána kontinuálně po dobu více než 100 dnů.
Tabulka 6
počáteční objem nádoru sloučenina1 (mg/kg denně) % inhibice (denní) Hodnota P
400 80 84 (36) 0,001
40 74 (36) 0,003
20 51 (36) 0,130
100 80 93 (40) 0,002
40 75 (40) 0,015
10 61 (40) 0,059
1 sloučenina 80
-135CZ 303705 B6
Výsledky v tabulce 6 byly získány s buňkami A431 (0,5 χ 106 buněk na myš), které byly implantovány SC do oblasti zadního boku athymické myši. Denní perorální podání (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4^dimethyl-l /7-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) v nosiči na bázi Cremophore nebo kontrolním nosiči se započalo v době, kdy nádory dosáhly indikovaného průměrného objemu. Nádory byly měřeny vemierovými kaliperami a objem nádoru byl spočten jako délka x šířka x výška. Hodnoty P byly vypočteny srovnáním velikosti nádorů u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou 80 (n = 8), stěmi zvířaty, která byla ošetřována nosičem (n = 16), v poslední den experimentu pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
io
Účinnost sloučeniny 80 proti etablovaným lidským nádorům různého původu byla stanovena pomocí Colo205 karcinom tlustého střeva), SF763T (gliom) a NCI-H460 (nemalobuněčný plicní karcinom) xenoimplantátů (viz tabulka 7). Tyto experimenty byly provedeny s (2-diethylaminoethyl)amidem 5-( 5-fl uor-2-oxo-1,2-d ihy dro indo l-3_yl iden m ethy l)-2,4-d i methy 1-1//-pyrrol15 3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) podávaným perorálně v množství 80 mg na kg denně; dávka, která byla účinná a dobře tolerována.
Tabulka 7
typ nádoru Počáteční objem nádoru % inhibice (denní) Hodnota P
A4311 epidermoidní 100 93 (40) 0,002
A4311 epidermoidní 400 84 (36) 0,001
Colo205 tlustého střeva 370 77 (54) 0,028
NCI-H460 plicní 300 61 (54) 0,003
ŠF763T gliom 550 53 (30) 0,001
1 údaje získané z experimentu uvedeného v tabulce 5
Ve výše zmíněných experimentech, jakmile nádory dosáhly indikované velikosti, byla sloučenina 80 podávána jednou denně v množství 80 mg na kg v nosiči na bázi Cremophoru. Procentuální inhibice v porovnání s kontrolní skupinou ošetřovanou nosičem byla vypočtena na konci experimentů. Hodnoty P byly spočteny srovnáním velikosti nádorů u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou, s těmi zvířaty, která byla ošetřována nosičem, pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
Ačkoliv (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-yIidenmethyl)-2,4dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny (sloučenina 80) inhiboval růst všech typů nádorů uvedených v tabulce 7, byl pozorován rozdíl v odpovědích různých modelů exonimplantátu. Konkrétně růst NCI-H460 a SF763T nádorů byl zastaven nebo ve velké míře zpomalen, jelikož nádory Colo205, jako třeba nádory A431, ustoupily po ošetření (2-diethylaminoethyl)amidem 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-y1idenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
Kvůli stanovení molekulární báze rozdílů v odpovědi u modelů xenoimplantátu byty studovány nádory. Byly vyhodnocovány nádory SF763T, které byly při molekulární hladině méně responzivní na ošetření (2-diethylaminoethyl)amidem 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-dimethy]-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny, pomocí imunohistologických technik
4o k stanovení účinku ošetření sloučeninou. Tyto studie byly původně prováděny na tomto typu nádoru, protože nádory SF763T jsou vysoce vaskularizovány mikrocévami, jenž silně exprimují
- 136CZ 303705 B6 endotheliální buněčný markér CD31, a jsou tudíž velmi vhodné pro studie hustoty nádorových mikrocév (MVD). Imunohistologické stanovení nádorů SF763T ukazuje, že nádory z ošetřovaných zvířat měly sníženou MVD v porovnání s kontrolními skupinami ošetřovanými nosičem, což je v souladu s antiangiogenním mechanizmem účinku sloučeniny 80; MVD byla 24,2 ±4,1 u zvířat ošetřovaných sloučeninou 80, v porovnání s 39,3 ± 5,7 u těch, které byly ošetřovány jen nosičem. Jak se předpokládá na základě zastavení doprovodného růstu nádoru, vyložená inhibice proliferace nádorových buněk byla evidentní u nádorů, které byly ošetřované sloučeninou 80. Tyto nádory měly poloviční mitotický index nádorů, které byly ošetřovány nosičem (data nejsou uvedena). Účinek sloučeniny 80 na MVD a proliferaci nádorových buněk indikuje, že sloučeniny io mají výrazné antiangiogenní a protinádorové účinky, i za podmínek, při kterých nádory neustuPují.
Schopnost sloučeniny 80 inhibovat fosforylaci PDGFR a následnou signalizaci in vivo byla také vyhodnocována na nádorech SF763T, které exprimuj i vysoké hladiny PDGFRp. Ošetření
SF763T nádorů sloučeninou 80 silně inhibovalo fosforylaci PDGFRp tyrosinu v etablovaných SF763T nádorech. Sloučenina 80 také snižovala hladiny fosforylované (aktivované) fosfolipázy C gamma (PLC-γ), okamžitý downstreamový indikátor aktivace PDGFR. Tato data demonstrují, že perorální podání sloučeniny 80 způsobuje přímý účinek na cílovou aktivitu (PDGFR) v nádorech in vivo.
Na základě důkazu, že schopnost sloučeniny 80 inhibovat VEGF-dependentní signalizaci v HUVEC in vitro je dlouhodobá {vide supra), účinnost sloučeniny byla stanovena po nečastém podání sloučeniny do modelu Colo205 nádoru. Jak je uvedeno v tabulce 8, bylo 80 mg na kg (91% inhibice) a 40 mg na kg (84% inhibice) účinných, za předpokladu, že dávka byla podávána denně, nikoliv týdně. Na rozdíl od vyšších dávek sloučeniny 80 (160 mg na kg), které inhibovaly (52% inhibice) růst etablovaných nádorů Colo205 při podání 2 x týdně, z čehož lze usuzovat, že tato sloučenina může být účinná při nefrekventovaném podáni ve vyšších dávkách. Mělo by být uvedeno, že dávkovači režimy mohou být stanoveny odbornou veřejností bez náležitého zkoušení.
Tabulka 8
dávka (mg/kg) frekvence inhibice % hodnota P
160 2 x týdně 52 0,085
1 x týdně 17 NS
80 denně 91 0,039
2 x týdně 19 NS
1 x týdně 0 NS
40 denně 84 0,028
2 x týdně 36 NS
NS; nevýznamná hodnota (P > 0,05 )
Výsledky z tabulky 8 byly získány z buněk Colo205 (0,5 x 106 buněk na myš), které byly 35 implantovány SC do oblasti zadního boku athymické myši. Perorální podání sloučeniny 80 podle indikovaného režimu bylo započato v době, kdy nádory dosáhly objemu 400 mm3. Nádory byly měřeny vemierovými kalipery a objem nádoru byl vypočten jako délka x šířka x výška produktu.
- 137CZ 303705 B6
Hodnoty P byly vypočteny srovnáním velikosti nádorů u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou 80, se zvířaty, která byla ošetřována nosičem, v poslední den experimentu pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
ϋ. Účinnost sloučeniny 80 na modelu diseminovaného onemocnění
Kromě podpory trvalého růstu pevných primárních nádorů, je angiogeneze také esenciální složka podporující vznik diseminovaného onemocnění v důsledku metastáze z primárního nádoru. Účinek sloučeniny 80 na vznik diseminovaného onemocnění byl zkoumán na modelu kolonizace ío plicního melanomu B16-F1 myší. Pri tomto modelu kolonizují B16-F1 buňky inokulované intravenózně via ocasní žílu athymické myši plíce a vytváření nádory. Jak je uvedeno v tabulce 8, podle vyhodnocení měření celkové hmotnosti plic účinně snižuje perorální podání sloučeniny 80 v množství 80 mg na kg denně hmotnost B16-F1 buněk v plicích. Tato data naznačují, že sloučenina 80 může inhibovat di sem i nované onemocnění in vivo.
Tabulka 9
hmotnost plic (g) % inhibice hodnota P
nosič 0,83 ± 0,07 - -
sloučenina1 0,41+0,04 50 <0,001
1 sloučenina 8 0
Výsledky z tabulky 9 byly získány z athymické myši, která byla inokulována B16-F1 nádoro20 vými buňkami (5 x 105 buněk na myš). Myši byly ošetřeny denně perorální dávkou sloučeniny 80 v množství 80 mg na kg denně (n = 10) nebo nosičem (n = 18) po dobu 24 dnů po inokulaci nádoru. Na konci doby ošetřování byly myši usmrceny a jejich plíce byly izolovány a zváženy. Procentuální inhibice byla vypočtena srovnáním hmotnosti plic u zvířat, která byla ošetřována sloučeninou 80, se zvířaty, které byly ošetřována pouze nosičem. Hodnota P byly stanoveny pomocí dvoustranného Studentova t-testu.
D. Příklady biologické aktivity
Příklady in vivo účinnosti sloučenin podle předloženého vynálezu jsou uvedeny v tabulce 2.
Závěr
Při studiích zaměřených na výzkum farmakokinetických charakteristik sloučenin z výhodných provedení podle předloženého vynálezu bylo prokázáno, že perorální podání jednotlivé dávky uvedených sloučeniny vede k vysoké biologické dostupnosti u myší. Dobrá perorální biologická dostupnost a lineární farmakokinetiká ukazují, že sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu mají příznivé farmakokinetické charakteristiky.
Navíc sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu jsou účinnými inhibitory aktivity tyrosinkinázy z dělené kinázové domény RTK Flk-1/KDR a PDGFR, které se podílejí na angiogenezi, a RTK c-kit, receptoru pro faktor kmenových buněk (SCF), který se podílí na určitých hemato logických rakovinách. Ve vysokých koncentracích sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu také inhibují aktivitu tyrosinkinázy FGFR-1, třetí RTK podílející se na angiogenezi, V souladu s jejich biochemickou aktivitou inhibují sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu ligand-dependentní fosforylaci tyrosinu cílových RTK a in vitro mitogenní odpověď lidských endotheliálních buněk žíly pupečníkové (HU V EC) stimulované VEGF nebo FGF, P DG FR-exprimuj ících NIH-3T3 buněk stimulovaných PDGF, a MO7E
- 138CZ 303705 B6 buněk akutní myeloidní leukémie stimulovaných SCF. Naproti tomu sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu přímo neinhibují proliferaci nádorových buněk v kompletním růstovém médiu kromě koncentrací vyšších o 2 až 3 řády, než jsou koncentrace nutné k inhibici ligand-dependentních mitogenních odpovědí. Při studiích xenoimplantátu na myších inhibovaly sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu růst etablovaných lidských nádorů různého původu způsobem závislým na dávce a v koncentracích, které byly dobře snášeny i po prodloužení dávkování (> 100 dnů). Při dávce 80 mg na kg denně indukovaly sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu regresi velkých etablovaných A431 a Colo205 nádorů a způsobovaly značnou inhibici růstu nebo stagnaci SF763T a NCIίο H460 nádorů. U myší majících SF763T nádory způsobovaly sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu redukce hustoty mikrocév, fosforylací PDGFR v nádorech a mitotický index v nádorových buňkách. Při této dávce také sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu inhibovaly plicní kolonizaci nádorovými buňkami B16-F1 v modelu metastázy nádoru. Studie režimů ukázaly, že sloučeniny z výhodných provedení podle před Ιοί 5 zeného vynálezu jsou nejúčinnější, pokud jsou podávány denně. Přímý důkaz antiangiogenní aktivity sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu byl proveden na SF763T nádorech, ve kterých byla hustota mikrocév redukována. Přímý důkaz, že sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu inhibovaly fosforylací PDGFR a signalizaci in vivo, byl také proveden na SF763T nádorech.
Když se vše spojí, podporují tato data názor, že perorálně podávané sloučeniny z výhodných provedení podle předloženého vynálezu jsou antiangiogenní prostředky pro ošetření rakovin, včetně pevných nádorů a hematologických zhoubných bujení, ve kterých angiogeneze a/nebo signalizace přes c—kit jsou důležité z hlediska patologie onemocnění.
Je zřejmé, že sloučeniny, postupy a farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou účinné při modulaci aktivity PK, a tudíž se předpokládá jejich účinnost jako terapeutických prostředků při poruchách souvisejících s RTK, CTK a STK.
Odborník též snadno ocení, že předkládaný vynález je dobře uzpůsoben k uskutečňování popsaných aspektů a dosahování uvedených cílů a výhod, stejně jako těch, které jsou mu inherentně vlastní. Molekulární komplexy a zde popisované metody, postupy, terapie, molekuly a konkrétní sloučeniny představují výhodná provedení a jsou pouze příklady, které nijak neomezují rozsah vynálezu. Odborníkovi jsou zřejmé jejich obměny a další použití, která jsou zahrnuta v duchu vynálezu, jakje definován připojenými patentovými nároky.
Odborníkovi je rovněž zřejmé, zeje možno provádět různé náhrady a modifikace předkládaného vynálezu, aniž by se překročil rozsah a myšlenka vynálezu.
Všechny patenty a publikace zmíněné v textu jsou ukazatelem úrovně odborníků, kterých se vynález týká. Všechny patenty publikace jsou zde zahrnuty formou odkazu, jako by bylo pro každou jednotlivou publikaci konkrétně ajednotlivě uvedeno, zeje zde zahmutajako odkaz.
Vynález, zde ilustrativně popsaný, může být výhodně prováděn za absence jakéhokoli prvku nebo prvků nebo omezení, která zde nejsou konkrétně uvedena. Tak například v každém případě zde může být kterýkoli z výrazů „zahrnující“, „sestávající v podstatě z“ a „sestávající z“ nahrazen kterýmkoli ze zbývajících dvou. Termíny a výrazy, které zde byly použity, jsou používány jako výrazy popisné a nikoli omezující a při jejich použití neexistuje vyloučení jakýchkoli ekvivalentů uvedených a popsaných znaků nebo jejich částí, ale potvrzuje se, že v rozsahu nárokovaného vynálezu jsou možné různé modifikace. Je tedy nutno zdůraznit, že ačkoliv je vynález popsán konkrétně pomocí výhodných provedení a volitelných znaků, může se odborník uchýlit k modifikacím a variacím zde uvedených konceptů a tyto modifikace a variace se považují za spadající do rozsahu vynálezu, definovaného připojenými patentovými nároky.
-139CZ 303705 B6
Tam, kde jsou znaky nebo předměty vynálezu popisovány pomocí Markushových definic, je navíc odborníkovi zřejmé, že vynález je tím také definován pomocí každého jednotlivého člena nebo podskupiny takové Markushovy skupiny. Například je-li význam symbolu X definován jako vybraný ze skupiny sestávající z bromu, chloru a jodu, jsou tím plně popsány nároky pro X znamenající brom i nároky pro X znamenající chlor.
Další provedení spadají do rozsahu připojených patentových nároků.

Claims (17)

1. Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloučenina obecného vzorce 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde:
R1 má význam vybraný z vodíku, (Cj-C4)alkylu, -(CH2)rR16 a -C(O)NR8R9,
R2 má význam vybraný z vodíku, halogenu, (C]-Ci2)arylu a -S(O)2NR,3R14,
R3 má význam vybraný z vodíku, (Ci -C4)alkylu. (C]-C4)alkoxy, (Ci-Ci2)arylu, heteroarylu a-C(O)R15,
R4 je vodík,
R5 má význam vybraný z vodíku a (C|^C4)alkylu,
R6 je-C(O)R'°,
R7 má význam vybraný z vodíku, (Ci-C4)alkylu a (CYC^larylu.
R8 a R9 mají význam nezávisle vybraný z vodíku, (C,-C4)alkylu a (Ci-C]2)arylu,
R10 je -N(R11)(CH2)nR12, kde n je 1,2 nebo 3, R11 je vodík a R12 má význam vybraný z hydroxy, (C,-C4)alkoxy, -C(())R15. heteroarylu a -NR13R'4,
R13 a R14 mají význam nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z vodíku, (Cj-C.jjalkyJu. (C3-C8)cykloalkylu, (Ci-Onjarylu a heteroarylu, nebo
R13 a R14 mohou být spojeny a tvořit heterocykloskupinu,
R15 má význam vybraný z vodíku, hydroxy, (Ci-C4)alkoxy a aryloxy,
- 140CZ 303705 B6
R16 má význam vybraný z hydroxy a -C(())R!l a r je 2 nebo 3, a kde:
alkoxy označuje O-alkyl nebo O-cykloalkyl, aryloxy označuje O-(C|-Ci2)aryl nebo O-heteroaryl, heteroaryl označuje monocyklickou nebo kondenzovanou kruhovou skupinu s 5 až 12 členy kruhu, obsahující jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané zN, O nebo S a zbylé atomy kruhu jsou C, heterocykloskupina označuje nasycený kruhový zbytek se 3 až 8 atomy kruhu, kde jeden nebo dva atomy kruhu jsou tvořeny heteroatomy vybranými z N, O nebo S(O)n, kde n je celé číslo od 0 do 2, a zbylé atomy kruhu jsou C, kde jeden nebo dva C atomy jsou případně nahrazeny karbonylovou skupinou, alkyly, alkoxyskupiny a cykloalkylová skupiny jsou nesubstituované, arylové a heteroarylové skupiny jsou případně substituované jedním nebo dvěma substituenty, nezávisle vybranými z halogenu, (C|-C4)alkylu, trihalogen(C]-C4)alkylu, hydroxy, merkapto, kyano, jV-amido, mono- nebo di(C]-C4)alkylamino, karboxy a JV-sulfonamido, heterocykloskupina je případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty nezávisle vybranými z halogenu, (C]-C4)alkylu, -(C|-C4)alkyl-karboxy, -(Ci-C4)alkyl-esleru, hydroxylu a mono- nebo di(C[-C4)alkylaminoskupiny.
2. Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce 1, kde R13 a R14 mají význam nezávisle vybraný z vodíku, (C,-C4)alkylu, heteroarylu, a jsou-li spojeny, -(CH2)4- -(CH2)5- -(CH2)2-O4CH2)2- a 4CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
3. Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde n je 2 nebo 3 a R'2 je -NRi3R'4, kde R13 a R14 jsou nezávisle (C,-C4)alkyl.
4. Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde n je 2 nebo 3 a R12 je -NR13R14, kde R13 a R14 jsou spojeny do skupiny vybrané z -(CH2)4-(CH2)5-, -<CH2)2-O-(CH2)2- nebo-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-.
5. Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R1 je -C(O)NR8R9. kde R8 je vodík a R9 je aryl.
6. Sloučenina podle nároku 1, kterou je (2-diethylaminoethyl)amid 5-(5-fluor-2-oxo-l,2-dihydroindol-3-ylidenmethyI)-2,4-dimethyl-I//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny vzorce
- 141 CZ 303705 B6 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
7. Sloučenina podle nároku 1, kterou je L-malátová sůl (2—diethylaminoethyl)amidu 5-(5fluor-2-oxo-1,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4—dimethyl-1 //-pyrro1-3-karboxyIové kyse5 liny.
8. Sloučenina podle nároku 1, kterou je (2-pyrrolidin-l-ylethyl)amid 5-(5_fluor-2-oxo-l,2dihydroindol-<3Z)-ylidenmethyl)-2,4-dimethyl-l//-pyrrol-3-karboxylové kyseliny vzorce io nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
9. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje pyrrolem substituovanou 2-indolinonovou sloučeninu podle nároku 1 obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přijatelný nosič nebo excipient.
15
10. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu podle nároku 6 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přijatelný nosič nebo excipient.
11. Farmaceutická kompozice podle nároku 10, vyznačující se tím, že zahrnuje L-malátovou sůl (2-diethylaminoethyl)amidu 5-(5-fluor-2-oxo-l ,2-dihydroindol-3-ylidenmethyl)-2,4-<limethyl-1 //-pyrrol-3-karboxylové kyseliny.
20
12. Použití pyrrolem substituované 2-indolinonové sloučeniny podle nároku 1 nebo 6 nebo její farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu léčiva pro léčbu poruchy organismu související sproteinkinázou.
13. Použití podle nároku 12, kde uvedená porucha související s proteinkinázou je vybrána z poruchy související s receptorovou tyrosinkinázou, poruchy související s nereceptorovou tyro25 sinkinázou a poruchy související se serin-threoninkinázou.
14. Použití podle nároku 12, kde uvedená porucha související s proteinkinázou je vybrána z poruchy související s EGFR, poruchy související s PDGFR, poruchy související s IGFR a poruchy související s flk.
15. Použití podle nároku 12, kde uvedenou poruchou související s proteinkinázou je rakovina
30 vybraná z karcinomu skvamózních buněk, astrocytomu, Kápo s ího sarkomu, glioblastomu, plicní rakoviny, rakoviny močového měchýře, rakoviny hlavy a krku, melanomu, ovariální rakoviny, rakoviny prostaty, rakoviny prsu, malobuněěné rakoviny plic, gliomu, kolorektální rakoviny, gen i to ur i námi rakoviny a gastrointestinální rakoviny.
16. Použití podle nároku 12, kde uvedená porucha související s proteinkinázou je vybrána ze
35 skupiny sestávající z diabetů, autoimunitní poruchy, hyperproliferativní poruchy, restenózy, fibrózy, psoriázy, von Heppelovy-Linadaurovy nemoci, osteoartritidy, revmatoidní artritidy, angiogeneze, zánětlivé poruchy, imunologické poruchy a kardiovaskulární poruchy.
17. Použití podle nároku 12, kde uvedeným organismem je člověk.
CZ20023081A 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloucenina pro pouzití jako inhibitor proteinkináz a farmaceutická kompozice s jejím obsahem CZ303705B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18271000P 2000-02-15 2000-02-15
US21642200P 2000-07-06 2000-07-06
US24353200P 2000-10-27 2000-10-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20023081A3 CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
CZ303705B6 true CZ303705B6 (cs) 2013-03-27

Family

ID=27391578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20023081A CZ303705B6 (cs) 2000-02-15 2001-02-15 Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloucenina pro pouzití jako inhibitor proteinkináz a farmaceutická kompozice s jejím obsahem

Country Status (43)

Country Link
US (4) US6573293B2 (cs)
EP (1) EP1255752B1 (cs)
JP (1) JP3663382B2 (cs)
KR (1) KR100713960B1 (cs)
CN (1) CN1329390C (cs)
AR (1) AR034118A1 (cs)
AT (1) ATE369359T1 (cs)
AU (2) AU2001239770B2 (cs)
BE (1) BE2010C009I2 (cs)
BG (1) BG65764B1 (cs)
BR (2) BRPI0108394B8 (cs)
CA (1) CA2399358C (cs)
CO (1) CO5280092A1 (cs)
CR (2) CR20120007A (cs)
CY (3) CY1108032T1 (cs)
CZ (1) CZ303705B6 (cs)
DE (3) DE122008000002I1 (cs)
DK (1) DK1255752T3 (cs)
EA (1) EA005996B1 (cs)
ES (1) ES2290117T3 (cs)
FR (1) FR08C0002I2 (cs)
HK (1) HK1051188A1 (cs)
HR (1) HRP20020751B1 (cs)
HU (1) HU228979B1 (cs)
IL (1) IL151127A0 (cs)
IS (1) IS2491B (cs)
LT (1) LTC1255752I2 (cs)
LU (2) LU91407I2 (cs)
ME (1) ME00415B (cs)
MX (1) MXPA02008021A (cs)
MY (1) MY130363A (cs)
NL (2) NL300332I2 (cs)
NO (4) NO325532B1 (cs)
NZ (1) NZ520640A (cs)
PE (1) PE20011083A1 (cs)
PL (1) PL211834B1 (cs)
PT (1) PT1255752E (cs)
RS (1) RS50444B (cs)
SI (1) SI1255752T1 (cs)
SK (1) SK287142B6 (cs)
TW (1) TWI306860B (cs)
UA (1) UA73976C2 (cs)
WO (1) WO2001060814A2 (cs)

Families Citing this family (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6569868B2 (en) 1998-04-16 2003-05-27 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US20040226056A1 (en) * 1998-12-22 2004-11-11 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating neurological disorders and diseases
MXPA01007099A (es) 1999-01-13 2002-03-27 Univ New York State Res Found Metodo novedoso para disenar inhibidores de la proteina cinasa.
AR034118A1 (es) * 2000-02-15 2004-02-04 Sugen Inc Compuestos de 2-indolinonas sustituidas con pirroles inhibidoras de proteinquinasas; sus composiciones farmaceuticas e intermediarios de sintesis
US7030219B2 (en) 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
WO2001094312A2 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Sugen, Inc. Indolinone derivatives as protein kinase/phosphatase inhibitors
CA2414468A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
EP1506962B1 (en) 2000-10-20 2008-07-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Nitrogen-containing aromatic heterocycles
EP1349852A2 (en) * 2000-12-20 2003-10-08 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones
AR042586A1 (es) * 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
EP1247809A3 (en) * 2001-03-30 2003-12-17 Pfizer Products Inc. Triazine compounds useful as sorbitol dehydrogenase inhibitors
US6599902B2 (en) 2001-05-30 2003-07-29 Sugen, Inc. 5-aralkysufonyl-3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
WO2003002109A2 (en) * 2001-06-29 2003-01-09 Ab Science Use of tyrosine kinase inhibitors for treating autoimmune diseases
AR038957A1 (es) * 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
DK3168218T3 (en) 2001-08-15 2019-01-14 Pharmacia & Upjohn Co Llc Crystalline comprising an L-malic acid salt of N- [2- (DIETHYLAMINO) ETHYL] -5 - [(5-FLUOR-1,2-DIHYDRO-2-OXO-3H-INDOL-3-YLIDE) METHYL] -2,4 -DIMETHYL-1H-PYRROL-3-CARBOXAMIDE FOR USE AS A MEDICINE
JP2005506982A (ja) 2001-09-10 2005-03-10 スージェン・インコーポレーテッド キナーゼ阻害剤としての３−（４，５，６，７−テトラヒドロインドール−２−イルメチリデン）−２−インドリノン誘導体
CA2462950A1 (en) * 2001-10-10 2003-04-17 Sugen, Inc. 3-[4-(substituted heterocyclyl)-pyrrol-2-ylmethylidene]-2-indolinone derivatives as kinase inhibitors
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
WO2003035621A1 (en) * 2001-10-22 2003-05-01 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors, methods for designing them, and methods of using them
US20030080191A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Allen Lubow Method and apparatus for applying bar code information to products during production
TWI259081B (en) * 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
US6797825B2 (en) 2001-12-13 2004-09-28 Abbott Laboratories Protein kinase inhibitors
AU2002366245A1 (en) * 2001-12-17 2003-06-30 International Barcode Corporation Double-sided bar code doubling as a single bar code
US20050131733A1 (en) * 2001-12-17 2005-06-16 Allen Lubow Sealable individual bar coded packets
CA2470480C (en) 2001-12-27 2010-12-14 Theravance, Inc. Indolinone derivatives useful as protein kinase inhibitors
AU2003216282A1 (en) 2002-02-15 2003-09-09 Pharmacia And Upjohn Company Llc Process for preparing indolinone derivatives
AU2003233576A1 (en) * 2002-05-17 2003-12-02 Sugen, Inc. Novel biomarkers of tyrosine kinase inhibitor exposure and activity in mammals
ITMI20021620A1 (it) * 2002-07-23 2004-01-23 Novuspharma Spa Composto ad ativita' antitumorale
WO2004016211A2 (en) * 2002-08-08 2004-02-26 Vanderbilt University Pi3k antagonists as radiosensitizers
AU2003259713A1 (en) * 2002-08-09 2004-02-25 Theravance, Inc. Oncokinase fusion polypeptides associated with hyperproliferative and related disorders, nucleic acids encoding the same and methods for detecting and identifying the same
US20040121407A1 (en) * 2002-09-06 2004-06-24 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Regulation of the growth hormone/IGF-1 axis
HN2003000272A (es) * 2002-09-10 2008-07-29 Pharmacia Italia Spa Formulaciones que comprenden un compuesto de indolinona
CA2506546A1 (en) * 2002-11-15 2004-06-17 Exelixis, Inc. Kinase modulators
AR042042A1 (es) * 2002-11-15 2005-06-08 Sugen Inc Administracion combinada de una indolinona con un agente quimioterapeutico para trastornos de proliferacion celular
US7452913B2 (en) * 2003-02-24 2008-11-18 Pharmacia & Upjohn Company Polymorphs of pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US20040209937A1 (en) * 2003-02-24 2004-10-21 Sugen, Inc. Treatment of excessive osteolysis with indolinone compounds
EA010727B1 (ru) 2003-02-26 2008-10-30 Суджен, Инк. Аминогетероарильные соединения в качестве ингибиторов протеинкиназ
US20040266843A1 (en) * 2003-03-07 2004-12-30 Sugen, Inc. Sulfonamide substituted indolinones as inhibitors of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)
US7157577B2 (en) * 2003-03-07 2007-01-02 Sugen Inc. 5-sulfonamido-substituted indolinone compounds as protein kinase inhibitors
EP1604665B1 (en) * 2003-03-10 2011-05-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. C-kit kinase inhibitor
US20050043233A1 (en) 2003-04-29 2005-02-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combinations for the treatment of diseases involving cell proliferation, migration or apoptosis of myeloma cells or angiogenesis
DE10334582A1 (de) * 2003-07-28 2005-02-24 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Maleinsäureanhydrid
WO2005023765A1 (en) * 2003-09-11 2005-03-17 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method for catalyzing amidation reactions by the presence of co2
RU2319702C2 (ru) * 2003-10-02 2008-03-20 Фармация Энд Апджон Компани Ллс Негигроскопическая кристаллическая малеатная соль 5-[(z)-(5-фтор-2-оксо-1,2-дигидро-3h-индол-3-илиден)метил]-n-[(2s)-2-гидрокси-3-морфолин-4-илпропил]-2,4-диметил-1h-пиррол-3-карбоксамида, фармацевтическая композиция и способ лечения рака
PL1680140T3 (pl) * 2003-10-16 2011-11-30 Imclone Llc Inhibitory receptora-1 czynnika wzrostu fibroblastów i związane z nim sposoby leczenia
JP4890255B2 (ja) 2003-11-07 2012-03-07 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 改良された薬物特性を有するキノリノン化合物の薬学的に受容可能な塩
CN100450998C (zh) 2003-11-11 2009-01-14 卫材R&D管理有限公司 脲衍生物的制备方法
CA2547066A1 (en) * 2003-11-26 2005-06-16 The Scripps Research Institute Advanced indolinone based protein kinase inhibitors
US20050171182A1 (en) * 2003-12-11 2005-08-04 Roger Briesewitz Methods and compositions for use in the treatment of mutant receptor tyrosine kinase driven cellular proliferative diseases
US20050152943A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Medtronic Vascular, Inc. Medical devices to treat or inhibit restenosis
WO2005118543A1 (ja) * 2004-06-03 2005-12-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. キナーゼ阻害薬およびその用途
EP1765313A2 (en) 2004-06-24 2007-03-28 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Compounds for immunopotentiation
SE0401790D0 (sv) * 2004-07-07 2004-07-07 Forskarpatent I Syd Ab Tamoxifen response in pre- and postmenopausal breast cancer patients
US20060009510A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Method of synthesizing indolinone compounds
CA2578066C (en) * 2004-08-26 2011-10-11 Pfizer Inc. Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
WO2006030826A1 (ja) 2004-09-17 2006-03-23 Eisai R & D Management Co., Ltd. 医薬組成物
CN100432071C (zh) * 2004-11-05 2008-11-12 中国科学院上海药物研究所 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途
GT200500321A (es) 2004-11-09 2006-09-04 Compuestos y composiciones como inhibidores de proteina kinase.
NZ561138A (en) * 2005-03-23 2009-06-26 Pfizer Prod Inc Anti-CTLA4 antibody and indolinone combination therapy for treatment of cancer
EP2444419A1 (en) 2005-04-26 2012-04-25 Pfizer Inc. P-Cadherin antibodies
MX2007014087A (es) * 2005-05-12 2008-02-07 Pfizer Combinaciones y procedimientos para usar un compuesto de indolinona.
DK1922307T3 (da) 2005-05-18 2012-04-02 Array Biopharma Inc Heterocykliske inhibitorer af MEK og fremgangsmåder til anvendelse heraf
CA2609353C (en) 2005-05-23 2015-04-28 Novartis Ag Crystalline and other forms of 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-quinolin-2-one lactic acid salts
BRPI0611419A2 (pt) * 2005-05-26 2010-09-08 Scripps Research Inst composto, sal, tautÈmero ou pró-fármaco, método para a modulação da atividade catalìtica de uma proteìna cinase e processo para a sìntese de uma pirrolil-indolinona
US20100105031A1 (en) * 2005-08-01 2010-04-29 Esai R & D Management Co., Ltd. Method for prediction of the efficacy of vascularization inhibitor
WO2007015578A1 (ja) 2005-08-02 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を検定する方法
JP5161777B2 (ja) 2005-09-07 2013-03-13 アムジェン フレモント インク． アクチビン受容体様キナーゼ−１に対するヒトモノクローナル抗体
US20080275101A1 (en) 2005-09-19 2008-11-06 Pfizer Inc. Solid Salt Forms Of A Pyrrole Substituted 2-Indolinone
JPWO2007052849A1 (ja) 2005-11-07 2009-04-30 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 血管新生阻害物質とｃ−ｋｉｔキナーゼ阻害物質との併用
UA96139C2 (uk) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
CN101389331A (zh) * 2005-12-29 2009-03-18 斯克里普斯研究学院 基于吲哚满酮的氨基酸衍生物的蛋白激酶抑制剂
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CN101007801A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 上海恒瑞医药有限公司 吡咯取代的2－二氢吲哚酮衍生物、其制法与医药上的用途
AR060358A1 (es) 2006-04-06 2008-06-11 Novartis Vaccines & Diagnostic Quinazolinas para la inhibicion de pdk 1
TW200813091A (en) 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
WO2007124288A1 (en) 2006-04-19 2007-11-01 Novartis Ag Indazole compounds and methods for inhibition of cdc7
UA91129C2 (ru) 2006-05-09 2010-06-25 Пфайзер Продактс Инк. Производные циклоалкиламинокислот и фармацевтическая композиция, которая их содержит
CN101443009A (zh) * 2006-05-18 2009-05-27 卫材R&D管理有限公司 针对甲状腺癌的抗肿瘤剂
DE102006024834B4 (de) * 2006-05-24 2010-07-01 Schebo Biotech Ag Neue Indol-Pyrrol-Derivate und deren Verwendungen
US20090203693A1 (en) * 2006-06-29 2009-08-13 Eisai R & D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for liver fibrosis
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
CA2656836A1 (en) 2006-07-13 2008-01-17 Zymogenetics, Inc. Interleukin 21 and tyrosine kinase inhibitor combination therapy
CL2007002225A1 (es) 2006-08-03 2008-04-18 Astrazeneca Ab Agente de union especifico para un receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (pdgfr-alfa); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped que la comprenden; conjugado que comprende al agente; y uso del agente de un
AR062207A1 (es) 2006-08-04 2008-10-22 Takeda Pharmaceutical Derivados de imidazopiridazina inhibidores de quinasas utiles para prevenir y/o tratar el cancer.
RU2445312C2 (ru) 2006-08-23 2012-03-20 Кудос Фармасьютиклз Лимитед ПРОИЗВОДНЫЕ 2-МЕТИЛМОРФОЛИН ПИРИДО-, ПИРАЗО- И ПИРИМИДО-ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ mTOR
CN101511793B (zh) * 2006-08-28 2011-08-03 卫材R&D管理有限公司 针对未分化型胃癌的抗肿瘤剂
AU2007294686B2 (en) 2006-09-15 2013-10-31 Equinox Sciences, Llc Kinase inhibitor compounds
BRPI0718029A2 (pt) 2006-11-06 2013-11-26 Supergen Inc Derivados de imidazo(1,2-b)piridazina e pirazolo(1,5-a)pirimidina e seu uso como inibidores da proteína cinase
CN101535302A (zh) * 2006-11-06 2009-09-16 株式会社泰丽巴镠斯 新型羟基吲哚衍生物
ATE547411T1 (de) 2006-12-04 2012-03-15 Jiangsu Simcere Pharmaceutical R & D Co Ltd 3-pyrrolo-cyclohexylen-2-dihydroindolinonderiva e und anwendungen davon
JP5319306B2 (ja) 2007-01-29 2013-10-16 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 未分化型胃癌治療用組成物
MX2009008386A (es) 2007-02-06 2009-10-16 Pfizer Derivados de 2-amino-5,7-dihidro-6h-pirrolo[3,4-d] pirimidina como inhibidores de proteinas de choque termico-90 para tratar cancer.
US8044056B2 (en) 2007-03-20 2011-10-25 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Adenine compound
US20090004213A1 (en) * 2007-03-26 2009-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Combination therapy using active immunotherapy
US20090042906A1 (en) * 2007-04-26 2009-02-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods for treating cancers associated with constitutive egfr signaling
WO2008138184A1 (fr) 2007-05-14 2008-11-20 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co.Ltd. Dérivés de pyrrolo-azacycles, leur procédé de fabrication et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de protéine kinases
WO2008145398A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Pfizer Italia S.R.L. 4-arylpyrrole substituted 2-indoline derivatives active as protein kinase inhibitors
JP5352476B2 (ja) 2007-06-05 2013-11-27 武田薬品工業株式会社 キナーゼ阻害剤としての二環式複素環化合物
US8324395B2 (en) 2007-08-23 2012-12-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound and use thereof
US20090062368A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Protia, Llc Deuterium-enriched sunitinib
US8299106B2 (en) * 2007-09-06 2012-10-30 Boston Biomedical, Inc. Compositions of kinase inhibitors and their use for treatment of cancer and other diseases related to kinases
CA2701057C (en) 2007-10-11 2015-03-24 Astrazeneca Ab Pyrrolo[2,3-d]pyrimidin derivatives as protein kinase b inhibitors
CN101848895B (zh) 2007-11-09 2013-10-23 卫材R&D管理有限公司 血管新生抑制物质和抗肿瘤性铂络合物的组合使用
CA2699306A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Sunitinib hemi-l-malate, polymorphs and preparation thereof, polymorphs of racemic sunitinib malate, compositins containing sunitinib base and malic acid and preparation thereof
US20100256392A1 (en) * 2007-11-21 2010-10-07 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphs of sunitinib base and processes for preparation thereof
WO2009074862A1 (en) * 2007-12-12 2009-06-18 Medichem S.A. Polymorphic forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone
MX2010006800A (es) 2007-12-19 2010-10-05 Genentech Inc 5-anilinoimidazopiridinas y metodos de uso de las mismas.
JP2011506560A (ja) 2007-12-20 2011-03-03 ノバルティス アーゲー Ｐｉ３キナーゼ阻害剤として用いられるチアゾール誘導体
NZ586575A (en) 2007-12-21 2012-03-30 Genentech Inc Azaindolizines and methods of use
MX2010008187A (es) * 2008-01-29 2010-08-10 Eisai R&D Man Co Ltd Uso combinado de inhibidor de angiogenesis y taxano.
EP2113248A1 (en) 2008-04-29 2009-11-04 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2-,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US20100310668A1 (en) * 2008-02-13 2010-12-09 Ratiopharm Gmbh Pharmaceutical compositions comprising n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide
EP2090306A1 (en) 2008-02-13 2009-08-19 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions comprising N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
CN101255154B (zh) * 2008-02-18 2011-09-07 靳广毅 一种取代的2-吲哚啉酮衍生物和制备方法及其应用
WO2009104021A2 (en) * 2008-02-21 2009-08-27 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs and processes for their preparation
EP2098521A1 (en) 2008-03-06 2009-09-09 Ratiopharm GmbH Crystal forms of N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrolle-3-carboxamide and methods for their prepparation
US20090247767A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-01 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Processes for preparing sunitinib and salts thereof
WO2009128083A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Natco Pharma Limited Novel polymorphic forms of sunitinib base
US8158656B2 (en) * 2008-05-16 2012-04-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. 2-indolinone derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
WO2009140928A1 (zh) * 2008-05-23 2009-11-26 上海医药工业研究院 二氢吲哚酮衍生物
WO2009154697A2 (en) * 2008-05-28 2009-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Disc-1 pathway activators in the control of neurogenesis
EP2313371B1 (en) * 2008-06-13 2012-08-15 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
KR20110036055A (ko) * 2008-06-23 2011-04-06 낫코 파마 리미티드 고순도의 수니티닙 및 이의 약학적으로 허용가능한 염의 개선된 제조 방법
EP2138167A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-30 ratiopharm GmbH Pharmaceutical composition comprising N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
WO2009156837A2 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Medichem, S.A. Amorphous form of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
CN102137866A (zh) * 2008-06-30 2011-07-27 赛林药物股份有限公司 羟吲哚化合物
AU2009269149B2 (en) 2008-06-30 2016-03-17 Mesoblast, Inc. Treatment of eye diseases and excessive neovascularization using a combined therapy
DE102008031038A1 (de) 2008-06-30 2009-12-31 Alexander Priv.-Doz. Dr. Dömling Sutent zur Anwendung in der Organtransplantation
EP2318364A2 (en) * 2008-07-02 2011-05-11 Generics [UK] Limited Preparation of 3-pyrrole substituted 2-indolinone derivatives
US20110257237A1 (en) * 2008-07-10 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Process for the preparation of crystalline forms of sunitinib malate
KR20110036588A (ko) 2008-07-24 2011-04-07 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 수니티닙 아세테이트 및 이의 다형을 통한 수니티닙 말레이트의 제조 방법
EP2342195B1 (en) 2008-07-24 2014-09-10 Medichem, S.A. Crystalline forms of a 3-pyrrole substituted 2-indolinone malate salt
WO2010017541A2 (en) * 2008-08-08 2010-02-11 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
AU2009288730B2 (en) 2008-08-25 2013-06-20 Amplimmune, Inc. Compositions of PD-1 antagonists and methods of use
AU2009286521A1 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel polymorphs of sunitinib and processes for their preparation
US20110223188A1 (en) * 2008-08-25 2011-09-15 Solomon Langermann Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer
WO2010023473A2 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Generics [Uk] Limited Novel crystalline form and processes for its preparation
KR20110066927A (ko) * 2008-09-05 2011-06-17 임페리얼 이노베이션스 리미티드 생체 내 영상화제로서 사용하기 위한 이사틴 유도체
KR20110057244A (ko) 2008-09-19 2011-05-31 메디뮨 엘엘씨 Ｄｌｌ4에 대한 항체 및 이의 용도
EP2350056A1 (en) * 2008-10-10 2011-08-03 Medichem, S.A. Process for preparing a 3-pyrrole subsituted 2-indolinone malate salt
EP2181991A1 (en) * 2008-10-28 2010-05-05 LEK Pharmaceuticals D.D. Novel salts of sunitinib
EP2186809A1 (en) * 2008-11-13 2010-05-19 LEK Pharmaceuticals D.D. New crystal form of sunitinib malate
US20100222371A1 (en) * 2008-11-20 2010-09-02 Children's Medical Center Corporation Prevention of surgical adhesions
JP5579619B2 (ja) 2008-12-01 2014-08-27 武田薬品工業株式会社 複素環化合物およびその用途
JO3101B1 (ar) 2008-12-02 2017-09-20 Takeda Pharmaceuticals Co مشتقات بنزوثيازول كعوامل مضادة للسرطان
UY32351A (es) 2008-12-22 2010-07-30 Astrazeneca Ab Compuestos de pirimidinil indol para uso como inhibidores de atr
EP2379595A2 (en) 2008-12-23 2011-10-26 AstraZeneca AB Targeted binding agents directed to 5 1 and uses thereof
EP2373643A4 (en) 2009-01-02 2013-08-07 Hetero Research Foundation NEW SUNITINIB MALATE POLYMORPHS
PL2387563T5 (pl) 2009-01-16 2023-03-13 Exelixis, Inc. Sól jabłczanowa N-(4-{[6,7-bis(metyloksy)chinolin-4-ylo]oksy}fenylo-N′-(4-fluorofenylo)cykloproano-1,1-dikarboksyamidu oraz jej krystaliczne postaci do leczenia raka
SG2014009138A (en) 2009-02-05 2014-03-28 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
CN102307875A (zh) 2009-02-09 2012-01-04 苏伯俭股份有限公司 吡咯并嘧啶基axl激酶抑制剂
US9265764B2 (en) * 2009-02-27 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Uses of chemicals to modulate GSK-3 signaling for treatment of bipolar disorder and other brain disorders
TW201035088A (en) 2009-02-27 2010-10-01 Supergen Inc Cyclopentathiophene/cyclohexathiophene DNA methyltransferase inhibitors
ES2529205T3 (es) 2009-03-13 2015-02-17 Cellzome Limited Derivados de pirimidina como inhibidores de mTOR
WO2010108503A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Life & Brain Gmbh Promotion of neuronal integration in neural stem cell grafts
WO2010118986A1 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Cellzome Limited Fluoro substituted pyrimidine compounds as jak3 inhibitors
WO2010120386A1 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Nektar Therapeutics Oligomer-protein tyrosine kinase inhibitor conjugates
EP2255792A1 (en) 2009-05-20 2010-12-01 Ratiopharm GmbH Pharmaceutical compositions for N-[2-(Diethylamino)ethyl]5-[(fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indole-3-ylidene) methyl]-2,4-dimenthyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8211901B2 (en) 2009-05-22 2012-07-03 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Naphthamide derivatives as multi-target protein kinase inhibitors and histone deacetylase inhibitors
EP2264027A1 (en) * 2009-05-27 2010-12-22 Ratiopharm GmbH Process for the preparation of N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluoro-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamide
US8389580B2 (en) 2009-06-02 2013-03-05 Duke University Arylcyclopropylamines and methods of use
CN101906076B (zh) 2009-06-04 2013-03-13 深圳微芯生物科技有限责任公司 作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的萘酰胺衍生物、其制备方法及应用
US8293753B2 (en) 2009-07-02 2012-10-23 Novartis Ag Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas
WO2011004200A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Generics [Uk] Limited Novel pyrrole derivatives
FR2948940B1 (fr) * 2009-08-04 2011-07-22 Servier Lab Nouveaux derives dihydroindolones, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2011029807A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Cellzome Limited Ortho substituted pyrimidine compounds as jak inhibitors
CA2774634A1 (en) 2009-09-16 2011-03-24 Ranbaxy Laboratories Limited Salts of sunitinib
WO2011048082A1 (en) 2009-10-20 2011-04-28 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as jak inhibitors
US20120271056A1 (en) 2009-11-12 2012-10-25 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form i of l-malic acid salt of sunitinib
US8916716B2 (en) 2009-11-19 2014-12-23 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of crystalline form II of L-malic acid salt of sunitinib
SI3279215T1 (sl) 2009-11-24 2020-07-31 Medimmune Limited Usmerjena vezavna sredstva proti B7-H1
WO2011068233A1 (en) 2009-12-03 2011-06-09 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Imidazoquinolines which act via toll - like receptors (tlr)
WO2011095802A1 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Generics [Uk] Limited Hplc method for analyzing sunitinib
WO2011100325A2 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Sicor Inc. Polymorphs of sunitinib salts
AU2011215900A1 (en) 2010-02-10 2012-07-26 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
JP5770751B2 (ja) 2010-02-22 2015-08-26 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン系のＰＩ３Ｋデルタ阻害化合物および使用方法
WO2011104555A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Generics [Uk] Limited Novel process
EP2542536B1 (en) 2010-03-04 2015-01-21 Cellzome Limited Morpholino substituted urea derivatives as mtor inhibitors
EP2542550A1 (en) 2010-03-04 2013-01-09 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the direct preparation of malic acid salt of sunitinib
CN102858739A (zh) * 2010-03-10 2013-01-02 斯索恩有限公司 酰胺化吡咯甲酸酯化合物的方法
AU2011228765A1 (en) 2010-03-18 2012-10-11 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of malic acid salt of sunitinib
US9162981B2 (en) 2010-03-23 2015-10-20 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of neurodegenerative disease
WO2011128699A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Generics [Uk] Limited Novel process
MX2012012328A (es) 2010-04-30 2013-05-06 Cellzome Ltd Compuestos pirazol como inhibidores de jak.
WO2011138565A1 (fr) 2010-05-05 2011-11-10 Biorebus Association pharmaceutique contenant l'acide lipoïque, l'acide hydroxycitrique et une somatostatine a titre de principes actifs
EP2392324A1 (en) 2010-06-01 2011-12-07 Societe De Coordination De Recherches Therapeutiques Rhenium complexes and their pharmaceutical use
SA111320519B1 (ar) 2010-06-11 2014-07-02 Astrazeneca Ab مركبات بيريميدينيل للاستخدام كمثبطات atr
US9012458B2 (en) 2010-06-25 2015-04-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antitumor agent using compounds having kinase inhibitory effect in combination
WO2012000970A1 (en) 2010-07-01 2012-01-05 Cellzome Limited Triazolopyridines as tyk2 inhibitors
WO2012006503A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AR082418A1 (es) 2010-08-02 2012-12-05 Novartis Ag Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico
US9040545B2 (en) 2010-08-20 2015-05-26 Cellzome Limited Heterocyclyl pyrazolopyrimidine analogues as selective JAK inhibitors
US8426418B2 (en) 2010-08-27 2013-04-23 CollabRx Inc. Method to treat melanoma in BRAF inhibitor-resistant subjects
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
WO2012058780A1 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Scinopharm (Kunshan) Biochemical Technology Co., Ltd. Processes for the preparation of 3-(pyrrol-2-yl)methylene)-2-pyrrolones using 2-silyloxy-pyrroles
WO2012059941A1 (en) * 2010-11-04 2012-05-10 Ind-Swift Laboratories Limited Process for preparation of sunitinib malate and salts thereof
EP2638018A1 (en) 2010-11-09 2013-09-18 Cellzome Limited Pyridine compounds and aza analogues thereof as tyk2 inhibitors
JP2014503500A (ja) 2010-11-18 2014-02-13 シンタ ファーマスーティカルズ コーポレーション 低酸素状態に基づく酸素感受性薬剤による治療に適した被験体の事前選択
CA2818612C (en) 2010-11-19 2020-12-29 Forsight Vision4, Inc. Therapeutic agent formulations for implanted devices
TWI410425B (zh) 2010-12-03 2013-10-01 Lilly Co Eli 唑并［５，４－ｂ］吡啶－５－基化合物
US9827326B2 (en) 2010-12-23 2017-11-28 Nektar Therapeutics Polymer-sunitinib conjugates
JP6009457B2 (ja) 2010-12-23 2016-10-19 ネクター セラピューティクス ポリマー−デスエチルスニチニブコンジュゲート
AP2013007043A0 (en) 2011-01-31 2013-08-31 Novartis Ag Novel heterocyclic derivatives
SG191965A1 (en) 2011-02-15 2013-08-30 Immunogen Inc Methods of preparation of conjugates
CA2827171C (en) 2011-02-17 2019-04-09 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Fak inhibitors
EP2675794B1 (en) 2011-02-17 2019-02-13 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited Selective fak inhibitors
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
US8630703B2 (en) 2011-03-09 2014-01-14 Technion Research & Development Foundation Limited Treatment utilizing hydrophobic weak bases chemotherapeutic agents and illumination
CN102115469A (zh) * 2011-03-21 2011-07-06 浙江大学 吲哚啉-2-酮类衍生物的制备和用途
JP2014510122A (ja) 2011-04-04 2014-04-24 セルゾーム リミテッド ｍＴＯＲ阻害剤としてのジヒドロピロロピリミジン誘導体
SG193527A1 (en) 2011-04-08 2013-10-30 Beta Pharma Inc New indolinone protein kinase inhibitors
CA2828946C (en) 2011-04-18 2016-06-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012143320A1 (en) 2011-04-18 2012-10-26 Cellzome Limited (7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-yl)amine compounds as jak3 inhibitors
CN102898402B (zh) * 2011-04-26 2016-01-20 北京大学 一种苯并异硒唑酮修饰的吡咯甲酸酯取代的吲哚酮类化合物及其应用
EP3444363B1 (en) 2011-06-03 2020-11-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for prediciting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
EP3812387A1 (en) 2011-07-21 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
US20140179664A1 (en) 2011-07-28 2014-06-26 Cellzome Limited Heterocyclyl Pyrimidine Analogues As JAK Inhibitors
WO2013017479A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
WO2013017480A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as jak inhibitors
EP2739252A4 (en) 2011-08-05 2015-08-12 Forsight Vision4 Inc SMALL MOLECULE ADMINISTRATION USING AN IMPLANTABLE THERAPEUTIC DEVICE
EP2760863A1 (en) 2011-09-20 2014-08-06 Cellzome Limited Pyrazolo[4,3-c]pyridine derivatives as kinase inhibitors
US9175011B2 (en) 2011-09-21 2015-11-03 Cellzone Limited Morpholino substituted urea or carbamate derivatives as MTOR inhibitors
ES2592219T3 (es) 2011-10-07 2016-11-28 Cellzome Limited Derivados de {(4-(4-morfolino-dihidrotieno[3,4-d]pirimidin-2-il)aril}urea o carbamato como inhibidores de mTOR
CN102499917B (zh) 2011-10-25 2014-12-17 澳门大学 吲哚酮类化合物在制备神经保护药物中的应用
JP6059731B2 (ja) 2011-10-28 2017-01-11 ノバルティス アーゲー 新規プリン誘導体および疾患の処置におけるその使用
CN103130774B (zh) * 2011-11-22 2016-06-22 齐鲁制药有限公司 具有酪氨酸激酶抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN103127096B (zh) * 2011-12-02 2015-11-25 杨子娇 吡咯基取代的吲哚类化合物在治疗青光眼病的应用
US20130178520A1 (en) 2011-12-23 2013-07-11 Duke University Methods of treatment using arylcyclopropylamine compounds
AU2012357038B2 (en) 2011-12-23 2016-05-12 Cellzome Limited Pyrimidine-2,4-diamine derivatives as kinase inhibitors
CN102491932A (zh) * 2011-12-26 2012-06-13 天津科技大学 一种3-吲哚啉酮类衍生物及其制备方法及其应用
ES2709110T3 (es) 2012-03-23 2019-04-15 Laurus Labs Ltd Un proceso mejorado para la preparación de sunitinib y sus sales de adición de ácido
WO2013158367A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Annji Pharmaceutical Co., Ltd. Cyclopropanecarboxylate esters of purine analogues
PL399027A1 (pl) 2012-04-27 2013-10-28 Instytut Farmaceutyczny Sposób otrzymywania N-[2-(dietylamino)etylo]-5-formylo-2,4-dimetylo-1H-pirolo-3-karboksyamidu o wysokiej czystosci i jego zastosowanie do wytwarzania sunitynibu
CN102653521B (zh) * 2012-04-27 2014-08-06 首都师范大学 吲哚-2-酮的哌嗪硫代甲酰肼衍生物及其制备方法和用途
EP3563865A3 (en) 2012-05-04 2019-12-04 Pfizer Inc Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
CA2872526A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Novartis Ag Dosage regimen for a pi-3 kinase inhibitor
BR112014030278A2 (pt) 2012-06-08 2017-06-27 Sutro Biopharma Inc anticorpo, e, composição.
EP3135690A1 (en) 2012-06-26 2017-03-01 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
US9238644B2 (en) 2012-08-17 2016-01-19 Cancer Therapeutics Crc Pty Limited VEGFR3 inhibitors
EP2887965A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
KR102182800B1 (ko) 2012-08-31 2020-11-25 서트로 바이오파마, 인크. 아지도 기를 포함하는 변형된 아미노산
WO2014041349A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Tetrahydropyran-4-ylethylamino- or tetrahydropyranyl-4-ethyloxy-pyrimidines or -pyridazines as isoprenylcysteincarboxymethyl transferase inhibitors
WO2014045101A1 (en) 2012-09-21 2014-03-27 Cellzome Gmbh Tetrazolo quinoxaline derivatives as tankyrase inhibitors
JP6243918B2 (ja) 2012-10-16 2017-12-06 トレロ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｐｋｍ２調節因子およびそれらの使用方法
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
CA2889866A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Eisai R&D Management Co., Ltd. Amorphous form of quinoline derivative, and method for producing same
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
EP2961435B1 (en) 2013-02-28 2019-05-01 ImmunoGen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
EP2970206A1 (en) * 2013-03-13 2016-01-20 Boston Biomedical, Inc. 3-(aryl or heteroaryl) methyleneindolin-2-one derivatives as inhibitors of cancer stem cell pathway kinases for the treatment of cancer
US9968603B2 (en) 2013-03-14 2018-05-15 Forsight Vision4, Inc. Systems for sustained intraocular delivery of low solubility compounds from a port delivery system implant
CA2905993C (en) 2013-03-14 2022-12-06 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Substituted 4-amino-pyrimidinyl-2-amino-phenyl derivatives and pharmaceutical compositions thereof for use as jak2 and alk2 inhibitors
AR095443A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Fundación Centro Nac De Investig Oncológicas Carlos Iii Heterociclos condensados con acción sobre atr
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
CN104119321B (zh) * 2013-04-28 2017-09-08 齐鲁制药有限公司 二氢吲哚酮衍生物的二马来酸盐及其多晶型物
NZ714049A (en) 2013-05-14 2020-05-29 Eisai R&D Man Co Ltd Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of endometrial cancer subjects to lenvatinib compounds
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
FR3008411B1 (fr) * 2013-07-12 2015-07-03 Servier Lab Nouveau sel de la 3-[(3-{[4-(4-morpholinylmethyl)-1h-pyrrol-2-yl]methylene}-2-oxo-2,3-dihydro-1h-indol-5-yl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione, sa preparation, et les formulations qui le contiennent
DK3039424T3 (da) 2013-08-28 2020-08-31 Crown Bioscience Inc Taicang Genekspressionssignaturer, der er prædiktive for et individs respons på en multikinaseinhibitor, og fremgangsmåder til anvendelse af disse
EP3055298B1 (en) 2013-10-11 2020-04-29 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CA2838585A1 (en) 2013-10-18 2015-04-18 Hari Babu Matta An ascorbic acid salt of sunitinib
US9604968B2 (en) 2013-10-18 2017-03-28 Sun Pharmaceutical Industries Limited Pure crystalline Form II of L-malic acid salt of sunitinib and processes for its preparation
PE20171142A1 (es) 2013-11-01 2017-08-10 Pfizer Vectores para expresion de antigenos asociados a prostata
US20170000778A1 (en) 2013-12-06 2017-01-05 Emmanuelle di Tomaso Dosage regimen for an alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
CN104829596B (zh) * 2014-02-10 2017-02-01 石家庄以岭药业股份有限公司 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途
CN103923014A (zh) * 2014-05-05 2014-07-16 宁夏宝马药业有限公司 环肌酸制备方法
EP3177289A4 (en) 2014-08-08 2018-03-21 Forsight Vision4, Inc. Stable and soluble formulations of receptor tyrosine kinase inhibitors, and methods of preparation thereof
CN106660964B (zh) 2014-08-28 2021-09-03 卫材R&D管理有限公司 高纯度喹啉衍生物及其生产方法
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
WO2016114322A1 (ja) 2015-01-13 2016-07-21 国立大学法人京都大学 筋萎縮性側索硬化症の予防及び／又は治療剤
US20180028662A1 (en) 2015-02-25 2018-02-01 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for Suppressing Bitterness of Quinoline Derivative
KR20170122809A (ko) 2015-03-04 2017-11-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
EP3611506B1 (en) 2015-04-20 2021-11-17 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling
WO2016184793A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating a patient with vegfr inhibitor-resistant metastatic renal cell carcinoma
CA2985804A1 (en) 2015-05-18 2016-11-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs having increased bioavailability
GB201510019D0 (en) 2015-06-09 2015-07-22 Cancer Therapeutics Crc Pty Ltd Compounds
RU2729936C2 (ru) 2015-06-16 2020-08-13 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Противораковое средство
US10568887B2 (en) 2015-08-03 2020-02-25 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies for treatment of cancer
EA037327B1 (ru) 2015-09-22 2021-03-12 Грейбуг Вижн, Инк. Соединения и композиции для лечения глазных расстройств
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
JP2018532750A (ja) 2015-11-02 2018-11-08 ノバルティス アーゲー ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤の投薬レジメン
CA3004886A1 (en) 2015-11-12 2017-05-18 Graybug Vision, Inc. Aggregating microparticles for medical therapy
CN109069664B (zh) 2016-01-27 2022-05-13 苏特罗生物制药公司 抗cd74抗体偶联物，包含抗cd74抗体偶联物的组合物以及抗cd74抗体偶联物的使用方法
JP2019508405A (ja) 2016-02-08 2019-03-28 ヴィトリサ セラピューティクス， インコーポレイテッド 改良された硝子体内半減期を有する組成物およびその使用
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
CN107459519A (zh) 2016-06-06 2017-12-12 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶哌啶环衍生物及其制备方法和应用
US10870694B2 (en) 2016-09-02 2020-12-22 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating B cell disorders
WO2018060833A1 (en) 2016-09-27 2018-04-05 Novartis Ag Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib
EA201991071A1 (ru) 2016-10-28 2019-11-29 Композиции и способы для лечения ezh2-опосредованного рака
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
KR102495436B1 (ko) 2016-12-05 2023-02-02 에이프로스 테라퓨틱스, 인크. 산성 기를 함유하는 피리미딘 화합물
US10786502B2 (en) 2016-12-05 2020-09-29 Apros Therapeutics, Inc. Substituted pyrimidines containing acidic groups as TLR7 modulators
EP3551185A4 (en) 2016-12-08 2021-07-14 Icahn School of Medicine at Mount Sinai COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF CDK4 / 6 MEDIATED CANCER
CA3047557A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Profiling peptides and methods for sensitivity profiling
CN106916143B (zh) * 2017-03-14 2019-09-27 哈尔滨医科大学 一种预防和治疗冠心病的药物及其应用
CA3056923A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Graybug Vision, Inc. Drugs and compositions for the treatment of ocular disorders
EP3621654A4 (en) 2017-05-10 2021-02-17 Graybug Vision, Inc. PROLONGED-RELEASE MICROPARTICLES AND SUSPENSIONS OF THESE INTENDED FOR MEDICAL THERAPY
US20200207859A1 (en) 2017-07-26 2020-07-02 Sutro Biopharma, Inc. Methods of using anti-cd74 antibodies and antibody conjugates in treatment of t-cell lymphoma
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
WO2019055909A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 Sutro Biopharma, Inc. ALPHA ANTI-FOLATE ANTIBODY-RECEPTOR CONJUGATES AND USES THEREOF
WO2019075367A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Tolero Pharmaceuticals, Inc. PKM2 ACTIVATORS IN COMBINATION WITH OXYGEN REACTIVE SPECIES FOR THE TREATMENT OF CANCER
NL2019801B1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Univ Leiden Delivery vectors
EP3762381A4 (en) 2018-03-06 2022-01-05 Icahn School of Medicine at Mount Sinai SERINE THREONINE KINASE (AKT) DEGRADATION / INTERRUPTION COMPOUNDS AND METHODS OF USE
EP3539536A1 (en) 2018-03-15 2019-09-18 MH10 Spolka z ograniczona odpowiedzialnoscia A pharmaceutical composition of sunitinib or its salt thereof in its polymorphic form i
WO2020216450A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Synthon B.V. Pharmaceutical composition comprising amorphous sunitinib
CN112513031A (zh) 2018-06-04 2021-03-16 阿普罗斯治疗公司 可用于治疗与tlr7调节相关的疾病的含酸性基团的嘧啶化合物
GB201810092D0 (en) 2018-06-20 2018-08-08 Ctxt Pty Ltd Compounds
GB201810581D0 (en) 2018-06-28 2018-08-15 Ctxt Pty Ltd Compounds
CN112512597A (zh) 2018-07-26 2021-03-16 大日本住友制药肿瘤公司 用于治疗与acvr1表达异常相关的疾病的方法以及用于此的acvr1抑制剂
US20220047716A1 (en) 2018-09-17 2022-02-17 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
AU2019391097A1 (en) 2018-12-04 2021-05-20 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. CDK9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
AU2019407426A1 (en) 2018-12-21 2021-07-22 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and kinase inhibitor
KR20210146290A (ko) 2019-02-12 2021-12-03 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 헤테로시클릭 단백질 키나제 억제제를 포함하는 제제
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
CN114364798A (zh) 2019-03-21 2022-04-15 欧恩科斯欧公司 用于治疗癌症的Dbait分子与激酶抑制剂的组合
US11712433B2 (en) 2019-03-22 2023-08-01 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising PKM2 modulators and methods of treatment using the same
EP3962951A1 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
CA3137916A1 (en) 2019-05-06 2020-11-12 Ichan School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of hpk1
CA3152674A1 (en) 2019-08-31 2021-03-04 Etern Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. Pyrazole derivatives for fgfr inhibitor and preparation method thereof
CN114761006A (zh) 2019-11-08 2022-07-15 Inserm(法国国家健康医学研究院) 对激酶抑制剂产生耐药性的癌症的治疗方法
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN111233841A (zh) * 2020-03-17 2020-06-05 湖北扬信医药科技有限公司 一种舒尼替尼有关物质及其制备方法和用途
WO2023278424A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 The Regents Of The University Of California Methods for treating and ameliorating t cell related diseases
CN113717159A (zh) * 2021-09-16 2021-11-30 中国药科大学 吲哚酮类化合物及其药物组合物、制备方法及用途
WO2023081923A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Frequency Therapeutics, Inc. Platelet-derived growth factor receptor (pdgfr) alpha inhibitors and uses thereof
WO2023228095A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Daiichi Sankyo Company, Limited Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024017372A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 成都百裕制药股份有限公司 一种吲哚酮衍生物及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998050356A1 (en) * 1997-05-07 1998-11-12 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
US5886020A (en) * 1995-06-07 1999-03-23 Sugen, Inc. 3-(4'-dimethylaminobenzylidenyl)-2-indolinone and analogues thereof for the treatment of disease
WO1999061422A1 (en) * 1998-05-29 1999-12-02 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
WO2000035908A1 (en) * 1998-12-17 2000-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag 4-alkenyl (and alkynyl) oxindoles as inhibitors of cyclin-dependent kinases, in particular cdk2
WO2000038519A1 (en) * 1998-12-31 2000-07-06 Sugen, Inc. 3-heteroarylidenyl-2-indolinone compounds for modulating protein kinase activity and for use in cancer chemotherapy
WO2001037820A2 (en) * 1999-11-24 2001-05-31 Sugen, Inc. Ionizable indolinone derivatives and their use as ptk ligands
WO2001045689A2 (en) * 1999-12-22 2001-06-28 Sugen, Inc. Indolinone derivatives for modulation of c-kit tyrosine protein kinase

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL230368A (cs) 1957-08-19
DE878539C (de) 1939-08-17 1953-06-05 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Methinfarbstoffen
BE507136A (cs) 1950-11-18
BE553661A (cs) 1955-12-23
NL96047C (cs) 1956-06-08
NL251055A (cs) 1959-04-29
FR1398224A (fr) 1964-05-06 1965-05-07 Ici Ltd Procédé de teinture de matières textiles de polyacrylonitrile
US3308134A (en) 1965-10-22 1967-03-07 Mcneilab Inc Spiro(indan-2, 3'-indoline)-1, 2'-diones
US3551571A (en) 1967-05-19 1970-12-29 Endo Lab Methods for reducing pain,reducing fever and alleviating inflammatory syndromes with heteroaromatic pyrrol-3-yl ketones
US3564016A (en) 1968-03-07 1971-02-16 Endo Lab Method of decarbonylation
US4070366A (en) 1968-06-12 1978-01-24 Canadian Patents & Development Limited Alkylation process
FR1599772A (cs) 1968-09-17 1970-07-20
US3922163A (en) 1970-01-30 1975-11-25 Upjohn Co Organic compounds and process
US3715364A (en) 1970-12-28 1973-02-06 Merck & Co Inc Nitroimidazole carboxamides
DE2159361A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159362A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159360A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Nitrofuranderivate, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
DE2159363A1 (de) 1971-11-30 1973-06-14 Bayer Ag Antimikrobielle mittel
GB1384599A (en) 1972-05-04 1975-02-19 Colgate Palmolive Co Coloured detergent compositions
US3880871A (en) 1973-09-27 1975-04-29 Squibb & Sons Inc Isothiocyanophenyl substituted imidazoles
US4002643A (en) 1975-06-27 1977-01-11 Mcneil Laboratories, Inc. Preparation of β-acyl pyrroles
US4002749A (en) 1975-08-12 1977-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Substituted indolinones
US4053613A (en) 1975-09-17 1977-10-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,3,thiazolinyl and 1,3 thiazinyl substituted indolinones
DE2855306A1 (de) 1978-12-21 1980-07-10 Boehringer Sohn Ingelheim Mittel zur senkung der herzfrequenz
GR73560B (cs) 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4343923A (en) 1980-08-07 1982-08-10 Armstrong World Industries, Inc. Process for reducing the acid dye uptake of polyamide textile materials with N-acylimidazole compound
CH646956A5 (de) 1981-12-15 1984-12-28 Ciba Geigy Ag Imidazolide.
EP0095285A1 (en) 1982-05-21 1983-11-30 Sumitomo Chemical Company, Limited N-acylimidazoles, their production and use
US4493642A (en) 1982-12-27 1985-01-15 Bogdon Glendon J Orthodontic device and associated orthodontic method
DE3310891A1 (de) 1983-03-25 1984-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue indolinon-(2)-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4489089A (en) 1983-04-06 1984-12-18 American Cyanamid Company Substituted N-[ω-(1H-imidazol-1-yl)alkyl]-amides
EP0124482B1 (de) 1983-04-29 1989-11-08 Ciba-Geigy Ag Neue Imidazolide und deren Verwendung als Härter für Polyepoxidverbindungen
DE3415138A1 (de) 1984-04-21 1985-10-31 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen N-(azolylcarbamoyl)-hydroxylamine und diese enthaltende fungizide
DE3426419A1 (de) 1984-07-18 1986-01-23 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue oxindol-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und zwischenprodukte
US4560700A (en) 1985-02-08 1985-12-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Pyrrole-3-carboxylate cardiotonic agents
JPH078851B2 (ja) 1985-07-29 1995-02-01 鐘淵化学工業株式会社 ３−フエニルチオメチルスチレン誘導体
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
WO1993012786A1 (en) 1986-07-10 1993-07-08 Howard Harry R Jr Indolinone derivatives
US4853404A (en) 1986-10-13 1989-08-01 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Phenoxyacetic acid derivatives composition and use
JP2539504B2 (ja) 1987-03-11 1996-10-02 鐘淵化学工業株式会社 ヒドロキシスチレン誘導体
US5202341A (en) 1987-03-11 1993-04-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Hydroxystyrene compounds having tyrosine kinase inhibiting activity
US5089516A (en) 1987-03-11 1992-02-18 Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha 1-phenyl-3,5-pyrazolidinedione hydroxystyrene compounds which have tyrosine kinase inhibiting activity
US5043348A (en) 1987-04-24 1991-08-27 Cassella Aktiengesellschaft Pyrrolealdehydes, their preparation and their use
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
DE3808071A1 (de) 1988-03-11 1989-09-21 Basf Ag Verfahren zur herstellung von acylierten imidazolen
US4868304A (en) 1988-05-27 1989-09-19 Iowa State University Research Foundation, Inc. Synthesis of nitrogen heterocycles
CA1339784C (en) 1988-06-23 1998-03-31 Shinya Inoue Pyrrolecarboxylic acid derivatives
JPH06104658B2 (ja) 1988-06-23 1994-12-21 三菱化成株式会社 ピロールカルボン酸誘導体
GB8816944D0 (en) 1988-07-15 1988-08-17 Sobio Lab Compounds
DE3824658A1 (de) 1988-07-15 1990-01-18 Schering Ag N-hetaryl-imidazolderivate
US5084280A (en) 1988-12-15 1992-01-28 Chapman Chemical Company Wood preservation composition and method
DE3902439A1 (de) 1989-01-27 1990-08-02 Basf Ag Pflanzenschuetzende mittel auf basis von 1-aryl- bzw. 1-hetarylimidazolcarbonsaeureestern
US5047554A (en) 1989-04-18 1991-09-10 Pfizer Inc. 3-substituted-2-oxindole derivatives
DE69031649T2 (de) 1989-07-25 1998-02-26 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Oxoindolderivate
US5258357A (en) 1989-10-07 1993-11-02 Basf Aktiengesellschaft Carboxamides, their preparation and their use as herbicides
CA2032421A1 (en) 1989-12-20 1991-06-21 Mitsubishi Chemical Corporation Pyrrolealdehyde derivative
GB9004483D0 (en) 1990-02-28 1990-04-25 Erba Carlo Spa New aryl-and heteroarylethenylene derivatives and process for their preparation
CA2012634A1 (en) 1990-03-20 1991-09-20 Hassan Salari Tyrphostins for treatment of allergic, inflammatory and cardiovascular diseases
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5196446A (en) 1990-04-16 1993-03-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
IT1247509B (it) 1991-04-19 1994-12-17 Univ Cagliari Composti di sintesi atti all'impiego nella terapia delle infezioni da rhinovirus
US5480883A (en) 1991-05-10 1996-01-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bis mono- and bicyclic aryl and heteroaryl compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase
ES2108120T3 (es) 1991-05-10 1997-12-16 Rhone Poulenc Rorer Int Compuestos bis arilicos y heteroarilicos mono- y biciclicos que inhiben tirosina quinasa receptora de egf y/o pdgf.
GB9115160D0 (en) 1991-07-12 1991-08-28 Erba Carlo Spa Methylen-oxindole derivatives and process for their preparation
US5124347A (en) 1991-07-31 1992-06-23 Warner-Lambert Co. 3-5-ditertiarybutylphenyl-4-hydroxymethylidene derivatives of 1,3-dihydro-2H-indole-2-ones as antiinflammatory agents
HU219131B (hu) 1991-10-18 2001-02-28 Monsanto Co. Módszer és fungicid készítmény növények torsgombabetegségének gátlására és a hatóanyagok
US5389661A (en) 1991-12-05 1995-02-14 Warner-Lambert Company Imidazole and 1,2,4-triazole derivatives with angiotensin II antagonist properties
US5322950A (en) 1991-12-05 1994-06-21 Warner-Lambert Company Imidazole with angiotensin II antagonist properties
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
FR2689397A1 (fr) 1992-04-01 1993-10-08 Adir Utilisation des dérivés de la 3-(3,5-Ditert-Butyl-4-Hydroxybenzylidenyl) Indoline-2-one pour l'obtention de médicaments.
DE4211531A1 (de) 1992-04-06 1993-10-07 Cassella Ag Verfahren zur Herstellung von Pyrrolderivaten
FR2694004B1 (fr) 1992-07-21 1994-08-26 Adir Nouvelles 3-(Hydroxybenzylidényl)-indoline-2-ones et 3-(hydroxybenzylidényl)-indoline-2-thiones, leurs procédés de préparation, et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5565324A (en) 1992-10-01 1996-10-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Complex combinatorial chemical libraries encoded with tags
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
JP3507124B2 (ja) 1993-05-26 2004-03-15 塩野義製薬株式会社 ベンジリデン誘導体の製造法
DE59402281D1 (de) 1993-06-28 1997-05-07 Bayer Ag Massefärben von Kunststoffen
US5332736A (en) 1993-11-01 1994-07-26 Ortho Pharmaceutical Corporation Anti-convulsant aroyl aminoacylpyrroles
US5610173A (en) 1994-01-07 1997-03-11 Sugen, Inc. Formulations for lipophilic compounds
GB9507298D0 (en) 1995-04-07 1995-05-31 Pharmacia Spa Substituted indolylmethylene-oxindale analogues as tyrosine kinase inhibitors
US5786488A (en) 1996-11-13 1998-07-28 Sugen, Inc. Synthetic methods for the preparation of indolyquinones
JP3246712B2 (ja) 1995-11-15 2002-01-15 株式会社トクヤマ エテニルアミド化合物の製造方法
EP0788890A1 (en) 1996-02-06 1997-08-13 Agfa-Gevaert N.V. Dyes and dye-donor elements for thermal dye transfer recording
CA2206201A1 (en) 1996-05-29 1997-11-29 Yoshiaki Isobe Pyrazole derivatives and their pharmaceutical use
ES2208935T3 (es) 1996-08-01 2004-06-16 Merckle Gmbh Acidos acil-pirrol-dicarboxilicos y acidos acil-indol-dicarboxilicos, asi como sus derivados como inhibidores de la fosfolipasa a2 citosolica.
US6133305A (en) 1997-09-26 2000-10-17 Sugen, Inc. 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity
US6462072B1 (en) 1998-09-21 2002-10-08 Gpi Nil Holdings, Inc. Cyclic ester or amide derivatives
CN1526448A (zh) 1998-12-14 2004-09-08 ���ռ�ҩ��ɷ����޹�˾ 用于治疗***直肠病的药物和方法
US6284894B1 (en) 1998-12-18 2001-09-04 Nycomed Imaging As Preparation of allylic aromatic compounds
AR034118A1 (es) * 2000-02-15 2004-02-04 Sugen Inc Compuestos de 2-indolinonas sustituidas con pirroles inhibidoras de proteinquinasas; sus composiciones farmaceuticas e intermediarios de sintesis
TWI270545B (en) 2000-05-24 2007-01-11 Sugen Inc Mannich base prodrugs of 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
CA2414468A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Sugen, Inc. 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
EP1349852A2 (en) * 2000-12-20 2003-10-08 Sugen, Inc. 4-(hetero)aryl substituted indolinones

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5886020A (en) * 1995-06-07 1999-03-23 Sugen, Inc. 3-(4'-dimethylaminobenzylidenyl)-2-indolinone and analogues thereof for the treatment of disease
WO1998050356A1 (en) * 1997-05-07 1998-11-12 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
WO1999061422A1 (en) * 1998-05-29 1999-12-02 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
WO2000035908A1 (en) * 1998-12-17 2000-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag 4-alkenyl (and alkynyl) oxindoles as inhibitors of cyclin-dependent kinases, in particular cdk2
WO2000038519A1 (en) * 1998-12-31 2000-07-06 Sugen, Inc. 3-heteroarylidenyl-2-indolinone compounds for modulating protein kinase activity and for use in cancer chemotherapy
WO2001037820A2 (en) * 1999-11-24 2001-05-31 Sugen, Inc. Ionizable indolinone derivatives and their use as ptk ligands
WO2001045689A2 (en) * 1999-12-22 2001-06-28 Sugen, Inc. Indolinone derivatives for modulation of c-kit tyrosine protein kinase

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Sun L. et al.:"Synthesis and biological evaluations of 3-substituted indolin-2-ones: ..." J. Med. Chem., 1998, vol. 41, str. 2588-2603 (str. 2594, 2601: slouceniny 44, 48) *

Also Published As

Publication number Publication date
DK1255752T3 (da) 2007-11-26
HUP0204433A2 (hu) 2003-04-28
DE122010000004I1 (de) 2010-04-15
KR100713960B1 (ko) 2007-05-02
HRP20020751B1 (en) 2011-01-31
NO20023831L (no) 2002-10-15
YU61402A (sh) 2005-07-19
CN1439005A (zh) 2003-08-27
ATE369359T1 (de) 2007-08-15
CR20120007A (es) 2012-02-24
BRPI0117360A2 (pt) 2012-01-24
HRP20020751A2 (en) 2004-12-31
NO2010002I1 (no) 2010-03-08
EA005996B1 (ru) 2005-08-25
BG107078A (bg) 2003-04-30
NO2019005I1 (no) 2019-02-11
DE60129794T2 (de) 2007-12-06
TWI306860B (en) 2009-03-01
PE20011083A1 (es) 2001-10-26
SK13262002A3 (sk) 2003-03-04
JP2003523340A (ja) 2003-08-05
LTPA2008002I1 (lt) 2019-02-25
ME00415B (me) 2011-10-10
CA2399358C (en) 2006-03-21
UA73976C2 (uk) 2005-10-17
LU91407I9 (cs) 2018-12-28
KR20030003229A (ko) 2003-01-09
NL300332I1 (nl) 2008-03-03
NO20023831D0 (no) 2002-08-13
BRPI0117360B1 (pt) 2018-11-13
CA2399358A1 (en) 2001-08-23
MXPA02008021A (es) 2004-04-05
LU91657I2 (fr) 2010-05-03
NO325532B1 (no) 2008-06-09
EA200200862A1 (ru) 2003-02-27
NO2008019I2 (no) 2011-10-17
AU2001239770B2 (en) 2006-01-05
CR20120009A (es) 2012-02-07
IL151127A0 (en) 2003-04-10
LTC1255752I2 (lt) 2019-08-26
AU3977001A (en) 2001-08-27
JP3663382B2 (ja) 2005-06-22
MY130363A (en) 2007-06-29
NO2010002I2 (no) 2010-12-06
NL300332I2 (nl) 2008-04-01
US20050176802A1 (en) 2005-08-11
LU91407I2 (fr) 2008-03-10
HUP0204433A3 (en) 2007-08-28
NO2008019I1 (no) 2009-01-12
US7572924B2 (en) 2009-08-11
BRPI0108394B8 (pt) 2021-05-25
SI1255752T1 (sl) 2007-12-31
RS50444B (sr) 2010-03-02
WO2001060814A2 (en) 2001-08-23
BRPI0117360B8 (pt) 2021-07-06
HU228979B1 (en) 2013-07-29
US7125905B2 (en) 2006-10-24
EP1255752A2 (en) 2002-11-13
CZ20023081A3 (cs) 2003-02-12
FR08C0002I1 (cs) 2008-03-21
PT1255752E (pt) 2007-10-17
US20020156292A1 (en) 2002-10-24
ES2290117T3 (es) 2008-02-16
CN1329390C (zh) 2007-08-01
NL300430I1 (nl) 2010-03-01
HK1051188A1 (en) 2003-07-25
CY2008004I1 (el) 2009-11-04
DE60129794D1 (de) 2007-09-20
IS2491B (is) 2009-01-15
AR034118A1 (es) 2004-02-04
PL211834B1 (pl) 2012-06-29
BG65764B1 (bg) 2009-10-30
NL300430I2 (nl) 2010-04-01
BR0108394A (pt) 2004-06-22
BE2010C009I2 (cs) 2020-01-30
CY2010004I1 (el) 2012-01-25
US20070010569A1 (en) 2007-01-11
BRPI0108394B1 (pt) 2018-12-11
WO2001060814A3 (en) 2002-01-24
US20040063773A1 (en) 2004-04-01
CY2010004I2 (el) 2012-01-25
DE122008000002I1 (de) 2008-04-17
CY1108032T1 (el) 2011-04-06
FR08C0002I2 (fr) 2009-01-02
EP1255752B1 (en) 2007-08-08
IS6501A (is) 2002-08-13
CY2008004I2 (el) 2009-11-04
SK287142B6 (sk) 2010-01-07
NZ520640A (en) 2005-04-29
PL361209A1 (en) 2004-09-20
CO5280092A1 (es) 2003-05-30
US6573293B2 (en) 2003-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ303705B6 (cs) Pyrrolem substituovaná 2-indolinonová sloucenina pro pouzití jako inhibitor proteinkináz a farmaceutická kompozice s jejím obsahem
KR100884858B1 (ko) 단백질 키나제 억제제로서의3-(4-아미도피롤-2-일메틸리덴)-2-인돌리논 유도체
US6635640B2 (en) 4-heteroaryl-3-heteroarylidenyl-2-indolinones and their use as protein kinase inhibitors
AU2001239770A1 (en) Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
AU2002247133A1 (en) 3-(4-amidopyrrol-2-ylmethlidene)-2-indolinone derivatives as protein kinase inhibitors
US6797725B2 (en) Prodrugs of a 3-(pyrrol-2-ylmethylidene)-2-indolinone derivatives
US6531502B1 (en) 3-Methylidenyl-2-indolinone modulators of protein kinase