BRPI0718029A2 - Derivados de imidazo(1,2-b)piridazina e pirazolo(1,5-a)pirimidina e seu uso como inibidores da proteína cinase - Google Patents

Description

“DERIVADOS DE IMIDAZO[1,2-B]PIRIDAZINA E PIRAZOLO[1,5-A]PIRIMIDINA E SEU USO COMO INIBIDORES DA PROTEÍNA CINASE”

REFERÊNCIA CRUZADA AO PEDIDO RELACIONADO

Este pedido refere-se ao Pedido de Patente Provisório U.S. N9 60/864.566, deposi- tado em 6 de Novembro de 2006, Pedido de Patente Provisório U.S. N2 60/892.523, deposi- tado em 1 de Março de 2007, e Pedido de Patente Provisório U.S. Na 60/957.988, deposita- do em 24 de Agosto de 2007, os quais são incorporados integralmente neste relatório como referência.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Campo Técnico

No geral, a presente invenção refere-se a compostos que inibem a atividade da pro- teína cinase, e a composições e métodos relacionados a estes.

Descrição da Técnica Relacionada

O câncer (e outras doenças hiperproliferativas) é caracterizado pela proliferação ce- lular descontrolada. Esta perda do controle normal da proliferação celular frequentemente parece ocorrer como o resultado de dano genético das vias celulares que controlam a pro- gressão através do ciclo celular. O ciclo celular consiste da síntese de DNA (fase S), divisão celular ou mitose (fase M), e períodos não sintéticos referidos como gap 1 (G1) e gap 2 (G2). A fase M é composta de mitose e citocinese (separação em duas células). Todas as etapas no ciclo celular são controladas por uma cascata ordenada de fosforilação de proteí- na e várias famílias de proteínas cinases estão envolvidas na realização destas etapas de fosforilação. Além disso, a atividade de muitas proteínas cinases aumenta em tumores hu- manos comparada a tecidos normais. Esta atividade aumentada pode ocorrer devido a vá- rios fatores, incluindo níveis aumentados de uma cinase ou mudanças na expressão de pro- teínas coativadoras ou inibitórias.

As células possuem proteínas que governam a transição de uma fase do ciclo celu- lar para uma outra. Por exemplo, as ciclinas são uma família de proteínas, cujas concentra- ções aumentam e diminuem por todo o ciclo celular. As ciclinas se ligam, no tempo apropri- ado, diferente das proteínas cinases dependentes de ciclina (CDKs) que fosforilam substra- tos essenciais para a progressão através do ciclo celular. A atividade de CDKs específicas em tempos específicos é essencial para a iniciação e progressão coordenada através do ciclo celular. Por exemplo, CDK1 é a reguladora do ciclo celular mais proeminente, a qual organiza as atividades da fase M. Entretanto, várias outras proteínas cinases mitóticas que participam da fase M foram identificadas, as quais incluem membros das famílias pólo, auro- ra, e NIMA (Never-In-Mitosis-A) e cinases implicaram em pontos de controle mitóticos, saída mitótica, e citocinese.

Cinases Pim (por exemplo, cinase Pim-1, cinase Pim-2, cinase Pim-3) são uma fa- mília de serina/treonina cinases oncogênicas. A cinase Pim-1 é conhecida por estar envolvi- da em várias vias de sinalização de citocina como um efetor a jusante. Uma vez ativada, a cinase Pim-1 causa a progressão do ciclo celular, a inibição de apoptose e a modulação de outras vias de transdução de sinal, incluindo as suas próprias. A cinase Pim-1 também é conhecida por efetuar a ativação de fatores de transcrição tais como NFAT1 p100, c-Myb e Pap-1, e a inibição de outros tais como HP1. A expressão normal da cinase Pim-1 é obser- vada em células de origem hematopoética, tais como fígado fetal, timo, baço e medula ós- sea. Adicionalmente, a expressão é observada na próstata e células epiteliais orais. Acredi- ta-se que a cinase Pim-1 esteja envolvida na iniciação ou progressão de transformação ma- ligna, levando a malignades incluindo Iinfoma de Burkitt, câncer de próstata, câncer oral e Iinfomas difusos de grandes células, entre outras.

Com base em seu envolvimento em várias malignades humanas, há uma necessi- dade quanto ao projeto racional de inibidores específicos e seletivos para o tratamento de câncer e outras condições que são mediadas e/ou associadas com proteínas cinases Pim. A presente invenção satisfaz estas necessidades e oferece outras vantagens relacionadas.

BREVE SUMÁRIO

No geral, a presente invenção é dirigida a compostos e composições farmacêuticas compreendendo os ditos compostos, onde os compostos têm as estruturas gerais seguintes (I) e (II) abaixo:

incluindo estereoisômeros, pró-medicamentos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, em que R, R1, R2 e X são conforme definidos neste relatório.

Estes compostos da presente invenção têm utilidade sobre uma faixa ampla de a- plicações terapêuticas, e podem ser usados para tratar doenças, tais como câncer, as quais são mediadas, pelo menos em parte, pela atividade da proteína cinase. Consequentemente, em um aspecto da invenção, os compostos descritos neste relatório são formulados como composições farmaceuticamente aceitáveis para administração a um paciente em necessi- dade destas.

Em um outro aspecto, a invenção fornece métodos para tratar ou prevenir uma do- ença mediada pela proteína cinase, tal como câncer, em que o método compreende admi- nistrar a um paciente em necessidade de um tal tratamento, uma quantidade terapeutica- mente eficaz de um composto descrito neste relatório ou uma composição farmaceutica- mente aceitável compreendendo o dito composto. Em certas modalidades, a doença media- da pela proteína cinase é uma doença mediada pela cinase Pim1 tal como um câncer ex-

(!)

dl) pressando a cinase Pim-1. Um outro aspecto da invenção refere-se à inibição da atividade da proteína cinase em uma amostra biológica, em que o método compreende contatar a amostra biológica com um composto descrito neste relatório, ou uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo o dito composto. Em certas modalidades, a proteína cinase é cinase Pim.

Um outro aspecto desta invenção refere-se a um método de inibir a atividade da proteína cinase em um paciente, em que o método compreende administrar ao paciente um composto descrito neste relatório ou uma composição farmaceuticamente aceitável compre- endendo o dito composto. Em certas modalidades, a proteína cinase é uma cinase Pim.

Estes e outros aspectos da invenção serão evidentes sob referência à descrição detalhada e figuras anexas seguintes. Para esta finalidade, certas patentes e outros docu- mentos são citados neste relatório para apresentar mais especificamente vários aspectos desta invenção. Estes documentos são, por meio deste relatório, incorporados integralmente como referência.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A figura 1 mostra a atividade inibitória da cinase Pim-1 de compostos ilustrativos.

A figura 2 mostra os resultados da triagem do composto 7-29 (Tabela VII) quanto à seletividade contra um painel de Serina/Treonina e Tirosina cinases em um ensaio radiomé- tri co.

As figuras 3 a 5 mostram os resultados para a marcação de phospho-Bad em célu- las MV-4-11 tratadas com os compostos 7-19, 7-29, e 7-31, respectivamente.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

De acordo com um aspecto geral da presente invenção, são fornecidos compostos úteis como inibidores da proteína cinase e composições e métodos relacionados a estes. Os compostos da invenção têm estruturas apresentadas em (I) ou (II) abaixo:

incluindo estereoisômeros, pró-medicamentos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, onde:

X é NH, S, O, SO ou SO2;

R é H, -OH, halo, alquila, haloalquila, alcóxi ou haloalcóxi;

R1 é carbociclo, carbociclo substituído, heterociclo, ou heterociclo substituído; ou uma estrutura selecionada de:

(!)

(II) onde R1' é uma substituição p, o ou m com uma ou mais ocorrências de halo, - OCF3, -OCHF2, -CF3, -OCH3l -NH2i -NO2l -OH1 -COCH3, -NHSO2CH3 ou -N(CH3)2.

R2 é -(CH2)n-ciclopropila, -(CH2)n-CicIopentiIa1 -(CH2)n-cicloexila, -SO2-CH3l -SO2- (CH2)nCH3l -(CH2)n-piperonila, -(CH2)n-piperidila, -(CH2)n-piperazinila, -(CH2)n-furila, -(CH2)n-

n é O1 1, 2, 3 ou 4 e cada uma das porções acima é opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; ou uma estrutura selecionada de:

onde L é opcional e, se presente, NH1 S1 O1 SO ou SO2; R3 é um ou mais substituin- tes opcionais; e Cicl1 é um carbociclo, carbociclo substituído, heterociclo ou heterociclo substituído.

A menos que de outro modo estabelecido, os termos seguintes usados no relatório descritivo e reivindicações têm os significados debatidos abaixo:

“Alquila” refere-se a um radical de hidrocarboneto reto ou ramificado saturado de um a seis átomos de carbono, preferivelmente um a quatro átomos de carbono, por exem- 15 pio, metila, etila, propila, 2-propila, n-butila, iso-butila, terc-butila, pentila, hexila, e semelhan- tes, preferivelmente metila, etila, propila, ou 2-propila. Alquilas de cadeia reta saturada re- presentativos incluem metila, etila, n-propila, n-butila, n-pentila, n-hexila, e semelhantes; enquanto alquilas ramificados saturados incluem isopropila, sec-butila, isobutila, terc-butila, isopentila, e semelhantes. Alquilas cíclicos saturados representativos incluem ciclopropila, 20 ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, -CH2-cicloexila, e semelhantes; enquanto alquilas cíclicos

tiofeno, -(CH2)n-piridila, -(CH2)n-pirimidila, -(CH2)nOCH3, -(CH2)nOH, ou -(CH2)nN(CH3)2, onde insaturados incluem ciclopentenila, cicloexenila, -CH2-cicloexenila, e semelhantes. Alquilas cíclicos também são referidos neste relatório como um “cicloalquila”. Alquilas insaturados contêm pelo menos uma ligação dupla ou tripla entre átomos de carbono adjacentes (referi- dos como um “alquenila” ou “alquinila”, respectivamente). Alquenilas de cadeia reta e ramifi- 5 cada representativos incluem etilenila, propilenila, 1-butenila, 2-butenila, isobutilenila, 1- pentenila, 2-pentenila, 3-metil-1-butenila, 2-metil-2-butenila, 2,3-dimetil-2-butenila, e seme- lhantes; enquanto alquinilas de cadeia reta e ramificada representativos incluem acetilenila, propinila, 1 -butinila, 2-butinila, 1-pentinila, 2-pentinila, 3-metil-1 -butinila, e semelhantes.

“Alquileno” significa um radical de hidrocarboneto divalente saturado linear de um a seis átomos de carbono ou um radical de hidrocarboneto divalente saturado ramificado de três a seis átomos de carbono, por exemplo, metileno, etileno, 2,2-dimetiletileno, propileno,

2-metilpropileno, butileno, pentileno, e semelhantes, preferivelmente metileno, etileno, ou propileno.

“Cicloalquila” refere-se a um radical de hidrocarboneto cíclico saturado de três a oi- to átomos de carbono, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou cicloexila.

“Alcóxi” significa um radical -ORa onde Ra é um alquila conforme definido acima, por exemplo, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi e semelhantes.

“Halo” significa flúor, cloro, bromo, ou iodo, preferivelmente flúor e cloro.

“Haloalquila” significa alquila substituído com um ou mais, preferivelmente um, dois ou três, os mesmos ou diferentes átomos de halo, por exemplo, -CH2CI, -CF3, -CH2CF3, - CH2CCI3, e semelhantes.

“Haloalcóxi” significa um radical -ORb onde Rb é um haloalquila, conforme definido acima, por exemplo, trifluorometóxi, tricloroetóxi, 2,2-dicloropropóxi, e semelhantes.

“Acila” significa um radical -C(O)Rc onde Rc é hidrogênio, alquila, ou haloalquila, conforme definido neste relatório, por exemplo, formila, acetila, trifluoroacetila, butanoila, e semelhantes.

“Arila” refere-se a grupos inteiramente de carbono monocíclicos ou de anel fundido policíclicos (isto é, anéis que compartilham pares adjacentes de átomos de carbono) de 6 a

12 átomos de carbono tendo um sistema elétron pi completamente conjugado. Exemplos, 30 sem limitação, de grupos arila são fenila, naftila e antracenila. O grupo arila pode ser substi- tuído ou não substituído. Quando substituído, o grupo arila é substituído com um ou mais substituintes, conforme este termo é definido abaixo, mais preferivelmente um, dois ou três, ainda mais preferivelmente um ou dois substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste de alquila (em que o alquila pode ser opcionalmente substituído com um 35 ou dois substituintes), haloalquila, halo, hidróxi, alcóxi, mercapto, alquiltio, ciano, acila, nitro, fenóxi, heteroarila, heteroarilóxi, haloalquila, haloalcóxi, carbóxi, alcoxicarbonila, amino, al- quilamino dialquilamino, arila, heteroarila, carbociclo ou heterociclo (em que o arila, heteroa- rila, carbociclo ou heterociclo podem ser opcionalmente substituídos).

“Heteroarila” refere-se a um grupo monocíclico ou de anel fundido (isto é, anéis que compartilham um par adjacente de átomos) de 5 a 12 átomos no anel contendo um, dois, três ou quatro heteroátomos no anel selecionados de N, O, ou S1 os átomos no anel rema- nescentes sendo C e, além disso, tendo um sistema elétron pi completamente conjugado. Exemplos, sem limitação, de grupos heteroarila não substituídos são pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirimidina, quinolina, isoquinolina, purina, triazol, tetrazol, triazina, e carbazol. O grupo heteroarila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o grupo heteroarila é substituído com um ou mais substituintes, confor- me este termo é definido abaixo, mais preferivelmente um, dois ou três, ainda mais preferi- velmente um ou dois substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste de alquila (em que o alquila pode ser opcionalmente substituído com um ou dois substituin- tes), haloalquila, halo, hidróxi, alcóxi, mercapto, alquiltio, ciano, acila, nitro, haloalquila, halo- alcóxi, carbóxi, alcoxicarbonila, amino, alquilamino dialquilamino, arila, heteroarila, carboci- clo ou heterociclo (em que o arila, heteroarila, carbociclo ou heterociclo podem ser opcio- nalmente substituídos).

“Carbociclo” refere-se a um sistema de anel saturado, insaturado ou aromático ten- do 3 a 14 átomos de carbono no anel. O termo “carbociclo”, se saturado ou parcialmente insaturado, também refere-se a anéis que são opcionalmente substituídos. O termo “carbo- ciclo” inclui arila. O termo “carbociclo” também inclui anéis alifáticos que são fundidos a um ou mais anéis aromáticos ou não aromáticos, tais como em um decaidronaftila ou tetraidro- naftila, onde o radical ou ponto de ligação está no anel alifático. O grupo carbociclo pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o grupo carbociclo é substituído com um ou mais substituintes, conforme este termo é definido abaixo, mais preferivelmente um, dois ou três, ainda mais preferivelmente um ou dois substituintes independentemente seleciona- dos do grupo que consiste de alquila (em que o alquila pode ser opcionalmente substituído com um ou dois substituintes), haloalquila, halo, hidróxi, alcóxi, mercapto, alquiltio, ciano, acila, nitro, haloalquila, haloalcóxi, carbóxi, alcoxicarbonila, amino, alquilamino dialquilamino, arila, heteroarila, carbociclo ou heterociclo (em que o arila, heteroarila, carbociclo ou hetero- ciclo podem ser opcionalmente substituídos).

“Heterociclo” refere-se a um sistema de anel cíclico saturado, insaturado ou aromá- tico tendo 3 a 14 átomos no anel em que um, dois ou três átomos no anel são heteroátomos selecionados de N, O, ou S(O)m (onde m é um número inteiro de O a 2), os átomos no anel remanescentes sendo C, onde um ou dois átomos C podem opcionalmente ser substituídos por um grupo carbonila. O termo “heterociclo” inclui heteroarila. O anel de heterociclila pode ser opcional e independentemente substituído com um ou mais substituintes, conforme este termo é definido abaixo, preferivelmente um, dois, ou três substituintes selecionados de al- quila (em que o alquila pode ser opcionalmente substituído com um ou dois substituintes), haloalquila, cicloalquilamino, cicloalquilalquila, cicloalquilaminoalquila, cicloalquilalquilamino- alquila, cianoalquila, halo, nitro, ciano, hidróxi, alcóxi, amino, alquilamino, dialquilamino, hi- droxialquila, carboxialquila, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, aralquila,

heteroaralquila, arila, heteroarila, carbociclo, heterociclo (em que o arila, heteroarila, carbo- ciclo ou heterociclo podem ser opcionalmente substituídos), aralquila, heteroaralquila, hete- rocicloamino saturado ou insaturado, heterocicloaminoalquila saturado ou insaturado, e - CORd (onde Rd é alquila). Mais especificamente, o termo heterociclila inclui, porém não é limitado a, tetraidropiranila, 2,2-dimetil-1,3-dioxolano, piperidino, N-metilpiperidin-3-ila, pipe- 10 razino, N-metilpirrolidin-3-ila, pirrolidino, morfolino, 4-ciclopropilmetilpiperazino, tiomorfolino, tiomorfolino-1-óxido, tiomorfolino-1,1 -dióxido, 4-etiloxicarbonilpiperazino, 3-oxopiperazino, 2- imidazolidona, 2-pirrolidinona, 2-oxoomopiperazino, tetraidropirimidin-2-ona, e os derivados destes. Em certas modalidades, o grupo heterociclo é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados de halo, alquila, alquila substituído com 15 carbóxi, éster, hidróxi, alquilamino, heterocicloamino saturado ou insaturado, heterocicloa- minoalquila saturado ou insaturado, ou dialquilamino.

“Opcional” ou “opcionalmente” significa que o evento ou circunstância subsequen- temente descrito pode não necessariamente ocorrer, e que a descrição inclui exemplos on- de o evento ou circunstância ocorre e exemplos em que não ocorre. Por exemplo, “grupo 20 heterocíclico opcionalmente substituído com um grupo alquila” significa que o alquila pode não necessariamente estar presente, e a descrição inclui situações onde o grupo heterociclo é substituído com um grupo alquila e situações onde o grupo heterociclo não é substituído com o grupo alquila.

Finalmente, o termo “substituído” conforme usado neste relatório significa qualquer um dos grupos acima (por exemplo, alquila, arila, heteroarila, carbociclo, heterociclo, etc.) em que pelo menos um átomo de hidrogênio é substituído com um substituinte. No caso de um substituinte oxo (“=0”), dois átomos de hidrogênio são substituídos. “Substituintes” den- tro do contexto desta invenção incluem halogênio, hidróxi, oxo, ciano, nitro, amino, alquila- mino, dialquilamino, alquila, alcóxi, tioalquila, haloalquila, hidroxialquila, arila, arila substituí- do, arilalquila, arilalquila substituído, heteroarila, heteroarila substituído, heteroarilalquila, heteroarilalquila substituído, heterociclo, heterociclo substituído, heterocicloalquila, heteroci- cloalquila substituído, -NReRf, NReC(=0)Rf, -NReC(=0)NReRf, -NReC(=0)0Rf, -NReSO2Rf, - ORei -C(=0)Re, -C(=0)0Re, -C(=0)NReRf, -0C(=0)NReRf, -SH, -SRe, -SORe, -S(=0)NH2, - S(=0)2Re, -0S(=0)2Re, -S(=0)20Re, em que Re e Rf são os mesmos ou diferentes e inde- pendentemente hidrogênio, alquila, haloalquila, alquila substituído, arila, arila substituído, arilalquila, arilalquila substituído, heteroarila, heteroarila substituído, heteroarilalquila, hete- roarilalquila substituído, heterociclo, heterociclo substituído, heterocicloalquila ou heteroci- cloalquila substituído. Certos compostos ilustrativos, de acordo com as estruturas (I) e (II), para o uso con- forme descrito neste relatório, são apresentados abaixo.

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, Ri é um anel de 5 a

6 membros saturado, parcialmente insaturado, ou completamente insaturado monocíclico tendo 0 a 3 heteroátomos, onde os heteroátomos são selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre.

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R1 é fenila substituí- do em p, o ou m com uma ou mais ocorrências de -F, -Cl, -CF3, -OCF3, -OCH3, -CH3, NO2, -

SCH3, piperazina ou morfolina.

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R1 é um grupo pira- zolila, furila, tiofeno, piridila, pirimidila, ou indolila opcionalmente substituído.

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R1 tem a estrutura:

onde R1' representa um ou mais substituintes opcionais ou, em uma modalidade mais específica, é uma substituição p, o ou m com uma ou mais ocorrências de halo, -OCF3,

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R2 é 2-butano-1-ol, -

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R2 é -(CH2)n- ciclopropila, -(CH2)n-ciclopentila, -(CH2)n-CicIoexiIa, -(CH2)n-piperonila, -(CH2)n-piperidila, - (CH2)n-piperazinila, -(CH2)n-furila, -(CH2)n-tiofeno, -(CH2)n-piridila, ou -(CH2)n-pirimidila opcio- nalmente substituídos.

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R2 tem uma estrutura selecionada de: onde L é opcional e, se presente, NH, S, O, SO ou SO2; R3 é um ou mais substituin- tes opcionais; e Cicl1 é um carbociclo, carbociclo substituído, heterociclo ou heterociclo substituído.

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R2 tem a estrutura seguinte:

onde L é opcional e, se presente, NH, S, O, SO ou SO2; e Cicl1 é um carbociclo, carbociclo substituído, heterociclo ou heterociclo substituído, e em uma modalidade mais específica Cicl1 é um anel de 5 a 6 membros saturado, parcialmente insaturado, ou comple- tamente insaturado monocíclico tendo O a 3 heteroátomos, onde os heteroátomos são sele- cionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre.

Em um aspecto mais específico das estruturas (I) e (II) acima, R2 tem uma estrutura selecionada de:

Em outras modalidades específicas das estruturas (I) e (II), X é NH e R1 é um fenila substituído ou não substituído (onde R é conforme definido acima e R1' é ausente ou repre- senta um ou mais substituintes), e os compostos têm as estruturas seguintes (I-A) e (ll-A), respectivamente: 10

.N

N

N

O

\\

O

R2-

R.’

Ri1

(I-A)

(II-A)

ou um estereoisômero, pró-medicamento ou sal farmaceuticamente aceitável des-

tes.

Em modalidades mais específicas de (I-A) e (II-A)1 R é alquila, tal como metila, e os compostos têm as estruturas seguintes (I-Aa) e (ll-Aa):

Rv

(I-Aa)

(II-Aa)

ou um estereoisômero, pró-medicamento ou sal farmaceuticamente aceitável des-

tes.

Em modalidades mais específicas de (l-A), (ll-A), (I-Aa) e (ll-Aa), R-ι é fenila substi- tuído tendo pelo menos um substituinte p, o ou m selecionado de halo, -OCF3, -OCHF2, - CF3, -OCH3, -NH2, -NO2, -OH, -COCH3, -NHSO2CH3 e -N(CH3)2, e em uma modalidade mais específica R1 é fenila substituído tendo pelo menos um substituinte p, o ou m selecionado de -OCF3, -OCHF2, -CF3, -OCH3 e -OH, e em uma modalidade mais específica R1 é seleciona- do de:

OCF,

OCF3

Em modalidades mais específicas de (l-A), (ll-A), (I-Aa) e (ll-Aa), R2 é -(CH2)12- piperid-4-ila, -(CH2)1,2-piperid-4-ila substituído, -(CH2)1i2-Piperazin-I-Ila, ou -(CH2)1i2- piperazin-1-ila substituído, tal como uma porção selecionada de: HN.

O^v

.CT3y

.N,

N

10

Mais especificamente, R2 é selecionado de:

Ό

Ainda em outras modalidades específicas das estruturas (I) e (II), X é O e Ri é um fenila substituído ou não substituído (onde R é conforme definido acima e R1' é ausente ou representa um ou mais substituintes), e os compostos têm as estruturas seguintes (I-B) e (II- B), respectivamente:

Ri'

(I-B)

ou um estereoisômero, pró-medicamento ou sal farmaceuticamente aceitável des-

tes.

Em modalidades mais específicas de (I-B) e (ll-B), R é alquila, tal como metila, e os compostos têm as estruturas seguintes (I-Bb) e (ll-Bb): Ri'

Ri

(II-Bb)

(I-Bb)

ou um estereoisômero, pró-medicamento ou sal farmaceuticamente aceitável des-

tes.

Em modalidades mais específicas de (I-B)1 (ll-B), (I-Bb) e (IIB-b), Ri é fenila substi- tuído tendo pelo menos um substituinte p, o ou m selecionado de halo, -OCF3, -OCHF2, - CF3, -OCH3, -NH2, -NO2, -OH, -COCH3, -NHSO2CH3 e -N(CH3)2, e em uma modalidade mais específica R1 é fenila substituído tendo pelo menos um substituinte p, o ou m selecionado de -OCF3, -OCHF2, -CF3, -OCH3 e -OH, e em uma modalidade mais específica R1 é seleciona- do de:

OCF,

OCF3

Em modalidades mais específicas das estruturas (l-B), (ll-B), (I-Bb) e (ll-Bb), R2 é - 10 (CH2)n-ciclopropila, -(CH2)n-ciclopentila, -(CH2)n-cicloexila, -SO2-CH3, -SO2-(CH2)nCH3, - (CH2)n-piperonila, -(CH2)n-piperidila, -(CH2)n-piperazinila, -(CH2)n-furila, -(CH2)n-tiofeno, - (CH2)n-piridila, -(CH2)n-pirimidila, -(CH2)nOCH3, -(CH2)nOH, ou -(CH2)nN(CH3)2, onde n é 0, 1, 2, 3 ou 4 e cada uma das porções acima é opcionalmente substituída com um ou mais subs- tituintes; ou uma estrutura selecionada de: ο„ Cr^ Ow cr^v cr^

-O

Em modalidades mais específicas de (I-B)1 (ll-B), (I-Bb) e (ll-Bb), R2 é -(CH2)i,2 piperid-4-ila, -(CH2)i,2-piperid-4-ila substituído, -(CH2)1,2-piperazin-1-ila, ou ^(CH2)12 piperazin-1-ila substituído, tal como uma porção selecionada de:

HN^J

.Cy3y

.Ow

.H .N.

Mais especificamente, R2 é selecionado de:

Ό

Ainda em outras modalidades específicas das estruturas (I) e (II), X é S, SO ou SO e R1 é um fenila substituído ou não substituído (onde R1' abaixo é ausente ou representa um ou mais substituintes), e os compostos têm as estruturas seguintes (I-C) e (Il-C), respecti- vamente:

R1'

Rr

(I-C) (II-C)

ou um estereoisômero, pró-medicamento ou sal farmaceuticamente aceitável des-

tes.

Em modalidades mais específicas de (I-C) e (ll-C), R é alquila, tal como metila, e os compostos têm as estruturas seguintes (I-Cc) e (ll-Cc):

Ri'

R1

(I-Cc) (II-Cc)

ou um estereoisômero, pró-medicamento ou sal farmaceuticamente aceitável des-

tes.

Em modalidades mais específicas de (l-C), (ll-C), (I-Cc) e (ll-Cc), R-ι é fenila substi-

tuído tendo pelo menos um substituinte p, o ou m selecionado de halo, -OCF3, -OCHF2, - CF3, -OCH3, -NH2, -NO2, -OH, -COCH3, -NHSO2CH3 e -N(CH3)2, e em uma modalidade mais específica R1 é fenila substituído tendo pelo menos um substituinte p, o ou m selecionado de -OCF3, -OCHF2, -CF3, -OCH3 e -OH, e em uma modalidade mais específica R1 é seleciona- do de:

OCF3

OCF3

Em modalidades mais específicas das estruturas (l-C), (ll-C), (I-Cc) e (ll-Cc), R2 é - (CH2)n-ciclopropila, -(CH2)n-ciclopentila, -(CH2)n-cicloexila, -SO2-CH3, -SO2-(CH2)nCH3, - (CH2)n-piperonila, -(CH2)n-piperidila, -(CH2)n-piperazinila, -(CH2)n-furila, -(CH2)n-tiofeno, - (CH2)n-PiridiIa1 -(CH2)n-PirimidiIa1 -(CH2)nOCH3, -(CH2)nOH, ou -(CH2)nN(CH3)2l onde n é O1 1,

2, 3 ou 4 e cada uma das porções acima é opcionalmente substituída com um ou mais subs- tituintes; ou uma estrutura selecionada de:

H2N

r^snH

Rrf I

Cich_L „N.

Em modalidades mais específicas de (I-C)1 (II-C)1 (I-Cc) e (II-Cc)1 R2 é -(CH2)12- piperid-4-ila, -(CH2)1,2-piperid-4-ila substituído, -(CH2)1 >2-piperazin-1-ila, ou -(CH2)1t2- piperazin-1-ila substituído, tal como uma porção selecionada de:

-N—1

N-

O^v

Mais especificamente R2 é selecionado de: Em aspectos mais específicos da estrutura (I) acima, o composto tem uma estrutura apresentada na Tabela Il (Compostos 2-1 a 2-22).

Em aspectos mais específicos da estrutura (II) acima, o composto tem uma estrutu- ra apresentada na Tabela Ill (Compostos 3-1 a 3-13).

Em aspectos mais específicos da estrutura (II) acima, compostos são fornecidos

tendo estruturas apresentadas na Tabela IV (Compostos 4-1 a 4-22).

Em aspectos mais específicos da estrutura (I) acima, compostos são fornecidos tendo estruturas apresentadas na Tabela Vll (Compostos 7-1 a 7-51).

Os compostos que têm a mesma fórmula molecular, porém diferem na natureza ou seqüência de união de seus átomos ou no arranjo de seus átomos no espaço são denomi- nados “isômeros”. Isômeros que diferem no arranjo de seus átomos no espaço são denomi- nados “estereoisômeros”. Estereoisômeros que não são imagens de espelho entre si são denominados “diastereômeros” e aqueles que são imagens de espelho não sobreponíveis entre si são denominados “enantiômeros”. Quando um composto tem um centro assimétrico, por exemplo, ele é ligado a quatro grupos diferentes, um par de enantiômeros é possível. Um enantiômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta de seu centro assimétri- co e é descrito pelas regras de ordenação R e S de Cahn e Prelog (Cahn, R., Ingold, C, e Prelog, V. Angew. Chem. 78:413-47, 1966; Angew. Chem. Intemat. Ed. Eng. 5:385-415, 511, 1966), ou pela maneira em que a molécula gira o plano de Iuz polarizada e designado como dextrorrotatório ou levorrotatório (isto é, como isômeros (+) ou (-) respectivamente). Um composto quiral pode existir como enantiômero individual ou como uma mistura deste. Uma mistura contendo proporções iguais dos enantiômeros é chamada uma “mistura racêmica”.

Os compostos desta invenção podem possuir um ou mais centros assimétricos; tais compostos podem, portanto, ser produzidos como estereoisômeros (R) ou (S) individuais ou 25 como misturas destes. A menos que de outro modo indicado, a descrição ou nomenclatura de um composto particular no relatório descritivo e reivindicações é intencionada a incluir tanto enantiômeros individuais quanto misturas racêmicas, ou de outro modo apresentados. Os métodos para a determinação da estereoquímica e da separação de estereoisômeros são bem conhecidos na técnica (veja debate no Cap. 4 de ADVANCED ORGANIC 30 CHEMISTRY, 4a edição, Março, J., John Wiley e Sons, Cidade de Nova Iorque, 1992). Os compostos da presente invenção podem exibir os fenômenos de tautomerismo e isomerismo estrutural. Por exemplo, os compostos descritos neste relatório podem adotar uma configuração E ou Z sobre a ligação dupla conectando a porção 2-indolinona à porção pirrol ou eles podem ser uma mistura de E e Z. Esta invenção abrange qualquer forma tau- tomérica ou isomérica estrutural e misturas desta, a qual possui a capacidade de modular a atividade de cinase aurora-2 e não é limitada a qualquer forma tautomérica ou isomérica estrutural.

É considerado que um composto da presente invenção seria metabolizado por en- zimas no organismo tal como de um ser humano para gerar um metabólito que pode modu- lar a atividade das proteínas cinases. Tais metabólitos estão dentro do escopo da presente invenção.

Um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, pode ser administrado como tal a um paciente humano ou pode ser administrado em com- posições farmacêuticas em que os materiais precedentes são misturados com portadores ou excipiente(s) adequados. Técnicas para formulação e administração de medicamentos po- dem ser encontradas, por exemplo, em REMINGTON’S PHARMACOLOGICAL SCIENCES, Mack Publishing Co., Easton, PA, última edição.

Uma “composição farmacêutica” refere-se a uma mistura de um ou mais compostos descritos neste relatório, ou sais farmaceuticamente aceitáveis ou pró-medicamentos des- tes, com outros componentes químicos, tais como excipientes farmaceuticamente aceitá- veis. O propósito de uma composição farmacêutica é facilitar a administração de um com- posto a um organismo.

“Excipiente farmaceuticamente aceitável” refere-se a uma substância inerte adicio- nada a uma composição farmacêutica para facilitar ainda a administração de um composto. Exemplos, sem limitação, de excipientes incluem carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vá- rios açúcares e tipos de amido, derivados de celulose, gelatina, óleos vegetais e polietileno glicóis.

“Sal farmaceuticamente aceitável” refere-se àqueles sais que retêm a efetividade e propriedades biológicas do composto precursor. Tais sais podem incluir: (1) sal de adição de ácido que é obtido por reação da base livre do composto precursor com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, e ácido perclórico e semelhantes, ou com ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido málico (D) ou (L), ácido maléico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfôni- co, ácido p-toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico e semelhantes, preferivelmente ácido clorídrico ou ácido málico (L); ou (2) sais formados quando um próton ácido presente no composto precursor é substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon alcalino terroso, ou um íon alumínio; ou coordenados com uma base orgânica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina, e semelhantes.

O composto da presente invenção também pode agir, ou ser designado para agir como um pró-medicamento. Um “pró-medicamento” refere-se a um agente, que é convertido

no medicamento precursor in vivo. Pró-medicamentos são frequentemente úteis, pois em algumas situações, eles podem ser mais fáceis de administrar do que o medicamento pre- cursor. Por exemplo, eles podem ser biodisponíveis para administração oral, se o medica- mento precursor não for. O pró-medicamento também pode ter solubilidade aperfeiçoada em composições farmacêuticas sobre o medicamento precursor. Um exemplo, sem limitação, 10 de um pró-medicamento seria um composto da presente invenção, que é, administrado co- mo um éster (o “pró-medicamento”), fosfato, amida, carbamato ou uréia.

“Quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se àquela quantidade do composto sendo administrada, a qual de certa forma atenuará um ou mais dos sintomas do distúrbio sendo tratado. Em referência ao tratamento de câncer, uma quantidade terapeuticamente 15 eficaz refere-se àquela quantidade que tem o efeito de: (1) reduzir o tamanho do tumor; (2) inibir a metástase do tumor; (3) inibir o crescimento do tumor; e/ou (4) atenuar um ou mais sintomas associados com o câncer.

O termo “condição mediada pela proteína cinase” ou “doença”, conforme usado neste relatório, significa qualquer doença ou outra condição deletéria em que uma proteína 20 cinase é conhecida desempenhar um papel. O termo “condição mediada pela proteína cina- se” ou “doença” também significa aquelas doenças ou condições que são aliviadas por tra- tamento com um inibidor da proteína cinase. Tais condições incluem, sem limitação, cânce- res que expressam cinases Pim, particularmente cinase Pim-1, e outros distúrbios hiperproli- feratívos associados com a expressão de cinase Pim. Em certas modalidades, o câncer é 25 um câncer de cólon, mama, estômago, próstata, pâncreas, ou tecido ovariano.

O termo “condição mediada pela cinase Pim” ou “doença”, conforme usado neste relatório, significa qualquer doença ou outra condição deletéria em que a cinase Pim 1, cina- se Pim 2 e/ou cinase Pim 3 é conhecida ser expressada e/ou desempenhar um papel. O termo “condição mediada pela cinase Pim” ou “doença” também significa aquelas doenças ou condições que são aliviadas por tratamento com um inibidor de cinase Pim.

Conforme usado neste relatório, “administrar” ou “administração” refere-se à libera- ção de um composto inventivo ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste ou de uma composição farmacêutica contendo um composto inventivo ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, pertencente a esta invenção, a um organismo, para o propósito de preven- ção ou tratamento de um distúrbio relacionado à proteína cinase.

Vias adequadas de administração podem incluir, sem limitação, administração oral, retal, transmucosal ou intestinal ou injeções intramusculares, subcutâneas, intramedulares, intratecais, intraventriculares diretas, intravenosas, intravítreas, intraperitoneais, intranasais, ou intraoculares. Em certas modalidades, as vias preferidas de administração são orais e intravenosas.

Alternativamente, uma pessoa pode administrar o composto em um local ao invés da maneira sistêmica, por exemplo, por intermédio da injeção do composto diretamente em um tumor sólido, frequentemente em uma formulação de liberação de depósito ou sustenta- da.

Além disso, uma pessoa pode administrar o medicamento em um sistema de libe- ração de medicamento alvejada, por exemplo, em um Iipossoma revestido com anticorpo específico para o tumor. Desta forma, os Iipossomas podem ser alvejados e absorvidos se- letivamente pelo tumor.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser fabricadas por processos bem conhecidos na técnica, por exemplo, por meio de processos de mistura, dis- solução, granulação, drageamento, levigação, emulsificação, encapsulamento, aprisiona- mento ou liofilização convencionais.

As composições farmacêuticas para o uso de acordo com a presente invenção po- dem ser formuladas em qualquer maneira convencional usando um ou mais portadores fisio- Iogicamente aceitáveis compreendendo excipientes e auxiliares que facilitam o processa- mento dos compostos ativos nas preparações que podem ser farmaceuticamente usadas. A formulação apropriada é dependente da via de administração escolhida.

Para injeção, os compostos da invenção podem ser formulados em soluções aquo- sas, preferivelmente em tampões fisiologicamente compatíveis, tais como solução de Hank, solução de Ringer, ou solução tampão salina fisiológica. Para administração transmucosal, penetrantes apropriados para a barreira ser permeada são usados na formulação. Tais pe- netrantes geralmente são conhecidos na técnica.

Para administração oral, os compostos podem ser formulados combinando-se os compostos ativos com portadores farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica. Tais portadores possibilitam que os compostos da invenção sejam formulados como table- tes, pílulas, pastilhas expectorantes, drágeas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, pastas flui- das, suspensões e semelhantes, para a ingestão oral por um paciente. Preparações farma- cêuticas para uso oral podem ser fabricadas usando um excipiente sólido, opcionalmente triturando a mistura resultante, e processando a mistura de grânulos, depois de adicionar outros auxiliares adequados, se desejado, para obter tabletes ou núcleos de drágeas. Exci- pientes úteis são, em particular, enchedores tais como açúcares, incluindo lactose, sacaro- se, manitol, ou sorbitol, preparações de celulose tais como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz e amido de batata e outros materiais tais como gelatina, go- ma tragacanto, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose sódica, e/ou polivinilpirrolidona (PVP). Se desejado, agentes desintegrantes podem ser adicionados, tais como polivinilpirrolidona reticulada, ágar, ou ácido algínico. Um sal, tal como alginato de sódio também pode ser usado.

Núcleos de drágeas são fornecidos com revestimentos adequados. Para este pro- pósito, soluções de açúcar concentradas podem ser usadas, as quais opcionalmente podem conter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietileno glicol, e/ou dióxi- do de titânio, soluções de verniz, e solventes orgânicos adequados ou misturas de solvente. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos tabletes ou revestimentos de drágeas para identificação ou para caracterizar combinações diferentes de doses do composto ativo.

As composições farmacêuticas que podem ser usadas oralmente incluem cápsulas de liberação controlada feitas de gelatina, assim como cápsulas moles e vedadas feitas de gelatina e um plasticizador, tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de liberação controlada podem conter os ingredientes ativos em mistura com um enchedor, tal como lactose, um aglutinante, tal como amido, e/ou um lubrificante, tal como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizadores. Em cápsulas moles, os compostos ativos podem ser dissol- vidos ou colocados em suspensão em líquidos adequados, tais como óleos graxos, parafina líquida, ou polietileno glicóis líquidos. Estabilizadores também podem ser adicionados nes- tas formulações. Composições farmacêuticas que também podem ser usadas incluem cáp- sulas de gelatina duras. As cápsulas ou pílulas podem ser empacotadas em frascos de vidro ou plástico pardos para proteger o composto ativo da luz. Os recipientes contendo a formu- lação em cápsula do composto ativo são preferivelmente armazenados na temperatura am- biente controlada (15 a 30 °C).

Para administração por inalação, os compostos para o uso, de acordo com a pre- sente invenção, podem ser convenientemente liberados na forma de uma pulverização por aerossol usando uma embalagem pressurizada ou um nebulizador e um gás propelente a- dequado, por exemplo, sem limitação, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorote- trafluoroetano ou dióxido de carbono. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser controlada fornecendo-se uma válvula para liberar uma quantidade me- dida. Por exemplo, cápsulas e cartuchos de gelatina para o uso em um inalador ou insufla- dor podem ser formulados contendo uma mistura em pó do composto e uma base em pó adequada, tal como lactose ou amido.

Os compostos também podem ser formulados para administração parenteral, por exemplo, por injeção em bolus ou infusão contínua. Formulações para injeção podem ser apresentadas na forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes de doses múltiplas com um preservante adicionado. As composições podem tomar tais for- mas como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter materiais de formulação tais como agentes de suspensão, estabilizadores e/ou dis- persantes.

As composições farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções a- quosas de uma forma solúvel em água, tal como, sem limitação, um sal do composto ativo. Adicionalmente, suspensões dos compostos ativos podem ser preparadas em um veículo

lipofílico. Veículos lipofílicos adequados incluem óleos graxos tais como óleo de gergelim, ésteres de ácido graxo sintéticos tais como oleato de etila e triglicerídeos, ou materiais tais como lipossomas. Suspensões para injeção aquosas podem conter substâncias que aumen- tam a viscosidade da suspensão, tais como carboximetilcelulose sódica, sorbitol, ou dextra- no. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizadores e/ou agentes ade- 10 quados que aumentam a solubilidade dos compostos para possibilitar a preparação de solu- ções altamente concentradas.

Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar na forma de pó para constituição com um veículo adequado, por exemplo, água estéril e livre de pirogênio, antes do uso.

Os compostos também podem ser formulados em composições retais tais como supositórios ou enemas de retenção, usando, por exemplo, bases de supositório convencio- nais tais como manteiga de cacau ou outros glicerídeos.

Além das formulações previamente descritas, os compostos também podem ser formulados como preparações de depósito. Tais formulações de ação longa podem ser ad- ministradas por implantação (por exemplo, subcutânea ou intramuscularmente) ou por inje- 20 ção intramuscular. Um composto desta invenção pode ser formulado por esta via de admi- nistração com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo, em uma e- mulsão com um óleo farmacologicamente aceitável), com resinas de troca iônica, ou como um derivado frugalmente solúvel tal como, sem limitação, um sal frugalmente solúvel.

Um exemplo não Iimitante de um portador farmacêutico para os compostos hidrofó- bicos da invenção é um sistema cossolvente compreendendo álcool benzílico, um tensoativo não polar, um polímero orgânico miscível em água e uma fase aquosa, tal como o sistema cossolvente VPD. VPD é uma solução de 3 % em p/v de álcool benzílico, 8 % em p/v do tensoativo não polar polisorbato 80, e 65 % em p/v de polietileno glicol 300, preparados para se avolumarem em etanol absoluto. O sistema cossolvente VPD (VPD:D5W) consiste de VPD diluída 1:1 com uma dextrose 5 % em solução aquosa. Este sistema cossolvente tam- bém dissolve compostos hidrofóbicos e por si só produz toxicidade baixa sob administração sistêmica. Naturalmente, as proporções de um tal sistema cossolvente podem ser variadas consideravelmente sem destruir suas características de solubilidade e toxicidade. Além dis- so, a identidade dos componentes cossolventes pode ser variada: por exemplo, outros ten- soativos não polares com toxicidade baixa podem estar no lugar de polisorbato 80, o tama- nho da fração de polietileno glicol pode ser variado, outros polímeros biocompatíveis podem substituir polietileno glicol, por exemplo, polivinilpirrolidona, e outros açúcares ou polissaca- rídeos podem substituir dextrose. Alternativamente, outros sistemas de liberação para compostos farmacêuticos hi- drofóbicos podem ser utilizados. Lipossomas e emulsões são exemplos bem conhecidos de veículos ou portadores de liberação para medicamentos hidrofóbicos. Além disso, certos solventes orgânicos, tais como dimetilsulfóxido, também podem ser utilizados, embora fre- quentemente ao custo de maior toxicidade.

Adicionalmente, os compostos podem ser liberados usando um sistema de libera- ção sustentada, tal como matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos con- tendo o agente terapêutico. Vários materiais de liberação sustentada foram estabelecidos e são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica. Cápsulas de liberação sustentada podem, dependendo de sua natureza química, liberar os compostos durante algumas sema- nas até mais de 100 dias. Dependendo da natureza química e da estabilidade biológica do reagente terapêutico, estratégias adicionais para a estabilização da proteína podem ser utili- zadas.

As composições farmacêuticas neste relatório também podem compreender porta- dores ou excipientes de fase sólida ou em gel adequados. Exemplos de tais portadores ou excipientes incluem, porém não são limitados a, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vá- rios açúcares, amidos, derivados de celulose, gelatina, e polímeros tais como polietileno glicóis.

Muitos dos compostos que modulam a proteína cinase da invenção podem ser for- necidos como sais fisiologicamente aceitáveis em que o composto reivindicado pode formar a espécie negativa ou positivamente carregada. Exemplos de sais em que o composto for- ma a porção positivamente carregada incluem, sem limitação, amônio quaternário (definido em outra parte neste relatório), sais tais como o cloridreto, sulfato, carbonato, lactato, tartra- to, malato, maleato, succinato em que o átomo de nitrogênio do grupo amônio quaternário é um nitrogênio do composto selecionado desta invenção que foi reagido com o ácido apropri- ado. Sais em que um composto desta invenção forma a espécie negativamente carregada incluem, sem limitação, os sais de sódio, potássio, cálcio e magnésio formados pela reação de um grupo ácido carboxílico no composto com uma base apropriada (por exemplo, hidró- xido de sódio (NaOH)1 hidróxido de potássio (KOH), hidróxido de cálcio (Ca(OH)2), etc).

As composições farmacêuticas adequadas para o uso na presente invenção inclu- em composições em que os ingredientes ativos são contidos em uma quantidade suficiente para obter o propósito intencionado, por exemplo, a modulação da atividade da proteína cinase e/ou o tratamento ou prevenção de um distúrbio relacionado à proteína cinase.

Mais especificamente, uma quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quan- tidade do composto eficaz para prevenir, aliviar ou melhorar os sintomas da doença ou pro- longar a sobrevivência do paciente sendo tratado. A determinação de uma quantidade terapeuticamente eficaz está ao alcance da ca- pacidade daquele habilitado na técnica, especialmente na Iuz da divulgação detalhada for- necida neste relatório.

Para qualquer composto usado nos métodos da invenção, a quantidade ou dose te- rapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura celular. Portanto, a dosagem pode ser formulada para o uso em modelos animais de modo a obter uma faixa de concentração circulante que inclui a IC50 conforme determinado na cultura ce- lular (isto é, a concentração do composto de teste que atinge uma inibição média máxima da atividade da proteína cinase). Tal informação depois pode ser usada para determinar mais precisamente doses úteis em seres humanos.

Toxicidade e eficácia terapêutica dos compostos descritos neste relatório podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, determinando-se a IC50 e a LD50 (ambas as quais são debatidas em outra parte neste relatório) para um composto objeto. Os dados obtidos a partir destes ensaios de cultura celular e estudos em animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para o uso em seres humanos. A dosagem pode variar dependendo da forma de dosagem utilizada e da via de administração utilizada. A formulação exata, via de administração e dosagem podem ser escolhidas pelo clínico individual tendo em vista a condição do paciente. (Veja, por exemplo, GOODMAN & GILMAN’S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Cap. 3, 9â ed., Ed. por Hardman1 J., e Limbard, L., McGraw-HiII, Cidade de Nova Iorque, 1996, p,46).

A quantidade e intervalo da dosagem podem ser ajustados individualmente para fornecer níveis plasmáticos da espécie ativa, os quais são suficientes para manter os efeitos que modulam cinase. Estes níveis plasmáticos são referidos como concentrações eficazes mínimas (MECs). A MEC variará para cada composto, porém pode ser estimada a partir de dados in vitro, por exemplo, a concentração necessária para obter 50 a 90 % de inibição de uma cinase pode ser verificada usando os ensaios descritos neste relatório. Dosagens ne- cessárias para obter a MEC dependerá das características individuais e via de administra- ção. Ensaios HPLC ou bioensaios podem ser usados para determinar concentrações plas- máticas.

Intervalos de dosagem também podem ser determinados usando o valor da MEC. Os compostos devem ser administrados usando um regime que mantém níveis plasmáticos acima da MEC durante 10 a 90 % do tempo, preferivelmente entre 30 a 90 % e o mais prefe- rivelmente entre 50 a 90 %.

No presente, as quantidades terapeuticamente eficazes dos compostos da presente invenção podem variar de aproximadamente 2,5 mg/m2 a 1500 mg/m2 por dia. Quantidades ilustrativas adicionais variam de 0,2 a 1000 mg/qid, 2 a 500 mg/qid, e 20 a 250 mg/qid. Em casos de administração local ou absorção seletiva, a concentração local eficaz do medicamento pode não estar relacionada à concentração plasmática, e outros procedi- mentos conhecidos na técnica podem ser utilizados para determinar a quantidade e intervalo de dosagem corretos.

A quantidade de uma composição administrada será, certamente, dependente do paciente sendo tratado, da severidade da aflição, da maneira de administração, do julga- mento da prescrição do clínico, etc.

As composições podem, se desejado, ser apresentadas em uma embalagem ou dispositivo dispensador, tal como um kit aprovado pela FDA, que pode conter uma ou mais formas de dosagem unitária contendo o ingrediente ativo. A embalagem pode, por exemplo, compreender folha metálica ou de plástico, tal como um carteia. A embalagem ou dispositivo dispensador pode estar acompanhado por instruções para a administração. A embalagem ou dispensador também pode estar acompanhado por uma advertência associada com o recipiente em uma forma prescrita por uma agência governamental que regula a fabricação, uso ou venda de produtos farmacêuticos, em que a advertência é refletiva de aprovação pela agência da forma das composições ou de administração humana ou veterinária. Tal advertência, por exemplo, pode estar no rótulo aprovado pela U.S. Food and Drug Adminis- tration para prescrição de medicamentos ou em um inserto do produto aprovado. Composi- ções compreendendo um composto da invenção formuladas em um portador farmacêutico compatível também podem ser preparadas, colocadas em um recipiente apropriado, e clas- sificadas para o tratamento de uma condição indicada. Condições adequadas indicadas no rótulo podem incluir tratamento de um tumor, inibição de angiogênese, tratamento de fibro- se, diabetes, e semelhantes.

Conforme mencionado acima, os compostos e composições da invenção encontra- rão utilidade em uma faixa ampla de doenças e condições mediadas por proteínas cinases, incluindo doenças e condições mediadas por cinase aurora-2. Tais doenças podem incluir, por via de exemplo e não de limitação, cânceres tais como câncer de pulmão, NSCLC (cân- cer de pulmão de células não pequenas), câncer linfocitóide, câncer ósseo, câncer pancreá- tico, câncer de pele, dermatofibrosarcoma protuberans, câncer de cabeça e pescoço, mela- noma cutâneo ou intraocular, câncer uterino, câncer ovariano, câncer colo-retal, câncer da região anal, câncer de estômago, câncer de cólon, câncer de mama, tumores ginecológicos (por exemplo, sarcomas uterinos, carcinoma das trompas de Falópio, carcinoma do endo- métrio, carcinoma do cérvix, carcinoma da vagina ou carcinoma da vulva), doença de Hodg- kin, câncer hepatocelular, câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do siste- ma endócrino (por exemplo, câncer da tireóide, pâncreas, paratireóide ou glândulas adre- nais), sarcomas de tecidos moles, câncer da uretra, câncer do pênis, câncer de próstata (particularmente hormônio-refratário), leucemia crônica ou aguda, tumores sólidos de infân- cia, hipereosinofilia, Iinfomas linfociticos, câncer da bexiga, câncer do rim ou uréter (por e- xemplo, carcinoma de células renais, carcinoma da pélvis renal), malignidades pediátricas, neoplasmas do sistema nervoso central (por exemplo, Iinfoma primário do SNC, tumores do eixo espinhal, meduloblastoma, gliomas do tronco cerebral ou adenomas pituitários), esôfa- go de Barrett (síndrome pré-maligna), doença cutânea neoplástica, psoríase, micose fungói- de, e hipertrofia prostática benigna, doenças relacionadas a diabetes tais como retinopatia diabética, isquemia da retina, e neovascularização da retina, cirrose hepática, angiogênese, doença cardiovascular tal como aterosclerose, doença imunológica tal como doença autoi- mune e doença renal.

O composto inventivo pode ser usado em combinação com um ou mais outros a- gentes quimioterápicos. A dosagem dos compostos inventivos pode ser ajustada para qual- quer reação medicamento-medicamento. Em uma modalidade, o agente quimioterapêutico é selecionado do grupo que consiste de inibidores mitóticos, agentes alquilantes, antimetabóli- tos, inibidores do ciclo celular, enzimas, inibidores da topoisomerase tais como CAMPTOSAR (irinotecano), modificadores da resposta biológica, anti-hormônios, agentes antiangiogênicos tais como inibidores de MMP-2, MMP-9 e COX-2, antiandrógenos, comple- xos de coordenação de platina (cisplatina, etc), uréias substituídas tais como hidroxiuréia; derivados de metilidrazina, por exemplo, procarbazina; supressores adrenocorticais, por exemplo, mitotano, aminoglutetimida, hormônio e antagonistas de hormônio tais como os adrenocorticosteróides (por exemplo, prednisona), progestinas (por exemplo, caproato de hidroxiprogesterona), estrógenos (por exemplo, dietilestilbesterol), antiestrógenos tais como tamoxifeno, andrógenos, por exemplo, propionato de testosterona, e inibidores de aromata- se, tais como anastrozol, e AROMASIN (exemestano).

O método acima pode ser realizado em combinação com exemplos de agentes al- quilantes, os quais incluem, sem limitação, fluorouracil (5-FU) sozinho ou em combinação adicional com leucovorin; outros análogos de pirimidina tais como UFT, capecitabina, genci- tabina e citarabina, os sulfonatos de alquila, por exemplo, bussulfano (usado no tratamento de leucemia granulocítica crônica), improssulfano e pipossulfano; aziridinas, por exemplo, benzodepa, carboquona, meturedepa e uredepa; etilenoiminas e metilmelaminas, por exem- plo, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimeti- lolmelamina; e as mostardas de nitrogênio, por exemplo, clorambucil (usado no tratamento de leucemia linfocítica crônica, macroglobulinemia primária e Iinfoma não-Hodgkin), ciclofos- famida (usada no tratamento da doença de Hodgkin, mieloma múltiplo, neuroblastoma, cân- cer de mama, câncer ovariano, câncer de pulmão, tumor de Wilm e rabdomiossarcoma), estramustina, ifosfamida, novembricina, prednimustina e mostarda de uracila (usada no tra- tamento de trombocitose primária, Iinfoma não-Hodgkin, doença de Hodgkin e câncer ovari- ano); e triazinas, por exemplo, dacarbazina (usada no tratamento de sarcoma dos tecidos moles).

O método acima pode ser realizado em combinação com exemplos de agentes quimioterápicos antimetabólitos, os quais incluem, sem limitação, análogos do ácido fólico, por exemplo, metotrexato (usado no tratamento de leucemia linfocítica aguda, coriocarcino- 5 ma, micose fungóide, câncer de mama, câncer de cabeça e pescoço e sarcoma osteogêni- co) e pteropterina; e os análogos de purina tais como mercaptopurina e tioguanina que en- contram uso no tratamento de Ieucemias granulocíticas agudas, linfocíticas agudas e granu- locíticas crônicas.

O método acima pode ser realizado em combinação com exemplos de agentes 10 quimioterápicos com base no produto natural, os quais incluem, sem limitação, os alcalóides da vinca, por exemplo, vinblastina (usada no tratamento de câncer de mama e testicular), vincristina e vindesina; as epipodofilotoxinas, por exemplo, etoposida e teniposida, ambas as quais são úteis no tratamento de câncer testicular e sarcoma de Kaposi; os agentes quimio- terápicos antibióticos, por exemplo, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitomicina 15 (usadas para tratar câncer de estômago, cérvíx, cólon, mama, bexiga e pancreático), dacti- nomicina, temozolomida, plicamicina, bleomicina (usadas no tratamento de câncer de pele, esôfago e do trato geniturinário); e os agentes quimioterápicos enzimáticos tais como L- asparaginase.

Exemplos de inibidores de COX-II úteis incluem Vioxx, CELEBREX (celecoxib), val- decoxib, paracoxib, rofecoxib, e Cox 189.

Exemplos de inibidores de metaloproteinase da matriz úteis são descritos na WO 96/33172 (publicada em 24 de Outubro de 1996), WO 96/27583 (publicada em 7 de Março de 1996), Pedido de Patente Européia N2 97304971,1 (depositado em 8 de Julho de 1997), Pedido de Patente Européia N- 99308617,2 (depositado em 29 de Outubro de 1999), WO 25 98/07697 (publicada em 26 de Fevereiro de 1998), WO 98/03516 (publicada em 29 de Ja- neiro de 1998), WO 98/34918 (publicada em 13 de Agosto de 1998), WO 98/34915 (publica- da em 13 de Agosto de 1998), WO 98/33768 (publicada em 6 de Agosto de 1998), WO 98/30566 (publicada em 16 de Julho de 1998), Publicação de Patente Européia 606.046 (publicada em 13 de Julho de 1994), Publicação de Patente Européia 931.788 (publicada 30 em 28 de Julho de 1999), WO 90/05719 (publicada em 31 de Maio de 1990), WO 99/52910 (publicada em 21 de Outubro de 1999), WO 99/52889 (publicada em 21 de Outubro de 1999), WO 99/29667 (publicada em 17 de Junho de 1999), Pedido Internacional PCT N2 PCT/IB98/01113 (depositado em 21 de Julho de 1998), Pedido de Patente Européia N2 99302232,1 (depositado em Março de 1999), pedido de patente da Grã Bretanha número 35 9912961,1 (depositado em 3 de Junho de 1999), Pat. U.S. N2 5.863.949 (concedida em 26 de Janeiro de 1999), Pat. U.S. Na 5.861.510 (concedida em 19 de Janeiro de 1999), e Publi- cação de Patente Européia 780.386 (publicada em 25 de Junho de 1997), todos os quais são incorporados integralmente neste relatório como referência. Inibidores de MMP-2 e MMP-9 preferidos são aqueles que têm pouca ou nenhuma inibição da atividade de MMP-1. Mais preferidos são aqueles que inibem seletivamente MMP-2 e/ou MMP-9 em relação a outras metaloproteinases da matriz (isto é, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP- 7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 e MMP-13).

Alguns exemplos específicos de inibidores de MMP úteis na presente invenção são AG-3340, RO 32-3555, RS 13-0830, e compostos selecionados de: ácido 3-[[4-(4-fluoro- fenóxi)-benzenossulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-ciclopentil)-amino]-propiônico; hidroxiamida do ácido 3-exo-3-[4-(4-fluoro-fenóxi)-benzenossulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3,2,1]octano-3- 10 carboxílico; hidroxiamida do ácido (2R,3R) 1-[4-(2-cloro-4-fluoro-benzilóxi)- benzenossulfonil]-3-hidróxi-3-metil-piperidino-2-carboxílico; hidroxiamida do ácido 4-[4-(4- fluoro-fenóxi)-benzenossulfonilamino]-tetraidro-piran-4-carboxílico; ácido 3-[[4-(4-fluoro- fenóxi)-benzenossulfonil]-( 1 -hidroxicarbamoil-ciclobutil)-amino]-propiônico; hidroxiamida do ácido 4-[4-(4-cloro-fenóxi)-benzenossulfonilamino]-tetraidro-piran-4-carboxílico; hidroxiamida 15 do ácido (R) 3-[4-(4-cloro-fenóxi)-benzenossulfonilamino]-tetraidro-piran-3-carboxílico; hidro- xiamida do ácido (2R,3R) 1-[4-(4-fluoro-2-metilbenzilóxi)-benzenossulfonil]-3-hidróxi-3-metil- piperidino-2-carboxílico; ácido 3-[[(4-(4-fluoro-fenóxi)-benzenossulfonil]-(1-hidroxicarbamoil-

1 -metil-etil)-amino]-propiônico; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenóxi)-benzenossulfonil]-(4- hidroxicarbamoil-tetraidro-piran-4-il)-amino]-propiônico; hidroxiamida do ácido 3-exo-3-[4-(4- 20 cloro-fenóxi)-benzenossulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3,2,1 ]octano-3-carboxílico; hidroxiamida do ácido 3-endo-3-[4-(4-fluoro-fenóxi)-benzenossulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3,2,1 ]octano-3- carboxílico; e hidroxiamida do ácido (R) 3-[4-(4-fluoro-fenóxi)-benzenossulfonilamino]- tetraidro-furano-3-carboxílico; e sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis destes com- postos.

Outros agentes antiangiogênicos, outros inibidores de COX-II e outros inibidores de

MMP, também podem ser usados na presente invenção.

Um composto inventivo também pode ser usado com outros inibidores de transdu- ção de sinal, tais como agentes que podem inibir respostas do EGFR (receptor de fator de crescimento epidérmico), tais como anticorpos EGFR, anticorpos EGF, e moléculas que são 30 inibidoras do EGFR; inibidores do VEGF (fator de crescimento do endotélio vascular); e ini- bidores do receptor de erbB2, tais como moléculas orgânicas ou anticorpos que se ligam ao receptor de erbB2, tal como HERCEPTIN (Genentech, Inc., Sul de São Francisco, CA). Ini- bidores de EGFR são descritos, por exemplo, na WO 95/19970 (publicada em 27 de Julho de 1995), WO 98/14451 (publicada em 9 de Abril de 1998), WO 98/02434 (publicada em 22 35 de Janeiro de 1998), e Pat. U.S. N2 5.747.498 (concedida em 5 de Maio de 1998), e tais substâncias podem ser usadas na presente invenção conforme descrito neste relatório.

Agentes que inibem EGFR incluem, porém não são limitados aos anticorpos mono- clonais C225 e anti-EGFR 22Mab (ImCIone Systems, Inc., Nova Iorque, NY), os compostos ZD-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex Inc., An- nandale, NJ), e OLX-103 (Merck & Co., Whitehouse Station, NJ), e toxina de fusão de EGF (Seragen Inc., Hopkinton, MA).

Estes e outros agentes que inibem EGFR podem ser usados na presente invenção.

Inibidores de VEGF, por exemplo SU-5416 e SU-6668 (Sugen Inc., Sul de São Francisco, CA), também podem ser combinados com um composto inventivo. Inibidores de VEGF são descritos, por exemplo, na WO 01/60814 A3 (publicada em 23 de Agosto de 2001), WO 99/24440 (publicada em 20 de Maio de 1999), Pedido Internacional PCT PCT/IB99/00797 10 (depositado em 3 de Maio de 1999), WO 95/21613 (publicada em 17 de Agosto de 1995), WO 99/61422 (publicada em 2 de Dezembro de 1999), Pat. U.S. N- 5.834.504 (concedida em 10 de Novembro de 1998), WO 01/60814, WO 98/50356 (publicadas em 12 de Novem- bro de 1998), Pat. U.S. N2 5.883.113 (concedida em 16 de Março de 1999), Pat. U.S. N2 5.886.020 (concedida em 23 de Março de 1999), Pat. U.S. N2 5.792.783 (concedida em 11 15 de Agosto de 1998), WO 99/10349 (publicada em 4 de Março de 1999), WO 97/32856 (pu- blicada em 12 de Setembro de 1997), WO 97/22596 (publicada em 26 de Junho de 1997), WO 98/54093 (publicada em 3 de Dezembro de 1998), WO 98/02438 (publicada em 22 de Janeiro de 1998), WO 99/16755 (publicada em 8 de Abril de 1999), e WO 98/02437 (publi- cada em 22 de Janeiro de 1998), todos os quais são incorporados integralmente neste rela- 20 tório como referência. Outros exemplos de alguns inibidores de VEGF específicos úteis na presente invenção são IM862 (Cytran Inc., Kirkland, WA); anticorpo monoclonal anti-VEGF da Genentech, Inc.; e angiozima, uma ribozima sintética da Ribozima (Boulder, CO) e Chi- ron (Emeryville, CA). Estes e outros inibidores de VEGF podem ser usados na presente in- venção conforme descrito neste relatório. Inibidores do receptor de pErbB2, tais como GW- 25 282974 (Glaxo Wellcome pic), e os anticorpos monoclonais AR-209 (Aronex Pharmaceuti- cals Inc., The Woodlands, TX) e 2B-1 (Chiron), além disso, podem ser combinados com um composto inventivo, por exemplo, aqueles indicados na WO 98/02434 (publicada em 22 de Janeiro de 1998), WO 99/35146 (publicada em 15 de Julho de 1999), WO 99/35132 (publi- cada em 15 de Julho de 1999), WO 98/02437 (publicada em 22 de Janeiro de 1998), WO 30 97/13760 (publicada em 17 de Abril de 1997), WO 95/19970 (publicada em 27 de Julho de 1995), Pat. U.S. Ne 5.587.458 (concedida em 24 de Dezembro de 1996), e Pat. U.S. N2 5.877.305 (concedida em 2 de Março de 1999), as quais são todas incorporadas integral- mente neste relatório como referência. Inibidores do receptor de ErbB2 úteis na presente invenção também são descritos na Pat. U.S. N2 6.284.764 (concedida em 4 de Setembro de 35 2001), incorporada integralmente neste relatório como referência. Os compostos e substân- cia inibidores do receptor de erbB2 descritos nos pedidos PCT, patentes U.S., e pedidos provisórios U.S. anteriormente mencionados, assim como outros compostos e substâncias que inibem o receptor de erbB2, podem ser usados com um composto inventivo, de acordo com a presente invenção.

Um composto inventivo também pode ser usado com outros agentes úteis no tra- tamento de câncer, incluindo, porém não limitados a, agentes capazes de realçar respostas imunes antitumor, tais como anticorpos CTLA4 (antígeno 4 do linfócito citotóxico), e outros agentes capazes de bloquear CTLA4; e agentes antiproliferativos tais como outros inibidores de farnesil proteína transferase, por exemplo os inibidores de farnesil proteína transferase descritos nas referências citadas na seção “Fundamentos” da Pat. U.S. N- 6.258.824 B1.

O método acima também pode ser realizado em combinação com terapia de radia- ção, em que a quantidade de um composto inventivo em combinação com a terapia de radi- ação é eficaz no tratamento das doenças acima mencionadas.

Técnicas para administrar a terapia de radiação são conhecidas no ramo, e estas técnicas podem ser usadas na terapia de combinação descrita neste relatório. A administra- ção do composto da invenção nesta terapia de combinação pode ser determinada conforme descrito neste relatório.

A invenção será ainda entendida sob consideração dos exemplos não Iimitantes seguintes.

EXEMPLOS

EXEMPLO 1

IDENTIFICAÇÃO DIRIGIDA COM BASE COMPUTACIONAL

Cálculos de triagem virtuais (Friesner et al. J. Med. Chem. 47, 1739-1749, 2004; Schrodinger. L. L. C, Nova Iorque (http://www.schrodinaer.com): Schrodinger LLC. FirstDis- covery Technical Notes] Schrodinger Press: Portland, 2003) foram realizados com base na estrutura cristalina da cinase PIM-1 em complexo com AMP-PNP como um modelo (Qian et al., J. BioiChem. 280, 6130-6137, 2005; Jacobs et al., J. Bioi Chem. 280, 13728, 2005; Kumar et al., J. Mol. Biol. 348, 183, 2005; Bullock et ai, J. Med. Chem. 48, 7604-7614, 2005; Ryan et ai, Publicação PCT WO 2004/024895; Jeremy et ai, Publicação PCT WO 2004/058769). A triagem computacional de -1,5 milhão de compostos específicos e ou de diversos tipos de medicamentos das bibliotecas da Life Chemicals, Maybridge, TimTee1 Bio- Focus ComGenex e Ambinter levou à seleção de 63 compostos candidatos exclusivamente da biblioteca da BioFocus (BioFocus, 2464, Massachusetts Avenue, Cambridge, MA 02140, USA, www.biofocus.com). Nove compostos foram descobertos serem ativos na faixa micro- molar baixa (8 a 10 //M) e 2 deles foram descobertos exibir atividade <8 μΜ no ensaio de ligação de cinase PIM-1 direto. Os compostos mais ativos para a identificação de regiões moleculares importantes quanto à atividade de cinase Pím-1 específica pertencem à classe de imidazo[1,2-b]piridazinas (Beswick et ai, Publicação PCT W01996/9631509; Raboisson et al., Tetrahedron 59, 5869-5878, 2003) e pírazolo[1,5-a]pírimidina (Williamson et al., Bioor- ganic & Med. Chem. Letters 15, 863-867, 2005). Conforme descrito abaixo, os compostos selecionados a partir da triagem virtual foram filtrados com base no modo de ligação, Qik- Prop (Schrodinger. L. L. C, Nova Iorque (http://www.schrodinQer.com): Schrodinger LLC. QikProp Technical Notes; Schrodinger Press: Portland, 2003). (solubilidade, permeabilidade) 5 normas de Lipinski (CA Lipinski, Adv. Drug Del. Rev. 23, 3, 1997) e a presença de grupos farmacofóricos desejados. Estas classes de compostos serviram como estruturas modelo para levar à otimização, síntese e triagem da cinase PIM-1.

1. Pré-processamento da Base de Dados do Liaante Tridimensional.

A base de dados de fonte externa na forma de arquivos no formato sdf da Life 10 Chemicals (16173), Maybridge (Hitfinder e coleta para triagem; 16000, 58855) TimTec (Ac- timol Collection; 82000), BioFocus (45842), ComGenex (4573) e Ambinter (5534), e suas coordenadas tridimensionais no formato mae, foi gerada para cada um dos arquivos sdf u- sando o módulo LigPrep dentro do pacote de software da Schrodinger. As coordenadas fi- nais foram armazenadas em um arquivo multi mae. LigPrep utiliza precaução especial com 15 respeito ao estado de protonação de grupos ionizáveis (por exemplo, aminas, amidinas, áci- dos carboxílicos) de todos os Iigantes selecionados que são considerados ionizados a um pH fisiológico de 7,4. Arquivos no formato multi mae separados adequados para triagem virtual QikProp e Glide foram gerados. Cada uma das bases de dados junto com a biblioteca final de 1.54122 moléculas foi considerada para triagem virtual.

2. Preparação de Coordenadas de Proteína e Definição de Sítios Ativos.

Coordenadas de proteína de referência usadas para triagem virtual Glide foram to- madas a partir da estrutura de raios X da cinase PIM-1 em complexo com AMP-PNP (pdb de entrada: 1XR1). Moléculas de água depois foram removidas e a ordem e geometrias de li- gação perdidas foram editadas. Átomos de hidrogênio foram adicionados e a estrutura com- 25 plexa combinada foi apresentada para o cálculo de preparação da proteína. A estrutura completamente refinada com a molécula AMP-PNP ligada foi ainda apresentada para o cál- culo Grid para definir o sítio ativo como a coleta de aminoácidos delimitados dentro de uma esfera de raio de 12 Â centralizada no Iigante da ligação.

3. Triagem virtual das bibliotecas filtradas por QikProp usando Glide.

Tipicamente, cada molécula do arquivo multi mae foi submetida aos cálculos de

QikProp. O coeficiente de Tanimoto, como os critérios para a seleção de compostos simila- res dentro das bases de dados foi implementado e isto levou à seleção de moléculas finais de 9267, 26593, 16394, 29394, 13258 e 3964 a partir de cada base de dados para triagem virtual.

4. Pós-processamento e Critérios de Seleção do Composto.

Compostos tendo escores Glide, formação de ligação de hidrogênio e interações hidrofóbicas desejados foram estimados por distâncias interatômicas para análise adicional. A estabilidade conformacional de cada candidato também foi estimada por diferença de e- nergia no campo de força entre a conformação complexada e a conformação livremente minimizada, e os candidatos principais do escore desta categoria foram selecionados para análise adicional. Compostos em cada uma das três categorias foram visualmente examina- 5 dos para eliminar candidatos sem geometria de ligação de hidrogênio, superfícies molecula- res hidrofóbicas, ou ângulos de torção ideais. As 236 estruturas resultantes foram ainda analisadas usando QikPro para calcular Iog S, permeabilidade, MW e normas de Lipinski. Isto reduziu ainda o número de compostos para 69. Estes candidatos foram agrupados, e entradas redundantes com a mesma estrutura química foram representadas por uma entra- 10 da única. Seis derivados de imidazo[1,2-b]piridazina e 13 derivados de pirazolo[1,5-

a]pirimidina foram selecionados e avaliados quanto a sua capacidade de inibir a atividade da cinase PIM-1 em um ensaio in vitro.

5. Resultados.

lmidazo[1,2-b]piridazinas e pirazolo[1,5-a]pirimidinas da biblioteca da BioFocus são 15 resumidos na Tabela I e Tabela III. O modo de ligação destes andaimes a partir dos prog- nósticos de acoplamento revelou que a porção imidazo[1,2-b]piridazina se posicionou simi- larmente àquela da adenina e interage com os resíduos da região dobradiça Glu121, Arg122 e Pro123. Os grupos aromáticos na posição Ri com várias substituições na terceira posição parecem mais favoráveis e exibem conformação mais estável com o grupo da cinase PIM-1. 20 As substituições C-8 são mais favoráveis do que as substituições C-6. Dados computacio- nais para estes dois andaimes sugeriram que as substituições de R1 e R2 exibem energia de ligação forte quando comparadas a pirazolo[1,5-a]pirimidina. Com base nestas análises, otimizamos os compostos identificados na biblioteca da BioFocus e desenvolvemos novos compostos apresentados nas Tabelas Il e IV.

Tabela I

Inibidores de Cinase PIM-1 ImidazoH .2-blPiridazina Ilustrativos 1-3 r a HN-SiL tl O 1-4 μ 'ò W HN 0A 1-5 .^y- O X 1-6 O-/ OH Tabela Il

Inibidores de Cinase Pim-1 lmidazoH.2-b1Piridazina Ilustrativos

N0 do composto Estrutura 2-1 ηοΊ Jk Jk IH NH2 2-2 h0N ^rN Jís- M-~y I H )=* 2-3 Η°Ί i*^V\ Αλ-Η [ " k=, <v Of* 2-14 hcN ΓΗ t Q 0^- 2-15 hoN .--U- N-^ I^N 0 2-16 Ν'Νχ Vy \ 0 HN-áL· Il 0 2-17 n'NX V F 2-18 N'X Q F 2-19 Q F 2-20 0 2-21 H0\ [ H o OA 2-22 H0% f«N Isa. HN-jL/ U O Tabela Ill

Inibidores de Cinase PIM-1 PirazoIoH .5-alPirimidina Ilustrativos N0 do composto Estrutura 3-1 JO NH 3-2 OH Ô N ^jTxj ηο^Λ^ 3-3 CN) ' N 3-4 O NH σ'0 3-5 HN HN „ °A 3-6 Tl JfD O=S=O H /=1X 1 Iy 0OF1 3-7 A JfD O=S=O <vV / φ a° 3-8 X^OX-O O 3-9 χΛ’-CvCO H2N 3-10 V5XX jTD 3-11 P HN -S*0 ο Λ 3-12 OS HN M HN, o^\ 3-13 Xr^O1-C? N I Tabela IV

Inibidores de Cinase Pim-1 PirazoloM .5-alPirimidina Ilustrativos

N0 do composto Estrutura 4-1 hcS NH2 4-2 HOvl Γ^νΛ N-. / 4-3 H°1 JTM'> I H o / '0 H 4-14 N Γη 4-15 H°1 Γη n^\L O 4-16 Ι^νΛ vnr Vo H N -s’---. U 0 4-17 νΊΐ '"'H F 4-18 fy\ V F 4-19 ---y ΓιΛ V F 4-20 Γτ > 0 B 0 4-21 H°1 J Γη N^>- ν^-Ν^'Ο H 4-22 H°1 \ o HN ti O EXEMPLO 2 SÍNTESE DOS COMPOSTOS DE IMIDAZ0[1,2-B]PIRIDAZINA.

Certos compostos ilustrativos da invenção foram preparados conforme apresenta- dos nos esquemas de reação seguintes e exemplos sintéticos detalhados.

Esquema 1

1,4-dibromo-trans-2-buteno (1) (10 g, 0,046 mol) foi dissolvido em CH2CI2 seco (100 ml) e esfriado a -78 0C e gás ozônio foi borbulhado até que a cor azul persistisse (-30 min). Uma corrente de nitrogênio foi passada através da solução até que a cor azul desapareces- 10 se, fornecendo solução incolor. Trifenilfosfina (12,9 g, 0,046 mol) foi adicionada às porções durante um período de 1 h. A mistura de reação foi levada a 0 0C e mantida no refrigerador durante 15 h. O solvente (CH2CI2) foi removido da mistura de reação (sem aplicação de vá- cuo) e o resíduo espesso foi destilado a 40 0C sob vácuo (Hg 1 mm), mantendo a tempera- tura do frasco receptor a -78 0C (durante a destilação, cuidado especial foi tomado para 15 manter uma circulação de água fria (-0 0C a -5 °C)). O bromoacetaldeído (2) (2,8 g, rendi- mento = 50 %) foi obtido como um líquido amarelo claro, que foi altamente lacrimatório.

3-Amino-6-cloropiridazina (1,5 g, 0,0116 mol) foi dissolvido em n-butanol (12 ml), esfriado a 0 0C e bromoacetaldeído (2,8 g, 0,023 mol) foi adicionado. A reação foi submetida

água foi adicionada e extraída com EtOAc (5 x 20 ml). As camadas orgânicas combinadas

o

Cl

/

5

Esquema 2

1

2

1. Preparação de Bromoacetaldeído (2)

1

2

2. 6-Cloro-imidazoH ,2-blpiridazina (4)

BrCH2CHO

3

4

ao refluxo durante 20 h e n-butanol foi removido sob pressão reduzida. À mistura de reação foram secas (Na2SO4), concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (EtOAc/hexano) para fornecer 6-Cloro-imidazo[1,2-b]piridazina (4) (690 mg, rendimento = 40 %).

3. 3-Bromo-6-cloro-imidazoH .2-blpiridazina (5)

acético glacial (5 ml) e bromo (0,4 ml) foi lentamente adicionado na temperatura ambiente. Depois de 20 minutos, o sólido foi separado por precipitação e foi filtrado. O sólido foi lavado com éter (3 x 15 ml) e seco ao ar para fornecer 3-Bromo-6-cloro-imidazo[1 t2-b]piridazina (5) (400 mg, rendimento = 60 %).

Em um frasco de fundo redondo de dois pescoços, Pd(PPh3)4 (0,07 g, 0,068 mmol) e CsF (0,31 g, 0,0020 mol) foram tomados em PhCH3 anidro (1,6 ml). Argônio foi borbulhado através da mistura de reação durante 10 minutos e depois 3-Bromo-6-cloro-imidazo[1,2- b]piridazina (5) seguido por ácido borônico foi adicionado. A mistura de reação foi submetida 15 ao refluxo durante 20 horas. Solvente foi removido da mistura de reação sob pressão redu- zida. O resíduo foi tomado em EtOAc (20 ml) e filtrado através de celite. O filtrado foi con- centrado sob pressão reduzida para obter o resíduo que foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH/CH2CI2) para fornecer [4-(6-cloro-imidazo[1,2-b]piridazino-3-il)-fenil]- dimetilamina (6) (50 mg, rendimento = 30 %).

5. 2-r3-(4-Dimetilaminofenil)-imidazoH .2-b1piridazino-6-il(±)-2-amino1butan-1-ol (7)

N Br2, AcOH

5

O 6-Cloro-imidazo[1,2-b]piridazina (4) (500 mg, 0,0032 mol) foi tomado em ácido

10

4. 4-(6-cloro-imidazoH.2-b1piridazino-3-il VfenilVdimetiIamina (6)

Cl

Pd(PPh3)4. CsF1 PhCH3 ei

\

I

/

N

/ OH

Cl

NH2

Pd2(Clba)3, NaOtBu1 L PhCH3

7 Λ N-.

L =

PCy2

NMe2

Em um frasco de fundo redondo de dois pescoços, Pd2(dba)3 (0,001 g, 0,0009 mmol), terc-butóxido de sódio (0,02 g, 0,256 mmol) e Iigante (0,001 g, 0,0027 mmol) foram tomados em PhCH3 anidro. Argônio foi passado através da mistura de reação durante 10 minutos e depois [4-(6-cloro-imidazo[1,2-b]piridazino-3-il)-fenil]-dimetilamina (6) (0,05 g, 0,18 5 mmol) e (±)-2-amino-1-butanol (0,02 g, 0,22 mmol) foram adicionados. A reação foi submeti- da ao refluxo durante 24 h. Tolueno foi removido da mistura de reação sob pressão reduzi- da, e o resíduo foi tomado em EtOAc (25 ml), filtrado através de celite. O filtrado foi concen- trado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (Me- OH/CH2CI2) para fornecer 2-[3-(4-Dimetilaminofenil)-imidazo[1,2-b]piridazino-6-il(±)-2- 10 amino]butan-1-ol (7) (15 mg, rendimento = 31 %, pureza HPLC = 97 %).

Em um frasco de fundo redondo de dois pescoços, Pd(PPh3)4 (0,068 mmol) e CsF (0,0020 mol) foram tomados em PhCH3 anidro (1,6 ml). Argônio foi borbulhado através da mistura de reação durante 10 minutos e depois 3-Bromo-6-cloro-imidazo[1,2-b]piridazina (5) seguido por ácidos 3 ou 4-substituídos borônicos foram adicionados. A mistura de reação foi submetida ao refluxo durante 20 horas. Solvente foi removido da mistura de reação sob

6. Esquema e procedimentos gerais para a síntese dos compostos 9 e 10 Esquema 3

OH

R = -N(CH3)2, 3-F, 4-F, 3-CF3, 4-CF3

3-OCF3, 4-OCF3, 3-NHS02CH3

4-NHS02CH3, 3-N02 3-N02, 4-N02, 3-OCH3, 4-OCH3, 3-CI 4-CI pressão reduzida. O resíduo foi tomado em EtOAc (20 ml) e filtrado através de celite. O fil- trado foi concentrado sob pressão reduzida para obter o resíduo que foi purificado por cro- matografia em coluna (MeOH/CH2CI2) para produzir [3 ou 4-(substituído)-(6-cloro- imidazo[1,2-b]piridazino-3-il)-fenil]-dimetilamina 9 e 10 com razão 6:4.

7. Esquema para a síntese de 2-(3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoí1.2-b1piridazin-6- il(±)-2-amino)-butan-1-ol (Composto 7-17).

Esquema 4

=V OH

OH

F3CO

\ //

Pd(PPh3)4 /Na2CO3

3-bromo-6-chloroimidazo- [1,2-6]pyridazine

.OH

NH2 ±)-2-Amino-1 1-butanol

Pd2(dba)3 NaOtBu/L PhCH3

L =

PCy2

NMe2

OCF3

LEGENDA DAS FÓRMULAS ACIMA - 3-bromo-6-cloroimidazo-[1,2-b]piridazina

a. Síntese de 6-cloro-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoH.2-b1piridazina (Compostos

7-12. 7-13).

A um solvente MeOH/Tolueno desgaseificado (1:4, 5 mL) e 2 M de Na2CO3 (0,215 mL, 0,430 mmol) sob Argônio foram adicionados 3-bromo-6-cloroimidazo[1,2-b]piridazina (100 mg, 0,430 mmol), ácido 3-fluorometoxifenil borônico (98 mg, 0,430 mmol) e Pd(PPh3)4 15 (8,95 mg, 7,74 μΜ, 0,018 eq). A mistura de reação resultante foi aquecida sob refluxo duran- te a noite (12 h). TLC (MeOH 5 %/DCM, Rf = 0,2) mostrou a presença do material de partida 3-bromo-6-cloroimidazo[1,2-b]piridazina e duas novas marcas adicionais com forte fluores- cência. A mistura de reação foi concentrada e o produto bruto foi purificado por CombiFIash Companion usando EtOAc/Hexano 0 % 70 % 40 min, o sistema de solvente (coluna Redi- 20 Sep Flash de fase normal 4 g com fluxo de 18 mL/min) forneceu a separação de dois produ- tos como forneceu o composto 7-12 63 mg (46,7 %), e o composto 7-13 13 mg (6,88 %).

b. Síntese de 2-(3-(3-(trifluorometóxi)feni0imidazon .2-b1piridazin-6-ilaminoVbutan-

1-ol (Composto 7-17).

Ao solvente tolueno foram adicionados 7-12 (30 mg), 2-amino-1-butanol (18,08 μΜ, 2 eq), Iigante (5,65 mg, 0,15 eq), Pd2(dba)3 (6,57, 0,05 eq) e NaOtBu (13,05 mg, 1,42 eq). A mistura de reação resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi a- quecida sob refluxo durante a noite (12 h). O produto bruto foi concentrado e TLC preparati- va foi realizada com sistema de solvente MeOH 10 %/DCM fornecendo 10 mg do 7-17 ra- cêmico (28,5 %).

9. Esquema para a síntese dos compostos 7-27 e 7-28.

Esquema 5

10. Síntese de 4-((3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoH.2-blpiridazin-6- ilamino)metilk>iperidino-1-carboxilato de terc-butila (Composto 7-27).

Ao solvente tolueno foram adicionados 7-12 (100 mg, 0,319 mmol), 4-Aminometil-1-

Boc-piperidina (68,3 mg, 0,319 mmol), Iigante (18,8 mg, 0,048 mmol), Pd2(dba)3 (0,05 eq) e NaOtBu (1,5 eq). A mistura de reação resultante foi desgaseificada durante 10 min sob ar- gônio e depois foi aquecida sob refluxo durante a noite (12 h). O produto bruto foi concen- trado e TLC preparativa foi realizada com sistema de solvente MeOH 10 %/DCM fornecendo 84 mg do 7-27 (53,6 %).

11. Síntese de 2,2.2-trifluoroacetato de N-(piperidin-4-ilmeti0-3-(3- (trifluorometóxi)feniDimidazofl .2-b1piridazin-6-amina (Composto 7-28).

1 mL de DCM e 1 mL de TFA (0,098 mmol) foram sequecialmente adicionados ao 7-27 (48 mg, 0,0). A reação foi concluída em 1 h na temperatura ambiente. TLC (MeOH 20 %/DCM) Rf = 0,1. A concentração para remover TFA completamente forneceu o sal de TFA do 7-28 bruto. TLC preparativa (MeOH 20 %/DCM) forneceu 48 mg (97 %) de sólido incolor.

12. Esquema para a Síntese de 7-29.

Esquema 6

13. Síntese de N-((1-metilpiperidin-4-i0metin-3-(3-(trifluorometóxnfeninimidazoF1 .2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-29):

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados 7-12 (40 mg, 0,128 mmol), (1- metilpiperidin-4-il)metanamina (24,53, 0,191 mmol), Iigante (7,53 mg, 0,019 mmol), Pd2(dba)3 (8,76, 9,56 mmols) e NaOtBu (17,40 mg, 0,181 mmol). A mistura de reação resul- tante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida sob refluxo duran- te a noite (12 h). O produto bruto foi concentrado e TLC preparativa foi realizada com siste-

blpiridazin-6-amina (Composto 7-31).

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados 7-12 (40 mg, 0,128 mmol), (±)2-(4- metilpiperazin-1-il)butan-1-amina (0,191 mmol), Iigante (0,019 mmol), Pd2(dba)3 (9,56 mmols) e NaOtBu (0,181 mmol). A mistura de reação resultante foi desgaseificada durante 15 10 min sob argônio e depois foi aquecida sob refluxo durante a noite (12 h). O produto bruto foi concentrado e TLC preparativa foi realizada com sistema de solvente MeOH 10 %/DCM fornecendo 22 mg do 7-31.

Uma maneira ilustrativa em que atividade da cinase Pim-1 pode ser determinada é pela quantidade de ATP remanescente na solução depois de uma reação da cinase Pim-1 in vitro. O Kit de Ensaio Kinase-Glo (Promega, Inc., Madison, Wl) possibilita este processo. A quantidade de ATP remanescente na solução depois da reação da cinase serve como um substrato para a Iuciferase catalisar Iuciferina para oxiluciferina mais um fóton de luz. Assim,

o sinal Iuminescente lido pelo Instrumento Luminoskan Ascent (Thermo Electron Corp., Mil- ford, MA) se correlaciona com a quantidade de ATP presente depois da reação da cinase e se correlaciona inversamente com a quantidade de atividade da cinase. Este ensaio é efici-

I I IWI

14. Esquema para a síntese do composto 7-31. Esquema 7

\

Cl

'0

OCF3

10 15.

±N-(2-(4-metilpiperazin-1-iObutiO-3-(3-(trifluorometóxOfeninimidazon .2-

EXEMPLO 3

ENSAIOS DE ATIVIDADE DA CINASE PIM-1

20

A. Ensaio de Inibição da Cinase Pim-1 ente para determinar os valores da IC5o dos inibidores da cinase contra a cinase Pim-1. Es- tes ensaios são estabelecidos em placas de 96 poços com fundo plano com volumes de 50 μΙ duplicados em branco. Inibidores são adicionados à solução de tampão cinase 1X, ATP μΜ, substrato específico para Pim-1 100 μΜ, 50 ng de enzima Pim-1 ativa, e água em diluições seriadas variando de concentrações micromolares para nanomolares. Esta solução é incubada a 30 graus Celsius em 360 rpm durante duas horas. Após a incubação, 50 μΙ do

rcagcr.tc dc !χΐΓΐ«30-0ι0 οαυ auiuunauuo a UdUd fJU^U, ll IUIUII IUU LUUUS US pUÇUS 06 cunxroie

positivo e negativo, e incubados na temperatura ambiente durante 15 minutos. A placa de- pois é lida pelo Instrumento Luminoskan Ascent e os resultados apresentados com a versão

2.6 do Software Ascent. Os valores da IC50 depois podem ser calculados para cada inibidor testado.

Alternativamente, a atividade da cinase Pim-1 pode ser determinada quantificando- se a fosforilação de um substrato Pim-1 conhecido em um outro ensaio in vitro. O Kit de En- saio Z-Lyte Protein Kinase (Invitrogen, Madison Wl) possibilita este processo, usando o pro- cedimento de Transferência de Energia por Ressonância Fluorescente (FRET). Brevemente, um substrato Pim-1 conhecido (Substrato Serina-Treonina 7 da Invitrogen), que conduz dois fluoróforos em extremidades opostas (coumarina e fluoresceína) é incubado com a enzima Pim-1 e um inibidor potencial. Em seguida, a reação da cinase é interrompida, e um reagen- te de desenvolvimento é adicionado. Este reagente, uma protease, clivará apenas o substra- to não fosforilado, separando os dois fluoróforos e reduzindo a quantidade de FRET que pode ocorrer entre eles. FRET depois pode ser medida usando um espectrofotômetro, tal como o Gemini EM (Molecular Devices). Uma redução na FRET é indicativo de um inibidor ativo.

B. Ensaios do Inibidorde Cinase Pim-1 de Base Celular:

Ensaios com base em cultura celular podem ser usados para avaliar a capacidade dos compostos da invenção em inibir uma ou mais atividades celulares, tais como cresci- mento e/ou sobrevivência de células cancerosas. Numerosas linhagens de células cancero- sas podem ser obtidas da American Type Culture Collection (ATCC) e outras fontes. Breve- mente, células são semeadas em placas brancas opacas, tratadas em cultura de tecido em 96 poços (Thermo Electron, Vantaa, Finlândia), entre 5.000 e 10.000 células por poço, de- pendendo da velocidade da proliferação celular, em 100 μ\ do meio de crescimento apropri- ado (determinado pela ATCC). Células depois são expostas à concentração apropriada do medicamento ou uma quantidade igual de DMSO (diluente do medicamento) e deixadas sob crescimento em sua presença durante 96 horas. Em seguida, 100 μ\ do reagente Cell-Titer- Glo (Promega, Inc., Madison, Wl) são adicionados a cada poço. As placas depois são agita- das durante 2 minutos na temperatura ambiente para possibilitar a Iise celular e incubadas durante 10 minutos na temperatura ambiente para estabilizar o sinal luminescente. Similar ao reagente do ensaio Kinase-Glo da Promega, este reagente contém tanto a enzima Iucife- rase quanto o seu substrato luciferina. Luciferase, ativada por ATP no Iisato celular, catalisa a conversão da luciferina para oxiluciferina, uma reação que produz luz. A quantidade de Iuz produzida é proporcional à quantidade de ATP no Iisato celular, que é por si só proporcional ao número celular e fornece um índice de proliferação celular.

De modo a detectar a inibição específica da enzima Pim-1 na cultura celular, um

Cr.GGiC Western biCÍ lâmuciii ociα Ioaiiz_auu. raia lüiu, UdUIcIS LjUt; IUimiI lldLdUdü UUIIl Ulil

inibidor de Pim-1 potencial são Iisadas com um tampão específico para o isolamento e pre- servação das proteínas (Nonidet P-40 1 %, NaCI 150 mM, Tris 50 mM pH 8,0, EDTA 5 mM, 10 Coquetel Inibidor da Protease Ill 1:500 [Calbiochem], NaF 100 mM, Ortovanadato de Sódio 100 mM). A concentração de proteína nestes Iisatos depois é quantificada usando o Kit de Ensaio BCA Protein (Pierce). Quantidades conhecidas de proteína, por exemplo, 10 /yg, são carregadas em géis de poliacrilamida SDS a 12 % e são submetidas à redução e desnatura- ção em SDS-PAGE. Proteínas submetidas à eletroforese são transferidas para uma mem- 15 brana de nitrocelulose, a qual depois é experimentada com anticorpos para p-21 e phospho (Thr 145) p-21. Como a Treonina-145 da proteína p-21 é um substrato para Pim-1, a medi- ção da quantidade de fosforilação neste sítio em células tratadas deveria fornecer um meio para se avaliar a eficácia de nossos inibidores de Pim-1.

C. Dados da Atividade Específica da Cinase Pim-1:

Usando essencialmente os procedimentos conforme descrito acima, os compostos

ilustrativos foram testados quanto à inibição da atividade da cinase Pim-1. A figura 1 mostra os resultados para compostos ilustrativos triados a 10//M usando o ensaio Z-LYTE. Valores são fornecidos como uma porcentagem de controles não tratados. Conforme mostrado na figura 1, os compostos foram eficazes para inibir a atividade da cinase Pim-1 através deste ensaio.

Além disso, os valores da IC50 foram determinados para os compostos ilustrativos contra cinase Pim-1, usando o ensaio Promega Kinase-GIo, os resultados para os quais são resumidos na Tabela V abaixo. Ainda mais, os compostos ilustrativos foram avaliados quan- to à atividade de base celular em células expressando Pim-1. Os valores da IC50, represen- 30 tando as concentrações necessárias para inibir o crescimento celular a 50 % de não trata- das, são fornecidos em μΜ na Tabela Vl abaixo. Assim, pelos ensaios múltiplos, os compos- tos representam inibidores ativos da cinase Pim-1 e são capazes de inibir o crescimento celular.

Tabela V

Atividade inibitória da cinase de compostos novos.

N do composto IC50 μΜ 1-1 4,47 1-3 5,35 3-13 52,07 7-1 3,99 MP-392 ND I apeia νι

Atividade de base celular de compostos ilustrativos.

N0 do composto Células K562 Células PC-3 1-1 > 300 >300 1-3 80,2 39,0 3-9 20,6 12,0 3-13 29,3 12,78 7-1 67,1 29,22 5

EXEMPLO 4

SÍNTESE DE COMPOSTOS DE IMIDAZO[1,2-B]PIRIDAZINA.

Outros compostos da invenção, incluindo compostos ilustrativos apresentados na Tabela VII, foram preparados de acordo com os exemplos sintéticos seguintes.

1. Preparação de Bromoacetaldeído (2)

03/TPP O Γ^^ΒΓ -►

1 2

1,4-dibromo-trans-2-buteno (1) (10 g, 0,046 mol) foi dissolvido em CH2CI2 seco (100 ml) e esfriado a -78 0C e gás ozônio foi borbulhado até que a cor azul persistisse (-30 min). Uma corrente de nitrogênio foi passada através da solução até que a cor azul desapareces- se fornecendo solução incolor. Trifenilfosfina (12,9 g, 0,046 mol) foi adicionada às porções 15 durante um período de 1 h. A mistura de reação foi levada a 0 0C e mantida no refrigerador durante 15 h. O solvente (CH2CI2) foi removido da mistura de reação (sem aplicação de vá- cuo) e o resíduo espesso foi destilado a 40 0C sob vácuo (Hg 1 mm) mantendo a temperatu- ra do frasco receptor a -78 °C. [Nota: Durante a destilação, cuidado especial foi tomado para manter uma circulação de água fria (-0 0C a -5 cC)]. O bromoacetaldeído (2) (2,8 g, rendi- 20 mento = 50 %) foi obtido como um líquido amarelo claro, que foi altamente lacrimatório.

2. 6-Cloro-imidazoH ,2-blpiridazina (4) 3-Amino-6-cloropiridazina (1,5 g, 0,0116 mol) foi dissolvido em n-butanol (12 ml), esfriado a 0 0C e bromoacetaldeído (2,8 g, 0,023 mol) foi adicionado. A reação foi submetida ao refiuxo aurame /une n-outanoi toi removido sob pressão reduzida. A mistura de reação, água foi adicionada e extraída com EtOAc (5 x 20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4), concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (EtOAc/hexano) para fornecer 6-Cloro-imidazo[1,2-b]piridazina (4) (690 mg, rendimento = 40 %).

3. 3-Bromo-6-cloro-imidazon .2-blpiridazina (5)

O 6-Cloro-imidazo[1,2-b]piridazina (4) (500 mg, 0,0032 mol) foi tomado em ácido acético glacial (5 ml) e bromo (0,4 ml) foi lentamente adicionado na temperatura ambiente. Depois de 20 min, o sólido foi separado por precipitação e foi filtrado. O sólido foi lavado com éter (3 x 15 ml) e seco ao ar para fornecer 3-Bromo-6-cloro-imidazo[1,2-b]piridazina (5) (400 mg, rendimento = 60 %).

4. Procedimento geral para preparar 6-cloro-3-substituído-imidazoH .2-blpiridazina Uma mistura de reação contendo 3-bromo-6-cloro-imidazo[1,2-b]piridazina (0,43

mmol), Ácido borônico (0,43 mmol), Pd(PhP3)4 (7,74 pmols, 0,018 eq) e NaCO3 (2 M1 0,43 mmol) em 5 mL de tolueno-MeOH (4:1) foi desgaseificada com Ar durante 10 min. A reação foi submetida ao refluxo durante a noite. A mistura foi filtrada através de MgSO4 e concen- trada sob vácuo. O resíduo foi purificado por CombiFIash (EtOAc/Hexano 0 % a 70) para fornecer os produtos desejados.

5. Procedimento geral para preparar 3.6-dissubstituído-imidazoH .2-blpiridazina Uma mistura de reação contendo 6-cloro-3-substituído-imidazo[1,2-b]piridazina

(0,096 mmol), amina (0,191 mmol), Iigante (0,014 mmol, 0,15 eq), Pd2(dba)3 (7,17 pmols, R. 0,075 eq) e NaOtBu (0,136 mmol, 1,4 eq) em 5 mL de tolueno foi desgaseificada com Ar durante 10 min. A mistura foi submetida ao refluxo durante a noite. A concentração e purifi- cação por TLC preparativa forneceram os produtos desejados.

12-(3-(3-(dimetilamino)fenil)imidazoH.2-b1piridazin-6-ilamino)butan-1-ol (Composto

M)

RMN de 1H: (400 MHz, CD3OD) 7,92 (m, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,30 (m, 2H), 6,94 (d, J

_ ΊΛ LJ- Ί LJ\ Γ> Ci A t__<4 1 I \ A - .4 l i\ 4 λλ / ^ιι\ « λ ^ / ~ ■ ·' ' ~ ' ' · * T ~ L-I ‘ ‘ \

■ w ■ i4-, iii/j vs,w ι \ιii, !·!/> yi 11, Il iy, ^t,^VJ ^lll, I Γ1^, O1U I [b, ΌΠ^, I ,UH1 ^L, ü “ * jO Γΐ^ι vil Ji

MS m/z: 326,1, 255,2.

2-(3-(4-fluorofenil)imidazof1.2-b1piridazin-6-ilamino)butan-1-ol (Composto 7-10)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,09 (m, 2H), 7,92 (m, 2H), 7,25 (t, J = 8,5 Hz, 2H),

6,97 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), 1,68 (m, 1H), 1,52 (m, 1H),

1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

2-(3-(3-fluorofenil)imidazof1.2-b1piridazin-6-ilamino)butan-1-ol (Composto 7-11)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 7,96 (m, 3H), 7,88 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 7,00 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 3,21 (m, 1H), 1,70 (m, 1H), 1,54 (m, 1H), 1,06 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

N-ciclopentil-3-(3-fluorofenil)imidazoH.2-b1piridazin-6-amina (Composto 7-15)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,17 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 6,8 Hz, 1H),

7,82 (s, 1H), 7,61 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,03 (m, 1H), 6,72 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,16 (m, 1H), 1,77 (m, 4H), 1,66 (m,4H).

2-(3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoH.2-b1piridazin-6-ilannino)butan-1-ol (Composto

7-17)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,24 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,57 (t, J =

6.2 Hz1 1H), 7,27 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,02 (dd, J1 =1,4 Hz, J2 = 9,6 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,25 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 1,64 (m, 2H), 1,08 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

(R)-1-(3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoí1,2-b1piridazin-6-ilóxi)butan-2-amina (Com- posto 7-18)

RMN de 1H (400 MHz1 CD3OD) 8,24 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,98 (t, J = 9,57 Hz, 2H), 7,58 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 9,57 Hzr 1H), 7,02 (d, J = 9,57 Hz, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 1,71-1,56 (m, 2H), 1,08 (m, 3H).

(S)-1-(3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazof1.2-blpiridazin-6-ilóxi)butan-2-amina (Com- posto 7-19)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,22 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,55 (t, J =

8.2 Hz, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,00 (dd, J1 = 9,9 Hz, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,18 (m, 1H),1,67-1,51 (m, 2H), 1,06 (m, 3H).

N-(ciclopropilmetil)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazori.2-b1piridazin-6-amina (Com- posto 7-20) RMN de 1H (400 MHz1 CD3OD) 8,43 (s, 1H), 7,97 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H),

7.62 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 8,2 Hz1 1H), 7,20 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,21 (d, J = 6,8 Hz1 2H), 1,2 (m, 1H), 0,55 (m, 2H), 0,28 (m, 2H).

N-(3-(6-(1-hidroxibutan-2-ilamino)imidazoH.2-b1piridazin-3- iOfeniOmetanossulfonamida (Composto 7-23)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,29 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,92 (m, 1H), 7,74 (d, J =

7,3 ! !z, 1!!), 7,44 (í, J - 7,0 I'm, In), 7,18 (m, 1H), ô,9õ (m, iH), 4,5 i (m, íH;, 4,oo ^m, ΊΜ), 3,24 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 1,74 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 1,05 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

2-(3-(3-(trifluorometil)fenil)imidazori .2-blpiridazin-6-ilamino)butan-1-ol (Composto 7-

24}

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,64 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,94 (m, 1H),

7.65 (s, 2H), 7,00 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,19 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 3,20 (m, 1H), 1,60 (m, 2H), 1,04 (t, J = 8,5 Hz, 3H).

N-(ciclopropilmetil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)irnidazori.2-btoiridazin-6-amina (Com- posto 7-25)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,82 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,60 (m, 3H),

6,74 (m, 1H), 3,20 (m, 2H), 1,18 (m, 1H), 0,55 (m, 2H), 0,26 (m, 2H).

4-((3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazori,2-blpiridazin-6-ilamino)metil)piperidino-1- carboxilato de terc-butila (Composto 7-27)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,39 (s, 1H), 7,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H),

7.62 (dd, J1 = 2,0 Hz, J2 = 9,9 Hz, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,21 (d, J = 8,2 Hz1 1H), 6,71 (dd, J1 =

2,0 Hz1 J2 = 9,57 Hz1 1H), 4,07 (m, 4H), 3,26 (m, 4H), 1,82 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,57 (m, 1H).

N-(piperidin-4-ilmetil)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazof1.2-blpiridazin-6-amina (Composto 7-28)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,37 (s, 1H), 7,99 (d, J = 8,2 Hz1 1H), 7,88 (s, 1H),

7.66 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,24 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 2,94 (m, 4H), 2,04 (m, 4H), 1,44 (m, 1H).

N-((1-metilpiperidin-4-il)metil)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoH,2-b1piridazin-6- amina (Composto 7-29)

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,38 (s, 1H), 8,00 (d, J = 7,9 Hz1 1H), 7,86 (s, 1H),

7,64 (m, 1H), 7,53 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,00 (d, J = 12 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,90 (d, J = 12,6 Hz, 3H), 1,38 (m, 2H), 2,20 (t, J = 11,6 Hz, 2H).

N-(2-(pirrolidin-1-il)etil)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoH .2-b1piridazin-6-amina

(Composto 7-30)

NMRde1H (400 MHz, CD3OD): 8,29 (s, 1H), 8,02 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,64 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,31 (m, 1H), 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,56 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,81 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,63 (s, 4H), 1,81 (m, 4H). EXEMPLO 5

SÍNTESE DE COMPOSTOS DE IMIDAZO[1,2-B]PIRIDAZINA E COMPOSTOS DE 7-METIL-IMIDAZO[1,2-BJPIRIDAZINA

Os compostos adicionais da invenção, incluindo compostos ilustrativos apresenta-

dCG PiCt Tabela Vl!, ίΟΓάΓΰ pi αυυο uc a^uiuu UUl 11 Ub CAtJI I IfJIUb bll UtUIUUS btiy Ull lltib. INGS-

tes exemplos, o composto 7-12 foi preparado conforme descrito acima no Exemplo 2, en- quanto o composto 11 foi preparado como segue:

6-cloro-5-metilpiridazin-3-amina 7:

NH4OH Refluxo com ^

etanol sob pres- são a 100 0C durante 48 h.

3,6-dicloro-4-metilpiridazina 6 (1 g) foi dissolvido em 5 mL de etanol e foi adicionado hidróxido de amônio (10 mL). A mistura de reação resultante foi vedada em um reservatório de pressão e aquecida a 100 0C durante 48 horas. A mistura de reação é esfriada e os sol- ventes foram evaporados e purificados por CombiFIash Companion usando o sistema de 15 solvente Hexano/DCM 40:60 (coluna RediSep Flash de fase normal 4 g com tempo condu- zido em fluxo por min de 18 mL/min) fornecendo 0,640 g (72,7 %) de 7 como sólido amare-

lo).

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 7,08 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 2,27 (s, 3H), ESI-MS m/z

143,9 (M+H)+.

6-cloro-7-metilimidazoí1.2-blpiridazina 8:

0'^Ah

Cl N Refluxo com

7 N-Butanol

8

6-cloro-5-metilpiridazin-3-amina 7 (0,6 g, 4,18 mmols) foi dissolvido em n-butanol (10 ml) e cloroacetaldeído (0,328 g, 4,18 mmols) foi adicionado. A reação foi submetida ao refluxo durante 6 h e n-butanol foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purifi- cado por cromatografia em coluna (DCM/hexano, 70:30) para fornecer o composto 8 (0,234 g, rendimento = 33,4 %).

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 8,66 (s, 1H), 8,05 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,96 (d, J =

8,2 Hz, 1H), 2,58 (s, 3H), ESI-MS m/z 167,8 (M+H)+. 3-bromo-6-cloro-7-metilimidazoí1.2-blpiridazina 9:

Cl IN

Temperatura ambiente Cl 20 min

Br2, AcOH

8

Br

9

O 6-cloro-7-metilimidazo[1,2-b]piridazina 8 (0,230 g, 1,372 mmol) foi tomado em á- uiuu auéiiuu yiaeiai (iu mi) e bromo (u,u/u mi, Λ,όίΖ mmol) toi lentamente adicionado na temperatura ambiente. Depois de 20 min, os solventes foram evaporados e o sólido marrom obtido foi lavado com éter (3 x 15 ml) e seco ao ar para fornecer o composto 9 (0,236 g, rendimento = 69,8 %).

do em 1,4-dioxano (10 mL) e foram adicionados ácido 3-Fluorometóxi borônico 10 (84 mg, 0,406 mmol), Pd(PPh3)4 (9,38 mg, 8,11 μΜ) e Na2CO3 (47,3 mg, 0,446 mmol). A mistura de reação foi aquecida usando micro-ondas a 150 0C durante 30 minutos. TLC (MeOH 6 %/DCM) mostrou a conclusão da reação. Concentração e TLC preparativa (MeOH 6 %/DCM) forneceram o composto 11.

Ao solvente tolueno (10 mL) foram adicionados o composto 7-12 (100 mg, 0,319

mmol), N-Boc-(S)-(+)-2-amino-1-butanol 12 (121 mg, 0,638 mmol), Iigante (18,82 mg, 0,048

mmol), NaOtBu (43,5 mg, 0,453 mmol) e Pd2(dba)3 (21,90, 0,024 mmol). A mistura de rea-

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 7,79 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 2,64 (s, 3H), ESI-MS m/z 247,9 (M+Hf.

6-cloro-7-metil-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazof1.2-blpiridazina 11:

9

10

11

10

3-bromo-6-cloro-7-metilimidazo[1,2-b]piridazina 9 (100 mg, 0,406 mmol) foi dissolvi-

RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) 8,01 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,51 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,21 (m, 1H), 6,96 (m, 1H), 2,69 (s, 3H), 1,54 (s, 3H). RMN de 19F (300 MHz, CDCI3)

-59,08.

(S)-2-(3-(3-(trifluorometóxi)feninimidazon.2-b1piridazin-6-ilamino)butan-1-ol (Com- posto 7-32): 10

15

20

ção resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida com mi- cro-ondas durante 1 h a 165 °C. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forne- ceram o composto 13 e o composto 7-32. A RMN indicou que 7-32 é um produto com Boc removido. O produto bruto foi concentrado e TLC preparativa foi realizada com sistema de solvente MeOH 10 %/DCM fornecendo 27 mg do 7-32 como um sólido amarelo (23,12 %).

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,30 (s, 1H), 8,02 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H),

7,62 (d, J = 9,6 Hz1 1 ri), 7,53 (i, J - 8,2 Hz., í n), 7,2 i (d, J - õ,5 Hz, i H), 6,78 (d, J = y,õ Hz1 1H), 3,93 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 1,73 (m, 2H), 1,03 (t, J = 7,5 Hz, 3H). ESI-MS m/z 367,13 (M+H)+.

6-((1-metilpiperidin-4-il)metóxi)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoM .2-blpiridazina (Composto 7-33):

Pd2(dba)3

OCF3

NaOtBu/L

PhCH3

7-12

14

L =

7-33

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados o composto 7-12 (50 mg, 0,159 mmol), (1-metilpiperidino-4-il)metanol 14 (30,9 mg, 0,239 mmol), Iigante (9,41 mg, 0,024 mmol), NaOtBu (21,75 mg, 0,226 mmol) e Pd2(dba)3 (10,95, 0,012 mmol). A mistura de rea- ção resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida sob re- fluxo durante 12 h. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forneceram 17,6 mg do composto 7-33.

RMN de 1H (400 MHz, CD3OD) 8,30 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,97 (m, 3H), 7,58 (t, J =

8,2 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 3,94 (d, J = 6,15 Hz, 1H), 3,07 (t, J = 12,64 Hz, 4H), 2,33 (t, J = 12,30 Hz, 4H), 2,02 (s, 3H). ESI-MS m/z 407,18 (M+H)+.

7-metil-6-((1-metilpiperidin-4-ihmetóx0-3-(3(trifluorometóxi)fenil)imidazoí1.2-

Pd2(dba)3

NaOtBu/L

PhCH3

11

14

L =

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados o composto 11 (80 mg, 0,224 mmol),

(1-metilpiperidino-4-il)metanol 14 (47,3 mg, 0,366 mmol), Iigante (14,41 mg, 0,037 mmol), NaOtBu (33,3 mg, 0,347 mmol) e Pd2(dba)3 (16,77, 0,018 mmol). A mistura de reação resul- tante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida com micro-ondas a 165 °C. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forneceram 111,5 mg (11,2 %) do composto 7-34.

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 8,27 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,55 (m, 1H), 7,23 (d, J =

8,1 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 4,18 (s, 2H), 2,96 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,11 (t, J = 12,3 Hz, 2H), 1,88 (d, J = 12,3 Hz, 4H), 1,44 (d, J = 12,6 Hz, 2H). ESI-MS m/z 421,18 (M+H)+.

N-((1-isopropilpiperidin-4-il)metil)-3-(3(trifluorometóxi)fenil)imidazoH,2-b1piridazin-6- amina (Composto 7-35):

Pd2(dba)3

NaOtBu/L

PhCH3

15

Ao solvente tolueno (10 mL) foram adicionados o composto 7-12 (10 mg, 0,319 mmol), (1-isopropilpiperidino-4-il)metanamina 15 (74,9 mg, 0,478 mmol), Iigante (18,82 mg, 0,048 mmol), NaOH (43,5 mg, 0,453 mmol) e Pd2(dba)3 (21,90, 0,024 mmol). A mistura de reação resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida sob 15 refluxo durante 12 h. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forneceram 11 mg (7,96 %) do composto 7-35.

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 7,60 (s, 1H), 7,18 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,84 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,73 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 6,43 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,94 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 2,85 (s, 1H), 2,14 (m, 3H), 1,93 (m, 2H), 1,42 (m, 3H), 1,07 (m, 4H), 0,286 (2s, 2CH3) ESI-MS m/z 434,23 (M+H)+.

Ciclopropil(4-((3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazof1.2-blpiridazin-6- ilamino)metil)piperidin-1-il)metanona (Composto 7-36):

NH2

Pd2(dba)3

PhCH3

rac-BÍNAP

Ao solvente tolueno (10 mL) foram adicionados o composto 7-12 (10 mg, 0,319 mmol), (1-ciclopropilcarbonilpiperidino-4-il)metanamina 16 (69,7 mg, 0,383 mmol), rac- BINAP (7,94 mg, 0,013 mmol) e Pd2(dba)3 (5,84, 6,38 μΜ). A mistura de reação resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida sob refluxo durante 12 h. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forneceram 29 mg (19,8 %) do com- posto 7-36.

5 RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 7,59 (s, 1H), 7,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,04 (d, J =

6,3 Hz, 1H), 6,81 (m, 1H), 6,70 (m, 1H), 6,40 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,90 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 1,83 (m, 1H), 1,28 (m, 1H), 1,12 (m, 3H), 0,4 (m, 2H), 0,027 (m, 4H). ESI-MS m/z 460,20 (M+Hf.

7-Metil-N-((1-metilpiperidin-4-il)metil)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)-imidazof1.2- 10 blpiridazin-6-amina (Composto 7-37):

Pd2(dba)3

OCF3

11 17 'I J 7-37

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados o composto 11 (57 mg, 0,174 mmol), (1-metilpiperidino-4-il)metanamina 17 (26,8 mg, 0,209 mmol), Iigante (10,27 mg, 0,026 mmol), NaOtBu (23,40 mg, 0,244 mmol) e Pd2(dba)3 (11,95, 0,013 mmol). A mistura de rea- ção resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida com mi- 15 cro-ondas a 150 0C durante 1 h. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forne- ceram 5,3 mg (7,26 %) do composto 7-37.

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 8,35 (s, 1H), 8,01 (d, J = 8,4 Hz1 1H), 7,83 (s, 1H), 7,51 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 3,65 (m, 2H), 2,36 (m, 3H), 2,98 (d, J = 11,4 Hz, 2H), 2,48 (m, 2H), 2,26 (d, J = 0,9 Hz, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,91 (m, 4H), 1,32 (m, 1H). 20 RMN de 19F (300 Hz, CD3OD) -56,456, FTMS+p MALDI: 420,20113 (M+H)\ Massa Exata em Teoria: 420,20112.

N-((1-etilpiperidin-4-il)metil)-7-metil-3-((trifluorometóxi)fenil)imidazof1.2-b1piridazin-6-

Pd2(dba)3

NaOtBu/L

PhCH3

L =

11 18

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados o composto 11 (50 mg, 0,153 mmol), BINAP (7,94 mg, 0,013 mmol) e Pd2(dba)3 (5,84, 6,38 μΜ). A mistura de reação resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida sob refluxo durante 12 h. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forneceram 29 mg (19,8 %) do com- posto 7-36.

5 RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 7,59 (s, 1H), 7,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,04 (d, J =

6,3 Hz, 1H), 6,81 (m, 1H), 6,70 (m, 1H), 6,40 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,90 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 1,83 (m, 1H), 1,28 (m, 1H), 1,12 (m, 3H), 0,4 (m, 2H), 0,027 (m, 4H). ESI-MS m/z 460,20 (M+Hf.

7-Metil-N-((1-metilpiperidin-4-il)metil)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)-imidazori.2- 10 blpiridazin-6-amina (Composto 7-37):

Pd2(dba)3

-OCFs “ ' ' ' 0CF>

11 " Λ-nU 7-37

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados o composto 11 (57 mg, 0,174 mmol), (1-metilpiperidino-4-il)metanamina 17 (26,8 mg, 0,209 mmol), Iigante (10,27 mg, 0,026 mmol), NaOtBu (23,40 mg, 0,244 mmol)e Pd2(dba)3 (11,95, 0,013 mmol). A mistura de rea- ção resultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida com mi- 15 cro-ondas a 150 0C durante 1 h. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) forne- ceram 5,3 mg (7,26 %) do composto 7-37.

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 8,35 (s, 1H), 8,01 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,51 (t, J = 7,8 Hz1 2H), 7,21 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 3,65 (m, 2H), 2,36 (m, 3H), 2,98 (d, J = 11,4 Hz, 2H), 2,48 (m, 2H), 2,26 (d, J = 0,9 Hz, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,91 (m, 4H), 1,32 (m, 1H). 20 RMN de 19F (300 Hz, CD3OD) -56,456, FTMS+p MALDI: 420,20113 (M+H)+, Massa Exata em Teoria: 420,20112.

N-((1-etilpiperidin-4-il)metil)-7-metil-3-((trifluorometóxi)fenil)imidazon.2-b1piridazin-6-

Pd2(dba)3

NaOtBu/L

PhCH3

11 18 L

Ao solvente tolueno (5 mL) foram adicionados o composto 11 (50 mg, 0,153 mmol), (1-etilpiperidino-4-il)metanamina 18 (26 mg, 0,183 mmol), Iigante 9,01 mg, 0,023 mmol), NaOtBu (20,53 mg, 0,214 mmol) e Pd2(dba)3 (10,48, 0,011 mmol). A mistura de reação re- sultante foi desgaseificada durante 10 min sob argônio e depois foi aquecida com micro- ondas a 150 0C durante 1,5 h. Concentração e TLC preparativa (MeOH 10 %/DCM) fornece- ram 11,9 mg (17,99 %) do composto 7-38.

RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 8,335 (s, 1H), 7,99 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,49 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,21 (m, 1H), 3,34 (m, 2H), 3,00 (d, J = 11,1 Hz, 2H), 2,44 (m, 4H), 2,26 (s, 3H), 1,91 (m, 4H), 1,32 (m, 1H), 1,08 (t, J = 6,9 Hz, 3H). RMN de 19F (300 Hz, CD3OD) -56,423, FTMS+p MALDI: 434,36365 (M+H)+, Massa Exata em Teoria: 433,20895.

N-((1-etilpiperidin-4-il)metil)-3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazoH .2-b1piridazin-6-

amina (Composto 7-39):

Pd2(dba)3/'BuONa rac-BINAP

NH2 100°C/16 hr

OCF3 Tolueno

7-12 18 "»*'

A uma solução do composto 7-12 (0,250 g, 0,797 mmol) e (1 -etilpiperidin-4-

il)metanamina 18 (0,113 g, 0,797 mmol) em tolueno (10 mL) foram adicionados butóxido terciário de sódio (0,138 g, 1,435 mmol), rac-BINAP (0,030 g, 0,048 mmol) e Pd2(dba)3 15 (0,022 g, 0,024 mmol) e a mistura foi aquecida a 100 0C durante a noite. Depois de 16 h, a solução marrom escuro resultante foi resfriada e foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido foi adicionalmente purificado usando-se cromatografia CombiFIash (coluna 6 g), elu- ente: TEA 5 % em acetato de etila/hexano (10-100) para remover as impurezas e TEA 5 % em acetato de etila/CH3OH (90:10) para obter o composto 7-39 (89 %).

RMN de 1H (DMSO-d6/300 MHz): 8,50 (s, 1H), 8,06 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 7,77 (d, J =

9.9 Hz1 1H), 7,57 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,28 (m, 2H), 6,76 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,16 (m, 2H), 2,87 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 2,27 (m, 2H), 1,76 (m, 4H), 1,22 (m, 1H), 0,97 (t, J =

6.9 Hz, 3H). ESI-MS m/z 420,2 (M+H)+.

Os compostos 7-40 a 7-51 foram preparados de acordo com o método geral seguin-

te:

A uma solução de 6-Cloro-3-(2-metóxi-5-(trifluorometoxil)-fenil)imidazo[1,2- b]piridazina ou 6-Cloro-3-(2-metóxi-4-(trifluorometoxil)-fenil)imidazo[1,2-b]piridazina (0,149 g,

0,434 mmol) e amina (0,434 mmol) em tolueno (5 mL) foram adicionados butóxido terciário de sódio (0,075 g, 0,780 mmol), rac-BINAP (0,012 g, 0,013 mmol) e Pd2(dba)3 (0,016 g, 0,026 mmol) e a mistura foi aquecida a 100 0C durante a noite. Depois de 16 h, a solução marrom escuro resultante foi resfriada e foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido foi adicionalmente purificado usando-se cromatografia CombiFIash (coluna 6 g): eluente: TEA 5 % em acetato de etila/hexano (10-100) para remover as impurezas e TEA 5 % em acetato de etila/CH3OH (90:10) para eluir o produto metóxi desejado.

O grupo metóxi foi removido por dissolução do composto metóxi (0,222 mmol) em diclorometano anidro (DCM) (3 mL) e adição de BBr3 (1,0 M em DCM1 0,667 mL) a -78 °C, e 5 agitação na temperatura ambiente durante a noite. Depois de 16 h, a solução marrom escu- ro resultante foi extinta com NaHCO3. Análise por HPLC indicou que a conversão foi conclu- ída. Depois da extração com DCM e secagem, o resíduo foi purificado usando-se cromato- grafia CombiFíash, eluente: metanol/Acetato de etila (TEA 5 %), razão 5 a 50 %. Rf = 0,23, Acetato de etila 50 % (TEA 5 %)/CH3OH. A estrutura é confirmada por RMN de 1H e espec- 10 trometria de massa (MS).

3-(2-metóxi-5-(trifluorometil)fenil)-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)imidazoH.2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-40):

Cl

Pd2(Ciba)3ZtBuONa rac-BINAP CF, 100°C/16 hr

^ Tnil ΙΔΠΛ

Tolueno

25%

20

NH2

CF3

19

7-40

RMN de 1H (CD3ODMOO MHz): 8,36 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,68 (s, 1H),

7,64 (s, 1H), 7,54 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 2H), 6,87 (m, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,12 (t, J = 18,3 Hz1 4H), 2,62 (t, J = 18,3 Hz, 4H), 2,33 (s, 3H). ESI-MS (ES+, m/z): 483,2 (M++1, 100,0).

3-(2-Hidróxi-5-(trifluorometil)fenil)-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)-imidazo[1.2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-41):

temperatura /-J6 hr

CF3

BBr3/DCM

CF3

3-(2-metóxi-5-(trifluorometóxi)fenil)· blpiridazin-6-amina (Composto 7-42): 10

15

—N

PcI2(Clba)3ZtBuONa rac-BINAP OCF3 100°C/16 hr

N

19

Tolueno

32%

RMN de 1H (CD3ODMOO MHz): 8,46 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,64 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,23 (dt, J = 9,2, 2,0 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,27 (m, J = 18,3 Hz1 2H), 3,15 (m, J = 18,3 Hz, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,41 (t, J = 18,3 Hz, 2H), 1,90 (m, J = 18,3 Hz, 3H), 1,29 (m, J = 18,3 Hz, 2H). ESI-MS (ES+, m/z): 436,2 (M++1, 100,0).

3-(2-hidróxi-5-(trifluorometóxnfenil)-N-((1-rnetilpiperidin-4-il)metil)-irnidazori.2- btoiridazin-6-amina (Composto 7-43):

-N ô .

BBr3ZDCM

.N

N \ temperatura Λ---, ambiente

\ 50%

7 W^OCF3

7-42

RMN de 1H (CD3ODMOO MHz): 8,60 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,74 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 7,13 (m, J = 9,2, 2,0 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,13 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,75 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,81 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 1,72 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 1,60 (m, J = 18,3 Hz, 1H). ESI-MS (ES+, m/z): 422,2 (M++1, 100,0).

3-(2-metóxi-5-(trifluorometóxi)fenil)-N-(2-(1-metilpiperidin-4-il)etil)-imidazon,2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-44):

—N

22

19

Pd^dba^BuONa

rac-BINAP

OCF3 1°0°C/16 hr 3 Tolueno

79%

OCF3

RMN de 1H (DMSO-d6/300 MHz): 8,53 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,75 (d, J =

9,6 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 8,7, 3,0 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 5,1 Hz, 1H),

6,77 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,81 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,89 (t, J = 11,7 Hz, 2H), 1,52 (d, J = 12,3 Hz, 2H), 1,27 (m, 1H), 1,17 (m, 2H), 0,84 (m, 4H). ESI-MS (ES+, m/z): 450,2 (M++1, 20,0).

3-(2-Hidroxil-5-(trifluoronnetóxi)fenil)-N-(2-(1-metilpiperidin-4-il)etil)-imidazo[1,2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-45):

RMN de 1H (CD3OD+CDCI3/300 MHz): 8,01 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,63 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,07 (dd, J = 8,9, 1,7 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,34 (s, 3H), 2,90 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,37 (t, J = 11,2 Hz, 2H), 1,69 (d, J = 12,3 Hz, 2H), 1,45 (m, 1H), 1,28 (m, 2H), 0,93 (m, 4H). ESI-MS (ES+, m/z): 436,3 (M++1, 20,0).

N-((1-etilpiperidin-4-il)metil)-3-(2-metóxi-5-(trifluorometóxi)feni[)-imidazof1.2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-46):

-N

NH,

18

19

Pd2(dba)3/tBuONa

OCF3 rac'BINAP á 100°C/16 hr Tolueno

81%

,N

RMN de 1H (DMSO-d6/400 MHz): 8,27 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,78 (d, J = 9,9 Hz, 1H),

7,33 (d, J = 8,9 Hz1 1H), 7,25 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,15 (t, J = 5,8 Hz, 4H), 2,88 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,30 (q, J = 7,2 Hz, 2H),

1,82 (t, J = 10,9 Hz, 2H), 1,75 (d, J = 13,3 Hz1 2H), 1,65 (m, 1H), 0,99 (t, J = 7,2 Hz, 3H). ESI-MS (ES+, m/z): 450,2 (M++1, 20,0).

N-((1-etilpiperidin-4-il)metil)-3-(2-hidróxi-5-(trifluorometóxi)fenil)-imidazon.2-

blpiridazin-6-amina (Composto 7-47):

-N

BBr3/DCM

temperatura . ambiente-7 ID nr

P^// Λ 98%

X ' OCF3

7-46

í

N

RMN de 1H (DMSO-d6/300 MHz): 8,60 (s, 1H), 7,96 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,75 (dd, J = 10

15

20

9,9, 3,6 Hz1 1 Η), 7,30 (d, J = 8,7 Hzt 1Η), 7,23 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,76 (d. J =

9,9 Hz, 1H), 3,16 (m, 4H), 2,78 (m, 2H), 2,30 (q, J = 7,2 Hz1 2H), 1,82 (m, 2H), 1,76 (m, 2H),

1,67 (m, 1H), 0,99 (t, J = 7,2 Hz, 3H). ESI-MS (ES+, m/z): 436,2 (M++1, 100,0).

N-((1-isopropilpiperidin-4-inmetil)-3-(2-metóxi-5-(trifluorometóxnfenil)-imidazo[1,2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-48V.

-N

15

NH2

19

Pd2(Ciba)3ZtBuONa

OCF3 rac-BINAP

100°C/16 hr Tolueno

81%

N

RMN de 1H (DMSO-d6/300 MHz): 8,52 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,66 (d, J =

10,7 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz1 1H), 7,14 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 7,04 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 9,4 Hz1 1H), 3,84 (s, 3H), 3,06 (t, J = 5,9 Hz, 4H), 2,71 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 2,55 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 1,99 (t, J = 9,2 Hz1 2H), 1,68 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 1,53 (m, 1H), 0,84 (d, J = 7,2 Hz1 6H). ESI-MS (ES+, m/z): 464,2 (M++1, 50,0).

N-((1-isopropilpiperidin-4-il)metil)-3-(2-hidróxi-5-(trifluorometóx()fenil)-imidazof1.2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-49V.

BBr3ZDCWl

N N \ temperatura/-J 0hr

,0V^Tbiente 71%

7 X OCF3

RMN de 1H (DMSO-d6/300 MHz): 8,59 (s, 1H), 8,04 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,75 (dd, J = 9,8, 2,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,3 Hz1 2H), 7,03 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,13 (m, 4H), 2,87 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 1,74 (m, 4H), 0,98 (d, J = 6,8 Hz1 6H). ESI-MS (ES+, m/z): 450,2 (M++1, 40,0).

N-(2-(1-etilpiperidin-4-il)etil)-3-(2-metóxi-5-(trifluorometóxi)fenil)-imidazof1,2- blpiridazin-6-amina (Composto 7-50):

-N

NHo

23

Pd2(Clba)3ZtBuONa OPF., rac-B!NAP 100°C/16 hr Tolueno

89%

OCF3 10

15

RMN de 1H (DMSO-d6/300 MHz): 8,58 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,76 (d, J =

9,7 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,98 (t, J = 5,2 Hz, 1H),

6.77 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,21 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H),

1.78 (m, 2H), 1,66 (m, 2H), 1,50 (m, 2H), 1,28 (m, 1H), 1,15 (m, 2H), 0,94 (t, J = 7,2 Hz, 3H). ESI-MS (ES+, m/z): 464,2 (M++1, 20,0).

N-((1-isopropilpiperidin-4-il)metil)-3-(4-(trifluorometóxi)fenil)-imidazori.2-b1piridazin-

6-amina (Composto 7-51):

-N

NH5

15

Pdsídba^BuONa

rac-BINAP

100°C/16 hr Tolueno

76%

.N

RMN de 1H (DMSO-d6/300 MHz): 8,32 (dt, J = 9,8, 2,4 Hz, 2H), 7,93 (s, 1 H), 7,75 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 7,44 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,19 (t, J = 5,4 Hz, 1 H), 6,74 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 3,14 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 2,79 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 2,63 (m, 1 H), 2,04 (t, J = 10,3 Hz1 2H),

1,74 (m, 2H), 1,23 (m, 1 H), 0,91 (d, J = 6,3 Hz, 6H). ESI-MS (ES+, m/z): 434,3 (M++1 , 40,0).

EXEMPLO 6

INIBIDORES DE CINASE PIM-1 IMIDAZO[1,2-B]PIRIDAZINA ILUSTRATIVOS

As estruturas de inibidores da cinase Pim-1 adicionais identificadas de acordo com a invenção e sintetizadas de acordo com os procedimentos sintéticos detalhados neste rela- tório são apresentadas na Tabela Vll abaixo.

Tabela Vll

Inibidores de Cinase Pim-1 lmidazori.2-b1Piridazina Ilustrativos

20

Composto Estrutura 7-1 HO^ (j^VNx ''''"'''Sm n''n \ H Q ✓n- Fórmula Química: C18H23N50 Peso Molecular: 325,41 7-2 Cl N Br Fórmula Química: C14H12BrCIN4 Peso Molecular: 351,63 7-3 α " p Fórmula Química: C14H13CIN4 Peso Molecular: 272,73 7-4 OH I XM a “ p ---N \ Fórmula Química: C18H23N50 Peso Molecular: 325,41 7-5 Ch Cl N O2N Fórmula Química: C12H7CIN4O2 Peso Molecular: 274,66 7-6 Zsn-nY O F Fórmula Química: C12H7CIFN3 Peso Molecular: 247,66 7-7 F Fórmula Química: C16HnF2N3 Peso Molecular: 307,30 7-8 cr N Y CK Fórmula Química: C12H7CIFN3 Peso Molecular: 247,66 7-9 Fórmula Química: C18H11F2N3 Peso Molecular: 307,30 7-10 pH £XM » "Q F Fórmula Química: C16H17FN4O Peso Molecular: 300,33 7-11 DH L XM »N p F Fórmula Química: C16H17FN4O Peso Molecular: 300,33 7-12 Cl N Y W^OCF3 Fórmula Química: C13H7CIF3N3O Peso Molecular: 313,66 7-13 ς/'-ί OCF3 WxOCF3 Fórmula Química: C20H11F6N3O2 Peso Molecular: 439,31 7-14 XQ O-c O Fórmula Química: C14H10CIN3O Peso Molecular: 271,70 7-15 O^V Fórmula Química: C17H17FN4 Peso Molecular: 296,34 7-16 ajÇíj> °Λ Fórmula Química: C13HiiCIN4O2S Peso Molecular: 322,77 7-17 H " Q-OCF3 Fórmula Química: C17H17F3N4O2 Peso Molecular: 366,34 7-18 \^---OCF3 7-19 V^-OCF3 7-20 jCA " Qhccfs Fórmula Química: C17H15F3N4O Peso Molecular: 348,32 7-21 JXj W^CF3 Fórmula Química: C13H7CIF3N3 Peso Molecular: 297,66 7-22 fi CF3 WAcf3 Fórmula Química: C20HnF6N3 Peso Molecular: 407,31 7-23 “XJCA rS N O Fórmula Química: C17H21N5O3S Peso Molecular: 375,45 7-24 Λ ~^>CFí Fórmula Química: C17Hi7F3N4O Peso Molecular: 350,34 7-25 N Q-Cf, Fórmula Química: C17H15F3N4 Peso Molecular: 332,32 7-26 PZ 0 Fórmula Química: C17H19N5O2S Peso Molecular: 357,43 7-27 Bocl |j Λ /-tf If^r-OCF3 '---NH \^J Fórmula Química: C24H28F3N5O3 Peso Molecular: 491,51 7-28 _,Nv. Fy Ocf3 /-NH O HN--- Fórmula Química: C19H2oF3N50 Peso Molecular: 391,39 7-29 OCF3 Fórmula Química: C2oH22F3N50 Peso Molecular: 405,42 7-30 °N\rr> N N Fórmula Química: Ci9H2OF3N5O Peso Molecular: 391,39 7-31 "O • Fórmula Química: C22H27F3N6O Peso Molecular: 448,48 7-32 rc$ 3o-°^ Fórmula Química: C17H17F3N4O2 Peso Molecular: 366,34 7-33 Fórmula Química: C2oH21 F3N4O2 Peso Molecular: 406,4 7-34 rvO» WTocf3 Fórmula Química: C21H23F3N4O2 Peso Molecular: 420,43 7-35 Fórmula Química: C22H26F3N5O Peso Molecular: 433,47 7-36 0^j O-ocf, Fórmula Química: C23H24F3N5O2 Peso Molecular: 459,46 7-37 WA-OCF3 Fórmula Química: C21H24F3N5O Peso Molecular: 419,44 7-38 rcr·^ I W/~~OCF3 Fórmula Química: C22H26FsN5O Peso Molecular: 433,47 7-39 -Cn-0I W/~-ocf3 Fórmula Química: C21H24F3N5O Peso Molecular: 419,44 7-40 ^ll irT '0XKf, Fórmula Química: C25H25F3N6O Peso Molecular: 482,5 7-41 '0XxirW Fórmula Química: C24H23F3N6O Peso Molecular: 468,47 7-42 .Uh ,O-^ocfj Fórmula Química: C21H24F3N5O2 Peso Molecular: 435,44 7-43 r^/> ^γ^Ν^νΝ"{ h ho-3^, Wj^OCF3 Fórmula Química: C20H22F3N5O2 Peso Molecular: 421,42 7-44 HrXXf JT '°~0~°CF. N I Fórmula Química: C22H26F3N5O2 Peso Molecular: 449,47 7-45 ηνΌ^( 6"^ I Fórmula Química: C2IH24F3N5O2 Peso Molecular: 435,44 7-46 jcr» Fórmula Química: C22H26F3N5O2 Peso Molecular: 449,47 7-47 Fórmula Química: C21H24F3N5O2 Peso Molecular: 435,44 7-48 Fórmula Química: C23H26F3N5O2 Peso Molecular: 463,5 7-49 I U1Z-OCF3 Fórmula Química: C22H26F3N5O2 Peso Molecular: 449,47 7-50 hn-OV N Fórmula Química: C23H28F3N5O2 Peso Molecular: 463,5 7-51 Γ^/> N'N λ ΎΝν-J h OCF3 Fórmula Química: C22H26F3N5O Peso Molecular: 433,47 EXEMPLO 7

ENSAIOS DA ATIVIDADE DA CINASE PIM-1

Os valores da IC50foram determinados para os compostos ilustrativos (por exemplo, da Tabela VII) usando o ensaio Promega Kinase-GIo, os resultados para os quais são resu- 5 midos na Tabela Vlll abaixo. Além disso, os compostos ilustrativos foram avaliados quanto à atividade de base celular em células expressando Pim-1. Valores da IC50 representando as concentrações necessárias para inibir o crescimento celular a 50 % de não tratadas, são fornecidos em μΜ na Tabela IX abaixo. Assim, pelos ensaios múltiplos, estes compostos ilustrativos representam inibidores ativos de cinase Pim-1 e são capazes de inibir o cresci- 10 mento celular do tumor.

Tabela Vlll

Atividade Inibitória da Cinase de Compostos Representativos

Composto IC50(Cinase) 7-1 3,99 μΜ 7-4 1,81 μΜ 7-7 9,76 μΜ 7-9 86,60 μΜ 7-10 3,96 μΜ 7-11 3,05 μΜ 7-15 5,35 μΜ 7-17 418 ηΜ 7-18 481 ηΜ 7-19 293 nM 7-20 2,68 μΜ 7-23 8,23 μΜ 7-24 519 ηΜ 7-25 798 ηΜ 7-27 7,49 μΜ 7-28 127 ηΜ 7-29 7,4 ηΜ/138,6 ηΜ 7-30 761 ηΜ 7-31 267 ηΜ 7-32 1,55 μΜ / 95 ηΜ 7-33 405 ηΜ / 282 ηΜ 7-34 272 ηΜ 7-35 79 ηΜ 7-36 73 ηΜ 7-37 13 ηΜ 7-39 111 ηΜ/18 ηΜ 7-43 1,10 μΜ 7-47 310 ηΜ 7-49 310 ηΜ Tabela IX

Atividade de Base Celular de Compostos Representativos.

Nome do composto IC50 (Κ562) IC50 (PC-3) 7-1 67,1 μΜ 29,22 μΜ 7-4 13,55 μΜ 54,59 μΜ 7-7 270,84 μΜ 87,25 μΜ 7-9 6,76 μΜ 21,18 μΜ 7-10 37,48 μΜ/25,76 μΜ 69,56 μΜ 7-11 7,31 μΜ / 8,05 μΜ 18,41 μΜ 7-13 19,07 μΜ 63,25 μΜ 7-15 20,83 μΜ 70,20 μΜ 7-17 5,38 μΜ 9,37 μΜ 7-18 5,82 μΜ --- 7-19 5,84 μΜ --- 7-20 7,79 μΜ 20,75 μΜ 7-23 23,19 μΜ 24,55 μΜ 7-24 4,26 μΜ 7,27 μΜ 7-25 4,64 μΜ 8,15 μΜ 7-26 NS NS 7-27 10,30 μΜ --- 7-28 1,95 μΜ --- 7-29 2,29 μΜ 4,83 μΜ 7-30 9,14 μΜ 9,26 μΜ 7-32 25,32 μΜ /19,99 μΜ 29,0 μΜ 7-33 5,99 μΜ 14,37 μΜ 7-34 1,73 μΜ 7,21 μΜ 7-35 2,92 μΜ 12,77 μΜ 7-36 6,91 μΜ 33,32 μΜ 7-37 3,89 μΜ 8,95 μΜ 7-38 1,41 μΜ 5,68 μΜ 7-39 1,66 μΜ 5,82 μΜ 7-42 9,6 μΜ 8,96 μΜ 7-43 4,9 μΜ Ν/Α 7-44 5,7 μΜ 17,7 μΜ 7-45 14,9 μΜ 52,0 μΜ 7-46 5,3 μΜ 10,6 μΜ 7-47 11,3 μΜ 57,4 μΜ 7-48 5,7 μΜ 17,7 μΜ EXEMPLO 8

SELETIVIDADE DO COMPOSTO 7-29 PARA PROTEÍNAS CINASES PARTICULARES

O composto 7-29 (Tabela VII) foi avaliado quanto à seletividade contra um painel de 5 Ser/Thr e Tirosina cinases no ensaio radiométrico a 1 mM. Os resultados são resumidos na figura 2. Contra as Ser/Thr cinases testadas, o composto 7-29 exibiu seletividade da cinase Pim 1 > 100 vezes sobre outras cinases testadas. O composto 7-29, entretanto, também exibiu seletividade contra Flt3, Mekl e TrkA. Este composto não mostrou atividade signifi- cante contra um painel de outra Ser/Thr cinase incluindo Aurora-A, CDK1, CDK2, Plk3 e 10 Nek2 e Tirosina cinase incluindo Able1 c-Kit, EGFR e Jak2.

EXEMPLO 9

Este exemplo demonstra a atividade inibitória da cinase Pim-1 para os sais de HCI dos compostos ilustrativos 7-19, 7-29 e 7-31.

7-19 7-29 7-31

Uma maneira ilustrativa para determinar o efeito de inibidores de Pim-1 na atividade da cinase Pim-1 é medir os níveis de fosforilação da proteína Bad no resíduo serina 112 (S112) (phospho-Bad ou pBad). É conhecido que Pim-1 causa a fosforilação de Bad em S112 de modo a inativar a proteína e inibir sua associação com membros da família anti-apoptótica Bcl-2, desse modo permitindo que estes membros da família Bcl-2 inibam adicionalmente sinais apoptóticos.

Brevemente, células MV-4-11 (leucemia mielomonocítica bifenotípica B) foram laminadas em frascos T25 em meio livre de soro (SFM) a 1,5 x 105 células/ml e deixadas para crescimento durante 24 h. Depois de 24 h, inibidores de Pim-1 em concentrações de 10, 5, 1, 0,5, 0,1 ou 0,01 10 μΜ foram adicionados em frascos individuais. O tratamento com os inibidores de Pim-1 continuou durante 1 h. Células foram colhidas depois de 1 h de tratamento e Iisatos celulares foram prepara- dos a partir de cada amostra. Quantidades iguais de proteína total dos Iisatos foram carregadas em um gel Tris-glicina 10 % (Invitrogen) para análise em SDS-PAGE. Depois que as proteínas foram separadas por SDS-PAGE, elas foram transferidas de membranas de nitrocelulose (Invitro- 15 gen) para Western blotting. O anticorpo primário para phospho-Bad (S112) (Cell Signaling Tech- nologies) foi usado para o experimento dos níveis de phospho-Bad (S112). De modo a calcular a EC50 dos inibidores na fosforilação de Bad (S112), os níveis da proteína Bad total foram determi- nados. Para a realização deste processo, o Western blot original foi retirado dos anticorpos e e- xaminado novamente usando anticorpos que reconhecem a proteína Bad (Cell Signaling Techno- 20 logies), independente do estado de fosforilação da proteína. Densitometria foi usada para quantifi- car os níveis de cada banda nos Western blots e usada para determinar a EC50 dos inibidores de Pim-1 para alterar os níveis da proteína phospho-Bad.

As figuras 3 a 5 mostram os resultados para a marcação de phospho-Bad em células MV-4-11 tratadas com os compostos 7-19, 7-29, e 7-31, respectivamente. Depois de 1 h de trata- 25 mento com os inibidores de Pim-1, os níveis de pBad diminuíram em uma maneira dose- dependente, mostrando uma ausência quase completa de pBad nos níveis mais altos. Níveis de Bad total foram similares através dos grupos de tratamento. Os valores da EC50 para os compos- tos 7-19, 7-29 e 7-31 foram determinados em 635 nM, 7,9 nM, e 57,4 nM, respectivamente.

Claims (34)

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que tem uma estrutura de acordo com a estrutura (I) ou a estrutura (II) abaixo: <formula>formula see original document page 75</formula> ou um estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável deste, em que: Xé NH; R é H, -OH, halo, alquila, haloalquila, alcóxi ou haloalcóxi; R1 é fenila ou fenila substituído; e R2 é -(CH2)1l2-PiperidM-Ila, -(CH2)1 i2-piperid-4-ila substituído, -(CH2)1 i2-piperazin-1- ila, ou -(CH2)12-piperazin-1-ila substituído.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R é hidrogênio.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R é metila.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é fenila substituído tendo pelo menos um substituinte p, o ou m selecionado de -OCF3, - OCHF2, -CF3, -OCH3, e -OH.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é selecionado de: <formula>formula see original document page 75</formula>

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é -(CH2)-Il2-piperid-4-ila substituído ou -(CH2)12-piperazin-1-ila substituído tendo um ou dois substituintes selecionados de alquila.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é selecionado de: OCF3 <formula>formula see original document page 76</formula>

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é: N-((1-metilpiperidin-4-il)metil)-3-(3-(trifluorometóxi)-fenil)imídazo[1,2-b]piridazin-6- amina (Composto 7-29); N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)butil)-3-(3-(trifluorometóxi)-fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-6- amina (Composto 7-31);7-metil-N-((1-metilpiperidin-4-il)metil)-3-(3-trifluorometóxi)-fenil)imidazo[1,2- b]piridazin-6-amina (Composto 7-37); ou N-((1-etilpiperidin-4-il)metil)-3-(3-(trifluorometóxi)-fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-6- amína (Composto 7-39).

9. Composição, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto, de acordo com a reivindicação 1, em combinação com um excipiente farmaceuticamente acei- tável.

10. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que tem uma estrutura de acordo com a estrutura (I) ou a estrutura (II) abaixo: <formula>formula see original document page 76</formula> ou um estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável deste, em que: X é O; R é H, -OH, halo, alquila, haloalquila, alcóxi ou haloalcóxi; R1 é fenila ou fenila substituído; e R2 é -(CH2)n-ciclopropila, -(CH2)n-CicIopentiIa, -(CH2)n-cicloexila, -SO2-CH3, -SO2- (CH2)nCH3, -(CH2)n-piperonila, -(CH2)n-piperidila, -(CH2)n-piperazinila, -(CH2)n-furila, -(CH2)n- tiofeno, -(CH2)n-piridila, -(CH2)n-PirimidiIa, -(CH2)nOCH3, -(CH2)nOH, ou -(CH2)nN(CH3)2, onde n é 0, 1, 2, 3 ou 4 e cada uma das porções acima é opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; ou uma estrutura selecionada de: <formula>formula see original document page 77</formula>

11. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que R é hidrogênio.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que R é metila.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é fenila substituído tendo pelo menos um substituinte ρ, o ou m selecionado de - OCF3, -OCHF2, -CF3, -OCH3, e -OH.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é selecionado de: <formula>formula see original document page 77</formula>

15. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é -(CH2)1 i2-piperid-4-ila substituído ou -(CH2)1,2-piperazin-1-ila substituído tendo um ou dois substituintes selecionados de alquila.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é selecionado de: <formula>formula see original document page 78</formula>

17. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é selecionado de: <formula>formula see original document page 78</formula>

18. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é: (R)-1-(3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-6-ilóxi)butan-2-amina (Com- posto 7-18); (S)-1-(3-(3-(trifluorometóxi)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-6-ilóxi)butan-2-amina (Com- posto 7-19);6-((1-metilpiperidin-4-il)metóxi)-3-(3-(trifluorometóxi)-fenil)imidazo[1,2-b]piri (Composto 7-33); ou 7-metil-6-((1-metilpiperidin-4-il)metóxi)-3-(3(trifluorometóxi)-fenil)imidazo[1,2^ bjpiridazina (Composto 7-34).

19. Composição, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto, de acordo com a reivindicação 10, em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

20. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que tem uma estrutura de acordo com a estrutura (I) ou a estrutura (II) abaixo: <formula>formula see original document page 78</formula> ou um estereoisômero ou sal farmaceuticamente aceitável deste, em que: X é S, SO ou SO2; Ri é fenila ou fenila substituído; e R2 é 2-butano-1-ol, -(CH2)n-ciclopropila, -(CH2)n-CicIopentiIa, -(CH2)n-CicIoexiIa, -SO2- CH3, -SO2-(CH2)nCH3, -(CH2)n-piperonila, -(CH2)n-piperidila, -(CH2)n-piperazinila, -(CH2)n- furila, -(CH2)n-tiofeno, -(CH2)n-piridila, -(CH2)n-pirimidila, -(CH2)nOCH3l -(CH2)nOH1 ou - (CH2)nN(CH3)2, onde η é O, 1, 2, 3 ou 4 e cada uma das porções acima é opcionalmente substituída com um ou mais substituintes; ou uma estrutura selecionada de: <formula>formula see original document page 79</formula>

21. Composto, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que R é hidrogênio.

22. Composto, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que R é metila.

23. Composto, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que R1 é fenila substituído tendo pelo menos um substituinte ρ, o ou m selecionado de - OCF3, -OCHF2, -CF3, -OCH3, e -OH.

24. Composto, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que Ri é selecionado de: <formula>formula see original document page 78</formula>

25. Composto, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é -(CH2)1,2-piperid-4-ila substituído ou -(CH2)i,2-piperazin-1-ila substituído tendo um ou dois substituintes selecionados de alquila.

26. Composto, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é selecionado de: <formula>formula see original document page 80</formula>

27. Composto, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é selecionado de: <formula>formula see original document page 80</formula>

28. Composição, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto, de acordo com a reivindicação 20, em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

29. Método para tratar uma doença mediada pela proteína cinase, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente em necessida- de deste, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição de acordo com a reivindicação 9.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença mediada pela proteína cinase é um câncer expressando a cinase Pim-1.

31. Método para tratar uma doença mediada pela proteína cinase, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente em necessida- de deste, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição de acordo com a reivindicação 19.

32. Método, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença mediada pela proteína cinase é um câncer expressando a cinase Pim-1.

33. Método para tratar uma doença mediada pela proteína cinase, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um paciente em necessida- de deste, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição de acordo com a reivindicação 28.

34. Método, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença mediada pela proteína cinase é um câncer expressando a cinase Pim-1.