TWI410425B - 唑并［５，４－ｂ］吡啶－５－基化合物 - Google Patents

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Description

唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物
p38 MAP激酶為屬於絲胺酸/蘇胺酸激酶超家族之有絲***原活化蛋白(MAP)激酶。此激酶由細胞外壓力(諸如熱、UV光及滲透壓力)以及由發炎性刺激物(諸如脂多醣)活化。當活化時，p38 MAP激酶使調節促炎性細胞激素腫瘤壞死因子α(TNFα)、介白素-1β(IL-1β)、介白素6(IL-6)及介白素8(IL-8)之生物合成的細胞內蛋白質受質磷酸化。此等細胞激素與大量慢性發炎性病症之病理學有關聯。慢性發炎為癌症發展之主要風險因素。舉例而言，p38 MAP激酶途徑為導致慢性發炎及肉瘤發展之卡堡氏肉瘤相關疱疹病毒(Kaposi's Sarcoma associated Herpes Virus，KSHV)之目標。此外，已發現由p38 MAP激酶調節之細胞激素(諸如IL-8)與驅動與腫瘤生長相關之血管生成有關聯。有絲***原活化蛋白激酶-蛋白激酶2之磷酸化形式(或pMAPKAPK2)亦為p38 MAP激酶途徑中之激酶且可直接由p38 MAP激酶活化。MAPKAPK2之小鼠基因剔除研究展示細胞激素產生減少，表明MAPKAPK2可為發炎性反應之主要調節劑且亦可為用於消炎及/或癌症療法之潛在目標(WO 2005120509)。
氮雜苯并噻唑基p38 MAP激酶抑制劑(例如WO 2007016392)已在此項技術中揭示用於治療消炎疾病。另外，氮雜苯并咪唑基p38 MAP激酶抑制劑(例如WO 2005075478)已在此項技術中揭示用於治療癌症。此外，WO 200917822揭示適用作PI3激酶抑制劑之咪唑基唑及唑并[4,5-b]吡啶-6-基化合物。
然而，某些p38 MAP激酶抑制劑或細胞激素抑制劑可能具有限制其活體內作用及治療使用的生物可用性及吸收問題。另外，某些p38 MAP激酶抑制劑可能對患者存在不利毒物學作用(尤其GI毒性)且具有患者藥物-藥物相互作用之風險。因此，對替代性細胞激素抑制性藥物存在需要。該等化合物較佳能夠以改良之效能及較高生物可用性抑制p38 MAP激酶。較佳該等化合物亦具有改良之毒物學特徵(尤其GI毒性)及降低之患者藥物-藥物相互作用風險。
本發明提供新穎唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物，其可具有作為用於治療癌症且特定言之治療卵巢癌及/或多發性骨髓瘤之單一藥劑的臨床用途。此外，本發明提供新穎唑并[5,4-b]吡啶-5-基化合物，其可具有與另一治療劑(諸如舒尼替尼(sunitinib))組合用於治療癌症且特定言之治療腎癌的臨床用途。另外，本發明化合物為有效p38 MAP激酶抑制劑(癌細胞中之p38α、p38β及p38 MAP激酶信號傳導)且可具有與某些先前已知之p38 MAP激酶抑制劑相比改良之毒物學特徵(尤其GI毒性)及降低之患者藥物-藥物相互作用風險。
本發明提供式I化合物：
其中：X為甲氧基乙基或乙氧基甲基；Q為環丙基、2-甲基-丙醇-2-基、3-甲基氧雜環丁-3-基或1-羥甲基-1-環丙基；或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明亦提供結晶2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特徵在於包含15.06處之峰及19.94、10.31及20.78處之一或多個峰(2θ +/- 0.2°)的X射線粉末繞射圖(Cu輻射，λ=1.54060 Å)。
本發明亦提供結晶2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特徵在於包含13.73處之峰及16.54、22.87及18.57處之一或多個峰(2θ +/- 0.2°)的X射線粉末繞射圖(Cu輻射，λ=1.54060 Å)。
本發明提供化合物2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供化合物5-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供化合物5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧雜環丁-3-基]-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供化合物[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]環丙基]甲醇或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供治療哺乳動物之卵巢癌之方法，該方法包含投與需要該治療之哺乳動物有效量之本發明之化合物或鹽。
本發明提供治療哺乳動物之多發性骨髓瘤之方法，該方法包含投與需要該治療之哺乳動物有效量之本發明之化合物或鹽。
本發明提供治療哺乳動物之癌症，尤其腎癌之方法，該方法包括與舒尼替尼同時、單獨或連續組合投與需要該治療之哺乳動物有效量之本發明之化合物或鹽。
本發明亦提供醫藥組合物，其包含本發明之化合物或鹽，與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之組合。在一特定實施例中，組合物進一步包含一或多種其他治療劑。更特定言之，其他治療劑為舒尼替尼。
本發明亦提供本發明之化合物或鹽，其係用於醫療。本發明亦提供本發明之化合物或鹽，其係用於治療癌症。另外，本發明提供本發明之化合物或鹽之用途，其係用於製造用於治療癌症之藥劑。另外，本發明提供本發明之化合物或鹽之用途，其係用於治療癌症。特定言之，此癌症為卵巢癌。另外，此癌症為多發性骨髓瘤。
本發明亦提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽及舒尼替尼作為組合製劑，供同時、單獨或連續用於治療。
本發明亦提供舒尼替尼，用於與本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽同時、單獨或連續組合用於治療癌症。在替代方案中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，用於與舒尼替尼同時、單獨或連續組合用於治療癌症。更特定言之，癌症為腎癌。
熟習此技藝之讀者將瞭解式I化合物能夠形成鹽。本發明之化合物含有鹼性雜環，且因此與多種無機酸及有機酸中之任一者反應形成醫藥學上可接受之酸加成鹽。該等醫藥學上可接受之酸加成鹽及其常用製備方法係此項技術所熟知者。參見例如P. Stahl等人，HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES,SELECTION AND USE(VCHA/Wiley-VCH,2008)；S.M. Berge等人，「Pharmaceutical Salts」，Journal of Pharmaceutical Sciences ，第66卷，第1期，1977年1月。
熟習此項技術者應瞭解，本發明之化合物含有至少一個對掌性中心。本發明涵蓋該等化合物之所有個別對映異構體或非對映異構體以及對映異構體及非對映異構體之混合物，包括外消旋體。含有至少一個對掌性中心之本發明化合物較佳以單一對映異構體或非對映異構體形式存在。可以對掌性試劑開始或藉由立體選擇性或立體特異性合成技術製備單一對映異構體或非對映異構體。或者，可藉由標準對掌性層析或結晶技術自混合物分離單一對映異構體或非對映異構體。
以SUTENT形式市售之舒尼替尼為口服小分子多靶向受體酪胺酸激酶抑制劑，其經FDA批准用於治療腎細胞癌及伊馬替尼(imatinib)抗性胃腸基質腫瘤。舒尼替尼揭示於WO 200160814中。
 流程I
製備式I化合物，其中R為環丙基或3-甲基氧雜環丁-3-基；X如上文所定義。
在乙醇中在加熱下以異硫氰酸酯(B)(其可為外消旋體或單一對映異構體)處理鄰羥基吡啶基-3-胺(A)。在加熱期間且定期添加過量N,N'-二取代之碳化二亞胺以移除硫化氫。舉例而言，可使用N,N'-二環己基-碳化二亞胺、N,N'-二異丙基-碳化二亞胺或1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽。異硫氰酸酯(B)(其可為外消旋體或單一對映異構體)之合成描述於以下製備中。
流程II
製備式I化合物，其中R為2-甲基-丙烷甲酸甲酯-2-基或環丙烷甲酸甲酯-1-基；X如上文所定義。
在***中以硼氫化鋰還原5-(1H-咪唑-4-基)唑并[5,4-b]吡啶(C)，得到式I化合物。中間體(C)類似於在流程I中利用異硫氰酸酯(B)自相應羥基吡啶基-3-胺(A)(流程I)製備，其中R為2-甲基-丙烷甲酸甲酯-2-基或環丙烷甲酸甲酯-1-基。
流程III
合成中間體(A)，其中R為2-甲基-丙烷甲酸甲酯-2-基、環丙烷甲酸甲酯-1-基、環丙基或3-甲基氧雜環丁-3-基。
6-(1H-咪唑-4-基)-3-硝基-吡啶-2-胺(D)在吡啶環上進行官能基操作，涉及2-吡啶基胺基之重氮化，隨後以水淬滅，接著氫化3-吡啶基硝基，得到中間體(A)。
流程IV
合成中間體(D)，其中R如流程III中所定義。
中間體(D)在二烷中藉由加熱利用乙酸銨自1-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(F)及已知醛(E)製備。中間體(F)之合成描述於以下製備中。
基本上如以下流程、製備及實例中所說明製備本發明之化合物。試劑及起始物質對於一般技術者而言容易獲得或可藉由選自有機及雜環化學之標準技術、與合成已知結構類似化合物類似之技術及以下實例中所述之程序(包括任何新穎程序)的程序製備。應瞭解，製備及實例係以說明而非限制之方式闡述，且一般技術者可進行各種修改。
以下製備及實例之命名通常使用SYMYXDraw 3.2.NET版中之IUPAC命名特徵進行。
製備1 (3S)-3-[苯甲基-[(1S)-1-苯乙基]胺基]丁酸第三丁酯
製備1及2已在WO 2006/076595中關於R,R對映異構體進行了描述。亦參見Davies,S. G.及Ichihara,O.Tetrahedron: Asymmetry 1991 ,2,183-186關於自(E)-丁-2-烯酸酯(巴豆酸酯)不對稱合成3-胺基丁酸酯所述。
將(1S)-N-苯甲基-1-苯基-乙胺(28.53 g，135 mmol)溶解於無水四氫呋喃(THF)中且在氬氣氛圍下使溶液冷卻至0℃。經30分鐘逐滴添加正丁基鋰(2.5 M於己烷中，54 mL，135 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物20分鐘且隨後冷卻至-78℃。經20分鐘添加(E)-丁-2-烯酸第三丁酯(10 g，70.32 mmol)於無水THF(75 mL)中之溶液至反應混合物中。75分鐘後，藉由添加NH4 Cl之飽和溶液(175 mL)及飽和NaCl水溶液(鹽水，100 mL)淬滅反應。分離各層且以***(2×125 mL)萃取水層。合併之有機層經無水MgSO4 乾燥、過濾且濃縮，得到黃色油狀物。將粗產物溶解於己烷(250 mL)中且以10%檸檬酸水溶液(3×75 mL)洗滌。有機層經MgSO4 乾燥、過濾且濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物(24.12 g，97%)。LC-ES/MS m/z 354(M+1)。
製備2 (3S)-3-[苯甲基-[(1S)-1-苯乙基]胺基]丁-1-醇
將(3S)-3-[苯甲基-[(1S)-1-苯乙基]胺基]丁酸第三丁酯(24 g，67.9 mmol)溶解於無水THF(237 mL)中且在氬氣氛圍下冷卻至0℃。經10分鐘逐滴添加1 M氫化鋰鋁之THF溶液(237 mL，237 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物1小時且隨後在60℃下攪拌1小時。使混合物冷卻至室溫(RT)且以***(500 mL)稀釋。以經15分鐘逐份添加之矽藻土及Na2 SO4 .10 H2 O(1:1)之混合物淬滅反應。過濾混合物且在真空下濃縮，得到呈無色油狀之標題化合物(17.54 g，90%)。LC-ES/MS m/z 284(M+1)。
製備3 (2S)-N-苯甲基-4-甲氧基-N-[(1S)-1-苯乙基]丁-2-胺
將(3S)-3-[苯甲基-[(1S)-1-苯乙基]胺基]丁-1-醇(17.54 g，61.9 mmol)溶解於無水THF(186 mL)中且在氬氣氛圍下冷卻至0℃。經10分鐘逐份添加氫化鈉(4.95 g，於礦物油中之60%懸浮液，123.8 mmol)。在0℃下攪拌混合物15分鐘，且隨後使其升溫至室溫。經30分鐘逐滴添加碘代甲烷(10.54 g，74.28 mmol)。再攪拌30分鐘後，藉由添加NH4 Cl於水中之飽和溶液淬滅反應。分離各層且以***(2×100 mL)萃取水層。合併之有機層經MgSO4 乾燥、濃縮，且藉由正相層析(兩個120 g矽膠筒，含10%甲基第三丁基醚之己烷)純化粗產物，得到呈無色油狀之標題化合物(14.96 g，81%)。LC-ES/MS m/z 298(M+1)。
製備4 (S)-4-甲氧基丁-2-胺鹽酸鹽
將(2S)-N-苯甲基-4-甲氧基-N-[(1S)-1-苯乙基]丁-2-胺(14.96 g，50.29 mmol)溶解於甲醇(400 mL)中。藉由以氮氣鼓泡通過溶液使溶液去氧。添加20%碳上氫氧化鈀(1.50 g)至溶液中，且以氫氣使所得懸浮液飽和且在氫氣氛圍下攪拌16小時。此時存在之主要產物為單去苄化產物。懸浮液經矽藻土墊過濾且添加1.1 g 20%碳上氫氧化鈀至所得溶液中。在氫氣氛圍下攪拌懸浮液24小時。懸浮液經矽藻土墊過濾且添加HCl於***中之2 N溶液(60 mL)至混合物中且攪拌30分鐘。在減壓下濃縮溶液，得到呈白色固體狀之標題化合物(7.01 g，99%)。 1 H NMR(400 MHz ,CDCl3 );δ 1.48(3H,d,J =6.8 Hz),1.8-1.9(1H,m),2.0-2.1(1H,m),3.37(3H,s),3.5-3.7(3H,m),8.3(3H,br)。
製備5 (R)-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯胺
以下程序由Ellman,J. A.等人J. Org. Chem. 2007,72,626-629改編而來。
向1 N HCl溶液(7.0 mL，7.00 mmol)中逐滴添加1,3,3-三甲氧基丁烷(53.19 mL，337.38 mmol)，且加熱所得溶液至50℃且攪拌30分鐘。添加碳酸氫鈉(16.50 g，196.41 mmol)至預先冷卻至室溫的混合物中，隨後添加***及MgSO4 。過濾隨後蒸發溶劑得到呈黃色油狀之酮醚中間體4-甲氧基丁-2-酮。在氮氣氛圍下在25℃下將油狀物添加至(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(36.80 g，303.64 mmol)及乙醇鈦(IV)(123.14 g，539.80 mmol)於THF(482 mL)中之溶液中。所得黃色懸浮液加熱至60℃且在彼溫度下攪拌16小時。反應混合物冷卻至室溫且隨後冷卻至-48℃。逐滴添加含1.0 M三(第二丁基)硼氫化鋰之THF(539.80 mL，539.80 mmol)。反應混合物升溫至室溫。1小時後，反應混合物冷卻至0℃且添加甲醇(1100 mL)，同時快速攪拌直至不再觀測到氣體逸出為止。所得懸浮液經矽藻土栓塞過濾且以乙酸乙酯洗滌濾餅。以鹽水洗滌濾液，且以乙酸乙酯萃取鹽水層兩次。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥、過濾且蒸發成黃色油狀物。
粗產物吸附至矽膠上且經由矽膠管柱使用己烷/乙酸乙酯梯度(7:1至100%乙酸乙酯)純化，得到所要產物。收集含有非極性雜質及所要產物的其他溶離份且藉由矽膠層析再次純化。以己烷/乙酸乙酯4:1移除非極性雜質。以二氯甲烷/甲醇95:5溶離所要產物得到另一份物質。合併兩批物質得到38 g(54%)，如由LCMS可見其為約3:1比率之所要/非所要非對映異構體。
將物質(38 g)與使用相同通用程序製備之另一批物質(23 g)合併且藉由對掌性相高效液相層析(固定相：OD-H；管柱尺寸：(20 μm,80×250 mm)；溶離方式：等濃度；移動相：己烷/異丙醇；流速：300 mL/min；UV偵測：215.16 nm；負載量：4 g/6 min)分離非對映異構體(3:1比率，61 g)。第一溶離峰為次要非對映異構體，TR =4.75分鐘。第二溶離峰為主要非對映異構體(標題化合物)，TR =6.61分鐘。自對掌性層析得到呈淡黃色油狀之標題化合物(43.5 g)。ES/MS m/z 208(M+1)；>98% ee。
製備6 (S)-4-甲氧基丁-2-胺鹽酸鹽
在0℃下將4.0 M氯化氫之二烷溶液(110.15 g，419.61 mmol)添加至(R)-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯胺(43.5 g，209.80 mmol)於1,4-二烷(109 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物1小時。在減壓下濃縮溶劑，殘餘物再懸浮於甲苯中且在減壓下蒸發溶劑。在真空下乾燥殘餘物15分鐘。添加THF且有白色固體沈澱。濾出白色固體，以THF洗滌，使其乾燥且收集，得到標題化合物(25.4 g，87%)。
可藉由以(S)-(-)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯基-乙酸進行衍生化且與由對掌性途徑獲得的製備4之(S)-4-甲氧基丁-2-胺之相同衍生物比較NMR來證實胺之絕對組態。
製備7 (3S)-3-異硫氰基-1-甲氧基-丁烷
將(S)-4-甲氧基丁-2-胺鹽酸鹽(25.4 g，181.92 mmol)懸浮於THF(609 mL)中且添加三乙胺(TEA，32.17 mL，230.78 mmol)。添加1,1'-硫羰基二咪唑(46.74 g，251.76 mmol)至白色懸浮液(輕微放熱反應)且在氮氣氛圍下攪拌所得黃色懸浮液隔夜。添加乙酸乙酯(500 mL)至黃色懸浮液中，隨後添加1 N HCl(500 mL)。分離有機相且以1 N HCl(3×200 mL)、水(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥、過濾且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物(25.3 g，83%)。 1 H NMR(400 MHz ,CDCl3 );δ 1.37(3H,d,J =6.6 Hz),1.83(2H,q,J =6.6 Hz),3.35(3H,s),3.6-3.4(2H,m),3.99(1H,六重峰,J =6.6 Hz)。
製備8 2,2-二甲基-3-側氧基-丙酸甲酯
將3-羥基-2,2-二甲基-丙酸甲酯(52.4 g，396.49 mmol)溶解於二氯甲烷(495 mL)中且在冰水浴中冷卻混合物。逐份添加三氯異三聚氰酸(101.36 g，436.14 mmol)，隨後添加2,2,6,6-四甲基哌啶-N-氧化物(6.20 g，39.65 mmol)。在0℃下攪拌混合物15分鐘且隨後使其升溫至室溫且再攪拌60分鐘。隨後經矽藻土過濾固體且以二氯甲烷(300 mL)沖洗。以Na2 CO3 於水中之飽和溶液洗滌濾液。有機相經Na2 SO4 乾燥、過濾且在減壓下濃縮，得到呈淺綠色油狀之標題化合物(41.24 g，80%)。產物未經進一步純化即用於下一反應步驟。 1 H NMR(400 MHz ,CDCl3 );δ 1.34(6H,s),1.34(6H,s),3.74(3H,s),9.64(1H,s)。
製備9 6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺
在氮氣下將6-氯-3-硝基-吡啶-2-基胺(1254 g，7.23 mol)、三乙胺(1510 mL，10.84 mol)及乙腈(10 L)裝入配備有機械攪拌器的20 L 4頸圓底燒瓶中。向所得黃色懸浮液中添加碘化銅(I)(13.9 g，72.3 mmol)及氯化雙(三苯膦)鈀(II)(50.72 g，72.3 mmol)。所得淺橙色懸浮液冷卻至0至5℃且隨後在10分鐘期間以氮氣脫氣。經60分鐘時間逐滴添加1-乙炔基-2,4-二氟-苯(1100 g，7.95 mol)溶解於乙腈(2.5 L)中之溶液。在室溫(30℃)下攪拌所得混合物隔夜。冷卻混合物至0至5℃。添加甲苯(6 L)至懸浮液中且攪拌混合物45分鐘且經玻璃料過濾。以甲苯(3×3 L)、水(2×3 L)洗滌固體且在真空烘箱中乾燥隔夜，得到呈黃色固體狀之標題化合物(1750 g，92%)。LC-ES/MS m/z 276(M+1)。
製備10 1-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮
向6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺(500 g，1.82 mol)於丙酮(10 L)中之冷懸浮液(0至10℃)中添加冷緩衝液[NaH2 PO4 (0.8 M)/Na2 HPO4 (0.8 M)=85/15(v/v)](pH=6.0；0至10℃；10 L)。溫度維持在15℃。逐份添加高錳酸鉀(1035 g，6.55 mol)(3份)。在15℃下攪拌混合物4小時。調節pH值至pH=5.0且保持溫度低於15℃。緩慢添加28%硫代硫酸鈉溶液(2054 mL，3.64 mol)，維持溫度低於15℃且pH值低於7.5。添加鹽水(7.5 L)以及甲基第三丁基醚(3.75 L)與乙酸乙酯(3.75 L)之混合物至懸浮液中。在13℃下攪拌混合物15分鐘。分離兩個相且以甲基第三丁基醚(3.5 L)萃取棕色水性懸浮液兩次。收集合併之有機層且以鹽水(2×3 L)洗滌、經Na2 SO4 乾燥、過濾，且在減壓下蒸發溶劑得到呈黃色固體狀之標題化合物(375 g)。在相同條件下再重複實驗兩次。合併所得批次，得到1080 g。LC-ES/MS m/z 308(M+1)。
製備11 2-[4-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯
向具有回流冷凝器之圓底燒瓶中添加1-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(50 g，162.75 mmol)、乙酸銨(126.72 g，1.63 mol)、2,2-二甲基-3-側氧基-丙酸甲酯(42.36g ，325.51 mmol)及1,4-二烷(163 mL)。經1.5小時時間加熱反應混合物至80℃。最初橙色之溶液在加熱時變深。在減壓下濃縮反應混合物以消除二烷且在高真空下乾燥殘餘物隔夜。殘餘物再溶解於乙酸乙酯(800 mL)中且以2 M Na2 CO3 於水中之溶液萃取。有機相經MgSO4 乾燥、濃縮且在高真空下乾燥隔夜，得到呈粗橙色固體狀之標題化合物(80 g)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LC-ES/MS m/z 418(M+1)。
製備12 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-(6-羥基-5-硝基-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯
向2-[4-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(56 g，134.17 mmol)於二甲亞碸(DMSO，400 mL)及水(320 mL)中之溶液中逐滴添加95%至97%硫酸(80 mL)。隨後冷卻混合物至0℃。在0℃下經15分鐘向以上混合物中逐滴添加亞硝酸鈉(18.70 g，268.35 mmol)於水(80 mL)中之溶液。在彼溫度下攪拌反應混合物20分鐘且隨後移除冷卻浴且使溫度上升至室溫。向反應混合物中添加0.8 M緩衝磷酸二氫鈉水溶液(1200 mL，pH=6)。出現黃色懸浮液。在室溫下攪拌此懸浮液1小時。過濾固體、以水洗滌且在烘箱中乾燥，得到呈橙色固體狀之標題化合物(49.5 g，88%)。LC-ES/MS m/z 419(M+1)。
製備13 2-[4-(5-胺基-6-羥基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯
在室溫下在氫氣氛圍(氣球)下攪拌2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-(6-羥基-5-硝基-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(49.5 g，118.32 mmol)及5%重量(乾重)活性碳上鈀(4.95 g，2.33 mmol)於甲醇(1.18 L)中之混合物隔夜。懸浮液經矽藻土過濾、以甲醇沖洗且在減壓下濃縮濾液，得到呈棕色固體狀之粗標題化合物(39 g)。
如下純化來自多次操作之粗物質(90 g，231.74 mmol)。將物質懸浮於二氯甲烷(450 mL)與乙酸乙酯(450 mL)之1:1混合物中。在室溫下攪拌懸浮液隔夜。濾出懸浮液且以二氯甲烷/乙酸乙酯之1:1混合物洗滌固體。使棕色固體乾燥且收集得到67 g標題化合物，其根據液相層析質譜分析具有大於98%之純度。LC-ES/MS m/z 389(M+1)。
製備14 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯
在室溫下將(3S)-3-異硫氰基-1-甲氧基-丁烷(24.68 g，169.94 mmol)添加至2-[4-(5-胺基-6-羥基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(55 g，141.62 mmol)於乙醇(550 mL)中之懸浮液中。在回流下攪拌反應混合物隔夜且隨後冷卻至50℃。添加二環己基碳化二亞胺(37.99 g，184.10 mmol)至混合物中且在回流下攪拌所得懸浮液20小時。使反應達到室溫且在減壓下蒸發溶劑。殘餘物吸收於矽膠中且經由矽膠管柱純化(首先使用二氯甲烷作為溶離劑以移除大部分非極性雜質且隨後使用二氯甲烷/甲醇95:5以溶離所要產物)，得到呈深棕色泡沫狀之標題化合物(52 g，74%)。LC-ES/MS m/z 500(M+1)。
製備15 2-[(1S)-2-羥基-1-甲基-乙基]異吲哚啉-1,3-二酮
在140℃下加熱(2S)-2-胺基丙-1-醇(26 mL，333 mmol)及鄰苯二甲酸酐(51.7 g，349.4 mmol)之混合物隔夜。在此時間期間固體變為橙色液體。冷卻反應至室溫且以乙酸乙酯(10 mL/g)稀釋。以飽和NaHCO3 及10%檸檬酸洗滌有機相、經MgSO4 乾燥、過濾且濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物(68.3 g，98%)，其未經進一步純化即使用。LC-ES/MS m/z 206(M+1)。
製備16 2-[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]異吲哚啉-1,3-二酮
向2-[(1S)-2-羥基-1-甲基-乙基]異吲哚啉-1,3-二酮(47 g，229 mmol)及碘乙烷(89.3 g，572.5 mmol)於THF(376 mL)中之溶液中一次性添加第三丁醇鉀(64.25 g，572.5 mmol)。在氮氣氛圍下攪拌混合物15小時。以乙酸乙酯(200 mL)稀釋混合物且以鹽水(200 mL)洗滌。以乙酸乙酯(2×100 mL)萃取水相。合併之有機萃取物經MgSO4 乾燥、過濾、在減壓下濃縮且隨後在高真空下乾燥，得到呈橙色固體狀之標題化合物(39.4 g,74%)，其未經進一步純化即使用。LC-ES/MS m/z 234(M+1)。
製備17 (2S)-1-乙氧基丙-2-胺鹽酸鹽
將2-[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]異吲哚啉-1,3-二酮(12.84 g，55 mmol)溶解於甲醇(120 mL)中。緩慢添加單水合肼(6.9 mL，138 mmol)且在40℃下攪拌混合物4小時(形成白色固體)。添加NaOH(1 mL)且pH值上升至13至14。過濾固體且以二氯甲烷洗滌。分離濾液層且以二氯甲烷進一步萃取水層。合併之有機層經MgSO4 乾燥且過濾。添加2 N HCl之***溶液(70 mL，140 mmol)至溶液中。攪拌混合物15分鐘且在減壓下蒸發溶劑得到呈白色固體狀之標題化合物(6.61 g，86%)。 1 H NMR(400 MHz,CD 3 OD);δ 1.22(t,3 H,J=7.02 Hz),1.28(d,3 H,J=6.52 Hz),3.42(m,2H),3.58(m,3H) 。
製備18 (2S)-1-乙氧基-2-異硫氰基-丙烷
向(2S)-1-乙氧基丙-2-胺鹽酸鹽(2 g，12.03 mmol)於二甲基甲醯胺(DMF，20 mL)及TEA(1.85 mL，13.24 mmol)中之溶液中添加1,1'-硫羰基二咪唑(2.36 g，13.24 mmol)。在氮氣氛圍下攪拌混合物16小時。以乙酸乙酯稀釋混合物且以1 N HCl、水及鹽水充分洗滌、經MgSO4 乾燥且在減壓下濃縮(為避免產物蒸發，浴溫度不超過20℃)得到含有標題化合物之粗物質(1.84 g)，其未經進一步純化即使用。 1 H NMR(400 MHz,CDCl 3 );δ 1.26(t,3H,J=7.13 Hz),1.33(d,2H,J=6.63 Hz),3.46(dd,J=5.86,1.62 Hz,2H),3.55(dd,J=13.98,6.97 Hz,2H),3.93(m,1H) 。
製備19 3-甲基氧雜環丁烷-3-甲醛
將(3-甲基氧雜環丁-3-基)甲醇(6.0 g，58.75 mmol)溶解於二氯甲烷(117 mL)中。在-5℃下逐份添加三氯異三聚氰酸(13.93 g，59.92 mmol)，隨後添加2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(TEMPO)(0.92 g，5.87 mmol)。在-5℃下攪拌反應混合物20分鐘，使其升溫至室溫且再攪拌20分鐘。混合物經矽藻土墊過濾，以二氯甲烷(200 mL)稀釋，且以飽和Na2 CO3 水溶液(100 mL)、1 N HCl(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。濃縮有機部分，得到呈橙色油狀之標題化合物(4.17 g，71%)，其未經進一步純化即使用。 1 H NMR(400 MHz,CDCl 3 );δ 1.48(s,3H),4.50(d,2H,J=6.34 Hz),4.88(d,2H,J=6.34 Hz),9.95(s,1H) 。
替代製備：
在0℃下添加溴化鉀(11.65 g，0.098 mol)至(3-甲基氧雜環丁-3-基)甲醇(200 g，1.96 mol)及TEMPO(3.06 g，0.019 mol)於二氯甲烷(2 L)中之混合物中。隨後，逐滴添加以固體NaHCO3 調節至pH=9的10%次氯酸鈉水溶液(1.6 L，2.35 mol)至上述溶液中(3小時添加，內部溫度保持低於10℃)。攪拌所得混合物15分鐘且分離兩個相。以10% 2-丙醇/二氯甲烷混合物萃取水相直至在水相中藉由薄層層析不能偵測到產物為止。合併之有機相以飽和硫代硫酸鈉溶液洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且濃縮，得到呈橙色油狀之標題化合物(114 g，58%)。
製備20 1-甲氧基羰基環丙烷甲酸
將環丙烷-1,1-二甲酸二甲酯(26.08 mL，189.87 mmol)溶解於甲醇(319 mL)中且冷卻溶液至0℃。逐滴添加1 N NaOH水溶液(190 mL，190 mmol，1當量)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。在減壓下濃縮溶液以移除甲醇且以二氯甲烷(3×50 mL)洗滌所得水溶液且以1 N HCl(pH=2至3)進行酸化。隨後以乙酸乙酯(5×100 mL)及二氯甲烷(3×50 mL)萃取溶液。合併之有機部分經MgSO4 乾燥、過濾且濃縮，得到標題化合物(16.4 g，60%)。 1 H NMR(400 MHz ,CDCl3 );δ 1.9-1.7(m,4H),3.78(s,3H)。
製備21 1-(羥甲基)環丙烷甲酸甲酯
將1-甲氧基羰基環丙烷甲酸(16.4 g，113.89 mmol)、TEA(17.6 mL，127.55 mmol)及THF(325 mL)裝入圓底燒瓶中。冷卻混合物至-10℃且逐滴添加氯甲酸異丁酯(16.5 mL，127.55 mmol)。攪拌溶液1小時。在單獨燒瓶中，將硼氫化鈉(13 g，341.67 mmol)溶解於THF(165 mL)與水(40 mL)之混合物中且在冰浴中冷卻。藉由過濾自第一溶液移除不可溶物質。經1.5小時之時間逐滴向硼氫化物溶液中添加上述1-甲氧基羰基環丙烷甲酸溶液。在相同溫度下攪拌所得溶液1小時。反應混合物傾入20%檸檬酸冷水溶液中且以乙酸乙酯(3×150 mL)萃取。合併之有機層以鹽水洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且在減壓下濃縮，得到標題化合物(13.5 g，91%)。 1 H NMR(400 MHz ,CDCl3 );δ 0.9-0.8(m,2H),1.3-1.2(m,2H),3.62(s,2H) 3.69(s,3H)。
製備22 1-甲醯基環丙烷甲酸甲酯
將1-(羥甲基)環丙烷甲酸甲酯(16.0 g，123.07 mmol)溶解於二氯甲烷(320 mL)中且冷卻混合物至-5℃。逐份添加三氯異三聚氰酸(29.1 g，125.5 mmol)，隨後添加TEMPO(1.9 g，12.3 mmol)。在-5℃下攪拌反應混合物20分鐘，使其升溫至室溫且攪拌20分鐘。經矽藻土墊過濾混合物且以二氯甲烷(500 mL)稀釋。溶液以飽和Na2 CO3 (300 mL)、1 N HCl(300 mL)、鹽水(300 mL)及飽和氯化銨(3×200 mL)洗滌。有機部分經MgSO4 乾燥、過濾且在減壓下濃縮，得到仍含有二氯甲烷的19 g標題化合物(理論值15.75 g)。物質以原樣用於下一反應中。 1 H NMR(400 MHz ,CDCl3 );δ 1.7-1.6(m,4H),3.81(s,3H),10.38(s,1H)。
製備23 6-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-胺
向KIMAX管中裝入1-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(5 g，16.28 mmol)、1,4-二烷50 mL)及乙酸銨(6.27 g，81.38 mmol)。逐滴添加環丙烷甲醛(3.42 mL，48.83 mmol)至混合物中。以氮氣淨化所得混合物，密封管且將其在80℃下加熱隔夜；之後使混合物冷卻至室溫。隨後在減壓下濃縮混合物至乾燥。添加乙酸乙酯(700 mL)及飽和NaHCO3 水溶液。分離有機層、以鹽水(3×250 mL)洗滌、經MgSO4 乾燥且濃縮，得到粗標題化合物(5.5 g)，其未經進一步純化即用於下一步驟。LC-ES/MS m/z 358(M+1)。
藉由基本上按照如製備23中所述之程序，使用1-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮及適當醛作為起始物質，製備下表中之中間體。
*反應在90℃下進行1.5小時。在處理期間固體沈澱，且藉由添加碳酸氫鹽溶液進行收集。如前所述處理濾液得到紅色油狀物。在乙酸乙酯/己烷之4:1混合物中音波處理油狀物，得到懸浮液，對其進行過濾。
製備26 6-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-醇
將6-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-胺(5.51 g，15.41 mmol)懸浮於二甲亞碸(DMSO，32 mL)、水(25 mL)及濃H2 SO4 (6 mL)中。在0℃下冷卻懸浮液且以維持溫度低於5℃之速率逐份添加亞硝酸鈉(2.13 g，30.81 mmol)。在0℃下攪拌混合物30分鐘，且隨後使其升溫至室溫且攪拌直至液相層析/質譜分析(LC/MS)表明起始物質完全轉化(1小時)。添加0.8 M磷酸二氫鈉水溶液(200 mL)至混合物中。形成黃色懸浮液。隨後添加1 N NaOH水溶液直至pH值上升至8為止。攪拌混合物30小時，過濾且以水沖洗固體，且隨後在減壓下乾燥，得到標題化合物(4.53 g，82%)。LC-ES/MS m/z 358.9(M+1)。
藉由基本上按照如製備26中所述之程序，使用適當3-硝基-吡啶-2-胺作為起始物質，製備下表中之中間體。
製備29 3-胺基-6-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]吡啶-2-醇
將6-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-3-硝基-吡啶-2-醇(4.525 g，12.63 mmol)溶解於乙醇(63 mL)中。以氮氣鼓泡使溶液脫氣。逐份添加10% Pd/C(920 mg)至混合物中且以氫氣使混合物飽和。在室溫下在氫氣氛圍(氣球)下攪拌混合物經過週末，此時LC/MS表明完全轉化。懸浮液經矽藻土墊過濾以移除催化劑且在減壓下濃縮溶液，得到標題化合物(3.97 g，89%)。LC-ES/MS m/z 328.9(M+1)。
藉由基本上按照如製備29中所述之程序，使用適當3-硝基-吡啶醇作為起始物質，製備下表中之中間體。
製備32 1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]環丙烷甲酸甲酯
將1-[4-(5-胺基-6-羥基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]環丙烷甲酸甲酯(4 g，10.35 mmol)與(2S)-1-乙氧基-2-異硫氰基-丙烷(2.379 g，15.53 mmol)之混合物溶解於乙醇(34 mL)中。在密封燒瓶中加熱混合物至85℃維持16小時。逐滴添加二異丙基碳化二亞胺(3.21 g，20.71 mmol)且在85℃下攪拌混合物16小時，之後再添加3 g二異丙基碳化二亞胺且再在85℃下加熱混合物4小時。蒸發溶劑且藉由正相層析(120 g矽膠筒，使用己烷-乙醇梯度)純化殘餘物，得到標題化合物(1.180 g，24%)。LC-ES/MS m/z 498.1(M+1)。
合成實例1之製備的替代方案 製備33 (S)-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯胺
對於在N -第三丁烷亞磺醯亞胺之還原中三第二丁基硼氫化鋰(L-Selectride)與硼氫化鈉之比較，參見Faul,M. M.J. Org. Chem. 2007 ,71 6859-6862。
將1,3,3-三甲氧基丁烷(145.4 g，0.98 mol)與1 N鹽酸水溶液(50.0 mL，0.05 mol)組合且在氮氣氛圍下在室溫下攪拌1至2小時。添加THF(1.5 L)且在低於70℃下在標準大氣壓下蒸發溶劑兩次。添加THF(1.5 L)以製備4-甲氧基丁-2-酮於THF中之溶液。添加(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(124.4 g，1.03 mol)及乙醇鈦(IV)(447.0 g，1.96 mol)且加熱反應至65至70℃維持16至17小時。冷卻反應混合物至-10至0℃。逐份添加硼氫化鈉(37.0 g，0.98 mol)，且隨後在相同溫度下攪拌混合物1至2小時。使反應混合物升溫至室溫且攪拌1至2小時。隨後將其冷卻至10至20℃且經1至2小時逐滴添加甲醇(100 mL)。添加25%氯化鈉水溶液(300 mL)且使混合物升溫至室溫。添加乙酸乙酯(500 mL)。在室溫下攪拌混合物1至2小時且隨後過濾。再以乙酸乙酯(807 mL)沖洗濾餅。分離各層且以25%氯化鈉水溶液(1.0 L)洗滌有機相。以乙酸乙酯(500 mL)萃取水相。合併有機部分且在低於75℃下在大氣壓下(非真空)蒸餾溶劑得到300至500 mL總體積之溶液。添加乙酸乙酯(600 mL)及硫代硫酸鈉(150.0 g)且在20至30℃下攪拌混合物1至2小時。過濾混合物且濃縮濾液。藉由超臨界流體層析分離非對映異構體，得到呈黃色油狀之標題化合物(205.0 g，65%)。管柱：ChiralPakAD 10 μm,50×300 mm；溶離方式：等濃度；移動相：CO2 /乙醇；流速：280 mL/min；UV偵測：215.16 nm；負載量：300 mg/mL。第一溶離峰為次要非對映異構體，TR =15.17分鐘。第二溶離峰為代表標題化合物的主要非對映異構體，TR =17.11分鐘。
製備34 (3S)-3-異硫氰基-1-甲氧基-丁烷
在氮氣氛圍下組合甲醇(185 mL)、THF(1.76 L)及N-S-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯胺(220.0 g，1.06 mol)且冷卻至-10至0℃。逐滴添加鹽酸(1.26 L，5.3 mol，4.2 N於THF中)且維持溫度低於10℃。在0至10℃下攪拌反應混合物3至4小時，且在低於45℃下在減壓下濃縮至溶液體積為400.0至600.0 mL。添加THF(880 mL)且在低於45℃下在減壓下濃縮反應混合物至溶液體積為400至600 mL。冷卻反應混合物至20至30℃且攪拌0.5至1小時。添加(S)-4-甲氧基丁-2-胺鹽酸鹽之晶種(5.0 g，35.8 mmol)。(晶種可由自製備4或6獲得之固體產生或可使用熟習此項技術者常用之其他方法(諸如小等分試樣之再結晶)獲得。)亦添加甲基第三丁基醚(660 mL)且在20至25℃下攪拌混合物2至4小時。冷卻混合物至0至5℃且攪拌2至4小時。藉由過濾收集固體且以甲基第三丁基醚(110 mL)洗滌濾餅。將固體轉移至反應容器中且在室溫下添加甲基第三丁基醚(660 mL)。添加硫代硫酸鈉(270.0 g，1.9 mol)及氫氧化鈉(42.5 g，1.06 mol)且在10至20℃下攪拌混合物1至2小時。過濾混合物且以甲基第三丁基醚(440 mL)洗滌濾餅，得到(S)-4-甲氧基丁-2-胺於甲基第三丁基醚中之粗溶液(87.5 g)。物質如下用於下一反應。
在氮氣氛圍下添加N,N -硫羰基二咪唑(97.0 g，0.55 mol)及THF(470 mL)且攪拌混合物15至30分鐘。冷卻混合物至10至0℃，添加(S)-4-甲氧基丁-2-胺(46.9 g，0.455 mol)於甲基第三丁基醚(389 mL)中之溶液，且使反應混合物升溫至10至20℃。在此溫度下攪拌反應混合物15至20小時，且隨後冷卻至0至10℃。添加鹽酸(275 mL，4 N於水中)得到1至2之pH值。使反應混合物升溫至室溫且分離各層。以乙酸乙酯(235 mL)萃取水層且合併有機層且以水(140 mL)洗滌。在低於45℃下在減壓下濃縮有機溶液，添加乙酸乙酯(211.5 mL)，且在低於45℃下在減壓下濃縮溶液兩次，且添加乙酸乙酯(235 mL)。添加硫代硫酸鈉(32.3 g，227.0 mmol)，過濾溶液且以乙酸乙酯(104 mL)洗滌濾餅。在低於45℃下在減壓下濃縮濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物(55.0 g，77%)。
製備35 2,2-二甲基-3-側氧基-丙酸甲酯
在室溫下在氮氣氛圍下在攪拌下組合3-羥基-2,2-二甲基-丙酸甲酯(25.4 kg，192.2 mol)及二氯甲烷(241 L)。添加(2,2,6,6-四甲基-哌啶-1-基)氧基(0.61 kg，3.9 mol)且冷卻反應混合物至0至5℃。在0至5℃下逐份添加三氯異三聚氰酸(31.2 kg，134.5 mol)且在此溫度下攪拌反應混合物16至18小時。過濾反應且以二氯甲烷(25.4 L)洗滌濾餅且在低於50℃下在減壓下濃縮濾液。添加1,4-二烷(25.4 L)且在低於65℃下在減壓下濃縮有機相得到呈黃色液體狀之標題化合物(127.8 kg，77%)，其未經進一步純化即使用。
製備36 6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺
在20至25℃下在氮氣氛圍下在攪拌下組合6-氯-3-硝基-吡啶-2-基胺(16.2 kg，93.3 mol)、乙腈(130.8 L)、碘化亞銅(0.18 kg，1.0 mol)及氯化雙(三苯膦)鈀(II)(0.66 kg，0.9 mol)。添加三乙胺(19.7 L，141.3 mol)且加熱混合物至30至35℃。在30至35℃下在氮氣氛圍下添加1-乙炔基-2,4-二氟-苯(18.0 kg，130.3 mol)於乙腈(32.6 L)中之溶液。在15至25℃下攪拌混合物2至4小時。添加甲苯(80.0 L)且攪拌混合物0.5至1小時，隨後冷卻至0至5℃且攪拌2至4小時。離心反應混合物且以甲苯(2×64 L)及水(2×32.4 L)沖洗濾餅。在低於50℃下在減壓下乾燥固體，得到呈黃色固體狀之標題化合物(21.7 kg，83%)。
製備37 1-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮
在氮氣氛圍下添加6-[2-(2,4-二氟苯基)乙炔基]-3-硝基-吡啶-2-胺(2.0 kg，7.3 mol)及丙酮(40.5 L)至反應器中且在攪拌下冷卻混合物至0至10℃。在0至15℃下添加水(38.3 L)、磷酸二氫鈉(3.3 kg)及磷酸氫二鈉(0.7 kg)之緩衝溶液。冷卻混合物至3至6℃且在3至6℃下裝入固體高錳酸鉀(4.1 kg，25.9 mol)。攪拌混合物3小時至5小時，且隨後在15至20℃下轉移部分反應混合物至含有水(9.3 L)及硫代硫酸鈉五水合物(3.6 kg)之容器中。在15至25℃下攪拌混合物。添加水(50 L)且攪拌混合物0.5至1小時且過濾。在低於45℃下在減壓下濃縮濾液。當溶劑蒸餾完全時，在20至25℃下添加水(40 L)且攪拌混合物0.5至1小時。藉由過濾收集固體且在低於40℃下乾燥濾餅，得到呈黃色固體狀之標題化合物(1.7 kg，75%)。
製備38 2-[4-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯，甲烷磺酸鹽
在20至25℃下在氮氣氛圍下在攪拌下組合乙酸銨(30.0 kg，389.2 mol)、1,4-二烷(193.6 L)及2,2-二甲基-3-側氧基-丙酸甲酯(10.2 kg，78.4 mol)歷時0.5至1小時。添加1-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-2-(2,4-二氟苯基)乙烷-1,2-二酮(18.5 kg，60.2 mol)且在20至25℃下攪拌混合物10至14小時。添加甲苯(36.9 L)且在低於65℃下在減壓下濃縮溶液。添加甲苯(76.8 L)且隨後在低於65℃下在減壓下濃縮溶液。添加甲苯(36.9 L)及乙酸乙酯(37.1 L)且過濾混合物。撇開濾液且濾餅轉移至另一反應器中且添加乙酸乙酯(37.1 L)。在攪拌下加熱混合物至50至60℃維持20至30分鐘。冷卻混合物至20至25℃，過濾且將濾液與先前濾液合併。在低於60℃下在減壓下濃縮合併之濾液且添加甲苯(76.8 L)。在低於65℃下在減壓下濃縮混合物。添加乙酸乙酯(18.6 L)及甲苯(18.3 L)且加熱溶液至50至70℃。添加含甲烷磺酸(4.3 L，66.2 mol)之乙酸乙酯(18.6 L)且攪拌反應1至2小時。冷卻反應至10至25℃且攪拌2至5小時。藉由過濾收集固體且以乙酸乙酯(18.6 L)洗滌濾餅，得到呈棕色固體狀之標題化合物(17.0 kg，96.2%純度，46.2%產率)。1 H NMR(d 6 -DMSO,400 MHz) δ 1.69(s,6H),2.36(s,3H),3.68(s,3H),6.89(d,1H,J =8.8 Hz),7.00(s,1H),7.25(s,1H),7.12(s,1H),7.27(dd,1H,J=8.4 Hz,1.6 Hz),7.45(ddd,1H,J =10.0 Hz,10.0 Hz,2.4 Hz),7.83-7.68(m,2H),8.40(d,1H,J =8.8 Hz)。
製備39 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-(6-羥基-5-硝基-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯
在氮氣氛圍下添加2-[4-(6-胺基-5-硝基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯甲烷磺酸鹽(68.9 g，134.2 mmol)、二甲亞碸(275.5 mL)、THF(116.2 mL)及水(303.2 mL)且在20至25℃下攪拌混合物。逐滴添加95%至97%硫酸(93.6 mL)至反應混合物中且維持溫度低於30℃。冷卻反應混合物至0至5℃，且在0至10℃下添加亞硝酸鈉(18.6 g，0.27 mmol)於水(82.7 mL)中之溶液。在此溫度下攪拌反應混合物1至2小時。逐滴添加10%磷酸二氫鈉水溶液(930.0 mL)，維持溫度低於25℃。在15至25℃下攪拌所得混合物2至3小時，且藉由過濾收集固體。以水(138 mL)洗滌濾餅且固體轉移至反應容器中。添加甲醇(566 mL)且加熱混合物至60至65℃維持1至2小時。添加水(87 mL)且在60至65℃下攪拌混合物1至2小時。冷卻反應混合物至15至25℃且在15至25℃下攪拌混合物2至4小時。過濾混合物，以甲醇(87 mL)洗滌濾餅且在低於70℃下在真空下乾燥，得到呈黃色固體狀之標題化合物(53.28 g，93%)。
製備40 2-[4-(5-胺基-6-羥基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯
在15至25℃下組合2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-(6-羥基-5-硝基-2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(90.0 g，0.22 mol)、濕10% Pd/C(4.5 g)及甲醇(1.77 L)。在20至25 psig氫氣氛圍下攪拌反應3至6小時。反應混合物經矽藻土過濾，且以甲醇(227 mL)洗滌助濾劑。在低於40℃下在減壓下濃縮濾液，且添加甲基第三丁基醚(729.3 mL)。在低於40℃下在減壓下移除MTBE，且再添加甲基第三丁基醚(729.3 mL)。在低於40℃下在減壓下移除MTBE。添加甲基第三丁基醚(182 mL)及甲醇(46 mL)且加熱混合物至50至60℃維持1至2小時。冷卻混合物至10至15℃且攪拌2至4小時。藉由過濾收集固體且以甲基第三丁基醚(61 mL)洗滌濾餅。在低於50℃下在真空下乾燥固體，得到呈黃色固體狀之標題化合物(75.0 g，88%)。
製備41 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯
在氮氣氛圍下在25至30℃下以氮氣使二甲亞碸(713 mL)脫氣0.5至1小時。添加2-[4-(5-胺基-6-羥基-2-吡啶基)-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(35.0 g，90.0 mmol)及(3S)-3-異硫氰基-1-甲氧基-丁烷(19.58 g，0.14 mol)且加熱反應至63至68℃。在此溫度下攪拌反應混合物18至24小時且隨後逐份添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(19.3 g，100.7 mmol)。在60至65℃下攪拌反應混合物2至4小時。若反應未達到完全轉化，則再添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(1.9 g，9.9 mmol)。冷卻反應混合物至20至30℃且經矽藻土過濾。添加乙酸乙酯(351 mL)及水(350 mL)至濾液中。分離各層且以乙酸乙酯(312 mL)萃取水相。合併有機層且以水(2×210 mL)洗滌，且隨後添加庚烷(626 mL)。攪拌溶液0.5至1小時且經矽膠過濾，以乙酸乙酯(351 mL)與庚烷(348 mL)之混合物沖洗。在低於45℃下在減壓下濃縮溶液且添加乙酸乙酯(156 mL)。添加活性碳(3.5 g)且在攪拌下加熱混合物至60至70℃維持0.5至1小時。冷卻混合物至20至30℃，過濾且在低於45℃下在減壓下濃縮濾液。將甲苯(242 mL)裝入所得殘餘物中且在低於45℃下在減壓下濃縮物質。添加甲苯(40 mL)且在攪拌下加熱混合物至60至70℃維持0.5至1小時。冷卻混合物至25至30℃，攪拌2至4小時，且隨後冷卻至0至5℃。在0至5℃下攪拌混合物2至4小時且藉由過濾收集固體。以甲苯(40 mL)洗滌濾餅且在低於60℃下在減壓下乾燥，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(33.0 g，71%)。
實例1 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇
將2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(497 mg，0.99 mmol)溶解於***(5 mL)與THF(2.5 mL)之混合物中。冷卻混合物至0℃且逐份添加硼氫化鋰(45.6 mg，1.99 mmol)。在氮氣氛圍下在室溫下攪拌反應混合物2小時。緩慢添加1 M HCl直至pH=1且在室溫下攪拌混合物15分鐘。以固體NaHCO3 鹼化混合物且分離各層。以二氯甲烷萃取水層且合併之有機層經MgSO4 乾燥、過濾且在減壓下濃縮。藉由正相層析(40 g矽膠筒，含20%乙醇之己烷)純化粗物質。得到棕色固體(298 mg)，其藉由逆相層析(XBRIDGETM 管柱(5 μm，19×100 mm)：梯度在含35%與38%乙腈之碳酸銨水溶液(pH=9)之間。流速25 mL/min)進一步純化，得到193 mg(41%)標題化合物。LC-ES/MS m/z 472(M+1)。[α]D 22 +33.79°(c=0.72，甲醇)。
實例1替代純化 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇
將2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(50 g，100.1 mmol)溶解於***(1 L)與THF(500 mL)之混合物中。冷卻混合物至0℃且添加硼氫化鋰(4.36 g，200.19 mmol)。在氮氣氛圍下在室溫下攪拌反應混合物2小時。緩慢添加1 M HCl(600 mL)(氣體逸出)且在室溫下攪拌所得混合物1.5小時。分離各層且以甲基第三丁基醚萃取水相。藉由添加2 M NaOH(200 mL)使水層鹼化(pH=8)且以二氯甲烷(3×400 mL)萃取。合併之有機層經Na2 SO4 乾燥、過濾且在減壓下濃縮成棕色泡沫體。經由矽膠管柱(溶離劑：二氯甲烷/含3 N NH3 之甲醇95:5)溶離粗產物得到呈紫色泡沫狀之所要產物(35 g)。將固體懸浮於2:1庚烷/甲基第三丁基醚之混合物中且音波處理。在室溫下攪拌懸浮液隔夜。過濾固體且在真空下乾燥，得到呈結晶灰白色固體狀之標題化合物(30 g，64%)。MS(m/z): 472(M+1)。
實例1：製備33至41之替代途徑 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇
在氮氣下冷卻2-甲基四氫呋喃(135 mL)至-5至0℃且逐份添加硼氫化鋰(4.95 g，0.23 mol)，同時維持溫度低於10℃。在-5至0℃下逐滴添加2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙酸甲酯(45.0 g，0.09 mol)於2-甲基四氫呋喃(225 mL)中之溶液且攪拌12至14小時。在-5至0℃下逐滴添加2 M鹽酸水溶液(203 mL)且在攪拌下加熱反應混合物至30至40℃維持1至2小時。冷卻反應混合物至15至25℃且分離各層。以水(135 mL)與2 M鹽酸水溶液(45 mL)之混合物萃取有機相，且棄去有機相。合併水層且逐滴添加25%氫氧化鈉水溶液(75 mL)以調整至pH=8至9。在室溫下以二氯甲烷(225 mL)萃取水溶液且分離各層。以水(2×180 mL)洗滌有機部分且隨後在低於40℃下在減壓下濃縮。添加甲基第三丁基醚(231 mL)且在低於40℃下在減壓下濃縮溶液兩次。添加乙酸乙酯(101 mL)且在攪拌下加熱混合物至50至60℃維持1至2小時。在攪拌下冷卻溶液至0至5℃維持2至4小時。過濾固體且以庚烷(66 mL)洗滌濾餅。固體轉移至反應容器中，添加乙酸乙酯(181 mL)且隨後在攪拌下加熱混合物至70至75℃維持0.5至1小時。冷卻混合物至50至60℃且逐滴添加庚烷(157 mL)且攪拌2至4小時。隨後在攪拌下冷卻混合物至10至15℃維持2至4小時。過濾固體且以庚烷(66 mL)洗滌濾餅。固體轉移至反應容器中且添加乙酸乙酯(406 mL)。在攪拌下加熱混合物至60至75℃維持0.5至1小時。隨後將其冷卻至40至45℃且在低於45℃下在減壓下濃縮，得到約200 mL總體積溶液。在攪拌下加熱混合物至70至75℃維持0.5至1小時，且隨後再冷卻至50至60℃。添加庚烷(268 mL)，隨後添加晶種(2.25 g)。(晶種可由先前自實例1之產物批次獲得之固體產生或可使用熟習此項技術者常用之其他方法(諸如小等分試樣之再結晶)獲得)。在50至60℃下攪拌混合物2至4小時。冷卻混合物至10至15℃且攪拌2至4小時。藉由過濾收集固體且以乙酸乙酯(18 mL)與庚烷(16 mL)之混合物洗滌濾餅。在低於65℃下在減壓下乾燥濾餅，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(27.5 g，63%)。HPLC方法：管柱：ChiralPakAD-H,5 mm,4.6×250 mm；溶離方式：等濃度；移動相：己烷/異丙醇/二乙胺(92:8:0.1)；流速：1.0 mL/min；UV偵測：337 nm。TR =22.6分鐘，100% ee。
實例1之化合物，X射線粉末繞射(XRPD)
利用在35 kV及50 mA下操作的配備有CuKa源(λ=1.54060)及Vantec偵測器之Bruker D4 Endeavor X射線粉末繞射儀獲得結晶固體之XRPD圖。樣品在4°與40° 2θ之間掃描，其中步長為0.009° 2θ且掃描速率為每步0.5秒，且具有0.6 mm發散，5.28固定抗散射及9.5 mm偵測器狹縫。將乾燥粉末裝填至石英樣品固持器上且使用載玻片得到平滑表面。在環境溫度及相對濕度下收集晶形繞射圖。在本發明之情況下，將考慮到±0.2 2θ之峰位置可變性，此等可能的變化不防礙指定晶形之明確鑑別。可根據可辨別峰(以° 2θ為單位)、通常更顯著峰之任何獨特組合來確定晶形。根據8.853及26.774度2θ處之NIST 675標準峰對在環境溫度及相對濕度下收集之晶形繞射圖進行調整。
表1： 實例1形式I之X射線粉末繞射峰
因此，本發明之結晶2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇形式I之特徵可在於使用CuKα 輻射獲得之X射線繞射圖，具有如表1中所述之繞射峰(2θ值)且特定言之具有15.06處之峰與19.94、10.31及20.78處之一或多個峰的組合；且更特定言之具有15.06處之峰；其中對於繞射角之容許誤差為0.2度。
實例1(游離鹼形式II)：
藉由在125 mL燒瓶中混合8.01 g游離鹼與100 mL甲基第三丁基醚得到固體之棕色漿液來製備實例1之游離鹼形式II。在300 rpm及50℃下將樣品製成漿液隔夜。18小時後，樣品為灰白色固體於酒紅色上清液下方之漿液。蒸發樣品以減少約一半體積，且藉由真空過濾回收灰白色固體。在65℃真空烘箱中乾燥所得灰白色固體塊2小時。回收7.15 g固體(89%)。
表2 ：實例1形式II之X射線粉末繞射峰
因此，本發明之結晶2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇形式II之特徵可在於使用CuKα 輻射獲得之X射線繞射圖，具有如表1中所述之繞射峰(2θ值)且特定言之具有13.73處之峰與16.54、22.87及18.57處之一或多個峰的組合；且更特定言之具有13.73處之峰；其中對於繞射角容許誤差為0.2度。
實例2 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，甲烷磺酸鹽
將2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇(37.5 mg，0.080 mmol)溶解於二氯甲烷/甲醇之1:1混合物(總共1 mL)中。逐滴添加甲烷磺酸於甲醇中之0.5 M溶液(0.16 mL)。在室溫下攪拌混合物30分鐘。在減壓下蒸發溶劑且以第三丁基甲基醚濕磨所得殘餘物兩次。在真空下乾燥殘餘物，得到標題化合物(42 mg，93%)。LC-ES/MS m/z 472(M+1)。
實例3 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，鹽酸鹽
在60℃下向2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇(25.7 g，54.51 mmol)於甲基第三丁基醚(771 mL)中之微粉紅色懸浮液中添加4.0 M HCl之二烷溶液(16.35 mL，65.41 mmol)。加熱所得懸浮液至60℃維持30分鐘且隨後使其逐漸達到室溫。形成固體且在氮氣之惰性氛圍下過濾且快速收集，且在60℃下在真空下乾燥隔夜，得到呈乳白色固體狀之標題化合物(27 g，98%)。LC-ES/MS m/z 472(M+1)。
實例4 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1R)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇
基本上使用與標題化合物之S對映異構體相同之合成途徑製備標題化合物，不同之處在於在製備1中使用(1R)-N-苯甲基-1-苯基-乙胺替代S對映異構體。[α]D 22 -32.11°,(c=0.54，甲醇)。
實例5 2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1R)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇甲烷磺酸鹽
使用基本上與實例2中所述用於標題化合物之S對映異構體相同之程序製備標題化合物。
實例6 5-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺
向KIMAX管中裝入3-胺基-6-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]吡啶-2-醇(0.7 g，2.13 mmol)及乙醇(7 mL)。添加(3S)-3-異硫氰基-1-甲氧基-丁烷(0.46 g，3.2 mmol)，密封燒瓶，且加熱混合物至85℃。16小時後，添加N,N'-二環己基碳化二亞胺(0.88 g，4.26 mmol)且在密封管中在85℃下攪拌混合物4小時。在此時間之後，再添加N,N'-二環己基碳化二亞胺(0.44 g，2.13 mmol)至混合物中。繼續在85℃下加熱隔夜。在此時間之後，再添加N,N'-二環己基-碳化二亞胺(0.88 g，4.26 mmol)至混合物中，且繼續在85℃下加熱4小時。在減壓下濃縮粗反應，且藉由正相層析(120 g矽膠筒，二氯甲烷-乙醇梯度)純化殘餘物。使用XBRIDGETM 管柱(5 μm,19×100 mm)及含36%乙腈之20 mM NH4 HCO3 (pH=9)之等濃度程式藉由半製備型逆相高效(LC/MS)以25 mL/min之流速在5分鐘內進一步純化含有所要化合物的溶離份，得到標題化合物(0.15 g，16%)。LCES/MS m/z 440(M+1);[α]D 22 +58.60°,(c=0.50，甲醇)。
實例7 5-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺甲烷磺酸鹽
將5-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺(0.090 g，0.23 mmol)溶解於二氯甲烷與甲醇之1:1混合物中(總共3 mL)。逐滴添甲烷磺酸於甲醇中之加0.5 M溶液(0.47 mL)至溶液中。在室溫下攪拌混合物30分鐘且隨後在減壓下蒸發溶劑。將殘餘物與甲醇混合且濃縮兩次，得到標題化合物(0.111 g，89%)。LC-ES/MS m/z 440(M+1)。
實例8 5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧雜環丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺
向KIMAX管中裝入3-胺基-6-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧雜環丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]吡啶-2-醇(2.28 g，6.36 mmol)及乙醇(18 mL)。添加(3S)-3-異硫氰基-1-甲氧基-丁烷(1.39 g，9.54 mmol)，密封燒瓶，且加熱混合物至85℃。16小時後，添加(3S)-3-異硫氰基-1-甲氧基-丁烷(700 mg)且在密封管中在85℃下攪拌混合物48小時。添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(1.04 g)且在密封管中在85℃下攪拌混合物3小時。在減壓下濃縮粗反應混合物，且藉由正相層析(120 g矽膠筒，己烷-乙醇)純化殘餘物。以3%乙醇溶離所要化合物，得到呈棕色固體狀之標題化合物(2.61 g，87%)。LC-ES/MS m/z 470(M+1);[α]D 22 +42.2°,(c=0.50，甲醇)。
實例9 5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧雜環丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺甲烷磺酸鹽
將5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧雜環丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺(0.72 g，1.54 mmol)溶解於二氯甲烷/甲醇之1:1混合物(總共15 mL)中。逐滴添加甲烷磺酸於甲醇中之0.5 M溶液(3.07 mL)至溶液中。在室溫下攪拌混合物30分鐘且隨後在減壓下蒸發溶劑。以第三丁基甲基醚濕磨殘餘物，得到呈棕色固體狀之標題化合物(0.841 g，97%)。LC-ES/MS m/z 470(M+1)。
實例10 [[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]環丙基]甲醇
在氮氣氛圍下將1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]環丙烷甲酸甲酯(0.9 g，1.99 mmol)溶解於無水***(20 mL)及無水THF(7 mL)中且冷卻至0℃。逐份添加硼氫化鋰(87 mg，3.99 mmol)且在0℃下攪拌混合物1小時。藉由在室溫下逐滴添加1 N HCl直至pH=1歷時30分鐘淬滅剩餘反應物。以乙酸乙酯洗滌混合物，以NaOH鹼化水層(直至pH=8)，且以二氯甲烷萃取。合併之有機層經MgSO4 乾燥、過濾且在減壓下濃縮。藉由正相層析(120 g矽膠筒)使用己烷-乙醇之梯度純化殘餘物，得到標題化合物(0.56 g，60%)。LC-ES/MS m/z 470.2(M+1)；[α]D 22 -18.00°,(c=0.50,MeOH)；[α]D 22 -18.0°,(c=0.50,CHCl3 )。
實例11 [[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]環丙基]甲醇甲烷磺酸鹽
[將[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]環丙基]甲醇(0.56 g，1.19 mmol)溶解於二氯甲烷/甲醇之1:1混合物(總共12 mL)中。逐滴添加甲烷磺酸於甲醇中之0.5 M溶液(2.37 mL)至溶液中。在室溫下攪拌混合物30分鐘且隨後在減壓下蒸發溶劑。將殘餘物與甲醇混合且濃縮兩次，得到標題化合物(0.64 g，96%)。LC-ES/MS m/z 470.1(M+1)。
生物分析
以下分析證明本發明之例示性化合物為p38α MAP激酶之有效抑制劑，為p38β MAP激酶之有效抑制劑，且為癌細胞中p38 MAP激酶信號傳導之有效抑制劑。以下分析亦證明實例1或實例1之鹽(實例2或3)具有有效活體內活性，且單獨及/或與其他溶瘤劑組合為有效抗癌劑。
抑制p38α MAP激酶酶活性 試劑製備：
激酶反應緩衝液製備為含有1440 μl 1 M 4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)(pH=7.5)、240 μl 1 M MgCl2 、72 μl 1 M二硫蘇糖醇(DTT)、25 μl 10% TRITONX-100、43223 μl H2 O的儲備溶液。藉由合併以下來製備受質混合物：2775 μl激酶反應緩衝液、75.0 μl 10 mM三磷酸腺苷(ATP)、270 μl 4 mM EGFR肽(Upstate Biotechnology/Millipore)(9.17 mg/mL)及12.5 μl33 P-ATP。藉由稀釋經純化人類p38α MAP激酶於3000 μl反應緩衝液中之0.1 mg/mL溶液製備p38 MAP激酶儲備溶液。藉由將測試化合物以10 mM溶解於100%二甲亞碸(DMSO)中產生測試化合物之儲備溶液。藉由於198 μl 20% DMSO中稀釋2 μl 10 mM儲備液產生100 μM儲備稀釋液盤。使用Tecan液體處理器自100 μM儲備液於20% DMSO中產生1:3稀釋液。
激酶分析：
對於激酶分析，將5 μL稀釋化合物、隨後10 μL酶儲備溶液(使用MULTIDROP液體分配器添加)轉移至反應盤中。為起始反應，用MULTIDROP添加10 μL受質混合物且震盪盤30秒。最終反應條件如下：25 mM HEPES(pH=7.5)、4.25 mM MgCl2 、1.30 mM DTT、0.004% TRITONX-100、100 μM ATP、100 μM EGFR肽、11.8 nM p38α MAP激酶及4% DMSO。在室溫下培育反應60分鐘且隨後藉由添加75 μL 5%乙酸(新鮮製備)終止。終止後，將100 μL反應混合物轉移至用100 μL 0.5%乙酸預洗滌的磷酸纖維素(phosphocellulose)過濾盤(Millipore，NAPH)。在磷酸纖維素盤上培育反應混合物30分鐘，使用真空歧管過濾，且以300 μL 0.5%正磷酸洗滌一次且隨後以200 μL 0.5%正磷酸洗滌兩次。在洗滌步驟後，添加80 μL MICROSCINTTM 20且在Trilux MICROBETA中對放射性進行計數。使用活性基質軟體(IDBS)計算IC50 值。所有例示性化合物之IC50 皆小於0.050 μM。舉例而言，實例1之IC50 =0.003 μM。此分析證明實例1之化合物為p38α MAP激酶之有效抑制劑。
抑制p38β MAP激酶酶活性 試劑製備：
基本上如上所述製備激酶反應緩衝液。藉由合併以下來製備受質混合物：2840 μL激酶反應緩衝液、15.0 μL 10 mM ATP、125 μL 4 mM EGFR肽(9.174 mg/ml)、18.75 μL33 P-ATP。藉由於2000 μL反應緩衝液中稀釋2.25 μL市售p38β MAP激酶(Upstate Biotechnology/Millipore)之0.57 mg/mL溶液製備p38β MAP激酶儲備溶液。基本上如上所述產生測試化合物之儲備溶液。
激酶分析：
基本上如對於p38α MAP激酶所述進行激酶分析。最終反應條件如下：25 mM HEPES(pH=7.5)、4.25 mM MgCl2 、1.30 mM DTT、0.004% TRITONX-100、20 μM ATP、65 μM EGFR肽、0.25 ng/μL p38β MAP激酶、4% DMSO。所有例示性化合物之IC50 皆小於0.050 μM。舉例而言，實例1之IC50 =0.007 μM。此分析證明實例1之化合物為p38β MAP激酶之有效抑制劑。
在細胞基分析中p38 MAP激酶之抑制
藉由在測試化合物存在下量測TNFα刺激後之p-MAPKAPK2含量分析海拉細胞(HeLa cell)中之p38 MAP激酶抑制。在含有10%胎牛血清(FBS，GIBCO)的達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(Dulbecco's Modification of Eagle's Medium，DMEM培養基)中培養人類海拉細胞(ATCC)。在細胞培養基中以1:3連續稀釋度製備測試化合物，最終DMSO濃度為0.1%。為進行分析，在96孔聚-D-離胺酸盤中利用含有10%胎牛血清之100 μL DMEM培養基每孔塗鋪60,000個細胞。在5% CO2 培育箱中在37℃下培育細胞隔夜。次日，翻轉盤以除掉培養基且添加含有DMSO(對照孔)或測試化合物連續稀釋液的90 μL新鮮培養基。在5% CO2 存在下在37℃下培育盤1小時。1小時後，添加20 μL人類TNFα之100 ng/mL溶液(在DMEM/FBS中製備)至孔中，得到18.2 ng/mL之最終濃度。以TNFα處理所有孔，除未接受TNFα的對照最低信號孔以外。細胞與TNFα一起培育15分鐘(37℃/5% CO2 )以刺激MAPKAPK-2(p38 MAP激酶受質)之磷酸化。
為進行cELISA分析，藉由翻轉盤移除培養基。在室溫下藉由添加PREFER固定劑(Anatech Ltd)固定細胞30分鐘。用含有0.1% TRITONX-100的100 μL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(此混合物稱為PBST)洗滌細胞三次每次5分鐘。添加100 μL含0.6% H2 O2 之PBST至細胞中歷時15分鐘以淬滅過氧化酶，之後再次以PBST洗滌三次每次5分鐘。藉由在室溫下添加5%牛血清白蛋白(BSA)溶液阻斷細胞1小時。以PBST洗滌細胞三次每次5分鐘。在4℃下將細胞與針對p-MAPKAPK-2 Thr334(Cell Signaling)之初級抗體於含有5% BSA的PBST中之1/1000稀釋液一起培育隔夜。以PBST洗滌細胞三次每次5分鐘。在室溫下以二次抗體(結合過氧化酶之抗兔Ig抗體(Amersham))於含有5% BSA的PBST中之1/1000稀釋液處理細胞1小時。以PBST洗滌細胞三次每次5分鐘。
為偵測信號，使用SUPERSIGNALELISA超微型套組(Pierce)。在使用之前將等份超微型魯米那(luminal)/增強劑及過氧化酶混合。添加100 μL混合物至各孔中且使用微板混合器震盪1分鐘。使用Victor 1420光度計測定相對光單位。使用活性基質軟體(IDBS)測定相對IC50 值。所有例示性化合物之IC50 皆小於0.050 μM。舉例而言，實例1之IC50 =0.0016 μM。此分析證明實例1之化合物為癌細胞中p38 MAP激酶信號傳導之有效抑制劑。
未處理C57BL/6小鼠中p38 MAP激酶之活體內目標抑制(IVTI)
使用用於p-MAPKAPK2(p38 MAP激酶受質)的流動式細胞測量術分析量測經口投與測試化合物之小鼠之外周血液單核細胞(PBMC)中p38 MAP激酶之IVTI。
生活期：
將雄性C57BL/6小鼠(6至8週齡)隨機分為多個組，每組4隻。藉由於0.1 mL體積媒劑(1%羥乙基纖維素(HEC)、0.25% TWEEN80、0.05%消泡劑)中經口管飼給與測試化合物。投與對照動物0.1 mL無測試化合物之媒劑。對於單次劑量及劑量反應研究，給藥後2小時處死動物。對於時程研究，在給藥後之不同時間點(通常1、2、4、6、18及24小時)處死動物。全血收集於經EDTA塗佈之管(AQUISEL)中。
藉由流動式細胞測量術偵測PBMC中之磷酸-MAPKAPK2：添加100 μL小鼠全血至各EDTA管中且在37℃下培育10分鐘。在染色/洗滌緩衝液中以以下稀釋度製備三種抗體之混合物：結合FITC之大鼠抗小鼠Ly-6G mAb(BD Biosciences)1:25；結合APC之大鼠抗小鼠CD11b mAb(BD Biosciences)1:10；及小鼠BD Fc阻斷(BD Biosciences)1:100。在DMSO中製備濃度為5 mg/mL之大茴香黴素(anisomycin)(Sigma)之儲備溶液。在單一管中等分15 μL儲備大茴香黴素且在-20℃下儲存用於單次利用。分析當天，在染色/洗滌緩衝液(BD)中將大茴香黴素自儲備液(5 mg/mL)稀釋至100 μg/mL。將等體積經稀釋大茴香黴素與抗體混合物混合。
添加20 μL上述混合物至各全血管中，每20秒一管。在恆溫混勻器(thermomixer)中在輕緩震盪下在37℃下培育樣品15分鐘。溶解/固定緩衝液(BD Biosciences)在水中稀釋5倍且升溫至37℃。以與先前相同之順序添加1.6 mL經稀釋之溶解/固定緩衝液(=1×工作濃度)至各管中，每20秒一管。在37℃下在震盪下培育樣品10分鐘。細胞隨後在室溫下在600×g下短暫離心8分鐘。以3 mL洗滌/染色緩衝液、PBS及5%去補體(熱不活化)FBS洗滌細胞一次。小心棄去上清液以避免損失細胞小球。在滲透介質B(Caltag)中將抗磷酸-MAPKAPK-2(Thr334)抗體(Cell Signaling Technology，純系27B)及小鼠Fc阻斷一起稀釋(兩者皆為250倍稀釋度)。使用200 μL經稀釋之抗體混合物再懸浮細胞。
隨後在室溫下培育細胞30分鐘。隨後添加3 mL染色/洗滌緩衝液且如上所述短暫離心細胞。以3 mL染色/洗滌緩衝液重複洗滌。在染色/洗滌緩衝液中稀釋山羊F(ab')2抗兔免疫球蛋白-PE結合物(Biosource)(250倍稀釋度)。隨後添加200 μL經稀釋之抗體至各管中。
在室溫下培育樣品30分鐘。隨後添加3 mL染色/洗滌緩衝液且短暫離心細胞。以3 mL染色/洗滌緩衝液重複洗滌。最終，將細胞再懸浮於250 μL PBS外加1%去補體(熱不活化)FBS中。藉由流動式細胞測量術(FACScaliber,BD)分析樣品。在藉由側向及正向散射界定活單細胞群體後，藉由CD11bhi Ly6G- 量測所界定(閘控(gated))單核細胞群體中p-MAPKAPK2之含量。
資料分析：
分析單核細胞中之中值螢光強度以測定p-MAPKAPK2之含量。使用大茴香黴素刺激之單核細胞中p-MAPKAPK2(pMK2)的含量減去媒劑對照動物之未刺激單核細胞中p-MAPKAPK2(pMK2)的含量來確定信號窗。藉由使用以下方程式確定測試化合物之抑制百分比：
抑制百分比=100-[100*
使用此方案，在給藥後2小時實例1化合物之70%抑制臨限有效劑量(TED70 )為5.1 mg/kg。在給藥後2小時藉由以相同分析量測血漿中之循環化合物而測定的70%抑制臨限有效濃度(TEC70 )為39.4 ng/mL(0.084 mM)。此分析證明實例1之化合物具有有效活體內活性。
攜帶腫瘤之小鼠中p38 MAP激酶之活體內抑制
使用利用人類腫瘤細胞株U87MG之鼠類異種移植模型來評估腫瘤中p38 MAP激酶之抑制。
生活期：
在雌性無胸腺裸小鼠(24至26 g，Harlan)後脅(rear flank)皮下每隻動物注射5×106 個U87MG細胞。細胞以0.2 mL體積利用細胞培養基與BD MATRIGELTM 基質之1:1混合物注射。在植入後7天，使用測徑規量測腫瘤且記錄資料。此後每週兩次量測腫瘤且記錄腫瘤尺寸。當腫瘤平均體積達到約250 mm3 時(通常在植入後10至15天)，將動物隨機分為多個8至10隻動物之組進行處理。隨後經口給與動物單獨0.2 mL媒劑(1% HEC、0.25% TWEEN80、0.05%消泡劑)或含有測試化合物之媒劑。給藥後2小時，對動物實施安樂死。切除腫瘤且即刻藉由在具有完全蛋白酶及磷酸酶抑制劑之混合液(Roche標準完全錠劑，不含EDTA之蛋白酶抑制劑混合液。目錄號11873580001)之1% TRITONX-100溶液中均質化進行處理。此外，在經乙二胺四乙酸(EDTA)塗佈之管中收集血液且以96孔盤格式產生血漿用於進行暴露分析。
腫瘤溶解產物中之p-MAPKAPK2分析：
使用Mesoscale Discovery(MSD)捕捉ELISA套組(2磷酸-MAPKAPK-2(Thr334))測定腫瘤溶解產物中之p-MAPKAPK-2含量。使用BioRad DC蛋白質分析套組(BioRad)測定溶解產物中蛋白質之濃度。使用1% TRITONX-100溶液將來自各腫瘤溶解產物之蛋白質樣品調整至2 mg/mL。為進行p-MAPKAPK2之中等規模偵測，添加50 μg腫瘤溶解產物至以捕捉抗體(=針對總MAPKAPK2蛋白之抗體)預先點漬的含碳電極之96孔板中。使用釕標記之抗p-MAPKAPK2偵測抗體探測p-MAPKAPK2含量。與偵測抗體一起培育之後，洗滌MSD盤，隨後添加MSD讀取緩衝液。在電流流經電極後，電化學發光導致產生光，該光可使用MSD Sector 6000儀器定量。對於各研究，相對於媒劑對照組計算抑制百分比，且使用用於測定統計顯著性之JMP套裝軟體進行ANOVA(計算統計變異數分析之方法)分析。由代表性研究中之免疫墨點確認分析。根據此研究，確定實例1化合物在腫瘤中之p38 MAP激酶目標抑制之TED70 為2.9 mg/kg，且TEC70 為31.3 ng/mL。此資料證明，對於實例1之化合物，在腫瘤中之目標抑制效能與在PBMC中之效能類似。
異種移植模型中活體內功效之測定 A2780異種移植模型：
自Charles River Laboratories獲得約22至25 g之雌性CD1 nu/nu小鼠。在1週環境適應後，將2×106 個A2780人類卵巢癌細胞以0.2 mL體積於細胞培養基與BD MATRIGELTM 基質之1:1混合物中皮下注射至各小鼠之後脅中。藉由測徑規量測每週兩次監測腫瘤尺寸。當平均腫瘤尺寸達到150 mm3 時，將動物隨機分為多個10隻動物之組。在隨機化後開始p38 MAP激酶抑制劑處理。實例2於0.2 mL體積之1% HEC、0.25% TWEEN80、0.05%消泡劑(HEC/TWEEN)中經口給與。以1、3及10 mg/kg之劑量給與化合物。以4天給藥、3天不給藥之時程每天三次(TID)進行給藥。進行三個給藥循環。在給藥期間每週兩次監測腫瘤體積，且相對於媒劑對照組(n=10隻動物)監測功效(腫瘤生長抑制)。在最後一次p38 MAP激酶抑制劑劑量後1、2及8小時，自動物獲得血漿以測定動物中化合物之循環含量。
OPM-2多發性骨髓瘤異種移植模型：
自Taconic獲得體重20至22 g之雌性CB-17 SCID小鼠。使小鼠適應環境一週後，以2.5戈雷(Gray)之劑量對其進行輻射。在輻射後24小時以內，在小鼠後脅以0.2 mL體積於細胞培養基與BD MATRIGELTM 基質之1:1混合物中皮下注射1.0×107 個OPM-2細胞。藉由測徑規量測每週兩次監測腫瘤尺寸.當平均腫瘤尺寸達到100至150 mm3 時，將動物隨機分至多個給藥組中。在隨機化後開始化合物處理。實例2於0.2 mL體積之1% HEC、0.25% TWEEN80、0.05%消泡劑(HEC/TWEEN)中經口給與。以15及30 mg/kg之劑量給與化合物。給藥每天進行兩次(BID)以進行28天之處理。在給藥期間每週兩次監測腫瘤體積，且相對於媒劑對照組(n=10隻動物)監測功效(腫瘤生長抑制)。
786-O異種移植模型與舒尼替尼組合：
自Harlan Labs獲得體重24至26 g之雌性無胸腺裸小鼠。在1週環境適應後，將5×106 個786-O人類腎細胞癌細胞以0.2 mL體積於細胞培養基與BD MATRIGELTM 基質之1:1混合物中皮下注射至各小鼠之後脅中。藉由測徑規量測每週兩次監測腫瘤尺寸。當平均腫瘤體積達到150至200 mm3 時，將動物隨機分為多個8至10隻動物之組。在隨機化後開始p38 MAP激酶抑制劑處理。化合物於0.2 mL體積之1% HEC、0.25% TWEEN80、0.05%消泡劑(HEC/TWEEN)中經口給與。每天兩次(BID)以15 mg/kg單獨或與10 mg/kg或20 mg/kg舒尼替尼組合進行給藥，亦每天兩次於相同媒劑中經口給藥。每週兩次監測腫瘤體積且相對於媒劑處理之對照動物比較功效(腫瘤生長抑制)。
*與媒劑相比在統計上顯著。
來自此研究之資料證明p38 MAP激酶抑制(15 mg/kg每天兩次)增強以20 mg/kg給藥之舒尼替尼之抗腫瘤功效。使用對於對數腫瘤體積隨時間之變化的雙因子重複指標變異數分析進行協同作用之統計學評估。此分析表明15 mg/kg每天兩次之p38 MAP激酶抑制劑與20 mg/kg每天兩次之舒尼替尼之間具有總體顯著之協同作用(p>0.0001)。
本發明化合物較佳調配為藉由多種途徑投與之醫藥組合物。該等組合物最佳用於經口或靜脈內投與。該等醫藥組合物及其製備方法為此項技術中所熟知。參見例如REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(D. Troy等人編，第21版，Lippincott Williams & Wilkins,2005)。
本發明化合物通常在廣泛的劑量範圍內有效。舉例而言，每天之劑量通常處於約14至155 mg之範圍內。在一些情況下，低於前述範圍下限之劑量可能完全足夠，而在其他情況下可在不導致任何有害副作用下使用較大劑量，且因此上述劑量範圍不欲以任何方式限制本發明之範疇。應瞭解，實際投與之化合物之量應由醫師根據相關情況確定，該等情況包括待治療之病況、所選投藥途徑、投與之實際化合物、個別患者之年齡、體重及反應以及患者症狀之嚴重程度。

Claims (20)

  1. 一種下式化合物， 其中：X為甲氧基乙基或乙氧基甲基；Q為環丙基、2-甲基-丙醇-2-基、3-甲基氧雜環丁-3-基或1-羥甲基-1-環丙基；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其為2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇或其醫藥學上可接受之鹽。
  3. 如請求項1或請求項2之化合物，其為結晶2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特徵在於包含15.06處之峰及19.94、10.31及20.78處之一或多個峰(2θ +/- 0.2°)的X射線粉末繞射圖(Cu輻射，λ=1.54060 Å)。
  4. 如請求項1或請求項2之化合物，其為結晶2-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]-2-甲基-丙-1-醇，其特 徵在於包含13.73處之峰及16.54、22.87及18.57處之一或多個峰(2θ +/- 0.2°)的X射線粉末繞射圖(Cu輻射，λ=1.54060 Å)。
  5. 如請求項1之化合物，其為5-[2-環丙基-5-(2,4-二氟苯基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其醫藥學上可接受之鹽。
  6. 如請求項1之化合物，其為5-[5-(2,4-二氟苯基)-2-(3-甲基氧雜環丁-3-基)-1H-咪唑-4-基]-N-[(1S)-3-甲氧基-1-甲基-丙基]唑并[5,4-b]吡啶-2-胺或其醫藥學上可接受之鹽。
  7. 如請求項1之化合物，其為[1-[5-(2,4-二氟苯基)-4-[2-[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-乙基]胺基]唑并[5,4-b]吡啶-5-基]-1H-咪唑-2-基]環丙基]甲醇或其醫藥學上可接受之鹽。
  8. 如請求項1或2之化合物，其係用於治療。
  9. 如請求項1或2之化合物，其係用於治療癌症。
  10. 如請求項9之化合物，其中該癌症為卵巢癌。
  11. 如請求項9之化合物，其中該癌症為多發性骨髓瘤。
  12. 如請求項1或2之化合物，其係用於與舒尼替尼(sunitinib)同時、單獨或連續組合用於治療癌症。
  13. 如請求項9之化合物，其中該癌症為腎癌。
  14. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至7中任一項之化合物或鹽，與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑組合。
  15. 如請求項14之醫藥組合物，其進一步包含一或多種治療劑。
  16. 一種如請求項1至7中任一項之化合物或鹽之用途，其係用於製造用於治療癌症之藥劑，其中該癌症係選自卵巢癌及多發性骨髓瘤。
  17. 如請求項16之用途，其中該癌症為卵巢癌。
  18. 如請求項16之用途，其中該癌症為多發性骨髓瘤。
  19. 一種如請求項1至7中任一項之化合物或鹽之用途，其係用於製造用於治療腎癌之藥劑，其中該藥劑用於與舒尼替尼組合使用或進一步包含舒尼替尼。
  20. 如請求項19之用途，其中該藥劑用於與舒尼替尼同時、單獨或連續組合使用。
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