CN100432071C

CN100432071C - 取代1h－吲哚－2－酮类化合物及其制备方法和用途

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Publication number: CN100432071C
Application number: CNB2004100679042A
Authority: CN
Inventors: 蒋华良; 罗小民; 李海泓; 谭金芝; 丁健; 林莉萍; 柳红; 陈凯先
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2004-11-05
Filing date: 2004-11-05
Publication date: 2008-11-12
Anticipated expiration: 2024-11-05
Also published as: CN1769284A

Abstract

本发明涉及具有如下结构的新型取代1H-吲哚-2-酮类化合物及其用途，药理实验表明，此类化合物具有一定的药理学性质，特别是对表皮生长因子受体酪氨酸激酶及与其相关联的各种肿瘤细胞的增生具有抑制作用，本发明还涉及该化合物的制备方法。

Description

取代1H-吲哚-2-酮类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一类取代1H-吲哚-2-酮类化合物，具体涉及一类对表皮生长因子酪氨酸激酶具有抑制作用的取代1H-吲哚-2-酮类化合物，本发明还涉及该类化合物的制备方法。

背景技术

蛋白酪氨酸激酶(PTKs)的作用是将ATP的磷酸基转移到功能蛋白特定酪氨酸残基上，而此酪氨酸磷酸化过程能调控细胞的生长，增殖和分化等过程。蛋白酪氨酸激酶的数量预计超过1000种，其中有100种的序列已经被测定。蛋白酪氨酸激酶在肿瘤发生过程中起到十分重要的作用，已经知道有一半以上的原癌基因表达具备PTK活性的蛋白，蛋白酪氨酸激酶在癌细胞增殖中的重要作用使它成为极具吸引力的癌症治疗靶标。

蛋白酪氨酸激酶中研究最广泛的是表皮生长因子受体(EGFR)，EGFR是一个170KDa的跨膜糖蛋白，其结构包括膜外配体结合域、跨膜域、细胞内结构域(具备PTK活性)和一个C末端结构域。表皮生长因子受体家族包括四个成员：EGFR(ErbB-1)，ErbB-2(HER2)，ErbB-3(HER3)，ErbB-4(HER4)。癌症临床研究表明该受体和它的配体与很多肿瘤都有重要联系，60％的癌症中出现EGFR的过量表达。这种异常表现有很多种形式，但每种异常都可导致过量的酪氨酸磷酸化信号传入细胞。在细胞***里，EGF或其它ErbB家族配体经常引起不可控制的细胞繁殖，从而使细胞由正常形态转化为典型的异常形态。膜外配体和EGFR结合，导致EGFR受体形成二聚体(同型二聚体或异型二聚)，激活酪氨酸激酶，将增殖信号传入细胞。利用药物作用于EGFR，可以中止其所介导的增殖信号，从而阻止癌细胞的过量繁殖。有两类药物可起到这样的作用：一类是单克隆抗体，另一类是小分子药物。单克隆抗体药物的作用方式是占据EGFR的膜外配体，使EGF等内源配体无法与EGFR结合，从而阻止信号传入细胞。小分子药物则通过阻断EGFR胞内酪氨酸激酶催化区，阻止酪氨酸磷酸化，从而阻断了细胞增殖信号。

小分子EGFR抑制剂包括天然抑制剂和有机合成化合物。天然抑制剂对EGFR有较好的抑制活性，但由于细胞毒性、酶选择性(尤其激酶选择性)和作用机理等方面的原因，目前尚未找到有药物开发前途的天然抑制剂母核。天然抑制剂的研究主要是通过对天然产物结构修饰寻找EGFR抑制剂(Alexander J.Bridges，Chem.Rev.2001，101，2541-2571)。

有机合成类小分子抑制剂按照与EGFR的作用方式可分为可逆抑制剂和不可逆抑制剂，按照母核类型可分为4-苯氨基(杂)环并嘧啶类和4-苯氨基-3-氰基喹啉类。4-苯氨基(杂)环并嘧啶类是研究最为广泛的一类EGFR抑制剂，包括4-苯氨基喹唑啉类、4-苯氨基吡啶并嘧啶类和4-苯氨基吡咯并嘧啶类等，其中4-苯氨基喹唑啉类最具代表性。

Zeneca公司公开了一种抑制EGFR的IC₅₀值达到20-40nM，并且有较好的选择性的4-苯氨基喹唑啉类化合物(欧洲专利公开号0520722A，1992)；Fry报道了一种抑制EGFR的IC₅₀值为29pM，并且是专一的EGFR抑制剂化合物，该化合物是可逆的ATP结合域竞争抑制剂，在细胞水平实验中表现了很好的酶选择性，抑制EGFR自磷酸化过程的IC₅₀值为14nM，但具有溶解性差的缺点。(Fry，Science，1994，265：1093-1095)。

是于2003年5月获得FDA批准上市的EGFR抑制剂，属4-苯氨基喹唑啉类化合物，是可逆的ATP结合域结合的竞争抑制剂，它在酶水平的EGFR抑制活性IC₅₀值为23nM，对EGF刺激繁殖的口腔上皮鳞癌细胞KB的抑制作用的IC₅₀值为80nM，具备高度的EGFR酶专一性，对其他激酶的抑制能力很低。研究表明Iressa有很好的生物利用度和极低的毒性，对非小细胞肺癌和乳腺癌也有明显的治疗作用。但部分研究显示Iressa在联合化疗时并不能提高生存率或改善症状；另外，在日本的一年临床实践发现有小部分患者出现了严重的毒副反应，如间质性肺炎(ILD)，并有部分病人死亡。Iressa主要毒副反应包括：腹泻，恶心，呕吐，皮疹和痤疮等，另外可能使服用抗凝药物华法令的患者出现出血症状。

据报道，6，7-二甲氧基-4-苯氨基-3-氰基喹啉对EGFR酶水平抑制活性IC₅₀值为190nM；以甲酰基在母核的3位上进行取代，其抑制活性达到μM级，但这类抑制剂在酶选择性方面稍差，它们还有c-SRC和MEK抑制活性。(Wang Y.D.，Miller K.，Boschelli D.H.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10：2477-2480；Boschelli D.H.，Yang Y.D.，Ye F.等，J.Med.Chem.2001，44：822-846)此外，2，3-二氢-2-硫酮-吲哚-3-烷基羧酸化合物及2，2’-二硫双吲哚-3-烷基羧酸均被报道作为EGFR的抑制剂(Zhang N.，Wu B.，Powell D.，Wissner A.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10：2825-2829)。

上述抑制剂都是与ATP竞争结合的可逆抑制剂，虽然是可逆抑制，但它们与酶的解离速度很慢。研究者认为这些“准不可逆抑制剂”和受体结合后可以引起受体的所谓“疏水性崩溃”，导致了受体的激酶区的封闭，阻止了蛋白磷酸化进程。ATP在细胞里的浓度是mM级的，所以在早期临床阶段可逆抑制剂的给药量都很大，目的就是维持所需的血药浓度，其中阻断酶和ATP结合的最长时间可以达到4小时，而且不易溶的药物分子要比易溶的药物分子效果好。鉴于此，有必要寻找EGFR的不可逆抑制剂。

目前已有进入临床试验阶段的EGFR不可逆抑制剂包括4-苯氨基喹唑啉类化合物和4-苯氨基3-氰基喹啉类化合物(Alexander J.Bridges，Chem.Rev.2001，101，2541-2571)。

EGFR抑制剂的开发仍存在很多问题，如Iressa在日本临床实验的失败引起人们关注的4-苯氨基喹唑啉类化合物未知毒性的问题，酶选择性的问题等。解决这些问题，开发新型的EGFR抑制剂是目前世界医药界的热门研究课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一类具有抑制表皮生长因子表达而达到抗肿瘤药效作用的新型的取代1H-吲哚-2-酮类化合物。

本发明的另一个目的是提供本发明化合物的制备方法。

本发明的再一个目的是提供本发明化合物在作为表皮生长因子酪氨酸激酶的抑制剂，用作制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明所述化合物为具有下述通式(I)结构的取代1H-吲哚-2-酮类化合物：

其中：

R₁选自氢、C_1-5烷基、C_2-5链烯基、C_3-10环烷基、羟基、C_1-5烷氧基、乙酰基、羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰基和三卤代甲磺酰基；

R₂、R₃、R₄、R₅各自独立地选自氢、C_1-5烷基、C_1-4烷氧基、芳基、芳氧基、C_1-5烷基芳基、C_1-5烷基芳氧基、C_3-10环烷基、巯基、C_1-5烷巯基、芳巯基、亚巯酰基、卤素、三卤甲基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰胺基、三卤代甲磺酰基、N-亚磺酰胺基、S-亚磺酰胺基、三卤代甲亚磺酰基、O-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基和-NR₁₁R₁₂，其中R₃和R₄、R₄和R₅可以结合形成六元芳环、亚甲二氧基或亚乙二氧基；

R₄、R₅还可以同时或分别选自以下基团：

其中R₁₃选自氢；C_1-5烷基；C_1-5烷氧基；芳基；芳氧基；C_1-5烷基芳基；C_1-5烷基芳氧基；三卤甲基；吡啶基；嘧啶基；噻吩基；上述每一个基团都可以被如下基团进行取代：三氟甲氧基；氟；氯；溴；碘；C_1-3-烷氧基或取代C_1-3-烷氧基，其中取代C_1-3-烷氧基是指在2-或3-位被氨基、C_1-3-烷基胺基、2-(C_1-3-烷基)胺基、苯基-(C_1-3-烷基)胺基、N-(C_1-3-烷基)-苯基-(C_1-3-烷基)胺基、吡咯烷基或哌啶基取代；苯基-C_1-3-烷基胺基-C_1-3-烷基，该取代基还可以以三氟甲基、氟、氯、溴、碘、C_1-5-烷基或者C_1-3-烷氧基对苯基核进行单取代或二取代，进行二取代时，取代基可以相同，也可以不同；

R₆选自氢、C_3-10环烷基、C_1-5烷基、卤素；

R₇和R₈各自选自氢、C_1-5烷基、C_1-4烷氧基、芳氧基、C_1-5烷基芳基、C_1-5烷基芳氧基、三卤代C_1-5烷基、C_3-10环烷基、巯基、C_1-5烷巯基、芳巯基、亚巯酰基、卤素、三卤甲基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰胺基、三卤代甲磺酰基、N-亚磺酰胺基、S-亚磺酰胺基、三卤代甲亚磺酰基、O-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基和-NR₁₁R₁₂；

R₉选自氢、C_1-5烷基、C_1-5烷氧基、芳基、芳氧基、C_1-5烷基芳基、C_1-5烷基芳氧基、卤素、三卤甲基、巯基、羟基、硫代C_1-5烷基和-NR₁₁R₁₂；

R₁₀选自氢、C_3-10环烷基、C_1-5烷基、C_2-5链烯基、芳基、杂芳基、羟基和杂脂环基；

R₁₁和R₁₂独立选自氢、C_1-5烷基、C_2-5链烯基、C_3-10环烷基、乙酰基、磺酰基、三氟甲磺酰基。

本发明化合物的一个优选化合物为具有通式(I)结构的1，4-二取代苯类化合物，其中R₄选自C_1-5烷基、卤素、磺酰胺基、氨基、氰基、硝基、羧基和-NR₁₁R₁₂；R₁、R₂、R₃、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂的定义同前述化合物的定义。

本发明化合物的另一个优选优选化合物为具有通式(I)结构的1，4-二取代苯类化合物，其中R₄、R₅同时或分别选自以下基团：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃的定义同前述化合物的定义。

在本发明中，芳基或含芳基的基团中的芳基指苯基、萘基和联苯基；杂芳基指的是单环和稠和环(即带有相邻对原子的环)基团，其在环上具有1-3个选自氮、氧和硫的原子并且另外具有完全连接的π-电子***，例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、异喹啉、嘌呤和咔唑等；杂脂环基指的是在环上具有选自氮、氧和硫原子的单环或稠和环(C_3-15)，所述环也可含有1到7个双键，然而，所述环不具有完全连接的π-电子***，如哌啶、四氢呋喃、四氢吡咯、四氢噻吩、环己烷并吡咯等。

本发明优选的化合物包括：(E)-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-1H-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-1H-吲哚-2-酮；(E)-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-羧基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(N-吗啉基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-二甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(六氢吡啶基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮。

本发明化合物的制备通过下列步骤实施：

本发明化合物(化合物I)由取代1H-吲哚-2-酮(化合物II)和取代3-甲酰基1H-吡咯(化合物III)缩合制得：在碱的催化下，等摩尔的化合物II和化合物III在有机溶剂中进行缩合反应，根据具体化合物的反应情况，反应温度为65℃～90℃；反应时间为3～6小时，反应完毕后一般采用的后处理方法包括冷却浓缩、重结晶、柱层析分离等。最终产物(I)用核磁共振或质谱来检测证明。

本发明中，有机溶剂指质子溶剂或质子惰性溶剂，其中质子溶剂为水或醇类(如乙醇、甲醇、正丁醇)；质子惰性溶剂为极性或非极性质子惰性溶剂，质子惰性溶剂的特征是不含有酸性氢，即不含有能与溶质结合的氢，优选的非极性质子惰性溶剂为戊烷、己烷、苯、甲苯、二氯甲烷或四氯化碳，优选的极性质子惰性溶剂为氯仿、四氢呋喃、二甲基亚砜或二甲基甲酰胺。碱催化剂指有机氮碱和无机碱，其中有机氮碱可采用三乙胺、吡啶、六氢吡啶、三甲胺、苯胺、二异丙基胺、1，8-二氮杂二环[5.4.1]十一-7-烯、吡咯烷、哌啶等，无机碱可采用氨、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物(如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钡)磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐等。当溶剂为质子溶剂时，所述碱催化剂为碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物。

本发明中，化合物II的合成方法参考专利方法(WO9961442)；

本发明中，化合物III的合成方法参考文献方法(Alan R.Battersby.，Eric Hunt et a1.，J.Chem.Soc.Perk.I 1976：1008-1035；Woodward，R.B.J.Am.Chem.Soc.1960，82，3800-3892.)。

有益效果

本发明设计与合成了一类新型的取代1H-吲哚-2-酮类化合物，对人常染色体显性遗传型多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞、A-549人肺腺癌细胞、A-431人皮肤鳞癌细胞和MDA-MB-468人乳腺癌细胞有抑制效果，可用于制备治疗过度或不正常细胞增生导致疾病的药物。本发明化合物结构相对简单，易于制备。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

下述制备例中，熔点采用上海精密科学仪器有限公司生产的X-4型熔点仪测定，温度未经校正；核磁共振由Bruker AMX-400型和INVOA-600型核磁共振仪测定，TMS为内标，化学位移单位为ppm；质谱由MAT-711型和MAT-95型质谱仪测定；柱层析用硅胶200-300目，青岛海洋化工厂生产；TLC硅胶板为烟台化工厂生产的HSGF-254型薄层层析预制板；石油醚沸程为60-90℃；采用紫外灯，碘缸显色。制备例中若未特别指出操作方法，所述浓缩指用旋转蒸发仪将制备化合物溶液中的溶剂蒸出；所述干燥指用DHG-9240A恒温干燥箱在80℃将制备化合物烘干。

实施例1(E)-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-1H-吲哚-2-酮(化合物I-1)的制备

在0-10℃冰浴下，将亚硝酸钠水溶液(亚硝酸钠29g，水60ml)加入到2-羰基-1，3-丙二酸二乙酯(80g)的乙酸(140ml)溶液中搅拌5小时。将乙酰乙酸苄酯(76g)的乙酸(140ml)溶液加入到反应液中，加入锌粉(46g)和无水乙酸钠(40g)，继续搅拌15分钟。撤除冰浴，用油浴加热至80℃，搅拌4小时后，将反应液倾倒入碎冰(1Kg)中，放置过夜，过滤，浓缩，得到60g淡黄色固体。用乙醇重结晶，得到51g白色固体4-苄氧基羰基-3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，产率33％。

将4-苄氧基羰基-3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(51g，136mmol)溶于四氢呋喃(50ml)中，加入10％钯碳(10g)，室温，通入氢气，搅拌1小时后过滤掉钯碳，用四氢呋喃(50ml)洗涤滤饼后，将滤液浓缩干燥得到36g白色固体3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-羧酸，产率95％。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-羧酸(36g)溶于1，2-二氯乙烷(200ml)中，油浴加热到50℃。加入碳酸氢钠水溶液(碳酸氢钠40g：水200ml)，搅拌，有气泡冒出后滴加含有碘化钠(20g)的碘水溶液(碘240g：水200ml)。继续加热搅拌半小时，薄层层析检测法跟踪测定反应完全后，加入亚硫酸氢钠除去过量的碘。分离有机层，干燥后浓缩，得到42g粗品。用1，2-二氯乙烷重结晶得到40g纯品3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-碘代-5-甲基-1H-吡咯，白色固体，产率91％。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-碘代-5-甲基-1H-吡咯(40g)溶于甲醇(200ml)中，油浴加热至回馏。加入碘化钠的水溶液(碘化钠25g：水30ml)后，加入浓盐酸(37％)(10ml)，15分钟后，加入亚硫酸氢钠(500mg)除去过量的碘。将反应液中的甲醇蒸除(75℃)，用1，2-二氯乙烷(100ml)萃取，浓缩有机层，干燥，得到29g的3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，白色固体，产率87％。

将的三氯氧磷(15ml)在0～5℃下滴加入的N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中。搅拌15分钟后，缓慢滴加3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(29g)的1、2-二氯乙烷(100ml)溶液，在0～5℃冰浴下继续搅拌15分钟后。撤除冰浴，用油浴加热至50℃，半小时后，加入乙酸钠的水溶液(无水乙酸钠10g：水50ml)。半小时后，冷却反应液，用分液漏斗分离有机层并浓缩，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3的洗脱液在硅胶柱上分离，得到26g的3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯，白色固体，产率80％。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g)和1H-吲哚-2-酮(0.5g)在乙醇(20ml)中混合，油浴加热到80℃，滴加六氢吡啶(0.1g)。反应3小时后浓缩反应液，用1，2-二氯乙烷(10ml)溶解后用20ml水和20ml 2N盐酸干燥洗涤后浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化得到1.2g的(E)-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-1H-吲哚-2-酮，黄色固体，产率83％。

H¹NMR(CDCl₃)9.20(s，1H，N-H)9.90(s，1H，N-H)7.82(s，1H，vinyl-H)7.20(t，2H，Ph-H)7.09(t，1H，Ph-H)6.90(m，2H，Ph-H)4.33(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)4.08(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)3.80(s，3H，CH₂CO₂CH₂CH₃)2.21(s，3H，CH ₃)1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。

实施例2(E)-5-溴-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-1H-吲哚-2-酮(化合物I-2)的制备：

将在乙腈(20ml)中的1H-吲哚-2-酮(1.3g)冷却至-10℃并在搅拌下缓慢加入N-溴代琥珀酰亚胺(2g)。在-10℃下，将反应物搅拌1小时并在0℃下搅拌2小时。收集沉淀，用20ml水洗涤并干燥，得到1.9g的5-溴-1H-吲哚-2-酮，产率90％。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(0.95g，3.6mmol)和5-溴-(1H)-吲哚-2-酮(0.8g，3.6mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃，滴加六氢吡啶(0.1g)，反应2.5小时后浓缩反应液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N盐酸干燥洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.6)得到1.56g黄色固体(E)-5-溴-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率90％。

H¹NMR(DMSO-d6)7.48(s，1H，vinyl-H)7.38(d，2H，Ph-H)6.96(s，1H，Ph-H)6.80(q，2H，Ph-H)4.23(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)3.75(s，CH ₂CO₂CH₂CH₃)2.09(s，3H，CH ₃)1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。MS m/e 460(M⁺)。

实施例3(E)-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-3)的制备：

在0-10℃冰浴下，将亚硝酸钠水溶液(亚硝酸钠19.8g：水100ml)滴加到2-羰基-1，3-丙二酸二甲酯(50g，287mmol)的乙酸(150ml)溶液中，撤除冰浴，室温搅拌5小时，溶液呈棕红色。在冰浴里，将乙酰乙酸苄酯(59g，287mmol)加入到反应液中，然后补充乙酸(50ml)，加入锌粉(25g)和无水乙酸钠(20g)，继续搅拌15分钟后，撤除冰浴，用油浴加热至80℃，固体全部溶解，搅拌4小时后，将反应液倾倒入冰水溶液中，放置过夜，过滤，浓缩滤液，得到35g淡黄色固体。用乙醇重结晶后得到34g的4-苄氧基羰基-3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，产率33％。Mp148℃。H¹NMR(CDCl₃)：9.0(broad，1-H)，7.3-7.4(m，5H，Ph-H)，5.25(s，2H，CH ₂Ph)，4.2(s，2H，CH ₂CO₂Me)，2.5(s，3H，CH ₃)，1.35(s，3H，CO₂CH ₃)，1.2(s，3H，CO₂CH ₃)。

将30g 4-苄氧基羰基-3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(87mmol)溶于四氢呋喃(50ml)中，加入10％钯碳(5g)，室温，通氢气，搅拌1小时后过滤掉钯碳，用四氢呋喃(50ml)洗涤滤饼后，将滤液浓缩干燥得到22g的3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-羧酸，产率95％。Mp243℃。H¹NMR(CDCl₃)：9.6(br，1-H，COOH)，3.80(s，2H，CH ₂CO₂Me)，2.3(s，3H，CH ₃)，1.3(s，3H，CO₂CH ₃)，1.2(s，3H，CO₂CH ₃)。

将20g 3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-羧酸(74mmol)溶于1，2-二氯乙烷(100ml)中，油浴加热到50℃，加入碳酸氢钠水溶液(碳酸氢钠24g：水100ml)，搅拌，有气泡冒出后滴加含有碘化钠(20g)的碘水溶液(碘23g：水100ml)，继续加热搅拌半小时，薄层层析检测至反应完全，加入过硫酸氢钠除去过量的碘，用分液漏斗分离有机层，干燥后浓缩，用1，2-二氯乙烷重结晶得到23g的3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-4-碘代-5-甲基-1H-吡咯，产率91％。Mp 102℃。EIMS m/e 336(M⁺)。

将3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-4-碘代-5-甲基-1H-吡咯(23g，65mmol)溶于甲醇(100ml)中，油浴加热至回流，搅拌，加入碘化钠的水溶液(碘化钠11g：水10ml)后，加入浓盐酸(37％)(2ml)，有碘析出，溶液迅速变成深红色，15分钟后，加入过硫酸氢钠除去过量的碘，将反应液中的甲醇蒸去，用1，2-二氯乙烷(50ml)萃取，干燥，浓缩有机层，得到12g的3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯，产率87％。Mp 238℃。H¹NMR(DMSO)：5.98(s，1H，3-pyrrole-H)，3.80(s，2H，CH ₂CO₂Me)，2.3(s，3H，CH ₃)，1.3(s，3H，CO₂CH ₃)，1.2(s，3H，CO₂CH ₃)。

将三氯氧磷(8ml)在0-5℃冰浴下滴加入N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中，在同样温度下搅拌15分钟后，缓慢滴加12g的3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯(53mmol)的1，2-二氯乙烷(50ml)溶液，在0-5℃下继续搅拌15分钟后，撤除冰浴，用油浴加热至50℃，搅拌半小时后，加入乙酸钠的水溶液(无水乙酸钠5g：水20ml)，搅拌半小时后，冷却反应液，用分液漏斗分离有机层并浓缩，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3的洗脱液在硅胶柱上分离(R_f＝0.5)，得到10g的3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯，产率80％。Mp 132℃。H¹NMR(CDCl₃)：10.0(s，1H，CHO)，9.1(br，1H，N-H)，4.3(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，2.3(s，3H，CH ₃)，1.3(t，3H，CO₂CH ₃)，1.2(t，3H，CO₂CH ₃)。

将3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(0.86g，3.6mmol)和5-溴-(1H)-吲哚-2-酮(0.82g，3.6mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.1g)，反应3小时后浓缩反应液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N盐酸洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.5)得到1.16g黄色固体(E)-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率91％。Mp215℃。

H¹NMR(CDCl₃)：9.10(s，1H，N-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.38(t，2H，Ph-H)，7.19(s，1H，Ph-H)，6.78(t，2H，Ph-H)，3.90(s，3H，CO₂CH₂CH ₃)，3.88(s，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.67(s，3H，CO₂CH ₃)，2.20(s，3H，CH ₃)。EIMS m/e 354(M⁺)。

实施例4(E)-5-溴-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-4)的制备：

将3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(0.95g，3.6mmol)和5-溴-(1H)-吲哚-2-酮(0.8g，3.6mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃，滴加六氢吡啶(0.1g)，反应2.5小时后浓缩反应液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N盐酸洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.6)得到1.4g黄色固体(E)-5-溴-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率91％。Mp 243℃。

H¹NMR(CDCl₃)：9.10(s，1H，N-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.38(t，2H，Ph-H)，7.19(s，1H，Ph-H)，6.78(t，2H，Ph-H)，3.90(s，3H，CO₂CH₂CH ₃)，3.88(s，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.67(s，3H，CO₂CH ₃)，2.20(s，3H，CH ₃)。EMS m/e 432(M⁺)。

实施例5(E)3-[(2，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-3-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-5)的制备：

将1H-吲哚-2-酮(6.5g)溶于浓硫酸(98％)(25ml)中并将混合物维持在-10℃至-15℃滴加入发烟硝酸(20ml)。加入硝酸(20ml)后，在0℃下，将反应混合物搅拌半小时并倾入到冰水中，通过过滤收集沉淀，并从50％乙酸重结晶然后过滤结晶产物，真空下干燥，得到6g的5-硝基-2-1H-吲哚-2-酮，产率70％。

乙酸(10ml)和氢氧化钠(1.2g，30mmol)加热到80℃，待氢氧化钠完全溶解后，继续加热反应液至回流。将乙酰乙酸乙酯(4.5g，34mmol)加入到反应器中，慢慢滴加亚硝酸钠的水溶液(8g，0.11mol，10ml水)。滴加结束后，缓慢降温到室温，放置四小时后有白色晶体析出，过滤。将该沉淀溶解于乙酸(10ml)中，加热到80℃，加入乙酰丙酮(3.4g，34mmol)和Zn粉(2g)。两小时后将反应液倒入冰水中，有白色沉淀析出。过滤，用乙酸(10ml)洗去多余的Zn粉，干燥，得到3.6g白色固体3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯，产率65％。Mp126℃。H¹NMR(CDCl₃)：8.76(br，1H，N-H)，5.79(s，1H，CH)，4.29(q，2H，CH ₂CH₃)，2.30(s，3H，CH ₃)，2.24(s，3H，CH ₃)，1.350(t，3H，CH₂CH ₃)。

将三氯氧磷(4ml)在0-5℃冰浴下滴加入N，N-二甲基甲酰胺(4ml)中。在同样温度下搅拌15分钟后，缓慢滴加3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯(3g，18mmol)的1，2-二氯乙烷(20ml)溶液。在0-5℃下继续搅拌15分钟后，撤除冰浴，用油浴加热至50℃，继续搅拌半小时后，加入乙酸钠的水溶液(无水乙酸钠1g：水10ml)。半小时后，冷却反应液，用分液漏斗分离有机层并浓缩，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脱液在硅胶柱上分离(R_f＝0.5)，得到2.8g白色固体的3，5二甲基-4-甲酰基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯，产率80％。Mp 182℃。H¹NMR(CDCl₃)：10.0(s，1H，CHO)，9.76(br，1H，N-H)，4.29(q，2H，CH ₂CH₃)，2.30(s，3H，CH ₃)，2.24(s，3H，CH ₃)，1.350(t，3H，CH₂CH ₃)。

将3，5二甲基-4-甲酰基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.1mmol)和2-(1H)-吲哚-2-酮(0.6g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃，滴加六氢吡啶(0.1g)，反应4小时后浓缩反应液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N盐酸洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.35)得到1.48g黄色固体的(E)3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率94％。Mp 185℃。

H¹NMR(DMCO)：7.55(s，1H，vinyl-H)，6.83-7.20(m，4H，Ph-H)，4.35(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，2.19(s，3H，CH ₃)，2.06(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CHH ₃)。EIMS m/e 310(M⁺)。

实施例6(E)-5-溴-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-6)的制备：

将3，5二甲基-4-甲酰基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.1mmol)和5-溴-2-(1H)-吲哚-2-酮(1g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃，滴加六氢吡啶(0.1g)，反应3小时后浓缩反应液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，20ml水和20ml 2N盐酸干燥洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.4)得到1.8g黄色固体的(E)-5-溴-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率95％。Mp 213℃。

H¹NMR(CDCl₃)：9.08(s，1H，N-H)，7.81(s，1H，N-H)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.31(d，2H，Ph-H)，7.17(s，1H，Ph-H)，6.75(d，2H，Ph-H)，4.35(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，2.19(s，3H，CH ₃)，2.06(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 388(M⁺)。

实施例7(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-7)的制备：

将3，5二甲基-4-甲酰基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.1mmol)和5-硝基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.9g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃，滴加六氢吡啶(0.1g)，反应3小时后浓缩反应液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，20ml水和20ml 2N盐酸干燥洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.4)得到1.8g黄色固体的(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率95％。Mp 286℃。

H¹NMR(DMSO-d6)：8.18(d，2H，Ph-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.65(s，1H，Ph-H)，7.05(d，2H，Ph-H)，4.22(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂ CH ₂CH₃)，3.77(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.09(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂ CH ₂CH₃)，1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 355(M⁺)。

实施例8(E)3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-8)的制备：

乙酸(10ml)和氢氧化钠(1.2g，30mmol)加热到80℃，待氢氧化钠完全溶解后，继续加热反应液到回流。将乙酰乙酸甲酯(4.7g，34mmol)加入到反应器中，慢慢滴加亚硝酸钠的水溶液(8g，0.11mol，10ml水)。滴加结束后，缓慢降温到室温，放置四小时后有白色晶体析出，过滤。将该沉淀溶解于乙酸(10ml)中，加热到80℃，加入乙酰丙酮(3.4g，34mmol)和Zn粉(2g)。两小时后将反应液倒入冰水中，有白色沉淀析出。过滤沉淀，用乙酸(10ml)洗去多余的Zn粉，干燥，得到3.8g白色固体3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯，产率68％。Mp 76℃。H¹NMR(CDCl₃)：8.76(br，1H，N-H)，5.80(s，1H，CH)，3.82(s，3H，CH ₃)，2.30(s，3H，CH ₃)，2.24(s，3H，CH ₃)。

将三氯氧磷(4ml)在0-5℃冰浴下，滴加入N，N-二甲基甲酰胺(4ml)中。在同样温度下搅拌15分钟后，缓慢滴加3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯(3.4g，18mmol)的1，2-二氯乙烷(20ml)溶液。在0-5℃下继续搅拌15分钟后，撤除冰浴，用油浴加热至50℃，继续搅拌半小时后，加入乙酸钠的水溶液(无水乙酸钠1g：水10ml)。半小时后，冷却反应液，用分液漏斗分离有机层并浓缩，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脱液在硅胶柱上分离(R_f＝0.6)，得到3.1g白色固体的3，5二甲基-4-甲酰基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯，产率82％。H¹NMR(CDCl₃)：9.76(s，1H，CHO)，3.82(s，3H，CH ₃)，2.30(s，3H，CH ₃)，2.24(s，3H，CH ₃)。

将3，5二甲基-4-甲酰基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.5mmol)和2-(1H)-吲哚-2-酮(0.7g，5.1mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.1g)，反应4小时后浓缩反应液，用1，2-二氯乙烷(10ml)溶解后用20ml水和20ml 2N盐酸洗涤后浓缩有机层。用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.55)得到1.46g黄色固体的(E)3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率94％。Mp213℃。

H¹NMR(DMCO)：7.55(s，1H，vinyl-H)，6.83-7.20(m，4H，Ph-H)，3.75(s，CO₂CH ₃)，2.20(s，3H，CH ₃)，2.06(s，3H，CH ₃)。EIMS m/e 296(M⁺)。

实施例9(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-9)的制备：

将3，5二甲基-4-甲酰基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯(1g，5.5mmol)和5-硝基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.98g，5.5mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.1g)，反应3小时后浓缩反应液，加入1，2-二氯乙烷(10ml)，用20ml水和20ml 2N盐酸洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.3)得到1.9g黄色固体的(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率95％。Mp 218℃。

H¹NMR(DMSO)：8.15(d，2H，Ph-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.66(s，1H，Ph-H)，7.00(d，2H，Ph-H)，3.75(s，3H，CO₂CH ₃)，2.20(s，3H，CH ₃)，2.06(s，3H，CH ₃)。EIMS m/e 341(M⁺)。

实施例10(E)-5-硝基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-10)的制备：

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-硝基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.78g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.1g)，反应5小时后浓缩反应液加入1，2-二氯乙烷(10ml)，20ml水和20ml 2N盐酸干燥洗涤，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.5)得到1.43g黄色固体的(E)-5-硝基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率91％。Mp 341℃。

H¹NMR(DMSO-d6)：8.18(d，2H，Ph-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.65(s，1H，Ph-H)，7.05(d，2H，Ph-H)，4.22(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.77(s，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.09(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 427(M⁺)。

实施例11(E)-5-羧基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-11)的制备：

将(1H)-吲哚-2-酮(6.7g，50mmol)加入到23g三氯化铝在30ml的1，2-二氯乙烷中的悬浮液中，缓慢加入氯乙酰氯(11.3g)并放出氯化氢气体。搅拌10分钟后，将反应液加热至40至50℃。薄层层析法(乙酸乙酯，硅胶)显示没有剩余的原料。将混合物冷却至室温并倾入到冰水中通过真空过滤收集沉淀，用水(80ml)洗涤并真空下干燥，得到10.3g的5-氯乙酰基-(1H)-吲哚-2-酮，白色固体的，产率98％。

在80至90℃下，将5-氯乙酰基-(1H)-吲哚-2-酮(9.3g，49mmol)在吡啶(9g)中的悬浮液搅拌3小时然后，冷却至室温。通过真空过滤收集沉淀并用乙醇(20ml)洗涤。将固体溶解于90ml的2.5N氢氧化钠中，并在70至80℃下搅拌3小时。将混合物冷却至室温并用0.5N盐酸酸化至pH＝2。通过真空过滤收集沉淀并用水(100ml)彻底洗涤，得到作为深棕色固体的5-羧基-2-(1H)-吲哚-2-酮。将滤液放置过夜后，得到2g为黄色固体的5-羧基-(1H)-吲哚-2-酮。将深棕色产物溶于热乙醇(20ml)中，通过过滤，除去不溶物并浓缩滤液，得到作为5.6g棕色固体的5-羧基-2-(1H)-吲哚-2-酮。合并的收率为97％。Mp 286℃。H¹NMR(DMSO)：12.56(br，1H，COOH)，10.70(s，1H，NH-1)，7.81(dd，1H，Ph-H)，7.74(s，1H，Ph-H)，3.53(s，2H，CH ₂)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-羧基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.65g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.1g)，反应5小时后浓缩反应液，用1，2-二氯乙烷(10ml)溶解后用20ml水和20ml 2N盐酸洗涤后，浓缩有机层，用乙酸乙酯∶石油醚＝4∶1的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.25)得到1.49g红色固体的(E)-5-羧基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率95％。Mp 214℃。

H¹NMR(DMSO-d6)：7.82(d，2H，Ph-H)，7.56(s，1H，vinyl-H)，7.54(s，1H，Ph-H)，6.98(q，2H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.77(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.09(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 426(M⁺)。

实施例12(E)-5-氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-12)的制备：

向盛有27ml氯磺酸的100ml烧瓶中缓慢加入13.3g(1H)-吲哚-2-酮。加入期间将反应温度维持在低于30℃。加入后，在室温下将反应混合物搅拌1.5小时，加热至68℃，反应1小时，冷却，并倾入到水中，用水洗涤(50ml)沉淀并在真空烘箱中干燥，得到11g的5-氯磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，产率50％。

将5-氯磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(2.1g)加入到在10mL乙醇的氨水(10ml)中，并在室温下搅拌过夜。浓缩混合物并通过真空过滤收集固体，得到0.4g灰白色固体的5-氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，产率20％。Mp 125℃。H¹NMR(DMSO)：10.67(s，1H，NH-1)，7.63-7.66(m，2H，Ph-H)，7.13(s，2H，H ₂ NSO₂-5)，6.91(d，1H，Ph-H)，3.56(s，2H，CH ₂)。MS m/e341(M⁺)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(0.543g，3.7mmol)，在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃，滴加六氢吡啶(0.1g)，反应5小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.85)得到1.2g橙黄色固体的(E)-5-氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率70％。Mp 148-150℃。

H¹NMR(CDCl₃)：7.60(s，1H，vinyl-H)，7.59(d，1H，Ph-H)，7.22(s，1H，Ph-H)，7.06(d，1H，Ph-H)，4.25(q，2H，CO₂ CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.80(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.10(s，3H，CH ₃)，1.28(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.05(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 461(M⁺)。

实施例13(E)-5-甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-13)的制备：

在室温下，将5-氯磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(2.3g，10mmol)在甲基胺(10ml)的甲醇(10ml)悬浮液中搅拌4小时，其间形成白色固体。过滤收集沉淀，用氢氧化钠(5ml，1N)和盐酸(5ml，1N)洗涤并真空干燥过夜，得到2.2g橙色固体5-甲基氨基磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮，收率82％。EIMS m/e 225(M⁺-1)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-甲基氨基磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.9g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.55)得到1.08g黄色固体的(E)-5-甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率67％。Mp126℃。

H¹NMR(CDCl₃)：9.31(s，1H，N-H)，8.41(s，1H，N-H)，7.8(s，1H，vinyl-H)，7.63(d，1H，Ph-H)，7.42(s，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，Ph-H)，4.32(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，4.10(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.80(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.42(s，3H，NCH ₃)，2.10(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，2H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 475(M⁺)。

实施例14(E)-5-(N-吗啉基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-14)的制备：

在室温下，将5-氯磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(2.3g，10mmol)溶解于四氢呋喃(10ml)中，加入吗啉(750mg，10mmol)，搅拌4小时，其间形成白色固体。过滤收集沉淀，用氢氧化钠(5ml，1N)和盐酸(5ml，IN)洗涤并真空干燥过夜，得到2.53g白色固体的5-(N-吗啉基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，收率90％。EIMS m/e 282(M⁺)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(N-吗啉基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.03g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.75)得到1.21g黄色固体的(E)-5-(N-吗啉基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率62％。Mp185℃。

H¹NMR(CDCl₃)：9.31(s，1H，N-H)，8.41(s，1H，N-H)，7.80(s，1H，vinyl-H)，7.63(d，1H，Ph-H)，7.42(s，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，Ph-H)，4.32(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，4.10(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.80(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，3.67(t，2H，1.4-morpholinyl)，2.90(t，2H，2.3-morpholinyl)，2.10(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，2H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 531(M⁺)。

实施例15(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-15)的制备：

在室温下，将5-氯磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(2.1g，9mmol)、3-氯苯胺(1.8g，14mmol)和吡啶(1.4g)在20mL二氯甲烷的悬浮液中搅拌4小时。通过真空过滤收集形成的沉淀，用15ml水洗涤两次并于40℃下真空干燥过夜，得到2.5g粉红色固体的5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，产率86％。EIMS m/e 321(M⁺-1)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.19g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.8)得到1.52g黄色固体的(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率72％。Mp 118-120℃。

H¹NMR(DMSO)：7.56(m，2H，Ph-H)，7.38(s，1H，vinyl-H)，6.80-6.98(m，5H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.77(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.00(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 571(M⁺)。

实施例16(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-16)的制备：

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-氟苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.13g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.85)得到1.49g黄色固体的(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率73％。Mp＞130℃分解。

H¹NMR(DMSO)：7.55(m，2H，Ph-H)，7.39(s，1H，vinyl-H)，6.80-6.98(m，5H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.77(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.00(s，3H，CH ₃)，1.36(t，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 555(M⁺)。

实施例17(E)-5-二甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-17)的制备：

在室温下，将2.3g的5-氯磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮加入二甲基胺的甲醇(10mL，2M)的悬浮液，搅拌4小时，其间形成白色固体。通过真空过滤收集沉淀，用氢氧化钠(5ml，1N)和盐酸(5ml，IN)洗涤并真空干燥过夜，得到1.8g的5-二甲基氨基-磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮，产率77％。EIMS m/e 240(M⁺)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-二甲基氨基-磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(0.94g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.60)得到1.17g黄色固体的(E)-5-二甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率65％。Mp145℃。

H¹NMR(CDCl₃)：9.32(s，1H，N-H)，8.43(s，1H，N-H)，7.80(s，1H，vinyl-H)，7.63(d，1H，Ph-H)，7.42(s，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，Ph-H)，4.32(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，4.10(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.80(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.43(s，6H，N(CH ₃)₂)，2.10(s，3H，CH₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，2H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 489(M⁺)。

实施例18(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-18)的制备：

在室温下，将5-氯磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(2.1g，9mmol)、3-氟-4-氯苯胺(2.03g，14mmol)和吡啶(1.4g)在20ml二氯甲烷中搅拌4小时。过滤，沉淀用15ml水洗涤两次并于40℃下真空干燥过夜，得到2.5g粉红色固体5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，产率80％。EIMS m/e 340(M⁺)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.25g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.75)得到1.52g黄色固体(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率70％。Mp＞130℃分解。

H¹NMR(DMSO)：7.56(m，2H，Ph-H)，7.38(s，1H，vinyl-H)，6.87-6.98(m，4H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.77(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.00(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 589(M⁺)。

实施例19(E)-5-(六氢吡啶基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-19)的制备：

在室温下，将5-氯磺酰基-2-(1H)-吲哚-2-酮(2.3g，10mmol)溶解于四氢呋喃(10ml)中，加入六氢吡啶(750mg，10mmol)，搅拌4小时，其间形成白色固体。过滤收集沉淀，用氢氧化钠(5ml，1N)和盐酸(5ml，1N)洗涤并真空干燥过夜，得到2.53g白色固体5-(N-六氢吡啶基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，收率90％。EIMS m/e 282(M⁺)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(N-六氢吡啶基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.03g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.70)得到1.21g黄色固体(E)-5-(六氢吡啶基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率60％。Mp145℃。

H¹NMR(DMCO)：11.20(s，1H，N-H)，9.99(s，1H，N-H)，7.70(s，1H，vinyl-H)，7.62(d，2H，Ph-H)，6.42(s，1H，Ph-H)，7.17(q，2H，Ph-H)，4.28(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，4.00(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.95(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.11(s，3H，CH ₃)，1.60(m，6H，4.5-(CH ₂)₃3-hexapyridinyl)，1.42(m，4H，1.2-(CH ₂ ) ₂-hexapyridinyl)，1.30(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.15(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 530(M⁺+1)。

实施例20(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮(化合物I-20)的制备：

在室温下，将5-氯磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(2.1g，9mmol)、3-溴苯胺(2.3g，14mmol)和吡啶(1.4g)，在20ml二氯甲烷中搅拌4小时。过滤，沉淀用15ml水洗涤两次并于40℃下真空干燥过夜，得到2.9g粉红色固体的5-(3-溴苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮，产率82％，EIMS m/e 365(M⁺)。

将3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-4-甲酰基-5-甲基-1H-吡咯(1g，3.7mmol)和5-(3-溴苯基)氨基磺酰基-(1H)-吲哚-2-酮(1.39g，3.7mmol)在20ml乙醇中混合搅拌，油浴加热到80℃。滴加六氢吡啶(0.01g)，反应6小时后浓缩反应液，用乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5的洗脱液在硅胶柱上纯化(R_f＝0.65)得到1.72g黄色固体(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮，产率73％。Mp 134-138℃。

H¹NMR(DMSO)：7.56(m，2H，Ph-H)，7.38(s，1H，vinyl-H)，6.80-6.98(m，5H，Ph-H)，4.21(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.98(q，2H，CO₂CH ₂CH₃)，3.77(s，2H，CH ₂CO₂CH₂CH₃)，2.00(s，3H，CH ₃)，1.36(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)，1.20(t，3H，CO₂CH₂CH ₃)。EIMS m/e 615(M⁺)。

实施例21本发明化合物对人常染色体显性遗传型多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞的抑制效果实验：

1、试剂及仪器

人类多囊肾病囊肿衬里上皮细胞株：由上海长征医院肾内科实验室建立并保存；

DMEM∶F12(1∶1)培养液(GIBCO公司)；

小牛血清(常州四季青公司)；

重组人类表皮生长因子(rhEGF)(Calbiochem公司)；

酶标仪(LabsysteEIMS MK3)

待测化合物：根据实施例1-16制备的化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-13、I-14、I-15、I-16。

待测化合物以培养液稀释，浓度梯度为50μM、5μM、500nM、50nM、5nM、0.5nM、0.05nM

2、实验方法

采用MTT法测定细胞增殖。将对数生长期的囊肿衬里上皮细胞接种于96孔板(1×103/孔)，24小时后，换无血清培养液同步24小时，使细胞静止于休止期。弃上清液，换用含2％小牛血清各浓度药物溶液，每个剂量组设9个复孔，37℃孵育72小时后，各剂量组加入1ng/mlrhEGF刺激24小时(根据预实验确定的最佳刺激浓度)。设立无药物处理、无EGF刺激的空白对照组，始终仅加入培养液(2％小牛血清)。取6个复孔，每孔加入10μl MTT，孵育4小时后弃上清，每孔加入100μl DMSO溶解结晶，用酶标仪读取490nm的吸光度值，实验重复5次。

抑制率＝(A490对照孔-A490给药孔)/A490对照孔×100％

根据各浓度抑制率，采用以竞争物浓度的对数同Logit〔I〕线性回归，求出抑制50％结合物时的竞争物浓度IC₅₀。以上每个实验重复2次，求出2次实验的平均IC₅₀值，作为抑制能力的最终指标，测得实验化合物的抑制百分率。

3、实验结果

实验结果见表1。

表1.本发明化合物在各浓度对人类多囊肾病囊肿衬里上皮细胞的抑制百分率(％)

实施例22本发明化合物对A-549人肺腺癌细胞、A-431人皮肤鳞癌细胞和MDA-MB-468人乳腺癌细胞的抑制效果实验

1、试剂及仪器

RPMII640购自Gibco公司；磺酰罗丹明B购自Sigma公司；三氯醋酸(TCA)、醋酸(HAC)和Tris base unbuffer均为国产分析纯；酶标仪(VERSAmax)。

待测化合物：根据实施例1-20制备的化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-13、I-14、I-15、I-16、I-17、I-18、I-19、I-20。

待测化合物以DMSO稀释，浓度梯度为10^-4M、10^-5M、10^-6M

2、实验方法(磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法)

根据细胞生长速率，分别将处于对数生长期的A-549人肺腺癌细胞、A-431人皮肤鳞癌细胞和MDA-MB-468人乳腺癌细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时，再加药10μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞凋零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO₂条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后，用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/ml溶液100μl/孔，室温中染色15分钟，去上清液，用1％醋酸洗涤5次，空气干燥，最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪540nm波长下测定A值。

用下列公式计算肿瘤细胞生长的抑制率：

抑制率＝(A540对照孔-A540给药孔)/A540对照孔×100％

3、实验结果

实验结果见表2-4。

表2.本发明化合物对A-549人肺腺癌细胞生长的抑制率(％)

表3.本发明化合物对A-431人皮肤鳞癌细胞生长的抑制率(％)

表4.本发明化合物对MDA-MB-468人乳腺癌细胞生长的抑制率(％)

从表1-4中可以看出，本发明化合物对富含EGFR的肿瘤细胞的抑制活性较高。在ADPKD囊肿衬里上皮细胞生长抑制实验里有八个化合物(化合物I-4、I-5、I-15、I-6、I-12、I-3、I-9和I-11)的IC₅₀达到了10^-5M，有两个化合物的IC₅₀达到了10^-6M，化合物I-4的IC₅₀达到了10^-7M。两个化合物(I-7和I-8)在浓度为10^-6M时，对A-549人肺腺癌细胞、A-431人皮肤鳞癌细胞和MDA-MB-468人乳腺癌细胞的抑制百分率为86％，表现为强效抑制剂。

Claims

1、具有下述通式(I)结构的取代1H-吲哚-2-酮类化合物：

其中：

R₂、R₃、R₄、R₅各自独立的选自氢、C_1-5烷基、C_1-4烷氧基、芳基、芳氧基、C_1-5烷基芳基、C_1-5烷基芳氧基、C_3-10环烷基、巯基、C_1-5烷巯基、芳巯基、亚巯酰基、卤素、三卤甲基、氨基、氰基、硝基、羧基、氧羧基、酰胺基、硫代酰胺基、磺酰胺基、三卤代甲磺酰基、N-亚磺酰胺基、S-亚磺酰胺基、三卤代甲亚磺酰基、O-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基和-NR₁₁R₁₂，其中R₃和R₄、R₄和R₅可以结合形成六元芳环、亚甲二氧基或亚乙二氧基；

R₄、R₅还可以同时或分别选自以下基团：

R₆选自氢、C_3-10环烷基、C_1-5烷基、卤素；

R₉选自氢、C_1-5烷基、C_1-5烷氧基、芳基、芳氧基、C_1-5烷基芳基、C_1-5烷基芳氧基、卤素、三卤甲基、巯基、羟基、硫C_1-5烷基和-NR₁₁R₁₂；

2、根据权利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物，其特征在于其中R₄选自C_1-5烷基、卤素、磺酰胺基、氨基、氰基、硝基、羧基和-NR₁₁R₁₂。

3、根据权利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物，其特征在于其中R₄、R₅同时或分别选自以下结构：

4、根据权利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物，其特征在于包括以下化合物：(E)-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-1H-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-1H-吲哚-2-酮；(E)-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(3-甲氧基羰基甲基-2-甲氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-溴-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-乙氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(3，5二甲基-2-甲氧基羰基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-硝基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-羧基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(N-吗啉基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-二甲基氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-氟-4-氯苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(六氢吡啶基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮；(E)-5-(3-溴苯基)氨基磺酰基-3-[(3-乙氧基羰基甲基-2-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-4-基)亚甲基]-(1H)-吲哚-2-酮。

5、权利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物的制备方法，其特征在于由在碱的催化下，化合物(I)由等摩尔的化合物II和化合物III在有机溶剂中进行缩合反应而制得：

6、根据权利要求5所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物的制备方法，其特征在于所述的碱催化剂为有机氮碱或无机碱，有机溶剂为质子溶剂或质子惰性溶剂，反应温度为65℃～90℃；反应时间为3～6小时。

7、根据权利要求6所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物的制备方法，其特征在于有机氮碱可采用三乙胺、吡啶、六氢吡啶、三甲胺、苯胺、二异丙基胺、1，8-二氮杂二环[5.4.1]十一-7-烯、吡咯烷、哌啶，无机碱可采用氨、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐或硫酸氢盐。

8、根据权利要求6所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物的制备方法，其特征在于质子溶剂为水或醇类，所述质子惰性溶剂为极性或非极性质子惰性溶剂，且不含有酸性氢，即不含有能与溶质结合的氢，其中非极性质子惰性溶剂可采用戊烷、己烷、苯、甲苯、二氯甲烷或四氯化碳，极性质子惰性溶剂可采用氯仿、四氢呋喃、二甲基亚砜或二甲基甲酰胺。

9、根据权利要求6或7所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物的制备方法，其特征在于当溶剂为质子溶剂时，所述碱催化剂为碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物。

10、权利要求1所述的取代1H-吲哚-2-酮类化合物作为表皮生长因子受体抑制剂，在制备抗肿瘤药物中的应用。