ES2213985T3

ES2213985T3 - Derivados de hidroxiamida de acido 5-oxo-pirrolidin-2-carboxilico.

Info

Publication number: ES2213985T3
Application number: ES99308617T
Authority: ES
Inventors: Ellen Ruth Pfizer Inc. Laird; Jr. Ralph Pelton Pfizer Inc. Robinson
Original assignee: Pfizer Products Inc
Current assignee: Pfizer Products Inc
Priority date: 1998-11-05
Filing date: 1999-10-29
Publication date: 2004-09-01
Anticipated expiration: 2019-10-29
Also published as: PT1004578E; BR9904998B1; CA2288445C; JP2000143625A; ATE260255T1; EP1004578A2; DK1004578T3; EP1004578A3; EP1004578B1; JP3188883B2; BR9904998A; US6114361A; DE69915004T2; DE69915004D1; CA2288445A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula en la que R1 es arilo (C6-C10), heteroarilo (C2-C9), arilo (C6-C10) alquilo (C1-C6), arilo (C6-C10) arilo (C6- C10), arilo (C6-C10) heteroarilo (C2-C9), heteroarilo (C2- C9) alquilo (C1-C6), heteroarilo (C2-C9) arilo (C6-C10), heteroarilo (C2-C9) heteroarilo (C2-C9), ariloxi (C6-C10) alquilo (C1-C6), ariloxi (C6-C10) arilo (C6-C10), ariloxi (C6-C10) heteroarilo (C2-C9), heteroariloxi (C2-C9) alquilo (C1-C6), heteroariloxi (C2-C9) arilo (C6-C10), heteroariloxi (C2-C9) heteroarilo (C2-C9), arilo (C6-C10) alquilo (C1-C6) arilo (C6-C10), arilo (C6-C10) alquilo (C1-C6) heteroarilo (C2-C9), arilo (C6-C10) alcoxi (C1- C6) arilo (C6-C10), arilo (C6-C10) alcoxi (C1-C6) heteroarilo (C2-C9), ariloxi (C6-C10) alquilo (C1-C6) arilo (C6-C10), ariloxi (C6-C10) alquilo (C1-C6) heteroarilo (C2-C9), heteroarilo (C2-C9) alquilo (C1-C6) arilo (C6-C10), heteroarilo (C2-C9) alquilo (C1-C6) heteroarilo (C2-C9), heteroarilo (C2-C9) alcoxi (C1-C6) arilo (C6-C10), heteroarilo (C2-C9) alcoxi (C1-C6) heteroarilo (C2-C9), heteroariloxi (C2-C9) alquilo (C1- C6) arilo (C6-C10), heteroariloxi (C2-C9) alquilo (C1-C6) heteroarilo (C2-C9), arilo (C6-C10) arilo (C6-C10) alquilo (C1-C6) o arilo (C6-C10) alcoxi (C1-C6) alquilo (C1-C6), en el que cada uno de dichos radicales arilo (C6- C10) o heteroarilo (C2-C9) está opcionalmente sustituido en cualquiera de los átomos de carbono del anillo capaces de formar un enlace adicional mediante uno o más sustituyentes por anillo, seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo (C1- C6), alcoxi (C1-C6), perfluoro alquilo (C1-C3), perfluoro alcoxi (C1-C3) y ariloxi (C6-C10) y R2 y R3 se seleccionan de forma independiente entre H, alquilo (C1-C6) y arilo CH2(C6-C10) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Derivados de hidroxiamida de ácido 5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a derivados de hidroxiamida de ácido 5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico y de composiciones farmacéuticas y de procedimientos de tratamiento.

Los compuestos de la presente invención son inhibidores de metaloendopeptidasas de cinc, especialmente de aquellas que pertenecen a la metaloproteinasa de la matriz (también denominadas MMP o matrixina) y a las subfamilias de la reprolisina (también conocida como adamilsina) de las metcincinas (Rawlings y col., Methods in Enzymology, 248, 183-228 (1995) y Stocker y col., Protein Science, 4, 823-840 (1995)).

La subfamilia de enzimas MMP contiene en la actualidad diecisiete miembros (MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20). Por lo que son más conocidas las MMP es por su papel en la regulación de la producción de proteínas de matriz extracelular y como tales desempeñan importantes papeles en procesos fisiológicos normales tales como la reproducción, el desarrollo y la diferenciación. Además, las MMP se expresan en muchas situaciones patológicas en las que se tiene lugar la producción de tejido conjuntivo anormal. Por ejemplo, se ha demostrado que la MMP-13, una enzima con potente actividad en la degradación de colágeno de tipo II (el principal colágeno en el cartílago), se sobreexpresa en cartílago osteoartrítico (Mitchell y col., J. Clin. Invest., 97, 761 (1996)). En el cartílago osteoartrítico también se pueden sobreexpresar otras MMP (MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-12) y se espera que la inhibición de alguna o de todas esas MMP retrase o bloquee la pérdida acelerada de cartílago típica de enfermedades de las articulaciones tales como osteoartritis o artritis reumatoide.

La publicación de patente internacional Nº WO97/32846 describe el uso de derivados de ácido hidroxámico que son útiles como inhibidores de distintas enzimas de la familia de la metaloproteinasa de matriz.

La publicación de patente internacional Nº WO98/37877 enseña el uso de alquilos o arilos sustituidos, o heteroamidas como inhibidores de la metaloproteinasa de matriz.

La publicación de patente europea Nº 0574758 enseña el uso de derivados de ácido hidroxámico como inhibidores de la colagenasa.

El artículo de Czekay, G en Biochem. J., (1993), 290, 921-6, describe el mecanismo catalítico de la ectoenzima que degrada la hormona liberadora de tirotropina.

El artículo de Gridinic V. y col. en Fresenius 'Z. Anal. Chem. (1982), 313, 143-4, describe una técnica para la detección de derivados de ácido hidroxámico.

Las reprolisinas de los mamíferos se conocen como ADAM (Disintegrin And Metalloproteinase, Wolfberg y col., J. Cell Biol., 131, 275-278 (1995)) y contienen un dominio disintegrina además de un dominio similar a metaloproteinasa. Hasta la fecha, se han identificado veintitrés ADAM diferentes.

La ADAM-17, también conocida como enzima convertidora del factor de necrosis tumoral alfa (TACE), es la ADAM que mejor se conoce. La ADAM-17 (TACE) es la responsable de la escisión de las células unidas al factor de necrosis tumoral alfa (TNF-\alpha, también conocido como cachectina). Se reconoce que el TNF-\alpha está implicado en muchas enfermedades infecciosas y autoinmunes (W. Friers, FEBS Letters, 285, 199 (1991)). Además, se ha mostrado que el TNF-\alpha es el principal mediador de la respuesta inflamatoria visto en la sepsis y en el shock séptico (Spooner y col., Clinical Immunology and Immunopathology, 62 S11 (1992)). Hay dos formas de TNF-\alpha, una proteína de membrana de tipo II de peso molecular relativo 26.000 (26 kD) y una forma soluble de 17 kD generada a partir de la proteína unida a la célula mediante escisión proteolítica específica. La forma soluble de TNF-\alpha de 17 kD se libera por la célula y se asocia con los efectos perjudiciales de la TNF-\alpha. Esta forma de TNF-\alpha también es capaz de actuar en posiciones distantes de la posición de síntesis. Así, los inhibidores de la TACE evitan la formación de TNF-\alpha soluble y evitan los efectos perjudiciales del factor soluble.

Los compuestos seleccionados de la presente invención son potentes inhibidores de la agrecanasa, una enzima importante en la degradación del agrecano del cartílago. Se cree que la agrecanasa también es una ADAM. La pérdida de agrecano de la matriz de cartílago es un factor importante en la progresión de enfermedades de las articulaciones tales como osteoartritis y artritis reumatoide y se espera que la inhibición de la agrecanasa retrase o bloquee la pérdida de cartílago en estas enfermedades.

Otras ADAM que han mostrado expresión en situaciones patológicas incluyen ADAM TS-1 (Kuno y col., J. Biol. Chem., 272, 556-562 (1997)) y ADAM 10, 12 y 15 (Wu y col., Biochem. Biophys. Res. Comm., 235, 437-442, (1997)). Teniendo conocimiento de la expresión, de los sustratos fisiológicos y de la asociación con la enfermedad de los aumentos de ADAM, se apreciará la importancia del papel de la inhibición de esta clase de enzimas.

Las enfermedades en las que la inhibición de MMP y/o ADAM proporcionará beneficio terapéutico incluyen: artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de dificultad respiratoria crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica de asma, enfermedad de Alzheimer, toxicidad de transplante de órganos, caquesia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica de contacto, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis bulosa congénita, osteoporosis, pérdida de implantes articulares artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma de aorta (incluyendo aneurisma de aorta abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, ictus, isquemia cerebral, trauma craneal, daño en la médula espinal, desórdenes neurodegenerativos (agudos y crónicos), desórdenes autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora nootrópica o mejora de la cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesiones en la córnea, degeneración macular, cicatrización anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrices de la córnea, escleritis, SIDA, sepsis, shock séptico y otras enfermedades caracterizadas por expresión de metaloproteinasa o de ADAM.

Esta invención también se refiere al uso de los compuestos de la presente invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento de las enfermedades anteriores en mamíferos, especialmente en seres humanos y, por tanto, se refiere a las composiciones farmacéuticas útiles.

Se reconoce que en distintas situaciones patológicas se expresan distintas combinaciones de MMP y de ADAM. Como tales, se pueden preferir inhibidores con selectividades específicas para ADAM y/o MMP particulares para enfermedades particulares. Por ejemplo, la artritis reumatoide es una enfermedad inflamatoria de las articulaciones caracterizada por niveles de TNF excesivos y por la pérdida de constituyentes de la matriz de la articulación. En este caso, la terapia preferida puede ser un compuesto que inhiba la TACE y la agrecanasa así como las MMP tales como MMP-13. En contraposición, en una enfermedad menos inflamatoria de las articulaciones tal como la osteoartritis, se pueden preferir compuestos que inhiban las MMP que degradan la matriz tales como MMP-13, pero que no inhiban la TACE.

Los inventores de la presente invención también han descubierto que es posible diseñar inhibidores con actividad metaloproteasa diferencial. De forma específica, por ejemplo, los inventores han sido capaces de diseñar moléculas que inhiben de forma selectiva la metaloproteasa-13 de matriz (MMP-13) con preferencia sobre la MMP-1.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a compuestos con la fórmula

1

en la que R^{1} es arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9})alquilo (C_{1}-C_{6}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6})arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) o arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) alquilo (C_{1}-C_{6}), en el que cada uno de dichos radicales arilo (C_{6}-C_{10}) o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) está opcionalmente sustituido en cualquiera de los átomos de carbono del anillo capaces de formar un enlace adicional mediante uno o más sustituyentes por anillo, seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo (C_{1}-C_{6}), alcoxi (C_{1}-C_{6}), perfluoro alquilo (C_{1}-C_{3}), perfluoro alcoxi (C_{1}-C_{3}) y ariloxi (C_{6}-C_{10}) y

R^{2} y R^{3} se seleccionan de forma independiente entre H, alquilo C_{1}-C_{6}) y arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10})

y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los compuestos preferidos de la presente invención se refieren a compuestos en los que R^{1} es arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), en los que cada radical arilo (C_{6}-C_{10}) o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) de dicho arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6} C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}) o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}) está opcionalmente sustituido en cualquiera de los átomos de carbono del anillo capaces de formar un enlace adicional mediante uno o más sustituyentes por anillo (preferiblemente uno a tres sustituyentes, lo más preferiblemente 0-2 sustituyentes) seleccionados de forma independiente entre flúor, cloro, bromo, alquilo (C_{1}-C_{6}), alcoxi (C_{1}-C_{6}), perfluoro alquilo (C_{1}-C_{3}), perfluoro alcoxi (C_{1}-C_{3}) y ariloxi (C_{6}-C_{10}).

En otra forma de realización, R^{2} y R^{3} son hidrógeno. En una forma de realización adicional, uno o ambos R^{2} y R^{3} se seleccionan de forma independiente entre alquilo (C_{1}-C_{6}) y arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10}).

El término "alquilo", tal y como se usa en la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario, incluye radicales de hidrocarburo monovalente saturados que tienen radicales lineales, ramificados o cíclicos o combinaciones de los mismos.

El término "alcoxi", tal y como se usa en la presente memoria descriptiva, incluye grupos O-alquilo en los que "alquilo" es tal y como se definió anteriormente.

El término "arilo", tal y como se usa en la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario, incluye un radical orgánico derivado de un hidrocarburo aromático mediante la eliminación de un hidrógeno, tales como fenilo o naftilo, sustituidos opcionalmente por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo formado por flúor, cloro, bromo, perfluoro alquilo (C_{1}-C_{6}) (incluyendo trifluorometilo), alcoxi (C_{1}-C_{6}), ariloxi (C_{6}-C_{10}), perfluoro alcoxi (C_{1}-C_{3}), (incluyendo trifluorometoxi y difluorometoxi) y alquilo (C_{1}-C_{6}).

El término "heteroarilo", tal y como se usa en la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario, incluye un radical orgánico derivado de un compuesto heterocíclico aromático mediante la eliminación de un hidrógeno, tal como piridilo, furilo, pirroilo, tienilo, isotiazolilo, imidazolilo, bencimidazoilo, tetrazolilo, pirazinilo, pirimidilo, quinolilo, isoquinolilo, benzofurilo, isobenzofurilo, benzotienilo, pirazolilo, indolilo, isoindolilo, purinilo, carbazolilo, isoxazolilo, tiaxolilo, oxazolilo, benzotiazolilo o benzoxazolilo, sustituido opcionalmente por 1 a 2 sustituyentes seleccionados del grupo formado por flúor, cloro, trifluorometilo, alcoxi (C_{1}-C_{6}), ariloxi (C_{6}-C_{10}), trifluorometoxi, difluorometoxi y alquilo (C_{1}-C_{6}). Heteroarilos preferidos incluyen piridilo, furilo, tienilo, isotiazolilo, pirazinilo, pirimidilo, pirazolilo, isoxazolilo, tiazolilo u oxazolilo. Los heteroarilos más preferidos incluyen piridilo, furilo o tienilo.

El compuesto de fórmula I puede tener centros quirales y, por tanto, existir en distintas formas enantioméricas. La presente invención se refiere a todos los isómeros ópticos, tautómeros y estereoisómeros de los compuestos de fórmula I y de mezclas de los mismos.

Compuestos más preferidos de la presente invención se refieren a un compuesto de fórmula I con la estereoquímica

2

Compuestos más preferidos de la presente invención se refieren a un compuesto de fórmula I, en el que R^{1} está sustituido opcionalmente con arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), preferiblemente sustituido con uno a tres sustituyentes (lo más preferiblemente cero o un sustituyente) seleccionado de forma independiente entre hidrógeno, flúor, cloro, alquilo (C_{1}-C_{6}) o alcoxi (C_{1}-C_{6}). Cuando el compuesto de fórmula I posee un sustituyente, ese sustituyente está lo más preferiblemente en la posición para u orto del anillo terminal.

Compuestos preferidos específicos de fórmula I se seleccionan del grupo constituido por:

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico e

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-fluorofenoxi)fenil]-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico.

Otros compuestos de fórmula I se seleccionan del grupo formado por:

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-5-oxo-4-(4-fenoxifenil)-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-clorofenoxi)fenil]-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[3-(4-clorofenoxi)fenil]-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[3-(4-fluorofenoxi)fenil]-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-5-oxo-4-[4-(piridin-4-iloxi)-fenil]pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-bifenil-4-il-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4'-fluorobifenil-4-il)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-benciloxifenil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-5-oxo-4-(4-fenetilfenil)-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-fluorobenciloxi)fenil]-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(3,5-difluorobenciloxi)fenil]-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxibencil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4'-fluorobifenil-4-ilmetil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-naftalen-2-il-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-fluorofenoxi)-fenil]-2,4-dimetil-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-fluorofenoxi)-fenil]-4-metil-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4R)-4-bencil-5-oxo-4-(4-fenoxifenil)-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-clorofenoxi)-fenil]-4-metil-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico e

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-clorofenoxi)-fenil]-2,4-dimetil-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico.

La presente invención también se refiere a las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de compuestos de fórmula I. Los ácidos que se usan para preparar las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos base mencionados de la presente invención son aquellos que forman sales de adición de ácido no tóxicas, por ejemplo, sales que contienen aniones farmacéuticamente aceptables, tales como sales de aniones clorhídrico, bromídrico, yodhídrico, nitrato, sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, acetato, lactato, citrato, citrato ácido, tartrato, bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y palmoato [es decir, 1,1'-metilen-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)].

La presente invención también se refiere a sales de adición básicas de fórmula I. Las bases químicas que se pueden usar como reactivos para preparar sales de bases farmacéuticamente aceptables de esos compuestos de fórmula I que son ácidos en su estado natural son aquellas que forman sales de bases no tóxicas con dichos compuestos. Dichas sales de base no tóxicas incluyen, pero no se limitan a ellas, a aquellas procedentes de cationes farmacéuticamente aceptables tales como cationes de metal alcalino (por ejemplo, potasio y sodio) y cationes de metal alcalinotérreo (por ejemplo, calcio y magnesio), amonio o sales de adición de amina solubles en agua tales como N-metilglucamina-(meglumina) y los alcanoamonios inferiores y otras sales de bases de aminas orgánicas farmacéuticamente aceptables.

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para el tratamiento de una dolencia seleccionada del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad de transplante de órganos, caquesia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica de contacto, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis bulosa congénita, osteoporosis, pérdida de implantes articulares artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma de aorta (incluyendo aneurisma de aorta abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, ictus, isquemia cerebral, trauma craneal, daño en la médula espinal, desórdenes neurodegenerativos (agudos y crónicos), desórdenes autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora nootrópica o mejora de la cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesiones en la córnea, degeneración macular, cicatrización anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrices de la córnea, escleritis, SIDA, sepsis, shock séptico y otras enfermedades caracterizadas por actividad de metaloproteinasa y otras enfermedades caracterizadas por actividad de reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un humano, composición farmacéutica que comprende una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo eficaz en dichos tratamientos y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para la inhibición de (a) metaloproteinasas de matriz u otras metaloproteinasas implicadas en la degradación de la matriz, o para la inhibición de (b) una reprolisina de mamífero (tal como agrecanasa o ADAM TS-1, 10, 12, 15 y 17, lo más preferiblemente ADAM-17) en un mamífero, incluyendo un humano, composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención también se refiere al uso de los compuestos de la invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia seleccionada del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad de transplante de órganos, caquesia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica de contacto, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis bulosa congénita, osteoporosis, pérdida de implantes articulares artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma de aorta (incluyendo aneurisma de aorta abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, ictus, isquemia cerebral, trauma craneal, daño en la médula espinal, desórdenes neurodegenerativos (agudos y crónicos), desórdenes autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora nootrópica o mejora de la cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesiones en la córnea, degeneración macular, cicatrización anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrices de la córnea, escleritis, SIDA, sepsis, shock séptico y otras enfermedades caracterizadas por actividad de metaloproteinasa y otras enfermedades caracterizadas por actividad de reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un humano, composición farmacéutica que comprende la administración a dicho mamífero de una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo eficaz el tratamiento de dicha dolencia.

La presente invención también se refiere a un procedimiento para la inhibición de (a) metaloproteinasas de matriz u otras metaloproteinasas implicadas en la degradación de la matriz, o para la inhibición de (b) una reprolisina de mamífero (tal como agrecanasa o ADAM TS-1, 10, 12, 15 y 17, lo más preferiblemente ADAM-17) en un mamífero, incluyendo un humano, procedimiento que comprende la administración a dicho mamífero de una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención también abarca composiciones farmacéuticas que contienen profármacos de compuestos con la fórmula I. La presente invención también abarca procedimientos de tratamiento o de prevención de desórdenes que se pueden tratar o prevenir mediante la inhibición de metaloproteinasas de matriz o mediante la inhibición de reprolisina de mamífero, procedimientos que comprenden la administración de profármacos de compuestos de fórmula I. Los compuestos de fórmula I que tienen grupos amino libres, grupos amido, hidroxi o carboxílicos se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un residuo aminoácido, o una cadena de polipéptido de dos o más (por ejemplo, dos, tres o cuatro) residuos de aminoácido, están unidos covalentemente a través de enlaces péptido a grupos amino libres, a grupos hidroxi o ácido carboxílico de compuestos de fórmula I. Los residuos de aminoácido incluyen los 20 aminoácidos de origen natural comúnmente designados por símbolos de tres letras y también incluyen 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metilhistidina, norvalina, beta-alanina, ácido gamma-aminobutírico, citrulina, homocisteina, homoserina, omitina y metionina sulfona. Los profármacos también incluyen compuestos en los que carbonatos, carbamatos, amidas y ésteres de alquilo están unidos covalentemente a los anteriores sustituyentes de fórmula I a través de la cadena lateral del carbono del carbonilo del
profármaco.

Un experto normal en la materia comprenderá que los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de diversos conjuntos de enfermedades. Un experto normal en la materia también comprenderá que cuando se usan los compuestos de la presente invención en el tratamiento de una enfermedad específica, los compuestos de la presente invención se pueden combinar con diversos agentes terapéuticos existentes usados para esa enfermedad.

Para el tratamiento de la artritis reumatoide, los compuestos de la presente invención se pueden combinar con agentes tales como inhibidores del TNF-\alpha tales como anticuerpos monoclonales anti-TNF y moléculas de inmunoglogulina receptoras del TNF (tales como Enbrel®), metotrexato en dosis bajas, lefunimida, hidroxicloroquinona, d-penicilamina, auranofina u oro por vía parenteral u oral.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes terapéuticos existentes para el tratamiento de la osteoartritis. Agentes adecuados para usarse en combinación incluyen agentes antiinflamatorios no esteroideos estándar (en los sucesivo, AINE (agentes antiinflamatorios no esteroideos) tales como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiónicos tales como naproxeno, flubiprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tales como ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas tales como fenilbutazona, salicilatos tales como la aspirina, inhibidores de COX-2 tales como celecoxib y rofecoxib, analgésicos y terapias intraarticulares tales como corticoesteroides y ácidos hialurónicos tales como hyalgan y synvisc.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes anticancerígenos tales como endostatina y angiostatina, daunomicina, cis-platino, etopósido, taxol, taxotere y alcaloides tales como vincristina y antimetabolitos tales como metotrexato.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes cardiovasculares tales como bloqueadores del canal del calcio, agentes reductores de lípidos tales como estatinas, fibratos, betabloqueantes, inhibidores de Ace, antagonistas del receptor de la Angiotensina 2 e inhibidores de la agregación plaquetaria.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes del SNC tales como antidepresivos (tales como sertralina), fármacos anti-Parkinson (tales como deprenil, L-dopa, requip, miratex, inhibidores de la MAOB (monoamino oxidasa B) tales como selegina y rasagilina, inhibidores de la comP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein (proteína de matriz oligomérica de cartílago)) tales como Tasmar, inhibidores A-2, inhibidores de la reabsorción de dopamina, antagonistas NMDA (N-metil-D-aspartato), agonistas de Nicotina, agonistas de Dopamina e inhibidores de la sintasa del óxido nítrico neuronal) y fármacos anti-Alzheimer tales como Aricept, tacrina, inhibidores de COX-2, propentofilina o metrifonato.

Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes de osteoporosis tales como droloxifeno o fosomax y con agentes inmunosupresores tales como FK-506 y rapamicina.

Descripción detallada de la invención

El siguiente esquema de reacción ilustra la preparación de los compuestos de la presente invención. A menos que se indique lo contrario, en los esquemas de reacción y en la exposición que sigue a continuación, R^{1}, R^{2} y R^{3} son tal y como se definieron anteriormente.

El esquema de reacción 1 muestra la síntesis de compuestos en los que R^{2} es hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}) o arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10}) y R^{3} es hidrógeno.

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Esquema 1

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En referencia al esquema 1, los compuestos con la fórmula I se preparan a partir de derivados de ácido hidroxámico con la fórmula II mediante la eliminación del grupo protector P^{3} de la hidroxiamida. Cuando P^{3} es bencilo, la eliminación del grupo protector de hidroxiamida se lleva a cabo mediante hidrogenólisis usando paladio catalítico sobre sulfato de bario en un disolvente polar a una temperatura de entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC, es decir, a temperatura ambiente, durante un período de entre aproximadamente 1 hora y aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. Cuando P^{3} es distinto de bencilo, la eliminación se facilita tal y como se describe en Greene y Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis" (Willey Interscience, 2ª Ed.) (1991), capítulo 2.

El compuesto de fórmula II se prepara a partir de un compuesto de fórmula III mediante la eliminación del grupo protector P^{1}, en el que P^{1} es tal y como se define a continuación. Cuando P^{1} es un grupo protector t-butoxi carbonilo, la eliminación se efectúa mediante el uso de un ácido en un disolvente inerte. Cuando P^{1} es distinto de t-butoxi carbonilo, la eliminación es tal y como se describe en Greene y Wuts, id. en págs. 397-405. Ácidos adecuados incluyen ácido clorhídrico y trifluoroacético, preferiblemente ácido clorhídrico. Disolventes adecuados incluyen cloruro de metileno, dietil éter o cloroformo, preferiblemente cloruro de metileno. La reacción se lleva a cabo a una temperatura que varía entre aproximadamente -25ºC y 50ºC; preferiblemente, la temperatura puede variar entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (es decir, temperatura ambiente). La reacción se conduce durante un período de entre aproximadamente 15 minutos y aproximadamente 2 horas, preferiblemente aproximadamente 30 minutos.

El derivado de ácido hidroxámico de fórmula III se prepara a partir de un compuesto de ácido carboxílico de fórmula IV mediante reacción con un derivado de hidroxilamina adecuadamente protegido con la fórmula P^{3}-ONH_{2}, en la que P^{3} es tal y como se define en Greene y Wuts, id., y hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio en presencia de una base, a temperatura ambiente, en un disolvente polar. Las bases adecuadas incluyen trietilamina, N-metilmorfolina o diisopropiletilamina, preferiblemente diisopropiletilamina. Disolventes adecuados incluyen THF, cloruro de metileno, N,N-dimetilformamida o N-metilpirrolidin-2-ona, preferiblemente cloruro de metileno. Grupos protectores P^{3} específicos incluyen bencilo, t-butildimetilsililo, trimetilsililo, 2-(trimetilsilil)etilo o alilo. La reacción antes citada se conduce durante un período de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas. La temperatura de la reacción antes citada varía entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 60ºC, preferiblemente entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (temperatura ambiente).

El ácido carboxílico de fórmula IV se prepara mediante la oxidación de un alcohol de fórmula V en presencia de ácido peryódico y de trióxido de cromo catalítico, en un disolvente polar. Disolventes adecuados incluyen acetonitrilo o agua, preferiblemente acetonitrilo húmedo (0,75 de volumen porcentual en agua). Las temperaturas adecuadas para la reacción antes citada varían entre aproximadamente -10ºC y aproximadamente 25ºC, preferiblemente la temperatura es aproximadamente 0ºC. La reacción se termina en el espacio de entre aproximadamente 10 minutos y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 0,5 horas. En Zhao y col., Tet. Lett., 39, 5323-5326 (1998), se describen condiciones de oxidación alternativas.

El alcohol de fórmula V se prepara a partir de un compuesto de fórmula VI mediante la eliminación de los grupos protectores en P^{2}, en el que P^{2} es tal y como se define a continuación. Cuando P^{2} es terc-butil dimetilsilil, la reacción se lleva a cabo mediante hidrólisis suave en presencia de ácido mineral acuoso diluido y de un disolvente tal como dietil éter. Ácidos minerales acuosos adecuados incluyen ácido clorhídrico o ácido sulfúrico diluidos, preferiblemente ácido clorhídrico 0,5 molar. La reacción se lleva a cabo a una temperatura que varía entre aproximadamente 0ºC y 50ºC; preferiblemente, la temperatura puede variar entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (es decir, temperatura ambiente). La reacción se conduce durante un período de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 48 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas.

El compuesto de fórmula VI, en el que R^{2} es alquilo (C_{1}-C_{6}) o arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10}), se prepara a partir de un compuesto de fórmula VII mediante la reacción del compuesto VII con un agente alquilante con la fórmula R^{2}-Z, en la que Z es bromo o yodo y una base fuerte tal como diisopropilamida de litio o (bis)trimetilsililamida de litio (preferiblemente diisopropilamida de litio) en un disolvente inerte tal como dietil éter o tetrahidrofurano (preferiblemente tetrahidrofurano). La reacción se lleva a cabo a una temperatura de entre -78ºC y 0ºC, preferiblemente a -78ºC durante un período de tiempo de entre 1 y 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas.

El compuesto de fórmula VII se prepara a partir de un compuesto de fórmula VIII mediante hidrogenación bajo una atmósfera de hidrógeno en presencia de un catalizador en un disolvente de reacción inerte. Los catalizadores adecuados incluyen paladio sobre sulfato de bario, paladio sobre carbono, hidróxido de paladio sobre carbono o sobre negro de carbono. El catalizador preferido es hidróxido de paladio sobre carbono. Los disolventes adecuados incluyen un alcohol tal como etanol, metanol o isopropanol, preferiblemente metanol. La reacción antes citada se puede llevar a cabo a una presión de entre aproximadamente 101,325 kPa (1 atmósfera) y 506,625 kPa (5 atmósferas), preferiblemente a aproximadamente 303,975 kPa (3 atmósferas). Las temperaturas adecuadas para la reacción antes citada varían entre aproximadamente 20ºC (temperatura ambiente) y aproximadamente 60ºC, preferiblemente la temperatura puede variar entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (es decir, temperatura ambiente). La reacción se termina en el espacio de entre aproximadamente 0,5 horas y aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. De forma alternativa, la reducción se puede llevar a cabo usando condiciones de disolución de metal o mediante el uso de L-selectride.

El compuesto de fórmula VIII se puede preparar a partir de un compuesto con la fórmula IX mediante el acoplamiento de Suzuki, preferiblemente mediante la reacción con un ácido borónico con la fórmula

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en presencia de un catalizador y de una base en un disolvente adecuado. Los catalizadores adecuados incluyen acetato de paladio (II), tetrakis(trifenilfosfeno)paladio y tetrakis[tris-(2-metoxifenil)-fosfino]paladio, preferiblemente tetrakis(trifenilfosfeno)paladio. Las bases adecuadas incluyen carbonato de sodio acuoso, carbonato de potasio acuoso o carbonato de cesio acuoso, preferiblemente carbonato de sodio acuoso. Disolventes adecuados incluyen éteres, tolueno y hexano, preferiblemente tolueno. Las temperaturas adecuadas para la reacción antes citada varían entre aproximadamente 20ºC (temperatura ambiente) y aproximadamente 110ºC, preferiblemente la temperatura puede variar entre aproximadamente 75ºC y aproximadamente 110ºC. La reacción se termina en el espacio de entre aproximadamente 0,5 horas y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas. Los acoplamientos de Suzuki son bien conocidos para los expertos en la técnica tal y como se describe en Suzuki, Pure Appl. Chem., 63, 419-422 (1991), Tetrahedron, 263 (1997) y Chem. Rev., 95, 2457-2483 (1995). Los ácidos borónicos también se pueden preparar mediante procedimientos bien conocidos para los expertos en la técnica, tales como los descritos en Caron y col., JOC, 63, 2054-2055 (1998).

Los compuestos con la fórmula VIII también se pueden preparar a partir de compuestos con la fórmula IX mediante la reacción con reactivos organometálicos con la fórmula R^{1}-M, en la que M es magnesio, litio, estaño, cinc, cobre o boro, en presencia de un catalizador de metal de transición apropiado tales como catalizadores basados en paladio o en níquel.

El compuesto de fórmula IX, en el que L es bromo o yodo, se puede preparar a partir de un compuesto de fórmula X mediante la reacción con una base, bromuro de fenilselenenilo y con un agente halogenante, seguido de oxidación en presencia de peróxido de hidrógeno. Las bases adecuadas incluyen bis(trimetilsilil)amida de litio o diisopropilamida de litio, preferiblemente bis(trimetilsilil)amida de litio. Agentes halogenantes adecuados incluyen 1,2-dibromotetracloroetano o N-yodosuccinamida, preferiblemente 1,2-dibromotetracloroetano. Las temperaturas adecuadas para la reacción antes citada varían entre aproximadamente -78ºC y aproximadamente -30ºC, preferiblemente la temperatura es aproximadamente -78ºC. La reacción se termina en el espacio de entre aproximadamente 0,5 horas y aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. La etapa de oxidación se lleva a cabo a una temperatura de entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 50ºC, preferiblemente a temperatura ambiente. La etapa de oxidación antes citada se termina en el espacio de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas. Disolventes adecuados para la etapa de oxidación incluyen cloruro de metileno. En Fray y col., JOC, 61, 3362-3374 (1996) se describen otras condiciones de la reacción antes citada.

Los compuestos con la fórmula X, en los que P^{1} y P^{2} son grupos protectores tal y como se describió anteriormente en Greene y Wuts, se conocen o se pueden obtener mediante procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica. En Yoda y col., Tetrahedron, 7(7), 2113-2116 (1996), se describe un ejemplo de un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula X en la que P^{1} es terc-butoxi carbonilo y P^{2} es t-butildimetilsililo. Grupos protectores P^{1} adecuados incluyen terc-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, metoxicarbonilo, 2-(trimetilsilil)etiloxicarbonilo, trifluoroacetilo o 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo. Grupos protectores P^{2} adecuados incluyen t-butildifenilsililo, bencilo, metoximetilo (MOM) o tetrahidropiranilo.

El esquema 2 muestra la síntesis de compuestos en los que R^{2} es hidrógeno y R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}) o arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10}).

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Esquema 2

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En referencia al esquema 2, los compuestos con la fórmula I se preparan a partir de derivados de ácido hidroxámico con la fórmula XI mediante la eliminación del grupo protector P^{3} de la hidroxiamida. Cuando P^{3} es bencilo, la eliminación del grupo protector de hidroxiamida se lleva a cabo mediante hidrogenólisis usando paladio catalítico sobre sulfato de bario en un disolvente polar a una temperatura de entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC, es decir, a temperatura ambiente, durante un período de entre aproximadamente 1 hora y aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. Cuando P^{3} es distinto de bencilo, la eliminación se facilita tal y como se describió anteriormente en Greene y Wuts.

El compuesto de fórmula XI se prepara a partir de un compuesto de fórmula XII mediante tratamiento con un ácido en un disolvente inerte. Ácidos adecuados incluyen ácido clorhídrico y trifluoroacético, preferiblemente ácido clorhídrico. Disolventes adecuados incluyen cloruro de metileno, dietil éter o cloroformo, preferiblemente cloruro de metileno. La reacción se lleva a cabo a una temperatura que varía entre aproximadamente -25ºC y 50ºC; preferiblemente, la temperatura puede variar entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (es decir, temperatura ambiente). La reacción se conduce durante un período de entre aproximadamente 15 minutos y aproximadamente 2 horas, preferiblemente aproximadamente 30 minutos.

El derivado de ácido hidroxámico de fórmula XII se prepara a partir de un compuesto de ácido carboxílico de fórmula XIII mediante reacción con un derivado de hidroxilamina adecuadamente protegido con la fórmula P^{3}-ONH_{2}, en la que P^{3} es tal y como se define en Greene y Wuts, id., y hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio en presencia de una base, a temperatura ambiente, en un disolvente polar. Las bases adecuadas incluyen trietilamina, N-metilmorfolina o diisopropiletilamina, preferiblemente diisopropiletilamina. Disolventes adecuados incluyen THF, cloruro de metileno, N,N-dimetilformamida o N-metilpirrolidin-2-ona, preferiblemente cloruro de metileno. Grupos protectores P^{3} específicos incluyen bencilo, t-butildimetilsililo, trimetilsililo, 2-(trimetilsilil)etilo o alilo. La reacción antes citada se conduce durante un período de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas. La temperatura de la reacción antes citada varía entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 60ºC, preferiblemente aproximadamente 20ºC hasta aproximadamente 25ºC (temperatura ambiente).

Los compuestos de fórmula XIII se preparan a partir de compuestos de fórmula XIV mediante hidrogenación bajo una atmósfera de hidrógeno en presencia de un catalizador en un disolvente de reacción inerte. Los catalizadores adecuados incluyen paladio sobre sulfato de bario, paladio sobre carbono, hidróxido de paladio sobre carbono o sobre negro de carbono. El catalizador preferido es hidróxido de paladio sobre carbono. Los disolventes adecuados incluyen un alcohol tal como etanol, metanol o isopropanol, preferiblemente metanol. La reacción antes citada se puede llevar a cabo a una presión de entre aproximadamente 101,325 kPa (1 atmósfera) y 506,625 kPa (5 atmósferas), preferiblemente a aproximadamente 303,975 kPa (3 atmósferas). Las temperaturas adecuadas para la reacción antes citada varían entre aproximadamente 20ºC (temperatura ambiente) y aproximadamente 60ºC, preferiblemente la temperatura puede variar entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (es decir, temperatura ambiente). La reacción se termina en el espacio de entre aproximadamente 0,5 horas y aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. De forma alternativa, la reducción se puede llevar a cabo usando condiciones de disolución de metal.

El compuesto de fórmula XIV se puede preparar a partir de un compuesto con la fórmula XV mediante el acoplamiento de Suzuki, preferiblemente mediante la reacción con un ácido borónico con la fórmula

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en presencia de un catalizador y de una base en un disolvente adecuado. Los catalizadores adecuados incluyen acetato de paladio (II), tetrakis(trifenilfosfeno)paladio y tetrakis[tris-(2-metoxifenil)-fosfino]paladio, preferiblemente tetrakis(trifenilfosfeno)paladio. Las bases adecuadas incluyen carbonato de sodio acuoso, carbonato de potasio acuoso o carbonato de cesio acuoso, preferiblemente carbonato de sodio acuoso. Disolventes adecuados incluyen éteres, tolueno y hexano, preferiblemente tolueno. Las temperaturas adecuadas para la reacción antes citada varían entre aproximadamente 20ºC (temperatura ambiente) y aproximadamente 110ºC, preferiblemente la temperatura puede variar entre aproximadamente 75ºC y aproximadamente 110ºC. La reacción se termina en el espacio de entre aproximadamente 0,5 horas y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas.

Los compuestos con la fórmula XIV también se pueden preparar a partir de compuestos con la fórmula XV mediante la reacción con reactivos organometálicos con la fórmula R^{1}-M, en la que M es magnesio, litio, estaño, cinc, cobre o boro, en presencia de un catalizador de metal de transición apropiado tales como catalizadores basados en paladio o en níquel.

Los compuestos de fórmula XV, en la que L es bromo o yodo, se pueden preparar a partir de un compuesto de fórmula XVI mediante la reacción con una base, bromuro de fenilselenenilo y con un agente halogenante, seguido de oxidación en presencia de peróxido de hidrógeno. Las bases adecuadas incluyen bis(trimetilsilil)amida de litio o diisopropilamida de litio, preferiblemente bis(trimetilsilil)amida de litio. Agentes halogenantes adecuados incluyen 1,2-dibromotetracloroetano o N-yodosuccinamida, preferiblemente 1,2-dibromotetracloroetano. Las temperaturas adecuadas para la reacción antes citada varían entre aproximadamente -78ºC y aproximadamente -30ºC, preferiblemente la temperatura es aproximadamente -78ºC. La reacción se termina en el espacio de entre aproximadamente 0,5 horas y aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. La etapa de oxidación se lleva a cabo a una temperatura de entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 50ºC, preferiblemente a temperatura ambiente. La etapa de oxidación antes citada se termina en el espacio de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas. Disolventes adecuados para la etapa de oxidación incluyen cloruro de metileno. En Fray y col., anteriormente, se describen otras condiciones de la reacción antes citada.

Los compuestos de fórmula XVI se preparan a partir de compuestos de fórmula XVII mediante la reacción de compuestos de fórmula XVII con dicarbonato de di-terc-butilo en presencia de una base tal como trietilamina o diisopropiletilamina, preferiblemente trietilamina y en presencia de una cantidad catalítica de 4-dimetilaminopiridina en un disolvente inerte tal como cloruro de metileno, cloroformo o tetrahidrofurano, preferiblemente tetrahidrofurano. La reacción se lleva a cabo a una temperatura de entre 0ºC y 50ºC, preferiblemente a aproximadamente 25ºC, durante 1 a 48 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas.

Los compuestos de fórmula XVII se preparan a partir de compuestos de fórmula XVIII mediante el calentamiento de los compuestos de fórmula XVIII en agua o en una mezcla de tetrahidrofurano, metanol y agua, constituida de forma tal que el compuesto XVIII sea soluble. La reacción se lleva a cabo a una temperatura de 50ºC a 180ºC durante un período de tiempo de 1 a 48 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas.

Los compuestos de fórmula XVIII se preparan a partir de compuestos de fórmula XIX mediante la reacción del derivado de aminoácido de fórmula XIX con acrilato de metilo y con una base tal como carbonato de potasio, carbonato de cesio o hidróxido de cesio, preferiblemente carbonato de potasio, en presencia de cloruro de bencil trietilamonio en un disolvente tal como acetonitrilo o cloruro de metileno, preferiblemente acetonitrilo. La reacción se lleva a cabo a una temperatura de entre 0ºC y 50ºC, preferiblemente a aproximadamente 25ºC, durante 1 a 24 horas, preferiblemente aproximadamente 2 horas.

Los compuestos con la fórmula XIX se conocen o se pueden producir mediante procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica.

El esquema 3 muestra la síntesis de compuestos de la presente invención en los que R^{2} y R^{3} son de forma independiente alquilo (C_{1}-C_{6}) o arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10}).

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Esquema 3

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En referencia al esquema 3, los compuestos con la fórmula I se preparan a partir de derivados de ácido hidroxámico con la fórmula XX mediante la eliminación del grupo protector P^{3} de la hidroxiamida. Cuando P^{3} es bencilo, la eliminación del grupo protector de hidroxiamida se lleva a cabo mediante hidrogenólisis usando paladio catalítico sobre sulfato de bario, en un disolvente polar a una temperatura de entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC, es decir, a temperatura ambiente, durante un período de entre aproximadamente 1 hora y aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. Cuando P^{3} es distinto de bencilo, la eliminación se facilita tal y como se describió anteriormente en Greene y Wuts.

Los derivados de ácido hidroxámico de fórmula XX se preparan a partir de compuestos de ácido carboxílico de fórmula XXI mediante reacción con un derivado de hidroxilamina adecuadamente protegido con la fórmula P^{3}-ONH_{2}, en la que P^{3} es tal y como se define en Greene y Wuts, id., y hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio en presencia de una base, a temperatura ambiente, en un disolvente polar. Las bases adecuadas incluyen trietilamina, N-metilmorfolina o diisopropiletilamina, preferiblemente diisopropiletilamina. Disolventes adecuados incluyen THF, cloruro de metileno, N,N-dimetilformamida o N-metilpirrolidin-2-ona, preferiblemente cloruro de metileno. Grupos protectores P^{3} específicos incluyen bencilo, t-butildimetilsililo, trimetilsililo, 2-(trimetilsilil)etilo o alilo. La reacción antes citada se conduce durante un período de entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas. La temperatura de la reacción antes citada varía entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 60ºC, preferiblemente entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (temperatura ambiente).

Los compuestos de fórmula XXI se preparan a partir de compuestos de fórmula XXII mediante la reacción de los compuestos de fórmula XXII con una base tal como hidróxido de litio, hidróxido de sodio o hidróxido de potasio, preferiblemente hidróxido de litio, en una mezcla de agua, metanol y tetrahidrofurano (constituida de forma tal que el compuesto XXII sea soluble). La reacción se lleva a cabo a una temperatura de reacción de 20ºC a 60ºC, preferiblemente a aproximadamente 25ºC durante 1 a 48 horas, preferiblemente aproximadamente 2 horas.

Los compuestos de fórmula XXII se preparan a partir de compuestos de fórmula XXIII mediante tratamiento con un ácido en un disolvente inerte. Ácidos adecuados incluyen ácido clorhídrico y trifluoroacético, preferiblemente ácido clorhídrico. Disolventes adecuados incluyen cloruro de metileno, dietil éter o cloroformo, preferiblemente cloruro de metileno. La reacción se lleva a cabo a una temperatura que varía entre aproximadamente -25ºC y 50ºC; preferiblemente, la temperatura puede variar entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC (es decir, temperatura ambiente). La reacción se conduce durante un período de entre aproximadamente 15 minutos y aproximadamente 2 horas, preferiblemente aproximadamente 30 minutos.

Los compuestos de fórmula XXIII se preparan a partir de compuestos de fórmula XXIV mediante la reacción de los compuestos de fórmula XXIV con un agente alquilante con la fórmula R^{2}-Z, en la que Z es bromo o yodo y con una base fuerte tal como diisopropilamida de litio o (bis)trimetilsililamida de litio (preferiblemente diisopropilamida de litio) en un disolvente inerte tal como dietil éter o tetrahidrofurano (preferiblemente tetrahidrofurano). La reacción se lleva a cabo a una temperatura de entre -78ºC y 0ºC, preferiblemente a -78ºC durante un período de tiempo de entre 1 y 24 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas.

Los compuestos de fórmula XXIV se preparan a partir de compuestos de fórmula XIII mediante la reacción de compuestos de fórmula XIII con yoduro de metilo y con una base tal como carbonato de sodio, carbonato de potasio o carbonato de cesio, preferiblemente carbonato de cesio, en un disolvente inerte tal como dimetilformamida o acetona, preferiblemente dimetilformamida. La reacción se conduce a una temperatura de 0ºC a 50ºC, preferiblemente a aproximadamente 25ºC. Tiempo de reacción: 1 a 48 horas, preferiblemente aproximadamente 16 horas.

Los compuestos con la fórmula I que son básicos en su estado natural son capaces de formar una amplia variedad de sales diferentes con distintos ácidos inorgánicos y orgánicos. Aunque dichas sales deben ser farmacéuticamente aceptables para la administración a animales, en la práctica a menudo es deseable aislar inicialmente un compuesto con la fórmula I de la mezcla de reacción como una sal no aceptable farmacéuticamente y a continuación simplemente convertir ésta última en el compuesto de base libre mediante el tratamiento con un reactivo alcalino y convertir, posteriormente, la base libre en una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido de los compuestos base de la presente invención se preparan fácilmente mediante el tratamiento del compuesto base con una cantidad sustancialmente equivalente del ácido mineral u orgánico elegido en un medio disolvente acuoso o en un disolvente orgánico adecuado tal como metanol o etanol. Tras una cuidadosa evaporación del disolvente, se obtiene la sal sólida deseada.

Los ácidos que se usan para preparar las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos base de la presente invención, son aquellos que forman sales de adición de ácido no tóxicas, por ejemplo, sales que contienen aniones farmacéuticamente aceptables, tales como sales de aniones clorhídrico, bromídrico, yodhídrico, nitrato, sulfato o bisulfato, fosfato o fosfato ácido, acetato, lactato, citrato o citrato ácido, tartrato o bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato y sales de palmoato [es decir, 1, 1'-metilen-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)].

Aquellos compuestos con la fórmula I que también son ácidos en su estado natural, son capaces de formar sales de base con distintos cationes farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de dichas sales incluyen las sales de metales alcalinos o las sales de metales alcalinotérreos y especialmente, las sales de sodio y de potasio. Todas estas sales se preparan mediante técnicas convencionales. Las bases químicas que se usan como reactivos para preparar las sales de base farmacéuticamente aceptables de la presente invención son aquellas que forman sales de base no tóxicas con los compuestos ácidos de fórmula I descritos en la presente memoria descriptiva. Estas sales de base no tóxicas incluyen a aquellas derivadas de cationes farmacéuticamente aceptables tales como sodio, potasio, calcio y magnesio, etc. Estas sales se pueden preparar fácilmente mediante el tratamiento de los compuestos ácidos correspondientes con una disolución acuosa que contiene los cationes farmacéuticamente aceptables deseados y evaporando a continuación la disolución resultante hasta sequedad, preferiblemente a presión reducida. De forma alternativa, también se pueden preparar mediante la mezcla de disoluciones alcanólicas inferiores de los compuestos ácidos con el alcóxido de metal alcalino deseado y evaporando a continuación la disolución resultante hasta sequedad de la misma forma que anteriormente. En cada caso, preferiblemente se emplean cantidades estequiométricas de reactivos para asegurar la finalización de la reacción y rendimientos de producto máximos.

La capacidad de los compuestos de fórmula I o de sus sales farmacéuticamente aceptables (también denominados en lo sucesivo como compuestos de la presente invención) para inhibir metaloproteinasas o reprolisina de mamífero y, consecuentemente, demostrar su eficacia para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por metaloproteinasa o por la producción del factor de necrosis tumoral se muestra mediante los siguientes ensayos de prueba in vitro.

Ensayo biológico Inhibición de colagenasa humana (MMP-1)

La colagenasa humana recombinante se activa con tripsina. La cantidad de tripsina se optimiza para cada lote de colagenasa-1, aunque una reacción típica usa la siguiente proporción: 5 \mug de tripsina por 100 \mug de colagenasa. La tripsina y la colagenasa se incuban a temperatura ambiente durante 10 minutos y a continuación se añade un exceso de cinco veces (50 mg/10 mg de tripsina) de inhibidor de tripsina de soja.

Las disoluciones madre (10 mM) de inhibidores se prepararon en dimetilsulfóxido y a continuación se diluyeron usando el siguiente esquema:

10 mM ------> 120 \muM ------> 12 \muM ------> 1,2 \muM ------> 0,12 \muM

A continuación se añaden por triplicado veinticinco microlitros de cada concentración a una microplaca de fluorescencia de 96 pocillos apropiada. La concentración final de inhibidor será una dilución 1:4 después de la adición de enzima y sustrato. Los controles positivos (enzima, sin inhibidor) se establecen en los pocillos D7-D12 y los controles negativos (sin enzima, sin inhibidor) se establecen en los pocillos D1-D6.

La colagenasa-1 se diluye hasta 240 ng/ml y a continuación se añaden 25 ml a los pocillos apropiados de la microplaca para fluorescencia. La concentración final de colagenasa en el ensayo es de 60 ng/ml.

El sustrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) se prepara como disolución madre 5 mM en dimetilsulfóxido y a continuación se diluye hasta 20 \muM en tampón de ensayo. El ensayo se inicia mediante la adición de 50 ml de sustrato por pocillo de la microplaca de fluorescencia para dar una concentración final 10 mM.

Las lecturas de fluorescencia (excitación a 360 nm, emisión a 460 nm) se toman a tiempo 0 y a continuación a intervalos de 20 minutos. El ensayo se conduce a temperatura ambiente con un tiempo de ensayo típico de 3 horas.

A continuación se representa la fluorescencia frente al tiempo tanto para el blanco como para las muestras que contienen colagenasa (los datos procedentes de determinaciones por triplicado se promedian). Para determinar los valores de CI_{50}, se escoge un punto de tiempo que proporcione una buena señal (al menos cinco veces sobre la del blanco) y que esté sobre la parte lineal de la curva (por lo general alrededor de 120 minutos). El tiempo cero se usa como blanco para cada compuesto en cada concentración y estos valores se restan de los datos de 120 minutos. Los datos se representan como concentración de inhibidor frente a % de control (fluorescencia del inhibidor dividido entre fluorescencia de la colagenasa sola x 100). Las CI_{50} se determinan a partir de la concentración de inhibidor que da una señal que es el 50% de la del control.

Si se informa que las CI_{50} son menores que 0,03 mM, a continuación se ensayan los inhibidores a concentraciones de 0,3 mM, 0,03 mM y 0,003 mM.

Inhibición de gelatinasa (MMP-2)

Durante 16-18 horas se activa gelatinasa humana recombinante de 72 kD (MMP-2, gelatinasa A) con acetato p-aminofenil-mercúrico 1 mM (preparada a partir de disolución madre 100 mM recién preparada en NaOH 0,2 N) a 4ºC, meciendo suavemente.

Se diluyen en serie disoluciones madre de inhibidores 10 mM en dimetilsulfóxido en tampón de prueba (TRIS 50 mM, pH 7,5, NaCI 200 mM, CaCl_{2} 5 mM, ZnCl_{2} 20 \muM y 0,02% de BRIJ-35 (vol./vol.)) usando el siguiente esquema:

10 mM ------> 120 \muM ------> 12 \muM ------> 1,2 \muM ------> 0,12 \muM

Según sea necesario, se hacen diluciones adicionales siguiendo este mismo esquema. En cada ensayo se realizan un mínimo de cuatro concentraciones de inhibidor por cada compuesto. A continuación se añaden 25 \muL de cada concentración a pocillos por triplicado de una microplaca de fluorescencia negra de 96 pocillos de fondo en U. Como el volumen de ensayo final es de 100 \muL, las concentraciones finales de inhibidor son el resultado de una dilución adicional 1:4 (es decir, 30 \muM ------> 3 \muM ------> 0,3 \muM ------> 0,03 \muM, etc.). También se prepararon por triplicado un blanco (sin enzima, sin inhibidor) y un control positivo de enzima (con enzima, sin inhibidor).

La enzima activada se diluye hasta 100 ng/mL en tampón de ensayo, se añaden 25 \muL por pocillo a los pocillos apropiados de la microplaca. La concentración de enzima final en el ensayo es de 25 ng/mL (0,34 mM).

Una disolución madre cinco mM en dimetilsulfóxido de sustrato (Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH_{2}) se diluye en tampón de ensayo hasta 20\muM. El ensayo se inicia mediante la adición de 50 \muL de sustrato diluido que produce una concentración de ensayo final 10 \muM de sustrato. A tiempo cero, la lectura de fluorescencia (excitación a 320; emisión a 390) se toma inmediatamente y las lecturas posteriores se toman cada quince minutos a temperatura ambiente con un lector de placas multipocillos PerSeptive Biosystems CytoFluor con la ganancia situada a 90 unidades.

El valor medio de fluorescencia de la enzima y del blanco se representa frente al tiempo. Para las determinaciones de la CI_{50} se escoge un punto de tiempo temprano sobre la parte lineal de esta curva. El punto de tiempo cero para cada compuesto en cada concentración se resta del último punto de tiempo y a continuación se expresa el dato como proporción porcentual de enzima de control (fluorescencia del inhibidor dividida entre fluorescencia del control positivo de enzima x 100). Los datos se representan como concentración de inhibidor frente a proporción porcentual de control de enzima. Las CI_{50} se definen como la concentración de inhibidor que da una señal que es el 50% de la del control positivo de enzima.

Inhibición de la actividad de la estromelisina (MMP-3)

Durante 20-22 horas se activa estromelisina humana recombinante (MMP-3, estromelisina-1) con acetato p-aminofenil-mercúrico 2 mM (preparada a partir de disolución madre 100 mM recién preparada en NaOH 0,2 N) a 37ºC.

Se diluyen en serie disoluciones madre 10 mM en dimetilsulfóxido de inhibidores en tampón de prueba (TRIS 50 mM, pH 7,5, NaCI 150 mM, CaCl_{2} 10 mM y 0,05% de BRIJ-35 (vol./vol.)) usando el siguiente esquema:

10 mM ------> 120 \muM ------> 12 \muM ------> 1,2 \muM ------> 0,12 \muM

La enzima activada se diluye hasta 200 ng/mL en tampón de ensayo, se añaden 25 \muL por pocillo a los pocillos apropiados de la microplaca. La concentración de enzima final en el ensayo es de 50 ng/mL (0,875 mM).

Una disolución madre diez mM en dimetilsulfóxido de sustrato (Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH_{2}) se diluye en tampón de ensayo hasta 6 \muM. El ensayo se inicia mediante la adición de 50 \muL de sustrato diluido que produce una concentración de ensayo final 3 \muM de sustrato. A tiempo cero, la lectura de fluorescencia (excitación a 320; emisión a 390) se toma inmediatamente y las lecturas posteriores se toman cada quince minutos a temperatura ambiente con un lector de placas multipocillos PerSeptive Biosystems CytoFluor con la ganancia situada a 90 unidades.

El valor medio de fluorescencia de la enzima y del blanco se representa frente al tiempo. Para las determinaciones de la CI_{50} se escoge un límite de tiempo temprano sobre la parte lineal de esta curva. El punto de tiempo cero para cada compuesto en cada dilución se resta del último punto de tiempo y a continuación se expresa el dato como proporción porcentual de enzima de control (fluorescencia del inhibidor dividida entre fluorescencia del control positivo de enzima x 100). Los datos se representan como concentración de inhibidor frente a proporción porcentual de control de enzima. Las CI_{50} se definen como la concentración de inhibidor que da una señal que es el 50% de la del control positivo de enzima.

Inhibición de MMP-13

La MMP-13 humana recombinante se activa con APMA 2mM (acetato p-aminofenil mercúrico (p-aminophenyl mecuric acetate)) durante 2,0 horas, a 37ºC y se diluye hasta 240 ng/ml en tampón de ensayo (Tris 50 mM, pH 7,5, cloruro de sodio 200 mM, cloruro de calcio 5 mM, cloruro de cinc 20 mM, 0,02% de brij 35). Se añaden veinticinco microlitros de enzima diluida por pocillo de una microplaca de fluorescencia de 96 pocillos. A continuación, la enzima se diluye en una proporción 1:4 mediante la adición de inhibidor y de sustrato para dar una concentración final en el ensayo de 60 ng/ml.

Las disoluciones madre (10 mM) de inhibidores se preparan en dimetilsulfóxido y a continuación se diluyen en tampón de ensayo de acuerdo con el esquema de inhibición del inhibidor para la inhibición de colagenasa-1 humana (MMP-1): se añaden por triplicado veinticinco microlitros de cada concentración a la microplaca para fluorescencia. Las concentraciones finales en el ensayo son 30 mM, 3 mM, 0,3 mM y 0,03 mM.

El sustrato (Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) se prepara para la inhibición de colagenasa humana (MMP-1) y se añaden 50 \mul a cada pocillo para dar una concentración final de ensayo de 10 \muM. Las lecturas de fluorescencia (excitación a 360 nm; emisión a 450 nm) se toman a tiempo 0 y cada 5 minutos durante 1 hora.

Se establecen controles positivos y controles negativos por triplicado tal y como se detalla en el ensayo MMP-1.

Las CI_{50} se determinan de acuerdo con la inhibición de colagenasa humana (MMP-1). Si se informa que las CI_{50} son menores que 0,03 mM, a continuación se ensayan inhibidores a concentraciones finales de 0,3 mM, 0,03 mM, 0,003 mM y 0,0003 mM.

Inhibición de producción de TNF

La capacidad de los compuestos o de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de inhibir la producción de TNF y, consecuentemente, demostrar su eficacia para el tratamiento de enfermedades que implican la producción de TNF se muestra mediante el siguiente ensayo in vitro:

A partir de sangre humana anticoagulada, se aislaron células mononucleares humanas usando una técnica de separación Ficoll-hypaque de una etapa. (2) Las células mononucleares se lavaron tres veces en solución salina equilibrada de Hanks (HBSS (Hanks balanced salt solution)) con cationes divalentes y se pusieron de nuevo en suspensión hasta una densidad de 2 x 10^{6} /ml en HBSS que contiene 1% de BSA (albúmina sérica bovina (bovine serum albumin)). Los contajes diferenciales determinados usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que los monocitos variaban entre el 17 y el 24% de las células totales en estas preparaciones.

Se prepararon alícuotas dentro de placas de 96 pocillos de fondo plano (Costar) a partir de 180 \mul de la suspensión de células. Las adiciones de compuestos y de LPS (concentración final de 100 ng/ml) dieron un volumen final de 200 \mul. Todas las condiciones se llevaron a cabo por triplicado. Después de unas cuatro horas de incubación a 37ºC en un incubador de CO_{2} humidificado, se eliminaron las placas y se centrifugaron (10 minutos a aproximadamente 250 x g) y los sobrenadantes se eliminaron y se sometieron a ensayo para TNF-\alpha usando el Kit R&D ELISA.

Inhibición de producción de TNF-\alpha soluble

La capacidad de los compuestos o de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de inhibir la liberación celular de TNF-\alpha y, consecuentemente, demostrar su eficacia para el tratamiento de enfermedades que implican la desregulación de TNF-\alpha soluble se muestra mediante el siguiente ensayo in vitro:

Procedimiento para la evaluación de TNF-\alpha recombinante que convierte la expresión de actividad de enzima de TACE recombinante

Un fragmento de ADN codificador para la secuencia de señal, preprodominio, prodominio y dominio catalítico de TACE (aminoácidos 1-473), se puede amplificar mediante la reacción en cadena de la polimerasa usando como cadena de ADN molde un banco de ADNc de pulmón humano. A continuación, el fragmento amplificado se clona en vector pFastBac. La secuencia de ADN del inserto se confirma para ambas hebras. Un bácmido preparado usando pFastBac en E. coli DH10Bac se transfecta a células de insecto SF9. A continuación, se amplifican las partículas de virus hasta las etapas P1, P2, P3. El virus P3 se infecta tanto en células de insecto SF9 y como en células de insecto High Five y se cultiva a 27ºC durante 48 horas. El medio se recoge y se usa para ensayos y para purificación adicional.

Preparación de sustrato inactivado fluorescente

Se prepara un sustrato modelo de TNF-\alpha peptídico (LY-LeucinaAlaninaGlutaminaAlaninaValinaArgininaSerina-SerinaLisina(CTMR)-Arginina (LY= amarillo lucifer (Lucifer Yellow); CTMR= Carboxitetrametil-Rodamina)) y la concentración se estima mediante absorbancia a 560 nm (E_{560}, 60.000 M-1CM-1) de acuerdo con el procedimiento de Geoghegan, KF, "Improved method for converting an unmodified peptide to an energy-transfer substrate for a proteinase." Bioconjugate Chem. 7, 385-391 (1995). Este péptido abarca la región de corte sobre pro-TNF que se escinde in vivo por TACE.

Expresión de TACE recombinante

Un fragmento de ADN codificador para la secuencia de señal, preprodominio, prodominio y dominio catalítico de TACE (aminoácidos 1-473), se amplifica mediante la reacción en cadena de la polimerasa usando como cadena de ADN molde un banco de ADNc de pulmón humano. El fragmento amplificado se clona en vector pFastBac. La secuencia de ADN del inserto se confirma para ambas hebras. Un bácmido preparado usando pFastBac en E. coli DH10Bac se transfecta a células de insecto SF9. Las partículas de virus se amplificaron hasta las etapas P1, P2, P3. El virus P3 se infecta tanto en células de insecto SF9 y como en células de insecto High Five y se cultiva a 27ºC durante 48 horas. El medio se recoge y se usa para ensayos y para purificación adicional.

Reacción de la enzima

La reacción, llevada a cabo en una placa de 96 pocillos (Dynatech), se comprende de 70 \mul de disolución tampón (Hepes-HCl 25 mM, pH 7,5, más ZnCl_{2} 20 \muM), 10 \mul de sustrato inactivado fluorescente 100 \muM, 10 \mul de una disolución de DMSO (5%) del compuesto de ensayo y una cantidad de enzima r-TACE que causará un 50% de escisión en 60 minutos, en un volumen total de 100 \mul. La especificidad de la escisión de la enzima en el enlace amida entre la alanina y la valina se verifica mediante HPLC y espectrometría de masas. Las velocidades iniciales de escisión se controlan mediante la medida de la velocidad de aumento en fluorescencia a 530 nm (excitación a 409 nm) durante 30 minutos. El experimento se controla del modo siguiente: 1) por la fluorescencia de fondo del sustrato; 2) por la fluorescencia del sustrato completamente escindido; 3) por la fluorescencia en estado estacionario o por aumento a partir de disoluciones que contienen el compuesto de ensayo.

Los datos se analizan del modo siguiente. Las velocidades de las reacciones "de control" que no contienen compuesto de ensayo se promediaron para establecer el valor del 100%. La velocidad de reacción en presencia del compuesto de ensayo se comparó con la velocidad de reacción en ausencia del compuesto y se tabuló como "proporción porcentual de control que no contiene el compuesto de ensayo". Los resultados se representan como "% de control" frente al logaritmo de la concentración de compuesto y un punto máximo medio o un valor de CI_{50} determinado.

Todos y cada uno de los compuestos de la presente invención tienen CI_{50} menor de 1 \muM, preferiblemente menor que 50 nM. Los compuestos más preferidos de la presente invención son al menos 100 veces menos potentes frente a r-MMP-1 que en el ensayo de TACE anterior.

Ensayo de monocito humano

A partir de sangre humana anticoagulada, se aíslan células mononucleares humanas usando una técnica de separación Ficoll-hypaque de una etapa. (2) Las células mononucleares se lavan tres veces en solución salina equilibrada de Hanks (HBSS (Hanks balanced salt solution)) con cationes divalentes y se ponen de nuevo en suspensión hasta una densidad de 2 x 10^{6} /ml en HBSS que contiene 1% de BSA. Los contajes diferenciales determinados usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que los monocitos variaban entre el 17 y el 24% de las células totales en estas preparaciones.

Ensayo de agrecanasa

Los condrocitos porcinos primarios obtenidos a partir de cartílago de articulación se aíslan mediante digestión secuencial con tripsina y colagenasa seguida por digestión con colagenasa durante la noche y se recubrieron a 2 x 10^{5} células por pocillo en placas de 48 pocillos con 5 \muCi/ml de azufre ^{35}S (1000 Ci/mmol) en placas recubiertas con colágeno de tipo I. Se permite que se incorporen células a la etiqueta dentro de su proteoglicano de matriz (aproximadamente 1 semana) a 37ºC, bajo una atmósfera con 5% de CO_{2}.

La noche antes de iniciar los ensayos, las monocapas de condrocito se lavaron dos veces en DMEM/ 1% PSF/G y (DMEM= medio Eagle modificado por Dulbecco (Dulbecco's modified Eagle medium)) a continuación se permitió que incubasen en DMEM puro/ 1% SBF (suero bovino fetal) toda la noche.

La mañana siguiente se lavan los condrocitos una vez en DMEM/ 1% PSF/G (fungicida de penicilina-estreptomicina/G (penicillin-streptomycin-fungicide/G)). Se permite que el lavado final se realice sobre las placas en el incubador mientras se hacen las diluciones.

Los medios y las diluciones se pueden hacer tal y como se describe en la tabla siguiente.

\newpage

Medio de control	DMEM sólo (medio de control)
Medio IL-1	DMEM + IL-1 (5 ng/ml)
Diluciones del Fármaco	\begin{minipage}[t]{110mm}Preparar todos los compuestos madre a una concentración 10 mM en DMSO.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm} Preparar una disolución madre 100 \mu M de cada compuesto en DMEM en una placa de 96 pocillos.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm} Almacenar en el congelador toda la noche.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm} Al día siguiente, realizar diluciones en serie en DMEM con IL-1 a 5 \mu M, 500 nM y 50 nM.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm} Aspirar el lavado final de los pocillos y añadir 50 \mu l de compuesto de las diluciones anteriores a 450 \mu l de medio IL-1 en los pocillos apropiados de las placas de 48 pocillos.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm} Concentraciones finales de compuesto iguales a 500 nM, 50 nM y 5 nM.\end{minipage}
	\begin{minipage}[t]{110mm} Todas las muestras se llevaron a cabo por triplicado con muestras sólo de Control y sólo de IL-1 en cada placa.\end{minipage}

Las placas se etiquetan y sólo se usan los 24 pocillos interiores de la placa. En una de las placas, varias de las columnas se designan como IL-1 (sin fármaco) y como Control (sin IL-1, sin medicamento). Estas columnas de control se recuentan periódicamente para controlar la liberación de 35S-proteoglicano. Los medios de control e IL-1 se añaden a los pocillos (450 \mul) seguidos por el compuesto (50 \mul) de forma que se inicia el ensayo. Las placas se incuban a 37ºC, con una atmósfera con 5% de CO_{2}.

A un 40-50% de liberación (cuando las CPM (cuentas por minuto) del medio IL-1 son 4-5 veces el medio de control), tal y como se calcula mediante el contador de centelleo líquido (LSC (liquid scintillation counting)) de muestras del medio, se termina el ensayo (9-12 horas). El medio se elimina de todos los pocillos y se pone en tubos para el contador de centelleo. Se añade el material de centelleo y se obtienen los conteos radioactivos (LSC). Para solubilizar las capas de células, se añaden a cada pocillo 500 \mul de tampón de digestión con papaina (Tris 0,2 M, pH 7,0, EDTA 5 mM, DTT 5 mM, y 1 mg/ml de papaina). Las placas con la disolución de digestión se incuban a 60ºC durante la noche. Al día siguiente se elimina la capa de células de las placas y se pone en tubos para el contador de centelleo. A continuación se añade el material de centelleo y se realiza el conteo (LSC).

Se determina el porcentaje de cuentas producidas en cada pocillo del total presente. Las medias de los triplicados se hacen con el control de fondo restado de cada pocillo. El porcentaje de inhibición del compuesto se basa en las muestras IL-1 como 0% de inhibición (100% de conteos totales).

Para la administración a mamíferos, incluyendo a humanos, para la inhibición de metaloproteinasas de matriz o para la producción del factor de necrosis tumoral (TNF (tumor necrosis factor)), se pueden usar una diversidad de rutas convencionales, incluyendo las vías oral, parenteral (por ejemplo, intravenosa, intramuscular o subcutánea), bucal, anal y tópica. En general, los compuestos de la presente invención (en lo sucesivo, también conocidos como los compuestos activos) se administrarán en dosis entre aproximadamente 0,1 y 25 mg/kg de peso corporal del sujeto a tratar por día, preferiblemente entre aproximadamente 0,3 y 5 mg/kg. Preferiblemente el compuesto activo se administrará por vía oral o parenteral. Sin embargo, alguna variación en la dosificación tendrá lugar necesariamente dependiendo del estado del sujeto a tratar. La persona responsable de la administración determinará, en cualquier caso, la dosis apropiada para el sujeto individual.

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en una amplia variedad de distintas formas de dosificación, en general, los compuestos terapéuticamente eficaces de la presente invención se presentan en dichas formas de dosificación a niveles de concentración que varían entre aproximadamente 5,0% y aproximadamente 70% en peso.

Para la administración por vía oral se pueden emplear comprimidos que contengan distintos excipientes tales como celulosa microcristalina, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato de dicalcio y glicina junto con distintos desintegrantes tales como almidón (y preferiblemente almidón de maíz, de patata o de tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos, junto con aglutinantes de granulación como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelificante y acacia. De forma adicional, los agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, lauril sulfato de sodio y talco a menudo son muy útiles para el propósito de obtener comprimidos. Las composiciones sólidas de tipo similar también se pueden emplear como rellenos en cápsulas de gelatina; en este sentido, los materiales preferidos también incluyen lactosa así como polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración por vía oral, el ingrediente activo se puede combinar con distintos edulcorantes o potenciadores del sabor, colorantes o tintes y, si así se desea, agentes de emulsión y/o suspensión también, junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y distintas combinaciones similares de los mismos. En el caso de animales, los compuestos de la presente invención se contienen de forma ventajosa en pienso animal o en agua potable en una concentración de 5-5000 ppm, preferiblemente 25 a 500 ppm.

Para administración por vía parenteral (uso intramuscular, intraperitoneal, subcutáneo e intravenoso) normalmente se prepara una disolución inyectable estéril del ingrediente activo. Se pueden emplear disoluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención tanto en aceite de sésamo, como en aceite de cacahuete o en propilenglicol acuoso. Las disoluciones acuosas deberían ajustarse y tamponarse adecuadamente, preferiblemente a un pH mayor de 8, en caso de necesidad y primero se deja isotónico el líquido diluyente. Estas disoluciones acuosas son adecuadas para propósitos de inyección intravenosa. Las disoluciones oleosas son adecuadas para propósitos de inyección intraarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas disoluciones bajo condiciones estériles se efectúa fácilmente mediante técnicas farmacéuticas estándar bien conocidas por los expertos en la materia. En el caso de animales, los compuestos se pueden administrar por vía intramuscular o subcutánea en niveles de dosificación de entre aproximadamente 0,1 y 50 mg/kg/día, de forma ventajosa entre 0,2 y 10 mg/kg/día suministrados en una dosis única o en hasta 3 dosis divididas.

Los compuestos activos de la presente invención también se pueden formular en composiciones por vía rectal tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contengan bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Para administración por vía intranasal o para administración mediante inhalación, los compuestos activos de la presente invención se administran convenientemente en forma de una disolución o de una suspensión desde un envase con bomba de pulverización que se exprime o se bombea por el paciente, o se administran en forma de una presentación de aerosol pulverizado desde un envase presurizado o desde un nebulizador, con el uso de un propulsor de aerosoles adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede estar determinada mediante el suministro de una válvula para entregar una cantidad medida. El envase presurizado o el nebulizador puede contener una disolución o una suspensión del compuesto activo. Las cápsulas y cartuchos (hechos, por ejemplo, de gelatina) para uso en un inhalador o en un insuflador se pueden formular conteniendo una mezcla de polvo de un compuesto de la presente invención y una base de polvo tal como lactosa o almidón.

Los siguientes ejemplos ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. Las temperaturas de fusión están sin corregir. Los datos de RMN se informan en partes por millón (\delta) y se refieren a la señal bloqueada de deuterio del disolvente de la muestra (deuterocloroformo, a menos que se indique lo contrario). Los reactivos comerciales se usaron sin purificación adicional. THF se refiere a tetrahidrofurano. DMF se refiere a N,N-dimetilformamida. Cromatografía se refiere a cromatografía en columna realizada usando gel de sílice de 32-63 mm y llevada a cabo bajo condiciones de presión con nitrógeno (cromatografía ultrarrápida). Temperatura ambiente se refiere a 20-25ºC. Todas las reacciones en medio no acuoso se realizaron bajo atmósfera de nitrógeno por conveniencia y para maximizar los rendimientos. Concentración a presión reducida significa que se usó un evaporador rotatorio.

Ejemplo 1 Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico

Etapa A

Terc-butil éster de ácido (5R)-3-bromo-5-(terc-butil-dimetilsilaniloximetil)-2-oxo-2,5-dihidropirrol-1-carboxílico

Una disolución de terc-butil éster de ácido 2-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-5-oxopirrolidin-1-carboxílico (16,5 gramos, 50 mmol) en tetrahidrofurano (800 mL) se enfrió en un baño a -78ºC. Se añadió lentamente una disolución 1 M de bis(trimetilsilil)amida de litio en tetrahidrofurano (100 mL, 100 mmol). Después de agitar durante 2 horas, se añadió una disolución de bromuro de fenilselenenilo (14,16 gramos, 60 mmol) en tetrahidrofurano (100 mL) y, después de 15 minutos, se añadió una disolución de 1,2-dibromotetracloroetano (19,5 gramos, 60 mmol) en tetrahidrofurano (100 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 horas adicionales mientras se enfriaba a -78º y se inactivó mediante la adición de una disolución saturada de cloruro de amonio. Se añadieron agua y dietil éter. Se separó la fase acuosa y se extrajo con dietil éter. Las capas orgánicas combinadas se concentraron hasta obtener un aceite de color naranja que se disolvió en cloruro de metileno (1000 mL). Se añadió una disolución acuosa al 30% p/v de peróxido de hidrógeno (20 mL) y la mezcla se agitó vigorosamente durante la noche. Se añadió agua (50 mL). La capa acuosa se separó y se extrajo con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron hasta dar un aceite de color naranja. El compuesto del título (12,0 gramos, 59%) se aisló mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo primero con una mezcla 1:1 de hexano y de cloruro de metileno y eluyendo a continuación sólo con cloruro de metileno.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 7,31 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 4,56 - 4,53 (m, 1 H), 4,08 (dd, J = 3,4, 10,0 Hz, 1 H), 3,74 (dd, J = 6,2, 10,0 Hz, 1 H), 1,53 (s, 9 H), 0,83 (s, 9 H), 0,01 (s, 3 H), 0,00 (s, 3 H).

RMN ^{13}C (CDCl_{3}): \delta 164,0, 149,1, 146,3, 118,2, 83,6, 62,8, 61,8, 28,0, 25,6, 18,0, -5,6, -5,7.

\newpage

Etapa B

Terc-butil éster de ácido (5R)-5-(terc-butil-dimetilsilaniloximetil)-3-(4-metoxifenil)-2-oxo-2,5-dihidropirrol-1-carboxílico

El complejo de dietanolamina del ácido 4-metoxifenil borónico (2,5 gramos, 11 mmol) se agitó durante 2 horas en una mezcla de diisopropil éter(50 mL) y disolución acuosa 1,5 M de ácido clorhídrico (30 mL). Después de la separación de la capa acuosa, se añadió tolueno (50 mL) y se concentró la mezcla para eliminar la mayor parte del diisopropil éter. Se añadieron terc-butil éster de ácido (5R)-3-bromo-5-(terc-butil-dimetilsilaniloximetil)-2-oxo-2,5-dihidropirrol-1-carboxílico (3,0 gramos, 7,38 mmol), tolueno (150 mL) y una disolución de carbonato de sodio (850 mg, 8 mmol) en agua (20 mL). Después de purgar de oxígeno la disolución, se añadió tetrakis(trifenilfosfeno)paladio (0) (250 mg) y la mezcla se calentó a reflujo durante 2,5 horas. La mezcla se enfrió y se diluyó con tolueno y agua. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta obtener un aceite de color marrón. El compuesto del título (1,7 gramos, 53%) se aisló mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con cloruro de metileno.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 7,74 (d, J = 8,9 Hz, 2 H), 7,24 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,9 Hz, 2 H), 4,57 - 4,54 (m, 1 H), 4,17 (dd, J = 3,6, 9,6 Hz, 1H), 3,79 (s, 3 H), 3,72 (dd, J = 6,6, 9,6 Hz, 1 H), 1,55 (s, 9 H), 0,82 (s, 9 H), 0,02 (s, 3 H), 0,01 (s, 3 H).

Etapa C

Terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-5-hidroximetil-3-(4-metoxifenil)-2-oxopirrolidin-1-carboxílico

Una disolución de terc-butil éster de ácido (5R)-5-(terc-butil-dimetilsilaniloximetil)-3-(4-metoxifenil)-2-oxo-2,5-dihidropirrol-1-carboxílico (1,7 gramos, 3,9 mmol) en etanol (100 mL) se trató con paladio (300 mg) y se hidrogenó durante la noche en un agitador Parr^{TM} a tres atmósferas de presión. El catalizador se eliminó mediante filtración y el disolvente se evaporó hasta proporcionar terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-5-(terc-butil-dimetilsilaniloximetil)-3-(4-metoxifenil)-2-oxopirrolidin-1-carboxílico bruto en la forma de un aceite. Éste se disolvió en tetrahidrofurano (40 mL) y se trató con una disolución acuosa 0,5 M de ácido clorhídrico (7,2 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se inactivó con disolución saturada de carbonato de sodio y se extrajo dos veces con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron hasta obtener un aceite de color naranja. El compuesto del título (551 mg, 48%) se aisló mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con hexano al 20% en acetato de etilo.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 7,15 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 6,84 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 4,18 - 4,13 (m, 1 H), 3,81 - 3,65 (m, 4 H), 3,76 (s, 3 H, solapado), 2,58 - 2,51 (m, 1 H), 1,96 - 1,87 (m, 1 H), 1,52 (s, 9H).

Etapa D

Terc-butil éster de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-1,2-dicarboxílico

Se preparó una disolución madre que contenía 12,0 gramos de ácido peryódico y trióxido de cromo (24 mg) en acetonitrilo húmedo (0,75 de volumen porcentual en agua). Se añadió una porción de esta disolución (9,6 mL) a una disolución de terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-5-hidroximetil-3-(4-metoxifenil)-2-oxopirrolidin-1-carboxílico (510 mg, 1,58 mmol) en acetonitrilo húmedo (0,75 de volumen porcentual en agua) a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción a 0ºC durante 2 horas y a continuación se inactivó mediante la adición de una disolución de fosfato de sodio dibásico (1,2 gramos) en agua (20 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo y el extracto orgánico se lavó con disolución acuosa de bisulfito de sodio y con salmuera. Después de secar sobre sulfato de magnesio, se evaporó el disolvente para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco, 518 mg (98%).

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 8,56 (br s, 1 H), 7,13 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,82 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 4,58 (t aparente, J = 8,3 Hz, 1 H), 3,78 - 3,73 (m, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 2,86 - 2,79 (m, 1 H), 2,13 - 2,05 (m, 1 H), 1,45 (s, 9 H).

RMN ^{13}C (CDCl_{3}): \delta 176,2, 173,2, 159,0, 149,4, 129,2, 129,0, 114,2, 84,3, 56,8, 55,2, 47,9, 30,2, 27,8.

EM m/z 334 (M - 1), 234.

[\alpha]_{D} = +4,4º (c = 1,12, CHCl_{3}).

Etapa E

Terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-5-benciloxicarbamoil-3-(4-metoxifenil)-2-oxopirrolidin-1-carboxílico

A una disolución de 1-terc-butil éster de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-1,2-dicarboxílico (305 mg, 0,91 mmol), diisopropiletilamina (0,35 mL, 2,0 mmol) y clorhidrato de O-bencilhidroxilamina (160 mg, 1,0 mmol) en cloruro de metileno (20 mL) se añadió hexafluoroborato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio (443 mg, 1,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de dilución con cloruro de metileno, la mezcla se lavó con disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, con agua y con salmuera. La disolución se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta obtener un sólido de color blanco a partir del que se aisló el compuesto del título (294 mg, 73%) mediante cromatografía ultrarrápida, eluyendo con hexano al 25% en acetato de etilo.

EM m/z 439 (M - 1), 339.

Etapa F

Benciloxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico

Se burbujeó gas de cloruro de hidrógeno durante 3 minutos a través de una disolución de terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-5-benciloxicarbamoil-3-(4-metoxifenil)-2-oxopirrolidin-1-carboxílico (270 mg, 0,61 mmol) en cloruro de metileno (40 mL). Después de agitar durante 10 minutos adicionales, se evaporó el disolvente hasta dejar una espuma de color blanco. El compuesto del título (169 mg, 80%) se aisló mediante cromatografía ultrarrápida (eluyendo con acetato de etilo) y mediante recristalización en una mezcla de acetato de hexilo y hexano.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 10,40 (br s, 1 H), 7,30 - 7,23 (m, 5 H), 7,15 (br s, 1 H), 7,04 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 6,76 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 4,79 - 4,72 (m, 2H), 3,89 (t aparente, J = 7,3 Hz, 1 H), 3,70 (s, 3 H), 3,45 (t aparente, J = 9,6 Hz, 1 H), 2,77 - 2,69 (m, 1 H), 2,06 - 1,98 (m, 1 H).

RMN ^{13}C (CDCl_{3}): \delta 179,1, 169,3, 158,8, 134,9, 130,0, 129,3, 129,2, 128,7, 128,5, 114,2, 78,1, 55,2, 53,9, 46,6, 34,6.

EM m/z 341 (M +1).

[\alpha]_{D} = +39,9º (c = 0,91, CHCl_{3}).

Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico

Una disolución de benciloxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico (150 mg, 0,44 mmol) en metanol (15 mL) se trató con 5% de paladio sobre sulfato de bario (40 mg) y se hidrogenó con un agitador Parr^{TM} a una presión de 303,975 kPa (3 atmósferas) durante 2,5 horas. El catalizador se eliminó mediante filtración y el disolvente se evaporó para proporcionar un sólido. El compuesto del título (106 mg, 96%) se aisló mediante cristalización a partir de una mezcla de acetato de hexilo y hexano.

RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 10,77 (br s, 1H), 8,97 (br s, 1 H), 8,01 (br s, 1 H), 7,14 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,84 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 3,91 (t aparente, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,69 (s, 3 H), 3,53 (t aparente, J = 7,8 Hz, 1 H), 2,67 - 2,58 (m, 1 H), 1,92 - 1,84 (m, 1 H).

EM m/z 249 (M -1).

Ejemplo 2 Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-fluorofenoxi)fenil]-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

Se preparó de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 1 partiendo del complejo de dietanolamina del ácido 4-(4-fluorofenoxi)fenil borónico.

RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 10,78 (br s, 1 H), 8,98 (br s, 1 H), 8,06 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 7,19 - 7,15 (m, 2 H), 7,02 - 6,98 (m, 2 H), 6,89(d, J = 8,7 Hz, 2 H), 3,91 (t aparente, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,59 (t aparente, J = 9,8 Hz, 1 H), 2,67 - 2,60 (m, 1 H), 1,94 - 1,86 (m, 1H).

RMN ^{13}C (DMSO-d_{6}): \delta 176,0, 167,8, 157,6 (d, J = 240 Hz), 155,2, 152,3, 134,8, 129,4, 119,9 (d, J = 9 Hz), 117,5, 116,0 (d, J = 23 Hz), 51,4, 45,5, 33,6.

EM m/z 329 (M -1).

[\alpha]_{D} = +24,3º (c = 1,14, MeOH).

Ejemplo 3 Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4'-fluorobifenil-4-il)-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

Se preparó de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 1 partiendo del complejo de dietanolamina del ácido 4'-fluorobifen-4-il borónico. Se recristalizó en metanol, punto de fusión: 193-202ºC.

RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 10,77 (br s, 1H), 8,97 (br s, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,67 - 7,63 (m, 2 H), 7,55 (d, J = 8,1 Hz, 2 H), 7,32 (d, J = 8,1 Hz, 2 H), 7,24 (t aparente, J = 8,8 Hz, 2 H), 3,95 (t aparente, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,65 (t aparente, J = 9,7 Hz, 1 H), 2,71 - 2,64 (m, 1 H), 2,00 - 1,93 (m, 1 H).

EM: m/z 313 (M -1).

Análisis calculado para C_{17}H_{15}FN_{2}O_{3}\cdot ½ H_{2}O: C, 63,15; H, 4,99; N, 8,66. Encontrado: C, 62,83; H, 5,48; N, 8,39.

Ejemplo 4 Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[3-(4-fluorofenoxi)fenil]-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

Se preparó de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 1 partiendo del complejo de dietanolamina del ácido 3-(4-fluorofenoxi)fenil borónico. Se recristalizó en acetato de etilo, punto de fusión: 151-152ºC.

RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 10,79 (s, 1 H), 8,98 (s, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,28 (t aparente, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,22 - 7,18 (m, 2 H), 7,04 - 7,01 (m, 3 H), 6,93 (s aparente, 1 H), 6,78 (dd, J = 2,5, 8,3 Hz, 1 H), 3,91 (t aparente, J = 7,6 Hz, 1 H), 3,62 (t aparente, J = 9,8 Hz, 1 H), 2,69 - 2,62 (m, 1 H), 1,95 - 1,87 (m, 1 H).

EM: m/z 329 (M -1).

[\alpha]_{D} = +17,9º (c = 1,00, MeOH).

Análisis calculado para C_{17}H_{15}FN_{2}O_{4}: C, 61,82; H, 4,58; N, 8,48. Encontrado: C, 61,85; H, 4,59; N, 8,40.

Ejemplo 5 Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-naftalen-2-il-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

Se preparó de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 1 partiendo de ácido 2-naftil borónico. Se recristalizó en acetato de etilo/metanol, punto de fusión: 197-199ºC.

RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 10,82 ( br s, 1 H), 9,00 (s, 1 H), 8,14 (s, 1 H), 7,86 - 7,83 (m, 3 H), 7,75 (s aparente, 1 H), 7,46 - 7,42 (m, 3 H), 4,00 (t aparente, J = 7,6 Hz, 1 H), 3,80 (t aparente, J = 9,6 Hz, 1 H), 2,77 - 2,72 (m, 1 H), 2,10 - 2,03 (m, 1 H).

EM: m/z 269 (M -1).

[\alpha]_{D} = 0º (c = 0,33, MeOH).

Análisis calculado para C_{15}H_{14}N_{2}O_{3}: C, 66,66; H, 5,22; N, 10,36. Encontrado: C, 66,43; H, 5,41; N, 10,10.

Ejemplo 6 Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-5-oxo-4-(4-fenetilfenil)-pirrolidin-2-carboxílico

Se preparó de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 1 partiendo de ácido 4-estirilfenil borónico. (El doble enlace del estirilo se reduce a un grupo fenetilo al mismo tiempo que se hidrogena el doble enlace del 2-oxo-2,5-dihidropirrol).

RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 10,78 ( br s, 1 H), 8,97 (s, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 7,24 - 7,22 (m, 4 H), 7,14 (s aparente, 5 H), 3,92 (t aparente, J = 7,4 Hz, 1 H), 3,55 (t aparente, J = 9,9 Hz, 1 H), 2,82 (s aparente, 4 H), 2,67 - 2,60 (m, 1 H), 1,95 - 1,87 (m, 1 H).

EM: m/z = 325 (M +1).

Ejemplo 7 Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-benciloxifenil)-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

Etapa A

Terc-butil éster de ácido (5R)-3-(4-benciloxifenil)-5-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2-oxo-2,5-dihidro-pirrol-1-carboxílico

El complejo de dietanolamina del ácido 4-fenetilfenil borónico (8,25 g, 27,8 mmol) se agitó durante 3 horas en una mezcla de dietil éter (165 mL) y disolución acuosa 3 M de ácido clorhídrico (66 mL). Después de la separación de la capa acuosa, se añadió tolueno (100 mL) y se concentró la mezcla para eliminar la mayor parte del dietil éter. Se añadieron terc-butil éster de ácido (5R)-3-bromo-5-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2-oxo-2,5-dihidropirrol-1-carboxílico (7,5 g, 18,5 mmol) y una disolución de Na_{2}CO_{3} (1,25 g, 11,8 mmol) en agua (25 mL). Después de purgar de oxígeno la disolución, se añadió tetrakis(trifenilfosfeno)paladio (0) (424 mg) y la mezcla se calentó a reflujo durante 18 h. La mezcla se enfrió y se diluyó con tolueno y agua. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta obtener un aceite oscuro. El compuesto del título (5,5 g, 58%) se aisló en forma de un sólido de color amarillo claro mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con dietil éter al 15% en hexano.

Etapa B Terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-3-(4-benciloxifenil)-5-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2-oxo-pirrolidin-1-carboxílico

Una disolución de terc-butil éster de ácido (5R)-3-(4-benciloxifenil)-5-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2-oxo-2,5-dihidro-pirrol-1-carboxílico (2,0 g, 3,92 mmol) en acetato de etilo (40 mL) y hexano (40 mL) se trató con 20% de hidróxido de paladio sobre carbono (200 mg) y se hidrogenó en un agitador Parr^{TM} a 303,975 kPa (3 atmósferas) de presión durante 2 horas. El catalizador se eliminó mediante filtración y el disolvente se evaporó hasta proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (2,0 g, 100%).

Etapa C

Terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-3-(4-benciloxifenil)-5-hidroximetil-2-oxo-pirrolidin-1-carboxílico

Una disolución de terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-3-(4-benciloxifenil)-5-(terc-butildimetilsilaniloximetil)-2-oxo-pirrolidin-1-carboxílico (2,0 g, 3,91 mmol) en tetrahidrofurano (45 mL) se enfrió en un baño de hielo. Se añadió una disolución acuosa 0,5 M de HCl (7,8 mL, 3,9 mmol) y se permitió que la mezcla resultante calentase a temperatura ambiente mientras se agitaba toda la noche. Después de un tiempo de reacción total de 24 horas, se añadió disolución acuosa satura de NaHCO_{3}. La mezcla se extrajo dos veces con dietil éter y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta obtener un aceite. El compuesto del título, un aceite incoloro (1,02 g, 65%), se aisló mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con hexano al 50% en acetato de etilo.

Etapa D

Hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-benciloxifenil)-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

Se preparó una disolución que contenía 6,0 g de ácido peryódico y trióxido de cromo (13 mg) en acetonitrilo húmedo (60 mL; 0,75 de volumen porcentual en agua). Una porción de esta disolución (15 mL) se añadió gota a gota a una disolución de terc-butil éster de ácido (3S, 5R)-3-(4-benciloxifenil)-5-hidroximetil-2-oxo-pirrolidin-1-carboxílico (1,02 g, 2,57 mmol) en acetonitrilo húmedo (15 mL; 0,75 de volumen porcentual en agua) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 2 horas. En ese momento, se añadió más disolución (5 mL) de ácido peryódico/trióxido de cromo. Se continuó agitando a 0ºC durante 1 hora adicional. Después de inactivar con una disolución de fosfato de sodio dibásico (720 mg) en agua (12 mL), se extrajo la mezcla dos veces con dietil éter. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con disolución acuosa de bisulfito de potasio (440 mg en 10 mL de agua) y con salmuera. Después de secar sobre MgSO_{4}, se evaporó el disolvente para proporcionar un sólido de color amarillo que se recogió en cloruro de metileno (100 mL) y que se enfrió en un baño de hielo. Se burbujeó gas de cloruro de hidrógeno a través de la disolución fría durante 2 minutos y la mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 1 hora. El disolvente y el HCl se evaporaron para proporcionar un sólido a partir del cual se aisló el compuesto del título 226 mg (28%) mediante trituración con una mezcla de cloruro de metileno, dietil éter y acetato de etilo. El filtrado de trituración se disolvió en una disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} y se lavó dos veces con dietil éter. Después de una cuidadosa acidificación con una disolución acuosa 6 M de HCl, la capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron para proporcionar más compuesto del título, 123 mg (15%).

Etapa E

(2-trimetilsilaniletoxi)amida de ácido (2R, 4S)-4-(4-benciloxifenil)-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico

A una disolución de ácido (2R, 4S)-4-(4-benciloxifenil)-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico (330 mg, 1,06 mmol), N-metil morfolina (0,25 mL, 2,3 mmol) y clorhidrato de O-(2-trimetilsililetil) hidroxilamina (220 mg, 1,30 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 mL) se añadió hexafluoroborato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio (560 mg, 1,27 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Después de dilución con CH_{2}Cl_{2}, la mezcla se lavó de forma secuencial con disolución acuosa 0,5 M de HCl, agua, disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} y salmuera. La disolución se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta obtener un sólido de color blanco que se trituró con acetato de etilo y se reservó. El filtrado de trituración se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con metanol al 5% en cloroformo. Las fracciones que contenían el compuesto del título se combinaron y se concentraron para proporcionar un sólido de color blanco que se combinó con el sólido obtenido directamente a partir de la mezcla de producto bruto. La mezcla se agitó en agua toda la noche. El compuesto del título se reunió mediante filtración y se secó. El rendimiento fue 194 mg (43%).

Etapa F

A una suspensión de (2-trimetilsilaniletoxi)amida de ácido (2R, 4S)-4-(4-benciloxifenil)-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico (95 mg, 0,22 mmol) en cloruro de metileno se le añadió eterato de trifluoruro de boro (0,86 \muL, 0,68 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 75 minutos. Durante este período el sólido en suspensión se disolvió completamente y el producto precipitó. La mezcla se inactivó mediante la adición de una disolución acuosa saturada de NH_{4}Cl. El compuesto del título se reunió mediante filtración, se lavó bien con acetato de etilo y agua y se secó. El rendimiento fue 56 mg (78%).

RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 10,74 ( br s, 1 H), 8,95 (br s, 1 H), 8,00 (br s, 1 H), 7,70 - 7,27 (m, 5 H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 6,91 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 5,04 (s aparente, 2 H), 3,89 (t aparente, J = 7,7 Hz, 1 H), 3,51 (t aparente, J = 9,7 Hz, 1 H), 2,64 - 2,57 (m, 1 H), 1,91 - 1,83 (m, 1 H).

EM: m/z 325 (M -1).

Claims

1. Un compuesto de la fórmula

8

en la que R^{1} es arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) alquilo (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}) alquilo (C_{1}-C_{6}) o arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) alquilo (C_{1}-C_{6}), en el que cada uno de dichos radicales arilo (C_{6}-C_{10}) o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) está opcionalmente sustituido en cualquiera de los átomos de carbono del anillo capaces de formar un enlace adicional mediante uno o más sustituyentes por anillo, seleccionados independientemente entre flúor, cloro, bromo, alquilo (C_{1}-C_{6}), alcoxi (C_{1}-C_{6}), perfluoro alquilo (C_{1}-C_{3}), perfluoro alcoxi (C_{1}-C_{3}) y ariloxi (C_{6}-C_{10}) y

R^{2} y R^{3} se seleccionan de forma independiente entre H, alquilo (C_{1}-C_{6}) y arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10})

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto según la reivindicación 1 en el que R^{1} es arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), en el que cada radical arilo (C_{6}-C_{10}) o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) de dicho arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), arilo (C_{6}-C_{10}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}), heteroarilo (C_{2}-C_{9}) allcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}) o heteroarilo (C_{2}-C_{9}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) heteroarilo (C_{2}-C_{9}) está opcionalmente sustituido en cualquiera de los átomos de carbono del anillo capaces de formar un enlace adicional mediante uno o más sustituyentes por anillo seleccionados de forma independiente entre flúor, cloro, bromo, alquilo (C_{1}-C_{6}), alcoxi (C_{1}-C_{6}), perfluoro alquilo (C_{1}-C_{3}), perfluoro alcoxi (C_{1}-C_{3}) y ariloxi (C_{6}-C_{10}).

3. Un compuesto según la reivindicación 1 con la estereoquímica

\vskip1.000000\baselineskip

9

4. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} es arilo (C_{6}-C_{10}) opcionalmente sustituido.

5. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} es ariloxi (C_{6}-C_{10}) arilo (C_{6}-C_{10}) opcionalmente sustituido.

6. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} es heteroariloxi (C_{2}-C_{9}) arilo (C_{6}-C_{10}) opcionalmente sustituido.

7. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{1} es arilo (C_{6}-C_{10}) alcoxi (C_{1}-C_{6}) arilo (C_{6}-C_{10}) opcionalmente sustituido.

8. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que dicho sustituyente opcional R^{1} es hidrógeno, flúor, cloro, alquilo (C_{1}-C_{6}) o alcoxi (C_{1}-C_{6}).

9. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que dicho sustituyente opcional R^{1} está en la posición para del anillo terminal.

10. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que dicho sustituyente opcional R^{1} está en la posición orto del anillo terminal.

11. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R^{2} y R^{3} son hidrógeno.

12. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que uno o ambos R^{2} y R^{3} se seleccionan de forma independiente entre alquilo (C_{1}-C_{6}) y arilo CH_{2}(C_{6}-C_{10}).

13. Un compuesto según la reivindicación 3, en el que dicho compuesto se selecciona del grupo constituido por:

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-(4-metoxifenil)-5-oxopirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-[4-(4-fluorofenoxi)fenil]-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-5-oxo-4-(4-fenoxifenil)-pirrolidin

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-bifenil-4-il-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico,

hidroxiamida de ácido (2R, 4S)-4-naftalen-2-il-5-oxo-pirrolidin-2-carboxílico;

14. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una afección seleccionada del grupo constituido por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad de transplante de órganos, caquesia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica de contacto, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis bulosa congénita, osteoporosis, pérdida de implantes articulares artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma de aorta (incluyendo aneurisma de aorta abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, ictus, isquemia cerebral, trauma craneal, daño en la médula espinal, desórdenes neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora nootrópica o mejora de la cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesiones en la córnea, degeneración macular, cicatrización anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrices de la córnea, escleritis, SIDA, sepsis y shock séptico en un mamífero, incluyendo un humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 eficaz en dichos tratamientos y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

15. El uso de una cantidad farmacéuticamente aceptable de un compuesto según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una afección en un mamífero, incluyendo un ser humano, seleccionada del grupo constituido por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad de transplante de órganos, caquesia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica de contacto, cáncer, ulceración de tejidos, reestenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis bulosa congénita, osteoporosis, pérdida de implantes articulares artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma de aorta (incluyendo aneurisma de aorta abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, ictus, isquemia cerebral, trauma craneal, daño en la médula espinal, desórdenes neurodegenerativos (agudos y crónicos), desórdenes autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, mejora nootrópica o mejora de la cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesiones en la córnea, degeneración macular, cicatrización anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrices de la córnea, escleritis, SIDA, sepsis y shock séptico en un mamífero, incluyendo un ser humano.

16. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una afección que puede ser tratada por la inhibición de la metalo proteinasa de la matriz en un mamífero, incluyendo el ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

17. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una dolencia que se pueda tratar mediante la inhibición de la reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprenda una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

18. El uso de una cantidad eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para la inhibición de metaloproteinasas de matriz en un mamífero, incluyendo un ser humano.

19. El uso de una cantidad eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para la inhibición de una reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano.