MXPA01006671A

MXPA01006671A - Amidomalonamidas y su uso como inhibidores de metaloproteinasa de matriz de mmp

Info

Publication number: MXPA01006671A
Application number: MXPA/A/2001/006671A
Authority: MX
Inventors: Michael J Janusz; Alan Warshawsky
Original assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1998-12-31
Filing date: 2001-06-28
Publication date: 2002-03-26

Abstract

La presente solicitud se relaciona a aminomalonamidas novedosas de la fórmula (I) y la composición farmacéutica de las mismas las cuales sonútiles para inhibir metaloproteinasas matriz.

Description

AM1DOMALONAMIDAS Y SU USO COMO INHIBIDORES DE METALOPROTEINASA DE MATRIZ DE MMP ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las metaloproteinasas matriz (MMPs) son una familia de zinc que contiene endopeptidasas , las cuales son capaces de desdoblar biomoléculas largas tales como los colágenos, proteoglicanos y gelatinas. La expresión superregulada por citocinas pro-inflamatorias y/o factores de crecimiento. Los MMPs son secretados como cimógenos inactivos los cuales, en la activación, están sometidos para el control por medio de los inhibidores endógenos, por ejemplo, inhibidor de tejido de metaloproteinasas (TIMP) y a2-macroglobulina . Chapman, K.T. et al., J. Med. Chem. 36, 4293-4301 (1993); Beckett, R.P. et al., DDT 1, 16-26 (1996). El rasgo característico de las enfermedades que involucran las enzimas parecen ser un desequilibrio estoquiométrico entre las enzimas activas y los inhibidores endógenos, conduciendo a la alteración del tejido excesivo, y algunas veces degradación. McCachren, S.S., Arthritis Rheum. 34, 1085-1093 (1991) . El descubrimiento de diferentes familias de metaloproteinasa matriz, sus relaciones, y sus características individuales han sido categorizadas en diversos reportes. Emonard, H., et al . , Cell Molec. Bio. 36, 131-153 (1990); Birkedal-Hansen, H., J. Oral Pathol. 17, 445- 451 (1988); Matnsian. L.M., Trends Genet. 6, 121-125 (1990); Murphy. G.J.P. et al., FEB Lett. 289, 4-7 (1991); Matrisian, L.M.. Bioessays 14, 455-463 (1992). Tres grupos de MMPs han sido delineados: las colagenasas que tienen colágeno mtesticial helicoidal triple como un substrato, las gelatmasas que son protemasas de colágeno desnaturalizado y colágeno Tipo IV, y las estromelismas que son originalmente caracterizadas como proteoglicanasas sino han sido ahora identificadas por tener un espectro proteolitico amplio. Ejemplos de colagenasas específicas incluyen colagenasa de fibroblasto (MMP-1), colagenasa neutrofil (MMP-8), y colagenasa 3 (MMP-13) . Ejemplos de gelatinasas incluyen gelatinasa 72kDa (gelatinasa A; MMP-2) y gelatmasa de 92kDa (gelatinasa B; MMP-9) . Ejemplos de estromelismas incluyen estromelisma 1 (MMP-3) , estromelisma 2 (MMP-10) y matrilisina (MMP-7). Otros MMPs que no se ajustan ordenadamente en los grupos anteriores incluyen metaloelastasa (MMP-12), membrana-tipo MMP (MT-MMP o MMP-14) y estromelisina 3 (MMP-11). Beckett, R.P. et al., supra . Sobre la expresión y activación de MMPs ha sido unida con un amplio rango de enfermedades tales como cáncer; artritis reumatoide; osteoartritis; trastornos inflamatorios crónicos, tales como enfisema y enfisema inducido por fumar; trastornos cardiovasculares, tales como aterosclerosis; ulceración corneal; enfermedades dentales tales como gingivitis y enfermedad periodontal; y trastornos neurológicos, tales como esclerosis múltiple. Por ejemplo, en adenocarcinoma, células gástricas próximas invasivas que expresan la forma 72kDa de la colagenasa Tipo IV, mientras no hacen células no invasivas. Schwartz, G.K. et al., Cáncer 73, 22-27 (1994). Las células de embrión de ratas transformadas por los oncogenes Ha-ras y v-myc o por el Ha-ras solo son metastáticos en nido de ratón y se libera de 92 kDa de gelatinasa colagenasa (MMP-9) . Bernhard, E.J. et al., Proc . Nati. Acad. Sci. 91, 4293-4597 (1994) . La concentración de plasma de MMP-9 fue significativamente incrementada (P<0.01) en 122 pacientes con cáncer tracto gastrointestinal y cáncer de pecho. Zucker, S., et al., Cáncer Res. 53, 140-146 (1993). Además, la administración intraperitoneal de batimastat, un inhibidor MMP sintético, da inhibición significante en el crecimiento y propagación metastática y número de colonias de pulmón que son producidas mediante la inyección intravenosa de la melanoma murina B16-BL6 en el ratón C57BL/6N. Chirivi, R.G.S. et al., Int. J. Cáncer 58, 460-464 (1994). La sobre-expresión de TIMP-2, el inhibidor de tejido endógeno de MMP-2, crecimiento de melanoma marcadamente reducido en la piel de los ratones es inmunodeficiente . Montgomery, A. M.P. et al., Cáncer Res. 54, 5467-5473 (1994). La anomalía acelerada de la matriz extracelular del cartílago articular es una característica clave en la patología de la artritis reumatoide y osteoartritis. La evidencia actual sugiere que la síntesis inapropiada de MMPs es el caso clave. Beeley, N.R.A. et al., Curr. Opin. Ther. Patents, 4(1), 7-16 (1994). La entrada de las herramientas de diagnóstico confiables han permitido a un número de grupos de búsqueda reconocer que la estromelisina es una enzima clave en la artritis y el trauma de articulación. Beeley, N.R.A. et al., Id. ; Hasty, K.A. et al., Arthr. Rheum. 33, 388-397 (1990). Ha sido mostrado que la estromelisina es importante para la conversión de la procolagenasa en la colagenasa activa. Murphy, G., et al., Biochem. J. 248, 265-268 (1987). Además, un rango de MMPs puede hidrolizar el precursor unido a la membrana del factor (TNF-a) de necrosis tumoral de citocina pro-inflamatoria. Gearing, A.J.H. et al., Nature 370, 555-557 (1994). Este desdoblamiento produce TNF-a soluble maduros y los inhibidores de MMPs pueden bloquear la producción de TNF-a ambos in vi tro e in vivo . Gearing, A.J.H. et al., Id^; Mohler, K.M. et al., Nature 370, 218-220 (1994); McGeehan, G.M. et al., Nature 370, 558-561 (1994). Esta acción farmacológica es un contribuyente probable en la acción antiartrítica de esta clase de compuestos vistos en modelos animales. Beckett, R.P. et al., supra. La estromelisina ha sido observada para degradar el inhibidor a proteinasa que regula la actividad de las enzimas tales como elastasa, los excesos de las cuales han sido unidos a los trastornos inflamatorios crónicos tales como enfisema y bronquitis crónica. Beeley, N.R.A. et al., supra . ; Wahl, R.C. et al., Annual Reports in Medicinal Chemistry 25, 177-184 (1990) . Además, un estudio reciente indica que el MMP-12 es requerido para el desarrollo en enfisema inducido por fumar en ratones. Science, 277, 2002 (1997) . La inhibición del MMP apropiado puede de esta manera potenciar la actividad inhibitoria de los inhibidores endógenos de este tipo. Los altos niveles de ARNm correspondientes a estromelisina han sido observados en las placas ateroscleróticas extraídas de los pacientes de transplante de corazón. Henney, A.M., et al., Proc. Nati. Acad. Sci. 88, 8154-8158 (1991). Se propone que el papel de la estromelisina en tales placas es alentar la ruptura de la matriz del tejido conectivo que encierra la placa. Esta ruptura se piensa a su vez que es un evento clave en la cascada que conduce a coagular la formación del tipo visto en la trombosis coronaria. La inhibición MMP es de esta manera una medida preventiva para tales trombosis. La colagenasa, estromelisina y gelatinasa han sido implicadas en la destrucción de la matriz extracelular de la córnea. Se piensa que es un mecanismo importante de morbosidad y pérdida visual en el número de enfermedades oculares ulcerativas, particularmente aquellas que siguen del daño de infección o químico. Burns, F.R. et al., Invest . Opthalmol. and Visual Sci. 32, 1569-1575 (1989) . El MMPs presente en el ojo durante la ulceración son derivados ya sea endógenamente a partir de los leucocitos de infiltración o fibroblastos, o exogénamente a partir de microbios. La colagenasa y las actividades de estromelisina han sido identificadas en los fibroblastos aislado a partir de la encía inflamada y los niveles de enzima han sido correlacionados con la severidad de la gingivitis observada. Beeley, N.R.A. et al., supra . ; Overall, C.M. et al., J. Periodontal Res. 22, 81-88 (1987) . Los niveles obsesivos de gelatinasa-B en el fluido cerebroespinal han sido unidos con la incidencia de esclerosis múltiple y otros trastornos neurológicos. Beeley. N.R.A. et al., supra. ; Miyazaki, K. et al., Nature 362, 839-841 (1993) . La enzima puede jugar un papel clave en la desmielinación de neuronas y la anomalía de la barrera del cerebro sanguíneo que ocurre en tales trastornos.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona aminomalonamidas novedosas de la fórmula en donde Ri y R2 son cada uno independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C10, -(CH2)a-Ar?, y - (CH2) b-Ar2; en donde a es un número entero de 1 a 6; b es un número entero de 2 a 6; Arx es un radical seleccionado del grupo que consiste de en donde R5 es 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C , hidroxi y alcoxi de C?-C4; Rs se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C4, y alcoxi de C1-C4; Ar2 es el radical en donde Re se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C4, y alcoxi de C?-C ; R3 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de C?-C6, -(CH2)m-W, -(CH2)p-Ar3, - (CH2) ~C02R9, (CH2)m-NR8-S02-Y? y (CH2)m-Z-Q en donde m es un número entero de 2 a 8; p es un número entero de 0-10, k es un número entero de 1 a 9; W es ftalimido; Ar3 se selecciona a partir del grupo que consiste de en donde R23 es de 1 a 2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C4, y alcoxi de C?-C4; R8 es hidrógeno o alquilo de Ci-Cß; Rg es hidrógeno o alquilo de Ci-Ce; Yi se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, - (CH2) -,-Ar4, y -N(R24)2 en donde j es 0 ó 1 ; R24 cada vez que se selecciona es independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-Cß o tomados juntos con el hidrógeno al cual están unidos forman N-morfolino, N-piperidino, N-pirrolidino, o N-isoindolilo; Ar4 es el radical en donde R25 es de 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C4, y alcoxi de C?-C4; Z se selecciona del grupo que consiste de -O-, -NR8-, -C(0)NR8-, -NR8C(0)-, -NR8C(0)NH-, -NR8C(0)0-, y -OC(0)NH-; en donde R8 es hidrógeno o alquilo de Ci-Cß; Q se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, (CH2)n-Y2, y -(CH2)XY3; en donde n es un número entero de 0 a 4 ; Y2 se seleccionan del grupo que consiste de hidrógeno, -(CH2)h-Ar5 y - (CH2) t-C (0) OR27 en donde rs se selecciona del grupo que consiste de en donde R26 es de 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C?-C , y alcoxi de C?-C ; h es un número entero de 0 a 6; t es un número entero de 1 a 6; R27 es hidrógeno o alquilo de C?-C6; x es un número entero de 2 a 4; Y3 se seleccionan a partir del grupo que consiste de -N(R28)2, N-morfolino, N-piperidino, N-pirrolidino, y N-isoindolilo; en donde R28 cada vez que se tome es independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-Cß; R4 se selecciona. a partir del grupo que consiste de hidrógeno, -C(0)R10 -C (0) - (CH2) q-K y -S-G en donde Rio se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, fenilo, y bencilo; q es 0, 1 , ó 2 ; K se selecciona a partir del grupo que consiste de ,N-Ru -11 en donde V se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace, -CH2-, -0-, -S(0)r-, -NR-, y -NC.(0)R'-; en donde r es 0, 1 ó 2; R se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, y bencilo; R' se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, -CF3, alquilo de C1-C10, fenilo, y bencilo; R11 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C?-C4, y bencilo; R11 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, y bencilo; G se selecciona a partir del grupo que consiste de en donde w es un número entero de 1 a 3 ; R?2 se seleccionan del grupo que consiste de hidrógeno , alquilo de Ci-Cß, -CH2CH2S ( 0 ) eCH3, y bencilo ; en donde e es 0 , 1 ó 2 ; Ri3 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, hidroxi, amino, alquilo de Ci-Cß, N-metilamino, N, N-dimetilamino, -C02R?7, y -OC(0)R?8; en donde R?7 es hidrógeno, -CH20-C ( 0) C (CH3) 3, alquilo de C1-C4, bencilo, o difenilmetilo; Ríe es hidrógeno, alquilo de Ci-Cß o fenilo; R14 es 1 ó 2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, o halógeno; Vi se selecciona a partir del grupo que consiste de -0-, -S-, y -NH-; V2 se selecciona a partir del grupo que consiste de -N- y -CH-; V3 se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace y -C(0)-; V4 se selecciona a partir del grupo que consiste de -0-, -S-, -NR19- y -NC(0)R20-; en donde R19 es hidrógeno, alquilo de C?-C , o bencilo; R20 es hidrógeno, -CF3, alquilo de C1-C10, o bencilo; R15 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de Ci-Cß, y bencilo; R16 se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo de C?~C ; y estereoisómeros, sales farmacéuticamente aceptables, e hidrato de los mismos. La presente invención además proporciona un método para inhibir la metaloproteinasa (MMPs) matriz en un paciente con necesidad del mismo que comprende administrar al mismo una cantidad inhibitoria de metaloproteinasa matriz efectiva de un compuesto de la fórmula (1) . Como tal la presente invención proporciona un método para tratar un estado de enfermedad neoplástico o cáncer; artritis reumatoide; osteoartptis ; osteoporosis; trastornos cardiovasculares, tales como aterosclerosis; ulceración corneal, enfermedades dentales, tales como gingivitis o enfermedad periodontal; y trastornos neurológicos, tales como esclerosis múltiple; trastornos inflamatorios crónicos, tales como enfisema y especialmente enfisema inducido por fumar. Además, la presente invención proporciona una composición que comprende una cantidad a la que se le puede hacer una prueba de un compuesto de la fórmula (1) en la mezcla o de otra manera en asociación con un portador inerte. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad inhibitoria de MMP efectiva de un compuesto de la fórmula (1) en la mezcla o de otra manera en asociación con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables o excipientes. Como se utiliza en esta solicitud: a) el término "halógeno" se refiere a un átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, o átomo de yodo; b) el término "alquilo de C?-C6" se refiere a un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, hexilo, etc. ; c) el término "alquilo de C?-C4" se refiere a una grupo alquilo de cadena lineal o ramificado saturado que contiene de 1 a 4 átomos de carbono e incluye metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, s-butilo, isobutilo, y t-butilo; d) el término "alcoxi de C?-C " se refiere a un grupo alcoxi lineal o ramificado que contiene de 1 a 4 átomos de carbono, tales como metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, t-butoxi, etc.; e) el término "alquilo de Ci-Cio" se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada saturado que contiene de 1 a 10 átomos de carbono e incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, y decilo, etc.; f) como se utiliza en los ejemplos y preparaciones, los siguientes términos tienen los significados indicados: "g" se refiere a gramos, "mg" se refiere a miligramos, ""µg" se refiere a microgramos, "mol" se refiere a moles, "mmol" se refiere a milimoles, "nmol" se refiere a nanomoles, "L" se refiere a litros, "mL" o "ml" se refiere a mililitros, "µL" se refiere a microlitros, "°r" se refiere a grados Centígrados, "Rf" se refiere a factor de retención, "mp" se refiere a punto de fusión, "dec" se refiere a descomposición, "bp" se refiere a punto de ebullición, "mm de Hg" se refiere a la presión en milímetros de mercurio, "cm" se refiere a centímetros, "nm" se refiere a nanómetros, "salmuera" se refiere a la solución de cloruro de sodio acuosa saturada, "M" se refiere a molar, " M" se refiere a milimolar, "µL" se refiere a micromolar, "NM" se refiere a nanomolar, "HPLC" se refiere a cromatografía de líquido altamente realizada, "HRMS" se refiere al espectro de masa de alta resolución, "DMF" se refiere a dimetilformamida, "µsi" se refiere a microcuries, "i.p." se refiere a intraperitonealmente, "i.v." se refiere a intravenosamente, y "DPM" se refiere a desintegraciones por minutos; g) el término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a ya sea una sal de adición acida o una sal de adición básica. La expresión "sales de adición acida farmacéuticamente aceptables" está pretendida para aplicar a cualesquier sales de adición acida orgánica o inorgánica no tóxica de los compuestos base representados por la fórmula (1) o cualquiera de sus intermedios. Los ácidos inorgánicos ilustrativos los cuales forman sales adecuadas incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, y fosfórico y sales de metal ácidos tales como ortofosfato monoácido de sodio, y sulfato ácido de potasio. Los ácidos orgánicos ilustrativos los cuales forman sales adecuadas incluyen los ácidos mono-, di-, y tricarboxílico. Ilustrativos de tales ácidos son por ejemplo, ácido acético, glicólico, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, hidroximaleico, benzoico, hidroxibenzoico, fenilacético, cinámico, salicílico, 2- fenoxibenzoico, p-toluensulfónico, y ácidos sulfónicos tales como ácido metansulfónico y ácido 2-hidroxietanosulfónico. Tales sales pueden existir en ya sea una forma hidratada o sustancialmente anhidra. En general, las sales de adición acida de estos compuestos son solubles en agua y varios solventes orgánicos hidrofílicos, y los cuales en comparación a sus formas de base libre, generalmente demuestran puntos de fusión elevados. La expresión "sales de adición básicas farmacéuticamente aceptables" se pretende aplicar a cualesquier sales de adición básica inorgánicas u orgánicas no tóxicas de los compuestos representados por la fórmula (1) o cualquiera de sus intermediarios . Las bases ilustrativas que forman las sales adecuadas incluyen hidróxidos de metal álcali o metal alcalinotérreo tales como hidróxidos de sodio, potasio, calcio, magnesio, o bario; amonio, y aminas alifáticas, alicíclicas u orgánicas aromáticas tales como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, y picolina. Como es apreciado por cualquier experto ordinario en la técnica los compuestos de la fórmula (1) existen como estereoisómeros. Específicamente, es reconocido que existen como estereoisómeros en el punto de unión de los sustituyentes R3, R?2, y -NHR15- . Donde se indicaron los compuestos de esta solicitud, si la fórmula (1), materiales iniciales, o intermediarios, siguen cualquiera de la designación (+)- y (-)- para la rotación óptica, la designación (D)- y (L) - de la estereoquímica relativa, o la designación Cahn-Ingold-Prelog de (R) - y (S)- para la estereoquímica. Cualquier referencia de esta aplicación en uno de los compuestos de la fórmula (1) se entiende que abarca cualquier estereoisómero específicos o una mezcla de estereoisómeros . Los estereoisómeros específicos pueden prepararse mediante síntesis estereoespecífica utilizando materiales iniciales enantioméricamente puros o enantioméricamente enriquecidos los cuales son bien conocidos en la técnica. Los estereoisómeros específicos de los materiales iniciales de aminoácido están comercialmente disponibles o pueden ser preparados mediante síntesis estereoespecífica como es bien conocido en la técnica o análogamente conocido en la técnica, tales como D. A. Evans, et al. J. Am. Chem. Soc . , 112. 4011-4030 (1990); S. Ikegami et al. Tetrahedron, 44, 5333-5342 (1988); W. Oppolzer et al. Tet. Lets. 30. 6009-6010 (1989); Synthesis of Optically Active a-Amino-Acids . R. M. Williams (Pergamon Press, Oxford 1989); M. J. O'Donnell ed.: a-Amino-Acid Synthesis, Tetrahedron Symposia in print, No. 33, Tetrahedron 44, No. 17 (1988); U. Schollkopf, PureAppl . Chem. 55, 1799 (1983); U. Hengartner et al. J. Org. Chem.. 44, 3748-3752 (1979): M. J. O'Donnell et al. Tet. Lets., 2641- 2644 (1978); M. J. O'Donnell et al. Tet. Lets. 23, 4255-4258 (1982); M. J. O'Donnell et al. J. Am. Chem. Soc., 110, 8520- 8525 (1988) . Los estereoisómeros específicos de cualesquiera materiales iniciales o productos pueden ser resueltos y recuperados por técnicas conocidas en el arte, tales como cromatografía en fase estacionaria quiral, resolución enzimática, o recristalización fraccional de las sales de adición formadas por reactivos utilizados por ese propósito. Los métodos útiles de resolver y recuperar estereoisómeros específicos son conocidos en la técnica y descritos en Stereoche istry of Organic Compounds, E., L. Eliel and S. H. Wilen, Wiley (1994) y Enantiomers, Racemates . and Resolutions. J. Jacques, A., Collet. and S. H. Wilen, Wiley (1981). Como con cualquier grupo de los compuestos estructuralmente relacionados que proponen una utilidad particular, ciertos grupos y configuraciones de sustituyentes son preferidos para los compuestos de la fórmula (1) . Las modalidades preferidas son dadas en lo siguiente: Los compuestos en los cuales Ri y R2 se seleccionan del grupo que consiste de alquilo de Ci-Cd y -(CH2)a_Ar? son preferidos; Los compuestos en los cuales Ri y R2 son -(CH2)a-AR? son más preferidos; Los compuestos en los cuales Ri y R2 son -(CH2)a_AR? en los cuales a es 1 ó 2 y ARi es fenilo o fenilo sustituido son más preferidos; Los compuestos en los cuales R3 se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo de C?~C6 y -(CH2)P-Ar3 son preferidos; Los compuestos en los cuales R4 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, -C(0)R?o y -S-G son preferidos; Los compuestos en los cuales R4 es hidrógeno son más preferidos; y Los compuestos en los cuales R4 se selecciona a partir del grupo que consiste de -C(0)R?o y Rio es el alquilo de C1-C4 más preferido. Los ejemplos de los compuestos abarcados por la presente invención incluyen lo siguiente. Se entiende que los ejemplos abarcan todos los isómeros de los compuesto y mezclas de los mismos. Esta lista es significante para ser representativa únicamente y no pretende limitar el alcance de la invención en cualquier forma. N,N' -di- (3-difenilpropil) -2- ( (S) -2-mercapto-4-fenilbutririlamino) malonamida; N,N' -di- (4-difenilbutil) -2- ( (S) -2-mercapto-4-fenilpropionilamino) malonamida; y N, ' -di- (3-difenilpropil) -2- ( (S) -2-mercapto-4-fenilbutirilamino) malonamida .

Los compuestos de la fórmula (1) pueden ser preparados utilizando técnicas y procedimientos bien conocidos y apreciados por un experto ordinario en la técnica. Para ilustrar, generalmente, esquema sintético para preparar intermediarios y los compuestos de la fórmula (1) se establecen en lo siguiente. En los esquemas de reacción siguientes, los reactivos y materiales iniciales están fácilmente disponibles para alguien con experiencia ordinaria en la técnica y todos los sustituyentes son como Esquema de la Reacción A 2 3 ) previa ente definidos a menos que se indique lo contrario En el Esquema A, etapa 1, un derivado ácido aminomalónico apropiado protegido de la fórmula (2aa) es acoplado con una amina apropiada para dar un compuesto de la fórmula (2ab) . Un derivado ácido aminomalónico apropiado protegido de la fórmula (2aa) es uno en el cual el grupo protector, Pgi puede ser eliminado en presencia de la amida formulada en esta etapa. Se prefiere el uso de t-Boc para Pgi. Tales derivados ácidos aminomalónicos protegidos de amino apropiado son fácilmente preparados por aminomalonato dietilo protegido de amina seguidos por hidrólisis de éster.

Una amina apropiada es una la cual da origen a Ri y R2 como se desee en el producto final de la fórmula (1) . Como es apreciado por la persona experta en la técnica, los compuestos de la fórmula (1) en los cuales Ri y R2 son diferentes pueden ser preparados utilizando derivados de ácido aminomalónicos mono-carboxi protegidos utilizando esta etapa, seguidos por la eliminación selectiva del grupo protector carboxi y la formulación amida repetida para dar compuestos de la fórmula (2ab) en la cual Ri y R2 son diferentes . Tales reacciones de acoplamiento para formar amidas son llevadas a cabo en solventes adecuados, tales como diclorometano, tetrahidrofurano, dietiléter, cloroformo, y similares, y utilizan bases adecuadas, tales como trietilamina, N-metilmorfolina, N, N-disopropiletilamina, piridina, y similares, y reactivos de acoplamiento, como es requerido, y son bien conocidos y apreciados en la técnica. Las reacciones son generalmente llevadas a cabo de -10°C a la temperatura de reflujo del solvente y generalmente se requiere de una hora a 2 días. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como la extracción, evaporación, trituración, liofilización, cromatografía y recristalización. La selección de un reactivo de acoplamiento apropiado está dentro de la experiencia de la técnica. Los reactivos de acoplamiento particularmente adecuados incluyen l-etil-3- (3- (dimetilamino) propil) carbodimida y 1-hidroxi-benzotriazol o N, N ' -diisopropilcarbodiimida y 1-hidroxi-benzotriazol. Otros agentes de acoplamiento son el complejo de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris (pirrolidino) fosfonio-complejo de hexafluorofosfato piridina benzotriazol-1-iloxitris (dimetilamino) fosfonio, carbodiimidas (por ejemplo, N, ' -diciclohexilcarbodiimida) ; cianamidas (por ejemplo N, N-dibencilcianamida ) ; (3) ceteniminas; sales de isoxazolio (por ejemplo, N-etil-5-fenil-isoxazolio-3 ' -sulfonato) ; nitrógeno monocíclico que contiene amidas heterocíclicas de carácter aromático que contiene uno a cuatro nitrógenos en el anillo tales como imidazolidas, pirazolidas, y 1, 2 , 4-triazolidas . Las amidas heterocíclicas específicas que son útiles incluyen N,N'- carbonildiimidazol y N, N-carbonil-di-1, 2 , -triazol; acetileno alcoxilado (por ejemplo, etoxiacetileno) ; reactivos que forman un anhídrido mezclado con la porción carboxilo del aminoácido (por ejemplo, etilcloroformiato e isobutilcloroformiato) . Otros reactivos de activación y su uso en acoplamiento de péptido se describen por Kapoor, J. Pharm. Sci., 59, 1-27 (1970) . En el Esquema A de Reacción, etapa 2, el grupo protector amino, Pgi, del compuesto de la fórmula (2ab) es selectivamente eliminado para dar compuestos de la fórmula (2ac) . Tales reacciones de desprotección aminoselectivas son bien conocidas y apreciadas en la técnica. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como la extracción o evaporación, formación de sal, trituración, liofilización, cromatografía y recristalización. En el Esquema A de Reacción, etapa 3, un compuesto de la fórmula (2ac) acoplado con un derivado ácido apropiado que soporta R3, y Y (compuesto de la fórmula (3) ) para dar un compuesto de la fórmula (4). Tales reacciones de acoplamiento son bien conocidas y apreciadas en la técnica y discutidas en lo anterior. El producto o puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte tales como extracción, evaporación, formación de sal, trituración, liofilización cromatografía y recristalización. Un compuesto apropiado de la fórmula (3) es uno en el cual R3 es R3 como se desea en el producto final de la fórmula (1) o da origen después de la desprotección a R3 como se desea en el producto final de la fórmula (1) y Y es un tio protegido sustituido o Y puede ser un sustituyente hidroxi protector o bromo el cual da origen bajo desprotección selectiva y desplazamiento o desplazamiento y además desprotección, y/o elaboración, si se requiere, a -SR4 como se desea en el producto final de la fórmula (1) . Alternativamente, un compuesto apropiado de la fórmula (3) puede también ser uno en el cual R3< da origen a R" el cual, en la derivación, da origen a R3 como se desea en el producto final de la fórmula (1) y Y es un sustituyente tio protector. Además, un compuesto apropiado de la fórmula (3) puede ser uno en el cual la estereoquímica en el R3< y Y que soporta el carbono es como se desea en el producto final de la fórmula (1) o da origen después del desplazamiento de la estereoquímica como se desea en aquel carbono en el producto final de la fórmula (1) . El grupo (A) de activación es uno el cual experimenta una reacción de amidación. Como es bien conocido en la técnica, una reacción de amidación puede proceder a través de un ácido, A es -OH; o un ácido puede ser primero convertido en un cloruro ácido, A es Cl; o un intermediario activado; tal como un anhídrido; un anhídrido mezclado o ácido carboxílico alifático, tal como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido butírico, ácido isobutírico, ácido piválico, ácido 2-etilbutírico, ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, y similares; los ácidos carboxílicos aromáticos tales como ácido benzoico y similares; de un éster activado, tales como fenoléster, p- nitrofenoléster, 2 , -dinitrofenoléster, pentafluorofenol-éster, pentaclorofenoléster, N-hidroxisuccinimida éster, N-hidroxiftalimida éster, 1-hidroxi-lH-benztriazol éster, y similares; la amida activada tal como imizadol, dimetilpirazol , triazol, o tetrazol: o un intermediario formado en presencia de agentes de acoplamiento, tal como diciclohexilcarbodiimida o 1- ( 3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida . Los cloruros ácidos e intermediarios activados pueden ser preparados pero no necesariamente aislados antes de la adición de dietilaminomalonato . El uso y selección de los grupos de protección apropiados están dentro de la habilidad de aquellos expertos en la técnica y dependerá del compuesto de la fórmula (3) para ser protegido, la presencia de otros residuos aminoácidos protectores, otros grupos de protección, y la naturaleza del grupo o grupos R3 y/o R4 particulares finalmente son introducidos. Los compuestos de la fórmula (3) en el cual Y es bromo y tio protector están comercialmente disponibles o pueden ser preparados utilizando materiales, técnicas, y procedimientos bien conocidos y apreciados por una persona ordinaria en la técnica o descrita en la presente. Véase Solicitud PCT WO 96/11209, publicada el 18 de abril de 1996. Los compuestos comercialmente disponibles de ejemplos de la fórmula (3) en los cuales Y es bromo incluyen ácido 2-bromopropiónico, ácido 2-bromobutírico, ácido 2-bromovalérico, ácido 2-bromohexanoico, ácido 6- (benzoilamino) -2-bromohexanoico, ácido 2-bromoheptanoico, ácido 2-bromooctanoico, ácido 2-bromo-3-metilbutírico, ácido 2-bromoisocaproico, ácido 2-bromo-3- (5-imidazoil ) propionico, ácido (R) - (+) -2-bromopropionico, ácido (S)-(-)-2-bromopropionico . Los compuestos de la fórmula (4) pueden también ser preparados como se establece en lo siguiente en el Esquema B de Reacción.

Esquema de la Reacción B En el Esquema B, etapa 1, el dietilaminomalonato (fórmula (2ba) es acoplado con un derivado ácido apropiado de la fórmula (3) para dar un compuesto de la fórmula (2bb) . En el Esquema de Reacción B, un derivado ácido apropiado de la fórmula (3) es uno en el cual R3- es como se describe en lo anterior en el Esquema de Reacción A y Y es un grupo tio protegido el cual es estable a la reacción de hidrólisis de la etapa 2. En el Esquema de Reacción B, el uso de los compuestos en el cual Y es p-metoxibencilmercapto es preferido. Tales reacciones de acoplamiento son llevadas a cabo en los solventes adecuados y utilizan bases adecuadas en los agentes de acoplamiento, como es requerido, y son bien conocidos y apreciados en la técnica y se discutieron en lo anterior . En el Esquema de Reacción B, etapa 2, el compuesto de la fórmula (2bb) es hidrolizado para dar un diácido de la fórmula (2bc) . La hidrólisis de esteres puede ser llevada a cabo bajo condiciones acídicas o básicas como es bien conocido en la técnica. En el Esquema de Reacción B, etapa 3, un compuesto de la fórmula (2bc) es acoplado con una amina apropiada como se describe en el Esquema de Reacción A, etapa 1, anterior, para dar un compuesto de la fórmula (4) . En el Esquema de Reacción C un compuesto de la fórmula (4) en el cual R3- es R3 como se desea en el producto final de la fórmula (1) o da origen después de la desprotección a R3 como se deseó en el producto final de la fórmula (1) y Y es un sustituyente tio protegido o hidroxi o bromo da origen a un producto final de la fórmula (1) .

Esquema de Reacción C (fórmula ( 1 ) o fórmula (1 ) ) protegida En el Esquema de Reacción C, etapa 1, un compuesto de fórmula (4) en el cual Y es tio protegido da origen bajo desprotección selectiva para dar un compuesto de la fórmula (5) . Por ejemplo, los compuestos de la fórmula (4) en la cual Y es un sustituyente tio protector son desprotegidos selectivamente para dar un tiol de la fórmula (5) . Los sustituyentes tio protectores incluyen tioésteres, tales como tioacetilo o tiobenzoilo, tioéteres, tales como tiobencilo, tio-4-metoxibencilo, tiotrifenilmetilo, o tio-t-butilo, o sulfuros no simétricos, tales como ditioetilo o ditio-t-butilo. El uso y eliminación selectiva de tales grupos de protección tio es bien conocido y apreciado en la técnica y descrito en Protective Groups in Organic Synthesis, Theodora W. Greene (Wiley-Interscience . 2nd Edition, 1991). En el Esquema de Reacción C, etapa 2, un compuesto de la fórmula (5) experimenta la reacción de modificación para dar un compuesto de la fórmula (1) . Tales reacciones de modificación incluyen, la esterificación de tiol y formación de disulfuro. Los compuestos de la fórmula (1) en la cual R4 es un grupo -C(0)R?o o -C (O) - (CH2) q-X puede ser sintetizado por esterificaciones de tiol de acuerdo con las técnicas bien conocidas y puede ser apreciado por alguien con experiencia ordinaria en la técnica, tal como aquella descrita en la Patente Norteamericana No. 5,424,425, expedida el 13 de junio de 1995. Por ejemplo, en una esterificación de tiol un compuesto de la fórmula (5) está en contacto con lo anterior, una cantidad equimolar de un ácido apropiado, tal como H0- C(0)R?0 o HO-C (0) - (CH2) q-X en presencia de un agente de acoplamiento adecuado para dar un compuesto de la fórmula (1) en la cual R4 es -C(0)R?o o -C (O) - (CH2) q-X. La reacción se lleva a cabo en presencia de un agente de acoplamiento tal como 2-fluoro-1-metilpiridinio p-toluensulfato, EDC (clorhidrato de 1- (3-dimetilaminopropil ) -3-etilcarbodiimida) , carbonildiimidazol, EEDQ ( l-etoxicarbonil-2-etoxi-l, 2-dihidroquinolina, DCC, o dietilcianofosfonato en un solvente aprótico adecuado tal como cloruro de metileno. La reacción generalmente se lleva a cabo a temperatura de entre -20°C y el punto de ebullición del solvente. Generalmente, la reacción requiere 1 a 24 horas. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como extracto, evaporación, trituración, liofilización, cromatografía, y recristalización. Los compuestos de la fórmula (1) en el cual R4 es el grupo -S-G puede ser sintetizado de acuerdo con técnicas bien conocidas y apreciadas por alguien con experiencia ordinaria en la técnica, como se describe en la solicitud PCT No. WO 95/21839, publicada el 17 de agosto de 1995 y las Patentes Norteamericanas Nos. 5,491,143, expedida el 13 de febrero de 1996, y 5,731,306, expedida el 24 de marzo de 1998, y Roques, B.P. et al. J. Med. Chem. 33, 2473-2481 (1992) . Por ejemplo, en una formulación de disulfuro, un compuesto de la fórmula (5) está en contacto con un compuesto apropiado de la fórmula (7) . (7) Un compuesto apropiado de la fórmula (7) es uno el cual da G como se desea en el producto final de la fórmula (1) o da origen bajo desproteccion a G como se desea en el producto final de la fórmula (1) . Además, el compuesto de la fórmula (7) puede tener estereoquímica como se desea en el producto final de la fórmula (1) . La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado, tal como etanol, metanol, diclorometano, o mezclas de etanol o metanol y diclorometano.

El solvente se desgasea mediante el paso de una corriente de gas nitrógeno a través de esto durante 15 minutos antes de que la reacción se lleve a cabo. La reacción se lleva a cabo utilizando 1.0 a 4.0 equivalentes molares de un compuesto apropiado de la fórmula (7) . La reacción se lleva a cabo a temperaturas desde 0°C a la temperatura de reflujo del solvente, con una temperatura de 10°C a 30°C que es preferida. La reacción generalmente requiere de 1 a 48 horas. El producto puede ser aislados por técnicas bien conocidas en el arte, tales como la extracción, evaporación y precipitación y puede ser purificada por cromatografía y recristalización. En el esquema de reacción C, etapa 3, un compuesto de la fórmula (4) en el cual Y es hidroxi o bromo puede ser desplazado por un tiol apropiado, HSR4, para dar un compuesto de la fórmula (1) o un compuesto protector de fórmula (1) . En el Esquema de Reacción C, etapa 3, un tiol apropiado HSR4 es uno el cual da R4 como se desea en el producto final de la fórmula (1) o da origen bajo desprotección de R4 como se desea en el producto final de la fórmula (1) . En el Esquema de Reacción C, etapa 3, un compuesto de la fórmula (4) en el cual Y es hidroxi (obtenido de los compuestos hidroxi protectores de la fórmula (4) experimenta una reacción de desplazamiento con un tio apropiado introduciendo el reactivo por medio de un método de Mitsunobu para dar un compuesto de la fórmula (4) en la cual Y es un sustituyente tio protector o -SR4 como se desee en el compuesto final de la fórmula (1) . Por ejemplo, un compuesto de la fórmula (4) en la cual Y es los reactivos hidroxi con ácido tioacético o ácido tiobenzoico, trifenilfosfina, y dietilazodicarboxilato en un solvente aprótico adecuado, tal como tetrahidrofurano para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual Y es tioacetilo o tiobenzoilo. La eliminación selectiva del ácido tioacético o porción de ácido tiobenzoico da el compuesto deseado de la fórmula (5) . El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tal como extracción, evaporación, trituración, liofilización, cromatografía, y recristalización. También, en el Esquema de Reacción C, etapa 3, un compuesto de la fórmula (4) en el cual Y es bromo experimenta una reacción de desplazamiento con un tio apropiado que introduce el reactivo para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual Y es el sustituyente tio protector el cual da origen bajo desprotección y elaboración subsecuente, si se desea, el -SR4 como se desea en el compuesto final de la fórmula (1) . Un reactivo de introducción tio apropiado también es uno el cual introduce un grupo -SR4 como se desea en el compuesto final de la fórmula ( 1 ) . Por ejemplo, una solución de p-metoxibencilmercaptano en un solvente orgánico adecuado tal como dimetilformamida es desgaseado y tratado con una base adecuada tal como hidruro de sodio, hidróxido de sodio, o carbonato de cesio. Después de aproximadamente 1 a 2 horas, una solución de un compuesto de la fórmula (4) en la cual Y es bromo se agrega. La reacción puede beneficiar a partir de la adición de un catalizador adecuado, tal como yoduro de tetra-n-butilamonio . La mezcla de reacción se lleva a cabo durante 1 a 25 horas a temperaturas que promedian de 0°C a aproximadamente 100°C. La eliminación selectiva de la porción 4-metoxibencilo da el compuesto deseado de la fórmula (1). El producto puede ser aislado y purificado mediante técnicas bien conocidas en el arte, tales como extracción, evaporación, trituración, liofilización, cromatografía y recristalización. Además, en el Esquema de Reacción C, etapa, 3 un compuesto de la fórmula (4) en el cual Y es bromo puede ser desplazado por un tioéster apropiado, Ph3S-C (0) - (CH2) q-X por técnicas bien conocidas y apreciadas en el arte, como se describe en la Patente Norteamericana No. 5,424,425 expedido el 13 de junio de 1995. En el Esquema de Reacción C, en una etapa opcional, un compuesto protector de la fórmula (1) es desprotegido para dar para dar un compuesto de la fórmula (1) . Las reacciones de desprotección son bien conocidas y apreciadas en la técnica y pueden incluir desprotecciones selectivas. En el Esquema de Reacción D un compuesto de la fórmula (4a) en la cual R3- da origen a R3<- y Y es -SR4 como se desea en el producto final de la fórmula (1) o un sustituyente tio protector da un compuesto de la fórmula (1) .

Esquema de Reacción D (fórmula (1) o fórmula (1) ) protegida En el Esquema de Reacción D, etapa 1, un compuesto apropiado de la fórmula (4a) es desprotegido, hidrolizado o reducido para dar un compuesto de la fórmula (4b) . En el Esquema de Reacción D, etapa 1, un compuesto apropiado de la fórmula (4a) es uno en el cual R3- da origen a un compuesto de la fórmula (4b) en el cual R3" es R3 como se desea en el producto final de la fórmula (1) o R3.. experimenta además la derivación (etapa 2) para dar un compuesto de la fórmula (4a) en la cual R3 es deseada en el producto final de la fórmula (1) . En el Esquema de Reacción D, etapa 1, un compuesto apropiado de la fórmula (4a) es uno en el cual Y es -SR4 como se desea en el compuesto final de la fórmula (1) o Y es tio protector que da origen bajo desprotección o desprotección y además funcionalización para dar -SR4, como se desea, en el producto final de la fórmula (1) como se describe en el Esquema de Reacción C, etapa 2, anterior. Por ejemplo, en una desprotección un compuesto de la fórmula (4a) en la cual R3. es -(CH2)m-W (grupo ftalmido) está en contacto con un exceso molar de monohidrato de hidrazina para dar un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3.. es -(CH2)m-NHR8 en la cual R8 es hidrógeno. La reacción se lleva a cabo típicamente en un solvente orgánico prótico, tal como metanol o etanol. La reacción es generalmente llevada a cabo a temperatura ambiente durante un periodo de tiempo que oscila de 5-24 horas. El producto puede ser aislado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como extracción, evaporación, y precipitación y puede ser purificado mediante cromatografía y recristalización. Alternativamente, por ejemplo, en una desprotección un compuesto de la fórmula (4a) en la cual R3> es - (CH2) m-NR8-t-Boc hace contacto con un exceso molar de un ácido adecuado para dar un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3.. es - (CH2) m-NHR8. La reacción es típicamente llevada a cabo en un solvente orgánico, tal como metanol, etanol, acetato de etilo, dietiléter, o dioxano. Los ácidos adecuados para esta reacción son bien conocidos en la técnica, incluyendo ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido trifluoroacético, y ácido metansulfónico. La reacción generalmente se lleva a cabo a temperatura ambiente durante un periodo de tiempo que oscila de 1-10 horas. El producto puede ser aislado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como extracción, evaporización, y precipitación y puede ser purificado por cromatografía y recristalización. Por ejemplo, en una hidrólisis un compuesto de la fórmula (4a) en la cual R3. es - (CH2) m-C (O) OPg3 y Pg3 es metilo o etilo está en contacto con aproximadamente 1 a 2 equivalentes molares de hidróxido de litio, hidróxido de sodio, o hidróxido de potasio para dar un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3" es - (CH2) m-C02H . La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado, tal como una mezcla de metanol, etanol, metanol/agua, mezclas de etanol/agua, o mezclas de tetrahidrofurano/agua y generalmente requieren 1 a 24 horas. La reacción se lleva a cabo a temperaturas desde aproximadamente 0°C a temperatura de reflujo de un solvente. El ácido resultante se aisla y se purifica por técnicas bien conocidas en el arte, tales como acidificación, extracción, evaporización, y precipitación y puede ser purificado por trituración, precipitación, cromatografía, y recristalización. Por ejemplo, en una reducción un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3> es - (CH2) m-?_C02-Pg3 en la cual Pg3 es metilo o etilo está en contacto con un agente de reducción adecuado, tal como borohidruro de litio, hidruro de diisobutilamino, 9-borabiciclo [ 3.3.1 ] nonano, preferiblemente borohidruro de litio para dar un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3.. es - (CH2) ra_?-CH20H . La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado tal como diclorometano, tetrahidrofurano o tolueno, con tetrahidrofurano que es preferido. La reacción se lleva a cabo a una temperatura desde aproximadamente -30°C hasta aproximadamente 50°C y generalmente requiere de 2 a 12 horas . El producto puede ser aislado por templado, extracción, evaporación y precipitado y puede ser purificado por trituración, cromatografía, y recristalización. En el Esquema de Reacción D, etapa 2, un compuesto de la fórmula (4b) experimenta una reacción de derivación para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual R3 es como se desea en el producto final de la fórmula (1) . Tales reacciones de derivación incluyen hidrólisis de esteres y formaciones de éster como son bien conocidos en la técnica, formación de éter, alquilación de amina, formación de amidas, formación de urea, formación de carbamato y formación de sulfonamida. En el Esquema de Reacción D, etapa 2, el compuesto de la fórmula (4b) es uno en el cual Y es un grupo tio protector, tal como tioacetilo, tiobenzoilo, 4-metoxibenciltiol o t-butiltiol. Por ejemplo, en una formación de éter un compuesto de la fórmula (4b) en el cual R3.. es - (CH2) m_?-CH20H está en contacto con 1 a 10 equivalentes molares de un agente de alquilación adecuado para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual R3 es - (CH2) m-Z-Q en el cual Z es -0- . Un agente de alquilación adecuado es uno el cual transfiere Q o Q protegida como se desee en el producto final de la fórmula (1), tal como bromuro de bencilo, cloruro de bencilo, bromuro de bencilo sustituido, cloruro de bencilo sustituido, bromoacetato de etilo, bromoacetato de t-butilo, 3-cloropropionato de etilo, 3-bromopropionato de etilo, 5-bromovalerato de etilo, 4-bromobutirato de etilo, 3-cloropropionamida, 2-bromoetilbenceno, 2-bromoetilbenceno sustituido, l-cloro-3-fenilpropano, l-bromo-4-fenilbutano, y similares, o mostaza de nitrógeno, incluyendo cloruro de 2-dimetilaminoetilo, cloruro de 2-dietilaminoetilo, y cloruro de 3-dimetilaminopropilo . La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado, tal como dietiléter, tetrahidrofurano, dimetilformamida, sulfóxido de dimetilo, o acetonitrilo, y utilizando una base adecuada, tal como hidruro de sodio, hidruro de potasio, t-butóxido de potasio, y diisopropilamida de litio. La reacción generalmente se lleva a cabo a temperaturas de -70°C y temperatura ambiente y requiere de aproximadamente 1-24 horas. El producto puede ser aislado por técnicas bien conocidas en el arte, tal como extracción, evaporación, y precipitación y puede ser purificado por cromatografía y recristalización. Alternativamente, como se aprecia por aquellos expertos en la técnica, una formación de éter puede también llevarse a cabo por un procedimiento similar a uno anterior utilizando un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3«- es - (CH2) m_?-CH2OH en la cual el grupo hidroxi es primero convertido a un grupo saliente, tal como cloro, bromo o mesilato y un alcohol adecuado que transfiere Q o Q protegida como se desee en el producto final de la fórmula (1), tal como alcohol bencílico, alcohol bencílico sustituido, fenol, fenol sustituido, y similares. La conversión de hidroxi a los grupos salientes, tal como cloro bromo y mesilato son bien conocidos y apreciados en la técnica. Por ejemplo, en una alquilación de amina un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3>- es -(CH2)m-NHR8 está en contacto con 1 a 10 equivalentes molares de un agente de alquilación adecuado para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual R3 es -(CH2)m-Z-Q en el cual Z es -NR8-. La reacción puede llevarse a cabo después de la protección de la función amina de R3>. en la cual R8 es hidrógeno mediante un grupo de protección adecuado, tal como bencilo o t-Boc. Para un alquilación de amina un agente de alquilación adecuado es uno como se describe en lo anterior por la formulación de éter y también incluyen alquilhaluro, tal como yoduro de metilo, bromuro de metilo, bromuro de etilo, bromuro de propilo, cloruro de propilo, bromuro de butilo, cloruro de butilo y similares. Las reacciones se llevan a cabo en un solvente adecuado tal como metanol, etanol, dimetilformamida, o piridina y utilizando una base adecuada, tal como carbonato de sodio, trietilamina, N, N-diisopropiletilamina o piridina. La reacción generalmente se lleva a cabo a temperaturas desde temperatura ambiente a la temperatura de reflujo del solvente y requieren desde aproximadamente 1-24 horas. El producto puede ser aislado por técnicas bien conocidas en el arte tal como extracción, evaporización, y precipitación y pueden purificarse por cromatografía y recristalización. Alternativamente, por ejemplo, en una alquilación amina un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3-< es -(CH2)m-NHR8 está en contacto en una alquilación de reducción con un aldehido adecuado para dar un compuesto de la fórmula (4) en la cual R3 es -(CH2)m-Z-Q en la cual Z es -NR8- . Un aldehido adecuado es uno que transfiere Q o Q protector como se desea en el producto final de la fórmula (1), tal como benzaldehído y benzaldehídos sustituidos. La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado, tal como metanol, etanol, tetrahidrofurano, o mezclas de metanol o etanol y tetrahidrofurano. La reacción puede llevarse a cabo en presencia de un agente de sequedad, tal como sulfato de sodio o tamices moleculares. La reacción se lleva a cabo en la presencia de 1.0 a 6.0 equivalentes molares de un agente de reducción adecuado, tal como, borohidruro de sodio o cianoborohidruro de sodio con cianoborohidruro de sodio que es preferido. Esto puede ser ventajoso para mantener el pH en el rango desde aproximadamente 4 a 6. La reacción generalmente se lleva a cabo a temperaturas desde 0°C a la temperatura de reflujo del solvente. Generalmente, las reacciones requieren de 1 a 72 horas. El producto puede ser aislado por técnicas bien conocidas en el arte tales como extracción, evaporación, y precipitación y puede ser purificadas por cromatografía y recristalización. Por ejemplo, en una formación de amida en un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3-« es -(CH2)m-C02H está en contacto con una amina adecuada en una formación de amida para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual R3 es -(CH2)m-Z-Q en la cual Z es amida. Tales reacciones de formación de amida utilizando la activación carboxi o en los agentes de acoplamiento adecuados son bien conocidos en la técnica y descritos en lo anterior. Una amina adecuada, HNR8Q da origen a R8 y Q como se desea en el producto final de la fórmula (1), tal como metilamina, etilamina, propilamina, butilamina, N-metil bencilamina, bencil ß-alanina, 4- (3- aminopropil) morfolina y similares. Por ejemplo, en una formación de amida un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3Ü es -(CH2)m-NHR8 está en contacto con un ácido carboxílico adecuado en una formación amida para dar un compuesto de la fórmula (4) en la cual R3 es -(CH2)m~Z-Q en la cual Z es amida. Tales reacciones de formación de amida utilizando la activación carboxi o agentes de acoplamiento adecuados son bien conocidos en la técnica como se describe en lo anterior. Los ácidos carboxílicos adecuados, QC(0)-0H son unos que dan origen a Q como se desea en el producto final de la fórmula (1), tal como ácido benzoico, ácidos benzoicos sustituidos, ácidos fenilacéticos, ácidos fenilacéticos sustituidos, mono-t-butil malonato, y similares . Por ejemplo, en una formación de urea un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3.. es -(CH2)m-NHR8 está en contacto con un isocianato apropiado, 0=C=N-Q, para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual R3 es -(CH2)m-Z-Q en la cual Z es urea. Un isocianato apropiado es uno el cual da origen a Q como se desea en el producto final, tal como isocianato de fenilo, isocianato de fenilo sustituido, isocianato de naftilo, isocianato-acetato de etilo, y similares. La reacción se lleva a cabo mediante la adición de un equivalente de, o un exceso molar ligero de, un isocianato apropiado, se agrega a una solución de un compuesto de la fórmula (4b) en el cual R3.. es -(CH2)m-NHR8 en un solvente adecuado, tal como dietiléter, benceno, o tolueno. La reacción se lleva a cabo a una temperatura desde aproximadamente 0°C a la temperatura de reflujo del solvente y requiere aproximadamente 1-24 horas. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tal como filtración, extracción, evaporación, trituración, cromatografía, y recristalización. Por ejemplo, en una formación N-carbamoilo un compuesto de la fórmula (4b) el cual R3- es -(CH2)m-NHR8 está en contacto con un cloroformiato apropiado para dar un compuesto de la fórmula (4) en la cual R3 es - (CH2) m~Z-Q en el cual Z es N-carbamoilo. Un cloroformiato apropiado es uno el cual da origen a Q como se desee en el producto final de la fórmula (1) . Ejemplos de cloroformiato incluyen cloroformiato de bencilo, cloroformiato de naftilo, cloroformiato de fenilo, y cloroformiatos de fenilo sustituidos, tales como cloroformiato 4-clofenilo, cloroformiato de 4-metilfenilo, cloroformiato de 4-bromofenilo, cloroformiato de 4-fluorofenilo, cloroformiato de 4 -metoxifenilo y similares. La reacción se lleva a cabo agregando un equivalente de, o un exceso molar ligero de, un cloroformiato apropiado en una solución de un compuesto de la fórmula (4b) en el cual R3" es - (CH2) m-NHR8 en un solvente adecuado, tal como tolueno, tetrahidrofurano, dimetilformamida, diclorometano, piridina, o cloroformo. La reacción se lleva a cabo en presencia de un exceso de una base adecuada, tal como trietilamina, carbonato de sodio, bicarbonato de potasio, piridina o N,N-diisopropiletilamina . La reacción se lleva a cabo a una temperatura desde aproximadamente -70°C a la temperatura de reflujo del solvente y generalmente requiere desde 30 minutos a 24 horas. El producto puede se aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como, extracción, evaporación, cromatografía, y recristalización. Por ejemplo, en un formación de O-carbamoilo un compuesto de la fórmula (4b) en la cual R3>. es -(CH2)m_? -CH20H está en contacto con un isocianato apropiado, como se definió en lo anterior por la formación de urea, para dar un compuesto de la fórmula (4) en el cual R3 es -(CH2)m-Z-Q en el cual Z es O-carbamoilo. La mezcla de reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado, tal como dietil éter tetrahidrofurano, dimetilformamida, o acetonitrilo. La reacción puede ser facilitada por el uso de la cantidad catalítica de una base adecuada, tal como hidruro de sodio, hidruro de potasio, o t-butóxido de potasio. La reacción generalmente se lleva a cabo a temperatura desde -20°C a temperatura ambiente y requiere desde aproximadamente 1-24 horas. El producto puede ser aislado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como extracción, la evaporación, y precipitación y puede ser purificada por cromatografía y recristalización. Por ejemplo, en una formación de sulfonamida para preparar un compuesto en el que R3 es - (CH2)m-S02NR8-Y?, un compuesto de la fórmula (4b) en el cual R3" es - (CH2)m-NHR8 está en contacto con un reactivo de formación de sulfonamida apropiado. Un reactivo de formación de sulfonamida apropiado, tal como un cloruro del sulfonilo, Y?S(0)2CI, o anhídrido de sulfonilo, Yi ( 0 ) 2S-0-S (0) 2 Yi, es uno el cual da origen a Yi como se deseó en el producto final. Ejemplos de los reactivos de formación de sulfonamida apropiados son cloruro de bencensulfonilo, cloruro 1-naftalensulfonilo, cloruro 2-naftalensulfonilo, cloruro de dansilo, cloruro de N-morfolinilsulfonilo, cloruro de N-piperidinilsulfonilo, 2 , 4 , 5-triclorobencensulfonilo, cloruro de 2 , 5-diclorobencen-sulfonilo, cloruro de 2, 4 , 6-triisopropilbenzensulfonilo, cloruro de 2-mesitilensulfonilo, cloruro de 4-bromobencen-sulfonilo, cloruro de 4-fluorobencensulfonilo, cloruro de 4-clorobencensulfonilo, cloruro de 4-metoxibencensulfonilo, cloruro de 4-t-butilbencensulfonilo, cloruro de p-toluensulfonilo, cloruro de 2 , 3, 4-triclorobencensulfonilo, cloruro de 2, 5-dimetoxibencensulfonilo, cloruro de 4-etilbencensulfonilo, cloruro de 3, -dimetoxibencensulfonilo, cloruro de 2 , 6-diclorobencensulfonilo, cloruro de 3- bromobencensulfonilo, cloruro de 4-n-butilbencensulfonilo, anhídrido de bencensulfónico, cloruro de 4-toluensulfónico anhídrido, y 2-mesitilensulfónico anhídrido. La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, diclorometano, piridino o cloroformo y en la presencia de un exceso de una base adecuada, tal como trietilamina, carbonato de sodio, piridino, o N,N- diisopropiletilamina . La reacción se lleva a cabo a una temperatura desde -50°C a la temperatura del reflujo del solvente. La reacción generalmente requiere desde 30 minutos a 24 horas. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tal como extracción, evaporación, cromatografía y recristalización. En el Esquema de Reacción D, etapa 3, un compuesto de la fórmula (4) en la cual R3 es como se desea en el producto final de la fórmula (1) experimenta una desprotección de tiol selectiva para dar un compuesto de la fórmula (4) . Tales desprotecciones de tiol selectivas utilizando grupos protectores adecuados son bien conocidos y apreciados en la técnica como se discutió en el Esquema de Reacción C, etapa 1, anteriormente. En el Esquema de Reacción D, etapa 4, un compuesto de la fórmula (4) experimenta una reacción de la modificación para dar el compuesto de la fórmula (1) o compuesto protegido de la fórmula (1) como se describió en el Esquema de Reacción C, etapa 2, anterior. En el Esquema de Reacción D, etapa 5, un compuesto de la fórmula (4a) en la cual Y es tio protegido es desprotegido para dar el compuesto de la fórmula (1) o un compuesto protegido de fórmula (1) . En el Esquema de Reacción D, una etapa opcional, un compuesto protegido de la fórmula (1) es desprotegida para dar un compuesto de la fórmula (1) . Tales reacciones de desprotección son bien conocidas y apreciadas en la técnica y pueden incluir desprotecciones selectivas. Las rutas alternativas para preparar los compuestos de la fórmula (3) en las cuales Y es bromo, están presentes en las Esquemas de Reacción F.l y F.2.

Es quema de Reacción F . l es bromo y A es -OH) En el Esquema de Reacción F.l, un ácido carboxílico a-amino apropiado de la fórmula (8) es desaminobrominado para dar un compuesto de la fórmula (3) en el cual Y es bromo y A es -OH. Un ácido carboxílico a-amino apropiado de la fórmula (8), y formas protectoras de los mismos en la cual R3> es R3 como se desea en el producto final de la fórmula (1) o da lugar después de la desprotección en R3 como se deseó en el producto final de la fórmula (1) . En la adición, ácido Ó- amino carboxílico de la fórmula (8) también puede ser uno en el cual la estereoquímica en la R3' que soporta carbono da lugar después del desplazamiento en la estereoquímica como se deseó en este carbono en el producto final de la fórmula (1) . Tal ácido carboxílico a-amino apropiado de la fórmula (8), son comercialmente disponibles o pueden ser fácilmente preparados por técnicas y procedimientos bien conocidos y apreciados por un experto ordinario en la técnica. Por ejemplo, L-alanina, D-alanina, L-valina, D-valina, D-norvalina, L-leucina, D-leucina, D-isoleucina, D-tert-leucina, glicina, ácido de L-glutámico, ácido D-glutámico, L-glutamina, D-glutamina, L-lisina, D-lisina, L-ornitina, D-ornitina, ácido de (D) - (-) -2-aminobutírico, D-treonina, D-homoserina, D-alotreonina, D-serina, ácido D-2-aminoadípico, ácido D-aspártico, ácido D-glutámico, hidrato D-lisina, monobromhidruro de ácido 2 , 3-diaminopropiónico, clorhidrato de D-ornitina, dihidrocloruro del ácido D,L-2,4-diaminobutiríco, L-meta-tirosina, D-4-hidroxifenilglicina, D-tirosina, L-fenilalanina, D-fenilalanina, D,L-2-fluorofenilalanina, clorhidrato de beta-metil-D, L-fenilalanina, D, L-3-fluorofenilalanina, 4-bromo-D,L- fenilalanina, L-fenilalanina, L-fenilglicina, D-fenilglicina, D, L-4-fluorofenilalanina, 4-yodo-D-fenilalanina, D-homofenilalanina, D, L-2-fluorofenilglicina, D,L-4-clorofenilalanina, y similares, son todos comercialmente disponibles y los métodos en D. A. Evans, et al. J. Am. Chem. Soc. , 112, 4011-4030 (1990): S. Ikegami et al. Tetrahedron. 44, 5333-5342 (1988); W. Oppolzer et al. Tet. Lets. 30. 6009-6010 (1989); Synthesis of Optically Active a-Amino-Acids, R. M. Williams (Pergamon Press, Oxford 1989); M. J. O'Donnell ed.: a-Amino-Acid Synthesis. Tetrahedrom Symposia in print, No. 33, Tetrahedro 44, No. 17 (1988); U. Schóllkopf, PureAppl. Chem. 55, 1799 (1983); U. Hengartner et al. J. Org. Chem. , 44, 3748-3752 (1979); M. J. O'Donnell et al. Tet. Lets., 2641-2644 (1978); M. J. O'Donnell et al. Tet. Lets. 23, 4255-4258 (1982); M. J. O'Donnell et al. J. Am. Chem. Soc, 110, 8520-8525 (1988). La desaminobrominación descrita en el Esquema de Reacción F.l puede ser realizada utilizando condiciones descritas en Compagnone, R.S. y Rapoport, H.. J. Org . Chem. , 51, 1713-1719 (1986); Patente Norteamericana No. 5,322,942, expedida el 21 de junio de 1994; Overberger, C.G. y Cho, I., J. Org. Chem., 33, 3321-3322 (1968); o P fister, K. et al., J. Am. Chem. Soc, 71, 1096-1100 (1949) . Por ejemplo, un ácido a-amino carboxílico de la fórmula (8) y un bromuro adecuado, tal como bromuro de hidrógeno o bromuro de potasio en una solución acida, tal como ácido sulfúrico, se trata con nitrito de sodio. La temperatura de reacción se lleva a cabo a temperaturas desde aproximadamente -25°C a aproximadamente a temperatura ambiente y requiere aproximadamente 1 a 5 horas. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como acidificación, extracción, evaporación, cromatografía, y recristalización para dar el compuesto de la fórmula (3) en el cual Y es bromo y A es -OH. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas y apreciadas en el arte, tales como acidificación, basificación, filtración, extracción, evaporación, trituración, cromatografía, y recristalización.

Esquema de Reacción F.2 (9) Br ((3) en la cual Y i es bromo y A es -OH) En el Esquema de Reacción F.2, un ácido carboxílico apropiado de la fórmula (9) es brominado para dar un compuesto de la fórmula (3.) en el cual Y es bromo y A es -OH.

Un ácido carboxílico apropiado de la fórmula (9), y las fórmulas protegidas de los mismos, es uno en el cual R3< es R3 como se desee en el producto final de la fórmula (1) o da origen después de la desprotección a R3 como se deseó en el producto final de la fórmula (1) . Por ejemplo, una mezcla de un ácido carboxílico de la fórmula (9) y fósforo rojo secó se tratan a gotas con bromuro a temperatura promedio que va desde aproximadamente -20° a aproximadamente 10°C. La mezcla de la reacción entonces se calienta a temperatura ambiente y luego se calienta a aproximadamente 80°C durante aproximadamente 2-5 horas. La mezcla de reacción entonces se enfría a temperatura ambiente, se vierte en agua que contiene bisulfito de sodio, y se neutraliza usando carbonato de sodio sólido. La capa acuosa se extrae y acidifica con un ácido adecuado, tal como un ácido clorhídrico concentrado. El precipitado se colecta por filtración y se seca para dar el compuesto de la fórmula (3) o fórmula (3b2) en la cual Y es bromo y A es -OH. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas y apreciadas en el arte, tal como acidificación, basificación, filtración, extracto, evaporación, trituración, cromatografía, y recristalización. Los compuestos de la fórmula (8) y (9) en los cuales R3. es un -(CH2)m-W para uso en los Esquemas de Reacción F.l y F.2 se preparan de acuerdo a los Esquemas de Reacción G.l y G.2.

Esquema de Reacción G . 1 (1 1) (9) en la cual R,,es W-(CH2)m- En el Esquema de Reacción G.l, un ácido ?-amino carboxílico apropiado de la fórmula (11) se convierte en un compuesto de la fórmula (9) en el cual R3< es W-(CH2)m-. Un ácido ?-amino carboxílico apropiado de la fórmula (11) es uno en el cual m es como se deseó en el producto final de la fórmula (1) y son disponibles en la técnica. Por ejemplo, la reacción se lleva a cabo en un solvente polar adecuado, tal como agua, etanol, dietiléter, tetrahidrofurano, o una mezcla de solvente agua/etereal utilizando la base adecuada, tal como carbonato de sodio y N-carbetoxiftalimida . La mezcla de reacción es típicamente agitada aproximadamente a temperatura ambiente durante 1-5 horas. El producto puede ser aislado y purificado por técnicas bien conocidas en el arte, tal como acidificación, extracción, evaporación, cromatografía y recristalización para dar el compuesto adicional de la fórmula (9) en la cual R3. es W-(CH2)m.

Esquema de Reacción G . 2 , W-(CH2)m- El Esquema de Reacción G.2, etapa 1, ácido a,?-diamino apropiado de la fórmula (12) experimenta una N-a-protección selectiva para dar un ácido N-a-protegido-?-diamino de la fórmula (13). Un ácido a,?-diamino apropiado de la fórmula (12) es uno en el cual m es como se desea en el producto final de la fórmula (1) .

Por ejemplo, una N-a-protección selectiva de un ácido a,?-diamino adecuado, tal como L-lisina (fórmula 12 en la cual m es 4) , se logra mediante el enmascaramiento del grupo ?-amino mediante la formación de una imina de benzilideno. La imina de benzilideno es formada disolviendo monohidrocloruro de L-lisina en hidróxido de litio y enfriar la solución en un rango de temperatura desde aproximadamente 0° a 10°C. El benzaldehído bruscamente destilado entonces se agrega y la solución se sacude. N-?-benzilidena-L-lisina se recupera por filtración y evaporación. El grupo a-amino de N-?-benzilidena-L-lisina entonces experimenta protección, tal como la introducción de un grupo Cbz o t-Boc seguido por desdoblamiento hidrolítico de la imina in si tu para dar N-a-benciloxi-carbonil-L-lisina . Consecuentemente, N-?-benziliden-L-lisina se agrega a una mezcla de hidróxido de sodio y etanol enfriado a una temperatura desde aproximadamente -5° a aproximadamente -25°C. Entonces, las soluciones pre-enfriadas del cloruro de benciloxicarbonilo en un solvente, tal como etanol, se agrega a la mezcla de reacción. La temperatura se mantiene en un rango desde aproximadamente -10° a aproximadamente -25CC durante el curso de la adición, y puede permitir surgir posteriormente. La mezcla de reacción entonces se acidifica utilizando un ácido adecuado, tal como ácido clorhídrico preenfriado y N-a-benziloxicarbonil-L-lisina, el cual corresponde a la fórmula (13) en donde m es 4, se recupera por filtración o evaporado y recristalización. En el Esquema de Reacción G.2, la etapa 2, N-a- benziloxicarbonil-L-lisina u otros compuestos de la fórmula (13) se convierten a ?-ftalimido-a-benziloxicarbonilo-L- lisina u otro ácido carboxílico ?-ftalimido-a-aminoprotegido de la fórmula (14) mediante el método descrito en el Esquema de Reacción G.l, anterior. Esquema de Reacción G.2, etapa 3, el ácido carboxílico ?-ftalimido-a-aminoprotegido de la fórmula (14) está desprotegido para dar un compuesto de la fórmula (8) en el cual R3- es W-(CH2)m_. Por ejemplo, ?-ftalimido-a-benziloxicarbonil-L-lisina está en contacto con el hidrógeno en presencia de un catalizador de hidrogenación, tal como paladio/carbono al %. Los reactivos son típicamente contactados en una mezcla de solvente adecuado tal como etanol, metanol, agua y mezclas de etanol/agua, o mezclas de metanol/agua. Los reactivos son típicamente sacudidos bajo una atmósfera de hidrógeno de 35-45 psi a temperatura ambiente durante un periodo de tiempo promediado desde 5-24 horas. El producto es típicamente recuperado por filtración y evaporación del solvente. Una ruta para preparar los compuestos de la fórmula (3) y la fórmula (3b2) en la cual Yi es tio protegido está presente en el Esquema de Reacción H. Los reactivos y materiales iniciales están fácilmente disponibles para uno de experiencia ordinaria en la técnica. El Esquema de Reacción H todos los sustituyentes, al menos de que se indique de otra manera, son como se definió previamente.

Esquema de reacción H g5 ( 15) ( 17) etapa 2 R, ((3) en la cual Y es (18) tio protegida) En el Esquema de Reacción H, etapa 1, un bromoacetato de la fórmula (15) está en contacto con un tiol apropiado para dar un éster ácido acético protegido de la fórmula (17) . En un bromoacetato de la fórmula (15) Pg5 es un grupo protector, tal como metilo, etilo, t-butilo, y bencilo. Un tiol apropiado es uno el cual da origen a un grupo tio protector, Y, en el producto de la fórmula (3b) . En el Esquema de Reacción H, etapa 1, el usó de 4-metoxibenzilmercaptano es preferido. Por ejemplo, un bromoacetato de la fórmula (15) está en contacto con un tiol apropiado en un solvente orgánico adecuado, tal como dimetilformamida. Ventajosamente, el solvente es desgaseado. La reacción se lleva a cabo utilizando una base adecuada, tal como hidróxido de sodio trietilamina, o N, N-diisopropiletilamina . La reacción se lleva a cabo a temperaturas desde aproximadamente -50° a aproximadamente a temperatura ambiente y se requiere aproximadamente 1 a 72 horas. El éster ácido acético protegido de la fórmula (17) puede ser aislado y purificado por métodos bien conocidos apreciados en la técnica, tales como extracción, evaporación, cromatografía, y destilación, y recristalización. En el Esquema de Reacción H, etapa 2, el éster ácido acético protegido de la fórmula (17) es alquilado con un agente de alquilación apropiado para dar un compuesto de la fórmula (18) . En el Esquema de Reacción H, etapa 2, un agente de alquilación apropiado es uno el cual transfiere R3< el cual es R3 como se deseó en el producto final de la fórmula (1) o da lugar después de la desprotección a R3 como se deseó en el producto final de la fórmula (1) o da origen a R3>> tal como se definió en el Esquema de Reacción D, etapa 1. Los agentes de alquilación apropiados incluyen alquilhaluros, tales como yoduro de metilo, bromuro de metilo, bromuro de etilo, bromuro de propilo, cloruro de propilo, bromuro de butilo, cloruro de butilo, y similares; bromuro de bencilo, cloruro de bencilo, bromuro de bencilo sustituido, cloruro de bencilo sustituido, bromoacetato de etilo, bromoacetato de t- butilo, etilo 3-cloropropionato, etilo 3-bromopropionato, etilo 5-bromovalerato, etilo 4-bromobutirato, 3- cloropropionamida, 2-bromoetilbenceno, 2-bromoetilbenceno sustituido, l-cloro-3-fenilpropano, l-bromo-4-fenilbutano, y similares, N- (2-bromoetil ) ftalimida, N-(3-bromopropil ) ftalimida, N- ( 4-bromobutil) ftalimida y similares; l-bromo-2-feniletano, l-bromo-3-fenilpropano, l-bromo-4- fenilbutano y similares. Por ejemplo, un éster ácido acético protegido de la fórmula (17) es alquilado con un agente de alquilación apropiado. La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado, tal como dietiléster, tetrahidrofurano, dimetilformamida, y tolueno utilizando una base adecuada, tal como hidruro de sodio, hidruro de potasio, t-butóxido de potasio, bis (trimetilsilil ) amida de litio, bis (trimetilsilil) amida de sodio, bis (trimetilsilil ) amida de potasio o diisopropilamida de litio. La reacción es generalmente llevada cabo a temperaturas desde aproximadamente -70°C a aproximadamente temperatura ambiente o requiere desde aproximadamente 1-24 horas. El producto puede ser aislado por técnicas bien conocidas en el arte, tales como extracción en la evaporación y precipitación y puede ser purificado por cromatografía y recristalización. En el Esquema de Reacción H, etapa 3, el compuesto de la fórmula (18) el grupo protector carboxi Pg3 es selectivamente eliminado para dar el compuesto de la fórmula (3) en el cual Y es tio protegido. Tal desprotección de esteres a ácidos en presencia de los grupos de protección tio adecuados son bien conocidos y apreciados en la técnica. Los ejemplos siguientes y las preparaciones de síntesis típicas presentes como se describen en los Esquemas de Reacción anteriores. Estos ejemplos y preparaciones se entienden que son ilustrativos únicamente y no pretenden limitar el alcance de la invención en cualquier forma.

PREPARACIÓN 1.1 Acido de 2- (t-Butoxicarbonilamino) malónico Clorhidrato aminomalonato de dietil combinado (5.0 g 23.6 mmoles), trietilamina (3.30 mL, 23.6 mmoles), y diclorometano (80 mL) . Se agrega di-t-butil dicarbonato (5.4 g, 24.8 mmoles) . Después de 18 horas, se extrajo con una solución de ácido sulfúrico al 5%, una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y luego salmuera. Se seca la capa orgánica sobre Na2S04, se filtra y evapora in vacuo para dar un residuo. La cromatografía del residuo en gel de sílice se eluye con acetato de hexano/etilo 3/2 para dar t-butoxicarbonilaminomalonato de dietilo (87%). t-butoxicarbonilaminomalonato de dietilo combinado (4.55 g, 16.5 mmoles), en una solución de hidróxido de sodio acuoso 6 M (6.65 mL, 40 mmoles), y etanol (30 mL) . Después de 18 horas, se evapora in vacuo para eliminar más del etanol, diluido en agua (50 mL) y se extrae con dietiléter. Se acidifica a un pH desde aproximadamente 3 con ácido clorhídrico 12M acuoso y se extrae dos veces con acetato de etilo. Se secan las capas orgánicas combinadas sobre Na2S04, se filtra, y concentra in vacuo para dar el compuesto del título (61%) .

PREPARACIÓN 1.2 Acido- ( t-Butoxicarbonilamino) malónico Clorhidrato de dietilaminomalonato combinado (13.34 g, 63.0 mmoles), trietilamina (8.8 mL, 63.0 mmoles), y diclorometano (220 mL) . Se Agrega dicarbonato de di-t-butilo (14.4 g, 66.2 mmoles) . Después de 18 horas, se extrae con solución de ácido sulfúrico 5% acuoso, una solución de bicarbonato de sodio acuoso saturada y salmuera. Se seca la capa orgánica sobre Na2S04, se filtra y se evapora in va cuo para dar t-butoxicarbonilaminomalonato (103%). El t-butoxicarbonilaminomalonato de dietilo combinado (22.72 g, 82.5 mmoles), una solución de hidróxido de sodio acuoso 6 M (55 mL, 330 mmoles >, y etanol (150 mL) .

Después de 56 horas, se evapora in vacuo para eliminar más del etanol, se diluye con agua (40 mL) . Se enfría y acidifica a un pH de aproximadamente 3 con ácido clorhídrico concentrado. El congelado seco da un compuesto del título y el cloruro de sodio como un polvo.

PREPARACIÓN 2 Acido 2- (R) -2-Bromo-3-metilbutírico D-valina combinada (4.7 g. 40.0 mmoles) y una solución de ácido sulfúrico 2.5 M acuoso se enfría aproximadamente como sigue -5°C. El ácido bromhídrico acuoso se agrega a (13.9 g, 48%, 40 mmoles) . Se Agrega una solución de nitruro de sodio (2.8 g, 40 mmoles) en agua (20 L) . Después de 2 horas, se caliente a aproximadamente 5°C. Después de 18 horas, se extrae tres veces con acetato del etilo. Se secan las capas orgánicas combinadas sobre Na2S04, se filtra, y evapora in va cuo para dar un residuo. El residuo se lleva a cromatografía de gel de sílice eluyendo con 1/1/0.1 diclorometano/acetato de etilo/ácido acético para dar un residuo. Se lleva cromatografía el residuo de gel de sílice con 1/1/0.5 diclorometano/acetato de etilo/acetato de dietilo/ácido acético para dar el compuesto del título (35%) .

EJEMPLO 1 N,N'-Difenetil-2-( (S) -2-mercapto-3-metilbutirilamino) -malonamida 1.1 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( t-butoxicarbonilamino) -malonamida Combinar ácido t-butoxicarbonilaminomalónico (0.465 g, 2.12 mmol), fenetilamino (0.715 mL, 5.70 mmol) y diclorometano (25 mL) . Agregar N-metilmorfolina (0.752 mL, 6.85 mmol) . Enfriar en un baño de hielo. Agregar complejo de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris (pirrolidino) -fosfonio (3.15 g, 6.85 mmol). Remover el baño de hielo y dejar calentar a temperatura ambiente. Después de 18 horas, diluir la mezcla de reacción con acetato de etilo, extraer con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, una solución de bicarbonato de sodio saturada, y luego salmuera. Secar las capas orgánicas sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 1.2 Síntesis de Sal de ácido trifluoroacético de N,N'-difenetil-2-aptinomalonamida Combinar N,N ' -difenetil-2- (t-butoxicarbonilamino) -malonamida (0.571 g, 1.35 mmol) y diclorometano (10 mL) . Agregar ácido trifluoroacético (1.8 mL) . Después de 2.5 horas evaporar in vacuo para dar un residuo. Agregar hexanos y tetracloruro de carbono para co-evaporar ácido trifluoroacético residual y evaporar in va cuo para dar el compuesto del título (100%). XX Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (R) -2-bromo-3-metilbutirilamino) malonamida Combinar sal del ácido trifluoroacético de N,N'-difenetil-2-aminomalonamida (0.285 g, 0.655 mmol) y diclorometano (5 mL) . Agregar ácido (R) -2-bromo-3-metilbutírico (0.118 g, 0.655 mmoles), N-metilmorfolina (0.10 mL . 0.983 mmol), y sal del ácido clorhídrico de 1-etil-3- (3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.14 g, 0.725 mmol), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.10 g, 0.72 mmol). Después de 18 horas, evaporar la mezcla de reacción in va cuo, diluir la mezcla de reacción concentrada con acetato de etilo, extraer con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, una solución de bicarbonato de sodio saturada, y luego salmuera . Saturar cada una de las capas acuosas con cloruro de sodio y extraer cuatro veces con acetato de etilo.

Combinar las capas orgánicas, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (67%) . 1.4 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (S ) -2-tioacetil-3-metilbutirilamino) malonamida Combinar N,N' -difenetil-2- ( (R) -2-bromo-3-metilbutirilamino) malonamida (0.20 g, 0.41 mmol), ácido tioacético (0.08 mL, 1.1 mmol), y dimetilformamida (8 mL) . Desgasear por ciclos repetidos de vacío y llenando con gas de nitrógeno. Agregar carbonato de cesio (0.215 g, 0.664 mmol) . Después de 18 horas, diluir con agua y extraer con acetato de etilo. Extraer la capa orgánica con salmuera, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 1/1 hexano acetato de etilo para dar el compuesto del título. 1.5 síntesis de N,N'-difenetil-2-( (S) -2-mercapto-3-metilbutirilamino) malonamida Enfriar metanol (10 mL) en un baño de hielo y burbujear con gas de amoníaco durante aproximadamente 15 minutos. Agregar una solución enfriada (aproximadamente 0°C) de N,N'-difenetil-2- ( (S) -2-tioacetil-3-metilbutirilamino) malonamida (0.17 g, 0.35 mmol) en metanol desgaseado (10 mL) . Después de 1 hora, evaporar in vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 3/2 hexano-acetato de etilo y luego 1/1 hexano-acetato de etilo da el compuesto del título (89%) .

EJEMPLO 2 N,N'-Difenetil-2-( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) -malonamida 2.1 Síntesis de N,N' -Difenetil-2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 1.3 utilizando sal del ácido trifluoroacético de N, N ' -difenetil-2-aminomalonamida (0.61 g, 0.600 mmol), ácido (R) -2-bromo-3-fenilpropiónico (0.137 g, 0.600 mmol), N-metilmorfolina (0.20 mL, 1.8 mmol), sal de ácido clorhídrico de l-etil-3-(3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.14 g, 0.72 mmoles), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.097 g, 0.72 mmol) en diclorometano (10 mL) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (60%). 2.2 Síntesis de N,N ' -difenetil-2- ( (S) -2-tioacetil-3- fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 1.4 utilizando N, N ' -difenetil-2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonamida (0.11 g, 0.21 mmol), ácido tioacético (0.05 mL, 0.62 mmol), y carbonato de cesio (0.10 g, 0.31 mmol) en dimetilformamida (8 mL) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 1/1 hexano acetato de etilo para dar el compuesto del título (92%) . 2.3 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 1.5 utilizando N, N' -difenetil-2- ( (S)-2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) -malonamida (0.10 g, 0.192 mmol).

Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 1/1 hexano acetato de etilo da el compuesto del título (83%) .

PREPARACIÓN 3 ácido 2- (S) -2-Tioacetil-4-fenilbutírico Combinar D-homofenilalanina (5.0 g, 28.0 mmol) y una solución de ácido sulfúrico acuosa 2.5M (28 mL) . Enfriar a aproximadamente -5°C. Agregar ácido bromhídrico acuoso (6.35 L, 48%, 56 mmol) . Agregar una solución de nitrito de sodio (1.95 g. 28 mmol) en agua (15 mL) durante aproximadamente 30 minutos. Después de 2 horas, calentar a aproximadamente 0°C. Después de 18 horas, extraer tres veces con acetato de etilo. Secar las capas orgánicas combinadas sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 9/1/0.5 diclorometano/acetato de etilo/ácido acético para dar ácido 2- (R) -2-bromo-4-fenilbutírico (54%). Combinar ácido 2- (R) -2-bromo-4-fenilbutírico (0.486 g, 2.05 mmol), ácido tioacético (0.40 mL, 5.5 mmol), y dimetilformamida (40 mL) . Desgasear por ciclos repetidos de vacío y llenar con gas de nitrógeno. Agregar carbonato de cesio (1.08 g, .32 mmol) . Después de 18 horas, diluir con agua y extraer con acetato de etilo. Extraer la capa orgánica con salmuera, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar el compuesto del título.

EJEMPLO 3 N,N'-Difenetil-2-( (S) -2-mercapto-4-fenilbutirilamino) -malonamida 3.1 Síntesis de N,N' -difenetil-2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida Combinar una mezcla de ácido t-butoxicarbonilaminomalónico y cloruro de sodio de la Preparación 1.2 (5.0 g, 13.7 mmol), fenetilamino (4.32 mL, 34.3 mmol), y tetrahidrofurano (25 mL) . Enfriar en un baño de hielo. Eliminar el baño de hielo. Agregar N-metilmorfolina (3.8 mL, 34.3 mmol), sal del ácido clorhídrico de l-etil-3- ( 3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (6.58 g, 34.3 mmol), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (4.63 g, 34.3 mmol) . Dejar calentar a temperatura ambiente. Después de 18 horas, diluir la mezcla de reacción con acetato de etilo, extraer con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, una solución de bicarbonato de sodio saturada, y luego salmuera. Secar las capas orgánicas sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en el gel de sílice eluyendo con 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (84%) . 3.2 Síntesis de sal del ácido trifluoroacético de N,N'-difenetil-2-aminomalonamida Combinar N, N-difenetil-2- ( t-butoxicarbonilamino) -malonamida (0.425 g, 1.00 mmol) y diclorometano (7 mL) . Agregar ácido trifluoroacético (1.5 mL) . Después de 2.5 horas, evaporar in vacuo para dar un residuo. Repetidamente, agregar tetracloruro de carbono para co-evaporar ácido trifluoroacético residual y evaporar in vacuo para dar el compuesto del título. 3.3 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (S) -2-tioacetil-4- fenilbutilamino) malonamida Combinar sal del ácido trifluoroacético de N,N'- difenetil-2-aminomalonamida (0.50 g, 1.0 mmoles) y diclorometano (15 mL) . Agregar ácido (R) -2-tioacetil-4- fenilbutírico (0.545 g, 1.0 mmoles), N-metilmorfolina (0.22 mL, 2.0 mmol), y sal del ácido clorhídrico de l-etil-3-(3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.23 g, 1.2 mmoles), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.16 g. 1.2 mmol). Después de 18 horas, evaporar la mezcla de reacción in vacuo, diluir la mezcla de reacción concentrada con acetato de etilo, extraer con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, una solución de bicarbonato de sodio saturada, y luego salmuera. Extraer cada capa acuosa con acetato de etilo. Combinar las capas orgánicas, secar sobre a2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (92%) . 3.4 Síntesis de N,N' -difenetil-2- ( (S) -2-mercapto-4-fenilbutirilamino) malonamida Enfriar metanol (15 mL) en un baño de hielo y burbujear con gas de amoníaco durante aproximadamente 15 minutos. Agregar una solución enfriada (aproximadamente 0°C) de N,N' -difenetil-2- ( (S) -2-tioacetil-4-fenilbutirilamino) -malonamida (0.50 g, 0.92 moles) en metanol desgaseado (15 mL) . Después de 1 hora, evaporar in vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en el gel de sílice eluyendo con 3/2 hexano acetato de etilo para dar el compuesto del título (28%) .

EJEMPLO 4 N,N'-Dibencil-2-( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) -malonamida 4.1 Síntesis de N, N ' -dibencil-2- ( t-butoxicarbonilamino) -malonamida Combinar ácido t-butoxicarbonilaminomalónico (0.438 g, 2.00 mmol), bencilamino (0.436 mL . 4.0 mmol), y diclorometano (10 mL) . Agregar N-metilmorfolina (0.55 mL, 5.00 mmol)), sal del ácido clorhídrico de l-etil-3-(3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.96 g. 5.0 mmol), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.67 g, 5.0 mmol). Después de 18 horas. Concentrar in vacuo, diluir la mezcla de reacción concentrada con acetato de etilo, extraer con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, una solución de bicarbonato de sodio saturada, y luego salmuera. Secar la capa orgánica sobre Na2S04, filtrar, y evaporar ín va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (52%) . 4.2 Síntesis de sal de ácido trifluoroacético de N,N'-dibencil-2-aminomalonamida trifluoroacético la sal acida Combinar N,N'-dibencil-2- (t-butoxicarbónilamino) -malonamida (0.415 g, 1.04 mmol) y diclorometano (7 mL) . Agregar ácido trifluoroacético (1.0 mL) . Después de 2.5 horas, evaporar in va cuo secar bajo alto vacío para dar el compuesto del título. 4.3 Síntesis de N,N' -dibencil-2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonamida Combinar sal del ácido trifluoroacético de N,N'-dibencil-2-aminomalonamida (0.41 g, 1.04 mmol), ácido (R)-2-bromo-3-fenilpropiónico (0.262 g, 1.15 mmol), N-metilmorfolina (0.23 mL, 2.08 mmol), sal del ácido clorhídrico de l-etil-3- ( 3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.22 g, 1.15 mmol), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.155 g, 1.15 mmol) en diclorometano (5 mL) . Después de 18 horas, extraer con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, una solución de bicarbonato de sodio saturada, y luego salmuera. Secar la capa orgánica sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo sobre gel de sílice eluyendo con 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 4.4 Síntesis de N,N' -dibencil-2- ( (S) -2-tioacetil-3- fenilpropionilamino) malonamida Combinar N, N ' -dibencil-2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonamida (0.49 g, 0.97 mmol) y ácido tioacético (0.172 mL . 2.42 mmol) en dimetilformamida (15 mL) . Desgasear por ciclos repetidos de vacío y llenar con nitrógeno. Agregar carbonato de cesio (0.473 g, 1.45 mmol). Después de 18 horas, diluir la mezcla de reacción con agua y extraer dos veces con acetato de etilo. Combinar las capas orgánicas. Extraer con salmuera, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (46%) . 4.5 Síntesis de N,N' -dibencil-2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Enfriar metanol (12 mL) en baño de hielo y burbujear con gas de amoníaco durante aproximadamente 15 minutos. Agregar una solución enfriada (aproximadamente 0°C) de N, N' -dibencil-2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) -malonamida (0.224 g, 0.445 mmol) en metanol desgaseado (12 mL) . Después de 1 hora, evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título.

EJEMPLO 5 N,N'-Di- (3-fenilpropil) -2-( (S) -2-mercapto-3- fenilpropionilamino) malonamida .1 síntesis de N,N' -di- (3-fenilpropil) -2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.1 utilizando 3-fenilpropilamino (0.54 mL, 4.0 mmol) . Agregar mediante purificación por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (27%) . 5.2 Síntesis de sal de ácido trifluoroacético de N,N'-di-(3-fenilpropil) -2-aminomalonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.2 utilizando N, N ' -di- (3-fenilpropil ) -2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida (0.24 g. 0.53 mmol) para dar, después de la evaporación in va cuo y secar bajo alto vacío, el compuesto del título. .3 Síntesis de N, N ' -di-3- (fenilpropil) -2- ( (R) -2-bromo-3- fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.3 utilizando sal del ácido trifluoroaético de N,N'-di-(3- fenilpropil) -2-aminomalonamida . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 5.4 Síntesis de N, N ' -di- (3-fenilpropil) -2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.4 utilizando N,N'-di- (3-fenilpropil) -2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionil-amino) alonamida (0.124 g, 0.575 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 5.5 Síntesis de N, N ' -di- (3-fenilpropil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.5 utilizando N,N'-di- ( 3-fenilpropil) -2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) malonamida (0.156 g, 0.289 mmoles). Después de 1 hora, evaporar in va cuo para dar un residuo. Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 5% acetona/diclorometano dar el compuesto del título.

EJEMPLO 6 N, N ' -Di- ( 4 -metoxifenetil ) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionil- amino) malonamida; •6.1 Síntesis de N,N' -di- (4 -metoxifenetil) -2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.1 utilizando 4-metoxifenetilamino (0.585 mL . 3.8 mmol). Agregar mediante purificación por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (27%) . 6.2 Síntesis de sal de ácido trifluoroacético de N,N'-di-(4-metoxifenetil ) -2-aminomalonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.2 utilizando N, N ' -di- ( 4 -metoxifenetil ) -2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida (0.20 g, 0.412 mmol) para dar, después de la evaporación in va cuo y secando bajo alto vacío, el compuesto del título. 6.3 Síntesis de N, N ' -di- (4-metoxifenetil) -2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.3 7S utilizando sal de ácido trifluoroacético de N,N'-di-(4-metoxifenetil) -2-aminomalonamida . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 6.4 Síntesis de N, N ' -di- ( 4-metoxifenetil) -2- ( (S) -2-tioacetil- 3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.4 utilizando N, N ' -di- ( 4 -metoxifenetil ) -2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionil-amino) malonamida (0.133 g, 0.223 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (54%) . 6.5 Síntesis de N, N ' -di- ( 4-metoxifenetil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) alonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.5 utilizando N,N' -di- ( 4-metoxifenetil ) -2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenil-propionilamino) malonamida (0.071 g, 0.12 mmol). Después de 1 hora, evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en el gel de sílice eluyendo con 1/1 acetato de etilo/hexano da el compuesto del título.

EJEMPLO 7 N,N'-Dipentil-2- ( 2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida 7.1 Síntesis de N, N ' -dipentil-2- ( t-butoxicarbonilamino) -malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.1 utilizando pentilamina (1.50 L, 12.8 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 1/1 acetato de etilo/hexano, 3/1 acetato de etilo/hexano, y luego 5/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (68%) . 7.2 Síntesis de sal de ácido trifluoroacético de N,N'-dipentil-2-aminomalonamida Combinar N,N'-dipentil-2- (t-butoxicarbonilamino) -malonamida (1.49 g, 4.17 mmol) . Después de 1.5 horas, evaporar in va cuo y triturar con tetracloruro de carbono para dar el compuesto del título. 7.3 Síntesis de N, N ' -dipentil-2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.3 utilizando sal de ácido trifluoroacético de N, N ' -dipentil-2-aminomalonamida . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 7.4 Síntesis de N,N'-dipentil-2- ( (S)-2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) alonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.4 utilizando N,N' -dipentil-2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonamida (0.45 g, 0.961 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (62%) . 7.5 Síntesis de N,N'-dipentil-2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.5 utilizando N, N ' -dipentil-2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) malonamida (0.277 g, 0.60 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 5% de acetona/diclorometano y luego 10% de acetona/diclorometano para dar el compuesto del título.

EJEMPLO 8 N,N' -Di- (2- (N-anilino) etil) -2- ( 2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida 8.1 Síntesis de N,N' -di- (2- (N-anilino) etil)-2-(t-butoxicarbonilamino) malonamida Combinar ácido t-butoxicarbonilaminomalónico (0.730 g, 2.00 mmol), 2- (N-anilino) etilamino (0.654 mL, 5.00 mmol) N-metilmorfolina (0.55 mL, 5.0 mmol)), sal de ácido clorhídrico l-etil-3-(3- (dimetilamino) propil ) -carbodiimida (0.958 g, 5.0 mmol), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.67 g, 5.00 mmol) en diclorometano (10 mL) y tetrahidrofurano (1 mL) . Después de 18 horas, concentrar in vacuo, diluir la mezcla de reacción concentrada con acetato de etilo y extraer con una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y luego salmuera. Extraer cada una de las capas acuosas con acetato de etilo. Combinar las capas orgánicas, secar sobre Na2S0 , filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Combinar el residuo, metanol (10 mL) , y celite y aplicar a una columna de gel de sílice. Llevar a cromatografía eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (60%) . 8.2 Síntesis de sal de ácido clorhídrico de N, N-di- (2- (N-anilino) etil) -2-a inomalonamida Combinar N,N' -di- (2- (N-anilino) etil) -2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida (0.55 g, 1.21 mmol) y tetrahidrofurano (7 mL) y dietiléter (7 mL) . Agregar una solución de ácido clorhídrico en dietiléter (10 mL, 1 M, 10 mmol) para dar un sólido. Después de 45 minutos, recolectar el sólido por filtración para dar el compuesto del título. 8.3 Síntesis de N, N ' -di- (2- (N-anilino) etil) -2- ( (R) -2-bromo-3- fenilpropionilamino) malonamida . Combinar sal de ácido clorhídrico de N, N ' -di- (2- (N-anilino) etil ) -2-aminomalonamida (0.474 g, 0.866 mmol) y diclorometano (10 mL) . Agregar ácido (R) -2-bromo-3- fenilpropionico (0.26 g, 1.13 mmol) . Agregar trietilamina (0.426 mL, 3.06 mmol). Agregar complejo de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris (dimetilamino) -fosfónio de piridina (0.478 g, 1.13 mmol). Después de 18 horas, evaporar in va cuo y diluir la mezcla de reacción concentrada con acetato de etilo, extraer con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, una solución de bicarbonato de sodio saturada, y luego salmuera. Extraer cada una de las capas acuosas con acetato de etilo. Combinar las capas orgánicas y secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 1/1 acetato de etilo/hexano y luego 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (62%) . 8.4 Síntesis de N, N ' -di- (2- (N-anilino) etil) -2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.4 utilizando N,N'-di- (2- (N-anilino) etil) -2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionil-amino) malonamida (0.311 g, 0.549 mmol) y ácido tioacético (0.08 L, 0.010 mmol) en dimetilformamida (8 mL) , y carbonato de cesio (0.18 g, 0.549 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 1/1 acetato de etilo/hexano, 2/1 acetato de etilo/hexano, y luego 3/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 8.5 Síntesis de N, N ' -di- (2- (N-anilino) etil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.5 utilizando metanol (10 mL) y N, N ' -di- (2- (N-anilino) etil) -2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) malonamida (0.151 g, 0.269 mmol) en metanol desgaseado (10 mL) y tetrahidrofurano (7 mL) . Después de 2.5 horas, evaporar in vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 3/2 acetato de etilo/hexano y luego 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título .

PREPARACIÓN 4 Acido 2- (S) -2-Tioacetil-3-fenilpropiónico Combinar ácido 2- (R) -2-bromo-3-fenilpropiónico (2.85 g, 12.4 mmol), ácido tioacético (1.4 mL, 19.5 mmol), y dimetilformamida (30 mL) . Desgasear por ciclos repetidos de vacío y llenar con gas de nitrógeno. Agregar carbonato de cesio (4.25 g, 12.4 mmol). Después de 18 horas, agregar con una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5%, diluir con agua, y extraer cuatro veces con acetato de etilo. Extraer las capas orgánicas combinadas con salmuera, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 1/1/0.02 hexano/acetato de tilo/ácido acético y luego 1/1/0.02 hexano/acetato de etilo/ácido acético para dar el compuesto del título (43%) .

EJEMPLO 9 N,N'-Di- (pidrid-4-iletil) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionil- amino) malonamida 9.1 Síntesis de N,N'-di- (pidrid-4-iletil) -2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida Combinar ácido t-butoxicarbonilaminomalónico (0.438 g, 2.0 mmol), 2- (pirid-4-il) etilamina (0.61 g, 5.0 mmol), N-metilmorfolina (0.55 L, 5.0 mmol)), sal de ácido clorhídrico l-etil-3- (3- (dimetilamino) propil ) carbodiimida (0.96 g, 5.0 mmol), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.68 g, 5.0 mmol) en diclorometano (10 mL) y tetrahidrofurano (1 mL) . Después de 18 horas, concentrar in va cuo, diluir la mezcla de reacción concentrada con acetato de etilo, y extraer con una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y luego salmuera. Extraer cada una de las capas acuosas con acetato de etilo. Combinar las capas orgánicas, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 10% de metanol/diclorometano para dar el compuesto del título (80%). 9.2 Síntesis de sal de ácido clorhídrico de N, N ' -di- (pidrid-4-iletil) -2-aminomalonamida Combinar N,N' -di- (pidrid-4-iletil ) -2- (t-butoxicarbonilamino) malonamida (0.686 g, 1.61 mmol) y dietiléter (20 mL) . Agregar una solución de ácido clorhídrico en dietiléter (10 mL, 1 M, 10 mmol) . Después de 1 hora, evaporar in vacuo para dar el compuesto del título. 9.3 Síntesis de N, N ' -di- (pidrid-4-iletil) -2- ( (R) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) malonamida Combinar sal de ácido clorhídrico de N,N'-di- (pidrid-4-iletil) -2-aminomalonamida (0.669 g, 1.63 mmol) y diclorometano (10 mL) , tetrahidrofurano (5 mL) , y dimetilformamida de (3 mL) . Agregar una solución de ácido (S ) -2-tioacetil-3-fenilpropiónico (0.43 g, 1.9 mmol) en diclorometano (1.9 mL) . Agregar N-metilmorfolina (0.357 mL, 4.90 mmol) , sal de ácido clorhídrico de l-etil-3-(3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.343 g, 1.8 mmol), e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.242 g, 0.18 mmol). Después de 18 horas, diluir la mezcla de reacción con acetato de etilo, extraer con una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada, y luego salmuera para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 10% de metanol/diclorometano y luego 15% de metanol/diclorometano para dar el compuesto del título (63%) . 9.4 Sintesis de N, N ' -di- (pidrid-4-iletil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.5 utilizando metanol (15 L) y N, N ' -di- (pidrid-4-iletil ) -2- ( (S) -2-tioacetil-3-fenilpropionilamino) malonamida (0.543 g, 1.02 mmol) en metanol desgaseado (15 mL) . Después de 1.5 horas, evaporar in vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 1/10 metanol/diclorometano para dar el compuesto del título.

EJEMPLO 10 N,N'-Difenetil-2-( (S) -2-mercaptopropionilamino) malonamida .1 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (R) -2-bromopropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.3 utilizando ácido (R) -2-bromopropionico (0.109 mL, 1.2 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 10.2 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (S) -2-tioacetilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.4 utilizando N,N' -difenetil-2- ( (R) -2-bromopropionilamino) malonamida (0.175 g, 0.38 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (76%) . 10.3 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (S) -2-mercaptopropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 1.5 utilizando N, N ' -difenetil-2- ( (R) -2-tioacetilpropionil-amino) malonamida (0.131 g, 0.29 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (98%) .

EJEMPLO 11 N, N ' -Difenetil-2- (2-mercaptopropionilamino) malonamida 11.1 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- (2-bromopropionilamino) -malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.3 utilizando ácido 2-bromopropiónico (0.108 mL, 1.2 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 11.2 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- (2-tioacetilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.4 utilizando N,N'-difenetil-2- (2-bromopropionilamino) alonamida (0.152 g. 0.33 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (96%) . 11.3 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- (2-mercaptopropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 1.5 utilizando N,N'-difenetil-2- (2-tioacetilpropionilamino) -malonamida (0.131 g, 0.29 mmol). Purificar por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (100%).

EJEMPLO 12 N,N' -Difenetil-2- ( 2-mercaptopentanoilamino) malonamida 12.1 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- (2-bromopentanoilamino) -malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.3 utilizando ácido 2-bromopentanoico (0.16 mL, 1.2 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 12.2 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- (2-tioacetilpentanoilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 4.4 utilizando N,N'-difenetil-2- (2-bromopentanoilamino) malonamida (0.162 g, 0.33 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 3/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (96%) . 12.3 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- (2-mercaptopentanoilamino) -malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 1.5 utilizando N,N'-difenetil-2- ( 2-tioacetilpentanoilamino) -malonamida (0.131 g, 0.29 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 2/3 acetato de etilo/hexano y luego 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título .

PREPARACIÓN 5 Acido 2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malónico Combinar ácido (R) -2-bromo-3-fenilpropionico (3.44 g, 15 mmol), clorhidrato de dietil aminomalonato (4.23 g, 20 mmol), y N-metilmorfolina (5.5 mL, 50 mmol) en diclorometano (50 mL) . Agregar sal de ácido clorhídrico de l-etil-3-(3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (3.83 g, 20 mmol) e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (2.70 g, 20 mmol). Agregar tetrahidrofurano (10 mL) . Después de 20 horas, concentrar in va cuo y dividir la mezcla de reacción concentrada entre una solución de ácido sulfúrico acuosa al 5% y t-butiléter de metilo. Separar las capas y extraer la capa orgánica con una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y luego salmuera. Secar la capa orgánica sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 1/4 acetato de etilo/hexano, 1/3 acetato de etilo/hexano, y luego 2.5/1 acetato de etilo/hexano para dar 2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) malonato de dietilo. Combinar 2- ( (R) -2-bromo-3-fenilpropionilamino) -malonato de dietilo (3.15 g, 8.16 mmol) y 4-metioxibencilmercaptan (2.6 mL. 19 mmol), y dimetilformamida (25 mL) . Desgasificar por aplicación repetida de vaciado y llenado el recipiente con nitrógeno. Agregar carbonato de cesio (2.94 g, 9.9 mmol). Después de 16 horas, dividir la mezcla de reacción entre agua y dietiléter. Extraer la capa orgánica con salmuera, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo sobre gel de sílice eluyendo secuencialmente con 3/1 hexano/acetato de etilo y luego 2/1 hexano/acetato de etilo para dar 2- ( (S) -2- (p-metoxibenzimercapto) -3-fenilpropionilamino) malonato de dietilo. Combinar 2- ( (S) -2- (metoxibencimercapto) -3-fenilpropionilamino) malonato de dietilo (3.15 g, 6.85 mmol) y una solución de hidróxido de sodio acuosa 6 M (4.6 mL, 28 mmol) en etanol (15 mL) . Después de 24 horas, concentrar in va cuo, diluir la mezcla de reacción concentrada con agua, ajustar el pH a aproximadamente 2.5 utilizando una solución de ácido clorhídrico acuosa 6 M y liofilizar para dar el compuesto del título y cloruro de sodio.

EJEMPLO 13 N, N ' -Di- (4-clorofenetil) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionil-amino) malonamida 13.1 Síntesis de N, ' -di- ( 4-clorofenetil ) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida Combinar ácido 2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malónico (preparado por el método de la Preparación 5, 0.476 g, 63% ácido/37% cloruro de sodio, 0.74, mmol), diclorometano (9 mL) , y tetrahidrofurano (1.5 mL) . Agregar 4-clorofeniletilamino (0.31 mL . 2.23 mmol), N-metilmorfolina (0.25 mL 2.3 mmol), sal de ácido clorhídrico l-etil-3- ( 3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.427 g, 2.23 mmol) e hidrato de 1-hidroxibenztriazole (0.301 g, 2.23 mmol) . Después de 3 días, concentrar in va cuo y dividir la mezcla de reacción concentrada entre una solución de ácido sulfúrico acuosa y acetato de etilo. Separar las capas y extraer la capa orgánica con una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y luego salmuera. Secar la capa orgánica sobre Na2S0 . Filtrar, y evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 2/3 acetato de etilo/hexano, 1/1 acetato de etilo/hexano, y luego 1/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 13.2 Síntesis de N, N ' -di- ( 4-clorofenetil ) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Combinación de N, N ' -di- ( 4-clorofenetil) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida (0.29 g, 0.43 mmol), mercurio (II) acetato (0.171 g, 0.54 mmol), y anisol (0.47 mL) en diclorometano (10 mL) . Enfriar en un baño de hielo y desgasificar aplicando repetidamente al vacio y llenando el recipiente con nitrógeno. Agregar ácido trifluoroacético (4 mL) . Después de 3 horas, purgar con sulfuro de hidrógeno (gas) durante aproximadamente 10 minutos. Filtrar y evaporar in va cuo para dar un residuo. Triturar el residuo con dietiléter para dar el compuesto del título como un sólido (80%).

EJEMPLO 14 N,N' -Di- (2-metoxifenetil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida 14.1 Síntesis de N, N ' -di- ( 2-metoxifenetil ) -2- ( ( S ) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 13.1 utilizando 2-metoxifeniletilamina (0.31 mL, 2.93 mmol). Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 2/3 acetato de etilo/hexano y luego 1/2 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (50%) . 14.2 Síntesis de N, N ' -di- (2-metoxifenetil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 13.2 utilizando N,N'-di- (2-metoxifenetil) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida (0.24 g, 0.37 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 2/3 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título (91%) .

EJEMPLO 15 N,N' -Di- (4-metilfenetil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .1 Síntesis de N, N ' -di- (2-metilfenetil) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida Combinar ácido 2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malónico (preparado por el método de la Preparación 5, 0.476 g, 63% ácido/37% cloruro de sodio, 0.74 mmol) . y N-metilmorfolina (0.27 mL, 2.4 mmol), 2-metilfeniletilamino (0.25 mL, 1.7 mmol), diclorometano (9 mL) , y tetrahidrofurano (1 mL) . Agregar, sal de ácido clorhídrico de l-etil-3- (3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.314 g. 1.64 mmol) e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.22 g, 1.64 mmol) . Después de 1 día, concentrar in va cuo y dividir la mezcla de reacción concentrada entre una solución ácido sulfúrico acuosa al 5% y acetato de etilo. Separar las capas y extraer la capa orgánica con una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y luego salmuera. Secar la capa orgánica sobre a2S04, filtrar, y se evaporar in va cuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 2/3 acetato de etilo/hexano y luego 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 15.2 Síntesis de N, N ' -di- ( 2-metilfenetil ) -2- (( S ) -2- (mercapto) -3-fenilpropilamino) malonamida Combinación de N, N « -di- (2-metilfenetil) -2- ( (S ) -2-(p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida (0.175 g, 0.274 mmol), acetato de mercurio (II) (0.108 g, 0.34 mmol), y anisol (0.3 mL) en diclorometano (10 mL) . Enfriar en un baño de un hielo y desgasificar aplicando repetidamente vacío y llenando el recipiente con nitrógeno. Agregar ácido trifluoroacético (4 mL) . Después de 3 horas, purgar con sulfuro de hidrógeno (gas) durante aproximadamente 10 minutos. Filtrar y evaporar in va cuo para dar un residuo. Combinar el residuo con tetracloruro de carbono y evaporar in va cuo para eliminar la mayoría del ácido trifluoroacético. Llevar a cromatografía el residuo en el gel de sílice eluyendo con 1/2 acetato de etilo/hexano y luego 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título.

EJEMPLO 16 N, N ' -Di- ( 3-metoxifenetil) -2- ( 2-mercapto-3-fenilpropionil-amino) malonamida 16.1 Síntesis de N, N ' -di- (3-metoxifenetil ) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 15.1 utilizando 3-metoxifeniletilamino (0.24 mL, 1.7 mmol) .

Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 2/3 acetato de etilo/hexano y luego 2/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título. 16.2 síntesis de N, N ' -di- (3-metoxifenetil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 15.2 utilizando N,N' -di- ( 3-metoxifenetil ) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida (0.181 g, 0.27 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 1/2 acetato de etilo/hexano y luego 1/1 acetato de etilo/hexano para dar el compuesto del título.

EJEMPLO 17 N,N'-Di- (3, 4 -dimetoxifenetil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida 17.1 Síntesis de N, N ' -di- (3, 4-dimetoxifenetil) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida Combinar ácido 2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) alónico (preparado por el método de la Preparación 5. 0.476 g, 63% ácido/37% cloruro de sodio, 0.74 mmol) y N-metilmorfolina (0.27 mL, 2.4 mmol), clorhidrato de 3, 4-dimetoxifeniletilamina (0.50 g. 2.3 mmol), diclorometano (9 mL) , y tetrahidrofurano (1 mL) . Enfriar en baño de hielo. Agregar, sal de ácido clorhídrico l-etil-3-(3- (dimetilamino) propil) carbodiimida (0.314 g, 1.64 mmol) e hidrato de 1-hidroxibenztriazol (0.22 g, 1.64 mmol). Después .de 1 día, concentrar in vacuo y dividir la mezcla de reacción concentrada entre una solución ácido sulfúrico acuosa al 5% y acetato de etilo. Separar las capas y extraer la capa orgánica con una solución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y luego salmuera. Secar la capa orgánica sobre Na2S04, filtrar, y evaporar ín vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 2/1 diclorometano/acetato de etilo y luego 1/1 diclorometano/acetato de etilo para dar el compuesto del título. 17.2 Síntesis de N, N ' -di- (3, -dimetoxifenetil ) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida Combinación de N, N ' -di- ( 3, 4-dimetoxifenetil ) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) -malonamida (0.139 g, 0.19 mmol), acetato de mercurio (II) (0.076 g) , y anisol (0.3 mL) , y veratrol (0.24 mL) en diclorometano (10 mL) . Enfriar en un baño de hielo y desgasificar aplicando repetidamente vacío y llenado el recipiente con nitrógeno. Agregar acido trifluoroacético (4 mL) . Después de 3 horas, purgar con sulfuro de hidrógeno (gas) durante aproximadamente 10 minutos. Filtrar y evaporar m vacuo para dar un residuo. Llevar a cromatografía el residuo en gel de sílice eluyendo con 3/1 diclorometano/acetato de etilo/hexano y luego 3/2 diclorometano/acetato de etilo para dar el compuesto del titulo .

EJEMPLO 18 N,N'-D?- (3-clorofenet?l) -2- (2-mercapto-3-fenilpropion l-ammo) malonamida 18.1 Síntesis de N, N ' -di- (3-clorofenetil ) -2- ( (S ) -2- (p-metoxibencil ercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 17.1 utilizando clorhidrato de 3-clorofeniletilamina (0.50 g. 2.6 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 3/2 hexano/acetato de etilo y luego 1/2 hexano/acetato de etilo para dar el compuesto del título. 18.2 Síntesis de N . N ' -d?-3-clorofenetil) -2- (2-mercapto-3- fenilpropionilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 15.2 utilizando N,N'-d?- ( 3-clorofenetil ) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropíonilamino) malonamida (0.126 g, 0.186 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 2/1 hexano/acetato de etilo y luego 1/1 hexano/acetato de etilo para dar el compuesto del título . EJEMPLO 19 N,N' -Di- (3, 4-d?clorofenet?l) -2- ( 2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida 19.1 Síntesis de N, N ' -di- ( 3 , 4-d?clorofenetil ) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilammo) alonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 17.1 utilizando clorhidrato de 3, -d?clorofeniletilamina (0.50 g, 2.2 mmol) . Purificar por cromatografía en gel de sílice eluyendo secuencialmente con 3/2 hexano/acetato de etilo y luego 1/2 hexano/acetato de etilo para dar el compuesto del titulo. 19.2 Síntesis de N, N ' -di- (3, 4-diclorofenetil) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) alonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 15.2 utilizando N,N'-di- (3, 4 -diclorofenetil ) -2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -3-fenilpropionilamino) malonamida (0.166 g, 0.222 mmol) . La coevaporación con tetracloruro de carbono da el compuesto del título.

PREPARACIÓN 6 Síntesis de ácido (R) -2-bromo-6-ftalimidohexanóico Combinar ácido ( (R) -Na-Cbz-lisina) (R)-2-N-carbobenziloxi-6-aminohexanóico (14.0 g, 50 mmol) y agua (500 mL) . Agregar carbonato de sodio (5.65 g. 53 mmol) y N-carbetoxiftalimida (13.15 g, 60 mmol). Después de 1.5 horas, acidifificar utilizando ácido clorhídrico acuoso 12M para dar un sólido Recolectar el sólido por filtración, enjuagar con agua, y secar para dar ácido (R) -2-N-carbobenziloxi-6-ftalamidohexanóico . Combinar ácido (R) -2-N-carbobenziloxi-6-ftalamidohexanóico obtenido en lo anterior, metanol (200 mL) , 10% de paladio sobre carbono (1 g) y tratar con hidrógeno a presión atmosférica. Después de 18 horas, filtrar, agregar al filtrado una solución de ácido clorhídrico en metanol (50 mL, 1 M, 50 mmol), y evaporar in va cuo para dar sal del ácido clorhídrico (R) -2-amino-6-ftalamidohexanóico acida.

EJEMPLO 20 N, N ' -Difenet l-2- ( (S) -2-mercapto- 6-ftalímidohexanoilamino) -malonamida .1 Síntesis de N,N'-d?fenet?l-2- ( (S) -2-bromo-6-ftalimidohexanoilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 3.3 utilizando sal de ácido tpfluoroacético de N, N ' -difenet?l-2-ammomalonamida (20 mmol) y ácido (R) -2-bromo-6-ftalimidohexanoico (25 mmol) para dar el compuesto del título. 20.2 Síntesis de N,N' -difenetil-2- ( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -6-ftalimidohexanoilamino) malonamida Combinar N,N'-d?fenet?l-2-( (S) -2-bromo-6-ftalimidohexanoilamino) malonam da (10 mmol), 4-metioxibencilmercaptan (3.48 mL . 25 mmol), y yoduro de tetrabutilamonio (aproximadamente 50 mg) en dimetilforma ida (10 mL) . Desgasificar aplicando repetidamente vacío y llenado el recipiente con nitrógeno. Agregar carbonato de cesio (4.10 g, 12.5 mmol) . Después de 15 horas, dividir la mezcla de reacción entre el agua y t-butiléter de metilo, saturar la capa acuosa con cloruro de sodio. Extraer la capa acuosa con salmuera, secar sobre Na2S04, filtrar, y evaporar in va cuo para dar el compuesto del título. 20.3 Síntesis de N, N ' -difenetil-2- ( (S) -2-mercapto-6-ftalimidohexanoilamino) malonamida Preparar mediante el método del Ejemplo 15.2 utilizando N,N'-difenetil-2-( (S) -2- (p-metoxibencilmercapto) -6-ftalimido-hexanoilamino) malonamida (5 mmol) para dar el compuesto del título. La presente invención proporciona un método para inhibir metaloproteinasa matriz (MMP) en un paciente con necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad inhibitoria de metaloproteinasa matriz efectiva de un compuesto de la fórmula (1) . Como se utiliza en la presente, el término "paciente" se refiere a animales o mamíferos de sangre caliente, incluyendo, cerdos, perros, ratas, ratones, hámsters, conejos y primates, incluyendo humanos. Un paciente está en necesidad de tratamiento para inhibir MMP cuando debe ser benéfico en el paciente para reducir el efecto fisiológico de MMP activo. Por ejemplo, un paciente está en necesidad de tratamiento para inhibir MMP cuando el paciente está sufriendo del estado de enfermedad caracterizado por la alteración del tejido excesivo o degradación del tejido, tal como, pero no limitado a, un estado de enfermedad neoplástico o cáncer, artritis reumatoide; osteoartptis; osteoporosis; desordenes cardiovasculares; tal como aterosclerosis; ulceración corneal, enfermedades dentales, tales como gingivitis o enfermedad periodontal; y trastornos neurológicos; tales como esclerosis múltiple; trastornos inflamatorios crónicos tales como enfisema y especialmente enfisema inducido por fumar. La identificación de aquellos pacientes los cuales están en necesidad de tratamiento para inhibir MMP es bien conocida dentro de la habilidad y conocimiento de un experto en la técnica. Un clínico experto en la técnica puede fácilmente identificar, por medio del uso de pruebas clínicas, exammación física e historial médico/familiar como a aquellos pacientes los cuales sufren de estados de enfermedad caracterizados por la alteración de tejido excesivo o degradación de tejido. Una "cantidad de inhibición de metaloprotemasa matriz efectiva" y un compuesto de la fórmula (1) es una cantidad la cual es efectiva, ba o administración de dosis sencilla o múltiple en el paciente, en la proporción de liberación de síntomas asociados con MMP y es de esta manera efectiva en la inhibición de la alteración del tejido MMP inducido y/o degradación de tejido MMP inducido. Como se utiliza en la presente "liberación de síntomas" de las condiciones mediadas por MMP se refieren a la disminución en la severidad sobre aquello esperado en la ausencia del tratamiento y no necesariamente indica una eliminación o cura total de la enfermedad. Liberación de síntomas es también pretendida para incluir profilaxis. Una metaloproteinasa matriz efectiva que inhibe la dosis puede ser ya determinada por el uso de técnicas convencionales y mediante la observación de los resultados obtenidos ba o las circunstancias análogas. En determinación a la dosis efectiva, un número de factores son considerados, que incluyen, pero no se limitan a: todas las especies del paciente; su tamaño, edad y salud general; la enfermedad específica involucrada; en el grado de implicación o la severidad de la enfermedad; la respuesta del paciente individual; el compuesto particular administrado; el modo de administración; las características biodisponibles de la preparación administrada; el régimen de dosis seleccionado; y el uso del medicamento concomitante . Una metaloproteinasa de matriz efectiva que inhibe la cantidad de un compuesto de la formula (1) que generalmente varía de aproximadamente 0.1 miligramos por kilogramo de peso corporal por día (mg/kd/día) a aproximadamente 300 miligramos por kilogramo del peso corporal por día (mg/kg/día) . Se prefiere una dosis diaria de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg. Un estado de enfermedad neoplástica se refiere a un estado anormal o condición caracterizada por la proliferación rápida del crecimiento celular o neoplasma. Los estados de enfermedad neoplástica por el cual el tratamiento con un compuesto de la fórmula (1) que particularmente serán útil: Leucemias, tales como, pero no se limitan a, linfoblástico agudo, linfocítico crónico, mieloblástica aguda y mielocítica crónica; Carcinomas y adenocarcinomas, tales como, pero no limitados a aquellos de la cerviz, esófago, estómago, intestinos pequeños, colon, pulmones (tanto células grandes como pequeñas), mama y próstata; Sarcomas, tales como, pero ni limitados a, oesteroma, osteosarcoma, lipoma, liposarcoma, hemangioma y hemangiosarcoma; Melanomas, que incluyen amelanóticos y melanóticos; y tipos de mezcla de tejido nuevo tales como, pero no limitadas a carcinosarcoma, tipo de tejido linfoide, retículo folicular, sarcomas celulares y Enfermedad de Hodgkin. Los estados de enfermedad neoplástica para el cual el tratamiento con un compuesto de la fórmula (1) que particularmente será preferido incluye carcinomas y adenocarcinomas, particularmente de mama, próstata y pulmón. La aterosclerosis es una estado de enfermedad caracterizado por el desarrollo y crecimiento de lesiones ateroscleróticas o plaquetas. La identificación de estos pacientes que están en necesidad de tratamiento para la aterosclerosis se encuentra muy bien dentro de la habilidad y el conocimiento de alguien con experiencia en la técnica. Por ejemplo, individuos que estén sufriendo ya sea aterosclerosis clínicamente importante o quienes tienen riesgo de desarrollar aterosclerosis clínicamente importante son pacientes en necesidad de tratamiento de aterosclerosis. Un clínico con experiencia ordinaria en la técnica puede determinar fácilmente, mediante el uso de pruebas clínicas, examinación física e historial médico/familiar, si un individuo es un paciente en necesidad de tratamiento para la aterosclerosis. El término "enfermedad inflamatoria crónica" se refiere a enfermedades o condiciones caracterizadas, por la inflamación persistente en ausencia de un irritante identificable o patógeno microbiano. Las enfermedades inflamatorias para las cuales el tratamiento con un compuesto de la fórmula (1) particularmente serán útiles incluyen: enfisema, bronquitis crónica, asma, e inflamación crónica, y especialmente enfisema inducido por fumar. En el tratamiento efectivo de un paciente, un compuesto de la fórmula (1) puede administrarse de cualquier forma o modo que haga al compuesto biodisponible en cantidades efectivas, incluyendo vías orales y parenterales. Por ejemplo, el compuesto puede administrarse en forma oral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmicamente, tópica, intranasal, rectalmente, por inhalación, y similares. Se prefiere generalmente la administración oral e inhalación.

Alguien con experiencia en la técnica para preparar formulaciones puede seleccionar fácilmente la forma adecuada y modo de administración dependiendo del estado de la enfermedad que se trata, la etapa de la enfermedad y otras circunstancias relevantes. Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co . (1990) . Un compuesto de la fórmula (1) puede administrarse en la forma de composiciones farmacéuticas o medicamentos que se hacen al combinar un compuesto de la fórmula (1) con portadores farmacéuticamente aceptables o excipientes, la proporción y naturaleza de la cual se determina por la vía de selección de administración y la práctica farmacéutica estándar . Las composiciones farmacéuticas o medicamentos se preparan en una forma bien conocida en la técnica farmacéutica. El portador o excipiente puede ser un sólido, semi-sólido o material líquido que pueda servir como un vehículo o medio para el ingrediente activo. Portadores adecuados o excipientes son muy conocidos en la técnica. La composición farmacéutica puede adaptarse para el uso oral o parenteral y puede administrarse al paciente en forma de tabletas, cápsulas, supositorios, soluciones, extensiones, geles, ungüentos, aerosoles o similares. La composiciones farmacéuticas pueden administrarse oralmente, por ejemplo, con un diluyente inerte o con un portador digerible. Se pueden encerrar en cápsula gelatinosas o comprimirse en tabletas. Para el propósito de la administración terapéutica oral, un compuesto de la fórmula (1) puede incorporarse con excipientes y usarse en la forma de tabletas, trociscos, cápsulas, elixir, suspensiones, jarabes, obleas, gomas masticables y similares. Estas preparaciones deben de contener por lo menos 4% de un compuesto de la fórmula (1), el ingrediente activo, aunque puede variarse dependiendo de la forma particular y puede estar convenientemente entre 4% a aproximadamente 70% del peso de la unidad. La cantidad del ingrediente activo presente en las composiciones es tal que se obtendrá una forma de dosificación por unidad adecuada por administración. Las tabletas, pildoras, cápsulas, trociscos y similares también pueden contener uno o más de los siguientes adyuvantes: aglutinantes tales como celulosa microcpstalina, goma de tragacanto o gelatina; excipientes tales como almidón o lactosa, agentes de desintegración tales como ácido algínico, Primogel, almidón de maíz y similares; lubricantes tales como estearato de magnesio o Sterotex; deslizantes tales como dióxido de silicio coloidal; y agentes endulzantes tales como sacarosa o sacarina pueden agregarse o un agente saborizante tal como metilo, salicilato de metilo o sabopzante de naranja. Cuando la forma de unidad de dosis es una cápsula, puede contener, además de los materiales del tipo anterior un portador líquido tal como polietilenglicol o un aceite graso. Otras formas de unidad de dosis pueden contener otros diversos materiales que modifiquen la forma física de la unidad de dosis, por ejemplo como recubrimiento. De este modo, las tabletas o pildoras pueden recubrirse con azúcar, goma laca u otros agentes de recubrimiento entérico. Un jarabe puede contener, además de los compuestos actuales, sacarosa, como un agente endulzante y ciertos conservadores, tintes y colorante y saborizantes. Materiales utilizados en la preparación de estas diversas composiciones deben ser farmacéuticamente puros y no tóxicos en las cantidades utilizadas . Para el propósito de administración terapéutica parenteral, los compuestos de la presente invención pueden incorporarse en una solución o suspensión. Estas preparaciones pueden contener al menos 0.1% de un compuesto de la invención, pero pueden variarse para estar entre 0.1% y aproximadamente 50% del peso del mismo. La cantidad del ingrediente activo presente en tales composiciones es tal que se obtendrá una dosis adecuada. Las composiciones preferidas y sus preparaciones son capaces de determinarse por alguien con experiencia en la técnica. Las soluciones o suspensiones también puede incluir uno o más de los siguiente adyuvantes: diluyentes estériles tales como agua por inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol, u otros solventes sintéticos; agentes antibacteriales tales como alcohol bencílico o metilparabeno; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes de quelación tales como ácido etilendiamintetracetico; amortiguadores tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la toxicidad tal como cloruro de sodio o dextrosa. La preparación parenteral puede encerrarse en cápsulas, jeringas desechables, o ampollas de dosis múltiple de plástico o vidrio. Los compuestos de la presente invención pueden administrarse por inhalación, tal como aerosol o polvo seco. El suministro puede ser mediante un gas licuado comprimido o un sistema de bombeo adecuado que disperse los compuestos de la presente invención o una formulación de los mismos. La formulaciones para la administración para la inhalación de los compuestos de la fórmula (1) pueden suministrarse en sistemas de una sola fase, bi-fásicos, o tri-fásicos. Una variedad de sistemas están disponibles para la administración por aerosol de los compuestos de la fórmula (1). Las formulaciones de polvo seco se preparan ya sea haciendo pellas o moliendo el compuesto de la fórmula (1) hasta obtener un tamaño de partícula adecuado o mezclando las pellas o el molido del compuesto de la fórmula (1) con un material portador adecuado, tal como lactosa y similares. La administración por inhalación incluye los recipientes, activadores, válvulas, sub-recipientes necesarios y similares. Las formulaciones en aerosol y polvo seco preferidos para la administración por inhalación pueden determinarse por alguien con experiencia en la técnica. Los inhibidores de MMP de la presente invención pueden evaluarse con los procedimientos que siguen.

EJEMPLO A Fuente y Activación de proMMP-1 ProMMP-1 (EC 3.4.24.7; colagenasa intersticial) se purificó a partir del medio de cultivo de fibroblastos sinoviales reumatoides humanos estimulados con el medio acondicionado con el macrófago de acuerdo con Okada, Y. et al., J. Biol. Chem. 261. 14245-14255 (1986). El MMP-1 activo se obtuvo por el tratamiento de proMMP-1 con tripsina (5 µg/mL) a 37°C durante 30 minutos, seguido por la adición del inhibidor de tripsina de soja (50 µg/mL) . Determinación de la Constante de Inhibición (Kj) para MMP-1 Se hizo el ensayo de MMP-1 activado utilizando un sustrato flurogénico, Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2, Knight, C.G. et al., FEBS Lett. 296. 263-266 (1992), a 37°C en 2.0 mL de un amortiguador de ensayo que contiene 50 mM Tris, pH 7.6, 0.2 M cloruro de sodio, 50 mM de cloruro de calcio, y 0.02% Brij-35. El incremento en fluorescencia debido al desdoblamiento del enlace de péptido Gly-Leu por MMP-3 se registró con el fluorímetro de Perkin-Elmer LS50B (?ex 328 nm, ?em 393 nm, separación de excitación de 2.5, separación de emisión de 10) . El sustrato y la solución de material inhibidor de hicieron en DMF. Para la determinación de los valores de Ki para los inhibidores de MMP-1 una serie de soluciones inhibidoras intermedias se prepararon en DMF y 1 ó 2 µL de la solución inhibidora diluida se mezcló con 1 µL de 2 mM de la solución de sustrato en DMF en una cubeta de cuarzo que contiene 2 mL del amortiguador de ensayo. La enzima (10 µL de 2.0 µM de la dilución de MMP-3 en el amortiguador de ensayo) se agregó al menos al inicio de la reacción. Para la medición de rutina de un valor K? para un inhibidor reversible, competitivo, las velocidades iniciales en presencia de al menos cuatro concentraciones inhibidoras (dos concentraciones anteriores de K-. y dos concentraciones siguientes de KJ se midieron utilizando [S]=l µM(<< Km) y [MMP-1]=0.8 nM. Bajo estas condiciones, la Kj.app medida se acerca a la K-. verdadera.

Cálculo de los Valores K-. La Kx para un inhibidor competitivo se calcula utilizando : donde o es la velocidad inicial en ausencia del inhibidor, vx es la velocidad inicial en la presencia del inhibidor y la concentración de [I], [S] es la concentración del sustrato, Km es la constante de Michaelis. Si se observa un enlace lento (es decir que el enfoque al equilibrio de enlace lento) , la velocidad de estado estable final en vez de la velocidad inicial se toma como v .

EJEMPLO B Fuente y activación de proMMP-2 El MMP-2 recombinante se purificó a partir de la fermentación de Pichia pas toris de levadura que porta el gen de MMP-2 integrado en su cromosoma. En breve, la longitud general del ADNc para MMP-2 se obtuvo por la transcripción inversa de ARN a partir de la línea celular A375M de melanoma por la reacción en cadena de polimerasa transcriptasa inversa (RT-PCR) utilizando oligonucleótidos específicos de secuencia. La secuencia nucleótida se confirmó por la secuencia del ciclo Taq. El ADNc se ligó en el vector de expresión Pichia pastoris de pHIL-D2 de tal forma que la expresión del pro-MMP-2 está bajo el control del promotor de oxidasa de alcohol inducible en metanol. La construcción de expresión se metabolizó con Salí o Nsil y se utilizó para transformar la Pichia pastoris KM71 y SMD1168. Un cultivo a gran escala de un clon seleccionado diseñado como 24S se realizó en un fermentador de densidad celular elevado y el MMP-2 recombinante se purificó a partir del sobrenadante de cultivo por gelatina-separosa 4B (farmacia). La enzima es lo suficientemente pura en esta etapa para la medición rutinaria de la inhibición. Si se desea, sin embargo, la enzima puede purificarse adicionalmente por filtración de gel de AcA 44 (Spectra) . Determinación de la Constante de Inhibición (Kj) de MMP-2. El MMP-2 activo se obtuvo por la activación de proMMP-2 a 37°C durante 1 hora con un acetato 4-aminofenilmercúrico que entonces de removió mediante una columna centrífuga de Sephadex G-50. La enzima se ensaya utilizando un sustrato fluorogénico, Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2, a 37°C en 2.0 mL de un amortiguador de ensayo que contenía 50 mM Tris, pH 7.6, cloruro de sodio 0.2 M, 50 mM de cloruro de calcio, 0.02% de Brij-35, y 50 µM ß-mercaptoetanol . El incremento en la fluorescencia se registró (?e:< 328 nm, ?em 393 nm) . El sustrato y las soluciones de material inhibidor se hicieron en DMF. La enzima se agrega al menos al inicio de la reacción. Para medición de rutina, de un valor de Ki para un inhibidor reversible competitivo, las velocidades iniciales en presencia de por lo menos cuatro concentraciones inhibidoras (dos concentraciones inhibidoras anteriores de Ki y dos siguientes de Ki) se mide utilizando [S]= 1 µM (<< Km) y [MMP-2]= 0.4 nM . Bajo estas condiciones, la medición Ki r app esta cerca de la Ki verdadera.

EJEMPLO C Fuente y Activación de proMMP-3 La proMMP-3 (EC 3.4.24.17; Stromelynsin-1 ) se purificó a partir del medio de cultivo de los fribroblastos sinoviales reumatoides humanos estimulado por el medio acondicionado de macrófago de acuerdo con Okada, Y. et al., J. Biol. Chem. 261, 14245-14255 (1986) . El MMP-3 activo se obtuvo por el tratamiento de proMMP-3 con tripsina (5 µg/mL) a 37°C durante 30 minutos, seguido por la adición del inhibidor de tripsina de soja (50 µg/mL) . Las alícuotas del MMP-3 activadas se almacenaron a -20°C. Determinación de la Constante de Inhibición (Kj) para MMP-3 EL MMP-3 activado de ensayo utilizando un sustrato flurogénico, Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2, Knight , C.G. et al., FEBS Lett. 296. 263-266 (1992), a 37°C en un amortiguador de ensayo que contiene 50 mM Tris, pH 7.6, 0.2 M cloruro de sodio, 50 mM de cloruro de calcio, y 0.02% Brij-35. El incremento en fluorescencia debido al desdoblamiento del enlace de péptido Gly-Leu por MMP-3 se registró con el fluorimetro de Perkin-Elmer LS50B (?ex 328 nm, ?era 393 nm, separación de excitación de 2.5, separación de emisión de 10) . El sustrato y la solución de material inhibidor se hicieron en DMF y 0.1% de HC1-DMF, respectivamente. Para la determinación de los valores de Kx para los inhibidores de MMP-3 una serie de soluciones inhibidoras intermedias se prepararon en 0.1% de HCl-DMF y 1 ó 2 µL de la solución inhibidora diluida se mezcló con 1 µL de 2 mM de la solución de sustrato en DMF en una cubeta de cuarzo que contiene 2 mL del amortiguador de ensayo. La enzima (10 µL de 0.2 µM de la dilución de MMP-3 en el amortiguador de ensayo) se agregó al menos al inicio de la reacción. Para la medición de rutina de un valor K-. para un inhibidor reversible, competitivo, las velocidades iniciales en presencia de al menos cuatro concentraciones inhibidoras (dos concentraciones anteriores de Kx y dos concentraciones siguientes de Kx) se midieron utilizando [S]=l µM(« Km) y [MMP-3]= 1 nM. Bajo estas condiciones, el K-..app medido está cercano a la K-. verdadera.

Cálculos de los Valores de K-. La K-. para un inhibidor competitivo se calcula utilizando : donde v0 es la velocidad inicial en ausencia del inhibidor, v-. es la velocidad inicial en presencia del inhibidor y la concentración de [I], [S] es la concentración del sustrato, Km es la constante de Michaelis. Si se observa un enlace lento (es decir que el enfoque al equilibrio de enlace lento) , la velocidad de estado estable final en vez de la velocidad inicial se toma como v? . 11! EJEMPLO D Fuente de MMP-12 (metaloelastasa de macrófago) La MMP-12 (EC 3.4.24.65) se clonó, se expresó y se purificó de acuerdo con Shapiro, S.D. et al., J Biol . Chem. 268.23824-23829(1993). La autoactivación resultó en la forma activa completamente procesada de la encima. Las alícuotas de MMP-12 se almacenaron a -70°C. Determinación de la Constante de Inhibición (Ki) para MMP-12. La potencia de los inhibidores de MMP-12 se midió utilizando cubetas de cuarzo o plaquetas de microtitulación. La actividad de MMP-12 se midió utilizando un sustrato fluorogénico, Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2 , Knight, C.G. et al., FEBS Lett. 296, 263-266 (1992), a 25°C de un amortiguador de ensayo que contiene 50 mM Tris, pH 7.6, 0.2 M cloruro de sodio, 50 mM de cloruro de calcio, y 0.02% Brij-35. El incremento en fluorescencia debido al desdoblamiento del enlace de péptido Gly-Leu por MMP-12 se registró con el fluorímetro de Perkin-Elmer LS50B (?ex 328 nm, ?em 393 nm, separación de excitación de 2.5, separación de emisión de 10) para el ensayo en la cubeta y con un lector de plaqueta de fluorescencia Molecular Devices Fmax (?ex 320 nm, ??em 405 nm) para el ensayo de plaquetas de microtitulación. El sustrato y la soluciones de material inhibidor, se hicieron en N,N, dimetilformamida (DMF) y 0.1% HCl-DMF, respectivamente.

Los valores de K-. se determinaron utilizando el método de cubeta por la preparación de una serie de soluciones inhibidoras intermedias en 0.1% HCl-DMF y mezclando el inhibidor con el sustrato (concentración final de 2 µM) en una cubeta de cuarzo que contiene 2 ml del amortiguador de ensayo. El MMP-12 se agregó al inicio de la reacción en una concentración de 2nM y se generaron las curvas en progreso. Para la medición de rutina de un valor de Ki para un inhibidor competitivo reversible, las velocidades iniciales en presencia de al menos cuatro concentraciones inhibidoras (dos concentraciones anteriores y dos concentraciones siguientes del Ki) se midieron [S]= 2 µM (<< Km) y [MMP-12]= 2 nM . Ba o estas condiciones, la medición Ki, app esta cercana de la Ki real. Los valores de Ki se determinaron utilizando el método de placa de la microtitulacion en una forma similar a aquella descrita para el método de cubeta con cierta modificación. Cuatro diferentes concentraciones inhibidoras (50 µl en un amortiguador de ensayo) de cada compuesto se agregaron para separar los pozos de una placa de microtitulacion y el sustrato se agrego (100 µil ) para conseguir una concentración final de 4 mM . El MMP-12 se agregó a una concentración final de 2 mM (50 µil ) para iniciar la reacción. El desdoblamiento de sustrato se registró cada 30 segundos durante 30 minutos y se generaron las curvas en progreso.

Cálculo de los Valores para Ki. La Ki para un inhibidor competitivo se calcula utilizando: Vo/Vi=(l + [I]/Ki,app) y Ki=Ki,app/(l + [S]/Km=), donde Vo es la velocidad inicial en ausencia del inhibidor, Vi es la velocidad inicial en presencia del inhibidor y la concentración de [I], [S] es la concentración del sustrato, Km es la constante de Michaelis. Si se observa un enlace lento (es decir si el enfoque al equilibrio de enlace es lento) , la velocidad de estado estable final en vez de la velocidad inicial se toma como Vi .

Claims

REI INDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula en donde Ri y R2 son cada uno independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de Ci-Cio, -(CH2)a-Ar?, y -(CH2)b-Ar2; en donde a es un número entero de 1 a 6; b es un número entero de 2 a 6; Ari es un radical seleccionado del grupo que consiste de en donde Rs es 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C?-C , hidroxi y alcoxi de C1-C4; Re se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C4, y alcoxi de C1-C ;

Ar2 es el radical en donde Re se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C?-C4, y alcoxi de C?-C4; R3 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de Cx-Ce, -(CH2)m-W, -(CH2)p-Ar3, - (CH2) k-C02R9, (CH2)m-NR8-S02-Y? y (CH2)m-Z-Q en donde m es un número entero de 2 a 8; p es un número entero de 0-10, k es un número entero de 1 a 9; W es ftalimido; Ar3 se selecciona a partir del grupo que consiste de en donde R23 es de 1 a 2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C4, y alcoxi de C?-C ;

R8 es hidrógeno o alquilo de C?-C6; Rg es hidrógeno o alquilo de Ci-Cß; Yi se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, - (CH2) j-Ar4, y -N(R24)2 en donde j es 0 ó 1 ; R24 cada vez que se selecciona es independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-Cß o tomados juntos con el hidrógeno al cual están unidos forman N-morfolino, N-piperidino, N-pirrolidino, o N-isoindolilo; Ar4 es el radical en donde R25 es de 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C?-C , y alcoxi de C?~C4; Z se selecciona del grupo que consiste de -O-, -NR8-, -C(0)NR8-, -NR8C(0)-, -NR8C(0)NH-, -NR8C(0)0-, y -OC (O)NH-; en donde R8 es hidrógeno o alquilo de C?-C6; Q se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, (CH2)n-Y2, y -(CH2)XY3; en donde n es un número entero de O a 4; Y2 se seleccionan del grupo que consiste de hidrógeno, -(CH2)h-Ar5 y - (CH2) t-C (0) OR27 en donde Ar5 se selecciona del grupo que consiste de en donde R26 es de 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-C , y alcoxi de C?-C4; h es un número entero de 0 a 6; t es un número entero de 1 a 6; R27 es hidrógeno o alquilo de C?-C6; x es un número entero de 2 a 4 ; Y3 se seleccionan a partir del grupo que consiste de -N(R2ß)2, N-morfolino, N-piperidino, N-pirrolidino, y N-isoindolilo; en donde R28 cada vez que se tome es independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-Cß," R4 se selecciona, a partir del grupo que consiste de hidrógeno, -C(0)R?0, -C (0) - (CH2) q-K y -S-G en donde Rio se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, fenilo, y bencilo; q es 0, 1 , ó 2 ; K se selecciona a partir del grupo que consiste de en donde V se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace, -CH2-, -0-, -S(0)r-, -NR-, y -NC(0)R'-; en donde r es 0, 1 ó 2 ; R se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, y bencilo; R' se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, -CF3, alquilo de C1-C10, fenilo, y bencilo; Rn se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, y bencilo; Rn se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, y bencilo; G se selecciona a partir del grupo que consiste de en donde es un número entero de 1 a 3 ; R12 se seleccionan del grupo que consi ste de hidrógeno , alquilo de C?-C6, -CH2CH2S ( 0 ) eCH3 , y bencilo ; en donde e es 0 , 1 ó 2 ; Ri3 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, hidroxi, amino, alquilo de Ci-Cß, N-metilamino, N, N-dimetilamino, -C02R?7, y -OC(0)R?8; en donde Ri7 es hidrógeno, -CH20-C ( 0 ) C (CH3) 3, alquilo de C1-C4, bencilo, o difenilmetilo; Ríe es hidrógeno, alquilo de C?-C6 o fenilo; R14 es 1 ó 2 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, o halógeno; Vi se selecciona a partir del grupo que consiste de -0-, -S-, y -NH-; V2 se selecciona a partir del grupo que consiste de

-N- y -CH-; V3 se selecciona a partir del grupo que consiste de un enlace y -C(0)-; V4 se selecciona a partir del grupo que consiste de -0-, -S-, -NR19- y -NC(0)R20-; en donde R19 es hidrógeno, alquilo de C1-C4, o bencilo; R20 es hidrógeno, -CF3, alquilo de C1-C10, o bencilo; R15 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de Ci-Cß, y bencilo; Ri6 se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo de C?-C4; y estereoisómeros, sales farmacéuticamente aceptables, e hidrato de los mismos. 2. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde Rj. y R2 son alquilo de Ci-C?. 3. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde Ri y R2 -(CH2)a_Ar? en donde a y Arx es como se definió en la reivindicación 1. 4. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 3, en donde a es 1 ó 2.

5. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 3, en donde Ar es fenilo o fenilo sustituido.

6. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde R4 es hidrógeno.

7. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde R4 son -S-G.

8. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde R4 es -C(0)R?0.

9. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 8, en donde Rio es alquilo de C1-C4.

10. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -difenet?l-2- ( (S) -2-mercapto-3-metilbutirilammo) malonamida .

11. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N-Difenet?l-2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilammo) malonamida .

12. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -Difenet?l-2- ( ( S) -2-mercapto-4-fenilbutirilaminojmalonamida .

13. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -d?benc?l-2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilammo) malonamida .

14. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, ' -Di- (3-fenilpropil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

15. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di-4-metoxifenetil) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

16. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -dipentil-2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

17. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di-4- (N-anilino) etil) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

18. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di- (pidrid-4-iletil ) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

19. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -difenetil-2- ( (S) -2-mercaptopropionilamino) malonamida .

20. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -difenetil-2- (2-mercaptopropionilamino) malonamida .

21. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, ' -difenetil-2- (2-mercaptopentanoilamino) malonamida .

22. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di- ( 4-clorofenetil ) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

23. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di ( 2-metoxifenetil ) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

24. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di- ( - (metilfenetil ) -2- ( (S) -2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

25. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di- (3-metoxifenetil) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

26. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N,N ' -di- (3, 4-dimetoxifenetil) -2- ( (S) 2 -mercapto-3-fenilpropionilamino) alonamida .

27. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N, N ' -di- ( 3-clorofenetil ) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

28. El compuesto de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el compuesto es N,N ' -di- (3, 4-diclorofenetil) -2- (2-mercapto-3-fenilpropionilamino) malonamida .

29. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad inhibidora de metaloproteinasa matriz efectiva de un compuesto de la reivindicación 1.

30. Un método para inhibir metaloproteinasa matriz en un paciente con necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad inhibidora de metaloproteinasa matriz efectiva de un compuesto de la reivindicación 1.

31. Un método para tratar una enfermedad neoplástica en un paciente con necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad inhibidora de metaloproteinasa matriz efectiva de un compuesto de la reivindicación 1.

32. Un método para tratar artritis reumatoide en un paciente con necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad inhibidora de metaloproteinasa matriz efectiva de un compuesto de la reivindicación 1.

33. Un método para tratar osteoporosis en un paciente con necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad inhibidora de metaloprotemasa matriz efectiva de un compuesto de la reivindicación 1.

34. 31. Un método para tratar trastornos inflamatorios crónicos en un paciente con necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad inhibidora de metaloproteinasa matriz efectiva de un compuesto de la reivindicación 1.

35. El método de acuerdo a la reivindicación 34, en donde el trastorno inflamatorio crónico es enfisema.