DE60029007T2

DE60029007T2 - Quinazolin-derivate als vegf-hemmer

Info

Publication number: DE60029007T2
Application number: DE60029007T
Authority: DE
Inventors: Laurent Francois Andre Hennequin; Elaine Sophie Elizabeth Macclesfield STOKES; Andrew Peter Macclesfield THOMAS
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1999-11-05
Filing date: 2000-11-01
Publication date: 2007-01-11
Anticipated expiration: 2020-11-02
Also published as: BG106659A; MXPA02004366A; KR20070104683A; BRPI0015203B8; IS6335A; CY1108256T1; US20210276972A1; AU769222B2; UA72946C2; NO20022139D0; US20190002433A1; KR20080023270A; DE60029007D1; PT1676845E; US8642608B2; PT1244647E; HK1049664B; BRPI0015203B1; US7173038B1; ZA200202775B

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Chinazolinderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung, pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Chinazolinderivate als Wirkstoff enthalten, ihre Verwendung als Arzneimittel und ihre Verwendung bei der Herstellung von Arzneimitteln zur Verwendung bei der Erzielung von antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssenkenden Wirkungen bei Warmblütern, wie Menschen.
Die normale Angiogenese spielt bei einer Reihe von Prozessen eine wichtige Rolle, u.a. bei der Embryonalentwicklung, bei der Wundheilung und bei verschiedenen Komponenten der weiblichen Fortpflanzungsfunktion. Eine unerwünschte oder pathologische Angiogenese wurde bereits mit Krankheitszuständen assoziiert, u.a. mit diabetischer Retinopathie, Psoriasis, Krebs, rheumatoider Arthritis, Atherom, Kaposi-Sarkom und Hämangiom (Fan et al., 1995, Trends Pharmacol. Sci. 16: 57–66; Folkman, 1995, Nature Medicine 1: 27–31). Es wird angenommen, daß sowohl bei normalen als auch bei pathologischen physiologischen Prozessen die Änderung der Gefäßpermeabilität eine Rolle spielt (Cullinan-Bove et al., 1993, Endocrinology 133: 829–837; Senger et al., 1993, Cancer and Metastasis Reviews, 12: 303–324). Einige Polypeptide, die in vitro das Wachstum von Endothelzellen fördern, wurden bereits identifiziert, u.a. der saure und der basische Fibroblastenwachstumsfaktor (aFGF und bFGF) und VEGF (vascular endothelial growth factor). Dank der begrenzten Expression seiner Rezeptoren ist die Wachstumsfaktorwirkung von VEGF im Gegensatz zu der der FGFs verhältnismäßig endothelzellenspezifisch. Neuere Befunde deuten darauf hin, daß VEGF ein wichtiger Stimulator sowohl der normalen als auch der pathologischen Angiogenese (Jakeman et al., 1993, Endocrinology, 133: 848–859; Kolch et al., 1995, Breast Cancer Research and Treatment, 36: 139–155) und Gefäßpermeabilität (Connolly et al., 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017–20024) ist. Die Antagonisierung der Wirkung von VEGF durch Sequestrierung von VEGF mit Antikörper kann zur Inhibierung von Tumorwachstum führen (Kim et al., 1993, Nature 362: 841–844).
Rezeptortyrosinkinasen (RTKs) sind bei der Übertragung von biochemischen Signalen über die Plasmamembran von Zellen von Bedeutung. Diese Transmembranmoleküle bestehen charakteristischerweise aus einer extrazellulären Ligandenbindungsdomäne, die durch ein Segment in der Plasmamembran mit einer intrazellulären Tyrosinkinasedomäne verbunden ist. Die Bindung von Ligand an den Rezeptor führt zur Stimulierung der rezeptorassoziierten Tyrosinkinaseaktivität, die zur Phosphorylierung von Tyrosinresten sowohl des Rezeptors als auch anderer intrazellulärer Moleküle führt. Durch diese Änderungen der Tyrosinphosphorylierung wird eine Signalkaskade initiiert, die zu einer Reihe von Zellreaktionen führt. Bisher wurden bereits mindestens neunzehn verschiedene Rezeptortyrosinkinase-Unterfamilien identifiziert, die durch Aminosäuresequenzhomologie definiert sind. Eine dieser Unterfamilien besteht derzeit aus dem „fms-like" Tyrosinkinaserezeptor Flt oder Flt1, KDR (kinase insert domaincontaining receptor, auch als Flk-1 bezeichnet) und einem anderen „fms-like" Tyrosinkinaserezeptor, nämlich Flt4. Es ist gezeigt worden, daß zwei dieser verwandten Rezeptortyrosinkinasen, nämlich Flt und KDR, VEGF mit hoher Affinität binden (De Vries et al., 1992, Science 255: 989–991; Terman et al., 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579–1586). Die Bindung von VEGF an diese in heterologen Zellen exprimierten Rezeptoren wurde mit Änderungen des Tyrosinphosphorylierungsstatus von Zellproteinen und Calciumfluxen in Verbindung gebracht.
In J. Med. Chem., 1999, 42, 5369–2389, werden Chinazolinderivate beschrieben, bei denen es sich um Inhibitoren von VEGF-Rezeptortyrosinkinase handelt.
In den internationalen Patentanmeldungen WO 97/30035 und WO 98/13354 werden Chinazolinderivate beschrieben, bei denen es sich um Inhibitoren von VEGF-Rezeptortyrosinkinase handelt. In WO 97/30035 und WO 98/13354 werden Verbindungen beschrieben, die Wirkung gegenüber VEGF-Rezeptortyrosinkinase und etwas Wirkung gegenüber EGF-Rezeptortyrosinkinase besitzen.
Erfindungsgemäße Verbindungen fallen unter die breite allgemeine Offenbarung von WO 97/30035 und WO 98/13354. Es wurde gefunden, daß erfindungsgemäße Verbindungen sehr gute Hemmwirkung gegenüber VEGF-Rezeptortyrosinkinase besitzen. Erfindungsgemäße Verbindungen, die getestet worden sind, zeigen in-vivo-Wirkung gegen eine Reihe von Tumorxenografts in Mäusen. Erfindungsgemäße Verbindungen besitzen beim Test in Ratten über einen Zeitraum von 14 Tagen ein vorteilhaftes toxikologisches Profil. Erfindungsgemäße Verbindungen besitzen sehr gute Hemmwirkung gegenüber VEGF-Rezeptortyrosinkinase, zeigen in-vivo-Wirkung gegen eine Reihe von Tumorxenografts in Mäusen und besitzen beim Test in Ratten über einen Zeitraum von 14 Tagen ein vorteilhaftes toxikologisches Profil.
Erfindungsgemäße Verbindungen inhibieren die Effekte von VEGF, was eine Eigenschaft darstellt, die bei der Behandlung von mit Angiogenese und/oder erhöhter Gefäßpermeabilität assoziierten Krankheitszuständen, wie Krebs, Diabetes, Psoriasis, rheumatoider Arthritis, Kaposi-Sarkom, Hämangiom, akuter und chronischer Nephropathie, Atherom, arterieller Restenose, Autoimmunerkrankungen, akuten Entzündungen, übermäßiger Narbenbildung und Adhäsionen, Endometriose, dysfunktionellen Uterusblutungen und Augenerkrankungen mit Netzhautgefäßproliferation, von Vorteil sind.
Erfindungsgemäße Verbindungen besitzen eine gute Wirkung gegenüber VEGF-Rezeptortyrosinkinase und etwas Wirkung gegenüber EGF-Rezeptortyrosinkinase.
Des weiteren besitzen einige erfindungsgemäße Verbindungen eine wesentlich höhere Wirksamkeit gegenüber VEGF-Rezeptortyrosinkinase als gegenüber EGF-Rezeptortyrosinkinase oder FGF-R1-Rezeptortyrosinkinase. Ohne Festlegung auf irgendwelche theoretischen Überlegungen können derartige Verbindungen beispielsweise bei der Behandlung von mit VEGF assoziierten Tumoren, insbesondere denjenigen Tumoren, deren Wachstum VEGF-abhängig ist, von Interesse sein. Es wird ferner angenommen, daß diese Verbindungen bei der Behandlung von Tumorzuständen, die sowohl mit VEGF als auch mit EGF assoziiert sind, von Interesse sein können, insbesondere wenn ein Patient an einer Erkrankung leidet, bei der Tumore vorliegen, deren Wachstum sowohl von VEGF als auch von EGF abhängig ist.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist gemäß einer Ausgestaltung ein Chinazolinderivat der Formel I:
worin:
m eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist;
R¹ für Halogen oder C_1-3-Alkyl steht;
R² aus einer der folgenden drei Gruppen ausgewählt ist:

1) C_1-5-AlkylR³ (worin R³ für Piperidin-4-yl steht, das einen oder zwei unter Hydroxy, Halogen, C_1-4-Alkyl, C_1-4-Hydroxyalkyl, C_1-4-Alkoxy ausgewählte Substituenten tragen kann);
2) C_2-5-AlkenylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt);
3) C_2-5-AlkinylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt);

Vorzugsweise steht m für 2.
Vorzugsweise ist die Phenylgruppe mit (R¹)_m unter 2-Fluor-4-methylphenyl, 4-Chlor-2,6-difluorphenyl, 4-Brom-2,6-difluorphenyl, 4-Chlor-2-fluorphenyl und 4-Brom-2-fluorphenyl ausgewählt.
Besonders bevorzugt ist die Phenylgruppe mit (R¹)_m unter 4-Chlor-2-fluorphenyl und 4-Brom-2-fluorphenyl ausgewählt.
Ganz besonders bevorzugt handelt es sich bei der Phenylgruppe mit (R¹)_m um 4-Brom-2-fluorphenyl.
Vorzugsweise steht R² für C_1-5-AlkylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt).
Besonders bevorzugt steht R² für C_1-3-AlkylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt).
Insbesondere steht R² für Piperidin-4-ylmethyl, wobei der Piperidinring einen oder zwei Substituenten gemäß obiger Definition tragen kann.
Ganz besonders steht R² für Piperidin-4-ylmethyl, wobei der Piperidinring einen oder zwei unter C_1-4-Alkyl ausgewählte Substituenten tragen kann.
Speziell steht R² für 1-Methylpiperidin-4-ylmethyl.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist gemäß einer weiteren Ausgestaltung ein Chinazolinderivat der Formel II:
worin:
ma eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist;
R^1a für Halogen oder C_1-3-Alkyl steht;
R^2a aus einer der folgenden drei Gruppen ausgewählt ist:

1) C_1-5-AlkylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt);
2) C_2-5-AlkenylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt);
3) C_2-5-AlkinylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt);

Vorzugsweise steht ma für 2.
Vorzugsweise ist die Phenylgruppe mit (R^1a)_ma unter 2-Fluor-4-methylphenyl, 4-Chlor-2,6-difluorphenyl, 4-Brom-2,6-difluorphenyl, 4-Chlor-2-fluorphenyl und 4-Brom-2-fluorphenyl ausgewählt.
Besonders bevorzugt ist die Phenylgruppe mit (R^1a)_ma unter 4-Chlor-2-fluorphenyl und 4-Brom-2-fluorphenyl ausgewählt.
Ganz besonders bevorzugt handelt es sich bei der Phenylgruppe mit (R^1a)_ma um 4-Brom-2-fluorphenyl.
Vorzugsweise steht R^2a für C_1-5-AlkylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt).
Besonders bevorzugt steht R^2a für C_1-3-AlkylR³ (worin R³ die oben angegebene Bedeutung besitzt).
Insbesondere steht R^2a für Piperidin-4-ylmethyl, wobei der Piperidinring einen oder zwei Substituenten gemäß obiger Definition tragen kann.
Ganz besonders steht R^2a für Piperidin-4-ylmethyl, wobei der Piperidinring einen oder zwei unter C_1-4-Alkyl ausgewählte Substituenten tragen kann.
Speziell steht R^2a für 1-Methylpiperidin-4-ylmethyl.
Bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen sind u.a.:
4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(2-Fluor-4-methylanilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(2-Fluor-4-methylanilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin und
4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin
und Salze davon, insbesondere Hydrochloridsalze davon.
Weiter bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen sind u.a.:
4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin und
4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin
und Salze davon, insbesondere Hydrochloridsalze davon.
Besonders bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen sind u.a.:
4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin,
4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin
und Salze davon, insbesondere Hydrochloridsalze davon.
Insbesondere bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen sind u.a.:
4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin und
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin
und Salze davon, insbesondere Hydrochloridsalze davon.
Eine speziell bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin
und Salze davon, insbesondere Hydrochloridsalze davon.
Zur Ausräumung jeglicher Zweifel versteht es sich, daß dort, wo in der vorliegenden Beschreibung eine Gruppe mit dem Attribut „oben angegebene Bedeutung" versehen ist, diese Gruppe die zuerst erscheinende und breiteste Definition sowie jede und alle der bevorzugten Definitionen für diese Gruppe umfaßt. Eine ähnliche Konvention gilt für „unten angegebene Bedeutung".
In der vorliegenden Beschreibung schließt der Begriff „Alkyl" sowohl geradkettige als auch verzweigtkettige Alkylgruppen ein, jedoch ist bei Bezugnahme auf einzelne Alkylgruppen wie „Propyl" ausschließlich die geradkettige Variante gemeint. Eine analoge Konvention gilt für andere generische Begriffe. Sofern nicht anders angegeben, bezieht sich der Begriff „Alkyl" vorteilhafterweise auf Ketten mit 1–5 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 1–3 Kohlenstoffatomen. Unter „Alkoxy" sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung „Alkyl"-O-Gruppen, in denen „Alkyl" die oben angegebene Bedeutung besitzt, zu verstehen, sofern nicht anders angegeben. Sofern nicht anders angegeben, bezieht sich der Begriff „Aryl" im Rahmen der vorliegenden Erfindung auf eine C_6-10-Arylgruppe, die gegebenenfalls einen oder mehrere unter Halogen, Alkyl, Alkoxy, Nitro, Trifluormethyl und Cyano (worin Alkyl und Alkoxy die oben angegebene Bedeutung besitzen) ausgewählte Substituenten tragen kann. Sofern nicht anders angegeben, sind unter „Aryloxy" im Rahmen der vorliegenden Erfindung „Aryl"-O-Gruppen, worin „Aryl" die oben angegebene Bedeutung hat, zu verstehen. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind unter „Sulfonyloxy" Alkylsulfonyloxy- und Arylsulfonyloxygruppen zu verstehen, in denen „Alkyl" und „Aryl" die oben angegebene Bedeutung besitzen. Sofern nicht anders angegeben, sind unter „Alkanoyl" Formyl- und Alkyl-C=O-Gruppen zu verstehen, in denen „Alkyl" die oben angegebene Bedeutung besitzt, beispielsweise steht C₂-Alkanoyl für Ethanoyl und bezieht sich auf CH₃C=O, und C₁-Alkanoyl steht für Formyl und bezieht sich auf CHO. Sofern nicht anders angegeben, sind unter „Alkenyl" im Rahmen der vorliegenden Beschreibung sowohl geradkettige als auch verzweigtkettige Alkenylgruppen zu verstehen, jedoch ist bei Bezugnahme auf einzelne Alkenylgruppen wie 2-Butenyl ausschließlich die geradkettige Variante gemeint. Sofern nicht anders angegeben, bezieht sich der Begriff „Alkenyl" vorteilhafterweise auf Ketten mit 2–5 Kohlenstoffatomen und vorzugsweise 3–5 Kohlenstoffatomen. Sofern nicht anders angegeben, sind unter dem Begriff „Alkinyl" im Rahmen der vorliegenden Erfindung sowohl geradkettige als auch verzweigtkettige Alkinylgruppen zu verstehen, jedoch ist bei Bezugnahme auf einzelne Alkinylgruppen wie 2-Butinyl ausschließlich die geradkettige Variante gemeint. Sofern nicht anders angegeben, bezieht sich der Begriff „Alkinyl" vorteilhafterweise auf Ketten mit 2–5 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 3–5 Kohlenstoffatomen.
In der Formel I gemäß der obigen Definition stehen in den Positionen 2, 5 und 8 der Chinazolingruppe Wasserstoffatome.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung versteht es sich, daß eine Verbindung der Formel I oder ein Salz davon das Phänomen der Tautomerie zeigen kann und daß die Formelzeichnungen in der vorliegenden Beschreibung lediglich eine der möglichen tautomeren Formen wiedergeben können. Es versteht sich, daß die Erfindung jegliche tautomere Form umfaßt, die die VEGF-Rezeptortyrosinkinaseaktivität inhibiert, und nicht nur auf irgendeine in den Formelzeichnungen verwendete tautomere Form beschränkt ist.
Außerdem versteht es sich, daß bestimmte Verbindungen der Formel I und Salze davon sowohl in solvatisierten als auch in unsolvatisierten Formen, wie beispielsweise hydratisierten Formen, existieren können. Es versteht sich, daß die Erfindung alle derartigen solvatisierten Formen umfaßt, die die VEGF-Rezeptortyrosinkinaseaktivität inhibieren.
Zur Ausräumung jeglicher Zweifel versteht es sich, daß in einer Verbindung der Formel I für den Fall, daß R² beispielsweise für eine Gruppe der Formel C_2-5-AlkenylR³ steht, die C_2-5-Alkenylgruppierung an -O- gebunden ist, und für andere Gruppen eine analoge Konvention gilt. Wenn R² für eine Gruppe 1-R³-Prop-1-en-3-yl steht, so ist das erste Kohlenstoffatom mit der Gruppe R³ verknüpft und das dritte Kohlenstoffatom mit -O- verbunden, und ganz analog für den Fall, daß R² für eine Gruppe 2-R³-Pent-3-en-5-yl steht, das zweite Kohlenstoffatom mit der Gruppe R³ verknüpft ist und das fünfte Kohlenstoffatom mit -O- verbunden ist, und für andere Gruppen eine analoge Konvention gilt.
Verbindungen der Formel I können in Form eines Prodrug, das im menschlichen oder tierischen Körper zu einer Verbindung der Formel I abgebaut wird, verabreicht werden. Beispiele für Prodrugs sind in vivo hydrolysierbare Ester einer Verbindung der Formel I.
Verschiedene Formen von Prodrugs sind im Stand der Technik bekannt. Für Beispiele siehe:

a) Design of Prodrugs, Herausgeber H. Bundgaard, (Elsevier, 1985), und Methods in Enzymology, Band 42, S. 309–396, Herausgeber K. Widder et al. (Academic Press, 1985);
b) A Textbook of Drug Design and Development, Herausgeber Krogsgaard-Larsen und H. Bundgaard, Kapitel 5 „Design and Application of Prodrugs", von H. Bundgaard, S. 113–191 (1991);
c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1–38 (1992);
d) H. Bundgaard et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988); und
e) N. Kakeya et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984).

In vivo hydrolysierbare Ester einer Verbindung der Formel I mit einer Hydroxylgruppe sind u.a. anorganische Ester, wie Phosphatester (einschließlich cyclischer Phosphorsäureamidester) und α-Acyloxyalkylether und verwandte Verbindungen, die infolge der in-vivo-Hydrolyse des Esters unter Bildung der zugrundeliegenden Hydroxylgruppe(n) abgebaut werden. Beispiele für α-Acyloxyalkylether sind Acetoxymethoxy und 2,2-Dimethylpropionyloxymethoxy. Als Auswahl von in vivo hydrolysierbare Ester bildenden Gruppen für Hydroxy seien Alkanoyl, Benzoyl, Phenylacetyl und substituiertes Benzoyl und Phenylacetyl, Alkoxycarbonyl (zur Bildung von Alkylcarbonatestern), Dialkylcarbamoyl und N-(Dialkylaminoethyl)-N-alkylcarbamoyl (zur Bildung von Carbamaten), Dialkylaminoacetyl und Carboxyacetyl genannt. Beispiele für Ringsubstituenten an Phenylacetyl und Benzoyl sind von einem Ringstickstoffatom aus über eine Methylengruppe an die 3- oder 4-Position des Benzoylrings gebundenes Morpholino oder Piperazino.
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verbindungen der Formel I gemäß obiger Definition sowie deren Salze. Salze zur Verwendung in pharmazeutischen Zusammensetzungen sind pharmazeutisch annehmbare Salze, jedoch können bei der Herstellung der Verbindungen der Formel I und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze auch andere Salze brauchbar sein. Zu den erfindungsgemäßen pharmazeutisch annehmbaren Salzen können beispielsweise Säureadditionssalze der Verbindungen der Formel I gemäß obiger Definition, die eine ausreichende Basizität zur Bildung derartiger Salze aufweisen, gehören. Beispiele für derartige Säureadditionssalze sind Salze mit anorganischen oder organischen Säuren, die pharmazeutisch annehmbare Anionen liefern, wie z.B. mit Halogenwasserstoffen (speziell Chlorwasserstoffsäure oder Bromwasserstoffsäure, wovon Chlorwasserstoffsäure insbesondere bevorzugt ist) oder mit Schwefelsäure oder Phosphorsäure, oder mit Trifluoressigsäure, Citronensäure oder Maleinsäure. Darüber hinaus können für den Fall, daß die Verbindungen der Formel I ausreichend sauer sind, pharmazeutisch annehmbare Salze mit einer anorganischen oder organischen Base, die ein pharmazeutisch annehmbares Kation liefert, gebildet werden. Beispiele für derartige Salze mit anorganischen oder organischen Basen sind ein Alkalimetallsalz, wie ein Natrium- oder Kaliumsalz, ein Erdalkalimetallsalz, wie ein Calcium- oder Magnesiumsalz, ein Ammoniumsalz oder beispielsweise ein Salz mit Methylamin, Dimethylamin, Trimethylamin, Piperidin, Morpholin oder Tris(2-hydroxyethyl)amin.
Zur Herstellung einer Verbindung der Formel I oder eines Salzes davon und anderer erfindungsgemäßer Verbindungen (gemäß nachstehender Definition) kann man sich jedes Verfahrens bedienen, das bekanntlich zur Herstellung von chemisch verwandten Verbindungen geeignet ist. Dazu gehören beispielsweise die verfahren gemäß den europäischen Patentanmeldungen 0520722, 0566226, 0602851 und 0635498 und den internationalen Patentanmeldungen WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 und WO 98/13354. Derartige Verfahren bilden ein weiteres Merkmal der Erfindung und werden im folgenden erläutert. Die benötigten Ausgangsstoffe sind nach Standardmethoden der organischen Chemie erhältlich. Die Herstellung derartiger Ausgangsstoffe wird in den beigefügten Beispielen, die die Erfindung in keiner weise einschränken sollen, beschrieben. Alternativ dazu sind die benötigten Ausgangsstoffe in Anlehnung an die erläuterten Methoden nach Verfahrensweisen erhältlich, die zum üblichen Fachwissen des organischen Chemikers gehören.
Somit bilden die folgenden Verfahren (a) bis (d) und (i) bis (iv) weitere Merkmale der vorliegenden Erfindung.
Synthese von Verbindungen der Formel I

(a) Verbindungen der Formel I und Salze davon können hergestellt werden, indem man eine Verbindung der Formel III:
(worin R² die oben angegebene Bedeutung besitzt und L¹ für eine austauschbare Gruppierung steht) mit einer Verbindung der Formel IV:
(worin R¹ und m die oben angegebene Bedeutung besitzen) zu Verbindungen der Formel I und Salzen davon umsetzt. Als zweckmäßige austauschbare Gruppierung L¹ eignet sich beispielsweise eine Halogen-, Alkoxy- (vorzugsweise C_1-4-Alkoxy), Aryloxy- oder Sulfonyloxygruppe, beispielsweise eine Chlor-, Brom-, Methoxy-, Phenoxy-, Methansulfonyloxy- oder Toluol-4-sulfonyloxygruppe. Die Umsetzung wird vorteilhafterweise entweder in Gegenwart einer Säure oder einer Base durchgeführt. Als Säure eignet sich hierbei beispielsweise eine wasserfreie anorganische Säure, wie Chlorwasserstoff. Als Base eignet sich hierbei beispielsweise eine organische Aminbase, wie beispielsweise Pyridin, 2,6-Lutidin, Collidin, 4-Dimethylaminopyridin, Triethylamin, Morpholin, N-Methylmorpholin oder Diazabicyclo[5,4,0]undec-7-en, oder beispielsweise ein Alkalimetall- oder Erdalkalimetallcarbonat oder -hydroxid, beispielsweise Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Calciumcarbonat, Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid. Als Base kommt aber beispielsweise auch ein Alkalimetallhydrid, beispielsweise Natriumhydrid, oder ein Alkalimetall- oder Erdalkalimetallamid, beispielsweise Natriumamid oder Natriumbis(trimethylsilyl)amid, in Betracht. Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels oder Verdünnungsmittels, beispielsweise eines Alkanols oder Esters, wie Methanol, Ethanol, 2-Propanol oder Essigsäureethylester, eines halogenierten Lösungsmittels, wie Methylenchlorid, Trichlormethan oder Tetrachlorkohlenstoff, eines Ethers, wie Tetrahydrofuran oder 1,4-Dioxan, eines aromatischen Lösungsmittels, wie Toluol, oder eines dipolar aprotischen Lösungsmittels, wie N,N-Dimethylformamid, N,N-Dimethylacetamid, N-Methylpyrrolidin-2-on oder Dimethylsulfoxid. Die Umsetzung erfolgt zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 150°C, vorzugsweise im Bereich von 20 bis 80°C. Bei diesem Verfahren kann die erfindungsgemäße Verbindung in Form der freien Base oder auch in Form eines Salzes mit der Säure der Formel H-L¹, worin L¹ die oben angegebene Bedeutung besitzt, erhalten werden. Will man aus dem Salz die freie Base erhalten, so kann man das Salz nach einer herkömmlichen Methode mit einer Base gemäß obiger Definition behandeln.
(b) Verbindungen der Formel I und Salze davon können hergestellt werden, indem man eine Verbindung der Formel V:
(worin m und R¹ die oben angegebene Bedeutung besitzen) mit einer Verbindung der Formel VI: R²-L¹ (VI)(worin R² und L¹ die oben angegebene Bedeutung besitzen), zweckmäßigerweise in Gegenwart einer Base gemäß obiger Definition, umsetzt; L¹ steht für eine austauschbare Gruppierung, beispielsweise eine Halogen- oder Sulfonyloxygruppe, wie eine Brom- oder Methansulfonyloxygruppe. Zweckmäßigerweise steht L¹ für eine Gruppe O-⁺P(Y)₃ (worin Y Butyl oder Phenyl bedeutet), und in solchen Fällen wird die Verbindung der Formel VI zweckmäßigerweise in situ gebildet. Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise in Gegenwart einer Base (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition) und vorteilhafterweise in einem inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittel (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition), vorteilhafterweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 150°C, zweckmäßigerweise bei etwa 50°C.
(c) Verbindungen der Formel I und Salze davon können hergestellt werden, indem man eine Verbindung der Formel VII:
mit einer Verbindung der Formel VIII: R⁴-O-H (VIII)(worin L¹, R¹, R² und m alle die oben angegebene Bedeutung besitzen) umsetzt. Die Umsetzung kann zweckmäßigerweise in Gegenwart einer Base (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition) und vorteilhafterweise in einem inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittel (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition), vorteilhafterweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 150°C, zweckmäßigerweise bei etwa 100°C, erfolgen.
(d) Verbindungen der Formel I und Salze davon können hergestellt werden, indem man eine Verbindung der Formel IX:
worin R¹ und m alle die oben angegebene Bedeutung besitzen und R⁴ für eine geschützte Gruppe R² steht, wobei R² die oben angegebene Bedeutung besitzt, aber zusätzlich eine oder mehrere Schutzgruppen P² trägt, entschützt. Die Wahl der Schutzgruppe P² gehört zum einschlägigen Fachwissen des organischen Chemikers, beispielsweise diejenigen, die in Standardtexten, wie „Protective Groups in Organic Synthesis", T. W. Greene und R. G. M. Wuts, 2. Auflage, Wiley 1991, zu finden sind. Vorzugsweise steht P² für eine Schutzgruppe wie Carbamat (Alkoxycarbonyl) (wie beispielsweise tert.-Butoxycarbonyl, tert.-Amyloxycarbonyl, Cyclobutoxycarbonyl, Propoxycarbonyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl, Allyloxycarbonyl oder Benzyloxycarbonyl). Weiter bevorzugt steht P² für tert.-Butoxycarbonyl. Die Umsetzung wird vorzugsweise in Gegenwart einer Säure durchgeführt. Als Säure eignet sich hierbei beispielsweise eine anorganische Säure, wie Chlorwasserstoff oder Bromwasserstoff, oder eine organische Säure, wie Trifluoressigsäure oder Trifluormethansulfonsäure. Die Umsetzung kann in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels, wie Methylenchlorid oder Trichlormethan, und in Gegenwart einer Spur Wasser durchgeführt werden. Die Umsetzung wird zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 100°C, vorzugsweise im Bereich von 20 bis 80°C, durchgeführt.

Synthese von Zwischenprodukten

(i) Die Verbindungen der Formel III und Salze davon, bei denen L¹ für Halogen steht, sind beispielsweise durch Halogenierung einer Verbindung der Formel X:
(worin R² die oben angegebene Bedeutung besitzt) zugänglich.

Beispiele für zweckmäßige Halogenierungsmittel sind anorganische Säurehalogenide, beispielsweise Thionylchlorid, Phosphor(III)-chlorid, Phosphor(V)-oxidchlorid und Phosphor(V)-chlorid. Die Halogenierungsreaktion erfolgt zweckmäßigerweise in Gegenwart eines inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittels, wie beispielsweise eines halogenierten Lösungsmittels, wie Methylenchlorid, Trichlormethan oder Tetrachlorkohlenstoff, oder eines aromatischen Kohlenwasserstofflösungsmittels, wie Benzol oder Toluol. Die Umsetzung erfolgt zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 150°C, vorzugsweise im Bereich von 40 bis 100°C.
Die Verbindungen der Formel X und Salze davon, die ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung bilden, sind beispielsweise durch Umsetzung einer Verbindung der Formel XI:
(worin L¹ die oben angegebene Bedeutung besitzt) mit einer Verbindung der Formel VIII gemäß obiger Definition zugänglich. Die Umsetzung kann zweckmäßigerweise in Gegenwart einer Base (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition) und vorteilhafterweise in Gegenwart eines inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittels (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition), vorteilhafterweise bei einer Temperatur im Bereich von beispiels weise 10 bis 150°C, zweckmäßigerweise bei etwa 100°C, erfolgen.
Die Verbindungen der Formel X und Salze davon können auch durch Cyclisierung einer Verbindung der Formel XII:
(worin R² die oben angegebene Bedeutung besitzt und A¹ für eine Hydroxyl-, Alkoxy- (vorzugsweise C_1-4-Alkoxy-) oder Aminogruppe steht) zu einer Verbindung der Formel X oder einem Salz davon hergestellt werden. Zur Cyclisierung kann man eine Verbindung der Formel XII, worin A¹ für eine Hydroxyl- oder Alkoxygruppe steht, mit Formamid oder einem cyclisierungswirksamen Äquivalent davon umsetzen, wobei man eine Verbindung der Formel X oder ein Salz davon erhält, wie [3-(Dimethylamino)-2-azaprop-2-enyliden]dimethylammoniumchlorid. Die Cyclisierung erfolgt zweckmäßigerweise in Gegenwart von Formamid als Lösungsmittel oder in Gegenwart eines inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittels, wie eines Ethers, beispielsweise 1,4-Dioxan. Die Cyclisierung erfolgt zweckmäßigerweise bei einer erhöhten Temperatur, vorzugsweise im Bereich von 80 bis 200°C. Die Verbindungen der Formel X können auch durch Cyclisierung einer Verbindung der Formel XII, worin A¹ für eine Aminogruppe steht, mit Ameisensäure oder einem cyclisierungswirksamen Äquivalent davon zu einer Verbindung der Formel XII oder einem Salz davon hergestellt werden. Beispiele für cyclisierungswirksame Ameisensäureäquivalente sind Tri-C_1-4-alkoxymethan, beispielsweise Triethoxymethan und Trimethoxymethan.
Die Cyclisierung erfolgt zweckmäßigerweise in Gegenwart einer katalytisch wirksamen Menge einer wasserfreien Säure, wie einer Sulfonsäure, beispielsweise p-Toluolsulfonsäure, und eines inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittels, wie beispielsweise eines halogenierten Lösungsmittels, wie Methylenchlorid, Trichlormethan oder Tetrachlorkohlenstoff, eines Ethers, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran, oder eines aromatischen Kohlenwasserstofflösungsmittels, wie Toluol. Die Cyclisierung erfolgt zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 100°C, vorzugsweise im Bereich von 20 bis 50°C.
Verbindungen der Formel XII und Salze davon, die ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung bilden, sind beispielsweise durch Reduktion der Nitrogruppe in einer Verbindung der Formel XIII:
(worin R² und A¹ die oben angegebene Bedeutung besitzen) zu einer Verbindung der Formel XII gemäß obiger Definition zugänglich. Die Reduktion der Nitrogruppe kann zweckmäßigerweise nach einer beliebigen der für eine derartige Transformation bekannten Verfahrensweisen erfolgen. Die Reduktion kann beispielsweise durch Hydrierung einer Lösung der Nitroverbindung in Gegenwart eines inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittels entsprechend der obigen Definition in Gegenwart eines zur Katalyse von Hydrierungsreaktionen befähigten Metalls, wie Palladium oder Platin, erfolgen. Ein weiteres Reduktionsmittel ist beispielsweise ein aktiviertes Metall, wie aktiviertes Eisen (das beispielsweise durch Waschen von Eisenpulver mit einer verdünnten Lösung einer Säure, wie Salzsäure, hergestellt wird). So kann die Reduktion beispielsweise durch Erhitzen einer Mischung der Nitroverbindung mit dem aktivierten Metall in Gegenwart eines Lösungs- oder Verdünnungsmittels, wie eines Gemischs aus Wasser und Alkohol, beispielsweise Methanol oder Ethanol, auf eine Temperatur im Bereich von beispielsweise 50 bis 150°C, zweckmäßigerweise bei etwa 70°C, erfolgen.
Verbindungen der Formel XIII und Salze davon, die ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung bilden, sind beispielsweise durch Umsetzung einer Verbindung der Formel XIV:
(worin L¹ und A¹ die oben angegebene Bedeutung besitzen) mit einer Verbindung der Formel VIII gemäß obiger Definition zu einer Verbindung der Formel XIII zugänglich. Die Umsetzung der Verbindungen der Formeln XIV und VIII erfolgt zweckmäßigerweise unter den oben unter Verfahren (c) beschriebenen Bedingungen.
Verbindungen der Formel XIII und Salze davon können beispielsweise auch durch Umsetzung einer Verbindung der Formel XV:
(worin A¹ die oben angegebene Bedeutung besitzt) mit einer Verbindung der Formel VI gemäß obiger Definition zu einer Verbindung der Formel XIII gemäß obiger Definition hergestellt werden. Die Umsetzung der Verbindungen der Formeln XV und VI erfolgt zweckmäßigerweise unter den oben unter Verfahren (b) beschriebenen Bedingungen.
Die Verbindungen der Formel III und Salze davon können beispielsweise auch durch Umsetzung einer Verbindung der Formel XVI:
(worin und L² für eine austauschbare Schutzgruppe steht) mit einer Verbindung der Formel VI gemäß obiger Definition zu einer Verbindung der Formel III, worin L¹ durch L² wiedergegeben wird, hergestellt werden.
Zweckmäßigerweise verwendet man eine Verbindung der Formel XVI, in der L² für eine Phenoxygruppe steht, die gegebenenfalls bis zu 5, vorzugsweise bis zu 2, unter Halogen, Nitro und Cyano ausgewählte Substituenten tragen kann. Die Umsetzung kann zweckmäßigerweise unter den oben unter Verfahren (b) beschriebenen Bedingungen erfolgen.
Die Verbindungen der Formel XVI und Salze davon gemäß obiger Definition können beispielsweise durch Entschützen einer Verbindung der Formel XVII:
(worin L² die oben angegebene Bedeutung besitzt und P¹ für eine Schutzgruppe für phenolische Hydroxylgruppen steht), hergestellt werden. Die Wahl der Schutzgruppe P¹ für phenolische Hydroxylgruppen gehört zum einschlägigen Fachwissen des organischen Chemikers, beispielsweise diejenigen, die in Standardtexten, wie „Protective Groups in Organic Synthesis", T. W. Greene und R. G. M. Wuts, 2. Auflage, Wiley 1991, zu finden sind, einschließlich Ethern (beispielsweise Methyl-, Methoxymethyl-, Allyl- und Benzylether sowie mit bis zu zwei, unter C_1-4-Alkoxy und Nitro ausgewählten Substituenten substituierte Benzylether), Silylethern (beispielsweise t-Butyldiphenylsilyl- und t-Butyldimethylsilylether), Estern (beispielsweise Essigsäure- und Benzoesäureester) und Carbonaten (beispielsweise Methyl- und Benzylcarbonat sowie mit bis zu zwei, unter C_1-4-Alkoxy und Nitro ausgewählten Substituenten substituiertes Benzylcarbonat). Die Entschützung kann nach in der Literatur gut bekannten Techniken erfolgen; beispielsweise kann die Entschützung für den Fall, daß P¹ für eine Benzylgruppe steht, durch Hydrogenolyse oder Behandlung mit Trifluoressigsäure erfolgen.
Die Abspaltung einer derartigen Schutzgruppe für phenolische Hydroxylgruppen kann nach einer beliebigen der für eine derartige Transformation bekannten Verfahrensweisen einschließlich der in Standardtexten wie dem oben zitierten angegebenen Reaktionsbedingungen oder in Anlehnung daran erfolgen. Dabei arbeitet man vorzugsweise unter solchen Reaktionsbedingungen, daß das Hydroxyderivat ohne unerwünschte Reaktionen an anderen Stellen in den Edukt- oder Produktverbindungen gebildet wird. Wenn es sich bei der Schutzgruppe P¹ beispielsweise um Essigsäureester handelt, so kann die Transformation zweckmäßigerweise durch Behandlung des Chinazolinderivats mit einer Base gemäß der obigen Definition und einschließlich Ammoniak und seinen mono- und dialkylierten Derivaten vorzugsweise in Gegenwart eines protischen Lösungsmittels oder Hilfslösungsmittels, wie Wasser oder eines Alkohols, beispielsweise Methanol oder Ethanol, erfolgen. Eine derartige Reaktion kann in Gegenwart eines zusätzlichen inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittels gemäß obiger Definition und bei einer Temperatur im Bereich von 0 bis 50°C, zweckmäßigerweise bei etwa 20°C, erfolgen.
Eine Verbindung der Formel III kann gegebenenfalls in eine andere Verbindung der Formel III mit einer anderen Gruppierung L¹ umgewandelt werden. So kann man beispielsweise eine Verbindung der Formel III, worin L¹ nicht für Halogen, sondern beispielsweise für gegebenenfalls substituiertes Phenoxy steht, in eine Verbindung der Formel III, worin L¹ für Halogen steht, umwandeln, indem man eine Verbindung der Formel III (worin L¹ nicht für Halogen steht) zu einer Verbindung der Formel X gemäß obiger Definition hydrolysiert und anschließend in die so erhaltene Verbindung der Formel X gemäß obiger Definition ein Halogenid einführt, wobei man eine Verbindung der Formel III, worin L¹ für Halogen steht, erhält.

(ii) Die Verbindungen der Formel V gemäß obiger Definition und Salze davon können durch Entschützen der Verbindung der Formel XVIII:
(worin R¹, P¹ und m die oben angegebene Bedeutung besitzen) durch ein Verfahren wie beispielsweise oben unter (i) beschrieben hergestellt werden. Die Verbindungen der Formel XVIII und Salze davon können durch Umsetzung von Verbindungen der Formeln XVII und IV gemäß obiger Definition unter den oben unter (a) beschriebenen Bedingungen zu einer Verbindung der Formel XVIII oder einem Salz davon hergestellt werden.
(iii) Verbindungen der Formel VII und Salze davon gemäß obiger Definition können durch Umsetzung einer Verbindung der Formel XIX:
(worin L¹ die oben angegebene Bedeutung besitzt und L¹ in 4-Stellung und 7-Stellung gleich oder verschieden sein kann) mit einer Verbindung der Formel IV gemäß obiger Definition hergestellt werden. Die Umsetzung kann beispielsweise nach einem Verfahren wie oben unter (a) beschrieben durchgeführt werden.
(iv) Eine Verbindung der Formel IX kann durch Umsetzung einer Verbindung der Formel V gemäß obiger Definition mit einer Verbindung der Formel XX: R⁴-L¹ (XX)worin R⁴ und L¹ die oben angegebene Bedeutung besitzen, unter den oben unter (b) beschriebenen Bedingungen zu einer Verbindung der Formel IX oder einem Salz davon hergestellt werden. Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise in Gegenwart einer Base (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition) und vorteilhafterweise in einem inerten Lösungs- oder Verdünnungsmittel (entsprechend der oben unter Verfahren (a) angegebenen Definition), vorteilhafterweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 150°C, zweckmäßigerweise im Bereich von 20 bis 50°C.

Wenn ein pharmazeutisch annehmbares Salz einer Verbindung der Formel I erwünscht ist, so ist dieses beispielsweise durch Umsetzung der Verbindung mit z.B. einer Säure nach einer herkömmlichen Verfahrensweise erhältlich, wobei die Säure ein pharmazeutisch annehmbares Anion aufweist, oder es ist durch Umsetzung der Verbindung mit einer Base nach einer herkömmlichen Verfahrensweise erhältlich.
Die Identifizierung von Verbindungen, die die mit den VEGF-Rezeptoren wie Flt und/oder KDR assoziierte Tyrosinkinaseaktivität wirksam inhibieren und die Angiogenese und/oder erhöhte Gefäßpermeabilität inhibieren, ist wünschenswert und Gegenstand der vorliegenden Erfindung. Diese Eigenschaften können beispielsweise mit einer oder mehreren der nachfolgend aufgeführten Verfahrensweisen abgeschätzt werden:
(a) In-vitro-Rezeptortyrosinkinase-Inhibitionstest
Bei diesem Test wird die Fähigkeit einer Testverbindung zur Inhibierung der Tyrosinkinaseaktivität bestimmt. Für die zytoplasmatischen Domänen von VEGF- oder EGF-Rezeptor (epidermal growth factor) kodierender DNA kann durch Gentotalsynthese (Edwards M., International Biotechnology Lab 5(3), 19–25, 1987) oder durch Klonen erhalten werden. Diese können dann in einem geeigneten Expressionssystem exprimiert werden, was Polypeptid mit Tyrosinkinaseaktivität ergibt. Beispielsweise wurde gefunden, daß durch Expression von rekombinantem Protein in Insektenzellen erhaltene zytoplasmatische Domänen des VEGF- und EGF-Rezeptors eine intrinsische Tyrosinkinaseaktivität zeigen. Im Fall des VEGF-Rezeptors Flt (Genbank-Zugangsnummer X51602) wurde aus cDNA ein von Shibuya et al. (Oncogene, 1990, 5: 519–524) beschriebenes, für den größten Teil der zytoplasmatischen Domäne kodierendes 1,7-kb-DNA-Fragment, beginnend mit Methionin 783 und einschließlich des Terminationscodons, isoliert und in einen Baculovirus-Übertragungsvektor (beispielsweise pAcYM1 (siehe The Baculovirus Expression System: A Laboratory Guide, L. A. King und R. D. Possee, Chapman und Hall, 1992), pAc360 oder pBlueBacHis (von der Firma Invitrogen Corporation erhältlich)) kloniert. Dieses rekombinante Konstrukt wurde zur Herstellung von rekombinantem Baculovirus mit viraler DNA (z.B. Pharmingen BaculoGold) in Insektenzellen (beispielsweise Spodoptera frugiperda 21(Sf21)) cotransfiziert (Einzelheiten der Methoden zum Zusammensetzen von rekombinanten DNA-Molekülen und der Herstellung und Verwendung von rekombinantem Baculovirus sind Standardtexten zu entnehmen, beispielsweise Sambrook et al., 1989, Molecular cloning – A Laboratory Manual, 2. Auflage, Cold Spring Harbour Laboratory Press, und O'Reilly et al., 1992, Baculovirus Expression Vectors – A Laboratory Manual, W. H. Freeman and Co., New York). Für andere Tyrosinkinasen zur Verwendung in Assays können von Methionin 806 (KDR, Genbank-Zugangsnummer L04947) und Methionin 668 (EGF-Rezeptor, Genbank-Zugangsnummer X00588) ausgehende Zytoplasmafragmente auf ähnliche Art und Weise kloniert und exprimiert werden.
Zur Expression von cFlt-Tyrosinkinaseaktivität wurden Sf21-Zellen mit plaquereinem cFlt-rekombinantem Virus mit einer Infektionsmultiplizität von 3 infiziert und 48 Stunden später geerntet. Die geernteten Zellen wurden mit eiskalter phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) (10 mM Natriumphosphat, pH 7,4, 138 mM Natriumchlorid, 2,7 mM Kaliumchlorid) gewaschen und dann in eiskaltem HNTG/PMSF (20 mM Hepes, pH 7,5, 150 mM Natriumchlorid, 10 Vol.-% Glycerin, 1 Vol.-% Triton X100, 1,5 mM Magnesiumchlorid, 1 mM Ethylenglykolbis(β-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetraessigsäure (EGTA), 1 mM PMSF (Phenylmethylsulfonylfluorid); das PMSF wird unmittelbar vor Gebrauch aus einer frisch hergestellten 100 mM Lösung in Methanol zugegeben) unter Verwendung von 1 ml HNTG/PMSF pro 10 Millionen Zellen resuspendiert. Nach 10 Minuten Zentrifugieren bei 13.000 UpM und 4°C wurde der Überstand (Enzymstammlösung) abgenommen und in Aliquots bei –70°C gelagert. Jede neue Stammenzymcharge wurde im Assay durch Verdünnung mit Enzymverdünnungsmittel (100 mM Hepes, pH 7,4, 0,2 mM Natriumorthovanadat, 0,1 Vol.-% Triton X100, 0,2 mM Dithiothreitol) titriert. Bei einer typischen Charge wird das Stammenzym mit Enzymverdünnungsmittel 1:2000 verdünnt, wonach für jede Assay-Vertiefung 50 μl verdünntes Enzym verwendet werden.
Aus einem tyrosinhaltigen statistischen Copolymer, beispielsweise Poly(Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899), wurde eine Substratstammlösung hergestellt, die als Stammlösung in einer Konzentration von 1 mg/ml in PBS bei –20°C gelagert und zur Plattenbeschichtung 1:500 mit PBS verdünnt wurde.
Am Tag vor dem Assay wurden in alle Vertiefungen von Assayplatten (Nunc, maxisorp immunoplates mit 96 Vertiefungen) 100 μl verdünnte Substratlösung gefüllt, wonach die Platten verschlossen und über Nacht bei 4°C stehengelassen wurden.
Am Assaytag wurde die Substratlösung verworfen, wonach die Vertiefungen der Assayplatte einmal mit PBST (PBS mit 0,05 Vol.-% Tween 20) und einmal mit 50 mM Hepes, pH 7,4, gewaschen wurden.
Die Testverbindungen wurden mit 10% Dimethylsulfoxid (DMSO) verdünnt, wonach 25 μl der verdünnten Verbindung in Vertiefungen in den gewaschenen Assayplatten überführt wurden. "Total"-Vergleichsvertiefungen enthielten 10% DMSO anstelle von Verbindung. Alle Testvertiefungen wurden mit fünfundzwanzig Mikroliter 40 mM Mangan(II)-chlorid mit 8 μM Adenosin-5'-triphosphat (ATP) versetzt, jedoch mit Ausnahme der "Blind"-Vergleichsvertiefungen, die Mangan(II)-chlorid ohne ATP enthielten. Zum Starten der Reaktionen wurde jede Vertiefung mit 50 μl frisch verdünntem Enzym versetzt, wonach die Platten 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert wurden. Dann wurde die Flüssigkeit verworfen, wonach die Platten zweimal mit PBST gewaschen wurden. Nach Zugabe von einhundert Mikroliter mit PBST mit 0,5% w/v Rinderserumalbumin (BSA) auf 1:6000 verdünntem Maus-IgG-Antiphosphotyrosin-Antikörper (Upstate Biotechnology Inc., Produkt 05-321) zu jeder Vertiefung wurden die Platten 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert, wonach die Flüssigkeit verworfen wurde und die Vertiefungen zweimal mit PBST gewaschen wurden. Nach Zusatz von einhundert Mikroliter mit PBST mit 0,5% w/v BSA auf 1:500 verdünntem, an Meerrettichperoxidase (HRP) gebundenem Schaf-anti-Maus-IgG-Antikörper (Amersham, Produkt NXA 931) wurden die Platten 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert, wonach die Flüssigkeit verworfen wurde und die Vertiefungen zweimal mit PBST gewaschen wurden. Dann wurde jede Vertiefung mit einhundert Mikroliter einer Lösung von 2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonsäure) (ABTS) versetzt, die mit einer 50-mg-ABTS-Tablette (Boehringer 1204 521) in 50 ml frisch hergestelltem 50 mM Phosphatcitrat-Puffer, pH 5,0, + 0,03% Natriumperborat (hergestellt aus 1 Kapsel Phosphatcitrat-Puffer mit Natriumperborat (PCSB) (Sigma P4922) auf 100 ml destilliertes Wasser) frisch hergestellt worden war. Die Platten wurden dann bei Raumtemperatur 20–60 Minuten inkubiert, bis die bei 405 nm mit einem Plattenlese-Spektralphotometer gemessene optische Dichte der "Total"-Vergleichsvertiefungen ungefähr 1,0 betrug. Der Verdünnungsbereich der Testverbindung, der 50% Inhibierung der Enzymaktivität ergab, wurde anhand von "Blind"-Vergleichswerten (kein ATP) und "Total"-Vergleichswerten (keine Verbindung) bestimmt.
(b) In-vitro-HUVEC-Proliferationsassay
Bei diesem Assay wird die Fähigkeit einer Testverbindung zur Inhibierung der wachstumsfaktorstimulierten Proliferation von Endothelzellen aus der menschlichen Nabelschnurvene (HUVEC) bestimmt.
HUVEC-Zellen wurden in MCDB 131 (Gibco BRL) + 7,5 Vol.-% fetalem Kalbsserum (FCS) isoliert und in MCDB 131 + 2 Vol.-% FCS + 3 μg/ml Heparin + 1 μg/ml Hydrocortison in einer Konzentration von 1000 Zellen/Vertiefung in Platten mit 96 Vertiefungen ausplattiert (bei Passage 2 bis 8). Nach mindestens 4 Stunden wurden der entsprechende Wachstumsfaktor (d.h. VEGF 3 ng/ml, EGF 3 ng/ml oder b-FGF 0,3 ng/ml) und Verbindung zugesetzt. Dann wurden die Kulturen bei 37°C 4 Tage mit 7,5% Kohlendioxid inkubiert. Am 4. Tag wurden die Kulturen mit 1 μCi/Vertiefung tritiiertem Thymidin (Amersham, Produkt TRA 61) gepulst und 4 Stunden inkubiert. Die Zellen wurden mit einem Erntegerät für Platten mit 96 Vertiefungen (Tomtek) geerntet und dann mit einem Beta-Plattenzähler auf Tritiumeinbau geprüft. Der in cpm ausgedrückte Einbau von Radioaktivität in Zellen wurde zur Messung der Inhibierung der wachstumsfaktorstimulierten Zellproliferation durch Verbindungen verwendet.
(c) In-vivo-Modell für eine Erkrankung mit einem soliden Tumor
Bei diesem Test wird die Fähigkeit von Verbindungen zur Inhibierung des Wachstums von soliden Tumoren gemessen.
In der Flanke von weiblichen athymischen Swiss-nu/nu-Mäusen wurden durch subkutane Injektion von 1 × 10⁶ CaLu-6-Zellen/Maus in 100 μl einer 50%igen (v/v) Lösung von Matrigel in serumfreiem Kulturmedium CaLu-6-Tumorxenografts etabliert. Zehn Tage nach der Zellimplantation wurden Mäuse Gruppen von 8–10 Tieren zugeteilt, um vergleichbare Gruppenmittelvolumina zu erhalten. Tumore wurden mit Nonius-Schublehren ausgemessen, und die Volumina wurden folgendermaßen berechnet: (l × w) × √(1 × w) × (π/6), worin 1 für den längsten Durchmesser steht und w für den zum längsten Durchmesser senkrechten Durchmesser steht. Testverbindungen wurden mindestens 21 Tage lang einmal täglich oral verabreicht, wohingegen Kontrolltiere Verbindungsverdünnungsmittel empfingen. Die Tumore wurden zweimal wöchentlich ausgemessen. Der Grad der Wachstumsinhibierung wurde durch Vergleich des mittleren Tumorvolumens der Kontrollgruppe gegenüber der Behandlungsgruppe unter Verwendung eines t-Tests nach Student und/oder eines Rangsummentests nach Mann und Whitney berechnet. Die Hemmwirkung der Verbindungsbehandlung wurde bei p < 0,05 als signifikant erachtet.
Das toxikologische Profil von erfindungsgemäßen Verbindungen kann beispielsweise mit anhand einer 14tägigen Rattenstudie gemäß nachstehender Beschreibung abgeschätzt werden.
(d) 14-Tage-Toxizitätstest an der Ratte
Bei diesem Test wird die Wirkung von Verbindungen bezüglich der Vergrößerung der Hypertrophiezone in den Femurepiphysen-Wachstumsplatten des distalen Femurs und der proximalen Tibia gemessen, was die Abschätzung von histopathologischen Veränderungen in anderen Geweben ermöglicht.
Die Angiogenese ist ein wesentliches Ereignis bei der endochondralen Ossifikation bei der Langknochenverlängerung, und es wurde vorgeschlagen, daß die Gefäßinvasion von der VEGF-Produktion durch hypertrophe Chondrozyten abhängt. Die Expansion der Zone hypertropher Chondrozyten und die Inhibierung der Angiogenese wurden nach Behandlung mit Mitteln, die VEGF spezifisch sequestrieren, wie beispielsweise (i) einem löslichen chimären VEGF-Rezeptor-Protein (Flt-(1-3)-IgG) bei der Maus (Gerber, H-P., Vu, T. H., Ryan, A. M., Kowalski, J., Werb, Z. und Ferrara, N. VEGF couples hypertrophic cartilage remodelling, ossification and angiogenesis during endochondral bone formation, Nature Med., 5: 623–628, 1999) und (ii) einem rekombinanten humanisierten monoklonalen Anti-VEGF-IgG1-Antikörper beim Cynomolgus-Affen (Ryan, A. M., Eppler, D. B., Hagler, K. E., Bruner, R. H., Thomford, P. J., Hall, R. L., Shopp, G. M. und O'Niell, C. A. Preclinical Safety Evaluation of rhuMAbVEGF, an antiangiogenic humanised monoclonal antibody, Tox. Path., 27: 78–86, 1999) demonstriert.
Ein Inhibitor der VEGF-Rezeptortyrosinkinaseaktivität sollte daher auch die Gefäßinvasion von Knorpelgewebe inhibieren und die Hypertrophiezone in den Femurepiphysen-Wachstumsplatten des distalen Femurs und der proximalen Tibia bei wachsenden Tieren vergrößern.
Verbindungen wurden zunächst durch Suspendieren in 1%iger (v/v) Lösung von Polyoxyethylen-(20)-sorbitanmonooleat in entionisiertem Wasser durch Mahlen über Nacht (mindestens 15 Stunden) bei 4°C in der Kugelmühle formuliert. Jungen Alderley-Park-Ratten (Wistar-Abstammung, Gewicht 135–150 g, Alter 4 bis 8 Wochen, 5–6 pro Gruppe) wurde per Schlundsonde einmal täglich über einen Zeitraum von 14 aufeinanderfolgenden Tagen Verbindung (0,25 ml/100 g Körpergewicht) oder Träger verabreicht. An Tag 15 wurden die Tiere mit einer steigenden Konzentration von Kohlendioxid human getötet, wonach eine Autopsie durchgeführt wurde. Eine Reihe von Geweben einschließlich der Femorotibialgelenke wurde entnommen und nach histologischen Standardtechniken zur Herstellung von Paraffinwachsschnitten verarbeitet. Histologische Schnitte wurden mit Hämatoxylin und Eosin angefärbt und lichtmikroskopisch auf Histopathologie untersucht. Die Femurepiphysen-Wachstumsplattenbereiche des distalen Femurs und der proximalen Tibia wurden in Femur- und Tibiaschnitten mittels morphometrischer Bildanalyse ausgemessen. Die Vergrößerung der Hypertrophiezone wurde durch Vergleich des mittleren Femurepiphysen-Wachstumsplattenbereichs der Kontrollgruppe gegenüber der Behandlungsgruppe bestimmt, und die statistische Signifiganz wurde unter Verwendung eines einseitigen t-Tests nach Student bestimmt. Die Hemmwirkung der Verbindungsbehandlung wurde bei p < 0,05 als signifikant erachtet.
Wenngleich die pharmakologischen Eigenschaften der Verbindungen der Formel I mit Strukturänderungen variieren, kann die Wirkung von Verbindungen der Formel I im allgemeinen bei den folgenden Konzentrationen oder Dosen in einem oder mehreren der obigen Tests (a), (b), (c) und (d) demonstriert werden:
Test (a): IC₅₀ im Bereich von beispielsweise < 5 μM;
Test (b): IC₅₀ im Bereich von beispielsweise 0,001–5 μM;
Test (c): Wirkung im Bereich von beispielsweise 0,1–100 mg/kg;
Test (d): Wirkung im Bereich von beispielsweise 0,1–100 mg/kg.
Gemäß einer Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung haben in dem 14-Tage-Toxizitätstest an der Ratte eingeschätzte Verbindungen der Formel I ein vorteilhaftes toxikologisches Profil gegenüber anderen Verbindungen im Schutzbereich der internationalen Patentanmeldung WO 98/13354.
Gemäß einer anderen Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung haben in dem 14-Tage-Toxizitätstest an der Ratte eingeschätzte Verbindungen der Formel I ein vorteilhaftes toxikologisches Profil gegenüber anderen Verbindungen im Schutzbereich der internationalen Patentanmeldung WO 97/30035.
Wenngleich die pharmakologischen Eigenschaften der Verbindungen der Formel I mit Strukturänderungen und zwischen Spezies variieren, ergeben Verbindungen der Formel I, die eine statistisch signifikante Vergrößerung des Femurepiphysen-Wachstumsplattenbereichs des distalen Femurs und der proximalen Tibia ergeben, bei Dosen bei der Ratte, vorzugsweise bei Dosen kleiner gleich 150 mg/kg, weiter bevorzugt bei Dosen kleiner gleich 100 mg/kg und speziell bei Dosen kleiner gleich 50 mg/kg in den im Rahmen eigener Forschungen durchgeführten Tests (d) keine unannehmbaren histopathologischen Veränderungen in anderen Geweben.
So ergab beispielsweise die gemäß (a), (b), (c) und (d) oben getestete Verbindung 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (Beispiel 2) die folgenden Ergebnisse:

(a) Flt – IC₅₀ 1,6 μM KDR – IC₅₀ 0,04 μM EGFR – IC₅₀ 0,50 μM
(b) VEGF – IC₅₀ 0,06 μM EGF – IC₅₀ 0,17 μM Basal – IC₅₀ > 3 μM
(c) 78%ige Inhibierung des Tumorwachstums bei 50 mg/kg; p < 0,001 (Rangsummentest nach Mann und Whitney);
(d) 75%ige Erhöhung der Epiphysenwachstumsplatten-Hypertrophie bei 100 mg/kg pro Tag bei weiblichen Ratten; p < 0,001 (einseitiger t-Test nach Student).

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist gemäß einer weiteren Ausgestaltung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung der Formel I gemäß obiger Definition oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon in Abmischung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoff oder Träger enthält.
Die Zusammensetzung kann in geeigneter Form für die orale Verabreichung (beispielsweise als Tabletten, Pastillen, Hart- oder Weichkapseln, wäßrige oder ölige Suspensionen, Emulsionen, dispergierbare Pulver oder Granulate, Sirupe oder Elixiere), für die Verabreichung durch Inhalation (beispielsweise als feinteiliges Pulver oder flüssiges Aerosol), für die Verabreichung durch Insufflation (beispielsweise als feinteiliges Pulver), für die parenterale Injektion (beispielsweise als sterile Lösung, Suspension oder Emulsion zur intravenösen, subkutanen, intramuskulären oder intravaskulären Injektion oder zur Dosierung durch Infusion), für die topische Verabreichung (beispielsweise als Cremes, Salben, Gele oder wäßrige oder ölige Lösungen oder Suspensionen) oder für die rektale Verabreichung (beispielsweise als Suppositorium) vorliegen. Die obigen Zusammensetzungen können im allgemeinen nach herkömmlichen Methoden unter Verwendung üblicher Hilfsstoffe hergestellt werden.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen werden vorteilhafterweise in Einzeldosisform dargeboten. Die Verbindung wird einem Warmblüter normalerweise in einer Einzeldosis im Bereich von 5–5000 mg pro Quadratmeter Körperfläche des Warmblüters, d.h. ungefähr 0,1–100 mg/kg, verabreicht. Vorzugsweise ist eine Einzeldosis im Bereich von beispielsweise 1–100 mg/kg, vorzugsweise 1–50 mg/kg, vorgesehen, was normalerweise eine therapeutisch wirksame Dosis liefert. Eine Einzeldosisform, wie eine Tablette oder Kapsel, enthält üblicherweise beispielsweise 1–250 mg Wirkstoff.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist gemäß einer weiteren Ausgestaltung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon gemäß obiger Definition zur Verwendung bei einer Methode zur Behandlung des menschlichen oder tierischen Körpers mittels Therapie.
Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen VEGF-Rezeptortyrosinkinaseaktivität inhibieren und daher wegen ihrer antiantiogenen Wirkungen und/oder ihrer Fähigkeit zur Bewirkung einer Senkung der Gefäßpermeabilität von Interesse sind.
Ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung ist eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon zur Verwendung als Arzneimittel, zweckmäßigerweise eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon zur Verwendung als Arzneimittel zur Erzielung einer antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssenkenden Wirkung bei einem Warmblüter, wie einem Menschen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist somit gemäß einer weiteren Ausgestaltung die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Erzielung einer antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssentenden Wirkung bei einem Warmblüter wie einem Menschen.
Wie oben bereits angegeben, wird die Größe der für die therapeutische oder prophylaktische Behandlung eines bestimmten Krankheitszustands notwendigen Dosis je nach dem behandelten Wirt, dem Verabreichungsweg und der Schwere der zu behandelnden Krankheit variiert. Vorzugsweise wird eine Tagesdosis im Bereich von 1–50 mg/kg eingesetzt. Die Tagesdosis wird jedoch je nach dem behandelten Wirt, dem speziellen Verabreichungsweg und der Schwere der zu behandelnden Krankheit variiert. Dementsprechend kann die optimale Dosis von dem einen bestimmten Patienten behandelnden Arzt bestimmt werden.
Die vorstehend definierte antiangiogene und/oder gefäßpermeabilitätssenkende Behandlung kann als alleinige Therapie angewandt werden oder neben einer erfindungsgemäßen Verbindung auch noch eine oder mehrere andere Substanzen und/oder Behandlungen umfassen. Für eine derartige Kombinationsbehandlung werden die Einzelkomponenten der Behandlung gleichzeitig, hintereinander oder getrennt verabreicht. Auf dem Gebiet der medizinischen Onkologie verwendet man zur Behandlung jedes Krebspatienten üblicherweise eine Kombination verschiedener Behandlungsformen. In der medizinischen Onkologie kann es sich bei der anderen Komponente bzw. den anderen Komponenten einer derartigen Kombinationsbehandlung neben der antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssenkenden Behandlung gemäß obiger Definition um Chirurgie, Radiotherapie oder Chemotherapie handeln. Eine derartige Chemotherapie kann drei Hauptkategorien von Therapeutika abdecken:

(i) andere antiangiogene Mittel, die nach Mechanismen arbeiten, die sich von den vorstehend definierten Mechanismen unterscheiden (beispielsweise Linomid, Inhibitoren der Integrin-ανβ3-Funktion, Angiostatin, Endostatin, Razoxin, Thalidomid), und einschließlich auf die Gefäße wirkender Mittel (beispielsweise Combretastatinphosphat und die gefäßschädigenden Mittel gemäß der internationalen Patentanmeldung WO 99/02166, worauf hiermit im vollen Umfang ausdrücklich Bezug genommen wird (beispielsweise N-Acetylcolchinol-O-phosphat));
(ii) Zytostatika, wie Antiöstrogene (beispielsweise Tamoxifen, Toremifen, Raloxifen, Droloxifen, Iodoxyfen), Progestogene (beispielsweise Megestrolacetat), Aromatase-Inhibitoren (beispielsweise Anastrozol, Letrazol, Vorazol, Exemestan), Antiprogestogene, Antiandrogene (beispielsweise Flutamid, Nilutamid, Bicalutamid, Cyproteronacetat), LHRH-Agonisten und -Antagonisten (beispielsweise Goserelinacetat, Luprolid, Abarelix), Inhibitoren der Testosteron-5α-dihydroreduktase (beispielsweise Finasterid), Antiinvasionsmittel (beispielsweise Metalloproteinase-Inhibitoren wie Marimastat und Inhibitoren der Urokinase-Plasminogenaktivator-Rezeptorfunktion) und Inhibitoren der Wachstumsfaktorfunktion (Beispiele für derartige Wachstumsfaktoren sind Plättchenwachstumsfaktor und Hepatozytenwachstumsfaktor; Beispiele für derartige Inhibitoren sind Wachstumsfaktorantikörper, Wachstumsfaktorrezeptorantikörper, Tyrosinkinase-Inhibitoren und Serin/Threoninkinase-Inhibitoren);
(iii) die biologische Reaktion modifizierende Mittel (beispielsweise Interferon);
(iv) Antikörper (beispielsweise Edrecolomab) und
(v) antiproliferative/antineoplastische Arzneistoffe und Kombinationen davon, wie sie in der medizinischen Onkologie zum Einsatz kommen, wie Antimetabolite (beispielsweise Antifolate wie Methotrexat, Fluorpyrimidine wie 5-Fluoruracil, Purin- und Adenosin-Analoge, Cytosinarabinosid); Antitumor-Antibiotika (beispielsweise Anthracycline wie Doxorubicin, Daunomycin, Epirubicin und Idarubicin, Mitomycin-C, Dactinomycin, Mithramycin); Platinderivate (beispielsweise Cisplatin, Carboplatin); Alkylierungsmittel (beispielsweise N-Lost, Melphalan, Chlorambucil, Busulfan, Cyclo phosphamid, Ifosfamid, Nitrosoharnstoffe, Thiotepa); Antimitotika (beispielsweise Vinca-Alkaloide wie Vincristin und Taxoide wie Taxol, Taxotere); Enzyme (beispielsweise Asparaginase) und Thymidylatsynthase-Inhibitoren (beispielsweise Raltitrexed); Topo-isomerase-Inhibitoren (beispielsweise Epipodophyllotoxine wie Etoposid und Teniposid, Amsacrin, Topotecan sowie Irinotecan).

Beispielsweise kann man eine derartige Kombinationsbehandlung mittels gleichzeitiger, sequentieller oder separater Verabreichung einer Verbindung der Formel I gemäß obiger Definition, wie 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin oder, eines Salzes davon, insbesondere eines Hydrochloridsalzes davon, und eines auf die Gefäße wirkenden Mittels gemäß WO 99/02166, wie N-Acetylcolchinol-O-phosphat (Beispiel 1 der WO 99/02166), erreichen.
Wie oben bereits angegeben, sind die in der vorliegenden Erfindung definierten Verbindungen wegen ihrer antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssenkenden Wirkung von Interesse. Es wird erwartet, daß derartige erfindungsgemäße Verbindungen sich zur Verwendung in einem breiten Bereich von Krankheitszuständen eignen, einschließlich Krebs, Diabetes, Psoriasis, rheumatoider Arthritis, Kaposi-Sarkom, Hämangiom, akuter und chronischer Nephropathie, Atherom, arterieller Restenose, Autoimmunerkrankungen, akuter Entzündung, übermäßiger Narbenbildung und Adhäsionen, Endometriose, dysfunktionalen Uterusblutungen und Augenkrankheiten mit Netzhautgefäßproliferation. Insbesondere wird erwartet, daß derartige erfindungsgemäße Verbindungen vorteilhafterweise das Wachstum von primären und rezidivierenden soliden Tumoren, z.B. des Kolons, der Brust, der Prostata, der Lunge und der Haut, verlangsamen. Im einzelnen wird erwartet, daß derartige erfindungsgemäße Verbindungen das Wachstum von primären und rezidivie renden soliden Tumoren, die mit VEGF assoziiert sind, insbesondere derjenigen Tumore, die hinsichtlich Wachstum und Ausbreitung in beträchtlichem Maße von VEGF abhängig sind, einschließlich beispielsweise bestimmter Tumore des Kolons, der Brust, der Prostata, der Lunge, der Vulva und der Haut, inhibieren.
In einer anderen Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung wird erwartet, daß erfindungsgemäße Verbindungen der Formel I das Wachstum von primären und rezidivierenden soliden Tumoren, die mit EGF assoziiert sind, insbesondere derjenigen Tumore, die hinsichtlich Wachstum und Ausbreitung in beträchtlichem Maße von EGF abhängig sind, inhibieren.
In einer anderen Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung wird erwartet, daß erfindungsgemäße Verbindungen der Formel I das Wachstum von primären und rezidivierenden soliden Tumoren, die sowohl mit VEGF als auch mit EGF assoziiert sind, insbesondere derjenigen Tumore, die hinsichtlich Wachstum und Ausbreitung in beträchtlichem Maße von VEGF und EGF abhängig sind, inhibieren.
Neben ihrer Verwendung in der therapeutischen Medizin eignen sich die Verbindungen der Formel I und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze auch als pharmakologische Werkzeuge bei der Entwicklung und Standardisierung von in-vitro- und in-vivo-Testsystemen zur Untersuchung der Wirkungen von Inhibitoren der VEGF-Rezeptortyrosinkinaseaktivität in Labortieren, wie z.B. Katzen, Hunden, Kaninchen, Affen, Ratten und Mäusen, als Teil der Suche nach neuen Therapeutika.
Es sei darauf hingewiesen, daß im Rahmen der vorliegenden Beschreibung unter "Ether" Diethylether zu verstehen ist.
Die Erfindung wird nun anhand der folgenden nicht einschränkenden Beispiele erläutert, in denen, sofern nicht anders vermerkt:

(i) Eindampfungen am Rotationsverdampfer im Vakuum durchgeführt wurden und Aufarbeitungsmethoden nach Abfiltrieren von restlichen Feststoffen, wie Trocknungsmitteln, durchgeführt wurden;
(ii) alle Arbeiten bei Umgebungstemperatur, d.h. im Bereich von 18–25°C, und unter einem Inertgas, wie Argon, durchgeführt wurden;
(iii) Säulenchromatographie (nach der Flash-Methode) und Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (MPLC) an Merck Kieselgel (Art. 9385) oder Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) reversed-phase Kieselgel von E. Merck, Darmstadt, Deutschland, vorgenommen wurden;
(iv) Ausbeuten lediglich zur Erläuterung angegeben sind und nicht unbedingt das erzielbare Maximum darstellen;
(v) Schmelzpunkte unkorrigiert sind und auf einem automatischen Schmelzpunktmeßgerät Mettler SP62, einer Ölbadapparatur oder einer Koffler-Heizbank bestimmt wurden;
(vi) die Strukturen der Endprodukte der Formel I durch kernmagnetische Resonanz (NMR; im allgemeinen Protonen-NMR) und Massenspektrometrie bestätigt wurden; chemische Verschiebungen bei der Protonen-NMR wurden auf der Delta-Skala gemessen, wobei die Signalmultiplizitäten folgendermaßen angegeben sind: s: Singulett, d: Dublett; t: Triplett; m: Multiplett; br: breit; q: Quartett; NMR-Spektren auf einer 400-MHz-Maschine bei 24°C aufgenommen wurden;
(vii) Zwischenprodukte nicht generell vollständig durchcharakterisiert wurden und die Reinheit mittels Dünnschichtchromatographie (DC), Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC), Infrarot-(IR-) oder NMR-Analyse abgeschätzt wurde;
(viii) die folgenden Abkürzungen verwendet wurden:

DMF

N,N-Dimethylformamid

DMSO

Dimethylsulfoxid

THF

Tetrahydrofuran

TFA

Trifluoressigsäure

NMP

1-Methyl-2-pyrrolidinon.

Beispiel 1
Eine Suspension von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-7-(1-tert.-butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-6-methoxychinazolin (673 mg, 1,2 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) wurde mit TFA (3 ml) versetzt. Nach 1 Stunde Rühren bei Umgebungstemperatur wurden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde mit einem Gemisch aus Wasser und Ether trituriert. Die organische Schicht wurde abgetrennt. Die wäßrige Schicht wurde erneut mit Ether gewaschen. Dann wurde die wäßrige Schicht mit 2 N Natronlauge auf pH 10 eingestellt. Die wäßrige Schicht wurde mit Methylenchlorid extrahiert. Die organische Schicht wurde getrocknet (MgSO₄) und unter Vakuum vom Lösungsmittel befreit. Der Feststoff wurde mit einem Gemisch aus Ether und Petrolether (1/1) trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)-chinazolin (390 mg, 70,5%) ergab.
MS-ESI: 461–463 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,13–1,3 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,87–2,0 (m, 1H), 2,5 (d, 2H), 3,0 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,98 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,5 (dd, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,68 (dd, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 9,55 (br s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 54,5 H 4,9 N 12,1
Berechnet für C₂₁H₂₂N₄O₂BrF: C 54,7 H 4,8 N 12,1%
Das Edukt wurde folgendermaßen hergestellt:
Eine Lösung von 7-Benzyloxy-4-chlor-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (8,35 g, 27,8 mmol) (hergestellt beispielsweise wie in WO 97/22596, Beispiel 1, beschrieben) und 4-Brom-2-fluoranilin (5,65 g, 29,7 mmol) in 2-Propanol (200 ml) wurde 4 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Der angefallene Niederschlag wurde abfiltriert, mit 2-Propanol und dann mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 7-Benzyloxy-4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (9,46 g, 78%) ergab.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆; CD₃COOD) 4,0 (s, 3H); 5,37 (s, 2H); 7,35–7,5 (m, 4H); 7,52–7,62 (m, 4H); 7,8 (d, 1H); 8,14 (9s, 1H); 8,79 (s, 1H)
MS-ESI: 456 [MH]⁺
Elementaranalyse: Gefunden: C 54,0 H 3,7 N 8,7
Berechnet für C₂₂H₁₇N₃O₂BrF 0,9HCl: C 54,2 H 3,7 N 8,6%
Eine Lösung von 7-Benzyloxy-4-(4-brom-2-fluoranilino)-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (9,4 g, 19,1 mmol) in TFA (90 ml) wurde 50 Minuten unter Rückfluß erhitzt. Dann wurde die Mischung abkühlen gelassen und auf Eis gegossen. Der angefallene Niederschlag wurde abfiltriert und in Methanol (70 ml) gelöst. Die Lösung wurde mit konzentrierter wäßriger Ammoniaklösung auf pH 9–10 eingestellt. Dann wurde die Mischung durch Eindampfen auf die Hälfte ihres Anfangsvolumens auf konzentriert. Der erhaltene Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser und dann mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (5,66 g, 82%) ergab.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆; CD₃COOD) 3,95 (s, 3H); 7,09 (s, 1H); 7,48 (s, 1H); 7,54 (t, 1H); 7,64 (d, 1H); 7,79 (s, 1H); 8,31 (s, 1H)
MS-ESI: 366 [MH]⁺
Elementaranalyse: Gefunden: C 49,5 H 3,1 N 11,3
Berechnet für C₁₅H₁₁N₃O₂BrF: C 49,5 H 3,0 N 11,5%
Unter Einhaltung einer Temperatur im Bereich von 0–5°C wurde eine Lösung von Di-tert.-butyldicarbonat (41,7 g, 0,19 mol) in Essigsäureethylester (75 ml) portionsweise zu einer auf 5°C abgekühlten Lösung von 4-Piperidincarbonsäureethylester (30 g, 0,19 mol) in Essigsäureethylester (150 ml) gegeben. Nach 48 Stunden Rühren bei Umgebungstemperatur wurde die Mischung auf Wasser (300 ml) gegossen. Die organische Schicht wurde abgetrennt, nacheinander mit Wasser (200 ml), 0,1 N wäßriger Salzsäure (200 ml), gesättigtem Natriumhydrogencarbonat (200 ml) und Kochsalzlösung (200 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, was 4-(1-tert.-Butoxycarbonyl)piperidincarbonsäureethylester (48 g, 98%) ergab.
¹H-NMR-Spektrum: (CDCl₃) 1,25 (t, 3H); 1,45 (s, 9H); 1,55–1,70 (m, 2H); 1,8–2,0 (d, 2H); 2,35–2,5 (m, 1H); 2,7–2,95 (t, 2H); 3,9–4,1 (br s, 2H); 4,15 (q, 2H)
Eine auf 0°C abgekühlte Lösung von 4-(1-tert.-Butoxycarbonyl)piperidincarbonsäureethylester (48 g, 0,19 mol) in trockenem THF (180 ml) wurde portionsweise mit einer Lösung von 1 M Lithiumaluminiumhydrid in THF (133 ml, 0,133 mol) versetzt. Nach 2 Stunden Rühren bei 0°C wurde Wasser (30 ml), gefolgt von 2 N Natriumhydroxid (10 ml) zugegeben. Der Niederschlag wurde über Diatomeenerde abfiltriert und mit Essigsäureethylester gewaschen. Das Filtrat wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, was (1-tert.-Butoxycarbonyl)-4-hydroxymethylpiperidin (36,3 g, 89%) ergab.
MS (EI): 215 [M.]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (CDCl₃) 1,05–1,2 (m, 2H); 1,35–1,55 (m, 10H); 1,6–1,8 (m, 2H); 2,6–2,8 (t, 2H); 3,4–3,6 (t, 2H); 4,0–4,2 (br s, 2H)
Eine Lösung von (1-tert.-Butoxycarbonyl)-4-hydroxymethylpiperidin (52,5 g, 0,244 mol) in tert.-Butylmethylether (525 ml) wurde mit 1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octan (42,4 g, 0,378 mol) versetzt. Nach 15 Minuten Rühren bei Umgebungstemperatur wurde die Mischung auf 5°C abgekühlt und unter Einhaltung einer Temperatur von 0°C über einen Zeitraum von 2 Stunden portionsweise mit einer Lösung von Toluolsulfonylchlorid (62,8 g, 0,33 mmol) in tert.-Butylmethylether (525 ml) versetzt. Der Niederschlag wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde eingedampft, was einen Feststoff ergab. Der Feststoff wurde in Ether gelöst und nacheinander mit 0,5 N wäßriger Salzsäure (2 × 500 ml), Wasser, gesättigtem Natriumhydrogencarbonat und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, was 1-(tert.-Butoxycarbonyl)-4-(4-methylphenylsulfonyloxymethyl)piperidin (76,7 g, 85%) ergab.
MS (ESI): 293 [MNa]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (CDCl₃) 1,0–1,2 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,65 (d, 2H); 1,75–1,9 (m, 2H); 2,45 (s, 3H); 2,55–2,75 (m, 2H); 3,85 (d, 1H); 4,0–4,2 (br s, 2H); 7,35 (d, 2H); 7,8 (d, 2H)
Eine Suspension von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (546 mg, 1,5 mmol) in DMF (5 ml) wurde mit Kaliumcarbonat (414 mg, 3 mmol) versetzt. Nach 10 Minuten Rühren bei Umgebungstemperatur wurde 1-(tert.-Butoxycarbonyl)-4-(4-methylphenylsulfonyloxymethyl)piperidin (636 mg, 1,72 mmol) zugegeben und die Mischung 2 Stunden auf 95°C erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde die Mischung auf gekühltes Wasser (20 ml) gegossen. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-7-(1-tert.-butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-6-methoxychinazolin (665 mg, 79%) ergab.
MS-ESI: 561–563 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,15–1,3 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,8 (d, 2H), 2,0–2,1 (m, 1H), 2,65–2,9 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (br s, 2H), 4,05 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,55 (br s, 1H)
Beispiel 2a
Eine Lösung von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (139 mg, 0,3 mmol) (hergestellt wie in Beispiel 1 beschrieben) in einem Gemisch aus THF und Methanol (1,4 ml/1,4 ml) wurde mit einer Lösung von 37%igem wäßrigem Formaldehyd (50 μl, 0,6 mmol) gefolgt von Natriumcyanoborhydrid (23 mg, 0,36 mmol) versetzt. Nach 1 Stunde Rühren bei Umgebungstemperatur wurde Wasser zugegeben, wonach die flüchtigen Bestandteile im Vakuum abgezogen wurden. Der Rückstand wurde mit Wasser trituriert, abfiltriert, mit Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet. Der feststoff wurde durch Chromatographie an neutralem Aluminiumoxid unter Verwendung von Methylenchlorid gefolgt von Methylenchlorid/Essigsäureethylester (1/1) gefolgt von Methylenchlorid/Essigsäureethylester/Methanol (50/45/5) gereinigt. Die das erwartete Produkt enthaltenden Fraktionen wurden unter Vakuum eingedampft. Der erhaltene weiße Feststoff wurde in Methylenchlorid/Methanol (3 ml/3 ml) gelöst und mit 3 N Chlorwasserstoff in Ether (0,5 ml) versetzt. Die flüchtigen Bestandteile wurden im Vakuum abgezogen. Der Feststoff wurde mit Ether trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin-hydrochlorid (120 mg, 69%) ergab.
MS-ESI: 475–477 [MH]⁺
Das NMR-Spektrum der protonierten Form von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-yl-methoxy)chinazolin-hydrochlorid zeigt das Vorliegen von 2 Formen A und B im Verhältnis A:B von ungefähr 9:1.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,55–1,7 (m, Form A, 2H); 1,85–2,0 (m, Form B, 4H); 2,03 (d, Form A, 2H); 2,08–2,14 (br s, Form A, 1H); 2,31–2,38 (br s, Form B, 1H); 2,79 (s, Form A, 3H); 2,82 (s, Form B, 3H); 3,03 (t, Form A, 2H); 3,21 (br s, Form B, 2H); 3,30 (br s, Form B, 2H); 3,52 (d, Form A, 2H); 4,02 (s, 3H); 4,12 (d, Form A, 2H); 4,30 (d, Form B, 2H); 7,41 (s, 1H); 7,5–7,65 (m, 2H); 7,81 (d, 1H); 8,20 (s, 1H); 8,88 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 46,0 H 5,2 N 9,6
Berechnet für C₂₂H₂₄N₄O₂BrF 0,3H₂O 2,65HCl: C 45,8 H 4,8 N 9,7%
Beispiel 2b
Eine Lösung von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-7-(1-(tert.-butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-6-methoxychinazolin (3,49 g, 6,22 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 1 beschrieben) in Ameisensäure (35 ml) wurde mit 37%igem wäßrigem Formaldehyd (3,5 ml, 42 mmol) versetzt. Nach 4 Stunden Erhitzen auf 95°C wurden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde in Wasser suspendiert, wonach die Mischung durch langsame Zugabe von 2 N Natriumhydroxidlösung auf pH 10,5 eingestellt wurde. Die Suspension wurde mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, was 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-yl-methoxy)chinazolin (2,61 g, 88%) ergab.
MS-ESI: 475–477 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3–1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7–1,9 (m, 1H), 1,95 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,85 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,05 (d, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,5 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,81 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 9,54 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 55,4 H 5,1 N 11,6
Berechnet für C₂₂H₂₄N₄O₂BrF: C 55,6 H 5,1 N 11,8%
Beispiel 2c
Eine Suspension von 4-Chlor-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (200 mg, 0,62 mmol) und 4-Brom-2-fluoranilin (142 mg, 0,74 mmol) in Isopropanol (3 ml) mit 6 N Chlorwasserstoff in Isopropanol (110 μl, 0,68 ml) wurde 1,5 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde der Niederschlag abfiltriert, mit Isopropanol, gefolgt von Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-yl-methoxy)chinazolin-hydrochlorid (304 mg, 90%) ergab.
Elementaranalyse: Gefunden: C 47,9 H 4,9 N 10,0
Berechnet für C₂₂H₂₄N₄O₂BrF 0,5H₂O 1,8HCl 0,08 Isopropanol: C 48,2 H 5,0 N 10,1%
Das NMR-Spektrum der protonierten Form von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-yl-methoxy)chinazolin-hydrochlorid zeigt das Vorliegen von 2 Formen A und 8 im Verhältnis A:B von ungefähr 9:1.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,6–1,78 (m, Form A, 2H); 1,81–1,93 (br s, Form B, 4H); 1,94–2,07 (d, Form A, 2H); 2,08–2,23 (br s, Form A, 1H); 2,29–2,37 (br s, Form B, 1H); 2,73 (d, Form A, 3H); 2,77 (d, Form B, 3H); 2,93–3,10 (q, Form A, 2H); 3,21 (br s, Form B, 2H); 3,27 (br s, Form B, 2H); 3,42–3,48 (d, Form A, 2H); 4,04 (s, 3H); 4,10 (d, Form A, 2H); 4,29 (d, Form B, 2H); 7,49 (s, 1H); 7,53–7,61 (m, 2H); 7,78 (d, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,81 (s, 1H); 10,48 (br s, Form A, 1H); 10,79 (br s, Form B, 1H); 11,90 (br s, 1H)
Für eine andere NMR-Messung wurde die DMSO-Lösung des 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin-hydrochlorids gemäß obiger Beschreibung zur Freisetzung der freien Base in NMR-Rohr mit etwas festem Kaliumcarbonat versetzt. Das NMR-Spektrum wurde erneut aufgenommen und zeigte nur eine Form gemäß nachstehender Beschreibung:
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆, festes Kaliumcarbonat) 1,3–1,45 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,7–1,9 (m, 1H); 1,89 (t, 2H); 2,18 (s, 3H); 2,8 (d, 2H); 3,98 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,48 (d, 1H); 7,55 (t, 1H); 7,68 (d, 1H); 7,8 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 9,75 (s, 1H)
Aus dem 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin-hydrochlorid (hergestellt wie oben beschrieben) wurde folgendermaßen eine Probe von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (freie Base) hergestellt:
4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin-hydrochlorid (50 mg) wurde in Methylenchlorid (2 ml) suspendiert und mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat gewaschen. Die Methylenchloridlösung wurde getrocknet (MgSO₄) und durch Abdampfen von den flüchtigen Bestandteilen befreit, was 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (freie Base) ergab. Das NMR-Spektrum der so gebildeten freien Base zeigt nur eine Form gemäß nachstehender Beschreibung:
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3–1,45 (m, 2H); 1,76 (d, 2H); 1,7–1,9 (m, 1H); 1,9 (t, 2H); 2,19 (s, 3H); 2,8 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,02 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,48 (d, 1H); 7,55 (t, 1H); 7,68 (d, 1H); 7,8 (s, 1H); 8,38 (s, 1H); 9,55 (br s, 1H)
Für eine andere NMR-Messung wurde die NMR-DMSO-Lösung des 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolins (freie Base) gemäß obiger Beschreibung mit etwas CF₃COOD versetzt, wonach das NMR-Spektrum erneut aufgenommen wurde. Das Spektrum der protonierten Form des so erhaltenen 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-yl-methoxy)chinazolin-Trifluoracetatsalzes zeigt das Vorliegen von 2 Formen A und B im Verhältnis A:B von ungefähr 9:1.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,5–1,7 (m, Form A, 2H); 1,93 (br s, Form B, 4H); 2,0–2,1 (d, Form A, 2H); 2,17 (br s, Form A, 1H); 2,35 (br s, Form B, 1H); 2,71 (s, Form A, 3H); 2,73 (s, Form B, 3H); 2,97–3,09 (t, Form A, 2H); 3,23 (br s, Form B, 2H); 3,34 (br s, Form B, 2H); 3,47–3,57 (d, Form A, 2H); 4,02 (s, 3H); 4,15 (d, Form A, 2H); 4,30 (d, Form B, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,3–7,5 (m, 2H); 7,6 (d, 1H); 7,9 (s, 1H); 8,7 (s, 1H)
Das Edukt wurde folgendermaßen hergestellt:
Eine Suspension von 3-Methoxy-4-hydroxybenzoesäureethylester (19,6 g, 0,1 mol) und Kaliumcarbonat (28 g, 0,2 mol) in trockenem DMF (200 ml) wurde mit 1-(tert.-Butoxycarbonyl)-4-(4-methylphenylsulfonyloxymethyl)piperidin (40 g, 0,11 mol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 1 beschrieben) versetzt. Nach 2,5 Stunden Rühren bei 95°C wurde die Mischung auf Umgebungstemperatur abgekühlt und zwischen Wasser und Essigsäureethylester/Ether verteilt. Die organische Schicht wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Das erhaltene Öl wurde aus Petrolether kristallisiert, und die Suspension wurde über Nacht bei 5°C aufbewahrt. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit Petrolether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(1-(tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-3-methoxybenzoesäureethylester (35 g, 89%) ergab.
Fp. 81–83°C
MS (ESI): 416 [MNa]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (CDCl₃) 1,2–1,35 (m, 2H); 1,4 (t, 3H); 1,48 (s, 9H); 1,8–1,9 (d, 2H); 2,0–2,15 (m, 2H); 2,75 (t, 2H); 3,9 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,05–4,25 (br s, 2H); 4,35 (q, 2H); 6,85 (d, 1H); 7,55 (s, 1H); 7,65 (d, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 63,4 H 8,0 N 3,5
Berechnet für C₂₁H₃₁NO₆ 0,3H₂O C 63,2 H 8,0 N 3,5%
Eine Lösung von 4-(1-(tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-3-methoxybenzoesäureethylester (35 g, 89 mmol) in Ameisensäure (35 ml) wurde mit Formaldehyd (12 M, 37%ig in Wasser, 35 ml, 420 mmol) versetzt. Nach 3 Stunden Rühren bei 95°C wurden die flüchtigen Bestandteile abgedampft. Der Rückstand wurde in Methylenchlorid gelöst und mit 3 M Chlorwasserstoff in Ether (40 ml, 120 mmol) versetzt. Nach Verdünnen mit Ether wurde die Mischung trituriert, bis sich ein Feststoff gebildet hatte. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit Ether gewaschen und über Nacht bei 50°C unter Vakuum getrocknet, was 3-Methoxy-4-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)benzoesäureethylester (30,6 g, quant.) ergab.
MS (ESI): 308 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,29 (t, 3H); 1,5–1,7 (m, 2H); 1,95 (d, 2H); 2,0–2,15 (br s, 1H); 2,72 (s, 3H); 2,9–3,1 (m, 2H); 3,35–3,5 (br s, 2H); 3,85 (s, 3H); 3,9– 4,05 (br s, 2H); 4,3 (q, 2H); 7,1 (d, 1H); 7,48 (s, 1H); 7,6 (d, 1H)
Eine Lösung von 3-Methoxy-4-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)benzoesäureethylester (30,6 g, 89 mmol) in Methylenchlorid (75 ml) wurde auf 0–5°C abgekühlt. Nach Zugabe von TFA (37,5 ml) wurde über einen Zeitraum von 15 Minuten eine Lösung von rauchender 24 M Salpetersäure (7,42 ml, 178 mmol) in Methylenchlorid (15 ml) zugetropft. Danach wurde die Lösung erwärmen gelassen und 2 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. Der nach Abdampfen der flüchtigen Bestandteile verbleibende Feststoff wurde in Methylenchlorid (50 ml) gelöst. Die Lösung wurde auf 0–5°C abgekühlt und mit Ether versetzt. Der Niederschlag wurde abfiltriert und bei 50°C unter Vakuum getrocknet. Der Feststoff wurde in Methylenchlorid (500 ml) gelöst und mit 3 M Chlorwasserstoff in Ether (30 ml), gefolgt von Ether (500 ml) versetzt. Der Feststoff wurde abfiltriert und bei 50°C unter Vakuum getrocknet, was 3-Methoxy-4-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)-6-nitrobenzoesäureethylester (28,4 g, 82%) ergab.
MS (ESI): 353 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3 (t, 3H); 1,45–1,65 (m, 2H); 1,75–2,1 (m, 3H); 2,75 (s, 3H); 2,9–3,05 (m, 2H); 3,4–3,5 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,05 (d, 2H); 4,3 (q, 2H); 7,32 (s, 1H); 7,66 (s, 1H)
Eine Suspension von 3-Methoxy-4-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)-6-nitrobenzoesäureethylester (3,89 g, 10 mmol) in Methanol (80 ml) mit 10% Platin auf Aktivkohle (50% feucht) (389 mg) wurde bei einem Druck von 1,8 Atmosphären bis zum Abklingen der Wasserstoffaufnahme hydriert. Die Mischung wurde filtriert, wonach die flüchtigen Bestandteile abgedampft wurden. Der Rückstand wurde in Wasser (30 ml) gelöst und mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung auf pH 10 eingestellt. Dann wurde die Mischung mit Essigsäureethylester/Ether (1/1) verdünnt und die organische Schicht abgetrennt. Die wäßrige Schicht wurde mit Essigsäureethylester/Ether weiter extrahiert, wonach die organischen Schichten vereinigt wurden. Die organischen Schichten wurden mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und filtriert, wonach die flüchtigen Bestandteile abgedampft wurden. Der erhaltene Feststoff wurde mit einem Gemisch aus Ether und Petrolether trituriert, mit Petrolether gewaschen und bei 60°C unter Vakuum getrocknet, was 6-Amino-3-methoxy-4-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)benzoesäureethylester (2,58 g, 80%) ergab.
Fp. 111–112°C
MS (ESI): 323 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (CDCl₃) 1,35 (t, 3H); 1,4–1,5 (m, 2H); 1,85 (m, 3H); 1,95 (t, 2H); 2,29 (s, 3H); 2,9 (d, 2H); 3,8 (s, 3H); 3,85 (d, 2H); 4,3 (q, 2H); 5,55 (br s, 2H); 6,13 (s, 1H); 7,33 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 62,8 H 8,5 N 8,3
Berechnet für C₁₇H₂₆N₂O₄ 0,2H₂O C 62,6 H 8,2 N 8,6%
Eine Lösung von 6-Amino-3-methoxy-4-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)benzoesäureethylester (16,1 g, 50 mmol) in 2-Methoxyethanol (160 ml) mit Formamidinacetat (5,2 g, 50 mmol) wurde 2 Stunden auf 115°C erhitzt. Über einen Zeitraum von 4 Stunden wurde alle 30 Minuten Formamidinacetat (10,4 g, 100 mmol) portionsweise zugegeben. Nach der letzten Zugabe wurde noch 30 Minuten erhitzt. Nach dem Abkühlen wurden die flüchtigen Bestandteile im Vakuum abgezogen. Der Feststoff wurde in Ethanol (100 ml) und Methylenchlorid (50 ml) gelöst. Der Niederschlag wurde abfiltriert, wonach das Filtrat auf ein Endvolumen von 100 ml eingeengt wurde. Die Suspension wurde auf 5°C abgekühlt, wonach der Feststoff abfiltriert, mit kaltem Ethanol und dann mit Ether gewaschen und über Nacht bei 60°C unter Vakuum getrocknet wurde, was 6-Methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (12,7 g, 70%) ergab.
MS (ESI): 304 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,25–1,4 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,9 (t, 1H); 1,9 (s, 3H); 2,16 (s, 2H); 2,8 (d, 2H); 3,9 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,11 (s, 1H); 7,44 (s, 1H); 7,97 (s, 1H)
Eine Lösung von 6-Methoxy-7-((1-methylpiperidin-4-yl)methoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (2,8 g, 9,24 mmol) in Thionylchlorid (28 ml) mit DMF (280 μl) wurde 1 Stunde bei 85°C am Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurden die flüchtigen Bestandteile abgedampft. Der Niederschlag wurde mit Ether trituriert, filtriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet. Der Feststoff wurde in Methylenchlorid gelöst und mit gesättigtem wäßrigen Natriumhydrogencarbonat versetzt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, was 4-Chlor-6-methoxy-7-((1-methylpiperidin-4-yl)methoxy)chinazolin (2,9 g, 98%) ergab.
MS (ESI): 322 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3–1,5 (m, 2H); 1,75–1,9 (m, 3H); 2,0 (t, 1H); 2,25 (s, 3H); 2,85 (d, 2H); 4,02 (s, 3H); 4,12 (d, 2H); 7,41 (s, 1H); 7,46 (s, 1H); 8,9 (s, 1H)
Alternativ dazu kann das 6-Methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-on folgendermaßen hergestellt werden:
Eine Lösung von 7-Benzyloxy-6-methoxy-3,4-dihydrochinazolin-4-on (8,46 g, 30 mmol) (hergestellt beispielsweise wie in WO 97/22596, Beispiel 1, beschrieben) in DMF (70 ml) wurde über einen Zeitraum von 20 Minuten portionsweise mit Natriumhydrid (1,44 g einer 60%igen Suspension in Mineralöl, 36 mmol) versetzt, wonach die Mischung 1,5 Stunden gerührt wurde. Nach Zutropfen von Pivalinsäurechlormethylester (5,65 g, 37,5 mmol) wurde die Mischung 2 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. Dann wurde die Mischung mit Essigsäureethylester (100 ml) verdünnt und auf Eis/Wasser (400 ml) und 2 N Salzsäure (4 ml) gegossen. Die organische Schicht wurde abgetrennt und die wäßrige Schicht mit Essigsäureethylester extrahiert, wonach die vereinigten Extrakte mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch Abdampfen vom Lösungsmittel befreit wurden. Der Rückstand wurde mit einem Gemisch aus Ether und Petrolether trituriert, wonach der Feststoff abfiltriert und unter Vakuum getrocknet wurde, was 7-Benzyloxy-6-methoxy-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (10 g, 84%) ergab.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,11 (s, 9H); 3,89 (s, 3H); 5,3 (s, 2H); 5,9 (s, 2H); 7,27 (s, 1H); 7,35 (m, 1H); 7,47 (t, 2H); 7,49 (d, 2H); 7,51 (s, 1H), 8,34 (s, 1H)
Eine Mischung aus 7-Benzyloxy-6-methoxy-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (7 g, 17,7 mmol) und 10% Palladium auf Kohle als Katalysator (700 mg) in Essigsäureethylester (250 ml), DMF (50 ml), Methanol (50 ml) und Essigsäure (0,7 ml) wurde 40 Minuten unter Wasserstoff bei Normaldruck gerührt. Nach Abfiltrieren des Katalysators wurde das Lösungsmittel vom Filtrat abgedampft. Der Rückstand wurde mit Ether trituriert, abfiltriert und unter Vakuum getrocknet, was 7-Hydroxy-6-methoxy-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (4,36 g, 80%) ergab.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,1 (s, 9H); 3,89 (s, 3H); 5,89 (s, 2H); 7,0 (s, 1H); 7,48 (s, 1H); 8,5 (s, 1H)
Eine Suspension von 7-Hydroxy-6-methoxy-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (1,53 g, 5 mmol) in Methylenchlorid (20 ml) wurde unter Stickstoff mit Triphenylphosphan (1,7 g, 6,5 mmol), gefolgt von 1-(tert.-Butoxycarbonyl)-4-(hydroxymethyl)piperidin (1,29 g, 6 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 1 beschrieben) und einer Lösung von Diethylazodicarboxylat (1,13 g, 6,5 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) versetzt. Nach 30 Minuten Rühren bei Umgebungstemperatur wurde die Reaktionsmischung auf eine Siliciumdioxidsäule gegossen und mit Essigsäureethyl ester/Petrolether (1/1, gefolgt von 6/5, 6/4 und 7/3) eluiert. Das Eindampfen der das erwartete Produkt enthaltenden Fraktionen ergab ein Öl, das nach Triturieren mit Pentan kristallisierte. Der Feststoff wurde abfiltriert und unter Vakuum getrocknet, was 7-(1-tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-6-methoxy-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (232 g, 92%) ergab.
MS-ESI: 526 [MNa]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (CDCl₃) 1,20 (s, 9H), 1,2–1,35 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,87 (d, 2H), 2,05–2,2 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 3,96 (d, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,1–4,25 (br s, 2H), 5,95 (s, 2H), 7,07 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 8,17 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 61,8 H 7,5 N 8,3
Berechnet für C₂₆H₃₇N₃O₇: C 62,0 H 7,4 N 8,3%
Eine Lösung von 7-(1-tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-6-methoxy-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (2,32 g, 4,6 mmol) in Methylenchlorid (23 ml) mit TFA (5 ml) wurde 1 Stunde bei Umgebungstemperatur gerührt. Die flüchtigen Bestandteile wurden unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde zwischen Essigsäureethylester und Natriumhydrogencarbonat verteilt. Nach Abziehen des organischen Lösungsmittels unter Vakuum wurde der Rückstand abfiltriert. Der Niederschlag wurde mit Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet. Der Feststoff wurde mit Toluol azeotropiert und unter Vakuum getrocknet, was 6-Methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (1,7 g, 92%) ergab.
MS-ESI: 404 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆; CF₃COOD): 1,15 (s, 9H), 1,45–1,6 (m, 2H), 1,95 (d, 2H), 2,1–2,25 (m, 1H), 2,95 (t, 2H), 3,35 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,1 (d, 2H), 5,95 (s, 2H), 7,23 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 8,45 (s, 1H)
Eine Lösung von 6-Methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (1,21 g, 3 mmol) in einem Gemisch aus THF und Methanol (10 ml/10 ml) wurde portionsweise mit 37%iger wäßriger Formaldehydlösung (501 μl, 6 mmmol), gefolgt von Natriumcyanoborhydrid (228 mg, 3,6 mmol) versetzt. Nach 30 Minuten Rühren bei Umgebungstemperatur wurden die organischen Lösungsmittel unter Vakuum abgezogen, wonach der Rückstand zwischen Methylenchlorid und Wasser verteilt wurde. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch Abdampfen von den flüchtigen bestandteilen befreit. Der Rückstand wurde mit Ether trituriert, wonach der erhaltene Feststoff abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet wurde, was 6-Methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (1,02 g, 82%) ergab.
MS-ESI: 418 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (CDCl₃) 1,19 (s, 9H), 1,4–1,55 (m, 2H), 1,9 (d, 2H), 2,0 (t, 2H), 1,85–2,1 (m, 1H), 2,3 (s, 3H), 2,92 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,99 (d, 2H), 5,94 (s, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 8,17 (s, 1H)
Eine Lösung von 6-Methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)-3-((pivaloyloxy)methyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (1,38 g, 3,3 mmol) in Methanol (5 ml) wurde mit einer gesättigten Lösung von Ammoniak in Methanol (14 ml) versetzt. Nach 20 Stunden Rühren bei Umgebungstemperatur wurde die Suspension mit Methylenchlorid (10 ml) verdünnt. Die Lösung wurde filtriert. Das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft, wonach der Rückstand mit Ether trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet wurde, was 6-Methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-on (910 mg, 83%) ergab.
MS-ESI: 304 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3–1,45 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,7–1,85 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,9 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,13 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,99 (s, 1H)
Beispiel 3a
Eine Suspension von 4-Chlor-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (80 mg, 0,25 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 2c beschrieben) in Isopropanol (3 ml) wurde mit 3,5 M Chlorwasserstoff in Ethanol (75 μl, 0,26 mmol) versetzt, wonach die Mischung auf 50°C erhitzt und mit 4-Chlor-2-fluoranilin (44 mg, 0,3 mmol) versetzt wurde. Die Mischung wurde 30 Minuten unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde die Mischung mit Ether (3 ml) verdünnt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin-hydrochlorid (105 mg, 82%) ergab.
MS-ESI: 431–433 [MH]⁺
Das NMR-Spektrum der protonierten Form von 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin-hydrochlorid zeigt das Vorliegen von 2 Formen A und B im Verhältnis A:B von ungefähr 9:1.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,55–1,7 (m, Form A, 2H), 1,85–2,0 (m, Form B, 4H), 2,05 (d, Form A, 2H), 2,1–2,2 (m, Form A, 1H), 2 35 (s, 3H); 2,79 (s, Form A, 3H), 2,82 (s, Form B, 3H), 3,03 (t, Form A, 2H), 3,2–3,3 (m, Form B, 2H); 3,3–3,4 (m, Form B, 2H), 3,52 (d, Form A, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,13 (d, Form A, 2H), 4,3 (d, Form B, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,63 (t, 1H), 7,69 (dd, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,88 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 51,8 H 5,6 N 10,9
Berechnet für C₂₂H₂₄N₄O₂ClF 0,4H₂O 2HCl: C 51,7 H 5,3 N 11,0%
Beispiel 3b
Eine alternative Herstellungsmethode sieht folgendermaßen aus:
Eine Lösung von 4-Hydroxymethyl-1-methylpiperidin (151 mg, 1,1 mmol) (J. Med. Chem. 1973, 16, 156) und 4-(4- Chlor-2-fluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (250 mg, 0,78 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 7 beschrieben) in Methylenchlorid (5 ml) wurde mit Triphenylphosphan (615 mg, 2,3 mmol) gefolgt von Diethylazodicarboxylat (369 μl, 2,3 mmol) versetzt. Nach 30 Minuten Rühren bei Umgebungstemperatur wurden 4-Hydroxymethyl-1-methylpiperidin (51 mg, 0,39 mmol), Triphenylphosphan (102 mg, 0,39 mmol) und Diethylazodicarboxylat (61 μl, 0,39 mmol) zugegeben. Nach 15 Minuten Rühren wurden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abgezogen, wonach der Rückstand mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von Methylenchlorid/Acetonitril/Methanol (70/10/20 gefolgt von 75/5/20 und 80/0/20) als Elutionsmittel gereinigt wurde. Die das erwartete Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und durch Abdampfen von den flüchtigen Bestandteilen befreit. Der Rückstand wurde in einem Gemisch aus Methylenchlorid und Methanol gelöst und mit 5 M Chlorwasserstoff in Isopropanol versetzt. Die Suspension wurde aufkonzentriert, wonach der Feststoff abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet wurde, was 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin-hydrochlorid (16 mg, 4%) ergab.
Beispiel 4
Unter Argon wurde eine Lösung von 4-Brom-2,6-difluoranilin (1,67 g, 8,08 mmol) in DMF mit Natriumhydrid (60%ig, 372 mg, 9,3 mmol) versetzt. Nach 30 Minuten Rühren bei Umgebungstemperatur wurde 4-Chlor-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (1,3 g, 4,04 mmol) zugegeben und noch 20 Stunden gerührt. Dann wurde die Mischung auf Wasser (130 ml) gegossen und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organischen Schichten wurden mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch Abdampfen von den flüchtigen Bestandteilen befreit. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie an Siliciumdioxid unter Verwendung von Methylenchlorid/Methanol (95/5) gefolgt von Methylenchlorid/Methanol mit Ammoniak (1%) (90/10) gereinigt. Die das erwartete Produkt enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Ether trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und bei 50°C unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (1,4 g, 70%) ergab.
MS-ESI: 493–495 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3–1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7–1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,35 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 53,8 H 4,8 N 11,3
Berechnet für C₂₂H₂₃N₄O₂BrF₂: C 53,6 H 4,7 N 11,4%
Beispiel 5
In Analogie zu Beispiel 4 wurde 4-Chlor-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (246 mg, 0,764 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 2c beschrieben) mit 4-Chlor-2,6-difluoranilin (250 mg, 1,53 mmol) (siehe WO 97/30035, Beispiel 15) in DMF und in Gegenwart von Natriumhydrid (60%ig, 76,5 mg, 1,9 mmol) zu 4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (210 mg, 61%) umgesetzt.
MS-ESI: 449–451 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3–1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7–1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,02 (d, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,35 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 59,0 H 5,3 N 12,5
Berechnet für C₂₂H₂₃N₄O₂ClF₂: C 58,9 H 5,2 N 12,5%
Das Edukt wurde folgendermaßen hergestellt:
4-Chlor-2,6-difluoranilin-hydrochlorid (siehe WO 97/30035, Beispiel 15) wurde zwischen Methylenchlorid Wasser verteilt und mit wäßrigem Natriumhydrogen carbonat versetzt, bis der pH-Wert der wäßrigen Schicht ungefähr 9 betrug. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, was die freie Base 4-Chlor-2,6-difluoranilin ergab.
Beispiel 6
Eine Suspension von 4-Chlor-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (200 mg, 0,622 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 2c beschrieben) und 2-Fluor-4-methylanilin (94 mg, 0,764 mmol) in Isopropanol (5 ml) mit 6,2 M Chlorwasserstoff in Isopropanol (110 μl) wurde 1,5 Stunden bei 80°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde der Niederschlag abfiltriert, mit Isopropanol gefolgt von Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet. Der Feststoff wurde mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von Methylenchlorid/Methanol (90/10) gefolgt von 5% Ammoniak in Methanol/Methylenchlorid (10/90) als Elutionsmittel gereinigt. Durch Eindampfen der das erwartete Produkt enthaltenden Fraktionen wurde 4-(2-Fluor-4-methylanilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (170 mg, 61%) erhalten.
MS-ESI: 411 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,3–1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7–1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,01 (d, 2H), 7,1 (d, 1H), 7,13 (d, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,4 (t, 1H), 7,81 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 9,4 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 66,5 H 6,7 N 13,7
Berechnet für C₂₃H₂₇N₄O₂F 0,3H₂O: C 66,4 H 6,7 N 13,5%
Beispiel 7
Eine Lösung von 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (585 mg, 1,83 mmol) in Methylenchlorid (20 ml) wurde mit 1-tert.-Butyloxycarbonyl-4-hydroxymethylpiperidin (590 mg, 2,75 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 1 beschrieben) gefolgt von Triphenylphosphan (1,2 g, 4,58 mmol) und Diethylazodicarboxylat (0,72 ml, 4,58 mmol) versetzt. Nach 1 Stunde Rühren bei Umgebungstemperatur wurden weiteres Triphenylphosphan (239 mg, 0,91 mmol) und Diethylazodicarboxylat (0,14 ml, 0,91 mmol) zugegeben. Nach 1,5 Stunden Rühren wurden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abgezogen, wonach der Rückstand mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von Essigsäureethylester/Methylenchlorid (1/1) als Elutionsmittel gereinigt wurde. Das Rohprodukt wurde direkt im nächsten Schritt verwendet.
Eine Lösung des Rohprodukts in Methylenchlorid (15 ml) mit TFA (4,5 ml) wurde 1,5 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. Die flüchtigen Bestandteile wurden im Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde zwischen Wasser und Essigsäureethylester verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit 2 N Natriumhydroixd auf pH 9,5 eingestellt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Wasser gefolgt von Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, was 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin ergab.
MS-ESI: 417–419 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,1–1,3 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,85–2,0 (br s, 1H), 2,55 (d, 2H), 2,95 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,55 (dd, 1H), 7,6 (t, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,55 (s, 1H)
Das Hydrochloridsalz wurde folgendermaßen hergestellt:
4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin wurde in einem Gemisch aus Methanol und Methylenchlorid gelöst und mit 6 M Chlorwasserstoff in Ether versetzt. Nach Abziehen der flüchtigen Bestandteile unter Vakuum wurde der Rückstand mit Ether trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(4-Chlor-2-fluor)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolinhydrochlorid (390 mg, 47% über zwei Schritte) ergab.
Elementaranalyse: Gefunden: C 50,4 H 5,2 N 11,0
Berechnet für C₂₁H₂₂O₂N₄ClF 2,25HCl C 50,6 H 4,9 N 11,2%
Das Edukt wurde folgendermaßen hergestellt:
Eine Lösung von 7-Benzyloxy-4-chlor-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (1,2 g, 4 mmol) (hergestellt wie in WO 97/22596, Beispiel 1, beschrieben) und 4-Chlor-2-fluoranilin (444 μl, 4 mmol) in 2-Propanol (40 ml) wurde 1,5 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde der Niederschlag abfiltriert, mit 2-Propanol und dann mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 7-Benzyloxy-4-(4-chlor-2-fluoranilino)-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (1,13 g, 64%) ergab.
Fp. 239–242°C
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 4,0 (s, 3H); 5,36 (s, 2H); 7,39–7,52 (m, 9H); 8,1 (s, 1H); 8,75 (s, 1H)
MS-ESI: 410 [MH]⁺
Elementaranalyse: Gefunden: C 59,2 H 4,3 N 9,4
Berechnet für C₂₂H₁₇N₃O₂ClF 1HCl: C 59,2 H 4,1 N 9,4%
Eine Lösung von 7-Benzyloxy-4-(4-chlor-2-fluoranilino)-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (892 mg, 2 mmol) in TFA (10 ml) wurde 50 Minuten unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde die Mischung auf Eis gegossen. Der Niederschlag wurde abfiltriert, in Methanol (10 ml) gelöst und mit wäßrigem Ammoniak bis pH 11 basisch gestellt. Nach Aufkonzentrieren durch Abdampfen wurde das feste Produkt abfiltriert, mit Wasser und dann mit Ether gewaschen und unter vakuum getrocknet, was 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin in Form eines gelben Feststoffs (460 mg, 72%) ergab.
Fp. 141–143°C
MS-ESI: 320–322 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H); 7,05 (s, 1H); 7,35 (d, 1H); 7,54–7,59 (m, 2H); 7,78 (s, 1H); 8,29 (s, 1H)
Beispiel 8
Eine Suspension von 7-(1-(tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-4-(2-fluor-4-methylanilino)-6-methoxychinazolin (318 mg, 0,64 mmol) in Methylenchlorid (5 ml) mit TFA (2,5 ml) wurde 2 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. Nach Abziehen der flüchtigen Bestandteile unter Vakuum wurde der Rückstand zwischen Methylenchlorid und Wasser verteilt. Die wäßrige Schicht wurde auf pH 10–11 eingestellt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch Abdampfen von den flüchtigen Bestandteilen befreit, was 4-(2-Fluor-4-methylaninilo)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (220 mg, 87%) ergab.
MS-ESI: 397 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,15–1,3 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,85–2,0 (m, 1H); 2,4 (s, 3H); 3,0 (d, 2H); 3,3–3,4 (d, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,04 (d, 1H); 7,15 (d, 1H); 7,17 (s, 1H); 7,4 (t, 1H); 7,8 (s, 1H); 8,3 (s, 1H); 9,4 (s, 1H)
Das Edukt wurde folgendermaßen hergestellt:
In Analogie zu Beispiel 6 wurde 7-Benzyloxy-4-chlor-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (1,55 g, 5,15 mmol) (hergestellt beispielsweise gemäß WO 97/22596, Beispiel 1) mit 2-Fluor-4-methylanilin (700 mg, 5,67 mmol) in Isopropanol (90 ml) mit 6,2 M Chlorwasserstoff in Isopropanol (80 μl, 0,51 mmol) zu 7-Benzyloxy-4-(2-fluor-4-methylanilino)-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (2 g, 91%) umgesetzt.
MS-ESI: 390 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 2,4 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 7,15 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,35–7,6 (m, 7H), 8,3 (s, 1H), 8,78 (s, 1H)
Eine Lösung von 7-Benzyloxy-4-(2-fluor-4-methylanilino)-6-methoxychinazolin-hydrochlorid (2 g, 4,7 mmol) in TFA (20 ml) wurde 5 Stunden auf 80°C erhitzt und über Nacht bei Umgebungstemperatur gerührt. Nach Abziehen der flüchtigen Bestandteile unter Vakuum wurde der Rückstand in Wasser (50 ml) suspendiert. Dann wurde festes Natriumhydrogencarbonat zugegeben, bis derbis der pH-Wert ungefähr 7 betrug. Der Niederschlag wurde abfiltiert, mit Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet. Der Feststoff wurde mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von Methanol/Methylenchlorid (5/95) als Elutionsmittel gereinigt. Nach Abdampfen des Lösungsmittels wurde der Feststoff mit Ether trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 4-(2-Fluor-4-methylanilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (1,04 g, 74%) ergab.
MS-ESI: 300 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 2,4 (s, 3H), 4,0 (s, 3H), 7,15 (d, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,41 (t, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,7 (s, 1H), 11,0 (s, 1H), 11,5–11,8 (br s, 1H)
Eine auf 0°C abgekühlte Suspension von 4-(2-Fluor-4-methylanilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (1 g, 3,34 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) wurde mit Triphenylphosphan (2,19 g, 8,36 mmol) gefolgt von 1-(tert.-Butoxycarbonyl)-4-hydroxymethylpiperidin (1,08 g, 5,01 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 1 beschrieben) und Diethylazodicarboxylat (1,31 ml, 8,36 mmol) versetzt. Nach 2 Stunden Rühren bei Umgebungstemperatur wurden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abgezogen. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von Methylenchlorid/Methanol (2/98) als Elutionsmittel gereinigt. Nach Abdampfen des Lösungsmittels wurde der Feststoff mit Ether trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 7-(1-(tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-(2-fluor-4-methylanilino)-6-methoxychinazolin (327 mg, 20%) ergab.
MS-ESI: 497 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,15–1,3 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,8 (d, 2H); 2,0–2,1 (m, 1H); 2,4 (s, 3H); 2,75–2,9 (br s, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,0 (br s, 2H); 4,05 (d, 2H); 7,1 (d, 1H); 7,15 (d, 1H); 7,2 (s, 1H); 7,4 (t, 1H); 7,85 (t, 1H); 8,32 (s, 1H); 9,45 (s, 1H)
Beispiel 9
Eine Lösung von 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-7-(1-(tert.-butoxycarbonylpiperidin-4-ylmethoxy)-6-methoxychinazolin (578 mg, 1 mmol) in Methylenchlorid (10 ml) mit TFA (4 ml) wurde 2 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. Nach Abziehen der flüchtigen Bestandteile unter Vakuum wurde der Rückstand in Wasser suspendiert. Die wäßrige Schicht wurde auf ungefähr pH 10 eingestellt. Die organische Schicht wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch Abdampfen von den flüchtigen Bestandteilen befreit. Der Rückstand wurde mit Ether trituriert und im Vakuum getrocknet, was 4-(4-Brom-2,6-difluoraninilo)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (110 mg, 23%) ergab.
MS-ESI: 479–481 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,15–1,3 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,85–2,0 (br s, 1H); 2,5 (d, 2H); 3,0 (d, 2H); 3,97 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,62 (d, 2H); 7,82 (s, 1H); 8,35 (s, 1H)
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,5–1,65 (m, 2H); 2,0 (d, 2H); 2,15–2,3 (br s, 1H); 3,0 (t, 2H); 3,4 (d, 2H); 4,02 (s, 3H); 4,15 (d, 2H); 7,4 (s, 1H); 7,75 (d, 2H); 8,1 (s, 1H); 8,92 (s, 1H)
Das Edukt wurde folgendermaßen hergestellt:
Eine Lösung von 4-Brom-2,6-difluoranilin (2,77 g, 6,65 mmol) in DMF (80 ml) wurde mit Natriumhydrid (60%ig, 612 mg, 15,3 mmol) versetzt. Nach 30 Minuten Rühren bei Umgebungstemperatur wurde 7-Benzyloxy-4-chlor-6-methoxychinazolin (2 g, 6,65 mmol) (hergestellt beispielsweise wie in WO 97/22596, Beispiel 1, beschrie ben, aber vor der Verwendung wurde die freie Base gebildet) zugegeben und noch 4 Stunden gerührt. Die Mischung wurde zwischen Essigsäureethylester und Wasser (200 ml) verteilt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch Abdampfen von den flüchtigen Bestandteilen befreit. Der Rückstand wurde mit Isopropanol trituriert, abfiltriert, mit Ether gewaschen und unter Vakuum getrocknet, was 7-Benzyloxy-4-(4-brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxychinazolin (1,95 g, 62%) ergab.
MS-ESI: 472–474 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 3,94 (s, 3H), 5,3 (s, 2H), 7,3 (s, 1H), 7,4 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,5 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,85 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,4–9,6 (br s, 1H)
In Analogie zur Synthese des Edukts in Beispiel 8 wurde 7-Benzyloxy-4-(4-brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxychinazolin (1,9 g, 4,02 mmol) mit TFA (20 ml) zu 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (1,5 g, 98%) umgesetzt.
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H), 7,1 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 9,45 (br s, 1H), 10,5 (br s, 1H)
In Analogie zur Synthese des Edukts in Beispiel 8 wurde 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (1 g, 2,62 mmol) mit 1-(tert.-Butoxycarbonyl)-4-hydroxymethylpiperidin (845 mg, 3,93 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 1 beschrieben) zu 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-7-(1-(tert.-butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-6-methoxychinazolin (620 mg, 41%) umgesetzt.
MS-ESI: 579–581 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,15–1,3 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,8 (d, 2H); 2,0–2,1 (m, 1H); 2,7–2,9 (m, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,0 (br s, 2H); 4,05 (d, 2H); 7,22 (s, 1H); 7,65 (d, 2H); 7,85 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 9,4–9,6 (br s, 1H)
Beispiel 10
In Analogie zu Beispiel 9 wurde 7-(1-(tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-4-(4-chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxychinazolin (95 mg, 0,2 mmol) in Methylenchlorid (2 ml) mit TFA (800 μl) behandelt, was 4-(4-Chlor-2,6-difluoraninilo)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin (20 mg, 26%) ergab.
MS-ESI: 435–437 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,2–1,3 (m, 2H); 1,75 (d, 2H); 1,85–2,0 (br s, 1H); 2,5 (d, 2H); 3,0 (d, 2H); 3,97 (s, 3H); 4,0 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 752 (d, 2H); 7,85 (s, 1H); 8,35 (s, 1H)
Das Edukt wurde folgendermaßen hergestellt:
In Analogie zur Herstellung des Edukts in Beispiel 9 wurde 7-Benzyloxy-4-chlor-6-methoxychinazolin (184 mg, 0,61 mmol) (hergestellt beispielsweise wie in WO 97/22596, Beispiel 1, beschrieben, aber vor der Verwendung wurde die freie Base gebildet) in Gegenwart von Natriumhydrid (60%ig, 87 mg, 1,4 mmol) in DMF (8 ml) mit 4-Chlor-2,6-difluoranilin (200 mg, 1,22 mmol) zu 7-Benzyloxy-4-(4-chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxychinaolin (212 mg, 74%) umgesetzt.
MS-ESI: 428 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 3,96 (s, 3H); 5,31 (s, 2H); 7,32 (s, 1H); 7,4 (d, 1H); 7,45 (t, 2H); 7,5–7,6 (m, 4H); 7,85 (s, 1H); 8,35 (br s, 1H); 9,55 (br s, 1H)
Eine Lösung von 7-Benzyloxy-4-(4-chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxychinaolin (200 mg, 0,47 mmol) in TFA (3 ml) wurde 3 Stunden bei 80°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurden die flüchtigen Bestandteile unter Vakuum abgezogen, wonach der Rückstand in Wasser mit 5% Methanol gelöst wurde. Nach Einstellung des pH-Werts auf 8 mit Natriumhydrogencarbonat wurde der Feststoff abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Der Feststoff wurde in einer Mischung aus Essigsäureethylester, Methanol und Methylenchlorid (47/6/47) solubilisiert.
Die flüchtigen Bestandteile wurden unter Vakuum abgezogen, was 4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (126 mg, 80%) ergab.
MS-ESI: 338 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H); 7,1 (s, 1H); 7,55 (d, 2H); 7,8 (s, 1H); 8,3 (s, 1H); 9,42 (br s, 1H)
In Analogie zur Herstellung des Edukts in Beispiel 9 wurde 4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-7-hydroxy-6-methoxychinazolin (150 mg, 0,44 mmol) mit 1-(tert.-Butoxycarbonyl)-4-hydroxymethylpiperidin (150 mg, 0,88 mmol) (hergestellt wie für das Edukt in Beispiel 1 beschrieben) zu 7-(1-(tert.-Butoxycarbonyl)piperidin-4-ylmethoxy)-4-(4-chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxychinazolin (113 mg, 59%) umgesetzt.
MS-ESI: 535 [MH]⁺
¹H-NMR-Spektrum: (DMSOd₆) 1,15–1,3 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,8 (d, 2H); 2,0–2,1 (m, 1H); 2,7–2,9 (m, 2H); 3,95 (s, 3H); 4,0 (br s, 2H); 4,05 (d, 2H); 7,2 (s, 1H); 7,6 (m, 2H); 7,8 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 9,4–9,6 (br s, 1H)
Beispiel 11

Im folgenden werden repräsentative pharmazeutische Dosierungsformen, die die Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon (im folgenden Verbindung X) enthalten, für die therapeutische oder prophylaktische Anwendung beim Menschen erläutert:

(a) Tablette I	mg/Tablette
Verbindung X	100
Lactose Ph. Eur	182,75
Croscarmellose-Natrium	12,0
Maisstärkepaste (5% w/v Paste)	2,25
Magnesiumstearat	3,0

(b) Tablette II	mg/Tablette
Verbindung X	50
Lactose Ph. Eur	223,75
Croscarmellose-Natrium	6,0
Maisstärke	15,0
Polyvinylpyrrolidon (5% w/v Paste)	2,25
Magnesiumstearat	3,0
(c) Tablette III	mg/Tablette
Verbindung X	1,0
Lactose Ph. Eur	93,25
Croscarmellose-Natrium	4,0
Maisstärkepaste (5% w/v Paste)	0,75
Magnesiumstearat	1,0
(d) Kapsel	mg/Kapsel
Verbindung X	10
Lactose Ph. Eur	488,5
Magnesiumstearat	1,5
(e) Injektion I	(50 mg/ml)
Verbindung X	5,0% w/v
1 M Natriumhydroxidlösung	15,0% v/v
0,1 M Salzsäure (zur Einstellung eines pH-Werts von 7,6) Polyethylenglykol 400	4,5% w/v
Wasser für Injektionszwecke ad 100%
(f) Injektion II	(10 mg/ml)
Verbindung X	1,0% w/v
Natriumphosphat BP	3,6% w/v
0,1 M Natriumhydroxidlösung	15,0% v/v
Wasser für Injektionszwecke ad 100%

(g) Injektion III	(1 mg/ml, auf pH 6 epuffert)
Verbindung X	0,1% w/v
Natriumphosphat BP	2,26% w/v
Citronensäure	0,38% w/v
Polyethylenglykol 400	3,5% w/v
Wasser für Injektionszwecke ad 100%

Anmerkung
Die obigen Formulierungen können nach in der Pharmazie gut bekannten herkömmlichen Methoden erhalten werden. Die Tabletten (a) bis (c) können mit herkömmlichen Mitteln magensaftresistent überzogen werden, beispielsweise mit einem Überzug aus Celluloseacetatphthalat.

Claims

Chinazolinderivat der Formel I:
worin: m eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist; R¹ für Halogen oder C_1-3-Alkyl steht; R² aus einer der folgenden drei Gruppen ausgewählt ist: 1) C_1-5-AlkylR³ (worin R³ für Piperidin-4-yl steht, das einen oder zwei unter Hydroxy, Halogen, C_1-4-Alkyl, C_1-4-Hydroxyalkyl, C_1-4-Alkoxy ausgewählte Substituenten tragen kann); 2) C_2-5-AlkenylR³ (worin R³ die hier angegebene Bedeutung besitzt); 3) C_2-5-AlkinylR³ (worin R³ die hier angegebene Bedeutung besitzt); und worin jede Alkyl-, Alkenyl- oder Alkinylgruppe einen oder mehrere unter Hydroxy, Halogen und Amino ausgewählte Substituenten tragen kann; oder ein Salz davon.
Chinazolinderivat nach Anspruch 1, worin die Phenylgruppe mit (R¹)_m unter 2-Fluor-4-methylphenyl, 4-Chlor-2,6-difluorphenyl, 4-Brom-2,6-difluorphenyl, 4-Chlor-2-fluorphenyl oder 4-Brom-2-fluorphenyl ausgewählt ist.
Chinazolinderivat nach Anspruch 1 oder 2, worin R² für C_1-5-AlkylR³ (worin R³ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt) steht.
Chinazolinderivat nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin R² für Piperidin-4-ylmethyl steht, wobei der Piperidinring einen oder zwei unter C_1-4-Alkyl ausgewählte Substituenten tragen kann.
Chinazolinderivat nach Anspruch 1 der Formel II:
worin: ma eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist; R^1a für Halogen oder C_1-3-Alkyl steht; R^2a aus einer der folgenden drei Gruppen ausgewählt ist. 1) C_1-5-AlkylR³ (worin R³ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt); 2) C_2-5-AlkenylR³ (worin R³ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt); 3) C_2-5-AlkinylR³ (worin R³ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt); oder ein Salz davon.
Chinazolinderivat, ausgewählt unter: 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(2-Fluor-4-methylanilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(2-Fluor-4-methylanilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin und 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(piperidin-4-ylmethoxy)chinazolin und Salzen davon.
Chinazolinderivat, ausgewählt unter: 4-(4-Chlor-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Chlor-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin, 4-(4-Brom-2,6-difluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin und Salzen davon.
Chinazolinderivat, ausgewählt unter: 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin und Salzen davon.
Chinazolinderivat nach einem der vorhergehenden Ansprüche in Form eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes.
Verfahren zur Herstellung eines Chinazolinderivats der Formel I gemäß Anspruch 1 oder eines Salzes davon, bei dem man: (a) eine Verbindung der Formel III:
worin R² die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt und L¹ für eine austauschbare Gruppierung steht, mit einer Verbindung der Formel IV:
worin R¹ und m die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, umsetzt; (b) eine Verbindung der Formel V:
worin m und R¹ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, mit einer Verbindung der Formel VI: R²-L¹ (VI)worin R² die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt und L¹ die hier angegebene Bedeutung besitzt, umsetzt; (c) eine Verbindung der Formel VII:
mit einer Verbindung der Formel VIII: R²-O-H (VIII)umsetzt, wobei R¹, R² und m die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen und L¹ die hier angegebene Bedeutung besitzt; oder (d) eine Verbindung der Formel IX:
worin R¹ und m die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen und R⁴ für eine geschützte Gruppe R² steht, wobei R² die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt, aber zusätzlich eine oder mehrere Schutzgruppen P² tragen kann, entschützt; und gegebenenfalls zur Herstellung eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes eines Chinazolinderivats der Formel I die erhaltene Verbindung mit einer Säure oder Base zu dem gewünschten pharmazeutisch annehmbaren Salz umsetzt.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die als Wirkstoff eine Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoff oder Träger enthält.
Verwendung einer Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Erzielung einer antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssenkenden Wirkung bei einem Warmblüter wie einem Menschen.
Verwendung einer Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und eines auf die Gefäße wirkenden Mittels bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Erzielung einer antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssenkenden Wirkung bei einem Warmblüter wie einem Menschen.
Verwendung von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon und N-Acetylcolchinol-O-phosphat nach Anspruch 13 bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Erzielung einer antiangiogenen und/oder gefäßpermeabilitätssenkenden Wirkung bei einem Warmblüter wie einem Menschen.
Verwendung einer Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Erzielung einer Antikrebswirkung bei einem Warmblüter wie einem Menschen.
Verwendung einer Verbindung der Formel I gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Inhibierung der Effekte von VEGF bei einem Warmblüter wie einem Menschen.
Verwendung von 4-(4-Brom-2-fluoranilino)-6-methoxy-7-(1-methylpiperidin-4-ylmethoxy)chinazolin oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon und N-Acetylcolchinol-O-phosphat nach Anspruch 14 bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Erzielung einer Antikrebswirkung bei einem Warmblüter wie einem Menschen.