SK287401B6 - Deriváty chinazolínu, spôsob ich prípravy, farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje, a ich použitie - Google Patents

Abstract

Opísané sú deriváty chinazolínu všeobecného vzorca (I), v ktorom index m je celé číslo dosahujúce hodnôt 1 až 3; substituent R1 reprezentuje halogén alebo C1-3alkylovú skupinu; substituent R2 je vybraný z jednej z nasledujúcich troch skupín: (1) C1-5alkylR3 (kde substituent R3 je piperid-4-yl, ktorý môže mať jeden alebo dva substituenty vybrané zo skupiny zahŕňajúcej hydroxyskupinu, halogén, C1-4alkylovú skupinu, C1-4hydroxyalkylovú skupinu, C1-4alkoxyskupinu); (2) C2-5alkenylR3 (kde substituent R3 je už definovaný); (3) C2-5alkenylR3 (kde substituent R3 je už definovaný); a kde akákoľvek alkylová, alkenylová alebo alkinylová skupina môže mať jeden alebo viac substituentov vybraných zo skupiny zahŕňajúcej hydroxyskupinu, halogén a aminoskupinu; a ich soli; spôsob ich prípravy, farmaceutické kompozície obsahujúce zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceuticky prijateľnú soľ ako aktívnu zložku. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich farmaceuticky prijateľné soli inhibujú účinky VEGF, niektoré prejavy pri liečení mnohých ochorení vrátane rakoviny alebo reumatoidnej artritídy.

Description

Predložený vynález sa týka derivátov chinazolínu, spôsobov ich prípravy, farmaceutických kompozícií, ktoré ich obsahujú ako aktívnu zložku, spôsobov ošetrenia ochorení spojených s angiogenézou a/alebo zvýšenou vaskulámou permeabilitou, spôsobov ich použitia ako liečivých prostriedkov a spôsobov ich použitia pri výrobe liečivých prostriedkov určených na tvorbu antiangiogenetických a/alebo vaskulámu permeabilitu znižujúcich účinkov u teplokrvných zvierat, napr. ľudí.

Doterajší stav techniky

Normálna angiogenéza má dôležitú úlohu pri rôznych procesoch zahŕňajúcich vývoj embrya, liečenie zranení a niekoľkých komponentov ženských reprodukčných funkcií. Nežiaduca alebo patologická angiogenéza býva spojená s ochorením zahŕňajúcim diabetickú retinopatiu, psoriázu, rakovinu, reumatoidnú artritídu, ateróm, Kaposiho sarkóm a nezhubný nádor z krvných ciev (Fan et al., 1995, Trends Pharmacol. Sci. 16: 57 - 66: Folkman, 1995, Náture Medicíne 1: 27 - 31). Predpokladá sa, že alterácia vaskulámej permeability má dôležitú úlohu pri normálnych aj patologických fyziologických procesoch (Cullinan-Bove et al, 1993, Endocrinology 133: 829 - 837; Senger et al., 1993, Cancer and Metastasis Reviews, 12: 303 - 324). Identifikovalo sa niekoľko polypeptidov, ktoré sú in vitro promótory endotelového bunkového rastu a zahŕňajú kyslé a bázické fibroblastové rastové faktory (aFGF & bFGF) a vaskulámy endotelový rastový faktor (VEGF). V dôsledku obmedzenej expresie ich receptorov, aktivita rastového faktora VEGF na rozdiel od FGF je relatívne špecifická vo vzťahu k endotelovým bunkám. Posledné dôkazy indikujú, že VEGF je dôležitým stimulátorom normálnej aj patologickej angiogenézy (Jakeman et al., 1993, Endocrinology, 133: 848 - 859; Kolch et al., 1995, Breast Cancer Research and Treatment, 36: 139 - 155) a vaskulámej permeability (Connolly et al., 1989, J. Biol. Chem., 264: 20017 -20024). Antagonizmus účinku VEGF tvorbou komplexov VEGF s protilátkou môže viesť k inhibícii nádorového rastu (Kim et al., 1993, Náture 362: 841 - 844).

Receptorové tyrozínkinázy (receptor tyrosin kinases (RTK)) sú dôležité pri prenose biochemických signálov cez plazmatickú membránu buniek. Pre tieto transmembránové molekuly je charakteristické, že pozostávajú z extracelulámej oblasti viažucej ligand, pripojenej cez segment v plazmatickej membráne až do intracelulámej oblasti tyrozínkinázy. Väzba ligandu na receptor vedie k stimulácii aktivity tyrozínkinázy spojenej s receptorom, ktorej následkom je fosforylácia tyrozínových zvyškov na receptorových aj ďalších intracelulámych molekulách. Zmeny vo fosforylácii tyrozínu iniciujú signálnu kaskádu, ktorej následkom sú rôzne bunkové odpovede. Doteraz sa identifikovalo devätnásť rozdielnych podskupín RTK definovaných homológiou v sekvencií aminokyselín. Jedna z týchto podskupín je zložená z fms-podobnej receptorovej tyrozínkinázy, Fit alebo Fltl receptorovej kinázy obsahujúcej inzertovanú doménu (KDR) (tiež označovaná ako Flk-1) a ďalšia fms-podobná receptorová tyrozínkináza Flt-4. Zistilo sa, že dve z príbuzných RTK, Fit a KDR viažu VEGF s vysokou afinitou (De Vrieš et al., 1992, Science 255: 989 - 991; Terman et al., 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579-1586). Väzba VEGF na tieto receptory exprimované v heterológnych bunkách býva spojená so zmenami stavu fosforylácie tyrozínu bunkových proteínov a prechodu vápnika.

Deriváty chinazolínu, ktoré sú inhibítormi VEGF receptorových tyrozínkináz, sú opísané v medzinárodnej prihláške vynálezu č. WO 97/30035 a WO 98/13354, v ktorých sú opísané zlúčeniny, ktoré sú aktívne proti VEGF receptorovým tyrozínkinázam a zároveň sú určitým spôsobom aktívne aj proti EGF receptorovým tyrozínkinázam.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu spadajú do všeobecného rozsiahleho opisu v patentových prihláškach WO 97/30035 a WO 98/13354. Boli objavené zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré majú veľmi dobrú inhibičnú aktivitu proti VEGF receptorovým tyrozínkinázam. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa testovali a mali in vivo aktivitu proti nádorovým xenoimplantátom myší. Pri štrnásťdennom testovaní zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa pri myšiach ukázal prospešný farmakologický profil.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu inhibujú účinky VEGF, čo sú dôležité vlastnosti pri ošetrení ochorení spojených s angiogenézou a/alebo zvýšenou vaskulámou permeabilitou, ako sú napr. rakovina, diabetes, psoriáza, reumatoidná artritída, Kaposiho sarkóm, nezhubný nádor z krvných ciev, akútna a chronická nefropatia, ateróm, arteriálna restenóza, autoimunitné ochorenie, akútny zápal, excesívna tvorba jaziev a adhézia, endometrióza, dysfunkčné maternicové krvácanie a choroby očí s proliferáciou retinálnej cievy.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú dobrú aktivitu proti VEGF receptorovej tyrozínkináze a zároveň majú tiež aktivita proti EGF receptorovej kináze. Ďalej niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú výrazne vyššiu účinnosť proti VEGF receptorovej tyrozínkináze ako proti EGF receptorovej tyrozínkináze alebo EGF R1 receptorovej tyrozínkináze. Aj keby sme nechceli byť zviazaní teoretickými úvahami, takéto zlúčeniny môžu byť výhodné napríklad pri ošetrení nádorov, ktoré sú spojené s VEGF, predovšetkým tie nádory, ktoré sú závislé od VEGF z hľadiska ich rastu. Ďalej sa predpokladá, že tieto zlúčeniny môžu byť výhodné pri ošetrení nádorových stavov spojených s VEGF aj EGF a hlavne tam, kde pacient trpí ocho2 rením s výskytom nádorov, ktoré sú závislé od VEGF aj EGF z hľadiska ich rastu.

Podstata vynálezu

V rámci jedného aspektu poskytuje predložený vynález derivát chinazolínu všeobecného vzorca (I):

(R*)_m (I), v ktorom index m je celé číslo dosahujúce hodnoty 1 až 3;

substituent R¹ reprezentuje halogén alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 3 atómy uhlíka;

X¹ reprezentuje skupinu -O-.

Substituent R² je vybraný z jednej z nasledujúcich troch skupín:

1. Ci_₅alkylR³ (kde substituent R³ je piperid-4-yl, ktorý môže mať jeden alebo dva substituenty vybrané zo skupiny zahŕňajúcej hydroxyskupinu, halogén, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka);

2. C₂.₅alkenylR³ (kde substituent R³ je už definovaný);

3. C₂.₅alkinylR³ (kde substituent R³ je už definovaný);

a kde akákoľvek alkylová, alkenylová alebo alkinylová skupina môže mať jeden alebo viac substituentov vybraných zo skupiny zahŕňajúcej hydroxyskupinu, halogén a aminoskupinu;

alebo jeho soľ, alebo jeho proliečivo.

Index m je výhodne 2.

Fenylová skupina obsahujúca skupinu (R¹),,, je výhodne vybraná zo skupiny zahŕňajúcej 2-fluór-4-metylfenyl, 4-chlór-2,6-difluórfenyl, 4-bróm-2,6-difluórfenyl, 4-chlór-2-fluórfenyl a 4-bróm-2-fluórfenyl.

Výhodnejšie je fenylová skupina obsahujúca skupinu (R’)_m vybraná zo skupiny zahŕňajúcej 4-chlór-2-fluórfenyl a 4-bróm-2-fluórfenyl.

Najvýhodnejšie je fenylová skupina obsahujúca skupinu (R¹),,, vybraná zo skupiny zahŕňajúcej 4-bróm-2-fluórfenyl.

Substituent R² je výhodne Cj.jalkylR³ (kde substituent R³ je už definovaný).

Výhodnejšie je substituent R² Ci_₃alkylR³ (kde substituent R³ je už definovaný).

Substituent R² je najmä piperid-4-ylmetyl, v ktorom piperidínový kruh môže mať jeden alebo dva substituenty už definované.

Detailnejšie, substituent R² je piperid-4-ylmetyl, v ktorom piperidínový kruh môže mať jeden alebo dva substituenty vybrané zo skupiny zahŕňajúcej alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka.

Substituent R² je najmä l-metylpiperid-4-ylmetyl.

Podľa ďalšieho aspektu, predložený vynález poskytuje derivát chinazolínu všeobecného vzorca (II):

(Π), v ktorom index máje celé číslo dosahujúce hodnoty 1 až 3;

substituent R^la reprezentuje halogén alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 3 atómy uhlíka;

X^la reprezentuje skupinu -O-.

Substituent R^2a je vybraný z jednej z nasledujúcich troch skupín:

1. C^alkylR³ (kde substituent R³ je už definovaný);

2. C₂.₅alkenylR³ (kde substituent R³ je už definovaný);

3. C₂_5alkinylR³ (kde substituent R³ je už definovaný);

alebo jeho soli, alebo proliečivá.

Index máje výhodne 2.

Výhodne je fenylová skupina obsahujúca skupinu (R*)_ma vybraná zo skupiny zahŕňajúcej 2-fluór-4-metylfenyl, 4-chlór-2,6-difluórfenyl, 4-bróm-2,6-difluórfenyl, 4-chlór-2-fluórfenyl a 4-bróm-2-fluórfenyl.

Výhodnejšie je fenylová skupina obsahujúca skupinu (Κ')_ηηα vybraná zo skupiny zahŕňajúcej 4-chlór-2-fluórfenyl a 4-bróm-2-fluórfenyl.

Najvýhodnejšie je fenylová skupina obsahujúca skupinu (R ’)_ma vybraná zo skupiny zahŕňajúcej 4-bróm-2-fluórfenyl.

Substituent R^2a je výhodne Ci_₅alkylR³ (kde substituent R³ je už definovaný).

Výhodnejšie je substituent R^2a C^alkylR³ (kde substituent R³ je už definovaný).

Substituent R^2a je najmä piperid-4-ylmetyl, v ktorom piperidínový kruh môže mať jeden alebo dva substituenty už definované.

Detailnejšie, substituent R^2a je piperid-4-ylmetyl, v ktorom piperidínový kruh môže mať jeden alebo dva substituenty vybrané zo skupiny zahŕňajúcej alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka.

Substituent R^2a je najmä l-metylpiperid-4-ylmetyl.

Výhodne zlúčeniny podľa predloženého vynálezu zahŕňajú: 4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(2-fluór-4-metylanilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-chlór-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-bróm-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(2-fluór-4-metylanilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolm, 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-chlór-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín a 4-(4-bróm-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín, a ich soli, potom hlavne ich hydrochloridové soli.

Výhodnejšie, zlúčeniny podľa predloženého vynálezu zahŕňajú: 4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-chlór-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-bróm-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(1 -metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-chlór-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chmazolm a 4-(4-bróm-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín, a ich soli, potom predovšetkým ich hydrochloridové soli.

Predovšetkým výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu zahŕňajú: 4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, 4-(4-chlór-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-( 1 -metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín a 4-(4-bróm-2,6-difluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, a ich soli, potom hlavne ich hydrochloridové soli.

Veľmi výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu zahŕňajú: 4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín a 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín a ich soli, potom hlavne ich hydrochloridové soli.

Predovšetkým výhodnou zlúčeninou podľa predloženého vynálezu je 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín a jej soli, potom hlavne jej hydrochloridové soli.

Tam, kde sa pri opise skupiny vyskytuje termín „už definovaná (uvedená)“ alebo „skôr definovaná (uvedená)“ znamená to, že daná skupina zahŕňa prvú uvedenú a najširšiu definíciu, ako aj každú a všetky výhodné definície danej skupiny. Podobné konvencie platia pre termín „neskôr definovaná“ alebo „definovaná neskôr“.

V predloženom vynáleze, pokiaľ nie je uvedené inak, termín „alkylová skupina“ označuje jednoduchý aj rozvetvený reťazec alkylových skupín, ale odkazy na jednotlivé alkylové skupiny, napr. „propylová skupi na“, sú špecifické iba pre verziu lineárneho reťazca. Analogická konvencia bude platiť pre ďalšie generické termíny. Pokiaľ nie je uvedené inak, termín „alkylová skupina“ výhodne označuje reťazce obsahujúce 1 až 5 atómov uhlíka, výhodne 1 až 3 atómy uhlíka. Termín „alkoxy skupina“ ako je používaný v predloženom vynáleze, pokiaľ nie je uvedené inak, zahŕňa skupiny „alkyl“-O-, v ktorých má „alkylová skupina“ skôr uvedený význam. Termín „arylová skupina“ ako je používaný v predloženom vynáleze, pokiaľ nie je uvedené inak, zahŕňa odkazy na arylovú skupinu obsahujúcu 6 až 10 atómov uhlíka, ktorá môže mať, pokiaľ je to potrebné, jeden alebo viac substituentov vybraných zo skupiny zahŕňajúcej halogén, alkylovú skupinu, alkoxyskupinu, nitroskupinu, trifluórmetylovú skupinu a kyanoskupinu, kde alkylová skupina a alkoxyskupina majú skôr uvedený význam. Termín „aryloxyskupina“ ako je používaný v predloženom vynáleze, pokiaľ nie je uvedené inak, zahŕňa skupiny „aryľ‘-O-, v ktorých „arylová skupina“ má skôr uvedený význam. Termín „sulfonyloxyskupina“, ako je používaný v predloženom vynáleze, označuje alkylsulfonyloxyskupinu a arylsulfonyloxyskupinu, v ktorých „alkylová skupina“ a „arylová skupina“ majú skôr definovaný význam. Termín „alkanoylová skupina“ ako je používaný v predloženom vynáleze, pokiaľ nie je uvedené inak, zahŕňa formylovú skupinu a skupiny alkyl-C=O, v ktorých „alkylová skupina“ má skôr uvedený význam, napr. alkanoylová skupina obsahujúca 2 atómy uhlíka je etanoyl so vzorcom CH₃C=O, alkanoylová skupina obsahujúca 1 atóm uhlíka je formyl so vzorcom CHO. Pokiaľ nie je uvedené inak, potom termín „alkenylová skupina“ ako je používaný v predkladanom vynáleze, zahŕňa alkenylové skupiny s lineárnym aj rozvetveným reťazcom, ale odkazy na jednotlivé alkenylové skupiny, napr. 2-butenyl, sú špecifické iba pre verziu lineárneho reťazca. Pokiaľ nie je uvedené inak, potom termín „alkenylová skupina“ výhodne označuje reťazce obsahujúce 2 až 5 atómov uhlíka, výhodne 3 až 5 atómov uhlíka. Pokiaľ nie je uvedené inak, potom termín „alkinylová skupina“ zahŕňa alkinylové skupiny s lineárnym aj rozvetveným reťazcom, ale odkazy na jednotlivé alkinylové skupiny, napr. 2-butynyl, sú špecifické iba pre verziu lineárneho reťazca. Pokiaľ nie je uvedené inak, potom termín „alkinylová skupina“ výhodne označuje reťazce obsahujúce 2 až 5 atómov uhlíka, výhodne 3 až 5 atómov uhlíka.

Vo všeobecnom vzorci (I), ktorý je už definovaný, bude atóm vodíka prítomný v polohách 2, 5 a 8 chinazolínovej skupiny.

V predloženom vynáleze môže zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej soľ tautomerizovať a vzorce uvedené v predloženom vynáleze môžu reprezentovať iba jednu z možných tautomémych foriem. Predložený vynález zahŕňa ktorúkoľvek tautomému formu, ktorá inhibuje aktivitu VEGF receptorovej tyrozínkinázy a nemala by byť obmedzená akoukoľvek tautomémou formou používanou v uvedených vzorcoch.

Niektoré zo zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich soli môžu existovať v solvatovaných, ako aj nesolvatovaných formách, napr. hydratované formy. Predložený vynález zahŕňa všetky tieto solvatované formy, ktoré inhibujú aktivitu VEGF receptorovej tyrozínkinázy.

S cieľom predísť akýmkoľvek nejasnostiam platí, že v zlúčenine všeobecného vzorca (I), keď substituent R² je napr. skupina všeobecného vzorca C₂_₅alkenylR³, je to alkenylová skupina obsahujúca 2 až 5 atómov uhlíka, ktorá je naviazaná na X¹ skupinu a analogické pravidlo platí pre ďalšie skupiny. Keď substituent R² je skupina l-R³-prop-l-en-3-yl, znamená to, že prvý atóm uhlíka je pripojený k skupine R³ a tretí atóm uhlíka je pripojený k skupine X¹, podobne pokiaľ substituent R² je skupina 2-R³-pent-3-en-5-yl, znamená to, že druhý atóm uhlíka je pripojený k skupine R³ a piaty atóm uhlíka je pripojený k skupine X¹ a analogické pravidlo platí pre ďalšie skupiny.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu byť podávané vo forme proliečiva, ktoré sa rozloží v ľudskom alebo zvieracom tele, pričom vznikne zlúčenina všeobecného vzorca (I). Príklady proliečiv zahŕňajú in vivo hydrolyzovateľné estery zlúčeniny všeobecného vzorca (I).

V doterajšej technike sú známe rôzne formy proliečiv.

Príklady takýchto liečiv pozri:

a) Design of Prodrugs, edited by H. Bungaard, (Elsevier, 1985) and Methods in Enzymology, Vol. 42 p. 309-396, edited by K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5 „Design and Application of Prodrugs“, by H. Bundgaard p. 113-191, (1991);

c) H. Bungaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38, (1992);

d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285, (1988) a

e) N. Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692, (1984).

In vivo hydrolyzovateľný ester zlúčenín všeobecného vzorca (I) obsahujúci hydroxyskupinu zahŕňa anorganické estery, napr. fosfátové estery (vrátane cyklických esterov kyseliny fosforamidovej) a a-acyloxyalkylové étery a príbuzné zlúčeniny, ktoré po in vivo hydrolýze esteru poskytnú materskú hydroxyskupinu(y). Príklady a-acyloxyalkylových éterov zahŕňajú acetoxymetoxyskupinu a 2,2-dimetylpropionyloxymetoxyskupinu. Výber in vivo hydrolyzovateľných esterov tvoriacich skupiny pre hydroxyskupinu zahŕňa alkanoylovú, benzoylovú, fenylacetylovú a substituovanú benzoylovú a fenylacetylovú, alkoxykarbonylovú (čím sa získajú estery alkylkarbonátu), dialkylkarbamoylovú a 7V-(dialkylaminoetyl)-7V-alkylkarbamoylovú skupinu (pričom vzniknú karbamáty), dialkylaminoacetylovú a karboxyacetylovú skupinu. Príklady substituentov na benzoyle zahŕňajú morfolinoskupinu a piperazinoskupinu pripojenú z atómu dusíka v kruhu cez metylénovú skupinu do polohy 3 alebo 4 benzoylového kruhu.

Predložený vynález sa týka skôr uvedených zlúčenín všeobecného vzorca (I), ako aj ich solí. Soli, ktoré je možné použiť vo farmaceutických kompozíciách, sú farmaceutický prijateľné soli, ale pri výrobe zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľných soli môžu byť užitočné tiež ďalšie soli. Farmaceutický prijateľné soli podľa predkladaného vynálezu môžu napr. zahŕňať adičné soli skôr definovaných zlúčenín všeobecného vzorca (I) s kyselinami, ktoré sú dostatočne bázické na vytvorenie takýchto solí. Tieto adičné soli s kyselinami zahŕňajú napr. soli s anorganickými alebo organickými kyselinami poskytujúcimi farmaceutický prijateľné anióny, napr. s halogénvodíkmi (najmä kyselina chlórvodíková alebo bromovodíková, pričom výhodná je kyselina chlórvodíková) alebo s kyselinou sírovou, fosforečnou, trifluóroctovou, citrónovou alebo maleínovou. Navyše tam, kde zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sú dostatočne kyslé, môžu byť vyrobené farmaceutický prijateľné soli s anorganickou alebo organickou bázou, ktorá poskytne farmaceutický prijateľný katión. Tieto soli s anorganickými alebo organickými bázami zahŕňajú napr. soli s alkalickými kovmi, napr. sodné alebo draselné soli, soli s kovmi alkalických zemín, napr. vápenaté alebo horečnaté soli, amónne soli alebo napr. soli s metylamínom, dimetylamínom, trimetylamínom, piperidínom, morfolínom alebo ŕrŕs-(2-hydroxyetyl)amínom.

Zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej soľ a ďalšie zlúčeniny podľa predloženého vynálezu (už definované) môžu byť pripravené akýmkoľvek štandardným spôsobom, ktorý môže byť aplikovateľný pri príprave chemicky príbuzných zlúčenín. Tieto spôsoby sú uvedené napr. v európskych patentových prihláškach č. 0520722, 0566226, 0602851 a 0635498 a v medzinárodných patentových prihláškach č. WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 a WO 98/13354. Tieto spôsoby patria medzi ďalší aspekt predloženého vynálezu a sú opísané v ďalšej časti tohto vynálezu. Potrebné východiskové látky sa môžu získať štandardnými spôsobmi. Príprava takýchto východiskových látok je opísaná v priložených a nijako nelimitujúcich príkladoch. Alebo sú potrebné východiskové látky pripravené analogickými postupmi.

Ako ďalší aspekt predloženého vynálezu sú uvedené nasledujúce spôsoby (a) až (d) a (i) až (iv).

Syntéza zlúčenín všeobecného vzorca (I) (a) Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli môžu byť pripravené reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (III)

(III), (kde substituenty R² a X¹ sú už definované a L¹ je substituovateľná časť), so zlúčeninou všeobecného vzorca (IV)

(IV), (kde substituent R¹ a index m sú už definované), čím sa získajú zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli. Štandardná substituovateľná časť L¹ je napr. halogén, alkoxyskupina (výhodne alkoxyskupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka), aryloxyskupina alebo sulfonyloxyskupina napr. chlór, bróm, metoxyskupina, fenoxyskupina, metánsulfonyloxyskupina alebo toluén-4-sulfonyloxyskupina.

Priebeh reakcie je výhodne uskutočnený v prítomnosti buď kyseliny, alebo bázy. Kyselinou môžu byť napr. bezvodé anorganické kyseliny, napr. kyselina chlórvodíková. Bázou môžu byť napr. organické amínové bázy, napr. pyridín, 2,6-lutidín, kolidín, 4-dimetylaminopyridín, trietylamín, morfolín, A-metylmorfolín alebo diazabicyklo[5.4.0]undec-7-én, alebo napr. hydroxidy alebo uhličitany alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín, napr. uhličitan sodný, uhličitan draselný, uhličitan vápenatý, hydroxid sodný alebo hydroxid draselný. Alebo bázy môžu byť napr. hydridy alkalického kovu, napr. hydrid sodný, alebo amidy alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín, napr. amid sodný alebo bis(trimetylsilyl)amid sodný. Reakcia sa výhodne uskutoční v prítomnosti inertného rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku, napr. alkanol alebo ester napr. metanol, etanol, 2-propanol alebo etylacetát, halogénového rozpúšťadla napr. metylénchlorid, chlór form alebo tetrachlórmetán, éter napr. tetrahydrofurán alebo 1,4-dioxán, aromatického uhľovodíkového rozpúšťadla napr. toluénu alebo dipolámeho aprotického rozpúšťadla, napr. N.A’-dimetylformamid, /V./Z-dimetylacetamid, Y-metylpyrolidin-2-ón alebo dimetylsulfoxid. Reakcia sa výhodne uskutoční pri teplote v rozmedzí napr. 10 až 150 °C, výhodne v rozmedzí 20 až 80 °C.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu týmto spôsobom získať vo forme voľnej bázy alebo sa môžu získať vo forme soli s kyselinou všeobecného vzorca H-Ľ, kde L¹ má význam už uvedený. Pokiaľ je treba získať zo soli voľnú bázu, môže sa soľ podrobiť reakcii s bázou, štandardným spôsobom už uvedeným, (b) Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli môžu byť pripravené reakciou, výhodne v prítomnosti skôr definovanej bázy, so zlúčeninou všeobecného vzorca (V)

(V), (kde index m, X¹ a R¹ sú už definované) so zlúčeninou všeobecného vzorca (VI)

R²-Ľ (VI), (kde substituenty R² a L¹ sú už definované); Ľ je substituovateľná časť napr. halogén alebo sulfonyloxyskupina, napr. bróm alebo metánsulfonyloxyskupina. Výhodne Ľ skupina O-⁺P(Y)₃ (kde Y je butyl alebo fenyl) a v takých prípadoch je zlúčenina všeobecného vzorca (VI) výhodne pripravená in situ. Reakcia sa výhodne uskutoční v prítomnosti bázy (už definovaná v spôsobe (a)) a výhodne v prítomnosti inertného rozpúšťadla (už definované v bode (a)), výhodne pri teplote v rozmedzí 10 až 150 °C, výhodne pri 50 °C.

(c) Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli sa môžu pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (VII)

(VII) so zlúčeninou všeobecného vzorca (VIII)

R²-X'-H (VIII), (kde L¹, R¹, R², m a X¹ sú všetky už definované). Reakcia sa môže uskutočniť v prítomnosti bázy (už definovaná v spôsobe (a)) a výhodne v prítomnosti inertného rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku (už definovaného v spôsobe (a)), výhodne pri teplote v rozmedzí 10 až 150 °C, štandardne pri 100 °C.

(d) Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli sa môžu pripraviť odstránením ochrannej skupiny zlúčeniny všeobecného vzorca (IX)

(ix), kde substituent R¹, index m a X¹ sú všetky už definované a substituent R⁴ reprezentuje chránený substituent R², kde substituent R² je už definovaný, ale dodatočne môže mať jednu alebo viac ochranných skupín P². Výber ochrannej skupiny P² je vykonaný štandardným spôsobom napr. podľa „Protective Groups in Organic Synthesis“ T.W.Greene awr/R.G.M. Wuts, 2^nd Ed. Wiley 1991. Výhodne je P² ochranná skupina napr. karbamát (alkoxykarbonyl) (napr. íerc-butoxykarbonyl, íerc-amyloxykarbonyl, cyklobutoxykarbonyl, propoxykarbonyl, metoxykarbonyl, etoxykarbonyl, izopropoxykarbonyl, alyloxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl). Výhodnejšie je P² íerc-butoxykarbonyl. Reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti kyseliny. Kyselinou je napr. anorganická kyselina, napr. kyselina chlórvodíková alebo bromovodíková, alebo organická kyselina, napr. kyselina trifluóroctová, kyselina trifluórmetánsulfónová. Reakcia sa môže uskutočniť v prítomnosti inertného rozpúšťadla napr. metylénchloridu, chlórformu a v prítomnosti stôp vody. Reakcia sa výhodne uskutočňuje pri teplote v rozmedzí 10 - 100 °C, výhodne v rozmedzí 20 - 80 °C.

Syntéza medziproduktov (i) Zlúčeniny všeobecného vzorca (III) a ich soli, v ktorých Ľ je halogén, sa môžu napríklad pripraviť halogenáciou zlúčeniny všeobecného vzorca (X)

(X), (kde substituent R² a X¹ sú už definované).

Vhodné halogenačné činidlá zahŕňajú halogenidy anorganických kyselín, napr. tionylchlorid, chlorid fosforitý, oxychlorid fosforečný a chlorid fosforečný. Halogenačná reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti inertného rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku napr. halogénované rozpúšťadlo, napr. metylénchlorid, chlórform alebo tetrachlórmetán, alebo aromatické uhľovodíkové rozpúšťadlá, napr. benzén alebo toluén. Výhodne sa reakcia uskutočňuje pri teplote v rozmedzí napr. 10 až 150 °C, výhodne v rozmedzí 40 až 100 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X) a ich soli sa môžu pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (xi)

(xi), (kde Ľ je už definovaná) so zlúčeninou všeobecného vzorca (VIII), ktorá je tak isto už definovaná. Výhodne sa reakcia uskutočňuje v prítomnosti bázy (už definovaná v spôsobe (a)) a výhodne v prítomnosti inertného rozpúšťadla pri teplote v rozmedzí napr. 10 až 150 °C, výhodne asi 100 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X) a ich soli sa môžu pripraviť cyklizáciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XII)

(ΧΠ), (kde substituent R² a X¹ sú už definované a A¹ je hydroxyskupina, alkoxyskupina (výhodne alkoxyskupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka) alebo aminoskupina), čím sa získa zlúčenina všeobecného vzorca (X) alebo jej soľ. Cyklizácia môže byť ovplyvňovaná reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XII), kde A¹ je hydroxyskupina alebo alkoxyskupina s formamidom alebo jeho ekvivalentom s cieľom uskutočniť cyklizáciu, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (X) alebo jej soli napr. chlorid [3-(dimetylamino)-2-azaprop-2-enylidén] dimety lamónny.

Cyklizácia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti formamidu ako rozpúšťadla alebo v prítomnosti inertného rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku, napr. éterového rozpúšťadla napr. 1,4-dioxánu. Cyklizácia sa tiež výhodne uskutočňuje výhodne pri teplote v rozmedzí 80 až 200 °C. Zlúčeniny všeobecného vzorca (X) sa môžu tiež pripraviť cyklizáciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XII), kde A¹ je aminoskupina, s kyselinou mravčou alebo jej ekvivalentom použiteľným na cyklizáciu a tým k vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (X) alebo jej soli. Ekvivalenty kyseliny mravčej použiteľné na cyklizáciu zahŕňajú napr. ň7-C_l.₄alkoxymetán, napr. trietoxymetán a trimetoxymetán. Cyklizácia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti katalytického množstva bezvodej kyseliny, napr. kyseliny sírovej, napr. kyseliny p-toluénsulfónovej a v prítomnosti inertného rozpúšťadla alebo riediaceho rozpúšťadla, napr. halogénového rozpúšťadla, napr. metylénchloridu, chlórformu alebo tetrachlórmetánu, éterové rozpúšťadlá, napr. dietyléteru alebo tetrahydrofuránu, alebo aromatického uhľovodíkového rozpúšťadla, napr. toluénu. Cyklizácia sa výhodne uskutočňuje pri teplote v rozmedzí 10 až 100 °C, výhodne v rozmedzí 20 až 50 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (XII) a ich soli sa môžu pripraviť redukciou nitroskupiny v zlúčenine všeobecného vzorca (XIII)

O (XIII), (kde substituenty R², X¹ a A¹ sú už definované), pričom vznikne zlúčenina všeobecného vzorca (XII) už definovaná. Redukcia nitroskupiny sa výhodne uskutoční akýmkoľvek štandardným spôsobom. Ďalej sa redukcia môže uskutočňovať napr. hydrogenáciou roztoku nitrozlúčeniny v prítomnosti skôr definovaného inertného rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku v prítomnosti kovu účinného ako katalyzátora hydrogenačných reakcií, napr. paládium alebo platina. Ďalšie redukčné činidlo je napr. aktivovaný kov, napr. aktivované železo (pripravené napr. premývaním železného prášku zriedeným roztokom kyseliny, napr. kyseliny chlórvodíkovej). Redukcia sa môže taktiež uskutočniť napr. zahrievaním nitrozlúčeniny a aktivovaného kovu v prítomnosti rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku, napr. zmesou vody a alkoholu, napr. metanol alebo etanol, pri teplote v rozmedzí napr. 50 až 150 °C, výhodne asi 70 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (XIII) a ich soli sa môžu pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (xiv)

(xiv), (kde L¹ a A¹ sú už definované) so zlúčeninou všeobecného vzorca (VIII) už uvedenou, pričom vznikne zlúčenina všeobecného vzorca (XIII). Reakcie zlúčenín všeobecných vzorcov (XIV) a (VIII) sa výhodne uskutočňujú v podmienkach uvedených už v spôsobe (c).

Zlúčeniny všeobecného vzorca (XIII) a ich soli sa môžu tiež pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XV)

O (XV), (kde X¹ a A¹ je už definované) s už definovanou zlúčeninou všeobecného vzorca (VI) za vzniku skôr definovanej zlúčeniny všeobecného vzorca (XIII). Reakcie zlúčenín všeobecných vzorcov (XV) a (VI) sa výhodne uskutočnia v podmienkach už uvedených v spôsobe (b).

Zlúčeniny všeobecného vzorca (III) a ich soli sa môžu tiež pripraviť napr. reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XVI)

(xvi), (kde X¹ je už definované a L² reprezentuje substituovateľnú ochrannú skupinu) s už definovanou zlúčeninou všeobecného vzorca (VI), pričom vznikne zlúčenina všeobecného vzorca (III), v ktorej L¹ je reprezentované vzorcom L².

Výhodne sa používa zlúčenina všeobecného vzorca (XVI), v ktorej L² reprezentuje fenoxyskupinu, ktorá môže mať podľa potreby až 5 substituentov, výhodne až 2 substituenty vybrané zo skupiny zahŕňajúcej halogén, nitroskupinu a kyanoskupinu. Reakcia sa môže výhodne uskutočniť v podmienkach už uvedených v spôsobe (b).

Už definované zlúčeniny všeobecného vzorca (XVI) a ich soli sa môžu napríklad pripraviť odstránením ochrannej skupiny v zlúčenine všeobecného vzorca (XVII)

(kde substituenty X¹ a L² sú už definované a P¹ reprezentuje fenolickú hydroxy-chrániacu skupinu). Výber fenolickej hydroxy-chrániacej skupiny P¹ sa uskutoční štandardným spôsobom, napr. podľa „Protective Groups in Organic Synthesis“ T.W.Greene and R.G.M. Wuts, 2^nd Ed. Wiley 1991, vrátane éterov (napr. metylu, metoxymetylu, alylu a benzylu, benzylu substituovaného až dvoma substituentmi vybranými zo skupiny zahŕňajúcej alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka a nitroskupinu), silyléterov (napr. Lbutyldifenylsilyl a í-butyldimetylsilyl), esterov (napr. acetát a benzoát) a karbonátov (napr. metyl a benzyl a benzyl substituovaný až dvoma substituentmi vybranými zo skupiny zahŕňajúcej alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka a nitroskupinu). Deprotekcia sa môže uskutočniť štandardnými technikami, napr. tam, kde P¹ reprezentuje benzylovú skupinu, je deprotekcia uskutočnená hydrogenolýzou alebo reakciou s kyselinou trifluóroctovou.

Odstránenie tejto fenolickej hydroxy-chrániacej skupiny sa môže uskutočniť akýmkoľvek štandardným postupom, vrátane tých reakčných podmienok, ktoré sú uvedené v štandardnej literatúre, napr. literatúra už citovaná. Výhodne sú reakčné podmienky také, aby pri hydroxyderiváte neprebiehali nežiaduce vedľajšie reakcie vo východiskových látkach alebo produktoch. Napríklad pokiaľ ochrannou skupinou P¹ je acetát, vhodne sa transformácia môže uskutočniť reakciou derivátu chinazolínu s bázou, ako je tu už definované a vrátane amoniaku, a jeho mono a dialkylovaných derivátov, výhodne v prítomnosti protického rozpúšťadla alebo spolurozpúšťadla, ako je voda či alkohol, napr. metanol alebo etanol. Táto reakcia sa môže uskutočniť v prítomnosti ďalšieho už definovaného inertného rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku a pri teplote v rozmedzí 0 až 50 °C, výhodne asi 20 °C.

Zlúčeninu všeobecného vzorca (III) je možné, pokiaľ je treba, konvertovať na ďalšiu zlúčeninu všeobecného vzorca (III), v ktorej je časť L¹ iná. To znamená, že napr. zlúčenina všeobecného vzorca (III), v ktorej Ľ je iná skupina ako halogén, napr. prípadne substituovaná fenoxyskupina, sa môže konvertovať na zlúčeninu všeobecného vzorca (III), v ktorej Ľ je halogén, hydrolýzou zlúčeniny všeobecného vzorca (III) (v ktorej Ľ je iná skupina než halogén), pričom vznikne už skôr definovaná zlúčenina všeobecného vzorca (X) a zavedením halogenidu do takto získanej zlúčeniny všeobecného vzorca (X) podľa už uvedeného spôsobu, čím vznikne zlúčenina všeobecného vzorca (III), v ktorej Ľ reprezentuje halogén.

(ii) Skôr definované zlúčeniny všeobecného vzorca (V) a ich soli sa môžu pripraviť deprotekciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XVIII)

(XVIII), (kde R¹, P¹, X¹ a index m sú už definované) napr. spôsobom podľa bodu (i).

Zlúčeniny všeobecného vzorca (XVIII) a ich soli sa môžu pripraviť reakciou skôr definovaných zlúčenín všeobecných vzorcov (XVII) a (IV) v podmienkach uvedených v bode (a), pričom vznikne zlúčenina všeobecného vzorca (XVIII) alebo jej soli.

(iii) Skôr definované zlúčeniny všeobecného vzorca (VII) a ich soli sa môžu pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XIX)

(kde L¹ je už definované a L¹ v polohe 4 a 7 môže byť rovnaké alebo rôzne) s už definovanou zlúčeninou všeobecného vzorca (IV), pričom sa reakcia môže uskutočniť podľa spôsobu z bodu (a).

(iv) Zlúčenina všeobecného vzorca (IX) sa môže pripraviť reakciou skôr definovanej zlúčeniny všeobecného vzorca (V) so zlúčeninou všeobecného vzorca (XX)

R⁴-Ľ (XX), kde substituenty R⁴ a L¹ sú skôr definované, v podmienkach uvedených v bode (b), čím vznikne zlúčenina všeobecného vzorca (IX) alebo jej soľ. Reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti bázy (podľa skôr definovaného spôsobu (a)) a výhodne v prítomnosti inertného rozpúšťadla alebo riediaceho roztoku (definované v bode (a)), výhodne pri teplote v rozmedzí 10 až 150 °C, výhodnejšie pri 20 - 50 °C.

Pokiaľ treba pripraviť farmaceutický prijateľnú soľ zlúčeniny všeobecného vzorca (I), je možné pripraviť ju štandardným spôsobom, t. j. reakciou uvedenej zlúčeniny napr. s kyselinou, pričom kyselina má farmaceutický prijateľný anión, alebo sa farmaceutický prijateľná soľ zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môže pripraviť štandardným spôsobom, t. j. reakciou danej zlúčeniny s bázou.

Charakterizácia zlúčenín, ktoré významne inhibujú aktivitu tyrozínkinázy súvisiacej s receptormi VEGF, napr. Fit a/alebo KDR, a ktoré inhibujú angiogenézu a/alebo zvýšenú vaskulámu permeabilitu, je žiaduca a spadá do zámeru predloženého vynálezu. Tieto vlastnosti sa môžu stanoviť napríklad jedným alebo viacerými tu uvedenými spôsobmi:

(a) In vitro test inhibicie receptorovej tyrozínkinázy

Tento test determinuje schopnosť testovanej zlúčeniny inhibovať aktivitu tyrozínkinázy. DNA kódujúca VEGF alebo epidermálny rastový faktor (EGF) receptorových cytoplazmatických domén sa môže získať úplnou génovou expresiou (Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19-25, 1987) alebo klonovaním. Táto DNA sa potom môže exprimovať vo vhodnom expresnom systéme s cieľom získať polypeptid s aktivitou tyrozínkinázy. Zistilo sa, že napr. VEGF a EGF receptorové cytoplazmatické domény, ktoré sa získali expresiou rekombinantného proteínu v hmyzích bunkách, majú intrinzickú aktivitu tyrozínkinázy. V prípade VEGF receptorovej Fit (Genbank accesion number X51602) 1,7 kb DNA fragment kódujúci väčšinu cytoplazmatickej domény, začínajúci metionínom 783 a zahŕňajúci terminačný kodón, opísaný Shibuyaem et al. (Oncogene, 1990, 5, 519-524), sa izoloval z cDNA a klonoval do bakulovírusového transsubstitučného (transplacemenť) vektora (napr. pAcYMl (pozri Baculovirus Expression Systém·. A Laboratory Guide, L.A. King and R.D. Possee, Chapman and Halí, 1992) alebo pAc360, alebo pBlueBacHis (dostupný v Invitrogen Corporation)). Tento rekombinantný konštrukt sa kotransfektoval do hmyzích buniek (napr. Spodoptera frugiperda 2 l(Sf21)) s vírusovou DNA (napr. Pharmigen BaculoGold) na prípravu rekombinantného bakulovírusu. (Detaily tohto spôsobu na zostavenie rekombinantných DNA molekúl a prípravu a použitie rekombinantného bakulovírusu je možné nájsť v klasickej literatúre napr. Sambrook et al, 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual, 2^nd edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press and O'Reilly et al, 1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W.H. Freeman and Co. New York). Pri ďalších tyrozínkinázach použitých v testoch sa cytoplazmatické fragmenty začínajúce metionínom 806 (KDR, Genbank accession number L04947) a metionínom 668 (EGF receptor, Genbank accession number XOO588) môžu klonovať a exprimovať podobným spôsobom.

Pri expresii aktivity cFlt tyrozínkinázy sa bunky Sf21 infikovali cFlt rekombinantným vírusom s čistým povlakom s multiplicitou infekcie 3 a po 48 hodinách sa zozbierali. Tieto zozbierané bunky sa premývali ľadovo studeným fyziologickým roztokom tlmeným fosfátom (PBS) (10 mM fosforečnan sodný pH 7,4, 138 mM chloridu sodného, 2,7 mM chloridu draselného), potom sa resuspendovali v ľadovo studenom roztoku HNTG/PMSF (20 mM Hepes pH 7,5, 150 mM chloridu sodného, 10 obj. % glycerolu, 1 obj. % Tritonu X100, 1,5 mM chloridu horečnatého, 1 mM kyseliny etylénglykol-/ú.y-(/3-aminoetyléter)-_JV,N,.V',A^r-tetraoctovej (EGTA), 1 mM PMSF (fenylmetylsulfonylfluorid); PMSF sa pred použitím upravoval čerstvo pripraveným 100 mM roztokom v metanole) použitím 1 ml HNTG/PMSF na 10 miliónov buniek. Suspenzia sa centrifugovala počas 10 minút pri 13 000 ot. za min. pri teplote 4 °C, supematant (enzýmová kultúra) sa odstránil a skladoval v alikvotných podieloch pri teplote -70 °C. Každá nová dávka enzýmovej kultúry sa pri teste titrovala zriedením enzýmovým riediacim roztokom (100 mM HEPES pH 7,4, 0,2 mM ortovanadátu sodného, 0,1 obj. % Tritonu X100, 0,2 mM ditiotreitolu). Pri typickom dávkovaní sa enzýmová kultúra zriedila 1 ku 2000 enzýmovým riediacim roztokom a pre každý test sa použilo 50 μΐ zriedeného enzýmu.

Zásobný roztok substrátu sa pripravil z nepravidelného kopolyméru obsahujúceho tyrozín napr. Poly (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899) a skladoval sa ako 1 mg/ml zásobný roztok v PBS pri teplote -20 °C a na potiahnutie doštičiek sa zriedil 1 k 500 pomocou PBS.

Jeden deň pred testom sa 100 μΐ zriedeného roztoku substrátu dávkovalo do všetkých jamôk testovacích doštičiek (imunodoštičky Nunc Maxisorp s 96 jamkami), aby sa potom uzatvorili a ponechali cez noc pri teplote 4 °C.

V deň testu sa roztok substrátu prečistil a jamky testovacích doštičiek sa premývali PBST (lx) (PBS obsahujúci 0,05 obj. % Tweenu 20) a 50 mM Hepes pH 7,4 (lx).

Testované zlúčeniny sa zriedili 10 % dimetylsulfoxidom (DMSO) a 25 μΐ zriedenej zlúčeniny sa nanieslo do jamôk v premytých testovacích doštičkách. „Úplne“ kontrolné jamky obsahovali namiesto zlúčeniny 10 % DMSO. Do všetkých testovacích jamôk okrem „slepých“ kontrolných jamôk, ktoré obsahovali chlorid manganatý bez ATP, sa pridalo 25 μΐ 40 mM chloridu manganatého obsahujúceho 8 μΜ adenozín-5'-trifosfátu (ATP). K spusteniu reakcií sa do každej jamky pridalo 50 μΐ čerstvo zriedeného enzýmu a doštičky sa inkubovali pri laboratórnej teplote počas 20 minút. Tekutý podiel sa potom odstránil a jamky sa premývali PBST (2x). Do každej jamky sa pridalo 100 μΐ myšacieho IgG απ/z-fosfotyrozínovej protilátky (Upstate Biotechnology Inc. Product 05-321) zriedenej 1 k 6000 pomocou PBST obsahujúceho 0,5 obj. % albumínu bovinného séra (BSA) a doštičky sa inkubovali počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote, potom sa tekutý podiel odstránil a jamky sa premývali pomocou PBST (2x). Do každej jamky sa pridalo 100 μΐ ovčej anti-myšej Ig protilátky viazanej s chrenovou peroxidázou (HRP) (Amersham product NXA 931) zriedenej 1 k 500 pomocou PBST obsahujúceho 0,5 obj. % (BSA) a doštičky sa inkubovali počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote, potom sa tekutý podiel odstránil a jamky sa premývali pomocou PBST (2x). Do každej jamky sa pridalo 100 μΐ roztoku 2,2'-azino-/ú.s-(3-etylbenztiazolín-6-sulfónovej kyseliny) (ABTS) čerstvo pripravenej pomocou jednej 50 mg ABTS tablety (Boehringer 1204 521) v 50 ml čerstvo pripraveného 50 mM fosfát-citrátového pufra pH = 5,0 + 0,03 % perboritanu sodného (pripraveného s 1 kapsulou fosfátcitrátového pufra s perboritanom sodným (PCSB) (Sigma P4922) na 100 ml destilovanej vody). Doštičky sa potom inkubovali počas 20 - 60 minút pri laboratórnej teplote, kým hodnota optickej hustoty „úplných“ kontrolných jamiek zmeraná pri 405 nm na spektrofotometri bola približne 1,0. „Slepé“ (bez ATP) a „úplné“ (bez zlúčeniny) kontrolné hodnoty sa použili na stanovenie zrieďovacieho pomeru testovanej zlúčeniny, ktorá poskytla 50 % inhibíciu enzýmovej aktivity.

(b) In vitro testy proliferácie HUVEC

Tento test determinuje schopnosť testovanej zlúčeniny inhibovať proliferáciu ľudských umbilikálnych žilových endotelových buniek (HUVEC) stimulovaných rastovým faktorom.

HUVEC bunky sa izolovali v MCDB 131 (Gibco BRL) + 7,5 obj. % fetálneho teľacieho séra (FCS) a naniesli sa na doštičku (do pasáže 2 až 8) v MCDB 131 + 2 obj. % FCS + 3 Mg/ml heparínu + 1 Mg/ml hydrokortizónu v koncentrácii 1000 buniek na jamku (96 jamôk na jednej doštičke). Po minimálne 4 hodinách sa do jamôk dávkoval príslušný rastový faktor (t. j. VEGF 3 ng/ml, EGF 3 ng/ml alebo b-EGF 0,3 ng/ml) a zlúčenina. Kultúry sa inkubovali počas 4 dní pri teplote 37 °C so 7,5 % oxidom uhličitým. Štvrtý deň sa kultúry vystavili tymidínu značenému tríciom 1 pd na jamku (Amersham product TRA 61) a inkubovali sa počas 4 hodín. Bunky sa zbierali pomocou zberača (Tomtek) na doštičky s 96 jamkami a následne sa testovala inkorporácia trícia pomocou merača beta žiarenia (Beta plate counter). Na meranie inhibície bunkovej proliferácie stimulovanej rastovým faktorom pomocou zlúčenín sa použila inkorporácia rádioaktivity do buniek.

(c) In vivo model pevného nádoru

V tomto teste sa meria schopnosť zlúčenín inhibovať rast pevného nádoru.

Nádorový xenoimplantát CaLu-6 sa zaviedol do boku samičej atymickej švajčiarskej nu/nu myši subkutánnou injekciou lxlO⁶ CaLu-6 buniek na myš v 100 μΐ 50 obj. % roztoku Matrigel v kultivačnom médiu bez séra. Desať dní po bunkovom implantáte sa myši rozdelili do skupín po 8 až 10 kusov takým spôsobom, aby sa získali porovnateľné skupiny s priemerným objemom nádoru. Nádory sa merali pomocou posuvného meradla s nóniom a objemy sa sčítali nasledovne. (1 x w) x ^'(1 x U’) x (π + ó), kde 1 je najdlhší priemer a w je priemer kolmý na najdlhší priemer. Testované zlúčeniny sa podávali perorálne raz denne počas minimálne 21 dní a kontrolné zvieratá dostali zriedený roztok zlúčeniny. Nádory sa merali dvakrát týždenne. Miera inhibície rastu sa spočítala porovnaním stredného objemu nádoru kontrolnej skupiny oproti ošetrovanej skupine a štatistická signifikancia sa stanovila Študentovým t-testom a/alebo Mann-Whitney poradovým sumárnym testom. Inhibičný účinok zlúčenín bol štatisticky významný, pokiaľ p<0,05.

Toxikologický profil zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa mohol stanoviť napr. pri 14-dennej štúdii účinku na potkanoch, ktorá je definovaná neskôr.

(d) 14-denný test toxicity na potkanoch

V tomto teste sa meria aktivita zlúčenín pri zvyšujúcej sa zóne hypertrofie vo femorálnych epifyzeálnych rastových doštičkách stehennej kosti a proximálnej holennej kosti a umožňuje vyšetrenie histopatologických zmien v ďalších tkanivách.

Angiogenéza je hlavnou príhodou pri endochondrálnej osifikácii počas elongácie dlhej kosti a predpokladá sa, že vaskuláma invázia rastovej doštičky závisí od produkcie VEGF hypertroínými chondrocytmi. Expanzia zóny hypertrofného chondrocytu a inhibícia angiogenézy sa demonštrovala po ošetrení agens, ktoré špecificky oddeľujú VEGF napr. (i) rozpustný VEGF receptorový chimérický proteín (Flt-(l-3)-IgG) pri myšiach (Gerber, Η-P., Vu, T.H., Ryan, A.M., Kowalski, J., Werb, Z. a Ferrara, N. VEGF couples hypertrophic cartilage remodelling, ossification and angiogenesis during endochondral bone formation, Náture Med., 5, 623-628, 1999) a (ii) rekombinantná humanizovaná aníz-VEGF monoklonálna IgGl protilátka pri cynomológnej opici (cynomologus monkey) (Ryan, A.M., Eppler, D.B., Hagler, K.E., Bruner, R.H., Thomford, P.J., Halí, R.L. Shopp, G.M. and O'Neill, C.A. Preclinical Safety Evaluation of rhuMAbVEGF, an antiangiogenic humanised monoclonal antibody, Tox. Path., 27, 78-86, 1999).

Inhibítor tyrozínkinázovej aktivity VEGF receptora by mal preto tiež inhibovať vaskulámu inváziu chrupavky a zvyšovať zónu hypertrofie vo femorálnych epifyzeálnych rastových doštičkách distálnej stehennej kosti a proximálnej holennej kosti pri rastúcich zvieratách.

Zlúčeniny sa najskôr formovali suspenziou v 1 obj. % roztoku monooleátu polyoxyetylén(20)-sorbitanu v deionizovanej vode mletím pri teplote 4 °C cez noc (aspoň 15 hodín). Zlúčeniny sa tesne pred dávkovaním znovu suspendovali miešaním. Mladým potkanom Alderley Park (vyšľachteným z Wistar, 135-150 g, staré 4 až 8 týždňov, 5-6 na skupinu) sa podávala jedenkrát denne pomocou perorálnej výživy žalúdočnou sondou počas nasledujúcich 14 dní zlúčenina (0,25 ml/100 g telesnej hmotnosti) alebo nosič. Na 15. deň sa zvieratá humánnym spôsobom usmrtili vzrastajúcou koncentráciou oxidu uhličitého a po smrti sa odobrali vzorky tkanív. Odobrali sa tkanivá, ktoré zahŕňali femorotibiálne spoje a spracovali sa štandardnými histologickými technikami s cieľom uskutočniť prípravu parafínových rezov. Histologické rezy sa odfarbili hematoxylínom a eozínom a skúmali sa svetelnou mikroskopiou s cieľom uskutočniť histopatológie. Oblasti femorálnych epifyzeálnych rastových doštičiek distálnej stehennej kosti a proximálnej holennej kosti sa merali v rezoch stehennej a holennej kosti pomocou morfometrickej zobrazovacej analýzy. Zvýšenie zóny hypertrofie sa stanovilo porovnaním priemernej oblasti epifyzeálnych rastových doštičiek kontrolnej skupiny oproti ošetrovanej skupine a štatistická signifikancia sa stanovila pomocou jednostranného Študentovho t-testu. Inhibičný účinok zlúčenín bol štatisticky významný, pokiaľ p < 0,05.

Napriek tomu farmakologické vlastnosti zlúčenín všeobecného vzorca (I) sú rôzne vďaka ich štruktúram a všeobecne sa môže aktivita zlúčenín všeobecného vzorca (I) demonštrovať nasledujúcimi koncentráciami alebo dávkami v jednom alebo viacerých z už skôr uvedených testov (a), (b), (c) a (d): test (a): - hodnota IC₅₀ v rozmedzí napr. < 5 μΜ;

test (b): - hodnota IC₅₀ v rozmedzí napr. 0,001 - 5 μΜ;

test (c): - aktivita v rozmedzí napr. 0,1 - 100 mg/kg; test (d): - aktivita v rozmedzí napr. 0,1 - 100 mg/kg.

Podľa jedného aspektu predloženého vynálezu majú zlúčeniny všeobecného vzorca (I) pri 14-dennom toxikologickom teste na potkanoch prospešný toxikologický profil na rozdiel od ďalších zlúčenín spadajúcich do rozsahu medzinárodnej prihlášky vynálezu číslo WO 98/13354.

Podľa ďalšieho aspektu predloženého vynálezu majú zlúčeniny všeobecného vzorca (I) pri 14-dennom toxikologickom teste na potkanoch prospešný toxikologický profil na rozdiel od ďalších zlúčenín spadajúcich do rozsahu medzinárodnej prihlášky vynálezu číslo WO 97/30035.

Hoci farmakologické vlastnosti zlúčenín všeobecného vzorca (I) sú rôzne vďaka ich štruktúram, pri podaní výhodne dávky menšej ako alebo rovnajúcej sa 150 mg/kg, výhodnejšie dávky menšej ako alebo rovnajúcej sa 100 mg/kg, najmä dávky menšej ako alebo rovnajúcej sa 50 mg/kg, neprodukovali zlúčeniny všeobecného vzorca (I) potkanom, ktoré majú štatisticky významné prírastky oblasti femorálnej epifyzeálnej rastovej doštičky distálnej stehennej kosti a/alebo proximálnej holennej kosti, pri uskutočňovaných testoch (d) neprijateľné histopatologické zmeny v ďalších tkanivách.

Napríklad zlúčenina 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín, (príklad 2), testovaná podľa uvedených bodov (a), (b), (c) a (d) mala nasledujúce výsledky:

(a) Flt-ICsopn 1,6 μΜ

KDR - IC₅₀ pri 0,04 μΜ

EGFR - IC₅₀ pri 0,5 μΜ (b) VEGF - IC₅₀ pri 0,06 μΜ

EGF - IC₅₀ pri 0,17 μΜ

Základný - IC₅₀ pri >3 μΜ (c) 78 % inhibícia nádorového rastu pri 50 mg/kg; p < 0,001 (Mann-Whitney poradovým sumárnym testom);

(d) 75% zvýšenie hypertrofie epifyzeálnej rastovej doštičky pri 100 mg/kg denne u samíc potkanov; p < 0,001 (jednostranný Študentov t-test).

V rámci ďalšieho aspektu predložený vynález poskytuje farmaceutickú kompozíciu, ktorá obsahuje definovanú zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ spoločne s farmaceutický prijateľným excipientom alebo nosičom.

Kompozícia môže byť vo forme vhodnej na perorálne podanie (napr. tablety, pastilky, tvrdé alebo mäkké kapsuly, vodné alebo olejovité suspenzie, emulzie, dispergovateľné prášky alebo granuly, sirupy alebo liečebné nápoje), alebo vo forme vhodnej na podanie inhaláciou (napr. jemne rozotrený prášok alebo tekutý aerosól, alebo vo forme vhodnej na podanie insufláciou (napr. jemne rozotrený prášok), alebo vo forme vhodnej na parenterálne injekcie (napr. sterilný roztok, suspenzia alebo emulzia na intravenózne, subkutánne, intramuskuláme, intravaskuláme alebo infúzne dávkovanie), alebo vo forme vhodnej na miestne podanie (napr. krémy, maste, gély alebo vodné, alebo olejovité roztoky alebo suspenzie), alebo vo forme vhodnej na rektálne použitie (napr. čapíky). Všeobecne sa môžu uvedené prostriedky pripraviť štandardným spôsobom použitím štandardných excipientov.

Kompozície podľa predloženého vynálezu majú výhodne jednotkovú dávkovú formu. Zlúčenina bude bežne podávaná teplokrvným zvieratám v rozmedzí jednotkovej dávky 5 - 5000 mg na m² tela zvieraťa, t. j. približne 0,1 - 100 mg/kg. Predpokladá sa, že jednotková dávka sa bude pohybovať v rozmedzí napr. 1-100 mg/kg, výhodne 1-50 mg/kg, ktoré stačí na poskytnutie terapeuticky účinnej dávky. Jednotková dávkovacia forma, napr. tableta alebo kapsula, bude obvykle obsahovať napr. 1 - 250 mg aktívnej zložky.

Podľa ďalšieho aspektu poskytuje predložený vynález skôr definovanú zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ na použitie pri terapeutickom spôsobe ošetrenia ľudí alebo zvierat.

Zistilo sa, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu inhibujú aktivitu VEGF receptorovej tyrozínkinázy a majú preto antiangiogenetické účinky a/alebo schopnosť znižovať vaskulámu permeabilitu.

Podľa ďalšieho aspektu poskytuje predložený vynález zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ na použitie ako liečebného prostriedku vytvárajúceho antiangiogenetický a/alebo vaskulámu permeabilitu znižujúci účinok u teplokrvných zvierat, napr. ľudí.

Podľa ďalšieho aspektu poskytuje predložený vynález použitie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli pri výrobe liečebného prostriedku s cieľom vytvoriť antiangiogenetický a/alebo vaskulámu permeabilitu znižujúci účinok u teplokrvných zvierat, napr. ľudí.

Podľa ďalšieho aspektu poskytuje predložený vynález spôsob vytvorenia antiangiogenetického a/alebo vaskulámu permeabilitu znižujúceho účinku u teplokrvných zvierat, napr. ľudí, ak je také ošetrenie potrebné, pričom daný spôsob zahŕňa podanie účinného množstva definovanej zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli uvedenému zvieraťu.

Ako je uvedené, veľkosť potrebnej dávky na dosiahnutie terapeutického alebo profylaktického ošetrenia príslušných ochorení bude rôzna v závislosti od ošetrovaného subjektu, spôsobu podania a sile ošetrovanej choroby. Výhodne sa denná dávka bude pohybovať v rozmedzí 1-50 mg/kg. Ale denná dávka bude rôzna v závislosti od ošetrovaného subjektu, spôsobu podania a sile ošetrovanej choroby. Preto môže byť optimálna dávka stanovená praktickým lekárom, ktorý príslušného pacienta ošetruje.

Antiangiogenetické a/alebo vaskulámu permeabilitu znižujúce ošetrenie už definované sa môže aplikovať ako základná terapia alebo môže zahŕňať okrem zlúčeniny podľa predloženého vynálezu jednu alebo viac ďalších látok a/alebo ošetrení. Toto spoločné ošetrenie môže byť dosiahnuté súčasným, postupným alebo separátnym spôsobom podania jednotlivých komponentov ošetrenia. Z hľadiska lekárskej onkológie je normálnou praxou používať kombinácie rôznych foriem ošetrenia na liečenie každého nového pacienta s rakovinou. V lekárskej onkológii môžu byť ďalšie komponenty tohto spoločného ošetrenia okrem skôr definovaného antiangiogenetického a/alebo vaskulámu permeabilitu znižujúceho ošetrenia nasledujúce: chirurgia, rádioterapia alebo chemoterapia. Daná chemoterapia môže zahŕňať päť rôznych kategórii terapeutického činidla:

(i) ďalšie antiangiogenetické činidlá, ktoré pôsobia odlišnými mechanizmami ako skôr definované činidlá (napr. linomide, inhibítory funkcie integrínu ανβ3, angiostatin, endostatin, razoxin, thalidomide) a zahŕňajúce vaskuláme cielené činidlá (napr. combrestatinfosfát) a činidlá poškodzujúce cievy opísané v medzinárodnej prihláške vynálezu číslo WO 99/02166, pričom dokument je tu uvedený ako odkaz (napr. yV-acetylkolchinol-O-fosfát);

(ii) cytostatiká, napr. antiestrogény (napr. tamoxifen, toremifene, raloxifene, droloxifene, iodoxifene), progestagény (napr. megestrolacetát), inhibítory aromatázy (napr. anastrozole, letrazole, vorazole, exemestane), antiprogestagény, antiandrogény (napr. flutamide, nilutamide, bicalutamide, cyproteroneacetát), agonisty a antagonisty LHRH (napr. goserelinacetát, luprolide, abarelix), inhibítory testosterón-5a-dihydroreduktázy (napr. finasteride), antiinvazívne činidlá (napr. inhibítory metaloproteinázy ako marimastat a inhibítory receptorovej funkcie plazminogénového aktivátora urokinázy) a inhibítory funkcie rastového faktora (napr. rastové faktory zahŕňajú napr. rastový faktor odvodený od krvnej doštičky a hepatocytový rastový faktor napr. inhibítory zahŕňajú protilátky rastového faktora, protilátky receptorov rastových faktorov, inhibítory tyrozínkinázy a serín/treonín kinázy);

(iii) modifikátory biologickej odpovede (napr. interferón);

(iv) protilátky (napr. edrecolomab); a (v) antiproliferatívne/antineoplastické liečivá a ich kombinácie používané v lekárskej onkológii, napr. antimetabolity (napr. antifoláty ako metotrexát, fluórpyrimidíny ako 5-fluóruracil, analógy purínu a adenozínu, cytozínarabinozid); protinádorové antibiotiká (napr. antracyklíny ako doxorubicin, daunomycin, epirubicin a idarubicin, mitomycin-C, dactinomycin, mitramycin); deriváty platiny (napr. cisplatina, karboplatina); alkylačné činidlá (napr. dusíkatý yperit, melphalan, chlorambucil, busulphan, cyklofosfamid, ifosfamid, nitrózomočoviny, thiotepa); antimitotické činidlá (napr. alkaloidy Vinea ako vinkristine a taxoidy ako taxol, taxotere); enzýmy (napr. asparagináza); inhibítory tymidylátsyntázy (napr. raltitrexed); inhibítory topoizomeráz (napr. epipodofylotoxíny ako etoposide a teniposide, amsacrine, topotecan, irinotecan).

Napríklad toto spoločné ošetrenie sa môže dosiahnuť simultánnym, sekvenčným alebo oddeleným spôsobom podania uvedenej zlúčeniny všeobecného vzorca (I), napr. 4-(4-bróm-2-fluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-yl-metoxy)chinazolínu alebo jej soli, predovšetkým jej hydrochloridové soli a vaskulárneho cieleného agens opísaného v WO 99/02166, ako je V-acetylkolchinol-O-fosfát (príklad 1 z WO 99/02166).

Ako je už uvedené, zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú zaujímavé z hľadiska svojich účinkov, ktoré majú antiangiogenetické a/alebo vaskulámu permeabilitu znižujúce účinky. Predpokladá sa, že tieto zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu budú použiteľné na širokú škálu ochorení zahŕňajúcich rakovinu, diabetes, psoriázu, reumatoidnú artritídu, Kaposiho sarkóm, nezhubný nádor z krvných ciev, akútnu a chronickú nefropatiu, ateróm, arteriálnu restenózu, autoimunitné ochorenia, akútny zápal, neprimeranú tvorbu jaziev a adhéziu, endometriózu, disfunkčné uterinné krvácanie a očné ochorenia s proliferáciou retinálnych ciev. Predovšetkým sa predpokladá, že tieto zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu budú priaznivo spomaľovať rast primárnych a rekurentných pevných nádorov napr. hrubého čreva, prsníkov, prostaty, pľúc a kože. Predovšetkým sa predpokladá, že tieto zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu budú inhibovať rast tých primárnych a rekurentných pevných nádorov, ktoré súvisia s VEGF a to predovšetkým tie nádory, ktoré sú výrazne závislé od VEGF z hľadiska svojho rastu a rozvoja, vrátane napr. určitých nádorov hrubého čreva, prsníkov, prostaty, pľúc, vulvy a kože.

V ďalšom aspekte predkladaného vynálezu sa predpokladá, že zlúčeniny všeobecného vzorca (I) inhibujú rast tých primárnych a rekurentných pevných nádorov, ktoré súvisia s EGF a predovšetkým tých nádorov, ktoré sú preukazne závislé od EGF z hľadiska ich rastu a rozširovania.

V ďalšom aspekte predkladaného vynálezu sa predpokladá, že zlúčeniny všeobecného vzorca (I) inhibujú rast tých primárnych a rekurentných pevných nádorov, ktoré súvisia s VEGF aj EGF a predovšetkým tých nádorov, ktoré sú preukazne závislé od VEGF aj EGF z hľadiska ich rastu a rozširovania.

Okrem svojho použitia v terapeutickom ošetrení sú zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľné soli použiteľné ako farmakologické nástroje pri vývoji a štandardizácii in vitro a in vivo testovacích systémov na laboratórnych zvieratách, napr. mačkách, psoch, králikoch, opiciach, potkanoch a myšiach, ako súčasť výskumu nových terapeutických činidiel.

Termín „éter“, používaný kdekoľvek v predkladanom vynáleze, označuje dietyléter.

Predkladaný vynález bude ďalej ilustrovaný bez akýchkoľvek obmedzení, nasledujúcimi príkladmi, v ktorých, pokiaľ nie je uvedené inak:

(i) odparovanie sa uskutočnilo na rotačnej odparke vo vákuu a spracovanie sa uskutočnilo po odstránení zvyšných pevných látok, napr. sušením a filtráciou, (ii) odparovanie sa uskutočnilo pri laboratórnej teplote, t. j. v rozmedzí 18 - 25 °C a v atmosfére inertného plynu, napr. argónu, (iii) stĺpcová chromatografia sa uskutočňovala („flash“ spôsobom) a strednotlaková kvapalinová chromatografia (MPLC) sa uskutočňovala so silikagélom značky Merck Kieselgel silica (Art. 9385) alebo Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) silikagél s reverznou fázou zakúpený u E. Merck, Darmstadt, Germany;

(iv) výťažky sú uvedené pre ilustráciu a v žiadnom prípade nemajú ukazovať maximálnu výťažnosť;

(v) teploty topenia nie sú korigované a stanovili sa na automatickom prístroji Mettler SP62 alebo Koffler s ohrevnou doskou, (vi) štruktúry konečných produktov všeobecného vzorca (I) sa potvrdili nukleárnou magnetickou rezonanciou (NMR) (väčšinou vodíkovou) a hmotnostnou spektrometriou; chemický posun pri vodíkových spektrách (NMR) sa meral na stupnici delta a multiplicita píkov sa označila nasledovne: s, singlet; d, dublet; t, triplet; m, multiplet; br, široký; q, kvartet; NMR spektrá sa merali na prístroji 400 MHz pri teplote 24 °C, (vii) medziprodukty sa všeobecne podrobne opísali a čistota sa stanovila pomocou tenkovrstvovej chromatografie (TLC), vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC), infračervenej spektroskopie (IR) alebo NMR;

(viii) a použili sa nasledovné skratky:

DMF - /V,/V-dimetylformamid,

DMSO - dimetylsulfoxid,

THF - tetrahydrofúrán,

TFA - kyselina trifluóroctová,

NMP - l-metyl-2-pyrolidinón.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

TFA (3 ml) sa pridalo do suspenzie 4-(4-bróm-2-fluórfanilino)-7-(l-(/erc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-6-metoxychinazolínu (673 mg, 1,2 mmol) v metylénchloride (10 ml). Po 1 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa odstránili tekuté látky vo vákuu. Zvyšok sa trituroval zmesou vody a éteru. Organická vrstva sa oddelila, vodná vrstva sa znovu premyla éterom, vodná vrstva sa upravila na pH = 10 2 N vodným roztokom hydroxidu sodného. Vodná vrstva sa extrahovala metylénchloridom, organická vrstva sa sušila (MgSO₄) a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Pevná látka sa triturovala zmesou éteru a petroléteru (1/1), filtrovala, premývala éterom a sušila vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín (390 mg, 70,5 %).

MS-ESI: 461-463 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,13-1,3 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,87-2,0 (m, 1H), 2,5 (d, 2H), 3,0 (d, 2H),

3,96 (s, 3H), 3,98 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,5 (dd, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,68 (dd, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 9,55 (br s, 1H)

Elementárna analýza: namerané C 54,5 H 4,9 N 12,1

C₂iH₂₂N₄O₂BrF vypočítané C 54,7 H 4,8 N 12,1 %

Východisková látka sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

Roztok 7-benzyloxy-4-chlór-6-metoxychinazolín-hydrochloridu (8,35 g, 27,8 mmol), (pripravený napr. podľa spôsobu z WO 97/22596, príklad 1. a 4-bróm-2-fluórfluóranilínu (5,65 g, 29,7 mmol) v 2-propanole (200 ml) sa zahrievali pri refluxe počas 4 hodín. Výsledný precipitát sa odfiltroval, premyl 2-propanolom, potom éterom a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 7-benzyloxid-4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxychinazolín-hydrochlorid (9,46 g, 78 %).

’H NMR spektrum: (DMSOde; CD₃COOD) 4,0 (s, 3H), 5,37 (s, 2H), 7,35-7,5 (m, 4H), 7,52-7,62 (m, 4H),

7,8 (d, 1H), 8,14 (9s, 1H), 8,79 (s, 1H) MS - ESI: 456 [MH]⁺ Elementárna analýza: C₂₂H|₇N₃O₂BrF. O,9HC1 namerané C 54,0 H 3,7 N 8,7 vypočítané C 54,2 H 3,7 N 8,6 %

Roztok 7-benzyloxy-4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxychinazolín-hydrochloridu (9,4 g, 19,1 mmol) v TFA (90 ml) sa zahrieval pri refluxe počas 50 minút. Zmes sa nechala ochladiť a naliala sa do ľadu. Výsledný precipitát sa odfiltroval a rozpustil sa v metanole (70 ml). Hodnota pH v roztoku sa upravila na 9-10 koncentrovaným vodným roztokom amoniaku. Zmes sa zahustila odparením na polovičný objem. Výsledný precipitát sa odfiltroval, premyl vodou a éterom a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolín (5,66 g, 82 %).

'H NMR spektrum: (DMSOck CD₃COOD) 3,95 (s, 3H), 7,09 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,79 (s, 1H), 8,31 (s, 1H)

MS - ESI: 366 [MH]⁺

Elementárna analýza: namerané C 49,5 H 3,1 N 11,3

Ci₅HnN₃O2BrF vypočítané C 49,5 H 3,0 N 11,5 %

Pri stálej teplote v rozmedzí 0-5 °C sa po kvapkách pridával roztok di-terc-butyldikarbonátu (41,7 g, 0,19 mol) v etylacetáte (75 ml) do roztoku etyl-4-piperidínkarboxylátu (30 g, 0,19 mol) v etylacetáte (150 ml) ochladenom na teplotu 5 °C. Po 48 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa zmes naliala do vody (300 ml). Organická vrstva sa oddelila, premývala sa postupne vodou (200 ml), 0,1 N vodným roztokom kyseliny chlórvodíkovej (200 ml), nasýteným hydrogenuhličitanom sodným (200 ml) a soľankou (200 ml), sušená (MgSO₄) a odparovaná, pričom sa získal etyl-4-(l-(terc-butoxykarbonyl)piperidín)karboxylát (48 g, 98 %).

Ή NMR spektrum: (CDC1₃) 1,25 (t, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,55-1,70 (m, 2H), 1,8-2,0 (d, 2H), 2,35-2,5 (m, 1H), 2,7-2,95 (t, 2H), 3,9-4,1 (br s, 2H), 4,15 (q, 2H)

Roztok 1 M hydridohlinitanu lítneho v THF (133 ml, 0,133 mol) sa po častiach pridal do roztoku etyl-4-(1-(terc-butoxykarbonyl)piperidín)karboxylátu (48 g, 0,19 mol) v suchom THF (180 ml) ochladenom na teplotu 0 °C. Po 2-hodinovom miešaní pri teplote 0 °C sa pridala voda (30 ml), potom 2 N hydroxid sodný (10 ml). Precipitát sa odstránil filtráciou cez kremičitú hlinku a premýval etylacetátom. Filtrát sa premýval vodou, soľankou, sušil sa (MgSO₄) a odparoval, pričom sa získal l-(terc-butoxykarbonyl)-4-hydroxymetylpiperidín (36,3 g, 89 %).

MS (EI): 215 [MH]⁺ ‘H NMR spektrum: (CDC1₃) 1,05-1,2 (m, 2H), 1,35-1,55 (m, 10H), 1,6-1,8 (m, 2H), 2,6-2,8 (t, 2H), 3,4-3,6 (t, 2H), 4,0-4,2 (br s, 2H)

1,4-Diazabicyklo[2,2,2]oktán (42,2 g, 0,378 mol) sa pridal do roztoku l-(ŕerc-butoxykarbonyl)-4-hydroxymetylpiperidínu (52,5 g, 0,244 mol) v terc-butylmetyléteri (525 ml). Po 15-minútovom miešaní pri laboratórnej teplote sa zmes ochladila na teplotu 5 °C a po častiach v priebehu 2 hodín sa pridával roztok toluénsulfonylchloridu (62,8 g, 0,33 mmol) v íerc-butylmetyléteri (525 ml), pričom sa teplota udržovala pri 0 °C. Po 1 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa pridal petroléter (11) a precipitát sa odstránil filtráciou. Filtrát sa odparoval, pričom sa získala pevná látka, ktorá sa rozpustila v éteri a premývala postupne 0,5 N vodnou kyselinou chlórvodíkovou (2x500 ml), vodou, nasýteným hydrogenuhličitanom sodným a soľankou, sušila sa (MgSO₄) a odparovala, pričom sa získal l-(terc-butoxykarbonyl)-4-(4-metylfenylsulfonyloxymetyl)piperidín (76,7 g, 85 %).

MS (ESI): 392 [MNa]⁺ 'H NMR spektrum: (CDC1₃) 1,0-1,2 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,65 (d, 2H), 1,75-1,9 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,55-2,75 (m, 2H), 3,85 (d, 1H), 4,0-4,2 (br s, 2H), 7,35 (d, 2H), 7,8 (d, 2H)

Uhličitan draselný (414 mg, 3 mmol) sa pridal do suspenzie 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolínu (546 g, 1,5 mmol) v DMF (5 ml). Po 10 minútovom miešaní pri laboratórnej teplote sa pridal l-(/erc-butoxykarbonyl)-4-(4-metylfenylsulfonyloxymetyl)piperidín (636 g, 1,72 mmol) a zmes sa zahrievala pri teplote 95 °C počas 2 hodín. Po ochladení sa zmes naliala do studenej vody (20 ml). Precipitát sa spojil filtráciou, premýval vodou a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-7-(l-(terc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-6-metoxychinazolín (665 g, 79 %).

MS-ESI: 561-563 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOde) 1,15-1,3 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,8 (d, 2H), 2,0-2,1 (m, 1H), 2,65-2,9 (m, 2H),

3,95 (s, 3H), 4,02 (br s 2H), 4,05 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,55 (br s, 1H)

Príklad 2a

Roztok 37 % vodného formaldehydu (50 μΐ, 0,6 mmol) a následne kyanoborohydridu sodného (23 mg, 0,36 mmol) sa pridal do roztoku 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolínu (139 mg, 0,3 mmol), (pripraveného podľa spôsobu z príkladu 1), v zmesi THF a metanolu (1,4 ml/1,4 ml). Po 1 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa pridala voda a tekuté látky sa odstránili vo vákuu. Zvyšok sa trituroval vodou, filtroval, premýval vodou a sušil sa vo vákuu. Pevná látka sa čistila chromatografiou na neutrálnej alumíne v systéme metylénchlorid, potom zmesou metylénchloridu a etylacetátu (1/1), potom zmesou metylénchloridu, etylacetátu a metanolu (50/45/5). Frakcie obsahujúce očakávaný produkt sa odparovali vo vákuu a výsledná pevná biela látka sa rozpustila v zmesi metylénchloridu a metanolu (3 ml/3 ml) a pridal sa 3 N chlórvodík v éteri (0,5 ml). Tekuté látky sa odstránili vo vákuu, pevná látka sa triturovala éterom, filtrovala, premývala éterom a sušila sa vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín-hydrochlorid (120 mg, 69 %). MS - ESI: 475-477 [MH]⁺

NMR spektrum protónovanej formy 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín-hydrochloridu vykazovalo prítomnosť dvoch foriem A a B v pomere A : B približne 9:1. ’H NMR spektrum: (DMSOde; CF₃COOD) 1,55-1,7 (m, forma A 2H), 1,85-2,0 (m, forma B 15 4H), 2,03 (d, forma A 2H), 2,08-2,14 (br s, forma A 1H), 2,31-2,38 (br s, forma B 1H), 2,79 (s, forma A 3H), 2,82 (s, forma B 3H), 3,03 (t, forma A 2H), 3,21 (br s, forma B 2H), 3,30 (br s, forma B 2H), 3,52 (d, forma A 2H), 4,02 (s, 3H), 4,12 (d, forma A 2H), 4,30 (d, forma B 2H), 7,41 (s, 1H), 7,5-7,65 (m, 2H), 7,81 (d, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,88 (s, 1H)

Elementárna analýza: namerané C 46,0 H 5,2 N 9,6

C₂₂H₂₄N₄O₂BrF 0,3.H₂O 2,65 HCl vypočítané C 45,8 H 4,8 N 9,7 %

Príklad 2b % vodný formaldehyd (3,5 ml, 42 mmol) sa pridal do roztoku 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-7-(l-(terc-butoxykarbonyl)-piperid-4-ylmetoxy)-6-metoxychinazolínu (3,49 g, 6,22 mmol), (pripraveného podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 1), v kyseline mravčej (35 ml). Po zahriatí pri teplote 95 °C počas 4 hodín sa tekuté látky odstránili vo vákuu. Zvyšok sa suspendoval vo vode a zmes sa upravila na pH = 10,5 pomalým pridaním roztoku 2 N hydroxidu sodného. Suspenzia sa extrahovala etylacetátom, organická vrstva sa premývala soľankou, sušila sa MgSO₄ a odparovala, pričom sa získal 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín (2,61 g, 88 %).

MS - ESI: 475-477 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,95 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,85 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,05 (d, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,5 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,81 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 9,54 (s, 1H)

Elementárna analýza: namerané C 55,4 H 5,1 N 11,6

C₂₂H₂₄N₄O₂BrF vypočítané C 55,6 H 5,1 N 11,8 %

Príklad 2c

Suspenzia 4-chlór-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínu (200 mg, 0,62 mmol) a 4-bromo-2-fluórfluóranilínu (142 mg, 0,74 mmol) v izopropanole (3 ml) obsahujúcom 6 N chlórvodík v izopropanole (110 μΐ, 0,68 ml) sa zahrievala pri refluxe počas 1,5-hodiny. Po ochladení sa precipitát spojil filtráciou, premýval sa izopropanolom, potom éterom a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín-hydrochlorid (304 mg, 90 %). Elementárna analýza: namerané C 47,9 H 4,9 N 10,0

C₂₂H₂₄N₄O₂BrF 0,5 H₂O 1,8 HCl vypočítané C 48,2 H 5,0 N 10,1 %

0,08 izopropanol

NMR spektrum protónovanej formy 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxyjchinazolín-hydrochloridu vykazovalo prítomnosť dvoch foriem A a B v pomere A : B približne 9:1. ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,6-1,78 (m, forma A 2H), 1,81-1,93 (br s, forma B 4H), 1,94-2,07 (d, forma A 2H), 2,08-2,23 (br s, forma A 1H), 2,29-2,37 (br s, forma B 1H), 2,73 (d, forma A 3H), 2,77 (d, forma B 3H), 2,93-3,10 (q, forma A 2H), 3,21 (br s, forma B 2H), 3,27 (br s, forma B 2H), 3,42-3,48 (d, forma A 2H), 4,04 (s, 3H), 4,10 (d, forma A 2H), 4,29 (d, forma B 2H), 7,49 (s, 1H), 7,53-7,61 (m, 2H), 7,78 (d, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 10,48 (br s, forma A 1H), 10,79 (br s, forma B 1H), 11,90 (br s, 1H)

Pri ďalšom meraní NMR sa do roztoku DMSO 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín-hydrochloridu už opísaného, pridal uhličitan draselný, aby sa uvoľnila voľná báza v NMR kyvete. Potom sa NMR spektrum zmeralo znova a vykazovalo prítomnosť iba jednej formy: ’H NMR spektrum: (DMSOd₆; pevný uhličitan draselný) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,89 (t, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,75 (s, 1H)

Vzorka 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(1 -metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínu (voľná báza) sa pripravila zo 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínhydrochlorídu (pripraveného podľa už skôr uvedeného spôsobu), nasledovne:

4-(4-bróm-2-fluórfhióranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín-hydrochlorid (50 mg) sa suspendoval v metylénchloride (2 ml) a premýval nasýteným hydrogenuhličitanom sodným. Metylénchloridový roztok sa sušil (MgSO₄) a tekuté látky sa odstránili odparením, pričom sa získal 4-(4-bróm-2-fluórfluóramlino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín (voľná báza). Týmto spôsobom vytvorená voľná báza vykazovala pri NMR prítomnosť iba jednej formy:

'H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,76 (d, 2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,68 (dd, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 9,55 (br s, 1H)

Pri ďalšom meraní NMR sa do DMSO roztoku 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chmazolínu (voľná báza) už opísaného, pridala CF₃COOD a NMR spektrum sa znovu zmeralo. Týmto spôsobom získané spektrum protónovanej formy triíluórfluóroctovej soli 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chmazolmu vykazovalo prítomnosť dvoch foriem A a B v pomere A : B približne 9:1.

'H NMR spektrum: (DMSOd_ä; CF₃COOD) 1,5-1,7 (m, forma A 2H), 1,93 (br s, forma B 4H), 2,0-2,1 (d, forma A 2H), 2,17 (br s, forma A 1H), 2,35 (br s, forma B 1H), 2,71 (s, forma A 3H), 2,73 (s, forma B 3H), 2,97-3,09 (t, forma A 2H), 3,23 (br s, forma B 2H), 3,34 (br s, forma B 2H), 3,47-3,57 (d, forma A 2H), 4,02 (s, 3H), 4,15 (d, forma A 2H), 4,30 (d, forma B 2H), 7,2 (s, 1H), 7,3-7,5 (m, 2H), 7,6 (d, 1H), 7,9 (s, 1H), 8,7 (s, 1H)

Východisková látka sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

l-(terc-Butoxykarbonyl)-4-(4-metylfenylsulfonyloxymetyl)piperidín (40 g, 0,11 mol), (pripravený spôsobom pre východiskovú látku z príkladu 1), sa pridal do suspenzie etyl-4-hydroxy-3-metoxybenzoátu (19,6 g, 0,1 mol) a uhličitanu draselného (28 g, 0,2 mol) v suchom DMF (200 ml). Po 2,5-hodinovom miešam pri teplote 95 °C sa zmes ochladila na laboratórnu teplotu a rozdelila sa medzi vodu a zmes etylacetátu a éteru. Organická vrstva sa premyla vodou, soľankou, sušila sa (MgSO₄) a odparovala sa. Výsledný olej sa kryštalizoval z petroléteru a suspenzia sa nechala cez noc pri teplote 5 °C. Pevná látka sa spojila filtráciou, premývala petroléterom a sušila sa vo vákuu, pričom sa získal etyl-4-(l-ŕerc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy-3-metoxybenzoát (35 g, 89 %).

Teplota topenia: 81 - 83 °C

MS (ESI): 416 [MNa]⁺ *H NMR spektrum: (CDC1₃) 1,2-1,35 (m, 2H), 1,4 (t, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,8-1,9 (d, 2H), 2,0-2,15 (m, 2H),

2,75 (t, 2H), 3,9 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,05-4,25 (br s, 2H), 4,35 (q, 2H), 6,85 (d, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,65 (d, 1H)

Elementárna analýza: namerané C 63,4 H 8,0 N 3,5

C_2IH_3INO₆O,3 H₂O vypočítané C 63,2 H 8,0 N 3,5 %

Formaldehyd (12 M, 37% vo vode, 35 ml, 420 mmol) sa pridal do roztoku etyl-4-(l-(ŕerc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-3-metoxybenzoátu (35 g, 89 mmol) v kyseline mravčej (35 ml). Po 3-hodinovom miešaní pri teplote 95 °C sa tekuté látky odstránili odparením. Zvyšok sa rozpustil v metylénchloride a pridal sa 3 M chlórvodík v éteri (40 ml, 120 mmol). Po zriedení éterom sa zmes triturovala, kým sa nevytvorila pevná látka, ktorá sa spojila filtráciou, premývala sa éterom a sušila vo vákuu cez noc pri teplote 50 °C, pričom sa získal etyl-3-metoxy-4-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)benzoát(30,6 g, kvánt.).

MS (ESI): 308 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,29 (t, 3H), 1,5-1,7 (m, 2H), 1,95 (d, 2H), 2,0-2,15 (br s, 1H), 2,72 (s, 3H), 2,9-3,1 (m, 2H), 3,35-3,5 (br s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,9-4,05 (br s, 2H), 4,3 (q, 2H), 7,1 (d, 1H), 7,48 (s, 1H),

7,6 (d, 1H)

Roztok etyl-3-metoxy-4-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)benzoátu (30,6 g, 89 mmol) v metylénchloride (75 ml) sa ochladil na teplotu 0-5 °C. Pridala sa TFA (37,5 ml), potom sa po kvapkách počas 15 minút pridávala 24 N kyselina dusičná (7,42 ml, 178 mmol) v metylénchloride (15 ml). Po pridaní sa roztok nechal ohriať a miešal sa pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Tekuté látky sa odstránili vo vákuu a zvyšok sa rozpustil v metylénchloride (50 ml). Roztok sa ochladil na teplotu 0-5 °C a pridal sa éter. Precipitát sa spojil filtráciou, sušil sa vo vákuu pri teplote 50 °C. Pevná látka sa rozpustila v metylénchloride (500 ml) a pridal sa 3 M chlórvodík v éteri (30 ml), potom éter (500 ml). Pevná látka sa spojila filtráciou a sušila vo vákuu pri teplote 50 °C, pričom sa získal etyl-3-metoxy-4-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-6-nitrobenzoát (28,4 g, 82 %). MS (ESI): 353 [MH]⁺

Ή NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3 (t, 3H), 1,45-1,65 (m, 2H), 1,75-2,1 (m, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,9-3,05 (m, 2H), 3,4-3,5 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,05 (d, 2H), 4,3 (q, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,66 (s, 1H)

Suspenzia etyl-3-metoxy-4-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-6-nitrobenzoát (3,89 g, 10 mmol) v metanole (80 ml) obsahujúca 10 % platinu na aktívnom uhlí (50 % vlhkosť) (389 mg) sa hydrogenovala pri tlaku 1,8 atm., pokiaľ sa neskončila absorpcia vodíka. Zmes sa zriedila zmesou etylacetátu a vody (1/1) a organická vrstva sa separovala. Vodná vrstva sa ďalej extrahovala zmesou etylacetátu a éteru a organické fázy sa spojili, premývali vodou, soľankou, sušili sa (MgSO₄), filtrovali a odparovali. Výsledná pevná látka sa triturovala v zmesi éter/petroléter, filtrovala, premývala petroléterom a sušila sa vo vákuu pri teplote 60 °C, pričom sa získal etyl-6-amino-3-metoxy-4-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)benzoát (2,58 g, 80 %).

Teplota topenia: 111 - 112 °C MS (ESI): 323 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (CDC1₃) 1,35 (t, 3H), 1,4-1,5 (m, 2H), 1,85 (m, 3H), 1,95 (t, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,9 (d,

2H), 3,8 (s, 3H), 3,85 (d, 2H), 4,3 (q, 2H), 5,55 (br s, 2H), 6,13 (s, 1H), 7,33 (s, 1H)

Elementárna analýza: namerané C 62,8 H 8,5 N 8,3

C₁₇H₂₆N₂O₄O,2 H₂O vypočítané C 62,6 H 8,2 N 8,6 %

Roztok etyl-6-amino-3-metoxy-4-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)benzoátu (16,1 g, 50 mmol) v 2-metoxyetanole (160 ml) obsahujúci formamidín-acetát (5,2 g, 50 mmol) sa zahrieval pri teplote 115 °C počas 2 hodín. Potom sa po častiach v priebehu 4 hodín pridával formamidín-acetát (10,4 g, 100 mmol). Po ochladení sa tekuté látky odstránili vo vákuu, pevná látka sa rozpustila v etanole (100 ml) a metylénchloride (50 ml). Precipitát sa odstránil filtráciou a filtrát sa koncentroval na konečný objem 100 ml. Suspenzia sa ochladila na teplotu 5 °C a pevná látka sa spojila filtráciou, premývala studeným etanolom, potom éterom a sušila sa cez noc pri teplote 60 °C, pričom sa získal 6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón (12,7 g, 70 %).

MS (ESI): 304 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOd«) 1,25-1,4 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,9 (t, 1H), 1,9 (s, 3H), 2,16 (s, 2H), 2,8 (d, 2H), 3,9 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,97 (s, 1H)

Roztok 6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-ónu (2,8 g, 9,24 mmol) v tionylchloride (28 ml) obsahujúcom DMF (280 pl) sa zahrieval pri refluxe 85 °C počas 1 hodiny. Po ochladení sa tekuté látky odstránili odparením. Precipitát sa trituroval éterom, filtroval, premýval éterom a sušil vo vákuu. Pevná látka sa rozpustila v metylénchloride a pridal sa nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva sa separovala, premývala vodou, soľankou, sušila sa (MgSO₄) a odparovala sa, pričom sa získal 4-chlór-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín (2,9 g, 98 %).

MS (ESI): 322 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3-1,5 (m, 2H), 1,75-1,9 (m, 3H), 2,0 (t, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,85 (d, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,12 (d, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 8,9 (s, ÍH)

Alebo sa 6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón môže pripraviť nasledovne:

Hydrid sodný (1,44 g zo 60 % suspenzie v minerálnom oleji, 36 mmol) sa v priebehu 20 minút po častiach pridával do roztoku 7-benzyloxy-6-metoxy-3,4-dihydrochinazolin-4-ónu (8,46 g, 30 mmol), (pripravený napríklad podľa spôsobu z WO 97/22596, príklad 1), v DMF (70 ml) a zmes sa miešala počas 1,5-hodiny. Po častiach sa pridával chlormetylpivalát (5,65 g, 37,5 mmol) a zmes sa miešala počas 2 hodín pri laboratórnej teplote, zriedila etylacetátom (100 ml) a naliala sa do ľadu s vodou (400 ml) a 2 N kyseliny chlórvodíkovej (4 ml). Organická vrstva sa separovala a vodná vrstva sa extrahovala etylacetátom. Spojené extrakty sa premývali soľankou, sušili sa (MgSO₄) a rozpúšťadlo sa odstránilo odparením. Zvyšok sa trituroval zmesou éteru a petroléteru. Pevná látka sa spojila filtráciou a sušila sa vo vákuu, pričom sa získal 7-benzyloxy-6-metoxy-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón (10 g, 84 %).

’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,11 (s, 9H), 3,89 (s, 3H), 5,3 (s, 2H), 5,9 (s, 2H), 7,27 (s, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,47 (t, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,51 (s, 1H), 8,34 (s, 1H)

Zmes 7-benzyloxy-6-metoxy-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ónu (7 g, 17,7 mmol) a 10 % paládia na aktívnom uhlí (700 mg) v etylacetáte (250 ml), DMF (50 ml), metanole (50 ml) a kyseline octovej (0,7 ml) sa miešala pod atmosférou vodíka počas 40 minút. Katalyzátor sa odstránil filtráciou a rozpúšťadlo z filtrátu odparením. Zvyšok sa trituroval éterom, spojil filtráciou a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 7-hydroxy-6-metoxy-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón (4,36 g, 80 %). ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,1 (s, 9H), 3,89 (s, 3H), 5,89 (s, 2H), 7,0 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 8,5 (s, 1H).

Trifenylfosfín (1,7 g, 6,5 mmol) sa v atmosfére dusíka pridal do suspenzie 7-hydroxy-6-metoxy-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ónu (1,53 g, 5 mmol) v metylénchloride (20 ml), potom sa pridal l-terc-butoxykarbonyl-4-(hydroxymetyl)piperidín (1,29 g, 6 mmol), (pripravený podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 1) a roztok dietylazodikarboxylátu (1,13 g, 6,5 mmol) v metylénchloride (5 ml). Po 30 minútovom miešaní pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes naniesla na stĺpec silikagélu a eluovala sa systémom etylacetát/petroléter (1/1, potom 6/5, 6/4 a 7/3). Odparením frakcií obsahujúcich očakávaný produkt sa získal olej, ktorý po triturácii pentánom kryštalizoval. Pevná látka sa spojila filtráciou a sušila sa vo vákuu, pričom sa získal 7-(l-(ŕerc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-6-metoxy-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón (232 g, 92 %).

MS - ESI: 526 [MNa]⁺ ’H NMR spektrum: (CDC1₃) 1,20 (s, 9H), 1,2-1,35 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,87 (d, 2H), 2,05-2,2 (m, 1H), 2,75 (t, 2H), 3,96 (d, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,1-4,25 (br s, 2H), 5,95 (s, 2H), 7,07 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 8,17 (s, 1H) Elementárna analýza: namerané C61,8H7,5N8,3

C₂₆H₃₇N₃O₇ vypočítané C 62,0 H 7,4 N 8,3 %

Roztok 7-(l-(terc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-6-metoxy-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ónu (2,32 g, 4,6 mmol) v metylénchloride (23 ml) obsahujúcom TFA (5 ml) sa miešal pri laboratórnej teplote počas 1 hodiny a tekuté látky sa odstránili vo vákuu. Zvyšok sa rozdelil medzi vrstvu etylacetátu a hydrogenuhličitanu sodného. Organické rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu a zvyšok sa filtroval, pre cipitát sa premýval vodou a sušil vo vákuu, pevná látka sa azeotropicky destilovala s toluénom a sušila vo vákuu, pričom sa získal 6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón(l,4 g, 92%).

MS - ESI: 404 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOde; CF₃COOD) 1,15 (s, 9H), 1,45-1,6 (m, 2H), 1,95 (d, 2H), 2,1-2,25 (m, 1H),

2,95 (t, 2H), 3,35 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,1 (d, 2H), 5,95 (s, 2H), 7,23 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 8,45 (s, 1H) % vodný roztok formaldehydu (501 μΐ, 6 mmol), potom kyanochlorid sodný (228 mg, 3,6 mmol) sa po častiach pridával do roztoku 6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ónu (1,21 g, 3 mmol) v zmesi THF a metanolu (10 ml/10 ml). Po 30 minútovom miešaní pri laboratórnej teplote sa organické rozpúšťadlá odstránili vo vákuu a zvyšok sa rozdelil medzi vrstvu metylénchloridu a vody. Organická vrstva sa separovala, premývala vodou a soľankou, sušila (MgSO₄) a tekuté látky sa odstránili odparením. Zvyšok sa trituroval éterom a výsledná pevná látka sa spojila filtráciou, premývala éterom a sušila sa vo vákuu, pričom sa získal 6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón (1,02 g, 82 %).

MS-ESI: 418 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (CDC1₃) 1,19 (s, 9H), 1,4-1,55 (m, 2H), 1,9 (d, 2H), 2,0 (t, 2H), 1,85-2,1 (m, 1H), 2,3 (s, 3H), 2,92 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,99 (d, 2H), 5,94 (s, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 8,17 (s, 1H)

Nasýtený roztok amoniaku v metanole (14 ml) sa pridal do roztoku 6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-3-((pivaloyloxy)metyl)-3,4-dihydrochinazolin-4-ónu (1,38 g, 3,3 mmol) v metanole (5 ml). Po 20 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa suspenzia zriedila metylénchloridom (10 ml) a roztok sa filtroval, filtrát sa odparoval vo vákuu a zvyšok sa trituroval éterom, odfiltroval a sušil vo vákuu, pričom sa získal 6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)-3,4-dihydrochinazolin-4-ón (914 mg, 83 %).

MS - ESI: 304 [MH]⁺ ’HNMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,7-1,85 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,9 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,13 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,99 (s, 1H)

Príklad 3 a

3,5 M roztok chlórvodíka v etanole (75 μΐ, 0,26 mmol) sa pridal do suspenzie 4-chlór-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínu (80 mg, 0,25 mmol), (pripraveného podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 2c), v izopropanole (3 ml). Zmes sa zahrievala na teplotu 50 °C a pridal sa 4-chlór-2-fluórfluóranilín (44 mg, 0,3 mmol). Zmes sa zahrievala pri refluxe počas 30 minút, potom po ochladení sa zriedila éterom (3 ml). Precipitát sa spojil filtráciou, premýval éterom a sušil vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín-hydrochlorid (105 mg, 82 %). MS (ESI): 431-433 [MH]⁺

NMR spektrum protónovanej formy 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxyjchinazolín-hydrochloridu vykazovalo prítomnosť dvoch foriem A a B v pomere A : B približne 9:1. 'H NMR spektrum: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,55-1,7 (m, forma A 2H), 1,85-2,0 (m, forma B 4H), 2,05 (d, forma A 2H), 2,1-2,2 (m, forma A 1H), 2,35 (s, 3H), 2,79 (s, forma A 3H), 2,82 (s, forma B 3H), 3,03 (t, forma A 2H), 3,2-3,3 (m, forma B 2H), 3,3-3,4 (m, forma B 2H), 3,52 (d, forma A 2H), 4,02 (s, 3H), 4,13 (d, forma A 2H), 4,3 (d, forma B 2H), 7,41 (s, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,63 (t, 1H), 7,69 (dd, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,88 (s, 1H) Elementárna analýza: namerané C 51,8 H 5,6 N 10,9

C₂₂H₂4N₄O₂C1F 0,4H₂O 2HC1 vypočítané C 51,7 H 5,3 N 11,0 %

Príklad 3b

Alternatívny spôsob prípravy je nasledujúci:

Trifenylfosfín (615 mg, 2,3 mmol) nasledovaný dietylazodikarboxylátom (369 μΐ, 2,3 mmol) sa pridávali do roztoku 4-hydroxymetyl-l-metylpiperidínu (151 mg, 1,1 mmol), (J. Med. Chem. 1973, 16, 156) 4-(4-chloro-2-fluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metylchinazolínu (250 mg, 0,78 mmol), (pripravený podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 7), v metylénchloride (5 ml). Po 30 minútach miešania pri laboratórnej teplote sa pridal 4-hydroxymetyl-l-metylpiperidín (51 mg, 0,39 mmol), trifenylfosfín (102 mg, 0,39 mmol) a dietylazodikarboxylát (61 μΐ, 0,39 mmol) Po 15 minútovom miešaní sa tekuté podiely odstránili vo vákuu a zvyšok sa čistil stĺpcovou chromatografiou so zmesou metylénchloridu, acetonitrilu a metanolu (70/10/20, potom 75/5/20 a 80/0/20) ako mobilnej fázy. Frakcie obsahujúce očakávaný produkt sa spojili a tekuté látky sa odstránili. Zvyšok sa rozpustil v zmesi metylénchloridu a metanolu a pridal sa 5 M roztok chlórvodíka v izopropanole. Suspenzia sa koncentrovala a pevná látka sa spojila filtráciou, premývala éterom a sušila vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínhydrochlorid (16 mg, 4 %).

Príklad 4

V atmosfére argónu sa do roztoku 4-bróm-2,6-difluórfluóranilínu (1,67 g, 8,08 mmol) v DMF pridal hydrid sodný (60 %, 372 mg, 9,3 mmol). Po 30-minútovom miešaní pri laboratórnej teplote sa pridal 4-chlo-ro6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín (1,3 g, 4,04 mmol) a v miešaní sa pokračovalo ďalších 20 hodín. Zmes sa naliala do vody (130 ml) a extrahovala etylacetátom. Organické vrstvy sa premývali vodou, soľankou, sušili sa (MgSO₄) a tekuté látky sa odstránili odparením. Zvyšok sa čistil stĺpcovou chromatografiou na silikagéli zmesou metylénchloridu a metanolu (95/5), potom metylénchloridu a metanolu v prítomnosti amoniaku (1 %) (90/10) ako mobilnej fázy. Frakcie obsahujúce očakávaný produkt sa spojili a odparili. Zvyšok sa trituroval éterom, spojil filtráciou, premýval éterom a sušil vo vákuu pri teplote 50 °C, pričom sa získal 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilmo)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín (1,4 g, 70 %).

MS - ESI: 493-495 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (d, 2H), 7,2 (s, ÍH), 7,63 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,35 (s, 1H) Elementárna analýza: namerané C 53,8 H 4,8 N 11,3

C₂₂H₂₃N₄O₂BrF₂ vypočítané C 53,6 H 4,7 N 11,4 %

Príklad 5

Podľa analogického postupu ako v príklade 4 sa 4,4-chlór-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín (246 mg, 0,764 mmol), (pripravený, ako je opísané pre východiskovú látku z príkladu 2c) nechal reagovať so 4-chlór-2,6-difluórfluóranilínom (250 mg, 1,53 mmol), (pozri WO 97/30035 príklad 15), v DMF (9 ml) a v prítomnosti hydridu sodného (60 %, 76,5 mg, 1,9 mmol), pričom sa získal 4-(4-chlór-2,6-difluorofluóranilmo)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolín (210 mg, 61 %).

MS-ESI: 449-451 [MH]⁺ *H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,02 (d, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 8,35 (s, 1H) Elementárna analýza: namerané C 59,0 H 5,3 N 12,5

C₂₂H₂₃N₄O₂BrF₂ vypočítané C 58,9 H 5,2 N 12,5 %

Východisková látka sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

4-Chlór-2,6-difluórfluóranilín-hydrochlorid (pozri WO 97/30035 príklad 15) sa rozdelil medzi vrstvu metylénchloridu a vody. Potom sa pridával hydrogenuhličitan sodný, pokiaľ pH vodnej vrstvy nebolo približne

9. Organická vrstva sa oddelila, premývala soľankou, sušila (MgSO₄) a odparovala, pričom sa získala voľná báza 4-chlór-2,6-difluórfluóranilínu.

Príklad 6

Suspenzia 4-chlór-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínu (200 mg, 0,622 mmol), (pripravený podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 2c) a 2-fluórfluór-4-metylanilín (94 mg, 0,764 mmol) v izopropanole (5 ml) obsahujúcom 6,2 M roztok chlórvodíka v izopropanole (110 μ) sa miešala pri teplote 80 °C počas 1,5-hodiny. Po ochladení sa precipitát spojil filtráciou, premýval izopropanolom, potom éterom a sušil vo vákuu. Pevná látka sa čistila stĺpcovou chromatografiou zmesou metylénchloridu a metanolu (90/10), potom 5 % amoniakom v zmesi metylénchloridu a metanolu (90/10) ako mobilnou fázou. Odparením frakcií obsahujúcich očakávaný produkt sa získal 4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chmazolín (170 mg, 61 %).

MS-ESI: 411 [MH]⁺ ‘H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,3-1,45 (m, 2H), 1,8 (d, 2H), 1,7-1,9 (m, 1H), 1,9 (t, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,8 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,01 (d, 2H), 7,1 (d, 1H), 7,13 (d, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,4 (t, 1H), 7,81 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 9,4 (s, 1H)

Elementárna analýza: namerané C 66,5 H 6,7 N 13,7

C₂₃H₂₇N₄O₂F 0,3H₂O vypočítané C 66,4 H 6,7 N 13,5 %

Príklad 7 l-7erc-butoxykarbonyl-4-hydroxymetylpiperidín (590 mg, 2,75 mmol), (pripravený podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 1), potom trifenylfosfín (1,2 g, 4,58 mmol) a dietylazodikarboxylát (0,72 ml, 4,58 mmol) sa pridali do roztoku 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolínu (585 mg, 1,83 mmol) v metylénchloride (20 ml). Po 1 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa pridával ďalší trifenylfosfín (239 g, 0,91 mmol) a dietylazodikarboxylát (0,14 ml, 0,91 mmol). Po 1,5-hodinovom miešaní sa tekuté látky odstránili vo vákuu a zvyšok sa čistil stĺpcovou chromatografiou zmesou etylacetátu a metylénchloridu (1/1) ako mobilnej fázy. Surový produkt sa použil priamo v nasledujúcom kroku. Roztok surového produktu v metylénchloride (15 ml) obsahujúcom TFA (4,5 ml) sa miešal pri laboratórnej teplote 1,5-hodiny. Tekuté látky sa odstránili vo vákuu. Zvyšok sa rozdelil medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa upravila na pH = 9 2 N hydroxidom sodným. Organická fáza sa oddelila, premývala vodou, potom soľankou, sušila (MgSO₄) a rozpúšťadlá sa odparili, pričom sa získal 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín.

MS - ESI: 417-419 [MH]⁺ ‘H NMR spektrum: (DMSOde) 1,1-1,3 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,85-2,0 (br s, 1H), 2,55 (d, 2H), 2,95 (d, 2H),

3,95 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,35 (dd, 1H), 7,55 (dd, 1H), 7,6 (t, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,55 (s, 1H)

Hydrochloridová soľ sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

4-(4-Chlór-2-fluórfluóramlmo)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín sa rozpustil v zmesi metanolu a metylénchloridu a pridal sa 6 M roztok chlórvodíka v éteri. Tekuté látky sa odstránia vo vákuu. Zvyšok sa trituroval éterom, spojil filtráciou, premýval éterom a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chmazolín-hydrochlorid (390 mg, 47 % po 2 stupňoch).

Elementárna analýza: namerané C 50,4 H 5,2 N 11,0

C₂,H₂₂N₄C1F 2,25 HCI vypočítané C 50,6 H 4,9 N 11,2 %

Východisková látka sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

Roztok 7-benzyloxy-4-chlór-6-metoxychinazolín-hydrochloridu (1,2 g, 4 mmol), (pripravený podľa WO 97/22596 príklad 1) a 4-chlór-2-fluóranilínu (444 μΐ, 4 mmol) v 2-propanole (40 ml) sa zahrievali pri refluxe 1,5-hodiny. Po ochladení sa precipitát odfiltroval, premýval 2-propanolom, potom éterom a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 7-benzyloxy-4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxychinazolín-hydrochlorid (1,13 g, 64 %).

Teplota topenia: 239-242 °C 'H NMR spektrum: (DMSOd₆) 4,0 (s, 3H), 5,36 (s, 2H), 7,39-7,52 (m, 9H), 8,1 (s, 1H), 8,75 (s, 1H) MS-ESI: 410 [MH]⁺

Elementárna analýza: namerané C 59,2 H 4,3 N 9,4

C₂₂H₁₇N₃O₂C1F 1HC1 vypočítané C 59,2 H 4,1 N 9,4 %

Roztok 7-benzyloxy-4-(4-chlór-2-fluóranilino)-6-metoxychinazolín-hydrochloridu (892 mg, 2 mmol) v TFA (10 ml) sa zahrieval do refluxu počas 50 minút. Po ochladení sa zmes naliala do ľadu, precipitát sa spojil filtráciou, rozpustil v metanole (10 ml) a alkalizoval na pH =11 vodným roztokom amoniaku. Po zahustení odparením sa tuhý produkt odfiltroval, premýval vodou, potom éterom a sušil sa vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-chlór-2-fluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolín vo forme žltej pevnej látky (460 mg, 72 %). Teplota topenia: 141 - 143 °C MS - ESI: 320-322 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H), 7,05 (s, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,54-7,59 (m, 2H), 7,78 (s, 1H), 8,29 (s, 1H)

Príklad 8

Suspenzia 7-( 1 -(/erc-butoxykarbonyl)-piperid-4-ylmetoxy)-4-(2-fluór-4-metylanilino)-6-metoxychinazilínu (318 mg, 0,64 mmol) v metylénchloride (5 ml) obsahujúcim TFA (2,5 ml) sa miešala pri laboratórnej teplote 2 hodiny, tekuté látky sa odstránili vo vákuu a zvyšok sa miešal v zmesi metylénchloridu a vody. Vodná vrstva sa upravila na pH = 10 - 11. Organická vrstva sa separovala, premývala vodou, soľankou, sušila (MgSO₄) a tekuté látky sa odparili vo vákuu, pričom sa získal 4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolin (220 mg, 87 %).

MS - ESI: 397 [MH]⁺ *H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,85-2,0 (m, 1H), 2,4 (s, 3H), 3,0 (d, 2H), 3,3-3,4 (d, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,04 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,4 (t, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 9,4 (s, 1H)

Východisková látka sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

Podľa podobného spôsobu ako v príklade 6 sa 7-benzyloxy-4-chlór-6-metoxychinazolm-hydrochlorid (1,55 g, 5,15 mmol), (pripravený napríklad podľa spôsobu WO 97/22596, príklad 1), použil v reakcii s 2-fluórfluór-4-metylanilínom (700 mg, 5,67 mmol) v izopropanole (90 ml) obsahujúcom 6,2 M roztok chlórvodíka v izopropanole (80 μΐ, 0,51 mmol), pričom sa získal 7-benzyloxy-4-(2-fluórfluór-4-metylanilmo)-6-metoxychinazolín-hydrochlorid (2 g, 91 %)

MS - ESI: 390 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOcT) 2,4 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 7,15 (d, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,35-7,6 (m, 7H), 8,3 (s, 1H), 8,78 (s, 1H)

Roztok 7-benzyloxy-4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-6-metoxychinazolín-hydrochloridu (2 g, 4,7 mmol) v TFA (20 ml) sa zahrieval pri teplote 80 °C počas 5 hodín a potom sa miešal pri laboratórnej teplote cez noc. Tekuté látky sa odparili vo vákuu a zvyšok sa suspendoval vo vode (50 ml). Tuhý hydrogenuhličitan sodný sa pridával, pokiaľ sa pH neupravilo približne na hodnotu 7. Precipitát sa potom odfiltroval, premýval vodou a sušil vo vákuu. Tuhá látka sa čistila stĺpcovou chromatografiou v zmesi metanolu a metylénchloridu (5/95) ako mobilnej fázy. Po odparení rozpúšťadla sa pevná látka triturovala éterom a sušila vo vákuu, pričom sa získal 4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolm (1,04 g, 74 %).

MS - ESI: 300 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOdJ 2,4 (s, 3H), 4,0 (s, 3H), 7,15 (d, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,41 (t, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,7 (s, 1H), 11,0 (s, 1H), 11,5-11,8 (br s, 1H)

Do suspenzie 4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-7-hydroxy-6-metoxychmazolínu (1 g, 3,34 mmol) v metylénchloride (10 ml) ochladenej na teplotu 0 °C sa pridal trifenylfosfín (2,19 g, 8,36 mmol), potom l-(terc-butoxykarbonyl)-4-hydroxymetylpiperidín (1,08 g, 5,01 mmol), (pripravený podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 1) a dietylazodikarboxylát (1,31 ml, 8,36 mmol). Po 2 hodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa tekuté látky odstránili vo vákuu. Zvyšok sa čistil stĺpcovou chromatografiou zmesou metylénchloridu a metanolu (2/98) ako mobilnej fázy. Po odparení rozpúšťadla sa zvyšok trituroval éterom, odfiltroval, premýval éterom a sušil vo vákuu, pričom sa získal 7-(l-(terc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-6-metoxychinazolín (327 g, 20 %).

MS - ESI: 497 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,8 (d, 2H), 2,0-2,1 (m, 1H), 2,4 (s, 3H), 2,75-2,9 (br s, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,0 (br s, 2H), 4,05 (d, 2H), 7,1 (d, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,2 (s, 1H), 7,4 (t, 1H), 7,85 (t, 1H), 8,32 (s, 1H), 9,45 (s, 1H)

Príklad 9

Roztok 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-7-(l-(terc-butoxykarbonyl)-piperid-4-ylmetoxy)-6-metoxychinazilínu (578 mg, 1 mmol) v metylénchloride (10 ml) obsahujúcim TFA (4 ml) sa miešala pri laboratórnej teplote 2 hodiny. Tekuté látky sa odstránili vo vákuu a zvyšok sa suspendoval vo vode. Vodná vrstva sa upravila približne na hodnotu pH = 10 a extrahovala s metylénchloridom. Organická vrstva sa premývala vodou, soľankou, sušila (MgSO₄) a tekuté látky sa odparili vo vákuu. Zvyšok sa trituroval éterom a sušil vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín (110 mg, 23 %).

MS-ESI: 479-481 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,85-2,0 (br s, 1H), 2,5 (d, 2H), 3,0 (d, 2H),

3,97 (s, 3H), 4,0 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,82 (s, 1H), 8,35 (s, 1H) ’H NMR spektrum: (DMSOd₆; CF₃COOD) 1,15-1,65 (m, 2H), 2,0 (d, 2H), 2,15-2,3 (br s, 1H), 3,0 (t, 2H), 3,4 (d, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,15 (d, 2H), 7,4 (s, 1H), 7,75 (d, 2H), 8,1 (s, 1H), 8,92 (s, 1H)

Východisková látka sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

Do roztoku 4-bróm-2,6-difluórfluóranilínu (2,77 g, 6,65 mmol) v DMF (80 ml) sa pridal hydrid sodný (60%, 612 mg, 15,3 mmol). Po 30 minútovom miešaní pri laboratórnej teplote sa pridal 7-benzyloxy-4-chlór-6-metoxychinazolín (2 g, 6,65 mmol), (pripravený napríklad podľa WO 97/22596, príklad 1, ale pred použitím sa pripravila voľná báza) a miešal sa ďalšie 4 hodiny. Zmes sa rozdelila medzi etylacetátovú a vodnú vrstvu (200 ml). Organická vrstva sa separovala, premývala vodou, soľankou, sušila (MgSO₄) a tekuté látky sa odparili. Zvyšok sa trituroval izopropanolom, odfiltroval, premýval éterom a sušil vo vákuu, pričom sa získal 7-benzyloxy-4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxychinazolín (1,95 g, 62 %).

MS-ESI: 472-474 [MH]⁺ ’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 3,94 (s, 3H), 5,3 (s, 2H), 7,3 (s, 1H), 7,4 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,5 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,85 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,4-9,6 (br s, 1H)

Podobným spôsobom ako pri príprave východiskovej látky v príklade 8 sa 7-benzyloxy-4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxychinazolín (1,9 g, 4,02 mmol) podrobil reakcii s TFA (20 ml), pričom sa získal 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolín (1,5 g, 98 %).

’H NMR spektrum: (DMSOd₆) 3,95 (s, 3H), 7,1 (s, 1H), 7,6 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 9,45 (br s, 1H), 10,5 (br s, 1H)

Podobným spôsobom ako pri príprave východiskovej látky v príklade 8 sa 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolín (1 g, 2,62 mmol) podrobil reakcii s l-(terc-butoxykarbonyl)-4-hydroxymetylpiperidínom (845 mg, 3,93 mmol), (pripravený podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 1), pričom sa získal 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-7-(l-(terc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-6-metoxychinazolín (620 mg, 41%).

MS-ESI: 579-581 [MH]⁺ ‘H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,15-1,3 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,8 (d, 2H), 2,0-2,1 (m, 1H), 2,7-2,9 (m, 2H),

3,95 (s, 3H), 4,0 (br s, 2H), 4,05 (d, 2H), 7,22 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,85 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,4-9,6 (br s, 1H)

Príklad 10

Podľa podobného spôsobu ako v príklade 9 sa 7-(l-(íerc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-4-(4-chlo ro-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxychinazolín (95 mg, 0,2 mmol) v metylénchloride (2 ml) podrobil reakciou s TFA (800 μΐ), pričom sa získal 4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperid-4-ylmetoxy)chinazolín (20 mg, 26 %).

MS - ESI: 435-437 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOd₆) 1,2-1,3 (m, 2H), 1,75 (d, 2H), 1,85-2,0 (br s, 1H), 2,5 (d, 2H), 3,0 (d, 2H),

3,97 (s, 3Η), 4,0 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,52 (d, 2H), 7,85 (s, 1H), 8,35 (s, 1H)

Východisková látka sa pripravila nasledujúcim spôsobom:

Podobným spôsobom ako pri príprave východiskovej látky v príklade 9 sa 7-benzyloxy-4-chlór-6-metoxychinazolín (184 mg, 0,61 mmol), (pripravený napríklad podľa spôsobu z WO 97/22596, príklad 1, ale pred použitím sa pripravila voľná báza), podrobil reakcii so 4-chlór-2,6-difluórfluóranilínom (200 mg, 1,22 mmol) v prítomnosti hydridu sodného (60 %, 87 mg, 1,4 mmol) v DMF (8 ml), pričom sa získal 7benzyloxy-4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxychinazolín (212 mg, 74 %).

MS - ESI: 428 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOd«) 3,96 (s, 3H), 5,31 (s, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,4 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,5-7,6 (m, 4H), 7,85 (s, 1H), 8,35 (br s, 1H), 9,55 (br s, 1H)

Roztok 7-benzyloxy-4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxychinazolínu (200 mg, 0,47 mmol) v TFA (3 ml) sa miešal pri teplote 80 °C počas 3 hodín. Po ochladení sa tekuté látky odstránili vo vákuu a zvyšok sa rozpustil vo vode obsahujúcej 5 % metanolu, pH sa upravilo na 8 hydrogenuhličitanom sodným a tuhá látka sa odfiltrovala a premyla vodou. Tuhá látka sa rozpustila v zmesi etylacetát, metanol a metylénchlorid (47/6/47), tekuté látky sa odstránili vo vákuu, pričom sa získal 4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolín (126 mg, 80 %).

MS - ESI: 338 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOde) 3,95 (s, 3H), 7,1 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,8 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 9,42 (br s, 1H)

Podobným spôsobom ako pri príprave východiskovej látky v príklade 9 sa 4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-7-hydroxy-6-metoxychinazolín (150 mg, 0,44 mmol) podrobil reakcii s l-(íerc-butoxykarbonyl)-4-hydroxymetylpiperidínom (150 mg, 0,88 mmol), (pripravený podľa spôsobu pre východiskovú látku z príkladu 1), pričom sa získal 7-(l-(terc-butoxykarbonyl)piperid-4-ylmetoxy)-4-(4-chlór-2,6-difluorofluóranilino)-6-metoxychinazolín(113 g, 59 %).

MS - ESI: 535 [MH]⁺ 'H NMR spektrum: (DMSOd^) 1,15-1,3 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,8 (d, 2H), 2,0-2,1 (m, 1H), 2,7-2,9 (m, 2H),

3,95 (s, 3H), 4,0 (br s, 2H), 4,05 (d, 2H), 7,2 (s, 1H), 7,6 (m, 2H), 7,8 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 9,4-9,6 (br s, 1H)

Príklad 11

Ďalej sú názorne uvedené reprezentatívne farmaceutické dávkové formy obsahujúce zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ (ďalej zlúčeninu X) na terapeutické alebo profylaktické použitie u ľudských subjektov:

(a)	Tableta I	mg/tableta
	Zlúčenina X	100
	Laktóza Ph. Eur	182,75
	Sodná soľ kroskarmelózy (croscarmellose sodium)	12,0
	Pasta z kukuričného škrobu (5obj.% pasty)	2,25
	Stearát horečnatý	3,0
(b)	Tableta II	mg/tableta
	Zlúčenina X	50
	Laktóza Ph. Eur	223,75
	Sodná soľ kroskarmelózy	6,0
	Kukuričný škrob	15,0
	Polyvinylpyrolidón (5obj.% pasty)	2,25
	Stearát horečnatý	3,0
(c)	Tableta III	mg/tableta
	Zlúčenina X	1,0
	Laktóza Ph. Eur	93,25
	Sodná soľ kroskarmelózy	4,0
	Pasta z kukuričného škrobu (5obj.% pasty)	0,75
	Stearát horečnatý	1,0
(d)	Kapsula	mg/kapsula
	Zlúčenina X	10
	Laktóza Ph. Eur	488,5
	Stearát horečnatý	1,5
(e)	Injekcia I	50 mg/ml

Zlúčenina X	5,0 obj.%
1 M roztok hydroxidu sodného	15,0 obj.%
0,1 M HCI (na upravenie na pH = 7,6)
Polyetylénglykol 400	4,5 obj.%
Voda na doplnenie injekcie do 100 %
Injekcia II	10 mg/ml
Zlúčenina X	1,0 obj.%
Fosforečnan sodný BP	3,6 obj.%
0,1 M hydroxidu sodného	15 obj.%
Voda na doplnenie injekcie do 100 %
Injekcia III	1 mg/ml,

pufrovaná na pH 6

Zlúčenina X

Fosforečnan sodný BP

Kyselina citrónová

Polyetylénglykol 400

Voda na doplnenie injekcie do 100 % Poznámka

0,1 obj.%

2,26 obj.%

0,38 obj.%

3,5 obj.%

Uvedené formulácie môžu byť pripravené štandardnými technikami používanými vo farmaceutickom odbore. Tablety (a)-(c) môžu byť enterosolventné, čo sa dá dosiahnuť štandardnými prostriedkami, napr. poťahom z acetát-ftalátu celulózy.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (20)

1. Derivát chinazolínu všeobecného vzorca (I): (I), v ktorom mje celé číslo od 1 do 3;

R¹ predstavuje halogén alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 3 atómy uhlíka;

R² je vybraný z jednej z nasledujúcich troch skupín:

1. Ci.₅alkylR³, kde substituent R³ je piperidín-4-yl, ktorý môže niesť jeden alebo dva substituenty vybrané z hydroxyskupiny, halogénu, alkylovej skupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka, hydroxyalkylovej skupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka a alkoxyskupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka;

2. C₂.₅alkenylR³, kde substituent R³ je už definovaný;

3. C₂_5alkinylR³, kde substituent R³ je už definovaný;

a kde ktorákoľvek alkylová, alkenylová alebo alkinylová skupina môže niesť jeden alebo viac substituentov vybraných z hydroxyskupiny, halogénu a aminoskupiny;

alebo jeho soľ.

2. Derivát chinazolínu podľa nároku 1, v ktorom fenylová skupina nesúca (R')_m je vybraná z 2-flu- orofluór-4-metylfenylu, 4-chlór-2,6-difluórfluórfenylu, 4-bróm-2,6-difluórfluórfenylu, 4-chlór-2-fluorofluórfenylu a 4-bróm-2-fluórfluórfenylu.

3. Derivát chinazolínu podľa nároku 1 alebo 2, v ktorom R² je C|.₅alkylR³, kde R³ je definovaný v nároku

1.

4. Derivát chinazolínu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, v ktorom R² je piperidin-4-ylmetyl, ktorého piperidinový kruh môže niesť jeden alebo dva substituenty vybrané z alkylovej skupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka.

5. Derivát chinazolínu všeobecného vzorca (II) podľa nároku 1:

(Π), v ktorom máje celé číslo od 1 do 3;

R^la predstavuje halogén alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 3 atómy uhlíka;

R^2a je vybraný z jednej z nasledujúcich troch skupín:

1. C]_5alkylR³, kde R³ je definovaný v nároku 1;

2. C₂.₅alkenylR³, kde R³ je definovaný v nároku 1;

3. C₂.₅alkinylR³, kde substituent R³ je definovaný v nároku 1; alebo jeho soľ.

6. Derivát chinazolínu podľa nároku 1 vybraný zo: 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(2-fluórfluór-4-metylanilino)-6-metoxy-7-(piperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(piperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu a ich solí.

7. Derivát chinazolínu podľa nároku 1 vybraný zo: 4-(4-chlór-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-chlór-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu, 4-(4-bróm-2,6-difluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperidin-4-ylmetoxy)chinazolínu a ich solí.

8. Derivát chinazolínu podľa nároku 1 vybraný zo: 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínu a jeho solí.

9. Derivát chinazolínu podľa nároku 1 vo forme farmaceutický prijateľnej soli.

10. Spôsob prípravy derivátu chinazolínu všeobecného vzorca (I), podľa nároku 1 alebo jeho soli, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa (a) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (III), (III) kde substituent R² je definovaný v nároku 1 a L¹ je nahradíteľná skupina, so zlúčeninou všeobecného vzorca (IV) (IV), nh₂ kde substituent R¹ a m sú definované v nároku 1;

(b) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (V) (V), kde m a R¹ sú definované v nároku 1, so zlúčeninou všeobecného vzorca (VI)

R²-L* (VI), kde R² je definovaný v nároku 1 a L¹ je už definovaný;

(c) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (VII) (VII) so zlúčeninou všeobecného vzorca (VIII)

R²-O-H (VIII), kde R¹, R² a m sú definované v nároku 1 a L¹ je už definovaný; alebo (d) odstránenie ochrannej skupiny zo všeobecného vzorca (IX):

(ix), kde R¹ a m sú definované v nároku 1, a R⁴ predstavuje chránenú skupinu R², pričom R² je definovaný v nároku 1, ale navyše nesie jednu alebo viac ochranných skupín P²;

a keď treba pripraviť farmaceutický prijateľnú soľ derivátu chinazolínu všeobecného vzorca (I), príslušná zlúčenina sa podrobí reakcii s kyselinou alebo bázou, a tým sa získa požadovaná farmaceutický prijateľná soľ.

11. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje ako aktívnu zložku zlúče ninu všeobecného vzorca (I) definovanú v nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ spolu s farmaceutický prijateľným excipientom alebo nosičom.

12. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) definovanej v nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na prípravu liečiva na liečenie chorobných stavov spojených s angiogenézou a/alebo zvýšenou vaskulárnou permeabilitou u teplokrvného živočícha, ako je človek.

13. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) definovanej v nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli a vaskuláme cieleného činidla na prípravu liečiva na liečenie chorobných stavov spojených s angiogenézou a/alebo zvýšenou vaskulámou permeabilitou u teplokrvného živočícha ako je človek.

14. Použitie podľa nároku 13 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metypiperidin-4-ylmetoxyjchmazolínu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli a A'-acetylkolchmol-O-fosfátu na prípravu liečiva na liečenie chorobných stavov spojených s angiogenézou a/alebo zvýšenou vaskulámou permeabilitou u teplokrvného živočícha, ako je človek.

15. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) definovanej v nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na prípravu liečiva na liečenie rakoviny u teplokrvného živočícha ako je človek.

16. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) definovanej v nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na prípravu liečiva na liečenie nádorov, ktoré súvisia s vaskulámym endotelovým rastovým faktorom u teplokrvného živočícha, ako je človek.

17. Použitie podľa nároku 14 4-(4-bróm-2-fluórfluóranilino)-6-metoxy-7-(l-metylpiperid-4-ylmetoxy)chinazolínu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli a N-acetylkolchinol-O-fosfátu na prípravu liečiva na liečenie rakoviny u teplokrvného živočícha ako je človek.

18. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) ako je definovaná v nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli a chemoterapeutického činidla vybraného z:

(i) ďalšieho antiangiogenézneho činidla, ktoré pôsobí mechanizmom odlišným od mechanizmu zlúčeniny všeobecného vzorca (I);

(ii) cytostatického činidla;

(iii) modifikátora biologickej odpovede;

(iv) protilátky a (v) antiproliferatívneho/antineoplastického liečiva alebo ich kombinácie;

na prípravu liečiva na liečenie chorobných stavov spojených s angiogenézou a/alebo zvýšenou vaskulámou permeabilitou u teplokrvného živočícha, ako je človek.

19. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) ako je definovaná v nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli a chemoterapeutického činidla vybraného z:

(i) ďalšieho antiangiogenézneho činidla, ktoré pôsobí mechanizmom odlišným od mechanizmu zlúčeniny všeobecného vzorca (I);

(ii) cytostatického činidla;

(iii) modifikátora biologickej odpovede;

(iv) protilátky a (v) antiproliferatívneho/antineoplastického liečiva alebo ich kombinácie;

na prípravu liečiva na liečenie rakoviny u teplokrvného živočícha, ako je človek.

20. Použitie podľa nároku 19, pričom rakovinou je rakovina hrubého čreva, prsníka, prostaty, pľúc alebo kože.