實例 實例 1 : 3-[3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 苯甲腈 步驟 1. 1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 7- 氧化物
於1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(4.90克,0.0415莫耳)在醋酸乙酯(41毫升,0.42莫耳)中之溶液內,在0℃下,添加間-氯過苯甲酸(MCPBA;9.3克,0.054莫耳)在醋酸乙酯(27毫升,0.28莫耳)中之溶液。當添加MCPBA之~20毫升溶液時,反應混合物係固化。添加另一份~10毫升醋酸乙酯,以致使溶液形成。使反應混合物溫熱至室溫(rt),並攪拌過夜,然後在0℃下冷卻,過濾,且以醋酸乙酯洗滌三次,獲得10.94克潮濕固體。接著使潮濕固體(8.45克)懸浮於水(35毫升)中,並於此懸浮液中,逐滴添加13毫升飽和Na2CO3,且將所形成之混合物於室溫下攪拌過夜。然後使混合物在0℃下冷卻,過濾,並以水洗滌(x4),獲得3.55克淡紫色固體,使其在40℃下乾燥過夜,而得所要之產物(2.47克,44.4%產率)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.2 (1H, d);7.95 (1H, d);7.5 (1H, d);7.2 (1H, m);6.65 (1H, d). MS (M+H)+:136.
步驟 2. 4- 氯基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
於1H-吡咯并[2,3-b]吡啶7-氧化物(2.47克,0.0184莫耳)在二甲基甲醯胺(DMF) (13.3毫升,0.172莫耳)中之粉紅色溶液內,在50℃下,添加氯化甲烷磺醯(4.0毫升,0.052莫耳),且粉紅色變化成橘色。將反應混合物於73℃下加熱2小時,然後冷卻至40℃。添加水(35毫升),並使所形成之懸浮液在0℃下冷卻。添加NaOH,以調整混合物之pH值至約7。過濾混合物,並以水洗滌(x3),獲得3.8克潮濕淡橘色固體,使其在40℃下乾燥過夜,獲得產物(2.35克,82.2%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.8 (1H, br);8.21 (1H, d);7.41 (1H, d);7.18 (1H, d);6.61 (1H, d). MS (M+H)+:153.
步驟 3. 4-(4- 溴基 -3- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將4-氯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.050克,0.00033莫耳)與4-溴基-3-甲基-1H-吡唑(0.10克,0.00066莫耳)之混合物,在130℃下加熱過夜。然後使反應混合物接受管柱層析(以5% MeOH/DCM,0.5% NH4OH溶離,於矽膠上),獲得80毫克淡黃色固體,將其以MeOH (1.5毫升)研製,產生產物,為淡黃色固體(44毫克,44%產率)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.32 (1H, s);8.25 (1H, d);7.6 (1H, s);7.45 (1H, d);7.37 (1H, d);6.96 (1H, d);2.4 (3H, s). MS (M+H)+:276.
步驟 4. 3-[3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 苯甲腈
將4-(4-溴基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.032克,0.00012莫耳)、(3-氰基苯基)二羥基硼烷(0.027克,0.00018莫耳)、碳酸鈉(0.032克,0.00030莫耳)及肆(三苯膦)鈀(0) (7.0毫克,0.0000060莫耳)在1,2-二甲氧基乙烷(0.3毫升,0.003莫耳)與水(0.3毫升,0.02莫耳)中之混合物,於130℃下加熱(液體形成,但具有兩個液層) 4小時。然後使反應混合物冷卻至室溫(rt),過濾,並以水(x2)與二甲基醚(DME) (x2)洗滌,獲得產物,為淡橘色固體(15毫克,44%產率)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.57 (1H, s);8.31 (1H, d);7.8 (2H, m);7.75 (2H, m);7.55 (1H, s);7.45 (2H, m);7.01 (1H, d);2.6 (3H, s). MS (M+H)+:299.
實例 2 : (2E)-3-[3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 丙烯腈三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1. 4- 溴基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
於經由實例1步驟1中所概述之程序製成之1H-吡咯并[2,3-b]吡啶7-氧化物(8.0克,0.060莫耳)在DMF (100毫升,1莫耳)中之溶液內,在0℃下,添加甲烷磺酸酐(20.8克,0.119莫耳,以四部份)將混合物於0℃下再攪拌20分鐘,接著添加溴化四甲基銨(23.0克,0.149莫耳)。將所形成之混合物攪拌過夜。添加水(0.1升),並發現稍微放熱。添加氫氧化鈉在水中之溶液(12.5M,12毫升),以調整混合物之pH值至約8,接著添加~0.25升水。將所形成之混合物再攪拌2小時,然後過濾。以水洗滌x3所獲得之固體,獲得6.72克帶紅色固體,使其在50℃下乾燥度過週末,獲得產物(5.75克,49%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.8 (1H, br);8.2 (1H, d);7.41 (1H, d);7.19 (1H, d);6.61 (1H, d). MS (M+H)+:196.
步驟 2. 4- 溴基 -1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
於4-溴基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(6.2克,0.031莫耳)與[β-(三甲基矽烷基)乙氧基]氯化甲烷(6.7毫升,0.038莫耳)在DMF (62毫升,0.80莫耳)中之溶液內,在0℃下,添加氫化鈉(1.5克,0.038莫耳),且所形成之溶液轉變成不透明。將混合物再攪拌4小時,然後以甲基第三-丁基醚(MTBE)稀釋。分離有機層,並以水(x2)與鹽水溶液連續洗滌。使有機相脫水乾燥,及在真空中濃縮,獲得14.1克產物,為淡橘色油。使油藉管柱層析純化,以5-20%醋酸乙酯/己烷溶離,獲得經純化之產物,為無色油(9.66克,94%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.2 (1H, d);7.49 (1H, d);7.19 (1H, d);6.62 (1H, d);5.78 (2H, s);3.6 (2H, t);0.98 (2H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:326.
步驟 3. (2E)-3-[3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 丙烯腈
使2-丙烯腈(0.043毫升,0.00065莫耳)、氯化雙(三苯膦)鈀(II) (0.0091克,0.000013莫耳)、4-(4-溴基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.036克,0.00013莫耳)及四乙胺(TEA) (0.15毫升,0.0011莫耳)在DMF (0.15毫升,0.0019莫耳)中之溶液,於120℃下微波2小時。然後以醋酸乙酯稀釋溶液,並以水(x2)與鹽水連續洗滌。使有機相脫水乾燥,及在真空中濃縮,獲得62毫克產物,為橘色固體。使橘色固體藉預備之LCMS純化,獲得12毫克灰白色固體,為三氟醋酸(TFA)鹽,將其以MTBE (1毫升)研製,以提供經純化之產物,為淡綠色固體(於60℃下乾燥4小時,9毫克,28%產率)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):2:1反式:順式異構物.關於反式:δ8.95 (NH, 1H, s);7.75 (烯烴1H, d);6.1 (烯烴1H, d);2.45 (Me, 3H, s). MS (M+H)+:249.
實例 3 : 3-[3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 TFA 將(2E)-3-[3-甲基-1-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]丙烯腈TFA鹽(0.0050克,0.000020莫耳,根據實例2製成)與鈀(5.8毫克,0.0000054莫耳)在甲醇(1毫升,0.02莫耳)與1,2-二氯乙烷(1毫升,0.01莫耳)中之混合物除氣,然後於氫大氣下攪拌3小時。接著過濾反應混合物,並使濾液在真空中濃縮,獲得8毫克產物,為灰白色固體。使粗製物質藉預備之LCMS純化,獲得5.1毫克白色固體,為TFA鹽,將其以MTB (1毫升)研製,獲得產物,為白色固體(1.7毫克,34%產率)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.52 (1H, s);8.35 (1H, d);7.72 (1H, d);7.6 (1H, s);7.38 (1H, d);6.96 (1H, d);2.7-2.9 (4H, m);2.4 (3H, s). MS (M+H)+:251.
實例 13 : 4-(4- 苯基 -1H- 咪唑 -1- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將4-氯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.050克,0.00033莫耳)在4-苯基-1H-咪唑(0.24克,0.0016莫耳)中之熔體,於200℃下加熱過夜。使反應物於醋酸乙酯與飽和NaHCO3之間作分液處理,分離,並以鹽水洗滌有機相。然後使有機層脫水乾燥,並蒸發,獲得250毫克橘色油。使油以7% MeOH/DCM,0.7% NH4OH層析,試樣在溶劑系統中。收集74毫克產物,為橘色玻璃態物質。將玻璃態物質以熱DCE (1.5毫升)研製,獲得51毫克褐色固體,使其在60℃下乾燥4小時,而得所要之產物(50毫克,59%產率)。 1H NMR (400 MHz, 二甲亞碸(DMSO)):δ12.5 (1H, s);8.5 (1H, s);8.4 (1H, s);8.38 (1H, d);7.8 (2H, m);7.62 (1H, d);7.4 (3H, m);7.3 (1H, m);6.81 (1H, d). MS (M+H)+:260.
實例 14 : [3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]- 六氫吡啶 -1- 基 - 甲酮 步驟 1. 3- 甲基 -1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸
於4-(4-溴基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.107克,0.000263莫耳)在THF (1毫升,0.01莫耳)與己烷中之正-丁基鋰(0.23毫升1.6M)中之-70℃溶液內,添加0.5克CO2固體。15分鐘後,以NH4Cl使反應淬滅。添加醋酸乙酯與水。以鹽水洗滌有機相,並蒸發,獲得84毫克灰白色玻璃態物質/固體。使固體以50%醋酸乙酯/己烷,0.5% AcOH層析,試樣於矽膠上,獲得40毫克經純化之產物,為白色固體(37%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.5 (1H, d);7.45 (1H, d);7.25 (1H, d);7.02 (1H, s);6.6 (1H, d);5.75 (2H, s);3.6 (2H, t);2.48 (3H, s);0.98 (3H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:372.
步驟 2. 4-[3- 甲基 -4-( 六氫吡啶 -1- 基羰基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
將3-甲基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-羧酸(0.040克,0.00011莫耳) (1:1 AcOH)與N,N-羰基二咪唑(0.035克,0.00021莫耳)在THF (1毫升,0.01莫耳)中之溶液攪拌1.2小時,於此段時間後,添加六氫吡啶(32微升,0.00032莫耳)。再2小時後,添加另一份之六氫吡啶(15微升),並將所形成之混合物攪拌過夜。然後使反應混合物於醋酸乙酯與水之間作分液處理,並以飽和NaHCO3與鹽水相繼洗滌。使有機相脫水乾燥,並蒸發,而得49毫克粗產物,為橘色油/玻璃態物質。使粗產物以75-100%醋酸乙酯/己烷層析,試樣在DCM中。收集25毫克經純化之產物,為無色玻璃態物質/油(50%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.45 (1H, d);8.23 (1H, s);7.5 (1H, d);7.4 (1H, d);7.05 (1H, d);5.8 (2H, s);3.7 (4H, br);3.6 (2H, t);2.55 (3H, s);1.7 (6H, br);1.0 (3H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:439.
步驟 3. 3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]- 六氫吡啶 -1- 基 - 甲酮
將4-[3-甲基-4-(六氫吡啶-1-基羰基)-1H-吡唑-1-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.025克,0.000057莫耳)在TFA (1毫升,0.01莫耳)中之溶液攪拌1.5小時。然後濃縮反應混合物,並於DCM與飽和NaHCO3x2及鹽水之間作分液處理。接著使有機層脫水乾燥,及濃縮,獲得28毫克產物,為白色泡沫物。使泡沫物溶於甲醇(1毫升,0.02莫耳)中,並以水中之氫氧化銨(8.0M,1毫升)處理1.5小時。使用迴轉式蒸發器濃縮反應物,獲得24毫克淡黃色玻璃態物質。將玻璃態物質以甲基第三-丁基醚(MTBE)研製,獲得13毫克白色固體,使其在室溫下乾燥度過週末。於乾燥後,獲得總計8毫克產物(45%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.7 (1H, s);8.4 (1H, d);8.2 (1H, s);7.42 (1H, d);7.4 (1H, d);6.99 (1H, d);3.4-3.8 (4H, br);2.47 (3H, s);1.5-1.8 (6H, br). MS (M+H)+:309.
實例 15 : [3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基甲基 ]- 苯基 - 胺 步驟 1. 3- 甲基 -1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 羧甲醛
於4-(4-溴基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.25克,0.00061莫耳)在THF (2毫升,0.03莫耳)、己烷中之1.6M正-丁基鋰(0.54毫升)中之-70℃溶液內,在10分鐘後,添加DMF (120微升,0.0015莫耳)。使反應物溫熱至室溫,並攪拌過夜。然後,以NH4Cl使反應淬滅。添加醋酸乙酯/水。分離有機相,並以鹽水洗滌,接著脫水乾燥,及濃縮,獲得180毫克橘色油。使粗產物以25%醋酸乙酯/己烷層析,試樣在DCM中。收集40毫克淡黃色油(18%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.15 (1H, s);8.7 (1H, s);8.47 (1H, d);7.58 (1H, d);7.5 (1H, d);7.05 (1H, d);5.8 (2H, s);3.63 (2H, t);2.7 (3H, s);0.98 (3H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:356.
步驟 2. N-[3- 甲基 -1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 甲基苯胺
將3-甲基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-羧甲醛(0.025克,0.000070莫耳)與苯胺(1M,在DCM中,0.070毫升)在DCM (1毫升,0.02莫耳)中之溶液攪拌1分鐘。添加醋酸(20微升,0.0004莫耳)、苯胺(1M,在DCM中,140微升)及三乙醯氧基硼氫化鈉(0.022克,0.00010莫耳)。將反應物攪拌過夜,並於DCM與飽和NaHCO3之間作分液處理,以鹽水洗滌。使有機相脫水乾燥,並蒸發,而得21毫克產物,為淡橘色玻璃態物質(70%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.4 (1H, d);8.15 (1H, s);7.65 (1H, d);7.35 (3H, m);7.09 (1H, d);6.82 (1H, m);6.89 (2H, m);5.8 (2H, s);4.35 (2H, s);3.6 (2H, t);2.5 (3H, s);0.99 (3H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:433.
步驟 3. [3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基甲基 ]- 苯基 - 胺
N-[3-甲基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]甲基苯胺之去除保護係根據實例14步驟3之程序進行,而得所要之產物(58%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.9 (1H, s);8.38 (1H, d);8.1 (1H, s);7.4 (1H, d);7.35 (1H, d);7.3 (2H, m);7.0 (1H, d);6.79 (1H, m);6.77 (2H, m);4.25 (2H, s);3.81 (1H, s);2.41 (3H, s). MS (M+H)+:303.
實例 25 : 3-[3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]- 環己醇 步驟 1. 3- 乙氧基 -1-[3- 甲基 -1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 環己 -2- 烯 -1- 醇 於4-(4-溴基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.11克,0.00027莫耳)在THF (1.5毫升,0.018莫耳)中之-75℃溶液內,添加己烷中之1.6M正-丁基鋰(0.22毫升)。反應混合物轉變成暗橘色。~10分鐘後,添加醚中之1.0M二溴化鎂(0.35毫升)。再50分鐘後,添加3-乙氧基-2-環己烯-1-酮(41.5微升,0.000308莫耳)在THF (~0.3毫升)中之溶液。使所形成之混合物溫熱至-40℃,歷經~1小時,並以NH4Cl使反應淬滅。然後添加醋酸乙酯/水。以鹽水洗滌有機相,及濃縮,而得145毫克橘色油。使粗產物以0-50%醋酸乙酯/己烷梯度液層析,試樣在DCM中。收集35毫克產物,為油狀物(30%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.49 (1H, d);8.38 (1H, s);7.55 (1H, d);7.4 (1H, d);7.1 (1H, d);6.0 (2H, s);3.6 (2H, t);2.81 (2H, m);2.62 (3H, s);2.58 (2H, m);2.27 (2H, m);1.0 (3H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:422.
步驟 2. 3-[3- 甲基 -1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 環己醇
將3-[3-甲基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]環己-2-烯-1-酮(0.019克,0.000045莫耳)與鈀/碳(Pd/C) (0.018克,0.000017莫耳)在甲醇(2毫升,0.05莫耳)中之混合物除氣,並於氫大氣下攪拌過夜。再添加48毫克10% Pd/C,並於氫大氣下攪拌8小時。過濾鈀,並將濾液與四氫硼酸鈉(0.032克,0.00084莫耳)一起攪拌5小時。使反應物藉預備之HPLC純化,獲得5毫克所要之產物。MS (M+H)+:426.
步驟 3. 3-[3- 甲基 -1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]- 環己醇
3-[3-甲基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]環己醇之去除保護係根據實例14步驟3之程序進行,而得所要之產物(40%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.72 (1H, s);8.35 (1H, d);7.95 (1H, s);7.41 (1H, d);7.35 (1H, d);7.02 (1H, d);3.78 (1H, m);2.6 (1H, m);2.4 (3H, s);1.2-2.4 (8H, m). MS (M+H)+:296.
實例 40 : 4-[1-(3- 甲氧基 -1- 甲基 - 丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. 4-[1-(3- 甲氧基 -1- 甲基丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ]- 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
於3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁-1-醇(醇係藉由實例58中酯之DIBAL還原作用製成) (0.056克,0.00014莫耳)在DMF (1毫升,0.01莫耳)中之0℃溶液內,添加氫化鈉(0.0107克,0.000268莫耳)。5分鐘後,添加碘化甲烷(18微升,0.00029莫耳),並將所形成之混合物攪拌度過週末。然後使混合物於醋酸乙酯與水之間作分液處理,分離,並以鹽水洗滌有機相。濃縮有機相,獲得淡橘色油。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.4 (1H, d);8.3 (1H, s);8.0 (1H, s);7.65 (1H, d);7.27 (1H, d);6.8 (1H, d);5.8 (2H, s);4.7 (1H, m);3.63 (2H, t);3.2-3.4 (2H, m);3.38 (3H, s);2.1-2.3 (2H, m);1.7 (3H,d);1.0 (2H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:400.
步驟 2. 4-[1-(3- 甲氧基 -1- 甲基 - 丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
4-[1-(3-甲氧基-1-甲基丙基)-1H-吡唑-4-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之去除保護係根據實例14步驟3之程序進行,而得所要之產物(25%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.0 (1H, s);8.35 (1H, d);8.18 (1H, s);7.95 (1H, s);7.41 (1H, d);7.21 (1H, d);6.75 (1H, d);4.63 (1H, m);3.15-3.4 (2H, m);3.35 (3H, s);2.21-2.05 (2H, m);1.6 (3H,d). MS (M+H)+:270.
實例 42 : 4-[1-(1- 甲基 -3- 吡唑 -1- 基 - 丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. 4-1-[1- 甲基 -3-(1H- 吡唑 -1- 基 ) 丙基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
於甲烷磺酸3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酯(藉由按實例59步驟1中醇之甲磺醯化作用而製成) (0.055克,0.00012莫耳)與1H-吡唑(0.025克,0.00036莫耳)在DMF (1毫升,0.01莫耳)中之0℃溶液內,添加氫化鈉(0.014克,0.00036莫耳)。將所形成之溶液攪拌過夜,然後於醋酸乙酯與0.1N HCl、水之間作分液處理。分離有機相,並以鹽水洗滌。接著濃縮有機層,獲得49毫克淡橘色玻璃態物質(87%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.4 (1H, d);8.18 (1H, s);7.99 (1H, s);7.6 (1H, t);7.5 (1H, d);7.4 (1H, t);7.27 (1H, d);6.8 (1H, d);6.3 (1H, m);5.8 (2H, s);4.2 (1H, m);4.0-4.2 (2H, m);3.61 (2H, t);2.58 (2H, m);1.65 (3H, d);1.0 (2H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H)+:436.
步驟 2. 4-[1-(1- 甲基 -3- 吡唑 -1- 基 - 丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
4-1-[1-甲基-3-(1H-吡唑-1-基)丙基]-1H-吡唑-4-基-1-[2-(三甲基-矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之去除保護係根據實例14步驟3之程序進行,而得所要之產物(38%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.7 (1H, s);8.38 (1H, d);8.1 (1H, s);7.7 (1H, s);7.59 (1H, t);7.4 (1H, d);7.35 (1H, t);7.21 (1H, d);6.75 (1H, d);6.25 (1H, m);4.4 (1H, m);3.9-4.15 (2H, m);2.55 (2H, m);1.63 (3H, d). MS (M+H)+:306. 下列表1中之化合物係藉由類似如上文所指示程序之方法製成。"純化A"表示產物在去除保護之後,係藉預備之HPLC,於下述條件下純化:C18,以含有0.15% NH4OH之MeCN/H2O梯度液溶離。
表 1 實例 46 : 4-(2- 第三 - 丁基 -1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶三氟 - 醋酸鹽 步驟 1. 4-(2- 第三 - 丁基 -1H- 咪唑 -5- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
於三甲基醋酸(0.169毫升,0.00147莫耳)在乙醇(6毫升,0.1莫耳)中之溶液內,添加碳酸銫(0.24克,0.00073莫耳),並將所形成之混合物攪拌2小時。於真空中移除溶劑,而得三甲基醋酸銫。 於2-氯基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙酮(例如按實例50步驟1製成) (0.054克,0.00017莫耳)在DMF (1.8毫升,0.023莫耳)中之溶液內,添加三甲基醋酸銫(0.0389克,0.000166莫耳),並將反應物在室溫下攪拌16小時。添加醋酸銨(0.45克,0.0058莫耳),並將反應物於微波中加熱至170℃,歷經5分鐘。添加水,並以MTBE萃取產物。使合併之有機萃液以硫酸鈉脫水乾燥,然後過濾,及濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(2.5% MeOH/DCM)純化,產生4-(2-第三-丁基-1H-咪唑-5-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(32毫克,52%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.31 (d, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.69 (s, 2H), 3.52 (dd, 2H), 1.46 (s, 9H), 0.90 (dd, 2H), -0.08 (s, 9H);MS (ES):371 (M+1).
步驟 2. 4-(2- 第三 - 丁基 -1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
於4-(2-第三-丁基-1H-咪唑-5-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.019克,0.000051莫耳)與碳酸鉀(0.15克,0.0011莫耳)在DMF (3毫升,0.04莫耳)中之混合物內,以兩份添加碘化甲烷(0.01毫升,0.00015莫耳),歷經48小時。然後添加水,並以MTBE萃取產物。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮,接著藉矽膠層析(20%醋酸乙酯/己烷)純化,而得4-(2-第三-丁基-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(10毫克,51%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.37 (d, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.44-7.22 (m, 2H), 7.19 (d, 1H), 5.78 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.60 (dd, 2H), 1.61 (s, 9H), 0.98 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):385 (M+1).
步驟 3.
將4-(2-第三-丁基-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.010克,0.000026莫耳)在TFA (3毫升,0.04莫耳)中之溶液攪拌2小時。然後蒸發過量TFA,並將殘留物在甲醇(3毫升,0.07莫耳)與NH4OH (1毫升)中攪拌16小時。移除溶劑,並使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得4-(2-第三-丁基-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶三氟醋酸鹽(9毫克,90%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.24 (s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.70-7.63 (m, 2H), 7.08 (br s, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.51 (s, 9H);MS (ES):255 (M+1). 其他類似物係如表2中所示,使用類似實例46中所述之程序,以不同起始物質,譬如於步驟1中之替代羧酸類而製成。當以自由態鹼獲得類似物時,產物係藉預備之HPLC (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)獲得。其結果係根據下列結構摘錄於表2中:
表 2 實例 50 : 4-(2- 苯基 -1,3- 噻唑 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1. 2- 氯基 -1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 ) 乙酮
於4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(2.05克,0.00626莫耳)在THF (10毫升,0.123莫耳)中之溶液內,在0℃下,逐滴添加異丙基氯化鎂在醚中之溶液(2.0M,9.4毫升)。使混合物溫熱至室溫,並攪拌4小時。然後將此混合物經由套管轉移至2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙醯胺(2.84克,0.0207莫耳)在THF (10毫升)中之溶液內。30分鐘反應時間後,藉由添加飽和氯化銨水溶液使溶液淬滅。以醋酸乙酯萃取產物,以鹽水洗滌合併之有機萃液,以Na2SO4脫水乾燥,過濾,及濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(0-20%醋酸乙酯/己烷)純化,而得2-氯基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)乙酮(711毫克,35%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.56 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.23 (d, 1H), 5.80 (s, 2H), 4.91 (s, 2H), 3.60 (dd, 2H), 0.98 (dd, 2H), 0.01 (s, 9H);MS (ES):325 (M+1).
步驟 2. 4-(2- 苯基 -1,3- 噻唑 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶三氟醋酸鹽
將2-氯基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-乙酮(0.050克,0.00015莫耳)與苯碳硫醯胺(0.031克,0.00022莫耳)在乙醇(2毫升,0.03莫耳)中之溶液加熱至回流,歷經1小時。於真空中移除溶劑。添加醋酸乙酯,並藉過濾單離所形成之固體,將粗製固體與TFA一起攪拌1小時,然後於真空中移除過量TFA。接著將粗製殘留物與NH4OH及MeOH水溶液一起攪拌16小時。移除溶劑,並使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得4-(2-苯基-1,3-噻唑-4-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,為三氟醋酸鹽(11毫克,18%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.01 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.39 (br s, 1H), 8.13-8.07 (m, 2H), 7.81 (d, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.62-7.52 (m, 3H), 7.22 (d, 1H);MS (ES):278 (M+1).
實例 51 : N- 甲基 -N- 丙基 -4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 胺三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1. N- 甲基 -N- 丙基硫 脲
將N-甲基-N-丙基胺(0.501毫升,0.00488莫耳)添加至1,1’-硫代羰基二咪唑(0.957克,0.00537莫耳)在THF (9毫升,0.1莫耳)中之溶液內,並將所形成之溶液攪拌16小時。藉矽膠層析(在DCM中之5% MeOH)單離得自反應混合物之中間物,並將此中間物與氨(在MeOH中之7M溶液) (6毫升)一起攪拌48小時。在真空中移除溶劑。於急驟式管柱層析(在DCM中之4% MeOH)後,獲得N-甲基-N-丙基硫脲。
步驟 2.
將2-氯基-1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-乙酮(0.050克,0.00015莫耳)與N-甲基-N-丙基硫脲(0.030克,0.00022莫耳)在乙醇(2毫升,0.03莫耳)中之溶液加熱至回流,歷經2小時。然後於真空中移除乙醇,並使殘留物溶於2毫升TFA中,且攪拌40分鐘。在真空中移除過量TFA,並使殘留物溶於3毫升MeOH中。於其中添加0.5毫升NH4OH與100微升乙二胺,並將所形成之溶液攪拌16小時。移除溶劑,接著添加水,獲得白色沉澱物,使其藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得N-甲基-N-丙基-4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,3-噻唑-2-胺,為三氟醋酸鹽(39毫克,67%)。 1H NMR (300 MHz, CD3OD):δ8.46-8.12 (br s, 1H), 7.92 (br s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.45 (br s, 1H), 3.56 (t, 2H), 3.20 (s, 3H), 1.78 (dq, 2H), 1.00 (t, 3H);MS (ES):273 (M+1). 其他胺基噻唑類似物係藉由類似實例51中所述之程序製成,使用不同起始物質,譬如於步驟2中之替代硫脲。於實例52與53中,藉過濾單離經由實例51之程序所獲得之白色沉澱物,以水洗滌,並在高真空下乾燥,而得類似物,為自由態胺。其結果係根據下列結構摘錄於表3中:
表 3 實例 54 : 4-(2- 苯基 -1,3- 噻唑 -5- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1. (2- 苯基 -1,3- 噻唑 -5- 基 ) 二羥基硼烷
於己烷中之正-丁基鋰(1.6M,2.1毫升)在醚(20毫升)中之溶液內,在-78℃下,逐滴添加2-苯基-1,3-噻唑(449毫克,0.00278莫耳)在醚(5毫升)中之溶液。將混合物於-78℃下攪拌一小時,接著添加硼酸三甲酯(0.949毫升,0.00835莫耳)。將混合物於-78℃下攪拌15分鐘,然後使其溫熱至室溫,並再攪拌40分鐘。添加飽和NH4Cl水溶液,接著為1.0N HCl水溶液。將經酸化之混合物攪拌15分鐘,並以四份含有15%異丙醇之DCM萃取所要之產物。使合併之有機萃液以硫酸鈉脫水乾燥,及濃縮,而得566毫克白色固體,含有所要之(2-苯基-1,3-噻唑-5-基)二羥基硼烷,為與2-苯基-1,3-噻唑之混合物。將此混合物用於步驟2,無需進一步純化。MS (ES):206 (M+1).
步驟 2.
於(2-苯基-1,3-噻唑-5-基)二羥基硼烷(75.0毫克,0.000366莫耳)與4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(80毫克,0.000244莫耳)在DMF (4毫升,0.0516莫耳)中之混合物內,添加碳酸鉀(101毫克,0.000732莫耳)在水(1毫升,0.0555莫耳)中之溶液。使混合物以穩定氮氣流滌氣15分鐘。 添加肆(三苯膦)鈀(0) (20毫克,0.000018莫耳),並將所形成之混合物加熱至125℃,歷經30分鐘。使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得12毫克黃色固體,含有所要之產物,為主要成份。將混合物在TFA (1毫升)中攪拌1小時。然後在真空中移除過量TFA,並將所形成之殘留物與2毫升MeOH、0.5毫升NH4OH及100微升乙二胺一起攪拌16小時。藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)分離產物,而得4-(2-苯基-1,3-噻唑-5-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶三氟醋酸鹽(5毫克,5%)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.64 (s, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.10-8.04 (m, 2H), 7.73 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.56-7.51 (m, 3H), 7.14 (d, 1H);MS (ES):278 (M+1).
實例 55 : 2- 甲基 -2-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙酸乙酯三氟醋酸鹽 (55a) 與 2- 甲基 -2-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙酸 (55b) 使4-(1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(60毫克,0.00019莫耳)溶於DMF (1.5毫升)中,並以冷浴使溶液冷卻至0℃。添加氫化鈉(15毫克,0.00038莫耳)。在攪拌10分鐘後,添加2-溴基-2-甲基-丙酸乙酯(42微升,0.00028莫耳)。然後移除冷浴,並使反應混合物溫熱至室溫,歷經1小時。以飽和氯化銨溶液使反應混合物淬滅。添加更多水,並以MTBE萃取產物。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮。使殘留物溶於2毫升TFA中,並攪拌1小時。接著在真空中移除過量TFA,並將所形成之殘留物在含有0.6毫升NH4OH溶液之2毫升EtOH中攪拌16小時。移除揮發性物質,且混合物之純化係經由預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)進行,獲得2-甲基-2-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸乙酯三氟醋酸鹽(13毫克,17%):1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ12.03 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.31-8.19 (m, 2H), 7.59 (t, 1H), 7.48 (d, 1H), 6.98 (br s, 1H), 4.10 (q, 2H), 1.84 (s, 6H), 1.12 (t, 3H);MS (ES):299 (M+1),與2-甲基-2-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸(27毫克,53%): 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ12.04 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.26 (s, 2H), 7.59 (br s, 1H), 7.48 (d, 1H), 6.99 (br s, 1H), 1.83 (s, 6H);MS (ES):271 (M+H).
實例 56 : 2- 甲基 -2-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙醯胺 將2-甲基-2-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸(23毫克,0.000085莫耳)與N,N-羰基二咪唑(CDI) (21毫克,0.00013莫耳)在2毫升DMF中之混合物攪拌3小時。將過量固體NH4Cl與TEA添加至混合物中,並將其攪拌3小時。於真空中移除大部份溶劑,並使粗製殘留物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,接著經由預備之HPLC (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)再純化,而得2-甲基-2-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙醯胺(6毫克,26%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ11.63 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.80 (dd, 1H), 1.77 (s, 6H);MS (ES):270 (M+1).
實例 57 : 3- 甲基 -3-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁酸乙酯三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1. 3- 甲基 -3-[4-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁酸乙酯
使4-(1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(220毫克,0.0006996莫耳)與3-甲基-2-丁烯酸乙酯(292微升,0.00210莫耳)溶於DMF (10毫升)中。添加碳酸銫(912毫克,0.00280莫耳),並將所形成之混合物於室溫下攪拌3小時。以水稀釋反應混合物,並以MTBE萃取產物數次。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,及濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(0-60% EtOAc/己烷)純化,而得3-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酸乙酯(244毫克,79%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.37 (d, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.24 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 5.77 (s, 2H), 4.10 (q, 2H), 3.62 (dd, 2H), 3.04 (s, 2H), 1.88 (s, 6H), 1.20 (t, 3H), 0.98 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):443 (M+1).
步驟 2.
將3-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酸乙酯(20毫克,0.0000452莫耳)在1毫升TFA中攪拌1小時。然後在真空中移除過量TFA。將殘留物在含有0.5毫升NH4OH之2毫升MeOH中攪拌16小時。蒸發揮發性物質,接著藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得3-甲基-3-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酸乙酯三氟醋酸鹽(5毫克,26%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.19 (s, 1H), 8.61 (br s, 1H), 8.34-8.22 (br m, 2H), 7.62 (br s, 1H), 7.51 (br d, 1H), 7.02 (br s, 1H), 3.91 (q, 2H), 2.96 (s, 2H), 1.70 (s, 6H), 1.02 (t, 3H);MS (ES):313 (M+1).
實例 58 : 3- 甲基 -3-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -1- 醇三氟醋酸鹽 ·TFA 於3-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酸乙酯(213毫克,0.000481莫耳)在THF (5毫升,0.0616莫耳)中之溶液內,在-78℃下,逐滴添加DCM中之氫化二異丁基鋁(1.00M,1.1毫升)。將反應混合物攪拌3小時,於此段時間內,使反應物慢慢溫熱至-10℃。在-10℃下,於混合物中,小心添加水中之酒石酸K/Na四水合物。將混合物攪拌2小時,然後以三份醋酸乙酯萃取。以二份水與一份鹽水洗滌合併之有機萃液,接著以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁-1-醇(185毫克,96%),使用之而無需進一步純化。將一份如此獲得之醇(15毫克,0.000037莫耳)在TFA (1毫升)中攪拌2小時。於真空中移除TFA,並將殘留物與含有0.5毫升NH4OH之2毫升MeOH一起攪拌16小時。移除揮發性物質,並使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得3-甲基-3-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁-1-醇,為三氟醋酸鹽(8.0毫克,57%)。 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ12.17 (s, 1H), 8.58 (br s, 1H), 8.32-8.22 (br m, 2H), 7.62 (br s, 1H), 7.53 (br d, 1H), 7.03 (br s, 1H), 3.25 (t, 2H), 2.07 (t, 2H), 1.62 (s, 6H);MS (ES):271 (M+1).
實例 59 : 4- 甲基 -4-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊腈三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1. 4- 甲基 -4-[4-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊腈
將TEA (38.0微升,0.000273莫耳)與氯化甲烷磺醯(21.1微升,0.000273莫耳),於0℃下,相繼添加至3-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁-1-醇(按實例58製成) (81毫克,0.00020莫耳)在DCM (4毫升,0.05莫耳)中之溶液內。使反應混合物在此溫度下保持1.5小時,然後藉由添加水使反應淬滅。以DCM萃取反應混合物四次。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗製甲烷磺酸3-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酯(87毫克)。MS (ES):479 (M+1). 將甲烷磺酸3-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酯(42毫克,0.000088莫耳)與氰化鉀(46毫克,0.000702莫耳)在DMF (1毫升)中之混合物,於125℃下,在微波反應器中加熱30分鐘,接著於135℃下另外30分鐘。然後以水稀釋混合物,並以三份MTBE萃取產物。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得61毫克粗製4-甲基-4-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊腈,使用之而無需進一步純化。MS (ES):410 (M+1).
步驟 2.
將4-甲基-4-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊腈(57毫克,0.00014莫耳)在DCM (4毫升)與TFA (1毫升)中攪拌2小時。在真空中移除溶劑,並將殘留物在含有0.2毫升乙二胺之2毫升MeOH中攪拌16小時。蒸發揮發性物質,並藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)使產物自反應混合物單離,獲得4-甲基-4-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊腈,為三氟醋酸鹽(10毫克,18%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.09 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 7.60 (t, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.00 (br s, 1H), 2.33-2.21 (m, 4H), 1.61 (s, 6H);MS (ES):280 (M+1).
實例 60 : 4- 甲基 -4-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醯胺三氟醋酸鹽 ·TFA 將粗製4-甲基-4-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊腈(36毫克,0.000088莫耳,參閱實例59中之製備)在TFA (2毫升)中攪拌1小時。濃縮混合物,以移除過量TFA,並將所形成之殘留物在含有0.5毫升NH4OH之2毫升甲醇中攪拌16小時。使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得4-甲基-4-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醯胺,為三氟-醋酸鹽(21毫克,58%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.18 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.33-8.21 (m, 2H), 7.62 (br s, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.22 (br s, 1H), 7.04 (br s, 1H), 6.71 (br s, 1H), 2.14-2.07 (m, 2H), 1.86-1.79 (m, 2H), 1.58 (s, 6H);MS (ES):298 (M+1).
實例 61 : (3S)-3-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁腈三氟 - 醋酸鹽 與 (3R)-3-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁腈三氟醋酸鹽 與
於4-(1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.050克,0.00016莫耳)在ACN中之溶液內,添加2-丁烯腈(0.014毫升,0.00017莫耳)與DBU (0.029毫升,0.00020莫耳)。將所形成之混合物攪拌16小時。然後蒸發揮發性物質,並使殘留物溶於醋酸乙酯中。連續以1.0N HCl、水及鹽水洗滌所形成之溶液,接著以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮。為獲得呈實質純式之對掌異構物,故使用方法A (見下文)。 使粗製殘留物溶於TFA (7毫升,0.09莫耳)中,並將溶液攪拌1小時。然後蒸發過量TFA,且接著將殘留物與甲醇(4毫升,0.09莫耳)中之乙二胺(0.1毫升,0.001莫耳)一起攪拌16小時。濃縮混合物,並使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得3-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈三氟-醋酸鹽(35毫克,61%)。 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ12.16 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 7.65-7.61 (m, 1H), 7.48 (d, 1H), 6.99 (d, 1H), 4.86 (q, 1H), 3.17 (d, 2H), 1.57 (d, 3H);MS (ES):252 (M+1). 其他類似物係藉由類似實例61中所述之程序,對吡唑環之烷基化作用,使用不同起始物質而製成。例如,α,β-不飽和腈類係藉由類似下述關於(2E)-與(2Z)-己烯腈所說明之程序製成:在0℃下,於1.00M第三-丁醇鉀在THF中之溶液(24.2毫升)內,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(4.10毫升,0.025莫耳)在THF (30毫升)中之溶液。移除浴液,並使溶液溫熱至室溫。於達到室溫後,使溶液再冷卻至0℃,並逐滴添加丁醛(2.00毫升,0.023莫耳)在THF (7毫升)中之溶液。使反應混合物溫熱至室溫,並攪拌過夜。以醋酸乙酯與水稀釋混合物。分離液層,並以三份醋酸乙酯萃取水層。以鹽水洗滌合併之有機萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮。這獲得1.6克粗製混合物,含有(2E)-與(2Z)-己烯腈兩者,將其用於後續烷基化步驟中,無需進一步純化。1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ6.72 (dt, 1H反式烯烴), 6.48 (dt, 1H順式烯烴), 5.34 (dt, 1H反式烯烴), 5.31-5.30 (m, 1H順式烯烴). 於期望獲得呈實質純式之對掌異構物之情況下,對掌性分離係藉由下述方法之一進行: A) 藉預備之對掌性HPLC (OD-H管柱,以己烷中之15%乙醇溶離)矽膠層析(醋酸乙酯/己烷)後,分離係於經SEM保護之中間物上進行; B) 分離係藉預備之對掌性HPLC (OD-H管柱,以己烷中之15%乙醇溶離),於去除保護之自由態鹼上進行; C) 藉預備之對掌性HPLC (D-H管柱,以己烷中之10%乙醇溶離)矽膠層析(醋酸乙酯/己烷)後,分離係於經SEM保護之中間物上進行; D) 藉預備之對掌性HPLC (D-H管柱,以己烷中之15%乙醇溶離)矽膠層析(醋酸乙酯/己烷)後,分離係於經SEM保護之中間物上進行; E) 藉預備之對掌性HPLC (OD-H管柱,以己烷中之20%乙醇溶離)矽膠層析(醋酸乙酯/己烷)後,分離係於經SEM保護之中間物上進行;或 F) 藉預備之對掌性HPLC (OD-H管柱,以己烷中之30%乙醇溶離)矽膠層析(醋酸乙酯/己烷)後,分離係於經SEM保護之中間物上進行。OD-H管柱係指得自對掌性技術公司之Chiralcel OD-H,3 x 25公分,5μM。D-H管柱係指得自對掌性技術公司之ChiralPak AD-H,2 x 25公分,5μM。關於化合物之結果係摘錄於下表4中。
表 4 實例 65 : (3R)-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 己腈三氟醋酸鹽 與 (3S)-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 己腈三氟醋酸鹽 與
步驟 1. 4- 氯基 -7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於4-氯基吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.86克,0.0056莫耳)在DMF (20毫升,0.2莫耳)中之溶液內,在0℃下,以數份添加氫化鈉(0.27克,0.0067莫耳)。將反應混合物再攪拌45分鐘,接著逐滴添加β-(三甲基矽烷基)乙氧基]-氯化甲烷(1.2毫升,0.0067莫耳)。將所形成之反應混合物在0℃下攪拌45分鐘,然後以水使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以水、鹽水洗滌有機萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得油。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(0-15%醋酸乙酯/己烷)純化,產生4-氯基-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.40克,88%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.71 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.71 (s, 2H), 3.59 (dd, 2H), 0.97 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):284 (M+1).
步驟 2. 4-(1H- 吡唑 -4- 基 )-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於4-氯基-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.4克,0.0049莫耳)與4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑(1.4克,0.0074莫耳)在DMF (40毫升,0.5莫耳)中之混合物內,添加15毫升水中之碳酸鉀(2.0克,0.015莫耳)。使混合物以穩定氮氣流滌氣15分鐘。添加肆(三苯基-膦)鈀(0) (0.41克,0.00036莫耳),並將反應物加熱至125℃,歷經30分鐘。使混合物冷卻,然後以醋酸乙酯稀釋。將經稀釋之反應混合物以水、鹽水洗滌,以Na2SO4脫水乾燥,及濃縮,而得小體積DMF (約2-3毫升)中之溶液。添加水,造成此物質形成膠質在燒瓶壁上。接著將水傾析,並使固體溶於醋酸乙酯中。使溶液以Na2SO4脫水乾燥,及在真空中濃縮,而得黃色固體。將產物以***研製,產生4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶,為白色粉末,使其在真空下乾燥(1克,60%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ10.80 (br s, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.46 (s, 2H), 7.46 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 3.61 (dd, 2H), 0.98 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):316 (M+1).
步驟 3.
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.050克,0.00016莫耳)在ACN (1毫升,0.02莫耳)中之溶液內,添加己-2-烯腈(0.100克,0.00105莫耳) (為順式與反式異構物之混合物),接著為DBU (60微升,0.0004莫耳)。將所形成之混合物於室溫下攪拌16小時。於真空中移除ACN。使粗製殘留物溶於醋酸乙酯中,並以1.0N HCl、鹽水洗滌,以Na2SO4脫水乾燥,及濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(0-70% EtOAc/己烷)純化,而得56毫克產物,將其與1:1 TFA/DCM一起攪拌1小時,並蒸發溶劑。將所形成之產物與含有乙二胺(0.1毫升,0.001莫耳)之甲醇(4毫升,0.1莫耳)一起攪拌過夜。蒸發溶劑,並使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]己腈,為三氟醋酸鹽鹽。在需要時,對掌異構物係藉由上文關於實例61所述之方法A,以實質純式單離。 1H NMR (300 MHz, CD3OD):δ8.93 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 4.87-4.77 (m, 1H), 3.26-3.05 (m, 2H), 2.20-2.05 (m, 1H), 2.00-1.86 (m, 1H), 1.40-1.10 (m, 2H), 0.95 (t, 3H);MS (ES):281 (M+1).
實例 67 : (3R)- 與 (3S)-3- 環戊基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 步驟 1. (2E)- 與 (2Z)-3- 環戊基丙烯腈
於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之溶液(235毫升)內,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(39.9毫升,0.246莫耳)在THF (300毫升)中之溶液。移除冷浴,並使反應物溫熱至室溫,接著再冷卻至0℃,此時,逐滴添加環戊烷羧甲醛(22.0克,0.224莫耳)在THF (60毫升)中之溶液。移除浴液,並使反應物溫熱至環境溫度,且攪拌64小時。使混合物於***與水之間作分液處理,以三份醚,接著二份醋酸乙酯萃取水溶液。以鹽水洗滌合併之萃液,然後以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮,而得混合物,含有24.4克烯烴異構物,使用之而無需進一步純化(89%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ6.69 (dd, 1H反式烯烴), 6.37 (t, 1H順式烯烴), 5.29 (dd, 1H反式烯烴), 5.20 (d, 1H順式烯烴), 3.07-2.95 (m, 1H順式產物), 2.64-2.52 (m, 1H反式產物), 1.98-1.26 (m, 16H).
步驟 2. (3R)- 與 (3S)-3- 環戊基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(15.0克,0.0476莫耳)在ACN (300毫升)中之溶液內,添加3-環戊基丙烯腈(15克,0.12莫耳) (為順式與反式異構物之混合物),接著為DBU (15毫升,0.10莫耳)。將所形成之混合物於室溫下攪拌過夜。使ACN蒸發。以醋酸乙酯稀釋混合物,並以1.0N HCl洗滌溶液。以三份醋酸乙酯逆萃取有機層。以鹽水洗滌合併之有機萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮。使粗產物藉矽膠層析純化(醋酸乙酯/己烷之梯度液),產生黏稠透明漿液,使其溶於乙醇中,並蒸發數次,以移除醋酸乙酯,而得19.4克外消旋加成物(93%)。藉預備之HPLC (OD-H,15%乙醇/己烷)分離對掌異構物,並個別地使用於下一步驟中,以產生其相應之最後產物。已發現產自各已分離之對掌異構物之最後產物(參閱步驟3)為活性JAK抑制劑;但是,產自第二個吸收峰而自預備HPLC溶離之最後產物,係比其對掌異構物更具活性。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.85 (s, 1H), 8.32 (s, 2H), 7.39 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.26 (dt, 1H), 3.54 (t, 2H), 3.14 (dd, 1H), 2.95 (dd, 1H), 2.67-2.50 (m, 1H), 2.03-1.88 (m, 1H), 1.80-1.15 (m, 7H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):437 (M+1).
步驟 3.
於3-環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(6.5克,0.015莫耳,按上文所單離之R或S對掌異構物)在DCM (40毫升)中之溶液內,添加TFA (16毫升),並將其攪拌6小時。於真空中移除溶劑與TFA。使殘留物溶於DCM中,並再使用迴轉式蒸發器濃縮兩次,以儘可能移除TFA。於此之後,將殘留物與甲醇(30毫升)中之乙二胺(4毫升,0.06莫耳)一起攪拌過夜。於真空中移除溶劑,添加水,並於三份醋酸乙酯中萃取產物。以鹽水洗滌合併之萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,傾析,及濃縮,而得粗產物,使其藉急驟式管柱層析(以甲醇/DCM之梯度液溶離)純化。使所形成之混合物藉預備之HPLC/MS (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)進一步純化,而得產物(2.68克,58%)。 1H NMR (400 MHz, D6-DMSO):δ12.11 (br s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.53 (dt, 1H), 3.27 (dd, 1H), 3.19 (dd, 1H), 2.48-2.36 (m, 1H), 1.86-1.76 (m, 1H), 1.68-1.13 (m, 7H);MS (ES):307 (M+1). 於下列表中所提供之其他類似物係藉由類似例如實例61與65中所述之程序,使用不同起始物質,譬如步驟3中之不同α,β-不飽和腈類而製成。呈實質上純式之對掌異構物之單離,係藉由上文表4之前所述之經指示對掌性分離方法(A-F)達成,在產物以自由態胺單離之情況下,於去除保護後之產物係藉預備之HPLC (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離),代替預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)而純化。此係被稱為"修正G"。其結果係根據下列結構摘錄於表5中:
表 5 實例 69 : 4-{1-[(1S)-1- 甲基丁基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 }-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 與 4-{1-[(1R)-1- 甲基丁基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 }-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 與
使4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(0.050克,0.00016莫耳)在DMF (2毫升,0.02莫耳)中之溶液,於冰浴中冷卻,並於其中添加氫化鈉(0.013克,0.00032莫耳)。將所形成之混合物攪拌10分鐘,接著添加2-溴基戊烷(0.030毫升,0.00024莫耳)。然後移除冷卻浴,並將反應物在室溫下攪拌3小時,此時,再添加一份2-溴基戊烷(0.015毫升,0.00012莫耳)。45分鐘後,添加水,並以三份醋酸乙酯萃取反應混合物。以鹽水洗滌合併之萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮。將殘留物與TFA (3毫升,0.04莫耳)及DCM (3毫升,0.05莫耳)一起攪拌3.5小時,然後於真空中移除溶劑。接著將殘留物與MeOH (4毫升)中之NH4OH (1.5毫升)一起攪拌16小時。蒸發溶劑,並使產物藉預備之HPLC (C18,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得4-[1-(1-甲基丁基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶,為三氟醋酸鹽(25毫克,44%)。 1H NMR (300 MHz, CD3OD):δ8.83 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.24 (d, 1H), 4.63-4.50 (m, 1H), 2.07-1.91 (m, 1H), 1.88-1.74 (m, 1H), 1.58 (d, 3H), 1.38-1.09 (m, 2H), 0.93 (t, 3H);MS (ES):256 (M+1). 呈實質純式之對掌異構物之單離係藉由外消旋自由態鹼(於去除保護後,藉急驟式管柱層析單離,以MeOH/DCM梯度液溶離)之分離,使用HPLC (OD-H,以5%異丙醇/己烷溶離)達成。
實例 69a : 4- 甲基 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊腈 步驟 1. 3- 甲基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁酸乙酯
將4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(12.1克,0.0384莫耳)、2-丁烯酸,3-甲基-,乙酯(16.0毫升,0.115莫耳)及DBU (14.3毫升,0.0959莫耳)在ACN (100毫升)中之溶液,於回流下加熱3.5小時。於真空中移除溶劑。以水稀釋殘留物,以醋酸乙酯萃取,並以飽和氯化銨洗滌合併之有機萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,及濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)純化,產生所要之產物(15.5克,91%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.83 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.37 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.03 (q, 2H), 3.54 (dd, 2H), 2.98 (s, 2H), 1.80 (s, 6H), 1.13 (t, 3H), 0.91 (dd, 2H), -0.07 (s, 9H);MS (ES):444 (M+1).
步驟 2. 3- 甲基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -1- 醇
於3-甲基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酸乙酯(15.4克,0.0347莫耳)在THF (151毫升)中之溶液內,在-78℃下,逐滴添加DCM中之1.00M氫化二異丁基鋁(84.5毫升)。將反應物攪拌2小時,並緩慢溫熱至-10℃。以水使混合物淬滅,然後以酒石酸鉀鈉四水合物與水處理。將混合物攪拌1小時,接著以醋酸乙酯萃取。以水與鹽水洗滌萃液,然後以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析純化,產生所要之產物(13.8克,99%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.83 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.38 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 3.65 (dd, 2H), 3.54 (dd, 2H), 2.21 (t, 2H), 1.72 (s, 6H), 0.91 (dd, 2H), -0.07 (s, 9H);MS (ES):402 (M+1).
步驟 3. 3- 甲基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -1- 醇
將3-甲基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁-1-醇(13.8克,0.0344莫耳)在TFA (20毫升)中之溶液攪拌1小時。然後在真空中濃縮混合物,並將殘留物在甲醇(30毫升)、氫氧化銨(30毫升)及乙二胺(8毫升)之混合物中攪拌2小時。接著濃縮混合物,並以水稀釋殘留物,及以數份15% IPA/CH2Cl2萃取。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,並在真空中濃縮,獲得20克白色固體。將固體以醚研製,並藉過濾產物單離,獲得產物,為白色固體(7.75克,83%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.99 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.38 (dd, 1H), 6.80 (dd, 1H), 3.66 (t, 2H), 2.72 (br s, 1H), 2.22 (t, 2H), 1.74 (s, 6H);MS (ES):272 (M+1).
步驟 4. 甲烷磺酸 3- 甲基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁酯
將3-甲基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁-1-醇(6.61克,0.0244莫耳)在DCM (300毫升)中之溶液,於0℃下,以TEA (3.74毫升,0.0268莫耳),接著以氯化甲烷磺醯(2.07毫升,0.0268莫耳)處理。將反應物攪拌1小時,然後在真空中濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析純化,而得所要之產物(4.9克,57%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.45 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.79 (dd, 1H), 7.11 (dd, 1H), 4.75 (t, 1H), 3.30 (s, 3H), 2.85 (t, 1H), 1.75 (s, 6H);MS (ES):254 (M-CH3SO3H+1).
步驟 5. 4- 甲基 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊腈
將甲烷磺酸3-甲基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁酯(2.97克,8.50毫莫耳)、DMF (120毫升)及氰化鈉(6.21克,0.127莫耳)均勻地分配至六個20毫升可微波容器中,將其每一個在125℃下,於微波反應器中加熱4000秒。合併小玻瓶之內容物,並以400毫升水稀釋,且以五份150毫升之醋酸乙酯萃取。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,及於真空中移除溶劑。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析純化,產生所要之產物(1.40克,59%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.52 (br s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.39 (dd, 1H), 6.81 (dd, 1H), 2.38 (dd, 2H), 2.16 (dd, 2H), 1.73 (s, 6H);MS (ES):281 (M+1). 於表5a中之類似物係根據上文關於實例69a所述之方法製成。關於實例69b,係使用共軛接受劑,並按
Perkin Trans. 1
, 2000, (17), 2968-2976中所述製成,且步驟4&5係於步驟3之前進行。
表 5a 實例 69d : 3- 甲基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁腈 步驟 1. 千里腈
於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之溶液內(2.0毫升),在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(0.33毫升,2.06毫莫耳)在THF (4毫升)中之溶液。移除冷浴,並使反應物溫熱至室溫。然後使反應物再冷卻至0℃,並逐滴添加丙酮(0.20毫升,2.81毫莫耳)。接著移除冷卻浴,並使反應物溫熱至室溫,且攪拌過夜。以水稀釋反應物,分離液層,並以醋酸乙酯萃取水溶液。以鹽水洗滌萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮。使用產物無需進一步純化(339毫克,67%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ5.10 (br s, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.92 (s, 3H).
步驟 2. 3- 甲基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(0.216克,0.684毫莫耳)在ACN (4毫升,0.08莫耳)中之溶液內,添加粗製千里腈(0.111克,1.37毫莫耳),接著為DBU (200微升,0.002莫耳),並將所形成之混合物加熱至60℃,歷經23小時。使混合物冷卻至室溫,並蒸發ACN。以醋酸乙酯稀釋混合物,並以稀HCl與鹽水洗滌。使有機溶液以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及濃縮。藉矽膠層析(醋酸乙酯/己烷)之純化,獲得所要之產物。 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ8.83 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 3.54 (dd, 2H), 3.08 (s, 2H), 1.84 (s, 6H), 0.91 (dd, 2H), -0.07 (s, 9H);MS (ES):397 (M+1). 於此產物在DCM中之溶液內,在0℃下,添加足以包含20% 總體積之TFA。將溶液在此溫度下攪拌30分鐘,然後於環境溫度下2小時又15分鐘。在真空中移除溶劑,並將殘留物與甲醇(10毫升)及乙二胺(0.4毫升,0.006莫耳)一起攪拌過夜。蒸發溶劑,並使產物藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得產物(25毫克,14%)。 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ12.08 (s, 1H), 8.68 (s, 2H), 8.39 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 3.32 (s, 2H), 1.73 (s, 6H);MS (ES):267 (M+1). 於表5b中之實例69e與69f係藉由類似上文關於實例69d所述之方法製成,使用無論是根據已發表之文獻程序,或經由步驟1中之方法製成之不飽和腈類。
表 5b
其他類似物係藉由類似實例69中所述之程序,對親核性取代步驟,使用不同起始物質,譬如替代溴化物或甲烷磺酸鹽化合物而製成。在獲得自由態胺為產物之情況下,係於去除保護後,使產物無論是藉矽膠層析(以DCM中之5%甲醇溶離)或藉預備之HPLC (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化。關於列示於表6中之化合物,摘錄其結果。
表 6 實例 74 : (2Z)-3- 環戊基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 丙烯腈 步驟 1. 3- 環戊基丙 -2- 炔腈
於環戊基乙炔(0.50克,5.3毫莫耳)在THF (5毫升)中之溶液內,在-78℃下,添加己烷中之2.5M正-丁基鋰(2.23毫升)。將混合物攪拌15分鐘,接著逐滴添加THF (3毫升)中之氰酸苯酯(0.70克,5.8毫莫耳)。使反應物溫熱至室溫。於反應混合物中傾倒6N NaOH,並將混合物攪拌5分鐘。以***萃取產物。以6N NaOH,且以鹽水洗滌萃液,然後以硫酸鈉脫水乾燥,傾析,並於真空中移除溶劑,而得產物(600毫克,95%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ2.81-2.68 (m, 1H), 2.07-1.54 (m, 8H).
步驟 2. (2Z)-3- 環戊基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙烯腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(0.40克,1.2毫莫耳)與3-環戊基丙-2-炔腈(0.30克,2.5毫莫耳)在DMF (8毫升)中之混合物內,添加碳酸鉀(0.09克,0.6毫莫耳)。將混合物攪拌35分鐘。以醋酸乙酯與鹽水稀釋反應物,並以三體積之醋酸乙酯萃取含水部份。將合併之有機萃液再以鹽水洗滌一次,然後以硫酸鈉脫水乾燥,傾析,及在真空中濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)純化,產生所要之產物(290毫克,53%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.98 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.84 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 5.21 (s, 1H), 3.64-3.55 (m, 1H), 3.53 (t, 2H), 2.13-2.01 (m, 2H), 1.83-1.66 (m, 4H), 1.57-1.46 (m, 2H), 0.91 (t, 2H), -0.07 (s, 9H);MS (ES):435 (M+1).
步驟 3. (2Z)-3- 環戊基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙烯腈
將(2Z)-3-環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙烯腈(0.030克,0.069莫耳)在DCM (3毫升)與TFA (2毫升)中之溶液攪拌1小時。於真空中移除溶劑,並將產物與THF (1.5毫升)、氫氧化鈉50%水溶液(0.75毫升)及水(0.75毫升)一起攪拌2小時。藉由逐滴添加濃HCl中和反應混合物。以醋酸乙酯萃取產物。使合併之有機物質以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。使粗製殘留物藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得所要之產物(16毫克,76%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ9.08 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 5.82 (d, 1H), 3.62-3.54 (m, 1H), 2.00-1.90 (m, 2H), 1.76-1.48 (m, 6H);MS (ES):305 (M+1).
實例 75 : 3- 亞環戊基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 丙腈 步驟 1. 3- 亞環戊基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於3-環戊基丙-2-炔腈(0.4克,0.003莫耳)在ACN (10毫升)中之懸浮液內,添加4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.53克,1.7毫莫耳)與DBU (0.33毫升,2.2毫莫耳)。將此混合物於室溫下攪拌50分鐘。使反應混合物於醋酸乙酯與稀HCl之間作分液處理。分離含水部份,並以醋酸乙酯萃取。以稀HCl與鹽水洗滌合併之有機萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)純化,產生所要之產物(540毫克,74%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.85 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.54 (dd, 2H), 2.55 (t, 2H), 2.45 (t, 2H), 1.85 (dddd, 2H), 1.73 (dddd, 2H), 0.91 (dd, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):435 (M+1).
步驟 2. 3- 亞環戊基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
將3-亞環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.030克,0.069毫莫耳)在DCM (3毫升)與TFA (2毫升)中之溶液攪拌1小時。在真空中蒸發溶劑,並將產物與氫氧化鈉50%水溶液(0.75毫升)與水(0.75毫升)及THF (1.5毫升)一起攪拌2小時。藉由逐滴添加濃HCl中和反應混合物。以醋酸乙酯萃取產物。使合併之有機萃液以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。使粗製殘留物藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得所要之產物(7毫克,33%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.23-12.01 (br s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.04 (d, 1H), 3.95 (s, 2H), 2.53 (t, 2H), 2.42 (t, 2H), 1.76 (dddd, 2H), 1.65 (dddd, 2H);MS (ES):305 (M+1).
實例 76 : 3- 甲基 [5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 胺基丙烷 - 腈三氟醋酸鹽 步驟 1. 4-(1,3- 噻唑 -5- 基 )-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
使4-氯基-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3.00克,0.0106莫耳)與1,3-噻唑(7.50毫升,0.106莫耳)溶於N,N-二甲基乙醯胺(40.0毫升)中。將溶液以等份分配至四個20毫升可微波之容器中。然後於各反應容器中,添加醋酸鉀(0.777克,7.93毫莫耳),接著為肆(三苯基-膦)鈀(0) (0.60克,2.1毫莫耳)。將各反應容器在200℃下,於微波反應器中加熱30分鐘。合併反應物,並於真空中移除大部份溶劑。以DCM稀釋殘留物,過濾,及濃縮。藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)之純化,獲得所要之產物(2.25克,64%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.99 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.91 (d, 1H), 5.70 (s, 2H), 3.56 (dd, 2H), 0.93 (dd, 2H), -0.05 (s, 9H);MS (ES):333 (M+1).
步驟 2. 4-(2- 溴基 -1,3- 噻唑 -5- 基 )-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
將己烷中之2.5M正-丁基鋰(0.860毫升)逐滴添加至4-(1,3-噻唑-5-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(550毫克,0.0016莫耳)在THF (20毫升)中之-78℃溶液內。將混合物於-78℃下攪拌30分鐘,接著以在THF (10毫升)中之溶液,緩慢添加四溴化碳(658毫克,0.00198莫耳)。30分鐘後,以少量飽和氯化銨使混合物淬滅,以醚稀釋,並以硫酸鈉脫水乾燥。使在過濾與濃縮後所得之殘留物藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)純化,而得所要之產物(387毫克,57%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.85 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 5.69 (s, 2H), 3.55 (dd, 2H), 0.92 (dd, 2H), -0.05 (s, 9H);MS (ES):411, 413 (M+1).
步驟 3. 4-(2- 溴基 -1,3- 噻唑 -5- 基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
將4-(2-溴基-1,3-噻唑-5-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(370毫克,0.90毫莫耳)在DCM (5.0毫升)與TFA (1.0毫升)中之溶液,於室溫下攪拌7小時。然後濃縮混合物,再溶於甲醇(2毫升)中,並添加乙二胺(0.5毫升)。將混合物在室溫下攪拌6小時。以DCM (10毫升)稀釋混合物,並藉過濾單離沉澱物,且以少量DCM洗滌,而得所要之產物(182毫克,72%)。 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ8.74 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.15 (d, 1H);MS (ES):281, 283 (M+1).
步驟 4. 3- 甲基 [5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 胺基丙腈
將4-(2-溴基-1,3-噻唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(31毫克,0.11毫莫耳)與3-(甲胺基)丙腈(103微升,0.00110莫耳)在DMF (1.0毫升,0.013莫耳)中之溶液,於90℃下攪拌2小時。使粗製反應混合物藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離),及再一次藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.1% TFA之ACN/H2O梯度液溶離)純化,產生所要之產物,為三氟醋酸鹽(30毫克,68%)。 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ12.25 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.60 (dd, 1H), 7.00 (dd, 1H), 3.89 (t, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.94 (t, 2H);MS (ES):285 (M+1).
實例 77 : (3S)- 與 (3R)-3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 己烷 - 腈 步驟 1. N- 甲氧基 -N- 甲基丁醯胺
於丁酸(1.01克,0.0115莫耳)與N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(1.12克,0.0115莫耳)在DCM (50毫升)中之混合物內,添加六氟磷酸苯并***-1-基氧基參(二甲胺基)-鏻(5.6克,0.013莫耳)與TEA (3.2毫升,0.023莫耳)。將混合物於室溫下攪拌過夜。然後以水與鹽水洗滌溶液,以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中濃縮。使粗產物藉急驟式管柱層析(醚/己烷)純化。移除溶劑(235毫巴/40℃),而得產物(1.33克,88%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ3.68 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.40 (t, 2H), 1.74-1.59 (m, 2H), 0.96 (t, 3H).
步驟 2. 1-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ]- 丁 -1- 酮
將己烷中之2.5M正-丁基鋰(878微升)慢慢地逐滴添加至4-(1,3-噻唑-5-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(501毫克,1.37毫莫耳)在THF (20毫升)中之-78℃溶液內。45分鐘後,添加N-甲氧基-N-甲基丁醯胺(0.360克,2.74毫莫耳)。將反應物於-78℃下持續30分鐘,然後使其達到室溫。以飽和氯化銨使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以水與鹽水洗滌萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中濃縮。急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷),獲得產物(235毫克,42%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.93 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 5.71 (s, 2H), 3.56 (dd, 2H), 3.19 (t, 2H), 1.92-1.77 (m, 2H), 1.05 (t, 3H), 0.93 (dd, 2H), -0.05 (s, 9H);MS (ES):403 (M+1).
步驟 3. (2E)- 與 (2Z)-3-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 己 -2- 烯腈
於THF中之1.0M第三-丁醇鉀(0.605毫升)在THF (4.0毫升)中之溶液內,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(0.102毫升,0.634毫莫耳)。移除冷卻浴,並使反應物溫熱至室溫。30分鐘後,逐滴添加1-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]丁-1-酮(232毫克,0.576毫莫耳)在THF (3.0毫升)中之溶液。將反應物攪拌2小時,然後使粗製混合物吸附於矽膠上,並藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)純化,而得產物,為烯烴異構物之混合物(225毫克,92%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3), 主要異構物:δ8.89 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.70 (s, 2H), 3.56 (dd, 2H), 2.96 (t, 2H), 1.88-1.72 (m, 2H), 1.08 (t, 3H), 0.93 (dd, 2H), -0.07 (s, 9H);MS (ES):426 (M+1).
步驟 4. (3S)- 與 (3R)-3-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 己腈
將銅醋酸鹽單水合物(0.7毫克,0.004毫莫耳)與(氧基二-2,1-次苯基)雙(二苯基-膦) (2毫克,0.004莫耳)在甲苯(0.24毫升)中混合。添加PMHS (30微升)。將混合物於室溫下攪拌25分鐘,接著添加甲苯(0.24毫升)中之(2E)-3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]己-2-烯腈(51毫克,0.12莫耳),且最後為第三-丁醇(0.043毫升)。將所形成之混合物攪拌過夜。使粗製混合物藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)直接純化,而得所要之產物(39毫克,76%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.87 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 5.69 (s, 2H), 3.60-3.46 (m, 3H), 2.99-2.82 (m, 2H), 2.05-1.89 (m, 2H), 1.50-1.34 (m, 2H), 0.97 (t, 3H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):428 (M+1).
步驟 5. (3S)- 與 (3R)-3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 己腈
將TFA (1.0毫升)添加至3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]己腈(36毫克,0.084毫莫耳)在DCM (4.0毫升)中之溶液內,並將混合物於室溫下攪拌3小時。濃縮混合物,並再溶於甲醇(3毫升)中,於其中添加乙二胺(0.1毫升)。於2小時反應時間後,濃縮混合物,並藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)直接純化,而得所要之產物(10毫克,40%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ9.96 (br s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.51-7.45 (m, 1H), 6.90-6.86 (m, 1H), 3.59-3.44 (m, 1H), 3.01-2.82 (m, 2H), 2.06-1.87 (m, 2H), 1.51-1.34 (m, 2H), 0.98 (t, 3H);MS (ES):298 (M+1).
實例 78 : (3R)- 與 (3S)-3- 環戊基 -3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 丙腈 於(2E)-與(2Z)-3-環戊基-3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]丙烯腈(199毫克,0.440毫莫耳)(例如按實例77步驟1至3製成)在乙醇(10毫升)與醋酸乙酯(10毫升)之混合物中之溶液內,添加催化量之10%鈀/碳。將混合物於室溫及一大氫氣壓下攪拌過夜。然後使其接受50 psi H2,直到反應完成為止。過濾,並移除溶劑,獲得油,使其溶於DCM (4毫升)與TFA (1毫升)中。將溶液攪拌,直到起始物質消耗為止,然後濃縮混合物,且再溶於甲醇(3毫升)中,於其中添加乙二胺(0.4毫升)。將溶液於室溫下攪拌一小時,並在真空中濃縮。使粗製混合物藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得所要之產物(36毫克,25%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.44 (br s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.50 (dd, 1H), 6.89 (dd, 1H), 3.34 (dt, 1H), 2.98 (dd, 1H), 2.89 (dd, 1H), 2.44-2.31 (m, 1H), 2.07-1.96 (m, 1H), 1.80-1.52 (m, 5H), 1.40-1.24 (m, 2H);MS (ES):324 (M+1). 表5c之下列化合物係按實例77、78或86所描述,如下表中所指示,利用不同Weinreb醯胺類(按實例77步驟1製成)而製成(為外消旋混合物):
表 5c 實例 84 : (2S)- 與 (2R)-2-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 戊烷 - 腈 步驟 1. (2S)- 與 (2R)-2-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 戊腈
於1-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]丁-1-酮(按實例77製成) (101毫克,0.251毫莫耳)與對-甲苯基磺醯基-異氰化甲烷(147毫克,0.753毫莫耳)在DMSO (5.0毫升)與乙醇(61微升)之混合物中之混合物內,添加THF中之1.0M第三-丁醇鉀(753微升)。然後將混合物加熱至45℃,歷經2小時。於冷卻至室溫後,藉由添加飽和氯化銨,接著為水,使混合物淬滅。以醚萃取產物,並以水與鹽水洗滌萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷),獲得產物(39毫克,25%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.88 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 5.70 (s, 2H), 4.32 (dd, 1H), 3.55 (dd, 2H), 2.20-2.11 (m, 2H), 1.71-1.57 (m, 2H), 1.03 (t, 3H), 0.93 (dd, 2H);MS (ES):414 (M+1).
步驟 2. (2S)- 與 (2R)-2-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 戊腈
將2-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]戊腈(59毫克,0.093毫莫耳)在DCM (3毫升)與TFA (0.5毫升)中之溶液,於室溫下攪拌4小時。然後濃縮混合物,接著使殘留物溶於甲醇(3毫升)中,然後於其中添加乙二胺(0.3毫升)。將溶液於室溫下攪拌40分鐘。在真空中移除溶劑,並使粗製混合物藉預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得所要之產物(20毫克,76%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.66 (br s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.49 (dd, 1H), 6.88 (dd, 1H), 4.33 (dd, 1H), 2.23-2.12 (m, 2H), 1.75-1.60 (m, 2H), 1.04 (t, 3H);MS (ES):284 (M+1).
實例 85 : (4S)- 與 (4R)-4-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 庚烷 - 腈 於膦酸基醋酸三乙酯(188毫克,0.838毫莫耳)在THF (6.0毫升)中之溶液內,在0℃下,添加THF中之1.0M第三-丁醇鉀(840微升)。然後使混合物溫熱至室溫,接著再冷卻至0℃,此時,添加THF (4.0毫升)中之1-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]丁-1-酮(按實例77製成) (225毫克,0.559毫莫耳)。將混合物於室溫下攪拌1.5小時,此時,以水使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以水與鹽水洗滌合併之萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中濃縮。急驟式管柱層析獲得產物,為烯烴異構物之混合物(222毫克,84%)。MS (ES):473 (M+1). 使3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]己-2-烯酸乙酯(為(2E)-與(2Z)-異構物之混合物)(222毫克,0.470毫莫耳)溶於乙醇(10毫升)中,並添加催化量之10% Pd-C。將混合物於經由氣瓶所提供之氫大氣下攪拌16小時。過濾,及在真空中濃縮,獲得所要之產物(201毫克,90%)。MS (ES):475 (M+1). 於3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]己酸乙酯(201毫克,0.423毫莫耳)在THF (5.0毫升)中之溶液內,在-78℃下,添加DCM中之1.00M氫化二異丁基鋁(1.06毫升)。使混合物慢慢地溫熱至-10℃,歷經1.5小時,接著添加酒石酸鉀鈉四水合物、水及醚。將混合物攪拌1小時,然後分離液層,並進一步以醋酸乙酯萃取水層。以水與鹽水洗滌有機萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中濃縮,而得所要之產物(176毫克,96%)。MS (ES):433 (M+1). 將3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]己烷-1-醇(88毫克,0.20毫莫耳)在TFA (2毫升)中之溶液攪拌30分鐘。然後蒸發TFA,並將殘留物在含有乙二胺(0.2毫升)與水滴之甲醇(2毫升)中攪拌30分鐘。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,獲得所要之產物(36毫克,58%)。MS (ES):303 (M+1). 於3-[5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]己烷-1-醇(36毫克,0.12毫莫耳)與TEA (19.9微升,0.143毫莫耳)在DCM (5毫升)中之混合物內,在0℃下,添加氯化甲烷磺醯(11.0微升,0.143毫莫耳)。在攪拌10分鐘後,使溶液濃縮,並溶於DMSO (1.6毫升)中,且添加氰化鈉(23毫克,0.48毫莫耳)。然後將混合物於125℃下,在微波中加熱30分鐘。接著將混合物使用預備之HPLC/MS (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)直接純化,而得所要之產物(10毫克,27%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.37 (br s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.46 (dd, 1H), 6.88 (dd, 1H), 3.34-3.25 (m, 1H), 2.47-2.30 (m, 2H), 2.22-2.12 (m, 2H), 1.95-1.71 (m, 2H), 1.44-1.31 (m, 2H), 0.94 (t, 3H);MS (ES):312 (M+1).
實例 86 : 3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 戊二腈 步驟 1. N- 甲氧基 -2-[(4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ]-N- 甲基乙醯胺
於[(4-甲氧基苄基)氧基]醋酸(
Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2001
, 第2837-2841頁) (6.86克,0.0350莫耳)與N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(3.41克,0.0350莫耳)在DCM (100毫升)中之混合物內,添加六氟磷酸苯并***-1-基氧基參(二甲胺基)-鏻(17克,0.038莫耳),接著為TEA (9.7毫升,0.070莫耳)。將所形成之混合物在室溫下攪拌過夜。然後以水、0.5M HCl、飽和NaHCO3及鹽水洗滌溶液,接著以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。急驟式管柱層析(醚/己烷),獲得所要之產物(5.75克,69%)。
步驟 2. 2-[(4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ]-1-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 乙酮
於4-(1,3-噻唑-5-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(2.12克,6.38毫莫耳)在THF (70毫升)中之溶液內,在-78℃下,慢慢地逐滴添加己烷中之2.5M正-丁基鋰(3.06毫升)。於攪拌30分鐘後,添加N-甲氧基-2-[(4-甲氧基苄基)氧基]-N-甲基乙醯胺(2.29克,9.56毫莫耳)。將反應物在添加之後,於-78℃下持續30分鐘,然後移除冷卻浴,並以飽和氯化銨使反應淬滅,且以醚萃取。使萃液以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中濃縮。使粗製混合物藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)純化,而得所要之產物(2.16克,66%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.93 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.37 (d, 2H), 6.91 (d, 2H), 6.89 (d, 1H), 5.70 (s, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.93 (dd, 2H), -0.05 (s, 9H);MS (ES):511 (M+1).
步驟 3. (2E)- 與 (2Z)-4-[(4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ]-3-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 丁 -2- 烯腈
於THF中之1M第三-丁醇鉀(4.44毫升)在THF (30毫升)中之溶液內,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(820毫克,0.0046莫耳)。移除浴液,並使反應物溫熱至室溫。30分鐘後,逐滴添加2-[(4-甲氧基苄基)-氧基]-1-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]-乙酮(2.16克,0.00423莫耳)在THF (20毫升)中之溶液。將反應物攪拌1小時,然後以少量飽和氯化銨使反應淬滅,以醚稀釋,以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中濃縮。藉急驟式管柱層析純化,以0-35%醋酸乙酯/己烷之梯度液溶離,獲得所要之產物,為呈幾乎等量之烯烴異構物之混合物(1.76克,78%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.90 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.50 (d, 2H), 7.35 (dd, 2H), 7.31 (dd, 2H), 6.92 (dd, 2H), 6.90 (dd, 2H), 6.86 (d, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (t, 1H), 5.70 (s, 4H), 4.75 (s, 2H), 4.72 (d, 2H), 4.64 (s, 4H), 3.82 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 3.55 (dd, 2H), 0.96-0.90 (m, 4H), -0.05 (s, 9H), -0.054 (s, 9H);MS (ES):534 (M+1).
步驟 4. 4-[(4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ]-3-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 丁腈
使(2E)-與(2Z)-4-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]丁-2-烯腈(880毫克,1.6毫莫耳)溶於乙醇(20毫升)與醋酸乙酯(20毫升)之混合物中。添加催化量之10% Pd-C。使混合物在50 psi氫下振盪。過濾混合物,並在真空中濃縮,而得所要之產物(0.85克,99%)。MS (ES):536 (M+1).
步驟 5. 3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 噻唑 -2- 基 ] 戊二腈
將DCM (10毫升)中之4-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]丁腈(251毫克,0.468毫莫耳)以二氯二氰基醌(DDQ) (434毫克,1.87毫莫耳),接著以水(376微升)處理。1.5小時後,添加水與飽和碳酸氫鈉,並以醋酸乙酯萃取反應物三次。以水、鹽水洗滌萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮,而得粗產物,使用之而無需進一步純化。 於0℃下,將上文所製成之4-羥基-3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]丁腈在DCM中之溶液(12毫升),相繼以TEA (130微升,0.94毫莫耳)與氯化甲烷磺醯(73微升,0.94毫莫耳)處理。於1小時反應時間後,以水稀釋混合物,並以醋酸乙酯萃取三次。以水與鹽水洗滌萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。然後使殘留物溶於DMSO (5毫升)中,並添加氰化鈉(110毫克,2.3毫莫耳)。30分鐘後,以水稀釋混合物,以醚萃取,以水、鹽水洗滌,及以硫酸鈉脫水乾燥。濃縮,並藉急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷)純化,獲得所要之產物(14毫克,7%)。MS (ES):425 (M+1). 將3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]戊二腈(14毫克,0.033毫莫耳)在含有TFA (0.6毫升)之DCM (3毫升)中之溶液攪拌4小時。然後濃縮混合物,並使殘留物再溶解於甲醇(2毫升)中,接著於其中添加乙二胺(0.4毫升)。於1小時反應時間後,使產物藉預備之HPLC/MS (C18,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,而得所要之產物(6毫克,62%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.27 (br s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.14 (d, 1H), 4.14 (m, 1H), 3.17 (d, 4H);MS (ES):295 (M+1).
實例 87 : (3R)-3- 環戊基 -3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 㗁唑 -2- 基 ]- 丙腈 與 (3S)-3- 環戊基 -3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 㗁唑 -2- 基 ] 丙腈 步驟 1. 4-(1,3- 㗁唑 -5- 基 )-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
將4-氯基-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.440克,1.55毫莫耳)、1,3-㗁唑(0.306毫升,4.65毫莫耳)、醋酸鉀(0.456克,4.65毫莫耳)及肆(三苯膦)鈀(0) (0.179克,0.155毫莫耳)在N,N-二甲基乙醯胺(8.0毫升)中之混合物,於微波反應器中,加熱至200℃,歷經30分鐘。於真空中移除大部份溶劑。以DCM稀釋所形成之殘留物,並過濾,及濃縮。急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷),獲得產物(330毫克,67%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.96 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.08 (d, 1H), 5.76 (s, 2H), 3.60 (t, 2H), 0.98 (t, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):317 (M+1).
步驟 2. 環戊基 [5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 㗁唑 -2- 基 ] 甲酮
將己烷中之正-丁基鋰(1.6M,0.30毫升)慢慢地逐滴添加至4-(1,3-㗁唑-5-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(140.0毫克,0.44毫莫耳)在THF (10.0毫升)中之-78℃溶液內。20分鐘後,添加醚中之1.0M二氯化鋅(0.53毫升)。然後將反應混合物在0℃下攪拌60分鐘。於此之後,添加碘化銅(I) (84毫克,0.44毫莫耳),並將此混合物攪拌10分鐘。接著添加氯化環戊碳醯(108微升,0.885毫莫耳)。將反應物於0℃下再攪拌1小時,此時,使其溫熱至室溫。藉由添加飽和NH4Cl溶液使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以水與鹽水洗滌萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷),獲得產物(97毫克,53%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.96 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 5.76 (s, 2H), 3.60 (t, 2H), 3.56 (t, 1H), 2.23-1.56 (m, 8H), 0.98 (t, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):413 (M+1).
步驟 3. (3R)- 與 (3S)-3- 環戊基 -3-[5-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 㗁唑 -2- 基 ] 丙腈
於THF中之1.0M第三-丁醇鉀(0.355毫升)與THF (3毫升)之溶液中,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(66毫克,0.37毫莫耳)。移除冷浴,並使反應物溫熱至室溫。30分鐘後,逐滴添加環戊基[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-㗁唑-2-基]甲酮(1.40E2毫克,0.338毫莫耳)在THF (2.0毫升)中之溶液。於3小時反應時間後,使混合物吸附於矽膠上,並急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷),獲得所要之產物,為烯烴異構物之混合物(89毫克,60%)。MS (ES):436 (M+1). 於醋酸銅單水合物(4.0毫克,0.020毫莫耳)與(氧基二-2,1-次苯基)雙(二苯膦) (11毫克,0.020毫莫耳)在甲苯(0.40毫升,0.0038莫耳)中之混合物內,添加PMHS (50微升)。將所形成之混合物在室溫下攪拌25分鐘,接著添加甲苯(0.40毫升)中之(2E)-與(2Z)-3-環戊基-3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3-㗁唑-2-基]丙烯腈(88毫克,0.20毫莫耳),然後為第三-丁醇(0.072毫升)。在室溫下,於16小時內反應失敗後,添加另外之醋酸銅單水合物與(氧基二-2,1-次苯基)雙(二苯膦) (各0.10莫耳當量),並將反應混合物於60℃下加熱16小時。使粗製混合物接受急驟式管柱層析(醋酸乙酯/己烷),而得所要之產物(21毫克,23%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.96 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 5.76 (s, 2H), 3.60 (t, 2H), 3.38-3.30 (m, 1H), 3.03 (dd, 1H), 2.95 (dd, 1H), 2.60-2.40 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.85-1.15 (m, 7H), 0.98 (t, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):438 (M+1).
步驟 4. (3R)- 與 (3S)-3- 環戊基 -3-[5-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1,3- 㗁唑 -2- 基 ]- 丙腈
將3-環戊基-3-[5-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1,3-㗁唑-2-基]丙腈之溶液(20.0毫克,0.0457毫莫耳)與DCM (0.2毫升)中之TFA (0.1毫升)一起攪拌6小時。移除溶劑,並將所形成之殘留物與甲醇(0.2毫升)中之乙二胺(0.1毫升)一起攪拌過夜。於真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離),獲得所要之產物(5.3毫克,38%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.25 (br s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 3.36-3.28 (m, 1H), 2.98 (dd, 1H), 2.90 (dd, 1H), 2.51-2.38 (m, 1H), 2.08-1.96 (m, 1H), 1.80-1.51 (m, 5H), 1.44-1.30 (m, 2H);MS (ES):308 (M+1). 根據上文實例87之程序,亦製成下列表5d之化合物,為外消旋混合物。
表 5d 實例 90 : 5-( 甲硫基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊烷 - 腈 步驟 1. (2E)-5-( 甲硫基 ) 戊 -2- 烯腈
於[氯基(三苯基)正膦基]ACN (2.5克,0.0073莫耳)在THF (10毫升,0.1莫耳)中之0℃混合物內,添加TEA (2.0毫升,0.014莫耳),並將所形成之混合物攪拌30分鐘。移除冰浴,歷經30分鐘,然後使混合物再冷卻回復至0℃添加3-(甲硫基)-丙醇(0.68毫升,0.0072莫耳)在THF (1毫升,0.02莫耳)中之溶液,並將混合物攪拌過夜。添加水,並過濾混合物。以水x3及鹽水洗滌濾液。使有機相脫水乾燥,並藉迴轉式蒸發移除溶劑,而得2.1克灰白色固體。將固體以MTBE研製,並過濾。以1N HCl、水、飽和NaHCO3及鹽水洗滌濾液。使有機相脫水乾燥,且使用迴轉式蒸發器濃縮,獲得0.62克橘色油(44%產率,反式:順式~2:1)。 關於反式之1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ6.68 (1H, m);5.14 (1H, d);2.6 (2H, m);2.55 (2H, t);2.1 (3H, s).
步驟 2. 5-( 甲硫基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊腈
將4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(0.30克,0.00095莫耳)、(2E)-5-(甲硫基)戊-2-烯腈(0.28克,0.0016莫耳)及DBU (45微升,0.00030莫耳)在ACN (3毫升,0.06莫耳)中之混合物,於室溫下攪拌5天。藉迴轉式蒸發移除溶劑,而得橘色油。使粗製油以30-70%醋酸乙酯/己烷層析,獲得0.35克無色油(83%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.95 (1H, s);8.41 (1H, s);8.4 (1H, s);7.48 (1H, d);6.84 (1H, d);5.75 (2H, s);4.95 (1H, br);3.6 (2H, t);3.1 (2H, m);2.58 (2H, m);2.28 (2H, m);2.1 (3H, s);1.99 (2H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H):443.
步驟 3. 5-( 甲硫基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊腈
將5-(甲硫基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊腈(0.35克,0.00079莫耳)在THF (4毫升,0.05莫耳)與水中之3.0M HCl (HCl) (4毫升)中之溶液加熱至回流過夜。藉迴轉式蒸發移除溶劑,而得淡橘色油。將油在乙醇(3毫升,0.05莫耳)與水中之8.0M氫氧化銨(1毫升)內攪拌過夜。使反應物濃縮,並藉預備之LCMS (C18管柱,以含有0.15% NH4OH之ACN/H2O梯度液溶離)純化,獲得125毫克白色泡沫物。將白色泡沫物以MTBE (~1.5毫升)研製。過濾所形成之固體,洗滌,並乾燥,獲得80毫克產物(32%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.38 (1H, s);8.88 (1H, s);8.39 (1H, s);8.38 (1H, s);7.44 (1H, d);6.8 (1H, d);5.75 (2H, s);4.9 (1H, br);3.05 (2H, m);2.5 (2H, m);2.23 (2H, d);2.1 (3H, s). MS (M+H):313.
實例 91 : 5-( 甲基亞磺醯基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 戊腈 將5-(甲硫基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-戊腈(0.065克,0.00021莫耳)與過氧化氫(0.022毫升,0.00023莫耳)在ACN (1毫升,0.02莫耳)中之溶液攪拌過夜。濃縮反應物,並藉HPLC純化,獲得21毫克固體。將固體以MTBE (1毫升)/DCM (10滴)研製。過濾固體,並洗滌,獲得13毫克白色固體(20%產率),使其在室溫至50℃下乾燥2小時。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.95 (1H, s);8.85 (1H, s);8.4 (2H, m);7.4 (1H, d);6.8 (1H, s);4.9 (1H, br);3.15 (2H, m);3.0 (2H, m);2.8-2.5 (2H, m);2.6 (3H, s). MS (M+H):329.
實例 92 : 5-( 甲磺醯基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 戊腈 使5-(甲硫基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-戊腈(0.040克,0.00013莫耳)與過氧化氫(0.5毫升,0.005莫耳)在ACN (1毫升,0.02莫耳)中之溶液回流過夜。使反應物藉HPLC純化,獲得16毫克白色玻璃態物質/固體,將其以EtOH (~0.8毫升)研製,獲得13毫克白色固體(30%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.75 (1H, s);8.48 (1H, d);8.4 (1H, d);7.43 (1H, d);6.8 (1H, s);5.0 (1H, br);3.4 (2H, m);3.2-3.0 (2H, m);2.8-2.5 (2H, m);2.95 (3H, s). MS (M+H):345.
實例 93 : 4,4,4- 三氟 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )- 吡唑 -1- 基 ]- 丁腈 步驟 1. 4,4,4- 三氟 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁腈
將4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(6.9克,0.022莫耳)、(2E)-4,4,4-三氟丁-2-烯腈(2.8克,0.023莫耳)及DBU (0.18毫升,0.0012莫耳)在ACN (70毫升,1莫耳)中之混合物攪拌20分鐘。過濾反應物,並藉迴轉式蒸發移除濾液,獲得橘色油。使粗製油以20-50%醋酸乙酯/已烷層析,獲得獲得9.1克固體/油(96%產率)。藉對掌性管柱層析(OD-H管柱,30% EtOH/己烷)分離單一對掌異構物(吸收峰2),為綠色固體/玻璃態物質(3.3克,32%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.93 (1H, s);8.46 (1H, s);8.45 (1H, s);7.5 (1H, d);6.85 (1H, d);5.75 (2H, s);5.2 (1H, m);3.6 (2H, t);3.7-3.3 (2H, m);1.99 (2H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H):438.
步驟 2. 4,4,4- 三氟 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )- 吡唑 -1- 基 ]- 丁腈
將得自步驟1之4,4,4-三氟-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈(3.1克,0.0071莫耳)在THF (35毫升,0.43莫耳)與水中之3.0M HCl (35毫升)中之溶液加熱至回流過夜。藉迴轉式蒸發移除溶劑,而得綠橘色油/玻璃態物質。將油與醋酸乙酯及飽和NaHCO3(50毫升)一起攪拌。以醋酸乙酯萃取水相。以鹽水洗滌有機層,並藉迴轉式蒸發減體積,而得油狀物/玻璃態殘留物。將殘留物在乙醇(20毫升,0.3莫耳)與水中之8.0M氫氧化銨(10毫升)攪拌度過週末。藉迴轉式蒸發移除溶劑,而得淡橘色泡沫物/固體。使粗製物以0-7% MeOH/DCM,0-0.7% NH4OH層析,獲得3克淡橘色糊劑/固體。使固體自EtOH再結晶,獲得1.6克灰白色結晶(74%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.2 (1H, s);8.95 (1H, s);8.7 (1H, s);8.5 (1H, s);7.63 (1H, d);6.96 (1H, d);6.01 (1H, m);3.7 (2H, m). MS (M+H):306. 表5e之下列化合物係按經標識為"製備實例編號"之直行中所指示而製成。
表 5e 實例 97 : 3-(2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 )- 環 - 戊烷 - 甲腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3-( 二甲氧基甲基 ) 環戊烷羧甲醛
於3-頸圓底燒瓶中,使2-正
烯(5.500克,0.05841莫耳)溶於DCM (198.0毫升)與甲醇(38.5毫升)中,並在-78℃下冷卻。使臭氧通過反應物,直到其轉變成藍色為止,並於-78℃下攪拌30分鐘。然後使氮通過20分鐘,並添加對-甲苯磺酸(0.95克,0.0055莫耳)。使反應物於20℃下溫熱,且攪拌90分鐘。於反應物中,添加碳酸氫鈉(1.67克,0.0199莫耳),並將所形成之混合物於20℃下攪拌30分鐘,且添加硫化二甲烷(9.4毫升,0.13莫耳)。將反應物攪拌16小時,並藉迴轉式蒸發減體積成~50毫升以DCM萃取反應物,並以水與鹽水洗滌有機萃液,脫水乾燥(MgSO4),及在真空中汽提。使反應物在135℃(浴溫)與高泵送真空下蒸餾,獲得產物(7.5克),為非對映異構物之~2:1混合物。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):9.64 & 9.62 (d, 1H), 4.15 & 4.12 (s, 1H), 3.35 & 3.34 (s, 6H), 2.77 (m, 1H), 2.34 (m, 1H), 1.35-2.00 (m, 6H).
步驟 2. (2E,Z)-3-[3-( 二甲氧基甲基 ) 環戊基 ] 丙烯腈。
於含有t-BuOK在THF中之0℃溶液(1.0M,6.10毫升)之燒瓶中,添加氰基甲基膦酸二乙酯(1.1克,6.4毫莫耳)在THF (8毫升)中之溶液。移除冷卻浴,並使反應物溫熱至環境溫度,然後逐滴添加3-(二甲氧基-甲基)環戊烷羧甲醛(1.00克,5.81毫莫耳)在THF (2毫升)中之溶液。在完成添加後不久,橘色似凝膠微粒子開始形成,大約1小時後,反應物為膠狀。使反應物保持於環境溫度下,並攪拌16小時,此時tlc顯示反應完成。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理,並以另外之EtOAc洗滌水相。將合併之有機相以水,接著飽和NaCl洗滌,然後以MgSO4脫水乾燥,並在真空中減體積,且使所形成之殘留物藉管柱層析純化,使用6:1己烷:EtOAc + 1% TEA,獲得產物,為E/Z異構物之1:1混合物(760毫克,61%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ乙烯基性質子在6.69 (m, 0.5H), 6.37 (m, 0.5H), 5.32 (m, 0.5H), 5.23 (m, 0.5H), 縮醛甲川質子在4.14 (m, 1H), 甲基質子在3.34 (s, 6H).
步驟 3. 3-[3-( 二甲氧基甲基 ) 環戊基 ]-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(230毫克,0.74毫莫耳)在ACN (5毫升)中之溶液內,添加(2E,Z)-3-[3-(二甲氧基甲基)環-戊基]丙烯腈(289毫克,1.48毫莫耳),接著為DBU (300微升,2.0毫莫耳)。將混合物於環境溫度下攪拌16小時,此時,LCMS與TLC顯示反應完成。使反應物在真空中減體積至乾涸,並使殘留物藉管柱層析純化,獲得產物,為非對映異構物之混合物(293毫克,77%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.85 (s, 1H), 8.31 (s, 2H), 7.40 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.28 (m, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.54 (t, 2H), 3.36 (s, 1.5H), 3.34 (s, 1.5H), 3.30 (s, 1.5H), 3.26 (s, 1.5H), 3.12 (m, 1H), 2.94 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 2.34 (m, 1H), 2.0-1.0 (m, 6H), 0.92 (t, 2H), -0.56 (s, 9H). MS (EI) m/z = 511.3 (M+H).
步驟 4. 3-(3- 甲醯基環戊基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於3-[3-(二甲氧基甲基)環戊基]-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(293毫克,0.574毫莫耳)在THF (4.5毫升)中之溶液內,添加HCl水溶液(1.0M,1.5毫升)。使反應物於環境溫度下保持2.5小時,此時TLC與LCMS顯示完成去除保護,成為其相應之醛。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理,並以另外之EtOAc萃取水相。以水,然後飽和NaHCO3,接著飽和NaCl洗滌合併之有機相,然後以MgSO4脫水乾燥,並過濾,且汽提至乾涸,留下粗產物,為非對映異構物之混合物。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.69 (d, 0.5H), 9.64 (d, 0.5H), 8.85 (s, 0.5H), 8.84 (s, 0.5H), 8.35 (s, 0.5H), 8.34 (s, 0.5H), 8.32 (s, 0.5H), 8.30 (s, 0.5H), 7.41 (d, 0.5H), 7.40 (d, 0.5H), 6.80 (d, 0.5H), 6.79 (d, 0.5H), 5.68 (s, 1H), 5.67 (s, 1H), 4.32 (m, 1H), 3.54 (m, 2H), 3.14 (m, 1H), 2.96 (m, 2H), 2.76 (m, 1H), 2.1-1.1 (m, 6H), 0.92 (m, 2H), -0.058 (s, 9H). MS (EI) m/z = 465.1 (M+H).
步驟 5. 3-3-[(E,Z)-( 羥亞胺基 ) 甲基 ] 環戊基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於3-(3-甲醯基環戊基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(336毫克,0.000723莫耳)在CH3OH(5.0毫升,0.12莫耳)中之溶液內,添加羥胺鹽酸鹽(60毫克,0.00087莫耳)與KHCO3(110毫克,0.0011莫耳),並使反應物於環境溫度下保持16小時,此時,LCMS顯示反應完成。使反應物在真空中減體積至乾涸,並使殘留物於水與EtOAc之間作分液處理,且以另外之EtOAc萃取水相。以水,然後飽和NaCl洗滌合併之有機相,接著以MgSO4脫水乾燥,及濃縮,留下粗產物,將其帶至後續反應,無需純化。NMR顯示醛性質子之消失。MS (EI) m/z = 480.2 (M+H).
步驟 6. 3-(2- 氰基 -1-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 ) 環戊腈
於3-3-[(E,Z)-(羥亞胺基)甲基]環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(324毫克,0.67毫莫耳)在吡啶(1.2毫升)中之溶液內,逐滴添加氯化甲烷磺醯(210微升,2.7毫莫耳)。將反應物加熱至60℃,歷經2.5小時,此時,LCMS顯示反應完成。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理,並以另外之EtOAc萃取水相。以水,然後0.1N HCl,接著以飽和NaCl洗滌合併之有機相,然後以MgSO4脫水乾燥。使粗產物藉管柱層析純化,獲得產物,為非對映異構物之混合物(164毫克,52%)。接著藉對掌性HPLC分離非對映異構物,以提供四種不同非對映異構物,將其直接取至去除保護步驟。MS (EI) m/z = 462.1 (M+H).
步驟 7. 3-(2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 )- 環戊烷 - 甲腈三氟醋酸鹽
接著使四種非對映異構物以此代表性方式,個別地去除保護。於已溶於CH2Cl2(2.0毫升)中之3-2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基環戊腈(35毫克,0.076毫莫耳)內,添加TFA (1.0毫升),並將反應物於環境溫度下攪拌2小時此時,LCMS顯示完全***成N-羥甲基中間物。移除溶劑,並於殘留物中,添加甲醇(1.0毫升),接著是乙二胺(40微升,0.61毫莫耳),將反應物攪拌16小時,此時,LCMS顯示反應完成。移除溶劑,且使殘留物藉預備之LCMS純化,以提供產物,為TFA鹽。NOE實驗証實所有異構物具有環戊基環上之順式幾何形狀。 異構物1與2:1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.95 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 4.72 (m, 1H), 3.27 (m, 1H), 3.19 (m, 1H), 2.95 (m, 1H), 2.72 (m, 1H), 2.2-1.9 (m, 4H), 1.67 (m, 2H).異構物3與4:1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.95 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 4.72 (m, 1H), 3.27 (m, 1H), 3.19 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 2.71 (m, 1H), 2.44 (m, 1H), 2.05 (m, 1H), 1.92 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.58 (m, 2H). MS (EI) m/z = 332.2 (M+H).
實例 98 : 3-[3-( 羥甲基 ) 環戊基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 步驟 1 : 3-[3-( 羥甲基 ) 環戊基 ]-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
使3-(3-甲醯基環戊基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(50.0毫克,0.108毫莫耳)在甲醇(280微升)中之溶液冷卻至0℃,然後添加四氫硼酸鈉(14毫克,0.37毫莫耳)。使反應物在0℃下保持10分鐘,此時,LCMS與TLC顯示反應完成。藉由小心添加1N HCl (3滴)與甲醇(1毫升)使反應淬滅,接著添加NaHCO3水溶液與CHCl3。分離液相,並以另外之CHCl3洗滌水相。以飽和NaCl洗滌合併之有機相,以MgSO4脫水乾燥,並減體積至乾涸。使殘留物藉管柱層析純化,獲得產物,為非對映異構物之混合物(37.4毫克,74%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.84 (s, 1H), 8.31 (s, 2H), 7.40 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.29 (m, 1H), 3.53 (m, 1H), 3.53 (t, 2H), 3.14 (m, 1H), 2.95 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.2-1.0 (m, 9H), 0.92 (t, 2H), -0.059 (s, 9H). MS (EI) m/z = 467.2 (M+H).
步驟 2. 3-[3-( 羥甲基 ) 環戊基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
在已溶於CH2Cl2(2.0毫升)中之3-[3-(羥甲基)環戊基]-3-[4-(7- [2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(60.4毫克,0.129毫莫耳)內,添加TFA (1.0毫升),並將反應物攪拌1小時,此時LCMS顯示完全***成N-羥甲基中間物(m/z = 367)。亦發現環戊基環之羥甲基之三氟醋酸酯(m/z = 463)。移除溶劑,並於殘留物中,添加甲醇(1.0毫升),接著為乙二胺(80微升,1.19毫莫耳)。將所形成之混合物攪拌16小時,此時,LCMS顯示完成反應至所要之產物。移除溶劑,並使殘留物藉對掌性HPLC純化,以提供四種不同非對映異構物(總計20.2毫克之四種異構物,46%)。NOE實驗指出所有異構物具有環戊基環上之順式幾何形狀。 異構物1與2:1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.65 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.51 (m, 1H), 3.40 (m, 2H), 3.22 (m, 1H), 3.11 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.10 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.6-1.4 (m, 3H), 1.03 (m, 1H).異構物3與4:1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.66 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.51 (m, 1H), 3.46 (m, 2H), 3.21 (m, 1H), 3.11 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 1.55-1.25 (m, 3H), 1.04 (m, 1H). MS (EI) m/z = 337.1 (M+H).
實例 100 : 1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H-吲 唑 (100a) 與 2-(1H- 吡咯并 [2,3-b]- 吡啶 -4- 基 )-2H-吲 唑 (100b) 將4-溴基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.078克,0.00040莫耳)與1H-吲唑(0.283克,0.00240莫耳)在密封管中,於200℃(油浴)下,在不含溶劑下加熱過夜並攪拌。使反應物冷卻至室溫,並使粗產物於C-18管柱上藉預備之LC-MS純化,以含有0.2% TFA之水/ACN梯度液溶離,而得標題化合物(0.015克,15%),為非晶質白色固體。LC/MS (M+H)+235. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.01 (bs, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.73 (d, 1H, J = 9.0), 7.67 (m, 2H), 7.58 (m, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.07 (m, 2H).
實例 106 : 3-[3-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1,2,4- 㗁二唑 -5- 基 ] 苯甲腈 步驟 1. 1-[2- 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 甲腈 使4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.300克,0.000917莫耳)溶於DMF (6.5毫升,0.084莫耳)中,然後添加氰化鋅(0.30克,0.0026莫耳)。將溶液以氮除氣,接著添加雙(三-第三-丁基膦)鈀(0.1克,0.0002莫耳)。將反應物密封,並在微波中加熱至100℃,歷經30分鐘。使反應物冷卻至室溫,溶於醋酸乙酯中,並以水、飽和碳酸鈉、鹽水洗滌,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得油。使粗產物於矽膠上藉急驟式管柱層析(FCC)純化,以己烷:醋酸乙酯梯度液溶離,獲得產物(0.25克),為無色油。LC/MS (M+H)+274. 1H NMR (CDCl3)δ8.22 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.40 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 3.50 (m, 2H), 0.90 (m, 2H), 0.0 (s, 9H).
步驟 2. N- 羥基 -1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 羧醯亞胺醯胺 使1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(0.05克,0.0002莫耳)溶於乙醇(2.0毫升,0.034莫耳)中,然後添加羥胺鹽酸鹽(0.023克,0.00033莫耳)與碳酸鉀(0.10克,0.00073莫耳)。將反應物加熱至回流,歷經5小時,接著使反應物冷卻至室溫,並過濾,以移除固體。使濾液濃縮,獲得產物0.06克,為黃色油狀殘留物。LC/MS (M+H)+307.
步驟 3. 3-[3-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1,2,4- 㗁二唑 -5- 基 ] 苯甲腈 使粗產物N-羥基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-羧醯亞胺醯胺(0.06克,0.0002莫耳)溶於吡啶(1.0毫升,0.012莫耳)中,然後在室溫下添加氯化3-氰基苯甲醯(0.040克,0.00024莫耳)。將此混合物攪拌1小時,並於油浴中加熱至80℃。在加熱18小時後,使反應物冷卻至室溫,接著以ACN稀釋,及在真空中濃縮,獲得3-[3-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,2,4-㗁二唑-5-基]苯甲腈0.08克,為灰白色殘留物。LC/MS (M+H)+418.
步驟 4. 3-[3-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1,2,4- 㗁二唑 -5- 基 ] 苯甲腈
於氮氣下,使粗製3-[3-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1,2,4-氧-二唑-5-基]苯甲腈(0.08克,0.0002莫耳)溶於TFA (3.0毫升,0.039莫耳)中,然後加熱至60℃。在加熱2小時後,使反應物冷卻至室溫,及在真空中濃縮。使所形成之殘留物溶於甲醇中,及濃縮,以儘可能移除TFA。使殘留物溶於甲醇(2.0毫升,0.049莫耳)與氫氧化銨(1毫升)中。將此混合物在室溫下攪拌2小時,於是反應完成。在真空中濃縮反應物,獲得粗產物,使其在C-18管柱上藉預備之HPLC純化,以ACN:水梯度液,具有0.2% TFA溶離,而得標題化合物(0.025克,43%)。(M+H)+288. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.1 (bs, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.48 (d, 1H, J = 6.4), 8.39 (d, 1H, J = 4.8), 8.16 (d, 1H, J = 6.4), 7.84 (t, 1H, J = 6.4), 7.75 (d, 1H, J = 4.8), 7.68 (m, 1H), 6.99 (m, 1H).
實例 107 : 4-(1- 苯并噻吩 -2- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. 4-(1- 苯并噻吩 -2- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將1-苯并噻吩-2-基二羥基硼烷(0.05克,0.0003莫耳)與4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.10克,0.00031莫耳)在甲苯(3.0毫升,0.028莫耳)與乙醇(1.0毫升,0.017莫耳)中合併。然後添加已溶於水(1.0毫升)中之碳酸鉀(0.085克,0.00062莫耳),並將反應物以氮除氣。接著添加肆(三苯膦)鈀(0) (0.05克,0.00004莫耳),並將反應物在密封管中,於微波中加熱至120℃,歷經60分鐘。使其冷卻至室溫,溶於醋酸乙酯中,並以水2x、鹽水洗滌,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得4-(1-苯并噻吩-2-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶(0.10克),為油狀物。LC/MS (M+H)+381.
步驟 2. 4-(1- 苯并噻吩 -2- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
使用類似實例106步驟4之程序,但使用4-(1-苯并噻吩-2-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,製成標題化合物,為黃色粉末(0.015克,18%)。LC/MS (M+H)+:251. 1H NMR (DMSO-d6)δ11.95 (bs, 1H), 8.28 (d, 1H, J = 5.4), 8.15 (s, 1H), 8.03 (m, 1H), 7.96 (m, 1H), 7.64 (m, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.39 (d, 1H, J = 5.4), 6.95 (m, 1H).
實例 120 : 4- 氟基 -2-[1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ] 酚 將4-溴基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.050克,0.00025莫耳)與4-氟基-2-(1H-吡唑-3-基)酚(0.150克,0.000842莫耳)在不含溶劑下加熱至160℃,歷經5小時。使反應物冷卻至室溫,並使殘留物於C-18管柱上藉預備之LC-MS純化,以含有0.2% TFA之水/ACN梯度液溶離,而得標題化合物(0.052克,20%),為非晶質白色固體。LC/MS (M+H)+295. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.01 (bs, 1H), 10.25 (bs, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.35 (d, 1H, J = 5.5), 7.77 (d, 1H, J = 9.5), 7.64 (m, 1H), 7.59 (d, 1H, J = 5.5), 7.32 (s, 1H), 7.09 (m, 1H), 7.05 (m, 1H), 7.01 (m, 1H).
實例 127 : 4-3-[3-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-1H- 吡唑 -1- 基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. (2E)-3-( 二甲胺基 )-1-[3-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 丙 -2- 烯 -1- 酮 將1-[5-(三氟甲基)苯基]乙酮(0.20毫升,0.0013莫耳)與1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(0.17毫升,0.0013莫耳)在密封管中合併,並於微波中加熱至120℃,歷經15分鐘,使反應物冷卻,並濃縮,以移除殘留DMF縮醛,獲得(2E)-3-(二甲胺基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮0.32克,為紅色油。LC/MS (M+H)+:244.
步驟 2 : 3-[3-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-1H- 吡唑 於氮氣下,使(2E)-3-(二甲胺基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯-1-酮(0.32克,0.0013莫耳)溶於乙醇(10.0毫升,0.171莫耳)與肼(0.24毫升,0.0078莫耳)中,並加熱至回流。藉HPLC監測反應,且幾乎立即完成,使混合物冷卻至室溫,及濃縮,而得粗產物,為油狀物。使產物於矽膠上藉FCC純化,以己烷:醋酸乙酯梯度液溶離,獲得3-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡唑為油狀物(0.25克,89%)。LC/MS (M+H)+:213. 1H NMR (CDCl3)δ8.06 (s, 1H), 7.99 (d, 1H, J = 7.5), 7.66 (d, 1H, J = 2.4), 7.57 (m, 1H), 7.55 (d, 1H, J = 7.5), 6.69 (d, 1H, J = 2.4).
步驟 3. 4-3-[3-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-1H- 吡唑 -1- 基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
將4-溴基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.028克,0.00014莫耳)與3-[3-(三氟甲基)-苯基]-1H-吡唑(0.03克,0.0001莫耳)在不含溶劑下合併。將反應物在密封管中,於油浴中加熱至175℃,歷經20分鐘,以產生粗產物,為黑色黏稠膠。使粗產物於C-18管柱上藉HPLC純化,以水:ACN梯度液,具有0.2% TFA溶離,獲得標題產物(0.025克,50%),為白色非晶質固體。LC/MS (M+H)+:329. 1H NMR (DMSO-d6)δ11.95 (bs, 1H), 8.83 (d, 1H, J = 2.7), 8.31 (m, 3H), 7.75 (m, 2H), 7.60 (m, 2H), 7.35 (d, 1H, J = 2.7), 7.14 (m, 1H).
實例 128 : 3-[1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ] 苯甲腈 步驟 1. 3-[(2E)-3-( 二甲胺基 ) 丙 -2- 烯醯基 ] 苯甲腈
將3-乙醯基苯甲腈(0.435克,0.00300莫耳)與1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(0.400毫升,0.00301莫耳)合併,並在密封管中,於微波中加熱至120℃,歷經15分鐘。然後使反應物冷卻至室溫,獲得3-[(2E)-3-(二甲胺基)丙-2-烯醯基]-苯甲腈,為紅橘色結晶性物質,LC/MS (M+H)+:201.
步驟 2. 3-(1H- 吡唑 -3- 基 ) 苯甲腈
於氮大氣及室溫下,將已溶於乙醇(20.0毫升,0.342莫耳)與肼(0.56毫升,0.018莫耳)中之3-[(2E)-3-(二甲胺基)丙-2-烯醯基]苯甲腈(0.600克,0.00300莫耳)攪拌1.5小時。在真空中濃縮反應物,獲得暗色產物,使其在矽膠上藉FCC純化,以醋酸乙酯-己烷1:1溶離,獲得3-(1H-吡唑-3-基)苯甲腈,為油狀物(0.430克,84%)。LC/MS (M+H)+:170.
步驟 3. 3-[1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -3- 基 ] 苯甲腈
將4-溴基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.075克,0.00038莫耳)與3-(1H-吡唑-3-基)苯甲腈(0.161克,0.000952莫耳)在密封管中加熱至160℃,歷經18小時。使所形成之產物,暗色黏稠膠,於C-18管柱上藉HPLC純化,以水:ACN梯度液,具有0.2% TFA溶離,獲得標題產物(0.030克,27%),為白色非晶質固體。LC/MS (M+H)+:286. 1H NMR (DMSO-d6)δ11.95 (bs, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.29 (d, 1H, J = 7.5), 8.25 (d, 1H, J = 5.0), 7.79 (d, 1H, J = 7.5), 7.62 (t, 1H, J = 7.5), 7.53 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.11 (m, 1H).
實例 153 : 3-[1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 苯甲腈 步驟 1. 4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼伍圜 -2- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡唑
使4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑(2.0克,0.010莫耳)與DMF (30.0毫升,0.387莫耳)之溶液冷卻至0℃。添加氫化鈉(320毫克,0.013莫耳) (60%,於油中),並將混合物攪拌10分鐘。添加[β-(三甲基矽烷基)乙氧基]氯化甲烷(2.4毫升,0.013莫耳),並將所形成之混合物在0℃下攪拌20分鐘,且於室溫下2小時。使反應物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。以鹽水洗滌有機層,以MgSO4脫水乾燥,及濃縮,而得4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡唑,為粗製物質。LC/MS (M+H)+:325. 1H NMR (CDCl3)δ7.85 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.55 (t, 2H), 1.35 (s, 12H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
步驟 2. 3-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯甲腈
將4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-1H-吡唑(150.0毫克,0.0004625莫耳)與3-溴基苯甲腈(0.10克,0.00056莫耳)在甲苯(2.0毫升,0.019莫耳)與乙醇(0.3毫升,0.005莫耳)中之混合物,以水(0.5毫升,0.03莫耳)中之碳酸鈉(98毫克,0.00092莫耳)處理。將混合物藉起泡氮除氣。添加肆(三苯膦)鈀(0) (53毫克,0.000046莫耳),並使氮起泡3分鐘。將反應物在80℃下,於微波中加熱30分鐘,然後使其冷卻至室溫,並溶於水與醋酸乙酯中。使有機層以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗產物,使其在矽膠上藉FCC純化,以EtOAc/己烷(1:5)溶離,獲得3-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡唑-4-基)苯甲腈,為油狀物。LC/MS (M+H)+:300.
步驟 3. 3-(1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯甲腈三氟醋酸鹽 使3-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡唑-4-基)苯甲腈之溶液(110.0毫克,0.0003673莫耳)溶於TFA (3.0毫升,0.039莫耳)中,並將混合物在120℃下,於微波中加熱3分鐘。使反應混合物冷卻至室溫,然後濃縮,獲得粗製殘留物。使產物於C-18管柱上藉HPLC純化,以含有0.2% TFA之水/ACN梯度液溶離,獲得3-(1H-吡唑-4-基)苯甲腈三氟醋酸鹽,為非晶質白色固體。LC/MS (M+H)+:170.
步驟 4. 3-[1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 苯甲腈
將4-溴基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(25.0毫克,0.000127莫耳)與3-(1H-吡唑-4-基)苯甲腈三氟醋酸鹽(23.6毫克,0.0000833莫耳)之混合物,於180℃下,在不含溶劑下加熱過夜。使粗製殘留物於C-18管柱上藉HPLC純化,以含有0.2% TFA之水;ACN梯度液溶離,而得標題化合物,為非晶質白色固體。LC/MS (M+H)+:286. 1H NMR (DMSO-d6)δ11.85 (bs, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.25 (d, 1H, J = 5.0), 8.07 (d, 1H, J = 7.0), 7.64 (d, 1H, J = 7.0), 7.56 (t, 1H, J = 7.0), 7.51 (m, 1H), 7.47 (d, 1H, J = 5.0), 7.03 (m, 1H).
實例 170 : 2-[1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1,3- 苯并㗁唑 步驟 1. 4-肼 基 -1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 於4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.98克,0.00605莫耳)中,添加肼(11.0毫升,0.350莫耳),接著添加甲醇(1.0毫升,0.025莫耳) (以改善溶解度)。將反應混合物在密封管中,於97℃(油浴)下加熱18小時。使反應混合物冷卻至室溫,且形成灰白色固體沉澱物。濾出固體,並以冷水沖洗,且乾燥,獲得4-肼基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.55克),為淡黃色固體。LC/MS (M+H)+:279. 1H NMR (DMSO-d6)δ7.98 (d, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.61 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 3.56 (t, 2H), 0.90 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
步驟 2. 2-[1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1,3- 苯并㗁唑 於甲苯(1.5毫升,0.014莫耳)中之4-肼基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.083克,0.00030莫耳) 3782-117-1與1,3-苯并㗁唑-2-基丙二醛(0.056克,0.00030莫耳)內,添加分子篩。將混合物在密封管中,於70℃(油浴)下加熱,並攪拌2小時。於真空中移除溶劑,並使粗產物於矽膠上藉FCC純化,使用醋酸乙酯:己烷3:7,獲得2-[1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-1,3-苯并㗁唑(0.090克),為油狀物。LC/MS (M+H)+:432.
步驟 3.
使用類似實例106步驟4之程序,但使用2-[1-(1-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-1,3-苯并㗁唑,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.015克,18%)。LC/MS (M+H)+:302. 1H NMR (DMSO-d6)δ11.85 (bs, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.36 (bs, 1H), 7.7-7.6 (m, 2H), 7.65 (d, 1H), 7.56 (bs, 1H), 7.38-7.34 (m, 2H), 7.01 (d, 1H).
實例 172 :環己基 [1-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 甲醇 步驟 1. 4-(4- 溴基 -1H- 吡唑 -1- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將4-溴基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.10克,0.00558莫耳)與4-溴基-1H-吡唑(1.2克,0.0084莫耳)之混合物,在不含溶劑下加熱至150℃,歷經2小時。添加DMF,以溶解粗製殘留物。使此殘留物溶於EtOAc中,並以1N NaOH洗滌。以鹽水洗滌有機層,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗製4-(4-溴基-1H-吡唑-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶殘留物。LC/MS (M+H)+:263, 265.
步驟 2. 4-(4- 溴基 -1H- 吡唑 -1- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 添加4-(4-溴基-1H-吡唑-1-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]氯化甲烷之溶液(1.4毫升,0.0079莫耳),並在0℃下攪拌20分鐘。使反應物於醋酸乙酯與水之間作分液處理。以鹽水洗滌有機層,以MgSO4脫水乾燥,及濃縮,而得粗製物質。使產物於矽膠上藉FCC純化(EtOAc/己烷,1/10),獲得4-(4-溴基-1H-吡唑-1-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,為固體產物。LC/MS (M+H)+:393, 394. 1H NMR (CDCl3)δ8.47 (d, 1H, J = 7.0), 8.27 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.52 (d, 1H, J = 4.5), 7.39 (d, 1H, J = 7.0), 7.069 (d, 1H, J = 4.5), 5.80 (s, 2H), 3.6 (t, 2H), 1.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
步驟 3. 環己基 [1-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 甲醇 使4-(4-溴基-1H-吡唑-1-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(50.0毫克,0.000127莫耳)在THF (2.0毫升,0.025莫耳)中之混合物,於氮大氣下冷卻至-78℃,並添加水中之1.6M正-丁基鋰(1.00毫升,0.0555莫耳)。將混合物攪拌3分鐘。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理。使有機層以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得環己基[1-(1:5)獲得4-基)-1H-吡唑-4-基]甲醇,為粗製殘留物。LC/MS (M+H)+:417.
步驟 4. 環己基 [1- 苯基乙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 甲醇
使用類似實例106步驟4之程序,但使用環己基[1-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.015克,18%)。LC/MS (M+H)+:297. 1H NMR (DMSO-d6)δ11.85 (bs, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.44 (d, 1H, J = 6.5), 7.0 (s, 1H), 5.37 (s, 1H).
實例 173 : 4-[4-(1- 苯基乙烯基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. 4-[4-(1- 苯基乙烯基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ]- 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將(1-苯基乙烯基)二羥基硼烷(24.0毫克,0.000162莫耳)與4-(4-溴基-1H-吡唑-1-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(50.0毫克,0.000127莫耳)在甲苯(2.00毫升,0.0188莫耳)與乙醇(0.50毫升,0.0086莫耳)中之混合物,以水(1.00毫升,0.0555莫耳)中之碳酸鉀(35毫克,0.00025莫耳)處理。將混合物藉起泡之氮除氣。添加肆(三苯膦)鈀(0) (10毫克,0.00001莫耳),並使氮起泡3分鐘。將反應物在密封管中,於微波中,在100℃下加熱30分鐘。使反應物冷卻至室溫,並於醋酸乙酯與水之間作分液處理。使合併之有機層以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗製物質。使粗產物於矽膠上藉FCC純化,以EtOAc/己烷(1:5)溶離,獲得4-[4-(1-苯基乙烯基)-1H-吡唑-1-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶,為固體殘留物。LC/MS (M+H)+:417.
步驟 2.
使用類似實例106步驟4之程序,但使用4-[4-(1-苯基乙烯基)-1H-吡唑-1-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.015克,31%)。LC/MS (M+H)+:287. 1H NMR (DMSO-d6)δ11.85 (bs, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.55 (bs, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.43-7.37 (m, 5H), 7.01 (m, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.37 (s, 1H).
實例 200 : 4-(1- 苄基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. 4-(1- 苄基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.100克,0.000306莫耳)與1-苄基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑(0.113克,0.000398莫耳)在甲苯(3.0毫升,0.028莫耳)與乙醇(0.5毫升,0.008莫耳)中合併。添加已溶於水(1.0毫升,0.056莫耳)中之碳酸鉀(0.084克,0.00061莫耳),並將反應混合物以氮除氣。添加肆(三苯膦)鈀(0) (0.080克,0.000069莫耳),並將混合物再以氮除氣一次,歷經5分鐘。將反應物在密封管中,於微波中加熱至100℃,歷經30分鐘。使反應物於醋酸乙酯與水之間作分液處理。以水、鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得粗製殘留物。使產物於矽膠上藉FCC純化,使用醋酸乙酯:己烷3:7,獲得4-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶0.092克,為半固體殘留物。LC/MS (M+H)+:405.
步驟 2. 4-(1- 苄基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
使用類似實例106步驟4之程序,但使用4-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.054克)。LC/MS (M+H)+:275. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.21 (bs, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.25 (vbs, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.49 (bs, 1H), 7.4-7.2 (m, 5H), 6.99 (s, 1H), 5.42 (s, 2H).
實例 201 : 4-[1-(2-萘 基甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. 1-(2-萘 基甲基 )-4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼伍圜 -2- 基 )-1H- 吡唑
於氮氣及室溫下,將4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑(0.10克,0.00052莫耳)與萘2-(溴基甲基)-(0.12克,0.00057莫耳)在ACN (3.0毫升,0.057莫耳)中合併。然後添加碳酸銫(0.50克,0.0015莫耳),且在攪拌1小時後,反應已完成。使其在醋酸乙酯與鹽水之間作分液處理。以鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得1-(2-萘基甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑0.17克,為油狀物。LC/MS (M+H)+:335. 1H NMR (CDCl3)δ7.89 (s, 1H), 7.79-7.84 (m, 3H), 7.69 (bs,2H), 7.49-7.4 (m, 2H), 7.46-7.33 (m, 1H), 5.47 (s, 2H), 1.31 (s, 12H).
步驟 2. 4-[1-(2-萘 基甲基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.06克,0.0002莫耳)與1-(2-萘基甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑(0.074克,0.00022莫耳)在甲苯(2.0毫升,0.019莫耳)與乙醇(1.0毫升,0.017莫耳)中合併,然後添加碳酸鉀(0.063克,0.00046莫耳,在1毫升水中)。將反應混合物以氮除氣,接著添加肆(三苯膦)鈀(0) (0.02克,0.00002莫耳),密封於管件中,並在微波中,加熱至120℃,歷經30分鐘。使其冷卻,然後於醋酸乙酯與鹽水之間作分液處理。使有機層以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得4-[1-(2-萘基甲基)-1H-吡唑-4-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶0.08克,為油狀殘留物。LC/MS (M+H)+:455.
步驟 3
使用類似實例106步驟4之程序,但使用4-[1-(2-萘基甲基)-1H-吡唑-4-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.053克,88%)。LC/MS (M+H)+:325. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.0 (bs, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.19 (d, 1H, J = 5.7), 7.82 (m, 4H), 7.56 (m, 1H), 7.43 (m, 4H), 6.92 (m, 1H), 5.54 (s, 2H).
實例 219 : 4-(1- 苯基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 步驟 1. 1- 苯基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼伍圜 -2- 基 )-1H- 吡唑
將4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑(0.07克,0.0003莫耳)與苯基二羥基硼烷(0.083克,0.00068莫耳)在DMF (1.50毫升,0.0194莫耳)中合併。然後添加二醋酸銅(II)(0.010克,0.000055莫耳)與吡啶(0.069毫升,0.00085莫耳)。將反應物在開口管中加熱至80℃,歷經40分鐘。藉HPLC得知反應已完成,使其冷卻至室溫,溶於醋酸乙酯中,並以水洗滌,以碳酸鈉飽和。以鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得1-苯基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑并0.09克,為油狀殘留物。LC/MS (M+H)+:271.
步驟 2. 4-(1- 苯基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
使用類似實例201步驟B與C之程序,但使用1-苯基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑并,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.015克,18%)。LC/MS (M+H)+:261. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.05 (bs, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.31 (m, 1H), 8.01 (m, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.57-7.52 (m, 3H), 7.36 (m, 1H), 7.13 (m, 1H).
實例 231 : 3-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 苯甲腈 步驟 1. 4-(1H- 吡唑 -4- 基 )-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 將4-溴基-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.20克,0.00061莫耳)與4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼伍圜-2-基)-1H-吡唑(0.15克,0.00079莫耳)在DMF (5.0毫升,0.064莫耳)中合併,然後添加1毫升水中之碳酸鉀(0.25克,0.0018莫耳)。將反應物以氮除氣,接著添加肆(三苯膦)-鈀(0) (0.08克,0.00007莫耳),並在密封管中,將反應物於油浴中加熱至120℃。將反應物加熱30分鐘,使其冷卻,然後溶於醋酸乙酯中。以鹽水洗滌反應混合物,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得油。使產物於矽膠上藉FCC純化,以己烷:醋酸乙酯梯度液溶離,獲得4-(1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.13克,70%),為結晶性白色粉末。LC/MS (M+H)+:315. 1H NMR (DMSO-d6)δ13.35 (bs, 1H), 8.59 (bs, 1H), 8.32 (d, 1H, J = 8.5), 8.26 (bs, 1H), 7.76 (d, 1H, J = 6.0), 7.45 (d, 1H, J = 8.5), 7.01 (d, 1H, J = 6.0), 5.73 (s, 2H), 3.61 (t, 2H), 0.92 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
步驟 2. 3-[4-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 苯甲腈 將4-(1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.025克,0.000080莫耳)與(3-氰基苯基)二羥基硼烷(0.023克,0.00016莫耳)在DMF (1.50毫升,0.0194莫耳)中合併。然後添加二醋酸銅(II)(0.002克,0.00001莫耳)與吡啶(0.019毫升,0.00024莫耳)。將反應物在開口管中加熱至125℃,歷經40分鐘,使其冷卻至室溫,溶於醋酸乙酯中,並以水洗滌,以碳酸鈉飽和。以鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-苯甲腈(0.025克,92%),為油狀殘留物。LC/MS (M+H)+:316.
步驟 3
使用類似實例106步驟4之程序,但使用3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]苯甲腈,製成標題化合物,為白色結晶性粉末(0.012克,60%)。LC/MS (M+H)+:286. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.05 (bs, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.59 (m, 1H), 8.55 (m, 1H), 8.36 (m, 1H), 8.30 (d, 1H, J = 5.2), 7.83 (m, 1H), 7.75 (m, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.51 (d, 1H, J = 5.2), 7.12 (m, 1H).
實例 250 : 4-{1-[(1R)-1- 甲基丁基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 }-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 (250a) 與 4-{1-[(1S)-1- 甲基丁基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 }-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 (250b) 與
步驟 1. 4-[1-(1- 甲基丁基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ]- 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
使4-(1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(50毫克,0.0002莫耳) (參閱實例231步驟1)溶於DMF (2毫升,0.02莫耳)中,並在0℃下冷卻。將此溶液以氫化鈉(7.0毫克,0.00029莫耳) (60%,於油中)處理,並攪拌15分鐘。然後將混合物以2-溴基戊烷(40毫克,0.0002莫耳)處理,並攪拌5小時。使反應物於醋酸乙酯與水之間作分液處理。以鹽水洗滌有機層,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗產物4-[1-(1-甲基丁基)-1H-吡唑-4-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,為油狀物。LC/MS (M+H)+:286.
步驟 2. 4-[1-(1- 甲基丁基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶
使用類似實例106步驟4之程序,但使用4-[1-(1-甲基丁基)-1H-吡唑-4-基]-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.025克,60%)。LC/MS (M+H)+:255. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.21 (bs, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.27 (bs, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 4.46 (m, 1H), 1.9-1.8 (m, 1H), 1.7-1.6 (m, 1H), 1.47 (d, 3H), 1.2-1.0 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).
步驟 3. 對掌異構物之分離
得自步驟2之4-[1-(1-甲基丁基)-1H-吡唑-4-基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶之對掌異構物之分離,係藉對掌性管柱預備HPLC分離而進行,使用OD-H管柱,以異丙醇:己烷梯度液溶離,獲得標題化合物,為非晶質白色殘留物。LC/MS (M+H)+:255. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.21 (bs, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.27 (bs, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 4.46 (m, 1H), 1.9-1.8 (m, 1H), 1.7-1.6 (m, 1H), 1.47 (d, 3H), 1.2-1.0 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).
實例 286 : 4- 甲基 -3-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 苯甲腈 步驟 1. 4- 甲基 -3-[4-(1-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 苯甲腈 於4-(1H-吡唑-4-基)-1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]-吡啶(0.050克,0.00016莫耳) (參閱實例231步驟1)與碳酸銫(0.10克,0.00032莫耳)在無水DMF (1.0毫升,0.013莫耳)中之混合物內,添加3-氟基-4-甲基苯甲腈(0.043克,0.00032莫耳)。將反應混合物在密封管中加熱至120℃,歷經5.5小時。使反應物冷卻,並於醋酸乙酯與水之間作分液處理。以水、鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得4-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]苯甲腈,為粗產物。LC/MS (M+H)+:430.
步驟 2. 4- 甲基 -3-[4-(1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 苯甲腈
使用類似實例106步驟4之程序,但使用4-甲基-3-[4-(1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]苯甲腈,製成標題化合物,為白色非晶質粉末(0.037克,88%)。LC/MS (M+H)+:300. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.19 (bs, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.31 (d, 1H, J = 7.0), 8.08 (s, 1H), 7.89 (d, 1H, J = 10), 7.66 (d, 1H, J = 10), 7.63 (m, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.07 (m, 1H), 2.4 (s, 3H). 本發明之其他實例化合物係提供於下表7, 8, 9, 10及11中。列示於表7, 8, 9, 10及11中之化合物為外消旋,除非對掌異構物係經個別地指示。
表 7 表 8 表 9 表 10 表 11 實例 407 : 3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊二腈 步驟 1 : 3-[4-(7-{[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊二酸二甲酯
使4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(31.0克,0.0983莫耳)懸浮於ACN (620毫升,12莫耳)中,並於氮氣下,添加DBU (9.3毫升,0.062莫耳)。將反應物加熱至65℃,並在2小時內,以5毫升部份添加(2E)-戊-2-烯二酸二甲酯(16毫升,0.12莫耳)。於攪拌過夜後,反應已完成。使反應物冷卻至室溫,並在真空中濃縮,獲得暗色油。使油於醋酸乙酯與水之間作分液處理。以1.0N HCl、鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,然後濃縮,獲得暗色油。將黏稠油以***3 x 500毫升研製,獲得暗色沉澱物。使油溶於醋酸乙酯中,以形成固體。收集固體,以***洗滌,並乾燥,獲得3-[4-(7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二酸二甲酯,為白色粉末(29.5克,64%)。LC/MS (M+H)+:474. 1H NMR (DMSO-d6)δ9.1 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 5.78 (s, 2H), 5.27 (m, 1H), 3.65 (m, 8H), 3.15 (m, 4H), 0.95 (t, 2H), 0.1 (s, 9H).
步驟 2 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 戊二酸
使3-[4-(7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二酸二甲酯(43.0克,0.0908莫耳)溶於甲醇(271.2毫升,6.695莫耳)中,並添加已溶於水(125毫升)中之氫氧化鋰單水合物(15克,0.36莫耳)。將反應物在室溫下攪拌2小時。於真空中移除甲醇,並使所形成之水層在冰浴中冷卻。以1N HCl使溶液呈酸性pH~4,獲得白色沉澱物。收集固體沉澱物,以水洗滌,乾燥,而得3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二酸,為白色結晶性粉末(31.8克,80%)。LC/MS (M+H)+:446. 1H NMR (DMSO-d6)δ8.85 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.17 (d, 1H), 5.71 (s, 2H), 5.18 (m, 1H), 3.65 (t, 2H), 3.05 (m, 4H), 0.92 (t, 2H), 0.1 (s, 9H).
步驟 3 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 戊二醯胺
於氮氣下,使3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二酸(31.80克,0.07137莫耳)溶於DMF (636毫升,8.21莫耳)中,在冰浴中冷卻,並添加CDI (34.7克,0.214莫耳)。將此混合物攪拌30分鐘,然後使其溫熱至室溫。在攪拌2小時後,使氨(12.2克,0.714莫耳)起泡經過此溶液,歷經30分鐘,獲得混濁懸浮液。濃縮反應混合物,以移除一部份DMF (~200毫升),接著慢慢添加水,獲得白色沉澱物。使此混合物在冰浴中冷卻,並收集固體沉澱物,以水洗滌,且在真空中乾燥,獲得3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二醯胺,為白色粉末(29.0克,91%)。LC/MS (M+H)+:444. 1H NMR (DMSO-d6)δ8.85 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.75 (s, 2H), 7.15 (d, 1H), 6.95 (s, 2H), 5.73 (s, 2H), 5.29 (m, 1H), 3.63 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.73 (m, 2H), 0.90 (t, 2H), 0.1 (s, 9H).
步驟 4 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 戊二腈
使3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二醯胺(29.0克,0.0654莫耳)部份溶於DMF (200毫升,2莫耳)、DCM (200毫升,3莫耳)及TEA (36毫升,0.26莫耳)中,並於氮大氣下,在冰浴中冷卻。逐滴添加氯化三氯乙醯(15毫升,0.14莫耳),反應物轉變成暗色溶液。將其在0℃下攪拌1/2小時。然後濃縮反應物,以移除DCM,並以水稀釋所形成之DMF溶液,以沉澱產物。收集固體沉澱物,並以水洗滌,獲得暗色固體。接著使固體溶於DCM中,且以鹽水洗滌,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得極暗色油狀殘留物。使殘留物溶於DCM中,並添加己烷,直到溶液變成稍微混濁為止。將其在室溫下攪拌,以沉澱3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二腈,為白色針狀結晶(22.7克,85%)。LC/MS (M+H)+:408. 1H NMR (DMSO-d6)δ9.07 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 5.75 (s, 2H), 5.30 (m, 1H), 3.62 (t, 2H), 3.40 (m, 4H), 0.91 (t, 2H), 0.10 (s, 9H).
步驟 5 : 3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊二腈
於室溫下,使3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二腈(10.0克,0.0245莫耳)溶於ACN (200毫升,3.83莫耳)與水(20克,1.1莫耳)中。於其中,添加四氟硼酸鋰(23.0克,0.245莫耳),獲得混濁溶液。將反應物加熱至回流,並藉HPLC監測。於加熱24小時後,使反應物冷卻至室溫,然後在冰浴中冷卻。於其中,慢慢添加氫氧化銨(23毫升,0.59莫耳)。使反應物溫熱至室溫。在攪拌18小時後,以水稀釋反應物,及在真空中濃縮,以移除ACN,獲得沉澱物。收集固體,以水洗滌,並乾燥,而得標題化合物,為灰白色固體(6.2克,91%)。LC/MS (M+H)+:278. 1H NMR (DMSO-d6)δ8.9 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 5.21 (m, 1H), 3.25 (m, 4H).
實例 421 : 5-{2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 }- 吡啶 -2- 甲腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3-(6- 氯基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
將TFA (3.0毫升,0.039莫耳)與DCM (3.0毫升,0.047莫耳)中之3-(6-氯基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(藉由類似關於實例61所述之方法製成) (0.070克,0.00014莫耳)於室溫下攪拌1小時。於真空中移除溶劑,並使殘留物溶於甲醇(4.0毫升,0.099莫耳)與乙二胺(0.07毫升,0.001莫耳)中。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。於真空中移除溶劑,使粗產物藉預備之HPLC純化,以ACN;水梯度液溶離,以氫氧化銨緩衝至pH = 10,獲得3-(6-氯基吡啶-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為白色粉末(35毫克,69%)。LCMS(M+1)+:350. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.21 (b, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.00 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.00 (s, 1H), 6.22 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.78 (m, 1H)
步驟 2 : 5-2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基吡啶 -2- 甲腈三氟醋酸鹽
將3-(6-氯基吡啶-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.025克,0.000071莫耳)與氰化鋅(0.08克,0.0007莫耳)在DMF (1.0毫升,0.013莫耳)中之混合物以氮除氣。於此混合物中,添加肆(三苯膦)鈀(0) (0.04克,0.00004莫耳),並將所形成之混合物以分子氮再除氣一次。將反應混合物於密封管中,在170℃下,於微波(Personal Chemistry)中加熱15分鐘。於冷卻至室溫後,過濾固體,以DMF沖洗,並在真空中濃縮合併之溶劑。將殘留物以己烷(3x)研製,並拋棄己烷洗液。使粗產物藉預備之HPLC純化,以含有0.2% TFA之ACN;水梯度液溶離,而得標題化合物,為白色粉末(16毫克,49.27%)。LCMS (M+1)+:341. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.50 (b, 1H), 9.05 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.18 (m, 2H), 7.78 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.20 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.77 (m, 1H).
實例 428 : 4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 庚二腈 步驟 1 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊烷 -1,5- 二醇
使實質上按實例407中所述製成之3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊二酸二乙酯(0.80克,0.0016莫耳)溶於THF (40毫升,0.49莫耳)中,並在氮大氣下,於冰浴中冷卻。於此混合物中,慢慢添加THF中之1.0M四氫鋁酸鋰(3.2毫升)。將反應物攪拌1小時,以冰使反應淬滅,並於醋酸乙酯與1N HCl之間作分液處理。以鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得琥珀色油。使產物於矽膠上藉FCC純化,以醋酸乙酯:甲醇梯度液溶離,獲得3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊烷-1,5-二醇,為透明黏稠油(0.51克,76%)。LC/MS (M+H)+:418. 1H NMR (DMSO-d6)δ8.85 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.91 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.59 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 2.18 (m, 4H), 0.95 (m, 2H), 0.1 (s, 9H).
步驟 2 :二甲烷磺酸 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊烷 -1,5- 二基酯
使3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊烷-1,5-二醇(50毫克,0.0001莫耳)在DCM (2毫升,0.03莫耳)中之混合物,於0℃下冷卻。於此混合物中,添加TEA (50微升,0.0004莫耳)。將反應物攪拌15分鐘。添加氯化甲烷磺醯(23微升,0.00030莫耳),並將所形成之混合物攪拌1小時。添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得二甲烷磺酸3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-戊烷-1,5-二基酯(57毫克,80%),為油狀物。MS (ES):574 (M+1).
步驟 3 : 4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 庚二腈
於二甲烷磺酸3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊烷-1,5-二基酯(57毫克,0.000099莫耳)在DMSO (1毫升,0.01莫耳)中之混合物內,添加氰化鈉(10毫克,0.0003莫耳),並將混合物攪拌2小時。將混合物在60℃下加熱1小時。添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]庚二腈(40毫克,90%),為油狀物。MS (ES):436 (M+1).
步驟 4 : 4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 庚二腈
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,製成標題化合物,為白色非晶質固體(17毫克,60%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.75 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 7.6 (d, 1H), 7.0 (d, 1H), 4.5 (m, 1H), 2.35 (m, 4H), 2.2 (m, 4H). MS (ES):306 (M+1).
實例 429 : 3-(5- 溴基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 步驟 1 : (2Z&E)-3-(5- 溴基吡啶 -3- 基 ) 丙烯腈 於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之混合物(2.7毫升)內,在0℃(水冰浴,於氮大氣下)下,逐滴添加THF (4.0毫升,0.049莫耳)中之氰基甲基膦酸二乙酯(0.48毫升,0.0030莫耳)。使反應混合物溫熱至室溫,然後冷卻至0℃,接著逐滴添加THF (1.0毫升,0.012莫耳)中之5-溴基菸鹼醛(0.5克,0.003莫耳)。在室溫下攪拌20小時後,以水使反應混合物淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以鹽水洗滌有機層,以無水硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗產物,為暗色油。使粗產物在矽膠上藉急驟式層析純化,使用醋酸乙酯-己烷3:7作為溶離劑,獲得順式與反式異構物(2)-3-(5-溴基吡啶-3-基)丙烯腈之混合物,為灰白色固體(268毫克,47.69%)。LCMS (M+1)+:209, 211. 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.75 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 6.00 (d, 1H).
步驟 2 : 3-(5- 溴基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 吡啶 - 醯亞胺 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於1.0毫升無水ACN中之4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.200克,0.000634莫耳)內,添加DBU (0.10毫升,0.00067莫耳),接著添加1.0毫升ACN中之(2Z&E)-3-(5-溴基吡啶-3-基)丙烯腈(0.234克,0.00112莫耳)。將反應混合物在67℃下攪拌4小時。在冷卻時,使混合物於稀鹽酸與醋酸乙酯之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌有機層,以無水硫酸鈉脫水乾燥,及濃縮。使粗產物在矽膠上藉急驟式層析純化,使用醋酸乙酯:己烷(7:3),獲得3-(5-溴基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為灰白色固體(225毫克,67.66%)。LCMS (M+1)+:524, 526. 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.90 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 5.81 (m, 1H), 5.75 (s, 2H), 3.70 (m, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.42 (m, 1H), 1.00 (m, 2H), 0.08 (s, 9H).
步驟 3 : 3-(5- 溴基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
將DCM (9.0毫升,0.14莫耳)與TFA (9.0毫升,0.12莫耳)中之3-(5-溴基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.220克,0.000419莫耳)於室溫下攪拌1小時。濃縮反應物,獲得殘留物,使此粗製中間物溶於甲醇(12毫升,0.30莫耳)與乙二胺(0.2毫升,0.003莫耳)中,並在室溫下攪拌過夜。在真空中濃縮反應物,獲得粗產物,使其藉預備之HPLC純化,以水:ACN梯度液溶離,以氫氧化銨緩衝(pH = 10),獲得3-(5-溴基吡啶-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為非晶質白色粉末(118毫克,71.36%)。LCMS (M+1)+:394, 396. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ12.05 (bs, 1H), 8.98 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 6.50 (m, 2H), 8.50 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.21 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.70 (m, 1H).
實例 430 : 3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊烷 -1,5- 二醇 使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,但使用得自實例428之3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-戊烷-1,5-二醇,製成標題化合物,為白色非晶質固體(25毫克,70%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.65 (s, 1H), 8.6 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.6 (d, 1H), 6.0 (d, 1H), 4.6 (m, 1H), 3.3 (m, 2H), 3.2 (m, 2H), 2.1 (m, 2H), 1.9 (m, 2H). MS (ES):288 (M+1).
實例 431 : 5-(2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 )- 菸鹼腈雙 ( 三氟醋酸鹽 ) 將3-(5-溴基吡啶-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.050克,0.00013莫耳) (得自實例429)、DMF (2.0毫升,0.026莫耳)及氰化鋅(0.1克,0.001莫耳)之漿液,藉由以氮滌氣而除氣。然後添加肆(三苯基-膦)鈀(0) (0.07克,0.00006莫耳),並將所形成之漿液再以氮除氣一次。將反應物密封,並在170℃下,於微波(Personal Chemistry)中加熱15分鐘。使反應物冷卻,並濾出固體。在真空中濃縮合併之DMF離份。將殘留物以醋酸乙酯-己烷2:8,接著***研製,以移除副產物。使粗產物藉預備之HPLC純化,以含有0.2% TFA之水:乙腈梯度液溶離,獲得外消旋標題化合物(43毫克,59.65%)。LCMS (M+1)+:341. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ12.60 (bs, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.30 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.70 (m, 1H).
實例 431R 與實例 431S
對掌異構物R-5-(2-氰基-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-乙基)菸鹼腈與S-5-(2-氰基-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-乙基)菸鹼腈係藉由對掌性管柱HPLC分離。
實例 467 : 3-(3- 胺基苯基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 丙腈雙 ( 三氟醋酸鹽 ) 步驟 1 : 3-(3- 硝基苯基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於8.0毫升無水ACN中之4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.500克,0.00158莫耳)內,添加DBU (0.24毫升,0.0016莫耳),接著添加2.0毫升ACN中之(2Z)-3-(3-硝基苯基)丙烯腈(0.36克,0.0021莫耳)。將反應混合物在67℃下加熱18小時。使其冷卻至室溫,並使混合物於稀鹽酸與醋酸乙酯之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌有機層,以無水硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮。使粗產物在矽膠上藉急驟式層析純化,使用醋酸乙酯-己烷6:4,獲得3-(3-硝基苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為暗橘色油(688毫克,88.65%)。LCMS (M+1)+:490.
步驟 2. 3-(3- 胺基苯基 )-3-(4-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 丙腈
使3-(3-硝基苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.630克,0.00129莫耳)溶於乙醇(65毫升,1.1莫耳)中,以氮除氣,然後添加鈀(0.55克,0.0052莫耳) (10%,於碳上)。使反應混合物再以氮滌氣一次,接著將其在50 psi氫下,裝填於帕爾振盪器中,歷經60分鐘。過濾反應混合物,及濃縮,而得3-(3-胺基-苯基)-3-(4-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基-1H-吡唑-1-基)丙腈,為無色油(550毫克,95.92%)。LCMS (M+1)+=460.
步驟 3. 3-(3- 胺基苯基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈雙 ( 三氟醋酸鹽 )
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,製成標題化合物,為白色非晶質固體(18毫克,38%)。LCMS (M+1)+=329. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.61 (b, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.18 (m, 1H), 6.85 (m, 2H), 6.02 (m, 1H), 3.78 (m, 1H), 3.60 (m, 1H).
實例 468 : N-(3-(2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 )- 苯基 ) 乙醯胺三氟醋酸鹽 步驟 1 -(3-2- 氰基 -1-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基苯基 ) 乙醯胺
於無水DCM (1.0毫升,0.016莫耳)中之3-(3-胺基苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.070克,0.00015莫耳) (得自實例467)內,添加TEA (0.042毫升,0.00030莫耳)。使反應物於冰浴中冷卻,並添加氯化乙醯(0.016毫升,0.00023莫耳)。將反應混合物攪拌30分鐘,並以水稀釋,且以醋酸乙酯萃取(2x)。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以無水硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮,獲得N-(3-2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基苯基)乙醯胺,為無色油(65毫克,85.08%)。LCMS (M+1)+=502.
步驟 2 N-(3-2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基苯基 ) 乙醯胺三氟醋酸鹽
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,製成標題化合物,為白色非晶質固體(40毫克,68.9%)。LCMS (M+1)+=372. 1H NMR (DMSO-d6)δ12.61 (b, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.24 (m, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.05 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.48 (m, 1H), 1.98 (s, 3H).
實例 470 : 4-(2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 )- 噻吩 -2- 甲腈三氟醋酸鹽 步驟 1 4- 溴基 -2-( 二乙氧基甲基 ) 噻吩
將4-溴基噻吩-2-羧甲醛(1.2克,0.0063莫耳)在乙醇(10毫升,0.2莫耳)中之混合物,以氯化銨(0.42克,0.0078莫耳)與原甲酸三乙酯(1.2克,0.0078莫耳)處理。將混合物在60℃下攪拌2小時。以水使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得4-溴基-2-(二乙氧基甲基)硫基苯為油狀物(1.3克,81%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.22 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 3.63 (q, 4H), 1.24 (t, 6H).
步驟 2 5-( 二乙氧基甲基 ) 噻吩 -3- 羧甲醛
使4-溴基-2-(二乙氧基甲基)噻吩(500毫克,0.002莫耳)在醚(5毫升,0.05莫耳)中之溶液,於-78℃下冷卻。於此溶液中,逐滴添加己烷中之2.5M正-丁基鋰(0.83毫升)。將反應物於-78℃下攪拌1小時。在-78℃下,於反應物中,添加DMF (0.4克,0.006莫耳),並將混合物攪拌30分鐘。以水使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析純化,產生5-(二乙氧基甲基)噻吩-3-羧甲醛,為油狀物(170毫克,42.0%)。藉由1H NMR得知形成兩種醛類之不同區域異構物,而並未分離;(註:NMR位移僅對主要異構物) 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.85 (s, 1H), 8.05 7.7 (s, 1H), 7.45,7.15 (s, 1H), 5.7 (s, 1H), 3.65 (m, 2H), 1.25 (m, 2H).
步驟 3 (2E)-3-[5-( 二乙氧基甲基 )-3- 噻吩基 ] 丙烯腈
於氰基甲基膦酸二乙酯(100毫克,0.0008莫耳)在THF (2毫升,0.02莫耳)中之溶液內,在0℃下冷卻,並逐滴添加THF中之1.0M第三-丁醇鉀(0.8毫升)。移除浴液,並使反應物溫熱至室溫,歷經30分鐘。使反應物冷卻至0℃,並逐滴添加5-(二乙氧基甲基)噻吩-3-羧甲醛(170毫克,0.00079莫耳)在THF (2毫升,0.02莫耳)中之溶液。將反應物在室溫下攪拌過夜。使反應物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮。使粗製殘留物於矽膠上溶離(醋酸乙酯:己烷1:5),藉急驟式管柱層析純化,獲得(2E)-3-[5-(二乙氧基甲基)-3-噻吩基]丙烯腈,為油狀物(160毫克,84.9%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.4-7.0 (m, 3H), 5.65 (m, 1H), 4.2 (m, 1H), 3.65 (m, 4H), 1.25 (m, 6H).
步驟 4 3-[5-( 二乙氧基甲基 )-3- 噻吩基 ]-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(200毫克,0.0007莫耳)在ACN (2毫升,0.04莫耳)與(2E)-3-[5-(二乙氧基甲基)-3-噻吩基]丙烯腈(160毫克,0.00067莫耳) (區域異構物之混合物)中之溶液內,添加DBU (80微升,0.0005莫耳)。將反應物攪拌過夜,然後添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮。使粗製殘留物於矽膠上溶離(50% EtOAc/己烷),藉急驟式管柱層析純化,獲得3-[5-(二乙氧基甲基)-3-噻吩基]-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(160毫克,43%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.92 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.29 (b, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.82 (m, 1H), 5.74 (d, 2H), 3.74 (m, 2H), 3.71 (m, 8H), 3.59 (m, 1H), 1.32 (m, 4H), 0.95 (m, 2H), -0.08 (s, 9H);MS (ES):553 (M+1).
步驟 5 3-(5- 甲醯基 -3- 噻吩基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
將3-[5-(二乙氧基甲基)-3-噻吩基]-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(70毫克,0.0001莫耳)在THF (1毫升,0.01莫耳)中之溶液,以水(400微升)中之1M HCl處理。將反應物在室溫下攪拌。添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-(5-甲醯基-3-噻吩基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為半固體殘留物(60毫克,98%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.96 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.44 (m, 2H), 7.46 (1H), 5.73 (s, 2H), 4.15 (m, 1H), 3.73-3.43 (m, 3H), 1.35 (m, 1H), 1.01 (m, 2H), 0.03 (s, 9H);MS (ES):479 (M+1).
步驟 6 : 5-[(E)-( 羥亞胺基 ) 甲基 ]-3- 噻吩基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
將3-(5-甲醯基-3-噻吩基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(65毫克,0.00014莫耳)在甲醇(2毫升,0.05莫耳)中之溶液,以羥胺鹽酸鹽(11毫克,0.00016莫耳)與碳酸氫鉀(23毫克,0.00023莫耳)處理。將反應物在室溫下攪拌4小時。添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-5-[(E)-(羥亞胺基)甲基]-3-噻吩基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為半固體油(60毫克,89.5%)。(粗產物含有肟之兩種異構物,以及噻吩之兩種區域異構物)。MS (ES):494 (M+1).
步驟 7 : 4-(2- 氰基 -1-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 ) 噻吩 -2- 甲腈
於3-5-[(E)-(羥亞胺基)甲基]-3-噻吩基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(70毫克,0.0001莫耳)在吡啶(1毫升,0.01莫耳)中之混合物內,添加氯化甲烷磺醯(100微升,0.001莫耳)。將混合物在60℃下攪拌2小時。添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以0.1N HCl、鹽水洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得4-(2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基)噻吩-2-甲腈,為粗產物(30毫克,44%)。MS (ES):476 (M+1).
步驟 8 : 4-(2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 ) 噻吩 -2- 甲腈三氟醋酸鹽
將4-(2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基)噻吩-2-甲腈(50毫克,0.0001莫耳)在DCM (2毫升,0.03莫耳)與TFA (1毫升,0.01莫耳)中之混合物攪拌1小時。起始物質係消耗,且形成所要之甲基羥基化合物。在真空中濃縮混合物,以移除TFA。使粗製中間物溶於甲醇(3毫升,0.07莫耳)中,並以乙二胺(1毫升,0.01莫耳)處理。將混合物攪拌過夜,及在真空中濃縮。使產物藉預備之HPLC純化,以ACN:水,具有0.2% TFA溶離,獲得兩種區域異構物,標題化合物,為非晶質白色固體(30毫克,60%)。 1H NMR (500 MHz, DMSO):δ8.95 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.25 (m, 1H), 3.80-3.60 (m, 2H);MS (ES):346 (M+1).
實例 471 : 5-(2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 )- 噻吩 -2- 甲腈三氟醋酸鹽 經單離為得自實例470之第二種區域異構物,標題化合物係以非晶質白色固體單離(4毫克,8%)。 1H NMR (500 MHz, DMSO):δ9.0 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.0 (d, 1H), 6.45 (m, 1H), 3.8 (dd, 2H);MS (ES):346 (M+1).
實例 472 : 3-[3-( 嗎福啉 -4- 基羰基 ) 苯基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3-(2- 氰基 -1-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 ) 苯甲酸
於3-2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基苯甲酸甲酯(50毫克,0.0001莫耳) (按實例61製成)在甲醇(2毫升,0.05莫耳)中之溶液內,慢慢添加水(1毫升,0.06莫耳)中之氫氧化鋰(1毫克,0.0001莫耳)。添加水,且亦添加一些1N HCl,直到溶液稍微酸性為止。以醋酸乙酯萃取水層。使合併之萃液以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-(2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基)苯甲酸,為粗製殘留物(35毫克,72.0%)。MS (ES):489 (M+1).
步驟 2 : 3-[3-( 嗎福啉 -1- 基羰基 ) 苯基 ]-3-[4-(7-{[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於3-(2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基)苯甲酸(40毫克,0.00008莫耳)在DMF (1毫升,0.01莫耳)中之溶液內,添加六氟磷酸N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮苯并***-1-基)
(36毫克,0.000095莫耳)與DIPEA (30微升,0.0002莫耳)。將反應物攪拌10分鐘,然後添加嗎福啉(10毫克,0.00012莫耳),並將所形成之混合物攪拌3小時。添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以1N HCl、鹽水洗滌合併之有機萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-[3-(嗎福啉-1-基羰基)苯基]-3-[4-(7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為粗製(40毫克,88%)產物。MS (ES):558 (M+1).
步驟 3 : 3-[3-( 嗎福啉 -4- 基羰基 ) 苯基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(18毫克,50%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ9.05 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.85 (b, 1H), 7.665 (s, 1H), 7.55-7.35 (m, 3H), 7.15 (s, 1H), 6.15 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.65-3.4 (m, 6H), 3.25 (m, 2H), 3.05 (m, 1H);MS (ES):428 (M+1).
實例 482 : 3-(5- 苯基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3-(5- 苯基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於3-(5-溴基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(得自實例429) (60毫克,0.0001莫耳)在1,4-二氧陸圜(2毫升,0.02莫耳)中之溶液內,添加水(0.5毫升,0.03莫耳)中之苯基二羥基硼烷(15毫克,0.00012莫耳)與碳酸氫鈉(30毫克,0.0003莫耳)。將所形成之混合物使用氮除氣。添加肆(三苯膦)鈀(0) (10毫克,0.00001莫耳),並使氮再一次起泡經過反應物。將反應物在80℃下,於油浴中加熱1小時。添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-(5-苯基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(50毫克,80%),為粗產物。MS (ES):522 (M+1).
步驟 2 : 3-(5- 苯基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序單離標題化合物,為非晶質白色固體(20毫克,40%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ9.15 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.85 (b, 1H), 7.67 (m, 2H), 7.45 (m, 2H), 7.43 (m, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.25 (m, 1H), 3.95 (dd, 1H), 3.80 (dd, 1H), 3.0 (m, 1H);MS (ES):392.1 (M+1)
實例 486 : 3-(5- 乙炔基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]-3-5-[( 三甲基矽烷基 ) 乙炔基 ] 吡啶 -3- 基丙腈
將3-(5-溴基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(得自實例429) (0.080克,0.00015莫耳)在TEA (0.300毫升,0.00215莫耳)中之溶液以氮除氣,然後添加碘化銅(I) (0.005克,0.00003莫耳)、(三甲基矽烷基)乙炔及氯化雙(三苯膦)鈀(II)。將反應混合物密封於管件中,並在室溫下攪拌過夜。使所形成之黑色溶液於水(10毫升)與***之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,及在真空中濃縮,獲得3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-5-[(三甲基矽烷基)乙炔基]吡啶-3-基丙腈,為黃色油(60毫克,72.6)。LCMS (M+1)+:542).
步驟 2 : 3-(5- 乙炔基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽
使3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-5-[(三甲基矽烷基)乙炔基]吡啶-3-基丙腈(0.050克,0.000092莫耳)溶於DCM (5.0毫升,0.078莫耳)與TFA (2.0毫升,0.026莫耳)中。將反應混合物在室溫下攪拌90分鐘,並於真空中濃縮。使乾燥殘留物溶於甲醇中,在冰浴中冷卻,並添加氫氧化鉀(0.482克,0.00859莫耳)在甲醇(10毫升,0.2莫耳)中之溶液。將反應溶液攪拌30分鐘,濃縮,且使粗產物藉預備之HPLC純化,以水:ACN梯度液,具有0.2% TFA溶離,而得標題化合物,為白色非晶質固體(15毫克,35.85%)。LCMS (M+1)+:340. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ12.1 (bs, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.70 (m, 2H), 8.48 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.15 (d, 1H), 6.20 (m, 1H), 4.82 (s, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.70 (m, 1H).
實例 488 : 3-[5-( 苯硫基 ) 吡啶 -3- 基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3-[5-( 苯硫基 ) 吡啶 -3- 基 ]-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於無水1,4-二氧陸圜(1.60毫升,0.0205莫耳)中之得自實例429步驟2之3-(5-溴基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.130克,0.000248莫耳)內,添加DIPEA (0.085毫升,0.00049莫耳)。將溶液以氮除氣,接著添加(9,9-二甲基-9H-二苯并哌喃-4,5-二基)雙(二苯膦) (0.007克,0.00001莫耳)、雙(二苯亞甲基丙酮)鈀(0) (0.0036克,0.0000062莫耳)及苯硫醇(0.025毫升,0.00025莫耳)。將溶液再以氮滌氣一次。將於密封管中之反應混合物加熱至回流,歷經3小時。以醋酸乙酯稀釋反應混合物,以水(2x)、鹽水(1x)洗滌,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及在真空中蒸發溶劑。將粗產物以己烷-醋酸乙酯9:1研製,產生3-[5-(苯硫基)吡啶-3-基]-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(110毫克,80%)。LC/MS (M+H)+:m/z = 554.2.
步驟 2 : 3-[5-( 苯硫基 ) 吡啶 -3- 基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 丙腈三氟醋酸鹽
使3-[5-(苯硫基)吡啶-3-基]-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(0.110克,0.000199莫耳)溶於DCM (5.0毫升,0.078莫耳)與TFA (2.0毫升,0.026莫耳)中,並將混合物於室溫下攪拌1小時。於真空中移除溶劑,並使所形成之殘留物溶於甲醇(5.0毫升,0.12莫耳)中,並添加乙二胺(0.1毫升,0.002莫耳)。將此反應混合物於室溫下攪拌過夜。在真空中濃縮混合物,且使粗產物藉LCMS (pH = 2)純化,產生標題化合物,為非晶質固體(62毫克,58.07%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.80 (s), 9.10 (s), 8.87 (d), 8.60 (s), 8.50 (s), 8.43 (s), 7.82 (s), 7.78 (m), 7.39 (m), 7.25 (m), 7.18 (d), 6.20 (m), 3.84 (m), 3.70 (m). LC/MS (M+H)+:m/z = 424.15
實例 491 : 3-(5- 嗎福啉 -4- 基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 步驟 1 : 4-(5- 溴基吡啶 -3- 基 ) 嗎福啉
於[3,5-二溴基吡啶(1000毫克,0.004莫耳)在1,4-二氧陸圜(8毫升,0.1莫耳)中之溶液內,添加嗎福啉(400毫克,0.004莫耳)與第三-丁醇鈉(400毫克,0.004莫耳)。使反應物以氮起泡。添加肆(三苯膦)鈀(0) (200毫克,0.0002莫耳),並使氮起泡經過,歷經數分鐘。將混合物在80℃下加熱過夜。使反應物冷卻至室溫,然後於水與醋酸乙酯之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗製殘留物。使粗產物於矽膠上藉FCC純化,以1:1,EtOAc:己烷溶離,獲得4-(5-溴基吡啶-3-基)嗎福啉,為黏稠油(400毫克,40%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.2 (s, 1H), 8.1 (s, 1H), 7.2 (s, 1H), 3.8 (m, 4H), 3.2 (m, 4H).
步驟 2 : 5- 嗎福啉 -4- 基菸鹼醛
將經-78℃下冷卻之4-(5-溴基吡啶-3-基)嗎福啉(100毫克,0.0004莫耳)在醚(2毫升,0.02莫耳)中之溶液,以己烷中之2.5M正-丁基鋰(0.2毫升)處理,並攪拌1小時。於此混合物中,逐滴添加DMF (0.5毫升,0.006莫耳)。以水使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得5-嗎福啉-4-基菸鹼醛(70毫克,90%),為粗產物。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.1 (s, 1H), 8.0 (s, 2H), 7.6 (s, 1H), 3.8 (m, 4H), 3.2 (m, 4H).
步驟 3 : (2E)-3-(5- 嗎福啉 -4- 基吡啶 -3- 基 ) 丙烯腈
於經0℃下冷卻之氰基甲基膦酸二乙酯(70毫克,0.0004莫耳)在THF (2毫升,0.02莫耳)中之溶液內,逐滴添加THF中之1.0M第三-丁醇鉀(0.50毫升)。移除冷浴,並使反應物溫熱至室溫,歷經30分鐘。使反應物冷卻至0℃,並逐滴添加5-嗎福啉-4-基菸鹼醛(70毫克,0.0004莫耳)在THF (2毫升,0.02莫耳)中之溶液。將反應物在室溫下攪拌4小時,以水使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得(2E)-3-(5-嗎福啉-4-基吡啶-3-基)丙烯腈(75毫克,100%),為異構物之混合物;LC/MS:216 (M+1).
步驟 4 : 3-(5- 嗎福啉 -4- 基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(120毫克,0.00038莫耳)在ACN (10毫升,0.2莫耳)與(2E)-3-(5-嗎福啉-4-基吡啶-3-基)丙烯腈(70毫克,0.0003莫耳) (異構物之混合物)中之溶液內,添加DBU (50微升,0.0003莫耳),並將所形成之混合物攪拌過夜。使混合物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-(5-嗎福啉-4-基吡啶-3-基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(200毫克,100%),為粗產物;L/MS = 531 (M+1).
步驟 5 : 3-(5- 嗎福啉 -4- 基吡啶 -3- 基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 丙腈
使用類似實例61,關於移除SEM保護之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(18毫克,50%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.8 (s, 1H), 8.6 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 8.2 (s, 1H), 8.0 (s, 1H), 7.6 (d, 1H), 7.4 (m, 1H), 6.9 (d, 1H), 6 (m, 1H), 3.8 (dd, 1H), 3.7 (m, 4H), 3.6 (dd, 1H), 3.1 (m, 4H);LC/MS:401 (M+1).
實例 496 : 3-[5-( 苯亞磺醯基 ) 吡啶 -3- 基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 與 實例 497 : 3-[5-( 苯磺醯基 ) 吡啶 -3- 基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 於得自實例488步驟2之3-[5-(苯硫基)吡啶-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈三氟醋酸鹽(0.050克,0.000093莫耳)在THF (1.0毫升,0.012莫耳)中之溶液內,添加MCPBA (0.022克,0.00013莫耳) (0.031克,77%,在水中),在水冰浴中。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。使粗產物藉LCMS (pH = 10)純化。收集兩個吸收峰: #1 -產生3-[5-(苯亞磺醯基)吡啶-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(8毫克,19.57%)。1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.1 (s), 8.89 (d), 8.80 (d), 8.70 (s), 8.62 (s), 8.40 (s), 8.19 (s), 7.70 (m), 7.58 (s), 7.42 (m), 6.90 (s), 6.20 (m), 3.82 (m), 3.65 (m). LC/MS (M+H)+:m/z = 440.0 #2 -產生3-[5-(苯磺醯基)吡啶-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(21毫克,50%)。1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.1 (s), 9.10 (s), 8.86 (m), 8.61 (s), 8.40 (m), 7.98 (m), 7.62 (m), 7.58 (m), 6.90 (s), 6.20 (m), 3.82 (m), 3.65 (m). LC/MS (M+H)+:m/z = 456.0
實例 498 : 3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊烷 -1- 醇 步驟 1 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醛
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(100毫克,0.0003莫耳)在ACN (2毫升,0.04莫耳)與DBU (50微升,0.0003莫耳)中之溶液內,逐滴添加1毫升ACN中之(2E)-戊-2-烯醛(4.0E1毫克,0.00048莫耳)。將反應物攪拌1小時,然後添加水,並以醋酸乙酯萃取所形成之混合物。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗製物,為水合產物形式。LC/MS (M+H)+:m/z = 400.
步驟 2 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊烷 -1- 醇
將[3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醛(50毫克,0.0001莫耳)在甲醇(2毫升,0.05莫耳)中之混合物,以四氫硼酸鈉(8毫克,0.0002莫耳)處理。將混合物於室溫下攪拌1小時,接著添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得所要之產物,為油狀物。LC/MS (M+H)+:m/z = 402.
步驟 3 :
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(6毫克,20%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.65 (d, 1H), 8.60 (d, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.50 (b, 1H), 4.4 (m, 1H), 3.4 (m, 1H), 3.2 (m, 1H), 2.1 (m, 1H), 1.8-2.0 (m, 3H), 0.7 (t, 3H);LC/MS (M+H)+:m/z = 272.
實例 499 : 3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊基碳酸甲酯 步驟 1 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊基碳酸甲酯
於得自實例498步驟2之[3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊烷-1-醇(50毫克,0.0001莫耳)在吡啶(1毫升,0.01莫耳)中之溶液內,添加氯甲酸甲酯(30微升,0.0003莫耳)。將反應物攪拌3小時,添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。1N HCl、鹽水洗滌合併之有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊基碳酸甲酯,為半固體殘留物(30毫克,50%)。LC/MS (M+H)+:m/z = 460.
步驟 2 :
使用類似實例61,關於移除SEM保護之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(8毫克,20%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.0 (b, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.65 (b, 1H), 7.600 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 4.4 (m, 1H), 4.0 (m, 1H), 3.8 (m, 1H), 3.6 (s, 3H), 2.1 (m, 1H), 2.2 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 0.75 (t, 3H);LC/MS (M+H)+:m/z = 330.
實例 500(a) : (1E)-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醛 肟 步驟 1 : (1E)-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醛 肟
於得自實例498步驟2之3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醛(60毫克,0.0002莫耳)在甲醇(2毫升,0.05莫耳)中之溶液內,添加羥胺鹽酸鹽(16毫克,0.00022莫耳)與碳酸氫鉀(22毫克,0.00022莫耳)。將反應物在室溫下攪拌2小時,添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得(1E)-3-[4-(7-[2-(三甲基-矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醛肟,為半固體殘留物(50毫克,80%)。LC/MS (M+H)+:m/z = 415.
步驟 2 :
使用類似實例61,關於移除SEM保護之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.0 (b, 1H), 8.6 (m, 2H), 8.2 (m, 1H), 7.5 (d, 1H), 7.1與6.5 (t, 1H), 4.6 (m, 1H), 4.4 (m, 1H), 2.6-2.8 (m, 2H), 1.8 (m, 2H), 0.65 (t, 3H);LC/MS (M+H)+:m/z = 285.
實例 501(a) : (1E)-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醛 O- 甲基 肟 與 實例 502(a) : (1Z)-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醛 O- 甲基 肟 步驟 1 : (1E)-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醛 O- 甲基 肟 與 (1Z)-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 戊醛 O- 甲基 肟
於3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醛(70毫克,0.0002莫耳)在甲醇(2毫升,0.05莫耳)中之溶液內,添加甲氧基胺鹽酸鹽(19毫克,0.00022莫耳)與碳酸氫鉀(22毫克,0.00022莫耳)。將反應物在室溫下攪拌2小時,添加水,並以醋酸乙酯萃取產物。以飽和氯化鈉洗滌合併之萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醛O-甲基肟,為異構物之混合物(70毫克,90%),粗產物。LC/MS (M+H)+:m/z = 429.
步驟 2 :
使用類似實例61,關於移除SEM保護之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(4毫克,25%)。 異構物1, 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.7 (s, 2H), 8.3 (s, 1H), 7.6 (s, 1H), 7.3 (t, 1H), 7.0 (s, 1H), 4.6 (m, 1H), 3.3 (s, 3H), 2.8 (m, 2H), 1.9 (m, 2H), 0.8 (t, 3H);LC/S (M+H)+:m/z = 299.異構物2 (3毫克,22%), 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.7 (s, 2H), 8.3 (s, 1H), 7.6 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 6.7 (t, 1H), 4.5 (m, 1H), 3.3 (s, 3H), 2.8-3.0 (m, 2H), 1.9 (m, 2H), 0.8 (t, 3H);LC/MS (M+H)+:m/z = 299.
實例 503 : 4-[1-(4,4- 二溴基 -1- 乙基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶三氟醋酸鹽 步驟 1 : 4-[1-(4,4- 二溴基 -1- 乙基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於經0℃下冷卻之3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醛(300毫克,0.0008莫耳)在DCM (4毫升,0.06莫耳)中之溶液內,添加三苯膦(800毫克,0.003莫耳)與四溴化碳(500毫克,0.002莫耳)。將反應物在0℃下攪拌10分鐘,添加水,並以醋酸乙酯萃取。以飽和氯化鈉洗滌合併之有機萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮。使粗產物藉預備之LC-MS (ACN,水,NH4OH)純化,獲得4-[1-(4,4-二溴基-1-乙基丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶,為非晶質固體(50毫克,10%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.9 (s, 2H), 8.4 (s, 1H), 8.3 (s, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.3 (s, 1H), 6.9 (m, 1H), 6.4 (m, 1H), 5.7 (s, 2H), 4.2 (m, 1H), 3.6 (m, 2H), 2.8 (m, 2H), 2.1 (m, 1H), 2.0 (m, 1H), 1.0 (m, 5H), LC/MS (M+H)+:m/z = 556
步驟 2 :
使用類似實例61,關於移除SEM保護之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(8毫克,40%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.8 (s, 2H), 8.4 (s, 1H), 7.7 (b, 1H), 7.2 (b, 1H), 6.5 (t, 1H), 4.4 (m, 1H), 2.6 (m, 2H), 1.8 (m, 2H), 0.8 (t, 3H);LC/MS (M+H)+:m/z = :426.
實例 506 : 4-[1-(1- 乙基丁 -3- 炔 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 步驟 1 : 4-[1-(1- 乙基丁 -3- 炔 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
將4-[1-(4,4-二溴基-1-乙基丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(20毫克,0.00004莫耳) (得自實例503步驟1)在THF (1毫升,0.01莫耳)中之溶液,於-78℃下,以己烷中之2.5M正-丁基鋰(0.032毫升)處理。將混合物於-78℃下攪拌1小時,然後在室溫下1小時。以水(1毫升,0.06莫耳)與1N HCl使反應淬滅。使反應物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌有機萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得4-[1-(1-乙基丁-3-炔-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三-甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶,為半固體(12毫克,80%)。LC/MS (M+H)+:m/z = 396.
步驟 2 :
使用類似實例61,關於移除SEM保護之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(4毫克,30%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.2 (b, 1H), 8.8 (s, 2H), 8.4 (s, 1H), 7.6 (s, 1H), 7.1 (s, 1H), 4.4 (m, 1H), 2.8 (m, 3H), 1.9 (m, 2H), 0.8 (t, 3H);LC/MS (M+H)+:m/z = 266.
實例 516 : (R)-3-[3-( 乙基磺醯基 ) 苯基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 與 (S)-3-[3-( 乙基磺醯基 ) 苯基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 丙腈 步驟 1 : 1- 溴基 -3-( 乙硫基 ) 苯
將碘化乙烷(0.46毫升,0.0058莫耳)添加至3-溴基硫酚(0.50毫升,0.0048莫耳)、ACN (7.11毫升,0.136莫耳)及碳酸鉀(2.0克,0.014莫耳)之懸浮液中。將反應物在室溫下攪拌2小時,以醋酸乙酯稀釋,並過濾,以移除固體。在真空中濃縮反應物,獲得1-溴基-3-(乙硫基)苯,為無色油1.0克,100%。
步驟 2 : 1- 溴基 -3-( 乙基磺醯基 ) 苯
將MCPBA (2.37克,10.6毫莫耳)添加至1-溴基-3-(乙硫基)苯(1.00克,4.80毫莫耳)在DCM (10毫升,156毫莫耳)中之經冷卻至0℃之溶液內。將反應物攪拌1小時,然後以水稀釋,並以醋酸乙酯萃取三次。使合併之有機層以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮。使所形成之粗製殘留物藉急驟式管柱層析純化,使用己烷:醋酸乙酯梯度液,獲得1-溴基-3-(乙基磺醯基)苯,為無色油1.1克,92%。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.09 (m, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.45 (t, 1H), 3.14 (q, 2H), 1.25 (t, 3H).
步驟 3 : (2E&Z)-3-[3-( 乙基磺醯基 ) 苯基 ] 丙烯腈
使1-溴基-3-(乙基磺醯基)苯(1.3克,0.0052莫耳)溶於DMF (15.0毫升,0.194莫耳)中,並添加2-丙烯腈(0.68毫升,0.010莫耳)、TEA (1.4毫升,0.010莫耳)及三苯膦(0.23克,0.00089莫耳)。將所形成之溶液以氮除氣,並添加醋酸鈀(0.07克,0.0003莫耳)。將反應物再以氮除氣一次,然後在密封管中加熱至110℃,歷經8小時。藉HPLC得知反應已完成,接著使其冷卻至室溫,然後於醋酸乙酯與水之間作分液處理。以鹽水洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮。使產物於矽膠上藉FCC純化,以己烷;醋酸乙酯梯度液溶離,獲得(2E&Z)-3-[3-(乙基磺醯基)苯基]丙烯腈,為琥珀色油(1.1克,92%)。LC/MS (M+H)+:m/z = 222.
步驟 4 : 3-[3-( 乙基磺醯基 ) 苯基 ]-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於氮氣及室溫下,將(2E&Z)-3-[3-(乙基磺醯基)苯基]丙烯腈(1.0克,0.0045莫耳)與4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.3克,0.0041莫耳)及DBU (0.61毫升,0.0041莫耳)在ACN (10.0毫升,0.191莫耳)中合併。將反應物在室溫下攪拌24小時。使其在醋酸乙酯與水之間作分液處理,並添加0.1N HCl,以調整pH至7。以鹽水洗滌合併之有機萃液,以硫酸鎂脫水乾燥,及濃縮,而得粗製油。使產物於矽膠上藉FCC純化,以己烷:醋酸乙酯梯度液溶離,獲得3-[3-(乙基磺醯基)苯基]-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為油狀物(1.5克,68%)。LC/MS (M+H)+:m/z = 537.該油為外消旋,將其藉對掌性管柱層析(Chiracel OD-H,以乙醇:甲醇:己烷30:30:40溶離,Rt 13.2與17.1分鐘)分離,獲得兩種對掌異構物,各為玻璃態物質(0.51克)。LC/MS (M+H)+:m/z = 537. 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.89 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.71 (t, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 5.85 (t, 1H), 5.75 (s, 2H), 3.78-3.42 (m, 4H), 3.18 (m, 2H), 1.35 (t, 3H), 0.97 (t, 2H), 0.05 (s, 9H).
步驟 5 :
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,製成標題化合物,以獲得異構物#1,為非晶質白色固體(300毫克,80%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ9.1 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.5 (s, 1H), 8.0 (s, 1H), 7.6-7.9 (m, 4H), 7.1 (s, 1H), 6.3 (m, 1H), 3.9 (m, 1H), 3.7 (m, 1H), 3.2 (q, 2H), 1.0 (t, 3H);MS (ES) (M+H)+:m/z = 407. 使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,製成標題化合物,以獲得異構物#2,為非晶質白色固體(300毫克,80%)。 1H NMP (400 MHz, DMSO):δ9.1 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.5 (s, 1H), 8.0 (s, 1H), 7.6-7.9 (m, 4H), 7.1 (s, 1H), 6.3 (m, 1H), 3.9 (m, 1H), 3.7 (m, 1H), 3.2 (q, 2H), 1.0 (t, 3H);MS (ES) (M+H)+:m/z = 407.
實例 526 : 4-[1-(1- 乙基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 步驟 1 : 4-[1-(1- 乙基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於溴化甲基三苯基鏻(100毫克,0.0004莫耳)在THF (2毫升,0.02莫耳)中之冰***液內,添加甲苯中之0.5M鉀雙(三甲基矽烷基)胺(0.8毫升)。將混合物在0℃冰浴下攪拌1小時,然後冷卻至-78℃,並以3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]戊醛(80毫克,0.0002莫耳) (得自實例498)處理。將反應物於-78℃下攪拌,並逐漸溫熱至室溫過夜。使反應物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。以飽和氯化鈉洗滌有機層,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得4-[1-(1-乙基丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶150毫克,為粗產物。LC/MS = 398 (M+1).
步驟 2 : 4-[1-(1- 乙基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
使用類似實例61,關於移除SEM保護基之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(25毫克,1%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.6 (s, 2H), 8.2 (s, 1H), 7.4 (s, 1H), 6.9 (s, 1H), 5.8 (m, 1H), 5.0 (dd, 2H), 4.2 (m, 1H), 2.4-2.6 (m, 2H), 1.7-1.9 (m, 2H), 0.6 (t, 3H);LC/MS:268 (M+1).
實例 500 : (3R)- 與 (3S)-4,4,4- 三氟 -3-[3-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡咯 -1- 基 ] 丁腈 步驟 1. 4- 氯基 -7-( 二乙氧基甲基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
將4-氯基吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.00克,0.0130莫耳)與原甲酸三乙酯(25毫升,0.15莫耳)之混合物加熱至回流,歷經2小時。蒸發溶劑,並使殘留物藉急驟式管柱層析(以醋酸乙酯/己烷溶離)純化,產生所要之產物(1.13克,34%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.63 (s, 1H), 7.58 (d, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.65 (d, 1H), 3.77-3.67 (m, 2H), 3.58-3.49 (m, 2H), 1.23 (t, 3H), 1.23 (t, 3H).
步驟 2. 7-( 二乙氧基甲基 )-4-(1H- 吡咯 -3- 基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於4-氯基-7-(二乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.13克,0.00442莫耳)與1-(三異丙基矽烷基)-3-二羥基硼烷(1.00克,0.00374莫耳)及碳酸鈉(0.396克,0.00374莫耳)在1,2-二甲氧基乙烷(15毫升)與水(3毫升)中之經除氣溶液內,添加肆(三苯膦)鈀(0) (0.22克,0.00019莫耳)。此將混合物於環境溫度下攪拌2小時,然後加熱至回流,歷經4小時。接著使混合物冷卻,濃縮,且藉急驟式管柱層析(以醋酸乙酯/己烷溶離)純化,而得殘留物,為油狀物。將ACN添加至殘留物中,並濾出所沉澱之產物,且以少量ACN洗滌(165毫克,13%)。 1H NMR (400 MHz, D6-DMSO):δ11.44 (br s, 1H), 8.66 (s, 1H), 7.80-7.78 (m, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.94 (dd, 1H), 6.90 (dd, 1H), 6.75 (s, 1H), 3.74-3.65 (m, 2H), 3.59-3.50 (m, 2H), 1.15 (t, 6H);MS (ES):M+H = 287.
步驟 3.
於7-(二乙氧基甲基)-4-(1H-吡咯-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.125克,0.436毫莫耳)與4,4,4-三氟丁-2-烯腈(0.0476毫升,0.480毫莫耳)在ACN (1毫升)中之溶液內,添加DBU (0.0653毫升,0.436毫莫耳)。添加TFA (0.5毫升),並將混合物攪拌1小時。於真空中移除TFA與溶劑。使殘留物藉預備之HPLC/MS (C-18,以含有0.15% NH4OH之H2O/ACN梯度液溶離)純化,而得產物(102毫克,76%)。在需要時,對掌異構物係呈實質純式,藉對掌性HPLC (AD-H,20% EtOH/己烷)分離。 1H NMR (300 MHz, D6-DMSO):δ12.05 (br s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.56 (dd, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.02 (dd, 1H), 6.93 (dd, 1H), 5.89-5.74 (m, 1H), 3.95 (dd, 1H), 3.66 (dd, 1H);MS (ES):M+H = 306. 在表12中之類似物係呈外消旋形式,根據相同程序,使用不同共軛接受劑製成,且除了步驟3中之共軛加成之外,反應係於40℃下進行3天。
表 12
表13中之下列化合物係按經標識為"製備方法"之直行中所指示而製成,且某些舉例之合成程序之詳細說明係提供於下表13中。
表 13 實例 649 : 3-[3-( 嗎福啉 -4- 基磺醯基 ) 苯基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈 步驟 1 : 4-[(3- 溴苯基 ) 磺醯基 ] 嗎福啉
將1.0毫升THF中之嗎福啉(0.19毫升,0.0022莫耳)逐滴添加至已於冰浴中冷卻之氯化3-溴苯磺醯(0.3毫升,0.002莫耳)與TEA (0.30毫升,0.0022莫耳)在無水4.0毫升THF中之溶液內。將反應混合物在室溫下攪拌過夜,然後於0.05N HCl與醋酸乙酯之間作分液處理。將有機層以水(2X)與鹽水(1X)洗滌,接著以無水硫酸鎂脫水乾燥,過濾,然後在真空中濃縮,獲得4-[(3-溴苯基)磺醯基]嗎福啉,為白色結晶性產物(470毫克,78%)。LCMS (M+H)+:m/z = 306, 308.
步驟 2 : (2E&Z)-3-[3-( 嗎福啉 -4- 基磺醯基 ) 苯基 ] 丙烯腈
使4-[(3-溴苯基)磺醯基]嗎福啉(0.250克,0.000816莫耳)溶於無水DMF (2.5毫升,0.032莫耳)中,並使用氮氣流將混合物除氣。於此混合物中添加TEA (0.23毫升,0.0016莫耳)、2-丙烯腈(0.11毫升,0.0016莫耳)、醋酸鈀(0.011克,0.000049莫耳)及三苯膦(0.0364克,0.000139莫耳),並將混合物再一次以氮除氣。將反應混合物於密封管中,在110℃下加熱16小時。在冷卻至室溫後,使反應混合物於0.05N HCl與醋酸乙酯之間作分液處理。將有機層以水(2X)與鹽水(1X)洗滌,以無水硫酸鎂脫水乾燥,過濾,及在真空中濃縮,獲得(2E&Z)-3-[3-(嗎福啉-4-基-磺醯基)苯基]丙烯腈,為油狀物(0.240克,85%),其係為順式與反式異構物之混合物。LCMS (M+H)+:m/z = 279.
步驟 3 : 3-[3-( 嗎福啉 -4- 基磺醯基 ) 苯基 ]-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(0.100克,0.000317莫耳)與(2E&Z)-3-[3-(嗎福啉-4-基磺醯基)苯基]丙烯腈(0.097克,0.00035莫耳)在無水ACN (2.0毫升,0.038莫耳)中之混合物內,添加DBU (0.095毫升,0.00063莫耳),並將所形成之混合物於室溫下攪拌過夜。然後,以水稀釋反應混合物,並以醋酸乙酯萃取。將合併之有機相以水(2X)與鹽水(1X)洗滌,以硫酸鎂脫水乾燥,過濾,接著於真空中濃縮,獲得粗產物。使粗產物藉矽膠急驟式管柱層析純化,使用醋酸乙酯-己烷(6:4)作為溶離劑,獲得3-[3-(嗎福啉-4-基磺醯基)苯基]-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈,為黏稠油(62毫克,32.94%)。LCMS (M+H)+:m/z = 594
步驟 4 :
使用類似實例61關於移除SEM保護之程序,單離標題化合物,為非晶質白色固體(30毫克,63.84%)。LCMS (M+H)+:m/z = 464. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ8.88 (s), 8.62 (s), 8.1 (s), 7.78 (m), 7.70 (m), 7.58 (m), 6.95 (m), 6.20 (m), 3.84 (m), 3.70 (m), 3.45 (m), 2.78 (m).
實例 679 :順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 - 乙腈 步驟 1 : 4-( 羥甲基 ) 環己醇
使4-酮基環己烷羧酸乙酯(2.0克,0.012莫耳)溶於醚(20.0毫升)中,然後在0℃下冷卻。於混合物中添加醚中之1M四氫鋁酸鋰(20毫升),並將所形成之混合物在0℃下攪拌2小時。以水(2毫升)與1N NaOH (2毫升)使反應淬滅,並添加醚(100毫升)。濾出已沉澱之固體,並將殘留物使用於下一反應。 1H NMR (CDCl3):δ4.02與3.75 (m, 1H), 3.45-3.61 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.84 (m, 1H), 1.52-1.80 (m, 2H), 1.44 (m, 1H), 1,32 (m, 2H), 1.03 (m, 1H).
步驟 2 : 4-[( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ] 環己醇
使4-(羥甲基)環己醇(2.0克,0.015莫耳)溶於吡啶(15.0毫升)中,並使混合物冷卻至0℃。於反應物中添加氯化三苯甲烷(4.7克,0.017莫耳),並將所形成之混合物在0℃下攪拌2小時,且於25℃下16小時。然後,使用迴轉式蒸發器濃縮反應物,並將濃縮物以醋酸乙酯萃取。將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),然後於真空中濃縮。使反應物於矽膠上層析,使用30% EtOAc/己烷,獲得順式異構物(0.74克) 1H NMR (CDCl3):δ7.52 (m, 6H), 7.27 (m, 9H), 3.98 (m, 1H), 2.93 (m, 2H), 1.21-1.68 (m, 9H);與反式異構物(2.72克) 1H NMR (CDCl3):δ7.44 (m, 6H), 7.20-7.31 (m, 9H), 3.54 (m, 1H), 2.88 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.60 (m, 1H), 0.99-1.37 (m, 4H).
步驟 3 :甲烷磺酸反式 -4-[( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ] 環己酯
使反式-4-[(三苯甲基氧基)甲基]環己醇(2.72克,0.00730莫耳)溶於氯仿(30.0毫升)中,並使混合物在0℃下冷卻。於此混合物中添加TEA (1.4毫升,0.010莫耳)與氯化甲烷磺醯(0.68毫升,0.0088莫耳),並將所形成之混合物於0℃下攪拌2小時。然後,以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。 1H NMR (CDCl3):δ7.43 (m, 6H), 7.20-7.31 (m, 9H), 4.57 (m, 1H), 3.00 (m, 3H), 2.90 (m, 2H), 2.16 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.09-1.60 (m, 5H).
步驟 4 : 7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -4-(1- 順式 -4-[( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ] 環己基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
將4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.5克,0.0048莫耳)與氫化鈉(0.34克,0.0086莫耳)及甲烷磺酸反式-4-[(三苯甲基氧基)甲基]環己酯(3.00克,0.00666莫耳)混合,並使混合物冷卻至-78℃。於此混合物中添加DMF (8.3毫升),並使混合物溫熱至25℃,及攪拌20分鐘。將已溫熱之混合物在55℃下攪拌48小時。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),然後在真空中濃縮。使濃縮物於矽膠上層析,使用40% EtOAc/己烷,獲得產物。LC/MS (M+H)+:670. 1H NMR (CDCl3):δ8.89 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 6.84-7.51 (m, 10H), 6.87 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.39 (m, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.12 (m, 2H), 1.76-2.11 (m, 9H), 0.96 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 5 :順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲醇
使7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-4-(1-順式-4-[(三苯甲基氧基)甲基]環己基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.3克,0.0004莫耳)溶於甲醇(7.0毫升)與THF (2.0毫升,0.025莫耳)中,並添加1,4-二氧陸圜中之4.0M HCl (0.5毫升)。然後,將反應物於25℃下攪拌2小時。TLC分析顯示無起始物質存在,而LCMS分析顯示產物存在。將反應物添加至飽和NaHCO3溶液中,並以醋酸乙酯萃取。將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。使濃縮物於矽膠上層析,使用EtOAc作為溶離劑,獲得產物。LC/MS (M+H)+:428. 1H NMR (CDCl3):δ8.89 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 5.73 (d, 2H), 4.41 (m, 1H), 3.51-3.71 (m, 4H), 2.31 (m, 2H), 2.08 (m, 3H), 1.70-1.93 (m, 4H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 6 :甲烷磺酸順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基酯
使順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲醇溶於氯仿(3.00毫升)中,並冷卻至0℃。於反應物中添加TEA (0.10毫升,0.00072莫耳)與氯化甲烷磺醯(0.05毫升,0.0006莫耳),並將此混合物在0℃下攪拌2小時,此時LCMS分析顯示大部份產物存在於混合物中。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。LC/MS (M+H)+:506
步驟 7 :順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基乙腈
將甲烷磺酸順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲酯(0.10克,0.00020莫耳)與氰化鈉(0.050克,0.0010莫耳)及DMSO (1.0毫升)混合。將混合物在60℃下攪拌24小時,此時LCMS分析顯示大部份起始物質已被消耗。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。使濃縮物於矽膠上層析,使用EtOAc作為溶離劑,獲得產物。LC/MS (M+H)+:437. 1H NMR (CDCl3):δ8.90 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.43 (m, 1H), 3.60 (m, 2H), 2.45 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 2.37 (m, 2H), 2.10 (m, 4H), 1.70-1.93 (m, 3H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 8 :順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基乙腈
將順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基乙腈(0.080克,0.00018莫耳)與TFA (0.50毫升,0.0065莫耳)添加至DCM (3.00毫升,0.0468莫耳)中,並將混合物於25℃下攪拌16小時。藉迴轉式蒸發使反應物濃縮,並使濃縮物溶於甲醇(3.0毫升,0.074莫耳)中,及添加氫氧化銨(0.5毫升,0.01莫耳)。將此反應物在25℃下攪拌6小時,此時LCMS分析未顯示起始物質存在。使反應物於矽膠上層析,使用5% MeOH/EtOAc,獲得產物。LC/MS (M+H)+:307. 1H NMR (CD3OD):δ8.64 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.42 (m, 1H), 2.61 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 2.27 (m, 2H), 1.70-2.15 (m, 7H).
實例 680 :硫氰酸順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲酯 步驟 1 :硫氰酸順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲酯
使甲烷磺酸順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲酯(0.10克,0.00020莫耳)溶於具有硫基氰酸鉀(0.082克,0.00084莫耳)之DMSO (1.00毫升)中。將反應物在68℃下加熱4天,此時LCMS分析顯示~4:1產物/起始物質比例。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。使濃縮物於矽膠上層析,使用1:1 EtOAc/己烷,獲得產物。LC/MS (M+H)+:469. 1H NMR (CDCl3):δ8.89 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.45 (m, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.05 (m, 2H), 2.37 (m, 2H), 2.10 (m, 4H), 1.70-1.93 (m, 3H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 2 :硫氰酸順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲酯
使硫氰酸順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲酯溶於甲醇(2.0毫升,0.049莫耳)與DCM (2.0毫升,0.031莫耳)中,並添加TFA (0.5毫升,0.006莫耳)。將所形成之混合物於25℃下攪拌16小時。TLC分析顯示無起始物質存在,而LCMS分析顯示產物存在。使用迴轉式蒸發器濃縮反應物,並將濃縮物於矽膠上層析,使用2% MeOH/EtOAc,獲得產物。LC/MS (M+H)+:339. 1H NMR (CD3OD)δ8.65 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.43 (m, 1H), 3.20 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 2.24 (m, 2H), 1.80-2.17 (m, 7H).
實例 681 : N-5-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 - 甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 基嘧啶 -2- 胺三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1 : 5-[( 順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 胺
使甲烷磺酸順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲酯(124.56毫克,0.00024莫耳)與5-胺基-4H-1,2,4-***-3-硫醇(43.00毫克,0.0003702莫耳)溶於DMF (1.20毫升)中,並添加碳酸鉀(0.122克,0.000887莫耳)。將反應物在50℃下攪拌18小時,此時LCMS顯示幾乎完成反應,且產物存在。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水、飽和NaCl洗滌,脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。將濃縮物於矽膠上層析,使用EtOAc作為溶離劑,獲得產物。LC/MS (M+H)+:526. 1H NMR (CDCl3):δ8.90 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.45 (brs, 2H), 4.41 (m, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.22 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 2.29 (m, 2H), 1.70-2.10 (m, 7H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 2 : 5-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 胺
使5-[(順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲基)硫基]-4H-1,2,4-***-3-胺(9a)溶於TFA (1毫升)中,並攪拌2小時。使用迴轉式蒸發器濃縮溶液,以移除TFA。使殘留物溶於甲醇(1毫升)中,並添加氫氧化銨(1毫升)。將溶液攪拌過夜。LCMS顯示去除保護完成。使用迴轉式蒸發器濃縮溶液。使產物藉預備之LCMS分離,使用30毫米x 100毫米C18管柱;11% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1.5分鐘,於6分鐘下至33%;60毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 396下;滯留時間5.5分鐘(2次操作)。使溶離液凍乾。產生21毫克(二-TFA鹽)。LC/MS (M+H)+:396. 1H NMR (d6-DMSO)δ12.9 (br s, 1H, NH);8.9 (2個單重峰, 2H);8.5 (s, 1H);7.9 (m, 1H);7.3 (m, 1H);4.4 (m, 1H, NCH);3.1 (d, 2H);2.2 (m, 2H);1.9 (m, 3H);1.7 (m, 2H);1.6 (m, 2H). MS(ES) 396 (M+1).
實例 682 : N-5-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 - 甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 基嘧啶 -2- 胺三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1 : N-5-[( 順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 基嘧啶 -2- 胺
於小玻瓶中,將[A] 5-[(順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲基)硫基]-4H-1,2,4-***-3-胺(0.047克,0.000089莫耳)與1,4-二氧陸圜(1.00毫升,0.0128莫耳)中之2-氯基嘧啶(0.011克,0.000096莫耳),於微波反應器中,在150℃下一起加熱40分鐘。LCMS分析未顯示發生反應。於反應物中,添加具有碳酸銫(0.033克,0.00010莫耳)與碘化銅(I) (4.00毫克,0.0000210莫耳)之2-氯基嘧啶(0.020克,0.00017莫耳),並將此混合物在115℃下加熱3小時,此時LCMS分析顯示無起始物質存在,而大部份產物存在。將反應物於矽膠上層析,使用2% MeOH/EtOAc,獲得產物。LC/MS (M+1)+:604. 1NMR (CDCl3):8.89 (s, 1H), 8.82 (m, 2H), 8.43 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.03 (br s, 2H), 6.88 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.40 (m, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.35 (d, 2H), 2.34 (m, 2H), 1.80-2.15 (m, 7H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 2 : N-5-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 基嘧啶 -2- 胺
使N-5-[(順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲基)硫基]-4H-1,2,4-***-3-基嘧啶-2-胺(0.024克,0.000040莫耳)溶於DCM (4.00毫升)中,並添加TFA (0.50毫升,0.0065莫耳)。將反應物於25℃下攪拌16小時,並在真空中濃縮。使殘留物溶於甲醇(3.00毫升)中,並添加濃氫氧化銨(0.50毫升)。將此反應物於25℃下攪拌2小時,此時LCMS分析顯示大部份產物。使用迴轉式蒸發器濃縮反應物,並使濃縮物藉預備之LC純化,獲得產物,為三氟醋酸鹽。LC/MS (M+H)+:474. 1H NMR (CD3OD)δ8.87 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.34 (m, 2H), 4.43 (m, 1H), 3.20 (d, 2H, J = 7.6 Hz), 2.24 (m, 2H), 1.80-2.17 (m, 7H).
實例 683 : 3- 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基丙腈三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1 : 2-(1,4- 二氧螺 [4.5] 癸 -8- 基 ) 乙醇
使根據Itagaki, Noriaki;Kimura, Mari;Sugahara, Tsutomu;Iwabuchi, Yoshiharu. (
Organic Letters 2005
;7(19);4181-4183.)之程序製成之1,4-二氧螺[4.5]癸-8-基醋酸乙酯(3.40克,0.0149莫耳)溶於醚(30.00毫升)中,並使混合物冷卻至0℃。於反應物中,添加醚中之1.00M四氫鋁酸鋰(15.0毫升),並將所形成之混合物於0℃下攪拌60分鐘,及在25℃下2小時。使反應物冷卻,並添加水(0.40毫升,0.022莫耳),接著為1.00M氫氧化鈉(0.40毫升)。然後,於反應物中添加醚(100.00毫升),並濾出已沉澱之固體。使用迴轉式蒸發器濃縮濾液,獲得產物。 1H NMR (CDCl3):3.94 (s, 4H), 3.67 (t, 2H), 1.20-1.80 (m, 11H).
步驟 2 : 4-(2- 羥乙基 ) 環己酮
使2-(1,4-二氧螺[4.5]癸-8-基)乙醇(2.70克,0.0145莫耳)溶於丙酮(10.00毫升)與THF (10.00毫升)中,並添加6.00M HCl (6.00毫升)。將反應物於25℃下攪拌16小時,以NaHCO3溶液中和,然後以醋酸乙酯萃取。將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。將此粗產物使用於下一反應,無需進一步純化。 1H NMR (CDCl3):3.75 (m, 2H), 2.36 (m, 4H), 1.20-2.13 (m, 7H).
步驟 3 : 4-(2- 羥乙基 ) 環己醇
使4-(2-羥乙基)環己酮(2.00克,0.0141莫耳)溶於醚(30.00毫升)中,並在0℃下冷卻。於反應物中添加醚中之1.0M四氫鋁酸鋰(14.1毫升),並將所形成之混合物於0℃下攪拌2小時,及在25℃下16小時。於反應物中添加THF (20.00毫升),並使此混合物在0℃下冷卻,然後,添加水(0.40毫升,0.022莫耳),接著為1.00M氫氧化鈉(0.40毫升)。然後,於反應物中添加醚(100.00毫升),並將所形成之混合物攪拌10分鐘,接著過濾,且使用迴轉式蒸發器濃縮濾液,以提供粗產物。將此粗產物使用於下一反應,無需進一步純化。 1H NMR (CDCl3):3.96與3.57 (m, 1H)較少與主要CHOH (~1:5比例) 3.70 (m, 2H), 0.94-2.02 (m, 11H).
步驟 4 : 4-[2-( 三苯甲基氧基 ) 乙基 ] 環己醇
使4-(2-羥乙基)環己醇(得自前述反應之粗製物) (1.88克,0.0130莫耳)溶於吡啶(20.00毫升)中,並在0℃下冷卻。於反應物中添加氯化三苯甲烷(4.0克,0.014莫耳),並將此混合物於0℃下攪拌2小時,及在25℃下16小時。使用迴轉式蒸發器濃縮反應物,並將濃縮物以醋酸乙酯萃取。將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,然後脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。使濃縮物於矽膠(30% EtOAc/己烷)上層析,獲得反式異構物(1.98克)。 1H NMR (CDCl3):7.42-7.45 (m, 6H), 7.20-7.30 (m, 9H), 3.50 (m, 1H), 3.07 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 1.17-1.60 (m, 5H), 0.89 (m, 2H).
步驟 5 :甲烷磺酸反式 -4-[2-( 三苯甲基氧基 ) 乙基 ] 環己酯
使反式-4-[2-(三苯甲基氧基)乙基]環己醇(1.95克,0.00504莫耳)溶於氯仿(40.00毫升)中,並使混合物冷卻至0℃。於反應物中添加TEA (0.98毫升,0.0071莫耳)與氯化甲烷磺醯(0.47毫升,0.0060莫耳),並將此混合物在0℃下攪拌2小時。然後,以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。 1H NMR (CDCl3):7.41-7.45 (m, 6H), 7.20-7.32 (m, 9H), 4.55 (m, 1H), 3.07 (m, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.20-1.60 (m, 5H), 0.95 (m, 2H).
步驟 6 : 7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -4-(1- 順式 -4-[2-( 三苯甲基氧基 ) 乙基 ] 環己基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
將4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.0克,0.0032莫耳)與氫化鈉(0.23克,0.0058莫耳)及甲烷磺酸反式-4-[2-(三苯甲基氧基)乙基]環己酯(2.10克,0.00452莫耳)混合,並使此混合物冷卻至-78℃。於反應物中添加DMF (6.00毫升),並使此混合物溫熱至25℃,然後攪拌20分鐘。將反應物在55℃下攪拌48小時,此時LCMS分析顯示大部份產物。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。將濃縮物於矽膠上層析,使用40% EtOAc/己烷,獲得產物。LC/MS (M+H)+:684. 1H NMR (CDCl3):8.89 (s, 1H), 8.35 (br s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.50 (m, 6H), 7.44 (d, 1H), 7.27-7.32 (m, 9H), 6.87 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.33 (m, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.17 (t, 2H), 1.50-2.25 (m, 11H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
步驟 7 : 2- 順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基乙醇 (7b)
使7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-4-(1-順式-4-[2-(三苯甲基氧基)乙基]環己基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.45克,0.00212莫耳)溶於甲醇(30.00毫升)與THF (10.00毫升)中,並添加1,4-二氧陸圜中之4.0M HCl (2.00毫升)。將混合物於25℃下攪拌2小時,此時TLC分析顯示無起始物質存在,而LCMS分析顯示產物存在。將反應物添加至飽和NaHCO3溶液中,然後以醋酸乙酯萃取。將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。使濃縮物於矽膠上層析,使用EtOAc作為溶離劑,獲得產物。LC/MS (M+H)+:442
步驟 8 :甲烷磺酸 2- 順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基乙酯 (8b)
使2-順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基乙醇(0.89克,0.0020莫耳)溶於DCM (12.00毫升,0.1872莫耳)中,並在0℃下冷卻。於反應物中添加TEA (0.43毫升,0.0031莫耳)與氯化甲烷磺醯(0.19毫升,0.0024莫耳),並將此混合物在0℃下攪拌2小時,此時LCMS分析顯示大部份產物存在。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。LC/MS (M+H)+:520. 1H NMR (CDCl3):8.90 (s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.40 (m, 1H), 4.27 (t, 2H), 3.60 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 1.60-2.40 (m, 11H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)
步驟 9 : 3- 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基丙腈三氟醋酸鹽 (9b)
使甲烷磺酸2-順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基乙酯(0.075克,0.00014莫耳)溶於DMSO (1.50毫升)中,並添加氰化鈉(0.035克,0.00072莫耳)。將反應物在40℃下攪拌16小時,此時LCMS分析顯示無起始物質存在。然後,以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。使殘留物溶於DCM (3.00毫升)中,並添加TFA (0.50毫升,0.0065莫耳)。將此混合物於25℃下攪拌16小時,此時LCMS分析顯示大部份為羥甲基中間物。使用迴轉式蒸發器濃縮混合物,並使濃縮物溶於甲醇(3.00毫升)中,及添加濃氫氧化銨(0.50毫升)。將反應物於25℃下攪拌3小時,此時LCMS分析顯示無起始物質存在。然後,使用迴轉式蒸發器濃縮反應物,並將濃縮物藉預備之LC純化,獲得產物,為TFA鹽(47.8毫克)。LC/MS (M+H)+:321. 1H NMR (CD3OD):8.86 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.31 (d, 1H), 4.48 (m, 1H), 2.51 (m, 2H), 2.28 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 1.80 (m, 5H), 1.67 (m, 2H).
實例 684 : 5-[(2- 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 - 乙基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 胺三氟醋酸鹽 TFA 使2-順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基乙基甲烷磺酸鹽(0.060克,0.00012莫耳)溶於具有5-胺基-4H-1,2,4-***-3-硫醇(0.020克,0.00017莫耳)與碳酸鉀(0.024克,0.00017莫耳)之DMF (1.31毫升)中。將此混合物在40℃下加熱18小時,此時LCMS分析顯示無起始物質存在。將反應物以EtOAc稀釋,過濾,然後使用迴轉式蒸發器濃縮。使殘留物溶於DCM (3.60毫升)中,並添加TFA (0.60毫升,0.0078莫耳)。將此混合物於25℃下攪拌5小時,然後使用迴轉式蒸發器濃縮。使殘留物溶於甲醇(3.60毫升)中,並添加濃氫氧化銨(0.60毫升),且將此混合物在25℃下攪拌2小時。使用迴轉式蒸發器濃縮反應物,並將濃縮物藉預備之LC純化,獲得產物。LC/MS (M+H)+:410. 1H NMR (CD3OD):8.85 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 4.46 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 2.27 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 1.62-1.90 (m, 7H).
實例 685 : 4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 亞環己基乙醯 - 腈三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1 : 1,4- 二氧螺 [4.5] 癸 -8- 醇
使1,4-二氧-螺[4.5]癸-8-酮(2.00克,0.0128莫耳)溶於醚(50毫升)中,並使混合物冷卻至0℃。於反應物中添加醚中之1M四氫鋁酸鋰(7.0毫升),並將此混合物在0℃下攪拌2小時,此時TLC分析顯示無起始物質存在。以水與1N NaOH (各0.5毫升)使反應淬滅,然後過濾。將已過濾之固體以醚洗滌,並使用迴轉式蒸發器使合併之醚濾液濃縮,獲得產物。NMR (CDCl3):3.94 (m, 4H), 3.81 (m, 1H), 1.79-1.92 (m, 4H), 1.54-1.70 (m, 4H).
步驟 2 :甲烷磺酸 1,4- 二氧螺 [4.5] 癸 -8- 基酯
使1,4-二氧螺[4.5]癸-8-醇(0.40克,0.0025莫耳)溶於氯仿(10.0毫升)中,並使所形成之混合物在0℃下冷卻。於混合物中添加TEA (0.49毫升,0.0035莫耳)與氯化甲烷磺醯(0.23毫升,0.0030莫耳),並將此混合物於0℃下攪拌2小時。以醋酸乙酯萃取反應物,並將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。將此粗產物使用於下一反應,無需進一步純化。 1H NMR (CDCl3):4.85 (m, 1H), 3.95 (m, 4H), 3.02 (s, 3H), 1.98-2.05 (m, 4H), 1.82-1.89 (m, 2H), 1.61-1.70 (m, 2H).
步驟 3 : 4-[1-(1,4- 二氧螺 [4.5] 癸 -8- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
使甲烷磺酸1,4-二氧螺[4.5]癸-8-基酯(0.50克,0.0015莫耳)與4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.36克,0.0011莫耳)及氫化鈉(0.082克,0.0020莫耳)之混合物在-78℃下冷卻,並添加DMF (2.0毫升)。使反應物溫熱至25℃,然後攪拌20分鐘,接著加熱至55℃,歷經24小時。然後以醋酸乙酯萃取反應物。將有機萃液以水與飽和NaCl洗滌,接著脫水乾燥(MgSO4),及在真空中濃縮。將濃縮物於矽膠上層析,使用1:1 EtOAc/己烷,獲得產物。LC/MS (M+H)+:456. 1H NMR (CDCl3):8.89 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.44 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.38 (m, 1H), 4.06 (s, 4H), 3.60 (m, 2H), 2.22-2.31 (m, 4H), 2.00 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 0.98 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)
步驟 4 : 4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己酮
於4-[1-(1,4-二氧螺[4.5]癸-8-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.13克,0.00467莫耳)中,添加丙酮(85毫升),接著為水中之12M HCl (4.0毫升)。將反應物在室溫下攪拌。1小時後,LCMS分析顯示66%反應。4小時後,HPLC顯示80%反應。20小時後,HPLC未顯示變化(且未損失SEM)。使反應混合物淬滅至過量飽和NaHCO3中。藉迴轉式蒸發移除丙酮。然後,將所形成之重碳酸鹽水溶液與白色固體混合物以EtOAc萃取。將合併之有機萃液與飽和NaCl一起振盪,以Na2SO4脫水乾燥,接著濃縮至乾涸,留下2.0克粗產物。TLC (5% iPrOH-40% EtOAc-己烷):產物Rf 0.12 (縮酮0.22)。使粗產物於矽膠上藉自動急驟式層析純化。使用40克管柱;流量40毫升/分鐘;[A = 2% iPrOH-己烷] [B = 6% iPrOH-50% EtOAc/己烷];A,2分鐘;在25分鐘內,梯度液至B,然後B,歷經10分鐘。使用迴轉式蒸發器濃縮溶離劑,獲得1.3克白色固體。HPLC方法:Zorbax SB C18,5微米,15公分,35℃,流量1.2毫升/分鐘,10% CH3CN-H2O (0.05% TFA)至100% CH3CN,在9.0分鐘內;停止時間12.3分鐘;偵測器268毫微米;滯留時間,起始物質7.4分鐘;產物6.9分鐘(UV極大值220, 268, 300, 322毫微米)。 1H NMR (CDCl3)δ8.8 (s, 1H);8.3 (m, 2H);7.4 (d, 1H);7.3 (s, 1H);6.8 (d, 1H);5.7 (s, 2H);4.7 (m, 1H, NCH);3.6 (t, 2H);2.3-2.5 (m, 8H);0.9 (t, 2H);-0.1 (s, 9H). MS (ES) 412 (M+1).
步驟 5 : 4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 亞環己基乙腈
於1.0M第三-丁醇鉀在THF (1.90毫升)中之溶液內,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(321微升,0.00198莫耳)在THF (4毫升)中之溶液。使反應物保持10分鐘,然後,將其添加至已在0℃及氮大氣下攪拌之4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己酮(743毫克,0.00180莫耳)在THF (5毫升)中之溶液內。將反應物在室溫下攪拌1.5小時。LCMS分析顯示完全轉化成所要之產物。接著,於反應混合物中添加水與EtOAc。分離液相,並以EtOAc萃取水相。將合併之有機萃液以水,然後以飽和NaCl洗滌,接著以Na2SO4脫水乾燥,及濃縮至乾涸,產生0.76克白色結晶性固體(TLC (EtOAc) Rf 0.33)。使產物於矽膠上藉自動急驟式層析純化。使用40克管柱;流量40毫升/分鐘;[A =己烷] [B = EtOAc];A,2分鐘;在20分鐘內梯度液至B。迴轉式蒸發,產生0.70克白色結晶性固體(89%產率)。 1H NMR (CDCl3)δ8.9 (s, 1H);8.3 (s, 2H);7.4 (d, 1H);7.3 (s, 1H);6.9 (d, 1H);5.7 (s, 2H);5.3 (s, 1H, 烯烴);4.5 (m, 1H, NCH);3.6 (m, 2H);3.2 (m, 1H);2.7 (m, 1H);2.5 (m, 4H);2.1 (m, 2H);1.0 (m, 2H);-0.1 (s, 9H). MS (ES) 435 (M+1).
步驟 6 : 4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 亞環己基乙腈
將TFA (0.5毫升,0.006莫耳)與4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]亞環己基乙腈(22.7毫克,0.0000522莫耳)之溶液攪拌1.5小時。然後,使用迴轉式蒸發器濃縮溶液,以移除TFA。LCMS分析顯示轉化成羥甲基中間物,M+H 335。添加甲醇,並使用迴轉式蒸發器使甲醇混合物再一次濃縮。使所形成之殘留物溶於甲醇(1毫升)中,並添加氫氧化銨(0.25毫升,0.0064莫耳)。將所形成之溶液攪拌16小時。LCMS分析顯示去除保護完成。接著,使用迴轉式蒸發器濃縮溶液。使產物藉預備之HPLC分離,使用30毫米x 100毫米C18管柱;18% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1分鐘,於6分鐘下至35%;60毫升/分鐘;偵測器設定在254毫微米下;滯留時間4.4分鐘。使溶離物凍乾,產生7.6毫克白色固體(TFA鹽;外消旋;34.6%)。 1H NMR (d6-DMSO)δ12.9 (br s, 1H, NH);8.9 (s, 2H);8.5 (s, 1H);7.8 (m, 1H);7.3 (m, 1H);5.6 (s, 1H, 烯烴);4.6 (m, 1H, NCH);2.8 (m, 1H);2.6 (m, 1H);2.5 (m, 2H);2.3 (m, 2H)2.0 (m, 2H). MS (ES) 305 (M+1).
實例 686 :順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己烷甲腈三氟醋酸鹽 步驟 1 :順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己烷羧甲醛 肟
於-10℃下,將三氧化硫-吡啶複合物(53.4毫克,0.000336莫耳)在DMSO (0.3毫升,0.004莫耳)中之溶液,添加至順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲醇(57.4毫克,0.000134莫耳)與TEA (56.1微升,0.000403莫耳)在DCM (0.3毫升,0.004莫耳)中之溶液內。將混合物在10-20℃下激烈攪拌一小時。LCMS分析顯示轉化成醛。然後,將混合物倒入冰水中,並以DCM萃取。將萃液以10%檸檬酸、水、飽和碳酸氫鈉水溶液、水及鹽水洗滌,接著以硫酸鈉脫水乾燥。濃縮,獲得57毫克殘留物。 於所形成之殘留物中,添加羥胺-HCl (50毫克)、1毫升20% K2CO3及3毫升MeOH,並將此混合物在室溫下攪拌,直到LCMS顯示轉化成其相應之肟為止,M+H 441。將產物藉預備之HPLC分離,使用30毫米x 10.0毫米,C18管柱;30% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1分鐘,於6分鐘下至60%;60毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 441下;滯留時間6.0分鐘。凍乾,產生17.4毫克白色固體。
步驟 2 :順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己烷甲腈
[A]使順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己烷羧甲醛肟(11.0毫克,0.0000250莫耳)溶於吡啶(0.25毫升,0.0031莫耳)中,並添加氯化苯磺醯(10.0微升,0.0000784莫耳),且將所形成之混合物在室溫下攪拌。於攪拌15小時後,LCMS分析顯示產物形成,M+H 423。使產物藉預備之HPLC分離,使用19毫米x 100毫米C18管柱;45% CH3CN-H2O (0.1% NH4OH),1分鐘,於6分鐘下至75%;30毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 423下;滯留時間4.8分鐘。使用迴轉式蒸發器濃縮溶離劑,獲得8毫克所要之產物。 使產物溶於TFA (0.25毫升)中,攪拌2小時。使用迴轉式蒸發器濃縮溶液,以移除TFA。添加甲醇,並使混合物再一次濃縮。LCMS顯示完全轉化成羥甲基中間物(M+H 323)。使殘留物溶於甲醇(1毫升)中,並添加氫氧化銨(0.25毫升)。將溶液攪拌0.5小時,此時LCMS顯示完全去除保護成所要之產物M+H 293。然後,使混合物藉迴轉式蒸發濃縮,並使產物藉預備之HPLC分離,使用19毫米x 100毫米C18管柱;15% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1.5分鐘,於6分鐘下至30%;30毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 293下;滯留時間5.2分鐘。使溶離液凍乾,產生5.5毫克產物,為TFA鹽。 1H NMR (d6-DMSO)δ12.82 (br s, 1H, NH);8.87 (s, 1H);8.85 (s, 1H);8.48 (s, 1H);7.82 (m, 1H);7.24 (m, 1H);4.40 (m, 1H, NCH);3.22 (m, 1H);2.05 (m, 6H);1.79 (m, 2H). MS (ES) 293 (M+1).
實例 687 : 2-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 - 甲基 ) 亞磺醯基 ] 苯甲腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 4-[1-( 順式 -4-[(2- 溴苯基 ) 硫基 ] 甲基環己基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 )- 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
此化合物係按實例686[A],製自甲烷磺酸(順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲酯。產率73%。將產物使用下述HPLC方法純化:Zorbax SB C18,5微米,15公分,35 C,流量1.2毫升/分鐘,10% CH3CN-H2O (0.05% TFA)至100% CH3CN,在9.0分鐘內;停止時間12.3分鐘;偵測器254毫微米;滯留時間,起始甲烷磺酸鹽,7.5分鐘;產物9.9分鐘(UV極大值215, 258, 300 & 326毫微米)。TLC:Rf 0.3,使用35% EtOAc/5% iPrOH/己烷。使產物藉自動化矽膠急驟式層析純化,使用30% EtOAc/5% iPrOH/己烷。 1H NMR (CDCl3)δ8.84 (s, 1H);8.31 (s, 1H);8.26 (s, 1H);7.55 (m, 1H);7.39 (d, 1H);7.27 (m, 2H);7.03 (m, 1H);6.82 (d, 1H);5.67 (s, 2H);4.34 (m, 1H, NCH);3.55 (m, 2H);2.98 (d, 2H);2.28 (m, 2H);2.02 (m, 3H);1.83 (m, 4H);0.92 (m, 2H);-0.06 (s, 9H). MS (ES) 598/600 1:1 (M+1).
步驟 2 : 2-[( 順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 硫基 ] 苯甲腈
將4-[1-(順式-4-[(2-溴苯基)硫基]甲基環己基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(62.7毫克,0.000105莫耳)、氰化鋅(123毫克,0.00105莫耳)及肆(三苯膦)鈀(0) (30.2毫克,0.0000262莫耳)在DMF (3毫升)中攪拌,並將溶液以氮沖洗。然後,將溶液在微波反應器中加熱至100℃,歷經25分鐘。LCMS與HPLC分析顯示> 90%反應。使產物藉預備之HPLC分離,使用30毫米x 100毫米C18管柱;52% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1.5分鐘,於6分鐘下至75%;60毫升/分鐘;偵測器設定在545毫微米下。使用迴轉式蒸發器濃縮溶離劑,獲得37毫克硫化2-氰基苯TFA鹽。HPLC方法:Zorbax SB C18,5微米,15公分,35 C,流量1.2毫升/分鐘,10% CH3CN-H2O (0.05% TFA)至100% CH3CN,在9.0分鐘內;停止時間12.3分鐘;偵測器265毫微米;滯留時間,起始物質9.9分鐘;產物8.9分鐘。MS (ES) 545 (M+1).
步驟 3 : 2-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 亞磺醯基 ]- 苯甲腈
將2-[(順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲基)硫基]苯甲腈(30.6毫克,0.0000562莫耳)在TFA (1毫升)中之溶液攪拌2小時。使用迴轉式蒸發器濃縮溶液,以移除TFA。添加甲醇,並再一次濃縮混合物。使所形成之殘留物溶於甲醇(1毫升)中,並添加氫氧化銨(1毫升)。將所形成之溶液攪拌過夜,此時HPLC顯示去除保護完成。使產物藉預備之HPLC分離,使用19毫米x 100毫米C18管柱;30% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1.5分鐘,於6分鐘下至59%;30毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 415毫微米下;滯留時間4.7分鐘。使用迴轉式蒸發器濃縮溶離液,獲得36毫克硫化物TFA鹽,無色玻璃態物質。NMR (d6-DMSO)δ12.82 (br s, 1H, NH);8.84 (2個單重峰, 2H);8.45 (s, 1H);7.8 (m, 2H);7.64 (m, 2H);7.34 (td, 1H);7.24 (s, 1H);4.39 (m, 1H, NCH);3.23 (d, 2H);2.19 (m, 2H);1.89 (m, 3H);1.72 (m, 4H). MS (ES) 415 (M+1)。然後,使此物質溶於CH2Cl2中,並冷卻至0℃。於已冷卻之混合物中添加MCPBA (12.9毫克,0.0000562莫耳),並將所形成之混合物攪拌1小時。LCMS顯示轉化成產物,且沒有殘留硫化物。使反應混合物藉由旋轉蒸發濃縮,並使產物藉預備之HPLC分離,使用19毫米x 100毫米C18管柱;18% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1.0分鐘,於6分鐘下至35%;30毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 431毫微米下;滯留時間5.6分鐘。將產物經由冷凍乾燥自溶離劑單離。產生27.6毫克TFA鹽。HPLC方法為:Zorbax SB C18,5微米,15公分,35℃,流量1.2毫升/分鐘,10% CH3CN-H20 (0.05% TFA)至100% CH3CN,在9.0分鐘內;停止時間12.3分鐘;偵測器268毫微米;滯留時間,起始物質5.6分鐘;亞碸4.8分鐘;碸5.2分鐘;MCPBA 6.0分鐘。 1H NMR (CDCl3)δ12.1 (br s, 1H, NH);9.0 (s, 1H);8.9 (s, 1H);8.3 (s, 1H);8.1 (m, 1H);7.9 (m, 1H);7.8 (m, 1H);7.6 (m, 2H);7.0 (m, 1H);4.4 (m, 1H, NCH);3.1 (dd, 1H);2.9 (dd, 1H);2.5 (m, 1H);2.3 (m, 1H);2.3-1.7 (m, 7H). MS (ES) 431 (M+1).
實例 688 : 2-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 - 甲基 ) 磺醯基 ] 苯甲腈三氟醋酸鹽 TFA 使2-[(順式-4-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲基)亞磺醯基]-苯甲腈(17.2毫克,0.0000400莫耳) (21毫克TFA鹽)溶於DCM (10毫升)中,並冷卻至0℃。於此混合物中添加MCPBA (18毫克,0.0000800莫耳)。將所形成之混合物於0℃下攪拌1小時,然後在室溫下16小時。HPLC與LCMS顯示80面積%產物與3面積%亞碸。使用飽和NaHCO3洗液移除MCPBA,並使所形成之經洗滌混合物藉迴轉式蒸發濃縮。使產物藉預備之HPLC分離,使用19毫米x 100毫米C18管柱;23% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1.0分鐘,於6分鐘下至43%;30毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 447毫微米下;滯留時間5.1分鐘。將產物經由冷凍乾燥自溶離劑單離。產物為5毫克TFA鹽。 1H NMR (d6-DMSO)δ12.70 (br s, 1H, NH);8.83 (s, 1H);8.82 (s, 1H);8.41 (s, 1H);8.21 (dd, 1H);8.16 (dd, 1H);8.01 (td, 1H);7.95 (td, 1H);7.78 (s, 1H);7.19 (s, 1H);4.34 (m, 1H, NCH);3.62 (d, 2H);2.28 (m, 1H);2.10 (m, 2H);1.90 (m, 2H);1.72 (m, 4H). MS (ES) 447 (M+1).
實例 689 : 3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基乙腈三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 環己酮
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(309毫克,0.980毫莫耳)在ACN (6毫升)中之溶液內,添加2-環己烯-1-酮(190微升,01.96毫莫耳),接著為DBU (40微升,0.3毫莫耳)。將所形成之混合物攪拌一小時,此時LCMS顯示添加完成。使混合物在真空中減體積,並使粗產物藉管柱層析純化,以獲得產物(397毫克,98%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.84 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.61 (m, 1H), 3.55 (m, 2H), 3.05-2.90 (m, 2H), 2.45-2.30 (m, 4H), 2.05 (m, 1H), 1.90 (m, 1H), 0.92 (m, 2H), -0.06 (s, 9H). MS (EI) m/z = 412.2 (M+H).
步驟 2 : (2E,Z)-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 亞環己基乙腈
於t-BuOK在THF中之溶液(1.0M,0.255毫升,0.255毫莫耳)內,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(43微升,0.27毫莫耳)在THF (0.6毫升)中之溶液。使反應物保持10分鐘,然後,逐滴添加3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己酮(100.0毫克,0.2430毫莫耳)在THF (0.34毫升)中之溶液。在添加完成後,移除冷卻浴,並使反應物於環境溫度下保持16小時,此時LCMS顯示添加完成,產生所要之產物,為E與Z異構物之混合物(87.9毫克,83%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.84 (s, 0.5H), 8.83 (s, 0.5H), 8.27 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.40 (s, 0.5H), 7.39 (s, 0.5H), 6.81 (d, 0.5H), 6.79 (d, 0.5H), 5.67 (s, 2H), 5.28 (s, 0.5H), 5.24 (s, 0.5H), 4.4 (m, 1H), 3.55 (m, 2H), 3.1-2.8 (m, 2H), 2.5-2.1 (m, 6H), 0.92 (m, 2H), -0.06 (s, 9H). MS (EI) m/z = 435.2 (M+H).
步驟 3 : 3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 環己基乙腈
於(2E,Z)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]亞環己基乙腈(42.0毫克,0.0966毫莫耳)中,添加THF (0.5毫升)。使所形成之溶液冷卻至-78℃,然後,逐滴添加THF中之1.0M L-Selectride®(120微升,0.12毫莫耳)。使反應物在-78℃下保持1小時,此時LCMS顯示還原作用完成。於-78℃下,藉由添加飽和NH4Cl水溶液與EtOAc使反應淬滅,接著使其溫熱至環境溫度。分離液相,並以另外之EtOAc萃取水相。將合併之有機相以水,然後以飽和NaCl洗滌,接著以MgSO4脫水乾燥。使粗產物藉管柱層析純化,以獲得產物(26.5毫克,63%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.84 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.53 (m, 1H), 3.52 (m, 2H), 2.6-1.4 (m, 11H), 0.92 (m, 2H), -0.06 (s, 9H). MS (EI) m/z = 437.2 (M+H).
步驟 4 : 3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基乙腈三氟醋酸鹽
於3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基乙腈(30.1毫克,0.0689毫莫耳)中,添加DCM (1.0毫升)與TFA (1.0毫升)。將所形成之混合物於環境溫度下攪拌1小時,此時LCMS顯示完全***成N-羥甲基中間物。移除溶劑,並於殘留物中添加甲醇(1.0毫升),接著為乙二胺(37微升,0.55毫莫耳),然後將反應物攪拌5小時,此時LCMS顯示反應完成。移除溶劑,並使殘留物藉預備之LCMS純化,以提供產物,為TFA鹽(24毫克,83%)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.91 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 2.58 (d, 2H), 2.5-1.5 (m, 9H). MS (EI) m/z = 307.10 (M+H).
實例 690 : 5-({ 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 } 硫基 )-1H-1,2,4- *** -3- 胺雙 ( 三氟醋酸鹽 ) 步驟 1 :反式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己醇
使4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己酮(662毫克,1.61毫莫耳)在THF (5毫升)中之溶液冷卻至0℃,並慢慢添加四氫鋁酸鋰(2M,在THF中,0.804毫升,1.61毫莫耳)。使混合物慢慢地溫熱至環境溫度,直到LCMS顯示還原作用完成為止。使反應物冷卻至0℃,並以逐滴添加水(0.5毫升)使反應淬滅。添加DCM,並將混合物於環境溫度下攪拌1小時,然後,藉過濾移除已沉澱之固體。使濾液在真空中減體積,留下白色固體(0.63克,99%)。此固體之HPLC顯示反式對順式產物大約4:1比例。Tlc (6:3:1 EtOAc:己烷:異丙醇),獲得對於順式產物之Rf為0.25,與對於反式產物為0.18。使產物於矽膠上藉急驟式層析純化,以回收230毫克純反式醇與25毫克純順式醇,及350毫克混合異構物。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.83 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.24 (m, 1H), 3.79 (m, 1H), 3.54 (m, 2H), 2.28 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 0.92 (m, 2H), -0.06 (s, 9H). MS (EI) m/z = 414 (M+H).
步驟 2 :甲烷磺酸反式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己酯
於反式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己醇(154毫克,0.372毫莫耳)中,添加DCM (1.0毫升)與TEA (73微升,0.52毫莫耳)。然後,使所形成之溶液冷卻至0℃,並添加氯化甲烷磺醯(34微升,0.45毫莫耳)。使反應物保持2小時,此時TLC與LCMS顯示反應完成。使反應物於水與DCM之間作分液處理,分離液相,並將水相以另外之溶劑萃取。將合併之有機相以水,接著以飽和NaCl洗滌,然後以MgSO4脫水乾燥,及在真空中減體積,獲得粗產物,使用之而無需進一步純化(173毫克,95%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.83 (s, 1H), 8.24 (s, 2H), 8.24 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.54 (m, 2H), 3.06 (s, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.03 (m, 2H), 1.82 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 0.92 (m, 2H), -0.06 (s, 9H). MS (EI) m/z = 492.1 (M+H).
步驟 3 : 5-({ 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 } 硫基 )-1H-1,2,4- *** -3- 胺雙 ( 三氟醋酸鹽 )
於甲烷磺酸反式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己酯(42毫克,0.085毫莫耳)在DMF (800微升)中之溶液內,添加3-胺基-1H-1,2,4-***-5-硫醇(30毫克,0.26毫莫耳)與K2CO3(36毫克,0.26毫莫耳)。將反應物密封,並在100℃下保持2小時,此時LCMS顯示轉化成所要之產物。以水稀釋反應物,並以醚、醋酸乙酯及3:1氯仿:異丙醇連續萃取。將合併之有機相以水,然後以飽和NaCl洗滌,以MgSO4脫水乾燥,並在真空中減體積,且使粗產物藉管柱層析純化,獲得5-({順式-4-[4-(7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基}硫基)-1H-1,2,4-***-3-胺(27.3毫克,63%)。於此產物中添加DCM (0.5毫升)與TFA (0.5毫升),並將反應物在環境溫度下攪拌1小時,此時LCMS顯示完全***成N-羥甲基中間物。移除溶劑,並於殘留物中添加甲醇(1.0毫升),接著為NH4OH (0.3毫升),將反應物攪拌16小時,此時LCMS顯示去除保護完成。移除溶劑,並使殘留物藉預備之LCMS純化,以提供產物,為雙-TFA鹽(15.1毫克,29%)。 1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ8.77 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.97 (m, 1H), 2.25 (m, 2H), 2.04 (m, 6H). MS (EI) m/z = 382.2 (M+H).
實例 691 : N-{5-[({ 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基 }- 甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 基 } 甲烷磺醯胺三氟醋酸鹽 TFA
步驟 1. N-5-[( 順式 -4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 基甲烷磺醯胺
使5-[(順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲基)硫基]-4H-1,2,4-***-3-胺(30.00毫克,5.706E-5莫耳)溶於具有TEA (0.024毫升,0.00017莫耳)之DCM (2.00毫升,0.0312莫耳)中,並在0℃下冷卻。於反應物中添加氯化甲烷磺醯(0.0066毫升,0.000086莫耳),並將所形成之混合物在0℃下攪拌60分鐘,此時LCMS分析顯示大部份為產物。使反應物於矽膠上層析,使用EtOAc作為溶離劑,獲得產物。LC/MS (M+1)+:604
步驟 2. N-5-[( 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 環己基甲基 ) 硫基 ]-4H-1,2,4- *** -3- 基甲烷磺醯胺
於1頸圓底燒瓶中,使[A] N-5-[(順式-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]環己基甲基)硫基]-4H-1,2,4-***-3-基甲烷-磺醯胺(0.025克,0.000041莫耳)溶於DCM (3.00毫升,0.0468莫耳)中,並添加TFA (毫升,0.006莫耳)。將反應物於25℃下攪拌16小時,此時LCMS分析顯示無起始物質存在。使用迴轉式蒸發器使反應物濃縮,並溶於甲醇(2.00毫升,0.0494莫耳)中,及添加水中之16M氨(0.2毫升)。將反應物於25℃下攪拌3小時,此時LCMS分析顯示無起始物質存在。使用迴轉式蒸發器使反應物濃縮,並藉預備之LC純化,獲得產物,為三氟醋酸鹽。LC/MS (M+1)+:474. 1H NMR (CD3OD):8.87 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.33 (d, 1H), 4.48 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.23 (d, 2H), 2.30 (m, 2H), 2.04 (m, 3H), 1.85 (m, 4H).
實例 692 : [ 順式 -4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]-1-(1H-1,2,4- *** -1- 基 ) 環己基 ] 乙腈 將1H-1,2,4-***(91.0毫克,0.00132莫耳)、DBU (174微升,0.00070莫耳)、[A] 4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]亞環己基-乙腈(86.4毫克,0.000199莫耳)及ACN (2.0毫升)在室溫下攪拌。於4天後,LCMS顯示約58面積%產物(兩個吸收峰,M+H 504,比例1:1)。以TFA使反應物中之DBU中和。將產物藉預備之HPLC分離,使用30毫米x 100毫米C18管柱;32% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1分鐘,於6分鐘下至47%;60毫升/分鐘;偵測器設定在254毫微米下;滯留時間,5.1 (A) & 5.4 (B)分鐘。使用迴轉式蒸發器濃縮溶離劑,獲得22毫克(A) & 36毫克(B)。 去除保護:使產物個別溶解於TFA (0.5毫升)中,並攪拌1小時。LCMS顯示轉化成羥甲基衍生物(M+H 404)。使用迴轉式蒸發器濃縮溶液,以移除TFA。添加甲醇,並使所形成之混合物再一次濃縮。使所形成之殘留物溶於甲醇(1毫升)中,並添加氫氧化銨(0.25毫升)。將溶液攪拌0.5小時。LCMS顯示去除保護完成(M+H 374),然後使混合物藉迴轉式蒸發濃縮。將各異構物藉預備之HPLC單離,使用19毫米x 100毫米C18管柱;15% CH3CN-H2O (0.1% TFA),1.5分鐘,於6分鐘下至32%;30毫升/分鐘;偵測器設定在m/z 374下;滯留時間4.5分鐘(A) & 4.7分鐘(B)。使溶離液凍乾。產生13毫克異構物A與24毫克異構物B (TFA鹽,白色固體)。NMR分析(包含NOE & COSY)係與所預期之結構一致,具有A=順式與B=反式。 NMR (d6-DMSO)δ順式:12.94 (br s, 1H, NH);8.95 (s, 1H);8.87 (s, 1H);8.81 (s, 1H);8.42 (s, 1H);8.14 (s, 1H);7.85 (m, 1H);7.22 (m, 1H);4.48 (m, 1H, NCH);3.12 (s, 2H);2.84 (m, 2H);2.07 (m, 4H);1.69 (m, 2H). MS (ES) 374 (M+1). 反式:12.85 (br s, 1H, NH);8.94 (s, 1H);8.89 (s, 1H);8.84 (s, 1H);8.47 (s, 1H);8.11 (s, 1H);7.84 (m, 1H);7.26 (m, 1H);4.50 (m, 1H, NCH);3.48 (s, 2H);2.42-2.10 (m, 8H). MS (ES) 374 (M+1).
實例 705 : 3-1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -3- 炔 -1- 基 - 苯甲腈三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3-{1-[4-(7-{[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -3- 炔 -1- 基 } 苯甲腈 將己烷中之1M氫化二異丁基鋁(0.31毫升)逐滴添加至3-(3-氰基苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸甲酯(100毫克,0.0002莫耳) (利用類似實例712步驟1之程序製成)在DCM (3毫升,0.05莫耳)中之溶液內,並使混合物冷卻至-78℃。將反應混合物於-78℃下攪拌4小時,然後以冷甲醇(3毫升,0.07莫耳)使反應淬滅。使反應物溫熱至0℃,並添加碳酸鉀(60毫克,0.0004莫耳)與Bestmann-Ohira試劑(1.5當量,57毫克) (E. Quesada等人,
Tetrahedron
, 62 (2006) 6673-6680)。將反應物在室溫下攪拌過夜,接著於醋酸乙酯與水之間作分液處理。將有機層以飽和NaCl洗滌,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得粗產物。使粗產物純化,使用矽膠(EtOAc/己烷1:3至1:1),而得所要之產物3-{1-[4-(7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁-3-炔-1-基}苯甲腈(40毫克混合物)。m/z = 469 (M+1).
步驟 2 : 3-1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -3- 炔 -1- 基苯甲腈三氟醋酸鹽
使用類似實例712步驟4之程序,製成標題化合物(4.5毫克,46%),為非晶質白色固體。 1H NMR (500 MHz, DMSO):δ12.5 (b, 1H), 9 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 8 (s, 1H), 7.8 (m, 2H), 7.7 (s, 1H), 7.6 (m, 1H), 7 (m, 1H), 5.9 (m, 1H), 3.4 (dd, 1H), 3.2 (dd, 1H), 2.9 (s, 1H). m/z = 339 (M+1).
實例 706 : 3-{1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -3- 炔 -1- 基 } 苯甲醛三氟醋酸鹽 使用實例705之程序,製成標題化合物,為次產物(4.5毫克,46%),為非晶質白色固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10 (s, 1H), 9 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 8 (s, 1H), 7.9 (m, 1H), 7.8 (m, 1H), 7.7 (s, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.1 (s, 1H), 5.9 (m, 1H), 3.4 (dd, 1H), 3.2 (dd, 1H), 2.9 (s, 1H). m/z = 342.
實例 712 : 4-[1-(3- 甲氧基 -1- 苯基丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 步驟 1 : 3- 苯基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙酸甲酯 將(2E)-3-丙烯酸苯甲酯(500毫克,0.003莫耳)在ACN (2毫升,0.04莫耳)中之溶液,慢慢添加至4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.5克,0.002莫耳)在ACN (2毫升,0.04莫耳)與DBU (500微升,0.003莫耳)中之溶液內。將反應物在室溫下攪拌度過週末。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理。將有機層以飽和氯化鈉洗滌,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得油。使產物於矽膠上藉FCC純化,使用EtOAc/己烷(1:2至1:1),獲得3-苯基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸甲酯(500毫克,70%),為半固體殘留物。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.9 (s, 1H), 8.4 (s, 2H), 7.4 (m, 5H), 6.8 (d, 1H), 6 (m, 1H), 5.7 (s, 2H), 3.7-3.8 (m, 3H), 3.6 (m, 2H), 2.2 (m, 1H), 1.4 (m, 2H), 1.1 (m, 2H), 0.02 (s, 9H), m/z = 478 (M+1).
步驟 2 : 3- 苯基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙 -1- 醇 於氮大氣下,將己烷中之氫化二異丁基鋁(1M,0.69毫升)添加至3-苯基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-丙酸甲酯(150毫克,0.00031莫耳)在DCM (3毫升,0.05莫耳)中之溶液內,並使混合物冷卻至-78℃。將反應物在-78℃下攪拌1小時,並使其溫熱至室溫,歷經4小時。以甲醇(100微升)與飽和氯化銨(100微升)使反應淬滅,然後溶於醋酸乙酯中,以MgSO4脫水乾燥,及過濾。使濾液濃縮,獲得3-苯基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙-1-醇(130毫克,92%),為油狀物。m/z = 450 (M+1).
步驟 3 : 4-[1-(3- 甲氧基 -1- 苯基丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 將氫化鈉(9.6毫克,0.00040莫耳)添加至3-苯基-3-[4-(7-[2-(三-甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙-1-醇(120毫克,0.00027莫耳)在DMF (3毫升,0.04莫耳)中之溶液內,並使混合物冷卻至0℃。將反應物攪拌20分鐘,並添加碘化甲烷(22微升,0.00035莫耳)。使反應物溫熱至室溫,並攪拌過夜。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理。將有機層以飽和NaCl洗滌,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得4-[1-(3-甲氧基-1-苯基丙基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(100毫克,88%),為半固體。m/z = 464 (M+1).
步驟 4 : 4-[1-(3- 甲氧基 -1- 苯基丙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽
於室溫下,將三氟醋酸(2毫升,0.02莫耳)添加至4-[1-(3-甲氧基-1-苯基丙基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(80毫克,0.0002莫耳)在DCM (3毫升,0.05莫耳)中之混合物內。在攪拌2小時後,起始物質被消耗,並使反應溶液濃縮,以移除TFA。在室溫下,將粗製反應物以甲醇(3毫升,0.07莫耳)稀釋,並以乙二胺(0.3毫升,0.004莫耳)處理。將反應混合物攪拌18小時,並濃縮,及在C-18管柱上使用HPLC純化,以含有0.2% TFA之ACN:水梯度液溶離,而得標題化合物(43毫克,60%),為白色非晶質固體。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.9 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 7.8 (s, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.3 (m, 5H), 7.2 (b, 1H), 5.7 (m, 1H), 3.3 (m, 1H), 3.2 (s, 3H), 2.7 (m, 1H), 2.4 (m, 1H). m/z = 334 (M+1).
實例 715 : 3-1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -3- 烯 -1- 基苯甲腈三氟醋酸鹽 將[4-1-[1-(3-溴苯基)丁-3-烯-1-基]-1H-吡唑-4-基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(20毫克,0.00005莫耳)在DMF (2毫升,0.02莫耳)與氰化鋅(60毫克,0.0005莫耳)中之混合物以氮氣流除氣。然後,將混合物以肆(三苯基-膦)鈀(0) (40毫克,0.00003莫耳)處理,再一次以氮除氣,接著,在微波反應器中加熱至170℃,歷經15分鐘。使反應物冷卻,過濾,並在C-18管柱上藉HPLC純化,以ACN/水/TFA梯度液溶離,而得標題化合物(10毫克,40%),為白色非晶質固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.9 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 7.9 (s, 1H), 7.8 (m, 3H), 7.6 (m, 1H), 7.1 (b, 1H), 5.6-5.8 (m, 2H), 5.1 (d, 1H), 5 (d, 1H), 3.3 (m, 1H), 3 (m, 1H). m/z = 341 (M+1).
實例 716 : 4-1-[1-(3- 溴苯基 ) 丁 -3- 烯 -1- 基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 步驟 1 : 3-(3- 溴苯基 )-3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙醛 將己烷中之氫化二異丁基鋁(1M,4毫升)添加至3-(3-溴苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸乙酯(600毫克,0.001莫耳)在DCM (6毫升,0.09莫耳)中之-78℃溶液內。在攪拌4小時後,以冷甲醇(300微升)使反應淬滅,然後添加飽和氯化銨(500微升),並將所形成之溶液攪拌1小時。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理。將有機層以鹽水洗滌,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮。使產物於矽膠上藉急驟式層析純化,以己烷:EtOAc (2:1至1:2)溶離,獲得3-(3-溴苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙醛(400毫克,70%),為油狀物。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.9 (s, 1H), 8.9 (s, 1H), 8.4 (s, 2H), 7.6 (d, 1H), 7.5 (d, 1H), 7.4 (d, 1H), 7.3-7.4 (m, 2H), 6.8 (d, 1H), 6.1 (m, 1H), 5.7 (s, 2H), 4 (m, 1H), 3.6 (m, 2H), 3.3 (dd, 1H), 1.0 (m, 2H), 0.01 (s, 9H). m/z = 526, 528 (M+1).
步驟 2 : 4-1-[1-(3- 溴苯基 ) 丁 -3- 烯 -1- 基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 於0℃下,將THF中之第三-丁醇鉀(1M,200微升)添加至碘化甲基三苯基鏻(80毫克,0.0002莫耳)在THF (2毫升,0.02莫耳)中之溶液內。將反應物在室溫下攪拌1小時,然後冷卻至-78℃。逐滴添加THF (2毫升,0.02莫耳)中之3-(3-溴苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基-矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙醛(90毫克,0.0002莫耳)。使反應物逐漸溫熱至室溫。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理。將有機層以飽和NaCl洗滌,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得油。使產物於矽膠上藉FCC純化,以EtOAc:己烷(1:1)溶離,獲得4-1-[1-(3-溴苯基)丁-3-烯-1-基]-1H-吡唑-4-基-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(35毫克,40%),為油狀物。m/z = 524, 526 (M+1).
步驟 3 : 4-1-[1-(3- 溴苯基 ) 丁 -3- 烯 -1- 基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
利用類似實例712步驟4之程序,但使用4-1-[1-(3-溴苯基)丁-3-烯-1-基]-1H-吡唑-4-基-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶,製成標題化合物(10毫克,30%),為白色非晶質固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.9 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 7.8 (s, 1H), 7.7 (s, 1H), 7.5 (m, 2H), 7.3 (m, 1H), 7.1 (s, 1H), 5.7 (m, 2H), 5.2 (d, 1H), 5.0 (d, 1H), 3.2 (m, 1H), 3.0 (m, 1H). m/z = 394, 396 (M+1).
實例 717 : 3-(4,4- 二氟 )-1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -3- 烯 -1- 基苯甲腈 步驟 1 : 4-{1-[1-(3- 溴苯基 )-4,4- 二氟丁 -3- 烯 -1- 基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 }-7-{[2-( 三甲基矽烷基 )- 乙氧基 ] 甲基 }-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 於3-(3-溴苯基)-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙醛(0.05克,0.00009莫耳)在N,N-二甲基乙醯胺(2毫升,0.02莫耳)中之溶液內,添加三苯膦(0.1克,0.0006莫耳)、二溴基二氟甲烷(50微升,0.0006莫耳)及THF中之0.76M鋅(0.7毫升)。將反應物在室溫下攪拌18小時。使反應物於水與EtOAc之間作分液處理。將有機層以飽和NaCl洗滌,以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得油。使產物於矽膠上藉FCC純化,以EtOAc、己烷(1:2)溶離,獲得4-{1-[1-(3-溴苯基)-4,4-二氟丁-3-烯-1-基]-1H-吡唑-4-基}-7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(20毫克,40%),為透明油。m/z = 560, 562 (M+1).
步驟 2 : 4-1-[1-(3- 溴苯基 )-4,4- 二氟丁 -3- 烯 -1- 基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 利用類似實例712步驟4之程序,但使用4-{1-[1-(3-溴苯基)-4,4-二氟丁-3-烯-1-基]-1H-吡唑-4-基}-7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶,製成化合物4-1-[1-(3-溴苯基)-4,4-二氟丁-3-烯-1-基]-1H-吡唑-4-基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(30毫克,99%),為油狀物。m/z = 430, 432 (M+1).
步驟 3 : 3-4,4- 二氟 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁 -3- 烯 -1- 基 - 苯甲腈 將4-1-[1-(3-溴苯基)-4,4-二氟丁-3-烯-1-基]-1H-吡唑-4-基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(30毫克,0.00007莫耳)在DMF (2毫升,0.02莫耳)與氰化鋅(80毫克,0.0007莫耳)中之混合物以氮除氣。然後,將混合物以肆(三苯基-膦)鈀(0) (50毫克,0.00004莫耳)處理,並以氮除氣,接著在微波中,於170℃下加熱15分鐘。然後,使反應物冷卻,過濾,並在C-18管柱上藉HPLC純化,以ACN/水/TFA梯度液溶離,而得標題化合物(10毫克,30%),為白色非晶質固體。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ8.9 (s, 1H), 8.7 (s, 1H), 8.4 (s, 1H), 7.9 (s, 1H), 7.7-7.8 (m, 3H), 7.5 (m, 1H), 7.1 (m, 1H), 5.7 (m, 1H), 4.3-4.4 (m, 1H), 3.1 (m, 1H), 2.9 (m, 1H). m/z = 377 (M+1). 下列在表14中之化合物係按經標識為"製備實例編號"之直行中所指示而製成,且某些舉例之合成程序之細節係提供於下表14中。
表 14
*實例731之步驟1係按下述作修正:於0℃下,將Ph3P與CF2Br2在DMAC中合併,然後,使其溫熱至室溫,直到當藉LCMS測定時,亞烷基化合物之形成完成為止。接著,使亞烷基化合物之溶液再冷卻至0℃,並將醛與鋅添加至該亞烷基化合物溶液中,且使反應物慢慢溫熱至室溫。
實例 727 : 4-[1-(1- 環戊基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1 : (2E)-3- 環戊基丙烯酸
於丙二酸(1.06克,10.2莫耳)在吡啶(1.25毫升)中之溶液內,添加六氫吡啶(0.15毫升)與環戊烷羧甲醛(1.00克,10.2毫莫耳)。將混合物加熱至40℃,歷經2小時,接著在室溫下攪拌16小時。然後,使混合物於冰浴中冷卻,並添加2N HCl以酸化。以醚萃取產物。將醚萃液以HCl水溶液與鹽水洗滌,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,並於真空中移除溶劑,而得產物(1.30克,77%),使用之而無需進一步純化。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.06 (dd, 1H), 5.80 (dd, 1H), 2.70-2.54 (m, 1H), 1.93-1.32 (m, 8H);MS (ES):141 (M+H).
步驟 2. (2E)-3- 環戊基丙烯酸甲酯
於(2E)-3-環戊基丙烯酸(1.3克,9.3毫莫耳)在DCM (65毫升)中之溶液內,在0℃下,逐滴添加氯化草醯(3.1毫升,37毫莫耳)。將所形成之溶液在0℃下攪拌40分鐘,然後在室溫下2小時。使揮發性物質蒸發,而得(2E)-3-環戊基氯化丙烯醯,為無色液體。使此(2E)-3-環戊基氯化丙烯醯(0.75克,4.7莫耳)之一部份溶於甲醇(10毫升)中,並將所形成之溶液攪拌2小時。蒸發溶劑,而得產物(700毫克,96%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ6.94 (dd, 1H), 5.79 (dd, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.66-2.50 (m, 1H), 1.92-1.27 (m, 8H).
步驟 3. 3- 環戊基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙酸甲酯
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.9克,9.2毫莫耳)與(2E)-3-環戊基丙烯酸甲酯(1.70克,11.0毫莫耳)在ACN (100毫升)中之溶液內,添加DBU (2.7毫升,18毫莫耳)。將所形成之混合物攪拌96小時。於真空中移除ACN,並使所形成之殘留物溶於醋酸乙酯中。將此溶液以1.0N HCl,接著以鹽水洗滌,接著以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-70%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(2.73克,63%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.84 (s, 1H), 8.28 (s, 2H), 7.39 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.46 (dt, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.54 (t, 2H), 3.18 (dd, 1H), 2.89 (dd, 1H), 2.59-2.42 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 1H), 1.75-1.10 (m, 7H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):470 (M+H).
步驟 4. 3- 環戊基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙醛
於3-環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙酸甲酯(0.501克,1.07毫莫耳)在THF (5.0毫升)中之溶液內,在-78℃下,逐滴添加DCM中之1.00M氫化二異丁基鋁(2.35毫升)。將反應物攪拌,並慢慢溫熱至-10℃,歷經2小時期間。在此溫度下,添加另一份DCM中之1.0M氫化二異丁基鋁(1.50毫升)。當藉由LCMS測得反應完成時,添加酒石酸K/Na之飽和溶液,接著為醚。將所形成之混合物在室溫下攪拌兩小時。分離有機層,並以水與鹽水洗滌,然後以硫酸鈉脫水乾燥,及於真空中移除溶劑,獲得黏稠油,使用之而無需進一步純化。MS (ES):442 (M+H). 於氯化草醯(0.108毫升,1.28毫莫耳)在DCM (10.0毫升)中之溶液內,在-78℃下,添加DMSO (151微升,2.13毫莫耳)。在攪拌5分鐘後,添加DCM (3.00毫升)中之3-環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙-1-醇(471毫克,1.07毫莫耳)。將混合物於-78℃下攪拌30分鐘。然後,添加TEA (594微升,4.26毫莫耳)。接著,使所形成之混合物溫熱至室溫,歷經30分鐘期間。添加水,並分離液層。將有機層以0.1N HCl、水、飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水連續洗滌,然後以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-60%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(384毫克,82%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ9.73 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.71 (br s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.47 (br s, 1H), 6.88 (br s, 1H), 5.69 (s, 2H), 4.66-4.49 (m, 1H), 3.54 (t, 2H), 3.40 (ddd, 1H), 2.95 (ddd, 1H), 2.55-2.44 (m, 1H), 2.01-1.21 (m, 8H), 0.98 (t, 2H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):440 (M+H).
步驟 5. 4-[1-(1- 環戊基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於THF中之1.0M第三-丁醇鉀(0.207毫升)在THF (2.0毫升)中之溶液內,在0℃下,添加三苯甲基溴化鏻(77.8毫克,0.218毫莫耳)。使所形成之混合物溫熱至室溫,並將其攪拌30分鐘。添加3-環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙醛(0.100克,0.228毫莫耳)在THF (2.0毫升)中之溶液。30分鐘後,藉由添加飽和氯化銨溶液使混合物淬滅,然後,將產物以醚萃取。使醚萃液以硫酸鈉脫水乾燥,並在真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-40%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(40毫克,44%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.84 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.19 (br s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.83 (br s, 1H), 5.67 (s, 2H), 5.60 (ddt, 1H), 5.01 (dq, 1H), 4.97-4.93 (m, 1H), 3.99 (dt, 1H), 3.54 (t, 2H), 2.79-2.60 (m, 2H), 2.60-2.40 (m, 1H), 1.99-1.89 (m, 1H), 1.75-1.41 (m, 5H), 1.37-1.12 (m, 2H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):438 (M+H).
步驟 6. 4-[1-(1- 環戊基丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽
使4-[1-(1-環戊基丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(13毫克,0.030毫莫耳)溶於DCM (3毫升)中,並添加TFA (0.5毫升)。將所形成之溶液於室溫下攪拌3小時。於真空中移除溶劑。使殘留物溶於THF (2毫升)中,並添加6N NaOH (1毫升)。將混合物於室溫下攪拌1小時,然後,於水與醋酸乙酯之間作分液處理。使有機層以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,獲得產物(10毫克,80%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.73 (s, 1H), 8.88 (s, 2H), 8.43 (s, 1H), 7.79 (t, 1H), 7.19 (dd, 1H), 5.60 (ddt, 1H), 5.00-4.93 (m, 1H), 4.91-4.87 (m, 1H), 4.23 (dt, 1H), 2.76-2.59 (m, 2H), 2.47-2.34 (m, 1H), 1.92-1.82 (m, 1H), 1.68-1.22 (m, 6H), 1.21-1.09 (m, 1H);MS (ES):308 (M+H).
實例 729 : 4-[1-(1- 環戊基 -2- 環丙基乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1. 4-[1-(1- 環戊基 -2- 環丙基乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽
將4-[1-(1-環戊基丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(於實例727步驟5中製成) (54.0毫克,0.123毫莫耳)在DCM (1毫升)中之溶液,添加至已保持在0℃下剛製成之過量CH2N2之含醚溶液中。添加醋酸鈀(10.0毫克,0.044莫耳)。於靜置2小時後,藉由添加醋酸使過量CH2N2淬滅。然後,將溶液以另外之DCM稀釋,以飽和碳酸氫鈉溶液、水及鹽水連續洗滌,並以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,獲得產物(13毫克,18%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ9.05 (s, 1H), 8.81 (d, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.03 (t, 1H), 5.76 (s, 2H), 4.10 (t, 1H), 3.59 (t, 2H), 2.57-2.36 (m, 1H), 2.15-2.00 (m, 1H), 2.00-1.83 (m, 1H), 1.79-1.40 (m, 6H), 1.37-1.09 (m, 2H), 0.97 (t, 2H), 0.55-0.26 (m, 3H), 0.07--0.15 (m, 11H);MS (ES):452 (M+H).
步驟 2. 4-[1-(1- 環戊基 -2- 環丙基乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽
將4-[1-(1-環戊基-2-環丙基乙基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶三氟醋酸鹽(13毫克,0.023莫耳),於室溫下,在含有TFA (1.5毫升)之DCM溶液(2毫升)中攪拌兩小時。於真空中移除溶劑。使所形成之殘留物再溶解於THF (3毫升)中,並添加6N NaOH (2毫升)。攪拌一小時後,使混合物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。使有機層以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,獲得產物(9毫克,90%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.75 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.19 (dt, 1H), 2.43-2.29 (m, 1H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.88-1.76 (m, 1H), 1.68-1.37 (m, 5H), 1.35-1.08 (m, 3H), 0.43-0.26 (m, 2H), 0.24-0.13 (m, 1H), 0.07--0.03 (m, 1H), -0.14--0.24 (m, 1H);MS (ES):322 (M+H).
實例 730 : 4-[1-(1- 環戊基丁 -3- 炔 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1. 4-[1-(1- 環戊基丁 -3- 炔 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於碳酸鉀(38.4毫克,0.278毫莫耳)在甲醇(2.0毫升)中之混合物內,在0℃下,添加3-環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙醛(按實例727步驟4製成) (61.0毫克,0.139毫莫耳)在甲醇(1.0毫升)中之溶液,接著為(1-重氮基-2-酮基丙基)膦酸二甲酯(40.0毫克,0.208毫莫耳)在甲醇(1.0毫升)中之溶液。使混合物慢慢溫熱至環境溫度,並攪拌16小時。然後,以水稀釋混合物,並以醋酸乙酯萃取。將合併之萃液以水、飽和氯化銨洗滌,接著以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑,而得產物,使用之而無需進一步純化(52毫克,86%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.85 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.84 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.14 (ddd, 1H), 3.53 (t, 2H), 2.90 (ddd, 1H), 2.79 (ddd, 1H), 2.66-2.49 (m, 1H), 1.98 (t, 1H), 2.00-1.88 (m, 1H), 1.78-1.44 (m, 5H), 1.39-1.11 (m, 2H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):436 (M+H).
步驟 2. 4-[1-(1- 環戊基丁 -3- 炔 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽
將4-[1-(1-環戊基丁-3-炔-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三甲基矽烷基)-乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(52毫克,0.12毫莫耳)在DCM (3毫升)與TFA (1毫升)中之溶液攪拌2小時。於真空中移除溶劑。使所形成之殘留物溶於THF (3毫升)中,並添加6N NaOH (2毫升)。在攪拌1小時後,使混合物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。使有機層以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,獲得產物(30毫克,60%)。 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO):δ12.72 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 4.34 (dt, 1H), 2.97-2.69 (m, 3H), 2.50-2.32 (m, 1H), 1.93-1.77 (m, 1H), 1.70-1.09 (m, 7H);MS (ES):306 (M+H).
實例 731 : 4-[1-(1- 環戊基丁基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 ·TFA 使4-[1-(1-環戊基丁-3-炔-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶三氟-醋酸鹽(在實例729中製成) (20毫克,0.048毫莫耳)溶於甲醇(2毫升)中,並添加催化量之5% Pd-C。於1大氣氫下,經由附加之氣瓶將混合物攪拌。2小時後,過濾混合物,並經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,而得產物(14毫克,69%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.73 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.79 (t, 1H), 7.20 (d, 1H), 4.11 (dt, 1H), 2.43-2.26 (m, 1H), 2.02-1.70 (m, 3H), 1.68-1.35 (m, 4H), 1.33-0.89 (m, 5H), 0.83 (t, 3H);MS (ES):310 (M+H).
實例 732 : 4-[1-(1- 環戊基 -4,4- 二氟丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1. 4-[1-(1- 環戊基 -4,4- 二氟丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ]- 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶
於3-環戊基-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙醛(按實例727步驟4製成) (181毫克,0.41毫莫耳)在N,N-二甲基乙醯胺(3.6毫升)中之溶液內,添加三苯膦(294毫克,1.12毫莫耳),接著為二溴基二氟甲烷(235毫克,1.12毫莫耳)。然後,以一份添加Rieke®鋅(1.8毫升懸浮液,2.5克,在50毫升THF中)。將所形成之混合物於室溫下攪拌4.5小時。經過矽藻土過濾混合物。使濾液於醚與水之間作分液處理。將醚層以水與鹽水洗滌,接著以硫酸鈉脫水乾燥,並在真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-30%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(104毫克,53%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.91 (s, 1H), 8.51 (br s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 6.93 (d, 1H), 5.74 (s, 2H), 4.05 (ddd, 1H), 4.04-3.96 (m, 1H), 3.60 (t, 2H), 2.78-2.62 (m, 2H), 2.58-2.45 (m, 1H), 2.07-0.87 (m, 10H), 0.00 (s, 9H);MS (ES):474 (M+H).
步驟 2. 4-[1-(1- 環戊基 -4,4- 二氟丁 -3- 烯 -1- 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶三氟醋酸鹽
將4-[1-(1-環戊基-4,4-二氟丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7-[2-(三-甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(41毫克,0.086毫莫耳)在DCM (3毫升)與TFA (1.5毫升)中之溶液,於室溫下攪拌兩小時。然後,使溶液在真空中濃縮。使所形成之殘留物再溶解於THF (3毫升)中,並添加6N NaOH (2毫升)。在攪拌1小時後,使混合物於水與醋酸乙酯之間作分液處理。使有機層以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,獲得所要之產物(39毫克,98%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.72 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.80 (t, 1H), 7.18 (d, 1H), 4.32 (ddt, 1H), 4.20 (dt, 1H), 2.72-2.37 (m, 3H), 1.95-1.81 (m, 1H), 1.69-1.06 (m, 7H);MS (ES):344 (M+H). 在共軛接受劑之情況下,譬如在實例737步驟3中所使用者,並不能市購取得,此種化合物係根據下文關於(2E)-3-(四氫呋喃-3-基)丙烯酸乙酯(針對實例733之製備)所提供之程序而產生。 (2E)-3-(四氫呋喃-3-基)丙烯酸乙酯之製備:
步驟 A :四氫 呋 喃 -3- 羧甲醛
於Dess-Martin過碘烷(3.37克,7.95毫莫耳)在DCM (20毫升)中之溶液內,添加四氫呋喃-3-基甲醇(0.701毫升,7.23毫莫耳)。將反應物於環境溫度下攪拌2小時,然後,於真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(使用DCM作為溶離劑),獲得產物,為透明油,使用之而無需進一步純化。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.65 (d, 1H), 4.12-4.07 (m, 1H), 3.92-3.85 (m, 2H), 3.80-3.73 (m, 1H), 3.10-3.02 (m, 1H), 2.26-2.10 (m, 2H).
步驟 B : (2E)-3-( 四氫 呋 喃 -3- 基 ) 丙烯酸乙酯
於氫化鈉(60%在礦油中) (382毫克,9.40毫莫耳)在DMF (15.0毫升) (THF亦可使用)中之0℃混合物內,逐滴添加膦酸基醋酸三乙酯(1.72毫升,8.68毫莫耳)。使所形成之混合物溫熱至室溫,並攪拌30分鐘,然後再冷卻至0℃,此時逐滴添加四氫呋喃-3-羧甲醛(724毫克,7.23毫莫耳)在DMF (4.0毫升)中之溶液。將所形成之混合物在此溫度下攪拌1.5小時,此時以水稀釋混合物,並以醚萃取產物。以水與鹽水洗滌合併之萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-40%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(640毫克,52%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ6.87 (dd, 1H), 5.86 (dd, 1H), 3.96-3.88 (m, 2H), 3.81 (dd, 1H), 3.53 (dd, 1H), 3.04-2.93 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.79 (dq, 1H).
實例 736 : 4-[1-(1- 環戊基 -4,4- 二氟丁基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]-7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶三氟醋酸鹽 ·TFA 使4-[1-(1-環戊基-4,4-二氟丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶三氟醋酸鹽(按實例731製成) (20.0毫克,0.041毫莫耳)溶於甲醇(3毫升)中,並添加催化量之5% Pd/C。將混合物於室溫下,在藉由附加之氣瓶所提供之氫大氣下攪拌2小時。過濾混合物,並經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,而得產物(4毫克,21%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO)δ12.74 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.80 (t, 1H), 7.20 (dd, 1H), 6.05 (tt, 1H), 4.17 (dt, 1H), 2.47-2.34 (m, 1H), 2.14-1.08 (m, 12H);MS (ES):346 (M+H).
實例 737 : 3-(1- 甲基環戊基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1 : 1- 甲基環戊烷羧甲醛
於環戊烷羧甲醛(1.00毫升,9.36毫莫耳)在DCM (47毫升)中之溶液內,在0℃下,以一份添加固體第三-丁醇鉀(1.44克,12.2毫莫耳),接著以一份添加碘化甲烷(1.7毫升,28毫莫耳)。在0℃下30分鐘後,使反應混合物溫熱至室溫,並於該溫度下攪拌16小時。將混合物倒入鹽水中,並分離液層。使有機層以硫酸鈉脫水乾燥,傾析,並濃縮,且將其使用於步驟2中,無需進一步純化。
步驟 2 : (2Z)- 與 (2E)-3-(1- 甲基環戊基 ) 丙烯腈
於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之溶液(9.36毫升)內,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(1.59毫升,9.81毫莫耳)在THF (10毫升)中之溶液。移除冷卻浴,並使反應物溫熱至室溫,接著再冷卻至0℃,此時逐滴添加1-甲基環戊烷羧甲醛(1.0克,於步驟1中產生)在THF (2毫升)中之溶液。移除浴液,並將反應物於環境溫度下攪拌3小時。於混合物中添加水與***。進一步以***萃取水層。將合併之萃液以鹽水洗滌,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,並在真空中吸附至矽膠上。急驟式管柱層析(以0-10%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物,為具有己烷之混合物,將此產物使用於步驟3中,無需進一步純化。
步驟 3 : 3-(1- 甲基環戊基 )-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.134克,0.426毫莫耳)在ACN (3毫升)中之混合物內,添加(2Z)-與(2E)-3-(1-甲基環戊基)丙烯腈(0.12克,0.9毫莫耳)之混合物,接著為DBU (0.13毫升,0.90毫莫耳)。將反應物加熱至60℃,歷經6小時。於真空中移除ACN。添加醋酸乙酯,接著為0.1N HCl。以三份醋酸乙酯萃取水層。將合併之有機萃液以鹽水洗滌,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及蒸發溶劑。使粗製物質經由與TFA (2毫升)在DCM (8毫升)中一起攪拌2小時而去除保護。於真空中移除溶劑與TFA。使用THF (8毫升)以溶解殘留物,並添加水中之6.0M氫氧化鈉(8毫升)。將反應物在此鹼性混合物中攪拌2小時。使用醋酸乙酯以萃取產物。使合併之萃液脫水乾燥(Na2SO4),並於真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,獲得產物(44毫克,24%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.71 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.72 (dd, 1H), 3.47 (dd, 1H), 3.21 (dd, 1H), 1.74-1.51 (m, 6H), 1.44-1.32 (m, 1H), 1.09-1.00 (m, 1H), 0.97 (s, 3H);MS (ES):321 (M+H).
實例 739 : 1-2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基環 - 丙烷甲腈三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1 : 1-( 羥甲基 ) 環丙烷甲腈
將THF (12.0毫升)中之1-氰基環丙烷羧酸乙酯(801毫克,5.76毫莫耳)以四氫硼酸鋰(251毫克,11.5毫莫耳)處理。將溶液加熱至回流,歷經1.5小時。於冷卻至室溫後,以水使反應淬滅,並以醋酸乙酯萃取。使合併之萃液以MgSO4脫水乾燥,過濾,及濃縮,而得透明油,將其使用於下列步驟中,而無需進一步純化(482毫克,86%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ3.61 (s, 2H), 1.27 (dd, 2H), 0.98 (dd, 2H).
步驟 2 : 1- 甲醯基環丙烷甲腈
使Dess-Martin過碘烷(1.11克,2.62毫莫耳)溶於DCM (12毫升)中,並添加1-(羥甲基)環丙烷甲腈(231毫克,2.38毫莫耳)。將反應物於環境溫度下攪拌一小時。然後,使混合物藉急驟式管柱層析(以0-80%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離)純化,而得產物(106毫克,46%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.35 (s, 1H), 1.79-1.74 (m, 4H).
步驟 3 : 1-[(E)-2- 氰基乙烯基 ] 環丙烷甲腈
於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之溶液(1.12毫升)內,在0℃下,慢慢地逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(210毫克,1.2毫莫耳)在THF (2毫升)中之溶液。移除冷浴,並使反應物溫熱至環境溫度。然後,使溶液再冷卻至0℃,並逐滴添加1-甲醯基環丙烷甲腈(101毫克,1.06毫莫耳)在THF (1.0毫升)中之溶液。移除冷浴,並將反應物在環境溫度下攪拌3小時。接著,將混合物以醚與水稀釋,將醚溶液分離,以鹽水洗滌,以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及於真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-60%***在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(24毫克,19%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ5.94 (d, 1H), 5.82 (d, 1H), 1.80 (dd, 2H), 1.39 (dd, 2H).
步驟 4 : 1-2- 氰基 -1-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基環丙烷甲腈
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(61.4毫克,0.195毫莫耳)與1-[(E)-2-氰基乙烯基]環丙烷甲腈(23毫克,0.19毫莫耳)在ACN (2毫升)中之溶液內,添加DBU (58微升0.39毫莫耳),並將所形成之混合物攪拌16小時。使ACN蒸發,並使殘留物溶於醋酸乙酯中。將此溶液以1.0N HCl、水及鹽水洗滌,並以硫酸鈉脫水乾燥,及在真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-80%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(49毫克,58%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.85 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 3.54 (dd, 1H), 3.51 (dd, 1H), 3.36 (dd, 1H), 1.62 (ddd, 1H), 1.45 (ddd, 1H), 1.34 (ddd, 1H), 1.25 (ddd, 1H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):434 (M+H).
步驟 5 : 1-2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基環丙烷 - 甲腈三氟醋酸鹽
將1-2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基環丙烷甲腈(48毫克,0.11毫莫耳)在DCM (3毫升)與TFA (2毫升)之混合物中攪拌3小時。在真空中移除溶劑,並使殘留物再溶於THF (3毫升)中。添加6N NaOH (2毫升),並將所形成之混合物於環境溫度下攪拌3小時。使粗製反應混合物於醋酸乙酯與水之間作分液處理。分離液層,並使有機層以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑。經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN之梯度液溶離)純化,獲得產物(20毫克,43%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.74 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.83 (t, 1H), 7.17 (dd, 1H), 4.55 (dd, 1H), 3.66 (dd, 1H), 3.54 (dd, 1H), 1.55-1.30 (m, 4H);MS (ES):304 (M+H).
實例 740 : N-[(1-2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基 - 環戊基 ) 甲基 ] 苯甲醯胺 步驟 1 : 1- 氰基環戊羧酸甲酯
於醋酸氰基甲酯(2.66毫升,30.3毫莫耳)與1,4-二溴基丁烷(3.62毫升,30.3毫莫耳)在丙酮(50毫升)中之溶液內添加碳酸鉀(8.37克,60.6毫莫耳)。將反應物於環境溫度下攪拌16小時。經過矽藻土過濾反應物,並濃縮。使所形成之殘留物於醚與飽和NH4Cl溶液之間作分液處理,並將水層以另外兩份醚萃取。將合併之含醚萃液以鹽水洗滌,並以硫酸鈉脫水乾燥,然後過濾,及於真空中移除溶劑。急驟式管柱層析(以0-30%醋酸乙酯在己烷中之梯度液溶離),獲得產物(2.92克,63%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ3.82 (s, 3H), 2.30-2.21 (m, 4H), 1.93-1.82 (m, 4H).
步驟 2 : 1-[( 第三 - 丁氧羰基 ) 胺基 ] 甲基環戊羧酸甲酯
於1-氰基環戊羧酸甲酯(1.26克,8.22毫莫耳)在甲醇(100毫升)中之溶液內,添加二氯化鈷(2.1克,16.0毫莫耳)。使紫色混合物在冰水浴中冷卻。分次添加四氫硼酸鈉(3.11克,82.2毫莫耳),並注意(放熱),以提供黑色混合物。在添加完成時,中止冷卻,並將反應物於氮氣下攪拌40分鐘,且藉由小心添加1N HCl (700毫升)使反應淬滅。於真空中移除甲醇,然後藉由添加濃NH4OH (水溶液)使溶液呈鹼性(pH~9)。以DCM萃取混合物(6次),並使合併之DCM萃液以硫酸鈉脫水乾燥,及濃縮,而得粗產物,為淡黃色油。於此DCM (50毫升)中之粗製胺內,添加二碳酸二-第三-丁酯(1.31克,6.01毫莫耳),並將反應物於25℃下攪拌30分鐘。以水稀釋反應物,並以醋酸乙酯萃取三次。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及在真空中移除溶劑。使粗製殘留物藉急驟式管柱層析純化,產生所要之產物(1.5克,71%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ5.03 (s, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.26 (d, 2H), 2.02-1.33 (m, 17H).
步驟 3 : [1-( 羥甲基 ) 環戊基 ] 甲基胺基甲酸第三 - 丁酯
於1-[(第三-丁氧羰基)胺基]甲基環戊羧酸甲酯(1.50克,5.83毫莫耳)在THF (25.0毫升)中之溶液內,在-78℃下,逐滴添加DCM中之1.0M氫化二異丁基鋁(17.5毫升)。將反應物攪拌2小時,並緩慢溫熱至-10℃。添加酒石酸K/Na之飽和溶液,接著為醚。將此混合物於環境溫度下攪拌30分鐘,且分離有機層,及以水與鹽水洗滌。然後使有機層以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑,而得產物(1.03克,77%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ4.90 (br s, 1H), 3.27 (s, 2H), 3.06 (d, 2H), 1.5-1.17 (m, 8H), 1.44 (s, 9H).
步驟 4 : [(1- 甲醯基環戊基 ) 甲基 ] 胺基甲酸第三 - 丁酯
於氯化草醯(456微升,5.38毫莫耳)在DCM (30.0毫升)中之溶液內,在-78℃下,添加DMSO (637微升,8.97毫莫耳),並將所形成之混合物攪拌5分鐘。添加DCM (10.0毫升)中之[1-(羥甲基)環戊基]甲基胺基甲酸第三-丁酯(1.03克,4.48毫莫耳),並將所形成之混合物於-78℃下攪拌30分鐘。添加TEA (2.50毫升,17.9毫莫耳),並使所形成之混合物溫熱至環境溫度,歷經30分鐘。添加水。相繼以0.1N HCl、水、飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌有機相,然後以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑,而得產物(957毫克,94%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ9.39 (s, 1H), 4.94 (br s, 1H), 3.25 (d, 2H), 1.89-1.46 (m, 8H), 1.41 (s, 9H).
步驟 5 : (1-[(E)-2- 氰基乙烯基 ] 環戊基甲基 ) 胺基甲酸第三 - 丁酯與 (1-[(Z)-2- 氰基 - 乙烯基 ] 環戊基甲基 ) 胺基甲酸第三 - 丁酯
於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之溶液內(4.4毫升),在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(820毫克,4.6毫莫耳)在THF (6.0毫升)中之溶液。移除冷浴,並使反應物溫熱至環境溫度。然後使混合物再冷卻至0℃,並逐滴添加[(1-甲醯基環戊基)甲基]胺基甲酸第三-丁酯(952毫克,4.19毫莫耳)在THF (4.0毫升)中之溶液。使反應物溫熱至環境溫度,並將經溫熱之混合物攪拌16小時。接著以醚稀釋與水反應混合物。分離有機層,且相繼以水與鹽水洗滌,然後以硫酸鈉脫水乾燥,接著過濾,及於真空中移除溶劑,而得產物(1.05克,99%),為(E)與(Z)異構物之混合物。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ6.71 (d, 1H, E), 6.46 (d, 1H, Z), 5.36 (d, 1H, Z), 5.36 (d, 1H, E), 4.70 (br s, 1H, Z), 4.51 (br s, 1H, E), 3.25 (d, 2H, Z), 3.18 (d, 2H, E), 1.88-1.48 (m, 8H (E)與8H (Z)), 1.43 (s, 9H (E)與9H (Z));MS (ES):151 (M+H-Boc).
步驟 6 : [(1-2- 氰基 -1-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基環戊基 ) 甲基 ] 胺基甲酸第三 - 丁酯
於4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶(355毫克,1.12毫莫耳)和(1-[(E)-2-氰基乙烯基]環戊基甲基)胺基甲酸第三-丁酯與(1-[(Z)-2-氰基乙烯基]環戊基甲基)胺基甲酸第三-丁酯,為異構物之混合物(329毫克,1.31毫莫耳)在ACN (10毫升)中之溶液內,添加DBU (0.168毫升,1.12毫莫耳)。將所形成之混合物於環境溫度下攪拌3小時,接著加熱至60℃,歷經2.5小時。於真空中移除ACN,並使所形成之殘留物藉急驟式管柱層析(以己烷中之0-55%醋酸乙酯溶離)純化,而得產物(350毫克,55%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.85 (s, 1H), 8.37 (br s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.37 (br s, 1H), 4.52 (dd, 1H), 3.54 (t, 2H), 3.40 (dd, 1H), 3.23 (dd, 1H), 3.08 (d, 1H), 2.90 (dd, 1H), 1.84-1.47 (m, 8H), 1.45 (s, 9H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):566 (M+H).
步驟 7 : N-[(1-2- 氰基 -1-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基環戊基 )- 甲基 ] 苯甲醯胺
將[(1-2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基環戊基)甲基]胺基甲酸第三-丁酯(175毫克,0.309毫莫耳)在DCM (5毫升)與TFA (5毫升)中之溶液攪拌3小時,然後在真空中移除溶劑。將所形成之殘留物在THF (3毫升)與6N NaOH (3毫升)之混合物中攪拌3小時。於真空中移除THF,並添加水(10毫升)。以數份含有15%異丙醇之DCM萃取混合物。使合併之萃液以硫酸鈉脫水乾燥,並在真空中移除溶劑,而得產物,使用之而無需進一步純化。MS (ES):336 (M+H). 於3-[1-(胺基甲基)環戊基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(31毫克,0.060毫莫耳)與氯化苯甲醯(7.0微升,0.060莫耳)在DCM (1.0毫升)中之溶液內,添加TEA (17微升,0.12毫莫耳)。15分鐘後,於真空中移除溶劑,並使混合物經由預備之HPLC/MS (C18,首先以含有0.1% TFA之H2O與ACN梯度液溶離,接著層析純化,以含有0.15% NH4OH之H2O與ACN梯度液溶離)純化,而得產物(7毫克,27%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.12 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.92-7.87 (m, 2H), 7.60 (d, 1H), 7.59-7.48 (m, 3H), 7.02 (d, 1H), 4.83 (dd, 1H), 3.52-3.45 (m, 2H), 3.42 (dd, 1H), 3.27 (dd, 1H), 2.06-1.95 (m, 1H), 1.68-1.12 (m, 7H);MS (ES):440 (M+H).
實例 741 : 3-1-[( 苄氧基 ) 甲基 ] 環戊基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1 : 1-( 羥甲基 ) 環戊腈
將1-氰基環戊羧酸甲酯(於實例740步驟1中製成) (500毫克,3.0毫莫耳)在THF (7毫升)中之混合物,以四氫硼酸鋰(100毫克,6.0毫莫耳)處理。將所形成之溶液加熱至回流,歷經3小時,然後於環境溫度下攪拌16小時。藉由添加水使混合物淬滅,並以醋酸乙酯萃取。使合併之有機萃液以Na2SO4脫水乾燥,接著過濾,並於真空中移除溶劑,而得產物(387毫克,95%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ3.62 (s, 2H), 2.39-1.60 (m, 8H).
步驟 2 : 1-[( 苄氧基 ) 甲基 ] 環戊腈
於1-(羥甲基)環戊腈(0.30克,2.0毫莫耳)在DMF (4毫升)中之溶液內,添加氫化鈉(在礦油中之60%分散液,0.101克,2.52莫耳)。將所形成之混合物攪拌20分鐘,接著添加溴化苄(0.28毫升,2.4毫莫耳)。將反應物於環境溫度下攪拌64小時。添加另外之氫化鈉(在礦油中之60%分散液,0.060克,1.5毫莫耳)與溴化苄(0.18毫升,1.5毫莫耳),並將反應物再攪拌30分鐘。然後將水添加至混合物中,接著為鹽水,並以醋酸乙酯萃取水層。合併萃液,並以硫酸鈉脫水乾燥,然後於真空中移除溶劑。於所形成之殘留物中,添加水。將產物藉由以***萃取分離。使含醚萃液以硫酸鈉脫水乾燥,及蒸發溶劑。急驟式管柱層析(以己烷中之0-30%醋酸乙酯梯度液溶離),獲得產物(330毫克,64%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.40-7.27 (m, 5H), 4.62 (s, 2H), 3.44 (s, 2H), 2.18-2.03 (m, 2H), 1.90-1.62 (m, 6H).
步驟 3 : 1-[( 苄氧基 ) 甲基 ] 環戊烷羧甲醛
於含有甲苯(5毫升)中之1-[(苄氧基)甲基]環戊腈(0.16克,0.75毫莫耳)之混合物內,在0℃下,添加己烷中之1.0M氫化二異丁基鋁(0.8毫升)。將反應物在0℃下攪拌1.5小時,於此段時間內,起始腈係被消耗。使反應物冷卻至-78℃,並藉由添加甲醇使反應淬滅。使混合物溫熱至環境溫度,並添加3N HCl。在攪拌45分鐘之後,添加固體NaCl,並以三份醋酸乙酯萃取混合物。使合併之萃液脫水乾燥(Na2SO4),且過濾,及在真空中移除溶劑。所形成殘留物之急驟式管柱層析(以己烷中之0-30%醋酸乙酯梯度液溶離),獲得產物(20毫克,12%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ9.60 (s, 1H), 7.38-7.26 (m, 5H), 4.52 (s, 2H), 3.54 (s, 2H), 2.00-1.89 (m, 2H), 1.66-1.46 (m, 6H).
步驟 4 : (2E)- 與 (2Z)-3-1-[( 苄氧基 ) 甲基 ] 環戊基丙烯腈
於氰基甲基膦酸二乙酯(18微升,0.11毫莫耳)在THF (1毫升)中之經攪拌溶液內,添加THF中之1.0M第三-丁醇鉀(0.10毫升)。將所形成之混合物攪拌30分鐘,然後添加1-[(苄氧基)甲基]環戊烷羧甲醛(0.020克,0.092毫莫耳)在THF (1毫升)中之溶液。將所形成之混合物攪拌16小時。接著將水添加至反應物中,並以三份***萃取所形成之混合物。以鹽水洗滌合併之萃液,然後以硫酸鈉脫水乾燥,自硫酸鈉傾析,且於真空中移除溶劑,而得產物,將其用於後續共軛物添加步驟中,而無需進一步純化。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ7.37-7.27 (m, 5H), 6.80 (d, 1H (E)), 6.59 (d, 1H (Z)), 5.34 (d, 1H (E)), 5.33 (d, 1H (Z)), 4.53 (s, 2H (Z)), 4.50 (s, 2H (E)), 3.45 (s, 2H (Z)), 3.31 (s, 2H (E)), 1.80-1.55 (m, 8H);MS (ES) = 242 (M+H).
步驟 5 : 3-1-[( 苄氧基 ) 甲基 ] 環戊基 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽
於(2E)-與(2Z)-3-1-[(苄氧基)甲基]環戊基丙烯腈(於步驟4中產生)與4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.037克,0.12毫莫耳)在ACN (1.5毫升)中之混合物內,添加DBU (18微升,0.12毫莫耳)。將所形成之混合物於環境溫度下攪拌3小時,然後加熱至60℃,歷經28小時。以***與0.1N HCl稀釋反應混合物。分離液層,並以醋酸乙酯萃取水層。以鹽水洗滌醋酸乙酯萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,傾析,並於真空中移除溶劑。使所形成之殘留物溶於DCM (3毫升)與TFA (0.75毫升)中,並將此溶液攪拌3小時。在真空中移除溶劑,且使所形成之殘留物溶於THF (5毫升)與水中之6.0M氫氧化鈉(3毫升)內,及攪拌2小時。以三份醋酸乙酯萃取反應混合物。以鹽水洗滌合併之萃液,以硫酸鈉脫水乾燥,傾析,並於真空中移除溶劑。使粗製混合物藉預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN梯度液溶離)純化,並凍乾,而得所要之產物(10毫克,20%,歷經兩個步驟)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO):δ12.71 (br s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.38-7.23 (m, 5H), 7.19-7.16 (m, 1H), 4.92 (dd, 1H), 4.50 (d, 1H), 4.44 (d, 1H), 3.49 (dd, 1H), 3.35 (d, 1H), 3.23 (dd, 1H), 3.05 (d, 1H), 1.92-1.82 (m, 1H), 1.66-1.27 (m, 7H);MS (ES):427 (M+H).
實例 742 : 3-[1-( 甲磺醯基 ) 四氫吡咯 -3- 基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽 ·TFA
步驟 1 : 3-( 羥甲基 ) 四氫吡咯 -1- 羧酸苄酯
於1-[(苄氧基)羰基]四氫吡咯-3-羧酸(1.0克,4.0毫莫耳)在THF (37毫升)中之溶液內,在0℃下,逐滴添加1.0M硼烷在THF中之溶液(16.4毫升)。使反應物溫熱至室溫,並攪拌16小時。使混合物冷卻至0℃,並添加10% HCl (50毫升)。於添加後,以DCM萃取混合物,並相繼以飽和NaHCO3溶液與鹽水洗滌萃液,然後以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,及於真空中移除溶劑。將產物用於隨後之氧化步驟中,無需進一步純化。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.39-7.26 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.61-3.31 (m, 5H), 3.18 (dt, 1H), 2.75 (br s, 0.45H), 2.59 (br s, 0.45H), 2.49-2.31 (m, 1H), 2.19 (br s, 0.1H), 2.05-1.89 (m, 1H), 1.77-1.58 (m, 1H);MS (ES):236 (M+H).
步驟 2 : 3- 甲醯基四氫吡咯 -1- 羧酸苄酯
於-78℃下,將DMSO (597微升,8.42毫莫耳)添加至氯化草醯(427微升,5.05毫莫耳)在DCM (25毫升)中之溶液內。5分鐘後,添加3-(羥甲基)四氫吡咯-1-羧酸苄酯(產生於步驟1)。反應係於-78℃下持續30分鐘。然後添加TEA (2.3毫升,17毫莫耳)。接著使所形成之混合物溫熱至室溫,歷經30分鐘期間。然後添加水。分離液層,並相繼以0.1N HCl、水、飽和NaHCO3及鹽水洗滌有機相。接著使有機相以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑,而得產物(0.82克,88%,歷經兩個步驟)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ9.68 (d, 1H), 7.38-7.28 (m, 5H), 5.13 (s, 2H), 3.79 (dd, 1H), 3.65-3.35 (m, 3H), 3.11-2.99 (m, 1H), 2.32-2.04 (m, 2H).
步驟 3 : 3-[(E)-2- 氰基乙烯基 ] 四氫吡咯 -1- 羧酸苄酯與 3-[(Z)-2- 氰基乙烯基 ]- 四氫吡咯 -1- 羧酸苄酯
於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之溶液內(4.40毫升),在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(820毫克,4.6毫莫耳)在THF (6.0毫升)中之溶液。移除冷浴,並使反應物溫熱至室溫,且攪拌15分鐘。使混合物冷卻至0℃,並逐滴添加3-甲醯基四氫吡咯-1-羧酸苄酯(0.82克,2.3毫莫耳)在THF (4.00毫升)中之溶液。中止冷卻,並將反應物於環境溫度下攪拌16小時。以醚與水稀釋混合物,分離液層,並以水,接著鹽水洗滌有機層,然後以硫酸鈉脫水乾燥,過濾,且於真空中移除溶劑。使所形成之殘留物藉急驟式管柱層析(以己烷中之0-35%醋酸乙酯梯度液溶離)純化,而得產物,為E與Z異構物之混合物(246毫克,42%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.41-7.27 (m, 5H), 6.70-6.58 (m, 0.3H (E)), 6.38 (dt, 0.7H (Z)), 5.50-5.30 (m, 1H), 5.14 (s, 2H), 3.79-3.11 (m, 5H), 2.27-2.06 (m, 1H), 1.90-1.70 (m, 1H);MS (ES):279 (M+Na).
步驟 4 : 3-2- 氰基 -1-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 乙基四氫吡咯 -1- 羧酸苄酯
於3-[(E)-2-氰基乙烯基]四氫吡咯-1-羧酸苄酯與3-[(Z)-2-氰基乙烯基]四氫吡咯-1-羧酸苄酯(241毫克,0.940毫莫耳)及DBU (234微升,1.57毫莫耳)在ACN (13毫升)中之混合物內,添加4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(250毫克,0.78毫莫耳)。將混合物於環境溫度下攪拌3小時。於真空中移除溶劑。使所形成之殘留物溶於醋酸乙酯中,並相繼以1N HCl、水、飽和NaHCO3及鹽水洗滌有機層。使經洗滌之溶液以硫酸鈉脫水乾燥,並於真空中移除溶劑。經由急驟式管柱層析(以己烷中之0-100% [5% MeOH/DCM]梯度液溶離)之純化,獲得產物,為非對映異構物之混合物(400毫克,89%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3, 非對映異構物之混合物):δ8.85 (s, 1H), 8.35-8.28 (m, 2H), 7.42-7.25 (m, 6H), 6.80-6.76 (m, 1H), 5.69-5.66 (m, 2H), 5.15-5.04 (m, 2H), 4.46-4.32 (m, 1H), 3.84-3.84 (m, 6H), 3.54 (t, 2H), 2.26-2.13 (m, 1H), 1.84-1.54 (m, 2H), 0.95-0.89 (m, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):572 (M+H).
步驟 5. 3- 四氫吡咯 -3- 基 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈
使3-2-氰基-1-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙基四氫吡咯-1-羧酸苄酯(161毫克,0.282毫莫耳)溶於甲醇(5毫升)中,並添加催化量之5% Pd-C。將此懸浮液於環境溫度及由氣瓶所提供之氫大氣下攪拌1小時,接著添加催化量之10% Pd-C,並將反應物於由氣瓶所提供之氫大氣下攪拌2小時。然後過濾混合物,且經由預備之HPLC/MS (C18,以含有0.15% NH4OH之H2O與ACN梯度液溶離)純化,而得產物,為非對映異構物之混合物(57毫克,46%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3, 非對映異構物之混合物):δ8.84 (s, 1H), 8.34-8.32 (m, 2H), 7.40 (d, 1H), 6.81-6.78 (m, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.38 (dt, 1H), 3.54 (t, 2H), 3.30-1.38 (m, 9H), 0.92 (t, 2H), -0.06 (s, 9H);MS (ES):438 (M+H).
步驟 6 : 3-[1-( 甲磺醯基 ) 四氫吡咯 -3- 基 ]-3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丙腈三氟醋酸鹽
於3-四氫吡咯-3-基-3-[4-(7-{[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基}-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)1H-吡唑-1-基]丙腈(25毫克,0.057毫莫耳)與TEA (10微升,0.074毫莫耳)在DCM (1.0毫升)中之溶液內,在0℃下,添加氯化甲烷磺醯(6微升,0.074毫莫耳)。使反應物達到環境溫度,並攪拌16小時。於真空中移除一半溶劑,並將TFA (1毫升)添加至小玻瓶中。在室溫下攪拌1小時後,於真空中移除溶劑,並將所形成之殘留物在THF (0.5毫升)中重配。於其中,添加6N NaOH (1毫升),且將此溶液攪拌2小時。以五份醋酸乙酯萃取反應混合物。使合併之萃液脫水乾燥(Na2SO4),傾析,及濃縮。使用預備之HPLC/MS (C18,以含有0.1% TFA之H2O與ACN梯度液溶離),以獲得產物(16毫克,57%)。 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO, 非對映異構物之混合物):δ12.69 (s, 1H), 8.98 (s, 0.5H), 8.95 (s, 0.5H), 8.84 (s, 1H), 8.53-8.51 (m, 1H), 7.80-7.77 (m, 1H), 7.16-7.13 (m, 1H), 4.86-4.75 (m, 1H), 3.55-3.48 (m, 1H), 3.42-3.08 (m, 4H), 2.99-2.91 (m, 1H), 2.90 (s, 1.5H), 2.85 (s, 1.5H), 2.16-2.07 (m, 1H), 1.82-1.70 (m, 1H), 1.64-1.48 (m, 1H);MS (ES):386 (M+H).
實例 743 : N’- 氰基 -4-( 氰基甲基 )-4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 六氫吡啶 -1- 羧醯亞胺醯胺 步驟 1 : 4-( 氰基亞甲基 ) 六氫吡啶 -1- 羧酸第三 - 丁酯
於1.0M第三-丁醇鉀在THF中之溶液(10.1毫升)內,在0℃下,逐滴添加氰基甲基膦酸二乙酯(1.66毫升,0.0102莫耳)在THF (20毫升)中之溶液。使反應保持10分鐘,然後添加至4-酮基-1-六氫吡啶羧酸第三-丁酯(2.00克,0.0100莫耳)在THF (30毫升)中之溶液內,於0℃及氮大氣下攪拌。在添加完成後,移除冷浴,並將反應物於20℃下攪拌1.0小時。LCMS分析顯示所要之產物,且無起始物質殘留。在200 & 230毫微米下,HPLC顯示產物UVmax。將水與EtOAc添加至反應混合物中。分離液相,並以EtOAc萃取水相。以水,然後飽和NaCl洗滌合併之有機相,接著以Na2SO4脫水乾燥,及濃縮至乾涸,以提供2.5克產物,為黃色油。TLC (25% EtOAc/己烷) Rf0.22。使產物於矽膠上藉自動急驟式層析純化。使用40克管柱;流量40毫升/分鐘;[A =己烷] [B = EtOAc]. A,4分鐘;梯度液至20% B,於30分鐘內。收集44毫升溶離份。產物於21-27分鐘內溶離。濃縮溶離份,產生0.67克白色固體。 1H NMR (CDCl3)δ5.19 (s, 1H);3.51 (m, 4H);2.56 (t, 2H);2.33 (t, 2H);1.50 (s, 9H). MS (ES) 245 (M+Na, 弱;基峰M+H-56 = 167).
步驟 2 : 4-( 氰基甲基 )-4-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 六氫吡啶 -1- 羧酸第三 - 丁酯
將4-(1H-吡唑-4-基)-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.840克,2.66毫莫耳)在ACN (20毫升)與DBU (398微升,2.66毫莫耳)之混合物中配成漿液,並添加4-(氰基亞甲基)六氫吡啶-1-羧酸第三-丁酯(0.651克,2.93毫莫耳)。吡唑並未於20℃下溶解,但當混合物加熱至40℃時,溶液形成,歷經1小時。LCMS與HPLC分析顯示約20%轉化成產物。將混合物於40-45℃下攪拌過夜。HPLC顯示60面積%產物。藉由迴轉式蒸發器,於20℃下移除ACN。於所形成之殘留物中,添加飽和NaHCO3與EtOAc。使有機層與更多飽和NaHCO3水溶液一起振盪,接著脫水乾燥(Na2SO4),及旋轉蒸發,獲得1.6克褐色油殘留物。TLC (60% EtOAc/己烷):產物Rf= 0.25。使產物於矽膠上藉自動急驟式層析純化,使用40克管柱,於流量40毫升/分鐘下;[A =己烷] [B = EtOAc]. A,3分鐘;梯度液至100% B,50分鐘。收集44毫升溶離份。產物於24-29分鐘內溶離;吡唑,於39-46分鐘內;及烯烴,於13-15分鐘內。於真空中對適當溶離份移除溶劑,獲得0.27克烯烴;0.30克吡唑;及產量為0.67克之產物,其全部係經單離,為白色固體。 1H NMR (CDCl3)δ8.84 (s, 1H);8.42 (s, 1H);8.33 (s, 1H);7.40 (d, 1H);6.79 (d, 1H);5.67 (s, 2H);3.94 (m, 2H);3.54 (m, 2H);3.07 (m, 2H);2.90 (s, 2H);2.72 (m, 2H);2.08 (m, 2H);1.45 (s, 9H);0.91 (m, 2H);-0.06 (s, 9H). MS (ES) 538 (M+H).
步驟 3 : 4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 六氫吡啶 -4- 基乙腈
使4-(氰基甲基)-4-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]六氫吡啶-1-羧酸第三-丁酯(0.670克,1.24毫莫耳)溶於TFA (5.0毫升,65毫莫耳)中,並攪拌1.3小時。LCMS顯示轉化成羥甲基中間物,M+H 338。濃縮溶液,以移除TFA。將甲醇添加至所形成之殘留物中,並濃縮所形成之混合物。使所形成之殘留物溶於甲醇(10毫升)中,並添加水中之15.0M氫氧化銨(1.66毫升)。將所形成之溶液攪拌2小時。LCMS與HPLC分析顯示去除保護完成。濃縮混合物。將甲苯添加至所形成之殘留物中,且濃縮所形成之混合物,以提供白色半固體。將大部份此中間產物用於下一步驟。使其餘藉預備之HPLC純化,使用30毫米x 100毫米,C18管柱;8% ACN-H2O (0.1% NH4OH),1.0分鐘,在6分鐘下至27%;60毫升/分鐘;偵測器設定於m/z 308下;滯留時間5.4分鐘。合併含有純產物之管件,並凍乾,獲得13.6毫克產物。 1H NMR (d6-DMSO)δ12.07 (s, 1H);8.68 (s, 1H);8.62 (s, 1H);8.36 (s, 1H);7.54 (d, 1H);7.00 (d, 1H);3.16 (s, 2H);2.87 (m, 2H);2.55 (m, 4H);1.94 (m, 2H). MS (ES) 308 (M+H).
步驟 4 : N- 氰基 -4-( 氰基甲基 )-4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ]- 六氫吡啶 -1- 碳醯亞胺基硫代酸甲酯
於20℃下,使4-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]六氫吡啶-4-基乙腈(361毫克,1.17毫莫耳)與碳酸N-氰基-S,S’-二甲基二硫醯亞胺酯(344毫克,2.35毫莫耳)溶於異丙醇(2.5毫升)與DMSO (2.5毫升)中。於16小時反應時間後,LCMS分析顯示一部份產物存在,M+H 406;試劑,M+H 147;及六氫吡啶,M+H 308。HPLC分析顯示約2%反應。HPLC方法為:Zorbax SB C18,5微米,15公分,35℃,流量1.2毫升/分鐘,5% ACN-H2O (0.05% TFA),1.5分鐘,至100% ACN,於15.0分鐘內;偵測器設定在324、225及265毫微米下。起始物質之滯留時間為4.9分鐘(UV極大值224、262、292 & 325毫微米);產物,6.5分鐘(UV極大值226、262、290 & 324毫微米);及試劑,7.7分鐘(UV極大值265毫微米)。於產物中,添加TEA (327微升,2.35毫莫耳),並將所形成之混合物在室溫下攪拌。在攪拌3小時後,HPLC與LCMS分析顯示60%反應。藉預備之HPLC單離產物與未反應之六氫吡啶,使用30毫米x 100毫米,C18管柱;5% ACN-H2O (0.1% TFA),1.0分鐘,於6分鐘下至35%;60毫升/分鐘;偵測器設定在326毫微米下。關於產物之滯留時間為5.9分鐘;而關於起始六氫吡啶為3.5-4.3分鐘。使產物凍乾,產生301毫克白色固體TFA鹽。 1H NMR (d6-DMSO)δ12.85 (s, 1H);9.01 (s, 1H);8.90 (s, 1H);8.59 (s, 1H);7.85 (m, 1H);7.30 (m, 1H);4.23 (m, 2H);3.35 (m, 2H);3.30 (s, 2H);2.78 (m, 2H);2.68 (s, 3H);2.16 (m, 2H). MS (ES) 406 (M+H).
步驟 5 : N’- 氰基 -4-( 氰基甲基 )-4-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 六氫吡啶 -1- 羧醯亞胺醯胺
使N-氰基-4-(氰基甲基)-4-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-六氫吡啶-1-碳醯亞胺基硫代酸甲酯(41.3毫克,0.102毫莫耳) (53毫克,TFA鹽)溶於異丙醇中之2.0M氨(4.00毫升)內。將所形成之混合物在微波反應器中加熱至100℃,歷經1小時。藉由HPLC與LCMS之分析顯示60%反應,獲得預期之M+H 375 (50面積%)。於此混合物中,添加2毫升7N NH3/MeOH。將所形成之混合物在120℃下加熱一小時。HPLC與LCMS分析顯示無殘留之起始物質。使反應混合物於迴轉轉蒸發器上濃縮。將產物藉由預備之HPLC MS單離,使用30毫米x 100毫米,C18管柱,以溶劑梯度液溶離;10% ACN-H2O (0.1% TFA),1.5分鐘,在6分鐘下至30%;60毫升/分鐘;偵測器設定於m/z 375下;滯留時間4.7分鐘。使溶離物凍乾,產生11.7毫克產物TFA鹽,為白色固體。 1H NMR (d6-DMSO)δ12.69 (s, 1H, NH);8.92 (s, 1H);8.81 (s, 1H);8.51 (s, 1H);7.75 (m, 1H);7.22 (m, 1H);7.18 (s, 2H, NH2);3.84 (m, 2H);3.23 (s, 2H);2.99 (m, 2H);2.60 (m, 2H);1.97 (m, 2H). MS (ES) 375 (M+H).
實例 744 : 4-1-[2,2,2- 三氟 -1-(1H- 咪唑 -2- 基甲基 ) 乙基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 步驟 1 : (3R)-4,4,4- 三氟 -3-[4-(7-[2-( 三甲基矽烷基 ) 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁醛 於(3R)-4,4,4-三氟-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈(1.06克,0.00243莫耳) (參閱實例93步驟1)在DCM (10毫升,0.2莫耳)中之-70℃溶液內,添加DCM中之1.0M氫化二異丁基鋁(4.8毫升)。將所形成之混合物攪拌3小時,並在此時間間隔期間,使其溫熱,從-70至-25℃,然後使反應物冷卻回復於-70℃下。添加甲醇(1.5毫升,0.037莫耳),接著為水中之2.0M HCl (15毫升)。然後將不溶性物質自反應混合物過濾。相繼以:水中之2.0M HCl、水及飽和NaCl水溶液,洗滌有機濾液。使經洗滌之有機相以硫酸鈉脫水乾燥,並使用迴轉式蒸發器濃縮,獲得0.58克粗產物,為淡黃色泡沫物/固體。使粗產物以0-80%醋酸乙酯/己烷層析,獲得經純化之產物(0.9克),為淡橘色油(47%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ9.85 (1H, s);8.95 (1H, s);8.5 (1H, s);8.4 (1H, s);7.5 (1H, d);6.85 (1H, d);5.75 (2H, s);5.5 (1H, m);4.0 (1H, dd);3.6 (2H, t);3.3 (1H, dd);1.99 (2H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H):440.
步驟 2 : 4-1-[2,2,2- 三氟 -1-(1H- 咪唑 -2- 基甲基 ) 乙基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -7-[2-( 三甲基矽烷基 )- 乙氧基 ] 甲基 -7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 使4,4,4-三氟-3-[4-(7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁醛(0.138克,0.000314莫耳)、甲醇中之7.0M氨(1毫升)、乙二醛(0.5毫升,0.004莫耳)及醋酸(20微升,0.0004莫耳)在甲醇(2毫升,0.05莫耳)中之溶液,於100瓦特上,在80℃下微波60分鐘。在微波反應之後,添加醋酸乙酯/水。分離有機相,並以飽和NaHCO3與飽和NaCl洗滌。使經洗滌之有機相脫水乾燥,及濃縮(迴轉式蒸發器),獲得196毫克粗產物,為橘色玻璃態物質。使粗產物藉層析純化,使用0-100%醋酸乙酯/己烷,獲得57毫克經純化之產物,為灰白色固體(38%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.91 (1H, s);8.4 (1H, s);8.2 (1H, s);7.5 (1H, d);7.0 (2H, s);6.83 (1H, d);5.75 (2H, s);5.62 (1H, m);4.15 (1H, dd);3.8 (1H, dd);3.6 (2H, t);1.99 (2H, t);0.0 (9H, s). MS (M+H):478.
步驟 3 : 4-1-[2,2,2- 三氟 -1-(1H- 咪唑 -2- 基甲基 ) 乙基 ]-1H- 吡唑 -4- 基 -7H- 吡咯并 [2,3-d]- 嘧啶
將4-1-[2,2,2-三氟-1-(1H-咪唑-2-基甲基)乙基]-1H-吡唑-4-基-7-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.055克,0.12毫莫耳)在1,2-二氯-乙烷(1毫升,10毫莫耳)與TFA (0.5毫升,6毫莫耳)中之溶液攪拌過夜。濃縮反應物,以提供橘色油。將油在甲醇(1毫升,20毫莫耳)與水中之8.0M氫氧化銨(1毫升)攪拌4小時。然後濃縮此混合物,以提供粗產物,為橘色玻璃態物質/固體。使粗產物藉預備之HPLC (pH 10)純化,獲得28毫克經純化之產物,為無色玻璃態物質,將其以2-甲氧基-2-甲基丙烷(1毫升,8毫莫耳)研製,接著過濾,且洗滌,以提供15毫克產物,為白色固體(38%產率),然後使其在室溫-50℃下乾燥3小時。 1H NMR (400 MHz, DMSO):δ12.13 (1H, s);11.89 (1H, s);8.65 (1H, s);8.37 (1H, s);7.6 (1H, d);6.95 (1H, d);6.92 (1H, d);5.91 (1H, m);3.78 (1H, dd);3.47 (H, dd). MS (M+H):348.
實例 745 : 4-(1-(1R)-2,2,2- 三氟 -1-[(4- 甲基 -1,3- 噻唑 -2- 基 ) 甲基 ] 乙基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 步驟 1 : (3R)-4,4,4- 三氟 -3-[4-(7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4- 基 )-1H- 吡唑 -1- 基 ] 丁烷 - 硫醯胺 將五硫化磷(0.46克,1.0毫莫耳)在乙醇(0.5毫升,8毫莫耳)中之懸浮液攪拌1小時。添加(3R)-4,4,4-三氟-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁烷-腈(0.15克,0.50毫莫耳) (參閱實例93),並將所形成之混合物在80℃下,於密封小玻瓶中加熱0.5小時,於此段期間內,反應混合物變成黃色溶液。將反應物加熱過夜。然後使反應物冷卻至室溫。將水(1克,60毫莫耳)與醋酸乙酯添加至混合物中。分離有機相,並以飽和NaHCO3與飽和NaCl水溶液洗滌。接著使經洗滌之有機相脫水乾燥,及濃縮,獲得387毫克粗產物,為白色玻璃態物質/油。使粗產物以0-10% MeOH/DCM,0-1% NH4OH層析,獲得0.13克經純化之產物,為白色固體(76%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ8.7 (1H, s);8.5 (1H, s);8.3 (1H, s);7.4 (1H, d);7.06.75 (1H, d);5.82 (1H, m);3.75 (1H, dd);3.2 (1H, dd). MS (M+H):341. 將(3R)-4,4,4-三氟-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁烷硫醯胺(0.038克,0.00011莫耳)、氯丙酮(15微升,0.00019莫耳)在乙醇(1毫升,0.02莫耳)與1,2-二氯乙烷(1毫升,0.01莫耳)中之懸浮液加熱至回流過夜。然後過濾此反應混合物,以移除不溶性物質。使濾液溶於MeOH (1毫升)與DMF (1毫升)中,並藉預備之HPLC,在pH 10下純化,以提供6毫克經純化之產物,為無色玻璃態物質/油,接著將其以MTBE/己烷研製,並使其於40℃下乾燥過夜,獲得5.2毫克經純化之產物,為灰白色固體(13%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ10.11 (1H, s);8.88 (1H, s);8.42 (1H, s);8.38 (1H, s);7.45 (1H, d);6.79 (1H, s);6.65 (1H, d);5.41 (1H, m);4.15 (1H, dd);3.75 (H, dd);2.18 (3H, s). MS (M+H):379.
實例 A :活體外 JAK 激酶檢測
本文之化合物係根據下文Park等人,
Analytical Biochemistry 1999
, 269, 94-104中所述之活體外檢測,測試JAK標的之抑制活性。具有N-末端His標記之人類JAK1 (a.a. 837-1142), Jak2 (a.a. 828-1132)及Jak3 (a.a. 781-1124)催化功能部位,係使用桿狀病毒表現於昆蟲細胞中,並經純化。JAK1, JAK2或JAK3之催化活性係藉由度量經生物素化肽之磷醯化作用而進行檢測。經磷醯基化之肽係藉由均勻時間解析螢光(HTRF)偵測。化合物之IC50係對各激酶,在含有該酵素、ATP及500 nM肽於具有100 mM NaCl, 5 mM DTT及0.1毫克/毫升(0.01%) BSA之50 mM Tris (pH 7.8)緩衝劑中之反應物內度量。於反應物中之ATP濃度對Jak1為90μM,對Jak2為30μM,及對Jak3為3μM。反應係在室溫下進行1小時,然後以20微升45 mM EDTA, 300 nM SA-APC, 6 nM Eu-Py20在檢測緩衝液(Perkin Elmer, Boston, MA)中使其停止。對銪標識抗體之結合係進行40分鐘,且HTRF信號係在融合板讀取器(Perkin Elmer, Boston, MA)上度量。對任何上文所提及JAK標的具有IC50為10μM或較低之化合物,係被認為是活性的。
實例 B :細胞檢測
一或多種本文之化合物係根據至少一種下述細胞檢測,測試對JAK標的之抑制活性。 將依賴細胞活素且因此是JAK/STAT訊息轉導以供生長之癌細胞系,於每井6000個細胞(96井板格式)下,覆蓋在RPMI 1640, 10% FBS及1毫微克/毫升適當細胞活素中。將化合物添加至DMSO/培養基(最後濃度0.2% DMSO)中之細胞內,並在37℃,5% CO2下培養72小時。化合物對細胞存活力之作用係使用CellTiter-Glo發光細胞存活力檢測(Promega),接著為TopCount (Perkin Elmer, Boston, MA)定量進行評估。化合物之潛在標的外作用係使用具有相同檢測示值讀數之非JAK驅動之細胞系平行度量。具有IC50為10μM或較低,且對JAK驅動之增生具有選擇性之化合物,係被認為是活性的。所有實驗係重複進行。 亦可使用上文細胞系,以檢視化合物對於JAK激酶或潛在下游受質譬如STAT蛋白質、Akt、Shp2或Erk之磷醯化之作用。此等實驗可以下述方式進行,在過夜細胞活素飢餓後,接著為與化合物之短暫預培養(2小時或較低),及大約1小時或較低之細胞活素刺激。然後,自細胞萃取蛋白質,並藉由熟練此藝者所熟悉之技術分析,包括Western氏沾吸或ELISA,使用可在經磷醯基化與總蛋白質之間作區別之抗體。此等實驗可利用正常或癌細胞,以研究化合物對於腫瘤細胞存活生物學或對於炎性疾病介體之活性。例如,關於後者,可使用細胞活素,譬如IL-6、IL-12、IL-23或IFN,以刺激JAK活化作用,而造成STAT蛋白質之磷醯化作用,及潛在地造成蛋白質譬如IL-17之轉錄作用形態(藉由陣列或qPCR技術評估)或生產及/或分泌。化合物抑制此等細胞活素所媒介作用之能力,可使用對熟練此藝者所常用之技術度量。 本文之化合物亦可在經設計以評估其抵抗突變JAK (例如在髓樣增生病症中所發現之JAK2V617F突變)之功效與活性之細胞模式中測試。此等實驗經常利用血液學家系之細胞活素依賴性細胞(例如BaF/3),野生型或突變JAK激酶係以異位方式表現於其中(James, C.等人,
Nature
434:1144-1148;Staerk, J.等人, JBC 280:41893-41899)。終點包括化合物對於細胞存活率,增生,及經磷醯基化之JAK、STAT、Akt或Erk蛋白質之作用。 本文之某些化合物已被或可被評估關於其抑制T-細胞增生之活性。譬如,檢測可被視為第二個細胞活素(意即JAK)驅動之增生檢測,以及免疫壓抑或免疫活化作用之抑制之過分簡化檢測。下述為此種實驗可如何進行之簡短概述。末梢血液單核細胞(PBMC)係使用Ficoll Hypaque分離方法,製自人類全血液試樣,而T-細胞(離份2000)可藉由淘出而得自PBMC。剛單離之人類T-細胞可被保持在培養基(RPMI 1640,經補充10%牛胎兒血清, 100 U/毫升青黴素, 100微克/毫升鏈黴素)中,在2 x 106個細胞/毫升之密度下,在37℃下,歷經高達2天。關於IL-2刺激之細胞增生分析,係首先將T-細胞以植物血球凝集素(PHA),在最後濃度10微克/毫升下處理72小時。在以PBS洗滌一次後,將6000個細胞/井覆蓋於96-井板中,並以化合物於不同濃度下,在培養基中,於100 U/毫升人類IL-2 (ProSpec-Tany TechnoGene;Rehovot, Israel)存在下處理。將板在37℃下培養72小時,並使用CellTiter-Glo發光試劑,按照製造者建議之擬案(Promega;Madison, WI)評估增生指數。
實例 C :活體內抗腫瘤功效
本文之化合物可在人類腫瘤異種移植物模式中,於免疫受到危害之老鼠中評估。例如,可使用INA-6漿細胞腫瘤細胞系之生瘤變種,以皮下方式接種SCID老鼠(Burger, R.等人,
Hematol J.
2:42-53, 2001)。帶有腫瘤之動物可接著被隨機分成藥物或媒劑處理組,並可將不同劑量之化合物藉任何數目之常用途徑投予,包括口服、腹膜腔內或使用可植入泵之連續灌注。腫瘤生長係隨著時間使用測徑器追蹤。再者,腫瘤試樣可在治療起始後之任何時間下採集,以供如上文所述(實例B)之分析,以評估化合物對於JAK活性與下游發出訊息途徑之作用。此外,化合物之選擇性可使用異種移植腫瘤模式評估,其係藉由其他已知激酶(例如Bcr-Abl)驅動,譬如K562腫瘤模式。
實例 D :老鼠皮膚接觸遲發過敏性回應試驗
本文之化合物亦可經測試關於其在T-細胞驅動之老鼠遲發過敏性試驗模式中(抑制JAK標的)之功效。老鼠皮膚接觸遲發型過敏性(DTH)回應係被認為是臨床接觸性皮膚炎,及皮膚之其他T-淋巴細胞所媒介免疫病症譬如牛皮癬之有效模式(
現代免疫
, 1998年1月;19 (1):37-44)。老鼠DTH係擔負關於牛皮癬之多重特徵,包括免疫浸潤,伴隨增加炎性細胞活素,及角質細胞過度增生。再者,於臨床上有效治療牛皮癬之許多藥劑種類,亦為老鼠中DTH回應之有效抑制劑(藥劑作用, 1993年1月;38 (1-2):116-21)。 於第0與1天時,對Balb/c老鼠之經刮毛腹部以局部塗敷抗原2,4-二硝基氟基苯(DNFB)使其敏化。於第5天時,使用工程師之測微計度量耳朵厚度。記錄此項度量值,並作為基線使用。然後,將動物兩耳藉由局部塗敷DNFB,以總共20微升(10微升於內部耳翼,及10微升於外部耳翼),在0.2%之濃度下激發。於激發後二十四至七十二小時,再一次度量耳朵。以待測化合物之治療係在整個敏化作用與激發期(第1至7天)或在激發之前及在整個激發期(通常為第4天下午至第7天)給予。待測化合物(於不同濃度中)之治療,係無論是以系統方式或局部方式(局部塗敷治療劑至耳朵)投予。待測化合物之功效,係與未使用該治療之狀況作比較,藉由降低耳朵腫脹而顯示。會造成降低20%或更多之化合物,係被認為是有效的。在一些實驗中,老鼠係被激發但未被敏化(負對照組)。 待測化合物之抑制作用(抑制JAK-STAT途徑之活化作用)可藉由免疫組織化學分析確認。JAK-STAT途徑之活化作用會造成功能性轉錄因子之形成與移位作用。再者,免疫細胞之流入量與增加之角質細胞增生,亦應在耳朵中提供獨特表現作用形態改變,其可經研究與定量。使已經福馬林固定且經石蠟包埋之耳朵切片(在DTH模式中,於激發期後採集)接受免疫組織化學分析,使用會專一性地與經磷醯基化之STAT3 交互作用之抗體(無性繁殖系58E12, 細胞發出訊息技術)。在DTH模式中,將老鼠耳朵以待測化合物、媒劑或***(一種對牛皮癬臨床上有效之治療劑)處理,或未進行任何處理,以供比較。待測化合物與***可於定性地與定量地兩者上,產生類似轉錄改變,且待測化合物與***兩者可降低浸潤細胞之數目。待測化合物之系統性地與局部投藥兩者,可產生抑制作用,意即降低浸潤細胞之數目,及抑制轉錄改變。
實例 E :活體內消炎活性
本文之化合物可以或已經在經設計以複製單一或複雜發炎回應之齧齒動物或非齧齒動物模式中評估。例如,關節炎之齧齒動物模式可用以評估以預防方式或治療方式服用之化合物之治療潛力。此等模式包括但不限於老鼠或大白鼠膠原引致之關節炎、大白鼠佐劑引致之關節炎及膠原抗體引致之關節炎。自身免疫疾病,包括但不限於多發性硬化、第I型糖尿病、葡萄膜視網膜炎、甲狀腺炎、重症肌無力、免疫球蛋白腎病、心肌炎、氣道過敏性(氣喘)、狼瘡或結腸炎,亦可用以評估本文化合物之治療潛力。此等模式係在研究團體中經良好建立,且為熟練此藝者所熟悉(免疫學上之現行擬案, 第3卷, Coligan, J.E.等人, Wiley出版社;
分子生物學方法
:第225卷, 發炎擬案, Winyard, P.G.與Willoughby, D.A., Humana出版社, 2003)。 除了本文中所述者之外,本發明之各種修正,自前文說明,將為熟諳此藝者所顯而易見。此種修正亦意欲落在隨文所附請求項之範圍內。於本申請案中所引述之各參考資料,係以其全文併於本文供參考。