EA034770B1 - Человеческие антитела к pd-1 - Google Patents

Человеческие антитела к pd-1 Download PDF

Info

Publication number
EA034770B1
EA034770B1 EA201691482A EA201691482A EA034770B1 EA 034770 B1 EA034770 B1 EA 034770B1 EA 201691482 A EA201691482 A EA 201691482A EA 201691482 A EA201691482 A EA 201691482A EA 034770 B1 EA034770 B1 EA 034770B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
antibodies
amino acid
antigen
fragment
Prior art date
Application number
EA201691482A
Other languages
English (en)
Other versions
EA034770B8 (ru
EA201691482A1 (ru
Inventor
Николас Дж. Парадопулос
Эндрю Дж. МЕРФИ
Гэвин ТЕРСТОН
Элла Иоффе
Елена Бурова
Original Assignee
Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52462456&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA034770(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201691482A1 publication Critical patent/EA201691482A1/ru
Publication of EA034770B1 publication Critical patent/EA034770B1/ru
Publication of EA034770B8 publication Critical patent/EA034770B8/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

Изобретение относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, специфически связывающемуся с белком программируемой смерти-1 (PD-1) человека, у которого CDR тяжелой цепи имеют последовательности SEQ ID NO: 164, 166, 168, a CDR легкой цепи имеют последовательности SEQ ID NO: 172, 174 и 176, а также к его вариантам. Кроме того, изобретение относится к фармацевтической композиции для ингибирования активности PD-1, нейтрализации активности PD-1 и/или стимуляции активации Т-клеток, которая содержит указанное выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, к выделенной полинуклеотидной молекуле, содержащей полинуклеотидную последовательность, которая кодирует указанное антитело или его фрагменты, к вектору экспрессии, клетке-хозяину, к способу получения антитела или содержащей его фармацевтической композиции, а также к применению указанного антитела или композиции.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к человеческим антителам и антигенсвязывающим фрагментам человеческих антител, которые специфично связываются с иммуномодулирующим рецептором программируемой смерти-1 (PD-1), и терапевтическим и диагностическим способам применения этих антител.
Состояние родственной области техники
Программируемая смерть-1 (PD-1) (также называемый CD279) представляет собой белковый рецептор из 288 аминокислот, экспрессируемый на активированных Т-клетках и В-клетках, естественных клетках-киллерах и моноцитах. PD-1 является членом семейства CD28/CTLA-4 (антигенов цитотоксических Т-лимфоцитов 4)/ICOS (индуцируемых костимуляторов) Т-клеточных со-ингибирующих рецепторов (Chen et al., 2 013, Nat. Rev. Immunol. 13: 227-242). Первичной функцией PD-1 является ослабление иммунного ответа (Riley 2009, Immunol. Rev. 229: 114-125). PD-1 имеет два лиганда, PD-лиганд1 (PD-L1) и PD-L2. PD-L1 (CD274, В7Н1) интенсивно экспрессируется как в лимфоидных, так и нелимфоидных тканях, таких как CD4 и CD8 Т-клетки, клетки линий макрофагов, периферические ткани, а также в опухолевых клетках, клетках, инфицированных вирусами и клетках аутоиммунных тканей. PD-L2 (CD273, B7-DC) имеет более ограниченную экспрессию, чем PD-L1, будучи экспрессируемым в активированных дендритных клетках и макрофагах (Dong et al., 1999, Nature Med.). PD-L1 экспрессируется при большинстве злокачественных новообразованиях человека, включающих меланому, глиому, немелкоклеточный рак легких, плоскоклеточный рак области головы и шеи, лейкемию, рак поджелудочной железы, почечно-клеточную карциному и гепатоклеточную карциному, и может индуцироваться почти при всех типах злокачественных новообразований (Zou and Chen 2008, Nat. Rev. Immunol. 8: 467-77). Связывание PD-1 с его лигандами в результате приводит к пониженной пролиферации Т-клеток и секреции цитокинов, нарушая гуморальные и клеточные иммунные ответы при заболеваниях, таких как злокачественное новообразование, вирусная инфекция и аутоиммунное заболевание. Блокаду связывания PD-1 с обратимой иммуносупрессией исследовали при иммунотерапии аутоиммунных, вирусных и опухолевых заболеваний (Ribas 2012, NEJM 366: 2517-2519; Watanabe et al., 2012, Clin. Dev. Immunol. Volume 2012, Article ID: 269756; Wang et al., 2013, J. Viral Hep. 20: 27-39).
Т-клеточные костимулирующие и со-ингибирующие молекулы (обобщенно называемые косигнальными молекулами) играют решающую роль в регуляции активации Т-клеток, внутригрупповой дифференциации, эффекторной функции и выживаемости (Chen et al., 2013, Nature Rev. Immunol. 13: 227-242). После распознавания когнатных пептид-МНС комплексов на антигенпрезентирующих клетках Тклеточными рецептора, косигнальные рецепторы солокализуются с Т-клеточными рецепторами в иммунном синапсе, где они синергитически взаимодействуют с сигнальным путем TCR, чтобы инициировать или ингибировать активацию и функцию Т-клеток (Flies et al., 2011, Yale J. Biol. Med. 84: 409-421). Окончательный иммунный ответ регулируется балансом между костимулирующими и соингибирующими сигналами (иммунными контрольными точками) (Pardoll 2012, Nature 12: 252-264). PD-1 функционирует в качестве одной такой иммунной контрольной точки при опосредовании толерантности периферических Т-клеток и при предотвращении аутоиммунности. PD-1 связывается с PD-L1 или PD-L2 и ингибирует активацию Т-клеток. Способность PD1 ингибировать активацию Т-клеток используется хроническими вирусными инфекциями и опухолями, чтобы уклониться от иммунного ответа. При хронических вирусных инфекциях, PD-1 интенсивно экспрессируется в вирус-специфичных Тклетках, и эти Т-клетки становятся истощенными с потерей эффекторных функций и пролиферативной способности (Freeman 2008, PNAS 105: 10275-10276). PD-L1 экспрессируется в разнообразных опухолях, и исследования на животных моделях показали, что PD-L1 в опухолях ингибирует активацию Т-клеток и лизис опухолевых клеток и может приводить к увеличенной смерти опухолеспецифичных Т-клеток. Система PD-1:PD-L1 также играет важную роль в индуцировании Т-регуляторного (Treg) развития клеток и в поддержании Treg функции (Francisco et al., 2010, Immunol. Rev. 236: 219-242).
Поскольку PD-1 играет важную роль при аутоиммунности, иммунитете против опухолей и иммунитете против инфекций, он представляет собой идеальную мишень для иммунотерапии. Блокирование PD1 антагонистами, включающими моноклональные антитела, исследовали при терапиях злокачественных новообразований и хронических вирусных инфекциях (Sheridan 2012, Nature Biotechnology 30: 729-730).
Моноклональные антитела к PD-1 известны в данной области и были описаны, например, в патентных публикациях США №№ 8008449, 8168757, 20110008369, 20130017199, 20130022595, и в WO2006121168, WO20091154335, WO2012145493, WO2013014668, WO2009101611, EP2262837 и EP2504028.
Краткое содержание сущности изобретения
Настоящее изобретение предоставляет антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с PD-1. Антитела настоящего изобретения являются применимыми, среди прочего, для целенаправленного действия на Т-клетки, экспрессирующие PD-1, и для модуляции активности PD-1. В некоторых вариантах осуществления, антитела изобретения являются применимыми для ингибирования или нейтрализации активности PD-1 и/или для стимуляции активации Т-клеток, например, при обстоятельствах, где опосредованное Т-клетками уничтожение является благоприятным или желательным. В альтернативных вариантах осуществления, антитела увеличивают связывание и/или активность PD-1, и
- 1 034770 могут применяться для ингибирования активации Т-клеток. Антитела против PD-1 изобретения, или их антигенсвязывающие части, могут быть включены в качестве части мультиспецифической антигенсвязывающей молекулы, например, чтобы модулировать иммунный ответ и/или нацеливать антитела на специфический тип клеток, такой как опухолевая клетка, клетка аутоиммунной ткани или клетка, инфицированная вирусом. Антитела являются применимыми при лечении заболевания или расстройства, такого как злокачественное новообразование, вирусная инфекция и аутоиммунное заболевание.
Антитела изобретения могут быть непроцессированными (например, антитело IgG1 или IgG4) или могут содержать только антигенсвязывающую часть (например, фрагмент Fab, F(ab')2 или scFv), и могут быть модифицированы, чтобы оказывать воздействие на функциональность, например, устранять остаточные эффекторные функции (Reddy et al., 2 000, J. Immunol. 164:192 5-1933). В некоторых вариантах осуществления, антитела могут являться биспецифическими.
В первом аспекте, настоящее изобретение предоставляет изолированные рекомбинантные моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с PD-1. В некоторых вариантах осуществления, антитела являются полностью человеческими. Иллюстративные антитела против PD-1 настоящего изобретения перечислены В табл. 1-3 настоящего описания. В табл. 1 приведены идентификаторы аминокислотных последовательностей вариабельных областей тяжелой цепи (HCVRs), вариабельных областей легкой цепи (LCVRs), определяющих комплементарность областей тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и определяющих комплементарность областей легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3) иллюстративных антител против PD-1. В табл. 2 приведены идентификаторы последовательностей нуклеиновых кислот HCVR, LCVR, HCDR1, HCDR2 HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3 иллюстративных антител против PD-1. В табл. 3 приведены идентификаторы аминокислотных последовательностей последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи иллюстративных антител против PD-1.
Настоящее изобретение предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие HCVR, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1, или, по существу, аналогичную ей последовательность, имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие LCVR, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей LCVR, перечисленных в табл. 1, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие пару аминокислотных последовательностей HCVR и LCVR (HCVR/LCVR), содержащую любую из аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1, в паре любой из аминокислотных последовательностей LCVR, перечисленных в табл. 1. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, настоящее изобретение предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, содержащуюся в любом из иллюстративных антител против PD-1, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления, пару аминокислотных последовательностей
HCVR/LCVR выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/202, 218/202, 226/202, 234/202, 242/202, 250/202, 258/202, 266/202, 274/202, 282/202, 290/202, 298/186, 306/186 и 314/186. В некоторых вариантах осуществления, пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR выбирают из одной из SEQ ID NO: 130/138 (например, H2M7795N), 162/170 (например, H2M7798N), 234/202 (например, Н4хН9048Р), или 314/186 (например, Н4хН9008Р).
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие CDR1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей HCDR1, перечисленных в табл. 1, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие CDR2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей HCDR1, перечисленных в табл. 1, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие CDR3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей HCDR3, перечисленных в табл. 1, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
- 2 034770
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие CDR1 легкой цепи, (LCDR1) содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей LCDR1, перечисленных в табл. 1, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие CDR2 легкой цепи (LCDR2), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей LCDR2, перечисленных в табл. 1, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие CDR3 легкой цепи (LCDR3), содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей LCDR3, перечисленных в табл. 1, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие пару аминокислотных последовательностей HCDR3 и LCDR3 (HCDR3/LCDR3), содержащую любую из аминокислотных последовательностей, перечисленных в табл. 1, в паре любой из аминокислотных последовательностей LCDR3, перечисленных в табл. 1. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, настоящее изобретение предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие пару аминокислотных последовательностей HCDR3/LCDR3, содержащуюся в любом из иллюстративных антител против PD-1, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления, пару аминокислотных последовательностей HCDR3/LCDR3 выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 136/144 (например,. H2M7795N), 168/176 (например, H2M7798N), 240/208 (например, Н4хН9048Р), и 320/192 (например, Н4хН9008Р).
Настоящее изобретение предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей НС, перечисленных в табл. 3, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую, с ней, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 98% или, по меньшей мере, 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из любых аминокислотных последовательностей LC, перечисленных в табл. 3, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие пару аминокислотных последовательностей НС и LC (HC/LC), содержащую любую из аминокислотных последовательностей НС, перечисленных в табл. 3, в паре любой из аминокислотных последовательностей LC, перечисленных в табл. 3. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, настоящее изобретение предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие пару аминокислотных последовательностей HC/LC, содержащуюся в любом из иллюстративных антител против PD-1, перечисленных в табл. 3. В некоторых вариантах осуществления, пару аминокислотных последовательностей HC/LC выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 330/331, 332/333, 334/335, и 336/337.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие набор из шести CDR (т.е., HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3), содержащийся в любом из иллюстративных антител против PD-1, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления, набор аминокислотных последовательностей HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2LCDR3 выбирают из группы, состоящей из SEQ ID NO: 132-134-136-140-142-144 (например, H2M7795N); 164-166-168-172-174-176 (например, H2M7798N); 236-238-240-204-206-208 (например, Н4хН9048Р); и 316-318-320-188-190-192 (например, Н4хН9008Р).
В связанном варианте осуществления, настоящее изобретение предоставляет антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие набор из шести CDR (т.е., HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1LCDR2-LCDR3), содержащийся в паре аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, определяемой любым из иллюстративных антител против PD-1, перечисленных в табл. 1. Например, настоящее изобретение включает антитела, или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие набор аминокислотных последовательностей HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3, содержащийся в паре аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 130/138 (например, H2M7795N); 162/170 (например, H2M7798N); 234/202 (например, Н4хН9048Р); и 314/186 (например, Н4хН9008Р). Методы и технологии для идентификации CDR в аминокислотных последовательностях HCVR и LCVR являются хорошо известными в данной области и могут применяться для идентификации CDR в обозначенных аминокислотных последовательностях HCVR и/или LCVR,
- 3 034770 раскрытых в настоящем описании. Иллюстративные договоренности, которые могут применяться для идентификации границ CDR, включают, например, определение Кабат, определение Хотиа и определение AbM. В целом, определение Кабат основано на вариабельности последовательности, определение Хотиа основано на расположении структурных петлевых областях, и определение AbM является компромиссом между подходами Кабат и Хотиа. См., например, Rabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); и Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9212 (1989). Общественные базы данных также являются доступными для идентификации последовательностей CDR в антителе.
Настоящее изобретение включает антитела против PD-1, имеющую модифицированную схему гликозилирования. В нескольких вариантах осуществления, может применяться модификация для удаления нежелательных участков гликозилирования, или для получения антитела без остатка фукозы, присутствующего в олигосахаридной, например, для увеличения функции антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) (см. Shield et al. (2002) JBC 277:26733). В других применениях, может быть проведена модификация галактозилирования, чтобы модифицировать комплементзависимую цитотоксичность (CDC).
Настоящее изобретение также предоставляет антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые конкурируют за специфическое связывание с PD-1, причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержат CDR из HCVR и CDR из LCVR, где каждая из HCVR и LCVR имеет аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей HCVR и LCVR, перечисленных в табл. 1.
Настоящее изобретение также предоставляет изолированные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые блокируют связывание PD-1 с PD-L1 или PD-L2. В нескольких вариантах осуществления, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые блокируют связывание PD-1 с PD-L1, могут связываться с таким же эпитопом на PD-1, как PD-L1, или могут связываться с эпитопом на PD-1, отличающимся от PD-L1.
В альтернативных вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые стимулируют связывание PD-1 с PD-L1. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет изолированные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с PD-1, где антитела или их антигенсвязывающие фрагменты усиливают связывание PD-1 с PD-L1. В нескольких вариантах осуществления, изолированные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты содержат CDR из HCVR, где HCVR имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 98, и 250; и CDR из LCVR, где LCVR имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, 106, и 202. В нескольких вариантах осуществления, изолированные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты содержат пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2/10 (например, H1M7789N), 98/106 (например, H2M7791N), и 250/202 (например, Н4Н9068Р2).
Настоящее изобретение также предоставляет антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с PD-1 от человека или другого вида. В некоторых вариантах осуществления, антитела могут связываться с PD-1 человека и/или с PD-1 обезьяны.
Настоящее изобретение также предоставляет антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые перекрестно конкурируют за связывание PD-1 с эталонным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, содержащими CDR из HCVR, и CDR из LCVR, где каждая из HCVR и LCVR имеет аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей HCVR и LCVR, перечисленных в табл. 1.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет изолированное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые имеют одну или несколько из следующих характеристик: (а) блокирует связывание PD-1 с PD-L1 или PD-L2; (b) специфически связывается с PD-1 человека и/или PD-1 обезьяны; (с) блокирует PD-1-индуцированную Т-клеточную понижающую регуляцию и оберегает передачу сигналов Т-клеток; (d) подавляет рост опухоли и увеличивает выживаемость у субъектов с раком толстой и ободочной кишки; (е) ингибирует пролиферацию Т-клеток в аналитическом тесте со смешанной реакцией лимфоцитов (MLR); и (f) увеличивает секрецию IL-2 и/или интерферона-гамма в аналитическом тесте MLR.
В нескольких вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут специфически связываться с PD-1 агонистическим образом, т.е., они могут усиливать или стимулировать связывание с PD-1 и/или его активность; в других вариантах осуществления, антитело может специфически связываться с PD-1 антагонистическим образом, т.е., оно может блокировать PD-1 от связывания с его лигандом.
В некоторых вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающие фрагменты настоящего изобретения являются биспецифическими, включающими первую специфичность связывания с PD-1 и вторую специфичность связывания для второго целевого эпитоп. Второй целевой эпитоп может являться еще одним эпитопом на PD-1 или на различных белках. В некоторых вариантах осуществления, целевой эпитоп может находиться на различных клетках, включающих различные Т-клетки, В-клетки, опухоле
- 4 034770 вые клетки, клетки аутоиммунной ткани или клетки, инфицированная вирусом.
Во втором аспекте настоящее изобретение предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела против PD-1 или их части. Например, настоящее изобретение предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любых последовательностей нуклеиновой кислоты HCVR, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей LCVR, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любых последовательностей нуклеиновой кислоты LCVR, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей HCDR1, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCDR1, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей HCDR2, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCDR2, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичной ей последовательности имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей HCDR3, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCDR3, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичной ей последовательности имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей LCDR1, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCDR1, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичной ей последовательности имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей LCDR2, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCDR2, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичной ей последовательности имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей LCDR3, перечисленных в табл. 1; в некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот LCDR3, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичной ей последовательности имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие HCVR, где HCVR содержит набор из трех CDR (т.е., HCDR1-HCDR2-HCDR3), где набор аминокислотных последовательностей HCDR1-HCDR2-HCDR3 является таким, как определено любым из иллюстративных антител против PD-1, перечисленных в табл. 1.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие LCVR, где LCVR содержит набор из трех CDR (т.е., LCDR1-LCDR2-LCDR3), где набор аминокислотных последовательностей LCDR1-LCDR2-LCDR3 является таким, как определено любым из иллюстративных антител против PD-1, перечисленных в табл. 1.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты кодирующ как HCVR, так и LCVR, где HCVR содержит аминокислотную последовательность из любых аминокислотных последовательностей HCVR, перечисленных в табл. 1, и где LCVR содержит аминокислотную по
- 5 034770 следовательность из любых аминокислотных последовательностей LCVR, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты содержит полинуклеотидную последовательность, выбранную из любой последовательности нуклеиновых кислот HCVR, перечисленных в табл. 2, или по существу аналогичной ей последовательности имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности, и полинуклеотидную последовательность, выбранную из любых последовательностей нуклеиновых кислот LCVR, перечисленных в табл. 2, или, по существу, аналогичной ей последовательности имеющую с ней по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности. В некоторых вариантах осуществления в соответствии с этим аспектом изобретения, молекула нуклеиновой кислоты кодирует HCVR и LCVR, где как HCVR, так и LCVR получают из одного и того же антитела против PD-1, приведенного в табл. 1.
Настоящее изобретение предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей тяжелой цепи, перечисленных в табл. 3. Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из аминокислотных последовательностей легкой цепи, перечисленных в табл. 3.
Настоящее изобретение также предоставляет молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие как тяжелую цепь (НС), так и легкую цепь (LC), где НС содержит аминокислотную последовательность из любой из аминокислотных последовательностей НС, перечисленных в табл. 3, и где LC содержит аминокислотную последовательность из любой из аминокислотных последовательностей LC, перечисленных в табл. 3.
В родственном аспекте настоящее изобретение предоставляет рекомбинантные векторы экспрессии, способные к экспрессии полипептида, содержащего вариабельную область тяжелой или легкой цепи антитела против PD-1. Например, настоящее изобретение включает рекомбинантные векторы экспрессии, содержащие любую из молекул нуклеиновой кислоты, указанных выше above, т.е., молекулы нуклеиновой кислоты кодирующие любую из последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, приведенных в табл. 1. Настоящее изобретение также предоставляет рекомбинантные векторы экспрессии, способные к экспрессии полипептида, содержащего тяжелую или легкую цепь антитела против PD-1. Например, настоящее изобретение включает рекомбинантные векторы экспрессии, содержащие любую из молекул нуклеиновой кислоты, указанных выше, т.е., молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любую из последовательностей тяжелой цепи или легкой цепи, приведенных в табл. 3. Также в объем настощего изобретения включены клетки-хозяева, в которые такие векторы были введены, а также способы продуцирования антител или их частей посредством культивирования клеток-хозяев при условиях, обеспечивающих выработку антител или фрагментов антител, и извлечение антител и фрагментов антител, продуцируемых таким образом.
В третьем аспекте настоящее изобретение предоставляет мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы и их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие первую антигенсвязывающую специфичность, которая специфически связывается с PD-1, и вторую антигенсвязывающую специфичность, которая специфически связывается с антигеном, выбранным из группы, состоящей из опухолевого клеточно-специфичного антигена, ткане-специфичного антигена аутоиммунной ткани, специфичного антигена инфицированной клетки, Т-клеточного со-ингибитора, Т-клеточного рецептора, Fc рецептора, PDL1 и PD-1. В некоторых вариантах осуществления, первая антигенсвязывающая специфичность может содержать три CDR, производные из HCVR с аминокислотной последовательностью, выбранной из последовательностей HCVR в табл. 1 и три CDR, производные из LCVR с аминокислотной последовательностью, выбранной из последовательностей LCVR в табл. 1. В одном варианте осуществления, первая антигенсвязывающая специфичность может содержать внеклеточный домен PD-L1. Вторая антигенсвязывающая специфичность может целенаправленно действовать на антиген в той же самой клетке, что и для PD-1, или в другой клетке такого же типа ткани или другого типа ткани. Например, мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы могут связываться с Т-клеткой, где первая антигенсвязывающая специфичность может специфически связываться с PD-1, а вторая антигенсвязывающая специфичность может связывться с Т-клеточным рецептором на Т-клетке. Альтернативно, в еще одном другом варианте осуществления, первая антигенсвязывающая специфичность может специфически связываться с PD-1 на Т-клетке, а вторая антигенсвязывающ специфичность может быть нацелена на антиген/рецептор на Вклетке или макрофаге или антигенпрезентирующей клетке. В некоторых вариантах осуществления, вторая антигенсвязывающая специфичность может быть направлена на антиген, ассоциированный с аутоиммунной тканью. В одном варианте осуществления, первая антигенсвязывающая специфичность может содержать внеклеточный домен PD-L1, а вторая антигенсвязывающая специфичность может связываться с еще одним другим эпитопом на PD-1. В некоторых вариантах осуществления, первая антигенсвязывающая специфичность связывается с PD-1 с более низкой аффинностью, например, с KD, большей чем 10-7 М, большей чем 10-6 М, большей чем 10-5 М или большей чем 10-4 М.
В четвертом аспекте изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, содержащую рекомбинантное человеческое антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с PD-1, и фармацевтически приемлемый носитель. В родственном аспекте, изобретение представляет композицию,
- 6 034770 которая представляет собой комбинацию антитела против PD-1 и второго терапевтического средства. В одном варианте осуществления, второе терапевтическое средство представляет собой любое средство, которое преимущественно комбинируется с антителом против PD-1. Иллюстративные средства, которые могут преимущественно комбинироваться с антителом против PD-1, включают, без ограничения, другие средства, которые связывают и/или модулируют сигнальный путь PD-1 (включающие другие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, и т.д.) и/или средства, которые не связываются непосредственно с PD-1, но тем не менее модулируют активацию иммунных клеток. Дополнительные комбинационные терапии и совместные лекарственные формы, включающие антитела против PD-1 настоящего изобретения, раскрыты еще в других разделах настоящего описания.
В пятом аспекте изобретение предоставляет способы модуляции иммунного ответа у субъекта, способы, включающие введение терапевтически эффективного количества антитела против PD-1 изобретения или его антигенсвязывающего фрагмента субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления изобретение предоставляет способы усиления иммунного ответа у субъекта, способы, включающие введение субъекту эффективного количества антитела изобретения или его фрагмента, которые связываются с PD-1 и блокируют связывание PD-1 с PD-L1. В одном варианте осуществления, изобретение предоставляет способ стимуляции или усиления стимуляции Т-клеток у субъекта. В одном варианте осуществления изобретение предоставляет способы ингибирования Т-регуляторных (Treg) клеток у субъекта, способы, включающие введение терапевтически эффективного количества блокирующего антитела изобретения или его антигенсвязывающего фрагмента субъекту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления субъект, нуждающийся в этом, может страдать от заболевания или расстройства, таких как злокачественное новообразование или вирусная инфекция. В альтернативных вариантах осуществления изобретение предоставляет способы ингибирования или подавления активации Т-клеток у субъекта, способы, включающие введение терапевтически эффективного количества активирующего антитела изобретения или его фрагмента субъекту, нуждающемуся в этом. В одном варианте осуществления субъект может страдать от аутоиммунного заболевания или расстройства.
В шестом аспекте изобретение предоставляет терапевтические способы для лечения заболевания или расстройства, такого как злокачественное новообразование, аутоиммунное заболевание или вирусная инфекция, у субъекта, с использованием антитела против PD-1 или антигенсвязывающей части антитела изобретения, где терапевтические способы включают включают введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, соодержащей антитело или фрагмент антитела изобретения, субъекту, нуждающемуся в этом. Расстройство, подвергаемое лечению, представляет собой любое заболевание или состояние, которое улучшается, облегчается, ингибируется или предотвращается посредством стимуляции или ингибирования активности или сигнального пути PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент изобретения вводят в комбинации со вторым терапевтическим средством субъекту, нуждающемуся в этом. Второе терапевтическое средство может быть выбрано из группы, состоящей из антитела к еще одному другому Т-клеточному соингибитору, антитела к антигену опухолевых клеток, антитела к Т-клеточному рецептору, антитела к Fc рецептору, антитела к эпитопу на клетке, инфицированной вирусом, антитела к антигену аутоиммунной ткани, антитела к PD-L1, цитотоксического средства, средства против злокачественного новообразования, противовирусного лекарственного средства, противовоспалительного лекарственного средства (например, кортикостероидов), химиотерапевтического средства, лучевой терапии, иммуносупрессанта и любых других лекарственных средств или терапий, известных в данной области. В некоторых вариантах осуществления второе терапевтическое средство может представлять собой средство, которое помогает противодействовать или снижать любые возможные побочные эффект (эффекты), ассоциированные с антителом изобретения или его антигенсвязывающим фрагментом, если такие побочные эффект (эффекты) будут иметь место.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы подавления роста опухоли. В некоторых вариантах осуществления, настоящее изобретение предоставляет способы увеличения выживаемости пациентов со злокачественным новообразованием. Примеры злокачественного новообразования включают, но не ограничиваются перечисленным, первичное и/или рецидивирующее злокачественное новообразование, включая рак мозга (например, мультиформную глиобластому), рак легких (например, немелкоклеточный рак легких), плоскоклеточный рак области головы и шеи, почечноклеточную карциному, меланому, множественную миелому, рак простаты и рак толстой кишки. Способы включают введение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество антитела против PD-1 настоящего изобретения в комбинации со вторым терапевтическим средством, выбранным из группы, состоящей из антагониста фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF) (например, афлиберцепта, бевацизумаб), ингибитора ангипоэтина-2 (Ang2) (например, антитела против Ang2, такого как несвакумаб), ингибитора гена активации лимфоцитов 3 (LAG-3), ингибитора антигена цитотоксических Т-лимфоцитов 4 (CTLA-4) (например, ипилимумаб), химиотерапевтического средства и лучевой терапии. Дополнительные примеры дополнительных терапий/терапевтических средств, которые могут применяться в комбинации с антителом против PD-1 изобретения для применения при лечении злокачественного новообразования, описаны где-либо еще в настоящем описании.
- 7 034770
Антитело или его фрагмент могут вводиться подкожно, внутривенно, внутрикожно, внутрибрюшинно, перорально, внутримышечно или интракраниально. Антитело или его фрагмент могут вводиться при дозе, равной от приблизительно 0,1 мг/кг массы тела до приблизительно 100 мг/кг массы тела субъекта.
Настоящее изобретение также включает применение антитела против PD-1 или его антигенсвязывающего фрагмента изобретения в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или расстройства, которое имело бы положительный эффект от блокады или увеличения связывания с PD-1 и/или передачи сигналов.
Другие варианты осуществления станут очевидными из обзора последующего подробного описание.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 представляет собой схематическое изображение биотеста на PD-1 на основе люциферазы, описанного в примере 8 данного документа. Панель А: Неактивные клетки Юркат; Панель В: Клетки Юркат активируются Т-клеточным рецептором (TCR), образующим кластер посредством биспецифического антитела CD3xCD20; Панель С: активация PD-1 ослабляет ответ у активированных клеток Юркат; Панель D: Блокирование PD-1 спасает ответ у активированных клеток Юркат.
Фиг. 2 иллюстрирует рост опухоли и результаты по выживаемости для мышей с имплантированными опухолевыми клетками Colon-26 на День 0 и мышей, прошедших лечение указанными комбинациями молекул посредством инъекции в Дни 3, 6, 10, 13 и 19 (модель опухоли на ранней стадии). График отображает объем опухоли (в мм3) для различных экспериментальных групп при различных временных отметках после имплантации. Верхние стрелки вдоль Х-оси указывают на временной режим лечебных инъекций. mIgG2a представляет собой изотипический контроль IgG2; Fc является человеческим Fc контролем; VEGF-Ловушка представляет собой афлиберцепт; против-PD-r1 представляет собой антитело против мышиного PD-1 клона RPMI-14; против-PD-Lr1 представляет собой моноклональное антитело против PD-L1, описанное в другом разделе настоящего описания.
Фиг. 3 иллюстрирует рост опухоли и результаты по выживаемости для мышей с имплантированными опухолевыми клетками Colon-26 на День 0 и мышей, прошедших лечение указанными комбинациями молекул посредством инъекции в Дни 3, 6, 10, 13 и 19 (модель опухоли на ранней стадии). График отображает объем опухоли (в мм3) индивидуальных мышей в каждой экспериментальной группе в День 28 после имплантаци. mIgG2a представляет собой изотипический контроль IgG2; Fc является человеческим Fc контролем; VEGF-Ловушка представляет собой афлиберцепт; против-PD-r1 представляет собой антитело против мышиного PD-1 клона RPMI-14; против-PD-Lr1 представляет собой моноклональное антитело против PD-L1, описанное в другом разделе настоящего описания.
Подробное описание
Перед тем, как способы настоящего изобретения будут описаны, следует понимать, что данное изобретение не ограничено конкретными способами и описанными экспериментальными условиями, так как такие способы и условия могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, применяется только в целях описания конкркетных вариантах осуществления, и не подразумевается как ограничивающая, так как объем настоящего изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения.
Если не определено иным образом, все технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют такое значение, которое обычно является понятным для рядового специалиста в данной области, к которой принадлежит это изобретение. Несмотря на то, что любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем способам и материалам, которые описаны в данном документе и могут применяться при практической реализации или тестировании настоящего изобретения, сейчас описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации, указанные в данном описании, полностью включены в него посредством ссылки.
Термин PD-1 относится к белку программируемой смерти-1, Т-клеточному соингибитору, также известному как CD279. Аминокислотная последовательность непроцессированного PD-1 предоствлена в GenBank под учетным номером NP 005009,2 и также называется в данном описании SEQ ID NO: 327. Термин PD-1 также включает белковые варианты PD-1, имеющие аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 321, 322, 323, или 324. Термин PD-1 включает рекомбинантный PD-1 или его фрагмент. Термин также охватывает PD-1 или его фрагмент, сочетанный, например, с гистидиновой меткой, мышиным или человеческим Fc или сигнальной последовательностью, такой как ROR1. Например, термин включает последовательности, демонстрируемые SEQ ID NO: 323 или 324, содержащими мышиный Fc (mIgG2a) или человеческий Fc (hIgG1) по С-концу, сочетанный с аминокислотными остатками 25-170 непроцессированного PD-1 с C93S изменением. Белковые варианты, как демонстрирует SEQ ID NO: 321, содержат гистидиновую метку по С-концу, сочетанную с аминокислотными остатками 25-170 непроцессированного PD-1. Если не обозначено, что он принадлежит нечеловеческому виду, термин PD-1 означает PD-1 человека.
PD-1 является членом семейства CD28/CTLA-4/ICOS Т-клеточных соингибиторов. PD-1 представляет собой белок из 288 аминокислот с внеклеточным N-концевым доменом, который является IgV- 8 034770 подобным, трансмембранным доменом и внутриклеточным доменом, содержащим иммунорецепторный ингибиторный (ITIM) мотив на основе тирозина и иммунорецепторный переключающий (ITSM) мотив на основе тирозина (Chattopadhyay et al., 2009, Immunol. Rev.). PD-1 рецептор имеет два лиганда, PDлиганд-1 (PD-L1) и PD-L2.
Термин PD-L1 относится к лиганду рецептора PD-1, также известный как CD274 и В7Н1. Аминокислотная последовательность непроцессированного PD-L1 предоставлена в GenBank под учетным номером NP 054862,1 и также называется в настоящем описании как SEQ ID NO: 328. Термин также охватывает PD-L1 или его фрагмент, сочетанный, например, с гистидиновой меткой, мышиным или человеческим Fc или сигнальной последовательностью, такой как ROR1. Например, термин включает последовательности, иллюстрированные SEQ ID NO: 32 5 или 326, содержащими мышиный Fc (mIgG2a) или человеческий Fc (hIgG1) по С-концу, сочетанные с аминокислотными остатками 19-239 непроцессированного PD-L1. PD-L1 представляет собой белок из 290 кислот с внеклеточным IgV-подобным доменом, трансмембранным доменом и в высокой степени консервативным внутриклеточным доменом из приблизительно 30 аминокислот. PD-L1 конститутивно экспрессируется в многих клетках, таких как антигенпрезентирующие клетки (например, дендритные клетки, макрофаги и В-клетки) и в гемопоэтических и негемопоэтических клетках (например, клетках сосудистого эндотелия, островках Лангерганса и участках с иммунной привилегией). PD-L1 также экспрессируются в самых разнообразиных опухолях, клетках, инфицированных вирусом и аутоиммунной ткани, и является компонентом иммуносупрессорной среды (Ribas 2012, NEJM 366:2517-2519).
Как используют в настоящем описании, термин Т-клеточный соингибитор относится к лиганду и/или рецептору, который модулирует иммунный ответ через активацию или супрессию Т-клеток. термин Т-клеточный со-ингибитор, также известный как Т-клеточная сосигнальная молекула, включает, но не ограничен приведенным, белок гена 3 активации лимфоцитов (LAG-3, также известный как CD223), цитотоксичный антиген-4 Т-лимфоцитов (CTLA-4), и ослабитель В- и Т-лимфоцитов (BTLA), CD-28, 2B4, LY108, Т-клеточный иммуноглобулин и муцин 3(TIM3), Т-клеточный иммунорецептор с иммуноглобулином и ITIM (TIGIT; также известный как VSIG9), ассоциированный с лейкоцитами иммуноглобулин-полобный рецептор 1 (LAIR1; также известный как CD305), индуцируемый Т-клеточный костимулятор (ICOS; также известный как CD278), V-домен Ig супрессора активации Т-клеток (VISTA) и CD160.
Как используют в настоящем описании, термин Fc рецептор относится к белку поверхностного рецептора, обнаруживаемуму на иммунных клетках, включающих В-лимфоциты, естественные клеткикиллеры, макрофаги, базофилы, нейтрофилы и тучные клетки, который имеет специфичность связывания с Fc областью антитела.
Термин Fc рецептор включает, но не ограничен приведенным, Fcy рецептор (например, FcyRI (CD64), FcyRIIA (CD32), FcyRIIB (CD32), FcyRIIIA (CD16a), и FcyRIIIB (CD16b)], Fca рецептор (например, FcaRI или CD89) и Fce рецептор (например, FceRI, и FceRII (CD23)].
Термин антитело, как используют в настоящем описании, предназначено для обозначения иммуноглобулиновых молекул, составленных из четырех полипептидных цепей, двух тяжелых (Н) цепей и двух легких (L) цепей, взаимосвязанных дисульфидными связями (т.е., полных молекул антител), а также их мультимеров (например, IgM) или их антигенсвязывающих фрагментов. Каждая тяжелая цепь составлена из вариабельной области тяжелой цепи (HCVR или VH) и константной области тяжелой цепи (состоящей из доменов СН1, СН2 и СН3). Каждая легкая цепь составлена из вариабельной области легкой цепи (LCVR или VL) и константной области легкой цепи (CL) . Области VH и VL могут быть дополнительно подразделены на области гипервариабельности, называемые областями, определяющими комплементарность (CDR), вперемежку с областями, которые являются более консервативными, называемыми каркасные области (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В некоторых вариантах осуществления изобретения, FR антитела (или антигенсвязывающего фрагмента) могут быть идентичными человеческим эмбриональным последовательностям, или могут быть естественным образом или искусственно модифицированы. Аминокислотная консенсусная последовательность может быть определена на основе сравнительного анализа двух или более CDR. Замена одного или нескольких остатков CDR или пропуск одной или нескольких CDR также являются возможными. В научной литературе были описаны антитела, в которых одна или две CDR могут быть обходиться без связывания. Padlan et al. (1995 FASEB J. 9:133-139) анализировали контактные области между антителами и их антигенами, на основании опубликованных кристаллических структур, и сделали вывод, что только приблизительно от одной пятой до одной трети остатков CDR в действительности контактируют с антигеном. Padlan также обнаружил много антител, в которых одна или две CDR не имели аминокислот в контакте с антигеном (см. также, Vajdos et al., 2002 J Mol. Biol. 320:415-428).
Остатки CDR, не контактирующие с антигеном, могут быть идентифицированы на основании предыдущих исследований (например, остатки Н60-Н65 в CDRH2 часто не требуются), из областей CDR по Кэбат, лежащих вне CDR по Хотиа, посредством молекулярного моделирования и/или эмпирически. Ес- 9 034770 ли CDR или ее остаток (остатки) пропущены, она обычно заменяется на аминокислоту, занимающую соответствующее положение в еще одной последовательности человеческого антитела или консенсусе таких последовательностей. Положения для замены внутри CDR и аминокислоты для замены также могут быть выбраны эмпирически. Эмпирические замены могут являться консервативными или неконсервативными заменами.
Полностью человеческие моноклональные антитела против PD-1, раскрытые в данном описании, могут содержать одну или несколько аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасной и/или вариабельных доменах CDR областей тяжелой и легкой цепи в сравнении с соответствующими эмбриональными последовательностями. Такие мутации могут быть легко установлены посредством сравнения аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном описании с эмбриональными последовательностями, доступными из, например, общедоступных баз данных последовательностей антител. Настоящее изобретение включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые являются производными от любой из аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном описании, где одна или несколько аминокислот внутри одной или нескольких каркасных и/или CDR областей подвергаются мутации до соответствующих остатка (остатков) эмбриональной последовательности, из которой антитело было получено, или до соответствующих остатка (остатков) еще одной человеческой эмбриональной последовательности или до замены консервативной аминокислоты из соттветствующих эмбриональных остатка (остатков) (такие изменения последовательности именуются в данном описании, как эмбриональные мутации). Рядовой специалист в данной области, начиная с последовательностей вариабельных областей тяжелой и легкой цепи, раскрытых в данном описании, сможет легко получить многочисленные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько индивидуальных эмбриональных мутаций или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления, все из каркасных и/или CDR остатков в доменах VH и/или VL подвергаются обратной мутации до остатков, обнаруживаемых в исходной эмбриональной последовательности из которой антитело было получено. В других вариантах осуществления, только некоторые остатки мутируют обратно к исходной эмбриональной последовательности, например, только мутировавшие остатки, обнаруженные в пределах первых 8 аминокислот of FR1 или в пределах последних 8 аминокислот FR4, или только мутировавшие остатки, обнаруженные в пределах CDR1, CDR2 или CDR3. В других вариантах осуществления, один или несколько из каркасных и/или CDR остатков мутируют в соответствующие остатки отличающейся эмбриональной последовательности (т.е., эмбриональной последовательности, которая отличается от эмбриональной последовательности, из которой антитело было первоначально получено). Кроме того, антитела настоящего изобретения могут содержать любую комбинацию из двух или нескольких эмбриональных мутаций в пределах каркасной и/или CDR областей, например, где некоторые индивидуальные остатки мутируют в соответствующий остаток конкретной эмбриональной последовательности, в то время как некоторые другие остатки, которые отличаются от исходной эмбриональной последовательности поддерживаются или мутируют в в соответствующий остаток другой эмбриональной последовательности. Сразу после получения, антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько эмбриональных мутаций, могут быть легко протестированы на одно или несколько желательных свойств, таких как, улучшенная специфичность связывания, увеличенная аффинность связывания, улучшенные или усиленные антагонистические или агонистические биологические свойства (в некоторых случаях), сниженная иммуногенность, и т.д. Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, полученные таким общим способом, охватываются настоящим изобретением.
Настоящее изобретение также включает полностью человеческие моноклональные антитела против PD-1, содержащие варианты любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, раскрытых здест, имеющих одну или несколько консервативных замен. Например, настоящее изобретение включает антитела против PD-1, имеющие аминокислотные последовательности HCVR, LCVR, и/или CDR с, например, 10 или меньше, 8 или меньше, б или меньше, 4 или меньше и т.д. консервативных аминокислотных замен относительно любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR, и/или CDR, раскрытых здесь.
Термин человеческое антитело, как используют в настоящем описании, подразумевает включение антител, имеющих вариабельные и константные области, полученные из человеческих эмбриональных последовательностей иммуноглобулинов. Человеческие mAb изобретения могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые человеческими эмбриональными последовательностями иммуноглобулинов (например, мутации, вводимые посредством случайного или сайт-специфичного мутагенеза in vitro или посредством соматической мутации in vivo), например, в CDR и, конкретно, в CDR3. Однако, термин человеческое антитело, как используют в настоящем описании, не предназначен для включения mAb, в которых последовательности CDR, полученные из эмбриональной линии еще одного вида млекопитающего (например, мыши), были привиты на человеческие последовательности FR. Термин включает антитела, рекомбинантно полученные в млекопитающем, не являющемся человеком, или в клетках млекопитающего, не являющегося человеком. Термин не предназначен для включения антител, изолированных из человеческого субъекта, или генерируемых в нем.
Термин рекомбинантное, как используют в настоящем описании, относится к антителам или их
- 10 034770 антигенсвязывающим фрагментам изобретения, созданным, экспрессированным, изолированным или полученным посредством технологий или способов, известных в области, таких как технология рекомбинантных ДНК, которая включает, например, сплайсинг ДНК и трансгенную экспрессию. Термин относится к антителам, экспрессируемым у млекопитающего, не являющегося человеком (включающего трансгенных нечеловеческих млекопитающих, например, трансгенных мышей), или клеточную (например, в клетках СНО) систему экспрессии, или изолированным из комбинаторной библиотеки рекомбинантных человеческих антител.
Термин мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы, как используют в настоящем описании, относится к биспецифическим, триспецифическим или мультиспецифическим антигенсвязывающим молекулам и их антигенсвязывающим фрагментам. Мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы могут быть специфичными для различных эпитопов одного целевого полипептида или могут содержать антигенсвязывающие домены, специфичные для эпитопов более чем одного целевого полипептида. Мультиспецифическая антигенсвязывающая молекула может представлять собой одиночный мультфункциональный полипептид, или она может являться мультимерным комплексом из двух или более полипептидов, которые ковалентно или нековалентно ассоциированы друг с другом. Термин мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы включает антитела настоящего изобретения, которые могут быть связаны или совместно экспрессируоваться с еще одной функциональной молекулой, например, еще одним пептидом или белком. Например, антитело или его фрагмент могут быть функционально связаны (например, посредством химического сочетания, генетической гибридизации, нековалентной ассоциации или иначе) с одним или несколькими другими молекулярными объектами, такими как белок или его фрагмент, для получения биспецифической или мультиспецифической антигенсвязывающей молекулы со второй специфичностью связывания. В соответствии с настоящим изобретением, термин мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы также включает биспецифические, триспецифические или мультиспецифические антитела или их антигенсвязывающие фрагменты. В некоторых вариантах осуществления, антитело настоящего изобретения является функционально связанным с еще одним антителом или его антигенсвязывающим фрагментом для получения биспецифического антитела со второй специфичностью связывания. Биспецифические и мультиспецифические антитела настоящего изобретения описаны в других разделах настоящего описания.
Термин специфически связывается или специфически связывается с, или т.п., означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, который является относительно стабильным при физиологических условиях. Специфичное связывание может характеризоваться равновесной константой диссоциации, равной, по меньшей мере, приблизительно 1 х 10-8 M или менее (например, более низкая KD ознчает более плотное связывание). Методы определения того, связываются ли две специфически две молекулы, хорошо известны в области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Как описано здесь, антитела идентифицировали посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, BIACORE™ который связывается специфически с PD-1. Более того, мультиспецифические антитела, которые связываются с одним доменом в PD-1 и одним или несколькими дополнительными антигенами или биспецифическая молекла, которая связывается с двумя различными областями PD-1, тем не менее считаются антителами, которые специфически связываются, как используют в настоящем описании.
Термин высокая аффинность антитела относится к mAb, имеющим аффинность связывания с PD1, выражаемую как KD, равную по меньшей мере 10-7 М; предпочтительно 10-8 М; более предпочтительно, 10-9М, даже более предпочтительно 10-10 М, даже более предпочтительно, 10-11 М, измеренную посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, BIACORE™ или ELISA с аффинностью в растворе.
Термин скорость замедления, Koff или kd означает антитело, диссоциирует из PD-1, константой скорости, равной 1 х 10-3 с-1 или менее, предпочтительно 1 х 10-4 с-1 или менее, как определяют поверхностным плазмонным резонансом, например, BIACORE™.
Термины антигенсвязывающая часть антитела, антигенсвязывающий фрагмент антитела, и т.п., как используют в настоящем описании, включают любой природный, ферментативно получаемый, синтетический или генетически сконструированный полипептид или гликопротеин, который специфически связывается с антигеном с образованием комплекса. Термины антигенсвязывающий фрагмент антитела или фрагмент антитела, как используют в настоящем описании, относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность связываться с PD-1.
В конкретных вариантах осуществления, антитело или фрагмент антитела изобретения может быть конъюгирован с фрагментом, таким как лиганд или терапевтический фрагмент (иммуноконъюгат), такой как антибиотик, второе антитело против PD-1 или антитело к еще одному антигену, такому как опухолеспецифичный антиген, антиген аутоиммунной ткани, антиген клетки, инфицированной вирусом, Fc рецептор, Т-клеточный рецептор, или Т-клеточный соингибитор, или иммунотоксин, или любой терапевтический фрагмент, примеимый для лечения заболевания или состояния, включающего злокачественное новообразование, аутоиммунное заболевание или хроническую вирусную инфекцию.
- 11 034770
Изолированное антитело, как используют в настоящем описании, предназначено для обозначения антитела, которое не содержит по существу других антител (Ab), имеющих различные антигенные специфичности (например, изолированное антитело, которое специфически связывается с PD-1, или его фрагмент, по существу не содержит Ab, которые специфически связывают антигены, отличные от PD-1.
Блокирующее антитело или нейтрализующее антитело, как используют в настоящем описании (или антитело, которое нейтрализует активность PD-1 или антагонистическое антитело), предназначено для обозначения антитела, связывание которого с PD-1 приводит к ингибированию, по меньшей мере, одной биологической активности PD-1. Например, антитело изобретения может предотвращать или блокировать связывание PD-1 с PD-L1.
Активирующее антитело или усиливающее антитело, как используют в настоящем описании (или агонистическое антитело), предназначено для обозначения антител, связывание которого с PD-1 приводит к увеличению или стимуляции, по меньшей мере, одной биологической активности of PD-1. Например, антитело изобретения может увеличивать связывание PD-1 с PD-L1.
Термин поверхностный плазмонный резонанс, как используют в настоящем описании, относится к оптическому явлению, которое делает возможным исследование биомолекулярных взаимодействий в режиме реального времени посредством обнаружения изменений концентраций белка в матрице биосенсора, например, используя систему BIACORE™ (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden и Piscataway, N.J.).
Термин KD, как используют в настоящем описании, предназначен для обозначения равновесной константы диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген.
Термин эпитоп относится к антигенной детерминанте, которая взаимодействует с конкретным участком связывания антигена в вариабельной области молекулы антитела, известной как паратоп. Одиночный антиген может иметь более, чем один эпитоп. Таким образом, различные антитела могут связываться с различными областями на антигене и могут иметь различные биологические эффекты. Термин эпитоп также относится к участку на антигене, на который реагируют В- и/или Т-клетки. Он также относится к области антигена, которая связывается антителом. Эпитопы могут быть определены, как структурные или функциональные. Функциональные эпитопы обычно представляют собой подвид структурных эпитопов и имеют такие остатки, которые непосредственно способствуют аффинности взаимодействия. Эпитопы могут также быть конформационными, то есть, состоящими из нелинейных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления, эпитопы могут включать детерминанты, которые являются химически активными поверхностными группировками молекул, таких как аминокислоты, сахарные боковые цепи, фосфорильные группы или сульфонильные группы, и, в некоторых вариантах осуществления, могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики, и/или специфические характеристики заряда.
Термин существенная идентичность или по существу идентичные, когда относят к нуклеиновой кислоте или ее фрагменту, указывает на то, что при оптимальном выравнивании с соответствующими нуклеотидными вставками или делециями с еще одной нуклеиновой кислотой (или ее комплементарной цепью), существует нуклеотидная идентичность последовательности по меньшей мере приблизительно на 90% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95, 96, 97, 98 или 99% нуклеотидных оснований, измеренная посредством любого хорошо известного алгоритма идентичности последовательности, такого как FASTA, BLAST или GAP, как обсуждается ниже. Молекула нуклеиновой кислоты, имеющая существенную идентичность с эталонной молекулой нуклеиновой кислоты, может, в некоторых случаях, кодировать полипептид, имеющий такую же или по существу аналогичную аминокислотную последовательность, как полипептид, кодируемый эталонной молекулой нуклеиновой кислоты.
Применимо к полипептидам, термин существенное сходство или по существу аналогичная означает, что две пептидных последовательности, при оптимальном выравнивании, таком как посредство программ GAP или BESTFIT с использованием гэп-масс по умолчанию, разделяют по меньшей мере 90% идентичности последовательности, даже более предпочтительно по меньшей мере 95, 98 или 99% идентичности последовательности. Предпочтительно, положения остатков, которые не являются идентичными, различаются консервативными заменами аминокислот. Консервативная замена аминокислоты является заменой, при которой аминокислотный остаток заменяется еще одним аминокислотным остатком, имеющим боковую цепь (R группу) с аналогичными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). В целом, консервативная аминокислотная замена не будет существенно изменять функциональные свойства белка. В случаях, где две или несколько аминокислотных последовательностей отличаются друг от друга консервативными заменами, процент или степень сходства могут регулироваться с повышением для коррекции консервативной природы замены. Средства проведения таких регулировок хорошо известны специалистам в области. См., например, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331, которая включена в настоящее описание посредством ссылки. Примеры групп аминокислот, которые имеют боковые цепи со сходными химическими свойствами, включают: 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатические-гидроксильные боковые цепи: серии и треонин; 3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кис- 12 034770 лые боковые цепи: аспартат и глутамат и 7) серосодержащие боковые цепи: цистеин и метионин. Предпочтительными консервативными аминокислотными заменяющими группами являются: валин-лейцинизолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагинглутамин.
Альтернативно консервативная замена представляет собой любое изменение, имеющее положительное значение в матрице лог-подобия РАМ250, раскрытой в Gonnet et al. (1992) Science 256:1443 45, включенной здесь посредством ссылки. Умеренно консервативная замена представляет собой любое изменение, имеющее неотрицательное значение в матрице лог-подобия РАМ250.
Сходство последовательностей для полипептидов обычно измеряют, используя программное обеспечение анализа последовательностей. Программное обеспечение анализа белка совмещает сходные последовательности с использованием измерений сходства, относимого к различным заменам, делециям и другим модификациям, включающим консервативные аминокислотные замены. Например, программное обеспечение GCG содержит программы, такие как GAP и BESTFIT, которые могут применяться с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательностей или идентичности последовательностей между близкородственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды от организмов различных видов или между белком дикого типа и его мутеином. См., например, GCG Version 6,1. Полипептидные последовательности также могут сравниваться с использованием FASTA с параметрами по умолчанию или рекомендованными параметрами; программа в GCG Version 6.1. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) предоставляет выравнивание и процент идентичности последовательностей областей наилучшего перекрывания между запрашиваемой и поисковой последовательностями (Pearson (2000) выше). Еще один предпочтительный алгоритм при сравнении последовательности изобретения с базой данных, содержащей большое число последовательностей от различных организмов, является компьютерная программа BLAST, особенно, BLASTP или TBLASTN, с использованием параметров по умолчанию. См., например, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки.
Фраза терапевтически эффективное количество означает количество, которое производит желательный эффект, для которого его вводят. Точное количество будет зависеть от цели лечения, и будет устанавливаться специалистом в области с использованием известных методов (см., например, Lloyd (1999) Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).
Как используют в настоящем описании, термин субъект относится к животному, предпочтительно, млекопитающему, нуждающемуся в снижении, предотвращении и/или лечении заболевания или расстройства, такого как хроническая вирусная инфекция, злокачественное новообразование или аутоиммунное заболевание.
Как используют в настоящем описании, противопухолевое средство означает любое средство, применимое для лечения злокачественного новообразования, включающего, но не ограниченного перечисленным, цитотоксины и средства, такие как антиметаболиты, алкилирующие средства, антрациклины, антибиотики, антимитотические средства, прокарбазин, гидроксимочевину, аспарагиназу, кортикостероиды, митотан (O,P'-(DDD)), биологические средства (например, антитела и интерфероны) и радиоактивные вещества. Как используют в настоящем описании, цитотоксин или цитотоксическое средство, также относится к химиотерапевтическому средству и означает любое средство, которые оказывает на клетки вредное воздействие. Примеры включают Taxol® (паклитаксел), темозоламид, цитохалазин В, грамицидин D, бромид этидия, эметин, цисплатин, митомицин, этопозид, тенопрзид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи.
Как используют в настоящем описании, термин противирусное средство относится к любому лекарственному средству или терапии, применняемой для лечения, предотвращения, или уменьшения вирусной инфекции у субъекта-хозяина. Термин противовирусное средство включает, но не ограничен приведенным, зидовудин, ламивудин, абакавир, рибавирин, лопинавир, эфавиренц, кобицистат, тенофовир, рилпивирин, анальгетики и кортикостероиды. В контексте настоящего изобретения, вирусные инфекции включают долговременные или хронические инфекции, вызываемые вирусами, включающими, но не ограниченными приведенным, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус гепатита В (HBV), вирус гепатита С (HCV), вирус папилломы человека (HPV), вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCMV) и вирус иммунодефицита обезьяны (SIV).
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты настоящего изобретения специфически связываются с PD-1 и модулируют взаимодействие PD-1 с PD-L1. Антитела против PD-1 могут связываться с PD-1 с высокой аффинностью или с низкой аффинностью. В некоторых вариантах осуществления, антитела настоящего изобретения могут являться блокирующими антителами, где антитела могут связываться с PD1 и блокировать взаимодействие PD-1 с PD-L1. В нескольких вариантах осуществления, блокирующие антитела изобретения могут блокировать связывание PD-1 с PD-L1 и/или стимулировать или усиливать активацию Т-клеток. В нескольких вариантах осуществления, блокирующие антитела могут применяться для стимуляции или усиления иммунного ответа и/или для лечения субъекта, страдающего от злокачест- 13 034770 венного новообразования или хронической вирусной инфекции. Антитела при введении субъекту, нуждающемуся в этом, могут снижать хроническую инфекцию, вызываемую вирусом, таким как HIV, LCMV или HBV у субъекта. Они могут применяться для ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта. Они могут применяться по отдельности или в качестве вспомогательной терапии с другими терапевтическими фрагментами или модальностями, известными в области для лечения злокачественного новообразования или вирусной инфекции.
В других вариантах осуществления антитела настоящего изобретения могут представлять собой активирующие антитела, где антитела могут связываться с PD-1 и усиливать взаимодействие PD-1 и PDL1. В нескольких вариантах осуществления, активирующие антитела могут усиливать связывание PD-1 с PD-L1 и/или ингибировать или подавлять активацию Т-клеток. Активирующие антитела настоящего изобретения могут быть применимыми для ингибирования иммунного ответа у субъекта и/или для лечения аутоиммунного заболевания.
В некоторых вариантах осуществления антитела против PD-1 могут представлять собой мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы, где они содержат первую специфичность связывания с PD1 и вторую специфичность связывания с антигеном, выбранным из группы, состоящей из еще одного Тклеточного соингибитора, антигена аутоиммунной ткани, Т-клеточного рецептора, Fc рецептора, Тклеточного рецептора, PD-L1 и другого эпитопа из PD-1.
В некоторых вариантах осуществления антитела изобретения получают из мышей, иммунизированных первичным иммуногеном, таким как непроцессированный PD-1 [См. GenBank учетный номер NP_005009,2 (SEQ ID NO: 327)] или рекомбинантной формой PD-1 или модифицированными фрагментами PD-1 человека (SEQ ID NO: 321, 32 3 или 324) или модифицированными фрагментами PD-1 обезьяны (SEQ ID NO: 322), с последующей иммунизацией вторичным иммуногеном или иммуногенно активным фрагментом PD-1.
Иммуноген может представлять собой биологически активный и/или иммуногенный фрагмент PD-1 или ДНК, кодирующую его активный фрагмент. Фрагмент может быть получен из N-концевого или Сконцевого домена PD-1. В некоторых вариантах осуществления изобретения, иммуноген является фрагментом PD-1, который находится в интервале аминокислотных остатков 25-170 из SEQ ID NO: 327 с изменением C93S.
Пептиды могут быть модифицированы для включения присоединения или замены некоторых остатков для мечения или для целей конъюгации с молекулами носителями, такими как, KLH. Например, цистеин может быть присоединен либо по N-терминальному или С-терминальному концу пептида, или линкерная последовательность может быть добавлена для получения пептида для конъюгации, например, с KLH для иммунизации.
Непроцессированная аминокислотная последовательность непроцессированного PD-1 человека показана как SEQ ID NO: 327.
В некоторых вариантах осуществления, антитела которые специфически связываются с PD-1, могут быть получены с использованием фрагментов указанных выше областей, или пептидов, которые находятся вне обозначенных областей на приблизительно 5-20 аминокислотных остатков от каждого из, или обоих, N- или С- терминальных концов областей, описанных здесь. В некоторых вариантах осуществления, любая комбинация указанных выше областей или их фрагментов может применяться при получении PD-1-специфичных антител. В некоторых вариантах осуществления, любая одна или несколько из указанных выше областей PD-1, или их фрагментов, может применяться для получения моноспецифических, биспецифических или мультиспецифических антител.
Некоторые антитела против PD-1 настоящего изобретения способны связываться с PD-1 и нейтрализовать его активность, как определяют посредством тестов in vitro или in vivo. Способность антител изобретения связываться с PD-1 и нейтрализовать его активность может быть измерена с использованием любых стандартных методов, известных специалистам в области, включающих тесты на связывание, или тесты на активность, как описано здесь.
Неограничивающие, иллюстративные тесты in vitro для измерения активности связывания иллюстрируются в примерах в настоящем описании. В примере 3, аффиности связывания и кинетические константы человеческих антител против PD-1 для PD-1 человека и PD-1 обезьяны определяли посредством поверхностного плазмонного резонанса и измерения проводили на приборе Biacore 4000 или Т200. В примерах 4 и 5, тесты на блокирование применяли для определения способности антител против PD-1 блокировать PD-L1-связывающую способность PD-1 in vitro. В примере 6, тесты на блокирование применяли для определения перекрестной конкуренции между антителами против PD-1. Пример 7 описывает связывание антител с клетками, сверхэкспрессирующими PD-1. В примере 8, люциферазный тест применяли для определения способности антител против PD-1 антагонизировать сигнальный путь PD1/PD-L1 в Т-клетках.
В некоторых вариантах осуществления, антитела настоящего изобретения способны усиливать или стимулировать активацию Т-клеток in vitro и у субъекта со злокачественным новообразованием или у субъекта, инфицированного вирусом, таким как LCMV. В некоторых вариантах осуществления, антитела настоящего изобретения применяют в комбинации со вторым терапевтическим средством, таким как
- 14 034770 антитело ко второму Т-клеточному соингибитору, для усиления иммунного ответа и ингибирования роста опухоли у субъекта.
Антитела, специфичные к PD-1, могут не содержать дополнительных меток или фрагментов, или они могут содержать N-концевые или С-концевые метку или фрагмент. В одном варианте осуществления, меткой или фрагментом является биотин. В тесте на связывание, положение метки (если она имеется) может определять ориентацию пептида относительно поверхности, над которой пептид связан. Например, если поверхность покрыта авидином, пептид, содержащий N-концевой биотин, будет ориентирован таким образом, что С-концевая часть пептида будет удалена от поверхности. В одном варианте осуществления, метка может представлять собой радионуклид, флуоресцентный краситель или МРТобнаруживаемую метку. В некоторых вариантах осуществления, такие меченые антитела могут применяться в диагностических аналитических тестах, включающих тесты с визуализацией.
Антигенсвязывающие фрагменты антител
Если конкретно не указано иначе, термин антитело, как используют в настоящем описании, следует понимать, как охватывающий молекулы антитела, содержащие две тяжелых цепи иммуноглобулина и две легких цепи иммуноглобулина (т.е., молекулы полного антитела), а также их антигенсвязывающией фрагменты. Термины антигенсвязывающая часть антитела, антигенсвязывающий фрагмент антитела, и т.п, как используют в настоящем описании, включают любой природный, получаемый ферментативно, синтетический или генетически сконструированный полипептид или гликопротеин, который специфически связывается с антигеном с образованием комплекса. Термины антигенсвязывающий фрагмент антитела или фрагмент антитела, как используют в настоящем описании, относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с PD-1. Фрагмент антитела может включать Fab фрагмент, F(ab')2 фрагмент, Fv фрагмент, dAb фрагмент, фрагмент, содержащий CDR, или изолированную CDR. В некоторых вариантах осуществления, термин антигенсвязывающий фрагмент относится к полипептидному фрагменту мультиспецифической антигенсвязывающей молекулы. В таких вариантах осуществления, термин антигенсвязывающий фрагмент включает, например, внеклеточный домен PD-L1, который специфически связывается с PD-1. Антигенсвязывающие фрагменты антител могут быть получены, например, из молекул полного антитела, с использованием любых подходящих стандартных методов, таких как протеолитическое расщепление, или методы рекомбинантной генетической инженерии, включающие манипуляции и экспрессию ДНК, кодирующей вариабельные и (необязательно) константные домены антитела. Такая ДНК является известной и/или легко доступной из, например, коммерческих источников, библиотек ДНК (включающих, например, библиотеки фаг-антитело), или может быть синтезирована. ДНК может быть секвенирована и обработана химически или посредством использования методов молекулярной биологии, например, для расположения одного или нескольких вариабельных и/или константных доменов в подходящей конфигурации, или для введения кодонов, создания цистеиновых остатков, модификации, добавления или делеции аминокислот и т.д.
Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают: (i) Fab фрагменты; (ii) F(ab')2 фрагменты; (iii) Fd фрагменты; (iv) Fv фрагменты; (v) одноцепочечные Fv (scFv) молекулы; (vi) dAb фрагменты; и (vii) минимальные единицы распознавания, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельную область антитела (например, изолированную область, определяющую комплементарность (CDR), такую как CDR3 пептид), или ограниченный пептид FR3-CDR3FR4. Другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфичные антитела, однодоменные антитела, антитела с исключенным доменом, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, минитела, нанотела (например, моновалентные нанотела, бивалентные нанотела, и т.д.), малые модулярные иммунофармацевтические средства (SMIP), и вариабельные IgNAR домены акулы, также охватываются выражением антигенсвязывающий фрагмент, как его используют в настоящем описании.
Антигенсвязывающий фрагмент антитела будет обычно содержать по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может иметь любой размер или аминокислотный состав и будет обычно включать по меньшей мере одну CDR, которая является смежной или находится в рамке с одной или несколькими каркасными последовательностями. В антигенсвязывающих фрагментах, имеющих VH домен, ассоциированный с VL доменом, VH и VL домены могут находиться друг относительно друга в любом подходящем расположении. Например, вариабельная область может быть димерной и содержать димеры VH - VH, VH - VL или VL - VL. Альтернативно, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный VH или VL домен.
В некоторых вариантах осуществления, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать, по меньшей мере, один вариабельный домен, ковалентно связанный, по меньшей мере, с одним константным доменом. Неограничивающие, иллюстративные конфигурации вариабельных и константных доменов, которые могут быть обнаружены в антигенсвязывающем фрагменте антитела настоящего изобретения, включают: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3 ; (vi) VHCh2-Ch3; (vii) Vh-Cl; (viii) Vl-Ch1; (ix) Vl-Ch2; (x) Vl-Ch3; (xi) Vl-Ch1-Ch2; (xii) Vl-Ch1-Ch2-Ch3; (xiii) Vl-Ch2-Ch3; и (xiv) VL-CL. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включающей
- 15 034770 любую из иллюстративных конфигураций, приведенных выше, вариабельные и константные домены могут быть либо непосредственно связаны друг с другом или могут быть связаны посредством полной или частичной шарнирной или линкерной областью. Шарнирная область может состоять по меньшей мере из 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислот, что приводит к гибкой или полугибкой связке между соседними вариабельными и/или константными доменами в единственной полипептидной молекуле. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела настоящего изобретения может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) с любыми конфигурациями вариабельного и константного домена, приведенными выше, в нековалентной ассоциации друг с другом и/или с одним или несколькими мономерными VH или VL доменами (например, посредством дисульфидных связи (связей)).
Что касается молекул полного антитела, антигенсвязывающие фрагменты могут быть моноспецифическими или мультиспецифическими (например, биспецифическими).
Мультиспецифический антигенсвязывающий фрагмент антитела будет обычно содержать, по меньшей мере, два различных вариабельных домена, где каждый вариабельный домен способен к специфичному связыванию с отдельным антигеном или с различными эпитопами на одном и том же антигене. Любой формат мультиспецифического антитела, включающий иллюстративные форматы биспецифического антитела, раскрытые здесь, могут быть адаптированы для применения в контексте антигенсвязывающего фрагмента антитела настоящего изобретения, с использованием рутинных методов, доступных в данной области.
Получение человеческих антител
Способы генерации человеческих антител в трансгенных мышах являются известными в данной области. Любые такие известные способы могут применяться в контексте настоящего изобретения для получения человеческих антител, которые специфически связываются с PD-1.
Иммуноген, содержащий любой из следующих, может применяться для генерации антител к PD-1. В некоторых вариантах осуществления, антитела изобретения получают из мышей, иммунизированных с использованием непроцессированного, нативного PD-1 (См. GenBank учетный номер NP_005009.2) (SEQ ID NO: 327), или с использованием рекомбинантного пептида PD-1. Альтернативно, PD-1 или его фрагмент могут быть получены с использованием стандартных биохимических методов и модифицированы (SEQ ID NO: 321-324) и применяться в качестве иммуногена.
В некоторых вариантах осуществления, иммуноген может представлять собой пептид из Nтерминального или С-терминального конца PD-1. В одном варианте осуществления, иммуноген представляет собой внеклеточный домен или IgV-подобный домен PD-1. В некоторых вариантах осуществления изобретения, иммуноген представляет собой фрагмент PD-1, который находится в приблизительном интервале аминокислотных остатков 25-170 из SEQ ID NO: 327 с изменением C93S.
В нескольких вариантах осуществления, иммуноген может представлять собой рекомбинантный пептид PD-1, экспрессируемый в Е. coli или в любых других эукариотных клетках или клетках млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомяка (СНО).
В некоторых вариантах осуществления, антитела, которые специфически связываются с PD-1, могут быть получены с использованием фрагментов отмеченных выше областей, или пептидов, которые находятся за пределами обозначенных областей на расстоянии приблизительно 5-20 аминокислотных остатков от каждого, или обоих, N- или С-терминальных концов областей, описанных здесь. В некоторых вариантах осуществления, любая комбинация из отмеченных выше областей или их фрагментов может применяться при получении PD-1-специфичных антител.
Применяя технологию VELOCIMMUNE® (см., например, US 6,596,541, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE®) или любой другой известный метод генерации моноклональных антител, первоначально выделяют химерные антитела к PD-1 с высокой аффинностью, имеющие человеческую вариабельную область и мышиную константную область. Технология VELOCIMMUNE® включает генерацию трансгенной мыши, имеющей геном, содержащий вариабельные области человеческих тяжелой и легкой цепей, функционально связанные с эндогенными локусами мышиной константной области, таким образом, что мышь продуцирует антитело, содержащее человеческую вариабельную область и мышиную константную область в ответ на антигенную стимуляцию. ДНК, кодирующую вариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела, выделяют и функционально связывают с ДНК, кодирующей константные области человеческих тяжелой и легкой цепей. ДНК затем экспрессируют в клетке, способной к экспрессии полностью человеческого антитела.
Биоэквиваленты
Антитела против PD-1 и фрагменты антител настоящего изобретения охватывают белки, имеющие аминокислотные последовательности, которые изменяются по сравнению с последовательностями описанных антител, но которые сохраняют способность связываться с PD-1. Такие варианты антител и фрагменты антител содержат одно или несколько дополнений, делеций или замен аминокислот при сравнении с родительской последовательностью, но проявляют биологическую активность, которая является по существу эквивалентной активности описанных антител. Аналогично, последовательности
- 16 034770
ДНК, кодирующие антитела настоящего изобретения, охватывают последовательности, которые содержат одно или несколько дополнений, делеций или замен нуклеотидов при сравнении с раскрытой последовательностью, но которые кодируют антитело или фрагмент антитела, которые по существу являются биоэквивалентными антителу или фрагменту антитела изобретения.
Два антигенсвязывающих белка или антитела считаются биоэквивалентными, если, например, они являются фармацевтическими эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, чья скорость и степень всасывания не показывают значительного различия при введении при одинаковой молярной дозе в сходных экспериментльных условиях, либо однократной дозы или множественных доз. Некоторые антитела будут считаться эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, если они являются эквивалентными по степени их всасывания, но не по их скорости всасывания, и еще могут считаться биоэквивалентными, поскольку такие различия по скорости всасывания являются намеренными и отражаются при мечении, не являются существенными для достижения эффективных концентраций лекарственного средства в организме при, например, хроническом применении, и считаются незначительными в медицинском отношении для конкретного исследуемого лекарственного продукта.
В одном варианте осуществления два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентными, если не существует клинически значимых различий по их безопасности, чистоте или активности.
В одном варианте осуществления два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентными, если пациент модет переключаться один или более раз между эталонным продуктом и биологическим продуктом без ожидаемого увеличения риска неблагоприятных эффектов, включающих клинически значимое изменение иммуногенности, или пониженную эффективность, в сравнении с продолжающейся терапии без такого переключения.
В одном варианте осуществления два антигенсвязывающих белка являются биоэквивалентными, если они оба действуют посредством общего механизма или механизмов действия для состояния или состояний применения, в той степени, в которой такие механизмы являются известными.
Биоэквивалентность может быть продемонстрирована методами in vivo и/или in vitro. Измерения биоэквивалентности включают, например, (а) тест in vivo у людей или других млекопитающих, у которых концентрацию антитела или его метаболитов измеряют в крови, плазме, сыворотке или другой биологической жидкости как функцию от времени; (b) тест in vitro, который коррелировался и являлся обоснованно прогнозирующим данные по биодоступности у человека in vivo; (с) тест in vivo у людей или других млекопитающих, у которых соответствующий острый фармакологический эффект антитела (или его мишени) измеряют как функцию от времени; и (d) хорошо контролируемое клиническое испытание, которое устанавливает безопасность, эффективность действия или биодоступность или биоэквивалентность антитела.
Биоэквивалентные варианты антител изобретения могут быть построены посредством, например, проведения различных замен остатков или последовательностей или делеции терминальных или внутренних остатков или последовательностей, не востребованных для биологической активности. Например, остатки цистеина, не являющиеся существенными для биологической активности, могут быть подвегнуты делеции или заменены на другие аминокислоты, чтобы предотвратить образование ненужных или некорректных внутримолекулярных дисульфидных мостиков при ренатурации. В других контекстах, биоэквивалентные антитела могут включать варианты антител, содержащие аминокислотные изменения, которые модифицируют характеристики гликозилирования антител, например, мутации, которые исключают или удаляют гликозилирование.
Антитела против PD-1, содержащие Fc варианты
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения, предоставлены антитела против PD-1, содержащие Fc домен, содержащий одну или более мутаций, которые усиливают или ослабляют связывание антитела с рецептором FcRn, например, при кислой pH в сравнении с нейтральным pH. Например, настоящее изобретение включает антитела против PD-1, содержащие мутацию в СН2 или СН3 области Fc домена, где мутация (мутации) увелтчивает аффинность Fc домена к FcRn в кислом окружении (например, в эндосоме, где pH находится в интервале от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,0). Такие мутации могут приводить к увеличению периода полужизни антитела в сыворотке, при введении животному. Неограничивающие примеры таких модификаций Fc включают, например, модификацию в положении 250 (например, Е или Q); 250 и 428 (например, L или F); 252 (например, L/Y/F/W или Т), 254 (например, S или Т), и 256 (например, S/R/Q/E/D или Т); или модификацию в положении 428 и/или 433 (например, H/L/R/S/P/Q или K) и/или 434 (например, А, W, H, F или Y [N434A, N434W, N434H, N434F или N434Y]); или модификацию в положении 250 и/или 428; или модификацию в положении 307 или 308 (например, 308F, V308F), и 434. В одном варианте осуществления, модификация включает модификацию 428L (например, M428L) и 434S (например, N434S); 428L, 259I (например, V2 59I), и модификацию 308F (например, V308F); модификацию 433K (например, Н433Ю и 434 (например, 434Y); модификацию 252, 254, и 256 (например, 252Y, 254Т, и 256Е); модификацию 250Q и 428L (например, T250Q и M428L); и модификацию 307 и/или 308 (например, 308F или 308Р). В еще одном другом варианте осуществления, модификация включает модификацию 265А (например, D265A) и/или 297А (например, N297A).
- 17 034770
Например, настоящее изобретение включает антитела против PD-1, содержащие Fc домен, содержащий одну или несколько пар или групп мутаций, выбранных из группы, состоящей из: 250Q и 248L (например, T250Q и M248L); 252Y, 254Т и 256Е (например, M252Y, S254T и Т256Е); 428L и 434S (например, M428L и N434S); 257I и 311I (например, P257I и Q311I); 257I и 434Н (например, P257I и N434H); 376V и 434Н (например, D376V и N434H); 307А, 380А и 434А (например, Т307А, Е380А и N434A); и 433K и 434F (например, Н4331< и N434F). В одном варианте осуществления, настоящее изобретение включает антитела против PD-1, содержащие Fc домен, содержащий мутацию S108P в шарнирной области IgG4 для инициации стабилизации димера. Все возможные комбинации приведенных выше мутаций Fc домена, и другие мутации в вариабельных доменах антитела, раскрытого здесь, подразумеваются в объеме настоящего изобретения.
Настоящее изобретение также включает антитела против PD-1, содержащие химерную константную (CH) область тяжелой цепи, где химерная CH область содержит сегменты, являющиеся производными CH областей из более, чем одного изотипа иммуноглобулина. Например, антитела изобретения могут содержать химерную CH область, содержащую часть СН2 домена или весь СН2 домен, производный от молекулы человеческого IgG1, человеческого IgG2 или человеческого IgG4, в сочетании с частью СН3 домена или всем СН3 доменои, производного от молекулы человеческого IgG1, человеческого IgG2 или человеческого IgG4. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, антитела изобретения содержат химерн CH область имеющ химерную шарнирную область. Например, химерный шарнир может содержать аминокислотную последовательность верхнего шарнира (аминокислотные остатки из положений 216-227 в соответствии с нумерацией EU), производную от шарнирной области человеческого IgG1, человеческого IgG2 или человеческого IgG4, в сочетании с последовательностью нижнего шарнира (аминокислотные остатки из положений 228-236 в соответствии с нумерацией EU) являющейся производной от шарнирной области человеческого IgG1, человеческого IgG2 или человеческ IgG4. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, химерная шарнирная область содержит аминокислотные остатки, производные от верхнего шарнира человеческого IgG1 или человеческого IgG4, и аминокислотные остатки, производные от нижнего шарнира человеческого IgG2. Антитело, содержащее химерную CH область, описанную в данном документе, может, в некоторых вариантах осуществления, проявлять эффекторные функции модифицированного Fc без оказания отрицательного воздействия на терапевтические или фармакокинетические свойства антитела. (См., например, USSN. 14/170,166, поданную 31 января 2014 г., раскрытие которой полностью включено в настоящее описание посредством ссылки).
Биологические характеристики антител
В целом, антитела настоящего изобретения функционируют посредством связывания с PD-1. Настоящее изобретение включает антитела против PD-1 и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают растворимые мономерные или димерные молекулы PD-1 с высокой аффинностью. Например, настоящее изобретение включает антитела и антигенсвязывающие фрагменты антител, которые связывают мономерный PD-1 (например, при 25°С или при 37°С) с KD, меньшей чем приблизительно 50 нМ, измеренной посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания. В некоторых вариантах осуществления, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты связывают мономерный PD-1 с KD, меньшей чем приблизительно 40 нМ, меньшей чем приблизительно 30 нМ, меньшей чем приблизительно 20 нМ, меньшей чем приблизительно 10 нМ, меньшей чем приблизительно 5 нМ, меньшей чем приблизительно 2 нМ или меньшей чем приблизительно 1 нМ, измеренной посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания, или по существу аналогичного теста.
Настоящее изобретение также включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают димерный PD-1 (например, при 25°С или при 37°С) с KD меньшей, чем приблизительно 400 пМ, измеренной посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания. В некоторых вариантах осуществления, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты связывают димерный PD-1 с KD, меньшей чем приблизительно 300 пМ, меньшей чем приблизительно 250 пМ, меньшей чем приблизительно 200 пМ, меньшей чем приблизительно 100 пМ или меньшей чем приблизительно 50 пМ, измеренной посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания, или по существу аналогичного теста.
Настоящее изобретение также включает антитела или их антигенсвязывающие фрагменты которые связывают PD-1 обезьяны (Масаса fascicularis) (например, при 25°С или при 37°С) с KD, меньшей чем приблизительно 35 нМ, измеренной посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания. В некоторых вариантах осуществления, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты связывают PD-1 обезьяны с KD, меньшей чем приблизительно 30 нМ, меньшей чем приблизительно 20 нМ, меньшей чем приблизительно 15 нМ, меньшей чем приблизительно 10 нМ, или меньшей чем приблизительно 5 нМ, измеренной посредством поверхностного плазмонного резонанса, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания, или по существу аналогичного теста.
- 18 034770
Настоящее изобретение также включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают PD-1 с периодом половинной диссоциации (11/2) большим, чем приблизительно 1,1 мин, измеренным посредством поверхностного плазмонного резонанса при 25 или 37°С, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания, или по существу аналогичного теста. В некоторых вариантах осуществления, антитела или антигенсвязывающие фрагменты настоящего изобретения связывают PD-1 с 11/2, большим чем приблизительно 5 мин, большим чем приблизительно 10 мин, большим чем приблизительно 30 мин, большим чем приблизительно 50 мин, большим чем приблизительно 60 мин, большим чем приблизительно 70 мин, большим чем приблизительно 80 мин, большим чем приблизительно 90 мин, большим чем приблизительно 100 мин, большим чем приблизительно 200 мин, большим чем приблизительно 300 мин, большим чем приблизительно 400 мин, большим чем приблизительно 500 мин, большим чем приблизительно 600 мин, большим чем приблизительно 700 мин, большим чем приблизительно 800 мин, большим чем приблизительно 900 мин, большим чем приблизительно 1000 мин или большим чем приблизительно 1200 мин, измеренным посредством поверхностного плазмонного резонанса при 25 или 37°С, например, с использованием формата теста, определенного в примере 3 настоящего описания (например, формат mAb-захвата или антиген-захвата), или по существу аналогичного теста.
Настоящее изобретение также включает антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые блокируют связывание PD-1 с PD-L1 с IC50, меньшей, чем приблизительно 3 нМ, определенной с использованием теста на основе иммуноанализа ELISA, например, как показано в примере 4, или по существу аналогичного теста. Настоящее изобретение также включает антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с PD-1 и усиливают связывание PD-1 с PD-L1.
В нескольких вариантах осуществления антитела настоящего изобретения могут связываться с внеклеточным доменом PD-1 или с фрагментом домена. В нескольких вариантах осуществления антитела настоящего изобретения могут связываться с более, чем одним доменом (кросс-реактивные антитела). В некоторых вариантах осуществления антитела настоящего изобретения могут связываться с эпитопом, расположенным во внеклеточном домене, содержащим аминокислотные остатки 21-171 PD-1 (SEQ ID NO: 327). В одном варианте осуществления антитела могут связываться с эпитопом, содержащим одну или несколько аминокислот, выбранных из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-146 из SEQ ID NO: 321-324.
В некоторых вариантах осуществления антитела настоящего изобретения могут функционировать посредством блокирования или ингибирования PD-L1-связывющей активности, ассоциированной с PD-1 посредством связывания с любой другой областью или фрагментом непроцессированного белка, аминокислотная последовательность которого показана в SEQ ID NO: 327. В некоторых вариантах осуществления, антитела могут ослаблять или модулировать взаимодействие между PD-1 и PD-L1.
В некоторых вариантах осуществления антитела настоящего изобретения могут представлять собой биспецифические антитела. Биспецифические антитела изобретения могут связывать один эпитоп в одном домене и также могут связывать второй эпитоп в другом домене PD-1. В некоторых вариантах осуществления биспецифические антитела изобретения могут связывать два различных эпитопа в одном и том же домене. В одном варианте осуществления мультиспецифическая антигенсвязывающая молекула включает первую специфичность связывания, где первая специфичность связывания включает внеклеточный домен или его фрагмент PD-L1; и вторую специфичность связывания с еще одним эпитопом из PD-1.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет изолированное полностью человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с PD-1, где антитело или его фрагмент проявляет одну или несколько из следующих характеристик: (i) содержит HCVR, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 306 и 314, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (ii) содержит LCVR, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, и 202, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (iii) содержит домен HCDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312, и 320, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере, 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен LCDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192 и 208, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (iv) содержит домен HCDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84,
- 19 034770
100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 2 92, 300, 308 и 316, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен HCDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278, 286, 294, 302, 310 и 318, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен LCDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188 и 204, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере, 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен LCDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, и 206, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (v) представляет собой мультиспецифическую антигенсвязывающую молекулу, содержащую первую специфичность связывания с PD-1 и вторую специфичность связывания с антигеном, выбранным из группы, состоящей из PD-1, опухолеспецифичного антигена, специфичного антигена аутоиммунной ткани, антигена клетки, инфицированной вирусом, различного Т-клеточного соингибитора, Т-клеточного рецептора и Fc рецептора; (vi) связывается с PD-1 человека с KD, равной приблизительно 28 пМ-1,5 мкМ; (vii) связывается с PD-1 обезьяны с KD, равной приблизительно 3 нМ-7,5 мкМ; (viii) блокирует или усливает связывание PD-1 с PD-L1 с IC50 < приблизительно 3,3 нМ; (ix) блокирует PD-1-индуцированную Тклеточную понижающую регуляцию и/или спасает сигнальный путь Т-клеток в тесте с Т-клетками/АРС люциферазным репортером; (х) стимулирует пролиферацию и активность Т-клеток в тесте со смешанной реакцией лимфоцитов (MLR); (xi) индуцирует выработку IL-2 и/или IFNy в аналитическом тесте MLR; и (xii) подавляет рост опухоли и увеличивает выживаемость у субъектов со злокачественным новообразованием.
В одном варианте осуществления, изобретение предоставляет изолированное полностью человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые блокируют связывание PD-1 с PD-L1, где антитело или его фрагмент проявляют одну или несколько из следующих характеристик: (i) содержит HCVR, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 130, 162, 234 и 314, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (ii) содержит LCVR, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 138, 170, 186 и 202, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или, по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (iii) содержит домен HCDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 136, 168, 240 и 320, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или, по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен LCDR3, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 144, 176, 192 и 208, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (iv) содержит домен HCDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 132, 164, 23 6 и 316, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен HCDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 134, 166, 238 и 318, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен LCDR1, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 140, 172, 188 и 204, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен LCDR2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 142, 174, 190 и 206, или по существу аналогичную ей последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; (v) представляет собой мультиспецифическую антигенсвязывающую молекулу, включающую первую специфичность связывания с PD-1 и вторую специфичность связывания с антигеном, выбранным из группы, состоящей из другого эпитопа PD-1, опухолеспецифичного антигена, специфичного антигена аутоиммунной ткани, антигена клетки, инфицированной вирусом, различного Тклеточного соингибитора, Т-клеточного рецептора и Fc рецептора; (vi) связывается с PD-1 человека с Kd<10-9M; (vii) связывается с PD-1 обезьяны с KD<10-8M; (viii) блокирует связывание PD-1 с PD-L1 с
- 20 034770
IC5o^1O'1oM; (ix) блокирует PD-1-индуцированную Т-клеточную понижающую регуляции и/или спасает сигнальный путь Т-клеток в тесте Т-клетки/АРС люциферазный репортер; (х) стимулирует пролиферацию и активность Т-клеток в тесте со смешанной реакцией лимфоцитов (MLR); (xi) индуцирует выработку IL-2 и/или IFNy в аналитическом тесте MLR; и (xii) подавляет рост опухоли и увеличивает выживаемость у субъектов со злокачественным новообразованием.
Антитела настоящего изобретения могут обладать одной или несколькими из указанных выше биологических характеристик, или любыми их комбинациями. Другие биологические характеристики антител настоящего изобретения будут очевидными для рядового специалиста в данной области из обзора настоящего раскрытия, включающего приведенные в нем рабочие
Примеры
Видовая селективность и видовая кросс-реактивность В соответствии с некоторыми вариантами осуществления изобретения, антитела против PD-1 связываются с PD-1 человека, но не связываются с PD-1 от другого вида. Альтернативно, антитела против PD-1 изобретения, в некоторых вариантах осуществления, связываются с PD-1 человека и с PD-1 от одного или нескольких видов, не являющихся человеком. Например, антитела против PD-1 изобретения могут связываться с PD-1 человека и могут связываться или не связываться, в некоторых случаях, с PD-1 от одного или нескольких из мыши, крысы, морской свинки, хомяка, песчанки, свиньи, кошки, собаки, кролика, козы, овцы, коровы, лошади, верблюда, макаки, мартышки, резуса или шимпанзе. В некоторых вариантах осуществления, антитела против PD-1 изобретения могут связываться с PD-1 человекак и PD-1 обезьяны с одинаковыми аффинностями или с различными аффиностями, но не связываться с крысиным и мышиным PD-1.
Картирование эпитопов и родственные технологии Настоящее изобретение включает антитела против PD-1, которые взаимодействуют с одной или несколькими аминокислотами, обнаруженными внутри одного или нескольких доменов молекулы PD-1, включающих, например, внеклеточный (IgV-подобный) домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, содержащий ингибирующий мотив иммунорецептора (ITIM) и переключающий на основе тирозина мотив иммунорецептора (ITSM). Эпитоп, с которым антитела связываются, может состоять из единичной граничащей последовательности из 3 или более (например, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более) аминокислот, расположенных внутри любого из указанных выше доменов молекулы PD-1 (например, линейного эпитопа в домене). Альтернативно, эпитоп может состоять из множества неграничащих аминокислот (или аминокислотных последовательностей), расположенных внутри каждого или обоих из указанных выше доменов молекулы PD-1 (например, конформационного эпитопа).
Различные методы, известные рядовому специалисту в данной области, могут применяться для определения того, взаимодействует ли антитело с одной или несколькими аминокислотами внутри полипептида или белка. Иллюстративные методы включают, например, рутинные тесты перекрестного блокирования, такие как описаны в Antibodies, Harlow и Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY). Другие методы включают анализ мутаций при сканировании аланина, блоттинг-анализ пептидов (Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63), кристаллографические исследования анализа расщепления пептидов и анализ методом ЯМР. В дополнение, могут использоваться методы, такие как иссечение эпитопов, экстракция эпитопов и химическая модификация антигенов (Tomer (2000) Prot. Sci. 9: 487-496). Еще один метод, который может применяться для идентификации аминокислот внутри полипептида, с которым антитело взаимодействует, является обмен водород/дейтерий, обнаруживаемый массспектрометрией. В общих чертах, метод обмена водород/дейтерий включает мечение дейтением белка, представляющего интерес, с последующим связыванием антитела антитело с меченым дейтерием белком. Далее, комплекс белок/антитело переносят в воду и обмениваемые протоны внутри аминокислот, которые защищены комплексом с антителом, претерпевают обратный обмен дейтерия на водород при более медленной скорости, чем обмениваемые протоны, внутри аминокислот, которые не являются частью поверхности раздела фаз. В результате, аминокислоты, которые образуют часть поверхности раздела фаз белок/антитело, могут удерживать дейтерий и, следовательно, проявляют относительно более высокую массу в сравнении с аминокислотами, не включенными в поверхность раздела фаз. После диссоциации антител, целевой белок подвергают расщеплению протеазой, и проводят массспектрометрический анализ, таким образом, отображая меченые дейтерием остатки, которые соответствуют конкретным аминокислотами, с которыми антитело взаимодействует. См., например, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259; Engen и Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A.
Термин эпитоп относится к участку на антигене на который реагируют В- и/или Т-клетки. Вклеточные эпитопы могут быть образованы как из граничащих аминокислот или неграничащих аминокислот, находящиеся рядом посредством третичного складывания белка. Эпитопы, образованные из граничащих аминокислот, обычно сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, в то время, как эпитопы, образованные посредством третичного складывания, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп обычно включает по меньшей мере 3 и более обычно по меньшей мере 5 или 8-10 аминокислот в уникальной пространственной конформации.
Профилирование с помощью модификации (MAP), также известное как профилирование антитела
- 21 034770 на основе структуры антигена (ASAP) представляет собой метод, который категоризирует большое число моноклональных антител (mAb), направленных против одного и того же антигена в соответствии с аналогиями профиля связывания каждого антитела с химически или ферментативно модифицированными поверхностями антигенов (см. US 2004/0101920, специально полностью включенную в данное описание посредством ссылки). Каждая категория может отражать уникальный эпитоп, либо четко отличающийся от эпитопа, представленного другой одной категорией, или частично перекрывающиегося с ним. Эта технология обеспечивает быструю фильтрацию генетически идентичных антител, таким образом, что характеризация может быть сфокусирована на генетически различимых антителах. При применении в скрининге гибридом, MAP может способствовать идентификации редких клонов гибридомы, которые продуцируют mAb, имеющие желательные характеристики. MAP может применяться для сортировки антител изобретения в группы антител, связывающих различные эпитопы.
В некоторых вариантах осуществления антитела против PD-1 или их антигенсвязывающие фрагменты связываются с эпитопом внутри любой одной или нескольких из областей, представленных в PD1, либо в природной форме, как представлено в SEQ ID NO: 327, или полученных рекомбинантно, как представлено в SEQ ID NO: 321-324, или с его фрагментом. В нескольких вариантах осуществления, антитела изобретения связываются с внеклеточной областью, содержащей одну или несколько аминокислот, выбранных из группы, состоящей из аминокислотных остатков 21-171 из PD-1. В нескольких вариантах осуществления, антитела изобретения связываются с внеклеточной областью, содержащей одну или несколько аминокислот, выбранных из группы, состоящей из аминокислотных остатков 1-146 PD-1 обезьяны, как представлено SEQ ID NO: 322.
В некоторых вариантах осуществления антитела изобретения, как показано в табл. 1, взаимодействуют с, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из аминокислотных остатков в интервале от приблизительно положения 21 до приблизительно положения 136 из SEQ ID NO: 327; или аминокислотных остатков в интервале от приблизительно положения 136 до приблизительно положения 171 из SEQ ID NO: 327. Эти области частично представлены в SEQ ID NO: 321-324.
Настоящее изобретение включает антитела против PD-1, которые связываются с одним и тем же эпитопом или частью эпитопа, как любое из конкретных иллюстративных антител, описанных в данном документе в табл. 1, или антитело, имеющее последовательности CDR любого из иллюстративных антител, описанных в табл. 1. Аналогично, настоящее изобретение также включает антитела против PD-1, которые конкурируют за связывание с PD-1 или фрагментом PD-1, с любым из конкретных иллюстративных антител, описанных здесь в табл. 1, или антителом, имеющим последовательности CDR любого из иллюстративных антител, описанных в табл. 1. Например, настоящее изобретение включает антитела против PD-1, которые перекрестно конкурируют за связывание с PD-1 с одним или несколькими антителами, определенными в примере 6 настоящего описания (например, H2aM7788N, H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, Н4Н9057Р2, Н4хН9120Р2, Н4хН9128Р2, Н4Н9019Р, Н4хН9119Р2, Н4хН9135Р2, Н4хН9034Р, H2aM7790N, H4xH9035P, Н4хН9037Р, Н4хН9045Р и H2aM7795N).
Можно легко определить, связывается ли антитело с одним и тем же эпитопом, или конкурирует за связывание с ним, с эталонным антителом против PD-1, посредством использования рутинных методов, известных в данной области. Например, чтобы определить, связывается ли тестируемое антитело с одним и тем же эпитопом, как эталонное антитело против PD-1 изобретения, обеспечивают связывание эталонного антитела с белком или пептидом PD-1 в условиях насыщения. Далее, оценивают способность тестируемого антитела связываться с молекулой PD-1. Если тестируемое антитело способно связываться с PD-1 после насыщающего связывания с эталонным антителом против PD-1, можно сделать вывод, что тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, чем эталонное антитело против PD-1. С другой стороны, если тестируемое антитело не способно связываться с белком PD-1 после насыщающего связывания с эталонным антителом против PD-1, тогда тестируемое антитело может связываться с таким же эпитопом, как эпитоп, связанный эталонным антителом против PD-1 изобретения.
Чтобы определить, конкурирует ли антитело за связывание с эталонным антителом против PD-1, описанную выше методологию связывания осуществляют в двух ориентациях: В первой ориентации, обеспечивают связывание эталонного антитела с белком PD-1 в условиях насыщения с последующей оценкой связывания тестируемого антитела с молекулой PD-1. Во второй ориентации, обеспечивают связывание тестируемого антитела с молекулой PD-1 в условиях насыщения с последующей оценкой связывания эталонного антитела с молекулой PD-1. Если в обеих ориентациях, только первое (насыщающее) антитело способно к связыванию с молекулой PD-1, тогда заключают, что тестируемое антитело и эталонное антитело конкурируют за связывание с PD-1. Как будет понятно рядовому специалисту в данной области, антитело, конкурирует за связывание с эталонным антителом, не обязательно может связываться с идентичным эпитопом, как эталонное антитело, но может стерически блокировать связывание эталонного антитела посредством связывания перекрывающегося или соседнего эпитопа.
Два антитела связываются с одним и тем же или перекрывающимся эпитопом, если каждое конкурентно ингибирует (блокирует) связывание другого с антигеном. Таким образом, 1-, 5-, 10-, 20- или 100
- 22 034770 кратный избыток одного антитела ингибирует связывание другого по меньшей мере на 50%, но предпочтительно 75, 90 или даже 99%, измеренное в тесте на конкурентное связывание (см., например, Junghans et al., Cancer Res. 1990 50:1495-1502). Альтернативно, два антитела имеют один и тот же эпитоп, если по существу все аминокислотные мутации в антигене, которые уменьшают или исключают связывание одного антитела, уменьшают или исключают связывание другого. Два антитела имеют перекрыывающиеся эпитопы, если некоторые аминокислотные мутации, которые уменьшают или исключают связывание одного антитела, уменьшают или исключают связывание другого.
Дополнительное рутинное экспериментирование (например, пептидная мутация и анализы связывания) могут затем проводиться для подтверждения того, наблюдается ли недостаток связывания тестируемого антитела фактически вследствие связывания с тем же эпитопом, что и для эталонного антитела, или является ли стерическое блокирование (или еще одно явление) ответственным за недостаток наблюдаемого связывания. Эксперименты этого типа могут проводиться с использованием ELISA, РИА, поверхностного плазмонного резонанса, поточной цитометрии или любого другого количественного или качественного теста на связывание антитела, доступного в данной области.
Иммуноконъюгаты
Изобретение охватывает человеческое моноклональное антитело против PD-1, конъюгированное с терапевтическим фрагментом (иммуноконъюгатом), таким как цитотоксин или химиотерапевтическим средством для лечения злокачественного новообразования. Как используют в настоящем описании, термин иммуноконъюгат относится к антителу, которое является химически или биологически связанным с цитотоксином, радиоактивным веществом, цитокином, интерфероном, целевым или репортерным фрагментом, ферментом, токсином, пептидом или белком или терапевтическим средством. Антитело может быть связано с цитотоксином, радиоактивным веществом, цитокином, интерфероном, целевым или репортерным фрагментом, ферментом, токсином, пептидом или терапевтическим средством по любому расположению вдоль молекулы, постольку, поскольку оно способно связываться со своей мишенью. Примеры иммуноконъюгатов включают конъюгаты антитела с лекарственным средством и гибридные белки антитело-токсин. В одном варианте осуществления средство может представлять собой второе отличающееся антитело к PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело может быть конъюгировано со средством, специфичным для опухолевой клетки или клетки, инфицированной вирусом. Тип терапевтического фрагмента, который может быть конъюгирован с антителом против PD-1 и будет выбран с учетом состояния, подлежащего лечению, и желательного терапевтического эффекта, которого необходимио достигнуть. Примеры подходящих средств для образования иммуноконъюгатов известны в данной области; см., например, WO 05/103081.
Мультиспецифические антитела
Антитела настоящего изобретения могут быть моноспецифическими, биспецифическими или мультиспецифическими. Мультиспецифические антитела могут быть специфичными для различных эпитопов одного целевого полипептида или могут содержать антигенсвязывающие домены, специфичные для более, чем одного целевого полипептида. См., например, Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244.
В одном аспекте настоящее изобретение включает мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы или их антигенсвязывающие фрагменты, где одна специфичность иммуноглобулина является специфичной для внеклеточного домена PD-1, или его фрагмента, а другая специфичность иммуноглобулина является специфичной для связывания с наружным внеклеточным доменом PD-1, или второй терапевтической мишени, или является конъюгированной с терапевтическим фрагментом. В некоторых вариантах осуществления первая антигенсвязывающая специфичность может содержать PD-L1 или PDL2 или их фрагмент. В некоторых вариантах осуществления изобретения, одна специфичность иммуноглобулина является специфичной для эпитопа, содержащего аминокислотные остатки 21-171 из PD-1 (SEQ ID NO: 327), или его фрагмента, а другая специфичность иммуноглобулина является специфичной для второго целевого антигена. Второй целевой антиген может находиться на той же клетке, что и PD-1, или на другой клетке. В одном варианте осуществления вторая целевая клетка является иммунной клеткой, отличающейся от Т-клетки, такой как В-клетка, антигенпрезентирующая клетка, моноцит, макрофаг или дендритная клетка. В нескольких вариантах осуществления, второй целевой антиген может присутствовать на опухолевой клетке или клетке аутоиммунной ткани или на клетке, инфицированной вирусом.
В еще одном другом аспекте изобретение предоставляет мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие первую антигенсвязывающую специфичность, которая связывается с PD-1, и вторую антигенсвязывающую специфичность, которая связывается с Т-клеточным рецептором, В-клеточным рецептором или Fc рецептором. В родственном аспекте изобретение предоставляет мультиспецифические антигенсвязывающие молекулы или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие первую антигенсвязывающую специфичность, которая связывается с PD-1, и вторую антигенсвязывающую специфичность, которая связывается с другим Т-клеточным со-ингибитором, таким как LAG-3, CTLA-4, BTLA, CD-28, 2B4, LY108, TIGIT, TIM3, LAIR1, ICOS и CD160.
В еще одном другой аспекте изобретение предоставляет мультиспецифические антигенсвязываю- 23 034770 щие молекулы или их антигенсвязывающие фрагменты, содержащие первую антигенсвязывающую специфичность, которая связывается с PD-1, и вторую антигенсвязывающую специфичность, которая связывается с антигеном, специфичным для аутоиммунной ткани. В некоторых вариантах осуществления антитела могут являться активирующими или агонистическими антителами.
Любая из мультиспецифических антигенсвязывающих молекул изобретения, или ее варианты, может быть построена с использованием стандартных методов молекулярной биологии (например, технологии рекомбинантной ДНК и экспрессии белка), как известно рядовому специалисту в данной области.
В нескольких вариантах осуществления PD-1-специфические антитела генерируют в биспецифическом формате (биспецифические), в котором вариабельные области, связывающеся с различающимися доменами PD-1, связывются вместе для придания двойной доменной специфичности в пределах единственной связывающей молекулы. Соответственно сконструированные биспецифические молекулы могут усиливать общую ингибирующую PD-1 эффективность действия посредством увеличения как специфичности, так и связывающей авидности. Вариабельные области со специфичностью для индивидуальных доменов, (например, сегментов N-концевого домен), или, которые могут связываться с различными областями внутри одного домена, являются спаренными на структурном каркасе, что позаоляет каждой области одновременно связываться с раздельными эпитопами, или с различными областями внутри одного домена. В одном примере биспецифической молекулы, вариабельные области тяжелой цепи (VH) из связующего со специфичностью для одного домена рекомбинируют с вариабельными областями легкой цепи (VL) из ряда связующих со специфичностью для второго домена, чтобы идентифицировать некогнатные партнеры VL, которые могу быть спарены с исходной VH без нарушения исходной специфичности для этого VH. Таким образом, единичный сегмент VL (например, VL1) может комбинироваться с двумя различными доменами VH (например, VH1 и VH2) для генерации биспецифической молекулы, составленной из двух связывающих плечей (VH1-VL1 и VH2-VL1). Применение единичного сегмента VL снижает сложность системы и, таким образом, упрощает операции и увеличивает эффективность в процессах клонирования, экспрессии и очистки, применяемых для генерации биспецифической молекулы (см., например, USSN13/022759 и US2010/0331527).
Альтернативно, антитела, которые связываются с несколькими доменами и второй мишенью, такие как, но не ограниченные приведенным, например, второе другое антитело против PD-1, могут быть получены в биспецифическом формате с использованием методов, описанных в данном документе, или других методов, известных квалифицированным специалистам в области.
Вариабельные области антитела, связывающиеся с различающимися областями, могут быть связаны вместе с вариабельными областями, которые связываются с нужными участками, например, на внеклеточном домене PD-1, для придания двойной антигенной специфичности в пределах единственной связывающей молекулы. Соответственно сконструированные биспецифические молекулы такой природы выполняют двойную функцию. Вариабельные области со специфичностью для внеклеточного домена комбинируют с вариабельной областью со специфичностью для наружного внеклеточного домен и спаривают на струтурном каркасе, который обеспечивает связывание каждой вариабельной области с раздельными антигенами.
Формат иллюстративного биспецифического антитела, которое может применяться в контексте настоящего изобретения, включает применение СН3 домена первого иммуноглобулина (Ig) и СН3 домена второго Ig, где СН3 домены первого и второго Ig отличаются друг от друга, по меньшей мере, одной аминокислотой, и, где, по меньшей мере, одно аминокислотное различие снижает связывание биспецифического антитела с Белком А в сравнении с биспецифическим антителом, в котором отсутствует аминокислотное различие. В одном варианте осуществления, СН3 домен первого Ig связывается с Белком А, а СН3 домен второго Ig содержит мутацию, котороая снижает или отменяет связывание с Белком А, такую как модификацию (по нумерации IMGT экзонов; H435R по нумерации EU). Второй СН3 может дополнительно содержать модификацию (по IMGT; Y436F по EU). Дополнительные модификации, которые могут быть обнаружены внутри второго СН3, включают: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M и V82I (по IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, и V422I по EU) в случае антитела IgG1; N44S, K52N, и V82I (IMGT; N384S, K392N, и V422I по EU) в случае антитела IgG2; и Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, и V82I (по IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, и V422I по EU) в случае антитела IgG4. Вариации форматов биспецифических антител, описаных выше, рассматриваются, как включенные в пределы объема настоящего изобретения.
Другие иллюстративные биспецифические форматы, которые могут применяться в контексте настоящего изобретения, включают, без ограничения, например, биспецифические форматы на основе scFv или диатело, гибриды IgG-scFv, домен с двойной вариабельностью (DVD)-Ig, Квадрому, формат выступы-во-впадины, общую легкую цепь (например, общую легкую цепь с форматом выступы-во-впадины, и т.д.), CrossMab, CrossFab, (SEED)тело, лейциновую молнию, Дуотело, IgG1/IgG2, двойного действия Fab (DAF)-IgG, и Mab2 биспецифические форматы (см., например, Klein et al., 2012, mAbs 4:6, 1-11, и ссылки, цитируемые в ней, для обзора приведенных выше форматов). Биспецифические антитела также могут быть построены с использованием конъюгации пептид/нуклеиновая кислота, например, где неприродные аминокислоты с ортогональной химической реактивностью применяют для генерации сайт-специфичных
- 24 034770 конъюгатов антитело-олигонуклеотид, которые затем подвергаются самосборке в мультимерные комплексы с заданными составом, валентностью и геометрией. (См., например, Kazane et al., J. Am. Chem.
Soc. [Epub: Dec. 4, 2012]).
Терапевтическое введение и лекарственные формы
Изобретение предоставляет терапевтические композиции, содержащие антитела против PD-1 настоящего изобретения или их антигенсвязывающие фрагменты. Терапевтические композиции в соответствии с изобретением будут вводиться вместе с подходящими носителями, эксципиентами и другими средствами, которые вводят в лекарственные формы для обеспечения улучшенного переноса, доставки, переносимости и т.п. Множество соотетствующих лекарственных форм можно найти в справочнике, известном всем химикам-фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Эти лекарственные формы включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воска, масла, липиды, содержащие липиды (катионные или анионные) везикулы (такие как ЛИПОФЕКТИН™), конъюгаты ДНК, безводные поглощающие пасты, эмульсии типа масло-в-воде и вода-в-масле, эмульсии карбовакса (полиэтиленгликолей с различной молекулярной массой), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. См. также Powell et al., Compendium of excipients for parenteral formulations PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
Доза антитела может варьировать в зависимости от возраста и размера субъекта, которому будут вводить, целевого заболевания, состояний, пути введения и т.п. Когда антитело настоящего изобретения применяют для лечения заболевания или расстройства у взрослого пациента или для предотвращения такого заболевания, преимущественным является вводить антитело настоящего изобретения обычно при однократной дозе, равной приблизительно от 0,1 до приблизительно 60 мг/кг массы тела, более предпочтительно, от приблизительно 5 до приблизительно 60, от приблизительно 10 до приблизительно 50, или от приблизительно 20 до приблизительно 50 мг/кг массы тела. В зависимости от тяжести состояния частоту и продолжительность лечения можно регулировать. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент изобретения могут вводиться в виде начальной дозы, равной, по меньшей мере, от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 800 мг, от приблизительно 1 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 5 до приблизительно 300 мг или от приблизительно 10 до приблизительно 200 мг, до приблизительно 100 мг или до приблизительно 50 мг. В некоторых вариантах осуществления начальная доза может сопровождаться введением второй или множества последующих доз антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в количестве, которое может быть приблизительно таким же или меньшим, чем количество начальной дозы, где последующие дозы разделены по времени по меньшей мере на от 1 дня до 3 дней; по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере 2 недели; по меньшей мере 3 недели; по меньшей мере 4 недели; по меньшей мере 5 недель; по меньшей мере 6 недель; по меньшей мере 7 недель; по меньшей мере 8 недель; по меньшей мере 9 недель; по меньшей мере 10 недель; по меньшей мере 12 недель; или по меньшей мере 14 недель.
Различные системы доставки являются известными и могут применяться для введения фармацевтической композиции изобретения, например, инкапсулирование в липисомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные к экспрессии мутантных вирусов, опосредованный рецептором эндоцитоз (см., например, Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262:4429-4432). Методы введения включают, но не ограничиваются перечисленным, внутрикожный, чрескожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и пероральный пути. Композиция может вводиться посредством любого удобного пути, например, посредством инфузии или болюсной инъекции, посредством всасывания через эпителиальные или слизисто-кожные выстилки (например, слизистую оболочку полости рта, слизистые оболочки прямой кишки и кишечника и т.д.) и может вводиться вместе с другими биологически активными средствами. Введение может быть системным или местным. Фармацевтическая композиция также может доставляться в везикуле, в частности, липосоме (см., например, Langer (1990) Science 249:1527-1533).
Применение наночастиц для доставки антитела настоящего изобретения также предусмотрено в настоящем описании. Конъюгированные с антителом наночастицы могут использоваться как для терапевтических, так и диагностических применений. Конъюгированные с антителом наночастицы и способы получения и применения описаны подробно в Arruebo, M., et al., 2009 (Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications in J. Nanomat. Volume 2009, Article ID 439389, 24 pages, doi: 10,1155/2009/439389), включенной в данной описание посредством ссылки. Наночастицы могут быть разработаны и конъюгированы с антителами, содержащимися в фармацевтических композициях, чтобы целенаправленно действовать на опухолевые клетки или клетки аутоиммунных тканей или клетки, инфицированные вирусом. Наночастицы для доставки лекарственного средства также были описаны, например, в US 8257740 или US 8246995, каждая из которых полностью включена в данное описание.
В некоторых ситуациях фармацевтическая композиция может быть доставлена в системе с контролируемым высвобождением. В одном варианте осуществления может применяться насос. В еще одном другом варианте осуществления могут применяться полимерные материалы. В еще одном другом варианте осуществления система с контролируемым высвобождением может помщаться в близости от мишени для композиции, таким образом, требуя только фракцию системной дозы.
- 25 034770
Инъекционные препараты могут включать дозированные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных, внутричерепных, внутрибрюшинных и внутримышечных инъекций, капельных инфузий и т.д. Эти инъекционные препараты могут быть получены общеизвестными методами. Например, инъекционные препараты могут быть получены, например, посредством растворения, суспендирования или эмульгирования антител или их солей, описанных выше, в стерильной водной среде или масляной среде, традиционно применяемых для инъекций. В качестве водной среды для инъекций существуют, например, физиологический раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные средства и т.д., которые могут применяться в комбинации с соответствующим солюбилизатором, таким как спирт (например, этанол), полиспирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионогенное поверхностно-активное вещество (например, полисорбат 80, НСО-50 (полиоксиэтиленовый (50 моль) аддукт гидрированного касторового масла)] и т.д. В качестве масляной среды используют, например, кунжутное масло, соевое масло, и т.д., которые могут применяться в комбинации с солюбилизатором, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т.д. Инъекцией, приготовленной таким образом, предпочтительно заполняют соответствующую ампулу.
Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть доставлена подкожно или внутривенно с использованием стандартной иглы и шприца. В дополнение по отношению к подкожной доставке шприц-ручка для доставки, очевидно, имеет применения при доставке фармацевтической композици настоящего изобретения. Такая шприц-ручка для доставки может быть многоразовой или одноразовой. В многоразовой шприц-ручке для доставки обычно используют сменный картридж, который содержит фармацевтическую композицию. Как только вся фармацевтическая композиция в картридже вводится и картридж опустшается, пустой картридж может легко быть утилизирован и заменен на новый картридж, который содержит фармацевтическую композицию. Шприц-ручка для доставки может затем повторно использоваться. В одноразовой шприц-ручке для доставки сменный картридж отсутствует. Вместо этого, одноразовую шприц-ручку для доставки получают предварительно заполненной фармацевтической композицией, содержащейся в резервуаре в устройстве. Как только резервуар освобождается от фармацевтической композиции, целое устройство утилизируют.
Многочисленные устройства для доставки в виде ручки и автоинжектора доставки находят применение при подкожной доставке фармацевтической композиции настоящего изобретения. Примеры включают, но, несомненно, не ограничиваются перечисленными, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), ручку DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), ручку HUMALOG MIX 75/25™, ручку HUMALOG™, ручку HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Copenhagen, DenMark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, DenMark) , ручку BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ и OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Germany), причем приведено только несколько примеров. Примеры одноразовых шприц-ручек для доставки, имеющих применения при подкожной доставке фармацевтической композиции настоящего изобретения включают, но, несомненно, не ограничиваются перечисленными, ручку SOLOSTAR™ (Sanofi-Aventis) , FLEXPEN™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™ (Eli Lilly), автоинжектор SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.) и ручку HUMIRA™ (Abbott Labs, Abbott Park, IL), причем приведено только несколько примеров.
Преимущественно, фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, описанные выше, получают в виде дозированных форм в однократной дозе, подходящей для обеспечения дозы активных ингредиентов. Такие дозированные формы в стандартной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекции (ампулы), суппозитории и т.д. Количество содержащегося антитела обычно составляет от приблизительно 5 до приблизительно 500 мг на дозированную форму в однократной дозе; особенно в форме инъекции, предпочтительно, чтобы антитело содержалось в количестве от приблизительно 5 до приблизительно 100 мг и от приблизительно 10 до приблизительно 250 мг для других дозированных форм.
Терапевтические применения антител
Антитела изобретения являются применимыми, среди прочего, для лечения, предотвращения и/или уменьшения тяжести любого заболевания или расстройства, ассоциированного с или опосредованного экспрессией, сигнальным путем или активностью PD-1, или вылечиваемого посредством блокирования взаимодействия между PD-1 и лигандом PD-1 (например, PD-L1 или PD-L2) или иного ингибирования активности и/или сигнального пути PD-1. Например, настоящее изобретение предоставляет способы лечения злокачественного новообразования (ингибирования роста опухоли), хронических вирусных инфекций и/или аутоиммунного заболевания посредством введения антитела против PD-1 (или фармацевтической композиции, содержащей антитело против PD-1), описанных в настоящем документе, пациенту, нуждающемуся в таком лечении. Антитела настоящего изобретения являются применимыми для лечения, предотвращения и/или уменьшения тяжести заболевания или расстройства или состояния, такого как злокачественное новообразование, аутоиммунное заболевание или вирусная инфекция, и/или для уменьшения, по меньшей мере, одного симптома, ассоциированного с таким заболеванием, расстрой- 26 034770 ством или состоянием. В контексте способов лечения, описанных в данном документе, антитело против
PD-1 может вводиться в виде монотерапии (т.е., только как терапевтическое средство) или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами (примеры которых описаны в различных разделах настоящего описаниия).
В нескольких вариантах осуществления изобретения антитела, описанные в настоящем документе, являются применимыми для лечения субъектов, страдающих от первичного или рецидивирующего злокачественного новообразования, включающего, но не ограниченного приведенными, почечно-клеточную карциному, рак ободочной и прямой кишки, немелкоклеточный рак легких, рак мозга (например, мультиформную глиобластому), плоскоклеточный рак области головы и шеи, рак желудка, рак простаты, рак яичника, рак почки, рак молочной железы, множественную миелому и меланому.
Антитела могут применяться для лечения симптомов на ранней стадии или поздней стадии злокачественного новообразования. В одном варианте осуществления антитело изобретения или его фрагмент могут применяться для лечения метастазирующего злокачественного новообразования. Антитела являются применимыми при снижении или ингибировании или уменьшения роста опухоли как для солидных опухолей, так и гематологических злокачественных новообразований. В некоторых вариантах осуществления лечение антителом изобретения или его антигенсвязывающим фрагментом приводит к более чем 50% регрессии, более чем 60% регрессии, более чем 70% регрессии, более чем 80% регрессии или более чем 90% регрессии опухоли у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, антитела могут применяться для предотвращения рецидив опухоли. В некоторых вариантах осуществления, антитела являются применимыми для увеличения общей выживаемости у субъекта со злокачественным новообразованием. В нескольких вариантах осуществления, антитела являются применимыми при снижении токсичности вследствие химиотерапии или лучевой терапии, в то время, поддерживая долговременную выживаемость у пациента, страдающего от злокачественного новообразования.
В некоторых вариантах осуществления антитела изобретения являются применимыми для лечения субъектов, страдающих от хронической вирусной инфекции. В нескольких вариантах осуществления антитела изобретения являются применимыми при снижении концентраций вирусов у хозяина и/или спасения истощенных Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления антитело изобретения или его фрагмент могут применяться для лечения хронической вирусной инфекции, вызываемой вирусом лимфоцитарного хориоменингита (LCMV). В нескольких вариантах осуществления антитело изобретения или его антигенсвязывающий фрагмент могут вводиться в терапевтической дозе пациенту, инфицированному вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или вирусом папилломы человека (HPV) или вирусом гепатита В/С (HBV/HCV). В близком варианте осуществления антитело изобретения или его антигенсвязывающий фрагмент могут применяться для лечения инфекции, вызывемой вирусом иммунодефицита обезьяны (SIV) у обезьяны-субъекта, такого как макака.
В некоторых вариантах осуществления блокирующее антитело настоящего изобретения может вводиться в терапевтически эффективном количестве субъекту, страдающему от злокачественного новообразования или вирусной инфекции.
В некоторых вариантах осуществления антитела изобретения являются применимыми для лечения аутоиммунного заболевания, включающего, но не ограниченного приведенными, очаговую алопецию, аутоиммунный гепатит, целиакию, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, тиреоидит Хашимото, гемолитическую анемию, воспалительное заболевание кишечника, воспалительные миопатии, рассеянный склероз, первичный билиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродерму, синдром Сегрена, системную красную волчанку, витилиго, аутоиммунный панкреатит, аутоиммунную крапивницу, аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру, болезнь Крона, диабет типа I, эозинофильный фасциит, эозинофильный энтерогастрит, синдром Гудпасчера, тяжелую миастению, псориатический артрит, ревматическую лихорадку, язвенный колит, васкулит и гранулематоз Вегенера. В некоторых вариантах осуществления активирующее антитело изобретения может применяться для лечения субъекта, страдающего от аутоиммунного заболевания.
Одно или несколько антител настоящего изобретения могут вводиться для ослабления или предотвращения или снижения тяжести одного или более симптомов или состояний заболевания или расстройства.
В данном описании также предусмотрено профилактическое применение одного или нескольких антител настоящего изобретения для пациентов, имеющих риск развития заболевания или расстройства, такого как злокачественное новообразование, аутоиммунное заболевание и хроническая вирусная инфекция.
В дополнительном варианте осуществления изобретения настоящие антитела применяют для получения препарата фармацевтической композиции для лечения пациентов, страдающих от злокачественного новообразования, аутоиммунного заболевания или вирусной инфекции. В еще одном другом варианте осуществления изобретения настоящие антитела применяют в качестве вспомогательной терапии вместе с любым другим средством или любой другой терапии, известной квалифицированным специалистам в области, применимой для лечения злокачественного новообразования, аутоиммунного заболевания или вирусной инфекции.
- 27 034770
Комбинированные терапии и лекарственные формы
Комбинированные терапии могут включать антитело против PD-1 изобретения и любое дополнительное терапевтическое средство, которые могут преимущественно комбинироваться с антителом изобретения, или с биологтчески активным фрагментом антитела изобретения.
Антитела настоящего изобретения могут комбинироваться синергетически с одним или несколькими противоопухолевыми средствами или терапией, применяемой для лечения злокачественного новообразования, включающего, например, почечно-клеточную карциному, рак ободочной и прямой кишки, мультиформную глиобластому, плоскоклеточный рак области головы и шеи, немелкоклеточный рак легких, рак толстой кишки, рак яичника, аденокарциному, рак простаты, глиому и меланому. В настоящем изобретении предусмотрено применение антител против PD-1 изобретения в комбинации с иммуностимулирующими и/или иммуноподдерживающими терапиями, чтобы ингибировать рост опухоли, и/или увеличить выживаемость пациентов со злокачественным новообразованием. Иммуностимулирующие терапии включают прямые иммуностимулирующие терапии для усиления активности иммунных клеток посредством либо растормаживания подавленных иммунных клеток или нажима, чтобы активировать иммунный ответ. Примеры включают целенаправленное действие на другие контрольные рецепторы, вакцинацию и адъюванты. Иммуноподдерживающие модальности могут увеличить антигенность опухоли посредством инициации смерти иммуногенных клеток, воспаления или иметь другие опосредованные эффекты, которые инициируют протвоопухолевый иммунный ответ. Примеры включают излучение, химиотерапию, антиагиогенные средства и хирургическое вмешательство.
В различных вариантах осуществления, одно или несколько антител настоящего изобретения могут применяться в комбинации с антителом к PD-L1, вторым антителом к PD-1 (например, ниволумаб), ингибитором LAG-3, ингибитором CTLA-4 (например, ипилимумаб), ингибитором TIM3, ингибитором BTLA, ингибитором TIGIT, ингибитором CD47, антагонистом еще одного Т-клеточного со-ингибитора или лиганда (например, антителом к CD-28, 2В4, LY108, LAIR1, ICOS, CD160 или VISTA), ингибитором индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), антагонистом фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF) (например, VEGF-Ловушкой, такой как афлиберцепт или другим VEGF-ингибирующим гибридным белком, приведенным в US 7,087,411, или антителом против VEGF или антигенсвязывающим фрагментом (например, бевацизумаб, или ранибизумаб) или низкомолекулярным ингибитором киназы рецептора VEGF (например, сунитиниб, сорафениб или пазопаниб)], Ang2 ингибитор (например, несвакумаб), ингибитором трансформирующего ростового фактора бета (TGF3), ингибитором рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (например, эрлотиниб, цетуксимаб), агонистом состимулирующего рецептора (например, агонистом глюкокортикоид-индуцированного TNFR-родственного белка), антителом к опухолеспецифичному антигену (например, СА9, СА125, ассоциированному с меланомой антигену 3 (MAGE3), карциноэмбриональным антигеном (СЕА), виментином, опухоль-М2-РК, простатспецифическим антигеном (PSA), муцином-1, MART-1, и СА19-9), вакциной (например, бациллой Кальмета-Герена, противораковой вакциной), адъювантом для увеличения презентации антигена (например, гранулоцитарным-макрофагальным колониестимулирующим фактором), биспецифическим антителом (например, биспецифическим антителом CD3xCD20, биспецифическим антителом PSMAxCD3), цитотоксином, химиотерапевтическим средством (например, дакарбазином, темозоломид, циклофосфамидом, доцетакселом, доксорубицином, даунорубицином, цисплатином, карбоплатином, гемцитабином, метотрексатом, митоксантроном, оксалиплатином, паклитакселом и винкристином), циклофосфамидом, лучевой терапией, ингибитором IL-6R (например, сарилумаб), ингибитором IL-4R (например, дупилумаб), ингибитором IL-10, цитокином, таким как IL-2, IL-7, IL-21 и IL-15, конъюгатом антитело-лекарственное средство (ADC) (например, против-CD19-DM4 ADC, и против-DS6-DM4 ADC), противовоспалительным лекарственным средством (например, кортикостероидами, и нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами), пищевой добавкой, такой, как антиоксиданты или любым паллиативным средством для лечения злокачественного новообразования. В некоторых вариантах осуществления, антитела против PD-1 настоящего изобретения могут применяться в комбинации с противораковыми вакцинами, включающими вакцины против дендритных клеток, онколитические вирусы, вакцины опухолевых клеток и т.д. для усиления протвоопухолевого ответа. Примеры противораковых вакцин, которые могут применяться в комбинации с антителами против PD-1 настоящего изобретения, включают вакцину MAGE3 против меланомы и рака мочевого пузыря, вакцину MUC1 против рака молочной железы, EGFRv3 (например, Риндопепимут) против рака мозга (включая мультиформную глиобластому), или LVAC-CEA (против СЕА+раков).
В некоторых вариантах осуществления, антитела против PD-1 изобретения могут вводиться в комбинации с лучевой терапией в способах для генерации долговременных продолжительных протвоопухолевых ответов и/или увеличения выживаемости пациентов со злокачественным новообразованием. В нескольких вариантах осуществления, антитела против PD-1 изобретения могут вводиться до введения, одновременно с введением или после введения лучевой терапии пациенту со злокачественным новообразованием. Например, лучевая терапия может вводиться в одной или нескольких дозах в опухолевые повреждения с последующим введением одной или нескольких доз антитела против PD-1 изобретения. В
- 28 034770 нескольких вариантах осуществления лучевая терапия может вводиться местно опухолевое повреждение для увеличения местной иммуногенности опухоли пациента (адъювантное излучение) и/или для уничтожения опухолевых клеток (аблативное излучение) с последующим системным введением антител против PD-1 изобретения. Например, внутричерепное облучение может вводиться пациенту с раком мозга (например, мультиформной глиобластомой) в комбинации с системным введением антитела против PD-1 изобретения. В некоторых вариантах осуществления, антитела против PD-1 изобретения могут вводиться в комбинации с лучевой терапией и химиотерапевтическим средством (например, темозоломидом) или антагонистом VEGF (например, афлиберцептом).
В некоторых вариантах осуществления антитела против PD-1 изобретения могут вводиться в комбинации с одним или несколькими противовирусными лекарственными средствами для лечения хронических вирусных инфекций, вызываемых LCMV, ВИЧ, HPV, HBV или HCV. Примеры противовирусных лекарственных средств включают, но не ограничиваются перечисленным, зидовудин, ламивудин, абакавир, рибавирин, лопинавир, эфавиренц, кобицистат, тенофовир, рилпивирин и кортикостероиды. В нескольких вариантах осуществления антитела против PD-1 изобретения могут вводиться в комбинации с ингибитором LAG3, ингибитором CTLA-4 или любым антагонистом еще одного другого Т-клеточного со-ингибитора для лечения хронической вирусной инфекции.
В некоторых вариантах осуществления антитела против PD-1 изобретения могут комбинироваться с антителом к Fc рецептору на иммунных клетках для лечения аутоиммунного заболевания. В одном варианте осуществления антитело изобретения или его фрагмент вводят в комбинации с антителом или антигенсвязывающим белком, нацеленными на антиген, специфичный к аутоиммунной ткани. В некоторых вариантах осуществления антитело изобретения или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в комбинации с антителом или антигенсвязывающим белком, целенаправленно действующими на Т-клеточный рецептор или В-клеточный рецептор, включающие, но не ограниченные приведенными, Fca (например, CD89), Fey (например, CD64, CD32, CD16a и CD16b), CD19 и т.д. Антитела изобретения или их фрагменты могут применяться в комбинации с любым лекарственным средством или терапией, известными в данной области (например, кортикостероидами и другими иммуносупрессорами) для лечения аутоиммунного заболевания или расстройства, включающего, но не ограниченного перечисленными, очаговую алопецию, аутоиммунный гепатит, целиакию, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, тиреоидит Хашимото, гемолитическую анемию, воспалительное заболевание кишечника, воспалительные миопатии, рассеянный склероз, первичный билиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, склеродерму, синдром Сегрена, системную красную волчанку, витилиго, аутоиммунный панкреатит, аутоиммунную крапивницу, аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру, болезнь Крона, диабет типа I, эозинофильный фасциит, эозинофильный энтергастрит, синдром Гудпасчера, тяжелую миастению, псориатический артрит, ревматическую лихорадку, язвенный колит, васкулит и гранулематоз Вегенера.
Дополнительные терапевтически активные средство (средства)/компонент (компоненты) могут вводиться перед введением, одновременно с введением или после введения антитела против PD-1 настоящего изобретения. Для целей настоящего раскрытия, такие режимы введения рассматривают как введение антитела против PD-1 в комбинации со вторым терапевтически активным компонентом.
Дополнительные терапевтически активные компонент (компоненты) могут вводиться субъекту перед введением антитела против PD-1 настоящего изобретения. Например, первый компонент может считаться вводимым перед вторым компонентом, если первый компонент вводят за 1 неделю до, 72 ч до, 60 ч до, 48 ч до, 36 ч до, 24 ч до, 12 ч до, 6 ч до, 5 ч до, 4 ч до, 3 ч до, 2 ч до, 1 ч до, 30 мин до, 15 мин до, 10 мин до, 5 мин до, или менее чем за 1 мин до введения второго компонента. В других вариантах осуществления, дополнительные терапевтически активные компонент (компоненты) могут вводиться субъекту после введения антитела против PD-1 настоящего изобретения. Например, первый компонент может считаться вводимым после второго компонента, если первый компонент вводят через 1 мин после, 5 мин после, 10 мин после, 15 мин после, 30 мин после, 1 ч после, 2 ч после, 3 ч после, 4 ч после, 5 ч после, 6 ч после, 12 ч после, 24 ч после, 36 ч после, 48 ч после, 60 ч после, 72 ч после введения второго компонента. В еще других вариантах осуществления, дополнительные терапевтически активные компонент (компоненты) могут вводиться субъекту сопутствующе с введением антитела против PD-1 настоящего изобретения. Сопутствующее введение, для целей настоящего изобретения, включает, например, введение антитела против PD-1 и дополнительного терапевтически активного компонента субъекту в разовой дозированной форме (например, совместно составленной), или в раздельных дозированных формах, вводимых субъекту в пределах приблизительно 30 мин или менее друг от друга. Если введение проводят в раздельных дозированных формах, каждая дозированная форма может вводиться через один и тот же путь (например, как антитело против PD-1, так и дополнительный терапевтически активный компонент могут вводиться внутривенно, подкожно, и т.д.); альтернативно, каждая дозированная форма может вводиться различным путем (например, антитело против PD-1 может вводиться внутривенно, а дополнительный терапевтически активный компонент может вводиться подкожно). При любом событии, любое введение компонентов в разовой дозированной форме, в раздельных дозированных формах посредством одного и того же пути, или в раздельных дозированных формах посредством различных путей считают
- 29 034770 сопутствующим введением для целей настоящего раскрытия. Для целей настоящего раскрытия, введение антитела против PD-1 перед введением, сопутствующе вместе с введением или после введения (как эти термины определены в данном описании выше) дополнительного терапевтически активного компонента рассматривают как введение антитела против PD-1 в комбинации с дополнительным терапевтически активным компонентом.
Настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, в которых антитело против PD-1 настоящего изобретения составляют в лекарственную форму с одним или несколькими дополнительными терапевтически активными компонентом (компонентами), как описано в любом разделе настоящего описания, используя разнообразные комбинации дозировок.
В иллюстративные вариантах осуществления, в которых антитело против PD-1 изобретения вводят в комбинации с антагонистом VEGF (например, VEGF-ловушкой, такой как афлиберцепт), включая введение совместных лекарственных форм, содержащих антитело против PD-1 и антагонист VEGF, индивидуальные компоненты могут вводиться субъекту и/или совместно быть составлены в лекарственную форму с использованием разнообразных комбинаций дозировок. Например, антитело против PD-1 может вводиться субъекту и/или содержаться в совместной лекарственной форме в количестве, выбранном из группы, состоящей из 0,01 мг, 0,02 мг, 0,03 мг, 0,04 мг, 0,05 мг, 0,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,б мг, 0,7 мг, 0,8 мг, 0,9 мг, 1,0 мг, 1,5 мг, 2,0 мг, 2,5 мг, 3,0 мг, 3,5 мг, 4,0 мг, 4,5 мг, 5,0 мг, 6,0 мг, 7,0 мг, 8,0 мг, 9,0 мг и 10,0 мг; и антагонист VEGF (например, VEGF-ловушка такая как афлиберцепт) может вводиться субъекту и/или содержаться в совместной лекарственной форме в количестве, выбранном из группы, состоящей из 0,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,6 мг, 0, 7 мг, 0, 8 мг, 0, 9 мг, 1, 0 мг, 1, 1 мг, 1, 2 мг, 1, 3 мг, 1, 4 мг, 1,5 мг, 1,6 мг, 1,7 мг, 1,8 мг, 1,9 мг, 2,0 мг, 2,1 мг, 2,2 мг, 2,3 мг, 2,4 мг, 2,5 мг, 2,6 мг, 2,7 мг, 2,8 мг, 2,9 мг и 3,0 мг. Комбинации/совместные лекарственные формы могут вводиться субъекту в соответствии с любым из режимов введения, раскрытых где-либо еще в настоящем описании, включая, например, дважды в неделю, однократно каждую неделю, однократно каждые 2 недели, однократно каждые 3 недели, однократно каждый месяц, однократно каждые 2 месяца, однократно каждые 3 месяца, однократно каждые 4 месяца, однократно каждые 5 месяцев, однократно каждые 6 месяцев и т.д.
Режимы введения
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения, множественные дозы антитела против PD-1 (или фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию антитела против PD-1 и любого из дополнительных терапевтически активных средств, указанных в данном описании) могут вводиться субъекту в течение заданного периода времени. Способы в соответствии с этим аспектом изобретения включают последовательное введение субъекту множества доз антитела против PD-1 изобретения. Как используют в настоящем описании, последовательное введение означает, что каждую дозу антитела против PD-1 вводят субъекту в различной временной отметке, например, в различные дни, разделенные предварительно определенным интервалом (например, часами, днями, неделями или месяцами). Настоящее изобретение включает способы, которые включают последовательное введение пациенту однократной начальной дозы антитела против PD-1, с последующими одной или несколькими вторичными дозами антитела против PD-1, и, необязательно, с последующими одной или несколькими третичными дозами антитела против PD-1. Антитело против PD-1 может вводиться при дозе между 0,1 мг/кг и 100 мг/кг.
Термины начальная доза вторичные дозы и третичные дозы относятся к временной последовательности введения антитела против PD-1 изобретения. Таким образом, начальная доза является дозой, которую вводят в начале режима лечения (также называемой исходная доза); вторичные дозы представляют собой дозы, которые вводят после начальной дозы; и третичные дозы представляют собой дозы, которые вводят после вторичных доз. Все начальные, вторичные и третичные дозы могут содержать одинаковое количество антитела против PD-1, но обычно могут отличаться друг от друга относительно частоты введения. В некоторых вариантах осуществления, однако, количество антитела против PD-1, содержащееся в начальных, вторичных и/или третичных дозах, варьирует относительно друг друга (например, регулируется с повышением или понижением, по необходимости) в ходе лечения. В некоторых вариантах осуществления, две или несколько доз (например, 2, 3, 4 или 5) доз вводят в начале режима лечения в качестве нагрузочных доз, сопровождаемые последующими дозами, которые вводят на менее частой основе (например, поддерживающие дозы).
В некоторых иллюстративных вариантах осуществления настоящего изобретения, каждую вторичную и/или третичную дозу вводят в течение от 1 до 26 (например, 1, 11/2, 2, 21/2, 3, 31/2, 4, 41/2, 5, 51/2, 6, А1 / -7 п1 / о о1/ q Q1/ 1Л mb 11 1 11 / Ю ΊΟ1/ 1-5 IO1/ ιλ 1/11/ 151/ ΙΑ ΙΑ1/ ΛΊ Η1/ IQ /2, 7, 7 /2, 8, 8 /2, 9, 9 /2, 10, 10 /2, 11, 11 /2, 12, 12 /2, 13, 13 /2, 14, 14 /2, 15, 15 /2, 16, 16 /2, 17, 17 /2, 18,
181/2, 19, 191/2, 20, 201/2, 21, 211/2, 22, 221/2, 23, 231/2, 24, 241/2, 25, 251/2, 26, 261/2, или более) недель после непосредственно предшествующей дозы. Фраза непосредственно предшествующая доза, как используют в настоящем описании, означает, что в последовательности множества введений, дозу антитела против PD-1, которую вводят пациенту перед введением следующей же дозы в последовательности без каких-либо промежуточных доз.
Способы в соответствии с этим аспектом изобретения могут включать введение пациенту любого числа вторичных и/или третичных доз антитела против PD-1. Например, в некоторых вариантах осуще- 30 034770 ствления, пациенту вводят только однократную вторичную дозу. В других вариантах осуществления, пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) вторичных доз. Аналогично, в некоторых вариантах осуществления, пациенту вводят только единственную третичную дозу. В других вариантах осуществления, пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) третичных доз.
В вариантах осуществления, включающих множество вторичных доз, каждую вторичную дозу могут вводить с такой же частотой, как для других вторичных доз. Например, каждая вторичная доза может вводиться пациенту через 1-2 недели или 1-2 месяца после непосредственно предшествующей дозы. Аналогично, в вариантах осуществления, включающих множество третичных доз, каждая третичная доза может вводиться с той же частотой, как и другие третичные дозы. Например, каждая третичная доза может вводиться пациенту через 2-12 недель после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах осуществления изобретения, частота, с которой вторичные и/или третичные дозы вводят пациенту, может варьировать в течение прохождения режима лечения. Частота введения может также регулироваться в ходе лечения терапевтом в зависимости от потребностей индивидуального пациента после клинического обследования.
Настоящее изобретение включает введение режимов, при которых от 2 до 6 нагрузочных доз вводят пациенту при первой частоте (например, однократно в неделю, однократно каждые две недели, однократно каждые три недели, однократно в месяц, однократно каждые два месяца и т.д.), с последующим введением двух или более поддерживающих доз пациенту на менее частой основе. Например, в соответствии с этим аспектом изобретения, если нагрузочные дозы вводят при частоте, равной, например, один раз в месяц (например, две, три, четыре или более нагрузочных доз, вводимых один раз в месяц), тогда поддерживающие дозы могут вводиться пациенту однократно каждые пять недель, однократно кажд шесть недель, однократно кажд семь недель, однократно каждые восемь недель, однократно каждые десять недель, однократно каждые двенадцать недель и т.д.).
Диагностические применения антител
Антитела против PD-1 настоящего изобретения могут применяться для обнаружения и/или измерения PD-1 в образце, например, для целей диагностики. Несколько вариантов осуществления предусматривают применение одного или нескольких антител настоящего изобретения в аналитических тестах для обнаружения заболевания или расстройства, такого как злокачественное новообразование, аутоиммунное заболевание или хроническая вирусная инфекция. Иллюстративные диагностические аналитические тесты для PD-1 могут включать в себя, например, контактирование образца, полученного от пациента, с антителом против PD-1 изобретения, где антитело против PD-1 является меченым обнаруживаемой меткой или репортерной молекулой или применяется в качестве иммобилизованного лиганда для селективного выделения PD-1 из образцов пациента. Альтернативно, немеченое антитело против PD-1 можетт применяться в диагностических приложениях в комбинации с вторичным антителом, которое само является обнаруживаемо меченым. Обнаруживаемая метка или репортерная молекула может представлять собой радиоактивный изотоп, такой как 3H, 14C, 32P, 35S или 125I; флуоресцентный или хемилюминесцентный фрагмент, такой как изотиоцианат флуоресцеина или родамин; или фермент, такой как щелочная фосфатаза, β-галактозидаза, пероксидаза хрена или люцифераза. Специфичные иллюстративные аналитические тесты, которые могут применяться для обнаружения или измерения PD-1 в образце, включают ферментсвязанный иммуносорбентный анализ (ELISA), радиоиммунологический анализ (РИА) и сортировку клеток с активированной флуоресценцией (FACS).
Образцы, которые могут применяться в диагностических аналитических тестах на PD-1 в соответствии с настоящим изобретением, включают любой образец ткани или жидкой среды, получаемый от пациента, который содержит обнаруживаемые количества либо белка PD-1 или его фрагментов при нормальных или патологических состояниях. Обычно, уровни PD-1 в конкретном образце, полученном от здорового пациента (например, пациента, не пораженного злокачественным новообразованием или аутоиммунным заболеванием), будут измеряться, чтобы первоначально установить исходный или стандартный уровень PD-1. Этот исходный уровень PD-1 может затем сравниваться с уровнями PD-1, измеренными в образцах, полученных от индивидуумов, с подозрением на состояние, относящееся к злокачественному новообразованию, или симптомами, ассоциированными с таким состоянием.
Антитела, специфичные к PD-1, могут не содержать дополнительных меток или фрагментов или они могут содержать N-концевую или С-концевую метку или фрагмент. В одном варианте осуществления метка или фрагмент представляет собой биотин. В аналитическом тесте на связывание, расположение метки (при ее наличии) может определять ориентацию пептида относительно поверхности, с которой пептид связан. Например, если поверхность покрыта авидином, пептид, содержащий N-концевой биотин, будет ориентирован таким образом, что С-концевая часть пептида будет удалена от поверхности.
Аспекты изобретения относятся к применению раскрытых антител в качестве маркеров для предсказательного прогнозирования злокачественного новообразования или аутоиммунного расстройства у пациентов. Антитела настоящего изобретения могут применяться в диагностических аналитических тестах для оценки прогнозирования злокачественного новообразования у пациента и для предсказания выживаемости.
- 31 034770
Примеры
Следующие примеры предлагаются, чтобы, таким образом, предоставить рядовым специалистам в области полное раскрытие и описание того, как осуществить и применить способы и композиции изобретения, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы изобретения считают их изобретения. Были сделаны попытки обеспечить точность по отношению к применяемым числовым значениям (например, количеств, температуры и т.д.), но следует принимать во внимание некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иначе, части представляют собой массовые части, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура приводится в градусах по шкале Цельсия, комнатная температура равна приблизительно 25°С, и давление является атмосферным или близким к атмосферному.
Пример 1. Генерация человеческих антител к PD-1.
Человеческие антитела к PD-1 генерировали, используя фрагмент PD-1, который находится в приблизительном приблизительном интервале аминокислот 25-170 из последовательности GenBank с учетным номером NP_005009,2 (SEQ ID NO: 32 7) с изменением C93S. Иммуноген вводили непосредственно, с адъювантом, чтобы стимулировать иммунный ответ, мышам VELOCIMMUNE®, содержащим ДНК, кодирующую тяжелую цепь и каппа область вариабельной области легкой цепи человеческого иммуноглобулина. Иммунный ответ антителами регистрировали посредством PD-1-специфичного иммунологического анализа. Когда достигали желательного иммунного ответа, спленоциты собирали и гибридизировали с клетками мышиной миеломы, чтобы сохранить их жизнеспособность и образовать клеточные линии гибридомы. Клеточные линии гибридомы подвергали скринингу и отбирали, чтобы идентифицировать клеточные линии, которые продуцируют PD-1-специфичные антитела. С использованием данного метода и иммуногена, описанного выше, были получены несколько химерных антител против PD-1 (т.е., антител, обладающих человеческими вариабельными доменами и мышиными константными доменами); иллюстративные антитела, генерируемые таким образом, были обозначены как H1M7789N, H1M7799N, H1M7800N, H2M7780N, H2M7788N, H2M7790N, H2M7791N, H2M7794N, H2M7795N, H2M7796N, и H2M7798N.
Антитела против PD-1 также изолировали непосредственно из антигенположительных В-клеток без гибридизации с клетками миеломы, как описано в U.S. 2007/0280945A1, полностью специально включенной в данное описание посредством ссылки. С использованием этого метода получили несколько полностью человеческих антител против PD-1 (т.е., антител, обладающих человеческими вариабельными доменами и человеческими константными доменами); иллюстративные антитела, генерируемые таким образом, были обозначены следующим образом: Н4Н9019Р, Н4хН9034Р2, Н4хН9035Р2, Н4хН9037Р2, Н4хН9045Р2, Н4хН9048Р2, Н4Н9057Р2, Н4Н9068Р2, Н4хН9119Р2, Н4хН9120Р2, Н4хН9128Р2, Н4хН9135Р2, Н4хН9145Р2, Н4хН8992Р, Н4хН8999Р, и Н4хН9008Р.
Биологические свойства иллюстративных антител, генерируемых в соответствии с методами данного примера, описаны подробно в примерах, приведенных ниже.
Пример 2. Аминокислотные и нуклеотидные последовательности тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи.
В табл. 1 приведены идентификаторы аминокислотных последовательностей тяжелой цепи и вариабельных областей легкой цепи и CDR выбранных антител против PD-1 изобретения. Идентификаторы соответствующих последовательностей нуклеиновых кислот приведены в табл. 2.
Таблица 1. Идентификаторы аминокислотных последовательностей
SEQ ID NO:
Обозначение антитела HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3
H1M7789N 2 4 6 8 10 12 14 16
H1M7799N 18 20 22 24 26 28 30 32
H1M7800N 34 36 38 40 42 44 46 48
H2M7780N 50 52 54 56 58 60 62 64
H2M7788N 66 68 70 72 74 76 78 80
H2M7790N 82 84 86 88 90 92 94 96
H2M7791N 98 100 102 104 106 108 110 112
H2M7794N 114 116 118 120 122 124 126 128
H2M7795N 130 132 134 136 138 140 142 144
- 32 034770
H2M7796N 146 148 150 152 154 156 158 160
H2M7798N 162 164 166 168 170 172 174 176
Н4Н9019Р 178 180 182 184 186 188 190 192
Н4хН9034Р2 194 196 198 200 202 204 206 208
Н4хН9035Р2 210 212 214 216 202 204 206 208
Н4хН9037Р2 218 220 222 224 202 204 206 208
Н4хН9045Р2 226 228 230 232 202 204 206 208
Н4хН9048Р2 234 236 238 240 202 204 206 208
Н4Н9057Р2 242 244 246 248 202 204 206 208
Н4Н9068Р2 250 252 254 256 202 204 206 208
Н4хН9119Р2 258 260 262 264 202 204 206 208
Н4хН9120Р2 266 268 270 272 202 204 206 208
Н4хН9128Р2 274 276 278 280 202 204 206 208
Н4хН9135Р2 282 284 286 288 202 204 206 208
Н4хН9145Р2 290 292 294 296 202 204 206 208
Н4хН8992Р 298 300 302 304 186 188 190 192
Н4хН8999Р 306 308 310 312 186 188 190 192
Н4хН9008Р 314 316 318 320 186 188 190 192
Таблица 2. Идентификаторы последовательностей нуклеиновых кислот
SEQ ID NO:
Обозначение антитела HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3
H1M7789N 1 3 5 7 9 11 13 15
H1M7799N 17 19 21 23 25 27 29 31
H1M7800N 33 35 37 39 41 43 45 47
H2M7780N 49 51 53 55 57 59 61 63
H2M7788N 65 67 69 71 73 75 77 79
H2M7790N 81 83 85 87 89 91 93 95
H2M7791N 97 99 101 103 105 107 109 111
H2M7794N 113 115 117 119 121 123 125 127
H2M7795N 129 131 133 135 137 139 141 143
H2M7796N 145 147 149 151 153 155 157 159
H2M7798N 161 163 165 167 169 171 173 175
Н4Н9019Р 177 179 181 183 185 187 189 191
Н4хН9034Р2 193 195 197 199 201 203 205 207
Н4хН9035Р2 209 211 213 215 201 203 205 207
Н4хН9037Р2 217 219 221 223 201 203 205 207
Н4хН9045Р2 225 227 229 231 201 203 205 207
Н4хН9048Р2 Н4Н9057Р2 Н4Н9068Р2 Н4хН9119Р2 Н4хН9120Р2 Н4хН9128Р2 Н4хН9135Р2 233 241 249 257 265 273 281 235 243 251 259 267 275 283 237 245 253 261 269 277 285 239 247 255 263 271 279 287 201 201 201 201 201 201 201 203 203 203 203 203 203 203 205 205 205 205 205 205 205 207 207 207 207 207 207 207
Н4хН9145Р2 289 291 293 295 201 203 205 207
Н4хН8992Р 297 299 301 303 185 187 189 191
Н4хН8999Р 305 307 309 311 185 187 189 191
Н4хН9008Р 313 315 317 319 185 187 189 191
Антитела типовым образом именуются в данном описании в соответствии со следующей номенклатурой: приставка Fc (например, Н4хН, H1M, H2M, и т.д.), с последующим числовым идентификатором (например, 7789, 7799, и т.д., как показано в табл. 1), с последующим суффиксом Р, Р2, N или В. Таким образом, в соответствии с данной номенклатурой, антитело может именоваться в данном описании, как, например, H1H7789N, H1M7799N, H2M7780N и т.д. Приставки Н4хН, H1M, Н2М и Н2аМ в обозначениях антитела, применяемые в данном описании, указывают на конкретный изотип об
- 33 034770 ласти Fc антитела. Например, антитело Н4хН имеет Fc человеческого IgG4 с 2 или более изменениями аминокислот, как раскрыто в US20100331527, антитело H1M имеет Fc мышиного IgG1, и антитело Н2М имеет Fc мышиного IgG2 (изотип а или b) (все вариабельные области полностью являются человеческими, как обозначено первой 'Н' в обозначении антитела). Как будет понятно рядовому специалисту в данной области, антитело, имеющее конкретный изотип Fc, может быть преобразовано в антитело с отличающимся изотипом Fc (например, антитело с Fc мышиного IgG1 может быть преобразовано в антитело с человеческим IgG4 и т.д.), но при любом событии, вариабельные домены (включающие CDR) которые указаны посредством числовых идентификаторов, показанных в табл. 1 -будут оставаться такими же, и ожидается, что свойства связывания с антигеном будут идентичными или по существу аналогичными, независимо от природы домена Fc.
В некоторых вариантах осуществления, выбранные антитела с Fc мышиного IgG1 были преобразованы в антитела с Fc человеческого IgG4. В одном варианте осуществления, домен Fc IgG4 содержит мутацию серина в пролин в шарнирной области (S108P) для инициации стабилизации димера. В табл. 3 приведены идентификаторы аминокислотных последовательностей последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи выбранных антител против PD-1 с Fc человеческого IgG4.
Таблица 3
SEQ ID NO:
Обозначение антитела Тяжелая цепь Легкая цепь
H4H7798N 330 331
H4H7795N2 332 333
Н4Н9008Р 334 335
Н4Н9048Р2 336 337
Каждая последовательность тяжелой цепи в табл. 3 содержала вариабельную область (VH или HCVR; содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и константную область (содержащую домены СН1, СН2 и СН3). Каждая последовательность легкой цепи в табл. 3 содержала вариабельную область (VL или LCVR; содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3) и константную область (CL) . SEQ ID NO: 330 содержала HCVR, содержащую аминокислоты 1-117 и константную область, содержащую аминокислоты 118-444. SEQ ID NO: 331 содержала LCVR, содержащую аминокислоты 1-107 и константную область, содержащую аминокислоты 108-214. SEQ ID NO: 332 содержала HCVR, содержащую аминокислоты 1-122 и константную область, содержащую аминокислоты 123-449. SEQ ID NO: 333 содержала LCVR, содержащую аминокислоты 1-107 и константную область, содержащую аминокислоты 108-214. SEQ ID NO: 334 содержала HCVR, содержащую аминокислоты 1-119, и константную область, содержащую аминокислоты 120-446. SEQ ID NO: 335 содержала LCVR, содержащую аминокислоты 1-108 и константную область, содержащую аминокислоты 109-215. SEQ ID NO: 336 содержала HCVR, содержащую аминокислоты 1121 и константную область, содержащую аминокислоты 122-448. SEQ ID NO: 337 содержала LCVR, содержащую аминокислоты 1-108, и константную область, содержащую аминокислоты 109-215.
Пример 3. Связывание антитела с PD-1, определенное посредством поверхностного плазмонного резонанса.
Константы скорости ассоциации и диссоциации при связывании (ka и kd, соответственно), равновесные константы диссоциации и периоды половинной диссоциации (KD и t1/2, соответственно) для связывания антигена с очищенными антителами против PD1 определяли с использованием аналитического биосенсорного теста методом поверхностного плазмонного резонанса в режиме реального времени на приборе Biacore 4000 или Biacore T200. Поверхность датчика Biacore дериватизировали либо поликлональными кроличьими против мышиных антителами (GE, # BR-1008-38) или моноклональными мышиными против человеческих Fc антителами (GE, # BR-1008-39) для захвата приблизительно 100-900 RU моноклональных антител против PD-1, экспрессируемых вместе с либо мышиным Fc или человеческим Fc, соответственно. Реагенты на PD-1, тестируемые на связывание с антителами против PD-1, включали рекомбинантный PD-1 человека, экспрессируемый с С-концевой myc-myc-гексагистидиновой меткой (hPD-1-MMH; SEQ ID NO: 321), рекомбинантный PD-1 обезьян-макак, экспрессируемый с С-концевой myc-myc-гексагистидиновой меткой (MfPD-1-MMH; SEQ ID NO: 322), димер рекомбинантного PD-1 человека, экспрессируемый либо с С-концевой Fc меткой мышиного IgG2a (hPD-1-mFc; SEQ ID NO: 323) или с С-концевым Fc человеческого IgG1 (hPD1-hFc; SEQ ID NO: 324), и PD-1 обезьяны с mFc (SEQ ID NO: 329). Различные концентрации реагентов на PD-1 в интервале от 200 нМ до 3,7 нМ инжектировали над поверхностью захвата моноклонального антитела против PD-1 при скорости потока, равной 30 мкл/мин на Biacore 4000 или 50 мкл/мин на Biacore T200. Связывание реагентов на PD-1 с захваченными моноклональными антителами регистрировали в течение 3-5 мин, в то время как их диссоциацию из антител регистрировали в течение 7-10 мин в подвижном буфере HBST (0,01 М HEPES pH 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,05% об/об поверхностно-активного вещества Р20). Эксперименты проводили при 25°С и 37°С. Кинетические константы скорости ассоциации (ka) и диссоциации (kd) определяли посред
- 34 034770 ством обработки и аппроксимации данных до модели связывания 1:1 с использованием программного обеспечения Scrubber 2,0с для подбора аппроксимирующей кривой. Равновесные констатнты диссоциации при связывании (KD) и периоды половинной диссоциации (t1/2) затем вычисляли из кинетических констант скорости как: KD(M)=kj/ka и t1/2 (мин)=[ln2/(60xkd)]. Параметры кинетики связывания для различных моноклональных антител против PD-1, связывающихся с различными реагентами на PD-1 при 25°С и 37°С, сведены в табл. 4-11.
Таблица 4. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с человеческим PD-1-MMH при 25°С
Антитело Ea (1/Mc) (1/c) Kd (M) t4 (мин)
H2aM7780N 9,32E+03 3,59E-04 3,85E-08 32
H2aM7788N 1,97E+04 3,88E-04 1,96E-08 30
H1M7789N 2,53E+04 5,31E-05 2,10E-09 218
H2aM7790N 4,63E+04 8,23E-04 1,78E-08 14
H2aM7791N 3,01E+04 7,06E-04 2,34E-08 16
H2aM7794N 5,50E+04 2,12E-03 3,80E-08 5, 4
H2aM7795N 4,91E+04 1,15E-03 2,35E-08 10
H2aM7796N 6,73E+03 1,93E-03 2,86E-07 6, 0
H2aM7798N 1,32E+05 3,06E-04 2,31E-09 38
H1M7799N 5,04E+04 1,23E-02 2,44E-07 0, 9
H1M7800N 5,88E+04 9,47E-03 1,61E-07 1,2
H4H9019P 2,05E+04 8,08E-04 3,94E-08 14
H4xH9034P 1,02E+05 1,49E-03 1,45E-08 7,8
H4xH9035P 1,03E+05 4,75E-04 4,62E-09 24
H4xH9037P 7,32E+04 7,95E-04 1,09E-08 15
H4xH9045P 5,40E+04 4,03E-03 7,46E-08 2,9
H4xH9048P2 1,37E+05 1,23E-03 8,95E-09 9, 4
H4H9057P2 4,60E+04 1,34E-02 2,91E-07 0, 9
H4H9068P2 NB* NB* NB* NB*
H4xH9119P2 7,84E+04 1,22E-03 1,56E-08 9, 5
H4xH9120P2 3,32E+04 9,98E-04 3,01E-08 12
H4xH9128P2 4,95E+04 7,19E-04 1,45E-08 16
H4xH9135P2 1,17E+05 1,20E-03 1,02E-08 10
H4xH9145P2 3,47E+04 1,34E-03 3,85E-08 8, 6
H4xH8992P 1,50E+05 2,13E-02 1,41E-07 0,5
H4xH8999P 2,83E+05 1,23E-03 4,33E-09 9, 4
H4xH9008P 4,29E+04 1,33E-03 3,10E-08 8,7
H4H7795N2 6,35E+04 1,48E-03 2,33E-08 8
H4H7798N 1,47E+05 4,43E-04 3,01E-09 26
*NB указывает на то, что при экспериментальных условиях, реагент на PD-1 не связывался с захваченным моноклональным антителом против PD-1.
- 35 034770
Таблица 5. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с человеческим PD-1-MMH при 37°С
Антитело (1/Mc) kd (lc) Kd (M) t4 (мин)
H2aM7780N 2,72E+04 1,52E-03 5,58E-08 7, 6
H2aM7788N 2,88E+04 1,49E-03 5,19E-08 7,7
H1M7789N 4,53E+04 2,95E-04 6,52E-09 39
H2aM7790N 6,13E+04 5,20E-03 8,49E-08 2,2
H2aM7791N 4,18E+04 2,24E-03 5,35E-08 5, 2
H2aM7794N 1,20E+05 7,92E-03 6,61E-08 1,5
H2aM7795N 6,75E+04 4,58E-03 6,78E-08 2,5
H2aM7796N 1,09E+04 1,65E-02 1,51E-06 0,7
H2aM7798N 1,73E+05 6,56E-04 3,79E-09 18
H1M7799N 7,94E+04 4,25E-02 5,36E-07 0,3
H1M7800N 7,83E+04 3,99E-02 5,10E-07 0,3
H4H9019P 1,20E+04 5,44E-03 4,53E-07 2,1
H4xH9034P 2,79E+05 1,12E-02 4,02E-08 1,0
H4xH9035P 2,98E+05 4,26E-03 1,43E-08 2,7
H4xH9037P 2,26E+05 6,68E-03 2,95E-08 1,7
H4xH9045P 8,04E+04 5,32E-02 6,62E-07 0,2
H4xH9048P2 3,70E+05 8,60E-03 2,32E-08 1,3
H4H9057P2 NB* NB* NB* NB*
H4H9068P2 NB* NB* NB* NB*
H4xH9119P2 2,40E+05 1,04E-02 4,35E-08 1,1
H4xH9120P2 6,88E+04 7,01E-03 1,02E-07 1, 6
H4xH9128P2 1,04E+05 4,36E-03 4,20E-08 2, 6
H4xH9135P2 4,18E+05 1,11E-02 2,66E-08 1, o
H4xH9145P2 1,31E+05 1,23E-02 9,40E-08 0, 9
H4xH8992P IC* IC* IC* IC*
H4xH8999P 5,99E+05 9,42E-03 1,57E-08 1,2
H4xH9008P 1,29E+05 8,09E-03 6,26E-08 1,4
H4H7795N2 6,41E+04 6,64E-03 1,04E-07 1,7
H4H7798N 2,27E+05 1,70E-03 7,48E-09 7
*NB указывает на то, что при экспериментальных условиях, реагент на PD-1 не связывался с захваченным моноклональным антителом против PD-1. IC указывает на то, что при экспериментальных условиях, связывание с PD-1 является неокончательным.
Таблица 6. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с димером человеческого PD-1 (человеческий PD-1-mFc . или человеческий PD-1-hFc) при 25°С
Антитело JCa (1/Mc) kd (1/c) Kd (M) t4 (мин)
H2aM7780N 4,21E+04 9,94E-06 2,36E-10 1162
H2aM7788N 8,94E+04 2,82E-05 3,15E-10 410
H1M7789N 3,91E+04 4,31E-05 1,10E-09 268
H2aM7790N 1,86E+05 3,02E-05 1,62E-10 383
H2aM7791N 4,05E+04 1,01E-04 2,49E-09 114
H2aM7794N 1,79E+05 1,06E-04 5,93E-10 109
H2aM7795N 1,38E+05 3,14E-05 2,27E-10 368
H2aM7796N 2,61E+04 8,67E-05 3,32E-09 133
- 36 034770
H2aM7798N 3,50Е+05 2,29Е-05 6,55Е-11 505
H1M7799N 2,38Е+05 8,55Е-05 3,60Е-10 135
H1M7800N 1,52Е+05 7,72Е-05 5,09Е-10 150
Н4Н9019Р 4,38Е+04 8,61Е-05 1,97Е-09 134
Н4хН9034Р 2,15Е+05 1,51Е-04 7,01Е-10 77
Н4хН9035Р 2,01Е+05 1,03Е-04 5,13Е-10 112
Н4хН9037Р 1,50Е+05 1,29Е-04 8,62Е-10 89
Н4хН9045Р 9,13Е+04 1,60Е-04 1,75Е-09 72
Н4хН9048Р2 2,36Е+05 1,88Е-04 7,98Е-10 61
Н4Н9057Р2 1,01Е+05 1,77Е-04 1,75Е-09 65
Н4Н9068Р2 4,72Е+04 2,80Е-03 5,94Е-08 4
Н4хН9119Р2 1,63Е+05 1,62Е-04 9,92Е-10 71
Н4хН9120Р2 6,52Е+04 1,19Е-04 1,82Е-09 97
Н4хН9128Р2 8,37Е+04 1,ЗЗЕ-04 1,59Е-09 87
Н4хН9135Р2 2,12Е+05 1,38Е-04 6,51Е-10 84
Н4хН9145Р2 6,58Е+04 1,58Е-04 2,40Е-09 73
Н4хН8992Р 2,35Е+05 1,60Е-04 6,80Е-10 72
Н4хН8999Р 5,55Е+05 1,20Е-04 2,17Е-10 96
Н4хН9008Р 3,52Е+04 2,80Е-05 7,96Е-10 412
H4H7795N2 1,50Е+05 9,25Е-05 6,15Е-10 125
H4H7798N 4,41Е+05 5,40Е-05 1,22Е-10 214
Таблица 7. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с димером человеческого PD-1 (человеческий PD-1-mFc или человеческий PD-1-hFc) при 37°С
Антитело ka (1/Mc) kd (1/c) KD (M) t4 (мин)
H2aM7780N 9,94E+04 2,29E-05 2,30E-10 505
H2aM7788N 1,31E+05 2,13E-05 1,63E-10 542
H1M7789N 1,09E+05 < 1,0E-05 < 9,17E-11 > 1155
H2aM7790N 2,01E+05 8,49E-05 4,22E-10 136
H2aM7791N 4,98E+04 1,79E-04 3,59E-09 65
H2aM7794N 4,68E+05 2,11E-04 4,52E-10 55
H2aM7795N 1,65E+05 6,13E-05 3,71E-10 188
H2aM7796N 2,21E+04 4,34E-04 1,96E-08 27
H2aM7798N 4,90E+05 1,40E-05 2,80E-11 825
H1M7799N 4,41E+05 1,81E-04 4,11E-10 64
H1M7800N 4,00E+05 1,81E-04 4,50E-10 64
H4H9019P 7,17E+04 1,95E-04 2,71E-09 59
H4xH9034P 3,02E+05 6,30E-04 2,09E-09 18
H4xH9035P 3,16E+05 5,54E-04 1,75E-09 21
H4xH9037P 2,63E+05 9,21E-04 3,50E-09 13
H4xH9045P 2,14E+05 1,10E-03 5,13E-09 11
H4xH9048P2 3,61E+05 1,10E-03 3,05E-09 10
H4H9057P2 2,33E+05 2,11E-03 9,07E-09 5
H4H9068P2 9,69E+04 1,20E-02 1,24E-07 1
H4xH9119P2 2,40E+05 9,09E-04 3, 80E-09 13
H4xH9120P2 8,08E+04 4,82E-04 5,96E-09 24
H4xH9128P2 1,86E+05 6,86E-04 3,68E-09 17
H4xH9135P2 3,10E+05 7,02E-04 2,27E-09 16
H4xH9145P2 1,60E+05 5,71E-04 3,58E-09 20
H4xH8992P 3,49E+05 1,02E-03 2,91E-09 11
H4xH8999P 7,57E+05 4,51E-04 5,96E-10 26
H4xH9008P 5,52E+04 < Ι,ΟΕ-05 < l,81E-10 > 1155
H4H7795N2 1,60E+05 2,64E-04 1,65E-09 44
H4H7798N 6,60E+05 1,15E-04 1,75E-10 100
- 37 034770
Таблица 8. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с MfPD-1-MMH при 25°С
Антитело ka (l/Mc) kd (1/c) KD (M) t4 (мин)
H2aM7780N 1,00E+04 3,15E-04 3,15E-08 37
H2aM7788N 8,63E+03 6,62E-04 7,66E-08 17
H1M7789N 1,55E+04 1,23E-04 7,89E-09 94
H2aM7790N 3,11E+04 9,37E-04 3,01E-08 12
H2aM7791N 1,61E+04 5,53E-04 3,44E-08 21
H2aM7794N 3,60E+04 5,99E-03 1,66E-07 1,9
H2aM7795N 4,44E+04 8,89E-04 2,01E-08 13
H2aM7796N NB* NB* NB* NB*
H2aM7798N 8,72E+04 3,93E-04 4,50E-09 29
H1M7799N 5,78E+04 1,30E-02 2,24E-07 0, 9
H1M7800N 5,89E+04 1,04E-02 1,76E-07 1,1
H4H9019P 1,94E+04 8,33E-04 4,29E-08 14
H4xH9034P 9,61E+04 2,69E-03 2,80E-08 4,3
H4xH9035P 9,36E+04 4,34E-04 4,64E-09 27
H4xH9037P 6,99E+04 9,15E-04 1,31E-08 13
H4xH9045P 6,25E+04 7,05E-03 1,13E-07 1, 6
H4xH9048P2 1,28E+05 8,97E-04 7,00E-09 13
H4H9057P2 3,46E+04 1,91E-02 5,51E-07 0, 6
H4H9068P2 NB* NB* NB* NB*
H4xH9119P2 7,50E+04 1,66E-03 2,22E-08 6, 9
H4xH9120P2 3,17E+04 1,08E-03 3,41E-08 11
H4xH9128P2 3,68E+04 6,49E-04 1,77E-08 18
H4xH9135P2 1,24E+05 1,31E-03 1,06E-08 8,8
H4xH9145P2 2,86E+04 1,24E-03 4,31E-08 9, 3
H4xH8992P 1,88E+05 3,76E-02 2,00E-07 0,3
H4xH8999P 4,29E+05 1,33E-03 3,09E-09 8,7
H4xH9008P 1,05E+05 2,49E-03 2,38E-08 4, 6
H4H7795N2 6,59E+04 1,48E-03 2,24E-08 8
H4H7798N 1,43E+05 5,51E-04 3,86E-09 21
*NB указывает на то, что при экспериментальных условиях, реагент на PD-1 не связывался с захваченным моноклональным антителом против PD-1.
- 38 034770
Таблица 9. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с MfPD-1-MMH при 37°С.
Антитело ka (1/Mc) kd (1/c) KD (M) t4 (мин)
H2aM7780N 2,29E+04 1,38E-03 6,05E-08 8,3
H2aM7788N 1,88E+04 3,28E-03 1,74E-07 3,5
H1M7789N 4,79E+04 4,08E-04 8,50E-09 28
H2aM7790N 2,55E+04 6,93E-03 2,71E-07 1,7
H2aM7791N 3,79E+04 1,91E-03 5,05E-08 6, 0
H2aM7794N 6,66E+04 2,01E-02 3,02E-07 0, 6
H2aM7795N 6,47E+04 3,89E-03 6,02E-08 3, 0
H2aM7796N NB* NB* NB* NB*
H2aM7798N 1,42E+05 9,93E-04 7,00E-09 12
H1M7799N 8,80E+04 4,67E-02 5,30E-07 0,2
H1M7800N 8,40E+04 4,43E-02 5, 27E-07 0,3
H4H9019P 2,14E+04 7,63E-03 3,56E-07 1,5
H4xH9034P 2,83E+05 2,47E-02 8,73E-08 0,5
H4xH9035P 3,06E+05 4,29E-03 1,40E-08 2,7
H4xH9037P 2,22E+05 8,80E-03 3,97E-08 1,3
H4xH9045P 1,40E+04 1,05E-01 7,54E-06 0, 1
H4xH9048P2 4,15E+05 6,97E-03 1,68E-08 1,7
H4H9057P2 NB* NB* NB* NB*
H4H9068P2 NB* NB* NB* NB*
H4xH9119P2 2,40E+05 1,23E-02 5,14E-08 0, 9
H4xH9120P2 6,98E+04 7,48E-03 1,07E-07 1,5
H4xH9128P2 9,06E+04 4,18E-03 4,61E-08 2,8
H4xH9135P2 4,62E+05 1,34E-02 2,89E-08 0, 9
H4xH9145P2 1,71E+05 1,43E-02 8,37E-08 0, 8
H4xH8992P IC* IC* IC* IC*
H4xH8999P 9,83E+05 9,26E-03 9, 41E-09 1,2
H4xH9008P 5,86E+05 1,38E-02 2,35E-08 0, 8
H4H7795N2 7,80E+04 6,89E-03 8,83E-08 1,7
H4H7798N 2,13E+05 2,23E-3 1,05E-08 5
*NB указывает на то, что при экспериментальных условиях, реагент на PD-1 не связывался с захваченным моноклональным антителом против PD-1. IC указывает на то, что при экспериментальных условиях, связывание с PD-1 является неокончательным.
- 39 034770
Таблица 10. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с димером PD-1 обезьяны (PD-1-mFc обезьяны) при 25°С
Антитело Количество захваченного mAb (RU) 100 нМ связанного PD-1mFc обезьяны (RU) ka (1/Мс) kd (1/s) KD (Μ) t4 (мин)
Н4Н9019Р 116 31 4,55Е+04 8,96Е-05 1,97Е-09 129
Н4хН9034Р 215 95 2,03Е+05 1,66Е-04 8,18Е-10 70
Н4хН9035Р 153 78 2,16Е+05 9,96Е-05 4,60Е-10 116
Н4хН9037Р 137 58 1,50Е+05 1,37Е-04 9,12Е-10 84
Н4хН9045Р 202 78 9,78Е+04 1,68Е-04 1,72Е-09 69
Н4хН9048Р2 227 115 2,43Е+05 1,84Е-04 7,54Е-10 63
Н4Н9057Р2 196 75 1,02Е+05 3,03Е-04 2,98Е-09 38
Н4Н9068Р2 178 17 5,70Е+04 3,09Е-03 5,42Е-08 4
Н4хН9119Р2 209 83 1,63Е+05 1,72Е-04 1,05Е-09 67
Н4хН9120Р2 195 52 5,84Е+04 1,12Е-04 1,91Е-09 104
Н4хН9128Р2 175 64 7,87Е+04 1,24Е-04 1,57Е-09 94
Н4хН9135Р2 150 74 2,38Е+05 1,43Е-04 6,02Е-10 81
Н4хН9145Р2 304 84 7,24Е+04 1,50Е-04 2,08Е-09 77
Н4хН8992Р 260 122 2,03Е+05 2,51Е-04 1,24Е-09 46
Н4хН8999Р 217 126 5,50Е+05 1,15Е-04 2,10Е-10 100
Н4хН9008Р 248 93 1,20Е+05 5,77Е-05 4,80E-10 200
H4H7795N2 204 60 1,60Е+05 9,92Е-05 6,21E-10 116
H4H7798N 223 93 4,49Е+05 6,14Е-05 1,37E-10 188
Таблица 11. Параметры кинетики связывания моноклональных антител против PD-1, связывающихся с димером PD-1 обезьяны (PD-1-mFc обезьяны) при 37°С
Антитело Количество захваченного mAb (RU) 100 нМ связанного PD-1mFc обезьяны (RU) ка (1/Мс) kd (1/с) KD (М) t4 (мин)
H4H9019P 89 36 8,16Е+04 2,59Е-04 3,17Е-09 45
H4xH9034P 184 81 3,07Е+05 7,49Е-04 2,44Е-09 15
H4xH9035P 88 40 3,67Е+05 6,23Е-04 1,70Е-09 19
Н4хН9037Р 55 24 2,80Е+05 8,97Е-04 3,21Е-09 13
Н4хН9045Р 161 65 2,41Е+05 1,36Е-03 5,66Е-09 8
Н4хН9048Р2 184 84 4,94Е+05 1,13Е-03 2,29Е-09 10
Н4Н9057Р2 105 28 1,61Е+05 4,77Е-03 2,96Е-08 2,4
Н4Н9068Р2 90 6 1,21Е+05 1,05Е-02 8,63Е-08 1, 1
Н4хН9119Р2 98 40 2,79Е+05 8,85Е-04 3,17Е-09 13
Н4хН9120Р2 141 46 8,29Е+04 5,02Е-04 6,06Е-09 23
Н4хН9128Р2 148 60 1,87Е+05 8,16Е-04 4,36Е-09 14
Н4хН9135Р2 106 52 3,42Е+05 7,94Е-04 2,32Е-09 15
Н4хН9145Р2 284 94 1,51Е+05 6,09Е-04 4,04Е-09 19
Н4хН8992Р 206 86 3,50Е+05 1,53Е-03 4,38Е-09 8
Н4хН8999Р 160 83 7,30Е+05 5,10Е-04 7,00Е-10 23
Н4хН9008Р 216 98 2,04Е+05 1,00Е-05* 4,90Е-11* 1155*
H4H7795N2 164 47 1,70Е+05 2,90Е-04 1,71Е-09 40
H4H7798N 203 88 6,30Е+05 1,27Е-04 2,02Е-10 91
*указывает на то, что при используемых экспериментальных условиях, диссоциации реагент на PD1 не наблюдали и значение kd вручную фиксировали при 1,00Е-05.
Как показано в табл. 4, при 25°С, 28 из 29 антител против PD-1 изобретения связывались с hPD-1MMH со значениями KD в интервале от 2,1 нМ до 291 нМ. Одно антитело, Н4Н9068Р2, не демонстрировало какого-либо измеряемого связывания с hPD-1-MMH при 25°С. Как показано в табл. 5, при 37°С, 26 из 29 антител против PD-1 изобретения связывались с hPD-1-MMH со значениями KD в интервале от 3,79 нМ до 1,51 мкМ. Три антитела изобретения не демонстрировали какого-либо убедительного связывания с hPD-1-MMH при 37°С. Как показано в табл. 6, при 25°С, все 29 антител против PD-1 изобретения свя
- 40 034770 зывались с белками димера hPD-1 со значениями KD в интервале от 65,5 пМ до 59,4 нМ. Как показано в табл. 7, при 37°С, все 27 антител изобретения против PD-1 связывались с белками димера hPD-1 со значениями KD в интервале от 3,09 пМ до 551 нМ. Как показано в табл. 8, при 25°С, 27 из 29 антител изобретения против PD-1 связывались с MfPD-1-MMH со значениями KD в интервале от 3,09 нМ до 551 нМ. Два антитела изобретения не демонстрировали какого-либо убедительного связывания с MfPD-1-ММН при 25°С. Как показано в табл. 9, при 37°С, 25 из 29 антител изобретения против PD-1 связывались с MfPD-1-MMH со значениями KD в интервале от 7,00 нМ до 7,54 мкМ. Четыре антитела изобретения не демонстрировали какого-либо убедительного связывания с MfPD-1-MMH при 37°С. Как показано в табл. 10, при 25°С, все 18 тестированных антител против PD-1 изобретения связывались с димером MfPD-1 со значениями KD в интервале от 137 пМ до 54,2 нМ. Как показано в табл. 11, при 37°С, все 18 тестированных антител изобретения против PD-1 связывались с димером MfPD-1 со значениями KD в интервале от менее, чем 49 пМ до 86,3 нМ.
Пример 4. Блокирование связывание PD-1 с PD-L1, определенное посредством ELISA.
Способность антител против PD-1 блокировать связывание PD-1 человека с его лигандом, PD-L1 рецептором, измеряли, используя три конкурентных формата сэндвич-ELISA.
Димерные человеческие белки PD-L1, состоящие из части внеклеточного домена человеческого PDL1, экспрессируемого либо с С-концевой меткой человеческого Fc (hPD-L1-hFc; SEQ ID: 325) или Сконцевой меткой мышиного Fc (hPD-L1-mFc; SEQ ID: 326), или димерный человеческий PD-L2, состоящий из внеклеточной области человеческого PD-L2, полученный с С-концевой меткой человеческого Fc (hPD-L2-hFc; R&D Systems, #1224-PL) раздельно вносили при концентрации, равной 2 мкг/мл в PBS в 96-луночный планшет для микротитрования и оставляли в течение ночи при 4°С. Участки неспецифического связывания последовательно блокировали, используя 0,5% (м/об) раствор BSA в PBS. В первом конкурентном формате, постоянную концентрацию, равную 1,5 нМ димерного белка PD-1 человека, содержащего из внеклеточный домен PD-1 человека экспрессируемый с С-концевой меткой мышиного Fc (hPD-1-mFc; SEQ ID: 323) добавляли к серийным разведениям антител против PD-1 или антител изотипического контроля, таким образом, что конечные концентрации антител находились в интервале от 0 до 200 нМ. Во втором конкурентном формате, постоянную концентрацию, равную 200 пМ димерного биотинированного белка PD-1 человека, содержащего внеклеточный домен PD-1 человека, который экспрессировался с С-концевой меткой человеческого Fc (biot-hPD-1-hFc; SEQ ID: 323), аналогично добавляли к серийным разведениям антител против PD-1 или антител изотипического контроля при конечных концентрациях антител в интервале от 0 до 50нМ. В третьем конкурентном формате, постоянную концентрацию, равную 100 пМ, димерного белка hPD-1-mFc аналогично добавляли к серийным разведениям антител против PD-1 или изотипическим контролям при конечных концентрациях антител в интервале от 0 до ЮОнМ. Эти комплексы антитело-белок затем инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре (КТ). Комплексы антитело-белок с 1,5 нМ константной hPD-1-mFc переносили в планшеты для микротитрования, покрытые hPD-L1-hFc, комплексы антитело-белок с 200 пМ константной biot-hPD-1hFc переносили в планшеты, покрытые hPD-L1-mFc, и комплексы антитело-белок с 100 пМ константной hPD-1-mFc переносили в планшеты для микротитрования, покрытые hPD-L2-hFc. После инкубации в течение 1 ч при КТ, лунки промывали, и связанный с планшетом hPD-1-mFc обнаруживали вместе с поликлональным антителом против mFc, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP) (Jackson ImmunoResearch Inc., #115-035-164), и связанный с планшетом biot-hPD-1-hFc обнаруживали вместе со стрептавидином, конъюгированным с HRP (Thermo Scientific, #N200). Образцы проявляли раствором ТМВ (BD Biosciences, #51-2606КС и #51-2 607КС) для получения колориметрической реакции и затем проявление цвета стабилизировали добавлением 1М серной кислоты перед измерением поглощения при 450 нм на считывающем устройстве для планшетов Victor X5. Анализ данных проводили, используя сигмовидную модель доза-ответ в программном обеспечении Prism™ (GraphPad). Рассчитанное значение IC50. определяемое как концентрация антитела, требуемая для снижения на 50% связывания PD-1 человека с человеческими PD-L1 или PD-L2, применяли как показатель активности блокирования potency. Процент максимальной блокады рассчитывали как меру измерения способности антитела полностью блокировать связывание PD-1 человека с человеческими PD-L1 или PD-L2 на планшете, как определяют по дозовой кривой. Данный процент максимальной блокировки рассчитывали посредством вычитания из 100% отношения снижения сигнала, наблюдаемого в присутствии наивысшей тестированной концентрации для каждого антитела относительно различия между сигналом, наблюдаемым для образца PD-1 человека, не содержащего антитела против PD-1 (0% блокирования), и фонового сигнала от HRP-конъюгированного вторичного антитела по отдельности (100% блокирования).
Процентная макимальная блокировка и рассчитанные значения IC50 для блокирования антителом, большего, чем 35% от сигнала связывания hPD-1, показаны В табл. 12-14. Антитела, которые показали снжение сигнала связывания hPD-1, равное 35% или менн, определяли как неблокаторы. Антитела, которые показали увеличение, равное 35% или более, сигнала связывания PD-1 человека, характеризовали как неблокаторы/энхансеры. Теоретический нижний предел теста, определяемый как минимальная концентрация антитела, теоретически необходимая для занятия 50% участков связывания PD-1 человека в тесте, составляет 0,75 нМ для формата с использованием постоянной 1,5 нМ hPD-1-mFc, 100 пМ для
- 41 034770 формата с использованием постоянной 200 пМ биот-hPD-l-hFc, и 50 пМ для формата с использованием постоянной 100 пМ hPD-1-mFc, указывая на то, что более низкие рассчитанные значения IC50 могут не представлять количественный участок связывания белок-антитело. По этой причине, антитела с рассчитанными значениями IC50, меньшими, чем 0,75 нМ в тесте с постоянным hPD-1-mFc и покрытием hPDL1, меньшими, чем 100 пМ в тесте с постоянным биот-hPD-EhFc и покрытием hPD-L1, и меньшими, чем 50 пМ в тесте с постоянным hPD-1-mFc и покрытием hPD-L2 приведены В табл. 12 - 14 как <7,5Е-10М, <1,0Е-10М и <5,0Е-11М, соответственно.
Таблица 12. Блокирование связывания PD-1 человека с человеческим PD-L1 под действием
Теоретический нижний предел теста: для блокирования ELISA с постояным hPD-1-mFc и покрытием hPD-L1 составляет 7,5Е-10 М.
(*) - Ниже теоретического нижнего предела теста; NT- не тестировали; NBl - неблокатор; NBl/Энхансер - неблокатор/энхансер; IC - неубедительный.
- 42 034770
Таблица 13. Блокирование связывания биотинилированного PD-1 человека с человеческим PD-L1 антителами против PD-1 по данным ELISA
Антитело
Н4Н9019Р
Н4хН9034Р
Н4хН9045Р
Н4хН9048Р2
Н4хН9120Р2
Н4хН9128Р2
Н4хН9035Р
Н4хН9135Р2
Н4хН9145Р2
Н4хН9119Р2
Н4Н9057Р2
Н4Н9068Р2
Н4хН9037Р
H2aM7780N
H2aM7788N
H1M7789N
H2aM7790N
H2aM7791N
H2aM7794N
H2aM7795N2
H2aM7796N
H2aM7798N
H1M7799N
H1M7800N
H4xH8992P
H4xH8999P
H4xH9008P
Изотипический контроль 1
Изотипический контроль 2
Изотипический контроль 2
Изотипический контроль 2
Блокировани связывания hPD-1-hFc с
00 пМ биотhPD-LlmFc, IC50 (Μ)
6,4Е-10
6,6Е-11*
1,ЗЕ-10
Блокирование 50 нМ антитела связывания
200рМ биот-hPD-l-hFc с hPD-Ll-mFc, % блокирования
3,9Е-10
1,9Е-10
8,0Е-11*
1,5Е-10
3,5Е-10
8,2Е-11*
NBl/Энхансер
NBl/Энхансер
7,8Е-11*
9,1Е-11*
6,5Е-11*
1,9Е-10
NBl/Энхансер
2,3E-10
6,9E-11*
1,3E-09
7,3E-11*
5,9E-11*
6,5E-11*
1,6E-10
1,8E-10
1,3E-09
Теоретическое нижний предел теста: для блокирования по данным ELISA с постоянным биот-hPD1-mFc и покрытием hPD-L1 составляет 1,0Е-10 М.
(*) - Ниже теоретическог нижнего предела теста;
NT- не тестированный; NBl - неблокатор;
NBl/Энхансер - неблокатор/энхансер;
IC - неокончательный.
- 43 034770
Таблица 14. Блокирование связывания PD-1 человека с человеческим PD-L2 антителами против PD-1 по данным ELISA
Антитело Блокирование 100 пМ связывания hPD-1-mFc с hPD-L2-hFc, 1С50 (М) Блокирование 100 нМ антитела связывания 100 пМ hPD-1-mFc с hPD-L2-hFc, % блокирования
Н4хН9048Р2 1,4Е-10 98
H2aM7795N2 2,6Е-10 100
H2aM7798N 1,ЗЕ-10 100
Н4хН9008Р 1,ЗЕ-09 94
Изотипический контроль 2 NB1 -27
Теоретический нижний предел теста: блокирование ELISA с использованием постоянного hPD-1mFc и покрытия hPD-L2 составляет 5,0Е-11 М;
NBl - неблокатор.
Как указано в табл. 12, в первом формате теста, 23 из 27 антител против PD-1 блокировали 1,5нМ hPD-1-mFc от связывания с hPD-L1-hFc со значениями IC50 в интервале от 190 пМ до 3,3 нМ с процентной максимальной блокировкой в интервале от 67% до 100%. Одно антитело, H2aM7796N, было идентифицировано, как неблокатор. Три антитела против PD-1 (H4H9068P2, H1M7789N, и H2aM7791N) идентифицировали как неблокаторы/энхансеры.
Как показано в табл. 13, во втором формате теста, 23 из 27 антител против PD-1 блокировали 200 рМ биот-hPD-EhFc от связывания с hPD-L1-mFc со значениями IC50 в интервале от 59 пМ до 1,3 нМ процентной максимальной блокировкой в интервале от 60% до 101%. Одно антитело, H1M7789N, было идентифицировано, как неблокатор. Три антитела против PD-1 (H4H9057P2, Н4Н9068Р2, и H2aM7791N) идентифицировали как неблокаторы/энхансеры.
В третьем формате теста, как показано в табл. 14, тестировали четыре антитела против PD-1 изобретения, и Изотипический контроль. Все 4 антитела против PD-1 изобретения блокировали 100 пМ (фиксированную концентрацию) hPD-1-mFc от связывания с покрытием hPD-L2-hFc на планшете со значениями IC50 в интервале от 0,13нМ до 1,3нМ и с процентной максимальной блокировкой в интервале от 94% до 100%.
Пример 5. Блокирование связывания PD-1 с PD-L1, определенное посредством биосенсорного теста и поверхностного плазмонного резонанса.
Ингибирование PD-1 человека от связывания с человеческим PD-L1 посредством различных моноклональных антител против PD-1 исследовали, используя либо тест с интерферометрией биослоя в режиме реального времени на биосенсорном приборе Octet Red96 (Fortebio Inc.) или применяя тест с поверхностным плазмонным резонансом биосенсора в режиме реального времени на приборе Biacore 3000.
Исследования ингибирования моноклональных антител против PD-1, экспрессируемых с мышиным Fc, проводили на приборе Octet Red 96. Сначала, 100 нМ рекомбинантного PD-1 человека, экспрессируемого с С-концевой Fc меткой мышиного IgG2a (hPD-1-mFc; SEQ ID NO: 323) инкубировали с 500 нМ каждого моноклонального антитела против PD-1 в течение, по меньшей мере, 1 ч перед началом теста на ингибирование assay. Приблизительно 0,8 нМ-1,2 нМ рекомбинантного человеческого PD-L1, экспрессируемого с С-концевой Fc меткой человеческого IgG1 (hPD-L1-hFc; SEQ ID NO: 325) подвергались захвату с использованием захвата Fc против человеческого IgG биосенсором Octet. Биосенсоры Octet, покрытые hPD-L1-hFc, затем погружали в лунки, содержащие смесь hPD-1-mFc и различных моноклональных антител против-PD-E Весь эксперимент проводили при 25°С в буфере Octet HBST (0,01 М HEPES pH7,4, 0,15M NaCl, 3 мМ EDTA, 0,05% об/об поверхностно-активного вещества Р20, 0,1 мг/мл BSA) при встряхивании планшета со скоростью 1000 об/мин. Биосенсоры промывали в буфере Octet HBST между каждой стадией эксперимента. Ответы связывания в режиме реального времени регистрировали в течение всего прохождения эксперимента и ответ связывания в конце каждой стадии записывали. Связывание hPD-1-mFc с захваченным hPD-L1-hFc сравнивали в присутствии и отсутствии различных моноклональных антител против-PDG и использовали для определения блокирующего поведения тестируемых антител, как показано в табл. 15.
- 44 034770
Таблица 15
Ингибирование связывания человеческого PD-L1 с PD-1 моноклональными антителами против PD-1, экспрессируемыми с мышиным Fc, измеренное на приборе OctetRed 96
Антитело против PD-1 Количество hPD- Ll-hFc Captured (нМ)
Нет антитела 0,77
H2aM7780N 1,07
H2aM7788N 0,74
H1M7789N 0,80
H2aM7790N 0,90
H2aM7791N 1,17
H2aM7794N 0,87
H2aM7795N 0,28
H2aM7796N 0,82
H2aM7798N 0,85
H1M7799N 0,79
H1M7800N 0,96
Связывание смеси 100 нМ hPD-l-mFc и 500 нМ моноклонального антитела противPD-1 (нМ) % Блокирования
0, 07 0
-0, 01 114
0, 00 100
0, 05 29
-0, 01 114
0,23 -229
-0, 01 114
-0, 01 114
-0, 02 129
0, 01 86
0, 00 100
0, 00 100
Как показано в табл. 15, 9 из 11 антител против PD-1, тестированных на приборе Octet Red 96, демонстрировали сильное блокирование hPD-1-mFc от связывания с hPD-L1-hFc в интервале от 86% до полного блокирования связывания. Одно тестированное антитело против PD-1 (H1M7789N) показало более слабое блокирование связывания hPD-1-mFc с hPD-L1-hFc с 29% блокировкой. Одно тестированное антитело (H2aM7791N) демонстрировало способность усиливать связывание hPD-1-mFc с hPD-L1hFc.
Далее, исследования ингибирования для моноклональных антител против PD-1, экспрессируемых с человеческим Fc, проводили на приборе Biacore 3000. Сначала, 100 нМ рекомбинантного PD-1 человека, экспрессируемого с С-концевой Fc меткой человеческого IgG1 (hPD-1-hFc; SEQ ID: 324) инкубировали с 500 нМ каждого моноклонального антитела против PD-1 в течение по меньшей мере 2 ч до прохождения теста на ингибирование. Поверхность сенсора СМ5 Biacore сначала дериватизировали поликлональными кроличьими антителами против мышиных антител (GE Catalog# BR-1008-38), используя стандартную химию EDC-NHS. Приблизительно 730 RU рекомбинантного человеческого PD-L1, экспрессируемого с С-концевой Fc меткой мышиного IgG2a (hPD-L1.mFc; SEQ ID: 326) затем подвергали захвату с последующей инъекцией 100нМ hPD-1.hFc в присутствии и отсутствии различных моноклональных антител против PD-1 при скорости потока, равной 25 мкл/мин в течение 3 мин. Весь эксперимент проводили при 25°С в подвижном буфере, содержащем 0,01 М HEPES pH7,4, 0,15M NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,05% об/об поверхностно-активное вещество Tween-20 (подвижный буфер HBS-ЕТ). Ответы связывания в режиме реального времени регистрировали в течение всего эксперимента, и ответ связывания в конце каждой стадии записывали. Связывание hPD-1-hFc с захваченным hPD-L1-mFc сравнивали в присутствии и отсутствии различных моноклональных антител против-PDn и применяли для определения блокирующего поведения тестируемых антител, как показано в табл. 16.
- 45 034770
Таблица 16. Ингибирование связывания человеческого PD-L1 с PD-1 моноклональными антителами против PD-1, экспрессируемыми с человеческим Fc, измеренное на приборе Biacore 3000
Моноклональное антитело против PD-1 500нМ моноклонального антитела против PD-1 (RU) Связывание смеси ЮОнМ hPD-l.hFc и 500 нМ моноклонального антитела против PD-1 (RU) % Блокирования
Без антитела N/A 100±1,78 N/A
Н4Н9019Р -2 -1 101
Н4хН9034Р -4 -5 105
Н4хН9035Р -3 -4 104
Н4хН9037Р -4 -4 104
Н4хН9045Р -4 -5 105
Н4Н9048Р2 -7 9 91
Н4Н9057Р2 58 57 43
Н4Н9068Р2 -2 365 -265
Н4хН9119Р2 -5 -5 105
Н4хН9120Р2 1 0 100
Н4хН9128Р2 -5 -5 105
Н4хН9135Р2 -3 -3 102
Н4хН9145Р2 -8 -6 106
Н4хН8992Р 3 2 98
Н4хН8999Р 1 0 100
Н4хН9008Р 0 1 99
H4H7795N2 -5 -6 106
H4H7798N -6 -6 106
Н4Н9008Р -7 -7 107
Н4Н9048Р2 -4 6 94
Как показано в табл. 16, 18 из 20 антител изобретения против PD-1, тестированных на приборе Biacore 3000, показали сильное блокирование hPD-1-hFc от связывания с hPD-L1-mFc с показателем блокировки в интервале от 96% до 100%. Одно антитело демонстрировало способность усиливать связывние hPD-1-hFc с hPD-L1-mFc. В этом иследовании, одно из тестированных антител изобретения (Н4Н9057Р2) демонстрировало неспецифическое фоновое связывание с поверхность захвата против мышиного Fc.
Пример 6. Перекрестное конкурирование между антителами против PD-1 на Octet.
Конкуренцию за связывание между моноклональными антителами против PD-1 определяли, используя тест с интерферометрией в режиме реального времени, биослоя без метки на биосенсоре Octet RED384 (Pall ForteBio Corp.). Весь эксперимент проводили при 25°С в 0,01 М HEPES pH7,4, 0,15М NaCl, 3 мМ EDTA, 0,05% об/об поверхностно-активного вещества Tween-20, 0,1 мг/mL BSA (Octet HBS-ET буфер) при встряхивании планшета со скоростью 1000 об/мин. Чтобы оценить, способны ли 2 антитела конкурировать друг с другм за связывание с их соответствующими эпитопами на рекомбинантно экспрессируемом PD-1 человека с С-концевой myc-myc-гексагистидиновой меткой (hPD-1-ММН; SEQ ID: 321), сначала проводили захват приблизительно 0,1 нМ hPD-1-MMH поверхностью наконечников биосенсора Octet, покрытых антителом против Пента-His (Pall ForteBio Corp., # 18-5079) посредством погружения наконечников в течение 5 мин в лунки, содержащие раствор 50 мкг/мл hPD-1-MMH. Наконечники биосенсора с захваченным антигеном затем насыщали первым моноклональным антителом против PD-1 (в дальнейшем именуемым mAb-1) посредством погружения в лунки, содержащие раствор 50 мкг/мл mAb-1 в течение 5 мин. Наконечники биосенсора затем последовательно погружали в лунки, содержащие раствор 50 мкг/мл второго моноклонального антитела против PD-1 (в дальнейшем именуемого mAb-2). Наконечники биосенсорапромывали в буфере Octet HBS-ET между каждой стадией эксперимента. Ответ связывания в режиме реального времени регистрировали в ходе эксперимента и ответ связывания в конце каждой стадии записывали. Ответ связывания mAb-2 с hPD-1-MMH, предварительно образовавшег комплекс с mAb-1, сравнивали, и определяли конкурентное/неконкурентное поведение различных моноклональных антител против PD-1. Результаты обобщены в табл. 17 (*Самоконкурирующие mAb2 не приведены).
- 46 034770
Таблица 17. Перкрестная конкуренция между парами выбранных антител против PD-1
Первое применяемое антитело applied (шАЫ) шАЬ2 антитела, с показанной конкуренцией с шАЬ1*
Н4хН8992Р Н4хН8999Р, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, Н4хН9135Р2, Н4хН9034Р, H2aM7790N, Н4хН9035Р, Н4хН9037Р, Н4хН9045Р, H2aM7795N
Н4хН8999Р Н4хН8992Р, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H4xH9008P
H1M7799N H2aM7780N H1M7800N H2aM7788N H2aM7794N H4xH8992P, H4xH8999P, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H4xH9008P H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H4xH9008P H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H4xH9008P
H2aM7798N H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H4xH9008P
- 47 034770
Н4хН8992Р, Н4хН8999Р, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4хН9145Р2 H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H4xH9008P H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4Н9057Р2 H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N, H4xH9048P2 H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9128P2,
Н4хН9120Р2 H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H4xH9048P2 H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2,
Н4хН9128Р2 H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H4xH9008P, H4H9066P2, H4xH9048P2 H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4Н9019Р H2aM7788N, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4хН9119Р2 H2aM7788N, H4H9019P, H4xH9135P2, H4xH9034P, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4хН9135Р2 H2aM7788N, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9034P, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4хН9034Р H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H2aM7788N, H2aM7790N, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N H4xH8992P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7788N, H2aM7794N, H2aM7798N,
H2aM7790N H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4xH9034P, H4xH8999P, H4xH9008P H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4хН9035Р H2aM7788N, H4H9019P, H4XH9119P2, H4xH9034P, H4xH9135P2, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N H4xH8992P, H4xH8999P, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2,
Н4хН9037Р H2aM7788N, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9034P, H4xH9135P2, H4xH9035P, H4xH9045P, H2aM7795N, H2aM7791N
- 48 034770
Н4хН9045Р Н4хН8992Р, Н4хН8999Р, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4H9057P2, H4xH9120P2, Н4хН9128Р2, H2aM7788N, Н4Н9019Р, Н4хН9119Р2, Н4хН9034Р, Н4хН9135Р2, Н4хН9035Р, Н4хН9037Р, H2aM7795N, H2aM7791N
H2aM7795N Н4хН8992Р, Н4хН8999Р, H1M7799N, H2aM7780N, H1M7800N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4H9057P2, H2aM7788N, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9034P, H4xH9135P2, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7791N
Н4хН9008Р H4xH8999P, H2aM7780N, H2aM7794N, H2aM7798N, H4xH9145P2, H4xH9128P2, H2aM7790N, H4H9068P2, H1M7799N, H4xH9048P2
H2aM7791N H2aM7788N, H4H9057P2, H4H9019P, H4xH9119P2, H4xH9135P2, H4xH9034P, H4xH9035P, H4xH9037P, H4xH9045P, H2aM7795N
Н4Н9068Р2 H4xH9128P2, H4xH9008P, H1M7789N, H4xH9048P2
H1M7789N H4xH9008P, H4H9068P2, H4xH9048P2
Н4хН9048Р2 H4H9057P2, H4xH9120P2, H4xH9128P2, H4H9019P, H4xH9008P, H4H9068P2, H1M7799N
Вторую конкуренцию за связывание между панелью выбраных моноклональных антител противPD-1 определяли, используя тест с интерферометрией в режиме реального времени, биослоя без метки на биосенсоре Octet RED384 (Pall ForteBio Corp.). Весь эксперимент проводили при 25°С в 0,01 М HEPES pH7,4, 0,15М NaCl, 3 мМ EDTA, 0,05% об/об поверхностно-активного вещества Tween-20, 0,1 мг/mL BSA (Octet HBS-ET буфер) при встряхивании планшета со скоростью 1000 об/мин. Чтобы оценить, способны ли 2 антитела конкурировать друг с другом за связывание с их соответствующими эпитопами на hPD-1-MMH, сначало проводиои захват приблизительно 0,25 нМ hPD-1-MMH на поверхности наконечников биосенсора Octet, покрытых антителом против Пента-His (Fortebio Inc, # 18-5079), посредством погружения наконечников на 150 с в лунки, содержащие раствор 10 мкг/мл hPD-1-MMH. Наконечники биосенсора с захваченным антиген затем насыщали первым моноклональным антителом против PD-1 (в дальнейшем называемым mAb-1) посредством погружения в лунки, содержащие раствор 100 мкг/мл mAb-1 на 5 мин. Наконечники биосенсора затем последовательно погружали в лунки, содержащие раствор 100 мкг/мл второго моноклонального антитела против PD-1 (в дальнейшем называемого mAb-2) на 4 мин. Все биосенсоры промывали в буфере Octet HBS-ET между каждой стадией эксперимента. Ответ связывания в режиме реального времени регистрировали в ходе эксперимента и ответ связывания в конце каждой стадии записывали, как показано на фиг. 2. Ответ связывания mAb-2 с hPD-1-MMH, предварительно образовавшего комплекс с mAb-1 сравнивали и определяли конкурентное/неконкурентное поведение различных моноклональных антител против PD-1. Результаты обобщены в табл. 18 (*Самоконкурирующие mAb2 не приведены).
Таблица 18. Перекрестная конкуренция между парами выбранных антител против PD-1
Первое применимое Антитела шАЬ2 с показанной
антитело (шАЫ) конкуренцией с шАЫ*
H4H7795N2 H4H7798N
H4H7798N H4H7795N2, ; Н4Н9008Р
Н4Н9008Р H4H7798N; Н4Н9068Р2
Н4Н9068Р2 Н4Н9008Р; Н4Н9048Р2
Н4Н9048Р2 Н4Н9068Р2
При экспериментальных условиях, раскрытых в данном Примере, H4H7795N2 перекрестно конкурировало с H4H7798N; H4H7798N перекрестно конкурировало с H4H7795N2 и Н4Н9008Р; Н4Н9008Р перекрестно конкурировало с H4H7798N и Н4Н9068Р2; Н4Н9068Р2 перекрестно конкурировало с Н4Н9008Р и Н4Н9048Р2.
Пример 7. Связывание антитела с клетками, сверхэкспрессирующими PD-1.
Связывание антител против PD-1 с человеческой линией эмбриональных клеток почки (HEK293; АТСС, #CRL-1573), стабильно трансфицированных непрцессированным PD-1 человека (аминокислоты 1-289 с учетным номером NP_005009.2) (HEK293/hPD-1), определяли посредством FACS.
Для теста адгезивные клетки отсоединяли с использованием трипсина или безферментного диссоциационного буфера и блокировали полной средой. Клетки центрифугировали и ресуспендировали при концентрации, равной 2,5-6х106 клеток/мл, в холодном PBS, содержащем 2% FBS. Родительские клетки HEK293 и клетки HEK293/hPD-1 затем инкубировали в течение 15-30 мин на льду с использованием 100 нМ каждого антитела против PD-1. Несвязанные антитела удаляли промывкой D-PBS, содержащим 2%
- 49 034770
FBS, и клетки последовательно инкубировали с аллофикоцианин-конъюгированным вторичным F(ab')2, распознающим либо человеческий Fc (Jackson ImmunoResearch, # 109-136-170) или мышиный Fc (Jackson ImmunoResearch, #115-136-146) в течение 15-30 мин на льду. Клетки промывали D-PBS, содержащим 2% FBS, для удаления несвязанного вторичного F(ab')2 и измерения флуоресценции проводили, используя либо проточный цитометр HyperCyte (IntelliCyt, Inc.) или проточный цитометр Accuri (BD Biosciences). Данные анализировали, используя программное обеспечение FlowJo (Tree Star).
Таблица 19. Связывание антител против PD-1 с клетками HEK293/hPD-1 и родительскими клетками HEK293 по данным FACS
Антитело FACS на родительских клетках HEK293 [MFI] FACS на клетках HEK293/hPD-l [MFI] Отношение клеток HEK293/hPD-l к родительским клеткам НЕК293
H1M7789N 262 24166 92,3
H1M7799N 255 6855 26, 9
H1M7800N 275 6812 24,7
H2aM7780N 320 23656 73, 8
H2aM7788N 305 23112 75, 7
H2aM7790N 270 47310 175, 5
H2aM7791N 274 4948 18,0
H2aM7794N 270 19127 71,0
H2aM7795N 288 817 2,8
H2aM7796N 297 49755 167,8
H2aM7798N 300 23443 78,1
H4H9019P 111 8610 77,2
H4H9057P2 141 6501 46, 1
H4H9068P2 285 1940 6, 8
H4xH8992P 358 17502 48,9
H4xH8999P 809 28875 35, 7
H4xH9008P 509 26233 51,5
H4xH9034P 147 10115 69, 0
H4xH9035P 108 9915 91,7
H4xH9037P 108 8787 81,4
H4xH9045P 95 8884 93,7
H4xH9048P2 102 7196 70, 8
H4xH9119P2 109 9142 84, 0
H4xH9120P2 109 9975 91,9
H4xH9128P2 135 9081 67,5
H4xH9135P2 114 9380 82,2
H4xH9145P2 226 11552 51,2
Как показано в табл. 19, 25 из 27 антител против PD-1 изобретения показывли сильное связывание с клетками HEK293/hPD-1 в сравнении со связыванием на родительской линии HEK293. Два антитела изобретения (H2aM7795N и Н4Н9068Р2) связывались слабее с клетками, экспрессирующими PD-1 человека в сравнении с другими тестируемыми антителами.
Чтобы дополнительно характеризовать антитела изобретения против PD1, дозозависимое связывание с человеческой линией эмбриональных клеток почки (HEK293; АТСС, #CRL-1573) стабильно трансфицированных непрцессированным PD-1 человека (аминокислоты 1-289 с учетным номером NP_005009.2) (HEK293/hPD-1), определяли посредством FACS.
Для теста адгезивные клетки отсоединяли с использованием трипсина и блокировали полной средой. Клетки центрифугировали и ресуспендировали при концентрации, равной 6х106 клеток/мл в окрашивающем буфере (1% FBS в PBS). Для определения EC50 и Emax антител против PD1, 90 мкл суспензии клеток инкубировали в течение 30 мин на льду с серийным разведением антител против PD-1 и контролей, разбавленных до конечной концентрации в интервале от 5 пМ до 100 нМ (ни одного образца mAb не было включено как отрицательного контроля) в окрашивающем буфере. Клетки затем центрифугировали и сгустки однократно промывали окрашивающим буфером для удаления несвязанных антител. Клетки последовательно инкубировали в течение 30 мин на льду либо с аллофикоцианин-конъюгированных вторичным F(ab')2, распознающим человеческий Fc (Jackson ImmunoResearch, # 10 9-136-170) или мышиный
- 50 034770
Fc (Jackson ImmunoResearch, #115-136-071). Клетки центрифугировали и сгустки однократно промывали окрашивающим буфером для удаления несвязанного вторичного F(ab')2, и затем фиксировали в течение ночи с использованием 1:1 разведения Cytofix (BD Biosciences, # 554655) и окрашивающего буфера. На следующий день, клетки центрифугировали и сгустки однократно промывали окрашивающим буфером, ресуспендировали и отфильтровывали. Измерения флуоресценции проводили на цитометре Hypercyt® и анализировали в ForeCyt™ (IntelliCyt; Albuquerque, NM) для определения средних интенсивностей флуоресценции (MFI). Значения EC50 рассчитывли по четырехпараметрическому логистическому уравнению для 11 -точечной кривой ответа, используя GraphPad Prism. Emax для каждого антитела определяли как
- 51 034770
Как показано в табл. 20, 25 из 28 антител против PD1 изобретения показали дозозависимое связывание с клетками HEK293/hPD-1 со значениями ЕС50 в интервале от 33,18 пМ до 2,59 нМ и значениями Emax в интервале от 37,789 до 11,3 68 MFI. Три антитела изобретения против PD1 не демонстрировали сильного связывания с клетками HEK293/hPD-1, и, следовательно, значение не могло быть определено. Ни один из изотипических контролей не демонстрировал какого-либо измеряемого связывания в данном тесте.
Как показано в табл. 21, 3 из 6 антител против PD1 изобретения показали дозозависимое связывание с клетками HEK293/hPD-1 со значениями EC50 в интервале от 509 пМ до 4,81 нМ и значения Emax в интервале от 39,774 до 14,111 MFI. Три тестированных антитела изобретения связывались с клетками HEK293/hPD-1, но не достигали плато. Следовательно, их точные значения EC50 не могли быть определены и их значения EC50 считаются неокончательными. Ни один из изотипических контролей не демонстрировал какого-либо измеряемого связывания в данном тесте.
Пример 8. Блокирование PD-1-индуцированной понижающей регуляции Т-клеток в тесте с Тклеточным/АРС люциферазным репортером.
Активация Т-клеток достигается посредством стимуляции Т-клеточных рецепторов (TcR), которые распознают конкретные пептиды, представленные основными белками комплекса гистосовместимости класса I или II на антигенпрезентирующих клетках (АРС). Активированные TcR в свою очередь инициируют каскад событий передачи сигналов, которые могут регистрироваться репортерными генами, управляемыми факторами транскрипции, такими как активаторный белок 1 (АР-1), ядерный фактор активированных Т-клеток (NFAT) или энхансер ядерного фактора каппа-легкой цепи активированных В-клеток (NFKb). Т-клеточный ответ модулируется через мобилизацию корецепторов, экспрессируемых либо конститутивно или индуцируемо на Т-клетках. Одним таким рецептором является PD-1, отрицательный регулятор Т-клеточной активности. PD-1 взаимодействует со своим лигандом, PD-L1, который экспрессируется на целевых клетках, включающих АРС или опухолевые клетки, и действует для доствки ингибиторных сигналов посредством рекрутинга фосфатаз к TcR сигналосоме, что приводит в результате к подавлению положительной передачи сигналов.
Способность антител против PD-1 антагонизировать PD-1/PD-L1-опосредованную передачу сигналов через рецептор PD-1 в человеческих Т-клеточных линиях оценивали, используя аналитический тест in vitro на клеточной основе, показанный на фиг. 1. Биотест был разработан для измерения передачи сигналов Т-клетками, индуцированной взаимодействием между АРС и Т-клетками с использованием смешанной культуры, полученной из двух клеточных линий млекопитающих: Клеток Юркат (линия иммортализованных Т-клеток) и клеток Раджи (линия В-клеток). Для первого компонента биотеста, клетки Юркат клона E6-1 (АТСС, #TIB-152) трансдуцировали с использованием репортера Cignal Lenti AP-1 Luc (Qiagen-Sabiosciences, #CLS-011L) в соответствии с инструкциями производителя. Лентивирус кодирует ген люциферазы светлячка под управлением минимального CMV промотора, тандемные повторы элемента ТРА-индуцируемого транскрипционного ответа (TRE) и ген резистентности к пуромицину. Сконструированную клеточную линию Юркат последовательно трансдуцировали химерой PD-1, содержащей внеклеточный домен PD-1 человека (аминокислоты от 1 до 170 человеческого PD1; учетный номер NP_005009.2) и трансмембранный и цитоплазматический домены человеческого CD300a (аминокислоты от 181 до 299 человеческого CD300a; учетный номер NP 009192.2).
Полученную в результате стабильную клеточную линию (Юркат/АР1-Luc/hPD1-hCD300a) отбирали и поддерживали в RPMI/10% FBS/пенициллин/стрептомицин/глутамин, дополненной 500 мкг/мл G418+1 мкг/мл пуромицина.
Для второго компонента биотеста, клетки Раджи (АТСС, #CCL-86) трансдуцировали с использованием человеческого гена PD-L1 (аминокислоты 1-290 из учетного номера NP_054862.1), которые клонировали в лентивирусную (pLEX) векторную систему (Thermo Scientific Biosystems, #OHS4735). Клетки Раджи, положительные к PD-L1 (Раджи/ hPD-L1), изолировали посредством FACS, используя антитело к PD-L1, и поддерживали в Iscove/10% FBS/пенициллин/стрептомицин/глутамин, дополненной 1 мкг/мл пуромицина.
Для стимуляции взаимодействия АРС/Т-клетки, использовали биспецифическое антитело, состоящее из одного плеча Fab, которое связывается с CD3 на Т-клетах, и другое одно плечо связывания Fab, которое связывается с CD20 на клетках Раджи (биспецифическое антитело CD3xCD20; например, как раскрыто в US20140088295). Присутствие биспецифической молекулы в аналитическом тесте приводит к активации Т-клеток и АРС посредством образования мостиков между субъединицами CD3 на Т-клетках с CD20, эндогенно экспрессируемыми в клетках Раджи. Было продемонстрировано, что лигирование CD3 с антителами против CD3 ведет к активации Т-клеток. В данном биотесте, антитела, блокирующие взаимодействие PD1/PD-L1, спасают активность Т-клеток посредством выведения из строя ингибиторного сигнального пути, что впоследствии приводит к увеличенной активации API-Luc.
В люциферазном биотесте, RPMI1640, дополненную 10% FBS и пенициллин/стрептомицин/глутамином, применяли в качестве аналитической среды для получения клеточных суспензий и разведений антитела для проведения скрининга моноклональных антител (mAbs) против PD1. В день скрининга, определяли значения ЕС50 mAbs против PD1, в присутствии фиксированной концентрации биспецифиче
- 52 034770 ского антитела CD3xCD20 (30 пМ), а также ЕС50 для отдельного биспецифического антитела. В следующем порядке клетки и реагенты добавляли в 96-луночные белые, плоскодонные планшеты. Для определений ЕС50 mAb против PD1, получали первую фиксированную концентрацию биспецифического антитела CD3xCD20 (окончательная 30 пМ) и добавляли в лунки планшета для микротитрования. Затем добавляли 12-точечные серийные разведения mAb против PD1 и контроли (конечные концентрации в интервале от 1,7 пМ до 100 нМ; плюс лунки со средой для анализа по отдельности). Для определения ЕС50 биспецифического антитела (отдельно взятого), биспецифическое антитело, при конечных концентрациях в интервале от 0,17 пМ до 10 нМ (плюс лунки со средой для анализа по отдельности), добавляли в лунки планшета для микротитрования. Последовательно получали суспензию с 2,5х106/мл клеток Раджи/hPD-L1, и добавляли 20 мкл на лунку (при конечном числе 5х104 клеток/лунку). Планшеты оставляли при комнатной температуре (15-20 мин), в то время как получали суспензию с 2,5х106/мл Юркат/AP1-Luc/hPD1(ecto)-hCD300a (ТМ-Цито). 20 мкл суспензии клеток Юркат (при конечном числе 5х104 клеток/лунку) добавляли в лунку. Планшеты, содержащие совмещенную культуру, инкубировали в течение 5-6 ч при 37°С/5% СО2. Образцы тестировали в двух повторностях, и люциферазную активность затем обнаруживали после добавления реагента ONE-Glo™ (Promega, # E6051), а относительные световые единицы (RLU) измеряли на люминометре Виктора.
Значения RLU для каждого скринированного антитела нормализовали посредством установки условия анализа с фиксированной (30 пМ) концентрацией биспецифического антитела CD3/CD20, но без антитела против PD-1, до 100%. Это условие соответствует максимальному ответу API-Luc, вызываемому биспецифической молекулой в присутствии ингибиторного сигнала PD-1/PD-L1. При добавлении антитела против PD-1, ингибиторный сигнал подавляется, и увеличенная стимуляция показана здесь как Emax, процентное увеличение сигнала в присутствии наивысшей тестируемой дозы антитела (100 нМ). Для сравнения активности тестируемого антитела против PD1, концентрация антитела, при которой нормализованное значение RLU достигало 150% активации, определяли из четырехпараметрическому логистическому уравнению для 12-точечной кривой ответа, используя GraphPad Prism. Результаты обобщены в табл. 22 и табл. 23, соответственно.
Таблица 22. Блокирование антителом против PD1 PD-1/PD-L1-зависимого ингибирования сигнального пути API-Luc в эксперименте 1
Антитело Антагонистический анализ Концентрация (Μ) антитела при 150% активации Эксперимент 1 Антагонистически й анализ Ещах
средн. [%] нМ Эксперт @ 100 -тент 1
H1M7789N Ν/Α 135
H1M7799N 2,97Е-08 183
H1M7800N 1,65Е-08 182
H2aM7779N 8,92Е-09 214
H2aM7780N 6,52Е-09 228
H2aM7781N 6,70Е-09 230
H2aM7782N 9,96Е-09 215
H2aM7787N 1,38Е-08 215
H2aM7788N 4,72Е-09 189
H2aM7790N 5,24Е-09 234
H2aM7791N Ν/Α 103
H2aM7794N 4,09Е-08 170
H2aM7795N Ν/Α 109
H2aM7796N Ν/Α 121
H2aM7798N 7,99Е-10 239
H4H9019P 1,79Е-08 180
H4xH9034P 2,62Е-09 202
H4xH9035P 1,20Е-09 227
H4xH9037P 2,82Е-09 195
H4xH9045P 2,23Е-08 176
H4xH9048P2 Ν/Α 138
H4H9057P2 2,68Е-08 212
H4H9068P2 Ν/Α 102
H4xH9119P2 1,11Е-08 163
- 53 034770
Ы/Л=неприменимо, так как при тестируемых концентрациях эти антитела не активируют 150%.
Таблица 23. Блокирование антителом против PD1 PD-1/PD-L1-зависимого ингибирования сигнального пути API-Luc в эксперименте 2
Антитело Антагонистический анализ Концентрация (М) антитела при 150% активации Эксперимент 2 Антагонистический анализ Етах средн. [%] @ 100 нМ Эксперимент 2
H4H7795N2 N/A 110
H4H7798N 1,59Е-10 343
Н4Н9008Р 9,84Е-08 150
Н4Н9048Р N/A 134
h!gG4 изотипический контроль N/A 98
NA неприменимо, так как при тестируемых концентрациях эти антитела не активируют 150%.
Как показано в табл. 22, 25 из 31 протестированного антитела изобретения против PD-1 блокировали ингибирование PD-1/PD-L1 со значениями Emax в интервале от 239 до 163. Шесть из 31 антитела изобретения против PD-1 не демонстрировали существенной блокады взаимодействия PD1/PD-L1 при тестировании в данном анализе.
Как показано в табл. 23, 2 из 4 протестированных антител изобретения против PD-1 блокировали ингибирование PD-1/PD-L1 со значениями Emax, равными 150 и 343%, соответственно. 2 из 4 антител изобретения против PD-1 не демонстрировали существенной блокады взаимодействия PD1/PD-L1 при тестировании в данном анализе.
Пример 9. Эффективность действия антител против PD-1 in vivo.
Чтобы определить эффект выбранного числа антител изобретения против PD-1 на релевантной модели in vivo, три исследования роста опухоли MC38.ova, включающие подкожную инъекцию опухолевых клеток и начинающиеся в различные Дни, проводили на мышах, которые были гомозиготными для экспрессии внеклеточного домена PD-1 человека вместо внеклеточного домена мышиного PD-1 (PD-1 мышей Humln) на основе 75% штамма 129 С57/В16/25%.
Для исследований, мышей равномерно разделяли в соответствии с массой тела на 5 групп лечения или контрольных групп для Исследования 1 (5 мышей на группу), 8 групп лечения или контрольных групп для Исследования 2 (5 мышей на группу), и 5 групп лечения или контрольных групп для Исследования 3 (7 мышей на группу). В День 0, мышей подвергали анестезии посредством ингаляции изофлураном и затем вводили посредством подкожной инъекции в правый бок клетки 5х105 MC38.ova в суспензии 100 мкл DMEM для Исследования 1 или клетки 1 х 106 MC38.ova в суспензии 100 мкл DMEM для Исследования 2 и Исследования 3. Для Исследования 1, группам лечения вводили посредством внутрибрюшинной инъекции 200 мкг либо одно из трех антител изобретения против PD-1, или изотипическое
- 54 034770 контрольное антитело с нерелевантной специфичностью в Дни 3, 7, 10, 14 и 17 эксперимента, в то время как одна группа мышей не подвергалась лечению. Для Исследования 2 группам лечения вводили посредством внутрибрюшинной инъекции либо одно из трех антител изобретения против PD-1 при 10 мг/кг или 5 мг/кг на дозу, одно антитело изобретения (H4H7795N2) при 10 мг/кг на дозу, или изотипическое контрольное антитело с нерелевантной специфичностью при 10 мг/кг в Дни 3, 7, 10, 14 и 17 эксперимента. Для Исследования 3, группам лечения вводили посредством внутрибрюшинной инъекции либо одно из двух антител изобретения против PD-1 при 5 мг/кг или 2,5 мг/кг на дозу или изотипическое контрольное антитело с нерелевантной специфичностью при 5 мг/кг в Дни 3, 7, 10, 14 и 17 эксперимента. Экспериментальное дозирование и протокол лечения для групп мышей показаны в табл. 24.
Таблица 24. Экспериментальное дозирование и протокол лечения для групп мышей
Исследование # Тестируемые образцы Дозирумое количество в каждой временной отметке дозирования Интервал дозирования
1 Изотипический контроль 200 мкг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Без лечения N/A N/A
H4H7798N 200 мкг Дни 3, 7, 10, 14, 17
H4H7795N2 200мкг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Н4Н9008Р 200 мкг Дни 3, 7, 10, 14, 17
2 Изотипический контроль 10 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
H4H7795N2 10 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
H4H7798N 10 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
H4H7798N 5 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Н4Н9048Р2 10 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Н4Н9048Р2 5 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Н4Н9008Р 10 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Н4Н9008Р 5 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
3 Изотипический контроль 5 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
H4H7798N 5 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
H4H7798N 2,5 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Н4Н9008Р 5 мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Н4Н9008Р 2,5мг/кг Дни 3, 7, 10, 14, 17
Для исследований, регистрировали средний объем опухолей, определенный посредством измерений циркулем, и процент выживаемости в день 14 или 17 и день 23 или 24 каждого эксперимента для каждой группы лечения. В дополнение, также оценивали число безопухолевых мышей в конце исследования (день 42 для исследования 1 и день 31 для исследования 2 и исследования 3). Результаты, выраженные в виде среднего объема опухоли (мм3) (±SD), процента выживаемости и числа безопухолевых мышей, показаны в табл. 25 для исследования 1, табл. 26 для исследования 2 и табл. 27 для исследования 3.
- 55 034770
Таблица 25. Средний объем опухоли, процент выживаемости и число безопухолевых мышей в каждой группа лечения по результатам исследования 1 опухолей in vivo
Группа лечения (п=5) Объем опухоли, мм3 среднее (±СО)
День 17 День 2 3
200 мкг/мышь 200 мкг/мышь
Без лечения 189 (±110) 554 (±317)
Изотипический контроль 86 (±114) 515 (±859)
H4H7798N 0 (0) 0 (0)
Н4Н9008Р 14 (±19) 205 (±312)
H4H7795N2 89 (±176) 445 (±889)
Выживаемость, % Без опухолевые мыши
День 42 День 2 3 День 42
200 мкг/мышь 200 мкг/мышь 200 мкг/мышь
1/5 (20%) 100% 1/5 (20%)
2/5 (40%) 60% 2/5 (40%)
5/5 (100%) 100% 5/5 (100%)
3/5 (60%) 100% 3/5 (60%)
3/5 (60%) 80% 3/5 (60%)
Как показано в табл. 25 для исследования 1, у мышей, подвергнутых лечению одним антителом изобретения, H4H7798N, не развивались обнаруживаемые опухоли во время прохождения исследования. Мыши, подвергнутые лечению Н4Н9008Р, проявляли пролонгированный сниженный объем опухоли в сравнении с контролями в дни 17 и 24 исследования, причем 3 из 5 мышей или 4 из 5 мышей были безопухолевыми к концу эксперимента, соответственно. Напротив, лечение с использованием одного из антител против PD1, H4H7795N2, не демонстрировало существенной эффективности при снижении объема опухоли в данном исследовании в сравнении с контролями. Ко дню 23 исследования, 1 из 5 мышей умерла в группе с H4H7795N2, и 2 из 5 мышей умерли в группе лечения изотипическим контролем. В группе без лечения и группе изотипического контроля несколько мышей проявляли спонтанную регрессию опухолей (1 из 5 мышей и 2 из 5 мышей, соответственно).
Таблица 26. Средний объем опухоли, процент выживаемости и число безопухолевых мышей в каждой группе лечения по результатам исследования 2 опухоли in vivo
Группа лечения (п=5) Объем опухоли, мм3 средний (+SD) Выживаемость,% Безопухолевые мыши
Дни 17 День 2 4 День 17 День 24 День 31
5 мг/кг 10 мг/кг 5 мг/кг 10 мг/кг 5 мг/кг 10 мг/кг 5 мг/кг 10 мг/кг 5 мг/кг 10 мг/кг
Изотипический контроль N/A 449 (±434) N/A 824 (±858) N/A 100% N/A 60% N/A 1/5 (20%)
H4H7798N 17 (±38) 0 (0) 104 (±233) 0 (0) 100% 100% 100% 100% 4/5 (80%) 5/5/ (100%)
Н4Н9008Р 91 (±204) 12 (±28) 228 (±509) 96 (±215) 100% 100% 80% 100% 4/5 (80%) 4/5 (80%)
Н4Н9048Р2 94 (±160) 10 (±21) 328 (±559) 67 (±150) 100% 100% 80% 100% 3/5 (60%) 4/5 (80%)
H4H7795N2 N/A 124 (±209) N/A 359 (±657) N/A 100% N/A 80% N/A 2/5 (40%)
Как показано в табл. 26 для исследования 2, у мышей, подвергнутых лечению одним антителом изобретения, H4H7798N при 10 мг/кг, не развивались обнаруживаемые опухоли во время прохождения исследования. Группы мышей, подвергнутых лечению при 10 мг/кг либо Н4Н9008Р или Н4Н9048Р2, проявляли значительно сниженный объем опухоли в сравнении с контролями в дни 17 и 24 исследования. Четыре из 5 мышей в каждой группе, подвергнутой лечению 10 мг/кг либо Н4Н9008Р или Н4Н9048Р2, были безопухолевыми в день 31, в то время как в группе лечения изотипическим контролем только 1 из 5 животных было безопухолевым в результате спонтанной регрессии опухоли. Одно антитело, тестированное при 10 мг/кг, H4H7795N2, демонстрировало значительно уменьшенный объем опухоли в сравнении с контролями в дни 17 и 24 исследования, но это антитело было наименее эффективным антителом против PD1, причем только 2 из 5 мышей, выжили в конце эксперимента.
Дозозависимый ответ при подавлении опухоли при тестируемых дозах (5 мг/кг и 10 мг/кг) наблюдали в группах, подвергнутых лечению H4H7798N, Н4Н9008Р, и Н4Н9048Р2. Терапия с использованием H4H7798N или Н4Н9008Р при 5 мг/кг была менее эффективной, с 4 из 5 безопухолевых мышей в конце эксперимента в день 21, в то время как 5 из 5 мышей оставались безопухолевыми в обеих группах с дозой 10 мг/кг H4H7798N и Н4Н9008Р.
Тест Даннета при двухфакторном дисперсионном анализе ANOVA множественных сравнений показал, что различия в росте опухолей между группой, подвергнутой лечению изотипическим контрольным антителом при 10 мг/кг, в качестве эталона, и группами, подвергнутыми лечению при 10 мг/кг либо H4H7798N, Н4Н9008Р или Н4Н9048Р2, были статистически значимыми со значением р<0,005. Различия в росте опухоли между группой подвергнутой лечению изотипическим контрольным антителом при 10
- 56 034770 мг/кг, в качестве эталона, и и группами, подвергнутыми лечению при 5 мг/кг либо H4H7798N, Н4Н9008Р или Н4Н9048Р2 были также статистически значимыми со значением р<0,05.
Таблица 27. Средний объем опухоли, процент выживаемости и число безопухолевых мышей в каждой группе лечения по результатам исследования 3 опухолей in vivo
Группа лечения (п=7) Объем опухоли, мм3 среднее (±СО) Выживаемость, % Безопухолев. мыши
День 14 День 21 День 14 День 21 День 31
2,5 мг/ кг 5 мг/кг 2,5 мг/ кг 5 мг/кг 2,5 мг/кг 5 мг/ кг 2,5 мг/ кг 5 мг/ кг 2,5 мг/кг 5 мг/ кг
Изотип. контроль N/A 94 (+44) N/A 405 (±326) N/A 100% N/A 86% N/A 0/7 (0%)
H4H7798N 0 (0) 0 (0) 19 (+51) 13 (+35) 100% 100% 100% 100% 6/7 (86%) 6/7 (86%)
Н4Н9008Р 41 (±68) 7 (+20) 87 (±123) 16 (+42) 100% 100% 100% 100% 4/7 (57%) 6/7 (86%)
Как показано в табл. 27 для исследования 3, 6 из 7 мышей, подвергавшихся лечению одним антителом изобретения, H4H7798N, или еще одним антителом изобретения, Н4Н9008Р, при 5 мг/кг были безопухолевыми в конце эксперимента, в то время как в группе изотипического контроля не было безопухолевых животных. Одна опухоленесущая мышь в контрольной группе с IgG4 умерла в день 17 после имплантации. Только 4 из 7 мышей, подвергавшихся лечению Н4Н9008Р при дозе 2,5 мг/кг, оставались безопухолевыми в конце эксперимента. Различие в объемах опухолей на день 21 между группой с тестируемыми антителами против PD-1 и группой изотипического контроля было статистически значимым, как определяли посредством однофакторного дисперсионного анализа ANOVA с апостериорным критерием множественного сравнения Даннета с р<0,01. Все четыре антитела против PD-1 были равнозначно более эффективными при дозе 5 мг/кг, чем при дозе 2,5 мг/кг.
Пример 10. Протвоопухолевые эффекты комбинации антитела против PD-1 и антагониста VEGF на мышиной модели раннего лечения опухоли.
Модель раннего лечения опухоли была разработана для тестирования эффективности действия комбинации антитела против PD-1 и антагониста VEGF. Для данной модели, комбинированную терапию вводят вскоре после имплантации опухоли. В эксперименте также применяли антитело против PD-L1 по отдельности и в комбинации с антагонистом VEGF. Антитело против PD-1, применяемое в данном эксперименте, представляло собой антитело против мышиного PD-1 клона RPMI-14 с крысиным IgG2b (Bio X Cell, West Lebanon, NH). Антагонист VEGF, применяемый в данном эксперименте, представлял собой афлиберцепт (химерную молекулу на основе рецептора VEGF, также известную как VEGFловушка или VEGFR1R2-FcΔC1(a),полное описание которой представлено в другом разделе настоящего описания). Антитело против PD-L1, применяем в данном эксперименте, представляло собой моноклональное антитело против PD-L1 с VH/VL последовательностями антитела YW243.55S70 в соответствии с US20100203056A1 (Genentech, Inc.), с мышиным IgG2a, и, которое имело перекрестную реактивность с мышиным PD-L1.
Для данной экспериментальной модели, 1,0х106 опухолевых клеток Colon-26 имплантировали подкожно мышам BALB/c в день 0. Начиная в день 3, перед установлением измеряемых опухолей, мышей подвергали лечению с использованием одной из моно- или комбинированных терапий или контрольной комбинации, как приведено в табл. 28.
Таблица 28. Экспериментальное дозирование и группы лечения
Группа лечения Первое средство Второе средство
Контрольная комбинация IgG2a изотипический контроль (250 мкг, ВБ) hFc control (250 мкг, ПК)
только VEGF- Ловушка IgG2a изотипический контроль (250 мкг, ВБ) Афлиберцепт (10 мг/кг, ПК)
только против- PD-l против-PD-l mAb RPMI-14 (250 мкг, ВБ) hFc control (250 мкг, ПК)
только против- PD-Ll против-PD-Ll mAb (250 мкг, ВБ) hFc control (250 мкг, ПК)
VEGF-Ловушка ± против-PD-l против-PD-l mAh RPMI-14 (250 мкг, ВБ) Афлиберцепт (10 мг/кг, ПК)
VEGF-Ловушка ± против-PD-Ll против-PD-Ll mAb (250 мкг, ВБ) Афлиберцепт (10 мг/кг, ПК)
- 57 034770
Различные терапии вводили в пяти различных временных отметках в течение двухнедельного периода(т.е., инъекции в день 3, день 6, день 10, день 13 и день 19).
Животных в каждой терапевтической группе оценивали с позиций появления опухоли, объема опухоли, среднего времени выживаемости, и числа безопухолевых животных ко дню 50. Степень роста опухоли обобщена на фиг. 2 (кривые роста опухоли) и фиг. 3 (объем опухоли на день 28). Результаты также обобщены в табл. 29.
Таблица 29. Безопухолевые мыши в группах лечения
Группа лечения № Безопухолевых животных на День 50
Контрольная комбинация 0/10
только VEGF-Ловушка 3/10
только против-PD-l 4/10
только против-PD-Ll 5/10
VEGF-Ловушка + против-PD-l 7/10
VEGF-Ловушка + против-PD-Ll 9/10
Рост опухоли значительно снижался у животных, подвергаемых лечению комбинацией VEGFЛовушка + антитело против PD-1 в сравнении с режимами лечения, включающими оба терапевтических средства по отдельности (см. фиг. 2 и 3). Кроме того, выживаемость существенно возрастала в группе VEGF-Ловушка + антитело против PD-1, причем, по меньшей мере, 70% животных выживали ко дню 50 после имплантации опухоли. Напротив, для групп с монотерапией антителом против PD-1 и VEGFЛовушкой, выживаемость ко дню 50 составляла только 40% и 30% соответственно (см. фиг. 3 и табл. 29).
Пример 11. Клиническое испытание повторного дозирования с использованием антитела против PD-1 в качестве единственной терапии и в комбинации с другими противоопухолевыми терапиями у пациентов с опухолями на поздней стадии.
Данное испытание представляет собой исследование с повышением дозы антитела против PD-1 по отдельности или в комбинации с лучевой терапией, циклофосфамидом или обоими, у пациентов с опухолями на поздней стадии. Иллюстративное антитело против PD-1 (mAb), применяемое в данном примере, содержит HCVR из SEQ ID NO: 162 и LCVR из SEQ ID NO: 170.
Цели клинического исследования
Первичной целью исследования является характеризовать безопасность, переносимость, DLT mAb, вводимых ВВ в виде монотерапии, или в комбинации с целенаправленным облучением (преднамеренно, чтобы оно служило в качестве иммуностимулирующей терапии, в большей степени, чем, в основном, опухолеаблативной терапии), низкодозовым циклофосфамидом (терапией, которая демонстрировала ингибирование регуляторных Т-клеточных ответов), или обоих вариантов, у пациентов с опухолями на поздней стадии.
Вторичными целями исследования являются: (1) определить рекомендованную дозу для фазы 2 (RP2D) mAb в качестве монотерапии и в комбинации с другими противоопухолевыми терапиями (целенаправленным облучением, низкодозовым циклофосфамидом или обоими); (2) описать предварительную противоопухолевую активность mAb, по отдельности и с каждым партнером (партнерами) комбинации;
(3) характеризовать ФК mAb в качестве монотерапии и в комбинации с другими противоопухолевыми терапиями (целенаправленным облученим, низкодозовым циклофосфамидом или обоими); и (4) оценить иммуногенность mAb.
Проект исследования
Безопасность будет оцениваться в раздельных, стандартных 3+3 когортах с повышением дозы (при монотерапии, комбинации с лучевой терапией, комбинации с циклофосфамидом и комбинации с лучевой терапией плюс циклофосфамид). Выбор комбинированной терапии с облучением, циклофосфамидом или обоими будет основываться на оценке исследователем лучшего выбора терапии для индивидуального пациента при консультации со спонсором. Чтобы быть включенным в когорту для лучевой терапии, пациент должен иметь повреждение, которое может быть безопасно облучено, и для которого облучение при предусмотренных ограниченных, паллиативных дозах могло бы считаться соответствующим в медицинском отношении, и, по меньшей мере, одно другое повреждение, подходящее для оценки ответа. Пациент сможет участвовать, только если в когорте доступно вакантное место для выбранного лечения.
Пациенты будут проходить через процедуры скрининга для определения соответствия требованиям в интервале 28 дней перед начальным введением mAb. После включения пациентов в когорту монотерапии mAb, включение последующих когорт будет определяться наличием DLT в предшествующих когортах (т.е., отсутствием DLT в когорте из 3 пациентов, или не более чем 1 DLT в расширенной когорте из 6 пациентов), и доступности вакантных мест для пациентов. Запранированные уровни дозы при монотерапии составляют 1, 3, или 10 мг/кг, вводимые ВВ каждые 14 дней (2 недели).
Как только периоды наблюдения для одной или обеих когорт с монотерапией по 1 мг/кг или 3 мг/кг
- 58 034770 mAb завершаются без DLT в когорте из 3 пациентов или с не более чем 1 DLT в расширенной когорте из 6 пациентов, пациенты могут быть включены в когорту с комбинированием циклофосфамида или лучевой терапией с mAb при таком же уровне дозы как для монотерапии. Пациенты могут быть включены в когорту с комбинацией mAb+циклофосфамид/лучевая терапия, как только периоды наблюдения DLT как для когорты с уровнем дозы mAb + циклофосфамид, так и для когорты с таким уровнем дозы mAb + такой же режим лучевой терапии завершаются без DLT в когорте из 3 пациентов, или с не более чем 1 DLT в расширенной когорте из 6 пациентов.
Как только период наблюдения DLT в когорте с монотерапией 3 мг/кг mAb завершается без DLT в когорте из 3 пациентов, или не более чем с 1 DLT в расширенной когорте из 6 пациентов, может быть также включена когорта с монотерапией 10 мг/кг mAb.
Когорты с монотерапией mAb 3 мг/кг и 10 мг/кг будут включены только тогда, когда требуемое число пациентов в когорте с монотерапией предшествующей дозой (т.е., 1 мг/кг и 3 мг/кг, соответственно) пройдет через день 28 периода наблюдения DLT без демонстрации максимальной переносимой дозы (MTD) для этого уровня дозы. Когорта 1 мг/кг mAb с комбинированным лечением будет включена только после завершения периода наблюдения DLT для когорты с монотерапией 1 мг/кг. Комбинированные когорты, получающие 3 мг/кг mAb, будут включены, только тогда, когда требуемое число пациентов в соответствующих комбинированных когортах с 1 мг/кг пройдет через период наблюдения DLT без демонстрации MTD. Когорты с тройной комбинацией, сочетающие mAb с циклофосфамидом и режимом облучения будут включены только тогда, когда требуемое число пациентов в обеих соответствующих когортах с двойной комбинацией при данном уровне дозирования пройдет период наблюдения DLT без демонстрации MTD.
Табл. 30 обобщает когорты с повышением дозы, в которые будут включены пациенты.
Таблица 30. Возможные когорты с повышением дозы
η Возможная заданная когорта лечения
3-6 монотерапия 0,3 мг/кг mAb (будет включена, только если MTD < 1 мг/кг mAb)
3-6 монотерапия 1 мг/кг mAb
3-6 монотерапия 3 мг/кг1* mAb
3-6 монотерапия 10 мг/кг2) mAb
3-6 1 мг/кгя mAb + лучевая терапия (6 Грх5)
3-6 1 мг/кгя mAb + лучевая терапия (9 ГрхЗ)
3-6 3 мг/кг2) (или MTD) mAb + циклофосфамид
3-6 3 мг/кг2) (или MTD) mAb + лучевая терапия (6 Грх5)
3-6 3 мг/кг2) (или MTD) mAb + лучевая терапия (9 ГрхЗ)
3-6 3 мг/кг2) (или MTD) mAb + лучевая терапия (6 Грх5) + циклофосфамид
3-6 3 мг/кг2) (или MTD) mAb + лучевая терапия (9 ГрхЗ) + циклофосфамид
DLT определяют как любое из следующих: негематологическая токсичность (например, увеит, или любое другое irAE), или гематологическая токсичность (например, нейтропения, тромбоцитопения, фебрильная нейтропения).
Максимальную переносимую дозу (MTD) определяют как наивысшую дозу, при которой менее чем треть расширенной когорты из 6 пациентов испытывают DLT во время первого цикла лечения. Таким образом, MTD определяют как уровень дозы сразу же ниже уровня, при котором дозирование останавливают вследствие наличия 2 или более DLT в расширенной когорте из 6 пациентов.
Если увеличение дозы не останавливают вследствие наличия DLT, будет считаться, что MTD не была определена. Возможно, что MTD может не определяться в данном исследовании, либо для группы монотерапии или для индивидуальных комбиниованных групп. Дополнительно, возможно, что MTD для mAb могут различаться для монотерапии и каждого режима комбинированного лечения.
Продолжительность исследования
Пациенты будут получать до 48 недель лечения, после которых будет 24-недельный период последующего наблюдения. Пациент будет получать лечение пока не завершится 48-недельный период лечения, или до прогрессирования заболевания, неприемлемой токсичности, прекращения согласия или наступления соответствия еще одному критерию прекращения участия в исследовании. После минималь
- 59 034770 ного 24-недельного лечения, пациенты с подтвержденными полными ответами (CR) могут выбрать прерывание лечения и продолжение со всеми уместными оценками при исследовании (например, оценками эффективности). После минимального 24-недельного лечения, пациенты с оценками опухолевой нагрузки стабильного заболевания (SD) или частичного ответа (PR), у которых не произошло изменений в течение 3 последовательных опухолевых оценок могут также выбрать прерывание лечения и продолжение со всеми уместными оценками при исследовании (например, оценками эффективности).
Популяция исследования
Целевая популяция для данного исследования включает пациентов с опухолями на поздней стадии, которые не являются кандидатами для стандартной терапии, не желают проходить стандартную терапию, или для которых не ожидают благоприятного клинического эффекта от доступной терапии; и пациентов со злокачественными новообразованиями, которые являются неизлечимыми, и которые не имели реакции или продемонстрировали прогрессирование опухоли, несмотря на стандартную терапию.
Критерии включения: пациент должен соответствовать следующим критериям, чтобы быть допущенным для включения в исследование: (1) демонстрировать прогрессирование солидной опухоли без альтернативной доступной терапевтической опции стандартного лечения; (2) иметь по меньшей мере 1 повреждение для оценки ответа. Пациентам, которым назначена лучевая терапия, требуется, по меньшей мере, одно дополнительное повреждение, которое может быть безопасно облучено при умеренном показателе повреждений, и, для которого облучение при предусмотренных ограниченных, паллиативных дозах будет считаться соответствующим в медицинском отношении; (3) иметь показатель общего состояния по шкале Восточной объединенной онкологической группы (ECOG) <1; (4) быть старше 18 лет; (5) функция печени: а) общий билирубин <1,5хверхний предел нормы (ULN; если метастазы в печени <3x мкл N), b) трансаминазы <3х мкл N (или <5,0хмкл N, если есть метастазы в печени), с. щелочная фосфатаза (ALP) <2,5хмкл N (или 5,0х мкл N, если есть метастазы в печени); (6) функция почек: креатинин в сыворотоке <1,5хмкл N; (7) число нейтрофилов (ANC)>1,5x10%, с. число тромбоцитов >75х109/л; (8) способность предоставить подписанное информированное согласие; и (9) способность и желание соблюдать запланированные визиты, лечебные планы, прохождение лабораторных тестов и другие имеющие отношение к исследованию процедуры.
Критерии исключения: пациент, который соответствует любому из следующих критериев, будет исключен из исследования:
(1) Продолжающееся или недавнее (в интервале 5 лет) очевидное свидетельство значительного аутоиммунного заболевания, которое требует лечения с использованием системных иммуносупрессорных терапий, которые могут преположительно создать риск для irAE;
(2) Предшествующее лечение средством, которое блокирует путь PD-1/PD-L1;
(3) Предшествующее лечение другими иммуномодулирующими средствами в интервале менее 4 недель или 4 периодов полужизни, независимо от того, который больше, перед первой дозы mAb;
(4) Примеры иммуномодуляторов включают блокаторы CTLA-4, 4-1BB (CD137), ОХ-40, терапевтические вакцины или цитокиновые терапии;
(5) Не подвергавшиеся лечению метастазы в мозге, которые могут считаться активными. Пациенты с ранее подвергавшимися лечению метастазами в мозге могут принять участие, при условии, что они являются стабильными (т.е., без явных признаков прогрессирования при визуализации, в течение, по меньшей мере, 4 недель перед первой дозой лечения при исследовании, и любые неврологические симптомы вернулись к исходному уровню), и отсутствуют явные новые или увеличенные метастазы в мозге;
(6) Иммуносупрессорные дозы кортикостероидов (>10 мг преднизона или эквивалента ежедневно) в интервале 4 недель до первой дозы mAb;
(7) Тромбоз глубоких вен, тромбоэмболия легочной артерии (включая асимптоматическую тромбоэмболию, идентифицируемую при визуализации), или другое тромбоэмболическое событие в интервале б месяцев, предшествующих первой дозе mAb;
(8) Активная инфекция, требующая терапии, включающая известную инфекцию вирусом имммунодефицита человека, или активная инфекция вирусом гепатита В или гепатита С;
(9) История пневмонии в интервале последних 5 лет;
(10) Любое исследовательское или противоопухолевое лечение в интервале 30 дней перед начальным введением mAb;
(11) История документированных аллергических реакций или острой реакции гиперчувствительности, относящейся к лечению терапий с использованием антител в целом, или к средствам, применяемым конкретно в исследовании;
(12) Известная аллергия на доксоциклин или тетрациклин (предосторожность вследствие присутствия следовых компонентов в mAb);
(13) Грудное вскармливание;
(14) Положительный сывороточный тест на беременность;
(15) История в интервале последних 5 лет инвазивного злокачественного новообразования, отличающегося от злокачественного новообразования, подвергаемого лечению в данном исследовании, за
- 60 034770 исключением иссеченной/подвергнутой абляции базальной или плоскоклеточной карциномы кожи или рака шейки матки in situ, или другие местные опухоли, считаемые излеченными посредством местного лечения;
(16) Острые или хронические психиатрические проблемы, которые, при оценке исследователем, делают пациента неподходящим для участия; и (17) Продолжающаяся сексуальная активность у мужчин или женщин с детородным потенциалом, которые не желают практиковать адекватную контрацепцию во время исследования.
Терапии в рамках исследования mAb будут поставлены в виде жидкости в стерильных пузырьках одноразового использования. Каждый пузырек будет содержать объем, достаточный для забора 10 мл mAb при концентрации, равной 25 мг/мл. Инструкции по дозе препарата предоставлены в справочном руководстве по исследованию. mAb будут вводиться в амбулаторном учреждении в виде 30 мин ВВ инфузии. Каждая доза для пациента будет зависеть от индивидуальной массы тела. Доза mAb должна регулироваться каждый цикл с учетом изменений массы тела >10%. mAb будут вводиться отдельно и в комбинации с облучением и/или циклофосфамидом.
Монотерапия mAb будут вводиться в амбулаторном учреждении посредством ВВ инфузии в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель (т.е., в Дни 1, 15±3, 29±3, и 43±3 56-дневного цикла). Планируемые режимы монотерапии для назначения могут включать: (i) ВВ инфузия 1 мг/кг в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель; (ii) инфузия 3 мг/кг в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель; (iii) инфузия 10 мг/кг в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель; и (iv) инфузия 0,3 мг/кг в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель (если определено, что MTD ниже 1 мг/кг).
Комбинированная терапия
Сопутствующие лучевая терапия и циклофосфамид будут применяться по назначению, и их применимость, доза, дозовые модификации, снижения или задержки, а также любые потенциальные АЕ, являющиеся результатом их применения, будут отслеживаться наряду с такими же действиями для mAb.
Совместное введение mAb и облучения: mAb будут вводиться посредством ВВ инфузии в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель в комбинации с лучевой терапией от дня 8 до дня 12. Планируемые режимы комбинации mAb и лучевой терапии могут включать:
инфузия 1 мг/кг mAb в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель плюс 30 Гр лучевой терапии (6 Грх5 раз/неделю; дается 1 неделю после первой дозы mAb, предпочтительно в последующие дни) инфузия 1 мг/кг mAb в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель плюс 27 Гр лучевой терапии (9 Грх3 раза/неделю; дается 1 недель после первой дозы mAb, предпочтительно не в последующие дни) инфузия 3 мг/кг mAb в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель плюс 30 Гр лучевой терапии (6 Грх5 раз/неделю; дается 1 неделю после первой дозы mAb, предпочтительно в последующие дни) инфузия 3 мг/кг mAb в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель плюс 27 Гр лучевой терапии (9 Грх3 раза/неделю; дается 1 недел после первой дозы mAb, предпочтительно не в последующие дни)
Пациенты будут получать либо 30 Гр, даваемые в виде 5 фракций по 6 Гр, вводимых ежедневно, начиная с 1 недели после первой дозы mAb, или 27 Гр, даваемые в виде 3 фракций по 9 Гр, вводимых в каждый следующий день, начиная с 1 недели после первой дозы mAb. Повреждение, выбранное для облучения должно представлять собой повреждение, которое может быть безопасно облучено фокусным излучением при щадящем показателе повреждения (повреждений), и, для которого облучение при предусимотренных ограниченных, паллиативных дозах будет считаться подходящим с медицинской точки зрении. Целевая доза для пациента будет основана на назначении когорты и должна соответствовать требованиям к нормальной ткани, в соответствии со стандартной практикой облучения в онкологии. Лечение при установленном в протоколе режиме дозирования разрешается, только если имеет место соответствие критериям для нормальной ткани. Если нельзя достичь соответствия критериям для нормальной ткани, при двух режимах лучевой терапии, установленных в протоколе, пациент не может быть допущен для включения в когорту комбинированного с облучением лечения в данном исследовании.
Совместное введение mAb и циклофосфамида: mAb будут вводиться посредством ВВ инфузии в течение 30 мин каждые 14 дней (2 недели) в течение 48 недель в комбинации с 200 мг/м2 циклофосфамида каждые 14 дней для всего 4 доз. Каждая из 4 доз циклофосфамида будет вводиться за 1 день перед каждой из первых 4 доз mAb (Дни 1, 14, 28 и 42 первого 56-дневного цикла).
Несмотря на то, что циклофосфамид успешно применялся сопутствующим образом вместе с другими лекарственными средствами, скорость метаболизма и лейкопеническая активность циклофосфамида, как сообщают, увеличиваются посредством постоянного введения высоких доз фенобарбитала. Лечение циклофосфамидом вызывает выраженное и усойчивое ингибирование холинэстеразной активности, та- 61 034770 ким образом, потенцируя эффект от сукцинилхолинхлорида. Планируемый режим комбинации mAb и циклофосфамида для назначения представляет собой: 200 мг/м2 Циклофосфамида каждые 14 дней (дни 1,
14, 28, и 42 первого 56-дневного цикл) при всего 4 дозах плюс инфузия 3 мг/кг mAb в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель (предоставленная доза монотерапии равна 3 мг/кг < MTD; если 3 мг/кг > MTD, доза будет равна 1 мг/кг).
Совместное введение mAb, облучения и циклофосфамида: планируемый режим комбинации mAb, облучения и циклофосфамида включает: 200 мг/м2 циклофосфамида каждые 14 дней (Дни 1, 14, 28, и 42 первого 56 дневного цикла) при всего 4 дозах плюс 27 Гр лучевой терапии (9 Грх3 раза/неделю; даваемой 1 неделю после первой дозы mAb, предпочтительно не в последующие дни) или 30 Гр лучевой терапии (6 Грх5 раз/неделю; даваемой 1 неделю после первой дозы mAb, предпочтительно в последующие дни) плюс инфузия 3 мг/кг mAb в течение 30 мин каждые 14 дней в течение 48 недель (предоставленная доза монотерапии равна 3 мг/кг < MTD; если 3 мг/кг > MTD, доза будет равна 1 мг/кг)
Переменные исследования
Первичные переменные: первичные переменные безопасности включают появление DLT, появление и тяжесть неблагоприятных явлений, возникших на фоне лечения (ТЕАЕ), и аномальные результаты лабораторных анализов на протяжении 48 недель лечения.
Вторичные переменные: ключевые вторичные переменные включают следующее: Концентрацию в сыворотке и фармакокинетику (ФК) mAb.
Противоопухолевую активность оценивают с использованием соответствующих критериев для назначения: критерии оценки ответа при солидных опухолях, измеренные посредством компьютерной томографии (КТ) или магнитно-резонансной томографии (МРТ).
Другие критерии оценки также должны применяться для конкретных опухолей, для которых измерения по RECIST не являются стандартными.
Критерии оценки ответа, относящегося к иммунитету (irRC), применяемые к данным измерений по RECIST.
Во всех случаях, irRC будет направляющим инструментом для определения прогрессирования заболевания (PD), SD, CR или PR. Стандартные данные RECIST будут также собраны для информационных целей.
Антитела против mAb Методики исследования
Следующие методики будут выполняться при скрининге с целью определения соответствия требованиям к исследованию или характеризации исходной популяции: (i) сывороточный β-HCG (результат должен быть <72 ч до первой дозы); (ii) Сбор архивированного опухолевого материала: После подписания пациентом информированного согласия, пациенту будет предложено предоставить любые доступные ранее собранные опухолевые образцы; (iii) MPT мозга: МРТ мозга требуется при скрининге, если не была проведена в течение предшествующих 60 дней; и (iv) Рентгенограмма грудной клетки: Рентгенограмма грудной клетки требуется при скрининге, если не была проведена в течение предшествующих 60 дней.
Методики оценки эффективности действия: КТ или МРТ для оценки опухоли будет выполняться при визите на скрининг (в интервале 28 дней перед инфузией) и во время каждого цикла (приблизительно каждые 8 недель) в День 56±3, и, когда предполагают прогрессирование заболевания. Дополнительно, для пациентов, у которых не было прогрессирования при исследовании, оценка опухоли будет выполняться в течение визитов 3, 5 и 7 последующего наблюдения. Как только сделан выбор применения сканирующей КТ или МРТ, последующие оценки будут проводиться с использованием такой же модальности.
Оценка опухолевого ответа будет выполняться в соответствии с критериями оценки относящегося к иммунитету ответа (irRC; Nishino 2013). Оценки в соответствии с критериями оценки ответа при солидных опухолях (RECIST) версия 1.1 (Eisenhauer 2009) также будет проводиться в качестве подтверждающего обследования; однако, первичное определение прогрессирования заболевания для индивидуального пациента будет сделано в соответствии с irRC. Измеряемые повреждения, выбранные в качестве целевых повреждений для оценок по RECIST, также будут включены как показатель повреждений для оценок согласно irRC.
Методики обеспечения безопасности: будут собраны основные показатели состояния организма, включающие температуру, артериальное давление в состоянии покоя, пульс и дыхание. При планировании проведения в тот же визит, что и другие методики, измерение основных показателей состояния организма должно проводиться перед клиническими лабораторными оценками, ФК, или поисковым сбором образцов. Во время цикла 1, основные показатели состояния организма будут регистрироваться в Дни лечения, перед лечением, в конце инфузии, каждые 30 мин в течение первых 4 ч после инфузии, и при 6 и 8 ч после введения исследуемого лекарственного средства. При последующих циклах, основные показатели состояния организма в Дни лечения будут оцениваться и документироваться перед инфузией, каждые 30 мин в течение первых 2 ч, и затем ежечасно до 4 ч после введения исследуемого лекарственного
- 62 034770 средства.
При визитах будет выполняться тщательный полный или ограниченный медицинский осмотр. Полный медицинский осмотр будет включать обследование кожи, головы, глаз, носа, горла, шеи, суставов, легких, сердца, пульса, брюшной полости (включая печень и селезенку), лимфатических узлов и конечностей, а также короткое неврологическое обследование. Ограниченный медицинский осмотр будет включать легкие, сердце, брюшную полость и кожу.
Будет выполняться стандартное ЭКГ в 12 отведениях. Любые результаты ЭКГ, которые по мнению исследователя представляют собой клинически значимое изменение (ухудшение) в сравнении с исходным значением, будут рассматриваться как АЕ, регистрироваться и наблюдаться.
Аналитические тесты на иммунологическую безопасность состоят из определения ревматоидного фактора (RF), тиреостимулирующего гормона (TSH), С-реактивного белка (CRP), и титра и распределения антиядерного антитела (ANA). Если во время прохождения исследования, наблюдают 4-кратное или более высокое увеличение от исходного уровня по RF или ANA или аномальные уровни TSH или CRP, могут также проводиться следующие тесты: на антитело против ДНК, антитело против антигена А синдрома Сегрена (SSA) (Ro), антитело против антигена В синдрома Сегрена (SSB) (La), антитело к тиреоглобулину, антитело против LKM, антитело против фосфолипида, антитело против островковых клеток, антитело против нейтрофилов C3, C4, CH50b цитоплазме. Активированное частичное тромбопластиновое время (аРТТ) и Международный коэффициент нормализации (INR) будут анализироваться местной лабораторией лечебного учреждения.
Безопасность
Неблагоприятное явление (АЕ) представляет собой любое нежелательное медицинское явление у пациента, которому введено исследуемое лекарственное средство, которое может иметь или не иметь причинно-следственную связь с исследуемым лекарственным средством. Следовательно, АЕ представляет собой неблагоприятный и нежелательный (включающий аномальный лабораторный результат), симптом, или заболевание, которое временно ассоциировано с применением исследуемого лекарственным средством, независимо от того или считают ли их относящимися к исследуемому лекарственному средству. АЕ также включает любое ухудшение (т.е., любое клинически значимое изменение частоты и/или интенсивности) ранее существующего состояния, которое временно ассоциировано с применением исследуемого лекарственного средства. Прогрессирование основополагающего злокачественного новообразования не будет считаться АЕ, если оно явным является следствием типичной схемы прогрессирования основополагающего злокачественного новообразования (включая период действия, пораженные органы и т.д.). Клинические симптомы прогрессирования могут быть представлены в отчете как АЕ, если симптом не может быть определен как исключительно обусловленный прогрессированием основополагающего злокачественного новообразования, или не соответствует ожидаемой схеме прогрессирования для заболевания при исследовании.
Серьезное неблагоприятное явление (SAE) представляет собой любое нежелательное медицинское явление, которое при любой дозе приводит к смерти, представляет угрозу для жизни, требует госпитализации в стационаре или пролонгирования существующей госпитализации, приводит к устойчивой или значительной нетрудоспособности/недееспособности (существенному нарушению способности выполнять обычные жизненные функции), является врожденной аномалией/патологией родов.
Информация по всем АЕ и SAE у пациента будет регистрироваться.
План статистического анализа
Повышение исследуемой дозы основано на традиционном дизайне 3+3, с 3-6 пациентами, отнесенными к уровню дозы. Точное число пациентов, включенных в исследование, будет зависеть от числа наблюдаемых заданных протоколом DLT, и необходимости расширять заданные применяемые уровни доз, или открывать дополнительные когорты при более низких дозовых уровнях. После требуемого начального включения в следующую когорту при наращивании дозы, включение в каждую из предыдущих когорт ниже MTD для такого лечения будет расширено (если ранее не расширяли во время наращивания) до всего 6 пациентов.
Данные будут обобщены с использованием только описательной статистики. В целом, данные будут обобщаться по дозовым уровням и комбинациям. Обобщения оценок безопасности и их анализы будут выполняться на основании выборки для анализа безопасности (SAF). Первичный анализ безопасности будет основан на нежелательных явлениях (АЕ), возникших на фоне лечения (ТЕАЕ).
Настоящее изобретение не будет ограничиваться по объему конкретными вариантами осуществления, описанными в настоящем документе. Несомненно, различные модификации изобретения в дополнение к модификациям, описанным здесь, будут понятны специалистам в данной области из предшествующего описания и сопровождающих чертежей. Такие модификации подразумевают как попадающие в пределы объема прилагаемой формулы изобретения.

Claims (30)

1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, специфически связывающееся с белком программируемой смерти-1 (PD-1) человека, содержащее три определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где:
a) HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164;
b) HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166;
c) HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168;
d) LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172;
e) LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 174 и
f) LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176.
2. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 162 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 170.
3. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, обладающее одним или несколькими из следующих свойств:
(a) блокирует связывание белка PD-1 человека с PD-L1 со значением IC50, равным меньше 3 нМ, как измерено методом конкурентного сэндвич-анализа ELISA при 25°С;
(b) связывается с мономерным PD-1 человека с константой равновесия диссоциации для связывания (KD), равным меньше приблизительно 50 нМ, как измерено анализом методом поверхностного плазмонного резонанса при 37°С;
(c) связывается с мономерным PD-1 человека с KD, равным меньше приблизительно 12 нМ, в анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 25°С;
(d) связывается с мономерным PD-1 обезьяны с KD, равным меньше приблизительно 8,5 нМ, в анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 25°С;
(e) связывается с мономерным PD-1 человека с периодом половинной диссоциации (t1/2), больше приблизительно 6,3 мин, как измерено при анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 25°С; и (f) связывается с мономерным PD-1 человека с периодом половинной диссоциации (t1/2), больше приблизительно 0,9 мин, как измерено при анализе методом поверхностного плазмонного резонанса при 37°С.
4. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 330.
5. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь, где легкая цепь содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 331.
6. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, содержащее пару аминокислотных последовательностей тяжелой цепи/легкой цепи SEQ ID NO: 330/331.
7. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, специфически связывающееся с белком программируемой смерти-1 (PD-1) человека, содержащее тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 330 и легкую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 331.
8. Фармацевтическая композиция для ингибирования активности PD-1, нейтрализации активности PD-1 или стимуляции активации Т-клеток, которая содержит выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с PD-1 человека, по любому из пп.1-7, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
9. Выделенная полинуклеотидная молекула, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует HCVR антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7.
10. Выделенная полинуклеотидная молекула, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует LCVR антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7.
11. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотидную последовательность по п.9.
12. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотидную последовательность по п.10.
13. Клетка-хозяин для получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7, содержащая вектор экспрессии по п.11 и 12.
14. Способ получения анти-PD-1 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий выращивание клетки-хозяина по п.13 в условиях, обеспечивающих продукцию антитела или фрагмента, и выделение полученного таким образом антитела или фрагмента.
15. Способ по п.14, где клетка-хозяин представляет собой клетку СНО.
16. Анти-PD-1 антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, полученные способом по п.14 или 15.
- 64 034770
17. Способ получения фармацевтической композиции для ингибирования активности PD-1 или стимуляции Т-клеточной активности, включающий выращивание клетки-хозяина по п.13 в условиях, обеспечивающих продукцию антитела или фрагмента, выделение полученного таким образом антитела или фрагмента и получение фармацевтической композиции, содержащий антитело или антигенсвязывающий фрагмент и приемлемый носитель.
18. Применение выделенного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 для усиления иммунного ответа у индивида, ингибирования регуляторных Т-клеток (Treg) у индивида или усиления Т-клеточной активации у индивида.
19. Применение фармацевтической композиции по п.8 для усиления иммунного ответа у индивида, ингибирования регуляторных Т-клеток (Treg) у индивида или усиления Т-клеточной активации у индивида.
20. Применение по п.18 или 19, при котором у индивида имеется опухоль.
21. Применение по п.20, при котором опухоль включает рак мозга, почечно-клеточную карциному, рак яичника, рак простаты, рак толстой кишки, немелкоклеточный рак легких, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак ободочной и прямой кишки, рак желудка, рак почки, рак молочной железы, множественную миелому или меланому.
22. Применение по п.18 или 19, при котором у индивида имеется вирусная инфекция.
23. Применение по п.22, при котором вирусная инфекция включает ВИЧ, HCV, HBV, HPV, LCMV, SIV или их комбинацию.
24. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 для получения лекарственного средства для ингибирования роста опухоли или опухолевой клетки.
25. Применение фармацевтической композиции по п.8 для получения лекарственного средства для ингибирования роста опухоли или опухолевой клетки.
26. Применение по п.24 или 25, при котором опухоль включает рак почек, рак яичников, рак предстательной железы, рак толстой кишки, немелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак ободочной и прямой кишки, рак мозга, рак желудка, рак почки, рак молочной железы, множественную миелому или меланому.
27. Способ ингибирования активности PD-1, нейтрализации активности PD-1 или стимуляции Тклеточной активации, включающий введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-7 в комбинации со вторым терапевтическим средством, включающим NSAID, кортикостероид, антитело против коингибитора Т-клеток, антитело против опухолеспецифического антигена, ингибитор IDO, ингибитор Ang2, противораковую вакцину, ингибитор EGFR, ингибитор TGF[1. антитело к PD-L1, диетическую добавку, такую как антиоксидант, антагонист VEGF, такой как анти-VEGFантитело, низкомолекулярный ингибитор киназы рецептора VEGF, ингибирующий VEGF слитый белок, хирургическое вмешательство, облучение, химиотерапевтическое средство, цитотоксическое средство или их комбинацию.
28. Способ ингибирования активности PD-1, нейтрализации активности PD-1 или стимуляции Тклеточной активации, включающий введение фармацевтической композиции по п.8 в комбинации со вторым терапевтическим средством и методом терапии, включающим NSAID, кортикостероид, антитело против коингибитора Т-клеток, антитело против опухолеспецифического антигена, ингибитор IDO, ингибитор Ang2, противораковую вакцину, ингибитор EGFR, ингибитор TGF3, антитело к PD-L1, диетическую добавку, такую как антиоксидант, антагонист VEGF, такой как анти-VEGF-антитело, низкомолекулярный ингибитор киназы рецептора VEGF, ингибирующий VEGF слитый белок, хирургическое вмешательство, облучение, химиотерапевтическое средство, цитотоксическое средство или их комбинацию.
29. Способ по п.27 или 28, в котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вводят подкожно, внутривенно, внутрикожно, внутрибрюшинно, перорально, внутримышечно или интракраниально.
30. Способ по любому из пп.27-29, в котором антитело или антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию, содержащую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вводят в дозе, равной от приблизительно 0,1 мг/кг массы тела до приблизительно 60 мг/кг массы тела индивида.
EA201691482A 2014-01-23 2015-01-23 Человеческие антитела к pd-1 EA034770B8 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461930576P 2014-01-23 2014-01-23
US201462014181P 2014-06-19 2014-06-19
PCT/US2015/012589 WO2015112800A1 (en) 2014-01-23 2015-01-23 Human antibodies to pd-1

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201691482A1 EA201691482A1 (ru) 2016-11-30
EA034770B1 true EA034770B1 (ru) 2020-03-18
EA034770B8 EA034770B8 (ru) 2020-07-10

Family

ID=52462456

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201691482A EA034770B8 (ru) 2014-01-23 2015-01-23 Человеческие антитела к pd-1

Country Status (30)

Country Link
US (3) US9987500B2 (ru)
EP (2) EP3097119B1 (ru)
JP (4) JP6425730B2 (ru)
KR (2) KR20210152583A (ru)
CN (2) CN113248614A (ru)
AU (1) AU2015209233B2 (ru)
BR (2) BR112016016699A2 (ru)
CA (2) CA3207270A1 (ru)
CL (1) CL2016001871A1 (ru)
CY (1) CY1124747T1 (ru)
DK (1) DK3097119T3 (ru)
EA (1) EA034770B8 (ru)
ES (1) ES2888224T3 (ru)
HR (1) HRP20211794T1 (ru)
HU (1) HUE056332T2 (ru)
IL (2) IL246818B (ru)
LT (1) LT3097119T (ru)
MX (3) MX2016009554A (ru)
MY (1) MY176475A (ru)
NZ (1) NZ722342A (ru)
PH (1) PH12016501330A1 (ru)
PL (1) PL3097119T3 (ru)
PT (1) PT3097119T (ru)
RS (1) RS62507B1 (ru)
SG (1) SG11201605482SA (ru)
SI (1) SI3097119T1 (ru)
TW (1) TWI681969B (ru)
UA (1) UA122666C2 (ru)
UY (1) UY35964A (ru)
WO (1) WO2015112800A1 (ru)

Families Citing this family (496)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI2376535T1 (sl) 2008-12-09 2017-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa anti-pd-l1 in njihova uporaba za izboljšanje funkcije celic t
ES2671748T3 (es) 2011-07-21 2018-06-08 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Inhibidores heterocíclicos de proteína quinasas
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
RS61400B1 (sr) 2013-05-02 2021-02-26 Anaptysbio Inc Antitela usmerena protiv programirane smrti-1 (pd-1)
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
EP3049442A4 (en) 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
RS59480B1 (sr) 2013-12-12 2019-12-31 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Pd-1 antitelo, njegov fragment koji se vezuje na antigen, i njegova medicinska primena
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
WO2017042633A2 (en) * 2015-09-10 2017-03-16 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory t cell levels or activity for treatment of disease and injury of the cns
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
JP6903432B2 (ja) 2014-03-12 2021-07-14 イエダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド Ｃｎｓの疾患および傷害を処置するために全身性調節性ｔ細胞のレベルまたは活性を低下させること
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
PT3177644T (pt) 2014-08-05 2021-01-13 MabQuest SA Reagentes imunológicos que se ligam a pd-1
US9982052B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
US9993551B2 (en) 2014-09-13 2018-06-12 Novartis Ag Combination therapies of EGFR inhibitors
WO2016081490A1 (en) 2014-11-17 2016-05-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for tumor treatment using cd3xcd20 bispecific antibody
PT3220927T (pt) * 2014-11-20 2022-02-07 Promega Corp Sistemas e métodos para avaliar moduladores de pontos de verificação imunitária
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
US11933786B2 (en) 2015-03-30 2024-03-19 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof
CN114380909A (zh) 2015-03-30 2022-04-22 斯特库比股份有限公司 特异性针对糖基化的pd-l1的抗体及其使用方法
AU2016242866B2 (en) 2015-03-30 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Heavy chain constant regions with reduced binding to FC gamma receptors
WO2016161410A2 (en) 2015-04-03 2016-10-06 Xoma Technology Ltd. Treatment of cancer using inhibitors of tgf-beta and pd-1
CN107995913B (zh) 2015-05-18 2022-02-11 T细胞受体治疗公司 使用融合蛋白对tcr重编程的组合物和方法
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TW201709929A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 宏觀基因股份有限公司 治療癌症的聯合療法
KR20180040138A (ko) 2015-07-13 2018-04-19 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 항pd-1 항체, 활성화 가능한 항pd-1 항체, 및 이들의 사용 방법
EP3322448A4 (en) 2015-07-16 2019-03-06 Bioxcel Therapeutics, Inc. NOVEL METHOD FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH IMMUNOMODULATION
KR20180034588A (ko) 2015-07-30 2018-04-04 마크로제닉스, 인크. Pd-1-결합 분자 및 그것의 사용 방법
TWI797060B (zh) 2015-08-04 2023-04-01 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
US20190010231A1 (en) 2015-08-07 2019-01-10 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Novel fusion polypeptide specific for lag-3 and pd-1
CA2993276A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Yong Zheng Novel anti-pd-1 antibodies
AR105654A1 (es) * 2015-08-24 2017-10-25 Lilly Co Eli Anticuerpos pd-l1 (ligando 1 de muerte celular programada)
EA201890630A1 (ru) 2015-09-01 2018-10-31 Эйдженус Инк. Антитела против pd-1 и способы их применения
IL258036B (en) 2015-09-23 2022-09-01 Regeneron Pharma Optimized bispecific antibodies against class 3 determinants and their uses
AU2016328279A1 (en) * 2015-09-24 2018-05-10 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for reducing metastases
EP3356416B1 (en) * 2015-09-29 2021-03-24 Shanghai Zhangjiang Biotechnology Co., Ltd Pd-1 antibodies and uses thereof
EA201890790A1 (ru) * 2015-09-29 2018-10-31 Селджин Корпорейшн Связывающие pd-1 белки и способы их применения
HUE059788T2 (hu) * 2015-10-02 2022-12-28 Symphogen As PD-1 elleni antitestek és készítmények
KR102146319B1 (ko) 2015-10-02 2020-08-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 tim3에 특이적인 이중특이성 항체
WO2017062619A2 (en) 2015-10-08 2017-04-13 Macrogenics, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
BR112018008904A2 (pt) * 2015-11-03 2018-11-27 Janssen Biotech Inc anticorpos que se ligam especificamente a tim-3 e seus usos
CN106699889A (zh) * 2015-11-18 2017-05-24 礼进生物医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其治疗用途
IL300122A (en) 2015-11-18 2023-03-01 Merck Sharp ַ& Dohme Llc Substances that bind to PD1 and/or LAG3
KR20180085793A (ko) * 2015-12-02 2018-07-27 주식회사 에스티큐브 글리코실화된 pd-1에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
CR20180318A (es) 2015-12-14 2018-09-19 Macrogenics Inc Moléculas biespecíficas que tienen inmunorreactividad con pd-1 y ctla-4, y métodos de uso de las mismas
US10392442B2 (en) 2015-12-17 2019-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-PD-1 antibody in combination with anti-CD27 antibody in cancer treatment
ES2954153T3 (es) * 2015-12-22 2023-11-20 Regeneron Pharma Combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anticuerpos biespecíficos anti-CD20/anti-CD3 para tratar el cáncer
CN105669864B (zh) * 2015-12-23 2018-10-16 杭州尚健生物技术有限公司 抗人程序性死亡受体1抗体及其制备方法和用途
AU2017210224B2 (en) * 2016-01-21 2024-02-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Treatment of cancer with combinations of immunoregulatory agents
US11214617B2 (en) 2016-01-22 2022-01-04 MabQuest SA Immunological reagents
AU2017208819B2 (en) * 2016-01-22 2023-10-19 MabQuest SA PD1 specific antibodies
CN109073635A (zh) * 2016-01-25 2018-12-21 豪夫迈·罗氏有限公司 用于测定t细胞依赖性双特异性抗体的方法
RU2018131123A (ru) 2016-02-17 2020-03-17 Новартис Аг Антитела к tgf-бета2
WO2017152088A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 JN Biosciences, LLC Antibodies to tigit
WO2017165683A1 (en) * 2016-03-23 2017-09-28 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
WO2017165681A1 (en) * 2016-03-24 2017-09-28 Gensun Biopharma Inc. Trispecific inhibitors for cancer treatment
US11542332B2 (en) 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
CN109563153B (zh) 2016-03-28 2022-09-02 加利福尼亚大学董事会 抗-ryk抗体及使用其的方法
EP3943508B1 (en) 2016-03-29 2024-01-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Dual function antibodies specific to glycosylated pd-l1 and methods of use thereof
EP3452084A4 (en) * 2016-05-02 2020-01-01 Tetragenetics, Inc. ANTI-KV 1.3 ANTIBODIES AND METHODS OF PRODUCING AND USING THE SAME
TWI822521B (zh) * 2016-05-13 2023-11-11 美商再生元醫藥公司 藉由投予pd-1抑制劑治療皮膚癌之方法
PT3463457T (pt) 2016-06-02 2023-09-07 Bristol Myers Squibb Co Bloqueio de pd-1 com nivolumab em linfoma de hodgkin refratário
EP3464368B1 (en) 2016-06-02 2023-06-28 Bristol-Myers Squibb Company Use of an anti-pd-1 antibody in combination with an anti-cd30 antibody in lymphoma treatment
EP3464369A1 (en) 2016-06-03 2019-04-10 Bristol-Myers Squibb Company Anti-pd-1 antibody for use in a method of treating a tumor
EP3463454A1 (en) 2016-06-03 2019-04-10 Bristol-Myers Squibb Company Anti-pd-1 antibody for use in a method of treatment of recurrent small cell lung cancer
US11332529B2 (en) 2016-06-03 2022-05-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating colorectal cancer
WO2017214182A1 (en) * 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
SG10201913326UA (en) * 2016-06-07 2020-02-27 Macrogenics Inc Combination therapy
AU2017278193B9 (en) 2016-06-10 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-GITR antibodies and uses thereof
JP2019517549A (ja) * 2016-06-10 2019-06-24 ノバルティス アーゲー Ｃ−ｒａｆ阻害薬の治療的使用
JP7185530B2 (ja) 2016-06-13 2022-12-07 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫細胞機能を促進するための方法および組成物
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
TWI784957B (zh) 2016-06-20 2022-12-01 英商克馬伯有限公司 免疫細胞介素
GB2569463A (en) * 2016-07-18 2019-06-19 Harvard College Human lymphoid tissue-on-chip
JP2019528251A (ja) 2016-07-20 2019-10-10 エスティーキューブ，インコーポレイテッド グリコシル化ｐｄ−ｌ１に結合する抗体の組合せを使用するがんの処置および治療の方法
NL2017267B1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings Europe B V Anti-pd-1 antibodies
CA3032498A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
WO2018026248A1 (ko) * 2016-08-05 2018-02-08 주식회사 와이바이오로직스 프로그램화된 세포 사멸 단백질(pd-1)에 대한 신규 항체 및 이의 용도
RU2725950C1 (ru) * 2016-08-05 2020-07-07 И-Байолоджикс Инк. Антитела против белка-1 запрограммированной клеточной смерти (pd-1) и их применение
US11858996B2 (en) 2016-08-09 2024-01-02 Kymab Limited Anti-ICOS antibodies
WO2018039131A1 (en) * 2016-08-22 2018-03-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Anti-pd-1 antibodies, or fragments thereof, for treating hepatitis b
WO2018035710A1 (en) 2016-08-23 2018-03-01 Akeso Biopharma, Inc. Anti-ctla4 antibodies
CN106977602B (zh) * 2016-08-23 2018-09-25 中山康方生物医药有限公司 一种抗pd1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
CN106967172B (zh) 2016-08-23 2019-01-08 康方药业有限公司 抗ctla4-抗pd-1 双功能抗体、其药物组合物及其用途
EP3504328A1 (en) 2016-08-24 2019-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
US10766958B2 (en) 2016-09-19 2020-09-08 Celgene Corporation Methods of treating vitiligo using PD-1 binding antibodies
WO2018053405A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 Celgene Corporation Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins
AU2017336867B2 (en) 2016-09-29 2024-03-14 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. Heterodimeric immunoglobulin constructs and preparation methods thereof
IL302917A (en) 2016-10-07 2023-07-01 Tcr2 Therapeutics Inc Preparations and methods for reprogramming T-cell receptors using fusion proteins
US20190315865A1 (en) 2016-10-28 2019-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating urothelial carcinoma using an anti-pd-1 antibody
CA3041684C (en) 2016-11-01 2023-09-26 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death- 1 (pd-1)
AU2017355401A1 (en) 2016-11-02 2019-05-02 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to PD-1 and uses thereof
PE20191131A1 (es) 2016-11-03 2019-09-02 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos anti antigeno 4 del linfocito t citotoxico (ctla-4) activables y sus usos
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
WO2018089293A2 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Qilu Puget Sound Biotherapeutics Corporation Anti-pd1 and anti-ctla4 antibodies
EP3533804A4 (en) 2016-11-18 2020-06-17 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. BISPECIFIC ANTIBODY TYPE ANTI-PD -1 / ANTI-HER2 NATURAL ANTIBODY HETERODIMERIC FORM AND PREPARATION THEREOF
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
US11359018B2 (en) 2016-11-18 2022-06-14 Symphogen A/S Anti-PD-1 antibodies and compositions
EP3544996A2 (en) 2016-11-22 2019-10-02 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
MX2019006448A (es) * 2016-12-01 2020-02-05 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-pd-l1 radiomarcados para imagenes de inmuno-pet.
AU2017371498B2 (en) 2016-12-09 2020-10-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for sequencing T cell receptors and uses thereof
CN106674209B (zh) * 2016-12-23 2020-03-06 深圳先进技术研究院 程序性死亡受体1基因抑制剂及其制备方法与应用
JP7122758B2 (ja) * 2016-12-23 2022-08-22 アールイーエムディー バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド プログラム死－１（ｐｄ－１）に結合する抗体を使用する免疫療法
CN108203464B (zh) * 2016-12-25 2021-07-20 南京金斯瑞生物科技有限公司 高亲和力、高特异性、多抗原识别表位的具有更高功能性的抗人pd-1抗体
CN113480530A (zh) 2016-12-26 2021-10-08 阿里根公司 芳香烃受体调节剂
EP3565839A4 (en) 2017-01-05 2021-04-21 Gensun Biopharma Inc. CHECKPOINT REGULATOR ANTAGONISTS
EP4219563A3 (en) 2017-01-09 2023-10-04 Tesaro, Inc. Methods of treating cancer with anti-pd-1 antibodies
WO2018134279A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Novel fusion polypeptides specific for lag-3 and pd-1
EP3570870A1 (en) 2017-01-20 2019-11-27 Novartis AG Combination therapy for the treatment of cancer
BR112019013238A2 (pt) 2017-01-20 2020-02-11 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anticorpos anti-pd-1 e usos dos mesmos
AR110904A1 (es) * 2017-01-20 2019-05-15 Sanofi Sa ANTICUERPOS ANTI-TGF-b Y SU USO
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
TW202313678A (zh) * 2017-01-20 2023-04-01 法商賽諾菲公司 抗TGF-β抗體及其用途
WO2018134681A1 (en) * 2017-01-20 2018-07-26 Sanofi Anti-tgf-beta antibodies and their use
JP7167041B2 (ja) 2017-02-10 2022-11-08 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 免疫ｐｅｔイメージングのための放射標識抗ｌａｇ３抗体
JP7161481B2 (ja) 2017-02-10 2022-10-26 ノバルティス アーゲー １－（４－アミノ－５－ブロモ－６－（１ｈ－ピラゾール－１－イル）ピリミジン－２－イル）－１ｈ－ピラゾール－４－オール及びがんの治療におけるその使用
TWI674261B (zh) 2017-02-17 2019-10-11 美商英能腫瘤免疫股份有限公司 Nlrp3 調節劑
CN110536905B (zh) * 2017-02-21 2023-10-27 瑞泽恩制药公司 用于治疗肺癌的抗pd-1抗体
US11459394B2 (en) 2017-02-24 2022-10-04 Macrogenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof
UY37621A (es) 2017-02-28 2018-09-28 Sanofi Sa Arn terapéutico que codifica citoquinas
WO2018162944A1 (en) * 2017-03-04 2018-09-13 Shenzhen Runshin Bioscience Recombinant antibodies to programmed death 1 (pd-1) and uses therefor
WO2018170288A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Pandion Therapeutics, Inc. Targeted immunotolerance
SG11201907948TA (en) * 2017-03-29 2019-09-27 Celgene Corp Formulations comprising pd-1 binding proteins and methods of making thereof
MA50056A (fr) 2017-03-31 2020-02-05 Bristol Myers Squibb Co Procédés de traitement de tumeur
AU2018243104A1 (en) 2017-04-01 2019-10-17 Beijing Hanmi Pharm. Co., Ltd. Anti-PD-L1/anti-PD-1 natural antibody structure-like heterodimeric bispecific antibody and preparation thereof
LT3606946T (lt) * 2017-04-03 2022-10-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd-1 antikūno imunokonjugatai su mutantiniu il-2 arba su il-15
CN110914300A (zh) 2017-04-03 2020-03-24 安康乐济股份有限公司 使用ps靶向抗体与免疫肿瘤学药剂治疗癌症的方法
KR102346336B1 (ko) 2017-04-05 2022-01-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 lag3에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체
JP2020513009A (ja) 2017-04-05 2020-04-30 シムフォゲン・アクティーゼルスカブＳｙｍｐｈｏｇｅｎ Ａ／Ｓ Ｐｄ−１、ｔｉｍ−３、およびｌａｇ−３を標的とする併用治療
US11603407B2 (en) * 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
AR111760A1 (es) 2017-05-19 2019-08-14 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de tumores sólidos mediante administración intratumoral
JP2020520985A (ja) * 2017-05-22 2020-07-16 オンコイミューン， インコーポレイテッド がん療法における免疫関連有害事象の治療のための可溶性ｃｄ２４の使用方法
BR112019024127A2 (pt) 2017-05-24 2020-06-23 Pandion Therapeutics, Inc. Imunotolerância alvejada
KR20200010500A (ko) 2017-05-30 2020-01-30 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-lag-3 항체, pd-1 경로 억제제, 및 면역요법제의 조합을 포함하는 조성물
CA3065304A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising an anti-lag-3 antibody or an anti-lag-3 antibody and an anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibody
JP2020522691A (ja) 2017-05-30 2020-07-30 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｌａｇ−３陽性腫瘍の処置
JOP20190279A1 (ar) 2017-05-31 2019-11-28 Novartis Ag الصور البلورية من 5-برومو -2، 6-داي (1h-بيرازول -1-يل) بيريميدين -4- أمين وأملاح جديدة
KR20200014363A (ko) 2017-06-01 2020-02-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체를 사용하여 종양을 치료하는 방법
EP3634995A4 (en) 2017-06-05 2021-06-09 Janssen Biotech, Inc. ANTIBODIES BINDING SPECIFICALLY TO PD-1 AND THEIR METHODS OF USE
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
JP7433910B2 (ja) 2017-06-22 2024-02-20 ノバルティス アーゲー Ｃｄ７３に対する抗体分子及びその使用
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
WO2018234879A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag USE OF IL-1β BINDING ANTIBODIES IN THE TREATMENT OF CANCER
WO2018237173A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag ANTIBODY MOLECULES DIRECTED AGAINST CD73 AND CORRESPONDING USES
JP2020529862A (ja) * 2017-06-25 2020-10-15 システィミューン， インク．Ｓｙｓｔｉｍｍｕｎｅ， Ｉｎｃ． 抗ｐｄ−１抗体とその作製及び使用方法
WO2019006007A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag POSOLOGICAL REGIMES FOR ANTI-TIM3 ANTIBODIES AND USES THEREOF
EP3421494A1 (en) 2017-06-29 2019-01-02 Sanofi Use of isatuximab in combination with an anti-pd-1 antibody
KR20210084695A (ko) 2017-07-06 2021-07-07 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 당단백질을 만들기 위한 세포 배양 과정
KR20200028434A (ko) 2017-07-14 2020-03-16 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Nlrp3 조정제
JP2020527572A (ja) 2017-07-20 2020-09-10 ノバルティス アーゲー 抗ｌａｇ−３抗体の投薬量レジメンおよびその使用
CN110997013B (zh) * 2017-07-24 2022-09-20 瑞泽恩制药公司 抗cd8抗体和其用途
TWI799432B (zh) 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
JP7186764B2 (ja) 2017-07-28 2022-12-09 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗癌剤としての環状ジヌクレオチド
WO2019027847A1 (en) * 2017-07-29 2019-02-07 University Of Southern California SYNTHETIC EXTRACELLULAR VESICLES FOR NEW THERAPIES
CR20200099A (es) 2017-08-03 2020-07-24 Amgen Inc Muteínas de interleucina 21 y métodos de tratamiento
CN111032672A (zh) 2017-08-31 2020-04-17 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的环二核苷酸
CN111051328B (zh) 2017-08-31 2023-11-03 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的环二核苷酸
EP3676278B1 (en) 2017-08-31 2023-04-12 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
EP3679070A1 (en) * 2017-09-07 2020-07-15 Augusta University Research Institute, Inc. Antibodies to programmed cell death protein 1
WO2019055579A1 (en) 2017-09-12 2019-03-21 Tolero Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT REGIME FOR CANCERS THAT ARE INSENSITIVE TO BCL-2 INHIBITORS USING THE MCL-1 ALVOCIDIB INHIBITOR
KR20200086371A (ko) 2017-09-20 2020-07-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 패신저 유전자 돌연변이 부담이 높은 종양을 가진 환자에 대한 면역 치료요법
WO2019074887A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
CN111247169A (zh) 2017-10-15 2020-06-05 百时美施贵宝公司 ***的方法
WO2019079261A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
AU2018361743A1 (en) * 2017-11-03 2020-04-09 Novartis Ag Anti-CD40 antibodies for use in treatment of Sjogren's syndrome
JP2021502066A (ja) 2017-11-06 2021-01-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの診断及び療法
EP3706778A1 (en) 2017-11-06 2020-09-16 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
AU2018363880B2 (en) * 2017-11-08 2022-04-07 Epiaxis Therapeutics Pty Ltd Immunogenic compositions and uses therefor
JP2021503478A (ja) 2017-11-16 2021-02-12 ノバルティス アーゲー 組み合わせ治療
US11459322B2 (en) 2017-11-20 2022-10-04 Ariagen, Inc. Indole compounds and their use
KR20200096253A (ko) 2017-11-30 2020-08-11 노파르티스 아게 Bcma-표적화 키메라 항원 수용체, 및 이의 용도
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
CN109912577B (zh) * 2017-12-12 2021-10-22 深圳先进技术研究院 用于抑制eb病毒相关肿瘤的化合物及其制备方法和用途
EP3728314A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
EP3727629A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System and method for characterizing drug product impurities
CN112218651A (zh) 2018-01-08 2021-01-12 诺华公司 用于与嵌合抗原受体疗法组合的免疫增强rna
CR20200330A (es) 2018-01-12 2020-12-23 Amgen Inc Anticuerpos anti-pd-1 y métodos de tratamiento
EP3740506A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer with antibodies against tim3
CA3096287A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Pascal Biosciences Inc. Cannabinoids and derivatives for promoting immunogenicity of tumor and infected cells
EA202091751A1 (ru) 2018-01-22 2020-11-06 Бристол-Маерс Сквибб Компани Композиции и способы лечения рака
US20210038659A1 (en) 2018-01-31 2021-02-11 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
CN111655722A (zh) 2018-01-31 2020-09-11 瑞泽恩制药公司 用于表征药物产品杂质的***和方法
TW202311746A (zh) 2018-02-02 2023-03-16 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
KR102171766B1 (ko) * 2018-02-02 2020-10-29 주식회사 뉴라클제네틱스 Pd-l1 결합력이 증대된 pd-1 변이체
WO2019153200A1 (zh) 2018-02-08 2019-08-15 北京韩美药品有限公司 抗pd-1/抗her2天然抗体结构样异源二聚体形式双特异抗体及其制备
US10519187B2 (en) 2018-02-13 2019-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019160956A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
GB201802573D0 (en) * 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
BR112020013426A2 (pt) 2018-02-28 2020-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. métodos para identificação de um vírus em uma amostra e para detecção de ácidos nucleicos virais em uma amostra de cultura de células
CA3085467A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Ap Biosciences, Inc. Bifunctional proteins combining checkpoint blockade for targeted therapy
JP7250808B2 (ja) 2018-03-08 2023-04-03 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗がん剤としての環状ジヌクレオチド
CN111868085A (zh) 2018-03-19 2020-10-30 瑞泽恩制药公司 微芯片毛细管电泳测定法及试剂
KR20200135447A (ko) * 2018-03-22 2020-12-02 카이레스 아게 길항성 pd-1, pd-l1 및 lag-3 결합 단백질
TW202003565A (zh) 2018-03-23 2020-01-16 美商必治妥美雅史谷比公司 抗mica及/或micb抗體及其用途
AU2019237257A1 (en) * 2018-03-23 2020-10-15 ISR Immune System Regulation Holding AB (publ) Combinations of macrolide compounds and immune checkpoint inhibitors
CN108546297B (zh) * 2018-03-29 2019-08-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 针对pd-1的单克隆抗体及其应用
CN111971306A (zh) 2018-03-30 2020-11-20 百时美施贵宝公司 ***的方法
CN112292399A (zh) 2018-04-04 2021-01-29 百时美施贵宝公司 抗cd27抗体及其用途
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
CN109336975B (zh) * 2018-04-18 2022-05-13 中国科学院微生物研究所 一种靶向pd-1的肿瘤抑制性抗体及其应用
PE20210160A1 (es) 2018-04-25 2021-01-26 Innate Tumor Immunity Inc Moduladores de nlrp3
CN110404066B (zh) * 2018-04-28 2022-06-17 齐鲁制药有限公司 一种抗人pd-1的单克隆抗体制剂、联合用药物及其用途
CN108840932B (zh) * 2018-04-28 2022-03-29 中国科学院微生物研究所 一种pd-1特异性抗体及其抗肿瘤应用
BR112020022145A2 (pt) 2018-05-04 2021-01-26 Merck Patent Gmbh inibição combinada de pd-1/pd-l1, tgfbeta e dna-pk para o tratamento de câncer
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
BR112020023195A2 (pt) 2018-05-14 2021-09-28 Immunocore Limited Polipeptídeos de ligação bifuncional, composição farmacêutica, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, método para preparar o polipeptídeo de ligação bifuncional, e método para tratar um distúrbio autoimune
EP3794039A4 (en) * 2018-05-17 2022-05-04 Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd. PD-1 BINDING ANTIBODIES AND USES THEREOF
TW202015726A (zh) 2018-05-30 2020-05-01 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
WO2019232319A1 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Peloton Therapeutics, Inc. Compositions and methods for inhibiting cd73
AU2019277029C1 (en) 2018-06-01 2024-01-04 Novartis Ag Binding molecules against BCMA and uses thereof
US11548947B2 (en) 2018-06-21 2023-01-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific anti-PSMA X anti-CD28 antibodies and uses thereof
TW202005985A (zh) * 2018-06-21 2020-02-01 美商再生元醫藥公司 用雙特異性抗ＣＤ３ｘＭＵＣ１６抗體及抗ＰＤ－１抗體治療癌症的方法
WO2019246557A1 (en) 2018-06-23 2019-12-26 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
US11795206B2 (en) * 2018-06-24 2023-10-24 Yunbiao Lu Specific bifunctional BY-001 (active composition of homomultimer of chimeric protein pd-L1 / fc-gamma1) down regulates the activation of human immune cells and the use thereof
WO2020006511A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Gensun Biopharma, Inc. Trispecific antagonists
CA3105750A1 (en) * 2018-07-09 2020-01-16 Precigen, Inc. Fusion constructs and methods of using thereof
RS64759B1 (sr) 2018-07-10 2023-11-30 Novartis Ag 3-(5-hidroksi-1-oksoizoindolin-2-il)piperidin-2,6-dion derivati i njihova primena u lečenju bolesti zavisnih od cink prsta 2 (ikzf2) iz porodice ikaros
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
CA3104147A1 (en) 2018-07-18 2020-01-23 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
EP3823991A4 (en) * 2018-07-19 2022-08-03 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. ANTI-PD-1 ANTIBODIES, DOSAGES AND USES THEREOF
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
WO2020021061A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Humanized anti-pd-1 antibodies and uses thereof
BR112021000511A2 (pt) 2018-07-26 2021-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Terapia de combinação de lag-3 para o tratamento de câncer
CN113038989A (zh) 2018-08-16 2021-06-25 先天肿瘤免疫公司 咪唑并[4,5-c]喹啉衍生的nlrp3调节剂
WO2020037092A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Innate Tumor Immunity, Inc. Imidazo[4,5-c]quinoline derived nlrp3-modulators
JP2021534180A (ja) 2018-08-16 2021-12-09 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッドInnate Tumor Immunity, Inc. 置換４−アミノ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン化合物およびその製造の改良法
WO2020041655A1 (en) 2018-08-24 2020-02-27 Sanofi Therapeutic rna for solid tumor cancers
AU2019328632A1 (en) 2018-08-27 2021-03-25 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Combination therapies comprising CD137/HER2 bispecific agents and PD-1 axis inhibitors and uses thereof
CN112218877A (zh) 2018-08-27 2021-01-12 瑞泽恩制药公司 拉曼光谱在下游纯化中的应用
CN112601963A (zh) 2018-08-30 2021-04-02 瑞泽恩制药公司 用于表征蛋白质复合物的方法
EP3844189A1 (en) 2018-08-31 2021-07-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/c20 bispecific antibodies
WO2020044252A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Novartis Ag Dosage regimes for anti-m-csf antibodies and uses thereof
JP2021535169A (ja) 2018-09-03 2021-12-16 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｔｅａｄモジュレーターとして有用なカルボキサミドおよびスルホンアミド誘導体
WO2020049534A1 (en) 2018-09-07 2020-03-12 Novartis Ag Sting agonist and combination therapy thereof for the treatment of cancer
WO2020076799A1 (en) 2018-10-09 2020-04-16 Bristol-Myers Squibb Company Anti-mertk antibodies for treating cancer
EP3867409A1 (en) 2018-10-16 2021-08-25 Novartis AG Tumor mutation burden alone or in combination with immune markers as biomarkers for predicting response to targeted therapy
AU2019361124A1 (en) 2018-10-19 2021-06-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for melanoma
JP2022505647A (ja) 2018-10-23 2022-01-14 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 腫瘍の処置方法
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
MX2021005594A (es) * 2018-11-13 2021-10-22 Compass Therapeutics Llc Constructos multiespecificos de union contra moleculas de puntos de control y usos de los mismos.
US20210388091A1 (en) 2018-11-14 2021-12-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Intralesional administration of pd-1 inhibitors for treating skin cancer
PE20211284A1 (es) 2018-11-16 2021-07-19 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos anti-nkg2a y usos de los mismos
EP3883605A1 (en) 2018-11-19 2021-09-29 Ariagen, Inc. Methods of treating cancer
EP3883610A4 (en) 2018-11-20 2022-11-02 Cornell University MACROCYCLIC COMPLEXES OF RADIONUCLIDES AND THEIR USE IN CANCER RADIATION THERAPY
KR20210098504A (ko) 2018-12-04 2021-08-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 다중 동위원소체 반응 모니터링에 의한 샘플내 보정 곡선을 사용한 분석 방법
MX2021006544A (es) 2018-12-04 2021-07-07 Sumitomo Pharma Oncology Inc Inhibidores de cinasa dependiente de ciclina 9 (cdk9) y polimorfos de los mismos para uso como agentes para el tratamiento de cancer.
MX2021006831A (es) 2018-12-11 2021-07-02 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Inhibidores de alk5.
MA54540A (fr) 2018-12-19 2021-10-27 Regeneron Pharma Anticorps anti-cd28 x anti-cd22 bispécifiques et leurs utilisations
CA3123420A1 (en) 2018-12-19 2020-06-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific anti-muc16 x anti-cd28 antibodies and uses thereof
WO2020132091A2 (en) * 2018-12-19 2020-06-25 Humabs Biomed Sa Antibodies that neutralize hepatitis b virus and uses thereof
AU2019402189B2 (en) 2018-12-20 2023-04-13 Novartis Ag Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
KR20210108422A (ko) 2018-12-21 2021-09-02 노파르티스 아게 IL-1β 결합 항체의 용도
US20220025036A1 (en) 2018-12-21 2022-01-27 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
KR20210107730A (ko) 2018-12-21 2021-09-01 노파르티스 아게 골수 형성이상 증후군의 치료 또는 예방에서의 il-1 베타 항체의 용도
US20220054524A1 (en) 2018-12-21 2022-02-24 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
JP7340021B2 (ja) 2018-12-23 2023-09-06 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 予測腫瘍遺伝子変異量に基づいた腫瘍分類
CN113544146A (zh) * 2018-12-27 2021-10-22 吉加根公司 抗pd-1结合蛋白及其使用方法
CN113286786A (zh) 2019-01-14 2021-08-20 先天肿瘤免疫公司 Nlrp3调节剂
JP7373571B2 (ja) 2019-01-14 2023-11-02 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド がん治療に用いるためのｎｌｒｐ３モジュレーターとしての置換キナゾリン
JP2022517111A (ja) 2019-01-14 2022-03-04 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド がんの治療に用いるためのヘテロ環ｎｌｒｐ３モジュレーター
AU2020208193A1 (en) 2019-01-14 2021-07-29 BioNTech SE Methods of treating cancer with a PD-1 axis binding antagonist and an RNA vaccine
KR20210114983A (ko) 2019-01-14 2021-09-24 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Nlrp3 조정제
CA3116732A1 (en) 2019-01-16 2020-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for identifying free thiols in proteins
BR112021013965A2 (pt) 2019-01-21 2021-09-21 Sanofi Rna terapêutico e anticorpos anti-pd1 para cânceres de tumor sólido em estágio avançado
JP2022523100A (ja) 2019-02-01 2022-04-21 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッド ベランタマブマフォドチンおよび抗ｏｘ４０抗体を含むがんの併用治療ならびにその使用および方法
MX2021009562A (es) 2019-02-12 2021-09-08 Novartis Ag Combinacion farmaceutica que comprende tno155 y un inhibidor de pd-1.
EP3924351A4 (en) 2019-02-12 2022-12-21 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. FORMULATIONS COMPRISING HETEROCYCLIC PROTEIN KINASE INHIBITORS
EA202192019A1 (ru) 2019-02-15 2021-11-02 Новартис Аг Производные 3-(1-оксо-5-(пиперидин-4-ил)изоиндолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона и пути их применения
AU2020222346B2 (en) 2019-02-15 2021-12-09 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
WO2020176699A1 (en) 2019-02-28 2020-09-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Administration of pd-1 inhibitors for treating skin cancer
AU2020231343A1 (en) 2019-03-06 2021-10-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-4/IL-13 pathway inhibitors for enhanced efficacy in treating cancer
WO2020191326A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (aml) with venetoclax failure
AU2020245437A1 (en) 2019-03-22 2021-09-30 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising PKM2 modulators and methods of treatment using the same
US11912767B2 (en) 2019-03-22 2024-02-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. EGFR × CD28 multispecific antibodies
KR20210146349A (ko) 2019-03-28 2021-12-03 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
US20220041733A1 (en) 2019-03-28 2022-02-10 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
WO2020208612A1 (en) 2019-04-12 2020-10-15 Vascular Biogenics Ltd. Methods of anti-tumor therapy
MX2021012543A (es) 2019-04-15 2021-12-10 Ariagen Inc Compuestos de indoles quirales y su uso.
CN114364703A (zh) 2019-04-19 2022-04-15 豪夫迈·罗氏有限公司 抗mertk抗体及它们的使用方法
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
JP2022532490A (ja) 2019-05-13 2022-07-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 癌の治療における有効性の増強のためのｐｄ－１阻害剤とｌａｇ－３阻害剤の組み合わせ
EP3969908A1 (en) 2019-05-13 2022-03-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Improved competitive ligand binding assays
WO2020231766A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
US20230242478A1 (en) 2019-05-13 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
KR20220035333A (ko) 2019-05-20 2022-03-22 팬디온 오퍼레이션스, 인코포레이티드 Madcam 표적 면역관용
EP3976090A1 (en) 2019-05-24 2022-04-06 Pfizer Inc. Combination therapies using cdk inhibitors
WO2020243568A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
US20220363760A1 (en) 2019-05-30 2022-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signature for suitability to immuno-oncology therapy
KR20220016157A (ko) 2019-05-30 2022-02-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 세포 국재화 시그너쳐 및 조합 요법
WO2020252471A1 (en) * 2019-06-14 2020-12-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antibodies against pd-1 and methods of use thereof
CN114630675A (zh) 2019-06-18 2022-06-14 爱尔兰詹森科学公司 乙型肝炎病毒(hbv)疫苗和抗pd-1或抗pd-l1抗体的组合
WO2020255009A2 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 antibody
US10851157B2 (en) 2019-07-01 2020-12-01 Gensun Biopharma, Inc. Antagonists targeting the TGF-β pathway
WO2021003417A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Tyrosine kinase non-receptor 1 (tnk1) inhibitors and uses thereof
KR20220030956A (ko) 2019-07-05 2022-03-11 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 Pd-1/cd3 이중 특이성 단백질에 의한 혈액암 치료
EP3997124A4 (en) * 2019-07-09 2024-01-03 Nat Institute For Biotechnology In The Negev Ltd ANTIBODIES WITH REDUCED IMMUNOGENICITY
AU2020322474A1 (en) * 2019-08-01 2022-03-10 Vaccinex,Inc. Combined inhibition of semaphorin-4D and TGFβ and compositions therefor
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
WO2021026179A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
WO2021025140A1 (ja) 2019-08-08 2021-02-11 小野薬品工業株式会社 二重特異性タンパク質
US11629190B2 (en) 2019-08-15 2023-04-18 Oregon State University Canine antibody therapeutic for treating cancer
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
JP2022548881A (ja) 2019-09-18 2022-11-22 ノバルティス アーゲー Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法
WO2021055994A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
MX2022003438A (es) 2019-09-24 2022-04-19 Regeneron Pharma Sistemas y metodos para uso y regeneracion de cromatografia.
MX2022003357A (es) 2019-09-25 2022-05-03 Seagen Inc Combinación de anticuerpo anti-cd30 conjugado con un farmaco, anti-pd-1 y quimioterapia para el tratamiento de cánceres hematopoyéticos.
JP2022549337A (ja) 2019-09-25 2022-11-24 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー がん療法のための複合バイオマーカー
MX2022004769A (es) 2019-10-21 2022-05-16 Novartis Ag Inhibidores de tim-3 y sus usos.
CN114786679A (zh) 2019-10-21 2022-07-22 诺华股份有限公司 具有维奈托克和tim-3抑制剂的组合疗法
US20210128710A1 (en) * 2019-11-04 2021-05-06 Inovio Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy to treat brain cancer
EP4055392A1 (en) 2019-11-05 2022-09-14 Bristol-Myers Squibb Company M-protein assays and uses thereof
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
CA3151629A1 (en) 2019-11-07 2021-05-14 Laura E. BENJAMIN Classification of tumor microenvironments
JP2022553851A (ja) 2019-11-08 2022-12-26 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 黒色腫の処置のためのｌａｇ－３アンタゴニスト
CA3155989A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Jason Robert ZBIEG Therapeutic compounds and methods of use
US20220395553A1 (en) 2019-11-14 2022-12-15 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
US20230000864A1 (en) 2019-11-22 2023-01-05 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Solid dose pharmaceutical composition
US11590116B2 (en) 2019-11-22 2023-02-28 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Substituted pyridines and methods of use
KR20220104797A (ko) 2019-11-25 2022-07-26 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 비수성 에멀전을 이용한 지속 방출 제형
MX2022006891A (es) 2019-12-09 2022-09-09 Seagen Inc Terapia combinada con liv1-adc y antagonista de pd-1.
US20230089255A1 (en) 2019-12-19 2023-03-23 Bristol-Myers Squibb Company Combinations of dgk inhibitors and checkpoint antagonists
WO2021123996A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Novartis Ag Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases
EP4079763A4 (en) * 2019-12-20 2023-10-11 Guangdong Feipeng Pharmaceutical Co., Ltd MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN PROGRAMMED DEATH-1 (PD-1)
US20230348458A1 (en) 2020-01-10 2023-11-02 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
CN114980902A (zh) 2020-01-17 2022-08-30 诺华股份有限公司 用于治疗骨髓增生异常综合征或慢性粒单核细胞白血病的包含tim-3抑制剂和低甲基化药物的组合
KR102544013B1 (ko) 2020-01-21 2023-06-19 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 당질화된 단백질의 전기영동을 위한 탈당질화 방법
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
WO2021152548A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 Benitah Salvador Aznar Combination therapy for treatment of cancer and cancer metastasis
TW202142257A (zh) 2020-01-31 2021-11-16 美商建南德克公司 用ｐｄ－１軸結合拮抗劑及ｒｎａ疫苗誘導新抗原決定基特異性ｔ細胞之方法
CN115362167A (zh) 2020-02-06 2022-11-18 百时美施贵宝公司 Il-10及其用途
CN113244385A (zh) * 2020-02-07 2021-08-13 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd-1抗体在治疗恶性肿瘤中的用途
KR20220148846A (ko) 2020-02-28 2022-11-07 노파르티스 아게 다브라페닙, erk 억제제, 및 raf 억제제를 포함하는 삼중 약학적 조합물
AU2021230575A1 (en) 2020-03-06 2022-10-20 Celgene Quanticel Research, Inc. Combination of an LSD-1 inhibitor and nivolumab for use in treating SCLC or sqNSCLC
BR112022017156A2 (pt) 2020-03-06 2022-11-08 Regeneron Pharma Anticorpo isolado ou fragmento de ligação, molécula polinucleotídica isolada, vetor, célula hospedeira isolada, composição farmacêutica, método de tratamento de câncer, e, uso de um anticorpo
IL295979A (en) 2020-03-06 2022-10-01 Ona Therapeutics S L Anti-cd36 antibodies and their use for cancer treatment
AU2021244200A1 (en) 2020-03-23 2022-11-24 Bristol-Myers Squibb Company Anti-CCR8 antibodies for treating cancer
AU2021242305A1 (en) * 2020-03-26 2022-10-20 Cureimmune Therapeutics Inc. Anti-PD-1 antibodies and methods of use
CN115443269A (zh) 2020-03-31 2022-12-06 施万生物制药研发Ip有限责任公司 经取代的嘧啶和使用方法
EP4138819A1 (en) 2020-04-21 2023-03-01 Novartis AG Dosing regimen for treating a disease modulated by csf-1r
KR20230004682A (ko) 2020-04-22 2023-01-06 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 인터류킨-2 수용체 베타 감마c 이량체에 대해 편향되고 비펩티드성 수용성 중합체에 접합된 인간 인터류킨-2 접합체
CN115666724A (zh) 2020-05-26 2023-01-31 瑞泽恩制药公司 通过施用pd-1抑制剂抗体西米普利单抗来治疗***的方法
US20230203157A1 (en) * 2020-05-27 2023-06-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bispecific molecules for selectively modulating t cells
MX2022015157A (es) 2020-06-02 2023-01-16 Arcus Biosciences Inc Anticuerpos para tigit.
WO2021253041A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Naphthyridine derivatives useful as alk5 inhibitors
TW202214857A (zh) 2020-06-19 2022-04-16 法商昂席歐公司 新型結合核酸分子及其用途
WO2021260528A1 (en) 2020-06-23 2021-12-30 Novartis Ag Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
KR20230033647A (ko) 2020-06-30 2023-03-08 멘두스 비.브이. 난소암 백신에서 백혈병 유래 세포의 용도
CA3182579A1 (en) 2020-07-07 2022-01-13 Ugur Sahin Therapeutic rna for hpv-positive cancer
WO2022009157A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Novartis Ag Lhc165 and spartalizumab combinations for treating solid tumors
US11787775B2 (en) 2020-07-24 2023-10-17 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
KR20230056761A (ko) 2020-08-26 2023-04-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Pd-1 저해제의 투여에 의한 암 치료 방법
BR112023003427A2 (pt) 2020-08-28 2023-03-21 Bristol Myers Squibb Co Terapia com antagonista de lag-3 para carcinoma hepatocelular
AU2021334361A1 (en) 2020-08-31 2023-05-11 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
EP4204578A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asparagine feed strategies to improve cell culture performance and mitigate asparagine sequence variants
WO2022043558A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022049526A1 (en) 2020-09-02 2022-03-10 Pharmabcine Inc. Combination therapy of a pd-1 antagonist and an antagonist for vegfr-2 for treating patients with cancer
IL300975A (en) 2020-09-03 2023-04-01 Regeneron Pharma Methods for treating cancer pain by administering a PD-1 inhibitor
EP4210734A1 (en) 2020-09-14 2023-07-19 Boehringer Ingelheim International GmbH Heterologous prime boost vaccine
IL301037A (en) 2020-09-18 2023-05-01 Regeneron Pharma Antigen binding molecules that bind CD38 and/or CD28 and uses thereof
CN116472290A (zh) 2020-09-24 2023-07-21 默沙东有限责任公司 程序性死亡受体1（pd-1）抗体和透明质酸酶变体及其片段的稳定制剂及其使用方法
EP4222171A1 (en) 2020-10-02 2023-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of antibodies for treating cancer with reduced cytokine release syndrome
CN116406369A (zh) 2020-10-05 2023-07-07 百时美施贵宝公司 用于浓缩蛋白质的方法
US20230364127A1 (en) 2020-10-06 2023-11-16 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6
TW202233671A (zh) 2020-10-20 2022-09-01 美商建南德克公司 Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法
EP4232019A1 (en) 2020-10-23 2023-08-30 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
MX2023004847A (es) 2020-10-28 2023-07-11 Ikena Oncology Inc Combinación de un inhibidor del receptor de hidrocarburos de arilo (ahr) con un inhibidor de pdx o doxorrubicina.
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
JP2023548064A (ja) 2020-11-04 2023-11-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体及び抗ｃｄ７９ｂ抗体薬物コンジュゲートによる処置のための投与
EP4240766A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
US20220162329A1 (en) 2020-11-04 2022-05-26 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2022097060A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
WO2022104043A1 (en) * 2020-11-13 2022-05-19 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd Pd-1 decoy variants for immunotherapy
KR20230113280A (ko) 2020-11-25 2023-07-28 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 비수성 멤브레인 유화법을 사용한 지속 방출 제형
WO2022118197A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
MX2023006488A (es) 2020-12-02 2023-06-20 Genentech Inc Procedimientos y composiciones para el tratamiento neoadyuvante y adyuvante del carcinoma urotelial.
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
US20240082394A1 (en) * 2020-12-15 2024-03-14 Bicara Therapeutics Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
KR20230121854A (ko) 2020-12-17 2023-08-21 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 단백질-캡슐화 마이크로겔의 제작
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
JP2024501029A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の皮下投与
AU2021411486A1 (en) 2020-12-28 2023-06-29 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
TW202233827A (zh) 2021-01-20 2022-09-01 美商再生元醫藥公司 改良細胞培養中蛋白質效價的方法
CA3203705A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 Erik Hans MANTING Methods of tumor vaccination
JP2024505049A (ja) 2021-01-29 2024-02-02 ノバルティス アーゲー 抗ｃｄ７３及び抗ｅｎｔｐｄ２抗体のための投与方式並びにその使用
US20240109899A1 (en) 2021-02-04 2024-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Benzofuran compounds as sting agonists
KR20230141869A (ko) 2021-02-11 2023-10-10 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 신보조 요법으로서 pd-1 저해제의 투여에 의한 암 치료 방법
AU2022230987A1 (en) 2021-03-03 2023-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for quantifying and modifying protein viscosity
US20220305100A1 (en) 2021-03-12 2022-09-29 Dcprime B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
CN117321418A (zh) 2021-03-18 2023-12-29 诺华股份有限公司 癌症生物标志物及其使用方法
WO2022204672A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer in immunosuppressed or immunocompromised patients by administering a pd-1 inhibitor
EP4314348A1 (en) 2021-03-25 2024-02-07 Oncxerna Therapeutics, Inc. Targeted therapies in cancer
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
BR112023018665A2 (pt) 2021-03-26 2023-10-03 Regeneron Pharma Métodos e sistemas para desenvolvimento de protocolos de mistura
WO2022212400A1 (en) 2021-03-29 2022-10-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
EP4314068A1 (en) 2021-04-02 2024-02-07 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
TW202309022A (zh) 2021-04-13 2023-03-01 美商努法倫特公司 用於治療具egfr突變之癌症之胺基取代雜環
JP2024516230A (ja) 2021-04-30 2024-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんのための治療及び診断方法並びに組成物
EP4330282A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
CN117412767A (zh) 2021-05-25 2024-01-16 雪绒花免疫公司 C-x-c基序趋化因子受体6（cxcr6）结合分子及其使用方法
WO2022251359A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use
EP4348234A1 (en) 2021-06-01 2024-04-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Micropchip capillary electrophoresis assays and reagents
WO2022256538A1 (en) 2021-06-03 2022-12-08 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and cetuximab
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
TW202317623A (zh) * 2021-06-14 2023-05-01 美商再生元醫藥公司 基於il2之治療劑及其使用方法
IL309310A (en) 2021-06-18 2024-02-01 Genzyme Corp Antibody formulations against TGF-beta and their use
BR112023026966A2 (pt) 2021-07-02 2024-03-12 Hoffmann La Roche Métodos para tratar um indivíduo com melanoma, para alcançar uma resposta clínica, para tratar um indivíduo com linfoma não hodgkin, para tratar uma população de indivíduos com linfoma não hodgkin e para tratar um indivíduo com câncer colorretal metastático
AU2022312698A1 (en) 2021-07-13 2024-01-25 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
AU2022314735A1 (en) 2021-07-19 2024-02-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of checkpoint inhibitors and an oncolytic virus for treating cancer
AU2022314734A1 (en) 2021-07-19 2024-02-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il12 receptor agonists and methods of use thereof
WO2023010094A2 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
AU2022317820A1 (en) 2021-07-28 2023-12-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
WO2023007472A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 ONA Therapeutics S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
WO2023022965A2 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Novel il27 receptor agonists and methods of use thereof
WO2023039457A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. A high-throughput and mass-spectrometry-based method for quantitating antibodies and other fc-containing proteins
CA3232463A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Philip Mellors Methods of controlling antibody heterogeneity
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
TW202327595A (zh) 2021-10-05 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 用於治療癌症之氮雜內醯胺化合物的組合
WO2023057534A1 (en) 2021-10-06 2023-04-13 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination
AU2022359898A1 (en) 2021-10-07 2024-03-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ph meter calibration and correction
WO2023059800A2 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods of ph modeling and control
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
TW202330104A (zh) 2021-10-26 2023-08-01 美商再生元醫藥公司 用於產生實驗室用水及分配不同溫度之實驗室用水的系統及方法
WO2023077090A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
WO2023079428A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Pfizer Inc. Combination therapies using tlr7/8 agonist
WO2023080900A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating kidney cancer
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
TW202319073A (zh) 2021-11-12 2023-05-16 瑞士商諾華公司 用於治療肺癌的組合療法
WO2023097195A1 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Genentech, Inc. Therapeutic indazole compounds and methods of use in the treatment of cancer
US20230203062A1 (en) 2021-11-24 2023-06-29 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
CN116333118B (zh) * 2021-12-16 2024-04-19 徕特康(苏州)生物制药有限公司 抗表皮生长因子受体抗体及其制备方法和用途
WO2023122573A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab
WO2023133280A1 (en) 2022-01-07 2023-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating recurrent ovarian cancer with bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
WO2023154799A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Combination immunotherapy for treating cancer
WO2023159102A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combinations of checkpoint inhibitors and oncolytic virus for treating cancer
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023177772A1 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating recurrent epithelioid sarcoma with bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023177836A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for analyzing polypeptide variants
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
CN116925223A (zh) * 2022-04-02 2023-10-24 普米斯生物技术(珠海)有限公司 抗pd-1单克隆抗体及其衍生物和用途
WO2023196987A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
WO2023196964A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Machine learning identification, classification, and quantification of tertiary lymphoid structures
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023220647A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific binding molecule proproteins and uses thereof
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023218046A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
WO2023224912A1 (en) 2022-05-16 2023-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating metastatic castration-resistant prostate cancer with bispecific anti-psma x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2023225098A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen binding molecules that bind cd38 and 4-1bb, and uses thereof
WO2023230554A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Pfizer Inc. Combination of a braf inhibitor, an egfr inhibitor, and a pd-1 antagonist for the treatment of braf v600e-mutant, msi-h/dmmr colorectal cancer
US20230382969A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interleukin-2 proproteins and uses thereof
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
US20230391844A1 (en) 2022-06-04 2023-12-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interleukin-2 proproteins and uses thereof
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4310197A1 (en) 2022-07-21 2024-01-24 Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda Method for identifying lung cancer patients for a combination treatment of immuno- and chemotherapy
WO2024018069A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Philogen S.P.A Anti-cd28 antibodies
WO2024023740A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Astrazeneca Ab Combinations of recombinant virus expressing interleukin-12 with pd-1/pd-l1 inhibitors
US20240043560A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of Treating Metastatic Castration-Resistant Prostate Cancer with Bispecific Anti-PSMA x Anti-CD28 Antibodies in Combination with Anti-PD-1 Antibodies
US20240067691A1 (en) 2022-08-18 2024-02-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interferon receptor agonists and uses thereof
WO2024040247A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interferon proproteins and uses thereof
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024069009A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Alentis Therapeutics Ag Treatment of drug-resistant hepatocellular carcinoma
WO2024076926A1 (en) 2022-10-03 2024-04-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer with bispecific egfr x cd28 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2024077095A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating bladder cancer
WO2024077166A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating lung cancer

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004056875A1 (en) * 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
EP1591527A1 (en) * 2003-01-23 2005-11-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human pd-1
WO2006121168A1 (en) * 2005-05-09 2006-11-16 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
WO2011110621A1 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Biological products: humanised agonistic anti-pd-1 antibodies

Family Cites Families (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2143491C (en) 1994-03-01 2011-02-22 Yasumasa Ishida A novel peptide related to human programmed cell death and dna encoding it
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
US6808710B1 (en) 1999-08-23 2004-10-26 Genetics Institute, Inc. Downmodulating an immune response with multivalent antibodies to PD-1
CA2383424C (en) 1999-08-23 2011-02-15 Gordon Freeman Novel b7-4 molecules and uses therefor
PT1234031T (pt) 1999-11-30 2017-06-26 Mayo Foundation B7-h1, uma nova molécula imunoregulatória
WO2002000730A2 (en) 2000-06-28 2002-01-03 Genetics Institute, Llc. Pd-l2 molecules: novel pd-1 ligands and uses therefor
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
AR036993A1 (es) 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
AU2002258941A1 (en) 2001-04-20 2002-11-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing cell responsiveness
WO2003042402A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
FI2206517T3 (fi) 2002-07-03 2023-10-19 Ono Pharmaceutical Co Immuunopotentioivia koostumuksia käsittäen anti-PD-L1 -vasta-aineita
JP2004104681A (ja) 2002-09-12 2004-04-02 Renesas Technology Corp 入力バッファ回路
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
JP5848861B2 (ja) 2004-04-20 2016-01-27 ジェンマブ エー／エスＧｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ Ｃｄ２０に対するヒトモノクローナル抗体
US8257740B1 (en) 2011-08-15 2012-09-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
US8246995B2 (en) 2005-05-10 2012-08-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Hydrophobic nanotubes and nanoparticles as transporters for the delivery of drugs into cells
CA2611814A1 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
CN105330741B (zh) 2005-07-01 2023-01-31 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
CN102875681A (zh) 2005-07-08 2013-01-16 拜奥根Idec马萨诸塞公司 抗-αvβ6抗体及其用途
EP1820513A1 (en) 2006-02-15 2007-08-22 Trion Pharma Gmbh Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies
US8216996B2 (en) 2006-03-03 2012-07-10 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Multimer of extracellular domain of cell surface functional molecule
MX2008014804A (es) 2006-06-02 2009-01-27 Regeneron Pharma Anticuerpos de afinidad elevada a receptor de il-6 humano.
DK2170959T3 (da) 2007-06-18 2014-01-13 Merck Sharp & Dohme Antistoffer mod human programmeret dødsreceptor pd-1
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
US9243052B2 (en) 2007-08-17 2016-01-26 Daniel Olive Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
AU2007358569B2 (en) 2007-09-07 2014-09-04 Ablynx N.V. Binding molecules with multiple binding sites, compositions comprising the same and uses thereof
BRPI0907718A2 (pt) 2008-02-11 2017-06-13 Curetech Ltd método para tratar um tumor, método para melhorar a tolerabilidade a pelo menos um agente quimiterápico, método para aumentar a sobrevida de um indivíduo que tem um tumor, método para reduzir ou prevenir recidiva tumoral, uso de um anticorpo monoclonal humanizado ou seu fragmento e anticorpo monoclonal humanizado ou seu fragmento
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
KR101001360B1 (ko) 2008-06-16 2010-12-14 (주)기가레인 전자 기기의 접지에 전기적으로 연결되는 인쇄회로기판
NZ591130A (en) 2008-08-25 2012-09-28 Amplimmune Inc Compositions comprising a PD-1 antagonists and cyclophosphamide and methods of use thereof
WO2010029434A1 (en) 2008-09-12 2010-03-18 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
AU2009290544B2 (en) 2008-09-12 2015-07-16 Oxford University Innovation Limited PD-1 specific antibodies and uses thereof
ES2592216T3 (es) 2008-09-26 2016-11-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anticuerpos anti-PD-1, PD-L1 y PD-L2 humanos y sus usos
KR101050829B1 (ko) 2008-10-02 2011-07-20 서울대학교산학협력단 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제
SI2376535T1 (sl) 2008-12-09 2017-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa anti-pd-l1 in njihova uporaba za izboljšanje funkcije celic t
JP5844159B2 (ja) 2009-02-09 2016-01-13 ユニヴェルシテ デクス−マルセイユＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｄ’Ａｉｘ−Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ Ｐｄ−１抗体およびｐｄ−ｌ１抗体ならびにその使用
AU2010265933B2 (en) 2009-06-26 2015-05-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
ES2681214T3 (es) 2009-09-30 2018-09-12 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Inmunoterapia de combinación para el tratamiento del cáncer
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
NZ599405A (en) 2009-11-24 2014-09-26 Medimmune Ltd Targeted binding agents against b7-h1
EP3095871B1 (en) 2010-02-08 2019-04-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common light chain mouse
JP5920929B2 (ja) 2010-03-11 2016-05-18 ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム Ｐｄ−１抗体
JP2013532153A (ja) 2010-06-18 2013-08-15 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 慢性免疫病に対する免疫治療のためのｔｉｍ−３およびｐｄ−１に対する二重特異性抗体
EP2910572B1 (en) 2010-11-11 2017-09-06 Versitech Limited Soluble pd-1 variants, fusion constructs, and uses thereof
LT2699264T (lt) 2011-04-20 2018-07-10 Medimmune, Llc Antikūnai ir kitos molekulės, kurios jungiasi prie b7-h1 ir pd-1
US8686119B2 (en) 2011-07-24 2014-04-01 Curetech Ltd. Variants of humanized immunomodulatory monoclonal antibodies
TW201840336A (zh) 2011-08-01 2018-11-16 美商建南德克公司 利用pd-1軸結合拮抗劑及mek抑制劑治療癌症之方法
KR101981873B1 (ko) 2011-11-28 2019-05-23 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
GB201120527D0 (en) 2011-11-29 2012-01-11 Ucl Business Plc Method
CA2899433A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Gliknik Inc. Fusion proteins comprising igg2 hinge domains
CN107827979A (zh) * 2012-03-16 2018-03-23 瑞泽恩制药公司 组氨酸工程改造的轻链抗体和用于生成所述抗体的经基因修饰的非人动物
AU2013256010B2 (en) 2012-05-04 2018-01-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Affinity matured anti-CCR4 humanized monoclonal antibodies and methods of use
WO2013169693A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer using an il-21 polypeptide and an anti-pd-1 antibody
US20130303250A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Ryan Moore Method of Playing a Card Game
US9856320B2 (en) 2012-05-15 2018-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting PD-1/PD-L1 signaling
EP3556776A1 (en) 2012-05-31 2019-10-23 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and vegf antagonists
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
EA038920B1 (ru) 2012-10-02 2021-11-10 Бристол-Майерс Сквибб Компани Комбинация антител к kir и антител к pd-1 для лечения злокачественной опухоли
WO2014066834A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The University Of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
CN109045289A (zh) 2013-02-22 2018-12-21 库瑞瓦格股份公司 疫苗接种和抑制pd-1途径的组合
PL2970473T3 (pl) 2013-03-14 2018-01-31 Bristol Myers Squibb Co Kombinacja agonisty dr5 i antagonisty anty-pd-1 oraz metody stosowania
EP2972373B1 (en) 2013-03-15 2019-10-09 F.Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions
RS61400B1 (sr) 2013-05-02 2021-02-26 Anaptysbio Inc Antitela usmerena protiv programirane smrti-1 (pd-1)
WO2014194293A1 (en) 2013-05-30 2014-12-04 Amplimmune, Inc. Improved methods for the selection of patients for pd-1 or b7-h4 targeted therapies, and combination therapies thereof
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
KR20160030936A (ko) 2013-07-16 2016-03-21 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법
JP2016531907A (ja) 2013-08-02 2016-10-13 アデュロ・バイオテック・ホールディングス・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップＡｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ， Ｅｕｒｏｐｅ Ｂ．Ｖ． 免疫刺激のためのｃｄ２７アゴニストと免疫チェックポイント阻害との組み合わせ
JP6586087B2 (ja) 2013-08-20 2019-10-02 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． Ｐｄ−１アンタゴニストとジナシクリブとの組合せでの癌治療
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
EP3178849B1 (en) 2013-09-20 2019-03-20 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-lag-3 antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat tumors
EP3049442A4 (en) 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
SG11201602283UA (en) 2013-09-27 2016-04-28 Genentech Inc Anti-pdl1 antibody formulations
DK3083689T3 (da) 2013-12-17 2020-08-03 Genentech Inc Anti-CD3-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) * 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
US10092645B2 (en) 2014-06-17 2018-10-09 Medimmune Limited Methods of treatment with antagonists against PD-1 and PD-L1 in combination with radiation therapy
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
CU20170052A7 (es) 2014-10-14 2017-11-07 Dana Farber Cancer Inst Inc Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1
SG11201707383PA (en) 2015-03-13 2017-10-30 Cytomx Therapeutics Inc Anti-pdl1 antibodies, activatable anti-pdl1 antibodies, and methods of use thereof
KR20180040138A (ko) * 2015-07-13 2018-04-19 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 항pd-1 항체, 활성화 가능한 항pd-1 항체, 및 이들의 사용 방법
ES2954153T3 (es) 2015-12-22 2023-11-20 Regeneron Pharma Combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anticuerpos biespecíficos anti-CD20/anti-CD3 para tratar el cáncer
US11603407B2 (en) * 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004056875A1 (en) * 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
EP1591527A1 (en) * 2003-01-23 2005-11-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human pd-1
WO2006121168A1 (en) * 2005-05-09 2006-11-16 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
WO2011110621A1 (en) * 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Biological products: humanised agonistic anti-pd-1 antibodies

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KEIR MARY E , LATCHMAN YVETTE E, FREEMAN GORDEN J, SHARPE ARLENE H: "Programmed death-1 (PD-1):PD-ligand 1 interactions inhibit TCR-mediated positive selection of thymocytes.", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, AMERICAN ASSOCIATION OF IMMUNOLOGISTS, US, vol. 175, no. 11, 1 December 2005 (2005-12-01), US, pages 7372 - 7379, XP002636167, ISSN: 0022-1767 *
R. MOREIRA DA SILVA: "Nivolumab: Anti-PD-1 monoclonal antibody cancer immunotherapy", DRUGS OF THE FUTURE, PROUS SCIENCE, ES, vol. 39, no. 1, 1 January 2014 (2014-01-01), ES, pages 15 - 24, XP055199597, ISSN: 0377-8282, DOI: 10.1358/dof.2014.039.01.2103754 *
RIELLA L V, PATERSON A M, SHARPE A H, CHANDRAKER A.: "Role of the PD-1 pathway in the immune response.", AMERICAN JOURNAL OF TRANSPLANTATION, BLACKWELL MUNKSGAARD,, DK, vol. 12, no. 10, 1 October 2012 (2012-10-01), DK, pages 2575 - 2587, XP002738626, ISSN: 1600-6135, DOI: 10.1111/j.1600-6143.2012.04224.x *
ZORAN GATALICA, ZORAN GATALICA, CARRIE L. SNYDER, KIMBERLY YEATTS, NIANQING XIAO, DANIEL HOLTERMAN, HENRY T. LYNCH: "Programmed death 1 (PD-1) lymphocytes and ligand (PD-L1) in colorectal cancer and their relationship to microsatellite instability status.", J CLIN ONCOL, vol. 32, no. 5s, 30 May 2014 (2014-05-30), XP055199884 *

Also Published As

Publication number Publication date
CA2936075A1 (en) 2015-07-30
RS62507B1 (sr) 2021-11-30
EP3097119B1 (en) 2021-08-25
US20180185668A1 (en) 2018-07-05
US20150203579A1 (en) 2015-07-23
JP6425730B2 (ja) 2018-11-21
JP2019038823A (ja) 2019-03-14
PL3097119T3 (pl) 2022-01-03
WO2015112800A1 (en) 2015-07-30
KR102337042B1 (ko) 2021-12-08
CY1124747T1 (el) 2022-07-22
CA3207270A1 (en) 2015-07-30
CL2016001871A1 (es) 2017-05-19
JP2017505125A (ja) 2017-02-16
AU2015209233A1 (en) 2016-08-04
EA034770B8 (ru) 2020-07-10
ES2888224T3 (es) 2022-01-03
JP6711883B2 (ja) 2020-06-17
BR122022010183B1 (pt) 2024-01-30
HUE056332T2 (hu) 2022-02-28
SG11201605482SA (en) 2016-08-30
UY35964A (es) 2015-08-31
JP2020146050A (ja) 2020-09-17
CN106068275B (zh) 2021-06-01
SI3097119T1 (sl) 2021-11-30
MX2016009554A (es) 2016-11-17
LT3097119T (lt) 2021-10-11
JP2022160558A (ja) 2022-10-19
EP3967710A1 (en) 2022-03-16
IL267798A (en) 2019-09-26
CA2936075C (en) 2023-09-19
MX2021009852A (es) 2021-09-10
JP7174009B2 (ja) 2022-11-17
KR20160132010A (ko) 2016-11-16
TW201540726A (zh) 2015-11-01
CN106068275A (zh) 2016-11-02
EP3097119A1 (en) 2016-11-30
IL267798B (en) 2020-09-30
IL246818A0 (en) 2016-08-31
NZ722342A (en) 2022-05-27
MX2021003436A (es) 2021-06-15
MY176475A (en) 2020-08-11
TWI681969B (zh) 2020-01-11
US9987500B2 (en) 2018-06-05
AU2015209233B2 (en) 2020-03-05
IL246818B (en) 2019-07-31
US10737113B2 (en) 2020-08-11
PH12016501330B1 (en) 2016-08-15
UA122666C2 (uk) 2020-12-28
US20200330794A1 (en) 2020-10-22
DK3097119T3 (en) 2021-09-27
CN113248614A (zh) 2021-08-13
KR20210152583A (ko) 2021-12-15
PH12016501330A1 (en) 2016-08-15
HRP20211794T1 (hr) 2022-03-18
BR112016016699A2 (pt) 2017-10-03
PT3097119T (pt) 2021-09-29
EA201691482A1 (ru) 2016-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7174009B2 (ja) Ｐｄ－１に対するヒト抗体
US20210380702A1 (en) Human antibodies to pd-l1
US11692032B2 (en) Anti-LAG3 antibodies and uses thereof
EA039718B1 (ru) Антитела к lag3 и их применения
NZ721656B2 (en) Human antibodies to pd-l1