JP2016531907A - 免疫刺激のためのcd27アゴニストと免疫チェックポイント阻害との組み合わせ - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、医学的/獣医学的診断および医学的/獣医学的研究を含むヒトおよび動物の医学の分野に関する。より詳細には、本発明は、免疫応答の刺激、特に、抗原特異的Tリンパ球の刺激によって改善される症状の処置に関する。本発明の様々な態様は、CD27+免疫細胞の刺激または1つ以上の免疫チェックポイントタンパク質の阻害によって回復すると知られているかまたは回復すると予想される任意の症状の処置に適している。本発明によって適切に処置される症状は、CD27アゴニストと1つ以上の免疫チェックポイント遮断薬との組み合わせを使用することによる免疫刺激によって回復する症状、例えば、感染症および癌である。
TNFレセプターファミリーのメンバーであるCD27は、ヒトT細胞上の膜分子として同定された(van Lier et al.,1987,J Immunol 139:1589−96)。現在の証拠によると、CD27は、単一のリガンドであるCD70を有し、また、このリガンドはTNFファミリーのメンバーである(Goodwin et al.,1993,Cell 73:447−56)。
したがって、当該分野の現在の状況は、CD27の刺激が、PD−1およびCTLA−4によって媒介される免疫寛容を無効にし、抗CD27抗体を使用した活性化によって、これらの免疫チェックポイントレセプターのダウンレギュレーションがもたらされるというものである。ゆえに、当該分野の状況によると、CD27レセプターを活性化する作用物質と1つ以上の免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせは、CD27の活性化のみまたは免疫チェックポイントの阻害のみに等しいかもしくは類似の有効性をもたらし得る。
第1の態様において、本発明は、免疫応答の刺激によって回復する症状の処置、特に、抗原特異的Tリンパ球の刺激によって回復する症状の処置において使用するための抗ヒトCD27アゴニスト抗体に関し、ここで、前記処置において、いくつかの免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が投与される。
「一本鎖Fv抗体」(または「scFv抗体」)とは、抗体のVHドメインおよびVLドメインを含む抗体フラグメントのことを指し、ここで、これらのドメインは、1つのポリペプチド鎖として存在する。一般に、Fvポリペプチドは、scFvが抗原結合にとって望ましい構造を形成するのを可能にするポリペプチドリンカーをVHドメインとVLドメインとの間にさらに含む。scFvの概説については、Pluckthun,1994,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.Springer−Verlag,New York,pp.269−315を参照のこと。国際特許出願公開番号WO88/01649ならびに米国特許第4,946,778号および同第5,260,203号もまた参照のこと。
(i)抗ヒトCD27アゴニスト抗体を医薬的に許容され得る担体とともに含む第1の医薬組成物を保持している第1の容器;
(ii)免疫チェックポイント阻害剤を医薬的に許容され得る担体とともに含む第2の医薬組成物を保持している第2の容器;
(iii)必要に応じて、免疫応答の刺激によって回復する症状の処置、特に、抗原特異的Tリンパ球の刺激または増強から恩恵を受ける症状の処置において使用するための、好ましくは第1の医薬組成物における抗ヒトCD27アゴニスト抗体の、好ましくは第2の医薬組成物における免疫チェックポイント阻害剤との併用を示す情報を含む情報担体。
(A)抗ヒトCD27アゴニスト抗体および免疫チェックポイント阻害剤を医薬的に許容され得る担体とともに含む医薬組成物を保持している容器;
(B)必要に応じて、好ましくは医薬組成物における抗ヒトCD27アゴニスト抗体を、好ましくは医薬組成物における免疫チェックポイント阻害剤とともに、免疫応答の刺激によって回復する症状の処置、特に、抗原特異的Tリンパ球の刺激から恩恵を受ける症状の処置において使用するために併用することを示す情報を含む情報担体。
CD27アゴニストをPD−1阻止抗体またはPD−L1阻止抗体と組み合わせることの効果を調べるために、ヒト末梢血単核球(PBMNC)をバフィーコートから単離した。まず、バフィーコートを、RTにおいて、ヘパリン溶液(Leo Pharma,DB6132,5000U/ml)が補充されたDMEM/F12培地(Gibco,11320)で300mlという総容積に希釈した。細胞懸濁液を混合した後、アリコート(aliquotes)を、コニカルチューブ内のFicoll−Paque Plus勾配上にローディングし、20℃、450gで30分間、ブレーキなしで遠心分離した。次に、血漿を吸引によって除去し、PBMCを血漿/Ficoll界面から回収した。PBMCをDMEM/F12培地で2回洗浄し、10%ウシ胎仔(Foetal Calf)血清が補充されたRPMI1640培地(Gibco,52400)に再懸濁した。PBMCを、96ウェル平底プレート(Nuclon)において2×105細胞/ウェルでプレーティングした。抗体(抗PD1(hPD109AのhIgG4キメラ、下記を参照のこと、WO/2008/156712)、抗hCD27(hCD27.15のhIgG4キメラ)、キメラ化については下記を参照のこと)、抗PDL1(MIH1,eBioscience 16.5983.82)、ヒトIgG4アイソタイプコントロール(Sigma,14639)およびマウスIgG1アイソタイプコントロール(eBioscience,16.4714.85))およびそれらの希釈物を、PBSにおいて希釈し、上記PBMCに加えた。ヒトIgG4キメラバージョンのhPD1.09AおよびhCD27.15は、そのVH遺伝子およびVL遺伝子を、それぞれヒトIgG4およびヒトカッパー定常ドメインをコードするcDNAの上流にクローニングすることによって構築した。完全なcDNAをpcDNA3.1(Invitrogen)にサブクローニングし、Lipofectamine2000(Invitrogen)を製造者の指示書に従って使用して293T/17細胞(ATCC)に一過性にトランスフェクトした。5〜7日後、上清を回収し、標準的なプロテインA精製を用いて抗体を精製した。最後に、10%ウシ胎仔血清が補充されたRPMI1640培地中に希釈されたブドウ球菌エンテロトキシンB(Sigma S4881)を、25ng/mlという最終濃度で上記ウェルに加えた。細胞を、37℃、5%CO2および95%湿度で2日間インキュベートした。免疫活性化のレベルを評価するために、Dulos et al.,J.Immunother,2012,35:169−78に記載されている方法に従って上清中のIL−2分泌レベルを測定した。この目的のために、上清を吸引し、遠心分離によっていずれの細胞材料も除去された。次に、4℃における一晩のインキュベーションによってPBS中の2μg/mlの抗hIL−2抗体(BD Pharmingen,555051)でコーティングしておいたNunc maxisorp ELISAプレートに、上清を加えた。上清を加える前に、ウェルを空にし、200μl/ウェルのPBS/1%BSAで室温(RT)において1時間ブロッキングした。上清をRTにおいて1時間インキュベートし、PBST(0.01%Tween20を含むPBS)で3回洗浄した。続いて、PBS/PBS−1%BSA(1:1)における、100μlの0.5μg/mlの抗hIL2−ビオチン(BD Pharmingen 555040)を加え、RTにおいて1時間インキュベートした。PBSTで3回洗浄した後、100μlのPBS/PBS−1%BSA(1:1)における、1:5000希釈されたストレプトアビジン−HRP(BD Pharmingen,554066)を加えた。PBSTで3回洗浄し、水で1回洗浄した後、100μl/ウェルのTMB安定化色素原(Invitrogen,SB02)を加えることによって、IL−2を検出した。100μlの0.5M H2SO4によって反応を停止し、450nmおよび620nmにおける吸光度を読み出した。このアッセイでは、上清中のIL−2タンパク質レベルを定量するために、組換えヒトIL−2(Sigma,H7041)を使用した。図1Aには、CD27アゴニスト抗体とPD−1阻止抗体との協同作用が示されており、図1Bには、CD27アゴニスト抗体とPD−L1阻止抗体との協同作用が示されている。
抗ヒトCD27アゴニスト抗体と免疫チェックポイントタンパク質阻害剤との組み合わせの効果をさらに示すために、さらなる確認実験を行った。この実験では、hCD27.15アナログを抗LAG3抗体および抗PD1抗体と組み合わせて使用した。使用されるアナログは、hCD27.15の機能的な重鎖CDR1、CDR2、CDR3(それぞれ配列番号1、2、3)および軽鎖CDR1、CDR2、CDR3(それぞれ配列番号4、5、6)を含む。さらに、それは、機能的に連結された機能的なヒトIgG4定常ドメイン(CH1−CH3,GenBankアクセッション#K01316)を含む。hCD27.15アナログの機能を、WO2012/004367の実施例2(49〜50頁)に開示されたものに対応するCD27結合アッセイおよびWO2012/004367の実施例3(54〜55頁)に開示されているNF−κB試験に対応するCD27シグナル伝達試験において証明した。
Claims (29)
- 免疫応答の刺激、特に、抗原特異的Tリンパ球の刺激によって回復する症状の処置において使用するための、抗ヒトCD27アゴニスト抗体、例えば、hCD27.15もしくは1F5またはその抗体アナログであって、前記処置では、いくつかの免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が投与される、抗ヒトCD27アゴニスト抗体またはその抗体アナログ。
- 免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が、CTLA−4、PD1、PD−L1、PD−L2、LAG−3、BTLA、B7H3、B7H4、TIM3またはKIRの阻害剤から選択される、請求項1に記載の抗ヒトCD27アゴニスト抗体。
- 免疫刺激、特に、抗原特異的Tリンパ球の刺激によって回復する症状が、感染症、例えば、細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症および寄生生物感染症、病原体、例えば、細菌、真菌、ウイルスまたは寄生生物から選択される病原体に対する免疫化、あるいはトキシンまたは良性腫瘍上もしくは癌などの悪性腫瘍上に発現される抗原を含む自己抗原に対するワクチン接種、あるいは癌などの無制御の細胞増殖に関連する症状から選択される、請求項1または2に記載の抗ヒトCD27アゴニスト抗体。
- 処置がワクチン接種であり、ワクチンが該処置において投与される、請求項1〜3のいずれかに記載の抗ヒトCD27アゴニスト抗体。
- 免疫応答の刺激、特に、抗原特異的Tリンパ球(lyphocytes)の刺激によって回復する症状の処置において使用するための免疫チェックポイント阻害剤であって、前記処置において、抗ヒトCD27アゴニスト抗体、例えば、hCD27.15もしくは1F5またはその抗体アナログが投与される、免疫チェックポイント阻害剤。
- 免疫チェックポイント阻害剤が、CTLA−4、PD1、PD−L1、PD−L2、LAG−3、BTLA、B7H3、B7H4、TIM3またはKIRの阻害剤から選択される、請求項5に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
- 免疫刺激によって回復する症状が、感染症、例えば、細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症および寄生生物感染症、病原体、例えば、細菌、真菌、ウイルスもしくは寄生生物から選択される病原体に対する免疫化、あるいはトキシンまたは良性腫瘍もしくは悪性腫瘍、例えば、癌において発現される抗原を含む自己抗原に対するワクチン接種、あるいは無制御の細胞増殖に関連する症状、例えば、癌から選択される、請求項5または6に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
- 処置がワクチン接種であり、ワクチンが該処置において投与される、請求項5〜7のいずれかに記載の免疫チェックポイント阻害剤。
- 免疫応答の刺激、特に、抗原特異的Tリンパ球の刺激によって回復する症状の処置において使用するための、抗ヒトCD27アゴニスト抗体、例えば、hCD27.15もしくは1F5またはその抗体アナログといくつかの免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせ。
- 免疫チェックポイント阻害剤が、CTLA−4、PD1、PD−L1、PD−L2、LAG−3、BTLA、B7H3、B7H4、TIM3またはKIRの阻害剤から選択される、請求項9に記載の組み合わせ。
- 免疫刺激によって回復する症状が、感染症、例えば、細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症および寄生生物感染症、病原体、例えば、細菌、真菌、ウイルスまたは寄生生物から選択される病原体に対する免疫化、あるいはトキシンまたは良性腫瘍上もしくは癌などの悪性腫瘍上に発現される抗原を含む自己抗原に対するワクチン接種、あるいは癌などの無制御の細胞増殖に関連する症状から選択される、請求項9または10に記載の組み合わせ。
- 処置がワクチン接種であり、ワクチンが該処置において投与される、請求項9〜11のいずれかに記載の組み合わせ。
- 免疫応答の刺激によって回復する症状を処置する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の抗ヒトCD27アゴニスト抗体およびさらに免疫チェックポイントタンパク質阻害剤を投与する工程を含む、方法。
- 前記抗ヒトCD27アゴニスト抗体が、配列番号1、2、3、4、5、6のCDRアミノ酸配列またはバリアント配列を含む抗ヒトCD27アゴニスト抗体;抗体hCD27.15のヒト化アナログ;hCD27.15と同じエピトープに結合する抗体hCD27.15のアナログ;抗体1F5;架橋を必要としない抗ヒトCD27アゴニスト抗体からなる群より選択される、請求項13に記載の方法。
- 前記さらなる免疫チェックポイント阻害剤タンパク質が、CTLA−4抗体、抗PD1抗体、抗PD−L1抗体、抗PD−L2抗体、抗LAG−3抗体、抗BTLA抗体、抗B7H3抗体、抗B7H4抗体、抗TIM3抗体および抗KIR抗体からなる群より選択される、請求項13または14に記載の方法。
- 前記さらなる免疫チェックポイント阻害剤タンパク質が、抗PD1抗体である、請求項13〜15のいずれかに記載の方法。
- 前記抗PD−1抗体が、ペンブロリズマブである、請求項13〜16のいずれかに記載の方法。
- 前記抗PD−1抗体が、ニボルマブである、請求項13〜17のいずれかに記載の方法。
- 前記さらなる免疫チェックポイント阻害剤タンパク質が、抗LAG3抗体である、請求項13〜18のいずれかに記載の方法。
- 前記抗LAG3抗体が、それぞれ配列番号23および配列番号24の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項19に記載の方法。
- 処置を必要とする被験体が、癌に罹患している、請求項13〜20のいずれかに記載の方法。
- 処置を必要とする被験体が、感染症(例えば、細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症および寄生生物感染症)に罹患している、請求項13〜20のいずれかに記載の方法。
- 抗ヒトCD27アゴニスト抗体を含み、さらに免疫チェックポイントタンパク質阻害剤を含む、ワクチン。
- 前記さらなる免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が、CTLA−4抗体、抗PD1抗体、抗PD−L1抗体、抗PD−L2抗体、抗LAG−3抗体、抗BTLA抗体、抗B7H3抗体、抗B7H4抗体、抗TIM3抗体および抗KIR抗体からなる群より選択される、請求項23に記載のワクチン。
- 前記さらなる免疫チェックポイント阻害剤タンパク質が、抗PD1抗体である、請求項23または24に記載のワクチン。
- 前記抗PD−1抗体が、ペンブロリズマブである、請求項23〜25のいずれかに記載のワクチン。
- 前記抗PD−1抗体が、ニボルマブである、請求項23〜26に記載のワクチン。
- 前記さらなる免疫チェックポイント阻害剤タンパク質が、抗LAG3抗体である、請求項23〜27のいずれかに記載のワクチン。
- 前記抗LAG3抗体が、それぞれ配列番号23および配列番号24の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項23〜28のいずれかに記載のワクチン。
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