KR20220030956A

KR20220030956A - Pd-1/cd3 이중 특이성 단백질에 의한 혈액암 치료

Info

Publication number: KR20220030956A
Application number: KR1020217043262A
Authority: KR
Inventors: 시로 시바야마; 다쿠야 심보
Original assignee: 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤
Priority date: 2019-07-05
Filing date: 2020-07-03
Publication date: 2022-03-11
Also published as: WO2021006199A1; US20220372148A1; TWI809286B; JP2021105053A; JP6881658B2; EP3998081A4; TW202328206A; TW202116804A; EP3998081A1; JP2021014449A

Abstract

본 발명의 과제는, 혈액암에 대한 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 또는 치료를 위한 새로운 약제를 제공하는 데에 있다. 본 발명의 발명자들은 예의 검토한 결과, 이러한 과제를 해결할 수 있는 물질로서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 단백질(바람직하게는 PD-1/CD3 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편)에 주목하여, 이들이 혈액암에 대한 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 또는 치료에 유용하다는 것을 알아냈다.

Description

PD-1/CD3 이중 특이성 단백질에 의한 혈액암 치료

본 발명은 PD-1 및 CD3에 각각 특이적으로 결합할 수 있는 이중 특이성 단백질(이하, 「PD-1/CD3 이중 특이성 단백질」이라고 약기하는 경우가 있다.)의 의약 치료 용도에 관한 것이다.

PD-1은 면역글로불린 패밀리에 속하는 면역억제 수용체이며, 항원 리셉터로부터의 자극에 의해 활성화한 T세포의 면역 활성화 시그널을 억제하는 기능을 갖는 분자이다. PD-1 녹아웃 마우스의 해석 등으로부터, PD-1 시그널은, 자기면역성 확장형 심근증, 루푸스 유사 증후군, 자기면역성 뇌척수염, 전신성루푸스에리테마토데스, 이식편대숙주병, I형 당뇨병 및 류마티스성 관절염 등의 자기면역 질환의 억제에 중요한 역할을 하는 것이 알려져 있다. 따라서, PD-1 시그널을 증강하는 물질은 자기면역 질환 등의 예방 또는 치료제가 될 수 있다는 것이 지적되었다.

지금까지 PD-1 시그널을 증강하는 물질로서, PD-1을 인식하는 이중 특이성 항체가 알려져 있다(특허문헌 1 내지 3). 이 이중 특이성 항체는, T세포 수용체 복합체의 멤버인 CD3을 인식하는 항체의 항원 인식 부위와 PD-1을 인식하는 항체의 항원 인식 부위가 유전자공학적으로 연결된 것으로, PD-1을 T세포 수용체 복합체 근방에 위치시키는 빈도를 올림으로써, T세포 수용체 복합체에 대한 PD-1의 억제 시그널을 증강하는 작용을 갖는다. 또한, 동 특허문헌에는 PD-1 이중 특이성 항체가 자기면역 질환 등의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다는 것도 기재되어 있다.

그러나, PD-1/CD3 이중 특이성 단백질이 혈액암의 예방 또는 치료에 유효하다는 보고는 없다.

[특허문헌 1] 국제공개 제2003/011911호 팜플렛 [특허문헌 2] 국제공개 제2004/072286호 팜플렛 [특허문헌 3] 국제공개 제2013/022091호 팜플렛

본 발명의 목적은, 혈액암에 대한 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 또는 치료를 위한 새로운 약제를 제공하는 데에 있다.

본 발명의 발명자들이 예의 검토한 결과, 이러한 과제를 해결할 수 있는 물질로서, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질에 주목하고, 이들이 혈액암의 예방 또는 치료에 효과를 기대할 수 있다는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

즉, 본 발명은 이하와 같다.

[1] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 단백질(본 명세서에 있어서, 「PD-1 및 CD3에 각각 특이적으로 결합할 수 있는 이중 특이성 단백질」과 동의이며, 이것에 관해서도 「PD-1/CD3 이중 특이성 단백질」이라고 약기하는 경우가 있다.)을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제.

[2] 상기 이중 특이성 단백질이, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체(이하, 「PD-1/CD3 이중 특이성 항체」라고 약기하는 경우가 있다.) 또는 그 항체 단편(이하, 이들을 합쳐 「PD-1/CD3 이중 특이성 항체 등」이라고 약기하는 경우가 있다.)인 전항 [1]에 기재한 제제.

[3] 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(A) (a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 1(이하, 「중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 1」을 VH-CDR1로 약기하는 경우가 있다.),

(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 2(이하, 「중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 2」를 VH-CDR2로 약기하는 경우가 있다.) 및

(c) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 3(이하, 「중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 3」을 VH-CDR3으로 약기하는 경우가 있다.)을 갖는 중쇄 가변 영역(이하, 「중쇄 가변 영역」을 VH로 약기하는 경우가 있다.),

(B) (a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,

(C) (a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,

(D) (a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH, 그리고

(E) (a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH에서 선택되는 어느 하나의 VH를 가지고, 여기서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의, VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3의 어느 하나 또는 복수의 VH-CDR에 있어서, 각각 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되어 있어도 좋은 전항 [2]에 기재한 제제.

[4] 상기 이중 특이성 항체 등의 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH를 가지고, 여기서, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의, VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3의 어느 하나 또는 복수의 VH-CDR에 있어서, 각각 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되어 있어도 좋은 전항 [2] 또는 [3]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[5] 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(A) (a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,

(B) (a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(C) (a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(D) (a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(E) (a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH에서 선택되는 어느 하나의 VH를 갖는 전항 [2]∼[4]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[6] 상기 이중 특이성 항체 등의 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH를 갖는 전항 [2]∼[5]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[7] (i) 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,

(ii) 상기 이중 특이성 항체 등의 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 전항 [2]에 기재한 제제.

[8] (i) 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

[9] (i) 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 전항 [2]에 기재한 제.

[10] (i) 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

[11] (i) 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

[12] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(a) HYJ¹LH로 표시되는 아미노산 서열[서열 중, J¹은 G(글리신) 또는 A(알라닌)을 나타내며, 여기서, J¹이 나타내는, 혹은 그 밖의 알파벳은, 각각 아미노산의 한 글자 약호를 나타낸다.]을 포함하는 VH-CDR1,

(b) WJ²NTNTU²NPTX²AQGFTG로 표시되는 아미노산 서열[서열 중, J²는 L(류신) 또는 I(이소류신)을 나타내고, U²는 E(글루타민산) 또는 G(글리신)을 나타내고, X²는 F(페닐알라닌) 또는 Y(티로신)을 나타내며, 여기서, J², U² 및 X²가 각각 나타내는, 혹은 그 밖의 알파벳은, 각각 상기와 동일한 의미를 나타낸다.]을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) GDJ³VVPTTIWNYYU³X³MZ³V로 표시되는 아미노산 서열[서열 중, J³은 M(메티오닌) 또는 L(류신)을 나타내고, U³은 H(히스티딘) 또는 Y(티로신)을 나타내고, X³은 F(페닐알라닌) 또는 Y(티로신)을 나타내고, Z³은 D(아스파라긴산) 또는 E(글루타민산)을 나타내며, 여기서, J³, U³, X³ 및 Z³이 각각 나타내는, 혹은 그 밖의 알파벳은, 각각 상기와 동일한 의미를 나타낸다.]을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH를 가지고, 그리고

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH를 갖는 상기 제제.

[13] (a) J¹은 G(글리신)을 나타내고, J²는 L(류신)을 나타내고, U²는 E(글루타민산)을 나타내고, X²는 F(페닐알라닌)을 나타내고, J³은 M(메티오닌)을 나타내고, U³은 H(히스티딘)을 나타내고, X³은 F(페닐알라닌)을 나타내고, 그리고 Z³은 D(아스파라긴산)을 나타내거나,

(b) J¹은 G(글리신)을 나타내고, J²는 I(이소류신)을 나타내고, U²는 G(글리신)을 나타내고, X²는 Y(티로신)을 나타내고, J³은 L(류신)을 나타내고, U³은 H(히스티딘)을 나타내고, X³은 Y(티로신)을 나타내고, 그리고 Z³은 E(글루타민산)을 나타내거나,

(c) J¹은 A(알라닌)을 나타내고, J²는 L(류신)을 나타내고, U²는 E(글루타민산)을 나타내고, X²는 Y(티로신)을 나타내고, J³은 M(메티오닌)을 나타내고, U³은 Y(티로신)을 나타내고, X³은 Y(티로신)을 나타내고, 그리고 Z³은 D(아스파라긴산)을 나타내거나, 또는

(d) J¹은 A(알라닌)을 나타내고, J²는 L(류신)을 나타내고, U²는 E(글루타민산)을 나타내고, X²는 F(페닐알라닌)을 나타내고, J³은 M(메티오닌)을 나타내고, U³은 H(히스티딘)을 나타내고, X³은 F(페닐알라닌)을 나타내고, 그리고 Z³은 D(아스파라긴산)을 나타내는 전항 [12]에 기재한 제제.

[14] 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH의 프레임워크(이하, 「프레임워크」를 FR로 약기하는 경우가 있다.) 영역 중, 프레임워크 1(이하, FR1로 약기하는 경우가 있다.), 프레임워크 2(이하, FR2로 약기하는 경우가 있다.) 및 프레임워크 3(이하, FR3으로 약기하는 경우가 있다.) 영역이, 생식세포계열형 V 유전자 IGHV7-4-1 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자에 의해 코드되는 아미노산 서열에 각각 대응하는 전항 [2]∼[13]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[15] 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH의 프레임워크 4(이하, 「프레임워크 4」를 FR4로 약기하는 경우가 있다.) 영역이, 생식세포계열형 J 유전자 JH6c 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자에 의해 코드되는 아미노산 서열(단, VH-CDR3 영역에 포함되는 아미노산 서열을 제외한다.)을 포함하는 전항 [14]에 기재한 제제.

[16] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH의 FR 영역이, 생식세포계열형 V 유전자 IGHV7-4-1의 체세포 돌연변이를 갖고 있어도 좋은 상기 유전자에 의해 코드되고, 상기 체세포 돌연변이에 의해, 서열 번호 21의 아미노산 서열 중의 위치 13의 리신이 글루타민으로, 위치 16의 알라닌이 발린으로, 또는 위치 19의 리신이 메티오닌으로 각각 치환되거나, 혹은 이들의 임의의 복수의 조합으로 치환된 혹은 치환되어 있어도 좋은 FR1 영역을 포함하는 전항 [14] 또는 [15]에 기재한 제제.

[17] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH의 FR 영역이, 생식세포계열형 V 유전자 IGHV7-4-1의 체세포 돌연변이를 갖고 있어도 좋은 상기 유전자에 의해 코드되고, 상기 체세포 돌연변이에 의해, 서열 번호 21의 아미노산 서열 중의 위치 37의 발린이 류신으로 치환된 혹은 치환되어 있어도 좋은 FR2 영역을 포함하는 전항 [14]∼[16]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[18] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH의 FR 영역이, 생식세포계열형 V 유전자 IGHV7-4-1의 체세포 돌연변이를 갖고 있어도 좋은 상기 유전자에 의해 코드되고, 상기 체세포 돌연변이에 의해, 서열 번호 21의 아미노산 서열 중의 위치 77의 세린이 트레오닌으로, 또는 위치 84의 시스테인이 세린 혹은 아스파라긴으로 각각 치환되거나, 혹은 이들의 임의의 복수의 조합으로 치환된 혹은 치환되어 있어도 좋은 FR3 영역을 포함하는 전항 [14]∼[17]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[19] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH의 FR4 영역이, 생식세포계열형 J 유전자 JH6c의 체세포 돌연변이를 갖고 있어도 좋은 상기 유전자(단, VH-CDR3 영역을 코드하는 유전자 영역을 제외한다.)에 코드되고, 그 FR4 영역의 아미노산 서열(Trp-Gly-Lys-Gly-Thr-Thr*-Val-Thr-Val-Ser-Ser)(서열 번호 41) 중의 리신(Lys)이 글루타민 혹은 아스파라긴으로 및/또는 * 표시의 트레오닌(Thr)이 류신으로 치환된 혹은 치환되어 있어도 좋은 전항 [14]∼[18]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[20] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가, 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80%, 90%, 95%, 98% 혹은 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[19]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[21] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[11]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[22] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80%, 90%, 95%, 98% 혹은 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[21]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[23] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[21]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[24] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[6]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[25] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서,

PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80%, 90%, 95%, 98% 혹은 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고,

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80%, 90%, 95%, 98% 혹은 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 상기 제제.

[26] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[7]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[27] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[6] 및 [8]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[28] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[6] 및 [9]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[29] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[6] 및 [10]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[30] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [2]∼[6] 및 [11]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[31] 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이, 각각

(a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 1(이하, 「경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 1」을 VL-CDR1로 약기하는 경우가 있다.),

(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 2(이하, 「경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 2」를 VL-CDR2로 약기하는 경우가 있다.) 및

(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 3(이하, 「경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 3」을 VL-CDR3으로 약기하는 경우가 있다.)을 갖는 경쇄 가변 영역(이하, 「경쇄 가변 영역」을 「VL」로 약기하는 경우가 있다.)을 갖는 전항 [2]∼[30]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[32] 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 각각 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 전항 [2]∼[30]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[33] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서,

(A) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 가지고, 그리고

(B) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 상기 제제.

[34] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서, 상기 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 (1) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 PD-1에의 결합 혹은 (2) 상기 VH 및 VL을 포함하는 PD-1에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역의 PD-1에의 결합에 교차 경합하는 상기 제제.

[35] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서, 상기 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 의한 PD-1에의 결합이 (1) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 혹은 (2) 상기 VH 및 VL을 포함하는 PD-1에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역에 의해서 교차 경합되는 상기 제제.

[36] 또한, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 (1) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 CD3에의 결합 또는 (2) 상기 VH 및 VL을 포함하는 CD3에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역의 CD3에의 결합에 교차 경합하는 전항 [34] 또는 [35]에 기재한 제제.

[37] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH를 갖는 전항 [34] 또는 [35]에 기재한 제제.

[38] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80%, 90%, 95%, 98% 혹은 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 전항 [34] 또는 [35]에 기재한 제제.

[39] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [34] 또는 [35]에 기재한 제제.

[40] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1,

(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및

(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL을 갖는 전항 [34], [35] 및 [37]∼[39]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[41] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 전항 [34], [35] 및 [37]∼[39]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[42] 상기 이중 특이성 항체가 IgG 항체인 전항 [2]∼[41]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[43] 전항 [42]에 기재한 IgG 항체가 IgG₁ 항체 또는 IgG₄ 항체인 전항 [42]에 기재한 제제.

[44] 전항 [42]에 기재한 IgG 항체가 IgG₁ 항체인 전항 [42]에 기재한 제제.

[45] 전항 [42]에 기재한 IgG 항체가 IgG₄ 항체인 전항 [42]에 기재한 제제.

[46] 상기 IgG₁ 항체의 Fc 수용체에의 결합이 소실 혹은 감약된 전항 [44]에 기재한 제제.

[47] 전항 [44]에 기재한 IgG₁ 항체에 있어서의 2개의 중쇄 정상(定常) 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 있어서의 235번째의 류신이 각각 글리신으로 치환되고, 및/또는 236번째의 글리신이 각각 아르기닌으로 치환된 전항 [44]에 기재한 제제.

[48] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신 및 366번째의 트레오닌이 함께 리신으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환된 전항 [44], [46] 또는 [47]에 기재한 제제.

[49] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신 및 366번째의 트레오닌이 함께 리신으로 치환된 전항 [44], [46] 또는 [47]에 기재한 제제.

[50] 전항 [44] 및 [46]∼[49]의 어느 한 항에 기재한 IgG₁ 항체의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 447번째의 리신이 각각 결여되어 있는 전항 [44] 및 [46]∼[49]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[51] 상기 IgG 항체의 태아성 Fc 수용체(이하, 「FcRn」으로 약기하는 경우가 있다.)에의 결합이 소실 혹은 감약된 전항 [42]∼[50]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[52] 상기 IgG₁ 항체에 있어서의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 (1) EU 넘버링 시스템에 있어서의 252번째의 메티오닌이 글루타민산, 프롤린, 아르기닌 혹은 아스파라긴산으로, (2) EU 넘버링 시스템에 의한 434번째의 아스파라긴이 류신으로, 및/또는 (3) EU 넘버링 시스템에 의한 438번째의 글루타민이 글루타민산으로 각각 치환된 전항 [44], [46]∼[51]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[53] 상기 IgG₁ 항체에 있어서의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 있어서의 252번째의 메티오닌이 아스파라긴산으로 각각 치환된 전항 [44], [46]∼[52]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[54] 전항 [52] 또는 [53]에 기재한 IgG₁ 항체의 혈액 내에서의 반감기가, 상기 아미노산 치환되지 않은 것의 항체와 비교하여 단축된 전항 [52] 또는 [53]에 기재한 제제.

[55] 전항 [52] 또는 [53]에 기재한 IgG₁ 항체의 혈액 내에서의 반감기가, 상기 아미노산 치환되지 않은 것의 항체와 비교하여, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 단축된 전항 [52] 또는 [53]에 기재한 제제.

[56] 전항 [45]에 기재한 IgG₄ 항체에 있어서의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 228번째의 세린이 각각 프롤린으로 치환된 전항 [45]에 기재한 제제.

[57] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 23, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 46 및 서열 번호 47에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하는 전항 [2]∼[42], [44], [46], [47] 및 [49]∼[55]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[58] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 24, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52 및 서열 번호 53에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하는 전항 [2]∼[42], [44], [46], [47], [49]∼[55] 및 [57]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[59] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VL을 갖는 경쇄 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 전항 [2]∼[58]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[60] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서,

(A) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 23, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 46 및 서열 번호 47에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하고,

(B) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하고,

(C) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 24, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52 및 서열 번호 53에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하고, 그리고

(D) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 상기 제제.

[61] 상기 이중 특이성 항체 등의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암은 항PD-1 항체의 VH 및 VL을 포함하고, 상기 이중 특이성 항체 등의 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암은 항CD3 항체의 VH 및 VL을 포함하는 전항 [2]에 기재한 제제.

[62] 상기 항PD-1 항체가 니볼루맙(Nivolumab), 세미플리맙(Cemiplimab), 펨브롤리주맙(Pembrolizumab), 스파르탈리주맙(Spartalizumab), 티스렐리주맙(Tislelizumab), 도스탈리맙(Dostarlimab), 토리팔리맙(Toripalimab), 캄렐리주맙(Camrelizumab), 제놀림주맙(Genolimzumab), 신틸리맙(Sintilimab), 로다폴리맙(Lodapolimab), 레티판리맙(Retifanlimab), 발스틸리맙(Balstilimab), 세플룰리맙(Serplulimab), 부디갈리맙(Budigalimab), 프롤골리맙(Prolgolimab), 사산리맙(Sasanlimab), 세트렐리맙(Cetrelimab), 짐베렐리맙(Zimberelimab), AMP-514, STI-A1110, ENUM 388D4, ENUM 244C8, GLS010, CS1003, BAT-1306, AK105, AK103, BI 754091, LZM009, CMAB819, Sym021, GB226, SSI-361, JY034, HX008, ISU106 및 CX-188의 어느 것에서 선택되는 전항 [61]에 기재한 제제.

[63] 상기 항CD3 항체가 포랄루맙(Foralumab), 무로모납(Muromonab)-CD3, 오텔릭시주맙(Otelixizumab), 테플리주맙(Teplizumab) 및 비실리주맙(Visilizumab)의 어느 것에서 선택되는 전항 [61] 또는 [62]에 기재한 제제.

[64] PD-1 및 CD3이 각각 인간 PD-1 및 인간 CD3인 전항 [1]∼[63]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[65] CD3이 CD3ε인 전항 [1]∼[64]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[66] 상기 이중 특이성 항체가 모노클로널 항체인 전항 [2]∼[65]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[67] 상기 이중 특이성 항체가 단리 항체인 전항 [2]∼[66]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[68] 상기 이중 특이성 단백질이 스캐폴드 분자 또는 수식형 펩티드인 전항 [1]에 기재한 제제.

[69] 상기 스캐폴드 분자가 애드넥틴(Adnectin), 애피바디(Affibody)(등록상표), 안티칼린(Anticalin)(등록상표), 아비머(Avimer), DARPin, LRRP, 아필린(Affilin)(등록상표), 아피틴(Affitin) 또는 피노머(Fynomer)의 형태이고, 상기 수식형 펩티드가 특수 환상 펩티드, 애드바디(Addbody)(등록상표) 또는 미라바디(Mirabody)(등록상표)의 형태인 전항 [68]에 기재한 제제.

[70] 상기 이중 특이성 단백질 또는 상기 이중 특이성 항체 혹은 그 항체 단편이 표적 세포인 혈액암의 암 세포에서 발현되는 PD-1 및 이펙터 세포인 림프구(예컨대 T세포 림프구)에서 발현되는 CD3에 각각 특이적으로 결합하는 전항 [1]∼[69]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[71] 상기 이중 특이성 단백질 또는 상기 이중 특이성 항체 혹은 그 항체 단편이 표적 세포인 T세포 유래의 암 세포에서 발현되는 PD-1 및 CD3에 각각 특이적으로 결합하는 전항 [1]∼[69]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[72] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 허용하는 전항 [1]∼[70]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[73] 상기 혈액암이 다발성 골수종, 악성 림프종, 백혈병, 중추신경계 원발 악성 림프종 및 골수증식 증후군에서 선택되는 하나 이상의 암인 전항 [1]∼[72]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[74] 상기 혈액암이 악성 림프종이고, 악성 림프종이 비(非)호지킨 림프종 또는 호지킨 림프종인 전항 [73]에 기재한 제제.

[75] 악성 림프종이 비호지킨 림프종이고, 비호지킨 림프종이 B세포성 비호지킨 림프종 또는 T/NK세포성 비호지킨 림프종인 전항 [74]에 기재한 제제.

[76] 비호지킨 림프종이 B세포성 비호지킨 림프종이고, B세포성 비호지킨 림프종이 전구 B세포 림프아구성 림프종, 전구 B세포 급성 림프구아성 백혈병, 만성 B림프성 백혈병, B세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 절성 변연대 B세포성 림프종, 절외성 변연대 B세포성 림프종, 비장(脾) 원발 변연대 B세포성 림프종, 유모세포 백혈병, 유모세포 백혈병·변종형, 여포성 림프종, 소아형 여포성 림프종, 확산성 대세포형 B세포성 림프종, 확산성 대세포형 B세포 림프종·비(非)특정형, 비장(脾) 확산성 적비수(赤脾髓) 소형 B세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 원발성 종격 대세포형 B세포성 림프종, 원발성 삼출성 림프종, 버킷 림프종, 맨틀세포 림프종, 단클론성 B세포 림프구증가증, 비장 B세포 림프종/백혈병·분류불능형, 의의 불명의 단클론성 감마글로불린혈증·IgM형, μ중쇄병, λ중쇄병, α중쇄병, 형질세포골수종, 골고립성 형질세포종, 골외성(骨外性) 형질세포종, 단클론성 면역글로불린 침착병, IRF4 재구성을 동반하는 대세포형 B세포 림프종, 원발성 피부 여포 중심 림프종, T세포/조직구 풍부형 대세포형 B세포 림프종, 원발성 중추신경계 확산성 대세포형 B세포 림프종, 원발성 피부 확산성 대세포형 B세포 림프종·하지형, EBV양성 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특정형, EBV양성 점막 피부 궤양, 만성 염증 관련 확산성 대세포형 B세포 림프종, 림프종모양 육아종증, 혈관내 대세포형 B세포 림프종, ALK양성 대세포형 B세포 림프종, 형질아구성 림프종, 원발성 체강액 림프종, HHV8양성 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특이형, 11q 이상을 동반하는 버킷 유사 림프종, MYC 및 BCL2와 BCL6의 양쪽이나 한쪽의 재구성을 동반하는 고악성도 B세포 림프종, 고악성도 B세포 림프종·비특이형 또는 확산성 대세포형 B세포 림프종과 고전적 호지킨 림프종의 중간적 특징을 동반하는 B세포 림프종·분류불능형인 전항 [75]에 기재한 제제.

[77] 비호지킨 림프종이 T/NK세포성 비호지킨 림프종이고, T/NK세포성 비호지킨 림프종이 전구 T세포 림프아구성 림프종, 만성 T림프구성 백혈병, T세포 급성 림프성 백혈병(T세포 림프아구성 백혈병), T세포형 대과립 림프구성 백혈병, 대과립 NK세포성 백혈병, 급속진행성 NK세포 백혈병, 말초성 T세포 림프종, 말초성 T세포 림프종·비특정형, 분류 불능의 말초성 T세포 림프종, 혈관면역아구성 T세포성 림프종, 미분화 대세포 (CD30양성) 림프종, 혈관중심성 림프종, 장관 T세포성 림프종, 장증형 T세포 림프종, 간비장형(肝脾型) γ-δ T세포 림프종, 피하 지방 조직염 유사 T세포 림프종, 균상식육증, 세자리 증후군, 호지킨 유사/호지킨 관련 미분화 대세포 림프종, 절외성 NK/T세포 림프종, 성인 T세포성 림프종, T세포 전림프구성 백혈병, 만성 NK세포 림프증식 이상증, 소아 전신성 EBV양성 T세포 림프종, 종두모양 수포증 유사 림프증식 이상증, 절외성 NK/T세포 림프종·비형(鼻型), 장증 관련 T세포 림프종, 단형성(單形性) 상피향성 장관 T세포 림프종, 위장관 완서진행성 T세포 림프증식 이상증, 간비장 T세포 림프종, 원발성 피부 CD30양성 T세포 림프증식 이상증, 림프종모양 구진증, 원발성 피부 미분화 대세포형 림프종, 원발성 피부 γδ T세포 림프종, 원발성 피부 CD8양성 급속진행성 표피향성 세포상해성 T세포 림프종, 원발성 피부 선단형 CD8양성 T세포 림프종, 원발성 피부 CD4양성 소형/중형 T세포 림프증식성증, 여포 T세포 림프종, 여포 헬퍼 T세포 형질을 동반하는 절성 말초성 T세포 림프종, 미분화 대세포 림프종·ALK양성형, 미분화 대세포 림프종·ALK음성형 또는 유방 임플란트 관련 미분화 대세포 림프종인 전항 [75]에 기재한 제제.

[78] 악성 림프종이 호지킨 림프종이고, 호지킨 림프종이 고전적 호지킨 림프종(예컨대 결절 경화형, 혼합 세포형, 림프구 풍부형 및 림프구 감소형) 또는 결절성 림프구 우위형 호지킨 림프종인 전항 [74]에 기재한 제제.

[79] 상기 혈액암이 백혈병이고, 백혈병이 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 골수이형성 증후군 또는 만성 골수성 백혈병인 전항 [73]에 기재한 제제.

[80] 상기 혈액암이 소아의 혈액암인 전항 [1]∼[79]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[81] 비호지킨 림프종이 T/NK세포성 비호지킨 림프종이고, T/NK세포성 비호지킨 림프종이 말초성 T세포 림프종 또는 성인 T세포성 림프종인 전항 [75]에 기재한 제제.

[82] 상기 혈액암이 다른 항암약에 의한 치료 효과가 불충분하거나 혹은 충분하지 않은 혈액암인 전항 [1]∼[81]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[83] 상기 혈액암이 다른 항암약에 의한 치료 후에 증악(增惡)된 혈액암인 전항 [1]∼[82]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[84] 혈액암 환자가 다른 항암약에 의한 치료 이력이 없는 전항 [1]∼[81]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[85] 상기 혈액암이 재발성 및/또는 난치성인 전항 [1]∼[84]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[86] 또한, 다른 항암약과 병용되는 전항 [1]∼[85]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[87] 상기 다른 항암약이 알킬화약, 백금 제제, 대사길항제(예컨대 엽산 대사길항약, 피리딘 대사 저해약, 퓨린 대사 저해약), 리보뉴클레오티드 리덕타아제 저해약, 뉴클레오티드 아날로그, 토포이소머라아제 저해약, 미소관 중합 저해약, 미소관 해중합 저해약, 항종양성 항생물질, 사이토카인 제제, 분자 표적약 및 암 면역 치료약에서 선택되는 하나 이상의 약제인 전항 [82], [83] 또는 [86]에 기재한 제제.

[88] 전항 [87]에 기재한 다른 항암약의 어느 하나 이상의 약제를 투여받는 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 전항 [86] 또는 [87]에 기재한 제제.

[89] 전항 [87]에 기재한 다른 항암약의 어느 하나 이상의 약제의 투여 후에 투여되는 것을 특징으로 하는 전항 [86] 또는 [87]에 기재한 제제.

[90] 전항 [87]에 기재한 다른 항암약의 어느 하나 이상의 약제의 투여 전에 투여되는 것을 특징으로 하는 전항 [86] 또는 [87]에 기재한 제제.

[91] 스테로이드약과 함께 투여되는 것을 특징으로 하는 전항 [1]∼[85]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[92] 스테로이드약의 투여 후에 투여되는 것을 특징으로 하는 전항 [1]∼[85]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[93] 정맥내 주사용인 전항 [1]∼[85]의 어느 한 항에 기재한 제제.

[94] 전항 [1]∼[72]의 어느 한 항에 기재한 이중 특이성 단백질 또는 이중 특이성 항체 혹은 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암 세포 증식 억제제.

[1-1] 전항 [1]∼[72]의 어느 한 항에 기재한 이중 특이성 단백질 또는 이중 특이성 항체 혹은 그 항체 단편의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 방법.

[2-1] 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료에 사용되는, 전항 [1]∼[72]의 어느 한 항에 기재한 이중 특이성 단백질 또는 이중 특이성 항체 혹은 그 항체 단편.

[3-1] 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의, 전항 [1]∼[72]의 어느 한 항에 기재한 이중 특이성 단백질 또는 이중 특이성 항체 혹은 그 항체 단편의 용도.

[4-1] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는 의약 조성물로서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(A) (a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(B) (a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(C) (a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(D) (a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(E) (a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH에서 선택되는 어느 하나의 VH, 그리고

(F) (a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1,

(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및

(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL을 포함하고,

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(A) (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH, 그리고

(B) (a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1,

(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및

(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL을 포함하는 상기 의약 조성물.

[4-2] (i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 전항 [4-1]에 기재한 의약 조성물.

[4-3] (i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

[4-4] (i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

[4-5] (i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

[4-6] (i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,

(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,

(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및

[4-7] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [4-1]에 기재한 의약 조성물.

[4-8] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [4-1] 또는 [4-2]에 기재한 의약 조성물.

[4-9] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [4-1] 또는 [4-3]에 기재한 의약 조성물.

[4-10] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [4-1] 또는 [4-4]에 기재한 의약 조성물.

[4-11] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [4-1] 또는 [4-5]에 기재한 의약 조성물.

[4-12] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 전항 [4-1] 또는 [4-6]에 기재한 의약 조성물.

[4-13] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 각각 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 전항 [4-1]∼[4-12]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-14] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는 의약 조성물로서,

(A) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 가지고, 그리고

(B) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 상기 의약 조성물.

[4-15] 상기 이중 특이성 항체가 IgG 항체인 전항 [4-1]∼[4-14]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-16] 상기 IgG 항체가 IgG₁ 항체인 전항 [4-15]에 기재한 의약 조성물.

[4-17] 상기 IgG₁ 항체의 Fc 수용체에의 결합이 소실 혹은 감약된 전항 [4-16]에 기재한 의약 조성물.

[4-18] 상기 IgG₁ 항체의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 있어서의 235번째의 류신이 각각 글리신으로 치환되고, 및/또는 236번째의 글리신이 각각 아르기닌으로 치환된 전항 [4-16]에 기재한 의약 조성물.

[4-19] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환된 전항 [4-16]∼[4-18]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-20] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환된 전항 [4-16]∼[4-18]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-21] 상기 IgG₁ 항체의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 447번째의 리신이 각각 결여되어 있는 전항 [4-16]∼[4-20]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-22] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하는 전항 [4-1]∼[4-16]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-23] CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하는 전항 [4-1]∼[4-16] 및 [4-22]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-24] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VL을 갖는 경쇄 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 전항 [4-1]∼[4-23]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

[4-25] PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는 의약 조성물로서,

(A) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하고,

(C) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하고, 그리고

(D) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 상기 의약 조성물.

[4-26] 또한, 약학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하는 전항 [4-1]∼[4-25]의 어느 한 항에 기재한 의약 조성물.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질(바람직하게는 PD-1/CD3 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편)은 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료의 효과를 기대할 수 있다.

도 1은 공통 경쇄의 VL 및 정상 영역의 아미노산 서열을 도시한다.
도 2는 공통 경쇄의 VL의 각 CDR의 아미노산 서열을 도시한다.
도 3은 생식세포계열형 V 유전자 IGHV7-4-1 및 IGHV3-33에 의해서 각각 코드되는 아미노산 서열을 도시한다.
도 4는 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체(이하, 항PD-1 항체라고 약기하는 경우가 있다.) 각 클론의 VH와 생식세포계열형 유전자 IGHV7-4-1 및 JH6c와의 서열 얼라인먼트를 도시한다. 도면에서 각 클론의 아미노산 서열 중의 “-”은 대응하는 생식세포계열형 유전자 IGHV7-4-1 혹은 JH6c의 아미노산 서열과 동일한 아미노산을 나타내고, 아미노산의 약자가 기재되어 있는 부분은 동 생식세포계열형 유전자의 아미노산 서열과 상이한 아미노산을 나타낸다.
도 5는 항PD-1 항체 각 클론의 VH의 아미노산 서열을 도시한다.
도 6은 항PD-1 항체 각 클론의 VH 중의 각 CDR의 아미노산 서열을 도시한다.
도 7은 CD3에 특이적으로 결합하는 항체(이하, 항CD3 항체라고 약기하는 경우가 있다.) 클론 CD3-2의 VH의 아미노산 서열을 도시한다.
도 8은 항CD3 항체 클론 CD3-2의 VH 중의 각 CDR의 아미노산 서열을 도시한다.
도 9는 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 각 중쇄 정상 영역의 아미노산 서열을 도시한다.
도 10은 WO2005/118635에 기재된 항CD3 항체 클론 15C3의 VH의 아미노산 서열을 도시한다. 또한, 밑줄로 나타낸 아미노산은 클론 CD3-1의 제작에 있어서 알라닌으로 변환되는 55번째의 글리신을 나타낸다.
도 11은 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 각 클론의 PD-1 및 CD3에 대한 결합 활성을 각각 확인한 Biacore(등록상표) 측정 결과를 도시한다.
도 12는 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 각 클론의 PD-1 및 CD3에의 동시 결합성을 확인한 유세포 분석을 도시한다.
도 13은 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 각 클론의 PD-1/PD-L1 상호작용에 미치는 영향을 확인한 유세포 분석을 도시한다.
도 14는 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 각 클론의 PD-1에의 결합에 대한 PD1-5(Bi)의 교차 경합성을 도시한다.
도 15는 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi)(0.01∼1000 ng/mL)의 B세포 림프종 세포주 EB-1(도면에서 A) 및 인간 PD-1 강제 발현 SU-DHL-4(도면에서 B)에 대한 세포 증식 억제 작용을 도시한다.
도 16은 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi)(0.01∼1000 ng/mL)의 다발성 골수종 세포주 RPMI8226에 대한 세포 증식 억제 작용을 도시한다.
도 17은 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi)(0.1∼1000 ng/mL)의 성인 T세포성 림프종 세포주 ILT-Mat에 대한 세포 증식 억제 작용을 도시한다.
도 18은 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi)(0.1∼1000 ng/mL)의 인간 PD-1 강제 발현 Jurkat(급성 T세포성 백혈병 세포주)에 대한 세포 증식 억제 작용을 도시한다.
도 19는 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi) 및 Mut1∼Mut3의 인간 FcRn 결합성을 Biacore(등록상표)로 평가한 결과를 도시한다.
도 20은 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 Mut4∼Mut6의 인간 FcRn 결합성을 Biacore(등록상표)로 평가한 결과를 도시한다.
도 21은 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi), Mut1 및 Mut4의 마우스 FcRn 결합성을 Biacore(등록상표)로 평가한 결과를 도시한다.
도 22는 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi)(0.1∼1000 ng/mL)의 T세포 급성 림프성 백혈병 세포주 HPB-ALL에 대한 세포 증식 억제 작용을 도시한다.
도 23은 표적 세포의 PD-1 분자수와 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi) 존재 하에서의 인간 말초혈 T세포에 의한 표적 세포(인간 PD-1 강제 발현 SU-DHL-4, EB-1 및 RPMI8226)에 대한 세포상해 활성(EC50(ng/mL))의 관계를 도시한다.

PD-1(Programmed Cell Death-1)은 인간에게 있어서는 GenBank 등록번호 NP_005009로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 막형 단백질이다. 본 명세서에 있어서 「PD-1」이라고 기재되는 경우, 특별히 한정하지 않는 한, 그 아이소폼 및 본 발명에 따른 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」의 에피토프가 보존된, 이들 개변체도 포함하는 것으로서 사용되는 경우가 있다. 본 발명에 있어서, PD-1로서 바람직하게는 인간 PD-1이다.

CD3은 T세포 수용체와 회합하여 T세포 수용체 복합체를 형성하는 막형 단백질이다. 본 명세서에 있어서 「CD3」으로 기재되는 경우, 특별히 한정하지 않는 한, 그 서브타입(ε, δ, γ 및 ζ 서브타입) 및 본 발명에 따른 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」의 에피토프가 보존된, 이들 개변체도 포함하는 것으로서 사용되는 경우가 있다. 본 발명에 있어서, CD3으로서 바람직하게는 CD3ε이고, 또한 인간 CD3이며, 보다 바람직하게는 인간 CD3ε이다.

본 명세서에 있어서 「단리」란, 숙주세포로부터 추출된, 복수 내지 무수의 성분이 포함되는 협잡물 중에서 동정, 분리 및/또는 정제됨으로써 실질적으로 단일의 순수한 성분으로 되는 것을 의미한다.

본 명세서에 있어서 「이중 특이성 단백질」이란, 2개의 다른 항원 분자 혹은 에피토프에 대한 결합 특이성을 1 분자에 구비하여 갖는 단백질을 의미하지만, 상기 결합 특이성을 갖는 한, 그 형태는 어느 것이라도 좋으며, 예컨대 이중 특이성 항체 및 그 항체 단편, 스캐폴드 분자(Current Opinion in Biotechnology (2006), Vol. 17, No. 6, p. 653-658, Current Opinion in Biotechnology (2007), Vol. 18, p. 1-10, Current Opinion in Structural Biology (1997), Vol. 7, p. 463-469 또는 Protein Science (2006), Vol. 15, p. 14-27 참조) 및 수식형 펩티드(예컨대 특수 환상 펩티드(J. Synth. Org. Chem., Jpn. (2017), Vol. 75, No. 11, p. 1171-1178), 애드바디(Addbody)(등록상표) 및 미라바디(Mirabody)(등록상표) 등) 등을 들 수 있지만, 그것에 한정되지 않는다. 또한, 그와 같은 스캐폴드 분자의 예로서는 애드넥틴(Adnectin)(WO2001/64942 참조), 애피바디(Affibody)(등록상표)(WO95/19374 및 WO2000/63243 참조), 안티칼린(Anticalin)(등록상표)(WO99/16873 참조), 아비머(Avimer)(Nature Biotechnology (2005), Vol. 23, p. 1556-1561 참조), DARPin(Nature Biotechnology (2004), Vol. 22, p. 575-582 참조), LRRP(Nature (2004), Vol. 430, No. 6996, p. 174-180 참조), 아필린(Affilin)(등록상표)(WO2001/04144 및 WO2004/106368 참조), 아피틴(Affitin)(Journal of molecular biology (2008), Vol. 383, No. 5, p. 1058-1068 참조) 및 피노머(Fynomer)(WO2011/023685) 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.

본 명세서에 있어서 「모노클로널 항체」란, 동일의 특정 항원에 대하여 결합하는, 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 얻어진 항체를 의미한다.

본 명세서에 있어서 「이중 특이성 항체」란, 2개의 다른 항원 분자 혹은 에피토프에 대한 결합 특이성을 1 분자에 구비하여 갖는 항체를 의미하고, 「이중 특이성 모노클로널 항체」란, 또한, 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 얻어진 이중 특이성 항체를 의미한다.

본 발명은 PD-1 및 CD3에 각각 특이적으로 결합할 수 있는 이중 특이성 단백질(본 명세서에 있어서 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질이라고 약기하는 경우가 있다.)에 관한 것이다. 본 발명에 있어서, PD-1/CD3 이중 특이성 단백질로서 바람직하게는 PD-1/CD3 이중 특이성 항체 및 그 항체 단편이며, 또한 PD-1/CD3 이중 특이성 항체로서 바람직하게는 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체이고, 보다 바람직하게는 단리 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체이며, 더욱 바람직하게는 단리 인간 PD-1/인간 CD3 이중 특이성 모노클로널 항체이다. 여기서, 「단리 인간 PD-1/인간 CD3 이중 특이성 모노클로널 항체」란, 인간 PD-1과 인간 CD3에 대한, 단리된 이중 특이성 모노클로널 항체를 의미한다.

여기서, 이중 특이성 항체의 형태에는, 예컨대 다이아바디, 이중 특이성 sc(Fv)₂, 이중 특이성 미니바디, 이중 특이성 F(ab')₂, 이중 특이성 하이브리드 항체, 공유 결합형 다이아바디(이중 특이성 DART), 이중 특이성 (FvCys)₂, 이중 특이성 F(ab'-지퍼)₂, 이중 특이성 (Fv-지퍼)₂, 이중 특이성 3쇄 항체 및 이중 특이성 mAb₂ 등이 있다.

다이아바디란, 다른 항원을 인식하는 VH, VL끼리 펩티드 링커로 연결된 1본쇄 펩티드의 이량체이다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993), Vol. 90, No. 14: p. 6444-6448 참조).

이중 특이성 sc(Fv)₂란, 다른 항원을 인식하는 2개의 항체의 2조의 VH/VL이 펩티드 링커를 통해 연속된 1본쇄 형태로 생산되도록 개변된 저분자화 항체이다(J. Biological Chemistry (1994), Vol. 269: p. 199-206 참조).

이중 특이성 F(ab')₂란, 다른 2개의 항원을 인식하는 항체의 Fab' 단편이 디술피드 결합 등에 의해 공유 결합한 저분자화 항체이다.

이중 특이성 미니바디란, 각각 다른 항원을 인식하는 scFv에 항체의 정상 영역 CH3 도메인이 연결되도록 개변된 저분자 항체 단편을 그 CH3 도메인 상의 디술피드 결합 등에 의해서 공유 결합한 저분자화 항체이다(Biochemistry (1992), Vo. 31, No. 6, p. 1579-1584 참조).

이중 특이성 하이브리드 항체란, 다른 2개의 항원을 인식하는 항체의 중쇄/경쇄 복합체가 디술피드 결합등에 의해서 공유 결합한 인택트의 항체이다.

본 발명에 있어서 바람직한 이중 특이성 항체의 형태로서는 이중 특이성 하이브리드 항체이다.

이중 특이성 하이브리드 항체는, 예컨대, 하이브리드 하이브리도마법(US4474893 참조)으로 제작된 하이브리도마로부터 생산시킬 수 있다. 또한, 다른 항원을 인식하는 항체의 중쇄 및 경쇄를 각각 코드하는 합계 4종류의 cDNA를 포유동물 세포에 공발현(共發現), 그리고 분비시켜 제조할 수 있다.

본 발명에 있어서 사용되는 모노클로널 항체는 하이브리도마법(예컨대 Kohler 및 Milstein 등, Natur (1975), Vol. 256, p. 495-97, Hongo 등, Hybridoma (1995), Vol. 14, No. 3, p. 253-260, Harlow 등, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988), Vol. 2) 및 Hammerling 등, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, p. 563-681(Elsevier, N.Y., 1981) 참조), 재조합 DNA법(예컨대 US4816567 참조), 파지 디스플레이 방법(예컨대 Ladner 등의 US5223409, US5403484 및 US5571698, Dower 등의 US5427908 및 US5580717, McCafferty 등의 US5969108 및 US6172197, 그리고 Griffiths 등의 US5885793, US6521404, US6544731, US6555313, US6582915 및 US6593081 참조)으로 제작할 수 있다.

항체 혹은 모노클로널 항체는, 인간에게 투여되는 경우에는, 그 항원성을 저감 혹은 소실시키기 위해서, 키메라 항체, 인간화 항체 혹은 완전 인간형 항체의 형태로 제작할 수 있다.

「키메라 항체」는, 가변 영역 서열과 정상 영역 서열이 따로따로의 포유동물에서 유래하는 항체를 의미하며, 예컨대 가변 영역 서열이 마우스 항체에서 유래하고, 정상 영역 서열이 인간 항체에서 유래하는 것이 있다. 키메라 항체는, 상기한 하이브리도마법, 재조합 DNA법 혹은 파지 디스플레이 방법으로 단리된 항체 생산 하이브리도마로부터 공지된 수법에 의해 단리된 항체 가변 영역을 코드하는 유전자를, 공지된 방법을 이용하여, 인간 유래의 항체 정상 영역을 코드하는 유전자에 연결시켜 제작할 수 있다(예컨대 Cabilly 등의 US4816567 참조).

「인간화 항체」란, 마우스와 같은 다른 포유동물의 생식세포형에서 유래하는 상보성 결정 영역(CDR) 서열을 인간 프레임워크 서열 상에 이식한 항체를 의미한다. 인간화 항체의 경우도, 상기 방법으로 단리된 항체 생산 하이브리도마로부터 공지된 수법에 의해 단리된 항체 CDR 영역을 코드하는 유전자를, 공지된 방법을 이용하여, 인간 유래의 항체 프레임워크 영역을 코드하는 유전자에 연결시켜 제작할 수 있다(예컨대 Winter의 US5225539 및 US5530101, Queen 등의 US5585089호 및 US6180370 참조).

「인간 항체」 또는 「완전 인간형 항체」란, 프레임워크 영역 및 CDR 영역을 포함하는 가변 영역 및 정상 영역 양쪽 모두 인간 생식세포형 면역글로불린 서열에서 유래하는 항체를 의미한다. 본 발명에 있어서 사용되는 인간 항체는, 인간 항체를 생산하도록 형질 전환된 마우스, 예컨대 Humab 마우스(예컨대 Lonberg와 Kay 등에 의한 US5545806, US5569825, US5625126, US5633425, US5789650, US5877397, US5661016, US5814318, US5874299 및 US5770429 참조), KM 마우스(예컨대 Ishida 등의 WO2002/43478 참조), Xeno 마우스(예컨대 US5939598, US6075181, US6114598, US6150584 및 US6162963 참조) 또는 Tc 마우스(예컨대 Tomizuka 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000), p. 722-727 참조)를 이용한 방법으로 제작할 수 있다. 또한, 면역에 의해 인간 항체 응답이 일어나도록 인간 면역세포를 재구축한 SCID 마우스(예컨대 Wilson 등의 US5476996 및 US5698767 참조)를 이용하여도 조제할 수 있다. 더욱이, 본 발명에 있어서 사용되는 인간 항체는 상기한 파지 디스플레이 방법으로도 제작할 수 있다.

본 명세서에 있어서, PD-1/CD3 이중 특이성 항체의 「항체 단편」이란, 전장(全長) 항체의 일부이고, PD-1에 대한 항원 결합 부분 및 CD3에 대한 항원 결합 부분을 갖는 항체이며, 예컨대 F(ab')₂ 등을 들 수 있다. 여기서, 항원 결합 부분이란, 항체가 그 항원에 결합할 수 있는 최소 단위를 의미하며, 예컨대 VH 및 VL에 있는 각각 3개씩의 CDR과 이들 CDR의 조합에 의해 목적의 항원을 인식할 수 있도록 CDR을 배치하는 프레임워크 영역으로 구성된다.

본 명세서에 있어서, 「공통 경쇄」란, 다른 2종 이상의 중쇄와 회합하여, 각각의 항원에 대하여 결합능을 보일 수 있는 경쇄를 의미한다(De Wildt RM 등, J. Mol. Biol. (1999), Vol. 285, p. 895-901, De Kruif 등, J. Mol. Biol. (2009), Vol. 387, p. 548-58, WO2004/009618, WO2009/157771 및 WO2014/051433). 그와 같은 공통 경쇄로서 바람직하게는 예컨대 인간 κ 경쇄 IgVκ1-39*01/IGJκ1*01(IMGT 데이터베이스에 의한 명명법) 생식세포계열형 유전자에 의해 코드되는 경쇄(이하, IGVK1-39/JK1 공통 경쇄라고 약기하는 경우가 있다.)이며, 보다 바람직하게는 예컨대 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 VL을 갖는 상기 경쇄, 더욱 바람직하게는 예컨대 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 상기 경쇄이다. 또한, 공통 경쇄의 정상 영역으로서 바람직하게는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 들 수 있다. 본 발명에 있어서 사용되는 공통 경쇄의 VL 및 정상 영역의 각각 아미노산 서열을 도 1에 도시하고, 그 가변 영역의 각 CDR의 아미노산 서열을 도 2에 도시한다.

본 명세서에 있어서 「아이소타입」이란, 중쇄 정상 영역 유전자에 의해서 코드되는 항체 클래스(예컨대 IgM 또는 IgG)를 칭하는 것으로서 사용된다. 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체로서 바람직한 아이소타입은 IgG이며, 보다 바람직하게는 IgG₁ 또는 IgG₄이다. 여기서, IgG₁로서는 Fc 수용체(예컨대 Fcγ 수용체)에의 결합이 소실 혹은 감약된 것이 바람직하다. 구체적으로는 그 중쇄 정상 영역의 임의의 아미노산을 치환, 결손 혹은 삽입함으로써, Fc 수용체에의 결합이 소실 혹은 감약된 IgG₁ 항체를 얻을 수 있다. 예컨대 이중 특이성 항체의 각각 2개의 중쇄 정상 영역 혹은 힌지 영역 상에 있어서, EU 넘버링 시스템에 의한 235번째의 류신이 글리신으로 치환되고 및/또는 236번째의 글리신이 아르기닌으로 치환된 항체를 들 수 있다. 또한, 항체의 불균일성을 저감시키기 위해서, C 말단의 아미노산, 예컨대 EU 넘버링 시스템에 의한 447번째의 리신을 결손한 항체가 바람직하다. 또한, 혈액 내에서의 반감기를 단축시키기 위해서는, 특히 FcRn 수용체에의 결합이 소실 혹은 감약된 것도 바람직하다. 구체적으로는 중쇄 정상 영역에 있어서의 FcRn 수용체 결합 부위에 속하는 아미노산의 치환 또는 결손에 의해 동 수용체에의 결합을 소실 혹은 감약시킬 수 있지만, IgG₁ 항체인 경우, 그와 같은 항체로서는 (1) EU 넘버링 시스템에 의한 252번째의 메티오닌이 글루타민산, 프롤린, 아르기닌 혹은 아스파라긴산으로, (2) EU 넘버링 시스템에 의한 434번째의 아스파라긴이 류신으로, 및/또는 (3) EU 넘버링 시스템에 의한 438번째의 글루타민이 글루타민산으로 각각 치환된 것을 들 수 있다. 한편, 이중 특이성 항체가 IgG₄인 경우, 항체 분자 내에 있어서의 스와핑을 억제하도록 그 중쇄 정상 영역의 임의의 아미노산이 치환, 결손 혹은 삽입된 개변체가 보다 바람직하다. 예컨대 힌지 영역에 위치하는, EU 넘버링 시스템에 의한 228번째의 세린을 프롤린으로 치환한 항체가 바람직하다. 또한, 본 명세서에 있어서, 항체의 가변 영역의 CDR과 프레임워크에 할당되는 아미노산 위치는 Kabat에 따라서 규정되는 경우가 있다(Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institute of Health, Bethesda, Md., (1987) 및 (1991) 참조). 또한, 정상 영역의 아미노산은 Kabat의 아미노산 위치에 준한 EU 넘버링 시스템(Sequences of proteins of immunological interest, NIH Publication No. 91-3242 참조)에 따라서 표시된다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체의 Fc 영역은, 2개의 다른 중쇄가 회합하기 쉽도록 그 영역의 임의의 아미노산이 치환되어 있어도 좋다. 바람직한 양태로서는, 예컨대 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄 상의 정상 영역의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환된 PD-1/CD3 이중 특이성 항체를 들 수 있다. 또한, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환된 PD-1/CD3 이중 특이성 항체도 들 수 있다.

PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암

본 명세서에 있어서, 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」(이하, 「제1 아암」이라고 약기하는 경우가 있다.)은, 본 발명에 따른 이중 특이성 단백질의 일부인지 혹은 그 자체 단일체로서 존재하는지에 상관없이 PD-1에 특이적으로 결합하는 단백질이며, 상기 이중 특이성 단백질이 이중 특이성 항체인 경우, 상기 제1 아암은 항체 혹은 항체 단편의 일부에 포함되는지 혹은 일부가 아니며 그 자체 단일체로서 존재하는지 여부에 상관없이, 적어도 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체(이하, 항PD-1 항체라고 약기하는 경우가 있다.)의 VH 및 VL을 포함하고, PD-1에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 부분을 의미한다. 예컨대 이러한 제1 아암에는, 항PD-1 항체의 항원 결합 부위를 구성하는 VH 및 VL을 포함하는 항체의 Fv부, 상기 VH 및 VL을 포함하는 항체의 Fab'부 및 Fab부도 이것에 포함된다. 여기서, 「PD-1에 특이적으로 결합한다」란, 적어도 1x10^-5 M, 바람직하게는 1x10^-7 M, 보다 바람직하게는 1x10^-9 M보다 높은 친화성(해리상수(Kd치))을 갖는 결합 활성으로 PD-1에 대하여 직접 결합할 수 있고, 적어도 CD28, CTLA-4 및 ICOS 등의, 소위 CD28 패밀리 수용체에 속하는 것 외의 수용체 멤버에게는 실질적으로 결합하지 않는 특징으로서 사용된다. 또한, 「PD-1에 특이적으로 결합하는 항체」 혹은 「항PD-1 항체」에 있어서의 「항체」란, 전장 항체, 즉, 디술피드 결합으로 연결된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 완전 길이의 항체를 의미하는데, 바람직하게는 그 모노클로널 항체이다.

여기서, 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 그 바람직한 양태로서는, 예컨대

(b) WJ²NTNTU²NPTX²AQGFTG로 표시되는 아미노산 서열[서열 중, J²는 L(류신) 또는 I(이소류신)를 나타내고, U²는 E(글루타민산) 또는 G(글리신)을 나타내고, X²는 F(페닐알라닌) 또는 Y(티로신)을 나타내며, 여기서, J², U² 및 X²가 각각 나타내는, 혹은 그 밖의 알파벳은, 각각 상기와 동일한 의미를 나타낸다.]을 포함하는 VH-CDR2, 그리고

(c) GDJ³VVPTTIWNYYU³X³MZ³V로 표시되는 아미노산 서열[서열 중, J³은 M(메티오닌) 또는 L(류신)을 나타내고, U³은 H(히스티딘) 또는 Y(티로신)을 나타내고, X³은 F(페닐알라닌) 또는 Y(티로신)을 나타내고, Z³은 D(아스파라긴산) 또는 E(글루타민산)을 나타내며, 여기서, J³, U³, X³ 및 Z³이 각각 나타내는, 혹은 그 밖의 알파벳은, 각각 상기와 동일한 의미를 나타낸다.]을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH를 갖는 것을 들 수 있다. 여기서, 바람직한 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」의 양태로서는, 예컨대

(1a) 그 VH-CDR1인 HYJ¹LH 서열 중의 J¹이 G(글리신)을 나타내고, 그 VH-CDR2인 WJ²NTNTU²NPTX²AQGFTG 서열 중의 J²가 L(류신)을, U²가 E(글루타민산)을, X²가 F(페닐알라닌)을 각각 나타내고, 그 VH-CDR3인 GDJ³VVPTTIWNYYU³X³MZ³V 서열 중의 J³이 M(메티오닌)을, U³이 H(히스티딘)을, X³이 F(페닐알라닌)을, Z³이 D(아스파라긴산)을 각각 나타내는, 각각 VH-CDR을 갖는 VH,

(2a) 그 VH-CDR1인 HYJ¹LH 서열 중의 J¹이 G(글리신)을 나타내고, 그 VH-CDR2인 WJ²NTNTU²NPTX²AQGFTG 서열 중의 J²가 I(이소류신)을, U²가 G(글리신)을, X²가 Y(티로신)를 각각 나타내고, 그 VH-CDR3인 GDJ³VVPTTIWNYYU³X³MZ³V 서열 중의 J³이 L(류신)을, U³이 H(히스티딘)을, X³이 Y(티로신)을, Z³이 E(글루타민산)을 각각 나타내는, 각각 VH-CDR을 갖는 VH,

(3a) 그 VH-CDR1인 HYJ¹LH 서열 중의 J¹이 A(알라닌)을 나타내고, 그 VH-CDR2인 WJ²NTNTU²NPTX²AQGFTG 서열 중의 J²가 L(류신)을, U²가 E(글루타민산)을, X²가 Y(티로신)를 각각 나타내고, 그 VH-CDR3인 GDJ³VVPTTIWNYYU³X³MZ³V 서열 중의 J³이 M(메티오닌)을, U³이 Y(티로신)을, X³이 Y(티로신)을, Z³은 D(아스파라긴산)을 각각 나타내는, 각각 VH-CDR을 갖는 VH, 또는

(4a) 그 VH-CDR1인 HYJ¹LH 서열 중의 J¹이 A(알라닌)을 나타내고, 그 VH-CDR2인 WJ²NTNTU²NPTX²AQGFTG 서열 중의 J²가 L(류신)을, U²가 E(글루타민산)을, X²가 F(페닐알라닌)을 각각 나타내고, 그 VH-CDR3인 GDJ³VVPTTIWNYYU³X³MZ³V 서열 중의 J³이 M(메티오닌)을, U³이 H(히스티딘)을, X³이 F(페닐알라닌)을, Z³이 D(아스파라긴산)을 각각 나타내는, 각각 VH-CDR을 갖는 VH를 갖는 것을 들 수 있다.

또한, 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 그 다른 양태로서 바람직하게는, 예컨대 (1b) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 VH,

(2b) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 VH,

(3b) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 VH,

(4b) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 VH, 그리고

(5b) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 VH에서 선택되는 어느 하나의 VH를 갖는 것을 들 수 있다.

더욱이, 본 발명에 있어서의, 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들에는 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나의 VH에 있어서의 각각의 VH-CDR에 있어서, 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되며 또한 상기 아미노산으로 치환되지 않은 원래의 제1 아암에 의한 PD-1에의 결합 활성과 실질적으로 동등한 결합 활성을 갖는 것도 포함된다. 예컨대 VH-CDR1의 경우에는 1개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되고, VH-CDR2 또는 VH-CDR3의 경우에는 각각 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환된 것을 들 수 있다. 또한, 도 4에 도시하는 것과 같이, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 각각 대응하는 항PD-1 항체 클론의 각 CDR에 있어서, 각 클론 사이에서 상이한 각 아미노산 또는 이들의 임의의 복수의 조합은 상기 클론 사이에 있어서 상호 치환 가능이다. 여기서, 보존적 아미노산에 의한 치환은, 유사한 측쇄를 갖는 잔기의 가환성(可換性)을 의미하며, 예컨대 지방족 측쇄를 갖는 아미노산군에 있어서는 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신이고, 지방족 히드록실 측쇄를 갖는 아미노산군에 있어서는 세린 및 트레오닌이고, 아미드 함유 측쇄를 갖는 아미노산군에 있어서는 아스파라긴 및 글루타민이고, 방향족 측쇄를 갖는 아미노산군에 있어서는 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판이고, 염기성 측쇄를 갖는 아미노산군에 있어서는 리신, 아르기닌 및 히스티딘이고, 황 함유 측쇄를 갖는 아미노산군에 있어서는 시스테인 및 메티오닌이다. 바람직한 보존적 아미노산에 의한 치환의 예로서는, 발린, 류신 및 이소류신 사이에서의 치환, 페닐알라닌 및 티로신 사이에서의 치환, 리신 및 아르기닌 사이에서의 치환, 알라닌 및 발린 사이에서의 치환, 그리고 아스파라긴 및 글루타민 사이에서의 치환을 들 수 있다. 또한, 여기서, 상기한 「상기 아미노산으로 치환되지 않은 원래의 제1 아암에 의한 PD-1에의 결합 활성과 실질적으로 동등한 결합 활성을 갖는다」란, 상기 아미노산으로 치환된 제1 아암의 PD-1에의 결합 활성이, 상기 아미노산으로 치환되지 않은 원래의 제1 아암의 결합 활성의 95% 이상이며, 바람직하게는 98% 이상이고, 보다 바람직하게는 99% 이상인 것을 의미한다.

더욱이, 본 발명에 있어서의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들에는, 그 VH에 있어서, 상술한 특정 아미노산 서열을 갖는 각 VH-CDR을 포함하고, 그 VH의 프레임워크의 아미노산 서열이 특정 생식세포계열형 유전자 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자에 의해 코드되는 VH를 갖는 것도 포함된다. 예컨대 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH는, 생식세포계열형 V 유전자가 IGHV7-4-1이고, 생식세포계열형 J 유전자가 JH6c인 VDJ 재조합 유전자 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자로 코드될 수 있다. 여기서, 생식세포계열형의 V 유전자 IGHV7-4-1에 의해서 각각 코드되는 아미노산 서열은 서열 번호 21의 아미노산 서열에 대응한다(도 3).

본 발명에 따른 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 항체 부분을 구성하는 경우, 그 VH의 프레임워크는 생식세포계열형의 VDJ 재조합 유전자가 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자에 의해서 코드되는 경우가 있다. 예컨대 생식세포계열형 V 유전자가 IGHV7-4-1인, 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH의 FR1, FR2, FR3은, 도 4에 도시하는 아미노산 위치에 있어서, IGHV7-4-1 유전자가 코드하는 아미노산 서열과 상이하기 때문에, 상기 각 위치에 있어서 체세포 돌연변이를 갖고 있다. 예컨대 FR1 영역에 관해서는, 서열 번호 21의 아미노산 서열 중의 위치 13의 리신이 글루타민으로, 위치 16의 알라닌이 발린으로, 또는 위치 19의 리신이 메티오닌으로 각각 치환되거나 혹은 이들의 임의의 복수의 조합으로 치환되어 있어도 좋다. FR2 영역에 관해서는, 서열 번호 21의 아미노산 서열 중의 위치 37의 발린이 류신으로 치환되어도 좋다. FR3 영역에 관해서는, 서열 번호 21의 아미노산 서열 중의 위치 77의 세린이 트레오닌으로, 위치 84의 시스테인이 세린 혹은 아스파라긴으로 각각 치환되거나 혹은 임의의 복수의 조합으로 치환되어도 좋다. 또한, 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH의 FR4 영역에 관해서는, J 유전자 JH6c에서 유래하는 FR4 영역 아미노산 서열(Trp-Gly-Lys-Gly-Thr-Thr*-Val-Thr-Val-Ser-Ser)(서열 번호 41) 중의 리신(Lys)이 글루타민 혹은 아스파라긴으로 및/또는 * 표시의 트레오닌(Thr)이 류신으로 치환되어 있어도 좋다. 상기 어느 하나의 아미노산 치환의 조합을 갖는 각각 FR1, FR2, FR3 및 FR4도, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 기능에 실질적인 영향을 주지 않고, 프레임워크로서 사용할 수 있다.

더욱이, 본 발명에 있어서의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들에는 상술한 특정 아미노산 서열을 갖는 각 CDR을 포함하며, 또한 그 VH의 FR의 아미노산 서열이 특정 생식세포계열형 유전자 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자로 코드되는 것도 포함된다. 예컨대 그와 같은 제1 아암으로서 서열 번호 1∼5에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 갖는 것을 들 수 있다.

더욱이, 그와 같은 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」에는, 예컨대 서열 번호 1∼5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하고, 바람직하게는 적어도 90% 동일하고, 보다 바람직하게는 적어도 95% 동일하고, 더욱 바람직하게는 적어도 98% 동일하고, 더욱 보다 바람직하게는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 가지며, 또한, 원래의 제1 아암의 VH의 아미노산 서열과의 차이가 PD-1에의 결합 활성에 실질적으로 영향을 주지 않는 것(이하, 상동 제1 아암이라고 약기하는 경우가 있다.)도 포함된다. 여기서, 아미노산 서열에 관한 동일성 비교에 있어서 사용되는 「% 동일」이란, 2개의 서열을 정렬시켜, 참조하는 아미노산 서열(여기서, 최대 퍼센트의 동일성을 달성하기 위해서 필요한 경우에는 갭을 도입한 후의 참조하는 아미노산 서열)과 동일한 아미노산 서열의 백분율로 정의된다. 또한, 여기서 「원래의 제1 아암의 VH의 아미노산 서열과의 차이가 PD-1에의 결합 활성에 실질적으로 영향을 주지 않는다」란, 상동 제1 아암의 PD-1에의 결합 활성이 원래의 제1 아암의 상기 결합 활성의 95% 이상이며, 바람직하게는 98% 이상이고, 보다 바람직하게는 99% 이상임을 의미한다.

또 다른 양태에 있어서, 본 발명에 있어서의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들에는 (1) 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH 혹은 서열 번호 1∼5에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 공통 경쇄의 VL을 갖는 제1 아암의 PD-1에의 결합 또는 (2) 상기 VH 및 VL을 포함하는 PD-1에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역의 PD-1에의 결합에 교차 경합하는 항PD-1 항체의 가변 영역(여기서, 상기 가변 영역은 그것을 구성하는 VH 및 VL을 포함한다.)을 갖는 것도 포함되고, 또한, PD-1에의 결합이 (3) 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH 혹은 서열 번호 1∼5에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 공통 경쇄의 VL을 갖는 제1 아암 또는 (4) 상기 VH 및 VL을 포함하는 PD-1에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역에 의해 교차 경합되는 항PD-1 항체의 가변 영역을 갖는 것도 포함된다. 여기서, 「PD-1에의 결합에 교차 경합한다」란, 본 명세서에 있어서 예시된 제1 아암과 동일한 혹은 일부 중복되는 에피토프에 결합함으로써, 상기 제1 아암의 PD-1에의 결합을 그 정도에 상관없이 저해하거나, 혹은 상기 예시된 제1 아암과 동일한 혹은 일부 중복되는 에피토프에 결합하는 항체에 의한 PD-1에의 결합이 상기 예시된 제1 아암에 의해서 그 정도에 상관없이 저해되는 것을 의미하고, 교차 경합하는지 여부는 경합 결합 어세이에 의해서 평가할 수 있다. 예컨대 비아코어 분석, 유세포 분석, 효소 결합 면역 흡착 검정법(ELISA), 형광 에너지 전이 측정법(FRET)이나 형광 미량 측정 기술(FMAT(등록상표))을 이용하여 판단할 수 있다.

예컨대 상기 (5b)에 나타내는 VH 및 공통 경쇄의 VL을 갖는 제1 아암에 의한 PD-1에의 결합에 교차 경합하는 것으로서, 예컨대 상기 (1b)∼(4b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH 및 공통 경쇄의 VL(바람직하게는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL)을 갖는 제1 아암, 나아가서는 서열 번호 1∼4에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 공통 경쇄의 VL(바람직하게는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL)을 갖는 제1 아암을 들 수 있다.

또한, 예컨대 상기 (1b)∼(4b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH 혹은 서열 번호 1∼4에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 공통 경쇄의 VL을 갖는 제1 아암에 의한 PD-1에의 결합에 교차 경합하는 것으로서, 예컨대 상기 (5b)에 나타내는 VH 및 공통 경쇄의 VL(바람직하게는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL)을 갖는 제1 아암, 나아가서는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 공통 경쇄의 VL(바람직하게는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL)을 갖는 제1 아암을 들 수 있다.

여기서, 본 발명에 있어서의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들로서 바람직하게는 상기 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH를 갖는 제1 아암을 들 수 있고, 또한 이 바람직한 제1 아암에는, 상술한 것과 같이, 그 VH의 각 CDR에 있어서, 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되며, 또한, 그 아미노산 치환이 PD-1에의 결합 활성에 실질적으로 영향을 주지 않는 것도 포함되고, 또한 추가로 상술한 것과 같이, VH의 프레임워크의 아미노산 서열이 생식세포계열형 V 유전자 IGHV7-4-1 혹은 동 J 유전자 JH6c 또는 이들의 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자로 코드되는 VH를 갖는 것도 포함된다. 그리고, 상기 제1 아암으로서 보다 바람직하게는 서열 번호 1∼5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 갖는 것을 들 수 있다.

더욱이, 본 발명에 있어서의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 그 VL은 공통 경쇄의 VL인 것이 바람직하고, 그와 같은 공통 경쇄로서 바람직하게는 예컨대 IGVK1-39/JK1 공통 경쇄이며, 보다 바람직하게는 예컨대 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 VL을 갖는 경쇄이고, 더욱 바람직하게는 예컨대 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 경쇄이다. 또한, 공통 경쇄의 정상 영역으로서 바람직하게는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 들 수 있다.

본 발명에 있어서의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」은, 하나의 실시양태로서, PD-1 및 PD-L1의 상호작용, PD-1 및 PD-L2의 상호작용 또는 이들 양 상호작용을 허용한다. 여기서, 「PD-1 및 PD-L1의 상호작용, PD-1 및 PD-L2의 상호작용 또는 이들 양 상호작용을 허용한다」란, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체가 가용형 PD-L1 또는 PD-L2의 농도의 20배 과잉으로 존재하는 상황 하에서도, 상기 PD-L1과 PD-1의 상호작용, 상기 PD-L2와 PD-1의 상호작용 또는 이들 양 상호작용이, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체가 존재하지 않을 때의 상기 상호작용과 비교하여 50% 이상 유지되고, 바람직하게는 70% 이상 유지되고, 보다 바람직하게는 80% 이상 유지되는 것을 의미한다. 또한, 「PD-1 및 PD-L1의 상호작용, PD-1 및 PD-L2의 상호작용 또는 이들 양 상호작용을 허용한다」라는 정의는, 「PD-1 및 PD-L1의 상호작용, PD-1 및 PD-L2의 상호작용 또는 이들 양 상호작용을 실질적으로 저해하지 않는다」라는 의미와 동의로 사용되는 경우가 있다.

본 발명에 있어서의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」은, 다른 실시양태로서 PD-1 및 PD-L1의 상호작용, PD-1 및 PD-L2의 상호작용 또는 이들 양 상호작용을 저해하는 경우가 있다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체를 구축하기 위해서 취득된 항PD-1 모노클로널 항체의 각 클론과 이들의 VH의 아미노산 서열 및 그 서열 번호의 대응 관계를 도 5에, 그리고 상기 항PD-1 모노클로널 항체의 각 클론의 VH 중의 각 CDR의 아미노산 서열과 그 서열 번호와의 대응 관계를 도 6에 도시한다.

또한, 그 밖의 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」으로서는, 예컨대 공지된 항PD-1 항체의 VH 및 VL의 조합을 들 수 있고, 그와 같은 공지된 항PD-1 항체로서는, 예컨대 니볼루맙, 세미플리맙, 펨브롤리주맙, 스파르탈리주맙, 티스렐리주맙, 도스탈리맙, 토리팔리맙, 캄렐리주맙, 제놀림주맙, 신틸리맙, 로다폴리맙, 레티판리맙, 발스틸리맙, 세플룰리맙, 부디갈리맙, 프롤골리맙, 사산리맙, 세트렐리맙, 짐베렐리맙, AMP-514, STI-A1110, ENUM 388D4, ENUM 244C8, GLS010, CS1003, BAT-1306, AK105, AK103, BI 754091, LZM009, CMAB819, Sym021, GB226, SSI-361, JY034, HX008, ISU106 및 CX-188 등을 들 수 있고, 또한 이하의 공개특허출원: US20180222982, US20180312564, WO2004/056875, WO2006/121168, WO2008/156712, WO2010/029434, WO2010/029435, WO2010/036959, WO2011/110604, WO2011/110621, WO2014/179664, WO2014/194302, WO2014/206107, WO2015/035606, WO2015/036394, WO2015/085847, WO2015/112800, WO2016/014688, WO2016/015685, WO2016/068801, WO2016/077397, WO2016/092419, WO2016/106159, WO2016/127179, WO2016/197497, WO2016/210129, WO2017/011580, WO2017/016497, WO2017/019846, WO2017/024465, WO2017/024515, WO2017/025016, WO2017/025051, WO2017/040790, WO2017/055443, WO2017/055547, WO2017/058115, WO2017/058859, WO2017/079112, WO2017/079116, WO2017/087599, WO2017/096026, WO2017/106656, WO2017/107885, WO2017/124050, WO2017/125815, WO2017/132827, WO2017/133540, WO2017/166804, WO2017/198741, WO2017/201766, WO2017/214182, WO2018/020476, WO2018/026248, WO2018/034226, WO2018/036472, WO2018/052818, WO2018/053106, WO2018/068336, WO2018/085358, WO2018/085468, WO2018/087143, WO2018/091661, WO2018/113258, WO2018/119474, WO2018/162944, WO2018/192089, WO2018/210230, WO2018/217227, WO2018/226580, WO2019/005635 또는 WO2019/051164에서 특정되는 특허출원 명세서에 각각 기재된 항PD-1 항체의 VH 및 VL의 조합도 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 예로서 들 수 있다. 또한, 상기 항PD-1 항체의 VH와 공통 경쇄의 조합도 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 예로서 들 수 있다.

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암

본 명세서에 있어서, 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」(이하, 「제2 아암」이라고 약기하는 경우가 있다.)이란, 본 발명에 따른 이중 특이성 단백질의 일부인지 혹은 그 자체 단일체로서 존재하는지에 상관없이 CD3에 특이적으로 결합하는 단백질이며, 상기 이중 특이성 단백질이 이중 특이성 항체인 경우, 상기 제2 아암은, 항체 혹은 항체 단편의 일부에 포함되는지 혹은 일부가 아니라 그 자체 단일체로서 존재하는지 여부에 상관없이, 적어도 CD3에 특이적으로 결합하는 항체(이하, 항CD3 항체라고 약기하는 경우가 있다.)의 VH 및 VL을 포함하며, CD3에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 부분을 의미한다. 예컨대, 이러한 제2 아암에는, 항CD3 항체의 항원 결합 부위를 구성하는 VH 및 VL을 포함하는 항체의 Fv부, 상기 VH 및 VL을 포함하는 항체의 Fab'부 및 Fab부도 이것에 포함된다. 여기서, 「CD3에 특이적으로 결합한다」란, 적어도 1x10^-5 M, 바람직하게는 1x10^-7 M, 보다 바람직하게는 1x10^-9 M보다 높은 친화성(해리상수(Kd치))을 갖는 결합 활성으로 CD3에 대하여 직접 결합할 수 있고, 다른 단백질에는 실질적으로 결합하지 않는 특징으로서 사용된다. 또한, 「CD3에 특이적으로 결합하는 항체」 혹은 「항CD3 항체」에 있어서의 「항체」란, 전장 항체, 즉, 디술피드 결합으로 연결된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 완전 길이의 항체를 의미하지만, 바람직하게는 그 모노클로널 항체이다.

여기서, 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들의 바람직한 양태로서는, 예컨대 (1c) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 포함하는 VH를 갖는 것을 들 수 있다.

더욱이, 본 발명에 있어서의, 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들에는, 상기 (1c)의 VH에 있어서의 각각의 CDR에 있어서, 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되며, 또한, 상기 아미노산으로 치환되지 않은 원래의 제2 아암에 의한 CD3에의 결합 활성과 실질적으로 동등한 결합 활성을 갖는 것도 포함된다. 예컨대 CDR1의 경우에는, 1개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되고, CDR2 또는 CDR3의 경우에는, 각각 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환된 것을 들 수 있다. 여기서, 「상기 아미노산으로 치환되지 않은 원래의 제2 아암에 의한 CD3에의 결합 활성과 실질적으로 동등한 결합 활성을 갖는다」란, 상기 아미노산 치환된 제2 아암의 CD3에의 결합 활성이 상기 아미노산으로 치환되지 않은 원래의 제2 아암의 결합 활성의 95% 이상이며, 바람직하게는 98% 이상이고, 보다 바람직하게는 99% 이상임을 의미한다. 또한, 제2 아암의 각 VH-CDR에 있어서의 「보존적 아미노산에 의한 치환」에는, 예컨대 상술한 제1 아암에 있어서의 아미노산 치환의 예를 들 수 있다.

더욱이, 본 발명에 있어서의, 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들에는, 그 VH에 있어서, 상술한 특정 아미노산 서열을 갖는 각 CDR을 포함하고, 그 VH의 FR의 아미노산 서열이 특정 생식세포계열형유전자 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자로 코드되는 VH를 갖는 것도 포함된다. 예컨대 상기 (1c)의 VH는, 생식세포계열형 V 유전자가 IGHV3-33인 VDJ 재조합 유전자 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자로 코드된다. 여기서, 생식세포계열형의 V 유전자 IGHV3-33에 의해서 코드되는 아미노산 서열(서열 번호 22)을 도 3에 도시한다. 또한, 그와 같은 제2 아암으로서, 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 갖는 것을 들 수 있다. 또한, 그와 같은 제2 아암에는, 예컨대 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하며, 바람직하게는 적어도 90% 동일하고, 보다 바람직하게는 적어도 95% 동일하고, 더욱 바람직하게는 적어도 98% 동일하고, 더욱 보다 바람직하게는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 가지며, 또한, 원래의 제2 아암의 VH의 아미노산 서열과의 차이가 CD3에의 결합 활성에 실질적으로 영향을 주지 않는 것(이하, 상동 제2 아암이라고 약기하는 경우가 있다.)도 포함된다. 여기서, 「원래의 제2 아암의 VH의 아미노산 서열과의 차이가 CD3에의 결합 활성에 실질적으로 영향을 주지 않는다」란, 상동 제2 아암의 CD3에의 결합 활성이 원래의 제2 아암의 상기 결합 활성의 95% 이상이며, 바람직하게는 98% 이상이고, 보다 바람직하게는 99% 이상임을 의미한다.

또 다른 양태에 있어서, 본 발명에 있어서의 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들에는, (1) 상기 (1c)로 표시되는 VH 또는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 공유 경쇄의 VL을 갖는 제2 아암의 CD3에의 결합 또는 (2) 상기 VH 및 VL을 포함하는 CD3에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역의 CD3에의 결합에 교차 경합하는 항CD3 항체의 가변 영역(여기서, 상기 가변 영역은 그것을 구성하는 VH 및 VL을 포함한다.)을 갖는 것도 포함된다. 여기서, 「CD3에의 결합에 있어서 교차 경합한다」란, 본 명세서에 있어서 예시된 제2 아암과 동일한 혹은 일부 중복되는 에피토프에 결합함으로써, 상기 제2 아암의 CD3에의 결합을 그 정도에 상관없이 저해하는 것을 의미한다. 여기서, 교차 경합하는지 여부는, 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」에 관한 설명에 있어서 기재된 방법에 준하여 같은 식으로 측정할 수 있다.

여기서, 본 발명에 있어서의 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 이들로서 바람직하게는 상기 (1c)로 표시되는 VH를 갖는 제2 아암을 들 수 있고, 또한 이 바람직한 제2 아암에는, 상술한 것과 같이 그 VH의 각 CDR에 있어서, 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되며, 또한, 그 아미노산 치환이 CD3에의 결합 활성에 실질적으로 영향을 주지 않는 것도 포함되고, 또한, 추가로 상술한 것과 같이, VH의 프레임워크의 아미노산 서열이 생식세포계열형 유전자 IGHV3-33 혹은 그 체세포 돌연변이를 갖는 상기 유전자로 코드되는 VH를 갖는 것도 포함된다. 그리고, 상기 제2 아암으로서 보다 바람직하게는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 갖는 것을 들 수 있다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체를 구축하기 위한 항CD3 항체의 각 클론과 이들의 VH의 아미노산 서열 및 그 서열 번호와의 대응 관계를 도 7에, 그리고 상기 항CD3 항체의 각 클론의 VH 중의 각 CDR의 아미노산 서열과 그 서열 번호와의 대응 관계를 도 8에 도시한다.

본 발명에 있어서의 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」이 항체 부분을 구성하는 경우, 그 VL은 공통 경쇄의 VL인 것이 바람직하고, 그와 같은 공통 경쇄로서 바람직하게는 예컨대 IGVK1-39/JK1 공통 경쇄이며, 보다 바람직하게는 예컨대 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 VL을 갖는 경쇄이고, 더욱 바람직하게는 예컨대 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 경쇄이다. 또한, 공통 경쇄의 정상 영역으로서 바람직하게는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 들 수 있다.

본 발명에 있어서의 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」으로서는 바람직하게는 CD3ε에 특이적으로 결합하는 것을 들 수 있다.

또한, 그 밖의 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」으로서는 예컨대 공지된 항CD3 항체의 VH 및 VL의 조합을 들 수 있고, 그와 같은 항CD3 항체로서는 예컨대 포랄루맙(Foralumab), 무로모납(Muromonab)-CD3, 오텔릭시주맙(Otelixizumab), 테플리주맙(Teplizumab) 및 비실리주맙(Visilizumab) 등을 들 수 있고, 또한, 블리나투모맙(Blinatumomab), 카투막소맙(Catumaxomab), 시비사타맙(Cibisatamab), 두보툭시주맙(Duvortuxizumab), 에르투막소맙(Ertumaxomab), 플로테투주맙(Flotetuzumab), 파소툭시주맙(Pasotuxizumab), 솔리토맙(Solitomab), 테벤타퍼스프(Tebentafusp), 테포디타맙(Tepoditamab), AMG-596, MOR209, REGN1979, XmAb13676 및 XmAb14045의 어느 하나의 이중 특이성 항체의 CD3 결합 부위를 구성하는 VH 및 VL의 조합도 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 예로서 들 수 있다. 또한, 이하의 공개특허출원: US20190016823, WO2018/223004, WO2018/223002, US2018/0291114, WO2018/114754, CN107501412, CN106810611, US20170218079, US20170174779, CN106349391, WO2017/070943, WO2017/053856, WO2017/021349, CN106084049, WO2017/021354, WO2016/179003, US20160176980, WO2016/014974, WO2016/016859, US20150266966, CN104098698, WO2014/151438, WO2013/186613, CN102219856, WO2010/052013, WO2010/037836, WO2007/042261, WO2007/033230, WO2003/026692, WO2000/005268, CN106084046, CN106146661 또는 WO2010/037835에서 특정되는 특허출원 명세서에 기재된 항CD3 항체 또는 이중 특이성 항체의 CD3 결합 부위의 VH 및 VL의 조합도 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 예로서 들 수 있다. 더욱이, 상기 항CD3 항체의 VH와 공통 경쇄의 조합도, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 예로서 들 수 있다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체로서 바람직한 아이소타입으로서는 IgG 항체이며, 더욱 바람직하게는 IgG₁ 혹은 IgG₄ 항체이고, 더욱 보다 바람직하게는 IgG₁ 항체이다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체로서 바람직한 양태로서는, 예컨대 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(A) 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나로 표시되는 VH에 있어서의, VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3에서 선택되는 어느 하나 또는 복수의 CDR에 있어서, 각각 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 그 보존적 아미노산)으로 치환되어 있어도 좋은 VH 및

(B) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 공통 경쇄의 VL을 가지고, 그리고

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(C) 상기 (1c)로 표시되는 VH에 있어서의, VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3에서 선택되는 어느 하나 또는 복수의 CDR에 있어서, 각각 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산(바람직하게는 보존적 아미노산)으로 치환되어 있어도 좋은 VH 및

(D) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1, 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 포함하는 공통 경쇄의 VL을 갖는 것을 특징으로 하는 PD-1/CD3 이중 특이성 항체를 들 수 있다.

보다 바람직하게는, 예컨대 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(A) 상기 (1a)∼(4a) 또는 (1b)∼(5b)에서 선택되는 어느 하나의 VH 및

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(C) 상기 (1c)로 표시되는 VH 및

또한, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체로서 바람직한 다른 양태로서는, 예컨대 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(A) 서열 번호 1∼5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및

(B) 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 공통 경쇄의 VL을 가지고, 그리고

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(C) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및

(D) 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 공통 경쇄의 VL을 갖는 것을 특징으로 하는 PD-1/CD3 이중 특이성 항체를 들 수 있다.

이의 다른 양태로서 보다 바람직하게는, 예컨대 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,

(A) 서열 번호 1∼5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및

(B) 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 공통 경쇄의 VL을 가지고, 그리고,

CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,

(C) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체 중, 동 항체가 IgG₁ 항체인 경우에는, 각각 2개의 중쇄 정상 영역 혹은 힌지 영역 상에 있어서, EU 넘버링 시스템에 의한 235번째의 류신이 글리신으로 치환되고 및/또는 236번째의 글리신이 아르기닌으로 치환된 IgG₁ 항체가 바람직하다. 또한, 이들 이중 특이성 항체의 중쇄 C 말단의 아미노산, 예컨대 EU 넘버링 시스템에 의한 447번째의 리신을 결손한 항체가 보다 바람직하다. 또한, PD-1/CD3 이중 특이성 항체가 IgG₄ 항체인 경우에는, 그 힌지 영역에 위치하는, EU 넘버링 시스템에 의한 228번째의 세린을 프롤린으로 치환한 항체가 바람직하다.

더욱이, 이들 PD-1/CD3 이중 특이성 항체가 IgG₁ 항체인 경우에 바람직한 양태로서는, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환된 IgG₁ 항체를 들 수 있다. 또한, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환된 IgG₁ 항체도 마찬가지로 바람직하다.

더욱이, 이들 PD-1/CD3 이중 특이성 항체가 IgG₁ 항체인 경우에 바람직한 양태로서는, 각각 2개의 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 (1) EU 넘버링 시스템에 의한 252번째의 메티오닌이 글루타민산, 프롤린, 아르기닌 혹은 아스파라긴산으로, (2) EU 넘버링 시스템에 의한 434번째의 아스파라긴이 류신으로, 및/또는 (3) EU 넘버링 시스템에 의한 438번째의 글루타민이 글루타민산으로 각각 치환된 IgG₁ 항체를 들 수 있다. 이들 아미노산 치환에 의해, 상기 PD-1/CD3 이중 특이성 항체의 혈액 내에서의 반감기가, 동 아미노산 치환이 이루어지지 않은 동 항체와 비교하여, 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 60%, 보다 바람직하게는 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80%, 가장 바람직하게는 적어도 90% 단축되는 것을 기대할 수 있다.

중쇄 정상 영역에 있어서의 상기한 모든 아미노산 치환을 도입한 PD-1/CD3 이중 특이성 IgG₁ 항체의 바람직한 양태로서는, 예컨대 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄가, 서열 번호 23, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 46 및 서열 번호 47에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 가지고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄가, 서열 번호 24, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52 및 서열 번호 53에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 갖는 항체를 들 수 있다. 이들 아미노산 서열의 몇 개를 도 9에 도시한다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체의 양태로서 가장 바람직하게는, 본 명세서 실시예 8에서 제작된, 클론 PD1-1(Bi), 클론 PD1-2(Bi), 클론 PD1-3(Bi), 클론 PD1-4(Bi) 및 클론 PD1-5(Bi), 그리고 실시예 17에서 제작된 클론 Mut1, 클론 Mut2, 클론 Mut3, 클론 Mut4, 클론 Mut5 및 클론 Mut6이다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질로서 바람직한 특징으로서는, (1) PD-1 및 PD-L1의 상호작용, PD-1 및 PD-L2의 상호작용 또는 이들 양 상호작용을 허용하는 것, (2) 사이토카인 생산이 충분히 저감된 것 및/또는 (3) 표적 세포인 혈액암의 암 세포에서 발현되는 PD-1 및 이펙터 세포인 림프구(예컨대 상해성 림프구)에서 발현되는 CD3에 각각 특이적으로 결합하는 것을 들 수 있다. 여기서, 「PD-1 및 PD-L1의 상호작용, PD-1 및 PD-L2의 상호작용 또는 이들 양 상호작용을 허용한다」란, 「PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암」에 관한 설명에서 기재된 정의와 같은 의미를 나타낸다. 한편, 「사이토카인 생산이 충분히 저감되었다」란, 예컨대 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체를 점적 등에 의해 정맥내 투여 중 혹은 투여하고 나서 24시간 이내에 있어서, 예컨대 혈중 혹은 조직중의 IL-2, IFN-γ 및/또는 TNF-α를 포함하는 사이토카인의 농도가 증가하지 않거나, 증가하더라도 스테로이드 투여에 의해 억제 가능한 정도임을 의미한다. 또한, 「표적 세포」란, 이펙터 세포인 림프구의 세포상해 작용을 받는 세포를 의미하며, 「이펙터 세포」란, 표적 세포에 대하여 세포상해 작용을 미치게 하는 세포를 의미한다.

PD-1/CD3 이중 특이성 항체의 제조 및 정제 방법

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질 중, 특히 이중 특이성 항체 및 그 항체 단편은 WO2014/051433, WO2013/157953 혹은 WO2013/157954에 개시된 방법으로도 제조할 수 있다.

구체적으로는 (1) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄를 코드하는 폴리뉴클레오티드, (2) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄를 코드하는 폴리뉴클레오티드 및 (3) 공통 경쇄를 코드하는 폴리뉴클레오티드가 각각 삽입된 발현 벡터를 포유동물 세포에 유전자 도입하여 형질 전환시키고, 양 중쇄 및 공유 경쇄를 공발현, 그리고 분비시켜 제조할 수 있다.

여기서, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체를 발현하는 숙주세포는, 발현 벡터를 유전자 도입할 수 있고, 도입된 발현 벡터를 발현할 수 있는 어떠한 숙주세포라도 좋다. 바람직하게는 SF-9 및 SF-21 세포와 같은 곤충 세포, 보다 바람직하게는 CHO 세포, BHK 세포, SP2/0 세포 및 NS-0 미엘로마 세포를 포함하는 마우스 세포, COS 및 Vero 세포와 같은 영장류 세포, MDCK 세포, BRL 3A 세포, 하이브리도마, 종양세포, 불사화한 일차 세포, W138, HepG2, HeLa, HEK293, HT1080 또는 PER.C6과 같은 배성(胚性)의 망막세포 등의 포유류 세포를 들 수 있다. 또한, 발현 시스템의 선택에 있어서는, 항체가 적절히 글리코실화되도록 포유류 세포의 발현 벡터 및 숙주를 이용하는 경우가 있다. 인간 세포주, 바람직하게는 PER.C6은, 인간에게 있어서의 글리코실화 패턴과 일치하는 항체를 얻기 위해서 유리하게 이용된다.

발현 벡터의 유전자 도입에 의해서 형질 전환된 숙주세포에 있어서의 단백질의 생산은, 예컨대 Current Protocols in Protein Science (1995), Coligan JE, Dunn BM, Ploegh HL, Speicher DW, Wingfield PT, ISBN 0-471-11184-8, Bendig, 1988을 참고로 실시할 수 있고, 또한, 숙주세포 배양의 생산성을 최대로 하기 위한 일반적인 지침, 수순 및 실용적인 방법은 Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach (M. Butler, ed., IRL Press, 1991)를 참고로 실시할 수 있다. 숙주세포에서의 항체의 발현은 예컨대 EP0120694, EP0314161, EP0481790, EP0523949, US4816567 및 WO2000/63403 등의 공개 공보에 기술되어 있다.

여기서, 숙주세포의 배양 조건은 공지된 방법에 의해 최적화할 수 있으며, 단백질의 생산량을 최적화할 수 있다. 배양은, 예컨대 배양 접시, 롤러 보틀 혹은 반응조 내에서, 배치 배양, 유가 배양, 연속 배양, 중공사에 의한 배양으로 실시할 수 있다. 세포 배양에 의해 대규모로 또한 연속적인 재조합 단백질을 생산하기 위해서는, 세포에 현탁액 내에서 증식시키는 것이 바람직하다. 또한, 동물 혹은 인간 유래 혈청 또는 동물 혹은 인간 유래 혈청의 구성 요소가 없는 조건 하에서 세포 배양시키는 것이 바람직하다.

숙주세포로 발현되어, 그 세포 또는 세포 배지로부터 공지된 방법에 의해 회수된 항체는, 공지된 방법을 이용하여 정제할 수 있다. 정제 방법에는, 면역침강법, 원심분리법, 여과, 사이즈 배제 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 양이온 및/또는 음이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피 등이 포함된다. 또한, 프로테인A 또는 프로테인G 친화성 크로마토그래피가 적합하게 이용되는 경우가 있다(예컨대 US4801687 및 US5151504 참조).

[의약적 용도]

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질은 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료에 유용하다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질이 예방, 증상 진전 억제 및/또는 치료할 수 있는 혈액암으로서는, 예컨대 다발성 골수종, 악성 림프종(예컨대 비호지킨 림프종(예컨대 B세포성 비호지킨 림프종(예컨대 전구 B세포 림프아구성 림프종, 전구 B세포 급성 림프구아성 백혈병, 만성 B림프성 백혈병(소림프구성 림프종 혹은 전구세포성 백혈병), B세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 절성 변연대 B세포성 림프종, 절외성 변연대 B세포성 림프종(MALT 림프종), 비장 원발 변연대 B세포성 림프종, 유모세포 백혈병, 유모세포 백혈병·변종형, 여포성 림프종, 소아형 여포성 림프종, 확산성 대세포형 B세포성 림프종, 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특정형, 비장 확산성 적비수 소형 B세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 원발성 종격 대세포형 B세포성 림프종, 원발성 삼출성 림프종, 버킷 림프종, 맨틀세포 림프종, 단클론성 B세포 림프구증가증, 비장 B세포 림프종/백혈병·분류불능형, 의의 불명의 단클론성 감마글로불린혈증·IgM형, μ중쇄병, λ중쇄병, α중쇄병, 형질세포 골수종, 골고립성 형질세포종, 골외성 형질세포종, 단클론성 면역글로불린 침착병, IRF4 재구성을 동반하는 대세포형 B세포 림프종, 원발성 피부 여포 중심 림프종, T세포/조직구 풍부형 대세포형 B세포 림프종, 원발성 중추신경계 확산성 대세포형 B세포 림프종, 원발성 피부 확산성 대세포형 B세포 림프종·하지형, EBV양성 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특정형, EBV양성 점막 피부 궤양, 만성 염증 관련 확산성 대세포형 B세포 림프종, 림프종모양 육아종증, 혈관내 대세포형 B세포 림프종, ALK양성 대세포형 B세포 림프종, 형질아구성 림프종, 원발성 체강액 림프종, HHV8양성 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특이형, 11q 이상을 동반하는 버킷 유사 림프종, MYC 및 BCL2와 BCL6 양쪽이나 한쪽의 재구성 동반하는 고악성도 B세포 림프종, 고악성도 B세포 림프종·비특이형 및 확산성 대세포형 B세포 림프종과 고전적 호지킨 림프종의 중간적 특징을 동반하는 B세포 림프종·분류불능형), T/NK세포성 비호지킨 림프종(예컨대 전구 T세포 림프아구성 림프종, 만성 T림프구성 백혈병, T세포 급성 림프성 백혈병(T세포 림프아구성 백혈병), T세포형 대과립 림프구성 백혈병, 대과립 NK세포성 백혈병, 급속진행성 NK세포 백혈병, 말초성 T세포 림프종, 말초성 T세포 림프종·비특정형, 분류 불능의 말초성 T세포 림프종, 혈관면역아구성 T세포성 림프종, 미분화 대세포 (CD30양성) 림프종, 혈관중심성 림프종, 장관 T세포성 림프종, 장증형 T세포 림프종, 간비장형 γ-δ T세포 림프종, 피하 지방 조직염 유사 T세포 림프종, 균상식육증, 세자리 증후군, 호지킨 유사/호지킨 관련 미분화 대세포 림프종, 절외성 NK/T세포 림프종, 성인 T세포성 림프종, T세포 전림프구성 백혈병, 만성 NK세포 림프증식 이상증, 소아 전신성 EBV양성 T세포 림프종, 종두모양 수포증 유사 림프증식 이상증, 절외성 NK/T세포 림프종·비형, 장증 관련 T세포 림프종, 단형성 상피향성 장관 T세포 림프종, 위장관 완서진행성 T세포 림프증식 이상증, 간비장 T세포 림프종, 원발성 피부 CD30양성 T세포 림프증식 이상증, 림프종모양 구진증, 원발성 피부 미분화 대세포형 림프종, 원발성 피부 γδ T세포 림프종, 원발성 피부 CD8양성 급속진행성 표피향성 세포상해성 T세포 림프종, 원발성 피부 선단형 CD8양성 T세포 림프종, 원발성 피부 CD4양성 소형/중형 T세포 림프증식성증, 여포 T세포 림프종, 여포 헬퍼 T세포 형질을 동반하는 절성 말초성 T세포 림프종, 미분화 대세포 림프종·ALK양성형, 미분화 대세포 림프종·ALK음성형 및 유방 임플란트 관련 미분화 대세포 림프종)) 및 호지킨 림프종(예컨대 고전적 호지킨 림프종(예컨대 결절 경화형, 혼합 세포형, 림프구 풍부형 및 림프구 감소형) 또는 결절성 림프구 우위형 호지킨 림프종)), 백혈병(예컨대 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병(림프아구성 림프종), 만성 림프성 백혈병(소림프구성 림프종), 골수이형성 증후군 및 만성 골수성 백혈병), 중추신경계 원발 악성 림프종 및 골수증식 증후군 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서 「치료」란, 예컨대 어떤 질환 혹은 그 증상을 치유시키는 것 또는 개선시키는 것을 의미하고, 「예방」이란, 어떤 질환 혹은 증상의 발현을 미연에 방지하거나 혹은 일정 기간 지연시키는 것을 의미하고, 「증상 진전 억제」란, 증상의 진전 또는 악화를 억제하여 병태의 진행을 멈추게 하는 것을 의미한다. 또한, 「예방」의 의미에는 재발 억제도 포함된다. 「재발 억제」란, 어떤 질환 혹은 증상의 재발을 방지 또는 재발 가능성을 저감시키는 것을 의미한다.

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질은 통상 전신적 또는 국소적으로 비경구 형태로 투여된다. 이러한 투여 방법으로서 구체적으로는 주사 투여, 경비 투여, 경폐 투여, 경피 투여 등을 들 수 있다. 주사 투여로서는 예컨대 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사 등을 들 수 있고, 정맥내 주사의 경우에는 점적에 의한 투여가 바람직하다. 그 투여량은 연령, 체중, 증상, 치료 효과, 투여 방법, 처리 시간 등에 따라 다르지만, 통상 성인 1인당, 1회에 0.1 μg/kg에서부터 300 mg/kg의 범위에서, 특히 바람직하게는 0.1 mg/kg에서부터 10 mg/kg의 범위에서, 1일 1회부터 수회 비경구 투여되거나, 또는 1일 30분에서부터 24시간의 범위에서 정맥내에 지속 투여된다. 물론 상기한 것과 같이, 투여량은 여러 가지 조건에 따라 변동되기 때문에, 상기 투여량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또한 범위를 넘어서 투여가 필요한 경우도 있다.

제제

본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질은, 주사제 또는 점적을 위한 수액으로서 제제화되어 이용되는 경우, 상기 주사제 또는 수액은 수용액, 현탁액 또는 유탁액의 어느 형태라도 좋고, 또한, 사용 시에 용제를 가함으로써 용해, 현탁 또는 유탁하여 사용되도록 약학적으로 허용할 수 있는 담체와 함께 고형제로서 제제화되어 있어도 좋다. 주사제 또는 점적을 위한 수액에 사용되는 용제로서, 예컨대 주사용증류수, 생리식염수, 포도당 용액 및 등장액(예컨대 염화나트륨, 염화칼륨, 글리세린, 만니톨, 소르비톨, 붕산, 붕사, 프로필렌글리콜 등의 용액) 등을 이용할 수 있다.

여기서, 약학적으로 허용할 수 있는 담체로서는 예컨대 안정제, 용해보조제, 현탁화제, 유화제, 무통화제, 완충제, 보존제, 방부제, pH 조정제 및 항산화제 등을 들 수 있다. 안정제로서는 예컨대 각종 아미노산, 알부민, 글로불린, 젤라틴, 만니톨, 글루코오스, 덱스트란, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 아스코르빈산, 아황산수소나트륨, 티오황산나트륨, 에데트산나트륨, 시트르산나트륨, 디부틸히드록시톨루엔 등을 이용할 수 있다. 용해보조제로서는 예컨대 알코올(예컨대 에탄올 등), 폴리알코올(예컨대 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등), 비이온성 계면활성제(예컨대 폴리솔베이트 20(등록상표), 폴리솔베이트 80(등록상표), HCO-50 등) 등을 이용할 수 있다. 현탁화제로서는 예컨대 모노스테아린산글리세린, 모노스테아린산알루미늄, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 라우릴황산나트륨 등을 이용할 수 있다. 유화제로서는 예컨대 아라비아 고무, 알긴산나트륨, 트래거캔스 등을 이용할 수 있다. 무통화제로서는 예컨대 벤질알코올, 클로로부탄올, 소르비톨 등을 이용할 수 있다. 완충제로서는 예컨대 인산 완충액, 아세트산 완충액, 붕산 완충액, 탄산 완충액, 시트르산 완충액, 트리스 완충액, 글루타민산 완충액, 엡실론아미노카프론산 완충액 등을 이용할 수 있다. 보존제로서는 예컨대 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산에틸, 파라옥시안식향산프로필, 파라옥시안식향산부틸, 클로로부탄올, 벤질알코올, 염화벤잘코늄, 데히드로아세트산나트륨, 에데트산나트륨, 붕산, 붕사 등을 이용할 수 있다. 방부제로서는 예컨대 염화벤잘코늄, 파라옥시안식향산, 클로로부탄올 등을 이용할 수 있다. pH 조정제로서는 예컨대 염산, 수산화나트륨, 인산, 아세트산 등을 이용할 수 있다. 항산화제로서 예컨대 (1) 아스코르빈산, 시스테인하이드로클로라이드, 중황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨 등과 같은 수용성 항산화제, (2) 아스코르빌팔미테이트, 부틸화하이드록시아니솔, 부틸화하이드록시톨루엔, 레시틴, 프로필갈레이트, α-토코페롤 등과 같은 유용성 항산화제 및 (3) 시트르산, 에틸렌디아민사아세트산, 소르비톨, 타르타르산, 인산 등과 같은 금속 킬레이트제 등을 이용할 수 있다.

주사제 또는 점적을 위한 수액은, 그 최종 공정에 있어서 멸균하거나 혹은 무균조작법, 예컨대 필터 등으로 여과하여 멸균하고, 이어서 무균적인 용기에 충전함으로써 제조할 수 있다. 또한, 주사제 또는 점적을 위한 수액은, 진공 건조 및 동결 건조에 의한 무균 분말(약학적으로 허용할 수 있는 담체의 분말을 포함하고 있어도 좋다.)을 적절한 용제에 용시 용해하여 사용할 수도 있다.

병용 또는 배합제

또한, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질은, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료에 사용되는 다른 약제와 함께 조합하여 사용하여도 좋다. 본 발명에 있어서, 다른 약제와 함께 조합하여 사용하는 경우(병용)의 투여 형태에는, 하나의 제제 중에 양 성분을 배합한 배합제 형태라도, 또한 따로따로의 제제로서의 투여 형태라도 좋다. 그 병용에 의해, 그 밖의 약제의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 효과를 보완하거나, 투여량 혹은 투여 횟수를 유지 내지 저감할 수 있다. 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질과 다른 약제를 따로따로 투여하는 경우에는, 일정 기간 동시 투여하고, 그 후, PD-1/CD3 이중 특이성 단백질만 혹은 다른 약제만을 투여하여도 좋다. 또한, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 항체 등을 먼저 투여하고, 그 투여 종료 후에 다른 약제를 투여하여도 좋고, 다른 약제를 먼저 투여하고, 그 투여 종료 후에 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질을 후에 투여하여도 좋으며, 각각의 투여 방법은 동일하더라도 다르더라도 좋다. 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질을 포함하는 제제와 다른 약제를 포함하는 제제의 키트로서 제공할 수도 있다. 여기서, 다른 약제의 투여량은 임상상 이용되고 있는 용량을 기준으로 하여 적절하게 선택할 수 있다. 또한, 다른 약제는 임의의 2종 이상을 적절한 비율로 조합하여 투여하여도 좋다. 또한, 상기 다른 약제에는, 현재까지 발견된 것뿐만 아니라, 앞으로 발견되는 것도 포함된다.

예컨대 알킬화약(예컨대 다카바진, 니무스틴, 테모졸로마이드, 포테무스틴, 벤다무스틴, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 카무스틴, 클로람부실 및 프로카바진 등), 백금 제제(예컨대 시스플라틴, 카보플라틴, 네다플라틴 및 옥살리플라틴 등), 대사길항제(예컨대 엽산 대사길항약(예컨대 페메트렉시드, 류코보린 및 메토트렉세이트 등), 피리딘 대사 저해약(예컨대 TS-1(등록상표), 5-플루오로우라실, UFT, 카모퍼(Carmofur), 독시플루리딘, FdUrd, 시타라빈 및 카페시타빈 등), 퓨린 대사 저해약(예컨대 플루다라빈, 클라드리빈 및 넬라라빈 등), 리보뉴클레오티드 리덕타아제 저해약, 뉴클레오티드 아날로그(예컨대 젬시타빈 등)), 토포이소머라아제 저해약(예컨대 이리노테칸, 노기테칸 및 에토포시드 등), 미소관 중합 저해약(예컨대 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 및 에리불린 등), 미소관 해중합 저해약(예컨대 도세탁셀 및 파클리탁셀 등), 항종양성 항생물질(예컨대 블레오마이신, 미토마이신 C, 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 에토포시드, 미토산트론, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 페플로마이신, 암루비신, 아클라루비신 및 에피루비신 등), 사이토카인 제제(예컨대 IFN-α2a, IFN-α2b, pegIFN-α2b, 천연형 IFN-β 및 인터류킨-2 등), 분자 표적약, 암 면역 치료약 및 그 밖의 항체 의약 등에서 선택되는 어느 하나 이상의 약제와 조합하여 사용하여도 좋다.

여기서, 분자 표적약으로서는, 예컨대 ALK 저해제(예컨대 크리조티닙, 세리티닙, 엔사르티닙, 알렉티닙 및 롤라티닙 등), BCR-ABL 저해제(예컨대 이매티닙 및 다사티닙 등), AXL 저해제(예컨대 ONO-7475 및 벰센티닙 등), CDK 저해제(예컨대 디나시클립, 아베마시클립, 팔보시클립 및 트릴라시클립 등), BTK 저해제(예컨대 이브루티닙 및 아칼라브루티닙 등), PI3K-δ/γ 저해제(예컨대 엄브랄리십, 파사클리십 및 IPI-549 등), JAK-1/2 저해제(예컨대 이타시티닙 및 룩솔리티닙 등), FAK 저해제(예컨대 데팍티닙 등), Syk/FLT3 이중 저해제(예컨대 미바보티닙(Mivavotinib) 등), ATR 저해제(예컨대 세랄라설팁 등), WEE1 키나아제 저해제(예컨대 아다보설팁 등), mTOR 저해제(예컨대 템시롤리무스, 에베로리무스, 비스투설팁(Vistusertib) 및 이리노테칸 등), HDAC 저해제(예컨대 보리노스탓, 로미뎁신, 엔티노스탓, 치다마이드, 모세티노스탓, 시타리노스탓, 파노비노스탓 및 발프로이트 등), EZH2 저해제(예컨대 타제메토스탓 등), STAT3 저해제(예컨대 나파부카신 등), DNMT 저해제(예컨대 아자시티딘 등), BCL-2 저해제(예컨대 나비토클락스 및 베네토클락스 등), SMO 저해제(예컨대 비스모데집 등), 항CD20 항체(예컨대 리툭시맙, 블론투벳맙, 에피투모맙, 이브리투모맙 튜세탄, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 테크네튬 (^99mTc) 노페투모맙 머펜탄, 토시투모맙, 벨투주맙, 오파투무맙, 우블리툭시맙, 오비누투주맙 및 노페투모맙 등), 항CD30 항체(예컨대 브렌툭시맙 베도틴 및 이라투무맙 등), 항CD38 항체(예컨대 다라투무맙, 이사툭시맙, 메자기타맙(Mezagitamab), AT13/5 및 MOR202 등), 항TNFRSF10B 항체(예컨대 베누푸타맙(Benufutamab), 코나투무맙, 드로지투맙, 렉사투무맙, 티가투주맙, 에프토자너민 알파(Eftozanermin alfa) 및 DS-8273a 등), 항CD40 항체(예컨대 블레셀루맙, 다세투주맙, 이스칼리맙, 루카투무맙, 미타잘리맙(Mitazalimab), 라바갈리맙(Ravagalimab), 셀리크렐루맙, 테넬릭시맙, ABBV-428 및 APX005M 등), 항CD70 항체(예컨대 쿠자투주맙, 보르세투주맙, 보르세투주맙 마포도틴 및 ARGX-110 등), 항TNFRSF10A 항체(예컨대 마파투무맙 등), 항CD79b 항체(예컨대 일라다투주맙(Iladatuzumab), 일라다투주맙 베도틴 및 폴라투주맙 베도틴 등), 항TNFSF11 항체(예컨대 데노수맙 등), 항NCAM1 항체(예컨대 로르보투주맙 메르탄신 등), 항CD37 항체(예컨대 릴로토맙, 루테튬 (¹⁷⁷lu) 릴로토맙 사테트락세탄, 나라툭시맙, 나라툭시맙 엠탄신 및 오틀레투주맙 등), 항CD200 항체(예컨대 사말리주맙 등), 항CD30-CD16A 이중 특이성 항체(예컨대 AFM13 등), 항IL3RA-CD3 이중 특이성 항체(플로테투주맙 및 비베코타맙(Vibecotamab)), 항GPRC5D-CD3 이중 특이성 항체(탈케타맙), 항CD3-CD19 이중 특이성 항체(예컨대 두보툭시주맙 및 블리나투모맙), 항TNFRSF17-CD3 이중 특이성 항체(테클리스타맙), 항CLEC12A-CD3 이중 특이성 항체(테포디타맙(Tepoditamab)) 및 항CD20-CD3 이중 특이성 항체(예컨대 플라모타맙(Plamotamab), 오드로넥스타맙, 모수네투주맙, 글로피타맙, 에코리타맙 및 REGN1979 등) 등을 들 수 있다.

또한, 암 면역 치료약으로서는, 예컨대 항PD-1 항체(예컨대 니볼루맙, 세미플리맙, 펨브롤리주맙, 스파르탈리주맙, 티스렐리주맙, 도스탈리맙, 토리팔리맙, 캄렐리주맙, 제놀림주맙, 신틸리맙, 로다폴리맙, 레티판리맙, 발스틸리맙, 서플룰리맙, 부디갈리맙, 프롤골리맙, 사산리맙, 세트렐리맙, 짐베렐리맙, AMP-514, STI-A1110, ENUM 388D4, ENUM 244C8, GLS010, CS1003, BAT-1306, AK105, AK103, BI 754091, LZM009, CMAB819, Sym021, GB226, SSI-361, JY034, ISU106, HX008 및 CX-188 등), 항PD-L1 항체(예컨대 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙, 마넬리맙(Manelimab), 팍밀리맙(Pacmilimab), 엔바폴리맙, 코시벨리맙, BMS-936559, STI-1010, STI-1011, STI-1014, SHR-1316, CS1001, MSB2311, BGB-A333, KL-A167, AK106, AK104, ZKAB001, FAZ053, CBT-502 및 JS003 등), PD-1 길항제(예컨대 AUNP-12, BMS-M1∼BMS-M10의 각 화합물, BMS-1, BMS-2, BMS-3, BMS-8, BMS-37, BMS-200, BMS-202, BMS-230, BMS-242, BMS-1001, BMS-1166, Incyte-1∼Incyte-6의 각 화합물, CAMC-1∼CAMC-4의 각 화합물, RG_1 및 DPPA-1 등), PD-L1/VISTA 길항제(예컨대, CA-170), PD-L1/TIM3 길항제(예컨대 CA-327), 항PD-L2 항체, PD-L1 융합 단백질, PD-L2 융합 단백질(예컨대 AMP-224 등), 항CTLA-4 항체(예컨대 이필리무맙, 잘리프렐리맙, 누룰리맙(Nurulimab) 및 트레멜리무맙 등), 항LAG-3 항체(예컨대 렐라틀리맙, 이어라밀리맙(Ieramilimab), 피안리맙, 엔셀리맙 및 마베젤리맙(Mavezelimab) 등), 항TIM3 항체(예컨대 MBG453 및 코볼리맙 등), 항KIR 항체(예컨대 리릴루맙, IPH2101, LY3321367 및 MK-4280 등), 항BTLA 항체, 항TIGIT 항체(예컨대 티라골루맙, 에티길리맙(Etigilimab), 비보스톨리맙 및 BMS-986207 등), 항VISTA 항체(예컨대 온바틸리맙 등), 항CD137 항체(예컨대 우렐루맙 및 유토밀루맙 등), 항CSF-1R 항체·CSF-1R 저해제(예컨대 카비랄리주맙, 에막투주맙, LY3022855, 악사틸리맙, MCS-110, IMC-CS4, AMG820, 펙시다티닙, BLZ945 및 ARRY-382 등), 항OX40 항체(예컨대 MEDI6469, 이북솔리맙(Ivuxolimab), MEDI0562, MEDI6383, 에피조네리모드(Efizonerimod), GSK3174998, BMS-986178 및 MOXR0916 등), 항HVEM 항체, 항CD27 항체(예컨대 발릴루맙 등), 항GITR 항체·GITR 융합 단백질(예컨대 에파프리네르민 알파(Efaprinermin alfa), 에프기바네르민 알파(Efgivanermin alfa), MK-4166, INCAGN01876, GWN323 및 TRX-518 등), 항CD28 항체, 항CCR4 항체(예컨대 모가물리주맙 등), 항B7-H3 항체(예컨대 에노블리투주맙, 미르조타맙(Mirzotamab), 미르조타맙 클레주토클락스(Mirzotamab clezutoclax) 및 옴부르타맙 등), 항ICOS 아고니스트 항체(예컨대 보프라텔리맙 및 GSK3359609 등), 항CD4 항체(예컨대 자놀리무맙 및 IT1208 등), 항DEC-205 항체/NY-ESO-1 융합 단백질(예컨대 CDX-1401), 항SLAMF7 항체(예컨대 아진툭시주맙(Azintuxizumab), 아진툭시주맙 베도틴 및 엘로투주맙 등), 항CD73 항체(예컨대 올레클루맙 및 BMS-986179 등), PEG화 IL-2(벰페갈데슬루킨), 항CD40 아고니스트 항체(예컨대 ABBV-428, APX005M 및 RO7009789 등), IDO 저해제(예컨대 에파카도스탓, 인독시모드 및 린로도스탓(Linrodostat) 등), TLR 아고니스트(예컨대 모톨리모드, CMP-001, G100, 틸소톨리모드, SD-101 및 MEDI9197 등), 아데노신 A2A 수용체 길항제(예컨대 프렐라데난트, AZD4635, 타미나데난트(Taminadenant) 및 시포라데난트(Ciforadenant) 등), 항NKG2A 항체(예컨대 모날리주맙 등), 항CSF-1 항체(예컨대 PD0360324 등), 면역증강제(예컨대 PV-10 등), IL-15 슈퍼아고니스트(예컨대 ALT-803), 가용성 LAG3(예컨대 IMP321 등), 항CD47 항체·CD47 길항제(예컨대 ALX148 등) 및 IL-12 길항제(예컨대 M9241 등) 등을 들 수 있다.

더욱이, 그 밖의 항체 의약으로서는, 예컨대 항IL-1β 항체(예컨대 카나키누맙 등) 및 항CCR2 항체(예컨대 폴로잘리주맙 등) 등을 들 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 단백질은, 스테로이드약(예컨대 코르티손, 코르티손아세트산에스테르, 히드로코르티손, 히드로코르티손인산에스테르나트륨, 히드로코르티손숙신산에스테르나트륨, 플루드로코르티손아세트산에스테르, 프레드니솔론, 프레드니솔론아세트산에스테르, 프레드니솔론숙신산에스테르나트륨, 부틸아세트산프레드니솔론, 프레드니솔론인산에스테르나트륨, 할로프레돈아세트산에스테르, 메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론아세트산에스테르, 메틸프레드니솔론숙신산에스테르나트륨, 트리암시놀론, 아세트산트리암시놀론, 트리암시놀론아세토니드, 덱사메타손, 덱사메타손아세트산에스테르, 덱사메타손발레르산에스테르, 덱사메타손시페실산에스테르, 덱사메타손프로피온산에스테르, 덱사메타손인산에스테르나트륨, 덱사메타손팔미틴산에스테르, 덱사메타손메타술포안식향산에스테르나트륨, 파라메타손, 파라메타손아세트산에스테르, 베타메타손, 베타메타손디프로피온산에스테르, 베타메타손발레르산에스테르, 베타메타손아세트산에스테르, 베타메타손부티르산에스테르프로피온산에스테르 및 베타메타손인산에스테르나트륨 등)과 조합하여 사용하여도 좋다.

본 발명을 이하의 실시예에 의해서 더욱 자세히 설명하지만, 본 발명의 범위는 이것에 한정되지 않는다. 본 발명의 기재에 기초하여 다양한 변경, 수식이 당업자에게는 가능하며, 이들 변경, 수식도 본 발명에 포함된다.

실시예

실시예 1: 재조합 인간 PD-1-Fc 융합 단백질을 이용한 MeMo(등록상표) 마우스에의 면역

본 발명에 따른 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 항체 부분을 구성하는 경우 이들을 취득하는 방법으로서, MeMo(등록상표) 마우스(WO2009/157771 참조)에 재조합 인간 PD-1 단백질을 면역하는 방법을 선택했다. MeMo(등록상표) 마우스는, 비재조합 인간 중쇄 V 유전자 영역, D 유전자 영역 및 J 유전자 영역, 그리고 재조합 인간 κ 경쇄 IgVκ1-39*01/IGJκ1*01 생식세포계열형 유전자를 포함하는 유전자 단편이 마우스 정상 영역 유전자에 연결되도록 유전자 개변된 마우스이며, 항체의 표적 단백질을 직접 면역함으로써, 다양성을 갖는 중쇄와 공통 경쇄를 포함하는 항체를 생산시킬 수 있다.

12∼16주령의 12마리의 MeMo(등록상표) MS5B/MS9 마우스에, Gerbu adjuvant MM(Gerbu Biotechnik, 형번 #3001)을 이용하여 에멀젼화한, 재조합 인간 PD-1-Fc 융합 단백질(R&D Systems, 형번 1086-PD)을 14일 간격으로 각각 면역했다. 면역 0일째, 14일째 및 28일째에 동 재조합 인간 PD-1-Fc 융합 단백질을 피하 투여하고, 이후의 타이밍에는, PBS에 용해한 동 재조합 인간 PD-1-Fc 융합 단백질을 피하 투여했다. 면역 21일째, 35일째, 56일째, 77일째 및 98일째에 인간 PD-1 강제 발현 HEK293T 세포주를 이용한 유세포 분석에 의해 혈청 중 항체가를 평가했다. 1000배 희석한 혈청에 있어서 인간 PD-1 강제 발현 HEK293T 세포주를 염색한 경우, 컨트롤이 되는 인간 PD-1 비발현 HEK293T 세포주와 비교하여 MFI치가 3배 이상 증가한 마우스의 림프 조직을 파지 디스플레이 라이브러리의 구축에 이용했다. 라이브러리 구축으로 진행하는 기준을 만족한 마우스는, 항체가 평가일로부터 3일간 재조합 PD-1-Fc 융합 단백질로 추가 면역하고, 비장 및 서혜 림프절을 회수했다. 인간 PD-1 및 필리핀원숭이 PD-1에 대한 혈청 중 항체가가 1/100 이상이며 또한 추가 면역에 의해서 항체가가 상승하지 않는 마우스도 비장 및 서혜 림프절을 회수했다. 이들 림프 조직으로부터 RNA를 추출한 후, cDNA 합성을 행했다.

실시예 2: PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암을 갖는 항PD-1 항체 취득을 위한 파지 디스플레이 라이브러리의 구축(단백질 면역)

실시예 1에서 조제한 DNA를 사용하고, 이뮤노글로블린 중쇄 가변 영역 패밀리에 특이적인 프라이머를 이용하여 PCR 반응을 행했다. 동 PCR 산물을 제한효소 SfiI와 XhoI로 절단한 후, 동 제한효소를 이용하여 절단한 MV1473 파지미드 벡터[공통 경쇄를 코드하는 유전자(인간 κ 경쇄 IgVκ1-39*01/IGJκ1*01 생식세포계열형 유전자)를 포함한다]에 삽입하여, 동 라이브러리를 구축했다.

실시예 3: PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암을 갖는 항PD-1 항체의 스크리닝

인간 PD-1-Fc 융합 단백질, 인간 PD-1-His 태그 융합 단백질, 필리핀원숭이 PD-1-His 태그 융합 단백질 또는 마우스 PD-1-His 태그 융합 단백질을 코팅한 플레이트를 이용하여, PD-1에의 결합성에 기초한 파지 셀렉션을 실시했다. 인간 PD-1-Fc 융합 단백질을 이용한 경우, 파지와 인큐베이션하는 동안, 인간 IgG(SIGMA, 형번 I4506)를 첨가함으로써, Fc 반응성 클론을 흡수했다. 인간 PD-1, 필리핀원숭이 PD-1 및 마우스 PD-1에 결합하는 결합 파지가 농축되었다. 필리핀원숭이 PD-1 발현 HEK293T 세포주에서의 셀렉션에 의해, 필리핀원숭이 PD-1에 결합하는 파지가 농축되었다. 셀렉션에 의해서 얻어진 파지로 형질 전환시킨 대장균주 TG1의 클론을 취득하여, 마스터 플레이트를 제작했다.

또한, 인간 PD-1-Fc 융합 단백질을 흡착시킨 플레이트 상의 PD-1에의 결합성에 기초하여, 상기 셀렉션으로부터 얻어진 클론의 페리플라즘 추출물로부터 파지 셀렉션을 실시했다. 또한, 선택하는 기준으로서, 음성 대조 웰(PBS)에서 얻어진 시그널(OD₄₅₀치)에 대하여, 3배 이상의 시그널이 얻어진 것을 양성 클론으로 했다.

실시예 4: PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암을 갖는 항PD-1 항체의 후보 클론의 DNA 시퀀스

실시예 3의 스크리닝에 의해서 취득된 양성 클론의 중쇄 가변 영역 유전자의 DNA 시퀀스를 실시했다. 해석된 DNA 서열은 수퍼클러스터(CDR3이 동일한 길이이고, CDR3의 아미노산 서열이 70% 이상 상동인 일군)와 클러스터(중쇄 CDR3의 아미노산 서열이 동일한 일군)로 분류했다. 924개의 클론이 취득되고, 이들은 146종의 수퍼클러스터 및 194종의 클러스터로 분류되었다.

실시예 5: PD-1 발현 세포에 대한 결합성 평가에 의한 스크리닝

분류된 각각 수퍼클러스터로부터 이하의 조건을 만족하는 항PD-1 모노클로널 항체 클론을 선별하여 단리했다.

(1) CDR 영역에 고빈도로 체세포 돌연변이가 도입되고,

(2) 사용 빈도가 높은 VH의 생식세포계열형 유전자를 가지고, 그리고

(3) 인간 PD-1-Fc 융합 단백질에 대한 결합성 스크리닝에 있어서 높은 시그널을 얻었다.

이들 페리플라즘 추출물에 포함되는 Fab 프래그먼트를 이용하여, 인간 PD-1 발현 CHO-S 세포주, 필리핀원숭이 PD-1 발현 CHO-S 세포주에 대한 결합성을 항마우스 IgG 폴리클로널 항체로 검출함으로써 평가했다. 평가한 117개의 클론(105종의 클러스터) 중, 항PD-1 모노클로널 항체 클론 PD1-1, PD1-2, PD1-3 및 PD1-4를 포함하는 22개의 클론에서 인간 PD-1 발현 CHO-S 세포주에 대한 결합성이 인정되었다.

실시예 6: PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암을 갖는 항PD-1 모노클로널 항체의 아미노산 치환체의 제작

클론 PD1-1 및 PD1-4는, 그 중쇄 가변 영역의 프레임워크 4에 탈아미드화 모티프(Asn-Gly)를 포함한다. 탈아미드화의 리스크를 저감한 제1 아암의 취득을 목적으로 하여, 이 탈아미드화 모티프를 변환한 변이체를 제작했다. 클론 PD1-4의 EU 넘버링 시스템에 의한 119번째의 아스파라긴(Asn)이, 공지된 부위 특이적 변이법에 의해, 글루타민으로 되도록 개변된 클론 PD1-5를 제작하여 단리했다. 동 클론도 인간 PD-1 발현 CHO-S 세포에 대한 결합성은 클론 PD1-4와 동등하였다.

실시예 7: CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 항CD3 모노클로널 항체의 스크리닝

WO2005/118635에 기재된 항CD3 항체 클론 15C3의 VH 및 IGVK1-39/JK1 공통 경쇄를 포함하는 항CD3 항체 클론에 기초하여, 더욱 보다 하전(荷電) 불균일성이 저감된 안정적인 CD3 결합 Fab를 취득하도록 하기의 방법으로 본 발명에 따른 「CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암」을 갖는 항CD3 항체를 취득했다.

도 10에 도시하는 15C3의 VH의 아미노산 서열 중, 밑줄로 나타내는 55번째 글리신을 알라닌으로 변환함으로써, 상기 항CD3 항체 클론과 동등한 인간 CD3 결합성을 가지면서 또한 하전 불균일성이 개선된 항CD3 항체 클론 CD3-1을 취득했다.

또한, 공통 경쇄(IgVκ1-39*01/IGJκ1*01)와의 VH/VL 상호작용을 개선시키는 복수의 CD3 결합 Fab를 얻기 위해서, 클론 CD3-1의 VH에 기초하여, 그 아미노산 잔기가 치환된 클론 CD3-1의 VH 변이체를 포함하는 Fab를 복수 발현하는 파지 디스플레이 라이브러리를 구축했다. 이 파지 라이브러리를 HBP-ALL 세포 또는 재조합 인간 CD3ε-Fc 단백질을 이용하여 스크리닝을 행했다. 재조합 인간 CD3ε-Fc 단백질에 결합하는 파지를 화학적으로 용출시켜, 세균의 재감염에 사용했다. 복수의 살아 남은 세균 콜로니를 적출한 후, 파지를 추출하여, 유세포 분석에 의해서 세포 표면 발현 CD3에의 결합에 관해서 스크리닝했다. CD3 결합을 보인 모든 파지에 관해서, 콜로니 PCR을 행하여 VH를 코드하는 cDNA를 증폭시켜, 그 DNA 서열을 결정했다.

그 결과 취득된, 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 갖는 항CD3 항체 클론 CD3-2는, 클론 CD3-1과 동등한 CD3 결합성 및 하전 균일성을 보였다.

실시예 8: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 조제

PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 항체 부분을 구성하는 경우, 그 항체 각각의 중쇄를 발현하는 발현 벡터는, 실시예 5에서 선택한 항PD-1 모노클로널 항체 클론 PD1-1∼PD1-5 및 PD1-6 각각의 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA를, IgG₁ 중쇄 정상 영역을 코드하는 DNA에 각각 연결하여 제작했다. 한편, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 중쇄를 발현하는 발현 벡터는, 실시예 7에서 선택한 항CD3 모노클로널 항체 클론으로 CD3-2의 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA를, IgG₁ 중쇄 정상 영역을 코드하는 DNA에 연결하여 제작했다. 여기서, 이들 중쇄 정상 영역을 발현하는 유전자에는, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 경우에는, L351D/L368E 변이(DE 변이)를 갖는 Fc 영역을 발현하는 것을 사용하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 경우에는, L351K/T366K 변이(KK 변이)를 갖는 Fc 영역을 발현하는 것을 사용했다. 이들 발현 벡터에는, IGVK1-39/JK1 공통 경쇄도 함께 발현하도록 이것을 코드하는 유전자를 포함하도록 구축되었다. 또한, 이들 중쇄 정상 영역을 발현하는 유전자에는, 각각 Fc 이펙터 활성을 소실시키기 위해서, 중쇄 정상 영역의 235번째 류신이 글리신으로, 236번째 글리신이 아르기닌으로 치환되어 발현하도록 개변되어 있고, 더구나, 번역 후의 프로세싱을 피하기 위해서, 중쇄 정상 영역 C 말단 447번째의 리신이 결실되도록 개변된 것을 사용했다. 이들 발현 벡터를, 함께 Free Style 293F 세포에 유전자 도입하여, 배양 상청 중에 항체를 생산시켰다. 배양 상청을 회수하여 프로테인A 어피니티 크로마토그래피로 처리함으로써, 본 발명에 따른 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체인, 클론 PD1-1(Bi), 클론 PD1-2(Bi), 클론 PD1-3(Bi), 클론 PD1-4(Bi) 및 클론 PD1-5(Bi)을 각각 정제했다. 또한, 클론 PD1-6(Bi)에 관해서도 같은 방법으로 제작되었다. 또한, 이들 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론은, 그 제작에 있어서 사용된 항PD-1 모노클로널 항체 클론 PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5, 그리고 PD1-6에 유래하는, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암을 갖는다는 점에 있어서, 이들 항PD-1 모노클로널 항체 클론에 각각 대응하고 있다.

실시예 9: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 결합성 평가

인간 IgG1-Fc 융합 인간 PD-1 세포외 영역 재조합 단백질 또는 6×His 태그 융합 필리핀원숭이 PD-1 세포외 영역 재조합 단백질을 이용한 Biacore(등록상표) 측정에 의해, 실시예 8에 있어서 취득한 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 제1 아암의, 각 PD-1 재조합 단백질에의 결합 친화성을 평가했다. 또한, 상기 재조합 단백질의 고정화에는 Series S Sensor Chip CM5 센서 칩(GE헬스케어, 형번 29-1049-88)을 사용했다. 마찬가지로, 인간 IgG1-Fc 융합 CD3δ/CD3ε 세포외 영역 재조합 단백질을 이용한 Biacore(등록상표) 측정에 의해, 동 항체의 제2 아암의 CD3 결합 친화성을 평가했다. 각 클론의 제1 아암의 PD-1에의 결합 친화성(Kd치) 및 제2 아암의 CD3δ/CD3ε에의 결합 친화성을 도 11에 도시한다.

실시예 10: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 결합성 확인

실시예 8에서 취득한 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체가 PD-1 및 CD3에 동시에 각각 특이적으로 결합하는 것을 확인했다.

우선, 인간 CD3을 발현하고 있는 인간 PD-1 결손 Jurkat 세포주(인간 T세포주)에 대하여, 클론 PD1-1(Bi)∼PD1-6(Bi)을 각각 첨가하여, 빙상에서 15분간 인큐베이트했다. 세포를 세정한 후, 3배량의 비오틴 표지한 가용성 PD-1 재조합 단백질(R&D systems, 형번 1086-PD-050)을 첨가하여, 빙상에서 15분간 인큐베이트했다. 세포를 세정한 후, Alexa Fluor 488 표지 스트렙트아비딘(BioLegend, 형번 405235) 1.25 μg/mL를 100 μL 첨가하여 빙상에서 15분간 인큐베이트했다. 세포를 세정한 후, 유세포 분석으로 가용성 PD-1 재조합 단백질의 결합량을 평가했다. 상기 어세이의 결과를 도 12에 도시한다.

어느 클론이나 PD-1 및 CD3에 동시에 결합했다. 또한, 이 실험계에서의 비특이적 결합은 검출되지 않았다.

실시예 11: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 제1 아암의 결합 특성 평가

실시예 8에서 취득한 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 제1 아암의 PD-1/PD-L1 결합에의 영향을 평가하기 위해서, 동 이중 특이성 모노클로널 항체 클론과 가용성 PD-L1 재조합 단백질의 PD-1에의 결합에 관한 경합 결합 어세이를 행했다. 우선, 인간 PD-1 발현 CHO-S 세포주에 대하여 클론 PD1-1(Bi)∼PD1-6(Bi)을 각각 첨가하여, 빙상에서 30분간 인큐베이트했다. 또한, 1/20량의 비오틴 표지한 가용성 PD-L1 재조합 단백질(R&D systems, 형번 156-B7-100)을 첨가하여, 빙상에서 30분간 인큐베이트했다. 세포를 세정한 후, PE 표지 스트렙트아비딘(BD Pharmingen, 형번 554061)을 첨가하여 빙상에서 30분간 인큐베이트했다. 세포를 세정한 후, 유세포 분석으로 가용성 PD-L1 재조합 단백질의 결합량을 평가했다. 그 결과를 도 13에 도시한다.

클론 PD1-1(Bi)∼PD1-5(Bi)은, 가용성 PD-L1 재조합 단백질에 대하여 20배량 존재하고 있음에도 불구하고, PD-1에 대한 가용성 PD-L1 재조합 단백질의 결합을 허용했다. 한편, PD1-6(Bi)은, 동 조건으로 PD-1에 대한 가용성 PD-L1 재조합 단백질의 결합을 완전히 저해했다.

실시예 12: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 각 클론의 PD-1에의 결합에 대한 PD1-5(Bi)의 교차 경합성의 평가

실시예 8에서 취득한 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 각 클론 PD1-1(Bi)∼PD1-5(Bi)의 PD-1에의 결합에 대한 PD1-5(Bi)의 교차 경합성을 평가하기 위해서, 경합 결합 어세이를 행했다.

우선, 인간 PD-1 발현 CHO-S 세포주에 대하여 클론 PD1-5(Bi)을 첨가하여, 빙상에서 20분간 인큐베이트했다. 또한, 첨가된 클론 PD1-5(Bi)에 대하여 1/100량의 비오틴 표지한 클론 PD1-1(Bi)∼PD1-5(Bi)을 각각 첨가하여, 빙상에서 20분간 인큐베이트했다. 세포를 세정한 후, PE 표지 스트렙트아비딘(BD Pharmingen, 형번 554061)을 첨가하여 빙상에서 20분간 인큐베이트했다. 세포를 세정한 후, 유세포 분석으로 비오틴 표지한 클론 PD1-1(Bi)∼PD1-5(Bi)의 결합량을 평가했다. 그 결과를 도 14에 도시한다.

PD1-5(Bi)는, 클론 PD1-1(Bi)∼PD1-4(Bi)의 PD-1에의 결합을 저해하여, 동 클론이 이들의 PD-1에의 결합에 대하여 교차 경합하는 것이 드러났다.

실시예 13: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 B세포 림프종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용

건강한 보통사람 말초혈 유래 pan-T세포(STEMCELL, 형번 ST-70024)(인간 T세포)를 이용하여, B세포 림프종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용을 평가했다. 둥근바닥 96웰 플레이트에 인간 T세포와, Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher, 형번 V22887)으로 표지한 B세포 림프종 세포주 EB-1 또는 인간 PD-1 강제 발현 SU-DHL-4를 파종하고, PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체인 클론 PD1-5(Bi)을 첨가하여, 48시간 공배양했다. 각 웰로부터 세포를 회수하고, Cell Viability Solution으로 염색하여, 유세포 분석기로 DiD 양성 생세포의 수를 카운트했다. 항체 비첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 수를 100%로 하여, PD1-5(Bi) 첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 감소율을 세포 증식 억제율로서 산출했다. 그 결과를 도 15의 (A) 및 (B) 각각에 도시한다. PD1-5(Bi) 첨가에 의해 어느 B세포 림프종 세포주도 증식 억제되었다.

실시예 14: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 다발성 골수종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용

건강한 보통사람 말초혈 유래 pan-T세포(STEMCELL, 형번 ST-70024)(인간 T세포)를 이용하여, 다발성 골수종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용을 평가했다. 둥근바닥 96웰 플레이트에 인간 T세포와, Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher, 형번 V22887)으로 표지한 다발성 골수종 세포주 RPMI8226을 파종하고, PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체인 클론 PD1-5(Bi)을 첨가하여, 48시간 공배양했다. 각 웰로부터 세포를 회수하고, Cell Viability Solution으로 염색하여, 유세포 분석기로 DiD 양성 생세포의 수를 카운트했다. 항체 비첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 수를 100%로 하여, PD1-5(Bi) 첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 감소율을 세포 증식 억제율로서 산출했다. 그 결과를 도 16에 도시한다. PD1-5(Bi) 첨가에 의해 RPMI8226이 증식 억제되었다.

실시예 15: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 성인 T세포성 림프종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용

건강한 보통사람 말초혈 유래 pan-T세포(STEMCELL, 형번 ST-70024)(인간 T세포)를 이용하여, 성인 T세포성 림프종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용을 평가했다. 둥근바닥 96웰 플레이트에 인간 T세포와, Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher, 형번 V22887)으로 표지한 성인 T세포성 림프종 세포주 ILT-Mat를 파종하고, PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체인 클론 PD1-5(Bi)을 첨가하여, 48시간 공배양했다. 각 웰로부터 세포를 회수하고, Cell Viability Solution으로 염색하여, 유세포 분석기로 DiD 양성 생세포의 수를 카운트했다. 항체 비첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 수를 100%로 하여, PD1-5(Bi) 첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 감소율을 세포 증식 억제율로서 산출했다. 그 결과를 도 17에 도시한다. PD1-5(Bi) 첨가에 의해 ILT-Mat가 증식 억제되었다.

실시예 16: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 급성 T세포성 백혈병 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용

건강한 보통사람 말초혈 유래 pan-T세포(STEMCELL, 형번 ST-70024)(인간 T세포)를 이용하여, 급성 T세포성 백혈병 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용을 평가했다. 둥근바닥 96웰 플레이트에 인간 T세포와, Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher, 형번 V22887)으로 표지한 인간 PD-1 강제 발현 Jurkat(급성 T세포성 백혈병 세포주)를 파종하고, PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체인 클론 PD1-5(Bi)을 첨가하여, 48시간 공배양했다. 각 웰로부터 세포를 회수하고, Cell Viability Solution으로 염색하여, 유세포 분석기로 DiD 양성 생세포의 수를 카운트했다. 항체 비첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 수를 100%로 하여, PD1-5(Bi) 첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 감소율을 세포 증식 억제율로서 산출했다. 그 결과를 도 18에 도시한다. PD1-5(Bi) 첨가에 의해 인간 PD-1 강제 발현 Jurkat가 증식 억제되었다.

실시예 17: 인간 FcRn 결합 부위의 아미노산에 변이를 도입한 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 제작과 FcRn 결합성 평가

PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi)의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 있어서의 252번째의 메티오닌을, 각각 글루타민산, 프롤린, 아르기닌 및 아스파라긴산으로 치환한 항체 클론 Mut1, Mut2, Mut3 및 Mut4를, 각각 아미노산 치환에 관한 공지된 기술에 준한 방법으로 제작했다. 또한, 동 클론 PD1-5(Bi)의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 있어서의 434번째의 아스파라긴을 류신으로 치환한 항체 클론 Mut5, 438번째의 글루타민을 글루타민산으로 치환한 항체 클론 Mut6을 같은 방법으로 각각 제작했다.

이어서, 이들 항체 클론 각각에 관해서, 인간 FcRn 또는 마우스 FcRn에 대한 결합 친화성을 표면 플라즈몬 공명을 이용하여 평가했다. Biacore T200(GE헬스케어)에 Biotin CAPture Kit(GE헬스케어, 형번 28-9202-34)의 Series S Sensor Chip CAP를 셋트하고, Human FcRn-human B2M(Immunitrack, 형번 ITF01) 및 Murine FcRn-murine B2M(Immunitrack, 형번 ITF07)을 각각 고정화했다. pH 6.0의 조건으로 PD1-5(Bi) 및 Mut1∼Mut6의 결합성을 각각 평가했다. 인간 FcRn에의 결합성 실험 결과를 도 19 및 20에, 마우스 FcRn에의 결합성 실험 결과를 도 21에 각각 도시한다.

Mut1∼Mut6의 인간 FcRn에의 각 친화성은, PD1-5(Bi)(해리상수(K_D치): 2.75×10^-8 M)와 비교하여 저하하고, 특히 Mut4와 Mut2가 현저히 저하했다. Mut1 및 Mut4의 마우스 FcRn에의 각 친화성은 PD1-5(Bi)(K_D치: 1.61×10^-8 M)보다 저하하고(Mut1의 K_D치: 4.67×10^-8 M), 특히 Mut4가 현저히 저하했다.

실시예 18: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 Mut4의 혈중 동태

이어서, 인간 CD3ε/인간 PD-1 녹인 C57BL/6 마우스를 이용하여 클론 Mut4의 in vivo 혈중 동태를 평가했다. 또한, 인간 CD3ε/인간 PD-1 녹인 C57BL/6 마우스는, Genesis. 2009 Jun; 47(6):414-22에 기재된 방법에 준하여 제작된 인간 CD3ε 녹인 마우스 및 인간 PD-1 녹인 마우스를 공지된 방법에 의해 교배시킴으로써 제작했다.

동 클론을 상기 C57BL/6 마우스의 꼬리정맥 내에 투여한 후 30분, 그리고 2, 4, 8, 24 및 288시간의 시점에 있어서, 마우스의 꼬리정맥을 가위로 일부 상처를 입혀, 약 40 μL의 혈액을 헤파린 처리된 튜브에 채취했다. 채혈액을 원심 분리하여 혈장을 조제하고, 전기 화학 발광(ECL)법을 이용하여 동 클론의 혈장 중 농도를 측정했다. 혈장 중 농도의 추이로부터 그 혈중 반감기를 산출했다.

측정 결과, 동 클론의 혈중 반감기는 8.0시간으로, 원래의 PD1-5(Bi)의 혈중 반감기 약 160시간보다도 단축되었다.

실시예 19: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 T세포 급성 림프성 백혈병 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용

건강한 보통사람 말초혈 유래 단핵 세포(HemaCare, 형번 PB009C-1)(인간 PBMC)를 이용하여 T세포 급성 림프성 백혈병 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용을 평가했다. 둥근바닥 96웰 플레이트에 인간 PBMC와, Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher, 형번 V22887)으로 표지한 T세포 급성 림프성 백혈병 세포주 HPB-ALL을 파종하고, PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체인 클론 PD1-5(Bi)을 첨가하여, 72시간 공배양했다. 각 웰로부터 세포를 회수하고, Cell Viability Solution으로 염색하여, 유세포 분석기로 DiD 양성 생세포의 수를 카운트했다. 항체 비첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 수를 100%로 하여, PD1-5(Bi) 첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 감소율을 세포 증식 억제율로서 산출했다. 그 결과를 도 22에 도시한다. PD1-5(Bi) 첨가에 의해 HPB-ALL이 증식 억제되었다.

실시예 20: PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 피부 T세포 림프종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용

건강한 보통사람 말초혈 유래 단핵 세포(Precision for Medicine, 형번 93000-10M)(인간 PBMC)을 이용하여 피부 T세포 림프종 세포주에 대한 세포 증식 억제 작용을 평가했다. 둥근바닥 96웰 플레이트에 인간 PBMC와, Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher, 형번 V22887)으로 표지한 피부 T세포 림프종(균상식육증) 세포주 MJ를 파종하고, PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체인 클론 PD-15(Bi)를 첨가하여, 72시간 공배양했다. 각 웰로부터 세포를 회수하고, SYTOX Green Dead Cell Stain(Thermo Fisher Scientific, 형번 S34860)으로 염색하여, 유세포 분석기로 DiD 양성 생세포의 수를 카운트했다. 항체 비첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 수를 100%로 하여, PD1-5(Bi) 첨가 샘플의 DiD 양성 생세포의 감소율을 세포 증식 억제율로서 산출했다. PD1-5(Bi) 첨가에 의해 피부 T세포 림프종 세포주 MJ가 증식 억제되었다.

실시예 21: 표적 세포 상의 PD-1 발현량과 PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체의 세포상해 활성의 평가

인간 PD-1 강제 발현 SU-DHL-4, EB-1 및 RPMI8226의 각 표적 세포에 대한, PD-1/CD3 이중 특이성 모노클로널 항체 클론 PD1-5(Bi)의 세포상해 활성을, 실시예 13 및 14에 기재한 방법에 준하여 각각 측정하여, 그 EC50(ng/mL)을 산출했다. 한편, 이들 표적 세포의 표면에 발현하는 1 세포당 PD-1 분자수를 유세포 분석기로 측정했다. 각 표적 세포의 PD-1 분자수와 세포상해 활성의 EC50의 관계를 산포도로서 도 23에 도시한다. 또한, 도면 중의 파선은 비선형 회귀 분석(양 대수 모델: Y=10^(slope×logX+Yintercept), Y: EC50(ng/mL), X: PD-1 분자수, slope: 직선의 기울기, Yintercept: Y 절편)에 기초하여 산출된 것이고, 도면 중의 수식은 상기 양 대수 모델의 수식에 대응한다. 또한, R²는 결정계수를 나타낸다.

표적 세포에 있어서의 PD-1 발현량의 증가에 따라서, PD1-5(Bi) 존재 하에 있어서의 인간 말초혈 T세포의 표적 세포에 대한 세포상해 활성이 증강되었음을 확인할 수 있었다.

SEQUENCE LISTING <110> ONO PHARMACEUTICAL CO., LTD. <120> Treatment of hematological cancer with PD-1/CD3 bispecific protein <130> P20-109WO <150> JP 2019-126503 <151> 2019-07-05 <150> JP 2019-139752 <151> 2019-07-30 <160> 53 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Gln Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Leu Asn Thr Asn Thr Glu Asn Pro Thr Phe Ala Gln Gly Phe 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Met Val Val Pro Thr Thr Ile Trp Asn Tyr Tyr His 100 105 110 Phe Met Asp Val Trp Gly Asn Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 2 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys 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sapiens <400> 19 Trp Leu Asn Thr Asn Thr Glu Asn Pro Thr Phe Ala Gln Gly Phe Thr 1 5 10 15 Gly <210> 20 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gly Asp Met Val Val Pro Thr Thr Ile Trp Asn Tyr Tyr His Phe Met 1 5 10 15 Asp Val <210> 21 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Cys Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 22 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 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Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 25 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 29 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 30 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(381) <400> 30 cag gtg cag ctg gtg caa tct ggg tct gag ttg aag cag cct ggg gcc 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Gln Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg aag gtt tcc tgt aag gct tct gga tac acc ttc act cac tat 96 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 ggt ttg cat tgg gtg cga cag gcc cct gga caa ggg ctt gag tgg atg 144 Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga tgg ctc aac acc aac act gag aac cca acg ttt gcc cag ggc ttc 192 Gly Trp Leu Asn Thr Asn Thr Glu Asn Pro Thr Phe Ala Gln Gly Phe 50 55 60 aca gga cgg ttt gtc ttc tcc ttg gac acc tct gtc acc acg gca tat 240 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag atc agc agc ctg aag gct gag gac act gcc gta tat tac tgt 288 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga ggg gat atg gta gta ccg act act ata tgg aac tac tac cac 336 Ala Arg Gly Asp Met Val Val Pro Thr Thr Ile Trp Asn Tyr Tyr His 100 105 110 ttc atg gac gtc tgg ggc aac ggc acc ctg gtc acc gtc tcg agt 381 Phe Met Asp Val Trp Gly Asn Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 31 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(381) <400> 31 cag gtg cag ctg gtg caa tct ggg tct gag ttg aag cag cct ggg gtc 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Gln Pro Gly Val 1 5 10 15 tca gtg aag gtt tcc tgc aag gct tct gga tac acc ttc act cac tat 96 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 ggt tta cat tgg gtg cga cag gcc cct gga caa ggg ctt gag tgg atg 144 Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga tgg atc aac acc aac act ggg aac cca acg tat gcc cag ggc ttc 192 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe 50 55 60 aca gga cgg ttt gtc ttc tcc ttg gac acc tct gtc agc acg gca tat 240 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag atc agc agc cta aag gct gaa gac act gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga ggg gat tta gta gta cca act act ata tgg aac tac tac cac 336 Ala Arg Gly Asp Leu Val Val Pro Thr Thr Ile Trp Asn Tyr Tyr His 100 105 110 tac atg gag gtc tgg ggc aaa ggc acc ctg gtc acc gtc tcg agt 381 Tyr Met Glu Val Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 32 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(381) <400> 32 cag gtg cag ctg gtg caa tct ggg tct gag ttg aag aag cct ggg gcc 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg atg gtt tcc tgc aag gct tct gga tac acc ttc act cac tat 96 Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 gct ttg cat tgg gtg cgc cag gcc cct gga caa ggg ctt gag tgg atg 144 Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga tgg ctc aat acc aac act gag aat cca acg tat gcc cag ggc ttc 192 Gly Trp Leu Asn Thr Asn Thr Glu Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe 50 55 60 aca gga cgg ttt gtc ttc tcc ttg gac acc tct gtc acc acg gca tat 240 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag atc aac agc cta aag gct gag gac act gcc gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Ile Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga ggg gat atg gta gta cca act act ata tgg aac tac tac tac 336 Ala Arg Gly Asp Met Val Val Pro Thr Thr Ile Trp Asn Tyr Tyr Tyr 100 105 110 tac atg gac gtc tgg ggc aaa ggg acc acg gtc acc gtc tcg agt 381 Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 33 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(381) <400> 33 cag gtg cag ctg gtg caa tct ggg tct gag ttg aag cag cct ggg gcc 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Gln Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg aag gtt tcc tgt aag gct tct gga tac acc ttc act cac tat 96 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 gct ttg cat tgg ttg cga cag gcc cct gga caa ggg ctt gag tgg atg 144 Ala Leu His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga tgg ctc aac acc aac act gag aac cca acg ttt gcc cag ggc ttc 192 Gly Trp Leu Asn Thr Asn Thr Glu Asn Pro Thr Phe Ala Gln Gly Phe 50 55 60 aca gga cgt ttt gtc ttc tct ttg gac acc tct gtc acc acg gca tat 240 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag atc agc agc ctg aag gct gag gac act gcc gta tat tac tgt 288 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga ggg gat atg gta gta ccg act act ata tgg aac tac tac cac 336 Ala Arg Gly Asp Met Val Val Pro Thr Thr Ile Trp Asn Tyr Tyr His 100 105 110 ttc atg gac gtc tgg ggc aac ggg acc acg gtc acc gtc tcg agt 381 Phe Met Asp Val Trp Gly Asn Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 34 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(381) <400> 34 cag gtg cag ctg gtg caa tct ggg tct gag ttg aag cag cct ggg gcc 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Gln Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg aag gtt tcc tgt aag gct tct gga tac acc ttc act cac tat 96 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 gct ttg cat tgg ttg cga cag gcc cct gga caa ggg ctt gag tgg atg 144 Ala Leu His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 gga tgg ctc aac acc aac act gag aac cca acg ttt gcc cag ggc ttc 192 Gly Trp Leu Asn Thr Asn Thr Glu Asn Pro Thr Phe Ala Gln Gly Phe 50 55 60 aca gga cgt ttt gtc ttc tct ttg gac acc tct gtc acc acg gca tat 240 Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ctg cag atc agc agc ctg aag gct gag gac act gcc gta tat tac tgt 288 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga ggg gat atg gta gta ccg act act ata tgg aac tac tac cac 336 Ala Arg Gly Asp Met Val Val Pro Thr Thr Ile Trp Asn Tyr Tyr His 100 105 110 ttc atg gac gtc tgg ggc cag ggg acc acg gtc acc gtc tcg agt 381 Phe Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 35 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(321) <400> 35 gac atc cag atg acc cag tct cca tcc tcc ctg tct gca tct gta gga 48 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 gac aga gtc acc atc act tgc cgg gca agt cag agc att agc agc tac 96 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 tta aat tgg tat cag cag aaa cca ggg aaa gcc cct aag ctc ctg atc 144 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 tat gct gca tcc agt ttg caa agt ggg gtc cca tca agg ttc agt ggc 192 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 agt gga tct ggg aca gat ttc act ctc acc atc agc agt ctg caa cct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 gaa gat ttt gca act tac tac tgt caa cag agt tac agt acc cct cca 288 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa 321 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 36 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gln Ile Trp Tyr Asn Ala Arg Lys Gln Glu Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 37 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Gln Ile Trp Tyr Asn Ala Arg Lys Gln Glu Tyr Ser Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 <210> 40 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(354) <400> 40 cag gtg cag ctg gtg cag tct ggc ggc gga gtg gtg cag ccc ggc aga 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 agc ctg aga ctg agc tgc gtg gcc agc ggc ttc acc ttc agc agc tac 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 ggc atg cac tgg gtc cgc cag gcc cct ggc aag gga ctg gaa tgg gtg 144 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 gcc cag atc tgg tac aac gcc cgg aag cag gaa tac tct gac agc gtg 192 Ala Gln Ile Trp Tyr Asn Ala Arg Lys Gln Glu Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cgg ttc acc atc agc cgg gac aac agc aag aac acc ctg tac 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg cag atg aac agc ctc cgg gcc gag gac acc gcc gtg tac tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 acc cgg ggc acc ggc tac aat tgg ttc gac cct tgg ggc cag ggc acc 336 Thr Arg Gly Thr Gly Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 ctg gtc acc gtc tcc agt 354 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 41 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 42 <211> 329 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Gly Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Glu Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 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Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Gly Arg Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Pro Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Asp Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 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Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 49 <211> 329 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser 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Claims

PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 단백질을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제.
제1항에 있어서, 상기 이중 특이성 단백질이 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편인 제제.
제2항에 있어서, 상기 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,
(A) (a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,
(B) (a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,
(C) (a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,
(D) (a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH, 그리고
(E) (a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH에서 선택되는 어느 하나의 VH, 그리고
(F) (a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1,
(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및
(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL을 포함하고,
상기 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편의 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,
(A) (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH, 그리고
(B) (a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1,
(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및
(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL을 포함하고,
여기서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의, VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3의 어느 하나 또는 복수의 VH-CDR에 있어서, 각각 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산으로 치환되어 있어도 좋고, 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의, VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3의 어느 하나 또는 복수의 VH-CDR에 있어서, 각각 그 임의의 1∼5개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산으로 치환되어 있어도 좋은 제제.
제2항에 있어서, 상기 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편의 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이,
(A) (a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,
(B) (a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,
(C) (a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH,
(D) (a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH, 그리고
(E) (a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH에서 선택되는 어느 하나의 VH, 그리고
(F) (a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1,
(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및
(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL을 포함하고,
상기 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편의 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이,
(A) (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 VH, 그리고
(B) (a) 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR1,
(b) 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR2 및
(c) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL-CDR3을 갖는 VL을 포함하는 제제.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,
(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 제제.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,
(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 제제.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,
(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 제제.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,
(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 제제.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 가지고,
(ii) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가,
(a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR1,
(b) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR2 및
(c) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH-CDR3을 갖는 제제.
제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH의 FR1, FR2 및 FR3 영역이, 생식세포계열형 V 유전자 IGHV7-4-1의 체세포 돌연변이를 갖고 있어도 좋은 상기 유전자에 의해 코드되는 아미노산 서열에 각각 대응하고, FR4 영역이 생식세포계열형 J 유전자 JH6c의 체세포 돌연변이를 갖고 있어도 좋은 상기 유전자에 의해 코드되는 아미노산 서열(단, VH-CDR3 영역에 포함되는 아미노산 서열을 제외한다.)을 포함하는 제제.
제2항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열 또는 상기 VH의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항 또는 제4항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항, 제4항 또는 제5항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항, 제4항 또는 제6항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항, 제4항 또는 제7항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항, 제4항 또는 제8항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항, 제4항 또는 제9항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암에 있어서의 VH가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 제제.
제2항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 각각 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 제제.
PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서,
(A) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 가지고, 그리고
(B) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는 상기 제제.
PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서, 상기 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암이 (1) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 PD-1에의 결합 혹은 (2) 상기 VH 및 VL로 이루어진 PD-1에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역의 PD-1에의 결합에 교차 경합하는 상기 제제.
PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서, 상기 PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암에 의한 PD-1에의 결합이, (1) 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 혹은 (2) 상기 VH 및 VL로 이루어진 PD-1에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역에 의해서 교차 경합되는 상기 제제.
제20항 또는 제21항에 있어서, 또한, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암이, (1) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 CD3에의 결합 또는 (2) 상기 VH 및 VL로 이루어진 CD3에 특이적으로 결합하는 모노클로널 항체의 가변 영역의 CD3에의 결합에 교차 경합하는 제제.
제2항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 특이성 항체가 IgG 항체인 제제.
제24항에 있어서, 상기 IgG 항체가 IgG₁ 항체 또는 IgG₄ 항체인 제제.
제24항에 있어서, 상기 IgG 항체가 IgG₁ 항체인 제제.
제26항에 있어서, 상기 IgG₁ 항체의 Fc 수용체에의 결합이 소실 혹은 감약된 제제.
제27항에 있어서, 상기 IgG₁ 항체의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 있어서의 235번째의 류신이 각각 글리신으로 치환되고, 및/또는 236번째의 글리신이 각각 아르기닌으로 치환된 제제.
제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환된 제제.
제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 351번째의 류신이 아스파라긴산으로 치환되며, 또한 368번째의 류신이 글루타민산으로 치환되고, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄에 있어서의 정상 영역 중의 351번째의 류신이 리신으로 치환되며, 또한 366번째의 트레오닌이 리신으로 치환된 제제.
제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG₁ 항체의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 447번째의 리신이 각각 결여되어 있는 제제.
제24항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG 항체의 FcRn 수용체에의 결합이 소실 혹은 감약된 제제.
제26항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG₁ 항체에 있어서의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 (1) EU 넘버링 시스템에 있어서의 252번째의 메티오닌이 글루타민산, 프롤린, 아르기닌 혹은 아스파라긴산으로, (2) EU 넘버링 시스템에 있어서의 434번째의 아스파라긴이 류신으로, 및/또는 (3) EU 넘버링 시스템에 있어서의 438번째의 글루타민이 글루타민산으로 각각 치환된 제제.
제26항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG₁ 항체에 있어서의 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 있어서의 252번째의 메티오닌이 각각 아스파라긴산으로 치환된 제제.
제25항에 있어서, 상기 IgG 항체가 IgG₄ 항체이고, 그 2개의 중쇄 정상 영역 중의 EU 넘버링 시스템에 의한 228번째의 세린이 각각 프롤린으로 치환된 제제.
제2항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 23, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 46 및 서열 번호 47에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하는 제제.
제2항 내지 제34항 및 제36항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 24, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52 및 서열 번호 53에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하는 제제.
제2항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VL을 갖는 경쇄 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 제제.
PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암을 갖는 이중 특이성 항체 또는 그 항체 단편을 유효 성분으로서 포함하는, 혈액암의 예방, 증상 진전 억제, 재발 억제 및/또는 치료 제제로서,
(A) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 23, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 46 및 서열 번호 47에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하고,
(B) PD-1에 특이적으로 결합하는 제1 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하고,
(C) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VH를 갖는 중쇄가 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH 그리고 서열 번호 24, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52 및 서열 번호 53에서 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 정상 영역을 포함하고, 그리고
(D) CD3에 특이적으로 결합하는 제2 아암의 VL을 갖는 경쇄가 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 정상 영역을 포함하는 상기 제제.
제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈액암이 다발성 골수종, 악성 림프종, 백혈병, 중추신경계 원발 악성 림프종 및 골수증식 증후군에서 선택되는 하나 이상의 암인 제제.
제40항에 있어서, 상기 혈액암이 악성 림프종이고, 악성 림프종이 비호지킨 림프종 또는 호지킨 림프종인 제제.
제41항에 있어서, 악성 림프종이 비호지킨 림프종이고, 비호지킨 림프종이 B세포성 비호지킨 림프종 또는 T/NK세포성 비호지킨 림프종인 제제.
제42항에 있어서, 비호지킨 림프종이 B세포성 비호지킨 림프종이고, B세포성 비호지킨 림프종이 전구 B세포 림프아구성 림프종, 전구 B세포 급성 림프구아성 백혈병, 만성 B림프성 백혈병, B세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 절성 변연대 B세포성 림프종, 절외성 변연대 B세포성 림프종, 비장 원발 변연대 B세포성 림프종, 유모세포 백혈병, 유모세포 백혈병·변종형, 여포성 림프종, 소아형 여포성 림프종, 확산성 대세포형 B세포성 림프종, 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특정형, 비장 확산성 적비수 소형 B세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 원발성 종격 대세포형 B세포성 림프종, 원발성 삼출성 림프종, 버킷 림프종, 맨틀세포 림프종, 단클론성 B세포 림프구증가증, 비장 B세포 림프종/백혈병·분류불능형, 의의 불명의 단클론성 감마글로불린혈증·IgM형, μ중쇄병, λ중쇄병, α중쇄병, 형질세포골수종, 골고립성 형질세포종, 골외성 형질세포종, 단클론성 면역글로불린 침착병, IRF4 재구성을 동반하는 대세포형 B세포 림프종, 원발성 피부 여포 중심 림프종, T세포/조직구 풍부형 대세포형 B세포 림프종, 원발성 중추신경계 확산성 대세포형 B세포 림프종, 원발성 피부 확산성 대세포형 B세포 림프종·하지형, EBV양성 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특정형, EBV양성 점막 피부 궤양, 만성 염증 관련 확산성 대세포형 B세포 림프종, 림프종모양 육아종증, 혈관내 대세포형 B세포 림프종, ALK양성 대세포형 B세포 림프종, 형질아구성 림프종, 원발성 체강액 림프종, HHV8양성 확산성 대세포형 B세포 림프종·비특이형, 11q 이상을 동반하는 버킷 유사 림프종, MYC 및 BCL2와 BCL6 양쪽이나 한쪽의 재구성을 동반하는 고악성도 B세포 림프종, 고악성도 B세포 림프종·비특이형 또는 확산성 대세포형 B세포 림프종과 고전적 호지킨 림프종의 중간적 특징을 동반하는 B세포 림프종·분류불능형인 제제.
제42항에 있어서, 비호지킨 림프종이 T/NK세포성 비호지킨 림프종이고, T/NK세포성 비호지킨 림프종이 전구 T세포 림프아구성 림프종, 만성 T림프구성 백혈병, T세포 급성 림프성 백혈병, T세포형 대과립 림프구성 백혈병, 대과립 NK세포성 백혈병, 급속진행성 NK세포 백혈병, 말초성 T세포 림프종, 말초성 T세포 림프종·비특정형, 분류 불능의 말초성 T세포 림프종, 혈관면역아구성 T세포성 림프종, 미분화 대세포 (CD30양성) 림프종, 혈관중심성 림프종, 장관 T세포성 림프종, 장증형 T세포 림프종, 간비장형 γ-δ T세포 림프종, 피하 지방 조직염 유사 T세포 림프종, 균상식육증, 세자리 증후군, 호지킨 유사/호지킨 관련 미분화 대세포 림프종, 절외성 NK/T세포 림프종, 성인 T세포성 림프종, T세포 전림프구성 백혈병, 만성 NK세포 림프증식 이상증, 소아 전신성 EBV양성 T세포 림프종, 종두모양 수포증 유사 림프증식 이상증, 절외성 NK/T세포 림프종·비형(鼻型), 장증 관련 T세포 림프종, 단형성 상피향성 장관 T세포 림프종, 위장관 완서진행성 T세포 림프증식 이상증, 간비장 T세포 림프종, 원발성 피부 CD30양성 T세포 림프증식 이상증, 림프종모양 구진증, 원발성 피부 미분화 대세포형 림프종, 원발성 피부 γδ T세포 림프종, 원발성 피부 CD8양성 급속진행성 표피향성 세포상해성 T세포 림프종, 원발성 피부 선단형 CD8양성 T세포 림프종, 원발성 피부 CD4양성 소형/중형 T세포 림프증식성증, 여포 T세포 림프종, 여포 헬퍼 T세포 형질을 동반하는 절성 말초성 T세포 림프종, 미분화 대세포 림프종·ALK양성형, 미분화 대세포 림프종·ALK음성형 또는 유방 임플란트 관련 미분화 대세포 림프종인 제제.
제41항에 있어서, 악성 림프종이 호지킨 림프종이고, 호지킨 림프종이 고전적 호지킨 림프종 또는 결절성 림프구 우위형 호지킨 림프종인 제제.
제40항에 있어서, 상기 혈액암이 백혈병이고, 백혈병이 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 골수이형성 증후군 또는 만성 골수성 백혈병인 제제.
제42항에 있어서, 비호지킨 림프종이 T/NK세포성 비호지킨 림프종이고, T/NK세포성 비호지킨 림프종이 말초성 T세포 림프종 또는 성인 T세포성 림프종인 제제.
제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 또한 다른 항암약과 병용되는 제제.
제48항에 있어서, 상기 다른 항암약이 알킬화약, 백금 제제, 대사길항제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 저해약, 뉴클레오티드 아날로그, 토포이소머라아제 저해약, 미소관 중합 저해약, 미소관 해중합 저해약, 항종양성 항생물질, 사이토카인 제제, 분자 표적약 및 암 면역 치료약에서 선택되는 하나 이상의 약제인 제제.