TW202327595A - 用於治療癌症之氮雜內醯胺化合物的組合 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種藉由向有需要之個體投與式(I)化合物與PD-1軸結合拮抗劑之組合來治療癌症的方法。

Description

用於治療癌症之氮雜內醯胺化合物的組合
本發明係關於適用於治療癌症之組合療法。某些實施例係關於一種組合療法，其包含HPK1抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽，或包含該等化合物或鹽的醫藥組合物，與PD-1軸結合拮抗劑之組合。本發明亦關於相關治療方法、醫藥組合物及醫藥用途。該等方法及組合物適用於其中療法自身適用於偵測、治療及/或預防個體之疾病、病症或其他病狀的任何適應症。
造血祖細胞激酶1 (Hematopoietic progenitor kinase 1，HPK1)亦稱為有絲***誘致劑活化之蛋白質激酶激酶激酶激酶1 (mitogen activated protein kinase kinase kinase kinase 1，MAP4K1)，為經由JNK及ERK信號傳導路徑操作之哺乳動物Ste20樣絲胺酸/蘇胺酸激酶家族成員。HPK1主要表現於造血器官及細胞(例如T細胞、B細胞及樹突狀細胞)中，表明HPK1可能參與調節造血譜系(包括淋巴球)中之信號傳導。(Shui等人, 「Hematopoietic progenitor kinase 1 negatively regulates T cell receptor signaling and T cell-mediated immune responses」, Nature Immunology 2006, 8, 84-91)。
T細胞識別腫瘤相關抗原(包括新抗原及睪丸癌抗原)之能力受HPK1限制(Sawasdikosol等人, 「A perspective on HPK1 as a novel immuno-oncology drug target」, Elife 2020, 9; Di Bartolo等人, 「A novel pathway down-modulating T cell activation involves HPK-1-dependent recruitment of 14-3-3 proteins on SLP-76」, J. Exp. Med. 2007, 204(3) : 681-91; Shui等人, 「Hematopoietic progenitor kinase 1 negatively regulates T cell receptor signaling and T cell-mediated immune responses」, Nat. Immunol. 2007, 8(1):84-91)。當T細胞受體(TCR)與新抗原接合時，TCR相關激酶Lck起始涉及SLP76之信號傳導級聯，最終導致T細胞增殖、細胞介素分泌及/或抗腫瘤細胞毒性。然而，Lck亦使HPK1磷酸化且活化，進而使SLP76磷酸化且靶向SLP76降解(Liou等人, 「HPK1 is activated by lymphocyte antigen receptors and negatively regulates AP-1」, Immunity, 2000, 12(4) : 399-408; Ling等人, 「Involvement of hematopoietic progenitor kinase 1 in T cell receptor signaling」, J. Biol. Chem., 2001, 276(22) : 18908-14; Sauer等人, 「Hematopoietic progenitor kinase 1 associates physically and functionally with the adaptor proteins B cell linker protein and SLP-76 in lymphocytes」, J. Biol. Chem., 2001, 276 (48) : 45207-16)。HPK1介導之SLP76缺失阻礙對次佳刺激之識別。
計劃性死亡1 (PD-1)受體由活化T細胞、B細胞及骨髓細胞表現。PD-1具有兩種已知配位體：計劃性死亡配位體1 (PD-L1)及計劃性死亡配位體2 (PD-L2)。PD-1藉由PD-L1 (亦稱為B7-H1、B7-4、CD274及B7-H)活化且PD-L2由基質細胞、腫瘤細胞或兩者表現，從而起始T細胞死亡及局部免疫抑制(Dong等人, 「B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion」, Nat. Med.1999; 5:1365-69; Freeman等人, 「Engagement of the PD-1  immunoinhibitory receptor by a novel B7 family member leads to negative regulation of lymphocyte activation」, J. Exp. Med.2000; 192:1027-34)。PD-L1與T細胞上之PD-1受體接合導致CD28共刺激信號傳導被抑制(Kamphorst等人, 「Rescue of exhausted CD8 T cells by PD-1-targeted therapies is CD28-dependent」, Science 2017, 355 (6332):1423-7; Hui等人, 「T cell costimulatory receptor CD28 is a primary target for PD-1-mediated inhibition」, Science 2017, 355(6332):1428-33)。相反，在非臨床動物模型中，此相互作用之抑制可增強局部T細胞反應且介導抗腫瘤活性(Iwai Y等人, 「Involvement of PD-L1 on tumor cells in the escape from host immune system and tumor immunotherapy by PD-L1 blockade」, Proc. Natl. Acad. Sci.USA 2002; 99:12293-97)。
PD-L1為細胞表面蛋白質且為B7家族之成員。PD-L1發現於幾乎所有類型之淋巴造血細胞上且由休眠T細胞、B細胞、巨噬細胞及樹突狀細胞低量表現且藉由以下進一步上調：B細胞之抗CD40抗體、T細胞之抗CD3抗體、巨噬細胞之抗CD40抗體、IFNγ及顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)及/或樹突狀細胞(DC)之抗CD40抗體、IFNγ、IL-4、IL-12及GM-CSF。PD-L1亦由一些非造血細胞表現且過度表現於諸多癌症中，其中其過度表現通常與不良預後相關(Okazaki T等人, PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application, Intern. Immun.2007 19(7):813) (Thompson R H等人, 「Tumor B7-H1 is associated with poor prognosis in renal cell carcinoma patients with long-term follow-up」, Cancer Res2006, 66(7):3381)。有趣地，與正常組織及末梢血液中之T淋巴球相比，大部分腫瘤浸潤性T淋巴球主要表現PD-1。腫瘤反應性T細胞上之PD-1可促成抗腫瘤免疫反應的減弱(Ahmadzadeh等人, 「Tumor antigen-specific CD8 T cells infiltrating the tumor express high levels of PD-1 and are functionally impaired」, Blood2009 114(8): 1537)。此可歸因於PD-L1信號傳導受到不當利用，其被表現PD-L1之腫瘤細胞介導，該等腫瘤細胞與表現PD-1之T細胞相互作用，導致T細胞活化衰減及免疫監視逃逸(Sharpe等人, 「The B7-CD28 superfamily」, Nat. Rev.2002) (Keir ME等人, PD-1 and its ligands in tolerance and immunity, Annu. Rev. Immunol.2008, 26:677)。因此，抑制PD-L1/PD-1相互相用可促進CD8+ T細胞介導之腫瘤殺死。
仍需要使用HPK1抑制劑與PD-1軸結合拮抗劑之組合來治療癌症的新療法。本發明係針對此需要及其他。本發明之組合療法展示比單獨用個別治療劑治療更大的療效。
本文中揭示之所有參考文獻、公開案及專利申請案均以全文引用的方式併入本文中。
本發明係關於用於治療癌症之治療方法、組合及醫藥組合物。亦提供包含本發明化合物與其他治療劑之組合療法。本發明亦提供包含本發明之一或多種組合物的套組。
在一個態樣中，本發明提供一種用於治療癌症之方法，其包含一量之HPK1抑制劑與一量之PD-1軸結合拮抗劑組合投與有需要之個體，其中該等量一起有效治療癌症；其中該HPK1抑制劑為式(I)化合物 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1a及R 1b各自獨立地為(C 1-C 6)烷基，或R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0、1或2個(C 1-C 6)烷基取代之5員雜環烷基； R 2a及R 2b各自獨立地為氫或(C 1-C 3)烷基； R 3a及R 3b各自獨立地為氫或(C 1-C 3)烷基； 各R 4獨立地為經0或1個鹵素或羥基取代之(C 1-C 6)烷基；且 n為0、1或2。
在如本文所描述之方法的一些較佳實施例中，該化合物為4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮(PF-07265028)，具有以下結構： 。
在如本文所描述之方法的一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑或PD-L2結合拮抗劑。
在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1結合拮抗劑。在一些此類實施例中，該PD-1結合拮抗劑抑制PD-1與其配位體結合搭配物之結合。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1與PD-Ll之結合。在一些實施例中，該PD-1結合拮抗劑抑制PD-1與PD-L2之結合。在一些實施例中，該PD-1結合拮抗劑抑制PD-1與PD-L1及PD-L2兩者之結合。
在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抗PD-1抗體。在一些此類實施例中，抗PD-1抗體為薩善利單抗(sasanlimab)、尼沃單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、匹地利珠單抗(pidilizumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、斯巴達珠單抗(spartalizumab)、信迪利單抗(sintilimab)、MEDI-0680、BGB-108或AGEN2034傑諾珠單抗(genolimzumab)、CBT-502、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)或其組合。在一個較佳實施例中，抗PD-1抗體為薩善利單抗、尼沃單抗或帕博利珠單抗。在另一較佳實施例中，抗PD-1抗體為薩善利單抗或尼沃單抗。
在如本文所描述之方法之一些實施例中，該PD-1軸結合拮抗劑包含PD-L1結合拮抗劑。在一些實施例中，其中該PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1與PD-1之結合。在一些實施例中，該PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1與B7-1之結合。在一些實施例中，該PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1與PD-1及B7-1兩者之結合。
在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。在一更特定實施例中，抗PD-L1抗體為BMS-936559、KN035、阿替利珠單抗(atezolizumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、阿維魯單抗(avelumab)或其組合。
在一個態樣中，本發明提供一種包含式(I)化合物及PD-1軸結合拮抗劑之組合，其用於治療有需要之個體之癌症，及醫藥學上可接受之載劑。
在一個態樣中，本發明提供一種包含式(I)化合物之藥劑，其與PD-1軸結合拮抗劑組合用於治療癌症。
在一個態樣中，本發明提供一種包含式(I)化合物及PD-1軸結合拮抗劑之組合用於治療有需要之個體之癌症的用途。
在一個態樣中，本發明提供一種套組，其包含式(I)化合物、PD-1軸結合拮抗劑及藥品說明書，且該藥品說明書包含使用藥劑治療個體之癌症的說明書。此類套組可用於例如本發明之方法中。
藉由參考以下對本發明實施例之詳細描述及其中包括的實例，可更容易理解本發明。應理解，本發明不限於特定合成製造方法，其當然可有所變化。應理解，本文中所使用之術語僅出於描述特定實施例之目的且不希望具有限制性。 E1.    一種用於治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與一量之式(I)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： R 1a及R 1b各自獨立地為(C 1-C 6)烷基，或R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0、1或2個(C 1-C 6)烷基取代之5員雜環烷基； R 2a及R 2b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； R 3a及R 3b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； 各R 4獨立地為經0或1個鹵素或羥基取代之(C 1-C 6)烷基；且 n為0、1或2； 以及一量之計劃性死亡1蛋白(PD-1)軸結合拮抗劑，其中該等量一起有效治療癌症。 E2.    如實施例E1之方法，其中R 1a及R 1b各自獨立地為甲基、乙基或異丙基。 E3.    如實施例E1或E2之方法，其中R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0或1個取代基甲基取代之5員雜環烷基。 E4.    如實施例E1至E3中任一項之方法，其中R 2a及R 2b為氫。 E5.    如實施例E1至E4中任一項之方法，其中R 3a及R 3b各自獨立地為氫、甲基或乙基。 E6.    如實施例E1至E5中任一項之方法，其中R 4為甲基或乙基。 E7.    如實施例E1至E6中任一項之方法，其中n為1。 E8.    如實施例E1至E7中任一項之方法，其中該式(I)化合物為： 4-[1-胺丙基]-2-{6-[5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5 H -吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或 4-[1-胺丙基]-2-{3-[5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。 E9.    如實施例E1至E8中任一項之方法，其中該式(I)化合物為： 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[(1R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[(1S)-1-胺乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[(1R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或 4-[(1R)-1-胺丙基]-2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。 E10.  如實施例E1至E9中任一項之方法，其中該式(I)化合物為： 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮。 E11.  如實施例E1至E10中任一項之方法，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑或PD-L2拮抗劑。 E12.  如實施例E11之方法，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1拮抗劑。 E13.  如實施例E11或E12之方法，其中該PD-1結合拮抗劑為抗PD-1抗體。 E14.  如實施例E13之方法，其中抗PD-1抗體係選自由以下組成之群：薩善利單抗、尼沃單抗、帕博利珠單抗、匹地利珠單抗、西米普利單抗、替雷利珠單抗、斯巴達珠單抗、信迪利單抗、MEDI-0680、BGB-108、AGEN2034傑諾珠單抗、CBT-502、卡瑞利珠單抗及其組合。 E15.  如實施例E14之方法，其中該抗PD-1抗體為薩善利單抗。 E16.  如實施例E14之方法，其中該抗PD-1抗體為尼沃單抗。 E17.  如實施例E14之方法，其中該抗PD-1抗體為帕博利珠單抗。 E18.  如實施例E11或E12之方法，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含PD-L1拮抗劑。 E19.  如實施例E18之方法，其中該PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。 E20.  如實施例E1至E19中任一項之方法，其中該個體為人類。 E21.  如實施例E1至E20中任一項之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：腦癌、頭/頸癌、***癌、膀胱癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、骨癌、大腸直腸癌、腎癌、肝癌、胰臟癌、食道癌、胃癌、胃食道接合部癌、甲狀腺癌、子宮頸癌、子宮癌及腎癌。 E22.  一種用於治療有需要之個體之癌症的組合，其包含： (i)式I化合物， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1a及R 1b各自獨立地為(C 1-C 6)烷基，或R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0、1或2個(C 1-C 6)烷基取代之5員雜環烷基； R 2a及R 2b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； R 3a及R 3b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； 各R 4獨立地為經0或1個鹵素或羥基取代之(C 1-C 6)烷基；且 n為0、1或2；及 (ii) PD-1軸結合拮抗劑。 E23.  如實施例E22之組合，其中該HKP1抑制劑為4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮，且該PD-1軸結合拮抗劑包含選自由以下組成之群的抗PD-1抗體：薩善利單抗、尼沃單抗、帕博利珠單抗、匹地利珠單抗、西米普利單抗、替雷利珠單抗、斯巴達珠單抗、信迪利單抗、MEDI-0680、BGB-108、或AGEN2034傑諾珠單抗、CBT-502、卡瑞利珠單抗及其組合。 E24.  如實施例E22或E23之組合，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含薩善利單抗。 E25.  如實施例E22或E23之組合，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含尼沃單抗。 E26.  如實施例E22或E23之組合，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含帕博利珠單抗。 E27.  一種如實施例E22至E26中任一項之組合之用途，其用於治療有需要之個體的癌症。
I. 定義如本文中所使用，除非另外規定，否則單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個提及物。舉例而言，「一」取代基包括一或多個取代基。在化合物、鹽及其類似者使用複數形式時，此亦意謂單一化合物、鹽或類似者。
本文中所描述之揭示內容可適當地在不存在本文中未特定揭示之任何要素的情況下實施。因此，舉例而言，在本文中，在各情況下，術語「包含(comprising)」、「基本上由……組成(consisting essentially of)」及「由……組成(consisting of)」中之任一者可經另兩個術語中之任一者置換。
術語「約」當用於修飾以數值定義之參數時意謂該參數在該參數之所述數值之上或之下的至多10%範圍內變化。
術語「烷基」係指飽和單價脂族烴基，包括具有指定數目個碳原子之直鏈及分支鏈基團。本文所揭示之烷基取代基可指定為1至6個碳原子(「C 1-C 6烷基」)，或1至4個碳原子(「C 1-C 4烷基」)等。烷基之實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、正庚基、正辛基及其類似基團。烷基可經取代或未經取代。特定言之，除非另外規定，否則烷基可經一或多個(至多為存在於烷基部分上之氫原子之總數)鹵基取代。因此，C 1-C 4烷基包括具有1至4個碳原子之鹵化烷基，且尤其氟化烷基，例如三氟甲基或二氟乙基(亦即CF 3及-CH 2CHF 2)。
在其他實施例中，烷基視情況經一或多個取代基(例如經1至3個取代基)取代，該等取代基獨立地選自由以下組成之群：鹵基、-OH、C 1-C 4烷氧基、-CN及-NR xR y。
術語「烷氧基」係指單價-O-烷基，其中烷基部分具有指定數目個碳原子。烷氧基通常含有1至8個碳原子(「C 1-C 8烷氧基」或1至6碳原子(「C 1-C 6烷氧基」)或1至4個碳原子(「C 1-C 4烷氧基」)。舉例而言，C 1-C 4烷氧基包括甲氧基、乙氧基、異丙氧基、三級丁氧基(亦即，-OCH 3、-OCH 2CH 3、-OCH(CH 3) 2、-OC(CH 3) 3)及其類似基團。
術語「雜環烷基」係指非芳族飽和或部分不飽和環系統，其含有指定數目個環原子，包括至少一個選自N、O及S之雜原子作為環成員。5員雜環烷基可包括四氫呋喃(四氫呋喃基)、四氫噻吩(四氫噻吩基)及吡咯啶(吡咯啶基)。
如本文所用，術語，包括(但不限於) 「藥品」、「藥劑」、「組分」、「組合物」、「化合物」、「物質」、「靶向劑」、「靶向治療劑」、「治療劑」及「藥物」可互換使用以指本發明之小分子化合物，例如HPK1抑制劑、抗PD-L1抗體、抗PD-1抗體或其組合。
如本文所用，術語「治療抗體」及「抗體」可互換使用以指用於治療疾病或病症的抗體。治療抗體可具有各種作用機制。治療抗體可結合及中和與抗原相關之標靶的正常功能。舉例而言，阻斷癌細胞存活所需之蛋白質活性的單株抗體引起細胞死亡。另一種治療抗體可結合且活化與抗原相關之標靶的正常功能。舉例而言，單株抗體可結合至細胞上之蛋白質且觸發細胞凋亡信號。又一單株抗體可結合至僅在病變組織上表現之標靶抗原；有毒有效負載(有效藥劑) (諸如化學治療劑或放射性藥劑)與單株抗體的結合可產生用於將有毒有效負載特異性遞送至病變組織之藥劑，減少對健康組織之損害。治療抗體之「生物功能性片段」將展現屬於完整抗體之生物學功能中的至少一者(若非一些或全部)，該功能至少包含特異性結合至標靶抗原。
治療抗體可結合至任何蛋白質，包括(但不限於) PD-L1、PD-1。因此，治療抗體包括(但不限於)抗PD-L1抗體、抗PD-1抗體或其組合。
「化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括烷基化劑，諸如噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(cyclophosphamide，CYTOXAN ®)；烷基磺酸鹽，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；伸乙亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(triethylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphoramide)及三羥甲基三聚氰胺；多聚乙醯(acetogenin)(尤其布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫***酚(屈***酚(dronabinol)，MARINOL ®)；β-拉帕酮(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙鹼；樺木酸；喜樹鹼(包括合成類似物拓樸替康(topotecan) (HYCAMTIN ®)、CPT-11 (伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR ®)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、東莨菪素(scopolectin)及9-胺基喜樹鹼)；苔蘚蟲素(bryostatin)；培美曲塞(pemetrexed)；海洋抑素(callystatin)；CC-1065 (包括其合成類似物阿多來新(adozelesin))、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin))；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸；替尼泊甙(teniposide)；念珠藻環肽(cryptophycin) (尤其念珠藻環肽1及念珠藻環肽8)；海兔毒素(dolastatin)；倍癌黴素(duocarmycin) (包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；TLK-286；CDP323，口服α-4整合素抑制劑；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、甲氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、芬司特瑞(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，尤其卡奇黴素γ及卡奇黴素Ω (例如Nicolaou等人, Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183- 186 (1994))；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團))、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放射菌素(actinomycin)、安麴黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、阿黴素(包括ADRIAMYCIN®、N-𠰌啉基-阿黴素、氰基N-𠰌啉基-阿黴素、2-吡咯啉基-阿黴素、阿黴素HC1脂質體注射劑(DOXIL®)及去氧小紅莓)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins) (諸如絲裂黴素C)、黴酚酸、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、潑非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine，GEMZAR®)、喃氟啶(tegafur，UFTORAL®)、卡培他濱(capecitabine，XELODA®)、埃坡黴素(epothilone)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫米嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、氮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)及伊馬替尼(imatinib，2-苯基胺基嘧啶衍生物)，以及其他c-it抑制劑；抗腎上腺藥劑，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝斯布西(bestrabucil)；比山群(bisantrene)；艾達曲克(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗利散(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲(hydroxyurea)；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；類美登素(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocins)；丙脒腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫比達摩(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK ®多醣複合物(JHS Natural Products, Eugene, OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2''-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecenes)(尤其T-2毒素、弗納庫林A (verracurin A)、桿孢菌素A (roridin A)及胺癸叮(anguidine))；尿烷(urethan)；長春地辛(vindesine)(ELDIS1NE ®、FILDESIN ®)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；***糖苷(arabinoside) (「Ara-C」)；噻替派(thiotepa)；類紫杉醇，例如紫杉醇(paclitaxel，TAXOL ®)、白蛋白工程化紫杉醇奈米粒子調配物(ABRAXANE™)及多西他賽(doxetaxel)(TAXOTERE ®)；苯丁酸氮芥；6-硫代鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰基嘌呤(mercaptopurine)；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春鹼(vinblastine)(VELBAN ®)；鉑；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN ®)；奧沙利鉑(oxaliplatin)；亮克沃林(leucovovin)；長春瑞賓(vinorelbine)(NAVELBINE ®)；諾凡特龍(novantrone)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅黴素(daunomycin)；胺基喋呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓樸異構酶(topoisomerase)抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(difluoromethylornithine，DFMO)；類視黃素，諸如視黃酸；以上中之任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及以上中之兩者或兩者以上的組合，諸如CHOP (環磷醯胺、阿黴素、長春新鹼及普賴蘇穠(prednisolone)組合療法的縮寫)及FOLFOX (奧沙利鉑(ELOXATIN™)與5-FU及亮克沃林(leucovovin)組合治療方案的縮寫)。
化學治療劑之其他實例包括抗激素劑，其用於調節、減少、阻斷或抑制可促進癌症生長之激素之作用，且通常呈全身性或全身治療形式。其本身可為激素。實例包括抗***及選擇性***受體調節劑(selective estrogen receptor modulator，SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen) (包括NOLVADEX®他莫昔芬)、雷諾昔酚(raloxifene)(EVISTA®)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY 1 1 7018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene)(FARESTON®)；抗孕酮；***受體下調劑(estrogen receptor down-regulator，ERD)；***受體拮抗劑，諸如氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®)；用以抑止或關閉卵巢的藥劑，例如，黃體生成激素釋放激素(leutinizing hormone-releasing hormone，LHRFl)促效劑，諸如亮丙立德乙酸鹽(leuprolide acetate)(LUPRON®及ELIGARD®)、戈舍瑞林乙酸鹽(goserelin acetate)、布舍瑞林乙酸鹽(buserelin acetate)及曲特瑞林(tripterelin)；抗雄激素，諸如氟他胺(fiutamide)、尼魯胺(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide)；及抑制芳香酶之芳香酶抑制劑，其調節腎上腺中之***產生，諸如4(5)-咪唑、胺魯米特、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)(MEGASE®)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN®)、福美斯坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、伏羅唑(vorozole)(RJVISOR®)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®)及阿那曲唑(anastrozole)(ARIMIDEX®)。另外，化學治療劑之此類定義包括：雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)(例如BONEFOS ®或OSTAC ®)、依替膦酸鹽(etidronate)(DIDROCAL ®)、NE-58095、唑來膦酸(zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate) (ZOMETA ®)、阿侖膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX ®)、帕米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA ®)、替魯膦酸鹽(tiludronate)(SKELID ®)或利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL ®)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧雜環戊烷核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其是抑制牽涉異常細胞增殖之信號傳導路徑中之基因表現的反義寡核苷酸，諸如PKC-α、Raf、H-Ras及表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗，諸如THERATOPE®疫苗及基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN ®疫苗、LEUVECTIN ®疫苗及VAXID ®疫苗；拓樸異構酶1抑制劑(例如LURTOTECAN ®)；抗***，諸如氟維司群；Kit抑制劑，諸如伊馬替尼或EXEL-0862 (酪胺酸激酶抑制劑)；EGFR抑制劑，諸如埃羅替尼(erlotinib)或西妥昔單抗(cetuximab)；抗VEGF抑制劑，諸如貝伐單抗(bevacizumab)；阿瑞替康(arinotecan)；rmRH (例如ABARELIX ®)；拉帕替尼(lapatinib)及二甲苯磺酸拉帕替尼(ErbB-2及EGFR雙重酪胺酸激酶小分子抑制劑，亦稱為GW572016)；17AAG (格爾德黴素(geldanamycin)衍生物，其為熱休克蛋白(Hsp) 90毒物)及以上中之任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
術語「免疫療法」係指藉由包含誘導、增強、抑止或以其他方式調節免疫反應之方法治療個體。
術語「異常細胞生長」及「過度增殖性病症」在本申請案中可互換使用。除非另外指明，否則如本文所使用，「異常細胞生長」係指不依賴於正常調節機制的細胞生長(例如接觸抑制喪失)。異常細胞生長可為良性(非癌性)或惡性(癌性)的。
「病症」為將受益於本發明化合物治療的任何病狀。此病狀包括慢性及急性病症或疾病，包括使個體易患所述病症之彼等病理學病狀。
如本文所用，術語「抗體」係指能夠經由位於免疫球蛋白分子可變區中之至少一個抗原識別位點特異性結合於標靶(諸如碳水化合物、聚核苷酸、脂質、多肽等)的免疫球蛋白分子。如本文所用，術語涵蓋多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、雙特異性抗體、雙重特異性抗體、雙官能抗體、三特異性抗體、多特異性抗體、雙特異性異二聚雙功能抗體、雙特異性異二聚IgG、經標記抗體、人類化抗體、人類抗體，及其片段(諸如Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv)、單鏈(scFv)及結構域抗體(包括例如鯊魚及駱駝抗體)、包含抗體之融合蛋白、包含抗原識別位點之免疫球蛋白分子之任何其他經修飾組態及抗體樣結合肽模擬物(ABiPs)。抗體包括任何類別之抗體，諸如IgG、IgA或IgM (或其子類)，且該抗體無需為任何特定類別。免疫球蛋白可視其重鏈恆定區之抗體胺基酸序列而歸為不同類別。存在五種主要類別之免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等免疫球蛋白中之若干者可以進一步劃分成子類(同型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3、IgG-4、IgA1及IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定區分別稱為α、δ、ε、γ及μ。不同類別之免疫球蛋白之次單元結構及三維組態為熟知的。
術語「免疫球蛋白」(Ig)可與本文中之「抗體」互換使用。基礎4鏈抗體單元係由兩條一致輕(L)鏈及兩條一致重(H)鏈構成的雜四聚醣蛋白。IgM抗體由5個基礎的雜四聚體單元及稱為J鏈之額外多肽組成且含有10個抗原結合位點，而IgA抗體包含2至5個基礎4鏈單元，該等單元可聚合以與J鏈組合形成多價集合體。在IgG的情況下，4鏈單元一般係約150,000道爾頓。各L鏈經一個共價二硫鍵連接至H鏈，而兩條H鏈經一或多個二硫鍵彼此連接，此視H鏈同型而定。各H鏈及L鏈亦具有有規律地隔開之鏈內二硫橋鍵。各H鏈在N端具有可變域(VH)，繼之為三個恆定域(CH) (對於α及γ鏈中之各者而言)以及四個CH域(對於μ及ε同型而言)。各L鏈在N端具有可變域(VL)，繼而在其另一端為恆定域。VL與VH對準且CL與重鏈之第一恆定域(CHI)對準。咸信特定胺基酸殘基在輕鏈可變域與重鏈可變域之間形成界面。VH與VL對一起形成單一抗原結合位點。對於不同類別之抗體之結構及特性，參見例如Daniel P. Sties, Abba I. Terr及Tristram G. Parsolw (編), Basic and Clinical Immunology, 第8版, 1994年, 第71頁及第6章。來自任何脊椎動物物種之L鏈可基於其恆定域之胺基酸序列而歸為兩種顯著不同類型(稱為κ及λ)中之一種。視免疫球蛋白之重鏈(CH)恆定域之胺基酸序列而定，其可歸為不同類別或同型。
如本文所用，「單株抗體」或「mAb」或「Mab」係指實質上均質之抗體群體，亦即，除可少量存在之可能天然存在之突變以外，構成該群體之抗體分子的胺基酸序列一致。相比之下，習知(多株)抗體製劑通常包括在可變域、尤其其CDR中具有不同胺基酸序列之多種不同抗體，其通常對不同抗原決定基具有特異性。修飾語「單株」指示抗體之特徵，如由實質上均質之抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，欲根據本發明使用之單株抗體可藉由首次由Kohler等人, Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity, Nature 1975, 256: 495描述之融合瘤方法製得；或可藉由重組DNA方法(例如美國專利第4,816,567號)製得。「單株抗體」亦可使用以下文獻中所描述之技術自噬菌體抗體庫分離：例如Clackson等人, Making antibody fragments using phage display libraries, Nature1991, 352: 624-628及Marks等人, By-passing immunization: human antibodies from V-gene libraries displayed on phage, J. Mol. Biol. 1991, 222: 581-597。亦參見Presta, Selection, design, and engineering of therapeutic antibodies, J. Allergy Clin. Immunol.2005 ,116:731。
「嵌合抗體」係指一種抗體，其中一部分重鏈及/或輕鏈與來源於特定物種(例如，人類)或屬於特定抗體類別或子類之抗體中之相應序列一致或同源，而該鏈之其餘部分與來源於另一物種(例如，小鼠)或屬於另一抗體類別或子類之抗體中之相應序列一致或同源，以及該等抗體之片段，只要其呈現所需生物活性即可。
「人類抗體」係指僅包含人類免疫球蛋白序列之抗體。若人類抗體產生於小鼠中、小鼠細胞中或來源於小鼠細胞之融合瘤中，則人類抗體可含有鼠類碳水化合物鏈。類似地，「小鼠抗體」或「大鼠抗體」分別係指僅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列之抗體。
「人類化抗體」係指含有來自非人類(例如鼠類)抗體以及人類抗體之序列之抗體形式。此類抗體含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列。一般而言，人類化抗體將包含至少一個且通常兩個可變域的實質上全部，其中全部或實質上全部高變環對應於非人類免疫球蛋白之高變環且全部或實質上全部FR區為人類免疫球蛋白序列之FR區。人類化抗體視情況亦將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常人類免疫球蛋白恆定區之至少一部分。當有必要區分人類化抗體與親本嚙齒動物抗體時，將字首「hum」、「hu」或「h」添加於抗體純系名稱中。嚙齒動物抗體之人類化形式一般將包含親本嚙齒動物抗體之相同CDR序列，不過可包括某些胺基酸取代以提高親和力、增加人類化抗體之穩定性或為了其他原因。
如本文所用，片語「實質上減少」、「實質上不同」或「實質上抑制」表示兩個數值(一般而言，一個與分子相關且另一個與參考/比較分子相關)之間的差異程度足夠高，使得熟習此項技術者認為兩個值之間的差異在該等值(例如Kd值)所量度之生物特徵之上下文中具有統計顯著性。相對於參考/比較分子之值，該兩個值之間的差值例如大於約10%、大於約20%、大於約30%、大於約40%及/或大於約50%。
如本文所用，術語「特異性結合」或「對...具有特異性」係指可量測及可再現相互作用，諸如標靶與抗體之間的結合，其在異質分子(包括生物分子)群體存在下決定標靶之存在。舉例而言，特異性結合至標靶(其可為抗原決定基)之抗體為結合此標靶之親和力(affinity)、親合力(avidity)、容易性及/或持續時間強於其結合至其他標靶的抗體。在一個實施例中，如藉由例如放射免疫分析(RIA)所量測，抗體與不相關標靶之結合程度低於抗體與標靶之結合的約10%。在某些實施例中，特異性結合至標靶之抗體的解離常數(Kd) ≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM或≤ 0.1 nM。在某些實施例中，抗體特異性結合至在不同物種之蛋白質中具有保守性之蛋白質上的抗原決定基。在另一實施例中，特異性結合可包括但並非必需排他性結合。
如本文所使用，術語「免疫黏附素」表示抗體樣分子，其具有異源蛋白質(「黏附素」)之結合特異性與免疫球蛋白恆定域之效應功能的組合。在結構上，免疫黏附素包含具有所需結合特異性(與抗體之抗原識別及結合位點不同的(亦即「異源的」))之胺基酸序列與免疫球蛋白恆定域序列的融合物。免疫黏附素分子之黏附素部分通常為至少包含受體或配位體之結合位點的鄰接胺基酸序列。免疫黏附素中之免疫球蛋白恆定域序列可獲自任何免疫球蛋白，諸如IgG-1、IgG-2 (包括IgG2A及IgG2B)、IgG-3或IgG-4亞型、IgA (包括IgA-1及IgA-2)、IgE、IgD或IgM。Ig融合物較佳包括用本文所描述之多肽或抗體之結構域替代Ig分子內之至少一個可變區。在一尤其較佳實施例中，免疫球蛋白融合物包括鉸鏈、CH2及CH3或IgG-1分子之鉸鏈、CH1、CH2及CH3區域。關於產生免疫球蛋白融合物，亦參見1995年6月27日頒佈之美國專利第5,428,130號。Ig Fc與細胞表面受體之ECD之免疫黏附素組合有時稱為可溶受體。
「融合蛋白」及「融合多肽」係指具有共價連接在一起的兩個部分之多肽，其中各部分為具有不同特性之多肽。特性可為生物學特性，諸如試管內或活體內活性。特性亦可為單一化學或物理特性，諸如結合於標靶分子、反應之催化等。兩個部分可藉由單個肽鍵直接連接或經由肽連接子連接，但彼此處於閱讀框架中。
如本文所描述，「PD-1寡肽」、「PD-L1寡肽」或「PD-L2寡肽」為結合(較佳特異性結合)至PD-1、PD-L1或PD-L2負共刺激多肽的寡肽，分別包括受體、配位體或信號傳導組分。此類寡肽可使用已知寡肽合成方法以化學方式合成或可使用重組技術製備及純化。此類寡肽通常具有至少約5個胺基酸長度，或者至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個胺基酸長度或更長。此類寡肽可使用熟知技術鑑別。就此而言，應注意，自寡肽庫中篩選出能夠特異性結合於多肽標靶之寡肽的技術為此項技術中所熟知的(例如美國專利第5,556,762號、第5,750,373號、第4,708,871號、第4,833,092號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,571,689號、第5,663,143號；PCT公開案第WO 1984/0003506號及第WO 1984/0003564號；Geysen等人, Use of peptide synthesis to probe viral antigens for epitopes to a resolution of a single amino acid, Proc. Natl. Acad. Sci. 1984, 81:3998-4002；Geysen等人 , Small peptides induce antibodies with a sequence and structural requirement for binding antigen comparable to antibodies raised against the native protein, Proc. Natl. Acad. Sci.1985, 82:178-182；Geysen等人, A priori delineation of a peptide which mimics a discontinuous antigenic determinant, Synthetic Peptides as Antigens, 1986, 130-149；Geysen,等人, Strategies for epitope analysis using peptide synthesis, J. Immunol. Meth.1987, 102, 259-274；Schoofs等人, Epitopes of an influenza viral peptide recognized by antibody at single amino acid resolution, J. Immunol, 1988, 140:611-616，Cwirla, S. E.等人, Peptides on phage: a vast library of peptides for identifying ligands., Proc. Natl. Acad. Sci.1990, 87:6378；Lowman, H.B.等人, Selecting high-affinity binding proteins by monovalent phage display, Biochemistry, 1991, 30:10832；Clackson, T.等人, Making antibody fragments using phage display libraries, Nature, 1991, 352: 624；Marks, J. D.等人, By-passing immunization: human antibodies from V-gene libraries displayed on phage, J. Mol. Biol, 1991, 222:581；Kang,等人, Linkage of Recognition and Replication Functions by Assembling Combinatorial Antibody Fab Libraries Along Phage Surfaces, PNAS, 1991, 第88卷, 第4363-4366頁，及 Smith, G. P.Surface presentation of protein epitopes using bacteriophage expression systems , Curr. Opin. Biotechnol.1991, 2:668。
「拮抗劑」抗體或「阻斷」抗體係抑制或降低其所結合之抗原之生物活性的抗體。在一些實施例中，阻斷抗體或拮抗劑抗體實質上或完全抑制抗原之生物活性。本發明之抗PD-L1抗體阻斷經由PD-1之信號傳導，以便使T細胞自功能異常狀態恢復對抗原刺激之功能反應(例如增殖、細胞介素產生、標靶細胞殺死)。
「促效劑」或「活化抗體」係藉由結合至抗原來增強或起始信號傳導的抗體。在一些實施例中，促效劑抗體在不存在天然配位體之情況下引起或活化信號傳導。
術語「功能異常」在免疫功能異常之情形下係指對抗原刺激之免疫反應減少的狀態。該術語包括耗竭及/或無反應性之共同成分，其中可發生抗原識別，但隨後的免疫反應對控制感染或腫瘤生長無效。
如本文所用，術語「功能異常」亦包括難以發生抗原識別或對抗原識別無反應，特定而言，將抗原識別轉變成下游T細胞效應功能(諸如增殖、細胞介素產生及/或標靶細胞殺死)的能力減弱。
術語「無反應性」係指由經由T細胞受體遞送之信號不完全或不足引起的對抗原刺激無反應之狀態(例如在不存在ras活化之情況下細胞內Ca+2升高)。在不存在共刺激之情況下，T細胞無反應性亦可在抗原刺激後產生，導致細胞變得即使在共刺激情況下亦難以藉由抗原進行後續活化。介白素-2之存在常常可推翻無反應狀態。無反應性T細胞不進行純系擴增及/或獲得效應功能。
術語「耗竭」係指呈T細胞功能異常狀態的T細胞耗竭，其因多種慢性感染及癌症期間發生之持續TCR信號傳導引起。其與無反應性之區別在於其並非由信號傳導不完全或不足引起，而係由持續信號傳導引起。其定義為不良效應功能、抑制性受體之持續表現及與功能性效應子或記憶T細胞不同之轉錄狀態。耗竭阻止對感染及腫瘤之最佳控制。耗竭可由外在負調節路徑(例如免疫調節細胞介素)以及細胞內在負調節(共刺激)路徑兩者引起。
「增強T細胞功能」意謂誘導、引起或刺激T細胞具有持續或擴增之生物功能，或更新或再活化耗竭或功能異常之T細胞。增強T細胞功能之實例包括：增強CD4+或CD8+ T細胞分泌γ干擾素、增強增殖、增加存活率、增強分化、增強抗原反應(例如病毒、病原體或腫瘤清除率) (相對於干預之前的此類水平)。在一些實施例中，增強水平為至少50%，或者60%、70%、80%、90%、100%、120%、150%、200%。量測此增強之方式為一般熟習此項技術者已知的。
如本文所用，「轉移」或「轉移性」意謂癌症自其原發部位向體內其他位置之擴散。癌細胞可脫離原發腫瘤，滲透至淋巴及血管中，經由血流循環，且在體內別處之正常組織中在遠端病灶中生長(轉移)。轉移可為局部或遠端的。視脫離原發腫瘤的腫瘤細胞而定，轉移為一種連續過程，其經由血流行進及在遠端部位停止。在新的部位，細胞建立血液供應且可生長以形成危及生命的腫塊。腫瘤細胞內之刺激分子與抑制分子均調節此行為，且在遠端部位中，腫瘤細胞與宿主細胞之間亦出現顯著的相互作用。
術語「癌症」、「癌性」或「惡性」係指或描述哺乳動物之生理學病狀，其特徵通常在於不受調控之細胞生長。術語「癌症」包括但不限於源自身體特定部位之原發癌、自開始之位置擴散至身體其他部分之轉移癌、原始原發癌在緩解後之復發及作為個人之新原發癌之第二原發癌，其病史中的前一種癌症與後一種癌症類型不同。癌症之實例包括(但不限於)：腦癌、頭/頸癌(包括頭頸部之鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma of the head and neck，SCCHN))、***癌、膀胱癌(包括尿道上皮癌，亦稱為移行細胞癌(transitional cell carcinoma，TCC))、肺癌(包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)及非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC))、乳癌、卵巢癌、骨癌、大腸直腸癌、腎癌、肝癌(包括肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC))、胰臟癌、食道癌(包括鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma，SCC))、胃癌、胃食道接合部癌、甲狀腺癌、宮頸癌、子宮癌及/或腎癌。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤。
術語「個體」或「有需要之個體」係指包括獸醫學個體之人類或非人類個體，諸如需要治療之牛、綿羊、貓、狗、馬、靈長類、兔及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。在一個實施例中，個體為人類且可稱為患者或個人，例如罹患癌症、處於罹患癌症之風險下或潛在地能夠罹患癌症的人類。熟習醫療技術者能夠容易地鑑別罹患癌症之個別患者。
如本文所用，術語「治療(treat/treating)」癌症意謂向患有癌症或經診斷患有癌症之個體投與本發明之組合療法，以達成至少一種積極治療作用，諸如減少癌細胞之數目；減小腫瘤尺寸；減少癌細胞浸潤至外周組織中的速率或減少腫瘤轉移或腫瘤生長之速率；逆轉、停止、控制、減緩、中斷、遏制、緩解及/或抑制病徵、症狀、病症、病狀或疾病之惡化或嚴重程度，但不必涉及完全消除全部疾病相關病徵、症狀、病狀或病症。在本發明之含義中，術語「治療(treat/treating)」亦表示遏制、延遲發作(亦即在疾病之臨床表現或疾病之症狀之前的時間段)及/或降低疾病症狀發展或惡化的風險。
如本文所用，「與......組合」、「組合投與」或「共投與」係指投與一種藥劑外加至少一種其他藥劑，其中一種藥劑之投與可在向個體投與至少一種其他藥劑之前、期間或之後進行。在一些實施例中，共投與兩種或更多種藥劑可適用於治療罹患對進行中的療法具有原發性或獲得性抗性之癌症的個體。本文所提供之組合療法可適用於改善癌症療法對此類療法有反應之個體的功效及/或減少其副作用。
如本文所用，術語「同時」、「同時投與(simultaneous administration/administered simultaneously)」、「並行」或「並行投與」意謂藥劑在相同時間點以各別劑型或作為相同劑型之一部分投與，或緊隨彼此投與，但該等藥劑可以任何順序投與。舉例而言，在後一情況中，在足夠接近之時間投與兩種或更多種藥劑以使得所觀測之結果與當藥劑在相同時間點投與時達成之結果不可區分。
本發明之藥劑可完全分開投與或以一或多種各別組合物形式投與。舉例而言，在治療過程中，藥劑可依組合療法有效治療癌症之時間間隔、在不同時間(以按時間順序錯開的方式，尤其序列特異性方式)單獨給與。
如本文所用，術語「依序(sequential/sequentially)」或「依序投與(administered sequentially/sequential administration)」係指本發明之組合療法之各藥劑單獨或以藥劑形式一種接著另一種投與，其中各藥劑可以任何順序投與。當組合療法中之治療劑呈不同劑型(例如一種藥劑為錠劑且另一藥劑為無菌液體)時，且/或藥劑係根據不同給藥時程投與(例如一種藥劑每日投與，且第二藥劑以更低頻率(諸如每週)投與)時，依序投與可尤其適用。
如本文所用，術語「單一調配物」係指用單一載劑或媒劑調配以向個體遞送有效量之兩種治療劑。單一媒劑經設計以遞送有效量之各種藥劑以及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。在一些實施例中，媒劑係錠劑、膠囊、丸劑或貼劑。在其他實施例中，媒劑係溶液或懸浮液。
術語「單位劑量」在本文中用以意謂兩種藥劑一起以一種劑型同時投與所治療之個體。在一些實施例中，單位劑量為單一調配物。在某些實施例中，單位劑量包括一或多種媒劑，使得各媒劑包括有效量之至少一種藥劑以及醫藥學上可接受之載劑及賦形劑。在一些實施例中，單位劑量為同時投與個體之一或多種錠劑、膠囊、丸劑或貼劑。
「口服劑型」包括醫囑或意欲經口投與之單位劑型。
如本文所用，術語「晚期」在其指乳癌時包括局部晚期(非轉移性)疾病及轉移性疾病。
術語「醫藥組合物」係指一種製劑，其呈允許活性成分之生物活性有效之形式，且其不含對調配物所投與之個體具有不可接受之毒性的其他組分。此類調配物為無菌的。「醫藥學上可接受之」載劑或賦形劑(媒劑、添加劑)為可合理地投與個體以提供有效劑量之所用活性成分的彼等物。
本文所提供之組合可藉由熟習醫藥調配物技術者顯而易知的多種方法調配。上文所描述之各種釋放特性可以多種不同方式實現。適合調配物包括例如錠劑、膠囊、壓製包衣調配物及其他易於投與之調配物。
「藥品說明書」係指通常包括於藥劑之商業包裝中之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投與、禁忌、待與包裝產品組合之其他藥劑及/或有關使用此類藥劑之警告等資訊。
藥品、藥劑、組分、組合物、化合物、物質、靶向劑、靶向治療劑、治療抗體、治療劑、藥物或醫藥組合物之「有效劑量」、「有效量」、「治療有效量」或「治療有效劑量」為一種量，其影響疾病、疾病發展期間呈現之其併發症及中期病理表型的任一種或多種有益或所需(包括生物化學、組織學及/或行為)症狀。
對於治療用途而言，治療有效量係指藥品、藥劑、組分、組合物、化合物、物質、靶向劑、靶向治療劑、治療抗體、治療劑、藥物或醫藥組合物的投與量，該量將在一定程度上緩解所治療之病症的一或多種症狀，諸如減少疾病產生之一或多種症狀、提高罹病者的生活品質、降低治療疾病所需之其他藥物的劑量、增強另一藥物治療之作用(諸如經由靶向、延遲疾病惡化及/或延長存活期)。
關於癌症之治療，治療有效量係指藥品、藥劑、組分、組合物、化合物、物質、靶向劑、靶向治療劑、治療抗體、治療劑、藥物或醫藥組合物的量，該量在投與一或多種療法後可有效實現以下結果中之一或多者：(1)減小腫瘤尺寸、(2)減少癌細胞之數目、(3)抑制(亦即，在一定程度上減緩，較佳停止)癌細胞浸潤至外周器官中、(4)抑制(亦即，在一定程度上減緩，較佳停止)腫瘤轉移、(5)抑制(亦即，在一定程度上減緩，較佳停止)腫瘤生長或腫瘤侵襲、(6)緩解(亦即，在一定程度上，較佳除去)與癌症相關之一或多種病徵或症狀、(7)降低治療疾病所需之其他藥物的劑量、(8)增強另一藥物治療之作用、(9)延遲疾病惡化、(10)改善或增加無病、無復發、無惡化及/或整體之存活期、持續時間或比率、(11)增加反應率、反應之耐久性或有反應或處於緩解之患者的數目、(12)降低住院比率、(13)降低住院時長、(14)維持腫瘤尺寸且不增加或增加小於10%、較佳小於5%、較佳小於4%、較佳小於2%；(12)增加處於緩解中之患者的數目、(15)增加緩解之時長或持續時間、(16)降低癌症復發率；(15)降低癌症復發次數及(17)改善癌症相關症狀及/或生活品質。
有效量可以一或多次投與來投與。出於本發明之目的，有效量為足以直接或間接完成達到防治性或治療性治療的量。如在臨床情形下所瞭解，藥品、化合物或醫藥組合物之有效量可或可不結合另一藥品、藥劑、組分、組合物、化合物、物質、靶向劑、靶向治療劑、治療抗體、治療劑、藥物或醫藥組合物達成。
有效量可以一或多次投與來投與。出於本發明之目的，藥品、化合物或醫藥組合物之有效量為足以直接或間接完成達到防治性或治療性治療的量。
如在臨床情形下所瞭解，藥品、化合物或醫藥組合物之有效量可或不可結合另一藥品、化合物或醫藥組合物達成。因此，可在投與一或多種治療劑的情形下考慮「有效量」，且若結合一或多種其他藥劑，可達成或已達成所需結果，則可考慮以有效量給與單一藥劑。
治療量亦可指監管機構已批准使用之藥品劑量。如本文所用，「次治療量」係指藥品劑量顯著低於批准劑量。
術語「治療方案」、「給藥方案」及「給藥療法」可互換地用於指本發明之組合中各治療劑之投與劑量及時序。
關於病症、疾病或病狀之術語「改善(ameliorating)」或「改善(amelioration)」係指任何可觀測到的有益治療效果。治療不必絕對有益於個體。舉例而言，與不投與本發明之方法或療法之治療劑相比，減輕意謂減少或改善疾病、病症或病狀之一或多種症狀。改善亦包括縮短或減少症狀之持續時間。
術語「生物類似物」係指一種生物產品，其高度類似於FDA批准之生物產品(參考產品)且在藥物動力學、安全性及療效方面與參考產品不具有臨床上有意義之差異。
術語「生物等效物」係指與FDA批准之生物產品(參考產品)在醫藥學上等效且具有類似生物可用率之生物產品。舉例而言，根據FDA，術語生物等效性定義為「在適當設計之研究中當以相同莫耳劑量在類似條件10下投與時，醫藥等效物或醫藥替代物中活性成分或活性部分在藥品作用部位處變得可用之比率及程度不存在顯著差異」(美國食品與藥物管理局，「Guidance for Industry: Bioavailability and Bioequicalence Studies for Orally Administered Drug Products - General Considerations」, 2003, 藥物評估與研究中心)。
「腫瘤」在應用於經診斷患有或疑似患有癌症之個體時係指任何尺寸之惡性或潛在惡性贅瘤或組織塊，且包括原發性腫瘤及繼發性贅瘤。實體腫瘤為通常不含囊腫或液體區域之組織異常生長或組織塊。實體腫瘤之實例為肉瘤、癌瘤及淋巴瘤。
「腫瘤負荷(Tumor burden)」亦稱為「腫瘤負載(tumor load)」係指分佈在整個體內之腫瘤物質的總量。腫瘤負荷係指整個身體(包括淋巴結及骨髓)癌細胞之總數目或腫瘤之總大小。腫瘤負荷可藉由此項技術中已知之多種方法測定，諸如使用測徑規，或在身體內時使用成像技術，例如超音波、骨骼掃描、電腦斷層掃描(CT)或磁共振成像(MRI)掃描。
術語「相加」用於意謂兩種或更多種藥劑組合的結果不大於各藥劑個別結果的總和。在一個實施例中，本文所描述之藥劑的組合呈現協同效應。術語「協同性」或「協同」用於意謂兩種或更多種藥劑組合的結果大於各藥劑個別結果的總和。經治療之疾病、病狀或病症的此改善為「協同」效應。「協同量」為產生如本文中所定義「協同」之協同效應之兩種或更多種藥劑組合的量。「協同組合」係指在活體內或替代地在試管內產生根據本文所描述之方法所量測之協同效應之藥劑組合。
確定兩種或更多種藥劑之間協同相互作用，可以不同劑量範圍及/或劑量比的藥劑投與需要治療之個體來明確定地量測各種藥劑達成作用的最佳範圍及達成作用的絕對劑量範圍。然而，如本文所描述，觀測試管內模型或活體內模型中之協同性可預測在人體及其他物種內以及在試管內模型或活體內模型存在的效果，以量測協同效應。此類研究結果亦可用於預測在人體及其他物種內所需的有效劑量及血漿濃度比範圍以及絕對劑量及血漿濃度，諸如應用藥物動力學及/或藥效動力學方法。
如本文所用，「非標準臨床給藥療法」係指投與物質、藥劑、化合物或組合物的療法，其不同於臨床配置中通常用於該物質、藥劑、化合物或組合物的量、劑量或時程。「非標準臨床給藥療法」包括「非標準臨床劑量」或「非標準給藥時程」。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指醫藥學上可接受之本發明化合物的有機或無機鹽。一些實施例亦關於本文所描述化合物之醫藥學上可接受之酸加成鹽。適合之酸加成鹽由形成無毒鹽之酸形成。適合酸加成鹽(亦即含有藥理學上可接受之陰離子的鹽)之非限制性實例包括(但不限於)乙酸鹽、酸式檸檬酸鹽、己二酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環己胺基磺酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、海苯酸鹽(hibenzate)、鹽酸鹽/氯化物、氫溴酸鹽/溴化物、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲烷磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘二甲酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、焦麩胺酸鹽、葡糖二酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、丹寧酸鹽(tannate)、酒石酸鹽、對甲苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽及羥萘甲酸鹽(xinofoate)。
其他實施例係關於本文所描述化合物之鹼加成鹽。適合之鹼加成鹽由形成無毒鹽之鹼形成。適合鹼鹽之非限制性實例包括鋁、精胺酸、苄星(benzathine)、鈣、膽鹼、二乙胺、二乙醇胺、甘胺酸、離胺酸、鎂、葡甲胺、乙醇胺、鉀、鈉、緩血酸胺及鋅之鹽。
本質上呈鹼性之本文所描述化合物能夠與各種無機及有機酸形成多種鹽。可用於製備本文所描述之此類鹼性化合物之醫藥學上可接受之酸加成鹽的酸為形成無毒性酸加成鹽的彼等酸，此等無毒性酸加成鹽例如含有藥理學上可接受之陰離子的鹽，諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽[亦即1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)]。包括鹼性部分(諸如胺基)的本文所描述化合物可與除上述酸之外的各種胺基酸形成醫藥學上可接受之鹽。
可用作試劑以製備本文所描述之彼等化合物的醫藥學上可接受之具有酸性性質之鹼鹽的化學鹼為與此等化合物形成無毒鹼鹽之彼等鹼。此等無毒性鹼鹽包括(但不限於)衍生自藥理學上可接受之此類陽離子(諸如鹼金屬陽離子(例如鉀及鈉)及鹼土金屬陽離子(例如鈣及鎂))、銨或水溶性胺加成鹽(諸如N-甲基葡糖胺(葡甲胺))及低碳烷醇銨的彼等物，及醫藥學上可接受之有機胺之其他鹼鹽。亦可形成酸及鹼之半鹽，例如半硫酸鹽及半鈣鹽。
關於合適鹽之綜述，參見Stahl及Wermuth之Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (Wiley-VCH, 2002)。用於製備本文所描述化合物之醫藥學上可接受之鹽的方法已為熟習此項技術者所知。
如本文所用，「載劑」包括醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑，其在所採用之劑量及濃度下對暴露於其之細胞或個體無毒性。生理學上可接受之載劑通常係水性pH緩衝溶液。生理學上可接受之載劑之實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS™。
本文所描述之化合物亦可以非溶劑化及溶劑化形式存在。因此，一些實施例係關於本文所描述之化合物之水合物及溶劑化物。如本文所用，術語「溶劑合物」描述包含本文所描述之化合物及一或多種醫藥學上可接受之溶劑分子(例如，水(水合物)及乙醇)的分子錯合物。
含有一或多個不對稱碳原子之本文所描述之化合物可以兩種或更多種立體異構物形式存在。當本文所描述之化合物含有烯基或伸烯基時，可存在順/反(或Z/E)幾何異構物。當結構異構物可經由低能量障壁互相轉化時，可發生互變異構現象(『互變現象』)。互變異構在含有例如亞胺基、酮基或肟基之本文所描述之化合物中可呈質子互變異構形式，或在含有芳族部分之化合物中可呈所謂的價互變異構形式。單一化合物可呈現超過一種異構類型。
本文所描述之實施例之化合物包括本文所描述之化合物之所有立體異構物(例如，順及反異構物)及所有光學異構物(例如， R及 S鏡像異構物)以及該等異構物之外消旋、非鏡像異構及其他混合物。雖然吾等之申請專利範圍之範疇內涵蓋所有立體異構物，但熟習此項技術者將認識到特定立體異構物可為較佳的。
在一些實施例中，本文所描述之化合物可以若干種互變異構形式存在，包括烯醇及亞胺形式，及酮及烯胺形式，以及其幾何異構物及混合物。所有該等互變異構形式均包括於本發明實施例之範疇內。互變異構物係以互變異構物集合之混合物形式存在於溶液中。在固體形式中，通常以一種互變異構物為主。儘管可描述一種互變異構物，但本發明實施例包括本發明化合物之所有互變異構物。
本發明實施例之範疇內包括本文所描述之化合物之所有立體異構物、幾何異構物及互變異構形式，包括呈現超過一種異構類型之化合物，及其一或多種之混合物。亦包括酸加成鹽或鹼鹽，其中相對離子具光活性，例如d-乳酸鹽或l-離胺酸；或為外消旋的，例如dl-酒石酸鹽或dl-精胺酸。
順/反異構物可藉由熟習此項技術者熟知之習知技術(例如層析及分步結晶)來分離。
用於製備/分離個別鏡像異構物之習知技術包括自適合之光學純前驅體進行手性合成或使用例如手性高壓液相層析(HPLC)對外消旋體(或鹽或衍生物之外消旋體)進行解析。
或者，外消旋體(或外消旋前驅體)可與合適的光活性化合物(例如醇，或在本文所描述化合物含有酸性或鹼性部分的情況下為鹼或酸，諸如1-苯乙胺或酒石酸)反應。所得非鏡像異構物混合物可藉由層析及/或分步結晶來分離，且藉由熟習此項技術者所熟知之方法使非鏡像異構物中之一者或兩者轉化為相應純鏡像異構物。
本文描述例示性方法及物質，但類似或等效於本文所描述者之方法及物質亦可用於本發明之實施或測試。該等物質、方法及實施例僅具說明性，且不希望具限制性。
II. HPK1 抑制劑本發明之實施例包含式I化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1a及R 1b各自獨立地為(C 1-C 6)烷基，或R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0、1或2個(C 1-C 6)烷基取代之5員雜環烷基； R 2a及R 2b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； R 3a及R 3b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； 各R 4獨立地為經0或1個鹵素或羥基取代之(C 1-C 6)烷基；且 n為0、1或2。
在某些實施例中，式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1a及R 1b各自獨立地為甲基、乙基、異丙基，且其中R 2a、R 2b、R 3a、R 3b、R 4及n如本文所描述之任何實施例中所定義。在一些實施例中，R 1a及R 1b中之一者為甲基。在一些實施例中，R 1a及R 1b中之一者為乙基。在一些實施例中，R 1a及R 1b中之一者為異丙基。在一些實施例中，R 1a及R 1b兩者均為甲基。在一些實施例中，R 1a及R 1b中之一者為甲基，且R 1a及R 1b中之另一者為乙基。在一些實施例中，R 1a及R 1b中之一者為甲基，且R 1a及R 1b中之另一者為異丙基。
在某些實施例中，式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1a及R 1b與其所連接之氮連在一起形成經0、1或2個(C 1-C 6)烷基取代之5員雜環烷基，且其中R 2a、R 2b、R 3a、R 3b、R 4及n如本文所描述之任何實施例中所定義。在一些實施例中，R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0或1個甲基取代之5員雜環烷基。
在某些實施例中，式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2a及R 2b均為氫，且其中R 1a、R 1b、R 3a、R 3b及R 4如本文所描述之任何實施例中所定義。在某些實施例中，式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2a及R 2b中之一者為氫且R 2a及R 2b中之另一者為甲基，且其中R 1a、R 1b、R 3a、R 3b、R 4及n如本文所描述之任何實施例中所定義。
在某些實施例中，式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3a及R 3b各自獨立地為氫、甲基或乙基，且其中R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 4及n如本文所描述之任何實施例中所定義。在一些實施例中，R 3a及R 3b中之一者為氫。在一些實施例中，R 3a及R 3b中之一者為甲基。在一些實施例中，R 3a及R 3b中之一者為乙基。在一些實施例中，R 3a及R 3b中之一者為氫且R 3a及R 3b中之另一者為甲基。在一些實施例中，R 3a及R 3b中之一者為氫且R 3a及R 3b中之另一者為乙基。在一些實施例中，R 3a及R 3b均為甲基。
在某些實施例中，式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4為甲基或乙基，n為1，且其中R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a及R 3b如本文所描述之任何實施例中所定義。在一些實施例中，R 4為甲基。在一些實施例中，R 4為乙基。在一些實施例中，R 4為經一個鹵素取代之甲基。在一些實施例中，R 4為經一個羥基取代之甲基。在一些實施例中，R 4連接至鄰接於N原子之碳。
在某些實施例中，式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中各R 4為甲基或乙基，n為2，且其中R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a及R 3b如本文所描述之任何實施例中所定義。在一些實施例中，兩個R 4均為甲基。
在某些實施例中，本發明提供式II化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2a、R 2b、R 3a及R 4如本文所描述之任何實施例中所定義。
在一些實施例中，本發明提供一種化合物，當R 3a不同於R 3b時，就R 2、R 3a及R 3b之定向而言，該化合物具有絕對立體化學，如式IIa中所示： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2a、R 2b、R 3a及R 4如本文所描述之任何實施例中所定義。
在一些實施例中，本發明提供式I、II、IIa化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2a及R 2b均為氫，R 3a為氫，R 3b為甲基或乙基，且R 4為甲基。
在一些實施例中，本發明提供HPK1抑制劑，其中該HPK1抑制劑為化合物4-[1-胺丙基]-2-{6-[5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5 H -吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或 4-[1-胺丙基]-2-{3-[5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。
舉例而言，本發明之HPK1抑制劑為化合物4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮； 4-[(1 R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮； 4-[(1 S)-1-胺乙基]-2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮； 4-[(1 R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{3-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。
較佳地，本發明之HPK1抑制劑為4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。
III. PD-1 軸結合拮抗劑本發明之實施例包含PD-1軸結合拮抗劑。
如本文所用，術語「PD-1軸結合拮抗劑」或「PD-1軸拮抗劑」係指抑制PD-1軸結合搭配物(例如，PD-1、PD-L1、PD-L2)與其結合搭配物中之一或多者之相互作用的分子，例如以便解決或部分解決由PD-1信號傳導軸上之信號傳導引起的T細胞功能異常—其結果為恢復、部分恢復或增強T細胞功能(例如增殖、細胞介素產生、標靶細胞殺死、存活)。如本文所用，PD-1軸結合拮抗劑包括(i) PD-1拮抗劑、(ii) PD-L1拮抗劑及/或(iii) PD-L2拮抗劑中之一或多者。
i) PD-1拮抗劑 如本文所用，術語「PD-1拮抗劑」係指一種分子，其減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與其結合搭配物(諸如PD-L1、PD-L2)中之一或多者之相互作用引起的信號轉導。在一些實施例中，PD-1拮抗劑為抑制PD-1與其結合搭配物之結合的分子。在一特定態樣中，PD-1拮抗劑抑制PD-1與PD-L1及/或PD-L2之結合。在特定實施例中，PD-1拮抗劑抑制PD-1與PD-L1之結合。在另一實施例中，PD-1拮抗劑抑制PD-1與PD-L2之結合。在另一實施例中，PD-1拮抗劑抑制PD-1與PD-L1及PD-L2兩者之結合。舉例而言，PD-1拮抗劑包括抗PD-1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與PD-L1及/或PD-L2之相互作用引起之信號轉導的其他分子。在一些實施例中，PD-1拮抗劑減少藉由或經由T淋巴球上所表現之細胞表面蛋白介導的負共刺激信號，該等T淋巴球係經由PD-1的信號傳導介導，以致使功能異常T細胞難以恢復正常功能。在一些實施例中，PD-1拮抗劑為抗PD-1抗體(αPD-1)。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑阻斷癌細胞上表現之PD-L1與免疫細胞(T細胞、B細胞或NKT細胞)上表現之PD-1的結合且較佳亦阻斷癌細胞上表現之PD-L2與免疫細胞表現之PD-1的結合。關於PD-1及其配位體之替代名稱或同義語包括：PDCD1、PD1、CD279及SLEB2用於PD-1；PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274及B7-H用於PD-L1；及PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc及CD273用於PD-L2。在以本發明之治療方法、藥物及用途中的任一者治療人類個體時，PD-1拮抗劑阻斷人類PD-L1與人類PD-1之結合且阻斷人類PD-L1及PD-L2與人類PD-1之結合。
適用於本發明之治療方法、藥物及用途中之任一者之PD-1拮抗劑包括單株抗體(mAb)或其抗原結合片段，其特異性結合於PD-1或PD-L1，且較佳特異性結合於人類PD-1或人類PD-L1。mAb可為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體，且可包括人類恆定區。在一些實施例中，人類恆定區選自由IgG1、IgG2、IgG3及IgG4恆定區組成之群，且在較佳實施例中，人類恆定區為IgG1或IgG4恆定區。在一些實施例中，抗原結合片段係選自由Fab、Fab'-SH、F(ab') 2、scFv及Fv片段組成之群。
結合至人類PD-1且適用於本發明之治療方法、藥物及用途之mAb之實例描述於美國專利第7,488,802號、第7,521,051號、第8,008,449號、第8,354,509號、第8,168,757號、PCT專利公開案第WO 2004/004771號、第WO 2004/072286號、WO 2004/056875號及美國專利公開案第2011/0271358號中。在本發明之治療方法、藥物及用途中適用作PD-1拮抗劑的特異性抗人類PD-1 mAb包括：薩善利單抗(RN888, PF-06801591, Pfizer Inc.)、尼沃單抗(OPDIVO®, ONO-4538, BMS-936558, MDX1106, Bristol-Myers Squibb Company)、帕博利珠單抗(KEYTRUDA®, MK-3475，藍布洛利珠單抗(lambrolizumab), Merck & Co., Inc.)、匹地利珠單抗(CT-011)、西米普利單抗(LIBTAYO®, REGN2810, Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)、替雷利珠單抗(BGB-A317, BeiGene Ltd./Celgene Corporation)、斯巴達珠單抗(PDR001, Novartis AG)、信迪利單抗(IBI308, Innovent Biologics, Inc.)、MEDI-0680 (AMP-514, AstraZeneca PLC)、BGB-108或AGEN2034 (Agenus Inc.)、傑諾珠單抗(CBT-501, CBT Pharmaceuticals)、CBT-502 (CBT Pharmaceuticals)、卡瑞利珠單抗(SHR-1210, Incyte Corporation)，或其組合。
在某些實施例中，PD-1拮抗劑為抗PD-1抗體。
較佳地，抗PD-1抗體為帕博利珠單抗、尼沃單抗或薩善利單抗。在一些較佳實施例中，抗PD-1抗體為尼沃單抗。在一些較佳實施例中，抗PD-1抗體為帕博利珠單抗。在一些較佳實施例中，抗PD-1抗體為薩善利單抗。薩善利單抗為結合至PD-1受體之人類化免疫球蛋白G4 (IgG4)單株抗體(mAb)。藉由阻斷該受體與PD-L1及PD-L2之相互作用，使得PD-1路徑介導之對免疫反應的抑制被釋放，引起抗腫瘤免疫反應。已發現薩善利單抗對包括非小細胞肺癌及尿道上皮癌之一組抗PD1敏感性實體腫瘤類型之臨床抗腫瘤活性。薩善利單抗描述於例如美國專利第US 10,155,037號中，該專利特此併入以用於所有目的。
其他例示性PD-1拮抗劑包括以下文獻中所述之彼等物：美國專利申請公開案20130280265、美國專利申請公開案20130237580、美國專利申請公開案20130230514、美國專利申請公開案20130109843、美國專利申請公開案20130108651、美國專利申請公開案20130017199、美國專利申請公開案20120251537、美國專利申請公開案20110271358、歐洲專利EP2170959B1、PCT公開案第WO 2011/066342號、PCT公開案第WO 2015/035606號、PCT公開案第WO 2015/085847號、PCT公開案第WO 2015/112800號、PCT公開案第WO 2015/112900號、PCT公開案第WO 2016/092419號、PCT公開案第WO 2017/017623號、PCT公開案第WO 2017/024465號、PCT公開案第WO 2017/054646號、PCT公開案第WO 2017/071625號、PCT公開案第WO 2017/019846號、PCT公開案第WO 2017/132827號、PCT公開案第WO 2017/214092號、PCT公開案第WO 2018/013017號、PCT公開案第WO 2018/053106號、PCT公開案第WO 2018/055503號、PCT公開案第WO 2018/053709號、PCT公開案第WO 2018/068336號及PCT公開案第WO 2018/072743號，其全部揭示內容以引用之方式併入本文中。其他例示性PD-1拮抗劑描述於Curran等人, PD-1 and CTLA-4 combination blockade expands infiltrating T cells and reduces regulatory T and myeloid cells within B16 melanoma tumors, PNAS, 2010, 107, 4275；Topalian等人, Safety, activity, and immune correlates of anti-PD-1 antibody in cancer, New Engl. J. Med.2012, 366, 2443；Brahmer等人, Safety and activity of anti-PD-L1 antibody in patients with advanced cancer, New Engl. J. Med.2012, 366, 2455；Dolan等人, PD-1 pathway inhibitors: changing the landscape of cancer immunotherapy, Cancer Control2014, 21, 3；及Sunshine等人, Pd-1/Pd-L1 Inhibitors, Curr. Opin. in Pharmacol.2015, 23。
ii) PD-L1拮抗劑 如本文所用之術語「PD-L1拮抗劑」係指一種分子，其減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L1與其結合搭配物(諸如PD-1、B7-1)中之一或多者之相互作用引起的信號轉導。在一些實施例中，PD-1軸拮抗劑包含PD-L1拮抗劑。在一些實施例中，PD-L1拮抗劑抑制PD-L1與其結合搭配物之結合。在一特定態樣中，PD-L1拮抗劑抑制PD-L1與PD-1之結合。在另一特定態樣中，PD-L1拮抗劑抑制PD-L1與PD-1及/或B7-1之結合。在另一特定態樣中，PD-L1拮抗劑抑制PD-L1與PD-1及B7-1兩者之結合。
在一些實施例中，PD-L1拮抗劑包括抗PD-L1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L1與其結合搭配物(諸如PD-1及/或B7-1)中之一或多者之相互作用引起的信號轉導的其他分子。在一些實施例中，PD-L1拮抗劑減少藉由或經由T淋巴球上所表現之細胞表面蛋白介導的負共刺激信號，該等T淋巴球係經由PD-L1的信號傳導介導，以致使功能異常T細胞難以恢復正常功能。在一些實施例中，PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體(αPD-L1)。在一些實施例中，PD-L1抗體為其生物類似物或生物等效物。
在一些實施例中，PD-1拮抗劑為抗PD-1抗體。
在一些實施例中，適用於本發明之抗PD-1抗體包括BMS-936559 (Bristol-Myers Squibb Company)、KN035 (Jiangsu Alphamab biopharmaceuticals Co., Ltd.)、阿替利珠單抗(TECENTRIQ®, MPDL3280A, Roche Holding AG)、度伐魯單抗(IMFINZI®, AstraZeneca PLC)及/或阿維魯單抗(BAVENCIO®, Merck & Co., Inc.及Pfizer, Inc.)。
其他例示性PD-L1拮抗劑包括以下文獻中所述之彼等物：美國專利申請公開案20090055944、美國專利申請公開案20100203056、美國專利申請公開案20120039906、美國專利申請公開案20130045202、美國專利申請公開案20130309250、美國專利申請公開案US20130034559、美國專利申請公開案US20150282460、美國專利申請公開案20160108123、PCT公開案第WO 2011/066389號、PCT公開案第WO 2016/000619號、PCT公開案第WO 2016/094273號、PCT公開案第WO 2016/061142號、PCT公開案第WO 2016/149201號、PCT公開案第WO 2016/149350號、PCT公開案第WO 2016/179576號、PCT公開案第WO 2017/020801號、PCT公開案第WO 2017/103147號、PCT公開案第WO 2017/112741號、PCT公開案第WO 2017/205213號、PCT公開案第WO 2017/054646號、PCT公開案第WO 2017/084495號、PCT公開案第WO 2017/161976號、PCT公開案第WO 2018/005682號、PCT公開案第WO 2018/053106號、PCT公開案第WO 2018/085469號、PCT公開案第WO 2018/111890號及PCT公開案第WO 2018/106529號，其全部揭示內容以引用之方式併入本文中。其他例示性PD-L1結合拮抗劑描述於Sunshine等人, 2015中。
iii) PD-L2拮抗劑 如本文所用之術語「PD-L2拮抗劑」係指一種分子，其減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L2與其結合搭配物(諸如PD-1)中之一或多者之相互作用引起的信號轉導。在一些實施例中，PD-L2拮抗劑為抑制PD-L2與其結合搭配物結合之分子。在一特定態樣中，PD-L2拮抗劑抑制PD-L2與PD-1之結合。在一些實施例中，PD-L2拮抗劑包括抗PD-L2抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L2與其結合搭配物中之任一或多者(諸如PD-1)之相互相用引起的信號轉導之其他分子。在一些實施例中，PD-L2拮抗劑減少藉由或經由T淋巴球上所表現之細胞表面蛋白介導的負共刺激信號，該等T淋巴球係經由PD-L2的信號傳導介導，以致使功能異常T細胞難以恢復正常功能。在一些實施例中，PD-L2拮抗劑為PD-L2免疫黏附素。
IV. 方法、用途及藥物 一般方法分子生物學中之標準方法描述於Sambrook, Fritsch及Maniatis (1982年及1989年第2版，2001年第3版) Molecular Cloning, A Laboratory Manual；Sambrook及Russell Molecular Cloning, 第3版, 2001; Wu, Recombinant DNA, 第217卷中。標準方法亦見於Ausbel等人, Current Protocols in Molecular Biology, 第1-4卷, 2001，該文獻描述細菌細胞之選殖及DNA突變誘發(第1卷)、哺乳動物細胞及酵母中之選殖(第2卷)、糖結合物及蛋白質表現(第3卷)及生物資訊(第4卷)。
描述用於蛋白純化之方法，包括免疫沈澱、層析、電泳、離心及結晶(Coligan等人, Current Protocols in Protein Science, 第1卷, 2000, John Wiley and Sons, Inc., New York)。描述化學分析、化學修飾、轉譯後修飾、融合蛋白產生及蛋白質糖基化(例如Coligan等人, Current Protocols in Protein Science, 第2卷, 2000；Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, 第3卷, 2001, 第16.0.5-16.22.17頁；Sigma-Aldrich, Co. Products for Life Science Research, 2001, 第45-89頁；Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, 第384-391頁)。描述多株及單株抗體之產生、純化及片段化(Coligan等人, Current Protocols in Immunology, 第1卷, 2001；Harlow及Lane, Using Antibodies, 1999)。可獲得用於表徵配位體/受體相互作用之標準技術(例如Coligan等人, Current Protocols in Immunology, 第4卷, 2001)。
可製備單株、多株及人類化抗體(例如Sheperd及Dean (編) Monoclonal Antibodies, 2000；Kontermann及Dubel (編) Antibody Engineering, 2001；Harlow及Lane, Antibodies A Laboratory Manual, 1988, 第139-243頁；Carpenter等人, Non-Fc receptor-binding humanized anti-CD3 antibodies induce apoptosis of activated human T cells, J. Immunol. 2000, 165:6205；He等人, Humanization and pharmacokinetics of a monoclonal antibody with specificity for both E-and P-selectin,J. Immunol. 1998, 160:1029；Tang等人, Use of a peptide mimotope to guide the humanization of MRK-16, an anti-P-glycoprotein monoclonal antibody ,  J. Biol. Chem. 1999, 274:27371-27378；Baca等人, Antibody humanization using monovalent phage display, J. Biol. Chem. 1997, 272:10678-10684；Chothia等人, Conformations of immunoglobulin hypervariable regions, Nature 1989, 342:877-883；Foote及Winter Antibody framework residues affecting the conformation of the hypervariable loops, J. Mol. Biol. 1992, 224:487-499；美國專利第6,329,511號)。
人類化之替代方式係使用噬菌體上所呈現之人類抗體庫或轉殖基因小鼠中之人類抗體庫(Vaughan等人, Human antibodies with sub-nanomolar affinities isolated from a large non-immunized phage display library, Nature Biotechnol. 1996, 14:309-314；Barbas , Synthetic human antibodies, Nature Medicine1995, 1:837-839；Mendez等人, Functional transplant of megabase human immunoglobulin loci recapitulates human antibody response in mice, Nature Genetics 1997, 15:146-156；Hoogenboom and Chames, Natural and designer binding sites made by phage display technology, Immunol. Today2000, 21:371-377；Barbas等人, Phage Display: A Laboratory Manual, 2001；Kay等人, Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, 1996；de Bruin等人, Selection of high-affinity phage antibodies from phage display libraries, Nature Biotechnol.1999, 17:397-399)。
抗原之純化並非抗體產生所必需。動物可用攜帶所關注抗原之細胞進行免疫。可隨後自免疫接種動物分離出脾細胞，且脾細胞可與骨髓瘤細胞株融合以產生融合瘤(例如Meyaard, L.等人 ,LAIR-1, a novel inhibitory receptor expressed on human mononuclear leukocytes, Immunity1997, 7:283-290；Wright等人, Inhibition of chicken adipocyte differentiation by in vitroexposure to monoclonal antibodies against embryonic chicken adipocyte plasma membranes, Immunity2000, 13:233-242；Preston等人, The leukocyte/neuron cell surface antigen OX2 binds to a ligand on macrophages) , Eur. J. Immunol.1997, 27:1911-1918, Kaithamana等人, Induction of experimental autoimmune Graves' disease in BALB/c mice, J. Immunol. 1999, 163:5157-5164)。
抗體可與例如小藥物分子、酶、脂質體、聚乙二醇(PEG)結合。抗體適用於治療、診斷、套組或其他目的，且包括與例如染料、放射性同位素、酶或金屬(例如膠態金)偶合之抗體(例如Le Doussal等人, Enhanced in vivotargeting of an asymmetric bivalent hapten to double-antigen-positive mouse B cells with monoclonal antibody conjugate cocktails, J. Immunol. 1991, 146:169-175；Gibellini等人, Extracellular HIV-1 Tat protein induces the rapid Ser133 phosphorylation and activation of CREB transcription factor in both Jurkat lymphoblastoid T cells and primary… , J. Immunol.1998160:3891-3898； Hsing 及 Bishop, Requirement for nuclear factor- κ B activation by a distinct subset of CD40-mediated effector functions in B lymphocytes, J. Immunol.1999, 162:2804-2811；Everts等人, Selective intracellular delivery of dexamethasone into activated endothelial cells using an E-selectin-directed immunoconjugate, J. Immunol.2002, 168:883-889)。
可獲得用於流式細胞分析技術之方法，包括螢光活化之細胞分選(fluorescence activated cell sorting，FACS) (例如Owens等人, Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, 1994；Givan Flow Cytometry, 第二版; 2001；Shapiro, Practical Flow Cytometry, 2003)。可獲得適用於修飾核酸(包括核酸引子及探針、多肽及抗體)之螢光試劑，其用作例如診斷試劑(Molecular Probes, Catalogue, 2003；Sigma-Aldrich, Catalogue, 2003。
描述免疫系統之標準組織學方法(例如Muller-Harmelink (編), Human Thymus: Histopathology and Pathology, 1986；Hiatt等人, Color Atlas of Histology, 2000；Louis等人, Basic Histology: Text and Atlas, 2002。
可獲得用於測定例如抗原片段、前導序列、蛋白質摺疊、功能域、糖基化位點及序列排比之套裝軟體及資料庫(例如GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD)；GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA)；DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada)；Menne等人, A comparison of signal sequence prediction methods using a test set of signal peptides, Bioinformatics2000, 16: 741-742；Menne,K.M.L.等人, A comparison of signal sequence prediction methods using a test set of signal peptides, Bioinformatics2000, 16, 741-742；Wren等人, SIGNAL-sequence information and GeNomic AnaLysis Comput. Methods Programs Biomed.2002, 68:177-181；von Heijne, Patterns of amino acids near signal‐sequence cleavage sites, Eur. J. Biochem. 1983, 133:17-21；von Heijne, A new method for predicting signal sequence cleavage sites, Nucleic Acids Res. 1986, 14:4683-4690) 。
治療方法及用途本發明提供治療方法及用途，其包含向個體投與如本文所描述之組合，視情況進一步與其他治療性或姑息性藥劑組合。
在一個態樣中，本發明提供一種治療個體之癌症的方法，其包含向個體投與本發明之組合療法。在一個態樣中，本發明提供一種用於治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與一量之HPK1抑制劑及一量之PD-1軸結合拮抗劑，其中該等量一起有效治療癌症，且其中該HPK1抑制劑為本文所揭示之式I、II或IIa化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些此類實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，該方法涉及使用本文所描述之HPK1抑制劑與抗PD-L1抗體的組合。
在一些實施例中，該方法涉及4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與選自以下之抗PD-1抗體組合的用途：薩善利單抗、尼沃單抗、帕博利珠單抗、匹地利珠單抗、西米普利單抗、替雷利珠單抗、斯巴達珠單抗、信迪利單抗、MEDI-0680、BGB-108，或AGEN2034傑諾珠單抗、CBT-502、卡瑞利珠單抗或其組合。
較佳地，該方法涉及4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與薩善利單抗組合的用途。
較佳地，該方法涉及4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與尼沃單抗組合的用途。
較佳地，該方法涉及4-[(1R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與帕博利珠單抗組合的用途。
在一些實施例中，在停止治療之後，治療引起個體之持續反應。本發明之方法可用於治療需要增強免疫原性(諸如增加腫瘤免疫原性以治療癌症)的病狀。因此，可治療多種癌症，或可延遲其惡化。
在一些實施例中，個體患有對一或多種PD-1軸結合拮抗劑具有抗性(已證實具有抗性)之癌症。在一些實施例中，對PD-1軸結合拮抗劑之抗性包括癌症或難治性癌症的復發。復發可指治療後，癌症在原始部位或新部位處再現。在一些實施例中，對PD-1軸結合拮抗劑之抗性包括在用PD-1軸結合拮抗劑治療期間癌症惡化。在一些實施例中，對PD-1軸結合拮抗劑之抗性包括對治療無反應之癌症。癌症可能在治療開始時便具有抗性或其可能在治療期間變得具有抗性。在一些實施例中，癌症處於初期或晚期。
在某些實施例中，個體已接受一種、兩種、三種、四種、五種或更多種先前癌症療法。在其他實施例中，個體未曾經過治療。在一些實施例中，個體在其他癌症治療時惡化。在某些實施例中，先前癌症療法包含免疫療法。在其他實施例中，先前癌症療法包含化學療法。在一些實施例中，腫瘤已復發。在一些實施例中，腫瘤為晚期的。在一些實施例中，腫瘤為轉移性的。在其他實施例中，腫瘤不為轉移性的。
在一些實施例中，個體已接受先前療法以治療腫瘤且腫瘤為復發性或難治性的。在一些實施例中，個體已接受先前免疫腫瘤學療法以治療腫瘤且腫瘤為復發性或難治性的。在一些實施例中，個體已接受超過一種先前療法以治療腫瘤且個體為復發性或難治性的。
在如本文所描述之方法之一些實施例中，癌症為實體腫瘤。
在另一實施例中，本發明係關於一種用於治療癌症之方法，其中癌症係選自由以下癌症組成之群：腦癌、頭/頸癌(包括頭部及頸部之鱗狀細胞癌(SCCHN))、***癌、膀胱癌(包括尿道上皮癌，亦稱為移行細胞癌(TCC))、肺癌(包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)及非小細胞肺癌NSCLC))、乳癌、卵巢癌、骨癌、大腸直腸癌、腎癌、肝癌(包括肝細胞癌(HCC))、胰臟癌、食道癌(包括鱗狀細胞癌(SCC))、胃癌、胃食道接合部癌、甲狀腺癌、宮頸癌、子宮癌及/或腎癌。在另一實施例中，本發明係關於一種用於治療癌症之方法，其中癌症係選自由頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、非小細胞肺癌(NSCLC)、尿道上皮癌及胃癌組成之群。在一些實施例中，本發明係關於一種治療癌症之方法，其中癌症為黑色素瘤。
在另一實施例中，本發明提供用於治療個體之黑色素瘤或乳癌的方法，其包含向個體投與4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與薩善利單抗、尼沃單抗或帕博利珠單抗的組合。
在另一實施例中，本發明提供用於治療個體之黑色素瘤或乳癌的方法，其包含向個體投與4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與薩善利單抗或尼沃單抗的組合。
在一個實施例中，本發明提供用於治療個體之黑色素瘤的方法，其包含向該個體投與4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與薩善利單抗的組合。
在另一實施例中，本發明提供用於治療個體之黑色素瘤或乳癌的方法，其包含向個體投與4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與尼沃單抗的組合。
在另一實施例中，本發明提供用於治療個體之黑色素瘤或乳癌的方法，其包含向個體投與4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽與帕博利珠單抗的組合。
在一些實施例中，該方法可進一步包含其他療法。其他療法可為放射療法、手術(例如***腫瘤切除術及***切除術)、化學療法、基因療法、DNA療法、病毒療法、RNA療法、免疫療法、骨髓移植、奈米療法、單株抗體療法、光照療法或前述各者之組合。其他療法可呈輔助或新輔助療法形式。在一些實施例中，其他療法為投與小分子酶抑制劑或抗轉移藥劑。在一些實施例中，其他療法為投與副作用限制劑(例如，意欲減少治療副作用之出現及/或嚴重程度的藥劑，諸如抗噁心劑等)。在一些實施例中，其他療法為放射療法。在一些實施例中，其他療法為手術。在一些實施例中，其他療法為放射療法與手術之組合。在一些實施例中，其他療法為免疫療法。
在一些實施例中，本發明之方法進一步包含向個體投與化學療法、放射療法、免疫療法或光照療法，或其任何組合。
在上文及本文所描述之方法、用途、組合物及套組的一些實施例中，療法進一步包含投與用於治療個體之癌症或延遲其惡化的化學治療劑。在一些實施例中，個體在用HPK1抑制劑與PD-1軸結合拮抗劑組合治療之前已用化學治療劑治療。在一些實施例中，用HPK1抑制劑、PD-1軸結合拮抗劑之組合治療之個體難以用化學治療劑治療。整個申請案中所描述的方法、用途、組合物及套組之一些實施例進一步包含投與用於治療或延遲癌症惡化的化學治療劑。
在一些實施例中，本發明之組合療法包含投與HPK1抑制劑與PD-1軸結合拮抗劑之組合。在本文所提供之方法中，HPK1抑制劑及PD-1軸結合拮抗劑中之各者可以此項技術中已知之任何適合方式投與。在一個實施例中，HPK1抑制劑及PD-1軸結合拮抗劑同時或以任一次序依序投與。
在前述各者之一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為：PD-1拮抗劑；PD-L1拮抗劑；或PD-1拮抗劑及PD-L1拮抗劑。
在前述各者之一些實施例中，a. PD-1結合拮抗劑及PD-L1結合拮抗劑存在於相同組合物中。
在一個態樣中，本發明提供一種協同組合。在一些此類實施例中，本發明提供一種協同組合，其包含：(i)式I、II或IIa之HPK1抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽；及(ii)本文所描述之PD-1軸結合拮抗劑，其用於治療個體之癌症，其中組分(i)及組分(ii)為協同的。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為PD-1拮抗劑。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為PD-L1拮抗劑。
在一些實施例中，本發明提供一種協同組合，其包含：(i)式I、II或IIa之HPK1抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽；及(ii)薩善利單抗；其用於治療個體之癌症，其中組分(i)及組分(ii)為協同的。
在一特定實施例中，本發明提供一種組合，其包含：(i) 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽；及(ii)抗PD-1抗體；其用於治療個體之癌症。
在一特定實施例中，本發明提供一種組合，其包含：a. (i) 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽；及(ii)薩善利單抗；其用於治療個體之癌症。
在另一實施例中，本發明提供一種組合，其包含：a. (i) 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽；及(ii)尼沃單抗；其用於治療個體之癌症。
在另一特定實施例中，本發明提供一種組合，其包含：a. (i) 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽；及(ii)帕博利珠單抗；其用於治療個體之癌症。
在前述各者之一特定實施例中，本發明提供一種組合，其中PD-1拮抗劑為抗PD-1抗體；及/或PD-L1拮抗劑為抗PD-L1抗體。
在本文所描述之方法、用途、組合物及套組之一些實施例中，癌症對治療劑或治療類別(包括標準照護藥劑或類別)具有抗性。在本文所描述之方法、用途、組合物及套組之一些實施例中，癌症之特徵在於對治療劑或治療類別(包括標準照護藥劑或類別)具有先天性或獲得性抗性。
在本文所描述之方法、用途、組合物及套組之一些實施例中，癌症為難治性的，亦即，癌症對治療劑或治療類別(包括標準照護藥劑或類別)之治療完全無反應或最初有反應，但在極短時段內開始再次生長。
在一些實施例中，本文所描述之方法、用途及組合與療法、輔助療法、一線療法、二線療法或三線或更晚線療法有關。在一些實施例中，本文所描述之方法、用途及組合與療法有關。在一些實施例中，本文所描述之方法、用途及組合與輔助療法有關。在一些實施例中，本文所描述之方法、用途及組合與一線療法有關。在一些實施例中，本文所描述之方法、用途及組合與二線療法有關。在一些實施例中，本文所描述之方法、用途及組合與三線或更晚線療法有關。
V. 劑型及療法本發明之化合物之投與可受能夠將化合物遞送至作用部位之任何方法影響。此等方法包括經口途徑、十二指腸內途徑、非經腸注射(包括靜脈內、皮下、肌肉內、血管內或輸注)、局部及直腸投與。
熟習此項技術者在考慮多種因素(包括(但不限於)疾病之惡化程度、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、所投與之化合物、投與時間及途徑、需要治療之癌症之性質及惡化以及個體所服用之其他藥物)的情況下，將能夠判定向患者投與之如本發明之組合中所用之各化合物的適當量、劑量或劑型。
在一些實施例中，本文之藥劑及組合之投與方法可包括經口、靜脈內、肌肉內、皮下、局部、經皮、腹膜內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、腦室內或鼻內投與。
可調整給藥方案以提供最佳所需反應。舉例而言，可投與單次推注，可隨時間投與若干次分次劑量，或可如治療情況之緊急程度所指示而按比例減少或增加劑量。為了易於投與及劑量之均勻性，將非經腸組合物調配成單位劑型尤其有利。如本文所用，單位劑型係指適合作為單位劑量用於待治療之個體的實體不連續單元；各單元含有經計算以產生所要治療作用之預定量之活性化合物與所需醫藥載劑。本發明之單位劑型之規格取決於且直接依賴於：(a)化學治療劑之獨特特徵及待實現之特定治療或預防作用，及(b)此類活性化合物混配技術中固有的關於個體治療敏感性之限制。
因此，熟習此項技術者會瞭解，基於本文提供之揭示內容，根據治療技術中熟知之方法調整劑量及給藥方案。亦即，可容易確定最大可耐受劑量，且亦可確定向患者提供可偵測治療益處之有效量，亦可確定投與各藥劑的暫時需要以向患者提供可偵測的治療益處。因此，儘管本文舉例說明某些劑量及投與方案，但此等實例決不限制在實施本發明時可向患者提供的劑量及投與方案。
對於如本文所描述之組合療法，該等藥劑可以其批准劑量投與。繼續治療，只要觀測到臨床益處或直至發生不可接受之毒性或疾病惡化才停止。儘管如此，但在某些實施例中，本發明之組合療法可有利地利用較低劑量之所投與治療劑，從而避免與各種單一療法相關之可能毒性或併發症。舉例而言，所投與藥劑之劑量顯著低於批准之劑量，例如次治療劑量之HPK1抑制劑與次治療劑量之PD-1軸結合拮抗劑組合投與。熟習此項技術者應瞭解，當本發明之藥劑用作組合療法之一部分時，與單獨藥劑投與個體時相比，可能需要較低劑量之藥劑，可經由使用組合療法實現協同治療作用，此又允許使用較低劑量之藥劑以獲得所需治療作用。
在一個實施例中，劑量可較低且亦可以較低頻率施用，由此可減少副作用之發生率或嚴重程度。此符合待治療之個體之需求及要求。
在一個實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含一量，該量聯合起來治療癌症時可為治療有效的。在此醫藥組合物中，兩種或更多種化合物可一起、一個接另一個或以一個組合單位劑型或以兩個單獨單位劑型分開投與。
單位劑型亦可為固定組合。應注意，劑量值可隨待減輕之病狀的類型及嚴重程度而變化，且可包括單次或多次劑量。此外應瞭解，對任何特定個體而言，特定劑量方案應根據個體需要及投與組合物或監督組合物投與的人員的專業判斷而隨時間調整，且本文所闡述之劑量範圍僅為例示性的，且不意欲限制所主張之組合物的範疇或實務。舉例而言，可基於藥物動力學或藥效學參數來調整劑量，該等參數可包括臨床效應，諸如毒性效應及/或實驗值。因此，本發明涵蓋如由熟習此項技術者所確定之患者內劑量遞增。確定化學治療劑之適當投與劑量及療法在相關技術中熟知，且涵蓋於本文所揭示之教示中，如熟習此項技術者所理解。
本發明藥劑之投與量將視所治療之個體、病症或病狀之嚴重程度、投與速率、化合物之配置及處方醫師之判斷而定。
可投與有效量之HPK1抑制劑及PD-1軸結合拮抗劑以預防或治療疾病。HPK1抑制劑及PD-1軸結合拮抗劑之適當劑量可基於以下判定：待治療之疾病類型、HPK1抑制劑、PD-1軸結合拮抗劑、疾病之嚴重程度及病程、個體之臨床病狀、個體之臨床病史及對治療之反應以及主治醫師之判斷。在一些實施例中，HPK1抑制劑與PD-1軸結合拮抗劑(例如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體)之組合療法具有協同作用，藉此減少組合中之HPK1抑制劑、PD-1軸結合拮抗劑之有效劑量(相對於HPK1抑制劑、PD1軸結合拮抗劑中之各者作為單一藥劑的有效劑量)。
在一些實施例中，個體患有晚期或轉移性實體腫瘤，其在包括至少一種檢查點抑制劑(例如，PD-1、PD-L1或CTLA-4)之全身性抗癌療法之後已惡化。在一些實施例中，個體患有晚期或轉移性實體腫瘤，其對一或多種檢查點抑制劑(例如，PD-1、PD-L1或CTLA-4)呈現抗性。在一些實施例中，個體患有晚期或轉移性實體腫瘤，其在包括至少一種檢查點抑制劑(例如，PD-1、PD-L1或CTLA-4)之全身性抗癌療法之後已惡化，且對檢查點抑制劑顯呈現抗性。在一些此類實施例中，晚期或轉移性腫瘤狀態已經組織學或細胞學證實。
在前述各者之一些實施例中，實體腫瘤係選自由以下組成之群：胃/胃食道接合部(GEJ)癌、頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)及尿道上皮癌。在前述各者之一些實施例中，實體腫瘤係選自由非小細胞肺癌及其他實體腫瘤組成之群。在一些實施例中，實體腫瘤為晚期實體腫瘤。在一些其他實施例中，實體腫瘤為轉移性實體腫瘤。
在一些實施例中，PD1軸結合拮抗劑為薩善利單抗且可在整個治療過程中以約14天(±2天)或約21天(±2天)或約30天(±2天)之時間間隔以約1、2、3、4、5、6、7或8 mg/kg之劑量皮下投與。在一些實施例中，薩善利單抗係以約80、150、160、200、240、250、300、320、350或400 mg之均一劑量投與。
VI.套組 在一些實施例中，本發明提供一種套組，其包含：(i)包含本文所描述之HPK1抑制劑及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物；(ii)包含本文所描述之PD-1軸結合拮抗劑及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
在一些實施例中，套組進一步包含藥品說明書，其包含與PD-1軸結合拮抗劑(例如抗PD-1或抗PD-L1抗體)聯合使用HPK1抑制劑治療或延遲個體之癌症惡化或增強患有癌症之個體之免疫功能的說明。在另一實施例中，套組中可包括本文所描述之HPK1抑制劑、PD-1軸結合拮抗劑中之任一者。舉例而言，在一些實施例中，HPK1抑制劑為式I、II或IIa化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些此等實施例中，HPK1抑制劑為4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抗PD-1抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體選自薩善利單抗、尼沃單抗、帕博利珠單抗、匹地利珠單抗、西米普利單抗、替雷利珠單抗、斯巴達珠單抗、信迪利單抗、MEDI-0680、BGB-108或AGEN2034傑諾珠單抗、CBT-502、卡瑞利珠單抗或其組合。在一個實施例中，PD-1結合拮抗劑為薩善利單抗。在一個實施例中，PD-1結合拮抗劑為尼沃單抗。
在一些實施例中，HPK1抑制劑及PD-1軸結合拮抗劑儲存於同一容器中或各別容器中。適合的容器包括例如瓶、小瓶、袋及注射器。容器可由多種材料形成，諸如玻璃、塑膠(諸如聚氯乙烯或聚烯烴)或金屬合金(諸如不鏽鋼或赫史特合金(hastelloy))。在一些實施例中，容器容納調配物，且容器上或與容器結合之標籤可指示使用說明。套組可進一步包括自商業及使用者的觀點來看合乎需要之其他物質，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針、注射器及帶有使用說明之藥品說明書。在一些實施例中，套組進一步包括一或多種另一藥劑(例如化學治療劑及抗腫瘤劑)。適用於一或多種藥劑之容器包括例如瓶、小瓶、袋及注射器。
本說明書足以使熟習此項技術者能夠實施本發明。熟習此項技術者將根據前文描述顯而易知除本文所展示及描述之修改之外的各種本發明修改，且該等修改在隨附申請專利範圍之範疇內。本文所引用之所有公開案、專利及專利申請案均以全文引用的方式併入本文中以達成所有目的。
實例參考以下實例將更好地理解本發明。此等實例意欲代表本發明之特定實施例且並不意欲限制本發明之範疇。
製備合成中間物對於本文中所製備之中間物及實例，在已知立體化學之情況下，立體化學如所繪製，且名稱指定特定立體化學，如( R)或( S)。已知如本文中所指定之立體化學，因為化合物係自已知、手性起始物質或外消旋混合物合成，且某些實例或中間物之立體化學係使用X射線結晶證實。
中間物 2 ：(5 S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]*** 步驟1：{(2 S)-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-5-側氧基戊-2-基}胺基甲酸三級丁酯 ( 2a )
將(4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]戊酸(600 mg，2.76 mmol)於THF (13.8 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(於EtOAc中之50%溶液，3.62 mL，6.08 mmol)，隨後移除浴且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。接著，添加 N , N-二異丙基乙胺(2.89 mL，16.6 mmol)及6-溴吡啶甲醯肼(656 mg，3.04 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌22小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物用水(15 mL)淬滅且用EtOAc (20 mL)轉移至分液漏斗中。分離各層，且依次用20%檸檬酸(20 mL)、NaHCO 3飽和溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌有機相。有機萃取物接著經MgSO 4乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈灰白色固體狀之標題化合物( 2a) (1.07 g，93%產率)，其不經進一步純化即使用。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.76 (br. s, 1H), 9.36 (br. s, 1H), 8.15 (dd, J= 0.9, 7.5 Hz, 1H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 1H), 4.45 (br. d, J=  1.0 Hz, 1H), 3.91 (br. s, 1H), 2.47 - 2.35 (m, 2H), 2.00 - 1.89 (m, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.22 (d, J=  6.6 Hz, 3H)。(C 11H 15BrN 4O 2)之LCMS m/z(APCI), 315.0 (M+H-Boc) +。
步驟2：{(2 S)-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]丁-2-基}胺基甲酸三級丁酯( 2b)
向{(2 S)-5-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-5-側氧基戊-2-基}胺基甲酸三級丁酯( 2a) (290 mg，0.698 mmol)於DCM (2.8 mL，0.25 M)中之溶液中添加三乙胺(0.292 mL，2.09 mmol)及對甲苯磺醯氯(160 mg，0.838 mmol)。將反應物在室溫下攪拌16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。添加乙二胺(0.047 mL，0.698 mmol)以清除過量之對甲苯磺醯氯；在添加期間，立即形成沈澱物。在室溫下攪拌30分鐘之後，用20%之檸檬酸(5 ml)洗滌反應物且分離各層。用DCM (5 mL)萃取水層，接著用鹽水(10 mL)洗滌經合併之有機層，經MgSO 4乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物( 2b) (274 mg，98%產率)，其不經進一步純化即使用。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.21 (dd, J= 0.9, 7.6 Hz, 1H), 7.76 - 7.69 (m, 1H), 7.68 - 7.65 (m, 1H), 4.39 (br. s, 1H), 3.85 (br. s, 1H), 3.08 - 3.01 (m, 2H), 2.17 - 2.03 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.22 (d, J= 6.6 Hz, 3H)。(C 11H 13BrN 4O)之LCMS m/z(APCI), 297.0 (M+H-Boc) +。
步驟3： 中間物 2向微波小瓶中裝入{(2 S)-4-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]丁-2-基}胺基甲酸三級丁酯( 2b) (150 mg，0.378 mmol)及三氟乙醇(1.89 mL，0.2 M)且進行密封，隨後在微波中加熱至180℃持續30分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，100%庚烷至1:10 MeOH/EtOAc)純化，得到呈褐色膠質固體狀之 中間物 2(74.3 mg，71%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.38 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.74 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 5.22 - 5.08 (m, 1H), 3.21 - 3.16 (m, 1H), 3.16 - 3.02 (m, 2H), 2.55 - 2.44 (m, 1H), 1.60 (d, J= 6.6 Hz, 3H)。(C 11H 11BrN 4)之LCMS m/z(APCI), 279.1 (M+H) +。藉由SFC (含10-60%甲醇(0.5% NH 3)之二氧化碳(400-450巴)，梯度時間=2分鐘，流動速率=4 mL/min，Chiralpack IC-U 50mm*3mm*1.6µm管柱)測定為單一鏡像異構物。 中間物 2之立體化學係基於步驟1中使用(4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]戊酸來指定。
中間物 3：(5 S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c] [1,2,4]*** 步驟1：{(2 S)-1-[甲氧基(甲基)胺基]-1-側氧基丁-2-基}胺基甲酸三級丁酯( 3a)
將(2 S)-2-[(三級丁氧基羰基)胺基]丁酸(2.0 g，9.84 mmol)於THF (49.2 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(於EtOAc中之50%溶液，12.9 mL，21.6 mmol)，隨後移除浴，且將反應混合物升溫至室溫且攪拌30分鐘。隨後，添加 N , N-二異丙基乙胺(10.3 mL，59.0 mmol)及甲氧基(甲基)胺鹽酸鹽(1.06 g，10.8mmol)且將反應混合物在室溫攪拌18小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。反應物用水(40 mL)淬滅且用EtOAc (40 mL)轉移至分液漏斗中。分離各層，且依次用20%檸檬酸(40 mL)、NaHCO 3飽和溶液(40 mL)及鹽水(40 mL)洗有機相。有機萃取物接著經MgSO 4乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈黃色油狀之標題化合物( 3a) (1.29 g，53%產率)，其不經進一步純化即使用。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 5.28 - 5.12 (m, 1H), 4.74 - 4.52 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 1.85 - 1.73 (m, 1H), 1.64 - 1.54 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 0.96 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。(C 11H 22N 2O 4)之LCMS m/z(APCI), 247.1 (M+H) +。
步驟2：( S)-(1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯( 3b)
將{(2 S)-1-[甲氧基(甲基)胺基]-1-側氧基丁烷-2-基}胺基甲酸三級丁酯( 3a) (1.29 g，5.25 mmol)於THF(26.2 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃將鋁氫化鋰(於2-MeTHF中之2.3 M溶液，2.51 mL，5.77 mmol)逐滴添加至溶液中。在0℃攪拌反應混合物40分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。反應物用EtOAc (10 mL)及1 M HCl (10 mL)淬滅且移至分液漏斗中。分離各層且用EtOAc (3×10 mL)萃取水相。隨後經MgSO 4乾燥合併之有機萃取物，過濾，且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈白色固體之標題化合物( 3b) (0.575 g，59%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.60 (s, 1H), 5.09 (br. s, 1H), 4.22 (br. s, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 1H), 1.73 - 1.64 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 0.99 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。
步驟3：(2 E,4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己-2-烯酸乙酯( 3c)
向( S)-(1-側氧基丁烷-2-基)胺基甲酸三級丁酯( 3b) (575 mg，3.07 mmol)於DCM (6.14 mL，0.5 M)中之溶液中添加(乙氧基羰基亞甲基)三苯基磷烷(1.60 g，4.61 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物17小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物濃縮至乾燥，隨後添加異丙醇(8.5 mL，0.36 M)及氯化鋅(1.26 g，9.21 mmol)以使三苯基氧化膦沈澱。在室溫下攪拌30分鐘之後，過濾反應混合物且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈無色油狀之標題化合物( 3c) (653 g，83%產率，E/Z異構物比率＞20:1)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 6.86 (dd, J= 5.4, 15.6 Hz, 1H), 5.94 (dd, J= 1.7, 15.7 Hz, 1H), 4.50 (br. s, 1H), 4.31 - 4.16 (m, 3H), 1.65 - 1.63 (m, 1H), 1.60 - 1.51 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.32 - 1.30 (m, 3H), 0.99 - 0.95 (m, 3H)。(C 8H 15NO 2)之LCMS m/z(APCI), 158.2 (M+H-Boc) +。
步驟4：(4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸乙酯( 3d)
向(2 E,4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己-2-烯酸乙酯( 3c) (653 mg，2.54 mmol)於甲醇(12.7 mL，0.2 M)中之溶液中添加鈀/碳(10% w/w，270 mg，0.254 mmol)。將反應小瓶抽成真空且在動態真空下用H 2再填充10秒。隨後在室溫下在1 atm H 2下攪拌反應混合物18小時。在室溫下攪拌混合物17小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。經Celite ®過濾反應物且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈無色油狀之標題化合物( 3d) (589 g，90%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 4.37 - 4.23 (m, 1H), 4.20 - 4.11 (m, 2H), 3.61 - 3.46 (m, 1H), 2.42 - 2.33 (m, 2H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.71 - 1.62 (m, 1H), 1.57 - 1.51 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.38 (m, 1H), 1.30 - 1.26 (m, 3H), 0.94 (t, J=  7.4 Hz, 3H)。
步驟5：(4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸( 3e)
向(4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸乙酯( 3d) (589 mg，2.27 mmol)於THF (11.4 mL，0.2 M)及MeOH (5.7 mL，0.4 M)中之溶液中添加LiOH (544 mg，22.7 mmol)於水(2.84 mL，0.8 M)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物24小時。在添加水及1 M HCl之前濃縮反應物直至達到pH 5。用EtOAc (3×20 mL)萃取水層。用鹽水洗滌經合併之有機層，用MgSO 4乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到呈淺黃色油狀之標題化合物( 3e) (260 mg，50%產率)，其不經進一步純化即使用。
步驟6：{(3 S)-6-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-6-側氧基己烷-3-基}胺基甲酸三級丁酯( 3f)
將(4 S)-4-[(三級丁氧基羰基)胺基]己酸( 3e) (260 mg，1.12 mmol)於THF (5.6 mL，0.2 M)中之溶液冷卻至0℃。在0℃下向溶液中添加丙基膦酸酐溶液(於EtOAc中之50%溶液，1.47 mL，2.47 mmol)，隨後移除浴且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。接著，添加 N , N-二異丙基乙胺(1.17 mL，6.74 mmol)及6-溴吡啶甲醯肼(267 mg，1.24 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物18小時。反應物用水(15 mL)淬滅且用EtOAc (20 mL)轉移至分液漏斗中。分離各層，且依次用20%檸檬酸(20 mL)、NaHCO 3飽和溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌有機相。有機萃取物接著經MgSO 4乾燥，過濾，且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物( 3f) (241 g，50%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.76 (br. s, 1H), 9.29 (br. s, 1H), 8.15 (d, J=  6.8 Hz, 1H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.68 - 7.64 (m, 1H), 4.45 - 4.31 (m, 1H), 3.69 (br. s, 1H), 2.45 - 2.37 (m, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.69 - 1.62 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.45 (br. d, J=  7.3 Hz, 2H), 0.99 (t, J=  7.5 Hz, 3H)。(C 12H 17BrN 4O 2)之LCMS m/z(APCI), 329.0 (M+H-Boc) +。
步驟7：{(3 S)-1-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]戊烷-3-基}胺基甲酸三級丁酯( 3g)
向{(3 S)-6-[2-(6-溴吡啶-2-羰基)肼基]-6-側氧基己烷-3-基}胺基甲酸三級丁酯( 3f) (241 mg，0.561 mmol)於DCM (2.2 mL，0.25 M)中之溶液中添加三乙胺(0.235 mL，1.68 mmol)及對甲苯磺醯氯(128 mg，0.673 mmol)。將反應物在室溫下攪拌16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。添加乙二胺(0.038 mL，0.561 mmol)以清除過量之對甲苯磺醯氯；在添加期間，立即形成沈澱物。在室溫下攪拌30分鐘之後，用20%之檸檬酸(5 mL)洗滌反應物且分離各層。用DCM (5 mL)萃取水層，接著用鹽水(10 mL)洗滌合併之有機層，經MgSO 4乾燥，過濾且濃縮至乾燥。殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，100%庚烷至100% EtOAc)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物( 3g) (178 g，77%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.22 (dd, J=  0.7, 7.6 Hz, 1H), 7.77 - 7.72 (m, 1H), 7.68 - 7.65 (m, 1H), 4.35 (br. d, J=  8.2 Hz, 1H), 3.65 (br. s, 1H), 3.07 (dt, J=  6.1, 10.0 Hz, 2H), 2.21 - 2.11 (m, 1H), 1.93 - 1.83 (m, 1H), 1.65 - 1.61 (m, 1H), 1.53 - 1.48 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 0.98 (t, J=  7.4 Hz, 3H)。(C 12H 15BrN 4O)之LCMS m/z(APCI), 311.0 (M+H-Boc) +。
步驟8： 中間物 3向微波小瓶中裝入{(3 S)-1-[5-(6-溴吡啶-2-基)-1,3,4-㗁二唑-2-基]戊-3-基}胺基甲酸三級丁酯( 3g) (178 mg，0.431 mmol)及三氟乙醇(2.16 mL，0.2 M)且進行密封，隨後在微波中加熱至180℃持續60分鐘。LCMS分析顯示起始物質耗盡。濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，100%庚烷至1:10 MeOH/EtOAc)純化，得到呈無色油狀之 中間物 3(116 mg，91%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.26 (dd, J=  0.7, 7.7 Hz, 1H), 7.67 (t, J=  7.9 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=  0.7, 7.8 Hz, 1H), 4.90 - 4.83 (m, 1H), 3.07 - 2.89 (m, 3H), 2.58 - 2.49 (m, 1H), 2.04 - 1.97 (m, 1H), 1.83 - 1.70 (m, 1H), 0.96 (t, J=  7.5 Hz, 3H)。(C 12H 13BrN 4)之LCMS m/z(APCI), 293.0 (M+H) +。藉由SFC (含10-60%甲醇(0.5% NH 3)之二氧化碳(400-450巴)，梯度時間=2分鐘，流動速率=4 mL/min，Kromasil (R,R)Whelk-O 50mm*3mm*1.8µm管柱)測定為97.4% ee。立體化學係基於在第一步驟中使用(2 S)-2-[(三級丁氧基羰基)胺基]丁酸來指定。
中間物 4 ：( S , S)-2-甲基-N-[(1 R)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺 步驟1：{2-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]吡啶-4-基}(哌啶-1-基)甲酮( 4a)
(2,6-二氯吡啶-4-基)(哌啶-1-基)甲酮(600 mg，2.32 mmol)及(2 R)-2-甲基吡咯啶(591 mg，6.95 mmol)於DMF (1.5 mL)中之溶液在100℃下攪拌16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至室溫，添加H 2O (40 mL)，且用DCM (3×40 mL)萃取反應物。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO 2，0-20% EtOAc/庚烷)純化，得到標題化合物( 4a) (664 mg，93%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 6.44 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 6.21 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 4.12 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 3.72 - 3.62 (m, 2H), 3.54 (ddd, J= 10.5, 7.6, 2.9 Hz, 1H), 3.40 - 3.28 (m, 2H), 2.10 - 2.04 (m, 2H), 1.75 - 1.62 (m, 4H), 1.26 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 1.21 (d, J= 6.3 Hz, 2H)；(C 16H 22ClN 3O)之 m/z(APCI+), 308.2 (M+H) +。
步驟2：2-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛( 4b)
向DMF (473 mg，6.47 mmol)於DCM (3.0 mL)中之溶液中添加POCl 3(992 mg，6.47 mmol)。攪拌混合物10分鐘，且接著添加{2-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]吡啶-4-基}(哌啶-1-基)甲酮( 4a) (664 mg，2.16 mmol)於DCM (3.0 mL)中之溶液。在回流下攪拌混合物15小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物濃縮至乾燥且緩慢倒入NaHCO 3飽和溶液(30 mL)中。用DCM (3×30 mL)萃取混合物。合併之有機物經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO 2，0-40% EtOAc/庚烷)純化，得到標題化合物( 4b) (568 mg，78%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 10.07 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.13 - 4.65 (m, 1H), 3.68 - 3.83 (m, 1H), 3.55 - 3.68 (m, 2H), 3.35 - 3.55 (m, 1H), 2.98 - 3.20 (m, 2H), 1.88 - 2.17 (m, 3H), 1.71 - 1.83 (m, 2H), 1.55 - 1.67 (m, 3H), 1.46 - 1.55 (m, 1H), 1.31 - 1.42 (m, 1H), 1.17 - 1.26 (m, 3H)；(C 17H 22ClN 3O 2)之 m/z(APCI+), 336.1 (M+H) +。
步驟3： N-[( E)-{2-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-基}亞甲基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺( 4c)
2-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-甲醛( 4b) (432 mg，1.29 mmol)、( R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(187 mg，1.54 mmol)及Ti(OEt) 4(880 mg，3.86 mmol)於THF (10.0 mL)中之混合物在45℃下攪拌16小時。LCMS分析顯示約25%剩餘起始物質。添加額外分批( R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(62.4 mg，0.515 mmol)及Ti(OEt) 4(293 mg，1.29 mmol)且將混合物在50℃下攪拌16小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至室溫。混合物用DCM (50 mL)稀釋且用NaHCO 3飽和溶液(35 mL)及鹽水(35 mL)洗滌。有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色膠狀之標題化合物( 4c) (495 mg，88%產率)，其不經進一步純化即使用。(C 21H 31ClN 4O 2S)之 m/z(APCI+), 440.2 (M+H) +。
步驟4：4-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 4d)
將 N-[( E)-{2-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-(哌啶-1-羰基)吡啶-3-基}亞甲基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺( 4c) (495 mg，1.13 mmol)於THF (15.0 mL)中之溶液冷卻至0℃，且隨後添加LiBH 4溶液(2.0 M於THF中，620 mL，1.24 mmol)。在0℃下攪拌混合物2小時且接著添加NaOMe溶液(25%於MeOH中，2.5 mL，10.1 mmol)。使反應物升溫至室溫且接著攪拌16小時。反應物用DCM (60 mL)稀釋且用飽和NH 4Cl水溶液(60 mL)及鹽水(60 mL)洗滌。有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，50-100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈無色泡沫狀之標題化合物( 4d) (199 mg，產率70%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 6.68 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.21 - 4.14 (m, 1H), 3.58 (ddd, J= 10.5, 7.6, 2.8 Hz, 1H), 3.39 (q, J= 8.9 Hz, 1H)，2.13 - 1.97 (m, 2H), 1.75 (dt, J= 5.2, 2.6 Hz, 1H), 1.23 (d, J= 6.3 Hz, 3H). 假定一個氫原子被水峰遮蔽； m/z(C 12H 14ClN 3O)之(APCI+), 252.3 (M+H) +。
步驟5：6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-甲腈( 4e)
在微波中將4-氯-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 4d) (438 mg，1.74 mmol)、Zn(CN) 2(306 mg，2.6 mmol)、DMF (15 mL)及Pd(PPh 3) 4(100 mg，0.09 mmol)之混合物加熱至140℃持續30分鐘。用DCM稀釋反應物且過濾。用DCM洗滌濾餅。真空濃縮濾液且藉由急驟層析(SiO 2，0至100% 1:1 EtOAc:DCM/庚烷)純化粗化合物，得到呈黃色固體狀之標題化合物( 4e) (375 mg，89%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.00 - 6.94 (m, 1H), 6.46 - 6.32 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.29 - 4.19 (m, 1H), 3.61 (ddd, J= 2.6, 7.6, 10.3 Hz, 1H), 3.46 - 3.34 (m, 1H), 2.22 - 2.02 (m, 3H), 1.86 - 1.72 (m, 1H), 1.25 (d, J= 6.4 Hz, 3H)；(C 13H 14N 4O)之 m/z(APCI+), 243.1 (M+H) +。
步驟6：4-乙醯基-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 4f)
在冰/水浴中向6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-甲腈( 4e) (355 mg，1.47 mmol)於THF (15 mL)中之溶液中添加MeMgBr (4.88 mL，14.7 mmol，3.0 M於THF中)。在此溫度下攪拌所得混合物10分鐘，接著升溫至室溫且允許攪拌2小時。在0℃下用2 N HCl (6 mL)淬滅混合物且在室溫下攪拌15分鐘。混合物用飽和NaHCO 3溶液中和且用DCM (3×40 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。粗化合物藉由急驟層析(SiO 2，20-50% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物( 4f) (190 mg，產率50%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) 6.98 (s, 1H), 6.59 (br. s, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.28 (br. t, J =5.7 Hz, 1H), 3.64 (ddd, J =2.6, 7.5, 10.1 Hz, 1H), 3.48 - 3.38 (m, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.19 - 2.10 (m, 2H), 2.08 - 2.01 (m, 1H), 1.79 (td, J =2.6, 5.0 Hz, 1H), 1.30 (d, J =6.2 Hz, 3H)；(C 14H 17N 3O 2)之 m/z(APCI+), 260.2 (M+H) +。
步驟7： 中間物 4向40 mL小瓶中添加4-乙醯基-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 4f) (200 mg，0.77 mmol)、( S)-三級丁基亞磺醯胺(187 mg，1.54 mmol)、THF (1.54 mL)及Ti(OEt) 4(1.54 mmol，0.323 mL)。將小瓶加蓋且加熱至80℃持續48小時。接著將反應物冷卻至-78℃ (乾冰/丙酮浴)且逐滴添加三-二級丁基硼氫化鋰(1.54 mmol，1.54 mL，1.0 M於THF中)。在-78℃下攪拌所得混合物3小時。使混合物升溫至室溫且逐滴用飽和NH 4Cl (2 mL)淬滅，接著添加DCM (20 mL)及鹽水(20 mL)。經由Celite ®過濾混合物，且用DCM (40 mL)洗滌。收集有機層，且用DCM (20 mL)萃取水層。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析(SiO 2，溶劑0-10% MeOH於EtOAc中)純化，得到呈黃色泡沫狀之 中間物4 (127 mg，45%產率)。(C 18H 28N 4O 2S)之 m/z(APCI+), 365.3 (M+H) +。立體化學基於步驟1中使用(2 R)-2-甲基吡咯啶及步驟7中使用( S)-三級丁基亞磺醯胺來指定。
中間物 5：( S , R)-2-甲基- N-[(1 R)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亞磺醯胺 步驟1：6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 5a)
將6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-甲腈( 4e) (808 mg，3.33 mmol)於THF (8.0 mL)中之溶液冷卻至0℃，且接著用溴化乙基鎂溶液(3.0 M於Et 2O中，11.1 mL，33.3 mmol)處理。在室溫下攪拌混合物1小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至0℃且藉由添加2 N HCl淬滅。在室溫下攪拌混合物10分鐘，藉由添加NaHCO 3飽和溶液中和，接著用DCM (2×30 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO 2，0-100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色油狀之標題化合物( 5a) (646 mg，71%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.01 (s, 1H), 6.41 (br. s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.39 - 4.22 (m, 1H), 3.66 (ddd, J = 2.6, 7.4, 10.1 Hz, 1H), 3.52 - 3.38 (m, 1H), 3.30 - 3.14 (m, 2H), 2.26 - 2.10 (m, 2H), 2.06 - 2.01 (m, 1H), 1.81 (td, J= 2.5, 5.1 Hz, 1H), 1.31 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.24 (t, J= 7.3 Hz, 3H)；(C 15H 19N 3O 2)之 m/z(APCI+), 274.2 (M+H) +。
步驟2：( S , S)-2-甲基- N-[(1 E)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}亞丙基]丙烷-2-亞磺醯胺( 5b)
向6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 5a) (640 mg，2.34 mmol)於THF (2.0 mL)中之溶液中添加( S)-(−)-2-甲基l-2-丙烷亞磺醯胺(568 mg，4.68 mmol)及Ti(OEt) 4(2.14 g，9.37 mmol)。在90℃下攪拌混合物23小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。使混合物冷卻至室溫且接著添加鹽水(40 mL)及DCM (30 mL)。將混合物攪拌10分鐘，且隨後經由Celite ®過濾。分離各層。用DCM (30 mL)萃取水層。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色泡沫狀之標題化合物( 5b) (779 mg，88%產率)，其直接用於下一步驟中。(C 19H 28N 4O 2S)之 m/z(APCI+), 377.2 (M+H) +。
步驟3： 中間物 5將( S , S)-2-甲基- N-[(1 E)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}亞丙基]丙烷-2-亞磺醯胺( 5b) (654 mg，1.40 mmol)於THF (12.0 mL)中之溶液冷卻至-78℃，且接著用三-二級丁基硼氫化鋰溶液(1.0 M於THF中，2.5 mL，2.5 mmol)逐滴處理。在-78℃下攪拌混合物1.5小時。添加額外之三-二級丁基硼氫化鋰(1.0 M，0.417 mL，0.417 mmol)且在-78℃下再攪拌混合物1.5小時。混合物用MeOH淬滅，用鹽水(50 mL)稀釋，且用DCM (2×50 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(12 g SiO 2，0-10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色膠狀之 中間物 5(300 mg，57%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.66 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.14 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.27 - 4.14 (m, 2H), 3.59 - 3.44 (m, 1H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 2.14 - 2.01 (m, 2H), 1.98 - 1.81 (m, 3H), 1.73 - 1.60 (m, 1H), 1.20 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.86 - 0.73 (m, 3H)；(C 19H 30N 4O 2S)之 m/z(APCI+), 379.2 (M+H) +。
立體化學係基於在合成 中間物 4之步驟1中使用(2 R)-2-甲基吡咯啶及步驟2中使用( S)-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺來指定。
中間物 10：( S , S)-2-甲基-N-[(1 R)-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亞磺醯胺 步驟1：6-[甲基(丙-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-甲腈
在微波中將4-氯-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 9d) (706 mg，2.95 mmol)、Zn(CN) 2(519 mg，4.42 mmol)、DMF (10 mL)及Pd(PPh 3) 4(170 mg，0.147 mmol)之混合物加熱至140℃持續30分鐘。用DCM稀釋反應物且過濾。用DCM洗滌濾餅。真空濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之標題化合物( 10a) (544 mg，80%產率)，其無需進一步純化即使用。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) 9.01 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.80 (td, J= 6.7, 13.4 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 2.89 (s, 3H), 1.15 (d, J= 6.7 Hz, 6H)；(C 12H 14N 4O)之 m/z(APCI+), 231.2 (M+H) +。
步驟2：6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 10b)
將6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-甲腈( 10a) (511 mg，2.22 mmol)於THF (20.0 mL)中之懸浮液冷卻至0℃，且接著用溴化乙基鎂溶液(3.0 M於Et 2O中，7.40 mL，22.2 mmol)處理。在室溫下攪拌混合物1小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將反應物冷卻至0℃且藉由添加飽和NH 4Cl (60 mL)淬滅，接著用DCM (2×80 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(24 g SiO 2，0至100% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色泡沫狀之標題化合物( 10b) (125 mg，22%產率)。(C 14H 19N 3O 2)之 m/z(APCI+), 262.2 (M+H) +。
步驟3： 中間物 10向6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-4-丙醯基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 10b) (124 mg，0.475 mmol)於THF (6.0 mL)中之溶液中添加( S)-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺(92 mg，0.759 mmol)及Ti(OEt) 4(433 mg，1.90 mmol)。在回流下攪拌混合物42小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。使混合物冷卻至-78℃且接著用三-二級丁基硼氫化鋰(1.0 M於THF中，1.9 mL，1.90 mmol)溶液逐滴處理。在-78℃下攪拌混合物4小時。混合物用MeOH淬滅，用鹽水(30 mL)稀釋，且用DCM (20×2 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(12 g SiO 2，0-10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色固體狀之 中間物 10(72 mg，41%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.67 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.25 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 4.94 (quin, J= 6.7 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.21 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 2.84 (s, 3H), 1.98 - 1.80 (m, 2H), 1.13 (dd, J= 3.6, 6.7 Hz, 6H), 1.06 (s, 9H), 0.83 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。(C 18H 30N 4O 2S)之 m/z(APCI+), 367.2 (M+H) +。立體化學係基於步驟2中使用( S)-(−)-2-甲基-2-丙烷亞磺醯胺來指定。
中間物 13：( S , S)-2-甲基- N-[(1 R)-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺 步驟1：4-乙醯基-6-(異丙基(甲基)胺基)-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮
在0℃下將甲基溴化鎂(9.11 g，76.4 mmol，25.9 mL，3.0 M)添加至6-(異丙基(甲基)胺基)-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-甲腈( 中間物 10a) (1.76 g，7.64 mmol)於THF (70 mL，c=0.11 M)中之溶液中。在此溫度下攪拌混合物10分鐘且接著升溫至室溫且攪拌3小時。接著在室溫下用2 M HCl (7 mL)逐滴淬滅混合物且攪拌30分鐘。添加NaHCO 3飽和溶液(70 mL)以中和溶液且用DCM (3×100 mL)萃取。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮。所得殘餘物藉由急驟層析(40 g SiO 2，10-40% EtOAc/庚烷)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物( 13a) (553 mg，29%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ  8.82 (s, 1H) 7.06 (s, 1H) 4.88 (br. d, J= 6.72 Hz, 1H) 4.49 (s, 2H) 2.94 (s, 3H) 2.61 (s, 3H) 1.19 (d, J= 6.60 Hz, 6H)；(C 13H 17N 3O 2)之 m/z(APCI+), 248.2 (M+H) +。
步驟2： 中間物 134-乙醯基-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮( 13a) (8.10 g，32.75 mmol)、( S)-三級丁基亞磺醯胺(7.94 g，65.5 mmol)於Ti(OEt) 4(29.9 g，131 mmol)中之混合物在THF (100 mL)中在90℃下在N 2下加熱72小時，且藉由LCMS監測反應。隨後將反應物冷卻至0℃且在0℃下逐滴添加三-二級丁基硼氫化鋰(1 M於THF中，131 mmol，131 mL)。在0℃下攪拌混合物3小時。在0至5℃下用飽和NH 4Cl (200 mL)及鹽水(200 mL)淬滅混合物。經由Celite ®襯墊過濾懸浮液，且用DCM (500 mL)洗滌濾餅。分離濾液層且用DCM (2×100 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(250 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，0-10% MeOH/DCM)純化，得到呈黃色固體狀之 中間物 13(10 g，87%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 6.83 (br. s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.89 - 4.76 (m, 1H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 3H), 2.83 (s, 3H), 1.55 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 1.19 - 1.07 (m, 15H)。(C 17H 28N 4O 2S)之 m/z(APCI+), 353.2 (M+H) +。立體化學係基於步驟1中使用( S)-三級丁基亞磺醯胺來指定。
中間物 14：( S , R)-2-甲基- N-[(1 S)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺
4-乙醯基-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮( 4f) (4000 mg，15.43 mmol)、( R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2240 mg，18.5 mmol)於Ti(OEt) 4(20 mL)中之混合物在N 2下、在100℃下攪拌20小時。LCMS分析顯示起始物質耗盡。將黃色溶液冷卻至0℃且用THF (50 mL)稀釋。在0℃下逐滴添加三-二級丁基硼氫化鋰(38.6 mmol，38.6 mL，1M於THF中)。混合物接著在10℃下攪拌20小時。LCMS顯示起始物質剩餘。在0℃下逐滴添加額外三-二級丁基硼氫化鋰(38.6 mmol，38.6 mL，1M於THF中)且在10℃下再攪拌混合物2小時。TLC分析顯示起始物質耗盡。在0至5℃下用NH 4Cl飽和水溶液(200 mL)淬滅混合物。經由Celite ®襯墊過濾懸浮液，且用EtOAc (2×50 mL)洗滌濾餅。分離濾液層且用EtOAc (2×20 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮，得到殘餘物。殘餘物首先藉由急驟層析(SiO 2，EtOAc/MeOH=10:1)純化且隨後藉由製備型HPLC (ACSSH-CA；方法管柱：YMC Triart C18 250*50 mm*7 µm；水(0.05 v/v%氫氧化銨)-ACN，得到呈灰白色固體狀之 中間物 14(2.5 g，44%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 6.70 (s, 1H), 6.47 (br. s, 1H), 4.57 - 4.34 (m, 4H), 4.20 (br. t, J= 5.9 Hz, 1H), 3.64 - 3.53 (m, 1H), 3.47 - 3.35 (m, 1H), 2.20 - 1.99 (m, 3H), 1.77 (br. dd, J= 2.5, 4.7 Hz, 1H), 1.64 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 1.28 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.22 (s, 9H)。(C 18H 28N 4O 2S)之 m/z(ESI), 365.1 (M+H) +。立體化學係基於使用( R)-三級丁基亞磺醯胺來指定。
實例 14-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮 步驟1：( S, S)-2-甲基-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺
( S , S)-2-甲基- N-[(1 R)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亞磺醯胺( 中間物 5) (63.0 mg，0.17 mmol)、(5 S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-將甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***( 中間物2) (147 mg，0.528 mmol)、K 3PO 4(336 mg，1.59 mmol)、Pd 2(dba) 3(30.4 mg，0.0528 mmol)及4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(XantPhos) (61.1 mg，0.106 mmol)於1,4-二㗁烷(4.5 mL，c=0.1 M)中之混合物在40 mL小瓶(加蓋)中在100℃ (加熱塊溫度)下加熱18小時。經由Celite ®過濾混合物，用DCM洗滌。真空濃縮濾液且藉由急驟層析(SiO 2，0至10% MeOH/DCM)純化粗化合物，得到呈淺黃色泡沫狀之標題化合物(194 mg，64%產率)。(C 29H 40N 8O 2S)之 m/z(APCI+) for, 577.3 (M+H) +。
步驟2： 實例 1將4 N HCl於1,4-二㗁烷中之溶液(1.01 mmol，0.252 mL，4 M)添加至( S , S)-2-甲基-N-[(1R)-1-(2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺(194 mg，0.336 mmol)於MeOH (12 mL)中之懸浮液中。在室溫下攪拌所得混合物2小時。減壓移除揮發物。粗產物藉由手性SFC (Phenomenex Lux纖維素-1 4.6×100mm 3 µm管柱，含30% MeOH + 10 mM NH 3之CO 2，在120巴下，4 mL/min)純化，得到呈淡黃色固體狀之實例1 (146 mg，92%產率，＞99% de)。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ 8.48 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 8.01 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.91 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.22 - 5.03 (m, 3H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 3.60 - 3.50 (m, 1H), 3.41 - 3.32 (m, 1H), 3.06 - 2.98 (m, 1H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.37 - 2.27 (m, 1H), 2.09 - 1.86 (m, 5H), 1.69 - 1.62 (m, 1H), 1.44 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.15 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 0.86 (t, J= 7.4 Hz, 3H)；(C 26H 32N 8O)之 m/z(APCI+), 473.2 (M+H) +；[α]D 22= +37.0° (c=0.1 M, MeOH) 。
實例 24-[(1 R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮 步驟1：( S , S)-N-[(1 R)-1-(2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
在N 2下向( S , S)-2-甲基-N-[(1 R)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺( 中間物4) (50 mg，0.14 mmol)、(5 S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***( 中間物3) (42.2 mg，0.144 mmol)及K 3PO 4(87.4 mg，0.412 mmol)於1,4-二㗁烷(3 mL)中之混合物中添加Pd 2(dba) 3(12.6 mg，0.014 mmol)及4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(15.9 mg，0.027 mmol)。在添加之後，混合物經N 2鼓泡2分鐘。將所得混合物密封且在85℃下攪拌18小時。真空濃縮反應混合物，且殘餘物藉由急驟層析(SiO 2，10% EtOAc/MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(60 mg，76%產率)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.70 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 8.18 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.93 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.11 - 5.02 (m, 2H), 4.99 - 4.93 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 2H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 3.67 - 3.57 (m, 1H), 3.46 - 3.35 (m, 1H), 3.11 - 3.01 (m, 3H), 2.65 (td, J= 3.7, 7.9 Hz, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 3H), 2.07 (s, 1H), 1.86 - 1.79 (m, 1H), 1.79 (br. d, J= 2.3 Hz, 1H), 1.69 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.31 - 1.28 (m, 3H), 1.22 (s, 9H), 1.02 (t, J= 7.5 Hz, 3H)；(C 30H 40N 8O 2S)之 m/z(ESI+), 577.5 (M+H) +；[α] D 22= +85.3° (c=0.1 M, MeOH)。
步驟2： 實例 2在0℃下向( S , S)-N-[(1 R)-1-(2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(60 mg，0.10 mmol)於EtOAc (5 mL)中之溶液中逐滴添加含4 M HCl之EtOAc (3 mL)。在20℃下攪拌混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。向殘餘物中添加EtOAc (10 mL)及水(10 mL)。水層用飽和NaHCO 3鹼化且用DCM (10 mL×3)萃取。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且真空濃縮。凍乾殘餘物16小時，得到呈淺黃色固體狀之 實例 2(47 mg，95%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.59 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 8.09 - 8.02 (m, 1H), 8.02 - 7.97 (m, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.33 (d, J= 17.1 Hz, 1H), 5.10 (d, J= 17.1 Hz, 1H), 4.99 (br. t, J= 6.1 Hz, 1H), 4.29 - 4.19 (m, 1H), 4.12 (q, J= 6.9 Hz, 1H), 3.55 (br. t, J= 8.0 Hz, 1H), 3.04 - 2.85 (m, 3H), 2.58 - 2.55 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 4H), 1.79 - 1.66 (m, 2H), 1.36 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 1.24 - 1.20 (m, 3H), 0.93 (t, J= 7.4 Hz, 3H)；(C 26H 32N 8O)之 m/z(ESI+), 473.4 (M+H) + 。
實例 34-[(1 S)-1-胺乙基]-2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮 步驟1：( S , R)-N-[(1 S)-1-(2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
在N 2下向( S , R)-2-甲基-N-[(1 S)-1-{6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺( 中間物 14) (2000 mg，5.487 mmol)、(5 S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***( 中間物 3) (1610 mg，5.49 mmol)及K 3PO 4(3490 mg，16.5 mmol)於1,4-二㗁烷(30 mL)中之懸浮液中添加Pd 2(dba) 3(502 mg，0.549 mmol)及4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(635 mg，1.10 mmol)。在添加之後，混合物用氬氣鼓泡2分鐘。將所得混合物密封且在85℃下攪拌18小時。TLC分析顯示起始物質耗盡。在攪拌下用H 2O (100 mL)稀釋混合物且過濾所得懸浮液。分離水性濾液。用DCM (100 mL)洗滌固體。有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮，得到黃色殘餘物(3 g)，藉由急驟層析(SiO 2，0至10% MeOH/EtOAc)純化，得到黃色固體。將固體溶解於DCM (50 mL)中且添加二氧化矽-SH (4 g)。使黃色混合物回流20分鐘。過濾混合物，且用DCM/MeOH (10:1)洗滌濾餅。濃縮濾液。用二氧化矽-SH再重複處理三次，得到呈黃色固體狀之標題化合物(2.3 g，72.7%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.71 (dd, J= 0.7, 8.4 Hz, 1H), 8.18 (dd, J= 0.7, 7.6 Hz, 1H), 7.97 - 7.87 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.19 - 5.11 (m, 1H), 5.03 - 4.94 (m, 2H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.57 - 4.51 (m, 1H), 4.24 (br t, J= 6.1 Hz, 1H), 3.66 - 3.56 (m, 1H), 3.48 - 3.39 (m, 1H), 3.13 - 2.98 (m, 3H), 2.71 - 2.59 (m, 1H), 2.21 - 2.03 (m, 4H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.68 (d, J= 6.5 Hz, 4H), 1.30 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.24 (s, 9H), 1.02 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。(C 30H 40N 8O 2S)之 m/z(ESI), 577.5 (M+H) +。
步驟2： 實例 3在0℃下向( S , R)-N-[(1 S)-1-(2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2300 mg，3.988 mmol)於EtOAc (10 mL)中之溶液中添加含4 M HCl之EtOAc (20 mL)。添加後，在15℃下攪拌混合物1小時。藉由LCMS監測反應。濃縮所得黃色懸浮液，得到殘餘物，將其溶解於H 2O (30 mL)中且用EtOAc (25 mL)萃取。用飽和NaHCO 3溶液將水層鹼化至約pH 8，且用DCM (3×35 mL)萃取水層。合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮，得到固體，向其中添加DCM (50 mL)。溶液經由玻璃微纖維過濾器GF/F (約0.7 µm)過濾四次。濃縮濾液，得到黃色固體，藉由製備型 HPLC (管柱：Agela DuraShell C18 150*40mm*5µm，水(0.05 v/v%氫氧化胺)-CAN，梯度時間12分鐘，流動速率25 mL/min) 來純化。此提供呈黃色固體狀之 實例 3(1.5 g，79.6%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.55 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.90 (m, 2H), 6.51 (s, 1H), 5.26 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.92 (m, 2H), 4.23 (br. t, J= 5.8 Hz, 1H), 4.09 (q, J= 6.5 Hz, 1H), 3.53 (br. t, J= 7.5 Hz, 1H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 3.07 - 2.83 (m, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.16 - 1.85 (m, 6H), 1.77 - 1.64 (m, 2H), 1.33 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 1.21 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 0.93 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。(C 26H 32N 8O)之 m/z(ESI), 473.4 (M+H) +。
實例 44-[(1 R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮 步驟1：( S , S)-N-[(1 R)-1-(2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
在N 2下將( S , S)-2-甲基-N-[(1 R)-1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}乙基]丙烷-2-亞磺醯胺( 中間物 13) (627 mg，1.78 mmol)、(5 S)-3-(6-溴吡啶-2-基)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***( 中間物 3) (521 mg，1.78 mmol)、K 3PO 4(1.13 mg，5.34 mmol)、Pd 2(dba) 3(102 mg，0.178 mmol)及4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(206 mg，0.356 mmol)於1,4-二㗁烷(17.8 mL，c=0.1 M)中之溶液在具有冷凝器之100 mL燒瓶中在100℃下加熱18小時。將混合物冷卻至室溫，過濾且用DCM (20 mL)洗滌。減壓濃縮濾液。殘餘物藉由急驟層析(24 g，SiO 2，0至10% MeOH/DCM)純化，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物(808 mg，80%)。(C 29H 40N 8O 2S)之 m/z(APCI+), 565.3 (M+H) +。
步驟2： 實例 4將HCl於1,4-二㗁烷中之4 N溶液(1.07 mL，4.29 mmol)添加至( S , S)-N-[(1 R)-1-(2-{6-[(5 S)-5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(808 mg，1.43 mmol)於MeOH (14.3 mL，c=0.1 M)中之溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。減壓移除揮發性物質。粗產物藉由手性SFC (Phenomenex Lux纖維素-1 21×250 mm管柱，含30% MeOH + 10 mM NH 3之CO 2，在120巴下保持，100 mL/min)純化，得到呈淡黃色固體狀之 實例 4(345 mg，52%產率，＞99% de，＞99%純)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.56 (dd, J= 1.0, 8.1 Hz, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 1H), 8.00 - 7.93 (m, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.34 - 5.28 (m, 1H), 5.17 - 5.10 (m, 1H), 5.02 - 4.95 (m, 1H), 4.89 (td, J= 6.7, 13.4 Hz, 1H), 4.18 (q, J= 6.7 Hz, 1H), 3.01 - 2.94 (m, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.62 - 2.54 (m, 2H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 1H), 1.41 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 1.20 (d, J= 6.6 Hz, 6H), 0.92 (t, J= 7.5 Hz, 3H)；(C 25H 32N 8O)之m/z (APCI+), 461.3 (M+H) +。[α]D 22= +120.5° (c=0.1 M, MeOH) 。
實例 54-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{3-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮 步驟1：( S,S)-2-甲基-N-[(1 R)-1-(2-{3-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺
將( S , S)-2-甲基- N-(1-{6-[甲基(丙烷-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基}丙基]丙烷-2-亞磺醯胺( 中間物 10) (63 mg，0.17 mmol)、(5 S)-3-(3-溴苯基)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***( 中間物 2) (48 mg，0.172 mmol)、K 3PO 4(109 mg，0.516 mmol)、Pd 2(dba) 3(9.88 mg，0.0172 mmol)及4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(19.9 mg，0.0344 mmol)於1,4-二㗁烷(4.5 mL，c=0.1 M)中之混合物在40 mL小瓶(加蓋)中在100℃下加熱18小時。減壓移除揮發物。殘餘物藉由急驟層析(12 g，SiO 2，0-10% MeOH/DCM)純化，得到呈淡黃色泡沫狀之標題化合物(74.0 mg，76%)。(C 29H 40N 8O 2S)之 m/z(APCI+), 565.3 (M+H) +。
步驟2： 實例 5將HCl於1,4-二㗁烷中之4 N溶液(0.164 mL，0.655 mmol)添加至( S,S)-2-甲基-N-[(1 R)-1-(2-{3-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-1-側氧基-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-4-基)丙基]丙烷-2-亞磺醯胺(74 mg，0.13 mmol)於MeOH (5.0 mL，c=0.026 M)中之溶液中。將混合物在室溫下攪拌2小時。減壓移除揮發物。粗產物藉由手性SFC (Phenomenex Lux纖維素-1 4.6×100mm 3 µm管柱，含5-60% MeOH + 10 mM NH 3之CO 2，經3.0分鐘緩慢上升，在120巴下，4 mL/min)純化，得到呈淡黃色固體狀之 實例 5(11.6 mg，19%產率，＞99% de，＞95%純)。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ 8.54 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 8.35 (br. s, 2H), 8.07 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 8.00 - 7.90 (m, 1H), 6.91 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 5.27 - 5.07 (m, 3H), 5.01 (br. s, 1H), 4.37 (br. s, 1H), 3.14 - 2.97 (m, 2H), 2.94 (d, J= 1.5 Hz, 3H), 2.92 - 2.85 (m, 1H), 2.42 - 2.35 (m, 1H), 2.06 - 1.91 (m, 2H), 1.50 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 1.19 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 1.15 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.92 (t, J= 7.3 Hz, 3H)；(C 25H 32N 8O)之 m/z(APCI+), 461.3 (M+H) +。[α]D 22= +75.9° (c=0.2 M, MeOH) 。
實例 6 HPK1 抑制劑 PF - 07265028 與抗 PD1 抗體薩善利單抗之組合的試管內生長抑制研究此實例之目的為評估HPK1抑制劑PF-07265028對腫瘤反應性T細胞殺死人類A375腫瘤細胞之能力的影響，及評估PF-07265028在本發明實施例之抗PD1抗體(薩善利單抗)存在或不存在下作為癌症治療選項的潛力。
材料及方法 細胞培養 ：為產生腫瘤反應性T細胞，利用EasySep人類T細胞分離套組(獲自StemCell Technologies)方案自PBMC分離出CD4或CD8 T細胞，且與經絲裂黴素C處理的A375細胞(10 μg/mL絲裂黴素C處理2小時；絲裂黴素C係獲自StemCell Technologies)在具有10%人類血清AB(獲自Fisher Scientific)之X-VIVO™ 15培養基(獲自Lonza Walkersville, Inc.)中混合。10分鐘後，添加20 ng/mL重組人類IL-2 (IS)及10 ng/mL重組人類IL-7 (獲自Miltenyi Biotec)以擴增活化T細胞，且在G-Rex培養容器中持續擴增21天。所得細胞在CryoStor CS10 (獲自StemCell)中低溫保存。
A375人類黑色素瘤細胞在含有10% FBS及1%青黴素/鏈黴素之Gibco達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium；DMEM)中繼代。在共培養物分析之前，A375細胞株用Incucyte NucLight綠色慢病毒(nucGFP) (獲自Sartorius)轉導且藉由1 μg/mL嘌呤黴素(獲自Sigma)選擇。
腫瘤殺死分析 ：將表現nucGFP之A375細胞於具有10%人類血清AB的100 μL XVIVO™ 15 (分析培養基)中以每孔5,000至10,000個細胞接種於ImageLock 96孔培養盤中。細胞在含濕氣培育箱中在37℃及5% CO 2下培養24小時。第二天，將冷凍CD4及CD8細胞在37℃分析培養基中解凍且靜置2小時。同時，預先接種之A375細胞之培養基用50 μL含有3×磷脂結合蛋白V紅染色試劑及3 mM CaCl 2的PBS替換。將50 μL分析培養基中之約8至300 nM濃度之PF-07265028及/或2 μg/mL薩善利單抗添加至各孔中，且亦添加存在於50 μL分析培養基中的T細胞。混合等量之CD4及CD8 T細胞，且接著添加至各孔中。視指定比率而定，孔含有每個腫瘤細胞2、4、5、10或20個T細胞。接著將培養盤轉移至Incucyte S3成像器且監測4天。
資料分析： Incucyte S3成像器經由核GFP監測A375增殖且經由磷脂結合蛋白V紅染色劑監測細胞凋亡，且報導每個視野之綠色及紅色目標之平均數目。
使用下式計算A375清除率百分比：
使用下式計算A375細胞凋亡百分比：
結果 ：產生針對A375細胞株的腫瘤反應性T細胞且接著在細胞凋亡標記物(磷脂結合蛋白V紅，獲自Sartorius)存在下與表現nucGFP之A375腫瘤細胞共培養。經由對GFP陽性細胞之頻率成像，監測A375細胞在四天期間內之擴增及損失。藉由螢光顯微法檢查綠色細胞核之數目對A375-nucGFP細胞進行計數。細胞用單獨111 nM PF-07265028、單獨2 μg/mL薩善利單抗或彼等試劑之組合處理。對照組為無T細胞或經模擬物處理之T細胞(DMSO中)存在下的A375細胞生長。PF-07265028單獨及與薩善利單抗組合對A375腫瘤細胞生長之作用顯示於 圖 1中。按各腫瘤細胞六個T細胞之比率接種。各值為六次重複實驗之平均值，其中誤差條表示SEM。
A375清除%之計算描述於方法中且報導96小時A375-nucGFP細胞之減少。評估單獨或與2 μg/mL薩善利單抗組合的PF-07265028之增加量。 圖 2顯示T細胞共培養物中之A375腫瘤細胞生長對PF-07265028單獨及與薩善利單抗之組合的劑量反應。對照組顯示DMSO處理(模擬物)或DMSO與薩善利單抗存在下的A375細胞生長。各值為六次重複實驗之平均值，其中誤差條表示SEM。
為評定PF-07265028與薩善利單抗之潛在組合益處，在薩善利單抗及濃度提高之PF-07265028存在下評估T細胞與腫瘤細胞之共培養物。如上文所描述，在細胞凋亡標記物(磷脂結合蛋白V紅)存在下，將腫瘤反應性T細胞與A375-nucGFP細胞共培養。 圖 3顯示PF-07265028單獨及與薩善利單抗之組合對T細胞共培養物中A375細胞凋亡腫瘤細胞之生長的作用。在T細胞及腫瘤細胞之共培養物中，PF-07265028使細胞凋亡腫瘤細胞之數目增加。藉由磷脂結合蛋白V紅染色劑使細胞凋亡A375-nucGFP腫瘤細胞成像，且如方法中所描述計算96小時共培養之後的A375凋亡細胞%。評估單獨或與2 μg/mL薩善利單抗組合之PF-07265028之增加量。對照組顯示DMSO處理(模擬物)或DMSO與薩善利單抗存在下的A375細胞生長。各值為六次重複實驗之平均值，其中誤差條描繪SEM。
在T細胞及腫瘤細胞之共培養物中，PF-07265028使T細胞所產生之IFNγ的量增加。在共培養96小時之後，收集上清液，且藉由MSD定量免疫分析進行分析。評估單獨或與2 μg/mL薩善利單抗組合之PF-07265028之增加量。 圖 4顯示PF-07265028單獨及與薩善利單抗之組合對與腫瘤細胞共培養之T細胞中之IFNγ產生的作用。對照組顯示DMSO處理(模擬物)或DMSO與薩善利單抗存在下的A375細胞生長。各值為六次重複實驗之平均值，其中誤差條表示SEM。
藉由 T 細胞及 PF - 07265028 控制腫瘤細胞生長觀測到添加300 nM PF-07265028在96小時之後產生33.9% A375清除率，而經模擬物處理之共培養物僅清除9.4% A375 ( 表 1， 圖 1)。A375細胞之清除部分歸因於A375細胞凋亡的增加，如藉由磷脂結合蛋白V紅染色劑所量測。儘管經模擬物處理之T細胞在96小時之後產生22.2% A375細胞凋亡，但添加300 nM PF-07265028產生31.9% ( 表 1)。與T細胞活性增加一致，觀測到IFNγ增加，自模擬物處理之T細胞存在下的8,165 pg/mL增加至300 nM PF-07265028後的15,651 pg/mL ( 表 1)。在與PF-07265028一起培育之後觀測到抗腫瘤劑量反應，其值列於 表 1中，且標繪於 圖 2、 圖 3及 圖 4中。 表 1：在第96小時，T細胞在PF-07265028存在下對腫瘤細胞的控制增強
PF-07265028濃度(nM) A375 清除率% SEM A375 細胞凋亡% SEM IFNγ (pg/mL) SEM
0 9.4 2.4 22.2 1.0 8165 488
8 13.6 2.8 24.1 0.6 8640 410
12 15.0 1.9 24.0 1.0 8208 346
25 14.3 5.0 24.4 2.4 8567 357
50 17.9 2.2 23.8 0.8 9656 295
83 28.6 3.3 29.2 1.7 10856 502
111 23.4 2.7 26.7 1.6 11924 517
300 33.9 4.9 31.9 3.2 15651 272
上表所列值標繪於 圖 2、 圖 3及 圖 4中，且表示六次重複實驗之平均值及SEM。A375清除率%及細胞凋亡%係基於A375腫瘤細胞之活細胞成像且如方法中所描述進行計算。IFNγ藉由MSD免疫分析量測。
PF - 07265028 與薩善利單抗在控制腫瘤細胞生長中之作用單獨之薩善利單抗使A375細胞在96小時時之清除率自9.4%增加至29.5% ( 表 2， 圖 1)。添加300 nM PF-07265028使A375清除率進一步增加至52.6%。單獨薩善利單抗與薩善利單抗與300 nM PF-07265028之組合相比，A375細胞凋亡%自30.2%增加至45.6% ( 表 2， 圖 3)。與此一致，IFNγ自14,428 pg/mL增加至26,082 pg/mL ( 表 2， 圖 4)。PF-07265028劑量反應列於 表 1中且圖示於 圖 2、 圖 3及 圖 4中，且展現8至300 nM PF-07265028皆存在組合益處。 表 2：PF-07265028與薩善利單抗在96小時時之組合益處
PF-07265028濃度(nM) A375 清除率% SEM A375 細胞凋亡% SEM IFNγ (pg/mL) SEM
0 29.5 3.6 30.2 1.4 14428 695
8 37.5 2.8 33.7 2.5 17447 835
12 32.7 1.7 30.6 0.9 14648 422
25 34.0 3.0 32.0 1.9 15572 940
50 38.3 3.0 34.7 2.6 18543 566
83 42.7 1.3 36.9 1.3 19231 291
111 53.1 5.4 47.5 5.3 23621 914
300 52.6 3.2 45.6 2.9 26082 693
上表所列值標繪於 圖 2及 圖 3中，且表示六次重複實驗之平均值及SEM。以約2 μg/mL添加薩善利單抗。A375清除率%及細胞凋亡%係基於A375腫瘤細胞之活細胞成像且如方法中所描述進行計算。IFNγ藉由MSD免疫分析量測。
實例 7 HPK1 抑制劑 PF - 07265028 與抗 PD1 抗體尼沃單抗之組合的試管內生長抑制研究此實例之目的為評估PF-07265028在本發明實施例之抗PD1抗體(尼沃單抗)存在或不存在下作為癌症治療選項的潛力。
除了用尼沃單抗10 μg/mL置換薩善利單抗2 μg/mL以外，此實例根據如實例6中所描述之相同方案進行。如下文所描述進行流式細胞分析技術。
材料及方法 流式細胞分析技術 ：對於細胞量測術，在60小時自共培養物洗滌T細胞，且根據製造商方案藉由抗體純系SK7 (BD 564001)、SK3 (BD 612887)、RPA-T8 (Biolegend 301028)、FN50 (Biolegend 310932)、B56 (BD 561284)及B27 (BD 554702)針對CD3、CD4、CD8、CD69、Ki67及IFNγ染色。活細胞藉由Live/Dead Near-IR染色劑(ThermoFischer L10119)鑑別。染色的細胞在Cytek Aurora CS上成像，且在FlowJo (10版)上分析資料。
結果 ： 圖 5展示PF-07265028單獨及與尼沃單抗之組合對A375腫瘤細胞生長之作用。 圖 6展示T細胞共培養物中之A375腫瘤細胞清除對PF-07265028單獨及與尼沃單抗之組合的劑量反應。 圖 7展示PF-07265028單獨及與尼沃單抗之組合對T細胞增殖的作用，如藉由Ki67所量測。 圖 8展示PF-07265028單獨及與尼沃單抗之組合對每個活化T細胞之IFNγ產生的作用。PF-07265028增加與腫瘤細胞共培養之T細胞增殖，而尼沃單抗增加每個T細胞產生的IFNγ之量。當將PF-07265028與尼沃單抗組合時，T細胞增殖與IFNγ產生存在協同性增加，從而更大程度地控制腫瘤生長。
實例 8 HPK1 抑制劑 PF-07265028 與抗 PD1 抗體尼沃單抗之組合在試管內使與乳癌細胞共培養之 T 細胞產生 IFNγ此實例之目的為評估HPK1抑制劑PF-07265028對腫瘤反應性T細胞回應於與另一種腫瘤適應症MDA-MB-231乳癌腫瘤細胞之共培養而產生IFNγ之能力的影響，及評估PF-07265028在抗PD1抗體存在或不存在下作為癌症治療選項的潛力。
材料及方法 細胞培養 ：為產生腫瘤反應性T細胞，利用EasySep人類T細胞分離套組(獲自StemCell Technologies)方案自PBMC (來源於兩個獨立人類供者，稱為『個體1』及『個體2』)分離出CD4或CD8 T細胞，且與經絲裂黴素處理的MDA-MB-231細胞(10 μg/mL絲裂黴素C處理2小時；絲裂黴素C係獲自StemCell Technologies)在具有10%人類血清AB (獲自Fisher Scientific)之X-VIVO™ 15培養基(獲自Lonza Walkersville, Inc.)中混合。10分鐘後，添加20 ng/mL重組人類IL-2 (IS)及10 ng/mL重組人類IL-7 (獲自Miltenyi Biotec)以擴增活化T細胞，且在G-Rex培養容器中持續擴增21天。所得細胞在90%胎牛血清(FBS，獲自Fisher Scientific)及10% DMSO之溶液中冷凍保存。
MDA-MB-231人類乳癌細胞在含有10% FBS及1%青黴素/鏈黴素之Gibco Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI)培養基中繼代。在共培養物分析之前，MDA-MB-231細胞株用Incucyte NucLight綠色慢病毒(nucGFP) (獲自Sartorius)轉導且藉由1 μg/mL嘌呤黴素(獲自Sigma)選擇。
腫瘤共培養物分析 ：將表現nucGFP之MDA-MB-231細胞於具有10% FBS的100 μL RPMI (分析培養基)中以每孔5,000至10,000個細胞接種於ImageLock 96孔培養盤(來自Sartorius)中。細胞在含濕氣培育箱中在37℃及5% CO 2下培養18小時。第二天，將冷凍CD4及CD8細胞在37℃分析培養基中解凍且靜置2小時。同時，預先接種之A375細胞之培養基用50 μL含有3×磷脂結合蛋白V紅染色試劑及3 mM CaCl 2的分析培養基替換。將50 μL分析培養基中之333 nM (3×最終)濃度之PF-07265028及/或30 μg/mL (3×最終)濃度之尼沃單抗(購自SelleckChemicals)添加至各孔中，且亦添加50 μL分析培養基中的T細胞。獨立地分析來自個體1及個體2之人類T細胞。對於個體1，混合等量CD4及CD8 T細胞，且隨後添加至各孔中。對於個體2，僅將CD8 T細胞添加至各孔中。對於每個腫瘤細胞而言，細胞總共含有10個T細胞，E:T比率為10:1。接著將培養盤轉移至37℃及5% CO 2Incucyte S3培育箱中且監測4天。
資料分析 ：在共培養96小時之後，自各孔收集50 μL細胞培養物上清液，轉移至單獨的96孔盤中，且在-20℃下儲存隔夜。第二天，將上清液樣品在室溫下解凍且根據製造商方案，藉由MSD定量免疫分析(人類IFNγ套組，Meso Scale Diagnostics)進行分析。使用製造商提供的規定濃度之校準器定量地測定上清液中之IFNγ濃度(以pg/mL為單位)以設定標準曲線。
結果 ：為了評估PF-07265028與抗PD1抗體的潛在組合益處，在尼沃單抗及PF-07265028存在下評估T細胞與腫瘤細胞的共培養物。產生來自兩個人類供者(個體1及個體2)之針對MDA-MB-231細胞株的腫瘤反應性T細胞，且隨後如上文在材料及方法中所描述與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養。細胞用單獨111 nM PF-07265028、單獨10 μg/mL尼沃單抗或彼等試劑之組合處理。對照組為不與T細胞培養或與經模擬物處理之T細胞(DMSO中)培養的MDA-MB-231細胞。在共培養96小時之後，收集上清液且藉由如上文在材料及方法中所描述之MSD定量免疫分析進行分析。PF-07265028單獨及與抗PD1抗體尼沃單抗之組合對與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體1 T細胞所產生的IFNγ之量的作用展示於 圖 9中。對照組展示在DMSO處理(模擬物)或具有尼沃單抗之DMSO存在下與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體1 T細胞所產生的IFNγ的量。按各腫瘤細胞十個T細胞之比率接種。條形圖描繪三次重複實驗之平均值，其中誤差條表示SEM且標繪個別資料點。
PF-07265028單獨及與抗PD1抗體尼沃單抗之組合對與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體2 T細胞所產生的IFNγ之量的作用展示於 圖 10中。對照組展示在DMSO處理(模擬物)或具有尼沃單抗之DMSO存在下與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體2 T細胞所產生的IFNγ的量。按各腫瘤細胞十個T細胞之比率接種。條形圖描繪三次重複實驗之平均值，其中誤差條表示SEM且標繪個別資料點。
PF - 07265028 及抗 PD1 抗體尼沃單抗在增強與乳癌細胞共培養之 T 細胞產生 IFNγ 方面的 組合益處據觀測，添加111 nM PF-07265028使IFNγ產生增加，此與T細胞活性增加一致。將111 nM PF-07265028添加至與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體1 T細胞中使IFNγ產生自經模擬物處理之細胞的9,114 pg/mL增加至17,473 pg/mL ( 表 3， 圖 9)。相比之下，僅將10 μg/mL抗PD1抗體尼沃單抗添加至與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體1 T細胞中使IFNγ產生自經模擬物處理之細胞的9,114 pg/mL增加至16,012 pg/mL ( 表 3， 圖 9)。111 nM PF-07265028與10 μg/mL尼沃單抗之組合添加使IFNγ產生進一步增加至29,795 pg/mL ( 表 3， 圖 9)。將111 nM PF-07265028添加至與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體2 T細胞中使IFNγ產生自經模擬物處理之細胞的231 pg/mL增加至816 pg/mL ( 表 3 ，圖 10)。相比之下，僅將10 μg/mL抗PD1抗體尼沃單抗添加至與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之個體2 T細胞中使IFNγ產生自經模擬物處理之細胞的231 pg/mL增加至398 pg/mL ( 表 3， 圖 10)。111 nM PF-07265028與10 μg/mL尼沃單抗之組合添加使IFNγ產生進一步增加至1,106 pg/mL ( 表 3， 圖 10)。兩個人類供者之所有定量結果列於 表 3中且圖示於 圖 9及 圖 10中，且證實PF-07265028及抗PD1抗體尼沃單抗在增強與乳癌腫瘤細胞共培養之T細胞產生IFNγ方面具有組合益處。 表 3：PF-07265028與抗PD1在96小時時之組合益處
T細胞供者 PF-07265028 濃度(nM) 尼沃單抗 (濃度μg/mL) IFNγ (pg/mL) SEM
個體1 0 0 9,114 879
個體1 111 0 17,473 380
個體1 0 10 16,012 435
個體1 111 10 29,795 1,543
個體2 0 0 231 10.0
個體2 111 0 816 64.5
個體2 0 10 398 13.0
個體2 111 10 1,106 14.3
上表所列值標繪於 圖 9及 圖 10中，且表示三個重複實驗之平均值及SEM。IFNγ如方法中所描述藉由MSD免疫分析量測。
本文中所引用之所有參考文獻，包括本說明書中所引用之專利申請案、專利公開案，皆以全文引用之方式併入本文中。儘管已藉助於說明及實例相當詳細地描述前述揭示內容，但一般熟習此項技術者根據本發明之教示內容將顯而易知，可在不背離隨附申請專利範圍之精神或範疇的情況下對其進行某些改變及修改。
前文描述及實例詳述本發明之某些特定實施例且描述本發明人預期之最佳模式。然而，將瞭解，無論以文字呈現之前述內容如何詳細，本發明可以許多方式實施，且本發明應根據所附申請專利範圍及其任何等效物解釋。
下文將參照諸圖描述本發明的各種實施例，在諸圖中： 圖 1根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體薩善利單抗組合對A375腫瘤細胞生長的作用。 圖 2根據本發明之某些實施例展示T細胞共培養物中之A375腫瘤細胞生長對PF-07265028單獨及與抗PD1抗體薩善利單抗組合的劑量反應。 圖 3根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體薩善利單抗組合對T細胞共培養物中之A375凋亡腫瘤細胞之生長的作用。 圖 4根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體薩善利單抗組合對具有腫瘤細胞之T細胞共培養物中之IFNγ產生的作用。 圖 5根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體尼沃單抗組合對A375腫瘤細胞生長的作用。 圖 6根據本發明之某些實施例展示T細胞共培養物中之A375腫瘤細胞生長對PF-07265028單獨及與尼沃單抗組合的劑量反應。 圖 7根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體尼沃單抗組合對A375腫瘤細胞共培養物中之Ki67陽性CD8 T細胞百分比的作用。 圖 8根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體尼沃單抗組合對A375腫瘤細胞共培養物中每個活化T細胞產生之IFNγ的作用。 圖 9根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體尼沃單抗組合對與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之人類供者『個體1』T細胞產生之IFNγ之量的作用。 圖 10根據本發明之某些實施例展示PF-07265028單獨及與抗PD1抗體尼沃單抗組合對與MDA-MB-231腫瘤細胞共培養之人類供者『個體2』T細胞產生之IFNγ之量的作用。

Claims (27)

  1. 一種用於治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與一量之式(I)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： R 1a及R 1b各自獨立地為(C 1-C 6)烷基，或R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0、1或2個(C 1-C 6)烷基取代之5員雜環烷基； R 2a及R 2b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； R 3a及R 3b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； 各R 4獨立地為經0或1個鹵素或羥基取代之(C 1-C 6)烷基；且 n為0、1或2； 與一量之計劃性死亡1蛋白(PD-1)軸結合拮抗劑的組合，其中該等量一起有效治療癌症。
  2. 如請求項1之方法，其中R 1a及R 1b各自獨立地為甲基、乙基或異丙基。
  3. 如請求項1或2之方法，其中R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0或1個甲基取代基取代之5員雜環烷基。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中R 2a及R 2b為氫。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中R 3a及R 3b各自獨立地為氫、甲基或乙基。
  6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中R 4為甲基或乙基。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中n為1。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該式(I)化合物為： 4-[1-胺丙基]-2-{6-[5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮； 4-[1-胺乙基]-2-{6-[5-乙基-6,7-二氫-5 H -吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或 4-[1-胺丙基]-2-{3-[5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。
  9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該式(I)化合物為： 4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[(1R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[(1S)-1-胺乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮； 4-[(1R)-1-胺乙基]-2-{6-[(5S)-5-乙基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或 4-[(1R)-1-胺丙基]-2-{3-[(5S)-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,1-c][1,2,4]***-3-基]苯基}-6-[甲基(丙-2-基)胺基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-1-酮；或其醫藥學上可接受之鹽。
  10. 如請求項1至9中任一項之方法，其中該式(I)化合物為4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮。
  11. 如請求項1至10中任一項之方法，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑或PD-L2拮抗劑。
  12. 如請求項11之方法，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1拮抗劑。
  13. 如請求項11或12之方法，其中該PD-1結合拮抗劑為抗PD-1抗體。
  14. 如請求項13之方法，其中該抗PD-1抗體係選自由以下組成之群：薩善利單抗(sasanlimab)、尼沃單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、匹地利珠單抗(pidilizumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、斯巴達珠單抗(spartalizumab)、信迪利單抗(sintilimab)、MEDI-0680、BGB-108、AGEN2034傑諾珠單抗(genolimzumab)、CBT-502、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)，及其組合。
  15. 如請求項14之方法，其中該抗PD-1抗體為薩善利單抗。
  16. 如請求項14之方法，其中該抗PD-1抗體為尼沃單抗。
  17. 如請求項14之方法，其中該抗PD-1抗體為帕博利珠單抗。
  18. 如請求項11或12之方法，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含PD-L1拮抗劑。
  19. 如請求項18之方法，其中該PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。
  20. 如請求項1至19中任一項之方法，其中該個體為人類。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：腦癌、頭/頸癌、***癌、膀胱癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、骨癌、大腸直腸癌、腎臟癌、肝癌、胰臟癌、食道癌、胃癌、胃食道接合部癌、甲狀腺癌、子宮頸癌、子宮癌及腎癌。
  22. 一種用於治療有需要之個體之癌症的組合，其包含： (i)式I化合物， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1a及R 1b各自獨立地為(C 1-C 6)烷基，或R 1a及R 1b與其所連接之氮一起形成經0、1或2個(C 1-C 6)烷基取代之5員雜環烷基； R 2a及R 2b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； R 3a及R 3b各自獨立地為氫或(C 1-C 4)烷基； 各R 4獨立地為經0或1個鹵素或羥基取代之(C 1-C 6)烷基；且 n為0、1或2；及 (ii) PD-1軸結合拮抗劑。
  23. 如請求項22之組合，其中該HKP1抑制劑為4-[(1 R)-1-胺丙基]-2-{6-[(5 S)-5-甲基-6,7-二氫-5 H-吡咯并[2,1- c][1,2,4]***-3-基]吡啶-2-基}-6-[(2 R)-2-甲基吡咯啶-1-基]-2,3-二氫-1 H-吡咯并[3,4- c]吡啶-1-酮，且該PD-1軸結合拮抗劑包含抗PD-1抗體，該抗PD-1抗體選自由以下組成之群：薩善利單抗、尼沃單抗、帕博利珠單抗、匹地利珠單抗、西米普利單抗、替雷利珠單抗、斯巴達珠單抗、信迪利單抗、MEDI-0680、BGB-108、或AGEN2034傑諾珠單抗、CBT-502、卡瑞利珠單抗，及其組合。
  24. 如請求項22或23之組合，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含薩善利單抗。
  25. 如請求項22或23之組合，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含尼沃單抗。
  26. 如請求項22或23之組合，其中該PD-1軸結合拮抗劑包含帕博利珠單抗。
  27. 一種如請求項22至26中任一項之組合之用途，其用於治療有需要之個體之癌症。
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