TW202233671A - Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法 - Google Patents

Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202233671A
TW202233671A TW110138708A TW110138708A TW202233671A TW 202233671 A TW202233671 A TW 202233671A TW 110138708 A TW110138708 A TW 110138708A TW 110138708 A TW110138708 A TW 110138708A TW 202233671 A TW202233671 A TW 202233671A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
acid sequence
cdr
Prior art date
Application number
TW110138708A
Other languages
English (en)
Inventor
偉慶 梁
偉瑜 林
雁 吳
民宏 嚴
布萊娜 幸子 弗爾曼
費明健
Original Assignee
美商建南德克公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商建南德克公司 filed Critical 美商建南德克公司
Publication of TW202233671A publication Critical patent/TW202233671A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

本發明提供抗 MerTK 抗體 (例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體) 及其製造及使用方法。

Description

PEG　結合抗　MerTK　抗體及其使用方法
本發明是有關於聚乙二醇化抗 MerTK 抗體及其製備和使用方法。
目前大部分癌症腫瘤免疫學 (IO) 療法集中在調節 T 細胞的活性、免疫系統的適應性臂 (adaptive arm)、藉由阻擋作為免疫查核點的抑制路徑。然而，藉由這些療法觸發的長效反應受限於癌症病患的亞群 (subpopulations)。腫瘤微環境中的各種免疫抑制機制造成相對低的反應速率。先天免疫系統是有效免疫反應的集成部分 (integral part)。先天免疫系統在適應性免疫反應 (adaptive immune response) 的啟動及後續方向扮演關鍵部分。標的先天免疫系統可與適應性腫瘤免疫學療法相配 (Mullard, A., Nat. Rev. Drug Discov., 17: 3-5 (2018))。
先天免疫系統的巨噬細胞在各種類型的實性瘤中相當充足，且對於基於T細胞療法可貢獻相對低的反應速率。它們為可實現各種功能的多功能細胞，包含吞噬細胞作用。巨噬細胞是在移除瀕死或死亡細胞及細胞碎片高度專一的專職性吞噬細胞。估計人體每天有數十億細胞死亡。但極少在正常生理條件下發現組織中的凋亡細胞，此要感謝吞噬細胞的快速且有效率的清除。在體內平衡中，凋亡細胞是在血漿膜完整性損失前在細胞死亡的早期階段即被移除。因此，通常細胞凋亡在免疫學上是沉默的。在實性瘤中，由於缺氧及代謝壓力，不受控制的腫瘤成長常伴隨細胞死亡增加。為躲避免疫監測，腫瘤利用細胞凋亡的非免疫天性。腫瘤相關巨噬細胞 (TAMs) 主動移除凋亡腫瘤細胞以避免改變免疫系統。
MerTK 已顯示在對凋亡細胞的清除方面發揮作用。因此，使用 MerTK 抑制劑減少凋亡細胞的 MerTK 介導的清除在癌症治療中是一種令人感興趣的治療方法。現存的抗 MerTK 抗體已有被描述但可能不適合於治療發展。例如，White 等人（「在小鼠中具有治療抗腫瘤活性的 MerTK 專一性抗體中斷食蟹獼猴的視網膜色素上皮的完整性 (MERTK-Specific Antibodies That Have Therapeutic Antitumor Activity in Mice Disrupt the Integrity of the Retinal Pigmented Epithelium in Cynomolgus Monkeys)」，其發表在美國癌症研究協會年會 (the American Association for Cancer Research Annual Meeting)，2019 年 3 月 31 日，亞特蘭大，喬治亞州）描述二抗 MerTK 抗體：一個與具有較高親和力 (8.7x10 -11M) 的人類 MerTK 結合 (SRF1)，一個與具有較低親和力 (4.4x10 9) 的人類 MerTK 結合但與鼠類 MerTK 交叉反應 (SRF2)。這些抗體在小鼠模型中已顯示結合抗 PD-L1 抗體可抑制各種 MerTK 功能及抑制腫瘤成長。然而，已發現二抗體引起食蟹獼猴的視網膜毒性。如此一來，二抗體中沒有一個是可被接受作為治療候選物。這些發現強調在發展具有可接受安全性總則 (safety profile) 的有效治療候選物中，審查多種因素的重要性，而非僅僅是抗體親和力。
因此，用於治療、穩定、防止及/或延遲各種癌症發展的最理想療法仍保有需求。特別是，需要具有最佳結合特性（ 例如，開關速率 (on and off rates)）的抗 MerTK 抗體以及期望的生物效應。例如，對於具有療效但降低或消除視網膜毒性的抗 MerTK 抗體存在需求。
本文所引用之所有參考文獻（包括專利申請案、專利公開案、及UniProtKB/Swiss-Prot存取編號）均以全文引用之方式併入本文中，就像各個別參考文獻被特定地且個別地指出以引用之方式併入一般。
本發明提供一種聚乙二醇化抗 MerTK 抗體及其使用方法。
一方面，本揭露提供一種與 MerTK 結合之聚乙二醇化抗體 (PEGylated antibody)，其中該抗體結合至一個或多個聚乙二醇 (PEG) 聚合物；其中該（等）PEG 聚合物中之各者在工程化半胱胺酸殘基結合至該抗體的重鏈或輕鏈；以及其中該抗體包含：(1) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有 SYAMG (SEQ ID NO: 1) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 2) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 DPGVSSNL (SEQ哀ID NO: 3) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 4) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 GASKLAS (SEQ ID NO: 5) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 6) 之胺基酸序列的 CDR-L3；或(2) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有ANTMN (SEQ ID NO: 7) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 8) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 9) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 10) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 AASILAS (SEQ ID NO: 11) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 12) 之胺基酸序列的 CDR-L3。一方面，本揭露提供一種與 MerTK 結合的聚乙二醇化抗體，其中該抗體結合至一個或多個聚乙二醇 (PEG) 聚合物；其中該（等）PEG 聚合物中之各者在工程化半胱胺酸殘基結合至抗體的重鏈或輕鏈；且其中所述抗體包含：重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 包含 SYAMG (SEQ ID NO:1) 之胺基酸序列的 CDR-H1，(b) 包含 IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 2) 之胺基酸序列的 CDR-H2，和 (c) 包含 DPGVSSNL (SEQ ID NO: 3) 之胺基酸序列的 CDR-H3；以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 包含 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 4) 之胺基酸序列的 CDR-L1，(e) 包含 GASKLAS (SEQ ID NO: 5) 之胺基酸序列的 CDR-L2，和 (f) 包含 QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 6) 之胺基酸序列的 CDR-L3。一方面，本揭露提供一種與 MerTK 結合的聚乙二醇化抗體，其中該抗體結合至一個或多個聚乙二醇 (PEG) 聚合物；其中該（等）PEG 聚合物中之各者在工程化半胱胺酸殘基結合至與抗體的重鏈或輕鏈；且其中所述抗體包含：重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 包含 ANTMN (SEQ ID NO: 7) 之胺基酸序列的 CDR-H1，(b) 包含 IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 8) 之胺基酸序列的 CDR-H2，和 (c) 包含 SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 9) 之胺基酸序列的 CDR-H3；以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 包含 QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 10) 之胺基酸序列的 CDR-L1，(e) 包含 AASILAS (SEQ ID NO: 11) 之胺基酸序列的 CDR-L2，和 (f) 包含 QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 12) 之胺基酸序列的 CDR-L3。
在一些實施例中，該 VH 域包含與 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列。在一些實施例中，該 VH 域包含與 EQQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 15) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DVQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKPPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 16) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 EQQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 15) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DVQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKPPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 16) 之胺基酸序列。在一些實施例中，該 VH 域包含與 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRTSTTVDLRMPSLTTEDTATYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 17) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASKLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQATYYSSNSVAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 18) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRTSTTVDLRMPSLTTEDTATYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 17) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASKLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQATYYSSNSVAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 18) 之胺基酸序列。在一些實施例中，該 VH 域包含與 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSANTMNWVRQAPGKGLEWIGIFTATGSTYYATWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSGSGSSSGAFNIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 19) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DPVLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSISSSLAWYQQKPGQPPKLLIYAASILASEISSRFKGSRSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTSYGSLFLGPFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 20) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSANTMNWVRQAPGKGLEWIGIFTATGSTYYATWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSGSGSSSGAFNIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 19) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DPVLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSISSSLAWYQQKPGQPPKLLIYAASILASEISSRFKGSRSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTSYGSLFLGPFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 20) 之胺基酸序列。
在一些實施例中，該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 21) 之序列。在一些實施例中，該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:22) 之序列。在一些實施例中，該輕鏈包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 23) 之序列。
在一些實施例中，抗體結合至一個或兩個 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物為線性 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物為分枝 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）分枝 PEG 聚合物包含 2 個分枝。在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體具有大於約 6 nm 的流體力學半徑。在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體具有大於或等於約 10 nm 的流體力學半徑。在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體的流體力學半徑介於約 6 nm 至約 10 nm 之間，或介於約 9 nm 至約 11 nm 之間。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物各自具有介於約 10 kDa 至約 40 kDa 之間、介於約 20 kDa 至約 40 kDa 之間、或介於約 10 kDa 至約 20 kDa 之間，例如約 10 kDa、約 20 kDa、約 30 kDa 或約 40 kDa 的分子量。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物中之各者經由順丁烯二醯亞胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至抗體的重鏈或輕鏈。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物中之各者經由碘乙醯胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至抗體的重鏈或輕鏈。在一些實施例中，工程化半胱胺酸殘基選自由以下所組成之群組：輕鏈的 K149C、輕鏈的 K183C、重鏈的 T186C 及重鏈的 Y373C，輕鏈的編號係根據 Kabat ，且重鏈的編號係根據 EU 指數。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條輕鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 K149C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條輕鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 K183C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條重鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 T186C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條重鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 Y373C 工程化半胱胺酸。
一方面，本揭露提供一種製造與 MerTK 結合的聚乙二醇化抗體的方法，包括使包含一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基的抗體與一個或多個包含順丁烯二醯亞胺部分的聚乙二醇 (PEG) 聚合物在適合該（等）PEG 聚合物中之各者經由硫醚鍵聯而結合至抗體之工程化半胱胺酸殘基的條件下接觸（亦即，共價連接）。在一些實施例中，抗體的一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基在介於 7.0 至 7.5 之間的 pH 下與一個或多個 PEG 聚合物的順丁烯二醯亞胺部分接觸（亦即，化學反應）。一方面，本揭露提供一種製造與 MerTK 結合的聚乙二醇化抗體的方法，包括使包含一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基的抗體與一個或多個包含碘乙醯胺部分的聚乙二醇 (PEG) 聚合物在適合該（等）PEG 聚合物中之各者經由硫醚鍵聯而結合至抗體之工程化半胱胺酸殘基的條件下接觸（亦即，共價連接）。在一些實施例中，該抗體包含重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 包含 SYAMG (SEQ ID NO: 1) 之胺基酸序列的 CDR-H1，(b) 包含 IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 2) 之胺基酸序列的 CDR-H2，和 (c) 包含 DPGVSSNL (SEQ ID NO: 3) 之胺基酸序列的 CDR-H3；及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 包含 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 4) 之胺基酸序列的 CDR-L1，(e) 包含 GASKLAS (SEQ ID NO: 5) 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (f) 包含 QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 6) 之胺基酸序列的 CDR-L3。在一些實施例中，該抗體包含重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 包含 ANTMN (SEQ ID NO: 7) 之胺基酸序列的 CDR-H1，(b) 包含 IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 8) 之胺基酸序列的 CDR-H2，和 (c) 包含 SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 9) 之胺基酸序列的 CDR-H3；及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 包含QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 10) 之胺基酸序列的 CDR-L1，(e) 包含 AASILAS (SEQ ID NO: 11) 之胺基酸序列的 CDR-L2，及 (f) 包含 QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 12) 之胺基酸序列的 CDR-L3。
在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物以每抗體 2.0 個聚合物的比率結合至抗體。在一些實施例中，在將抗體與 PEG聚合物接觸（亦即，共價連接）之前，游離工程化半胱胺酸殘基中之各者用半胱胺酸或麩胱甘肽部分阻擋 (block)；且該方法進一步包括將該工程化半胱胺酸殘基去阻擋 (deblock)。在一些實施例中，該方法進一步包括，在使抗體與一個或多個 PEG 聚合物接觸（亦即，共價連接）之後，從未結合的抗體及 PEG 聚合物純化聚乙二醇化抗體。在一些實施例中，聚乙二醇化抗體藉由疏水***互作用層析純化。
在一些實施例中，該 VH 域包含與 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列。在一些實施例中，該 VH 域包含與 EQQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 15) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DVQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKPPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 16) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 EQQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 15) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DVQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKPPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 16) 之胺基酸序列。在一些實施例中，該 VH 域包含與 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRTSTTVDLRMPSLTTEDTATYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 17) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASKLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQATYYSSNSVAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 18) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRTSTTVDLRMPSLTTEDTATYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 17) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASKLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQATYYSSNSVAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 18) 之胺基酸序列。在一些實施例中，該 VH 域包含與 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSANTMNWVRQAPGKGLEWIGIFTATGSTYYATWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSGSGSSSGAFNIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 19) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；以及/或該 VL 域包含與 DPVLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSISSSLAWYQQKPGQPPKLLIYAASILASEISSRFKGSRSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTSYGSLFLGPFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 20) 之胺基酸序列具有至少 95％ 序列同一性的序列。在一些實施例中，該 VH 域包含 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSANTMNWVRQAPGKGLEWIGIFTATGSTYYATWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSGSGSSSGAFNIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 19) 之胺基酸序列；以及該 VL 域包含 DPVLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSISSSLAWYQQKPGQPPKLLIYAASILASEISSRFKGSRSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTSYGSLFLGPFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 20) 之胺基酸序列。
在一些實施例中，該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 21) 之序列。在一些實施例中，該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:22) 之序列。在一些實施例中，該輕鏈包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 23) 之序列。
在一些實施例中，抗體結合至一個或兩個 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物為線性 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物為分枝 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）分枝 PEG 聚合物包含 2 個分枝。在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體具有大於約 6 nm 的流體力學半徑。在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體具有大於或等於約 10 nm 的流體力學半徑。在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體的流體力學半徑介於約 6 nm 至約 10 nm 之間，或介於約 9 nm 至約 11 nm 之間。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物各自具有介於約 10 kDa 至約 40 kDa 之間、介於約 20 kDa 至約 40 kDa 之間、或介於約 10 kDa 至約 20 kDa 之間，例如約 10 kDa、約 20 kDa、約 30 kDa 或約 40 kDa 的分子量。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物中之各者經由順丁烯二醯亞胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至抗體的重鏈或輕鏈。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物中之各者經由碘乙醯胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至抗體的重鏈或輕鏈。在一些實施例中，工程化半胱胺酸殘基選自由以下所組成之群組：輕鏈的 K149C、輕鏈的 K183C、重鏈的 T186C 及重鏈的 Y373C，輕鏈的編號係根據 Kabat ，且重鏈的編號係根據 EU 指數。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條輕鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 K149C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條輕鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 K183C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條重鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 T186C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且其中抗體的兩條重鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 Y373C 工程化半胱胺酸。
一方面，本揭露提供一種聚乙二醇化抗體，其與藉由上述實施例中任一項之方法製造的 MerTK 結合。一方面，本揭露提供一種醫藥組成物，其包含上述任一實施例的聚乙二醇化抗 MerTK 抗體及醫藥上可接受之載劑。
一方面，本揭露提供一種治療罹患癌症之個體的方法，包括投予該個體有效量的上述實施例中任一項之聚乙二醇化抗體或組成物。一方面，本揭露提供一種減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的方法，包括投予該個體有效量的上述實施例中任一項之聚乙二醇化抗體或組成物。一方面，本揭露提供上述實施例中任一項之聚乙二醇化抗 MerTK 抗體或組成物，其用為藥物。一方面，本揭露提供上述實施例中任一項之聚乙二醇化抗 MerTK 抗體或組成物，其用於治療癌症。一方面，本揭露提供上述實施例中任一項之聚乙二醇化抗 MerTK 抗體或組成物，其用於本文揭露的任何方法中，例如用於治療罹患癌症之個體及/或減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的方法中。一方面，本揭露提供上述實施例中任一項之聚乙二醇化抗 MerTK 抗體或組成物，其用於製造例如用於治療罹患癌症的個體及/或減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的藥物。
在一些實施例中，與 MerTK 結合的未聚乙二醇化之抗體之投予相比，聚乙二醇化抗體之投予使得該個體的視網膜毒性減少。在一些實施例中，該方法進一步包括對個體投予另外的治療劑。在一些實施例中，該另外的治療劑係選自以下中之一者或多者：他莫昔芬 (tamoxifen)、利妥唑 (letrozole)、伊析美斯坦 (exemestane)、阿那曲唑 (anastrozole)、抗癌妥 (irinotecan)、西妥昔單抗 (cetuximab)、氟維司群 (fulvestrant)、溫諾平 (vinorelbine)、得舒緩 (erlotinib)、貝伐珠單抗 (bevacizumab)、長春新鹼 (vincristine)、甲磺酸伊馬替尼 (imatinib mesylate)、索拉非尼 (sorafenib)、拉帕替尼 (lapatinib)、曲妥珠單抗 (trastuzumab)、順鉑 (cisplatin)、吉西他濱 (gemcitabine)、胺甲喋呤 (methotrexate)、長春花鹼 (vinblastine)、卡鉑 (carboplatin)、紫杉醇 (paclitaxel)、5-氟尿嘧啶 (5-fluorouracil)、阿黴素 (doxorubicin)、硼替佐米 (bortezomib)、黴法蘭 (melphalan)、強體松 (prednisone) 及多西紫杉醇 (docetaxel) 。在一些實施例中，該另外的治療劑為免疫查核點抑制劑。在一些實施例中，該免疫查核點抑制劑係選自由以下所組成之群組：細胞毒性 T 淋巴球相關蛋白 4 (CTLA4) 抑制劑、計畫性細胞死亡蛋白 1 (PD-1) 結合拮抗劑及計畫性死亡配體 1 (PDL1) 結合拮抗劑。在一些實施例中，該免疫查核點抑制劑為抗 PDL1 結合拮抗劑。在一些實施例中，該 PDL1 結合拮抗劑為抗 PDL1 抗體，例如阿替利珠單抗 (atezolizumab)。在一些實施例中，該方法進一步包括投予該個體有效量的另外的化療劑。在一些實施例中，該癌症為大腸癌。在一些實施例中，該癌症係選自泌尿上皮癌、非小細胞肺癌、三陰性乳癌、小細胞肺癌、肝細胞癌及黑色素瘤。在一些實施例中，凋亡細胞的清除減少約 1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9 或 8.0 倍。
應理解，可組合本文所揭示之各種實施例中的一種、一些或全部特性以形成本揭露之其他實施例。本揭露之此等及其他態樣對於熟習此項技術者將變得顯而易見。本揭露之此等及其他實施例藉由下文之實施方式進一步描述。
相關申請的交叉引用
本案主張 2020 年 10 月 20 日提交的美國臨時申請序號 63/094,197 的優先權，其揭露內容以全文引用之方式併入本文中。 I. 定義
應理解，本揭露不限於特定組成物或生物系統，其可理所當然有所變化。亦應理解，本文所用之術語僅出於描述特定具體實例之目的，且不意欲作為限制性的。
除非上下文另外明確指示，否則如本說明書及所附申請專利範圍中所用，單數形式「一（a/an）」及「該（the）」包括複數個指示物。因此，舉例而言，提及「一分子」視情況包括兩個或更多個此類分子之組合及其類似者。
如本文所用，術語「約」係指本技術領域技術人員易於知曉的各個值的通常誤差範圍。本文提及「約」值或參數包括 (和描述) 針對該值或參數本身的實施例。
應理解，本揭露之方面及實施例包括「包含」方面及實施例、「由」方面及實施例「組成」及「基本上由」方面及實施例「組成」。
就本文目的而言，「接受者人骨架 (acceptor human framework)」為包含衍生自人免疫球蛋白骨架或人共通骨架的輕鏈可變域 (VL) 骨架或重鏈可變域 (VH) 骨架的胺基酸序列的骨架，如下定義。「衍生自 (derived from)」人免疫球蛋白骨架或人共通骨架的受體人骨架可包含與此等為相同的胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列的變更。在一些態樣中，胺基酸變更數目為 10 或更少、9 或更少、8 或更少、7 或更少、6 或更少、5 或更少、4 或更少、3 或更少、或 2 或更少。在一些態樣中，VL 受體人骨架與 VL 人免疫球蛋白骨架序列或人共通骨架序列的序列相同。
「親和力」係指分子 (例如抗體) 之單一結合位點與其結合配偶體 (例如抗原) 之間的非共價交互作用總和的強度。除非另有說明，否則如本文中所使用的「結合親和力」，係指反映結合對成員 (例如抗體及抗原) 之間 1:1 交互作用之內在結合親和力。分子 X 對於其搭配物 Y 之親和力通常可藉由解離常數 (K D) 來表示。可以藉由本領域已知的常規方法測量親和力，包括彼等本文所述之方法。下面描述了用於測量結合親和力的具體說明性和例示性方法。
術語「親和力成熟」之抗體是指在一或多個互補決定區 (CDR) 中具有一或多種變化之抗體，與不具有此等變化之親本抗體相比，此類變化引起該抗體對抗原之親和力的改善。
術語「抗 MerTK 抗體」及「與 MerTK 結合之抗體」指能夠以足夠親和力與 MerTK 結合，從而使得該抗體可用為靶向 MerTK 之診斷劑及/或治療劑之抗體。一方面，抗 MerTK 抗體與無關、非 MerTK 蛋白質結合之程度低於該抗體與 MerTK 結合的約 10%，其藉由例如表面電漿子共振 (SPR) 所量測。在某些方面，與 MerTK 結合之抗體之解離常數 (K D) 為 ≤ 1μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM、或≤ 0.001 nM (例如 10 -8M 或更低，例如 10 -8M 至 10 -13M，例如 10 -9至 10 -13M )。當抗體之 K D為 1μM 或更低時，稱該抗體與 MerTK「特異性結合」。在某些方面，抗 MerTK 抗體與 MerTK 結合之抗原決定位，其在不同物種的 MerTK 之間為保守性的。
本文中的術語「抗體」以最廣義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）及抗體片段，只要其等展示出預期抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指除完整抗體以外的分子，其包含結合完整抗體所結合抗原之完整抗體的一部分。抗體片段之實例包括 (但不限於) Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab') 2；從抗體片段所形成之雙功能抗體 (diabody)、線性抗體；單鏈抗體分子 (例如 scFv 及 scFab)；單域抗體 (dAb)；及多重特異性抗體。關於某些抗體片段的綜述，參見 Holliger 及 Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136 (2005)。
術語"嵌合"抗體是指其中重鏈和/或輕鏈的一部分源自特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈的其餘部分源自不同來源或物種的抗體。
抗體之「類別 (class)」係指為其重鏈所具有的恆定域或恆定區之類型。有五大類抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干者可進一步分成子類（同型），例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。在某些方面，該抗體是屬 IgG 1同型。在某些方面，該抗體是屬 IgG 1同型，具有 P329G、L234A 及 L235A 突變以減少 Fc 區效應子功能。在其他方面，該抗體屬 IgG2 同型。在某些方面，該抗體屬 IgG4 同型，在鉸鏈區中具有 S228P 突變以改善 IgG4 抗體之穩定性。對應於不同類別之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為 α、δ、ε、γ 及 μ。基於其恆定域之胺基酸序列，抗體之輕鏈可被歸類為兩種類型中的一種，稱為卡帕 (κ) 及蘭姆達 (λ)。
本申請中使用的術語「源自人源的恆定區」或「人恆定區」表示亞類 IgG1、IgG2、IgG3 或 IgG4 的人抗體的恆定重鏈區及/或恆定輕鏈 κ 或 λ 區。該等恆定區在現有技術中係習知者，例如，Kabat, E.A., 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) 中所揭示者（亦參見例如 Johnson, G. 與 Wu, T.T.，Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218 ；Kabat, E.A. 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72 (1975) 2785-2788）。除非本文另有說明，否則恆定區中胺基酸殘基之編號係根據 EU 編號系統 (也稱為 Kabat EU 索引)，如 Kabat, E.A. 等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242 中所揭示。
「效用功能 (effector function)」，係指歸因於抗體的 Fc 區域的那些生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q 結合和補體依賴性細胞毒性 (CDC)；Fc 受體結合；抗體依賴性細胞媒介之細胞毒性 (ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體 (例如 B 細胞受體) 的下調；以及 B 細胞活化。
藥劑例如醫藥組成物的「治療有效量」係指在所需之給藥劑量和時間段內有效實現所需的治療或預防效果的量。
本文中的術語「Fc 區域」，用於定義包含至少一部分恆定區域的免疫球蛋白重鏈的 C 端區域。該術語包括天然序列 Fc 區域和變異 Fc 區域。在一個方面，人 IgG 重鏈 Fc 區從 Cys226 或 Pro230 延伸至重鏈的羧基端。但是，由宿主細胞產生的抗體可能經歷重鏈 C 端的一種或多種，特別是一種或兩種胺基酸之轉譯後切割。因此，由宿主細胞藉由表現編碼全長重鏈的特定核酸分子而產生的抗體可包括全長重鏈，或者可包括全長重鏈的切割變異體。這可能是重鏈的最後兩個 C 端胺基酸為甘胺酸 (G446) 及離胺酸（K447，EU 編號系統）的情況。因此，可以存在或可以不存在 Fc 區域之 C 端離胺酸 (Lys447) 或 C 端甘胺酸 (Gly446) 及離胺酸 (Lys447)。除非另有說明，否則包括 Fc 區域之重鏈之胺基酸序列在本文中表示不含 C 端甘胺酸-離胺酸二肽。一方面，包含在根據本發明之抗體中的包括本文所述之 Fc 區的重鏈包含另外的 C 端甘胺酸-離胺酸二肽（G446 和 K447，EU 編號系統）。一方面，包含在根據本發明之抗體中的包括本文所述之 Fc 區的重鏈包含另外的 C 端甘胺酸殘基（G446，根據 EU 索引編號）。除非本文另有說明，否則 Fc 區域或恆定區中胺基酸殘基之編號根據 EU 編號系統 (也稱為 EU 指數) 進行，如 Kabat 等人所述 (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991) (另見上文)。
「骨架」或「FR」係指互補決定區 (CDR) 之外的可變域殘基。可變域之 FR 通常由四個 FR 域組成： FR1、FR2、FR3、及 FR4。因此，CDR 及 FR 序列通常以如下順序出現在 VH (或 VL) 中： FR1-CDR-H1(CDR-L1)-FR2-CDR-H2(CDR-L2)-FR3-CDR-H3(CDR-L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，係指具有與天然抗體結構實質上類似的結構或具有包含本文所定義之 Fc 區域的重鏈之抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用，係指已將外源核酸引入其中的細胞，包括此等細胞的子代細胞。宿主細胞包括「轉化子」和「轉化細胞」，其包括原代轉化細胞及由其衍生的子代細胞，而與傳代次數無關。子代細胞之核酸含量可能與親代細胞不完全相同，但可能含有突變。本文包括與自原始轉變細胞中所篩選或選擇具有相同功能或生物活性的突變子代細胞。
「人抗體 (human antibody)」為具有胺基酸序列之抗體，該胺基酸序列對應於由人或人體細胞產生或自利用人抗體譜系 (antibody repertoire) 或其他人抗體編碼序列之非人來源衍生之抗體之胺基酸序列。人抗體的該定義特定地排除包含非人抗原結合殘基之人源化抗體。
「人共通骨架」是代表一系列人免疫球蛋白 VL 或 VH 骨架序列中最常見的胺基酸殘基的骨架。通常，人免疫球蛋白 VL 或 VH 序列的選擇來自可變域序列的次群組。通常，序列的亞組是如 Kabat 等人在 Sequences of Proteins of Immunological Interest(第五版，NIH Publication 91-3242，Bethesda MD (1991)，第 1-3 卷) 中所述之亞組 。在一個方面，對於 VL，亞組是如 Kabat 等人在 上述文獻中所述之亞組 κ I。在一個方面，對於 VH，亞組是如 Kabat 等人在 上述文獻中所述之亞組 III。
「人源化 (humanized)」抗體係指包含來自非人 CDR 之胺基酸殘基及來自人 FR 之胺基酸殘基之嵌合抗體。在某些方面，人源化抗體將包括實質上所有至少一個 (且通常兩個) 可變域，其中所有或實質上所有 CDR 對應於非人抗體之其等，及所有或實質上所有 FR 對應對於人抗體之其等。人源化抗體視情況可包含衍生自人抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體 (例如非人抗體) 之「人源化形式 (humanized form)」係指已經歷人源化之抗體。
如本文所用，術語「高度可變區」或「HVR」是指抗體可變域中序列高度可變並決定抗原結合特異性的各個區，例如「互補決定區」(「CDR」)。通常，抗體包括六個 CDR：三個在 VH 中 (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，及三個在 VL 中 (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。在本文中，例示性 CDR 包括： (a) 高度可變環存在於胺基酸殘基 26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)、及 96-101 (H3) 處 (Chothia 及 Lesk， J. Mol. Biol.196:901-917 (1987))； (b) CDR 存在於胺基酸殘基 24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2)、及 95-102 (H3) 處（Kabat 等人， Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda, MD (1991)）；及 (c) 抗原接觸存在於胺基酸殘基 27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2)、及 93-101 (H3) 處 (MacCallum 等人 J. Mol. Biol.262: 732-745 (1996))。 除非另有說明，否則 CDR 根據 Kabat 等人在上述文獻中所述之方法來確定。本領域之技術人員將理解，也可以根據 Chothia 在上述文獻、McCallum 在上述文獻中所述之方法或任何其他科學上接受之命名系統來確定 CDR 名稱。
一方面，CDR 殘基包含第 II.A 節或本説明書中其他地方所標識之殘基。
「免疫結合物」為結合至一個或多個異源分子之抗體，其包括但不限於細胞毒性劑。
「個體」或「受試者」為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於馴養的動物 (例如牛、綿羊、貓、狗和馬)、靈長類動物 (例如人及非人類靈長類動物諸如猴)、兔以及囓齒動物 (例如小鼠及大鼠)。在某些方面，受試者或個體為人類。
「分離的」抗體是從其自然環境的組分中分離出來之抗體。在一些實施例中，將抗體純化至大於 95% 或 99% 純度，藉由 (例如) 電泳 (例如 SDS-PAGE、等電聚焦 (IEF)、毛細管電泳) 或層析 (例如，離子交換或反相 HPLC) 方法測定。關於評估抗體純度之方法的綜述，參見例如 Flatman 等人， J. Chromatogr. B848:79-87 (2007).
術語「核酸分子」或「多核苷酸」包括任何包含核苷酸聚合物的化合物及/或物質。每個核苷酸由鹼基具體而言嘌呤或嘧啶鹼基 (即，胞嘧啶 (C)、鳥嘌呤 (G)、腺嘌呤 (A)、胸腺嘧啶 (T) 或尿嘧啶 (U))、糖 (即，脫氧核糖或核糖) 及磷酸基團構成。通常，核酸分子通過鹼基序列進行描述，其中所述鹼基代表核酸分子的一級結構 (線性結構)。鹼基序列通常由 5’ 至 3’ 表示。在本文中，術語核酸分子包括：去氧核糖核酸 (DNA)，其包括例如互補 DNA (cDNA) 和基因體 DNA；核糖核酸 (RNA)，特定而言信使 RNA (mRNA)；DNA 或 RNA 的合成形式；以及包含兩個或更多個這些分子的混合聚合物。核酸分子可以是線性或環狀的。此外，術語核酸分子包括有義股和反義股，以及單股和雙股形式。此外，本文所述之核酸分子可包含天然存在或非天然存在之核苷酸。非天然存在之核苷酸的例子包括帶有衍生糖、磷酸鹽連接或化學修飾殘基的經修飾之核苷酸鹼基。核酸分子還包括適於在體外及/或體內例如在宿主或患者體內直接表現本發明之抗體的載體的 DNA 和 RNA 分子。此等 DNA (例如，cDNA) 或 RNA (例如，mRNA) 載體可以是未修飾的或經過修飾的。例如，mRNA 可經過化學修飾以增強 RNA 載體之穩定性及/或編碼分子之表達，從而將 mRNA 注入個體內以產生抗體 (參見例如 Stadler 等人，Nature Medicine 2017，線上發表于 2017 年 6 月 12 日，doi:10.1038/nm.4356 或 EP 2 101 823 B1)。
「分離的」核酸係指已經與其天然環境的組分分離的核酸分子。分離的核酸包括通常包含核酸分子之細胞中所含之核酸分子，但是核酸分子存在於染色體外或與自然染色體位置不同之染色體位置。
「經分離之編碼抗 MerTK 抗體的核酸」係指編碼抗 MerTK 抗體重鏈和輕鏈（或其片段）之一種或多種核酸分子，包括在單個載體或單獨抗體中之此等核酸分子，且此等核酸分子存在於宿主細胞中的一個或多個位置。
如本文所用的術語「單株抗體」係指獲自實質上同源抗體群體之抗體，即包含群體的個體抗體是相同的和/或結合相同的抗原決定位，除了例如含有天然生成之突變或於單株抗體製劑生產過程中產生的可能的變異體抗體之外，此等變異體通常係以少量存在。與通常包括針對不同決定位 (抗原決定基) 之不同抗體之多株抗體製劑相反，單株抗體製劑之每個單株抗體係針對於抗原上的單一決定位。因此，修飾詞「單株」表示抗體之特徵係獲自實質上同質之抗體群體，且不應解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。例如，意欲根據本發明使用的單株抗體可藉由多種技術來製造，包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法、及利用包含全部或部分人免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物之方法，本文描述此等方法及用於製備單株抗體之其他例示性方法。
「裸抗體」係指未與異源部分 (例如，細胞毒性部分) 或放射性標記結合之抗體。裸抗體可存在於醫藥組成物中。
「天然抗體」係指具有不同結構的天然生成之免疫球蛋白分子。例如，Ig 天然 IgG 抗體為約 150,000 道耳頓、由二條相同的輕鏈及二條相同的重鏈經二硫鍵鍵合所構成之異四聚體糖蛋白。從N端至C端，每條重鏈具有可變域(VH)，亦稱為可變重鏈域或重鏈可變區，接著係三個重鏈恆定域 (CH1、CH2及CH3)。類似地，從N端至C端，每條輕鏈具有可變域(VL)，亦稱為可變輕鏈域或輕鏈可變區，接著為輕鏈恆定(CL)域。
術語「包裝插頁」用於指涉通常包含在治療性產品的商業包裝中的說明，該說明包含有關使用此等治療性產品的適應症、用法、劑量、投予途徑、聯合治療、禁忌症及/或警告等資訊。
相對於參照多肽序列所述之「胺基酸序列同一性百分比 (%)」，是指候選序列中胺基酸殘基與參照多肽序列中之胺基酸殘基相同之百分比，在比對序列並引入差異後 (如有必要)，可實現最大的序列同一性百分比，並且不考慮將任何保守取代作為序列同一性之一部分。為確定胺基酸序列同一性百分比之目的而進行的比對可透過本領域中技術範圍內之各種方式實現，例如，使用公開可用的電腦軟體諸如 BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign (DNASTAR) 軟件或 FASTA 程式套件實現。本領域之技術人員可確定用於比對序列之合適參數，包括在所比較之序列全長上實現最大比對所需之任何演算法。可替代地，可使用序列比較計算機程式 ALIGN-2 生成同一性百分比值。ALIGN-2 序列比較計算機程式由建南德克公司開發，並且其源代碼已與用戶文檔一起歸檔在位於美國華盛頓特區 20559 的美國著作權局，其已經注冊 (美國版權註冊號 TXU510087) 並在 WO 2001/007611 中有所描述。
除非另有說明，否則出於本文之目的，使用 FASTA 套件 36.3.8c 版或更高版本的 ggsearch 程式及 BLOSUM50 比較矩陣來生成胺基酸序列同一性百分比值。FASTA 程式套件由以下作者開發：W. R. Pearson 及 D. J. Lipman (1988) (「Improved Tools for Biological Sequence Analysis」, PNAS 85:2444-2448)；W. R. Pearson (1996) (「Effective protein sequence comparison」 Meth. Enzymol. 266:227-258)；及 Pearson 等人(1997) (Genomics 46:24-36)，並可從以下網址公開存取：www.fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml 或 www. ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta。可替代地，可使用透過 fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi 存取的公用伺服器，使用 ggsearch (global protein:protein) 程式和預設選項 (BLOSUM50; open: -10; ext: -2; Ktup = 2) 比較序列，以確保執行全局而不是局部比對。胺基酸同一性百分比提供於輸出比對標題中。
術語「醫藥組成物」或「醫藥調配物」係指以下製劑，其形式為允許其中所含之活性成分的生物活性有效，並且不含對組成物將投予之個體具有不可接受之毒性的其他組分。
「醫藥上可接受之載劑」是指醫藥組成物或調配物中除對個體無毒之活性成分以外的成分。醫藥上可接受之載劑包括但不限於緩衝液、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
除非另有說明，否則如本文所使用之術語「MerTK」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然 MerTK，該脊椎動物包括哺乳動物，諸如靈長類動物（例如，人）以及囓齒動物（例如，小鼠及大鼠）。術語涵蓋「全長」未經加工的 MerTK 以及在細胞中加工所產生的任何形式之 MerTK。該術語亦涵蓋天然 MerTK 變異體，例如剪接變異體或等位基因變異體。例示性人 MerTK 之胺基酸序列如 US 2006/0121562 中所揭示。
如本文所用，「治療」(及其語法變體，諸如「治療過程」或「治療中」)，係指試圖改變受治療個體之疾病自然病程的臨床干預，並且可進行預防或在臨床病理過程中執行。期望之治療效果包括但不限於預防疾病之發生或複發、減輕症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理後果、預防轉移、降低疾病進展之速度、改善或減輕疾病狀態、緩解或改善預後。在一些方面，本發明之抗體用於延遲疾病之發展或減慢疾病之進展。
術語「可變區 (variable region)」或「可變域 (variable domain)」係指參與抗體與抗原結合的抗體重鏈或輕鏈之域。天然抗體之重鏈及輕鏈 (分別為 VH 及 VL) 之可變域通常具有類似的結構，且每個域均包含四個保守性骨架區 (FR) 及三個互補決定區 (CDR)。(參見，例如，Kindt 等人 Kuby Immunology, 6 thed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)。) 單個 VH 或 VL 域可能足以賦予抗原結合特異性。此外，可以使用 VH 或 VL 域從結合抗原的抗體中分離結合特定抗原的抗體，以分別篩選互補 VL 或 VH 域的文庫。參見，例如，Portolano 等人， J. Immunol.150:880-887 (1993); Clarkson 等人， Nature352:624-628 (1991)。
如本文所用，術語「載體」是指一種核酸分子，其能夠傳送與其連接之另一種核酸。該術語包括作為自我複制核酸結構之載體以及摻入已引入該宿主細胞的基因體中的載體。某些載體能夠引導與其操作性連接之核酸的表現。這些載體在本文中稱為「表現載體」。 II. 組成物及方法
一方面，本發明部分地基於以下觀察：在臨床前靈長類動物和小鼠模型中，MerTK 抗體治療可導致靶向視網膜毒性（特別是光感受器及外核層中的細胞）。如本文所揭露，增加抗 MerTK 抗體的流體力學半徑（例如，藉由將一個或多個聚乙二醇 (PEG) 聚合物結合至抗體）可以減少全身投予後的眼部分布，從而減少向 RPE 細胞的分布及所得視網膜毒性。在某些方面，提供了與 MerTK 結合之聚乙二醇化抗體。本發明之聚乙二醇化抗體例如可用於治療癌症。
C-Mer 原癌基因酪胺酸激酶 (MerTK) 是一種受體酪胺酸激酶，它在與各種配體（諸如半乳糖凝集素 3、蛋白質 S 和 Gas6）結合後轉導細胞外信號，從而活化效應物基因之表現。MerTK 通路調節基本的細胞過程，包括細胞存活、細胞激素製造、遷移、分化及吞噬作用（Cabernoy N., 等人 JCell Physio.227 (2012): 401-407；Wu, G., 等人 Cell Death & Disease8 (2017): e2700）。在多種造血細胞類型，例如巨噬細胞、樹突細胞、自然殺手 (NK) 細胞中發現了 MerTK 的表現。重要的是，MerTK 受體通路在包括大腸癌在內的多種實性癌和血液癌中具有活性（Wu, G., 等人 Cell Death & Disease8 (2017): e2700）。
然而，MerTK 也在視網膜色素上皮中表現，且為對視力至關重要之光感受器外段 (POS) 周轉所必需。事實上，已經在視網膜營養性萎縮患者中發現了 MerTK 中的突變。
MerTK 受體由細胞外成分、跨膜 (TM) 域和細胞內成分組成。如下圖所示，MerTK 的細胞外或配體結合區包含兩個類免疫球蛋白 (Ig) 域和兩個類纖網蛋白 (FN) III 型域。
Figure 02_image001
例如，在人 MerTK 中，兩個類 Ig 域分別由胺基酸殘基 76-195 和胺基酸殘基 199-283 界定。此外，人 MerTK 的兩個類纖網蛋白域分別由胺基酸殘基 286-384 和胺基酸殘基 388-480 界定。MerTK 的細胞內區包含一個酪胺酸激酶 (TK) 域，它在配體與細胞外區結合後使特定酪胺酸殘基自磷酸化並促進 MerTK 受體二聚化，從而活化下游效應物基因表現（Toledo, R.A, 等人 Clin Can.Res. 22 (2016): 2301-2312）。人 MerTK 包含胺基酸序列： MGPAPLPLLLGLFLPALWRRAITEAREEAKPYPLFPGPFPGSLQTDHTPLLSLPHASGYQPALMFSPTQPGRPHTGNVAIPQVTSVESKPLPPLAFKHTVGHIILSEHKGVKFNCSISVPNIYQDTTISWWKDGKELLGAHHAITQFYPDDEVTAIIASFSITSVQRSDNGSYICKMKINNEEIVSDPIYIEVQGLPHFTKQPESMNVTRNTAFNLTCQAVGPPEPVNIFWVQNSSRVNEQPEKSPSVLTVPGLTEMAVFSCEAHNDKGLTVSKGVQINIKAIPSPPTEVSIRNSTAHSILISWVPGFDGYSPFRNCSIQVKEADPLSNGSVMIFNTSALPHLYQIKQLQALANYSIGVSCMNEIGWSAVSPWILASTTEGAPSVAPLNVTVFLNESSDNVDIRWMKPPTKQQDGELVGYRISHVWQSAGISKELLEEVGQNGSRARISVQVHNATCTVRIAAVTRGGVGPFSDPVKIFIPAHGWVDYAPSSTPAPGNADPVLIIFGCFCGFILIGLILYISLAIRKRVQETKFGNAFTEEDSELVVNYIAKKSFCRRAIELTLHSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLILGKILGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSLKVAVKTMKLDNSSQREIEEFLSEAACMKDFSHPNVIRLLGVCIEMSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTYLLYSRLETGPKHIPLQTLLKFMVDIALGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEIATRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYEIMYSCWRTDPLDRPTFSVLRLQLEKLLESLPDVRNQADVIYVNTQLLESSEGLAQGSTLAPLDLNIDPDSIIASCTPRAAISVVTAEVHDSKPHEGRYILNGGSEEWEDLTSAPSAAVTAEKNSVLPGERLVRNGVSWSHSSMLPLGSSLPDELLFADDSSEGSEVLM (SEQ ID NO: 42)。 A. 例示性抗 MerTK 抗體
一方面，本發明提供與 MerTK 結合之抗體（例如，聚乙二醇化抗體）。一方面，提供了與 MerTK 結合之經分離之抗體。一方面，本發明提供與 MerTK 特異性結合之抗體。在某些方面，抗 MerTK 抗體經聚乙二醇化的，亦即，結合至一個或多個（例如，1 或 2 個）PEG 聚合物。
一方面，本發明提供一種抗 MerTK 抗體，該抗體包含選自以下之至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或全部六個 CDR：(a) 包含 SYAMG (SEQ ID NO: 1) 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 2) 之胺基酸序列的 CDR-H2；(c) 包含 DPGVSSNL (SEQ ID NO: 3) 之胺基酸序列的 CDR-H3；(d) 包含 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 4) 之胺基酸序列的 CDR-L1；(e) 包含 GASKLAS (SEQ ID NO: 5) 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (f) 包含 QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 6) 之胺基酸序列的 CDR-L3。
一方面，本發明提供一種抗體，該抗體包含選自以下之至少一個、至少兩個或全部三個 VH CDR 序列：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3。一方面，該抗體包含 CDR-H3，其包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列。另一方面，該抗體包含：包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3；及包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3。又一方面，該抗體包含：包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3、包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3、及包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2。又一方面，該抗體包含：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3。
另一方面，本發明提供一種抗體，該抗體包含選自以下之至少一個、至少兩個或全部三個 VL CDR 序列：(a) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(b) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3。一方面，該抗體包含 (a) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(b) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3。
另一方面，本發明提供一種抗 MerTK 抗體，該抗體包含選自以下之至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或全部六個 CDR：(a) 包含 ANTMN (SEQ ID NO: 7) 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 8) 之胺基酸序列的 CDR-H2；(c) 包含 SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 9) 之胺基酸序列的 CDR-H3；(d) 包含 QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 10) 之胺基酸序列的 CDR-L1；(e) 包含 AASILAS (SEQ ID NO: 11) 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (f) 包含 QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 12) 之胺基酸序列的 CDR-L3。
一方面，本發明提供一種抗體，該抗體包含選自以下之至少一個、至少兩個或全部三個 VH CDR 序列：(a) 包含 SEQ ID NO: 7 之胺基酸序列的CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的 CDR-H2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的 CDR-H3。一方面，該抗體包含 CDR-H3，其包含 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列。另一方面，該抗體包含：包含 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的 CDR-H3；及包含 SEQ ID NO: 12 之胺基酸序列的 CDR-L3。又一方面，該抗體包含：包含 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的 CDR-H3、包含 SEQ ID NO: 12 之胺基酸序列的 CDR-L3、及包含 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的 CDR-H2。又一方面，該抗體包含：(a) 包含 SEQ ID NO: 7 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的 CDR-H2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的 CDR-H3。
另一方面，本發明提供一種抗體，該抗體包含選自以下之至少一個、至少兩個或全部三個 VL CDR 序列：(a) 包含 SEQ ID NO: 10 之胺基酸序列的 CDR-L1；(b) 包含 SEQ ID NO: 11 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 12 之胺基酸序列的 CDR-L3。一方面，該抗體包含 (a) 包含 SEQ ID NO: 10 之胺基酸序列的 CDR-L1；(b) 包含 SEQ ID NO: 11 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 12 之胺基酸序列的 CDR-L3。
在本文提供的任一方面，抗 MerTK 抗體為人源化抗體。一方面，抗 MerTK 抗體進一步包含接受者人骨架，例如人免疫球蛋白骨架或人共通骨架。
另一方面，抗MerTK抗體進一步包含分別包含 SEQ ID NO: 13 或 SEQ ID NO: 14 之 FR1、FR2、FR3 或 FR4 序列的 VH 或 VL。 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS(SEQ ID NO: 13) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 14)
另一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 13 之 VH 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 14 之 VL 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 13 之 VH 的 CDR 序列及 SEQ ID NO: 14 之 VL 的 CDR 序列。
又一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 13 之 VH 域的 CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3 胺基酸序列及 SEQ ID NO: 14 之 VL 域的 CDR-L1、CDR-L2 和 CDR-L3 胺基酸序列。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 13 之 VH 域的一個或多個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 13 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 13 之 VH 域的三個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 13 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 13 之 VH 域的三個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 13 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。另一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 13 之 VH 域的三個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 13 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 98% 的序列同一性。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 14 之 VL 域的一個或多個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 14 之 VL 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 14 之 VL 域的三個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 14 之 VL 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 14 之 VL 域的三個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 14 之 VL 域的骨架胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。另一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 14 之 VL 域的三個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 13 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 98% 的序列同一性。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；(c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3；(d) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(e) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (f) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3；及 VH 域，其與 SEQ ID NO: 13 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性；及 VL 域，其與 SEQ ID NO: 14 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性。一方面，VH 域與 SEQ ID NO: 13 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在一方面，VL 域與 SEQ ID NO: 14 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；(c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3；(d) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(e) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (f) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列 CDR-L3；及 VH 域，其與 SEQ ID NO: 13 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性；及 VL 域，其與 SEQ ID NO: 14 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性；其中該抗體與 MerTK 特異性結合。一方面，VH 域與 SEQ ID NO: 13 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在一方面，VL 域與 SEQ ID NO: 14 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。
另一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈可變域 (VH) 序列，該 VH 序列與 SEQ ID NO: 13 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈可變域 (VH) 序列，該 VH 序列與 SEQ ID NO: 13 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在某些方面，具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的同一性的 VH 序列包含相對於參考序列的取代（例如，保守取代）、***或缺失，但是包含該序列的抗 MerTK 抗體保留與 MerTK 結合之能力。在某些方面，在 SEQ ID NO: 13 中，總計 1 至 10 個胺基酸被取代、***及/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失發生在 CDR 以外的區域 (即，在 FR 中)。視情況，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 13 中之 VH 序列，其包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定方面，VH 包含選自以下項的一個、兩個或三個 CDR：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3。另一方面，提供一種抗MerTK 抗體，其中該抗體包含輕鏈可變域 (VL) 序列，該 VL 序列與 SEQ ID NO:14 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含輕鏈可變域 (VL) 序列，該 VL 序列與 SEQ ID NO: 14 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在某些方面，具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的同一性的 VL 序列包含相對於參考序列的取代（例如，保守取代）、***或缺失，但是包含該序列的抗 MerTK 抗體保留與 MerTK 結合之能力。在某些方面，在 SEQ ID NO: 14 中，總計 1 至 10 個胺基酸被取代、***及/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失發生在 CDR 以外的區域 (即，在 FR 中)。視情況，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 14 中之 VL 序列，其包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定方面，VL 包含選自以下項的一個、兩個或三個 CDR：(a) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(b) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3。
另一方面，提供一種抗 MerTK 抗體，其中該抗體包含上文提供之任一方面的 VH 序列及上文提供之任一方面的 VL 序列。一方面，該抗體包含分別爲 SEQ ID NO: 13 和 SEQ ID NO: 14 之 VH 和 VL 序列，其包括那些序列之轉譯後修飾。
另一方面，抗MerTK抗體進一步包含分別包含 SEQ ID NO: 15 或 SEQ ID NO: 16 之 FR1、FR2、FR3 或 FR4 序列的 VH 或 VL。 EQQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO: 15) DVQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKPPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK(SEQ ID NO: 16)
另一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 15 之 VH 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 16 之 VL 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 15 之 VH 的 CDR 序列及 SEQ ID NO: 16 之 VL 的 CDR 序列。
又一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 15 之 VH 域的 CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3 胺基酸序列及 SEQ ID NO: 16 之 VL 域的 CDR-L1、CDR-L2 和 CDR-L3 胺基酸序列。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 15 之 VH 域的一個或多個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 15 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 15 之 VH 域的三個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 15 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 15 之 VH 域的三個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 15 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。另一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 15 之 VH 域的三個重鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 15 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 98% 的序列同一性。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 16 之 VL 域的一個或多個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 16 之 VL 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 16 之 VL 域的三個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 16 之 VL 域的骨架胺基酸序列具有至少 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 16 之 VL 域的三個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 16 之 VL 域的骨架胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。另一方面，抗 MerTK 抗體包含：SEQ ID NO: 16 之 VL 域的三個輕鏈 CDR 胺基酸序列；及骨架，該骨架與 SEQ ID NO: 15 之 VH 域的骨架胺基酸序列具有至少 98% 的序列同一性。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；(c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3；(d) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(e) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (f) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3；及 VH 域，其與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性；及 VL 域，其與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性。一方面，VH 域與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在一方面，VL 域與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。
一方面，抗 MerTK 抗體包含：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；(c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3；(d) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(e) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (f) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列 CDR-L3；及 VH 域，其與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性；及 VL 域，其與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性；其中該抗體與 MerTK 特異性結合。一方面，VH 域與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在一方面，VL 域與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。
另一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈可變域 (VH) 序列，該 VH 序列與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈可變域 (VH) 序列，該 VH 序列與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在某些方面，具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的同一性的 VH 序列包含相對於參考序列的取代（例如，保守取代）、***或缺失，但是包含該序列的抗 MerTK 抗體保留與 MerTK 結合之能力。在某些方面，在 SEQ ID NO: 15 中，總計 1 至 10 個胺基酸被取代、***及/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失發生在 CDR 以外的區域 (即，在 FR 中)。視情況，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 13 中之 VH 序列，其包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定方面，VH 包含選自以下項的一個、兩個或三個 CDR：(a) 包含 SEQ ID NO: 1 之胺基酸序列的 CDR-H1；(b) 包含 SEQ ID NO: 2 之胺基酸序列的 CDR-H2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 3 之胺基酸序列的 CDR-H3。另一方面，提供一種抗MerTK 抗體，其中該抗體包含輕鏈可變域 (VL) 序列，該 VL 序列與 SEQ ID NO:16 之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的序列同一性。一方面，抗 MerTK 抗體包含輕鏈可變域 (VL) 序列，該 VL 序列與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列具有至少 95% 的序列同一性。在某些方面，具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的同一性的 VL 序列包含相對於參考序列的取代（例如，保守取代）、***或缺失，但是包含該序列的抗 MerTK 抗體保留與 MerTK 結合之能力。在某些方面，在 SEQ ID NO: 16 中，總計 1 至 10 個胺基酸被取代、***及/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失發生在 CDR 以外的區域 (即，在 FR 中)。視情況，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 16 中之 VL 序列，其包括該序列之轉譯後修飾。在一個特定方面，VL 包含選自以下項的一個、兩個或三個 CDR：(a) 包含 SEQ ID NO: 4 之胺基酸序列的 CDR-L1；(b) 包含 SEQ ID NO: 5 之胺基酸序列的 CDR-L2；及 (c) 包含 SEQ ID NO: 6 之胺基酸序列的 CDR-L3。
另一方面，提供一種抗 MerTK 抗體，其中該抗體包含上文提供之任一方面的 VH 序列及上文提供之任一方面的 VL 序列。一方面，該抗體包含分別爲 SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 16 之 VH 和 VL 序列，其包括那些序列之轉譯後修飾。
另一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 17 之 VH 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 18 之 VL 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 17 之 VH 的 CDR 序列及 SEQ ID NO: 18 之 VL 的 CDR 序列。 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRTSTTVDLRMPSLTTEDTATYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO: 17) DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASKLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQATYYSSNSVAFGGGTEVVVK(SEQ ID NO: 18)
又一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 17 之 VH 域的 CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3 胺基酸序列及 SEQ ID NO: 18 之 VL 域的 CDR-L1、CDR-L2 和 CDR-L3 胺基酸序列。
一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 17 的 VH 域之一個或多個重鏈 CDR 胺基酸序列以及一個、兩個、三個或四個人骨架序列（例如，HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3 及/或 HC-FR4）。一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 18 的 VL 域之一個或多個輕鏈 CDR 胺基酸序列以及一個、兩個、三個或四個人骨架序列（例如，LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3 及/或 LC-FR4）。
另一方面，提供一種抗 MerTK 抗體，其中該抗體包含上文提供之任一方面的 VH 序列及上文提供之任一方面的 VL 序列。一方面，該抗體包含分別爲 SEQ ID NO: 17 和 SEQ ID NO: 18 之 VH 和 VL 序列，其包括那些序列之轉譯後修飾。
另一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 19 之 VH 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 20 之 VL 的一個或多個 CDR 序列。在另一實施例中，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 19 之 VH 的 CDR 序列及 SEQ ID NO: 20 之 VL 的 CDR 序列。 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSANTMNWVRQAPGKGLEWIGIFTATGSTYYATWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSGSGSSSGAFNIWGPGTLVTVSL(SEQ ID NO: 19) DPVLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSISSSLAWYQQKPGQPPKLLIYAASILASEISSRFKGSRSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTSYGSLFLGPFGGGTEVVVK(SEQ ID NO: 20)
又一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 19 之 VH 域的 CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3 胺基酸序列及 SEQ ID NO: 20 之 VL 域的 CDR-L1、CDR-L2 和 CDR-L3 胺基酸序列。
一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 19 的 VH 域之一個或多個重鏈 CDR 胺基酸序列以及一個、兩個、三個或四個人骨架序列（例如，HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3 及/或 HC-FR4）。一方面，抗 MerTK 抗體包含 SEQ ID NO: 20 的 VL 域之一個或多個輕鏈 CDR 胺基酸序列以及一個、兩個、三個或四個人骨架序列（例如，LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3 及/或 LC-FR4）。
另一方面，提供一種抗 MerTK 抗體，其中該抗體包含上文提供之任一方面的 VH 序列及上文提供之任一方面的 VL 序列。一方面，該抗體包含分別爲 SEQ ID NO: 19 和 SEQ ID NO: 20 之 VH 和 VL 序列，其包括那些序列之轉譯後修飾。
在本發明的又一方面，根據任一上述方面之抗 MerTK 抗體為單株抗體，包括嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。一方面，抗 MerTK 抗體為抗體片段，例如 Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體或 F(ab’) 2片段。
另一方面，抗體為全長抗體，例如本文所定義之完整 IgG1 抗體或其他抗體類別或同型。
一方面，另外存在 C 端甘胺酸 (Gly446)。一方面，另外存在 C 端離胺酸 (Lys447)。一方面，另外存在 C 端甘胺酸 (Gly446) 及 C 端賴胺酸 (Lys447)。
在某些實施例中，抗體在 Fc 區中包含至少一個減少與 Fc 受體及/或補體結合的突變。在一實施例中，抗體在 Fc 區中包含稱為 LALAPG（L234A、L235A 和 P329G，根據 EU 索引編號）的一組突變。LALAPG 及其他 Fc 突變於下文及例如美國專利第 8,969,526 號中進一步揭示。
一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈，該重鏈包含序列 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 21)。
一方面，抗 MerTK 抗體包含 Fc區（例如，人 IgG1 Fc 區），該 Fc 區包含 N297G 突變，根據 EU 索引編號。
一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈，該重鏈包含序列 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:22)。
一方面，抗 MerTK 抗體包含輕鏈，該輕鏈包含序列 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 23)。
一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含 SEQ ID NO:21 之序列，且該輕鏈其包含 SEQ ID NO:23 之序列。一方面，抗 MerTK 抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含 SEQ ID NO:22 之序列，且該輕鏈其包含 SEQ ID NO:23 之序列。 B.  PEG 聚合物
本揭露之某些方面涉及與 MerTK 結合之聚乙二醇化抗體。本揭露之任何抗 MerTK 抗體（例如，如上文所述）可以經聚乙二醇化。
如本領域已知者，抗體之聚乙二醇化指 PEG 單體之聚合物與抗體的結合（例如，化學偶合）。下文提供 PEG 單體之結構，且 PEG 聚合物通常表示為 (O-CH2-CH2) n -OCH3，其中 n表示 PEG 單體之數目。適用於本文之多種 PEG 聚合物為本領域已知者。參見例如 Jevsevar, S. 等人 (2010) Biotechnol. J.5:113-128。
Figure 02_image003
在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物為線性 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物為分枝 PEG 聚合物。在一些實施例中，該（等）分枝 PEG 聚合物包含 2 個或更多個分枝。在一些實施例中，該（等）分枝 PEG 聚合物包含 2 個分枝。
在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體具有大於約 6 nm 的流體力學半徑。在一些實施例中，該聚乙二醇化抗體具有大於或等於約 10 nm 的流體力學半徑。在一些實施例中，聚乙二醇化抗體具有介於約 9 nm 至約 11 nm 之間、介於約 6 nm 至約 11 nm 之間或介於約 6 nm 至約 10 nm 之間的流體力學半徑。
在一些實施例中，本揭露之抗 MerTK 抗體結合至一個或多個 PEG 聚合物。在一些實施例中，本揭露之抗 MerTK 抗體結合至一個或兩個 PEG 聚合物。
在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物各自具有介於約 10 kDa 至約 40 kDa 之間的分子量。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物各自具有介於約 20 kDa 至約 40 kDa 之間的分子量。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物各自具有介於約 10 kDa 至約 20 kDa 之間的分子量。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物各自具有約 10 kDa、約 20 kDa、約 30 kDa 或約 40 kDa 之分子量。
在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物（例如，一個或兩個 PEG 聚合物）於重鏈及/或輕鏈結合至本揭露之抗 MerTK 抗體。在一些實施例中，該（等）PEG 聚合物（例如，一個或兩個 PEG 聚合物）於重鏈及/或輕鏈的工程化半胱胺酸殘基結合至本揭露之抗 MerTK 抗體。工程化半胱胺酸殘基於下文中更詳細揭示。
在一些實施例中，工程化半胱胺酸殘基選自由以下所組成之群組：輕鏈的 K149C、輕鏈的 K183C、重鏈的 T186C 及重鏈的 Y373C（輕鏈的編號係根據 Kabat ，且重鏈的編號係根據 EU 指數）。例如，在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且抗體的兩條輕鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 K149C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且抗體的兩條輕鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 K183C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且抗體的兩條重鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 T186C 工程化半胱胺酸。在一些實施例中，該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈和兩個 PEG 聚合物；且抗體的兩條重鏈皆包含結合至兩個 PEG 聚合物中之一者的 Y373C 工程化半胱胺酸。
本揭露之某些方面涉及製造與 MerTK 結合之聚乙二醇化抗體的方法。本揭露之任何抗 MerTK 抗體（例如，如上文所述）可以用於本文揭露之方法。在一些實施例中，一個或多個 PEG 聚合物經由順丁烯二醯亞胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至本揭露之抗 MerTK 抗體的重鏈或輕鏈。在一些實施例中，一個或多個 PEG 聚合物經由碘乙醯胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至本揭露之抗 MerTK 抗體的重鏈或輕鏈。
在一些實施例中，該等方法包括使包含一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基的抗體與一個或多個包含順丁烯二醯亞胺部分的聚乙二醇 (PEG) 聚合物在適合該（等）PEG 聚合物中之各者經由硫醚鍵聯而結合至抗體之工程化半胱胺酸殘基的條件下接觸（亦即，共價連接）。在一些實施例中，結合在適合避免與離胺酸結合及/或順丁烯二醯亞胺環打開的 pH 下進行。在一些實施例中，結合在 pH 7 至 pH 7.5 下進行。非限制性反應條件在下文中舉例說明。在一些實施例中，監測結合反應，例如使用 HPLC 及粒徑篩析層析法 (SEC) 來解析具有不同聚合物比例的抗體種類。
在一些實施例中，該等方法包括使包含一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基的抗體與一個或多個包含碘乙醯胺部分的聚乙二醇 (PEG) 聚合物在適合該（等）PEG 聚合物中之各者經由硫醚鍵聯而結合至抗體之工程化半胱胺酸殘基的條件下接觸（亦即，共價連接）。
在一些實施例中，PEG 聚合物以每抗體 2.0 個聚合物的比率結合至抗體。PEG:抗體的比率可以例如使用 SEC 及 HPLC 來確定。
在一些實施例中，游離工程化半胱胺酸殘基中之各者於結合之前用半胱胺酸或麩胱甘肽部分進行阻擋。在一些實施例中，該等方法進一步包括，於結合之前，去阻擋游離的工程化半胱胺酸殘基。在一些實施例中，藉由在 pH 8.5 下還原來進行游離的工程化半胱胺酸殘基的去阻擋，例如，特別是對於具有較高硫醇 pKa 之位點（包括但不限於，輕鏈的 K149C）。在一些實施例中，對於具有較高硫醇 pKa 之位點（包括但不限於，輕鏈的 K149C），使用更具還原性之還原劑來進行游離的工程化半胱胺酸殘基的去阻擋。在一些實施例中，還原劑為 DTT。非限制性反應條件在下文中舉例說明。在一些實施例中，於去阻擋之後，重新氧化抗體。在一些實施例中，於去阻擋之後，純化抗體，例如，使用陽離子交換層析去除還原劑以及還原的半胱胺酸和麩胱甘肽。
在一些實施例中，該等方法進一步包括於結合後從未結合的抗體及 PEG 聚合物純化聚乙二醇化抗體。非限制性純化方法在下文中舉例說明。例如，在一些實施例中，聚乙二醇化抗體可以藉由疏水***互作用層析 (HIC) 純化。 1.    MerTK 生物活性
在一些實施例中，抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）減少藉由吞噬細胞進行的 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除，例如，對凋亡細胞之清除減少 1-10 倍、1-8 倍、1-5 倍、1-4 倍、1-3 倍、1-2 倍、2-10 倍、2-8 倍、2-5 倍、2-4 倍、2-3 倍、3-10 倍、3-8 倍、3-5 倍、3-4 倍，或減少約 1.1 倍、1.2 倍、1.3 倍、1.4 倍、1.5 倍、1.6 倍、1.7 倍、1.8 倍、1.9 倍、2.0 倍、2.1 倍、2.2 倍、2.3 倍、2.4 倍、2.5 倍、2.6 倍、2.7 倍、2.8 倍、2.9 倍、3.0 倍、3.1 倍、3.2 倍、3.3 倍、3.4 倍、3.5 倍、3.6 倍、3.7 倍、3.8 倍、3.9 倍、4.0 倍、4.1 倍、4.2 倍、4.3 倍、4.4 倍、4.5 倍、4.6 倍、4.7 倍、4.8 倍、4.9 倍、5.0 倍、5.1 倍、5.2 倍、5.3 倍、5.4 倍、5.5 倍、5.6 倍、5.7 倍、5.8 倍、5.9 倍、6.0 倍、6.1 倍、6.2 倍、6.3 倍、6.4 倍、6.5 倍、6.6 倍、6.7 倍、6.8 倍、6.9 倍、7.0 倍、7.1 倍、7.2 倍、7.3 倍、7.4 倍、7.5 倍、7.6 倍、7.7 倍、7.8 倍、7.9 倍或 8.0 倍。在一些實施例中，吞噬細胞為巨噬細胞。在一些此類實施例中，巨噬細胞為腫瘤相關巨噬細胞 (TAM)。在人類中，可以基於各種細胞表面標誌物的表現來鑑定 TAM，包括 CD14、HLA-DR（MHC II 類）、CD312、CD115、CD16、CD163、CD204、CD206 和 CD301。此外，特定功能性生物標誌物的製造，例如基質金屬蛋白酶、IL-10、誘導型一氧化氮合酶 (iNOS)、TNF-α 或 IL-12，可與細胞表面生物標誌物結合以準確地鑑定 TAM 群體（Quatromoni, J., 等人， Am J Transl Res.4 (2012): 376–389。） 凋亡細胞的清除可以藉由本領域技術人員已知的用於該目的之任何檢定法來量測。例如，對於體外凋亡細胞清除檢定，使用諸如小鼠腹腔巨噬細胞或人單核球源性巨噬細胞之類的吞噬細胞。凋亡細胞藉由***處理而產生並用偵檢探針進行標記。將凋亡細胞與吞噬細胞培養後，可以藉由顯微鏡或流式細胞分析技術分析吞噬作用。在一些實施例中，對凋亡細胞之清除減少，如在室溫下於此類凋亡細胞清除檢定中所量測。例如，對於體內凋亡清除檢定，對小鼠注射***以誘導胸腺細胞死亡。胸腺中之駐留巨噬細胞辨識並吞噬瀕死/死亡細胞 (Seitz, H. M. J Immunol. 178(9) 5635-5642 (2007))。在一些實施例中，對凋亡細胞之清除減少，如於此類凋亡細胞體內清除檢定中所量測。在一些實施例中，抗體減少配體介導之 MerTK 信號傳遞。在一些實施例中，該配體為 hGAS6-Fc (EC50 = ~ 84 pM)。在一些實施例中，抗體誘導促發炎反應。在一些實施例中，抗體誘導 I 型 IFN 反應。
在一些實施例中，本揭露之抗 MerTK抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK抗體）將凋亡細胞之吞噬活性減少約 10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%、60-100%、70-100%、75-100%、80-100%、85-100%、90-100%、95-100%、10-95%、20-95%、30-95%、40-95%、50-95%、60-95%、70-95%、75-95%、80-95%、85-95%、90-95%、10-90%、20-90%、30-90%、40-90%、50-90%、60-90%、70-90%、75-90%、80-90%、85-90%、10-85%、20-85%、30-85%、40-85%、50-85%、60-85%、70-85%、75-85%、80-85%、10-80%、20-80%、30-80%、40-80%、50-80%、60-80%、70-80%、75-80%、10-75%、20-75%、30-75%、40-75%、50-75%、60-75%、70-75%、10-70%、20-70%、30-70%、40-70%、50-70%、60-70%、10-65%、20-65%、30-65%、40-65%、50-65%、60-65%、10-60%、20-60%、30-60%、40-60%、50-60%、10-55%、20-55%、30-55%、40-55%、50-55%、10-40%、20-40% 或 30-40%，或減少至少約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99%。在一些實施例中，抗 MerTK抗體的用於減少凋亡細胞之吞噬活性的半數最大抑制濃度 (IC50) 為約 1 pM – 50 pM、1 pM - 100 pM、1 pM – 500 pM、1 pM – 1 nM、1 pM – 1.5 nM、5 pM – 50 pM、5 pM - 100 pM、5 pM – 500 pM、5 pM – 1 nM、5 pM – 1.5 nM、10 pM – 50 pM、10 pM - 100 pM、10 pM – 500 pM、10 pM – 1 nM、10 pM – 1.5 nM、50 pM - 100 pM、50 pM – 500 pM、50 pM – 1 nM、50 pM – 1.5 nM、100 pM – 500 pM、100 pM – 1 nM 或 100 pM – 1.5 nM。用於確定吞噬活性及 IC50 的例示性方法於下文的實例中揭示。
在一些實施例中，本揭露之抗 MerTK抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）將查核點抑制劑之活性增強約 1-2 倍、1-5 倍、1-10 倍、1-15 倍、1-20 倍、1-25 倍、1-30 倍、1-50 倍、1-75 倍、1-100 倍、1-150 倍、1-200 倍、1-250 倍、1.5-2 倍、1.5-5 倍、1.5-10 倍、1.5-15 倍、1.5-20 倍、1.5-25 倍、1.5-30 倍、1.5-50 倍、1.5-75 倍、1.5-100 倍、1.5-150 倍、1.5-200 倍、1.5-250 倍、2-5 倍、2-10 倍、2-15 倍、2-20 倍、2-25 倍、2-30 倍、2-50 倍、2-75 倍、2-100 倍、2-150 倍、2-200 倍、2-250 倍、2.5-5 倍、2.5-10 倍、2.5-15 倍、2.5-20 倍、2.5-25 倍、2.5-30 倍、2.5-50 倍、2.5-75 倍、2.5-100 倍、2.5-150 倍、2.5-200 倍、2.5-250 倍、5-10 倍、5-15 倍、5-20 倍、5-25 倍、5-30 倍、5-50 倍、5-75 倍、5-100 倍、5-150 倍、5-200 倍、5-250 倍、10-15 倍、10-20 倍、10-25 倍、10-30 倍、10-50 倍、10-75 倍、10-100 倍、10-150 倍、10-200 倍、10-250 倍、20-25 倍、20-30 倍、20-50 倍、20-75 倍、20-100 倍、20-150 倍、20-200 倍、20-250 倍、25-30 倍、25-50 倍、25-75 倍、25-100 倍、25-150 倍、25-200 倍或 25-250 被，或增強至少約 1 倍、2 倍、5 倍、10 倍、15 倍、20 倍、25 倍、30 倍、40 倍、50 fold 60 倍、70 倍、75 倍、80 倍、90 倍、100 倍、125 倍、150 倍、200 倍、225 倍或 250 倍。在某些實施例中，本揭露之抗 MerTK 抗體增強查核點抑制劑的活性，如使用下文實例中所揭示之檢定法確定，例如藉由使用抗 MerTK 抗體與查核點抑制劑的組合確定小鼠腫瘤模型中腫瘤體積的減少與單獨使用查核點抑制劑時腫瘤體積的減少進行比較。在某些實施例中，在用治療劑治療後至少 10 天、14 天、20 天、21 天或 30 天後確定腫瘤體積的減少。在某些實施例中，查核點抑制劑為抗 PD1 軸拮抗劑。在一個例示性實施例中，查核點抑制劑為抗 PD-L1 抗體。在另一實施例中，查核點抑制劑為抗 PD1 抗體。
在一些實施例中，本揭露之抗 MerTK 抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）將例如血液或血漿樣品中的無細胞 DNA (cfDNA) 及/或循環腫瘤 DNA (ctDNA) 增加約 1-2 倍、1-3 倍、1-4 倍、1-5 倍、1-10 倍、1.5-2 倍、1.5-3 倍、1.5-4 倍、1.5-5 倍、1.5-10 倍、2-3 倍、2-4 倍、2-5 倍、2-10 倍、3-5 倍、3-10 倍、4-5 倍、4-10 倍、5-10 倍，或增加至少約 1 倍、2 倍、3 倍、4 倍、5 倍或10倍。在某些實施例中，本揭露之抗 MerTK 抗體增加無細胞 DNA (cfDNA) 及/或循環腫瘤 DNA (ctDNA)，如使用下文實例中所揭示之檢定法確定，例如藉由從血液或血漿樣品中分離 cfDNA 及/或 ctDNA，並使用 PCR 和定量 DNA 電泳偵檢 cfDNA 及/或 ctDNA 的水平。 2. 抗體親和力
在某些方面，本文提供之抗體具有的解離常數 (K D) 是 ≤ 1μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM、或 ≤ 0.001 nM (例如 10 -8M 或更小，例如 10 -8M 之 10 -13M，例如 10 -9M 之 10 -13M)。
一方面，使用 BIACORE ®表面電漿子共振檢定法量測 K D。例如，使用 BIACORE ®-2000 或 BIACORE ®-3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway，NJ) 於 25℃ 用固定化抗原 CM5 晶片以 ~10 反應單位 (RU) 進行檢定。在一個態樣中，根據供應商的說明，用 N-乙基- N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽 (EDC) 和 N-羥基琥珀醯亞胺 (NHS) 活化羧甲基化葡聚醣生物感測器晶片 (CM5，BIACORE, Inc.)。用 10 mM 醋酸鈉 (pH 4.8) 將抗原稀釋至 5 μg/ml (約 0.2 μM)，然後以 5 μl/min的流速注入，以獲得大約 10 反應單位 (RU) 的偶合蛋白。注入抗原後，注入 1 M 乙醇胺以封閉未反應的基團。在動力學測量中，將 Fab 之兩倍連續稀釋液 (0.78 nM 至 500 nM) 在 25°C 下以約 25 μl/min 的流速注入含 0.05% 聚山梨糖醇酯 20 (TWEEN-20 TM) 界面活性劑 (PBST) 的 PBS 中。藉由同時擬合締合及解離感測圖，使用簡單的一對一 Langmuir 結合模型（BIACORE ®評估軟體版本 3.2）計算締合速率 (k on) 和解離速率 (k off)。平衡解離常數 (K D) 藉由 k off/k on比率計算得出。參閱，例如，Chen 等人， J. Mol. Biol.293:865-881 (1999)。如果藉由上述表面電漿子共振檢定法測得的締合速率 (on-rate) 超過 10 6M -1s -1，則可以使用螢光淬滅技術確定締合速率，該技術可量測 25°C 下 PBS (pH 7.2) 中的 20 nM 抗原抗體（Fab 形式）在濃度遞增之抗原存在下螢光發射強度的增加或減少（激發波長 = 295 nm；發射波長 = 340 nm，帶通 16 nm），該螢光發射強度可藉由分光光度計諸如停流分光光度計 (Aviv Instruments) 或帶有攪拌比色皿的 8000 系列 SLM-AMINCO TM分光光度計 (ThermoSpectronic) 測得。
在另一種方法中，K D通過放射性標記的抗原結合測定 (RIA) 進行測量。在一個方面，使用目標抗體及其抗原之 Fab 版執行 RIA。例如，藉由在滴定系列未標記的抗原存在下用最小濃度的 ( 125I) 標記的抗原平衡 Fab，然後用抗 Fab 抗體塗覆的板捕獲結合的抗原，來量測 Fab 對抗原的溶液結合親和力（參見例如 Chen 等人， J. Mol. Biol.293:865-881(1999)）。為確定測定的條件，用溶於 50 mM 碳酸鈉 (pH 9.6) 中的 5 μg/ml 捕獲抗 Fab 抗體 (Cappel Labs) 將 MICROTITER ®多孔板 (Thermo Scientific) 塗布隔夜，然後在室溫 (約 23°C) 下用溶於 PBS 中的 2% (w/v) 牛血清白蛋白封閉二至五小時。在非吸附板 (Nunc #269620) 中，將 100 pM 或 26 pM [ 125I]-抗原與目標 Fab 的系列稀釋液混合 (例如，與 Presta 等人在 Cancer Res.57:4593-4599 (1997) 中所述之抗 VEGF 抗體 Fab-12 的評估結果一致)。然後將目標 Fab 過夜孵育；但是，可繼續孵育更長時間 (例如約 65 小時)，以確保達到平衡。此後，將混合物轉移之捕獲板上，在室溫下進行孵育 (例如，孵化一小時)。然後除去溶液，用溶於 PBS 中的 0.1% 聚山梨糖醇酯 20 (TWEEN-20 ®) 將板洗滌八次。當板乾燥後，將閃爍劑 (MICROSCINT-20 TM；Packard) 以 150 μl/孔的量加入，並利用 TOPCOUNT TM伽瑪計數器 (Packard) 進行十分鐘計數。選擇提供小於或等於最大結合之 20% 的各 Fab 的濃度以用於競爭性結合檢定中。 3. 抗體片段
在某些方面，本文提供之抗體為抗體片段。
在一個方面，抗體片段為 Fab、Fab’、Fab’-SH 或 F(ab’) 2片段，特別是 Fab 片段。木瓜酶對完整抗體之消化產生兩個相同的抗原結合片段，稱為「Fab」片段，其各自包含重鏈和輕鏈可變域 (分別為 VH 和 VL) 及輕鏈之恆定域 (CL) 和重鏈之第一恆定域 (CH1)。因此，術語「Fab 片段」係指包含輕鏈 (包含 VL 域和 CL 域) 及重鏈片段 (包含 VH 域和 CH1 域) 之抗體片段。「Fab’ 片段」與 Fab 片段的區別在於在 CH1 域的羧基末端增加了殘基，其包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱胺酸。Fab’-SH 是 Fab’ 片段，其中恆定域的半胱胺酸殘基帶有一個游離硫醇基團。胃蛋白酶處理產生一個 F(ab') 2片段，該片段具有兩個抗原結合位點 (兩個 Fab 片段) 及一部分 Fc 區。關於包含補救受體結合抗原決定位位殘基且具有增加的 體內半衰期之 Fab 及 F(ab') 2片段的論述，參見美國專利號 5,869,046 。
在另一個實施例中，抗體片段為雙鏈抗體、三鏈抗體或四鏈抗體。雙抗體為具有兩個抗原結合位點 (其可為二價或雙特異性的) 之抗體片段。參見例如 EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson 等人，Nat. Med. 9:129-134 (2003)；及 Hollinger 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人, Nat. Med. 9:129-134 (2003)中。
在又一方面，抗體片段為單鏈 Fab 片段。「單鏈 Fab 片段」或「scFab」是由抗體重鏈可變域 (VH)、抗體重鏈恆定域 1 (CH1)、抗體輕鏈可變域 (VL)、抗體輕鏈恆定域 (CL) 及連接子組成的多肽，其中該抗體域及該連接子在 N 端至 C 端方向具有以下序列之一：a) VH-CH1-連接子-VL-CL、b) VL-CL-連接子-VH-CH1、c) VH-CL-連接子-VL-CH1 或 d) VL-CH1-連接子-VH-CL。特定而言，該連接子為至少 30 個胺基酸且較佳地 32 至 50 個胺基酸組成之多肽。該單鏈 Fab 片段通過 CL 域與 CH1 域之間的天然雙硫鍵達到穩定。此外，這些單鏈 Fab 片段可通過***半胱胺酸殘基產生鏈間雙硫鍵而得到進一步穩定 (例如，根據 Kabat 編號，在變異重鏈之位置 44 和變異輕鏈之位置 100 處***)。
在另一方面，抗體片段為單鏈可變片段 (scFv)。「單鏈變異片段」 或 「scFv」 為抗體之重鏈 (VH) 和輕鏈 (VL) 的可變域之融合蛋白，其通過連接子連接。特別地，連接子為 10 個至 25 個胺基酸組成之短多肽，並且通常富含甘胺酸以提高柔韌性，並含有絲胺酸或蘇胺酸以提高溶解性，並且可將 VH 之 N 端與 VL 之 C 端連接，或反之亦然。儘管去除了恆定區並引入了連接子，但是該蛋白仍保留了原始抗體的特異性。關於 scFv 片段的綜述，參見例如 Plückthun，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第 113 卷，Rosenburg 及 Moore 編輯，Springer-Verlag，New York，第 269 頁至第 315 頁 (1994)；亦可參見 WO 93/16185；及美國專利第 5,571,894 號及第 5,587,458 號。
在另一方面，抗體片段為單域抗體。單域抗體為包含抗體之重鏈可變域之全部或部分或抗體之輕鏈可變域之全部或部分之抗體片段。在某些方面，單域抗體為人單域抗體 (Domantis, Inc., Waltham, MA；參見例如美國專利號 6,248,516 B1)。
抗體片段可藉由各種技術製造，包括但不限於如本文所述之完整抗體之蛋白水解消化以及重組宿主細胞 (例如大腸桿菌) 之重組產生。 4. 嵌合抗體及人源化抗體
在某些方面，本文提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體描述於例如美國專利號 4,816,567；及 Morrison 等人 ， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)。在一個實例中，嵌合抗體包含非人可變區 (例如，來源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物如猴的可變區) 及人恆定區。在又一個實例中，嵌合抗體為「類別轉換」抗體，其中類或子類相比於其親代抗體已發生變更。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些方面，嵌合抗體為人源化抗體。通常，非人抗體為人源化抗體以降低對人的免疫原性，同時保留親代非人抗體之特異性及親和力。通常，人源化抗體包含一個或多個可變域，其中 CDR (或其部分) 來源於非人抗體，並且 FR (或其部分) 來源於人抗體序列。人源化抗體視情況將包含人恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人源化抗體中的一些 FR 殘基經來自非人抗體 (例如衍生 CDR 殘基之抗體) 之對應殘基取代，以例如恢復或改善抗體特異性或親和力。
人源化抗體及其製備方法綜述於例如 Almagro 和 Fransson， Front. Biosci.13:1619-1633 (2008) 中，並且進一步描述於例如：Riechmann 等人 ， Nature332:323-329 (1988)；Queen 等人， Proc. Nat'l Acad. Sci. USA86:10029-10033 (1989)；US 專利號 5, 821,337、7,527,791、6,982,321 和 7,087,409；Kashmiri 等人， Methods36:25-34 (2005) (具體描述了決定區 (SDR) 接枝)；Padlan， Mol. Immunol.28:489-498 (1991) (描述了「表面重塑」)；Dall'Acqua 等人， Methods36:43-60 (2005) (描述了「FR 改組」)；Osbourn 等人， Methods36:61-68 (2005)；及 Klimka 等人， Br. J. Cancer，83:252-260 (2000) (描述了 FR 改組的「導向選擇」法)。
可以用於人源化的人抗體骨架區包括但不限於： 使用「最佳匹配」方法選擇的骨架區 (參見例如 Sims 等人 J. Immunol.151:2296 (1993))；來源於輕鏈或重鏈可變區的特定子群的人抗體的共通序列的骨架區 (參見例如：Carter 等人 Proc. Natl. Acad. Sci. USA，89:4285 (1992)；及 Presta 等人 J. Immunol.，151:2623 (1993))；人成熟的 (體細胞突變) 骨架區或人種系骨架區 (參見例如 Almagro 和 Fransson， Front. Biosci.13:1619-1633 (2008))；以及來源於篩選 FR 庫的骨架區 (參見例如：Baca 等人， J. Biol. Chem.272:10678-10684 (1997)；及 Rosok 等人， J. Biol. Chem.271:22611-22618 (1996))。 5. 多特異性抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少兩個不同位點 (即不同抗原上之不同抗原決定位位或同一抗原上之不同抗原決定位) 具有結合特異性的單株抗體。在某些實施例中，多特異性抗體具有三種或更多種結合特異性。在某些方面，結合特異性中之一者係針對 MerTK 的結合特異性，而其他特異性則係針對任何其他抗原。在某些方面，雙特異性抗體可與 MerTK 的兩個（或更多個）不同抗原決定位結合。多特異性（例如，雙特異性）抗體亦可用於將細胞毒性劑或細胞定位於表現 MerTK 之細胞。多特異性抗體可製成全長抗體或抗體片段。
用於製備多特異性抗體之技術包括但不限於重組共表現兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對 (參見 Milstein 及 Cuello， Nature305: 537 (1983)) 及「杵臼」(knob-in-hole) 工程 (參見例如美國專利號 5,731,168，及 Atwell 等人 J. Mol. Biol. 270:26 (1997))。多特異性抗體也可透過以下方法進行製備：用於製備抗體 Fc-異型二聚體分子的工程靜電轉向效應 (參見例如 WO 2009/089004)；交聯兩個或更多個抗體或片段 (參見例如美國專利號 4,676,980；及 Brennan 等人， Science, 229: 81 (1985))；使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體 (參見例如，Kostelny 等人， J. Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992)；及 WO 2011/034605)；使用常用輕鏈技術規避輕鏈錯配問題 (參見例如 WO 98/50431)；使用「雙抗體」技術製備雙特異性抗體片段 (參見例如，Hollinger 等人 ， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993))；以及使用單鏈 Fv (sFv) 二聚體 (參見例如 Gruber 等人 ， J. Immunol., 152:5368 (1994))；以及按照例如 Tutt 等人 J. Immunol.147: 60 (1991) 所述之方法製備三特異性抗體。
本文還包括具有三個或更多個抗原結合位點之工程化抗體，包括例如「章魚抗體」(Octopus antibodies) 或 DVD-Ig (參見例如 WO 2001/77342 及 WO 2008/024715)。具有三個或更多個抗原結合位點之多特異性抗體的其他實例可參見 WO 2010/115589、WO 2010/112193、WO 2010/136172、WO 2010/145792 及 WO 2013/026831 中。雙特異性抗體或其抗原結合片段亦包括「雙重作用 FAb」或「DAF」，其包含與 MerTK 以及另一種不同抗原結合或與 MerTK 的兩個不同抗原決定位之抗原結合位點結合（參見例如 US 2008/0069820 及 WO 2015/095539）。
多特異性抗體也可提供為不對稱形式，其包含在一個或多個具有相同抗原特異性之結合臂中交叉的域，即透過交換 VH/VL 域 (參見例如 WO 2009/080252 及 WO 2015/150447)、CH1/CL 域 (參見例如 WO 2009/080253) 或完整的 Fab 臂 (參見例如 WO 2009/080251、WO 2016/016299，另見 Schaefer 等人，PNAS，108 (2011) 1187-1191，及 Klein 等人，MAbs 8 (2016) 1010-20) 實現。在一個方面，多特異性抗體包含 cross-Fab 片段。術語「cross-Fab 片段」或「xFab 片段」或「交叉 Fab 片段」 是指其中重鏈和輕鏈之可變區或恆定區發生交換的 Fab 片段。cross-Fab 片段包含由輕鏈可變區 (VL) 和重鏈恆定區 1 (CH1) 構成之多肽鏈以及由重鏈可變區 (VH) 和輕鏈恆定區 (CL) 構成之多肽鏈。還可透過將帶電荷或不帶電荷之胺基酸突變引入域界面引導正確 Fab 配對，從而設計不對稱之 Fab 臂。參見例如 WO 2016/172485。
用於多特異性抗體之各種其他分子形式為本技術領域中已知的並且包括在本文中 (參見例如 Spiess 等人，Mol Immunol 67 (2015) 95-106)。 6. 抗體變異體
在某些方面，考慮到本文提供之抗體的胺基酸序列變異體。例如，可能希望改變抗體的結合親和力及/或其他生物學特性。可藉由將適當的修飾引入編碼抗體的核苷酸序列中，或藉由肽合成來製備抗體之胺基酸序列變異體。此等修飾包括例如抗體之胺基酸序列中的殘基的缺失及/或***及/或取代。可實施缺失、***和取代之任意組合以得到最終構建體，前提條件是最終構建體具有所需之特徵，例如抗原結合特徵。 a) 取代、***和刪除變異體
在某些方面，提供了具有一個或多個胺基酸取代的抗體變異體。取代誘變的目標位點包括 CDR 和 FR。保守取代列於表 1 之「優選取代」標題下。表 1 中之「例示性取代」標題下提供了更多實質性變更，並且下文將參考胺基酸側鏈類別進行進一步描述。可將胺基酸取代引入目標抗體中，並篩選具有所需活性之產物，例如，保留/改善的抗原結合特徵、降低的免疫原性或改善的 ADCC 或 CDC。 表 1
原始 殘基 例示性 取代 較佳 取代
Ala (A) Val；Leu；Ile Val
Arg (R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn (N) Gln；His；Asp；Lys；Arg Gln
Asp (D) Glu；Asn Glu
Cys (C) Ser；Ala Ser
Gln (Q) Asn；Glu Asn
Glu (E) Asp；Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile (I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸 Leu
Leu (L) 正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys (K) Arg；Gln；Asn Arg
Met (M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe (F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val；Ser Ser
Trp (W) Tyr；Phe Tyr
Tyr (Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val (V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸 Leu
胺基酸可根據常見的側鏈特性進行分組： (1) 疏水性：正白胺酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile； (2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3) 酸性：Asp，Glu； (4) 鹼性：His，Lys，Arg; (5) 影響鏈取向之殘基：Gly，Pro； (6) 芳香族：Trp，Tyr，Phe。
非保守取代需要將這些類別中之一類的成員交換為另一類的成員。
一種類型的取代變異體涉及取代一個或多個親代抗體 (例如，人源化或人抗體) 之超可變區殘基。通常，選擇用於進一步研究之所得變異體將相對於親代抗體在某些生物學特性 (例如提高親和力、降低免疫原性) 上具有修飾 (例如，改善) 及/或基本上保留親代抗體之某些生物學特性。例示性取代變體是親和性成熟的抗體，其可以方便地產生，例如，使用基於噬菌體展示的親和性成熟技術，例如本文所述的那些。簡而言之，取代一個或多個。CDR 殘基發生突變，並且變異體抗體在噬菌體上展示並篩選出特定的生物學活性 (例如，結合親和力)。
可以在 CDR 中進行更改 (例如，取代)，以改善抗體親和力。此等修改可以在 CDR 「熱點」中進行，即由密碼子編碼的殘基在體細胞成熟過程中經歷高頻率突變 (參見例如 Chowdhury， Methods Mol. Biol.207:179-196 (2008)) 及/或與抗原接觸的殘基，並測試所得變異體 VH 或 VL 之結合親和力。透過構建並從二級文庫中重新選擇以實現親和力成熟，例如 Hoogenboom 等人在 Methods in Molecular Biology178:1-37 (O'Brien 等人主編，Human Press，Totowa，NJ，(2001)) 中所述。在親和力成熟之某些方面，通過多種方法 (例如，易錯 PCR、鏈改組（chain shuffling）或寡核苷酸定向誘變) 將多樣性引入選擇用於成熟的變異基因中。然後創建第二庫。然後篩選該庫，以識別具有所需之親和力的任何抗體變異體。引入多樣性的另一種方法是 CDR 定向方法，其中將若干 CDR 殘基 (例如，每次 4-6 個殘基) 隨機化。可藉由例如丙胺酸掃描誘變或建模以特異性識別參與抗原結合的 CDR 殘基。特別地，CDR-H3 和 CDR-L3 經常成為靶點。
在某些方面，在一個或多個 CDR 內可能發生取代、***或缺失，只要此等修改不顯著降低抗體以結合抗原的能力即可。例如，可在 CDR 中實施基本上不降低結合親和力的保守修改 (例如，本文所提供之保守取代)。例如，此等修改可能在 CDR 中之抗原接觸殘基之外。在上文提供之某些 VH 和 VL 序列變異體中，每個 CDR 均未改變，或包含不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
如 Cunningham 和 Wells (1989) ( Science，244:1081-1085) 所述，用於識別可能誘變的抗體殘基或區域的一種有用的方法稱為「丙胺酸掃描誘變」。在該方法中，識別殘基或目標殘基組 (例如，帶電荷的殘基，如 arg、asp、his、lys 和 glu)，並用中性或帶負電荷的胺基酸 (例如，丙胺酸或聚丙胺酸) 取代以確定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在胺基酸位置引入更多取代，表明對初始取代具有良好的功能敏感性。可替代地或另外地，可使用抗原-抗體複合物之晶體結構來識別抗體與抗原之間的接觸點。此等接觸殘基和鄰近殘基可靶向或消除為取代的候選物。可篩選變異體以確定它們是否包含所欲之特性。
胺基酸序列***包括胺基及/或羧基末端融合體之長度，從一個殘基到包含一百個或更多殘基之多肽，以及單個或多個胺基酸殘基的序列內***。末端***的實例包括具有 N 端甲硫胺醯基殘基的抗體。抗體分子之其他***變異體包括與抗體的 N 端或 C 端融合的酶 (例如，對於 ADEPT (針對抗體之酶前驅藥治療)) 或提高抗體血清半衰期之多肽。 b) 醣基化變異體
在某些實施例中，改變本文提供的抗體以增加或減少抗體發生醣基化之程度。抗體中添加或刪除醣基化位點可透過改變胺基酸序列以使得產生或去除一個或多個醣基化位點而方便地實現。
當抗體包含 Fc 區域時，可改變與其相連的寡糖。由哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含分支的雙觸角寡醣，該寡醣通常藉由 N-鍵聯附接至 Fc 區之 CH2 域的 Asn297。例如參見 Wright 等人， TIBTECH15:26-32 (1997)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露醣、N-乙醯基葡醣胺 (GlcNAc)、半乳醣及唾液酸以及在雙觸角寡醣結構之「莖」中附接至 GlcNAc 的岩藻醣。在一些實施例中，可對本發明之抗體中的寡糖進行修飾，以產生具有某些改善之特性的抗體變異體。
在一個方面中，提供了具有非岩藻糖基化寡醣的抗體變異體，即缺少 (直接或間接地) 連接至 Fc 區的岩藻糖的寡醣結構。此等非岩藻醣基化寡糖 (也稱為「去岩藻醣基化」寡糖) 特定而言在雙天線型寡糖結構的莖中缺少與第一 GlcNAc 連接之岩藻糖殘基的 N-連接寡糖。在一個方面中，提供了與天然或親本抗體相比在 Fc 區中具有增加比例的非岩藻糖基化寡醣的抗體變異體。例如，非岩藻醣基化寡糖的比例可以為至少約 20%、至少約 40%、至少約 60%、至少約 80% 或甚至約 100% (即不存在岩藻醣基化寡糖)。非岩藻醣基化寡糖之百分比是缺少岩藻糖殘基之寡糖相對於連接至 Asn 297 (例如復合物、雜合和高甘露糖結構) 的所有寡糖的總和之 (平均) 量，該百分比透過 MALDI-TOF 質譜法測得，例如 WO 2006/082515 中所述。Asn297 係指位於 Fc 區域位置 297 附近之天冬醯胺殘基 (Fc 區域殘基的 EU 編號)；但是，Asn297 也可以位於位置 297 上游或下游大約 ±3 個胺基酸處，即由於抗體之微小序列變化而介於位置 294 和 300 之間。此等在 Fc 區域中具有增加的比例的非岩藻醣基化寡糖的抗體可具有改善的 FcγRIIIa 受體結合及/或改善的效應功能，特定而言改善的 ADCC 功能。參見例如 US 2003/0157108；US 2004/0093621。
能夠產生具有減少的岩藻醣基化抗體之細胞系的實例包括缺乏蛋白質岩藻醣基化之 Lec13 CHO 細胞 (Ripka 等人， Arch. Biochem. Biophys.249:533-545 (1986)；US 2003/0157108；及 WO 2004/056312，尤其是在實例 11 中)；和敲除細胞系，諸如敲除 α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因 FUT8的 CHO 細胞 (參見例如 Yamane-Ohnuki 等人 Biotech. Bioeng.87:614-622 (2004)；Kanda, Y. 等人 , Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及 WO 2003/085107)；或 GDP-岩藻糖合成或轉運蛋白活性降低或消失的細胞 (參見例如 US2004259150、US2005031613、US2004132140、US2004110282)。
在另一個實施例中，抗體變異體被提供有二等分之寡糖，例如，其中連接至抗體之 Fc 區域的雙天線型寡糖被 GlcNAc 平分。此等抗體變異體可具有如上文所述之減少的岩藻醣基化及/或改善的 ADCC 功能。此等抗體變異體之實例描述於例如：Umana 等人，Nat Biotechnol 17，176-180 (1999)；Ferrara 等人，Biotechn Bioeng 93，851-861 (2006)；WO 99/54342；WO 2004/065540、WO 2003/011878。
還提供了在寡糖上具有至少一個連接至 Fc 區域之半乳糖殘基的抗體變異體。此等抗體變異體可具有改善的 CDC 功能。此等抗體變異體描述於例如 WO 1997/30087、WO 1998/58964 及 WO 1999/22764 中。 c)   Fc 區變異體
在某些方面，可在本文所提供之抗體的 Fc 區域中引入一個或多個胺基酸修飾，從而產生 Fc 區變異體。Fc 區域變異體可包含人 Fc 區域序列（例如，人 IgG1、IgG2、IgG3 或 IgG4 Fc 區域），其在一個或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾（例如，取代）。
在某些態樣中，本發明考慮了一種具有一部分但非全部效應子功能的抗體變異體，使其成為以下應用中所需之候選抗體：其中抗體體內半衰期很重要，但某些效應子功能 (例如補體依賴性細胞毒性 (CDC) 和抗體依賴性細胞媒介之細胞毒性 (ADCC)) 是不必要或有害的。可實施 體外及/或 體內細胞毒性測定，以確認 CDC 及/或 ADCC 活性之下降/耗竭。例如，可實施 Fc 受體 (FcR) 結合測定，以確保抗體缺乏 Fc　R 結合 (因此可能缺乏 ADCC 活性)，但保留 FcRn 結合能力。介導 ADCC 之初代細胞 NK 細胞僅表現 Fc　RIII，而單核細胞則表現 Fc　RI、Fc　RII 及 Fc　RIII。FcR 在造血細胞上之表達匯總於 Ravetch 和 Kinet 的論文 ( Annu. Rev. Immunol.9:457-492 (1991)) 之第 464 頁的表 3 中。用於評估目標分子之 ADCC 活性的 體外分析方法的非限制性實例描述於美國專利號 5,500,362 中 (參見例如，Hellstrom, I. 等人， Proc. Nat’l Acad. Sci. USA83:7059-7063 (1986)) 和 Hellstrom, I 等人， Proc. Nat’l Acad. Sci. USA82:1499-1502 (1985)；5,821,337 (參見 Bruggemann, M. 等人， J. Exp. Med.166:1351-1361 (1987))。可替代地，可採用非放射性測定方法 (參見例如：用於流式細胞術的 ACTI™ 非放射性細胞毒性測定 (CellTechnology，Inc. Mountain View，CA)；及 CytoTox 96 ®非放射性細胞毒性測定 (Promega，Madison，WI))。用於此等分析的有用的效應細胞包括外周血單核細胞 (PBMC) 及自然殺手 (NK) 細胞。可替代地或另外地，可在例如 Clynes 等人在 Proc. Natl Acad. Sci. USA95:652-656 (1998) 中公開的動物模型中在體內評估目標分子之 ADCC 活性。還可實施 C1q 結合測定以確認該抗體無法結合 C1q 並因此缺乏 CDC 活性。參見例如 WO 2006/029879 及 WO 2005/100402 中的 C1q 和 C3c 結合 ELISA。為評估補體活化，可實施 CDC 測定 (參見例如：Gazzano-Santoro 等人， J. Immunol. Methods202:163 (1996)；Cragg, M.S. 等人， Blood101:1045-1052 (2003)；及 Cragg, M.S. 和 M.J. Glennie， Blood103:2738-2743 (2004))。FcRn 結合和體內清除率/半衰期測定也可使用此領域中所公知的方法進行 (參見例如 Petkova, S.B. 等人， Int’l. Immunol.18(12):1759-1769 (2006)；WO 2013/120929)。
效應子功能下降的抗體包括一個或多個 Fc 區域殘基 238、265、269、270、297、327 和 329 被取代之抗體 (美國第 6,737,056 號專利)。此等 Fc 變異體包括在胺基酸位置 265、269、270、297 和 327 中的兩個或更多個取代的 Fc 變異體，包括所謂的「DANA」 Fc 變異體，其中殘基 265 和 297 被丙胺酸取代 (美國專利號 7,332,581)。
其中描述了某些與 FcR 的結合能力得到改善或減弱的抗體變異體。(參見例如，美國專利號 6,737,056；WO 2004/056312 及 Shields 等人， J. Biol. Chem.9(2): 6591-6604 (2001)。)
在某些方面，抗體變異體包含具有一個或多個胺基酸取代的 Fc 區域，這些取代改善了 ADCC，例如 Fc 區域的位置 298、333 及/或 334 (殘基的 EU 編號) 處之取代。
在某些方面，抗體變異體包含具有一個或多個胺基酸取代的 Fc 區域，這些取代減弱了 FcγR 結合，例如 Fc 區域的位置 234 和 235 (殘基的 EU 編號) 處之取代。在一個方面，取代為 L234A 和 L235A (LALA)。在某些方面，抗體變異體進一步包含 Fc 區中之 D265A 及/或 P329G，其來源於人 IgG1 Fc 區。一方面，取代為 Fc 區中的 L234A、L235A 和 P329G (LALA-PG)，其來源於人 IgG1 Fc 區。參見例如 WO 2012/130831。另一方面，取代為 Fc 區中的 L234A、L235A 和 D265A (LALA-DA)，其來源於人 IgG1 Fc 區。
在某些方面，在 Fc 區域中進行修改，得到修改 (即改善或減少) 之 C1q 結合及/或補體依賴性細胞毒性 (CDC)，例如美國專利號 6,194,551、WO 99/51642 及 Idusogie 等人 J. Immunol.164: 4178-4184 (2000) 所述。
具有更長半衰期並改善了與新生兒 Fc 受體 (FcRn)（其負責將母體 IgG 轉移給胎兒，參見 Guyer 等人 J. Immunol.117:587 (1976) 和 Kim 等人 J. Immunol.24:249 (1994)）之結合的抗體描述於 US2005/0014934（Hinton 等人）中。那些抗體包含其中具有一個或多個取代之 Fc 區域，其改善了 Fc 區域與 FcRn 之結合。此等 Fc 變異體包括在一個或多個 Fc 區域殘基上發生取代之 Fc 變異體：238、252、254、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424 或 434，例如 Fc 區域殘基 434 之取代 (參見例如美國專利號 7,371,826；Dall'Acqua, W.F. 等人，J. Biol. Chem. 281 (2006) 23514-23524)。
通過定點誘變已經識別出對小鼠 Fc-小鼠 FcRn 相互作用至關重要之 Fc 區域殘基 (參見例如，Dall’Acqua, W.F. 等人 J. Immunol 169 (2002) 5171-5180)。殘基 I253、H310、H433、N434 和 H435（殘基的 EU 編號）參與交互作用（Medesan, C. 等人，Eur. J. Immunol. 26 (1996) 2533；Firan, M. 等人，Int. Immunol. 13 (2001) 993；Kim, J.K. 等人，Eur. J. Immunol. 24 (1994) 542）。已發現殘基 I253、H310 和 H435 對於人 Fc 與小鼠 FcRn 之相互作用至關重要 (Kim, J.K. 等人，Eur. J. Immunol. 29 (1999) 2819)。對人 Fc-人 FcRn 複合物的研究表明，殘基 I253、S254、H435 和 Y436 對於相互作用至關重要 (Firan, M. 等人，Int. Immunol. 13 (2001) 993；Shields, R.L. 等人，J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604)。在 Yeung, Y.A. 等人 (J. Immunol. 182 (2009) 7667-7671) 中，已經報導並研究了殘基 248 至 259 及 301 至 317 及 376 至 382 及 424 至 437 的各種突變體。
在某些方面，抗體變異體包含具有一個或多個胺基酸取代的 Fc 區域，這些取代減少 FcRn 結合，例如 Fc 區域之位置 253、及/或 310、及/或 435 (殘基的 EU 編號) 處之取代。在某些方面，抗體變異體包含 Fc 區域，該 Fc 區域具有在位置 253、310 和 435 處之胺基酸取代。在一個方面，取代為 Fc 區域中之 I253A、H310A 和 H435A，其來源於人 IgG1 Fc 區域。參見例如 Grevys, A 等人，J. Immunol. 194 (2015) 5497-5508。
在某些方面，抗體變異體包含具有一個或多個胺基酸取代的 Fc 區域，這些取代減少 FcRn 結合，例如 Fc 區域之位置 310、及/或 433、及/或 436 (殘基的 EU 編號) 處之取代。在某些方面，抗體變異體包含 Fc 區域，該 Fc 區域具有在位置 310、433 和 436 處之胺基酸取代。在一個方面，取代為 Fc 區域中之 H310A、H433A 和 Y436A，其來源於人 IgG1 Fc 區域。(參見例如 WO 2014/177460 Al。)
在某些方面，抗體變異體包含具有一個或多個胺基酸取代的 Fc 區域，這些取代增加 FcRn 結合，例如 Fc 區域之位置 252、及/或 254、及/或 256 (殘基的 EU 編號) 處之取代。在某些方面，抗體變異體包含 Fc 區域，該 Fc 區域具有在位置 252、254 和 256 處之胺基酸取代。在一個方面，取代為 Fc 區域中之 M252Y、S254T 和 T256E，其來源於人 IgG1 Fc 區域。亦參見 Duncan & Winter, Nature322:738-40 (1988)；美國專利第 5,648,260 號；美國專利第 5,624,821 號；及 WO 94/29351，其中涉及 Fc 區變異體之其他實例。
重鏈的 C 端可以是縮短的 C 端，其中一個或兩個 C 端胺基酸殘基已被去除。在一個優選方面，重鏈之 C 端是縮短的 C 端結尾 PG。在本文所報告的所有方面中之一方面，一種包含重鏈的抗體包括本文所指定之 C 端 CH3 域，其包含 C 端甘胺酸-離胺酸二肽 (G446 和 K447，胺基酸位置的 EU 指數編號)。在本文所報告的所有方面中之一方面，一種包含重鏈的抗體包括本文所指定之 C 端 CH3 域，其包含 C 端甘胺酸殘基 (G446，胺基酸位置的 EU 指數編號)。 d) 半胱胺酸工程化抗體變異體
在某些方面，可能希望創建半胱胺酸工程化抗體，例如 THIOMAB TM抗體，其中抗體之一個或多個殘基被半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，取代殘基出現在抗體之可進入的位點。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基團由此被定位在抗體之可及位點，並可用於使該抗體與其他部分（諸如一個或多個 PEG 聚合物、藥物部分或連接子-藥物部分）結合，以形成免疫結合物或聚乙二醇化抗體，如本文進一步所揭示。半胱胺酸工程化抗體可按照例如美國專利第 7,521,541 號、第 8,30,930 號、第 7,855,275 號、第 9,000,130 號、WO 2016040856 或WO 2011/156328 所揭示之方法製造。 e) 抗體衍生物
在某些實施例中，可進一步修飾本文所提供之抗體，以使其包含本技術領域中已知且容易獲得的附加的非蛋白質部分。適用於抗體之衍生化的部分包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括但不限於聚乙二醇 (PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚醣、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧戊環、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸 (均聚物或隨機共聚物) 以及葡聚醣或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇 (例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其水中之穩定性而可能在製造中具有優勢。該聚合物可具有任何分子量，且可聚支鏈或無支鏈。連接至抗體的聚合物之數量可以變化，並且如果連接的聚合物超過一種，則它們可以為相同或不同之分子。通常，用於衍生化的聚合物之數量及/或類型可基於以下考慮因素來確定，該等考慮因素包括但不限於待改善之抗體的特定性質或功能、抗體衍生物是否將用於指定條件下的治療中等。 7. 免疫結合物
本發明亦提供包含本文之抗 MerTK 抗體的免疫結合物，其結合（化學鍵結）至一種或多種治療劑諸如細胞毒性劑、化療劑、藥物、生長抑制劑、毒素（例如來源於細菌、真菌、植物或動物之蛋白毒素、酶活性毒素或其片段）或放射性同位素。
在一個方面中，免疫結合物為抗體-藥物結合物 (ADC)，其中抗體與上述一種或多種治療劑結合。通常使用連接子將抗體連接至一種或多種治療劑。ADC 技術概述 (包括治療劑、藥物和連接子之實例) 載於 Pharmacol Review68:3-19 (2016) 中。
在另一個實施例中，免疫複合體包括綴合至酶活性毒素或其片段的本文所述之抗體，該酶活性毒素或其片段包括但不限於白喉 A 鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素 A 鏈 (來源於銅綠假單胞菌)、蓖麻毒蛋白 A 鏈、相思子毒素 A 鏈、莫迪素 A 鏈、α-八疊球菌、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、美洲商陸蛋白 (PAPI、PAPII 和 PAP-S)、苦瓜抑制因子、薑黃素、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、白樹毒素、米托菌素、局限曲菌素、酚黴素、伊諾黴素和單端孢黴烯族毒素。
在另一個實施例中，免疫複合體包含綴合至放射性原子以形成放射性複合體的本文所述之抗體。多種放射性同位素可用於產生放射性結合物。實例包括 At 211、I 131、I 125、Y 90、Re 186、Re 188、Sm 153、Bi 212、P 32、Pb 212及 Lu 之放射性同位素。當放射性共軛體用於檢測時，它可能包含用於閃爍掃描研究之放射性原子，例如，tc99m 或 I123，或用於核磁共振 (NMR) 成像 (亦稱為磁共振成像，mri) 之自旋標記物，例如，碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
抗體和細胞毒性劑之結合物可使用多種雙功能蛋白偶合劑進行製備，該雙功能蛋白偶合劑例如，N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基雙硫代)丙酸酯 (SPDP)、琥珀醯亞胺基-4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯 (SMCC)、亞胺基硫烷 (IT)、亞胺基酸酯的雙功能衍生物 (例如，己二酸二甲酯鹽酸鹽，HCl)、活性酯 (例如，雙琥珀醯亞胺辛二酸)、醛 (例如，戊二醛)、雙疊氮化合物 (例如，雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物 (例如，雙-(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯 (例如，甲苯 2,6-二異氰酸酯) 和雙活性氟化合物 (例如，1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒蛋白免疫毒素可如 Vitetta 等人， Science238:1098 (1987) 中所闡述進行製備。用於將放射性核苷酸結合至抗體的一種例示性螯合劑為碳-14 標記的 1-異硫氰酸芐基-3-甲基二亞乙基三胺五乙酸 (MX-DTPA)。參見 WO 94/11026。連接子可以為促進細胞中細胞毒性藥物釋放的「可切割連接子」。例如，可使用酸不穩定之連接子、對肽酶敏感之連接子、光不穩定之連接子、二甲基連接子或含雙硫鍵之連接子 (Chari 等人， Cancer Res.52:127-131 (1992)；美國專利第 5,208,020 號)。
本文之免疫結合物或 ADC 明確考慮但不限於此等用交聯劑製得之結合物，該交聯劑包括但不限於可商購獲得 (例如從 Pierce Biotechnology, Inc. (Rockford, IL., U.S.A) 商購獲得) 之 BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC 和磺基-SMPB 以及 SVSB (琥珀醯亞胺基-(4-乙烯碸)苯甲酸酯)。 C. 重組方法和組成物
可使用重組方法和組成物來生產抗體，例如 US 4,816,567 中所述。對於這些方法，提供了一個或多個編碼抗體的分離之核酸。
如果是天然抗體或天然抗體片段，則需要兩個核酸，一個用於輕鏈或其片段，且另一個用於重鏈或其片段。此等核酸編碼包含 VL 之胺基酸序列及/或包含抗體的 VH 之胺基酸序列 (例如，抗體之輕鏈及/或重鏈)。這些核酸可以在同一表現載體上，也可以在不同表現載體上。
如果是具有異源二聚體重鏈的雙特異性抗體，需要四個核酸，一個用於第一輕鏈，一個用於第一重鏈 (其包含第一異源單體 Fc 區多肽)，一個用於第二輕鏈，且一個用於第二重鏈 (其包含第二異源單體 Fc 區多肽)。這四個核酸可包含在一個或多個核酸分子或表現載體中。此等核酸編碼包含第一 VL 之胺基酸序列、及/或包含第一 VH (其包括第一異源單體 Fc 區) 之胺基酸序列、及/或包含第二 VL 之胺基酸序列、及/或包含第二 VH (其包括抗體之第二異源單體 Fc 區域) 之胺基酸序列 (例如，抗體之第一及/或第二輕鏈、及/或第一及/或第二重鏈)。這些核酸可以在同一表現載體上，也可以在不同表現載體上，通常這些核酸位於兩個或三個表現載體上，即一個載體可包含一個以上的這些核酸。這些雙特異性抗體的實例是 CrossMabs (參見例如 Schaefer, W. 等人，PNAS, 108 (2011) 11187-1191)。例如，異源單體重鏈之一包含所謂「杵突變」 (T366W，視情況為 S354C 或 Y349C 之一)，且另一個包含所謂「臼突變」 (T366S、L368A 及 Y407V，以及視情況 Y349C 或 S354C) (參見例如 Carter, P. 等人，Immunotechnol.2 (1996) 73) (根據 EU 索引編號)。
在一個方面，提供了編碼抗體的經單離之核酸，該抗體用於如本文所報導的方法中。
一方面，提供一種製備抗 MerTK 抗體之方法，其中該方法包括在適合於表現抗體之條件下培養包含如上文提供之一種或多種編碼抗體的核酸的宿主細胞，並視情況自宿主細胞（或宿主細胞培養基）回收抗體。
對於抗 MerTK 抗體之重組製造，將例如上揭之編碼抗體之核酸分離並***至一種或多種載體中，以在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此等核酸可通過常規方法 (例如，使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結合的寡核苷酸探針) 輕易地分離並序列化，或通過重組方法或化學合成進行生產。
適用於選殖或表現編碼抗體之載體的宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。例如，抗體可能在細菌中產生，特別是在無需醣基化和 Fc 效用功能的情況下。有關抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如 US 5,648,237、US 5,789,199 及 US 5,840,523。(另請參見 Charlton, K.A.，在：Methods in Molecular Biology，第 248 卷，Lo, B.K.C. (編輯)，Humana Press, Totowa, NJ (2003), 第 245-254 頁，其中描述了抗體片段在大腸桿菌中之表現。)在表現後，抗體可與可溶性部分中的細菌細胞糊分離，並可經過進一步純化。
除原核生物以外，真核微生物 (如絲狀真菌或酵母菌) 也為合適的抗體編碼載體的選殖或表現宿主，包括其醣基化途徑已被「人源化」的真菌和酵母菌株，從而導致具有部分或完全人醣基化模式的抗體的產生。參見 Gerngross, T.U.，Nat. Biotech. 22 (2004) 1409-1414；及 Li, H. 等人，Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215。
用於表現 (醣基化) 抗體的合適的宿主細胞也來源於多細胞生物 (無脊椎動物和脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑定出許多桿狀病毒株，它們可以與昆蟲細胞結合使用，特別是用於轉染草地貪夜蛾 (Spodoptera frugiperda) 細胞。
植物細胞培養物亦可以用作宿主。參見例如 US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978 及 US 6,417,429 (描述了在轉基因植物中生產抗體的 PLANTIBODIESTM 技術)。
脊椎動物細胞也可用作宿主。例如，可使用適於在懸浮液中生長的哺乳動物細胞系。可用的哺乳動物宿主細胞系的其他實例包括：由 SV40 (COS-7) 轉化的猴腎 CV1 系；人胚胎腎系 (如 Graham, F.L. 等人，J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74 中所述之 293 或 293T 細胞)；幼地鼠腎細胞 (BHK)；小鼠睾丸支持細胞 (如 Mather, J.P.，Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252 中所述之 TM4 細胞)；猴腎細胞 (CV1)；非洲綠猴腎細胞 (VERO-76)；人宮頸癌細胞 (HELA)；犬腎細胞 (MDCK)；Buffalo 大鼠肝細胞 (BRL 3A)；人肺細胞 (W138)；人肝細胞 (Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤細胞 (MMT 060562)；TRI 細胞 (如 Mather, J.P. 等人，Annals N.Y.Acad. Sci. 383 (1982) 44-68 所述)；MRC 5 細胞；及 FS4 細胞。其他可用的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞，包括 DHFR- CHO 細胞 (Urlaub, G. 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220)；及骨髓瘤細胞系，例如 Y0、NS0 和 Sp2/0。有關某些適用於抗體生產的哺乳動物宿主細胞系的綜述，參見例如：Yazaki, P. 和 Wu, A.M.，Methods in Molecular Biology，第 248 卷，Lo, B.K.C. 主編，Humana Press，Totowa，NJ (2004)，第 255-268 頁。
在一個方面，宿主細胞為真核細胞，例如中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞或淋巴樣細胞 (例如，Y0、NS0、Sp20 細胞)。 D. 分析
可藉由本領域中已知之各種檢定法對本文所提供之抗 MerTK 抗體的物理/化學特性及/或生物活性進行鑑定、篩選或特性化。 1. 結合測定及其他測定
在一個方面，利用已知方法諸如 ELISA、Western blot 等，檢測本發明之抗體的抗原結合活性。
另一方面，競爭檢定法可用於鑑定與上文揭示之任何抗 MerTK 抗體競爭與 MerTK 結合的抗體。在某些方面，此類競爭性抗體與被本文揭示之任何抗 MerTK 抗體結合的相同抗原決定位（例如，線性或構形抗原決定位）結合。用於將抗原決定位映射至抗體結合的詳細例示性方法提供於 Morris (1996) 「Epitope Mapping Protocols」 (在 Methods in Molecular Biology第 66 卷 (Humana Press, Totowa, NJ) 中)。
於例示性競爭檢定中，將固定化之 MerTK 在溶液中培養，該溶液包含與 MerTK 結合的第一標記抗體（例如，上文所揭示之任何抗 MerTK 抗體）及第二未標記抗體（正在測試其與第一抗體競爭與 MerTK 結合的能力）。第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照，將固定化 MerTK 在包含第一標記抗體但不包含第二未標記抗體的溶液中進行培養。在允許第一抗體與 MerTK 結合的條件下培養後，去除過量的未結合抗體，並量測與固定化 MerTK 締合之標記的含量。如果測試樣品中與固定化 MerTK 締合之標記的含量相對於對照樣品而言明顯減少，則表明第二抗體正在與第一抗體競爭與 MerTK 的結合。參見 Harlow 和 Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manualch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。 2. 活性測定
一方面，提供鑑定抗 MerTK 抗體之生物活性的檢定法。生物活性可以包括例如減少 MerTK 介導之吞噬活性、減少凋亡細胞的 MerTK 介導之清除及/或增強查核點抑制劑的腫瘤免疫原性。還提供了在 體內及/或 體外具有此等生物學活性之抗體。
在某些方面，對本發明之抗體進行了此等生物學活性試驗。適用於量測此類生物活性的檢定法之實例在本文中進一步揭示，包括下面的示例章節。 E. 醫藥組成物
在又一方面，提供了包含本文所提供之任何抗體的醫藥組成物，例如用於以下任何治療方法。在一個方面，醫藥組成物包含本文所提供之任何抗體和醫藥上可接受之載劑。在另一方面，醫藥組成物包含本文所提供之任何抗體及至少一種另外治療劑 (如下文所述)。
藉由將具有所欲程度之純度的此類抗體與一種或多種視情況選用之醫藥上可接受之載劑（ Remington's Pharmaceutical Sciences16th edition，Osol, A. 主編 (1980)）混合，來製備如本文所揭示之抗 MerTK 抗體的呈凍乾組成物或水溶液形式的醫藥組成物。醫藥上可接受之載體在採用的劑量和濃度下通常對受體無毒，其包括但不限於：緩衝劑，例如組胺酸、磷酸鹽、檸檬酸鹽、醋酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑 (例如十八烷基二甲基芐基氯化銨；六甲基氯化銨；苯扎氯銨；芐索銨氯化物；苯酚、丁醇或芐醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇和間甲酚)；低分子量 (小於約 10 個殘基) 多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，例如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑 (例如 EDTA)；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，例如鈉；金屬錯合物 (例如鋅蛋白錯合物)；及/或非離子表面活性劑，例如聚乙二醇 (PEG)。本文中例示性醫藥上可接受之載劑進一步包括間質性藥物分散劑，例如可溶性中性活性透明質酸酶醣蛋白 (sHASEGP)，例如，人類可溶性 PH-20 透明質酸酶醣蛋白，諸如 rHuPH20 (HYLENEX ®，Halozyme, Inc.)。某些例示性 sHASEGP 及用法 (包括 rHuPH20) 描述於美國專利公開號 2005/0260186 和 2006/0104968 中。在一方面，sHASEGP 與一種或多種附加的醣胺聚醣酶諸如軟骨素酶結合在一起。
例示性凍乾抗體組成物如美國專利第 6,267,958 號中所揭示。水溶性抗體組成物包括美國專利號 6,171,586 和 WO 2006/044908 中所述的那些，後者所述之組成物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝劑。
本文所述之醫藥組成物還可包含適合於所治療的特定適應症的多於一種活性成分，較佳地，為那些相互無不利影響的具有互補活性成分。例如，可能需要進一步提供一種或多種免疫查核點抑制劑，例如，抗 PDL1 抗體。此等活性成分適宜地以對預期目的有效的量組合存在。
活性成分可以包載在例如透過凝聚技術或透過介面聚合製備的微囊 (例如，分別為羥甲基纖維素微囊或明膠微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊) 中、膠體藥物遞送系統 (例如脂質體、白蛋白微球、微乳、奈米顆粒和奈米囊 (nanocapsule)) 中或粗滴乳狀液中。此等技術揭示於 Remington's Pharmaceutical Sciences16th edition, Osol, A. Ed. (1980)。
可製備用於緩釋之醫藥組成物。緩釋製劑的合適的實例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半透性受質，該受質是成形物品的形式，例如膜或微囊。
用於 活體內投予之醫藥組成物通常為無菌的。無菌性可易於例如藉由無菌濾膜過濾來實現。 F. 治療方法及投予途徑
本文所提供之任何抗 MerTK 抗體皆可用於治療方法中。在本文揭露之任何方法中，在一些實施例中，與使用非聚乙二醇化抗 MerTK 抗體的類似方法相比，該等方法（例如，使用本揭露至聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）使得視網膜毒性減少。
一方面，提供用為藥物的抗 MerTK 抗體。在其他方面，提供用於治療癌症的抗 MerTK 抗體。在某些方面，提供用於治療方法中的抗 MerTK 抗體。在某些方面，本發明提供用於治療罹患癌症的個體之方法中的抗 MerTK 抗體，該方法包括投予該個體有效量之抗 MerTK 抗體。在一個此等方面，該方法進一步包含將有效量之至少一種另外的治療劑 (如下文所述) (例如，一種、兩種、三種、四種、五種或六種另外治療劑) 投予該個體。在其他方面，本發明提供用於增強免疫功能及/或減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的抗 MerTK 抗體。在某些方面，本發明提供用於增強免疫功能及/或減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的方法中的抗 MerTK 抗體，該方法包括投予個體有效量的抗 MerTK 抗體以增強免疫功能及/或減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除。根據上述任一方面的「個體」較佳地為人。
又一方面，本發明提供抗 MerTK 抗體在藥物的製造或製備中的用途。一方面，該藥物用於治療癌症。再一方面，該藥物用於治療癌症的方法中，該方法包含向患有癌症的受試者投予有效量之藥物。在一個此等方面，該方法進一步包含將有效量之至少一種另外治療劑 (例如，如下文所述) 投予個體。又一方面，該藥物用於增強免疫功能及/或減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除。又一方面，該藥物用於增強免疫功能及/或減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的方法中，該方法包括投予個體有效量的該藥物以增強免疫功能及/或減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除。根據上述任一方面的「個體」可以是人。
在又一方面，本發明提供治療癌症的方法。一方面，該方法包括對罹患該癌症的個體投予有效量之抗 MerTK 抗體。在一個此等方面，該方法進一步包含將有效量之至少一種另外治療劑 (如下文所述) 投予個體。
根據上述任一方面的「個體」可以是人。
又一方面，本發明提供用於在個體（例如，罹患癌症之個體）中增強免疫功能及/或減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的方法。一方面，該方法包括對個體投予有效量的抗 MerTK 抗體以增強免疫功能及/或減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除。在一個方面，「受試者」為人。
又一方面，本發明提供包含本文所提供之任何抗 MerTK 抗體的醫藥組成物，其例如用於任何上述治療方法中。一方面，醫藥組成物包含本文所提供之任何抗 MerTK 抗體及醫藥上可接受之載劑。另一方面，醫藥組成物包含本文所提供之任何抗 MerTK 抗體及至少一種另外治療劑，例如，如下所揭。 1. 單一療法
在一些實施例中，本揭露之抗 MerTK 抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）作為單一療法投予以治療罹患癌症的個體。如本文所用，「癌症」指或揭示通常以不受調控之細胞生長/增殖為特徵的哺乳動物生理狀況。在某些實施例中，癌症可以為實性癌或血液癌症。實性癌通常以在特定組織中形成腫瘤塊為特徵。如本文所用，術語「腫瘤」係指所有贅生性細胞生長及增殖，無論惡性或良性，及所有癌前及癌性細胞及組織。待使用本揭露之抗 MerTK 抗體治療的實性癌的非限制性實例包括癌、淋巴瘤、母細胞瘤和肉瘤。此類癌症的更具體實例包括但不限於，鱗狀細胞癌（例如上皮鱗狀細胞癌）、肺癌（包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌和肺鱗癌）、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌或胃部癌症（包括胃腸道癌和胃腸道間質癌）、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝癌、乳癌、大腸癌、直腸癌、大腸直腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎臟癌症或腎癌、***癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、黑色素瘤、淺表擴散性黑色素瘤、惡性雀斑黑色素瘤、肢端雀斑黑色素瘤、結節性黑色素瘤，以及與斑痣性錯構瘤病相關的異常血管增生、水腫（如 與腦腫瘤相關）、Meigs 症候群、腦癌、頭頸癌及相關轉移。在某些實施例中，適合藉由本揭露之抗 MerTK抗體治療的癌症包括乳癌、大腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、神經膠質母細胞瘤、腎細胞癌、***癌、肝癌、胰臟癌、軟組織肉瘤、卡波西肉瘤、類癌、頭頸癌、卵巢癌和間皮瘤。在一些實施例中，癌症係選自：小細胞肺癌、神經膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑色素瘤、乳癌、胃癌、大腸直腸癌 (CRC) 和肝細胞癌。又，在一些實施例中，癌症係選自：非小細胞肺癌、大腸直腸癌、神經膠質母細胞瘤和乳癌，包括彼等癌症之轉移形式。在一些實施例中，癌症為大腸直腸癌，包括大腸癌和直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿上皮癌、非小細胞肺癌、三陰性乳癌、小細胞肺癌、肝細胞癌或黑色素瘤。
相比之下，血液癌症起源於血液或骨髓。在一些實施例中，待使用本揭露之抗 MerTK 抗體治療的血液癌症為白血病。白血病之實例包括但不限於，慢性淋巴球性白血病 (CLL)；急性淋巴球性白血病 (ALL)；毛細胞白血病；慢性骨髓性白血病和急性骨髓性白血病。在一些實施例中，待使用本揭露之抗 MerTK 抗體治療的血液癌症為淋巴瘤。淋巴瘤的非限制性實例包括 T 細胞淋巴瘤（諸如成人 T 細胞白血病/淋巴瘤；肝脾 T 細胞淋巴瘤；外周 T 細胞淋巴瘤、間變性大細胞淋巴瘤；以及血管免疫母細胞性 T 細胞淋巴瘤）、B 細胞淋巴瘤（包括低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤 (NHL)；小淋巴球性 (SL) NHL；中級/濾泡性 NHL；中級瀰漫性 NHL；高級免疫母細胞性 NHL；高級淋巴母細胞性 NHL；高級小非裂解細胞 NHL ；大塊病 NHL；瀰漫性大 B 細胞淋巴瘤；被套細胞淋巴瘤；伯奇氏淋巴瘤；AIDS 相關淋巴瘤；和 Waldenstrom 巨球蛋白血症）、何杰金氏淋巴瘤及移植後淋巴組織增生性疾病 (PTLD)。在一些實施例中，待使用本揭露之抗 MerTK 抗體治療的血液癌症為骨髓瘤。在一具體實施例中，骨髓瘤為漿細胞瘤或多發性骨髓瘤。在某些實施例中，適合藉由本揭露之抗 MerTK 抗體治療的癌症包括非何杰金氏淋巴瘤和多發性骨髓瘤。
另一方面，本文提供用於治療個體中癌症或延緩其進展的方法，包括投予該個體有效量的如本揭露中所揭示之抗 MerTK 抗體。在一些實施例中，治療造成個體在治療停止後的持續反應。本文所揭示之方法可用於治療需要增強免疫原性的病症，諸如增加用於治療癌症的腫瘤免疫原性。本文亦提供增強罹患癌症之個體的免疫功能的方法，包括投予該個體有效量的如本揭露所揭示之抗 MerTK 抗體。在一些實施例中，癌症表現功能性 STING、功能性 Cx43 和功能性 cGAS 多肽。功能性蛋白質為能夠在細胞中執行其常規功能的蛋白質。功能蛋白質的實例可包括野生型蛋白質、標記蛋白質和與野生型蛋白質相比保留或改善蛋白質功能的突變蛋白質。可以藉由本領域技術人員已知的任何方法量測蛋白質功能，包括檢定蛋白質或 mRNA 表現以及對基因體 DNA 或 mRNA 定序。在一些實施例中，癌症包含表現功能性 STING 多肽的腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，癌症包括表現功能性 cGAS 多肽的腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症包括表現功能性 Cx43 多肽的腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症為大腸直腸癌，包括大腸癌和直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿上皮癌、非小細胞肺癌、三陰性乳癌、小細胞肺癌、肝細胞癌或黑色素瘤。
本文亦提供減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的方法，包括投予該個體有效量的如本揭露所揭示之抗 MerTK 抗體以減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除。在一些實施例中，對凋亡細胞之清除減少 1-10 倍、1-8 倍、1-5 倍、1-4 倍、1-3 倍、1-2 倍、2-10 倍、2-8 倍、2-5 倍、2-4 倍、2-3 倍、3-10 倍、3-8 倍、3-5 倍、3-4 倍，或減少至少約 1.1 倍、1.2 倍、1.3 倍、1.4 倍、1.5 倍、1.6 倍、1.7 倍、1.8 倍、1.9 倍、2.0 倍、2.1 倍、2.2 倍、2.3 倍、2.4 倍、2.5 倍、2.6 倍、2.7 倍、2.8 倍、2.9 倍、3.0 倍、3.1 倍、3.2 倍、3.3 倍、3.4 倍、3.5 倍、3.6 倍、3.7 倍、3.8 倍、3.9 倍、4.0 倍、4.1 倍、4.2 倍、4.3 倍、4.4 倍、4.5 倍、4.6 倍、4.7 倍、4.8 倍、4.9 倍、5.0 倍、5.1 倍、5.2 倍、5.3 倍、5.4 倍、5.5 倍、5.6 倍、5.7 倍、5.8 倍、5.9 倍、6.0 倍、6.1 倍、6.2 倍、6.3 倍、6.4 倍、6.5 倍、6.6 倍、6.7 倍、6.8 倍、6.9 倍、7.0 倍、7.1 倍、7.2 倍、7.3 倍、7.4 倍、7.5 倍、7.6 倍、7.7 倍、7.8 倍、7.9 倍或 8.0 倍。MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的減少可以藉由將來自投予有效量之抗 MerTK 抗體或其免疫結合物後的個體的樣品中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除水平與 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的參考水平進行比較來確定。在一些實施例中，參考水平為參考樣品中 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除的水平。在一些實施例中，參考樣品取自受試者，在投予有效量之抗 MerTK 抗體或其免疫結合物之前採集。在一些實施例中，樣品包含腫瘤組織或腫瘤細胞。
在一些實施例中，本揭露之抗 MerTK 抗體將凋亡細胞之吞噬活性減少約 10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%、60-100%、70-100%、75-100%、80-100%、85-100%、90-100%、95-100%、10-95%、20-95%、30-95%、40-95%、50-95%、60-95%、70-95%、75-95%、80-95%、85-95%、90-95%、10-90%、20-90%、30-90%、40-90%、50-90%、60-90%、70-90%、75-90%、80-90%、85-90%、10-85%、20-85%、30-85%、40-85%、50-85%、60-85%、70-85%、75-85%、80-85%、10-80%、20-80%、30-80%、40-80%、50-80%、60-80%、70-80%、75-80%、10-75%、20-75%、30-75%、40-75%、50-75%、60-75%、70-75%、10-70%、20-70%、30-70%、40-70%、50-70%、60-70%、10-65%、20-65%、30-65%、40-65%、50-65%、60-65%、10-60%、20-60%、30-60%、40-60%、50-60%、10-55%、20-55%、30-55%、40-55%、50-55%、10-40%、20-40% 或 30-40%，或減少至少約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99%。在一些實施例中，抗 MerTK抗體的用於減少凋亡細胞之吞噬活性的半數最大抑制濃度 (IC50) 為約 1 pM – 50 pM、1 pM - 100 pM、1 pM – 500 pM、1 pM – 1 nM、1 pM – 1.5 nM、5 pM – 50 pM、5 pM - 100 pM、5 pM – 500 pM、5 pM – 1 nM、5 pM – 1.5 nM、10 pM – 50 pM、10 pM - 100 pM、10 pM – 500 pM、10 pM – 1 nM、10 pM – 1.5 nM、50 pM - 100 pM、50 pM – 500 pM、50 pM – 1 nM、50 pM – 1.5 nM、100 pM – 500 pM、100 pM – 1 nM 或 100 pM – 1.5 nM。
抗 MerTK 抗體可以靜脈內、肌內、皮下、局部、口服、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內腔、心室內或鼻內投予。抗 MerTK 抗體的適當劑量可基於待治療疾病的類型、疾病的嚴重程度和病程、個體的臨床狀況、個體的臨床病史和對治療的反應以及主治醫師酌情決定權來確定。 2. 與另外療法組合
本發明之抗體可單獨投予或用於聯合治療。例如，聯合治療包括投予本發明之抗體並投予至少一種另外的治療劑 (例如，一種、兩種、三種、四種、五種或六種另外的治療劑)。在某些方面，組合療法包含投予本發明之抗體並投予至少一種另外治療劑諸如免疫查核點抑制劑。
在一些實施例中，該等用途和方法可進一步包括另外療法或者投予有效量的另外治療劑。其他療法可為放射療法、手術（例如***腫瘤切除術及***切除術）、化學療法、基因療法、DNA 療法、病毒療法、RNA 療法、免疫療法、骨髓移植、奈米療法、單株抗體療法或前述之組合。額外療法可為採取輔助療法或新輔助療法的形式。在一些實施例中，該額外療法為投予小分子酶抑制劑或抗轉移劑。在一些具體實例中，其他療法為投予副作用限制性藥劑 (例如意欲減少治療副作用之出現及/或嚴重程度的藥劑，諸如抗噁心劑等)。在一些實施例中，該額外療法為放射治療。在一些實施例中，該額外療法為手術。在一些實施例中，該額外療法為放射治療與手術的組合。在一些實施例中，該額外療法為 γ 射線。在一些實施例中，額外療法是靶向 PI3K/AKT/mTOR 通路、HSP90 抑制劑、微管蛋白抑制劑、凋亡抑制劑和/或化學預防劑之療法。
在一些實施例中，另外療法為針對 B7-H3 的拮抗劑（亦稱為 CD276），例如，阻斷性抗體 MGA271，針對 TGFβ 的拮抗劑，例如，美替木單抗 (metelimumab)（亦稱為 CAT-192）、非蘇木單抗 (fresolimumab)（亦稱為 GC1008）或 LY2157299，包括過繼轉移表現嵌合抗原受體 (CAR) 的 T 細胞（例如，細胞毒性 T 細胞或 CTL）之治療，包括過繼轉移包含顯性陰性 TGF β 受體（例如，顯性陰性 TGF β II 型受體）的 T 細胞之治療，包括 HERCREEM 方案之治療（參見例如，ClinicalTrials.gov 標識符 NCT00889954），針對 CD137（亦稱為 TNFRSF9、4-1BB 或 ILA）的激動劑，例如，活化性抗體烏瑞蘆單抗（亦稱為 BMS-663513），針對 CD40 的激動劑，例如，活化性抗體 CP-870893，針對 OX40 的激動劑（亦稱為 CD134），例如，與另一抗 OX40 抗體（例如，AgonOX）組合投予的活化性抗體，針對 CD27 的激動劑，例如，活化性抗體 CDX-1127，吲哚胺-2,3-二氧酶 (IDO)，1-甲基-D-色胺酸（亦稱為 1-D-MT），抗體-藥物結合物（在一些實施例中，包含美登素或單甲基澳瑞他汀 E（MMAE）），抗 NaPi2b 抗體-MMAE 結合物（亦稱為 DNIB0600A 或 RG7599），曲妥珠单抗-美坦新 (trastuzumab emtansine)（亦稱為 T-DM1、ado-曲妥珠單抗-美坦新或 KADCYLA®，建南德克公司），DMUC5754A，一種靶向內皮素 B 受體 (EDNBR) 的抗體-藥物結合物，例如，針對 EDNBR 的抗體結合至 MMAE（一種血管生成抑制劑），針對 VEGF 的抗體，例如，VEGF-A，貝伐珠單抗（亦稱為 AVASTIN®，建南德克公司），針對血管生成素 2（亦稱為 Ang2）的抗體，MEDI3617，一種抗腫瘤藥，靶向 CSF-1R 的藥物（亦稱為 M-CSFR 或 CD115），抗 CSF-1R（亦稱為 IMC-CS4），干擾素（例如，干擾素 α 或干擾素 γ），Roferon-A，GM-CSF（亦稱為重組人顆粒球巨噬細胞株刺激因子、rhu GM-CSF、沙格司亭或 Leukine®），IL-2（亦稱為阿地間白素 (aldesleukin) 或 Proleukin®），IL-12，靶向 CD20 的抗體（在一些實施例中，靶向 CD20 的抗體為奧比妥珠單抗 (obinutuzumab)（亦稱為 GA101 或 Gazyva®）或利妥昔單抗 (rituximab)），靶向 GITR 的抗體（在一些實施例中，靶向 GITR 的抗體為 TRX518），組合癌症疫苗（在一些實施例中，癌症疫苗為肽癌疫苗，在一些實施例中為個性化肽疫苗；在一些實施例中，肽癌疫苗為多價長肽、多肽、肽混合物、雜合肽或肽脈衝樹突細胞疫苗（參見例如，Yamada 等人，Cancer Sci, 104:14-21, 2013）），與佐劑合用，TLR 激動劑，例如，Poly-ICLC（亦稱為 Hiltonol®）、LPS、MPL 或 CpG ODN、腫瘤壞死因子 (TNF) α、IL-1、HMGB1、IL-10 拮抗劑、IL-4 拮抗劑、IL-13 拮抗劑、HVEM 拮抗劑、ICOS 激動劑，例如，藉由投予 ICOS-L 或針對 ICOS 的激動性抗體，靶向 CX3CL1 的治療，靶向 CXCL10 的治療，靶向 CCL5 的治療，LFA-1 或 ICAM1 激動劑，選擇素激動劑，靶向療法，B-Raf 抑制劑，維羅非尼 (vemurafenib)（亦稱為 Zelboraf®，達拉非尼 (dabrafenib)（亦稱為 Tafinlar®），得舒緩 (erlotinib)（亦稱為 Tarceva®），MEK 之抑制劑，諸如 MEK1（亦稱為 MAP2K1）或 MEK2（亦稱為 MAP2K2），考比替尼 (cobimetinib)（亦稱為 GDC-0973 或 Xl-518），曲美替尼 (trametinib)（亦稱為 Mekinist®），K-Ras 抑制劑，c-Met 抑制劑，奧那妥珠單抗 (onartuzumab)（亦稱為 MetMAb），Alk 抑制劑，AF802（亦稱為 CH5424802 或艾樂替尼 (alectinib)），磷脂酸肌醇 3 激酶 (PI3K) 抑制劑，BKM120，艾代拉里斯(idelalisib)（亦稱為 GS-1101 或 CAL-101），哌立福新 (perifosine)（亦稱為 KRX-0401），Akt，MK2206，GSK690693，GDC-0941，mTOR 抑制劑，西羅莫司 (sirolimus)（亦稱為雷帕黴素），替西羅莫司 (temsirolimus)（亦稱為 CCI-779 或 Torisel®），依維莫司 (everolimus)（亦稱為 RAD001），地磷莫司 (ridaforolimus)（亦稱為 AP-23573、MK-8669 或雷帕黴素），OSI-027，AZD8055，INK128，PI3K/mTOR 雙重抑制劑，XL765，GDC-0980，BEZ235（亦稱為 NVP-BEZ235），BGT226，GSK2126458，PF- 04691502 或 PF-05212384（亦稱為 PKI-587）。在一些實施例中，另外治療劑為 CT-011（亦稱為匹定利珠單抗 (Pidilizumab) 或 MDV9300；CAS 登記號 1036730-42-3；CureTech/Medivation）。CT-011，亦稱為 hBAT 或 hBAT-1，為 WO2009/101611 中揭示之抗體。 3. 與查核點抑制劑組合
在一些實施例中，該另外的治療劑為免疫查核點抑制劑。在某些方面，本申請提供用於增強罹患癌症之個體的免疫功能的方法，包括投予有效量的抗 MerTK 抗體與免疫查核點抑制劑的組合。在某些實施例中，抗 MERTK 抗體將免疫查核點抑制劑的免疫效應增加約 2 倍、3 倍、5 倍、8 倍、10 倍、15 倍或 20 倍。在某些實施例中，抗 MERTK 抗體將免疫查核點抑制劑的免疫效應增加約 1-2 倍、1-5 倍、1-10 倍、1-15 倍、1-20 倍、1-25 倍、1-30 倍、1-50 倍、1-75 倍、1-100 倍、1-150 倍、1-200 倍、1-250 倍、1.5-2 倍、1.5-5 倍、1.5-10 倍、1.5-15 倍、1.5-20 倍、1.5-25 倍、1.5-30 倍、1.5-50 倍、1.5-75 倍、1.5-100 倍、1.5-150 倍、1.5-200 倍、1.5-250 倍、2-5 倍、2-10 倍、2-15 倍、2-20 倍、2-25 倍、2-30 倍、2-50 倍、2-75 倍、2-100 倍、2-150 倍、2-200 倍、2-250 倍、2.5-5 倍、2.5-10 倍、2.5-15 倍、2.5-20 倍、2.5-25 倍、2.5-30 倍、2.5-50 倍、2.5-75 倍、2.5-100 倍、2.5-150 倍、2.5-200 倍、2.5-250 倍、5-10 倍、5-15 倍、5-20 倍、5-25 倍、5-30 倍、5-50 倍、5-75 倍、5-100 倍、5-150 倍、5-200 倍、5-250 倍、10-15 倍、10-20 倍、10-25 倍、10-30 倍、10-50 倍、10-75 倍、10-100 倍、10-150 倍、10-200 倍、10-250 倍、20-25 倍、20-30 倍、20-50 倍、20-75 倍、20-100 倍、20-150 倍、20-200 倍、20-250 倍、25-30 倍、25-50 倍、25-75 倍、25-100 倍、25-150 倍、25-200 倍或 25-250 倍，或增加至少約 1 倍、2 倍、5 倍、10 倍、15 倍、20 倍、25 倍、30 倍、40 倍、50 倍、60 倍、70 倍、75 倍、80 倍、90 倍、100 倍、125 倍、150 倍、200 倍、225 倍或 250 倍。
在一些實施例中，個體罹患對一種或多種免疫查核點抑制劑具有抗性（已證明具有抗性）的癌症。在一些實施例中，對免疫查核點抑制劑的抗性包括癌症復發或難治性癌症。復發可指癌症於治療之後在原始位點或新位點再次出現。在一些實施例中，對免疫查核點抑制劑的抗性包括在用免疫查核點抑制劑治療期間癌症的進展。在一些實施例中，對免疫查核點抑制劑的抗性包括對治療沒有反應的癌症。該癌症可於治療開始時具有耐藥性或其可於治療過程中變為具有耐藥性。在一些實施例中，該癌症處於早期或晚期。
關於治療性免疫查核點抑制劑的更多細節在以下文獻中提供：例如 Byun 等人，(2017) Nat Rev Endocrinol. 13: 195-207；La-Beck 等人，(2015) Pharmacotherapy.35(10): 963-976；Buchbinder 等人，(2016) Am J Clin Oncol.39(1): 98-106；Michot 等人，(2016) Eur J Cancer.54: 139-148；以及 Topalian 等人，(2016) Nat Rev Cancer.16: 275-287。
在一些實施例中，免疫查核點抑制劑為細胞毒性 T 淋巴球相關蛋白 4 (CTLA4)（亦稱為 CD152）抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4 抑制劑為阻斷性抗體、伊匹單抗 (ipilimumab)（亦稱為 MDX-010、MDX-101 或 Yervoy®）、曲美木單抗 (tremelimumab)（也稱為替西木單抗 (ticilimumab) 或 CP-675,206）。
在一些實施例中，免疫查核點抑制劑為 PD-1 軸結合拮抗劑。
本文提供治療個體癌症的方法，包括投予個體有效量的 PD-1 軸結合拮抗劑及本揭露之抗 MerTK 抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）。本文亦提供增強個體（例如，罹患癌症的個體）的免疫功能或反應的方法，包括投予個體有效量的本揭露之 PD-1 軸結合拮抗劑及抗 MerTK 抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）。
於此類方法中，PD-1 軸結合拮抗劑包括 PD-1 結合拮抗劑、PDL1 結合拮抗劑及/或 PDL2 結合拮抗劑。「PD-1」之替代名稱包括CD279及SLEB2。「PDL1」之替代名稱包括B7-H1、B7-4、CD274及B7-H。「PDL2」之替代名稱包括B7-DC、Btdc及CD273。在一些具體實例中，PD-1、PDL1及PDL2為人類PD-1、PDL1及PDL2。
在一些具體實例中，PD-1結合拮抗劑為抑制PD-1與其配位體結合搭配物之結合的分子。在一特定態樣中，PD-1配位體結合搭配物為PDL1及/或PDL2。在另一具體實例中，PDL1結合拮抗劑為抑制PDL1與其結合搭配物之結合的分子。在一特定態樣中，PDL1結合搭配物為PD-1及/或B7-1。在另一具體實例中，PDL2結合拮抗劑為抑制PDL2與其結合搭配物之結合的分子。在一特定態樣中，PDL2結合搭配物為PD-1。該拮抗劑可以為抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽或小分子。如果拮抗劑為抗體，則在一些實施例中，該抗體包含選自由 IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4 所組成之群組的人恆定區。
在一些具體實例中，PD-1結合拮抗劑為抗 PD-1 抗體（例如人抗體、人源化抗體或嵌合抗體）。多種抗 PD-1 抗體可用於本文揭露的方法中。在本文之任一實施例中，PD-1 抗體可以與人 PD-1 或其變異體結合。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體為選自由以下所組成之群組的抗體片段：Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv 和 (Fab’) 2片段。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體為嵌合抗體或人源化抗體。於其他實施例中，抗 PD-1 抗體為人抗體。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為納武單抗（CAS登記號：946414-94-4)。納武單抗（Bristol-Myers Squibb/Ono），亦稱為MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558及OPDIVO®，為WO2006/121168中所描述之抗PD-1抗體。在一些具體實例中，抗PD-1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a) 該重鏈包含胺基酸序列： QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWY DGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO: 24)，且 (b) 該輕鏈包含胺基酸序列： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO: 25)。
在一些實施例中，抗 PD-1 抗體包含六個來自 SEQ ID NO: 24 及 SEQ ID NO: 25 之 HVR 序列（例如，三個來自 SEQ ID NO: 24 之重鏈 HVR 及三個來自 SEQ ID NO: 25 之輕鏈 HVR）。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體包含來自 SEQ ID NO: 24 之重鏈可變域及來自 SEQ ID NO: 25 之輕鏈可變域。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為派立珠單抗（CAS登記號1374853-91-4)。帕博利珠單抗(Pembrolizumab) (Merck)，亦稱為 MK-3475、Merck 3475、派姆單抗(lambrolizumab)、SCH-900475 和 KEYTRUDA®，為 WO2009/114335 中所揭示之抗 PD-1 抗體。在一些具體實例中，抗PD-1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a) 該重鏈包含胺基酸序列： QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGG INPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYW GQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCP APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 26)，且 (b) 該輕鏈包含胺基酸序列： EIVLTQSPAT LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLES GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 27)。
在一些實施例中，抗 PD-1 抗體包含六個來自 SEQ ID NO: 26 及 SEQ ID NO: 27 之 HVR 序列（例如，三個來自 SEQ ID NO: 26 之重鏈 HVR 及三個來自 SEQ ID NO: 27 之輕鏈 HVR）。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體包含來自 SEQ ID NO: 26 之重鏈可變域及來自 SEQ ID NO: 27 之輕鏈可變域。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為MEDI-0680（AMP-514；AstraZeneca）。MEDI-0680 是人源化 IgG4 抗 PD-1 抗體。
在一些具體實例中，抗 PD-1 抗體為 PDR001（CAS登記號 1859072-53-9；Novartis）。PDR001 是人源化 IgG4 抗 PD-1 抗體，可阻斷 PDL1 和 PDL2 與 PD-1 之結合。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為REGN2810（Regeneron）。REGN2810 是人抗 PD-1 抗體。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為BGB-108（BeiGene）。在一些具體實例中，抗PD-1抗體為BGB-A317（BeiGene）。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為JS-001（Shanghai Junshi）。JS-001 是人源化抗 PD-1 抗體。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為STI-A1110（Sorrento）。STI-A1110 是人抗 PD-1 抗體。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為INCSHR-1210（Incyte）。INCSHR-1210 是人 IgG4 抗 PD-1 抗體。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為PF-06801591（Pfizer）。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為TSR-042（亦稱為ANB011；Tesaro/AnaptysBio）。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為AM0001（ARMO Biosciences）。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為ENUM 244C8（Enumeral Biomedical Holdings）。ENUM 244C8 是抗 PD-1 抗體，可抑制 PD-1 功能而不阻斷 PDL1 與 PD-1 之結合。
在一些具體實例中，抗PD-1抗體為ENUM 388D4（Enumeral Biomedical Holdings）。ENUM 388D4 是抗 PD-1 抗體，可競爭性抑制 PDL1 與 PD-1 之結合。
在一些實施例中，PD-1 抗體包含六個 HVR 序列（例如，三個重鏈 HVR 及三個輕鏈 HVR）及/或來自下列中所揭示之 PD-1 抗體的重鏈可變域和輕鏈可變域：WO2015/112800（申請人：Regeneron）、WO2015/112805（申請人: Regeneron）、WO2015/112900（申請人: 諾華公司）、US20150210769（轉讓給諾華公司）、WO2016/089873（申請人：Celgene），WO2015/035606（申請人：百濟神州公司）、WO2015/085847（申請人：上海恒瑞藥業/江蘇恆瑞醫藥）、WO2014/206107（申請人：上海君實生物/君夢生物）、WO2012/145493（申請人：Amplimmune）、US9205148（轉讓給 MedImmune）、WO2015/119930（申請人：輝瑞公司/默克公司）、WO2015/119923（申請人：輝瑞公司/默克公司）、WO2016/032927（申請人：輝瑞公司/默克公司），WO2014/179664（申請人：AnaptysBio）、WO2016/106160（申請人：Enumeral）和 WO2014/194302（申請人：索倫托公司）。
在一些具體實例中，PD-1軸結合拮抗劑為抗PDL1抗體。本文涵蓋且描述多種抗PDL1抗體。在本文之具體實例中之任一者中，經分離抗PDL1抗體可結合至人類PDL1，例如如UniProtKB/Swiss-Prot存取編號Q9NZQ7.1所示之人類PDL1，或其變體。在一些具體實例中，抗PDL1抗體能夠抑制PDL1與PD-1之間及/或PDL1與B7-1之間的結合。在一些具體實例中，抗PDL1抗體為單株抗體。在一些具體實例中，抗PDL1抗體為選自由以下組成之群的抗體片段：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv及(Fab') 2片段。在一些具體實例中，抗PDL1抗體為人類化抗體。在一些具體實例中，抗 PDL1 抗體為人抗體。可用於本揭露之方法的抗 PDL1 抗體的實例及其製備方法揭示於 PCT 專利申請案 WO 2010/077634 A1 及美國專利第 8,217,149 號中，其以引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，抗 PDL1 抗體為阿替利珠單抗 (atezolizumab) (CAS 登記號：1422185-06-5)。阿替利珠單抗（建南德克公司），亦稱為 MPDL3280A，是一種抗 PDL1 抗體。
在一些具體實例中，抗PDL1抗體包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中： (a) 該重鏈可變區包含分別為 GFTFSDSWIH (SEQ ID NO: 28)、AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 29) 及 RHWPGGFDY (SEQ ID NO: 30) 之 HVR-H1、HVR-H2 及 HVR-H3 序列，且 (b) 該輕鏈可變區包含分別為 RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 31)、SASFLYS (SEQ ID NO: 32) 及 QQYLYHPAT (SEQ ID NO: 33) 之 HVR-L1、HVR-L2 及 HVR-L3 序列。
在一些具體實例中，抗PDL1抗體為MPDL3280A，亦稱為阿特珠單抗及TECENTRIQ®（CAS登記號：1422185-06-5)。在一些具體實例中，抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a) 該重鏈可變區序列包含胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 34)，且 (b) 該輕鏈可變區序列包含胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 35)。
在一些具體實例中，抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a) 該重鏈包含胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 36)，且 (b) 該輕鏈包含胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 37)
在一些具體實例中，抗PDL1抗體為阿維魯單抗（CAS登記號：1537032-82-8)。阿維魯單抗(Avelumab)，亦稱為 MSB0010718C，是人單株 IgG1 抗 PDL1 抗體 (Merck KGaA, Pfizer)。在一些具體實例中，抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a) 該重鏈包含胺基酸序列： EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 38)，且 (b) 該輕鏈包含胺基酸序列： QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO: 39)。
在一些實施例中，抗 PDL1 抗體包含六個來自 SEQ ID NO: 38 及 SEQ ID NO: 39 之 HVR 序列（例如，三個來自 SEQ ID NO: 38 之重鏈 HVR 及三個來自 SEQ ID NO: 39 之輕鏈 HVR）。在一些實施例中，抗 PDL1 抗體包含來自 SEQ ID NO: 38 之重鏈可變域及來自 SEQ ID NO: 39 之輕鏈可變域。
在一些實施例中，抗 PDL1 抗體為度伐魯單抗 (durvalumab) （CAS 登錄號：1428935-60-7)。德瓦魯單抗，亦稱為MEDI4736，為WO2011/066389及US2013/034559中所描述之Fc最佳化人類單株IgG1 κ抗PDL1抗體（MedImmune，AstraZeneca）。在一些具體實例中，抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a) 該重鏈包含胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 40)，且 (b) 該輕鏈包含胺基酸序列： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 41)。
在一些實施例中，抗 PDL1 抗體包含六個來自 SEQ ID NO: 40 及 SEQ ID NO: 41 之 HVR 序列（例如，三個來自 SEQ ID NO: 40 之重鏈 HVR 及三個來自 SEQ ID NO: 41 之輕鏈 HVR）。在一些實施例中，抗 PDL1 抗體包含來自 SEQ ID NO: 40 之重鏈可變域及來自 SEQ ID NO: 41 之輕鏈可變域。
在一些具體實例中，抗PDL1抗體為MDX-1105（Bristol Myers Squibb）。MDX-1105，亦稱為BMS-936559，為WO2007/005874中所述之抗PDL1抗體。
在一些具體實例中，抗PDL1抗體為LY3300054（Eli Lilly）。
在一些具體實例中，抗PDL1抗體為STI-A1014（Sorrento）。STI-A1014 是人抗 PDL1 抗體。
在一些具體實例中，抗PDL1抗體為KN035（Suzhou Alphamab）。KN035 是生成自駱駝噬菌體展示文庫之單域抗體 (dAB)。
在一些具體實例中，抗 PDL1 抗體包含可裂解部分或連接子，其在裂解（例如在腫瘤微環境中藉由蛋白酶）時活化抗體抗原結合域以例如藉由移除非結合空間部分而允許其結合其抗原。在一些具體實例中，抗PDL1抗體為CX-072（CytomX Therapeutics）。
在一些實施例中，PDL1 抗體包含六個 HVR 序列（例如，三個重鏈 HVR 及三個輕鏈 HVR）及/或來自下列中所揭示之 PDL1 抗體的重鏈可變域和輕鏈可變域：US20160108123（轉讓給諾華公司）、WO2016/000619（申請人：百濟神州公司）、WO2012/145493（申請人：Amplimmune）、US9205148（轉讓給 MedImmune）、WO2013/181634（申請人：索倫托公司）和 WO2016/061142（申請人：諾華公司）。
在又一具體方面，抗 PD-1 或 PDL1 抗體具有減少的或最低限度的效應物功能。在又一具體方面，最低限度的效應物功能來自「較少效應物 Fc 突變」或醣基化突變。在另一具體實例中，無效應子Fc突變為恆定區中之N297A或D265A/N297A取代。在一些具體實例中，經分離抗PDL1抗體經去糖基化。抗體之糖基化典型地為N-連接或O-連接的。N-連接係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基的側鏈相聯。三肽序列，天冬醯胺酸-X-絲胺酸和天冬醯胺酸-X-蘇胺酸，其中 X 是除脯胺酸外的任何胺基酸，是將碳水化合物部分與天冬醯胺酸側鏈酶促相聯的識別序列。因此，多肽中這些三肽序列中任一個的存在產生潛在的醣基化位點。O連接型糖基化係指糖N-乙醯半乳胺糖、半乳糖或木糖中之一者與羥胺基酸，最通常是絲胺酸或蘇胺酸的連接，但亦可使用5-羥脯胺酸或5-羥離胺酸。移除糖基化位點形式抗體宜藉由改變胺基酸序列以使得上文所描述之三肽序列（針對N連接型糖基化位點）中之一者得以移除來實現。可藉由將糖基化位點內之天冬醯胺、絲胺酸或蘇胺酸殘基取代成另一胺基酸殘基（例如甘胺酸、丙胺酸或保守性取代物）來進行改變。
在一些實施例中，抗 MERTK 抗體在組合治療 20 天後將抗 PDL1 抗體的免疫作用增加約 3 倍。在一些實施例中，抗 MERTK 抗體在治療 30 天後將抗 PDL1 抗體的免疫作用增加約 10 倍。
在一些具體實例中，PD-1結合拮抗劑係免疫黏附素（例如包含融合至恆定區（例如免疫球蛋白序列之Fc區）之PDL1或PDL2之細胞外或PD-1結合部分的免疫黏附素）。在一些具體實例中，PD-1結合拮抗劑為AMP-224。AMP-224（CAS登記號1422184-00-6；GlaxoSmithKline/MedImmune），亦稱為B7-DCIg，為WO2010/027827及WO2011/066342中所述之PDL2-Fc融合物可溶性受體。
在一些具體實例中，PD-1結合拮抗劑為肽或小分子化合物。在一些具體實例中，PD-1結合拮抗劑為AUNP-12（PierreFabre/Aurigene）。參見例如，WO2012/168944、WO2015/036927、WO2015/044900、WO2015/033303、WO2013/144704、WO2013/132317 及 WO2011/161699。
在一些具體實例中，PDL1結合拮抗劑為抑制PD-1之小分子。在一些具體實例中，PDL1結合拮抗劑為抑制PDL1之小分子。在一些具體實例中，PDL1結合拮抗劑為抑制PDL1及VISTA之小分子。在一些具體實例中，PDL1結合拮抗劑為CA-170（亦稱為AUPM-170）。在一些具體實例中，PDL1結合拮抗劑為抑制PDL1及TIM3之小分子。在一些具體實例中，小分子為WO2015/033301及WO2015/033299中所述之化合物。
另一方面，本文提供用於增強罹患癌症之個體的免疫功能的方法，包括投予有效量的抗 MerTK 抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）與免疫查核點抑制劑的組合。可以藉由本文所揭示之抗 MerTK 抗體增強的免疫功能的各個方面以及用於量測此增強的方法揭示於下。
在本揭露之方法的一些實施例中，癌症（在一些實施例中，使用診斷測試檢查的患者之癌症樣品）具有升高的 T 細胞浸潤水平。如本文所用，癌症的 T 細胞浸潤可以指 T 細胞（諸如腫瘤浸潤淋巴球 (TIL)）存在於癌症組織內或以其他方式與癌症組織關聯。本領域已知 T 細胞浸潤可能與某些癌症中改善的臨床結果相關（參見例如 Zhang 等人， N. Engl. J.Med.348(3):203-213 (2003)）。
然而，T 細胞耗竭亦係癌症的一個主要免疫學特徵，許多腫瘤浸潤淋巴球 (TIL) 表現高水平的抑制性共受體且缺乏製造效應細胞激素的能力（Wherry, E.J. Nature immunology12: 492-499 (2011)；Rabinovich, G.A., 等人， Annual review of immunology25:267-296 (2007)）。在本揭露之方法的一些實施例中，個體罹患 T 細胞功能障礙。在本揭露之方法的一些實施例中，T 細胞功能障礙的特徵在於 T 細胞無反應性或者分泌細胞激素、增殖或執行細胞溶解活性的能力降低。在本揭露之方法的一些實施例中，T 細胞功能障礙的特徵在於 T 細胞耗竭。在本揭露之方法的一些實施例中，T 細胞為 CD4+ 及 CD8+ T 細胞。在一些實施例中，T 細胞為 CD4+ 及/或 CD8+ T 細胞。
在一些實施例中，CD8+ T 細胞的特徵在於，例如，CD8b 表現之存在（例如，藉由使用例如 Fluidigm 的 rtPCR）（Cd8b 亦稱為 T 細胞表面醣蛋白 CD8β 鏈；CD8 抗原，α 多肽 p37；登錄號為 NM_172213）。在一些實施例中，CD8+ T 細胞來自周邊血。在一些實施例中，CD8+ T 細胞來自腫瘤。
在一些實施例中，Treg 細胞的特徵在於，例如，Fox3p 表現之存在（例如，藉由使用例如 Fluidigm 的 rtPCR）（Foxp3 亦稱為叉頭盒蛋白 P3；scurfin；FOXP3δ7；免疫缺陷，多內分泌疾病，腸病，X 性聯；登錄號為 NM_014009）。在一些實施例中，Treg 來自周邊血。在一些實施例中，Treg 細胞來自腫瘤。
在一些實施例中，發炎性 T 細胞的特徵在於，例如，Tbet 及/或 CXCR3 表現之存在（例如，藉由使用例如 Fluidigm 的 rtPCR）。在一些實施例中，發炎性 T 細胞來自周邊血。在一些實施例中，發炎性 T 細胞來自腫瘤。
在本揭露之方法的一些實施例中，CD4 及/或 CD8 T 細胞展示出增加的選自由 IFN-γ、TNF-α 及間白素所組成之群組的細胞激素的釋放。細胞激素釋放可以藉由本領域已知的任何方式來量測，例如，使用西方墨點法、ELISA 或免疫組織化學檢定來偵檢含有 CD4 及/或 CD8 T 細胞的樣品中釋放的細胞激素之存在。
在本揭露之方法的一些實施例中，CD4 及/或 CD8 T 細胞為效應記憶 T 細胞。在本揭露之方法的一些實施例中，CD4 及/或 CD8 效應記憶 T 細胞的特徵在於具有 CD44 highCD62L low的表現。CD44 highCD62L low的表現可以藉由本領域已知的任何方式偵檢，例如藉由製備組織（例如，癌組織）的單細胞懸液並使用針對 CD44 及 CD62L 的商品化抗體進行表面染色及流式細胞分析技術。在本揭露之方法的一些實施例中，CD4 及/或 CD8 效應記憶 T 細胞的特徵在於具有 CXCR3（亦稱為 C-X-C 趨化介素受體 3 型；Mig 受體；IP10 受體；G 蛋白偶聯受體 9 ；干擾素誘導蛋白 10 受體；登錄號 NM_001504）之表現。在一些實施例中，CD4 及/或 CD8 效應記憶 T 細胞來自周邊血。在一些實施例中，CD4 及/或 CD8 效應記憶 T 細胞來自腫瘤。
在本揭露之方法的一些實施例中，相對於投予該組合之前，Treg 功能被抑制。在一些實施例中，相對於投予該組合之前，T 細胞減少。
在一些實施例中，相對於投予該組合之前，Treg 的數量降低。在一些實施例中，相對於投予該組合之前，血漿干擾素 γ 增加。例如，可以藉由確定 CD4+Fox3p+CD45+ 細胞的百分比（例如，藉由 FACS 分析）來評估 Treg 數量。在一些實施例中，確定例如樣品中的 Treg 的絕對數量。在一些實施例中，Treg 來自周邊血。在一些實施例中，Treg 來自腫瘤。
在一些實施例中，相對於投予該組合之前，T 細胞引發、活化及/或增殖增加。在一些實施例中，T 細胞為 CD4+ 及/或 CD8+ T 細胞。在一些實施例中，T 細胞增殖藉由確定 Ki67+CD8+T 細胞的百分比來偵檢（例如，藉由 FACS 分析）。在一些實施例中，T 細胞增殖藉由確定 Ki67+CD4+T 細胞的百分比來偵檢（例如，藉由 FACS 分析）。在一些實施例中，T 細胞來自周邊血。在一些實施例中，T 細胞來自腫瘤。
上面提到的此等聯合療法涵蓋聯合施用 (其中兩種或多種治療劑包含在同一或單獨的醫藥組成物中)，以及單獨施用，在這種情況下，本發明之抗體的施用可在施用另外的一種或多種治療劑之前、同時和/或之後發生。一方面，投予抗 MerTK 抗體及投予另外治療劑彼此發生在約一個月內，或發生在約一週、兩週或三週內，或發生在約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內。在一個方面，在治療之第 1 天將抗體及另外治療劑投於患者。本發明之抗體亦可與放射療法組合使用。
本發明之抗體（及任何另外治療劑）可藉由任何合適的方式投予，包括腸胃外、肺內和鼻內投予，且如果需要局部治療，則可以採用病灶內投予。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可透過任何合適的途徑進行，例如透過注射，諸如靜脈內或皮下注射，部分取決於短暫施用還是長期施用。本文中考慮各種給藥方案，其包括但不限於在多種時間點單次或多次投予、快速注射投予和脈衝輸注。
本發明之抗體將按照與良好醫學實踐一致的方式進行配製、給藥及施用。在這種情況下，考慮的因素包括待治療的具體障礙、待治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床病症、障礙的原因、遞送藥物的部位、施用方法、施用日程及醫療從業者已知的其他因素。該抗體並非必須、但可以視情況與一種或多種目前用於預防或治療所述疾病之藥劑一起配製。此等其他藥劑的有效量取決於醫藥組成物中存在之抗體的量、疾病或治療的類型以及上文討論的其他因素。這些通常以與本文中所述相同的劑量和投予途徑，或本文中所述劑量的約 1% 至 99%，或以經驗上/臨床上確定為適當的任何劑量和藉由任何途徑使用。
對於疾病的預防或治療，本發明之抗體的適當劑量 (單獨使用或與一種或多種其他另外的治療劑組合使用) 將取決於待治療疾病的類型、抗體的類型、疾病的嚴重度及病程、為了預防或是治療目的施用該抗體、之前的治療、患者的臨床病史及對該抗體的反應及主治醫師的判斷。在一次或一系列的治療中適宜地對患者施用抗體。根據疾病的類型和嚴重程度不同，約 1 µg/kg 至 15 mg/kg (例如 0.1mg/kg – -10mg/kg) 的抗體可為例如透過一次或多次分開的施用或透過連續輸注來對患者施用的初始候選劑量。根據上述因素，一種典型的日劑量可在約 1 µg/kg 至 100 mg/kg 或更多的範圍內。對於在幾天或更長時間內重複投予，視病狀而定，治療通常將持續至出現期望的疾病症狀阻抑。抗體的一種例示性劑量將在從 0.05 mg/kg 至約 10 mg/kg 的範圍內。因此，可向患者投予約 0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、4.0 mg/kg 或 10 mg/kg 中的一種或多種劑量 (或其任何組合)。此等劑量可以間歇施用，例如每週或每三周施用 (例如，使得患者接受約兩種至約二十種或例如約六種劑量的抗體)。可投予初始較高的負載劑量，隨後投予一個或多個較低劑量。
本文所揭示之任何抗 MerTK 抗體及本領域已知或本文所揭示之任何免疫查核點抑制劑皆可用於本揭露之方法中。
在一些實施例中，本揭露之組合療法包括投予抗 MerTK 抗體及免疫查核點抑制劑。抗 MerTK 抗體及免疫查核點抑制劑可以本領域已知的任何合適的方式投予。例如，可依序（在不同時間）或同時（在同一時間）投予抗 MerTK 抗體及免疫查核點抑制劑。在一些實施例中，免疫查核點抑制劑與抗 MerTK 抗體係處於獨立之組成物中。在一些實施例中，免疫查核點抑制劑與抗 MerTK 抗體自處於同一組成物中。
可藉由相同投予途徑或藉由不同投予途徑來投予抗 MerTK 抗體及免疫查核點抑制劑。在一些實施例中，免疫查核點抑制劑經靜脈內、肌內、皮下、局部、口服、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內腔、心室內或鼻內投予。在一些實施例中，抗 MerTK 抗體經靜脈內、肌內、皮下、局部、口服、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內腔、心室內或鼻內投予。可投予有效量之免疫查核點抑制劑及抗 MerTK 抗體以預防或治療疾病。抗 MerTK 抗體及/或免疫查核點抑制劑的適當劑量可基於待治療疾病的類型、免疫查核點抑制劑及抗 MerTK 抗體之類型、疾病的嚴重程度和病程、個體的臨床狀況、個體的臨床病史和對治療的反應以及主治醫師酌情決定權來確定。在一些實施例中，用抗 MerTK 抗體與免疫查核點抑制劑（例如，抗 PD-1 或抗 PDL1 抗體）的組合治療係協同作用者，由此組合中抗 MerTK 抗體的有效劑量相對於抗 MerTK 抗體作為單一藥劑的有效劑量減少。
作為一般性建議，投予人之抗體的治療有效量將在約 0.01 至約 50 mg/kg 患者體重之範圍內，無論藉由單次投予亦或多次投予。在一些實施例中，使用的抗體為約 0.01 至約 45 mg/kg、約 0.01 至約 40 mg/kg、約 0.01 至約 35 mg/kg、約 0.01 至約 30 mg/kg、約 0.01 至約 25 mg/kg、約 0.01 至約 20 mg/kg、約 0.01 至約 15 mg/kg、約 0.01 至約 10 mg/kg、約 0.01 至約 5 mg/kg 或約 0.01 至約 1 mg/kg，舉例而言。在一些實施例中，該抗體以 15 mg/kg 投予。然而，可以使用其他劑量方案。在一實施例中，在 21 天週期的第 1 天，以約 100 mg、約 200 mg、約 300 mg、約 400 mg、約 500 mg、約 600 mg、約 700 mg、約 800 的、約 900 mg、約 1000 mg、約 1100 mg、約 1200 mg、約 1300 mg 或約 1400 mg 的劑量投予人本文所揭示之抗 MerTK 抗體或本文所揭示之抗 PDL1 抗體。該劑量可以單劑量或以多劑量 (例如 2 或 3 劑量) 投予，例如輸注。與單一治療相比，在組合治療中投予的抗體劑量可以減少。藉由習用技術很容易監測此療法之進展。
藉由習用技術及檢定很容易監測此療法之進展。
一方面，本揭露提供用為藥物的如上文揭示之抗 MerTK 抗體（例如，聚乙二醇化抗 MerTK 抗體）。在一些實施例中，該用途為治療癌症。在一些實施例中，該用途為減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除。本文進一步提供如上文揭示之抗 MerTK 抗體在藥物製造中的用途。在一些實施例中，該藥物用於治療癌症。在一些實施例中，癌症表現功能性 cGAS-STING 細胞溶質 DNA 感測路徑蛋白。此等蛋白質係 cGAS-STING 信號傳遞路徑之一部分，且在先天免疫中發揮作用，以偵檢細胞溶質 DNA 之存在，從而觸發發炎性基因的表現。cGAS-STING 細胞溶質 DNA 感測路徑蛋白的實例包括但不限於 cGAS、STING、TBK-1、IRF3、p50、p60、p65、NF-κΒ、ISRE、IKK 和 STAT6。在一些實施例中，癌症表現功能性 STING、功能性 Cx43 和功能性 cGAS 多肽。功能性蛋白質為能夠在細胞中執行其常規功能的蛋白質。功能蛋白質的實例可包括野生型蛋白質、標記蛋白質和與野生型蛋白質相比保留或改善蛋白質功能的突變蛋白質。可以藉由本領域技術人員已知的任何方法量測蛋白質功能，包括檢定蛋白質或 mRNA 表現以及對基因體 DNA 或 mRNA 定序。在一些實施例中，癌症包含表現功能性 STING 多肽的腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，癌症包括表現功能性 cGAS 多肽的腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症包括表現功能性 Cx43 多肽的腫瘤細胞。在某些實施例中，該癌症為大腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿上皮癌、非小細胞肺癌、三陰性乳癌、小細胞肺癌、肝細胞癌或黑色素瘤。在一些實施例中，該藥物用於減少 MerTK 介導的對凋亡細胞之清除。
另一方面，個體罹患表現（例如，在診斷測試中已顯示表現）PDL1 生物標誌物的癌症。在一些實施例中，患者之癌症表現低 PDL1 生物標誌物。在一些實施例中，患者之癌症表現高 PDL1 生物標誌物。在任何方法、檢定及/或套組的一些實施例中，當 PDL1 生物標誌物佔樣品的 0% 時，樣品中不存在 PDL1 生物標誌物。
在任何方法、檢定及/或套組的一些實施例中，當 PDL1 生物標誌物佔據樣品的 0% 以上時，樣品中存在 PDL1 生物標誌物。在一些實施例中，PDL1 生物標誌物存在於樣品的至少 1% 中。在一些實施例中，PDL1 生物標誌物存在於樣品的至少 5% 中。在一些實施例中，PDL1 生物標誌物存在於樣品的至少 10% 中。
在任何方法、檢定及/或套組的一些實施例中，使用選自由以下所組成之群組的方法偵檢樣品中之 PDL1 生物標誌物：FACS、西方墨點法、ELISA、免疫沉澱、免疫組織化學、免疫螢光、放射免疫檢定、斑點印漬、免疫偵檢方法、HPLC、表面電漿子共振、光譜學、質譜、HPLC、qPCR、RT-qPCR、多重 qPCR 或 RT-qPCR、RNA-seq、微陣列分析、SAGE、MassARRAY 技術和 FISH，及其組合。
在任何方法、檢定及/或套組的一些實施例中，藉由蛋白質表現偵檢樣品中的 PDL1 生物標誌物。在一些實施例中，蛋白質表現藉由免疫組織化學 (IHC) 來確定。在一些實施例中，PDL1 生物標誌物使用抗 PDL1 抗體偵檢之。在一些實施例中，PDL1 生物標誌物藉由 IHC 偵檢為弱染色強度。在一些實施例中，PDL1 生物標誌物藉由 IHC 偵檢為中等染色強度。在一些實施例中，PDL1 生物標誌物藉由 IHC 偵檢為強染色強度。在一些實施例中，於腫瘤細胞、腫瘤浸潤免疫細胞、基質細胞及其任何組合上偵檢 PDL1 生物標誌物。在一些實施例中，染色為膜染色、細胞質染色或其組合。
在任何方法、檢定及/或套組的一些實施例中，PDL1 生物標誌物之不存在係偵檢為樣品中不存在染色或沒有染色。在任何方法、檢定及/或套組的一些實施例中，PDL1 生物標誌物之存在係偵檢為樣品中的任何染色。 G. 製品
在本發明之另一方面，提供含有可用於治療、預防及/或診斷上述病症之材料的製品。製成品包括容器及容器上或與容器相關的標籤或藥品說明書。合適的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV 溶液袋等。容器可以由多種材料例如玻璃或塑膠形成。該容器可容納組成物，該組成物本身或與有效治療、預防和/或診斷症狀的另一組成物結合使用，並可能具有無菌入口 (例如，容器可為具有可透過皮下注射針頭穿孔的塞子的靜脈內溶液袋或小管)。組成物中的至少一種活性劑為本發明之抗體。標籤或包裝插頁指示，該組成物可用於治療所選病狀。此外，該製品可以包括 (a) 其中包含有組成物的第一容器，其中，該組成物包含本發明之抗體；及 (b) 其中包含有組成物的第二容器，其中，組成物包含其他細胞毒性或其他治療劑。本發明之此實施例中的製成品可以進一步包含指示組成物可以用於治療具體疾病的包裝說明書。可替代地或另外地，製成品可以進一步包含第二 (或第三) 容器，該容器包含醫藥上可接受之緩衝劑，例如抑菌注射用水 (BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、Ringer 溶液和葡萄糖溶液。從商業和使用者的角度來看，它可以進一步包含其他材料，其中包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭和注射器。
認為本說明書足以使熟習此項技術者能夠實踐本揭露之組成物及方法。根據前文描述，除彼等於本文中顯示及揭示者之外，各種修改對於熟習此項技術者而言亦為顯而易見，且該等修改落入隨附申請專利範圍之範疇內。本文引用之所有出版物、專利及專利申請出於所有目的以引用之方式整體併入本文。 實例
參見以下實施例會更完全地理解本發明。然而，其不應解釋為限制本揭露之範圍。應理解，本文所闡述之實例及實施例僅用於闡釋目的，且鑒於其之各種修改或改變將由熟習此項技術者想到，且將包括在本申請案之精神及範圍以及隨附申請專利範圍之範圍內。 實例 1 ：抗 MerTK 抗體治療的靶向眼部毒性
MerTK 於 RPE 細胞之頂膜上表現，且於脫落的感光細胞之吞噬作用中起關鍵作用。MerTK 功能喪失且組成型剔除之囓齒動物的 RPE 無法藉由吞噬作用去除脫落的光感受器外段，造成視網膜變性。MerTK 功能有缺陷的人會在兒童早期發展為夜盲症，然後在成年早期視力迅速下降。使用小分子 MerTK 抑制劑及抗 MERTK 單株抗體 (mAb) 阻斷 MerTK 時，已經觀察到視網膜毒性。
本實例揭示對於與投予抗 MerTK 單株抗體相關的潛在視網膜毒性的評估。 材料與方法 第一項先導毒理學研究
在對 C57BL/6N 小鼠進行的第一項先導毒理學研究（毒理學研究 1）中，14C9 抗 MerTK mAb 以 0（對照）、10 及 30 mg/kg 之劑量經靜脈內 (IV) 投予，每週兩次 (BIW)，持續 4 週（總計 9 個劑量）。將雄性及雌性（n = 4/性別/組）分配至使用多個毒性組且在給藥期結束時（第 32 研究日）安排屍檢。收集來自 14C9 mAb 治療組（n = 6/性別/組）中其他小鼠的血液用於毒物動力學評估。評估準則包括下列參數：臨床觀察、體重、臨床病理學（血液學及臨床化學）、主要關注器官之解剖病理學、及毒物動力學。 第二項先導毒理學研究
為了確定毒理學研究 1 中觀察到的視網膜病變是否與視網膜功能受損有關，對 BALB/c 小鼠進行後續先導毒理學研究（毒理學研究 2），其中包括全視野眼動電波圖 (ffERG)。於本項研究中，14C9 mAb 以 0、5 或 30 mg/kg 每週兩次（BIW；總計 8 個劑量）或 45 mg/kg 每週三次（TIW；總計 12 個劑量）IV 投予，持續 4 週，之後為 6 週的恢復期。將雄性和雌性小鼠（n = 4/性別/組）分配到全部劑量水平的毒性組，終末和恢復期屍檢分別在第 30 及 72 研究日進行。自 14C9 mAb 治療組（n = 6/性別/組）中之其他小鼠收集血液用於毒物動力學評估。評估準則包括下列參數：臨床觀察、體重、臨床病理學（血液學及臨床化學）、眼睛及睪丸之解剖病理學、ffERG 及毒物動力學。 第三項先導毒理學研究
在食蟹猴中進行了第三項先導毒理學研究。13B4 抗 MerTK mAb 以單劑量或每 3 週 (Q3W) 重複劑量靜脈內 (IV) 投予，持續 6 週。將雌性猴（n = 3/組）分配到各劑量組，終末和恢復期屍檢在第 45 研究日進行。接受單劑量的動物以 10 mg/kg 使用，而 Q3W 給藥的動物以 10 或 30 mg/kg（總計 3 次投予）投予。評估準則包括以下參數：臨床觀察、食物消耗、體重、身體檢查、眼科檢查、眼底攝影、眼壓、ERG（全視野 [ffERG] 及多焦點 [mfERG]）、光學同調斷層掃描(OCT)、臨床病理學（例如血液學、臨床化學及尿液分析）、解剖病理學、毒物動力學及抗藥物抗體量測。 結果
MerTK 係光感受器外段 (POS) 細胞周轉所必需者，且 MerTK 的持續阻斷會造成視網膜毒性（ 圖 1A）。為了評估與投予抗 MerTK mAb 相關的潛在視網膜毒性，進行了三項毒理學研究。
該等毒理學研究中之第一項，毒理學研究 1，是在 C57BL/6N 小鼠中使用小鼠替代抗 MerTK mAb 14C9 進行的。於第一項研究中，每週兩次以 0、10 和 30 mg/kg 的劑量投予小鼠 14C9 mAb，持續 4 週。在 14C9 暴露的毒物動力學曲線中觀察到曲線下面積 (AUC) 增加。此增加與劑量成正比，因為隨著劑量從 10 增加到 30 mg/kg 觀察到該增加。 於第 5 研究日發現 30 mg/kg 劑量組中的一隻雄性小鼠死亡，死因被認為與 14C9 治療無關。10 mg/kg 劑量組中的兩隻雄性小鼠和 30 mg/kg 劑量組中的一隻雄性小鼠垂死並分別在第 22 和第 18 研究日較早地實施安樂死。該等動物之死因被認為與程序有關，與 14C9 投予無關。對於存活至終末屍檢的其餘動物，屍檢樣品的分析顯示眼睛和睾丸中的 14C9 相關毒性。在該等小鼠中觀察到與 14C9 相關的外層視網膜變性，該變性由最低限度至輕度的光感受器 (PR) 空泡化、增加的 PR 層細胞性及外核層脫落組成，且發病率和嚴重程度呈劑量依賴性增加。此外，在睾丸中，在全部經 14C9 治療的雄性小鼠中皆觀察到中度至顯著的生精小管萎縮和變性（與睾丸重量降低相關），沒有任何劑量依賴性。基於此等發現，得出結論，將 14C9 mAb 以 10 和 30 mg/kg BIW 投予 C57BL/6N 小鼠 4 週會造成視網膜和睾丸毒性。
為了確定毒理學研究 1 中觀察到的視網膜病變是否與視網膜的功能受損有關，進行了後續先導毒理學研究（毒理學研究 2）。該第二項毒理學研究用 BALB/c 小鼠進行，並結合了全視野眼動電波圖 (ffERG)。於本項研究中，14C9 mAb 以 0、5 或 30 mg/kg 每週兩次或 45 mg/kg 每週三次投予，持續 4 週，之後為 6 週的恢復期。毒物動力學分析顯示，在劑量從 10 增加到 30 mg/kg BIW 和 45 mg/kg TIW 時，本研究中 14C9 暴露的 AUC 隨劑量成比例增加。
於第 15 研究日發現 30 mg/kg 劑量組中的一隻雌性小鼠死亡，死因未被認為與 14C9 治療有關。30 mg/kg 劑量組中的一隻雄性小鼠在第 21 研究日垂死並較早地實施安樂死，死因被認為與麻醉有關。對於毒理學研究 2 中存活至終末屍檢的其餘動物，臨床病理學發現僅限於受試動物的丙胺酸轉胺酶 (ALT) 基天冬胺酸轉胺酶 (AST) 水平的可逆、最低限度至輕度的升高，以及在 45 mg/kg 劑量下，球蛋白水平的最低限度升高和白蛋白/球蛋白比率降低。如 圖 1C所示，亦觀察到 14C9 相關的外層視網膜變性，該變性由最低限度到顯著的 PR 空泡化、增加的 PR 層細胞性、外核層脫落以及伴有變性或壞死的外核層之細胞性減少組成，嚴重程度呈劑量依賴性增加。在一隻對照雄性中觀察到類似的發現。如藉由 ffERG 評估者，視網膜病變與 PR 功能的降低相關，兩者都沒有在恢復期間得到解決。在全部投予 14C9 的雄性小鼠的睾丸中皆觀察到明顯的生精小管萎縮和變性，沒有任何劑量依賴性。
根據毒理學研究 2 的結果，得出結論，以 10 或 30 mg/kg BIW 或 45 mg/kg TIW 投予 BALB/c 小鼠 14C9 mAb，持續 4 週，造成不可逆的視網膜和睾丸病變以及 PR 的功能受損。在毒理學研究 1 期間，在 BALB/c 小鼠（白化品系）中觀察到的視網膜病變明顯比在 C57BL6/N 小鼠（有色品系）中觀察到的明顯更廣泛，表明對於抗 MerTK mAb 視網膜效應的敏感性可能存在與品系相關的差異。
最後，第三項毒理學研究（毒理學研究 3）使用未結合的 13B4 抗 MerTK mAb 在食蟹猴中進行，該 mAb 具有攜帶 LALAPG 突變的 hIgG1 同型。抗 MerTK mAb 以 10 mg/kg 之單劑量或每 3 週 (Q3W) 10 或 30 mg/kg 之重複劑量靜脈內 (IV) 投予，持續 6 週。將雌性猴（n = 3/組）分配到各劑量組，終末和恢復期屍檢在第 45 研究日進行。
全部動物皆存活至預定於第 45 研究日進行的屍檢。於全部劑量組中，臨床病理學參數的變化僅限於最低限度增加的 AST 和輕微增加的 ALT 水平（沒有組織學相關性），該等接受單次 10mg/kg 13B4 投予的動物中恢復到基線。在投予 13B4 ≥ 10 mg/kg Q3W 的動物中觀察到淋巴組織中與 13B4 相關的顯微發現，包括胸腺中之淋巴球的最低限度或輕微減少（與使用 30 mg/kg 的動物胸腺重量減少相關），以及在脾、腸系膜和下頜淋巴結的濾泡生發中心以及 GALT/派亞氏淋巴叢中的最低限度增加之核碎裂碎片。
如 圖 1B所示，在 30 mg/kg Q3W 下，在一隻動物的光感受器層中觀察到最低限度的巨噬細胞浸潤。對於該組，沒有觀察到光感受器損傷的證據，也沒有觀察到 ffERG、mfERG 和 OCT 的變化。此外，未觀察到 10 mg/kg Q3W 組的 ERG 變化。在兩個劑量水平皆觀察到藥效學 (PD) 效應的證據，呈現為無細胞 DN 增加和濾泡生發中心的凋亡碎片增加，可能是由於藉由駐留巨噬細胞進行的清除受損。根據毒理學研究 3 的結果，可以得出結論，將 13B4 mAb 以單次 10 mg/kg 劑量或以 10 或 30 mg/kg Q3W的重複劑量（總計投予 3 次）投予食蟹猴的耐受性良好，在接受多次劑量 30 mg/kg 13B4 之動物的淋巴組織和眼睛中發現與 13B4 相關的顯微鏡檢查結果。
根據該等毒理學研究之結果，視網膜毒性的關鍵安全風險被認為是由於對脫落的光感受器外段的 MerTK 介導之 RPE 吞噬的靶向抑制。視網膜毒性也可能由超過閾值的時間驅動，且基於現有資料，ERG 或 OCT 分析對食蟹猴和小鼠缺乏可監測性。 實例 2 ：透過工程化半胱胺酸將大 PEG 聚合物與抗 MerTK 抗體結合
本實例揭示聚合物結合之抗 MerTK 抗體的製造。 材料與方法 用於結合之 THIOMAB 抗體的製備
製造在不同位置具有工程化半胱胺酸之抗體，該抗體於 CHO 細胞中表現並透過標準方法純化，該等標準方法包括蛋白 A 親和層析，然後為粒徑篩析層析法。具有反應性順丁烯二醯亞胺部分及 40 kDa 標稱分子量的可結合 PEG 聚合物購自 NOFAmerica，目錄號為 GL2-400MA（2 臂分枝）及 ME-400MA（線性）。
THIOMAB 抗體形式中的工程化半胱胺酸通常被在哺乳動物細胞表現期間出現的半胱胺酸或麩胱甘肽阻擋。進行去阻擋的標準過程，以從工程化半胱胺酸中去除半胱胺酸或麩胱甘肽，從而結合所需部分。簡而言之，將 50-100 莫耳過量之還原劑 DTT 添加到處於 100 mM Tris pH 8.5、150 mM NaCl、2 mM EDTA 中之鹼性 pH 值為 7.5-8.5 的 10 mg/mL 抗體中，並將混合物在室溫培養約 18 小時。然後使用陽離子交換來純化抗體，以去除 DTT 以及還原的半胱胺酸和麩胱甘肽。在室溫下於 20 mM Tris pH 7 中，使用 15 莫耳過量的 DHAA 將經部分還原的抗體再氧化 2-3 小時。使用 LC-MS 評估氧化狀態，以檢查完整氧化抗體之質量並監測游離輕鏈之存在。然後藉由陽離子交換層析來純化再氧化的抗體，並與 10 mM 琥珀酸鹽 pH 5、150 mM NaCl、2 mM EDTA 一起配製。 PEG 結合物的製備
PEG 聚合物與 THIOMAB 抗體之結合如下製造。將溶解在 10 mM 琥珀酸鹽 pH 5 中的 4-6 莫耳當量 PEG 添加到 10 mg/mL 抗體溶液中，該溶液的 pH 值用 1M Hepes pH 7.2 調節至最終濃度為 100 mM Hepes pH 7.2。結合反應在室溫下進行大約 3 至 18 小時，直到達成最大的抗體與聚合物之比率。使用配備 YARRA SEC-4000 管柱之 HPLC 監測結合反應的進程，該管柱可以解析抗體與聚合物之比率為 0、1 和 2。然後使用疏水***互作用層析來純化結合反應。用 pH 5.0 的 1M 乙酸鈉將結合反應的 pH 調節至 pH 6.5，並添加終濃度為 800 mM 的硫酸銨。然後使用 ProPAC HIC-10 鍵結矽膠 10x150 mm 管柱純化結合物，並使用透析將其配製在 20 mM 醋酸組胺酸 pH 5.5、240 mM 蔗糖、0.02% Tween-20 中。慮及 PEG 在 280 nm 處不吸收，結合抗體組分的消光係數，使用 280 nm 處的 UV 吸光度來確定所配製之結合物的基於抗體的濃度。
使用配備有 YARRA SEC-4000 的 HPLC 和 0.2 M 磷酸鉀、0.25 M 氯化鉀、pH 6.2、15% 異丙醇特性化聚合物與抗體之比率和百分比聚集。使用 Charles River EndoSafe 小柱確定內毒素水平。使用配備有 Acclaim-1000 管柱的 UPLC SEC-MALS/QELS Wyatt 系統確定結合物的流體力學半徑，使用 Astra 7.1.2 軟體包處理並分析所得資料。 結合親和力確定
對於 IgG 中 14C9.C90S THIOMAB 結合物的結合親和力確定，使用 Biacore™-8K 儀器 (GE Healthcare) 進行表面電漿子共振 (SRP) 量測。簡而言之，各 IgG 變異體皆被 Series S 感測器晶片 Protein A（29127555，GE Healthcare）捕獲以達成大約 100RU，然後於 25℃ 以 50μl/min 之流速將小鼠 MerTK的 3 倍系列稀釋物（0.6 nM 至 50 nM）注入 HBS-EP 緩衝液（100 mM 4-(2-羥基乙基)-1-哌𠯤乙磺酸 (HEPES) pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05% (v/v) 界面活性劑 P20）中。使用簡單的一對一 Langmuir 結合模型（Biacore Insight 軟體版本 2.0）計算締合速率 (k on) 及解離速率 (k off)。平衡解離常數 (K D) 藉由 k off/k on比率計算得出。
對於 Fab 中 14C9.C90S_LC_K149C 系列之 THIOMAB 結合物的結合親和力確定，使用 Biacore™-T200 儀器 (GE Healthcare) 進行表面電漿子共振 (SRP) 量測。簡而言之，人 Fc 標記之小鼠 MerTK (R&D 591-MR) 被蛋白 A 感測器晶片捕獲以達成大約 50RU，然後於 25℃ 以 50μl/min 之流速將各 Fab 變異體的 3 倍連續稀釋物（0.6 nM 至 50 nM）注入 HBS-EP 緩衝液（100 mM 4-(2-羥基乙基)-1-哌𠯤乙磺酸 (HEPES) pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05% (v/v) 界面活性劑 P20）中。使用簡單的一對一 Langmuir 結合模型（BIAcore T200 評估軟體版本 2.0）計算締合速率 (k on) 及解離速率 (k off)。平衡解離常數 (K D) 藉由 k off/k on比率計算得出。 結果
假設透過聚合物之結合來增加抗體的尺寸（例如，流體力學半徑）可能會減少抗 MerTK 抗體的眼部攝取，並減少使用親本抗體觀察到的靶向眼部毒性。親水性聚合物注入 PEG 傳統上已用於增加小分子和抗體片段的全身半衰期，且最近用於增加玻璃體內投予之生物製劑的玻璃體半衰期。其基本原理為透過與 PEG 結合來增加藥物之尺寸，由於繞過全身投予之腎小球濾過截止值且繞過 IVT 的視網膜清除機制，清除顯著減少。增加抗 MerTK 抗體之尺寸可能會藉由阻止抗體穿過血液-視網膜屏障來減少眼睛處之分佈，同時保持抗體與腫瘤微環境中腫瘤相關巨噬細胞上的 MerTK 結合的能力，但尚未有系統研究解決尺寸對血液-視網膜屏障滲透的影響（del Amo 等人 (2018) Progress in Retinal and Eye Research 57:134–185）。
親水性聚合物（諸如 PEG）可以多種形式獲得，具有不同的可用尺寸、形式（線性、分枝）和用於與抗體結合的反應性部分。與其他親水性聚合物相比，PEG 已被廣泛用於臨床，並獲得了針對聚乙二醇化蛋白質及抗體片段的多項批准。選擇標稱分子量為 40 kDa 的兩種形式的 PEG（線性和 2 臂分枝形式）進行評估，因為先前資料表明 PEG 的形式會影響藥物動力學和生物分佈（Leong, S.R.等人 (2001) Cytokine16:106-119；Vugmeyster, Y. 等人 (2012) Bioconjugate chemistry23:1452-1462）。
對於鼠和人抗 MerTK 抗體兩者，使用半胱胺酸工程化 (THIOMAB) 抗體技術將位點特異性半胱胺酸工程化到抗體骨架中以用於結合。半胱胺酸-順丁烯二醯亞胺結合化學與 THIOMAB 抗體組合允許位點特異性結合，該結合能夠製造關於抗體與聚合物比率的同質產物，並能夠控制抗體與聚合物之間連結的穩定性。篩選了一組抗鼠 MerTK mIgG2a 形式的預測穩定位點，該等位點可能會轉譯為抗人 MerTK huIgG1 形式上的已知穩定位點（Ohri, R. 等人 (2018) Bioconjugate Chemistry29:473-485），其中該等位點之選擇是基於 mIgG2a 骨架和人 IgG1 骨架的序列和結構。選擇抗體之 Fab 區恆定域上的三個位點來工程化半胱胺酸，LC K183、LC K149C 和 HC T182C。
具有順丁烯二醯亞胺部分的線性和 2 臂分枝的 40 kDa PEG 聚合物皆易與 THIOMAB 抗體的去阻擋、還原的半胱胺酸反應，以在環境溫度下培養 3-18 小時後製造聚合物與抗體比率至少為 1.8 的聚合物-抗體結合物，在反應過程中觀察到小於 10% 的聚集。預期的最大聚合物與抗體比率為 2，因為各單一工程化半胱胺酸在異源二聚體抗體中出現兩次。使用 SEC-HPLC 和 YARRA SEC-4000 管柱監測 40 kDa PEG 的結合，該管柱能夠將抗體-聚合物比率為 2 和 1 的結合物與未結合的抗體分離。純化和配製後，抗體與聚合物的比率平均為 2.0，聚集率為 0%，這在抗鼠 14C9 mIgG2a 和抗人 13B4 huIgG1 抗體兩者中的不同結合位點中經常觀察到。按照該方法形成的 PEG 結合物的示意圖顯示在 圖 2中。
結合後，特性化抗 MerTK PEG 結合物的流體動力學比率。使用配備有 MALS 和 QELS 偵檢器的 UPLC 確定抗 MerTK PEG 結合物的流體力學半徑和分子量，並將樣品於 ACCLAIM-1000 SEC 管柱上以磷酸鹽緩衝生理食鹽水為流動相進行分析。觀察到抗 MerTK 14C9 抗體和 PEG 結合物的分子量與理論分子量值一致（ 表 2）。未結合抗體的流體力學半徑確定為 5 nm，與報告的值非常一致。聚乙二醇化結合物的流體力學半徑經確定為針對未結合抗體所觀察者的兩倍，與 2 臂分枝 PEG-40K 的 10.3 nm 相比，線性 PEG-40K 略大，為 10.8 nm（ 表 2）。 表 2.藉由 SEC-MALS/QELS 量測的親本抗鼠 MerTK 抗體和 THIOMAB 抗體-PEG 結合物的流體力學半徑。
14C9 抗體 / 結合物 MW (kDa) Rh (nm)
親本 14C9.C90S 149 5.1
14C9 LC K149C MC-PEG40K-線性 251 10.8
14C9 LC K149C MC-PEG40K-支鏈 250 10.3
抗 MerTK PEG 結合物的結合親和力藉由 Biacore 分析進行評估。如 圖 3A-3B所示，PEG 與 14C9 的結合在對小鼠 MerTK 胞外域 (ECD) 的結合親和力方面似乎具有適度改善（3-5 倍）。在 Fab 域上工程化半胱胺酸的不同位點之間沒有觀察到差異。此外，如 圖 4所示，當使用表面電漿子共振 (SPR) 分析結合時，觀察到對 MerTK ECD 的結合親和力適度增加（3 倍）。 結論
鼠抗 MerTK 和人抗 MerTK THIOMAB 抗體皆易結合至順丁烯二醯亞胺鍵聯之線性及 2 臂分枝 40 kDa PEG 聚合物，製造抗體與聚合物之比為 2.0 的結合物，且在經純化、配製的結合物中具有 ＜ 5% 聚集。結合物的流體力學半徑大約比未結合抗體大兩倍，且線性聚乙二醇化抗體的半徑略大於分枝形式。 實例 3 ：聚乙二醇化抗 MerTK 抗體的體外胞葬作用及巨噬細胞結合分析
本實例揭示抗 MerTK 抗體結合物對巨噬細胞介導之胞葬作用的抑制。 材料與方法 試劑
細胞激素小鼠 M-CSF 獲自 PeproTech (Rocky Hill, NJ)。來自鏈黴菌屬 ( Streptomyces sp.) 的星形孢菌素 (Staurosporine) 購自 Sigma-Aldrich (Saint Louis, MI)。pHrodo Red 琥珀醯亞胺酯 (pHrodo Red SE) 購自 Thermo Scientific, (Whaltham, MA)。 小鼠腹腔巨噬細胞
小鼠腹腔巨噬細胞 (MPM) 要麼從 Cell Biologics（Cat# C57-6032TF，Chicago, IL）獲得，要麼在內部新鮮分離。為了分離 MPM，使用了 8 周齡之 C57-BL6 小鼠。首先用 CO 2對小鼠進行安樂死，然後將 10 mL 冷 PBS（含 3% FBS）注射到每隻小鼠的腹腔中。將液體抽回同一注射器後，將收集的腹膜細胞懸液以 1,400 rpm 的速度離心 5 分鐘，並將沉澱的細胞重新懸浮在補充有 10% FBS 的 RPMI 培養基中。在溫度敏感的 Nunc UpCell 10 cm 培養皿 (Thermo Scientific, Whaltham, MA) 中，將商品化 MPM（600 萬個細胞）在補充有 10% FBS 和重組小鼠 M-CSF (30 ng/mL) 的 RPMI 培養基中培養 3 天以促進恢復。恢復後，藉由用冷 PBS 洗滌而不使用解離酶來收穫 MPM。 pHrodo 標記之凋亡 Jurkat 細胞的製備
將 Jurkat 細胞 (ATCC #TIB-152) 在補充有 10% FBS 的 RPMI 培養基中培養。藉由在室溫下用 1.0 µM 星形孢菌素處理 4 小時，收穫來自指數生長培養物的細胞並誘導細胞凋亡。然後將細胞洗滌兩次並重新懸浮在 PBS 中至密度為 1.0 x 10 6個細胞/ml。然後藉由在 1.0 µM pHrodo Red 琥珀醯亞胺酯中在黑暗中於室溫下培養 1 小時來標記凋亡細胞。標記後，用 PBS 洗滌凋亡細胞​​並進行 10 分鐘慢速離心 (750xg) 3 次。然後將細胞重新懸浮在 RPMI 培養基 + 10% FBS 中，然後用於胞葬作用檢定。 透過 IncuCyte Zoom 進行實時成像寶藏作用檢定
巨噬細胞以 4.0 x 10 4個細胞/孔的密度在 96 孔、低蒸發 Nunclon Delta 表面板 (Thermo Scientific) 上於補充有 10% FBS 的 RPMI 培養基中接種越夜。在補充有 10% FBS 的 RPMI 培養基中製備抗體的系列稀釋物，然後添加到含有分化巨噬細胞的 96 孔板中，放置 1 小時。與封閉抗體培養後，將新鮮製備的 pHrodo 標記之凋亡細胞以 8.0 x 10 5個細胞/孔的密度添加到巨噬細胞中。添加凋亡細胞後，將 96 孔板置於 IncuCyte Zoom 儀器 (Essen Biosciences; Ann Harbor, MI) 中，使用 10x 物鏡和紅色通道每 15 分鐘獲取一次圖像，持續 24-48 小時。使用 IncuCyte 基本軟體 (2016B) 量化總紅色螢光強度，並使用 Top-Hat 方法減去背景噪音。各圖像中的細胞融合也被量化，並用於標準化來自不同孔的總紅色螢光強度。將胞葬作用活性量化為（總紅色螢光強度 - 凋亡細胞的背景螢光強度）/（巨噬細胞融合），最大活性 (100%) 定義為在未處理的巨噬細胞 + 凋亡細胞的孔中獲得的值。使用在添加凋亡細胞後 4-8 小時記錄的胞葬作用來產生抑制曲線。將一式兩份或一式三份孔的胞葬作用活性繪製為抗體濃度的函數，並將資料擬合到帶有 Prism 的反曲 (sigmoidal) 模型 (Graphpad Software; La Jolla, CA)。IC 50值計算為將巨噬細胞的胞葬作用活性降低 50% 所需的測試材料濃度。 結果
THIOMAB 抗體-PEG 結合物（ 圖 2）如實例 2 中所揭示者製備。然後評估了 PEG 結合之抗 MerTK 抗體抑制小鼠腹膜巨噬細胞介導之胞葬作用的能力。全部經結合之抗體皆抑制小鼠腹膜巨噬細胞介導之胞葬作用（ 圖 5A）。特別地，PEG40K-分枝結合之 14C9 抗體在抑制胞葬作用方面顯示出與親本 mAb 相當的效力。14C9 親本抗體和 PEG 結合抗體的效力和功效總結在 圖 5B中。
選擇 14C9 LC K149C 結合物進行進一步評估。該等 14C9 PEG 抗體結合物在小鼠胞葬作用檢定中顯示出與親本抗體相當的抑制活性（ 圖 6A-6B）。分枝和線性 PEG 結合之抗體皆抑制小鼠腹膜巨噬細胞介導之胞葬作用。PEG40K-分枝結合之 14C9 抗體顯示出與親本 mAb 相當的效力，且比 PEG40K-線性結合之 14C9 抗體更具效力。藉由流式細胞分析技術確定，14C9 LC K149C 結合物亦展示出約 10 倍的 EC50 細胞結合增加（ 圖 7）。針對與鼠巨噬細胞結合而確定的 EC50 總結在 表 3中。 表 3.親本抗鼠 MerTK 抗體和 THIOMAB 抗體-PEG 結合物與原代腹膜鼠巨噬細胞上鼠 MerTK 結合。
14C9 抗體 / 結合物 EC50 (nM) 倍數變化
親本 14C9.C90S 0.2 -
14C9 LC K149C MC-PEG40K-線性 1.8 9
14C9 LC K149C MC-PEG40K-支鏈 2.7 13.5
亦進行了胞葬作用檢定以評估 14C9 Fab 結合物。如 圖 8A-8B所示，14C9 Fab 結合物以與未結合之 14C9 Fab 相似的效力抑制胞葬作用。與親本 14C9 抗體相比，對於全部 Fab 皆觀察到效力之降低。 實例 4 ：聚乙二醇化抗 MerTK 抗體的體內特徵
本實施例揭示 PEG 結合之抗 MerTK 抗體的體內評估。 材料與方法 單次高劑量研究
對於該研究，雌性 C57BL/6J 小鼠在右下腹皮下接種了 10 萬個 MC38 細胞。基於體重和腫瘤體積對動物進行分組，以確保治療前體重和起始腫瘤體積分佈相似。抗 gp120（對照抗體）、抗 MerTK 或抗體結合物透過靜脈內 (i.v) 注射以 30 mg/kg 抗體部分的劑量投予。兩天後，收集腫瘤及眼睛。
對於受體佔用率檢定，解離一半的腫瘤和眼睛以獲得單細胞懸液。細胞用活/死染料 (L10119) 和特定標記物染色，然後進行洗滌及固定步驟。然後用抗 MerTK(14C9)-AF647 染色細胞，以評估腫瘤相關巨噬細胞 (TAM) 和 RPE 上的 MerTK 受體佔用率。對於腫瘤藥效學檢定，從一半的腫瘤中分離出 RNA，並使用 qPCR 檢定來檢查基因表現。使用的抗體：抗 CD45（殖株 30-F11）、抗 CD11b（殖株 M1/70）、抗 CD11c（殖株 HL3）、抗 Ly6G（殖株 1A8）、抗 Ly6C（殖株 HK1.4）、抗 CD90.2（殖株 30-H12）、II 類抗 MHC (M5/114.15.1)、抗 F4/80 （殖株 BM8）、抗 CD24（殖株 GK1.5）、抗 CD31（殖株 390）及抗 RPE65 (401.8B11.3D9)。使用的 Taqman 探針：IFNb (Mm00439546_s1)、IFIT1 (Mm00515153_m1)、USP18 (Mm01188805_m1) 和 IRF7 (Mm00516793_g1)。 重複高劑量研究
在本研究中，於第 1 天和第 5 天，將抗 gp120（對照抗體）、抗 MerTK 或抗體結合物以 45 mg/kg 抗體部分的劑量透過靜脈注射 (IV) 投予天然（非荷瘤）雌性 C57BL/6J 小鼠。在第 7 天，收集眼睛，並如單次高劑量研究 (16-3045Y) 中所揭示者評估 RPE 上的 MerTK 佔用率。 重複低劑量研究
除了在第 1 天和第 5 天以 2.5 mg/kg 抗體部分的劑量投予抗體或抗體結合物之外，如針對重複高劑量研究所揭示者進行重複低劑量研究。在第 7 天，檢查了腫瘤相關巨噬細胞 (TAM) 上的受體佔用率和腫瘤藥效學反應。 結果
在初始研究期間，PEG 結合之 14C9 抗 MerTK 抗體以 30 mg/kg 的單劑量靜脈投予荷 MC38 腫瘤的小鼠。獲得眼睛和腫瘤樣品以評估 MerTK 受體的佔用率，以及評估腫瘤中干擾素反應的誘導。如 圖 9所示，親本抗體和 PEG 結合之抗體在腫瘤中展示出可比的干擾素 β (IFNb) 和干擾素刺激基因 (ISG) 的誘導。PEG 結合之抗體略微地保持視網膜色素上皮細胞 (RPE) 上的 MerTK 佔用率，但保持在腫瘤相關巨噬細胞 (TAM) 上的佔用率（ 圖 10A-10C）。此外，平均螢光強度 (MFI) 表明部分佔用，與使用親本抗體時的大約 27% 相比，使用抗體結合物時保留了大約 70% 或更多的未佔用 MerTK。使用親本抗體時，大約 20% 的 RPE 保持了大約 30% 的 MerTK 受體的佔用率，而使用抗體結合物時，至少 90% 的 RPE 保持了至少 70% 的 MerTK 受體的佔用率。
在初始的單劑量研究之後，進行了重複的高劑量研究，其目的為評估在用高劑量的抗 MerTK mAb (14C9) 或 Ab 結合物重複治療後，非荷瘤小鼠中的 RPE 上的 MerTK 佔用率。在該研究中，在研究的第 1 天和第 5 天，以 45 mg/kg 的劑量藉由靜脈注射投予非荷瘤小鼠抗 gp120（對照抗體）、抗 MerTK 或抗體結合物。在第 7 天，收集眼睛樣品以評估 RPE 上的 MerTK 佔用率。
在投予重複高劑量抗體後，PEG 結合之抗體減少了 RPE 上的 MerTK 佔用率（ 圖 11A-11B）。在投予 45mg/kg 之重複劑量後，親本抗體幾乎完全佔用了 RPE 上的 MerTK。相比之下，抗體結合物保持了至少 60% 的游離 MerTK+ RPE，而 PEG-40K 分枝 (PEG-40K-B) 保持了大約 90% 的游離 MerTK+ RPE。在荷有功能性或未佔用的 MerTK（游離 MerTK+ 細胞）的 RPE 上，與親本抗體相比，使用抗體結合物時，未佔用的 MerTK 的水平得以改善（ 圖 11C）。PEG-40K-分枝結合物相對較好，大約 90% 的 RPE 保持了大約 57% 的 MerTK 受體的佔用率。如上所述，在單次高劑量 (30 mg/kg) 投予後，全部抗體結合物皆使得至少 90% 的 RPE 保持了至少 70% 的 MerTK 受體的佔用率。
最後，在重複的低劑量研究中評估了 PEG 結合之抗體，其中在第 1 天和第 5 天以 2.5 mg/kg 投予荷瘤小鼠。在重複低劑量投予後，與親本 Ab 相比，PEG40K-線性和 PEG40K-分枝結合之抗體皆表明在 TAM 上的 MerTK 佔用率較低（ 圖 12A-12C）。使用低劑量 (2.5 mg/kg x2) 的親本抗體時，大約 31% 的 TAM 保留了大約 35.8% 的游離 MerTK 受體，而大約 69% 的 TAM 被完全佔用。相比之下，PEG40K-線性和 PEG-40K-分枝結合之抗體使得大約 73% 的 TAM 保留了大約 59% 的游離 MerTK 受體，而大約 27% 的 TAM 被完全佔用。在低重複劑量下，親本抗體和 PEG 結合之抗體在腫瘤中展示出可比之 ISG 誘導（ 圖 13）。
儘管出於清楚理解之目的藉由圖示及實例的方式略微詳細地闡述本揭露，但該等說明及實例不應解釋為限制本揭露之範圍。本文引用的所有專利和科學文獻的揭示內容均以引用的方式明確納入其全部內容。
圖 1A-1C描繪了使用抗 MerTK 抗體的靶向眼部毒性。 圖 1A為視網膜色素上皮 (RPE) 的示意圖，描繪了 MerTK 在 RPE 頂膜上的表現。RPE 中抗 MerTK 抗體對 MerTK 的阻擋造成無法吞噬脫落的光感受器外段 (POS)，從而導致碎片積累以及光感受器的最終變性和損失。 圖 1B顯示在每 3 週一次投予 30 mg/kg 13B4 抗 MerTK mAb 持續 6 週（總共 3 個劑量）後，食蟹猴的外光感受器 (PR) 層中的視網膜巨噬細胞浸潤。影像中標記了外核層 (ONL)。蘇木精和曙紅 (HE)，200X。 圖 1C顯示在每週兩次投予 30 mg/kg 14C9 抗 MerTK mAb 持續 4 週（總共 8 個劑量）後，Balb/c 小鼠的視網膜毒性。與對照組相比，接受 30 mg/kg 14C9 的動物具有顯著的外視網膜變性，其特徵是 PR 空泡化，PR 層的細胞性增加，以及 ONL 的細胞性減少、變性和壞死。蘇木精和曙紅 (HE)，200X。 圖 2為抗 MerTK 半胱胺酸工程化抗體-PEG 聚合物結合物的示意圖，該等結合物包含 40 kDa 線性 PEG（左）及 40 kDa 2 臂支化 PEG（右）。 圖 3A 和 3B顯示藉由 Biacore SPR 對 14C9 半胱胺酸工程化抗體-PEG 結合物結合的分析。藉由 Biacore SPR 評估了 14C9.C90S 上總計 6 個 THIOMAB 結合物，包括 3 個位點（LC_K149C、HC_T182C、LC_K183C）上的 2 個聚乙二醇化部分（線性 PEG40K 和分枝 PEG40K），以及未經處理的或對照處理的 14C9.C90S 針對小鼠 MerTK 的 IgG 結合親和力。 圖 3A顯示線性 PEG40K 結合的14C9 THIOMAB 的結合分析結果，而 圖 3B顯示分枝 PEG40K 結合的14C9 THIOMAB的結果。結果表明，全部 PEG 結合的 14C9.C90S IgG 變體似乎在與小鼠 MerTK 的結合親和力方面有適度的改善（3-5 倍），在結合位點之間沒有差異。 圖 4顯示 14C9 Fab 結合物的結合分析結果。藉由 Biacore SPR 評估了 Fab 中 14C9.C90S LC K149C 系列 THIOMAB 結合物（線性 PEG40K 和分枝 PEG40K）針對表面結合小鼠 MerTK 的結合親和力。全部變異體針對小鼠 MerTK 的結合親和力皆展示出約 3 倍的下降，在結合位點之間沒有差異。 圖 5A-5B顯示 PEG40 結合的 14C9 抗 MerTK 抗體和親本 mAb 在小鼠腹膜巨噬細胞介導之胞葬作用 (efferocytosis) 中的抑制活性的比較。 圖 5A顯示用 PEG 結合的 14C9 抗體進行的胞葬作用檢定的結果。每一圖代表對具有不同結合位點之抗體的分析：輕鏈上的 K149C（上左）、輕鏈上的 K183C（上右）或重鏈上的 T182C（下）。 圖 5B總結了 14C9 抗體及結合物在胞葬作用檢定中的效力和功效。 圖 6A-6B顯示 PEG40 結合的 14C9 LC K149C 抗體和親本 mAb 在小鼠腹膜巨噬細胞介導之胞葬作用中的抑制活性的比較。 圖 6A顯示使用商品化（左）和內部分離的小鼠腹膜巨噬細胞（右），用 PEG 結合之 14C9 LC K149C 抗體進行的胞葬作用檢定的結果。 圖 6B總結了 14C9 抗體及 14C9 LC K149C 結合物在胞葬作用檢定中的效力和功效。 圖 7顯示藉由 FACS 量測的抗鼠 MerTK 親本抗體及 THIOMAB 抗體-PEG 結合物與原代鼠腹膜巨噬細胞的結合。 圖 8A 和 8B顯示 PEG40 結合之 14C9 與親本 mAb 和 Fab 在小鼠腹膜巨噬細胞介導之胞葬作用中的抑制活性的比較。 圖 8A顯示用 PEG 結合的 14C9 Fab 進行的胞葬作用檢定的結果。 圖 8B總結了 14C9 mAb、Fab 及 Fab PEG 結合物的效力和功效。 圖 9顯示在單次高劑量 (30mg/kg) PEG 結合的 14C9 抗體或親本 mAb（n = 8/組）後檢查 MerTK 佔用率及 I 型 IFN 信號傳遞的結果。顯示了對腫瘤中 IFNb 及干擾素刺激基因 (ISG) 誘導的分析。 圖 10A-10C顯示在單次高劑量 (30mg/kg) 抗體後抗 MerTK 抗體結合物對腫瘤相關巨噬細胞 (TAM) 及視網膜色素上皮細胞 (RPE) 中 MerTK 佔用率的分析結果。 圖 10A顯示對 TAM 和 RPE（n = 8/組）的佔用分析的結果，而 圖 10B總結了佔用結果。 圖 10C顯示游離 MerTK+ RPE 細胞上未被佔用的 MerTK 的水平。MFI（平均螢光強度）分析表明 MerTK 的部分佔用。 圖 11A-11D顯示在用抗 MerTK 抗體結合物重複高劑量治療（在第 1 天和第 5 天，45 mg/kg）後 RPE 上的 MerTK 佔用率。 圖 11A顯示 MerTK 的佔用水平，而 圖 11B總結了觀察到的佔用。 圖 11C顯示與抗 MerTK 抗體結合物培養後游離 MerTK+ RPE 細胞上未被佔用的 MerTK 的水平。 圖 11D總結了抗 MerTK 抗體結合物的分子量。 圖 12A-12C顯示在用抗 MerTK 抗體結合物低重複劑量治療（在第 1 天和第 5 天，2.5 mg/kg）後對腫瘤相關巨噬細胞 (TAM) 中的 MerTK 佔用率的分析。 圖 12A顯示對 TAM 的佔用分析的結果。 圖 12B總結了佔用結果。 圖 12C顯示游離 MerTK+ TAM 細胞上未被佔用的 MerTK 的水平。 圖 13顯示在用 PEG 結合的抗 MerTK 抗體進行低重複劑量 (2.5mg/kg) 後對腫瘤中 IFNb 及干擾素刺激基因 (ISG) 的誘導。 
<![CDATA[<110> 美商建南德克公司 (GENENTECH INC.)]]>
          <![CDATA[<120> PEG 結合抗 MerTK 抗體及其使用方法]]>
          <![CDATA[<130> 14639-20517.42]]>
          <![CDATA[<140> 尚未分配]]>
          <![CDATA[<141> 同上]]>
          <![CDATA[<150> US 63/094,197]]>
          <![CDATA[<151> 2020-10-20]]>
          <![CDATA[<160> 42]]>
          <![CDATA[<170> 用於 Windows 之 FastSEQ，4.0 版]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Ser Tyr Ala Met Gly
           1               5  
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          Ile Ile Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 8]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Asp Pro Gly Val Ser Ser Asn Leu
           1               5              
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Gly Leu Ala
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 5]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser
           1               5          
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Gln Ala Thr Tyr Tyr Ser Ser Asn Ser Val Ala
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Ala Asn Thr Met Asn
           1               5  
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Ile Phe Thr Ala Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Val Asn Gly
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Ser Gly Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Phe Asn Ile
           1               5                  10          
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Leu Ala
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Ala Ala Ser Ile Leu Ala Ser
           1               5          
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 12]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Gln Cys Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Phe Leu Gly Pro
           1               5                  10          
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 116]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Pro Gly Val Ser Ser Asn Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser
                  115     
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 109]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Gly
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ala Thr Tyr Tyr Ser Ser Asn
                          85                  90                  95      
          Ser Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 116]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Phe Cys Ala
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Pro Gly Val Ser Ser Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser
                  115     
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 109]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Gly
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ala Thr Tyr Tyr Ser Ser Asn
                          85                  90                  95      
          Ser Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 113]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
           1               5                  10                  15      
          Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
                      20                  25                  30          
          Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
                  35                  40                  45              
          Ile Ile Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Met Pro
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Pro
                          85                  90                  95      
          Gly Val Ser Ser Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
                      100                 105                 110         
          Ser
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 109]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Gly
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
          65                  70                  75                  80  
          Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ala Thr Tyr Tyr Ser Ser Asn
                          85                  90                  95      
          Ser Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 117]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
           1               5                  10                  15      
          Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ala Asn Thr
                      20                  25                  30          
          Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
                  35                  40                  45              
          Ile Phe Thr Ala Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Val Asn Gly
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
          65                  70                  75                  80  
          Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ser Gly
                          85                  90                  95      
          Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Leu
                  115         
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 110]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Asp Pro Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ala Ala Ser Ile Leu Ala Ser Glu Ile Ser Ser Arg Phe Lys Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
          65                  70                  75                  80  
          Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Ser Tyr Gly Ser Leu
                          85                  90                  95      
          Phe Leu Gly Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
                      100                 105                 110 
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 445]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Pro Gly Val Ser Ser Asn Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 445]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
                  35                  40                  45              
          Gly Ile Ile Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Pro Gly Val Ser Ser Asn Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 216]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Gly
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ala Thr Tyr Tyr Ser Ser Asn
                          85                  90                  95      
          Ser Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
                      100                 105                 110         
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
              130                 135                 140                 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
                      180                 185                 190         
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
              210                 215     
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 440]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
                      100                 105                 110         
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
                  115                 120                 125             
          Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
              130                 135                 140                 
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                          165                 170                 175     
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
                      180                 185                 190         
          Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
                  195                 200                 205             
          Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
              210                 215                 220                 
          Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
          225                 230                 235                 240 
          Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
                          245                 250                 255     
          Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
                      260                 265                 270         
          Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
                  275                 280                 285             
          Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
              290                 295                 300                 
          Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
          305                 310                 315                 320 
          Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
                          325                 330                 335     
          Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
                      340                 345                 350         
          Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                  355                 360                 365             
          Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
              370                 375                 380                 
          Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
          385                 390                 395                 400 
          Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
                          405                 410                 415     
          Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
                      420                 425                 430         
          Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
                  435                 440 
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 214]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
           1               5                  10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys
              210                 
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 447]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
           1               5                  10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
              210                 215                 220                 
          Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
                      260                 265                 270         
          Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 218]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
           1               5                  10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
                      20                  25                  30          
          Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
                          85                  90                  95      
          Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
              210                 215             
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His
           1               5                  10  
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
           1               5                  10                  15      
          Lys Gly
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
           1               5          
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 118]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser
                  115             
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 108]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                      100                 105             
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 447]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
                  115                 120                 125             
          Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
              130                 135                 140                 
          Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
                      180                 185                 190         
          Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
                  195                 200                 205             
          Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
              210                 215                 220                 
          His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
                      260                 265                 270         
          Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 214]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
           1               5                  10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys
              210                 
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 449]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
                      20                  25                  30          
          Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                  35                  40                  45              
          Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
                  355                 360                 365             
          Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
                  435                 440                 445             
          Gly
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<211> 216]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
           1               5                  10                  15      
          Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
                      20                  25                  30          
          Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
                  35                  40                  45              
          Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
          65                  70                  75                  80  
          Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
                          85                  90                  95      
          Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
                      100                 105                 110         
          Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
                  115                 120                 125             
          Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
              130                 135                 140                 
          Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
          145                 150                 155                 160 
          Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
                          165                 170                 175     
          Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
                      180                 185                 190         
          Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
                  195                 200                 205             
          Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
              210                 215     
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 450]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
           1               5                  10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
                      20                  25                  30          
          Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                  35                  40                  45              
          Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
                  115                 120                 125             
          Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
          145                 150                 155                 160 
          Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                          165                 170                 175     
          Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
                      180                 185                 190         
          Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
                  195                 200                 205             
          Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
              210                 215                 220                 
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
          225                 230                 235                 240 
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                          245                 250                 255     
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
                      260                 265                 270         
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
                  275                 280                 285             
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
              290                 295                 300                 
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
                          325                 330                 335     
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
                      340                 345                 350         
          Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
                  355                 360                 365             
          Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
              370                 375                 380                 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
          385                 390                 395                 400 
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
                          405                 410                 415     
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
                      420                 425                 430         
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
                  435                 440                 445             
          Pro Gly
              450 
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 215]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成構建體]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
           1               5                  10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
                          85                  90                  95      
          Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
              210                 215 
          <![CDATA[<210> 42]]>
          <![CDATA[<211> 999]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 42]]>
          Met Gly Pro Ala Pro Leu Pro Leu Leu Leu Gly Leu Phe Leu Pro Ala
           1               5                  10                  15      
          Leu Trp Arg Arg Ala Ile Thr Glu Ala Arg Glu Glu Ala Lys Pro Tyr
                      20                  25                  30          
          Pro Leu Phe Pro Gly Pro Phe Pro Gly Ser Leu Gln Thr Asp His Thr
                  35                  40                  45              
          Pro Leu Leu Ser Leu Pro His Ala Ser Gly Tyr Gln Pro Ala Leu Met
              50                  55                  60                  
          Phe Ser Pro Thr Gln Pro Gly Arg Pro His Thr Gly Asn Val Ala Ile
          65                  70                  75                  80  
          Pro Gln Val Thr Ser Val Glu Ser Lys Pro Leu Pro Pro Leu Ala Phe
                          85                  90                  95      
          Lys His Thr Val Gly His Ile Ile Leu Ser Glu His Lys Gly Val Lys
                      100                 105                 110         
          Phe Asn Cys Ser Ile Ser Val Pro Asn Ile Tyr Gln Asp Thr Thr Ile
                  115                 120                 125             
          Ser Trp Trp Lys Asp Gly Lys Glu Leu Leu Gly Ala His His Ala Ile
              130                 135                 140                 
          Thr Gln Phe Tyr Pro Asp Asp Glu Val Thr Ala Ile Ile Ala Ser Phe
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ile Thr Ser Val Gln Arg Ser Asp Asn Gly Ser Tyr Ile Cys Lys
                          165                 170                 175     
          Met Lys Ile Asn Asn Glu Glu Ile Val Ser Asp Pro Ile Tyr Ile Glu
                      180                 185                 190         
          Val Gln Gly Leu Pro His Phe Thr Lys Gln Pro Glu Ser Met Asn Val
                  195                 200                 205             
          Thr Arg Asn Thr Ala Phe Asn Leu Thr Cys Gln Ala Val Gly Pro Pro
              210                 215                 220                 
          Glu Pro Val Asn Ile Phe Trp Val Gln Asn Ser Ser Arg Val Asn Glu
          225                 230                 235                 240 
          Gln Pro Glu Lys Ser Pro Ser Val Leu Thr Val Pro Gly Leu Thr Glu
                          245                 250                 255     
          Met Ala Val Phe Ser Cys Glu Ala His Asn Asp Lys Gly Leu Thr Val
                      260                 265                 270         
          Ser Lys Gly Val Gln Ile Asn Ile Lys Ala Ile Pro Ser Pro Pro Thr
                  275                 280                 285             
          Glu Val Ser Ile Arg Asn Ser Thr Ala His Ser Ile Leu Ile Ser Trp
              290                 295                 300                 
          Val Pro Gly Phe Asp Gly Tyr Ser Pro Phe Arg Asn Cys Ser Ile Gln
          305                 310                 315                 320 
          Val Lys Glu Ala Asp Pro Leu Ser Asn Gly Ser Val Met Ile Phe Asn
                          325                 330                 335     
          Thr Ser Ala Leu Pro His Leu Tyr Gln Ile Lys Gln Leu Gln Ala Leu
                      340                 345                 350         
          Ala Asn Tyr Ser Ile Gly Val Ser Cys Met Asn Glu Ile Gly Trp Ser
                  355                 360                 365             
          Ala Val Ser Pro Trp Ile Leu Ala Ser Thr Thr Glu Gly Ala Pro Ser
              370                 375                 380                 
          Val Ala Pro Leu Asn Val Thr Val Phe Leu Asn Glu Ser Ser Asp Asn
          385                 390                 395                 400 
          Val Asp Ile Arg Trp Met Lys Pro Pro Thr Lys Gln Gln Asp Gly Glu
                          405                 410                 415     
          Leu Val Gly Tyr Arg Ile Ser His Val Trp Gln Ser Ala Gly Ile Ser
                      420                 425                 430         
          Lys Glu Leu Leu Glu Glu Val Gly Gln Asn Gly Ser Arg Ala Arg Ile
                  435                 440                 445             
          Ser Val Gln Val His Asn Ala Thr Cys Thr Val Arg Ile Ala Ala Val
              450                 455                 460                 
          Thr Arg Gly Gly Val Gly Pro Phe Ser Asp Pro Val Lys Ile Phe Ile
          465                 470                 475                 480 
          Pro Ala His Gly Trp Val Asp Tyr Ala Pro Ser Ser Thr Pro Ala Pro
                          485                 490                 495     
          Gly Asn Ala Asp Pro Val Leu Ile Ile Phe Gly Cys Phe Cys Gly Phe
                      500                 505                 510         
          Ile Leu Ile Gly Leu Ile Leu Tyr Ile Ser Leu Ala Ile Arg Lys Arg
                  515                 520                 525             
          Val Gln Glu Thr Lys Phe Gly Asn Ala Phe Thr Glu Glu Asp Ser Glu
              530                 535                 540                 
          Leu Val Val Asn Tyr Ile Ala Lys Lys Ser Phe Cys Arg Arg Ala Ile
          545                 550                 555                 560 
          Glu Leu Thr Leu His Ser Leu Gly Val Ser Glu Glu Leu Gln Asn Lys
                          565                 570                 575     
          Leu Glu Asp Val Val Ile Asp Arg Asn Leu Leu Ile Leu Gly Lys Ile
                      580                 585                 590         
          Leu Gly Glu Gly Glu Phe Gly Ser Val Met Glu Gly Asn Leu Lys Gln
                  595                 600                 605             
          Glu Asp Gly Thr Ser Leu Lys Val Ala Val Lys Thr Met Lys Leu Asp
              610                 615                 620                 
          Asn Ser Ser Gln Arg Glu Ile Glu Glu Phe Leu Ser Glu Ala Ala Cys
          625                 630                 635                 640 
          Met Lys Asp Phe Ser His Pro Asn Val Ile Arg Leu Leu Gly Val Cys
                          645                 650                 655     
          Ile Glu Met Ser Ser Gln Gly Ile Pro Lys Pro Met Val Ile Leu Pro
                      660                 665                 670         
          Phe Met Lys Tyr Gly Asp Leu His Thr Tyr Leu Leu Tyr Ser Arg Leu
                  675                 680                 685             
          Glu Thr Gly Pro Lys His Ile Pro Leu Gln Thr Leu Leu Lys Phe Met
              690                 695                 700                 
          Val Asp Ile Ala Leu Gly Met Glu Tyr Leu Ser Asn Arg Asn Phe Leu
          705                 710                 715                 720 
          His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Arg Asp Asp Met Thr
                          725                 730                 735     
          Val Cys Val Ala Asp Phe Gly Leu Ser Lys Lys Ile Tyr Ser Gly Asp
                      740                 745                 750         
          Tyr Tyr Arg Gln Gly Arg Ile Ala Lys Met Pro Val Lys Trp Ile Ala
                  755                 760                 765             
          Ile Glu Ser Leu Ala Asp Arg Val Tyr Thr Ser Lys Ser Asp Val Trp
              770                 775                 780                 
          Ala Phe Gly Val Thr Met Trp Glu Ile Ala Thr Arg Gly Met Thr Pro
          785                 790                 795                 800 
          Tyr Pro Gly Val Gln Asn His Glu Met Tyr Asp Tyr Leu Leu His Gly
                          805                 810                 815     
          His Arg Leu Lys Gln Pro Glu Asp Cys Leu Asp Glu Leu Tyr Glu Ile
                      820                 825                 830         
          Met Tyr Ser Cys Trp Arg Thr Asp Pro Leu Asp Arg Pro Thr Phe Ser
                  835                 840                 845             
          Val Leu Arg Leu Gln Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ser Leu Pro Asp Val
              850                 855                 860                 
          Arg Asn Gln Ala Asp Val Ile Tyr Val Asn Thr Gln Leu Leu Glu Ser
          865                 870                 875                 880 
          Ser Glu Gly Leu Ala Gln Gly Ser Thr Leu Ala Pro Leu Asp Leu Asn
                          885                 890                 895     
          Ile Asp Pro Asp Ser Ile Ile Ala Ser Cys Thr Pro Arg Ala Ala Ile
                      900                 905                 910         
          Ser Val Val Thr Ala Glu Val His Asp Ser Lys Pro His Glu Gly Arg
                  915                 920                 925             
          Tyr Ile Leu Asn Gly Gly Ser Glu Glu Trp Glu Asp Leu Thr Ser Ala
              930                 935                 940                 
          Pro Ser Ala Ala Val Thr Ala Glu Lys Asn Ser Val Leu Pro Gly Glu
          945                 950                 955                 960 
          Arg Leu Val Arg Asn Gly Val Ser Trp Ser His Ser Ser Met Leu Pro
                          965                 970                 975     
          Leu Gly Ser Ser Leu Pro Asp Glu Leu Leu Phe Ala Asp Asp Ser Ser
                      980                 985                 990         
          Glu Gly Ser Glu Val Leu Met
                  995
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028

Claims (69)

  1. 一種與 MerTK 結合之聚乙二醇化抗體，其中該抗體結合至一個或多個聚乙二醇 (PEG) 聚合物；其中該 (等) PEG 聚合物中之各者在工程化半胱胺酸殘基結合至該抗體的重鏈或輕鏈； 且其中該抗體包含： (1) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有 SYAMG (SEQ ID NO: 1) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 2) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 DPGVSSNL (SEQ ID NO: 3) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 4) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 GASKLAS (SEQ ID NO: 5) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 6) 之胺基酸序列的 CDR-L3；或 (2) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有 ANTMN (SEQ ID NO: 7) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 8) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 9) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 10) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 AASILAS (SEQ ID NO: 11) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 12) 之胺基酸序列的 CDR-L3。
  2. 如請求項 1 之抗體，其中該 VH 域包含與 EVQLVESGEGLVQPG GSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；及/或該 VL 域包含與 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQ NIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列。
  3. 如請求項 2 之抗體，其中該 VH 域包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLR LSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列；且該 VL 域包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列。
  4. 如請求項 2 或請求項 3 之抗體，其中該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 21) 之胺基酸序列。
  5. 如請求項 2 或請求項 3 之抗體，其中該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 22) 之胺基酸序列。
  6. 如請求項 2 至 5 中任一項之抗體，其中該輕鏈包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 23) 之胺基酸序列。
  7. 如請求項 1 至 6 中任一項之抗體，其中該抗體結合至一個或兩個 PEG 聚合物。
  8. 如請求項 1 至 7 中任一項之抗體，其中該 (等) PEG 聚合物為線性 PEG 聚合物。
  9. 如請求項 1 至 7 中任一項之抗體，其中該 (等) PEG 聚合物為分枝 PEG 聚合物。
  10. 如請求項 9 之抗體，其中該 (等) 分枝 PEG 聚合物包含 2 個分枝。
  11. 如請求項 1 至 10 中任一項之抗體，其中該聚乙二醇化抗體具有大於約 6 nm 的流體力學半徑。
  12. 如請求項 1 至 11 中任一項之抗體，其中該聚乙二醇化抗體具有大於或等於約 10 nm 的流體力學半徑。
  13. 如請求項 1 至 12 中任一項之抗體，其中該聚乙二醇化抗體具有介於約 9 nm 至約 11 nm 之間的流體力學半徑。
  14. 如請求項 1 至 13 中任一項之抗體，其中該 (等) PEG 聚合物各自具有介於約 10 kDa 至約 40 kDa 之間的分子量。
  15. 如請求項 1 至 14 中任一項之抗體，其中該 (等) PEG 聚合物中之各者經由順丁烯二醯亞胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至該抗體的重鏈或輕鏈。
  16. 如請求項 1 至 14 中任一項之抗體，其中該 (等) PEG 聚合物中之各者經由碘乙醯胺-半胱胺酸結合在工程化半胱胺酸殘基結合至該抗體的重鏈或輕鏈。
  17. 如請求項 1 至 16 中任一項之抗體，其中該工程化半胱胺酸殘基係選自由以下所組成之群組：該輕鏈的 K149C、該輕鏈的 K183C、該重鏈的 T186C 及該重鏈的 Y373C，該輕鏈的編號是根據 Kabat 且該重鏈的編號是根據 EU 索引。
  18. 如請求項 17 之抗體，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條輕鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 K149C 工程化半胱胺酸。
  19. 如請求項 17 之抗體，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條輕鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 K183C 工程化半胱胺酸。
  20. 如請求項 17 之抗體，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條重鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 T186C 工程化半胱胺酸。
  21. 如請求項 17 之抗體，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條重鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 Y373C 工程化半胱胺酸。
  22. 一種製造與 MerTK 結合之聚乙二醇化抗體的方法，該方法包含將包含一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基的抗體與包含順丁烯二醯亞胺部分的一個或多個聚乙二醇 (PEG) 聚合物，在適合該 (等) PEG 聚合物中之各者經由硫醚鍵聯而結合至該抗體的工程化半胱胺酸殘基的條件下接觸；其中該抗體包含： (1) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有 SYAMG (SEQ ID NO: 1) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 2) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 DPGVSSNL (SEQ ID NO: 3) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 4) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 GASKLAS (SEQ ID NO: 5) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 6) 之胺基酸序列的 CDR-L3；或 (2) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有 ANTMN (SEQ ID NO: 7) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 8) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 9) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 10) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 AASILAS (SEQ ID NO: 11) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 12) 之胺基酸序列的 CDR-L3。
  23. 如請求項 22 之方法，其中該抗體的該一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基係在 pH 7.0 至 7.5 之間與該一個或多個 PEG 聚合物的該順丁烯二醯亞胺部分接觸。
  24. 一種製造與 MerTK 結合之聚乙二醇化抗體的方法，該方法包含將包含一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基的抗體與包含碘乙醯胺部分的一個或多個聚乙二醇 (PEG) 聚合物，在適合該 (等) PEG 聚合物中之各者經由硫醚鍵聯而結合至該抗體的工程化半胱胺酸殘基的條件下接觸；其中該抗體包含： (1) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有 SYAMG (SEQ ID NO: 1) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 2) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 DPGVSSNL (SEQ ID NO: 3) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 4) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 GASKLAS (SEQ ID NO: 5) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 6) 之胺基酸序列的 CDR-L3；或 (2) 重鏈可變域 (VH)，其包含 (a) 含有 ANTMN (SEQ ID NO: 7) 之胺基酸序列的 CDR-H1、(b) 含有 IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 8) 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (c) 含有 SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 9) 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及輕鏈可變域 (VL)，其包含 (d) 含有 QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 10) 之胺基酸序列的 CDR-L1、(e) 含有 AASILAS (SEQ ID NO: 11) 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (f) 含有 QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 12) 之胺基酸序列的 CDR-L3。
  25. 如請求項 22 至 24 中任一項之方法，其中該 (等) PEG 聚合物以每抗體 2.0 個聚合物的比率結合至該抗體。
  26. 如請求項 22 至 25 中任一項之方法，其中在將該抗體與該 (等) PEG 聚合物接觸前，該等游離工程化半胱胺酸殘基中之各者係以半胱胺酸或麩胱甘肽部分阻斷(block)；且該方法進一步包含將該工程化半胱胺酸殘基去阻斷(deblock)。
  27. 如請求項 22 至 26 中任一項之方法，其進一步包含在將該抗體與該 (等) PEG 聚合物接觸後，從未結合的抗體及PEG 聚合物純化該聚乙二醇化抗體。
  28. 如請求項 27 之方法，其中該聚乙二醇化抗體藉由疏水***互作用層析法純化。
  29. 如請求項 22 至 28 中任一項之方法，其中該 VH 域包含與 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列；及/或該 VL 域包含與 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列具有至少 95% 序列同一性的序列。
  30. 如請求項 29 之方法，其中該 VH 域包含 EVQLVESGEGLVQPGG SLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13) 之胺基酸序列；且該 VL 域包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 14) 之胺基酸序列。
  31. 如請求項 29 或請求項 30 之方法，其中該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 21) 之胺基酸序列。
  32. 如請求項 29 或請求項 30 之方法，其中該重鏈包含 EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 22) 之胺基酸序列。
  33. 如請求項 29 至 32 中任一項之方法，其中該輕鏈包含 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 23) 之胺基酸序列。
  34. 如請求項 22 至 33 中任一項之方法，其中該 (等) PEG 聚合物為線性 PEG 聚合物。
  35. 如請求項 22 至 33 中任一項之方法，其中該 (等) PEG 聚合物為分枝 PEG 聚合物。
  36. 如請求項 35 之方法，其中該 (等) 分枝 PEG 聚合物包含 2 個分枝。
  37. 如請求項 22 至 36 中任一項之方法，其中該聚乙二醇化抗體具有大於約 6 nm 的流體力學半徑。
  38. 如請求項 22 至 37 中任一項之方法，其中該聚乙二醇化抗體具有大於或等於約 10 nm 的流體力學半徑。
  39. 如請求項 22 至 38 中任一項之方法，其中該聚乙二醇化抗體具有介於約 9 nm 至約 11 nm 之間的流體力學半徑。
  40. 如請求項 22 至 39 中任一項之方法，其中每一個該 (等) PEG 聚合物具有介於約 10 kDa 至約 40 kDa 之間的分子量。
  41. 如請求項 22 至 40 中任一項之方法，其中該一個或多個游離工程化半胱胺酸殘基係選自由以下所組成之群組：該輕鏈的 K149C、該輕鏈的 K183C、該重鏈的 T186C 及該重鏈的 Y373C，該輕鏈的編號是根據 Kabat 且該重鏈的編號是根據 EU 索引。
  42. 如請求項 41 之方法，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條輕鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 K149C 工程化半胱胺酸。
  43. 如請求項 41 之方法，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條輕鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 K183C 工程化半胱胺酸。
  44. 如請求項 41 之方法，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條重鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 T186C 工程化半胱胺酸。
  45. 如請求項 41 之方法，其中該抗體包含兩條重鏈、兩條輕鏈及兩個 PEG 聚合物；且其中該抗體的兩條重鏈包含結合至該兩個 PEG 聚合物中之一者的 Y373C 工程化半胱胺酸。
  46. 一種藉由如請求項 22 至 45 中任一項之方法所製造之與 MerTK 結合的聚乙二醇化抗體。
  47. 一種醫藥組成物，其包含如請求項 1 至 21 及 46 中任一項之聚乙二醇化抗體及醫藥上可接受之載劑。
  48. 如請求項 47 之醫藥組成物，其進一步包含另外的治療劑。
  49. 如請求項 48 之醫藥組成物，其中該另外的治療劑係選自以下中之一者或多者：他莫昔芬 (tamoxifen)、利妥唑 (letrozole)、伊析美斯坦 (exemestane)、阿那曲唑 (anastrozole)、抗癌妥 (irinotecan)、西妥昔單抗 (cetuximab)、氟維司群 (fulvestrant)、溫諾平 (vinorelbine)、得舒緩 (erlotinib)、貝伐珠單抗 (bevacizumab)、長春新鹼 (vincristine)、甲磺酸伊馬替尼 (imatinib mesylate)、索拉非尼 (sorafenib)、拉帕替尼 (lapatinib)、曲妥珠單抗 (trastuzumab)、順鉑 (cisplatin)、吉西他濱 (gemcitabine)、胺甲喋呤 (methotrexate)、長春花鹼 (vinblastine)、卡鉑 (carboplatin)、紫杉醇 (paclitaxel)、5-氟尿嘧啶 (5-fluorouracil)、阿黴素 (doxorubicin)、硼替佐米 (bortezomib)、黴法蘭 (melphalan)、強體松 (prednisone) 及多西紫杉醇 (docetaxel)。
  50. 如請求項 48 之醫藥組成物，其中該另外的治療劑為免疫查核點抑制劑。
  51. 如請求項 1 至 21 及 46 中任一項之聚乙二醇化抗體或如請求項 47 至 50 中任一項之醫藥組成物，其用為藥物。
  52. 如請求項 1 至 21 及 46 中任一項之聚乙二醇化抗體或如請求項 47 至 50 中任一項之醫藥組成物，其用於治療癌症。
  53. 一種如請求項 1 至 21 及 46 中任一項之聚乙二醇化抗體或如請求項 47 至 50 中任一項之醫藥組成物在製備用於治療癌症之藥物中的用途。
  54. 一種如請求項 1 至 21 及 46 中任一項之聚乙二醇化抗體或如請求項 47 至 50 中任一項之醫藥組成物在製備用於減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞的清除之藥物中的用途。
  55. 一種治療罹患癌症的個體之方法，其包含投予該個體有效量之如請求項 1 至 21 及 46 中任一項之聚乙二醇化抗體或如請求項 47 至 50 中任一項之醫藥組成物。
  56. 如請求項 55 之方法，其中相較於投予未聚乙二醇化之與 MerTK 結合的抗體，投予該聚乙二醇化抗體使得該個體的視網膜毒性減少。
  57. 如請求項 55 或請求項 56 之方法，其進一步包含投予該個體另外的治療劑。
  58. 如請求項 57 之方法，其中該另外的治療劑係選自以下中之一者或多者：他莫昔芬、利妥唑、伊析美斯坦、阿那曲唑、抗癌妥、西妥昔單抗、氟維司群、溫諾平、得舒緩、貝伐珠單抗、長春新鹼、甲磺酸伊馬替尼、索拉非尼、拉帕替尼、曲妥珠單抗、順鉑、吉西他濱、胺甲喋呤、長春花鹼、卡鉑、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、阿黴素、硼替佐米、黴法蘭、強體松及多西紫杉醇。
  59. 如請求項 57 之方法，其中該另外的治療劑為免疫查核點抑制劑。
  60. 如請求項 59 之方法，其中該免疫查核點抑制劑係選自由以下所組成之群組：細胞毒性 T 淋巴球相關蛋白 4 (CTLA4) 抑制劑、計畫性细胞死亡蛋白 1 (PD-1) 結合拮抗劑及計畫性死亡配體 1 (PDL1) 結合拮抗劑。
  61. 如請求項 59 之方法，其中該免疫查核點抑制劑為 PDL1 結合拮抗劑。
  62. 如請求項 61 之方法，其中該 PDL1 結合拮抗劑為抗 PDL1 抗體。
  63. 如請求項 62 之方法，其中該抗 PDL1 抗體為阿替利珠單抗 (atezolizumab)。
  64. 如請求項 59 至 63 中任一項之方法，其進一步包含投予該個體有效量之另外的化學治療劑。
  65. 如請求項 55 至 64 中任一項之方法，其中該癌症為大腸癌。
  66. 如請求項 55 至 64 中任一項之方法，其中該癌症係選自由以下所組成之群組：大腸癌、泌尿上皮癌、非小細胞肺癌、三陰性乳癌、小細胞肺癌、肝細胞癌及黑色素瘤。
  67. 一種減少個體中 MerTK 介導的對凋亡細胞的清除之方法，其包含投予該個體有效量之如請求項 1 至 21 及 46 中任一項之聚乙二醇化抗體或如請求項 47 至 50 中任一項之醫藥組成物，以減少 MerTK 介導的對凋亡細胞的清除。
  68. 如請求項 67 之方法，其中相較於投予未聚乙二醇化之與 MerTK 結合的抗體，投予該聚乙二醇化抗體使得該個體的視網膜毒性減少。
  69. 如請求項 67 或請求項 68 之方法，其中該對凋亡細胞的清除減少約 1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9 或 8.0 倍。
TW110138708A 2020-10-20 2021-10-19 Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法 TW202233671A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063094197P 2020-10-20 2020-10-20
US63/094,197 2020-10-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202233671A true TW202233671A (zh) 2022-09-01

Family

ID=78725615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110138708A TW202233671A (zh) 2020-10-20 2021-10-19 Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法

Country Status (3)

Country Link
AR (1) AR123855A1 (zh)
TW (1) TW202233671A (zh)
WO (1) WO2022086957A1 (zh)

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US830930A (en) 1905-11-22 1906-09-11 E & T Fairbanks & Co Weighing-scale.
US1624821A (en) 1926-03-26 1927-04-12 Sidney C Ashton Oil-well pump
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
JP2919890B2 (ja) 1988-11-11 1999-07-19 メディカル リサーチ カウンスル 単一ドメインリガンド、そのリガンドからなる受容体、その製造方法、ならびにそのリガンドおよび受容体の使用
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
WO1993006217A1 (en) 1991-09-19 1993-04-01 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab')2 ANTIBODIES
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
EP1997894B1 (en) 1992-02-06 2011-03-30 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
WO1994011026A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
ES2246069T3 (es) 1997-05-02 2006-02-01 Genentech, Inc. Procedimiento de preparacion de anticuerpos multiespecificos que tienen componentes comunes y multimericos.
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
WO1998058964A1 (en) 1997-06-24 1998-12-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
ES2375931T3 (es) 1997-12-05 2012-03-07 The Scripps Research Institute Humanización de anticuerpo murino.
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
EP2261229A3 (en) 1998-04-20 2011-03-23 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2001007611A2 (en) 1999-07-26 2001-02-01 Genentech, Inc. Novel polynucleotides and method for the use thereof
MXPA02003456A (es) 1999-10-04 2002-10-23 Medicago Inc Metodo para regular la transcripcion de genes foraneos.
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
JP2003531588A (ja) 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
EP1423510A4 (en) 2001-08-03 2005-06-01 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED CELL CYTOTOXICITY DEPENDENT OF ANTIBODIES
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
BR0309145A (pt) 2002-04-09 2005-02-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk Células das quais o genoma é modificado
WO2003085119A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia
US20060121562A1 (en) 2002-06-28 2006-06-08 Jiing-Ren Liou Human receptor tyrosine kinase mertk
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
PL212899B1 (pl) 2002-12-16 2012-12-31 Genentech Inc Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku
NZ603037A (en) 2003-01-22 2014-05-30 Roche Glycart Ag Fusion constructs and use of same to produce antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
JP5128935B2 (ja) 2004-03-31 2013-01-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化抗ＴＧＦ−β抗体
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
DK1871805T3 (da) 2005-02-07 2019-12-02 Roche Glycart Ag Antigenbindende molekyler der binder egfr, vektorer der koder derfor, og anvendelser deraf
DK2161336T4 (en) 2005-05-09 2017-04-24 Ono Pharmaceutical Co Human monoclonal antibodies for programmed death 1 (PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapies
EP1907424B1 (en) 2005-07-01 2015-07-29 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1)
US20080044455A1 (en) 2006-08-21 2008-02-21 Chaim Welczer Tonsillitus Treatment
PL2059533T3 (pl) 2006-08-30 2013-04-30 Genentech Inc Przeciwciała wieloswoiste
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US8592562B2 (en) 2008-01-07 2013-11-26 Amgen Inc. Method for making antibody Fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
RU2531758C2 (ru) 2008-02-11 2014-10-27 Куретек Лтд. Моноклональные антитела для лечения опухолей
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
US20110223188A1 (en) 2008-08-25 2011-09-15 Solomon Langermann Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer
PL2376535T3 (pl) 2008-12-09 2017-09-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała ANTY-PD-L1 i ich zastosowanie do nasilania działania limfocytów T
EP2225932B1 (en) 2009-03-03 2013-01-23 Institut de Recherche pour le Développement ( IRD) Method for enhancing market garden plant growth
BRPI1014089A2 (pt) 2009-04-02 2016-04-19 Roche Glycart Ag anticorpos multiespecíficos que compreendem anticorpos de comprimento completo e fragmentos fab de cadeia simples
EP2417156B1 (en) 2009-04-07 2015-02-11 Roche Glycart AG Trivalent, bispecific antibodies
CA2761233A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Tri- or tetraspecific antibodies
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
CN101606769A (zh) 2009-07-15 2009-12-23 陈德芳 一种宝石连接结构
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
SI3279215T1 (sl) 2009-11-24 2020-07-31 Medimmune Limited Usmerjena vezavna sredstva proti B7-H1
KR101839163B1 (ko) 2010-06-08 2018-03-15 제넨테크, 인크. 시스테인 조작된 항체 및 접합체
US8907053B2 (en) 2010-06-25 2014-12-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunosuppression modulating compounds
DK2691417T3 (en) 2011-03-29 2018-11-19 Roche Glycart Ag ANTIBODY FC VARIANTS
KR101970025B1 (ko) 2011-04-20 2019-04-17 메디뮨 엘엘씨 Ｂ7-ｈ1 및 ｐｄ-1과 결합하는 항체 및 다른 분자들
US9096642B2 (en) 2011-06-08 2015-08-04 Aurigene Discovery Technologies Limited Therapeutic compounds for immunomodulation
RS57744B1 (sr) 2011-08-23 2018-12-31 Roche Glycart Ag Bispecifični antigen vezujući molekuli
CN202382282U (zh) 2011-09-30 2012-08-15 张伟生 一种节能燃气灶
JP6152120B2 (ja) 2012-02-15 2017-06-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｆｃ受容体に基づくアフィニティークロマトグラフィー
CN104159911A (zh) 2012-03-07 2014-11-19 奥瑞基尼探索技术有限公司 作为免疫调节剂的模拟肽化合物
EP3553086A1 (en) 2012-05-31 2019-10-16 Sorrento Therapeutics Inc. Antigen binding proteins that bind pd-l1
PL2992012T3 (pl) 2013-04-29 2019-12-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Zmodyfikowane ludzkie przeciwciała wiążące FcRn i sposoby ich zastosowania
WO2014179664A2 (en) 2013-05-02 2014-11-06 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (pd-1)
CN111423511B (zh) 2013-05-31 2024-02-23 索伦托药业有限公司 与pd-1结合的抗原结合蛋白
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
CN103650585B (zh) 2013-07-08 2017-11-21 华为技术有限公司 一种小区切换的方法和装置
JP2016532711A (ja) 2013-09-06 2016-10-20 オーリジーン ディスカバリー テクノロジーズ リミテッドＡｕｒｉｇｅｎｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ 免疫調節剤としての１，３，４−オキサジアゾール及び１，３，４−チアジアゾールの誘導体
PL3363790T3 (pl) 2013-09-06 2020-07-27 Aurigene Discovery Technologies Limited Pochodne 1,2,4-oksadiazolu jako immunomodulatory
WO2015036927A1 (en) 2013-09-10 2015-03-19 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunomodulating peptidomimetic derivatives
MX2016003292A (es) 2013-09-13 2016-06-24 Beigene Ltd Anticuerpos anti-muerte programada 1 y su uso como terapeuticos y diagnosticos.
WO2015044900A1 (en) 2013-09-27 2015-04-02 Aurigene Discovery Technologies Limited Therapeutic immunomodulating compounds
SI3081576T1 (sl) 2013-12-12 2019-12-31 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd., Protitelo PD-1, njegov antigen-vezavni fragment in njegova medicinska uporaba
CA2931113C (en) 2013-12-20 2023-07-11 Genentech, Inc. Antibodies comprising an antigen-binding site that specifically binds to two different epitopes and methods of making them
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
EP3102605B1 (en) 2014-02-04 2018-11-14 Pfizer Inc Combination of a pd-1 antagonist and a vegfr inhibitor for treating cancer
ES2783026T3 (es) 2014-02-04 2020-09-16 Pfizer Combinación de un antagonista de PD-1 y un agonista de 4-1BB para el tratamiento de cáncer
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
AU2015283802A1 (en) 2014-06-30 2017-02-16 Acn 616 222 309 Pty Ltd System and method for rendering buildings in three dimensions
WO2016016299A1 (en) 2014-07-29 2016-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
CA2955676A1 (en) 2014-08-25 2016-03-03 Pfizer Inc. Combination of a pd-1 antagonist and an alk inhibitor for treating cancer
KR20170052600A (ko) 2014-09-12 2017-05-12 제넨테크, 인크. 시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트
CN107001478B (zh) 2014-10-14 2022-01-11 诺华股份有限公司 针对pd-l1的抗体分子及其用途
US10949507B2 (en) 2014-10-17 2021-03-16 Vulpecula, Llc. Methods, systems, and computer program products for web browsing
BR112017011536A2 (pt) 2014-12-02 2018-02-27 Celgene Corp terapias de combinação
CN107787332B (zh) 2015-04-24 2022-09-09 豪夫迈·罗氏有限公司 多特异性抗原结合蛋白
CN114364703A (zh) * 2019-04-19 2022-04-15 豪夫迈·罗氏有限公司 抗mertk抗体及它们的使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022086957A1 (en) 2022-04-28
AR123855A1 (es) 2023-01-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI825431B (zh) FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法
CN106999580B (zh) 对fap和dr5特异性的双特异性抗体和化疗剂的组合疗法
KR20190074300A (ko) 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체에 의한 치료를 위한 투약
CN105658237B (zh) 抗Ly6E抗体及使用方法
US20220135701A1 (en) Anti-mertk antibodies and their methods of use
AU2018366650A1 (en) Single-domain antibodies and variants thereof against PD-L1
JP2022516881A (ja) 抗ｃｔｌａ４抗体およびその使用方法
TW201609805A (zh) 結合ｅｇｆｒ及ｍｅｔ之多功能抗體
KR20220131260A (ko) 항tigit항체, 이를 포함하는 다중 특이적 항체 및 그 사용 방법
WO2017208210A1 (en) Anti-mcam antibodies and associated methods of use
KR20180021875A (ko) 다중특이적 결합 단백질
KR20220131261A (ko) 항tigit항체, 이를 포함하는 다중 특이적 항체 및 그 사용 방법
CN109563160B (zh) 抗聚泛素多特异性抗体
KR20210100668A (ko) 항-CD79b 면역접합체, 알킬화제 및 항-CD20 항체를 포함하는 미만성 큰 B-세포 림프종의 조합 요법
TW202233671A (zh) Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法
KR20210111785A (ko) Flt3 항진제 항체 및 이의 용도
RU2793296C1 (ru) Лечение рака биспецифическими антителами к her2xcd3 в комбинации с моноклональным антителом к her2
JP7472056B2 (ja) ＦｃＲＨ５に対するヒト化親和性成熟抗体及び使用方法
US20220098325A1 (en) Treatment of cancer with her2xcd3 bispecific antibodies in combination with anti-her2 mab
WO2022116877A1 (en) ANTI-GARP/TGFβ ANTIBODIES AND METHODS OF USE
CN117425678A (zh) 抗gpc3抗体、多特异性抗体和使用方法
JP2024515201A (ja) 抗ｇｐｃ３抗体及び使用方法
TW202408562A (zh) 治療性蛋白質之醫藥組成物及使用方法
TW202243689A (zh) 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體及抗ｃｄ７８ｂ抗體藥物結合物的組合治療之給藥