CN114364703A - 抗mertk抗体及它们的使用方法 - Google Patents

抗mertk抗体及它们的使用方法 Download PDF

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Abstract

本公开提供抗MerTK抗体及其使用方法。所述方法包括施用抗MerTK抗体或其免疫缀合物。

Description

抗MERTK抗体及它们的使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年4月19日提交的美国临时专利申请序列号62/836,580和2019年4月23日提交的美国临时专利申请序列号62/890,858的优先权权益，该美国临时专利申请各自据此以引用方式整体并入。
以ASCII文本文件提交序列表
以下提交的ASCII文本文件的内容以引用方式整体并入本文：序列表的计算机可读格式(CRF)(文件名：146392047940SEQLIST.TXT，记录日期：2020年3月30日，大小：136KB)。
技术领域
本公开涉及抗MerTK抗体及其使用方法。
背景技术
当前，大多数癌症免疫肿瘤学(IO)疗法关注于通过阻断作为免疫检查点的抑制性通路来调节T细胞活性(免疫***的适应性分支)。然而，这些疗法所触发的长期应答仅限于癌症患者的亚群体。相对较低的应答率是由肿瘤微环境中的各种免疫抑制机制引起的。先天性免疫***是有效免疫应答的组成部分。先天性免疫细胞在适应性免疫应答的起始及后续方向中起至关重要的作用。靶向先天性免疫***可对适应性免疫肿瘤学疗法予以补充(Mullard,A.,Nat.Rev.Drug Discov.,17:3-5(2018))。
先天性免疫***的巨噬细胞在各种类型的实体瘤中大量存在，且其可导致对基于T细胞的疗法的相对较低的应答率。该巨噬细胞是能够执行多种功能(包括吞噬作用)的多功能细胞。巨噬细胞是专业吞噬细胞，其高度专攻于去除濒死细胞或死亡细胞以及细胞碎片。据估计，人体中每天有数十亿的细胞死亡。但是，由于吞噬细胞的快速且有效的清除，故很少在正常生理条件下的组织中发现凋亡细胞。在稳态中，凋亡细胞在细胞死亡早期在丧失质膜完整性之前被去除。因此，一般而言，凋亡在免疫学上是沉默的。在实体瘤中，不受控的肿瘤生长通常伴随由于缺氧和代谢压力所导致的细胞死亡增加。为逃避免疫监督，肿瘤利用凋亡的非免疫原性性质。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)主动去除濒死的肿瘤细胞，以避免向免疫***发出警报。
已显示MerTK在凋亡细胞的清除中起作用。因此，使用MerTK抑制剂降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除是治疗癌症的有吸引力的治疗方法。已有对现有抗MerTK抗体的描述，但其可能不适于治疗性开发。例如，White等人(在美国癌症研究协会(AmericanAssociation for Cancer Research)年会上提出的“MERTK-Specific Antibodies ThatHave Therapeutic Antitumor Activity in Mice Disrupt the Integrity of theRetinal Pigmented Epithelium in Cynomolgus Monkeys”；2019年3月31日；Atlanta，GA)描述两种抗MerTK抗体：其中一种以较高的亲和力结合至人MerTK(8.7×10-11M；SRF1)，并且另一种以较低的亲和力(4.4×109)结合至人MerTK，但与鼠类MerTK交叉反应(SRF2)。这些抗体显示在小鼠模型中与抗PD-L1抗体组合可抑制各种MerTK功能并且抑制肿瘤生长。然而，发现两种抗体均促进食蟹猴中的视网膜毒性。因此，两种抗体均不可接受作为治疗候选物。这些发现强调在开发具有可接受安全性概况的有效治疗候选物中检查多种因素而非仅检查抗体亲和力的重要性。
因此，业内仍需要用于治疗、稳定、预防和/或延迟多种癌症的发展的最佳疗法。特别地，需要具有最佳结合特性(例如结合和解离速率)以及期望生物效应的抗MerTK抗体。
本文所引用的所有参考文献，包括专利申请书、专利出版物和UniProtKB/Swiss-Prot登录号均是以全文引用的方式并入本文中，如同明确地且个别地指示将每一单独参考文献以引用方式并入一般。
发明内容
本文描述满足用于治疗、稳定、预防和/或延迟各种癌症的发展的优化疗法所需的抗MerTK抗体及其使用方法。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中该抗体降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。在一些实施例中，该抗体降低MerTK介导的吞噬细胞对凋亡细胞的清除。在一些实施例中，吞噬细胞是巨噬细胞。在示例性实施例中，巨噬细胞是肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施例中，如在室温在凋亡细胞清除测定中所测量的，对凋亡细胞的清除降低。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体降低配体介导的MerTK信号传导。在一些实施例中，抗体诱导促炎应答，包括但不限于I型IFN应答。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施例中，抗体是结合至MerTK的抗体片段。在一些实施例中，抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域或免疫球蛋白样结构域。
在示例性实施例中，本公开的抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:83的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQID NO:83的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL。
在一方面，本公开提供结合至包含抗体的MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:85的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:68的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的轻链。
在一方面，本公开提供结合至包含抗体的MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ IDNO:69的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:70的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:70的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:72的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:73的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:115的氨基酸序列的轻链。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH和含有SEQID NO:74的氨基酸序列的VL。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH和含有SEQID NO:75的氨基酸序列的VL。
在示例性实施例中，本公开的抗MerTK抗体结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:42的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:77的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:97的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:98的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:79的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:108的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:99的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ IDNO:80的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:109的氨基酸序列的重链。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的轻链。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:54的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:81的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域的抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:101的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL。在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体是全长IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在某些实施例中，抗体是全长IgG1抗体。在某些实施例中，抗体包含LALAPG突变。在一些实施例中，抗体包含轻链可变区中的Q2和L4残基以及重链可变区中的I48、G49和K71残基。在一些实施例中，抗体包含轻链可变区中的L4和F87以及重链可变区中的V24、I48、G49和K71。在一些实施例中，抗体包含轻链可变区中的L4和P43以及重链可变区中的K71。在一些实施例中，抗体包含重链可变区中的G49和V78残基。
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体在25℃以≤100nM的解离常数(Kd)结合至人MerTK。在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体在25℃以≤100nM的解离常数(Kd)结合至食蟹猴MerTK。在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体在25℃以≤10nM的解离常数(Kd)结合至小鼠MerTK。在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体在25℃以≤10nM的解离常数(Kd)结合至大鼠MerTK。在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体在25℃以≤10nM、≤5nM或≤2nM的解离常数(Kd)结合至人MerTK。
在一方面，本公开提供与参考抗体竞争结合至MerTK的经分离抗体。此类参考抗体包括：包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL的抗体；以及包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL的抗体。在一些实施例中，经分离抗体结合至人MerTK。在一些实施例中，参考抗体是Y323。
在一方面，本公开提供竞争结合至MerTK上的相同表位的经分离抗体作为参考抗体。此类参考抗体包括：包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL的抗体；以及包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH和含有SEQ IDNO:82的氨基酸序列的VL的抗体。在一些实施例中，经分离抗体结合至人MerTK。在一些实施例中，参考抗体是Y323。
在一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的轻链。在一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的轻链。在一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQ IDNO:105的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链。在一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的轻链。在一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:115的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQID NO:108的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链。在仍另一方面，本公开提供结合至MerTK的经分离抗体，其中抗体包含含有SEQ ID NO:109的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。在具体实施例中，抗MerTK抗体降低MerTK介导的吞噬细胞对凋亡细胞的清除。在某些实施例中，吞噬细胞是巨噬细胞。在具体实施例中，巨噬细胞是肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施例中，如在室温在凋亡细胞清除测定中所测量，对凋亡细胞的清除降低。在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体增加血液或血浆中的循环肿瘤DNA(ctDNA)。在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体增加血液或血浆中的无细胞DNA(cfDNA)。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK是单克隆抗体。在某些实施例中，抗MerTK抗体是人源化抗体或嵌合抗体。在某些实施例中，抗MerTK抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在某些实施例中，抗MerTK抗体是结合MerTK的抗体片段。在某些实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域或免疫球蛋白样结构域。在某些实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。在某些实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域。
在一方面，本公开提供经分离核酸，其编码本文所述的任一抗MerTK抗体。在另一方面，本公开提供载体，其包括编码本文所述的任一抗MerTK抗体的核酸。在更进一步方面，本公开提供宿主细胞，其含有适于表达编码本文所述的任一抗MerTK抗体的核酸的载体。
本文进一步提供产生本公开的抗MerTK抗体的方法，其包括在适于表达抗MerTK抗体的条件下培养含有编码该抗体的核酸的宿主细胞。在一些实施例中，该方法进一步包括从细胞培养物回收抗MerTK抗体。
在一方面，本公开涉及免疫缀合物，其包括与细胞毒性剂缀合的本文所提供的抗MerTK抗体。在另一方面，本公开涉及药物制剂，其包括上文所述抗MerTK抗体中的任一者和药用载体。在另一方面，本公开涉及药物制剂，其包括上文所述抗MerTK免疫缀合物中的任一者和药用载体。
在一方面，本公开提供如上文所述的抗MerTK抗体或免疫缀合物，其用作药物。在一些实施例中，用途是治疗癌症。在一些实施例中，用途是降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
本文进一步提供如上文所述的抗MerTK抗体或免疫缀合物的用途，其用于制造药物。在一些实施例中，该药物用于治疗癌症。在一些实施例中，癌症表达功能性STING、功能性Cx43和功能性cGAS多肽。在一些实施例中，癌症包含表达功能性STING多肽的肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性cGAS多肽的肿瘤细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性Cx43多肽的肿瘤细胞。在某些实施例中，癌症是结肠癌。在一些实施例中，该药物用于降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
在一些实施例中，用途可进一步包括附加疗法或施用有效量的附加治疗剂。在一些实施例中，该附加疗法选自以下项中的一者或多者：他莫西芬(tamoxifen)、来曲唑(letrozole)、依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、伊立替康(irinotecan)、西妥昔单抗(cetuximab)、氟维司群(fulvestrant)、长春瑞滨(vinorelbine)、厄洛替尼(erlotinib)、贝伐单抗(bevacizumab)、长春新碱(vincristine)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)、索拉非尼(sorafenib)、拉帕替尼(lapatinib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、顺铂(cisplatin)、吉西他滨(gemcitabine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、长春碱(vinblastine)、卡铂(carboplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、5-氟尿嘧啶、阿霉素(doxorubicin)、硼替佐米(bortezomib)、美法仑(melphalan)、***(prednisone)和多西他赛(docetaxel)。在一些实施例中，附加治疗剂是免疫检查点抑制剂。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂选自以下项中的一者或多者：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制剂、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)结合拮抗剂或程序性死亡配体1(PDL1)结合拮抗剂。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是PDL1结合拮抗剂。在示例性实施例中，PDL1结合拮抗剂是抗PDL1抗体。在一些此类实施例中，抗PDL1抗体是阿特珠单抗(atezolizumab)。在一些实施例中，药物进一步与有效量的化疗剂组合使用。
在另一方面，本文提供用于治疗个体的癌症或延迟其进展的方法，该方法包括向个体施用有效量的如本公开中所述的抗MerTK抗体或其免疫缀合物。在一些实施例中，癌症表达功能性STING、功能性Cx43和功能性cGAS多肽。在一些实施例中，癌症包含表达功能性STING多肽的肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性cGAS多肽的肿瘤细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性Cx43多肽的肿瘤细胞。在某些实施例中，癌症是结肠癌。
在一些实施例中，方法可进一步包括附加疗法或施用有效量的附加治疗剂。在一些实施例中，该附加疗法选自以下项中的一者或多者：他莫西芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、厄洛替尼、贝伐单抗、长春新碱、甲磺酸伊马替尼、索拉非尼、拉帕替尼、曲妥珠单抗、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、长春碱、卡铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、阿霉素、硼替佐米、美法仑、***和多西他赛。
在一些实施例中，附加治疗剂是免疫检查点抑制剂。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂选自以下项中的一者或多者：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制剂、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)结合拮抗剂或程序性死亡配体1(PDL1)结合拮抗剂。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是PDL1结合拮抗剂。在示例性实施例中，PDL1结合拮抗剂是抗PDL1抗体。在一些此类实施例中，抗PDL1抗体是阿特珠单抗。在一些实施例中，该方法可进一步包括向个体施用有效量的附加化疗剂。
在另一方面，本文提供降低个体中MerTK介导的对凋亡细胞清除的方法，该方法包括向个体施用有效量的如本公开中所述的抗MerTK抗体或其免疫缀合物以降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。在一些实施例中，对凋亡细胞的清除降低约1-10倍、1-8倍、1-5倍、1-4倍、1-3倍、1-2倍、2-10倍、2-8倍、2-5倍、2-4倍、2-3倍、3-10倍、3-8倍、3-5倍或3-4倍，或降低约1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。
应理解，可将本文所述各个实施例的一个、一些或全部性质加以组合以形成本公开的其他实施例。本公开的这些和其他方面将对本领域的任一技术人员显而易见。通过下文的详细说明来进一步描述本公开的这些和其他实施例。
附图说明
图1A和图1B：通过PCR扩增在兔中产生的每个MerTK特异性抗体的轻链和重链可变区，且将其克隆至表达载体中以进行纯化和测序。将轻链可变区(图1A)和重链可变区(图1B)的氨基酸序列进行比对。将所引用的残基编号与Kabat等人所定义的序列匹配，且对CDR序列加下划线。SEQ ID NO如下：Rbt8F4(SEQ ID NO:65)、Rbt9E3.FN(SEQ ID NO:66)、Rbt10C3(SEQ ID NO:69)、Rbt10F7(SEQ ID NO:71)、Rbt11G11(SEQ ID NO:76)、Rbt12H4(SEQ ID NO:77)、Rbt13B4(SEQ ID NO:78)、Rbt13D8(SEQ ID NO:74)、Rbt14C9(SEQ ID NO:81)、Rbt18G7(SEQ ID NO:82)和Rbt22C4(SEQ ID NO:75)。图1B中的SEQ ID NO如下：Rbt8F4(SEQ ID NO:83)、Rbt9E3.FN(SEQ ID NO:84)、Rbt10C3(SEQ ID NO:87)、Rbt10F7(SEQ IDNO:90)、Rbt11G11(SEQ ID NO:95)、Rbt12H4(SEQ ID NO:96)、Rbt13B4(SEQ ID NO:97)、Rbt13D8(SEQ ID NO:93)、Rbt14C9(SEQ ID NO:100)、Rbt18G7(SEQ ID NO:101)和Rbt22C4(SEQ ID NO:94)。
图2A、图2B、图2C和图2D：选择抗体10F7、9E3、13B4和10C3进行人源化。将抗体10F7在人源化之前、人源化阶段1之后(.v1)和人源化阶段2之后(.v16)的轻链和重链可变区的氨基酸序列进行比对(图2A)。将抗体9E3在人源化之前、人源化阶段1之后(.v1)和人源化阶段2之后(.v16)的轻链和重链可变区的氨基酸序列进行比对(图2B)。将抗体13B4在人源化之前、人源化阶段1之后(.v1)和人源化阶段2之后(.v16)的轻链和重链可变区的氨基酸序列进行比对(图2C)。将抗体10C3在人源化之前、人源化阶段1之后(.v1)和人源化阶段2之后(.v14)的轻链和重链可变区的氨基酸序列进行比对(图2D)。将所引用的残基编号与Kabat等人所定义的序列匹配，且对CDR序列加下划线。轻链序列的SEQ ID NO如下：Rbt10F7(SEQID NO:71)、h10F7.v1(SEQ ID NO:72)、h10F7.v16(SEQ ID NO:73)、Rbt9E3.FN(SEQ ID NO:66)、h9E3.FN.v1(SEQ ID NO:67)、h9E3.FN.v16(SEQ ID NO:68)、Rbt13B4(SEQ ID NO:78)、h13B4.v1(SEQ ID NO:79)、h13B4.v16(SEQ ID NO:80)、Rbt10C3(SEQ ID NO:69)、h10C3.v1和h10C3.v14(SEQ ID NO:70)。图2A至图2D中重链序列的SEQ ID NO如下：Rbt10F7(SEQ IDNO:90)、h10F7.v1(SEQ ID NO:91)、h10F7.v16(SEQ ID NO:92)、Rbt9E3.FN(SEQ ID NO:84)、h9E3.FN.v1(SEQ ID NO:85)、h9E3.FN.v16(SEQ ID NO:86)、Rbt13B4(SEQ ID NO:97)、h13B4.v1(SEQ ID NO:98)、h13B4.v16(SEQ ID NO:99)、Rbt10C3(SEQ ID NO:87)、h10C3.v1(SEQ ID NO:88)和h10C3.v14(SEQ ID NO:89)。
图3：使用表位分箱(Epitope binning)来确定每个抗MerTK抗体的表位结构域特异性。针对小鼠MerTK产生的抗体8F4、22C4和13D8以及针对人MerTK产生的抗体10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4和13D8相互竞争结合。针对小鼠MerTK产生的抗体12H4、18G7、14C9和11G11以及针对人MerTK产生的抗体13B4、12H4、18G7和11G11相互竞争。如下文实例中进一步描述，抗体10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4和13D8结合至MerTK的纤连蛋白样结构域，且抗体13B4、12H4、18G7和11G11结合至MerTK的Ig样结构域。
图4A、图4B、图4C、图4D和图4E：实施胞葬作用测定以评估抗MerTK抗体的体外吞噬作用抑制活性。抗MerTK抗体抑制从三个不同供体分离的人巨噬细胞的吞噬活性(图4A至图4C)。抗MerTK抗体h13B4.v16(13B4完全人源化)(一种Ig结构域结合抗体)抑制人巨噬细胞的吞噬作用的功效为抗MerTK抗体h10F7.v16(10F7完全人源化)(一种纤连蛋白结构域结合抗体)的5.2倍(图4D)。抗MerTK抗体14C9mIgG2a LALAPG抑制小鼠巨噬细胞的吞噬作用的功效为抗MerTK抗体h10F7.v16(10F7完全人源化)的4.8倍(图4E)。
图5A、图5B和图5C：实施对凋亡细胞的清除测定以评估抗MerTK抗体的体内活性。在Dex治疗后8小时，凋亡细胞累积，且大部分24小时清除(图5A)。在Dex治疗后24小时，抗MerTK(克隆14C9，mIgG2a，LALAPG)阻断胸腺中对凋亡细胞的清除，而对照抗体抗gp120(mIgG2a，LALAPG)不阻断(图5B)。相对于抗gp120对照，抗MerTK抗体阻断对凋亡细胞的清除(图5C)。
图6A、图6B、图6C和图6D：在MC-38同基因肿瘤模型中实施肿瘤效能研究以确定抗MerTK抗体是否影响肿瘤生长。测量每个治疗组的各个肿瘤大小(图6A和图6B；每条线代表单一肿瘤)和平均肿瘤大小(图6C和图6D)随时间的变化。在肿瘤体积追踪图中，灰线代表截至数据收集日仍处于研究中的动物的肿瘤大小(图6A和图6B)。红线代表处以安乐死且从研究移除的具有溃烂或进展肿瘤的动物(图6A和图6B)。红色水平虚线指示从治疗开始肿瘤体积的倍增，而绿色水平虚线代表可测量的最小肿瘤体积(图6A和图6B)。在绿色虚线下方区域中的具有肿瘤的动物视为已具有完全应答。抗gp120与抗PDL1抗体的治疗组合并没有在很大程度上抑制肿瘤生长。然而，将抗PDL1与抗MerTK抗体组合的治疗则展现增强的抗肿瘤活性(图6A至图6D)。
图7A、图7B和图7C：抗MerTK抗体阻断MerTK依赖性胞葬作用的示意图(图7A)。实施体外胞葬作用测定以评估抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗的吞噬作用抑制效应。与经对照抗体抗gp120(mIgG2a LALAPG)处理的巨噬细胞(黑色)相比，经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体处理的腹腔巨噬细胞(绿色)展现出降低大约8倍的对凋亡胸腺细胞(红色)的吞噬清除(图7B)。实施体内凋亡细胞清除测定以确定抗MerTK治疗对胸腺中凋亡细胞的清除的效应。在利用***(dexamethasone，Dex)诱导胸腺细胞凋亡后24小时，与经对照抗体抗gp120(mIgG2a LALAPG)治疗的小鼠(黑色)相比，经抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)抗体治疗的小鼠累积大约6倍多的凋亡胸腺细胞(红色)(图7C)。
图8A、图8B、图8C、图8D和图8E：通过测量与配体hGAS6-Fc一起培育的巨噬细胞中的pAKT水平来执行对抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗对配体介导的MerTK信号传导的效应进行定量的体外测定(EC50＝约84pM)。利用渐增浓度的抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)抗体处理J774A.1巨噬细胞阻断配体介导的MerTK信号传导，如与经同种型对照抗体处理的巨噬细胞相比，经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)处理的巨噬细胞中pAKT的水平更低所证明(图8A)。实施凋亡细胞清除测定以评估Dex对胸腺细胞的体内效应。在Dex治疗后8小时，凋亡胸腺细胞累积，且大部分24小时清除(图8B)。使用荧光显微法对MC38肿瘤切片内MerTK蛋白的分布进行成像。MerTK蛋白与CD68(肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的标志物)共定位，这指示MerTK在TAM中特异性地表达(图8C)。在经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体染色的Mertk-/-组织切片中未观察到背景信号。(图8C)。使用来自癌症基因组图谱(TheCancer Genome Atlas，TCGA)的表达数据来确定MerTK表达的分布。与其他免疫细胞类型相比，MerTK表达展现出更大的与TAM丰度的相关性(图8D)。实施胞葬作用测定以评估抗MerTK14C9(mIgG2a LALAPG)抗体对TAM(TAM，绿色)体外吞噬凋亡胸腺细胞(AC，红色)的抑制效应。抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体抑制从MC38肿瘤分离的TAM的吞噬活性(图8E)。
图9A、图9B、图9C、图9D和图9E：评估抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗对MC38 TAM的基因表达模式的效应的RNA测序实验。抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗引起TAM中基因表达的显著变化(图9A)。实施基因集合富集分析(GSEA)以揭示应答于利用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗而差异调控的基因群。在抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)抗体治疗后，IFN-α应答基因群富集(图9B)。通过qPCR评估抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)抗体治疗对TAM中Ifnb1和多种干扰素刺激基因(ISG)的表达的效应。相对于对照抗体治疗，在抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗后，所指示基因的表达更高(图9C)。实施定量ELISA以确定抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗对IFN-β蛋白水平的效应。抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗使得MC38肿瘤中IFN-β蛋白显著累积(图9D)。通过qPCR评估抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗对所指示MC38肿瘤来源细胞类型中的IFN-β表达的效应。相对于经对照抗体处理的细胞，经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)处理的CD45+细胞和TAM中IFN-β的表达更高。在CD45-细胞或树突细胞(DC)中未观察到IFN-β表达的显著变化(图9E)。
图10A、图10B、图10C、图10D和图10e：绘示从肿瘤来源单细胞悬浮液分离TAM的方法(图10A)。通过FACS评估经分离TAM的纯度(图10B)。绘制为火山图的统计分析鉴定因抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗而表达增加、减少或不变的基因(图10C)。实施基因集合富集分析(GSEA)以揭示应答于利用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗而差异调控的基因群。根据在抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗后的富集程度，对所指示基因群进行排序(图10D)。进行qPCR分析以对抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗对总MC38肿瘤中所指示ISG的表达的效应进行定量。相对于对照抗体，在抗MerTK14C9(mIgG2aLALAPG)抗体治疗后，所指示基因的表达更高(图10E)。
图11A和图11B：实施qPCR分析以对抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗对MC38肿瘤来源TAM(图11A)或总MC38肿瘤匀浆(图11B)中所指示基因的表达的效应进行定量。使用Actb、Gapdh、Rpl13a、Rpl19、Hprt和Rpl4作为管家基因。
图12A、图12B和图12C：采用体内抗原呈递测定法来评估抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)抗体治疗对TAM和树突细胞(DC)呈递抗原的效应。抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗显著地增加TAM对结合至I类MHC分子H-2Kb的MC38.OVA肿瘤来源SIINFEKL抗原的呈递，但不增加DC对其的呈递(图12A)。对CD86(一种促进T细胞活化的蛋白质)的表达进行定量以评估抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体对T细胞活化的效应。抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗在TAM上诱导更高水平的CD86，但在DC上不诱导(图12A)。通过对MC38肿瘤来源T细胞进行基因组DNA测序来测量抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗对T细胞受体(TCR)的有效重排和克隆性(clonality)的效应。相对于对照抗体，抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗使得TCR克隆性和有效重排显著更强(图12B)。对MC38肿瘤中CD8+、CD4+和p15e四聚体反应性T细胞的相对丰度进行定量以确定抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)治疗对抗肿瘤免疫应答的效应。如在抗MerTK抗体治疗后，CD8+和p15e四聚体反应性T细胞的相对丰度显著增加所证明，相对于对照抗体，抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗显著地增强抗肿瘤应答(图12C)。
图13A、图13B和图13C：对肿瘤匀浆中CCL3、CCL4、CCL5、CCL7和CCL12的蛋白质水平进行定量以评估抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)治疗对自分泌和旁分泌细胞因子和趋化因子的效应。相对于利用对照抗体治疗，抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗引起所有测试蛋白质的显著富集(图13A)。通过qPCR分析来确定外周血单核细胞(PBMC)中ISG的表达，以确定抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗的效应。相对于对照抗体，在抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗后，未观察到所指示基因的表达的显著差异(图13B)。对肿瘤(n＝10)中所指示细胞因子和趋化因子的表达的定量揭露抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗无显著效应。
图14A、图14B和图14C：采用如图14A中的代表性FACS图中所绘示的门控策略从MC38肿瘤的单细胞悬浮液分离特定细胞类型(图14A)。对MC38肿瘤中的TAM和DC随时间推移的频率(n＝8，第8天；n＝10，第13天和第15天)进行定量。在MC38肿瘤中，TAM较DC明显更丰富，且随时间推移，肿瘤中CD45+TAM的频率增加，而DC保持恒定(图14B)。为评估抗MerTK14C9(mIgG2a LALAPG)治疗对TAM中的CD206表达的效应，实施流式细胞分析并且报告MFI(中位荧光强度)(n＝10)。抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗使TAM上的CD206表达减少(图14C)。
图15A、图15B和图15C：MC38肿瘤在早期进展阶段开始利用单一药剂抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)进行治疗(图15A)或在确立阶段利用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)和抗PD-L1组合治疗(n＝10)进行治疗(图15B)。单一药剂抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗抑制早期进展阶段肿瘤的生长(图15A)。在确立阶段利用抗PD-L1和抗MerTK14C9(mIgG2aLALAPG)抗体组合治疗抑制MC38肿瘤的生长，而单一药剂抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)或抗PD-L1治疗分别具有微小或中等效应(图15B)。利用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)与吉西他滨(gemcitabine，Gem)以及抗PD-1的组合治疗已确立的MC38肿瘤(n＝15，对照Ab组；n＝8，抗PD-1+抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)；n＝10，其他组)。抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)治疗与吉西他滨(Gem)以及抗PD-1的组合抑制肿瘤生长。单一药剂抗PD-1或Gem疗法抑制肿瘤生长的程度低于抗PD-1和/或Gem与抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)的组合治疗(图15C)。呈现每一组的个体肿瘤生长曲线和LME拟合的肿瘤生长曲线二者(图15A、图15B和图15C)。
图16A和图16B：对在存在或不存在抗IFNAR1(n＝5)的情况下经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗的肿瘤中的代表性ISG的表达进行定量，以评估1型IFN信号传导对抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗的效应。抗IFNAR1治疗消除由抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)引起的所指示ISG的增强表达(图16A)。对经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)和抗PD-L1连同抗IFNARI的组合治疗的MC38肿瘤的生长进行评估，以确定1型IFN信号传导对抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)和抗PD-L1组合治疗的效应(n＝10)。抗IFNAR1抗体治疗降低抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)和抗PD-L1组合疗法的肿瘤抑制效应。呈现每一组的个体肿瘤生长曲线和LME拟合的肿瘤生长曲线二者(图16B)。
图17A、图17B和图17C：对经单一药剂抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)疗法连同抗IFNARI抗体治疗的MC38肿瘤的生长进行评估(n＝10)，以确定1型IFN信号传导对抗MerTK14C9(mIgG2a LALAPG)治疗的效应。抗IFNAR1抗体治疗使抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体疗法的肿瘤抑制效应无效(图17A)。对在WT或Stinggt/gt小鼠中生长的MC38肿瘤中的代表性ISG的表达进行定量，以评估STING对抗MerTK14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗的效应(n＝9，WT宿主；n＝10，Stinggt/gt宿主)。STING破坏消除由抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)引起的所指示ISG的增强表达(图17B)。对WT或Stinggt/gt宿主小鼠中MC38肿瘤的生长进行定量，以评估STING对抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体治疗的效应(n＝10)。STING破坏消除抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗的肿瘤抑制效应(图17C)。呈现每一组的个体肿瘤生长曲线和LME拟合的肿瘤生长曲线二者(图17A和图17C)。
图18A、图18B、图18C、图18D、图18E和图18F：实施细胞质DNA转染实验以评估STING和cGAS在巨噬细胞对细胞质DNA的应答中的功能。IFN-β的累积需要应答于DNA转染的巨噬细胞中功能性STING表达(图18A)和cGAS表达(图18B)二者。对MC38肿瘤细胞和J774A.1巨噬细胞中cGAS和STING表达的蛋白质印迹(Western blot)分析确定，J774A.1巨噬细胞表达cGAS和STING，而MC38肿瘤细胞仅表达cGAS(图18C)。对WT和cGAS-/-AB22肿瘤中的代表性ISG的表达进行定量，以评估在抗MerTK治疗期间肿瘤细胞中cGAS表达的作用。肿瘤细胞中cGAS表达的破坏消除应答于抗MerTK治疗的所指示ISG的累积(图18D)。对WT或cGAS-/-MC38肿瘤的生长进行定量，以评估肿瘤细胞中cGAS表达对作为单一药剂或与抗PD-L1组合的抗MerTK的效应(n＝9，组合治疗的WT MC38；n＝10，其他组)。在cGAS-/-MC38肿瘤中，抗MerTK和抗PD-L1组合疗法对肿瘤生长的抑制降低。呈现每一组的个体肿瘤生长曲线和LME拟合的肿瘤生长曲线二者(图18E)。使用通过LC-MS/MS的蛋白质定量来测量MC38肿瘤细胞中的cGAMP产生，在经HT-DNA转染后，WT肿瘤细胞中的cGAMP产生增加，但在cGAS-/-肿瘤细胞中不增加(图18F)。
图19A、图19B、图19C、图19D和图19E：对与UV辐射WT或cGAS-/-MC38细胞共培养的WT和Stinggt/gt BMDM(图19A)或WT和cGAS-/-J774A.1巨噬细胞(图19B)的IFN-β蛋白产生进行定量。IFN-β蛋白累积依赖于肿瘤细胞中的cGAS表达和巨噬细胞中的STING表达(图19A和图19B)。巨噬细胞中的cGAS表达对于IFN-β蛋白累积是非必需的(图19B)。对在WT宿主小鼠(n＝10)中生长的WT或cGAS-/-MC38肿瘤中的代表性ISG的表达进行定量，以评估肿瘤细胞中的cGAS表达对抗MerTK单一药剂疗法的效应。肿瘤细胞中的cGAS破坏消除应答于抗MerTK治疗的所指示ISG的增强表达(图19C)。在单一药剂抗MerTK或抗PD-L1治疗后，对在WT宿主小鼠中生长的WT或cGAS-/-早期MC38肿瘤的生长进行测量(n＝10)。如通过肿瘤生长抑制所测量，cGAS缺陷型肿瘤细胞对单一药剂抗MerTK或抗PD-L1治疗具有抗性。呈现每一组的个体肿瘤生长曲线和LME拟合的肿瘤生长曲线二者(图19D和图19E)。
图20A、图20B、图20C、图20D和图20E：实施蛋白质印迹分析以证实Cx43蛋白在Cx43-/-MC38肿瘤细胞中丢失(图20A)。绘示染料转移测定法的示意图，该测定法测量钙黄绿素经由Cx43在细胞之间的运动(图20B)。实施图20B的染料转移测定法以对Cx43在钙黄绿素介于MC38肿瘤细胞之间转移(图20C)或在钙黄绿素从巨噬细胞转移至肿瘤细胞(图20D)中的作用进行定量。Cx43的丢失损害荧光染料钙黄绿素在MC38细胞之间的转移(图20C)以及从J774A.1巨噬细胞向MC38肿瘤细胞的转移(图20D)。在利用抗MerTK和抗PD-L1组合疗法治疗后，对WT宿主小鼠中WT或Cx43-/-MC38肿瘤的生长进行测量(n＝10，WT MC38；n＝8，Cx43-/-MC38)。如通过肿瘤生长抑制所测量，Cx43缺陷型肿瘤细胞对抗MerTK和抗PD-L1组合疗法具有抗性。呈现每一组的个体肿瘤生长曲线和LME拟合的肿瘤生长曲线二者(图20E)。
图21A、图21B、图21C和图21D：cGAMP从MC38细胞的缝隙连结依赖性转移以及由巨噬细胞产生IFN-β的示意图(图21A)。对与经HT-DNA转染(+DNA)的WT或Cx43-/-MC38肿瘤细胞共培养的J774A.1巨噬细胞的IFN-β蛋白产生进行定量。肿瘤细胞中Cx43的破坏消除由DNA转染肿瘤细胞所引起的增加的巨噬细胞IFN-β产生(图21B)。对代表性ISG在Cx43-/-MC38肿瘤中的mRNA表达进行定量以确定肿瘤细胞中的Cx43破坏对抗MerTK治疗的效应(n＝10，对照Ab；n＝9，抗MerTK)。利用抗MerTK治疗Cx43-/-MC38肿瘤不会导致ISG表达的显著变化(图21C)。这是绘示阻断MerTK依赖性先天性免疫检查点的模型。TAM中的MerTK信号传导介导了对应激或濒死肿瘤细胞的快速清除，这导致对肿瘤来源材料的静态处置而不会向免疫***发出警报。利用抗MerTK进行治疗防止胞葬作用，允许表达cGAS的肿瘤细胞延长产生cGAMP并且增加cGAMP经由缝隙连结向宿主巨噬细胞的转移。TAM产生的IFN-β以自分泌/旁分泌方式起作用，以增加抗原呈递细胞的抗原呈递和对共刺激分子的表达，最终使得T细胞应答增强(图21D)。
图22A和图22B：利用抗MerTK或对照抗体治疗后，小鼠MC38肿瘤模型中循环肿瘤DNA(ctDNA)和无细胞DNA(cfDNA)的定量。将MC38肿瘤细胞接种至C57BL/6J小鼠中。在肿瘤确立后，施用抗MerTK或对照抗体。在抗MerTK治疗后三天，在荷瘤小鼠的血浆中检测到ctDNA的显著增加(图22A)。抗MerTK也使血液循环中宿主来源cfDNA的水平增加(图22B)。所指示的p值基于未配对的双尾Student’st检验。该结果展示，在肿瘤微环境中，抗MerTK治疗能够阻断TAM对凋亡细胞的持续清除。
图23显示使用表面等离子体共振(SPR)的抗MerTK抗体对人MerTK的结合亲和力的分析。确定10种市售抗体和h13B4.v16对人MerTK的结合亲和力。所观察到的结合亲和力如下：Y323为0.4nM，A3KCAT为6.8nM，590H11G1E3为7.6nM，MAB8912-100为17.3nM并且h13B4.v16为1.6nM。其余六种抗体(10g86_D21F11、2D2、7E5G1、7N-20、MAB891和MAB8911)不显示结合至人MerTK。
图24A至图24C显示检查抗MerTK抗体的竞争性结合实验的结果。使用经典夹心形式测试抗MerTK抗体Y323、A3KCAT、590H11G1E3和MAB8912-100与抗体h13B4.v16结合至人MerTK的竞争性(图24A)。发现抗体Y323与h13B4.v16竞争结合至人MerTK(图24B)，然而抗体A3KCAT、590H11G1E3和MAB8912-100不与h13B4.v16竞争结合至人MerTK(图24C)。
具体实施方式
I.定义
应理解，本公开不限于特定组合物或生物学***，其当然可变化。也应理解，本文所用的术语仅是出于描述特定实施例的目的，且不意图具有限制性。
除非内容另外明确指示，否则如本说明书和随附权利要求书中所用，单数形式“一(a、an)”和“该/所述”包括复数个指示物。因此，例如，对“分子”的引用任选地包括两个或更多个此类分子的组合等等。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员已知的相应值的一般误差范围。在本文中引用“约”一值或参数包括(且描述)涉及该值或参数本身的实施例。
应理解，本公开的方面和实施例包括“包含”方面和实施例、“由其组成”和“基本上由其组成”。
出于本文目的的“接受体人类框架”是包含源自如下文所定义的人类免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列的框架。“源自”人类免疫球蛋白框架或人共有框架的接受体人类框架可包含其相同氨基酸序列，或其可含有氨基酸序列变化。在一些实施例中，氨基酸变化的数量为10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小、或2或更小、或1或更小。在一些实施例中，VL接受体人类框架的序列与VL人类免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列一致。在一些实施例中，VH接受体人类框架的序列与VH人类免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列一致。在一些实施例中，VL和VH接受体人类框架的序列与VH和VL人类免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列一致。
“亲和力”是指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和强度。除非另有指示，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对成员(例如抗体与抗原)之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可通过解离常数(Kd)来表示。亲和力可通过本技术中已知的常用方法(包括本文所述的那些方法)来测量。用于测量结合亲和力的具体说明性和示例性实施例描述于下文中。
“亲和力成熟”抗体是指与不具有此类改变的亲代抗体相比，在一个或多个高变区(HVR)中具有一个或多个改变的抗体，此类改变使得抗体对抗原的亲和力提高。
术语“抗MerTK抗体”和“结合至MerTK的抗体”是指能够以足够亲和力结合MerTK，使得该抗体可用作靶向MerTK的诊断剂和/或治疗剂的抗体。在一个实施例中，如例如通过放射免疫测定(RIA)所测量，抗MerTK抗体与不相关、非MerTK蛋白的结合程度小于该抗体与MerTK结合的约10％。在某些实施例中，结合至MerTK的抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更小，例如10-8M至10- 13M，例如10-9M至10-13M)。在某些实施例中，抗MerTK抗体结合至在来自不同物种的MerTK中保守的MerTK表位。
本文中的术语“抗体”是以最广泛意义使用并且涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要其展现期望的抗原结合活性即可。
“抗体片段”是指除完整抗体外的分子，该完整抗体包含完整抗体的一部分，该完整抗体与完整抗体所结合的抗原结合。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；双体抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和从抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“嵌合”抗体是指其中重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种的抗体。
抗体的“类别”是指其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在5大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且该类别中的几个可进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。
如本文所用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化疗剂或药物(例如甲氨蝶呤、阿霉素(adriamicin)、长春花生物碱(vinca alkaloid)(长春新碱、长春碱、依托泊苷(etoposide))、多柔比星、美法仑、丝裂霉素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道诺霉素(daunorubicin)或其他嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；毒素，诸如细菌、真菌、植物或动物起源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体；以及下文所公开的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。
“效应功能”是指可归因于抗体Fc区的那些生物学活性，其可随抗体同种型而变化。抗体效应功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；以及B细胞活化。
药剂(例如药物制剂)的“有效量”是指在所需剂量和所需时间段内有效达成期望治疗或预防结果的量。
术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链中含有恒定区的至少一部分的C末端区。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施例中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文中另外指定，否则Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。
“框架”或“FR”是指除高变区(HVR)残基以外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常是由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常按以下顺序出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，其是指具有实质上与天然抗体结构相似的结构或具有含有如本文所定义Fc区的重链的抗体。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用并且是指其中已引入外源性核酸的细胞，包括此类细胞的子代。宿主细胞包括“转化株”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和源自其的子代(与传代次数无关)。子代的核酸含量与亲代细胞可不完全相同，而是可含有突变。本文包括经筛选或选择用于原始转化细胞中的具有相同功能或生物活性的突变体子代。
“人抗体”是具有对应于如下抗体的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体：由人或人类细胞产生或源自利用人抗体谱或其他人抗体编码序列的非人类来源。人抗体的该定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“人共有框架”是代表在人类免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的框架。通常，人类免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH出版91-3242，Bethesda MD(1991)，第1卷至第3卷中的亚组。在一个实施例中，对于VL，该亚组如Kabat等人，上文文献中的亚组κI。在一个实施例中，对于VH，该亚组如Kabat等人，上文文献中的亚组III。
“人源化”抗体是指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施例中，人源化抗体将包含实质上全部的至少一个、并且通常两个可变结构域，其中全部或实质上全部的HVR(例如CDR)对应于非人抗体的那些HVR，并且全部或实质上全部的FR对应于人抗体的那些FR。人源化抗体任选地可包含源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体(例如非人抗体)的“人源化形式”是指已经历人源化的抗体。
如本文所用的术语“高变区”或“HVR”是指在序列上超变的抗体可变结构域(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构明确环(“超变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原触点”)的每个区。通常，抗体包含六个HVR：三个在VH中(H1、H2、H3)，并且三个在VL中(L1、L2、L3)。本文中的示例性HVR包括：
(a)超变环，其出现于氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96
(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)处(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；
(b)CDR，其出现于氨基酸残基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、
31-35b(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)处(Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD
(1991))；
(c)抗原触点，其出现于氨基酸残基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96
(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)和93-101(H3)处(MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；以及
(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)、47-56
(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65
(H2)、93-102(H3)和94-102(H3)。
在一个实施例中，HVR残基包含本公开的表6中所鉴定的那些残基。
除非另有指示，否则可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如FR残基)在本文中根据Kabat等人，上文文献来编号。
“免疫缀合物”是缀合至一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)的抗体。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物(例如牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施例中，个体或受试者是人。
“经分离”抗体是已从其自然环境的组分分离的抗体。在一些实施例中，如通过(例如)电泳(例如SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或层析(例如离子交换或反相HPLC)所确定，抗体纯化至大于95％或99％的纯度。关于评估抗体纯度的方法的综述，例如参见Flatman等人，J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
“经分离”核酸是指已从其自然环境的组分分离的核酸分子。经分离核酸包括通常含有核酸分子的细胞中所含的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或存在于与其天然染色***置不同的染色***置处。
“编码抗MerTK抗体的经分离核酸”是指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或单独载体中的一种或多种此类核酸分子以及存在于宿主细胞中的一个或多个位置处的一种或多种此类核酸分子。
如本文所用的术语“LALAPG突变”是指抗体Fc区中的突变，其包含以下三种突变：亮氨酸234突变为丙氨酸(L234A)、亮氨酸235突变为丙氨酸(L235A)和脯氨酸239突变为甘氨酸(P329G)，其先前已显示降低与Fc受体和补体的结合(例如，参见美国出版物第2012/0251531号和美国专利第8,969,526号)。Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述的EU编号***(也称为EU索引)。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从实质上同源抗体群体获得的抗体，即包含该群体的个别抗体相同和/或结合相同表位，可能的变体抗体(例如含有天然突变或在产生单克隆抗体制剂期间产生)除外，此类变体通常以较小量存在。与通常包括针对不同决定因素(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定因素。因此，修饰词“单克隆”指示抗体的特征在于从实质上同源的抗体群体获得，并且不应解释为需要通过任何特定方法来产生该抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可通过各种技术来制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有全部或一部分人类免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，用于制备单克隆抗体的此类方法和其他示例性方法描述于本文中。
“裸抗体”是指不与异源部分(例如细胞毒性部分)或放射性标记缀合的抗体。裸抗体可存在于药物制剂中。
“天然抗体”是指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道耳顿(dalton)的异四聚体糖蛋白，其由二硫键的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N末端至C末端，每条重链具有可变区(VH)(也称为可变重链结构域或重链可变结构域)，之后为三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N末端至C末端，每条轻链具有可变区(VL)(也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域)，之后为恒定轻链(CL)结构域。基于抗体恒定结构域的氨基酸序列，可将该抗体的轻链指派到称为卡帕(kappa，κ)和拉姆达(lambda，λ)的两种类型中的一者。
术语“包装插页”用于指通常包括在治疗产品的商业包装内的说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、施用、组合疗法、禁忌和/或关于此类治疗产品的使用警告的信息。
关于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”定义为在比对序列并且引入空位(视需要)以达成最大序列同一性百分比之后，并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基一致的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的，比对可以以本领域技术人员所熟知的各种方式来达成，例如使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长范围内达成最大比对所需要的任何算法。然而，出于本文目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2来生成氨基酸序列同一性％的值。ALIGN-2序列比较计算机程序是由基因泰克公司(Genentech,Inc.)编写，并且原始码已与使用者文件一起提交至U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，在此其以美国著作权注册号TXU510087注册。ALIGN-2程序可从基因泰克公司(Genentech,Inc.),South San Francisco,California公开获得，或可从原始码进行编译。ALIGN-2程序应经编译用于UNIX操作***(包括数字UNIX V4.0D)中。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设定且不改变。
在采用ALIGN-2以进行氨基酸序列比较的情形下，如下计算给定氨基酸序列A与给定氨基酸序列B、同给定氨基酸序列B或相对于给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(可替代地其可表述为与给定氨基酸序列B、同给定氨基酸序列B或相对于给定氨基酸序列B具有或包含一定的氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)：
100×分数X/Y
其中X是在A与B的程序比对中由序列比对程序ALIGN-2评定为一致性匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中氨基酸残基的总数。应了解，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情形下，A与B的氨基酸序列同一性％将不等于B与A的氨基酸序列同一性％。除非另有明确说明，否则本文所用的所有氨基酸序列同一性％的值均是如紧接前述段落中所描述使用ALIGN-2计算机程序获得。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”是指抑制PD-1轴结合配偶体与其一个或多个结合配偶体相互作用以去除由PD-1信号传导轴上的信号传导引起的T细胞功能障碍，并且结果为恢复或增强T细胞功能(例如增殖、产生细胞因子、杀死靶T细胞)的分子。如本文所用，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”是指减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-L1和L2)的相互作用引起的信号转导的分子。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1与其一个或多个结合配偶体的结合的分子。在具体方面，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。例如，PD-1结合拮抗剂包括减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与PD-L1和/或PD-L2的相互作用引起的信号转导的抗PD-1抗体、其抗原结合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽和其他分子。在一个实施例中，PD-1结合拮抗剂降低通过或藉助通过PD-1的信号传导所介导T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的负共刺激信号，以使功能障碍T细胞功能障碍较少(例如增强对抗原识别的效应子应答(effectorresponse))。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。下文提供PD-1结合拮抗剂的具体实例。
术语“PD-L1结合拮抗剂”是指减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-1和/或B7-1)的相互作用引起的信号转导的分子。在一些实施例中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1与其结合配偶体的结合的分子。在具体方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1和/或B7-1的结合。在一些实施例中，PD-L1结合拮抗剂包括减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-1和/或B7-1)的相互作用引起的信号转导的抗PD-L1抗体、其抗原结合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽和其他分子。在一个实施例中，PD-L1结合拮抗剂降低通过或藉助通过PD-L1的信号传导所介导T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的负共刺激信号，以使功能障碍T细胞功能障碍较少(例如增强对抗原识别的效应子应答(effector response))。在一些实施例中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。下文提供PD-L1结合拮抗剂的具体实例。
术语“PD-L2结合拮抗剂”是指减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-1)的相互作用引起的信号转导的分子。在一些实施例中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2与其结合配偶体的结合的分子。在具体方面，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2与PD-1的结合。在一些实施例中，PD-L2拮抗剂包括减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-1)的相互作用引起的信号转导的抗PD-L2抗体、其抗原结合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及其他分子。在一个实施例中，PD-L2结合拮抗剂降低通过或藉助通过PD-L2的信号传导所介导T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的负共刺激信号，以使功能障碍T细胞功能障碍较少(例如增强对抗原识别的效应子应答(effector response))。在一些实施例中，PD-L2结合拮抗剂是免疫黏附素。
术语“药物制剂”是指如下制剂：其所呈现形式允许其中所含活性成分的生物活性有效，并且不含对所述制剂待施用的受试者具有不可接受毒性的附加组分。
“药用载体”是指药物制剂中除活性成分以外的成分，其对受试者是无毒的。药用载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
除非另有指示，否则如本文所用的术语“MerTK”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然MerTK，该脊椎动物来源包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人类)及啮齿类动物(例如小鼠及大鼠)。该术语涵盖未经处理的“全长”MerTK以及由于在细胞中处理而产生的MerTK的任何形式。该术语也涵盖MerTK的天然变体，例如剪接变体或等位基因变体。示例性人MerTK的氨基酸序列描述于US 2006/0121562中。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变化形式，诸如“治疗(treat或treating)”)是指试图改变所治疗个体的自然病程的临床干预，并且其可出于预防性目的或在临床病理学病程期间实施。治疗的理想效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、缓和症状、减弱疾病的任何直接或间接病理结果、预防转移、降低疾病进展的速率、改善或缓解疾病状态以及缓解或改良预后。在一些实施例中，使用本发明的抗体来延迟疾病发生或减缓疾病进展。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原结合的结构域。天然抗体的重链及轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似结构，其中每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(例如，参见Kindt等人，KubyImmunology，第6版，W.H.Freeman和Co.，第91页(2007))。单一VH或VL结构域可足以赋予抗原结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可使用来自结合该抗原的抗体的VH或VL结构域来分离以分别筛选互补VL或VH结构域文库。例如，参见Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。
如本文所用的术语“载体”是指能够转运其所连接的另一核酸的核酸分子。该术语包括呈自我复制核酸结构的载体以及纳入至引入其的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够引导与其可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
II.抗MerTK抗体
本公开是基于新型抗MerTK抗体的发现。此类新型抗MerTK抗体可用于治疗癌症。特定而言，本公开是基于如下发现：本文所描述的抗MerTK抗体增强基于免疫检查点抑制剂的疗法的有效性。
C-Mer原癌基因酪氨酸激酶(MerTK)是一种受体酪氨酸激酶，其在结合至各种配体(诸如半乳糖凝集素-3、蛋白质S和Gas6)时转导细胞外信号，由此活化效应基因的表达。MerTK路径调控基本细胞过程，包括细胞存活、细胞因子产生、迁移、分化和吞噬作用(Cabernoy N.等人，J Cell Physio.227(2012):401-407；Wu,G.等人，Cell Death&Disease8(2017):e2700)。MerTK的表达在多种造血细胞类型中发现，诸如巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤(NK)细胞。重要的是，MerTK受体路径在若干种实体和血液癌症中具有活性，包括结肠癌(Wu,G.等人，Cell Death&Disease8(2017):e2700)。
MerTK受体是由细胞外组分、跨膜(TM)结构域和细胞内组分构成。如下图所示，MerTK的细胞外或配体结合区含有两个免疫球蛋白(Ig)样结构域和两个III型纤连蛋白(FN)样结构域。
Figure BDA0003407662520000371
例如，在人MerTK中，该两个Ig样结构域分别由氨基酸残基76-195和氨基酸残基199-283界定。另外，人MerTK的该两个纤连蛋白样结构域分别由氨基酸残基286-384和氨基酸残基388-480界定。MerTK的细胞内区域含有酪氨酸激酶(TK)结构域，该结构域在配体结合至细胞外区域后使特定酪氨酸残基自磷酸化并且促进MerTK受体二聚化，由此活化下游效应基因表达(Toledo,R.A等人，Clin Can.Res.22(2016):2301-2312)。人MerTK包含以下氨基酸序列：
MGPAPLPLLLGLFLPALWRRAITEAREEAKPYPLFPGPFPGSLQTDHTPLLSLPHASGYQPALMFSPTQPGRPHTGNVAIPQVTSVESKPLPPLAFKHTVGHIILSEHKGVKFNCSISVPNIYQDTTISWWKDGKELLGAHHAITQFYPDDEVTAIIASFSITSVQRSDNGSYICKMKINNEEIVSDPIYIEVQGLPHFTKQPESMNVTRNTAFNLTCQAVGPPEPVNIFWVQNSSRVNEQPEKSPSVLTVPGLTEMAVFSCEAHNDKGLTVSKGVQINIKAIPSPPTEVSIRNSTAHSILISWVPGFDGYSPFRNCSIQVKEADPLSNGSVMIFNTSALPHLYQIKQLQALANYSIGVSCMNEIGWSAVSPWILASTTEGAPSVAPLNVTVFLNESSDNVDIRWMKPPTKQQDGELVGYRISHVWQSAGISKELLEEVGQNGSRARISVQVHNATCTVRIAAVTRGGVGPFSDPVKIFIPAHGWVDYAPSSTPAPGNADPVLIIFGCFCGFILIGLILYISLAIRKRVQETKFGNAFTEEDSELVVNYIAKKSFCRRAIELTLHSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLILGKILGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSLKVAVKTMKLDNSSQREIEEFLSEAACMKDFSHPNVIRLLGVCIEMSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTYLLYSRLETGPKHIPLQTLLKFMVDIALGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEIATRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYEIMYSCWRTDPLDRPTFSVLRLQLEKLLESLPDVRNQADVIYVNTQLLESSEGLAQGSTLAPLDLNIDPDSIIASCTPRAAISVVTAEVHDSKPHEGRYILNGGSEEWEDLTSAPSAAVTAEKNSVLPGERLVRNGVSWSHSSMLPLGSSLPDELLFADDSSEGSEVLM(SEQ ID NO:137)。
本文提供结合至MerTK的经分离抗体，其中该抗体具有以下性质中的一者或多者：(i)拮抗MerTK的一种或多种生物活性，(ii)降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除，(iii)降低MerTK介导的吞噬活性，(iv)增强检查点抑制剂的肿瘤免疫原性，(v)结合至MerTK的纤连蛋白样结构域，(vi)结合至MerTK上的Ig样结构域，(vii)特异性结合至人MerTK，(viii)结合至人、小鼠和/或食蟹猴MerTK中的一者或多者，和/或(ix)以小于20nM(例如小于10nM、小于5nM或小于2nM)的KD结合至MerTK。
A.示例性抗MerTK抗体
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQID NO:5的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQID NO:2的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:6的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:83的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:83中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:83中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:65中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:65中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:83和SEQID NO:65中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:12的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:84中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:84中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:66中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:66中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:84和SEQID NO:66中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:85的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:85中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:85中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:67中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:67中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:85和SEQID NO:67中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:102的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:102中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:102中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:110中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:110中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:110中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:86中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:86中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:68中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:68中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:86和SEQID NO:68中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:103的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:103中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:103中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:10的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:111中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:111中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:111中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:18的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:87中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:87中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:69中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:69中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:87和SEQID NO:69中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:88中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:88中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:70中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:70中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:88和SEQID NO:70中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:104中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:104中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:112中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:112中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:112中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:89中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:89中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:70中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:70中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:89和SEQID NO:70中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:105的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:105中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:105中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:16的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:113中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:113中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:113中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:24的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:90中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:90中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:71中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:71中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:90和SEQID NO:71中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:91中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:91中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:72中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:72中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:91和SEQID NO:72中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:106中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:106中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:114中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:114中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:106和SEQ ID NO:114中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:92中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:92中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:73中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:73中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:92和SEQID NO:73中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:107的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:107中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:107中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:22的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:115中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:115中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:115中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:27的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:93中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:93中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:74中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:74中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:93和SEQID NO:74中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:94中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:94中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:75中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:75中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:94和SEQID NO:75中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:40的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:95中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:95中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:76中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:76中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:95和SEQID NO:76中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:46的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:44的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:96中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:96中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:77的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:77中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:77中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:96和SEQID NO:77中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:52的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:97的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:97中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:97中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:78中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:78中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:97和SEQID NO:78中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:98的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:98中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:98中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:79的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:79中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:79中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:98和SEQID NO:79中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:108的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:108中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:108中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:116的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:116中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:116中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:116中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:99的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:99中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:99中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:80中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:80中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:99和SEQID NO:80中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的重链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:109中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:109中的重链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，重链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQID NO:50的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:117的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:117中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:117中的轻链序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，轻链包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的重链和如上文所提供任一实施例中的轻链。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:117中的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:58的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:56的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:100中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:100中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:81的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:81中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:81中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:81中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在一个实施例中，抗体包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明的抗MerTK抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列，和(iii)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:64的氨基酸序列；和(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，本发明提供抗MerTK抗体，该抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；和(f)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在上述任一实施例中，抗MerTK抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MerTK抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含接受体人类框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架，其任选地具有最多10个氨基酸取代(例如1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸取代)。在示例性实施例中，此类氨基酸取代对应于来自兔框架区序列的氨基酸残基，诸如例如以下残基中的一者或多者：轻链可变区框架序列中的Q2、L4、P43和/或F87和/或以下残基中的一者或多者：重链可变区框架序列中的V24、I48、G49、K71和/或V78。氨基酸残基的编号根据如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所描述的EU编号***(也称为EU索引)。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
在另一方面，抗MerTK抗体包含与SEQ ID NO:101的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:101中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:101中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VH包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但包含该序列的抗MerTK抗体保留结合至MerTK的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:82中总计有1至10个氨基酸经取代、***和/或缺失。在某些实施例中，取代、***或缺失发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗MerTK抗体包含SEQ ID NO:82中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在另一方面，提供抗MerTK抗体，其中该抗体包含如上文所提供任一实施例中的VH和如上文所提供任一实施例中的VL。在一个实施例中，该抗体分别包含SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:82中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在示例性实施例中，抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig-样结构域。
在进一步的方面，本发明提供与本文所提供的抗MerTK参考抗体竞争结合至MerTK的抗体。例如，在某些实施例中，提供与以下抗MerTK参考抗体中的一者或多者竞争结合至MerTK的抗体：包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链和含有SEQ IDNO:112的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH和含有SEQID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:115的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:108的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ IDNO:99的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ IDNO:109的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL的抗体；以及包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL的抗体。在一些实施例中，经分离抗体结合至人MerTK。在一些实施例中，参考抗体是Y323，其可商业购得(abcam目录号ab52968)。
在进一步的方面，本发明提供与本文所提供的抗MerTK抗体结合相同表位的抗体。例如，在某些实施例中，提供与以下抗MerTK抗体中的任一者结合相同表位的抗体：包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的重链和含有SEQ IDNO:115的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH和含有SEQID NO:74的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH和含有SEQID NO:75的氨基酸序列的VL的抗体。在某些实施例中，提供结合至MerTK的纤连蛋白样结构域内的表位的抗体，该表位由MerTK SEQ ID NO:129的氨基酸残基286-384或388-480组成。在一些实施例中，该抗体结合至与抗体Y323所结合相同的表位，该Y323可商业购得(abcam目录号ab52968)。
在进一步的方面，本发明提供与本文所提供的抗MerTK抗体结合相同表位的抗体。例如，在某些实施例中，提供与以下抗MerTK抗体中的任一者结合相同表位的抗体：包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:108的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL的抗体；包含含有SEQ ID NO:109的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的轻链的抗体；包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL的抗体；以及包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL的抗体。在某些实施例中，提供结合至MerTK的Ig样结构域内的表位的抗体，该表位由MerTK SEQ ID NO:129的氨基酸残基76-195或199-283组成。
在本发明的进一步方面中，根据上述任一实施例的抗MerTK抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施例中，抗MerTK抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，抗体是全长抗体，例如完整IgG1抗体或如本文所定义的其他抗体类别或同种型。在某些实施例中，抗体在Fc区中包含突变，该突变降低与Fc受体和/或补体的结合。在一个实施例中，抗体在Fc区中包含LALAPG突变。
在进一步的方面，根据上述任一实施例的抗MerTK抗体可单独地或组合地纳入如下文部分1至8中所描述的任一特征：
1.MerTK生物活性
在一些实施例中，抗体降低MerTK介导的吞噬细胞对凋亡细胞的清除，例如对凋亡细胞的清除降低1-10倍、1-8倍、1-5倍、1-4倍、1-3倍、1-2倍、2-10倍、2-8倍、2-5倍、2-4倍、2-3倍、3-10倍、3-8倍、3-5倍、3-4倍，或约1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。在一些实施例中，吞噬细胞是巨噬细胞。在一些此类实施例中，巨噬细胞是肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。在人类中，可基于各种细胞表面标志物的表达来鉴定TAM，该细胞表面标志物包括CD14、HLA-DR(II类MHC)、CD312、CD115、CD16、CD163、CD204、CD206和CD301。此外，可将特定功能性生物标志物(诸如基质金属蛋白酶、IL-10、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α或IL-12)的产生与细胞表面生物标志物组合以准确地鉴定TAM群体(Quatromoni,J.等人，Am J Transl Res.4(2012):376-389。)对凋亡细胞的清除可通过本领域技术人员已知的出于此目的的任一测定来测量。例如，对于体外对凋亡细胞清除测定，使用诸如小鼠腹腔巨噬细胞或人单核细胞来源的巨噬细胞等吞噬细胞。通过利用***处理来产生凋亡细胞并且利用检测探针进行标记。在使凋亡细胞与吞噬细胞一起培育之后，可通过显微镜术或流式细胞术分析吞噬作用。在一些实施例中，如在室温在此类对凋亡细胞的清除测定中所测量，对凋亡细胞的清除降低。例如，针对体内凋亡的清除测定，向小鼠注射***以诱导胸腺细胞死亡。胸腺中的驻留巨噬细胞识别并且吞食濒死/死亡细胞(Seitz,H.M.JImmunol.178(9)5635-5642(2007)。在一些实施例中，如体内在对此类凋亡细胞的清除测定中所测量，对凋亡细胞的清除降低。在一些实施例中，抗体降低配体介导的MerTK信号传导。在一些实施例中，配体是hGAS6-Fc(EC50＝约84pM)。在一些实施例中，抗体诱导促炎应答。在一些实施例中，抗体诱导I型IFN应答。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体将对凋亡细胞的吞噬活性降低约10-100％、20-100％、30-100％、40-100％、50-100％、60-100％、70-100％、75-100％、80-100％、85-100％、90-100％、95-100％、10-95％、20-95％、30-95％、40-95％、50-95％、60-95％、70-95％、75-95％、80-95％、85-95％、90-95％、10-90％、20-90％、30-90％、40-90％、50-90％、60-90％、70-90％、75-90％、80-90％、85-90％、10-85％、20-85％、30-85％、40-85％、50-85％、60-85％、70-85％、75-85％、80-85％、10-80％、20-80％、30-80％、40-80％、50-80％、60-80％、70-80％、75-80％、10-75％、20-75％、30-75％、40-75％、50-75％、60-75％、70-75％、10-70％、20-70％、30-70％、40-70％、50-70％、60-70％、10-65％、20-65％、30-65％、40-65％、50-65％、60-65％、10-60％、20-60％、30-60％、40-60％、50-60％、10-55％、20-55％、30-55％、40-55％、50-55％、10-40％、20-40％或30-40％，或降低至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施例中，抗MerTK抗体降低对凋亡细胞的吞噬活性的半最大抑制浓度(IC50)为约1pM-50pM、1pM-100pM、1pM-500pM、1pM-1nM、1pM-1.5nM、5pM-50pM、5pM-100pM、5pM-500pM、5pM-1nM、5pM-1.5nM、10pM-50pM、10pM-100pM、10pM-500pM、10pM-1nM、10pM-1.5nM、50pM-100pM、50pM-500pM、50pM-1nM、50pM-1.5nM、100pM-500pM、100pM-1nM或100pM-1.5nM。确定吞噬活性和IC50的示例性方法描述于下文实例中。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体使检查点抑制剂的活性增强约1-2倍、1-5倍、1-10倍、1-15倍、1-20倍、1-25倍、1-30倍、1-50倍、1-75倍、1-100倍、1-150倍、1-200倍、1-250倍、1.5-2倍、1.5-5倍、1.5-10倍、1.5-15倍、1.5-20倍、1.5-25倍、1.5-30倍、1.5-50倍、1.5-75倍、1.5-100倍、1.5-150倍、1.5-200倍、1.5-250倍、2-5倍、2-10倍、2-15倍、2-20倍、2-25倍、2-30倍、2-50倍、2-75倍、2-100倍、2-150倍、2-200倍、2-250倍、2.5-5倍、2.5-10倍、2.5-15倍、2.5-20倍、2.5-25倍、2.5-30倍、2.5-50倍、2.5-75倍、2.5-100倍、2.5-150倍、2.5-200倍、2.5-250倍、5-10倍、5-15倍、5-20倍、5-25倍、5-30倍、5-50倍、5-75倍、5-100倍、5-150倍、5-200倍、5-250倍、10-15倍、10-20倍、10-25倍、10-30倍、10-50倍、10-75倍、10-100倍、10-150倍、10-200倍、10-250倍、20-25倍、20-30倍、20-50倍、20-75倍、20-100倍、20-150倍、20-200倍、20-250倍、25-30倍、25-50倍、25-75倍、25-100倍、25-150倍、25-200倍或25-250倍，或增强至少约1倍、2倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、75倍、80倍、90倍、100倍、125倍、150倍、200倍、225倍或250倍。在某些实施例中，如使用如下文实例中所描述的测定确定，本公开的抗MerTK抗体增强检查点抑制剂的活性，该测定诸如例如通过确定与仅使用检查点抑制剂时肿瘤体积的减少相比，在小鼠肿瘤模型中使用抗MerTK抗体加检查点抑制剂的组合时肿瘤体积的减少来实施。在某些实施例中，肿瘤体积的减少是在利用治疗剂治疗后至少10天、14天、20天、21天或30天后来确定。在某些实施例中，检查点抑制剂是抗PD1轴拮抗剂。在一个示例性实施例中，检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。在另一实施例中，检查点抑制剂是抗PD1抗体。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体将例如血液或血浆样品中的无细胞DNA(cfDNA)和/或循环肿瘤DNA(ctDNA)增加约1-2倍、1-3倍、1-4倍、1-5倍、1-10倍、1.5-2倍、1.5-3倍、1.5-4倍、1.5-5倍、1.5-10倍、2-3倍、2-4倍、2-5倍、2-10倍、3-5倍、3-10倍、4-5倍、4-10倍、5-10倍，或增加至少约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10倍。在某些实施例中，如使用如下文实例中所描述的测定确定，本公开的抗MerTK抗体增加无细胞DNA(cfDNA)和/或循环肿瘤DNA(ctDNA)，该测定诸如例如通过从血液或血浆样品分离cfDNA和/或ctDNA并且使用PCR和定量DNA电泳检测cfDNA和/或ctDNA的水平来实施。
2.抗体亲和力和特异性
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM，或约1pM-0.1nM、1pM-0.2nM、1pM-0.5nM、1pM-1nM、1pM-2nM、1pM-5nM、1pM-10nM、1pM-15nM、5pM-0.1nM、5pM-0.2nM、5pM-0.5nM、5pM-1nM、5pM-2nM、5pM-5nM、5pM-10nM、5pM-15nM、10pM-0.1nM、10pM-0.2nM、10pM-0.5nM、10pM-1nM、10pM-2nM、10pM-5nM、10pM-10nM、10pM-15nM、20pM-0.1nM、20pM-0.2nM、20pM-0.5nM、20pM-1nM、20pM-2nM、20pM-5nM、20pM-10nM、20pM-15nM、25pM-0.1nM、25pM-0.2nM、25pM-0.5nM、25pM-1nM、25pM-2nM、25pM-5nM、25pM-10nM、25pM-15nM、50pM-0.1nM、50pM-0.2nM、50pM-0.5nM、50pM-1nM、50pM-2nM、50pM-5nM、50pM-10nM、50pM-15nM、100pM-0.2nM、100pM-0.5nM、100pM-1nM、100pM-2nM、100pM-5nM、100pM-10nM或100pM-15nM。在某些实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体的Kd是在25℃测量。在某些实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体的Kd是在37℃测量。
在一个实施例中，通过放射性标记抗原结合测定(RIA)来测量Kd。在一个实施例中，利用目标抗体的Fab型式及其抗原来实施RIA。例如，Fab对抗原的溶液结合亲和力是通过以下来测量：在滴定系列的未标记抗原存在下，利用最低浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，接着利用抗Fab抗体包被的板捕获所结合抗原(例如，参见Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为确立该测定的条件，利用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕获用抗Fab抗体(Cappel Labs)将
Figure BDA0003407662520000911
多孔板(Thermo Scientific)包被隔夜，并且随后在室温下(大约23℃)利用PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白封闭2至5小时。在非吸附性板(Nunc编号269620)中，将100pM或26pM[125I]抗原与目标Fab的连续稀释液混合(例如与Presta等人，Cancer Res.57:4593-4599(1997)中对抗VEGF抗体Fab-12的评估一致)。接着将目标Fab培育隔夜；然而，可继续培育较长时期(例如约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温下进行培育(例如1小时)。接着将溶液去除并且利用PBS中的0.1％聚山梨醇酯20
Figure BDA0003407662520000921
将板洗涤8次。在板已干燥时，添加150μl/孔的闪烁体(MICROSCINT-20TM；Packard)，并且经10分钟在TOPCOUNT TMγ计数器(Packard)上对板进行计数。选择得到小于或等于20％最大结合的每个Fab的浓度用于竞争性结合测定。
根据另一实施例，使用
Figure BDA0003407662520000922
表面等离子体共振测定来测量Kd。例如，在25℃利用固定化抗原CM5芯片以约10个应答单位(RU)实施使用
Figure BDA0003407662520000923
-2000或
Figure BDA0003407662520000924
-3000(BIAcore Inc.,Piscataway,NJ)的测定。在一个实施例中，根据供货商的说明书，利用N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)使羧甲基化的聚葡萄糖生物传感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)活化。利用10mM乙酸钠(pH 4.8)将抗原稀释至5μg/ml(约0.2μM)，之后以5μl/分钟的流量注射以达成大约10个应答单位(RU)的偶合蛋白质。在注射抗原后，注射1M乙醇胺以封闭未反应的基团。对于动力学测量，在25℃以大约25μl/min的流量注射Fab于含有0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中的两倍连续稀释液(0.78nM至500nM)。使用简单一对一Langmuir结合模型(
Figure BDA0003407662520000925
评估软件3.2版)，通过同时拟合缔合和解离感测图来计算缔合速率(k缔合)和解离速率(k解离)。平衡解离常数(Kd)计算为比率k解离/k缔合。例如，参见Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。若通过上述表面等离子体共振测定测得的缔合速率超过106M-1s-1，则缔合速率可通过使用荧光淬灭技术来确定，该技术在25℃在渐增浓度的抗原存在下于PBS(pH 7.2)中测量的20nM抗-抗原抗体(Fab形式)的荧光发射强度的增加或减少(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)，如在光谱仪(诸如具有搅拌比色管的停流装备的分光亮度计(Aviv Instruments)或8000-系列SLM-AMINCO TM分光亮度计(ThermoSpectronic))中所测量。
在某些实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至人MerTK、食蟹猴MerTK、小鼠MerTK和/或大鼠MerTK中的一者或多者。在一个实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体特异性结合至人MerTK。在一个实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至人MerTK和食蟹猴MerTK。在一个实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至人MerTK和小鼠MerTK。在一个实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至人MerTK、食蟹猴MerTK和小鼠MerTK。在一个实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至人MerTK、食蟹猴MerTK、小鼠MerTK和大鼠MerTK。在一个实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体特异性结合至小鼠MerTK。
在某些实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至MerTK的Ig样结构域。在一个实施例中，结合至MerTK的Ig样结构域的抗MerTK抗体结合至该Ig样结构域中对应于MerTK SEQ ID NO:129的氨基酸残基76-195的一个或多个氨基酸残基，例如该抗MerTK抗体结合至MerTK SEQ ID NO:129的残基76-195中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸或1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸残基。在一个实施例中，结合至MerTK的Ig样结构域的抗MerTK抗体结合至该Ig样结构域中对应于MerTK SEQ ID NO:129的氨基酸残基199-283的一个或多个氨基酸残基，例如该抗MerTK抗体结合至MerTK SEQ ID NO:129的残基199-283中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸或1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸残基。
在某些实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。在一个实施例中，结合至MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体结合至该纤连蛋白样结构域中对应于MerTK SEQ ID NO:129的氨基酸残基286-384的一个或多个氨基酸残基，例如该抗MerTK抗体结合至MerTK SEQ ID NO:129的残基286-384中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸或1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸残基。在一个实施例中，结合至MerTK的纤连蛋白样结构域的抗MerTK抗体结合至该纤连蛋白样结构域中对应于MerTK SEQ ID NO:129的氨基酸残基388-480的一个或多个氨基酸残基，例如该抗MerTK抗体结合至MerTK SEQ ID NO:129的残基388-480中的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸或1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个或1-10个氨基酸残基。
在示例性实施例中，如本文所公开的抗MerTK抗体结合至人和食蟹猴MerTK的Ig样结构域。在一个实施例中，此类抗体以大约相同的37℃的Kd结合至人和食蟹猴MerTK，例如该抗体结合至食蟹猴MerTK的37℃的Kd与该抗体对于人MerTK的37℃的Kd相差不超过10％、15％或20％。在某些实施例中，此类抗体结合至人和食蟹猴MerTK的37℃Kd较该抗体对于小鼠和大鼠MerTK的37℃Kd优至少20倍、25倍或50倍。
3.抗体片段
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段，以及下文所描述的其他片段。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，例如参见Pluckthün，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑，(Springer-Verlag,New York)，第269-315页(1994)；也参见WO93/16185；及美国专利第5,571,894号和第5,587,458号。关于包含补救受体结合表位残基并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的论述，参见美国专利第5,869,046号。
双体抗体是具有两个抗原结合位点的可为二价或双特异性的抗体片段。例如，参见EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三抗体和四抗体也描述于Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)中。
单一结构域抗体是包含抗体中重链可变结构域的全部或一部分或轻链可变结构域的全部或一部分的抗体片段。在某些实施例中，单一结构域抗体是人单一结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,Ma；例如，参见美国专利第6,248,516B1号)。
如本文所描述，抗体片段可通过各种技术来制备，这些技术包括但不限于蛋白水解消化完整抗体以及通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌(E.coli)或噬菌体)来产生。
4.嵌合和人源化抗体
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于(例如)美国专利第4,816,567号；和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))中。在一个实例中，嵌合抗体包含非人类可变区(例如源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人类灵长类动物(诸如猴)的可变区)和人类恒定区。在另一实例中，嵌合抗体是类别或亚类已从亲代抗体的类别或亚类发生变化的“类别切换”抗体。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施例中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，使非人抗体人源化以降低对人类的免疫原性，同时保留亲代非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVR、例如CDR(或其部分)源自非人抗体，并且FR(或其部分)源自人抗体序列。人源化抗体任选地也将包含人类恒定区的至少一部分。在一些实施例中，人源化抗体中的一些FR残基经来自非人抗体(例如HVR残基所源自的抗体)的相应残基取代，以(例如)恢复或改良抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其制备方法综述于例如Almagro和Fransson，Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中，并且进一步描述于例如Riechmann等人，Nature 332:323-329(1988)；Queen等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA86:10029-10033(1989)；美国专利第5,821,337号、第7,527,791号、第6,982,321号和第7,087,409号；Kashmiri等人，Methods 36:25-34(2005)(描述特异性决定区(SDR)移植)；Padlan，Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述“表面重修”)；Dall’Acqua等人，Methods 36:43-60(2005)(描述“FR改组”)；以及Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述FR改组的“引导选择”方法)中。
可用于人源化的人类框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法选择的框架区(例如，参见Sims等人，J.Immunol.151:2296(1993))；源自轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体一致序列的框架区(例如，参见Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等人，J.Immunol.,151:2623(1993))；人类成熟(体细胞突变)框架区或人类生殖系框架区(例如，参见Almagro和Fransson，Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及源自筛选FR文库的框架区(例如，参见Baca等人，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
5.人抗体
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体是人抗体。人抗体可使用此项技术中已知的各种技术来产生。人抗体通常描述于van Dijk和van de Winkel，Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)和Lonberg，Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中。
可通过向转基因动物施用免疫原来制备人抗体，该转基因动物已经改良以产生完整人抗体或具有应答于抗原性攻击的人类可变区的完整抗体。此类动物通常含有人类免疫球蛋白基因座的全部或一部分，所述基因座替代内源性免疫球蛋白基因座，或存在于染色体外或随机整合至动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已不活化。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg，Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。也参见例如描述XENOMOUSETM技术的美国专利第6,075,181号和第6,150,584号；描述
Figure BDA0003407662520000961
技术的美国专利第5,770,429号；描述K-M
Figure BDA0003407662520000962
技术的美国专利第7,041,870号和描述
Figure BDA0003407662520000963
技术的美国专利申请出版物第US 2007/0061900号)。可例如通过与不同人类恒定区进行组合来进一步修饰来自由此类动物所产生完整抗体的人类可变区。
人抗体也可通过基于杂交瘤的方法来制备。已描述用于产生人类单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系。(例如，参见Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991))。经由人类B细胞杂交瘤技术产生的人抗体也描述于Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中。其他方法包括例如美国专利第7,189,826号(描述从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni，Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述人-人杂交瘤)中所描述的那些方法。人类杂交瘤技术(三源杂交瘤技术)也描述于Vollmers和Brandlein，Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)以及Vollmers和Brandlein，Methods and Findings in Experimental and ClinicalPharmacology,27(3):185-91(2005)中。
也可通过分离选自人类来源噬菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列来产生人抗体。接着可将此类可变结构域序列与期望的人类恒定结构域组合。从抗体文库选择人抗体的技术描述于下文中。
6.文库来源的抗体
本发明的抗MerTK抗体可通过筛选组合文库中具有一种或多种期望活性的抗体来分离。例如，此项技术中已知用于产生噬菌体展示文库和从此类文库筛选具有期望结合特性的抗体的多种方法。此类方法综述于例如Hoogenboom等人，Methods in MolecularBiology 178:1-37(O’Brien等人编辑，Human Press,Totowa,NJ,2001)中，并且进一步描述于例如McCafferty等人，Nature 348:552-554；Clackson等人，Nature 352:624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury，Methods inMolecular Biology 248:161-175(Lo编辑，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；以及Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，通过聚合酶链式反应(PCR)单独地克隆VH和VL基因谱并且将其随机重组于噬菌体文库中，接着可如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所描述筛选抗原结合噬菌体。噬菌体通常展示呈单链Fv(scFv)片段或呈Fab片段的抗体片段。来自经免疫来源的文库无需构筑杂交瘤即可提供针对免疫原的高亲和力抗体。可替代地，可如Griffiths等人，EMBO J,12:725-734(1993)中所描述来克隆原初谱(例如从人)，以向各种无任何免疫的非自体抗原以及自体抗原提供单一来源的抗体。最终，也可如Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)中所描述，通过从干细胞克隆未重排的V基因区段，并且使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外完成重排来合成地制备原初文库。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括例如：美国专利第5,750,373号和美国专利出版物第2005/0079574号、第2005/0119455号、第2005/0266000号、第2007/0117126号、第2007/0160598号、第2007/0237764号、第2007/0292936号和第2009/0002360号。
从人抗体文库分离的抗体或抗体片段在本文中视为人抗体或人抗体片段。
7.多特异性抗体
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施例中，一种结合特异性是针对MerTK的，并且另一种是针对任一其他抗原的。在某些实施例中，双特异性抗体可结合至MerTK的两个不同表位。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂局域化至表达MerTK的细胞。双特异性抗体可制备为全长抗体或抗体片段。
用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于重组共表达两个具有不同特异性的免疫球蛋白重链-轻链对(参见Milstein和Cuello，Nature 305:537(1983))、WO 93/08829和Traunecker等人，EMBO J.10:3655(1991))和“杵臼结构(knob-in-hole)”工程改造(例如，参见美国专利第5,731,168号)。多特异性抗体也可通过以下方式来制备：工程改造用于制备抗体Fc-异源二聚分子的静电牵引效应(WO 2009/089004A1)；使两个或更多个抗体或片段交联(例如，参见美国专利第4,676,980号和Brennan等人，Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链产生双特异性抗体(例如，参见Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用用于制备双特异性抗体片段的“双体抗体”技术(例如，参见Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；和使用单链Fv(sFv)二聚体(例如，参见Gruber等人，J.Immunol.,152:5368(1994))；以及制备三特异性抗体(例如，如Tutt等人，J.Immunol.147:60(1991)中所描述)。
本文也包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程改造抗体，包括“章鱼抗体”(例如，参见US 2006/0025576A1)。
本文中的抗体或片段也包括“双重作用的FAb”或“DAF”，其包含结合至MerTK以和另一不同抗原的抗原结合位点(例如，参见US 2008/0069820)。
8.抗体变体
在某些实施例中，预期本文所提供的抗MerTK抗体的氨基酸序列变体。例如，可期望改良抗MerTK抗体的结合亲和力和/或其他生物性质。抗体的氨基酸序列变体可通过将适当修饰引入至编码该抗体的核苷酸序列中或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内残基的缺失和/或***和/或取代。可实施缺失、***和取代的任一组合以达成最终构建体，条件是最终构建体具有期望特性，例如抗原结合。
a)取代、***和缺失变体
在某些实施例中，提供具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。用于取代诱变的目标位点包括HVR和FR。保守取代示于表1中的“优选取代”标题下。更多实质性变化提供于表1中的“示例性取代”标题下，并且如下文关于氨基酸侧链类别所进一步描述。可将氨基酸取代引入至目标抗体中并且针对期望活性对产物进行筛选，该期望活性是例如保留/改良抗原结合、降低免疫原性或改良ADCC或CDC。
表1
Figure BDA0003407662520000991
Figure BDA0003407662520001001
可根据常见侧链性质将氨基酸分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链定向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代将导致这些类别中的一者的成员交换为另一类别。
一种类型的取代变体涉及取代亲代抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择进行进一步研究的一种或多种所得变体相对于亲代抗体将在某些生物性质方面(例如增加的亲和力、降低的免疫原性)具有改质(例如改良)和/或将实质上保留亲代抗体的某些生物性质。示例性取代变体是亲和力成熟抗体，其可例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术(诸如本文所描述的那些技术)便捷地产生。简言之，使一个或多个HVR残基突变，并且将变体抗体展示在噬菌体上并针对特定生物活性(例如结合亲和力)进行筛选。
可对HVR作出改变(例如取代)以例如改良抗体亲和力。此类改变可在HVR“热点(hotspot)”(即由在体细胞成熟过程期间经历高频率突变的密码子编码的残基)(例如，参见Chowdhury，Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或接触抗原的残基中进行，其中测试所得变体VH或VL的结合亲和力。通过从二级文库构筑和重新选择来达成亲和力成熟已描述于例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人编辑，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在亲和力成熟的一些实施例中，通过多种方法中的任一者(例如易错PCR、链改组或寡核苷酸定向诱变)将多样性引入至选择用于成熟的可变基因中。二级文库由此创建。接着对该文库进行筛选以鉴定具有期望亲和力的任一抗体变体。引入多样性的另一方法涉及HVR定向方法，其中将若干个HVR残基(例如一次4至6个残基)随机化。可例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特定地鉴定参与抗原结合的HVR残基。特别地，通常靶向CDR-H3和L3。
在某些实施例中，取代、***或缺失可发生于一个或多个HVR内，只要此类改变不会实质上降低抗体结合抗原的能力即可。例如，可对HVR作出不会实质上降低结合亲和力的保守改变(例如如本文所提供的保守取代)。此类改变可例如在HVR中的抗原接触残基之外。在上文所提供变体VH和VL序列的某些实施例中，每个HVR未经改变，或含有不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085中所描述，用于鉴定抗体中可靶向用于诱变的残基或区域的有用方法称为“丙氨酸扫描诱变”。在此方法中，鉴定出残基或目标残基组(例如带电残基，诸如arg、asp、his、lys和glu)，并且用中性或带负电氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)替换以确定是否影响抗体与抗原的相互作用。可在对初始取代展现功能敏感性的氨基酸位置处引入其他取代。可替代地或另外地，抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原的间的接触点。作为取代候选物，可靶向或消除此类接触残基和相邻残基。可筛选变体以确定其是否含有期望性质。
氨基酸序列***包括氨基末端和/或羧基末端融合物(长度在一个残基至含有上百或更多个残基的多肽范围内)以及单一个或多个氨基酸残基的序列内***。末端***的实例包括具有N末端甲硫胺酰基残基的抗体。抗体分子的其他***变体包括抗体的N末端或C末端与酶(例如用于ADEPT)或延长抗体血清半衰期的多肽的融合物。
b)糖基化变体
在某些实施例中，对本文所提供的抗MerTK抗体进行改变以增加或降低抗体糖基化的程度。可通过改变氨基酸序列从而使得产生或移除一个或多个糖基化位点来便捷地完成抗体中糖基化位点的增加或缺失。
在抗体包含Fc区的情形下，可对与Fc区连接的碳水化合物进行改变。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含具支链、二分枝寡糖，其通常由N键联连接至Fc区的CH2结构域的Asn297。例如，参见Wright等人，TIBTECH 15:26-32(1997)。该寡糖可包括各种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及连接至二分枝寡糖结构“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施例中，可对本发明抗体中的寡糖进行修饰以产生具有某些改良性质的抗体变体。
在一个实施例中，提供抗体变体，该变体具有缺乏连接(直接或间接)至Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，此抗体中岩藻糖的量可为1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。如例如WO 2008/077546中所描述，岩藻糖的量是通过计算糖链内Asn297处的岩藻糖相对于连接至Asn 297的所有糖结构(例如复合、杂合和高甘露糖结构)的总和的平均量来确定，这些量如通过MALDI-TOF质谱法测量。Asn297是指位于Fc区中约位置297处的天冬酰胺残基(Fc区残基的Eu编号)；然而，因抗体中的微小序列变化，所以Asn297也可位于位置297上游或下游的约±3个氨基酸处，即，介于位置294与300之间。此类岩藻糖基化变体可具有改良的ADCC功能。例如，参见美国专利出版物第US 2003/0157108号(Presta,L.)；第US 2004/0093621号(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。与“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”抗体变体有关的出版物的实例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生去岩藻糖基化抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13CHO细胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请案第US 2003/0157108 A1号，Presta,L；和WO 2004/056312A1，Adams等人，特别地在实例11中)以及剔除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8剔除CHO细胞(例如，参见Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。
进一步提供具有二等分寡糖的抗体变体，例如其中连接至抗体Fc区的二分枝寡糖由GlcNAc二等分。此类抗体变体可具有降低的岩藻糖基化和/或改良的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美国专利第6,602,684号(Umana等人)；以及US 2005/0123546(Umana等人)中。也提供在连接至Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可具有改良的CDC功能。此类抗体变体描述于例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；以及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
c)Fc区变体
在某些实施例中，可将一个或多个氨基酸修饰引入至本文所提供抗MerTK抗体的Fc区中，藉此产生Fc区变体。该Fc区变体可包含人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc区)，该序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如取代)。
在某些实施例中，本发明涵盖抗体变体，该抗体变体具有一些(但非全部)效应功能，从儿使得该抗体变体成为许多应用的合意候选物，在这些应用中抗体的体内半衰期较为重要，但某些效应功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可进行体外和/或体内细胞毒性测定以证实CDC和/或ADCC活性降低/缺失。例如，可进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。介导ADCC的原代细胞(NK细胞)仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。FcR在造血细胞上的表达汇总于Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中。评估目标分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利第5,500,362号(例如，参见Hellstrom,I.等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；第5,821,337号(参见Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中。可替代地，可采用非放射性测定方法(例如，参见用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；和CytoTox
Figure BDA0003407662520001041
非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,WI)。用于此类测定的可用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可替代地或另外地，可在体内评估目标分子的ADCC活性，例如在诸如Clynes等人，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA 95:652-656(1998)中所公开的动物模型中。也可实施C1q结合测定以证实抗体不能结合C1q并且因此缺乏CDC活性。例如，参见WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为评估补体活化，可实施CDC测定(例如，参见Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie，Blood 103:2738-2743(2004))。也可使用此项技术中已知的方法来实施FcRn结合和体内清除/半衰期确定(例如，参见Petkova,S.B.等人，Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
效应功能降低的抗体包括Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一者或多者经取代的那些抗体(美国专利第6,737,056号)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两者或更多者处具有取代的Fc突变体，包括在残基265和297处取代为丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利第7,332,581号)。
描述具有经改良或降低的FcR结合的某些抗体变体。(例如，参见美国专利第6,737,056号；WO 2004/056312，和Shields等人，J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些实施例中，抗体变体包含具有一个或多个改良ADCC的氨基酸取代的Fc区，例如在Fc区的位置298、333和/或334(残基的EU编号)处的取代。
在一些实施例中，例如如美国专利第6,194,551号、WO 99/51642和Idusogie等人，J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所描述，在Fc区中作出改变，从而改变(即改良或降低)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。
半衰期延长并且与新生儿Fc受体(FcRn)(其负责将母体IgG转移至胎儿中)(Guyer等人，J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人，J.Immunol.24:249(1994))的结合改良的抗体描述于US2005/0014934A1(Hinton等人)中。那些抗体包含其中具有一个或多个取代的Fc区，该一个或多个取代改良Fc区与FcRn的结合。此类Fc变体包括在以下Fc区残基中的一者或多者处具有取代的那些变体：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如取代Fc区残基434(美国专利第7,371,826号)。
也参见Duncan和Winter，Nature 322:738-40(1988)；美国专利第5,648,260号；美国专利第5,624,821号；以及关于Fc区变体的其他实例的WO 94/29351。
在示例性实施例中，本文所公开的抗MerTK抗体在Fc区中包含LALPG突变。
d)半胱氨酸工程改造的抗体变体
在某些实施例中，可期望产生半胱氨酸工程改造的抗体，例如“硫MAb”，其中抗体的一个或多个残基经半胱氨酸残基取代。在特定实施例中，经取代残基在抗体的可及位点处出现。如本文所进一步描述，通过用半胱氨酸取代那些残基，反应性硫醇基团藉此定位于抗体的可及位点处，并且可用于使抗体结合至其他部分(诸如药物部分或连接基-药物部分)，以产生免疫缀合物。在某些实施例中，以下残基中的任一者或多者可经半胱氨酸取代：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；和重链Fc区的S400(EU编号)。可如例如美国专利第7,521,541号中所描述来产生半胱氨酸工程改造的抗体。
e)抗体衍生物
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体可经进一步修饰以含有此项技术中已知并且容易获得的其他非蛋白质性部分。适于衍生抗体的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、聚葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧杂环戊烷、聚-1,3,6-三氧杂环己烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)和聚葡萄糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛可因其在水中具有稳定性而在制造方面具有优势。该聚合物可具有任何分子量，并且可为具支链或无支链。连接至抗体的聚合物的数量可有所变化，并且若连接一个以上的聚合物，则所述聚合物可为相同或不同分子。一般而言，用于衍生的聚合物的数量和/或类型可基于包括但不限于以下的考虑因素来确定：欲改良抗体的特定性质或功能、抗体衍生物是否将用于定义条件下的疗法等。
在另一实施例中，提供抗体与非蛋白质性部分的缀合物，其可通过暴露于辐射来选择性地加热。在一个实施例中，非蛋白质性部分是碳纳米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可具有任何波长，并且包括但不限于如下波长：其并不会危害正常细胞，但会将非蛋白质性部分加热至可杀死抗体-非蛋白质性部分附近的细胞的温度。
B.重组方法和组合物
可使用如例如美国专利第4,816,567号中所描述的重组方法和组合物来产生抗体。在一个实施例中，提供编码本文所描述的抗MerTK抗体的经分离核酸。此类核酸可编码包含该抗体的VL的氨基酸序列和/或包含该抗体的VH的氨基酸序列(例如该抗体的轻链和/或重链)。在另一实施例中，提供一个或多个包含此核酸的载体(例如表达载体)。在另一实施例中，提供包含此核酸的宿主细胞。在一个此类实施例中，宿主细胞包含以下载体(例如已经以下载体转型)：(1)包含如下核酸的载体：其编码构成抗体的VL的氨基酸序列和构成抗体的VH的氨基酸序列，或(2)第一载体，其包含编码含有抗体的VL的氨基酸序列的核酸，和第二载体，其包含编码含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一个实施例中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施例中，提供制备抗MerTK抗体的方法，其中该方法包括在适于表达该抗体的条件下培养如上文所提供的包含编码该抗体的核酸的宿主细胞，和任选地从该宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收该抗体。
为了重组产生抗MerTK抗体，将例如如上文所描述的编码抗体的核酸分离并且***至一种或多种载体中以用于进一步克隆和/或在宿主细胞中表达。此核酸可使用常规程序容易地分离并且测序(例如通过使用能够与编码该抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。
用于克隆或表达抗体编码载体的合适宿主细胞包括本文所描述的原核或真核细胞。例如，抗体可在细菌中产生，特别是在无需糖基化和Fc效应功能时。关于在细菌中表达抗体片段和多肽，例如参见美国专利第5,648,237号、第5,789,199号和第5,840,523号。(也参见Charlton，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254页，其描述在大肠杆菌中表达抗体片段。)在表达后，抗体可以以可溶性部分从细菌细胞浆分离并且可经进一步纯化。
除原核生物以外，真核微生物(诸如丝状真菌或酵母)也是抗体编码载体的合适克隆或表达宿主，包括其糖基化路径已经“人源化”，从而产生具有部分或完全人类糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株。参见Gerngross，Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)，和Li等人，Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也可源自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴定出可结合昆虫细胞使用、特别是用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的多种杆状病毒株。
也可利用植物细胞培养物作为宿主。例如，参见美国专利第5,959,177号、第6,040,498号、第6,420,548号、第7,125,978号和第6,417,429号(描述用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，可使用适应于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是通过SV40转型的猴肾CV1株(COS-7)；人类胚肾系(293或293细胞，如例如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所描述)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠赛特利细胞(TM4细胞，如例如Mather，Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所描述)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人类子***细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；布法罗大鼠肝细胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A)；人类肺细胞(W138)；人类肝细胞(Hep G2)；小鼠***肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如例如Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci 383:44-68(1982)中所描述；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他可用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，例如参见Yazaki和Wu，Methods inMolecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268页(2003)。
C.测定
可通过此项技术中已知的各种测定来鉴定、筛选或表征本文所提供的抗MerTK抗体的其物理/化学性质和/或生物活性。
在一方面，测试本发明抗体的抗原结合活性，例如通过诸如ELISA、蛋白质印迹等已知方法来实施。
在另一方面，可使用竞争测定来鉴定与本文所公开抗MerTK抗体中的一者或多者竞争结合至MerTK的抗体。在某些实施例中，此类竞争性抗体结合至由本文所公开抗MerTK抗体中的一者或多者所结合的相同表位(例如线性或构形表位)。用于定位抗体所结合表位的详细示例性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”，Methods inMolecular Biology，第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
在示例性竞争测定中，在溶液中培育固定化MerTK，该溶液包含结合至MerTK的第一经标记抗体以及正在测试与该第一抗体竞争结合至MerTK的能力的第二未经标记抗体。该第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化MerTK在包含第一经标记抗体而非第二未经标记抗体的溶液中培育。在允许第一抗体与MerTK结合的条件下培育后，去除过量未结合抗体，并且测量与固定化MerTK缔合的标记的量。若与固定化MerTK缔合的标记的量在测试样品中相对于对照样品实质上减少，则此指示第二抗体与第一抗体竞争与MerTK的结合。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual，第14章(ColdSpring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
在另一方面，提供用于鉴定具有生物活性的其抗MerTK抗体的测定。生物活性可包括例如降低MerTK介导的吞噬活性、降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除和/或增强检查点抑制剂的肿瘤免疫原性。也提供在体内和/或在体外具有此生物活性的抗体。
在某些实施例中，测试本发明抗体的此生物活性。本文(包括下文的例示部分)进一步描述适于测量此生物活性的测定的实例。
D.免疫缀合物
本发明也提供免疫缀合物，其包含本文中与一种或多种细胞毒性剂结合的抗MerTK抗体，该细胞毒性剂诸如化疗剂或药物、生长抑制剂、毒素(例如蛋白质毒素、细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素。
在一个实施例中，免疫结合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体缀合至一种或多种药物，该药物包括但不限于类美登素(maytansinoid)(参见美国专利第5,208,020号、第5,416,064号和欧洲专利EP 0 425 235 B1)；奥里斯他汀(auristatin)，诸如单甲基奥里斯他汀药物部分DE和DF(MMAE和MMAF)(参见美国专利第5,635,483号和第5,780,588号和第7,498,298号)；多拉司他汀(dolastatin)；卡奇霉素(calicheamicin)或其衍生物(参见美国专利第5,712,374号、第5,714,586号、第5,739,116号、第5,767,285号、第5,770,701号、第5,770,710号、第5,773,001号和第5,877,296号；Hinman等人，Cancer Res.53:3336-3342(1993)；和Lode等人，Cancer Res.58:2925-2928(1998))；蒽环，诸如道诺霉素或多柔比星(参见Kratz等人，Current Med.Chem.13:477-523(2006)；Jeffrey等人，Bioorganic&Med.Chem.Letters 16:358-362(2006)；Torgov等人，Bioconj.Chem.16:717-721(2005)；Nagy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等人，Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002)；King等人，J.Med.Chem.45:4336-4343(2002)；和美国专利第6,630,579号)；甲氨蝶呤；长春地辛(vindesine)；紫杉烷，诸如多西他赛、紫杉醇、拉洛他赛(larotaxel)、替司他赛(tesetaxel)和奥他赛(ortataxel)；单端孢霉烯(trichothecene)；以及CC1065。
在另一实施例中，免疫缀合物包含缀合至酶活性毒素或其片段的如本文所描述的抗体，该酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A链、相思子素A链、莫迪素(modeccin)A链、α-八迭球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、泻果素(curcin)、巴豆毒素、皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树素、有丝***素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和新月毒素(tricothecene)。
在另一实施例中，免疫缀合物包含缀合至放射性原子以形成放射性缀合物的如本文所描述的抗体。多种放射性同位素可用于产生放射性缀合物。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。在使用放射性缀合物进行检测时，其可包含用于闪烁法研究的放射性原子，例如tc99m或I123；或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，mri)的自旋标记，诸如碘-123(同上)、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
抗体与细胞毒性剂的缀合物可使用多种双功能蛋白质偶合剂来制备，诸如3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-琥珀酰亚胺酯(SPDP)、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚胺基硫杂环戊烷(It)、亚氨酸酯的双功能衍生物(诸如己二酰亚胺二甲酯HCl)、活性酯(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(诸如戊二醛)、双-迭氮基化合物(诸如双(对迭氮基苯甲酰基)己二胺)、双-重氮衍生物(诸如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。例如，可如Vitetta等人，Science 238:1098(1987)中所描述，制备蓖麻毒素免疫毒素。经碳-14标记的1-异氰硫基苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于使放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。参见WO94/11026。连接基可是有助于细胞中细胞毒性药物释放的“可裂解连接基”。例如，可使用酸不稳定连接基、肽酶敏感性连接基、光不稳定连接基、二甲基连接基或含二硫键的连接基(Chari等人，Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利第5,208,020号)。
本文的免疫缀合物或ADC明确地涵盖但不限于利用交联试剂制备的此类缀合物，所述交联试剂包括但不限于BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB以及SVSB((4-乙烯基砜)苯甲酸琥珀酰亚胺酯)，以上试剂可商业购得(例如购自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
E.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些实施例中，本文所提供的抗MerTK抗体中的任一者可用于检测生物样品中MerTK的存在。如本文所用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。
在一个实施例中，提供用于诊断或检测方法中的抗MerTK抗体。在另一方面，提供检测生物样品中MerTK的存在的方法。在某些实施例中，该方法包括在允许抗MerTK抗体与MerTK结合的条件下使生物样品与如本文所描述的抗MerTK抗体接触，及检测在抗MerTK抗体与MerTK的间是否形成复合物。此方法可是体外或体内方法。在一个实施例中，抗MerTK抗体用于选择适用于利用抗MerTK抗体进行治疗的个体，例如在MerTK是用于选择患者的生物标志物的情形下。
在某些实施例中，提供经标记的抗MerTK抗体。标记包括但不限于直接检测的标记或部分(诸如荧光标记、发色标记、电子致密标记、化学发光标记和放射性标记)，以及经由例如酶反应或分子相互作用间接检测的部分(诸如酶或配体)。示例性标记包括但不限于放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I、荧光团(诸如稀土螯合物或荧光黄及其衍生物)、玫瑰红及其衍生物、丹磺酰、伞形酮、荧光素酶(例如萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶)(美国专利第4,737,456号)、荧光素、2,3-二氢酞嗪二酮、辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸去氢酶)、杂环氧化酶(诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶，其与诸如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶等采用过氧化氢来氧化染料前体的酶结合)、生物素/抗生物素蛋白、自旋标记、噬菌体标记、稳定自由基及诸如此类。
F.药物组合物和制剂
本文也提供药物组合物和制剂，其包含抗MerTK抗体和药用载体。
在一些实施例中，本文所描述的抗MerTK抗体是在包含约60mg/mL的量的该抗体、约20mM浓度的组氨酸乙酸盐、约120mM浓度的蔗糖和0.04％(w/v)浓度的聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)的制剂中，并且该制剂的pH为约5.8。在一些实施例中，本文所描述的抗PDL1抗体是在包含约125mg/mL的量的该抗体、约20mM浓度的组氨酸乙酸盐、约240mM浓度的蔗糖和0.02％(w/v)浓度的聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)的制剂中，并且该制剂的pH为约5.5。
在制备目标抗MerTK抗体(例如，用于产生可如本文所公开来调配所述的抗体的技术详细描述于本文中并且为此项技术中所已知)的后，制备包含其的药物制剂。在某些实施例中，待调配的抗MerTK抗体未经受先前冻干，并且本文中的目标制剂是水性制剂。在某些实施例中，抗MerTK抗体是全长抗体。在一个实施例中，制剂中的抗MerTK抗体是抗体片段，诸如F(ab’)2，在该情形下，可能需要解决全长抗体可能不会发生的问题(诸如将抗体剪切成Fab)。通过虑及例如期望的剂量体积和一种或多种施用模式来确定制剂中存在的抗MerTK抗体的治疗有效量。约25mg/mL至约150mg/mL、或约30mg/mL至约140mg/mL、或约35mg/mL至约130mg/mL、或约40mg/mL至约120mg/mL、或约50mg/mL至约130mg/mL、或约50mg/mL至约125mg/mL、或约50mg/mL至约120mg/mL、或约50mg/mL至约110mg/mL、或约50mg/mL至约100mg/mL、或约50mg/mL至约90mg/mL、或约50mg/mL至约80mg/mL、或约54mg/mL至约66mg/mL是制剂中的示例性抗体浓度。
制备水性制剂，其包含于pH缓冲溶液中的抗体。在一些实施例中，本公开的缓冲液的pH是在约5.0至约7.0范围内。在某些实施例中，pH是在约5.0至约6.5范围内，pH是在约5.0至约6.4范围内，在约5.0至约6.3范围内，pH是在约5.0至约6.2范围内，pH是在约5.0至约6.1范围内，pH是在约5.5至约6.1范围内，pH是在约5.0至约6.0范围内，pH是在约5.0至约5.9范围内，pH是在约5.0至约5.8范围内，pH是在约5.1至约6.0范围内，pH是在约5.2至约6.0范围内，pH是在约5.3至约6.0范围内，pH是在约5.4至约6.0范围内，pH是在约5.5至约6.0范围内，pH是在约5.6至约6.0范围内，pH是在约5.7至约6.0范围内，或pH是在约5.8至约6.0范围内。在一些实施例中，制剂的pH为6.0或约6.0。在一些实施例中，制剂的pH为5.9或约5.9。在一些实施例中，制剂的pH为5.8或约5.8。在一些实施例中，制剂的pH为5.7或约5.7。在一些实施例中，制剂的pH为5.6或约5.6。在一些实施例中，制剂的pH为5.5或约5.5。在一些实施例中，制剂的pH为5.4或约5.4。在一些实施例中，制剂的pH为5.3或约5.3。在一些实施例中，制剂的pH为5.2或约5.2。将pH控制在此范围内的缓冲液的实例包括组氨酸(诸如L-组氨酸)或乙酸钠。在某些实施例中，缓冲液含有浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐或乙酸钠。在一些实施例中，缓冲液含有以下浓度的组氨酸乙酸盐或乙酸钠：约15mM至约25mM、约16mM至约25mM、约17mM至约25mM、约18mM至约25mM、约19mM至约25mM、约20mM至约25mM、约21mM至约25mM、约22mM至约25mM、约15mM、约16mM、约17mM、约18mM、约19mM、约20mM、约21mM、约22mM、约23mM、约24mM或约25mM。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.0。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.1。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.2。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.3。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.4。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.5。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.6。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH5.7。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.8。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.9。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 6.0。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 6.1。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 6.2。在一个实施例中，缓冲液是约20mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 6.3。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.2。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.3。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.4。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.5。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.6。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.7。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.8。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 5.9。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 6.0。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 6.1。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH6.2。在一个实施例中，缓冲液是约25mM的量的组氨酸乙酸盐或乙酸钠，pH 6.3。
在一些实施例中，制剂进一步包含约60mM至约240mM的量的蔗糖。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为约60mM至约230mM、约60mM至约220mM、约60mM至约210mM、约60mM至约200mM、约60mM至约190mM、约60mM至约180mM、约60mM至约170mM、约60mM至约160mM、约60mM至约150mM、约60mM至约140mM、约80mM至约240mM、约90mM至约240mM、约100mM至约240mM、约110mM至约240mM、约120mM至约240mM、约130mM至约240mM、约140mM至约240mM、约150mM至约240mM、约160mM至约240mM、约170mM至约240mM、约180mM至约240mM、约190mM至约240mM、约200mM至约240mM、约80mM至约160mM、约100mM至约140mM或约110mM至约130mM。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为约60mM、约70mM、约80mM、约90mM、约100mM、约110mM、约120mM、约130mM、约140mM、约150mM、约160mM、约170mM、约180mM、约190mM、约200mM、约210mM、约220mM、约230mM或约240mM。
在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约40mg/ml至约125mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗体浓度为约40mg/ml至约120mg/ml、约40mg/ml至约110mg/ml、约40mg/ml至约100mg/ml、约40mg/ml至约90mg/ml、约40mg/ml至约80mg/ml、约40mg/ml至约70mg/ml、约50mg/ml至约120mg/ml、约60mg/ml至约120mg/ml、约70mg/ml至约120mg/ml、约80mg/ml至约120mg/ml、约90mg/ml至约120mg/ml或约100mg/ml至约120mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约60mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约65mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约70mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约75mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约80mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约85mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约90mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约95mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约100mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约110mg/ml。在一些实施例中，制剂中的抗MerTK抗体浓度为约125mg/ml。
在一些实施例中，将表面活性剂添加至抗MerTK抗体制剂。示例性表面活性剂包括非离子表面活性剂，诸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188等)。所添加表面活性剂的量应可降低所调配抗体的聚集和/或使制剂中微粒的形成最小化和/或降低吸附。例如，表面活性剂可以约0.001％至约0.5％(w/v)的量存在于制剂中。在一些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)为约0.005％至约0.2％、约0.005％至约0.1％、约0.005％至约0.09％、约0.005％至约0.08％、约0.005％至约0.07％、约0.005％至约0.06％、约0.005％至约0.05％、约0.005％至约0.04％、约0.008％至约0.06％、约0.01％至约0.06％、约0.02％至约0.06％、约0.01％至约0.05％或约0.02％至约0.04％。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.005％或约0.005％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.006％或约0.006％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.007％或约0.007％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.008％或约0.008％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.009％或约0.009％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.01％或约0.01％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.02％或约0.02％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.03％或约0.03％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.04％或约0.04％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.05％或约0.05％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.06％或约0.06％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.07％或约0.07％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.08％或约0.08％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.1％或约0.1％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.2％或约0.2％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.3％或约0.3％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.4％或约0.4％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.5％或约0.5％的量存在于制剂中。
在一个实施例中，制剂含有上文所鉴定的药剂(例如抗体、缓冲剂、蔗糖和/或表面活性剂)，并且基本上不含一种或多种防腐剂，诸如苄醇、苯酚、间甲酚、氯丁醇和苄索氯铵。在另一实施例中，制剂中可包括防腐剂，特别是在制剂是多剂量制剂的情形下。防腐剂的浓度可在约0.1％至约2％、优选约0.5％至约1％范围内。制剂中可包括一种或多种其他药用载体、赋形剂或稳定剂(诸如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.编辑(1980)中所描述的那些药剂)，条件是其不会不利地影响制剂的期望特性。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括：附加缓冲剂；共溶剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；螯合剂，诸如EDTA；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；生物可降解聚合物，诸如聚酯；和/或成盐相对离子。本文的示例性药用载体进一步包括间质性药物分散剂，诸如可溶性中性活性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人类可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
Figure BDA0003407662520001171
Baxter International,Inc.)。某些示例性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)描述于美国专利出版物第2005/0260186号和第2006/0104968号中。在一方面，将sHASEGP与一种或多种附加糖胺聚糖酶(诸如软骨素酶)组合。
本文的制剂也可视需要含有一种以上用于所治疗特定适应症的蛋白质，优选为互补活性不会对其他蛋白质产生不利影响的那些蛋白质。例如，倘若抗体是抗MerTK，则可将其与另一药剂(例如化疗剂和/或抗瘤剂)组合。
如本文所描述的药物组合物和制剂可通过将具有期望纯度的活性成分(诸如抗体或多肽)与一种或多种任选地存在的药用载体混合来制备(Remington’s PharmaceuticalSciences，第16版，Osol,A编辑(1980))，其呈冻干制剂或水溶液的形式。药用载体在所采用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵(benzalkonium chloride)、苄索氯铵(benzethoniumchloride)；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲基酯或对羟基苯甲酸丙基酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯基吡咯啶酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐相对离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文的示例性药用载体进一步包括间质性药物分散剂，诸如可溶性中性活性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人类可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
Figure BDA0003407662520001181
Baxter International,Inc.)。某些示例性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)描述于美国专利出版物第2005/0260186号和第2006/0104968号中。在一方面，将sHASEGP与一种或多种附加糖胺聚糖酶(诸如软骨素酶)组合。
示例性冻干抗体制剂描述于美国专利第6,267,958号中。水性抗体制剂包括美国专利第6,171,586号和WO2006/044908中所描述的那些制剂，后者制剂包括组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文的组合物和制剂也可视需要含有一种以上用于所治疗特定适应症的活性成分，优选为互补活性不会对彼此产生不利影响的那些成分。此类活性成分适于以对预期目的有效的量以组合形式存在。
可将活性成分分别装入例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中、胶质药物递送***(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗滴乳液中。此类技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.编辑(1980)中。
可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有抗MerTK抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质呈成形对象的形式，例如膜或微胶囊。欲用于体内施用的制剂通常是无菌的。无菌性可通过例如经由无菌滤膜过滤来容易地实现。
III.治疗方法和用途
在一方面，本公开提供治疗患有癌症的个体的方法，其包括向该个体施用有效量的如上文所描述的抗MerTK抗体。
(i)单一疗法
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体是作为单一疗法施用以治疗患有癌症的个体。如本文所用，“癌症”是指或描述哺乳动物中的通常以细胞生长失调为特征的生理状况。在某些实施例中，癌症可是实体癌症或血液癌症。实体癌症的特征通常在于特定组织中的肿瘤团块形成。如本文所用，“肿瘤”是指所有赘瘤细胞生长和增殖(无论是恶性的抑或良性的)，以及所有癌前和癌性细胞和组织。欲利用本公开的抗MerTK抗体治疗的实体癌症的非限制性实例包括癌、淋巴瘤、胚细胞瘤和肉瘤。此类癌症的更特定实例包括但不限于鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric cancer或stomach cancer)(包括胃肠癌和胃肠基质癌)、胰脏癌、胶质母细胞瘤、子***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿路癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney cancer或renalcancer)、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、***癌、***癌、黑色素瘤、浅表性扩散性黑色素瘤、恶性雀斑样痣黑色素瘤、肢端着色斑性黑色素瘤、结节性黑色素瘤以及与斑痣性错构瘤病相关的异常血管增生、水肿(诸如与脑瘤相关的水肿)、麦格氏症候群(Meigs’syndrome)、脑头颈癌和相关转移。在某些实施例中，适于通过本公开的抗MerTK抗体治疗的癌症包括乳腺癌、结肠直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、***癌、肝癌、胰脏癌、软组织肉瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi’s sarcoma)、类癌、头颈癌、卵巢癌和间皮瘤。在一些实施例中，癌症选自：小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌(CRC)和肝细胞癌。然而，在一些实施例中，癌症选自：非小细胞肺癌、结肠直肠癌、胶质母细胞瘤和乳腺癌，包括那些癌症的转移形式。在一些实施例中，癌症是结肠直肠癌，包括结肠癌和直肠癌。
相比之下，血液癌症起源于血液或骨髓。在一些实施例中，欲利用本公开的抗MerTK抗体治疗的血液癌症是白血病。白血病的实例包括但不限于慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞性白血病；和急性骨髓母细胞性白血病。在一些实施例中，欲利用本公开的抗MerTK抗体治疗的血液癌症是淋巴瘤。淋巴瘤的非限制性实例包括T细胞淋巴瘤(诸如成人T细胞白血病/淋巴瘤；肝脾T细胞淋巴瘤；外周T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤；和血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤)、B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)；小淋巴细胞性(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞性NHL；高级淋巴母细胞性NHL；高级非裂解小细胞NHL；巨大肿瘤病变(bulky disease)NHL；弥漫性大B细胞淋巴瘤；外套细胞淋巴瘤；柏基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦登斯特隆巨球蛋白血症(Waldenstrom’s Macroglobulinemia))、霍奇金氏淋巴瘤和移植后淋巴增殖性疾患(PTLD)。在一些实施例中，欲利用本公开的抗MerTK抗体治疗的血液癌症是骨髓瘤。在具体实施例中，骨髓瘤是浆细胞瘤或多发性骨髓瘤。在某些实施例中，适于通过本公开的抗MerTK抗体治疗的癌症包括非霍奇金氏淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在另一方面，本文提供用于治疗个体的癌症或延迟其进展的方法，其包括向该个体施用有效量的如本公开中所描述的抗MerTK抗体。在一些实施例中，治疗使得在停止治疗之后个体的应答持续。本文所描述的方法可用于治疗期望增强免疫原性的病症，诸如增加肿瘤免疫原性以供治疗癌症。本文也提供增强患有癌症的个体的免疫功能的方法，其包括向该个体施用有效量的如本公开中所描述的抗MerTK抗体。在一些实施例中，癌症表达功能性STING、功能性Cx43和功能性cGAS多肽。功能性蛋白质是能够在细胞中执行其常规功能的蛋白质。功能性蛋白质的实例可包括野生型蛋白质、带标签的蛋白质和突变蛋白质，其与野生型蛋白质相比保留或改良蛋白质功能。蛋白质功能可通过本领域技术人员已知的任何方法来测量，包括对蛋白质或mRNA表达进行测定和对基因组DNA或mRNA进行测序。在一些实施例中，癌症包含表达功能性STING多肽的肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性cGAS多肽的肿瘤细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性Cx43多肽的肿瘤细胞。在一些实施例中，癌症是结肠直肠癌，包括结肠癌和直肠癌。
本文也提供降低个体中MerTK介导的对凋亡细胞清除的方法，其包括向该个体施用有效量的如本公开中所描述的抗MerTK抗体，以降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。在一些实施例中，对凋亡细胞的清除降低1-10倍、1-8倍、1-5倍、1-4倍、1-3倍、1-2倍、2-10倍、2-8倍、2-5倍、2-4倍、2-3倍、3-10倍、3-8倍、3-5倍、3-4倍，或降低至少约1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。可通过将施用有效量的抗MerTK抗体或其免疫缀合物之后个体样品中的MerTK介导的对凋亡细胞清除水平与MerTK介导的对凋亡细胞清除的参考水平进行比较来确定MerTK介导的对凋亡细胞清除的降低。在一些实施例中，参考水平是参考样品中MerTK介导的对凋亡细胞清除的水平。在一些实施例中，参考样品取自施用有效量的抗MerTK抗体或其免疫缀合物之前的受试者。在一些实施例中，样品包含肿瘤组织或肿瘤细胞。
在一些实施例中，本公开的抗MerTK抗体将对凋亡细胞的吞噬活性降低约10-100％、20-100％、30-100％、40-100％、50-100％、60-100％、70-100％、75-100％、80-100％、85-100％、90-100％、95-100％、10-95％、20-95％、30-95％、40-95％、50-95％、60-95％、70-95％、75-95％、80-95％、85-95％、90-95％、10-90％、20-90％、30-90％、40-90％、50-90％、60-90％、70-90％、75-90％、80-90％、85-90％、10-85％、20-85％、30-85％、40-85％、50-85％、60-85％、70-85％、75-85％、80-85％、10-80％、20-80％、30-80％、40-80％、50-80％、60-80％、70-80％、75-80％、10-75％、20-75％、30-75％、40-75％、50-75％、60-75％、70-75％、10-70％、20-70％、30-70％、40-70％、50-70％、60-70％、10-65％、20-65％、30-65％、40-65％、50-65％、60-65％、10-60％、20-60％、30-60％、40-60％、50-60％、10-55％、20-55％、30-55％、40-55％、50-55％、10-40％、20-40％或30-40％，或降低至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施例中，抗MerTK抗体降低对凋亡细胞的吞噬活性的半最大抑制浓度(IC50)为约1pM-50pM、1pM-100pM、1pM-500pM、1pM-1nM、1pM-1.5nM、5pM-50pM、5pM-100pM、5pM-500pM、5pM-1nM、5pM-1.5nM、10pM-50pM、10pM-100pM、10pM-500pM、10pM-1nM、10pM-1.5nM、50pM-100pM、50pM-500pM、50pM-1nM、50pM-1.5nM、100pM-500pM、100pM-1nM或100pM-1.5nM。
在一些实施例中，个体是人。
抗MerTK抗体可静脉内、肌内、皮下、经局部、经口、经皮、腹膜内、眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、室内或鼻内施用。抗MerTK抗体的适当剂量可基于欲治疗疾病的类型、疾病的严重程度和病程、个体的临床状况、个体的临床病症及对治疗的应答以及主治医师的判断来确定。
(ii)与附加疗法的组合
在一些实施例中，所述用途和方法可进一步包含附加疗法或施用有效量的附加治疗剂。附加疗法可是放射疗法、手术(例如***肿瘤切除术和***切除术)、化学疗法、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法、骨髓移植、纳米疗法、单克隆抗体疗法或前述的组合。附加疗法可呈辅助或新辅助疗法形式。在一些实施例中，附加疗法是施用小分子酶抑制剂或抗转移剂。在一些实施例中，附加疗法是施用副作用限制剂(例如意欲减轻治疗副作用的出现和/或严重程度的药剂，诸如抗恶心剂等)。在一些实施例中，附加疗法是放射疗法。在一些实施例中，附加疗法是手术。在一些实施例中，附加疗法是放射疗法与手术的组合。在一些实施例中，附加疗法是伽马辐射。在一些实施例中，附加疗法是靶向PI3K/AKT/mTOR路径的疗法、HSP90抑制剂、微管蛋白抑制剂、凋亡抑制剂和/或化学预防剂。
在一些实施例中，附加疗法是针对B7-H3(也称为CD276)的拮抗剂，例如阻断性抗体MGA271；针对TGFβ的拮抗剂，例如美替木单抗(metelimumab)(也称为CAT-192)、夫苏木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)或LY2157299；包含过继性转移表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(例如细胞毒性T细胞或CTL)的治疗；包含过继性转移包含显性负性TGFβ受体(例如显性负性TGFβII型受体)的T细胞的治疗；包含HERCREEM方案(例如，参见ClinicalTrials.gov标识符NCT00889954)的治疗；针对CD137(也称为TNFRSF9、4-1BB或ILA)的激动剂，例如活化性抗体乌瑞鲁单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)；针对CD40的激动剂，例如活化性抗体CP-870893；针对OX40(也称为CD134)的激动剂，例如与不同抗OX40抗体(例如AgonOX)联合施用的活化性抗体；针对CD27的激动剂，例如活化性抗体CDX-1127、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)、1-甲基-D-色氨酸(也称为1-D-MT)；抗体-药物缀合物(在一些实施例中，包含莫登素(mertansine)或单甲基奥里斯他汀E(MMAE))；抗NaPi2b抗体-MMAE结合物(也称为DNIB0600A或RG7599)曲妥珠单抗艾坦辛(trastuzumab emtansine)(也称为DM1、阿多-曲妥珠单抗艾坦辛(ado-trastuzumab emtansine)或
Figure BDA0003407662520001231
Genentech)、DMUC5754A；靶向内皮素B受体(EDNBR)的抗体-药物缀合物，例如针对EDNBR的抗体与MMAE(血管生成抑制剂)的结合物；针对VEGF(例如VEGF-A)的抗体贝伐珠单抗(也称为
Figure BDA0003407662520001232
Genentech)；针对血管生成素2(也称为Ang2)的抗体MEDI3617(抗赘瘤剂)；靶向CSF-1R(也称为M-CSFR或CD115)的药剂；抗CSF-1R(也称为IMC-CS4)；干扰素，例如干扰素α或干扰素γ；罗扰素-A(Roferon-A)；GM-CSF(也称为重组人类颗粒球巨噬细胞群落刺激因子、rhu GM-CSF、沙格司亭(sargramostim)或
Figure BDA0003407662520001233
)；IL-2(也称为阿地白介素(aldesleukin)或
Figure BDA0003407662520001234
)；IL-12；靶向CD20的抗体(在一些实施例中，靶向CD20的抗体是奥妥珠单抗(obinutuzumab)(也称为GA101或
Figure BDA0003407662520001235
)或利妥昔单抗(rituximab))；靶向GITR的抗体(在一些实施例中，靶向GITR的抗体是TRX518)，联合癌症疫苗(在一些实施例中，癌症疫苗是肽癌症疫苗，其在一些实施例中是个性化肽疫苗；在一些实施例中，肽癌症疫苗是多价长肽、多肽、肽混合剂、杂合肽或肽脉冲树突细胞疫苗(例如，参见Yamada等人，Cancer Sci,104:14-21,2013))，其联合佐剂使用；TLR激动剂，例如聚-ICLC(也称为
Figure BDA0003407662520001241
)、LPS、MPL或CpG ODN；肿瘤坏死因子(TNF)α；IL-1；HMGB1；IL-10拮抗剂；IL-4拮抗剂；IL-13拮抗剂；HVEM拮抗剂；ICOS激动剂，例如通过施用ICOS-L或针对ICOS的激动性抗体；靶向CX3CL1的治疗；靶向CXCL10的治疗；靶向CCL5的治疗；LFA-1或ICAM1激动剂；选择素激动剂；靶向疗法；B-Raf抑制剂威罗菲尼(vemurafenib)(也称为
Figure BDA0003407662520001242
)、达拉菲尼(dabrafenib)(也称为
Figure BDA0003407662520001243
)、厄洛替尼(也称为
Figure BDA0003407662520001244
)；MEK(诸如MEK1(也称为MAP2K1)或MEK2(也称为MAP2K2))的抑制剂考比替尼(cobimetinib)(也称为GDC-0973或Xl-518)、曲美替尼(trametinib)(也称为
Figure BDA0003407662520001245
)；K-Ras抑制剂；c-Met抑制剂昂妥珠单抗(onartuzumab)(也称为MetMAb)；Alk抑制剂AF802(也称为CH5424802或阿雷替尼(alectinib))；磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂BKM120、艾代拉里斯(idelalisib)(也称为GS-1101或CAL-101)、哌立福辛(perifosine)(也称为KRX-0401)、Akt、MK2206、GSK690693、GDC-0941；mTOR抑制剂西罗莫司(sirolimus)(也称为雷帕霉素(rapamycin))、替西罗莫司(temsirolimus)(也称为CCI-779或
Figure BDA0003407662520001246
)、依维莫司(everolimus)(也称为RAD001)、利达莫司(ridaforolimus)(也称为AP-23573、MK-8669或地伏莫司(deforolimus))、OSI-027、AZD8055、INK128；双重PI3K/mTOR抑制剂XL765、GDC-0980、BEZ235(也称为BEZ235)、BGT226、GSK2126458、PF-04691502或PF-05212384(也称为PKI-587)。在一些实施例中，附加治疗剂是CT-011(也称为匹利珠单抗(Pidilizumab)或MDV9300；CAS登记号1036730-42-3；CureTech/Medivation)。CT-011也称为hBAT或hBAT-1，其是WO2009/101611中所描述的抗体。
(iii)与免疫检查点抑制剂的组合
在一些实施例中，附加治疗剂是免疫检查点抑制剂。在某些方面中，本申请案提供增强患有癌症的个体的免疫功能的方法，其包括施用有效量的抗MerTK抗体与免疫检查点抑制剂的组合。在某些实施例中，抗MerTK抗体使免疫检查点抑制剂的免疫效应提高约2倍、3倍、5倍、8倍、10倍、15倍或20倍。在某些实施例中，抗MerTK抗体使免疫检查点抑制剂的免疫效应提高约1-2倍、1-5倍、1-10倍、1-15倍、1-20倍、1-25倍、1-30倍、1-50倍、1-75倍、1-100倍、1-150倍、1-200倍、1-250倍、1.5-2倍、1.5-5倍、1.5-10倍、1.5-15倍、1.5-20倍、1.5-25倍、1.5-30倍、1.5-50倍、1.5-75倍、1.5-100倍、1.5-150倍、1.5-200倍、1.5-250倍、2-5倍、2-10倍、2-15倍、2-20倍、2-25倍、2-30倍、2-50倍、2-75倍、2-100倍、2-150倍、2-200倍、2-250倍、2.5-5倍、2.5-10倍、2.5-15倍、2.5-20倍、2.5-25倍、2.5-30倍、2.5-50倍、2.5-75倍、2.5-100倍、2.5-150倍、2.5-200倍、2.5-250倍、5-10倍、5-15倍、5-20倍、5-25倍、5-30倍、5-50倍、5-75倍、5-100倍、5-150倍、5-200倍、5-250倍、10-15倍、10-20倍、10-25倍、10-30倍、10-50倍、10-75倍、10-100倍、10-150倍、10-200倍、10-250倍、20-25倍、20-30倍、20-50倍、20-75倍、20-100倍、20-150倍、20-200倍、20-250倍、25-30倍、25-50倍、25-75倍、25-100倍、25-150倍、25-200倍或25-250倍，或增加至少约1倍、2倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、75倍、80倍、90倍、100倍、125倍、150倍、200倍、225倍或250倍。
在一些实施例中，个体患有对一种或多种免疫检查点抑制剂具有抗性(已展示具有抗性)的癌症。在一些实施例中，对免疫检查点抑制剂的抗性包括癌症或难治性癌症的复发。复发可是指在治疗后，癌症在原始位点或新位点重新出现。在一些实施例中，对免疫检查点抑制剂的抗性包括在利用免疫检查点抑制剂治疗期间癌症的进展。在一些实施例中，对免疫检查点抑制剂的抗性包括对治疗没有应答的癌症。癌症可在治疗开始具有抗性，或其可在治疗期间产生抗性。在一些实施例中，癌症处于早期或晚期。
关于治疗性免疫检查点抑制剂的进一步细节提供于下文和例如Byun等人(2017)Nat Rev Endocrinol.13:195-207；La-Beck等人(2015)Pharmacotherapy.35(10):963-976；Buchbinder等人(2016)Am J Clin Oncol.39(1):98-106；Michot等人(2016)Eur JCancer.54:139-148，和Topalian等人(2016)Nat Rev Cancer.16:275-287中。
CTLA4抑制剂
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)(也称为CD152)抑制剂。在一些实施例中，CTLA-4抑制剂是阻断性抗体伊匹单抗(ipilimumab)(也称为MDX-010、MDX-101或
Figure BDA0003407662520001261
)、曲美目单抗(tremelimumab)(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206)。
PD-1轴结合拮抗剂
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是PD-1轴结合拮抗剂。
本文提供用于治疗个体癌症的方法，其包括向该个体施用有效量的PD-1轴结合拮抗剂和本公开的抗MerTK抗体。本文也提供增强个体(例如患有癌症的个体)的免疫功能或应答的方法，其包括向该个体施用有效量的PD-1轴结合拮抗剂和本公开的抗MerTK抗体。
在此类方法中，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PDL1结合拮抗剂和/或PDL2结合拮抗剂。“PD-1”的替代名称包括CD279和SLEB2。“PDL1”的替代名称包括B7-H1、B7-4、CD274和B7-H。“PDL2”的替代名称包括B7-DC、Btdc和CD273。在一些实施例中，PD-1、PDL1和PDL2是人PD-1、PDL1和PDL2。
在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1与其一种或多种配体结合配偶体的结合的分子。在具体方面中，PD-1配体结合配偶体是PDL1和/或PDL2。在另一实施例中，PDL1结合拮抗剂是抑制PDL1与其一种或多种结合配偶体的结合的分子。在具体方面，PDL1结合配偶体是PD-1和/或B7-1。在另一实施例中，PDL2结合拮抗剂是抑制PDL2与其一种或多种结合配偶体的结合的分子。在具体方面，PDL2结合配偶体是PD-1。拮抗剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽或小分子。若拮抗剂是抗体，则在一些实施例中，该抗体包含选自由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4组成的组的人类恒定区。
A.抗PD-1抗体
在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体(例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)。多种抗PD-1抗体可用于本文所公开的方法中。在本文的任一实施例中，PD-1抗体可结合至人PD-1或其变体。在一些实施例中，抗PD-1抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自由Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv和(Fab’)2片段组成的组的抗体片段。在一些实施例中，抗PD-1抗体是嵌合或人源化抗体。在其他实施例中，抗PD-1抗体是人抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是纳武单抗(nivolumab)(CAS登记号：946414-94-4)。纳武单抗(Bristol-Myers Squibb/Ono)也称为MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558和
Figure BDA0003407662520001271
其是WO2006/121168中所描述的抗PD-1抗体。在一些实施例中，抗PD-1抗体包含重链和轻链序列，其中：
(a)重链包含以下氨基酸序列：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ IDNO:118)，并且
(b)轻链包含以下氨基酸序列：
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:119)。
在一些实施例中，抗PD-1抗体包含来自SEQ ID NO:118和SEQ ID NO:119的六个HVR序列(例如来自SEQ ID NO:118的三个重链HVR和来自SEQ ID NO:119的三个轻链HVR)。在一些实施例中，抗PD-1抗体包含来自SEQ ID NO:118的重链可变结构域和来自SEQ IDNO:119的轻链可变结构域。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)(CAS登记号：1374853-91-4)。派姆单抗(Merck)也称为MK-3475、Merck 3475、兰布鲁珠单抗(lambrolizumab)、SCH-900475和
Figure BDA0003407662520001281
其是WO2009/114335中所描述的抗PD-1抗体。在一些实施例中，抗PD-1抗体包含重链和轻链序列，其中：
(a)重链包含以下氨基酸序列：
QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:120)，并且
(b)轻链包含以下氨基酸序列：
EIVLTQSPAT LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:121)。
在一些实施例中，抗PD-1抗体包含来自SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:121的六个HVR序列(例如来自SEQ ID NO:120的三个重链HVR和来自SEQ ID NO:121的三个轻链HVR)。在一些实施例中，抗PD-1抗体包含来自SEQ ID NO:120的重链可变结构域和来自SEQ IDNO:121的轻链可变结构域。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是MEDI-0680(AMP-514；AstraZeneca)。MEDI-0680是人源化IgG4抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是PDR001(CAS登记号1859072-53-9；Novartis)。PDR001是阻断PDL1和PDL2与PD-1的结合的人源化IgG4抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是REGN2810(Regeneron)。REGN2810是人抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是BGB-108(BeiGene)。在一些实施例中，抗PD-1抗体是BGB-A317(BeiGene)。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是JS-001(Shanghai Junshi)。JS-001是人源化抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是A1110(Sorrento)。STI-A1110是人抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是INCSHR-1210(Incyte)。INCSHR-1210是人IgG4抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是PF-06801591(Pfizer)。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是TSR-042(也称为ANB011；Tesaro/AnaptysBio)。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是AM0001(ARMO Biosciences)。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是ENUM 244C8(Enumeral Biomedical Holdings)。ENUM 244C8是抑制PD-1功能而不阻断PDL1与PD-1的结合的抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是ENUM 388D4(Enumeral Biomedical Holdings)。ENUM 388D4是竞争性地抑制PDL1与PD-1的结合的抗PD-1抗体。
在一些实施例中，PD-1抗体包含来自以下各项中所述PD-1抗体的六个HVR序列(例如三个重链HVR和三个轻链HVR)和/或重链可变结构域和轻链可变结构域：WO2015/112800(申请者：Regeneron)、WO2015/112805(申请者：Regeneron)、WO2015/112900(申请者：Novartis)、US20150210769(转让给Novartis)、WO2016/089873(申请者：Celgene)、WO2015/035606(申请者：Beigene)、WO2015/085847(申请者：Shanghai Hengrui Pharmaceutical/Jiangsu Hengrui Medicine)、WO2014/206107(申请者：Shanghai Junshi Biosciences/Junmeng Biosciences)、WO2012/145493(申请者：Amplimmune)、US9205148(转让给MedImmune)、WO2015/119930(申请者：Pfizer/Merck)、WO2015/119923(申请者：Pfizer/Merck)、WO2016/032927(申请者：Pfizer/Merck)、WO2014/179664(申请者：AnaptysBio)、WO2016/106160(申请者：Enumeral)和WO2014/194302(申请者：Sorrento)。
B.抗PDL1抗体
在一些实施例中，PD-1轴结合拮抗剂是抗PDL1抗体。本文涵盖并且描述多种抗PDL1抗体。在本文的任一实施例中，经分离的抗PDL1抗体可结合至人PDL1(例如如UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q9NZQ7.1中所示的人PDL1)或其变体。在一些实施例中，抗PDL1抗体能够抑制PDL1与PD-1之间和/或PDL1与B7-1之间的结合。在一些实施例中，抗PD-1抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗PDL1抗体是选自由Fab、Fab’-SH、Fv、scFv和(Fab’)2片段组成的组的抗体片段。在一些实施例中，抗PDL1抗体是人源化抗体。在一些实施例中，抗PDL1抗体是人抗体。可用于本公开方法的抗PDL1抗体的实例及其制备方法描述于PCT专利申请案WO 2010/077634 A1和美国专利第8,217,149号中，其是以引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，抗PDL1抗体是阿特珠单抗(CAS登记号：1422185-06-5)。阿特珠单抗(Genentech)也称为MPDL3280A，其是抗PDL1抗体。
在一些实施例中，抗PDL1抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(a)重链可变区分别包含GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:122)、AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQID NO:123)和RHWPGGFDY(SEQ ID NO:124)的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3序列，并且
(b)轻链可变区分别包含RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:125)、SASFLYS(SEQ ID NO:126)和QQYLYHPAT(SEQ ID NO:127)的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3序列。
在一些实施例中，抗PDL1抗体是MPDL3280A，其也称为阿特珠单抗和
Figure BDA0003407662520001311
(CAS登记号：1422185-06-5)。在一些实施例中，抗PDL1抗体包含重链和轻链序列，其中：
(a)重链可变区序列包含以下氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:128)，并且
(b)轻链可变区序列包含以下氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:129)。
在一些实施例中，抗PDL1抗体包含重链和轻链序列，其中：
(a)重链包含以下氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:130)，并且
(b)轻链包含以下氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:131)。
在一些实施例中，抗PDL1抗体是阿维单抗(CAS登记号：1537032-82-8)。阿维单抗也称为MSB0010718C，其是人单克隆IgG1抗PDL1抗体(Merck KGaA,Pfizer)。在一些实施例中，抗PDL1抗体包含重链和轻链序列，其中：
(a)重链包含以下氨基酸序列：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:132)，并且
(b)轻链包含以下氨基酸序列：
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQID NO:133)。
在一些实施例中，抗PDL1抗体包含来自SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:133的六个HVR序列(例如来自SEQ ID NO:132的三个重链HVR和来自SEQ ID NO:133的三个轻链HVR)。在一些实施例中，抗PDL1抗体包含来自SEQ ID NO:132的重链可变结构域和来自SEQ IDNO:133的轻链可变结构域。
在一些实施例中，抗PDL1抗体是德瓦鲁单抗(CAS登记号：1428935-60-7)。德瓦鲁单抗也称为MEDI4736，其是WO2011/066389和US2013/034559中所描述的Fc优化的人单克隆IgG1κ抗PDL1抗体(MedImmune,AstraZeneca)。在一些实施例中，抗PDL1抗体包含重链和轻链序列，其中：
(a)重链包含以下氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:134)，并且
(b)轻链包含以下氨基酸序列：
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:135)。
在一些实施例中，抗PDL1抗体包含来自SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:135的六个HVR序列(例如来自SEQ ID NO:134的三个重链HVR和来自SEQ ID NO:135的三个轻链HVR)。在一些实施例中，抗PDL1抗体包含来自SEQ ID NO:134的重链可变结构域和来自SEQ IDNO:135的轻链可变结构域。
在一些实施例中，抗PDL1抗体是MDX-1105(Bristol Myers Squibb)。MDX-1105也称为BMS-936559，其是WO2007/005874中所描述的抗PDL1抗体。
在一些实施例中，抗PDL1抗体是LY3300054(Eli Lilly)。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是A1014(Sorrento)。STI-A1014是人抗PDL1抗体。
在一些实施例中，抗PDL1抗体是KN035(Suzhou Alphamab)。KN035是从骆驼噬菌体展示文库产生的单一结构域抗体(dAB)。
在一些实施例中，抗PDL1抗体包含可裂解部分或连接基，该可裂解部分或连接基在裂解(例如由肿瘤微环境中的蛋白酶裂解)时使抗体的抗原结合结构域活化以容许该抗体结合其抗原，例如通过去除非结合的空间部分。在一些实施例中，抗PDL1抗体是CX-072(CytomX Therapeutics)。
在一些实施例中，PDL1抗体包含来自以下各项中所描述PDL1抗体的六个HVR序列(例如三个重链HVR和三个轻链HVR)和/或重链可变结构域以及轻链可变结构域：US20160108123(转让给Novartis)、WO2016/000619(申请者：Beigene)、WO2012/145493(申请者：Amplimmune)、US9205148(转让给MedImmune)、WO2013/181634(申请者：Sorrento)以及WO2016/061142(申请者：Novartis)。
在另一具体方面，PD-1或PDL1抗体具有降低或最低的效应功能。在另一具体方面，最低效应功能是由“无效应子的Fc突变”或糖基化突变导致。在另一实施例中，无效应子的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A取代。在一些实施例中，经分离的抗PDL1抗体是无糖基化的。抗体的糖基化通常是N连接或O连接的。N连接是指碳水化合物部分与天冬酰胺残基的侧链连接。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任一氨基酸)是碳水化合物部分与天冬酰胺侧链酶连接的识别序列。因此，多肽中存在所述三肽序列中的任一者均可产生潜在糖基化位点。O连接的糖基化是指糖N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一者与羟基氨基酸(最常见为丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸)的连接。从抗体去除糖基化位点可通过改变氨基酸序列，使得上文所描述三肽序列中的一者(对于N连接的糖基化位点而言)去除来便捷地完成。改变可通过用另一氨基酸残基取代糖基化位点内的天冬酰胺、丝氨酸或苏氨酸残基(例如甘氨酸、丙氨酸或保守取代)来进行。
在一些实施例中，在20天的组合治疗后，抗MerTK抗体使抗PDL1抗体的免疫效应提高约3倍。在一些实施例中，在30天的治疗后，抗MerTK抗体使抗PDL1抗体的免疫效应提高约10倍。
C.其他PD-1抑制剂
在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是免疫黏附素(例如包含融合至恒定区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)的PDL1或PDL2的细胞外或PD-1结合部分的免疫黏附素)。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。AMP-224(CAS登记号1422184-00-6；GlaxoSmithKline/MedImmune)也称为B7-DCIg，其是WO2010/027827和WO2011/066342中所描述的PDL2-Fc融合可溶性受体。
在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是肽或小分子化合物。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是AUNP-12(PierreFabre/Aurigene)。例如，参见WO2012/168944、WO2015/036927、WO2015/044900、WO2015/033303、WO2013/144704、WO2013/132317和WO2011/161699。
在一些实施例中，PDL1结合拮抗剂是抑制PD-1的小分子。在一些实施例中，PDL1结合拮抗剂是抑制PDL1的小分子。在一些实施例中，PDL1结合拮抗剂是抑制PDL1和VISTA的小分子。在一些实施例中，PDL1结合拮抗剂是CA-170(也称为AUPM-170)。在一些实施例中，PDL1结合拮抗剂是抑制PDL1和TIM3的小分子。在一些实施例中，小分子是WO2015/033301和WO2015/033299中所描述的化合物。
免疫功能的增强
在另一方面，本文提供用于增强患有癌症的个体的免疫功能的方法，其包括施用有效量的抗MerTK抗体与免疫检查点抑制剂的组合。可由本文所描述的抗MerTK抗体增强的免疫功能的各个方面以及测量此增强的方法描述于下文中。
在本公开方法的一些实施例中，癌症(在一些实施例中，使用诊断测试检查的患者癌症样品)具有升高的T细胞浸润水平。如本文所用，癌症的T细胞浸润可是指在癌症组织内存在T细胞(诸如肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL))，或所述T细胞以其他方式与癌症组织缔合。此项技术中已知，在某些癌症中，T细胞浸润可与改善的临床结果相关(例如，参见Zhang等人，N.Engl.J.Med.348(3):203-213(2003))。
然而，T细胞耗竭也是癌症的主要免疫特征，其中许多肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)表达高水平的抑制性辅受体并且缺乏产生效应细胞因子的能力(Wherry,E.J.Nature immunology 12:492-499(2011)；Rabinovich,G.A.等人，Annual review of immunology25:267-296(2007))。在本公开方法的一些实施例中，个体患有T细胞功能障碍疾患。在本公开方法的一些实施例中，T细胞功能障碍疾患的特征在于T细胞无应答性或分泌细胞因子、增殖或执行细胞溶解活性的能力降低。在本公开方法的一些实施例中，T细胞功能障碍疾患的特征在于T细胞耗竭。在本公开方法的一些实施例中，T细胞是CD4+和CD8+T细胞。在一些实施例中，T细胞是CD4+和/或CD8+T细胞。
在一些实施例中，CD8+T细胞的特征在于例如存在CD8b表达(例如通过rtPCR，使用例如Fluidigm)(Cd8b也称为T细胞表面糖蛋白CD8β链；CD8抗原，α多肽p37；登录号是NM_172213)。在一些实施例中，CD8+T细胞来自外周血。在一些实施例中，CD8+T细胞来自肿瘤。
在一些实施例中，Treg细胞的特征在于例如存在Fox3p表达(例如通过rtPCR，使用例如Fluidigm)(Foxp3也称为叉头框蛋白P3；scurfin；FOXP3δ7；免疫缺失，多内分泌病变，肠病变，X连锁；登录号是NM_014009)。在一些实施例中，Treg来自外周血。在一些实施例中，Treg细胞来自肿瘤。
在一些实施例中，发炎性T细胞的特征在于例如存在Tbet和/或CXCR3表达(例如通过rtPCR，使用例如Fluidigm)。在一些实施例中，发炎性T细胞来自外周血。在一些实施例中，发炎性T细胞来自肿瘤。
在本公开方法的一些实施例中，CD4和/或CD8 T细胞展现选自由IFN-γ、TNF-α和白介素组成的组的细胞因子的释放增加。细胞因子释放可通过此项技术中已知的任何方式来测量，例如使用蛋白质印迹、ELISA或免疫组织化学测定以检测含有CD4和/或CD8 T细胞的样品中释放的细胞因子的存在。
在本公开方法的一些实施例中，CD4和/或CD8 T细胞是效应记忆T细胞。在本公开方法的一些实施例中，CD4和/或CD8效应记忆T细胞的特征在于具有CD44高CD62L低的表达。CD44高CD62L低的表达可通过此项技术中已知的任何方式来检测，例如通过制备组织(例如癌症组织)的单细胞悬浮液并且使用针对CD44和CD62L的市售抗体实施表面染色和流式细胞术。在本公开方法的一些实施例中，CD4和/或CD8效应记忆T细胞的特征在于具有CXCR3(也称为3型C-X-C趋化因子受体；Mig受体；IP10受体；G蛋白偶合受体9；干扰素诱导蛋白10受体；登录号NM_001504)的表达。在一些实施例中，CD4和/或CD8效应记忆T细胞来自外周血。在一些实施例中，CD4和/或CD8效应记忆T细胞来自肿瘤。
在本公开方法的一些实施例中，相对于施用该组合之前，Treg功能被抑制。在一些实施例中，相对于施用该组合之前，T细胞耗竭降低。
在一些实施例中，相对于施用该组合之前，Treg的数量减少。在一些实施例中，相对于施用该组合之前，血浆干扰素γ增加。可例如通过确定CD4+Fox3p+CD45+细胞的百分比(例如通过FACS分析)来评估Treg数量。在一些实施例中，确定例如样品中Treg的绝对数量。在一些实施例中，Treg来自外周血。在一些实施例中，Treg来自肿瘤。
在一些实施例中，相对于施用该组合之前，T细胞启动、活化和/或增殖增加。在一些实施例中，T细胞是CD4+和/或CD8+T细胞。在一些实施例中，通过确定Ki67+CD8+T细胞的百分比(例如通过FACS分析)来检测T细胞增殖。在一些实施例中，通过确定Ki67+CD4+T细胞的百分比(例如通过FACS分析)来检测T细胞增殖。在一些实施例中，T细胞来自外周血。在一些实施例中，T细胞来自肿瘤。
剂量和施用
本文所描述的任一抗MerTK抗体以及此项技术中已知或描述于本文中的任一免疫检查点抑制剂可用于本公开的方法中。
在一些实施例中，本公开的组合疗法包含施用抗MerTK抗体和免疫检查点抑制剂。抗MerTK抗体和免疫检查点抑制剂可以以此项技术中已知的任何合适方式来施用。例如，抗MerTK抗体和免疫检查点抑制剂可依序(在不同时间)或并行(同时)施用。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂与抗MerTK抗体在分开的组合物中。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂与抗MerTK抗体在同一组合物中。
抗MerTK抗体和免疫检查点抑制剂可通过相同施用途径或通过不同施用途径来施用。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂以静脉内、肌内、皮下、经局部、经口、经皮、腹膜内、眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、室内或鼻内方式施用。在一些实施例中，抗MerTK抗体以静脉内、肌内、皮下、经局部、经口、经皮、腹膜内、眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、室内或鼻内方式施用。可施用有效量的免疫检查点抑制剂和抗MerTK抗体以供预防或治疗疾病。抗MerTK抗体和/或免疫检查点抑制剂的适当剂量可基于以下来确定：欲治疗疾病的类型、免疫检查点抑制剂和抗MerTK抗体的类型、疾病的严重程度和病程、个体的临床状况、个体的临床病症和对治疗的应答以及主治医师的判断。在一些实施例中，抗MerTK抗体与免疫检查点抑制剂(例如抗PD-1或抗PDL1抗体)的组合治疗具有协同性，其中抗MerTK抗体在组合中的有效剂量相对于抗MerTK抗体作为单一药剂的有效剂量降低。
作为一般主张，无论通过一次或多次施用，施用人的抗体的治疗有效量均将在约0.01mg/kg患者体重至约50mg/kg患者体重范围内。在一些实施例中，所用抗体每天施用例如约0.01mg/kg至约45mg/kg、约0.01mg/kg至约40mg/kg、约0.01mg/kg至约35mg/kg、约0.01mg/kg至约30mg/kg、约0.01mg/kg至约25mg/kg、约0.01mg/kg至约20mg/kg、约0.01mg/kg至约15mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约5mg/kg或约0.01mg/kg至约1mg/kg。在一些实施例中，以15mg/kg施用抗体。然而，其他剂量方案可以是有用的。在一个实施例中，在21天周期的第1天，以下列剂量向人施用本文所描述的抗MerTK抗体或本文所描述的抗PDL1抗体：约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg或约1400mg。剂量可作为单剂量或作为多剂量(例如2剂或3剂)施用，诸如输注。与单一治疗相比，组合治疗中所施用的抗体剂量可降低。通过常规技术可容易地监测此疗法的进展。
(iv)用途
在一方面，本公开提供如上文所述的抗MerTK抗体，其用作药物。在一些实施例中，用途是治疗癌症。在一些实施例中，用途是降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。本文进一步提供如上文所述的抗MerTK抗体的用途，其用于制造药物。在一些实施例中，该药物用于治疗癌症。在一些实施例中，癌症表达功能性cGAS-STING胞质DNA感测路径蛋白质。这些蛋白质是cGAS-STING信号传导路径的一部分，并且在先天性免疫中起作用以检测胞质DNA的存在，从而触发发炎基因的表达。cGAS-STING胞质DNA感测路径蛋白质的实例包括但不限于cGAS、STING、TBK-1、IRF3、p50、p60、p65、NF-κΒ、ISRE、IKK和STAT6。在一些实施例中，癌症表达功能性STING、功能性Cx43和功能性cGAS多肽。功能性蛋白质是能够在细胞中执行其常规功能的蛋白质。功能性蛋白质的实例可包括野生型蛋白质、带标签的蛋白质和突变蛋白质，其与野生型蛋白质相比保留或改良蛋白质功能。蛋白质功能可通过本领域技术人员已知的任何方法来测量，包括对蛋白质或mRNA表达进行测定和对基因组DNA或mRNA进行测序。在一些实施例中，癌症包含表达功能性STING多肽的肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性cGAS多肽的肿瘤细胞。在一些实施例中，癌症包含表达功能性Cx43多肽的肿瘤细胞。在某些实施例中，癌症是结肠癌。在一些实施例中，该药物用于降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
在另一方面，个体患有表达(例如在诊断测试中已显示表达)PDL1生物标志物的癌症。在一些实施例中，患者的癌症表达低PDL1生物标志物。在一些实施例中，患者的癌症表达高PDL1生物标志物。在任一方法、测定和/或试剂盒的一些实施例中，当PDL1生物标志物占样品的0％时，其不存在于样品中。
在任一方法、测定和/或试剂盒的一些实施例中，当PDL1生物标志物占样品的0％以上时，其存在于样品中。在一些实施例中，PDL1生物标志物以样品的至少1％存在。在一些实施例中，PDL1生物标志物以样品的至少5％存在。在一些实施例中，PDL1生物标志物以样品的至少10％存在。
在任一方法、测定和/或试剂盒的一些实施例中，使用选自由以下组成的组的方法检测样品中的PDL1生物标志物：FACS、蛋白质印迹、ELISA、免疫沉淀、免疫组织化学、免疫荧光、放射免疫测定、斑点印渍、免疫检测方法、HPLC、表面等离子体共振、光谱法、质谱法、HPLC、qPCR、RT-qPCR、多任务qPCR或RT-qPCR、RNA-seq、微阵列分析、SAGE、MassARRAY技术和FISH以及其组合。
在任一方法、测定和/或试剂盒的一些实施例中，通过蛋白质表达检测样品中的PDL1生物标志物。在一些实施例中，通过免疫组织化学(IHC)确定蛋白质表达。在一些实施例中，使用抗PDL1抗体检测PDL1生物标志物。在一些实施例中，PDL1生物标志物通过IHC检测为弱染色强度。在一些实施例中，PDL1生物标志物通过IHC检测为中等染色强度。在一些实施例中，PDL1生物标志物通过IHC检测为强染色强度。在一些实施例中，在肿瘤细胞、肿瘤浸润性免疫细胞、基质细胞和其任何组合上检测到PDL1生物标志物。在一些实施例中，染色是膜染色、细胞质染色或其组合。
在任一方法、测定和/或试剂盒的一些实施例中，不存在PDL1生物标志物检测为在样品中不存在或无染色。在任一方法、测定和/或试剂盒的一些实施例中，存在PDL1生物标志物检测为样品中的任何染色。
IV.检测方法
在一些方面中，本公开提供抗MerTK抗体或其免疫缀合物，其用于检测MerTK蛋白和表达MerTK蛋白的细胞。
在某些实施例中，使用IHC和染色方案检查样品中蛋白质的存在和/或表达水平/量。已显示，组织切片的IHC染色是确定或检测样品中蛋白质的存在的可靠方法。在一些实施例中，通过免疫组织化学检测MerTK。在一些实施例中，使用IHC确定升高的蛋白质表达。在一个实施例中，使用如下方法确定MerTK的表达水平，该方法包括：(a)利用抗体对样品(诸如受试者癌症样品)执行IHC分析；和b)确定样品中蛋白质的表达水平。在一些实施例中，相对于参考来确定IHC染色强度。在一些实施例中，参考是参考值。在一些实施例中，参考是参考样品(例如对照细胞系染色样品或来自非癌患者的组织样品)。
IHC可与诸如形态学染色和/或荧光原位杂交等其他技术组合执行。IHC有两种通用方法；直接和间接测定。根据第一测定，抗体与靶抗原的结合是直接确定的。此直接测定使用经标记的试剂(诸如荧光卷标或酶标记一级抗体)，其可在无需进行进一步抗体相互作用的情形下可视化。在典型间接测定中，使非缀合的一级抗体结合至抗原，并且接着将标记的二级抗体结合至一级抗体。在二级抗体缀合至酶标记的情形下，添加发色或荧光底物以提供抗原的可视化。由于几种二级抗体可与一级抗体上的不同表位反应，故发生信号放大。
用于IHC的一级和/或二级抗体通常将标记有可检测部分。多种标记可供使用，其通常可分成以下类别：(a)放射性同位素，诸如35S、14C、125I、3H和131I；(b)胶体金颗粒；(c)荧光标记，包括但不限于稀土螯合物(铕螯合物)、得克萨斯红(Texas Red)、玫瑰红、荧光黄、丹磺酰、丽丝胺(Lissamine)、伞形酮、藻红蛋白、藻青蛋白或市售荧光团(诸如SPECTRUMORANGE7和SPECTRUM以及SPECTRUM GREEN7)和/或以上任一者或多者的衍生物；(d)各种酶-底物标记可供使用并且美国专利第4,275,149号提供一些这些标记的综述。酶标记的实例包括荧光素酶(例如萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶；美国专利第4,737,456号)、荧光素、2,3-二氢酞嗪二酮、苹果酸去氢酶、脲酶、过氧化物酶(诸如辣根过氧化物酶(HRPO))、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸去氢酶)、杂环氧化酶(诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶及诸如此类。
酶-底物组合的实例包括例如辣根过氧化物酶(HRPO)与作为底物的过氧化氢酶；碱性磷酸酶(AP)与作为发色底物的磷酸对硝基苯酯；和β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)与发色底物(例如对硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶)或荧光底物(例如4-甲基伞形酮基-β-D-半乳糖苷酶)。关于所述酶-底物组合的一般性综述，参见美国专利第4,275,149号和第4,318,980号。
可将由此制备的试样安装并加盖玻片。接着例如使用显微镜来确定玻片评估，并且可采用此项技术中惯常使用的染色强度准则。在一个实施例中，应理解，当使用IHC检查来自肿瘤的细胞和/或组织时，通常在肿瘤细胞和/或组织中确定或评估染色(与样品中可能存在的基质或周围组织形成对照)。在一些实施例中，应理解，当使用IHC检查来自肿瘤的细胞和/或组织时，染色包括确定或评估肿瘤浸润性免疫细胞，包括肿瘤内或瘤周免疫细胞。
V.制品或试剂盒
在本公开的另一实施例中，提供包含抗MerTK抗体的制品或试剂盒。在一些实施例中，该制品或试剂盒进一步包含包装插页，该包装插页包含关于使用抗MerTK抗体治疗个体癌症或延迟其进展或增强患有癌症的个体的免疫功能的说明书。本文所描述的任一抗MerTK抗体均可包括在该制品或试剂盒内。该制品或试剂盒可进一步包含免疫检查点抑制剂。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是抗PDL1抗体。
在一些实施例中，免疫检查点抑制剂和抗MerTK抗体是在同一容器中或在分开的容器中。合适容器包括例如瓶、小瓶、袋和注射器。容器可从多种材料形成，诸如玻璃、塑料(诸如聚氯乙烯或聚烯烃)或金属合金(诸如不锈钢或哈氏合金(hastelloy))。在一些实施例中，容器容纳制剂，并且容器上或与容器相连的标记可指示使用说明。制品或试剂盒可进一步包括从商业和使用者角度期望的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器和带有使用说明书的包装插页。在一些实施例中，制品进一步包括一种或多种另一药剂(例如化疗剂和抗瘤剂)。用于该一种或多种药剂的合适容器包括例如瓶、小瓶、袋和注射器。
认为本说明书足以使得本领域技术人员能够实践本公开的组合物和方法。除本文所显示和描述的那些修改以外，本领域技术人员从前述说明将明了各种修改，并且所述修改属于随附申请专利范围的范畴内。本文所引用的所有出版物、专利和专利申请案出于所有目的均以全文引用的方式并入本文中。
实例
通过参考以下实例将更全面地理解本公开。然而，不应将所述实例解释为限制本公开的范畴。应理解，本文所描述的实例和实施例仅出于说明性目的，并且基于其的各种修改或变化应为本领域技术人员所了解并且欲包括在本申请案的精神和范围以及随附申请专利范围的范畴内。
实例1：产生兔抗MerTK单克隆抗体并且进行人源化
在兔中产生针对MerTK的单克隆抗体。接着，使抗体人源化，并且鉴定对稳定性和亲和力重要的残基。
产生兔抗MerTK单克隆抗体
利用人和小鼠MerTK对新西兰白兔进行免疫。使用源自已公开文献的改良方案来分离个别B细胞(Offner等人PLoS ONE 9(2),2014)。使用直接FACS IgG+分选将人类和小鼠MerTK+B细胞分选至单一孔中。针对人和小鼠MerTK结合，经由初步ELISA筛选对B细胞培养上清液进行分析，并且使B细胞溶解并储存在-80℃。
如已公开文献中所描述，通过PCR扩增MerTK特异性B细胞的轻链和重链可变区，并且将其克隆至表达载体中(Offner等人，PLoS ONE 9(2),2014)。使每个重组兔单克隆抗体在Expi293细胞中表达并且利用蛋白质A进行纯化。接着使经纯化的抗MerTK抗体经受功能性表征、亲和力确定和表位分箱。
使所引用的每个抗体的残基编号与Kabat et al.,Sequences of proteins ofimmunological interest,5th Ed.,Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991).图1A和图1B匹配，分别显示每个抗MerTK兔抗体的轻链和重链可变区的比对序列。如Kabat等人所定义的CDR序列在图1A和图1B中加下划线。
MerTK抗体人源化
步骤1：产生一级人源化抗体
使所引用的每个抗体的残基编号与Kabat et al.匹配。首先，将每个兔抗体的高变区工程改造至其最接近的人类生殖系受体框架中，以产生第1型式的(标记为“v1”)一级人源化抗体(人IgG1)(图2A至图2D)。具体地，保留兔抗体轻链可变结构域(VL)位置24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)以及重链可变结构域(VH)位置26-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)用于来自每个兔抗体的CDR(图2A至图2D)。在该框架中，也包括在“光标”区域的兔残基，这些残基可调整CDR结构并且微调抗原配合度(例如，参见Foote和Winter，J.Mol.Biol.224:487-499(1992))。图2A至图2D显示在第一步人源化之后，每个抗体的比对序列。
步骤2：框架精制(polishing)人源化抗体
使第1形式的一级人源化抗体的框架“光标(Vernier)”区域中的每个兔残基根据其相应最接近的人类受体框架突变为人类残基。
使每个人源化突变变体经受BIAcore分析，以确定对于结合和稳定性而言重要的兔残基。使用来自BIAcoreTM-T200仪器的表面等离子体共振(SRP)测量值获得结合亲和力确定值。简言之，捕获每个人源化突变变体抗体以达成大约100个Ru(应答单位)。接着，在37℃，将稀释于HBS-EP缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂P20)中的人MerTK的3倍连续稀释液(0.4nM至100nM)以30μl/min的流量注射至BIAcoreTM-T200仪器中。使用简单1:1Langmuir结合模型(BIAcore T200评估软件第2.0版)计算缔合速率(k缔合)和解离速率(k解离)。将平衡解离常数(KD)计算为比率k解离/k缔合。
表2至表5在灰色阴影中鉴定对于结合和稳定性重要的残基。克隆h10C3.V1的重要残基是轻链可变区中的Q2和L4以及重链可变区中的I48、G49S和K71(表2)。克隆h10F7.V1的重要残基是轻链可变区中的L4和F87以及重链可变区中的V24、I48、G49、K71和S73(表3)。克隆h9E3.FN.V1的重要残基是轻链可变区中的L4和P43以及重链可变区中的K71(表4)。克隆h13B4.V1的重要残基是重链可变区中的G49和V78(表5)。
表2
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表3
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表4
Figure BDA0003407662520001452
表5
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为产生最终人源化框架精制抗体，维持重要的结合和稳定性兔框架残基，而使其他残基变为最接近的人类生殖系框架残基。图2A至图2D显示每个抗体的比对序列，包括最终人源化框架精制抗体型式(v.14或v.16)的序列。
表6至表8中提供兔和人源化抗体序列的汇总。
表6
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表7
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表8
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在某些实施例中，SEQ ID NO:102-109中的每一者可任选地在氨基酸序列的C-末端包含赖氨酸(K)，例如每个序列可以PGK终止，而非以PG终止。
实例2：抗体结合亲和力
使每个兔和人源化抗体经受结合测定，以确定其对源自各物种的MerTK的亲和力。
使用来自BIAcoreTM-T200仪器的表面等离子体共振(SPR)测量值获得所有结合亲和力确定值。简言之，捕获每个兔或人源化抗体以达成大约100个RU(应答单位)。接着，在25℃或37℃，将稀释于HBS-EP缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂P20)中的来自各物种的MerTK的3倍连续稀释液(0.4nM至100nM)以30μl/min的流量注射至BIAcoreTM-T200仪器中。使用简单1:1Langmuir结合模型(BIAcore T200评估软件第2.0版)计算缔合速率(k缔合)和解离速率(k解离)。将平衡解离常数(KD)计算为比率k解离/k缔合。
表9显示经由BIAcore分析测量的每个兔抗MerTK抗体与人类、食蟹猴和小鼠MerTK蛋白结合的平衡解离常数KD。表10至表13对在第一步人源化(V1)之后，所测量的兔抗MerTK单克隆抗体与其匹配抗体的KD进行比较。表14至表17对在最后一步人源化(人源化精制mAb)之后每个抗体与人类、食蟹猴、大鼠和小鼠MerTK蛋白结合的KD与在第一步人源化(V1)之后相同抗体的KD进行比较。精制人源化mAb分别是h10C3.v14、h9E3.FN.v1、h10F7.v16和h13B4.v16。
表9
Figure BDA0003407662520001621
表10
Figure BDA0003407662520001622
Figure BDA0003407662520001631
表11
Figure BDA0003407662520001632
表12
Figure BDA0003407662520001633
表13
Figure BDA0003407662520001641
表14
Figure BDA0003407662520001642
表15
Figure BDA0003407662520001643
表16
Figure BDA0003407662520001651
表17
Figure BDA0003407662520001652
这些结果证实，大多数兔抗体是跨物种MerTK结合体，14C9(其是小鼠特异性MerTK结合物)和13B4(其是人类特异性MerTK结合物)除外。该结果进一步指示，在步骤1人源化之后，抗体10F7对所有四种物种的MerTK的亲和力均存在略微改良，但10C3和9E3.FN无改良，其显示略微的亲和力下降。对于抗体13B4而言，其在人源化之前和之后是相当的。在步骤2的人源化之后，10C3、9E3和10F7对所有四种物种的MerTK的亲和力均改良，但13B4无改良。
实例3：抗体表位表征
通过表位分箱和结合分析对经分离的抗MerTK抗体进行表征，以确定表位结构域特异性。
表位分箱
使用基于96×96数组的SPR成像***(Carterra USA)对一组MerTK单克隆抗体进行表位分箱。首先，在连续流动微量点样器(Carterra,USA)中，使用胺偶合化学，将以10ug/ml稀释于10mM乙酸钠缓冲液pH 4.5中的每个抗MerTK兔抗体直接固定至SPR sensorprismCMD 200M传感器芯片(XanTec Bioanalytics,Germany)上。接着，将100nM的MerTK注射在传感器芯片上并且保持4分钟以容许结合，之后使10ug/ml的每个分箱兔抗体再结合4分钟。
在每个循环之间使用10mM甘氨酸pH 1.5使表面再生，并且在25℃使用HBS-EP缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl、3mM EDTA和0.05％表面活性剂P20)进行实验。使用IBIS MX96 SPRi仪器(Carterra USA)来记录对所固定抗体的结合应答。使用Wasatch分箱软件工具分析结合数据以生成表位网络图。
图3中分箱实验的结果指示哪些抗体在某些MerTK表位上相互竞争结合。针对小鼠MerTK产生的抗体8F4、22C4和13D8以及针对人MerTK产生的抗体10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4和13D8相互竞争结合(图3)。针对小鼠MerTK产生的抗体12H4、18G7、14C9和11G11以及针对人MerTK产生的抗体13B4、12H4、18G7和11G11相互竞争(图3)。如下文描述，抗体10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4和13D8结合至MerTK的纤连蛋白样结构域，并且抗体13B4、12H4、18G7和11G11结合至MerTK的Ig样结构域。
表位结合分析
也通过结合实验确定兔抗体的表位特异性。测试每个兔抗体与来自人MerTK或小鼠MerTK的以下四个结构域的结合：细胞外结构域(HuMER R26-A499或MuMER E23-S496)，其包括两个Ig样结构域和两个纤连蛋白样结构域；Ig样1和2结构域(HuMER G76-P284或MuMERA70-P279)；Ig样1结构域(HuMER G76-G195或MuMER A70-G190)；以及Ig样2结构域(HuMERG195-P284或MuMER G190-P279)。
使用来自BIAcoreTM-T200仪器的表面等离子体共振(SRP)测量值获得结合亲和力确定值。简言之，捕获每个兔抗体以达成大约100个RU(应答单位)。接着，在25℃或37℃，将稀释于HBS-EP缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂P20)中的各种MerTK结构域的3倍连续稀释液(0.4nM至100nM)以30μl/min的流量注射至BIAcoreTM-T200仪器中。使用简单1:1Langmuir结合模型(BIAcore T200评估软件第2.0版)计算缔合速率(k缔合)和解离速率(k解离)。将平衡解离常数(KD)计算为比率k解离/k缔合。
通过BIAcore分析来评估针对人和小鼠MerTK细胞外结构域二者(HuMER R26-A499和MuMER E23-S496)、Ig1和2结构域、仅Ig1结构域和仅Ig2结构域结合的兔抗体的抗体表位确定(表18)。人MerTK及其结构域以浅灰色显示，而小鼠MerTK及其结构域以深灰色显示。
表位结合分析的结果展示，交叉反应性FN结构域抗体Rbt8F4、Rbt22C4和Rbt13D8在1uM不结合人或小鼠Ig1和Ig2结构域(表18)。未收集抗体Rbt9E3.FN、Rbt10C3和Rbt10F7的表位结合数据。然而，Wasatch分箱展示，Rbt9E3.FN、Rbt10C3和Rbt10F7的表位特异性与FN结构域抗体Rbt8F4、Rbt22C4和Rbt13D8有所重叠(图3)。因此，这些结果表明，Rbt9E3.FN、Rbt10C3和Rbt10F7是不会结合经分离的Ig1和Ig2结构域的FN结合结构域抗体。
表位结合分析的结果进一步展示，抗体Rbt11G11、Rbt12H4、Rbt18G7、Rbt13B4和Rbt14C9是Ig结构域结合抗体(表18)。抗体Rbt11G11、Rbt12H4和Rbt18G7是结合人和小鼠MerTK Ig二者的交叉反应性Ig结构域抗体(表18)。相比之下，Rbt13B4和Rbt14C9是物种特异性Ig结构域抗体，其分别结合人和小鼠Ig(表18)。
表18
Figure BDA0003407662520001681
实例4：抗MerTK抑制体外人和小鼠巨噬细胞的吞噬作用
实施胞葬作用测定以评估抗MerTK抗体的体外巨噬细胞吞噬作用抑制活性。
简言之，使用IncuCyte实时成像平台对胞葬作用(即对凋亡细胞的吞噬作用)进行定量。凋亡细胞用pH敏感性探针(pHrodo)标记。pHrodo在被巨噬细胞吞噬后将仅在吞噬溶酶体的酸性环境中发荧光。将吞噬作用事件定量为总荧光强度(TFI)，并且根据每孔中巨噬细胞的数量进行正规化。将观察到的最大正规化TFI指定为100％吞噬活性。最大吞噬作用抑制(0％吞噬活性)指定为在没有巨噬细胞的对照孔中仅由经pHrodo标记的凋亡细胞产生的自体荧光。
胞葬作用测定展示，人源化抗MerTK抗体可抑制人巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬作用(图4A、图4B和图4C)。这些结果表明，人源化抗体h13B4.v16是最强效的吞噬作用抑制剂(表19)。此外，发现抗MerTK抗体h13B4.v16(13B4完全人源化)(一种Ig结构域结合抗体)抑制人巨噬细胞的吞噬作用的功效为抗MerTK抗体h10F7.v16(10F7完全人源化)(一种纤连蛋白结构域结合抗体)的5.2倍(表20；图4D)。
另外，图4E显示评估抗MerTK抗体抑制小鼠巨噬细胞吞噬作用的能力的胞葬作用测定的结果。这些结果展示，抗MerTK抗体能够阻断小鼠巨噬细胞吞噬作用(图4E)。此外，这些结果显示，抗MerTK抗体14C9mIgG2a LALAPG(一种Ig结构域结合抗体)在抑制小鼠巨噬细胞的吞噬作用方面的功效为抗MerTK抗体h10F7.v16(10F7完全人源化)(一种纤连蛋白结构域结合抗体)的4.8倍(表21)。
表19
Figure BDA0003407662520001691
表20
Figure BDA0003407662520001692
表21
Figure BDA0003407662520001693
实例5：抗MerTK体内抑制对凋亡细胞的清除
实施对凋亡细胞的清除测定以评估抗MerTK抗体的体内活性(Seitz,H.M.等人，Macrophages and dendritic cells use different Axl/Mertk/Tyro3 receptors inclearance of apoptotic cells,J Immunol.178(9)5635-5642(2007))。
简言之，向5至7周龄C57BL/6小鼠腹膜内注射0.2mg/25g***(Dex)。8小时或24小时后，分离出胸腺并且将其解离成单细胞悬浮液。利用VAD-FMK-FITC(1:500于PBS中，Promega，目录号G7461)使细胞染色，以检测半胱天冬酶3阳性活性凋亡细胞。使用碘化丙啶对死细胞进行染色(1:1000，Biochemika，目录号：70335)。在BD FACSCalibur流式细胞仪上分析细胞。通过VAD-FMK-FITC单阳性细胞(早期凋亡细胞)和PI/VAD-FMK-FITC双阳性细胞(晚期凋亡细胞)来测量凋亡细胞的累积。图5A展示，在Dex治疗后8小时，凋亡细胞累积，并且大部分在24小时内清除。
来自胸腺的对凋亡细胞的清除依赖于巨噬细胞上表达的MerTK。因此，测试一组功能阻断性抗MerTK抗体的每个抗体抑制对凋亡/死亡细胞的清除的能力。在Dex治疗后24小时，抗MerTK(克隆14C9，mIgG2a，LALAPG)阻断胸腺中对凋亡细胞的清除，而对照抗体抗gp120(mIgG2a，LALAPG)不阻断(图5B)。在经抗gp120或抗MerTK治疗的小鼠中，在Dex注射后24小时，对胸腺中凋亡/死亡细胞累积的定量展示，相对于抗gp120对照，抗MerTK抗体阻断对凋亡细胞的清除(图5C)。
实例6：抗MerTK抗体在MC-38同基因肿瘤模型中的治疗效应
在MC-38同基因肿瘤模型中实施肿瘤效能研究以确定抗MerTK抗体是否影响肿瘤生长。
向年龄相匹配的6至8周龄雌性C57BL/6小鼠的右侧腹中皮下接种1×105个悬浮于汉克氏缓冲盐水溶液(Hank’s Buffered Saline Solution，HBSS)和无酚红基质胶(BDBioscience)中的MC-38肿瘤细胞。当肿瘤达到150-250mm3的体积时(第0天)，将小鼠分成n＝10的不同治疗组。经由静脉内(IV)注射在第1天和第5天以30mg kg-1施用抗MerTK抗体(mIgG2a，LALAPG)或对照抗gp120(mIgG2a，LALAPG)抗体，之后在第9天和第13天进行腹膜内(IP)注射。经由IV注射在第1天以30mg kg-1施用抗PDL1抗体，之后在第5天、第9天和第13天以5mg kg-1进行IP注射。每周测量两次肿瘤体积并且使用修正的椭球公式1/2(长度×宽度2)进行计算。肿瘤>2,000mm3视为进展。
在肿瘤体积追踪图中，灰线代表截至数据收集日仍处于研究中的动物的肿瘤大小(图6A和图6B)。红线代表处以安乐死且从研究移除的具有溃烂或进展肿瘤的动物(图6A和图6B)。红色水平虚线指示从治疗开始肿瘤体积的倍增，而绿色水平虚线代表可测量的最小肿瘤体积(图6A和图6B)。在绿色虚线下方区域中的具有肿瘤的动物视为已具有完全应答。
作为单一疗法，免疫检查点抑制剂抗PDL1展现中等抗肿瘤活性(图6A至图6D)。测量每个治疗组的个体肿瘤大小(图6A和图6B)和平均肿瘤大小(图6C和图6D)随时间的变化。与抗MerTK抗体的组合治疗极大地增强抗PDL1抗体的抗肿瘤效能(图6A至图6D)。
在实体肿瘤的正常生理环境中，表达MerTK的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对濒死肿瘤细胞的快速去除是免疫沉默的。不受限于理论，据信，在上文所描述实验中利用抗MerTK抗体完成的对MerTK的阻断可活化先天性促炎应答，这进而可进一步增强抗PD-1疗法所释放的适应性T细胞应答。
实例7：抗MerTK抗体降低体外和体内对凋亡胸腺细胞的清除
实施胞葬作用测定以评估抗MerTK抗体(克隆14C9，重新格式化成mIgG2a，LALAPG框架)的体外巨噬细胞吞噬作用抑制活性。
对于体外胞葬作用测定，从4至6周龄C57BL/6N小鼠采集胸腺组织并且将其切碎以产生单细胞悬浮液。通过2μM***在37℃诱导胸腺细胞凋亡5小时。使用具有PI的APC膜联蛋白V凋亡检测试剂盒(Biolegend)评估膜完整性和磷酯酰丝氨酸在细胞表面上的暴露。凋亡胸腺细胞用1μg/ml pHrodo红琥珀酰亚胺基酯标记。使巨噬细胞与30μg/ml对照抗体或抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)一起预先培育1小时，之后添加经pHrodo红标记的凋亡细胞。pHrodo在被巨噬细胞吞噬后将仅在吞噬溶酶体的酸性环境中发荧光。在培育45分钟后，洗去其余的凋亡细胞，并且利用FITC缀合的抗CD11b抗体(eBioscience，克隆M1/70)标记巨噬细胞。在拍摄荧光影像之后，将细胞从细胞培养板分离以供通过FACS分析进行定量。
对于体内胞葬作用测定，向5至7周龄C57BL/6N小鼠投用20mg/kg抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抗体，并且接着在1小时后腹膜内注射0.2mg/25g***(Dex)。8小时或24小时后，分离出胸腺并且将其解离成单细胞悬浮液。利用VAD-FMK-FITC(1:500于PBS中，Promega，目录号G7461)使细胞染色，以检测半胱天冬酶3阳性活性凋亡细胞。使用碘化丙啶对死细胞进行染色(1:1000，Biochemika，目录号：70335)。在BD FACSCalibur流式细胞仪上分析细胞。通过VAD-FMK-FITC单阳性细胞(早期凋亡细胞)和PI/VAD-FMK-FITC双阳性细胞(晚期凋亡细胞)来测量凋亡细胞的累积。
在体外胞葬作用测定中，抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)实质上降低腹腔巨噬细胞对凋亡胸腺细胞的摄取(图7B)。此外，在体内测定中，抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)有效地抑制经***治疗的小鼠中凋亡胸腺细胞的清除(图7C和图8B)。此体内结果与在MerTK缺陷型小鼠中观察到的缺陷性胞葬作用(Scott,R.S.等人，Phagocytosis andclearance of apoptotic cells is mediated by MER.Nature 411,207-211(2001))一致，此展示抗MerTK抗体的功能有效性。
实例8：抗MerTK抗体抑制配体介导的MerTK信号传导
测量MerTK配体依赖性AKT磷酸化以评估抗MerTK抗体对配体介导的MerTK信号传导的效应。
简言之，在96孔板中将来自指数生长培养物的J774A.1小鼠巨噬细胞以2.0×105个细胞/孔的密度接种于RPMI培养基+10％FBS中。第二天，将细胞用200μL无血清RPMI洗涤两次，并且于200μL无血清RPMI中培育4小时。在血清饥饿后，添加10μg/mL为MerTK配体的重组人GAS6-Fc蛋白并且培育20分钟。使用磷酸-AKT-1(Ser473)HTRF试剂盒(Cisbio，编号63ADK078PEG)，遵循制造商的说明书(两板测定方案的标准方案，20μL最终体积)，从经处理的细胞溶解物进行磷酸-AKT(pAKT)测量。AKT磷酸化测定展示，如通过巨噬细胞中的pAKT活性所测量，与同种型对照相比，抗MerTK抗体强效地抑制配体介导的MerTK信号传导(图8A)。
实例9：抗MerTK抗体对肿瘤相关巨噬细胞的效应
在肿瘤相关巨噬细胞(TAM)中实施MerTK表达和分布研究，TAM是最丰富的肿瘤浸润性免疫细胞之一。为分离TAM，采集肿瘤并且将其解离成单细胞悬浮液。使用淋巴细胞M培养基(Cedarlane Labs)富集活细胞。利用生物素缀合的抗体标记CD335+、Siglec F+和抗Ly6G/6C+细胞，并且用抗生物素MACSiBeadTM颗粒(Miltenyi Biotec)耗尽。接着利用抗F4/80微型珠粒(Miltenyi Biotec)纯化TAM(图10A)。如通过FACS所评估，证实所分离TAM的纯度>90％(图10B)。使用荧光显微法来确定TAM中的MerTK分布和TAM清除凋亡细胞的能力(图8C和图8E)。实施qPCR和转录组分析以鉴定在经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)或对照抗体处理的细胞中差异表达的基因(图9、图10、图11和图13)。
对在野生型(WT)或Mertk-/-小鼠中生长的MC38同基因鼠类结肠腺癌肿瘤的分析显示MerTK在TAM中的特异性表达(图8C)。另外，来自MC38肿瘤的TAM能够吞食凋亡细胞，并且重要的是，抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)抑制该摄取(图8E)。该结果展示，在肿瘤微环境中，MerTK在TAM对凋亡细胞的清除中起重要作用，并且利用抗MerTK抗体处理TAM抑制此摄取。
对来自经抗MerTK抗体治疗的已确立MC38肿瘤的TAM实施转录组分析以确定MerTK抑制对TAM的影响。转录组分析揭露，与经对照抗体治疗的TAM相比，来自经抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗的小鼠的TAM展示基因表达的显著变化(图9A和图10C)。基因集合富集分析揭露I型IFN应答是最显著上调的基因印记(图9B和图10D)。qPCR分析证实在来自抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗的肿瘤的TAM中，Ifnb1和多个干扰素刺激基因(ISG)上调(图9C和图11A)。在肿瘤样品中也观察到IFNβ蛋白的显著增加(图9D)和ISG的伴随诱导(图10E和图11B)。Ifnb1表达的上调限于CD45+免疫细胞，并且IFNβ在CD45+免疫细胞中的基础水平表达显著高于CD45-细胞。另外，IFNβ在TAM中显著上调，但在DC中不显著(图9E)，并且在MC38肿瘤中，TAM较DC明显更丰富(图14B)。
实例10：MerTK在人类癌症中的分布
使用来自癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)的表达数据来确定人类癌症中MerTK表达的分布。如Daemen等人所描述获得TCGA样品中的表达数据。(Daemen,A.等人，Pan-Cancer Metabolic Signature Predicts Co-Dependency on Glutaminaseand De Novo Glutathione Synthesis Linked to a High-Mesenchymal CellState.Cell Metab 28,383-399e389(2018))。RPKM形式的基因表达用作TIMER软件(Li,T.等人，TIMER:A Web Server for Comprehensive Analysis of Tumor-InfiltratingImmune Cells.Cancer Res 77,e108-e110(2017))的输入，以计算六个肿瘤浸润性免疫子集的相对水平。已证实，MerTK不是用于估计免疫集合丰度的印记的一部分。针对每个细胞类型和适应症计算基因表达水平与免疫细胞类型估计值的间的皮尔逊(Pearson)相关系数。在人类癌症中，与其他免疫细胞类型相比，MerTK表达展现出更大的与TAM丰度的相关性(图8D)，此与MerTK由TAM表达一致。
实例11：抗MerTK抗体在肿瘤微环境中诱导局部I型IFN应答
对抗MerTK抗体治疗与I型IFN应答之间的关系进行研究。简言之，向雌性C57BL/6小鼠的右侧腹中皮下接种1×105个悬浮于汉克氏缓冲盐水溶液(HBSS)和无酚红基质胶(1:1v/v)(BD Bioscience)中的MC38肿瘤细胞，并且接着利用20mg/kg抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)抗体或对照抗体进行治疗。治疗后三天，使用gentleMACS解离器(MiltenyiBiotec)遵循制造商的方案，在gentleMACS M管(Miltenyi Biotec)中，使肿瘤于补充有HaltTM蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合剂(ThermoFisher Scientific)的PBS中进行均质化。每100mg肿瘤组织使用500μL缓冲液。通过在4℃以12,000×g离心20分钟使肿瘤匀浆澄清。基于通过BCA蛋白质测定试剂盒(Piece)所确定的总蛋白质浓度使匀浆正规化。分别使用高敏感性小鼠IFNβELISA试剂盒(PBL Assay Science)和小鼠MCP-3实时ELISA试剂盒(Invitrogen)来测定IFN-β和CCL7(MCP-3)。使用MILLIPLEX MAP小鼠细胞因子/趋化因子磁珠平板预混合15-Plex和32-Plex(Millipore)来测定其他细胞因子/趋化因子。细胞因子/趋化因子结果表示为肿瘤匀浆中的pg/mg总蛋白质。
I型IFN活化调节先天性和适应性免疫应答的细胞因子和趋化因子的自分泌和/或旁分泌产生。与此相一致，在经抗MerTK抗体治疗的肿瘤匀浆中观察到细胞因子或趋化因子CCL3、CCL4、CCL5、CCL7和CCL12的蛋白质水平(图13A)。I型IFN应答似乎局限于肿瘤部位，此乃因在从经抗MerTK抗体治疗的荷瘤小鼠收集的外周血单核细胞(PBMC)中未发现ISG表达的显著变化(图13B)。未观察到先前报导与MerTK活化相关的细胞因子(包括IL10、TGFβ1、IL6和IL12a)表达的显著变化(图13C)。总之，该数据展示，抗MerTK抗体可在肿瘤微环境中诱导局部I型IFN应答。
实例12：抗MerTK抗体增强抗肿瘤免疫性
鉴于抗MerTK抗体诱导I型IFN应答并且I型IFN正向调控抗原呈递细胞(APC)的各个方面，实施抗原呈递测定以确定抗MerTK抗体是否增强TAM和肿瘤相关DC对抗原的呈递。简言之，向雌性C57BL/6小鼠的右侧腹中皮下接种5×106个悬浮于汉克氏缓冲盐水溶液(HBSS)和无酚红基质胶(1:1v/v)(BD Bioscience)中的MC38.OVA肿瘤细胞。当肿瘤达到100-150mm3的体积时(第0天)，经由腹膜内(IP)注射以20mg/kg的剂量向小鼠施用抗MerTK14C9(mIgG2a LALAPG)抗体或对照抗体抗gp120。稍后对肿瘤进行抗原呈递增强分析。在MC38.OVA肿瘤模型中，可容易地检测H-2Kb结合的OVA来源SIINFEKL肽以供监测抗原呈递。使用抗H-2Kb-SIINFEKL(Biolegend，克隆25-D1.16)特异性地检测结合至I类MHC H-2Kb的OVA源性肽SIINFEKL，但不检测未结合的H-2Kb或与其他肽结合的H-2Kb。
抗MerTK抗体显著地增加TAM上H-2Kb-SIINFEKL复合物的水平(图12A)。T细胞活化的共刺激分子CD86在TAM中也升高，但在DC中不升高(图12A)。在抗MerTK抗体治疗后，也在TAM上观察到“M2样”巨噬细胞标志物CD206的下调(图14C)。这些发现表明，抗MerTK抗体诱导肿瘤微环境的免疫原性再程序化，此进而可增强适应性T细胞应答。
肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)克隆性反映在肿瘤部位使用特定TCR链的T细胞的频率。为确定抗MerTK抗体治疗是否影响抗原特异性TIL的克隆扩增，使用Dynabeads MousePan T试剂盒(ThermoFisher Scientific)来富集肿瘤浸润性T细胞。使用AllPrep DNA/RNA/蛋白质小型试剂盒(Qiagen)提取来自经富集T细胞的基因组DNA，并且使用调查水平Immunoseq平台(Adaptive Biotechnologies)使该基因组DNA经受TCRβCDR3测序。使用ImmunoSEQ分析仪(Adaptive Biotechnologies)分析测序结果。将克隆性评分计算为1-(熵)/log2(有效单一序列的数量)，其中熵计和变化的克隆频率。
抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗使得TIL克隆性显著增加(图12B)，此指示抗原特异性TIL的克隆扩增。另外，抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)治疗增加总CD8+T细胞以及抗原特异性CD8+T细胞(例如识别由MC38肿瘤细胞呈递的内源性抗原p15e的T细胞)的频率(图12C)。因此，MerTK阻断增强对肿瘤细胞的免疫识别和肿瘤特异性CD8+T应答。
实例13：抗MerTK抗体在与抗Pd-1、抗PD-L1和吉西他滨组合时是有效的为进一步表征抗MerTK抗体作为组合疗法的有效性，如先前所描述实施肿瘤生长测定。简言之，向雌性C57BL/6小鼠的右侧腹中皮下接种1×105个悬浮于汉克氏缓冲盐水溶液(HBSS)和无酚红基质胶(1:1v/v)(BD Bioscience)中的MC38肿瘤细胞。在接种后的预先确定日，向小鼠施用(1)作为单一疗法的抗MerTK抗体(图15A)；(2)作为组合疗法的抗MerTK抗体和抗PD-L1抗体(图15B)；或(3)作为组合疗法的抗MerTK抗体、抗PD-1抗体和化学治疗性吉西他滨(图15C)。抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)以20mg/kg施用，抗PD-L1以10mg/kg施用，抗PD1以8mg/kg施用，并且吉西他滨以120mg/kg施用。在肿瘤进展早期(图15A)或在肿瘤完全确立时(图15B和图15C)施用治疗。
当在肿瘤进展早期开始治疗时，单一药剂抗MerTK抗体能够显著降低肿瘤生长(图15A)。相比之下，在治疗完全确立肿瘤的干预背景中，单独的抗MerTK抗体或抗PD-L1抗体具有微小效应(图15B)。相比之下，利用抗MerTK抗体和抗PD-L1抗体同时治疗展现强劲的抗肿瘤效应(图15B)。类似地，利用抗MerTK抗体治疗显著地改良靶向PD-1(PD-L1的受体)的抗体的效能(图15C)。化学疗法药物吉西他滨中等地改良抗PD-1抗体疗法。然而，向吉西他滨加抗PD-1抗体的组合疗法增加抗MerTK抗体使所有***完全消退(图15C)。
实例14：抗MerTK抗体抗肿瘤效应依赖于肿瘤宿主中功能性STING的存在
为探索I型IFN信号传导在抗MerTK诱导的抗肿瘤免疫应答中的作用，使用针对IFNAR1的功能性中和抗体(抗IFNAR1克隆MAR1-5A3BioXCell)来干扰I型IFN信号传导，并且如先前所描述实施肿瘤生长测定。简言之，向雌性C57BL/6小鼠的右侧腹中皮下接种1×105个悬浮于汉克氏缓冲盐水溶液(HBSS)和无酚红基质胶(1:1v/v)(BD Bioscience)中的MC38肿瘤细胞。在接种后的预先确定日，向小鼠施用(1)作为单一疗法的抗MerTK 14C9(mIgG2aLALAPG)抗体；(2)作为单一疗法的抗IFNAR1抗体；(3)作为组合疗法的抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)和抗PD-L1抗体；或(4)作为组合疗法的抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)、抗PD-L1抗体和抗INFAR1抗体。
抗IFNAR1抗体治疗完全消除MerTK阻断对ISG的调节(图16A)。阻断I型IFN信号传导也使抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)作为单一药剂(图17A)或与抗PD-L1的组合(图16B)的抗肿瘤活性无效。这些结果展示，抗MerTK抗体的抗肿瘤效应依赖于完整的I型IFN信号传导。
STING路径已成为驱动抗肿瘤I型IFN应答的关键信号传导机制(Woo,S.R.等人，STING-dependent cytosolic DNA sensing mediates innate immune recognition ofimmunogenic tumors.Immunity 41,830-842(2014)；Deng,L.等人，STING-DependentCytosolic DNA Sensing Promotes Radiation-Induced Type I Interferon-DependentAntitumor Immunity in Immunogenic Tumors.Immunity 41,843-852(2014))。为确定STING信号传导对MerTK阻断的抗肿瘤效应的作用，对WT和STING缺陷(Stinggt/gt)小鼠进行肿瘤研究。与WT小鼠相反，在抗MerTK抗体治疗之后，在Stinggt/gt小鼠中未检测到ISG的上调(图17B)。此外，在小鼠中不存在功能性STING的情形下，MerTK抑制的抗肿瘤效应丧失(图17C)。这些数据展示，抗MerTK抗体的抗肿瘤效应依赖于宿主中功能性STING的存在。
实例15：抗MerTK抗体抗肿瘤效应依赖于肿瘤细胞中功能性cGAS的存在
实施细胞质DNA转染实验以评估STING和cGAS对抗MerTK抗体抗肿瘤效应的效应。简言之，使用lipofectamine 3000(Invitrogen)，利用鲱鱼睪丸-DNA(HT-DNA)转染WT骨髓来源巨噬细胞(BMDM)、Stinggt/gt BMDM、WT J774A.1巨噬细胞和cGAS-/-J774A.1巨噬细胞，并且接着使用UV交联剂(Stratagene)通过250mJ/cm2 UV-C进行辐射以诱导凋亡，并且使用高敏感性小鼠IFNβELISA试剂盒(PBL Assay Science)测量所产生的IFN-β蛋白的量。巨噬细胞应答于经由脂质体介导的转染所外源性递送的胞质DNA进行IFNβ诱导需要功能性cGAS和STING(图18A和图18B)。对MC38肿瘤细胞和J774A.1巨噬细胞中cGAS和STING表达的蛋白质印迹分析确定，J774A.1巨噬细胞表达cGAS和STING，而MC38肿瘤细胞仅表达cGAS(图18C)。与缺乏STING表达一致，MC38细胞自身在UV辐射后不产生任何可检测到的IFNβ(图18C和图19A)。当UV辐射的肿瘤细胞与WT而非Stinggt/gt巨噬细胞共培养时，会诱导IFNβ(图19A)。
在另一实验中，利用如上文所描述的DNA转染濒死肿瘤细胞，使其与巨噬细胞共培养24小时，并且使用高敏感性小鼠IFNβELISA试剂盒(PBL Assay Science)确定培养上清液中的IFNβ蛋白水平。缺乏cGAS的巨噬细胞在与濒死肿瘤细胞共培养时仍能够产生IFNβ(图19B)。为研究肿瘤细胞是否向巨噬细胞提供功能性cGAS从而导致IFN-β表达，测试cGAS-/-MC38细胞诱导IFN-β表达的能力。这显示，不管巨噬细胞的基因型为哪种，cGAS-/-MC38细胞均不能刺激IFNβ产生(图19A和图19B)。这些结果支持巨噬细胞中的STING是由肿瘤来源cGAS反式活化的模型。
为研究肿瘤来源cGAS在体内使STING反式活化的意义，我们利用cGAS-/-MC38或AB22肿瘤细胞进行肿瘤研究。简言之，向C57BL/6N小鼠接种1×105个WT或cGAS-/-MC38细胞或向BALB/c小鼠接种1×107个WT或cGAS-/-AB22细胞，接着如实例11中所述利用抗MerTK14C9(mIgG2a LALAPG)或对照抗体进行治疗。对于早期肿瘤研究，在接种后4天向小鼠施用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)或对照抗体(图19C)，或在肿瘤细胞接种后4天、7天和10天施用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)、抗PD-L1或对照抗体(图19D和图19E)。对于已确立肿瘤研究，在接种后18天、22天、26天和30天向小鼠施用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)与抗PD-L1的组合或对照抗体(图18E)，或使肿瘤生长至100-150mm3的体积，并且接着在当天向小鼠施用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)或对照抗体(图18D)。
在抗MerTK抗体治疗后，在MC38肿瘤中观察到的I型IFN应答在ccGAS-/-MC38肿瘤中完全消失(图19C)。在间皮瘤AB22肿瘤中获得类似结果(图18D)。重要的是，cGAS缺乏使肿瘤在早期肿瘤进展设定中对抗MerTK抗体或抗PD-L1抗体的单一药剂治疗具有抗性(图19D和图19E)，或在治疗完全确立的肿瘤时对组合疗法具有抗性(图18E)。因此，抗MerTK抗体抗肿瘤效应依赖于肿瘤细胞中功能性cGAS的存在。
实例16：抗MerTK抗体抗肿瘤效应可能依赖于肿瘤细胞与巨噬细胞的间的缝隙连结的存在
已知cGAS的活化导致产生cGAMP。为确定肿瘤细胞来源cGAMP是否导致免疫细胞中STING的活化，使用通过LC-MS/MS的蛋白质定量来测量经DNA转染的WT和cGAS-/-MC38肿瘤细胞中的cGAMP产生。在经HT-DNA转染后，WT肿瘤细胞中cGAMP增加，但cGAS-/-肿瘤细胞失去应答于胞质DNA产生cGAMP的能力(图18F)。为确定紧密连结是否有助于肿瘤细胞来源cGAMP传递至巨噬细胞中，实施肿瘤细胞与巨噬细胞的间的染料转移测定和IFN-β转移测定。对于染料转移测定，在37℃利用于PBS中的0.5μg/ml钙黄绿素-AM染料(ThermoFisher)使供体细胞(WT MC38肿瘤细胞、Cx43-/-MC38肿瘤细胞或J774A.1巨噬细胞)染色30分钟，并且用培养基充分洗涤以去除游离染料。将载有钙黄绿素的供体细胞与接受者细胞(WT或Cx43-/-MC38肿瘤细胞)以3:1的比率共培养4至5小时。通过FACS分析细胞以评估染料转移。为增加Cx43表达，在用于染料转移实验之前，将J774A.1巨噬细胞用0.5μg/ml LPS(Invivogen)刺激隔夜。使用Pe-得克萨斯红缀合的抗CD11b(ThermoFisher)区分巨噬细胞与肿瘤细胞。
Cx43是最遍在表达的连结蛋白家族蛋白质(Cx)，其组装以形成邻近细胞的间的缝隙连结。Cx43的丢失消除MC38细胞的间的染料转移(图20B和图20C)，此证实Cx43是用于形成功能性缝隙连结的关键连结蛋白。染料转移实验也显示巨噬细胞与MC38肿瘤细胞之间的Cx43依赖性细胞间通讯(图20D)。
在另一实验中，将DNA转染至WT或Cx43-/-MC38肿瘤细胞中以诱导cGAMP的产生。在DNA转染后，将5×105个肿瘤细胞与5×105个经LPS处理的J774A.1巨噬细胞共培养24小时以容许cGAMP转移。利用高敏感性小鼠IFNβELISA试剂盒(PBL Assay Science)测量培养上清液中的IFNβ蛋白。由于MC38肿瘤细胞因缺乏STING表达而不能产生IFNβ，故IFNβ的产生反映cGAMP从肿瘤细胞向巨噬细胞的有效转移。DNA转染的WT MC38细胞而非Cx43-/-MC38细胞诱导IFNβ产生(图21B)。鉴于WT和Cx43-/-MC38细胞表达类似水平的cGAS(图20A)，Cx43-/-MC38细胞无法诱导IFNβ有可能是由于有缺陷的空隙连结。总之，这些数据支持cGAMP从肿瘤细胞向巨噬细胞的缝隙连结依赖性转移的可能性。
进一步研究WT和Cx43-/-MC38肿瘤细胞，以确定在此模型中缺陷性缝隙连结是否消除抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)的抗肿瘤效应。简言之，如实例11中所描述向C57BL/6N小鼠接种Cx43-/-MC38细胞，并且4天后利用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)进行治疗。在抗MerTK抗体治疗后，与WT MC38肿瘤不同，在Cx43-/-MC38肿瘤中未观察到ISG表达的显著变化(图21C)。
也研究Cx43丢失对抗MerTK抗体抗肿瘤效应的效应。简言之，向C57BL/6N小鼠接种1×105个WT或cGAS-/-MC38细胞或向BALB/c小鼠接种1×107个WT或Cx43-/-MC38细胞，接着如实例11中所述利用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)或对照抗体进行治疗。在接种肿瘤细胞后14天、18天、22天和26天向小鼠施用抗MerTK 14C9(mIgG2a LALAPG)和抗PD-L1作为组合疗法或对照抗体。Cx43-/-MC38肿瘤对抗MerTK14C9(mIgG2a LALAPG)与抗PD-L1的组合疗法产生抗性(图20E)。总之，这些结果展示，抗MerTK抗体有效***，并且抗MerTK抗体的有效性依赖于宿主STING、肿瘤来源cGAS和肿瘤细胞与巨噬细胞之间的紧密连结的存在。
实例17：抗MerTK抗体阻断肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对凋亡细胞的持续清除
血液循环中的无细胞DNA(cfDNA)是由受损或死亡细胞释放(Wan,J.C.M.等人(2017)Nat.Rev.Cancer 17:223-238)。在癌症患者或荷瘤小鼠中，cfDNA的一个亚群体是肿瘤来源的，称为循环肿瘤DNA(ctDNA)。在此实例中，利用SNP来区分MC38肿瘤模型中的宿主来源cfDNA与肿瘤来源ctDNA，以研究抗MerTK抗体治疗的效应。
将MC38肿瘤细胞接种至C57BL/6J小鼠中并且使肿瘤确立。在肿瘤确立后，施用抗MerTK或对照抗体。治疗后三天，通过心脏穿刺将全血收集至无细胞DNA BCT管(Streck)中。通过双旋转程序(1,600g 10分钟，分离，之后16,000g 10分钟)获得血浆。使用MagMAXTM无细胞DNA分离试剂盒(ThermoFisher Scientific)遵循制造商的方案获得cfDNA(12.5μL，200μL血浆)。
为测定宿主来源cfDNA和MC38来源ctDNA的水平，使用含有靶向基因Jmjd1c的SNP(rs13480628,ThermoFisher Scientific)的引物和探针的测定实施多任务液滴数字PCR(Bio-Rad Laboratories)。C57BL/6J小鼠和MC38细胞分别在此基因座表达“T”和“C”等位基因。对于液滴数字PCR，每个20μL反应物中使用4μL经分离的cfDNA，并且以一式两份分析每个样品。使用QuantaSoft软件(Bio-Rad Laboratories)实施样品分析，并且计算靶DNA(拷贝/μL血浆)作为定量结果。使用Agilent Bioanalyzer 2100也证实经分离cfDNA的大小主要为约170bp。
如上文所描述将MC38肿瘤细胞接种至C57BL/6J小鼠中，并且在肿瘤确立后施用抗MerTK或对照抗体。在抗MerTK治疗后三天，在荷瘤小鼠的血浆中检测到ctDNA的显著增加(图22A)。抗MerTK也使血液循环中宿主来源cfDNA的水平增加(图22B)。这些结果清楚地展示，肿瘤微环境抗MerTK能够阻断TAM对凋亡细胞的持续清除。
实例18：抗MerTK抗体结合亲和力的分析和表位定位
对于本公开的抗MerTK抗体作为对照连同市售MerTK抗体的结合亲和力确定，使用BIAcoreTM-T200仪器进行表面等离子体共振(SPR)测量。首先，通过蛋白质A传感器芯片捕获两种兔抗体(Y323和10g86_D21F11)和抗MerTK抗体h13B4.v16，并且通过山羊抗小鼠IgG传感器芯片在每个流动槽上分别捕获八种小鼠抗体(A3KCAT、2D2、7E5G1、7N-20、590H11G1E3、MAB891、MAB8911和MAB8912-100)以达成大约100个RU。在25℃以50μl/min的流量注射人MerTK于HBS-EP缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂P20)中的三倍连续稀释液(0.4nM至100nM)，以记录随时间而变化的结合应答。利用1:1Langmuir结合模型对感测图进行拟合以计算缔合速率(k缔合)和解离速率(k解离)(BIAcoreT200评估软件第2.0版)。将结合亲和力(平衡解离常数(KD))计算为比率k解离/k缔合。
如图23中所示，所选10种市售抗体中仅有4种显示结合至人MerTK。这些结果指示Y323对人MerTK的结合亲和力为0.4nM，A3KCAT为6.8nM，590H11G1E3为7.6nM，MAB8912-100为17.3nM并且h13B4.v16为1.6nM，而其余抗体不显示结合。图23显示，Y323是亲和力高于h13B4.v16的抗体，包括与h13B4.v16相比，缔合速率(ka)为其约12倍并且解离速率(kd)为其3倍。另外，如上所述，图3、图4A至图4C和表19展示，h13B4.v16具有抗MerTK抗体所期望的生物性质，诸如对胞葬作用更强效的抑制。因此，h13B4 v16具有独特的结合特性(包括缔合和解离速率)、亲和力、结合表位和所产生的期望生物效应(例如胞葬作用)，从而使得此抗体成为特别有用的治疗候选物。
进一步评估该4种抗体(Y323、A3KCAT、590H11G1E3和MAB8912-100)，以确定其结合表位是否与h13B4.v16竞争结合人MerTK。为进行此实验，使用相同BIAcoreTM-T200仪器，并且应用经典夹心形式(图24A)。首先通过山羊抗人Fab传感器芯片捕获2ug/mL的h13B4.v16，并且接着以50μl/min的流量注射于HBS-EP缓冲液中的50nM人MerTK以记录第1次结合，之后记录注射或不注射10ug/mL测试抗体的情形下的第2次结合。若观察到第2次结合，则测试抗体不与前导分子竞争，并且反之也然，若未观察到第2次结合，则测试抗体与h13B4.v16竞争。
这些结果指示，仅抗体Y323与h13B4.v16竞争结合至人MerTK(图24B)。其余三种抗体不与h13B4.v16竞争结合至人MerTK(图24C)。
尽管已出于理解清晰的目的藉助说明和实例相当详细地描述本公开，但描述和实例不应解释为限制本公开的范畴。本文所引用的所有专利和科学文献的公开内容均明确地以全文引用的方式并入。
序列表
<110> 豪夫迈·罗氏有限公司
<120> 抗 MERTK 抗体及使用方法
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<220>
<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 83
Gln Ser Val Gln Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 84
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
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Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Ser Ala Ser Trp Ala Lys Gly
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Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Met Asp Leu Lys Ile Thr
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Phe Phe Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Tyr Gly Ile Ile His Arg Leu
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Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 85
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 85
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn
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Gly Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Ser Ala Ser Trp Ala Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn
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Ser Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Ser Ala Ser Trp Ala Lys
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 87
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr Thr
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<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 88
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr
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Arg Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 89
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 90
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr Ala
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<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 91
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr
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<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr
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Asp Arg Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
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Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Val Ile Ser Ala Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Met Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Ala
85 90 95
Phe Thr Ala Tyr Asn Arg Gly Ser Cys Val Ile His Arg Leu Asp Leu
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 94
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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ser
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly
35 40 45
Ile Val Ser Val Ala Ile Asp Pro Val Tyr Ala Thr Trp Ala Arg Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asn Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr Gly
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Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
35 40 45
Tyr Ile Tyr Pro Gly Phe Gly Ile Thr Asn Tyr Ala His Ser Val Lys
50 55 60
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65 70 75 80
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Tyr Tyr Phe Thr Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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35 40 45
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Ser
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<220>
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<220>
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<400> 99
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
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Gly Ile Ile Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys
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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
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Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Asp Pro Gly Val Ser Ser Asn Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
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<220>
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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ala Asn Thr
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Thr Gly Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
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<220>
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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<213> 人工序列
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<223> 合成构建体
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn
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Ser Ile Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Ser Ala Ser Trp Ala Lys
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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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100 105 110
His Arg Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 104
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr
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Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
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Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
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Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
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Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
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Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
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Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
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Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
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Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 105
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Tyr
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Gly Val Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Thr Asn Trp Ala Lys
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Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
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Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
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Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
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Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
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Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
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<211> 457
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 107
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145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
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<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 108
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
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Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
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Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 109
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
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35 40 45
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
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Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
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Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
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<213> 人工序列
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<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 113
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<211> 219
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<223> 合成构建体
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Asp Ala Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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<400> 115
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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<223> 合成构建体
<400> 116
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
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<223> 合成构建体
<400> 117
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355 360 365
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Leu Gly Lys
385
<210> 119
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 119
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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210
<210> 120
<211> 447
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 120
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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 121
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 121
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 122
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His
1 5 10
<210> 123
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 123
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 124
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 124
Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 125
Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 126
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 127
Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr
1 5
<210> 128
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 128
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 129
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 130
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 130
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 131
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 132
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 132
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 133
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 133
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 134
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 134
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
450
<210> 135
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 135
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
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Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 136
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 136
Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu
1 5
<210> 137
<211> 999
<212> PRT
<213> 智人
<400> 137
Met Gly Pro Ala Pro Leu Pro Leu Leu Leu Gly Leu Phe Leu Pro Ala
1 5 10 15
Leu Trp Arg Arg Ala Ile Thr Glu Ala Arg Glu Glu Ala Lys Pro Tyr
20 25 30
Pro Leu Phe Pro Gly Pro Phe Pro Gly Ser Leu Gln Thr Asp His Thr
35 40 45
Pro Leu Leu Ser Leu Pro His Ala Ser Gly Tyr Gln Pro Ala Leu Met
50 55 60
Phe Ser Pro Thr Gln Pro Gly Arg Pro His Thr Gly Asn Val Ala Ile
65 70 75 80
Pro Gln Val Thr Ser Val Glu Ser Lys Pro Leu Pro Pro Leu Ala Phe
85 90 95
Lys His Thr Val Gly His Ile Ile Leu Ser Glu His Lys Gly Val Lys
100 105 110
Phe Asn Cys Ser Ile Ser Val Pro Asn Ile Tyr Gln Asp Thr Thr Ile
115 120 125
Ser Trp Trp Lys Asp Gly Lys Glu Leu Leu Gly Ala His His Ala Ile
130 135 140
Thr Gln Phe Tyr Pro Asp Asp Glu Val Thr Ala Ile Ile Ala Ser Phe
145 150 155 160
Ser Ile Thr Ser Val Gln Arg Ser Asp Asn Gly Ser Tyr Ile Cys Lys
165 170 175
Met Lys Ile Asn Asn Glu Glu Ile Val Ser Asp Pro Ile Tyr Ile Glu
180 185 190
Val Gln Gly Leu Pro His Phe Thr Lys Gln Pro Glu Ser Met Asn Val
195 200 205
Thr Arg Asn Thr Ala Phe Asn Leu Thr Cys Gln Ala Val Gly Pro Pro
210 215 220
Glu Pro Val Asn Ile Phe Trp Val Gln Asn Ser Ser Arg Val Asn Glu
225 230 235 240
Gln Pro Glu Lys Ser Pro Ser Val Leu Thr Val Pro Gly Leu Thr Glu
245 250 255
Met Ala Val Phe Ser Cys Glu Ala His Asn Asp Lys Gly Leu Thr Val
260 265 270
Ser Lys Gly Val Gln Ile Asn Ile Lys Ala Ile Pro Ser Pro Pro Thr
275 280 285
Glu Val Ser Ile Arg Asn Ser Thr Ala His Ser Ile Leu Ile Ser Trp
290 295 300
Val Pro Gly Phe Asp Gly Tyr Ser Pro Phe Arg Asn Cys Ser Ile Gln
305 310 315 320
Val Lys Glu Ala Asp Pro Leu Ser Asn Gly Ser Val Met Ile Phe Asn
325 330 335
Thr Ser Ala Leu Pro His Leu Tyr Gln Ile Lys Gln Leu Gln Ala Leu
340 345 350
Ala Asn Tyr Ser Ile Gly Val Ser Cys Met Asn Glu Ile Gly Trp Ser
355 360 365
Ala Val Ser Pro Trp Ile Leu Ala Ser Thr Thr Glu Gly Ala Pro Ser
370 375 380
Val Ala Pro Leu Asn Val Thr Val Phe Leu Asn Glu Ser Ser Asp Asn
385 390 395 400
Val Asp Ile Arg Trp Met Lys Pro Pro Thr Lys Gln Gln Asp Gly Glu
405 410 415
Leu Val Gly Tyr Arg Ile Ser His Val Trp Gln Ser Ala Gly Ile Ser
420 425 430
Lys Glu Leu Leu Glu Glu Val Gly Gln Asn Gly Ser Arg Ala Arg Ile
435 440 445
Ser Val Gln Val His Asn Ala Thr Cys Thr Val Arg Ile Ala Ala Val
450 455 460
Thr Arg Gly Gly Val Gly Pro Phe Ser Asp Pro Val Lys Ile Phe Ile
465 470 475 480
Pro Ala His Gly Trp Val Asp Tyr Ala Pro Ser Ser Thr Pro Ala Pro
485 490 495
Gly Asn Ala Asp Pro Val Leu Ile Ile Phe Gly Cys Phe Cys Gly Phe
500 505 510
Ile Leu Ile Gly Leu Ile Leu Tyr Ile Ser Leu Ala Ile Arg Lys Arg
515 520 525
Val Gln Glu Thr Lys Phe Gly Asn Ala Phe Thr Glu Glu Asp Ser Glu
530 535 540
Leu Val Val Asn Tyr Ile Ala Lys Lys Ser Phe Cys Arg Arg Ala Ile
545 550 555 560
Glu Leu Thr Leu His Ser Leu Gly Val Ser Glu Glu Leu Gln Asn Lys
565 570 575
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580 585 590
Leu Gly Glu Gly Glu Phe Gly Ser Val Met Glu Gly Asn Leu Lys Gln
595 600 605
Glu Asp Gly Thr Ser Leu Lys Val Ala Val Lys Thr Met Lys Leu Asp
610 615 620
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Met Lys Asp Phe Ser His Pro Asn Val Ile Arg Leu Leu Gly Val Cys
645 650 655
Ile Glu Met Ser Ser Gln Gly Ile Pro Lys Pro Met Val Ile Leu Pro
660 665 670
Phe Met Lys Tyr Gly Asp Leu His Thr Tyr Leu Leu Tyr Ser Arg Leu
675 680 685
Glu Thr Gly Pro Lys His Ile Pro Leu Gln Thr Leu Leu Lys Phe Met
690 695 700
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725 730 735
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740 745 750
Tyr Tyr Arg Gln Gly Arg Ile Ala Lys Met Pro Val Lys Trp Ile Ala
755 760 765
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770 775 780
Ala Phe Gly Val Thr Met Trp Glu Ile Ala Thr Arg Gly Met Thr Pro
785 790 795 800
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805 810 815
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820 825 830
Met Tyr Ser Cys Trp Arg Thr Asp Pro Leu Asp Arg Pro Thr Phe Ser
835 840 845
Val Leu Arg Leu Gln Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ser Leu Pro Asp Val
850 855 860
Arg Asn Gln Ala Asp Val Ile Tyr Val Asn Thr Gln Leu Leu Glu Ser
865 870 875 880
Ser Glu Gly Leu Ala Gln Gly Ser Thr Leu Ala Pro Leu Asp Leu Asn
885 890 895
Ile Asp Pro Asp Ser Ile Ile Ala Ser Cys Thr Pro Arg Ala Ala Ile
900 905 910
Ser Val Val Thr Ala Glu Val His Asp Ser Lys Pro His Glu Gly Arg
915 920 925
Tyr Ile Leu Asn Gly Gly Ser Glu Glu Trp Glu Asp Leu Thr Ser Ala
930 935 940
Pro Ser Ala Ala Val Thr Ala Glu Lys Asn Ser Val Leu Pro Gly Glu
945 950 955 960
Arg Leu Val Arg Asn Gly Val Ser Trp Ser His Ser Ser Met Leu Pro
965 970 975
Leu Gly Ser Ser Leu Pro Asp Glu Leu Leu Phe Ala Asp Asp Ser Ser
980 985 990
Glu Gly Ser Glu Val Leu Met
995

Claims (233)

1.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体降低MerTK介导的吞噬细胞对凋亡细胞的清除。
3.根据权利要求2所述的抗体，其中所述吞噬细胞是巨噬细胞。
4.根据权利要求3所述的抗体，其中所述巨噬细胞是肿瘤相关巨噬细胞。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中如在室温在凋亡细胞清除测定中所测量的，对凋亡细胞的所述清除降低。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述抗体降低配体介导的MerTK信号传导。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述抗体诱导促炎应答或I型IFN应答。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体是结合MerTK的抗体片段。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域或免疫球蛋白样结构域。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合至MerTK的所述纤连蛋白样结构域。
13.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
14.根据权利要求13所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列。
15.根据权利要求13或14所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:83的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
16.根据权利要求15所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的VH。
17.根据权利要求15或16所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL。
18.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的VL。
19.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:10的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
20.根据权利要求19所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列。
21.根据权利要求19或20所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:84的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
22.根据权利要求21所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH。
23.根据权利要求21或22所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL。
24.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:84的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的VL。
25.根据权利要求19或20所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:85的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
26.根据权利要求25所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH。
27.根据权利要求25所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL。
28.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链。
30.根据权利要求25至29中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的轻链。
31.根据权利要求19或20所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:86的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
32.根据权利要求31所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH。
33.根据权利要求31或32所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL。
34.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL。
35.根据权利要求31至34中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链。
36.根据权利要求31至35中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的轻链。
37.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。
38.根据权利要求37所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:15的氨基酸序列。
39.根据权利要求37或38所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
40.根据权利要求39所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH。
41.根据权利要求39或40所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL。
42.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL。
43.根据权利要求37或38所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:88的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
44.根据权利要求43所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH。
45.根据权利要求43或44所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。
46.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:88的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。
47.根据权利要求43至46中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链。
48.根据权利要求43至47中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的轻链。
49.根据权利要求37或38所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:89的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
50.根据权利要求49所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH。
51.根据权利要求49或50所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。
52.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的VL。
53.根据权利要求49至52中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的重链。
54.根据权利要求49至53中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链。
55.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:22的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。
56.根据权利要求55所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:21的氨基酸序列。
57.根据权利要求55或56所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:90的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
58.根据权利要求57所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH。
59.根据权利要求57或58所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL。
60.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的VL。
61.根据权利要求55或56所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:91的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
62.根据权利要求61所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH。
63.根据权利要求61或62所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL。
64.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的VL。
65.根据权利要求61至64中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的重链。
66.根据权利要求61至65中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的轻链。
67.根据权利要求55或56所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:92的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
68.根据权利要求67所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH。
69.根据权利要求67或68所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL。
70.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VL。
71.根据权利要求67至70中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的重链。
72.根据权利要求67至71中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:115的氨基酸序列的轻链。
73.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:27的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。
74.根据权利要求73所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:26的氨基酸序列。
75.根据权利要求73或74所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:93的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
76.根据权利要求75所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH。
77.根据权利要求75或76所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL。
78.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL。
79.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
80.根据权利要求79所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:32的氨基酸序列。
81.根据权利要求79或80所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
82.根据权利要求81所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH。
83.根据权利要求81或82所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL。
84.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的VL。
85.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合至MerTK的所述免疫球蛋白样结构域。
86.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。
87.根据权利要求86所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:37的氨基酸序列。
88.根据权利要求86或87所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:95的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
89.根据权利要求88所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH。
90.根据权利要求88或89所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL。
91.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的VL。
92.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:44的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
93.根据权利要求92所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:43的氨基酸序列。
94.根据权利要求92或93所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:96的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:77的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
95.根据权利要求94所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH。
96.根据权利要求94或95所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL。
97.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL。
98.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:50的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。
99.根据权利要求98所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ IDNO:49的氨基酸序列。
100.根据权利要求98或99所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:97的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
101.根据权利要求100所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH。
102.根据权利要求100或101所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL。
103.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL。
104.根据权利要求98或99所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:98的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:79的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
105.根据权利要求104所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH。
106.根据权利要求104或105所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL。
107.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VL。
108.根据权利要求104至107中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:108的氨基酸序列的重链。
109.根据权利要求104至108中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链。
110.根据权利要求98或99所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO:99的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
111.根据权利要求110所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH。
112.根据权利要求110或111所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL。
113.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL。
114.根据权利要求110至113中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:109的氨基酸序列的重链。
115.根据权利要求110至114中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的轻链。
116.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:56的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。
117.根据权利要求116所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQID NO:55的氨基酸序列。
118.根据权利要求116或117所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:81的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
119.根据权利要求118所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH。
120.根据权利要求118或119所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL。
121.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL。
122.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列，以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。
123.根据权利要求122所述的抗体，其进一步包含：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQID NO:61的氨基酸序列。
124.根据权利要求122或123所述的抗体，其包含：(a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:101的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；(b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。
125.根据权利要求124所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH。
126.根据权利要求124或125所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL。
127.一种抗体，其包含含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL。
128.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求18所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
129.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求18所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
130.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求24所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
131.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求24所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
132.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求28所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
133.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求28所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
134.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求34所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
135.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求34所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
136.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求42所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
137.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求42所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
138.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求46所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
139.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求46所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
140.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求52所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
141.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求52所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
142.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求60所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
143.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求60所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
144.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求64所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
145.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求64所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
146.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求70所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
147.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求70所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
148.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求78所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
149.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求78所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
150.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求84所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
151.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求84所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
152.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求91所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
153.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求91所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
154.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求97所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
155.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求97所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
156.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求103所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
157.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求103所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
158.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求107所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
159.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求107所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
160.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求113所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
161.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求113所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
162.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求121所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
163.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求121所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
164.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求127所述的抗体的参考抗体竞争结合至MerTK。
165.一种经分离抗体，其与包括根据权利要求127所述的抗体的参考抗体结合至MerTK上的相同表位。
166.根据权利要求128至165中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体结合至人MerTK。
167.根据权利要求1至166中任一项所述的抗体，其中所述抗体是全长IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
168.根据权利要求167所述的抗体，其中所述抗体是全长IgG1抗体。
169.根据权利要求167或168所述的抗体，其中所述抗体包含LALAPG突变。
170.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含轻链可变区中的Q2和L4残基以及重链可变区中的I48、G49和K71残基。
171.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含轻链可变区中的L4和F87以及重链可变区中的V24、I48、G49和K71。
172.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含轻链可变区中的L4和P43以及重链可变区中的K71。
173.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链可变区中的G49和V78残基。
174.根据权利要求1至115及122至127中任一项所述的抗体，其中所述抗体在25℃以≤100nM的解离常数结合至人MerTK。
175.根据权利要求1至97及122至127中任一项所述的抗体，其中所述抗体在25℃以≤100nM的解离常数结合至食蟹猴MerTK。
176.根据权利要求1至97及116至127中任一项所述的抗体，其中所述抗体在25℃以≤10nM的解离常数结合至小鼠MerTK。
177.根据权利要求1至97及116至127中任一项所述的抗体，其中所述抗体在37℃以≤10nM的解离常数结合至大鼠MerTK。
178.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的轻链。
179.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的轻链。
180.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的轻链。
181.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链。
182.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的轻链。
183.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:115的氨基酸序列的轻链。
184.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:108的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链。
185.一种结合至MerTK的经分离抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:109的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的轻链。
186.根据权利要求13至84或86至185中任一项所述的经分离抗体，其中所述抗体降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
187.根据权利要求186所述的抗体，其中所述抗体降低MerTK介导的吞噬细胞对凋亡细胞的清除。
188.根据权利要求187所述的抗体，其中所述吞噬细胞是巨噬细胞。
189.根据权利要求188所述的抗体，其中所述巨噬细胞是肿瘤相关巨噬细胞。
190.根据权利要求186至189中任一项所述的抗体，其中如在室温在凋亡细胞清除测定中所测量的，对凋亡细胞的所述清除降低。
191.根据权利要求13至190中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
192.根据权利要求186至138或178至185中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体或嵌合抗体。
193.根据权利要求128至185中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
194.根据权利要求13至193中任一项所述的抗体，其中所述抗体是结合MerTK的抗体片段。
195.根据权利要求13至194中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域或免疫球蛋白样结构域。
196.根据权利要求195所述的抗体，其中所述抗体结合至MerTK的纤连蛋白样结构域。
197.根据权利要求195所述的抗体，其中所述抗体结合至MerTK的免疫球蛋白样结构域。
198.一种经分离核酸，其编码根据权利要求1至197中任一项所述的抗体。
199.一种载体，其包含根据权利要求198所述的核酸。
200.一种宿主细胞，其包含根据权利要求199所述的载体。
201.一种产生抗MerTK抗体的方法，其包括在适于表达所述抗体的条件下在细胞培养物中培养根据权利要求200所述的宿主细胞。
202.根据权利要求201所述的方法，其进一步包括从所述细胞培养物回收所述抗MerTK抗体。
203.一种免疫缀合物，其包含连接至细胞毒性剂的根据权利要求1至197中任一项所述的抗体。
204.一种药物制剂，其包含根据权利要求1至197中任一项所述的抗体或根据权利要求203所述的免疫缀合物以及药用载体。
205.根据权利要求1至197中任一项所述的抗体或根据权利要求203所述的免疫缀合物，其用作药物。
206.根据权利要求1至197中任一项所述的抗体或根据权利要求203所述的免疫缀合物，其用于治疗癌症。
207.根据权利要求1至197中任一项所述的抗体或根据权利要求203所述的免疫缀合物，其用于降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
208.根据权利要求1至197中任一项所述的抗体或根据权利要求203所述的免疫缀合物在制造药物中的用途。
209.根据权利要求208所述的用途，其中所述药物用于治疗癌症。
210.根据权利要求209所述的用途，其中所述癌症表达功能性STING、功能性Cx43和功能性cGAS多肽。
211.根据权利要求209所述的用途，其中所述癌症是结肠癌。
212.根据权利要求1至197中任一项所述的抗体或根据权利要求203所述的免疫缀合物在制造药物中的用途，所述药物用于降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
213.根据权利要求208至212中任一项所述的用途，其中所述药物与有效量的附加治疗剂组合使用。
214.根据权利要求213所述的用途，其中所述附加治疗剂选自以下项中的一者或多者：他莫西芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、厄洛替尼、贝伐单抗、长春新碱、甲磺酸伊马替尼、索拉非尼、拉帕替尼、曲妥珠单抗、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、长春碱、卡铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、阿霉素、硼替佐米、美法仑、***及多西他赛。
215.根据权利要求213所述的用途，其中所述附加治疗剂是免疫检查点抑制剂。
216.根据权利要求215所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂选自由以下项组成的组：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制剂、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)结合拮抗剂或程序性死亡配体1(PDL1)结合拮抗剂。
217.根据权利要求216所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是PDL1结合拮抗剂。
218.根据权利要求217所述的用途，其中所述PDL1结合拮抗剂是抗PDL1抗体。
219.根据权利要求218所述的用途，其中所述抗PDL1抗体是阿特珠单抗。
220.根据权利要求215至219中任一项所述的用途，其中所述药物进一步与有效量的化疗剂组合使用。
221.一种治疗患有癌症的个体的方法，其包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至197中任一项所述的抗体或有效量的根据权利要求203所述的免疫缀合物。
222.根据权利要求221所述的方法，其中所述癌症表达功能性STING、功能性Cx43和功能性cGAS多肽。
223.根据权利要求221或221所述的方法，其进一步包括向所述个体施用附加治疗剂。
224.根据权利要求223所述的方法，其中所述附加治疗剂选自以下项中的一者或多者：他莫西芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、厄洛替尼、贝伐单抗、长春新碱、甲磺酸伊马替尼、索拉非尼、拉帕替尼、曲妥珠单抗、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、长春碱、卡铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、阿霉素、硼替佐米、美法仑、***及多西他赛。
225.根据权利要求223所述的方法，其中所述附加治疗剂是免疫检查点抑制剂。
226.根据权利要求225所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自由以下项组成的组：细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制剂、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)结合拮抗剂和程序性死亡配体1(PDL1)结合拮抗剂。
227.根据权利要求226所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是PDL1结合拮抗剂。
228.根据权利要求227所述的方法，其中所述PDL1结合拮抗剂是抗PDL1抗体。
229.根据权利要求228所述的方法，其中所述抗PDL1抗体是阿特珠单抗。
230.根据权利要求225至229中任一项所述的方法，其进一步包括向所述个体施用有效量的附加化疗剂。
231.根据权利要求216至230中任一项所述的方法，其中所述癌症是结肠癌。
232.一种降低个体中MerTK介导的对凋亡细胞的清除的方法，其包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至195中任一项所述的抗体或根据权利要求201所述的免疫缀合物以降低MerTK介导的对凋亡细胞的清除。
233.根据权利要求232所述的方法，其中对凋亡细胞的所述清除降低约1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。
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