CN107266453B

CN107266453B - 作为蛋白激酶抑制剂的吡咯并嘧啶化合物

Info

Publication number: CN107266453B
Application number: CN201710229308.7A
Authority: CN
Inventors: 徐晓; 王小波; 毛龙; 赵莉; 奚彪
Original assignee: Essen Pharmaceuticals
Current assignee: Essen pharmaceuticals
Priority date: 2012-08-06
Filing date: 2013-07-11
Publication date: 2020-02-07
Anticipated expiration: 2033-07-11
Also published as: RU2015107831A; ES2733576T3; CN103748096A; BR112015002709B1; KR102181365B1; ES2618007T3; JP6215938B2; ZA201500762B; DK2880035T3; EP3170825B1; EP2880035B9; SG11201500872SA; HRP20170311T1; JP2015524468A; RU2645672C2; MX2015001715A; EP2880035A1; PT2880035T; CN103748096B; AU2013300106B2

Abstract

本发明涉及一些吡咯并嘧啶衍生物、含有它们的药物组合物、以及使用它们的方法，包括用于治疗与激酶(例如，但不限于EGFR(包括HER)、Alk、PDGFR、BLK、BMX/ETK、BTK、FLT3(D835Y)、ITK、JAK1、JAK2、AK3、TEC和TXK)和/或各自途径的失调有关的增殖性病症和其他疾病的方法。

Description

作为蛋白激酶抑制剂的吡咯并嘧啶化合物

本申请是申请日为2013年7月11日、申请号为201380001359.4、发明名称为“作为蛋白激酶抑制剂的新型吡咯并嘧啶化合物”的发明专利申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求 2012年8月6日提交的名称为“NOVEL EGFR MODULATORS AND USESTHEREOF”的美国临时申请第61/680,231号、2013年4月19日提交的名称为“NOVELPYRROLOPYRIMIDINE COMPOUNDS AS INHIBITORS OF PROTEIN KINASES”的美国临时申请第61/814,147号、2013年3月15日提交的名称为“NOVEL EGFR MODULATORS AND USESTHEREOF”的美国专利申请第13/843,554号、和2013年6月13日提交的名称为“NOVEL EGFRMODULATORS AND USES THEREOF”的美国专利申请第13/917,514号的优先权益。本申请，在一些方面，涉及2012年1月13日提交的名称为“Heterocyclic Compounds and Uses asAnticancer Agents”的美国临时申请第 61/586,718号、和2013年1月12日提交的名称为“HETEROCYCLIC COMPOUNDS AND USES AS ANTICANCER AGENTS”的美国专利申请第13/740,182号。上述参考申请的内容在此以其全文引入作为参考。

技术领域

本发明的领域是药物化合物、组合物和方法，特别地它们涉及用于治疗与激酶(例如，但不限于EGFR (包括HER)、Alk、PDGFR、BLK、BMX/ETK、BTK、FLT3(D835Y)、ITK、JAK1、JAK2、AK3、TEC和TXK)和/或各自途径的失调有关的增殖性病症和其他疾病的组合物和方法。

背景技术

蛋白激酶是一组调节种种重要生物过程的酶，所述生物过程包括细胞生长、增殖、生存、侵袭和分化、器官形成、组织修复和再生等。蛋白激酶通过催化蛋白质磷酸化从而调节细胞活动，而发挥它们的生理功能。因为蛋白激酶对细胞产生深远的影响，所以它们的活性受到高度调节。激酶通过磷酸化(有时通过自身磷酸化)、通过激活蛋白或抑制蛋白或小分子的结合、或通过控制它们在细胞中相对其底物的位置，进行开启或关闭。遗传异常或环境因素所产生的激酶活动的功能障碍，是已知与多种疾病有关的。几种严重的病理状态，包括癌症和慢性炎症，是与细胞内信号的刺激有关的，并由于激酶积极地传递信号事件，它们的抑制提供了抑制或控制信号传导级联的强大方式。

表皮生长因子受体(EGFR；ErbB-1；人类HER1)是受体ErbB家族的成员，有四种密切相关的受体酪氨酸激酶的亚族：EGFR (ErbB-1)、HER2/c-neu (ErbB-2)、Her 3 (ErbB-3)和Her 4 (ErbB-4)。至于胞外蛋白配体的表皮生长因子家族(EGF-家族)的成员，EGFR是细胞表面受体。影响EGFR表达或活性的突变可导致癌症。据报道，在大多数实体瘤类型即肺癌、乳腺癌和脑肿瘤中EGFR被解除管制。据估计，EGFR或家庭成员的突变、扩增或误调节牵涉到约30％的所有上皮癌。基于抑制EGFR，通过抗体药物或小分子抑制剂药物，如吉非替尼和厄洛替尼，已经开发了治疗方法。在非小细胞肺癌中的情况下，吉非替尼和厄洛替尼显示出约有10-40％患者获益。然而，在治疗一段时间后，对吉非替尼或厄洛替尼获得耐药性成为主要的临床问题。经研究证实，发展耐药性的一种主要原因是由于存在T790M的新突变，T790M是EGFR的门控。随后，可以战胜这种T790M的抑制剂，已被开发并在临床试验中显示出优势，如BIBW2992。然而，这些T790M靶标的EGFR抑制剂对野生型EGFR仍然具有相对的抑制活性，这限制了临床应用。需要进一步开发更高效类型的EGFR 抑制剂，其将基本上靶向该突变，而基本上不靶向野生型蛋白。

关于小分子药物，其它有用靶向的蛋白激酶包括B淋巴细胞酪氨酸激酶(BLK)、janus激酶1(JAK1)、X染色体上的骨髓激酶(BMX/ETK)、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)、janus激酶2(JAK2)、janus激酶3(JAK3)、肝细胞肝癌中表达的酪氨酸激酶(TEC)、静息淋巴细胞激酶(TXK，也被称为RLK)、FMS-样酪氨酸激酶3 (FLT3)、和FLT3 (D835Y)。

概述

本发明涉及一些吡咯并嘧啶衍生物、药物组合物、以及使用这些化合物和组合物治疗增殖和其他病症的方法。

本发明提供通式(VIII)的化合物：

其中

X¹是O、NH、S、CH₂、或CF₂；

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

其中所述的烷基或环烷基是未取代的或被羟基或氨基取代；和

其中R²²和R²³各自独立地选自氢和C_1-6烷基或R²²和R²³可以结合以形成3至10元的环；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

R⁶选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基；

R⁷选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基；

R⁸选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基；

Q是CR⁹或N；

R⁹选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；

R¹³选自氢、C_1-6烷基、C_1-6酰基、SO₂-C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和C_6-20芳基，

其中各烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代；和

-NR¹⁸R¹⁹是

或

；

其中R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹⁵是未取代的甲基，或者是未取代的或被羟基、甲氧基、或卤素取代的C_2-4烷基；和

m是1或 2；

或R¹⁹和R⁹一起形成5-或6-元的杂芳基环，其任选被C_1-6烷基取代，所述C_1-6烷基是未取代的或被氨基、羟基、或卤素取代；和 R¹⁸是氢或C_1-6烷基，或不存在以满足杂芳基环的化合价；

条件是当–NR¹⁸R¹⁹是

时，R⁶或R⁷都不是甲氧基；

或其药学上可接受的盐。

本发明提供通式(Ia)和(Ib)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

R⁶选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基；

R⁷选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

a是1或2；

环A是芳香环；

R²⁰和R²¹独立地选自氢和C_1-6烷基；其中烷基是未取代的或被氨基、羟基、或卤素取代；其中R²¹可能不存在以满足化合价；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

其中各烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代；

或其药学上可接受的盐。

本发明提供通式(II)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

R¹³选自氢、C_1-6烷基、和C_6-20芳基，其中各烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代；

或其药学上可接受的盐。

本发明提供通式(III)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

本发明提供通式(IV)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

本发明提供通式(V)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

本发明提供通式(VI)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明提供如下所述的通式(VII)的化合物。

在一些实施方案中，通式(I)-(VIII)的化合物是选自下面详细描述中描述或例示的那些种类的化合物。

在进一步的方面，本发明提供药物组合物，其包括通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其药学上可接受的盐。药物组合物可进一步包括药学上可接受的载体或赋形剂。本发明还提供通式(I)-(VIII)的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。

在另一方面，本发明提供治疗和/或预防增殖性病症的方法，其包括给需要这种治疗的受试者施用有效量的通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其药学上可接受的盐。

在另一方面，本发明提供通式(I)-(VIII)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗。在另一方面，本发明提供通式(I)-(VIII)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗增殖性病症。在另一方面，本发明提供通式(I)-(VIII)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗增殖性病症的药物中的用途。

在另一方面，本发明提供治疗与靶向突变的EGFR而不是野生型EGFR 的EGFR抑制活性相关状况的方法，其包括给需要这种治疗的受试者施用有效量的通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，突变的EGFR包括T790M突变。本发明提供通式(I)-(VIII)的化合物在制备用于治疗这样的疾病和医疗状况的药物中的用途，以及这样的化合物和盐用于治疗这样的疾病和医疗状况的用途。

在另一方面，本发明提供抑制细胞中突变EGFR的方法，其包括用有效量的通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其盐、和/或用所述实施方案的至少一种药物组合物接触细胞，其中所述接触是在体外、离体或体内。在一些实施方案中，突变的EGFR包括T790M突变。

在另一方面，本发明提供治疗与激酶抑制活性相关的疾病和医疗状况的方法，其包括给需要这种治疗的受试者施用有效量的通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其药学上可接受的盐，其中所述激酶选自EGFR、EGFR (T790M)、BLK、BMX/ETK、BTK、JAK2、JAK3、TEC、TXK、FLT3、和FLT3 (D835Y)。本发明提供通式(I)-(VIII)的化合物在制备用于治疗这类疾病和医疗状况的药物中的用途，以及这样的化合物和盐用于治疗这类疾病和医疗状况的用途。在另一方面，本发明提供抑制细胞中突变激酶的方法，其包括用有效量的通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其盐、和/或用所述实施方案的至少一种药物组合物接触细胞，其中所述接触是在体外、离体或体内。在一些实施方案中，突变的激酶是D835Y突变的FLT3。

本领域的普通技术人员将认识到，通式(II)-(VI)的化合物是通式(I)的化合物，和通式(I)-(VII)的化合物是通式(VIII)的化合物。

根据以下的详细描述和通过本发明的实践，本发明其它的实施方案、特征、和优点将是显而易见的。

为了简洁起见，本说明书中所引用的出版物包括专利的内容在此引入，作为参考。

附图简述

图1显示出用不同浓度的化合物3治疗H1975肺癌细胞的一些效应物的SDS-PAGE。

图2显示出化合物3在不同时间间隔所***的一些效应物的免疫印迹。

图3显示出在NCI-H1975模型中不同组的小鼠体重变化图。

图4显示出在HCC827模型中不同组的小鼠体重变化图。

图5显示出在A431模型中不同组的小鼠体重变化图。

图6显示出在NCI-H1975模型中不同组的小鼠肿瘤体积图。

图7显示出在HCC827模型中不同组的小鼠肿瘤体积图。

图8显示出在A431模型中不同组的小鼠肿瘤体积图。

图9A-9F显示出在不同浓度的化合物3(9A, 9B)、吉非替尼(9C, 9D)、和WZ4002(9E, 9F)治疗的H1975肺癌细胞中EGFR-Tyr1068磷酸化和下游信号的SDS-PAGE (9A, 9C,9E)和抑制曲线图(9B, 9D, 9F)。

图10A-10F显示出在不同浓度的化合物3(10A, 10B)、吉非替尼(10C, 10D)、和WZ4002 (10E, 10F)治疗的HCC-827 EGFR突变细胞中EGFR-Tyr1068磷酸化和下游信号的SDS-PAGE (10A, 10C, 10E)和抑制曲线图(10B, 10D, 10F)。

图11A-11F显示出在不同浓度的化合物3(11A, 11B)、吉非替尼(11C, 11D)、和WZ4002(11E, 11F)治疗的表达WT EGFR的A431细胞中EGFR-Tyr1068磷酸化和下游信号的SDS-PAGE(11A, 11C, 11E)和抑制曲线图(11B, 11D, 11F)。

图12显示单次剂量的12.5、50、和200 mg/kg化合物3治疗时，H1975肿瘤组织中EGFR磷酸化的抑制。

图13显示与100 mg/kg吉非替尼相比8次剂量的12.5和50 mg/kg化合物3治疗时，H1975肿瘤组织中EGFR磷酸化的抑制。

图14显示基于细胞的脉冲追踪测定的结果，表明化合物3是EGFR T790M突变的H1975细胞增殖的不可逆抑制剂。

图15A显示化合物3对BLK的IC₅₀滴定曲线。图15B显示星形孢菌素对BLK的IC₅₀滴定曲线。

图16显示化合物3对BMX/ETK的IC₅₀滴定曲线。

图17显示化合物3对 BTK的IC₅₀滴定曲线。

图18显示化合物3 对FLT3 (D835Y)的IC₅₀滴定曲线。

图19显示化合物3对ITK的IC₅₀滴定曲线。

图20显示化合物3对JAK2的IC₅₀滴定曲线。

图21显示化合物3对JAK3的IC₅₀滴定曲线。

图22显示化合物3对TEC的IC₅₀滴定曲线。

图23显示化合物3对TXK的IC₅₀滴定曲线。

详细描述

本发明涉及一些吡咯并嘧啶衍生物、药物组合物、以及使用这些化合物和组合物治疗增殖性病症的方法。本文所述的化合物表现出抗肿瘤、抗癌、抗炎、抗感染、和抗增殖活性。在一些实施方案中，本发明化合物使用多种癌细胞系在本文所述的基于细胞的测定中已显示出具有抗癌活性，这证明基本上靶向突变和基本上不靶向野生型蛋白的非常有效的EGFR抑制活性。在一些实施方案中，突变的EGFR包括T790M突变。因此，本发明化合物和包括实施方案化合物的组合物有用于治疗特征在于那些突变癌细胞的状况。在一些情况下，这些化合物有用于治疗肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、***、胃癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、肺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、***癌、乳腺癌、肝癌、头颈部癌、和胰腺癌。

在其它实施方案中，本发明化合物已显示出具有抗蛋白激酶范围的活性，所述蛋白激酶包括EGFR、EGFR (T790M)、BLK、BMX/ETK、BTK、JAK2、JAK3、TEC、TXK、FLT3、和FLT3(D835Y)。在一些情况下，这些化合物有用于治疗癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫有关的疾病。在其它实施方案中，这样的疾病是由至少一种选自BTK、JAK3、ITK、和BMX的激酶所介导的。在其它实施方案中，所述癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫介导的疾病是由异常活化的B淋巴细胞、T淋巴细胞、或两者所介导的。在其它实施方案中，炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫介导的疾病是关节炎、类风湿性关节炎、脊椎关节病、痛风性关节炎、骨关节炎、幼年型关节炎、其它关节炎状况、狼疮、***性红斑狼疮(SLE)、皮肤有关的疾病、银屑病、干眼、湿疹、皮炎、特应性皮炎、疼痛、肺部病症(pulmonarydisorder)、肺部炎症、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺结节病、慢性肺部炎症性疾病、慢性阻塞性肺疾病 (COPD)、心血管疾病、动脉粥样硬化、心肌梗死、充血性心脏衰竭、心脏再灌注损伤、炎性肠道疾病、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、哮喘、干燥综合征(Sjogren’s syndrome)、自身免疫甲状腺疾病、荨麻疹(风疹)、多发性硬化症、硬皮病、器官移植排斥、异种移植、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、糖尿病相关疾病、炎症、***性疾病、变应性鼻炎、变应性支气管炎、变应性鼻窦炎、白血病、淋巴瘤(lymphioma)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、骨髓瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、急性髓性白血病 (AML)、慢性髓性白血病 (CML)、毛细胞白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、***、胃癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、肺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、***癌、乳腺癌、肝癌、头颈部癌、或胰腺癌。在其它实施方案中，所述疾病是自身免疫性疾病或移植引起的炎症性病症，包括但不限于同种移植、移植物抗宿主病、或自身免疫性糖尿病。

在本发明作进一步描述前，应当理解，本发明并不限于所述的特定实施方案，当然可同样发生变化。也应当理解，本文使用的术语目的仅仅在于描述特定的实施方案，而不旨在限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求书所限制。

必须指出，本文和所附权利要求书中所用的单数形式“一种”、“一个”和“该”包括复数指示物，除非上下文另有清楚指出。另外地指出，可以制定权利要求以排除任何可选元素。因此，这种声明旨在为了在叙述权利要求元素的结合中使用这样的排他的术语如“独自”、“唯一”等，或为了使用“否定”的限制，充当先行基础。

本文所用的术语“包括”、“含有”、和“包含”以其开放的、非限制的意义使用。

为了提供更简明的描述，本文给出的一些定量表达没有用术语“约”一起限定。应当理解，不论术语“约”是否明确使用，本文给出的每个数量意指实际给出的值，并且它也意指所给出值的近似值，这应基于本领域普通技术人员的合理推断，包括由于所给出值的实验和/或测量条件的等值和近似值。每当以百分比给出产率时，这样的产率是指相对于相同实体在特定化学计量条件下可得到的最大量所给出产率的实体质量。以百分比给出的浓度是指质量比，除非有不同指示。

除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。虽然在本发明的实施或测试中也可使用任何类似或等同于本文所述的那些方法和材料，优选的方法和材料是现在描述的。本文所提到的所有出版物在此引入作为参考，以结合所引用的出版物进行披露和描述方法和/或材料。

除非另外注明，通常根据本领域众所周知的常规方法以及按照本说明书中所引用和讨论的多种通用和更具体参考的描述，执行本实施方案的方法和技术。例如参见，Loudon，Organic Chemistry，第四版，New York：Oxford University Press，2002；Smith和March，March's Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，第五版，Wiley-Interscience，2001。

在本文实施例中举例说明了本文所用的命名主题化合物的命名法。该命名法通常使用市售AutoNom软件(MDL, San Leandro, Calif.)得出。

应当理解，为清楚起见在分开的实施方案内容中所述本发明的一些特征，也可以在单一实施方案中组合提供。相反，为简短起见在单一实施方案内容中所述本发明的多种特征也可以单独或以任何适当的子组合提供。实施方案有关的由变量表示的化学基团的所有组合是本发明特别包括的，且其恰如各自和每种组合单独明确地公开一样，在本文被公开到这样组合的程度，所述组合包括化合物是稳定的化合物(即可分离、赋予特征、和测试生物活性的化合物)。此外，实施方案中描述这样变量所列出的化学基团的所有子组合也是本发明特别包括的，且其在本文公开恰好如同化学基团各自和每种这样的子组合在本文单独明确地公开一样。

化学术语

术语“烷基”是指链中具有1至12个碳原子的直链或支链的烷基。烷基的实例包括甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基、以及依据本领域普通技术人员和本文所提供的教导认为是相当于上述实例中的任何一种基团。

术语“烷氧基”是指键接氧原子的如上定义的烷基。烷氧基经由氧原子连接到母体结构。

术语“氨基”是指–NH₂基团、或单-或二烷基氨基。

术语“环烷基”是指饱和或部分饱和的，单环的、稠合多环的、桥连多环的、或螺多环的碳环，每个碳环具有3至12个环原子数。环烷基的说明性实例包括以下的以适当键合部分形式的实体：

。

术语“杂芳基”是指单环的、稠合双环的、或稠合多环的芳族杂环(环结构具有选自碳原子和至多四个选自氮、氧和硫的杂原子的环原子)，每个杂环具有3至12个环原子。杂芳基的说明性实例包括以下的以适当键合部分形式的实体：

。

术语“卤素”表示氯、氟、溴或碘。术语“卤代”代表氯代、氟代、溴代或碘代。术语“卤代烷基”是指如上所定义的烷基，其被一个或多个卤原子取代。术语“卤代烷氧基”是指如上所定义的烷氧基，其被一个或多个卤原子取代。

术语“酰基”是指1至10个碳原子的直链、支链、或环状构型或其组合的基团R-C(O)-，其通过羰基官能团连接到母体结构。这样的基团可以是饱和的或不饱和的、和脂族或芳族的。

术语“氰基”是指基团–CN。

术语“硝基”是指基团–NO₂。

术语“羟基”是指基团–OH。

本领域技术人员将认识到，上面列出或举例说明的物种不是穷举的，且也可选择在这些术语定义范围内的其他物种。

术语“取代的”表示所指定的基团或部分携带一个或多个取代基。术语“未取代的”表示所指定的基团不携带取代基。术语“任选取代基的”表示所指定的基团是未取代的或被一个或多个取代基取代。当术语“取代的”用于描述结构***时，所述取代是指发生在***上化合价允许的任何位置。

本文所描述的任何通式旨在代表该结构式的化合物以及一些变体或形式。例如，本文所给出的通式旨在包括外消旋形式、或一种或多种对映体、非对映异构体、或几何异构体、或它们的混合物。此外，本文所给出的任何通式也旨在提及这种化合物的水合物、溶剂化物、或多晶型物、或它们的混合物。

本文所给出的任何通式也旨在代表化合物的未标记形式以及同位素标记的形式。同位素标记的化合物具有本文所给出的通式所描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选原子质量或质量数的原子所取代。可并入实施方案化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯、和碘的同位素，分别例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl、和¹²⁵I。这样的同位素标记的化合物有用于代谢研究(优选使用¹⁴C)、反应动力学研究(例如使用²H或³H)、检测或成像技术[例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)]，包括药物或底物组织分布试验或在患者放射性治疗中。特别地，¹⁸F或¹¹C标记的化合物可特别优选用于PET或SPECT研究。此外，用重同位素如氘(即²H)取代可提供一些治疗优势，原因为其更大的代谢稳定性，例如增加体内的半衰期或减少所需剂量。一般通过执行下面描述的方案或实施例和制备中公开的操作程序，通过用容易获得的同位素标记试剂代替非同位素标记试剂，可以制备实施方案的同位素标记化合物及其前体药物。

当本文用于一类取代基时，携带j > i的“C_i-j”命名意指独立地实现每个从i到j包括i和j数量的碳成员的实施方案。通过举例的方式，术语C_1-3独立地是指具有一个碳成员(C₁)的实施方案、具有两个碳成员(C₂)的实施方案、和具有三个碳碳成员(C₃)的实施方案。

本文涉及的任何二取代是指在允许一种以上的这种可能性时包括多种连接的可能性。例如，提及二取代A-B-，其中A ≠ B时, 本文是指这样的二取代：A连接至第一取代的成员和B连接至第二取代的成员，它也是指这样的二取代：A连接至第二取代的成员和B连接至第一取代的成员。

本发明提供了由通式(I)-(VIII)表示的化合物的药学上可接受的盐，优选上面描述的那些和本文列举的具体化合物的药学上可接受的盐，以及包括这样盐的药物组合物，和使用这样盐的方法。

“药学上可接受的盐”旨在表示本文代表化合物的游离酸或碱的盐是无毒的、生物上可容忍的、或生物上适合给受试者施用的别的盐。一般参见，S.M. Berge等人，“Pharmaceutical Salts,” J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19。优选的药学上可接受的盐是药理学上有效的并适于接触受试者的组织而没有不适当的毒性、刺激、或变应性应答的那些盐。本文所描述的化合物可具有足够的酸性基团、足够的碱性基团、这两种类型的官能团、或一种以上的每种类型，并因此与许多无机碱或有机碱、无机酸和有机酸起反应，以形成药学上可接受的盐。

药学上可接受的盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐(propiolates)、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-2,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐(methylbenzoates)、二硝基苯甲酸盐(dinitrobenzoates)、羟基苯甲酸盐(hydroxybenzoates)、甲氧基苯甲酸盐(methoxybenzoates)、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、甲基磺酸盐(methylsulfonates)、丙基磺酸盐(propylsulfonates)、苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐(xylenesulfonates)、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、苯基乙酸盐(phenylacetates)、苯基丙酸盐(phenylpropionates)、苯基丁酸盐(phenylbutyrates)、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、和扁桃酸盐。

关于含有碱性氮的通式(I)-(VIII)的化合物，药学上可接受的盐可以通过本领域可用的任何合适的方法制得，例如，用无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、硼酸、和磷酸等，或用有机酸如乙酸、苯基乙酸、丙酸、硬脂酸、乳酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、羟乙磺酸、琥珀酸、戊酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、油酸、棕榈酸、月桂酸、吡喃糖酸(pyranosidyl acid)如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸如扁桃酸、柠檬酸、或酒石酸、氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸、芳香族酸如苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、萘甲酸、或肉桂酸、磺酸如月桂基磺酸(laurylsulfonic acid)、对甲苯磺酸、甲磺酸、或乙磺酸、或如本文作为实例给出的酸的任何相容的混合物、和根据本技术领域普通技术水平视为等同物或可接受的替代品的任何其他酸及其混合物，处理游离碱。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是盐酸盐、马来酸盐、氢溴酸盐、羟基丁二酸盐、富马酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、或甲磺酸盐。

本发明提供通式(I)-(VIII)化合物的药学上可接受的前体药物，以及使用这样的药学上可接受的前体药物的治疗方法。术语“前体药物”表示指定化合物的前体，其给受试者施用后在体内经由化学或生理过程如溶剂分解或酶裂解，或在生理条件下(例如前体药物置于生理pH被转化为通式(I)-(VIII)的化合物)，产生该化合物。“药学上可接受的前体药物”是无毒的、生物上可容忍的、和别的生物上适合给受试者施用的前体药物。选择和制备适当前体药物衍生物的说明性操作程序例如描述于“Design of Prodrugs”, ed. H.Bundgaard, Elsevier, 1985。

本发明提供通式(I)-(VIII)化合物的药学上的活性代谢物，以及这样的代谢物在实施方案方法中的用途。“药学上的活性代谢物”是指通式(I)-(VIII)的化合物或其盐在体内代谢的药理学活性产物。化合物的前体药物和活性代谢物可使用本领域已知的或可用的常规技术确定。例如参见，Bertolini等人, J. Med. Chem. 1997, 40, 2011-2016；Shan等人, J. Pharm. Sci. 1997, 86 (7), 765-767；Bagshawe, Drug Dev. Res. 1995, 34,220-230；Bodor, Adv. Drug Res. 1984, 13, 255-331；Bundgaard, Design of Prodrugs(Elsevier Press, 1985)；和 Larsen, Design and Application of Prodrugs, DrugDesign and Development (Krogsgaard-Larsen等人, eds., Harwood AcademicPublishers, 1991)。

代表性实施方案

通式(VIII)

本发明提供通式(VIII)的化合物。在一些实施方案中，X¹是O或NH。在其它实施方案中，X¹是CH₂或CF₂。在其它实施方案中，X¹是O。

在通式(VIII)的一些实施方案中，-NR¹⁸R¹⁹是。在其它实施方案中，-NR¹⁸R¹⁹是

。在一些实施方案中，R¹⁵是甲基、羟基乙基、甲氧基乙基、或氟乙基。在其它实施方案中，R¹⁵是氟乙基。在一些实施方案中，m为1。在其它实施方案中，m为2。

在一些实施方案中，R⁹和R¹⁹一起形成任选取代的5-或6-元的杂芳基环。在一些实施方案中，R¹⁹和R⁹一起形成5-或6-元的环，其任选被C_1-6烷基取代，所述C_1-6烷基是未取代的或被氨基取代。在一些实施方案中，杂芳基环被二甲基氨基甲基或哌啶基甲基取代。在其它实施方案中，R⁹和R¹⁹一起形成吡咯或吡啶。在一些实施方案中，R¹⁸是二甲基氨基乙基。

在一些实施方案中，R⁶是甲氧基。在其它实施方案中，R⁷是甲氧基。在一些情况下，R⁷是氢或甲氧基。

在通式(VIII)的一些实施方案中，其中各变量的定义如同下述通式(I)-(VII)或其实施方案的任何一种。特别地，通式(VIII)的一些实施方案如同下通式(I)各变量所定义的，且所述定义在此引入作为参考。

通式(I)

本发明提供通式(Ia)和(Ib)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和－NR²²R²³；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

a是1或2；

环A是芳香环；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

通式(I)意指通式(Ia)和通式(Ib)。

在通式(I)中，R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R¹是氢。在一些情况下，R¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹是甲基或乙基。在一些情况下，R²是氢。在一些情况下，R²是C_1-6烷基。在一些情况下，R²是甲基或乙基。在一些情况下，R¹和R²各自为氢。

在通式(I)中，n是零至4的数字。在一些情况下，n是零。在一些情况下，n是1。在一些情况下，n是2。在一些情况下，n是3。在一些情况下，n是4。

在通式(I)中，R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基。在一些情况下，R³是卤素。在一些情况下，R³是羟基。在一些情况下，R³是C_1-6烷基。在一些情况下，R³是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R³是氰基。在一些情况下，R³是硝基。

在通式(I)中，R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和-NR²²R²³；其中所述的烷基或环烷基是未取代的或被羟基或氨基取代；和其中R²²和R²³各自独立地选自氢和C_1-6烷基或R²²和R²¹可以结合以形成3至10元的环。在一些情况下，R⁴是氢。在一些情况下，R⁴是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是C_3-7环烷基。在一些情况下，R⁴是–NR²²R²³。

在一些情况下，R⁴是未取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是被羟基取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是被羟基取代的C_1-3烷基。在一些情况下，R⁴是被氨基取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是被–NH₂取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是被–N(CH₃)₂取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是被–NH₂取代的C_1-3烷基。在一些情况下，R⁴是被–N(CH₃)₂取代的C_1-3烷基。

在一些情况下，R⁴是未取代的C_3-7环烷基。在一些情况下，R⁴是未取代的C₃环烷基。在一些情况下，R⁴是未取代的C₄环烷基。在一些情况下，R⁴是未取代的C_5-6环烷基。在一些情况下，R⁴是未取代的C₇环烷基。

在一些情况下，R⁴是–NR²²R²³, 其中R²²和R²³各自独立地选自氢和C_1-6烷基或R²²和R²³可以结合以形成3至10元的环。在一些情况下，R²²和R²³是氢。在一些情况下，R²²和R²³是C_1-6烷基。在一些情况下，R²²和R²³是C_1-3烷基。在一些情况下，R²²和R²³是甲基。

在一些情况下，R²²和R²³可以结合以形成3至10元的环, 致使R⁴是

，其中w是1到8的数字。在一些情况下，R²²和R²³可以结合以形成3元环。在一些情况下，R²²和R²³可以结合以形成4元环。在一些情况下，R²²和R²³可以结合以形成5元环。在一些情况下，R²²和R²³可以结合以形成6元环。在一些情况下，R²²和R²³可以结合以形成7元环。

在通式(I)中，R⁵选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是氢。在一些情况下，R⁵是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是甲基。在一些情况下，R⁵是乙基。在一些情况下，R⁵是C_1-3烷基。在一些情况下，R⁵是C_4-6烷基。

在通式(I)中，R⁶选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁶是氢。在一些情况下，R⁶是卤素。在一些情况下，R⁶是氟。在一些情况下，R⁶是氯。在一些情况下，R⁶是溴。在一些情况下，R⁶是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁶是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁶是羟基。在一些情况下，R⁶是氰基。在一些情况下，R⁶是硝基。

在通式(I)中，R⁷选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁷是氢。在一些情况下，R⁷是卤素。在一些情况下，R⁷是氟。在一些情况下，R⁷是氯。在一些情况下，R⁷是溴。在一些情况下，R⁷是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁷是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁷是羟基。在一些情况下，R⁷是氰基。在一些情况下，R⁷是硝基。

在通式(I)中，R⁸选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁸是氢。在一些情况下，R⁸是卤素。在一些情况下，R⁸是氟。在一些情况下，R⁸是氯。在一些情况下，R⁸是溴。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁸是羟基。在一些情况下，R⁸是氰基。在一些情况下，R⁸是硝基。

在通式(I)中，Q是CR⁹或N。在一些情况下，Q是CR⁹。在一些情况下，Q是N。

在通式(I)中，R⁹选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁹是氢。在一些情况下，R⁹是卤素。在一些情况下，R⁹是氟。在一些情况下，R⁹是氯。在一些情况下，R⁹是溴。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁹是羟基。在一些情况下，R⁹是氰基。在一些情况下，R⁹是硝基。在一些情况下，R⁹是氢或氟。

在通式(I)中，R¹⁰选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是氢。在一些情况下，R¹⁰是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是甲基。在一些情况下，R¹⁰是乙基。在一些情况下，R¹⁰是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹⁰是C_4-6烷基。

在通式(I)中，a是1或2和环A是芳香环。在一些情况下，a是1，如下所示：

。在一些情况下，a是2，如下所示：

。

在通式(I)中，R²⁰和R²¹独立地选自氢和C_1-6烷基；其中烷基是未取代的或被氨基、羟基、或卤素取代；其中R²¹可能不存在以满足化合价。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为氢。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为未取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为被氨基取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为被–NR²⁴R²⁵取代的C_1-6烷基, 其中R²⁴和R²⁵独立地选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为被–NR²⁴R²⁵取代的C_1-6烷基, 其中R²⁴和R²⁵独立地选自氢和C_1-3烷基。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为被–NR²⁴R²⁵取代的C_1-6烷基，其中R²⁴和R²⁵独立地选自氢和甲基。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为被–NR²⁴R²⁵取代的C_1-3烷基, 其中R²⁴和R²⁵独立地选自氢和甲基。在一些情况下，R²⁰和R²¹独立地为被羟基取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R²⁰和R²¹是被卤素取代的C_1-6烷基。

在通式(I)中，R¹¹选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是氢。在一些情况下，R¹¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是甲基。在一些情况下，R¹¹是乙基。在一些情况下，R¹¹是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹¹是C_4-6烷基。

在通式(I)中，R¹²选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是氢。在一些情况下，R¹²是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是甲基。在一些情况下，R¹²是乙基。在一些情况下，R¹²是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹²是C_4-6烷基。

在通式(I)中，R¹³选自氢、C_1-6烷基、C_1-6酰基、SO₂-C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和C_6-20芳基，其中各烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代。在一些情况下，R¹³是氢。在一些情况下，R¹³是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是C_1-6酰基。在一些情况下，R¹³是SO₂-C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是C_3-7环烷基。在一些情况下，R¹³是C_6-20芳基。在一些情况下，R¹³是被羟基或卤素取代的C_1-6烷基。

在一些情况下，R¹³是未取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是被羟基取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是–(CH₂)_mOH, 其中m是1到3的数字。在一些情况下，R¹³是–CH₂OH。在一些情况下，R¹³是被C_1-6烷氧基取代的C_1-6烷基。

在一些情况下，R¹³是被卤素取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是–(CH₂)_mX, 其中m是1到3的数字和X是卤素。在一些情况下，R¹³是被氟取代的C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是–(CH₂)_mF，其中m是1到3的数字。在一些情况下，R¹³是–(CH₂)₂F。

在一些情况下，R¹³是C_1-6酰基。在一些情况下，R¹³是C₁酰基。在一些情况下，R¹³是C₂酰基。在一些情况下，R¹³是C₃酰基。在一些情况下，R¹³是C_4-6酰基。

在一些情况下，R¹³是SO₂-C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是SO₂-C₁烷基。在一些情况下，R¹³是SO₂-C₂烷基。在一些情况下，R¹³是SO₂-C₃烷基。在一些情况下，R¹³是SO₂-C_4-6烷基。

在一些情况下，R¹³是C_3-7环烷基。在一些情况下，R¹³是未取代的C₃环烷基。在一些情况下，R¹³是未取代的C₄环烷基。在一些情况下，R¹³是未取代的C_5-6环烷基。在一些情况下，R¹³是未取代的C₇环烷基。

在一些情况下，R¹³是未取代的C_6-20芳基。在一些情况下，R¹³是被羟基取代的C_6-20芳基。在一些情况下，R¹³是被C_1-6烷氧基取代的C_6-20芳基。在一些情况下，R¹³是被卤素取代的C_6-20芳基。

在一些情况下，R⁶、R⁷、R⁸、和R⁹是氢。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢和R⁹是卤素。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢和R⁹是氟。

在一些情况下，R⁶、R⁷、R⁸、和R⁹是氢和R¹⁰是甲基。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹⁰是甲基。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹⁰是甲基。

在一些情况下，R⁶、R⁷、R⁸、和R⁹是氢和R¹³是氢。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹³是氢。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹³是氢。

在一些情况下，R⁶、R⁷、R⁸、和R⁹是氢和R¹³是–CH₂OH。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹³是–CH₂OH。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹³是–CH₂OH。

在一些情况下，R⁶、R⁷、R⁸、和R⁹是氢和R¹³是–(CH₂)_mF, 其中m是1到3的数字。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹³是–(CH₂)_mF, 其中m是1到3的数字。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹³是–(CH₂)_mF, 其中m是1到3的数字。

通式(II)

本发明提供通式(II)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

其中R²²和R²³各自独立地选自氢和C_1-6烷基或R²²和R²¹可以结合以形成3至10元的环；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

在通式(II)中，R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R¹是氢。在一些情况下，R¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹是甲基或乙基。在一些情况下，R²是氢。在一些情况下，R²是C_1-6烷基。在一些情况下，R²是甲基或乙基。在一些情况下，R¹和R²是氢。

在通式(II)中，n是零至4的数字。在一些情况下，n是零。在一些情况下，n是1。在一些情况下，n是2。在一些情况下，n是3。在一些情况下，n是4。

在通式(II)中，R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基。在一些情况下，R³是卤素。在一些情况下，R³是羟基。在一些情况下，R³是C_1-6烷基。在一些情况下，R³是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R³是氰基。在一些情况下，R³是硝基。

在通式(II)中，R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和-NR²²R²³；其中所述的烷基或环烷基是未取代的或被羟基或氨基取代；和其中R²²和R²³各自独立地选自氢和C_1-6烷基或R²²和R²¹可以结合以形成3至10元的环。在一些情况下，R⁴是氢。在一些情况下，R⁴是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是C_3-7环烷基。在一些情况下，R⁴是–NR²²R²³。

在通式(II)中，R⁵选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是氢。在一些情况下，R⁵是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是甲基。在一些情况下，R⁵是乙基。在一些情况下，R⁵是C_1-3烷基。在一些情况下，R⁵是C_4-6烷基。

在通式(II)中，R⁶选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁶是氢。在一些情况下，R⁶是卤素。在一些情况下，R⁶是氟。在一些情况下，R⁶是氯。在一些情况下，R⁶是溴。在一些情况下，R⁶是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁶是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁶是羟基。在一些情况下，R⁶是氰基。在一些情况下，R⁶是硝基。

在通式(II)中，R⁷选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁷是氢。在一些情况下，R⁷是卤素。在一些情况下，R⁷是氟。在一些情况下，R⁷是氯。在一些情况下，R⁷是溴。在一些情况下，R⁷是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁷是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁷是羟基。在一些情况下，R⁷是氰基。在一些情况下，R⁷是硝基。

在通式(II)中，R⁸选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁸是氢。在一些情况下，R⁸是卤素。在一些情况下，R⁸是氟。在一些情况下，R⁸是氯。在一些情况下，R⁸是溴。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁸是羟基。在一些情况下，R⁸是氰基。在一些情况下，R⁸是硝基。

在通式(II)中，Q是CR⁹或N。在一些情况下，Q是CR⁹。在一些情况下，Q是N。

在通式(II)中，R⁹选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁹是氢。在一些情况下，R⁹是卤素。在一些情况下，R⁹是氟。在一些情况下，R⁹是氯。在一些情况下，R⁹是溴。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁹是羟基。在一些情况下，R⁹是氰基。在一些情况下，R⁹是硝基。

在通式(II)中，R¹⁰选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是氢。在一些情况下，R¹⁰是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是甲基。在一些情况下，R¹⁰是乙基。在一些情况下，R¹⁰是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹⁰是C_4-6烷基。

在通式(II)中，R¹¹选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是氢。在一些情况下，R¹¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是甲基。在一些情况下，R¹¹是乙基。在一些情况下，R¹¹是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹¹是C_4-6烷基。

在通式(II)中，R¹²选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是氢。在一些情况下，R¹²是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是甲基。在一些情况下，R¹²是乙基。在一些情况下，R¹²是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹²是C_4-6烷基。

在通式(II)中，R¹³选自氢、C_1-6烷基、和C_6-20芳基，其中各个烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代。在一些情况下，R¹³是氢。在一些情况下，R¹³是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是C_6-20芳基。

通式(III)

本发明提供通式(III)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

在通式(III)中，R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R¹是氢。在一些情况下，R¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹是甲基或乙基。在一些情况下，R²是氢。在一些情况下，R²是C_1-6烷基。在一些情况下，R²是甲基或乙基。在一些情况下，R¹和R²是氢。

在通式(III)中，n是零至4的数字。在一些情况下，n是零。在一些情况下，n是1。在一些情况下，n是2。在一些情况下，n是3。在一些情况下，n是4。

在通式(III)中，R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基。在一些情况下，R³是卤素。在一些情况下，R³是羟基。在一些情况下，R³是C_1-6烷基。在一些情况下，R³是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R³是氰基。在一些情况下，R³是硝基。

在通式(III)中，R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和-NR²²R²³；其中所述的烷基或环烷基是未取代的或被羟基或氨基取代；和其中R²²和R²³各自独立地选自氢和C_1-6烷基或R²²和R²¹可以结合以形成3至10元的环。在一些情况下，R⁴是氢。在一些情况下，R⁴是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是C_3-7环烷基。在一些情况下，R⁴是–NR²²R²³。

在通式(III)中，R⁵选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是氢。在一些情况下，R⁵是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是甲基。在一些情况下，R⁵是乙基。在一些情况下，R⁵是C_1-3烷基。在一些情况下，R⁵是C_4-6烷基。

在通式(III)中，R⁶选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁶是氢。在一些情况下，R⁶是卤素。在一些情况下，R⁶是氟。在一些情况下，R⁶是氯。在一些情况下，R⁶是溴。在一些情况下，R⁶是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁶是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁶是羟基。在一些情况下，R⁶是氰基。在一些情况下，R⁶是硝基。

在通式(III)中，R⁷选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁷是氢。在一些情况下，R⁷是卤素。在一些情况下，R⁷是氟。在一些情况下，R⁷是氯。在一些情况下，R⁷是溴。在一些情况下，R⁷是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁷是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁷是羟基。在一些情况下，R⁷是氰基。在一些情况下，R⁷是硝基。

在通式(III)中，R⁸选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁸是氢。在一些情况下，R⁸是卤素。在一些情况下，R⁸是氟。在一些情况下，R⁸是氯。在一些情况下，R⁸是溴。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁸是羟基。在一些情况下，R⁸是氰基。在一些情况下，R⁸是硝基。

在通式(III)中，R⁹选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁹是氢。在一些情况下，R⁹是卤素。在一些情况下，R⁹是氟。在一些情况下，R⁹是氯。在一些情况下，R⁹是溴。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁹是羟基。在一些情况下，R⁹是氰基。在一些情况下，R⁹是硝基。

在通式(III)中，R¹⁰选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是氢。在一些情况下，R¹⁰是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是甲基。在一些情况下，R¹⁰是乙基。在一些情况下，R¹⁰是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹⁰是C_4-6烷基。

在通式(III)中，R¹¹选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是氢。在一些情况下，R¹¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是甲基。在一些情况下，R¹¹是乙基。在一些情况下，R¹¹是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹¹是C_4-6烷基。

在通式(III)中，R¹²选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是氢。在一些情况下，R¹²是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是甲基。在一些情况下，R¹²是乙基。在一些情况下，R¹²是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹²是C_4-6烷基。

在通式(III)中，R¹³选自氢、C_1-6烷基、和C_6-20芳基，其中各个烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代。在一些情况下，R¹³是氢。在一些情况下，R¹³是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是C_6-20芳基。

通式(IV)

本发明提供通式(IV)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基；

n是零至4的数字；

R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和–NR²²R²³；

R⁵选自氢和C_1-6烷基；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

在通式(IV)中，R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R¹是氢。在一些情况下，R¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹是甲基或乙基。在一些情况下，R²是氢。在一些情况下，R²是C_1-6烷基。在一些情况下，R²是甲基或乙基。在一些情况下，R¹和R²是氢。

在通式(IV)中，n是零至4的数字。在一些情况下，n是零。在一些情况下，n是1。在一些情况下，n是2。在一些情况下，n是3。在一些情况下，n是4。

在通式(IV)中，R³选自卤素、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氰基、和硝基。在一些情况下，R³是卤素。在一些情况下，R³是羟基。在一些情况下，R³是C_1-6烷基。在一些情况下，R³是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R³是氰基。在一些情况下，R³是硝基。

在通式(IV)中，R⁴选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、和-NR²²R²³；其中所述的烷基或环烷基是未取代的或被羟基或氨基取代；和其中R²²和R²³各自独立地选自氢和C_1-6烷基或R²²和R²¹可以结合以形成3至10元的环。在一些情况下，R⁴是氢。在一些情况下，R⁴是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁴是C_3-7环烷基。在一些情况下，R⁴是–NR²²R²³。

在通式(IV)中，R⁵选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是氢。在一些情况下，R⁵是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁵是甲基。在一些情况下，R⁵是乙基。在一些情况下，R⁵是C_1-3烷基。在一些情况下，R⁵是C_4-6烷基。

在通式(IV)中，R⁶选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁶是氢。在一些情况下，R⁶是卤素。在一些情况下，R⁶是氟。在一些情况下，R⁶是氯。在一些情况下，R⁶是溴。在一些情况下，R⁶是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁶是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁶是羟基。在一些情况下，R⁶是氰基。在一些情况下，R⁶是硝基。

在通式(IV)中，R⁷选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁷是氢。在一些情况下，R⁷是卤素。在一些情况下，R⁷是氟。在一些情况下，R⁷是氯。在一些情况下，R⁷是溴。在一些情况下，R⁷是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁷是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁷是羟基。在一些情况下，R⁷是氰基。在一些情况下，R⁷是硝基。

在通式(IV)中，R⁸选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁸是氢。在一些情况下，R⁸是卤素。在一些情况下，R⁸是氟。在一些情况下，R⁸是氯。在一些情况下，R⁸是溴。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁸是羟基。在一些情况下，R⁸是氰基。在一些情况下，R⁸是硝基。

在通式(IV)中，R¹⁰选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是氢。在一些情况下，R¹⁰是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是甲基。在一些情况下，R¹⁰是乙基。在一些情况下，R¹⁰是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹⁰是C_4-6烷基。

在通式(IV)中，R¹¹选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是氢。在一些情况下，R¹¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是甲基。在一些情况下，R¹¹是乙基。在一些情况下，R¹¹是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹¹是C_4-6烷基。

在通式(IV)中，R¹²选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是氢。在一些情况下，R¹²是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是甲基。在一些情况下，R¹²是乙基。在一些情况下，R¹²是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹²是C_4-6烷基。

在通式(IV)中，R¹³选自氢、C_1-6烷基、和C_6-20芳基，其中各个烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代。在一些情况下，R¹³是氢。在一些情况下，R¹³是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是C_6-20芳基。

在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢和R¹⁰是甲基。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢和R¹³是氢。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢和R¹³是–CH₂OH。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢和R¹³是氢。在一些情况下，R⁶、R⁷、和R⁸是氢和R¹³是–(CH₂)_mF, 其中m是1到3的数字。

通式(V)

本发明提供通式(V)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；

R¹¹选自氢和C_1-6烷基；

R¹²选自氢和C_1-6烷基；

或其药学上可接受的盐。

在通式(V)中，R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R¹是氢。在一些情况下，R¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹是甲基或乙基。在一些情况下，R²是氢。在一些情况下，R²是C_1-6烷基。在一些情况下，R²是甲基或乙基。在一些情况下，R¹和R²是氢。

在通式(V)中，R⁶选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁶是氢。在一些情况下，R⁶是卤素。在一些情况下，R⁶是氟。在一些情况下，R⁶是氯。在一些情况下，R⁶是溴。在一些情况下，R⁶是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁶是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁶是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁶是羟基。在一些情况下，R⁶是氰基。在一些情况下，R⁶是硝基。

在通式(V)中，R⁷选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_2-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁷是氢。在一些情况下，R⁷是卤素。在一些情况下，R⁷是氟。在一些情况下，R⁷是氯。在一些情况下，R⁷是溴。在一些情况下，R⁷是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁷是C_2-6烷氧基。在一些情况下，R⁷是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁷是羟基。在一些情况下，R⁷是氰基。在一些情况下，R⁷是硝基。

在通式(V)中，R⁸选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁸是氢。在一些情况下，R⁸是卤素。在一些情况下，R⁸是氟。在一些情况下，R⁸是氯。在一些情况下，R⁸是溴。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁸是羟基。在一些情况下，R⁸是氰基。在一些情况下，R⁸是硝基。

在通式(V)中，Q是CR⁹或N。在一些情况下，Q是CR⁹。在一些情况下，Q是N。

在通式(V)中，R⁹选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁹是氢。在一些情况下，R⁹是卤素。在一些情况下，R⁹是氟。在一些情况下，R⁹是氯。在一些情况下，R⁹是溴。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁹是羟基。在一些情况下，R⁹是氰基。在一些情况下，R⁹是硝基。

在通式(V)中，R¹⁰选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是氢。在一些情况下，R¹⁰是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是甲基。在一些情况下，R¹⁰是乙基。在一些情况下，R¹⁰是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹⁰是C_4-6烷基。

在通式(V)中，R¹¹选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是氢。在一些情况下，R¹¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹¹是甲基。在一些情况下，R¹¹是乙基。在一些情况下，R¹¹是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹¹是C_4-6烷基。

在通式(V)中，R¹²选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是氢。在一些情况下，R¹²是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹²是甲基。在一些情况下，R¹²是乙基。在一些情况下，R¹²是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹²是C_4-6烷基。

在通式(V)中，R¹³选自氢、C_1-6烷基、和C_6-20芳基，其中各个烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代。在一些情况下，R¹³是氢。在一些情况下，R¹³是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是C_6-20芳基。

通式(VI)

本发明提供通式(VI)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

Q是CR⁹或N；

R¹⁰选自氢和C_1-6烷基；和

或其药学上可接受的盐。

在通式(VI)中，R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R¹是氢。在一些情况下，R¹是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹是甲基或乙基。在一些情况下，R²是氢。在一些情况下，R²是C_1-6烷基。在一些情况下，R²是甲基或乙基。在一些情况下，R¹和R²是氢。

在通式(VI)中， R⁸选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁸是氢。在一些情况下，R⁸是卤素。在一些情况下，R⁸是氟。在一些情况下，R⁸是氯。在一些情况下，R⁸是溴。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁸是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁸是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁸是羟基。在一些情况下，R⁸是氰基。在一些情况下，R⁸是硝基。

在通式(VI)中， Q是CR⁹或N。在一些情况下，Q是CR⁹。在一些情况下，Q是N。

在通式(VI)中， R⁹选自氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基。在一些情况下，R⁹是氢。在一些情况下，R⁹是卤素。在一些情况下，R⁹是氟。在一些情况下，R⁹是氯。在一些情况下，R⁹是溴。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷基。在一些情况下，R⁹是C_1-6烷氧基。在一些情况下，R⁹是C_1-6卤代烷氧基。在一些情况下，R⁹是羟基。在一些情况下，R⁹是氰基。在一些情况下，R⁹是硝基。

在通式(VI)中， R¹⁰选自氢和C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是氢。在一些情况下，R¹⁰是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹⁰是甲基。在一些情况下，R¹⁰是乙基。在一些情况下，R¹⁰是C_1-3烷基。在一些情况下，R¹⁰是C_4-6烷基。

在通式(VI)中，R¹³选自氢、C_1-6烷基、和C_6-20芳基，其中各个烷基或芳基是未取代的或被羟基、C_1-6烷氧基、或卤素取代。在一些情况下，R¹³是氢。在一些情况下，R¹³是C_1-6烷基。在一些情况下，R¹³是C_6-20芳基。

在一些情况下，R⁸和R⁹是氢。在一些情况下，R⁸是氢，和R⁹是卤素。在一些情况下，R⁸是氢和R⁹是氟。

在一些情况下，R⁸和R⁹是氢和R¹⁰是甲基。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹⁰是甲基。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹⁰是甲基。

在一些情况下，R⁸和R⁹是氢和R¹³是氢。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹³是氢。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹³是氢。

在一些情况下，R⁸和R⁹是氢和R¹³是–CH₂OH。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹³是–CH₂OH。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹³是–CH₂OH。

在一些情况下，R⁸和R⁹是氢和R¹³是–(CH₂)_mF, 其中m是1到3的数字。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是卤素；和 R¹³是–(CH₂)_mF, 其中m是1到3的数字。在一些情况下，R⁸是氢；R⁹是氟；和 R¹³是–(CH₂)_mF, 其中m是1到3的数字。

通式(VII)

本发明提供通式(VII)的化合物：

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R⁸选自卤素、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷氧基、羟基、氰基、和硝基；

R¹⁰是C_1-6烷基；和

R¹³是氢或C_1-6烷基；

或其药学上可接受的盐。

在通式(VII)的一些实施方案中，R¹和R²各自为氢。在其它实施方案中，R⁸是卤素、甲基、甲氧基、或氰基。在仍旧其它实施方案中，R⁸是卤素。在仍旧其它实施方案中，R⁸是氟。在一些实施方案中，R¹⁰是甲基、乙基、或异丙基。在其它实施方案中，R¹⁰是甲基。在一些实施方案中，R¹³是氢、甲基、乙基、或异丙基。在其它实施方案中，R¹³是氢。

在通式(I)-(VI)化合物的一些实施方案中，R⁶和R⁷也可以是甲氧基，条件是当R¹⁰是甲基时R⁶或R⁷均不是甲氧基。在通式(I)-(VII)的其它实施方案中，

基团被

代替，其中m和R¹⁵如本文所定义。

式XX

在一些实施方案中，本发明的化合物是式XX的化合物：

其中：

R³⁰和R³¹各自独立地为H或C_1-4烷基；

R³²是H和R³³是

或R³²和R³³与它们连接的氮原子一起形成

；

其中R³⁶是H、C_1-4烷基、或C_1-4卤代烷基；和

R³⁷是H或C_1-4烷基；

Q是CH、CF、或N；

R³⁴是H或甲氧基；

R³⁵是H、-CH₂OH、或–CH₂CH₂F；

其中当Q是CH、–NR³²R³³是

、和R³⁷是甲基时，R³⁴不是甲氧基；或其药学上可接受的盐。

在通式(XX)的一些实施方案中，R³⁰和R³¹均为H。在一些实施方案中，R³²是H和R³³是

。在一些实施方案中，R³⁶是–CH₂CH₂F。在其它实施方案中，R³²和R³³与它们连接的氮原子一起形成

。在仍旧其它实施方案中，R³⁷是甲基。在其它实施方案中，Q是N和R³⁴是H。在仍旧其它实施方案中，Q是CH和R³⁴是甲氧基。在仍旧其它实施方案中，Q是CF和R³⁴是H。在其它实施方案中，R³⁵是H。

在一些实施方案中，本发明提供选自下列的化合物：

及其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明提供选自下列的化合物：

及其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中本发明提供化合物3, N-(3-((2-((3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧)苯基)丙烯酰胺，

及其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供化合物3, N-(3-((2-((3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧)苯基)丙烯酰胺的马来酸盐。在一些实施方案中，本发明提供化合物3, N-(3-((2-((3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧)苯基)丙烯酰胺的盐酸盐。

所公开的药物组合物可以用所公开化合物的药学上可接受的盐来配制。药学上可接受的盐是化合物游离碱形式的无毒盐，其具有所述游离碱预期的药理学活性。这些盐可以来自无机酸或有机酸。药学上可接受的盐的非限制性实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-2,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、甲基磺酸盐、丙基磺酸盐、苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、和扁桃酸盐。其它合适的药学上可接受的盐的列表参见Remington's Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack PublishingCompany, Easton, Pa., 1985。

药物组合物

为了治疗的目的，包含本文所述化合物的药物组合物还可以包括一种或多种药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂是无毒的和别的生物学上适合给受试者施用的物质。这样的赋形剂有利于本文所述化合物的给药，并与活性组分相容。药学上可接受的赋形剂的实例包括稳定剂、润滑剂、表面活性剂、稀释剂、抗氧化剂、粘合剂、着色剂、填充剂、乳化剂、或味道改性剂。在优选的实施方案中，根据实施方案的药物组合物是无菌的组合物。药物组合物可以使用已知的或本领域技术人员可用的配药技术来制备。

无菌组合物，包括符合管理这样组合物的国家和地方法规的组合物，落在本发明范围内。

本文所述的药物组合物和化合物可以根据本领域已知的制备各种剂型的常规方法，在合适的药用溶剂或载体中配制成溶液、乳液、悬浮液、或分散体，或与固体载体一起配制成丸剂、片剂、锭剂、栓剂、香囊剂、糖锭剂、颗粒剂、粉剂、重构用的粉剂、或胶囊剂。通过合适的递送途径如口服、肠胃外、直肠、鼻、局部、或眼途径或通过吸入，可施用实施方案的药物组合物。优选地，所述组合物配制成用于静脉注射或口服给药的组合物。

对于口服给药，实施方案的化合物可以以固体形式如片剂或胶囊剂，或以溶液、乳液或悬浮液提供。为了制备口用组合物，可以配制实施方案的化合物以产生例如每日约0.01到约50mg/kg、或每日约0.05至约20mg/kg、或每日约0.1％至约10kg的剂量。口服片剂可包括与相容的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分，所述赋形剂如稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。合适的惰性填充剂包括碳酸钠和钙、磷酸钠和钙、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、和山梨糖醇等。示例性的液体口服赋形剂包括乙醇、甘油、和水等。淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟基乙酸淀粉钠、微晶纤维素、和海藻酸是示例性的崩解剂。粘合剂可以包括淀粉和明胶。润滑剂，如果存在，可以是硬脂酸镁、硬脂酸、或滑石。如果需要，片剂可用材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯包衣以延缓在胃肠道中的吸收，或可用肠溶衣包衣。

用于口服给药的胶囊包括硬和软明胶胶囊。为了制备硬明胶胶囊，活性成分可与固体、半固体或液体稀释剂混合。软明胶胶囊可通过将活性成分与水、油如花生油或橄榄油、液体石蜡、短链脂肪酸的单和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400、或丙二醇混合来制备。

用于口服给药的液体可以是悬浮液、溶液、乳剂、或糖浆的形式，或可以是冻干的或以使用前与水或其它适宜溶媒重新配制的干燥产品存在。这样的液体组合物可任选地包含：药学上可接受的赋形剂，如悬浮剂(例如山梨糖醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、和硬脂酸铝凝胶等)；非水载体，例如油(例如杏仁油，分馏椰子油)、丙二醇、乙醇、或水；防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)；润湿剂，如卵磷脂；以及，如果需要，矫味剂或着色剂。

组合物可以配制成用于直肠给药的栓剂。至于肠胃外使用，包括静脉内、肌内、腹膜内、鼻内或皮下途径，可在缓冲至适当的pH值和等渗的无菌水溶液或悬浮液中或在肠胃外可接受的油中，提供实施方案的化合物。合适的含水溶媒包括林格氏溶液和等渗氯化钠。这样的形式可呈单位剂量形式如安瓿或一次性注射装置、多剂量形式如可提取适当剂量的小瓶、或呈可用于制备注射剂型的固体形式或预浓缩物。说明性输注剂量范围为经几分钟到数天时期的与药用载体混合的约1至1000μg/kg/分钟的药物。

对于鼻、吸入、或口服给药，可使用例如还含有合适载体的喷雾制剂施用药物组合物。

对于局部应用，实施方案的化合物优选配制成乳膏或软膏或适于局部给药的类似媒介。对于局部给药，实施方案的化合物可以与药用载体混合，药物对媒介的浓度为约0.1％至约10％。施用实施方案化合物的另一种方式可以利用贴剂制剂，以产生经皮递送。

在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含通式(I)-(VIII)的化合物和甲基纤维素。在一些实施方案中，甲基纤维素以约0.1、0.2、0.3、0.4、或0.5至约1％悬浮。在一些实施方案中，甲基纤维素以约0.1至约 0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、或1％悬浮。在一些实施方案中，甲基纤维素以约0.1至约1％悬浮。在一些实施方案中，甲基纤维素以约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.8、或1％悬浮。在一些实施方案中，甲基纤维素以约0.5%悬浮。

本文所用的术语“治疗”或“治疗”包括“预防”和“根治”治疗。“预防”治疗意指推迟疾病的发展、疾病的症状、或医疗状况，抑制可能出现的症状，或降低疾病或症状发展或复发的风险。“根治”治疗包括降低现有疾病、症状、或状况的严重程度或抑制现有疾病、症状、或状况的恶化。因此，治疗包括改善或防止现有疾病症状的恶化，防止其他症状出现，改善或防止症状的潜在全身性原因，抑制病症或疾病，例如阻止病症或疾病的发展，缓解病症或疾病，引起病症或疾病的消退，缓解病症或疾病所引起的状况，或停止疾病或病症的症状。

本领域普通技术人员可以在本说明书教导内修改制剂，以提供特定给药途径的众多制剂。特别地，本发明化合物可被修改，以使它们更易溶于水或其他媒介。为了患者最大的有益效果而控制本发明化合物的药代动力学，对特定化合物的给药途径和给药方案的修改也很好地落在本领域普通技术人员范围内。

术语“受试者”是指需要这种治疗的哺乳动物患者，诸如人。

本发明化合物可以给需要治疗增殖性病症的受试者施用。增殖性病症的实例是癌症。在一些情况下，所述化合物有用于治疗肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、***、胃癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、肺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、***癌、乳腺癌、肝癌、头颈部癌、和胰腺癌。

本发明化合物也可以给需要治疗疾病或医疗状况的受试者施用，所述疾病或医疗状况是由选自EGFR、EGFR (T790M)、BLK、BMX/ETK、BTK、JAK1、JAK2、JAK3、TEC、TXK、FLT3、和FLT3 (D835Y)的蛋白激酶介导的。在一些情况下，所述化合物有用于治疗癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫有关的疾病。在其它实施方案中，这样的疾病是由至少一种选自BTK、JAK3、ITK、和BMX的激酶所介导的。在其它实施方案中，所述癌症、肿瘤、炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫介导的疾病是由异常活化的B淋巴细胞、T淋巴细胞、或两者所介导的。在其它实施方案中，所述炎症性疾病、自身免疫性疾病、或免疫介导的疾病是关节炎、类风湿性关节炎、脊椎关节病、痛风性关节炎、骨关节炎、幼年型关节炎、其它关节炎状况、狼疮、***性红斑狼疮(SLE)、皮肤有关的疾病、银屑病、湿疹、皮炎、特应性皮炎、疼痛、肺部病症、肺部炎症、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺结节病、慢性肺部炎症性疾病、慢性阻塞性肺疾病 (COPD)、心血管疾病、动脉粥样硬化、心肌梗死、充血性心脏衰竭、心脏再灌注损伤、炎性肠道疾病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、哮喘、干燥综合征、自身免疫甲状腺疾病、荨麻疹(风疹)、多发性硬化症、硬皮病、器官移植排斥、异种移植、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、糖尿病相关疾病、炎症、***性疾病、变应性鼻炎、变应性支气管炎、变应性鼻窦炎、白血病、淋巴瘤(lymphioma)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、骨髓瘤、急性淋巴性白血病 (ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、急性髓性白血病 (AML)、慢性髓性白血病 (CML)、毛细胞白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、***、胃癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、肺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、***癌、乳腺癌、肝癌、头颈部癌、或胰腺癌。在其它实施方案中，所述疾病是自身免疫性疾病或移植引起的炎症性病症，包括但不限于同种移植、移植物抗宿主病、或自身免疫性糖尿病。

在一方面中，实施方案的化合物和药物组合物可以给受试者施用，所述受试者需要治疗与基本上靶向突变EGFR而基本上不靶向野生型EGFR的EGFR抑制活性有关的状况。在一些实施方案中，突变的EGFR包括T790M突变。本发明提供通式(I)-(VIII)的化合物在制备用于治疗这样状况的药物中的用途，和这样的化合物及盐用于治疗这样状况的用途。在其它方面中，本化合物和药物组合物以给受试者施用，所述受试者需要治疗与基本上靶向突变FLT3而基本上不靶向野生型FLT3的FLT3抑制活性有关的状况。在一些实施方案中，突变的FLT3包括D835Y突变。本发明提供通式(I)-(VIII)的化合物在制备用于治疗这样状况的药物中的用途，和这样的化合物及盐用于治疗这样状况的用途。

在另一方面，本发明提供抑制细胞中突变EGFR的方法，其包括用有效量的通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其盐、和/或用所述实施方案的至少一种药物组合物接触细胞，其中所述接触是在体外、离体或体内。在一些实施方案中，突变的EGFR包括T790M突变。在另一方面，本发明提供抑制细胞中突变FLT3的方法，其包括用有效量的通式(I)-(VIII)的至少一种化合物或其盐、和/或用包含所述化合物或其盐的至少一种药物组合物接触细胞，其中所述接触是在体外、离体或体内。

在实施方案的抑制方法中，“有效量”表示足以抑制靶受体例如突变的EGFR而不是野生型EGFR，或突变的FLT3而不是野生型FLT3的量。在一些实施方案中，突变的EGFR包括T790M突变。在其它实施方案中，突变的FLT3包括D835Y突变。通过常规的分析方法，例如下面所描述的那些方法，可以进行抑制程度的测量。这种调节在多种设置包括在体外实验中是有用的。其他的设置包括离体和体内。

在根据实施方案的治疗方法中，“有效量”表示足以在需要这种治疗的受试者中通常产生所需治疗利益的量或剂量。通过常规的方法例如建模、剂量递增、或临床试验，考虑常规因素，例如给药或药物递送的方式或途径、药物的药代动力学、感染的严重度和过程、受试者的健康状态、状况和重量、和治医生的判断，可以确定实施方案化合物的有效量或剂量。示例性的剂量范围为每日每公斤受试者体重约1 µg到2 mg的活性剂，优选为约0.05至100 mg/kg/天，或约1至35 mg/kg/天，或约0.1至10 mg/kg/天。总剂量可以以单次或分剂量单位 (例如BID、TID、QID)给予。

一旦出现了患者疾病的改善，剂量可根据预防或维持治疗进行调整。例如，给药剂量或频率，或两者，可以作为症状的函数而减少至维持所期望的治疗或预防效果的水平。当然，如果症状已缓解到适当的水平，治疗可以停止。然而，患者可能需要长期的基于任何症状复发的间歇治疗。患者可能还需要长期的慢性治疗。

药物组合

实施方案的方法包括施用有效量的通式(I)-(VIII)或其实施方案的至少一种化合物；任选所述化合物可与一种或多种其它治疗剂组合施用，所述其它治疗剂特别是已知的有用于治疗困扰受试者的增生性病症或癌症的治疗剂。在一些实施方案中，一种或多种治疗剂选自抗癌剂(如细胞信号传导抑制剂、有丝***抑制剂、烷化剂、抗代谢药、嵌合(intercalating)抗癌剂、拓扑异构酶抑制剂、免疫治疗剂、或抗激素剂)、类固醇药物、甲氨蝶呤、来氟米特、抗TNFα剂、钙调神经磷酸酶(calcineurin)抑制剂、和抗组胺药物。

其它活性成分可以在与实施方案化合物分开的单独药物组合物中施用，或可以在单一药物组合物中包括其它活性成分和实施方案化合物。其它活性成分可以在实施方案化合物施用的同时、之前、或之后施用。

化学合成

实施方案方法中有用的示例性化学实体，现在将参考下面的一般制备和以下具体实施例的说明性合成方案进行描述。技工人员将认识到，为获得本文的各种化合物，可适当选择起始原料，致使通过反应方案，有或没有保护，进行最终所需的取代，以适当产生所需的产物。替代选择地，在最终所需取代的地方，有可能必须或希望采用合适的基团，所述基团可通过反应方案进行，并在适当时用所需取代基代替。此外，本领域技术人员将认识到，下面方案中所示的转换可以以兼容特定侧基功能的任何顺序进行。一般方案中所述的各反应优选在温度约0℃到所用有机溶剂的回流温度下运行。除非另有规定，变量如同上通式(I)中提及的一样定义。本领域普通技术人员也将认识到，在这些示例性方案中所述的方法也适用于制备通式(VIII)的化合物以及通式(II)-(VII)的化合物。

主题化合物的代表性合成示于方案1中。

方案1

在方案1中，变量如本文所定义。正如下面所讨论的，X^2a和X^2b包括离去基团。起始原料可从商业来源或通过已确立的合成操作程序获得。

参照方案1，通过亲核反应，化合物1-A与化合物1-B反应，形成化合物1-C。在化合物1-A中，羟基是亲核基团，可提供化合物1-C中的醚键。亲核基团可以在亲核取代中反应，其中亲核基团替换其它反应物上的离去基团。在备选的实施方案中，使用1-A的苯胺或苯硫酚类似物接近其中X¹是NH或S的化合物。在化合物1-B中，X^2a包括离去基团。离去基团的实例包括但不限于卤素、三氟甲磺酸酯(triflate)、氟磺酸酯(fluorosulfonate)、对甲苯磺酸酯(tosylate)或甲磺酸酯(mesylate)。

继续参考方案1，在布赫瓦尔德-哈特维希交叉偶联反应条件下，化合物1-C与化合物1-D反应，提供化合物1-E。在化合物1-D中，氨基是亲核基团，可提供化合物1-E中的氨基键。亲核基团可以在亲核芳香族取代中反应，其中亲核基团替换其它反应物上的离去基团。在化合物1-C中，X^2b包括离去基团。离去基团的实例包括但不限于卤素、三氟甲磺酸酯、氟磺酸酯、对甲苯磺酸酯或甲磺酸酯。

继续参考方案1，化合物1-E中的硝基被还原，得到化合物1-F中的氨基。硝基还原可以使用酸催化剂和金属或使用金属催化剂在氢气下进行。在酸催化剂的反应中，铁、锌、锂、钠、或锡(通常为氯化锡)可以用作金属，和无机酸如盐酸、硫酸、硝酸、或磷酸；有机羧酸如乙酸或三氟乙酸；胺酸盐如氯化铵，可以用作酸催化剂。另外，在氢气下使用金属催化剂的还原中，钯、镍、铂、钌、或铑可以用作金属催化剂。

继续参考方案1，将化合物1-F酰胺化得到通式(I)的化合物。在酰胺化反应中，化合物1-F与含有离去基团的丙烯酰衍生物反应。离去基团的实例包括但不限于卤素、三氟甲磺酸酯、氟磺酸酯、对甲苯磺酸酯或甲磺酸酯。酰胺化反应可以在溶剂如二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，在碱如三乙胺或二异丙基乙胺存在下进行。酰胺化反应可以使用偶联剂，例如二环己基碳二亚胺(DCC)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、或N-[二甲基氨基-1H-1,2,3-***[4,5-b]-吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基-甲铵(HATU)与1-羟基-1H-苯并***(HOBT)一起进行。

在一些实施方案中，主题化合物的代表性合成示于方案2中。

方案2

在一些实施方案中，主题化合物的代表性合成示于方案3中。

方案3

在一些实施方案中，主题化合物的代表性合成示于方案4中。

方案4

在一些实施方案中，主题化合物的代表性合成示于方案5中。

方案5

其中X¹是NH的化合物按照如示例性化合物35所示的方案5-1制备。

方案5-1

因此，如本文中更详细描述，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包括：

让式的化合物与反应，

由此产生式的化合物，其中R³、R⁶、R⁷、R⁸、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、Q、和n如本文所定义，且X²是离去基团。

让式

的化合物与

反应，

由此产生式

的化合物, 其中X¹、R³、R⁶、R⁷、R⁸、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁸、R¹⁹、Q、和n如本文所定义，且X²是离去基团。

将式

的化合物的硝基还原；和

与含有离去基团的丙烯酰衍生物进行酰胺化反应；

由此产生通式(I)的化合物。

将式

的化合物的硝基还原；和

与含有离去基团的丙烯酰衍生物进行酰胺化反应；

由此产生通式(VIII)的化合物。

在一些情况下，上述方法还涉及形成本发明化合物的盐的步骤。实施方案涉及本文所述的其它方法；以及通过本文所述的任何方法所制备的产物。

实施例

提供以下实施例用于举例说明，而不是限制本发明。

实施例1：化合物1和化合物4的合成：

方案6

N-(3-((7-(羟基甲基)-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧)苯基)丙烯酰胺(化合物4)和N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧)苯基)丙烯酰胺(化合物1)及其中间体的合成示于方案6中并描述如下。

2,4-二氯-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物6-B)的合成：

向化合物2-A (575mg, 3.06 mmol)和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基氯(561 mg,3.37 mmol)于四氢呋喃(5 mL)的混合物中，在0℃搅拌下加入氢化钠(60%, 46.7mg, 3.06mmol)。让反应混合物升温至室温并搅拌3小时，然后用水 (5 mL)淬火。混合物用乙酸乙酯(10 mL x3)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并过滤。浓缩滤液，粗品经柱色谱法(PE/EA = 20/1)纯化，得到化合物6-B (520 mg, 产率53.4%, M+H⁺= 319.27)，为淡黄色固体。

2-氯-4-(3-硝基苯氧基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2, 3-d]嘧啶(化合物6-C)的合成：

向化合物6-B (200 mg, 0.628 mmol)和3-硝基苯酚(96.2 g, 0.691 mmol)于二甲基甲酰胺(2 mL)的混合物中，加入K₂CO₃ (173.7 mg, 1.26 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物过滤。将滤液用水稀释，然后用乙酸乙酯提取。有机层用水、盐水洗涤，并用Na₂SO₄干燥。过滤后，在真空中除去挥发物，粗产物经快速柱色谱法(PE/EA = 20/1)纯化，得到化合物6-C (200 mg, 产率75.6%, M+H⁺= 421.92)，为白色固体。

N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-4-(3-硝基苯氧基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物6-D)的合成：

将化合物6-C (150 mg, 0.356 mmol)、4-(4-甲基哌嗪子基(piperazino))苯胺(70 mg, 0.356 mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(36 mg, 0.0356 mmol)、二环己基(2',4',6'-三异丙基联苯-2-基)膦(100 mg, 0.214 mmol)和碳酸钾(197 mg, 1.424 mmol)在叔丁醇(8 mL)中的混合物，在80℃在氩气下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤。将硅藻土垫用甲醇洗涤，滤液在减压下浓缩。剩余物经快速柱色谱法(DCM/MeOH =20/1)纯化，得到化合物6-D (180 mg, M+H⁺= 576.23)，为黄色固体。

4-(3-氨基苯氧基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物6-E)的合成：

将化合物6-D (180mg, 0.312 mmol)溶解在乙醇(6 mL)中，加入水(2 mL)。然后加入铁粉(90 mg, 1.61 mmol)和氯化铵(230 mg, 4.3 mmol)，将所得混合物加热回流3小时。将反应混合物冷却至室温，并通过硅藻土垫过滤。在真空下除去乙醇，将所得剩余物用碳酸氢钠碱化，并用乙酸乙酯提取。将有机层分离，用无水硫酸钠干燥，浓缩，经快速色谱法用20:1的二氯甲烷－甲醇纯化，得到化合物6-E (170 mg, M+H⁺= 546)，为白色固体。

N-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物6-F)的合成

在0℃向化合物6-E (170 mg, 0.312 mmol)和二异丙基乙胺(55 mg, 0.426mmol)的二氯甲烷(3 mL)溶液中，滴加丙烯酰氯(33.8 mg, 0.374 mmol)。将反应混合物搅拌1小时。加入水以淬灭反应。有机层用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。过滤后，在真空下进行除去挥发物。将粗产物通过快速色谱法(DCM/MeOH = 20/1)纯化，得到化合物6-F (125 mg,产率66.9 %, M+H⁺= 600.8)，为白色固体。

N-(3-(7-(羟基甲基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物4)的合成

将于二氯甲烷 (3 mL)和三氟乙酸(1 mL)中的化合物6-F (125 mg, 0.208 mmol)在室温下搅拌3小时。通过薄层色谱法监测表明，所有的起始原料已耗尽。然后在0℃加入饱和NaHCO₃水溶液到反应混合物中。将反应混合物用二氯甲烷萃取。有机层用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并过滤。浓缩滤液，将粗品用柱色谱法(DCM/MeOH = 20/1)纯化，得到化合物4(70 mg, 产率71.5%, M+H⁺= 500.5)，为白色固体。

N-(3-(2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物1)的合成

将化合物4 (100 mg, 0.2 mmol)的甲醇(2 mL)溶液用氨水饱和。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过LC-MS监测表明，所有的起始原料已耗尽。浓缩溶剂，粗品用柱色谱法(DCM/MeOH = 20/1)纯化，得到化合物1 (60 mg, 产率63.8%, M+H⁺= 470.5)，为淡黄色固体。

实施例2：化合物2和5的合成：

方案7

N-(3-(7-(羟基甲基)-2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物5)和N-(3-(2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物2)及其中间体的合成示于方案7中并描述如下。

N-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4-(3-硝基苯氧基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物7-B)的合成：

根据化合物6-D的操作程序，使用3-氨基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)吡啶盐酸盐代替4-(4-甲基哌嗪子基)苯胺，制备了化合物7-B (产率62%，根据3, M+H⁺= 577.3)。

4-(3-氨基苯氧基)-N-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物7-C)的合成：

根据化合物6-E的操作程序，制备了化合物7-C(产率80%，根据化合物7-B, M+H⁺=547.3)。

N-(3-(2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物7-D)的合成

根据化合物6-F的操作程序，制备了化合物7-D(产率67%，根据化合物7-C, M+H⁺=601.3)。

N-(3-(7-(羟基甲基)-2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-7H-吡咯并[2, 3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物5)的合成：

根据化合物4的操作程序，制备了化合物7-E (产率70%，根据化合物5, M+H⁺=501.6)。

N-(3-(2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物2)的合成：

根据化合物1的操作程序，制备了化合物2 (产率62%，根据化合物5, M+H⁺=471.5)。

实施例3：化合物3和6的合成：

方案8

N-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7-(羟基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物6)和N-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物3)及其中间体的合成示于方案8中并描述如下。

N-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-4-(3-硝基苯氧基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物8-B)的合成

根据化合物6-D的操作程序，使用3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺代替4-(4-甲基哌嗪子基)苯胺，制备了化合物8-B (产率%，根据化合物8-A, M+H⁺= 594.3)。

4-(3-氨基苯氧基)-N-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物8-C)的合成：

根据化合物6-E的操作程序，制备了化合物8-C(产率85%，根据化合物8-B, M+H⁺=564.3)。

N-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物8-D)的合成

根据化合物6-F的操作程序，制备了化合物8-D(产率75%，根据化合物8-C, M+H⁺=618.3)。

N-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7-(羟基甲基)-7H-吡咯并[2, 3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物6)的合成：

根据化合物4的操作程序，制备了化合物6 (产率78%，根据化合物8-D, M+H⁺=518.6)。

N-(3-(2-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物3)的合成：

根据化合物1的操作程序，制备了化合物3 (产率83%，根据化合物6, M+H⁺=488.5)。

实施例4：N-(3-(7-(2-氟乙基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7H-吡咯并 [2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物7)

方案9

N-(3-(7-(2-氟乙基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物7)及其中间体的合成示于方案9中并描述如下。

2, 4-二氯-7-(2-氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物9-B)的合成

向化合物9-A (1g, 5.3 mmol)和BrCH₂CH₂F (1.519 g, 11.9 mmol)于乙腈(10mL)的混合物中，室温下加入氢化钠(60%, 424 mg, 10.6 mmol)。将反应混合物搅拌4小时，然后用水淬火，然后用乙酸乙酯提取。有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并过滤。浓缩滤液，将粗品用柱色谱法(PE/EA = 20/1)纯化，得到化合物9-B (1.1 g, 产率90%, M+H⁺=234.0)，为淡黄色固体。

2-氯-7-(2-氟乙基)-4-(3-硝基苯氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物9-C)的合成

根据化合物6-C的操作程序，制备了化合物9-C (产率82%，根据化合物9-B, M+H⁺=337.0)。

7-(2-氟乙基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-4-(3-硝基苯氧基)-7H-吡咯并 [2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物9-D)的合成

根据化合物6-D的操作程序，制备了化合物9-D (产率73%，根据化合物9-C, M+H⁺=492.2)。

4-(3-氨基苯氧基)-7-(2-氟乙基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-7H-吡咯并 [2,3-d]嘧啶-2-胺(化合物9-E)的合成

根据化合物6-E的操作程序，制备了化合物9-E(产率81%，根据化合物9-D, M+H⁺=462.2)。

N-(3-(7-(2-氟乙基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物7)的合成

根据化合物6-F的操作程序，制备了化合物7 (产率77%，根据化合物9-E, M+H⁺=516.6)。

实施例5：N-(3-(2-(4-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基氨基)-2-甲氧基苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物34)的合成

3-(3-甲氧基-4-硝基苯基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的合成

在100 mL的装有回流冷凝器的3-颈圆底烧瓶中，装入4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(4.086 g)和3-氨基氮杂环丁烷-l-甲酸叔丁酯(4.4 g)、三乙胺(9.6 mL)、和二甲亚砜(20mL)。将反应混合物在95℃下加热8小时。将反应混合物倾入水(200 mL)中，并用乙酸乙酯(50 mL x3)萃取。将有机层用盐水(50 mL x2)洗涤，用硫酸钠干燥，并在40℃减压下完全地浓缩，得到标题化合物(9 g)，其使用无需进一步纯化。

N-(3-甲氧基-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-3-胺的合成

在室温下，向3-(3-甲氧基-4-硝基苯基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(9 g)中加入TFA (18 mL)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟，然后在40℃下减压浓缩，得到标题化合物，为TFA盐(7.24 g)。

1-(2-氟乙基)-N-(3-甲氧基-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-3-胺的合成

于DMF (30 mL)中，向N-(3-甲氧基-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(3 g)中，加入Cs₂CO₃ (12 g)和1,2-溴氟乙烷(1.5 g)。将反应混合物在50℃下加热8小时。将反应混合物倾入水中，用乙酸乙酯(100 mL x3)萃取。有机层用盐水(100 mL x2)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将粗产物通过柱色谱法(DCM/MeOH = 50/1作为洗脱液)纯化，得到标题化合物(1.35 g, 产率51 %，3个步骤)，为黄色固体。

N1-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯-1,4-二胺的合成

将1-(2-氟乙基)-N-(3-甲氧基-4-硝基苯基)氮杂环丁烷-3-胺(2.6 g)和Pd/C (1g)于1,4-二噁烷(50 mL)的溶液在室温下氢化4小时。将反应混合物通过硅藻泥土过滤，用MeOH洗涤。将滤液浓缩，并通过柱色谱法(DCM/MeOH = 50/1作为洗脱液)纯化，提供标题化合物(1.57g, 产率68%, M+H⁺ = 240.2)。

(2-(4-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基氨基)-2-甲氧基苯基氨基)-4-(3-硝基苯氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯(化合物34-A)的合成

将N1-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯-1,4-二胺(870 mg, 3.64mmol)和(2-氯-4-(3-硝基苯氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯 (1.55 g,3.83 mmol)、碳酸钾(1.35 g, 9.77 mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(173 mg, 0.19 mmol)和二环己基(2',4',6'-三异丙基联苯-2-基)膦(222 mg, 0.47mmol)、磁石(magnetite)、和叔丁醇(35 mL)的混合物，在氮气氛下加热回流并搅拌2小时。将混合物冷却至40~50℃，并通过硅藻泥土过滤，用乙酸乙酯 (50 mL)洗涤。滤液在减压下浓缩。将粗产物通过柱色谱法(DCM/MeOH = 50/1作为洗脱液)纯化，得到标题化合物(1.7 g, 产率74 %, M+H⁺= 608.3)，为浅黄色固体。

N1-(4-(3-氨基苯氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-N4-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯-1,4-二胺的合成

将(2-(4-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基氨基)-2-甲氧基苯基氨基)-4-(3-硝基苯氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯(530 mg, 0.87 mmol)、NH₂NH₂•H₂O(98%, 2.5 mL)、Pd/C (110 mg)、磁石和MeOH (10 mL)的混合物在回流温度下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，并通过硅藻泥土过滤，用 MeOH (20 mL)洗涤。滤液在减压下浓缩。加入NaHCO₃水溶液，将该混合物用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取。合并后的有机层在减压下浓缩。将粗产物通过柱色谱法(DCM/MeOH = 40/1作为洗脱液)纯化，得到标题化合物(125 mg, 产率31 %, M+H⁺= 464.2)，为白色固体。

N-(3-(2-(4-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基氨基)-2-甲氧基苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氧)苯基)丙烯酰胺(化合物34)的合成

在具有磁石的50mL圆底烧瓶中，装入N1-(4-(3-氨基苯氧基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-N4-(1-(2-氟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯-1,4-二胺 (125mg, 0.27mmol)、二异丙基乙胺(43 mg, 0.33 mmol)和DCM (20 mL)。混合物用冰浴冷却，直到温度低于0℃，经5分钟内滴加丙烯酰氯(33 mg, 0.33 mmol)的THF (2 mL)溶液。通过制备的HPLC或制备的LC/MS，或通过其他标准的纯化技术，分离并纯化标题化合物。在一些实验中，标题化合物通过制备的LC/MS分离和纯化。

化合物34经使用如下的替代合成途径也得到合成：

化合物34-B的合成：

在EtOH (60 mL)中，向于100 ml圆底***化合物34-A (0.6g)中，加入铁粉(0.3g)和NH₄Cl (0.5 g)。将反应混合物在90~100℃下搅拌3~4小时。此时，反应通过TLC (DCM：MeOH=8：1)指示已经完成。将反应混合物通过硅藻土过滤，用MeOH (~60 mL)进一步洗涤。合并后的滤液在减压下浓缩。将剩余物(油)溶于乙酸乙酯(100 mL)，用盐水(50 mL x2)洗涤，并经硫酸钠干燥。有机层在减压下浓缩。将所得粗品用柱色谱法(DCM：MeOH=30：1)进一步纯化，得到所需产物34-B (420 mg, M+H⁺= 578.5)。

化合物34-C的合成：

在DCM (30 mL)中，向于100 ml圆底***化合物34-B (288 mg)中，加入丙烯酸(41 mg)和EDCI (176 mg)。反应混合物在0℃(冰浴)搅拌1~1.5小时。此时，TLC (DCM：MeOH=7：1)显示反应完成。加入少量的水(0.5 mL)以淬灭反应。反应混合物在减压下浓缩。将所得剩余物溶于乙酸乙酯(30 mL)。将有机层用盐水(10 mL x2)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物，将其用柱色谱法(DCM：MeOH=30：1)进一步纯化，得到所需产物34-C(79mg, M+H⁺=632.5)。

化合物34的合成：

在100 ml圆底烧瓶中，向于MeOH (15 mL)的化合物34-C (79 mg)中，加入NaOH水溶液(2.5 mol/L)。将反应混合物在0℃(冰浴)搅拌4~5小时。此时，LC-MS指示反应完成。将反应混合物倾入水(100 mL)中，用乙酸乙酯(50 mL x3)萃取。将有机层用盐水(30 mL x2)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。粗品用柱色谱法(DCM：MeOH=25：1)进一步纯化，得到所需产物34 (32 mg, M+H⁺= 464.5)。

使用类似前述方案和实施例中所述的那些方法，这些合成实施例中未示出的其它示例性化合物由适当的起始原料制得。

生物学实施例A：

使用实时细胞电子传感(RT-CES)***的基于体外细胞的筛选

下面描述用于证明实施方案化合物抗癌作用的一些测定和实施例。

实施方案中的吡咯并嘧啶化合物被开发用于对具有某些分子靶标即EGFR(表皮生长因子受体)的癌细胞的抗癌活性。通过在暴露给抗癌剂后提供动态细胞应答信息的ACEABiosciences, Inc.实时电子细胞传感(RT-CES)***(或Roche Applied Sciences/ACEABiosciences Inc.的xCELLigence***)，吡咯并嘧啶化合物的抗癌功效可以在体外使用一组EGFR癌细胞系进行初步筛选。

详细的细胞电子传感技术，称谓实时细胞电子传感(RT-CES^®)和相关的设备，***和使用方法描述于美国专利号7,732,127；专利号7,192,752；专利号7,459,303；专利号7,468,255；专利号7,470,533；专利号7,560,269；2002年7月20日提交的美国临时申请号60/397,749；2002年12月20日提交的美国临时申请号60/435,400；2003年5月9日提交的美国临时申请60/469,572，2003年7月18日提交的PCT申请号PCT/US03/22557；2003年7月18日提交的PCT申请号PCT/US03/22537；2004年11月12日提交的PCT申请号PCT/US04/37696；2005年2月9日提交的PCT申请号PCT/US05/04481；2003年11月10日提交的美国专利申请号10/705,447；2003年11月10日提交的美国专利申请号10/705,615；2004年11月12日提交的美国专利申请号10/987,732；2005年2月9日提交的美国专利申请号11/055,639，其各自均被引入作为参考。RT-CES技术的更多细节进一步披露于2003年11月12日提交的美国临时申请号60/519,567，和2004年2月9日提交的美国临时申请号60/542,927，2004年2月27提交的美国临时申请号60/548,713，2004年8月4日提交的美国临时申请号60/598,608；2004年8月4日提交的美国临时申请号60/598,609；2004年9月27日提交的美国临时申请号60/613,749；2004年9月27日提交的美国临时申请号60/613,872；2004年9月29日提交的美国临时申请号60/614,601；2004年11月22日提交的美国临时申请号60/630,071；2004年11月22日提交的美国临时申请号60/630,131，其各自在此引入作为参考。

为了使用RT-CES技术测量细胞-底物或细胞-电极的阻抗，将具有适当几何形状的微电极装配在微量滴定板或类似装置的底面，面对入孔。将细胞引入装置的孔中，并接触和连接到电极表面。细胞的存在、不存在或特性变化均影响电极传感器表面上的电子和离子的通道。测量电极之间或之中的阻抗提供了存在于传感器的细胞生物状态的信息。当模拟细胞的生物状态有变化时，电子读出信号被自动和实时地测量，并被转换为处理和分析的数字信号。

在RT-CES***，基于所测量的电极阻抗值自动产生并提供细胞指数。所获得适宜给出的细胞指数反映：1)该孔中有多少个细胞连接到电极表面；和2)该孔中怎样的孔细胞连接到电极表面。因此，在类似生理条件下相同类型的细胞连接到电极表面越多，细胞指数越大。而且细胞连接到电极表面越好(例如细胞展开有更大的接触面积，或细胞连接电极表面更紧)，细胞指数越大。我们发现，当用阳性对照EGFR(表皮生长因子受体)抑制剂治疗时，cMet-成瘾细胞系会产生瞬态阻抗响应曲线。

通过使用RT-CES***，以上实施例所述的吡咯并嘧啶化合物已显示出在RT-CES***上产生类似阳性对照抑制剂所产生的细胞响应阻抗曲线。此外，这些化合物已显示出在一些细胞系中抑制EGFR (表皮生长因子受体)诱导的细胞迁移。此外，当这些化合物用于治疗非cMet成瘾的癌症细胞系时，已显示出没有或可忽略不计的影响。

RT-CES***(或xCELLigence RTCA***)包括三部件，电子传感分析器、装置站和16X或96X微量滴定板装置(即E-板16或E板96)。用平版印刷微制作方法将微电极传感器阵列装配在载玻片上，并将含电极的载玻片组装至塑料盘上以形成含电极的孔。RT-CES***中使用的各16X (或96X) 微量滴定板装置包括高达16 (或96)个这样的含电极的孔。装置站接收16X或96X微量滴定板装置，并能够将任何一个孔在电子上切换到传感分析器，以用于阻抗测量。在操作中，将孔中培养细胞的装置放入位于孵化器内部的装置站(xCELLigence RTCA SP站或RT-CES SP站)。将电缆连接装置站至传感分析器(xCELLigenceRTCA分析器或RT-CES分析器)。在RT-CES或xCELLigence RTCA软件控制下，传感分析器可以自动选择待测量的孔，并连续进行阻抗测量。来自分析器的阻抗数据被传送到计算机中，通过集成软件分析和处理。

在单个孔中电极之间测量的阻抗取决于电极的几何形状、孔中离子浓度以及是否有细胞连接在电极上。在细胞不存在时，电极的阻抗主要是由电极/溶液界面和本体溶液中的离子环境决定的。在细胞存在时，连接在电极传感器表面的细胞将改变电极/溶液界面的局部离子环境，导致阻抗的增加。电极上有越多的细胞，细胞-电极阻抗的增加越大。此外，阻抗变化还取决于细胞的形态和细胞连接到电极的程度。

为了量化基于测得的细胞-电极阻抗的细胞状态，根据如下得到命名细胞指数的参数，

其中和

分别是没有细胞或细胞存在的频率依赖性电极电阻(阻抗的组分)。N是测量该阻抗时频率点的数目。因此，细胞指数是在包含电极的孔中细胞状态的定量量度。在相同的生理条件下，更多连接电极的细胞导致更大的

值，从而导致更大的细胞指数值。此外，对于孔中存在相同数量的细胞，细胞状态如形态的变化会导致细胞指数的变化。例如，细胞粘附或细胞伸展的增加导致更大的细胞-电极的接触面积，这将导致增加

，因此有更大的细胞指数值。也可以使用不同于此处所述的公式计算出细胞指数。基于阻抗测量的细胞指数的其他计算方法可以参见美国专利号7,732,127；专利号7,192,752；专利号7,459,303；专利号7,468,255；专利号7,470,533；专利号7,560,269； 2004年11月12日提交的PCT申请号PCT/US04/37696, 2005年2月9日提交的PCT申请号PCT/US05/04481, 2004年11月12日提交的美国专利申请号10/987,732, 和2005年2月9日提交的美国专利申请号11/055,639。

生物学实施例B-1

吡咯并嘧啶化合物对EGFR突变的细胞系的生物活性

材料和方法

细胞培养和试剂

所有细胞系获自美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection)，并在37℃、5% CO₂下保持在添加10％胎牛血清和1％ L-谷氨酰胺-青霉素-链霉素培养基中。H1975和HCC827细胞用RPMI 1640培养基培养。A431细胞保持在达尔伯克改良伊格尔培养基中。EGF (R&D)、EGF抑制剂根据制造商的指示进行悬浮和存储。

细胞增殖和生长抑制测定

按照制造商的说明，通过WST测定(Roche, Indianapolis, IN)，评估了细胞增殖。以每孔3000、3000和4000个细胞，将H1975、HCC827和A431细胞接种到96孔板中，培养24小时后，将细胞用试验化合物处理72小时。通过用WST-1试剂孵育细胞2小时，然后在450nm波长处测量吸光度，测定了细胞生存能力。使用GraphPad Prism4.0版本，计算了数据。使用S形剂量响应的非线性回归模型，拟合了IC₅₀值。

蛋白质印迹法

以每孔1 × 10⁶个细胞的浓度，将H1975和A431细胞接种到6孔板上。在含血清的培养基中生长24小时后，将细胞在无血清的培养基中孵育1小时，然后用试验化合物处理2小时。A431细胞在化合物处理的最后20分钟用30ng/mL EGF刺激。使用特异性磷酸化的EGFR(pY1068)、总的EGFR、磷酸化Akt (Ser-473)、总的Akt、磷酸化-ERK1/2 (pT202/pY204)和总的ERK1/2抗体(Cell Signaling Technology)，在全细胞提取物上进行蛋白质(Western)印迹。

为了蛋白质分离，将肿瘤切片在液氮中迅速冷冻，通过蛋白质印迹，用包括下列的主要抗体：异性磷酸化的EGFR (pY1068)、总的EGFR、磷酸化Akt (Ser-473)、总的Akt、磷酸化-ERK1/2 (pT202/pY204)和总的ERK1/2评估了EGFR信号转导。

ELISA测定

以每孔4×10⁴个细胞的密度，将H1975和A431细胞接种到96孔板的各孔中。在含血清的培养基中生长24小时后，将细胞在无血清的培养基中用试验化合物处理2小时。A431细胞在化合物处理的最后15分钟用30ng/mL EGF刺激。将细胞用冰冷的PBS洗涤，然后每孔用100 μl细胞裂解缓冲液萃取。使用夹心ELISA测定法，用一对特异性磷酸化的EGFR(pY1068)和总的EGFR抗体测量了EGFR的磷酸化。

结果

化合物3抑制EGFR突变细胞的增殖

对下列化合物进行了测试。

化合物3

化合物A

化合物B (WZ4002)

吉非替尼。

表达EGFR WT、Exon 19 Del、L858R/T790M和delE746-A750的癌症细胞系对化合物3、化合物B和吉非替尼的灵敏度。细胞增殖测定应用WST，用增加浓度的化合物进行了72小时。通过GraphPad软件确定IC₅₀值。化合物3抑制T790M-阳性H1975细胞的增殖比吉非替尼更有效。

表1

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞 (WT)	HCC827细胞 (delE746-A750)
				化合物3	0.61 µM	10.8 µM	0.019 µM
化合物B	1.1 µM	4.5 µM	0.013 µM
				吉非替尼	>10 µM	ND	0.024 µM

化合物3抑制H1975细胞的EGFR磷酸化

用化合物3处理H1975细胞的EGFR磷酸化和增殖的抑制。H1975和A431细胞用不同浓度的化合物3或化合物B孵育2小时，将全细胞提取物直接收集并通过ELISA测试pEGFR。通过GraphPad软件确定IC₅₀值。

表2

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞(WT)
			化合物3	0.031 µM	12.7 µM
化合物B	0.063 µM	8.9 µM

化合物3抑制H1975细胞的EGFR信号通路

将指数生长的H1975肺癌细胞在无血清培养基中用指定浓度的化合物3处理2小时。如图1所示，全细胞提取物通过SDS-PAGE解析，然后被印迹到硝酸纤维(nitrocellular)膜上。EGFR磷酸化的抑制导致其下游效应物p-Akt和p-ERK的抑制。所有抗体均购自CellSignaling。

化合物3抑制H1975肿瘤的EGFR信号通路

化合物3以100mg/kg经PO给药，在单次剂量1、4、8、18和25小时后，收集肿瘤。如图2所示，对pEGFR、总的EGFR、pAkt、总的Akt、p –ERK和总的ERK探测了免疫印迹。化合物3以时间依赖性方式抑制EGFR磷酸化，EGFR的抑制导致其下游效应物p-Akt和p-ERK的抑制。

化合物3和化合物A之间的比较

1． WST结果

表3

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞 (WT)	HCC827细胞 (delE746-A750)
				化合物3	0.73 µM	0.62 µM	0.011 µM
化合物A	1.63 µM	4.17 µM	0.023 µM

2．ELISA结果

表4

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞 (WT)	H1975细胞 (T790M/L858R) EGF刺激
				化合物3	0.0032 µM	0.4737 µM	0.025 µM
化合物A	0.0088 µM	1.0270 µM	0.091 µM

生物学实施例B-2

细胞培养和试剂

所有细胞系获自美国典型培养物保藏中心，并在37℃、5% CO₂下保持在添加10％胎牛血清和1％ L-谷氨酰胺-青霉素-链霉素培养基中。H1975和HCC827细胞用RPMI 1640培养基培养。A431细胞保持在达尔伯克改良伊格尔培养中。GTL-16细胞、T47D细胞和BxPC3细胞用RPMI 1640培养基培养。NIH-3T3细胞、H460细胞和HepG2细胞用达尔伯克改良伊格尔培养培养。A549细胞用F-12K营养混合物培养基培养。H295R用DMEM：F12培养基培养。WST-1试剂获自Roche。EGF (R&D)、EGF抑制剂根据制造商的指示进行悬浮和存储。

细胞增殖和生长抑制测定

按照制造商的说明，通过WST测定(Roche, Indianapolis, IN)，评估了细胞增殖。以每孔3000、3000和4000个细胞，将H1975、HCC-827和A431细胞接种到96孔板中，培养24小时后，将细胞用试验化合物处理72小时。以每孔2000、2000、5000、5000、2500、5000、2000、5000和5000个细胞，将NIH-3T3细胞、A549细胞、H295R细胞、GTL-16细胞、H460细胞、HepG2细胞、Hela细胞、T47D细胞和BxPC3细胞接种到96孔板中。通过用WST-1试剂孵育细胞3小时，测定了细胞生存能力。使用Beckman DTX880在OD450-620测量吸光度。使用GraphPadPrism4.0版本，计算了数据。使用S形剂量响应的非线性回归模型，拟合了IC50。

ELISA测定

分别以每孔40000、40000和60000个细胞的密度，将H1975、HCC-827和A431细胞接种到96孔板上。在含血清的培养基中生长24小时后，将细胞在无血清的培养基中用试验化合物处理2小时。A431细胞在化合物处理的最后15分钟用50ng/mL EGF刺激。将细胞用冰冷的PBS洗涤，然后每孔用100 μl细胞裂解缓冲液萃取。使用夹心ELISA测定法，用一对特异性磷酸化的EGFR (pY1068)和总的EGFR抗体测量了EGFR的磷酸化。使用GraphPad Prism4.0版本，计算了数据。使用S形剂量响应的非线性回归模型，拟合了IC50。

蛋白质印迹法

以每孔1 × 10⁶个细胞的浓度，将H1975、HCC-827和A431细胞接种到6孔板上。在含血清的培养基中生长24小时后，将细胞在无血清的培养基中孵育1小时，然后用试验化合物处理2小时。A431细胞在化合物处理的最后20分钟用30ng/mL EGF刺激。使用特异性磷酸化的EGFR (pY1068)、总的EGFR、磷酸化Akt (Ser-473)、总的Akt、磷酸化-ERK1/2 (pT202/pY204)和总的ERK1/2抗体(Cell Signaling Technology)，在全细胞提取物上进行蛋白质印迹。印迹带的密度使用ImageJ软件获得，使用非线性回归模型，通过GraphPad Prism4.0版本，拟合了EGFR Tyr1068磷酸化的IC50。

化合物3以指定的剂量(12.5、50、200mg/kg)口服给药，吉非替尼(GF) 以100mg/kg口服给药。肿瘤组织在剂量(12.5、50 mg/kg)的第一天单次剂量后的1、4、8和24小时收集，或者在8个连续剂量后的第8天收集。为了蛋白质分离，将肿瘤切片在液氮中迅速冷冻，通过蛋白质印迹，用包括下列的主要抗体：异性磷酸化的EGFR (pY1068)、总的EGFR评估了EGFR信号转导。

用于化合物不可逆转性评估的基于细胞的脉冲追踪测定

将H1975以每孔3000个细胞接种于RTCA***(xCELLigence SP 仪器, ACEABiosciences)。培养一天后，将细胞用10µM浓度的化合物3、WZ4002的化合物处理22小时，然后取出，并与药物继续保持相比较。在恢复后约60小时，细胞受到WST生存能力测量。

结果

化合物3抑制包含EGFR突变的癌细胞的增殖

化合物3实现了对于H1975 (T790M/L858R)细胞的增殖抑制，其IC50为91±60nM，对于HCC827(Del E746-A750)细胞的增殖抑制，其IC50为19±8 nM，而对A431(WT)细胞的敏感性是非常低的 (IC50= 2113±1660 nM)。相反，第一代EGFR抑制剂吉非替尼表现出对 A431细胞的敏感性，但对包含T790M突变的细胞增殖的抑制没有活性(IC50 >20uM)。

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞 (WT)	HCC827细胞 (delE746-A750)
				化合物3	91±60 nM	2113±1660 nM	19±8 nM
WZ4002	1905±732 nM	4393±617 nM	35±12 nM
				吉非替尼	>20000 nM	523±115 nM	9±1 nM

化合物3显著降低EGFR突变细胞的EGFR Tyr1068磷酸化

将H1975和A431细胞用多种浓度的化合物3或WZ4002孵育2小时，将全细胞提取物直接收集并通过ELISA测试pEGFR。通过GraphPad软件确定IC50值。

基于细胞的ELISA测定证实了化合物3显著降低EGFR突变细胞系的EGFR Tyr1068 磷酸化，而吉非替尼显示出抑制该磷酸化的更少程度。

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞 (WT)
			化合物3	4±2 nM	650±63 nM
WZ4002	32±12 nM	970±340nM

如下表中所示，化合物3显著降低EGFR突变细胞中的EGFR Tyr1068磷酸化和下游信号，在表达野生型EGFR的细胞系是较少有效的。

如图9A和9B所示，化合物3抑制H1975 EGFR突变细胞中的EGFR-Tyr1068磷酸化和下游信号。吉非替尼和WZ4002的比较数据示于9C-9F中。

如图10A和10B所示，化合物3抑制HCC-827 EGFR突变细胞中的EGFR-Tyr1068磷酸化和下游信号。吉非替尼和WZ4002的比较数据示于10C-10F中。

如图11A和11B所示，化合物3在表达WT EGFR的A431细胞中对EGFR-Tyr1068磷酸化和下游信号的抑制是较少有效的。吉非替尼和WZ4002的比较数据示于11C-11F中。

化合物3抑制H1975肿瘤的EGFR磷酸化

化合物3在12.5、50和200 mg/kg的所有三个剂量均显著抑制H1975肿瘤组织中的EGFR磷酸化。化合物3对EGFR磷酸化的抑制是剂量和时间依赖性的。相反，吉非替尼在100mg/kg的剂量没有检测到EGFR磷酸化的抑制。

如图12中所示，在化合物3单一剂量时，化合物3抑制H1975肿瘤组织中的EGFR磷酸化。

如图13中所示，在化合物3的8个连续剂量后，化合物3抑制H1975肿瘤组织中的EGFR磷酸化。

如图14所示，化合物3不可逆地抑制包含EGFR T790M突变的H1975细胞的增殖。化合物3的可逆性是基于细胞的脉冲追踪测定进行评估的。如图14中所示，根据22小时处理后撤出化合物3，H1975的增殖抑制持续(7.8±1.3%)高达60小时。相反，从WZ4002治疗中恢复为27±10%。本研究的结果表明，化合物3是不可逆的EGFR抑制剂，并显示比WZ4002强的结合特性。

与媒介对照的生存能力的比较(%)

	化合物3，22小时处理	WZ4002，22小时处理
			H1975细胞(%)的生存能力	7.8±1.3	27±10

1． WST结果

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞 (WT)	HCC827细胞 (delE746-A750)
				化合物3	0.19 uM	2.03 uM	0.011 uM
化合物A	1.16 uM	11.82 uM*	0.023 uM

*注：化合物A的A431值以前错误报告为9.14 uM。

2． ELISA结果

化合物	H1975细胞 (T790M/L858R)	A431细胞 (WT) EGF 刺激	H1975细胞 (T790M/L858R)
				化合物3	0.0032 uM	0.4737 uM	0.025 uM
化合物A	0.0088 uM	1.0270 uM	0.091 uM

生物学实施例B-3

使用新的H1975细胞系和上面生物学实施例B-2所述的ELISA方案，得到的结果如下：

使用新的H1975细胞系和上述(在5％胎牛血清存在下的生物学实施例B-2中)WST方案，得到的结果如下：

* p值 1) <0.05(标记为黑色粗体)表示显著差异；2) 0.05-0.15表示重要的差异/改善，虽然没有显著性；3) >0.15表示无显著差异。

基于上述两个表中的实验数据和p值，化合物3在WST和ELISA测定中均表现出比化合物A和B具有显著更大的效能，其十个(10) p值 <0.05和两个(2) p值在0.05 – 0.15之间。在选择性方面，化合物3在WST和ELISA测定中均显示出比化合物A和B更高的选择性总趋势，其两个p值 <0.05，两个(2) p值在0.05 – 0.15之间，和四个(4) p值在0.15以上。

生物学实施例C

化合物3在治疗H1975、HCC827和A431异种移植小鼠模型中的功效评价

该实施例评价化合物3在治疗NCI-H1975 (L858R/T790M)人类非小细胞肺腺癌、HCC827 (L858R)人类肺腺癌和A431 (WT)人皮肤表皮样癌的裸鼠异种移植肿瘤模型中的功效。第一代可逆的EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼在这三个小鼠异种移植肿瘤模型中用作阳性对照。

实验设计和给药方案

实验设计和给药方案如下所示。

表5：NCI-H1975模型

组别	n	治疗	剂量(mg/kg)	给药体积 (µl/g)	给药途径	溶剂	给药天数	方案
									1	8	媒介	-	16.7	PO	PEG***	14	QD
2	8	化合物3	25	10	PO	PEG***	14	QD
									3	8	化合物3	50	10	PO	PEG***	14	QD
4	8	化合物3	100	16.7	PO	PEG***	14	QD
									5	8	吉非替尼	100	10	PO	1%吐温80	14	QD

表6： HCC827 模型

组别	n	治疗	剂量(mg/kg)	给药体积 (µl/g)	给药途径	溶剂	给药天数	方案
									1	8	媒介	-	10	PO	-	35	QD
2	8	化合物3	50	10	PO	PEG***	35	QD
									3	8	化合物3	50	10	PO	0.5%MC	35	QD
4	8	吉非替尼	100	10	PO	1%吐温80	7	QD

表7： A431模型

组别	n	治疗	剂量(mg/kg)	给药体积 (µl/g)	给药途径	溶剂	给药天数	方案
									1	8	媒介	-	16.7	PO	PEG***	14	QD
2	8	化合物3	100	16.7	PO	PEG***	14	QD
									3	8	吉非替尼	100	10	PO	1%吐温80	14	QD

注：n ：动物数量；给药体积：基于体重调整的给药体积；PEG***： PEG200：乙醇：5％葡萄糖= 4：1：5；如果体重减轻>15％则调整治疗方案。

动物住房

动物

动物的详细信息如下所示。

种类：小鼠

品种： Nu/Nu裸鼠

龄：7-8周

性别：雌性

体重：20-25 g

动物供应商：中国北京维通利华实验动物技术有限公司(Vital RiverLaboratories, Beijing, China。

住房条件

在ACEA生物科技杭州有限公司(ACEA Bioscience Hangzhou Inc)，将小鼠保持在恒定的温度和湿度的个体通风笼中，各个笼4只动物。

-温度：约20-26℃

-湿度约40-70％。

IVC笼：聚碳酸酯制成。尺寸为300 mm x 180 mm x 150 mm。垫层材料是玉米芯，每周更换两次。

饮食：动物在整个研究期间自由食用辐照灭菌的干颗粒食品。

水：动物自由饮用无菌饮用水。

笼识别：每个笼识别标签包含以下信息：动物的数量、性别、品种、接收日期、治疗、研究数号、组别数和治疗开始日期。

动物识别：动物通过耳切割标记。

实验方法及操作程序

细胞培养

按照ATCC推荐，在37℃、5％ CO₂的气氛中，将NCI-H1975、HCC827和A431肿瘤细胞体外以单层培养保持在添加10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的培养基中。肿瘤细胞通过胰蛋白酶- EDTA处理，每周两次常规传代培养。为了肿瘤接种，将指数生长期的细胞收集并计数。

肿瘤接种

每只小鼠在右侧面皮下接种分别于0.2 ml培养基中的H1975细胞(5 x 10⁶)、HCC827 (5 x 10⁶)和A431 (5 x 10⁶)以发展肿瘤。当肿瘤大小达到约200-250 mm³时，开始治疗。测试品根据实验设计表中所示的预定方案给小鼠施用。

观察

按照实验动物管理评估和认可协会(Association for Assessment andAccreditation of Laboratory Animal Care，AAALAC)指导方针，根据机构动物管理与使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee，IACUC)批准的指导方针，进行本研究中动物处理、管理和治疗相关的所有操作程序。在常规监测时，检查动物对肿瘤生长的任何影响，治疗对正常行为(如运动性、食品和水的消耗(通过观测)、体重增加/减轻(体重每周测量两次)、眼和/毛缠结)的任何影响，和任何其他异常。基于各亚组动物的数量，记录死亡和观察到的临床体征。在死亡前或达到昏迷状态前，将观察为持续恶化状况的动物施行安乐死。

肿瘤测量和终点

主要的终点是看肿瘤生长是否可被延迟或小鼠是否可被治愈。使用卡尺每周两次二维测量肿瘤的大小，并用公式V = 0.5 a x b ²以mm³表示体积，其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。然后将肿瘤的大小用于计算T-C和T/C值。用治疗组肿瘤达到预定大小(例如1000mm³)所需的中位时间(天数)T，和对照组肿瘤达到相同大小的中位时间(天数)C，计算T-C。T/C值(百分数)是抗肿瘤有效性的指标；T和C分别为指定天时治疗和对照组的平均体积。在研究终止时测定肿瘤重量。计算T/C值(百分数)，其中T和C分别为治疗和对照组的平均肿瘤重量。

统计分析

为各个时间点各组的肿瘤体积，提供了总的统计，包括平均值和平均值的标准误差(SEM)。

对最终剂量(肿瘤接种后第15天)后的最好治疗时间点获得的数据，进行各组之间的肿瘤体积和肿瘤重量的统计差异分析。

进行单向方差分析，以比较各组之间的肿瘤体积和肿瘤重量，当获得显著的F-统计(治疗方差与误差方差的比)，用LSD和Games-Howell检验进行组间比较。采用SPSS 16.0分析所有数据。p<0.05被考虑为有统计学意义。

结果

5.1.体重

在NCI-H1975、HCC827和A431模型的荷瘤小鼠中，体重变化的结果分别示于图3、图4、和图5。

在治疗NCI-H1975、HCC827和A431结束时，不同组的荷瘤小鼠的小鼠体重分别示于表8、表9和表10。

表8. NCI-H1975模型的不同组中的小鼠体重

表9. HCC827模型的不同组中的小鼠体重

表10. A431模型的不同组中的小鼠体重

注：a. 平均值± SEM。

肿瘤体积

NCI-H1975、HCC827和A431不同时间点上不同组的肿瘤大小分别示于表11、表12和表13。

表11. NCI-H1975模型的不同治疗组中的肿瘤大小

表12. HCC827模型的不同治疗组中的肿瘤大小

表13. A431模型的不同治疗组中的肿瘤大小

注：a. 平均值±SEM。

肿瘤生长抑制

对NCI-H1975、HCC827和A431模型的肿瘤生长抑制分别总结于表14、表15、和表16中。

表14.化合物在治疗H1975异种移植瘤模型中的效果

表15.化合物在治疗HCC827异种移植瘤模型中的效果

表16.化合物在治疗A431异种移植瘤模型中的效果

注：a. 平均值± SEM

b. 肿瘤退化率(%) = (1-治疗后肿瘤体积/治疗前肿瘤体积) * 100%。

肿瘤生长曲线

NCI-H1975、HCC827和A431模型中不同组荷瘤小鼠的肿瘤生长曲线分别示于图6、图7、和图8。

肿瘤重量

NCI-H1975、HCC827和A431模型中不同组的小鼠肿瘤重量分别示于表17、表18、和表19。

表17. 化合物在治疗NCI-H1975模型中的抗肿瘤活性

表18. 化合物在治疗HCC827模型中的抗肿瘤活性

表19. 化合物在治疗A431模型中的抗肿瘤活性

a： IR (抑制率) = (TW_对照–TW_治疗)/TW_对照× 100％。

生物学实施例D

化合物3的马来酸盐和盐酸盐的合成和药代动力学研究

如下所示由化合物3的游离碱合成其马来酸盐和盐酸盐：

在40℃向于乙醇/水(5：95, 22 mL)的游离碱化合物3(2 g)中，滴加马来酸(1.2当量)或HCl (2.2当量)。固体溶解后，将溶液冷却至室温，并静置过夜。将生成的晶体(浅黄色或灰白色)收集，用冷水洗涤，并干燥过夜(产率超过85％)。

游离碱、马来酸盐、盐酸盐形式的化合物3对大鼠的药代动力学研究：

使用游离碱、马来酸盐、盐酸盐形式的化合物3对雌性大鼠(Zhe Jiang AMS)进行了药代动力学的比较研究。详细研究条件与实验结果一起显示在下表20中：

表20

结果表明，在0.5％甲基纤维素(MC)的相同制剂中，与游离碱形式相比，盐形式(马来酸盐和HCl盐两者)具有约3倍的更好的生物利用度。

生物学实施例E

化合物3对一系列其他蛋白激酶进行了测试。

测定说明。使用“HotSpot”测定平台，对蛋白激酶进行了体外分析。简言之，在反应缓冲液中，连同所需的辅助因子一起制备特定的激酶/底物对。将化合物放入反应中，15-20分钟后，加入ATP (Sigma, St. Louis MO)和³³P ATP (Perkin Elmer, Waltham MA)的混合物至最终浓度为10μM。反应在室温下进行120分钟，随后将反应混合物点在P81离子交换滤纸(Whatman Inc., Piscataway, NJ)上。通过0.75％磷酸彻底清洗过滤器，除去未结合的磷酸盐。在减去来自于包含无活性酶的对照反应的背景后，激酶活性的数据以测试样品中剩余激酶活性相对媒介(二甲基亚砜)反应的百分数表示。IC₅₀值和曲线拟合使用Prism(GraphPad软件)获得。

反应条件：缓冲液条件：20 mM Hepes (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.02% Brij35, 0.02 mg/mL BSA, 0.1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 和1% DMSO。ATP浓度：10μM。反应时间：2小时。与普通激酶抑制剂参考化合物星形孢菌素相比，化合物3如下测试了10种浓度。化合物在10点IC50模式中以10 uM开始3倍系列稀释，进行了测试。对照化合物在10点 IC50模式中以20 uM开始3倍系列稀释，进行了测试。所有激酶反应在10 uM ATP下进行。测试浓度以摩尔单位(M)提供如下。

化合物3	星形孢菌素-对照
		1.00E-05	2.00E-05
3.33E-06	6.67E-06
		1.11E-06	2.22E-06
3.70E-07	7.41E-07
		1.23E-07	2.47E-07
4.12E-08	8.23E-08
		1.37E-08	2.74E-08
4.57E-09	9.14E-09
		1.52E-09	3.05E-09
5.08E-10	1.02E-09

测试了下面的激酶：

结果：各种激酶靶标的IC₅₀值总结如下：

各个体靶向酶的IC₅₀值和原始数据的明细表提供如下：

活性百分数是与仅有缓冲溶液相比的相对值。DMSO被列为参考。化合物3对BLK的IC₅₀值为0.23 nM。化合物3的相应曲线分别示于图15A和15B中。

化合物3对BMX/ETK的IC₅₀为0.35 nM。化合物3的曲线示于图16中。

化合物3对BTK的IC₅₀为0.40 nM。化合物3的曲线示于图17中。

化合物3对FLT3 (D835Y)的IC₅₀为10.90 nM。化合物3的曲线示于图18中。

化合物3对ITK的IC₅₀为0.52 nM。化合物3的曲线示于图19中。

化合物3对JAK2的IC₅₀为501 nM。化合物3的曲线示于图20中。

为了评估JAK3抑制作用，在其他测定中评价了化合物3，但是开始的浓度为100nM。在其他测定中，稀释系数是3倍，导致测试浓度范围为100 nM至5.08 pM。化合物3对JAK3的IC₅₀为91.1 pM。化合物3的曲线示于图21中。

化合物3对TEC的IC₅₀为0.67 nM。化合物3的曲线示于图22中。

化合物3对TXK的IC₅₀为0.70 nM。化合物3的曲线示于图23中。

其它化合物的数据

1. ELISA测定(EGFR)：

使用生物学实施例B-2中所述的方案，下列化合物也在ELISA测定(EGFR)中进行了测试。结果示于下表21中。

表21

2. 其他激酶–酶的测定：

使用生物学实施例E中所述的方案，下列化合物也对其他激酶(BTK、Jak1、Jak2和Jak3)进行了测试(下表22)。

表22

其他激酶(BTK和JAK3)–基于细胞的测定：

ClariCELL™ JAK3和BTK测定的方案描述如下：

●用人wt BTK、人wt JAK3、或激酶死亡的人JAK3 (用作JAK3阴性对照)，将HEK293人胚肾细胞瞬时转染。对于BTK阴性对照，利用wt BTK转染，并加用1uM 依鲁替尼(Ibrutinib)处理。

●关于BTK以约8000个细胞/孔，或关于JAK3以每孔20000个细胞，将细胞分配到96孔板中。

●每种化合物在100％DMSO中制备八种3倍的系列稀释(或对于托法替尼(tofacitinib)2倍)。

●然后在水中将化合物稀释至10x的最终测定浓度和6％DMSO。

●在96孔板中将化合物加到细胞中(在组织培养基中10倍的稀释)，最终测定浓度1x的化合物和0.6% DMSO。

●将细胞与化合物于37℃下孵育2小时。

●裂解细胞，并将裂解物转移到ELISA板，该板已经先前涂有抗体以捕捉底物(人BTK或人JAK3)。

●洗涤板，然后用抗体孵育以检测总的酪氨酸磷酸化*。

●洗涤板，然后用标记HRP的二级抗体孵育。

●加入HRP底物，在450nm处读取吸光度。

● *注意，因为利用了泛抗磷酸酪氨酸抗体，有可能测量到除了BTK或JAK3之外的酪氨酸激酶的活性。

基于BTK细胞测定的试验结果示于下表23中。

基于JAK3细胞测定的试验结果示于下表24中。

Claims

1.通式(VII)的化合物：

(VII)

其中

R¹和R²独立地选自氢、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6卤代烷基；

R¹⁰是C_1-6烷基；和

R¹³是氢或C_1-6烷基；

或其药学上可接受的盐。

2.权利要求1的化合物，其中R¹和R²分别为氢。

3.权利要求1的化合物，其中R¹⁰是甲基。

4.权利要求1的化合物，其中R¹³是氢。

5.权利要求1的化合物，其中R¹³是C_1-6烷基。

6.药物组合物，其包括(a)权利要求1-5中任一项的至少一种化合物，或其药学上可接受的盐，和(b)药学上可接受的载体或赋形剂。

7.有效量的权利要求1-5中任一项的至少一种化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和/或预防需要这种治疗的受试者的增殖性病症、炎症性疾病、银屑病、干眼或免疫相关疾病。

8.权利要求7的用途，其中所述增殖性病症是肿瘤，且所述免疫相关疾病是自身免疫性疾病。

9.权利要求8的用途，其中所述肿瘤是癌症。

10.权利要求7的用途，其中增殖性病症选自肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、***、胃癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、***癌、乳腺癌、肝癌、头颈部癌、和胰腺癌。

11.权利要求10的用途，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。

12.权利要求7的用途，所述治疗和/或预防还包括施用有效量的用于治疗和/或预防受试者中增殖性病症的第二种预防或治疗药物。

13.化合物N-(3-((2-((3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧基)苯基)丙烯酰胺。

14.权利要求6的药物组合物，其中药学上可接受的盐是盐酸盐、马来酸盐、氢溴酸盐、羟基丁二酸盐或富马酸盐。

15.权利要求7的用途，其中药学上可接受的盐是盐酸盐、马来酸盐、氢溴酸盐、羟基丁二酸盐或富马酸盐。

16.权利要求1-5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途。

17.治疗和/或预防受试者中增殖性病症、炎症性疾病、银屑病、干眼或免疫相关疾病的组合产品，该组合产品包括有效量的权利要求1-5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，和有效量的用于治疗和/或预防受试者中增殖性病症、炎症性疾病、银屑病、干眼或免疫相关疾病的第二种预防或治疗药物。

18.权利要求17的组合产品，其中所述增殖性病症是肿瘤，且所述免疫相关疾病是自身免疫性疾病。

19.权利要求18的组合产品，其中所述肿瘤是癌症。

20.有效量的权利要求17的组合产品在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和/或预防受试者中增殖性病症、炎症性疾病、银屑病、干眼或免疫相关疾病。

21.权利要求20的用途，其中所述增殖性病症是肿瘤，且所述免疫相关疾病是自身免疫性疾病。

22.权利要求21的用途，其中所述肿瘤是癌症。