CN107955019B - 一种egfr抑制剂的盐型、晶型及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种EGFR抑制剂的盐型、晶型及其制备方法，还包括所述盐型和晶型在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

Description

一种EGFR抑制剂的盐型、晶型及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种T790M突变的EGFR抑制剂的盐型、晶型及其制备方法，还包括所述盐型和晶型在治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

背景技术

蛋白酪氨酸激酶是一类催化位于蛋白质底物上的磷酸基团从ATP或GTP转移到酪氨酸残基的酶。受体酪氨酸激酶通过从细胞外到细胞内传递信号引起磷酸化来激活次级信号通路。多种细胞过程都是由这些信号调控，包括增殖，碳水化合物利用，蛋白质合成，血管生成，细胞生长和细胞存活。此外，许多疾病或病症是与一种或多种激酶的活性失常，异常或失调相关。

表皮生长因子受体属于跨膜酪氨酸激酶受体ErbB家族，该家族包括EGFR(也称为的ErbB或HER1)，ErbB2的(HER2或neu基因)，ErbB3的(HER3)和ErbB4(HER4)。除HER3以外，均具有酪氨酸激酶活性。所述EGFR/ErbB家族酪氨酸激酶受体在细胞增殖，分化和凋亡中具有不可或缺的作用，并因此成为用于防止肿瘤生长和转移的有效靶标。第一代的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI中)，包括吉非替尼(J Med 2004；350:2129-39)和厄洛替尼(Lancet Oncol 2011；12:735-42)，它们已被证明在具有体细胞活化突变的晚期NSCLC患者中是有效的。这些突变在编码表皮生长因子受体的激酶结构域，如多核苷酸19号外显子的框内缺失和21号外显子上的858位的亮氨酸置换为精氨酸的点突变(L858R)(Nat RevCancer 2007；7:169-81)。然而，病人在接受第一代EGFR-TKIs后最终会由于耐药而导致肿瘤产生继发性生长。790号位的苏氨酸置换为甲硫氨酸(T790M)的二次突变是最普遍认为的耐药机制。这种突变在50％～60％疾病出现进展的病人的肿瘤细胞中被检测出来(N EnglJ Med 2005；353:207-8)。第二代EGFR-TKIs，如阿法替尼(Lancet Oncol 2014；15:213-22)和dacomitinib(Cancer 2014；120:1145-54)的开发用以克服一代TKIs产生的耐药性。它们可以不可逆的共价结合EGFR上797位的半胱氨酸。共价机制被认为可以克服双突变体所增加的ATP的亲和力。然而半胱氨酸-797存在于所有形式的EGFR中。因此这些第二代的化合物，不仅对活性突变和二次突变的EGFR有活性，而且对野生型的EGFR也具有活性。对野生型EGFR的抑制不被认为有助于其临床疗效，而是会导致皮疹和腹泻的副作用(Curr.Med.Chem.2006,13,3483-3492)。

因此第三代EGFR-TKIs，包括AZD9291(Cancer Discov 2014；4:1046-61),CO-1686(Cancer Res.2013；19:2240-2247)和HM61713(US 2013011213),它们是口服的不可逆的具有突变选择性的EGFR-TKIs,可以抑制T790M突变和传统的EGFR突变，而对野生型EGFR没有作用。它们在T790M阳性肿瘤中有高效，但他们仍然存在一定的毒性，像依然会产生腹泻，皮疹，恶心甚至高血糖等临床副作用((J Clin Oncol 2014；32:abstr 8009；J Clin Oncol2014；32:abstr 8010)。很显然，一个具有更高活性和低毒性的化合物会带来更大好处。

阿斯利康AZD9291是一种口服的小分子第三代表皮生长因子络氨酸激酶抑制剂，AZD9291针对耐药突变T790M和敏感突变位点(19Del和L858R)的特异性结合能力较强，因此对于一线TKI治疗后耐药的非小细胞肺癌患者具有很好的治疗效果，但由于其对EGFR野生型也有一定的抑制，因此临床上会产生腹泻、皮疹等副作用。

CO1686是一种治疗EGFR突变型非小细胞肺癌患者的新型、口服、选择性抑制剂，它能够抑制关键激活和T790M耐药突变，它使野生型EGFR信号闲置，并有良好的耐受性，CO1686产生的代谢物对IGF1R及INSR两个靶标有抑制作用，因而临床上副作用表现为高血糖。

发明内容

本发明提供式(II)化合物。

本发明还提供式(II)化合物的A晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：4.55±0.2°，13.84±0.2°，15.97±0.2°，18.91±0.2°。

在本发明的一些方案中，上述A晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：4.55±0.2°，10.21±0.2°，11.35±0.2°，13.84±0.2°，15.97±0.2°，17.22±0.2°，18.91±0.2°，22.54±0.2°。

在本发明的一些方案中，上述A晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：4.55±0.2°，9.27±0.2°，10.21±0.2°，11.35±0.2°，13.84±0.2°，14.45±0.2°，15.97±0.2°，16.58±0.2°，17.22±0.2°，18.91±0.2°，22.54±0.2°，23.67±0.2°。

在本发明的一些方案中，上述A晶型的A晶型，其XRPD图谱如图1所示。

本发明的一些方案中，上述A晶型的XRPD图谱解析数据如表1所示：

表1

在本发明的一些方案中，上述A晶型的差示扫描量热曲线在71.51℃±3℃和154.71℃±3℃处具有吸热峰。

在本发明的一些方案中，上述A晶型的DSC图谱如图2所示。

在本发明的一些方案中，上述A晶型的热重分析曲线在126.44℃±3℃时失重达2.676％，在172.01℃±3℃时失重达2.9411％。

在本发明的一些方案中，上述A晶型的TGA图谱如图3所示。

本发明还提供式(II)化合物A晶型的制备方法，包括：

(a)将式(I)化合物加入溶剂中溶解；

(b)在搅拌下缓慢加入甲磺酸和溶剂的混合溶液；

(c)20～30℃下搅拌8～16小时；

(d)离心后干燥8～16小时；

其中，所述溶剂为四氢呋喃，所述混合溶液中甲磺酸和溶剂的体积比为1:9。

本发明还提供式(II)化合物的B晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：9.89±0.2°，15.46±0.2°，19.60±0.2°，21.44±0.2°.

在本发明的一些方案中，上述B晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：5.00±0.2°，9.89±0.2°，14.86±0.2°，15.46±0.2°，19.60±0.2°，21.44±0.2°，24.64±0.2°。

在本发明的一些方案中，上述B晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：5.00±0.2°，9.89±0.2°，12.00±0.2°，14.86±0.2°，15.46±0.2°，19.60±0.2°，20.11±0.2°，21.44±0.2°，24.05±0.2°，24.64±0.2°。

在本发明的一些方案中，上述B晶型的XRPD图谱如图5所示。

本发明的一些方案中，上述B晶型的XRPD图谱解析数据如表2所示：

表2

在本发明的一些方案中，上述B晶型的差示扫描量热曲线在199.07℃±3℃处具有吸热峰。

在本发明的一些方案中，上述B晶型的DSC图谱如图6所示。

在本发明的一些方案中，上述B晶型的热重分析曲线其热重分析曲线在173.87℃±3℃时失重达0.1283％，在212.74℃±3℃时失重达0.9514％。

在本发明的一些方案中，上述B晶型的TGA图谱如图7所示。

本发明还提供式(II)化合物B晶型的制备方法，包括：

(a)将式(II)化合物加入溶剂中使其成悬浊液；

(b)悬浊液35～45℃下搅拌8～16小时；

(c)离心后干燥8～16小时；

其中，所述溶剂选自丙酮、异丙醇、乙酸乙酯和2-甲基四氢呋喃。

本发明还提供上述化合物或A晶型或B晶型在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

技术效果

本发明对化合物具有较好的PK性质及口服吸收率，其晶型稳定、引湿性良好、受光热影响小。

本发明化合物对敏感突变和双突变的EGFR(敏感和T790M耐药)显示出优良的活性，并对野生型EGFR具有较高选择性。它们对由表皮生长因子受体的酶的异常引起的疾病有可能提供更有效的治疗。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在含有下列含义。一个特定的短语或术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文出现商品名时，旨在指代其对应的商品或其活性成分。

本发明的中间体化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。

下面会通过实施例具体描述本发明，这些实施例并不意味着对本发明的任何限制。

本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。

本发明采用下述缩略词：r.t.代表室温；THF代表四氢呋喃；NMP代表N-甲基吡咯烷酮；MeSO₃H代表甲烷磺酸；DME代表乙二醇二甲醚；DCM代表二氯甲烷；Xphos代表2-双环己基膦-2’4’6’-三异丙基联苯；EtOAc代表乙酸乙酯；MeOH代表甲醇；acetone代表丙酮；2-Me-THF代表2-甲基四氢呋喃；IPA代表异丙醇。

化合物经手工或者

软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

本发明粉末X-射线衍射(X-ray powder diffractometer,XRPD)方法

仪器型号：布鲁克D8advance X-射线衍射仪

测试方法：大约10～20mg样品用于XRPD检测。

详细的XRPD参数如下：

光管：Cu,kα,

光管电压：40kV，光管电流：40mA

发散狭缝：0.60mm

探测器狭缝：10.50mm

防散射狭缝：7.10mm

扫描范围：4-40deg

步径：0.02deg

步长：0.12秒

样品盘转速：15rpm

本发明差热分析(Differential Scanning Calorimeter,DSC)方法

仪器型号：TA Q2000差示扫描量热仪

测试方法：取样品(～1mg)置于DSC铝锅内进行测试，在50mL/min N₂条件下，以10℃/min的升温速率，加热样品从30℃(室温)到300℃(或350℃)。

本发明热重分析(Thermal Gravimetric Analyzer,TGA)方法

仪器型号：TA Q5000IR热重分析仪

测试方法：取样品(2～5mg)置于TGA铂金锅内进行测试，在25mL/min N₂条件下，以10℃/min的升温速率，加热样品从室温到350℃或失重20％。

本发明动态蒸汽吸附分析(Dynamic Vapor Sorption,DVS)方法

仪器型号：SMS DVS Advantage动态蒸汽吸附仪

测试条件：取样品(10～15mg)置于DVS样品盘内进行测试。

详细的DVS参数如下：

温度：25℃

平衡：dm/dt＝0.01％/min(最短：10min，最长：180min)

干燥：0％RH下干燥120min

RH(％)测试梯级：10％

RH(％)测试梯级范围：0％-90％-0％

引湿性评价分类如下：

吸湿性分类	ΔW％
		潮解	吸收足量水分形成液体
极具吸湿性	ΔW％≥15％
		有吸湿性	15％>ΔW％≥2％
略有吸湿性	2％>ΔW％≥0.2％
		无或几乎无吸湿性	ΔW％<0.2％

注：ΔW％表示受试品在25±1℃和80±2％RH下的吸湿增重。

附图说明

图1为(II)化合物A晶型的Cu-Kα辐射的XRPD谱图；

图2为(II)化合物A晶型的DSC谱图；

图3为(II)化合物A晶型的TGA谱图；

图4为(II)化合物A晶型的DVS谱图；

图5为(II)化合物B晶型的Cu-Kα辐射XRPD谱图；

图6为(II)化合物B晶型的DSC谱图；

图7为(II)化合物B晶型的TGA谱图；

图8为(II)化合物B晶型的DVS谱图。

具体实施方式

为了更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例来做进一步的说明，但具体的实施方式并不是对本发明的内容所做的限制。

实施例1：式(I)化合物的制备

步骤1：

N₂保护下，将吡啶(1.74Kg，22.01mol，1.10当量)的二氯甲烷(20L)溶液冷却至-20℃，缓慢滴加三氟甲烷磺酸酐(5.87Kg,20.81mol,1.04当量)，滴加完毕，反应体系在-20℃并搅拌0.5小时，再缓慢滴加2-溴乙醇(2.50Kg,20.01mol,1.0当量)，反应温度维持在0℃以下并搅拌1.0小时，TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)显示反应完成。反应完毕直接将反应体系过滤，将滤液浓缩，再加入石油醚(15L)，将析出的固体过滤，滤液浓缩，得到化合物b(4.80Kg，收率93.33％)为深黄色的油状物。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):4.77(t,J＝6.40Hz,2H),3.63(t,J＝6.40Hz,2H).

步骤2：

将化合物b(8.5Kg，33.07mol，1当量)和二苯硫醚(6.78Kg,36.38mol，1.10当量)置于无水甲苯(22.0L)中,反应混合物在氮气保护下，加热至100℃并搅拌6小时。¹HNMR显示反应完成。将反应体系冷却到室温，并加入甲基叔丁基醚(20L)，析出的固体过滤，滤饼在真空干燥箱中40℃干燥，得到化合物c(7.4Kg,收率为50.48％)为棕色固体。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):8.08-8.15(m,4H),7.69-7.83(m,6H),4.85-4.93(m,2H),3.66-3.72(m,2H).

步骤3：

将化合物c(7.4Kg，16.69mol，1当量)和碳酸氢钾(2.01Kg,20.03mol，1.20当量)置于四氢呋喃(18.2L)和H₂O(9.1L)中,反应混合物在15℃搅拌3小时。¹HNMR显示反应完成。加入H₂O(10L)，水相用DCM萃取(10L*4)，合并有机相并浓缩得到化合物d(5.72Kg,收率为94.57％)为深黄色的油状物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):7.87(d,J＝7.60Hz,8H),7.62-7.78(m,12H),7.48(dd,J＝16.00,8.80Hz,2H),6.68(dd,J＝8.80,1.60Hz,2H),6.53(dd,J＝16.00,2.20Hz,2H).

步骤4：

吲哚-2-羧酸(3Kg，18.62mol，1.0当量)溶于THF(15L)中，在20℃下开始分批加入四氢铝锂(900g，23.7mol，1.3当量)，程序升温至70℃，四氢铝锂加完后，70℃下搅拌3小时，TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)监测反应完全，降温至20℃，缓慢加入水(900mL)，NaOH(1N,900mL)淬灭反应，淬灭完全后，减压抽滤，滤液旋干，得到红褐色的油状物，油状物溶于EA(3L),搅拌状态下，加入石油醚(30L)，溶液中析出淡黄色的固体。过滤，固体用石油醚:乙酸乙酯＝10:1(15L)打浆，减压抽滤，固体在50℃真空干燥箱烘干至恒重得到化合物r(2.14kg，收率：74％)，为淡黄色固体.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.36(br s,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.20(dt,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.15-7.09(m,1H),6.42(d,J＝1.6Hz,1H),4.83(s,2H),1.93(br s,1H).

步骤5：

在N₂保护下，将化合物r(2.14kg,14.04mol，1.0当量)溶于DCM(50L)，降温至0℃，加入KOH(1.97Kg，35.1mol，2.5当量)，0℃下，搅拌30min，将二苯基(乙烯基)锍(6.36Kg，17.54mol，1.25当量)溶于DCM(10L)，缓慢滴加到反应体系中，控制反应温度在0-5℃，滴加完毕，升温至30℃，搅拌5小时，TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)监测反应完全，加水(30L)淬灭反应，分液，有机相用食盐水(60L)洗涤，干燥旋干，得到黑色的油状物，加入DME(1.2L)，在-10℃下搅拌过夜，析出黄色的固体，过滤，固体用DME(1.2L)在-10℃下打浆，过滤，滤饼用石油醚(800mL)在常温下打浆一次，过滤，滤饼真空干燥箱干燥至恒重，得到化合物e为白色的固体(1.1Kg，收率：44.5％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.63-7.57(m,1H),7.31(dd,J＝0.8,8.0Hz,1H),7.21(dt,J＝0.8,8.0Hz,1H),7.18-7.11(m,1H),6.24(d,J＝0.8Hz,1H),5.01(d,J＝0.8Hz,2H),4.22-4.16(m,2H),4.13-4.07(m,2H)

步骤6：

将5-氟-2,4-二氯嘧啶(2.12kg，12.67mol，1.05当量)加入乙二醇二甲醚(10L)的溶液中，将溶液冷却至0-5℃，N₂保护下分批加入三氯化铝(3.22kg，24.13mol，2.0当量)后将反应液在30℃下搅拌下1小时。再将化合物e(3.22kg,24.13mol,1.0当量)缓慢加入上述反应液中，20℃下搅拌15小时，TLC(二氯甲烷：甲醇＝6:1)监测反应完全。将反应液缓慢加入水(40L)中，有大量固体析出，继续搅拌0.5小时后过滤，滤饼加入到甲醇(16L)中，室温打浆1小时，冷却到室温后过滤。滤饼干燥得到化合物g(3.36kg，90％收率)为棕黄色固体。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43–8.42(d,J＝4.0Hz,1H),7.98-7.96(m，1H),7.40-7.32(m，3H),5.28(s,2H),4.27-4.22(m,4H)

LCMS(ESI)(20-80AB):m/z:304.1[M+1].

步骤7：

将30L 1,4-二氧六环加入到50L釜(20℃)，将化合物(f)(3.0kg，9.88mol，1.0当量)，化合物(g)(1.93Kg，10.37mol,1.05当量)，醋酸钯(110.91g，0.494mol，0.05当量)，XPhos(471g，0.988mol，0.1当量)，磷酸钾(4.19Kg，19.76mol，2.0当量)加入反应釜中(20℃)，N₂置换3次。程序升温至100±5℃，取样HPLC中控检测反应完成后，冷却至室温。将反应液减压过滤。滤饼用40L纯化水25±5℃打浆2小时。将滤饼用甲醇(30L)打浆1小时，滤饼在50℃条件下真空干燥至恒重。得到化合物i(4.18kg，91.6％收率)为黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89(d,J＝8.0Hz,1H)，8.59(d,J＝1.92Hz,1H)，8.50(s,1H)，7.78(dd,J＝7.2,3.58Hz,1H)，7.55(d,J＝8.0Hz,1H)，7.37(d,J＝13.30Hz,1H)，7.17-7.29(m,2H)，5.11(s,2H)，4.21(br dd,J＝12.99,4.83Hz,4H)，4.02(s,3H).LCMS(ESI)(20-80AB):m/z:454.2[M+1].

步骤8：

将10.4L N-甲基吡咯烷酮加入到50L釜(20℃)，将化合物(h)(4.15kg，9.15mol，1.0当量)，N,N,N-三甲基乙二胺(1.12Kg，10.98mol,1.2当量)，碳酸钾(2.53Kg，18.30mol，2.0当量)加入反应釜中(20℃)。程序升温至100±5℃，取样HPLC中控检测反应完成后，冷却至25±5℃。将10.4L纯化水滴加至上述溶液中，析出大量红色固体。减压抽滤，将滤饼用纯化水(20L)洗涤滤饼至滤液无色，滤饼用20L甲醇25±5℃打浆1小时，减压抽滤，滤饼在50℃条件下真空干燥至恒重。得到化合物k(4.26kg，86.4％收率)为红色固体。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.06(s,1H)，8.35(d,J＝2.89Hz,1H)，7.91(br,dd,J＝4.96,3.70Hz,1H)，7.54(s,1H)，7.35-7.43(m,1H)，7.27-7.33(m,3H)，6.69(s,1H)，5.29(s,2H)，4.30(t,J＝5.08Hz,2H)，4.22(t,J＝5.14Hz,2H)，4.00(s,3H)，3.28(t,J＝7.15Hz,2H)，2.89(s,3H)，2.57(t,J＝7.15Hz,2H)，2.28(s,6H)，1.69(s,3H).LCMS(ESI)(20-80AB):m/z:536.3[M+1].

步骤9：

将NMP(6L)加入到10L高压釜中(室温)，将0.75kg化合物(l)加入反应釜中(室温)，N₂鼓泡～5min。将75g湿Pd-C(50％)加入反应液中，用H₂气置换4次。调整反应压力至2.0MPa，搅拌条件下，将反应升温至25℃。在25℃下，搅拌20小时(当R1压力小于1.5MPa时，补加H₂至2.0MPa)后，中控取样检测(HPLC)，取样检测(取样方法：取0.1mL溶于1mL MeOH)。停止反应，然后将高压釜压力降至常压；反应液通过硅藻土(750g)减压过滤；滤饼用6L DCM洗涤1次，滤液用Aq.HCl(1M，0.4L)调节pH＝1；向滤液中加入DCM(6L x 5)萃取，TLC检测(取样方法：直接取水相0.1ml；展开剂：DCM/MeOH＝10：1,碘显色，基本看不到NMP)。水相加NaOH(5M)调节pH至5，有固体析出，继续搅拌0.5h。减压抽滤，滤饼用水洗涤，收集滤饼。固体在50℃真空干燥48小时得到化合物l。¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ,8.55(s,1H),8.41(d,J＝3.14Hz,1H),7.83-7.89(m,1H),7.49(dd,J＝7.22,1.19Hz,1H),7.27(ddd,J＝8.82,7.62,1.13Hz,2H),7.16(s,1H),5.14(s,2H),4.18-4.30(m,4H),4.04(s,3H),3.37-3.49(m,4H),2.92(s,6H),2.74(s,3H)LCMS(ESI)(20-80AB):m/z:506.4[M+1].

步骤10：

将10L纯化水、458.76g NaHCO₃、15L二氯甲烷加入50L反应釜中，室温下搅拌至固体溶清。缓慢加入化合物(J)1.48Kg，搅拌10min后，反应液静置10min分层。有机相二氯甲烷层用饱和食盐水洗涤2次(10L x 2)。无水硫酸钠干燥。将有机层旋干，得棕色固体1.26Kg。将游离胺(1.26Kg,2.49mol,1.0当量)用12.6L DME和1.26L纯化水溶解并转移至50L高压釜中，降温至-5-0℃，将氯丙酰氯(347.77g，2.74mol，1.1当量)缓慢滴加至上述溶液中，滴加完毕。继续搅拌0.5小时。LCMS 20-80AB 35MIN监测原料剩余小于1％，反应完成。将氢氧化钠(398.74g，9.96mol，4.0当量)加入上述溶液中，升温至70℃，搅拌6-8小时，反应完全。将反应液降至室温。反应液倒入65L纯化水中，析出大量棕色固体，减压抽滤，滤饼真空干燥24小时至恒重，得式(I)化合物棕色固体(1.16Kg，收率78％).¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ,10.12(s,1H),9.45(s,1H),8.39(d,J＝3.01Hz,1H),7.88-7.96(m,1H),7.55(s,1H),7.24-7.40(m,4H),6.81(s,1H),6.25-6.45(m,2H),5.68(dd,J＝9.79,2.01Hz,1H),5.31(s,2H),4.14-4.27(m,4H),3.90(s,3H),2.86-2.92(m,2H),2.73(s,3H),2.25-2.32(m,8H)LCMS(ESI)(20-80AB):m/z:560.3[M+1].

实施例2：式(II)化合物的制备

将8L丙酮加入至50L反应釜中，室温下将式(I)化合物(1.10Kg,1.97mol，1.0当量)加入反应釜中，搅拌至溶解澄清，将硫脲树脂(220.44g，20％质量比)加入到上述反应液中，25℃搅拌过夜，减压抽滤，滤饼用3L丙酮洗涤。合并丙酮，将溶液转移至50L反应釜中，升温至65℃，恒压滴液漏斗缓慢滴加甲烷磺酸(185.34g，1.93mol，0.98当量)，滴加完毕，溶液澄清。30min后，溶液析出类白色固体。保温搅拌2小时，降温至25℃。N₂保护下减压抽滤，滤饼真空干燥箱干燥至恒重，得式(II)化合物为棕色固体(965g，收率73％).¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ,8.37(s,1H),8.34(d,J＝3.07Hz,1H),7.87(dd,J＝7.78,3.14Hz,1H),7.44(d,J＝7.91Hz,1H),7.15-7.26(m,2H),6.96(s,1H),6.42-6.55(m,2H),5.86(dd,J＝8.72,3.07Hz,1H),5.05(s,2H),4.13-4.22(m,4H),4.00(s,3H),3.49(t,J＝5.65Hz,2H),3.28(t,J＝5.71Hz,2H),2.87(s,6H),2.72(d,J＝1.51Hz,6H).LCMS(ESI)(20-80AB):m/z:560.3[M+1].

实施例3：式(II)化合物A晶型的制备

取120mg的式(I)化合物，加入0.5mL四氢呋喃溶解，然后在搅拌下缓慢加入0.14mL的甲磺酸-四氢呋喃溶液(V/V,1:9)。25℃下搅拌过夜后离心，残留固体样品置于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得式(II)化合物的A晶型。

实施例4：式(II)化合物B晶型的制备

称取50mg式(II)化合物加入到4.0mL玻璃小瓶中，加入适量的丙酮使其成悬浊液。加入磁子后，将上述悬浊液样品置于磁力加热搅拌器上(40℃)进行试验(避光)，40℃下搅拌过夜后离心，残留固体样品置于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得式(II)化合物的B晶型。

称取50mg式(II)化合物加入到4.0mL玻璃小瓶中，加入适量的异丙醇使其成悬浊液。加入磁子后，将上述悬浊液样品置于磁力加热搅拌器上(40℃)进行试验(避光)，40℃下搅拌过夜后离心，残留固体样品置于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得式(II)化合物的B晶型。

称取50mg式(II)化合物加入到4.0mL玻璃小瓶中，加入适量的乙酸乙酯使其成悬浊液。加入磁子后，将上述悬浊液样品置于磁力加热搅拌器上(40℃)进行试验(避光)，40℃下搅拌过夜后离心，残留固体样品置于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得式(II)化合物的B晶型。

称取50mg式(II)化合物加入到4.0mL玻璃小瓶中，加入适量的2-甲基四氢呋喃使其成悬浊液。加入磁子后，将上述悬浊液样品置于磁力加热搅拌器上(40℃)进行试验(避光)，40℃下搅拌过夜后离心，残留固体样品置于真空干燥箱中(30℃)干燥过夜，得式(II)化合物的B晶型。

室温条件下，将式(II)化合物(700g)、无水乙醇(5.6L)加入到反应釜中。搅拌并升温至85℃至固体全部溶清。将正庚烷(3.5L)缓慢加入至反应釜中，溶液中析出部分固体。保温搅拌1小时，反应液降温至25℃。N₂保护下减压抽滤，固体真空干燥箱干燥至恒重。将固体和7L丙酮加入至反应釜中，搅拌并升温至内温60℃搅拌12-40小时转晶，转晶完成后，降温至室温。N₂保护下减压抽滤，滤饼真空干燥箱中干燥至恒重，得式(II)化合物的B晶型(530g，收率75％).¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ,8.37(s,1H),8.34(d,J＝3.07Hz,1H),7.87(dd,J＝7.78,3.14Hz,1H),7.44(d,J＝7.91Hz,1H),7.15-7.26(m,2H),6.96(s,1H),6.42-6.55(m,2H),5.86(dd,J＝8.72,3.07Hz,1H),5.05(s,2H),4.13-4.22(m,4H),4.00(s,3H),3.49(t,J＝5.65Hz,2H),3.28(t,J＝5.71Hz,2H),2.87(s,6H),2.72(d,J＝1.51Hz,6H).LCMS(ESI)(20-80AB):m/z:560.3[M+1].

实施例5：式(II)化合物A晶型的吸湿性研究

实验材料：

SMS DVS Advantage动态蒸汽吸附仪

实验方法：

取式(II)化合物A晶型10～15mg置于DVS样品盘内进行测试。

实验结果：

式(II)化合物A晶型的DVS谱图如图4所示，△W＝7.86％。

实验结论：

式(II)化合物A晶型在25℃和80％RH下的吸湿增重为7.86％，有吸湿性。

实施例6：式(II)化合物B晶型的吸湿性研究

实验材料：

SMS DVS Advantage动态蒸汽吸附仪

实验方法：

取式(II)化合物B晶型10～15mg置于DVS样品盘内进行测试。

实验结果：

式(II)化合物B晶型的DVS谱图如图8所示，△W＝0.830％。

实验结论：

式(II)化合物B晶型在25℃和80％RH下的吸湿增重为0.83％，略有吸湿性。

实施例7：式(II)化合物B晶型的固体稳定性试验

依据《原料药与制剂稳定性试验指导原则》(中国药典2015版四部通则9001)，考察式(II)化合物B晶型在高温(60℃，敞口)，高湿(室温/相对湿度92.5％，敞口)及强光照(5000lx，密闭)条件下的稳定性。

称取式(II)化合物B晶型15mg，置于玻璃样品瓶的底部，摊成薄薄一层。高温及高湿条件下放置的样品用铝箔纸封瓶口，并在铝箔纸上扎些小孔，保证样品能与环境空气充分接触；强光照条件下放置的样品用螺纹瓶盖密封。不同条件下放置的样品于第5天，10天取样检测(XRPD)，检测结果与0天的初始检测结果进行比较，试验结果见下表3所示：

表3式(II)化合物B晶型的固体稳定性试验结果

结论：式(II)化合物B晶型在高温、高湿、强光照条件下具有良好的稳定性。

式(II)化合物B晶型在NCI-H1975异种移植(CDX)模型的体内药效研究

实验材料：

BALB/c裸鼠，雌性，6-8周，体重约18-22克，将小鼠保持在一个特殊的无病原体的环境中，且在单个通风笼中(10只小鼠每笼)。所有的笼子，铺垫和水在使用前进行消毒。所有的动物都可以自由获取标准认证的商业实验室饮食。共有100只购于北京维通利华的小鼠用于研究。每只小鼠在右胁腹皮下植入肿瘤组织(20-30立方毫米)，用于肿瘤的生长。当平均肿瘤体积达到约140-200立方毫米时开始实验。实验方法：

皮下植入NCI-H1975肺癌患者来源的异种移植(CDX)BALB/c裸小鼠上进行体内药效。实验将受试化合物每日口服给药，连续给药21天。肿瘤体积一周两次用二维卡尺测量，体积以立方毫米计量，通过以下公式计算：V＝V＝0.5a x b2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。抗肿瘤药效是通过用化合物处理过的动物的平均肿瘤增加体积除以未处理过动物的平均肿瘤增加体积来确定。

实验结果：见表4。

表4

实验结论：

式(II)化合物B晶型(12mg/Kg)具有和AZD9291(3mg/Kg)、CO1686(50mg/Kg)相当的抑制肿瘤活性。

式(II)化合物B晶型在A431异种移植(CDX)模型的体内药效研究

实验材料：

BALB/c裸鼠，雌性，6-8周，体重约18-20克，将小鼠保持在一个特殊的无病原体的环境中，且在单个通风笼中(5只小鼠每笼)。所有的笼子，铺垫和水在使用前进行消毒。所有的动物都可以自由获取标准认证的商业实验室饮食。所有实验用小鼠均购于上海BKLaboratory Animal Co.,LTD的小鼠用于研究。每只小鼠在右胁腹皮下植入肿瘤组织(20-30立方毫米)，用于肿瘤的生长。当平均肿瘤体积达到约150-200立方毫米时开始实验

实验方法：

在皮下植入人皮肤鳞状细胞A431异种移植(CDX)BALB/c裸小鼠上进行体内选择性实验。

将试验化合物口服给药连续给药11天。肿瘤体积一周两次用二维卡尺测量，体积以立方毫米计量，通过以下公式计算：V＝V＝0.5a x b2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。抗肿瘤药效是通过用化合物处理过的动物的平均肿瘤增加体积除以未处理过动物的平均肿瘤增加体积来确定。

实验结果：见表5。

表5

实验结论：

式(II)化合物B晶型(12mg/Kg)具有比AZD9291(3mg/Kg)更优的选择性。

Claims (8)

1.式(II)化合物的B晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：5.00±0.2°，9.89±0.2°，10.04±0.2°，12.00±0.2°，14.86±0.2°，15.46±0.2°，19.60±0.2°，20.11±0.2°，21.44±0.2°，24.05±0.2°，24.64±0.2°，24.82±0.2°

2.根据权利要求1所述的B晶型，其XRPD图谱如图5所示。

3.根据权利要求1或2所述的B晶型，其差示扫描量热曲线在199.07℃±3℃处具有吸热峰。

4.根据权利要求3所述的B晶型，其DSC图谱如图6所示。

5.根据权利要求1或2所述的B晶型，其热重分析曲线在173.87℃±3℃时失重达0.1283，在212.74℃±3℃时失重达0.9514。

6.根据权利要求5所述的B晶型，其TGA图谱如图7所示。

7.根据权利要求1～6所述的式(II)化合物B晶型的制备方法，包括：

(a)将式(II)化合物加入溶剂中使其成悬浊液；

(b)悬浊液35～45℃下搅拌8～16小时；

(c)离心后干燥8～16小时；

其中，所述溶剂选自丙酮、异丙醇、乙酸乙酯和2-甲基四氢呋喃。

8.根据权利要求1～6所述B晶型在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应用。

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