KR20220116522A

KR20220116522A - 증식성 질환의 치료를 위한 항-tgf-베타 항체 및 체크포인트 억제제의 용도

Info

Publication number: KR20220116522A
Application number: KR1020227024758A
Authority: KR
Inventors: 미렉 도스탈렉; 클레어 파브르; 파리바 칸샨
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2019-12-20
Filing date: 2020-12-03
Publication date: 2022-08-23
Also published as: IL293889A; JP2023506958A; CA3165399A1; CN115052662A; JP2023507190A; MX2022007761A; IL293834A; KR20220116257A; CL2022001708A1; US20230056470A1; TW202135859A; WO2021123902A1; AU2020406350A1; CN115175937A; EP4077389A1; EP4076660A1; BR112022011902A2; WO2021123996A1; MX2022007759A; CA3165274A1

Abstract

TGF-β 억제제 및/또는 PD-1 억제제를 사용한 치료법이 개시된다. 특정 용량(균일 용량 포함) 및 요법에서 이러한 약물은 췌장암을 포함한 고형 종양과 같은 증식성 질환을 치료하거나 방지하는 데 사용할 수 있다. 이의 추가 조합 및 용도가 또한 개시된다.

Description

증식성 질환의 치료를 위한 항-TGF-베타 항체 및 체크포인트 억제제의 용도

상호 참조

본 출원은 2019년 12월 20일에 출원된 미국 가출원 제62/951,632호, 2020년 2월 18일에 출원된 미국 가출원 제62/978,267호, 2020년 7월 22일에 출원된 미국 가출원 제63/055,230호, 2020년 10월 11일에 출원된 미국 가출원 제63/090,259호, 2020년 10월 11일에 출원된 미국 가출원 제63/090,264호 및 2020년 11월 23일에 출원된 미국 가출원 제63/117,206호의 우선권 이익을 청구하며, 모든 출원의 내용은 그 전체가 참조로 포함된다.

참조에 의한 포함

본 출원에 인용된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 및 다른 문헌은 각각의 개별 간행물, 특허, 특허 출원 또는 다른 문헌이 모든 목적을 위해 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 나타내는 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 본원에 포함된 참고문헌 중 하나 이상의 교시와 본 개시 사이에 불일치가 있는 경우에, 본 명세서의 교시로 의도한다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 형식으로 전자 제출되었고 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2020년 11월 29일에 생성된 ASCII 복사본은 PAT058932_SL.txt로 명명되고 크기는 360,965 바이트이다.

전환 성장 인자 베타(TGFβ) 단백질 패밀리는 포유류에서 확인되는 3개의 구별되는 이소형(TGFβ1, TGFβ2 및 TGFβ3)으로 구성된다. TGFβ 단백질은 세포 증식, 염증 및 심혈관 병태를 포함하는 질환 상태에 영향을 미치는 여러 유전자 반응을 활성화하고 조절한다. TGFβ는 원래 정상 섬유아세포를 부착-무관 성장이 가능한 세포로 개질시키는 능력으로 인해 명명된 다기능 사이토카인이다. TGFβ 분자는 주로 조혈 및 종양 세포에 의해 생성되며 다양한 정상 및 신생물 조직 기원 둘 다로부터의 세포 성장 및 분화를 조절, 즉 자극하거나 억제할 수 있고(Sporn et al., Science, 233: 532 (1986)), 다양한 간질 세포의 형성 및 증식을 자극할 수 있다.

TGFβ는 세포 증식 및 분화, 배아 발생, 세포외 기질 형성, 뼈 발달, 상처 치유, 조혈, 그리고 면역 및 염증 반응과 같은 많은 증식 및 비증식 세포 공정에 관여하는 것으로 알려져 있다. 예를 들어 문헌[Pircher et al, Biochem. Biophys. Res. Commun., 136: 30-37 (1986); Wakefield et al., Growth Factors, 1: 203-218 (1989); Roberts and Sporn, pp 419-472 in Handbook of Experimental Pharmacology eds M. B. Sporn & A. B. Roberts (Springer, Heidelberg, 1990); Massague et al., Annual Rev. Cell Biol., 6: 597-646 (1990); Singer and Clark, New Eng. J . Med., 341: 738-745 (1999)]을 참고한다. 또한, TGFβ는 장 점막 질환의 치료 및 방지에서 사용된다(WO 2001/24813). TGFβ는 또한 세포독성 T 림프구(CTL) 억제(Ranges et al., J . Exp. Med., 166: 991, 1987), Espevik et al., J . Immunol., 140: 2312, 1988), 억제된 B 세포 림프구 형성 및 카파 경쇄 발현(Lee et al., J . Exp. Med., 166: 1290, 1987), 조혈의 음성적 조절(Sing et al., Blood, 72: 1504, 1988), 종양 세포 상에서 HLA-DR 발현의 하향조절(Czarniecki et al., J . Immunol., 140: 4217, 1988), 및 B-세포 성장 인자에 반응하는 항원-활성화 B 림프구의 증식 억제(Petit-Koskas et al., Eur. J. Immunol., 18: 111, 1988)를 포함하여, 다양한 면역학적 세포 유형 상에서 강력한 면역억제 효과를 갖는 것으로 알려져 있다. 또한 미국 특허 7,527,791을 참고한다.

다양한 질환 및 의학적 병태를 표적화하기 위한 TGFβ 억제제, 예컨대 항-TGFβ 항체 사용에 대해 충족되지 않은 요구가 존재한다. 또한, 투약 편의성을 유지하면서 다양한 질환 및 의학적 병태(증식성 질환 포함)를 효과적으로 치료할 수 있는 방식으로 이러한 TGFβ 억제제를 투여할 필요성이 있다.

대상체에서 증식성 질환을 치료하는 방법이 본원에 개시되어 있다. 증식성 질환의 치료는 대상체에 TGF-β 억제제를 약 16 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 이들이 증식성 질환이 있음을 인지할 수 있으며, 예를 들어 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 각각 서열번호 1, 2 및 3의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 서열번호 4, 5, 및 6의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 추가로, 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 각각 아미노산 서열 서열번호 7 및 8에서 제시된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 본질적으로 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄로 구성된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄로 구성된다.

TGF-β 억제제는 때때로 상이한 용량으로 투여될 수 있다. 이러한 용량은 암 또는 기타 고형 종양과 같은 증식성 질환을 방지하거나, 치료하거나, 완화시키는 데 효과적일 수 있다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 20 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 30 mg/kg의 용량으로 투여된다.

치료받는 대상체는 체중이 다를 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 50 kg 내지 90 kg일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 70 kg일 수 있다.

TGF-β 억제제는 또한 고정 용량으로 대상체에 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1200 mg 내지 약 1600 mg의 용량으로 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1900 mg 내지 약 2300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2100 mg의 용량으로 투여된다.

TGF-β 억제제는 상이한 간격으로 1회 초과 투여될 수 있다. 예를 들어, TGF-β 억제제는 1주 1회, 2주 1회, 3주 1회 또는 4주 1회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 1주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 2주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 3주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 4주 1회 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 20분 내지 약 40분의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 30분의 기간에 걸쳐 투여된다.

대상체에 투여되는 TGF-β 억제제는 화학 소분자, 핵산 또는 단백질과 같은 임의의 형태일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 단일특이적 항체이다. 일부 구현예에서, TGF-β 항체는 다중특이적 항체이다. TGF-β 항체가 다중특이적인 경우, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 삼중특이적 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 4개 이상의 표적에 특이적으로 결합할 수 있다.

본원에 기재된 치료 방법은 또한 TGF-β 억제제와 조합하여 체크포인트 억제제를 대상체에 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 체크포인트 억제제는 PD1 억제제이다. PD1 억제제는 화학 소분자, 핵산 또는 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, PD1 억제제는 항-PD1 항체이다. 예를 들어, 항-PD1 항체는 스파르탈리주맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, BGB-A317, BGB-108, INCSHR1210, AMP-224, 또는 이의 임의의 조합일 수 있다.

일부 구현예에서, 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체이다. 예를 들어, 스파르탈리주맙은 항-PD1 항체로 사용될 수 있다. 스파르탈리주맙이 사용되는 경우, 이는 균일 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 스파르탈리주맙은 약 300 mg 또는 약 400 mg으로 투여된다. 추가 구현예에서, 스파르탈리주맙은 1주 1회, 2주 1회, 3주 1회, 또는 4주 1회 투여된다. 예를 들어, 스파르탈리주맙은 3주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 스파르탈리주맙은 4주 1회 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, PD1 억제제는 정맥내 투여된다.

조합 치료의 경우, 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제와 동일한 날에 투여된다. 다른 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제가 투여되기 전에 투여된다. 추가 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제가 투여된 후에 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 (부분적 또는 완전한) 관해 시까지 하나 이상의 투약 주기 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 억제제는 (부분적 또는 완전한) 관해 시까지 하나 이상의 투약 주기 동안 투여된다

기재된 방법은 증식성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 증식성 질환은 암(예를 들어, 고형 종양)이다. 일부 구현예에서, 암은 골수섬유증, 골수이형성 증후군(예를 들어, 저위험 또는 고위험 골수이형성 증후군), 백혈병, 림프종, 골수종, 폐암, 위장관암, 피부암, 난소암, 중피종, 방광암, 연조직 육종, 골암, 신장암, 간암, 담관암종, 육종, 전립샘암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 결장직장암, 비인두암, 십이지장암, 자궁내막암, 췌장암, 두경부암, 항문암, 위식도암, 갑상샘암, 자궁경부암 또는 신경내분비 종양이다. 기재된 방법에 의해 치료받을 수 있는 암의 유형은 췌장암일 수 있다. 일부 구현예에서, 췌장암은 췌관 샘암종(PDAC)이다. 일부 구현예에서, 기재된 방법에 의해 치료받을 수 있는 암의 유형은 위장관암일 수 있다. 일부 구현예에서, 위장관암은 결장직장암이다. 일부 구현예에서, 기재된 방법에 의해 치료받을 수 있는 암의 유형은 골수섬유증일 수 있다. 일부 구현예에서, 기재된 방법에 의해 치료받을 수 있는 암의 유형은 골수이형성 증후군일 수 있다. 일부 구현예에서, 기재된 방법에 의해 치료받을 수 있는 암의 유형은 유방암일 수 있다. 예를 들어, 유방암은 삼중 음성 유방암일 수 있다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제 및/또는 체크포인트 억제제는 관해 시까지 하나 이상의 투약 주기 동안 투여된다.

일부 구현예에서, 방법은 하나 이상의 항암 치료법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 항암 치료법은 화학치료법, 표적 치료법(예를 들어, 항체 또는 CAR T), 방사선, 본원에 기재된 임의의 치료법이다. 일부 구현예에서, 항암 치료법은 표준 케어 치료법이다.

이를 필요로 하는 대상체에 2주 1회 2100 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는 췌관 샘암종을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 여기서 TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다.

이를 필요로 하는 대상체에 3주 1회 2100 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는 췌관 샘암종을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 여기서 TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다.

이를 필요로 하는 대상체에 2주 1회 2100 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는 결장직장암을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 여기서 TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다.

이를 필요로 하는 대상체에 3주 1회 2100 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는 결장직장암을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 여기서 TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다.

이를 필요로 하는 대상체에 2주 1회 1400 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는 췌관 샘암종을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 여기서 TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다.

이를 필요로 하는 대상체에 3주 1회 1400 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는 결장직장암을 치료하는 방법이 본원에 개시되며, 여기서 TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다.

일부 구현예에서, 방법은 3주 1회 약 300 mg의 용량으로 스파르탈리주맙을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 4주 1회 약 400 mg의 용량으로 스파르탈리주맙을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

TGF-β 항체 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물이 본원에 개시되며, 여기서 TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, TGF-β 항체는 100 mg/mL의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 pH 5.5에서 20 mM 농도의 히스티딘 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 220 mM 농도의 수크로스를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 포함한다.

본 발명의 기타 특징, 목적 및 장점은 이러한 설명 및 도면으로부터, 그리고 청구범위로부터 명백할 것이다.

도 1은 주기 1에 대한 NIS793의 각각의 용량 코호트에 대한 평균 농도-시간 프로파일을 나타낸다.
도 2는 주기 3에 대한 NIS793의 각각의 용량 코호트에 대한 평균 농도-시간 프로파일을 나타낸다.

면역계는 암세포의 조기 검출 및 파괴를 담당한다. 암 세포는 감소된 면역 인식, 면역 세포에 의한 공격에 대해 증가된 내성과 같은 다양한 기전을 통해 또는 면역억제성 종양 미세환경으로 인해 면역 감시를 회피할 수 있다(Mittal et al 2014). 일부 암은 강력한 면역억제 사이토카인인 TGFβ를 생성하며, 이는 세포독성 림프구를 길항하고 종양 성장 및 진행을 선호하는 억제성 면역 세포의 모집을 촉진한다(Wojtowicz-Praga-2003, Teicher 2007, Yang et al 2010).

TGFβ는 뼈 형태형성 단백질(BMP), 성장 및 분화 인자, 액티빈 및 인히빈을 포함하는 구조적으로 관련된 사이토카인의 큰 패밀리에 속한다. 포유류에서 발현되는 TGFβ 리간드에는 TGFβ1, 2, 및 3의 3가지 이소형이 존재한다. 정상 조건 하에, TGF-β는 항상성을 유지하고 항-증식 및 아폽토시스 반응의 유도를 통해 상피, 내피, 신경, 및 조혈 세포 계통의 성장을 제한한다. 따라서 TGFβ 신호 전달 경로의 변경은 심혈관 질환, 섬유증, 생식 장애, 상처 치유 및 암을 포함하는 인간 질환에 관여되는 것으로 여겨진다(Wakefield and Hill 2013).

NIS793은 완전 인간 IgG2, 인간/마우스 교차 반응성, TGF-β-중화 항체이다. NIS793은 리간드 수용체 수준에서 작용한다. 모든 TGFβ 이소형을 중화하는 범 TGFβ 억제제인 프레솔리무맙에 비해, NIS793은 TGFβ1 및 2를 보다 특이적으로 길항하고 TGFβ3은 더 적은 정도로 길항한다.

면역 감시를 회피하기 위해, 암 세포는 PD-1/PD-L1 축과 같은 T 세포 활성화를 엄격하게 조절하는 면역 체크포인트 경로를 추가로 이용할 수 있다(Pardoll 2012). 따라서 단독 또는 면역 체크포인트 차단과 조합된 TGFβ의 길항 작용은 보다 강력한 항종양 면역성을 자극할 수 있다.

정의

추가 용어가 아래에서 그리고 본 출원에 걸쳐 정의된다.

본원에서 사용되는 관사(“a” 및 “an”)는 관사의 문법상 목적어 중 하나 이상(예를 들어, 적어도 하나)을 나타낸다.

용어 "또는"은 맥락 상 명확히 달리 나타내지 않는 한, 용어 "및/또는"을 의미하는 것으로 본원에서 사용되고, 이와 상호 교환적으로 사용된다.

"약" 및 "대략"은 측정의 성질 또는 정확도를 고려하여, 측정된 양에 대해 허용되는 오차의 정도를 의미한다. 예시적인 오차의 정도는 주어진 값 또는 값의 범위의 20% 이내, 전형적으로 10% 이내, 보다 전형적으로 5% 이내이다. 일부 구현예에서, 수치가 용어 "약"을 언급할 때 수치는 정확한 수치 값도 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, "약 10"은 값 10을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한 10 ± 2, 10 ± 1 또는 10 ± 0.5도 포함한다.

"조합" 또는 "와 조합하여"는 치료법 또는 치료제가 동시에 투여되고/되거나 함께 전달되도록 제형화되어야 함을 시사하려 의도하는 것은 아니지만, 이들 전달 방법은 본원에 기재된 범위 내에 있다. 조합된 치료제는 하나 이상의 다른 추가 치료법 또는 치료제와 동시에, 그 전에, 또는 그 후에 투여될 수 있다. 치료제 또는 치료 프로토콜은 임의의 순서로 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 작용제는 그러한 작용제에 대해 결정된 용량으로 그리고/또는 시간 스케줄로 투여될 것이다. 상기 조합에서 이용되는 추가 치료제는 단일 조성물로 함께 투여되거나 상이한 조성물로 별도로 투여될 수 있음이 추가로 이해될 것이다. 치료제는 임의의 순서로 투여될 수 있다. 제1 제제와 추가 제제(예를 들어, 제2, 제3 제제)는 동일한 투여 경로를 통해 또는 상이한 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 일반적으로, 조합하여 이용되는 추가 치료제는 개별적으로 이용되는 수준을 초과하지 않는 수준으로 이용될 것으로 예상된다. 일부 구현예에서, 조합하여 이용되는 수준은 개별적으로 이용되는 수준보다 더 낮을 것이다.

일부 구현예에서, 추가 치료제는 치료적 용량으로 또는 치료적 용량보다 낮은 용량으로 투여된다. 특정 구현예에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제2 치료제의 농도는 제2 치료제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자)가 개별적으로 투여될 때보다 제2 치료제가 제1 치료제(예를 들어 항-TGFβ 항체 분자)와 조합하여 투여될 때 더 낮다. 특정 구현예에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제1 치료제의 농도는 제1 치료제가 개별적으로 투여될 때보다 제1 치료제가 제2 치료제와 조합하여 투여될 때 더 낮다. 특정 구현예에서, 조합 치료법에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제2 치료제의 농도는 단일 치료법으로의 제2 치료제의 치료적 용량보다 낮으며, 예를 들어 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 또는 80% 내지 90% 더 낮다. 특정 구현예에서, 조합 치료법에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제1 치료제의 농도는 단일 치료법으로의 제1 치료제의 치료적 용량보다 낮으며, 예를 들어 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 또는 80% 내지 90% 더 낮다.

용어 "억제", "억제제", 또는 "길항제"는 주어진 분자(예를 들어 면역 체크포인트 억제제 또는 TGFβ 억제제)의 특정 파라미터, 예를 들어 활성의 감소를 포함한다. 예를 들어, 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40% 이상의 활성, 예를 들어 TGFβ, PD-1 또는 PD-L1 활성의 억제가 이 용어에 의해 포함된다. 따라서, 억제가 100%일 필요는 없다.

용어 "활성화", "활성화제", 또는 "작용제"는 주어진 분자(예를 들어 공동자극 분자)의 특정 파라미터, 예를 들어 활성의 증가를 포함한다. 예를 들어, 적어도 5%, 10%, 25%, 50%, 75% 이상의 활성, 예를 들어 공동자극 활성의 증가가 이 용어에 의해 포함된다.

용어 "항암 효과"는, 예를 들어 종양 부피의 감소, 암 세포 수의 감소, 전이 수의 감소, 기대 수명의 증가, 암 세포 증식의 감소, 암 세포 생존의 감소, 또는 암성 병태와 연관된 다양한 생리적 증상의 완화를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 다양한 수단에 의해 발현될 수 있는 생물학적 효과를 나타낸다. "항암 효과"는 또한 먼저 암 발생의 방지에서의 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 세포 및 항체의 능력에 의해 발현될 수 있다.

용어 "항종양 효과"는, 예를 들어 종양 부피의 감소, 종양 세포 수의 감소, 종양 세포 증식의 감소, 또는 종양 세포 생존의 감소를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 다양한 수단에 의해 발현될 수 있는 생물학적 효과를 나타낸다.

용어 "암"은 비정상 세포의 급속하고 제어되지 않은 성장을 특징으로 하는 질환(예를 들어, 증식성 질환)을 나타낸다. 암 세포는 국소적으로 또는 혈류 및 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 확산될 수 있다. 다양한 암의 예가 본원에 기재되며, 예를 들어 폐암, 유방암, 전립샘암, 난소암, 자궁경부암, 피부암, 췌장암, 결장직장암, 신암, 간암, 및 뇌암, 그리고 조혈 악성물, 예를 들어 림프종 및 백혈병 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 "종양" 및 "암"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 예를 들어 두 용어는 모두 고형 및 액상, 예를 들어 미만성 또는 순환성 종양을 포괄한다. 본원에서 사용되는 용어 "암" 또는 "종양"은 악성 암 및 종양뿐만 아니라 전암성 암 및 종양을 포함한다.

용어 "항원 제시 세포" 또는 "APC"는 그의 표면 상에 주조직 적합성 복합체(MHC)와 복합체화된 외래 항원을 디스플레이하는 면역계 세포, 예컨대 보조 세포(예를 들어 B-세포, 수지상 세포 등)를 나타낸다. T 세포는 T 세포 수용체(TCR)를 사용하여 이들 복합체를 인식할 수 있다. APC는 항원을 프로세싱하여 T 세포에 제시한다.

용어 "공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합하여, T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대 증식(그러나 이에 제한되지 않음)을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너를 나타낸다. 공동자극 분자는 효율적인 면역 반응에 필요한 항원 수용체 또는 이의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 공동 자극 분자는 MHC 클래스 I 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구성 활성화 분자(SLAM 단백질), 활성화 NK 세포 수용체, BTLA, Toll 리간드 수용체, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), 4-1BB(CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS(CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM(LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80(KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8 알파, CD8 베타, IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a 및 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에서 사용되는 용어 "면역 효과기 세포" 또는 "효과기 세포"는 면역 반응, 예를 들어 면역 효과기 반응의 촉진에 관여되는 세포를 나타낸다. 면역 효과기 세포의 예는 T 세포, 예를 들어 알파/베타 T 세포 및 감마/델타 T 세포, B 세포, 자연 살해(NK) 세포, 자연 살해 T(NKT) 세포, 비만 세포, 및 골수-유래 식세포를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "면역 효과기” 또는 “효과기” “기능” 또는 “반응"은, 예를 들어 표적 세포의 면역 공격을 증강시키거나 촉진하는 면역 효과기 세포의, 기능 또는 반응을 나타낸다. 예를 들어 면역 효과기 기능 또는 반응은 표적 세포의 사멸을 촉진하거나 이의 성장 또는 증식을 억제하는 T 또는 NK 세포의 특성을 나타낸다. T 세포의 경우에, 일차 자극 및 공동자극이 면역 효과기 기능 또는 반응의 예이다.

용어 "효과기 기능"은 특화된 세포 기능을 나타낸다. T 세포의 효과기 기능은, 예를 들어 사이토카인의 분비를 포함하는 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 장애, 예를 들어 증식성 장애의 진행, 중증도 및/또는 지속기간의 감소 또는 완화, 또는 하나 이상의 치료법의 투여로부터 일어나는 장애의 하나 이상의 증상(바람직하게는, 하나 이상의 식별 가능한 증상)의 완화를 나타낸다. 특정 구현예에서, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 환자가 반드시 식별할 수 있는 것은 아닌, 증식성 장애의 적어도 하나의 측정 가능한 신체적 파라미터, 예컨대 종양의 성장의 완화를 나타낸다. 다른 구현예에서, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 예를 들어, 식별 가능한 증상의 안정화에 의해 물리적으로의, 예를 들어 물리적 파라미터의 안정화에 의해 생리학적으로의, 또는 둘 다에 의한, 증식성 장애의 진행 억제를 나타낸다. 다른 구현예에서, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 종양 크기 또는 암성 세포 수의 감소 또는 안정화를 나타낸다.

본 발명의 조성물, 제형물, 및 방법은 특정된 서열, 또는 이와 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어, 특정된 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한 서열을 갖는 폴리펩타이드 및 핵산을 포괄한다. 아미노산 서열의 맥락에서, 용어 "실질적으로 동일한"은 제1 및 제2 아미노산 서열이 공통 구조 도메인 및/또는 공통 기능적 활성을 가질 수 있도록 제2 아미노산 서열에서 정렬된 아미노산 잔기와 i) 동일하거나 ii) 이의 보존적 치환인 아미노산 잔기의 충분한 수 또는 최소 수를 포함하는 제1 아미노산을 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, 참조 서열, 예를 들어 본원에서 제공된 서열과 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일성을 갖는 공통 구조 도메인을 포함하는 아미노산 서열.

뉴클레오타이드 서열의 맥락에서, 용어 "실질적으로 동일한"은 제1 및 제2 뉴클레오타이드 서열이 공통 기능 활성을 갖는 폴리펩타이드를 암호화하거나, 공통 구조 폴리펩타이드 도메인 또는 공통 기능적 폴리펩타이드 활성을 암호화하도록 제2 핵산 서열에서 정렬된 뉴클레오타이드와 동일한 뉴클레오타이드의 충분한 수 또는 최소 수를 포함하는 제1 핵산 서열을 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, 참조 서열, 예를 들어 본원에서 제공된 서열과 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열.

용어 "기능적 변이체"는 자연 발생 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖거나, 실질적으로 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되며, 자연 발생 서열의 하나 이상의 활성을 가질 수 있는 폴리펩타이드를 나타낸다.

서열 간의 상동성 또는 서열 동일성(이 용어들은 본원에서 상호 교환적으로 사용됨)의 계산은 하기와 같이 수행된다.

2개의 아미노산 서열, 또는 2개의 핵산 서열의 동일성%를 결정하기 위해, 서열은 최적 비교 목적을 위해 정렬된다(예를 들어 최적 정렬을 위해 제1 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열 중 하나 또는 둘 모두에 갭이 도입될 수 있으며, 비교 목적을 위해 비-상동성 서열이 무시될 수 있음). 바람직한 구현예에서, 비교 목적을 위해 정렬된 참조 서열의 길이는 참조 서열의 길이의 적어도 30%, 바람직하게는 적어도 40%, 더욱 바람직하게는 적어도 50%, 60%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 70%, 80%, 90%, 100%이다. 이어서, 대응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드가 비교된다. 제1 서열에서의 위치가 제2 서열에서 대응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 동일하다(본원에서 사용된 바와 같이, 아미노산 또는 핵산 "동일성"은 아미노산 또는 핵산 "상동성"과 동등함).

두 서열 간 동일성%는 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치 수의 함수로서, 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 갭의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한다.

두 서열 간 서열 비교 및 동일성%의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 두 아미노산 서열 간 동일성%는 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, 문헌[Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:444-453]의 알고리즘을 이용하여 결정되며, 이는 GCG 소프트웨어 패키지(www.gcg.com에서 이용 가능함) 내의 GAP 프로그램에 포함되었다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 두 뉴클레오타이드 서열 간 동일성%는 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램(www.gcg.com에서 이용 가능함)을 사용하여 결정된다. 특히 바람직한 파라미터 세트(및 달리 명시되지 않는 한 사용되어야 하는 것)는 12의 갭 페널티, 4의 갭 확장 페널티, 및 5의 프레임시프트 갭 페널티를 갖는 Blossum 62 스코어링 매트릭스이다.

2개의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열 긴 동일성%는 PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 12, 및 갭 페널티 4를 사용하여 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 포함된 문헌[E. Meyers and W. Miller (1989) CABIOS, 4:11-17]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.

본원에 기재된 핵산 및 단백질 서열은, 예를 들어 다른 패밀리 구성원 또는 관련 서열을 확인하기 위해 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위한 "쿼리 서열"로 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌[Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다. 본 발명의 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 수득하기 위해 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 워드길이 = 12로 BLAST 뉴클레오타이드 검색이 수행될 수 있다. 본 발명의 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 수득하기 위해 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 워드길이 = 3으로 BLAST 단백질 검색이 수행될 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 수득하기 위해, 문헌[Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기재된 바와 같이 Gapped BLAST가 이용될 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용하는 경우, 각 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터가 사용될 수 있다. www.ncbi.nlm.nih.gov를 참고한다.

본원에서 사용되는 용어 "저 엄격성, 중간 엄격성, 고 엄격성 또는 매우 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화하는"은 혼성화 및 세척 조건을 설명한다. 혼성화 반응을 수행하기 위한 지침은 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6]에서 확인될 수 있다. 수성 및 비수성 방법은 이 참고문헌에 기재되어 있으며, 어느 것이든 사용될 수 있다. 본원에서 나타내는 특이적 혼성화 조건은 하기와 같다: 1) 약 45℃에서 6X 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC), 이어서 적어도 50℃(저 엄격성 조건에서는 세척물의 온도를 55℃까지 증가시킬 수 있음)에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중 2회 세척의 저 엄격성 혼성화 조건; 2) 약 45℃에서 6X SSC, 이어서 60℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척의 중간 엄격성 혼성화 조건; 3) 약 45℃에서 6X SSC, 이어서 65℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척의 고 엄격성 혼성화 조건; 그리고 바람직하게는 4) 매우 높은 엄격성 혼성화 조건은 65℃에서 0.5M 인산나트륨, 7% SDS, 이어서 65℃에서 0.2X SSC, 1% SDS에서 1회 이상 세척이다. 매우 높은 엄격성 조건(4)이 바람직한 조건이며, 달리 명시되지 않는 한 사용되어야 하는 것이다.

본 발명의 분자는 이의 기능에 실질적인 영향을 미치지 않는 추가의 보존적 또는 비-필수적 아미노산 치환을 가질 수 있는 것으로 이해된다.

용어 "아미노산"은 아미노 작용기 및 산 작용기를 모두 포함하고 자연 발생 아미노산 중합체에 포함될 수 있는, 천연 또는 합성의 모든 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 예시적인 아미노산에는 자연 발생 아미노산; 이의 유사체, 유도체 및 동족체; 변이체 측쇄를 갖는 아미노산 유사체; 및 상기 중 어느 하나의 모든 입체이성질체를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "아미노산"은 D- 또는 L-광학 이성질체 모두 및 펩타이드모사체를 포함한다.

"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기 패밀리는 당분야에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다.

용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"(단일 사슬의 경우)은 본원에서 임의의 길이의 아미노산 중합체를 나타내기 위해 상호 교환적으로 사용된다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 개질된 아미노산을 포함할 수 있으며, 비-아미노산이 개재될 수 있다. 이 용어는 또한 개질된 아미노산 중합체; 예를 들어, 디설파이드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 표지화 구성요소와의 접합과 같은 임의의 다른 조작을 포괄한다. 폴리펩타이드는 천연 원천으로부터 단리될 수 있거나, 진핵 또는 원핵 숙주로부터 재조합 기법에 의해 생산될 수 있거나, 합성 절차의 산물일 수 있다.

용어 "핵산", "핵산 서열", "뉴클레오타이드 서열" 또는 "폴리뉴클레오타이드 서열" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 상호 교환적으로 사용된다. 이들은 데옥시리보뉴클레오타이드건 리보뉴클레오타이드건, 임의의 길이의 뉴클레오타이드, 또는 이의 유사체의 중합체 형태를 나타낸다. 폴리뉴클레오타이드는 단일-가닥이거나 이중-가닥일 수 있으며, 단일-가닥인 경우 코딩 가닥 또는 비-코딩(안티센스) 가닥일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 메틸화 뉴클레오타이드 및 뉴클레오타이드 유사체와 같은 개질된 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열에는 비-뉴클레오타이드 구성요소가 개재될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 중합 후, 예컨대 표지화 구성요소와의 접합에 의해 추가로 개질될 수 있다. 핵산은 자연 발생하지 않거나 비자연적 배열로 또 다른 폴리뉴클레오타이드에 결합되는 재조합 폴리뉴클레오타이드, 또는 게놈, cDNA, 반합성, 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오타이드일 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "단리된"은 그의 원래의 또는 천연 환경(예를 들어 자연 발생인 경우 자연 환경)으로부터 제거된 물질을 나타낸다. 예를 들어, 살아 있는 동물에 존재하는 자연 발생 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 단리된 것이 아니지만, 인간의 개입에 의해 자연계에서 공존하는 물질의 일부 또는 전부로부터 분리된 해당 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 단리된 것이다. 이러한 폴리뉴클레오타이드는 벡터의 일부일 수 있고/있거나 이러한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 조성물의 일부일 수 있으며, 이러한 벡터 또는 조성물은 이것이 자연에서 확인되는 환경의 일부가 아니라는 점에서 여전히 단리된 것일 수 있다.

본 발명의 다양한 양태가 아래에 추가로 상세히 기재되어 있다. 추가 정의가 본 명세서 전체에 걸쳐 제시되어 있다.

TGF-β 억제제

TGF-β는 예를 들어 뼈 형태형성 단백질(BMP), 성장 및 분화 인자, 앤티빈 및 인히빈을 포함하는 구조적으로 관련된 사이토카인의 큰 패밀리에 속한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 TGF-β 억제제는 TGF-β의 하나 이상의 이소형(예를 들어 1개, 2개, 또는 모든 TGF-β1, TGF-β2, 또는 TGF-β3)에 결합하고/하거나 이를 억제할 수 있다.

전환 성장 인자 베타(본원에서 상호 교환적으로 사용되는, TGF-β, TGFβ, TGFb, 또는 TGF-베타로도 알려짐) 억제제(예를 들어, 항-TGF-β 항체 분자)는 전체에 걸쳐 기재되며 전체에 걸쳐 기재된 방법에서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 NIS793, 프레솔리무맙, PF-06952229 또는 AVID200이다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 NIS973, 또는 국제 출원 공보 제WO 2012/167143호에 개시된 화합물을 포함한다. NIS793은 XOMA 089 또는 XPA.42.089로도 알려져 있다. NIS793은 TGF-베타 1 및 2 리간드에 특이적으로 결합하고 이를 중화하는 완전 인간 모노클로날 항체이다.

NIS793의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 다음 아미노 서열을 갖는다: 각각 GGTFSSYAIS(서열번호 1); GIIPIFGTANYAQKFQG(서열번호 2); 및 GLWEVRALPSVY(서열번호 3).

NIS793의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 다음 아미노 서열을 갖는다: 각각 GANDIGSKSVH(서열번호 4); EDIIRPS(서열번호 5); QVWDRDSDQYV(서열번호 6).

NIS793의 중쇄 가변 영역은 다음 아미노산 서열을 갖는다: QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLWEVRALPSVYWGQGTLVTVSS(서열번호 7)(WO2012/167143에서 서열번호 6으로 개시됨). NIS793의 경쇄 가변 영역은 다음 아미노산 서열을 갖는다: SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGANDIGSKSVHWYQQKAGQAPVLVVSEDIIRPSGIPERISGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRDSDQYVFGTGTKVTVLG(서열번호 8)(WO 2012/167143호에 서열번호 8로 개시됨).

NIS793의 중쇄는 다음 아미노산 서열을 갖는다: QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLWEVRALPSVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호 9). NIS793의 경쇄는 다음 아미노산 서열을 갖는다: SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGANDIGSKSVHWYQQKAGQAPVLVVSEDIIRPSGIPERISGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRDSDQYVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(서열번호 10).

NIS793은 인간 TGF-β 이소형에 높은 친화도로 결합한다. 일반적으로, NIS793은 TGF-β1 및 TGF-β2에 높은 친화도로 결합하고, TGF-β3에는 더 적은 정도로 결합한다. Biacore 검정에서, 인간 TGF-β에 대한 NIS793의 K_D는 TGF-β1의 경우 14.6 pM, TGF-β2의 경우 67.3 pM, TGF-β3의 경우 948 pM이다. 3개의 TGF-β 이소형 모두에 대한 고친화도 결합을 고려하면, 특정 구현예에서, NIS793은 본원에 기재된 바와 같은 NIS793의 용량으로 TGF-β1, 2 및 3에 결합할 것으로 예상된다. NIS793은 설치류 및 게잡이 원숭이 TGF-β와 교차 반응하고, 시험관내 및 생체내 기능적 활성을 나타내어, 설치류 및 게잡이 원숭이 관련 종을 독성학 연구를 위한 것으로 만든다.

특정 구현예에서, TGF-β 억제제는 암(예를 들어, PDAC과 같은 췌장암 또는 결장직장암과 같은 위장관암)을 치료하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제(예를 들어, 본원에 기재된 PD1의 억제제)와 조합하여 사용되어 암을 치료하는데 사용된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 15 mg/kg 초과의 용량으로 투여된다. 예를 들어, TGF-β 억제제는 15.1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량으로 투여된다, 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 16 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 16 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 20 mg/kg 내지 약 40 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 25 mg/kg 내지 약 35 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 20 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 30 mg/kg의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 고정 용량으로 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서 TGF-β 억제제는 약 1000 mg 내지 약 1600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1100 mg 내지 약 1500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1200 mg 내지 약 1400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1300 mg 내지 약 1400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1300 mg 내지 약 1500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1300 mg 내지 약 1600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1200 mg 내지 약 1500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1200 mg 내지 약 1600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1400 mg 내지 약 1500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1400 mg 내지 약 1600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1100 mg 내지 약 1600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 1100 mg 내지 약 1400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1100 mg 내지 약 1300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1100 mg 내지 약 1200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1000 mg 내지 약 1500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1000 mg 내지 약 1400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1000 mg 내지 약 1300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1000 mg 내지 약 1200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1000 mg 내지 약 1100 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1000 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1100 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1200 mg 내지 약 2100 mg의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2000 mg 내지 약 2500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2000 mg 내지 약 2400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1900 mg 내지 약 2300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1900 mg 내지 약 2200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2000 mg 내지 약 2100 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2100 mg 내지 약 2500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2100 mg 내지 약 2400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2100 mg 내지 약 2300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2100 mg 내지 약 2200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2200 mg 내지 약 2500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2200 mg 내지 약 2400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2200 mg 내지 약 2300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2300 mg 내지 약 2500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2300 mg 내지 약 2400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2400 mg 내지 약 2500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2000 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2100 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2500 mg의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 1주 1회, 2주 1회, 3주 1회, 또는 4주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 1주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 2주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 3주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 4 3주 1회 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 정맥내 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 20분 내지 약 40분의 기간에 걸쳐 투여된다. 예를 들어, TGF-β 억제제는 약 30분의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 1시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 2시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 3시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 4시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 5시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 약 6시간의 기간에 걸쳐 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 2주 1회 약 1300 mg 내지 약 1500 mg(예를 들어, 약 1400 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 2주 1회, 약 2000 mg 내지 약 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 3주 1회, 약 2000 mg 내지 약 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 2주 1회, 약 20분 내지 약 40분(예를 들어, 약 30분)의 기간에 걸쳐, 약 1300 mg 내지 약 1500 mg(예를 들어, 약 1400 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 2주 1회, 약 20분 내지 약 40분(예를 들어, 약 30분)의 기간에 걸쳐, 약 2000 mg 내지 약 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 3주 1회, 약 20분 내지 약 40분(예를 들어, 약 30분)의 기간에 걸쳐, 약 2000 mg 내지 약 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 하나 이상의 다른 치료제, 절차 또는 방식을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자) 및/또는 PD-L 억제제(PD-L1 및/또는 PD-L2)와 조합하여 투여된다. 하나의 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 억제(또는 면역 체크포인트) 분자 PD-1, PD-L1, PD-L2, 및/또는 TGFβ의 억제제를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 억제제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, 및/또는 TGFβ에 결합하는 항체 또는 항체 단편이다.

대안적으로, 또는 전술한 방법과 조합하여, 본원에 기재된 방법은 하기 중 하나 이상과 함께 투여되거나 사용될 수 있다: 면역조절제(예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 억제 분자, 예를 들어, 면역 체크포인트 분자의 억제제); 백신, 예를 들어, 치료용 암 백신; 또는 기타 형태의 세포 면역치료법.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 공동자극 분자 또는 억제 분자의 조절제, 예를 들어 공동-억제 리간드 또는 수용체와 함께 투여되거나 사용된다.

다른 예시적인 TGF-β 억제제

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 프레솔리무맙(CAS 등록 번호: 948564-73-6)을 포함한다. 프레솔리무맙은 GC1008로도 알려져 있다. 프레솔리무맙은 TGF-베타 이소형 1, 2 및 3에 결합하고 이를 억제하는 인간 모노클로날 항체이다.

프레솔리무맙의 중쇄는 다음 아미노산 서열을 갖는다: QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSSNVISWVRQAPGQGLEWMGGVIPIVDIANYAQRFKGRVTITADESTSTTYMELSSLRSEDTAVYYCASTLGLVLDAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(서열번호 11).

프레솔리무맙의 경쇄는 다음 아미노산 서열을 갖는다: ETVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYADSPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호 12).

프레솔리무맙은, 예를 들어 국제 출원 공보 제WO 2006/086469호, 및 미국 특허 제8,383,780호 및 제8,591,901호에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 PF-06952229이다. PF-06952229는 TGF-βR1의 억제제로, 수용체를 통한 신호전달 및 TGF-βR1 매개 면역억제를 방지하여 항종양 면역 반응을 증강시킨다. PF-06952229은, 예를 들어 문헌[Yano et al. Immunology 2019; 157(3) 232-47]에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 AVID200이다. AVID200은 TGF-β 수용체 엑토도메인-IgG Fc 융합 단백질이며, 이는 TGF-β 이소형 1 및 3을 선택적으로 표적화하고 중화한다. AVID200은, 예를 들어 문헌[O'Connor-McCourt, MD et al. Can. Res. 2018; 78(13)]에 개시되어 있다.

PD-1 억제제

PD-1은 예를 들어 활성화된 CD4+ 및 CD8+ T 세포, Treg 및 B 세포 상에서 발현되는 CD28/CTLA-4 패밀리 구성원이다. 이는 효과기 T 세포 신호전달 및 기능을 음성적으로 조절한다. PD-1은 종양-침윤 T 세포 상에서 유도되며, 기능적 고갈 또는 기능이상을 일으킬 수 있다(Keir 등. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-1은 그의 2개의 리간드, 즉 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1) 또는 프로그래밍된 사멸-리간드 2(PD-L2) 중 어느 하나에 대한 결합 시에 공동억제 신호를 전달한다. PD-L1은 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 수지상 세포(DC), B 세포, 상피 세포, 혈관 내피 세포를 포함하는 다수의 세포 유형뿐만 아니라 많은 유형의 종양 상에서 발현된다. 뮤린 및 인간 종양 상에서 PD-L1의 높은 발현은 다양한 암에서의 불량한 임상 결과와 연관되었다(Keir 등 (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-L2는 수지상 세포, 대식세포 및 일부 종양 상에서 발현된다. PD-1 경로의 차단은 암 면역치료법을 위해 전임상적으로, 그리고 임상적으로 검증되었다. 전임상 및 임상 연구 둘 다는 항-PD-1 차단이 효과기 T 세포의 활성을 복원할 수 있으며, 강력한 항-종양 반응을 일으킴을 실증하였다. 예를 들어 PD-1 경로의 차단은 고갈된/기능이상 효과기 T 세포 기능(예를 들어 증식, IFN-γ 분비 또는 세포용해 기능)을 복원하고/하거나 Treg 세포 기능을 억제할 수 있다(Keir et al. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-1 경로의 차단은 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역접착소(immunoadhesin), 융합 단백질, 또는 PD-1, PD-L1 및/또는 PD-L2의 올리고펩타이드에 의해 수행될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "프로그래밍된 사멸 1" 또는 "PD-1"은 이소형, 포유류, 예를 들어 인간 PD-1, 인간 PD-1의 종 상동체 및 PD-1과 적어도 하나의 공통의 에피토프를 포함하는 유사체를 포함한다. PD-1, 예를 들어 인간 PD-1의 아미노산 서열은 당분야에, 예를 들어 문헌[Shinohara T et al. (1994) Genomics 23(3):704-6; Finger LR, et al. Gene (1997) 197(1-2):177-87]에 알려져 있다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 TGFβ 억제제는 PD-1 억제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 스파르탈리주맙(PDR001, Novartis), 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb), 펨브롤리주맙(Merck & Co), 피딜리주맙(CureTech), MEDI0680(Medimmune), REGN2810(Regeneron), TSR-042(Tesaro), PF-06801591(Pfizer), BGB-A317(Beigene), BGB-108(Beigene), INCSHR1210(Incyte), 또는 AMP-224(Amplimmune)이다.

예시적인 PD-1 억제제

하나의 구현예에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, PD-1 억제제는 "Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof"라는 명칭으로 2015년 7월 30일에 공개된 미국 특허 2015/0210769에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 억제제는 PDR001로도 알려진 스파르탈리주맙이다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 표 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터의(예를 들어, 표 1에 개시된 BAP049-클론-E 또는 BAP049-클론-B의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터의), 또는 표 1에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합으로서 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 1에서 제시된 바와 같은) Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 1에서 제시된 바와 같은) Chothia 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 1에서 제시된 바와 같은) Kabat 및 Chothia 둘 다의 조합된 CDR 정의를 따른다. 하나의 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GYTFTTYWMH(서열번호 13)를 포함한다. 하나의 구현예에서, 하나 이상의 CDR(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 1에 나타내거나 표 1에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변화, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 각각 표 1에 개시된, 서열번호 14의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 15의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 16의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 23의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 24의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 25의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 각각 표 1에 개시된, 서열번호 37의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열변호 38의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 39의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 42의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 43의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 44의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 19의 아미노산 서열, 또는 서열번호 19와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 33의 아미노산 서열, 또는 서열번호 33과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 29의 아미노산 서열, 또는 서열번호 29와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 20과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 34 또는 30의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 34 또는 30과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 34 또는 30의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 21의 아미노산 서열, 또는 서열번호 21과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 35의 아미노산 서열, 또는 서열번호 35와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 31의 아미노산 서열, 또는 서열번호 31과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 22의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 22와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 36 또는 32의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 36 또는 32와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 22의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 36 또는 32의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.

본원에 기재된 항체 분자는 WO 2015/0210769에 기재된 벡터, 숙주 세포 및 방법에 의해 제조될 수 있다.

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 약 100 mg 내지 약 600 mg의 균일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 100 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 100 mg 내지 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 100 mg 내지 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 100 mg 내지 약 200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 200 mg 내지 약 600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 200 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 200 mg 내지 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 200 mg 내지 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 300 mg 내지 약 600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 300 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 300 mg 내지 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 400 mg 내지 약 600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 400 mg 내지 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 500 mg 내지 약 600 mg의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 약 100 mg의 균일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 500 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 600 mg의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 4주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 3주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 2주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 1주 1회 투여된다.

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 정맥내 투여된다.

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 약 20분 내지 40분(예를 들어, 약 30분)의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 30분의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 1시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 2시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 3시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 4시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 5시간의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 약 6시간의 기간에 걸쳐 투여된다.

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 4주 1회, 약 300 mg 내지 약 500 mg(예를 들어, 약 400 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 3주 1회 약 200 mg 내지 약 400 mg(예를 들어, 약 300 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 스파르탈리지맙은 4주 1회 400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 스파르탈리주맙은 3주 1회 300 mg의 용량으로 투여된다

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 2주 1회, 약 20분 내지 약 40분(예를 들어, 약 30분)의 기간에 걸쳐, 약 300 mg 내지 약 500 mg(예를 들어, 약 400 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 3주 1회, 약 20분 내지 약 40분(예를 들어, 약 30분)의 기간에 걸쳐, 약 200 mg 내지 약 400 mg(예를 들어, 약 300 mg)의 용량으로 정맥내 투여된다.

일부 구현예에서, PD-1 억제제(예를 들어, 스파르탈리주맙)는 TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)와 조합하여 투여된다.

[표 1]

다른 예시적인 PD-1 억제제

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558, 또는 OPDIVO®로도 알려져 있는 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb)이다. 니볼루맙(클론 5C4) 및 다른 항-PD-1 항체는 미국 특허 8,008,449 및 WO 2006/121168에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는, 예를 들어 표 2에 개시된 바와 같은 니볼루맙의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 람브롤리주맙, MK-3475, MK03475, SCH-900475, 또는 KEYTRUDA®로도 알려져 있는 펨브롤리주맙(Merck & Co)이다. 펨브롤리주맙 및 다른 항-PD-1 항체는 문헌[Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44, 미국 특허 8,354,509, 및 WO 2009/114335]에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는, 예를 들어 표 2에 개시된 바와 같은 펨브롤리주맙의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 CT-011로도 알려져 있는 피딜리주맙(CureTech)이다. 피딜리주맙 및 다른 항-PD-1 항체는 문헌[Rosenblatt, J. et al. (2011) J Immunotherapy 34(5): 409-18, 미국 특허 7,695,715, 미국 특허 7,332,582, 및 미국 특허 8,686,119]에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는, 예를 들어 표 2에 개시된 바와 같은 피딜리주맙의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 AMP-514로도 알려져 있는 MEDI0680(Medimmune)이다. MEDI0680 및 다른 항-PD-1 항체는 미국 특허 9,205,148 및 WO 2012/145493에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 MEDI0680의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 REGN2810(Regeneron)이다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 REGN2810의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 PF-06801591(Pfizer)이다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 PF-06801591의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 BGB-A317 또는 BGB-108(Beigene)이다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 BGB-A317 또는 BGB-108의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 INCSHR01210 또는 SHR-1210으로도 알려져 있는 INCSHR1210(Incyte)이다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 INCSHR1210의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 ANB011로도 알려져 있는 TSR-042(Tesaro)이다. 하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 TSR-042의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

추가의 알려진 항-PD-1 항체는 예를 들어 WO 2015/112800, WO 2016/092419, WO 2015/085847, WO 2014/179664, WO 2014/194302, WO 2014/209804, WO 2015/200119, 미국 특허 8,735,553, 미국 특허 7,488,802, 미국 특허 8,927,697, 미국 특허 8,993,731 및 미국 특허 9,102,727에 기재된 것을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-1 항체는 본원에 기재된 항-PD-1 항체 중 하나와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나, PD-1 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다.

하나의 구현예에서, PD-1 억제제는 예를 들어 미국 특허 제8,907,053호에 기재된 바와 같이 PD-1 신호전달 경로를 억제하는 펩타이드이다. 하나의 구현예에서, PD-1 억제제는 면역접착소(예를 들어 불변 영역(예를 들어 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역접착소)이다. 하나의 구현예에서, PD-1 억제제는 AMP-224(예를 들어 WO 2010/027827 및 WO 2011/066342에 개시된, B7-DCIg(Amplimmune))이다.

[표 2]

PD-L1 억제제

특정 구현예에서, 기재된 방법은 PD-L1 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, PD-L1 억제제는 FAZ053(Novartis), 아테졸리주맙(Genentech/Roche), 아벨루맙(Merck Serono 및 Pfizer), 더발루맙(MedImmune/AstraZeneca), 또는 BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)이다.

예시적인 PD-L1 억제제

하나의 구현예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, PD-L1 억제제는 "Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof"라는 명칭으로 2016년 4월 21일에 공개된 미국 특허 2016/0108123에 개시된 바와 같은 항-PD-1 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 표 3에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터의(예를 들어 표 3에 개시된 BAP058-클론-O 또는 BAP058-클론-N의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터의), 또는 표 3에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 3에서 제시된 바와 같은) Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 3에서 제시된 바와 같은) Chothia 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 3에서 제시된 바와 같은) Kabat 및 Chothia 둘 다의 조합된 CDR 정의를 따른다. 하나의 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GYTFTSYWMY(서열번호 100)를 포함한다. 하나의 구현예에서, 하나 이상의 CDR(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 3에 나타내거나 표 3에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변화, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 각각 표 3에 개시된, 서열번호 54의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 55의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 56의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 62의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 63의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 64의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 각각 표 3에 개시된, 서열번호 81의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열번호 82의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 83의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 86의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 87의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 88의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 59의 아미노산 서열, 또는 서열번호 59와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 69의 아미노산 서열, 또는 서열번호 69와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 73의 아미노산 서열, 또는 서열번호 73과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 77의 아미노산 서열, 또는 서열번호 77과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 60의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 60과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 70의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 70과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 74의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 74와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 78의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 78과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 60의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 70의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 72의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 78의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 61의 아미노산 서열, 또는 서열번호 61과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 71의 아미노산 서열, 또는 서열번호 71과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 75의 아미노산 서열, 또는 서열번호 75와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 79의 아미노산 서열, 또는 서열번호 79와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 68의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 68과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 72의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 72와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 76의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 76과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 80의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 80과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 68의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 72의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 76의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 80의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.

본원에 기재된 항체 분자는 WO 2016/0108123에 기재된 벡터, 숙주 세포 및 방법에 의해 제조될 수 있다.

[표 3]

다른 예시적인 PD-L1 억제제

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 MPDL3280A, RG7446, RO5541267, YW243.55.S70, 또는 TECENTRIQ™로도 알려져 있는 아테졸리주맙(Genentech/Roche)이다. 아테졸리주맙 및 다른 항-PD-L1 항체는 미국 특허 8,217,149에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 4에 개시된 바와 같은 아테졸리주맙의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 MSB0010718C로도 알려져 있는 아벨루맙(Merck Serono 및 Pfizer)이다. 아벨루맙 및 다른 항-PD-L1 항체는 WO 2013/079174에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 4에 개시된 바와 같은 아벨루맙의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 MEDI4736으로도 알려져 있는 더발루맙(MedImmune/AstraZeneca)이다. 더발루맙 및 다른 항-PD-L1 항체는 미국 특허 8,779,108에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 4에 개시된 바와 같은 더발루맙의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는 MDX-1105 또는 12A4로도 알려져 있는 BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)이다. BMS-936559 및 다른 항-PD-L1 항체는 미국 특허 7,943,743 및 WO 2015/081158에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체 분자는, 예를 들어 표 4에 개시된 바와 같은 BMS-936559의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

추가로 알려진 항-PD-L1 항체는 예를 들어 WO 2015/181342, WO 2014/100079, WO 2016/000619, WO 2014/022758, WO 2014/055897, WO 2015/061668, WO 2013/079174, WO 2012/145493, WO 2015/112805, WO 2015/109124, WO 2015/195163, 미국 특허 8,168,179, 미국 특허 8,552,154, 미국 특허 8,460,927 및 미국 특허 9,175,082에 기재된 것들을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 항-PD-L1 항체 중 하나와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나, PD-L1 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다.

[표 4]

항체 및 항체-유사 분자

본원에서 사용되는 "항체 분자"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질, 예를 들어 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편을 나타낸다. 용어 "항체 분자"는, 예를 들어 모노클로날 항체(면역글로불린 Fc 영역을 갖는 전장 항체 포함)를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체, 또는 전장 면역글로불린 사슬을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체, 또는 전장 면역글로불린 사슬의 항원 결합 또는 기능적 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 다중특이적 항체 분자이며, 예를 들어 이는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하고, 여기서 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프(예를 들어, 제1 표적)에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프(예를 들어, 제2 표적)에 대한 결합 특이성을 갖는다. 하나의 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 단일특이적 항체 분자이고 단일 에피토프(예를 들어, 단일 표적, 예컨대 NIS793과 같은 TGFβ)에 결합한다. 예를 들어, 단일특이적 항체 분자는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 가질 수 있으며, 이들 각각은 동일한 에피토프에 결합한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 다중특이적 항체 분자로서, 예를 들어 이는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하며, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프(예를 들어, 제1 표적)에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프(예를 들어, 제2 표적)에 대한 결합 특이성을 갖는다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질(또는 다량체성 단백질의 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 하나의 구현예에서, 제1 에피토프 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체성 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 제3, 제4, 또는 제5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자, 삼중특이적 항체 분자, 또는 사중특이적 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자이다. 이중특이적 항체는 2개 이하의 항원에 대해 특이성을 갖는다. 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질(또는 다량체성 단백질의 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체성 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체를 포함한다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 제1 에피토프는 TGFβ(1, 2, 및/또는 3) 상에 위치하며, 제2 에피토프는 PD-1(또는 PD-L1 또는 PD-L2) 상에 위치한다.

다중-특이적(예를 들어, 이중특이적 또는 삼중특이적) 또는 이종이량체 항체 분자를 생성하기 위한 프로토콜은 당분야에 알려져 있고; 예를 들어 미국 특허 5,731,168에 기재된 "노브 인 홀(knob in a hole)" 접근; 예를 들어 WO 09/089004, WO 06/106905 및 WO 2010/129304에 기재된 바와 같은 정전기적 스티어링 Fc 쌍형성; 예를 들어 WO 07/110205에 기재된 바와 같은 가닥 교환 조작 도메인(SEED) 이종이량체 형성; 예를 들어 WO 08/119353, WO 2011/131746, 및 WO 2013/060867에 기재된 바와 같은 Fab 아암 교환; 예를 들어 미국 특허 4,433,059에 기재된 바와 같은, 아민 반응기 및 설프하이드릴 반응기를 갖는 이종2기능적 시약을 사용하여 이중특이적 구조를 생성하는, 예를 들어 항체 가교에 의한 이중 항체 접합체; 예를 들어 미국 특허 4,444,878에 기재된 바와 같은, 2개의 중쇄 간 디설파이드 결합의 환원 및 산화 주기를 통해 상이한 항체로부터 절반 항체(중쇄-경쇄 쌍 또는 Fab) 재조합에 의해 생성된 이중특이적 항체 결정기; 3기능적 항체, 예를 들어 미국 특허 5,273,743에 기재된 바와 같은, 예를 들어 설프하이드릴 반응기를 통해 가교된 3개의 Fab' 단편; 생합성 결합 단백질, 예를 들어 미국 특허 5,534,254에 기재된 바와 같은, 예를 들어 C-말단 테일을 통해, 바람직하게는 디설파이드 또는 아민-반응성 화학적 가교를 통해 가교된 scFv 쌍; 2기능적 항체, 예를 들어 미국 특허 5,582,996에 기재된 바와 같은, 예를 들어 불변 도메인을 대체한 류신 지퍼(예를 들어, c-fos 및 c-jun)를 통해 이량체화된, 상이한 결합 특이성을 갖는 Fab 단편; 이중특이적 및 올리고특이적 1가- 및 올리고가 수용체, 예를 들어 미국 특허 5,591,828에 기재된 바와 같은, 예를 들어 한 항체의 CH1 영역 및 전형적으로 경쇄와 연합된 다른 항체의 VH 영역 간 폴리펩타이드 스페이서를 통해 결합된 2개의 항체(2개의 Fab 단편)의 VH-CH1 영역; 이중특이적 DNA-항체 접합체, 예를 들어 미국 특허 5,635,602에 기재된 바와 같은, 예를 들어 DNA의 이중 가닥 조각을 통한 항체 또는 Fab 단편의 가교; 이중특이적 융합 단백질, 예를 들어 미국 특허 5,637,481에 기재된 바와 같은, 예를 들어 2개의 scFv를, 이들과 전체 불변 영역 간 친수성 나선 펩타이드 링커와 함께 함유하는 발현 작제물; 다가 및 다중특이적 결합 단백질, 예를 들어 일반적으로 디아바디로 불리는, Ig 중쇄 가변 영역의 결합 영역을 갖는 제1 도메인, 및 Ig 경쇄 가변 영역의 결합 영역을 갖는 제2 도메인을 갖는 폴리펩타이드의 이량체(예를 들어 미국 특허 5,837,242에 기재된 바와 같은, 이중특이적, 삼중특이적 또는 사중특이적 분자를 생성하는 보다 고차원의 구조 또한, 개시됨); 예를 들어 미국 특허 5,837,821에 기재된 바와 같은, 이량체화되어 이중특이적/다가 분자를 형성할 수 있는, 항체 힌지 영역 및 CH3 영역에 펩타이드 스페이서로 추가로 연결된 결합된 VL 및 VH 사슬을 갖는 미니바디 작제물; 이량체를 형성하여 이중특이적 디아바디를 형성할 수 있는, 어느 하나의 배향으로 짧은 펩타이드 링커(예를 들어, 5개 또는 10개 아미노산)를 사용하거나 또는 링커가 전혀 없이 결합된 VH 및 VL 도메인; 예를 들어 미국 특허 5,844,094에 기재된 바와 같은, 삼량체 및 사량체; 예를 들어 미국 특허 5,864,019에 기재된 바와 같은, 일련의 FV(또는 scFv)를 형성하기 위해 VL 도메인과 추가로 연합된, C-말단에서 가교 가능한 기와의 펩타이드 결합에 의해 연결된 VH 도메인(또는 패밀리 구성원 내의 VL 도메인)의 스트링; 및 예를 들어 미국 특허 5,869,620에 기재된 바와 같은, 비-공유 또는 화학적 가교를 통해 다가 구조로 조합되어, 예를 들어 scFv 또는 디아바디 유형 포맷 둘 다를 사용해서 동종2가, 이종2가, 3가 및 4가 구조를 형성하는, 펩타이드 링커를 통해 결합된 VH 및 VL 도메인 둘 다를 갖는 단일쇄 결합 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가의 예시적인 다중특이적 및 이중특이적 분자 및 이를 제조하는 방법은 예를 들어, 미국 특허 5,910,573, 미국 특허 5,932,448, 미국 특허 5,959,083, 미국 특허 5,989,830, 미국 특허 6,005,079, 미국 특허 6,239,259, 미국 특허 6,294,353, 미국 특허 6,333,396, 미국 특허 6,476,198, 미국 특허 6,511,663, 미국 특허 6,670,453, 미국 특허 6,743,896, 미국 특허 6,809,185, 미국 특허 6,833,441, 미국 특허 7,129,330, 미국 특허 7,183,076, 미국 특허 7,521,056, 미국 특허 7,527,787, 미국 특허 7,534,866, 미국 특허 7,612,181, 미국 특허 2002/004587A1, 미국 특허 2002/076406A1, 미국 특허 2002/103345A1, 미국 특허 2003/207346A1, 미국 특허 2003/211078A1, 미국 특허 2004/219643A1, 미국 특허 2004/220388A1, 미국 특허 2004/242847A1, 미국 특허 2005/003403A1, 미국 특허 2005/004352A1, 미국 특허 2005/069552A1, 미국 특허 2005/079170A1, 미국 특허 2005/100543A1, 미국 특허 2005/136049A1, 미국 특허 2005/136051A1, 미국 특허 2005/163782A1, 미국 특허 2005/266425A1, 미국 특허 2006/083747A1, 미국 특허 2006/120960A1, 미국 특허 2006/204493A1, 미국 특허 2006/263367A1, 미국 특허 2007/004909A1, 미국 특허 2007/087381A1, 미국 특허 2007/128150A1, 미국 특허 2007/141049A1, 미국 특허 2007/154901A1, 미국 특허 2007/274985A1, 미국 특허 2008/050370A1, 미국 특허 2008/069820A1, 미국 특허 2008/152645A1, 미국 특허 2008/171855A1, 미국 특허 2008/241884A1, 미국 특허 2008/254512A1, 미국 특허 2008/260738A1, 미국 특허 2009/130106A1, 미국 특허 2009/148905A1, 미국 특허 2009/155275A1, 미국 특허 2009/162359A1, 미국 특허 2009/162360A1, 미국 특허 2009/175851A1, 미국 특허 2009/175867A1, 미국 특허 2009/232811A1, 미국 특허 2009/234105A1, 미국 특허 2009/263392A1, 미국 특허 2009/274649A1, EP 346087A2, WO 00/06605A2, WO 02/072635A2, WO 04/081051A1, WO 06/020258A2, WO 2007/044887A2, WO 2007/095338A2, WO 2007/137760A2, WO 2008/119353A1, WO 2009/021754A2, WO 2009/068630A1, WO 91/03493A1, WO 93/23537A1, WO 94/09131A1, WO 94/12625A2, WO 95/09917A1, WO 96/37621A2, WO 99/64460A1에서 확인된다.

"융합 단백질" 및 "융합 폴리펩타이드"는 서로 공유 결합된 적어도 2개의 부분을 갖는 폴리펩타이드를 나타내며, 각각의 부분은 상이한 특성을 가진 폴리펩타이드이다. 특성은 생물학적 특성, 예컨대 시험관내 또는 생체내 활성일 수 있다. 특성은 또한 단순한 화학적 또는 물리적 특성, 예컨대 표적 분자에 대한 결합, 반응의 촉매 등일 수 있다. 2개 부분은 단일 펩타이드 결합에 의해 또는 펩타이드 링커를 통해 직접 결합될 수 있지만, 서로 해독틀 안에 있다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 디아바디, 및 단일쇄 분자뿐만 아니라, 항체의 항원-결합 단편(예를 들어, Fab, F(ab')₂, 및 Fv)을 포함한다. 예를 들어, 항체 분자는 중(H)쇄 가변 도메인 서열(본원에서 VH로 약칭됨), 및 경(L)쇄 가변 도메인 서열(본원에서 VL로 약칭됨)을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 중쇄 및 경쇄를 포함하거나 이로 구성된다(본 명세서에서 절반 항체로 나타냄). 또 다른 예에서, 항체 분자는 2개의 중(H)쇄 가변 도메인 서열 및 2개의 경(L)쇄 가변 도메인 서열을 포함함으로써 2개의 항원 결합 부위를 형성하며, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')₂, Fc, Fd, Fd', Fv, 단일쇄 항체(예를 들어, scFv), 단일 가변 도메인 항체, 디아바디(Dab)(2가 및 이중특이적), 및 키메라(예를 들어, 인간화) 항체는 전체 항체의 개질에 의해 생성되거나 재조합 DNA 기술을 사용하여 새로(de novo) 합성될 수 있다. 이들 기능적 항체 단편은 이들 각각의 항원 또는 수용체와 선택적으로 결합하는 능력을 보유한다. 항체 및 항체 단편은 IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 클래스의 항체로부터의 것이거나 항체의 임의의 하위클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4)로부터의 것일 수 있다. 항체 분자의 제조는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있다. 항체 분자는 또한 인간, 인간화, CDR-이식, 또는 시험관내 생성된 항체일 수 있다. 항체는 중쇄 불변 영역, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4를 가질 수 있다. 항체는 또한 경쇄, 예를 들어 카파 또는 람다를 가질 수 있다. 용어 "면역글로불린"(Ig)은 본원에서 용어 "항체"와 상호 교환적으로 사용된다.

항체 분자의 항원 결합 단편의 예는 하기를 포함한다: (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성되는 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디설파이드 가교에 의해 결합된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성되는 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 구성되는 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 구성되는 디아바디(dAb) 단편; (vi) 낙타 또는 낙타화 가변 도메인; (vii) 단일쇄 Fv(scFv)(예를 들어, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 참고); (viii) 단일 도메인 항체. 이들 항체 단편은 당업자에게 알려진 통상적인 기법을 사용하여 수득되며, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.

용어 "항체"는 온전한 분자뿐만 아니라 이의 기능적 단편을 포함한다. 항체의 불변 영역은 변경, 예를 들어, 돌연변이되어, 항체의 특성을 개질할 수 있다(예를 들어, 하기 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시킬 수 있다: Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능, 또는 보체 기능).

항체 분자는 또한 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 그 상보성 결정 영역이 단일 도메인 폴리펩타이드의 일부인 항체를 포함할 수 있다. 예는 중쇄 항체, 자연적으로 경쇄가 없는 항체, 통상적인 4-쇄 항체로부터 유래된 단일 도메인 항체, 조작된 항체 및 항체로부터 유래된 것 이외의 단일 도메인 스캐폴드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 단일 도메인 항체는 당분야에 기재된 바와 같은 임의의 것, 또는 임의의 미래의 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 마우스, 인간, 낙타, 라마, 어류, 상어, 염소, 토끼, 및 소를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 단일 도메인 항체는 경쇄가 없는 중쇄 항체로 알려져 있는 자연 발생 단일 도메인 항체이다. 이러한 단일 도메인 항체는, 예를 들어 WO 94/04678에 개시되어 있다. 명확성을 위해, 자연적으로 경쇄가 없는 중쇄 항체로부터 유래된 이러한 가변 도메인은 이를 4 사슬 면역글로불린의 통상적인 VH와 구별하기 위해 VHH 또는 나노바디로 본원에서 알려져 있다. 이러한 VHH 분자는 낙타과(Camelidae) 종으로부터, 예를 들어 낙타, 라마, 단봉낙타, 알파카 및 과나코에서 생성된 항체로부터 유래될 수 있다. 낙타과 이외의 다른 종이 자연적으로 경쇄가 없는 중쇄 항체를 생성할 수 있고; 이러한 VHH는 본 발명의 범위 내에 있다.

VH 및 VL 영역은 "프레임워크 영역"(FR 또는 FW)으로 불리는 더 보존된 영역이 산재되어 있는, "상보성 결정 영역"(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 세분될 수 있다.

프레임워크 영역 및 CDR의 범위는 다수의 방법에 의해 정확하게 정의되었다(문헌[Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917]; 및 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된 AbM 정의 참고). 일반적으로, 예를 들어 문헌[Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg)]을 참고한다.

본원에서 사용되는 용어 "상보성 결정 영역" 및 "CDR"은 항원 특이성 및 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산 서열을 나타낸다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(HCDR1, HCDR2, HCDR3) 및 각각의 경쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(LCDR1, LCDR2, LCDR3)이 있다.

주어진 CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD("Kabat" 넘버링 체계), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948("Chothia" 넘버링 체계)]에 기재된 것들을 포함하는, 다수의 잘 알려진 체계 중 임의의 것을 사용하여 결정될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "Chothia" 번호 체계에 따라 정의된 CDR은 또한 때때로 "초가변 루프"로 나타낸다.

예를 들어, Kabat 하에서, 중쇄 가변 도메인(VH) 내의 CDR 아미노산 잔기는 31~35(HCDR1), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3)로 넘버링되고; 경쇄 가변 도메인(VL) 내의 CDR 아미노산 잔기는 24~34(LCDR1), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)로 넘버링된다. Chothia 하에서, VH 내의 CDR 아미노산은 26~32(HCDR1), 52~56(HCDR2), 및 95-102(HCDR3)로 넘버링되고; VL 내의 아미노산 잔기는 26~32(LCDR1), 50~52(LCDR2), 및 91~96(LCDR3)으로 넘버링된다. Kabat 및 Chothia 둘 모두의 CDR 정의의 조합에 의하면, CDR은 인간 VH 내의 아미노산 잔기 26~35(HCDR1), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3) 및 인간 VL 내의 아미노산 잔기 24~34(LCDR1), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)로 구성된다.

일반적으로, 구체적으로 지시되지 않는 한, 항체 분자는 하나 이상의 Kabat CDR 및/또는 Chothia 초가변 루프의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 표 1에 기재된 항체 분자에 대해 하기 정의가 사용된다: Kabat 및 Chothia 둘 모두의 조합된 CDR 정의에 따른 HCDR1, 및 Kabat의 CDR 정의에 다른 HCCDR 2~3 및 LCCDR 1~3. 모든 정의 하에서, 각각의 VH 및 VL은 전형적으로 하기 순서로 아미노 말단부터 카복시 말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

본원에 사용된 바와 같은 "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 나타낸다. 예를 들어, 서열은 자연 발생 가변 도메인의 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열은 1개, 또는 2개 이상의 N- 또는 C-말단 아미노산을 포함할 수 있거나, 포함하지 않을 수 있거나, 단백질 구조의 형성과 상용성인 다른 변경을 포함할 수 있다.

용어 "항원-결합 부위"는 표적(예컨대 TGFβ) 또는 이의 에피토프에 결합하는 계면을 형성하는 결정기를 포함하는 항체 분자의 일부를 나타낸다. 단백질(또는 단백질 모방체)에 관하여, 항원 결합 부위는 전형적으로 표적 폴리펩타이드에 결합하는 계면을 형성하는 (적어도 4개의 아미노산 또는 아미노산 모방체의) 하나 이상의 루프를 포함한다. 전형적으로, 항체 분자의 항원 결합 부위는 적어도 1개 또는 2개의 CDR 및/또는 초가변 루프, 또는 더 전형적으로는 적어도 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR 및/또는 초가변 루프를 포함한다.

용어 "경쟁하다" 또는 "교차-경쟁하다"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되어 항체 분자가 또 다른 항체 분자, 예를 들어 본원에 제공된 항-TGFβ 항체 분자의 표적, 예를 들어 TGFβ1, 2, 또는 3에 대한 결합을 방해하는 능력을 나타낸다. 결합의 방해는 직접적이거나 간접적일(예를 들어 항체 분자 또는 표적의 알로스테릭 조절을 통해) 수 있다. 항체 분자가 또 다른 항체 분자의 표적에 대한 결합을 방해할 수 있는 정도, 그리고 이에 따라 이것이 경쟁하는 것으로 언급될 수 있는지 여부는 경쟁 결합 검정, 예를 들어 FACS 검정, ELISA 또는 BIACORE 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 경쟁 결합 검정은 정량적 경쟁 검정이다. 일부 구현예에서, 제1 항-TGFβ 항체 분자는 표적에 대한 제1 항체 분자의 결합이 경쟁 결합 검정(예를 들어 본원에 기재된 경쟁 검정)에서 10% 이상, 예를 들어 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 99% 이상만큼 감소되는 경우, 제2 항-TGFβ 항체 분자와 표적으로의 결합에 대해 경쟁한다고 언급된다.

본원에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 단일 분자 조성의 항체 분자 제조물을 나타낸다. 모노클로날 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타낸다. 모노클로날 항체는 하이브리도마 기술에 의해 또는 하이브리도마 기술을 사용하지 않는 방법(예를 들어 재조합 방법)에 의해 제조될 수 있다.

"사실상 인간" 단백질은 중화 항체 반응, 예를 들어 인간 항-뮤린 항체(HAMA) 반응을 유발하지 않는 단백질이다. HAMA는, 예를 들어 항체 분자가, 예를 들어 만성 또는 재발성 질환 병태의 치료에서, 반복 투여되는 경우, 여러 상황에서 문제가 될 수 있다. HAMA 반응은 혈청으로부터의 증가된 항체 제거(예를 들어, 문헌[Saleh et al. , Cancer Immunol. Immunother. 32:180-190 (1990)] 참고)로 인해 그리고 또한, 잠재적인 알러지 반응(예를 들어, 문헌[LoBuglio et al., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)] 참고)으로 인해 반복된 항체 투여를 잠재적으로 비효과적으로 만들 수 있다.

항체 분자는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체일 수 있다. 다른 구현예에서, 항체는 재조합적으로 생성될 수 있으며, 예를 들어 파지 디스플레이에 의해 또는 조합적 방법에 의해 생성될 수 있다.

항체를 생성하기 위한 파지 디스플레이 및 조합적 방법은 당분야에 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Ladner 등의 미국 특허 제5,223,409호; Kang 등의 국제 공보 제WO 92/18619호; Dower 등의 국제 공보 제WO 91/17271호; Winter 등의 국제 공보 WO 92/20791; Markland 등의 국제 공보 제WO 92/15679호; Breitling 등의 국제 공보 WO 93/01288; McCafferty 등의 국제 국제 공보 제WO 92/01047호; Garrard 등의 국제 국제 공보 제WO 92/09690호; Ladner 등의 국제 국제 공보 제WO 90/02809호; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9 :1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibody Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; Griffths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; 및 Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982]에 기재된 바와 같음).

하나의 구현예에서, 항체는 완전 인간 항체(예를 들어, 인간 면역글로불린 서열로부터 항체를 생성하기 위해 유전적으로 조작된 마우스에서 제조된 항체), 또는 비-인간 항체, 예를 들어 설치류(마우스 또는 래트), 염소, 영장류(예를 들어 원숭이), 낙타 항체이다. 바람직하게는, 비-인간 항체는 설치류(마우스 또는 래트 항체)이다. 설치류 항체를 생성하는 방법은 알려져 있다.

인간 모노클로날 항체는 마우스 시스템이 아닌 인간 면역글로불린 유전자를 운반하는 트랜스제닉 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 관심 항원으로 면역화된 이러한 트랜스제닉 마우스의 비장세포는 인간 단백질로부터의 에피토프에 대해 특이적인 친화도를 가진 인간 mAb를 분비하는 하이브리도마를 생성하는 데 사용된다(예를 들어, 문헌[Wood 등의 국제 출원 WO 91/00906, Kucherlapati 등의 PCT 공보 WO 91/10741; Lonberg 등의 국제 출원 WO 92/03918; Kay 등의 국제 출원 92/03917; Lonberg, N. et al. 1994 Nature 368:856-859; Green, L.L. et al. 1994 Nature Genet. 7:13-21; Morrison, S.L. et al. 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855; Bruggeman et al. 1993 Year Immunol 7:33-40; Tuaillon et al. 1993 PNAS 90:3720-3724; Bruggeman et al. 1991 Eur J Immunol 21:1323-1326] 참고).

항체는 가변 영역, 또는 이의 일부, 예를 들어 CDR이 비-인간 유기체, 예를 들어 래트 또는 마우스에서 생성되는 것일 수 있다. 키메라, CDR-이식, 및 인간화 항체는 본 발명의 범위 내이다. 인간에서의 항원성을 감소시키기 위해 비-인간 유기체, 예를 들어 래트 또는 마우스에서 생성된 후, 예를 들어 가변 프레임워크 또는 불변 영역이 개질된 항체는 본 발명의 범위 내이다.

키메라 항체는 당분야에 알려진 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 수 있다(문헌[Robinson 등의 국제 특허 국제 공보 PCT/US86/02269; Akira 등의 유럽 특허 출원 184,187; Taniguchi, M.의 유럽 특허 출원 171,496; Morrison 등의 유럽 특허 출원 173,494; Neuberger 등의 국제 출원 WO 86/01533; Cabilly 등의 미국 특허 제4,816,567호; Cabilly 등의 유럽 특허 출원 125,023; Better et al. (1988 Science 240:1041-1043); Liu et al. (1987) PNAS 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Canc. Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-449; 및 Shaw et al., 1988, J. Natl Cancer Inst. 80:1553-1559)] 참고).

인간화 또는 CDR-이식 항체는 (중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 사슬 중) 적어도 1개 또는 2개, 그러나 일반적으로는 3개의 모든 수령 CDR이 공여 CDR로 대체될 것이다. 항체는 비인간 CDR의 적어도 일부로 대체될 수 있거나 CDR의 일부만이 비인간 CDR로 대체될 수 있다. 그 표적, 예를 들어 TGFβ에 대한 인간화 항체의 결합에 요구되는 CDR의 수만 대체하는 것이 필요하다. 바람직하게는, 공여체는 설치류 항체, 예를 들어 래트 또는 마우스 항체일 것이며, 수령체는 인간 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크일 것이다. 전형적으로, CDR을 제공하는 면역글로불린은 "공여체"로 불리고, 프레임워크를 제공하는 면역글로불린은 "수신체"로 불린다. 하나의 구현예에서, 공여체 면역글로불린은 비인간(예를 들어, 설치류)이다. 수신체 프레임워크는 자연 발생(예를 들어, 인간) 프레임워크 또는 공통 프레임워크이거나, 이와 약 85% 이상, 바람직하게는 90%, 95%, 99% 이상 동일한 서열이다.

본원에서 사용되는 용어 "공통 서열"은 관련 서열 패밀리(예를 들어 문헌[Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987)] 참고)에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산(또는 뉴클레오타이드)으로부터 형성된 서열을 나타낸다. 단백질 패밀리에서, 공통 서열에서의 각각의 위치는 패밀리에서의 그 위치에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산에 의해 점유된다. 2개의 아미노산이 동일하게 빈번히 발생하는 경우, 둘 중 어느 것이든 공통 서열에 포함될 수 있다. "공통 프레임워크"는 공통 면역글로불린 서열에서의 프레임워크 영역을 나타낸다.

항체는 당분야에 알려진 방법에 의해 인간화될 수 있다(예를 들어, 문헌[Morrison, S. L., 1985, Science 229:1202-1207, Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214, 및 Queen 등의 미국 특허 5,585,089, 미국 특허 5,693,761 및 미국 특허 5,693,762] 참고).

인간화 또는 CDR-이식 항체는 CDR-이식 또는 CDR 치환에 의해 생성될 수 있고, 면역글로불린 사슬의 1개, 2개 또는 모든 CDR이 대체될 수 있다. 예를 들어, 문헌[미국 특허 5,225,539; Jones et al. 1986 Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. 1988 Science 239:1534; Beidler et al. 1988 J. Immunol. 141:4053-4060; Winter 미국 특허 5,225,539]를 참고한다. Winter는 본 발명의 인간화 항체를 제조하는 데 사용될 수 있는 CDR 이식 방법을 설명한다(1987년 3월 26일 출원된 영국 특허 출원 GB 2188638A; Winter 미국 특허 5,225,539).

또한 특정 아미노산이 치환되거나, 결실되거나, 부가된 인간화 항체는 본 발명의 범위 내이다. 공여체로부터 아미노산을 선택하는 기준은 미국 특허 5,585,089, 예를 들어 미국 특허 5,585,089의 12~16열, 예를 들어 미국 특허 5,585,089의 12~16열에 기재되어 있다. 항체를 인간화하는 다른 기법은 1992년 12월 23일에 공개된 Padlan 등의 EP 519596 A1에 기재되어 있다.

항체 분자는 단일쇄 항체일 수 있다. 단일쇄 항체(scFV)는 조작될 수 있다(예를 들어, 문헌[Colcher, D. et al. (1999) Ann N Y Acad Sci 880:263-80; 및 Reiter, Y. (1996) Clin Cancer Res 2:245-52] 참고). 단일쇄 항체는 동일한 표적 단백질의 상이한 에피토프에 대해 특이성을 갖는 다가 항체를 생성하기 위해 이량체화되거나 다량체화될 수 있다.

다른 구현예에서, 항체 분자는 중쇄 불변 영역, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역; 특히, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 (인간) 중쇄 불변 영역을 갖는다. 또 다른 구현예에서, 항체 분자는 경쇄 불변 영역, 예를 들어 카파 또는 람다 (인간) 경쇄 불변 영역을 갖는다. 불변 영역은 변경되어, 예를 들어, 돌연변이되어, 항체의 특성을 개질할 수 있다(예를 들어, 하기: Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능, 및/또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시킬 수 있음). 하나의 구현예에서, 항체는 효과기 기능을 가지며; 보체를 고정할 수 있다. 다른 구현예에서, 항체는 효과기 세포를 모집하거나 보체를 고정하지 않는다. 다른 구현예에서, 항체는 Fc 수용체에 결합하는 능력이 감소되거나 없다. 예를 들어, 이는 이소형 또는 서브타입, 단편 또는 다른 돌연변이체이고, 이는 Fc 수용체에 대한 결합을 지지하지 않으며, 예를 들어 돌연변이되거나 결실된 Fc 수용체 결합 영역을 갖는다.

항체 불변 영역을 변경하는 방법은 당분야에 알려져 있다. 효과기 리간드, 예를 들어 세포 상의 FcR, 또는 보체의 C1 구성요소에 대해 변경된 기능, 예를 들어 변경된 친화도를 갖는 항체는 항체의 불변 부분에서 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 잔기로 대체함으로써 생성될 수 있다(예를 들어, EP 388,151 A1, 미국 특허 제5,624,821호 및 미국 특허 제5,648,260호 참고). 뮤린, 또는 다른 종에 적용되는 경우 면역글로불린이 이들 기능을 감소시키거나 제거할 유사한 유형의 변경이 기재될 수 있다.

항체 분자는 또 다른 기능적 분자(예를 들어 또 다른 펩타이드 또는 단백질)로 유도체화되거나 이에 결합될 수 있다. 본원에서 사용되는 "유도체화" 항체 분자는 개질된 것이다. 유도체화 방법은 형광 모이어티, 방사성뉴클레오타이드, 독소, 효소 또는 친화도 리간드, 예컨대 바이오틴의 부가를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, 본 발명의 항체 분자는 면역접착소 분자를 포함하여, 본원에 기재된 항체의 유도체화 및 달리 개질된 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 항체 분자는 하나 이상의 다른 분자 대상물, 예컨대 또 다른 항체(예를 들어 이중특이적 항체 또는 디아바디), 검출 가능 제제, 세포독성 제제, 약학 제제, 및/또는 항체 또는 항체의 부분과 또 다른 분자(예컨대 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)의 연합을 매개할 수 있는 단백질 또는 펩타이드에 기능적으로 결합될 수 있다(화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유 연합 등에 의해).

유도체화 항체 분자의 하나의 유형은 2개 이상의(예를 들어 이중특이적 항체를 생성하기 위한, 동일한 유형 또는 상이한 유형의) 항체를 가교함으로써 생성된다. 적합한 가교제는 적절한 스페이서(예를 들어 m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르)에 의해 분리된 2개의 구별되는 반응기를 갖는 이종2기능성 또는 동종2기능성(예를 들어 디숙신이미딜 수베레이트)인 것들을 포함한다. 이러한 링커는 Pierce Chemical Company(Rockford, Ill)로부터 입수 가능하다.

본 발명의 항체 분자가 유도체화(또는 표지)될 수 있는 유용한 검출 가능 제제는 형광 화합물, 다양한 효소, 보철기, 발광 물질, 생체발광 물질, 형광 방출 금속 원자, 예를 들어 유로퓸(Eu) 및 다른 안탄족 원소 및 방사활성 물질(아래에 기재됨)을 포함한다. 예시적인 검출 가능 형광 제제는 플루오레신, 플루오레신 이소티오시아네이트, 로다민, 5디메틸아민-1-나프탈렌설포닐 클로라이드, 피코에리트린 등을 포함한다. 항체는 또한 검출 가능 효소, 예컨대 알칼리성 포스파타제, 홀스래디쉬 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 아세틸콜린에스터라제, 글루코스 옥시다제 등으로 유도체화될 수 있다. 항체가 검출 가능 효소로 유도체화되는 경우, 이는 효소가 검출 가능 반응 산물을 생성하기 위해 사용하는 추가 시약을 첨가함으로써 검출된다. 예를 들어, 검출 가능 제제 홀스래디쉬 퍼옥시다제가 존재하는 경우, 과산화수소 및 디아미노벤지딘의 첨가는 검출 가능한, 유색 반응 산물을 생성한다. 항체 분자는 또한 보철기(예를 들어 스트렙타비딘/바이오틴 및 애비딘/바이오틴)로 유도체화될 수 있다. 예를 들어, 항체는 바이오틴으로 유도체화되고, 애비딘 또는 스트렙타비딘 결합의 간접적 측정을 통해 검출될 수 있다. 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레신, 플루오레신 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레신, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하며; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하고; 생체발광 물질의 예는 루시퍼라제, 루시페린, 및 애쿠오린을 포함한다.

표지된 항체 분자는, 예를 들어, (i) 표준 기법, 예컨대 친화도 크로마토그래피 또는 면역침전에 의해 사전결정된 항원을 단리하기 위해서; (ii) 단백질의 풍부도 및 발현 패턴을 평가하기 위한 사전결정된 항원을(예를 들어 세포 용해액 또는 세포 상청액 중) 검출하기 위해서; (iii) 예를 들어 주어진 치료 요법의 유효성을 결정하기 위한, 임상 시험 절차의 일환으로 조직 내 단백질 수준을 모니터링하기 위해서를 포함하는 여러 맥락에서 진단학적으로 및/또는 실험적으로 사용될 수 있다.

항체 분자는 또 다른 분자 대상물, 전형적으로 표지 또는 치료(예를 들어, 세포독성 또는 세포증식억제) 제제 또는 모이어티에 접합될 수 있다. 방사활성 동위원소는 진단 또는 치료 적용에서 사용될 수 있다.

본 발명은 방사성표지된 항체 분자 및 이를 표지하는 방법을 제공한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자를 표지하는 방법이 개시되어 있다. 방법은 항체 분자를 킬레이트화제와 접촉시켜 접합된 항체를 생성하는 단계를 포함한다.

상기 논의된 바와 같이, 항체 분자는 치료제에 접합될 수 있다. 치료 활성 방사성동위원소는 이미 언급되었다. 다른 치료제의 예는 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 액티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 메이탄시노이드, 예를 들어 메이탄시놀(예를 들어 미국 특허 제5,208,020호 참고), CC-1065(예를 들어 미국 특허 제5,475,092호, 제5,585,499호, 제5,846,545호 참고) 및 이의 유사체 또는 상동체를 포함한다. 치료제는 항대사물질(예를 들어 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예를 들어 메클로르에타민, 티오에파 클로람부실, CC-1065, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 사이클로토스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민 백금(II)(DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린(예를 들어 다우노루비신(예전 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예를 들어 닥티노마이신(예전 액티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신(AMC)), 및 항-유사분열 제제(예를 들어 빈크리스틴, 빈블라스틴, 탁솔 및 메이탄시노이드)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

하나의 양태에서, 본 개시는 전체에 걸쳐 개시된 표적에 특이적으로 결합하는 표적 결합 분자를 제공하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 표적 결합 분자는 항체 분자이다. 방법은 비-인간 단백질의 적어도 일부를 포함하는 표적 단백질을 제공하는 단계로서, 이 부분은 인간 표적 단백질의 대응하는 부분과 상동성이지만(적어도 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하지만) 적어도 하나의 아미노산(예를 들어 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 또는 9개 아미노산)만큼 상이한, 단계; 항원에 특이적으로 결합하는 항체 분자를 수득하는 단계; 및 표적 단백질의 활성 조절에서 결합제의 유효성을 평가하는 단계를 포함한다. 방법은 결합제(예를 들어 항체 분자) 또는 유도체(예를 들어 인간화 항체 분자)를 인간 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

본 개시는 전체에 걸쳐 기재된 임의의 항체 분자를 암호화하는 단리된 핵산 분자(즉, 폴리뉴클레오타이드)를 제공한다. 또한, 핵산 분자를 포함하는 벡터 및 이의 숙주 세포가 개시되어 있다. 핵산 분자는 RNA, 게놈 DNA, 및 cDNA를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

조합

본원에서 기재된 치료 방법은 조합하여 투여되는 2개 이상의 다른 치료제, 절차 또는 방식을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는 PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자)와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 PD1 억제제와 동일한 날에 투여된다. 추가 구현예에서, TGF-β 억제제는 PD1 억제제의 투여가 시작된 후에 투여된다. 추가 구현예에서, TGF-β 억제제는 항-PD1 억제제의 투여가 완료된 1시간 후에 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는, 예를 들어 2주 1회, 1300 mg 내지 1500 mg(예를 들어, 약 1400 mg)의 용량으로 투여되고, PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자, 예를 들어, 스파르탈리주맙)는, 예를 들어 4주 1회, 300 mg 내지 500 mg(예를 들어, 400 mg)의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는, 예를 들어 2주 1회, 1300 mg 내지 1500 mg(예를 들어, 약 1400 mg)의 용량으로 투여되고, PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자, 예를 들어, 스파르탈리주맙)는, 예를 들어 3주 1회, 200 mg 내지 400 mg(예를 들어, 300 mg)의 용량으로 투여된다

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는, 예를 들어 2주 1회, 2000 mg 내지 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 투여되고, PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자, 예를 들어, 스파르탈리주맙)는, 예를 들어 4주 1회, 300 mg 내지 500 mg(예를 들어, 400 mg)의 용량으로 투여된다

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는, 예를 들어 2주 1회, 2000 mg 내지 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 투여되고, PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자, 예를 들어, 스파르탈리주맙)는, 예를 들어 3주 1회, 200 mg 내지 400 mg(예를 들어, 300 mg)의 용량으로 투여된다

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는, 예를 들어 3주 1회, 2000 mg 내지 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 투여되고, PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자, 예를 들어, 스파르탈리주맙)는, 예를 들어 4주 1회, 300 mg 내지 500 mg(예를 들어, 400 mg)의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, TGF-β 억제제(예를 들어, NIS793)는, 예를 들어 3주 1회, 2000 mg 내지 2200 mg(예를 들어, 약 2100 mg)의 용량으로 투여되고, PD1 억제제(예를 들어, 항-PD1 항체 분자, 예를 들어, 스파르탈리주맙)는, 예를 들어 3주 1회, 200 mg 내지 400 mg(예를 들어, 300 mg)의 용량으로 투여된다

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 항체 분자, 화학치료제, 기타 항암 치료법(예를 들어, 표적화된 항암 치료법, 유전자 치료법, 바이러스 치료법, RNA 치료법 골수 이식, 나노치료법 또는 종양용해 약물), 세포독성제, 면역 기반 치료법(예를 들어 사이토카인 또는 세포 기반 면역 치료법), 수술 절차(예를 들어 유방절제술 또는 유방절제술) 또는 방사선 시술, 또는 전술한 것 중 어느 하나의 조합을 포함하는 하나 이상의 다른 치료제와 함께 투여될 수 있다. 추가 치료법은 애주번트 또는 네오애주번트 치료법 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 치료법은 효소 억제제(예를 들어, 소분자 효소 억제제) 또는 전이 억제제이다. 조합하여 투여될 수 있는 예시적인 세포독성제는 항미세소관제, 토포이소머라제 억제제, 항대사물질, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 종격제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제, 아폽토시스를 촉진하는 제제, 프로테아좀 억제제, 및 방사선(예를 들어, 국소 또는 전신 조사(예를 들어, 감마 조사))을 포함한다. 다른 구현예에서, 추가 치료법은 수술 또는 방사선, 또는 이의 조합이다. 다른 구현예에서, 추가 치료법은 하나 이상의 PI3K/AKT/mTOR 경로를 표적화하는 치료법, HSP90 억제제, 또는 튜불린 억제제이다.

대안적으로, 또는 상기 언급된 방법과 조합하여, 본원에 기재된 방법은 하기 중 하나 이상과 함께 투여되거나 사용될 수 있다: 면역조절제(예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 억제 분자, 예를 들어, 면역 체크포인트 분자의 억제제); 백신, 예를 들어, 치료용 암 백신; 또는 기타 형태의 세포 면역치료법.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 조합은 공동자극 분자 또는 억제 분자의 조절제, 예를 들어 공동-억제 리간드 또는 수용체와 함께 투여되거나 사용된다.

하나의 구현예에서, 본원에 기재된 조합은 억제(또는 면역 체크포인트) 분자 PD-1, PD-L1, PD-L2, 및/또는 TGFβ의 억제제와 조합하여 투여되거나 사용된다. 하나의 구현예에서, 억제제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, 또는 TGFβ에 결합하는 항체 또는 항체 단편이다.

조합 치료의 경우, 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제와 동일한 날에 투여된다. 다른 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제의 투여가 완료되기 전에 투여된다. 추가 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제의 투여가 완료된 후에 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 체크포인트 억제제와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, TGF-β 억제제는 (부분적 또는 완전한) 관해 시까지 제공된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 억제제는 (부분적 또는 완전한) 관해 시까지 제공된다.

본 개시의 화합물은 하나 이상의 치료제(약학 조합) 또는 방식, 예를 들어 비-약물 치료법과의 조합 치료법에서 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 다른 항암제와 함께 시너지 효과가 나타날 수 있다. 본 출원의 화합물이 다른 치료제와 함께 투여되는 경우, 공동 투여 화합물의 투여량은 이용되는 공동 약물의 유형, 이용되는 특정 약물, 치료받는 병태 등에 따라 달라진다.

화합물은 다른 약물 치료법 또는 치료 방식에 대해 동시에(단일 제조물 또는 별도 제조물로서), 순차적으로, 별도로, 또는 일정 시기에 걸쳐 투여될 수 있다. 일반적으로, 조합 치료법은 단일 치료법 주기 또는 과정 동안 2개 이상의 약물 투여를 계획한다. 치료제는, 예를 들어 화학적 화합물, 펩타이드, 항체, 항체 단편, 또는 핵산이며, 이는 치료적으로 활성이거나 본 발명의 화합물과 조합하여 환자에게 투여될 때 치료 활성을 증강시킨다.

하나의 양태에서, TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1 또는 PD-L2 억제제)는 다른 치료제, 예컨대 다른 항암제, 항알러기제, 항오심제(또는 항구토제), 진통제, 세포보호제, 및 이의 조합과 조합될 수 있다.

일부 구현예에서, TGFβ 억제제는 질환, 예를 들어, 암을 치료하기 위해, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, LAG-3 억제제, 사이토카인, A2A 길항제, GITR 작용제, TIM-3 억제제, STING 작용제, 및 TLR7 작용제로부터 선택되는 하나 이상의 제2 제제(들)와 조합하여 투여된다.

또 다른 구현예에서, 질환, 예를 들어, 암을 치료하기 위해 하나 이상의 화학치료제가 TGFβ 억제제(및/또는 PD-1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용되며, 상기 화학치료제는 아나스트로졸(Arimidex®), 바이칼루타미드(Casodex®), 블레오마이신 설페이트(Blenoxane®), 부설판(Myleran®), 부설판 주사(Busulfex®), 카페시타빈(Xeloda®), N4-펜톡시카보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카보플라틴(Paraplatin®), 카르무스틴(BiCNU®), 클로람부실(Leukeran®), 시스플라틴(Platinol®), 클라드리빈(Leustatin®), 사이클로포스파미드(Cytoxan® 또는 Neosar®), 시타라빈, 시토신 아라비노시드(Cytosar-U®), 시타라빈 리포좀 주사(DepoCyt®), 다카바진(DTIC-Dome®), 닥티노마이신(액티노마이신 D, 코스메간), 다우노루비신 하이드로클로라이드(Cerubidine®), 다우노루비신 시트레이트 리포좀 주사(DaunoXome®), 덱사메타손, 도세탁셀(Taxotere®), 독소루비신 하이드로클로라이드(Adriamycin®, Rubex®), 에토포시드(Vepesid®), 플루다라빈 포스페이트(Fludara®), 5-플루오로우라실(Adrucil®, Efudex®), 플루타미드(Eulexin®), 테자시티빈, 젬시타빈(디플루오로데옥시시티딘), 하이드록시우레아(Hydrea®), 이다루비신(Idamycin®), 이포스파미드(IFEX®), 이리노테칸(Camptosar®), L-아스파라기나제(ELSPAR®), 류코보린 칼슘, 멜팔란(Alkeran®), 6-메르캅토퓨린(Purinethol®), 메토트렉세이트(Folex®), 미톡산트론(Novantrone®), 마일로타그, 파클리탁셀(Taxol®), 피닉스(이트륨90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 카르무스틴 임플란트와 폴리페프로산 20(Gliadel®), 타목시펜 시트레이트(Nolvadex®), 테니포시드(Vumon®), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민(Tirazone®), 주사용 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamptin®), 빈블라스틴(Velban®), 빈크리스틴(Oncovin®), 비노렐빈(Navelbine®), 에피루비신(Ellence®), 옥살리플라틴(Eloxatin®), 엑세메스탄(Aromasin®), 레트로졸(Femara®), 및 풀베스트란트(Faslodex®)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD-1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 하나 이상의 다른 항-HER2 항체, 예를 들어 트라스트주맙, 퍼투주맙, 마르게툭시맙, 또는 상술된 HT-19, 또는 다른 항-HER2 접합체, 예를 들어 아도-트라스트주맙 엠탄신(Kadcyla® 또는 T-DM1로도 알려짐)과 조합하여 사용된다.

다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD-1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환, 예를 들어, 암을 치료하기 위해 EGFR 억제제, Her3 억제제, IGFR 억제제, 및 Met 억제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 티로신 키나제 억제제와 조합하여 사용된다.

예를 들어, 티로신 키나제 억제제는 에를로티닙 하이드로클로라이드(Tarceva®); 리니파닙(N-[4-(3-아미노-1H-인다졸-4-일)페닐]-N'-(2-플루오로-5-메틸페닐)우레아(ABT 869로도 알려짐, Genentech에서 입수 가능); 수니티닙 말레이트(Sutent®); 보수티닙(4-[(2,4-디클로로-5-메톡시페닐)아미노]-6-메톡시-7-[3-(4-메틸피페라진-1-일)프로폭시]퀴놀린-3-카보니트릴(SKI-606으로도 알려져 있고, 미국 특허 제6,780,996호에 기재되어 있음); 다사티닙(Sprycel®); 파조파닙(Votrient®); 소라페닙(Nexavar®); 작티마(ZD6474); 및 이마티닙 또는 이마티닙 메실레이트(Gilvec® 및 Gleevec®)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

표피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제는 에를로티닙 하이드로클로라이드(Tarceva®), 게피티닙(Iressa®); N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3''S'')-테트라하이드로-3-푸라닐]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4(디메틸아미노)-2-부텐아미드, Tovok®); 반데타닙(Caprelsa®); 라파티닙(Tykerb®); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); 카네르티닙 디하이드로클로라이드(CI-1033); 6-[4-[(4-에틸-1-피페라진일)메틸]페닐]-N-[(1R)-1-페닐에틸]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(AEE788, CAS 497839-62-0); 무브리티닙(TAK165); 펠리티닙(EKB569); 아파티닙(Gilotrif®); 네라티닙(HKI-272); N-[4-[[1-[(3-플루오로페닐)메틸]-1H-인다졸-5-일]아미노]-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-카밤산, (3S)-3-모르폴리닐메틸 에스테르(BMS599626); N-(3,4-디클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸시클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8); 및 4-[4-[[(1R)-1-페닐에틸]아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀(PKI166, CAS187724-61-4)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

EGFR 항체는 세툭시맙(Erbitux®); 파니투무맙(Vectibix®); 마투주맙(EMD-72000); 니모투주맙(hR3); 잘루투무맙; TheraCIM h-R3; MDX0447(CAS 339151-96-1); 및 ch806(mAb-806, CAS 946414-09-1)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

다른 HER2 억제제는 네라티닙(HKI-272, (2E)-N-[4-[[3-클로로-4-[(피리딘-2-일)메톡시]페닐]아미노]-3-시아노-7-에톡시퀴놀린-6-일]-4-(디메틸아미노)부트-2-엔아미드(PCT 공보 제WO 05/028443호에 기재되어 있음); 라파티닙 또는 라파티닙 디토실레이트(Tykerb®); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); (2E)-N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3S)-테트라하이드로-3-푸라닐]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4-(디메틸아미노)-2-부텐아미드(BIBW-2992, CAS 850140-72-6); N-[4-[[1-[(3-플루오로페닐)메틸]-1H-인다졸-5-일]아미노]-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-카밤산, (3S)-3-모르폴리닐메틸 에스테르(BMS 599626, CAS 714971-09-2); 카네르티닙 디하이드로클로라이드(PD183805 또는 CI-1033); 및 N-(3,4-디클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸사이클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

HER3 억제제는 LJM716, MM-121, AMG-888, RG7116, REGN-1400, AV-203, MP-RM-1, MM-111, 및 MEHD-7945A를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

MET 억제제는 카보잔티닙(XL184, CAS 849217-68-1); 포레티닙(GSK1363089, 예전 XL880, CAS 849217-64-7); 티반티닙(ARQ197, CAS 1000873-98-2); 1-(2-하이드록시-2-메틸프로필)-N-(5-(7-메톡시퀴놀린-4-일옥시)피리딘-2-일)-5-메틸-3-옥소-2-페닐-2,3-디하이드로-1H-피라졸-4-카복사미드(AMG 458); 크리조티닙(Xalkori®, PF-02341066); (3Z)-5-(2,3-디하이드로-1H-인돌-1-일설포닐)-3-({3,5-디메틸-4-[(4-메틸피페라진-1-일)카보닐]-1H-피롤-2-일}메틸렌)-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(SU11271); (3Z)-N-(3-클로로페닐)-3-({3,5-디메틸-4-[(4-메틸피페라진-1-일)카보닐]-1H-피롤-2-일}메틸렌)-N-메틸-2-옥소인돌린-5-설폰아미드(SU11274); (3Z)-N-(3-클로로페닐)-3-{[3,5-디메틸-4-(3-모르폴린-4-일프로필)-1H-피롤-2-일]메틸렌}-N-메틸-2-옥소인돌린-5-설폰아미드(SU11606); 6-[디플루오로[6-(1-메틸-1H피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸]-퀴놀린(JNJ38877605, CAS 943540-75-8); 2-[4-[1-(퀴놀린-6-일메틸)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-6-일]-1H-피라졸-1-일]에탄올(PF04217903, CAS 956905-27-4); N-((2R)-1,4-디옥산-2-일메틸)-N-메틸-N'-[3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-옥소-5H-벤조[4,5]사이클로헵타[1,2-b]피리딘-7-일]설파미드(MK2461, CAS 917879-39-1); 6-[[6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진 3-일]티오]-퀴놀린(SGX523, CAS 1022150-57-7); 및 (3Z)-5-[[(2,6-디클로로페닐)페틸]설포닐]-3-[[3,5-디메틸-4-[[(2R)-2-(1-피롤리디닐메틸)-1-피롤리디닐]카보닐]-1H-피롤-2-일]메틸렌]-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(PHA665752, CAS 477575-56-7)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

IGFR 억제제는 BMS-754807, XL-228, OSI-906, GSK0904529A, A-928605, AXL1717, KW-2450, MK0646, AMG479, IMCA12, MEDI-573, 및 BI836845를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Yee, JNCI, 104; 975 (2012)]을 참고한다.

또 다른 구현예에서, TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환(예를 들어, 암)을 치료하기 위해 MEK 억제제, BRAF 억제제, PI3K/Akt 억제제, SHP2 억제제, 및 또한 mTOR 억제제, 그리고 CDK 억제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 증식 신호전달 경로 억제제와 조합하여 사용된다.

예를 들어, 미토겐-활성화 단백질 키나제(MEK) 억제제는 XL-518(GDC-0973으로도 알려짐, CAS 번호 1029872-29-4, ACC Corp.에서 입수 가능); 2-[(2-클로로-4-요오도페닐)아미노]-N-(사이클로프로필메톡시)-3,4-디플루오로-벤즈아미드(CI-1040 또는 PD184352로도 알려지고 PCT 공보 제WO2000035436호에 기재되어 있음); N-[(2R)-2,3-디하이드록시프로폭시]-3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-벤즈아미드(PD0325901로도 알려지고 PCT 공보 제WO2002006213호에 기재되어 있음); 2,3-비스[아미노[(2-아미노페닐)티오]메틸렌]-부탄디니트릴(U0126으로도 알려지고 미국 특허 제2,779,780호에 기재되어 있음); N-[3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-6-메톡시페닐]-1-[(2R)-2,3-디하이드록시프로필]-사이클로프로판설폰아미드(RDEA119 또는 BAY869766으로도 알려지고 PCT 공보 제WO2007014011호에 기재되어 있음); (3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(에틸아미노)-8,9,16-트리하이드록시-3,4-디메틸-3,4,9,19-테트라하이드로-1H-2-벤족사사이클로테트라데신-1,7(8H)-디온](E6201로도 알려지고 PCT 공보 제WO2003076424호에 기재되어 있음); 2'-아미노-3'-메톡시플라본(PD98059로도 알려지고, Biaffin GmbH & Co.(KG, 독일)에서 입수 가능); (R)-3-(2,3-디하이드록시프로필)-6-플루오로-5-(2-플루오로-4-요오도페닐아미노)-8-메틸피리도[2,3-d]피리미딘-4,7(3H,8H)-디온(TAK-733, CAS 1035555-63-5); 피마세르팁(AS-703026, CAS 1204531-26-9); 및 트라메티닙 디메틸 설폭시드(GSK-1120212, CAS 1204531-25-80)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

BRAF 억제제는 베무라페닙(또는 Zelboraf®, PLX-4032, CAS 918504-65-1), GDC-0879, PLX-4720(Symansis에서 입수 가능), 다브라페닙(또는 GSK2118436), LGX 818, CEP-32496, UI-152, RAF 265, 레고라페닙(BAY 73-4506), CCT239065, 또는 소라페닙(또는 소라페닙 토실레이트, 또는 Nexavar®)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

포스포이노시티드 3-키나제(PI3K) 억제제는 4-[2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸설포닐)피페라진-1-일]메틸]티에노[3,2-d]피리미딘-4-일]모르폴린(GDC0941, RG7321, GNE0941, 픽트렐리십, 또는 픽틸리십으로도 알려져 있고, PCT 공보 제WO 09/036082호 및 제WO 09/055730호에 기재되어 있음); 토자세르팁(VX680 또는 MK-0457, CAS 639089-54-6); (5Z)-5-[[4-(4-피리디닐)-6-퀴놀리닐]메틸렌]-2,4-티아졸리딘디온(GSK1059615, CAS 958852-01-2); (1E,4S,4aR,5R,6aS,9aR)-5-(아세틸옥시)-1-[(디-2-프로페닐아미노)메틸렌]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-옥타하이드로-11-하이드록시-4-(메톡시메틸)-4a,6a-디메틸사이클로펜타[5,6]나프토[1,2-c]피란-2,7,10(1H)-트리온(PX866, CAS 502632-66-8); 8-페닐-2-(모르폴린-4-일)-크로멘-4-온(LY294002, CAS 154447-36-6); (S)-N1-(4-메틸-5-(2-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)피리딘-4-일)티아졸-2-일)피롤리딘-1,2-디카복사미드(BYL719 또는 알펠리십으로도 알려짐); 2-(4-(2-(1-이소프로필-3-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일)-5,6-디하이드로벤조[f]이미다조[1,2-d][1,4]옥사제핀-9-일)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판아미드(GDC0032, RG7604, 또는 타셀리십으로도 알려짐)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

mTOR 억제제는 템시롤리무스(Torisel®); 리다포롤리무스(예전에는 데페롤리무스로 알려짐, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2 [(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-디하이드록시-19,30-디메톡시-15,17,21,23,29,35-헥사메틸-2,3,10,14,20-펜타옥소-11,36-디옥사-4-아자트리사이클로[30.3.1.04,9] 헥사트리아콘타-16,24,26,28-테트라엔-12-일]프로필]-2-메톡시사이클로헥실 디메틸포스피네이트, AP23573 및 MK8669로도 알려져 있고, PCT 공보 제WO 03/064383호에 기재되어 있음); 에버롤리무스(Afinitor® 또는 RAD001); 라파마이신(AY22989, Sirolimus®); 시마피모드(CAS 164301-51-3); (5-{2,4-비스[(3S)-3-메틸모르폴린-4-일]피리도[2,3-d]피리미딘-7-일}-2-메톡시페닐)메탄올(AZD8055); 2-아미노-8-[트랜스-4-(2-하이드록시에톡시)사이클로헥실]-6-(6-메톡시-3-피리디닐)-4-메틸-피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온(PF04691502, CAS 1013101-36-4); 및 N ² -[1,4-디옥소-4-[[4-(4-옥소-8-페닐-4H-1-벤조피란-2-일)모르폴리늄-4-일]메톡시]부틸]-L-아르기닐글리실-L-α-아스파틸-L-세린-, 분자내염(SF1126, CAS 936487-67-1)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

CDK 억제제는 팔보시클립(PD-0332991, Ibrance®, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-{[5-(1-피페라지닐)-2-피리디닐]아미노}피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온으로도 알려짐)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

또 다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환, 예를 들어, 암을 치료하기 위해 IAP 억제제, BCL2 억제제, MCL1 억제제, TRAIL 제제, CHK 억제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 친-아폽토시스제와 조합하여 사용된다.

예를 들어, IAP 억제제는 LCL161, GDC-0917, AEG-35156, AT406, 및 TL32711을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. IAP 억제제의 다른 예는 WO04/005284, WO 04/007529, WO05/097791, WO 05/069894, WO 05/069888, WO 05/094818, 미국 특허 2006/0014700, 미국 특허 2006/0025347, WO 06/069063, WO 06/010118, WO 06/017295, 및 WO08/134679에 개시된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

BCL-2 억제제는 4-[4-[[2-(4-클로로페닐)-5,5-디메틸-1-사이클로헥센-1-일]메틸]-1-피페라지닐]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-모르폴리닐)-1-[(페닐티오)메틸]프로필]아미노]-3-[(트리플루오로메틸)설포닐]페닐]설포닐]벤즈아미드(ABT-263으로도 알려져 있고 PCT 공보 제WO 09/155386호에 기재되어 있음); 테트로카신 A; 안티마이신; 고시폴((-)BL-193); 오바토클락스; 에틸-2-아미노-6-사이클로펜틸-4-(1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸)-4H크로몬-3-카복실레이트(HA14-1); 오블리메르센(G3139, Genasense®); Bak BH3 펩타이드; (-)-고시폴 아세트산(AT-101); 4-[4-[(4'-클로로[1,1'-바이페닐]-2-일)메틸]-1-피페라지닐]-N-[[4-[[(1R)-3-(디메틸아미노)-1-[(페닐티오)메틸]프로필]아미노]-3-니트로페닐]설포닐]-벤즈아미드(ABT-737, CAS 852808-04-9); 및 나비토클락스(ABT-263, CAS 923564-51-6)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

DR4(TRAILR1) 및 DR5(TRAILR2)를 포함하는 친아폽토시스 수용체 작용제(PARA)는 둘라네르민(AMG-951, RhApo2L/TRAIL); 마파투무맙(HRS-ETR1, CAS 658052-09-6); 렉사투무맙(HGS-ETR2, CAS 845816-02-6); 아포맙(Apomab®); 코나투무맙(AMG655, CAS 896731-82-1); 및 티가투주맙(CS1008, CAS 946415-34-5, Daiichi Sankyo에서 입수 가능)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

체크포인트 키나제(CHK) 억제제는 7-하이드록시스타우로스포린(UCN-01); 6-브로모-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-(3R)-3-피페리디닐피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-아민(SCH900776, CAS 891494-63-6); 5-(3-플루오로페닐)-3-우레이도티오펜-2-카복실산 N-[(S)-피페리딘-3-일]아미드(AZD7762, CAS 860352-01-8); 4-[((3S)-1-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-3-일)아미노]-3-(1H-벤즈이미다졸-2-일)-6-클로로퀴놀린-2(1H)-온(CHIR 124, CAS 405168-58-3); 7-아미노닥티노마이신(7-AAD), 이소그라눌라티미드, 데브로모하이메니알디신; N-[5-브로모-4-메틸-2-[(2S)-2-모르폴리닐메톡시]-페닐]-N'-(5-메틸-2-피라지닐)우레아(LY2603618, CAS 911222-45-2); 설포라판(CAS 4478-93-7, 4-메틸설피닐부틸 이소티오시아네이트); 9,10,11,12-테트라하이드로-9,12-에폭시-1H-디인돌로[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]피롤로[3,4-i][1,6]벤조디아조신-1,3(2H)-디온(SB-218078, CAS 135897-06-2); 및 TAT-S216A(YGRKKRRQRRRLYRSPAMPENL(서열번호 318)), 및 CBP501((d-Bpa)sws(d-Phe-F5)(d-Cha)rrrqrr)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

추가 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 하나 이상의 면역조절제(예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제 중 하나 이상)와 조합하여 사용된다.

특정 구현예에서, 면역조절제는 공동자극 분자의 활성화제이다. 하나의 구현예에서, 공동자극 분자의 작용제는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), ICOS(CD278), 4-1BB(CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, 또는 CD83 리간드의 작용제(예를 들어, 작용성 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 가용성 융합체)로부터 선택된다.

GITR 작용제

일부 구현예에서, GITR 작용제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, GITR 작용제는 GWN323(Novartis), BMS-986156, MK-4166 또는 MK-1248(Merck), TRX518(Leap Therapeutics), INCAGN1876(Incyte/Agenus), AMG 228(Amgen), 또는 INBRX-110(Inhibrx)이다.

예시적인 GITR 작용제

하나의 구현예에서, GITR 작용제는 항-GITR 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, GITR 작용제는 "Compositions and Methods of Use for Augmented Immune Response and Cancer Therapy"라는 명칭으로 2016년 4월 14일에 공개된 WO 2016/057846에 기재된 바와 같은 항-GITR 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 표 5에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역(예를 들어, 표 5에 개시된 MAB7의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열)에서 유래된, 또는 표 5에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 Kabat 정의를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 Chothia 정의를 따른다. 하나의 구현예에서, 하나 이상의 CDR(또는 집합적으로 모든 CDR)은 아미노산 서열에 비해, 또는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변화, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 표 5에 각각 개시된 서열번호 109의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 111의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 113의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 114의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 116의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 118의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 101의 아미노산 서열, 또는 서열번호 101과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 102의 아미노산 서열, 또는 서열번호 102와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 105의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 105와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 106의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 106과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 105의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 106의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 103의 아미노산 서열, 또는 서열번호 103과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 104의 아미노산 서열, 또는 서열번호 104와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 107의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 107과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 108의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 108과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 107의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 108의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.

본원에 기재된 분자는 WO 2016/057846에 기재된 벡터, 숙주 세포 및 방법에 의해 제조될 수 있다.

[표 5]

다른 예시적인 GITR 작용제

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 BMS 986156 또는 BMS986156으로도 알려진 BMS-986156(Bristol-Myers Squibb)이다. BMS-986156 및 다른 항-GITR 항체는 미국 특허 9,228,016 및 WO 2016/196792에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는, 예를 들어 표 6에 개시된 바와 같은 BMS-986156의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 MK-4166 또는 MK-1248(Merck)이다. MK-4166, MK-1248, 및 다른 항-GITR 항체는, 예를 들어, 미국 특허 8,709,424, WO 2011/028683, WO 2015/026684, 및 문헌[Mahne et al. Cancer Res. 2017; 77(5):1108-1118]에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 MK-4166 또는 MK-1248의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 TRX518(Leap Therapeutics)이다. TRX518 및 다른 항-GITR 항체는 예를 들어, 미국 특허 7,812,135, 미국 특허 8,388,967, 미국 특허 9,028,823, WO 2006/105021, 및 문헌[Ponte J et al. (2010) Clinical Immunology; 135:S96]에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 TRX518의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 INCAGN1876(Incyte/Agenus)이다. INCAGN1876 및 다른 항-PD-L1 항체는 미국 특허 2015/0368349 및 WO 2015/184099에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 INCAGN1876의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 AMG 228(Amgen)이다. AMG 228 및 다른 항-GITR 항체는 예를 들어 미국 특허 9,464,139 및 WO 2015/031667에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 AMG 228의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체 분자는 INBRX-110(Inhibrx)이다. INBRX-110 및 다른 항-PD-L1 항체는 미국 특허 2017/0022284 및 WO 2017/015623에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, GITR 작용제는 INBRX-110의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, GITR 작용제(예를 들어, 융합 단백질)는 MEDI1873으로도 알려진 MEDI 1873(MedImmune)이다. MEDI 1873 및 다른 GITR 작용제는 예를 들어, 미국 특허 2017/0073386, WO 2017/025610, 및 문헌[Ross et al. Cancer Res 2016; 76(14 Suppl): Abstract nr 561]에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, GITR 작용제는 IgG Fc 도메인, 기능적 다량체화 도메인, 및 MEDI 1873의 글루코코르티코이드-유도 TNF 수용체 리간드(GITRL)의 수용체 결합 도메인 중 하나 이상을 포함한다.

추가로 알려진 GITR 작용제(예를 들어, 항-GITR 항체)는 예를 들어 WO 2016/054638에 기재된 것들을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-GITR 항체는 본원에 기재된 항-GITR 항체 중 하나와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나 GITR 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다.

하나의 구현예에서, GITR 작용제는 GITR 신호전달 경로를 활성화하는 펩타이드이다. 하나의 구현예에서, GITR 작용제는 불변 영역(예를 들어 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 면역접착소 결합 단편(예를 들어 GITRL의 세포외 또는 GITR 결합 부분을 포함하는 면역접착소 결합 단편)이다.

[표 6]

특정 구현예에서, 면역조절제는 면역 체크포인트 분자의 억제제이다. 하나의 구현예에서, 면역조절제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR베타의 억제제이다. 하나의 구현예에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 또는 CTLA4, 또는 이의 임의의 조합을 억제한다.

억제 분자의 억제는 DNA, RNA, 또는 단백질 수준에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 억제 분자의 발현을 억제하기 위해 억제 핵산(예를 들어, dsRNA, siRNA, 또는 shRNA)이 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 억제 신호의 억제제는 억제 분자에 결합하는 폴리펩타이드, 예를 들어 가용성 리간드(예를 들어, PD-1-Ig 또는 CTLA-4 Ig), 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 예를 들어, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR 베타, 또는 이의 조합에 결합하는 항체 또는 이의 단편(본원에서 "항체 분자"로도 나타냄)이다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체 또는 이의 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단일쇄 Fv 단편(svFv))이다. 또 다른 구현예에서, 항체 분자는, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택되는; 구체적으로는, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 중쇄 불변 영역, 더 구체적으로는 IgG1 또는 IgG4(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4)의 중쇄 불변 영역으로부터 선택되는 중쇄 불변 영역(Fc)을 갖는다. 하나의 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4이다. 하나의 구현예에서, 불변 영역은 항체 분자의 특성을 개질하기 위해(예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능, 또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가 또는 감소시키기 위해) 변경되며, 예를 들어 돌연변이된다.

특정 구현예에서, 항체 분자는 이중특이적 또는 다중특이적 항체 분자의 형태이다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1에 대한 제1 결합 특이성, 및 제2 결합 특이성, 예를 들어 TGFβ, TIM-3, LAG-3, 또는 PD-L2에 대한 제2 결합 특이성을 갖는다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 TIM-3에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 TGFβ에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 및 TGFβ에 결합한다,. . 상기 분자의 임의의 조합은 다중특이적 항체 분자, 예를 들어 PD-1 또는 PD-1에 대한 제1 결합 특이성, 및 TGFβ, TIM-3, LAG-3, 또는 PD-L2 중 둘 이상에 대한 제2 및 제3 결합 특이성을 포함하는 삼중특이적 항체에서 이루어질 수 있다.

특정 구현예에서, 면역조절제는 PD-1, 예를 들어 인간 PD-1의 억제제이다. 또 다른 구현예에서, 면역조절제는 PD-L1, 예를 들어 인간 PD-L1의 억제제이다. 하나의 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제는 PD-1 또는 PD-L1에 대한 항체 분자이다. PD-1 또는 PD-L1 억제제는 단독으로, 또는 다른 면역조절제와 조합하여, 예를 들어 TGFβ, LAG-3, TIM-3, 또는 CTLA4의 억제제와 조합하여 투여될 수 있다. 예시적 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-TGFβ, 또는 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 LAG-3 억제제, 예를 들어 항-LAG-3 항체 분자와 조합하여 투여된다. 또 다른 구현예에서, TGFβ, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-TGFβ 또는 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 TIM-3 억제제, 예를 들어 항-TIM-3 항체 분자와 조합하여 투여된다. 또 다른 구현예에서, TGFβ, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-TGFβ 또는 항-PD-1 항체 분자는 LAG-3 억제제, 예를 들어 항-LAG-3 항체 분자, 및 TIM-3 억제제, 예를 들어 항-TIM-3 항체 분자와 조합하여 투여된다.

PD-1 억제제(예를 들어, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR 중 하나 이상)와 면역조절제의 다른 조합도 본 개시의 범위 내이다. 당분야에 알려지거나 본원에 개시된 임의의 항체 분자가 체크포인트 분자의 억제제의 상기 조합에서 사용될 수 있다.

CTLA-4 억제제

일부 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 CTLA-4 억제제와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 이필리무맙(MDX-010, MDX-101, 또는 Yervoy, Bristol-Myers Squibb), 트레멜릴루맙(티실리무맙. Pfizer/AstraZeneca), AGEN1181(Agenus), 잘리프렐리맙(AGEN1884, Agenus), IBI310(Innovent Biologics)으로부터 선택된다,

LAG-3 억제제

일부 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 LAG-3 억제제와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, LAG-3 억제제는 LAG525(Novartis), BMS-986016(Bristol-Myers Squibb), 또는 TSR-033(Tesaro)으로부터 선택된다.

예시적인 LAG-3 억제제

하나의 구현예에서, LAG-3 억제제는 항-LAG-3 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, LAG-3 억제제는 "Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof"라는 명칭으로 2015년 9월 17일에 공개된 미국 특허 2015/0259420에 개시된 바와 같은 항-LAG-3 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 표 7에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터의(예를 들어, 표 7에 개시된 BAP050-클론 I 또는 BAP050-클론 J의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터의), 또는 표 7에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 Kabat 정의(예를 들어, 표 7에서 제시된 바와 같음)를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 Chothia 정의(예를 들어, 표 7에서 제시된 바와 같음)를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 (예를 들어, 표 7에서 제시된 바와 같은) Kabat 및 Chothia 둘 다의 조합된 CDR 정의를 따른다. 하나의 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GFTLTNYGMN(서열번호 122)을 포함한다. 하나의 구현예에서, 하나 이상의 CDR(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 7에 나타내거나, 표 7에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 아미노산 서열 대비 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변화, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 각각 표 7에 개시된, 서열번호 123의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 124의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 125의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 132의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 133의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 134의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 각각 표 7에 개시된, 서열번호 158 또는 159의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열번호 160 또는 161의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 162 또는 163의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 168 또는 169의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 170 또는 171의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 172 또는 173의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 각각 표 7에 개시된, 서열번호 180 또는 159의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR1, 서열번호 181 또는 161의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR2, 및 서열번호 182 또는 163의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VHCDR3을 포함하는 VH; 및 서열번호 168 또는 169의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR1, 서열번호 170 또는 171의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR2, 및 서열번호 172 또는 173의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VLCDR3을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 128의 아미노산 서열, 또는 서열번호 128과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 140의 아미노산 서열, 또는 서열번호 140와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 146의 아미노산 서열, 또는 서열번호 146과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 152의 아미노산 서열, 또는 서열번호 152와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 129 또는 130의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 129 또는 130과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 141 또는 142의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 141 또는 142와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 147 또는 148의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 147 또는 148과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 153 또는 154의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 153 또는 154와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 129 또는 130의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 141 또는 142의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 147 또는 148의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 153 또는 154의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 131의 아미노산 서열, 또는 서열번호 131과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 143의 아미노산 서열, 또는 서열번호 143과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 149의 아미노산 서열, 또는 서열번호 149와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 155의 아미노산 서열, 또는 서열번호 155와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 서열번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 138 또는 139의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 138 또는 139와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 144 또는 145의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 144 또는 145와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 150 또는 151의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 150 또는 151과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 156 또는 157의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 156 또는 157과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 138 또는 139의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 144 또는 145의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 150 또는 151의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 156 또는 157의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.

본원에 기재된 분자는 미국 특허 2015/0259420에 기재된 벡터, 숙주 세포 및 방법에 의해 제조될 수 있다.

[표 7]

다른 예시적인 LAG-3 억제제

하나의 구현예에서, LAG-3 억제제는 항-LAG-3 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, LAG-3 억제제는 BMS986016으로도 알려진 BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)이다. BMS-986016 및 다른 항-LAG-3 항체는 WO 2015/116539 및 미국 특허 9,505,839에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는, 예를 들어 표 8에 개시된 바와 같은 BMS-986016의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 TSR-033(Tesaro)이다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 TSR-033의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 IMP731 또는 GSK2831781(GSK and Prima BioMed)이다. IMP731 및 다른 항-LAG-3 항체는 WO 2008/132601 및 미국 특허 9,244,059에 개시되어 있다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는, 예를 들어 표 8에 개시된 바와 같은 IMP731의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 GSK2831781의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 IMP761(Prima BioMed)이다. 하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체 분자는 IMP761의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

추가로 알려진 항-LAG-3 항체는 예를 들어 WO 2008/132601, WO 2010/019570, WO 2014/140180, WO 2015/116539, WO 2015/200119, WO 2016/028672, 미국 특허 9,244,059, 미국 특허 9,505,839에 기재된 것들을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 항체는 본원에 기재된 항-LAG-3 항체 중 하나와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나, LAG-3 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다.

하나의 구현예에서, 항-LAG-3 억제제는 예를 들어 WO 2009/044273에 개시된 바와 같은 가용성 LAG-3 단백질, 예를 들어 IMP321(Prima BioMed)이다.

[표 8]

TIM-3 억제제

특정 구현예에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 TIM-3의 억제제이다. 일부 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TIM-3 억제제와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, TIM-3 억제제는 MGB453(Novartis), LY3321367(Eli Lilly), Sym023(Symphogen), BGB-A425(Beigene), INCAGN-2390(Agenus/Incyte), MBS-986258(BMS/Five Prime), RO-7121661(Roche), LY-3415244(Eli Lilly), 또는 TSR-022(Tesaro)이다.

예시적인 TIM-3 억제제

하나의 구현예에서, TIM-3 억제제는 항-TIM-3 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, TIM-3 억제제는 "Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof"라는 명칭으로 2015년 8월 6일에 공개된 미국 특허 2015/0218274에 개시된 항-TIM-3 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 표 9에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로부터의(예를 들어, 표 9에 개시된 ABTIM3-hum11 또는 ABTIM3-hum03의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로부터의), 또는 표 9에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된, 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 상보성 결정 영역(CDR)(또는 집합적으로 모든 CDR)을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR은 Kabat 정의(예를 들어, 표 9에서 제시된 바와 같음)를 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 Chothia 정의(예를 들어, 표 9에서 제시된 바와 같음)를 따른다. 하나의 구현예에서, 하나 이상의 CDR(또는 집합적으로 모든 CDR)은 표 9에 나타내거나, 표 9에 나타낸 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 아미노산 서열 대비 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 변화, 예를 들어 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환) 또는 결실을 갖는다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 각각 표 9에 개시된, 서열번호 189의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 190의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 191의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 198의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 199의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 200의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 각각 표 9에 개시된, 서열번호 189의 VHCDR1 아미노산 서열, 서열번호 208의 VHCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 191의 VHCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 198의 VLCDR1 아미노산 서열, 서열번호 199의 VLCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 200의 VLCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 194의 아미노산 서열, 또는 서열번호 194와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 204의 아미노산 서열, 또는 서열번호 204와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 210의 아미노산 서열, 또는 서열번호 210과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 214의 아미노산 서열, 또는 서열번호 214와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 194의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 195의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 195와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 205의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 205와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 211의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 211과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 215의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 215와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 195의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 205의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 211의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VH 및 서열번호 215의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 VL을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 196의 아미노산 서열, 또는 서열번호 196과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 206의 아미노산 서열, 또는 서열번호 206과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 212의 아미노산 서열, 또는 서열번호 212와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 216의 아미노산 서열, 또는 서열번호 216과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 197의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 197과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 207의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 207과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 213의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 213과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 217의 뉴클레오타이드 서열, 또는 서열번호 217과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 197의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 207의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 서열번호 213의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 서열번호 217의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다.

본원에 기재된 분자는 미국 특허 2015/0218274에 기재된 벡터, 숙주 세포 및 방법에 의해 제조될 수 있다.

[표 9]

다른 예시적인 TIM-3 억제제

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 TSR-022(AnaptysBio/Tesaro)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 TSR-022의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는, 예를 들어 표 10에 개시된 바와 같은 APE5137 또는 APE5121의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다. APE5137, APE5121 및 다른 항-TIM-3 항체는 WO 2016/161270에 개시되어 있다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 항체 클론 F38-2E2이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 F38-2E2의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 LY3321367(Eli Lilly)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 LY3321367의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 서열 및/또는 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 Sym023(Symphogen)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 Sym023의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 서열 및/또는 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 BGB-A425(Beigene)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 BGB-A425의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 서열 및/또는 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 INCAGN-2390(Agenus/Incyte)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 INCAGN-2390의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 BMS-986258(BMS/Five Prime)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 BMS-986258의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 서열 및/또는 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 또는 억제제 분자는 RO-7121661(Roche)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 RO-7121661의 TIM-3 결합 아암의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 서열 및/또는 또는 경쇄 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 또는 억제제 분자는 LY-3415244(Eli Lilly)이다. 하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체 분자는 LY-3415244의 TIM-3 결합 아암의 하나 이상의 CDR 서열(또는 집합적으로 모든 CDR 서열), 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 서열, 또는 중쇄 서열 및/또는 또는 경쇄 서열을 포함한다.

추가로 알려진 항-TIM-3 항체는 예를 들어 WO 2016/111947, WO 2016/071448, WO 2016/144803, 미국 특허 8,552,156, 미국 특허 8,841,418 및 미국 특허 9,163,087에 기재된 것들을 포함한다.

하나의 구현예에서, 항-TIM-3 항체는 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 중 하나와 결합하기 위해 경쟁하고/하거나, TIM-3 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다.

[표 10]

사이토카인

또 다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 인터페론, IL-2, IL-15, IL-7 또는 IL21을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 사이토카인과 조합하여 투여된다. 특정 구현예에서, TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 IL-15/IL-15Ra 복합체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 복합체는 NIZ985(Novartis), ATL-803(Altor) 또는 CYP0150(Cytune)으로부터 선택된다.

예시적인 IL-15/IL-15Ra 복합체

하나의 구현예에서, 사이토카인은 IL-15 수용체 알파(IL-15Ra)의 가용성 형태와 복합체화된 IL-15이다. IL-15/IL-15Ra 복합체는 IL-15Ra의 가용성 형태에 공유 또는 비공유 결합된 IL-15를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 인간 IL-15는 IL-15Ra의 가용성 형태에 비공유 결합된다. 특정 구현예에서, WO 2014/066527에 기재된 바와 같이, 제형물의 인간 IL-15는 표 11의 서열번호 222의 아미노산 서열 또는 서열번호 222와 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 인간 IL-15Ra의 가용성 형태는 표 11의 서열번호 223의 아미노산 서열 또는 서열번호 223과 적어도 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 본원에 기재된 분자는 WO 2007084342에 기재된 벡터, 숙주 세포 및 방법에 의해 제조될 수 있다.

[표 11]

다른 예시적인 IL-15/IL-15Ra 복합체

하나의 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 복합체는 IL-15/IL-15Ra Fc 융합 단백질(IL-15N72D:IL-15RaSu/Fc 가용성 복합체)인 ALT-803이다. ALT-803은 WO 2008/143794에 기재되어 있다. 하나의 구현예에서, IL-15/IL-15Ra Fc 융합 단백질은 표 12에 개시된 바와 같은 서열을 포함한다.

하나의 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 복합체는 IL-15Ra의 스시(sushi) 도메인에 융합된 IL-15(CYP0150, Cytune)를 포함한다. IL-15Ra의 스시 도메인은 IL-15Ra의 신호 펩타이드 뒤의 첫 번째 시스테인 잔기에서 시작하여, 상기 신호 펩타이드 뒤의 네 번째 시스테인 잔기에서 종결되는 도메인을 나타낸다. IL-15Ra의 스시 도메인에 융합된 IL-15의 복합체는 WO 2007/04606 및 WO 2012/175222에 기재되어 있다. 하나의 구현예에서, IL-15/IL-15Ra 스시 도메인 융합체는 표 12에 개시된 바와 같은 서열을 포함한다.

[표 12]

또 다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 질환, 예를 들어, 암을 치료하기 위해 toll 유사 수용체(TLR, 예를 들어 TLR7, TLR8, TLR9)의 하나 이상의 작용제와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 본 개시의 화합물은 TLR7 작용제 또는 TLR7 작용제 접합체와 조합하여 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, TLR7 작용제는 국제 출원 공보 제WO2011/049677호에 개시된 화합물을 포함한다. 일부 구현예에서, TLR7 작용제는 3-(5-아미노-2-(4-(2-(3,3-디플루오로-3-포스포노프로폭시)에톡시)-2-메틸페네틸)벤조[f][1,7]나프티리딘-8-일)프로판산을 포함한다. 일부 구현예에서, TLR7 작용제는 하기 화학식의 화합물을 포함한다.

다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 암 치료를 위해 하나 이상의 혈관신생 억제제, 예를 들어 베바시주맙(Avastin®), 엑시티닙(Inlyta®); 브리바닙 알라니네이트(BMS-582664, (S)-((R)-1-(4-(4-플루오로-2-메틸-1H-인돌-5-일옥시)-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일옥시)프로판-2-일)2-아미노프로파노에이트); 소라페닙(Nexavar®); 파조파닙(Votrient®); 수니티닙 말레이트(Sutent®); 세디라닙(AZD2171, CAS 288383-20-1); 바르카테프(BIBF1120, CAS 928326-83-4); 포레티닙(GSK1363089); 텔라티닙(BAY57-9352, CAS 332012-40-5); 아파티닙(YN968D1, CAS 811803-05-1); 이마티닙(Gleevec®); 포나티닙(AP24534, CAS 943319-70-8); 티보자닙(AV951, CAS 475108-18-0); 레고라페닙(BAY73-4506, CAS 755037-03-7); 바탈라닙 디하이드로클로라이드(PTK787, CAS 212141-51-0); 브리바닙(BMS-540215, CAS 649735-46-6); 반데타닙(Caprelsa® 또는 AZD6474); 모테사닙 디포스페이트(AMG706, CAS 857876-30-3, N-(2,3-디하이드로-3,3-디메틸-1H-인돌-6-일)-2-[(4-피리디닐메틸)아미노]-3-피리딘카복사미드, PCT 공보 제WO 02/066470호에 기재되어 있음); 도비티닙 디락트산(TKI258, CAS 852433-84-2); 린파닙(ABT869, CAS 796967-16-3); 카보잔티닙(XL184, CAS 849217-68-1); 레스타우르티닙(CAS 111358-88-4); N-[5-[[[5-(1,1-디메틸에틸)-2-옥사졸릴]메틸]티오]-2-티아졸릴]-4-피페리딘카복사미드(BMS38703, CAS 345627-80-7); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690512); N-(3,4-디클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸사이클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8); 4-메틸-3-[[1-메틸-6-(3-피리디닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]아미노]-N-[3-(트리플루오로메틸)페닐]-벤즈아미드(BHG712, CAS 940310-85-0); 또는 애플리베르셉트(Eylea®)와 조합하여 사용된다.

또 다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 암 치료를 위해 하나 이상의 열 충격 단백질 억제제, 예를 들어 타네스피마이신(17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, KOS-953 및 17-AAG로도 알려져 있고, SIGMA에서 입수 가능하며, 미국 특허 제4,261,989호에 기재되어 있음); 레타스피마이신(IPI504), 가네테스피브(STA-9090); [6-클로로-9-(4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일메틸)-9H-퓨린-2-일]아민(BIIB021 또는 -CNF2024, CAS 848695-25-0); 트랜스-4-[[2-(아미노카보닐)-5-[4,5,6,7-테트라하이드로-6,6-디메틸-4-옥소-3-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-1-일]페닐]아미노]사이클로헥실 글리신 에스테르(SNX5422 또는 PF04929113, CAS 908115-27-5); 5-[2,4-디하이드록시-5-(1-메틸에틸)페닐]-N-에틸-4-[4-(4-모르폴리닐메틸)페닐]-3-이속사졸카복사미드(AUY922, CAS 747412-49-3); 또는 17-디메틸아미노에틸아미노-17-데메톡시겔다나마이신(17-DMAG)과 조합하여 사용된다.

또 다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 하나 이상의 HDAC 억제제 또는 다른 후성적 개질제와 조합하여 투여된다. 예시적인 HDAC 억제제는 보니노스타트(Zolinza®); 로미뎁신(Istodax®); 트레이코스타틴 A(TSA); 옥삼플라틴; 보리노스타트(Zolinza®, 수베로일아닐리드 하이드록삼산); 피록사미드(시베로일-3-아미노피리딘아미드 하이드록삼산); 트라폭신 A(RF-1023A); 트라폭신 B(RF-10238); 사이클로[(αS,2S)-α-아미노-η-옥소-2-옥시란옥타노일-O-메틸-D-티로실-L-이소류실-L-프롤릴](Cyl-1); 사이클로[(αS,2S)-α-아미노-η-옥소-2-옥시란옥타노일-O-메틸-D-티로실-L-이소류실-(2S)-2-피페리딘카보닐](Cyl-2); 사이클릭[L-알라닐-D-알라닐-(2S)-η-옥소-L-α-아미노옥시란옥타노일-D-프롤릴](HC-독소); 사이클로[(αS,2S)-α-아미노-η-옥소-2-옥시란옥타노일-D-페닐알라닐-L-류실-(2S)-2-피페리딘카보닐](WF-3161); 클라미도신((S)-사이클릭(2-메틸알라닐-L-페닐알라닐-D-프롤릴-η-옥소-L-α-아미노옥시란옥타노일); 아피디신(사이클로(8-옥소-L-2-아미노데카노일-1-메톡시-L-트립토필-L-이소류실-D-2-피페리딘카보닐); 로미뎁신(Istodax®, FR-901228); 4-페닐부티레이트; 스피루코스타틴 A; 밀프로인(발프로산); 엔티노스타트(MS-275, N-(2-아미노페닐)-4-[N-(피리딘-3-일-메톡시카보닐)-아미노-메틸]-벤즈아미드); 데푸데신(4,5:8,9-디안하이드로-1,2,6,7,11-펜타데옥시-D-트레오-D-요오도-운데카-1,6-디에니톨); 4-(아세틸아미노)-N-(2-아미노페닐)-벤즈아미드(CI-994로도 알려짐); N1-(2-아미노페닐)-N8-페닐-옥탄디아미드(BML-210으로도 알려짐); 4-(디메틸아미노)-N-(7-(하이드록시아미노)-7-옥소헵틸)벤즈아미드(M344로도 알려짐); (E)-3-(4-(((2-(1H-인돌-3-일)에틸)(2-하이드록시에틸)아미노)-메틸)페닐)-N-하이드록시아크릴아미드; 파노비노스타트(Farydak®); 모세티노스타트, 및 벨리노스타트(PXD101, Beleodaq®, 또는 (2E)-N-하이드록시-3-[3-(페닐설파모일)페닐]프로프-2-엔아미드로도 알려짐), 또는 키다미드(CS055 또는 HBI-8000, (E)-N-(2-아미노-5-플루오로페닐)-4-((3-(피리딘-3-일)아크릴아미도)메틸)벤즈아미드로도 알려짐)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다른 후성적 개질제는 EZH2(zeste 상동체 2의 인핸서), EED(배아 외배엽 발생), 또는 LSD1(라이신-특이적 히스톤 데메틸라제 1A 또는 KDM1A)의 억제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

또 다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 암을 치료하기 위해 하나 이상의 인돌아민-피롤 2,3-디옥시게나제(IDO)의 억제제, 예를 들어 인독시모드(NLG-8189로도 알려짐), α-사이클로헥실-5H-이미다조[5,1-a]이소인돌-5-에탄올(NLG919로도 알려짐), 또는 (4E)-4-[(3-클로로-4-플루오로아닐리노)-니트로소메틸리덴]-1,2,5-옥사디아졸-3-아민(INCB024360으로도 알려짐)과 조합하여 사용된다.

키메라 항원 수용체

본 개시는 차용 면역치료법 방법 및 시약, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR) 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포, 또는 키메라 TCR-형질도입 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포와 조합하여 사용하기 위한 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)를 제공한다. 이 섹션에서는 일반적으로 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1 또는 PD-L2 억제제)와의 조합에 유용한 CAR 기술을 기재하고 CAR 시약, 예를 들어 세포 및 조성물, 그리고 방법을 기재한다.

일반적으로, 본 개시의 양태는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이거나 이를 포함하며, 여기서 CAR은 본원에 기재된 바와 같은 종양 항원에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 항체 단편, TCR 또는 TCR 단편), 막관통 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 막관통 도메인), 및 세포내 신호전달 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 세포내 신호전달 도메인)(예를 들어, 공동자극 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 공동자극 도메인) 및/또는 일차 신호전달 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 일차 신호전달 도메인)을 포함하는 세포내 신호전달 도메인)을 포함한다. 다른 양태에서, 본 개시는 상기 핵산을 함유하는 숙주 세포 및 이러한 핵산 분자에 의해 암호화되는 단리된 단백질을 포함한다. 본 개시와 관련된 CAR 핵산 작제물, 암호화된 단백질, 함유 벡터, 숙주 세포, 약학 조성물, 그리고 투여 및 치료 방법은 국제 특허 출원 공보 제WO2015142675호에 상세하게 개시되어 있다.

일부 구현예에서, 본 개시는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 단리된 핵산 분자에 관한 것으로, 여기서 CAR은 종양 지지 항원(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 종양 지지 항원)에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 항체 단편, TCR 또는 TCR 단편), 막관통 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 막관통 도메인), 및 세포내 신호전달 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 세포내 신호전달 도메인)(예를 들어, 공동자극 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 공동자극 도메인) 및/또는 일차 신호전달 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 일차 신호전달 도메인)을 포함하는 세포내 신호전달 도메인)을 포함한다. 일부 구현예에서, 종양 지지 항원은 간질 세포 또는 골수 유래 억제 세포(MDSC) 상에 존재하는 항원이다. 다른 양태에서, 본 개시는 이러한 핵산에 의해 암호화된 폴리펩타이드 및 이러한 핵산 및/또는 폴리펩타이드를 함유하는 숙주 세포를 특징으로 한다.

대안적으로, 본 개시의 양태는 본원에 기재된 암 항원에 대한 특이성을 갖는 TCR 알파 및/또는 TCR 베타 가변 도메인을 포함하는 키메라 T 세포 수용체(TCR)를 암호화하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 예를 들어, 문헌[Dembic et al., Nature, 320, 232-238 (1986), Schumacher, Nat. Rev. Immunol., 2, 512-519 (2002), Kershaw et al., Nat. Rev. Immunol., 5, 928-940 (2005), Xue et al., Clin. Exp. Immunol., 139, 167-172 (2005), Rossig et al., Mol. Ther., 10, 5-18 (2004), 및 Murphy et al., Immunity, 22, 403-414 (2005); (Morgan et al. J. Immunol., 171, 3287-3295 (2003), Hughes et al., Hum. Gene Ther., 16, 1-16 (2005), Zhao et al., J. Immunol., 174, 4415-4423 (2005), Roszkowski et al., Cancer Res., 65, 1570-1576 (2005), 및 Engels et al., Hum. Gene Ther., 16, 799-810 (2005); 미국 특허 2009/03046557]을 참고한다. 이러한 키메라 TCR은 예를 들어 암 항원, 예컨대 MART-1, gp-100, p53, 및 NY-ESO-1, MAGE A3/A6, MAGEA3, SSX2, HPV-16 E6 또는 HPV-16 E7을 인식할 수 있다. 다른 양태에서, 본 개시는 이러한 핵산에 의해 암호화된 폴리펩타이드 및 이러한 핵산 및/또는 폴리펩타이드를 함유하는 숙주 세포를 특징으로 한다.

CAR의 일부일 수 있는 다양한 구성요소의 비제한적인 예에 대한 서열이 표 11a에 열거되어 있으며, 여기서 "aa"는 아미노산을 나타내고 "na"는 대응하는 펩타이드를 암호화하는 핵산을 나타낸다.

[표 11a]

표적

본 개시는 본원에 기재된 바와 같은 gRNA 분자 또는 CRISPR 시스템을 포함하거나 언제라도 포함한 세포, 예를 들어 면역 효과기 세포(예를 들어, T 세포, NK 세포)로서, 면역 효과기 세포를 원치 않는 세포(예를 들어, 암세포)로 유도하는 하나 이상의 CAR을 함유하도록 추가로 조작된, 세포를 제공한다. 이는 암 연관 항원에 특이적인 CAR 상의 항원 결합 도메인을 통해 달성된다. 본 개시의 CAR에 의해 표적화될 수 있는 2가지 클래스의 암 연관 항원(종양 항원)이 존재한다: (1) 암 세포의 표면에서 발현되는 암 연관 항원; 및 (2) 그 자체는 세포 내에 있지만 이러한 항원의 단편(펩타이드)이 MHC(주조직 적합성 복합체)에 의해 암 세포의 표면에서 제시되는 암 연관 항원.

일부 구현예에서, 종양 항원은 하기 중 하나 이상으로부터 선택된다: CD19; CD123; CD22; CD30; CD171; CS-1(CD2 하위세트 1, CRACC, SLAMF7, CD319 및 19A24로도 나타냄); C형 렉틴 유사 분자-1(CLL-1 또는 CLECL1); CD33; 표피 성장 인자 수용체 변이체 III(EGFRvIII); 강글리오시드 G2(GD2); 강글리오시드 GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer); TNF 수용체 패밀리 구성원 B 세포 성숙(BCMA); Tn 항원((Tn Ag) 또는 (GalNAcα-Ser/Thr)); 전립샘 특이적 막 항원(PSMA); 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1); Fms 유사 티로신 키나제 3(FLT3); 종양 연관 당단백질 72(TAG72); CD38; CD44v6; 암배아 항원(CEA); 상피 세포 접착 분자(EPCAM); B7H3(CD276); KIT(CD117); 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL-13Ra2 또는 CD213A2); 메소텔린; 인터루킨 11 수용체 알파(IL-11Ra); 전립샘 줄기 세포 항원(PSCA); 프로테아제 세린 21(테스티신(Testisin) 또는 PRSS21); 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2); 루이스(Y) 항원; CD24; 혈소판 유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFR-베타); 단계 특이적 배아 항원-4(SSEA-4); CD20; 폴레이트 수용체 알파; 수용체 티로신-단백질 키나제 ERBB2(Her2/neu); 뮤신(Mucin) 1, 세포 표면 연관(MUC1); 표피 성장 인자 수용체(EGFR); 신경 세포 접착 분자(NCAM); 프로스타제(Prostase); 전립샘 산 포스파타제(PAP); 돌연변이된 신장 인자 2(ELF2M); 에프린(Ephrin) B2; 섬유모세포 활성화 단백질 알파(FAP); 인슐린 유사 성장 인자 1 수용체(IGF-I 수용체), 탄산 탈수효소 IX(CAIX); 프로테아좀(프로좀(Prosome), 마크로파인(Macropain)) 서브유닛, 베타형, 9(LMP2); 당단백질 100(gp100); 절단점 클러스터 영역(BCR) 및 아벨슨(Abelson) 뮤린 백혈병 바이러스 종양유전자 상동체 1(Ab1)로 구성되는 종양유전자 융합 단백질(bcr-ab1); 티로시나제; 에프린 A형 수용체 2(EphA2); 푸코실 GM1; 시알릴 루이스 접착 분자(sLe); 강글리오시드 GM3(aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer); 트랜스글루타미나제 5(TGS5); 고분자량 흑색종 연관 항원(HMWMAA); o-아세틸-GD2 강글리오시드(OAcGD2); 폴레이트 수용체 베타; 종양 내피 마커 1(TEM1/CD248); 종양 내피 마커 7 관련(TEM7R); 클라우딘 6(CLDN6); 갑상샘 자극 호르몬 수용체(TSHR); G 단백질 커플링된 수용체 클래스 C 그룹 5, 구성원 D(GPRC5D); 염색체 X 개방 해독틀 61(CXORF61); CD97; CD179a; 역형성 림프종 키나제(ALK); 폴리시알산; 태반 특이적 1(PLAC1); 글로보H(globoH) 글리코세라미드의 육당류 부분(GloboH); 유선 분화 항원(NY-BR-1); 유로플라킨 2(UPK2); A형 간염 바이러스 세포 수용체 1(HAVCR1); 아드레날린수용체 베타 3(ADRB3); 판넥신 3(PANX3); G 단백질 커플링된 수용체 20(GPR20); 림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 K 9(LY6K); 후각 수용체 51E2(OR51E2); TCR 감마 대안적 해독틀 단백질(TARP); 윌름 종양 단백질(WT1); 암/고환 항원 1(NY-ESO-1); 암/고환 항원 2(LAGE-1a); 흑색종 연관 항원 1(MAGE-A1); 염색체 12p에 위치한 ETS 전위-변이체 유전자 6(ETV6-AML); 정자 단백질 17(SPA17); X 항원 패밀리, 구성원 1A(XAGE1); 안지오포이에틴 결합 세포 표면 수용체 2(Tie 2); 흑색종 암 고환 항원-1(MAD-CT-1); 흑색종 암 고환 항원-2(MAD-CT-2); Fos 관련 항원 1; 종양 단백질 p53(p53); p53 돌연변이체; 프로스테인; 서바이빙(surviving); 텔로머라아제; 전립샘 암종 종양 항원-1(PCTA-1 또는 갈렉틴(Galectin) 8); T 세포에 의해 인식되는 흑색종 항원 1(MelanA 또는 MART1); 래트 육종(Ras) 돌연변이체; 인간 텔로머라아제 역전사효소(hTERT); 육종 전위 절단점; 흑색종 아폽토시스 억제제(ML-IAP); ERG(막관통 프로테아제, 세린 2(TMPRSS2) ETS 융합 유전자); N-아세틸 글루코사미닐 트랜스퍼라아제 V(NA17); 쌍 형성된 박스 단백질 Pax-3(PAX3); 안드로겐 수용체; 사이클린 B1; v-myc 조류 골수구종증 바이러스 종양유전자 신경모세포종 유래 상동체(MYCN); Ras 상동체 패밀리 구성원 C(RhoC); 티로시나제 관련 단백질 2(TRP-2); 시토크롬 P450 1B1(CYP1B1); CCCTC 결합 인자(징크 핑거 단백질) 유사(BORIS 또는 각인된 부위의 조절인자 형제(Brother of the Regulator of Imprinted Sites)); T 세포에 의해 인식되는 편평 세포 암종 항원 3(SART3); 쌍 형성된 박스 단백질 Pax-5(PAX5); 프로아크로신 결합 단백질 sp32(OY-TES1); 림프구 특이적 단백질 티로신 키나제(LCK); A 키나제 앵커 단백질 4(AKAP-4); 활막 육종, X 절단점 2(SSX2); 진행성 당화 최종산물에 대한 수용체(RAGE-1); 신장 편재 1(RU1); 신장 편재 2(RU2); 레구마인; 인간 유두종 바이러스 E6(HPV E6); 인간 유두종 바이러스 E7(HPV E7); 장 카복실 에스터라제; 돌연변이된 열 충격 단백질 70-2(mut hsp70-2); CD79a; CD79b; CD72; 백혈구 연관 면역글로불린 유사 수용체 1(LAIR1); IgA 수용체의 Fc 단편(FCAR 또는 CD89); 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 서브패밀리 A 구성원 2(LILRA2); CD300 분자 유사 패밀리 구성원 f(CD300LF); C형 렉틴 도메인 패밀리 12 구성원 A(CLEC12A); 골수 간질 세포 항원 2(BST2); EGF 유사 모듈 함유 뮤신 유사 호르몬 수용체 유사 2(EMR2); 림프구 항원 75(LY75); 글리피칸(Glypican)-3(GPC3); Fc 수용체 유사 5(FCRL5); 및 면역글로불린 람다 유사 폴리펩타이드 1(IGLL1).

본원에 기재된 CAR은 종양 지지 항원(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 종양 지지 항원)에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 항체 단편, TCR 또는 TCR 단편)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 종양 지지 항원은 간질 세포 또는 골수 유래 억제 세포(MDSC) 상에 존재하는 항원이다. 간질 세포는 미세환경에서 세포 분열을 촉진하도록 성장 인자를 분비할 수 있다. MDSC 세포는 T세포의 증식 및 활성화를 억제할 수 있다. 이론에 구애되고자 함이 없이, 일부 구현예에서, CAR-발현 세포는 종양-지지 세포를 파괴함으로써 종양의 성장 또는 생존을 간접적으로 억제한다.

구현예에서, 간질 세포 항원은 하기 중 하나 이상으로부터 선택된다: 골수 간질 세포 항원 2(BST2), 섬유모세포 활성화 단백질(FAP) 및 테나신. 하나의 구현예에서, FAP 특이적 항체는 시브로투주맙이거나, 시브로투주맙과 결합에 대해 경쟁하거나, 시브로투주맙과 동일한 CDR을 갖는다. 구현예에서, MDSC 항원은 하기 중 하나 이상으로부터 선택된다: CD33, CD11b, C14, CD15, 및 CD66b. 따라서, 일부 구현예에서, 종양 지지 항원은 하기 중 하나 이상으로부터 선택된다: 골수 간질 세포 항원 2(BST2), 섬유모세포 활성화 단백질(FAP) 또는 테나신, CD33, CD11b, C14, CD15, 및 CD66b.

항원 결합 도메인 구조

일부 구현예에서, 암호화된 CAR 분자의 항원 결합 도메인은 항체, 항체 단편, scFv, Fv, Fab, (Fab’)2, 단일 도메인 항체(SDAB), VH 또는 VL 도메인, 낙타과 VHH 도메인 또는 2기능적(예를 들어, 이중특이적) 하이브리드 항체를 포함한다(예를 들어, Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987)).

일부 예에서, scFv는 당분야에 알려진 방법에 따라 제조될 수 있다(예를 들어 문헌[Bird et al., (1988) Science 242:423-426 및 Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참고). scFv 분자는 가요성 폴리펩타이드 링커를 사용하여 VH 및 VL 영역을 함께 결합함으로써 생성될 수 있다. scFv 분자는 최적화된 길이 및/또는 아미노산 조성을 갖는 링커(예를 들어 Ser-Gly 링커)를 포함한다. 링커 길이는 scFv의 가변 영역이 폴딩하고 상호작용하는 방식에 크게 영향을 미칠 수 있다. 실제로, 짧은 폴리펩타이드 링커가 이용되는 경우(예를 들어, 5개 내지 10개의 아미노산), 사슬내 폴딩이 방지된다. 사슬간 폴딩은 또한 2개의 가변 영역을 함께 모아 기능적 에피토프 결합 부위를 형성하기 위해 필요하다. 링커 배향 및 크기의 예에 대해서는, 예를 들어 문헌[Hollinger et al. 1993 Proc Natl Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-6448, 미국 특허 출원 공보 제2005/0100543호, 제2005/0175606호, 제2007/0014794호, 및 PCT 공보 제WO2006/020258호 및 제WO2007/024715호]를 참고한다.

scFv는 그 VL 영역과 VH 영역 사이에 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 50개 이상의 아미노산 잔기의 링커를 포함할 수 있다. 링커 서열은 임의의 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 아미노산 글리신 및 세린을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 링커 서열은 글리신 및 세린 반복체 세트, 예컨대 (Gly₄Ser)n을 포함하며, 여기서 n은 1 이상의 양의 정수이다(서열번호 232). 하나의 구현예에서, 링커는 (Gly₄Ser)₄(서열번호 230) 또는 (Gly₄Ser)₃(서열번호 231)일 수 있다. 링커 길이의 변화는 활성을 유지하거나 증강시켜, 활성 연구에서 더 우수한 효능을 유도할 수 있다.

또 다른 양태에서, 항원 결합 도메인은 T 세포 수용체("TCR"), 또는 이의 단편, 예를 들어 단일쇄 TCR(scTCR)이다. 이러한 TCR을 제조하는 방법은 당분야에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Willemsen RA et al, Gene Therapy 7: 1369-1377 (2000); Zhang T et al, Cancer Gene Ther 11: 487-496 (2004); Aggen et al, Gene Ther. 19(4):365-74 (2012)]을 참고한다. 예를 들어, 링커(예를 들어, 가요성 펩타이드)에 의해 결합된 T 세포 클론으로부터의 Vα 및 Vβ 유전자를 함유하는 scTCR이 조작될 수 있다. 이러한 접근은 그 자체는 세포 내에 있으나 이러한 항원의 단편(펩타이드)이 MHC에 의해 암 세포의 표면 상에서 제시되는 암 연관 표적에 매우 유용하다.

특정 구현예에서, 암호화된 항원 결합 도메인은 10^-4 M 내지 10^-8 M의 결합 친화도 KD를 갖는다.

하나의 구현예에서, 암호화된 CAR 분자는 표적 항원에 대해 10^-4 M 내지 10^-8 M, 예를 들어 10^-5 M 내지 10^-7 M, 예를 들어 10^-6 M 또는 10^-7 M의 결합 친화도 KD를 갖는 항원 결합 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 참조 항체, 예를 들어 본원에 기재된 항체보다 적어도 5배, 10배, 20배, 30배, 50배, 100배, 또는 1,000배 더 적은 결합 친화도를 갖는다. 하나의 구현예에서, 암호화된 항원 결합 도메인은 참조 항체(예를 들어, 항원 결합 도메인이 유래된 항체)보다 적어도 5배 더 적은 결합 친화도를 갖는다. 하나의 양태에서, 이러한 항체 단편은 당업자에 의해 이해될 바와 같이, 면역 반응의 활성화, 그 표적 항원으로부터의 신호 전달 기점의 억제, 키나제 활성의 억제 등을 포함할 수 있는 이에 제한되지는 않는 생물학적 반응을 제공한다는 점에서 기능적이다.

하나의 양태에서, CAR의 항원 결합 도메인은 이것이 유래된 scFv의 뮤린 서열과 비교하여 인간화된 scFv 항체 단편이다.

하나의 양태에서, 본 개시의 CAR의 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)은 서열이 포유류 세포에서의 발현에 대해 코돈 최적화된 핵산 분자에 의해 암호화된다. 하나의 양태에서, 본 개시의 전체 CAR 작제물은 전체 서열이 포유류 세포에서의 발현에 대해 코돈 최적화된 핵산 분자에 의해 암호화된다. 코돈 최적화는 암호화 DNA 내의 동의 코돈(즉, 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈)의 발생 빈도가 상이한 종에서 편향된다는 발견을 나타낸다. 이러한 코돈 축퇴성은 동일한 폴리펩타이드가 다양한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있도록 한다. 다양한 코돈 최적화 방법이 당분야에 알려져 있고, 예를 들어 적어도 미국 특허 제5,786,464호 및 제6,114,148호에 개시된 방법을 포함한다.

항원 결합 도메인(및 표적화된 항원)

하나의 구현예에서, CD19에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[PCT 공보 WO2012/079000; PCT 공보 WO2014/153270; Kochenderfer, J.N. et al., J. Immunother. 32 (7), 689-702 (2009); Kochenderfer, J.N., et al., Blood, 116 (20), 4099-4102 (2010); PCT 공보 WO2014/031687; Bejcek, Cancer Research, 55, 2346-2351, 1995; 또는 미국 특허 제7,446,190호]에 기재된 CAR, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, 메소텔린에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 PCT 공보 WO2015/090230에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, 메소텔린에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 PCT 공보 WO1997/025068, WO1999/028471, WO2005/014652, WO2006/099141, WO2009/045957, WO2009/068204, WO2013/142034, WO2013/040557, 또는 WO2013/063419에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, 메소텔린에 대한 항원 결합 도메인은 WO/2015/090230에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CD123에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 PCT 공보 WO2014/130635에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, CD123에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 PCT 공보 WO2014/138805, WO2014/138819, WO2013/173820, WO2014/144622, WO2001/66139, WO2010/126066, WO2014/144622, 또는 미국 특허 2009/0252742에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, CD123에 대한 항원 결합 도메인은 WO/2016/028896에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, EGFRvIII에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 WO/2014/130657에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CD22에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어, 문헌[Haso et al., Blood, 121(7): 1165-1174 (2013); Wayne et al., Clin Cancer Res 16(6): 1894-1903 (2010); Kato et al., Leuk Res 37(1):83-88 (2013); Creative BioMart (creativebiomart.net): MOM-18047-S(P)]에 기재된 항체의 항원 결합부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CS-1에 대한 항원 결합 도메인은 엘로투주맙(BMS)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이며, 예를 들어 문헌[Tai et al., 2008, Blood 112(4):1329-37; Tai et al., 2007, Blood. 110(5):1656-63]을 참고한다.

하나의 구현예에서, CLL-1에 대한 항원 결합 도메인은 R&D, ebiosciences, Abcam으로부터 입수 가능한 항체, 예를 들어 PE-CLL1-hu(카탈로그 번호 353604(BioLegend)); 및 PE-CLL1(CLEC12A)(카탈로그 번호 562566(BD))의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, CLL-1에 대한 항원 결합 도메인은 WO/2016/014535에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CD33에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Bross et al., Clin Cancer Res 7(6):1490-1496 (2001)]에 기재된 항체(겜투주맙 오조가미신(Gemtuzumab Ozogamicin), hP67.6), 문헌[Caron et al., Cancer Res 52(24):6761-6767 (1992)]에 기재된 항체(린투주맙(Lintuzumab), HuM195), 문헌[Lapusan et al., Invest New Drugs 30(3):1121-1131 (2012)]에 기재된 항체(AVE9633), 문헌[Aigner et al., Leukemia 27(5): 1107-1115 (2013)]에 기재된 항체(AMG330, CD33 BiTE), 문헌[Dutour et al., Adv hematol 2012:683065 (2012), 및 Pizzitola et al., Leukemia doi:10.1038/Lue.2014.62 (2014)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, CD33에 대한 항원 결합 도메인은 WO/2016/014576에 기재된 항체, 항원 결합 단편, 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, GD2에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어, 문헌[Mujoo et al., Cancer Res. 47(4):1098-1104 (1987); Cheung et al., Cancer Res 45(6):2642-2649 (1985), Cheung et al., J Clin Oncol 5(9):1430-1440 (1987), Cheung et al., J Clin Oncol 16(9):3053-3060 (1998), Handgretinger et al., Cancer Immunol Immunother 35(3):199-204 (1992)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 일부 구현예에서, GD2에 대한 항원 결합 도메인은 mAb 14.18, 14G2a, ch14.18, hu14.18, 3F8, hu3F8, 3G6, 8B6, 60C3, 10B8, ME36.1, 및 8H9로부터 선택된 항체의 항원 결합 부분이며, 예를 들어, WO2012033885, WO2013040371, WO2013192294, WO2013061273, WO2013123061, WO2013074916, 및 WO201385552를 참고한다. 일부 구현예에서, GD2에 대한 항원 결합 도메인은 미국 특허 국제 공보 제20100150910호 또는 PCT 공보 제WO 2011160119호에 기재된 항체의 항원 결합 부분이다.

하나의 구현예에서, BCMA에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 WO2012163805, WO200112812, 및 WO2003062401에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, BCMA에 대한 항원 결합 도메인은 WO/2016/014565호에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 CAR의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, Tn 항원에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[미국 특허 8,440,798, Brooks et al., PNAS 107(22):10056-10061 (2010), 및 Stone et al., OncoImmunology 1(6):863-873(2012)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, PSMA에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Parker et al., Protein Expr Purif 89(2):136-145 (2013), 미국 특허 20110268656]에 기재된 항체(J591 ScFv); 문헌[Frigerio et al, European J Cancer 49(9):2223-2232 (2013)]에 기재된 항체(scFvD2B); WO 2006125481에 기재된 항체(mAbs 3/A12, 3/E7 및 3/F11) 및 단일쇄 항체 단편(scFv A5 및 D7)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, ROR1에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Hudecek et al., Clin Cancer Res 19(12):3153-3164 (2013); WO 2011159847; 및 미국 특허20130101607]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, FLT3에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 WO2011076922, 미국 특허 5777084, EP0754230, 미국 특허 20090297529에 기재된 항체, 및 여러 상업적 카탈로그의 항체(R&D, ebiosciences, Abcam)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, TAG72에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Hombach et al., Gastroenterology 113(4):1163-1170 (1997)]에 기재된 항체; 및 Abcam ab691의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, FAP에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어, 문헌[Ostermann et al., Clinical Cancer Research 14:4584-4592 (2008)](FAP5), 미국 특허 국제 공보 제2009/0304718호에 기재된 항체; 시브로투주맙(예를 들어, 문헌[Hofheinz et al., Oncology Research and Treatment 26(1), (2003); 및 Tran et al., J Exp Med 210(6):1125-1135 (2013)] 참고)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CD38에 대한 항원 결합 도메인은 다라투무맙(예를 들어, 문헌[Groen et al., Blood 116(21):1261-1262 (2010)] 참고); MOR202(예를 들어, 미국 특허 8,263,746 참고); 또는 미국 특허 8,362,211에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CD44v6에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Casucci et al., Blood 122(20):3461-3472 (2013)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CEA에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Chmielewski et al., Gastoenterology 143(4):1095-1107 (2012)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, EPCAM에 대한 항원 결합 도메인은 MT110, EpCAM-CD3 이중특이적 Ab(예를 들어, clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00635596 참고); 에드레콜로맙(Edrecolomab); 3622W94; ING-1; 및 아데카투무맙(MT201)으로부터 선택되는 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, PRSS21에 대한 항원 결합 도메인은 미국 특허 제8,080,650호에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, B7H3에 대한 항원 결합 도메인은 항체 MGA271(Macrogenics)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, KIT에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 7915391, 미국 특허 20120288506에 기재된 항체, 및 여러 상업적 카탈로그의 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, IL-13Ra2에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 WO2008/146911, WO2004087758에 기재된 항체, 여러 상업적 카탈로그의 항체, 및 WO2004087758에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CD30에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어, 미국 특허 7090843 B1, 및 유럽 특허 0805871에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, GD3에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 7253263; 미국 특허 8,207,308; 미국 특허 20120276046; EP1013761; WO2005035577; 및 미국 특허 6437098에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CD171에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Hong et al., J Immunother 37(2):93-104 (2014)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, IL-11Ra에 대한 항원 결합 도메인은, Abcam(카탈로그 번호 ab55262) 또는 Novus Biologicals(카탈로그 번호 EPR5446)로부터 입수 가능한 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다. 또 다른 구현예에서, IL-11Ra에 대한 항원 결합 도메인은 펩타이드이며, 예를 들어, 문헌[Huang et al., Cancer Res 72(1):271-281 (2012)]을 참고한다.

하나의 구현예에서, PSCA에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Morgenroth et al., Prostate 67(10):1121-1131 (2007)]에 기재된 항체(scFv 7F5); 문헌[Nejatollahi et al., J of Oncology 2013(2013), article ID 839831]에 기재된 항체(scFv C5-II); 및 미국 특허 공보 제20090311181호에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, VEGFR2에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Chinnasamy et al., J Clin Invest 120(11):3953-3968 (2010)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, LewisY에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Kelly et al., Cancer Biother Radiopharm 23(4):411-423 (2008)]에 기재된 항체(hu3S193 Ab(scFv)); 문헌[Dolezal et al., Protein Engineering 16(1):47-56 (2003)]에 기재된 항체(NC10 scFv)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CD24에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Maliar et al., Gastroenterology 143(5):1375-1384 (2012)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, PDGFR-베타에 대한 항원 결합 도메인은 항체 Abcam ab32570의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, SSEA-4에 대한 항원 결합 도메인은 항체 MC813(Cell Signalling), 또는 다른 상업적으로 입수 가능한 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CD20에 대한 항원 결합 도메인은 항체 리툭시맙, 오파투무맙, 오크렐리주맙, 벨투주맙 또는 GA101의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, 폴레이트 수용체 알파에 대한 항원 결합 도메인은 항체 IMGN853, 또는 미국 특허 20120009181, 미국 특허 4851332, LK26: 미국 특허 5952484에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, ERBB2(Her2/neu)에 대한 항원 결합 도메인은 항체 트라스투주맙 또는 페르투주맙의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, MUC1에 대한 항원 결합 도메인은 항체 SAR566658의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, EGFR에 대한 항원 결합 도메인은 항체 세툭시맙, 파니투무맙, 잘루투무맙, 니모투주맙, 또는 마투주맙의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, NCAM에 대한 항원 결합 도메인은 항체 클론 2-2B: MAB5324(EMD Millipore)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, 에프린(Ephrin) B2에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Abengozar et al., Blood 119(19):4565-4576 (2012)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, IGF-I 수용체에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 8344112 B2; EP2322550 A1; WO 2006/138315, 또는 PCT/US2006/022995에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CAIX에 대한 항원 결합 도메인은 항체 클론 303123(R&D Systems)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, LMP2에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 7,410,640 또는 미국 특허 20050129701에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, gp100에 대한 항원 결합 도메인은 항체 HMB45, NKI베타B, 또는 WO2013165940 또는 미국 특허 20130295007에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, 티로시나제에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 5843674 또는 미국 특허 19950504048에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, EphA2에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Yu et al., Mol Ther 22(1):102-111 (2014)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, GD3에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 7253263; 미국 특허 8,207,308; 미국 특허 20120276046; EP1013761 A3; 20120276046; WO2005035577; 또는 미국 특허 6437098에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, 푸코실 GM1에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 20100297138 또는 WO2007/067992에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, sLe에 대한 항원 결합 도메인은 항체 G193(lewis Y의 경우)(문헌[Scott AM et al, Cancer Res 60: 3254-61 (2000)] 참고, 또한 문헌[Neeson et al, J Immunol May 2013 190 (Meeting Abstract Supplement) 177.10]에 기재된 바와 같음)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, GM3에 대한 항원 결합 도메인은 항체 CA 2523449(mAb 14F7)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, HMWMAA에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Kmiecik et al., Oncoimmunology 3(1):e27185 (2014) (PMID: 24575382)]에 기재된 항체(mAb9.2.27); 미국 특허 6528481; WO2010033866; 또는 미국 특허 20140004124에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, o-아세틸-GD2에 대한 항원 결합 도메인은 항체 8B6의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, TEM1/CD248에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Marty et al., Cancer Lett 235(2):298-308 (2006); Zhao et al., J Immunol Methods 363(2):221-232 (2011)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CLDN6에 대한 항원 결합 도메인은 항체 IMAB027(Ganymed Pharmaceuticals)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이며, 예를 들어, clinicaltrial.gov/show/NCT02054351을 참고한다.

하나의 구현예에서, TSHR에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 미국 특허 8,603,466; 미국 특허 8,501,415; 또는 미국 특허 8,309,693에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, GPRC5D에 대한 항원 결합 도메인은 항체 FAB6300A(R&D Systems); 또는 LS-A4180(Lifespan Biosciences)

하나의 구현예에서, CD97에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 미국 특허 6,846,911;문헌[de Groot et al., J Immunol 183(6):4127-4134 (2009)]에 기재된 항체; 또는 R&D로부터의 항체:MAB3734의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, ALK에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Mino-Kenudson et al., Clin Cancer Res 16(5):1561-1571 (2010)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, 폴리시알산에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Nagae et al., J Biol Chem 288(47):33784-33796 (2013)]에 기재된

하나의 구현예에서, PLAC1에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Ghods et al., Biotechnol Appl Biochem 2013 doi:10.1002/bab.1177]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, 글로보H에 대한 항원 결합 도메인은 항체 VK9; 또는 예를 들어 문헌[Kudryashov V et al., Glycoconj J.15(3):243-9 (1998), Lou et al., Proc Natl Acad Sci USA 111(7):2482-2487 (2014); MBr1: Bremer E-G et al. J Biol Chem 259:14773-14777 (1984)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분이다.

하나의 구현예에서, NY-BR-1에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Jager et al., Appl Immunohistochem Mol Morphol 15(1):77-83 (2007)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, WT-1에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Dao et al., Sci Transl Med 5(176):176ra33 (2013); 또는 WO2012/135854]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, MAGE-A1에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Willemsen et al., J Immunol 174(12):7853-7858 (2005)]에 기재된 항체(TCR-유사 scFv)]의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, 정자 단백질 17에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Song et al., Target Oncol 2013 Aug 14 (PMID: 23943313); Song et al., Med Oncol 29(4):2923-2931 (2012)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, Tie 2에 대한 항원 결합 도메인은 항체 AB33(Cell Signalling Technology)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, MAD-CT-2에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[PMID: 2450952; 미국 특허 7635753]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, Fos-관련 항원 1에 대한 항원 결합 도메인은 항체 12F9(Novus Biologicals)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, MelanA/MART1에 대한 항원 결합 도메인은 EP2514766 A2 또는 미국 특허 7,749,719에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, 육종 전위 절단점에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어, 문헌[Luo et al, EMBO Mol. Med. 4(6):453-461 (2012)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, TRP-2에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[Wang et al, J Exp Med. 184(6):2207-16 (1996)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CYP1B1에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 문헌[Maecker et al, Blood 102 (9): 3287-3294 (2003)]에 기재된 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, RAGE-1에 대한 항원 결합 도메인은 항체 MAB5328(EMD Millipore)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, 인간 텔로머라아제 역전사효소에 대한 항원 결합 도메인은 항체 카탈로그 번호 LS-B95-100(Lifespan Biosciences)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, 장 카르복실 에스터라제에 대한 항원 결합 도메인은 항체 4F12: 카탈로그 번호 LS-B6190-50(Lifespan Biosciences)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, mut hsp70-2에 대한 항원 결합 도메인은 항체 Lifespan Biosciences: 모노클로날: 카탈로그 번호: LS-C133261-100(Lifespan Biosciences)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CD79a에 대한 항원 결합 도메인은 Abcam으로부터 입수 가능한 항체 항-CD79a 항체[HM47/A9](ab3121); Cell Signalling Technology로부터 입수 가능한 항체 CD79A 항체 #3351; 또는 Sigma Aldrich로부터 입수 가능한, 토끼에서 생성된 항-CD79A 항체인 항체 HPA017748의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CD79b에 대한 항원 결합 도메인은 항체 폴라투주맙 베도틴, 문헌[Dornan et al., "Therapeutic potential of an anti-CD79b antibody-drug conjugate, anti-CD79b-vc-MMAE, for the treatment of non-Hodgkin lymphoma" Blood. 2009 Sep 24;114(13):2721-9. doi: 10.1182/blood-2009-02-205500. Epub 2009 Jul 24]에 기재된 항-CD79b, 또는 문헌["4507 Pre-Clinical Characterization of T Cell-Dependent Bispecific Antibody Anti-CD79b/CD3 As a Potential Therapy for B Cell Malignancies" Abstracts of 56^th ASH Annual Meeting and Exposition, San Francisco, CA December 6-9 2014]에 기재된 이중특이적 항체 항-CD79b/CD3의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CD72에 대한 항원 결합 도메인은 문헌[Myers, and Uckun, "An anti-CD72 immunotoxin against therapy-refractory B-lineage acute lymphoblastic leukemia". Leuk Lymphoma. 1995 Jun;18(1-2):119-22]에 기재된 항체 J3-109, 또는 문헌[Polson et al., "Antibody-Drug Conjugates for the Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma: Target and Linker-Drug Selection" Cancer Res March 15, 2009 69; 2358]에 기재된 항-CD72(10D6.8.1, mIgG1)의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, LAIR1에 대한 항원 결합 도메인은 ProSpec으로부터 입수 가능한 항체, ANT-301 LAIR1 항체; 또는 BioLegend로부터 입수 가능한 항-인간 CD305(LAIR1) 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, FCAR에 대한 항원 결합 도메인은 Sino Biological Inc.에서 입수 가능한 항체 CD89/FCAR 항체(카탈로그 번호 10414-H08H)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, LILRA2에 대한 항원 결합 도메인은 Abnova에서 입수 가능한 항체 LILRA2 모노클로날 항체(M17), 클론 3C7, 또는 Lifespan Biosciences에서 입수 가능한 마우스 항-LILRA2 항체, 모노클로날(2D7)의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, CD300LF에 대한 항원 결합 도메인은 BioLegend로부터 입수 가능한 항체, 마우스 항-CMRF35-유사 분자 1 항체, 모노클로날[UP-D2], 또는 R&D Systems로부터 입수 가능한 래트 항-CMRF35-유사 분자 1 항체, 모노클로날[234903]의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CLEC12A에 대한 항원 결합 도메인은 항체 이중특이적 T 세포 관여체(BiTE) scFv-항체 및 문헌[Noordhuis et al., "Targeting of CLEC12A In Acute Myeloid Leukemia by Antibody-Drug-Conjugates and Bispecific CLL-1xCD3 BiTE Antibody" 53^rd ASH Annual Meeting and Exposition, December 10-13, 2011, and MCLA-117 (Merus)]에 기재된 ADC의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, BST2(CD317로도 불림)에 대한 항원 결합 도메인은 Antibodies-Online으로부터 입수 가능한 항체, 마우스 항-CD317 항체, 모노클로날[3H4], 또는 R&D Systems로부터 입수 가능한 마우스 항-CD317 항체, 모노클로날[696739]의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, EMR2(CD312로도 불림)에 대한 항원 결합 도메인은 Lifespan Biosciences로부터 입수 가능한 항체, 마우스 항-CD312 항체, 모노클로날[LS-B8033], 또는 R&D Systems로부터 입수 가능한 마우스 항-CD312 항체, 모노클로날[494025]의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, LY75에 대한 항원 결합 도메인은 EMD Millipore로부터 입수 가능한 항체, 마우스 항-림프구 항원 75 항체, 모노클로날[HD30], 또는 Life Technologies로부터 입수 가능한 마우스 항-림프구 항원 75 항체, 모노클로날[A15797]의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, GPC3에 대한 항원 결합 도메인은 문헌[Nakano K, Ishiguro T, Konishi H, et al. Generation of a humanized anti-glypican 3 antibody by CDR grafting and stability optimization. Anticancer Drugs. 2010 Nov;21(10):907916]에 기재된 항체 hGC33, 또는 3개 모두 문헌[Feng et al., “Glypican-3 antibodies: a new therapeutic target for liver cancer.” FEBS Lett. 2014 Jan 21;588(2):377-82]에 기재된 MDX-1414, HN3, 또는 YP7의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, FCRL5에 대한 항원 결합 도메인은 문헌[Elkins et al., "FcRL5 as a target of antibody-drug conjugates for the treatment of multiple myeloma" Mol Cancer Ther. 2012 Oct;11(10):2222-32]에 기재된 항-FcRL5 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다. 하나의 구현예에서, FCRL5에 대한 항원 결합 도메인은 예를 들어 WO2001/038490, WO/2005/117986, WO2006/039238, WO2006/076691, WO2010/114940, WO2010/120561, 또는 WO2014/210064에 기재된 항-FcRL5 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, IGLL1에 대한 항원 결합 도메인은 Lifespan Biosciences에서 입수 가능한 항체 마우스 항-면역글로불린 람다-유사 폴리펩타이드 1 항체, 모노클로날[AT1G4], BioLegend에서 입수 가능한 마우스 항-면역글로불린 람다-유사 폴리펩타이드 1 항체, 모노클로날[HSL11]의 항원 결합 부분, 예를 들어 CDR이다.

하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 위에 열거된 항체로부터의 1개, 2개, 3개(예를 들어, 3개 모두)의 중쇄 CDR, HC CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3, 및/또는 위에 열거된 항체로부터의 1개, 2개, 3개(예를 들어, 3개 모두)의 경쇄 CDR, LC CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 상기 열거된 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

또 다른 양태에서, 항원 결합 도메인은 인간화 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 양태에서, 비인간 항체는 인간화되며, 여기서 항체의 특정 서열 또는 영역은 인간에서 자연적으로 생산된 항체 또는 이의 단편과의 유사성을 증가시키도록 개질된다. 하나의 양태에서, 항원 결합 도메인은 인간화된다.

하나의 구현예에서, CAR, 예를 들어 본 개시의 세포에 의해 발현된 CAR의 항원 결합 도메인은 CD19에 결합한다. CD19는 프로/프리-B 세포 단계로부터 최종 분화된 형질 세포 단계를 통한 계통 분화에 걸쳐 B 세포 상에서 확인된다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 인간 CD19에 결합하는 뮤린 scFv 도메인, 예를 들어, CTL019의 항원 결합 도메인(예를 들어, 서열번호 252)이다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 인간화 항체 또는 항체 단편, 예를 들어 뮤린 CTL019 scFv로부터 유래된 scFv 도메인이다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 인간 CD19에 결합하는 인간 항체 또는 항체 단편이다. CD19에 결합하는 예시적인 scFv 도메인(및 이의 서열, 예를 들어 CDR, VL, 및 VH 서열)이 표 12a에 제공된다. 표 12a에 제공된 scFv 도메인 서열은 경쇄 가변 영역(VL) 및 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. VL 및 VH는 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 231)를 포함하는 링커에 의해 예를 들어, 하기 배향: VL-링커-VH로 부착된다.

[표 12a]

표 12a에 제공된 CD19 항원 결합 도메인의 scFv 도메인의 CDR 서열의 중쇄 가변 도메인에 대한 서열을 표 12b에 나타내고 경쇄 가변 도메인에 대한 서열을 표 12c에 나타낸다. "ID"는 각 CDR에 대한 각각의 서열번호를 나타낸다.

[표 12b]

[표 12c]

하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 항-CD19 항체, 또는 이의 단편, 예를 들어 scFv를 포함한다. 예를 들어, 항원 결합 도메인은 표 12d에 열거된 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함한다. 가변 중쇄와 가변 경쇄를 연결하는 링커 서열은 본원에 기재된 임의의 링커 서열일 수 있거나, 또는 대안적으로 GSTSGSGKPGSGEGSTKG(서열번호 248)일 수 있다. scFv의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역은 예를 들어, 임의의 하기 배향: 경쇄 가변 영역-링커-중쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역-링커-경쇄 가변 영역일 수 있다.

[표 12d]

하나의 구현예에서, CD19 결합 도메인은 본원에 기재된, 예를 들어 표 12a 또는 15에 제공된 CD19 결합 도메인의 하나 이상(예를 들어, 3개 모두)의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LC CDR1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(LC CDR2), 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(LC CDR3), 및/또는 본원에 기재된, 예를 들어 표 12a 또는 16에 제공된 CD19 결합 도메인의 하나 이상(예를 들어, 3개 모두)의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HC CDR1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(HC CDR2), 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(HC CDR3)을 포함한다. 하나의 구현예에서, CD19 결합 도메인은 표 12c에 제공된 바와 같은 임의의 아미노산 서열의 LC CDR1, LC CDR2, 및 LC CDR3 중 1개, 2개, 또는 모두; 및 표 12b에 제공된 임의의 아미노산 서열의 HC CDR1, HC CDR2, 및 HC CDR3 중 1개, 2개, 또는 모두를 포함한다.

당분야에 알려진 임의의 CD19 CAR, 예를 들어 임의의 알려진 CD19 CAR의 CD19 항원 결합 도메인을 본 개시에 따라 사용하여 CAR을 작제할 수 있다. 예를 들어, LG-740; CD19 CAR은 문헌[미국 특허 제8,399,645호; 미국 특허 제7,446,190호; Xu et al., Leuk Lymphoma. 2013 54(2):255-260(2012); Cruz et al., Blood 122(17):2965-2973 (2013); Brentjens et al., Blood, 118(18):4817-4828 (2011); Kochenderfer et al., Blood 116(20):4099-102 (2010); Kochenderfer et al., Blood 122 (25):4129-39(2013); 및 16th Annu Meet Am Soc Gen Cell Ther (ASGCT) (May 15-18, Salt Lake City) 2013, Abst 10]에 기재되었다. 하나의 구현예에서, CD19에 대한 항원 결합 도메인은, 예를 들어 문헌[PCT 공보 WO2012/079000; PCT 공보 WO2014/153270; Kochenderfer, J.N. et al., J. Immunother. 32 (7), 689-702 (2009); Kochenderfer, J.N., et al., Blood, 116 (20), 4099-4102 (2010); PCT 공보 WO2014/031687호; Bejcek, Cancer Research, 55, 2346-2351, 1995; 또는 미국 특허 제7,446,190호]에 기재된 CAR, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 부분, 예를 들어, CDR이다.

하나의 구현예에서, CAR, 예를 들어 본 개시의 세포에 의해 발현된 CAR의 항원 결합 도메인은 BCMA에 결합한다. BCMA는 성숙 B 림프구에서 우선적으로 발현되는 것으로 확인된다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 인간 BCMA에 결합하는 뮤린 scFv 도메인이다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 인간 BCMA에 결합하는 인간화 항체 또는 항체 단편, 예를 들어 scFv 도메인이다. 하나의 구현예에서, 항원 결합 도메인은 인간 BCMA에 결합하는 인간 항체 또는 항체 단편이다. 구현예에서, 예시적인 BCMA CAR 작제물은 PCT 공보 WO2012/0163805의 VH 및 VL 서열을 사용하여 생성된다. 구현예에서, PCT 공보 WO2016/014565로부터의 VH 및 VL 서열을 사용하여 추가의 예시적인 BCMA CAR 작제물이 생성된다. 구현예에서, PCT 공보 WO2014/122144로부터의 VH 및 VL 서열을 사용하여 추가의 예시적인 BCMA CAR 작제물이 생성된다. 구현예에서, 추가의 예시적인 BCMA CAR 작제물은 PCT 공보 WO2016/014789로부터의 CAR 분자, 및/또는 VH 및 VL 서열을 사용하여 생성된다. 구현예에서, 추가의 예시적인 BCMA CAR 작제물은 PCT 공보 WO2014/089335의 CAR 분자, 및/또는 VH 및 VL 서열을 사용하여 생성된다. 구현예에서, 추가의 예시적인 BCMA CAR 작제물은 PCT 공보 WO2014/140248의 CAR 분자, 및/또는 VH 및 VL 서열을 사용하여 생성된다.

당분야에 알려진 임의의 BCMA CAR, 예를 들어 임의의 알려진 BCMA CAR의 BMCA 항원 결합 도메인이 본 개시에 따라 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 것들.

예시적인 CAR 분자

하나의 양태에서, CAR, 예를 들어 본 개시의 세포에 의해 발현된 CAR은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 B 세포 항원, 예컨대 CD19 또는 BCMA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR 분자를 포함한다.

하나의 구현예에서, CAR은, CD19 항원 결합 도메인(예를 들어, CD19에 특이적으로 결합하는 뮤린, 인간 또는 인간화 항체 또는 항체 단편), 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인(예를 들어, 공동자극 도메인 및/또는 일차 신호전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호전달 도메인)을 포함하는 CAR 분자를 포함한다.

본원에 기재된 예시적인 CAR 분자는 표 12e에 제공된다. 표 12e의 CAR 분자는 CD19 항원 결합 도메인, 예를 들어 표 12a에 제공된 임의의 CD19 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함한다.

[표 12e]

하나의 양태에서, CAR, 예를 들어, 본 개시의 세포에 의해 발현된 CAR은, BCMA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR 분자를 포함하며, 예를 들어, BCMA 항원 결합 도메인(예를 들어, BCMA, 예를 들어, 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 뮤린, 인간 또는 인간화 항체 또는 항체 단편), 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인(예를 들어, 공동자극 도메인 및/또는 일차 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인)을 포함한다.

본원에 기재된 CAR의 예시적인 CAR 분자는 WO2016/014565의 표 1에 제공된다.

막관통 도메인

막관통 도메인에 관하여, 다양한 구현예에서, CAR은 CAR의 세포외 도메인에 부착된 막관통 도메인을 포함하도록 설계될 수 있다. 막관통 도메인은 막관통 영역에 인접한 하나 이상의 추가의 아미노산, 예를 들어 막관통 영역이 유래된 단백질의 세포외 영역과 연관된 하나 이상의 아미노산(예를 들어 세포외 영역의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 최대 15개의 아미노산) 및/또는 막관통 단백질이 유래된 단백질의 세포내 영역과 연관된 하나 이상의 추가 아미노산(예를 들어 세포내 영역의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 최대 15개의 아미노산)을 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, 막관통 도메인은 CAR의 다른 도메인 중 하나와 연관된 것이고, 예를 들어 하나의 구현예에서, 막관통 도메인은 신호전달 도메인, 공동자극 도메인 또는 힌지 도메인이 유래된 동일한 단백질로부터의 것일 수 있다. 또 다른 양태에서, 막관통 도메인은 CAR의 임의의 다른 도메인이 유래된 동일한 단백질로부터 유래되지 않는다. 일부 예에서, 막관통 도메인은 이러한 도메인이 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 결합을 배제하도록, 예를 들어 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하도록 선택되거나 아미노산 치환에 의해 개질될 수 있다. 하나의 양태에서, 막관통 도메인은 CAR-발현 세포의 세포 표면 상에서 또 다른 CAR과 동종이량체화할 수 있다. 다른 양태에서, 막관통 도메인의 아미노산 서열은 동일한 CAR-발현 세포에 존재하는 천연 결합 파트너의 결합 도메인과의 상호작용을 최소화하도록 개질되거나 치환될 수 있다.

막관통 도메인은 천연 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우에, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 하나의 양태에서, 막관통 도메인은 CAR이 표적에 결합할 때마다 세포내 도메인(들)으로의 신호전달이 가능하다. 본 개시에서 특정 용도의 막관통 도메인은 적어도, 예를 들어 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬인 CD28, CD27, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 막관통 영역(들)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 적어도, 예를 들어 KIRDS2, OX40, CD2, CD27, LFA-1(CD11a, CD18), ICOS(CD278), 4-1BB(CD137), GITR, CD40, BAFFR, HVEM(LIGHTR), SLAMF7, NKp80(KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD160, CD19, IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R α, ITGA1, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, PAG/Cbp, NKG2D, NKG2C의 막관통 영역(들)을 포함할 수 있다.

일부 예에서, 막관통 도메인은 힌지, 예를 들어 인간 단백질로부터의 힌지를 통해 CAR의 세포외 영역, 예를 들어 CAR의 항원 결합 도메인에 부착될 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 힌지는 인간 Ig(면역글로불린) 힌지(예를 들어, IgG4 힌지, IgD 힌지), GS 링커(예를 들어, 본원에 기재된 GS 링커), KIR2DS2 힌지, 또는 CD8a 힌지일 수 있다. 하나의 구현예에서, 힌지 또는 스페이서는 서열번호 265의 아미노산 서열을 포함한다(예를 들어, 이로 구성된다). 하나의 양태에서, 막관통 도메인은 서열번호 266의 막관통 도메인을 포함한다(예를 들어, 이로 구성된다).

특정 구현예에서, 암호화된 막관통 도메인은 서열번호 266의 아미노산 서열의 적어도 1개, 2개, 또는 3개 개질, 그러나 20개, 10개, 또는 5개 이하의 개질을 갖는 CD8 막관통 도메인의 아미노산 서열, 또는 서열번호 266의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 암호화된 막관통 도메인은 서열번호 266의 서열을 포함한다.

다른 구현예에서, CAR을 암호화하는 핵산 분자는 예를 들어 서열번호 267 또는 서열번호 304의 서열, 또는 이와 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는, CD8 막관통 도메인의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 암호화된 항원 결합 도메인은 힌지 영역에 의해 막관통 도메인에 연결된다. 하나의 구현예에서, 암호화된 힌지 영역은 CD8 힌지의 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 265; 또는 IgG4 힌지의 아미노산 서열, 예를 들어, 서열번호 268 또는 서열번호 265 또는 서열번호 268과 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 힌지 영역을 암호화하는 핵산 서열은 각각 CD8 힌지 또는 IgG4 힌지에 대응하는 서열번호 269 또는 서열번호 270의 서열, 또는 서열번호 269 또는 270과 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.

하나의 양태에서, 힌지 또는 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 힌지 또는 스페이서는 아미노산 서열 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM(서열번호 268)의 힌지를 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 또는 스페이서는 GAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCCCTTGCCCTGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAGGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAGCAGTTCAATAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAATACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCAGCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCAAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAGGGCAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGATG(서열번호 270)의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 힌지를 포함한다.

하나의 양태에서, 힌지 또는 스페이서는 IgD 힌지를 포함한다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 힌지 또는 스페이서는 RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH(서열번호 271)의 아미노산 서열의 힌지를 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 또는 스페이서는 AGGTGGCCCGAAAGTCCCAAGGCCCAGGCATCTAGTGTTCCTACTGCACAGCCCCAGGCAGAAGGCAGCCTAGCCAAAGCTACTACTGCACCTGCCACTACGCGCAATACTGGCCGTGGCGGGGAGGAGAAGAAAAAGGAGAAAGAGAAAGAAGAACAGGAAGAGAGGGAGACCAAGACCCCTGAATGTCCATCCCATACCCAGCCGCTGGGCGTCTATCTCTTGACTCCCGCAGTACAGGACTTGTGGCTTAGAGATAAGGCCACCTTTACATGTTTCGTCGTGGGCTCTGACCTGAAGGATGCCCATTTGACTTGGGAGGTTGCCGGAAAGGTACCCACAGGGGGGGTTGAGGAAGGGTTGCTGGAGCGCCATTCCAATGGCTCTCAGAGCCAGCACTCAAGACTCACCCTTCCGAGATCCCTGTGGAACGCCGGGACCTCTGTCACATGTACTCTAAATCATCCTAGCCTGCCCCCACAGCGTCTGATGGCCCTTAGAGAGCCAGCCGCCCAGGCACCAGTTAAGCTTAGCCTGAATCTGCTCGCCAGTAGTGATCCCCCAGAGGCCGCCAGCTGGCTCTTATGCGAAGTGTCCGGCTTTAGCCCGCCCAACATCTTGCTCATGTGGCTGGAGGACCAGCGAGAAGTGAACACCAGCGGCTTCGCTCCAGCCCGGCCCCCACCCCAGCCGGGTTCTACCACATTCTGGGCCTGGAGTGTCTTAAGGGTCCCAGCACCACCTAGCCCCCAGCCAGCCACATACACCTGTGTTGTGTCCCATGAAGATAGCAGGACCCTGCTAAATGCTTCTAGGAGTCTGGAGGTTTCCTACGTGACTGACCATT(서열번호 272)의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 힌지를 포함한다.

하나의 양태에서, 막관통 도메인은 재조합 도메인일 수 있으며, 이 경우 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 주로 포함할 것이다. 하나의 양태에서, 페닐알라닌, 트립토판, 및 발린의 삼중체가 재조합 막관통 도메인의 각각의 말단에서 확인될 수 있다.

선택적으로, 2 내지 10개 아미노산 길이의 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커가 CAR의 막관통 도메인과 세포질 영역 간 결합을 형성할 수 있다. 글리신-세린 이중체가 특히 적합한 링커를 제공한다. 예를 들어, 하나의 양태에서, 링커는 GGGGSGGGGS(서열번호 273)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC(서열번호 274)의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.

하나의 양태에서, 힌지 또는 스페이서는 KIR2DS2 힌지를 포함한다.

신호전달 도메인

세포내 신호전달 도메인을 갖는 본 개시의 구현예에서, 이러한 도메인은 예를 들어, 일차 신호전달 도메인 및/또는 공동자극 신호전달 도메인 중 하나 이상을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 일차 신호전달 도메인을 암호화하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 공동자극 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 일차 신호전달 도메인 및 공동자극 신호전달 도메인을 포함한다.

본 개시의 CAR의 세포질 부분 내 세포내 신호전달 서열은 무작위로 또는 명시된 순서로 서로 결합될 수 있다. 선택적으로, 예를 들어 2개 내지 10개 아미노산(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산) 길이의 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커가 세포내 신호전달 도메인 간 결합을 형성할 수 있다. 하나의 구현예에서, 글리신-세린 이중체가 적합한 링커로서 사용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 단일 아미노산, 예를 들어 알라닌, 글리신이 적합한 링커로서 사용될 수 있다.

하나의 양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 2개 이상, 예를 들어 2개, 3개, 4개, 5개 이상의 공동자극 신호전달 도메인을 포함하도록 설계된다. 하나의 구현예에서, 2개 이상, 예를 들어 2개, 3개, 4개, 5개 이상의 공동자극 신호전달 도메인은 링커 분자, 예를 들어 본원에 기재된 링커 분자에 의해 분리된다. 하나의 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 2개의 공동자극 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 분자는 글리신 잔기이다. 일부 구현예에서, 링커는 알라닌 잔기이다.

일차 신호전달 도메인

일차 신호전달 도메인은 TCR 복합체의 일차 활성화를 자극 방식 또는 억제 방식으로 조절한다. 자극 방식으로 작용하는 일차 세포내 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호전달 모티프를 함유할 수 있다.

본 개시에 특히 유용한 일차 세포내 신호전달 도메인을 함유하는 ITAM의 예는 CD3 제타, 공통 FcR 감마(FCER1G), Fc 감마 RIIa, FcR 베타(Fc 엡실론 R1b), CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD79a, CD79b, DAP10 및 DAP12의 것들을 포함한다. 하나의 구현예에서, 본 개시의 CAR은 세포내 신호전달 도메인, 예를 들어 CD3-제타의 일차 신호전달 도메인을 포함한다.

하나의 구현예에서, 암호화된 일차 신호전달 도메인은 CD3 제타의 기능적 신호전달 도메인을 포함한다. 암호화된 CD3 제타 일차 신호전달 도메인은 서열번호 275 또는 서열번호 276의 아미노산 서열 또는 서열번호 275 또는 서열번호 276의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열의 적어도 1개, 2개, 또는 3개, 그러나 20개, 10개, 또는 5개 이하의 개질을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 암호화된 일차 신호전달 도메인은 서열번호 275 또는 서열번호 276의 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 일차 신호전달 도메인을 암호화하는 핵산 서열은 서열번호 277, 서열번호 303, 또는 서열번호 278의 서열, 또는 이와 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.

공동자극 신호전달 도메인

일부 구현예에서, 암호화된 세포내 신호전달 도메인은 공동자극 신호전달 도메인을 포함한다. 예를 들어, 세포내 신호전달 도메인은 일차 신호전달 도메인 및 공동자극 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 암호화된 공동자극 신호전달 도메인은 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능-연관 항원-1(LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, HVEM(LIGHTR), SLAMF7, NKp80(KLRF1), CD160, CD19, CD4, CD8알파, CD8베타, IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, NKp44, NKp30, NKp46, 또는 NKG2D 중 하나 이상으로부터 선택된 단백질의 기능적 신호전달 도메인을 포함한다.

특정 구현예에서, 암호화된 공동자극 신호전달 도메인은 서열번호 279 또는 서열번호 280의 아미노산 서열 또는 서열번호 279 또는 서열번호 280의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열의 적어도 1개, 2개, 또는 3개, 그러나 20개, 10개, 또는 5개 이하의 개질을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 암호화된 공동자극 신호전달 도메인은 서열번호 279 또는 서열번호 280의 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 공동자극 신호전달 도메인을 암호화하는 핵산 서열은 서열번호 281, 서열번호 305, 또는 서열번호 282의 서열, 또는 이와 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.

다른 구현예에서, 암호화된 세포내 도메인은 서열번호 279 또는 서열번호 280의 서열 및 서열번호 275 또는 서열번호 276의 서열을 포함하며, 여기서 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 서열은 동일한 프레임에서 그리고 단일 폴리펩타이드쇄로서 발현된다.

특정 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인을 암호화하는 핵산 서열은 서열번호 281, 서열번호 305, 또는 서열번호 282의 서열, 또는 이와 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열, 및 서열번호 277, 서열번호 306, 또는 서열번호 278의 서열, 또는 이와 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 핵산 분자는 리더 서열을 추가로 암호화한다. 하나의 구현예에서, 리더 서열은 서열번호 283의 서열을 포함한다.

하나의 양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD3-제타의 신호전달 도메인 및 CD28의 신호전달 도메인을 포함하도록 설계된다. 하나의 양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD3-제타의 신호전달 도메인 및 4-1BB의 신호전달 도메인을 포함하도록 설계된다. 하나의 양태에서, 4-1BB의 신호전달 도메인은 서열번호 279의 신호전달 도메인이다. 하나의 양태에서, CD3-제타의 신호전달 도메인은 서열번호 275의 신호전달 도메인이다.

하나의 양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD3-제타의 신호전달 도메인 및 CD27의 신호전달 도메인을 포함하도록 설계된다. 하나의 양태에서, CD27의 신호전달 도메인은 QRRKYRSNKGESPVEPAEPCRYSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP(서열번호 280)의 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 양태에서, CD27의 신호전달 도메인은 Caacgaaggaaatatagatcaaacaaaggagaaagtcctgtggagcctgcagagccttgtcgttacagctgccccagggaggaggagggcagcaccatccccatccaggaggattaccgaaaaccggagcctgcctgctccccc(서열번호 282)의 핵산 서열에 의해 암호화된다.

벡터

또 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 CAR을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 하나의 구현예에서, 벡터는 DNA 벡터, RNA 벡터, 플라스미드, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 또는 레트로바이러스 벡터로부터 선택된다. 하나의 구현예에서, 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 이러한 벡터 또는 이의 일부는 특히, 본원에 기재된 바와 같은 CRISPR 시스템과 함께 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 주형 핵산을 생성하는 데 사용될 수 있다. 대안적으로, 벡터는 CRISPR 시스템과 무관하게 세포, 예를 들어 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포, 예를 들어 동종이형 T 세포에 직접 핵산을 전달하는 데 사용될 수 있다.

본 개시는 또한 본 개시의 DNA가 삽입되는 벡터를 제공한다. 렌티바이러스와 같은 레트로바이러스로부터 유래된 벡터는 딸 세포에서 이식유전자의 장기, 안정적 통합 및 이의 전파를 허용하므로 장기 유전자 전달을 달성하는 데 적합한 도구이다. 렌티바이러스 벡터는 간세포와 같은 비증식성 세포를 형질도입할 수 있다는 점에서 뮤린 백혈병 바이러스와 같은 종양-레트로바이러스로부터 유래된 벡터에 비해 추가적인 장점을 갖는다. 이들은 또한 낮은 면역원성의 추가적 장점을 갖는다. 레트로바이러스 벡터는 예를 들어 감마레트로바이러스 벡터일 수도 있다. 감마레트로바이러스 벡터는 예를 들어 프로모터, 패키징 신호(Ψ), 프라이머 결합 부위(PBS), 하나 이상(예를 들어 2개)의 장형 말단 반복(LTR), 및 관심 이식유전자, 예를 들어 CAR을 암호화하는 유전자를 포함할 수 있다. 감마레트로바이러스 벡터에는 gag, pol, 및 env와 같은 바이러스 구조 유전자가 결여되어 있을 수 있다. 예시적인 감마레트로바이러스 벡터는 뮤린 백혈병 바이러스(MLV), 비장-병소 형성 바이러스(SFFV), 및 골수증식성 육종 바이러스(MPSV), 및 이로부터 유래된 벡터를 포함한다. 다른 감마레트로바이러스 벡터는, 예를 들어 문헌[Tobias Maetzig et al., "Gammaretroviral Vectors: Biology, Technology and Application” Viruses. 2011 Jun; 3(6): 677-713]에 기재되어 있다.

또 다른 구현예에서, 본 개시의 요망되는 CAR을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터는 아데노바이러스 벡터(A5/35)이다. 또 다른 구현예에서, CAR을 암호화하는 핵산의 발현은 트랜스포존, 예컨대 슬리핑 뷰티, crisper, CAS9, 및 징크 핑거 뉴클레아제를 사용하여 달성될 수 있다. 아래에서 문헌[June et al. 2009Nature Reviews Immunology 9.10: 704-716]을 참고한다.

핵산은 여러 유형의 벡터에 클로닝될 수 있다. 예를 들어, 핵산은 플라스미드, 파지미드, 파지 유도체, 동물 바이러스, 및 코스미드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 벡터에 클로닝될 수 있다. 특히 관심 벡터는 발현 벡터, 복제 벡터, 탐침 생성 벡터, 및 시퀀싱 벡터를 포함한다.

시험관내 전사된 RNA CAR을 생성하는 방법이 본원에 개시되어 있다. 본 개시는 또한 세포 내로 직접 형질감염될 수 있는 CAR 암호화 RNA 작제물을 포함한다. 형질감염에 사용하기 위한 mRNA를 생성하는 방법에는 특별히 설계된 프라이머를 이용한 주형의 시험관내 전사(IVT)에 이은 polyA 부가가 관여되어, 3' 및 5' 미번역 서열("UTR"), 5' 캡 및/또는 내부 리보솜 진입 부위(IRES), 발현될 핵산, 및 전형적으로 50개~2000개 염기 길이의 polyA 테일을 함유하는 작제물(서열번호 310)을 생성할 수 있다. 이렇게 생성된 RNA는 상이한 종류의 세포를 효율적으로 형질감염시킬 수 있다. 하나의 양태에서, 주형은 CAR에 대한 서열을 포함한다.

비바이러스성 전달 방법

일부 양태에서, 본원에 기재된 CAR을 암호화하는 핵산을 세포 또는 조직 또는 대상체 내로 전달하기 위해 비바이러스성 방법이 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 비바이러스성 방법은 트랜스포존(전위 요소라고도 불림)의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 트랜스포존은 게놈의 한 위치에 자신의 삽입할 수 있는 DNA 조각, 예를 들어 자기 복제가 가능하고 자신의 카피를 게놈에 삽입할 수 있는 DNA 조각, 또는 더 긴 핵산에서 스플라이싱되어 게놈의 또 다른 위치에 삽입될 수 있는 DNA 조각이다. 예를 들어, 트랜스포존은 전위를 위해 유전자 측면에 역위 반복으로 이루어진 DNA 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, SBTS를 사용한 유전자 삽입과 뉴클레아제(예를 들어, 징크 핑거 뉴클레아제(ZFN), 전사 활성화제-유사 효과인자 뉴클레아제(TALEN), CRISPR/Cas 시스템, 또는 조작된 메가뉴클레아제 재조작된 호밍 엔도뉴클레아제)를 사용한 유전자 편집의 조합을 사용하여 본원에 기재된 CAR을 발현하는 세포, 예를 들어 T 세포 또는 NK 세포가 생성된다.

일부 구현예에서, 세포를 (a) 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 gRNA 분자, 및 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 Cas 분자, 예를 들어 Cas9 분자를 포함하는 조성물, 및 (b) 예를 들어 본원에 기재된 CAR을 암호화하는 서열을 포함하는 핵산(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 주형 핵산 분자)과 접촉시킴으로써, 본 개시의 세포, (예를 들어, 본원에 기재된 CAR을 발현하는), 예를 들어 본원에 기재된 T 세포 또는 NK 세포, 예를 들어 동종이형 T 세포가 생성된다. 이론에 구애됨이 없이, 상기 (a)의 상기 조성물은 gRNA 분자(들)의 표적화 도메인에 의해 표적화된 게놈 DNA에서 또는 그 근처에서 절단을 유도할 것이고, (b)의 핵산은 통합 시 암호화된 CAR 분자가 발현되도록 상기 절단점에서 또는 그 근처에서, 예를 들어 부분적으로 또는 전체적으로, 게놈에 혼입될 것이다. 구현예에서, CAR의 발현은 게놈에 내인성인 프로모터 또는 다른 조절 요소(예를 들어, (b)의 핵산이 삽입된 유전자로부터 발현을 제어하는 프로모터)에 의해 제어될 것이다. 다른 구현예에서, (b)의 핵산은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 프로모터 및/또는 다른 조절 요소, 예를 들어 CAR을 암호화하는 서열에 작동 가능하게 결합된 EF1-알파 프로모터를 추가로 포함하여, 통합 시 그 프로모터 및/또는 다른 조절 요소에 의해 CAR의 발현이 제어된다. 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 CAR을 암호화하는 핵산 서열의 직접적 통합을 위해, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 CRISPR/Cas9 시스템의 사용과 관련된 본 개시의 추가적인 특징은 본 출원의 다른 곳, 예를 들어 유전자 삽입 및 상동 재조합에 관한 섹션에 기재되어 있다. 구현예에서, 상기 a)의 조성물은 하나 이상의 gRNA 분자를 포함하는 RNP를 포함하는 조성물이다. 구현예에서, 고유의 표적 서열을 표적화하는 gRNA를 포함하는 RNP는 동시에, 예를 들어 하나 이상의 gRNA를 포함하는 RNP의 혼합물로서 세포 내로 도입된다. 구현예에서, 고유 표적 서열을 표적화하는 gRNA를 포함하는 RNP는 순차적으로 세포 내로 도입된다.

일부 구현예에서, 비바이러스성 전달 방법의 사용은 세포, 예를 들어 T 세포 또는 NK 세포의 재프로그래밍, 및 대상체 내로의 세포의 직접적 주입을 허용한다. 비바이러스성 벡터의 장점은 환자 집단을 충족시키는 데 필요한 충분한 양의 생산에 대한 용이성 및 상대적으로 낮은 비용, 보관 동안의 안정성, 및 면역원성의 부재를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

프로모터

하나의 구현예에서, 벡터는 프로모터를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 프로모터는 EF-1 프로모터, CMV IE 유전자 프로모터, EF-1α 프로모터, 유비퀴틴 C 프로모터, 또는 포스포글리세레이트 키나제(PGK) 프로모터로부터 선택된다. 하나의 구현예에서, 프로모터는 EF-1 프로모터이다. 하나의 구현예에서, EF-1 프로모터는 서열번호 285의 서열을 포함한다.

CAR 발현을 위한 숙주 세포

상기 주지된 바와 같이, 일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 바와 같은 핵산 분자, CAR 폴리펩타이드 분자, 또는 벡터를 포함하는 세포, 예를 들어 면역 효과기 세포(예를 들어, 세포 집단, 예를 들어 면역 효과기 세포 집단)에 관한 것이다.

본 개시의 특정 양태에서, 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포는 Ficoll™ 분리와 같은, 당업자에게 알려진 임의의 여러 기법을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위로부터 수득될 수 있다. 바람직한 하나의 양태에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 성분채집에 의해 수득된다. 성분채집 산물은 전형적으로 T 세포를 포함하는 림프구, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구, 및 혈소판을 함유한다. 하나의 양태에서, 성분채집에 의해 수집된 세포는 혈장 분획을 제거하기 위해 세척될 수 있고, 선택적으로 후속 처리 단계를 위해 세포를 적절한 완충액 또는 배지에 배치할 수 있다. 하나의 구현예에서, 세포는 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척된다. 대안적 구현예에서, 세척 용액에는 칼슘이 없고, 마그네슘이 없을 수 있거나, 전부는 아니지만 많은 2가 양이온이 없을 수 있다.

칼슘 부재 하의 초기 활성화 단계는 활성화 확대를 야기할 수 있다. 당업자가 용이하게 이해할 바와 같이, 세척 단계는 당업자에게 알려진 방법에 의해, 예컨대 반자동 "관류" 원심분리기(예를 들어, Cobe 2991 세포 처리기, Baxter CytoMate, 또는 Haemonetics Cell Saver 5)를 제조업체의 지침에 따라 사용함으로써 달성될 수 있다. 세척 후, 세포는 다양한 생체적합성 완충액, 예를 들어 Ca-무함유, Mg-무함유 PBS, PlasmaLyte A, 또는 완충액이 있거나 없는 기타 식염수 용액에 재현탁될 수 있다. 대안적으로, 성분채집 샘플의 요망되지 않는 구성요소이 제거되고, 세포가 배양 배지에 직접 재현탁될 수 있다.

본 출원의 방법은 5% 이하, 예를 들어 2%의 인간 AB 혈청을 포함하는 배양 배지 조건을 이용할 수 있고, 알려진 배양 배지 조건 및 조성, 예를 들어 문헌[Smith et al., "Ex vivo expansion of human T cells for adoptive immunotherapy using the novel Xeno-free CTS Immune Cell Serum Replacement" Clinical & Translational Immunology (2015) 4, e31; doi:10.1038/cti.2014.31]에 기재된 것들을 이용할 수 있음이 인식된다.

하나의 양태에서, 적혈구를 용해하고, 예를 들어 PERCOLL^TM구배를 통한 원심분리에 의해 또는 역류 원심분리 정화에 의해 단핵구를 고갈시켜 말초혈 림프구로부터 T 세포가 단리된다.

본원에 기재된 방법은 예를 들어 본원에 기재된, 예를 들어 음성 선택 기법을 사용한, 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 조절 세포-고갈 집단, CD25+ 고갈 세포인 T 세포의 특정 하위집단의 선택을 포함할 수 있다. 바람직하게는, T 조절 고갈 세포의 집단은 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 미만의 CD25+ 세포를 함유한다.

하나의 구현예에서, T 조절 세포, 예를 들어 CD25+ T 세포는 항-CD25 항체 또는 이의 단편, 또는 CD25-결합 리간드, IL-2를 사용하여 집단으로부터 제거된다. 하나의 구현예에서, 항-CD25 항체 또는 이의 단편, 또는 CD25-결합 리간드는 기질, 예를 들어 비드에 접합되거나, 또는 다르게는 기재, 예를 들어 비드 상에 코팅된다. 하나의 구현예에서, 항-CD25 항체 또는 이의 단편은 본원에 기재된 바와 같은 기재에 접합된다.

하나의 구현예에서, T 조절 세포, 예를 들어 CD25+ T 세포는 Miltenyi^TM의 CD25 고갈 시약을 사용해 집단으로부터 제거된다. 하나의 구현예에서, 세포 대 CD25 고갈 시약의 비는 1e7개 세포 대 20 uL, 또는 1e7개 세포 대 15 uL, 또는 1e7개 세포 대 10 uL, 또는 1e7개 세포 대 5 uL, 또는 1e7개 세포 대 2.5 uL, 또는 1e7개 세포 대 1.25 uL이다. 하나의 구현예에서, 예를 들어 T 조절 세포, 예를 들어, CD25+ 고갈에 대해, 5억개/ml 초과의 세포가 사용된다. 추가 양태에서, 6억, 7억, 8억 또는 9억개 세포/ml의 세포 농도가 사용된다.

하나의 구현예에서, 고갈될 면역 효과기 세포 집단은 약 6 x 10⁹개의 CD25+ T 세포를 포함한다. 다른 양태에서, 고갈될 면역 효과기 세포 집단은 약 1 x 10⁹내지 1x 10¹⁰개, 및 그 사이의 임의의 정수값의 CD25+ T 세포를 포함한다. 하나의 구현예에서, 생성된 T 조절 고갈 세포 집단은 2 x 10⁹개 이하의 T 조절 세포, 예를 들어 CD25+ 세포(예를 들어, 1 x 10⁹, 5 x 10⁸, 1 x 10⁸, 5 x 10⁷, 1 x 10⁷개 이하의 CD25+ 세포)를 갖는다.

하나의 구현예에서, T 조절 세포, 예를 들어 CD25+ 세포는 예를 들어 튜빙 162-01과 같은 고갈 튜빙 세트가 구비된 CliniMAC 시스템을 사용하여 집단으로부터 제거된다. 하나의 구현예에서, CliniMAC 시스템은, 예를 들어 DEPLETION2.1과 같은 고갈 설정에서 수행된다.

특정 이론에 구애됨이 없이, 성분채집 전에 또는 CAR-발현 세포 산물의 제조 동안 대상체에서 면역 세포의 음성 조절인자의 수준을 감소시키면(예를 들어, 원치 않는 면역 세포, 예를 들어 T_REG세포의 수를 감소시키면), 대상체 재발 위험을 줄일 수 있다. 예를 들어, T_REG세포를 고갈시키는 방법은 당분야에 알려져 있다. T_REG세포를 감소시키는 방법은 사이클로포스파미드, 항-GITR 항체(본원에 기재된 항-GITR 항체), CD25-고갈, 및 이의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, 제조 방법은 CAR 발현 세포의 제조 전에 T_REG세포의 수를 감소(예를 들어, 고갈)시키는 단계를 포함한다. 예를 들어, 제조 방법은, 예를 들어 CAR 발현 세포(예를 들어, T 세포, NK 세포) 산물을 제조하기 전에 T_REG세포를 고갈시키기 위해, 샘플, 예를 들어, 성분채집 샘플을 항-GITR 항체 및/또는 항-CD25 항체(또는 이의 단편, 또는 CD25-결합 리간드)와 접촉시키는 단계를 포함한다.

하나의 구현예에서, CAR 발현 세포 산물 제조를 위한 세포의 수집 전에 T_REG세포를 감소시키는 하나 이상의 치료법으로 대상체가 사전-처치됨으로써, CAR 발현 세포 치료에 대한 대상체 재발 위험을 감소시킨다. 하나의 구현예에서, T_REG세포를 감소시키는 방법은 사이클로포스파미드, 항-GITR 항체, CD25-고갈, 또는 이의 조합 중 하나 이상의 대상체로의 투여 단계를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 사이클로포스파미드, 항-GITR 항체 CD25-고갈, 또는 이의 조합 중 하나 이상의 투여는 CAR-발현 세포 산물의 주입 전에, 동안 또는 후에 일어날 수 있다.

하나의 구현예에서, 대상체는 CAR-발현 세포 산물 제조를 위한 세포의 수집 전에 사이클로포스파미드로 사전 처치되고, 그에 의해 CAR-발현 세포 치료에 대한 대상체 재발의 위험을 감소시킨다. 하나의 구현예에서, 대상체는 CAR-발현 세포 산물 제조를 위한 세포의 수집 전에 항-GITR 항체로 사전 처치되고, 이로 인해 CAR-발현 세포 치료에 대한 대상체 재발 위험을 감소시킨다.

하나의 구현예에서, 제거될 세포 집단은 조절 T 세포나 종양 세포가 아니라, 달리 CART 세포의 증식 및/또는 기능에 부정적인 영향을 미치는 세포, 예를 들어 CD14, CD11b, CD33, CD15, 또는 잠재적 면역 억제 세포에 의해 발현되는 다른 마커를 발현하는 세포이다. 하나의 구현예에서, 이러한 세포는 조절 T 세포 및/또는 종양 세포와 동시에, 또는 상기 고갈 후에, 또는 또 다른 순서로 제거되는 것으로 계획된다.

본원에 기재된 방법은 하나 초과의 선택 단계, 예를 들어 하나 초과의 고갈 단계를 포함할 수 있다. 음성 선택에 의한 T 세포 집단의 증강은 예를 들어 음성 선택된 세포에 고유한 표면 마커에 대한 항체의 조합을 이용하여 달성될 수 있다. 하나의 방법은 음성 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커에 대한 모노클로날 항체 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역부착 또는 유세포 측정을 통한 세포 정렬 및/또는 선택이다. 예를 들어 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함할 수 있다.

본원에 기재된 방법은 종양 항원, 예를 들어 CD25를 포함하지 않는 종양 항원, 예를 들어 CD19, CD30, CD38, CD123, CD20, CD14 또는 CD11b를 발현하는 세포를 집단으로부터 제거하고, 이로 인해 CAR, 예를 들어 본원에 기재된 CAR의 발현에 적합한 T 조절 고갈, 예를 들어 CD25+ 고갈 및 종양 항원 고갈 세포 집단을 제공하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 종양 항원 발현 세포는 T 조절, 예를 들어 CD25+ 세포와 동시에 제거된다. 예를 들어, 항-CD25 항체 또는 이의 단편, 및 항-종양 항원 항체 또는 이의 단편은 세포를 제거하는 데 사용될 수 있는 동일한 기재, 예를 들어 비드에 부착될 수 있거나, 항-CD25 항체 또는 이의 단편, 또는 항-종양 항원 항체 또는 이의 단편은 별도 비드에 부착될 수 있고, 이의 혼합물이 세포를 제거하는 데 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, T 조절 세포, 예를 들어 CD25+ 세포의 제거 및 종양 항원 발현 세포의 제거는 순차적이며, 예를 들어 어느 순서로든 발생할 수 있다.

또한, 체크포인트 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 체크포인트 억제제를 발현하는 세포, 예를 들어 PD1+ 세포, LAG3+ 세포, 및 TIM3+ 세포 중 하나 이상을 집단으로부터 제거하고, 이로 인해 T 조절 고갈, 예를 들어 CD25+ 고갈 세포 및 체크포인트 억제제 고갈 세포, 예를 들어 PD1+, LAG3+, 및/또는 TIM3+ 고갈 세포 집단을 제공하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 예시적인 체크포인트 억제제는 B7-H1, B7-1, CD160, P1H, 2B4, PD1, TIM3, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), LAG3, TIGIT, CTLA-4, BTLA 및 LAIR1을 포함한다. 하나의 구현예에서, 체크포인트 억제제 발현 세포는 T 조절, 예를 들어 CD25+ 세포와 동시에 제거된다. 예를 들어, 항-CD25 항체 또는 이의 단편, 및 항-체크포인트 억제제 항체 또는 이의 단편은 세포를 제거하는 데 사용될 수 있는 동일한 비드에 부착될 수 있거나, 항-CD25 항체 또는 이의 단편, 및 항-체크포인트 억제제 항체 또는 이의 단편은 별도 비드에 부착될 수 있고, 이의 혼합물이 세포를 제거하는 데 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, T 조절 세포, 예를 들어 CD25+ 세포의 제거 및 체크포인트 억제제 발현 세포의 제거는 순차적이며, 예를 들어 어느 순서로든 발생할 수 있다.

본원에 기재된 방법은 양성 선택 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, T 세포는 요망되는 T 세포의 양성 선택에 충분한 시기 동안 항-CD3/항-CD28(예를 들어, 3x28)-접합 비드, 예컨대 DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T와의 인큐베이션에 의해 단리될 수 있다. 하나의 구현예에서, 시기는 약 30분이다. 추가 구현예에서, 시기는 30분 내지 36시간 이상 및 그 사이의 모든 정수값의 범위이다. 추가 구현예에서, 시기는 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 또는 6시간이다. 또 다른 구현예에서, 시기는 10시간 내지 24시간, 예를 들어, 24시간이다. 다른 세포 유형과 비교하여 T 세포가 거의 없는 임의의 상황에서, 예컨대 종양 조직으로부터 또는 면역손상된 개체로부터 종양 침윤 림프구(TIL)를 단리하는 데 있어서, T 세포를 단리하기 위하여 보다 긴 인큐베이션 시간이 사용될 수 있다. 또한, 보다 긴 인큐베이션 시간의 사용은 CD8+ T 세포의 포획 효율을 증가시킬 수 있다. 따라서, 단순히 시간을 단축하거나 연장함으로써 T 세포가 CD3/CD28 비드에 결합하도록 허용하고/하거나, 비드 대 T 세포의 비를 증가시키거나 감소시킴으로써(본원에 추가로 기재된 바와 같음), T 세포의 하위집단이 배양 개시 시에 또는 그 과정 동안의 다른 시점에 우선적으로 그에 대하여 또는 그에 반하여 선택될 수 있다. 추가로, 비드 또는 다른 표면 상의 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체의 비를 증가시키거나 감소시킴으로써, T 세포의 하위집단이 배양 개시 시에 또는 다른 요망되는 시점에 우선적으로 그에 대하여 또는 그에 반하여 선택될 수 있다.

하나의 구현예에서, IFN-γ, TNFα, IL-17A, IL-2, IL-3, IL-4, GM-CSF, IL-10, IL-13, 그랜자임 B, 및 퍼포린, 또는 기타 적절한 분자, 예를 들어 다른 사이토카인 중 하나 이상을 발현하는 T 세포 집단이 선택될 수 있다. 세포 발현에 대한 스크리닝 방법은, 예를 들어 PCT 공보 제WO 2013/126712호에 기재된 방법에 의해 결정될 수 있다.

양성 또는 음성 선택에 의한 요망되는 세포 집단의 단리를 위해, 세포의 농도 및 표면(예를 들어 입자, 예컨대 비드)은 달라질 수 있다. 특정 양태에서, 세포 및 비드의 최대 접촉을 보장하기 위해 비드 및 세포가 함께 혼합되는 부피를 유의하게 감소시키는(예를 들어 세포의 농도를 증가시키는) 것이 요망될 수 있다. 예를 들어, 하나의 양태에서, 100억개 세포/ml, 90억개/ml, 80억개/ml, 70억개/ml, 60억개/ml, 또는 50억개/ml의 농도가 사용된다. 하나의 양태에서, 10억개 세포/ml의 농도가 사용된다. 추가의 하나의 양태에서, 7500만, 8000만, 8500만, 9000만, 9500만, 또는 1억개 세포/ml의 세포 농도가 사용된다. 추가 양태에서, 1억 2500만 또는 1억 5000만개 세포/ml의 농도가 사용될 수 있다.

고농도를 사용하면 세포 수율, 세포 활성화, 및 세포 증식을 증가시킬 수 있다. 또한, 높은 세포 농도의 사용은 관심 표적 항원을 약하게 발현할 수 있는 세포, 예컨대 CD28-음성 T 세포의, 또는 많은 종양 세포가 존재하는 샘플(예를 들어 백혈병 혈액, 종양 조직 등)로부터의 보다 효율적인 포획을 허용한다. 이러한 세포 집단은 치료 가치를 가질 수 있고, 수득하는 것이 요망될 것이다. 예를 들어 높은 농도의 세포를 사용하는 것은, 정상적으로는 보다 약한 CD28 발현을 갖는 CD8+ T 세포의 보다 효율적인 선택을 허용한다.

관련 양태에서, 보다 낮은 농도의 세포를 사용하는 것이 요망될 수 있다. T 세포와 표면(예를 들어, 비드와 같은 입자)의 혼합물을 상당히 희석함으로써, 입자와 세포 간 상호작용이 최소화된다. 이는 입자에 결합되는 다량의 요망되는 항원을 발현하는 세포를 선택한다. 예를 들어 CD4+ T 세포는 희석 농도에서 보다 높은 수준의 CD28을 발현하고 CD8+ T 세포보다 더 효율적으로 포획된다. 하나의 양태에서, 사용되는 세포의 농도는 5 x 10⁶/ml이다. 다른 양태에서, 사용되는 농도는 약 1 x 10⁵/ml 내지 1 x 10⁶/ml, 및 그 사이의 임의의 정수값일 수 있다.

다른 양태에서, 세포는 2℃ 내지 10℃ 또는 실온에서 다양한 속도로 다양한 길이의 시간 동안 회전기 상에서 인큐베이션될 수 있다.

자극을 위한 T 세포는 또한 세척 단계 후에 냉동될 수 있다. 이론에 구애됨이 없이, 냉동 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도까지의 단핵구를 제거함으로써 보다 균일한 산물을 제공한다. 혈장 및 혈소판을 제거하는 세척 단계 후, 세포는 냉동 용액에 현탁될 수 있다. 많은 냉동 용액 및 파라미터가 당분야에 알려져 있고 이러한 맥막에서 유용할 것이지만, 하나의 방법에는 20%의 DMSO 및 8%의 인간 혈청 알부민을 함유하는 PBS, 또는 10%의 덱스트란 40 및 5%의 덱스트로스, 20%의 인간 혈청 알부민 및 7.5%의 DMSO, 또는 31.25%의 Plasmalyte-A, 31.25%의 덱스트로스 5%, 0.45%의 NaCl, 10%의 덱스트란 40 및 5%의 덱스트로스, 20%의 인간 혈청 알부민, 및 7.5%의 DMSO를 함유하는 배양 배지, 또는 예를 들어 Hespan 및 PlasmaLyte A를 함유하는 기타 적합한 세포 냉동 배지의 사용이 관여되고, 이어서 세포는 분당 1°의 속도로 -80℃까지 냉동되고 액체 질소 저장 탱크의 증기상에 보관된다. -20℃ 또는 액체 질소에서의 즉각적인 제어되지 않은 냉동뿐만 아니라 다른 제어된 냉동 방법이 사용될 수 있다.

특정 양태에서, 동결보존된 세포는 본원에 기재된 바와 같이 해동 및 세척되고, 실온에서 1시간 동안 휴지하도록 허용된 후, 본 개시의 방법을 사용하여 활성화된다.

또한, 본원에 기재된 바와 같은 증식된 세포가 필요할 수 있기 전의 시기에 대상체로부터 혈액 샘플 또는 성분채집 산물의 수집이 본 개시의 맥락에서 고려된다. 이와 같이, 증식될 세포의 공급원은 필요한 임의의 시점에 수집될 수 있으며, T 세포와 같은 요망되는 세포는 면역 효과기 세포 치료법, 예컨대 본원에 기재된 바와 같은 것들로부터 이익을 얻을 많은 질환 또는 병태에 대한 면역 효과기 세포 치료법에서의 차후 사용을 위해 단리되고 냉동된다. 하나의 양태에서, 혈액 샘플 또는 성분채집은 일반적으로 건강한 대상체로부터 채취된다. 특정 양태에서, 혈액 샘플 또는 성분채집은 질환 발생 위험이 있지만 아직 질환이 발생하지 않은 일반적으로 건강한 대상체로부터 채취되며, 관심 세포는 추후 사용을 위해 단리되고 냉동된다. 특정 양태에서, T 세포는 증식되고, 냉동되며, 추후 사용될 수 있다. 특정 양태에서, 샘플은 본원에 기재된 바와 같은 특정 질환의 진단 직후에, 그러나 임의의 치료 전에 환자로부터 수집된다. 추가 양태에서, 세포는 나탈리주맙, 에팔리주맙, 항바이러스제와 같은 제제, 화학치료법, 방사선, 면역억제제, 예컨대 사이클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 미코페놀레이트, 및 FK506, 항체, 또는 기타 면역제거제, 예컨대 CAMPATH, 항-CD3 항체, 사이톡산, 플루다라빈, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신, 미코페놀산, 스테로이드, FR901228, 및 조사를 이용한 치료를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 수의 관련 치료 방식 전에 대상체로부터의 혈액 샘플 또는 성분채집으로부터 단리된다.

본 개시의 추가 양태에서, T 세포는 대상체에게 기능적 T 세포를 남기는 치료 후에 바로 환자로부터 수득된다. 이와 관련하여, 특정 암 치료, 특히 면역계를 손상시키는 약물을 사용한 치료 후, 환자가 치료로부터 정상적으로 회복될 기간 동안의 치료 직후에, 수득된 T 세포의 품질이 생체외 증식 능력에 대해 최적이거나 개선될 수 있음이 관찰되었다. 마찬가지로, 본원에 기재된 방법을 사용한 생체외 조작 후에, 이들 세포는 증강된 생착 및 세포내 증식에 바람직한 상태일 수 있다. 따라서, 이러한 회복상 동안 T 세포, 수지상 세포, 또는 조혈 계통의 다른 세포를 포함하는 혈액 세포를 수집하는 것이 본 개시의 맥락 내에서 고려된다. 또한, 특정 양태에서, 특히 치료법 후의 규정된 시간 윈도우 동안, 특정 세포 유형의 재집락, 재순환, 재생, 및/또는 증식이 선호되는 대상체에서의 상태를 생성하기 위해 동원(예를 들어, GM-CSF를 사용한 동원) 및 컨디셔닝 요법이 사용될 수 있다. 예시적인 세포 유형은 T 세포, B 세포, 수지상 세포, 및 면역계의 다른 세포를 포함한다.

하나의 구현예에서, CAR 분자, 예를 들어 본원에 기재된 CAR 분자를 발현하는 면역 효과기 세포는 낮은 면역 증강 용량의 mTOR 억제제를 수여받은 대상체로부터 수득된다. 하나의 구현예에서, CAR를 발현하도록 조작될 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포 집단은 대상체 내의, 또는 대상체로부터 수확된, PD1 음성 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포의 수준, 또는 PD1 음성 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포/PD1 양성 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포의 비가 적어도 일시적으로 증가된, 충분한 시간 후에, 또는 낮은 면역 증강 용량의 mTOR 억제제의 충분한 투약 후에 수확된다.

다른 구현예에서, CAR을 발현하도록 조작되었거나 조작될 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포 집단은, PD1 음성 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포의 수를 증가시키거나, PD1 음성 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포/PD1 양성 면역 효과기 세포, 예를 들어 T 세포의 비를 증가시키는 양의 mTOR 억제제와의 접촉에 의해 생체외 처리될 수 있다.

하나의 구현예에서, T 세포 집단은 디아글리세롤 키나제(DGK) 결핍이다. DGK-결핍 세포는 DGK RNA 또는 단백질을 발현하지 않는 세포, 또는 DGK 활성이 감소되거나 억제된 세포를 포함한다. DGK-결핍 세포는 유전적 접근에 의해, 예를 들어 RNA 간섭제, 예를 들어 siRNA, shRNA, miRNA를 투여하여 DGK 발현을 감소하거나 방지함으로써 생성될 수 있다. 대안적으로, DGK-결핍 세포는 본원에 기재된 DGK 억제제를 이용한 처치에 의해 생성될 수 있다.

하나의 구현예에서, T 세포 집단은 Ikaros 결핍이다. Ikaros-결핍 세포는 Ikaros RNA 또는 단백질을 발현하지 않는 세포, 또는 Ikaros 활성이 감소되거나 억제된 세포를 포함하며, Ikaros-결핍 세포는 유전적 접근에 의해, 예를 들어 RNA 간섭제, 예를 들어 siRNA, shRNA, miRNA를 투여하여 Ikaros 발현을 감소시키거나 방지함으로써 생성될 수 있다. 대안적으로, Ikaros-결핍 세포는 Ikaros 억제제, 예를 들어 레날리도미드를 이용한 처치에 의해 생성될 수 있다.

구현예에서, T 세포 집단은 DGK-결핍 및 Ikaros-결핍이며, 예를 들어 DGK 및 Ikaros를 발현하지 않거나, 감소되거나 억제된 DGK 및 Ikaros 활성을 갖는다. 이러한 DGK 및 Ikaros-결핍 세포는 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생성될 수 있다.

하나의 구현예에서, NK 세포는 대상체로부터 수득된다. 또 다른 구현예에서, NK 세포는 NK 세포주, 예를 들어 NK-92 세포주(Conkwest)이다.

일부 양태에서, 본 개시의 세포(예를 들어, 본 개시의 면역 효과기 세포, 예를 들어 본 개시의 CAR-발현 세포)는 유도된 만능 줄기 세포("iPSC") 또는 배아 줄기 세포(ESC)이거나, 상기 iPSC 및/또는 ESC로부터 생성된(예를 들어, 분화된) T 세포이다. iPSC는 예를 들어 말초혈 T 림프구, 예를 들어 건강한 자원자로부터 단리된 말초혈 T 림프구로부터 당분야에 알려진 방법에 의해 생성될 수 있다. 또한, 이러한 세포는 당분야에 알려진 방법에 의해 T 세포로 분화될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli M. et al., Nat. Biotechnol., 31, pp. 928-933 (2013); doi:10.1038/WO2014165707]을 참고한다.

또 다른 구현예에서, 본 개시의 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)는 암을 치료하기 위해, 표 13에 열거되거나 표 13에 인용된 특허 및 특허 출원에 열거된 치료제 중 하나 이상과 조합하여 사용된다. 각각의 공보는 여기서의 모든 구조식을 포함하여, 표 13에 기재된다.

[표 13]

에스트로겐 수용체 길항제

일부 구현예에서, 에스트로겐 수용체(ER) 길항제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 에스트로겐 수용체 길항제는 선택적 에스트로겐 수용체 분해제(SERD)이다. SERD는 수용체에 결합하여 예를 들어, 수용체의 분해 또는 하향조절을 일으키는 에스트로겐 수용체 길항제이다(Boer K. et al., (2017) Therapeutic Advances in Medical Oncology 9(7): 465-479). ER은 예를 들어 인간 생식계의 성장, 발달, 및 생리에 중요한 호르몬-활성화 전사 인자이다. ER은 예를 들어 호르몬 에스트로겐(17베타 에스트라디올)에 의해 활성화된다. ER 발현 및 신호전달은 암(예를 들어, 유방암), 예를 들어, ER 양성(ER+) 유방암에 연루된다. 일부 구현예에서, SERD는 LSZ102, 풀베스트란트, 브릴라네스트란트, 또는 엘라세스트란트로부터 선택된다.

예시적인 에스트로겐 수용체 길항제

일부 구현예에서, SERD는 국제 출원 공보 제WO 2014/130310호에 개시된 화합물을 포함한다. 일부 구현예에서, SERD는 LSZ102를 포함한다. LSZ102는 하기 화학명: (E)-3-(4-((2-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)-6-하이드록시벤조[b]티오펜-3-일)옥시)페닐)아크릴산을 갖는다.

다른 예시적인 에스트로겐 수용체 길항제

일부 구현예에서, SERD는 풀베스트란트(CAS 등록 번호: 129453-61-8), 또는 국제 출원 공보 제WO 2001/051056호에 개시된 화합물을 포함한다. 풀베스트란트는 ICI 182780, ZM 182780, FASLODEX®, 또는 (7α,17β)-7-{9-[(4,4,5,5,5-펜타플루오로펜틸)설피닐]노닐}에스트라-1,3,5(10)-트리엔-3,17-디올로도 알려져 있다. 풀베스트란트는 IC50이 0.29 nM인 고친화도 에스트로겐 수용체 길항제이다.

일부 구현예에서, SERD는 엘라세스트란트(CAS 등록 번호: 722533-56-4), 또는 미국 특허 제7,612,114호에 개시된 화합물을 포함한다. 엘라세스트란트는 RAD1901, ER-306323, 또는 (6R)-6-{2-[에틸({4-[2-(에틸아미노)에틸]페닐}메틸)아미노]-4-메톡시페닐}-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올로도 알려져 있다. 엘라세스트란트는 경구로 생체이용 가능한 비스테로이드성 복합 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM) 및 SERD이다. 엘라세스트란트는 또한 예를 들어 문헌[Garner F et al., (2015) Anticancer Drugs 26(9):948-56]에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, SERD는 브릴라네스트란트(CAS 등록 번호: 1365888-06-7), 또는 국제 출원 공보 제WO 2015/136017호에 개시된 화합물이다. 브릴라네스트란트는 GDC-0810, ARN810, RG-6046, RO-7056118, 또는 (2E)-3-{4-[(1E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일]페닐}프로프-2-엔산으로도 알려져 있다. 브릴라네스트란트는 IC50이 0.7 nM인 차세대, 경구로 생체이용 가능한 선택적 SERD이다. 브릴란스트란트는 또한, 문헌[Lai A. et al. (2015) Journal of Medicinal Chemistry 58 (12): 4888-4904]에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, SERD는 RU 58668, GW7604, AZD9496, 바제독시펜, 피펜독시펜, 아르족시펜, OP-1074, 또는 아콜비펜으로부터 선택되며, 예를 들어, 문헌[McDonell et al. (2015) Journal of Medicinal Chemistry 58(12) 4883-4887]에 개시된 바와 같다. 다른 예시적인 에스트로겐 수용체 길항제는 예를 들어 WO 2011/156518, WO 2011/159769, WO 2012/037410, WO 2012/037411, 및 미국 특허 2012/0071535에 개시되어 있다.

CDK4/6 억제제

일부 구현예에서, 사이클린-의존적 키나제 4 또는 6의 억제제(CDK4/6)는 질환, 예를 들어, 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, CDK4/6 억제제는 리보시클립, 아베마시클립(Eli Lilly), 또는 팔보시클립으로부터 선택된다.

예시적인 CDK4/6 억제제

일부 구현예에서, CDK4/6 억제제는 리보시클립(CAS 등록 번호: 1211441-98-3), 또는 미국 특허 제8,415,355호 및 제8,685,980호에 개시된 화합물을 포함한다.

일부 구현예에서, CDK4/6 억제제는 국제 출원 공보 제WO 2010/020675호 및 미국 특허 제8,415,355호 및 제8,685,980호에 개시된 화합물을 포함한다.

일부 구현예에서, CDK4/6 억제제는 리보시클립(CAS 등록 번호: 1211441-98-3)을 포함한다. 리보시클립은 LEE011, KISQALI®, 또는 7-사이클로펜틸-N,N-디메틸-2-((5-(피페라진-1-일)피리딘-2-일)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-카복사미드로도 알려져 있다.

다른 예시적인 CDK4/6 억제제

일부 구현예에서, CDK4/6 억제제는 아베마시클립(CAS 등록 번호: 1231929-97-7)을 포함한다. 아베마시클립은 LY835219 또는 N-[5-[(4-에틸-1-피페라지닐)메틸]-2-피리디닐]-5-플루오로-4-[4-플루오로-2-메틸-1-(1-메틸에틸)-1H-벤즈이미다졸-6-일]-2-피리미딘아민으로도 알려져 있다. 아베마시클립은 CDK4 및 CDK6에 대해 선택적인 CDK 억제제이고, 예를 들어, 문헌[Torres-Guzman R et al. (2017) Oncotarget 10.18632/oncotarget.17778]에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, CDK4/6 억제제는 팔보시클립(CAS 등록 번호: 571190-30-2)을 포함한다. 팔보시클립은 PD-0332991, IBRANCE®, 또는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-{[5-(1-피페라지닐)-2-피리디닐]아미노}피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온으로도 알려져 있다. 팔보시클립은 CDK4를 11 nM의 IC50으로 억제하고, CDK6을 16 nM의 IC50으로 억제하고, 예를 들어, 문헌[Finn et al. (2009) Breast Cancer Research 11(5):R77]에 개시되어 있다.

CXCR2 억제제

일부 구현예에서, 케모카인(CXC 모티프) 수용체 2 억제제(CXCR2)는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 6-클로로-3-((3,4-디옥소-2-펜탄-3-일아미노)사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)-2-하이드록시-N-메톡시-N-메틸벤젠설폰아미드, 다니릭신, 레파릭신, 또는 나바릭신으로부터 선택된다.

예시적인 CXCR2 억제제

일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 미국 특허 제7989497호, 제8288588호, 제8329754호, 제8722925호, 제9115087호, 미국 출원 공보 제US 2010/0152205호, 제US 2011/0251205호 및 제US 2011/0251206호, 및 국제 출원 공보 제WO 2008/061740호, 제WO 2008/061741호, 제WO 2008/062026호, 제WO 2009/106539호, 제WO2010/063802호, 제WO 2012/062713호, 제WO 2013/168108호, 제WO 2010/015613호 및 제WO 2013/030803호에 개시된 화합물을 포함한다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 6-클로로-3-((3,4-디옥소-2-(펜탄-3-일아미노)사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)-2-하이드록시-N-메톡시-N-메틸벤젠설폰아미드 또는 이의 콜린염을 포함한다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 6-클로로-3-((3,4-디옥소-2-(펜탄-3-일아미노)사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)-2-하이드록시-N-메톡시-N-메틸벤젠설폰아미드 콜린염을 포함한다. 일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 2-하이드록시-N,N,N-트리메틸에탄-1-아미늄 3-클로로-6-({3,4-디옥소-2-[(펜탄-3-일)아미노]사이클로부트-1-엔-1-일}아미노)-2-(N-메톡시-N-메틸설파모일)페놀레이트(즉, 6-클로로-3-((3,4-디옥소-2-(펜탄-3-일아미노)사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)-2-하이드록시-N-메톡시-N-메틸벤젠설폰아미드 콜린염)이고, 하기 화학 구조를 갖는다:

.

다른 예시적인 CXCR2 억제제

일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 다니릭신(CAS 등록 번호: 954126-98-8)을 포함한다. 다니릭신은 GSK1325756 또는 1-(4-클로로-2-하이드록시-3-피페리딘-3-일설포닐페닐)-3-(3-플루오로-2-메틸페닐)우레아로도 알려져 있다. 다니릭신은 예를 들어, 문헌[Miller et al. Eur J Drug Metab Pharmacokinet (2014) 39:173-181; 및 Miller et al. BMC Pharmacology and Toxicology (2015), 16:18]에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 레파릭신(CAS 등록 번호: 266359-83-5)을 포함한다. 레파릭신은 레페르탁신 또는 (2R)-2-[4-(2-메틸프로필)페닐]-N-메틸설포닐프로판아미드로도 알려져 있다. 레파릭신은 CXCR1/2의 비경쟁적 알로스테릭 억제제이다. 레파릭신은 예를 들어, 문헌[Zarbock et al. Br J Pharmacol. 2008; 155(3):357-64]에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, CXCR2 억제제는 나바릭신을 포함한다. 나바릭신은 MK-7123, SCH 527123, PS291822, 또는 2-하이드록시-N,N-디메틸-3-[[2-[[(1R)-1-(5-메틸퓨란-2-일)프로필]아미노]-3,4-디옥소사이클로부텐-1-일]아미노]벤즈아미드로도 알려져 있다. 나바릭신은 예를 들어, 문헌[Ning et al. Mol Cancer Ther. 2012; 11(6):1353-64]에 개시되어 있다.

CSF-1/1R 결합제

일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 대식세포 콜로니-자극 인자(M-CSF)의 억제제, 예를 들어 M-CSF에 대한 모노클로날 항체 또는 Fab(예를 들어, MCS110), CSF-1R 티로신 키나제 억제제(예를 들어, 4-((2-(((1R,2R)-2-하이드록시사이클로헥실)아미노)벤조[d]티아졸-6-일)옥시)-N-메틸피콜린아미드 또는 BLZ945), 수용체 티로신 키나제 억제제(RTK)(예를 들어, 펙시다티닙), 또는 CSF-1R을 표적화하는 항체(예를 들어, 에막투주맙 또는 FPA008)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, CSF-1/1R 억제제는 BLZ945이다. 일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 MCS110이다. 다른 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 펙시다티닙이다.

예시적인 CSF-1 결합제

일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF)의 억제제를 포함한다. M-CSF는 때때로 CSF-1로도 알려져 있다. 특정 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 CSF-1에 대한 항체(예를 들어, MCS110)이다. 다른 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 CSF-1R의 억제제(예를 들어, BLZ945)이다.

일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 M-CSF에 대한 모노클로날 항체 또는 Fab(예를 들어, MCS110/H-RX1), 또는 H-RX1 또는 5H4(예를 들어, M-CSF에 대한 항체 분자 또는 Fab 단편)를 포함하는, 국제 출원 공보 제WO 2004/045532호 및 제WO 2005/068503호, 그리고 미국 특허 9079956에 개시된 CSF-1에 대한 결합제를 포함한다.

[표 13a]

또 다른 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 CSF-1R 티로신 키나제 억제제, 4-((2-(((1R,2R)-2-하이드록시사이클로헥실)아미노)벤조[d]티아졸-6-일)옥시)-N-메틸피콜린아미드(BLZ945), 또는 국제 출원 공보 제WO 2007/121484호 및 미국 특허 제7,553,854호, 제8,173,689호, 및 제8,710,048호에 개시된 화합물을 포함한다.

다른 예시적인 CSF-1/1R 결합제

일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 펙시다티닙(CAS 등록 번호 1029044-16-3)을 포함한다. 펙시다티닙은 PLX3397 또는 5-((5-클로로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-N-((6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)메틸)피리딘-2-아민으로도 알려져 있다. 펙시다티닙은 KIT, CSF1R, 및 FLT3의 소분자 수용체 티로신 키나제(RTK) 억제제이다. FLT3, CSF1R, 및 FLT3은 많은 암 세포 유형에서 과발현되거나 돌연변이되며, 종양 세포 증식 및 전이에 중요한 역할을 한다. PLX3397은 줄기 세포 인자 수용체(KIT), 콜로니-자극 인자-1 수용체(CSF1R), 및 FMS-유사 티로신 키나제 3(FLT3)에 결합하여 인산화를 억제할 수 있고, 이는 종양 세포 증식의 억제 및 골용해성 전이성 질환에 관여되는 대식세포, 파골세포, 및 비만 세포의 하향조절을 일으킬 수 있다.

일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 에막투주맙이다. 에막투주맙은 RG7155 또는 RO5509554로도 알려져 있다. 에막투주맙은 CSF1R을 표적화하는 인간화 IgG1 mAb이다. 일부 구현예에서, CSF-1/1R 결합제는 FPA008이다. FPA008은 CSF1R을 억제하는 인간화 mAb이다.

A2aR 길항제

일부 구현예에서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 길항제(예를 들어, A2aR 경로의 억제제, 예를 들어 아데노신 억제제, 예를 들어 A2aR 또는 CD-73의 억제제)는 질환(예를 들어, 암)을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, A2aR 길항제는 PBF509(NIR178)(Palobiofarma/Novartis), CPI444/V81444(Corvus/Genentech), AZD4635/HTL-1071(AstraZeneca/Heptares), 비파데난트(Redox/Juno), GBV-2034(Globavir), AB928(Arcus Biosciences), 테오필린, 이스트라데필린(Kyowa Hakko Kogyo), 토자데난트/SYN-115(Acorda), KW-6356(Kyowa Hakko Kogyo), ST-4206(Leadiant Biosciences), 및 프렐라데난트/SCH 420814(Merck/Schering)로부터 선택된다.

예시적인 A2aR 길항제

일부 구현예에서, A2aR 길항제는 PBF509(NIR178), 또는 미국 특허 제8,796,284호 또는 국제 출원 공보 제WO 2017/025918호에 개시된 화합물을 포함한다. PBF509(NIR178)는 NIR178로도 알려져 있다.

다른 예시적인 A2aR 길항제

특정 구현예에서, A2aR 길항제는 CPI444/V81444를 포함한다. CPI-444 및 다른 A2aR 길항제는 국제 출원 공보 제WO 2009/156737호에 개시되어 있다. 특정 구현예에서, A2aR 길항제는 (S)-7-(5-메틸퓨란-2-일)-3-((6-(((테트라하이드로퓨란-3-일)옥시)메틸)피리딘-2-일)메틸)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-5-아민이다. 특정 구현예에서, A2aR 길항제는 (R)-7-(5-메틸퓨란-2-일)-3-((6-(((테트라하이드로퓨란-3-일)옥시)메틸)피리딘-2-일)메틸)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-5-아민, 또는 이의 라세미체이다. 특정 구현예에서, A2aR 길항제는 7-(5-메틸퓨란-2-일)-3-((6-(((테트라하이드로퓨란-3-일)옥시)메틸)피리딘-2-일)메틸)-3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-5-아민이다.

특정 구현예에서, A2aR 길항제는 AZD4635/HTL-1071이다. A2aR 길항제는 국제 출원 공보 제WO 2011/095625호에 개시되어 있다. 특정 구현예에서, A2aR 길항제는 6-(2-클로로-6-메틸피리딘-4-일)-5-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아진-3-아민이다.

특정 구현예에서, A2aR 길항제는 ST-4206(Leadiant Biosciences)이다. 특정 구현예에서, A2aR 길항제는 미국 특허 제9,133,197호에 기재된 A2aR 길항제이다.

특정 구현예에서, A2aR 길항제는 미국 특허 제8,114,845호 및 제9,029,393호, 미국 출원 공보 제2017/0015758호 및 제2016/0129108호에 기재된 A2aR 길항제이다.

일부 구현예에서, A2aR 길항제는 이스트라데필린(CAS 등록 번호: 155270-99-8)이다. 이스트라데필린은 KW-6002 또는 8-[(E)-2-(3,4-디메톡시페닐)비닐]-1,3-디에틸-7-메틸-3,7-디하이드로-1H-퓨린-2,6-디온으로도 알려져 있다. 이스트라데필린은 예를 들어, 문헌[LeWitt et al. (2008) Annals of Neurology 63 (3): 295-302]에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, A2aR 길항제는 토자데난트(Biotie)이다. 토자데난트는 SYN115 또는 4-하이드록시-N-(4-메톡시-7-모르폴린-4-일-1,3-벤조티아졸-2-일)-4-메틸피페리딘-1-카복사미드로도 알려져 있다. 토자데난트는 A2a 수용체에서 내인성 아데노신의 효과를 차단하여, D2 수용체에서 도파민의 효과 강화 및 mGluR5 수용체에서 글루타메이트의 효과 억제를 일으킨다. 일부 구현예에서, A2aR 길항제는 프렐라데난트(CAS 등록 번호: 377727-87-2)이다. 프렐라데난트는 SCH 420814 또는 2-(2-푸라닐)-7-[2-[4-[4-(2-메톡시에톡시)페닐]-1-피페라지닐]에틸]7H-피라졸로[4,3-e][1,2,4]트리아졸로[1,5-c]피리미딘-5-아민으로도 알려져 있다. 프렐라데난트는 아데노신 A2A 수용체에서 강력하고 선택적인 길항제로 작용하는 약물로서 개발되었다.

일부 구현예에서, A2aR 길항제는 비파데난이다. 비파데난은 BIIB014, V2006, 또는 3-[(4-아미노-3-메틸페닐)메틸]-7-(퓨란-2-일)트리아졸로[4,5-d]피리미딘-5-아민으로도 알려져 있다. 다른 예시적인 A2aR 길항제는 예를 들어 ATL-444, MSX-3, SCH-58261, SCH-412,348, SCH-442,416, VER-6623, VER-6947, VER-7835, CGS-15943, 및 ZM-241,385를 포함한다.

일부 구현예에서, A2aR 길항제는 A2aR 경로 길항제(예를 들어, CD-73 억제제, 예를 들어 항-CD73 항체)이며, MEDI9447이다. MEDI9447은 CD73에 특이적인 모노클로날 항체이다. CD73에 의한 아데노신의 세포외 생산의 표적화는 아데노신의 면역억제 효과를 감소시킬 수 있다. MEDI9447은 다양한 활성, 예를 들어 CD73 엑토뉴클레오티다제 활성의 억제, AMP-매개 림프구 억제의 구제, 및 동계 종양 성장의 억제를 갖는 것으로 보고되었다. MEDI9447은 종양 미세환경 내의 골수 및 림프 침윤 백혈구 집단 둘 다에서 변화를 유도할 수 있다. 이러한 변화는 예를 들어 CD8 효과기 세포 및 활성화된 대식세포의 증가뿐만 아니라 골수-유래 억제 세포(MCSC) 및 조절 T 림프구의 비율 감소를 포함한다.

IDO 억제제

일부 구현예에서, 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO) 및/또는 트립토판 2,3-디옥시게나제(TDO)의 억제제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, IDO 억제제는 (4E)-4-[(3-클로로-4-플루오로아닐리노)-니트로소메틸리덴]-1,2,5-옥사디아졸-3-아민(에파카도스타트 또는 INCB24360으로도 알려짐), 인독시모드(), (1-메틸-D-트립토판), α-사이클로헥실-5H-이미다조[5,1-a]이소인돌-5-에탄올(NLG919로도 알려짐), 인독시모드, 및 BMS-986205(예전 F001287)로부터 선택된다.

예시적인 IDO 억제제

일부 구현예에서, IDO/TDO 억제제는 인독시모드(New Link Genetics)이다. 1-메틸-트립토판의 D 이성질체인 인독시모드는 종양이 면역-매개 파괴를 회피하는 기전을 손상시키는 경구 투여되는 소분자 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO) 경로 억제제이다.

일부 구현예에서, IDO/TDO 억제제는 NLG919(New Link Genetics)이다. NLG919는 무세포 검정에서 Ki/EC50이 7 nM/75 nM인 강력한 IDO(인돌아민-(2,3)-디옥시게나제) 경로 억제제이다.

일부 구현예에서, IDO/TDO 억제제는 에파카도스타트(CAS 등록 번호: 1204669-58-8)이다. 에파카도스타트는 INCB24360 또는 INCB024360(Incyte)으로도 알려져 있다. 에파카도스타트는 IDO2 또는 트립토판 2,3-디옥시게나제(TDO)와 같은 다른 관련 효소에 비해 매우 선택적인 10 nM의 IC50을 갖는, 강력하고 선택적인 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO1) 억제제이다.

일부 구현예에서, IDO/TDO 억제제는 F001287(Flexus/BMS)이다. F001287은 인돌아민 2,3-디옥시게나제 1(IDO1)의 소분자 억제제이다.

STING 작용제

일부 구현예에서, STING 작용제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다 일부 구현예에서, STING 작용제는 고리형 디뉴클레오타이드, 예를 들어 퓨린 또는 피리미딘 핵염기(예를 들어, 아데노신, 구아닌, 우라실, 티민, 또는 시토신 핵염기)를 포함하는 고리형 디뉴클레오타이드이다. 일부 구현예에서, 고리형 디뉴클레오타이드의 핵염기는 동일한 핵염기 또는 상이한 핵염기를 포함한다.

일부 구현예에서, STING 작용제는 아데노신 또는 구아노신 핵염기를 포함한다. 일부 구현예에서, STING 작용제는 하나의 아데노신 핵염기 및 하나의 구아노신 핵염기를 포함한다. 일부 구현예에서, STING 작용제는 2개의 아데노신 핵염기 또는 2개의 구아노신 핵염기를 포함한다.

일부 구현예에서, STING 작용제는 예를 들어 개질된 핵염기, 개질된 리보스, 또는 개질된 포스페이트 결합을 포함하는, 개질된 고리형 디뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 개질된 고리형 디뉴클레오타이드는 개질된 포스페이트 결합, 예를 들어 티오포스페이트를 포함한다.

일부 구현예에서, STING 작용제는 2',5' 또는 3',5' 포스페이트 결합을 갖는 고리형 디뉴클레오타이드(예를 들어, 개질된 고리형 디뉴클레오타이드)를 포함한다. 일부 구현예에서, STING 작용제는 포스페이트 결합 주위에 Rp 또는 Sp 입체화학을 갖는 고리형 디뉴클레오타이드(예를 들어, 개질된 고리형 디뉴클레오타이드)를 포함한다.

일부 구현예에서, STING 작용제는 MK-1454(Merck)이다. MK-1454는 STING 경로를 활성화하는 고리형 디뉴클레오타이드 인터페론 유전자 자극인자(STING) 작용제이다. 예시적인 STING 작용제는 예를 들어 PCT 공보 제WO 2017/027645호에 개시되어 있다.

갈렉틴 억제제

일부 구현예에서, 갈렉틴, 예를 들어, 갈렉틴-1 또는 갈렉틴-3, 억제제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 조합은 갈렉틴-1 억제제 및 갈렉틴-3 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 조합은 갈렉틴-1 및 갈렉틴-3 둘 다를 표적화하는 이중특이적 억제제(예를 들어, 이중특이적 항체 분자)를 포함한다. 일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 항-갈렉틴 항체 분자, GR-MD-02(Galectin Therapeutics), 갈렉틴-3C(Mandal Med), 안지넥스, 또는 OTX-008(OncoEthix, Merck)로부터 선택된다. 갈렉틴은 베타 갈락토시다제 당에 결합하는 단백질 패밀리이다.

갈렉틴 단백질 패밀리는 적어도 갈렉틴-1, 갈렉틴-2, 갈렉틴-3, 갈렉틴-4, 갈렉틴-7, 및 갈렉틴-8을 포함한다. 갈렉틴은 S형 렉틴으로도 나타내며, 예를 들어 세포내 및 세포외 기능을 갖는 가용성 단백질이다.

갈렉틴-1 및 갈렉틴-3은 다양한 종양 유형에서 고도로 발현된다. 갈렉틴-1 및 갈렉틴-3은 혈관신생을 촉진하고/하거나 골수세포를 전 종양(pro-tumor) 표현형으로 재프로그래밍할 수 있고, 예를 들어, 골수 세포로부터의 면역억제를 강화할 수 있다. 가용성 갈렉틴-3은 또한 침윤성 T 세포에 결합하고/하거나 이를 불활성화할 수 있다.

예시적인 갈렉틴 억제제

일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, 항체 분자는 단일특이적 항체 분자이고, 단일 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 단일특이적 항체 분자는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 가지며, 그 각각은 동일한 에피토프에 결합한다. 하나의 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 항-갈렉틴, 예를 들어 항-갈렉틴-1 또는 항-갈렉틴-3, 항체 분자이다. 일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 항-갈렉틴-1 항체 분자이다. 일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 항-갈렉틴-3 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 항체 분자는 다중특이적 항체 분자이며, 예를 들어 이는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하고, 여기서 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질(또는 다량체성 단백질의 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체성 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 제3, 제4, 또는 제5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자, 삼중특이적 항체 분자, 또는 사중특이적 항체 분자이다.

하나의 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 다중특이적 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자이다. 이중특이적 항체는 2개 이하의 항원에 대해 특이성을 갖는다. 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질(또는 다량체성 단백질의 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체성 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 있다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열, 그리고 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체를 포함한다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체, 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체, 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 하나의 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 이중특이적 항체 분자이다. 하나의 구현예에서, 제1 에피토프는 갈렉틴-1 상에 위치하고, 제2 에피토프는 갈렉틴-3 상에 위치한다.

이중특이적 또는 이종이량체 항체 분자를 생성하기 위한 프로토콜은 당분야에 알려져 있으며, 예를 들어 미국 특허 5731168에 기재된 "노브 인 홀(knob in a hole)" 접근; 예를 들어 WO 09/089004, WO 06/106905, 및 WO 2010/129304에 기재된 정전기적 스티어링 Fc 쌍형성; 예를 들어 WO 07/110205에 기재된 바와 같은 가닥 교환 조작 도메인(SEED) 이종이량체 형성; 예를 들어 WO 08/119353, WO 2011/131746, 및 WO 2013/060867에 기재된 바와 같은 Fab 아암 교환; 예를 들어 미국 특허 4433059에 기재된 바와 같은, 아민 반응기 및 설프하이드릴 반응기를 갖는 이종2기능적 시약을 사용하여 이중특이적 구조를 생성하는 항체 가교에 의한 이중 항체 접합체; 예를 들어 미국 특허 4444878에 기재된 바와 같은, 2개의 중쇄 간 디설파이드 결합의 환원 및 산화 주기를 통한 상이한 항체로부터의 절반 항체(중쇄-경쇄 쌍 또는 Fab) 재조합에 의해 생성된 이중특이적 항체 결정기; 예를 들어 미국 특허 5273743에 기재된 바와 같은, 3기능적 항체, 예를 들어 설프하이드릴 반응기를 통해 가교된 3개의 Fab' 단편; 예를 들어 미국 특허 5534254에 기재된 바와 같은, 생합성 결합 단백질, 예를 들어 C-말단 테일을 통해, 바람직하게는 디설파이드 또는 아민-반응성 화학적 가교를 통해 가교된 scFv 쌍; 예를 들어 미국 특허 5582996에 기재된 바와 같은, 2기능적 항체, 예를 들어 불변 도메인을 대체한 류신 지퍼(예를 들어, c-fos 및 c-jun)를 통해 이량체화된, 상이한 결합 특이성을 갖는 Fab 단편; 예를 들어 미국 특허 5591828에 기재된 바와 같은, 이중특이적 및 올리고특이적 1가- 및 올리고가 수용체, 예를 들어 한 항체의 CH1 영역 및 전형적으로 경쇄와 연합된 다른 항체의 VH 영역 간 폴리펩타이드 스페이서를 통해 결합된 2개의 항체(2개의 Fab 단편)의 VH-CH1 영역; 예를 들어 미국 특허 5635602에 기재된 바와 같은, 이중특이적 DNA-항체 접합체, 예를 들어 DNA의 이중 가닥 조각을 통한 항체 또는 Fab 단편의 가교; 예를 들어 미국 특허 5637481에 기재된 바와 같은, 이중특이적 융합 단백질, 예를 들어 2개의 scFv를, 이들과 전체 불변 영역 간 친수성 나선 펩타이드 링커와 함께 함유하는 발현 작제물; 예를 들어 미국 특허 5837242에 기재된 바와 같은, 다가 및 다중특이적 결합 단백질, 예를 들어 일반적으로 디아바디로 불리는, Ig 중쇄 가변 영역의 결합 영역을 갖는 제1 도메인, 및 Ig 경쇄 가변 영역의 결합 영역을 갖는 제2 도메인을 갖는 폴리펩타이드의 이량체(이중특이적, 삼중특이적, 또는 사중특이적 분자를 생성하는 보다 고차원의 구조가 또한 개시됨); 예를 들어 미국 특허 5837821에 기재된 바와 같은, 이량체화되어 이중특이적/다가 분자를 형성할 수 있는, 항체 힌지 영역 및 CH3 영역에 펩타이드 스페이서로 추가로 연결된 결합된 VL 및 VH 사슬을 갖는 미니바디 작제물; 이량체를 형성하여 이중특이적 디아바디를 형성할 수 있는, 어느 하나의 배향으로 짧은 펩타이드 링커(예를 들어, 5개 또는 10개 아미노산)를 사용하거나 또는 링커가 전혀 없이 결합된 VH 및 VL 도메인; 예를 들어 미국 특허 5844094에 기재된 바와 같은, 삼량체 및 사량체; 예를 들어 미국 특허 5,864,019에 기재된 바와 같은, 일련의 FV(또는 scFv)를 형성하기 위해 VL 도메인과 추가로 연합된, C-말단에서 가교 가능한 기와의 펩타이드 결합에 의해 결합된 VH 도메인(또는 패밀리 구성원 내의 VL 도메인)의 스트링; 및 예를 들어 미국 특허 5869620에 기재된 바와 같은, 비공유 또는 화학적 가교를 통해 다가 구조로 조합되어, 예를 들어 scFv 또는 디아바디 유형 포맷 둘 다를 사용해서 동종2가, 이종2가, 3가, 및 4가 구조를 형성하는, 펩타이드 링커를 통해 결합된 VH 및 VL 도메인 둘 다를 갖는 단일쇄 결합 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가의 예시적인 다중특이적 및 이중특이적 분자 및 이의 제조 방법은 예를 들어 US5910573, US5932448, US5959083, US5989830, US6005079, US6239259, US6294353, US6333396, US6476198, US6511663, US6670453, US6743896, US6809185, US6833441, US7129330, US7183076, US7521056, US7527787, US7534866, US7612181, US2002/004587A1, US2002/076406A1, US2002/103345A1, US2003/207346A1, US2003/211078A1, US2004/219643A1, US2004/220388A1, US2004/242847A1, US2005/003403A1, US2005/004352A1, US2005/069552A1, US2005/079170A1, US2005/100543A1, US2005/136049A1, US2005/136051A1, US2005/163782A1, US2005/266425A1, US2006/083747A1, US2006/120960A1, US2006/204493A1, US2006/263367A1, US2007/004909A1, US2007/087381A1, US2007/128150A1, US2007/141049A1, US2007/154901A1, US2007/274985A1, US2008/050370A1, US2008/069820A1, US2008/152645A1, US2008/171855A1, US2008/241884A1, US2008/254512A1, US2008/260738A1, US2009/130106A1, US2009/148905A1, US2009/155275A1, US2009/162359A1, US2009/162360A1, US2009/175851A1, US2009/175867A1, US2009/232811A1, US2009/234105A1, US2009/263392A1, US2009/274649A1, EP346087A2, WO00/06605A2, WO02/072635A2, WO04/081051A1, WO06/020258A2, WO2007/044887A2, WO2007/095338A2, WO2007/137760A2, WO2008/119353A1, WO2009/021754A2, WO2009/068630A1, WO91/03493A1, WO93/23537A1, WO94/09131A1, WO94/12625A2, WO95/09917A1, WO96/37621A2, WO99/64460A1에서 확인된다.

다른 구현예에서, 항-갈렉틴, 예를 들어 항-갈렉틴-1 또는 항-갈렉틴-3, 항체 분자(예를 들어, 단일특이적, 이중특이적, 또는 다중특이적 항체 분자)는 또 다른 파트너, 예를 들어 단백질에, 예를 들어 융합 분자, 예를 들어 융합 단백질로서 공유 결합되며, 예를 들어 융합된다. 하나의 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 표적(예를 들어, 갈렉틴-1)에 대한 제1 결합 특이성, 제2 표적(예를 들어, 갈렉틴-3)에 대한 제2 결합 특이성을 갖는다.

본 발명은 상기 항체 분자를 암호화하는 단리된 핵산 분자, 이의 벡터 및 숙주 세포를 제공한다. 핵산 분자는 RNA, 게놈 DNA, 및 cDNA를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 갈렉틴, 예를 들어 갈렉틴-1 또는 갈렉틴-3에 결합하고 그 기능을 억제할 수 있는 펩타이드, 예를 들어 단백질이다. 일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 갈렉틴-3에 결합하고 그 기능을 억제할 수 있는 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 펩타이드 갈렉틴-3C이다. 하나의 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 미국 특허 제6,770,622호에 개시된 갈렉틴-3 억제제이다.

갈렉틴-3C는 갈렉틴-3의 N-말단 절단된 단백질이고, 예를 들어 갈렉틴-3의 경쟁적 억제제로서 기능한다. 갈렉틴-3C는 예를 들어 표면, 예를 들어 암 세포 표면 상의 라미닌 및 세포외 기질(ECM)의 다른 베타-갈락토시다제 당접합체에 대한 내인성 갈렉틴-3의 결합을 방지한다. 갈렉틴-3C 및 다른 예시적인 갈렉틴 억제 펩타이드는 미국 특허 6,770,622에 개시되어 있다.

일부 구현예에서, 갈렉틴-3C는 서열번호 294, 또는 이와 실질적으로 동일한(예를 들어, 90, 95, 또는 99% 동일한) 아미노산의 아미노산 서열을 포함한다.

GAPAGPLIVPYNLPLPGGVVPRMLITILGTVKPNANRIALDFQRGNDVAFHFNPRFNENNRRVIVCNTKLDNNWGREERQSVFPFESGKPFKIQVLVEPDHFKVAVNDAHLLQYNHRVKKLNEISKLGISGDIDITSASYTMI(서열번호 294).

일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 갈렉틴-1에 결합하고 그 기능을 억제할 수 있는 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 펩타이드 안지넥스이다. 안지넥스는 갈렉틴-1에 결합하는 항-혈관신생 펩타이드이다(Salomonsson E, et al., (2011) Journal of Biological Chemistry, 286(16):13801-13804). 갈렉틴-1에 대한 안지넥스의 결합은 예를 들어 갈렉틴-1의 혈관신생-촉진 효과를 방해할 수 있다.

일부 구현예에서, 갈렉틴, 예를 들어 갈렉틴-1 또는 갈렉틴-3, 억제제는 비펩타이드성 토포미메틱(topomimetic) 분자이다. 일부 구현예에서, 비펩타이드성 토포미메틱 갈렉틴 억제제는 OTX-008(OncoEthix)이다. 일부 구현예에서, 비펩타이드성 토포미메틱은 미국 특허 8,207,228에 개시된 비펩타이드성 토포미메틱이다. PTX-008 또는 칼릭사린 0118로도 알려진 OTX-008은 갈렉틴-1의 선택적 알로스테릭 억제제이다. OTX-008는 하기 화학명: N-[2-(디메틸아미노)에틸]-2-{[26,27,28-트리스({[2-(디메틸아미노)에틸]카바모일}메톡시)펜타사이클로[19.3.1.1,7.1,.15,]옥타코사-1(25),3(28),4,6,9(27),1012,15,17,19(26),21,23-도데카엔-25-일]옥시}아세트아미드이다.

일부 구현예에서, 갈렉틴, 예를 들어, 갈렉틴-1 또는 갈렉틴-3, 억제제는 탄수화물 기반 화합물이다. 일부 구현예에서, 갈렉틴 억제제는 GR-MD-02(Galectin Therapeutics)이다.

일부 구현예에서, GR-MD-02는 갈렉틴-3 억제제이다. GR-MD-02는 예를 들어 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트로도 나타내는, 갈락토스-프롱드 다당류이다. GR-MD-02 및 다른 갈락토스-프롱드 중합체, 예를 들어 갈락토 아라비노-람노갈라투로네이트는 미국 특허 8,236,780 및 미국 국제 공보 2014/0086932에 개시되어 있다

MEK 억제제

일부 구현예에서, MEK 억제제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, MEK 억제제는 트라메티닙, 셀루메티닙, AS703026, BIX 02189, BIX 02188, CI-1040, PD0325901, PD98059, U0126, XL-518, G-38963, 또는 G02443714로부터 선택된다. 일부 구현예에서, MEK 억제제는 트라메티닙이다.

예시적인 MEK 억제제

일부 구현예에서, MEK 억제제는 트라메티닙이다. 트라메티닙은 JTP-74057, TMT212, N-(3-{3-사이클로프로필-5-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-6,8-디메틸-2,4,7-트리옥소-3,4,6,7-테트라하이드로피리도[4,3-d]피리미딘-1(2H)-일}페닐)아세트아미드, 또는 메키니스트(CAS 번호 871700-17-3)로도 알려져 있다.

다른 예시적인 MEK 억제제

일부 구현예에서 MEK 억제제는 하기 화학명: (5-[(4-브로모-2-클로로페닐)아미노]-4-플루오로-N-(2-하이드록시에톡시)-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-6-카복사미드를 갖는 셀루메티닙을 포함한다. 셀루메티닙은 예를 들어 PCT 공보 제WO2003077914호에 기재된 바와 같은 AZD6244 또는 ARRY 142886으로도 알려져 있다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 AS703026, BIX 02189, 또는 BIX 02188을 포함한다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 예를 들어 PCT 공보 제WO2000035436호에 기재된 바와 같은 2-[(2-클로로-4-요오도페닐)아미노]-N-(사이클로프로필메톡시)-3,4-디플루오로-벤즈아미드(CI-1040 또는 PD184352로도 알려짐)를 포함한다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 예를 들어 PCT 공보 제WO2002006213호에 기재된 바와 같은 N-[(2R)-2,3-디하이드록시프로폭시]-3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-벤즈아미드(PD0325901로도 알려짐)를 포함한다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 Biaffin GmbH & Co., KG(독일)에서 입수 가능한 2'-아미노-3'-메톡시플라본(PD98059로도 알려짐)을 포함한다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 예를 들어 미국 특허 제2,779,780호에 기재된 바와 같은 2,3-비스[아미노[(2-아미노페닐)티오]메틸렌]-부탄디니트릴(U0126으로도 알려짐)을 포함한다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 CAS 번호가 1029872-29-4이고 ACC Corp.에서 입수 가능한 XL-518(GDC-0973으로도 알려짐)을 포함한다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 G-38963을 포함한다.

일부 구현예에서, MEK 억제제는 G02443714(AS703206으로도 알려짐)를 포함한다.

MEK 억제제의 추가예는 WO 2013/019906, WO 03/077914, WO 2005/121142, WO 2007/04415, WO 2008/024725 및 WO 2009/085983에 개시되어 있다. MEK 억제제의 추가예는 2,3-비스[아미노[(2-아미노페닐)티오]메틸렌]-부탄디니트릴(U0126으로도 알려져 있고, 미국 특허 제2,779,780호에 기재됨); (3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(에틸아미노)-8,9,16-트리하이드록시-3,4-디메틸-3,4,9,19-테트라하이드로-1H-2-벤족사사이클로테트라데신-1,7(8H)-디온](E6201로도 알려져 있고, PCT 공보 제WO2003076424호에 기재됨); 베무라페닙(PLX-4032, CAS 918504-65-1); (R)-3-(2,3-디하이드록시프로필)-6-플루오로-5-(2-플루오로-4-요오도페닐아미노)-8-메틸피리도[2,3-d]피리미딘-4,7(3H,8H)-디온(TAK-733, CAS 1035555-63-5); 피마세르팁(AS-703026, CAS 1204531-26-9); 2-(2-플루오로-4-요오도페닐아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)-1,5-디메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리딘-3-카복사미드(AZD 8330); 및 3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-N-(2-하이드록시에톡시)-5-[(3-옥소-[1,2]옥사지난-2-일)메틸]벤즈아미드(CH 4987655 또는 Ro 4987655)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

c-MET 억제제

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 많은 종양 세포 유형에서 과발현되거나 돌연변이된 수용체 티로신 키나제인 c-MET는 종양 세포 증식, 생존, 침습, 전이 및 종양 혈관신생에서 중요한 역할을 한다. c-MET의 억제는 c-MET 단백질을 과발현하거나 항시적으로 활성화된 c-MET 단백질을 발현하는 종양 세포에서 세포사를 유도할 수 있다.

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 카프마티닙(INC280), JNJ-3887605, AMG 337, LY2801653, MSC2156119J, 크리조티닙, 티반티닙, 또는 골바티닙으로부터 선택된다.

예시적인 c-MET 억제제

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 카프마티닙(INC280) 또는 미국 특허 제7,767,675호 및 미국 특허 8,461,330에 기재된 화합물을 포함한다.

다른 예시적인 c-MET 억제제

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 JNJ-38877605를 포함한다. JNJ-38877605는 c-Met의 경구로 이용 가능한 소분자 억제제이다. JNJ-38877605는 c-MET에 선택적으로 결합함으로써, c-MET 인산화를 억제하고 c-Met 신호 전달 경로를 손상시킨다.

일부 구현예에서, c-Met 억제제는 AMG 208이다. AMG 208은 c-MET의 선택적 소분자 억제제이다. AMG 208은 c-MET의 리간드-의존적 및 리간드-독립적 활성화를 억제하여 티로신 키나제 활성을 억제하며, 이는 c-Met을 과발현하는 종양에서 세포 성장 억제를 일으킬 수 있다.

일부 구현예에서, c-Met 억제제는 AMG 337을 포함한다. AMG 337은 c-Met의 경구로 생체이용 가능한 억제제이다. AMG 337은 c-MET에 선택적으로 결합함으로써, c-MET 신호 전달 경로를 손상시킨다.

일부 구현예에서, c-Met 억제제는 LY2801653을 포함한다. LY2801653는 c-Met의 경구로 이용 가능한 소분자 억제제이다. LY2801653은 c-MET에 선택적으로 결합함으로써, c-MET 인산화를 억제하고 c-Met 신호 전달 경로를 손상시킨다.

일부 구현예에서, c-Met 억제제는 MSC2156119J를 포함한다. MSC2156119J는 c-Met의 경구로 생체이용 가능한 억제제이다. MSC2156119J는 c-MET에 선택적으로 결합하며, 이는 c-MET 인산화를 억제하고 c-Met-매개 신호 전달 경로를 손상시킨다.

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 카프마티닙이다. 카프마티닙은 INCB028060으로도 알려져 있다. 카프마티닙은 c-MET의 경구로 생체이용 가능한 억제제이다. 카프마티닙은 c-Met에 선택적으로 결합함으로써, c-Met 인산화를 억제하고 c-Met 신호 전달 경로를 손상시킨다.

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 크리조티닙을 포함한다. 크리조티닙은 PF-02341066으로도 알려져 있다. 크리조티닙은 수용체 티로신 키나제 역형성 림프종 키나제(ALK) 및 c-Met/간세포 성장 인자 수용체(HGFR)의 경구로 이용 가능한 아미노피리딘계 억제제이다. 크리조티닙은 ATP-경쟁적 방식으로 ALK 키나제 및 ALK 융합 단백질에 결합하고 이를 억제한다. 또한, 크리조티닙은 c-Met 키나제를 억제하고, c-Met 신호전달 경로를 손상시킨다. 종합하면, 상기 제제는 종양 세포 성장을 억제한다.

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 골바티닙을 포함한다. 골바티닙은 잠재적인 항신생물 활성을 갖는 c-MET 및 VEGFR-2의 경구로 생체이용 가능한 이중 키나제 억제제이다. 골바티닙은 c-MET 및 VEGFR-2 둘 다에 결합하여 이의 활성을 억제하고, 이는 종양 세포 성장 및 이러한 수용체 티로신 키나제를 과발현하는 종양 세포의 생존을 억제할 수 있다.

일부 구현예에서, c-MET 억제제는 티반티닙이다. 티반티닙은 ARQ 197로도 알려져 있다. 티반티닙은 c-MET의 경구로 생체이용 가능한 소분자 억제제이다. 티반티닙은 c-MET 단백질에 결합하고 c-Met 신호 전달 경로를 손상시키며, 이는 c-MET 단백질을 과발현하거나 구성적으로 활성화된 c-Met 단백질을 발현하는 종양 세포에서 세포사를 유도할 수 있다.

IL-1β 억제제

사이토카인의 인터루킨-1(IL-1) 패밀리는 염증 및 면역 반응에서 중심적인 역할을 하는 분비된 다면발현성 사이토카인 군이다. 암을 포함하는 다수의 임상 환경에서 IL-1의 증가가 관찰된다(Apte et al. (2006) Cancer Metastasis Rev. p. 387-408; Dinarello (2010) Eur. J. Immunol. p. 599-606). IL-1 패밀리는 특히 IL-1 베타(IL-1b) 및 IL-1 알파(IL-1a)를 포함한다. IL-1b는 폐암, 유방암, 및 결장직장암에서 상승되며(Voronov et al. (2014) Front Physiol. p. 114), 불량한 예후와 연관된다(Apte et al. (2000) Adv. Exp. Med. Biol. p. 277-88). 이론에 구애되고자 함이 없이, 일부 구현예에서, 종양 미세환경으로부터 유래되고, 악성 세포에 의한, 분비된 IL-1b는 부분적으로는 억제성 호중구를 동원하여, 종양 세포 증식을 촉진하고, 침습성을 증가시키고, 항-종양 면역 반응을 둔화하는 것으로 여겨진다(Apte et al. (2006) Cancer Metastasis Rev. p. 387-408; Miller et al. (2007) J. Immunol. p. 6933-42). 실험 데이터는 IL-1b의 억제가 종양 부담 및 전이의 감소를 일으킴을 시사한다(Voronov et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. p. 2645-50).

일부 구현예에서, 인터루킨-1 베타(IL-1β) 억제제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1, 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, IL-1β 억제제는 카나키누맙, 게보키주맙, 아나킨라 또는 릴로나셉트로부터 선택된다. 일부 구현예에서, IL-1β 억제제는 카나키누맙이다.

예시적인 IL-1β 억제제

일부 구현예에서, IL-1β 억제제는 카나키누맙이다. 카나키누맙은 ACZ885 또는 ILARIS®로도 알려져 있다. 카나키누맙은 인간 IL-1β의 생체활성을 중화하는 인간 모노클로날 IgG1/κ 항체이다.

카나키누맙은 예를 들어 WO 2002/16436, 미국 특허 7,446,175, 및 EP 1313769에 개시되어 있다. 카나키누맙의 중쇄 가변 영역은 하기 아미노산 서열을 갖는다: MEFGLSWVFLVALLRGVQCQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSVYGMNWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGDNQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNGLRAEDTAVYYCARDLRTGPFDYWGQGTLVTVSS(서열번호 297)(미국 특허 7,446,175에 서열번호 1로 개시됨). 카나키누맙의 경쇄 가변 영역은 하기 아미노산 서열을 갖는다: MLPSQLIGFLLLWVPASRGEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAAAYYCHQSSSLPFTFGPGTKVDIK(서열번호 298)(미국 특허 7,446,175에 서열번호 2로 개시됨).

카나키누맙은 예를 들어 성인 및 소아의 크리오피린 연관 주기적 증후군(CAPS)의 치료, 전신 청소년 특발성 관절염(SJIA)의 치료, 성인의 급성 통풍성 관절염 발작의 증상 치료, 및 기타 IL-1β 유도된 염증성 질환을 위해 사용되어 왔다. 이론에 구애되고자 함이 없이, 일부 구현예에서, IL-1β 억제제, 예를 들어, 카나키누맙은 예를 들어, 면역억제성 호중구의 종양 미세환경으로의 모집, 종양 혈관신생의 자극, 및/또는 전이의 촉진을 포함하는, IL-1b의 하나 이상의 기능을 차단함으로써, 항-종양 면역 반응을 증가시킬 수 있다(Dinarello (2010) Eur. J. Immunol. p. 599-606).

일부 구현예에서, 본원에 기재된 조합은 IL-1β 억제제, 카나키누맙, 또는 WO 2002/16436에 개시된 화합물, 및 면역 체크포인트 분자의 억제제, 예를 들어 PD-1의 억제제(예를 들어, 항-PD-1 항체 분자)를 포함한다. IL-1은 염증 및 면역 반응에서 중심적인 역할을 하는 분비된 다면발현성 사이토카인이다. 암을 포함하는 다수의 임상 환경에서 IL-1의 증가가 관찰된다(Apte et al. (2006) Cancer Metastasis Rev. p. 387-408; Dinarello (2010) Eur. J. Immunol. p. 599-606). IL-1b는 폐암, 유방암, 및 결장직장암에서 상승되며(Voronov et al. (2014) Front Physiol. p. 114), 불량한 예후와 연관된다(Apte et al. (2000) Adv. Exp. Med. Biol. p. 277-88). 이론에 구애되고자 함이 없이, 일부 구현예에서, 종양 미세환경으로부터 유래되고, 악성 세포에 의한, 분비된 IL-1b는 부분적으로는 억제성 호중구를 모집하여, 종양 세포 증식을 촉진하고, 침습성을 증가시키고, 항-종양 면역 반응을 둔화시키는 것으로 여겨진다(Apte et al. (2006) Cancer Metastasis Rev. p. 387-408; Miller et al. (2007) J. Immunol. p. 6933-42). 실험 데이터는 IL-1b의 억제가 종양 부담 및 전이의 감소를 일으킴을 시사한다(Voronov et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. p. 2645-50). 카나키누맙은 IL-1b에 결합하고, IL-1-매개 신호전달을 억제할 수 있다. 따라서, 특정 구현예에서, IL-1β 억제제, 예를 들어 카나키누맙은 PD-1 억제제(예를 들어, 항-PD-1 항체 분자)의 면역-매개 항-종양 효과를 증강시키거나 증강시키기 위해 사용된다.

일부 구현예에서, IL-1β 억제제, 카나키누맙, 또는 WO 2002/16436에 개시된 화합물, 및 면역 체크포인트 분자의 억제제, 예를 들어 PD-1의 억제제(예를 들어, 항-PD-1 항체 분자)는 각각 조합으로 요망되는 항-종양 활성을 달성하는 용량 및/또는 시간 일정으로 투여된다.

MDM2 억제제

일부 구현예에서, 마우스 이중 극미 상동체(MDM2) 억제제는 질환, 예를 들어 암을 치료하기 위해 TGFβ 억제제(및/또는 PD1, PD-L1 또는 PD-L2 억제제)와 조합하여 사용된다. MDM2의 인간 상동체는 HDM2로도 알려져 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 MDM2 억제제는 HDM2 억제제로도 알려져 있다. 일부 구현예에서, MDM2 억제제는 HDM201 또는 CGM097로부터 선택된다.

하나의 구현예에서 MDM2 억제제는 장애, 예를 들어, 본원에 기재된 장애를 치료하기 위해 (S)-1-(4-클로로페닐)-7-이소프로폭시-6-메톡시-2-(4-(메틸(((1r,4S)-4-(4-메틸-3-옥소피페라진-1-일)사이클로헥실)메틸)아미노)페닐)-1,2-디하이드로이소퀴놀린-3(4H)-온(CGM097로도 알려짐), 또는 PCT 공보 제WO 2011/076786호에 개시된 화합물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 본원에 개시된 치료제는 CGM097과 조합하여 사용된다.

하나의 구현예에서, MDM2 억제제는 p53 및/또는 p53/Mdm2 상호작용의 억제제를 포함한다. 하나의 구현예에서, MDM2 억제제는 장애, 예를 들어, 본원에 기재된 장애를 치료하기 위해 (S)-5-(5-클로로-1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-일)-6-(4-클로로페닐)-2-(2,4-디메톡시피리미딘-5-일)-1-이소프로필-5,6-디하이드로피롤로[3,4-d]이미다졸-4(1H)-온(HDM201로도 알려짐), 또는 PCT 공보 제WO2013/111105호에 개시된 화합물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 본원에 개시된 치료제는 HDM201과 조합하여 사용된다. 일부 구현예에서, HDM201은 경구로 투여된다.

하나의 구현예에서, 본원에 개시된 조합은 생체내 암 치료에 적합하다. 예를 들어, 조합은 암성 종양의 성장을 억제하는 데 사용될 수 있다. 조합은 또한 본원에서 장애를 치료하기 위해, 하기: (예를 들어, 암 또는 감염성 장애를 위한) 표준 케어 치료, 백신(예를 들어, 치료용 암 백신), 세포 치료법, 방사선 치료법, 수술, 또는 임의의 기타 치료제 또는 방식 중 하나 이상과 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역성의 항원 특이적 증강을 달성하기 위하여, 조합이 관심 항원과 함께 투여될 수 있다.

약학 조성물, 제형물, 및 키트

또 다른 측면에서, 본 개시는 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제형화된, 본원에 기재된 조합을 포함하는 조성물, 예를 들어 약학적으로 허용 가능한 조성물을 제공한다. 본원에 사용된 바와 같은 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 상용성인 임의의 모든 용매, 분산 매질, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 직장내, 척수 또는 표피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입에 의함)에 적합할 수 있다.

본원에 기재된 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어 액체, 반고체 및 고체 투여형, 예컨대 액체 용액(예를 들어, 주사 가능 및 주입 가능 용액), 분산액 또는 현탁액, 리포좀 및 좌약을 포함한다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료 적용에 의존한다. 기재된 억제제(항체 억제제 포함)는 주사 가능하거나 주입 가능한 용액의 형태일 수 있다. 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 복막내, 근육내)이다. 하나의 구현예에서, 항체는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 또 다른 구현예에서, 항체는 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.

본원에서 사용되는 어구 "비경구 투여" 및 "비경구 투여된"은 보통 주사에 의한, 장 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 낭내, 안구내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하(subcuticular), 관절내, 낭하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

치료 조성물은 전형적으로 제조 및 보관 조건 하에서 멸균 상태이고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포좀, 또는 높은 항체 농도에 적합한 다른 질서있는 구조로서 제형화될 수 있다. 필요한 양의 활성 화합물(즉, 항체 또는 항체의 부분)을, 필요에 따라 상기 열거된 성분 중 하나 또는 이의 조합과 함께, 적절한 용매 중에 혼입한 후, 여과 멸균함으로써 멸균 주사제 용액이 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들으로부터의 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 활성 화합물을 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사제 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 미리 멸균-여과된 용액으로부터의 활성 성분과 임의의 요망되는 추가 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동-건조이다. 예를 들어, 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 용액의 적절한 유동성이 유지될 수 있다. 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써, 주사제 조성물의 연장된 흡수를 일으킬 수 있다.

본원에 기재된 조합 또는 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 대상체에게 투여(예를 들어, 정맥내 투여)에 적합한 제형물(예를 들어, 용량 제형물 또는 투여형)로 제형화될 수 있다. 본원에 기재된 제형물은 액체 제형물, 동결건조 제형물, 또는 재구성된 제형물일 수 있다.

특정 구현예에서, 제형물은 액체 제형물이다. 일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 TGFβ 억제제(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항-TGFβ 항체 분자) 및 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 PD-1 억제제(예를 들어, 본원에 기재된 항-PD-1 항체 분자) 및 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 PD-L1 억제제(예를 들어, 본원에 기재된 항-PD-L1 항체 분자) 및 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 PD-L2 억제제(예를 들어, 항-PD-L2 항체) 및 완충제를 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 약 25 mg/mL 내지 약 250 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 60 mg/mL 내지 약 180 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 70 mg/mL 내지 약 150 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 80 mg/mL 내지 약 120 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 90 mg/mL 내지 약 110 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 100 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 50 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 60 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 70 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 80 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 90 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 100 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 110 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 120 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 130 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 140 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 150 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 80 mg/mL 내지 약 120 mg/mL, 예를 들어 약 100 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/L2) 항체 분자를 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 히스티딘을 포함하는 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)를 포함한다. 특정 구현예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 약 1 mM 내지 약 100 mM, 예를 들어, 약 2 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 10 mM 내지 약 30 mM, 약 15 내지 약 25 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 5 mM 내지 약 30 mM, 약 5 mM 내지 약 20 mM, 약 5 mM 내지 약 10 mM, 약 40 mM 내지 약 50 mM, 약 30 mM 내지 약 50 mM, 약 20 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 50 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 50 mM, 예를 들어, 약 2 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 또는 약 50 mM의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 약 15 mM 내지 약 25 mM, 예를 들어, 약 20 mM의 농도로 존재한다. 다른 구체예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 pH가 약 4 내지 약 7, 예를 들어, 약 5 내지 약 6, 예를 들어, 약 5, 약 5.5, 또는 약 6이다. 일부 구체예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 pH가 약 5 내지 약 6, 예를 들어 약 5.5이다. 특정 구현예에서, 완충제는 약 15 mM 내지 약 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고 pH가 약 5 내지 약 6(예를 들어, 5.5)이다. 특정 구현예에서, 완충제는 히스티딘 및 히스티딘-HCl을 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 80 내지 120 mg/mL, 예를 들어, 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 및 15 mM 내지 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고 pH가 5 내지 6(예를 들어, 5.5)인 완충제를 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 탄수화물을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 탄수화물은 수크로스이다. 일부 구현예에서, 탄수화물(예를 들어, 수크로스)은 약 50 mM 내지 약 500 mM, 예를 들어, 약 100 mM 내지 약 400 mM, 약 150 mM 내지 약 300 mM, 약 180 mM 내지 약 250 mM, 약 200 mM 내지 약 240 mM, 약 210 mM 내지 약 230 mM, 약 100 mM 내지 약 300 mM, 약 100 mM 내지 약 250 mM, 약 100 mM 내지 약 200 mM, 약 100 mM 내지 약 150 mM, 약 300 mM 내지 약 400 mM, 약 200 mM 내지 약 400 mM, 또는 약 100 mM 내지 약 400 mM, 예를 들어, 약 100 mM, 약 150 mM, 약 180 mM, 약 200 mM, 약 220 mM, 약 250 mM, 약 300 mM, 약 350 mM, 또는 약 400 mM의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 200 mM 내지 약 250 mM, 예를 들어, 약 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스를 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 80 내지 120 mg/mL, 예를 들어, 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 15 mM 내지 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고 pH가 5 내지 6(예를 들어, 5.5)인 완충제; 및 200 mM 내지 250 mM, 예를 들어, 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스를 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 계면활성제를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다. 일부 구현예에서, 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20은 약 0.005% 내지 약 0.1%(w/w), 예를 들어, 약 0.01% 내지 약 0.08%, 약 0.01% 내지 약 0.08%, 약 0.02% 내지 약 0.06%, 약 0.03% 내지 약 0.05%, 약 0.01% 내지 약 0.06%, 약 0.01% 내지 약 0.05%, 약 0.01% 내지 약 0.03%, 약 0.06% 내지 약 0.08%, 약 0.04% 내지 약 0.08%, 또는 약 0.02% 내지 약 0.08%(w/w), 예를 들어, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.04%, 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09%, 또는 약 0.1%(w/w)의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 0.03% 내지 약 0.05%, 예를 들어, 약 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 약 80 내지 120 mg/mL, 예를 들어 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 15 mM 내지 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고 pH가 5 내지 6(예를 들어, 5.5)인 완충제; 200 mM 내지 250 mM, 예를 들어, 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스; 및 0.03% 내지 0.05%, 예를 들어, 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 20 mM 농도의 히스티딘 완충액(예를 들어, 히스티딘/히스티딘-HCL)을 포함하고 pH가 5.5인 완충제; 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스; 및 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 포함한다.

일부 구현예에서, 액체 제형물은 본원에 기재된 항체 분자를 포함하는 제형물을 희석함으로써 제조된다. 예를 들어, 원료 의약품 제형물은 하나 이상의 부형제(예를 들어 농축된 부형제)를 포함하는 용액으로 희석될 수 있다. 일부 구현예에서, 용액은 히스티딘, 수크로스, 또는 폴리소르베이트 20 중 하나, 둘 또는 모두를 포함한다. 특정 구현예에서, 용액은 원료 의약품 제형물과 동일한 부형제(들)를 포함한다. 예시적인 부형제는 아미노산(예를 들어, 히스티딘), 탄수화물(예를 들어, 수크로스), 또는 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 20)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 액체 제형물은 재구성된 동결건조 제형물이 아니다. 다른 구현예에서, 액체 제형물은 재구성된 동결건조 제형물이다. 일부 구현예에서, 제형물은 액체로 보관된다. 다른 구현예에서, 제형물은 액체로서 제조된 다음, 저장 전에, 예를 들어 동결건조 또는 분무 건조에 의해 건조된다.

특정 구현예에서, 용기(예를 들어, 바이알) 당 약 0.5 mL 내지 약 10 mL(예를 들어, 약 0.5 mL 내지 약 8 mL, 약 1 mL 내지 약 6 mL, 또는 약 2 mL 내지 약 5 mL, 예를 들어, 약 1 mL, 약 1.2 mL, 약 1.5 mL, 약 2 mL, 약 3 mL, 약 4 mL, 약 4.5 mL, 약 5 mL, 약 5.5 mL, 약 6 mL, 약 6.5 mL, 약 7 mL, 약 7.5 mL, 약 8 mL, 약 8.5 mL, 약 9 mL, 약 9.5 mL, 또는 약 10 mL)의 액체 제형물이 충전된다. 다른 구현예에서, 액체 제형물은 용기(예를 들어, 바이알) 당 적어도 1 mL(예를 들어, 적어도 1.2 mL, 적어도 1.5 mL, 적어도 2 mL, 적어도 3 mL)의 추출 가능한 부피가 회수될 수 있도록 용기(예를 들어, 바이알) 내로 충전된다. 특정 구현예에서, 액체 제형물은 임상 현장에서 희석 없이 용기(예를 들어, 바이알)로부터 추출된다. 특정 구현예에서, 액체 제형물은 원료 의약품 제형물로부터 희석되고 임상 현장에서 용기(예를 들어, 바이알)로부터 추출된다. 특정 구현예에서, 제형물(예를 들어, 액체 제형물)은 환자에게 주입이 시작되기 전에, 예를 들어 1시간 내에(예를 들어, 45분, 30분 또는 15분 내에) 주입 백에 주사된다.

본원에 기재된 제형물은 용기에서 보관될 수 있다. 본원에 기재된 제형물 중 어느 하나에 사용되는 용기는 예를 들어 바이알, 및 선택적으로 마개, 캡 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 바이알은 유리 바이알, 예를 들어 6R 백색 유리 바이알이다. 다른 구현예에서, 마개는 고무 마개, 예를 들어 회색 고무 마개이다. 다른 구현예에서, 캡은 플립-오프 캡, 예를 들어 알루미늄 플립-오프 캡이다. 일부 구현예에서, 용기는 6R 백색 유리 바이알, 회색 고무 마개, 및 알루미늄 플립-오프 캡을 포함한다. 일부 구현예에서, 용기(예를 들어, 바이알)는 일회용 용기를 위한 것이다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체 분자의 약 250 mg 내지 약 1500 mg이 용기에 존재한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 300 mg 내지 약 1250 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 350 mg 내지 약 1200 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 400 mg 내지 약 1100 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 450 mg 내지 약 1000 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 500 mg 내지 약 900 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 600 mg 내지 약 800 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 300 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 400 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 500 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 600 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 700 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 800 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 900 mg의 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기는 약 1000 mg의 항체를 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물은 동결건조 제형물이다. 특정 구현예에서, 동결건조 제형물은 본원에 기재된 항체 분자를 포함하는 액체 제형물로부터 동결건조되거나 건조된다. 예를 들어, 용기(예를 들어, 바이알) 당 약 1 mL 내지 약 10 mL, 예를 들어, 약 6 mL 내지 약 8 mL의 액체 제형물이 충전되고 동결건조될 수 있다.

일부 구현예에서, 제형물은 재구성된 제형물이다. 특정 구현예에서, 재구성된 제형물은 본원에 기재된 항체 분자를 포함하는 동결건조 제형물로부터 재구성된다. 예를 들어, 재구성된 제형물은 단백질이 재구성된 제형물에 분산되도록 동결건조 제형물을 희석제에 용해시킴으로써 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 동결건조 제형물은 약 1 mL 내지 약 15 mL, 예를 들어, 약 5 mL 내지 약 9 mL 또는 약 7 mL의 주사용수 또는 주사용 완충액으로 재구성된다. 특정 구현예에서, 동결건조 제형물은, 예를 들어 임상 현장에서, 약 6 mL 내지 약 8 mL의 주사용수로 재구성된다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 항체 분자(예를 들어, 본원에 개시된 바와 같은 항-TGF-β 또는 항-PD-1 항체(또는 항-PD-L1/2) 분자) 및 완충제를 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 25 mg/mL 내지 약 250 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 60 mg/mL 내지 약 180 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1 항체(또는 항-PD-L1/2) 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 70 mg/mL 내지 약 150 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 80 mg/mL 내지 약 120 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 90 mg/mL 내지 약 110 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1 항체(또는 항-PD-L1/2) 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 100 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 50 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 60 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 70 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 80 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 90 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 100 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 110 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 120 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 130 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 140 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 150 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 80 mg/mL 내지 약 120 mg/mL, 예를 들어, 약 100 mg/mL 농도의 항-TGF-β 또는 항-PD1(또는 항-PD-L1/2) 항체 분자를 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 히스티딘을 포함하는 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)를 포함한다 특정 구현예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 약 1 mM 내지 약 100 mM, 예를 들어, 약 2 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 10 mM 내지 약 30 mM, 약 15 내지 약 25 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 5 mM 내지 약 30 mM, 약 5 mM 내지 약 20 mM, 약 5 mM 내지 약 10 mM, 약 40 mM 내지 약 50 mM, 약 30 mM 내지 약 50 mM, 약 20 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 50 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 50 mM, 예를 들어, 약 2 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 또는 약 50 mM의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 약 15 mM 내지 약 25 mM, 예를 들어, 약 20 mM의 농도로 존재한다. 다른 구체예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 pH가 약 4 내지 약 7, 예를 들어, 약 5 내지 약 6, 예를 들어, 약 5, 약 5.5, 또는 약 6이다. 일부 구체예에서, 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충액)는 pH가 약 5 내지 약 6, 예를 들어 약 5.5이다. 특정 구현예에서, 완충제는 약 15 mM 내지 약 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충제를 포함하고 pH가 약 5 내지 약 6(예를 들어, 5.5)이다. 특정 구현예에서, 완충제는 히스티딘 및 히스티딘-HCl을 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 80 mg/mL 내지 약 120 mg/mL, 예를 들어, 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 및 약 15 mM 내지 약 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고 pH가 5 내지 6(예를 들어, 5.5)인 완충제를 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 탄수화물을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 탄수화물은 수크로스이다. 일부 구현예에서, 탄수화물(예를 들어, 수크로스)은 50 mM 내지 약 500 mM, 예를 들어, 약 100 mM 내지 약 400 mM, 약 150 mM 내지 약 300 mM, 약 180 mM 내지 약 250 mM, 약 200 mM 내지 약 240 mM, 약 210 mM 내지 약 230 mM, 약 100 mM 내지 약 300 mM, 약 100 mM 내지 약 250 mM, 약 100 mM 내지 약 200 mM, 약 100 mM 내지 약 150 mM, 약 300 mM 내지 약 400 mM, 약 200 mM 내지 약 400 mM, 또는 약 100 mM 내지 약 400 mM, 예를 들어, 약 100 mM, 약 150 mM, 약 180 mM, 약 200 mM, 약 220 mM, 약 250 mM, 약 300 mM, 약 350 mM, 또는 약 400 mM의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 200 mM 내지 약 250 mM, 예를 들어, 약 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스를 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 80 mg/mL 내지 약 120 mg/mL, 예를 들어, 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 약 15 mM 내지 약 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고 pH가 약 5 내지 약 6(예를 들어, 5.5)인 완충제; 및 약 200 mM 내지 약 250 mM, 예를 들어 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스를 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 계면활성제를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다. 일부 구현예에서, 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20은 약 0.005% 내지 약 0.1%(w/w), 예를 들어, 약 0.01% 내지 약 0.08%, 약 0.02% 내지 약 0.06%, 약 0.03% 내지 약 0.05%, 약 0.01% 내지 약 0.06%, 약 0.01% 내지 약 0.05%, 약 0.01% 내지 약 0.03%, 약 0.06% 내지 약 0.08%, 약 0.04% 내지 약 0.08%, 또는 약 0.02% 내지 약 0.08%(w/w), 예를 들어, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.04%, 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09%, 또는 약 0.1%(w/w)의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 제형물은 약 0.03% 내지 약 0.05%, 예를 들어, 약 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 80 mg/mL 내지 약 120 mg/mL, 예를 들어 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 약 15 mM 내지 약 25 mM(예를 들어, 20 mM) 농도의 히스티딘 완충액을 포함하고 pH가 약 5 내지 약 6(예를 들어, 5.5)인 완충제; 약 200 mM 내지 약 250 mM, 예를 들어, 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스; 및 약 0.03% 내지 약 0.05%, 예를 들어, 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 100 mg/mL의 농도로 존재하는 본원에 개시된 바와 같은 항체 분자; 20 mM 농도의 히스티딘 완충액(예를 들어, 히스티딘/히스티딘-HCL)을 포함하고 pH가 5.5인 완충제; 220 mM의 농도로 존재하는 탄수화물 또는 수크로스; 및 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 포함한다.

일부 구현예에서, 제형물은 재구성된 제형물의 적어도 1 mL(예를 들어, 적어도 1.2 mL, 1.5 mL, 2 mL, 2.5 mL, 3 mL, 3.5 mL, 4 mL, 4.5 mL, 5 mL, 5.5 mL, 6 mL, 6.5 mL, 7 mL, 7.5 mL, 8 mL, 8.5 mL, 9 mL, 9.5 mL 또는 10 mL)의 추출 가능 부피가 재구성된 제형물을 함유하는 용기(예를 들어 바이알)로부터 회수될 수 있도록 재구성된다. 특정 구현예에서, 제형물은 임상 현장에서 용기(예를 들어, 바이알)로부터 재구성되고/되거나 추출된다. 특정 구현예에서, 제형물(예를 들어, 재구성된 제형물)은 환자에게 주입이 시작되기 전에, 예를 들어 1시간 내에(예를 들어, 45분, 30분 또는 15분 내에) 주입 백으로 주사된다.

일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 1 mL 내지 약 5 mL의 충전 부피를 갖는다. 특정 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 2 mL 내지 약 4 mL의 충전 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 3 mL의 충전 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 3.2 mL의 충전 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 3.4 mL의 충전 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 3.6 mL의 충전 부피를 갖는다. 일부 구현예에서, 재구성된 제형물은 약 3.8 mL의 충전 부피를 갖는다.

본원에 기재된 제형물에서 사용될 수 있는 다른 예시적인 완충제는 아르기닌 완충액, 시트레이트 완충액 또는 포스페이트 완충액을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 제형물에서 사용될 수 있는 다른 예시적인 탄수화물은 트레할로스, 만니톨, 소르비톨, 또는 이의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 제형물은 또한 긴장성 제제, 예를 들어 염화나트륨, 및/또는 안정화제, 예를 들어 아미노산(예를 들어, 글리신, 아르기닌, 메티오닌, 또는 이의 조합)을 함유할 수 있다

항체 분자는 많은 치료 적용에 있어서, 바람직한 투여 경로/방식이 정맥내 주사 또는 주입이지만, 당분야에 알려져 있는 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는 20 mg/분 초과, 예를 들어 20 mg/분내지 40 mg/분, 전형적으로 40 mg/분 이상의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어 약 35 mg/m²내지 440 mg/m², 전형적으로 약 70 mg/m²내지 310 mg/m², 더 전형적으로는 약 110 mg/m²내지 130 mg/m²의 용량에 도달할 수 있다. 구현예에서, 항체 분자는 10 mg/분 미만; 바람직하게는 5 mg/분 이하의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어, 약 1 mg/m²내지 100 mg/m², 바람직하게는 약 5 mg/m²내지 50 mg/m², 약 7 mg/m²내지 25 mg/m², 더 바람직하게는 약 10 mg/m²의 용량에 도달할 수 있다. 당업자가 이해할 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 요망되는 결과에 따라 달라질 것이다. 특정 구현예에서, 활성 화합물은 화합물을 급속 방출에 대해 보호할 담체와 함께, 예컨대 임플란트, 경피 패치, 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형물로 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르소에스테르, 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체적합성 중합체가 사용될 수 있다. 이러한 제형물의 제조를 위한 많은 방법이 특허받았거나, 일반적으로 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참고한다.

특정 구현예에서, 항체 분자는, 예를 들어 불활성 희석제 또는 동화성 식용 담체와 함께, 경구 투여될 수 있다. 화합물(그리고 요망되는 경우, 다른 성분)은 또한 경질 또는 연질 셸 젤라틴 캡슐 내에 봉입되거나, 정제로 압축되거나, 대상체의 식이 내로 직접 혼입될 수 있다. 경구 치료용 투여를 위하여, 화합물에 부형제가 혼입될 수 있고, 섭취 가능 정제, 협측 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 비경투 투여 이외의 것으로 투여하기 위해, 불활성화를 방지하는 물질로 화합물을 코팅하거나 그러한 물질과 함께 화합물을 공동-투여하는 것이 필요할 수 있다. 치료용 조성물은 또한 당분야에 알려진 의료 장치로 투여될 수 있다.

투여량 요법은 요망되는 최적 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있고, 여러 분할 용량이 경시적으로 투여될 수 있거나, 치료 상황의 긴급성에 따라 용량이 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여량 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 투여량 단위 형태는 치료받을 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 나타내며; 각 단위는 필요한 약학 담체와 연합하여 요망되는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여량 단위 형태에 대한 사양은 (a) 활성 화합물의 고유 특징 및 달성될 특정 치료 효과, 및 (b) 개체의 민감도 치료를 위한 이러한 활성 화합물의 배합 분야에 내재된 한계에 의해 지정되며, 이에 직접 의존한다.

항체 분자는 20 mg/분 초과, 예를 들어 20 mg/분 내지 40 mg/분, 전형적으로 40 mg/분 이상의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어, 약 35 mg/m²내지 440 mg/m², 전형적으로 약 70 mg/m²내지 310 mg/m², 더 전형적으로는 약 110 mg/m²내지 130 mg/m²의 용량에 도달할 수 있다. 구현예에서, 약 110 mg/m²내지 130 mg/m²의 주입 속도는 약 3 mg/kg의 수준을 달성한다. 다른 구현예에서, 항체 분자는 10 mg/분 미만, 예를 들어 5 mg/분 이하의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어, 약 1 mg/m²내지 100 mg/m², 예를 들어 약 5 mg/m²내지 50 mg/m², 약 7 mg/m²내지 25 mg/m², 또는 약 10 mg/m²의 용량에 도달할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 약 30분의 기간에 걸쳐 주입된다. 투여량 값은 경감시키고자 하는 병태의 유형 및 중증도에 따라 변할 수 있음이 주지되어야 한다. 임의의 특정 대상체에 있어서, 구체적인 투여량 요법은 개체의 필요성 및 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 경시적으로 조정되어야 하고, 본원에 제시된 투여량 범위는 단지 예시적이며 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하려는 것이 아님이 추가로 이해되어야 한다.

본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 항체 또는 항체의 부분의 "치료 유효량" 또는 "예방 유효량"을 포함할 수 있다. "치료 유효량"은 요망되는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량으로 그러한 시기 동안 효과적인 양을 나타낸다. 개질된 항체 또는 항체 단편의 치료 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 그리고 항체 또는 항체의 부분이 개체에서 요망되는 반응을 유발하는 능력과 같은 요인에 따라 변할 수 있다. 또한, 치료 유효량은 개질된 항체 또는 항체 단편의 임의의 독성 효과 또는 유해 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 큰 것이다. "치료 유효 투여량"은 바람직하게는 측정 가능한 파라미터, 예를 들어 종양 성장 속도를 치료받지 않은 대상체에 비해 적어도 약 20%만큼, 더 바람직하게는 적어도 약 40%만큼, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 60%만큼, 휠씬 더 바람직하게는 적어도 약 80%만큼 억제한다. 측정 가능한 파라미터, 예를 들어 암을 억제하는 화합물의 능력은 인간 종양에서의 유효성을 예측하는 동물 모델 시스템에서 평가될 수 있다. 대안적으로, 조성물의 이러한 특성은 숙련된 실무자에게 알려진 검정에 의해 시험관내에서 그러한 억제를 억제하는 화합물의 능력을 조사함으로써 평가될 수 있다.

"예방 유효량"은 요망되는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량으로 그러한 시기 동안 효과적인 양을 나타낸다. 전형적으로, 예방 용량은 질환의 초기 단계 전에 또는 초기 단계에 대상체에서 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 적을 것이다.

또한, 본원에 기재된 조합, 조성물, 또는 제형물을 포함하는 키트가 본 개시의 범위 내에 있다. 키트는 하기를 포함하는 하나 이상의 다른 요소를 포함할 수 있다: 사용 설명서(예를 들어, 본원에 기재된 투여량 요법에 따름); 다른 시약, 예를 들어 표지, 치료제, 또는 항체를 표지 또는 치료제에 킬레이팅하거나 달리 커플링하기에 유용한 제제, 또는 방사성방호 조성물; 투여를 위한 항체를 제조하기 위한 장치 또는 다른 물질; 약학적으로 허용 가능한 담체; 및 대상체에게 투여하기 위한 장치 또는 다른 물질.

대상체 진단 및 대상체 치료

본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 인간 및 비-인간 동물을 포함하려는 것이다. 일부 구현예에서, 대상체는 인간 대상체이다. 용어 "비-인간 동물"은 포유류 및 비-포유류, 예컨대 비-인간 영장류를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 대상체는 면역 반응의 증강을 필요로 하는 인간 환자이다. 본원에 기재된 조합은 면역 반응을 조절(예를 들어, 증대 또는 억제)함으로써 치료받을 수 있는 장애를 갖는 인간 환자를 치료하는 데 적합하다. 특정 구현예에서, 환자는 본원에 기재된 장애, 예를 들어 본원에 기재된 암을 갖거나 가질 위험이 있다.

일부 경우에, 본원에 개시된 방법을 사용하여 치료받고 있는 대상체는 이들이 일부 경우에 본원에 기재된 방법으로부터 이익을 얻을 질환 또는 병태가 있음을 알고 있다. 예를 들어, 일부 경우, 대상체는 질환에 대해 시험 및/또는 진단되었다. 이 시험 및/또는 진단은 의사 또는 기타 자격을 갖춘 의료 인력이 제공할 수 있다. 일부 경우, 시험 및/또는 진단은 튀어나온 물질, 덩어리 등과 같은 하나 이상의 증상을 기초로 자가 수행될 수 있다. 따라서 일부 구현예에서 대상체는 이의 질환 또는 병태를 치료하기 위해 본원에 기재된 방법을 필요로 할 수 있다. "이를 필요로 하는"이라는 용어는 대상체(또는 대상체를 치료하는 사람)가 병태 또는 질환(예를 들어, 암과 같은 증식성 질환)의 존재를 알고 있음을 설명하기 위한 것이다.

특정 구현예에서, 대상체는 이의 종양(들)(또는 종양 미세환경)에서 TGFβ(1, 2, 또는 3) 발현을 갖는 것으로 확인되었다. 특정 구현예에서, 대상체는 이의 종양(들)(또는 종양 미세환경)에서 PD-1 발현을 갖는 것으로 확인되었다. 특정 구현예에서, 대상체는 이의 종양(들)(또는 종양 미세환경)에서 PD-L1 발현을 갖는 것으로 확인되었다. 특정 구현예에서, 대상체는 이의 종양(들)(또는 종양 미세환경)에서 PD-L2 발현을 갖는 것으로 확인되었다. 일부 구현예에서, 대상체는 이의 종양(들)(또는 종양 미세환경)에서 TGFβ(1, 2 또는 3) 및 PD-1 발현을 모두 갖는 것으로 확인되었다. 일부 구현예에서, 대상체는 이의 종양(들)(또는 종양 미세환경)에서 TGFβ(1, 2 또는 3) 및 PD-L1 발현을 모두 갖는 것으로 확인되었다. 일부 구현예에서, 대상체는 이의 종양(들)(또는 종양 미세환경)에서 TGFβ(1, 2 또는 3) 및 PD-L2 발현을 모두 갖는 것으로 확인되었다. 이러한 바이오마커가 발견되면 기재된 방법을 사용하는 치료가 사용될 수 있다

일부 구현예에서, 대상체는 약 5 kg 내지 약 500 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 10 kg 내지 약 400 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 15 kg 내지 약 300 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 20 kg 내지 약 200 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 25 kg 내지 약 150 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 40 kg 내지 약 125 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 50 kg 내지 약 100 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 65 kg 내지 약 85 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 40 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 45 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 50 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 55 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 60 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 65 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 70 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 75 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 80 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 85 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 90 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 95 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 100 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 110 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 120 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 130 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 140 kg이다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 150 kg이다.

암 XXXX

일부 구현예에서, 방법은 암, 예컨대 골수섬유증(예를 들어, 원발성 골수섬유증(PMF), 본태성 혈소판증가증-후 골수섬유증(PET-MF), 진성 적혈구증가증-후 골수섬유증(PPV-MF)), 백혈병(예를 들어, 급성 골수성 백혈병(AML), 예를 들어 재발성 또는 불응성 AML 또는 새로운 AML; 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)), 림프종(예를 들어 T 세포 림프종, B 세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 또는 소림프구성 림프종(SLL)), 골수종(예를 들어 다발성 골수종), 폐암(예를 들어 비-소세포 폐암(NSCLC)(예를 들어 편평 및 /또는 비편평 조직학을 갖는 NSCLC, 또는 NSCLC 샘암종), 또는 소세포 폐암(SCLC)), 피부암(예를 들어, 메르켈 세포 암종 또는 흑색종(예를 들어, 진행성 흑색종)), 난소암, 중피종, 방광암, 연조직 육종(예를 들어 혈관주위세포종(HPC)), 골암(골육종), 신장암(예를 들어 신암(예를 들어 신세포 암종)), 간암(예를 들어 간세포 암종), 담관암종, 육종, 골수이형성 증후군(MDS)(예를 들어 저위험 MDS), 전립샘암, 유방암(예를 들어 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 또는 Her2/neu 중 하나, 둘 또는 모두를 발현하지 않는 유방암, 예를 들어 삼중 음성 유방암), 결장직장암, 비인두암, 십이지장암, 자궁내막암, 췌장암(예를 들어, 췌관 샘암종(PDAC), 두경부암(예를 들어, 두경부 편평 상피 세포 암종(HNSCC), 항문암, 위식도암, 갑상샘암(예를 들어 역형성 갑상샘 암종), 자궁경부암, 또는 신경내분비 종양(NET)(예를 들어, 비정형 폐 카르시노이드 종양)을 치료하기 위해 사용된다.

특정 구현예에서, 환자는 본원에 기재된 하나 이상의 암을 갖는 환자에서 확립된 이점을 갖는 표준 치료 요법에 적합하지 않다. 일부 구현예에서, 대상체는 화학치료법에 부적합하다. 일부 구현예에서, 화학치료법은 집중 유도 화학치료법이다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법은 기재된 바와 같은 하나 이상의 암을 갖는 성인 환자의 치료에 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 억제제(TGFβ 및/또는 PD1))는 암 또는 이의 증상을 치료하기 효과적인 양으로 투여된다.

본원에 기재된 조성물, 제형물 또는 방법은 암성 종양의 성장을 억제하는 데 사용될 수 있다. 대안적으로, 본원에 기재된 조성물, 제형물 또는 방법은 하기: 암에 대한 표준 케어 치료, 또 다른 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역조절제(예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 억제성 분자의 억제제); 백신, 예를 들어, 치료용 암 백신; 또는 본원에 기재된 바와 같은 세포 면역치료법의 다른 형태 중 하나 이상과 조합하여 사용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 방법은 생체내 암 치료에 적합하다.

또 다른 양태에서, 대상체를 치료하는 방법, 예를 들어 대상체에서 과증식성 병태 또는 장애(예를 들어 암), 예를 들어 고형 종양, 혈액암, 연조직 종양, 또는 전이성 병소를 감소시키거나 완화하는 방법이 제공된다. 방법은 본원에 개시된 투여 요법에 따라 본원에 기재된 방법, 또는 본원에 기재된 조성물 또는 제형물을 수행하는 단계를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "암"은 조직병리학적 유형 또는 침습 단계와 무관하게, 모든 유형의 암성 성장 또는 종양발생 과정, 전이성 조직 또는 악성 암화 세포, 조직 또는 기관을 포함하려는 것이다. 암성 장애의 예는 혈액암, 고형 종양, 연조직 종양 및 전이성 병소를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

고형 종양의 예는 악성물, 예를 들어 다양한 기관계의 육종 및 암종(샘암종 및 편평 상피 세포 암종 포함), 예컨대 간, 폐, 유방, 림프계, 위장관(예를 들어, 결장), 항문, 생식기 및 비뇨생식기(예를 들어, 신장, 요로상피, 방광), 전립샘, CNS(예를 들어, 뇌, 신경 또는 아교 세포), 두경부, 피부, 췌장 및 인두에 영향을 미치는 것들을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 샘암종은 악성물, 예컨대 대부분의 결장암, 직장암, 신암(예를 들어 신세포 암종(예를 들어 투명 세포 또는 비-투명 세포 신세포 암종), 간암, 폐암(예를 들어 폐의 비-소세포 암종(예를 들어 편평 또는 비-편평 비-소세포 폐암), 소장암, 및 식도암을 포함한다. 편평 상피 세포 암종은 악성물, 예를 들어 폐, 식도, 피부, 두경부 영역, 구강, 항문, 및 자궁경부에서의 악성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 암은 흑색종, 예를 들어 진행성 단계의 흑색종이다. 암은 초기, 중기, 말기 또는 전이성 암일 수 있다. 전술된 암의 전이성 병소는 또한 본원에 기재된 조합을 사용하여 치료되거나 방지될 수 있다.

특정 구현예에서, 암은 고형 종양이다. 일부 구현예에서, 암은 난소암이다. 다른 구현예에서, 암은 폐암, 예를 들어 소세포 폐암(SCLC) 또는 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 다른 구현예에서, 암은 중피종이다. 다른 구현예에서, 암은 피부암, 예를 들어 메르켈 세포 암종 또는 흑색종이다. 다른 구현예에서, 암은 신장암, 예를 들어 신세포 암종(RCC)이다. 다른 구현예에서, 암은 방광암이다. 다른 구현예에서, 암은 연조직 육종, 예를 들어 혈관주위세포종(HPC)이다. 다른 구현예에서, 암은 골암, 예를 들어 골육종이다. 다른 구현예에서, 암은 결장직장암이다. 다른 구현예에서, 암은 췌장암(예를 들어, PDAC)이다. 다른 구현예에서, 암은 비인두암이다. 다른 구현예에서, 암은 유방암이다. 다른 구현예에서, 암은 십이지장암이다. 다른 구현예에서, 암은 자궁내막암이다. 다른 구현예에서, 암은 샘암종, 예를 들어 미지의 샘암종이다. 다른 구현예에서, 암은 간암, 예를 들어 간세포 암종이다. 다른 구현예에서, 암은 담관암종종이다. 다른 구현예에서, 암은 육종이다. 특정 구현예에서, 암은 골수이형성 증후군(MDS)(예를 들어, 고위험 MDS 또는 저위험 MDS)이다.

또 다른 구현예에서, 암은 암종(예를 들어, 진행성 또는 전이성 암종), 흑색종 또는 폐 암종, 예를 들어, 비-소세포 폐 암종이다. 하나의 구현예에서, 암은 폐암, 예를 들어 비-소세포 폐암 또는 소세포 폐암이다. 일부 구현예에서, 비-소세포성 폐암은 I기(예를 들어, Ia기 또는 Ib기), II기(예를 들어, IIa기 또는 IIb기), III기(예를 들어, IIIa기 또는 IIIb기), 또는 IV기, 비-소세포 폐암이다. 하나의 구현예에서, 암은 흑색종, 예를 들어 진행성 흑색종이다. 하나의 구현예에서, 암은 다른 치료법에 반응하지 않는 진행성 또는 절제 불가능한 흑색종이다. 다른 구현예에서, 암은 BRAF 돌연변이(예를 들어, BRAF V600 돌연변이)를 갖는 흑색종이다. 또 다른 구현예에서, 암은 바이러스 감염, 예를 들어 만성 바이러스 간염을 갖거나 갖지 않는 간암종, 예를 들어 진행성 간암종이다. 또 다른 구현예에서, 암은 전립샘암, 예를 들어 진행성 전립샘암이다. 또 다른 구현예에서, 암은 골수종, 예를 들어 다발성 골수종이다. 또 다른 구현예에서, 암은 신암, 예를 들어, 신세포 암종(RCC)(예를 들어, 전이성 RCC, 비-투명 세포 신세포 암종(nccRCC), 또는 투명 세포 신세포 암종(CCRCC))이다.

일부 구현예에서, 암은 MSI-고 암이다. 일부 구현예에서, 암은 전이성 암이다. 다른 구현예에서, 암은 진행성 암이다. 다른 구현예에서, 암은 재발성 또는 불응성 암이다.

본원에 개시된 바와 같은 방법, 조성물 또는 제형물을 사용하여 성장이 억제될 수 있는 예시적인 암은 전형적으로 면역치료법에 반응성인 암을 포함한다. 추가로, 불응성 또는 재발성 악성물은 본원에 기재된 조합을 사용하여 치료받을 수 있다.

치료받을 수 있는 다른 암의 예는 기저 세포 암종, 담도암; 방광암; 골암; 뇌 및 CNS 암; 원발성 CNS 림프종; 중추신경계(CNS)의 신생물; 유방암; 자궁경부암; 융모막암종; 결장직장암; 결합 조직 암; 소화계의 암; 자궁내막암; 식도암; 눈암; 두경부암; 위암; 상피내 신생물; 신장암; 후두암; 백혈병(급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 또는 급성 백혈병 포함); 간 암; 폐암(예를 들어, 소세포 및 비-소세포); 호지킨 림프종 및 비호지킨 림프종을 포함하는 림프종; 림프구성 림프종; 흑색종, 예를 들어 피부 또는 안내 악성 흑색종; 골수종; 신경모세포종; 구강암(예를 들어, 입술, 혀, 입 및 인두); 난소암; 췌장암; 전립샘암; 망막모세포종; 횡문근육종; 직장암; 호흡계의 암; 육종; 피부암; 위암; 고환암; 갑상샘암; 자궁암; 비뇨계의 암, 간암종, 항문 부위 암, 나팔관 암종, 질 암종, 외음부 암종, 소장암, 내분비계의 암, 부갑상샘암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아 고형 종양, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 샘종, 카포시 육종, 표피양암, 편평 상피 세포 암, T 세포 림프종, 석면에 의해 유도된 암을 포함하는 환경적으로 유도된 암뿐만 아니라 다른 암종 및 육종, 및 상기 암의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에 기재된 방법 및 치료법은 하나 이상의 치료제, 예를 들어, 하나 이상의 항암제, 세포독성제 또는 세포증식억제제, 호르몬 치료, 백신, 및/또는 기타 면역치료법과 공동 제형화되고/되거나 공동 투여되는 조성물을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 분자는 수술, 방사선, 냉동수술, 및/또는 열치료법을 포함하는 다른 치료적 처치 방식과 조합하여 투여된다. 이러한 조합 치료법은 유리하게는 더 적은 투여량의 투여되는 치료제를 이용할 수 있어서, 다양한 단일치료법과 연관된 가능한 독성 또는 합병증을 배제할 수 있다.

조합하여 투여되는 경우, TGF-β 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 또는 PD-L2 억제제, 하나 이상의 추가 제제, 또는 모두는 개별적으로, 예를 들어 단일치료법으로서 사용되는 각 제제의 양 또는 투여량보다 많거나 적거나 동일한 양 또는 용량으로 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, TGF-β 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 또는 PD-L2 억제제, 하나 이상의 추가 제제, 또는 모두의 투여되는 양 또는 투여량은 개별적으로, 예를 들어 단일치료법으로서 사용되는 각 제제의 양 또는 투여량보다(예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%) 더 적다. 다른 구현예에서, 요망되는 효과(예를 들어, 암 치료)를 일으키는 TGF-β 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 또는 PD-L2 억제제, 하나 이상의 추가 제제, 또는 모두의 양 또는 투여량은 더 적다(예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 또는 적어도 50% 더 적음).

다른 구현예에서, 추가 치료제는 WO 2017/019897의 표 6에 열거된 제제로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 하기 중 하나 이상이다: 예를 들어 WO 2017/019897의 표 6에 기재된 바와 같은, 1) 단백질 키나제 C(PKC) 억제제; 2) 열 충격 단백질 90(HSP90) 억제제; 3) 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K) 및/또는 라파마이신의 표적(mTOR)의 억제제; 4) 시토크롬 P450의 억제제(예를 들어 CYP17 억제제 또는 17알파-하이드록실라제/C17-20 라이아제 억제제); 5) 철 킬레이트화제; 6) 아로마타제 억제제; 7) p53의 억제제, 예를 들어 p53/Mdm2 상호작용의 억제제; 8) 아폽토시스 유도제; 9) 혈관신생 억제제; 10) 알도스테론 합성효소 억제제; 11) SMO(smoothened) 수용체 억제제; 12) 프로락틴 수용체(PRLR) 억제제; 13) Wnt 신호전달 억제제; 14) CDK4/6 억제제; 15) 섬유아세포 성장 인자 수용체 2(FGFR2)/섬유아세포 성장 인자 수용체 4(FGFR4) 억제제; 16) 대식세포 콜로니-자극 인자(M-CSF)의 억제제; 17) c-KIT, 히스타민 방출, Flt3(예를 들어 FLK2/STK1) 또는 PKC 중 하나 이상의 억제제; 18) VEGFR-2(예를 들어 FLK-1/KDR), PDGFR베타, c-KIT 또는 Raf 키나제 C 중 하나 이상의 억제제; 19) 소마토스타틴 작용제 및/또는 성장 호르몬 방출 억제제; 20) 역형성 림프종 키나제(ALK) 억제제; 21) 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체(IGF-1R) 억제제; 22) P-당단백질 1 억제제; 23) 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR) 억제제; 24) BCR-ABL 키나제 억제제; 25) FGFR 억제제; 26) CYP11B2의 억제제; 27) HDM2 억제제, 예를 들어 HDM2-p53 상호작용의 억제제; 28) 티로신 키나제의 억제제; 29) c-MET의 억제제; 30) JAK의 억제제; 31) DAC의 억제제; 32) 11β-하이드록실라제의 억제제; 33) IAP의 억제제; 34) PIM 키나제의 억제제; 35) Porcupine의 억제제; 36) BRAF, 예를 들어 BRAF V600E 또는 야생형 BRAF의 억제제; 37) HER3의 억제제; 38) MEK의 억제제; 또는 39) 지질 키나제의 억제제.

실시예

실시예 1: 완제 의약품

NIS793으로 알려진 TGFβ 억제제를 주입용 용액으로 사용할 수 있는 분말로 만들었다. 분말을 플립-오프 캡으로 밀봉된 고무 마개가 있는 유리 바이알에 제공하였다. 각 바이알은 100 mg의 NIS793 동결건조물을 함유하였다. 완제 의약품은 표준 무균 공정을 사용하여 제조하였다. NIS793 외에도, 완제 의약품은 하기 약학 부형제: L-히스티딘/L-히스티딘 염산염 1수화물, 폴리소르베이트 20 및 수크로스를 함유하였다. 전체 용량을 회수할 수 있도록 바이알을 20% 과충전하였다.

완제 의약품은 투여 전에 주사용 멸균수 1 mL로 재구성하여 100 mg/mL NIS793 용액을 생성하도록 설계되었다.

주입용 용액을 위한 NIS793 농축액을 플립-오프 캡으로 밀봉된 고무 마개가 있는 유리 바이알에 제공하였다. 각 바이알은 7 mL의 용액 중 700 mg의 NIS793을 함유하였다. 완제 의약품 용액은 멸균수 중의 재구성 후 주입용 용액을 위한 NIS793 분말과 동일한 정량적 및 정성적 부형제를 함유하였다. 유사하게, 전체 용량을 회수할 수 있도록 7% 과충전하였다.

실시예 2: 인간 연구

실시예 1에 기재된 바와 같이 NIS793을 함유하는 완제 의약품을 임상 시험에서 사용하였다. 진행 중인 인간 시험의 요약을 아래의 표 5에 제공한다.

[표 5]

1건의 인간 연구가 시작되어 진행 중이다: 최초 인간-내 연구, CNIS793X2101, " 진행성 악성물을 갖는 성인 환자에서 PDR001과 조합된 NIS793의 I/Ib상, 국제 공보 표지, 다기관 용량 증량 연구". 총 120명의 환자를 단일 제제로 또는 PDR001과 조합하여 NIS793으로 치료하였다(표 5).

인간에서의 약동학, 대사 및 약력학

CNIS793X2101 연구(75명 환자, 컷오프 일자 2020년 5월 04일)로부터 NIS793의 PK 데이터를 특성규명하였다. 증량 코호트에서 단일 제제(NIS793: 0.3 mg/kg~1 mg/kg Q3W)로서 및 PDR001과 조합된 NIS793(NIS 793/PDR001: 0.3 mg/kg/100 mg Q3W, 0.3 mg/kg/300 mg~30 mg/kg/300 mg Q3W 및 20 mg/kg~30 mg/kg Q2W/400 mg Q4W)에 대해 유도된 PK 파라미터 추정치 요약을 주기 1에 대해 표 6에 그리고 주기 3에 대해 표 7에 제시한다. 또한, MSS-CRC 및 NSCLC에서의 확대 코호트에서 PDR001과 조합된 NIS793(NIS793/PDR001: 2100 mg/300 mg Q3W)에 대해 유도된 PK 파라미터 추정치의 요약을 표 8에 제시한다. NIS793의 각 용량 코호트에 대한 평균 농도-시간 프로파일을 주기 1에 대해 도 1에 그리고 주기 3에 대해 도 2에 도시한다.

30분 정맥내 주입을 통한 NIS793의 투여 후, 0.3 mg/kg에서 30 mg/kg까지 NIS793 노출(즉, 주기 1 Cmax 및 AUClast)에서 대략 용량 비례 증가가 관찰되었다. NIS793의 중등도 축적(대략 최대 2.0배)이 주기 1 대비 주기 3에서 AUClast 및 Cmax의 비에 기초하여 관찰되었다. PK 변동성은 대상체 간 변동성(CV%)으로 예시된 바와 같이 낮거나 중등도였다(예를 들어 Cmax의 경우 12.1%~73.3%).

PDR001은 3회 용량 및 2회 투약 요법(100 mg 또는 300 mg Q3W 및 400 mg Q4W)으로 NIS793과 조합하여 투여하였다. NIS793과 조합된 PDR001의 PK는 PDR001 임상 시험 연구로부터의 단일 제제 데이터와 유사한 것으로 나타난다.

[표 6]

[표 7]

[표 8]

연구 CNIS793X2101의 용량 증량상의 농도 데이터에 대한 집단 PK 분석을 사용하여 제거율 및 분포 부피에 대한 공변량으로서 체중의 영향을 포함하여 NIS793의 약동학적 특징을 설명했다. 분석은 NIS793의 약동학이 중앙 구획에서 1차 제거를 갖는 2 구획 모델을 사용하여 잘 설명될 수 있음을 제시했다. 이는 NIS793 PK가 비구획 분석에 기초하여 용량 비례적이고 시간 독립적인 것으로 보인다는 관찰과 일치한다.

체중(BW)은 검정력 모델에서 추정 지수가 0.55(CV%=40%)인 집단 PK 모델에서 제거율에 대한 공변량이지만, 체중 기반 및 고정 투약 요법 간 항정 상태에서의 예상 노출 및 최저 농도는 다양한 BW 분류에 걸쳐 필적했다. 이 분석은 체중 기반 투약이 개인 간 변동성을 감소시키지 않기 때문에 환자 체중에 무관하게 mg 기준으로의 고정 또는 균일 투약의 사용을 뒷받침한다. 모델 기반 시뮬레이션은 2100 mg의 용량이 30 mg/kg에서 관찰된 노출과 매칭될 것임을 시사하였다. 추가로 1400 mg의 용량은 또한 20 mg/kg에서 관찰된 노출과 매칭될 것이다

균등부

본 발명의 특정 구현예가 논의되었지만, 상기 명세서는 예시적이고 제한적이지 않다. 본 명세서 및 하기 청구범위의 검토 시 본 발명의 많은 변화가 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 전체 범위는 이의 균등부의 전체 범위와 함께 청구범위를 참조하여, 그리고 이의 변화와 함께 명세서를 참조하여 결정되어야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Novartis Institute for Biomedical Research <120> USES OF ANTI-TGF? ANTIBODIES AND CHECKPOINT INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF PROLIFERATIVE DISEASES <130> PAT058932 <160> 320 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 1 Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 2 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 3 Gly Leu Trp Glu Val Arg Ala Leu Pro Ser Val Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 4 Gly Ala Asn Asp Ile Gly Ser Lys Ser Val His 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 5 Glu Asp Ile Ile Arg Pro Ser 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 6 Gln Val Trp Asp Arg Asp Ser Asp Gln Tyr Val 1 5 10 <210> 7 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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agtctactag caccgtctat 240 atggaactga gttccctgag gtctgaggac accgccgtct actactgcgc tagagtgggc 300 ggagccttcc ctatggacta ctggggtcaa ggcactaccg tgaccgtgtc tagcgctagc 360 actaagggcc cgtccgtgtt ccccctggca ccttgtagcc ggagcactag cgaatccacc 420 gctgccctcg gctgcctggt caaggattac ttcccggagc ccgtgaccgt gtcctggaac 480 agcggagccc tgacctccgg agtgcacacc ttccccgctg tgctgcagag ctccgggctg 540 tactcgctgt cgtcggtggt cacggtgcct tcatctagcc tgggtaccaa gacctacact 600 tgcaacgtgg accacaagcc ttccaacact aaggtggaca agcgcgtcga atcgaagtac 660 ggcccaccgt gcccgccttg tcccgcgccg gagttcctcg gcggtccctc ggtctttctg 720 ttcccaccga agcccaagga cactttgatg atttcccgca cccctgaagt gacatgcgtg 780 gtcgtggacg tgtcacagga agatccggag gtgcagttca attggtacgt ggatggcgtc 840 gaggtgcaca acgccaaaac caagccgagg gaggagcagt tcaactccac ttaccgcgtc 900 gtgtccgtgc tgacggtgct gcatcaggac tggctgaacg ggaaggagta caagtgcaaa 960 gtgtccaaca agggacttcc tagctcaatc gaaaagacca tctcgaaagc caagggacag 1020 ccccgggaac cccaagtgta taccctgcca ccgagccagg aagaaatgac taagaaccaa 1080 gtctcattga cttgccttgt gaagggcttc tacccatcgg atatcgccgt ggaatgggag 1140 tccaacggcc agccggaaaa caactacaag accacccctc cggtgctgga ctcagacgga 1200 tccttcttcc tctactcgcg gctgaccgtg gataagagca gatggcagga gggaaatgtg 1260 ttcagctgtt ctgtgatgca tgaagccctg cacaaccact acactcagaa gtccctgtcc 1320 ctctccctgg ga 1332 <210> 198 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 198 Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Met Gln 1 5 10 15 <210> 199 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 199 Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser 1 5 <210> 200 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 200 Gln Gln Ser Arg Lys Asp Pro Ser Thr 1 5 <210> 201 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 201 Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu 1 5 10 <210> 202 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 202 Ala Ala Ser 1 <210> 203 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial 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caagggacag 1020 ccccgggaac cccaagtgta taccctgcca ccgagccagg aagaaatgac taagaaccaa 1080 gtctcattga cttgccttgt gaagggcttc tacccatcgg atatcgccgt ggaatgggag 1140 tccaacggcc agccggaaaa caactacaag accacccctc cggtgctgga ctcagacgga 1200 tccttcttcc tctactcgcg gctgaccgtg gataagagca gatggcagga gggaaatgtg 1260 ttcagctgtt ctgtgatgca tgaagccctg cacaaccact acactcagaa gtccctgtcc 1320 ctctccctgg ga 1332 <210> 214 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 214 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr 20 25 30 Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg 85 90 95 Lys Asp Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 215 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240 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 245 250 255 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 260 265 270 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 275 280 285 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 290 295 300 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 305 310 315 320 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 325 330 335 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 340 345 350 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 355 360 365 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 370 375 380 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 385 390 <210> 308 <211> 1182 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 308 atggccctcc ctgtcactgc cctgcttctc cccctcgcac tcctgctcca cgccgctaga 60 ccacccggat ggtttctgga ctctccggat cgcccgtgga atcccccaac cttctcaccg 120 gcactcttgg ttgtgactga gggcgataat gcgaccttca cgtgctcgtt ctccaacacc 180 tccgaatcat tcgtgctgaa ctggtaccgc atgagcccgt caaaccagac cgacaagctc 240 gccgcgtttc cggaagatcg gtcgcaaccg ggacaggatt gtcggttccg cgtgactcaa 300 ctgccgaatg gcagagactt ccacatgagc gtggtccgcg ctaggcgaaa cgactccggg 360 acctacctgt gcggagccat ctcgctggcg cctaaggccc aaatcaaaga gagcttgagg 420 gccgaactga gagtgaccga gcgcagagct gaggtgccaa ctgcacatcc atccccatcg 480 cctcggcctg cggggcagtt tcagaccctg gtcacgacca ctccggcgcc gcgcccaccg 540 actccggccc caactatcgc gagccagccc ctgtcgctga ggccggaagc atgccgccct 600 gccgccggag gtgctgtgca tacccgggga ttggacttcg catgcgacat ctacatttgg 660 gctcctctcg ccggaacttg tggcgtgctc cttctgtccc tggtcatcac cctgtactgc 720 aagcggggtc ggaaaaagct tctgtacatt ttcaagcagc ccttcatgag gcccgtgcaa 780 accacccagg aggaggacgg ttgctcctgc cggttccccg aagaggaaga aggaggttgc 840 gagctgcgcg tgaagttctc ccggagcgcc gacgcccccg cctataagca gggccagaac 900 cagctgtaca acgaactgaa cctgggacgg cgggaagagt acgatgtgct ggacaagcgg 960 cgcggccggg accccgaaat gggcgggaag cctagaagaa agaaccctca ggaaggcctg 1020 tataacgagc tgcagaagga caagatggcc gaggcctact ccgaaattgg gatgaaggga 1080 gagcggcgga ggggaaaggg gcacgacggc ctgtaccaag gactgtccac cgccaccaag 1140 gacacatacg atgccctgca catgcaggcc cttccccctc gc 1182 <210> 309 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 309 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 310 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 310 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 50 <210> 311 <211> 373 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 311 Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr 1 5 10 15 Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe 20 25 30 Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr 35 40 45 Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu 50 55 60 Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu 65 70 75 80 Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn 85 90 95 Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala 100 105 110 Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg 115 120 125 Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly 130 135 140 Gln Phe Gln Thr Leu Val Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 145 150 155 160 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 165 170 175 Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 180 185 190 Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val 195 200 205 Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys 210 215 220 Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr 225 230 235 240 Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu 245 250 255 Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro 260 265 270 Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly 275 280 285 Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro 290 295 300 Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr 305 310 315 320 Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 325 330 335 Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 340 345 350 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 355 360 365 Ala Leu Pro Pro Arg 370 <210> 312 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 312 Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr 1 5 10 15 Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg Leu Thr Asp 20 25 30 Val Thr Leu 35 <210> 313 <211> 105 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 313 acaaaaaaga agtattcatc cagtgtgcac gaccctaacg gtgaatacat gttcatgaga 60 gcagtgaaca cagccaaaaa atccagactc acagatgtga cccta 105 <210> 314 <211> 69 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 314 Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 1 5 10 15 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 20 25 30 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Leu 35 40 45 Pro Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile 50 55 60 Leu Ile Cys Trp Leu 65 <210> 315 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 315 accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60 tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120 gacttcgcct gtgatttctg gttacccata ggatgtgcag cctttgttgt agtctgcatt 180 ttgggatgca tacttatttg ttggctt 207 <210> 316 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 316 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 317 <211> 123 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 317 aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60 gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120 tcc 123 <210> 318 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 318 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Tyr Arg Ser Pro 1 5 10 15 Ala Met Pro Glu Asn Leu 20 <210> 319 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 319 Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 10 <210> 320 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biologic <400> 320 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15

Claims

대상체에 2주 또는 3주 1회 약 16 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 증식성 질환을 치료하는 방법으로서, TGF-β 항체는 각각 서열번호 1, 2 및 3의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 각각 서열번호 4, 5 및 6의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, TGF-β 항체가 약 20 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, TGF-β 항체가 약 30 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
대상체에 2주 또는 3주 1회 약 1200 mg 내지 약 1600 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 증식성 질환을 치료하는 방법으로서, TGF-β 항체는 각각 서열번호 1, 2 및 3의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 각각 서열번호 4, 5 및 6의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는, 방법.
제4항에 있어서, TGF-β 항체가 약 1400 mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제4항 또는 제5항에 있어서, TGF-β 항체가 2주마다 투여되는, 방법.
이를 필요로 하는 대상체에 2주 또는 3주 1회 약 1900 mg 내지 약 2300 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 증식성 질환을 치료하는 방법으로서, TGF-β 항체는 각각 서열번호 1, 2 및 3의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 각각 서열번호 4, 5 및 6의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는, 방법.
제7항에 있어서, TGF-β 항체가 약 2100 mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제7항 또는 제8항에 있어서, TGF-β 항체가 3주마다 투여되는, 방법.
제7항 또는 제8항에 있어서, TGF-β 항체가 2주마다 투여되는, 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 항체가 각각 SEQ ID NO: 7 및 8의 아미노산 서열로 제시된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 항체가 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 항체가 모노클로날 항체인, 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 다중특이적 항체인, 방법.
제14항에 있어서, 다중특이적 항체가 이중특이적 항체인, 방법.
제14항에 있어서, 다중특이적 항체가 삼중특이적 항체인, 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 억제제가 약 20분 내지 약 40분의 기간에 걸쳐 투여되는, 방법.
제17항에 있어서, TGF-β 억제제가 약 30분의 기간에 걸쳐 투여되는, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 약 70 kg인, 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 체크포인트 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제20항에 있어서, 체크포인트 억제제가 PD1 억제제인, 방법.
제21항에 있어서, PD1 억제제가 항-PD1 항체인, 방법.
제22항에 있어서, 항-PD1 항체가 스파르탈리주맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591, BGB-A317, BGB-108, INCSHR1210, AMP-224, 또는 이의 임의의 조합인, 방법.
제22항 또는 제23항에 있어서, 항-PD1 항체가 스파르탈리주맙인, 방법.
제24항에 있어서, 스파르탈리주맙이 균일 용량으로 투여되는, 방법.
제25항에 있어서, 스파르탈리주맙이 3주 1회 또는 4주 1회 약 300 mg 또는 약 400 mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 스파르탈리주맙이 3주 1회 약 300 mg 스파르탈리주맙의 용량으로 투여되는, 방법.
제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 스파르탈리주맙이 4주 1회 약 400 mg 스파르탈리주맙의 용량으로 투여되는, 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 억제제 및/또는 PD1 억제제가 정맥내 투여되는, 방법.
제20항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 억제제가 체크포인트 억제제와 동일한 날에 투여되는, 방법.
제20항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 억제제가 체크포인트 억제제가 투여되기 전에 투여되는, 방법.
제20항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 억제제가 체크포인트 억제제가 투여된 후에 투여되는, 방법.
제20항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 억제제가 체크포인트 억제제와 동시에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 증식성 질환이 암인, 방법.
제34항에 있어서, 암이 골수섬유증, 백혈병, 림프종, 골수종, 폐암, 피부암, 난소암, 중피종, 위장관암, 방광암, 연조직 육종, 골암, 신장암, 간암, 담관암종, 육종, 골수이형성 증후군(예를 들어 저위험 또는 고위험 골수이형성 증후군), 전립샘암, 유방암(예를 들어 삼중 음성 유방암), 결장직장암, 비인두암, 십이지장암, 자궁내막암, 췌장암, 두경부암, 항문암, 위식도암, 갑상샘암, 자궁경부암, 또는 신경내분비 종양인, 방법.
제35항에 있어서, 암이 췌장암인, 방법.
제36항에 있어서, 췌장암이 췌관 샘암종(PDAC)인, 방법.
제35항에 있어서, 암이 위장관암인, 방법.
제38항에 있어서, 위장관암이 결장직장암인, 방법.
제35항에 있어서, 암이 골수섬유증인, 방법.
제35항에 있어서, 암이 골수이형성 증후군인, 방법.
제35항에 있어서, 암이 유방암인, 방법.
제42항에 있어서, 유방암이 삼중 음성 유방암인, 방법.
제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, TGF-β 억제제 및/또는 체크포인트 억제제가 관해 시까지 제공되는, 방법.
제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 하나 이상의 항암 치료법을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제45항에 있어서, 항암 치료법이 표준 케어 치료법 또는 항암 치료제인, 방법.
이를 필요로 하는 대상체에 2주 또는 3주 1회 2100 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 췌관 샘암종을 치료하는 방법으로서, TGF-β 항체가 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 방법.
이를 필요로 하는 대상체에 2주 또는 3주 1회 2100 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 결장직장암을 치료하는 방법으로서, TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 방법.
이를 필요로 하는 대상체에 2주 1회 1400 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 췌관 샘암종을 치료하는 방법으로서, TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 방법.
이를 필요로 하는 대상체에 3주 1회 1400 mg의 용량으로 TGF-β 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 결장직장암을 치료하는 방법으로서, TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 방법.
제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 3주 1회 약 300 mg의 용량으로 스파르탈리주맙을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 4주 1회 약 400 mg의 용량으로 스파르탈리주맙을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
TGF-β 항체 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물로서, TGF-β 항체는 각각 서열번호 9 및 10의 아미노산 서열에서 제시된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 약학 조성물.
제53항에 있어서, TGF-β 항체가 100 mg/mL의 농도로 존재하는, 약학 조성물.
제53항 또는 제54항에 있어서, (a) pH가 5.5인, 20 mM 농도의 히스티딘 완충액; (b) 220 mM 농도의 수크로스; 및 (c) 0.04%(w/w)의 농도로 존재하는 계면활성제 또는 폴리소르베이트 20을 추가로 포함하는 약학 조성물.