TW201425336A - Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於BCMA(B細胞成熟抗原)抗原結合蛋白，諸如抗體；編碼該等抗原結合蛋白之聚核苷酸序列；以及診斷及治療疾病之組合物及方法。本發明亦係關於BCMA抗體藥物結合物及其用途。

Description

BCMA抗原結合蛋白質 【相關申請案之交互參照】
本申請案根據35 U.S.C.§119主張2012年12月7日申請之美國臨時申請案第61/734,767號、2013年2月1日申請之美國臨時申請案第61/759,702號、2013年3月8日申請之美國臨時申請案第61/775,125號及2013年10月11日申請之美國臨時申請案第61/890,064號的權益，該等臨時申請案據此以引用的方式併入本文中。
本發明係關於B細胞成熟抗原(BCMA)抗原結合蛋白，特定言之抗體；編碼該等抗原結合蛋白之聚核苷酸序列；以及治療疾病之組合物及方法。本發明之態樣亦包括抗體藥物結合物及其用途。
B細胞成熟抗原(BCMA)、B細胞活化因子受體(BAFF-R)以及跨膜活化因子及鈣調節因子及親環蛋白(cyclophilin)配體相互作用因子(TACI)藉由嚙合增殖誘導性配體(APRIL)及/或BAFF(B細胞活化因子)來在不同發育階段促進B細胞存活。調控異常之信號傳導可促進B細胞存活及增殖，從而導致自體免疫性及贅瘤形成。對於評述，請參見Rickert等人,Immunological Reviews 2011,第244卷：115-133。
BAFF及APRIL展現結構相似性及重疊但不同之受體結合特異性。BAFF及APRIL結合BCMA，但APRIL：BCMA相互作用具有較高親和力，而BAFF-R僅以高親和力結合BAFF。負性調控因子TACI以類似親和力結合BAFF與APRIL兩者。BCMA在B細胞譜系中之表現局限於生髮中心B細胞、記憶B細胞(在人類中)及漿細胞。BCMA為骨髓漿細胞上用於BAFF及APRIL嚙合之受體，但TACI亦在此等細胞上表現。長壽命漿細胞之存活不需要BAFF，而是取決於APRIL。
BCMA表現高度局限於漿細胞。多發性骨髓瘤係由惡性漿 細胞之純系擴增引起。截至2020年，主要市場的新發多發性骨髓瘤(MM)病例之總數將自46,400增加至55,300。新診斷骨髓瘤病例在三個疾病階段之間的分佈類似，其中階段1、2及3各自佔診斷病例的約33%。在美國，每年有約20,500人被診斷出多發性骨髓瘤，且每年將近11,000名MM患者死亡。儘管療法方面存在進步，但多發性骨髓瘤仍為一種不可治癒的疾病，參見Jemal A等人CA Cancer J Clin.2008；58：71-96；Kyle RA等人Mayo Clin Proc.2003；778：21-33；Bergsagel DE等人Blood.1999,94：1174-1182。
圖1顯示人類BCMA(SEQ ID NO：285)及食蟹獼猴(Macaca fascicularis)BCMA(SEQ ID NO：286)之胺基酸序列。
圖2為抗體藥物結合物之一個實施例之顯示示範性連接子及毒素之結構的示意圖。
圖3顯示BCMA mRNA在>99%的多發性骨髓瘤患者樣品上表現。
圖4A及4B為兩個階段之單株抗體產生、篩檢及表徵之示意圖。
圖5A-C為兩個階段之單株抗體產生、篩檢及表徵之資料表。
圖6顯示2A1及1E1 mAb與骨髓瘤細胞株H929之結合。
圖7顯示各種骨髓瘤及B細胞株上2A1 mAb結合之BCMA。
圖8為2A1及1E1抗體之ADCC活性之圖(2A1之EC50為11ng/ml且1E1之EC50為76ng/ml)。
圖9顯示2A1抗體在結合H929細胞上之BCMA之後容易地內化。
圖10為藉由質譜分析之各種2A1-MCC-DM1 ADC。
圖11描繪與不同連接子及美登素分子結合且分析了殺傷骨髓瘤細胞之能力的兩種不同抗體(2A1及1E)。
圖12A-F顯示相對於多種多發性骨髓瘤細胞株測試2A1-MCC-DM1 ADC，該等細胞株包括H929、U266、MMIR、MMIS、EW36 B細胞淋巴 瘤細胞株及RAMOS伯基特氏淋巴瘤細胞株。
圖13圖解說明暴露於游離DM1之各種細胞株實際上由游離DM1所殺傷。
圖14A及14B顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質之Tm。
圖15為顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質與H919細胞之結合的圖。
圖16A及16B顯示一些2A1突變蛋白質抗體相對於親本2A1(2A1WT)保留了類似的與BCMA之結合性，而2A1協變3、8、9及11-19抗體與BCMA之結合降低。
圖17顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質之比較ADCC活性。
圖18A及18B顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質之比較ADCC活性。
圖19A及19B顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質之比較ADCC活性。
圖20為顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質之比較表現效價之直方圖。
圖21A及21B顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質之比較結合活性。
圖22A及22B顯示各種2A1 mAb協變突變蛋白質之比較ADCC活性。
圖23顯示來自第二階段之抗huBCMA抗體能夠結合食蟹獼猴BCMA。
圖24顯示一些來自第二階段之抗huBCMA抗體能夠結合H929多發性骨髓瘤細胞株上之huBCMA。
圖25A及25B顯示由29C12.1、29G5.1、32B5.1、33C7.1、35D2.1、37B2.1及40D7.1抗體製得之ADC選擇性殺傷huBCMA表現性目標細胞。
圖26顯示各種候選抗體(包括來自第二階段之協變突變蛋白質)間與H929細胞上之huBCMA之結合的比較。
圖27說明各種ADC對H929細胞之相對殺傷。
圖28顯示來自第二階段之大多數協變突變蛋白質抗體保留結合食蟹獼猴BCMA之能力。
圖29圖解描繪BCMA ADC可抑制異種移植物皮下腫瘤模型的H929骨髓瘤細胞生長。用2A1-MCC-DM1治療顯示在200ug DM1/kg高劑量(10mg Ab/kg)下存在穩固的腫瘤生長抑制，且在67ug DM1/kg中等劑量(3mg Ab/kg)下存在中度腫瘤生長抑制。
圖30顯示2A1CV5-MCC-DM1、32B5-MCC-DM1及29C12-MCC-DM1 ADC能夠靶向且殺傷BCMA表現性骨髓瘤細胞(H929)。
圖31描繪2A1CV5及2A1CV5-MCC-DM1內化至H929細胞中之量及速率。
圖32顯示在H929嗜骨性異種移植物模型中，在用2A1-MCC-DM1或2A1CV5-MCC-DM1單次治療之後觀測到完全腫瘤消退。
圖33圖解說明圖2A1CV5-MCC-DM1能夠在U266人類骨髓瘤嗜骨性異種移植物模型中介導顯著腫瘤消退。
圖34A及34B顯示實例13之分析方案及閘控方法。
圖35說明2A1抗體及其突變蛋白質能夠結合幾乎所有多發性骨髓瘤患者測試樣品上之BCMA。
圖36顯示BCMA抗體(2A1CV4-經pHrodo標記)在所有29個多發性骨髓瘤患者樣品中有效內化，從而說明2A1抗體及其突變蛋白質能夠結合BCMA且在所有多發性骨髓瘤患者測試樣品上有效內化。
圖37為顯示2A1CV5-MCC-DM1傳遞DM1至原發性骨髓瘤骨髓單核腫瘤細胞(BMMC)樣品及MM1R骨髓瘤細胞株中的直方圖。
圖38顯示κ輕鏈之產生與H929腫瘤尺寸相關。
圖39顯示在來自H929異種移植物之血清中而非在來自用2A1CV5-MCC-DM1治療之小鼠之血清中偵測到κ輕鏈。
圖40顯示多發性骨髓瘤患者BMMC樣品中之BCMA表現似乎並不基於治療史而改變。
圖41A及41B為具有最佳性質之協變突變蛋白質之重可變域及輕可變域的序列比對。
圖42A及42B描繪對親本抗體可變輕域及重域序列之分枝系分析，其說明在2A1抗體與29C12、32B5及來自第二階段之其他抗體之間存在差異。
圖43A-F描繪生物感測器資料，其顯示Ab-1特異性結合人類BCMA之平衡解離速率常數(Kd)為約155pM，且僅以平衡解離速率常數(Kd)>10nM與大鼠BCMA最低限度地相互作用(即不特異性結合)。Ab-2及Ab-3結合人類BCMA之平衡解離速率常數(Kd)分別為約1.11nM及750pM。Ab-2及Ab-3特異性結合大鼠BCMA，平衡解離速率常數(Kd)分別為約2.35nM及 2.07nM。
圖44顯示人類BCMA之細胞外域之胺基酸2-51：SEQ ID NO：352；食蟹獼猴BCMA之細胞外域之胺基酸2-51：SEQ ID NO：353；及大鼠BCMA之細胞外域之胺基酸2-49：SEQ ID NO：351之序列比對。
圖45提供來自具有SEQ ID NO：350之rhuBCMA融合蛋白(6×His：：Sumo：：huBCMA(aa 5-51)：：GGS：：G3：：Avi)的人類BCMA之細胞外域之胺基端的三個逐漸變小片段之序列(SEQ ID NO：354、SEQ ID NO：355及SEQ ID NO：356)。
圖46顯示SEQ ID NO：350及人類BCMA之細胞外域之胺基端的三個逐漸變小片段之尺寸排阻層析結果(尺寸估計值以道爾頓計)(峰A：SEQ ID NO：354，峰B：SEQ ID NO：355，及峰C：SEQ ID NO：356)。
圖47A-D為顯示Ab-1結合人類BCMA之各種片段(亦即SEQ ID NO：350、354、355及356)的層析圖。圖47A顯示SEQ ID NO：350之滯留時間。圖47B顯示Ab-1之滯留時間。圖47C顯示相對於3ug BCMA(SEQ ID NO：350)過量之Ab-1(60ug)不產生游離BCMA，包括剪短片段(亦即SEQ ID NO：354-356)，且兩個峰代表結合於各種BCMA片段之Ab-1(滯留時間2.748)及未結合之過量Ab-1(滯留時間3.078)。圖47D顯示在BCMA過量(60ug SEQ ID NO：350)之情況下Ab-1抗體(30ug)結合BCMA，但亦存在少量BCMA片段(SEQ ID NO：354-356)。
圖48A-C為顯示類似於在圖47A-D中對2A1 mAb所觀察的結果，29C12mAb結合所有形式之人類BCMA的層析圖。
圖49A顯示在Sumo與Sumo-BCMA之間存在可偵測尺寸差異且圖49B顯示無關抗體對照(抗SA)不結合Sumo-BCMA。圖49C顯示2A1及29C12不結合Sumo。
圖50A提供顯示BCMA之由2A1抗體結合之截短形式(峰A、B、D及E)的層析圖。圖50B顯示BCMA之由29C12抗體結合之截短形式(峰A、B、C及E)。
圖51為huBCMA在huBCMA與Ab-1 Fab之複合物中之總體結構排列的圖解表示(Ab-1 Fab未顯示)。二硫鍵用棍表示法顯示。
本文所用之章節標題僅出於組織目的且不應解釋為限制所述標的物。實例及申請專利範圍為發明詳述的一部分。超出當前呈現之申請專利範圍之其他申請專利範圍可由本描述引出。
對於重組DNA、寡核苷酸合成、組織培養及轉型、蛋白質純化等而言可使用標準技術。可根據製造商說明書或如此項技術中通常所達成或如本文所述來執行酶促反應及純化技術。以下程序及技術可通常根據此項技術中熟知及如本說明書整篇引用及論述之各種一般性及更特定參考文獻中所述之習用方法來執行。參見例如Sambrook等人,2001,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,第3版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.，其出於任何目的以引用的方式併入本文中。除非提供明確定義，否則結合本文所述之分析化學、有機化學以及醫學及醫藥化學使用之命名法及本文所述之分析化學、有機化學以及醫學及醫藥化學之實驗室程序及技術為此項技術中熟知且通常使用者。對於化學合成、化學分析、醫藥製劑、調配及傳遞以及治療患者而言可使用標準技術。
本發明之態樣提供特異性結合BCMA且抑制由諸如但不限於BAFF及APRIL之BCMA配體介導之BCMA活化的抗原結合蛋白，如本文更充分描述。本發明之態樣包括特異性結合人類BCMA之抗體藥物結合物(ADC)。在結合於在細胞表面上表現之BCMA時，BCMA抗體促進BCMA/ADC複合物內化至內體區室中且最終將ADC傳遞至溶酶體。內化之ADC經由結合於抗體之藥物特異性殺傷細胞。本發明之態樣包括ADC治療B細胞相關癌症，包括多發性骨髓瘤之用途，如本文更充分描述。
BCMA
如本文所用之「BCMA」意謂結合BAFF及/或APRIL之細胞表面受體(或包含BCMA之受體複合物)。人類BCMA(huBCMA)之胺基酸序列提供於NCBI寄存編號Q02223(GI：313104029)中且顯示於圖1中(SEQ ID NO：285)。BCMA蛋白質亦可包括變異體。BCMA蛋白質亦可包括不具有全部或一部分跨膜及/或細胞內域之片段，諸如細胞外域，以及細胞外域之片段。細胞外域之實例包括SEQ ID NO：285之胺基酸1-50至54或 8-48。huBCMA之可溶性形式包括細胞外域或細胞外域之保留結合BAFF及/或APRIL之能力的片段。術語「BCMA」亦包括BCMA胺基酸序列之轉譯後修飾。轉譯後修飾包括但不限於N-連接型糖基化及O-連接型糖基化。本發明之態樣係關於與食蟹獼猴(cynomolgus)BCMA交叉反應之抗體。
BCMA抗原結合蛋白
本發明提供特異性結合BCMA之抗原結合蛋白。實施例包括結合huBCMA之單株抗體。實施例包括包含本文所述之一或多種單株抗體之一部分或全部多肽序列的多肽。BCMA之正常組織表現高度局限於B細胞譜系，在B細胞譜系中，其主要表現於扁桃腺/淋巴結之次級卵泡/生髮中心中之漿母細胞及分化漿細胞上。BCMA在惡性漿細胞中之表現量相對高於在正常漿細胞上觀測到之含量，特別是在多發性骨髓瘤、鬱積型骨髓瘤(smoldering myeloma)及原因不明性單株γ球蛋白症(MGUS)漿細胞中。BCMA為尤其合乎治療表現BCMA之B細胞相關惡性疾病需要之目標，因為其表現高度局限於正常及惡性漿細胞，且因此應具有最小非目標組織毒性。此外，多發性骨髓瘤患者樣品之BCMA表現在面對正在進行或先前之治療方案時仍然持續，如圖40中所示。
產生了結合天然huBCMA，不與huBAFF-R或huTACI交叉反應，且快速內化至BCMA表現性骨髓瘤細胞株及來自多發性骨髓瘤患者之初級分離株中的稀有高特異性人類抗huBCMA Xenomouse®抗體。
實施例包括結合huBCMA且亦與食蟹獼猴BCMA(圖1中之SEQ ID NO：286)交叉反應之抗體。此為本文提供之抗體之獨特且有利之特徵。結合食蟹獼猴BCMA之抗huBCMA抗體及由其製備之ADC(參見例如實例2)可用於食蟹獼猴動物模型中以測試毒性、藥物動力學及其他藥理學特徵。
本文所述抗體之另一獨特且有利之特徵為關於其他相關受體對huBCMA具有特異性。特定選擇以高親和力結合huBCMA之本文所述抗體的實施例且篩檢其中不特異性結合huTACI及huBAFF-R者(參見例如實例2)。對huBCMA之特異性及缺乏與huTACI及huBAFF-R之交叉反應性對本文所述之抗體提供靶向漿B細胞及治療多發性骨髓瘤及其他B細胞 相關癌症之獨特優勢。
本文所述實施例之另一獨特且有利之特徵為抗體藉由抑制其配體APRIL之生物活性來抑制huBCMA活化。選擇性篩檢具有此重要生物屬性之本文提供之實施例(參見例如實例2)。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為選擇具有極高度ADCC活性之抗體(參見例如實例4及8)。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為抗體對huBCMA不具有促效性且因此在結合時將不會活化huBCMA。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為在結合於細胞表面上表現之huBCMA時能夠內化。由於huBCMA之細胞外域極小(約50個胺基酸)，所以此並非微不足道且當然並非可預測。尤其重要的是在多發性骨髓瘤初級分離株以及已加工且冷凍之多發性骨髓瘤樣品中以及在多發性骨髓瘤細胞株中，能夠結合且經由huBCMA介導之胞吞作用內化(參見例如實例3、5、7、8、10、11、13及14)。
本文提供所選實施例之另一獨特且有利之特徵為經由定點突變誘發，抗體具有憑經驗工程改造之增強之穩定性及可製造性(參見例如實例8)。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為能夠成功結合於連接子及藥物(亦稱毒素)且仍保留以高親和力結合huBCMA、內化及成功殺傷細胞之能力(參見例如實例6、7、及9-11)。不可預測且高度合乎需要的是Ab-1抗體之結合形式(亦即Ab-1 ADC，在本文中亦稱為2A1CV5-MCC-DM1或2A1CV5 ADC)以如此高之親和力進行結合。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為在結合骨髓瘤細胞表面上之huBCMA時，例如Ab-1 ADC與未結合抗體類似地內化且在H929腫瘤細胞生長抑制分析中具有約78pM(抗體濃度)之IC50(參見例如實例11)。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為平均BCMA表現密度低至每個細胞3,000個位點之多發性骨髓瘤細胞株可由Ab-1 ADC及其他抗huBCMA ADC殺傷(參見例如實例10)。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為在多發性骨髓瘤患者樣品之初級分離株中Ab-1 ADC有效內化(參見例如實例13及14)。
本文提供實施例之另一獨特且有利之特徵為在三個活體內骨髓瘤腫瘤異種移植物模型中，在全部三個模型中存在抗huBCMA ADC介導之抗腫瘤活性且在3個模型中之2個模型中存在腫瘤消退。在建立之嗜骨性多發性骨髓瘤小鼠模型中，在投與單次靜脈內劑量之Ab-1 ADC之後，觀測到骨中腫瘤完全消退而無可偵測腫瘤負荷(參見例如實例9及12)。
因此，本文提供之抗體已經選擇性篩檢，憑經驗工程改造且化學改變以使得使其區別於其他抗體之許多獨特、不可預測及驚人之屬性最大化。
抗原結合蛋白之實施例包含特異性結合huBCMA之肽及/或多肽(其視情況包括轉譯後修飾)。抗原結合蛋白之實施例包含如本文以不同方式定義之特異性結合huBCMA之抗體及其片段。本發明之態樣包括特異性結合huBCMA且抑制BAFF及/或APRIL結合及/或活化huBCMA或包含huBCMA之多聚或雜聚受體複合物之抗體。
本發明之抗原結合蛋白特異性結合人類BCMA。如本文所用之「特異性結合」意謂抗原結合蛋白優先於結合其他蛋白質結合人類BCMA。在一些實施例中，「特異性結合」意謂BCMA抗原結合蛋白對BCMA之親和力高於對其他蛋白質之親和力。舉例而言，平衡解離常數為<10-7至10-11M、或<10-8至<10-10M、或<10-9至<10-10M。用於確定抗原結合蛋白是否特異性結合huBCMA之分析之實例可見於實例2及16中。
應瞭解當提及本文所述之BCMA抗體之各種實施例時，亦涵蓋其BCMA結合片段。BCMA結合片段包含本文所述之保留特異性結合人類BCMA之能力的任何抗體片段或域。該等BCMA結合片段可處於本文所述之任何骨架中。該等BCMA結合片段亦能夠抑制BCMA之活化，如本說明書整篇所述。
本發明之態樣包括與Ab-1、Ab-2及/或Ab-3抗體結合huBCMA上之相同或類似抗原決定基之抗體。抗體抗原決定基通常定義為抗原內可結合於抗體之可變區之三維結構。(Greenbaum等人,J Molec Recognition,2007,20：75-82)。「相同或類似抗原決定基」定義為藉由x射線結晶學鑒別之抗原決定基，如實例17中所示及本文所述。
本發明之態樣包括競爭性抑制Ab-1、Ab-2及/或Ab-3抗體與huBCMA之結合之經分離單株抗體。本發明之態樣包括競爭性抑制Ab-1、Ab-2及/或Ab-3抗體與huBCMA之結合之經分離人類單株抗體。本發明之態樣包括競爭性抑制Ab-1、Ab-2及/或Ab-3抗體與huBCMA之結合之經分離人類單株IgG抗體。本發明之態樣包括競爭性抑制如本文以不同方式定義之Ab-1與huBCMA之結合之經分離單株抗體。本發明之態樣包括競爭性抑制如本文以不同方式定義之Ab-1與huBCMA之結合之經分離人類單株抗體。本發明之態樣包括競爭性抑制如本文以不同方式定義之Ab-1與huBCMA之結合之經分離人類單株IgG抗體。當在細胞基或重組蛋白質基ELISA分析中，競爭性抗體(亦即非Ab-1)相對於Ab-1處於等莫耳濃度或兩倍莫耳濃度過量下時，若抗體使Ab-1與huBCMA之結合降低90%，則其競爭性抑制Ab-1之結合。
實例16提供Ab-1特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA及具有SEQ ID NO：286之食蟹獼猴BCMA，但不特異性結合具有SEQ ID NO：351之大鼠BCMA的證據。在此差異性結合之情形下及在描述以下實施例時，片語「不特異性結合」意謂在如實例16中所述之分析中或在此項技術中已知之類似分析中，抗體結合目標蛋白質之平衡解離速率常數(Kd)>10nM。圖44顯示人類BCMA之細胞外域之胺基酸2-51：SEQ ID NO：352；食蟹獼猴BCMA之細胞外域之胺基酸2-51：SEQ ID NO：353；及大鼠BCMA之細胞外域之胺基酸2-49：SEQ ID NO：351之序列比對。
鑒於物種之間的有限序列多樣性，Ab-1之差異性結合表明Ab-1結合人類BCMA上之包含SEQ ID NO：285之胺基酸1-20，且更特定言之包含SEQ ID NO：285之胺基酸1-11的中和決定子。本文提供之實驗證據顯示Ab-1特異性結合人類BCMA之細胞外域SEQ ID NO：352，但不特異性結合大鼠BCMA之細胞外域SEQ ID NO：351。因此，本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：285及SEQ ID NO：286，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離單株抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離單株抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：285及SEQ ID NO：286，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離人類單株抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離人類單株抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：285及SEQ ID NO：286，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離人類單株IgG抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離人類單株IgG抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：285及SEQ ID NO：286，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352，但不特異性結合SEQ ID NO：351之經分離人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd在1nM與.01nM之間，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離單株抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd在1nM與.01nM之間，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離人類單株抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd在1nM與.01nM之間，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離人類單株IgG抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd在1nM與.01nM之間，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離人類單株IgG1抗體。可使用實例16中所述之分析或類似分析測定Kd值。
本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離單株抗體。「約0.16nM」意謂0.16nM±0.1nM。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離人類單株抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離人類單株IgG抗體。本發明之態樣包括特異性結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的經分離人類單株IgG1抗體。可使用實例16中所述之分析或類似分析測定Kd值。
實例16亦提供Ab-1結合人類BCMA之細胞外域之胺基端之逐漸變小片段(亦即SEQ ID NO：350、354、357、355及356，如圖45-47A-D及圖50A中所示)的證據。SEQ ID NO：356為所有BCMA片段所共有，且因此顯示Ab-1結合人類BCMA之胺基端。此證據連同Ab-1差異性結合BCMA之不同直系同源物一起顯示Ab-1結合人類BCMA上之包含SEQ ID NO：285之胺基酸1-20之中和決定子，或更特定言之包含SEQ ID NO：285之1-11之中和決定子。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離單株抗體。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離單株抗體。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株抗體。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株抗體。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體。以上提及之實施例無需結合1至20胺基酸域或1至11胺基酸域中之每個胺基酸。
本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至 11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。
本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。 本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之 Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測。
本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現 之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。
本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離單株抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離單株抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。
本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。
本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例 11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。本發明之較佳實施例包括結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括1及11)之中和決定子的經分離人類單株IgG1抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中在如實例11中所述之FACS分析中，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50為約1.2nM。
本發明之態樣包括但不限於以下實施例，諸如實施例1：一種選自由以下組成之群之經分離抗體或其BCMA結合片段：包含Ab-1之六個CDR之抗體；包含Ab-2之六個CDR之抗體；包含Ab-3之六個CDR之抗體；包含Ab-4之六個CDR之抗體；包含Ab-5之六個CDR之抗體；包含Ab-6之六個CDR之抗體；包含Ab-7之六個CDR之抗體；包含Ab-8之六個CDR之抗體；包含Ab-9之六個CDR之抗體；包含Ab-10之六個CDR之抗體；包含Ab-11之六個CDR之抗體；包含Ab-12之六個CDR之抗體；包含Ab-13之六個CDR之抗體；包含Ab-14之六個CDR之抗體；包含Ab-15之六個CDR之抗體；包含Ab-16之六個CDR之抗體；包含Ab-17之六個CDR之抗體；包含Ab-18之六個CDR之抗體；包含Ab-19之六個CDR之抗體；包含Ab-20之六個CDR之抗體；包含Ab-21之六個CDR之抗體；包含Ab-22之六個CDR之抗體；包含Ab-23之六個CDR之抗體；包含Ab-24之六個CDR之抗體；包含Ab-25之六個CDR之抗體；包含Ab-26之六個CDR之抗體；包含Ab-27之六個CDR之抗體；包含Ab-28之六個CDR之抗體；包含Ab-29之六個CDR之抗體；包含Ab-30之六個CDR之抗體；包含Ab-31之六個CDR之抗體；包含Ab-32之六個CDR之抗體；包含Ab-33之六個CDR之抗體；包含Ab-34之六個CDR之抗體；包含Ab-35之六個CDR之抗體；包含Ab-36之六個CDR之抗體；包含Ab-37之六個CDR之抗體；及包含Ab-38之六個CDR之抗體。實施例2：如實施例1之抗體或片段，其中該抗體或片段係選自由以下組成之群：包含Ab-1之六個CDR之抗體；包含Ab-2之六個CDR之抗體；及包含Ab-3之六個CDR之抗體。實施例3：如實施例1或2之抗體或片段，其中該抗體或片段為包含 Ab-1之六個CDR之抗體。實施例4：如實施例1-3之抗體或片段，其中Ab-1之該等CDR包括包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3；其中Ab-2之該等CDR包括包含SEQ ID NO：10之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：11之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：12之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：112之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：113之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：114之Vl-CDR3；其中Ab-3之該等CDR包括包含SEQ ID NO：16之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：17之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：18之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：118之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：119之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：120之Vl-CDR3；其中Ab-4之該等CDR包括包含SEQ ID NO：22之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：23之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：24之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：124之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：125之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：126之Vl-CDR3；其中Ab-5之該等CDR包括包含SEQ ID NO：28之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：29之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：30之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：130之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：131之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：132之Vl-CDR3；其中Ab-6之該等CDR包括包含SEQ ID NO：34之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：35之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：36之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：136之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：137之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：138之Vl-CDR3；其中Ab-7之該等CDR包括包含SEQ ID NO：40之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：41之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：42之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：142之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：143之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：144之Vl-CDR3；其中Ab-8之該等CDR包括包含SEQ ID NO：46之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：47之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：48之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：148之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：149之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：150之Vl-CDR3；其中Ab-9之該等CDR包括包含SEQ ID NO：52之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：53之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：54之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：154之 Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：155之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：156之Vl-CDR3；其中Ab-10之該等CDR包括包含SEQ ID NO：58之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：59之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：60之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：160之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：161之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：162之Vl-CDR3；其中Ab-11之該等CDR包括包含SEQ ID NO：64之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：65之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：66之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：166之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：167之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：168之Vl-CDR3；其中Ab-12之該等CDR包括包含SEQ ID NO：70之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：71之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：72之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：172之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：173之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：174之Vl-CDR3；其中Ab-13之該等CDR包括包含SEQ ID NO：76之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：77之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：78之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：178之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：179之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：180之Vl-CDR3；其中Ab-14之該等CDR包括包含SEQ ID NO：82之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：83之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：84之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：184之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：185之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：186之Vl-CDR3；其中Ab-15之該等CDR包括包含SEQ ID NO：88之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：89之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：90之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：190之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：191之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：192之Vl-CDR3；其中Ab-16之該等CDR包括包含SEQ ID NO：94之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：95之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：96之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：196之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：197之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：198之Vl-CDR3；且其中Ab-17之該等CDR包括包含SEQ ID NO：100之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：101之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：102之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：202之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：203之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：204之Vl-CDR3。實施例5：如實施例1-4之抗體或片段，其中Ab-1之該等CDR包括包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包 含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3；其中Ab-2之該等CDR包括包含SEQ ID NO：10之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：11之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：12之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：112之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：113之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：114之Vl-CDR3；且其中Ab-3之該等CDR包括包含SEQ ID NO：16之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：17之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：18之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：118之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：119之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：120之Vl-CDR3。實施例6：如實施例1-5之抗體或片段，其中Ab-1之該等CDR包括包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3。實施例7：如實施例1-6之抗體或片段，其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：240之Ab-1Vl域及包含SEQ ID NO：206之Ab-1Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：242之Ab-2Vl域及包含SEQ ID NO：208之Ab-2Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：244之Ab-3Vl域及包含SEQ ID NO：210之Ab-3Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：246之Ab-4Vl域及包含SEQ ID NO：212之Ab-4Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：248之Ab-5Vl域及包含SEQ ID NO：214之Ab-5Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：250之Ab-6Vl域及包含SEQ ID NO：216之Ab-6Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：252之Ab-7Vl域及包含SEQ ID NO：218之Ab-7Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：254之Ab-8Vl域及包含SEQ ID NO：220之Ab-8Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：256之Ab-9Vl域及包含SEQ ID NO：222之Ab-9Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：258之Ab-10Vl域及包含SEQ ID NO：224之Ab-10Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：260之Ab-11Vl域及包含SEQ ID NO：226之Ab-11Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：262之Ab-12Vl及包含SEQ ID NO：228之Ab-12Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：264之Ab-13Vl域及包含SEQ ID NO：230之Ab-13Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：266之Ab-14Vl域及包含SEQ ID NO：232之Ab-14Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：268之Ab-15Vl域及包含SEQ ID NO：234之Ab-15Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：270之Ab-16Vl域及包含SEQ ID NO：236之Ab-16Vh域；且其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：272之Ab-17Vl域及包含SEQ ID NO：238之Ab-17Vh域。實施例8：如實施例1-7之抗體或片段，其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：240之Ab-1Vl域及包含SEQ ID NO：206之Ab-1Vh域；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：242之Ab-2Vl域及包含SEQ ID NO：208之Ab-2Vh域；且其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：244之Ab-3Vl域及包含SEQ ID NO：210之Ab-3Vh域。實施例9：如實施例1-8之抗體或片段，其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：240之Ab-1Vl域及包含SEQ ID NO：206之Ab-1Vh域。實施例10：如實施例1-9之抗體或片段，其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：282之Ab-2輕鏈及包含SEQ ID NO：276之Ab-2重鏈；其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：284之Ab-3輕鏈及包含SEQ ID NO：278之Ab-3重鏈；其中該抗體或片段包括兩個包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈；其中該抗體或片段包括兩個包含SEQ ID NO：282之Ab-2輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：276之Ab-2重鏈；且其中該抗體或片段包括兩個包含SEQ ID NO：284之Ab-3輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：278之Ab-3重鏈。實施例11：如實施例1-10之抗體或片段，其中該抗體或片段包括包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈；且其中該抗體或片段包括兩個包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈。實施例12：如實施例1-11之抗體或片段，其中該抗體或片段包括兩個包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈。實施例13：如實施例1-12之抗體或片段，其中該抗體或片段為人類抗體或片段。實施例14：如實施例1-13之抗體或片段，其中該抗體或片段為人類單株抗體。實施例15：如實施例1-12之抗 體或片段，其中該抗體或片段為嵌合單株抗體。實施例16：如實施例1-15之抗體或片段，其中該抗體或片段特異性結合人類BCMA。實施例17：如實施例1-16之抗體或片段，其中該抗體或片段特異性結合人類BCMA且與食蟹獼猴BCMA交叉反應。實施例18：如實施例1-17之抗體或片段，其中該抗體或片段不特異性結合TACI或BAFF-R。實施例19：如實施例1-18之抗體或片段，其中該抗體或片段結合人類骨髓瘤細胞表面上之BCMA。 實施例20：如實施例1-19之抗體或片段，其中該抗體或片段結合人類多發性骨髓瘤細胞表面上之BCMA。實施例21：如實施例1-20之抗體或片段，其中該抗體或片段結合人類細胞表面上之BCMA且由該等細胞內化。實施例22：如實施例1-21之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含連接子。 實施例23：如實施例1-22之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含藥物或化學治療劑。實施例24：如實施例1-23之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含選自由以下組成之群之連接子：6-順丁烯二醯亞胺基己醯基、順丁烯二醯亞胺基丙醯基、纈胺酸-瓜胺酸、丙胺酸-***酸、對胺基苯甲氧基羰基、Mal-dPEG4-NHS、4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-丁二醯亞胺酯(「SPP」)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)及(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SIAB」)。實施例25：如實施例1-24之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含連接子，其中該連接子為4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)。實施例26：如實施例1-25之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含選自由以下組成之群之藥物或化學治療劑：噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(cyclophosphamide)(CYTOXAN.TM.)；烷基磺酸酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及保釋芬(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)，諸如本多帕(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、米特多帕(meturedopa)及優多帕(uredopa)；伸乙亞胺(ethylenimine)及甲基蜜胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphaoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚 乙醯(acetogenin)(尤其布拉它辛(bullatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包括合成類似物拓撲替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；凱利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素(cryptophycin)(特定言之念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；軟珊瑚醇(eleutherobin)；潘卡他汀(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯瑪法辛(chlomaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽固醇(phenesterine)、松龍苯芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲(nitrosurea)，諸如卡莫司汀(carmustine)、吡葡亞硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，尤其卡奇黴素γ1及卡奇黴素θI，參見例如Angew Chem.Intl.Ed.Engl.33：183-186(1994)；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、重氮絲胺酸(azaserine)、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)；色黴素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(doxorubicin)(包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯基)-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(nitomycin)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素 (puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺蝶呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、甲胺蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄激素(androgen)，諸如二***(calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸(folic acid)補充劑，諸如弗羅林酸(frolinic acid)；乙醯葡醛酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地佛法明(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵(gallium nitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；洛尼代寧(lonidamine)；美登木素(maytansinoid)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫匹丹莫(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他汀(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；足葉草酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK.RTM.；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(trichothecene)(尤其T-2毒素、維拉庫林A(verracurin A)、桿孢菌素A(roridin A)及蛇形菌素 (anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；格塞圖辛(gacytosine)；***糖苷(arabinoside)(「Ara-C」)；環磷醯胺(cyclophosphamide)；噻替派(thiotepa)；紫杉烷(taxoid)，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL.TM.，Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)及多西他賽(doxetaxel)(TAXOTERE.RTM.，Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰基嘌呤(mercaptopurine)；甲胺蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春花鹼(vinblastine)；鉑；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；絲裂黴素C；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；諾維本(navelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道諾黴素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；希羅達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸(retinoic acid)；卡培他濱(capecitabine)；他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、克昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene)(法樂通(Fareston))；及抗雄激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)、秋水仙鹼(Colchicine)位點結合劑(庫瑞辛(Curacin))、考布他汀(Combretastatin)(AVE806、考布他汀A-4前藥(CA4P)、Oxi-4503)、念珠藻素(Cryptophycin)(LY355703)、盤皮海綿內酯(Discodermolide)、多拉司他汀(Dolastatin)及類似物(奧莉斯汀(Auristatin)PHE、多拉司他汀10、ILX-651、西普司他汀(Symplostatin)1、TZT-1027)、埃博黴素(Epothilone)(BMS-247550、BMS-310705、EP0906、KOS-862、ZK-EPO)、軟珊瑚醇(Eleutherobin)、FR182877、大田軟海綿素(Halichondrin)B(E7389)、月苄三甲氯銨(Halimide)(NPI-2352及NPI-2358)、哈米特林(Hemiasterlin)(HTI-286)、勞瑪立得(Laulimalide)、美登木素(Maytansinoid)(「DM1」、「DM3」或「DM4」)(比伐單抗莫坦辛(Bivatuzumab mertansine)、huN901-DM1/BB-10901TAP、MLN591DM1、My9-6-DM1、曲妥珠單抗(Trastuzumab)-DM1)、PC-SPES、普魯賽德(Peloruside)A、白藜蘆醇(Resveratrol)、S-烯丙基巰基半胱胺酸(SAMC)、海綿抑制素(Spongistatin)、維魯米德(Vitilevuamide)、分子運動驅動蛋白(Molecular Motor-Kinesin)(SB-715992)、改造之秋水仙鹼位點結合劑(A-289099、A-293620/A-318315、ABT-751/E7010、D-24851/D-64131、ZD6126)、其他新穎紡錘體毒物(2-甲氧***(Methoxyestradiol)(2-ME2)、苯并咪唑胺基甲酸酯(ANG 600系列、甲苯咪唑(Mebendazole))、CP248/CP461、HMN-214、R440、SDX-103、T67/T607)。實施例27：如實施例1-26之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含選自由以下組成之群之藥物或化學治療劑：美登木素(「DM1」、「DM3」或「DM4」)。實施例28：如實施例1-27之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含DM1。實施例29：如實施例1-28之抗體或片段，其中該抗體或片段的藥物與抗體比率在1與10之間。實施例30：如實施例1-29之抗體或片段，其中該抗體或片段的藥物與抗體比率在2與5之間。實施例31：一種經分離多肽或其BCMA結合片段，其選自由以下組成之群：包含Ab-1之六個CDR之多肽；包含Ab-2之六個CDR之多肽；包含Ab-3之六個CDR之多肽；包含Ab-4之六個CDR之多肽；包含Ab-5之六個CDR之多肽；包含Ab-6之六個CDR之多肽；包含Ab-7之六個CDR之多肽；包含Ab-8之六個CDR之多肽；包含Ab-9之六個CDR之多肽；包含Ab-10之六個CDR之多肽；包含Ab-11之六個CDR之多肽；包含Ab-12之六個CDR之多肽；包含Ab-13之六個CDR之多肽；包含Ab-14之六個CDR之多肽；包含Ab-15之六個CDR之多肽；包含Ab-16之六個CDR之多肽；包含Ab-17之六個CDR之多肽；包含Ab-18之六個CDR之多肽；包含Ab-19之六個CDR之多肽；包含Ab-20之六個CDR之多肽；包含Ab-21之六個CDR之多肽；包含Ab-22之六個CDR之多肽；包含Ab-23之六個CDR之多肽；包含Ab-24之六個CDR之多肽；包含Ab-25之六個CDR之多肽；包含Ab-26之六個CDR之多肽；包含Ab-27之六個CDR之多肽；包含Ab-28之六個CDR之多肽；包含Ab-29之六個CDR之多肽；包含Ab-30之六個CDR之多肽；包含Ab-31之六個CDR之多肽；包含Ab-32 之六個CDR之多肽；包含Ab-33之六個CDR之多肽；包含Ab-34之六個CDR之多肽；包含Ab-35之六個CDR之多肽；包含Ab-36之六個CDR之多肽；包含Ab-37之六個CDR之多肽；及包含Ab-38之六個CDR之多肽。 實施例32：如實施例31之多肽或片段，其中該多肽或片段係選自由以下組成之群：包含Ab-1之六個CDR之多肽；包含Ab-2之六個CDR之多肽；及包含Ab-3之六個CDR之多肽。實施例33：如實施例31-32之多肽或片段，其中該多肽或片段為包含Ab-1之六個CDR之多肽。實施例34：如實施例31-33之多肽或片段，其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：10之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：11之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：12之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：112之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：113之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：114之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：16之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：17之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：18之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：118之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：119之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：120之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：22之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：23之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：24之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：124之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：125之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：126之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：28之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：29之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：30之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：130之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：131之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：132之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：34之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：35之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：36之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：136之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：137之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：138之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：40之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：41之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：42之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：142之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：143之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：144之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：46之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：47之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：48之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：148之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：149之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：150之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：52之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：53之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：54之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：154之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：155之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：156之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：58之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：59之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：60之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：160之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：161之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：162之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：64之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：65之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：66之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：166之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：167之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：168之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：70之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：71之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：72之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：172之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：173之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：174之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：76之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：77之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：78之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：178之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：179之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：180之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：82之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：83之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：84之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：184之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：185之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：186之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：88之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：89之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：90之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：190之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：191之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：192之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：94之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：95之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：96之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：196之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：197之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：198之Vl-CDR3；且其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：100之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：101之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：102之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：202之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：203之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：204之Vl-CDR3。實施例35：如實施例31-34之多肽或片段，其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3；其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：10之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：11之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：12之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：112之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：113之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：114之Vl-CDR3；且其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：16之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：17之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：18之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：118之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：119之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：120之Vl-CDR3。實施例36：如實施例31-35之多肽或片段，其中該等CDR包括包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3。實施例37：如實施例31-36之多肽或片段，其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：240之Vl域及包含SEQ ID NO：206之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：242之Vl域及包含SEQ ID NO：208之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：244之Vl域及包含SEQ ID NO：210之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：246之Vl域及包含SEQ ID NO：212之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：248之Vl域及包含SEQ ID NO：214之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：250之Vl域及包含SEQ ID NO：216之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：252之Vl域及包含SEQ ID NO：218之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：254之Vl域及包含SEQ ID NO：220之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：256之Vl域及包含SEQ ID NO：222之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：258之Vl域及包含SEQ ID NO：224之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：260之Vl域及包含SEQ ID NO：226之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：262之Vl及包含SEQ ID NO：228之Vh域；其中該多肽 或片段包括包含SEQ ID NO：264之Vl域及包含SEQ ID NO：230之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：266之Vl域及包含SEQ ID NO：232之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：268之Vl域及包含SEQ ID NO：234之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：270之Vl域及包含SEQ ID NO：236之Vh域；且其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：272之Vl域及包含SEQ ID NO：238之Vh域。實施例38：如實施例31-37之多肽或片段，其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：240之Vl域及包含SEQ ID NO：206之Vh域；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：242之Vl域及包含SEQ ID NO：208之Vh域；且其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：244之Vl域及包含SEQ ID NO：210之Vh域。實施例39：如實施例31-38之多肽或片段，其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：240之Vl域及包含SEQ ID NO：206之Vh域。實施例40：如實施例31-39之多肽或片段，其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：282之Ab-2輕鏈及包含SEQ ID NO：276之Ab-2重鏈；其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：284之Ab-3輕鏈及包含SEQ ID NO：278之Ab-3重鏈；其中該多肽或片段包括兩個包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈；其中該多肽或片段包括兩個包含SEQ ID NO：282之Ab-2輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：276之Ab-2重鏈；且其中該多肽或片段包括兩個包含SEQ ID NO：284之Ab-3輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：278之Ab-3重鏈。實施例41：如實施例31-40之多肽或片段，其中該多肽或片段包括包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈；且其中該多肽或片段包括兩個包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈。實施例42：如實施例31-41之多肽或片段，其中該多肽或片段包括兩個包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及兩個包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈。實施例43：如實施例31-42之多肽或片段，其中該多肽或片段特異性結合人類BCMA。實施例44：如實施例31-43之多肽或片段，其中該多肽或片段特異性結合人類BCMA且與食蟹獼猴BCMA交叉反應。實施例45：如實施例31-44之多肽或片段，其中該多肽或片段 不特異性結合TACI或BAFF-R。實施例46：如實施例31-45之多肽或片段，其中該多肽或片段結合人類骨髓瘤細胞表面上之BCMA。實施例47：如實施例31-46之多肽或片段，其中該多肽或片段結合人類多發性骨髓瘤細胞表面上之BCMA。實施例48：如實施例31-47之多肽或片段，其中該多肽或片段結合人類細胞表面上之BCMA且由該等細胞內化。實施例49：如實施例31-48之多肽或片段，其中該多肽或片段進一步包含連接子。實施例50：如實施例31-49之多肽或片段，其中該多肽或片段進一步包含藥物或化學治療劑。實施例51：如實施例31-50之多肽或片段，其中該多肽或片段進一步包含選自由以下組成之群之連接子：6-順丁烯二醯亞胺基己醯基、順丁烯二醯亞胺基丙醯基、纈胺酸-瓜胺酸、丙胺酸-***酸、對胺基苯甲氧基羰基、Mal-dPEG4-NHS、4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-丁二醯亞胺酯(「SPP」)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)及(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SIAB」)。實施例52：如實施例31-51之多肽或片段，其中該多肽或片段進一步包含連接子，其中該連接子為4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)。實施例53：如實施例31-52之多肽或片段，其中該多肽或片段進一步包含選自由以下組成之群之藥物或化學治療劑：噻替派及環磷醯胺(CYTOXAN.TM.)；烷基磺酸酯，諸如白消安、英丙舒凡及保釋芬；氮丙啶，諸如本多帕、卡巴醌、米特多帕及優多帕；伸乙亞胺及甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；多聚乙醯(尤其布拉它辛及布拉它辛酮)；喜樹鹼(包括合成類似物拓撲替康)；苔蘚抑素；凱利他汀；CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新及比折來新合成類似物)；念珠藻素(特定言之念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌黴素(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；軟珊瑚醇；潘卡他汀；匍枝珊瑚醇；海綿抑制素；氮芥，諸如苯丁酸氮芥、氯瑪法辛、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖、新恩比興、苯芥膽固醇、松龍苯芥、氯乙環磷醯胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，諸如卡莫司汀、吡葡亞硝脲、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡 奇黴素，尤其卡奇黴素γ1及卡奇黴素θI，參見例如Angew Chem.Intl.Ed.Engl.33：183-186(1994)；達內黴素，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素；以及新抑癌素發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素、放線菌素、安麯黴素、重氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C、卡拉比星、洋紅黴素、嗜癌菌素；色黴素、放線菌素D、道諾黴素、地托比星、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯基)-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅黴素、絲裂黴素、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、培洛黴素、波弗黴素、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈脲黴素、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他汀、佐柔比星；抗代謝物，諸如甲胺蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、甲胺蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如環胞苷、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-FU；雄激素，諸如二***、屈他雄酮丙酸鹽、環硫雄醇、美雄烷、睾內酯；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑，諸如弗羅林酸；乙醯葡醛酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；安吖啶；倍曲布西；比生群；依達曲沙；地佛法明；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞；依利醋銨；埃博黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；洛尼代寧；美登木素，諸如美登素及安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹丹莫；二胺硝吖啶；噴司他汀；苯來美特；吡柔比星；足葉草酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK.RTM.；雷佐生；根黴素；西索菲蘭；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(尤其T-2毒素、維拉庫林A、桿孢菌素A及蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；格塞圖辛；***糖苷(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；紫杉烷，例如太平洋紫杉醇(TAXOL.TM.，Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)及多西他賽(TAXOTERE.RTM.，Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春花鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；絲裂黴素C；米托 蒽醌；長春新鹼；長春瑞濱；諾維本；諾安托；替尼泊苷；道諾黴素；胺基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸；卡培他濱；他莫昔芬、雷洛昔芬、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬、LY117018、奧那司酮及托瑞米芬(法樂通)；及抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、秋水仙鹼位點結合劑(庫瑞辛)、考布他汀(AVE806、考布他汀A-4前藥(CA4P)、Oxi-4503)、念珠藻素(LY355703)、盤皮海綿內酯、多拉司他汀及類似物(奧莉斯汀PHE、多拉司他汀10、ILX-651、西普司他汀1、TZT-1027)、埃博黴素(BMS-247550、BMS-310705、EP0906、KOS-862、ZK-EPO)、軟珊瑚醇、FR182877、大田軟海綿素B(E7389)、月苄三甲氯銨(NPI-2352及NPI-2358)、哈米特林(HTI-286)、勞瑪立得、美登木素(「DM1」、「DM3」或「DM4」)(比伐單抗莫坦辛、huN901-DM1/BB-10901TAP、MLN591DM1、My9-6-DM1、曲妥珠單抗-DM1)、PC-SPES、普魯賽德A、白藜蘆醇、S-烯丙基巰基半胱胺酸(SAMC)、海綿抑制素、維魯米德、分子運動驅動蛋白(SB-715992)、改造之秋水仙鹼位點結合劑(A-289099、A-293620/A-318315、ABT-751/E7010、D-24851/D-64131、ZD6126)、其他新穎紡錘體毒物(2-甲氧***(2-ME2)、苯并咪唑胺基甲酸酯(ANG 600系列、甲苯咪唑)、CP248/CP461、HMN-214、R440、SDX-103、T67/T607)。實施例54：如實施例31-53之多肽或片段，其中該多肽或片段進一步包含選自由以下組成之群之藥物或化學治療劑：美登木素(「DM1」、「DM3」或「DM4」)。實施例55：如實施例31-54之多肽或片段，其中該多肽或片段進一步包含DM1。實施例56：如實施例31-55之多肽或片段，其中該多肽或片段的藥物與多肽比率在1與10之間。實施例57：如實施例31-57之多肽或片段，其中該多肽或片段的藥物與多肽比率在2與5之間。實施例58：一種組合物，其包含如實施例1-57中任一者之抗體、多肽或其片段。實施例59：一種醫藥組合物，其包含如實施例1-58中任一者之抗體、多肽或其片段。實施例60：如實施例59之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑及/或防腐劑。實施例61：一種治療疾病之方法，其包含投與有效量之如實施例58-60 中任一者之組合物，其中該疾病係選自由以下組成之群：B細胞癌、多發性骨髓瘤、惡性漿細胞贅瘤、卡勒氏病(Kahler's disease)及骨髓瘤病；漿細胞白血病；漿細胞瘤；B細胞前淋巴細胞性白血病；毛細胞白血病；B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin's lymphoma)(NHL)；急性骨髓性白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)；急性淋巴細胞性白血病(ALL)；慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；濾泡性淋巴瘤(包括濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤類型)；伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)(地方性伯基特氏淋巴瘤；單發性伯基特氏淋巴瘤)；邊緣區淋巴瘤(黏膜相關淋巴組織；MALT/MALT瘤；單核細胞樣B細胞淋巴瘤；伴有絨毛狀淋巴細胞之脾淋巴瘤)；套膜細胞淋巴瘤；大細胞淋巴瘤(彌漫性大細胞；彌漫性混合細胞；免疫母細胞性淋巴瘤；原發性縱隔B細胞淋巴瘤；血管中心淋巴瘤-肺B細胞)；小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)；前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤；骨髓性白血病(粒細胞性；髓細胞性；急性骨髓性白血病；慢性骨髓性白血病；亞急性骨髓性白血病；骨髓肉瘤；綠色瘤(Chloroma)；粒細胞肉瘤；急性早幼粒細胞白血病(Acute promyelocytic leukemia)；急性髓單核細胞白血病)；瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)或其他B細胞淋巴瘤。實施例62：如實施例61之方法，其中該疾病係選自由以下組成之群：B細胞癌、多發性骨髓瘤、惡性漿細胞贅瘤或其他B細胞淋巴瘤。實施例63：如實施例62之方法，其中該疾病為多發性骨髓瘤。實施例64：如實施例61-63之方法，其進一步包含投與一或多種選自由以下組成之群之其他治療：化學療法、放射療法、手術、蛋白酶體抑制劑、皮質類固醇及幹細胞移植物。實施例65：如實施例64之方法，其中投與該其他治療係在投與如實施例58-60中任一者之組合物之前、與之同時或在其之後或與其各自組合。實施例66：如實施例62-65之方法，其中如實施例58-60中任一者之組合物係非經腸投與。實施例67：一種經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸編碼如實施例1-21及31-48中任一者之抗體或多肽。實施例68：如實施例67之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：1之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：2之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：3之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：103之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：104之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：105之 Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：7之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：8之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：9之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：109之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：110之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：111之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：13之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：14之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：15之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：115之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：116之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：117之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：19之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：20之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：21之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：121之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：122之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：123之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：25之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：26之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：27之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：127之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：128之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：129之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：31之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：32之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：33之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：133之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：134之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：135之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：37之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：38之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：39之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：139之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：140之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：141之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：43之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：44之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：45之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：145之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：146之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：147之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：49之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：50之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：51之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：151之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：152之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：153之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：55之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：56之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：57之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：157之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：158之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：159之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：61之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：62之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：63之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：163之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：164之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：165之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：67之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：68之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：69之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：169之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：170之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：171之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：73之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：74之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：75之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：175之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：176之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：177之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：79之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：80之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：81之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：181之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：182之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：183之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：85之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：86之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：87之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：187之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：188之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：189之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：91之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：92之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：93之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：193之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：194之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：195之Vl-CDR3；且其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：97之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：98之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：99之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：199之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：200之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：201之Vl-CDR3。實施例69：如實施例67-68之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：1之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：2之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：3之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：103之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：104之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：105之Vl-CDR3；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：7之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：8之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：9之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：109之 Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：110之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：111之Vl-CDR3；且其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：13之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：14之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：15之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：115之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：116之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：117之Vl-CDR3。實施例70：如實施例67-69之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：1之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：2之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：3之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：103之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：104之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：105之Vl-CDR3。實施例71：如實施例67-70之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：239之Ab-1Vl及包含SEQ ID NO：205之Ab-1Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：241之Ab-2Vl及包含SEQ ID NO：207之Ab-2Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：243之Ab-3Vl及包含SEQ ID NO：209之Ab-3Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：245之Ab-4Vl及包含SEQ ID NO：211之Ab-4Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：247之Ab-5Vl及包含SEQ ID NO：213之Ab-5Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：249之Ab-6Vl及包含SEQ ID NO：215之Ab-6Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：251之Ab-7Vl及包含SEQ ID NO：217之Ab-7Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：253之Ab-8Vl及包含SEQ ID NO：219之Ab-8Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：255之Ab-9Vl及包含SEQ ID NO：221之Ab-9Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：257之Ab-10Vl及包含SEQ ID NO：223之Ab-10Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：259之Ab-11Vl及包含SEQ ID NO：225之Ab-11Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：261之Ab-12Vl及包含SEQ ID NO：227之Ab-12Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：263之Ab-13Vl及包含SEQ ID NO：229之Ab-13Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：265之Ab-14Vl及包含SEQ ID NO：231之Ab-14Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：267之Ab-15Vl及包含SEQ ID NO：233之Ab-15Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：269之Ab-16Vl及包含SEQ ID NO：235之 Ab-16Vh；且其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：271之Ab-17Vl及包含SEQ ID NO：237之Ab-17Vh。實施例72：如實施例67-71之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：239之Ab-1Vl及包含SEQ ID NO：205之Ab-1Vh；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：241之Ab-2Vl及包含SEQ ID NO：207之Ab-2Vh；且其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：243之Ab-3Vl及包含SEQ ID NO：209之Ab-3Vh。實施例73：如實施例67-72之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：239之Ab-1Vl及包含SEQ ID NO：205之Ab-1Vh。實施例74：如實施例67-72之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：279之輕鏈及包含SEQ ID NO：273之重鏈；其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：281之輕鏈及包含SEQ ID NO：275之重鏈；且其中該聚核苷酸序列包括包含SEQ ID NO：283之輕鏈及包含SEQ ID NO：277之重鏈。實施例75：一種質體，其包含如實施例67-72中任一者之聚核苷酸。實施例76：如實施例75之質體，其中該質體包含表現載體。實施例77：一種經分離細胞，其包含如實施例76之該質體，其中該細胞係選自由以下組成之群：a.原核細胞；b.真核細胞；c.哺乳動物細胞；d.昆蟲細胞；及e. CHO細胞。實施例78：一種製備如實施例1-21及31-48中任一者之抗體或多肽之方法，其包含在允許如實施例77之該經分離細胞表現該抗體或多肽之條件下培育該經分離細胞。實施例79：一種經分離抗體，其包含由如實施例77之CHO細胞產生之抗體，其中該抗體包含由包含SEQ ID NO：273之序列編碼之重鏈及由包含SEQ ID NO：279之序列編碼之輕鏈。實施例80：一種醫藥組合物，其包含如實施例79之抗體。實施例81：一種經分離單株抗體，其包含特異性結合SEQ ID NO：285及SEQ ID NO：286，但不特異性結合SEQ ID NO：351之單株抗體。實施例82：如實施例81之抗體，其中該抗體為人類單株抗體。 實施例83：如實施例82之抗體，其中該抗體為IgG。實施例84：一種經分離單株抗體，其包含特異性結合SEQ ID NO：352，但不特異性結合SEQ ID NO：351之單株抗體。實施例85：如實施例84之抗體，其中該抗體為人類單株抗體。實施例86：如實施例85之抗體，其中該抗體為IgG。實施例87：如實施例85之抗體，其中該抗體為IgG1。實施例88：如實施例81至87 中任一者之抗體，其中該抗體特異性結合SEQ ID NO：352之Kd在1nM與.01nM之間，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM。實施例89：如實施例81至88中任一者之抗體，其中該抗體特異性結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM。實施例90：一種經分離單株抗體，其包含結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括1及20)之中和決定子的單株抗體。實施例91：如實施例90之抗體，其中該抗體為人類單株抗體。實施例92：如實施例91之抗體，其中該抗體為IgG。實施例93：如實施例92之抗體，其中該抗體為IgG1。實施例94：一種經分離單株抗體，其包含結合包含SEQ ID NO：285之胺基酸1至至11(包括1及至11)之中和決定子的單株抗體。實施例95：如實施例94之抗體，其中該抗體為人類單株抗體。實施例96：如實施例95之抗體，其中該抗體為IgG。實施例97：如實施例96之抗體，其中該抗體為IgG1。實施例98：如實施例90至97中任一者之抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。實施例99：如實施例90至98中任一者之抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM±0.1nM，如生物感測器分析中所量測。實施例100：如實施例90至97中任一者之抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。 實施例101：如實施例90至97中任一者之抗體，其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。實施例102：如實施例90至97及101中任一者之抗體，其中根據FACS分析，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285的EC50為約1.2nM。實施例103：如實施例90至97中任一者之抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM，且其中該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285之EC50小於或等於10nM。實施例104：如實施例90至97及103中任一者之抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM，如實例16中所述之生物感測器分析中所量測，且其中根據FACS分析，該抗體結合在H929細胞表面上表現之SEQ ID NO：285的EC50為約1.2nM。 實施例105：如實施例1-3及31-33中任一者之抗體，其中該六個CDR係藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。實施例106：如 實施例1-14中任一者之抗體，其中該抗體為人類單株IgG抗體。實施例107：如實施例1-14及106中任一者之抗體，其中該抗體為人類單株IgG1抗體。
如上所述，鑒於抗體抗原決定基通常定義為抗原內可結合於抗體之可變區之三維結構，因此抗原決定基之特定態樣係藉由用於描繪其之方法加以定義。一些方法描繪抗原決定基之結構態樣，諸如抗原上由所結合抗體覆蓋之表面積，如藉由溶劑可及表面積(ASA)分析所量測。本發明之實施例包括以與Ab-1類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類單株抗體)，如藉由溶劑可及表面積(ASA)分析所測定。本發明之實施例包括以與Ab-2類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類單株抗體)，如藉由溶劑可及表面積(ASA)分析所測定。本發明之實施例包括以與Ab-3類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類單株抗體)，如藉由溶劑可及表面積(ASA)分析所測定。
一些方法描繪抗原決定基之功能態樣，其為抗原上與抗體上之殘基相互作用之殘基，諸如接觸距離分析。抗體上與huBCMA上之殘基相互作用之殘基總稱為抗體之互補位。
就「相互作用」而言，其意謂抗體之胺基酸殘基與HuBCMA之胺基酸殘基在其間形成一或多種非共價力，諸如氫鍵、鹽橋、靜電力、疏水性力及/或凡得瓦力(van der Waals force)。
本發明之實施例包括以與Ab-1類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類IgG單株抗體)，如藉由約0-3.4Å之x射線結晶學接觸距離分析所確定(當關於結晶學接觸距離分析使用時「約」意謂±0.5Å)。本發明之實施例包括以與Ab-1類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類IgG單株抗體)，如藉由約3.4-5.0Å之x射線結晶學接觸距離分析所確定。本發明之實施例包括以與Ab-2類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類IgG單株抗體)，如藉由約0-3.4Å之x射線結晶學接觸距離分析所確定。本發明之實施例包括以與Ab-2類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類IgG單株抗體)，如藉由約3.4-5.0Å之x射線結晶學接觸距離分析所確定。本發明之實施例包括以與Ab-3類似之 方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類IgG單株抗體)，如藉由約0-3.4Å之x射線結晶學接觸距離分析所確定。本發明之實施例包括以與Ab-3類似之方式結合huBCMA之單株抗體(特定言之人類IgG單株抗體)，如藉由約3.4-5.0Å之x射線結晶學接觸距離分析所確定。
因此，本發明之態樣包括但不限於其他實施例，諸如實施例108：一種經分離單株抗體或其片段，其中該抗體或其片段特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA且抑制APRIL之生物活性，且其中該抗體競爭性抑制人類IgG1單株抗體之結合，該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3，且其中該抗體對人類BCMA之Kd在1與.01nM之間(包括1及.01nM)。實施例109：如實施例108之抗體或其片段，其中該抗體或其片段為人類抗體或其片段，且其中該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：206之Vh域及包含SEQ ID NO：240之Vl域。實施例110：如實施例108或109之抗體或其片段，其中該抗體或其片段為人類抗體或其片段，且其中該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：274之重鏈及包含SEQ ID NO：280之輕鏈。實施例111：如實施例108至110之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17及His19相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定。實施例112：如實施例111之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Cys8、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19及Ala20相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例113：如實施例112之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Cys8、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19、Ala20、Ile22、Leu26、Arg27、Pro33、Pro34、Leu35及Leu36相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例114：如實施例113之抗體 或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gln7、Asp15、Ser16、Leu17及His19形成氫鍵，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定。實施例115：一種經分離單株抗體或其片段，其中該抗體或其片段為特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA且抑制APRIL之生物活性的人類IgG單株抗體或其片段，且其中該抗體包含與SEQ ID NO：206至少90%一致之Vh域及與SEQ ID NO：240至少90%一致之Vl域。實施例116：如實施例115之抗體或其片段，其中該抗體或其片段包含與SEQ ID NO：274至少90%一致之重鏈及與SEQ ID NO：280至少90%一致之輕鏈。實施例117：如實施例115之抗體或其片段，其中抗體或其片段包含與SEQ ID NO：206至少95%一致之重鏈可變域及與SEQ ID NO：240至少95%一致之輕鏈可變域。實施例118：如實施例117之抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：274至少95%一致之重鏈及與SEQ ID NO：280至少95%一致之輕鏈。實施例119：如實施例115至118之抗體或其片段，其中該抗體或其片段包含Vl域之Asn32、Thr33、Asn35、Asn51、Trp92、Asp94及Trp99及Vh域之Arg52、Ser101及Tyr103。 實施例120：如實施例115至119之抗體或其片段，其中該抗體或其片段包含Vl域之Ser26、Ser31、Asn32、Thr33、Val34、Asn35、Leu47、Phe50、Asn51、Tyr52、His53、Gln54、Lys67、Trp92、Asp93、Asp94、Asn97及Trp99及Vh域之Ala33、Ser35、Val50、Arg52、Tyr56、Ser101、Gly102、Tyr103、Trp107、Pro109、Phe110及Asp111。實施例121：如實施例108至120之抗體或其片段，其中該抗體或其片段對人類BCMA之Kd為0.16nM±0.1nM(包括0.16nM±0.1nM)。實施例122：一種經分離單株抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段與人類IgG1單株抗體特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA上之相同抗原決定基，該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：206之Vh域及包含SEQ ID NO：240之Vl域，且其中該抗體或其Fab片段抑制APRIL之生物活性。實施例123：如實施例122之抗體或其Fab片段，其中該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：274之重鏈及包含SEQ ID NO：280之輕鏈。實施例124：如實施例122或123之抗體或其Fab片段，其中該抗原決定基係藉由x射線結晶學所確定。實 施例125：如實施例124之抗體或其Fab片段，其中該抗原決定基係藉由x射線結晶學及0至3.4Å(包括0及3.4Å)之接觸距離分析所確定。實施例126：如實施例125之抗體或其Fab片段，其中該抗原決定基係藉由x射線結晶學及3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)之接觸距離分析所確定。實施例127：如實施例125或126之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段覆蓋具有SEQ ID NO：285之人類BCMA之表面積1,964Å2±5%且具有形狀互補度0.70±0.03。實施例128：如實施例122至127之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類單株抗體或其Fab片段。實施例129：如實施例128之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG。實施例130：如實施例129之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG1。實施例131：如實施例122至130之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段不特異性結合具有SEQ ID NO：351之大鼠BCMA且對該大鼠BCMA之Kd大於10nM。實施例132：如實施例122至131之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd在1與.01nM之間(包括1及.01nM)。實施例133：如實施例132之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd為0.16nM±0.1nM(包括0.16nM±0.1nM)。實施例134：如實施例133之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段亦特異性結合人類BCMA之由SEQ ID NO：285之胺基酸1-20(包括1及20)組成的片段。實施例135：一種經分離單株抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段特異性結合人類BCMA且與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17及His19相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定，且其中該抗體或其Fab片段抑制APRIL之生物活性。實施例136：如實施例135之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Cys8、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19及Ala20相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例137：如實施例136之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Cys8、 Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19、Ala20、Ile22、Leu26、Arg27、Pro33、Pro34、Leu35及Leu36相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例138：如實施例137之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gln7、Asp15、Ser16、Leu17及His19形成氫鍵，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定。實施例139：如實施例135至138中任一者之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類單株抗體或其Fab片段。實施例140：如實施例139之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG。 實施例141：如實施例140之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG1。實施例142：如實施例135至141之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd在1與.01nM之間(包括1及.01nM)。實施例143：如實施例142之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd為0.16nM±0.1nM(包括0.16nM±0.1nM)。實施例144：一種經分離單株抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段特異性結合具有SEQ ID NO：360之人類BCMA且藉此在SEQ ID NO：360之胺基酸殘基Gly6、Gln7、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19、Ala20、Ile22、Arg27、Pro34及Leu35處使該人類BMCA上之溶劑可及表面積變化大於50%，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定，且其中該抗體或其Fab片段抑制APRIL之生物活性。實施例145：如實施例144之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類單株抗體或其Fab片段。實施例146：如實施例145之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG。 實施例147：如實施例146之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG1。實施例148：如實施例144至147之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd在1與.01nM之間(包括1及.01nM)。實施例149：如實施例148之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd為0.16nM±0.1nM(包括0.16nM±0.1nM)。實施例150：如實施例149之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab 片段亦特異性結合人類BCMA之由SEQ ID NO：285之胺基酸1-20(包括1及20)組成的片段。實施例151：一種經分離單株抗體或其片段，其中該抗體或其片段特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA且抑制APRIL之生物活性，且其中該抗體競爭性抑制人類IgG1單株抗體之結合，該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：10之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：11之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：12之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：112之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：113之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：114之Vl-CDR3，其中該抗體對人類BCMA之Kd為0.75至1.11nM±0.1nM(包括0.75及1.11nM±0.1nM)。實施例152：如實施例151之抗體或其片段，其中該抗體或其片段為人類抗體或其片段，且其中該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：208之Vh域及包含SEQ ID NO：242之Vl。實施例153：如實施例151或152之抗體或其片段，其中該抗體或其片段為人類抗體或其片段，且其中該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：276之重鏈及包含SEQ ID NO：282之輕鏈。實施例154：如實施例151至153之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Tyr13、Ser16、Leu17、His19、Arg27及Leu35相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定。 實施例155：如實施例154之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18及His19相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例156：如實施例155之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19、Arg27、Ser30、Thr32、Pro33、Pro34及Leu35相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例157：如實施例156之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gln7、Ser16及His19形成氫鍵且在Arg27處形成鹽橋，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定。實施例158：一種經分離單株抗體或其片段， 其中該抗體或其片段為特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA且抑制APRIL之生物活性之人類IgG單株抗體或其片段，且其中該抗體包含與SEQ ID NO：208至少90%一致之Vh域及與SEQ ID NO：242至少90%一致之Vl域。實施例159：如實施例158之抗體或其片段，其中該抗體或其片段包含與SEQ ID NO：276至少90%一致之重鏈及與SEQ ID NO：282至少90%一致之輕鏈。實施例160：如實施例158之抗體或其片段，其中抗體或其片段包含與SEQ ID NO：208至少95%一致之Vh域及與SEQ ID NO：242至少95%一致之Vl域。實施例161：如實施例160之抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：276至少95%一致之重鏈及與SEQ ID NO：282至少95%一致之輕鏈。實施例162：如實施例158至161之抗體或其片段，其中該抗體或其片段包含Vl域之Tyr37、Ala96、Leu97及Arg101及Vh域之Ser31、Val53、Asp56、Asp98、Gly105及Trp107。實施例163：如實施例158至162之抗體或其片段，其中該抗體或其片段包含輕鏈可變域之His31、Asn33、Tyr37、Ala96、Leu97、Gln98、Pro99及Arg101及重鏈可變域之Thr28、Ser30、Ser31、Ala33、Asn35、Ala50、Ile51、Ser52、Val53、Gly54、Gly55、Asp56、Tyr58、Arg71、Asp98、Val100、Met102、Gly105、Val106、Trp107、Tyr108及Tyr109。實施例164：如實施例158至163之抗體或其片段，其中該抗體或其片段對人類BCMA之Kd為0.75至1.11nM±0.1nM(包括0.75及1.11nM±0.1nM)。實施例165：一種經分離單株抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段與人類IgG1單株抗體特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA上之相同抗原決定基，該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：208之Vh域及包含SEQ ID NO：242之Vl域，且其中該抗體或其Fab片段抑制APRIL之生物活性。實施例166：如實施例165之抗體或其Fab片段，其中該人類IgG1單株抗體包括包含SEQ ID NO：276之重鏈及包含SEQ ID NO：282之輕鏈。實施例167：如實施例165或166之抗體或其Fab片段，其中該抗原決定基係藉由x射線結晶學所確定。實施例168：如實施例167之抗體或其Fab片段，其中該抗原決定基係藉由x射線結晶學及0至3.4Å(包括0及3.4Å)之接觸距離分析所確定。實施例169：如實施例168之抗體或其Fab片段，其中該抗原決定基係藉由x射線 結晶學及3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)之接觸距離分析所確定。實施例170：如實施例168或169之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段覆蓋具有SEQ ID NO：285之人類BCMA之表面積1,669Å2±5%且具有形狀互補度0.71±0.03。實施例171：如實施例168至170中任一者之抗體，其中該單株抗體或其Fab片段為人類單株抗體或其Fab片段。
實施例172：如實施例171之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG。實施例173：如實施例172之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG1。實施例174：如實施例165至173中任一者之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段對具有SEQ ID NO：285之huBCMA之Kd為0.75至1.11nM±0.1nM(包括0.75及1.11nM±0.1nM)。實施例175：一種經分離單株抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段特異性結合人類BCMA且與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Tyr13、Ser16、Leu17、His19、Arg27及Leu35相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定，且其中該抗體或其Fab片段抑制APRIL之生物活性。實施例176：如實施例175之抗體，其中該抗體或其Fab片段與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18及His19相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例177：如實施例175或176之抗體，其中該抗體或其Fab片段與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19、Arg27、Ser30、Thr32、Pro33、Pro34及Leu35相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4至5.0Å(包括3.4及5.0Å)下所確定。實施例178：如實施例175至177之抗體，其中該抗體或其Fab片段與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gln7、Ser16及His19形成氫鍵且在Arg27處形成鹽橋，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定。 實施例179：如實施例175至178之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類單株抗體或其Fab片段。實施例180：如實施例179之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG。實施例181： 如實施例180之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG1。實施例182：如實施例175至181之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd為0.75至1.11nM±0.1nM(包括0.75及1.11nM±0.1nM)。實施例183：一種經分離單株抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段特異性結合具有SEQ ID NO：360之人類BCMA且藉此在SEQ ID NO：360之胺基酸殘基Gly6、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、His19、Thr32、Pro34及Leu35處使該人類BMCA上之溶劑可及表面積變化大於50%，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0至3.4Å(包括0及3.4Å)下所確定，且其中該抗體或其Fab片段抑制APRIL之生物活性。 實施例184：如實施例183之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類單株抗體或其Fab片段。實施例185：如實施例184之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG。實施例186：如實施例185之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG1。 實施例187：如實施例183至186之抗體，其中該抗體或其Fab片段對人類BCMA之Kd為0.75至1.11nM±0.1nM(包括0.75及1.11nM±0.1nM)。實施例188：如實施例108至187中任一者之抗體或其片段，其進一步包含連接子。實施例189：如實施例188之抗體或其片段，其進一步包含藥物或化學治療劑。實施例190：如實施例189之抗體或片段，其中該多肽或片段進一步包含選自由以下組成之群之連接子：6-順丁烯二醯亞胺基己醯基、順丁烯二醯亞胺基丙醯基、纈胺酸-瓜胺酸、丙胺酸-***酸、對胺基苯甲氧基羰基、Mal-dPEG4-NHS、4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-丁二醯亞胺酯(「SPP」)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)及(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SIAB」)。實施例191：如實施例190之抗體或片段，其中該連接子為4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯。實施例192：如實施例188至191之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含選自由以下組成之群之藥物或化學治療劑：噻替派及環磷醯胺(CYTOXAN.TM.)；烷基磺酸酯，諸如白消安、英丙舒凡及保釋芬；氮丙啶，諸如本多帕、卡巴醌、米特多帕及優多帕；伸乙亞胺及甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基蜜胺、三伸乙基磷 醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；多聚乙醯(尤其布拉它辛及布拉它辛酮)；喜樹鹼(包括合成類似物拓撲替康)；苔蘚抑素；凱利他汀；CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新及比折來新合成類似物)；念珠藻素(特定言之念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌黴素(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；軟珊瑚醇；潘卡他汀；匍枝珊瑚醇；海綿抑制素；氮芥，諸如苯丁酸氮芥、氯瑪法辛、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖、新恩比興、苯芥膽固醇、松龍苯芥、氯乙環磷醯胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，諸如卡莫司汀、吡葡亞硝脲、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素，尤其卡奇黴素γ1及卡奇黴素θI，參見例如Angew Chem.Intl.Ed.Engl.33：183-186(1994)；達內黴素，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素；以及新抑癌素發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素、放線菌素、安麯黴素、重氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C、卡拉比星、洋紅黴素、嗜癌菌素；色黴素、放線菌素D、道諾黴素、地托比星、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯基)-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅黴素、絲裂黴素、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、培洛黴素、波弗黴素、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈脲黴素、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他汀、佐柔比星；抗代謝物，諸如甲胺蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、甲胺蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如環胞苷、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-FU；雄激素，諸如二***、屈他雄酮丙酸鹽、環硫雄醇、美雄烷、睾內酯；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑，諸如弗羅林酸；乙醯葡醛酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；安吖啶；倍曲布西；比生群；依達曲沙；地佛法明；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞；依利醋銨；埃博黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；洛尼代寧；美登木素，諸如美登素及安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹丹莫；二胺硝吖啶；噴司他汀； 苯來美特；吡柔比星；足葉草酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK.RTM.；雷佐生；根黴素；西索菲蘭；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(尤其T-2毒素、維拉庫林A、桿孢菌素A及蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；格塞圖辛；***糖苷(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；紫杉烷，例如太平洋紫杉醇(TAXOL.TM.，Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)及多西他賽(TAXOTERE.RTM.，Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春花鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；絲裂黴素C；米托蒽醌；長春新鹼；長春瑞濱；諾維本；諾安托；替尼泊苷；道諾黴素；胺基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸；卡培他濱；他莫昔芬、雷洛昔芬、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬、LY117018、奧那司酮及托瑞米芬(法樂通)；及抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、秋水仙鹼位點結合劑(庫瑞辛)、考布他汀(AVE806、考布他汀A-4前藥(CA4P)、Oxi-4503)、念珠藻素(LY355703)、盤皮海綿內酯、多拉司他汀及類似物(奧莉斯汀PHE、多拉司他汀10、ILX-651、西普司他汀1、TZT-1027)、埃博黴素(BMS-247550、BMS-310705、EP0906、KOS-862、ZK-EPO)、軟珊瑚醇、FR182877、大田軟海綿素B(E7389)、月苄三甲氯銨(NPI-2352及NPI-2358)、哈米特林(HTI-286)、勞瑪立得、美登木素(「DM1」、「DM3」或「DM4」)(比伐單抗莫坦辛、huN901-DM1/BB-10901TAP、MLN591DM1、My9-6-DM1、曲妥珠單抗-DM1)、PC-SPES、普魯賽德A、白藜蘆醇、S-烯丙基巰基半胱胺酸(SAMC)、海綿抑制素、維魯米德、分子運動驅動蛋白(SB-715992)、改造之秋水仙鹼位點結合劑(A-289099、A-293620/A-318315、ABT-751/E7010、D-24851/D-64131、ZD6126)、其他新穎紡錘體毒物(2-甲氧***(2-ME2)、苯并咪唑胺基甲酸酯(ANG 600系列、甲苯咪唑)、CP248/CP461、HMN-214、R440、SDX-103、T67/T607)。實施例193：如實施例192之抗體或片段，其中藥物或化學治療劑係選自由以下組成之群：美登木素(「DM1」、「DM3」 或「DM4」)。實施例194：如實施例193之抗體或片段，其中該藥物或化學治療劑為DM1。實施例195：如實施例193或194之抗體或片段，其中該抗體或片段的藥物與抗體/抗體片段比率在1與10之間，包括1及10。 實施例196：如實施例195之抗體或片段，其中該抗體或片段的藥物與抗體/抗體片段比率在2與5之間，包括2及5。實施例197：一種組合物，其包含如實施例108至196中任一者之抗體或其片段。實施例198：一種醫藥組合物，其包含如實施例108至196中任一者之抗體或其片段。實施例199：如實施例198之醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑及/或防腐劑。實施例200：一種治療疾病之方法，其包含投與有效量之如實施例197至199中任一者之組合物，其中該疾病係選自由以下組成之群：B細胞癌、多發性骨髓瘤、惡性漿細胞贅瘤、卡勒氏病及骨髓瘤病；漿細胞白血病；漿細胞瘤；B細胞前淋巴細胞性白血病；毛細胞白血病；B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；急性骨髓性白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)；急性淋巴細胞性白血病(ALL)；慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；濾泡性淋巴瘤(包括濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤類型)；伯基特氏淋巴瘤(地方性伯基特氏淋巴瘤；單發性伯基特氏淋巴瘤)；邊緣區淋巴瘤(黏膜相關淋巴組織；MALT/MALT瘤；單核細胞樣B細胞淋巴瘤；伴有絨毛狀淋巴細胞之脾淋巴瘤)；套膜細胞淋巴瘤；大細胞淋巴瘤(彌漫性大細胞；彌漫性混合細胞；免疫母細胞性淋巴瘤；原發性縱隔B細胞淋巴瘤；血管中心淋巴瘤-肺B細胞)；小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)；前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤；骨髓性白血病(粒細胞性；髓細胞性；急性骨髓性白血病；慢性骨髓性白血病；亞急性骨髓性白血病；骨髓肉瘤；綠色瘤；粒細胞肉瘤；急性早幼粒細胞白血病；急性髓單核細胞白血病)；瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症或其他B細胞淋巴瘤。實施例201：如實施例200之方法，其中該疾病係選自由以下組成之群：B細胞癌、多發性骨髓瘤、惡性漿細胞贅瘤或其他B細胞淋巴瘤。實施例202：如實施例201之方法，其中該疾病為多發性骨髓瘤。實施例203：如實施例200至202中任一者之方法，其進一步包含投與一或多種選自由以下組成之群之其他治療：化學療法、放射療法、手術、蛋白酶體抑制劑、皮質類固醇及幹細胞移植物。實施例204：如 實施例203之方法，其中投與該其他治療係在投與如實施例197-199中任一者之組合物之前、與之同時或在其之後或與其各自組合。
在BCMA抗原結合蛋白用於治療性應用之實施例中，BCMA抗原結合蛋白之一個特徵在於其可抑制BAFF及/或APRIL對BCMA之活化。此等抗體由於其能夠抑制BAFF及/或APRIL對BCMA之活化而被視為中和抗體。在此情況下，抗原結合蛋白特異性結合BCMA且抑制BAFF及/或APRIL針對BCMA之生物活性達10%至100%之間的任何程度，諸如抑制至少約20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99%以上(例如藉由在如本文，諸如在實例2中所述之活體外競爭性結合分析中量測結合)。本發明之態樣包括在實例2中所述之分析條件或類似分析下，特異性結合人類BCMA且使人類APRIL與人類BCMA之結合抑制約89%(±5%)之人類單株抗體，諸如Ab-1。
抗原結合蛋白之實施例包含如本文以不同方式定義之具有一或多個互補決定區(CDR)之骨架結構。抗原結合蛋白之實施例包含具有一或多個可變域之骨架結構。實施例包括表1中所列之抗體以及其片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。實施例包括表1中所列之抗體之ADC。表1中所列之抗體之序列提供於序列表中。
使用AHo編號系統表徵本文所述之各種抗體之CDR域。 AHo編號系統在此項技術中為熟知的，參見Honegger,A.及Plückthun,A.(2001),J.Mol.Biol.309,657-670。本發明之實施例包括包含見於本文所述之Vh及Vl域中之CDR的抗體，該等CDR係使用其他習知編號系統，諸如Kabat及Clothia編號系統加以鑒別。此等編號系統在此項技術中為熟知的(參見http：//www.bioc.uzh.ch/antibody)。對於此等CDR編號系統之比較，參見：http：//www.bioc.uzh.ch/antibody/Numbering/NumFrame.html。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單 株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。 本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。 本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。 本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包 含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。 以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)。本發明 之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)域。本發明之態樣包括單株抗體，其包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含 Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)域。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)域。本發明之態樣包括經分離抗體，其包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)域。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及兩個Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及兩個Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及兩個Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)之至多一 個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或 取代。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)至少95%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)至少 80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)至少95%一致。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%或99%一致。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
如本文所用，術語「抗體」係指各種形式之包含一或多個特異性結合抗原之多肽鏈的單體或多聚蛋白質，如本文以不同方式所述。在某些實施例中，藉由重組DNA技術產生抗體。在其他實施例中，藉由酶促或化學裂解天然存在之抗體來產生抗體。在另一態樣中，抗體係選自由以下組成之群：人類抗體；人類化抗體；嵌合抗體；單株抗體；抗原結合抗體片段；單鏈抗體；微型雙功能抗體；微型三功能抗體；微型四功能抗體；Fab片段；F(ab’)2片段；IgD抗體；IgE抗體；IgM抗體；IgA抗體；IgG1抗體；IgG2抗體；IgG3抗體；及IgG4抗體。
作為一般性結構，本發明之抗原結合蛋白包含(a)骨架及(b)複數個CDR。如本文所用之「互補決定區」或「CDR」係指構成用於抗原結合之主要表面接觸點之結合蛋白區。本發明之實施例包括包埋於抗原結合蛋白之骨架結構中之一或多個CDR。抗原結合蛋白之骨架結構可為抗體或其片段或變異體之構架，或本質上可為完全合成的。下文進一步描述本發明之抗原結合蛋白之各種骨架結構的實例。
如本說明書整篇與諸如肽、多肽、核酸、宿主細胞及其類似物之生物物質結合使用之術語「天然存在」係指物質可見於自然界中。在天然存在之抗體中，H-CDR1通常包含約五(5)個至約七(7)個胺基酸，H-CDR2通常包含約十六(16)個至約十九(19)個胺基酸，且H-CDR3通常包含約三(3)個至約二十五(25)個胺基酸。L-CDR1通常包含約十(10)個至約十七(17)個胺基酸，L-CDR2通常包含約七(7)個胺基酸，且L-CDR3通常包含約七(7)個至約十(10)個胺基酸。本發明之各種抗體之特定CDR的序列識別符提供於表1中。
天然存在之抗體通常包括信號序列，其引導抗體進入用於蛋白質分泌之細胞路徑中且其不存在於成熟抗體中。編碼本發明之抗體之聚核苷酸可編碼天然存在之信號序列或如下所述之異源信號序列。
天然存在之抗體內之CDR的一般性結構及性質已在此項技術中加以描述。簡言之，在傳統抗體骨架中，CDR包埋在重鏈及輕鏈可變 區中之構架內，在可變區中，該等CDR構成主要負責抗原結合及識別之區域。可變區在構架區(根據Kabat等人,1991(上文)，稱為構架區1-4，即FR1、FR2、FR3及FR4；亦參見Chothia及Lesk,1987(上文))內包含至少三個重鏈或輕鏈CDR，參見上文(Kabat等人,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,Public Health Service N.I.H.,Bethesda,MD；亦參見Chothia及Lesk,1987,J.Mol.Biol.196：901-917；Chothia等人,1989,Nature 342：877-883)。參見下文。然而，由本發明提供之CDR可不僅用於界定傳統抗體結構之抗原結合域，而且亦可包埋在如本文所述之多種其他骨架結構中。
本發明之抗體可包含此項技術中已知之任何恆定區。輕鏈恆定區可為例如κ或λ型輕鏈恆定區，例如人類κ或λ型輕鏈恆定區。重鏈恆定區可為例如α、δ、ε、γ或μ型重鏈恆定區，例如人類α、δ、ε、γ或μ型重鏈恆定區。在一個實施例中，輕鏈或重鏈恆定區為天然存在之恆定區之片段、衍生物、變異體或突變蛋白質。
實施例包括使用人類抗體骨架組分(例如恆定域)。人類IgG1重鏈恆定域之一較佳實施例描繪於SEQ ID NO：274(連同Vh域一起)中且一較佳人類IgG1重鏈恆定域描繪於SEQ ID NO：280(連同Vl域一起)中。實施例包括使用人類抗體骨架組分。當然，應瞭解可採用此項技術中已知之任何適合抗體骨架。
傳統抗體結構單元通常包含四聚體。各四聚體通常由兩對相同多肽鏈構成，各對具有一個「輕」鏈(通常具有分子量約25kDa)及一個「重」鏈(通常具有分子量約50-70kDa)。各鏈之胺基端部分包括具有約100個至110個或110個以上胺基酸之主要負責抗原識別的可變區。各鏈之羧基端部分界定主要負責效應功能之恆定區。人類輕鏈分類為κ及λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε，且將抗體之同型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。IgG具有若干子類，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。IgM具有子類，包括但不限於IgM1及IgM2。本發明之實施例包括併有如本文所述之抗原結合蛋白之可變域或CDR的所有此等類別之抗體。
在輕鏈及重鏈內，可變區與恆定區係藉由具有約十二(12)個 或十二個以上胺基酸之「J」區接合，其中重鏈亦包括具有另外約十(10)個胺基酸之「D」區。一般性參見Paul,W.編,1989,Fundamental Immunology第7章,第2版Raven Press,N.Y。各輕鏈/重鏈對之可變區形成抗體結合位點。本發明之骨架包括此等區域。
然而，在一些實施例中，骨架組分可為來自不同物種之混合物。因此，若抗原結合蛋白為抗體，則此抗體可為嵌合抗體及/或人類化抗體。一般而言，「嵌合抗體」與「人類化抗體」兩者均指組合有來自一個以上物種之區域之抗體。舉例而言，「嵌合抗體」傳統上包含來自小鼠(或在一些情況下大鼠)之可變區及來自人類之恆定區。
「人類化抗體」通常指可變域構架區已替換成見於人類抗體中之序列的非人類抗體。通常，在人類化抗體中，除CDR之外的整個抗體係由人類來源之聚核苷酸編碼或除其CDR內之外與該種抗體相同。將其中一些或全部由起源於非人類生物體中之核酸編碼之CDR移植至人類抗體可變區之β片構架中以產生特異性由所移植CDR決定之抗體。此等抗體之產生例如描述於WO 92/11018、Jones,1986,Nature 321：522-525、Verhoeyen等人,1988,Science 239：1534-1536中。亦可使用具有遺傳工程改造免疫系統之小鼠產生人類化抗體。Roque等人,2004,Biotechnol.Prog.20：639-654。在本發明中，標識之CDR為人類CDR，且因此在此情形下，人類化抗體與嵌合抗體兩者均包括一些非人類CDR；例如可產生包含CDRH3及CDRL3區之人類化抗體，其中一或多個其他CDR區具有不同特定來源。
在一個實施例中，BCMA抗原結合蛋白為多特異性抗體，且特別是雙特異性抗體，有時亦稱為「微型雙功能抗體」。此等抗體為結合兩種(或兩種以上)不同抗原之抗體。微型雙功能抗體可以此項技術中已知之多種方式製造(Holliger及Winter,1993,Current Opinion Biotechnol.4：446-449)，例如以化學方式或由雜交融合瘤製備。
在一個實施例中，BCMA抗原結合蛋白為微抗體。微抗體為包含scFv接合於CH3域之最小化抗體樣蛋白質。Hu等人,1996,Cancer Res.56：3055-3061。
在一個實施例中，BCMA抗原結合蛋白為域抗體；參見例 如美國專利第6,248,516號。域抗體(dAb)為抗體之功能性結合域，其對應於人類抗體之重(VH)鏈或輕(VL)鏈之可變區。dAB之分子量為約13kDa，或小於完整抗體之十分之一大小。dAB充分表現於多種宿主，包括細菌、酵母及哺乳動物細胞系統中。此外，甚至在經受苛刻條件，諸如冷凍乾燥或熱變性之後，dAb亦高度穩定且保持活性。參見例如美國專利6,291,158；6,582,915；6,593,081；6,172,197；US第2004/0110941號；歐洲專利0368684；美國專利6,696,245；WO 04/058821；WO 04/003019及WO 03/002609。
在一個實施例中，BCMA抗原結合蛋白為作為本文概述之任何抗體的保留對BCMA之結合特異性之片段的抗體片段。在各種實施例中，抗體結合蛋白包含但不限於F(ab)、F(ab')、F(ab')2、Fv或單鏈Fv片段(ScFv)。如本文所述之抗體至少包含可特異性結合BCMA之包含全部或一部分輕鏈或重鏈可變區，諸如一或多個CDR的多肽。
BCMA結合抗體片段之其他實例包括但不限於(i)由VL、VH、CL及CH1域組成之Fab片段，(i)由VH及CH1域組成之Fd片段，(iii)由單一抗體之VL及VH域組成之Fv片段；(iv)由單一可變區組成之dAb片段(Ward等人,1989,Nature 341：544-546)，(v)經分離CDR區，(vi)F(ab')2片段，其為一種包含兩個連接之Fab片段之二價片段，(vii)單鏈Fv分子(scFv)，其中VH域與VL域係由允許兩個域締合以形成抗原結合位點之肽連接子連接(Bird等人,1988,Science 242：423-426、Huston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：5879-5883)，(viii)雙特異性單鏈Fv二聚體(PCT/US92/09965)及(ix)「微型雙功能抗體」或「微型三功能抗體」，藉由基因融合構築之多價或多特異性片段(Tomlinson等人,2000,Methods Enzymol.326：461-479；WO94/13804；Holliger等人,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6444-6448)。抗體片段可經修飾。舉例而言，可藉由併入連接VH域及VL域之二硫橋分子來使分子穩定(Reiter等人,1996,Nature Biotech.14：1239-1245)。本發明之態樣包括其中此等片段之非CDR組分為人類序列之實施例。
特定實施例包括完全人類BCMA抗體。在此實施例中，如上所概述，特定結構包含描繪為包含CDR區之完整重鏈及輕鏈。其他實施 例利用本發明之一或多個CDR，其中其他CDR、構架區、J區及D區、恆定區等來自其他人類抗體。舉例而言，本發明之CDR可替換許多人類抗體，特定言之商業相關抗體之CDR。
XenoMouse®技術用於製備本文提供之人類抗體(參見實例2)。此技術能夠在鼠類免疫球蛋白分子及抗體之產生不足之情況下產生人類免疫球蛋白分子及抗體。經由使用此技術，可產生針對BCMA之完全人類單株抗體。在一個實施例中，將XenoMouse®小鼠品系用huBCMA免疫，自表現抗體之小鼠回收淋巴細胞(諸如B細胞)，且使此等細胞與骨髓型細胞株融合以製備永生融合瘤細胞株，且篩檢並選擇此等融合瘤細胞株以鑒別產生對相關抗原具有特異性之抗體之融合瘤細胞株。本文提供用於產生會產生對BCMA具有特異性之抗體之多個融合瘤細胞株的方法。此外，本文提供對由此等細胞株產生之抗體的表徵，包括此等抗體之重鏈及輕鏈之核苷酸及胺基酸序列。
或者，替代融合於骨髓瘤細胞以產生融合瘤，進一步篩檢由自免疫XenoMouse®小鼠品系分離之回收細胞產生的抗體中具有針對初始抗原(較佳BCMA蛋白質)之反應性者。此篩檢包括用BCMA蛋白質進行ELISA、與(例如)穩定表現全長BCMA之293T細胞的活體外結合。接著使用標準BCMA特異性結合分析(諸如藉由FACS)分離分泌相關抗體之單一B細胞。分離單一抗原特異性漿細胞且自該單一漿細胞分離編碼抗體之特異性之遺傳資訊。使用逆轉錄酶PCR，可選殖編碼所分泌抗體之可變區之DNA。此選殖DNA可接著進一步***適合表現載體中，較佳諸如pcDNA之載體卡匣，更佳含有免疫球蛋白重鏈及輕鏈之恆定域的該種pcDNA載體。產生之載體可接著轉染至宿主細胞，較佳CHO細胞中，且在酌情針對誘導啟動子加以改進之習知營養培養基中培養、選擇轉型體或擴增編碼所要序列之基因。
來自XenoMouse®小鼠之B細胞亦可用作可用以產生抗體呈現文庫之遺傳物質之來源。可使用此項技術中之一般技藝在噬菌體、酵母中或經由核糖體呈現在活體外製備此等文庫。超免疫XenoMouse®小鼠可為可用以分離高親和力抗原反應性抗體之豐富來源。因此，針對BCMA超免 疫之XenoMouse®小鼠可用於產生可用以分離針對BCMA之高親和力抗體之抗體呈現文庫。可針對表現BCMA之細胞篩檢此等文庫以確認對天然呈現抗原之特異性。可接著使用重組DNA技術表現完整IgG抗體。參見例如WO 99/53049。
一般而言，由以上提及之細胞株產生之抗體具有完全人類IgG1或IgG2重鏈及人類κ輕鏈。在一個實施例中，當藉由固相或溶液相量測時，抗體具有高親和力，通常具有親和力常數約10-9至約10-13M。如熟習此項技術者所瞭解，本發明實施例之抗體可在除融合瘤細胞株以外之細胞株中表現。編碼特定抗體之序列可用於轉型適合哺乳動物宿主細胞。轉型可藉由用於將聚核苷酸引入宿主細胞中，包括例如將聚核苷酸包裝在病毒中(或病毒載體中)且用該病毒(或載體)轉導宿主細胞之任何已知方法或藉由此項技術中已知之轉染程序來達成，如由美國專利第4,399,216號、第4,912,040號、第4,740,461號及第4,959,455號(該等專利據此以引用的方式併入本文中)所示範。所用轉型程序取決於欲轉型之宿主。用於將異源聚核苷酸引入哺乳動物細胞中之方法在此項技術中為熟知的且包括葡聚糖介導之轉染、磷酸鈣沈澱、聚凝胺介導之轉染、原生質體融合、電穿孔、將聚核苷酸囊封於脂質體中及將DNA直接顯微注射至核中。可用作表現宿主之哺乳動物細胞株在此項技術中為熟知的且包括可自美國菌種中心(American Type Culture Collection，ATCC)獲得之許多永生化細胞株，包括但不限於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、HeLa細胞、幼小倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞(例如Hep G2)及許多其他細胞株。經由確定哪些細胞株具有高表現量且產生具有組成性BCMA結合性質之抗體來選擇特別較佳之細胞株。
單鏈抗體可藉由經由胺基酸橋(短肽連接子)連接重鏈及輕鏈可變域(Fv區)片段，從而產生單一多肽鏈來形成。此等單鏈Fv(scFv)已藉由在編碼兩個可變域多肽(VL及VH)之DNA之間融合編碼肽連接子之DNA來製備。所得多肽可自身折疊以形成抗原結合單體，或其可形成多聚體(例如二聚體、三聚體或四聚體)，視兩個可變域之間的可撓性連接子之長度而定(Kortt等人,1997,Prot.Eng.10：423；Kortt等人,2001,Biomol.Eng. 18：95-108)。藉由組合包含不同VL及VH之多肽，可形成結合不同抗原決定基之多聚scFv(Kriangkum等人,2001,Biomol.Eng.18：31-40)。所開發用於產生單鏈抗體之技術包括美國專利第4,946,778號；Bird,1988,Science 242：423；Huston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879；Ward等人,1989,Nature 334：544；de Graaf等人,2002,Methods Mol Biol.178：379-87中所述者。
在一個實施例中，BCMA抗原結合蛋白為抗體融合蛋白(在本文中有時稱為「抗體結合物」或「抗體-藥物結合物」或「ADC」)。結合物搭配物可為蛋白質或非蛋白質；後者通常係使用抗原結合蛋白上之官能基(參見關於抗原結合蛋白之共價修飾之論述)及結合物搭配物上之官能基而產生。例如，連接子在此項技術中為已知的；例如同源或異源雙官能連接子為熟知的(參見1994 Pierce Chemical Company目錄,technical section on cross-linkers,第155-200頁，以引用的方式併入本文中)。在下文及實例中更詳細描述本發明之ADC。
在一個實施例中，BCMA抗原結合蛋白為抗體類似物，有時稱為「合成抗體」。舉例而言，多種新近研究利用具有移植CDR之替代性蛋白質骨架或人工骨架。此等骨架包括但不限於經引入以使結合蛋白之三維結構穩定之突變形式以及例如由生物相容性聚合物組成之完全合成骨架。參見例如Korndorfer等人,2003,Proteins：Structure,Function,and Bioinformatics,第53卷,第1期：121-129。Roque等人,2004,Biotechnol.Prog.20：639-654。此外，可使用肽抗體模擬物(「PAM」)，以及利用纖維連接蛋白(fibronectin)組分作為骨架之基於抗體模擬物的製品。
除Ab-1、Ab-2及Ab-3中示範之人類IgG1骨架以外設想之骨架之其他實例包括：纖維連接蛋白、新抑癌素(neocarzinostatin)CBM4-2、載脂蛋白(lipocalin)、T細胞受體、蛋白質A域(蛋白質Z)、Im9、TPR蛋白質、鋅指域、pVIII、禽胰多肽、GCN4、WW域、Src同源域3、PDZ域、TEM-1 β-內醯胺酶(Beta-lactamase)、硫氧還蛋白(thioredoxin)、葡萄球菌核酸酶(staphylococcal nuclease)、PHD指域、CL-2、BPTI、APPI、HPSTI、大腸桿菌素(ecotin)、LACI-D1、LDTI、MTI-II、蠍毒素(scorpion toxin)、昆蟲 防衛素(defensin)A肽、EETI-II、Min-23、CBD、PBP、細胞色素(cytochrome)b-562、Ldl受體域、γ-晶狀體蛋白(gamma-crystallin)、泛素(ubiquitin)、轉鐵蛋白(transferring)及/或C型凝集素(lectin)樣域。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)。本發明之態樣包括包含Ab-17之六 個CDR之經分離多肽，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)域。本發明之態樣包括多肽，其包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)域。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)域。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含兩個或兩個以上Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及兩個或兩個以上Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含兩個或兩個以上Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及兩個或兩個以上Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含兩個或兩個以上Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及兩個或兩個以上Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)之至多一個、兩個、三個、四個、五 個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離多肽，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。
本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)至少80%、81%、82%、83%、84%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括多肽，其包含分別與Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。 本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。 本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。 本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。 本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。 本發明之態樣包括經分離多肽，其包含分別與Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列。
本發明之態樣包括經分離多肽，其與包含Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及/或Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)之多肽至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。本發明之態樣包括經分離多肽，其與包含Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及/或Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)之多肽至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。本發明之態樣包括經分離多肽，其與包含Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及/或Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)之多肽至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
就如本文所用之「蛋白質」而言，其意謂至少兩個共價連接之胺基酸，其包括蛋白質、多肽、寡肽及肽。在一些實施例中，兩個或兩個以上共價連接之胺基酸由肽鍵連接。蛋白質可由天然存在之胺基酸及肽鍵組成，例如當蛋白質係使用如下概述之表現系統及宿主細胞重組製備時。或者，蛋白質可包括合成胺基酸(例如高***酸、瓜胺酸、鳥胺酸及正白胺酸)或可對蛋白酶或其他生理及/或儲存條件具有抗性之肽模擬結構，亦即「肽或蛋白質類似物」，諸如類肽(參見Simon等人,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：9367，該文獻以引用的方式併入本文中)。此等合成胺基酸可特定言之當抗原結合蛋白藉由此項技術中熟知之習用方法在活體外合成時得到併入。此外，可使用肽模擬、合成及天然存在之殘基/結構之任何組合。「胺基酸」亦包括亞胺基酸殘基，諸如脯胺酸及羥脯胺酸。胺基酸「R基團」或「側鏈」可呈(L)-組態或(S)-組態。在一特定實施例中，胺基酸呈(L)-組態或(S)-組態。
「重組蛋白」為使用重組技術，利用此項技術中已知之任何技術及方法，亦即經由表現如本文所述之重組核酸製備的蛋白質。用於產生重組蛋白之方法及技術在此項技術中為熟知的。
在一些實施例中，本發明之抗原結合蛋白為經分離蛋白質或 實質上純的蛋白質。「經分離」蛋白質不伴有至少一些其在其天然狀態下通常與之相伴的物質，經分離蛋白質例如構成指定樣品中之總蛋白質之至少約5重量%或至少約50重量%。應瞭解，視情況而定，經分離蛋白質可構成總蛋白質含量之5重量%至99.9重量%。舉例而言，可經由使用誘導性啟動子或高表現啟動子來製備濃度顯著較高之蛋白質，以使得所製得蛋白質之濃度含量增加。定義包括在此項技術中已知之廣泛多種生物體及/或宿主細胞中產生抗原結合蛋白。
對於胺基酸序列，序列一致性及/或類似性係藉由使用此項技術中已知之標準技術來確定，該等技術包括但不限於Smith及Waterman,1981,Adv.Appl.Math.2：482之局部序列一致性算法、Needleman及Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48：443之序列一致性比對算法、Pearson及Lipman,1988,Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.85：2444之類似性搜尋法、此等算法之電腦化執行程式(Wisconsin Genetics軟體套件(Genetics Computer Group,575 Science Drive,Madison,Wis.)中之GAP、BESTFIT、FASTA及TFASTA)、藉由Devereux等人,1984,Nucl.Acid Res.12：387-395所述之較佳使用內定設置之最佳擬合序列程式、或藉由檢查來進行。較佳地，基於以下參數藉由FastDB計算一致性百分比：錯配罰分1；間隙罰分1；間隙尺寸罰分0.33；及接合罰分30，「Current Methods in Sequence Comparison and Analysis,」Macromolecule Sequencing and Synthesis,Selected Methods and Applications,第127-149頁(1988),Alan R.Liss公司。
適用算法之一實例為PILEUP。PILEUP使用漸進成對比對由一組相關序列產生多序列比對。其亦可繪製顯示用於產生比對之叢集關係之樹。PILEUP使用Feng及Doolittle,1987,J.Mol.Evol.35：351-360之漸進比對方法之簡化形式；該方法類似於由Higgins及Sharp,1989,CABIOS 5：151-153所述之方法。適用PILEUP參數包括內定間隙權重3.00、內定間隙長度權重0.10及加權末端間隙。
適用算法之另一實例為描述於以下文獻中之BLAST算法：Altschul等人,1990,J.Mol.Biol.215：403-410；Altschul等人,1997,Nucleic Acids Res.25：3389-3402；及Karin等人,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 90：5873-5787。一特別適用BLAST程式為自Altschul等人,1996,Methods in Enzymology 266：460-480獲得之WU-BLAST-2程式。WU-BLAST-2使用若干搜尋參數，其中大多數被設置成內定值。可調整參數設為以下值：重疊間距=1，重疊分數=0.125，字臨限值(T)=II。HSP S及HSP S2參數為動態值且由程式自身視特定序列之組成及搜尋相關序列所針對之特定資料庫之組成而確定；然而，該等值可經調整以增加靈敏度。
另一適用算法為如由Altschul等人,1993,Nucl.Acids Res.25：3389-3402所報導之間隙BLAST。間隙BLAST使用BLOSUM-62代換計分；臨限值T參數設為9；兩次命中法來觸發無間隙延伸，電荷間隙長度k，以10+k為代價；Xu設為16，且Xg對於資料庫搜尋階段而言設為40且對於算法輸出階段而言設為67。間隙比對由對應於約22位元之計分觸發。
通常，相對於本文所述之序列，個別變異型CDR之間的胺基酸同源性、類似性或一致性為至少80%，且更通常較佳遞增同源性或一致性為至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%及接近100%。以類似方式，關於本文鑒別之結合蛋白之核酸序列的「核酸序列一致性百分比(%)」定義為候選序列中與抗原結合蛋白之編碼序列中之核苷酸殘基一致之核苷酸殘基的百分比。一特定方法利用WU-BLAST-2之設為內定參數之BLASTN模組，其中重疊間距及重疊分數分別設為1及0.125。
儘管預先確定用於引入胺基酸序列變異之位點或區域，但突變本身無需預先確定。舉例而言，為使指定位點處之突變之效能最佳化，可在目標密碼子或區域處進行隨機突變誘發且篩檢具有所要活性之最佳組合之所表現抗原結合蛋白CDR變異體。在具有已知序列之DNA中之預定位點處進行取代突變之技術為熟知的，該等技術例如M13引子突變誘發及PCR突變誘發。使用例如實例中所述之分析對突變體進行篩檢。
胺基酸取代通常為單一殘基取代；***通常大致為約一(1)個至約二十(20)個胺基酸殘基，但可耐受顯著較大***物。缺失在約一(1)個至約二十(20)個胺基酸殘基之範圍內，但在一些情況下，缺失可大得多。 取代、缺失、***或其任何組合可用於獲得最終衍生物或變異體。通常對 少許胺基酸進行此等變化以使分子之改變，特定言之抗原結合蛋白之免疫原性及特異性的改變最小。然而，在某些情況下可耐受較大變化。通常根據如表2所述之以下圖表進行保守性取代。
藉由選擇保守性小於表2中所示之取代的取代來進行功能或免疫特性之實質性變化。舉例而言，可進行更顯著地影響以下之取代：所改變區域中之多肽骨架之結構，例如α螺旋或β片結構；目標位點處之分子電荷或疏水性；或側鏈之體積。通常預期會使多肽之性質產生最大變化之取代為以下取代：其中(a)例如絲胺醯基或酥胺醯基之親水性殘基取代以下殘基或由以下殘基取代：例如白胺醯基、異白胺醯基、***醯基、纈胺醯基或丙胺醯基之疏水性殘基；(b)半胱胺酸或脯胺酸取代任何其他殘基取代或由任何其他殘基取代；(c)例如離胺醯基、精胺醯基或組胺醯基之具有正電性側鏈之殘基取代以下殘基或由以下殘基取代：例如麩胺醯基或天冬胺醯基之負電性殘基；或(d)例如***酸之具有龐大側鏈之殘基取代以下殘基或由以下殘基取代：例如甘胺酸之不具有側鏈之殘基。
變異體通常展現相同定性生物活性且將引發與天然存在之 類似物相同之免疫反應，但亦視需要選擇變異體以改進抗原結合蛋白之特徵。或者，可設計變異體以使抗原結合蛋白之生物活性得以改變。舉例而言，可如本文所論述改變或移除糖基化位點。BCMA抗原結合蛋白(包括抗體)之該種修飾形式為衍生物之一實例。多肽之「衍生物」為已例如經由結合於另一化學部分(諸如聚乙二醇、白蛋白(albumin)(例如人類血清白蛋白))、磷酸化及糖基化而經化學修飾之多肽(例如抗體)。
在本發明之範疇內之其他BCMA抗體衍生物包括BCMA抗體或其片段與其他蛋白質或多肽之共價或聚集結合物，諸如藉由表現包含異源多肽融合於BCMA抗體多肽之N末端或C末端的重組融合蛋白所達成。舉例而言，結合之肽可為異源信號(或前導序列)多肽(例如酵母α-因子前導序列)或諸如抗原決定基標籤之肽。含有BCMA抗體之融合蛋白可包含添加以有助於純化或鑒別BCMA抗體之肽(例如多聚His)。BCMA抗體多肽亦可連接於如Hopp等人,Bio/Technology 6：1204,1988及美國專利5,011,912中所述之FLAG肽DYKDDDDK(SEQ ID NO：447)。FLAG肽具有高度抗原性且提供由特定單株抗體(mAb)可逆性結合之抗原決定基，從而使得能夠快速分析及容易地純化所表現重組蛋白。適用於製備FLAG肽融合於指定多肽之融合蛋白之試劑可購得(Sigma,St.Louis,MO)。
含有一或多個BCMA抗體多肽之寡聚物可用作BCMA拮抗劑。寡聚物可呈共價連接或非共價連接之二聚體、三聚體或三聚以上寡聚物形式。意欲使用包含兩個或兩個以上BCMA抗體多肽之寡聚物，其中一個實例為均二聚體。其他寡聚物包括雜二聚體、均三聚體、雜三聚體、均四聚體、雜四聚體等。一個實施例係有關包含經由融合於BCMA抗體多肽之肽部分之間的共價或非共價相互作用接合之多個BCMA抗體多肽之寡聚物。此等肽可為肽連接子(間隔子)或具有促進寡聚合之性質之肽。白胺酸拉鍊及源於抗體之某些多肽屬於可促進與其連接之BCMA抗體多肽寡聚合之肽，如以下更詳細所述。在特定實施例中，寡聚物包含兩個至四個BCMA抗體多肽。寡聚物之BCMA抗體部分可呈上述任何形式，例如變異體或片段。
本發明之一個實施例係有關一種包含兩個藉由使BCMA抗 體之BCMA結合片段融合於抗體之Fc區產生之融合蛋白的二聚體。該二聚體可藉由例如以下方式製備：將編碼融合蛋白之基因融合物***適當表現載體中，在經重組表現載體轉型之宿主細胞中表現該基因融合物，及使所表現之融合蛋白裝配成如同抗體分子一般，因此在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵以產生二聚體。或者，寡聚物為包含多個BCMA抗體多肽之有或無肽連接子(間隔子肽)之融合蛋白。適合肽連接子尤其為美國專利4,751,180及4,935,233中所述者。
製備寡聚BCMA抗體衍生物之另一方法涉及使用白胺酸拉鍊。白胺酸拉鍊域為促進其所存在於其中之蛋白質寡聚合之肽。白胺酸拉鍊最初在若干DNA結合蛋白中鑒別出來(Landschulz等人,1988,Science 240：1759)，且此後發現於多種不同蛋白質中。已知白胺酸拉鍊尤其為天然存在之二聚或三聚之肽及其衍生物。適於產生可溶性寡聚蛋白質之白胺酸拉鍊域之實例描述於PCT申請案WO 94/10308中，且源於肺界面活性劑蛋白質D(SPD)之白胺酸拉鍊描述於Hoppe等人,1994,FEBS Letters 344：191中，該文獻據此以引用的方式併入本文中。允許與其融合之異源蛋白質之穩定三聚合的經修飾白胺酸拉鍊之使用描述於Fanslow等人,1994,Semin.Immunol.6：267-78中。在一種方法中，在適合宿主細胞中表現包含BCMA抗體片段或衍生物融合於白胺酸拉鍊肽之重組融合蛋白，且自培養物上清液回收形成之可溶性寡聚BCMA抗體片段或衍生物。
共價修飾亦視為BCMA抗原結合蛋白之衍生物且包括在本發明之範疇內，且通常但不總是在轉譯後進行。舉例而言，藉由使抗原結合蛋白之特定胺基酸殘基與能夠與所選側鏈或N末端或C末端殘基反應之有機衍生劑反應來將若干類型之抗原結合蛋白共價修飾引入分子中。
最通常使半胱胺醯基殘基與α-鹵乙酸酯(及相應胺)，諸如氯乙酸或氯乙醯胺反應以得到羧甲基或羧基醯胺基甲基衍生物。亦藉由與溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑基)丙酸、氯乙醯基磷酸酯、N-烷基順丁烯二醯亞胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、甲基2-吡啶基二硫化物、對氯汞基苯甲酸酯、2-氯汞基-4-硝基苯酚或氯-7-硝基苯并-2-氧雜-1,3-二唑反應來使半胱胺醯基殘基衍生化。
藉由與焦碳酸二乙酯在pH 5.5-7.0下反應來使組胺醯基殘基衍生化，因為此試劑對組胺醯基側鏈具有相對特異性。對溴苯甲醯甲基溴亦適用；反應較佳於0.1M二甲胂酸鈉中在pH 6.0下進行。
使離胺醯基及胺基端殘基與丁二酸酐或其他羧酸酐反應。用此等試劑衍生化具有使離胺醯基殘基之電荷反轉之作用。用於使含有α-胺基之殘基衍生化之其他適合試劑包括亞胺基酯，諸如甲基吡啶亞胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；氯硼氫化物；三硝基苯磺酸；O-甲基異脲；2,4-戊二酮；及與乙醛酸酯之轉胺酶催化反應。
藉由與一種或若干種習知試劑，尤其為苯甲醯甲醛、2,3-丁二酮、1,2-環己二酮及水合茚三酮反應來修飾精胺醯基殘基。由於胍官能基之pKa較高，所以精胺酸殘基之衍生化需要反應在鹼性條件下進行。此外，此等試劑可與離胺酸之基團以及精胺酸ε-胺基反應。
可對酪胺醯基殘基進行特定修飾，其中特別感興趣的是藉由與芳族重氮化合物或四硝基甲烷反應將光譜標記引入酪胺醯基殘基中。最通常地，分別使用N-乙醯基咪唑及四硝基甲烷來形成O-乙醯基酪胺醯基物質及3-硝基衍生物。使用125I或131I使酪胺醯基殘基碘化以製備用於放射免疫分析中之經標記蛋白質，其中上述氯胺T方法為適合的。
藉由與碳化二亞胺(R'-N=C=N--R')反應來選擇性修飾羧基側基(天冬胺醯基或麩胺醯基)，其中R及R'視情況為不同烷基，諸如1-環己基-3-(2-嗎啉基-4-乙基)碳化二亞胺或1-乙基-3-(4-氮鎓-4,4-二甲基戊基)碳化二亞胺。此外，藉由與銨離子反應來使天冬胺醯基及麩胺醯基殘基轉化成天冬醯胺醯基及麩醯胺醯基。
用雙官能試劑進行衍生化適用於使抗原結合蛋白交聯於水不溶性支撐基質或表面以用於多種方法中。通常使用之交聯劑包括例如1,1-雙(重氮基乙醯基)-2-苯乙烷、戊二醛、N-羥基丁二醯亞胺酯(例如含4-疊氮基水楊酸之酯)、同雙官能亞胺基酯(包括二丁二醯亞胺基酯，諸如3,3'-二硫基雙(丙酸丁二醯亞胺酯))及雙官能順丁烯二醯亞胺(諸如雙-N-順丁烯二醯亞胺基-1,8-辛烷)。諸如甲基-3-[(對疊氮基苯基)二硫基]丙亞胺酸酯之衍生化劑會產生能夠在光存在下形成交聯之光可活化中間物。或者，採用諸如溴 化氰活化之碳水化合物之反應性水不溶性基質及美國專利第3,969,287號；第3,691,016號；第4,195,128號；第4,247,642號；第4,229,537號；及第4,330,440號中所述之反應性基質進行蛋白質固定。
麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基經常分別去醯胺化成相應麩胺醯基及天冬胺醯基殘基。或者，此等殘基在溫和酸性條件下去醯胺。此等殘基之任一形式皆屬於本發明之範疇。
其他修飾包括脯胺酸及離胺酸之羥基化；絲胺醯基或酥胺醯基殘基之羥基之磷酸化；離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基之甲基化(T.E.Creighton,Proteins：Structure and Molecular Properties,W.H.Freeman & Co.,San Francisco,1983,第79-86頁)；N末端胺之乙醯化及任何C末端羧基之醯胺化。
包括在本發明之範疇內之抗原結合蛋白的另一類型之共價修飾包含改變蛋白質之糖基化型態。如此項技術中所知，糖基化型態可取決於蛋白質序列(例如存在或不存在以下論述之特定糖基化胺基酸殘基)或用以產生蛋白質之宿主細胞或生物體兩者。以下論述特定表現系統。
多肽之糖基化通常為N-連接型糖基化或O-連接型糖基化。N-連接型係指碳水化物部分連接於天冬醯胺殘基之側鏈。其中X為除脯胺酸之外之任何胺基酸的三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-酥胺酸為碳水化物部分酶促連接於天冬醯胺側鏈之識別序列。因此，多肽中存在此等三肽序列中之任一者皆會產生潛在糖基化位點。O-連接型糖基化係指糖N-乙醯半乳糖胺、半乳糖或木糖中之一者連接於羥基胺基酸，最通常為絲胺酸或酥胺酸，但亦可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。
向抗原結合蛋白中添加糖基化位點宜藉由改變胺基酸序列以使其含有上述三肽序列中之一或多者來達成(針對N-連接型糖基化位點)。改變亦可藉由向起始序列中添加一或多個絲胺酸或酥胺酸殘基或取代起始序列之一或多個絲胺酸或酥胺酸殘基來進行(針對O-連接型糖基化位點)。為容易起見，較佳經由在DNA層面上之變化，特定言之藉由使編碼目標多肽之DNA在預先選擇之鹼基處突變以使得產生將轉譯成所要胺基酸之密碼子來改變抗原結合蛋白胺基酸序列。
增加抗原結合蛋白上之碳水化合物部分之數目的另一手段係藉由使糖苷化學或酶促偶合於蛋白質來達成。此等程序為有利的，因為其不需要在具有N-連接型糖基化及O-連接型糖基化之糖基化能力之宿主細胞中產生蛋白質。視所用偶合模式而定，糖可連接於(a)精胺酸及組胺酸，(b)游離羧基，(c)游離硫氫基，諸如半胱胺酸之游離硫氫基，(d)游離羥基，諸如絲胺酸、酥胺酸或羥基脯胺酸之游離羥基，(e)芳族殘基，諸如***酸、酪胺酸或色胺酸之芳族殘基，或(f)麩醯胺酸之醯胺基。此等方法描述於1987年9月11日公開之WO 87/05330中及Aplin及Wriston,1981,CRC Crit.Rev.Biochem.,第259-306頁中。
移除存在於起始抗原結合蛋白上之碳水化合物部分可以化學方式或以酶促方式達成。化學去糖基化需要蛋白質暴露於化合物三氟甲烷磺酸或等效化合物。此處理導致除連接糖(N-乙醯葡糖胺或N-乙醯半乳糖胺)之外的大多數或全部糖裂解，同時保持多肽完整。化學去糖基化由Hakimuddin等人,1987,Arch.Biochem.Biophys.259：52及Edge等人,1981,Anal.Biochem.118：131描述。多肽上碳水化合物部分之酶促裂解可藉由使用如Thotakura等人,1987,Meth.Enzymol.138：350所述之多種內糖苷酶及外糖苷酶達成。可藉由使用如Duskin等人,1982,J.Biol.Chem.257：3105所述之化合物衣黴素(tunicamycin)來防止在潛在糖基化位點處發生糖基化。衣黴素阻斷蛋白質-N-糖苷鍵形成。
抗原結合蛋白之另一類型之共價修飾包含以美國專利第4,640,835號；第4,496,689號；第4,301,144號；第4,670,417號；第4,791,192號或第4,179,337號中所述之方式使抗原結合蛋白連接於各種非蛋白質聚合物，包括但不限於各種多元醇，諸如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯。此外，如此項技術中所知，可在抗原結合蛋白內之各種位置上進行胺基酸取代以有助於添加諸如PEG之聚合物。
在一些實施例中，本發明之抗原結合蛋白之共價修飾包含添加一或多個標記。術語「標記基團」意謂任何可偵測標記。適合標記基團之實例包括但不限於以下：放射性同位素或放射性核種(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、螢光基團(例如FITC、若丹明(rhodamine)、 鑭系元素磷光體)、酶基團(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶(luciferase)、鹼性磷酸酶)、化學發光基團、生物素基或由二級報導體識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鍊對序列、二級抗體之結合位點、金屬結合域、抗原決定基標籤)。在一些實施例中，經由具有各種長度之間隔子臂使標記基團偶合於抗原結合蛋白以降低潛在空間位阻。用於標記蛋白質之各種方法在此項技術中為已知的且可用於實施本發明。
一般而言，視欲用以偵測標記之分析而定，標記屬於多種類別：a)同位素標記，其可為放射性或重同位素；b)磁性標記(例如磁性粒子)；c)氧化還原活性部分；d)光學染料；酶基團(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)；e)生物素化基團；及f)由二級報導體識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鍊對序列、二級抗體之結合位點、金屬結合域、抗原決定基標籤等)。在一些實施例中，經由具有各種長度之間隔子臂使標記基團偶合於抗原結合蛋白以降低潛在空間位阻。用於標記蛋白質之各種方法在此項技術中為已知的且可用於實施本發明。
特定標記包括光學染料，包括但不限於發色團、磷光體及螢光團，其中後者在許多情況下具有特異性。螢光團可為「小分子」螢光劑或蛋白質性螢光劑。
就「螢光標記」而言，其意謂可經由其固有螢光性質進行偵測之任何分子。適合螢光標記包括但不限於螢光素(fluorescein)、若丹明、四甲基若丹明、伊紅(eosin)、藻紅(erythrosin)、香豆素(coumarin)、甲基香豆素、芘、孔雀石綠(Malacite green)、二苯乙烯、螢光黃(Lucifer Yellow)、層疊藍J(Cascade BlueJ)、德克薩斯紅(Texas Red)、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC紅640、Cy 5、Cy 5.5、LC紅705、俄勒岡綠(Oregon green)、Alexa-Fluor染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680)、層疊藍、層疊黃(Cascade Yellow)和R-藻紅素(phycoerythrin，PE)(Molecular Probes,Eugene,OR)、FITC、若丹明及德克薩斯紅(Pierce，Rockford,IL)、Cy5、Cy5.5、Cy7(Amersham Life Science,Pittsburgh,PA)。包括螢光團在內之適合光學染料描述於由Richard P. Haugland所著之Molecular Probes Handbook中，該手冊據此以引用的方式明確併入本文中。
適合蛋白質性螢光標記亦包括但不限於綠色螢光蛋白，包括海腎(Renilla)、海筆(Ptilosarcus)或水母(Aequorea)物種之GFP(Chalfie等人,1994,Science 263：802-805)、EGFP(Clontech Laboratories公司,Genbank寄存編號U55762)、藍色螢光蛋白(BFP，Quantum Biotechnologies公司1801 de Maisonneuve Blvd.West,第8層,Montreal,Quebec,Canada H3H 1J9；Stauber,1998,Biotechniques 24：462-471；Heim等人,1996,Curr.Biol.6：178-182)、增強型黃色螢光蛋白(EYFP，Clontech Laboratories公司)、螢光素酶(Ichiki等人,1993,J.Immunol.150：5408-5417)、β半乳糖苷酶(Nolan等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：2603-2607)及海腎(WO92/15673、WO95/07463、WO98/14605、WO98/26277、WO99/49019、美國專利第5292658號、第5418155號、第5683888號、第5741668號、第5777079號、第5804387號、第5874304號、第5876995號、第5925558號)。所有以上引用之參考文獻皆以引用的方式明確併入本文中。
編碼BCMA抗原結合蛋白之聚核苷酸
本發明內涵蓋編碼BCMA抗原結合蛋白之聚核苷酸，特定言之如本文定義之抗體。本文提供所選抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區、CDR及全長重鏈及輕鏈之聚核苷酸序列。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編 碼包含Ab-10之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之六個 CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR 之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及 Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)域之單株抗 體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)域之單株抗體之經分離聚核苷酸。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包 括編碼包含Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含兩個Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及兩個Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含兩個Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及兩個Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)之單株抗體之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含兩個Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及兩個Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)之單株抗體之經分離聚核苷酸。 以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)之至多一個、兩個、 三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編 碼包含Ab-11之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該等CDR 包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)至少80%、 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明 之態樣包括編碼包含分別與Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之單株抗體的經分離聚核苷酸。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：1)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：2)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：3)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：103)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：104)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：105)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：7)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：8)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：9)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：109)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：110)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：111)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：13)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：14)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：15)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：115)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：116)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：117)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：19)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：20)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：21)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：121)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：122)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：123)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之單株抗體的經分 離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：25)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：26)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：27)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：127)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：128)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：129)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：31)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：32)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：33)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：133)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：134)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：135)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：37)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：38)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：39)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：139)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：140)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：141)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：43)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：44)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：45)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：145)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：146)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：147)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：49)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：50)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：51)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：151)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：152)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：153)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：55)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：56)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：57)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：157)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：158)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：159)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：61)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：62)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：63)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：163)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：164)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：165)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：67)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：68)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：69)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：169)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：170)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：171)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：73)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：74)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：75)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：175)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：176)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：177)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：79)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：80)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：81)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：181)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：182)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：183)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：85)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：86)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：87)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：187)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：188)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：189)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：91)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：92)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：93)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：193)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：194)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：195)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：97)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：98)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：99)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：199)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：200)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：201)。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：239)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：205)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：241)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：207)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：243)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：209)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸 序列包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：245)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：211)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：247)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：213)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：249)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：215)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：251)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：217)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：253)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：219)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：255)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：221)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：257)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：223)域。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：259)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：225)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-12Vl(SEQ ID NO：261)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：227)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：263)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：229)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：265)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：231)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：267)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：233)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：269)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：235)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之Vl及Vh域之單株抗體的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：271)及 Ab-17Vh(SEQ ID NO：237)。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括編碼包含抗體Ab-1之單株抗體之經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含輕鏈(SEQ ID NO：279)及重鏈(SEQ ID NO：273)。本發明之態樣包括編碼包含抗體Ab-2之單株抗體之經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含輕鏈(SEQ ID NO：281)及重鏈(SEQ ID NO：275)。本發明之態樣包括編碼包含抗體Ab-3之單株抗體之經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含輕鏈(SEQ ID NO：283)及重鏈(SEQ ID NO：277)。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR 之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)。本發明之態樣包括 編碼包含Ab-14之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及 Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)域之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含兩個Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及兩個Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含兩個或兩個以上Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及兩個或兩個以上Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含兩個或兩個以上Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及兩個或兩個以上Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)之多肽之經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、 Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺 基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等 CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代。
本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離 聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl 及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。 本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。本發明之態樣包括編碼包含分別與Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列之多肽的經分離聚核苷酸。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：1)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：2)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：3)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：103)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：104)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：105)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：7)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：8)、 Vh-CDR3(SEQ ID NO：9)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：109)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：110)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：111)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：13)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：14)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：15)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：115)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：116)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：117)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：19)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：20)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：21)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：121)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：122)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：123)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：25)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：26)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：27)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：127)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：128)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：129)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：31)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：32)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：33)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：133)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：134)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：135)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：37)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：38)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：39)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：139)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：140)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：141)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：43)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：44)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：45)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：145)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：146)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：147)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：49)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：50)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：51)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：151)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：152)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：153)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該 聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：55)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：56)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：57)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：157)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：158)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：159)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：61)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：62)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：63)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：163)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：164)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：165)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：67)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：68)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：69)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：169)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：170)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：171)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：73)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：74)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：75)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：175)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：176)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：177)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：79)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：80)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：81)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：181)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：182)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：183)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：85)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：86)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：87)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：187)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：188)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：189)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：91)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：92)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：93)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：193)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：194)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：195)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之六個CDR之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Vh-CDR1(SEQ ID NO：97)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：98)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：99)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：199)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：200)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：201)。
本發明之態樣包括編碼包含Ab-1之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：239)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：205)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-2之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：241)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：207)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-3之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：243)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：209)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-4之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：245)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：211)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-5之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：247)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：213)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-6之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：249)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：215)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-7之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：251)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：217)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-8之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：253)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：219)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-9之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：255)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：221)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-10之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：257)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：223)域。本發明之態樣包括編碼包含Ab-11之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：259)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：225)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-12之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-12Vl(SEQ ID NO：261)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：227)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-13之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：263)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：229)。 本發明之態樣包括編碼包含Ab-14之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷 酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：265)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：231)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-15之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：267)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：233)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-16之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：269)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：235)。本發明之態樣包括編碼包含Ab-17之Vl及Vh域之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：271)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：237)。
本發明之態樣包括編碼包含抗體Ab-1之重鏈及輕鏈之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含輕鏈(SEQ ID NO：279)及重鏈(SEQ ID NO：273)。本發明之態樣包括編碼包含抗體Ab-2之重鏈及輕鏈之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含輕鏈(SEQ ID NO：281)及重鏈(SEQ ID NO：275)。本發明之態樣包括編碼包含抗體Ab-3之重鏈及輕鏈之多肽的經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列包含輕鏈(SEQ ID NO：283)及重鏈(SEQ ID NO：277)。
對應於本文所述之胺基酸序列之欲用作分離核酸之探針或引子或用作資料庫搜尋之查詢序列的核苷酸序列可藉由自胺基酸序列「回轉譯」或藉由鑒別與已鑒別出了編碼DNA序列之多肽具有胺基酸一致性之區域來獲得。熟知聚合酶鏈反應(PCR)程序可用於分離及擴增編碼BCMA抗原結合蛋白或BCMA抗原結合蛋白多肽片段之所要組合之DNA序列。 使用界定DNA片段之組合之所要末端的寡核苷酸作為5'及3'引子。寡核苷酸可另外含有限制核酸內切酶之識別位點以有助於將擴增之DNA片段組合***表現載體中。PCR技術描述於Saiki等人,Science 239：487(1988)；Recombinant DNA Methodology,Wu等人編,Academic Press公司,San Diego(1989),第189-196頁；及PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications,Innis等人編,Academic Press公司(1990)中。
本發明之核酸分子包括呈單股形式與雙股形式兩者之DNA及RNA以及相應互補序列。DNA包括例如cDNA、基因組DNA、化學合成DNA、藉由PCR擴增之DNA及其組合。本發明之核酸分子包括全長基 因或cDNA分子以及其片段之組合。本發明之核酸優先源於人類來源，但本發明亦包括源於非人類物種者。
在自天然存在之來源分離核酸之情況下，「經分離核酸」為已與自其分離核酸之生物體之基因組中存在之相鄰遺傳序列分離的核酸。 在自模板酶促合成或化學合成核酸(諸如PCR產物、cDNA分子或例如寡核苷酸)之情況下，應瞭解由此等方法產生之核酸為經分離核酸。經分離核酸分子係指呈單獨片段形式或呈較大核酸構築體之組分形式之核酸分子。在一個較佳實施例中，核酸實質上不含污染性內源物質。核酸分子較佳源於至少分離一次之呈實質上純的形式且量或濃度使得能夠藉由標準生物化學方法(諸如Sambrook等人,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,第2版,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY(1989)中所概述者)鑒別、操作及回收其組成核苷酸序列之DNA或RNA。較佳以未由通常存在於真核基因中之內部非轉譯序列或內含子中斷之開放閱讀框形式提供及/或構築此等序列。非轉譯DNA之序列可存在於開放閱讀框之5'或3'，在5'或3'處，該等序列不干擾編碼區之操作或表現。
本發明亦包括在中等嚴格條件且更佳高度嚴格條件下與編碼如本文所述之BCMA抗原結合蛋白之核酸雜交的核酸。影響雜交條件之選擇之基本參數及對設計適合條件之指導由Sambrook、Fritsch及Maniatis(1989,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,第9及11章；及Current Protocols in Molecular Biology,1995,Ausubel等人編,John Wiley & Sons公司,第2.10及6.3-6.4章節)所闡述，且可易於由一般技藝人士基於例如DNA之長度及/或鹼基組成加以確定。一種達成中等嚴格條件之方法涉及使用含有5×SSC、0.5% SDS、1.0mM EDTA(pH 8.0)之預洗滌溶液；具有約50%甲醯胺、6×SSC之雜交緩衝液；及雜交溫度約55℃(或其他類似雜交溶液，諸如含有約50%甲醯胺之雜交溶液，其中雜交溫度為約42℃)，以及於0.5×SSC、0.1% SDS中約60℃之洗滌條件。通常，高度嚴格條件定義為如上雜交條件，但在約68℃下於0.2×SSC、0.1% SDS中進行洗滌。在雜交及洗滌緩衝液中，可以SSPE(1×SSPE為0.15M NaCl、10mM NaH2PO4及1.25mM EDTA，pH 7.4)替換SSC(1×SSC為0.15M NaCl及15mM檸檬酸鈉)；在雜交完成之後進行洗滌15分鐘。應瞭解必要時可藉由應用如熟習此項技術者已知且以下進一步所述之支配雜交反應及雙鏈體穩定性之基本原則調整洗滌溫度及洗滌鹽濃度以達成所要嚴格程度(參見例如Sambrook等人,1989)。當使核酸與序列未知之目標核酸雜交時，雜交物長度假定為雜交核酸之長度。當對序列已知之核酸進行雜交時，雜交物長度可藉由比對核酸序列及鑒別具有最佳序列互補性之一或多個區域來確定。預期長度小於50個鹼基對之雜交物之雜交溫度應比雜交物之熔融溫度(Tm)低5至10℃，其中Tm係根據以下等式確定。對於長度小於18個鹼基對之雜交物，Tm(℃)=2(A+T鹼基數)+4(G+C鹼基數)。對於長度大於18個鹼基對之雜交物，Tm(℃)=81.5+16.6(log10[Na+])+0.41(G+C%)-(600/N)，其中N為雜交物中之鹼基數，且([Na+]為雜交緩衝液中之鈉離子濃度(1×SSC之[Na+]=0.165M)。較佳地，此雜交核酸各自之長度為至少15個核苷酸(或更佳至少18個核苷酸、或至少20個核苷酸、或至少25個核苷酸、或至少30個核苷酸、或至少40個核苷酸、或最佳至少50個核苷酸)，或為其所雜交之本發明核酸的長度之至少25%(更佳至少50%、或至少60%、或至少70%，且最佳至少80%)，且與其所雜交之本發明核酸的序列一致性為至少60%(更佳至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%，且最佳至少99.5%)，其中序列一致性係藉由在對準以使重疊及一致性最大，同時使如上更詳細所述之序列間隙最小時比較雜交核酸之序列來確定。
本發明之變異體通常藉由以下方式來製備：使用卡匣或PCR突變誘發或此項技術中熟知之其他技術，對編碼抗原結合蛋白之DNA中之核苷酸進行位點特異性突變誘發以產生編碼變異體之DNA，及此後在如本文概述之細胞培養物中表現重組DNA。然而，可藉由使用既定技術進行活體外合成來製備包含變異型CDR之具有多達約100-150個殘基之抗原結合蛋白片段。變異體通常展現與天然存在之類似物相同之定性生物活性，例 如結合BCMA及抑制信號傳導，但亦可選擇具有修飾特徵之變異體，如以下將更充分概述。
如此項技術者將瞭解，歸因於遺傳密碼之簡併性，可製備極大數目之皆編碼本發明之CDR(及抗原結合蛋白之重鏈及輕鏈或其他組分)的核酸。因此，在已鑒別了特定胺基酸序列時，熟習此項技術者可藉由以不改變所編碼蛋白質之胺基酸序列之方式，僅修改一或多個密碼子之序列來製備許多不同核酸。
本發明亦提供呈質體、表現載體、轉錄或表現卡匣形式之包含至少一種上述聚核苷酸之表現系統及構築體。此外，本發明提供包含此等表現系統或構築體之宿主細胞。
通常，用於任何宿主細胞中之表現載體將含有用於質體維持及用於選殖及表現外源性核苷酸序列之序列。在某些實施例中總稱為「側接序列」之此等序列將通常包括以下核苷酸序列中之一或多者：啟動子、一或多種增強子序列、複製起點、轉錄終止序列、含有供體及接受體拼接位點之完全內含子序列、編碼用於多肽分泌之前導序列之序列、核糖體結合位點、聚腺苷酸化序列、用於***欲表現之編碼多肽之核酸的多連接子區域、及可選擇標記物元件。以下論述此等序列中之每一者。
視情況，載體可含有「標籤」編碼序列，亦即位於BCMA抗原結合蛋白編碼序列之5'或3'末端之寡核苷酸分子；寡核苷酸序列編碼多聚His(諸如六His)或市售抗體存在之另一「標籤」，諸如FLAG、HA(血球凝集素流感病毒(hemaglutinin influenza virus))或myc。此標籤通常在多肽表現時融合於多肽，且可充當一種親和純化或偵測宿主細胞之BCMA抗原結合蛋白之手段。親和純化可例如藉由使用針對標籤之抗體作為親和基質進行管柱層析來達成。視情況，可隨後藉由各種手段，諸如使用用於裂解之某些肽酶自純化BCMA抗原結合蛋白移除標籤。
側接序列可為同源的(亦即來自與宿主細胞相同之物種及/或品系)、異源的(亦即來自除宿主細胞物種或品系以外之物種)、雜交的(亦即來自一種以上來源之側接序列之組合)、合成的或天然的。因此，側接序列之來源可為任何原核或真核生物體、任何脊椎動物或無脊椎動物生物 體、或任何植物，其限制條件為側接序列在宿主細胞機構中具有功能性且可藉由宿主細胞機構活化。
適用於本發明之載體中之側接序列可藉由此項技術中熟知之若干方法中之任一者獲得。通常，適用於本文中之側接序列先前已藉由圖譜分析及/或藉由限制核酸內切酶消化而鑒別且因此可使用適當限制核酸內切酶自適當組織來源分離。在一些情況下，側接序列之完整核苷酸序列可為已知的。在本文中，可使用本文對於核酸合成或選殖所述之方法合成側接序列。
無論已知全部或僅一部分側接序列，其均可使用聚合酶鏈反應(PCR)及/或藉由用適合探針，諸如來自相同或另一物種之寡核苷酸及/或側接序列片段對基因組文庫進行篩檢來獲得。當側接序列未知時，含有側接序列之DNA片段可自一段可含有例如編碼序列或甚至另外一或多種基因之較大DNA分離。分離可藉由以下方式達成：限制核酸內切酶消化以產生適當DNA片段，隨後使用瓊脂糖凝膠純化、Qiagen®管柱層析(Chatsworth,CA)或熟練技術人員已知之其他方法進行分離。對用以達成此目的之適合酶之選擇將易於為一般技藝人士所顯而易知。
複製起點通常為彼等商購原核表現載體之一部分，且起點有助於在宿主細胞中擴增載體。若所選載體不含有複製起點位點，則可基於已知序列化學合成複製起點位點，且連接至載體中。舉例而言，來自質體pBR322(New England Biolabs,Beverly,MA)之複製起點適於大多數革蘭氏陰性細菌，且各種病毒起點(例如SV40、多瘤、腺病毒、水泡性口炎病毒(VSV)或諸如HPV或BPV之乳頭狀瘤病毒)適用於哺乳動物細胞中之選殖載體。 通常，複製起點組分不為哺乳動物表現載體所需(例如僅因為SV40起點亦含有病毒早期啟動子而常使用SV40起點)。
轉錄終止序列通常位於多肽編碼區之末端之3'方向且用於終止轉錄。通常，原核細胞中之轉錄終止序列為富含G-C之片段，繼而為多聚T序列。儘管序列易於自文庫選殖或甚至作為載體之一部分商購，但其亦可使用用於核酸合成之方法(諸如本文所述者)容易地合成。
可選擇標記基因編碼為在選擇性培養基中生長之宿主細胞 之存活及生長所必需的蛋白質。典型選擇標記基因編碼具有以下性質之蛋白質：(a)賦予原核宿主細胞對抗生素或其他毒素，例如胺苄青黴素(ampicillin)、四環素(tetracycline)或康黴素(kanamycin)之抗性；(b)彌補細胞之營養缺陷不足；或(c)供應不可自複合或成分確定培養基獲得之關鍵養分。特定可選擇標記物為康黴素抗性基因、胺苄青黴素抗性基因及四環素抗性基因。有利的是，新黴素(neomycin)抗性基因亦可用於在原核宿主細胞與真核宿主細胞兩者中進行選擇。
其他可選擇基因可用於擴增將表現之基因。擴增為產生對生長或細胞存活而言關鍵之蛋白質所需之基因在連續多代重組細胞之染色體內串聯重複的過程。適於哺乳動物細胞之可選擇標記物之實例包括二氫葉酸還原酶(DHFR)及無啟動子胸苷激酶基因。將哺乳動物細胞轉型體置於選擇壓力下，其中僅轉型體藉助於載體中存在之可選擇基因而唯一適於存活。選擇壓力係藉由在以下條件下培養經轉型細胞來施加：連續增加培養基中選擇劑之濃度，藉此導致擴增可選擇基因與編碼另一基因(諸如結合BCMA多肽之抗原結合蛋白抗體)之DNA兩者。因此，自擴增之DNA合成增加量之多肽，諸如BCMA抗原結合蛋白。
核糖體結合位點通常為rnRNA之轉譯啟始所必需且特徵在於具有Shine-Dalgarno序列(原核生物)或Kozak序列(真核生物)。該元件通常位於啟動子之3'方向及欲表現多肽之編碼序列的5'方向。
在一些情況下，諸如當在真核宿主細胞表現系統中需要糖基化時，可操作各種前序列或原序列以改良糖基化或產率。舉例而言，可改變特定信號肽之肽酶裂解位點，或添加原序列，此亦可影響糖基化。最終蛋白質產物可在-1位置(相對於成熟蛋白質之第一個胺基酸)具有一或多個由表現產生之可能尚未完全移除之額外胺基酸。舉例而言，最終蛋白質產物可具有一或兩個存在於肽酶裂解位點中之連接於胺基端之胺基酸殘基。 或者，若酶在成熟多肽內之此區域處切割，則使用一些酶裂解位點可產生所要多肽之略微截短形式。
本發明之表現及選殖載體將通常含有由宿主生物體識別且可操作地連接於編碼BCMA抗原結合蛋白之分子之啟動子。啟動子為位於 結構基因之起始密碼子上游(亦即5')之非轉錄序列(通常在約100至1000bp內)，其控制結構基因之轉錄。啟動子依照慣例分組至以下兩個類別之一：誘導性啟動子及組成性啟動子。誘導性啟動子可回應於培養條件之某一變化(諸如存在或不存在某一養分或溫度變化)來引發在其控制下自DNA之轉錄程度增加。另一方面，組成性啟動子均一轉錄其所可操作地連接之基因，亦即幾乎不控制或不控制基因表現。許多由多種潛在宿主細胞識別之啟動子為熟知的。藉由限制酶消化自來源DNA移除啟動子及將所要啟動子序列***載體中來使適合啟動子可操作地連接於編碼構成本發明之BCMA抗原結合蛋白之重鏈或輕鏈的DNA。
適合用於酵母宿主之啟動子亦在此項技術中為熟知的。酵母增強子有利地與酵母啟動子一起使用。適合用於哺乳動物宿主細胞之啟動子為熟知的且包括但不限於自病毒之基因組獲得者，該等病毒諸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(諸如腺病毒2)、牛乳頭狀瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨細胞病毒、逆轉錄病毒、B型肝炎病毒且最佳為猿猴病毒40(SV40)。其他適合哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子，例如熱休克啟動子及肌動蛋白(actin)啟動子。
可能受到關注之其他啟動子包括但不限於：SV40早期啟動子(Benoist及Chambon,1981,Nature 290：304-310)；CMV啟動子(Thornsen等人,1984,Proc.Natl.Acad.U.S.A.81：659-663)；勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)之3'長末端重複序列中所含之啟動子(Yamamoto等人,1980,Cell 22：787-797)；皰疹胸苷激酶啟動子(Wagner等人,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.78：1444-1445)；金屬硫蛋白(metallothionine)基因之啟動子及調控序列(Prinster等人,1982,Nature 296：39-42)；及原核啟動子，諸如β-內醯胺酶啟動子(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.75：3727-3731)；或tac啟動子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80：21-25)。亦受到關注的是展現組織特異性且已用於轉殖基因動物中之以下動物轉錄控制區：在胰腺腺泡細胞中具有活性之彈性蛋白酶(elastase)I基因控制區(Swift等人,1984,Cell 38：639-646；Ornitz等人,1986,Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.50：399-409；MacDonald,1987,Hepatology 7：425-515)；在胰腺β細胞中具有活性之胰島素基因控制區(Hanahan,1985,Nature 315：115-122)；在淋巴樣細胞中具有活性之免疫球蛋白基因控制區(Grosschedl等人,1984,Cell 38：647-658；Adames等人,1985,Nature 318：533-538；Alexander等人,1987,Mol.Cell.Biol.7：1436-1444)；在睾丸、***、淋巴樣及肥大細胞中具有活性之小鼠乳腺腫瘤病毒控制區(Leder等人,1986,Cell 45：485-495)；在肝中具有活性之白蛋白(albumin)基因控制區(Pinkert等人,1987,Genes and Devel.1：268-276)；在肝中具有活性之α-胎蛋白(alpha-feto-protein)基因控制區(Krumlauf等人,1985,Mol.Cell.Biol.5：1639-1648；Hammer等人,1987,Science 253：53-58)；在肝中具有活性之α1-抗胰蛋白酶基因控制區(Kelsey等人,1987,Genes and Devel.1：161-171)；在骨髓細胞中具有活性之β-球蛋白基因控制區(Mogram等人,1985,Nature 315：338-340；Kollias等人,1986,Cell 46：89-94)；在腦中之寡樹突細胞中具有活性之髓磷脂(myelin)鹼性蛋白基因控制區(Readhead等人,1987,Cell 48：703-712)；在骨骼肌中具有活性之肌球蛋白(myosin)輕鏈-2基因控制區(Sani,1985,Nature 314：283-286)；及在下視丘中具有活性之促性腺釋放激素基因控制區(Mason等人,1986,Science 234：1372-1378)。
增強子序列可***載體中以增加由高等真核生物對編碼構成本發明之BCMA抗原結合蛋白之輕鏈或重鏈的DNA之轉錄。增強子為DNA之順式作用元件，長度通常為約10-300bp，其作用於啟動子以增加轉錄。增強子具有相對定向及位置非依賴性，其已見於轉錄單元之5'位置與3'位置兩者處。可自哺乳動物基因獲得之若干增強子序列為已知的(例如球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白及胰島素)。然而，通常使用來自病毒之增強子。此項技術中已知之SV40增強子、巨細胞病毒早期啟動子增強子、多瘤增強子及腺病毒增強子為用於活化真核啟動子之示範性增強元件。儘管增強子可在載體中位於編碼序列之5'或3'方向，但其通常位於啟動子之5'位點處。編碼適當天然或異源信號序列(前導序列或信號肽)之序列可併入表現載體中以促進抗體之細胞外分泌。對信號肽或前導序列之選擇取決於欲在其中產生抗體之宿主細胞之類型，且異源信號序列可替換天然信號序列。在哺乳動物宿主細胞中具有功能性之信號肽之實例包括以下：美 國專利第4,965,195號中所述之介白素(interleukin)-7(IL-7)之信號序列；Cosman等人,1984,Nature 312：768中所述之介白素-2受體之信號序列；EP專利第0367 566號中所述之介白素-4受體信號肽；美國專利第4,968,607號中所述之I型介白素-1受體信號肽；EP專利第0 460 846號中所述之II型介白素-1受體信號肽。
本發明之表現載體可自諸如市售載體之起始載體構築。此等載體可含有或可不含有全部所要側接序列。當本文所述之一或多種側接序列未已存在於載體中時，其可個別地獲得且連接至載體中。用於獲得各側接序列之方法為熟習此項技術者所熟知。
在已構築載體且編碼構成BCMA抗原結合序列之輕鏈、重鏈、或輕鏈及重鏈之核酸分子已***載體之適當位點中之後，所完成之載體可***適合宿主細胞中以用於擴增及/或多肽表現。將BCMA抗原結合蛋白之表現載體轉型至所選宿主細胞中可藉由熟知方法來達成，該等方法包括轉染、感染、磷酸鈣共沈澱、電穿孔、顯微注射、脂質體轉染、DEAE-葡聚糖介導之轉染或其他已知技術。所選方法將部分地隨欲使用之宿主細胞之類型而變。此等方法及其他適合方法為熟練技術人員所熟知，且例如闡述於Sambrook等人,2001(上文)中。
當在適當條件下培養時，宿主細胞合成BCMA抗原結合蛋白，其可隨後自培養基收集(若宿主細胞將其分泌至培養基中)或直接自產生其之宿主細胞收集(若其不分泌)。對適當宿主細胞之選擇將取決於各種因素，諸如所要表現量、合乎活性需要或為活性所必需之多肽修飾(諸如糖基化或磷酸化)及折疊成生物活性分子之容易性。宿主細胞可為真核或原核細胞。
可用作表現宿主之哺乳動物細胞株在此項技術中為熟知的且包括但不限於可自美國菌種中心(ATCC)獲得之永生化細胞株且用於此項技術中已知之表現系統中之任何細胞株皆可用於製備本發明之重組多肽。一般而言，用包含編碼所要抗BCMA抗體多肽之DNA之重組表現載體轉型宿主細胞。可採用之宿主細胞尤其為原核生物、酵母或高等真核細胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌(E.coli)或桿 菌。高等真核細胞包括昆蟲細胞及哺乳動物來源之既定細胞株。適合哺乳動物宿主細胞株之實例包括猴腎細胞之COS-7株系(ATCC CRL 1651)(Gluzman等人,1981,Cell 23：175)、L細胞、293細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或其衍生物(諸如Veggie CHO及在無血清培養基中生長之相關細胞株(Rasmussen等人,1998,Cytotechnology 28：31))、HeLa細胞、BHK(ATCC CRL 10)細胞株、及如McMahan等人,1991,EMBO J.10：2821所述之源於非洲綠猴腎細胞株CVI之CVI/EBNA細胞株(ATCC CCL 70)、人類胚腎細胞(諸如293、293 EBNA或MSR 293)、人類表皮A431細胞、人類Colo205細胞、其他經轉型靈長類動物細胞株、正常二倍體細胞、源於活體外培養原生組織、原生外植體之細胞株、HL-60、U937、HaK或Jurkat細胞。視情況，當需要在各種信號轉導或報導體分析中使用多肽時，可使用例如哺乳動物細胞株(諸如HepG2/3B、KB、NIH 3T3或S49)來表現多肽。或者，有可能在諸如酵母之低等真核生物中或在諸如細菌之原核生物中產生多肽。適合酵母包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、克魯維酵母菌株(Kluyveromyces strain)、念珠菌屬(Candida)或能夠表現異源多肽之任何酵母菌株。適合細菌菌株包括大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、鼠傷寒沙氏桿菌(Salmonella typhimurium)或能夠表現異源多肽之任何細菌菌株。若在酵母或細菌中製備多肽，則可能需要例如藉由使適當位點磷酸化或糖基化來修飾其中產生之多肽以獲得功能性多肽。此等共價連接可使用已知化學或酶促方法達成。 亦可藉由使本發明之經分離核酸可操作地連接於一或多種昆蟲表現載體中之適合控制序列及採用昆蟲表現系統來產生多肽。用於桿狀病毒/昆蟲細胞表現系統之材料及方法可以套組形式自例如Invitrogen,San Diego,Calif.,U.S.A.(MaxBac®套組)購得，且此等方法在此項技術中為熟知的，如Summers及Smith,Texas Agricultural Experiment Station Bulletin第1555期(1987)、以及Luckow及Summers,Bio/Technology 6：47(1988)中所述。無細胞轉譯系統亦可用於使用源於本文揭露之核酸構築體之RNA來產生多肽。 供用於細菌、真菌、酵母及哺乳動物細胞宿主之適當選殖及表現載體由 Pouwels等人(Cloning Vectors：A Laboratory Manual,Elsevier,New York,1985)描述。包含較佳可操作地連接於至少一種表現控制序列之本發明之經分離核酸的宿主細胞為「重組宿主細胞」。
在某些實施例中，可經由確定哪些細胞株具有高表現量且組成性產生具有BCMA結合性質之抗原結合蛋白來選擇細胞株。在另一實施例中，可選擇來自B細胞譜系之不產生其自身抗體，但能夠製備且分泌異源抗體之細胞株。
抗體藥物結合物(ADC)
本發明之實施例包括抗體藥物結合物(ADC)。如將瞭解，結合於諸如毒素或其他分子之藥物之抗體高度適用於靶向殺傷表現可由諸如抗體之特定結合分子特異性結合之分子的細胞。BCMA在惡性漿細胞(多發性骨髓瘤及鬱積型骨髓瘤)及原因不明性單株γ球蛋白症(MGUS)漿細胞中之表現量相對高於在正常漿細胞上觀測到之含量，如實例1中所示。
通常，ADC包含結合於化學治療劑，例如細胞毒性劑、細胞生長抑制劑、毒素或放射性藥劑之本文所述之BCMA抗原結合蛋白，較佳為抗體(更佳為人類單株抗huBCMA抗體，諸如Ab-1、Ab-2或Ab-3)。連接子分子可用於使藥物結合於抗體。適用於ADC技術中之多種連接子及藥物在此項技術中為已知的且可用於本發明之實施例中。(參見US20090028856；US2009/0274713；US2007/0031402；WO2005/084390；WO2009/099728；US5208020；US5416064；US5475092；5585499；6436931；6372738；及6340701，其皆以引用的方式併入本文中)。
實施例包括結合於如本文定義之藥物的包含本申請案整篇提供之序列之BCMA抗原結合蛋白。較佳實施例包含結合於如本文所述之抗huBCMA抗體之藥物。較佳實施例包含使用連接子結合於如本文所述之抗huBCMA抗體之藥物。較佳實施例包含使用連接子結合於如本文所述之抗huBCMA抗體之藥物，其中該等連接子為不可裂解的，諸如MCC或Mal-dPEG4-NHS。較佳實施例包含使用不可裂解連接子結合於如本文所述之抗huBCMA抗體之藥物，其中該連接子為MCC(在本文中亦稱為SMCC，參見圖2)。較佳藥物包含如下所述之美登木素，且特定言之為DM1或 DM4。因此，在較佳實施例中，如本文所述之抗huBCMA抗體藉由MCC連接子結合於DM1。在特別較佳實施例中，抗huBCMA抗體為如本文以不同方式所述之藉由MCC連接子結合於DM1之Ab-1、Ab-2或Ab-3。
連接子
在某些實施例中，ADC包含由一或多種連接子組分組成之連接子。示範性連接子組分包括6-順丁烯二醯亞胺基己醯基、順丁烯二醯亞胺基丙醯基、纈胺酸-瓜胺酸、丙胺酸-***酸、對胺基苯甲氧基羰基、Mal-dPEG4-NHS(QuantaBiodesign)、及由與連接子試劑結合產生之連接子組分，該等連接子試劑包括但不限於4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-丁二醯亞胺酯(「SPP」)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」，在本文中亦稱為「MCC」)及(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SIAB」)。連接子可為「可裂解」連接子或「不可裂解」連接子(Ducry及Stump,Bioconjugate Chem.2010,21,5-13；以全文引用的方式併入本文中)。可裂解連接子經設計以在經受某些環境因素時，例如在內化至目標細胞中時釋放藥物。可裂解連接子包括酸不穩定性連接子、蛋白酶敏感性連接子、光不穩定性連接子、二甲基連接子或含有二硫化物之連接子。不可裂解連接子傾向於在由目標細胞內化及在目標細胞內降解後保持與抗體之至少一個胺基酸及藥物共價締合。一示範性不可裂解連接子為MCC(在本文中亦稱為SMCC)。BCMA ADC之最佳不可裂解連接子為4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」，在本文中亦稱為「MCC」)或Mal-dPEG4-NHS，如下所示。
藥物
在某些實施例中，抗體結合於化學治療劑。化學治療劑之實 例包括烷基化劑，諸如噻替派及環磷醯胺(CYTOXAN.TM.)；烷基磺酸酯，諸如白消安、英丙舒凡及保釋芬；氮丙啶，諸如本多帕、卡巴醌、米特多帕及優多帕；伸乙亞胺及甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；多聚乙醯(尤其布拉它辛及布拉它辛酮)；喜樹鹼(包括合成類似物拓撲替康)；苔蘚抑素；凱利他汀；CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新及比折來新合成類似物)；念珠藻素(特定言之念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌黴素(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；軟珊瑚醇；潘卡他汀；匍枝珊瑚醇；海綿抑制素；氮芥，諸如苯丁酸氮芥、氯瑪法辛、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖、新恩比興、苯芥膽固醇、松龍苯芥、氯乙環磷醯胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，諸如卡莫司汀、吡葡亞硝脲、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素，尤其卡奇黴素γ1及卡奇黴素θI，參見例如Angew Chem.Intl.Ed.Engl.33：183-186(1994)；達內黴素，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素；以及新抑癌素發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素、放線菌素、安麯黴素、重氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C、卡拉比星、洋紅黴素、嗜癌菌素；色黴素、放線菌素D、道諾黴素、地托比星、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯基)-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅黴素、絲裂黴素、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、培洛黴素、波弗黴素、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈脲黴素、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他汀、佐柔比星；抗代謝物，諸如甲胺蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、甲胺蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如環胞苷、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-FU；雄激素，諸如二***、屈他雄酮丙酸鹽、環硫雄醇、美雄烷、睾內酯；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑，諸如弗羅林酸；乙醯葡醛酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；安吖啶；倍曲布西；比生群；依達 曲沙；地佛法明；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞；依利醋銨；埃博黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；洛尼代寧；美登木素，諸如美登素及安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹丹莫；二胺硝吖啶；噴司他汀；苯來美特；吡柔比星；足葉草酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK.RTM.；雷佐生；根黴素；西索菲蘭；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(尤其T-2毒素、維拉庫林A、桿孢菌素A及蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；格塞圖辛；***糖苷(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；紫杉烷，例如太平洋紫杉醇(TAXOL.TM.，Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)及多西他賽(TAXOTERE.RTM.，Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春花鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；絲裂黴素C；米托蒽醌；長春新鹼；長春瑞濱；諾維本；諾安托；替尼泊苷；道諾黴素；胺基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸；卡培他濱；及以上任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。此定義中亦包括用於調控或抑制激素對腫瘤之作用之抗激素劑，諸如抗***，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬、LY117018、奧那司酮及托瑞米芬(法樂通)；及抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林及戈舍瑞林；siRNA及以上任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。可用於本發明之其他化學治療劑揭露於美國公開案第20080171040號或美國公開案第20080305044號中且以全文引用的方式併入本文中。
存在許多影響細胞微管之自天然來源萃取物獲得之化合物、及似乎具有作為用於產生免疫結合物之毒素之潛力的半合成及合成類似物。此等分子及利用其之藥物產品之實例包括以下：秋水仙鹼位點結合劑(庫瑞辛)、考布他汀(AVE806、考布他汀A-4前藥(CA4P)、Oxi-4503)、念珠藻素(LY355703)、盤皮海綿內酯、多拉司他汀及類似物(奧莉斯汀PHE、多拉司他汀10、ILX-651、西普司他汀1、TZT-1027)、埃博黴素 (BMS-247550、BMS-310705、EP0906、KOS-862、ZK-EPO)、軟珊瑚醇、FR182877、大田軟海綿素B(E7389)、月苄三甲氯銨(NPI-2352及NPI-2358)、哈米特林(HTI-286)、勞瑪立得、美登木素(「DM1」、「DM3」或「DM4」)(比伐單抗莫坦辛、huN901-DM1/BB-10901TAP、MLN591DM1、My9-6-DM1、曲妥珠單抗-DM1)、PC-SPES、普魯賽德A、白藜蘆醇、S-烯丙基巰基半胱胺酸(SAMC)、海綿抑制素、維魯米德、分子運動驅動蛋白(SB-715992)、改造之秋水仙鹼位點結合劑(A-289099、A-293620/A-318315、ABT-751/E7010、D-24851/D-64131、ZD6126)、其他新穎紡錘體毒物(2-甲氧***(2-ME2)、苯并咪唑胺基甲酸酯(ANG 600系列、甲苯咪唑)、CP248/CP461、HMN-214、R440、SDX-103、T67/T607)。此外，其他海洋來源毒素評述於Mayer,A.M.S.Marine Pharmacology in 1998：Antitumor and Cytotoxic Compounds.The Pharmacologist.41(4)：159-164(1999)中。
在較佳實施例中，BCMA ADC包含結合於一或多個作為藉由抑制微管蛋白聚合來起作用之有絲***抑制劑之美登木素分子的如本文所述之抗體。包括各種修飾在內之美登木素描述於美國專利第3896111號；第4151042號；第4137230號；第4248870號；第4256746號；第4260608號；第4265814號；第4294757號；第4307016號；第4308268號；第4309428號；第4313946號；第4315929號；第4317821號；第4322348號；第4331598號；第4361650號；第4364866號；第4424219號；第4450254號；第4362663號；第4371533號；及WO 2009/099728中。美登木素藥物部分可自天然來源分離，使用重組技術產生或合成製備。示範性美登木素包括C-19-去氯基(美國專利第4256746號)、C-20-羥基(或C-20-去甲基)+/-C-19-去氯基(美國專利第4307016號及第4361650號)、C-20-去甲氧基(或C-20-醯基氧基(-OCOR))+/-去氯基(美國專利第4294757號)、C-9-SH(美國專利第4,424,219號)、C-14-烷氧基甲基(去甲氧基/CH2OR)(美國專利第4,331,598號)、C-14-羥甲基或醯基氧基甲基(CH2OH或CH2OAc)(美國專利第4,450,254號)、C-15-羥基/醯基氧基(美國專利第4,364,866號)、C-15-甲氧基(美國專利第4,313,946號及第4,315,929號)、C-18-N-去甲基(美國專利第4,362,663號及第4,322,348號)及4,5-去氧基(美國專利第4,371,533號)。美登木素化合物上 之各種位置可用作鍵聯位置，視所要連接之類型而定。舉例而言，對於形成酯鍵，具有羥基之C-3位置、經羥甲基改質之C-14位置、經羥基改質之C-15位置及具有羥基之C-20位置皆適合(美國專利第5208020號、第RE39151號及第6913748號；美國專利申請公開案第20060167245號及第20070037972號以及WO 2009099728)。
較佳美登木素包括此項技術中稱為DM1、DM3及DM4之美登木素(美國專利申請公開案第2009030924號及第20050276812號，以引用的方式併入本文中)。合成改變安絲菌素P-3以產生彈頭型DM1。DM1據報導在長春花生物鹼結合位點中結合微管蛋白且抑制微管蛋白聚合。
含有美登木素之ADC、製備此等ADC之方法及其治療用途揭露於美國專利第5208020號及第5416064號、美國專利申請公開案第20050276812號及WO 2009099728(皆以引用的方式併入本文中)中。適用於製備美登木素ADC之連接子在此項技術中為已知的(美國專利第5208020號及美國專利申請公開案第2005016993號及20090274713；皆以引用的方式併入本文中)。包含SMCC連接子之美登木素ADC可如美國專利公開案第2005/0276812號中所揭露進行製備。
本發明之實施例包括Ab-1-MCC-DM1、Ab-2-MCC-DM1、Ab-3-MCC-DM1、Ab-4-MCC-DM1、Ab-5-MCC-DM1、Ab-6-MCC-DM1、Ab-7-MCC-DM1、Ab-8-MCC-DM1、Ab-9-MCC-DM1、Ab-10-MCC-DM1、Ab-11-MCC-DM1、Ab-12-MCC-DM1、Ab-13-MCC-DM1、Ab-14-MCC-DM1、Ab-15-MCC-DM1、Ab-16-MCC-DM1及Ab-17-MCC-DM1。
藥物裝載
現存抗體-藥物結合物之一主要缺點為其不能傳遞足夠濃度之藥物至目標部位，因為靶向抗原之數目有限及如甲胺蝶呤、道諾黴素及長春新鹼之制癌藥物之細胞毒性相對溫和。為達成顯著細胞毒性，使大量藥物分子直接或經由聚合載體分子連接於抗體變得有必要。然而，此等經重大修飾之抗體常顯示與目標抗原之結合受損及自血流之活體內清除較快。
美登木素與細胞結合劑(諸如抗體)之當前結合方法在此項技術中為熟知的且可用於產生BCMA ADC。結合方法可涉及兩個反應步驟，如美國專利第5,208,020號中所述。用於結合美登木素之一步方法可用於產生BCMA ADC且描述於美國專利第6,441,163號中。基於美登木素之免疫毒素技術可自ImmunoGen公司(Cambridge,Mass.)獲得。
使美登木素(例如DM1)結合於如本文所述之BCMA抗體之方法將產生包含一群美登木素(例如DM1)結合之抗體之組合物，其中每個抗體具有一定範圍之美登木素(例如DM1)分子(藥物-抗體比率或DAR)。 BCMA ADC之每個抗體可具有1至20個化學治療劑。BCMA ADC之組合物可藉由組合物中每個抗體分子具有之平均藥物部分數表徵。平均藥物部分數可藉由習知手段，諸如質譜、免疫分析及HPLC(例如參見實例7)確定。 在一些情況下，均質BCMA ADC群體可藉助於逆相HPLC或電泳進行分離並純化。因此，醫藥BCMA ADC組合物可含有連接於1、2、3、4、5、6、7或7個以上藥物部分之抗體之異質或均質群體。本發明之實施例包括包含每個BCMA ADC之平均美登木素(例如DM1)分子數在1與10之間、在2與7之間或較佳在3與5之間的組合物。在較佳實施例中，BCMA ADC之組合物的每個BCMA ADC之平均美登木素(例如DM1)分子數為約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9、約4.0、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4、約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9或約5.0。該種組合物可含有治療有效量之BCMA ADC且可凍乾。在特別較佳實施例中，BCMA ADC包含如本文以不同方式所述之在上述比率下藉由MCC連接子結合於DM1之抗體Ab-1、Ab-2或Ab-3。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥 物。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia 編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接 子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)，其中該抗體進一步包含連接子及藥 物。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明 之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態 樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及兩個Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及兩個Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及兩個Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。 本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括 Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之 態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺 基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經 分離單株抗體，其包含分別與Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-13Vl(SEQ ID NO：264) 及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗 體，其與Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如 DM1。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat 或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該 抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR係如藉由AHo、Kabat或Clothia編號系統中之任一者所確定，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為 Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包 含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，該等CDR特定言之為Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括單株抗體，其包含Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)域，其中該抗體進一步包含連接子及 藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)域，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗 體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及兩個Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及兩個Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含兩個Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及兩個Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。本發明之態樣包括以上提及者之片段、衍生物、突變蛋白質及變異體。
本發明之態樣包括包含Ab-1之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：4)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：5)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：6)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：106)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：107)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：108)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-2之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：10)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：11)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：12)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：112)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：113)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：114)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-3之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：16)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：17)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：18)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：118)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：119)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：120)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-4之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：22)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：23)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：24)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：124)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：125)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：126)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-5之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：28)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：29)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：30)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：130)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：131)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：132)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-6之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：34)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：35)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：36)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：136)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：137)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：138)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-7之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：40)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：41)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：42)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：142)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：143)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：144)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-8之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：46)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：47)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：48)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：148)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：149)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：150)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-9之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：52)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：53)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：54)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：154)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：155)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：156)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-10之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：58)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：59)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：60)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：160)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：161)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：162)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-11之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：64)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：65)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：66)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：166)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：167)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：168)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-12之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：70)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：71)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：72)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：172)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：173)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：174)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-13之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：76)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：77)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：78)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：178)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：179)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：180)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-14之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：82)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：83)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：84)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：184)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：185)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：186)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-15之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：88)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：89)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：90)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：190)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：191)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：192)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-16之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：94)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：95)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：96)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：196)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：197)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：198)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括包含Ab-17之六個CDR之經分離單株抗體，其中該等CDR包括Vh-CDR1(SEQ ID NO：100)、Vh-CDR2(SEQ ID NO：101)、Vh-CDR3(SEQ ID NO：102)、Vl-CDR1(SEQ ID NO：202)、Vl-CDR2(SEQ ID NO：203)及Vl-CDR3(SEQ ID NO：204)之至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸添加、缺失或取代，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-1Vl(SEQ ID NO：240)及Ab-1Vh(SEQ ID NO：206)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-2Vl(SEQ ID NO：242)及Ab-2Vh(SEQ ID NO：208)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-3Vl(SEQ ID NO：244)及Ab-3Vh(SEQ ID NO：210)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-4Vl(SEQ ID NO：246)及Ab-4Vh(SEQ ID NO：212)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-5Vl(SEQ ID NO：248)及Ab-5Vh(SEQ ID NO：214)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物， 且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-6Vl(SEQ ID NO：250)及Ab-6Vh(SEQ ID NO：216)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-7Vl(SEQ ID NO：252)及Ab-7Vh(SEQ ID NO：218)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-8Vl(SEQ ID NO：254)及Ab-8Vh(SEQ ID NO：220)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-9Vl(SEQ ID NO：256)及Ab-9Vh(SEQ ID NO：222)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-10Vl(SEQ ID NO：258)及Ab-10Vh(SEQ ID NO：224)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-11Vl(SEQ ID NO：260)及Ab-11Vh(SEQ ID NO：226)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-12Vl(SEQ ID NO：262)及Ab-12Vh(SEQ ID NO：228)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-13Vl(SEQ ID NO：264)及Ab-13Vh(SEQ ID NO：230)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-14Vl(SEQ ID NO：266)及Ab-14Vh(SEQ ID NO：232)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-15Vl(SEQ ID NO：268)及Ab-15Vh(SEQ ID NO：234)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-16Vl(SEQ ID NO：270)及Ab-16Vh(SEQ ID NO：236)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其包含分別與Ab-17Vl(SEQ ID NO：272)及Ab-17Vh(SEQ ID NO：238)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致之Vl及Vh胺基酸序列，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-1輕鏈(SEQ ID NO：280)及Ab-1重鏈(SEQ ID NO：274)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離抗體，其與Ab-2輕鏈(SEQ ID NO：282)及Ab-2重鏈(SEQ ID NO：276)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。本發明之態樣包括經分離單株抗體，其與Ab-3輕鏈(SEQ ID NO：284)及Ab-3重鏈(SEQ ID NO：278)至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致，其中該抗體進一步包含連接子及藥物，且其中該連接子為MCC且該藥物為美登木素，諸如DM1。以上提及之實施例之態樣包括人類單株抗體、人類單株IgG抗體及人類單株IgG1抗體。
BCMA抗原結合蛋白用於治療目的之用途
本說明書整篇所述之BCMA抗原結合蛋白之所有態樣皆可用於製備治療本文所述之各種病狀及疾病之藥劑。本說明書整篇所述之BCMA抗原結合蛋白之所有態樣皆可用於治療與表現BCMA之B細胞，且特定言之記憶B細胞及漿B細胞相關之疾病或病狀。BCMA在惡性漿細胞(多發性骨髓瘤及鬱積型骨髓瘤)及原因不明性單株γ球蛋白症(MGUS)漿細胞中之表現量相對高於在正常漿細胞上觀測到之含量，如實例1中所示。
如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC可用於治療其中惡性B細胞在其表面上表現BCMA之B細胞相關癌症。BCMA ADC結合惡性B細胞 表面上之BCMA，藉由受體介導之胞吞作用內化，在細胞內釋放化學治療藥物(通常經由溶酶體-內體路徑之酸性環境)且藉此殺傷惡性細胞。在細胞內釋放藥物會降低游離藥物對非惡性細胞之旁觀者殺傷(bystander killing)。因此，如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC可用於治療疾病，包括但不限於B細胞癌症，且特定言之多發性骨髓瘤及惡性漿細胞贅瘤，以及BCMA+高級淋巴瘤。如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC亦可用於治療卡勒氏病及骨髓瘤病；漿細胞白血病；漿細胞瘤；B細胞前淋巴細胞性白血病；毛細胞白血病；B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；急性骨髓性白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)；急性淋巴細胞性白血病(ALL)；慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；濾泡性淋巴瘤(包括濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤類型)；伯基特氏淋巴瘤(地方性伯基特氏淋巴瘤；單發性伯基特氏淋巴瘤)；邊緣區淋巴瘤(黏膜相關淋巴組織；MALT/MALT瘤；單核細胞樣B細胞淋巴瘤；伴有絨毛狀淋巴細胞之脾淋巴瘤)；套膜細胞淋巴瘤；大細胞淋巴瘤(彌漫性大細胞；彌漫性混合細胞；免疫母細胞性淋巴瘤；原發性縱隔B細胞淋巴瘤；血管中心淋巴瘤-肺B細胞)；小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)；前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤；骨髓性白血病(粒細胞性；髓細胞性；急性骨髓性白血病；慢性骨髓性白血病；亞急性骨髓性白血病；骨髓肉瘤；綠色瘤；粒細胞肉瘤；急性早幼粒細胞白血病；急性髓單核細胞白血病)；瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症或其他B細胞淋巴瘤。
如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC可與標準癌症療法，諸如但不限於手術、放射療法及化學療法以及蛋白酶體抑制劑、皮質類固醇及幹細胞移植物組合使用。如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC可與投與化學治療劑組合使用。化學治療劑可在投與一或多種如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC之前、與之同時或在其之後投與。化學治療劑為用於治療癌症之化合物。化學治 療劑之實例包括但不限於：13-順-視黃酸、2-CdA 2-氯去氧腺苷、5-阿紮胞苷5-氟尿嘧啶5-FU、6-巰基嘌呤、6-MP 6-TG 6-硫鳥嘌呤、凱素(Abraxane)、Accutane®、放線菌素-D、Adriamycin®、Adrucil®、Agrylin®、Ala-Cort®、阿地介白素(Aldesleukin)、阿來珠單抗(Alemtuzumab)、愛寧達(ALIMTA)、阿利維甲酸(Alitretinoin)、Alkaban-AQ®、Alkeran®、全反式視黃酸(All-transretinoic Acid)、α干擾素、六甲蜜胺(Altretamine)、胺甲喋呤(Amethopterin)、阿米福汀(Amifostine)、胺魯米特阿那格雷(Aminoglutethimide Anagrelide)、Anandron®、阿那曲唑(Anastrozole)、阿糖胞嘧啶(Arabinosylcytosine)、阿糖胞苷(Ara-C)、Aranesp®、Aredia®、Arimidex®、Aromasin®、Arranon®、三氧化二砷、天冬醯胺酶、ATRA、Avastin®、阿紮胞苷、BCG、BCNU、苯達莫司汀(Bendamustine)、貝伐單抗(Bevacizumab)、蓓薩羅丁(Bexarotene)、BEXXAR®、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU、Blenoxane®、博萊黴素(Bleomycin)、硼替佐米(Bortezomib)、白消安(Busulfan)、Busulfex®、C225、甲醯四氫葉酸鈣、Campath®、Camptosar®、喜樹鹼(Camptothecin)-11、卡培他濱(Capecitabine)CaracTM、卡鉑(Carboplatin)、卡莫司汀(Carmustine)、卡莫司汀粉片、Casodex®、CC-5013、CCI-779、CCNU、CDDP、CeeNU、Cerubidine®、西妥昔單抗(Cetuximab)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、順鉑(Cisplatin)、嗜橙菌因子(Citrovorum Factor)、克拉屈濱(Cladribine)、皮質酮(Cortisone)、Cosmegen®、CPT-11、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、Cytadren®、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿糖胞苷脂質體、Cytosar-U®、Cytoxan®、達卡巴嗪(Dacarbazine)、達克金(Dacogen)、放線菌素D、阿法達貝泊汀(Darbepoetin Alfa)、達沙替尼(Dasatinib)、道諾黴素(Daunomycin)、道諾黴素(Daunorubicin)、道諾黴素鹽酸鹽、道諾黴素脂質體、DaunoXome®、地卡特隆(Decadron)、地西他濱(Decitabine)、Delta-Cortef®、Deltasone®、地尼介白素、地夫替妥(Diftitox)、DepoCytTM、***(Dexamethasone)、乙酸***、***磷酸鈉、地塞松(Dexasone)、右雷佐生(Dexrazoxane)、DHAD、DIC、戴奧德克斯(Diodex)、多西他賽(Docetaxel)、Doxil®、小紅莓(Doxorubicin)、小紅莓脂質體、DroxiaTM、DTIC、DTIC-Dome®、 Duralone®、Efudex®、EligardTM、EllenceTM、EloxatinTM、Elspar®、Emcyt®、表柔比星(Epirubicin)、阿法依伯汀(Epoetin Alfa)、愛必妥(Erbitux)、埃羅替尼(Erlotinib)、歐文氏菌屬L-天冬醯胺酶(Erwinia L-asparaginase)、雌氮芥(Estramustine)、伊索(Ethyol)、Etopophos®、依託泊苷(Etoposide)、磷酸依託泊苷、Eulexin®、Evista®、依西美坦(Exemestane)、Fareston®、Faslodex®、Femara®、非格司亭(Filgrastim)、氟尿苷(Floxuridine)、Fludara®、氟達拉濱(Fludarabine)、Fluoroplex®、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、氟羥甲基睪酮(Fluoxymesterone)、氟他胺(Flutamide)、亞葉酸(Folinic Acid)、FUDR®、氟維司群(Fulvestrant)、G-CSF、吉非替尼(Gefitinib)、吉西他濱、吉妥單抗(Gemtuzumab)、奧佐米星(ozogamicin)、健擇(Gemzar)、GleevecTM、Gliadel®粉片、GM-CSF、戈舍瑞林、Halotestin®、Herceptin®、赫賽卓(Hexadrol)、Hexalen®、六甲蜜胺、HMM、Hycamtin®、Hydrea®、Hydrocort Acetate®、氫化皮質酮(Hydrocortisone)、氫化皮質酮磷酸鈉、氫化皮質酮丁二酸鈉、磷酸氫可酮(Hydrocortone Phosphate)、羥基脲、異貝莫單抗(Ibritumomab)、替坦異貝莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)、Idamycin®、伊達比星(Idarubicin)、Ifex®、IFN-α、異環磷醯胺(Ifosfamide)、伊馬替尼(Imatinib)、甲磺酸酯(mesylate)、咪唑、甲醯胺、干擾素α、干擾素α-2b(PEG結合物)、介白素-2、介白素-11、Intron A®(干擾素α-2b)、Iressa®、伊立替康(Irinotecan)、異維甲酸(Isotretinoin)、伊沙匹隆(Ixabepilone)、IxempraTM、天冬醯胺酶(Kidrolase)、Lanacort®、拉帕替尼(Lapatinib)、L-天冬醯胺酶、LCR、來那度胺(Lenalidomide)、來曲唑(Letrozole)、甲醯四氫葉酸(Leucovorin)、瘤可寧(Leukeran)、LeukineTM、亮丙瑞林(Leuprolide)、長春新鹼(Leurocristine)、LeustatinTM、脂質體阿糖胞苷、液體Pred®、洛莫司汀(Lomustine)、L-PAM、L-溶肉瘤素(L-Sarcolysin)、Lupron®、Lupron Depot®、Matulane®、瑪西德克斯(Maxidex)、二氯甲基二乙胺(Mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺鹽酸鹽、Medralone®、Medrol®、Megace®、甲地孕酮(Megestrol)、乙酸甲地孕酮、美法侖(Melphalan)、巰基嘌呤、美斯納(Mesna)、MesnexTM、甲胺蝶呤、甲胺蝶呤鈉、甲潑尼龍(Methylprednisolone)、Meticorten®、絲裂黴素(Mitomycin)、絲裂黴素-C、米托蒽醌(Mitoxantrone)、M-Prednisol®、MTC、 MTX、Mustargen®、氮芥(Mustine)、Mutamycin®、Myleran®、MylocelTM、Mylotarg®、Navelbine®、奈拉濱(Nelarabine)、Neosar®、NeulastaTM、Neumega®、Neupogen®、Nexavar®、Nilandron®、尼魯米特(Nilutamide)、Nipent®、氮芥(Nitrogen Mustard)、Novaldex®、Novantrone®、奧曲肽(Octreotide)、乙酸奧曲肽、Oncospar®、Oncovin®、Ontak®、OnxalTM、奧普瑞介白素(Oprevelkin)、Orapred®、Orasone®、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(Paclitaxel)、結合有蛋白質之太平洋紫杉醇、帕米膦酸鹽(Pamidronate)、帕尼單抗(Panitumumab)、Panretin®、Paraplatin®、Pediapred®、PEG干擾素、培加帕酶(Pegaspargase)、培非格司亭(Pegfilgrastim)、PEG-INTRONTM、PEG-L-天冬醯胺酶、培美曲塞(PEMETREXED)、噴司他汀(Pentostatin)、***酸氮芥(Phenylalanine Mustard)、Platinol®、Platinol-AQ®、潑尼松龍(Prednisolone)、潑尼松(Prednisone)、Prelone®、丙卡巴肼(Procarbazine)、PROCRIT®、Proleukin®、具有卡莫司汀植入物之普里普斯潘20(Prolifeprospan 20 with Carmustine Implant)、Purinethol®、雷洛昔芬(Raloxifene)、Revlimid®、Rheumatrex®、Rituxan®、利妥昔單抗(Rituximab)、Roferon-A®(干擾素α-2a)、Rubex®、紅比黴素鹽酸鹽(Rubidomycin hydrochloride)、Sandostatin®、Sandostatin LAR®、沙莫司亭(Sargramostim)、Solu-Cortef®、Solu-Medrol®、索拉非尼(Sorafenib)、SPRYCELTM、STI-571、鏈脲黴素(Streptozocin)、SU11248、舒尼替尼(Sunitinib)、Sutent®、他莫昔芬、Tarceva®、Targretin®、Taxol®、Taxotere®、Temodar®、替莫唑胺(Temozolomide)、坦羅莫司(Temsirolimus)、替尼泊苷(Teniposide)、TESPA、沙利度胺(Thalidomide)、Thalomid®、TheraCys®、硫鳥嘌呤、硫鳥嘌呤Tabloid®、硫代磷醯胺(Thiophosphoamide)、Thioplex®、噻替派、TICE®、Toposar®、拓撲替康(Topotecan)、托瑞米芬(Toremifene)、Torisel®、托西莫單抗(Tositumomab)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、Treanda®、維甲酸(Tretinoin)、TrexallTM、Trisenox®、TSPA、TYKERB®、VCR、VectibixTM、Velban®、Velcade®、VePesid®、Vesanoid®、ViadurTM、Vidaza®、長春花鹼(Vinblastine)、硫酸長春花鹼、維卡薩(Vincasar)、Pfs®、長春新鹼(Vincristine)、長春瑞濱 (Vinorelbine)、酒石酸長春瑞濱、VLB、VM-26、伏立諾他(Vorinostat)、VP-16、Vumon®、Xeloda®、Zanosar®、ZevalinTM、Zinecard®、Zoladex®、唑來膦酸(Zoledronic acid)、佐林紮(Zolinza)、Zometa®及其類似物。
如上所提及，如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC可與標準癌症療法，諸如但不限於蛋白酶體抑制劑，且特定言之卡非佐米(carfilzomib)(諸如Kyprolis®)組合使用。
此外，如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC可用於治療其中由漿細胞產生之抗體促進疾病之免疫發病機制的自體免疫性病症，諸如但不限於全身性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、休格連氏病(Sjogrens)、免疫介導之血小板減少症、溶血性貧血症、大皰性類天皰瘡、重症肌無力、I型糖尿病、格雷福斯病(Graves’ disease)、阿狄森氏病(Addison’s disease)、落葉狀天皰瘡(pemphigus foliaceus)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎及關節黏連性脊椎炎。在其他實施例中，未結合於藥物之抗huBCMA抗體可用於治療此段落中所列之自體免疫性疾病，該等抗huBCMA抗體特定言之為如本文以不同方式所述之Ab-1、Ab-2或Ab-3，且更特定言之為Ab-1。更特定言之，Ab-1可用於治療SLE。更特定言之，Ab-1可用於治療MS。應瞭解上述方法亦涵蓋如本說明書中其他地方所述之針對第一及第二醫學用途及其申請專利範圍的類似方法。
診斷用途、分析及套組
本發明之BCMA抗原結合蛋白可用於診斷分析，例如用以偵測及/或定量組織(諸如骨髓)或細胞(諸如漿細胞)中表現之BCMA之結合分析中。BCMA抗原結合蛋白可用於用以進一步研究BCMA在疾病中之作用之研究中。BCMA抗原結合蛋白可用於進一步研究BCMA在形成同聚及/或雜聚受體複合物方面之作用及該等BCMA受體複合物在疾病中之作用。
在某些實施例中，患者層化分析可用於確定患者是否將適合於用BCMA ADC治療。特定言之，可預篩檢用於治療之多發性骨髓瘤患者。舉例而言，若偵測到BCMA在患者B細胞上之臨限表現量，則患者適 合於治療。反之，若BCMA在患者B細胞上之臨限表現量不足，則患者可能不適合於治療。可藉由測試在患者之細胞中存在BCMA編碼RNA，或存在在細胞表面上表現之BCMA蛋白質來測定BCMA表現。樣品可為血液樣品或生檢體。本文所述之BCMA抗體可用於此等分析中以定量在患者之細胞表面上表現之BCMA之量。
本發明之態樣包括用以量測BCMA ADC之藥效學之分析。 如本文所述，BCMA ADC結合細胞表面BCMA且內化，藉此抗體被分解代謝，從而將lys-MCC-DM1釋放至細胞質中，在細胞質中，lys-MCC-DM1抑制微管蛋白聚合且誘導有絲***阻滯及細胞死亡。多發性骨髓瘤為一種由骨髓中之漿細胞擴增驅動之疾病，但周邊漿細胞之數目通常過小以致不能用作骨髓區室中之腫瘤細胞之替代物(Dingli D,Nowakowski GS,DispenzieriA等人,Blood 107,3384-8(2006))。用以評估BCMA ADC對漿細胞之作用之藥效學替代標記物之一個實施例在於藉由血清分析物量測腫瘤負荷之降低。腫瘤負荷程度為多發性骨髓瘤中之常用評估且用於確定疾病狀態及區分MGUS與多發性骨髓瘤(Waxman AJ等人,Clin Lymphoma Myeloma Leuk.10,248-57(2010))。3g/dL含量之血清單株(M)蛋白質為用於診斷MM之準則且血清M蛋白質降低為一個用於界定臨床反應之準則(Schaefer EW等人,Cancer 116,640-6(2010))。血清M蛋白質分析量測在血液中循環之單株蛋白質之量。此分析為一種通常用於多發性骨髓瘤診斷中之臨床驗證分析。一小子組MM患者(2-5%)在血清中不分泌單株蛋白質。
血清BCMA含量可為用於量測腫瘤負荷之預後及新型工具(Sanchez E等人,Serum B-cell maturation antigen is elevated in multiple myeloma and correlates with disease status and survival.Br J Haematology 158,727-38(2012))。本發明之實施例包括用以量測作為腫瘤細胞上膜結合BCMA之潛在替代物之可溶性BCMA的診斷分析及套組。舉例而言，在用一或多種BCMA ADC單獨或與習知療法組合治療之前量測可溶性BCMA以確定血清BCMA基線含量且定期測試以監測對該療法之反應。BCMA配體BAFF及APRIL由骨髓基質細胞分泌至腫瘤微環境中且已在MM血清樣品中偵測到BAFF(Moreaux J等人,Blood 106,1021-30(2005)；Tai YT等人, Cancer Res.66,6675-82(2006)；及Fragioudaki M等人,Leuk Res. 36,1004-8(2012))。恰如上所述，設想用於監測患者之臨床狀態之可溶性BMCA、APRIL及BAFF診斷分析，諸如ELISA、流式細胞測量術等。若認定適當分析，則將測試MM血清之可溶性BCMA、APRIL及BAFF之含量。
對人類IgG游離輕鏈(κ)作為潛在生物標記物，作為Ab-1(2A1CV5)ADC活體內藥理學實驗之一部分進行了研究，該等實驗顯示在H929嗜骨性異種移植物模型中，Ab-1(2A1CV5)ADC介導腫瘤消退(參見實例12)。人類免疫球蛋白分子由兩個界定類別(IgG、IgA、IgM、IgD、IgE)之重鏈及兩個相同輕鏈(κ或λ)組成。在健康個體中，血清中之大多數輕鏈以結合於重鏈之形式存在。游離輕鏈(FLC)為B淋巴細胞之天然產物且代表贅生及反應性B細胞相關病症之一種獨特生物標記物。FLC增加與各種惡性血漿病症相關聯。FLC之偵測為多種疾病，包括多發性骨髓瘤、鬱積型骨髓瘤及原因不明性單株γ球蛋白症之重要診斷輔助。人類IgG FLC κ ELISA(Biovendor，RD 194088100R-K)用於分析FLC在來自H929異種移植物之血清中之存在。在用2A1CV5-MCC-DM1處理之後18天，在小鼠血清中未偵測到κ輕鏈抗體，但在接受媒劑(PBS)或同型對照結合物(抗抗生蛋白鏈菌素(Streptavidin)-MCC-DM1)之小鼠之血清中偵測到(參見圖38及39)。 因此，血清中抗體游離γ及κ輕鏈(sFLC)之量測結果可用作診斷組中之多發性骨髓瘤生物標記。sFLC之一個尤其適用性質為其半衰期較短，此可允許臨床醫師在幾天內確定對治療之反應(Davids MS等人,Serum free light chain analysis.Am J.Hematology 85,787-790(2010))。
本發明之抗原結合蛋白可用於診斷目的以偵測、診斷或監測與BCMA相關之疾病及/或病狀。本發明允許使用熟習此項技術者已知之經典免疫組織學方法(例如Tijssen,1993,Practice and Theory of Enzyme Immunoassays,第15卷(R.H.Burdon及P.H.van Knippenberg編,Elsevier,Amsterdam)；Zola,1987,Monoclonal Antibodiess：A Manual of Techniques,第147-158頁(CRC Press公司)；Jalkanen等人,1985,J.Cell.Biol.101：976-985；Jalkanen等人,1987,J.Cell Biol.105：3087-3096)偵測BCMA在樣品中之存在。可在活體內或在活體外對BCMA進行偵測。適用於偵測 BCMA之存在之方法的實例包括ELISA、FACS、RIA等。
對於診斷應用，BCMA抗原結合蛋白通常用可偵測標記基團標記。適合標記基團包括但不限於以下：放射性同位素或放射性核種(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、螢光基團(例如FITC、若丹明、鑭系元素磷光體)、酶基團(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶(luciferase)、鹼性磷酸酶)、化學發光基團、生物素基團或由二級報導體識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鍊對序列、二級抗體之結合位點、金屬結合域、抗原決定基標籤)。在一些實施例中，經由具有各種長度之間隔子臂使標記基團偶合於抗原結合蛋白以減少潛在空間位阻。用於標記蛋白質之各種方法在此項技術中為已知的且可用於實施本發明。
本發明之一個態樣允許鑒別表現BCMA之一或多種細胞。在一特定實施例中，抗原結合蛋白用標記基團標記且偵測經標記抗原結合蛋白與BCMA之結合。在另一特定實施例中，在活體內偵測抗原結合蛋白與BCMA之結合。在另一特定實施例中，使用此項技術中已知之技術分離及量測抗原結合蛋白-BCMA。參見例如Harlow及Lane,1988,Antibodies：A Laboratory Manual,New York：Cold Spring Harbor(1991版及定期增刊)；John E.Coligan編,1993,Current Protocols In Immunology New York：John Wiley & Sons。
本發明之另一態樣提供偵測與本發明之抗原結合蛋白競爭結合BCMA之測試分子的存在。一種此分析之一實例將涉及在存在或不存在測試分子下偵測含有一定量之BCMA之溶液中游離抗原結合蛋白的量。游離抗原結合蛋白(亦即未結合於BCMA之抗原結合蛋白)之量增加將指示測試分子能夠與抗原結合蛋白競爭結合BCMA。在一個實施例中，抗原結合蛋白用標記基團標記。或者，標記測試分子且在存在及不存在抗原結合蛋白下監測游離測試分子之量。
醫藥調配物、投藥途徑
在一些實施例中，本發明提供醫藥組合物，其包含治療有效量之一或多種本發明之抗原結合蛋白以及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑、防腐劑及/或佐劑。此外，本發明提供藉由投與此醫 藥組合物來治療患者之方法。
在一些實施例中，BCMA ADC，特定言之Ab-1 ADC為包含治療有效量之至少一種本文所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1 ADC以及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑、防腐劑及/或佐劑的醫藥組合物。此外，本發明提供藉由投與此醫藥組合物來治療患者之方法。
包含如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1 ADC的醫藥組合物可用於治療其中惡性B細胞在其表面上表現BCMA之B細胞相關癌症。BCMA ADC結合惡性B細胞表面上之BCMA，藉由受體介導之胞吞作用內化，在細胞內釋放化學治療藥物(通常經由溶酶體-內體路徑之酸性環境)且藉此殺傷惡性細胞。在細胞內釋放化學治療藥物會降低游離藥物對非惡性細胞之旁觀者殺傷。因此，包含如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1 ADC的醫藥組合物可用於治療疾病，包括但不限於B細胞癌症，且特定言之多發性骨髓瘤及惡性漿細胞贅瘤。如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1 ADC亦可用於治療卡勒氏病及骨髓瘤病；漿細胞白血病；漿細胞瘤；B細胞前淋巴細胞性白血病；毛細胞白血病；B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；急性骨髓性白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)；急性淋巴細胞性白血病(ALL)；慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；濾泡性淋巴瘤(包括濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤類型)；伯基特氏淋巴瘤(地方性伯基特氏淋巴瘤；單發性伯基特氏淋巴瘤)；邊緣區淋巴瘤(黏膜相關淋巴組織；MALT/MALT瘤；單核細胞樣B細胞淋巴瘤；伴有絨毛狀淋巴細胞之脾淋巴瘤)；套膜細胞淋巴瘤；大細胞淋巴瘤(彌漫性大細胞；彌漫性混合細胞；免疫母細胞性淋巴瘤；原發性縱隔B細胞淋巴瘤；血管中心淋巴瘤-肺B細胞)；小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)；前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤；骨髓性白血病(粒細胞性；髓細胞性；急性骨髓性白血病；慢性骨髓性白血病；亞急性骨髓性白血病；骨髓肉瘤；綠色瘤；粒細胞肉瘤；急性早幼粒細胞白血病；急性髓單核細胞白血病)；瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症或其他B細胞淋巴瘤。
此外，包含如本文以不同方式所述之BCMA ADC，特定言之Ab-1、Ab-2或Ab-3 ADC，且更特定言之Ab-1 ADC的醫藥組合物可用 於治療其中由漿細胞產生之抗體促進疾病之免疫發病機制的自體免疫性病症，諸如但不限於全身性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、休格連氏病、免疫介導之血小板減少症、溶血性貧血症、大皰性類天皰瘡、重症肌無力、I型糖尿病、格雷福斯病、阿狄森氏病、落葉狀天皰瘡、牛皮癬、牛皮癬性關節炎及關節黏連性脊椎炎。在其他實施例中，包含未結合於藥物之抗huBCMA抗體之醫藥組合物可用於治療此段落中所列之自體免疫性疾病，該等抗huBCMA抗體特定言之為如本文以不同方式所述之Ab-1、Ab-2或Ab-3，且更特定言之為Ab-1。更特定言之，包含Ab-1之醫藥組合物可用於治療SLE。更特定言之，包含Ab-1之醫藥組合物可用於治療MS。
在某些實施例中，可接受之調配物質較佳在所用劑量及濃度下對接受者無毒。在某些實施例中，醫藥組合物可含有用於調節、維持或保持例如組合物之pH值、容積莫耳滲透濃度、黏度、澄清度、顏色、等張性、氣味、無菌性、穩定性、溶解或釋放速率、吸收或滲透之調配物質。 在此等實施例中，適合調配物質包括但不限於胺基酸(諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(諸如抗壞血酸(ascorbic acid)、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(諸如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機酸)；增積劑(諸如甘露糖醇或甘胺酸)；螯合劑(諸如乙二胺四乙酸(EDTA))；錯合劑(諸如咖啡鹼(caffeine)、聚乙烯吡咯啶酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精)；填充劑；單醣；雙醣；及其他碳水化合物(諸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白質(諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、調味劑及稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(諸如聚乙烯吡咯啶酮)；低分子量多肽；成鹽相對離子(諸如鈉)；防腐劑(諸如氯化苯甲烴銨、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞(thimerosal)、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定(chlorhexidine)、山梨酸(sorbic acid)或過氧化氫)；溶劑(諸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(諸如甘露糖醇或山梨糖醇)；懸浮劑；界面活性劑或濕潤劑(諸如普洛尼克(pluronic)、PEG、脫水山梨醇酯、聚山梨醇酯(諸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯)、曲通(triton)、緩血酸胺(tromethamine)、卵磷脂(lecithin)、膽固醇、泰洛沙泊(tyloxapal))；穩 定性增強劑(諸如蔗糖或山梨糖醇)；張力增強劑(諸如鹼金屬鹵化物(較佳氯化鈉或氯化鉀)、甘露糖醇山梨糖醇)；傳遞媒劑；稀釋劑；賦形劑及/或醫藥佐劑。參見REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES,第18版,(A.R.Genrmo編),1990,Mack出版公司。
在某些實施例中，最佳醫藥組合物將由熟習此項技術者視例如預定投藥途徑、傳遞形式及所要劑量而確定。參見例如REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES(上文)。在某些實施例中，此等組合物可影響本發明之抗原結合蛋白之物理狀態、穩定性、活體內釋放速率及活體內清除速率。在某些實施例中，醫藥組合物中之主要媒劑或載劑在性質方面可為水性或非水性。舉例而言，適合媒劑或載劑可為注射用水、生理鹽水溶液或人工腦脊髓液，可能補充有用於非經腸投藥之組合物中常見之其他物質。與血清白蛋白混合之中性緩衝生理食鹽水或生理食鹽水為其他示範性媒劑。在特定實施例中，醫藥組合物包含pH值為約7.0-8.5之Tris緩衝液或pH值為約4.0-5.5之乙酸鹽緩衝液，且可進一步包括山梨糖醇或其適合替代物。在本發明之某些實施例中，可藉由混合具有所要純度之所選組合物與視情況選用之調配劑(REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES(上文))來製備呈凍乾餅或水溶液形式之BCMA抗原結合蛋白組合物以供儲存。此外，在某些實施例中，可使用諸如蔗糖之適當賦形劑將BCMA抗原結合蛋白產物調配成凍乾物。
可選擇本發明之醫藥組合物以用於非經腸傳遞。或者，可選擇組合物以用於吸入或經由消化道傳遞，諸如經口傳遞。製備此等醫藥學上可接受之組合物屬於此項技術之技能範圍內。
調配組分較佳以可為投藥部位接受之濃度存在。在某些實施例中，使用緩衝劑來維持組合物在生理pH值或略微較低PH值下，通常在約5至約8之pH值範圍內。
當意欲非經腸投藥時，用於本發明中之治療組合物可以於醫藥學上可接受之媒劑中包含所要BCMA抗原結合蛋白之無熱原、非經腸可接受之水溶液形式提供。特別適於非經腸注射之媒劑為無菌蒸餾水，BCMA抗原結合蛋白於其中調配成經適當防腐之無菌等張溶液。在某些實施例 中，製備可涉及調配所要分子與可提供可經由儲槽注射傳遞之產品之控制或持續釋放的試劑，諸如可注射微球、生物可侵蝕粒子、聚合化合物(諸如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠粒或脂質體。在某些實施例中，亦可使用具有提升在循環中之持續時間之作用的透明質酸。在某些實施例中，可使用可植入藥物傳遞裝置來引入所要抗原結合蛋白。
可調配用於吸入之本發明之醫藥組合物。在此等實施例中，BCMA抗原結合蛋白有利地調配成乾燥可吸入散劑。在特定實施例中，BCMA抗原結合蛋白吸入溶液亦可與推進劑一起調配以用於氣霧劑傳遞。 在某些實施例中，溶液可經霧化。經肺投藥及因此調配方法進一步描述於國際專利申請案第PCT/US94/001875號中，該申請案以引用的方式併入本文中且描述經肺傳遞化學修飾蛋白質。亦意欲調配物可經口投與。以此方式投與之BCMA抗原結合蛋白可與或不與慣常用於混配諸如錠劑及膠囊之固體劑型之載劑一起調配。在某些實施例中，膠囊可設計成在於胃腸道中時釋放調配物之活性部分，此時生物可用性最大且全身前降解最小。可包括其他試劑以促進BCMA抗原結合蛋白吸收。亦可採用稀釋劑、調味劑、低熔點蠟、植物油、潤滑劑、懸浮劑、錠劑崩解劑及黏合劑。
較佳提供包含有效量之一種或複數種BCMA抗原結合蛋白與適於製造錠劑之無毒賦形劑之混合物的本發明之醫藥組合物。藉由將錠劑溶解於無菌水或另一適當媒劑中，可以單位劑型製備溶液。適合賦形劑包括但不限於惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉或碳酸氫鹽、乳糖或磷酸鈣；或黏合劑，諸如澱粉、明膠或***膠(acacia)；或潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。
其他醫藥組合物將為熟習此項技術者所顯而易知，包括涉及呈持續或控制傳遞調配物形式之BCMA抗原結合蛋白之調配物。調配多種其他持續或控制傳遞機構，諸如脂質體載體、生物可侵蝕微粒或多孔珠粒及儲槽注射液之技術亦為熟習此項技術者所知。參見例如國際專利申請案第PCT/US93/00829號，其以引用的方式併入本文中且描述多孔聚合微粒之控制釋放以傳遞醫藥組合物。持續釋放製劑可包括呈定形物品，例如薄膜或微膠囊形式之半透性聚合物基質。持續釋放基質可包括聚酯、水凝膠、 聚交酯(如美國專利第3,773,919號及歐洲專利申請公開案第EP 058481號中所揭露，其各自以引用的方式併入本文中)、L-麩胺酸與L-麩胺酸γ乙酯之共聚物(Sidman等人,1983,Biopolymers 2：547-556)、聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)(Langer等人,1981,J.Biomed.Mater.Res.15：167-277及Langer,1982,Chem.Tech.12：98-105)、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等人,1981(上文))或聚D(-)-3-羥丁酸(歐洲專利申請公開案第EP 133,988號)。持續釋放組合物亦可包括可藉由此項技術中已知之若干方法中之任一者製備的脂質體。參見例如Eppstein等人,1985,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82：3688-3692；歐洲專利申請公開案第EP 036,676號；第EP 088,046號及第EP 143,949號，該等文獻及專利以引用的方式併入本文中。
通常以無菌製劑形式提供用於活體內投藥之醫藥組合物。滅菌可藉由經無菌過濾膜過濾來達成。當凍乾組合物時，使用此方法進行之滅菌可在凍乾及復原之前或之後進行。用於非經腸投藥之組合物可以凍乾形式或以溶液形式儲存。非經腸組合物通常置放入具有無菌入口之容器，例如具有可由皮下注射針刺穿之塞之靜脈內溶液袋或小瓶中。
關於蛋白質穩定化及調配物質及就此而言適用之方法，有多個闡述可用，諸如Arakawa等人,「Solvent interactions in pharmaceutical formulations,」Pharm Res.8(3)：285-91(1991)；Kendrick等人,「Physical stabilization of proteins in aqueous solution,」RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS：THEORY AND PRACTICE,Carpenter及Manning編Pharmaceutical Biotechnology.13：61-84(2002)；及Randolph等人,「Surfactant-protein interactions,」Pharm Biotechnol.13：159-75(2002)，其各自以全文引用的方式併入本文中，特定言之關於該等文獻之用於本發明之自緩衝蛋白質調配物之賦形劑及方法的部分，尤其關於用於獸醫學及/或人類醫學用途之蛋白質醫藥產品及方法。
適用於本發明中之各種賦形劑列於表3中且在下文進一步描述。
可根據本發明之某些實施例使用鹽以例如調整調配物之離子強度及/或等張性及/或改良蛋白質之溶解性及/或物理穩定性。鹽亦可有效用於降低蛋白質調配物之黏度且可在本發明中用於彼目的。如所熟知，離子可藉由結合於蛋白質之表面上之帶電荷殘基及藉由遮蔽蛋白質中之帶電荷及極性基團且降低其靜電相互作用、吸引及排斥相互作用之強度來使蛋白質之天然狀態穩定。離子亦可藉由結合於特定言之蛋白質之變性肽鍵(-CONH)來使蛋白質之變性狀態穩定。此外，與蛋白質中之帶電荷及極性基團之離子相互作用亦可降低分子間靜電相互作用，且藉此防止或減少蛋白質聚集及不溶。
離子物質在其對蛋白質之影響方面顯著不同。已建立對離子及其對蛋白質之影響之許多類別分級，其可用於調配本發明之自緩衝蛋白 質組合物。一個實例為郝夫麥士特序列(Hofmeister series)，其根據離子及極性非離子溶質對溶液中之蛋白質之構形穩定性的影響來將其分級。穩定性溶質稱為「低離液序列(kosmotropic)」溶質。去穩性溶質稱為高離液序列(chaotropic)溶質。低離液序列物通常在高濃度(例如>1莫耳硫酸銨)下用於使蛋白質自溶液沈澱(「鹽析」)。高離液序列物通常用於使蛋白質變性及/或溶解(「鹽溶」)。離子「鹽溶」及「鹽析」之相對有效性劃定其在郝夫麥士特序列中之位置。
為維持根據本發明之較佳實施例之非經腸調配物中的等張性、改良蛋白質溶解性及/或穩定性、改良黏度特徵、避免鹽對蛋白質穩定性及聚集之有害影響，且防止鹽介導之蛋白質降解，調配物中之鹽濃度可小於150mM(就單價離子而言)及150毫當量/公升(對於多價離子)。就此而言，在本發明之某些特別較佳實施例中，總鹽濃度為約75毫當量/公升至約140毫當量/公升。
諸如但不限於離胺酸、脯胺酸、絲胺酸及丙胺酸之游離胺基酸可用於使調配物中之蛋白質穩定，可在BCMA ADC調配物中用作增積劑、穩定劑及抗氧化劑以及用於其他標準用途。甘胺酸適用於凍乾中以確保恰當餅結構及性質。精胺酸可適用於在液體調配物與凍乾調配物兩者中抑制蛋白質聚集。甲硫胺酸適用作抗氧化劑。
多元醇包括糖，例如甘露糖醇、蔗糖及山梨糖醇；及多羥基醇，諸如甘油及丙二醇，及出於本文論述之目的，包括聚乙二醇(PEG)及相關物質。多元醇為低離液序列的。其為液體調配物與凍乾調配物兩者中之適用於保護蛋白質免遭物理及化學降解過程之穩定劑。多元醇亦適用於調整調配物之張力。
適用於本發明之所選實施例中之多元醇尤其為通常用於確保凍乾調配物中之餅之結構穩定性的甘露糖醇。其確保餅之結構穩定性。 其通常與例如蔗糖之凍乾保護劑一起使用。山梨糖醇及蔗糖為用於調整張力且作為在運輸期間或在製造過程中製備大塊期間防止凍融逆境之穩定劑的尤其較佳試劑。
BCMA ADC調配物之實施例可視情況進一步包含界面活性 劑。蛋白質分子可能易於吸附於表面上且易變性及隨後在空氣-液體、固體-液體及液體-液體界面處聚集。此等效應通常與蛋白質濃度成反比。此等有害相互作用通常與蛋白質濃度成反比且通常因物理攪動，諸如在產品之運送及處理期間產生之物理攪動而加劇。界面活性劑常用於防止、最小化或降低表面吸附。就此而言，適用於本發明中之界面活性劑包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、脫水山梨醇聚乙氧基化物之其他脂肪酸酯及泊洛沙姆188(poloxamer 188)。界面活性劑亦通常用於控制蛋白質構形穩定性。就此而言，界面活性劑之使用具有蛋白質特異性，因為任何指定界面活性劑通常皆將使一些蛋白質穩定且使其他蛋白質去穩。聚山梨醇酯易經受氧化降解且常在供應時含有會導致蛋白質殘基側鏈，尤其甲硫胺酸氧化之足量過氧化物。因此，聚山梨醇酯應小心使用，且當使用時，應在其最低有效濃度下採用。就此而言，聚山梨醇酯示範賦形劑應以其最低有效濃度使用之一般性準則。
BCMA ADC調配物之實施例可視情況進一步包含一或多種抗氧化劑。在某種程度上，蛋白質之有害氧化可藉由維持適當程度之環境氧及溫度及藉由避免暴露於光而在醫藥調配物中得到防止。抗氧化劑賦形劑亦可用於防止蛋白質之氧化降解。就此而言，適用抗氧化劑尤其為還原劑、氧/自由基清除劑及螯合劑。用於本發明之治療蛋白質調配物中之抗氧化劑較佳為水溶性的且在產品之整個保存期限期間維持其活性。抗氧化劑會損害蛋白質。舉例而言，特定言之諸如谷胱甘肽(glutathione)之還原劑會破壞分子內二硫鍵。因此，用於本發明中之抗氧化劑經過選擇以尤其消除或充分降低其自身損害調配物中之蛋白質之可能性。
本發明之調配物可包括作為蛋白質輔因子且為形成蛋白質配位錯合物所必需之金屬離子。金屬離子亦可抑制一些使蛋白質降解之過程。
BCMA ADC調配物之實施例可視情況進一步包含一或多種防腐劑。當開發涉及自同一容器抽取一次以上之多劑量非經腸調配物時，防腐劑為必需的。其主要功能在於在藥物產品之整個保存期限或使用期中抑制微生物生長且確保產品無菌。通常使用之防腐劑包括苯甲醇、苯酚及 間甲酚。在調配及開發防腐劑型期間需要考慮若干態樣。必須使藥物產品中之有效防腐劑濃度最佳化。此需要以賦予抗微生物有效性而不損害蛋白質穩定性之一定濃度範圍測試劑型中之指定防腐劑。
開發含有防腐劑之液體調配物可比凍乾調配物更具挑戰。冷凍乾燥產品可在無防腐劑下凍乾且在使用時用含有防腐劑之稀釋劑復原。此舉縮短防腐劑與蛋白質接觸之時間，從而使相關穩定性風險顯著降至最小。就液體調配物而言，防腐劑有效性及穩定性必須歷經整個產品保存期限(約18至24個月)得到維持。一個需注意之要點為防腐劑有效性必須在含有活性藥物及所有賦形劑組分之最終調配物中進行證明。
一旦醫藥組合物已調配，其可以溶液、懸浮液、凝膠劑、乳液、固體、晶體形式或以脫水或凍乾散劑形式儲存在無菌小瓶中。此等調配物可以備用形式或以在投與之前復原之形式(例如凍乾形式)儲存。本發明亦提供用於產生單次劑量投藥單位之套組。本發明之套組可各自含有具有乾燥蛋白質之第一容器與具有水性調配物之第二容器兩者。在本發明之某些實施例中，提供含有單室及多室預填充注射器(例如液體注射器及冷凍注射器)之套組。
欲採用之含有BCMA ADC之醫藥組合物的治療有效量將例如取決於治療情形及目標。熟習此項技術者將瞭解適用於治療之劑量將部分地視傳遞之分子、使用BCMA ADC所針對之適應症、投藥途徑及患者之體型(體重、身體表面或器官尺寸)及/或狀況(年齡及總體健康狀況)而變化。在某些實施例中，臨床醫師可滴定劑量且改變投藥途徑以獲得最佳治療效果。視以上提及之因素而定，典型劑量可在約0.1μg/kg至多達約30mg/kg或30mg/kg以上之範圍內。
給藥頻率將取決於所用調配物中之特定BCMA ADC之藥物動力學參數。通常，臨床醫師投與組合物直至達到達成所要效果之劑量。因此，組合物可以單次劑量形式，或以一段時間內兩次或兩次以上劑量(其可含有或可不含相同量之所要分子)形式，或以經由植入裝置或導管之連續輸液形式投與。對適當劑量之進一步改進由一般技藝人士常規進行且屬於由其常規執行之任務範圍內。可經由使用適當劑量-反應資料確定適當劑 量。在某些實施例中，本發明之抗原結合蛋白可在整個延長時期內向患者投與。
醫藥組合物之投藥途徑係依照已知方法，例如經口；經由藉由靜脈內、腹膜內、腦內(實質內)、腦室內、肌肉內、眼內、動脈內、門靜脈內或病變內途徑進行之注射；藉由持續釋放系統或藉由植入裝置。在某些實施例中，組合物可藉由團式注射投與，或藉由輸注連續投與，或藉由植入裝置投與。組合物亦可經由植入其上已吸收或囊封有所要分子之膜、海綿或另一適當材料來局部投與。在使用植入裝置之某些實施例中，裝置可植入任何適合組織或器官中，且可經由擴散、定時釋放大丸劑或連續投藥傳遞所要分子。
本說明書之主體內引用之所有參考文獻皆據此明確以全文引用的方式併入本文中。
實例
僅出於說明目的提供以下實例(包括進行之實驗及達成之結果)且其不欲解釋為限制本發明。
實例1
除來自正常個體之含有駐留漿細胞之正常組織，包括骨髓及腸管樣品之外，亦對多發性骨髓瘤、鬱積型骨髓瘤及MGUS患者樣品中之BCMA mRNA表現進行綜合分析。藉由在可自Amgen獲得之腫瘤DNA微陣列資料庫，包括Oncomine/Oncomine Power Tools and AscentaTM中查詢，經由電子分析(in silico analysis)獲得BCMA mRNA表現結果。在OncomineTM資料集中，存在994個檢查了BCMA表現之原發性多發性骨髓瘤樣品且其中僅5個樣品不表現可偵測之BCMA mRNA信號水準(信號處於偵測限下且與在與本底水準一致且為已知不表現BCMA之組織之非B譜系組織(包括黑素瘤及皮膚)中觀測到之信號相同)。
結果顯示BCMA mRNA高度表現於多發性骨髓瘤中。圖3顯示使用來自Compendia Bioscience之市售Oncomine Power Tools(由Life Technologies獲得)產生之散佈圖。使用12個資料集(GSE4452、GSE9782、GSE2912、GSE17498、GSE5788、GSE2361、GSE2113、GSE3526、GSE1133、 GSE1159、GSE2658、GSE5900)及兩個Affymetrix基平台(人類基因組U133 Plus 2.0陣列及人類基因組U133A陣列)構建表現圖。使用Affymetrix Probeset 206641測定BCMA(HUGO符號：TNFRSF17)線性表現且在七個組織類型(骨髓、CD34+周邊血液細胞、原因不明性單株γ球蛋白症、多發性骨髓瘤、周邊血液、漿細胞白血病及鬱積型骨髓瘤)及四個樣品類型(骨髓吸出物、骨髓試樣、周邊血液試樣及組織試樣)中進行量測。
資料處理及校正：在產生單一強度值之陣列上量測樣品。不使用常見參照。作者提供之資料檔案常已經MAS4、MAS5或RMA處理。當併入MAS5資料時，包括所有表現值且忽略不存在/存在調用。藉由自各值減去中值來使每個微陣列實驗之中值相對於零點定標。進行此步驟以移除樣品之間的信號強度偏差。此假定樣品之間的中值表現量幾乎相同且每個樣品具有相等數目之基因在高於及低於中值下表現。此使樣品間之中值得以標準化。
線性標度解釋：中值=1。倍數變化解釋為「x軸單位」-高於中值基因表現之倍數。舉例而言，線性標度值30為中值基因表現1之30倍大。
此資料顯示BCMAmRNA高度表現於多發性骨髓瘤、鬱積型骨髓瘤以及原因不明性單株γ球蛋白症中。此資料顯示BCMA mRNA在>99%多發性骨髓瘤患者樣品上表現(85%(796/934)多發性骨髓瘤樣品之線性表現值大於10)。此資料顯示BCMA為一種高度合乎以使用如本文以不同方式所述之BCMA抗體及ADC治療本文所述之以上提及之及其他癌症為目標需要的受體蛋白質。
實例2
使用Abgenix(現為Amgen Fremont公司)XenoMouse®技術(美國專利第6,114,598號；第6,162,963號；第6,833,268號；第7,049,426號；第7,064,244號，其以全文引用的方式併入本文中；Green等人,1994,Nature Genetics 7：13-21；Mendez等人,1997,Nature Genetics 15：146-156；Green及Jakobovitis,1998,J.Ex.Med.188：483-495)進行針對人類BCMA之完全人類單株抗體的開發。
第一階段概述：概述提供於圖4A中。用293T/BCMA短暫表現性細胞或含有單體形式huBCMA與二聚形式huBCMA兩者之可溶性huBCMA蛋白質之混合物免疫XenoMouse®動物。產生融合瘤且藉由FMAT鑒別關於CHO/BCMA短暫細胞之抗原特異性結合劑。使用人類H929及L3055細胞株篩檢一組416個結合劑中與內源性huBCMA結合者。使用FAC分析產生關於293/食蟹獼猴BCMA短暫細胞之其他食蟹獼猴交叉反應性資料。藉由根據與內源性人類BCMA之最佳結合，且接著其次根據與食蟹獼猴受體之最佳交叉反應性對抗體分級來鑒別一組22個先導融合瘤株系。此先導組接著進行次選殖、按比例擴大、定序及純化。同時，評估一組416個結合劑之APRIL阻斷以及與鼠類BCMA之交叉反應性。在22個融合瘤株系中，僅三個抗體為完全人類抗體(親本Ab-1(亦即2A1)、親本Ab-4(亦即1E1)及親本Ab-6(亦即11F12))，剩餘為人類重鏈及小鼠輕鏈嵌合物之組合，其中三者未能進行次選殖。三個抗體，亦即親本Ab-1(2A1)、親本Ab-4(1E1)及親本Ab-6(11F12)經重組選殖為IgG1抗體。此資料說明產生具有合乎需要屬性之完全人類抗體不為常規操作且不可預測。
第二階段概述：概述提供於圖4B中。免疫原及初級篩檢與第一階段相同。第二階段產生一組581個與人類BCMA特異性結合之抗體。藉由FAC測試此組與食蟹獼猴BCMA之交叉反應性。食蟹獼猴交叉反應性資料用於選擇90個具有可偵測食蟹獼猴交叉反應性之抗體。使用短暫表現系統，藉由FAC測試此子組90個抗體與TACI及BAFF-R之結合。排除具有任何程度可偵測結合之抗體。篩檢90個抗體之輕鏈使用且排除具有鼠類λ輕鏈者。此等二級篩檢導致自90個抗體中鑒別出45個為完全人類IgG且對人類BCMA之選擇性超過對TACI及BAFFR之選擇性的抗體。接著藉由使用食蟹獼猴BCMA FAC資料進一步改進此組45個抗體以根據食蟹獼猴結合程度對該組進行次序分級。接著30個最佳食蟹獼猴交叉反應性結合劑依序進行次選殖、按比例擴大、定序及純化。包括另一細胞活力篩檢用以鑒別ADC勝任Ab。此處，替代直接DM1結合，利用結合有SMCC-DM1之抗huFc二級 抗體。具有類似包覆性質之一組初始七個抗體滿足篩檢準則且以IgG1形式重組選殖出來。一組結合劑(人類及食蟹獼猴BCMA之結合劑)接著進行重組選殖(32B5、37B2、35D2、29C12、40D7、33C7)。啟始熱點修復，從而修整N-連接型糖基化位點及協變違規者。對熱點修復抗體之選擇包括表現及純化特徵、細胞表面結合之FACS評估、ADC結合及細胞活力分析。對細胞表面表現之BCMA之表觀親和力低於2A1且2A1CV5-MCC-DM1之ADC效能比對於32B5或29C12-MCC-DM1觀測到之ADC效能提高2至3倍。兩個序列相關工程改造抗體(29C12.V1及32B5.V1)經鑒別為具有用於產生ADC及醫藥組合物之獨特且合乎需要之屬性。
免疫：使用XenoMouse®技術、經工程改造以表現相應同型之完全人類IgGK及IgGλ抗體之不同譜系的轉殖基因小鼠產生針對BCMA之完全人類抗體(Mendez,M.J.等人,(1997)Nature genetics 15,146-156；Kellermann,S.A.等人,(2002)Current opinion in biotechnology 13,593-597)。XMG1-KL、XMG2-K、XMG2-KL、XMG4-KL小鼠品系用兩種形式之BCMA免疫原免疫；亦即表現全長人類BCMA之293T轉染子及純化之BCMA可溶性蛋白質。BCMA可溶性蛋白質免疫原由兩種形式之混合物組成；亦即表現為具有avi-His標籤之單體胞外域之BCMA及表現為人類Fc連接之均二聚體之BCMA。在每個小鼠10μg之劑量下用可溶性蛋白質免疫作為首次加強免疫且在每個小鼠5μg可溶性BCMA(在單體：二聚體比率1：1下)之劑量下投與後續加強免疫。在每個小鼠4.0×106個BCMA轉染細胞下給予細胞免疫原且後續加強免疫為每個小鼠2.0×106個BCMA轉染細胞。所用注射部位為皮下尾根與腹膜內之組合。所用佐劑為根據製造商說明書製備之TiterMax金(Sigma；目錄號T2684)、礬(E.M.Sergent Pulp and Chemical公司,Clifton,NJ，目錄號1452-250)且以佐劑乳液與抗原溶液之比率1：1混合。歷經4至12週之時期以11-17次加強免疫之範圍對小鼠進行免疫。
在首次注射之後約5及9週收集血清且藉由對短暫表現於CHO-S細胞上之重組BCMA受體進行FAC染色來測定比效價。鑒別出總計38個動物具有特異性免疫反應，此等動物匯合成6組且接著進行抗體產 生。
製備單株抗體：自各組之免疫動物收集引流淋巴結及脾且匯合。在適合培養基(例如杜貝卡氏經改良依格培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)；DMEM；可自Invitrogen,Carlsbad,CA獲得)中使淋巴細胞及脾細胞自組織解離以自組織釋放細胞，且懸浮於DMEM中。使用適合方法選擇及/或擴增B細胞，且與適合融合搭配物，例如非分泌骨髓瘤P3X63Ag8.653細胞(美國菌種中心CRL 1580；Kearney等人,J.Immunol.123,1979,1548-1550)融合。
在比率1：4下使B細胞與融合搭配物細胞混合。藉由在400×g下離心4分鐘來溫和集結細胞混合物，傾析上清液，且藉由使用1ml吸移管溫和混合細胞混合物。用PEG/DMSO(聚乙二醇/二甲亞碸；自Sigma-Aldrich,St.Louis MO獲得；每百萬個淋巴細胞1ml)誘導融合。歷經1分鐘在溫和攪拌下緩慢添加PEG/DMSO，隨後混合1分鐘。接著在溫和攪拌下歷經2分鐘添加IDMEM(無麩醯胺酸之DMEM；每百萬個B細胞2ml)，隨後歷經3分鐘再添加IDMEM(每百萬個B細胞8ml)。
溫和集結(400×g 6分鐘)融合細胞且再懸浮於每百萬個B細胞20ml選擇培養基(例如含有重氮絲胺酸及次黃嘌呤[HA]及必要時其他補充物質之DMEM)中。在37℃下培育細胞20-30分鐘且接著再懸浮於200ml選擇培養基中並於T175燒瓶中培養3至4天，隨後進行96孔接種。
使用標準技術將細胞分配至96孔盤中以使所得群落之純系性最大。在培養數天之後，收集融合瘤上清液且使其經受如以下實例中詳述之篩檢分析，包括確認與人類BCMA受體結合、藉由配體結合競爭分析鑒別APRIL阻斷抗體及評估與BCMA受體相關之其他受體(例如TACI及BAFF受體)之交叉反應性。接著進一步選擇經鑒別具有相關結合性質之融合瘤株系且使其經受標準選殖及次選殖技術。活體外擴增純系株系，且獲得分泌之人類抗體以進行分析並進行V基因定序。
藉由FMAT選擇BCMA受體特異性結合抗體：在培養14天之後，藉由螢光微體積分析技術 (FMAT)(Applied Biosystems,Foster City,CA)篩檢融合瘤上清液中之BCMA特異性單株抗體。相對於用人類BCMA短暫轉染之CHO-S細胞篩檢上清液且相對於用不含BCMA基因之相同表現質體短暫轉染之CHO-S細胞進行反篩檢。
簡言之，將細胞於Freestyle培養基(Invitrogen,Carlsbad,CA)中以50μL/孔之體積在約4000個細胞/孔之密度下(針對穩定轉染子)，及在約16,000個細胞/孔之密度下(針對親本細胞)接種至384孔FMAT盤中，且將細胞在37℃下培育隔夜。接著，添加10μL/孔上清液且在4℃下培育各盤約1小時，此後在2.8μg/ml之濃度(400ng/ml最終濃度)下添加10μL/孔抗人類IgG-Cy5二級抗體(Jackson Immunoresearch,West Grove,PA)。接著在4℃下培育各盤1小時，且使用FMAT巨共焦掃描器(Applied Biosystems,Foster City,CA)讀取螢光。
在多個篩檢階段之後，鑒別出一組897個抗BCMA結合融合瘤株系且接著進行進一步表徵分析。
藉由流式細胞測量術(FAC)進行其他結合表徵：進行FACS結合分析以評估抗BCMA受體特異性抗體與在H929及L3055腫瘤細胞株上表現之內源性BCMA受體之結合。此外，亦使用短暫表現於293T細胞上之各種受體之重組形式，藉由FAC評估與鼠類及食蟹獼猴BCMA直系同源物之交叉反應性結合以及與相關B細胞受體TACI及BAFF-R之結合。
藉由在4℃下與10,000至25,000個細胞一起培育融合瘤上清液1小時，隨後用PBS/2% FBS洗滌兩次來進行FAC分析。接著在4℃下用經螢光染料標記之二級抗體處理細胞，隨後洗滌兩次。將細胞再懸浮於50ul PBS/2% FBS中且使用FACSCaliburTM儀器分析抗體結合。
藉由FACS進行配體結合競爭分析來鑒別阻斷抗體：開發配體結合競爭方法以鑒別結合BCMA受體且阻斷APRIL配體結合之抗體(於融合瘤上清液中)。在96孔V形底盤(Sarstedt #82.1583.001)中，在4℃下培育50,000個短暫轉染293T細胞與15μl抗BCMA融合瘤上清液1小時，隨後用PBS/2% FBS洗滌兩次。接著添加50μl 2.5μg/ml經Alexa647標記之APRIL-Fc至各孔中且在4℃下培育各盤1小時。接著洗滌細胞且藉由流式細胞測量術定量細胞締合之經Alexa647標記之APRIL-Fc的量。
實驗包括陰性對照融合瘤上清液。在此等陰性對照實驗中觀測到之平均信號採納為分析之最大可能信號。將實驗上清液與此最大信號進行比較且計算各孔之抑制百分比(抑制%=(1-(抗BCMA融合瘤上清液之FL4幾何平均值/最大FL4幾何平均信號))。
對2A1及1E1之進一步表徵：一重要準則為對表現在細胞表面上之野生型人類BCMA之靈敏選擇性。使用標準技術進行關於短暫轉染以表現全長BCMA、TACI或BAFF-R之細胞之FACS結合。將約40×106個短暫轉染目標細胞再懸浮於染色溶液(含2%山羊血清、1%兔血清、0.02%疊氮化物之PBS)中且根據實驗設計等分至圓底96孔盤(Corning公司,Acton,MA)中。在攝氏4度下培育細胞30分鐘以阻斷非特異性位點。將抗體滴定至染色溶液中。藉由以200μl/孔再懸浮細胞來於沖洗溶液(PBS+0.02%疊氮化物)中沖洗細胞。在攝氏4度下在1500rpm下離心細胞7分鐘。移除沖洗溶液且重複沖洗步驟。將細胞在30μl/孔下再懸浮於適當抗體溶液(參見表4中之矩陣)中且在攝氏4度下培育30分鐘。huIgG1陰性對照二級試劑依次為生物素化抗huIgG(Jackson目錄號109-065-098)及抗生蛋白鏈菌素-藻紅素(streptavidin-phycoerythrin，SA-PE)結合物(BD Pharmingen目錄號554061)；1E1、2A1及11F12二級試劑為相同生物素化抗huIgG，隨後為SA-PE。對於小鼠IgG1陰性對照及兩個小鼠抗體(1.183及1.288)，二級試劑為抗小鼠IgG-PE結合物(BD Pharmingen目錄號550589)。如上所述沖洗細胞/抗體以移除過量/未結合抗體。在末次沖洗之後，將細胞再懸浮於添加有一滴染色溶液以使細胞免於聚集之200ul沖洗溶液中。在FACS上在532nM波長下讀取樣品。若MFI為陰性對照值兩倍，則樣品視為結合陽性。
如表4中所示，2A1及1E1抗體對BCMA具有特異性，而11F12與結構同源受體TACI及BAFF-R交叉反應。1.183及1.288為與TACI及/或BAFF-R交叉反應且因此充當交叉反應性陽性對照之小鼠抗huBCMA 單株抗體。
藉由FACS分析評估2A1及1E1抗體對表現在細胞表面上之人類及食蟹獼猴(cyno)BCMA之結合親和力。簡言之：第1天-製備用食蟹獼猴或人類BCMA短暫轉染之293T細胞
第2天-添加5mM丁酸鈉至細胞中以提高BCMA表現
第3天-在37℃下於培養基(FreestyleTM 293表現培養基(Gibco/Invitrogen,San Diego,CA)+2% FBS+50ug/mL G418+0.05%疊氮化鈉)中持續約16小時建立平衡分析
平衡條件：在4℃及37℃下依次以1：2及1：4滴定800nM各Mab，10個資料點；製備短暫表現人類BCMA之2×104個細胞及3×105個293T細胞，且製備短暫表現食蟹獼猴BCMA之2×104個細胞及2.6×105個293T細胞
第4天-FACS分析：產生各mAb之兩個曲線，一個受Kd控制，一個受Ab控制
藉由BIAcoreTM表面電漿子共振分析評估2A1及1E1抗體對人類及食蟹獼猴(cyno)BCMA之平衡解離常數(K d )。
分析條件：在25℃下，使用配備有CM5感測器晶片之BIAcoreTM 3000光學生物感測器(GE Healthcare,Piscataway,NJ)於HBS-EP緩衝系統(10mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、3.4mM EDTA及0.005%界面活性劑P20)中進行生物感測器分析。自動取樣器維持在4℃下。
表面製備：使用標準胺偶合化學(10,000-11,000 RU)使山羊抗人類IgG捕捉抗體(Jackson ImmunoResearch Laboratories公司,West Grove,PA；109-005-098)固定於感測器晶片之所有流動槽中。此表面類型提供一種 在各再生步驟之後可重現地捕捉新鮮分析抗體(配體)之形式。
配體製備：流動槽2、3及4用於分析捕捉到之抗BCMA抗體(約350-480 RU)，而流動槽1用作參照流動槽。
分析物製備：於操作緩衝液中製備在75.0至0.103nM(3倍稀釋度)之範圍內之七個抗huBCMA濃度。
相互作用參數：作為一種評估結合之重現性及管理注射次序之潛在系統偏差的手段，一式三份且以混合次序操作七個分析物樣品濃度中之每一者。亦操作多個空白(緩衝液)注射且其用於評估及減去系統人為效應。分別在50uL/min之流速下持續180s及900s監測所有分析物濃度之締合及解離階段。另外，使用75.0nM rhu BCMA濃度，在50uL/min之流速下進行5400s之長解離階段實驗。
表面再生：用10mM甘胺酸(pH 1.5)在50uL/min之流速下再生表面35s。
模型/擬合：對資料進行對準、雙重參照且使用Scrubber v2.0©軟體(BioLogic Software Pty有限公司,Campbell,Australia)擬合，該軟體為一種SPR資料處理及非線性最小平方回歸擬合程式。首先，對於1A2及1E1抗BCMA抗體，由5400s解離階段資料確定解離速率係數(kd)。其次，此值用作相對於1：1結合模型對180s締合階段資料整體擬合中之固定參數以確定締合速率係數(ka)及Rmax值。對於11F12-1抗BCMA抗體，由穩態信號估計平衡解離常數(K d )且相對於簡單1：1結合等溫線進行擬合。
如表5中所示，2A1及1E1對人類BCMA顯示低nM親和力。重要的是2A1結合食蟹獼猴BCMA之親和力與結合人類BCMA之親和力類似。相反，1E1結合食蟹獼猴BCMA之親和力相對較低(亦即>100nM)。此資料進一步說明2A1抗體之獨特且少見之特徵。2A1抗體由於其對BCMA之特異性卓越、其對huBCMA之親和力較高及其與食蟹獼猴BCMA具有交叉反應性而被選擇用於進一步表徵及開發。1E1與11F12不共有此等獨特特徵。
表5. 抗BCMA抗體之由Biacore獲得之平衡解離常數(K d )及相對FACS親和力
實例3
現已確定2A1及1E1抗體結合在短暫表現性細胞上表現之huBCMA(實例2)，重要的是確定此等抗體是否能夠結合自骨髓瘤患者分離之天然BCMA表現性B淋巴細胞(例如最初來源於骨髓瘤患者之H929細胞株)。此外，測試許多不同骨髓瘤及B細胞株以確定2A1及1E1抗體是否且在何種程度上結合此等細胞表面上之BCMA。
將約10至40×106個H929骨髓瘤細胞再懸浮於染色溶液(含2%山羊血清、1%兔血清、0.02%疊氮化物之PBS)中且根據實驗設計等分至圓底96孔盤(Corning公司,Acton,MA)中。在攝氏4度下培育細胞30分鐘以阻斷非特異性位點。將抗體滴定至染色溶液中。藉由以200ul/孔再懸浮細胞來於沖洗溶液(PBS+0.02%疊氮化物)中沖洗細胞。在攝氏4度下在1500rpm下離心細胞7分鐘。移除沖洗溶液且重複沖洗步驟。以30ul/孔將細胞與2A1或1E1一起再懸浮且在攝氏4度下培育30分鐘。huIgG1陰性對照之二級試劑依次為生物素化抗huIgG(Jackson Labs,Bar Harbor,Me,目錄號109-065-098)及抗生蛋白鏈菌素-藻紅素(SA-PE)結合物(BD Pharmingen,San Diego,CA，目錄號554061)。2A1及1E1二級試劑為相同生物素化抗huIgG，隨後為SA-PE。如上所述沖洗細胞/抗體以移除過量/未結合抗體。在末次沖洗之後，將細胞再懸浮於添加有一滴染色溶液以使細胞免於聚集之200ul沖洗溶液中。在FACS上在532nM波長下讀取樣品。
如圖5中所示，2A1抗體與1E1抗體兩者均結合在骨髓瘤細胞株(H929)表面上表現之人類BCMA。儘管兩種抗體均充分結合，但2A1抗體之結合特徵顯著優於1E1抗體。此資料進一步證實2A1抗體為獨特的，因為其與表現於骨髓瘤細胞中之人類BCMA之結合更優。
測試許多不同骨髓瘤及B細胞株以確定2A1及1E1抗體是否且在何種程度上結合此等細胞表面上之BCMA。測試以下骨髓瘤細胞株 之2A1結合：H929、RPMI 8226、OPM2、MM1S、U266及MM1R以及B細胞株RAMOS及EW36。將約10至40×106個細胞再懸浮於染色溶液(含2%山羊血清、1%兔血清、0.02%疊氮化物之PBS)中且根據實驗設計等分至圓底96孔盤(Corning公司,Acton,MA)中。在攝氏4度下培育細胞30分鐘以阻斷非特異性位點。將抗體滴定至染色溶液中。藉由以200ul/孔再懸浮細胞來於沖洗溶液(PBS+0.02%疊氮化物)中沖洗細胞。在攝氏4度下在1500rpm下離心細胞7分鐘。移除沖洗溶液且重複沖洗步驟。使用標準方法，諸如由EMP Biotech提供者(用於標記及純化蛋白質以形成分別在約652nm及671nm下具有螢光激發及螢光發射最大值之蛋白質-染料結合物的Fluoro-Spin 649蛋白質標記及純化套組)，利用DY-649之反應性丁二醯亞胺基酯使2A1抗體及人類IgG1同型對照抗體結合於Dy649。以30ul/孔將細胞與2A1或對照抗體一起再懸浮且在攝氏4度下培育30分鐘。如上所述沖洗細胞/抗體以移除過量/未結合抗體。在末次沖洗之後，將細胞再懸浮於添加有一滴染色溶液以使細胞免於聚集之200ul沖洗溶液中。
如圖7中所示，2A1抗體結合所有骨髓瘤細胞株及B細胞株，但與RAMOS B細胞株之結合相對較低。此資料顯示2A1抗體能夠結合多種人類骨髓瘤細胞上之BCMA。因此，此資料顯示2A1抗體適用於靶向表現BCMA之各種人類骨髓瘤細胞上之BCMA。
實例4
較佳實施例之一高度合乎需要之屬性為藉由多種手段，包括ADCC(抗體依賴性細胞介導之細胞毒性)殺傷目標細胞之能力。通常，ADCC涉及由抗體活化天然殺傷細胞(NK細胞)。NK細胞表現FcγR(一種Fc受體蛋白質)。FcγR結合已結合於目標細胞表面之諸如IgG1之抗體的Fc部分。在結合後，NK細胞釋放細胞激素及含有穿孔素(perforin)及粒酶(granzyme)之細胞毒性顆粒，其進入目標細胞且藉由觸發細胞凋亡來促進細胞死亡。本文提供之抗體及ADC之實施例具有IgG1同型(如上所述)且因此持有ADCC活性之希望。
活體外ADCC分析：如下用鈣黃綠素(calcein)-AM標記目標細胞H929，其為一 種最初自以相對較高含量表現BCMA之骨髓瘤患者分離之人類B淋巴細胞細胞株。收集H929細胞且以2×106個細胞/ml再懸浮於cRPMI-10培養基(RPMI(Life Technologies,Carlsberg,CA)+10%胎牛血清)中。添加含4mM鈣黃綠素-AM之無水DMSO(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)以獲得最終濃度10μM(1：400稀釋)。在37℃下培育細胞30分鐘，隨後於PBS中洗滌兩次(每次在4℃下，1500rpm，5分鐘)。將集結粒再懸浮於cRPMI-10中且調整至0.2×106個細胞/ml之濃度並置放在冰上以用於下一步驟中。在自10ug/ml起始之10倍連續滴定下添加測試抗體至U型底96孔盤(BD,Franklin Lakes,NJ)中。利妥昔單抗(Genentech,South San Francisco,CA)用作陽性抗體對照。此外，1E1抗體之IgG2同型用作對照。添加鈣黃綠素-AM標記之H929細胞至各孔中(1×104個細胞/孔)且在37℃下與抗體一起培育20分鐘。在培育之後，以4×106個細胞/ml之濃度添加50μl NK細胞至各孔中，或以20×106個細胞/ml之濃度添加PBMC且在37℃下培育4小時。在4℃下在1500rpm下集結作為效應細胞之NK細胞或PBMC 5分鐘且再懸浮於cRPMI-10中，從而調整細胞濃度至4×106個細胞/ml(NK)或20×106個細胞/ml(PBMC)。在培育之後，藉由添加20μl/孔9% NP-40(IGEPAL CA 630,Sigma-Aldrich)以刺激100%溶解來製備陽性對照。所有其他孔接收單獨20μl/孔cRPMI-10培養基。在4℃下在800RPM下旋轉各盤4分鐘。移除約150μl上清液且轉移至透明底部黑色96孔盤(Corning,Lowell,MA)中並在標準盤讀取器(Molecular Devices,Spectra max GEMINI)上，在激發485、發射535下讀取螢光。最大溶解百分比計算為(樣品值-自發溶解)/(100%溶解-自發溶解)X100。
如圖8中所示，2A1及1E1抗體顯示很好的ADCC活性，其中對2A1及1E1之EC50分別為11ng/ml及76ng/ml。此等抗體之ADCC活性遠超過利妥星(Rituxan)基準抗體之ADCC活性。因此，2A1及1E1抗體因其極佳ADCC活性而為獨特的且因此此等抗體之ADC形式提供多個用於殺傷癌症患者之BCMA表現性細胞，諸如多發性骨髓瘤之途徑。
實例5
此等實驗說明2A1抗體在結合人類骨髓瘤細胞上之 huBCMA時內化。此為用於開發成ADC之候選抗體之一重要屬性，因為抗體較佳藉由BCMA介導之胞吞作用內化以使ADC內化至內體/溶酶體路徑中以在旁觀者殺傷最小下選擇性殺傷彼細胞。
在生長培養基(RPMI 1640、10% FBS、MEM非必需胺基酸、HEPES、β-巰基乙醇、青黴素/鏈黴素、L-麩醯胺酸、丙酮酸鈉、慶大黴素(gentamicin))中培養H929骨髓瘤腫瘤細胞。以每管約500,000個細胞將H929細胞收集至兩個3ml FACS管中且用分析介質(含有2% FBS之PBS)洗滌一次。以每管10μg/mL(每管200μL)將細胞與2A1或CD138抗體一起懸浮於分析介質中。在4℃下培育30分鐘之後，細胞用分析介質洗滌一次。添加抗人類IgG Alexa 488(Molecular Probes公司,Eugene,OR.目錄號A11013，以1：1,000於分析介質中稀釋)與Hoechst 33342(Molecular Probes公司,Eugene,OR.目錄號H21492，以1：2000於分析介質中稀釋)之混合物至細胞中。在4℃下培育細胞15分鐘之後，洗滌細胞一次且接著用0.5ml分析介質再懸浮以達到每毫升1×106個細胞之濃度。以各抗體8個孔轉移50μL細胞至96孔盤中。以時間零點起始藉由添加50μl BD cytofix/cytoperm套組(BD Biosicences.目錄號554714)來固定及滲透細胞，或在37℃、5% CO2下培育細胞持續0.5、1及2小時時間點。在各培育時間下，使用與對於0時間點所指示相同之步驟固定及滲透細胞。在採用40×物鏡之使用BioApplication「光點偵測器」算法之ArrayScan VTI HCS讀取器(第6版,Cellomics,Thermo Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)上定量內化速率。內化濾光片設置在下表中指示。在各孔中計數至少200個細胞。
ArrayScan之輸出參數算法為「SpotCountPerObjectCh2」。結果報導為每200個細胞之總光點計數。使用Prism 4.01(GraphPad,San Diego,CA)進行統計分析。光點計數表示為重複量測結果(n=2)之平均值±標準平均誤差(SEM)。使用分析工具，相對於單相指數關聯等式擬合每單位時間之光點計數(內化速率=T1/2)。使用來自GraphPadTM Prism之單相指數關聯計算 內化之半衰期。
圖9顯示抗體2A1在結合H929細胞上之BCMA之後易於內化。此進一步說明此抗體之獨特屬性及其作為靶向BCMA以藉由消除表現BCMA之B細胞來治療癌症之ADC的適用性。
實例6
使用不可裂解連接子(SMCC)使親本2A1抗體(重鏈胺基酸序列SEQ ID NO：287及輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO：288)結合於美登素(DM1)，從而產生稱為2A1-MCC-DM1之ADC。
開發與DM1-SMCC(4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺酯，其含有NHS酯及順丁烯二醯亞胺)之單步驟結合。獨立合成DM1-SMCC試劑且用作ADC過程中之單一結合試劑，如下所示。藉由使已結合於連接子之藥物美登素(例如且在此情況下為DM1)帶電荷，避免產生許多潛在過程雜質。
結合概述：如以下圖解所述一步製備結合於SMCC-DM1之抗huBCMA 2A1。於50mM磷酸鉀、50mM NaCl、2mM EDTA(pH 7.5)中之2.5mg/mL 2A1用於DMA(10%)中之8、10及12倍莫耳過量之連接子-藥物修飾。在室溫下在搖盪器上進行反應90分鐘且接著在4℃下置放在搖盪器上培育隔夜。藉由HiLoad 16/60 SuperdexTM 200移除未反應連接子-藥物。匯合未聚集部分且在Amicon® Ultra-15 30kD MWCO離心過濾器上濃縮且隨後使用 0.22微米過濾器過濾。
使用質譜分析各種2A1-MCC-DM1 ADC(參見圖10)。為簡化完整質量概況，以酶/受質重量比率1/20使用PNG酶F(New England Biolabs)，在37℃下使ADC樣品於PBS緩衝液中去糖基化隔夜(16小時)。 在具有雙重噴霧器電噴霧離子源之Agilent 6210 TOF LC/MS系統中分析20μg去糖基化ADC樣品。使2.1×150mm Pursuit 5μM粒度二苯基管柱(Agilent Technologies)連接於LC系統且在0.4ml/min下操作。管柱溫度為75℃，溶劑A為含0.1% TFA之水，且溶劑B為含0.1% TFA之乙腈。以B之百分比計之梯度為在3、5、30、32、33及35分鐘內分別為5-5、5-25、25-80、80-80、80-5、5-。在100至10000m/z之範圍內調諧且校正TOF質譜儀。TOF MS條件包括毛細管電壓4500V、乾燥氣體流速12L/min、乾燥氣體溫度300℃、噴霧器氣體流速40L/min及碎裂器電壓350V。在Agilent MassHunter定性分析程式中分析MS資料。
如表7中所示，所得2A1-MCC-DM1之平均藥物：抗體比率(DAR)為約2.8至3.4。
使用各種連接子及藥物自2A1及1E1抗體產生ADC。除MCC-DM1結合之外，2A1及1E1抗體亦成功結合於PEG4-Mal-DM4。此證實可使用除DM1-SMCC方法以外之連接子及藥物技術製備本文所述之ADC，特定言之對於2A1抗體而言。
2A1CV5(Ab-1)之結合：基本上如上所述進行2A1CV5(Ab-1)及2A1CV4抗體與DM1-SMCC之結合。一般而言，在pH 8.5之緩衝溶液中進行結合。在完成初始結合後，引入甘胺酸以清除/淬滅未反應DM1-SMCC及水解不穩定DM1-MCC結合物。藉由切向流過濾(TFF)使ADC與小分子組分分離。此特定結合之條件為：5g/L抗體於50mM硼酸、50mM NaCl、2mM EDTA(pH 8.5)中稀釋。添加10倍莫耳過量之DM1-SMCC(於7.5% DMAC中)且在20℃下培育90分鐘。使用200mM在pH 8.0下淬滅反應30分鐘。調整pH值至pH 5.2且使溶液經受切向流過濾以緩衝交換成調配緩衝液(10 mM麩胺酸、4%甘露糖醇、2%蔗糖，pH 5.0)且濃縮成約11-14g/L。接著於10mM麩胺酸、4%甘露糖醇、2%蔗糖、0.01% PS-20(pH 5.0)中將物質稀釋成最終濃度10g/L。經由結合過程，2A1CV5(Ab-1)抗體與2A1CV4抗體兩者均可接受地且同等地表現。表8概述2A1CV5(Ab-1)及2A1CV4 ADC之最終結合結果。
在進一步分析時，具有高DAR值之ADC傾向於在IV pH值跳躍測試中自溶液沈澱析出。跟蹤研究確定DAR小於4之ADC顯示在IV pH值跳躍測試中未觀測到沈澱或渾濁。使用DAR為3-4之2A1CV5(Ab-1)進行進一步結合研究發現其對pH值變化穩定。藉由降低結合過程中使用之DM1-SMCC之莫耳當量，達成所要平均DAR 3至4(參見上文)。結合本文所述之抗體，特定言之2A1CV5(Ab-1)之方法包括使用上述「一步」方法，其使用相對於抗體之量X倍莫耳過量之預偶合美登素-連接子，特定言之DM1-MCC，其中X可為3、4、5、6、7、8、9或10及介於之間的任何值。
實例7
測試ADC靶向及殺傷BCMA表現性骨髓瘤細胞之能力。CellTiter-Glo®發光細胞活力分析為一種基於對存在之ATP定量來測定培養物中之活細胞數的均質方法，ATP為存在代謝活性細胞之信號。CellTiter-Glo®分析可適用於細胞毒性分析(對於更多資訊，參見http：//www.promega.com/products/cell-health-assays/cell-viability-assays/celltiter_glo-luminescent-cell-viability-assay/)。細胞活力分析用於評估各種ADC對各種多發性骨髓瘤細胞株及B細胞株之相對殺傷能力。遵循Cell Titer-Glo套組(Promega G7572)中提供之方案。簡言之，將於90ul RPMI 1640、10% FBS中之5×103個目標細胞等分至透明平底白色有壁96孔盤(Costar #3903)中。將ADC稀釋成10X儲備物以產生500nM美登素藥物當量。以500nM儲備物起始，以2倍稀釋度於RPMI 1640、10% FBS中連續稀釋各ADC。添加10ul 10×ADC稀釋系列至90ul含細胞之培養基中(一式三份孔)。最高濃度之ADC為約50nM美登素藥物當量，且最低濃度之ADC為約50pM美登素藥物當量。包括同型對照ADC(結合於MCC-DM1之抗抗生蛋白鏈菌素huIgG1)以及僅含培養基之對照。在37℃、5% CO2下培育各盤96小時。在培育之後，添加100ul受質溶液(Promega G7572)至各孔中。在EnVisionTM多標記讀取器(PerkinElmer)或Analyst HT盤讀取器(LJL Biosciences)上讀取發光。使用GraphPad PrismTM分析及圖示資料以確定ADC對各種癌症細胞株之相對功效。
在第一實驗中，使兩種不同抗體(2A1及1E)與不同連接子及美登素分子結合且分析其殺傷骨髓瘤細胞之能力。詳言之，針對H929骨髓瘤細胞測試1E1-PEG4-Mal-DM4、1E1-MCC-DM1、2A1-PEG4-Mal-DM4及2A1-MCC-DM1。如圖11中所示，PEG4-Mal-DM4 ADC與MCC-DM1 ADC兩者在選擇性殺傷骨髓瘤細胞方面均極其良好地起作用。2A1-PEG4-Mal-DM4 ADC之IC50為2.2nM，且2A1-MCC-DM1 ADC之IC50為2.4nM，而1E1-PEG4-Mal-DM4 ADC之IC50為680pM且1E1-MCC-DM1 ADC之IC50為630pM。此資料顯示2A1與1E1兩者均可成功結合以產生具有生物活性且有效之ADC。此資料亦顯示2A1 ADC之優越性。
接著，相對於各種多發性骨髓瘤細胞株測試2A1-MCC-DM1 ADC，該等細胞株包括H929、U266、MMIR、MMIS、EW36 B細胞淋巴瘤細胞株及RAMOS伯基特氏淋巴瘤細胞株。作為對照，使各種細胞株暴露於游離DM1以確定細胞實際上由游離DM1殺傷(參見圖13)。如圖12A-F中所說明，2A1-MCC-DM1 ADC極有效殺傷多種骨髓瘤細胞株且殺傷EW36及RAMOS細胞的程度小得多。IC50(nM DM1)值為：H929：IC50 0.6nM DM1
U266：IC50 0.8nM DM1
MM1R：IC50 3.9nM DM1
MMIS：IC50 1.0nM DM1
EW36：IC50 30nM DM1
RAMOS：IC50 32nM DM1
實例8
分析2A1抗體之可導致較低穩定性、潛在聚集、錯誤折疊及其類似問題之潛在有問題胺基酸殘基。自源於親本2A1融合瘤之獨立次純系對輕鏈及重鏈可變區進行PCR擴增。測定抗體2A1由VL1/1c/JL3b λ輕鏈可變區及VH3-15-22/JH4 γ可變區構成。將輕鏈可變區選殖於具有VK1|O2012信號肽之λ輕恆定區上，且將γ鏈可變區選殖於具有VK1|O2012信號肽之IgG1(z)非x非a恆定區上。使用標準技術及試劑，基本上如WO 2011/005621中所述進行定點突變誘發。簡言之，藉由使用QuikChangeTM定點突變誘發(Strategene)使所選胺基酸之密碼子突變來產生IgG1變異體。藉由DNA定序來確認預期突變。使用pTT5短暫哺乳動物表現載體在293E細胞中表現野生型及突變型蛋白質(Durocher Y.等人,Nucleic Acid Research 30(2)：E9)。使用標準蛋白質A層析(5ml管柱，Pierce)來純化突變蛋白質。
觀測到結合於MCC-DM1之2A1親本抗體之聚集。對2A1抗體之序列分析鑒別出在VH中之位置107處存在Cys殘基，使其變成Ala(在生殖系中表現)。此外，鑒別出CDRL1及CDRL3中之三個推定Asn脫醯胺位點及CDRH2及CDRL3中之Asp異構化位點。CDRL3及CDRH3亦含有可傾向於氧化之Trp殘基。若干輪協變分析用於增加親本2A1 Fab 區之穩定性及生物物理學性質(Tm Fab=66℃)。鑒別2A1抗體之可變重域(SEQ ID NO：287)中之協變違規者且設計以下協變突變以校正冒犯性胺基酸：K14Q、R17G、T24A、G32S、F44V、G56S、D84N、F88T、T98A、T107A及S108K；以及在可變輕域(SEQ ID NO：287)中：E144K。本發明之態樣包括具有以上提及之突變之任何組合的2A1抗體。
評估包括非二硫鍵結之Cys之協變違規者(10 VH、1 LC)之產生、與細胞之結合及活體外ADCC效能。2A1突變蛋白質組提供於表9中。
示差掃描熱析法(DSC)用於比較親本抗體與工程改造抗體之熱穩定性。DSC為一種用於直接評估在溫度之調控增加或降低時發生在樣品中之熱能吸收之熱力學工具。DSC通常用於評估蛋白質之熱穩定性及構形穩定性。蛋白質或個別域之熔融溫度可自DSC概況獲得，且若反應可逆，則可測定展開之熱力學參數。當Tm(轉變溫度)較高時，蛋白質被視為 更具熱穩定性。當熱穩定性資料與其他生物分析方法，如尺寸排阻層析(SEC)進行比較時，已觀測到熱穩定性較大(Tm較高)與聚集降低之間存在關聯。Tm較高且聚集形成降低之抗體具有長期穩定性改良，因此有可能製備較佳生物治療劑之潛力。
使用配備有自動取樣器之MicroCalTM VP-毛細管DSC系統(GE Healthcare,Piscataway,NJ)進行DSC。連續量測參照槽與樣品槽之間的溫度差異，且相對於動力單位進行校正。舉例而言，於緩衝溶液中將表10中所示之全長抗體稀釋成0.5mg/mL。在135μL槽中在加熱速率60℃/小時下自20℃至110℃量測溶液參照及蛋白質樣品。預掃描設定為15分鐘，而過濾期為10秒。來自空白緩衝溶液之信號用於基線減除。使用MicroCalTM Origin 7軟體進行資料分析。藉由在蛋白質濃度範圍內進行校正來計算蛋白質熔融期間之熱容量。
如圖14A及14B中所示，經由定點突變誘發加以選擇性工程改造之抗體更具熱穩定性，如藉由Tm所量度。圖14B顯示三個協變變化導致Tm增加8.2℃。進行關於其他工程改造突變蛋白質之進一步研究且結果顯示於下表11中。此資料共同顯示若干工程改造抗體，特定言之表11 中所示者(亦即Ab-1(2A1CV5))具有超過其他抗體之增加之穩定性。熱穩定性增加為醫藥製備中之高度合乎需要的屬性。
為進一步表徵工程改造突變蛋白質抗體，藉由FACS分析測試其結合BCMA之能力。使用標準FAC技術測試抗體與內源性表現在自來自骨髓瘤/漿細胞瘤患者之B淋巴細胞產生之多種細胞(包括H929細胞株)(ATCC,Manassa,VA)上之BCMA的結合。使用標準方法：500mL FAC緩衝液(PBS、1% BSA、5mM EDTA、0.02% NaN3)及FAC阻斷緩衝液(30mL FAC緩衝液、5%正常兔血清、5%正常人類血清)製備試劑。將約10至50×106個H929細胞等分於標準96孔盤(較佳深孔，諸如由Corning提供者)中。用FAC緩衝液調整細胞體積以使所有體積皆達到1mL/管。在4℃下在1200rpm下離心細胞10分鐘。移除上清液且將細胞集結粒再懸浮於每管100μL FAC阻斷緩衝液中。在冰上培育細胞30至60分鐘。藉由以10ug/ml抗體(例如)起始以最終體積100ul於FACS阻斷緩衝液中製備1：3連續稀釋抗體預混合物來製備BCMA抗體。在4℃下在1200rpm下離心阻斷細胞10分鐘。 移除上清液且將細胞集結粒再懸浮於100uL含有BCMA抗體之FAC阻斷緩衝液中。在冰上培育細胞60分鐘。在培育之後，添加1mL冷FAC阻斷緩衝液至各管中。在4℃下在1200rpm下離心細胞10分鐘。移除上清液且以於FAC阻斷緩衝液中1：100稀釋將細胞集結粒再懸浮於100uL含有生物素化抗huIgG(Jackson Labs,Bar Harbor,Me,目錄號109-065-098)之FAC阻斷緩衝液中。在冰上培育細胞45分鐘。在培育之後，添加1mL冷FAC阻斷緩衝液至各管中。在4℃下在1200rpm下離心細胞10分鐘。移除上清液且以於FAC阻斷緩衝液中1：100稀釋度將細胞集結粒再懸浮於100uL含有抗生蛋白鏈菌素-藻紅素(SA-PE)結合物(BD Pharmingen,San Diego,CA,目錄號554061)之FAC阻斷緩衝液中。在冰上培育細胞45分鐘。在培育之後，添加1mL冷FAC阻斷緩衝液至各管中。在4℃下在1200rpm下離心細胞10分鐘。移除上清液且將細胞集結粒再懸浮於0.2mL/管含4%多聚甲醛之PBS中並藉由流式細胞測量術進行分析。
在初步研究中，如上所述藉由流式細胞測量術測試2A1-C107T、2A1-S108R及2A1-C107T+S108R突變蛋白質與人類骨髓瘤細胞(H929細胞)上之BCMA之結合。圖15顯示在2A1親本抗體與三個突變蛋白質之間，與H929細胞上之BCMA之結合類似。接著，藉由流式細 胞測量術測試較大組2A1突變蛋白質(亦即表9中所列者)與H929細胞上之BCMA之結合。圖16A及16B顯示一些2A1突變蛋白質抗體相對於親本2A1(2A1WT)保留與BCMA之類似結合性，而2A1協變3、8、9及11-19抗體與BCMA之結合降低。
另一重要考慮因素為突變誘發對抗體ADCC活性之影響且因此使用標準方法測試各種突變蛋白質抗體之相對ADCC活性。目標細胞H929(具有相對較高BCMA表現量)及JD38(具有相對較低BCMA表現量)。 JD38為一種源於在患有復發性未分化非伯基特淋巴瘤之男性兒童之周邊血液中循環之腫瘤細胞的艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus，EBV)陰性細胞株。用鈣黃綠素-AM標記H929及JD38。收集H929及JD38且以2×106個細胞/ml再懸浮於cRPMI-10培養基(RPMI(Life Technologies,Carlsberg,CA)+10%胎牛血清)中。添加含4mM鈣黃綠素-AM之無水DMSO(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)以獲得最終濃度10μM(1：400稀釋)。在37℃下培育細胞30分鐘，隨後於PBS中洗滌兩次(各次在4℃下，1500rpm，5分鐘)。將集結粒再懸浮於cRPMI-10中且調整至0.2×106個細胞/ml之濃度並置放在冰上以用於下一步驟中。首先在自10μg/ml起始之10倍連續滴定下添加各種2A1突變蛋白質抗體至U型底96孔盤(BD,Franklin Lakes,NJ)中。利妥昔單抗(Genentech,South San Francisco,CA)在使用時充當基準抗體對照。接著添加先前鈣黃綠素-AM標記之目標細胞至各孔中(10,000個細胞/孔)且在37℃下與抗體一起培育20分鐘。製備效應細胞：在4℃下在1500rpm下集結NK細胞或PBMC 5分鐘且再懸浮於cRPMI-10中以獲得最終細胞濃度4×106個細胞/ml(針對NK細胞)或20×106個細胞/ml(針對PBMC)。 在培育之後，以4×106個細胞/ml之濃度添加50μl NK細胞至各孔中，或以20×106個細胞/ml之濃度添加PBMC且在37℃下培育4小時。在培育之後，藉由添加20μl/孔9% NP-40(IGEPAL CA 630,Sigma-Aldrich)以刺激100%溶解來製備對照孔。所有其他孔接收單獨20μl/孔cRPMI-10培養基。在4℃下在800RPM下旋轉各盤4分鐘。移除上清液(150μl)且轉移至透明底部黑色96孔盤(Corning,Lowell,MA)中並在盤讀取器(Molecular Devices,Spectra max GEMINI)上，在激發485、發射535下讀取螢光。最大溶解百分比計算 為(樣品值-自發溶解)/(100%溶解-自發溶解)X100。
在初步研究中，如上所述測試2A1-C107T、2A1-S108R及2A1-C107T+S108R突變蛋白質之ADCC活性。概述2A1突變蛋白質之EC50(ng/ml)之圖17及表12顯示在2A1親本抗體與三個突變蛋白質之間，ADCC活性類似。接著，測試較大組2A1突變蛋白質(亦即表9中所列者中之一些)之ADCC活性。圖18A、18B、19A及19B以及表13顯示一些2A1突變蛋白質抗體相對於親本2A1(2A1WT)保留類似ADCC活性，而一些2A1協變物相對於親本2A1具有降低之ADCC活性。
另一考慮因素為突變誘發對工程改造抗體之表現量之影響。使用自動24孔轉染方案使表9中所列之抗體短暫表現於293-6F哺乳 動物細胞中。使用以下方案：試劑：
- 校正至20ng/uL之DNA
- 25kDa線性PEI MaxTM(Polysciences,目錄號24765)轉染試劑(3mg/mL儲備物)
- 1e6個細胞/mL且活力>98%之2936E細胞
生長及轉染培養基：
- 生長培養基：補充有10mL普洛尼克(Pluronic)F68(Life Technologies,目錄號24040)及0.5mL遺傳黴素(Geneticin)(50mg/mL，Life Technologies,目錄號10131)之1L 293 FreestyleTM培養基(Life Technologies,目錄號12338-018)
- 蛋白腖再進料：20% w/v Difco TC酵母萃取物UF儲備物(BD Biosciences,目錄號292805)
供應：
- 熱壓處理24深孔區塊：Seahorse Bioscience 201272-100(Fisher 50 995 855)
- 熱壓處理uflask蓋
- 96孔costar 3799盤(Fisher 07 200 95)
自動轉染過程：在靶向約1×106個細胞/mL之VCD及大於98%之活力的Vi-Cell(Beckman Coulter)上量測活細胞密度(VCD)。每毫升培養物添加0.25μg DNA。轉移50uL經校正之匯合HC/LC DNA至24孔盤中(1ug總DNA)。添加200uL培養基(未補充之293 Freestyle)+7ug PEI至24孔盤中(1：7 DNA：PEI比率)。添加DNA至盤中，隨後添加培養基加PEI。使DNA/培養基/PEI複合10分鐘。藉由以約1×106個細胞/mL將4mL 2936E細胞懸浮液等分成最終體積4.25mL來將細胞分配至各盤中。將細胞置放在具有無菌uflask蓋之KuhnerTM培育箱中。藉由添加20% w/v酵母萃取物以獲得最終濃度0.5% w/v來在轉染後1-4小時用蛋白腖基培養基進行再進料。使細胞返回至培育箱以藉由將其在37℃及5% CO2下在240rpm下置放在軌道式振盪器上來進行生產階段。使細胞在生長培養基中繼代且量測VCD以保持細 胞處於對數期(約1.5×105至2×106個細胞/mL)。約每隔一天使細胞繼代。在第6天藉由在3000rpm下旋轉各盤10分鐘且轉移上清液至新盤中來收集上清液。
使用伴有再生方案之校準蛋白質A基本定量法在ForteBio Octet QKeTM上分析IgG含量。
材料：
- 黑色平底分析盤(來自Greiner Bio-One之BLK NS 96孔半區平底PP微量滴定盤，製造商零件號675076，Fisher-Scientific零件號_NC9624456)
- 4℃之中和緩衝液(ForteBio稀釋劑-含0.1% BSA、0.02% Tween 20®、0.05%疊氮化鈉之PBS，pH 7.4，)
- 再生緩衝液(短暫溶離緩衝液-10mM甘胺酸、150mM NaCl，pH 2.0)
蛋白質A感測器用於定量人類IgG。在1-500ug/mL之範圍內操作標準曲線(STD CRV)。用ForteBio稀釋劑預浸漬感測器。藉由添加100uL Fortebio稀釋劑至黑色分析盤之孔中且將感測器之框架安置在黑色分析盤之頂部上來預備每個樣品之一個感測器。在分析之前使感測器浸漬至少10分鐘。製備同型匹配標準對照(huIgG1)。藉由一式兩份添加100uL ForteBio稀釋劑至第2-10行中且添加200uL於ForteBio稀釋劑中稀釋成500ug/mL之對照抗體至第1行中來將對照抗體滴定於分析盤中。進行連續稀釋(來自第1行至第10行之100uL)，從而產生具有以下濃度之標準曲線：500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.91、1.95、0.98μg/mL。在單獨黑色分析盤中，藉由將培養基稀釋至Fortebio稀釋劑中以獲得總體積100μL來製備抗體樣品。所用軟體為「Data Acquisition 7.0」及「Basic Quantitation with Regeneration」。設置「分析設置」以使『時間』區域設定為120秒且『振盪速度』區域處於400下。『再生』及『中和』步驟之『時間』區域設定為5秒，其中『振盪速度』為400。分析結果在「Data Analysis 7.0」軟體上加以分析。
圖20顯示表9中所列之協變突變蛋白質抗體之表現效價(以μg/ml計)。若干協變突變蛋白質顯示表現量增高。許多協變突變蛋白質顯示可接受之表現量。
對其他2A1協變突變蛋白質進行進一步分析。使用上述方法測試表14中之2A1突變蛋白質(列為「變異體」)之Tm以及評估產量(mg/L)。此資料顯示C107A之Tm稍好於C107S及C107T變異體，但皆可接受。
為確保最近一輪協變突變蛋白質抗體保留所要生物活性，使用兩種不同細胞株對其他2A1突變蛋白質之BCMA結合性及ADCC活性進行量測。使用上述分析，測試以下2A1突變蛋白質與H929骨髓瘤細胞株(具有相對較高BCMA表面表現)及JD38細胞株(具有相對較低BCMA表 面表現)上之BCMA之結合。測試以下協變突變蛋白質2A1抗體：2A1(C107T)、2A1(R17G、C107A)、2A1(F88T、C107A)、2A1(T24A、C107A)、2A1(T24A、F88T、C107A)、2A1(R17G、F88T、C107A)、2A1(R17G、T24A、C107A)及2A1(R17G、T24A、F88T、C107A)。圖21A及21B顯示協變突變蛋白質保留與表現在骨髓瘤細胞上之BCMA之結合且在所測試之抗體之中，存在一定程度的次要結合差異。圖22A及22B顯示協變突變蛋白質保留對表現在兩種癌症細胞株上之BCMA之ADCC活性。
使用上述分析對來自第二階段之抗體進行表徵及序列工程改造。如上所述自純化融合瘤上清液製備其他Xenomouse人類單株抗體(IgG2或IgG4抗huBCMA mAb 30E1.1、29C12.1、29G5.1、32B5.1、32H3.1、33C7.1、33D4.1、35D2.1、37B2.1及40D7.1)。如本文所述進一步分析此等抗體與經短暫轉染以表現食蟹獼猴BCMA之293T細胞上之食蟹獼猴BCMA的結合。圖23顯示此組所選抗體顯示與食蟹獼猴BCMA之交叉反應性且十個抗體中之七者與食蟹獼猴BCMA之結合高於2A1抗體與食蟹獼猴BCMA之結合。進一步表徵該組抗體與多發性骨髓瘤細胞株H929上之huBCMA之結合。圖24顯示存在廣泛範圍之結合，從而進一步說明獲得具有與huBCMA之足夠結合能力之人類單株抗體不可預測或不為常規操作。
基本上如實例6中所述製備來自純化融合瘤上清液之其他Xenomouse人類單株抗體(抗huBCMA mAb 30E1.1、29C12.1、29G5.1、32B5.1、32H3.1、33C7.1、33D4.1、35D2.1、37B2.1及40D7.1)之抗體-藥物結合物。使用實例10中所述之CellTiter-Glo®發光細胞活力分析測試此等ADC靶向及殺傷huBCMA表現性骨髓瘤細胞(H929細胞株)之能力。圖25A及25B顯示29C12.1、29G5.1、32B5.1、33C7.1、35D2.1、37B2.1及40D7.1 ADC顯示對huBCMA表現性骨髓瘤目標細胞具有細胞毒性。
使來自第二階段之抗體組轉化成人類IgG1同型。如上所述分析序列之協變違規者。表15概述所列抗體之取代清單。
經由定點突變誘發產生許多協變體且藉由各種手段(如上所述)進行分析。表16概述序列變化、效價、產量、純度及Tm。值得注意的是29C12(LC：N69Q)及32B5(HC：A11G、H92Q、S97R；LC：N69Q、F103V)協變體具有顯著效價、產量及Tm增加。表17提供全長輕鏈及重鏈之胺基酸序列。
測試若干來自上述第二階段之協變抗體之功能活性以評估突變誘發對生物活性之影響。圖26顯示在各種候選抗體(包括一些來自第二階段之協變抗體)之中針對與H929細胞上之huBCMA之結合的比較結合。基本上如實例6中所述產生以下抗體之ADC：32B5親本、32B5(V1D)、32B5(I5T)、32B5(A11G、S97R、F103V)、32B5(A11G、H92Q、S97R、F103V)、35D2/32B5(N69Q)、37B2/35B5(N69Q)、29C12(N69Q)及29C12/40D7(N69Q)。使用實例10中所述之CellTiter-Glo®發光細胞活力分析測試此等ADC靶向及殺傷BCMA表現性骨髓瘤細胞(H929細胞株)之能力。圖27顯示由各種ADC達成之對H929細胞之相對殺傷。圖28顯示大多數來自第二階段之協變抗體保留結合食蟹獼猴BCMA(短暫轉染之293T細胞)之能力。
具有如本文所述之最佳性質之協變突變蛋白質的重可變域及輕可變域之序列比對提供於圖41A及41B中(29C12cv1為Ab-8，29C12cv2為Ab-2，32B5cv1係以SEQ ID NO：315-320提供於表11中，32B5cv2為Ab-3，2A1cv4係以SEQ ID NO：309-314提供於表11中，且2A1cv5為Ab-1)。此顯示在2A1與29C12及32B5協變突變蛋白質之間存在顯著序列差異。對親本抗體可變輕域及重域序列之分枝系分析進一步說明在2A1抗體與29C12、32B5及來自第二階段之其他抗體之間存在差異(圖42A及42B)。抗體之CDR或互補位之此序列差異證實兩個抗體分枝系可能結合huBCMA上之不同抗原決定基。
實例9
以下實驗顯示抗BCMA ADC在異種移植物皮下腫瘤模型中抑制H929骨髓瘤細胞生長。大多數多發性骨髓瘤腫瘤細胞存在於骨髓中且腫瘤負荷已發現與溶骨性骨病相關聯。此外，骨髓基質細胞及破骨細胞可保護多發性骨髓瘤腫瘤細胞免於化學療法破壞。參見Dougall,WC等人,RANKL is a therapeutic target in multiple myeloma,Roodman-GD編Myeloma Bone Disease.Humana Press.2010：169-182。已報導NSG/NOG小鼠模型為多發性骨髓瘤細胞在骨中生長之一種改良宿主(Miyakawa-Y等人,BBRC 313(2004)258-262)。亦已使NSG小鼠模型最佳化以使用螢光素酶標記進行生物發光成像及針對增加之腫瘤獲取及生長速率進行離體選擇(參見實例10)。使用減少生長因子之MatrigelTM(BD Biosciences)將5×106個H929人類骨髓瘤細胞皮下植入雌性NSG(NOD/SCID IL2Rg-/-)小鼠中以產生用於功效研究之腫瘤異種移植物。H929細胞表現平均每個細胞約24,000個BCMA位點。當腫瘤尺寸達到平均約150mm3時，啟始用2A1-MCC-DM1或對照結合物(抗抗生蛋白鏈菌素-MCC-DM1)治療。根據腫瘤尺寸將腫瘤攜帶動物隨機分入各自具有十個動物之組中且靜脈內給藥一次。在於20-200ug DM1/kg(1-10mg Ab/kg)之範圍內之劑量下對2A1-MCC-DM1進行盲法劑量反應研究。在研究過程中，在任何給藥組中皆未觀測到體重減輕。不提供營養補充。
如圖29中所示，用2A1-MCC-DM1治療顯示在200ug DM1/kg高劑量(10mg Ab/kg)下存在穩定的腫瘤生長抑制，且在67ug DM1/kg中等劑量(3mg Ab/kg)下存在中度腫瘤生長抑制。此資料證實2A1-ADC在業內公認之多發性骨髓瘤動物模型中具有活體內功效。
實例10
測試2A1CV5-MCC-DM1、32B5-MCC-DM1及29C12-MCC-DM1 ADC靶向及殺傷BCMA表現性骨髓瘤細胞(H929)之能力。CellTiter-Glo®發光細胞活力分析為一種基於對存在之ATP定量來測定培養物中之活細胞數的均質方法，ATP為存在代謝活性細胞之信號。CellTiter-Glo®分析可適用於細胞毒性分析(對於更多資訊，參見http：//www.promega.com/products/cell-health-assays/cell-viability-assays/celltit er_glo-luminescent-cell-viability-assay/)。細胞活力分析用於評估各種ADC對各種多發性骨髓瘤細胞株及B細胞株之相對殺傷能力。遵循Cell Titer-Glo套組(Promega G7572)中提供之方案。簡言之，將於90ul RPMI 1640、10% FBS中之5×103個目標細胞等分至透明平底白色有壁96孔盤(Costar #3903)中。將ADC稀釋成10X儲備物以產生500nM美登素藥物當量。以500nM儲備物起始，以2倍稀釋度於RPMI 1640、10% FBS中連續稀釋各ADC。 添加10ul 10× ADC稀釋系列至90ul含細胞之培養基中(一式三份孔)。最高濃度之ADC為約50nM美登素藥物當量，且最低濃度之ADC為約50pM美登素藥物當量。包括同型對照ADC(結合於MCC-DM1之抗抗生蛋白鏈菌素huIgG1)以及僅含培養基之對照。在37℃、5% CO2下培育各盤96小時。 在培育之後，添加100ul受質溶液(Promega G7572)至各孔中。在EnVisionTM多標記讀取器(PerkinElmer)或Analyst HT盤讀取器(LJL Biosciences)上讀取發光。使用GraphPad PrismTM分析及圖示資料以確定ADC對各種癌症細胞株之相對功效。
圖30顯示相較於對照結合物，所有三種ADC皆為H929細胞生長之有效抑制劑。2A1CV5-MCC-DM1(具有IC50 234pM)展現效能比對32B5-MCC-DM1及29C12-MCC-DM1(具有IC50分別為506pM及390pM)觀測到之效能增加2-3倍。
實例11
以下實驗進一步表徵在本文中亦稱為2A1CV5-MCC-DM1之Ab-1(2A1CV5)ADC且提供證據表明在多發性骨髓瘤細胞(H929)中達成BCMA介導之內化。使用本文所述之分析方法，發現完全人類抗huBCMA抗體2A1CV5結合於表現在人類多發性骨髓瘤細胞株H929上之天然人類BCMA的親合力比對於完全人類抗BCMA抗體32B5及29C12觀測到之親合力高3倍。2A1CV5-MCC-DM1抗體藥物結合物(ADC)顯示如藉由流式細胞測量術評估之與天然人類BCMA之結合量級類似於用未結合2A1CV5觀測到之結合。2A1CV5之觀測結合EC50比用2A1CV5-MCC-DM1觀測到之結合EC50高兩倍以上，而32B5-MCC-DM1對天然BCMA之結合EC50比對於32B5觀測到之結合EC50低約2倍(表18)。藉由使用BiacoreTM相互作用 技術(如本文所述)量測2A1(2A1CV5同等結合)及32B5結合重組可溶性人類BCMA之能力來測定其平衡結合之精確量測結果。結果顯示2A1CV5以兩位數pM親和力結合重組人類BCMA。
將2A1CV5-MCC-DM1內化至H929細胞中之能力與未結合2A1CV5之內化進行比較。
材料
- 抗抗生蛋白鏈菌素-MCC-DM1(DAR為4.5之αSA-MCC-DM1)
- 2A1CV5-MCC-DM1(DAR 4.8)
- 在生長培養基：RPMI 1640+10% FBS+MEM非必需胺基酸
+HEPES+β-巰基乙醇+青黴素/鏈黴素+L-麩醯胺酸+丙酮酸鈉+慶大黴素中培養腫瘤細胞H929。
- 山羊抗人類IgG(H+L)，Alexa 488(Molecular Probes公司,Eugene,OR.目錄號A11013)。
- Hoechst 33342(Molecular Probes公司,Eugene,OR.目錄號H21492)。
在生長培養基(RPMI 1640、10% FBS、MEM非必需胺基酸、HEPES、β-巰基乙醇、青黴素/鏈黴素、L-麩醯胺酸、丙酮酸鈉、慶大黴素)中培養H929骨髓瘤腫瘤細胞。以每管約500,000個細胞將H929細胞收集至兩個3ml FACS管中且用分析介質(含有2% FBS之PBS)洗滌一次。以每管10μg/mL(每管200μL)將細胞與2A1或CD138抗體一起懸浮於分析介質中。在4℃下培育30分鐘之後，細胞用分析介質洗滌一次。添加抗人類IgG Alexa 488(Molecular Probes公司,Eugene,OR.目錄號A11013，以1：1,000於分析介質中稀釋)與Hoechst 33342(Molecular Probes公司,Eugene,OR.目錄號H21492，以1：2000於分析介質中稀釋)之混合物至細胞中。在4℃下培育 細胞15分鐘之後，洗滌細胞一次且接著用0.5ml分析介質再懸浮以達到每毫升1×106個細胞之濃度。以各抗體8孔轉移50μL細胞至96孔盤中(參見下表19)。以時間零點起始藉由添加50μl BD cytofix/cytoperm套組(BD Biosicences.目錄號554714)來固定及滲透細胞，或在37℃、5% CO2下培育細胞持續0.5、1及2小時時間點。在各培育時間下，使用與對於0時間點所指示相同之步驟固定及滲透細胞。在採用40×物鏡之使用BioApplication「光點偵測器」算法之ArrayScan VTI HCS讀取器(第6版,Cellomics,Thermo Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)上定量內化速率。在下表中指示內化濾光片設置。在各孔中計數至少200個細胞。
ArrayScan之輸出參數算法為「SpotCountPerObjectCh2」。結果報導為每200個細胞之總光點計數。使用Prism 4.01(GraphPad,San Diego,CA)進行統計分析。光點計數表示為重複量測結果(n=2)之平均值±標準平均誤差(SEM)。使用分析工具，相對於單相指數關聯等式擬合每單位時間之光 點計數(內化速率=T1/2)。使用來自GraphPadTM Prism之單相指數關聯計算內化之半衰期。
2A1CV5及2A1CV5-MCC-DM1內化至H929細胞中之程度及速率類似，在啟始培育後約30分鐘達到最大內化程度之一半(圖31)。此外，2A1CV5-MCC-DM1內化至MM1R多發性骨髓瘤細胞株中之速率接近內化至H929中之速率，在啟始培育後約50分鐘達到最大內化程度之一半。 此等結果顯示在結合於BCMA之後，2A1CV5-MCC-DM1可快速內化至BCMA表現性細胞中。
使用本文所述之分析測試2A1CV5 ADC殺傷各種多發性骨髓瘤細胞株之能力。如表21中所示，2A1CV5 ADC能夠有效殺傷眾多具有廣泛範圍之細胞表面BCMA表現之多發性骨髓瘤細胞株。
實例12
評估Ab-1(2A1CV5)ADC之活體內藥理學。此等實驗顯示Ab-1(2A1CV5)ADC在H929嗜骨性異種移植物模型中介導腫瘤消退。簡言之，向NSG小鼠靜脈內投與(1×106個細胞)表現平均每個細胞約24,000個BCMA位點之H929螢光素酶標記骨髓瘤細胞。在腫瘤接種之後14天，基於後肢生物發光(腫瘤負荷)將腫瘤攜帶動物隨機分入各自具有十個動物之 組中且靜脈內給藥一次。採用單次劑量250ug DM1/kg(10mg Ab/kg)在此建立之嗜骨性腫瘤模型中對2A1CV5-MCC-DM1、未結合2A1CV5及對照結合物進行盲法給藥研究。不提供營養補充。
研究設計：
˙1×106個細胞，H929-luc細胞，IV
˙第14天根據後肢BLI確定將小鼠分配入同等組中
˙第14天在10mg/kg下用抗體單次I.V.治療
˙每週量測BLI 2次(盲法)
˙研究終點第35天
˙在1/13/11對80 NSG(NOD/SCID IL2Rg-/-)小鼠靜脈內注射1×106個H929luc細胞
˙每週量測BLI兩次
˙基於如藉由BLI量度之後肢腫瘤負荷將第14天小鼠分配入五個同等組(n=10)中
˙治療計劃：一次I.V.注射
˙以盲法對待治療組且其包括：
˙媒劑(PBS)
˙抗huBCMA-huIgG1-2A1-CV5(未結合)
˙抗huBCMA-huIgG1-2A1-CV5-MCC-DM1
˙抗huBCMA-huIgG1-2A1-WT-MCC-DM1
˙抗抗生蛋白鏈菌素-MCC-DM1
˙抗huBCMA-2A1-CV5-MCC-DM1，在10mpk下使用
˙基於10mpk 2A1-CV5-MCC-DM1之美登木素藥物當量校正抗huBCMA-2A1-WT-MCC-DM1及抗抗生蛋白鏈菌素-MCC-DM1。
˙時序：注射H929luc細胞，在第14天開始ADC治療，在第35天進行分析
圖32顯示在用2A1-MCC-DM1或2A1CV5-MCC-DM1以250ug DM1/kg單次治療之後觀測到完全腫瘤消退。在用未結合2A1CV5在與結合物相同之抗體劑量下單次治療之後觀察到中等腫瘤生長抑制效應。 此外，在用2A1CV5-MCC-DM1治療之小鼠中未觀測到溶解骨病變，但在接受媒劑(PBS)或同型對照結合物(抗抗生蛋白鏈菌素-MCC-DM1)之小鼠中觀測到。在用對照結合物或媒劑治療之動物中未偵測到抗腫瘤作用。在研究過程中，在任何給藥組中皆未觀測到體重減輕。
在類似於以上模型之另一骨髓瘤嗜骨性異種移植物模型中，向NSG小鼠靜脈內投與(1×106個細胞)表現平均每個細胞9,000個BCMA位點之U266螢光素酶標記骨髓瘤細胞。在腫瘤接種之後28天，基於後肢生物發光(腫瘤負荷)將腫瘤攜帶動物隨機分入各自具有十個動物之組中且靜脈內給藥或如藉由紅色Rx符號所指示腹膜內給藥。採用在第28天投與之單次劑量250ug DM1/kg(10mg Ab/kg)在此建立之嗜骨性腫瘤模型中對2A1CV5-MCC-DM1、未結合2A1CV5及PBS進行盲法給藥研究。 在安樂死之後，對動物放射照相。肢解後肢，於10%中性緩衝福馬林(formalin)中固定且去鈣。隨後對骨進行處理、包埋、切片且來自各動物之單一代表性骨由H&E、TRAP染色劑染色且分析huCD138表現(IHC)。顯微檢查骨切片以確定是否存在殘餘疾病(huCD138+細胞)且估計TRAP+破骨細胞覆蓋髓腔及骨針表面之程度。
異種移植物細胞使正常小鼠骨髓細胞群體消除。腫瘤負荷較大之動物似乎具有增加數目之內襯於髓腔且覆蓋骨針之TRAP+破骨細胞。 在具有有活力異種移植物之動物中，贅生性細胞有時橫跨骨皮質之寬度且到達骨膜。成功治療之特徵在於髓內TRAP+破骨細胞減少且存在正常小鼠骨髓。當以單次注射液形式傳遞時，經由IV或IP途徑傳遞之抗體2A1CV-MCC-DM1完全治癒患有其疾病之小鼠。未結合抗體2A1CV減緩腫瘤生長但不治癒患有其疾病之動物。完全治癒先前用2A1CV或媒劑治療(在第28天)，隨後用抗體2A1CV-MCC-DM1治療(在第63及84天)之動物之疾病。TRAP+破骨細胞在具有顯著腫瘤負荷之動物中似乎比在成功治療之動物中更充足。在用2A1CV5-MCC-DM1在藉由任一途徑投與250ug DM1/kg單次治療之後觀測到完全腫瘤消退(圖33)。在用未結合2A1CV5治療之動物中觀測到適度腫瘤生長降低。在腫瘤接種後第63天，接著將用PBS或未結合2A1CV5治療之動物隨機分入各自具有5個動物之兩組中且接著 以10mg Ab/kg靜脈內投與一次額外2A1CV5-MCC-DM1治療。 2A1CV5-MCC-DM1治療在此兩組動物中均誘導穩定的腫瘤消退，該等動物攜帶比在腫瘤接種後第28天啟始治療時大2個以上數量級的腫瘤負荷(圖33)。此等結果顯示2A1CV5-MCC-DM1能夠在U266人類骨髓瘤嗜骨性模型中介導顯著腫瘤消退，在該模型中，腫瘤表現之平均受體密度比H929嗜骨性骨髓瘤異種移植物模型中低將近3倍。
實例13
藉由採用不與BAFF-R或TACI交叉反應之BCMA選擇性單株抗體(2A1CV4)進行流式細胞測量術來評估42個原發性骨髓瘤患者樣品之BCMA蛋白質表現。自商業來源(AllCells,Conversant,Proteogenex)獲得樣品以獲得每個樣品約1×106個漿細胞。在室溫(RT)下溫和解凍個別多發性骨髓瘤(MM)樣品。在室溫下逐滴添加解凍細胞至4ml 50% FBS(胎牛血清)RPMI緩衝液中。添加3ml 10% FBS RPMI至細胞懸浮液中。溫和倒置細胞懸浮液以進行混合且在低速下離心以集結細胞。吸出培養基且將細胞集結粒再懸浮於1% FBS PBS(磷酸鹽緩衝鹽水)中。在血球計上手動計數細胞。添加細胞至10 FBS RPMI中且使其在37℃下在5% CO2下在培育箱中恢復1小時。如下評估細胞活力。將來自原發性MM及H929細胞株之細胞以每孔200,000個細胞接種於含新鮮10% FBS RPMI緩衝液之96孔盤中，其中每個樣品5個孔。將盤離心以集結細胞且吸出培養基並於PBS中再懸浮3次。根據製造商方案用紫色活/死細胞染色劑(Molecular Probes-L34955)染色細胞且在室溫下在黑暗中培育30分鐘。接著將盤離心以集結細胞且吸出培養基並於10% FBS RPMI中再懸浮3次。如下評估內化/免疫表型(IP)。添加抗BCMA-pHrodo或抗CD38-pHrodo試劑至各樣品之1個孔中且所有樣品皆在37℃下在5% CO2下培育。在4小時之後，將盤離心以集結細胞且吸出培養基並於PBS中再懸浮3次。在3個未處理孔中，添加抗BCMA-pHrodo、抗BCMA-DyLight488或抗CD38-pHrodo試劑至各樣品及所有樣品之1個孔中。所有孔皆用IP組(CD19 PE-Cy5、CD56 PE-Cy7、CD38 A594、CD138 APC、CD45 APC-H7，參見表22)染色。將盤在4℃下培育1小時。如下進行固定及分析。所有孔皆於1%多聚甲醛中固 定。使用LSRII(BD Bioscience)評估各孔之細胞且產生FCS檔案。使用以下閘控進行漿細胞鑒別：閘控樣品之活力；選擇CD138/CD38表現之次閘；產生BCMA表現及內化以及CD38內化、及最終FMO對照之直方圖；且輸出細胞計數或MFI以在ExcelTM及GraphPadTM中進行概括分析及圖解表示(參見圖34A及34B)。
流式細胞測量結果說明98%(42之41)之多發性骨髓瘤患者評估樣品表現可偵測BMCA蛋白質。如圖35中所示，相較於FMO對照(黑色條)，所有29個骨髓瘤患者測試樣品(總計42個樣品之子組)皆表現可偵測BCMA表現(綠色條)。此資料進一步說明BCMA在來自多發性骨髓瘤患者之經分離細胞上表現且充當使用本文所述之BCMA ADC進行治療干預之出色目標。此資料亦說明2A1抗體及其突變蛋白質能夠結合幾乎所有多發性骨髓瘤患者樣品上之BCMA。
藉由如上所述對來自骨髓單核細胞製劑之CD138+漿細胞部分進行流式細胞測量來評估2A1抗體(2A1CV4)在多發性骨髓瘤患者樣品上之內化。圖36顯示BCMA抗體(2A1CV4-經pHrodo標記)在所有29個多發性骨髓瘤患者樣品中皆有效內化。此資料亦說明2A1抗體及其突變蛋白質能夠結合BCMA且在所有多發性骨髓瘤患者測試樣品上有效內化。
實例14
開發使用抗DM1特異性單株抗體作為偵測試劑之基於流式細胞測量術之內化分析來評估2A1CV5-MCC-DM1(Ab-1 ADC)是否能夠將DM1傳遞至自多發性骨髓瘤患者之骨髓獲得之原發性骨髓瘤腫瘤細胞中。 表現相對較低BCMA含量之人類骨髓瘤腫瘤細胞株MM1R用作相對陽性對照以評估2A1CV5-MCC-DM1是否傳遞足夠DM1至細胞中以誘導細胞死亡。圖37顯示2A1CV5-MCC-DM1傳遞DM1至原發性骨髓瘤骨髓單核腫瘤細胞(BMMC)樣品及MM1R骨髓瘤細胞株中(相較於對照直方圖向其緊接之左側移動，MM1R與BMMC#12兩者在最右側直方圖中之峰值已向右移動，從而說明DM1已內化至細胞中)。在檢查之13個可評估原發性多發性骨髓瘤患者BMMC樣品中，2A1CV5-MCC-DM1傳遞不同含量之DM1至所有13個患者樣品中。此資料提供明顯證據表明2A1CV5 ADC結合BCMA，內化，且選擇性殺傷原發性多發性骨髓瘤患者樣品。
實例15
對人類IgG游離輕鏈(κ)作為潛在生物標記物，作為Ab-1(2A1CV5)ADC活體內藥理學實驗之一部分進行了研究，該等實驗顯示在H929嗜骨性異種移植物模型中，Ab-1(2A1CV5)ADC介導腫瘤消退(參見實例12)。人類免疫球蛋白分子由兩個界定類別(IgG、IgA、IgM、IgD、IgE)之重鏈及兩個相同輕鏈(κ或λ)組成。在健康個體中，血清中之大多數輕鏈以結合於重鏈之形式存在。游離輕鏈(FLC)為B淋巴細胞之天然產物且代表贅生及反應性B細胞相關病症之一種獨特生物標記物。FLC增加與各種惡性血漿病症相關聯。FLC之偵測為多種疾病，包括多發性骨髓瘤、鬱積型骨髓瘤及原因不明性單株γ球蛋白症之重要診斷輔助。人類IgG FLC κ ELISA(Biovendor，RD 194088100R-K)用於分析FLC在來自H929異種移植物之血清中之存在。在用2A1CV5-MCC-DM1治療之後18天，在小鼠血清中未偵測到κ輕鏈抗體，但在接受媒劑(PBS)或同型對照結合物(抗抗生蛋白鏈菌素-MCC-DM1)之小鼠之血清中偵測到(參見圖38及39)。
實例16
確定Ab-1(亦即2A1CV5)、Ab-2(亦即29C12_mut)及Ab-3(亦即32B5_mut)結合重組人類(rhu)BCMA及重組大鼠(rrat)BCMA之締合及解離速率常數(ka，kd)及解離平衡結合常數(Kd)。
分析條件：根據製造商一般性方案在25℃下使用配備有CM5感測器晶片之Biacore T200光學生物感測器於HBS-P緩衝系統(10mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl及0.5%界面活性劑P20)中進行生物感測器分析。自動取樣器維持在8℃下。
表面製備：使用標準胺偶合化學(9,000 RU)使山羊抗人類IgG捕捉抗體(Jackson Laboratories；109-005-098)固定於感測器晶片之所有流動槽中。此表面類型提供一種在各再生步驟之後可重現地捕捉新鮮分析抗體(配體)之形式。
配體製備：流動槽1、2及3用於分析所捕捉抗BCMA抗體(約400-500 RU)，而流動槽4用作參照流動槽。
分析物製備：於操作緩衝液中製備在75.0至0.309nM(3倍稀釋度)之範圍內之六個rBCMA濃度。rrat BCMA融合蛋白(GS：：6×His：：Sumo：：ratBCMA(aa 2-49)：：GGS：：G3：：Avi)序列：MGSSHHHHHHGSGIVPRGSASMSDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG AQRCFHSEYFDSLLHACKPCRLRCSNPPAPCQPYCDPSMTSSVRGTYT GGSGGGLNDIFEAQKIEWHE(SEQ ID NO：349)
rhuBCMA融合蛋白(6×His：：Sumo：：huBCMA(aa 5-51)：：GGS：：G3：：Avi)序列：MGSSHHHHHHGSGLVPRGSASMSDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG AGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA GGGSGGGLNDIFEAQKIEWHE(SEQ ID NO：350)
相互作用參數：作為一種評估結合之重現性及管理注射次序之潛在系統偏差的手段，一式兩份且以混合次序操作六個分析物樣品濃度中之每一者。亦操作多個空白(緩衝液)注射且其用於評估及減去系統人為效應。分別在50uL/min之流速下持續300s及3600s監測所有分析物濃度之締合及解離階段。
表面再生：用10mM甘胺酸(pH 1.5)在50uL/min之流速下 再生表面30s。
模型/擬合：資料進行對準、雙重參照且使用Scrubber 2TM軟體擬合，該軟體為一種SPR資料處理及非線性最小平方回歸擬合程式。首先，由前600s解離階段資料確定解離速率係數(k d )。其次，解離速率係數用作使用1：1結合模型對300s締合階段資料整體擬合中之固定參數以確定締合速率係數(k a )及Rmax值。
結果：在SEQ ID NO：350之情形下，Ab-1特異性結合人類BCMA之平衡解離速率常數(Kd)為約155pM，且僅以平衡解離速率常數(Kd)>10nM與大鼠BCMA最低限度地相互作用。在SEQ ID NO：350之情形下，Ab-2及Ab-3結合人類BCMA之平衡解離速率常數(Kd)分別為約1.11nM及750pM。在SEQ ID NO：349之情形下，Ab-2及Ab-3結合大鼠BCMA之平衡解離速率常數(Kd)分別為約2.35nM及2.07nM。參照圖43A-F及表23。
此資料提供證據表明人類BCMA上之域及胺基酸對於Ab-1結合而言是重要的。Ab-1特異性結合人類及食蟹獼猴BCMA而非大鼠BCMA。圖44顯示人類BCMA之細胞外域之胺基酸2-51：LQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKG(SEQ ID NO：352)；食蟹獼猴BCMA之細胞外域之胺基酸2-51：LQMARQCSQNEYFDSLLHDCKPCQLRCSSTPPLTCQRYCNASMTNSVKGM(SEQ ID NO：353)；及大鼠BCMA之細胞外域之胺基酸2-49：AQRCFHSEYFDSLLHACKPCRLRCSNPPAPCQPYCDPSMTSSVRGTYT(SEQ ID NO：351)的序列比對。
鑒於物種之間的有限序列多樣性，Ab-1之差異性結合表明Ab-1結合人類BCMA上之包含SEQ ID NO：285之胺基酸1-20，且更特定言之包含SEQ ID NO：285之胺基酸1-11的中和決定子。
尺寸排阻層析(SEC)用於偵測抗huBCMA抗體(2A1或29C12)與單體[6×組胺酸-SUMO]-huBCMA(SEQ ID NO：350)及其羧基端剪短形式之間的相互作用。實際上，2A1及29C12(150kDa)之抗體分離物或單體[6×組胺酸-SUMO]-huBCMA(約15-18kDa)分離物在SEC上遷移比藉由培育抗huBCMA 2A1或29C12與[6×組胺酸-SUMO]-huBCMA形成之複合物慢。為確定哪些形式之6×His-SUMO-huBCMA結合於抗huBCMA抗體，分離SEC溶離份且加以分析。以剪短形式自如圖45中所示之具有SEQ ID NO：350之rhuBCMA融合蛋白(6×His：：Sumo：：huBCMA(aa 5-51)：：GGS：：G3：：Avi)產生人類BCMA之細胞外域之羧基端片段。
根據製造商推薦使用Superdex 200TM 10/30cm SEC管柱(GE Healthcare Life Sciences)且於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中操作。在室溫下進行抗體與過量sumoBCMA之培育至少30分鐘。圖46顯示SEQ ID NO：350及人類BCMA之細胞外域之胺基端的三個逐漸變小片段之尺寸排阻層析結果(尺寸估計值以道爾頓(Dalton)計)(峰A：SEQ ID NO：354，峰B：SEQ ID NO：355，及峰C：SEQ ID NO：356)。
Ab-1顯示結合人類BCMA之所有片段(亦即SEQ ID NO：350、354、355及356)，如圖47A-D中所示之SEC層析圖中所說明。圖47A顯示SEQ ID NO：350之滯留時間。圖47B顯示Ab-1之滯留時間。圖47C顯示相對於3ug BCMA(SEQ ID NO：350)過量之Ab-1(60ug)不產生游離BCMA，包括剪短片段(亦即SEQ ID NO：354-356)，且兩個峰代表結合於各種BCMA片段之Ab-1(滯留時間2.748)及未結合之過量Ab-1(滯留時間3.078)。圖47D顯示在BCMA過量(60ug SEQ ID NO：350)之情況下Ab-1抗體(30ug)結合BCMA，但亦存在少量BCMA片段(SEQ ID NO：354-356)。顯示29C12抗體具有類似結果，如圖48A-C中所示。此資料亦表明BCMA分子與每個抗體之2：1化學計量。
在用以確認2A1及29C12抗體結合截短形式之BCMA細胞 外域(羧基端片段)之另一實驗中，按比例放大SEC以提供用於藉由LC/MS分析所捕捉之SEC峰之起始物質。根據製造商推薦條件使用Superdex 200TM 10/30cm SEC管柱(GE Healthcare Life Sciences)且於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中操作。在室溫下進行抗體與過量sumoBCMA之培育至少30分鐘。經SEC管柱操作500ug 2A1或29C12以及500ug 2A1或29C12加500ug SumoBCMA。SEC對照包括500ug 2A1或29C12加300ug Sumo(自SumoBCMA裂解)、及500ug結合抗生蛋白鏈菌素(SA)之無關抗體加500ug Sumo-BCMA。圖49A顯示在Sumo與Sumo-BCMA之間存在可偵測尺寸差異(但在Sumo製劑中可存在小於10-15% Sumo-BCMA)。圖49B顯示無關抗體對照(抗SA)不結合Sumo-BCMA。圖49C顯示2A1及29C12不結合Sumo。
液相層析及質譜分析(LC/MS)用於鑒別huBCMA之由2A1及29C12結合之形式(亦即全長形式及各種截短形式)。
樣品：
1. 2A1+Sumo-總濃度：0.6mg/ml
2. 2A1+SumoBCMA-總濃度：4.3mg/ml
3. 29C12+Sumo-總濃度：0.6mg/ml
4. 29C12+SumoBCMA-總濃度：2.2mg/ml
5. Sumo(主要為Sumo，伴有小百分比之Sumo-BCMA)
6. Sumo-BCMA
7. 2A1抗體
8. 29C12抗體
方案：在55℃下使5ug總蛋白質於50mM Tris/4M胍/9mM DTT(pH 8.0)中還原15分鐘，且使用Vydac C8管柱(2.1mm ID×150mm，5μM粒度)於Agilent LCTOF系統中加以分析。管柱溫度為55℃，溶劑A為含0.1% TFA之水，溶劑B為含0.1% TFA之乙腈，且流速為0.2ml/min。以B之百分比計之梯度為在3、5、40、42、42.5及45分鐘內分別為5-5、5-10、10-80、80-80、80-5、5-。在100至3200m/z之範圍內調諧且校正TOF 質譜儀。TOF MS條件包括毛細管電壓4000V、乾燥氣體流速10L/min、乾燥氣體溫度300℃、噴霧器氣體流速40L/min及碎裂器電壓300V。在Agilent MassHunterTM定性分析程式中分析MS資料。
2A1及29C12結合全長BCMA及截短形式之BCMA。如圖50A中所示，BCMA之由2A1抗體結合之截短形式包括峰A、B、D及E，且如圖50B中所示，BCMA之由29C12抗體結合之截短形式包括峰A、B、C及E。參照圖50A及50B，峰A對應於SEQ ID NO：354，峰D對應於SEQ ID NO：355，且峰E對應於SEQ ID NO：356(參見圖45)。在此更詳細分析中，鑒別BCMA之結合BCMA mAb之兩個另外的羧基端片段(粗體且加下劃線部分為BCMA)：峰B：GSSHHHHHHGSGIVPRGSASMSDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG AGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQR (SEQ ID NO：357)
峰C：GSSHHHHHHGSGLVPRGSASMSDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG AGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCS (SEQ ID NO：358)
此資料顯示Ab-1結合人類BCMA之逐漸變小片段(亦即SEQ ID NO：350、354、357、355及356)，其全部保留胺基端之一部分。SEQ ID NO：356為所有BCMA片段所共有，且因此顯示Ab-1結合人類BCMA之胺基端。為明確起見，SEQ ID NO：356由具有SEQ ID NO：285之huBCMA之胺基酸5至20(包括胺基酸5及20)組成。此證據連同Ab-1差異性結合BCMA之不同直系同源物一起顯示Ab-1結合人類BCMA上之包含SEQ ID NO：285之胺基酸1-20之中和決定子，或更特定言之包含SEQ ID NO：285之胺基酸1-11之中和決定子。應瞭解Ab-1無需結合1至20胺基酸域或1至11胺基酸域中之每個胺基酸。
實例17
huBCMA：Ab-1、huBCMA：Ab-2及huBCMA：Ab-3複合物之晶體結構及抗原決定基定位。
蛋白質表現及純化：在293-6E細胞中用含有卡斯帕酶(Caspase)-3敏感性位點之pTT5表現載體(Lonza,Basel,Switzerland)以全長抗體形式表現Ab-1(2A1CV5)、Ab-2(29C12_mut)及Ab-3(32B5_mut)，該位點***在鉸鏈區之半胱胺酸N末端之後以使在彼位點處之裂解產生Fab片段。使用標準Lonza產生方案及抗體純化方案來產生完整抗體。於PBS中調配完整抗體，其中添加多達100：1 w/w比率之含組胺酸標籤之卡斯帕酶-3及抗體以產生Fab片段。使用線上連接於用以移除含組胺酸標籤之卡斯帕酶-3之HisTrapTM(GE Healthcare Life Sciences)管柱之MabSelect SuRETM蛋白質A管柱(GE Healthcare Life Sciences)使Fab片段與Fc及完整抗體分離。
藉由使用在大腸桿菌GM221細胞中表現之GSS：：6×His：：Sumo：：具有胺基酸5-54之huBCMA細胞外域構築體以可溶性蛋白質形式產生人類BCMA：GSSHHHHHHGSGLVPRGSASMSDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGGAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA(SEQ ID NO：359)
基本上遵循製造商推薦方案在鎳瓊脂糖FastFlowTM管柱(GE Healthcare Life Sciences)及高裝載量SuperdexTM 200 26/60(GE Healthcare Life Sciences)上純化蛋白質。出於使以下資料與線性序列相關聯之目的，huBCMA之大致細胞外域之胺基酸序列(aa 5-54)係如下所示(注意：首個Ala為第5號位置，且對於參照點而言，為相對於SEQ ID NO：285之胺基酸編號5)：AGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA(SEQ ID NO：360)。
huBCMA-Fab複合物形成及純化： 藉由混合Fab與過量huBCMA形成複合物huBCMA：Ab-1 Fab、huBCMA：Ab-2 Fab及huBCMA：Ab-3 Fab。各複合物在高裝載量SuperdexTM 200 16/60上純化且濃縮成10mg/mL以進行結晶。使huBCMA：Ab-1 Fab複合物於0.2M硫酸銨、0.1M乙酸鈉及22%聚乙二醇4000中結晶。使huBCMA：Ab-2 Fab複合物於0.2M酒石酸二銨及20%聚乙二醇3350中結晶。使huBCMA：Ab-3 Fab複合物於0.2M硫酸銨、0.1M Hepes(pH 7.0)及28%聚乙二醇3350中結晶。所有結晶實驗皆在20℃下利用座滴式蒸氣擴散方法來進行。此方法在此項技術中為已知的，參見例如Dessau等人,J Vis Exp.,2011；47：2285。
資料收集及結構解析：在阿爾貢國立實驗室(Argonne National Laboratory，Argonne,IL)在先進光子源(Advanced Photon Source)以低至以下之解析度分析複合物：huBCMA：Ab-1 Fab，在1.5Å下；huBCMA：Ab-2 Fab，在1.85Å下；及huBCMA：Ab-3 Fab，在1.9Å下。所有資料皆用d*TREK©處理且藉由SCALEPACK©定標。藉由使用Fab CR9114之公開結構(pdb碼：4FQH)，用程式PHASER©執行分子置換方法來解析huBCMA：Ab-1 Fab之結構。使用CCP4程式套件中之自動建模軟體BUCCANEER©解析huBCMA之結構。藉由使用先前解析之huBCMA：Ab-1 Fab結構，用程式PHASER©執行分子置換方法來解析huBCMA：Ab-2 Fab及huBCMA：Ab-3 Fab之結構。使用REFMAC5©及COOT©進行多輪迭代結構細化及建模。
Ab-1(2A1CV5)Fab
huBCMA：Ab-1 Fab複合物之晶體結構解析至解析度1.5Å，R因子為16.4%(R自由因子為22.4%)。在不對稱單元中存在一個複合物。複合物由一個huBCMA分子及一個Ab-1 Fab組成。總之，複合物中之huBCMA及Ab-1中之大多數殘基在電子密度，尤其抗原決定基及互補位區域方面得到良好解析。huBCMA細胞外域(ECD)分子折疊成含有兩個模組之鞍樣結構，其中各模組作為鞍之一半且獨特螺旋作為『騎乘物(rider)』(圖51)。分子之N端半部之A1模組含有三個β股及一個二硫鍵。稱為D2之另一模組在分子之C端半部中含有兩個短α螺旋及兩個二硫鍵。結合於人類APRIL 之人類BCMA之晶體結構先前已描述於Hymowitz等人,J Bio Chem,2005,第280卷,第7218-7227頁中，其中作者將β1-β2域指定為大致涵蓋SEQ ID NO：352之胺基酸4-22。熟習此項技術者瞭解此指定為基於算法之近似指定且實際域可比如所指定之域略微更長或更短。
Ab-1與huBCMA發生廣泛非共價相互作用，從而包埋總表面積1964Å2，此顯著大於習知抗體：抗原表面積1500-1700Å2。此外，鑒於大多數單株抗體之典型形狀互補度為0.64-0.68，形狀互補度0.70尤其良好。Ab-1利用重可變域及輕可變域之所有六個CDR環來與huBCMA相互作用。對於huBCMA，N端、β1-β2環、β2至α1區段、α1-α2環及α-2螺旋之N端與抗體發生直接相互作用。
基於1)當比較呈其游離形式之huBCMA與呈與Fab之複合物形式之huBCMA時，溶劑可及表面積之變化，及2)huBCMA與Fab之間的接觸距離來分析huBCMA：Ab-1界面。抗原決定基區域與互補位區域兩者均經由以上分析以及相互作用之性質進行鑒別。Ab-1以來自輕鏈與重鏈兩者之CDR與huBCMA相互作用，其中輕鏈與huBCMA產生9個氫鍵及343個凡得瓦(van der Waals)接觸(0-5.0Å之總數)，且重鏈CDR具有5個氫鍵及248個凡得瓦接觸(0-5.0Å之總數)。huBCMA之A2模組中之β1-β2環***Ab-1之CDR區域中之重鏈與輕鏈之間的裂隙中，此可部分地說明Ab-1對huBCMA之異常高親和力。huBCMA之D2模組(C末端)主要與Ab-1之輕鏈相互作用。huBCMA之A2模組中之β1-β2環為關鍵特徵抗原決定基區域，因為在huBCMA之β1-β2環及N末端中觀測到所有氫鍵相互作用及密切凡得瓦相互作用(<3.4Å)。
Ab-2(29C12)Fab
huBCMA：Ab-2 Fab複合物之晶體結構解析至解析度1.85Å，R因子為21.3%(R自由因子為22.8%)。複合物由一個huBCMA分子及一個Ab-2 Fab組成。總之，複合物中之huBCMA及Ab-2中之大多數殘基在電子密度，包括抗原決定基及互補位區域方面得到良好解析。huBCMA之D2模組之一部分顯示較低電子密度，指示其具有可撓性，尤其圍繞殘基Thr32、Leu35及Gln38具有可撓性。
總之，Ab-2與huBCMA發生相對廣泛相互作用，從而包埋總表面積1669Å2，形狀互補度為0.71。Ab-2利用重鏈可變域之所有三個CDR環及輕鏈可變域之CDR1及CDR3來與huBCMA相互作用。對於huBCMA，N端、β1-β2環及α1-α2環(包括C端α1及N端α2)與Ab-1相互作用。
基於1)當比較呈其游離形式之huBCMA與呈與Ab-2 Fab之複合物形式之huBCMA時，溶劑可及表面積之變化及2)huBCMA與Ab-2之間的接觸距離來分析huBCMA：Ab-2 Fab界面。抗原決定基區域與互補位區域兩者均經由以上分析以及相互作用之性質進行鑒別。Ab-2以輕鏈可變域與重鏈可變域兩者識別huBCMA，其中輕鏈可變域與huBCMA產生2個氫鍵及106個凡得瓦接觸(0-5.0Å之總數)且重鏈可變域具有3個氫鍵、2個鹽橋及319個凡得瓦接觸(0-5.0Å之總數)。因此，Ab-2重鏈可變域之CDR在識別huBCMA方面起關鍵作用。huBCMA之A2模組中之β1-β2環充當關鍵特徵抗原決定基區域，其***Ab-2 Fab之CDR區域中之重鏈與輕鏈之間的裂隙中。huBCMA之D2模組(C端)僅與重鏈可變域相互作用。主要在huBCMA中之β1-β2環及N端中觀測到所有氫鍵相互作用及密切凡得瓦相互作用(<3.4Å)。由D2模組中之殘基(諸如Arg27及Leu35)顯示之相互作用可能由於其電子密度資料較低而較不重要。
huBCMA：Ab-3 Fab複合物之晶體結構解析至解析度1.9Å，R因子為21.8%(R自由因子為24.3%)。複合物由一個huBCMA分子及一個Ab-3 Fab組成。總之，複合物中之huBCMA及Ab-3中之大多數殘基在電子密度，包括抗原決定基及互補位區域方面得到良好解析。huBCMA之D2模組之一部分顯示較低電子密度，指示其具有可撓性，尤其圍繞殘基Arg39及Asn31具有可撓性。
總之，Ab-3與huBCMA發生相對廣泛相互作用，從而包埋總表面積1719Å2，形狀互補度為0.71。Ab-3利用重鏈可變域之所有三個CDR環及輕鏈可變域之CDR1及CDR3來與huBCMA相互作用。對於huBCMA，N端、β1-β2環及α1-α2環(包括C端α1及N端α2)與Ab-3相互作用。
基於1)當比較呈其游離形式之huBCMA與呈與Ab-3 Fab之複合物形式之huBCMA時，溶劑可及表面積之變化，及2)huBCMA與Ab-3之間的接觸距離來分析huBCMA：Ab-3 Fab界面。抗原決定基區域與互補位區域兩者均經由以上分析以及相互作用(亦即在如本文提供之「相互作用」之定義中描繪的相互作用)之性質進行鑒別。Ab-3以輕鏈可變域與重鏈可變域兩者識別huBCMA，其中輕鏈可變域與huBCMA產生1個氫鍵及101個凡得瓦接觸(0-5.0Å之總數)且重鏈可變域具有4個氫鍵、2個鹽橋及339個凡得瓦接觸(0-5.0Å之總數)。因此，Ab-3重鏈可變域之CDR在與huBCMA相互作用方面起關鍵作用。huBCMA之A2模組中之β1-β2環為關鍵特徵抗原決定基區域，其***Ab-3之CDR區域中之重鏈與輕鏈之間的裂隙中。huBCMA之D2模組(C端，如上所述)僅與Ab-3之重鏈可變域相互作用。主要在huBCMA之β1-β2環及N末端中觀測到所有氫鍵相互作用及密切凡得瓦相互作用(<3.4Å)。由D2模組中之殘基(諸如Arg27、Thr32及Leu35)顯示之相互作用可能由於其電子密度資料微弱而較不重要。
結晶學資料證明Ab-1、Ab-2及Ab-3與huBCMA上之關鍵結構域(亦即β1-β2環及N末端)以及此關鍵區域外部之殘基相互作用。結晶學資料確證實例16中對Ab-1之肽基抗原決定基定位，該定位顯示Ab-1結合huBCMA之逐漸變小片段(亦即SEQ ID NO：350、354、357、355及356)，其全部保留胺基端之一部分。SEQ ID NO：356為測試之所有huBCMA片段所共有；SEQ ID NO：356由具有SEQ ID NO：285之huBCMA之胺基酸5至20(包括胺基酸5及20)(或SEQ ID NO：360之胺基酸1至16(包括胺基酸1及16))組成，該等胺基酸涵蓋大致整個β1-β2環。總之，此為huBCMA之胺基端及尤其β1-β2環為抗原決定基中對Ab-1關鍵之結構域的證據，其中應瞭解Ab-1與huBCMA上在此區域外部之殘基相互作用，如對結晶學資料之更詳細分析中所示。
huBCMA與Ab-1及Ab-2/Ab-3之間的詳細相互作用為不同的。觀測到之Ab-1與huBCMA之β1股及α1至α2螺旋的其他相互作用亦為廣泛的，該等股及螺旋由Ab-1之重鏈與輕鏈兩者所識別。然而，用Ab-2及Ab-3觀測到之與huBCMA之自C端α1至N端α2之區段(殘基Arg27至Leu35)的其他相互作用可能由於該區域中之電子密度微弱而較不顯著，該區段僅由Ab-2及Ab-3之重鏈所識別。
<110> AMGEN INC. ARMITAGE,Richard BLAKE,Michelle FANSLOW,III,William C. O’NEILL,Jason KANNAN,Gunasekaran XU,Jiangchun TOMETSKO,Mark Edward WANG,Zhulun SUDOM,Athena
<120> BCMA抗原結合蛋白
<130> A-1870-WO-PCT
<140> --待指定--
<141> 2013-12-06
<150> 61/890,064
<151> 2013-10-11
<150> 61/775,125
<151> 2013-03-08
<150> 61/759,702
<151> 2013-02-01
<150> 61/734,767
<151> 2012-12-07
<160> 361
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸
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<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸
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<220>
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<220>
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<223> 人工序列之描述：合成多肽
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<223> 人工序列之描述：合成多肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 343
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 345
<210> 346
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 346
<210> 347
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 347
<210> 348
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 350
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<213> 智人
<400> 352
<210> 353
<211> 50
<212> PRT
<213> 食蟹獼猴
<400> 353
<210> 354
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 354
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 355
<210> 356
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 356
<210> 357
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 357
<210> 358
<211> 143
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 358
<210> 359
<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 359
<210> 360
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 360
<210> 361
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成6×His標籤
<400> 361

Claims (52)

  1. 一種經分離抗體或其BCMA結合片段，其選自由以下組成之群：包含有包含SEQ ID NO：4之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：5之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：6之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：106之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：107之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：108之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：10之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：11之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：12之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：112之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：113之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：114之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：16之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：17之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：18之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：118之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：119之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：120之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：22之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：23之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：24之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：124之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：125之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：126之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：28之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：29之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：30之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：130之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：131之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：132之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：34之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：35之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：36之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：136之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：137之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：138之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：40之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：41之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：42之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：142之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：143之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：144之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：46之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：47之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：48之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：148之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：149之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：150之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：52之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：53之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：54之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：154之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：155之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：156之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：58之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：59之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：60之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：160之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：161之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：162之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：64之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：65之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：66之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：166之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：167之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：168之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：70之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：71之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：72之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：172之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：173之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：174之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：76之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：77之 Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：78之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：178之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：179之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：180之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：82之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：83之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：84之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：184之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：185之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：186之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：88之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：89之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：90之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：190之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：191之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：192之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：94之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：95之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：96之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：196之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：197之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：198之Vl-CDR3的抗體；包含有包含SEQ ID NO：100之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：101之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：102之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：202之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：203之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：204之Vl-CDR3的抗體；包含SEQ ID NO：240之Ab-1Vl域及包含SEQ ID NO：206之Ab-1Vh域；包含SEQ ID NO：242之Ab-2Vl域及包含SEQ ID NO：208之Ab-2Vh域；包含SEQ ID NO：244之Ab-3Vl域及包含SEQ ID NO：210之Ab-3Vh域；包含SEQ ID NO：246之Ab-4Vl域及包含SEQ ID NO：212之 Ab-4Vh域；包含SEQ ID NO：248之Ab-5Vl域及包含SEQ ID NO：214之Ab-5Vh域；包含SEQ ID NO：250之Ab-6Vl域及包含SEQ ID NO：216之Ab-6Vh域；包含SEQ ID NO：252之Ab-7Vl域及包含SEQ ID NO：218之Ab-7Vh域；包含SEQ ID NO：254之Ab-8Vl域及包含SEQ ID NO：220之Ab-8Vh域；包含SEQ ID NO：256之Ab-9Vl域及包含SEQ ID NO：222之Ab-9Vh域；包含SEQ ID NO：258之Ab-10Vl域及包含SEQ ID NO：224之Ab-10Vh域；包含SEQ ID NO：260之Ab-11Vl域及包含SEQ ID NO：226之Ab-11Vh域；包含SEQ ID NO：262之Ab-12Vl域及包含SEQ ID NO：228之Ab-12Vh域；包含SEQ ID NO：264之Ab-13Vl域及包含SEQ ID NO：230之Ab-13Vh域；包含SEQ ID NO：266之Ab-14Vl域及包含SEQ ID NO：232之Ab-14Vh域；包含SEQ ID NO：268之Ab-15Vl域及包含SEQ ID NO：234之Ab-15Vh域；包含SEQ ID NO：270之Ab-16Vl域及包含SEQ ID NO：236之Ab-16Vh域；包含SEQ ID NO：272之Ab-17Vl域及包含SEQ ID NO：238之 Ab-17Vh域；包含SEQ ID NO：280之Ab-1輕鏈及包含SEQ ID NO：274之Ab-1重鏈；包含SEQ ID NO：282之Ab-2輕鏈及包含SEQ ID NO：276之Ab-2重鏈；及包含SEQ ID NO：284之Ab-3輕鏈及包含SEQ ID NO：278之Ab-3重鏈，其中該抗體或片段特異性結合人類BCMA。
  2. 如請求項1之抗體或片段，其中該抗體或片段為人類抗體或片段。
  3. 如請求項1之抗體或片段，其中該抗體或片段為嵌合單株抗體。
  4. 如請求項1之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含連接子。
  5. 如請求項4之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含藥物或化學治療劑。
  6. 如請求項5之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含選自由以下組成之群之連接子：6-順丁烯二醯亞胺基己醯基、順丁烯二醯亞胺基丙醯基、纈胺酸-瓜胺酸、丙胺酸-***酸、對胺基苯甲氧基羰基、Mal-dPEG4-NHS、4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-丁二醯亞胺酯(「SPP」)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)及(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SIAB」)。
  7. 如請求項6之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含連接子，其中該連接子為4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)。
  8. 如請求項6之抗體或片段，其中該抗體或片段進一步包含選自由以下組成之群之藥物或化學治療劑：噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(cyclophosphamide)(CYTOXAN.TM.)；烷基磺酸酯，諸如白消安 (busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及保釋芬(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)，諸如本多帕(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、米特多帕(meturedopa)及優多帕(uredopa)；伸乙亞胺(ethylenimine)及甲基蜜胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphaoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙醯(acetogenin)(尤其布拉它辛(bullatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包括合成類似物拓撲替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；凱利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素(cryptophycin)(特定言之念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；軟珊瑚醇(eleutherobin)；潘卡他汀(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯瑪法辛(chlomaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽固醇(phenesterine)、松龍苯芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲(nitrosurea)，諸如卡莫司汀(carmustine)、吡葡亞硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，諸如烯二 炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，尤其卡奇黴素γ1及卡奇黴素θI，參見例如Angew Chem.Intl.Ed.Engl.33：183-186(1994)；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、重氮絲胺酸(azaserine)、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)；色黴素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(doxorubicin)(包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯基)-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(nitomycin)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺蝶呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、甲胺蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞 苷(cytarabine)、二去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄激素(androgen)，諸如二***(calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸(folic acid)補充劑，諸如弗羅林酸(frolinic acid)；乙醯葡醛酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地佛法明(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elfomithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵(gallium nitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；洛尼代寧(lonidamine)；美登木素(maytansinoid)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫匹丹莫(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他汀(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；足葉草酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK.RTM.；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(trichothecene)(尤其T-2毒素、維拉庫林A(verracurin A)、桿孢菌素A(roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛 醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；格塞圖辛(gacytosine)；***糖苷(arabinoside)(「Ara-C」)；環磷醯胺(cyclophosphamide)；噻替派(thiotepa)；紫杉烷(taxoid)，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL.TM.，Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)及多西他賽(doxetaxel)(TAXOTERE.RTM.，Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰基嘌呤(mercaptopurine)；甲胺蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春花鹼(vinblastine)；鉑；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；絲裂黴素C；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；諾維本(navelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道諾黴素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；希羅達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸(retinoic acid)；卡培他濱(capecitabine)；他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、克昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene)(法樂通(Fareston))；及抗雄激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)、秋水仙鹼(Colchicine)位點結合劑(庫瑞辛(Curacin))、考布他汀(Combretastatin)(AVE806、考布他汀A-4前藥(CA4P)、Oxi-4503)、念珠藻素(Cryptophycin)(LY355703)、盤皮海綿內酯(Discodermolide)、多拉司他汀(Dolastatin)及類似物(奧莉斯汀(Auristatin)PHE、多拉司他汀10、ILX-651、西普司他汀(Symplostatin)1、TZT-1027)、埃博 黴素(Epothilone)(BMS-247550、BMS-310705、EP0906、KOS-862、ZK-EPO)、軟珊瑚醇(Eleutherobin)、FR182877、大田軟海綿素(Halichondrin)B(E7389)、月苄三甲氯銨(Halimide)(NPI-2352及NPI-2358)、哈米特林(Hemiasterlin)(HTI-286)、勞瑪立得(Laulimalide)、美登木素(Maytansinoid)(「DM1」、「DM3」或「DM4」)(比伐單抗莫坦辛(Bivatuzumab mertansine)、坎珠單抗莫坦辛(Cantuzumab mertansine)huN901-DM1/BB-10901TAP、MLN591DM1、My9-6-DM1、曲妥珠單抗(Trastuzumab)-DM1)、PC-SPES、普魯賽德(Peloruside)A、白藜蘆醇(Resveratrol)、S-烯丙基巰基半胱胺酸(SAMC)、海綿抑制素(Spongistatin)、維魯米德(Vitilevuamide)、分子運動驅動蛋白(Molecular Motor-Kinesin)(SB-715992)、改造之秋水仙鹼位點結合劑(A-289099、A-293620/A-318315、ABT-751/E7010、D-24851/D-64131、ZD6126)、其他新穎紡錘體毒物(2-甲氧***(Methoxyestradiol)(2-ME2)、苯并咪唑胺基甲酸酯(ANG 600系列、甲苯咪唑(Mebendazole))、CP248/CP461、HMN-214、R440、SDX-103、T67/T607)。
  9. 如請求項8之抗體或片段，其中該藥物或化學治療劑係選自由以下組成之群：美登木素(「DM1」、「DM3」或「DM4」)。
  10. 如請求項9之抗體或片段，其中該藥物或化學治療劑為DM1。
  11. 如請求項10之抗體或片段，其中該抗體或片段的藥物與抗體比率在1與10之間。
  12. 如請求項11之抗體或片段，其中該抗體或片段的藥物與抗體比率在2與5之間。
  13. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至12中任一項之抗體或其片段。
  14. 如請求項13之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑及/或防腐劑。
  15. 一種如請求項13之組合物的用途，其係用於製備用以治療疾病之藥劑，其中該疾病係選自由以下組成之群：B細胞癌症、多發性骨髓瘤、惡性漿細胞贅瘤、卡勒氏病(Kahler's disease)及骨髓瘤病；漿細胞白血病；漿細胞瘤；B細胞前淋巴細胞性白血病；毛細胞白血病；B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin's lymphoma)(NHL)；急性骨髓性白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)；急性淋巴細胞性白血病(ALL)；慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；濾泡性淋巴瘤(包括濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤類型)；伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)(地方性伯基特氏淋巴瘤；單發性伯基特氏淋巴瘤)；邊緣區淋巴瘤(黏膜相關淋巴組織；MALT/MALT瘤；單核細胞樣B細胞淋巴瘤；伴有絨毛狀淋巴細胞之脾淋巴瘤)；套膜細胞淋巴瘤；大細胞淋巴瘤(彌漫性大細胞；彌漫性混合細胞；免疫母細胞性淋巴瘤；原發性縱隔B細胞淋巴瘤；血管中心淋巴瘤-肺B細胞)；小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)；前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤；骨髓性白血病(粒細胞性；髓細胞性；急性骨髓性白血病；慢性骨髓性白血病；亞急性骨髓性白血病；骨髓肉瘤；綠色瘤(Chloroma)；粒細胞肉瘤；急性早幼粒細胞白血病(Acute promyelocytic leukemia)；急性髓單核細胞白血病)；瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)或其他B細胞淋巴瘤。
  16. 如請求項15之用途，其中該疾病係選自由以下組成之群：B細胞癌症、多發性骨髓瘤、惡性漿細胞贅瘤或其他B細胞淋巴瘤。
  17. 如請求項16之用途，其中該疾病為多發性骨髓瘤。
  18. 如請求項16之用途，其進一步包含一或多種選自由以下組成之群 之其他治療：化學療法、放射療法、手術、蛋白酶體抑制劑、皮質類固醇及幹細胞移植物。
  19. 一種經分離聚核苷酸，其中該聚核苷酸編碼如請求項1之抗體或其片段。
  20. 如請求項19之聚核苷酸，其中該聚核苷酸序列係選自由以下組成之群：包含SEQ ID NO：1之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：2之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：3之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：103之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：104之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：105之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：7之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：8之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：9之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：109之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：110之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：111之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：13之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：14之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：15之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：115之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：116之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：117之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：19之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：20之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：21之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：121之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：122之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：123之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：25之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：26之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：27之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：127之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：128之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：129之Vl-CDR3； 包含SEQ ID NO：31之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：32之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：33之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：133之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：134之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：135之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：37之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：38之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：39之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：139之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：140之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：141之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：43之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：44之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：45之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：145之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：146之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：147之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：49之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：50之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：51之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：151之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：152之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：153之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：55之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：56之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：57之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：157之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：158之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：159之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：61之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：62之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：63之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：163之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：164之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：165之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：67之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：68之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：69之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：169 之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：170之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：171之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：73之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：74之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：75之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：175之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：176之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：177之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：79之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：80之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：81之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：181之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：182之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：183之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：85之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：86之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：87之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：187之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：188之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：189之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：91之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：92之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：93之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：193之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：194之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：195之Vl-CDR3；包含SEQ ID NO：97之Vh-CDR1、包含SEQ ID NO：98之Vh-CDR2、包含SEQ ID NO：99之Vh-CDR3、包含SEQ ID NO：199之Vl-CDR1、包含SEQ ID NO：200之Vl-CDR2及包含SEQ ID NO：201之Vl-CDR3包含SEQ ID NO：239之Ab-1Vl及包含SEQ ID NO：205之Ab-1Vh；包含SEQ ID NO：241之Ab-2Vl及包含SEQ ID NO：207之Ab-2Vh； 包含SEQ ID NO：243之Ab-3Vl及包含SEQ ID NO：209之Ab-3Vh；包含SEQ ID NO：245之Ab-4Vl及包含SEQ ID NO：211之Ab-4Vh；包含SEQ ID NO：247之Ab-5Vl及包含SEQ ID NO：213之Ab-5Vh；包含SEQ ID NO：249之Ab-6Vl及包含SEQ ID NO：215之Ab-6Vh；包含SEQ ID NO：251之Ab-7Vl及包含SEQ ID NO：217之Ab-7Vh；包含SEQ ID NO：253之Ab-8Vl及包含SEQ ID NO：219之Ab-8Vh；包含SEQ ID NO：255之Ab-9Vl及包含SEQ ID NO：221之Ab-9Vh；包含SEQ ID NO：257之Ab-10Vl及包含SEQ ID NO：223之Ab-10Vh；包含SEQ ID NO：259之Ab-11Vl及包含SEQ ID NO：225之Ab-11Vh；包含SEQ ID NO：261之Ab-12Vl及包含SEQ ID NO：227之Ab-12Vh；包含SEQ ID NO：263之Ab-13Vl及包含SEQ ID NO：229之Ab-13Vh；包含SEQ ID NO：265之Ab-14Vl及包含SEQ ID NO：231之Ab-14Vh；包含SEQ ID NO：267之Ab-15Vl及包含SEQ ID NO：233之Ab-15Vh；包含SEQ ID NO：269之Ab-16Vl及包含SEQ ID NO：235之 Ab-16Vh；包含SEQ ID NO：271之Ab-17Vl及包含SEQ ID NO：237之Ab-17Vh；包含SEQ ID NO：279之輕鏈及包含SEQ ID NO：273之重鏈；包含SEQ ID NO：281之輕鏈及包含SEQ ID NO：275之重鏈；及包含SEQ ID NO：283之輕鏈及包含SEQ ID NO：277之重鏈。
  21. 一種質體，其包含如請求項20之聚核苷酸。
  22. 如請求項21之質體，其中該質體包含表現載體。
  23. 一種經分離細胞，其包含如請求項21之該質體，其中該細胞係選自由以下組成之群：a.原核細胞；b.真核細胞；c.哺乳動物細胞；d.昆蟲細胞；及e. CHO細胞。
  24. 一種製備如請求項1之抗體的方法，其包含在允許如請求項23之該經分離細胞表現該抗體或多肽之條件下培育該經分離細胞。
  25. 一種經分離抗體，其包含由如請求項23之CHO細胞產生之抗體，其中該抗體包含由包含SEQ ID NO：273之序列編碼之重鏈及由包含SEQ ID NO：279之序列編碼之輕鏈。
  26. 一種醫藥組合物，其包含如請求項25之抗體。
  27. 一種經分離單株抗體，其包含結合SEQ ID NO：352之Kd在1nM與.01nM之間且結合SEQ ID NO：351之Kd大於10nM的單株抗體。
  28. 如請求項27之抗體，其中該抗體為人類單株抗體。
  29. 如請求項28之抗體，其中該抗體為IgG。
  30. 如請求項28之抗體，其中該抗體為IgG1。
  31. 一種經分離單株抗體，其包含選自由以下組成之群之人類單株抗體：結合由SEQ ID NO：285之胺基酸1至20(包括胺基酸1及20)組成之中和決定子的人類單株抗體；及結合由SEQ ID NO：285之胺基酸1至11(包括胺基酸1及11)組成之中和決定子的人類單株抗體。
  32. 如請求項31之抗體，其中該抗體為IgG。
  33. 如請求項32之抗體，其中該抗體為IgG1。
  34. 如請求項31之抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：285之Kd小於或等於1nM。
  35. 如請求項34之抗體，其中該抗體結合SEQ ID NO：352之Kd為約0.16nM±0.1nM，如生物感測器分析中所量測。
  36. 一種經分離單株抗體或其片段，其中該抗體或其片段特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA且抑制APRIL之生物活性，且其中該抗體競爭性抑制人類IgG1單株抗體之結合，該人類IgG1單株抗體包含有包含SEQ ID NO：206之Vh域及包含SEQ ID NO：240之Vl域，且其中該抗體對人類BCMA之Kd在1nM與.01nM之間(包括1nM及.01nM)。
  37. 一種經分離抗體或其片段，其包含與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17及His19相互作用之人類IgG單株抗體，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0Å至3.4Å(包括0Å及3.4Å)下所測定。
  38. 如請求項37之抗體或其片段，其中該抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Cys8、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19及Ala20相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4Å至5.0Å(包括3.4Å及5.0Å)下所測定。
  39. 如請求項38之抗體或其片段，其中該抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Cys8、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19、Ala20、Ile22、Leu26、Arg27、Pro33、Pro34、Leu35及Leu36相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4Å至5.0Å(包括3.4Å及5.0Å)下所測定。
  40. 如請求項39之抗體或其片段，其中該人類IgG1單株抗體與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gln7、Asp15、Ser16、Leu17及His19形成氫鍵，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0Å至3.4Å(包括0Å及3.4Å)下所測定。
  41. 一種經分離單株抗體或其片段，其中該抗體或其片段為特異性結合具有SEQ ID NO：285之人類BCMA且抑制APRIL之生物活性之人類IgG單株抗體或其片段，且其中該抗體包含與SEQ ID NO：206至少90%一致之Vh域及與SEQ ID NO：240至少90%一致之Vl域。
  42. 如請求項41之抗體或其片段，其中抗體或其片段包含與SEQ ID NO：206至少95%一致之重鏈可變域及與SEQ ID NO：240至少95%一致之輕鏈可變域。
  43. 如請求項41之抗體或其片段，其中該抗體或其片段包含Vl域之Ser26、Ser31、Asn32、Thr33、Val34、Asn35、Leu47、Phe50、Asn51、Tyr52、His53、Gln54、Lys67、Trp92、Asp93、Asp94、Asn97及Trp99以及Vh域之Ala33、Ser35、Val50、Arg52、Tyr56、Ser101、Gly102、Tyr103、Trp107、Pro109、Phe110及Asp111。
  44. 一種經分離單株抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段特異性結合人類BCMA且與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Gly6、Gln7、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17及His19相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度0Å至3.4Å(包括0Å及3.4Å)下所測定，且其中該抗體或其Fab片段抑制APRIL之生物活性。
  45. 如請求項44之抗體或其Fab片段，其中該抗體或其Fab片段與具有SEQ ID NO：360之人類BCMA之Ala5、Gly6、Gln7、Cys8、Tyr13、Phe14、Asp15、Ser16、Leu17、Leu18、His19、Ala20、Ile22、Leu26、Arg27、Pro33、Pro34、Leu35及Leu36相互作用，如藉由x射線結晶學在接觸距離解析度3.4Å至5.0Å(包括3.4Å及5.0Å)下所測定。
  46. 如請求項45之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類單株抗體或其Fab片段。
  47. 如請求項46之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG。
  48. 如請求項47之抗體或其Fab片段，其中該單株抗體或其Fab片段為人類IgG1。
  49. 如請求項48之抗體或其Fab片段，其進一步包含連接子。
  50. 如請求項49之抗體或其Fab片段，其進一步包含藥物或化學治療劑。
  51. 如請求項50之抗體或Fab片段，其中該多肽或片段進一步包含選自由以下組成之群之連接子：6-順丁烯二醯亞胺基己醯基、順丁烯二醯亞胺基丙醯基、纈胺酸-瓜胺酸、丙胺酸-***酸、對胺基苯甲氧基羰基、Mal-dPEG4-NHS、4-(2-吡啶基硫基)戊酸N-丁二醯亞胺酯(「SPP」)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SMCC」或「MCC」)及(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(「SIAB」)。
  52. 如請求項50之抗體或Fab片段，其中該抗體或片段進一步包含選自由以下組成之群之藥物或化學治療劑：噻替派及環磷醯胺(CYTOXAN.TM.)；烷基磺酸酯，諸如白消安、英丙舒凡及保釋芬；氮丙啶，諸如本多帕、卡巴醌、米特多帕及優多帕；伸乙亞胺及 甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基蜜胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；多聚乙醯(尤其布拉它辛及布拉它辛酮)；喜樹鹼(包括合成類似物拓撲替康)；苔蘚抑素；凱利他汀；CC-1065(包括其阿多來新、卡折來新及比折來新合成類似物)；念珠藻素(特定言之念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌黴素(包括合成類似物KW-2189及CBI-TMI)；軟珊瑚醇；潘卡他汀；匍枝珊瑚醇；海綿抑制素；氮芥，諸如苯丁酸氮芥、氯瑪法辛、氯磷醯胺、雌氮芥、異環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖、新恩比興、苯芥膽固醇、松龍苯芥、氯乙環磷醯胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，諸如卡莫司汀、吡葡亞硝脲、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素，尤其卡奇黴素γ1及卡奇黴素θI，參見例如Angew Chem.Intl.Ed.Engl.33：183-186(1994)；達內黴素，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素；以及新抑癌素發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素、放線菌素、安麯黴素、重氮絲胺酸、博萊黴素、放線菌素C、卡拉比星、洋紅黴素、嗜癌菌素；色黴素、放線菌素D、道諾黴素、地托比星、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯基)-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅黴素、絲裂黴素、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、培洛黴素、波弗黴素、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈脲黴素、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他汀、佐柔比星；抗代謝物，諸如甲胺蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、甲胺蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如環胞苷、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫 氟、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-FU；雄激素，諸如二***、屈他雄酮丙酸鹽、環硫雄醇、美雄烷、睾內酯；抗腎上腺劑，諸如胺魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑，諸如弗羅林酸；乙醯葡醛酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；安吖啶；倍曲布西；比生群；依達曲沙；地佛法明；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞；依利醋銨；埃博黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；洛尼代寧；美登木素，諸如美登素及安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹丹莫；二胺硝吖啶；噴司他汀；苯來美特；吡柔比星；足葉草酸；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK.RTM.；雷佐生；根黴素；西索菲蘭；螺旋鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(尤其T-2毒素、維拉庫林A、桿孢菌素A及蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；格塞圖辛；***糖苷(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；紫杉烷，例如太平洋紫杉醇(TAXOL.TM.，Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)及多西他賽(TAXOTERE.RTM.，Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春花鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；絲裂黴素C；米托蒽醌；長春新鹼；長春瑞濱；諾維本；諾安托；替尼泊苷；道諾黴素；胺基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；視黃酸；卡培他濱；他莫昔芬、雷洛昔芬、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬、LY117018、奧那司酮及托瑞米芬(法樂通)；及抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、秋水仙鹼位點結合劑(庫瑞辛)、考布他汀(AVE806、考布他汀A-4前藥 (CA4P)、Oxi-4503)、念珠藻素(LY355703)、盤皮海綿內酯、多拉司他汀及類似物(奧莉斯汀PHE、多拉司他汀10、ILX-651、西普司他汀1、TZT-1027)、埃博黴素(BMS-247550、BMS-310705、EP0906、KOS-862、ZK-EPO)、軟珊瑚醇、FR182877、大田軟海綿素B(E7389)、月苄三甲氯銨(NPI-2352及NPI-2358)、哈米特林(HTI-286)、勞瑪立得、美登木素(「DM1」、「DM3」或「DM4」)(比伐單抗莫坦辛、坎珠單抗莫坦辛(Cantuzumab mertansine)huN901-DM1/BB-10901TAP、MLN591DM1、My9-6-DM1、曲妥珠單抗-DM1)、PC-SPES、普魯賽德A、白藜蘆醇、S-烯丙基巰基半胱胺酸(SAMC)、海綿抑制素、維魯米德、分子運動驅動蛋白(SB-715992)、改造之秋水仙鹼位點結合劑(A-289099、A-293620/A-318315、ABT-751/E7010、D-24851/D-64131、ZD6126)、其他新穎紡錘體毒物(2-甲氧***(2-ME2)、苯并咪唑胺基甲酸酯(ANG 600系列、甲苯咪唑)、CP248/CP461、HMN-214、R440、SDX-103、T67/T607)。
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