KR101470653B1

KR101470653B1 - 갑상선암에 대한 항종양제

Info

Publication number: KR101470653B1
Application number: KR1020087029472A
Authority: KR
Inventors: 준지 마츠이
Original assignee: 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤
Priority date: 2006-05-18
Filing date: 2008-12-02
Publication date: 2014-12-08
Also published as: JPWO2007136103A1; CA2652442C; RU2448708C2; CN104706637A; IL195282A0; IL195282A; AU2007252506A1; RU2008149948A; AU2007252506B2; CA2652442A1; JP5190361B2; KR20090009937A; EP2036557A4; RU2448708C3; ES2556173T3; US9006256B2; US20090209580A1; AU2007252506C1; EP2036557A1; US20110207756A1

Abstract

본 발명의 과제는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대해, 보다 유효하게 효과를 발휘하는 의약 조성물 및 치료 방법을 제공하는 것에 있다. 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 및 그 유사 화합물은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대해 보다 유효하게 효과를 발휘할 수 있다.

Description

갑상선암에 대한 항종양제{ANTITUMOR AGENT FOR THYROID CANCER}

본 발명은 RET 키나아제 활성을 저해하는 물질 (이하, 「RET 키나아제 저해 물질」이라고 칭하는 경우가 있다) 을 함유하는 다발성 내분비 종양증 IIA 형 (multiple endocrine neoplasia, type IIA), 다발성 내분비 종양증 IIB 형 (multiple endocrine neoplasia, type IIB), 가족성 갑상선 수양암 (familial medullary thyroid carcinoma), 갑상선 유두암 (papillary thyroid carcinoma), 산발성 갑상선 수양암 (sporadic medullary thyroid carcinoma), 히르쉬스프룽병 (Hirschsprung disease), 갈색 세포종 (Pheochromocytoma), 부갑상선 과형성증 (parathyroid hyperplasia) 및 소화관의 점막 신경종 (mucosal neuromas of the gastrointestinal tract) 으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제, 치료 방법, 상기 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질에 관한 것이다.

또, 본 발명은 RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 갑상선암 (thyroid carcinoma) 에 대한 치료제, 치료 방법, 상기 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하는 것을 특징으로 하는 질환의 치료 방법, 상기 의약 조성물의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 의약 조성물을 위한 RET 키나아제 저해 물질에 관한 것이다.

또, 본 발명은 RET 키나아제 저해제에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 세포 중의 RET 변이의 유무를 지표로서, 환자에 대한 RET 키나아제 저해 물질의 효과를 예측하는 방법에 관한 것이다.

RET 는 리셉터 티로신키나아제의 하나이며, 세포 증식이나 분화의 시그널을 전달하는 세포 표면 분자이다.

RET 의 변이는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 산발성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 히르쉬스프룽병 등의 질환에 관련하는 것으로 알려져 있다 ^{(1, 2)}. 그리고, RET 키나아제 저해 물질은 상기 질환에 대한 유용한 치료제가 될 수 있는 것이 시사되고 있다 ^{(1, 2)}.

다발성 내분비 종양증 IIA 형의 환자의 93% 내지 98% 에 있어서, RET 의 코돈 609, 611, 618, 620, 634 의 5 개의 시스테인 잔기 중 하나의 변이가 인정된다. 그리고, RET 의 코돈 634 의 변이가 가장 많이 인정된다 ^{(3, 4)}.

한편, 다발성 내분비 종양증 IIB 형의 환자의 95% 에 있어서, RET 의 코돈 M918T 의 변이 (코돈 918 의 메티오닌으로부터 티로신으로의 변이) 가 인정된다 ⁽⁴⁾.

또, 가족성 갑상선 수양암이 많은 환자에 있어서, RET 의 코돈 609, 611, 618, 620, 634, 768, 790, 791, 804, 891 중 하나의 변이가 인정된다 ⁽⁴⁾.

이들의 점변이는, 모두 리간드 비의존적인 RET 의 항상적 활성화를 일으키는 것이 알려져 있다 ^{(3, 4)}.

여기에서, 다발성 내분비 종양증 IIA 형은 갑상선 수양암, 갈색 세포종 및 부갑상선 과형성증이 특징인 증후군이다. 한편, 다발성 내분비 종양증 IIB 형은 갑상선 수양암, 갈색 세포종, 소화관의 점막 신경종의 증상을 수반하는 증후군이다. 또, 가족성 갑상선 수양암은 갑상선 수양암을 주된 증상으로 하는 증후군이다 ⁽⁵⁾.

또, 산발성 갑상선 수양암 환자의 약 40% 에 있어서 RET 의 체세포의 점변이가 인정되고, 이들 변이의 대부분은 코돈 918 에 있어서 인정된다 ⁽⁶⁾.

또한, 갑상선 유두암에 있어서 염색체 역위 (chromosomal inversions) 또는 염색체 전좌 (chromosomal translocation) 에 의해 RET 유전자와 다른 유전자와의 융합 유전자, 즉, RET 유전자의 재구축 (rearrengement) 이 인정된다. 그리고, RET 유전자의 재구축에 의해 생성된 융합 단백질은 리간드 비의존적인 다이머리제이션과 RET 의 항상적 활성화를 일으키는 것으로 알려져 있다 ⁽⁷⁾.

히르쉬스프룽병 (Hirschsprung disease) 은 대장 신경총의 이상에서 기인하는 신생아의 장관 확장과 심한 변비를 특징으로 하는 질환이다. 히르쉬스프룽병의 원인 중 하나는 RET 의 변이가 원인인 것으로 알려져 있다 ⁽⁸⁾.

RET 의 변이는 NIH3T3 세포에 있어서 족장 비의존성 증식 및 조종양성을 일으킨 것으로 보고되어 있다 ⁽²⁾.

또, RET 키나아제 저해 물질인 ZD6474 는, 변이형 RET 에 의해 형질 전환시킨 NIH3T3 세포에 있어서의 족장 비의존성 증식을 억제하고, 누드 마우스로의 당해 세포의 주입 후의 종양의 형성을 저해한 것으로 보고되어 있다 ⁽²⁾.

또한, 인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 피하 이식 모델에 있어서, RET 키나아제 저해 물질인 BAY 43-9006 은 종양을 축소시킨 것으로 보고되어 있다 ⁽⁹⁾.

이와 같이, RET 키나아제 저해 물질은 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포에 대해 세포 증식 억제를 일으키고, 상기 세포를 함유하는 종양에 대해 항종양 효과를 나타내는 것으로 시사되어 있다. 또, RET 키나아제 저해 물질은 RET 의 변이를 원인으로 하는 질환에 대해 유효하다고 생각된다.

즉, RET 키나아제 저해 물질은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종 그리고 갑상선암에 유효하다고 생각된다.

여기에서, 혈관 신생 저해 물질로서 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 및 그 유사 화합물이 알려져 있다 ^(10-12). 그러나, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 및 그 유사 화합물이 RET 키나아제 저해 활성을 갖는 것에 대해서는 일절 보고되어 있지 않다.

참고 문헌

(1) Oncogene, 19, 5590-5597, 2000.

(2) Cancer Research, 15, 7284-7290, 2002.

(3) Cancer Research, 66, 1177-1180, 2006.

(4) Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 88, 5438-5443, 2003.

(5) Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 89, 4142-4145, 2004.

(6) Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 89, 5823-5827, 2004.

(7) Endocrinology, 145, 5448-5451, 2004.

(8) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 102, 8949-8954, 2005.

(9) Journal of the National Cancer Institute, 98, 326-334, 2006.

(10) 국제 공개 제02/32872호 팜플렛

(11) 국제 공개 제2004/080462호 팜플렛

(12) 국제 공개 제2005/063713호 팜플렛

발명의 개시

본 발명은 이와 같은 상황을 감안하여 이루어진 것이며, 그 해결하고자 하는 과제는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환 그리고 갑상선암에 대한 치료제 및 치료 방법을 제공하는 것, 그리고, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 보다 유효하게 효과를 발휘하는 의약 조성물 및 치료 방법을 제공하는 것에 있다. 또한, 본 발명의 해결하고자 하는 다른 과제는 RET 키나아제 저해제를 제공하는 것에 있다. 또, 본 발명의 해결하고자 하는 다른 과제는 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 및 그 유사 화합물의 효과를 예측하는 방법을 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해 예의 검토를 거듭한 결과, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드가 RET 키나아제 저해 활성을 갖는 것을 발견하였다. 그리고, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 및 그 유사 화합물은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환 그리고 갑상선암에 대해, 보다 유효하게 효과를 발휘하는 것을 발견하였다. 또, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 및 그 유사 화합물은 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해, 보다 유효하게 효과를 발휘하는 것을 발견하였다. 또한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 및 그 유사 화합물의 효과는 세포 중의 RET 변이의 유무를 지표로 함으로써 예측할 수 있다는 것을 발견하였다.

즉 본 발명은, 이하에 관한 것이다.

(1) RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제.

(2) RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 갑상선암에 대한 치료제.

(3) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물.

(4) RET 키나아제 저해 물질을 환자에게 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환의 치료 방법.

(5) RET 키나아제 저해 물질을 환자에게 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 갑상선암의 치료 방법.

(6) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 RET 키나아제 저해 물질을 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 질환의 치료 방법.

(7) 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용.

(8) 갑상선암에 대한 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용.

(9) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용.

(10) 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질.

(11) 갑상선암에 대한 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질.

(12) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물을 위한 RET 키나아제 저해 물질.

(13) 세포 중의 RET 변이의 유무를 지표로 하여, 환자가 RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성인지의 여부를 예측하는 방법.

(14) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는, RET 키나아제 저해 물질에 대한 세포의 감수성을 분석하는 방법.

(15) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는, RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성을 나타내는 세포를 선택하는 방법.

(16) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는, RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성을 나타내는 환자를 선택하는 방법.

(17) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정함으로써 RET 키나아제 저해 물질에 대한 감수성을 분석하여 얻어지는 결과에 따라 환자를 분류하는 방법.

(18) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하고, 얻어지는 측정 결과로부터 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 갖는 환자를 선택하는 것을 포함하는, RET 키나아제 저해 물질의 투여 대상이 되는 환자를 선택하는 방법.

(19) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는, 환자에 대한 RET 키나아제 저해 물질의 치료 효과를 예측하는 방법.

(20) 환자의 RET 키나아제 저해 물질에 대한 감수성의 정도를 예측하기 위해 당해 환자 유래의 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 방법.

상기 RET 키나아제 저해 물질은,

일반식 (I)

［식 (I) 중, R¹ 은 식 -V¹-V²-V³ (식 중, V¹ 은 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6 알킬렌기를 의미한다 ； V² 는 단결합, 산소 원자, 황 원자, 카르보닐기, 술피닐기, 술포닐기, 식 -CONR⁶- 으로 나타내는 기, 식 -SO₂NR⁶- 으로 나타내는 기, 식 -NR⁶SO₂- 로 나타내는 기, 식 -NR⁶CO- 로 나타내는 기 또는 식 -NR⁶- 으로 나타내는 기를 의미한다 (식 중, R⁶ 은 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C_3-8시클로알킬기를 의미한다) ； V³ 은 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_2-6알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_6-10아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기를 의미한다) 으로 나타내는 기를 의미한다 ；

R² 는 시아노기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6알콕시기, 카르복실기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_2-7알콕시카르보닐기 또는 식 -CONV^a11V^a12 (식 중, V^a11은 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_2-6알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_2-6알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_3-8 시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₆ _- ₁₀아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기를 의미한다 ； V^a12 는 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _-6 알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _-6 알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₆ _-10아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기, 수산기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알콕시기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알콕시기를 의미한다) 로 나타내는 기를 의미한다 ；

Y¹ 은 식

또는

(식 중, R⁷ 및 R⁸ 은 각각 독립적으로 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, 아미노기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_3-8시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6알콕시기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6알킬티오기, 포르밀기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_2-7아실기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_2-7알콕시카르보닐기 또는 식 -CONV^d1V^d2 (식 중, V^d1 및 V^d2 는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기를 의미한다) 로 나타내는 기를 의미한다 ；

W¹ 및 W² 는 각각 독립적으로 치환기를 갖고 있어도 되는 탄소 원자 또는 질소 원자를 의미한다) 로 나타내는 기를 의미한다 ；

R³ 및 R⁴ 는 각각 독립적으로 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₇아실기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₇알콕시카르보닐기를 의미한다 ；

R⁵ 는 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₆ _- ₁₀아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기를 의미한다］로 나타내는 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 들 수 있다.

또, 상기 RET 키나아제 저해 물질은 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실릭 엑시드(2-디에틸아미노에틸)아미드, N-｛2-클로로-4-［(6,7-디메톡시-4-퀴놀릴)옥시］페닐｝-N＇-(5-메틸-3-이소옥사졸릴)우레아

및

4-［(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일)옥시］-6-메톡시-7-［3-(피롤리딘-1-일)프로폭시］퀴나졸린

으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 들 수 있다.

또, 본 발명은 이하에 관한 것이다.

(21) 상기의 일반식 (I) 로 나타내는 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 RET 키나아제 저해제.

(22) 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실릭 엑시드(2-디에틸아미노에틸)아미드,

N-｛2-클로로-4-［(6,7-디메톡시-4-퀴놀릴)옥시］페닐｝-N＇-(5-메틸-3-이소옥사졸릴)우레아

및

으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 RET 키나아제 저해제.

또, 본 발명은 바람직하게는 이하에 관한 것이다.

(23) 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제.

(24) 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 갑상선암에 대한 치료제.

(25) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 의약 조성물.

(26) 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 환자에게 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환의 치료 방법.

(27) 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 환자에게 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 갑상선암의 치료 방법.

(28) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 질환의 치료 방법.

(29) 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제의 제조를 위한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물의 사용.

(30) 갑상선암에 대한 치료제의 제조를 위한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물의 사용.

(31) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물의 제조를 위한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물의 사용.

(32) 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제를 위한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물.

(33) 갑상선암에 대한 치료제를 위한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물.

(34) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물을 위한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물.

(35) 세포 중의 RET 변이의 유무를 지표로 하여, 환자가 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물에 대해 고감수성인지의 여부를 예측하는 방법.

(36) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 세포의 감수성을 분석하는 방법.

(37) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물에 대해 고감수성을 나타내는 세포를 선택하는 방법.

(38) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물에 대해 고감수성을 나타내는 환자를 선택하는 방법.

(39) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정함으로써 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 감수성을 분석하여 얻어지는 결과에 따라 환자를 분류하는 방법.

(40) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하고, 얻어지는 측정 결과로부터 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 갖는 환자를 선택하는 것을 포함하는, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물의 투여 대상이 되는 환자를 선택하는 방법.

(41) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 것을 포함하는 환자에 대한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물의 치료 효과를 예측하는 방법.

(42) 환자의 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 감수성의 정도를 예측하기 위해, 당해 환자 유래의 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 방법.

(43) 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 RET 키나아제 저해제.

본 발명에 의해, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제, 치료 방법, 상기 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질이 제공된다.

또, 본 발명에 의해, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 갑상선암에 대한 치료제, 치료 방법, 상기 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질이 제공된다.

또한, 본 발명에 의해, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하는 것을 특징으로 하는 질환의 치료 방법, 상기 의약 조성물의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 의약 조성물을 위한 RET 키나아제 저해 물질이 제공된다.

또, 본 발명에 의해 RET 키나아제 저해제가 제공된다.

또한, 본 발명에 의해 RET 키나아제 저해 물질의 효과를 예측하는 방법이 제공된다.

보다 상세하게는 RET 키나아제 저해 물질의 효과는 세포 중의 RET 변이의 유무를 지표로 함으로써 예측할 수 있게 되었다.

본 발명에 관련된 방법에 의해, 환자에게 화합물을 투여하지 않고 효과를 예측할 수 있게 되므로, 당해 화합물에 의한 효과를 더욱 기대할 수 있는 환자를 선택할 수 있어, 환자의 QOL 에 공헌할 수 있게 되었다.

도 1 은 인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 배양 하에 있어서의 RET 키나아제 및 Erk1/2 의 활성화 (인산화를 지표) 에 대한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드의 효과를 나타낸 것이다. 또한, 가장 왼쪽의 레인은 피검 물질을 첨가하지 않고 RET 키나아제 및 Erk1/2 의 활성화 (인산화를 지표) 를 측정한 것이다.

도 2 는 인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 피하 이식 모델에 있어서의 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드의 항종양 효과를 나타낸 것이다.

도 3 은 인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 피하 이식 모델에 있어서의 종양 조직 내의 RET 키나아제에 대한 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드의 효과를 나타낸 것이다. (A) 는 피검 물질의 각 투여량 (10, 30 또는 100㎎/㎏) 에서의 경구 투여 2 시간 후의 RET 의 인산화에 대한 효과, (B) 는 피검 물질의 100㎎/㎏ 투여 후의 2, 8, 12 또는 24 시간 후의 RET 의 인산화에 대한 효과를 나타낸다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

이하에 본 발명의 실시형태에 대해 설명한다. 이하의 실시형태는 본 발명을 설명하기 위한 예시이며, 본 발명을 이 실시형태에만 한정하는 취지는 아니다. 본 발명은 그 요지를 일탈하지 않는 한 다양한 형태로 실시할 수 있다.

또한, 본 명세서에 있어서 인용한 문헌, 및 공개 공보, 특허 공보 그 밖의 특허 문헌은 참조로써 본 명세서에 도입하는 것으로 한다. 또, 본 명세서는 본 원 우선권 주장의 기초가 되는 미국 가출원 60/747,570호의 개시 내용을 포함한다.

1. 본 발명의 치료제, 의약 조성물, 치료 방법

(1) RET

본 발명에 있어서, RET 란 ret proto-oncogene 에 의해 코드되는 단백질이고, 예를 들어, 배열 번호：2 (GenBank 액세션 번호：NM_020975) 로 나타내는 아미노산 배열 또는 배열 번호：4 (GenBank 액세션 번호：NM_020630) 로 나타내는 아미노산 배열로 이루어지는 폴리펩티드를 들 수 있다. 배열 번호：2 로 나타내는 아미노산 배열은 1114aa 의 길이를 갖고, 배열 번호：4 로 나타내는 아미노산 배열은 1072aa 의 길이를 갖는 배열이다.

또, ret proto-oncogene 은 예를 들어, 배열 번호：1 (GenBank 액세션 번호：NM_020975) 로 나타내는 염기 배열 중, 181 ∼ 3522 번의 염기 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드, 또는 배열 번호：3 (GenBank 액세션 번호：NM_020630) 으로 나타내는 염기 배열 중, 181 ∼ 3396 번의 염기 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 이들의 RET 를 「야생형의 RET」라고 칭하는 경우도 있다.

(2) 변이형 RET

본 발명에 있어서, 변이형 RET 는 야생형의 RET 의 아미노산 배열, 예를 들어, 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 1 혹은 수 개의 아미노산이 결실, 치환 혹은 부가되고, 또는 그들의 조합에 의해 변이된 아미노산 배열을 함유하는 폴리펩티드로서, RET 키나아제 활성을 갖는 폴리펩티드를 들 수 있다. 또, 변이형 RET 는, 바람직하게는 야생형의 RET 의 아미노산 배열, 예를 들어, 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 1 개의 아미노산이 치환된 아미노산 배열을 함유하는 폴리펩티드로서, RET 키나아제 활성을 갖는 폴리펩티드를 들 수 있다.

여기에서, 「RET 키나아제 활성」은 RET 가 자기 또는 다른 단백질의 티로신 잔기를 인산화하는 활성을 의미한다.

변이형 RET 는, 예를 들어, 하기 (i) ∼ (xix) 로 나타내는 배열을 함유하는 폴리펩티드를 들 수 있다.

(i) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 321 번째의 글리신이 다른 아미노산, 바람직하게는 아르기닌으로 치환된 아미노산 배열 (Journal of Endocrinology Investigation, 28, 905-909, 2005),

(ii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 533 번째의 글리신이 다른 아미노산, 바람직하게는 시스테인으로 치환된 아미노산 배열 (Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 88, 5438-5443, 2003),

(iii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 609 번째의 시스테인이 다른 아미노산, 바람직하게는 세린으로 치환된 아미노산 배열 (Clin Endocrinol, 63, 676-682, 2005),

(iv) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 611 번째의 시스테인이 다른 아미노산, 바람직하게는 세린, 티로신 또는 페닐알라닌으로 치환된 아 미노산 배열 (European Journal of Human Genetics, 11, 364-368, 2003., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86, 1104-1109, 2001),

(v) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 618 번째의 시스테인이 다른 아미노산, 바람직하게는 아르기닌, 세린, 글리신 또는 페닐알라닌으로 치환된 아미노산 배열 (American Journal of Pathology, 168, 1262-1275, 2006., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86, 1104-1109, 2001),

(vi) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 620 번째의 시스테인이 다른 아미노산, 바람직하게는 아르기닌 또는 세린으로 치환된 아미노산 배열 (American Journal of Pathology, 168, 1262-1275, 2006., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86, 1104-1109, 2001),

(vii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 630 번째의 시스테인이 다른 아미노산, 바람직하게는 아르기닌 또는 티로신으로 치환된 아미노산 배열 (Thyroid, 15, 668-671, 2005., Biochemical and Biophysical Research Communications, 255, 587-590, 1999),

(viii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 631 번째의 아스파라긴산이 다른 아미노산, 바람직하게는 티로신, 글리신, 아스파라긴 또는 알라닌으로 치환된 아미노산 배열 (Biochemical and Biophysical Research Communications, 255, 587-590, 1999),

(ix) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 634 번째의 시스테인이 다른 아미노산, 바람직하게는 아르기닌, 글리신, 티로신, 페닐알라닌, 세린 또는 트립토판으로 치환된 아미노산 배열 (Biochemical and Biophysical Research Communications, 255, 587-590, 1999., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86, 1104-1109, 2001., Biochemical and Biophysical Research Communications, 207, 1022-1028, 1995),

(x) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 691 번째의 글리신이 다른 아미노산, 바람직하게는 세린으로 치환된 아미노산 배열 (Cancer Research, 66, 1177-1180, 2006),

(xi) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 768 번째의 글루타민산이 다른 아미노산, 바람직하게는 아스파라긴산으로 치환된 아미노산 배열 (Clinical Chemistry, 50, 522-529, 2004., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86, 1104-1109, 2001),

(xii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 790 번째의 류신이 다른 아미노산, 바람직하게는 페닐알라닌으로 치환된 아미노산 배열 (Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 83, 770-774, 1998., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86, 1104-1109, 2001),

(xiii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 791 번째의 티로신이 다른 아미노산, 바람직하게는 페닐알라닌으로 치환된 아미노산 배열 (Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 83, 770-774, 1998),

(xiv) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 804 번째의 발린이 다른 아미노산, 바람직하게는 메티오닌으로 치환된 아미노산 배열 (Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 86, 1104-1109, 2001),

(xv) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 806 번째의 티로신이 다른 아미노산, 바람직하게는 시스테인으로 치환된 아미노산 배열 (Japanese Journal of Cancer Research, 90, 1-5, 1999),

(xvi) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 844 번째의 아르기닌이 다른 아미노산, 바람직하게는 류신으로 치환된 아미노산 배열 (Exp Clin Endocrinol Diabetes, 108, 128-132, 2000),

(xvii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 883 번째의 알라닌이 다른 아미노산, 바람직하게는 페닐알라닌 또는 티로신으로 치환된 아미노산 배열 (European Journal of Endocrinology, 142, 573-575, 2000., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 89, 5823-5827, 2004),

(xviii) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 891 번째의 세린이 다른 아미노산, 바람직하게는 알라닌으로 치환된 아미노산 배열 (Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 89, 4142-4145, 2004),

(xix) 배열 번호：2 또는 4 로 나타내는 아미노산 배열 중, 918 번째의 메티오닌이 다른 아미노산, 바람직하게는 트레오닌으로 치환된 아미노산 배열 (Clinical Cancer Research, 8, 457-463, 2002).

또, 변이형 RET 는 배열 번호：2 또는 4 에 기재된 아미노산 배열에 있어서, 상기의 (i) ∼ (xix) 로 나타내는 치환을 적어도 하나 포함하는 것, 즉, 코돈 321, 533, 609, 611, 618, 620, 630, 631, 634, 691, 768, 790, 791, 804, 806, 844, 883, 891 및 918 의 아미노산으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 변이 부위를 함유하는 것을 들 수 있다. 예를 들어, 배열 번호：2 로 나타내는 아미노산 배열 중, 804 번째의 발린이 다른 아미노산으로 치환된 변이 부위, 및 806 번째의 티로신이 다른 아미노산으로 치환된 변이 부위를 함유하는 아미노산 배열을 함유하는 폴리펩티드는 변이형 RET 에 포함된다. 여기에서, 변이형 RET 에 포함되는 상기의 (i) ∼ (xix) 로 나타내는 치환의 개수 및 조합은 특별히 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 변이형 RET 는 바람직하게는 상기의 (iii), (iv), (v), (vi), (ix), (xi), (xii), (xiii), (xiv), (xviii) 또는 (xix) 로 나타내는 배열을 함유하는 폴리펩티드이고, 보다 바람직하게는 (ix) 또는 (xix) 로 나타내는 배열을 함유하는 폴리펩티드이다.

또한, 본 명세서 중, 아미노산의 알파벳 표기는 통상적인 3 문자 또는 1 문자로 나타내는 경우가 있다. 또, 숫자의 앞에 표시한 알파벳은 치환 전 아미노산의 1 문자 표기를 나타내고, 숫자의 뒤에 표시한 알파벳은 치환 후 아미노산의 1 문자 표기를 나타내고, 숫자는 아미노산 배열에 있어서의 당해 아미노산의 존재 위치를 나타내는 경우가 있다. 예를 들어, 상기의 (xix) 로 나타내는 바와 같이, 918 번째의 메티오닌이 트레오닌으로 치환된 경우에는 「M918T」라고 표시하는 경우가 있다.

또, 코돈에 뒤따르는 숫자는, 아미노산 배열에 있어서의 아미노산의 존재 위치를 나타내는 경우가 있다. 예를 들어, 「코돈 918 의 아미노산」은 아미노산 배열에 있어서 918 번째의 아미노산을 의미한다.

또, 본 발명에 있어서, 변이형 RET 는 야생형의 RET 를 코드하는 유전자 (이하, 「RET 유전자」라고 칭하는 경우가 있다) 가 다른 유전자와 재구축된 유전자에 의해 코드되는 폴리펩티드로서, RET 키나아제 활성을 갖는 폴리펩티드를 들 수 있다. 또, 본 발명에 있어서, 변이형 RET 는, 예를 들어, 배열 번호：1 또는 3 에 기재된 염기 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 중, 일부의 폴리뉴클레오티드가 다른 유전자와 재구축된 폴리뉴클레오티드에 의해 코드되는 폴리펩티드로서, RET 키나아제 활성을 갖는 폴리펩티드를 들 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서, 변이형 RET 는 예를 들어, 배열 번호：1 의 181 ∼ 3522 번의 염기 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드, 또는 배열 번호：3 의 181 ∼ 3396 번의 염기 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드가 다른 유전자와 재구축된 폴리뉴클레오티드에 의해 코드되는 폴리펩티드로서, RET 키나아제 활성을 갖는 폴리펩티드를 들 수 있다.

여기에서, 「유전자의 재구축」이란, 유전자간에 재조합이 일어나고, 그 결과, 새로운 유전자가 생기는 것을 말한다.

변이형 RET 는, 예를 들어, 하기 (i) ∼ (xi) 의 폴리펩티드를 들 수 있다. 하기의 (i) ∼ (xi) 의 폴리펩티드에 있어서의 유전자의 재구축의 양태는 괄호 내에 나타낸 각 문헌에 기재되어 있다.

(i) RET 유전자가 H4 (CCDC6, coiled-coil domain containing 6 또는 D10S170 이라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_005436) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PTC1」이라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (European Journal of Cancer, 41, 816-821, 2005., Cell, 60, 557-563, 1990),

(ii) RET 유전자가 RIα (PRKAR1A, cAMP-dependent regulatory type I alpha라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_212471) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PTC2」라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Eur J Endocrinology, 147, 741-745, 2002),

(iii) RET 유전자가 ELE1 (NCOA4, nuclear receptor coactivator 4 또는 RFG라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_005437) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PTC3」이라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (European Journal of Cancer, 41, 816-821, 2005),

(iv) RET 유전자가 ELE1 (NCOA4, nuclear receptor coactivator 4 또는 RFG 라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_005437) 의 유전자와 재구축된 유전자 ( 「RET/PTC4」라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Oncogene, 13, 1093-1097, 1996),

(v) RET 유전자가 RFG5 (GOLGA5, golgin-84 라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_005113) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PTC5」라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Cancer Research, 58, 198-203, 1998),

(vi) RET 유전자가 hTIF (TRIM24, tripartite motif-containing 24 또는 PTC6 라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_003852) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PTC6」이라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Oncogene, 18, 4388-4393, 1999),

(vii) RET 유전자가 RFG7 (TRIM33, tripartite motif-containing 33, PTC7 이라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_033020) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PTC7」이라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Cancer Research, 60, 2786-2789, 2000),

(viii) RET 유전자가 kinectin (KTN1, kinectin 1 이라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_182926) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PTC8」라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Cancer Research, 60, 7028-7032,2000., Cancer Research, 60, 2786-2789, 2000),

(ix) RET 유전자가 ELKS (RAB6IP2 또는 RAB6 interacting protein 2 라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_178037) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/ELKS」라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Genes Chromosomes Cancer, 25, 97-103, 1999),

(x) RET 유전자가 PCM-1 (PCM1 또는 pericentriolar material 1 이라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_006197) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RET/PCM-1」이라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Oncogene, 19, 4236-4242, 2000).

(xi) RET 유전자가 RFP (ret finger protein 라고도 한다. GenBank 액세션 번호：NM_006510) 의 유전자와 재구축된 유전자 (「RFP-RET」라고도 한다) 에 의해 코드되는 폴리펩티드 (Endocrinology, 145, 5448-5451, 2004).

RET 변이의 유무는, RET 의 유전자 배열 또는 RET 유전자의 전사 산물인 mRNA 의 배열을 해석함으로써 조사할 수 있다. 배열의 해석 방법은, 예를 들어, 디데옥시뉴클레오티드 체인 터미네이션법 (Sanger et al. (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5463) 등을 들 수 있다. 적당한 DNA 시퀀서를 이용하여 배열을 해석할 수도 있다.

또, RET 변이의 유무는, 예를 들어, in situ 하이브리다이제이션, 노던 블롯 해석, DNA 마이크로어레이, RT-PCR, SSCP-PCR (Single-Strand Conformation Polymorphism-PCR) 등의 방법에 의해 해석할 수도 있다. 이들의 방법은, 통상적인 방법에 따라 실시할 수 있다 (Clinical Cancer Research, 8, 457-463, 2002).

또한, RET 변이의 유무는, 예를 들어, 면역 화학적 방법 (예를 들어, 면역 조직 화학적 방법, 면역 침강법, 웨스턴 블롯, 플로사이토메트리, ELISA, RIA 등) 에 의해 해석할 수도 있다. 이들의 방법은 통상적인 방법에 따라 실시할 수 있다.

변이형 RET 의 유무를 PCR 로 해석하기 위해, 프라이머의 배열은 통상적인 방법에 따라 설계할 수 있다. 프라이머의 배열은, 예를 들어, Primer Expression (Perkin-Elmer Applied Biosystems) 을 이용하여 설계할 수 있다.

또, 변이형 RET 의 유무를 PCR 로 해석하기 위해, 예를 들어, 표 1 에 기재된 프라이머를 사용할 수 있다. 예를 들어, RET/PTC1 을 해석하기 위해서는 배열 번호：5 및 6 에 기재된 배열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드를 프라이머로 할 수 있다.

표 1 은, 해석 대상이 되는 변이형 RET 에 대한 프라이머의 일례를 나타낸 것이다.

이하에, 배열 번호：5 ∼ 20 에 기재된 염기 배열을 나타낸다.

(3) 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포

본 발명에 있어서, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포는 바람직하게는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종의 세포이다. 또, 본 발명에 있어서 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포는 바람직하게는 갑상선암의 세포이다.

(4) 본 발명의 RET 키나아제 저해 물질

본 명세서에 있어서, 「할로겐 원자」란 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자를 의미한다.

「할로겐 원자」의 바람직한 예로서는 불소 원자, 염소 원자를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서, 「C_1-6알킬기」란 탄소수가 1 ∼ 6 개의 직사슬형 또는 분지사슬형의 알킬기를 의미하고, 구체예로서는 메틸기, 에틸기, 1-프로필기(n-프로필기), 2-프로필기(i-프로필기), 2-메틸-1-프로필기(i-부틸기), 2-메틸-2-프로필기(t-부틸기), 1-부틸기(n-부틸기), 2-부틸기(s-부틸기), 1-펜틸기, 2-펜틸기, 3-펜틸기, 2-메틸-1-부틸기, 3-메틸-1-부틸기, 2-메틸-2-부틸기, 3-메틸-2-부틸기, 2,2-디메틸-1-프로필기, 1-헥실기, 2-헥실기, 3-헥실기, 2-메틸-1-펜틸기, 3-메틸-1-펜틸기, 4-메틸-1-펜틸기, 2-메틸-2-펜틸기, 3-메틸-2-펜틸기, 4-메틸-2-펜틸기, 2-메틸-3-펜틸기, 3-메틸-3-펜틸기, 2,3-디메틸-1-부틸기, 3,3-디메틸-1-부틸기, 2,2-디메틸-1-부틸기, 2-에틸-1-부틸기, 3,3-디메틸-2-부틸기, 2,3-디메틸-2-부틸기 등을 들 수 있다.

「C₁ _- ₆알킬기」의 바람직한 예로서는, 메틸기, 에틸기, 1-프로필기, 2-프로필기, 2-메틸-1-프로필기, 2-메틸-2-프로필기, 1-부틸기, 2-부틸기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₁ _- ₆알킬렌기」란, 상기 정의 「C₁ _- ₆알킬기」로부터 추가로 임의의 수소 원자를 1 개 제거하고 유도되는 2 가의 기를 의미하고, 구체예로서는 메틸렌기, 1,2-에틸렌기, 1,1-에틸렌기, 1,3-프로필렌기, 테트라메틸렌기, 펜타메틸렌기, 헥사메틸렌기 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₂ _- ₆알케닐기」란, 이중 결합을 1 개 갖는 탄소수가 2 ∼ 6 개의 직사슬형 또는 분지사슬형의 알케닐기를 의미하고, 구체예로서는 에테닐기(비닐기), 1-프로페닐기, 2-프로페닐기(알릴기), 1-부테닐기, 2-부테닐기, 3-부테닐기, 펜테닐기, 헥세닐기 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₂ _- ₆알키닐기」란 3 중 결합을 1 개 갖는 탄소수가 2 ∼ 6 개의 직사슬형 또는 분지사슬형의 알키닐기를 의미하고, 구체예로서는 에티닐기, 1-프로피닐기, 2-프로피닐기, 1-부티닐기, 2-부티닐기, 3-부티닐기, 펜티닐기, 헥시닐기 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₃ _- ₈시클로알킬기」란, 탄소수가 3 ∼ 8 개의 단환 또는 2 환의 포화 지방족 탄화수소기를 의미하고, 구체예로서는 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기, 시클로헥실기, 시클로헵틸기, 시클로옥틸기, 비시클로[2.1.0]펜틸기, 비시클로[3.1.0]헥실기, 비시클로[2.1.1]헥실기, 비시클로[4.1.0]헵틸기, 비시클로[2.2.1]헵틸기(노르보르닐기), 비시클로[3.3.0]옥틸기, 비시클로[3.2.1]옥틸기, 비시클로[2.2.2]옥틸기 등을 들 수 있다.

「C₃ _- ₈시클로알킬기」의 바람직한 예로서는 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₆ _- ₁₀아릴기」란 탄소수가 6 ∼ 10 개의 방향족성의 탄화수소 고리형기를 의미하고, 구체예로서는 페닐기, 1-나프틸기, 2-나프틸기, 인데닐기, 아즈레닐기 등을 들 수 있다.

「C₆ _- ₁₀아릴기」의 바람직한 예로서는 페닐기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「헤테로 원자」란 질소 원자, 산소 원자 또는 황 원자를 의미한다.

본 명세서에 있어서 「5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기」란, 고리를 구성하는 원자의 수가 5 ∼ 10 개이며, 고리를 구성하는 원자 중에 1 ∼ 5 개의 헤테로 원자를 함유하는 방향족성의 고리형기를 의미하고, 구체예로서는 푸릴기, 티에닐기, 피롤릴기, 이미다졸릴기, 트리아졸릴기, 테트라졸릴기, 티아졸릴기, 피라졸릴기, 옥사졸릴기, 이소옥사졸릴기, 이소티아졸릴기, 푸라자닐기, 티아디아졸릴기, 옥사디아졸릴기, 피리딜기, 피라디닐기, 피리다디닐기, 피리미디닐기, 트리아디닐기, 프리닐기, 프테리디닐기, 퀴놀릴기, 이소퀴놀릴기, 나프티리디닐기, 퀴녹살리닐기, 신노리닐기, 퀴나졸리닐기, 프탈라지닐기, 이미다졸피리딜기, 이미다졸티아졸릴기, 이미다졸옥사졸릴기, 벤조티아졸릴기, 벤조옥사졸릴기, 벤즈이미다졸릴기, 인돌릴기, 이소인돌릴기, 인다졸릴기, 피롤로피리딜기, 티에노피리딜기, 프로피리딜기, 벤조티아디아졸릴기, 벤조옥사디아졸릴기, 피리드피리미디닐기, 벤조푸릴기, 벤조티에닐기, 티에노푸릴기 등을 들 수 있다.

「5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기」의 바람직한 예로서는 푸릴기, 티에닐기, 피롤릴기, 이미다졸릴기, 티아졸릴기, 피라졸릴기, 옥사졸릴기, 이소옥사졸릴기, 이소티아졸릴기, 피리딜기, 피리미디닐기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기」란,

(a) 고리를 구성하는 원자의 수가 3 ∼ 10 개이고,

(b) 고리를 구성하는 원자 중에 1 ∼ 2 개의 헤테로 원자를 함유하고,

(c) 고리 중에 이중 결합을 1 ∼ 2 개 함유하고 있어도 되고,

(d) 고리 중에 카르보닐기, 술피닐기 또는 술포닐기를 1 ∼ 3 개 함유하고 있어도 된다,

(e) 단환식 또는 2 환식인 비방향족성의 고리형기를 의미하고, 고리를 구성하는 원자 중에 질소 원자를 함유하는 경우, 질소 원자로부터 결합수(結合手)가 나와 있어도 된다.

구체예로서는, 아지리디닐기, 아제티디닐기, 피롤리디닐기, 피페리디닐기, 아제파닐기, 아조카닐기, 피페라디닐기, 디아제파닐기, 디아조카닐기, 디아자비시클로[2.2.1]헵틸기, 모르폴리닐기, 티오모르폴리닐기, 1,1-디옥소티오모르폴리닐기, 옥시라닐기, 옥세타닐기, 테트라히드로푸릴기, 디옥소라닐기, 테트라히드로피라닐기, 디옥사닐기, 테트라히드로티에닐기, 테트라히드로티오피라닐기, 옥사졸리디닐기, 티아졸리디닐기 등을 들 수 있다.

「3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기」의 바람직한 예로서는, 아지리디닐기, 아제티디닐기, 피롤리디닐기, 피페리디닐기, 아제파닐기, 피페라디닐기, 디아제파닐기, 모르폴리닐기, 티오모르폴리닐기, 1,1-디옥소티오모르폴리닐기, 테트라히드로푸릴기, 테트라히드로피라닐기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₁ _- ₆알콕시기」란, 상기 정의 「C₁ _- ₆알킬기」의 말단에 산소 원자가 결합한 기인 것을 의미하고, 구체예로서는 메톡시기, 에톡시기, 1-프로폭시기(n-프로폭시기), 2-프로폭시기(i-프로폭시기), 2-메틸-1-프로폭시기(i-부톡시기), 2-메틸-2-프로폭시기(t-부톡시기), 1-부톡시기(n-부톡시기), 2-부톡시기(s-부톡시기), 1-펜틸옥시기, 2-펜틸옥시기, 3-펜틸옥시기, 2-메틸-1-부톡시기, 3-메틸-1-부톡시기, 2-메틸-2-부톡시기, 3-메틸-2-부톡시기, 2,2-디메틸-1-프로폭시기, 1-헥실옥시기, 2-헥실옥시기, 3-헥실옥시기, 2-메틸-1-펜틸옥시기, 3-메틸-1-펜틸옥시기, 4-메틸-1-펜틸옥시기, 2-메틸-2-펜틸옥시기, 3-메틸-2-펜틸옥시기, 4-메틸-2-펜틸옥시기, 2-메틸-3-펜틸옥시기, 3-메틸-3-펜틸옥시기, 2,3-디메틸-1-부톡시기, 3,3-디메틸-1-부톡시기, 2,2-디메틸-1-부톡시기, 2-에틸-1-부톡시기, 3,3-디메틸-2-부톡시기, 2,3-디메틸-2-부톡시기 등을 들 수 있다.

「C₁ _- ₆알콕시기」의 바람직한 예로서는, 메톡시기, 에톡시기, 1-프로폭시기, 2-프로폭시기, 2-메틸-1-프로폭시기, 2-메틸-2-프로폭시기, 1-부톡시기, 2-부톡시기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₁ _- ₆알킬티오기」란, 상기 정의 「C₁ _- ₆알킬기」의 말단에 황 원자가 결합한 기인 것을 의미하고, 구체예로서는 메틸티오기, 에틸티오기, 1-프로필티오기(n-프로필티오기), 2-프로필티오기(i-프로필티오기), 2-메틸-1-프로필티오기(i-부틸티오기), 2-메틸-2-프로필티오기(t-부틸티오기), 1-부틸티오기(n-부틸티오기), 2-부틸티오기(s-부틸티오기), 1-펜틸티오기, 2-펜틸티오기, 3-펜틸티오기, 2-메틸-1-부틸티오기, 3-메틸-1-부틸티오기, 2-메틸-2-부틸티오기, 3-메틸-2-부틸티오기, 2,2-디메틸-1-프로필티오기, 1-헥실티오기, 2-헥실티오기, 3-헥실티오기, 2-메틸-1-펜틸티오기, 3-메틸-1-펜틸티오기, 4-메틸-1-펜틸티오기, 2-메틸-2-펜틸티오기, 3-메틸-2-펜틸티오기, 4-메틸-2-펜틸티오기, 2-메틸-3-펜틸티오기, 3-메틸-3-펜틸티오기, 2,3-디메틸-1-부틸티오기, 3,3-디메틸-1-부틸티오기, 2,2-디메틸-1-부틸티오기, 2-에틸-1-부틸티오기, 3,3-디메틸-2-부틸티오기, 2,3-디메틸-2-부틸티오기 등을 들 수 있다.

「C₁ _- ₆알킬티오기」의 바람직한 예로서는 메틸티오기, 에틸티오기, 1-프로필티오기(n-프로필티오기), 2-프로필티오기(i-프로필티오기), 2-메틸-1-프로필티오기(i-부틸티오기), 2-메틸-2-프로필티오기(t-부틸티오기), 1-부틸티오기(n-부틸티오기), 2-부틸티오기(s-부틸티오기) 를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₃ _- ₈시클로알콕시기」란 상기 정의 「C₃ _- ₈시클로알킬기」의 말단에 산소 원자가 결합한 기인 것을 의미하고, 구체예로서는 시클로프로폭시기, 시클로부톡시기, 시클로펜틸옥시기, 시클로헥실옥시기, 시클로헵틸옥시기, 시클로옥틸옥시기, 비시클로[2.1.0]펜틸옥시기, 비시클로[3.1.0]헥실옥시기, 비시클로[2.1.1]헥실옥시기, 비시클로[4.1.0]헵틸옥시기, 비시클로[2.2.1]헵틸옥시기(노르보르닐옥시기), 비시클로[3.3.0]옥틸옥시기, 비시클로[3.2.1]옥틸옥시기, 비시클로[2.2.2]옥틸옥시기 등을 들 수 있다.

「C₃ _- ₈시클로알콕시기」의 바람직한 예로서는, 시클로프로폭시기, 시클로부톡시기, 시클로펜틸옥시기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「모노-C₁ _- ₆알킬아미노기」란 아미노기 중의 1 개의 수소 원자를 상기 정의 「C₁ _- ₆알킬기」로 치환한 기를 의미하고, 구체예로서는 메틸아미노기, 에틸아미노기, 1-프로필아미노기(n-프로필아미노기), 2-프로필아미노기(i-프로필아미노기), 2-메틸-1-프로필아미노기(i-부틸아미노기), 2-메틸-2-프로필아미노기(t-부틸아미노기), 1-부틸아미노기(n-부틸아미노기), 2-부틸아미노기(s-부틸아미노기), 1-펜틸아미노기, 2-펜틸아미노기, 3-펜틸아미노기, 2-메틸-1-부틸아미노기, 3-메틸-1-부틸아미노기, 2-메틸-2-부틸아미노기, 3-메틸-2-부틸아미노기, 2,2-디메틸-1-프로필아미노기, 1-헥실아미노기, 2-헥실아미노기, 3-헥실아미노기, 2-메틸-1-펜틸아미노기, 3-메틸-1-펜틸아미노기, 4-메틸-1-펜틸아미노기, 2-메틸-2-펜틸아미노기, 3-메틸-2-펜틸아미노기, 4-메틸-2-펜틸아미노기, 2-메틸-3-펜틸아미노기, 3-메틸-3-펜틸아미노기, 2,3-디메틸-1-부틸아미노기, 3,3-디메틸-1-부틸아미노기, 2,2-디메틸-1-부틸아미노기, 2-에틸-1-부틸아미노기, 3,3-디메틸-2-부틸아미노기, 2,3-디메틸-2-부틸아미노기 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「디-C₁ _- ₆알킬아미노기」란, 아미노기 중의 2 개의 수소 원자를 각각 동일한 또는 상이한, 상기 정의 「C₁ _- ₆알킬기」로 치환한 기를 의미하고, 구체예로서는 N,N-디메틸아미노기, N,N-디에틸아미노기, N,N-디-n-프로필아미노기, N,N-디-i-프로필아미노기, N,N-디-n-부틸아미노기, N,N-디-i-부틸아미노기, N,N-디-s-부틸아미노기, N,N-디-t-부틸아미노기, N-에틸-N-메틸아미노기, N-n-프로필-N-메틸아미노기, N-i-프로필-N-메틸아미노기, N-n-부틸-N-메틸아미노기, N-i-부틸-N-메틸아미노기, N-s-부틸-N-메틸아미노기, N-t-부틸-N-메틸아미노기 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₂ _- ₇아실기」란 상기 정의의 「C₁ _- ₆알킬기」가 결합한 카르보닐기인 것을 의미하고, 구체예로서는 예를 들어, 아세틸기, 프로피오닐기, 이소프로피오닐기, 부티릴기, 이소부티릴기, 발레릴기, 이소발레릴기, 피발로일기 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「C₂ _- ₇알콕시카르보닐기」란 상기 정의의 「C₁ _- ₆알콕시기」가 결합한 카르보닐기인 것을 의미하고, 구체예로서는, 예를 들어, 메톡시카르보닐기, 에톡시카르보닐기, 1-프로필옥시카르보닐기, 2-프로필옥시카르보닐기, 2-메틸-2-프로폭시카르보닐기 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 「치환기를 갖고 있어도 된다」란 「치환 가능한 부위에, 임의로 조합하여 1 또는 복수개의 치환기를 가져도 된다」는 것을 의미하고, 치환기의 구체예로서는 예를 들어, 할로겐 원자, 수산기, 티올기, 니트로기, 시아노기, 포르밀기, 카르복실기, 아미노기, 실릴기, 메탄술포닐기, C₁ _- ₆알킬기, C₂ _- ₆알케닐기, C₂ _- ₆알키닐기, C₃ _- ₈시클로알킬기, C₆ _- ₁₀아릴기, 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기, 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기, C₁ _- ₆알콕시기, C₁ _- ₆알킬티오기, C₃ _- ₈시클로알콕시기, 모노-C₁ _- ₆알킬아미노기, 디-C₁ _- ₆알킬아미노기, C₂ _- ₇아실기 또는 C₂ _- ₇알콕시카르보닐기 등을 들 수 있다. 단, C₁ _- ₆알킬기, C₂ _- ₆알케닐기, C₂ _- ₆알키닐기, C₃ _- ₈시클로알킬기, C_6-10아릴기, 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기, 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기, C₁ _- ₆알콕시기, C₁ _- ₆알킬티오기, C₃ _- ₈시클로알콕시기, 모노-C₁ _- ₆알킬아미노기, 디-C₁ _- ₆알킬아미노기, C₂ _- ₇아실기 및 C₂ _- ₇알콕시카르보닐기는 각각 독립적으로 하기 치환기군으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 ∼ 3 개의 기를 갖고 있어도 된다.

＜치환기군＞

할로겐 원자, 수산기, 티올기, 니트로기, 시아노기, C₁ _- ₆알킬기, C₃ _- ₈시클로알킬기, C_2-6알케닐기, C_2-6알키닐기, C_6-10아릴기, 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기, 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기, C_1-6알콕시기 및 C_1-6알킬티오기.

본 발명에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은 예를 들어,

일반식 (I)

로 나타내는 화합물을 들 수 있다.

(i) R¹

R¹ 은 식 -V¹-V²-V³ (식 중, V¹ 은 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬렌기를 의미한다 ； V² 는 단결합, 산소 원자, 황 원자, 카르보닐기, 술피닐기, 술포닐기, 식 -CONR⁶- 으로 나타내는 기, 식 -SO₂NR⁶- 으로 나타내는 기, 식 -NR⁶SO₂- 로 나타내는 기, 식 -NR⁶CO- 로 나타내는 기 또는 식 -NR⁶- 으로 나타내는 기를 의미한다 (식 중, R⁶ 은 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기를 의미한다) ； V³ 은 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₆ _- ₁₀아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기를 의미한다) 로 나타내는 기를 의미한다.

R¹ 의 바람직한 예로서는 C₁ _- ₆알킬기를 들 수 있다. 단, 이 경우, R¹ 은 C_1-6알킬기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기, 수산기, C₁ _- ₆알콕시기, 아미노기, 모노-C_1-6알킬아미노기 및 디-C_1-6알킬아미노기에서 선택되는 치환기를 갖고 있어도 된다.

R¹ 의 보다 바람직한 예로서는 메틸기 또는 식

(식 중, R^a3 은 메틸기를 의미한다 ； R^a1 은 수소 원자 또는 수산기를 의미한다 ； R^a2 는 메톡시기, 에톡시기, 1-피롤리디닐기, 1-피페리디닐기, 4-모르폴리닐기, 디메틸아미노기 또는 디에틸아미노기를 의미한다) 중 어느 하나로 나타내는 기를 들 수 있다.

R¹ 의 더욱 바람직한 예로서는 메틸기 또는 2-메톡시에틸기를 들 수 있다.

(ii) R²

R² 는 시아노기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알콕시기, 카르복실기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₇알콕시카르보닐기 또는 식 -CONV^a11V^a12 (식 중, V^a11 은 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_2-6알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_3-8시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_6-10아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기를 의미한다 ； V^a12 는 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₆ _- ₁₀아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기, 수산기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알콕시기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알콕시기를 의미한다) 로 나타내는 기를 의미한다.

R² 의 바람직한 예로서는, 시아노기 또는 식 -CONV^a11V^a12 (식 중, V^a11 및 V^a12 는 상기 정의와 동일한 의미이다) 로 나타내는 기를 들 수 있다.

R² 의 더욱 바람직한 예로서는, 시아노기 또는 식 -CONHV^a16 (식 중, V^a16 은 수소 원자, C₁ _- ₆알킬기, C₃ _- ₈시클로알킬기, C₁ _- ₆알콕시기 또는 C₃ _- ₈시클로알콕시기를 의미한다. 단, V^a16 은 할로겐 원자, 시아노기, 수산기 및 C₁ _- ₆알콕시기에서 선택되는 치환기를 갖고 있어도 된다) 로 나타내는 기를 들 수 있다.

R² 의 더욱 바람직한 예로서는, 식 -CONHV^a17 (식 중, V^a17 은 수소 원자, C₁ _- ₆알킬기 또는 C₁ _- ₆알콕시기를 의미한다) 로 나타내는 기를 들 수 있다.

R² 의 가장 바람직한 예로서는, 식 -CONHV^a18 (식 중, V^a18 은 수소 원자, 메틸기 또는 메톡시기를 의미한다) 로 나타내는 기를 들 수 있다.

(iii) Y¹

Y¹ 은 식

또는

(식 중, R⁷ 및 R⁸ 은 각각 독립적으로 수소 원자, 할로겐 원자, 시아노기, 니트로기, 아미노기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_3-8시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_1-6알콕시기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬티오기, 포르밀기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₇아실기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₇알콕시카르보닐기 또는 식 -CONV^d1V^d2 (식 중, V^d1 및 V^d2 는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기를 의미한다) 로 나타내는 기를 의미한다 ；

W¹ 및 W² 는 각각 독립적으로 치환기를 갖고 있어도 되는 탄소 원자 또는 질소 원자를 의미한다) 로 나타내는 기를 의미한다.

Y¹ 의 바람직한 예로서는, 식

(식 중, R⁷¹ 은 수소 원자 또는 할로겐 원자를 의미한다) 로 나타내는 기를 들 수 있다.

(iv) R³ 및 R⁴

R³ 및 R⁴ 는 각각 독립적으로 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₇아실기 또는 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₇알콕시카르보닐기를 의미한다.

R³ 및 R⁴ 의 바람직한 예로서는 수소 원자를 들 수 있다.

(v) R⁵

R⁵ 는 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₃ _- ₈시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₆ _- ₁₀아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 5 ∼ 10 원자 헤테로아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기를 의미한다.

R⁵ 의 바람직한 예로서는, 수소 원자, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₁ _- ₆알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알케닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C₂ _- ₆알키닐기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_3-8시클로알킬기, 치환기를 갖고 있어도 되는 C_6-10아릴기, 치환기를 갖고 있어도 되는 3 ∼ 10 원자 비방향족 헤테로 고리형기를 들 수 있다.

R⁵ 의 보다 바람직한 예로서는, 수소 원자, C₁ _- ₆알킬기, C₃ _- ₈시클로알킬기 또는 C₆ _- ₁₀아릴기 (단, R⁵ 는 할로겐 원자 및 메탄술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 치환기를 갖고 있어도 된다) 를 들 수 있다.

R⁵ 의 더욱 바람직한 예로서는, 메틸기, 에틸기 또는 시클로프로필기를 들 수 있다.

또, 일반식 (I) 로 나타내는 화합물의 바람직한 예로서는,

N-(4-(6-시아노-7-(2-메톡시에톡시)-4-퀴놀릴)옥시-2-플루오로페닐)-N'-(4-플루오로페닐)우레아,

N-(2-클로로-4-((6-시아노-7-((1-메틸-4-피페리딜)메톡시)-4-퀴놀릴)옥시)페닐)-N'-시클로프로필우레아,

N-(4-((6-시아노-7-(((2R)-3-(디에틸아미노)-2-히드록시프로필)옥시)-4-퀴놀릴)옥시)페닐)-N'-(4-플루오로페닐)우레아,

N-(4-((6-시아노-7-(((2R)-2-히드록시-3-(1-피롤리디노)프로필)옥시)-4-퀴놀릴)옥시)페닐)-N'-(4-플루오로페닐)우레아,

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-(2-메톡시에톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-시클로프로필-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-(2-메톡시에틸)-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-(2-플루오로에틸)-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메톡시-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-에틸-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-플루오로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-(2-메톡시 에톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-(2-히드록시 에톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-((2S)-2,3-디히드록시프로필)옥시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(메틸아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(에틸아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메톡시-4-(3-클로로-4-(((에틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-(2-에톡시에톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(4-((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노페녹시)-7-(2-메톡시에톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N-(2-플루오로-4-((6-카르바모일-7-메톡시-4-퀴놀릴)옥시)페닐)-N＇-시클로프로필우레아,

N6-(2-히드록시에틸)-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(1-프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(cis-2-플루오로-시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-(2-메톡시에톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((에틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-(2-(4-모르폴리노)에톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(2-플루오로에틸아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-((2R)테트라히드로-2-푸라닐메틸)-4-(3-클로로-4-(((메틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-플루오로-4-(에틸아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-클로로-4-(((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-((2R)-2-히드록시-3-(1-피롤리디노)프로폭시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((메틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-((2R)-3-디에틸아미노-2-히드록시프로폭시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((에틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-((2R)-3-디에틸아미노-2-히드록시프로폭시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((메틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-((2R)-2-히드록시-3-(1-피롤리디노)프로폭시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((에틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-((2R)-2-히드록시-3-(1-피롤리디노)프로폭시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((메틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-((1-메틸-4-피페리딜)메톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-메틸-4-(3-클로로-4-(((에틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-((1-메틸-4-피페리딜)메톡시)-6-퀴놀린카르복사미드,

N-(4-(6-시아노-7-(2-메톡시에톡시)-4-퀴놀릴)옥시-2-플루오로페닐)-N'-시클로프로필우레아,

N-(4-(6-시아노-7-(3-(4-모르폴리노)프로폭시)-4-퀴놀릴)옥시페닐)-N'-(3-(메틸술포닐)페닐)우레아,

4-(4-((시클로프로필아미노)카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(3-플루오로-4-((2-플루오로에틸아미노)카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

N6-(2-에톡시에틸)-4-(3-클로로-4-(((메틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드,

4-(4-(3-에틸우레이도)-3-플루오로-페녹시)-7-메톡시퀴놀린-6-카르복실릭 엑시드(2-시아노에틸)아미드

및

N-(4-(6-(2-시아노에틸)카르바모일-7-메톡시-4-퀴놀릴)옥시-2-플루오로페닐)-N'-시클로프로필우레아를 들 수 있다.

또한, 일반식 (I) 로 나타내는 화합물의 보다 바람직한 예로서는,

4-(3-클로로-4-(메틸아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드

및

N6-메톡시-4-(3-클로로-4-(((에틸아미노)카르보닐)아미노)페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드를 들 수 있다.

또, 일반식 (I) 로 나타내는 화합물의 더욱 바람직한 예로서는, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 (식 (II) 참조) 를 들 수 있다.

RET 키나아제 저해 물질의 가장 바람직한 예로서는, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드의 메탄술폰산염을 들 수 있다.

일반식 (I) 로 나타내는 화합물은 공지된 방법으로 제조할 수 있고, 예를 들어, 국제 공개 제02/32872호 팜플렛 (WO02/32872) 및 국제 공개 제2005/063713호 팜플렛 (WO2005/063713) 에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.

또, 본 발명에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은 예를 들어,

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실릭 엑시드(2-디에틸아미노에틸)아미드 (이하,「SU11248」라고도 한다. Clinical Cancer Research, 9, 327-337, 2003, Journal of Medicinal Chemistry., 46 : 1116-9, 2003., WO01/060814) (식 (III) 참조),

N-｛2-클로로-4-［(6,7-디메톡시-4-퀴놀릴)옥시］페닐｝-N＇-(5-메틸-3-이소옥사졸릴)우레아 (이하, 「KRN951」라고도 한다. WO02/088110) (식 (IV) 참조),

4-［(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일)옥시］-6-메톡시-7-［3-(피롤리딘-1-일) 프로폭시］퀴나졸린 (이하, 「AZD2171」라고도 한다. Cancer Research. 65 : 4389-400, 2005, WO00/47212) (식 (V) 참조),

등을 들 수 있다.

SU11248, KRN951 및 AZD2171 은 공지된 방법으로 제조할 수 있고, 예를 들어, 각각의 문헌에 기재된 방법으로 제조할 수 있다.

본 발명에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은 산 또는 염기와 약리학적으로 허용되는 염을 형성하는 경우도 있다. 본 발명에 있어서의 상기 RET 키나아제 저해 물질은 이들의 약리학적으로 허용되는 염도 포함한다. 산과의 염으로서는 예를 들어, 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 인산염 등의 무기산염 및 포름산, 아세트산, 락트산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 시트르산, 타르타르산, 스테아르산, 벤조산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 트리플루오로아세트산 등의 유기산염 등을 들 수 있다. 또, 염기와의 염으로서는 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리금속염, 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리토금속염, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 디시클로헥실아민, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 아르기닌, 리신 등의 유기 염기염, 암모늄염 등을 들 수 있다.

또, 본 발명에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은, 이들 화합물의 용매화물 및 광학 이성체가 존재하는 경우에는 그들의 용매화물 및 광학 이성체가 포함된다. 용매화물은 예를 들어, 수화물, 비수화물 등을 들 수 있고, 바람직하게는 수화물을 들 수 있다. 용매는 예를 들어, 물, 알코올 (예를 들어, 메탄올, 에탄올, n-프로판올), 디메틸포름아미드 등을 들 수 있다.

또한 본 발명에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은 결정이어도 되고 무결정이어도 되며, 또, 결정 다형이 존재하는 경우에는 그들 중 어느 하나의 결정형의 단일물이어도 되고 혼합물이어도 된다.

또, 본 발명에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은 생체 내에서 산화, 환원, 가수 분해, 포함 등의 대사를 받는 RET 키나아제 저해 물질도 포함한다. 또, 본 발명에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은 생체 내에서 산화, 환원, 가수 분해 등의 대사를 받아 RET 키나아제 저해 물질을 생성하는 화합물도 포함한다.

또한, 본 발명의 RET 키나아제 저해 물질은 RET 키나아제 활성을 저해하는 활성 (「RET 키나아제 저해 활성」이라고도 칭하는 경우가 있다) 을 갖는 것이다. 본 발명의 RET 키나아제 저해 물질은 RET 가 갖는 키나아제 활성을 저해하는 작용을 가지면 되고, 그 저해의 정도에는 한정되지 않는다. RET 키나아제 저해 물질이 갖는 RET 키나아제 저해 활성의 측정 방법은 예를 들어, Cell free 키나아제 어세이, 웨스턴 블롯, 세포 증식 어세이, 생존 어세이 등을 들 수 있다. 세포 증식 어세이는 예를 들어, 트리튬티미딘 주입법, MTT 법, XTT 법 (cell counting kit-8 (도진 화학 주식회사)), 알라머 블루법, 뉴트럴 레드법, BrdU 법, Ki67 염색법, PCNA 염색법 등을 들 수 있다. 생존 어세이는 예를 들어, TUNNEL 염색법, Caspase-3 절단 검출법, PARP 절단 검출법 등을 들 수 있다. 이들의 방법은 통상적인 방법에 의해 실시할 수 있다 (Blood. 2005, 105, 2941-2948., Molecular Cancer Therapeutics. 2005, 4, 787-798).

이하, RET 키나아제 저해 활성의 측정 방법의 일례에 대해 기재한다.

RET 키나아제 저해 활성은 Cell free 키나아제 어세이에 의해 측정할 수 있다.

RET 는 통상적인 방법에 따라 유전자 공학적 수법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, Baculovirus Expression System 의 방법에 의해, 곤충 세포 (Spondoptea frugiperda 9 (Sf9)) 에 인간 리컴비넌트 GST 융합 단백질, 인간 리컴비넌트 히스티딘태그 융합 단백질 등으로서 발현시킬 수 있다. 또, 발현시킨 리컴비넌트 단백질은 어피니티 크로마토그래피 (예를 들어, GSH-agarose (시그마사 제조) 또는 Ni-NTH-agarose (키아겐사 제조) 등) 에 의해 정제할 수 있다. 단백질의 순도 및 동정은 SDS-PAGE, 은염색 및 RET 에 대한 특이적 항체를 사용한 웨스턴 블롯에 의해 확인할 수 있다.

Cell free 키나아제 어세이는 이하와 같이 실시할 수 있다.

먼저, 플레이트 (예를 들어, 96 웰, 384 웰 등) 의 각 웰에 표준 반응액 20㎕, ATP 용액 5㎕, 피검 물질 5㎕, RET 리컴비넌트 단백질 50ng 을 함유하는 용액 10㎕ 및 비오틴화 수식 Poly(Glu, Tyr)_4:1125ng 을 함유하는 용액 10㎕ 의 혼합 용액을 순서대로 첨가할 수 있다.

이 키나아제 반응액 50㎕ 에는 60mM HEPES-NaOH (pH7.5), 3mM MgCl₂, 3mM MnCl₂, 3μM Na-orthovanadate, 1.2mM DTT, 50㎍/㎖ PEG₂₀₀₀₀, 1μM ATP 등을 함유시키도록 할 수 있다. 이 때, ATP 는 [γ-³²P]-ATP, [γ-³³P]-ATP 등의 방사성 동위체로 표지한 ATP 를 사용할 수 있다.

반응액을 소정 시간 인큐베이션한 후, 2% (v/v) H₃PO₄ 용액 50㎕ 를 첨가함으로써 반응을 정지시킬 수 있다.

각 웰은 적절히 세정 조작을 실시할 수 있다.

ATP 의 주입량을 측정함으로써 RET 키나아제 저해 활성을 평가할 수 있다. 상기의 방사성 동위체 표지 ATP 를 사용한 경우에는, ATP 의 주입량은 플레이트 상에 포착된 방사 활성을 신틸레이션 카운터로 측정함으로써 평가할 수 있다.

상기의 방법에 의해, 화합물의 RET 키나아제 저해 활성을 평가할 수 있다.

(5) 치료제, 의약 조성물, 치료 방법

본 발명의 치료제는 RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 것이고, 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제이다. 또, 본 발명의 치료제는 RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 것이며, 갑상선암에 대한 치료제이다. 본 발명의 치료제는, 바람직하게는 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 질환에 대해 사용된다.

본 발명의 치료제는 상기 질환의 치료가 필요한 생체, 즉, 포유 동물 (예, 인간, 래트, 토끼, 양, 돼지, 소, 고양이, 개, 원숭이 등) 에 대해 투여할 수 있다.

또, 본 발명의 의약 조성물은 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물이다.

본 발명의 의약 조성물은 변이형 RET 를 발현하고 있는 것을 특징으로 하는 질환에 대한 치료제로서 사용할 수 있다. 변이형 RET 를 발현하고 있는 것을 특징으로 하는 질환으로서는, 예를 들어, 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증, 소화관의 점막 신경종 등을 들 수 있다.

본 발명의 의약 조성물은 생체, 즉, 포유 동물 (예, 인간, 래트, 토끼, 양, 돼지, 소, 고양이, 개, 원숭이 등) 에 대해 투여할 수 있다. 본 발명에 있어서 당해 생체는, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체이다.

본 발명에 있어서 치료제로는, 예후 개선제 및 재발 예방제 등도 포함된다. 암 또는 종양의 치료제의 경우에는, 치료제로는 항종양제 및 암전이 억제제 등도 포함된다.

치료의 효과는 X 레이 사진, CT 등의 소견이나 생검의 병리 조직 진단에 의해, 또는 질환 마커의 값에 의해 확인할 수 있다.

본 발명의 치료제 또는 의약 조성물을 사용하는 경우, RET 키나아제 저해 물질의 투여량은 증상의 정도, 환자의 연령, 성별, 체중, 감수성 차, 투여 방법, 투여 시기, 투여 간격, 의약 제제의 성질, 조제, 종류, 유효 성분의 종류 등에 따라 상이하고, 특별히 한정되지 않지만, 통상 성인 (체중 60㎏) 1 일당 0.1 ∼ 1000㎎, 바람직하게는 0.5 ∼ 100㎎, 더욱 바람직하게는 1 ∼ 30㎎ 이고, 이것을 통상 1 일 1 ∼ 3 회로 나누어 투여할 수 있다.

본 발명의 RET 키나아제 저해 물질을 유효 성분으로서 함유하는 치료제 또는 의약 조성물은 그대로 사용할 수도 있지만, 통상, 적당한 첨가제를 혼화하여 제제화한 것을 사용할 수도 있다.

상기 첨가제로서는 일반적으로 의약에 사용되는 부형제, 결합제, 활택제, 붕괴제, 착색제, 교미 교취제, 유화제, 계면 활성제, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충제, 방부제, 항산화제, 안정화제, 흡수 촉진제 등을 들 수 있고, 원하는 바에 따라 이들을 적절히 조합하여 사용할 수도 있다. 이하에 상기 첨가제의 예를 든다.

부형제 ： 젖당, 자당, 포도당, 옥수수 전분, 만니톨, 소르비톨, 전분, α화 전분, 덱스트린, 결정 셀룰로오스, 경질 무수 규산, 규산알루미늄, 규산칼슘, 메타규산알루민산마그네슘, 인산수소칼슘

결합제 ： 예를 들어 폴리비닐알코올, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 아라비아 고무, 트래거캔스, 젤라틴, 쉘락, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 마크로골

활택제 ： 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 푸마르산스테아릴나트륨, 탤크, 폴리에틸렌글리콜, 콜로이드실리카

붕괴제 ： 결정 셀룰로오스, 한천, 젤라틴, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨, 시트르산칼슘, 덱스트린, 펙틴, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스칼슘, 크로스카르멜로오스나트륨, 카르복시메틸녹말, 카르복시메틸녹말나트륨

착색제 ： 3 이산화철, 황색 3 이산화철, 카르민, 캐러멜, β-카로틴, 산화티탄, 탤크, 인산리보플라빈나트륨, 황색 알루미늄레이크 등, 의약품에 첨가하는 것이 허가되어 있는 것

교미 교취제 ： 코코아말, 박하뇌, 방향산, 박하유, 용뇌, 계피말

유화제 또는 계면 활성제 ： 스테아릴트리에탄올아민, 라우릴황산나트륨, 라우릴아미노프로피온산, 레시틴, 모노스테아르산글리세린, 자당지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르

용해 보조제 ： 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 벤조산벤질, 에탄올, 콜레스테롤, 트리에탄올아민, 탄산나트륨, 시트르산나트륨, 폴리솔베이트 80, 니코틴산아미드

현탁화제 ： 상기 계면 활성제 외에, 예를 들어 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등의 친수성 고분자

등장화제 ： 포도당, 염화나트륨, 만니톨, 소르비톨

완충제 ： 인산염, 아세트산염, 탄산염, 시트르산염 등의 완충액

방부제 ： 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로로부탄올, 벤질알코올, 페네틸알코올, 데히드로아세트산, 소르브산

항산화제 ： 황산염, 아스코르브산, α-토코페롤

안정화제 ： 일반적으로 의약에 사용되는 것

흡수 촉진제 ： 일반적으로 의약에 사용되는 것

또, 필요에 따라, 비타민류, 아미노산 등의 성분을 배합해도 된다.

또, 상기 제제로서는 정제, 산제, 과립제, 세립제, 캡슐제, 시럽제, 트로키제, 흡입제 등의 경구제 ； 좌제, 연고제, 안연고제, 테이프제, 점안제, 점비제, 점이제, 파프제, 로션제 등의 외용제 또는 주사제를 들 수 있다.

상기 경구제는 상기 첨가제를 적절히 조합하여 제제화할 수 있다. 또한, 필요에 따라 이들의 표면을 코팅해도 된다.

상기 외용제는 상기 첨가제 중, 특히 부형제, 결합제, 교미 교취제, 유화제, 계면 활성제, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 방부제, 항산화제, 안정화제 또는 흡수 촉진제를 적절히 조합하여 제제화할 수 있다.

상기 주사제는 상기 첨가제 중, 특히 유화제, 계면 활성제, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충제, 방부제, 항산화제, 안정화제 또는 흡수 촉진제를 적절히 조합하여 제제화할 수 있다. 주사제는 점적, 근주, 피하주, 피내주, 정주 등의 방법으로 사용할 수 있다.

본 발명은 RET 키나아제 저해 물질을 환자에게 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는, 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료 방법을 포함하는 것이다. 또, 본 발명은 RET 키나아제 저해 물질을 환자에게 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 갑상선암에 대한 치료 방법을 포함하는 것이다.

또한 본 발명은 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 RET 키나아제 저해 물질을 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 질환의 치료 방법도 포함하는 것이다. 본 발명에 있어서 상기 질환은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환인 것이 바람직하다.

본 발명의 치료 방법에 있어서 RET 키나아제 저해 물질의 투여 경로 및 투여 방법은 특별히 한정되지 않지만, 상기 본 발명의 치료제 또는 의약 조성물의 기재를 참조할 수 있다.

본 발명은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용을 포함하는 것이다. 또, 본 발명은, 갑상선암에 대한 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용을 포함하는 것이다.

또한, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용도 함유하는 것이다. 본 발명의 사용에 있어서 상기 의약 조성물은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제로서 유용하다.

본 발명은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질을 포함하는 것이다. 또, 본 발명은 갑상선암에 대한 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질을 포함하는 것이다.

또한, 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물을 위한 RET 키나아제 저해 물질도 포함하는 것이다. 본 발명에 있어서 상기 의약 조성물은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료제로서 유용하다.

또, 본 발명에 의해 일반식 (I) 로 나타내는 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 RET 키나아제 저해제가 제공된다.

일반식 (I) 로 나타내는 화합물은 상기와 같은데, 바람직하게는 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드이다.

또한, 본 발명에 의해 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카르복실릭 엑시드(2-디에틸아미노에틸)아미드 (SU11248), N-｛2-클로로-4-［(6,7-디메톡시-4-퀴놀릴)옥시］페닐｝-N＇-(5-메틸-3-이소옥사졸릴)우레아 (KRN951)

및

4-［(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일)옥시］-6-메톡시-7-［3-(피롤리딘-1-일) 프로폭시］퀴나졸린 (AZD2171) 으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 RET 키나아제 저해제가 제공된다.

본 발명의 RET 키나아제 저해제가 갖는 RET 키나아제 저해 활성은 상기 서술한 바와 같이 측정할 수 있다.

본 발명의 RET 키나아제 저해제는 화합물을 그대로 사용할 수도 있고, 상기의 적당한 첨가제를 혼화하여 제제화한 것을 사용할 수도 있다.

본 발명 RET 키나아제 저해제의 용법, 용량은 상기의 치료제 또는 의약 조성물의 기재를 참조할 수 있다.

또, 본 발명에는 RET 키나아제 저해제의 제조를 위한 일반식 (I) 로 나타내는 화합물, SU11248, KRN951 및 AZD2171 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물의 사용도 포함된다.

또한 본 발명은 일반식 (I) 로 나타내는 화합물, SU11248, KRN951 및 AZD2171 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 화합물, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물에 의한 RET 키나아제의 저해 방법도 포함된다. 본 발명의 방법에 있어서, 당해 화합물 등의 용법, 용량은 특별히 한정되지 않는데, 상기의 치료제 또는 의약 조성물의 기재를 참조할 수 있다.

2. 감수성을 예측하는 방법

본 발명은, 세포 중의 RET 변이의 유무를 지표로 하여, 환자가 본 발명의 RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성인지의 여부를 예측하는 방법을 제공한다.

RET 키나아제 저해 물질에 대해 감수성이 높은 환자는 당해 물질에 의한 치료 효과를 더욱 기대할 수 있는 환자이다.

본 발명의 방법에 있어서, 환자는 바람직하게는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환의 환자이다.

(1) 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 공정

본 공정에 있어서 세포는 환자로부터 취출된 세포가 바람직하다. 그리고, 세포는 예를 들어, 환자로부터 외과적 처치 (예를 들어, 바이옵시 등) 로 적출함으로써 얻을 수 있다. 또, 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선암, 갑상선 유두암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종 등의 유전적인 변이에서 기인하는 질환에서는, 세포는 혈액 세포를 사용하는 것이 바람직하다.

RET 변이의 유무는 상기 서술한 방법에 의해 측정할 수 있다.

(2) 환자가 RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성인지의 여부를 예측하는 공정

본 공정에서는, 바람직하게는 (1) 에서 측정한 세포 중의 RET 변이의 유무를 지표로 하여, 환자가 RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성인지의 여부를 예측할 수 있다. 즉, 측정한 세포에 있어서 변이형 RET 를 발현하고 있는 경우에는 환자가 RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성이라고 판단할 수 있다.

본 발명의 다른 양태로서 (1) 의 측정 결과를 지표에 이용하고, RET 키나아제 저해 물질에 대한 세포의 감수성을 분석하는 방법을 들 수 있다. 즉, (1) 의 측정 결과로부터, 세포가 변이형 RET 를 발현하고 있을 때에는, 당해 세포는 변이형 RET 를 발현하고 있지 않은 세포에 비해 RET 키나아제 저해 물질에 대한 높은 감수성을 나타낸다고 판단할 수 있다.

또, 본 발명의 다른 양태로서 (1) 의 측정 결과를 지표에 이용하고, RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성을 나타내는 세포 또는 환자를 선택하는 방법을 들 수 있다. 즉, (1) 의 측정 결과로부터, 세포가 변이형 RET 를 발현하고 있을 때에는, 당해 세포 또는 당해 세포를 갖는 환자는 RET 키나아제 저해 물질에 대한 고감수성을 나타낸다고 판단할 수 있다. 따라서, 이와 같은 세포 또는 환자를 RET 키나아제 저해 물질에 대한 고감수성을 나타내는 세포 또는 환자로서 선택할 수 있다.

또, 본 발명의 다른 양태로서 (1) 의 측정 결과를 지표에 이용하여, RET 키나아제 저해 물질에 대한 감수성을 분석하고, 분석 결과에 따라 환자를 분류하는 방법을 들 수 있다. 즉, 본 발명의 방법에 있어서, (1) 의 측정 결과로부터 상기와 같이 RET 키나아제 저해 물질에 대한 감수성을 분석하고, 이 분석 결과에 기초하여 소정의 세포를 포함하는 환자를 분류할 수 있다. 예를 들어, 환자를 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 포함하는 그룹과, 발현하고 있지 않은 세포를 포함하는 그룹으로 분류할 수 있다. 혹은, 환자를 RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성을 나타내는 그룹과, 그 이외의 그룹으로 분류할 수 있다.

또, 본 발명의 다른 양태로서 (1) 의 측정 결과로부터 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 갖는 환자를 선택하는 것을 포함하는, RET 키나아제 저해 물질의 투여 대상이 되는 환자를 선택하는 방법을 들 수 있다. 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 갖는 환자는 RET 키나아제 저해 물질의 투여 대상이 된다.

또, 본 발명의 다른 양태로서 (1) 의 측정 결과로부터 환자에 대한 RET 키나아제 저해 물질의 치료 효과를 예측하는 방법을 들 수 있다. 본 발명의 방법에 있어서, (1) 의 측정 결과, 세포가 변이형 RET 를 발현하고 있을 때에는 RET 키나아제 저해 물질에 대해 높은 감수성을 나타낸다고 판단할 수 있기 때문에, 당해 세포 또는 당해 세포를 갖는 환자에 있어서의 당해 물질의 치료 효과는 높다고 예측할 수 있다.

또, 본 발명에는 환자의 RET 키나아제 저해 물질에 대한 감수성의 정도를 예측하기 위해, 당해 환자 유래의 세포 중의 RET 변이의 유무를 측정하는 방법이 포함된다. 당해 측정 방법은 상기 (1) 에 나타내는 바와 같다.

RET 변이의 유무를 측정함으로써, 환자의 RET 키나아제 저해 물질에 대한 감수성의 정도를 예측할 수 있게 된다.

본 공정에 있어서 RET 키나아제 저해 물질은 상기 서술한 바와 같은데, 바람직하게는 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 혹은 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물이다.

본 발명에 관련된 방법은 RET 키나아제 저해 물질을 환자에게 투여하기 전에, 당해 환자에 있어서의 RET 키나아제 저해 물질의 유효성의 정도를 예측하는 데 사용할 수 있다. 그리고, RET 키나아제 저해 물질이 갖는 효과를 더욱 기대할 수 있는 환자를 선택하여 질환의 치료를 실시할 수 있다. 따라서, 본 발명은 임상면에서 매우 유용하다.

본 발명은 본 발명의 방법에 사용하기 위한 RET 변이의 유무를 측정하기 위한 검사용 키트를 제공한다. 본 발명의 검사용 키트는, 측정에 있어서 사용되는 상기 시약을 포함하는 것이다. 본 발명의 검사용 키트에 의해 환자가 RET 키나아제 저해 물질에 대해 고감수성인지의 여부를 예측할 수 있다.

또, 본 발명은 상기 예측을 위한 당해 검사용 키트의 사용도 포함한다.

이하에, 구체적인 예로써 본 발명을 나타내는데, 본 발명은 이것에 한정되는 것은 아니다.

［실시예 1］RET 키나아제 저해 물질의 RET 키나아제 저해 활성의 측정

피검 물질의 RET 키나아제 저해 활성은 ProQinase 사 (Freiburg, 독일, GmbH) 에 대한 위탁 시험으로서 실시되었다. RET 키나아제 저해 활성은, 구체적으로는 하기와 같이 측정하였다.

1. RET 의 발현 및 정제

RET 는 Baculovirus Expression System 의 방법에 의해, 곤충 세포 (Spondoptea frugiperda 9 (Sf9)) 에 인간 리컴비넌트 GST 융합 단백질로서 발현시켰다 (이하, 「RET 리컴비넌트 단백질」이라고 칭하는 경우가 있다). 발현시킨 RET 리컴비넌트 단백질은 GSH-agarose (시그마사 제조) 또는 Ni-NTH-agarose (키아겐사 제조) 를 사용한 어피니티 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 단백질의 순도 및 동정은, SDS-PAGE 은염색 그리고 RET 에 대한 특이적 항체를 사용한 웨스턴 블롯법에 의해 확인하였다.

2. RET 키나아제 활성에 대한 저해 활성의 측정

먼저, 스트렙토아비딘 코트된 96 웰 FlashPlate (Perkin Elmer/NEM 사 제조) 의 각 웰에 표준 반응액 20㎕, ATP 용액 (H₂O 로 희석) 5㎕, 피검 물질 5㎕ (10% 디메틸술폭시드 수용액), 및 RET 리컴비넌트 단백질 50ng 을 함유하는 용액 10㎕ 와 비오틴화 수식 Poly (Glu, Tyr)_4:1 125ng 을 함유하는 용액 10㎕ 의 혼합 용액을 순서대로 첨가하였다. 이 키나아제 반응액 50㎕ 에는 60mM HEPES-NaOH (pH7.5), 3mM MgCl₂, 3mM MnCl₂, 3μM Na-orthovanadate, 1.2mM DTT, 50㎍/㎖ PEG₂₀₀₀₀, 1μM [γ-³³P]-ATP 가 함유되어 있었다.

피검 물질에는 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드(메탄술폰산염), 6-［2-(메틸카르바모일)페닐술파닐］-3-E-［2-(피리딘-2-일)에테닐］인다졸 (이하, 「AG013736」이라고 칭하는 경우가 있다), SU11248, KRN951 또는 AZD2171 을 사용하였다.

또한, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드는 국제 공개 제02/32872호 팜플렛 (WO02/32872) 및 국제 공개 제2005/063713호 팜플렛 (WO2005/063713) 의 기재에 기초하여 제조하였다.

또, AG013736 은 국제 공개 제01/002369호 팜플렛 (WO01/002369) 의 기재에 기초하여 제조하였다. 또한, SU11248 은 국제 공개 제01/060814호 팜플렛 (WO01/060814) 의 기재에 기초하여 제조하였다. 또, KRN951 은 국제 공개 제02/088110호 팜플렛 (WO02/088110) 의 기재에 기초하여 제조하였다. AZD2171 은 국제 공개 제00/47212호 팜플렛 (WO00/47212) 의 기재에 기초하여 제조하였다.

다음으로, 반응액을 30℃ 에서 80 분간 인큐베이션한 후, 2% (v/v) H₃PO₄ 용액 50㎕ 를 첨가함으로써 반응을 정지시켰다.

96 웰 플레이트의 각 웰을 0.9% (w/v) 의 NaCl 용액 200㎕ 에 의해 2 회 세정 및 흡인을 실시하였다.

³³P_i 의 주입량은 플레이트 상에 포착된 방사 활성을 microplate scintillation counter (Microbeta, Wallac 제) 에 의해 측정함으로써 평가하였다.

조작은 BeckmanCoulter/Sagian robotic system 에 의해 실시하였다.

RET 키나아제 활성을 50% 저해하는데 필요한 피검 물질의 농도 (IC₅₀) 는 각 농도 (10μM 내지 0.0003μM 까지 10 포인트) 에 있어서의 ³³P 비방사 활성을 이용하고, Prism 3.03 (Windows, Graphpad, San Diego, California, USA) 을 이용하여 산출하였다.

그 때, RET 리컴비넌트 단백질을 함유하지 않고 기질 Poly (Glu, Tyr)_4:1 만을 넣은 경우의 값을 0% 값으로 하고, 피검 물질을 넣지 않고 RET 리컴비넌트 단백질과 기질 Poly (Glu, Tyr)_4: ₁ 를 넣었을 경우의 값을 100% 값으로 하였다.

각 농도의 피검 물질 존재 하에 있어서의 키나아제 활성은, 각각의 방사 활성의 값으로부터 0% 값을 뺀 값이, 100% 값으로부터 0% 값을 뺀 값에 대해 몇 퍼센트에 상당하는지를 산출하고, 이 비율 (%) 에 의해 RET 키나아제 활성을 50% 저해 하는 데 필요한 피검 물질의 농도 (IC₅₀) 를 산출하였다.

그 결과, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드는 RET 키나아제 저해 활성을 갖는 것 (IC₅₀ = 35nM) 이 명백해졌다. 또, SU11248, KRN951, AZD2171 는 RET 키나아제 저해 활성을 갖는 것 (각각 IC₅₀ = 64, 92, 7nM) 이 명백해졌다. AG013736 은 IC₅₀ = 5600nM 이었다. 또한, 각 피검 물질의 RET 키나아제 저해 활성에는 정도의 차이가 있는 것이 명백해졌다.

［실시예 2］인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 에 있어서의 리간드 비의존성 RET 인산화에 대한 RET 키나아제 저해 물질의 효과

1. 세포 추출액의 조제

인간 갑상선 수양암 세포주 (TT, ATCC 로부터 구입) 를 15% FBS 를 함유하는 RPMI1640 배지 (Sigma 사로부터 구입) 에 현탁하였다. 또한, TT 는 야생형 RET 의 아미노산 배열에 있어서, 코돈 634 의 시스테인이 트립토판으로 변이한 RET 를 발현하고 있는 세포이다 (Biochemical and Biophysical Research Communications, 207, 1022-1028, 1995). 그 세포 현탁액 (4×10⁵ 개/㎖) 2㎖/well 을 세포 배양용 6 웰 플레이트 (FALCON 사로부터 구입) 에 첨가하고, 5% CO₂ 인큐베이터 중 (37℃) 에서 하룻밤 배양하였다. 배양 후, 각 웰로부터 상청액을 제거하고, 1.8㎖ 의 15% FBS 를 함유하는 RPMI1640 배지를 첨가하였다. 그것에, 디메틸술폭시드 에 용해시킨 피검 물질 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드(메탄술폰산염) (15% FBS 를 함유하는 RPMI1640 배지로 희석) 를 0.2㎖ 첨가하여, 5% CO₂ 인큐베이터 중 (37℃) 에서 1 시간 배양하였다. 각 웰로부터 상청액을 제거하고, 각 웰을 PBS 400㎕ 로 세정하여, 그곳에 가용화 완충액 (50mM Hepes (pH7.4), 150mM NaCl, 10% (v/v) 글리세롤, 1% Triton X-100, 1.5mM MgCl₂, 1mM EDTA (pH8.0), 100mM NaF, 1mM PMSF, 10㎍/㎖ Aprotinin, 50㎍/㎖ Leupeptin, 1㎍/㎖ Pepstatin A, 1mM Na₃VO₄) 을 100㎕ 첨가하였다. 이 용액을 함유하는 세포를 스크레이퍼로 회수하고, 4℃, 15 분, 15,000rpm 에서 처리하고, 상청액에 SDS buffer 를 첨가한 후에 94℃, 5 분 처리를 실시함으로써 단백질을 가용화시켜, 그것을 세포 추출액으로서 20㎍/10㎕ 로 조제하였다.

2. 전기 영동 및 웨스턴 블로팅

상기 세포 추출액 20㎍/10㎕ 를 4-20% gradient polyacrylamide gel (다이이치 화학 약품 주식회사로부터 구입) 로 전기 영동을 실시하였다. 영동 후, 통상적인 방법에 따라 PVDF 막 (Amersham pharmacia biotech 사로부터 구입) 에 트랜스퍼하였다. 그리고, 트랜스퍼한 멤브레인에 대해 1 차 항체로서 항 RET 항체 (anti-RET, Cell Signaling 사로부터 구입), 항인산화 RET 항체 (anti-phospho RET (Tyr 905), Cell Signaling 사로부터 구입), 항 Erk1/2 항체 (anti-Erk1/2, Cell Signaling 사로부터 구입) 또는 항인산화 Erk1/2 항체 (anti-phospho-Erk1/2, Cell Signaling 사로부터 구입) 를, 2 차 항체로서 horse radish peroxidase 표지 항토끼 IgG 항체 (anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody (Cell Signaling 사로부터 구입)) 를 이용하여 임뮤노 블롯을 실시하였다. 멤브레인을 세정 후, Super Signal (PIERCE 사로부터 구입) 로 발색시켰다.

피검 물질을 첨가하고 있지 않은 세포 추출액을 첨가한 웰의 흡광도를 100% 의 RET 자기 인산화 활성으로 하여, 각 레인의 RET 자기 인산화 활성 (%) 을 구하였다. 피검 물질의 농도를 수 단계로 바꾸고, 각각의 경우에 있어서의 RET 자기 인산화 활성 (%) 을 구하여 피검 물질의 RET 자기 인산화 활성을 50% 저해하는데 필요한 피검 물질의 농도 (IC₅₀) 를 산출하였다.

그 결과, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드는, 농도 의존적으로 RET 의 인산화를 저해시켰다 (IC₅₀ = 27nM) (도 1). 또, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드는 RET 의 하류 분자 중 하나이며 세포 증식 시그널에 관련하는 Erk1/2 의 인산화에 대해서도 RET 키나아제와 동등한 농도로 저해하는 것이 명백해졌다 (도 1).

［실시예 3］인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 의 세포 증식에 대한 RET 키나아제 저해 물질의 효과

인간 갑상선 수양암 세포주 (TT, ATCC 로부터 구입) 를 15% FBS 를 함유하는 RPMI1640 배지 (Sigma 사로부터 구입) 에 현탁하였다. 그 세포 현탁액 (3×10⁴ 개/㎖) 0.1㎖/well 을 세포 배양용 96 웰 플레이트 (NUNC 사로부터 구입) 에 첨가하고, 5% CO₂ 인큐베이터 중 (37℃) 에서 하룻밤 배양하였다. 배양 후, 각 웰에 15% FBS 를 함유하는 RPMI1640 배지로 희석한 피검 물질 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드(메탄술폰산염) 0.1㎖ 를 첨가하고, 추가로 5% CO₂ 인큐베이터 중 (37℃) 에서 10 일간 배양하였다. 배양 후, 각 웰에 Cell Counting Kit-1 (DOJINDO 사로부터 구입) 을 10㎕ 첨가하고, 5% CO₂ 인큐베이터 중 (37℃) 에서 발색 후, 측정 파장을 415㎚, 대조 파장을 660㎚ 로 하여, 각 웰의 흡광도를 플레이트 리더 MTP-500 (코로나 전기사 제조) 을 이용하여 측정하였다. 피검 물질을 첨가하지 않은 웰의 흡광도에 대한 피검 물질을 첨가한 각 웰의 흡광도의 비율 (%) 을 구하여, 이 비율로부터 세포 증식을 50% 저해하는 데 필요한 피검 물질의 농도 (IC₅₀) 를 산출하였다.

그 결과, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드는 인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 의 증식에 대해 IC₅₀ = 78㎚ 의 저해 활성을 갖는 것이 명백해졌다.

［실시예 4］인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 피하 이식 모델에 있어서의 RET 키나아제 저해 물질의 항종양 효과

인간 갑상선 수양암 세포주 (TT, ATCC 로부터 구입) 를 37℃ 하, 5% 탄산 가스 인큐베이터 내에 있어서 RPMI1640 (15% FBS 함) 으로 약 80% 컨플루언트가 될 때까지 배양하여, 통상적인 방법에 따라 트립신 EDTA 에 의해 세포를 회수하였다. 세포를 인산 완충액으로 현탁하여 1×10⁸cells/㎖ 현탁액을 조제하였다. 그리고, 얻어진 세포 현탁액을 0.1㎖ 씩 누드마우스 (찰즈 리버사로부터 구입) 체측 피하에 이식하였다.

이식 후, 종양 체적이 약 100-200㎣ 가 된 시점으로부터, 피검 물질 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드(메탄술폰산염) 을 10㎎/㎏, 30㎎/㎏ 또는 100㎎/㎏, 1 일 1 회, 4 주간의 스케줄로 경구 투여하였다. 종양 장경 및 단경을 디지매틱 캘리퍼 (Mitsutoyo) 로 측정하고, 이하의 식으로 종양 체적을 산출하였다.

종양 체적 (TV) = 종양 장경 (mm) × 종양 단경² (㎟) / 2

그 결과, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드는 인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 피하 이식 모델에 있어서, 용량 의존적으로 항종양 효과를 갖는 것이 명백해졌다 (도 2).

［실시예 5］인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 피하 이식 모델에 있어서의 RET 의 인산화에 대한 RET 키나아제 저해 물질의 효과

인간 갑상선 수양암 세포주 (TT, ATCC 로부터 구입) 를 37℃ 하, 5% 탄산 가스 인큐베이터 내에 있어서 RPMI1640 (15% FBS 함) 으로 약 80% 컨플루언트가 될 때까지 배양하고, 통상적인 방법에 따라 트립신 EDTA 에 의해 세포를 회수하였다. 세포를 인산 완충액으로 현탁하여 1×10⁸cells/㎖ 현탁액을 조제하였다. 그 리고, 얻어진 세포 현탁액을 0.1㎖ 씩 누드마우스 (찰즈 리버사로부터 구입) 체측 피하에 이식하였다.

이식 후, 종양 체적이 약 100-200㎣ 가 된 시점에 있어서, 피검 물질 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드(메탄술폰산염) 10㎎/㎏, 30㎎/㎏ 또는 100㎎/㎏ 을 경구 투여하였다. 투여 후, 2, 8, 12 또는 24 시간 동안 종양을 적출하고, 적출한 종양에 가용화 완충액 (50mM Hepes (pH7.4), 150mM NaCl, 10% (v/v) 글리세롤, 1% Triton X-100, 1.5mM MgCl₂, 1mM EDTA (pH8.0), 100mM NaF, 1mM PMSF, 10㎍/㎖ Aprotinin, 50㎍/㎖ Leupeptin, 1㎍/㎖ Pepstatin A, 1mM Na₃VO₄), 25mM β-glycerophosphate, phosphatase inhibitor cocktail II (SIGMA)) 을 첨가하여 호모디나이즈하였다. 4℃, 15 분, 15,000rpm 으로 처리하고, 상청액에 SDS buffer 를 첨가한 후에 94℃, 5 분 처리를 실시함으로써 단백질을 가용화시켜, 그것을 세포 추출액으로서 20㎍/10㎕ 에 조제하였다. 실시예 2 와 동일한 방법에 의해 상기 세포 추출액으로 전기 영동 및 임뮤노 블롯을 실시하였다.

그 결과, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드는 인간 갑상선 수양암 세포주 (TT) 피하 이식 모델에 있어서, 항종양 효과가 인정된 투여량으로 RET 의 자기 인산화의 저해 활성을 갖는 것이 명백해졌다 (도 3).

이들의 결과로부터 본 발명의 RET 키나아제 저해 물질은, 변이형 RET 를 발 현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 보다 유효한 효과를 기대할 수 있는 것이 나타났다. 그리고, 본 발명의 RET 키나아제 저해 물질은 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환 그리고 갑상선암에 대한 치료제로서 유용하다는 것이 나타났다.

[참고예]

RET 키나아제 저해 물질 중 하나인 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드 제제의 제조법을 이하에 참고예로서 기재한다.

(의약 조성물의 제조)

(1) 1㎎ 정

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드메탄술폰산염의 결정

(C) (이하, 「결정 (C)」라고 칭하는 경우가 있다. 또한, 결정 (C) 는 WO2005/063713 의 실시예 7 에 기재된 방법에 따라 제조한 것이다) 24g 과 무수 경질 규산 (겔화 방지제, 상품명 AEROSIL (등록상표) 200, 일본 아에로질 주식회사) 192g 을 20ℓ 슈퍼 믹서로 혼합 후, 추가로 D-만니톨 (부형제, 토와 화성 공업 주식회사) 1236g, 결정 셀룰로오스 (부형제, 상품명 아비셀 PH101, 아사히 화성 공업 주식회사) 720g, 히드록시프로필셀룰로오스 (결합제, 상품명 HPC-L, 닛폰 소다 주 식회사) 72g 을 첨가하여 혼합하였다. 그 후, 무수 에탄올을 적당량 첨가하고 결정 (C) 을 함유하는 조립물을 얻었다. 이 조립물을 선반식 건조기 (60℃) 로 건조 후, 파워 밀을 이용하여 정립하여 과립을 얻었다. 이 과립과 함께 크로스카르멜로오스나트륨 (붕괴제, 상품명 Ac-Di-Sol, FMC International Inc) 120g, 푸마르산스테아릴나트륨 (활택제, JRS Pharma LP) 36g 을 20ℓ 텀블러 믹서에 넣고 혼합 후, 타정기로 제정(製錠)하여 1 정당 총 질량 100㎎ 의 정제를 얻었다. 또한 정제 코팅기로, 코팅액으로서 10% 오파드라이 옐로우 (OPADRY 03F42069 YELLOW, 니혼 카라콘 주식회사) 수용액을 이용하여 정제에 코팅하여 1 정당 총 질량 105㎎ 의 코팅정을 얻었다.

(2) 10㎎ 정

결정 (C) 60g 과 무수 경질 규산 (겔화 방지제, 상품명 AEROSIL (등록상표) 200, 니혼 아에로질 주식회사) 192g 을 20ℓ 슈퍼 믹서로 혼합 후, 추가로 D-만니톨 (부형제, 토와 화성 공업 주식회사) 1200g, 결정 셀룰로오스 (부형제, 상품명 아비셀 PH101, 아사히 화성 공업 주식회사) 720g, 히드록시프로필셀룰로오스 (결합제, 상품명 HPC-L, 닛폰 소다 주식회사) 72g 을 첨가하여 혼합하였다. 그 후, 무수 에탄올을 적당량 첨가하여 결정 (C) 을 함유하는 조립물을 얻었다. 이 조립물을 선반식 건조기 (60℃) 로 건조 후, 파워 밀을 이용하고 정립하여 과립을 얻었다. 이 과립과 함께 크로스카르멜오로스나트륨 (붕괴제, 상품명 Ac-Di-Sol, FMC International Inc) 120g, 푸마르산스테아릴나트륨 (활택제, JRS Pharma LP) 36g 을 20ℓ 텀블러 믹서에 넣고 혼합 후, 타정기로 제정하여 1 정당 총 질량 400 ㎎ 의 정제를 얻었다. 또한 정제 코팅기로, 코팅액으로서 10% 오파드라이 옐로우 (OPADRY 03 F42069 YELLOW, 니혼 카라콘 주식회사) 수용액을 이용하여 정제에 코팅 하여 1 정당 총 질량 411㎎ 의 코팅정을 얻었다.

(3) 100㎎ 정

결정 (C) 31.4g 과 무수 경질 규산 (겔화 방지제, 상품명 AEROSIL (등록상표) 200, 니혼 아에로질 주식회사) 4g 을 1ℓ 슈퍼 믹서로 혼합 후, 추가로 무수 인산 수소 칼슘 (부형제, 쿄와 화학 공업 주식회사) 40.1g, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스 (결합제, 상품명 L-HPC (LH-21), 신에츠 화학 공업 주식회사) 10g, 히드록시프로필셀룰로오스 (결합제, 상품명 HPC-L, 닛폰 소다 주식회사) 3g 을 첨가하여 혼합하였다. 그 후, 무수 에탄올을 적당량 첨가하고 결정 (C) 를 함유하는 조립물을 얻었다. 이 조립물을 선반식 건조기 (60℃) 로 건조 후, 파워 밀을 이용하여 정립하여 과립을 얻었다. 이 과립과 함께 크로스카르멜로오스나트륨 (붕괴제, 상품명 Ac-Di-Sol, FMC International Inc) 10g, 푸마르산스테아릴나트륨 (활택제, JRS Pharma LP) 1.5g 을 혼합 후, 타정기로 제정하여 1 정당 총 질량 400㎎ 의 정제를 얻었다.

본 발명에 의해 RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 다발성 내분비 종양증 IIA 형, 다발성 내분비 종양증 IIB 형, 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 산발성 갑상선 수양암, 히르쉬스프룽병, 갈색 세포종, 부갑상선 과형성증 및 소화관의 점막 신경종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환에 대한 치료 제, 치료 방법, 상기 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질이 제공된다.

또, 본 발명에 의해 RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 갑상선암에 대한 치료제, 치료 방법, 상기 치료제의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 치료제를 위한 RET 키나아제 저해 물질이 제공된다.

또한, 본 발명에 의해 변이형 RET 를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하기 위한, RET 키나아제 저해 물질을 함유하는 의약 조성물, 변이형 RET를 발현하고 있는 세포를 함유하는 생체에 대해 투여하는 것을 특징으로 하는 질환의 치료 방법, 상기 의약 조성물의 제조를 위한 RET 키나아제 저해 물질의 사용 및 상기 의약 조성물을 위한 RET 키나아제 저해 물질이 제공된다.

또, 본 발명에 의해 RET 키나아제 저해제가 제공된다.

본 발명에 관련된 방법에 의해 환자에게 화합물을 투여하지 않고 효과를 예측하는 것이 가능해지므로, 당해 화합물에 의한 효과를 더욱 기대할 수 있는 환자를 선택할 수 있어, 환자의 QOL 에 공헌할 수 있게 되었다.

배열표 프리 텍스트

배열 번호 ： 5 ∼ 20 프라이머

SEQUENCE LISTING <110> Eisai R&D Management Co., Ltd. <120> Anti-tumor agents for thyroid carcinomas <130> PCT06-0173 <150> US 60/747,570 <151> 2006-05-18 <160> 20 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 4757 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ccgaagcagg gcgcgcagca gcgctgagtg ccccggaacg tgcgtcgcgc ccccagtgtc 60 cgtcgcgtcc gccgcgcccc gggcggggat ggggcggcca gactgagcgc cgcacccgcc 120 atccagaccc gccggcccta gccgcagtcc ctccagccgt ggccccagcg cgcacgggcg 180 atggcgaagg cgacgtccgg tgccgcgggg ctgcgtctgc tgttgctgct gctgctgccg 240 ctgctaggca aagtggcatt gggcctctac ttctcgaggg atgcttactg ggagaagctg 300 tatgtggacc aggcggccgg cacgcccttg ctgtacgtcc atgccctgcg ggacgcccct 360 gaggaggtgc ccagcttccg cctgggccag catctctacg gcacgtaccg cacacggctg 420 catgagaaca actggatctg catccaggag gacaccggcc tcctctacct taaccggagc 480 ctggaccata gctcctggga gaagctcagt gtccgcaacc gcggctttcc cctgctcacc 540 gtctacctca aggtcttcct gtcacccaca tcccttcgtg agggcgagtg ccagtggcca 600 ggctgtgccc gcgtatactt ctccttcttc aacacctcct ttccagcctg cagctccctc 660 aagccccggg agctctgctt cccagagaca aggccctcct tccgcattcg ggagaaccga 720 cccccaggca ccttccacca gttccgcctg ctgcctgtgc agttcttgtg ccccaacatc 780 agcgtggcct acaggctcct ggagggtgag ggtctgccct tccgctgcgc cccggacagc 840 ctggaggtga gcacgcgctg ggccctggac cgcgagcagc gggagaagta cgagctggtg 900 gccgtgtgca ccgtgcacgc cggcgcgcgc gaggaggtgg tgatggtgcc cttcccggtg 960 accgtgtacg acgaggacga ctcggcgccc accttccccg cgggcgtcga caccgccagc 1020 gccgtggtgg agttcaagcg gaaggaggac accgtggtgg ccacgctgcg tgtcttcgat 1080 gcagacgtgg tacctgcatc aggggagctg gtgaggcggt acacaagcac gctgctcccc 1140 ggggacacct gggcccagca gaccttccgg gtggaacact ggcccaacga gacctcggtc 1200 caggccaacg gcagcttcgt gcgggcgacc gtacatgact ataggctggt tctcaaccgg 1260 aacctctcca tctcggagaa ccgcaccatg cagctggcgg tgctggtcaa tgactcagac 1320 ttccagggcc caggagcggg cgtcctcttg ctccacttca acgtgtcggt gctgccggtc 1380 agcctgcacc tgcccagtac ctactccctc tccgtgagca ggagggctcg ccgatttgcc 1440 cagatcggga aagtctgtgt ggaaaactgc caggcattca gtggcatcaa cgtccagtac 1500 aagctgcatt cctctggtgc caactgcagc acgctagggg tggtcacctc agccgaggac 1560 acctcgggga tcctgtttgt gaatgacacc aaggccctgc ggcggcccaa gtgtgccgaa 1620 cttcactaca tggtggtggc caccgaccag cagacctcta ggcaggccca ggcccagctg 1680 cttgtaacag tggaggggtc atatgtggcc gaggaggcgg gctgccccct gtcctgtgca 1740 gtcagcaaga gacggctgga gtgtgaggag tgtggcggcc tgggctcccc aacaggcagg 1800 tgtgagtgga ggcaaggaga tggcaaaggg atcaccagga acttctccac ctgctctccc 1860 agcaccaaga cctgccccga cggccactgc gatgttgtgg agacccaaga catcaacatt 1920 tgccctcagg actgcctccg gggcagcatt gttgggggac acgagcctgg ggagccccgg 1980 gggattaaag ctggctatgg cacctgcaac tgcttccctg aggaggagaa gtgcttctgc 2040 gagcccgaag acatccagga tccactgtgc gacgagctgt gccgcacggt gatcgcagcc 2100 gctgtcctct tctccttcat cgtctcggtg ctgctgtctg ccttctgcat ccactgctac 2160 cacaagtttg cccacaagcc acccatctcc tcagctgaga tgaccttccg gaggcccgcc 2220 caggccttcc cggtcagcta ctcctcttcc ggtgcccgcc ggccctcgct ggactccatg 2280 gagaaccagg tctccgtgga tgccttcaag atcctggagg atccaaagtg ggaattccct 2340 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<220> <223> primer <400> 10 tgccccttca gtgttcctac t 21 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 11 cttgataaca ctggcaggtt 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 12 gaggcgttct ctttcagcat 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 13 tggaagaact tcggcatgag 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 14 gaattcacag ccaccaagtg 20 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 15 ctacttagct ttccaagtgg 20 <210> 16 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 16 gggacagaca cctttggaaa ta 22 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 17 gttgaaggag tccttgactg 20 <210> 18 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 18 ctttcagcat cttcacgg 18 <210> 19 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 19 agtgaagttt ctaccatcc 19 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 20 ggcgttctct ttcagcatct 20 1/1

Claims

4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드, 그 약리학적으로 허용되는 염, 또는 그들의 용매화물을 포함하는, 갑상선암을 치료하기 위한 치료제.
제 1 항에 있어서, 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드의 약리학적으로 허용되는 염이 4-(3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐)아미노페녹시)-7-메톡시-6-퀴놀린카르복사미드의 메탄술폰산염인 치료제.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

갑상선암이 가족성 갑상선 수양암, 갑상선 유두암, 또는 산발성 갑상선 수양암인 치료제.
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