ES2424881T3

ES2424881T3 - 2,4-Di(fenilamino)-pirimidinas útiles en el tratamiento de enfermedades neoplásicas, trastornos inflamatorios y del sistema inmunitario

Info

Publication number: ES2424881T3
Application number: ES10010291T
Authority: ES
Inventors: Carlos Garcia-Echeverria; Takanori Kanazawa; Eiji Kawahara; Keiichi Masuya; Naoko Matsuura; Takahiro Miyake; Osamu Ohmori; Ichiro Umemura; Ruo Steensma; Greg Chopiuk; Jiqing Jiang; Yongqin Wan; Qiang Ding; Qiong Zhang; Nathanael Schiander Gray; Donald Karanewsky
Original assignee: IRM LLC; Novartis AG
Current assignee: IRM LLC; Novartis AG
Priority date: 2003-08-15
Filing date: 2004-08-13
Publication date: 2013-10-09
Anticipated expiration: 2024-08-13
Also published as: ZA200600464B; TW200526598A; AU2008229685B2; RU2395500C2; HK1091813A1; EP2287156B1; EP1660458A1; PT2287156E; DK2287156T3; HRP20130724T1; TNSN06052A1; PL1660458T3; CA2533320A1; CY1117015T1; AU2008229685A1; US20080132504A1; NO20061214L; KR100904570B1; MA27994A1; ECSP066371A

Abstract

Compuesto de fórmula I' **Fórmula** en el que: n' se selecciona entre 1 y 2; R'1 se selecciona entre fenilo, piridinilo, pirazolilo y pirimidinilo; en el que R'1 está sustituido por 2 ó 3 radicalesseleccionados independientemente entre etoxi, etilo, propilo, metilo, t-butilo, trifluorometilo, nitrilo, ciclobutiloxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, isobutiloxi, t-butiloxi, isopropiloxi, metil-amino-carbonilo, ciclopropil-metoxi, dimetilamino-propilamino,metoxi-etoxi, -X'R'4, -C(O)R'4 y -OX'R'4; en los que X' es un enlace, metileno o etileno; R'4 se selecciona entrepiperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, azepanilo y 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-ilo; en los que R'4 estáopcionalmente sustituido por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente entre metilo, isopropilo, acetilo,acetil-metilamino, 3-dimetilamino-2,2-dimetil-propilamino, etil-metil-amino-etoxi, dietil-amino-etoxi, amino-carbonilo,etilo, 2-oxo-pirrolidin-1-ilo, pirrolidinilo, pirrolidinil-metilo, piperidinilo opcionalmente sustituido con metilo o etilo,morfolino, dimetilamino, dimetilamino-propil-amino, metil-amino y etil-amino. R'2 se selecciona entre hidrógeno y halógeno; R'3 se selecciona entre dimetil-sulfamoílo, isobutil-sulfamoílo, etil-sulfamoílo, propilsulfonilo, etil-amino-carbonilo, 1-etil-propil-sulfamoílo, ciclopentil-sulfamoílo, isopropilsulfamoílo, ciclohexil-sulfonilo, ciclopropil-metil-sulfamoílo,ciclobutil-sulfamoílo e isopropil-sulfonilo; o las sales, hidratos, solvatos y estereoisómeros de los mismos farmacéuticamente aceptables.

Description

2,4-Di(fenilamino)-pirimidinas útiles en el tratamiento de enfermedades neoplásicas, trastornos inflamatorios y del sistema inmunitario.

5 [0001] La presente invención se refiere al uso de derivados de pirimidina novedosos, a ciertos derivados de pirimidina novedosos, a procedimientos para su producción, a su uso como productos farmacéuticos y a composiciones farmacéuticas que los comprenden.

10 [0002] El documento WO 00/39101 A1 describe compuestos de fórmula general (I) para utilizar como agentes anticancerosos.

[0003] El documento WO 03/078404 A1 describe compuestos de fórmula (I) para utilizar en trastornos en los que la inhibición de ZAP-70 y/o Syk juega un papel o están causados por un mal funcionamiento de las cascadas de 30 señales conectadas con FAK.

45 [0004] Por consiguiente, en un primer aspecto, la presente invención da a conocer un compuesto de fórmula I’

en el que: n’ se selecciona entre 1 y 2; R’1 se selecciona entre fenilo, piridinilo, pirazolilo y pirimidinilo; en el que R’1 está sustituido por 2 ó 3 radicales seleccionados independientemente entre etoxi, etilo, propilo, metilo, t-butilo, trifluorometilo, nitrilo, ciclobutiloxi, 2,2,2

5 trifluoroetoxi, isobutiloxi, t-butiloxi, isopropiloxi, metil-amino-carbonilo, ciclopropil-metoxi, dimetilamino-propilamino, metoxi-etoxi, -X’R’4, -C(O)R’4 y -OX’R’4; en los que X’ es un enlace, metileno o etileno; R’4 se selecciona entre piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, azepanilo y 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-ilo; en los que R’4 está opcionalmente sustituido por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente entre metilo, isopropilo, acetilo, acetil-metilamino, 3-dimetilamino-2,2-dimetil-propilamino, etil-metil-amino-etoxi, dietil-amino-etoxi, amino-carbonilo,

10 etilo, 2-oxo-pirrolidin-1-ilo, pirrolidinilo, pirrolidinil-metilo, piperidinilo opcionalmente sustituido con metilo o etilo, morfolino, dimetilamino, dimetilamino-propil-amino, metil-amino y etil-amino. R’2 se selecciona entre hidrógeno y halógeno; R’3 se selecciona entre dimetil-sulfamoílo, isobutil-sulfamoílo, etil-sulfamoílo, propilsulfonilo, etil-amino-carbonilo, 1etil-propil-sulfamoílo, ciclopentil-sulfamoílo, isopropilsulfamoílo, ciclohexil-sulfonilo, ciclopropil-metil-sulfamoílo,

15 ciclobutil-sulfamoílo e isopropil-sulfonilo;

o las sales, hidratos, solvatos y estereoisómeros de los mismos farmacéuticamente aceptables.

[0005] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer una composición farmacéutica que comprende el

20 compuesto de fórmula I’, tal como se define en el presente documento, como principio activo junto con uno o más diluyentes o portadores farmacéuticamente aceptables.

[0006] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer la utilización de un compuesto de fórmula I, tal como se define en el presente documento, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la

25 prevención de enfermedades neoplásicas y trastornos del sistema inmunitario.

[0007] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, tal como se define en el presente documento, y una o más sustancias farmacológicas adicionales, siendo dicha sustancia farmacológica adicional útil en el tratamiento de

30 enfermedades neoplásicas o trastornos del sistema inmunitario.

[0008] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer la utilización de un compuesto de fórmula I, tal como se define en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad que response a la inhibición de IGF-1R o

35 ALK. En algunas realizaciones, la enfermedad puede ser una enfermedad proliferativa, tal como un tumor de mama, renal, próstata, colorrectal, tiroides, ovario, páncreas, neuronal, pulmón, uterino o tumores gastrointestinales, así como osteosarcomas y melanomas. En otras realizaciones, la enfermedad puede ser una enfermedad inmunitaria.

[0009] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer la utilización de un compuesto de fórmula I, tal

40 como se define en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un trastorno inflamatorio y/o un trastorno inmunitario. Ejemplos de trastornos inflamatorios y/o inmunitarios incluyen el rechazo a transplante, alergia y trastornos autoinmunitarios mediados por células inmunitarias que incluyen linfocitos T, linfocitos B, macrófagos, células dendríticas, mastocitos y eosinófilos.

45 [0010] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer un compuesto de fórmula I, tal como se define en el presente documento, para utilizar en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad neoplásica, un trastorno del sistema inmunitario, una enfermedad inflamatoria o una enfermedad proliferativa.

50 [0011] Los términos generales usados anteriormente en este documento y denominados en lo sucesivo tienen preferentemente dentro del contexto de esta divulgación los siguientes significados, a menos que se indique lo contrario:

Si la forma plural se usa para los compuestos, sales y similares, se toma que ésta también significa un único 55 compuesto, sal o similares.

[0012] Cualquier átomo de carbono asimétrico puede estar presente en la configuración (R), (S) o (R,S), preferentemente en la configuración (R) o (S). Por tanto, los compuestos pueden estar presentes como mezclas de isómeros o como isómeros puros, preferentemente como diaestereómeros puros en enantiómeros.

[0013] La invención también se refiere a posibles tautómeros de los compuestos de fórmula I’.

[0014] El heterociclilo de 5 ó 6 miembros sin sustituir o sustituido que comprende 1, 2 ó 3 heteroátomos

5 seleccionados de N, O y S puede estar insaturado, parcialmente insaturado o saturado, y adicionalmente condensado con un grupo benzo o un grupo heterociclilo de 5 ó 6 miembros, y puede unirse mediante un heteroátomo o un átomo de carbono y es, por ejemplo, pirrolilo, indolilo, pirrolidinilo, imidazolilo, bencimidazolilo, pirazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tetrazolilo, piridilo, quinolinilo, isoquinolinilo, 1,2,3,4-tetrahidroquinolinilo, piperidilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, purinilo, tetrazinilo, oxazolilo, isoxalilo, morfolinilo, tiazolilo,

10 benzotiazolilo, oxadiazolilo y benzoxadiazolilo. Sustituyentes considerados son alquilo C1-C8, hidroxialquilo C1-C8, alcoxi C1-C8-alquilo C1-C8, alcoxi C1-C8-alcoxi C1-C8, haloalquilo C1-C8, hidroxi, amino, amino sustituido, alcoxi C1-C8, halógeno, carboxi, alquil C1-C8-carbonilo, alcoxi C1-C8-carbonilo, carbamoílo, alquil C1-C8-carbamoílo, ciano, oxo o heterociclilo de 5 ó 6 miembros sin sustituir o sustituido como se define en este párrafo. Heterociclilo de 5 ó 6 miembros comprende preferentemente 1 ó 2 heteroátomos seleccionados de N, O y S, y es especialmente indolilo,

15 pirrolidinilo, pirrolidonilo, imidazolilo, N-metilimidazolilo, bencimidazolilo, S,S-dioxoisotiazolidinilo, piperidilo, 4acetilaminopiperidilo, 4-metilcarbamoilpiperidilo, 4-piperidinopiperidilo, 4-cianopiperidilo, piperazinilo, Nmetilpiperazinilo, N-(2-hidroxietil)piperazinilo, morfolinilo, 1-aza-2,2-dioxo-2-tiaciclohexilo o sulfolanilo.

[0015] En heterocicliloxi sin sustituir o sustituido, heterociclilo tiene el significado que se define anteriormente, y es

20 especialmente N-metil-4-piperidiloxi. En heterociclilalcoxi C1-C8 sin sustituir o sustituido, heterociclilo tiene el significado que se define anteriormente, y es especialmente 2-pirrolidinoetoxi, 2-morfolinoetoxi, 3-morfolinopropoxi, 1-metil-piperidin-3-ilmetoxi, 3-(N-metilpiperazino)propoxi o 2-(1-imidazolil)etoxi.

[0016] En un anillo carbocíclico o heterocíclico de 5 ó 6 miembros que comprende 0, 1, 2 ó 3 heteroátomos

25 seleccionados de N, O y S, y está formado por dos sustituyentes adyacentes junto con el anillo de benceno, el anillo puede estar adicionalmente sustituido, por ejemplo, con alquilo C1-C8, alcoxi C1-C8, haloalquilo C1-C8, hidroxi, amino, amino sustituido, alcoxi C1-C8, halógeno, carboxi, alcoxi C1-C8-carbonilo, carbamoílo, ciano u oxo. Los dos sustituyentes adyacentes que forman un anillo tal son preferentemente propileno, butileno, 1-aza-2-propilideno, 3aza-1-propilideno, 1,2-diaza-2-propilideno, 2,3-diaza-1-propilideno, 1-oxapropileno, 1-oxapropilideno, metilendioxi,

30 difluorometilendioxi, 2-aza-1-oxopropileno, 2-aza-2-metil-1-oxopropileno, 1-aza-2-oxopropileno, 2-aza-1,1-dioxo-1tiapropileno o los derivados de butileno correspondientes que forman un anillo de 6 miembros.

[0017] Las sales son especialmente las sales farmacéuticamente aceptables de compuestos de fórmula I.

35 [0018] Tales sales se forman, por ejemplo, como sales de adición de ácido, preferentemente con ácidos orgánicos o inorgánicos, a partir de compuestos de fórmula I con un átomo de nitrógeno básico, especialmente las salesfarmacéuticamente aceptables. Ácidos inorgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos de halógeno tales comoácido clorhídrico, ácido sulfúrico o ácido fosfórico. Ácidos orgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos carboxílico, fosfónico, sulfónico o sulfámico, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido octanoico, ácido decanoico,

40 ácido dodecanoico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido adípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, aminoácidos tales como ácido glutámico o ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido ciclohexanocarboxílico, ácido adamantanocarboxílico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácido ftálico, ácido fenilacético, ácido mandélico, ácido cinámico, ácido metano o etanosulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido etano-1,2

45 disulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 1,5-naftaleno-disulfónico, ácido 2-, 3-o 4metilbencenosulfónico, ácido metilsulfúrico, ácido etilsulfúrico, ácido dodecilsulfúrico, ácido N-ciclohexilsulfámico, ácido N-metil-, N-etil- o N-propil-sulfámico, u otros ácidos protónicos orgánicos tales como ácido ascórbico.

[0019] Para fines de aislamiento o purificación también es posible usar sales farmacéuticamente inaceptables, por

50 ejemplo, picratos o percloratos. Para uso terapéutico sólo se emplean sales farmacéuticamente aceptables o compuestos libres (si procede en forma de preparaciones farmacéuticas) y, por tanto, se prefieren éstos.

[0020] En vista de la estrecha relación entre los compuestos novedosos en forma libre y aquellos en forma de sus sales, que incluyen aquellas sales que pueden usarse como productos intermedios, por ejemplo, en la purificación o

55 identificación de los compuestos novedosos, cualquier referencia a los compuestos libres anteriormente y posteriormente en este documento debe entenderse que también se refiere a las sales correspondientes, según convenga y sea oportuno.

[0021] Los compuestos de fórmula I’ tienen valiosas propiedades farmacológicas como se describe anteriormente y

posteriormente en este documento.

[0022] Pueden prepararse sales de un compuesto de fórmula I’ con un grupo formador de un modo por sí conocido. Por tanto, las sales de adición de ácido de compuestos de fórmula I’ pueden obtenerse mediante tratamiento con un 5 ácido o con un reactivo de intercambio aniónico adecuado.

[0023] Las sales pueden convertirse normalmente en compuestos en forma libre, por ejemplo, tratando con agentes básicos adecuados, por ejemplo, con carbonatos de metales alcalinos, hidrogenocarbonatos de metales alcalinos o hidróxidos de metales alcalinos, normalmente carbonato de potasio o hidróxido sódico.

10 [0024] Las mezclas estereoisoméricas, por ejemplo, mezclas de diaestereómeros, pueden separarse en sus isómeros correspondientes de un modo por sí conocido por medio de procedimientos de separación adecuados. Las mezclas diaestereoméricas pueden separarse, por ejemplo, en sus diaestereómeros individuales por medio de cristalización fraccionada, cromatografía, distribución en disolventes y procedimientos similares. Esta separación

15 puede tener lugar tanto al nivel de un compuesto de partida como en el propio compuesto de fórmula I’. Los enantiómeros pueden separarse mediante la formación de sales diaestereoméricas, por ejemplo, por formación de sales con un ácido quiral puro en enantiómeros, o por medio de cromatografía, por ejemplo, por HPLC, usando sustratos cromatográficos con ligandos quirales.

20 [0025] Debe enfatizarse que las reacciones análogas a las conversiones mencionadas en este capítulo también pueden tener lugar al nivel de productos intermedios apropiados.

[0026] Los compuestos de fórmula I’, que incluyen sus sales, también son obtenibles en forma de hidratos, o sus cristales pueden incluir, por ejemplo, el disolvente usado para la cristalización (presente como solvatos).

25 [0027] La quinasa de adhesión focal (FAK) es una enzima clave en la cascada de señales de fuera a dentro mediada por integrinas (D. Schlaepfer y col., Prog Blophys Mol Biol 1999, 71, 435-478). La interacción entre células y las proteínas de la matriz extracelular (ECM) se transduce como señales intracelulares importantes para el crecimiento, la supervivencia y la migración a través de los receptores de la superficie celular, las integrinas. La FAK desempeña

30 una función esencial en estas cascadas de señales de fuera a dentro mediadas por integrinas. El desencadenante en la cascada de transducción de señales es la autofosforilación de Y397. Y397 autofosforilado es un sitio de enlace SH2 para las tirosina quinasas de la familia Src. La quinasa c-Src unida fosforila otros residuos de tirosina en FAK. Entre ellos, Y925 fosforilado se convierte en un sitio de unión para el sitio SH2 de la proteína adaptadora pequeña Grb2. Esta unión directa de Grb2 a FAK es una de las etapas clave para la activación de dianas aguas abajo tal

35 como la cascada de la quinasa Ras-ERK2/MAP.

[0028] La inhibición de resultados de la señalización de FAK endógena produce motilidad reducida y en algunos casos induce muerte celular. Por otra parte, la potenciación de la señalización de FAK por expresión exógena aumenta la motilidad celular y la transmisión de una señal de supervivencia celular de ECM. Además, FAK se 40 expresa en exceso en cánceres epiteliales, mesenquimatosos, de tiroides y de próstata invasivos y metastásicos. Por consiguiente, es probable que un inhibidor de FAK sea un fármaco para el crecimiento antitumoral y metástasis. Por tanto, los compuestos de la invención están indicados, por ejemplo, para prevenir y/o tratar un vertebrado y más particularmente un mamífero afectado por un enfermedad neoplásica, en particular tumor de mama, cáncer del intestino (colon y recto), cáncer de estómago y cáncer de ovario y próstata, cáncer de pulmón de células no

45 pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de hígado, melanoma, tumor de vejiga y cáncer de cabeza y cuello.

[0029] La relación entre la inhibición de FAK y el sistema inmunitario se describe, por ejemplo, en G.A. van Seventer y col., Eur. J. Immunol. 2001, 31, 1417-1427. Por tanto, los compuestos de la invención son, por ejemplo, útiles para 50 prevenir y/o tratar un vertebrado, y más particularmente un mamífero, afectado por trastornos del sistema inmunitario, enfermedades o trastornos mediados por linfocitos T, linfocitos B, mastocitos y/o eosinófilos, por ejemplo, rechazo agudo o crónico de órgano o aloinjertos o xenoinjertos de tejido, aterosclerosis, oclusión vascular debida a lesión vascular tal como angioplastia, reestenosis, hipertensión, insuficiencia cardíaca, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad del SNC tal como enfermedad de Alzheimer o esclerosis lateral 55 amiotrófica, cáncer, enfermedad infecciosa tal como SIDA, choque séptico o síndrome disneico del adulto, lesión por isquemia/reperfusión, por ejemplo, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, isquemia del intestino, insuficiencia renal o choque por hemorragia, o choque traumático. El agente de la invención también es útil en el tratamiento y/o la prevención de enfermedades inflamatorias agudas o crónicas o trastornos o enfermedades autoinmunitarias, por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis, lupus eritematoso sistémico, tiroiditis de Hashimoto,

esclerosis múltiple, miastenia grave, diabetes (tipo I y II) y los trastornos asociados a la misma, enfermedades respiratorias tales como asma o lesión hepática inflamatoria, lesión glomerular inflamatoria, manifestaciones cutáneas de trastornos o enfermedades inmunológicamente mediadas, enfermedades de la piel inflamatorias e hiperproliferativas (tales como psoriasis, dermatitis atópica, dermatitis alérgica de contacto, dermatitis de contacto

5 irritante y adicionalmente dermatitis eccematosa, dermatitis seborreica), enfermedades oculares inflamatorias, por ejemplo, síndrome de Sjoegren, queratoconjuntivitis o uveítis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.

[0030] Los compuestos de la invención son activos en un sistema de ensayo de FAK como se describe en los 10 ejemplos, y muestran una CI50 de inhibición en el intervalo de 1 nM a 100 nM.

[0031] Algunos de los compuestos de la invención también presentan actividad inhibidora de la proteína tirosina quinasa ZAP-70 (proteína asociada a la cadena zeta de 70 kD). La interacción de la proteína tirosina quinasa ZAP70 de los agentes de la invención puede demostrarse por su capacidad para prevenir la fosforilación de, por ejemplo,

15 LAT-11 (ligador para la activación de linfocito T) por la proteína tirosina quinasa ZAP-70 humana en disolución acuosa como se describe en los ejemplos. Por tanto, los compuestos de la invención están indicados para la prevención o el tratamiento de trastornos o enfermedades en los que la inhibición de ZAP-70 desempeña una función.

20 [0032] Los compuestos de la invención son activos en un sistema de ensayo de ZAP-70 como se describe en los ejemplos, y muestran una CI50 de inhibición en el intervalo de 1 µM a 10 µM.

[0033] Los compuestos de la presente invención también son buenos inhibidores del IGF-1R (receptor 1 del factor de crecimiento similar a la insulina) y, por tanto, son útiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por IGF-1R, por 25 ejemplo, tales enfermedades incluyen enfermedades proliferativas tales como tumores como, por ejemplo, de mama, renales, de próstata, colorrectales, de tiroides, de ovario, de páncreas, neuronales, de pulmón, uterinos y tumores gastrointestinales, además de osteosarcomas y melanomas. La eficacia de los compuestos de la invención como inhibidores de la actividad de tirosina quinasas de IGF-1R puede demostrarse usando un “ELISA de captura” celular. En este ensayo se determina la actividad de los compuestos de la invención contra la autofosforilación del IGF-1R

30 inducida por el factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF-1).

[0034] Los compuestos de fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables presentan valiosas propiedades farmacológicas cuando se prueban in vitro en ensayos de quinasas libres de células y en ensayos celulares y, por tanto, son útiles como productos farmacéuticos. En particular, los compuestos de la invención son inhibidores de la

35 quinasa de adhesión focal (ALK) y son útiles como productos farmacéuticos para tratar afecciones producidas por un mal funcionamiento de las cascadas de señales conectadas a la quinasa de adhesión focal, en particular tumores como se describen más adelante en este documento.

[0035] La señalización mediada por ALK podría desempeñar una función en el desarrollo y/o la progresión de varios

40 tumores sólidos comunes (Pulford, K., y col., J. Cell. Physiol. 2004 Jun;199(3):330-58). Los compuestos de la presente invención también presentan una poderosa inhibición de la actividad de tirosina quinasas de quinasa del linfoma anaplásico (ALK) y sus proteínas de fusión, particularmente la proteína de fusión NPM-ALK. Esta proteína tirosina quinasa resulta de una fusión de genes de nucleofosmina (NPM) y la quinasa del linfoma anaplásico (ALK), haciendo que la actividad de las proteínas tirosina quinasas sea independiente del ligando de ALK. NPM-ALK

45 desempeña una función clave en la transmisión de señales en varias células hematopoyéticas y otras humanas conduciendo a enfermedades hematológicas y neoplásicas, por ejemplo, en linfoma de células grandes anaplásicas (ALCL) y linfomas no Hodgkin (NHL), específicamente en ALK+ NHL o alcomas, en tumores miofibroblásticos inflamatorios (IMT) y neuroblastomas (Duyster J y col. 2001 Oncogene 20, 5623-5637). Se ha mostrado que NPM-ALK es un potente oncogén in vitro, pudiendo transformar diversas líneas celulares y células hematopoyéticas

50 primarias. Además, las células de la médula ósea transducidas por NPM-ALK puede inducir una enfermedad similar a linfoma después del trasplante en ratones receptores irradiados. Las rutas de señalización activadas por NPM-ALK incluyen las rutas ras, PLC y PI3K y, además, se ha mostrado que STAT5 se fosforila por NPM-ALK. Además de NPM-ALK se han identificado otras fusiones de genes en enfermedades hematológicas y neoplásicas humanas; principalmente TPM3-ALK (una fusión de tropomiosina 3 de no músculo con ALK). Además, la proteína de fusión de

55 ALK CLTC-ALK está asociada a enfermedades que incluyen ALCL de linfocitos T o nulo clásico, ALK+ DLBCL y tumores miofibroblásticos inflamatorios. También se cree que CLTCL-ALK desempeña una función en la patogénesis de linfomas de linfocitos B grandes.

[0036] Además, la proteína de fusión de ALK CLTC-ALK está asociada a enfermedades que incluyen ALCL de linfocitos T o nulo clásico, ALK+ DLBCL y tumores miofibroblásticos inflamatorios. También se cree que CLTCL-ALK desempeña una función en la patogénesis de linfomas de linfocitos B grandes.

[0037] La actividad anómala de ALK participa en el desarrollo de tumores cerebrales y se ha informado de la

5 expresión en exceso de ALK en neuroblastomas y varias líneas celulares derivadas de tejido neural. La señalización mediada por ALK podría desempeñar una función en el desarrollo y/o la progresión de varios tumores sólidos comunes (Pulford, K., y col., J. Cell. Physiol. 2004 Jun;199(3):330-58).

[0038] La inhibición de la actividad de tirosina quinasas ALK puede demostrarse usando procedimientos conocidos,

10 por ejemplo, usando el dominio de quinasas recombinante de ALK en analogía al ensayo de quinasas VEGF-R descrito en J. Wood y col. Cancer Res. 60, 2178-2189 (2000). Los ensayos enzimáticos in vitro usando la proteína tirosina quinasa GST-ALK se realizan en placas de 96 pocillos como un ensayo de unión a filtro en Tris·HCl 20 mM, pH = 7,5, MgCl2 3 mM, MnCl2 10 mM, DTT 1 mM, 0,1 µCl/ensayo (= 30 µl) de [γ-33P]-ATP, ATP 2 µM, 3 µg/ml de poli (Glu, Tyr 4:1) Poly-EY (Sigma P-0275), 1% de DMSO, 25 ng de enzima ALK. Los ensayos se incuban durante 10

15 min a temperatura ambiente. Las reacciones se terminan añadiendo 50 µl de EDTA 125 mM y la mezcla de reacción se transfiere a una placa MAIP Multiscreen (Millipore, Bedford, MA, EE.UU.) previamente humedecida con metanol, y se rehidrata durante 5 min con H2O. Tras el lavado (0,5% de H3PO4), las placas se cuentan en un contador de centelleo líquido. Los valores de CI50 se calculan por análisis de regresión lineal de la inhibición en porcentaje. En comparación con el control sin inhibidor, los compuestos de fórmula I inhiben la actividad enzimática el 50% (CI50),

20 por ejemplo, en una concentración de 0,001 a 0,5 µM, especialmente de 0,01 a 0,1 µM.

[0039] Los compuestos de fórmula I' inhiben potentemente el crecimiento de células BaF3 murinas que expresan en exceso NPM-ALK humana (DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania). La expresión de NPM-ALK se logra transfectando la línea celular BaF3 con un vector de 25 expresión pCIneo™ (Promega Corp., Madison WI, USA) que codifica NPM-ALK y posterior selección de células resistentes a G418. Las células BaF3 no transfectadas dependen de IL-3 para la supervivencia celular. A diferencia, las células BaF3 que expresan NPM-ALK (llamadas BaF3-NPM-ALK en lo sucesivo) pueden proliferar en ausencia de IL-3 debido a que obtienen la señal proliferativa por la quinasa NPM-ALK. Por tanto, los inhibidores putativos de la quinasa NPM-ALK abolen la señal de crecimiento y producen actividad antiproliferativa. Sin embargo, la actividad 30 antiproliferativa de inhibidores putativos de la quinasa NPM-ALK puede vencerse mediante la adición de IL-3 que proporciona señales de crecimiento por un mecanismo independiente de NPM-ALK [para un sistema de células análogo usando FLT3 quinasa véase E Weisberg y col. Cancer Cell; 1, 433-443 (2002)]. La actividad inhibitoria de los compuestos de fórmula I se determina, brevemente, del siguiente modo: células BaF3-NPM-ALK (15.000/pocillo de placa de microtitulación) se transfieren a placas de microtitulación de 96 pocillos. Los compuestos de prueba 35 [disueltos en sulfóxido de dimetilo (DMSO)] se añaden en una serie de concentraciones (series de dilución) de tal forma que la concentración final de DMSO no sea superior al 1% (v/v). Después de la adición, las placas se incuban durante dos días durante los cuales los cultivos de control sin compuesto de prueba pueden experimentar dos ciclos de división celular. El crecimiento de las células BaF3-NPM-ALK se mide por medio de tinción Yopro™ [T Idziorek y col. J. Immunol. Methods; 185: 249-258 (1995)]: 25 µl de tampón de lisis que consisten en citrato de sodio 20 mM,

40 pH 4,0, cloruro sódico 26,8 mM, 0,4% de NP40, EDTA 20 mM y 20 mM se añaden a cada pocillo. La lisis de células se completa en el plazo de 60 min a temperatura ambiente y la cantidad total de ADN unido a Yopro se determina por medición usando el lector de 98 pocillos Cytofluor II (PerSeptive Biosystems) con los siguientes parámetros: excitación (nm) 485/20 y emisión (nm) 530/25.

45 [0040] Los valores de CI50 se determinan por un sistema asistido por ordenador usando la fórmula:

CI50 = [(ABSprueba – ABSinicial) / (ABScontrol – ABSinicial)] x 100 (ABS = absorción)

[0041] El valor de CI50 en aquellos experimentos se facilita como la concentración del compuesto de prueba en

50 cuestión que produce una cifra de células que es el 50% inferior a la obtenida usando el control sin inhibidor. Los compuestos de fórmula l' presentan una actividad inhibitoria con una CI50 en el intervalo de aproximadamente 0,01 a 1 µM.

[0042] La acción antiproliferativa de los compuestos de fórmula I' también puede determinarse en la línea celular de

55 linfoma KARPAS-299 humano (DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania) [descrita en WG Dirks y col. Int. J. Cancer 100, 49-56 (2002)] usando la misma metodología descrita anteriormente para la línea celular BaF3-NPM-ALK. Los compuestos de fórmula I presentan actividad inhibitoria con una CI50 en el intervalo de aproximadamente 0,01 a 1 µM.

[0043] La acción de los compuestos de fórmula I' sobre la autofosforilación de ALK puede determinarse en la línea celular de linfoma KARPAS-299 humano por medio de una inmunotransferencia como se describe en WG Dirks y col. Int J. Cancer 100, 49-56 (2002). En esa prueba, los compuestos de fórmula I presentan una CI50 de

5 aproximadamente de 0,001 a 1 µM.

[0044] Para los usos anteriores en el tratamiento de enfermedades neoplásicas y trastornos del sistema inmunitario, la dosificación requerida variará por supuesto dependiendo del modo de administración, la afección particular que va a tratarse y el efecto deseado. En general, se indica que se obtienen resultados satisfactorios sistémicamente a

10 dosificaciones diarias de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal. Una dosificación diaria indicada en el mamífero superior, por ejemplo, seres humanos, está en el intervalo de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 2000 mg, convenientemente administrada, por ejemplo, en dosis divididas hasta cuatro veces al día o en forma retardada.

15 [0045] Los compuestos de la invención pueden administrarse por cualquier vía convencional, en particular parenteralmente, por ejemplo, en forma de disoluciones o suspensiones inyectables, enteralmente, preferentemente por vía oral, por ejemplo, en forma de comprimidos o cápsulas, tópicamente, por ejemplo, en forma de lociones, geles, pomadas o cremas, o en una forma nasal o un supositorio. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención en asociación con al menos un vehículo o diluyente farmacéutico

20 aceptable pueden prepararse de manera convencional mezclando con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Formas de dosificación unitaria para administración por vía oral contienen, por ejemplo, de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 500 mg de sustancia activa. La administración tópica es, por ejemplo, a la piel. Otra forma de administración tópica es al ojo.

25 [0046] Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se preparan de un modo por sí conocido, por ejemplo, por medio de procedimientos convencionales de mezcla, granulación, recubrimiento, disolución o liofilización.

[0047] Se da preferencia al uso de disoluciones del principio activo, y también a suspensiones o dispersiones,

30 especialmente disoluciones, dispersiones o suspensiones acuosas isotónicas que, por ejemplo, en el caso de composiciones liofilizadas que comprenden el principio activo solo o junto con un vehículo, por ejemplo, manitol, pueden prepararse hasta antes de uso. Las composiciones farmacéuticas pueden esterilizarse y/o pueden comprender excipientes, por ejemplo, conservantes, estabilizadores, agentes humectantes y/o emulsionantes, solubilizantes, sales para regular la presión osmótica y/o tampones y se preparan de un modo por sí conocido, por

35 ejemplo, por medio de procedimientos convencionales de disolución y liofilización. Dichas disoluciones o suspensiones pueden comprender agentes que aumentan la viscosidad, normalmente carboximetilcelulosa de sodio, carboximetilcelulosa, dextrano, polivinilpirrolidona o gelatinas, o también solubilizantes, por ejemplo, Tween 80® (mono-oleato de polioxietileno(20)-sorbitano).

40 [0048] Las suspensiones en aceite comprenden como componente de aceite los aceites vegetales, sintéticos o semisintéticos tradicionales para fines de inyección. Respecto a esto puede hacerse mención especial de ésteres de ácidos grasos líquidos que contienen como componente de aceite un ácido graso de cadenas largas que tiene de 8 a 22, especialmente de 12 a 22 átomos de carbono, por ejemplo, ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mirístico, ácido pentadecílico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico o ácidos

45 insaturados correspondientes, por ejemplo, ácido oleico, ácido elaídico, ácido erúcico, ácido brasídico o ácido linoleico, si se desea con la adición de antioxidantes, por ejemplo, vitamina E, �-caroteno o 3,5-di-terc-butil-4hidroxitolueno. El componente de alcohol de estos ésteres de ácidos grasos tiene un máximo de 6 átomos de carbono y es un alcohol monovalente o polivalente, por ejemplo, uno mono-, di- o trivalente, por ejemplo, metanol, etanol, propanol, butanol o pentanol o los isómeros de los mismos, pero especialmente glicol y glicerol. Por tanto,

50 como ésteres de ácidos grasos se mencionan los siguientes: oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, “Labrafil M 2375” (polioxietilenglicerol), “Labrafil M 1944 CS” (glicéridos poliglicolizados insaturados preparados por alcohólisis de aceite de huesos de albaricoque y que consisten en glicéridos y éster de polietilenglicol), “Labrasol” (glicéridos poliglicolizados saturados preparados por alcohólisis de TCM y que consisten en glicéridos y éster de polietilenglicol; todos disponibles de Gattefossé, Francia) y/o “Miglyol 812” (triglicérido de

55 ácidos grasos saturados de longitud de cadena C8 a C12 de Hüls AG, Alemania), pero especialmente aceites vegetales tales como aceite de semilla de algodón, aceite de almendra, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de sésamo, aceite de soja y más especialmente aceite de cacahuete.

[0049] La preparación de preparaciones inyectables se lleva a cabo normalmente bajo condiciones estériles como es

el envasado, por ejemplo, en ampollas o viales, y el sellado de los recipientes.

[0050] Las composiciones farmacéuticas para administración por vía oral pueden obtenerse, por ejemplo, combinando el principio activo con uno o más vehículos sólidos, si se desea granulando una mezcla resultante, y 5 procesando la mezcla o los gránulos, si se desea o es necesario, por la inclusión de excipientes adicionales para formar comprimidos o núcleos de comprimido.

[0051] Vehículos adecuados son especialmente cargas tales como azúcares, por ejemplo, lactosa, sacarosa, manitol

o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos de calcio, por ejemplo, trifosfato de calcio o hidrogenofosfato de

10 calcio, y también aglutinantes tales como almidones, por ejemplo, almidón de maíz, trigo, arroz o de patata, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona y/o, si se desea, disgregantes tales como los almidones anteriormente mencionados, es decir, carboximetilalmidón, polivinilpirrolidona reticulada, ácido algínico o una sal del mismo tal como alginato de sodio. Excipientes adicionales son especialmente acondicionadores del flujo y lubricantes, por ejemplo, ácido silícico, talco, ácido esteárico o sales del mismo tal como

15 estearato de magnesio o de calcio, y/o polietilenglicol, o derivados del mismo.

[0052] Los núcleos de comprimido pueden proporcionarse con recubrimientos adecuados, opcionalmente entéricos, mediante el uso de, entre otros, disoluciones de azúcar concentradas que pueden comprender goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, o disoluciones de recubrimiento en disolventes orgánicos

20 adecuados o mezclas de disolventes o, para la preparación de recubrimientos entéricos, disoluciones de preparaciones de celulosa adecuadas tales como ftalato de acetilcelulosa o ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa. Pueden añadirse colorantes o pigmentos a los comprimidos o recubrimientos de comprimido, por ejemplo, para fines de identificación o para indicar diferentes dosis de principio activo.

25 [0053] Las composiciones farmacéuticas para administración por vía oral también incluyen cápsulas duras que consisten en gelatina, y también cápsulas selladas blandas que consisten en gelatina y un plastificante tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras pueden contener el principio activo en forma de gránulos, por ejemplo, en mezcla con cargas tales como almidón de maíz, aglutinantes y/o deslizantes tales como talco o estearato de magnesio, y opcionalmente estabilizadores. En las cápsulas blandas, el principio activo está preferentemente

30 disuelto o suspendido en excipientes líquidos adecuados tales como aceites grasos, aceite de parafina o polietilenglicoles líquidos o ésteres de etileno de ácidos grasos o propilenglicol, a los que también pueden añadírsele estabilizadores y detergentes, por ejemplo, del tipo de ésteres de ácidos grasos de polioxietileno-sorbitano.

[0054] Las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración rectal son, por ejemplo, supositorios que

35 consisten en una combinación del principio activo y una base de supositorio. Bases de supositorio adecuadas son, por ejemplo, triglicéridos naturales o sintéticos, hidrocarburos de parafina, polietilenglicoles o alcanoles superiores.

[0055] Para administración parenteral son especialmente adecuadas disoluciones acuosas de un principio activo en forma soluble en agua, por ejemplo, de una sal soluble en agua, o suspensiones para inyección acuosa que

40 contienen sustancias que aumentan la viscosidad, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol y/o dextrano y, si se desea, estabilizadores. El principio activo, opcionalmente junto con excipientes, también puede estar en forma de un liofilizado y puede prepararse en una disolución antes de la administración parenteral mediante la adición de disolventes adecuados.

45 [0056] Disoluciones como tales se usan, por ejemplo, para administración parenteral, también pueden emplearse como disoluciones para infusión.

[0057] Conservantes preferidos son, por ejemplo, antioxidantes tales como ácido ascórbico, o microbicidas tales como ácido sórbico o ácido benzoico.

50 [0058] Los compuestos de la invención pueden administrarse como el único principio activo o junto con otros fármacos útiles contra enfermedades neoplásicas o útiles en pautas de inmunomodulación. Por ejemplo, los agentes de la invención pueden usarse según la invención en combinación con composiciones farmacéuticas eficaces en diversas enfermedades como se han descrito anteriormente, por ejemplo, con ciclofosfamida, 5-fluorouracilo,

55 fludarabina, gemcitabina, cisplatino, carboplatino, vincristina, vinblastina, etopósido, irinotecan, paclitaxel, docetaxel, rituxan, doxorubicina, gefitinib o imatinib; o también con ciclosporinas, rapamicinas, ascomicinas o sus análogos inmunosupresores, por ejemplo, ciclosporina A, ciclosporina G, FK-506, sirolimus o everolimus, corticosteroide, por ejemplo, prednisona, ciclofosfamida, azatiopreno, metrotrexato, sales de oro, sulfasalazina, antipalúdicos, brequinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato, mofetilo, 15-desoxispergualina, anticuerpos monoclonales inmunosupresores, por ejemplo, anticuerpos monoclonales para receptores de leucocitos, por ejemplo, MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, CD40, CD45, CD58, CD80, CD86, CD152, CD137, CD154, ICOS, LFA-1, VLA-4 o sus ligandos, u otros compuestos inmunomoduladores, por ejemplo, CTLA4Ig.

5 [0059] El valor de CI50 en aquellos experimentos se facilita como la concentración del compuesto de prueba en cuestión que produce una cifra de células que es el 50% inferior a la obtenida usando el control sin inhibidor. Los compuestos de fórmula l' presentan una actividad inhibitoria con una CI50 en el intervalo de aproximadamente 0,01 a 1 µM.

10 [0060] Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar la invención sin limitar la invención en su alcance.

Ejemplos

15 Abreviaturas

[0061] AcOH = ácido acético, ALK = quinasa del linfoma anaplásico, ATP = adenosin 5'-trifosfato, salmuera = disolución saturada de cloruro sódico, BSA = albúmina de suero bovino, DIAD = azodicarboxilato de diisopropilo, DIPCDI = N,N'-diisopropilcarbodiimida, DMAP = 4-dimetilaminopiridina, DMF = N,N-dimetilformamida, DTT = 1,420 ditio-D,L-treitol, EDTA = ácido etilendiaminatetraacético, Et = etilo, EtOAc = acetato de etilo, EtOH = etanol, Eu-PT66 = anticuerpo antifosfotirosina marcado con europio W1024 LANCE™ (Perkin Elmer), FAK = quinasa de adhesión focal, FRET = transferencia de energía por resonancia de fluorescencia, HEPES = ácido N-2-hidroxietilpiperazin-N'2-etanosulfónico, HOAt = 1-hidroxi-7-azabenzotriazol, Me = metilo, RT-PCR = reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa, SA-(SL)APC = estreptavidina conjugada con aloficocianina SuperLight™ (Perkin Elmer),

25 sust. = sustituido, TBTU = tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilamonio, THF = tetrahidrofurano.

Ejemplo 1

Número de Estructura Datos físicos

compuesto RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

5 RMN 1H 400 MHz (CDCl3) δ 12,5 (s, a, 1H), 10,3 (s, 1H), 8,39 (d, 1H, J = 8,38 Hz), 7,97 (s, 1H), 7,87 (dd, 1H, J = 1,63, 7,55 Hz), 7,49 (d, 1H, J = 8,69 Hz), 6,54 (d, 1H, J = 2,49 Hz), 6,43 (dd, 1H, J = 2,51, 8,73 Hz), 4,70 (s, 1H), 4,04 (q, 2H, J = 6,98 Hz), 3,51 (m, 2H), 3,29 (d, 1H, J = 19,2 Hz), 3,18 (m, 2H), 2,89 (d, 3H, J = 3,26 Hz), 2,77 (s, 6H), 2,39 (m, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,40 (t, 3H, J = 6,97 Hz). EM m/z 561,4 (M + 1)

6 EM m/z 589,4 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

7 EM m/z 633,4 / 635,4 (M + 1).

16 EM m/z 575,4 (M + 1).

19 EM m/z 532,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

28 EM m/z 633,4 / 635,3 (M + 1).

29 EM m/z 603,4 (M + 1).

30 EM m/z 601,4 (M + 1).

31 EM m/z 603,4 (M + 1).

32 EM m/z 601,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

33 EM m/z 575,4 (M + 1).

34 EM m/z 561,4 (M + 1).

35 RMN 1H 600 MHz (acetona-d6) δ 8,47 (d, J = 7,13, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,09 (d, J = 7,85 Hz, 1H), 7,83 (m, 1H), 7,73 (t, J = 7,67 Hz, 1H), 7,50 (m, 1H), 6,87 (m, 1H), 6,71 (m, 1H), 5,46 (d, J = 31,2 Hz, 1H), 4,22 (m, 3H), 3,55 (m, 5H), 2,51 (m, 1H), 2,49 (m, 1H), 2,21 (m, 1H), 1,50 (m, 6H), 1,10 (d, J = 6,56 Hz, 6H). EM m/z 575,4 (M + 1).

36 EM m/z 574,4 (M + 1).

37 EM m/z 562,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

38 EM m/z 560,4 (M + 1).

39 EM m/z 546,4 (M + 1).

40 EM m/z 560,4 (M + 1).

41 EM m/z 559,4 (M + 1).

42 EM m/z 547,4 (M + 1).

43 EM m/z 559,4 (M + 1).

Número de: Estructura Datos físicos

compuesto 44: RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z) EM m/z 600,4 (M + 1).

45: EM m/z 586,4 (M + 1).

46: EM m/z 600,4 (M + 1).

47: EM m/z 599,4 (M + 1).

48: EM m/z 587,4 (M + 1).

49: RMN 1H 600 MHz (acetona-d6) δ 10,35 (m,

1H), 8,72 (s, a, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,00 (d, J =

7,93 Hz, 1H), 7,73 (m, 1H), 7,64 (m, 1H),

7,50 (t, J = 7,77 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,43

(d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,31 (m, 1H), 4,22 (q, J =

6,93 Hz, 2H), 3,97 (m, 2H), 3,80 (t, J = 8,45

Hz, 1H), 3,58 (q, J = 8,38 Hz, 1H), 3,36 (m,

1H), 3,17 (s, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,66 (m, 1H),

2,15 (m, 2H), 1,73 (d, J = 12,9 Hz, 2H), 1,59

(d, J = 12,9 Hz, 1H), 1,55 (m, 2H), 1,43 (m,

3H), 1,35 (m, 2H), 1,25 (m, 1H). EM m/z

599,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

50 EM m/z 562,4 (M + 1).

51 EM m/z 614,5 (M + 1).

52 EM m/z 640,5 (M + 1).

53 EM m/z 640,5 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

54 EM m/z 628,5 (M + 1).

57 EM m/z 613,5 (M + 1).

58 EM m/z 578,5 (M + 1).

59 EM m/z 560,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

60 EM m/z 586,4 (M + 1).

61 EM m/z 586,4 (M + 1).

62 EM m/z 574,4 (M + 1).

65 EM m/z 559,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

66 RMN 1H 600 MHz (CD3OD) δ 8,65 (a, 1H), 8,03 (a, 1H), 7,78 (d, J = 7,76 Hz, 1H), 7,49 (a, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,38 (m, 1H), 6,33 (dd, J = 1,69, 8,64 Hz, 1H), 4,12 (q, J = 6,96 Hz, 2H), 4,06 (m, 1H), 3,71 (dd, J = 6,68, 10,74 Hz, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,56 (dd, J = 4,71, 10,76 Hz, 1H), 3,42 (m, 3H), 3,22 (q, J = 7,28 Hz, 2H), 2,57 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 1,39 (t, J = 7,28 Hz, 3H), 1,34 (t, J = 6,96 Hz, 3H). EM m/z 524,4 (M + 1).

67 EM m/z 574,4 (M + 1).

68 RMN 1H 600 MHz (CD3OD) δ 8,23 (s, 1H), 8,18 (d, J = 8,16 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 8,44 Hz, 2H), 7,68 (m, 1H), 7,43 (m, 1H), 7,22 (d, J = 2,29 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 2,30, 8,81 Hz, 1H), 4,20 (q, J = 6,99 Hz, 2H), 3,77 (m, 2H), 3,58 (m, 2H), 2,75 (d, J = 7,03 Hz, 2H), 2,72 (m, 1H), 2,18 (m, 4H), 1,47 (t, J = 6,97 Hz, 3H), 0,75 (m, 1H), 0,30 (m, 2H), 0,00 (m, 2H). EM m/z 600,4 (M + 1).

69 EM m/z 600,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

70 EM m/z 588,4 (M + 1).

73 EM m/z 573,4 (M + 1).

74 EM m/z 538,4 (M + 1).

75 EM m/z 573,4 (M + 1).

76 EM m/z 578,5 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

77 EM m/z 613,5 (M + 1).

78 EM m/z 511,4 (M + 1).

79 EM m/z 525,5 (M + 1).

80 EM m/z 524,5 (M + 1).

81 EM m/z 510,5 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

82 EM m/z 525,4 (M + 1).

83 EM m/z 627,5 (M + 1).

84 RMN 1H 600 MHz (CD3OD) δ 9,18 (m, 2H), 8,05 (d, J = 7,93 Hz, 1H), 7,93 (t, J = 7,64 Hz, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,58 (t, J = 7,54 Hz, 1H), 4,72 (s, 2H), 4,07 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,34 (a, 4H), 2,96 (t, J = 12,3 Hz, 2H), 2,87 (s, 6H), m, 2H), 2,28 (s, 1H), 2,00 (a, 7H), 1,81 (a, 2H). EM m/z 627,5 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

85 EM m/z 591,5 (M + 1).

86 EM m/z 601,5 (M + 1).

87 EM m/z 602,4 (M + 1).

88 EM m/z 566,5 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

92 RMN 1H 600 MHz (CD3OD) δ 8,31 (d, J = 7,65 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,94 (dd, J = 1,33, 7,96 Hz, 1H), 7,67 (t, J = 7,70 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 7,68 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,56 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 1,37 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 8,66 Hz, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,11 (a, 2H), 3,91 (d, J = 12,68 Hz, 2H), 3,83 (a, 2H), 3,58 (a, 2H), 3,46 (m, 1H), 3,23 (a, 2H), 3,00 (t, J = 12,19 Hz, 2H), 2,73 (s, 6H), 2,33 (d, J = 12,14 Hz, 2H), 1,97 (m, 2H), 1,30 (d, J = 6,04 Hz, 6H). EM m/z 630,5 (M + 1).

93 EM m/z 629,5 (M + 1).

94 EM m/z 594,5 (M + 1).

103 EM m/z 547,1 (M + 1).

111 EM m/z 557,3 (M + 1).

112 EM m/z 559,3 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

EM m/z 529,2 (M + 1).

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) δ 9,91 (s a, 1H), 9,50 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,49 (s a, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,74 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,41 (s a, 1H), 7,23 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,18 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,89 (m, 2H), 3,84 (d, 2H, J = 11,4 Hz), 3,54 (d, 2H, J = 11,4 Hz), 3,18 (q, 2H, J = 8,0 Hz), 2,95 (t, 2H, J = 11,4 Hz), 2,88 (s, 3H), 2,64 (s, 6H), 2,53 (m, 2H), 1,06 (t, 3H, J = 8,0 Hz); EM m/z 530,2 (M + 1).

117 EM m/z 556,2 (M + 1).

118 EM m/z 556,2 (M + 1).

EM m/z 600,2 (M + 1).

EM m/z 574,2 (M + 1).

EM m/z 573,2 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

129 EM m/z 576,2 (M + 1).

130 EM m/z 588,2 (M + 1).

133 EM m/z 589,2 (M + 1).

134 EM m/z 575,2 (M + 1).

135 EM m/z 574,2 (M + 1).

136 EM m/z 601,2 (M + 1).

137 EM m/z 560,2 (M + 1).

EM m/z 575,2 (M + 1).

RMN 1H 600 MHz (DMSO-d6) δ 10,35 (s a, 1H), 9,45 (s, 1H), 8,47 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 8,33 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,79 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,57 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 7,23 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 6,68 (s, 0,4H), 6,64 (s, 0,6H), 6,50 (s, 0,6H), 6,49 (s, 0,4H), 5,19 (s, 0,6H), 5,15 (s, 0,4H), 4,58 (m, 1H), 3,99 (m, 0,4H), 3,73 (m, 1,6H), 3,36 (m, 0,6H), 3,26 (m, 0,8H), 3,15 (m, 0,6H), 2,96 (s, 1,2H), 2,89 (s, 1,8H), 2,64 (s, 6H), 2,60 (m, 1H), 2,24 (m, 0,6H), 2,07 (m, 0,4H), 1,20 (d, 6H, J = 6,0 Hz); EM m/z 561,2 (M + 1).

140 EM m/z 587,2 (M + 1).

141 EM m/z 587,2 (M + 1).

142 EM m/z 560,2 (M + 1).

EM m/z 575,2 (M + 1).

EM m/z 561,2 (M + 1).

EM m/z 587,2 (M + 1).

RMN 1H 600 MHz (DMSO-d6) 3 9,81 (s a, 0,4H), 9,74 (s a, 0,6H), 9,59 (s a, 1H), 8,48 (s a, 1H), 8,34 (s, 0,4H), 8,33 (s, 0,6H), 8,232 (s, 0,6H), 8,228 (s, 0,4H), 7,82 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,59 (m, 1H), 7,49 (d, 0,6H, J = 8,4 Hz), 7,47 (d, 0,4H, J = 8,4 Hz), 7,34 (q, 1H, J = 7,2 Hz), 6,75 (s, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,57 (dd, 0,6H, J, = 2,4 Hz, J2 8,4 Hz), 6,54 (dd, 0,4H, J, = 2,4 Hz, J2 = 8,4 Hz), 4,73 (m, 0,6H), 4,58 (m, 1H), 4,52 (m, 0,4H), 3,52 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,35 (m, 0,4H), 3,33 (m, 0,6H), 3,21 (m, 1H), 3,11 (m, 1H), 2,85 (d, 1,8H, J = 4,8 Hz), 2,82 (d, 1,2H, J = 3,0 Hz), 2,25 (m, 1H), 2,07 (m, 0,4H), 2,05 (m, 0,6H), 1,98 (m, 1H), 1,76 (m, 1H), 1,20 (d, 3,6H, J = 6,0 Hz), 1,18 (d, 2,4H, J = 6,0 Hz), 1,15 (d, 6H, J = 7,2 Hz); EM m/z 574,2 (M + 1).

148 EM m/z 589,3 (M + 1).

149 EM m/z 575,2 (M + 1).

150 EM m/z 601,3 (M + 1).

151 EM m/z 601,3 (M + 1).

156 EM m/z 587,2 (M + 1).

Número de: Estructura Datos físicos

compuesto: RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z) RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) δ 10,05 (s a,

1H), 9,42 (s, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 7,6 Hz),

8,35 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,79

(dd, 1H, J1 = 1,6 Hz, J2 = 8,0 Hz), 7,58 (t, 1H,

J = 8,0 Hz), 7,32 (t, 1H, J = 8,4 Hz), 7,15 (m,

2H), 4,70 (m, 1H), 4,07 (m, 2H), 3,45 (m,

2H), 3,21 (m, 2H), 3,06 (m, 2H), 2,83 (s, 3H),

2,65 (s, 6H), 1,27 (d, 6H, J = 6,0 Hz); EM m/z

588,2 (M + 1).

EM m/z 614,2 (M + 1).

EM m/z 573,2 (M + 1).

RMN 1H 600 MHz (DMSO-d6) δ 9,45 (s, 1H),

8,44 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 8,38 (s, 1H), 8,27 (s,

1H), 7,81 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,66 (d, 1H, J =

8,4 Hz), 7,64 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,35 (t, 1H, J

= 7,2 Hz), 6,97 (s, 1H), 6,76 (d, 1H, J = 8,4

Hz), 4,06 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 3,59 (m, 6H),

3,29 (m, 4H), 2,92 (m, 2H), 2,86 (s, 3H), 2,64

(s, 6H), 1,31 (t, 3H, J = 6,6 Hz); EM m/z

574,2 (M + 1).

EM m/z 600,2 (M + 1).

EM m/z 600,2 (M + 1).

EM m/z 627,5 (M + 1).

: EM m/z 628,5 (M + 1).

165 EM m/z 654,5 (M + 1).

166 EM m/z 654,5 (M + 1).

167 EM m/z 592,3 (M + 1).

168 EM m/z 588,2 (M + 1).

169 EM m/z 614,2 (M + 1).

171 RMN 1H 600 MHz (DMSO-d6) δ 9,66 (s, 1H), 8,48 (s a, 1H), 8,40 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,30 (s, 1H), 7,66 (dd, 1H, J = 1,6 Hz, J2 = 7,6 Hz), 7,71 (t, 1H, J = 8,4 Hz), 7,46 (s, 1H), 7,41 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,17 (s a, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,93 (s a, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,02 (q, 1H, J = 7,2 Hz), 3,65 (m, 2H), 3,46 (m, 1H), 3,34 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 1,94 (m, 4H), 1,26 (d, 6H, J = 6,0 Hz), 1,15 (d, 6H, J = 6,0 Hz); EM m/z 587,2 (M + 1). EM m/z 615,3 (M + 1).

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) δ 9,94 (s a, 1H), 9,53 (s, 1H), 8,49 (m, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,79 (dd, 1H, J1 = 2,0 Hz, J2 = 8,0 Hz), 7,58 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 7,32 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 6,68 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 6,51 (dd, 1H, J1 = 2,0 Hz, J2 = 8,4 Hz), 421 (m, 2H), 4,04 (q, 2H, J = 6,8 Hz), 3,86 (d, 2H, J = 12 Hz), 3,68 (t, 2H, J = 12 Hz), 3,51 (d, 2H, J = 11,2 Hz), 3,38 (t, 1H, J = 12 Hz), 3,13 (m, 2H), 2,73 (t, 2H, J = 11,2 Hz); 2,64 (s, 6H), 2,16 (d, 2H, J = 11,2 Hz), 1,73 (m, 2H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2 Hz); EM m/z 616,3 (M + 1).

185 EM m/z 642,3 (M + 1).

187 EM m/z 599,3 (M + 1).

188 EM m/z 600,3 (M + 1).

189 EM m/z 626,3 (M + 1).

191 EM m/z 599,3 (M + 1).

192 RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) δ 9,86 (s a, 1H), 9,56 (s, 1H), 8,59 (s a, 1H), 8,47 (s a, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,79 (dd, 1H, J1 = 1,6 Hz, J2 = 8,0 Hz), 7,58 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,33 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 6,70 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,51 (dd, 1H, J1 = 2,4 Hz, J2 = 8,4 Hz), 4,03 (q, 2H, J = 6,8 Hz), 3,81 (d, 2H, J = 12,4 Hz), 3,58 (m, 2H), 3,28 (m, 1H), 3,11 (m, 2H), 2,74 (t, 2H, J = 12 Hz), 2,64 (s, 6H), 2,15 (d, 2H, J = 11,6 Hz), 2,03 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 1,73 (m, 2H), 1,24 (t, 3H, J = 6,8 Hz); EM m/z 600,2 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

193 EM m/z 626,2 (M + 1).

219 EM m/z 561,40 (M + 1).

223 EM m/z 573,40 (M + 1).

224 EM m/z 547,40 (M + 1).

225 EM m/z 547,40 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

226 EM m/z 546,40 (M + 1).

227 EM m/z 546,40 (M + 1).

234 EM m/z 561,4 (M + 1).

EM m/z 573,4 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

EM m/z 573,4 (M + 1).

252 EM m/z 573,4 (M + 1).

253 EM m/z 519,1 (M + 1).

254 EM m/z 563,1 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

EM m/z 577,1 (M + 1).

256 EM m/z 588,2 (M + 1).

259 3H, J = 6,8 Hz); EM m/z 628,5 (M + 1) RMN 1H 400 MHz (CD3OD) δ 8,17 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,93 (s, 1H), 7,74 (dd, 1H, J = 1,6, 8,0 Hz), 7,47 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,25 (m, 1H), 7,13 (d, 1H, 8,8 Hz), 6,48 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,37 (dd, 1H, J = 2,4, 8,8 Hz), 3,66 (m, 4H), 3,34 (m, 2H), 3,14 (m, 4H), 2,81 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,98 (d, 2H, J = 12 Hz), 1,68 (m, 7H), 1,30 (m, 1H), 1,02 (d, 6H, J = 6,8 Hz), 0,99 (m, 1H), 0,32 (m, 2H), 0,04 (m, 2H); EM m/z 639,5 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

276 RMN 1H 400 MHz (CD3OD) δ 8,32 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 8,11 (s, 1H), 7,92 (dd, 1H, J = 1,6, 8,0 Hz), 7,65 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,43 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,28 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,67 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,56 (dd, 1H, J = 2,4, 8,8 Hz), 4,03 (m, 2H), 3,86 (m, 4H), 3,73 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 3,23 (m, 2H), 2,85 (m, 2H), 2,23 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 1,19 (d, 6H), 1,13 (m, 1H), 0,48 (m, 2H), 0,21 (m, 2H); EM m/z 641,5 (M + 1)

EM m/z 641,5 (M + 1) 279 EM m/z 600,5 (M + 1) 281

282 RMN 400 MHz (CD3OD) δ 8,30 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 8,21 (s, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,91 (dd, 1H, J = 1,63, 8,0 Hz), 7,71 (m, 1H), 7,42 (m, 1H), 7,08 (d, 1H. J = 2,0 Hz), 6,91 (dd, 1H, J = 1,6, 8,4 Hz), 4,30 (m, 2H), 4,13 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 3,60 (m, 4H), 3,16 (m, 2H), 1,41 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 1,90 9d, 6H, J = 6,8 Hz); EM m/z. 573,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

EM m/z 590,4 (M + 1) 298 EM m/z 574,4 (M + 1) 303 EM m/z 588,2 (M + 1) 305 EM m/z 576,2 (M + 1) 309

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

EM m/z 616,5 (M + 1) 313 EM m/z 589,4 (M + 1) 325

EM m/z 589,4 (M + 1)

EM m/z 587,4 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

EM m/z 587,4 (M + 1) 328 EM m/z 586,4 (M + 1) 329 EM m/z 587,1 (M + 1) 330 EM m/z 586,4 (M + 1) 331

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

EM m/z 600,2 (M + 1) 332 EM m/z 588,4 (M + 1) 340 EM m/z 600,4 (M + 1) 341 EM m/z 602,4 (M + 1) 342

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

368 EM m/z 605,20 / 607,20 (M + 1)

372 EM m/z 563,20 / 565,20 (M + 1)

373 EM m/z 519,20 / 521,20 (M + 1)

374 EM m/z 533,20 / 535,20 (M + 1)

375 EM m/z 476,20 / 478,20 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

376 RMN 1H 600 MHz (DMSO-d6) δ 9,39 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,88 (t, J = 6,02 Hz, 1H), 7,78 (dd, J = 7,94, 1,35 Hz, 1H), 7,50 (dt, J = 8,24, 1,89 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,25 (t, J = 7,39 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,92 Hz, 1H) 5,65 (dd, J = 8,87, 3,03 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,54 (s,

378 EM m/z 591,20 / 593,20 (M + 1)

379 EM m/z 547,20 / 549,20 (M + 1)

380 EM m/z 561,20 / 563,20 (M + 1)

381 EM m/z 548,20 / 550,20 / 552,20 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

382 EM m/z 548,20 / 550,20 / 552,20 (M + 1)

383 EM m/z 563,30 / 565,30 (M + 1)

384 EM m/z 577,30 / 579,30 (M + 1)

385 EM m/z 591,40 / 593,30 (M + 1)

386 EM m/z 605,40 / 607,40 (M + 1)

387 EM m/z 617,40 / 619,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

388 EM m/z 619,40 / 621,40 (M + 1)

389 EM m/z 576,30 / 578,30 (M + 1)

390 EM m/z 563,30 / 565,30 (M + 1)

391 EM m/z 560,40 / 562,40 (M + 1)

392 EM m/z 574,40 / 576,50 (M + 1)

393 RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) δ 9,47 (s, 1H), 8,45 (d, J = 7,37 Hz, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,83 (d, J = 7,93 Hz, 1H), 7,59 (t, J = 8,07 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 8,69 Hz, 1H), 7,32 (t, J = 7,54 Hz, 1H), 6,63 (dd, J = 12,67, 2,42 Hz, 1H), 6,49 (m, 1H), 5,16 (m, 1H), 4,013,68 (m, 3H). 3,48-EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

395 EM m/z 573,40 / 575,40 (M + 1)

396 EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1)

397 EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1)

398 EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

399 EM m/z 560,40 / 562,40 (M + 1)

400 RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) δ 10,30 (s, a, 1H), 9,53 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,41 (d, J = 7,90 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,90 (dd, J = 7,91,1,25 Hz, 1H), 7,64 (t, J = 7,93 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 8,70 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 7,48 Hz, 1H), 6,67 (dd, J = 13,68, 2,49 Hz, 1H), 6,46 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 4,04 (m, EM m/z 573,20 / 575,20 (M + 1)

402 EM m/z 573,20 / 575,20 (M + 1)

403 EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

404 EM m/z 573,401575,40 (M + 1)

405 EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1)

406 EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1)

407 EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1)

411 EM m/z 587,50 / 589,40 (M + 1)

412 EM m/z 588,50 / 590,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

413 EM m/z 637,50 / 639,50 (M + 1)

414 EM m/z 638,50 / 640,50 (M + 1)

415 EM m/z 602,50 / 604,50 (M + 1)

416 EM m/z 583,40 / 585,40 (M + 1)

417 EM m/z 584,40 / 586,40 (M + 1)

EM m/z 548,40 / 550,40 (M + 1)

EM m/z 540,40 / 542,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

420 EM m/z 541,40 / 543,40 (M + 1)

421 EM m/z 505,40 / 507,40 (M + 1)

422 EM m/z 667,30 / 669,30 (M + 1)

423 EM m/z 632,30 / 634,30 (M + 1)

424 EM m/z 573,40 / 575,40 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

427 EM m/z 504,20 (M + 1).

428 EM m/z 585,30 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

429 EM m/z 627,20 (M + 1).

431 EM m/z 602,20 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

432 EM m/z 562,10 (M + 1).

434 EM m/z 421,1 (M + 1).

440 EM m/z 468,20 (M + 1).

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

441 EM m/z 552,30 (M + 1).

442 EM m/z 592,30 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

443 EM m/z 504,20 (M + 1)

444 EM m/z 588,30 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

445 EM m/z 628,30 (M + 1)

447 EM m/z 503,20 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

448 EM m/z 587,20 (M + 1)

449 EM m/z 627,30 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

451 EM m/z 549,30 (M + 1)

452 EM m/z 509,30 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

453 EM m/z 495,20 (M + 1)

454 EM m/z 495,20 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

455 EM m/z 585,20 (M + 1)

456 EM m/z 545,20 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

457 EM m/z 531,20 (M + 1)

458 EM m/z 531,20 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

459 EM m/z 584,30 (M + 1)

460 EM m/z 544,20 (M + 1)

Número de Estructura Datos físicos compuesto

RMN 1H 400 MHz (DMSO-d6) y/o EM (m/z)

461 EM m/z 530,20 (M + 1)

462 EM m/z 530,20 (M + 1)

Ejemplo 2: Ensayo de quinasas ZAP-70 libres de células

[0062] El ensayo de quinasas ZAP-70 se basa en la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia

5 resuelta en el tiempo (FRET). Se incuba ZAP-70 80 nM con Lck 80 nM (proteína tirosina quinasa de linfocitos T linfoides) y ATP 4 µM en tampón quinasa ZAP-70 (Tris 20 mM, pH 7,5, Na3VO4 10 µM, DTT 1 mM, MnCl2 1 mM, 0,01% de BSA, 0,05% de Tween-20) durante 1 hora a temperatura ambiente en un tubo de polipropileno siliconizado. A continuación, se añade el inhibidor de Lck selectivo PP2 (1-terc-butil-3-(4-cloro-fenil)-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-4-ilamina; Alexis Biochemicals) (concentración final 1,2 µM) y se incuba durante otros 10 min. 10 µl de

10 esta disolución se mezclan con 10 µl del péptido biotinilado LAT-11 (1 µM) como sustrato y 20 µl de diluciones seriadas de inhibidores y se incuban durante 4 horas a temperatura ambiente. La reacción de la quinasa se termina con 10 µl de una disolución de EDTA 10 mM en tampón de detección (Tris 20 mM, pH 7,5, 0,01% de BSA, 0,05% de Tween-20). Se añaden 50 µl de anticuerpo antifosfotirosina marcado con europio (Eu-PT66; concentración final 0,125 nM); y 50 µl de estreptavidina-aloficocianina (SA-APC; concentración final 40 nM) en tampón de detección.

15 Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente la fluorescencia se mide en el contador Victor2 Multilabel (Wallac) a 665 nm. Los valores de referencia (control bajo) se obtienen en ausencia de muestras de prueba y ATP y se restan de todos los valores. Las señales obtenidas en ausencia de muestras de prueba se toman como el 100% (control alto). La inhibición obtenida en presencia de compuestos de prueba se calcula como inhibición en porcentaje de control alto. La concentración de compuestos de prueba resultante con una inhibición del 50% (CI50) se determina a partir de las curvas de dosis-respuesta. En este ensayo, los agentes de la invención tienen valores de CI50 en el intervalo de 10 nM a 2 µM, preferentemente de 10 nM a 100 nM.

[0063] Se obtiene quinasa ZAP-70 recombinante del siguiente modo: un ácido nucleico que codifica ZAP-70 humano de longitud completa (GenBank nº L05148) se amplifica a partir de una biblioteca de ADNc de Jurkat por RT-PCR y se clona en el vector pBluescript KS (Stratagene, California, EE.UU.). La autenticidad del inserto de ADNc de ZAP70 se valida por análisis de secuencias completo. Este plásmido donante se usa luego para la construcción de un vector de transferencia de baculovirus recombinante basado en el plásmido pVL1392 (Pharmingen, California, EE.UU.) que además caracteriza una marca de hexahistidina en el extremo N. Tras la co-transfección con ADN vírico de AcNPV, 10 cepas aisladas víricas independientes se derivan mediante purificación en placa, se amplifican a pequeña escala y posteriormente se analizan para la expresión de ZAP-70 recombinante por transferencia Western usando un anticuerpo anti-ZAP-70 comercialmente disponible (clon 2F3.1, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY, EE.UU.). Tras la amplificación adicional de una placa recombinante positiva se preparan cepas de virus valoradas y se usan para la infección de células Sf9 cultivadas en medio SF900 II libre de suero (Life Technologies, Basilea, Suiza) bajo condiciones optimizadas definidas. La proteína ZAP-70 se aísla del lisado de células Sf9 infectadas por cromatografía de afinidad sobre una columna Ni-NTA (Qiagen, Basilea, Suiza).

[0064] También está disponible ZAP-70 marcada con His recombinante de PanVera LLC, Madison, Wisconsin, EE.UU.

[0065] LAT-11 (ligador para la activación de linfocito T): el péptido biotinilado LAT-11 (biotina-EEGAPDYENLQELN) usado como sustrato en el ensayo de quinasas ZAP-70 se prepara en analogía a los procedimientos conocidos de la síntesis de péptidos. El grupo N-a Fmoc de Fmoc-Asn(Trt)-oximetil-4-fenoximetil-co(poliestireno-1%-divinil-benceno), contenido de Asn aprox. 0,5 mmol/g, se escinde usando piperidina, 20% en DMF. Cuatro equivalentes por grupo amino de Fmoc-aminoácido protegido en sus cadenas laterales [Asp(OtBu), Glu(OtBu), Asn(Trt), Gln(Trt) y Tyr(tBu)] se acoplan usando DIPCDI y HOBt en DMF. Después de completarse el ensamblaje de la cadena de péptidos el grupo protector Fmoc terminal se elimina con piperidina en DMF como antes. Luego se acopla ácido L(+)-biotinilaminohexanoico al grupo amino terminal usando DIPCDI y HOBt en DMF usando cuatro equivalentes de los reactivos durante cuatro días a TA. El péptido se escinde del soporte de resina y todos los grupos protectores de la cadena lateral se eliminan simultáneamente usando un reactivo que consiste en 5% de sulfuro de dodecilmetilo y 5% de agua en TFA durante dos horas a TA. Las partículas de resina se separan por filtración, se lavan con TFA y el producto se precipita en los filtrados combinados mediante la adición de 10 a 20 volúmenes de éter dietílico, se lava con éter y se seca. El producto se purifica por cromatografía sobre una columna de silicona de poro ancho C-18 usando un gradiente de acetonitrilo en 2% de ácido fosfórico acuoso. Las fracciones que contienen el compuesto puro se recogen, se filtran a través de una resina de intercambio aniónico (Biorad, forma de acetato AG4-X4) y se liofilizan dando el compuesto del título. EM: 1958,0 (M-H)-1

Ejemplo 3: Ensayo celular de crecimiento tumoral independiente del anclaje

[0066] Células 4T1 de carcinoma mamario de ratón (5 x 103) se siembran en placas Ultra low Attachment de 96 pocillos (nº 3474, Corning Inc.) en 100 µl de medio Eagle modificado por Dulbecco que contiene 10% de SBF. Las células se cultivan durante 2 h y se añaden inhibidores a diversas concentraciones en una concentración final de 0,1% de DMSO. Después de 48 h, el crecimiento celular se ensaya con kit de recuento de células 8 (Wako Pure Chemical) que usa una sal de tetrazolio soluble en agua WST8. Se añaden veinte µl de reactivo a cada pocillo y las células se cultivan adicionalmente durante 2 h. La densidad óptica se mide a 450 nm. Se determina la concentración de compuesto que provoca el 50% de inhibición del crecimiento.

Ejemplo 4: Actividad in vivo en el modelo de xenoinjerto de ratón sin pelo:

[0067] Ratones sin pelo BALB/c macho o hembra (5-8 semanas de edad, Charles River Japan, Inc., Yokohama, Japón) se mantienen bajo condiciones estériles con agua y alimento a voluntad. Los tumores se inducen por inyección subcutánea de células tumorales (línea celular epitelial humana MIA PaCa-2; Colección europea de cultivos celulares (ECACC), Salisbury, Wiltshire, RU, número de catálogo 85062806; línea celular de un varón caucásico de 65 años de edad; línea celular de carcinoma pancreático humano sin diferenciar) en el flanco derecho

o izquierdo de ratones bajo anestesia Forene® (Abbott Japan Co., Ltd., Tokio, Japón). El tratamiento con el compuesto de prueba se empieza cuando los volúmenes de tumor medios alcanzaron aproximadamente 100 mm3. El crecimiento del tumor se mide dos veces por semana y 1 día después del último tratamiento determinando la longitud de dos ejes perpendiculares. Los volúmenes del tumor se calculan según procedimientos publicados (véase

Evans y col., Brit. J. Cancer 45, 466-8, 1982). La eficacia antitumoral se determina como el aumento medio en el volumen de tumor de los animales tratados dividido entre el aumento medio en el volumen de tumor de los animales sin tratar (controles) y, después de la multiplicación por 100, se expresa como delta T/C [%]. La regresión del tumor se informa como los cambios medios del volumen de tumor de los animales tratados divididos entre el volumen de 5 tumor medio al principio del tratamiento y, después de la multiplicación por 100, se expresa como regresión [%]. El

compuesto de prueba se administra diariamente por vía oral con o sin descanso de fármaco.

[0068] Como alternativa a la línea celular MIA PaCa-2 también puede usarse otra línea celular del mismo modo, por

ejemplo: 10

-: la línea celular de carcinoma de mama 4T1 (número ATCC CRL-2539; véase también Cancer. 88(12 Supple), 2979-2988, 2000) con ratones BALB/c hembra (inyección en el panículo adiposo mamario).

[0069] Basándose en estos estudios, un compuesto de fórmula I según la invención muestra eficacia terapéutica 15 especialmente contra enfermedades proliferativas sensibles a una inhibición de una tirosina quinasa.

Ejemplo 5: Comprimidos

[0070] Comprimidos que comprenden 50 mg de principio activo, por ejemplo, uno de los compuestos de fórmula I 20 descritos en los Ejemplos 1 a 131, y que tienen la siguiente composición, se preparan de forma tradicional.

Composición:

[0071]

25

principio activo: 50 mg

almidón de trigo: 150 mg

lactosa: 125 mg

ácido silícico coloidal: 12,5 mg

talco: 22,5 mg

estearato de magnesio: 2,5 mg

Total:: 362,5 mg

[0072] Preparación: El principio activo se mezcla con una parte del almidón de trigo, con la lactosa y el ácido silícico coloidal y la mezcla se obliga a pasar por un tamiz. Otra porción del almidón de trigo se prepara en una pasta, en un baño de agua, con cinco veces la cantidad de agua y la mezcla en polvo se amasa con la pasta hasta que se

30 obtiene una masa ligeramente plástica.

[0073] La masa plástica se comprime a través de un tamiz de aproximadamente 3 mm de tamaño de malla y se seca, y los gránulos secos resultantes se obligan de nuevo a pasar por un tamiz. A continuación,, el resto del almidón de trigo, el talco y el estearato de magnesio se mezclan y la mezcla se comprime para formar comprimidos

35 que pesan 145 mg y que tienen una muesca de rotura.

Ejemplo 6: Cápsulas de gelatina

[0074] Se preparan de forma tradicional 5000 cápsulas de gelatina blanda que comprende cada una 50 mg de 40 principio activo, por ejemplo, uno de los compuestos de fórmula I descritos en los Ejemplos 1 a 131:

Composición:

[0075]

principio activo 250 g Lauroglykol 2 litros

[0076] Preparación: el principio activo pulverizado se suspende en Lauroglykol® (laurato de propilenglicol, Gattefossé S.A., Saint Priest, Francia) y se muele en un pulverizador en húmedo a un tamaño de partícula de aproximadamente 1 a 3 µm. A continuación, se dispensan porciones de 0,419 g de la mezcla a cápsulas de gelatina

50 blanda usando una máquina envasadora de cápsulas.

1. Compuesto de fórmula I'

Claims

REIVINDICACIONES

en el que: n’ se selecciona entre 1 y 2; R’1 se selecciona entre fenilo, piridinilo, pirazolilo y pirimidinilo; en el que R’1 está sustituido por 2 ó 3 radicales seleccionados independientemente entre etoxi, etilo, propilo, metilo, t-butilo, trifluorometilo, nitrilo, ciclobutiloxi, 2,2,2trifluoroetoxi, isobutiloxi, t-butiloxi, isopropiloxi, metil-amino-carbonilo, ciclopropil-metoxi, dimetilamino-propilamino, metoxi-etoxi, -X’R’4, -C(O)R’4 y -OX’R’4; en los que X’ es un enlace, metileno o etileno; R’4 se selecciona entre piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, azepanilo y 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-ilo; en los que R’4 está opcionalmente sustituido por 1 a 3 radicales seleccionados independientemente entre metilo, isopropilo, acetilo, acetil-metilamino, 3-dimetilamino-2,2-dimetil-propilamino, etil-metil-amino-etoxi, dietil-amino-etoxi, amino-carbonilo, etilo, 2-oxo-pirrolidin-1-ilo, pirrolidinilo, pirrolidinil-metilo, piperidinilo opcionalmente sustituido con metilo o etilo, morfolino, dimetilamino, dimetilamino-propil-amino, metil-amino y etil-amino. R’2 se selecciona entre hidrógeno y halógeno; R’3 se selecciona entre dimetil-sulfamoílo, isobutil-sulfamoílo, etil-sulfamoílo, propilsulfonilo, etil-amino-carbonilo, 1etil-propil-sulfamoílo, ciclopentil-sulfamoílo, isopropilsulfamoílo, ciclohexil-sulfonilo, ciclopropil-metil-sulfamoílo, ciclobutil-sulfamoílo e isopropil-sulfonilo;

o las sales, hidratos, solvatos y estereoisómeros de los mismos farmacéuticamente aceptables.
2.

Compuesto de fórmula I', según la reivindicación 1, en el que el compuesto es:
3.

Composición farmacéutica que comprende un compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, como principio activo junto con uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.
4.

Uso de un compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de enfermedades neoplásicas y trastornos del sistema inmunitario.
5.

Combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, y una o más sustancias farmacológicas adicionales, siendo dicha sustancia farmacológica adicional útil en el tratamiento de enfermedades neoplásicas o trastornos del sistema inmunitario.
6.

Uso de un compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad que responde a la inhibición de IGF-1R o ALK.
7.

Uso, según la reivindicación 6, en el que la enfermedad a tratar se selecciona entre enfermedades proliferativas.
8.

Uso, según la reivindicación 7, en el que la enfermedad proliferativa a tratar se selecciona entre un tumor de mama, renal, próstata, colorrectal, tiroides, ovario, páncreas, neuronal, pulmón, uterino y tumores gastrointestinales, así como osteosarcomas y melanomas.
9.

Uso, según la reivindicación 6, en el que la enfermedad a tratar es una enfermedad inmunitaria.
10.

Uso de un compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un trastorno inflamatorio y/o inmunitario.
11.

Uso, según la reivindicación 10, en el que el trastorno inflamatorio y/o inmunitario se selecciona entre rechazo a transplante, alergia y trastornos autoinmunitarios mediados por células inmunitarias que incluyen linfocitos T, linfocitos B, macrófagos, células dendríticas, mastocitos y eosinófilos.
12.

Compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, para utilizar en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad neoplásica, un trastorno del sistema inmunitario, una enfermedad inflamatoria o una enfermedad proliferativa.