WO2020088390A1 - 作为***egfr抑制剂的嘧啶吡唑类化合物 - Google Patents

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WO2020088390A1
WO2020088390A1 PCT/CN2019/113608 CN2019113608W WO2020088390A1 WO 2020088390 A1 WO2020088390 A1 WO 2020088390A1 CN 2019113608 W CN2019113608 W CN 2019113608W WO 2020088390 A1 WO2020088390 A1 WO 2020088390A1
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lcms
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PCT/CN2019/113608
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English (en)
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桑迎霞
谷晓辉
诸舜伟
薛黎婷
于晓虹
任晋生
Original Assignee
江苏先声药业有限公司
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Publication date
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to novel pyrimidine pyrazole compounds as fourth-generation (T790M / C797S mutation) EGFR kinase inhibitors and their medical applications, and specifically discloses compounds represented by formula (I), their stereoisomers, racemates, Tautomers, isotopic labels, nitrogen oxides or pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • EGFR Epithelial growth factor Receptor
  • EGF epithelial growth factor
  • EGFR belongs to a family of ErbB receptors, which includes EGFR (ErbB-1), HER2 / c-neu (ErbB-2), HER3 (ErbB-3) and HER4 (ErbB-4).
  • EGFR is also called HER1, ErbB1.
  • EGFR is widely distributed on the cell surface of mammalian epithelial cells, fibroblasts, glial cells, keratinocytes, etc.
  • EGFR signaling pathway plays an important role in the physiological processes of cell growth, proliferation and differentiation.
  • EGFR is divided into three regions: extracellular ligand binding region, transmembrane region and intracellular kinase region.
  • extracellular ligand binding region When the EGFR is bound by the corresponding ligand, it will induce the formation of homo- or heterodimers, thereby activating the intracellular tyrosine kinase pathway to phosphorylate itself, thereby guiding downstream phosphorylation, including MAPK, Akt and JNK Pathway to induce cell proliferation.
  • EGFR tyrosine kinase inhibitor (Tyrosine Kinase Inhibitor, TKI) is to block endogenous ATP binding to the intracellular kinase region, thereby inhibiting receptor phosphorylation and the activation of downstream signal transduction molecules, blocking tumors Cell proliferation.
  • TKI Tyrosine Kinase Inhibitor
  • EGFR targeted therapy has successfully entered the clinical stage and drugs have been marketed, EGFR gene mutations have led to drug resistance.
  • the mutations mainly occur in exons 18-21, of which the deletion of exon 19 and the point mutation of L858R in exon 21 are the most common mutation subtypes, accounting for 90% of all mutation types. With the development and use of drugs, most drug resistance appears in the second mutation of T790M in the gatekeeper region of kinases.
  • the present invention provides the compound represented by formula (I), its stereoisomers, racemates, and Variant isomers, isotope labels, nitrogen oxides or pharmaceutically acceptable salts thereof,
  • E is selected from Y is selected from O or S;
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 are the same or different, and are independently selected from C 1-12 alkyl;
  • A is selected from N or C-Q;
  • B is selected from N or C-D
  • Q and D are the same or different and are independently selected from H, halogen, cyano, hydroxy, amino, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more R a of the following groups: C 1-12 alkane group, C 1-12 heteroalkyl, C 2 - 12 alkenyl group, C 2-12 alkenyl, heteroaryl, C 2 - 12 alkynyl group, C 2-12 heteroaryl alkynyl, C 1-12 alkoxy, C 3 --20 cycloalkyl, 3-20 membered heterocyclyl, C 6 - 20 aryl, 5-20 membered heteroaryl, -COOC 1-12 alkyl, -COC 1-12 alkyl;
  • Each R a is the same or different and is independently selected from halogen, cyano, amino, hydroxy, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more Rs of the following groups: C 1-12 alkyl, C 1-12 heteroalkyl, C 1-12 alkoxy, C 3 - 20 cycloalkyl, 3-20 membered heterocyclyl, -COOC 1-12 alkyl, -COC 1-12 alkyl;
  • V and Z are the same or different and are independently selected from H, halogen, cyano, hydroxy, amino, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more R b of the following groups: C 1-12 alkane group, C 1-12 heteroalkyl, C 2 - 12 alkenyl group, C 2-12 alkenyl, heteroaryl, C 2 - 12 alkynyl group, C 2-12 heteroaryl alkynyl, C 1-12 alkoxy, C 3 --20 cycloalkyl, 3-20 membered heterocyclyl, C 6 - 20 aryl, 5-20 membered heteroaryl, -COOC 1-12 alkyl, -COC 1-12 alkyl, -N (C 1 -12 alkyl) 2 , -NHC 1-12 alkyl;
  • Each R b is the same or different and is independently selected from halogen, cyano, hydroxy, amino, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more Rs of the following groups: C 1-12 alkyl, C 1-12 alkoxy, C 1-12 heteroalkyl, C 3 - 20 cycloalkyl, 3-20 membered heterocyclyl;
  • Each Rs is the same or different and is independently selected from halogen, CN, OH, C 1-12 alkyl;
  • W is selected from the group consisting of hydrogen, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more R c : C 1-12 alkyl, C 1-12 heteroalkyl, C 1-12 alkanoyl, C 1-12 alkanoyl heteroaryl, 3-20 membered heterocyclyl group, C 3 - 20 cycloalkyl, 3-20 membered heterocyclyl, C 6 - 18 aryl, 5-20 membered heteroaryl, C 3 - 20 cycloalkyl and C 3 - 20 cycloalkyl group formed spiro cycloalkyl group, C 3 - 20 cycloalkyl group spiro ring and 3-20 membered heterocyclic group formed, 3-20 membered heterocyclic group 3-20 membered Spirocyclic group formed by heterocyclic group, C3-20 cycloalkyl and C3-20 cycloalkyl cyclic group, C3-20 cycloalkyl and 3-20 membered hetero
  • Q and D are identical or different and independently selected from H, halo, cyano, hydroxy, amino, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more of the following R a substituents group Group: C 1-6 alkyl, C 1-6 heteroalkyl, C 1-6 alkenyl, C 1-6 heteroalkenyl, C 1-6 alkynyl, C 1-6 heteroalkynyl, C 3- 6 cycloalkyl, C 3-6 heterocycloalkyl, phenyl and 5-6 membered heteroaryl;
  • V and Z are the same or different and are independently selected from H, halogen, cyano, hydroxy, amino, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more R b of the following groups: C 1-6 alkane Group, C 1-6 heteroalkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 3-6 heterocycloalkyl, phenyl and 5-6 membered heteroaryl, the C 1-6 alkyl, C 1 -6 heteroalkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 3-6 heterocycloalkyl, phenyl and 5-6 membered heteroaryl;
  • W is selected from the group consisting of hydrogen, unsubstituted or optionally substituted with one, two or more R c : C 1-6 alkyl, C 1-6 heteroalkyl, C 1-3 alkanoyl, C 1-3 Heteroalkanoyl, C 3-8 cycloalkyl, C 3-8 heterocyclyl, C 3-6 cycloalkyl and C 3-6 cycloalkyl spiro, C 3-6 cycloalkyl Spirocyclic group with C 3-6 heterocyclic group, C 3-6 cycloalkyl group and C 3-6 cycloalkyl group, C 3-6 cycloalkyl group and C 3-6 heterocyclic group Cyclocyclic group, C 3-6 heterocyclic group and C 3-6 heterocyclic group, C 5-14 bridge ring group, C 5-14 hetero bridge ring group;
  • each R a, R b, R c identical or different, each independently selected from -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -CN, -NH 2, -CH 3 , CH 3 CH 2- , -CF 3 , -CHF 2 , -CH 2 F, NH 2 CH 2- , -NH (CH 3 ) 2 , -OCH 3 , CH 3 CH 2 O-, CH 3 OCH 2 -, MeSO 2- , -CH 2 CH 2 F, -CH 2 CHF 2 , -CH 2 C (CH 3 ) 2 OH, -CH 2 CH 2 SO 2 Me, -CH 2 OH, -CH 2 CH 2 OH , -CH 2 CH 2 CN, -CH 2 CH 2 OCH 3 , -COOCH (CF 3 ) 2 , -COCH 2 OH, -CH 2 COOH, -CH 2 CONH 2 , 2- (1-morpholin
  • each Rs is the same or different and is independently selected from halogen, CN, OH, C 1-6 alkyl;
  • E is selected from Y is selected from O or S;
  • R 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are the same or different, and are independently selected from C 1-6 alkyl;
  • A is selected from N or CQ;
  • B is selected from N or CD;
  • a and At least one of B is N, and A and B are not N at the same time;
  • Q and D are the same or different and are independently selected from H, halogen, cyano, C 1-6 alkyl, halogen substituted C 1-6 alkyl, C 1-6 heteroalkyl, C 1-6 alkoxy group, C 3 - 12 cycloalkyl, 3-12 membered heterocyclyl, -COOC 1-6 alkyl, -COC 1-6 alkyl;
  • V and Z identical or different, independently selected from H, halo, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 3 - 6 cycloalkyl;
  • W is selected from unsubstituted or optionally substituted by one, two or more R c is the group: C 1-6 alkyl, C 1-6 heteroalkyl, C 3 - 12 cycloalkyl group, 3- 12-membered heterocyclic, C 6 - 12 aryl, 5-12 membered heteroaryl, C 3 - 6 cycloalkyl and C 3 - 6 cycloalkyl group formed spiro cycloalkyl group, C 3 - 12 cycloalkyl and The spirocyclic group formed by the 3-12 membered heterocyclic group, the spirocyclic group formed by the 3-12 membered heterocyclic group and the 3-12 membered heterocyclic group, the combination of the C 3-6 cycloalkyl group and the C3-6 heterocyclic group cycloalkyl group, C3-6 heterocyclyl and C3-6 cycloalkyl and heterocyclyl group, C 5 - 14 bridged cycloalkyl groups, 5-14
  • each R a and R b are the same or different and are independently selected from each other.
  • R is selected from -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -CN, -NH 2 , and -CH 3 , CH 3 CH 2- , -CF 3 , -CHF 2 , -CH 2 F, NH 2 CH 2- , -NH (CH 3 ) 2 , -OCH 3 , CH 3 CH 2 O-, CH 3 OCH 2 -, MeSO 2- , -CH 2 CH 2 F, -CH 2 CHF 2 , -CH 2 C (CH 3 ) 2 OH, -CH 2 CH 2 SO 2 Me, -CH 2 OH, -CH 2 CH 2 OH , -CH 2 CH 2 CN, -CH 2 CH 2 OCH 3 , -COOCH (CF 3 ) 2 , -COCH 2 OH, -CH 2 COOH, 1-tetrahydro
  • E is selected from Y is selected from O or S;
  • At least one of A and B is N, and A and B are not N at the same time;
  • Q and D are the same or different, and are independently selected from H, F, Cl, Br, trifluoromethyl, cyano, isopropyl, methoxy, cyclopropyl, -COOC 2 H 5 ;
  • V and Z are the same or different, and are independently selected from H, F, Cl, Br, methyl, methoxy, cyclopropyl;
  • W is selected from: tert-butyl
  • the compound of formula (I) is selected from the following compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof:
  • the salt is hydrochloride, trifluoroacetate or formate.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of the compound represented by formula (I), its stereoisomer, racemate, tautomer, isotope label, nitrogen oxide or At least one of pharmaceutically acceptable salts.
  • the pharmaceutical composition further includes a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the present invention also provides at least one of the compound represented by formula (I), its stereoisomer, racemate, tautomer, isotopic label, nitrogen oxide, or pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the cancer is non-small cell lung cancer, glioblastoma, pancreatic cancer, head and neck cancer, breast cancer, colorectal cancer, epithelial cancer, ovarian cancer, prostate cancer, adenocarcinoma or squamous cell carcinoma.
  • the present invention also provides at least one of the compound represented by formula (I), its stereoisomer, racemate, tautomer, isotopic label, nitrogen oxide, or a pharmaceutically acceptable salt thereof Application in preparing medicine for treating diseases caused by EGFR mutation.
  • the EGFR mutation is one, two or more mutations selected from: (1) Del19; (2) T790M; (3) C797S; (4) L858R; (5) T790M; (6) C797S .
  • the present invention also provides a method for treating cancer, comprising: combining a compound represented by formula (I), its stereoisomer, racemate, tautomer, isotope label, nitrogen oxide, or its pharmaceutical At least one of the acceptable salts is administered to individuals in need.
  • the position indicates the connection site.
  • halogen refers to F, Cl, Br and I. In other words, F, Cl, Br and I can be described as "halogen" in this specification.
  • C 1-12 alkyl group is understood to mean preferably a linear or branched saturated monovalent hydrocarbon group having 1 to 12 carbon atoms, preferably a C 1-10 alkyl group.
  • C 1-10 alkyl is understood to preferably mean a linear or branched saturated monovalent hydrocarbon group having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 carbon atoms.
  • the alkyl group is, for example, methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, isopropyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl, 2-methylbutyl, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, neopentyl, 1,1-dimethylpropyl, 4-methylpentyl, 3-methylpentyl Group, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 2-ethylbutyl, 1-ethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, etc.
  • the group has 1, 2, 3, 4, 5, 6, carbon atoms ("C 1-6 alkyl”), such as methyl, ethyl, propyl, butyl, isopropyl , Isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, more particularly, the group has 1, 2 or 3 carbon atoms ("C 1-3 alkyl”), such as methyl, ethyl, n-propyl Base or isopropyl.
  • C 1-3 alkyl such as methyl, ethyl, n-propyl Base or isopropyl.
  • C 2-12 alkenyl is understood to mean preferably a linear or branched monovalent hydrocarbon group which contains one or more double bonds and has 2 to 12 carbon atoms, preferably “C 2-10 alkenyl” , Further preferably, “C 2-6 alkenyl”.
  • C 2-10 alkenyl is understood to mean preferably a linear or branched monovalent hydrocarbon group, which contains one or more double bonds and has 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 Carbon atoms, especially 2 or 3 carbon atoms (“C 2-3 alkenyl”), it should be understood that in the case where the alkenyl group contains more than one double bond, the double bonds may be separated from each other yoke.
  • the alkenyl group is, for example, vinyl, allyl, (E) -2-methylvinyl, (Z) -2-methylvinyl, (E) -but-2-enyl, (Z)- But-2-enyl, (E) -but-1-enyl, (Z) -but-1-enyl, pent-4-enyl, (E) -pent-3-enyl, (Z) -Pent-3-enyl, (E) -pent-2-enyl, (Z) -pent-2-enyl, (E) -pent-1-enyl, (Z) -pent-1-ene Group, hex-5-enyl, (E) -hex-4-enyl, (Z) -hex-4-enyl, (E) -hex-3-enyl, (Z) -hex-3- Alkenyl, (E) -hex-2-enyl, (Z) -hex
  • C 1-n alkenyl for example, “C 1-12 alkenyl” or “C 1-6 alkenyl”
  • C 2-n alkenyl Eg C 2-12 alkenyl
  • C 2 - 12 alkynyl group is understood to mean a linear or branched divalent hydrocarbon chain comprising one or more triple bonds and having 2 to 12 carbon atoms, preferably “C 2 -C 10 alkynyl” , Further preferably, “C 2 -C 6 alkynyl”.
  • C 2 -C 10 alkynyl is understood to mean preferably a linear or branched monovalent hydrocarbon group, which contains one or more triple bonds and has 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 Or 10 carbon atoms, especially 2 or 3 carbon atoms ("C 2 -C 3 -alkynyl").
  • the alkynyl group is, for example, ethynyl, prop-1-ynyl, prop-2-ynyl, but-1-ynyl, but-2-ynyl, but-3-ynyl, pent-1-ynyl , Pent-2-ynyl, pent-3-ynyl, pent-4-ynyl, hex-1-ynyl, hex-2-ynyl, hex-3-ynyl, hex-4-ynyl, Hex-5-ynyl, 1-methylprop-2-ynyl, 2-methylbut-3-ynyl, 1-methylbut-3-ynyl, 1-methylbut-2-ynyl , 3-methylbut-1-ynyl, 1-ethylprop-2-ynyl, 3-methylpent-4-ynyl, 2-methylpent-4-ynyl, 1-methylpentane -4-ynyl, 2-methylpent-3-yn
  • alkynyl group is ethynyl, prop-1-ynyl or prop-2-ynyl.
  • C 1-n alkynyl for example, “C 1-12 alkynyl” or “C 1-6 alkynyl”
  • C 2-n alkynyl Eg C 2-12 alkynyl
  • C 1-12 alkyl C 2-12 alkenyl
  • C 2-12 alkynyl also apply to “C 1-12 heteroalkane group ",” C 2-12 alkenyl heteroaryl ",” C 2-12 alkynyl heteroaryl "relates to alkyl, alkenyl, alkynyl moieties.
  • C 3-20 cycloalkyl is understood to mean a saturated or unsaturated monovalent monocyclic or bicyclic hydrocarbon ring having 3 to 20 carbon atoms, preferably “C 3-10 cycloalkyl”.
  • C 3-10 cycloalkyl is understood to mean a saturated monovalent monocyclic or bicyclic hydrocarbon ring having 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 carbon atoms.
  • the C 3-10 cycloalkyl group may be a monocyclic hydrocarbon group, such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl or cyclodecyl, or bicyclic Hydrocarbon groups such as decalin ring.
  • the "C 3-20 cycloalkyl group” may further include, for example, a C 1-8 cycloalkyl group, a C 3-8 cycloalkyl group, a C 3-6 cycloalkyl group, or the like.
  • 3-20 membered heterocyclic group means a saturated or unsaturated monovalent monocyclic or bicyclic hydrocarbon ring, which contains 1-5 heteroatoms independently selected from N, O, and S, preferably “3-10 membered” Heterocyclyl ".
  • the term “3-10 membered heterocyclic group” means a saturated monovalent monocyclic or bicyclic hydrocarbon ring, which contains 1-5, preferably 1-3 heteroatoms selected from N, O, and S.
  • the heterocyclic group may be connected to the rest of the molecule through any of the carbon atoms or nitrogen atom (if present).
  • the heterocyclic group may include, but is not limited to: a 4-membered ring, such as azetidine, oxetanyl; a 5-membered ring, such as tetrahydrofuranyl, dioxolyl, pyrrole Alkyl, imidazolidinyl, pyrazolidinyl, pyrrolinyl; or 6-membered rings, such as tetrahydropyranyl, piperidinyl, morpholinyl, dithialkyl, thiomorpholinyl, piperazinyl Or trithiane; or a 7-membered ring, such as diazacycloheptanyl.
  • a 4-membered ring such as azetidine, oxetanyl
  • a 5-membered ring such as tetrahydrofuranyl, dioxolyl, pyrrole Alkyl, imidazolidinyl, pyrazolidinyl,
  • the heterocyclic group may be benzo-fused.
  • the heterocyclic group may be bicyclic, such as but not limited to a 5,5 membered ring, such as hexahydrocyclopenta [c] pyrrole-2 (1H) -yl ring, or a 5,6 membered bicyclic ring, such as hexahydropyrrole And [1,2-a] pyrazine-2 (1H) -yl ring.
  • the nitrogen-containing ring may be partially unsaturated, ie it may contain one or more double bonds, such as but not limited to 2,5-dihydro-1H-pyrrolyl, 4H- [1,3,4] thiadi Azinyl, 4,5-dihydrooxazolyl, or 4H- [1,4] thiazinyl, or it may be benzo-fused, such as but not limited to dihydroisoquinolinyl.
  • the heterocyclic group is non-aromatic.
  • C3-6 heterocycloalkyl and C3-6 heterocyclyl correspond to a heterocyclic group having 3 to 6 C atoms, and are also covered by the above-mentioned “3-20 membered heterocyclic group”.
  • C 6-20 aryl is understood to mean preferably a monovalent aromatic or partially aromatic monocyclic, bicyclic or tricyclic hydrocarbon ring having 6 to 20 carbon atoms, preferably “C 6-14 aryl” .
  • the term “C 6-14 aryl” is understood to preferably mean a monovalent aromatic or partially aromatic monocyclic, bicyclic or monocyclic aromatic ring having 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 carbon atoms Tricyclic hydrocarbon rings (“C 6-14 aryl”), especially those with 6 carbon atoms (“C 6 aryl”), such as phenyl; or biphenyl, or those with 9 carbon atoms Ring (“C 9 aryl”), such as indanyl or indenyl, or a ring having 10 carbon atoms (“C 10 aryl”), such as tetrahydronaphthyl, dihydronaphthyl, or naphthyl, Either a ring with 13 carbon atoms ("C 13 aryl)
  • 5-20 membered heteroaryl should be understood to include monovalent monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic ring systems having 5 to 20 ring atoms and containing 1 to 5 independently selected from N, O And S heteroatoms, such as "5-14 membered heteroaryl".
  • the term “5-14 membered heteroaryl” is understood to include monovalent monocyclic, bicyclic or tricyclic aromatic ring systems having 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 ring atoms, especially 5 or 6 or 9 or 10 carbon atoms, and it contains 1-5, preferably 1-3 heteroatoms independently selected from N, O and S and, in addition, in each case The bottom can be benzo fused.
  • the heteroaryl group is selected from thienyl, furyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, triazolyl, thio Diazolyl, thi-4H-pyrazolyl, etc.
  • heterocyclyl, heteroaryl or heteroarylene includes all possible isomeric forms thereof, such as positional isomers.
  • pyridyl or pyridinylene includes pyridin-2-yl, pyridin-2-yl, pyridin-3-yl, pyridin-3-yl, pyridin-4-yl And pyridin-4-yl;
  • thienyl or thienylene includes thien-2-yl, thien-2-yl, thien-3-yl and thien-3-yl.
  • C 5-14 bridged cyclic group refers to a 5- to 14-membered, all-carbon polycyclic group in which any two rings share two carbon atoms that are not directly connected. These may contain one or more double bonds, but none of them The ring has a completely conjugated ⁇ electron system. Including 7 to 10 yuan.
  • the number of constituent rings it can be divided into bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic bridge cycloalkyl.
  • C 5-14 heterobridge ring group refers to a polycyclic group of 5 to 14 members, any two rings sharing two atoms that are not directly connected, these may contain one or more double bonds, but none of the rings has A completely conjugated ⁇ -electron system in which one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen, or S (O) n (where n is an integer from 0 to 2) heteroatom, and the remaining ring atoms are carbon. It is preferably 7 to 10 yuan. E.g:
  • bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic bridged cycloalkyl groups according to the number of constituent rings, preferably bicyclic, tricyclic or tetracyclic, and more preferably bicyclic or tricyclic.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a particular atom are replaced by a substituent, which may include heavy hydrogen and hydrogen variants, as long as the valence state of the particular atom is normal and the compound after substitution is stable of.
  • keto group O
  • two hydrogen atoms are substituted.
  • Ketone substitution does not occur on aromatic groups.
  • optionally substituted means that it may or may not be substituted. Unless otherwise specified, the types of substituents and trees may be arbitrary on the basis that they are chemically achievable.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and / or dosage forms that are within the scope of reliable medical judgment and are suitable for use in contact with human and animal tissues, and No excessive toxicity, irritation, allergic reactions or other problems or function concurrently, commensurate with a reasonable benefit / risk ratio.
  • “Pharmaceutically acceptable salts” means those salts that retain the biological effectiveness and properties of the parent compound. Such salts include: (1) Forming a salt with an acid, which is obtained by reacting the free base of the parent compound with an inorganic acid or an organic acid.
  • the inorganic acid includes hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, phosphoric acid, metaphosphoric acid, sulfuric acid, and sulfurous acid
  • organic acids include acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, acrylic acid, hexanoic acid, cyclopentane propionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, oxalic acid, (D) or (L) malic acid, fumaric acid , Maleic acid, benzoic acid, hydroxybenzoic acid, ⁇ -hydroxybutyric acid, methoxybenzoic acid, phthalic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, naphthalene-1-sulfonic acid, naphthalene-2-sulfonic acid , P-toluenesulfonic acid, salicylic acid, tartaric acid, citric acid, lactic acid, cinnamic acid, dodecyl
  • the salts of acid protons present in the parent compound are replaced by metal ions or coordinated with organic bases.
  • metals are alkali metal ions, alkaline earth metal ions, or aluminum ions.
  • Organic bases are ethanolamine, diethanolamine, and triethanolamine. Ethanolamine, tromethamine, N-methylglucamine, etc.
  • the compounds provided by the invention also exist in prodrug forms.
  • the prodrugs of the compounds described herein easily undergo chemical changes under victory conditions to transform the compounds of the invention.
  • prodrugs can be converted to the compounds of the invention by chemical or biochemical methods in the in vivo environment.
  • Certain compounds of the invention may exist in unsolvated or solvated forms, including hydrated forms.
  • the solvated form is equivalent to the unsolvated form and is included in the scope of the present invention.
  • the compounds of the present invention may exist in specific geometric or stereoisomeric forms.
  • the present invention contemplates all such compounds, including cis and trans isomers, (-)-and (+)-enantiomers, (R)-and (S) -enantiomers, non- Enantiomers, (D) -isomers, (L) -isomers, and their racemic and other mixtures, such as enantiomerically or diastereomerically enriched mixtures, all of these Mixtures are within the scope of the present invention.
  • Substituents such as alkyl groups may have additional asymmetric carbon atoms. All these isomers and mixtures thereof are included in the scope of the present invention.
  • optically active (R)-and (S) -isomers and (D)-and (L) -isomers can be prepared by chiral synthesis or chiral reagents or other conventional techniques. If an enantiomer of a compound of the present invention is desired, it can be prepared by asymmetric synthesis or derivatization with a chiral auxiliary, where the resulting mixture of diastereomers is separated and the auxiliary group is cleaved to provide pure The desired enantiomer.
  • a salt of a diastereomer is formed with an appropriate optically active acid or base, and then known by the art
  • the conventional method is used for resolution, and then the pure enantiomer is recovered.
  • the separation of enantiomers and diastereomers is usually accomplished by using chromatography, which employs a chiral stationary phase and is optionally combined with chemical derivatization methods (for example, the formation of carbamate from amines) Acid salt).
  • the compound of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes in one or more atoms constituting the compound.
  • compounds can be labeled with radioactive isotopes, such as tritium, iodine-125, C-14. All changes in isotopic composition of the compounds of the present invention, whether radioactive or not, are included in the scope of the present invention.
  • “Pharmaceutical composition” refers to combining one or more of the compounds of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, or prodrug thereof with other chemical components, such as a pharmaceutically acceptable carrier, carrier Form or diluent mixed.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to facilitate the process of administration to animals.
  • “Pharmaceutically acceptable carrier” means an inactive ingredient in a pharmaceutical composition that does not cause significant irritation to the organism and does not interfere with the biological activity and properties of the administered compound, such as but not limited to: calcium carbonate, calcium phosphate , Various sugars (such as lactose, mannitol, etc.), starch, cyclodextrin, magnesium stearate, cellulose, magnesium carbonate, acrylic polymer or methacrylic polymer, gel, water, polyethylene glycol, Propylene glycol, ethylene glycol, castor oil or hydrogenated castor oil or polyethoxylated hydrogenated castor oil, sesame oil, corn oil, peanut oil, etc.
  • Excipient refers to an inert substance added to the pharmaceutical composition to further facilitate administration of the compound.
  • excipients include (but are not limited to) calcium carbonate, calcium phosphate, various sugars and various types of starch, cellulose derivatives, gelatin, vegetable oil, and polyethylene glycol.
  • the aforementioned pharmaceutical composition may also include adjuvants commonly used in medicine (agents), for example: antibacterial agents, antifungal agents, antimicrobial agents, shelf-stable agents, Colorants, solubilizers, thickeners, surfactants, complexing agents, proteins, amino acids, fats, sugars, vitamins, minerals, trace elements, sweeteners, colors, flavors, or combinations thereof.
  • adjuvants commonly used in medicine for example: antibacterial agents, antifungal agents, antimicrobial agents, shelf-stable agents, Colorants, solubilizers, thickeners, surfactants, complexing agents, proteins, amino acids, fats, sugars, vitamins, minerals, trace elements, sweeteners, colors, flavors, or combinations thereof.
  • the compounds of the present invention can be prepared by various synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, the implementation methods formed by the combination with other chemical synthetic methods, and the well known to those skilled in the art Equivalently, preferred embodiments include but are not limited to the embodiments of the present invention.
  • the solvent used in the present invention is commercially available.
  • the present invention uses the following abbreviations:
  • the total elution time is shown in each spectrum (2-10 minutes).
  • HPLC gradient general formula: AxBy or CxDy (x + y 100), A, C: water (acid: containing 0.1% trifluoroacetic acid, basic: containing 0.1% ammonium bicarbonate), B, D: acetonitrile (acid: Containing 0.1% trifluoroacetic acid, alkaline: containing 0.1% ammonium bicarbonate), gradient conditions: acetonitrile y% ⁇ 95%. The total elution time is shown in each spectrum (generally 16 minutes).
  • the aqueous phase was separated with ethyl acetate (20 mL X 3) Extraction, the organic phases are combined, washed with saturated aqueous sodium chloride solution (50 mL), then dried and filtered with anhydrous sodium sulfate, and the filtrate is concentrated under reduced pressure to obtain the target intermediate D23 (100 mg, yield: 76.9%, yellow liquid) ) Used directly in the next step.
  • compound D33 200 mg, 0.54 mmol, compound cyclopropylboronic acid (52 mg, 0.61 mmol), K 2 CO 3 (228 mg, 1.662 mmol) and Pd (dppf) Cl 2 (40 mg, 0.054 mmol) were added to 1, 4In dioxane (5mL) and H 2 O (0.1mL). After replacing the reaction solution with argon three times, heat to 100 ° C and stir the reaction for 8 hours. The reaction was completed by LCMS. After the reaction solution was cooled to room temperature, water was added ( 20 mL) diluted, the mixture was extracted with dichloromethane (20 mL ⁇ 3).
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (20 mL).
  • the ethyl acetate phases were combined and dried over anhydrous sodium sulfate. It was dried and filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • tert-butyl 3-hydroxypiperidine-1-carboxylate 10 g, 49.7 mmol
  • triethylamine 15 g, 149 mmol
  • the mixture was replaced with argon three times and then cooled to -20 ° C.
  • Methanesulfonyl chloride 11.38g, 99.4mmol was slowly added dropwise to the system. After the addition, the reaction was stirred at room temperature for 4 hours.
  • HPLC 99.79% (214nm), 99.89% (254nm)

Abstract

公开了***(T790M/C797S突变)EGFR激酶抑制剂的新型嘧啶吡唑类化合物及其医药用途，具体公开了式(I)所示化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐。所述化合物在EGFR Del19/T790M/C797S和L858R/T790M/C797S异常突变引起的疾病上有着较好的疗效。（I）

Description

作为***EGFR抑制剂的嘧啶吡唑类化合物
本申请要求2018年10月29日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为201811266972.X，发明名称为“作为***EGFR抑制剂的嘧啶吡唑类化合物”以及2019年6月4日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为201910479288.8，发明名称为“作为***EGFR抑制剂的嘧啶吡唑类化合物”的两件在先申请的优先权。所述两件申请的全文通过引用的方式结合于本申请中。
技术领域
本发明涉及作为***(T790M/C797S突变)EGFR激酶抑制剂的新型嘧啶吡唑类化合物及其医药应用，具体公开了式(I)所示化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐。
背景技术
EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体。EGFR属于ErbB受体家族的一种，该家族包括EGFR(ErbB-1)、HER2/c-neu(ErbB-2)、HER 3(ErbB-3)和HER4(ErbB-4)。EGFR也被称作HER1、ErbB1。EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR分为三区：胞外配体结合区，跨膜区和胞内激酶区。当EGFR受到相应配体结合后，会诱导其形成同型或者异型二聚体，从而激活胞内的酪氨酸激酶通路，使其自身磷酸化，从而引导下游的磷酸化，包括MAPK、Akt和JNK通路,诱导细胞增殖。
EGFR酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitor,TKI)是通过阻断内源性的ATP结合到胞内的激酶区域，从而抑制受体磷酸化及其下游信号转导分子的活化，阻断肿瘤细胞的增殖。尽管EGFR靶向治疗已经成功进入临床阶段，并已有药物上市，但是EGFR的基因突变导致药物出现耐药。其突变主要发生在18-21号外显子，其中19号外显子缺失和21号外显子的L858R的点突变是最常见的突变亚型，占所有突变类型的90％。随着药物的开发使用，大部分耐药出现在激酶的gatekeeper区域T790M的二次突变。最近几年开发的三代不可逆抑制剂对T790M突变的抑制活性很好，但是也不可避免地出现了C797S突变，而且是明星药物AZD9291的主要耐药机制(40％左右)。2018年AZD9291已经进入一线治疗，针对C797S突变，人们急需开发新型的、更加安全有效的EGFR TKI。
发明内容
为了针对性地解决第三代抑制剂出现的耐药问题，即EGFR发生的第三次突变C797S问题，本发明提供式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2019113608-appb-000001
其中，E选自
Figure PCTCN2019113608-appb-000002
Y选自O或S；R 1、R 2、R 3、R 4相同或不同，彼此独立地选自C 1-12烷基；
A选自N或C-Q；
B选自N或C-D；
Q和D相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个R a取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 2- 12烯基、C 2-12杂烯基、C 2- 12炔基、C 2-12杂炔基、C 1-12烷氧基、C 3- 20环烷基、3-20元杂环基、C 6- 20芳基、5-20元杂芳基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基；
每一个R a相同或不同，彼此独立地选自卤素、氰基、氨基、羟基、无取代或任选被一个、两个或更多个Rs取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 1-12烷氧基、C 3- 20环烷基、3-20元杂环基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基；
V和Z相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个R b取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 2- 12烯基、C 2-12杂烯基、C 2- 12炔基、C 2-12杂炔基、C 1-12烷氧基、C 3- 20环烷基、3-20元杂环基、C 6- 20芳基、5-20元杂芳基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基、-N(C 1-12烷基) 2、-NHC 1-12烷基；
每一个R b相同或不同，彼此独立地选自卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个Rs取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12烷氧基、C 1-12杂烷基、C 3- 20环烷基、3-20元杂环基；
每一个Rs相同或不同，彼此独立地选自卤素、CN、OH、C 1-12烷基；
W选自氢、无取代或任选被一个、两个或更多个R c取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 1-12烷酰基、C 1-12杂烷酰基、3-20元杂环酰基、C 3- 20环烷基、3-20元杂环基、C 6- 18芳基、5-20元杂芳基、C 3- 20环烷基与C 3- 20环烷基形成的螺环基、C 3- 20环烷基与3-20元杂环基形成的螺环基、3-20元杂环基与3-20元杂环基形成的螺环基、C3-20环烷基与C3-20环烷基的并环基、C3-20环烷基与3-20元杂环基的并环基、3-20元杂环基与3-20元杂环基的并环基、C 5- 14桥环基、5-14元杂桥环基；
每一个R c相同或不同，彼此独立地选自＝O、卤素、氰基、羟基、氨基、羧基、无取代或任选被一个、两个或更多个R d取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12烷氧基、C 1-12杂烷基、-S(O) 2C 1-12烷基、-C(O) 2C 1-12烷基、-COC 1-12烷基、C 3- 20环烷基、3-20元杂环基；
每一个R d相同或不同，彼此独立地选自卤素、＝O、卤素、氰基、羟基、-S(O) 2C 1-12烷基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基、C 1-12烷基；当W选自3-20元杂环基、C 3- 20环烷基与3-20元杂环基形成的螺环基、3-20元杂环基与3-20元杂环基形成的螺环基、5-14元杂桥环基时，所述取代R c可以杂原子或碳原子相连。
根据本发明的实施方案，Q和D相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个R a取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 1-6烯基、C 1-6杂烯基、C 1-6炔基、C 1-6杂炔基、C 3-6环烷基、C 3-6杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基；
V和Z相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个R b取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 3-6环烷基、C 3-6杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，所述的C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 3-6环烷基、C 3-6杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基；
W选自氢、无取代或任选被一个、两个或更多个R c取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 1-3烷酰基、C 1-3杂烷酰基、C 3-8环烷基、C 3-8杂环基、C 3-6环烷基与C 3-6环烷基的螺环基、C 3-6环烷基与C 3-6的杂环基的螺环基、C 3-6环烷基与C 3-6环烷基的并环基、C 3-6环烷基与C 3-6杂环基的并环基、C 3-6杂环基与C 3-6杂环基的并环基、C 5-14桥环基、C 5-14杂桥环基；
根据本发明的实施方案，每个R a、R b、R c相同或不同，彼此独立地选自-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-CN、-NH 2、-CH 3、CH 3CH 2-、-CF 3、-CHF 2、-CH 2F、NH 2CH 2-、-NH(CH 3) 2、-OCH 3、CH 3CH 2O-、CH 3OCH 2-、MeSO 2-、-CH 2CH 2F、-CH 2CHF 2、-CH 2C(CH 3) 2OH、-CH 2CH 2SO 2Me、-CH 2OH、-CH 2CH 2OH、-CH 2CH 2CN、-CH 2CH 2OCH 3、-COOCH(CF 3) 2、-COCH 2OH、-CH 2COOH、-CH 2CONH 2、2-(1-吗啉基) 乙基、1-甲基哌啶-4-酰基、3-吡啶基、2-(吡咯烷-1-基)乙基、3-氧杂环丁基、四氢吡咯基、吗啉基、4-甲基-1-哌嗪基、1-甲基-4-哌啶基；
根据本发明的实施方案，每一个Rs相同或不同，彼此独立地选自卤素、CN、OH、C 1-6烷基；
优选地，E选自
Figure PCTCN2019113608-appb-000003
Y选自O或S；R 1、R 2、R 3、R 4相同或不同，彼此独立地选自C 1-6烷基；A选自N或C-Q；B选自N或C-D；A和B中至少有一个为N，且A和B不同时为N；
Q和D相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、C 1-6烷基、卤素取代的C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 1-6烷氧基、C 3- 12环烷基、3-12元杂环基、-COOC 1-6烷基、-COC 1-6烷基；
V和Z相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3- 6环烷基；
W选自无取代或任选被一个、两个或更多个R c取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 3- 12环烷基、3-12元杂环基、C 6- 12芳基、5-12元杂芳基、C 3- 6环烷基与C 3- 6环烷基形成的螺环基、C 3- 12环烷基与3-12元杂环基形成的螺环基、3-12元杂环基与3-12元杂环基形成的螺环基、C 3-6环烷基与C3-6杂环基的并环基、C3-6杂环基与C3-6杂环基的并环基、C 5- 14桥环基、5-14元杂桥环基；
根据本发明的实施方案，每个R a、R b相同或不同，彼此独立地选自R选自-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-CN、-NH 2、-CH 3、CH 3CH 2-、-CF 3、-CHF 2、-CH 2F、NH 2CH 2-、-NH(CH 3) 2、-OCH 3、CH 3CH 2O-、CH 3OCH 2-、MeSO 2-、-CH 2CH 2F、-CH 2CHF 2、-CH 2C(CH 3) 2OH、-CH 2CH 2SO 2Me、-CH 2OH、-CH 2CH 2OH、-CH 2CH 2CN、-CH 2CH 2OCH 3、-COOCH(CF 3) 2、-COCH 2OH、-CH 2COOH、1-四氢吡咯基、2-(1-吗啉基)乙基、1-甲基哌啶-4-酰基、3-吡啶基、2-(吡咯烷-1-基)乙基；
更优选地，E选自
Figure PCTCN2019113608-appb-000004
Y选自O或S；
A和B至少有一个为N，且A和B不同时为N；
Q和D相同或不同，彼此独立地选自H、F、Cl、Br、三氟甲基、氰基、异丙基、甲氧基、环丙基、-COOC 2H 5；
V和Z相同或不同，彼此独立地选自H、F、Cl、Br、甲基、甲氧基、环丙基；
W选自：叔丁基、
Figure PCTCN2019113608-appb-000005
Figure PCTCN2019113608-appb-000006
Figure PCTCN2019113608-appb-000007
在一些优选的实施方式中，当W为
Figure PCTCN2019113608-appb-000008
Z为甲基，V为H，B为N，E为
Figure PCTCN2019113608-appb-000009
Y为O时，A为C-D，D选自：卤素、C1-6烷氧基、C3-6环烷基；当W为
Figure PCTCN2019113608-appb-000010
Z为甲氧基，V为H，B为N，E为
Figure PCTCN2019113608-appb-000011
Y为O时，A为C-D，D选自：C1-6烷基、卤素取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、C1-6杂烷基；当W为
Figure PCTCN2019113608-appb-000012
Z为甲基，V为H，A为N，E为
Figure PCTCN2019113608-appb-000013
Y为O时，B为C-Q，Q选自卤素、C1-6烷基、卤素取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、C1-6杂烷基。
更优选地，所述式(I)化合物选自如下化合物或其药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2019113608-appb-000014
Figure PCTCN2019113608-appb-000015
Figure PCTCN2019113608-appb-000016
Figure PCTCN2019113608-appb-000017
Figure PCTCN2019113608-appb-000018
Figure PCTCN2019113608-appb-000019
Figure PCTCN2019113608-appb-000020
Figure PCTCN2019113608-appb-000021
Figure PCTCN2019113608-appb-000022
其中，所述盐为盐酸盐、三氟乙酸盐或甲酸盐。
本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐中的至少一种。
优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的赋形剂。
本发明还提供式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐中的至少一种在制备用于治疗癌症的药物中的应用。优选地，所述癌症为非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、胰腺癌、头颈癌、乳腺癌、结肠直肠癌、上皮癌、卵巢癌、***癌、腺癌或鳞状细胞癌。
本发明还提供式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、或其药学上可接受的盐中的至少一种在制备用于治疗EGFR突变导致的疾病的药物中的应用。
优选地，所述EGFR突变为一个、两个或多个选自以下的突变：(1)Del19；(2)T790M；(3)C797S；(4)L858R；(5)T790M；(6)C797S。
本发明还提供一种治疗癌症的方法，包括：将式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐中的至少一种施用于有此需要的个体。
有益效果：体外活性实验结果证明，本发明化合物在EGFR Del19/T790M/C797S和L858R/T790M/C797S异常突变引起的疾病上有着较好的潜在疗效。
术语定义和说明
本发明中
Figure PCTCN2019113608-appb-000023
处表示连接位点。
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。
其中，“更多个”表示三个或三个以上。
术语“卤素”指F、Cl、Br和I。换言之，F、Cl、Br和I在本说明书中可描述为“卤素”。
术语“C 1-12烷基”应理解为优选表示具有1～12个碳原子的直链或支链饱和一价烃基，优选为C 1-10烷基。“C 1-10烷基”应理解为优选表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、 2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2、3、4、5、6、个碳原子(“C 1-6烷基”)，例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基，更特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C 1-3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
术语“C 2-12烯基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2～12个碳原子，优选“C 2-10烯基”，进一步优选“C 2-6烯基”。“C 2-10烯基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，特别是2或3个碳原子(“C 2-3烯基”)，应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(E)-戊-3-烯基、(Z)-戊-3-烯基、(E)-戊-2-烯基、(Z)-戊-2-烯基、(E)-戊-1-烯基、(Z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(E)-己-4-烯基、(Z)-己-4-烯基、(E)-己-3-烯基、(Z)-己-3-烯基、(E)-己-2-烯基、(Z)-己-2-烯基、(E)-己-1-烯基、(Z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(E)-2-甲基丁-2-烯基、(Z)-2-甲基丁-2-烯基、(E)-1-甲基丁-2-烯基、(Z)-1-甲基丁-2-烯基、(E)-3-甲基丁-1-烯基、(Z)-3-甲基丁-1-烯基、(E)-2-甲基丁-1-烯基、(Z)-2-甲基丁-1-烯基、(E)-1-甲基丁-1-烯基、(Z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基。本领域技术人员可以理解，术语“C 1-n烯基”(例如“C 1-12烯基”或“C 1-6烯基”)均等同于上述“C 2-n烯基”的定义(例如C 2-12烯基)。
术语“C 2- 12炔基”应理解为表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2～12个碳原子，优选“C 2-C 10炔基”，进一步优选“C 2-C 6炔基”。术语“C 2-C 10炔基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，特别是2或3个碳原子(“C 2-C 3-炔基”)。所述炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。本领域技术人员可以理解，术语“C 1-n炔基”(例如“C 1-12炔基”或“C 1-6炔基”)均等同于上述“C 2-n炔基”的定义(例如C 2-12炔基)。
“杂”表示杂原子或杂原子团，分别独立地选自-O-,-S-,＝O,＝S,-O-N＝,-C(＝O)O-,-C(＝O)-,-C(＝S)-,-S(＝O)2-,-S(＝O)-,-C(＝O)NH-,-NH-,-C(＝NH)-,-S(＝O)2NH-,-S(＝O)NH-和-NHC(＝O)NH-；-P-,-P(＝O)Me2以上任何一种情况下，杂原子或者杂原子团的数目分别地选自1,2或3。
本领域技术人员可以理解，前述术语“C 1-12烷基”、“C 2-12烯基”、“C 2-12炔基”对于基团的定义同样适用于“C 1-12杂烷基”、“C 2-12杂烯基”、“C 2-12杂炔基”所涉及的烷基、烯基、炔基部分。
术语“C 3-20环烷基”应理解为表示饱和或不饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～20个碳原子，优选“C 3-10环烷基”。术语“C 3-10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。所述C 3-10环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。所述“C 3-20环烷基”内还可以进一步任选例如C 1-8环烷基、C 3-8环烷基、C 3-6环烷基等范围。
术语“3-20元杂环基”意指饱和或不饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子，优选“3-10元杂环基”。术语“3-10元杂环基”意指饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个，优选1-3个选自N、O和S的杂原子。所述杂环基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话) 与分子的其余部分连接。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。根据本发明，所述杂环基是无芳香性的。
术语“C3-6杂环烷基”、“C3-6杂环基”对应C原子数为3-6的杂环基，同样涵盖在上述“3-20元杂环基”范围内。
术语“C 6-20芳基”应理解为优选表示具有6～20个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环，优选“C 6-14芳基”。术语“C 6-14芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C 6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C 6芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C 9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C 10芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C 13芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C 14芳基”)，例如蒽基。
术语“5-20元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5～20个环原子且包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子，例如“5-14元杂芳基”。术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3各独立选自N、O和S的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、***基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并***基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
除非另有说明，杂环基、杂芳基或亚杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，吡啶基或亚吡啶基包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基。
术语“C 5-14桥环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。包含7至10元。例如如下基团：
Figure PCTCN2019113608-appb-000024
根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基。
术语“C 5-14杂桥环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为7至10元。例如：
Figure PCTCN2019113608-appb-000025
根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和树木在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。
这里所用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物，材料，组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性，刺激性，过敏性反应或其它问题或并发挥职能，与合理的利益/风险比相称。
“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸包括盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸包括乙酸、三氟乙酸、丙酸、丙烯酸、己酸、环戊烷丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、肉桂酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、天冬氨酸、硬脂酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属例子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在胜利条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以再体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化形式相当，都包含在本发明范围内。
除非另有说明，用契形键和虚形键
Figure PCTCN2019113608-appb-000026
表示一个立体中心的绝对构型，用
Figure PCTCN2019113608-appb-000027
表示一个立体中心的相对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E,Z 几何异构体。同样地，所有的互变异构形式包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体，(-)-和(+)-对映异构体，(R)-和(S)-对映异构体，非对映异构体，(D)-异构体，(L)-异构体，及其外消旋混合物和其它混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及(D)-和(L)-异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中所得到非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性基团(如氨基)或酸性官能团(如羧酸)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚，碘-125，C-14。本发明的化合物的所有的同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
“药物组合物”指将本发明中的化合物中的一个或多个或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或前药与其他的化学成分，例如药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合。药物组合物的目的是促进给药给动物的过程。
“药学上可接受的载体”指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的药物组合物中的非活性成分，例如但不限于：碳酸钙、磷酸钙、各种糖(例如乳糖、甘露醇等)、淀粉、环糊精、硬脂酸镁、纤维素、碳酸镁、丙烯酸聚合物或甲基丙烯酸聚合物、凝胶、水、聚乙二醇、丙二醇、乙二醇、蓖麻油或氢化蓖麻油或多乙氧基氢化蓖麻油、芝麻油、玉米油、花生油等。
赋形剂指的是加入到药用组合物中以进一步便利于给予化合物的惰性物质。赋形剂的实例包括(不局限于)碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
前述的药物组合物中，除了包括药学上可接受的载体外，还可以包括在药(剂)学上常用的辅剂，例如：抗细菌剂、抗真菌剂、抗微生物剂、保质剂、调色剂、增溶剂、增稠剂、表面活性剂、络合剂、蛋白质、氨基酸、脂肪、糖类、维生素、矿物质、微量元素、甜味剂、色素、香精或它们的结合等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式，其与其它化学合成方法的结合所形成的实施方法以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用以下缩略词：
Figure PCTCN2019113608-appb-000028
Figure PCTCN2019113608-appb-000029
化合物经手工或者ChemDraw软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
LCMS梯度通式：AxBy或者CxDy(x+y＝100)，A、C：水(酸性：含0.1％甲酸，碱性：含0.1％碳酸氢铵)，B、D：乙腈(酸性：含0.1％甲酸，碱性：含0.1％碳酸氢铵)，梯度条件：乙腈y％～95％。总的洗脱时间见每一张谱图(2～10分钟)。
HPLC梯度通式：AxBy或者CxDy(x+y＝100)，A、C：水(酸性：含0.1％三氟乙酸，碱性：含0.1％碳酸氢铵)，B、D：乙腈(酸性：含0.1％三氟乙酸，碱性：含0.1％碳酸氢铵)，梯度条件：乙腈y％～95％。总的洗脱时间见每一张谱图(一般为16分钟)。
具体实施方式
下面通过实施例对发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种改变和改进将是显而易见的。
中间体制备例1：中间体D1的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000030
室温下将化合物4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.0g,24.8mmol)和三乙胺(7.54g,74.5mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中,然后向反应液中缓慢滴加甲磺酰氯(3.13g,27.3mmol)。滴加完毕,反应混合物在室温下搅拌反应8小时。TLC(PE：EtOAc＝1:1，Rf＝0.6)显示原料消失，产物生成。反应液用水(40mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(350mL×2)萃取。有机相合并用无水Na 2SO 4干燥过滤，滤液减压浓缩得到目标粗产物D1(6.37g，产率：91.7％，白色固体)。
1H NMR(400MHz,CD 3Cl 3)δ：4.89-4.87(m,1H)3.73-3.67(m,2H),3.33-3.26(m,2H),3.09(s,3H),1.97-1.94(m,2H),1.83-1.79(m,2H),1.41(s,9H).
中间体制备例2：中间体D2的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000031
在250mL的单口瓶中依次加入化合物D1(3.00g，10.7mmol)，化合物4-硝基吡唑(1.28g，11.3mmol)，K 2CO 3(2.97g,21.5mmol)和DMF(40mL)。反应体系搅拌均匀后升温至110℃并搅拌反应1小时。TLC(PE：EtOA c＝3:1，Rf＝0.5)显示原料消失，产物生成。反应液用水(100mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。有机相合并用饱和氯化钠溶液(100mL X 3)洗涤，所得有机溶液用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩得到目标粗产品D2(1.94g，产率：61％，白色固体)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ：8.17(s,1H),8.08(s,1H),4.30-4.26(m,3H)2.82-2.93(m,2H),2.18-2.15(m,2H),1.93-1.89(m,2H),1.46(s,9H).
中间体制备例3：中间体D3的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000032
在100mL的三口瓶中将化合物D2(1.00g，3.37mmol)溶于THF(10mL)后将溶液冷却至-78℃，然后向反应液中滴加LiHMDS(8.76mL,8.76mmol),滴加完毕，反应液在-78℃搅拌反应30min,然后向反应液中缓慢加入六氯乙烷(1.20g，5.06mmol)的THF(10mL)溶液。滴加完毕，混合物在-78℃下搅拌反应2.5小时。TLC(PE：EtOAc＝3:1，Rf＝0.7)显示原料消失，产物生成。反应用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭,混合物用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：PE：EtOAc＝100:1～5:1)纯化得到目标产品D3(980mg，产率：87.5％，白色固体)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ：8.18(s,1H),4.50-4.3(m,3H)，2.82-2.93(m,2H),2.18-2.15(m,2H),1.93-1.89(m,2H),1.46(s,9H).
中间体制备例4：中间体D4的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000033
将化合物D3(500mg，1.69mmol)，硼酸甲酯(1.01g，16.9mmol)，K 2CO 3(699mg，5.06mmol)，Pd(dppf)Cl 2(123mg,0.170mmol)加到1,4-Dioxane(5mL)和H 2O(1mL)的混合溶剂里，用氮气置换3次。将反应液升温至85℃，搅拌反应10小时，LCMS检测到化合物D4且D3完全消失。反应液冷却至室温，加入到水(10mL)和乙酸乙酯(30mL)混合液中，两相分离后，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。有机相合并干燥浓缩，残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度PE：EtOAc＝100:1～5:1)纯化得到目标产品D4(290mg，产率：55.4％,白色固体)。
1H NMR(400MHz,CD 3Cl 3)δ8.09(s,1H),4.32-4.17(m,3H),2.87-2.85(m,2H),2.69(s,2H),2.19-2.10(m,2H),1.88(d,J＝12Hz,2H),1.48(s,9H).
中间体制备例5：中间体D5的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000034
在室温下将Pd/C(100mg，10％)加入到化合物D4(240mg，0.770mmol)的乙醇(5mL)溶液中。反应混合物抽真空充入氢气置换3次，然后体系在氢氛下60℃搅拌反应1小时，LCMS检测反应完全。反应混合物过滤除去Pd/C。滤液减压浓缩得到粗品目标化合物D5(200mg，产率：93％,棕黄色固体)。
LCMS:Rt:1.178min；MS m/z(ESI):281.3[M+H]。
中间体制备例6：中间体D6的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000035
室温下将碳酸钾(8.8g，64.4mmol)加入到化合物4-硝基-1吡唑(3.6g，32.2mmol)和化合物甲磺酸(4-六氢吡喃)酯(5.8g，32.2mmol)的DMF(50mL)溶液中，然后将反应液加热至80℃搅拌反应过夜。反应完全后，反应液用水(300mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(100mL X 3)萃取，有机相用饱和氯化钠 水溶液(300mL X 3)洗涤；然后有机溶液用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱梯度：PE：EtOAc＝5:1)纯化得到目标产品D6(2.7g，产率：43％，黄色固体)。
中间体制备例7：中间体D7的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000036
将化合物D6(0.2g，1.01mmol)的THF(5mL)溶液冷却至-78℃后缓慢滴加LiHMDS(2mL，1M)；滴加完毕后反应液继续搅拌20分钟，然后向反应液中加入六氯乙烷(0.288g,1.22mmol)；混合物继续在-78℃下搅拌反应1小时。TLC(PE：EtOAc＝3:1，Rf＝0.7)显示原料消失，产物生成。用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭反应,混合物用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩得到目标粗产品D7(130mg,产率：55％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.50(s,1H),4.70-4.60(m,1H)3.97(d,J＝8.4Hz,2H),3.53-3.47(m,2H),2.01-1.85(m,4H).
中间体制备例8：中间体D8的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000037
氮气保护下，将化合物D7(300mg,1.5mmol)和甲基硼酸(448.9mg,7.5mmol)溶于二氧六环(10mL)和水(2mL)中，再向体系中加入Pd(dppf)Cl 2(110mg,0.15mmol)和磷酸钾(955mg,4.5mmol)；反应体系用氮气保护后加热升温至90℃并在此条件下搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯(20mL)洗涤，有机相合并后干燥过滤，滤液减压浓缩；残余物通过柱色谱层析法(洗脱梯度：PE：EtOAc＝10:1-5:1)纯化得到目标产品D8(220mg，产率：80.3％，淡黄色固体)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ：8.04(s,1H),4.25-4.19(m,1H),4.10-4.06(m,2H),3.55-3.44(m,2H),2.62(s,3H),2.32-2.22(m,2H),1.78-1.52(m,2H)
中间体制备例9：中间体D9的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000038
在100mL的单口瓶中依次加入化合物D8(220mg，1.04mmol)，MeOH(50mL)和Pd/C(22mg，5％)。反应体系在氢氛下室温搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩得到目标粗产品D9(180mg,产率：96％，棕色固体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.365min；MS m/z(ESI):182.4[M+H]。
中间体制备例10：中间体D10的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000039
在100mL的三口瓶中分别加入化合物(2-氨基苯基)二甲基膦氧化物(0.5g，3.27mmol)，2,6-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(847mg，3.92mmol)，DIEA(1.26g，9.81mmol)和DMF(10mL)。混合物在室温下搅拌反应16小时。反应结束后将反应混合物倒入水(50mL)中。混合物用EtOAc(30mL 2)萃取，有机相合并后用饱和氯化钠水溶液(60mL X 2)洗涤，所得有机溶液用无水Na 2SO 4干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：PE：EtOAc＝5:1-0:1)纯化得到目标产品D10和副产物D10’的混合物(0.9g，产率：87.5％，淡黄色固体)。混合物难以分离，直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:1.245min,1.521min；MS m/z(ESI):350.1[M+H]。
中间体制备例11：中间体D11的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000040
室温下将化合物D6(200mg，1.0mmol)溶解于MeOH(20mL)中，然后加入Pd/C(40mg)；反应体系用氢气置换3次后在室温下搅拌反应2h。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D11(100mg，产率：58.8％,黄色油状液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.273min；MS m/z(ESI):168.4[M+H]。
中间体制备例12：中间体D12的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000041
室温下将化合物(2-氨基苯基)二甲基氧化膦(1.0g，5.0mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(923mg，5.0mmol)，NaHCO 3(1.59g，15.0mmol)溶解于EtOH/H 2O(45mL，8:1)中，反应体系在Ar保护下升温至80℃并搅拌反应过夜。LCMS检测原料反应一半，混合物用乙酸乙酯(50mLX3)萃取。有机相合并用饱和NaCl溶液(100mL)洗涤，经过无水Na 2SO 4干燥，过滤，滤液浓缩。残余物通过硅胶柱(洗脱梯度：PE:EtOAC＝1:10—1:5)纯化得到目标中间体D12(740mg，产率：39.7％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.827min；MS m/z(ESI):316.0[M+H]。
中间体制备例13：中间体D13的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000042
室温下在100mL的三口瓶中分别加入化合物4-硝基吡唑(3.39g，30mmol)，2-溴乙醇(3.75g，30mmol)，K 2CO 3(4.97g，36mmol)和CH 3CN(50mL)。混合物加热至80℃反应16小时。反应结束后反应液冷却至室温并过滤，滤液减压浓缩得到粗品目标产品D13(4.7g,产率:100％,白色固体)直接用于下一步。
LCMS:Rt:0.775min；MS m/z(ESI):158.1[M+H]。
中间体制备例14：中间体D14的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000043
室温下在250mL单口瓶中依次加入D13(4.7g，30mmol)，TBSCl(5.0g，33mmol),咪唑(2.5g，36mmol)和二氯甲烷(50mL)。反应液在室温条件下搅拌反应16小时。反应结束后反应液用水(40mL X 3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩.残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：PE:EtOAC＝20:1-10:1)纯化，得到目标产品D14(6.7g，产率:80％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.399min；MS m/z(ESI):272.2[M+H]。
中间体制备例15：中间体D15的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000044
在-60℃，将LiHMDS(25mL，25mmol)缓慢加入化合物D14(2.7g，10mmol)的THF(30mL)溶液中。加完以后，反应液在-60℃搅拌30分钟，然后分批次加入C 2Cl 6(3.0g，12mmol)。加完以后，反应液在-60℃搅拌3小时。反应结束后将反应液升温至0℃，然后用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭反应，两相分离后，水相用乙酸乙酯(30mL X 3)萃取。有机相合并后用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：PE:EtOAC＝20:1-10:1)纯化，得到目标产品D15(1.0g，产率:30％,黄色固体)。
LCMS:Rt:1.553min；MS m/z(ESI):306.2[M+H]。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ：8.61(s,1H),4.43(t,J＝4.0Hz,2H),4.05(t,J＝4.0Hz,2H),0.84(s,9H),0.00(s,6H).
中间体制备例16：中间体D16的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000045
室温下在100mL的单口瓶中分别加入化合物4-硝基吡唑(2.26g，20mmol)，1-溴-2-甲氧基乙烷(2.76g，20mmol)，K 2CO 3(6.72g，40mmol)和CH 3CN(30mL)。将混合物加热至80℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温后过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标产品D16(3.1g,产率:91.1％,无色液体)直接用于下一步。
LCMS:Rt:0.984min；MS m/z(ESI):172.4[M+H]。
中间体制备例17：中间体D17的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000046
室温下在100mL的单口瓶中依次加入化合物D16(342.0mg,2mmol)，MeOH(5mL)和Pd/C(34.2mg，10％)。反应体系在氢气氛下室温搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩，得到粗品目标产品D17(284mg,产率：100％,黄色液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.327min；MS m/z(ESI):142.2[M+H]。
中间体制备例18：中间体D18的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000047
室温下在100mL的单口瓶中依次加入化合物D14(271mg，1.0mmol)，MeOH(5mL)和Pd/C(27.1mg,10％)。反应体系在氢气氛下室温搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩得到粗品目标产品D18(241mg,产率：100％，黑色液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.827min；MS m/z(ESI):242.4[M+H]。
中间体制备例19：中间体D19的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000048
在-60℃下将LiHMDS(15mL，15mmol)缓慢加入化合物D16(1.71g，10mmol)的THF(30mL)溶液中。加完以后，反应液在-60℃搅拌30分钟，然后分批次加入C 2Cl 6(4.68g，20mmol)。加完以后，反应液在-60℃搅拌4小时。反应结束后将反应液升温至0℃，然后用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭反应，两相分离后，水相用乙酸乙酯(30mL X 3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(30mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：PE:EtOAC＝10:1-5:1)纯化，得到目标产品D19(1.8g，产率:87.4％，黄色液体)。
LCMS:Rt:1.068min；MS m/z(ESI):206.0[M+H]。
中间体制备例20：中间体D20的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000049
室温下将化合物D19(205mg，1.0mmol)，铁粉(280mg，5.0mmol)，NH 4Cl(428mg，8.0mmol)加入到EtOH/H 2O(4:1，20mL)中，然后将反应液加热升温至90℃反应2小时。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温，然后向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(20mL)，混合物搅拌5分钟后过滤；滤液两相分离后，水相用乙酸乙酯(20mL X 3)萃取；有机相合并后用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体D20(100mg,产率:57.1％, 黄色液体)直接用于下一步。
LCMS:Rt:0.51min；MS m/z(ESI):176.2[M+H]。
中间体制备例21：中间体D21的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000050
室温下将化合物D12(200mg，0.63mmol)，和化合物D5(177mg,0.63mmol)和NH 4Cl(101mg,1.9mmol)溶于EtOH(5mL)，反应液在100℃下搅拌反应3小时。LCMS检测反应完全后将反应液冷却至室温，混合物过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度PE/EtOAc＝1:100,Rf＝0.3)纯化，得到目标化合物D21(180mg，产率：50.8％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.42min；MS m/z(ESI):560.3[M+H]。
中间体制备例22：中间体D22的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000051
将化合物D6(0.2g，1.01mmol)的THF(5mL)溶液冷却至-78℃后缓慢滴加LiHMDS(2mL，1M)；滴加完毕后反应液继续搅拌20分钟，然后向反应液中加入六氯乙烷(0.288g,1.22mmol)；混合物继续在-78℃下搅拌反应1小时。TLC(PE:EtOAc＝3:1，Rf＝0.7)显示原料消失，产物生成。用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭反应,混合物用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩得到目标粗产品D22(130mg,产率：55％，黄色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.50(s,1H),4.70-4.60(m,1H)3.97(d,J＝8.4Hz,2H),3.53-3.47(m,2H),2.01-1.85(m,4H).
中间体制备例23：中间体D23的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000052
室温下将化合物D22(150mg，0.64mmol)，铁粉(180mg，3.2mmol)和NH 4Cl(274mg，5.12mmol)加入到EtOH/H 2O(4:1，20mL)中，反应体系加热升温至90℃反应2h。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温并用加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(20mL)稀释；混合物搅拌5分钟后过滤，两相分离后，水相用乙酸乙酯(20mL X 3)萃取，有机相合并后用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标中间体D23(100mg,产率:76.9％,黄色液体)直接用于下一步。
LCMS:Rt:0.47min；MS m/z(ESI):202.1[M+H]。
中间体制备例24：中间体D24的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000053
氮气保护下，将化合物D15(305mg,1.0mmol)和甲基硼酸(360.0mg,6.0mmol)溶于二氧六环(10mL)和水(2mL)中，再向体系中加入Pd(dppf)Cl 2(73.3mg,0.1mmol)和碳酸钾(276mg,2.0mmol)。反应体系用氮气保护后加热升温至100℃并在此条件下搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯(20mL)洗涤，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩；残余物通过柱色谱层析法(洗脱梯度：PE:EtOAc＝10:1-5:1)纯化，得到目标产品D24(160mg，产率：56.1％,淡黄色液体)。
LCMS:Rt:1.863min；MS m/z(ESI):286.4[M+H]。
中间体制备例25：中间体D25的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000054
在100mL的单口瓶中依次加入化合物D24(160mg，0.56mmol)，MeOH(5mL)和Pd/C(16mg，10％)。反应体系在氢气氛下室温搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩得到粗品目标产品D25(143mg,产率：100％,黄色液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.890min；MS m/z(ESI):256.3[M+H]。
中间体制备例26：中间体D26的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000055
室温下将化合物D19(500mg，2.5mmol)，甲基硼酸(900mg，15.0mmol)溶解于1,4-二氧六环(36mL)中，然后滴加K 2CO 3(1.04g，7.5mmol)的水(4mL)溶液；反应体系用氩气置换三次后加入Pd(dppf)Cl 2(200mg，0.25mmol)，体系再用氩气置换三次后加热升温至80℃搅拌反应过夜。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温，混合物用水(100mL)稀释后用乙酸乙酯(30mL X 3)萃取，有机相合并后用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，溶液用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度：PE:ETOAC＝2:1)纯化，得到目标中间体D26(170mg，Yeild：36.8％，黄色油状液体)。
LCMS:Rt:1.383min；MS m/z(ESI):186.4[M+H]。
中间体制备例27：中间体D27的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000056
室温下将化合物D26(170mg，0.92mmol)溶解于MeOH(20mL)中，再加入Pd/C(30mg)；反应体系用氢气置换三次后在室温下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D27(155mg，产率：100％,黄色油状液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt 0.282min；MS m/z(ESI):156.3[M+H]。
中间体制备例28：中间体D28的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000057
室温下将化合物E7(390mg,0.79mmol)和DIETOAC(308mg,2.36mmol)溶于DMF(15mL)中，然后向反应液中加入溴乙酸甲酯(121mg,0.79mmol)，反应液在室温下搅拌反应2小时。LCMS检测反应已经完全后将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液(20mL)中。混合物用乙酸乙酯(30mL X 4)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：EtOAc：MeOH＝10:1，Rf＝0.5)纯化，得到目标产品D28(366mg，产率：87％,米黄色固体)。
LCMS:Rt:0.77min；MS m/z(ESI):532.4[M+H]。
中间体制备例29：中间体D29的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000058
氮气保护下，将化合物D23(300mg,1.5mmol)和甲基硼酸(448.9mg,7.5mmol)溶于二氧六环(10mL)和水(2mL)中，再向体系中加入Pd(dppf)Cl 2(110mg,0.15mmol)和磷酸钾(955mg,4.5mmol)；反应体系用氮气保护后加热升温至90℃并在此条件下搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯(20mL)洗涤，有机相合并后干燥过滤，滤液减压浓缩；残余物通过柱色谱层析法(洗脱梯度：PE：EtOAc＝10:1-5:1)得到目标产品D29(220mg，产率：80.3％，淡黄色固体)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ：8.04(s,1H),4.25-4.19(m,1H),4.10-4.06(m,2H),3.55-3.44(m,2H),2.62(s,3H),2.32-2.22(m,2H),1.78-1.52(m,2H)
中间体制备例30：中间体D30的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000059
化合物D22(120mg，0.51mmol)，环丙基硼酸(263mg，3.06mmol)溶解于1,4-二氧六环(18mL)中，滴加2mL K 2CO 3(211mg，1.53mmol)溶液，Ar换气3次，加入Pd(dppf)Cl 2(38mg，0.051mmol)，充分换气3次，加热升温至80℃反应过夜。LCMS检测基本反应完全，将反应液冷却至室温，倒入分液漏斗中加入水(50mL)和ETOAC(20mLx3)萃取，合并有机相用饱和NaCl溶液(50mL)洗涤，经过无水Na 2SO 4干燥后过滤，滤液浓缩蒸干，粗品用TLC制备板(PE:ETOAC＝2:1)纯化得到目标中间体D30(120mg，收率：100％，黄色油状液体)。
LCMS:Rt:1.553min；MS m/z(ESI):238.4[M+H]。
中间体制备例31：中间体D31的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000060
室温下将化合物D30(120mg，0.51mmol)溶解于MeOH(20mL)中，然后加入Pd/C(20mg)；加完后反应体系用氢气置换3次，然后体系在室温下搅拌反应2h。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D31(80mg，产率：100％,黄色油状液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.542min；MS m/z(ESI):208.3[M+H]。
中间体制备例32：中间体D32的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000061
室温下将化合物(507mg，3.0mmol)，5-氟-2,4-二氯嘧啶(501mg，3.0mmol)和NaHCO 3(756mg，9.0mmol)溶解于EtOH/H 2O(8:1，45mL)中，然后将反应体系加热升温至80℃反应过夜。反应结束后将反应液冷却至室温并用水(100mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取，有机相合并后用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用prep-HPLC(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000062
)纯化，得到目标中间体D32(36mg,产率:4％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.453min；MS m/z(ESI):300.3[M+H]。
中间体制备例33：中间体D33的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000063
室温下将化合5-溴-2,4-二氯嘧啶(5g，22.02mmol)，化合物2-(氨基苯基)二甲基氧化膦(3.7g,22.02mmol)和NaHCO 3(5.5g,66.06mmol)溶于EtOH(50mL)和水(10mL)中。将反应液加热至100℃搅拌反应10小时，LCMS检测反应完全。将反应液冷却至室温后用水(50mL)稀释，混合物用二氯甲烷(50mL×5)萃取，有机相用硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度PE/EtOAc＝100:1～1:100)纯化，得到目标化合物D33(4g，产率：50％，白色固体)。
LCMS:Rt:1.23min；MS m/z(ESI):362.1[M+H]。
中间体制备例34：中间体D34的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000064
室温下将化合物(2-氨基苯基)二甲基氧化膦(450mg,2.5mmol),化合物2,4-二氯-5-甲氧基嘧啶(505mg,3.0mmol)和DIETOAC(650mg,5.0mmol)溶于DMF(10mL)中，反应液在140℃下搅拌反应12小时。LCMS检测反应已经完全后，将反应混合物减压浓缩，残留物用制备TLC(洗脱剂梯度ETOAC/MeOH＝10:1)纯化，得到目标产品D34(340mg，产率：45％，浅黄色固体)。
LCMS:Rt:1.28min；MS m/z(ESI):312.2[M+H]。
中间体制备例35：中间体D35的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000065
室温下将化合物2,4-二氯-5-甲基嘧啶(500mg，3.07mmol)和化合物(2-氨基苯基)二甲基氧化膦(466mg,2.76mmol)溶于DMF(5mL)，然后加入DIEA(1.18mg,9.21mmol)。反应液加热至100℃搅拌反应10小时。LCMS检测反应完全，将反应液降温至室温后用水(20mL)稀释，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度PE/EtOAc＝1:1,R f＝0.2)纯化，得到目标化合物D35(200mg，产率：22％，白色固体)。
LCMS:Rt:1.20min；MS m/z(ESI):296.1[M+H]。
中间体制备例36：中间体D36的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000066
室温下将化合物E7(390mg,0.79mmol)和DIEA(308mg,2.36mmol)溶于DMF(15mL)中，然后向反应液中加入溴乙酸甲酯(121mg,0.79mmol)，反应液在室温下搅拌反应2小时。LCMS检测反应已经完全后，将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液(20mL)中。混合物用乙酸乙酯(30mL X 4)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：EtOAc：MeOH＝10:1，Rf＝0.5)纯化，得到目标产品D36(366mg，产率：87％,米黄色固体)。
LCMS:Rt:0.77min；MS m/z(ESI):532.4[M+H]。
中间体制备例37：中间体D37的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000067
室温下将化合物D36(106mg,0.2mmol)溶于MeOH/THF/H2O(4mL/4mL/1mL)中并加入LiOH(25mg,0.6mmol)，反应液在室温搅拌反应3小时。LCMS检测反应已经完全后，将反应混合物pH调到pH～3，然后将反应液直接减压浓缩，得到粗品目标产品D37(104mg，产率：100％,白色固体)。
LCMS:Rt:0.29min；MS m/z(ESI):518.0[M+H]。
中间体制备例38和中间体制备例39：中间体D38和D39的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000068
室温下将化合物2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(2.2g，10mmol)，化合物(2-氨基苯基)二甲基氧化膦(2.0g，12mmol)和DIEA(4.0g，30mmol)溶于DMF(25mL)中，反应液在室温下搅拌反应16小时。LCMS检测原料消失，同时有两个异构体的产物生成。反应液减压浓缩，所得产物(粗品：8.0g)通过以下柱层析条件分离：
第一批：4.0g粗品，330g反相制备柱，洗脱剂梯度：乙腈/水＝0～100％，时间＝110分钟；Peak 1：28分钟～38分钟；Peak 2：42分钟～52分钟。
第二批：4.0g粗品，330g反相制备柱，洗脱剂梯度：乙腈/水＝0～100％，时间＝130分钟；Peak 1：35分钟～41分钟，Peak 2：50分钟～55分钟。
两批次Peak1合并减压浓缩，得到产物D38(1.8g，产率：69％,黄色固体)
LCMS:Rt:1.099min；MS m/z(ESI):350.1[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：11.1(s,1H),8.67(s,1H),8.21(m,1H),7.68(m,2H),7.32(t,J＝8.0Hz,1H),1.80(s,3H),1.76(s,3H)。
两批次Peak 2合并减压浓缩，得到产物D39(0.7g，产率：69％,黄色固体)
LCMS:Rt:1.358min；MS m/z(ESI):350.1[M+H]，
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：11.9(s,1H),8.85(s,1H),8.48(m,1H),7.68(m,2H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),1.83(s,3H),1.79(s,3H)。
中间体制备例40：中间体D40的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000069
室温下将化合物D38(350mg，1.0mmol)和中间体D5(420mg，1.5mmol)溶于EtOH(30mL)中，向反应体系中加入NH 4Cl(535mg，10.0mmol)后，将反应液加热至80℃搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤,滤饼用乙醇(10mL X 2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱层析法(洗脱剂梯度DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到目标中间体D40(420mg,产率:70.8％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.593min；MS m/z(ESI):594.5[M+H]。
中间体制备例41：中间体D41的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000070
室温下将化合物D39(350mg，1.0mmol)和中间体D5(420mg，1.5mmol)溶于EtOH(30mL)中，向反应体系中加入NH 4Cl(535mg，10.0mmol)后，将反应液加热至80℃搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤,滤饼用乙醇(10mL X 2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱层析法(洗脱剂梯度DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到目标中间体D41(450mg,产率:75.8％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.723min；MS m/z(ESI):594.6[M+H]。
中间体制备例42：中间体D42的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000071
室温下将化合物D22(200mg，0.86mmol)和乙烯基硼酸频哪醇酯(800mg，5.18mmol)溶解于1,4-二 氧六环(18mL)中，然后滴加K 2CO 3(358mg，2.59mmol)的水(2mL)溶液，反应体系用氩气置换3次后加入Pd(dppf)Cl 2(32mg，0.043mmol)，体系再置换3次后，加热升温至80℃反应过夜。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温并用水(50mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(20mL X 3)萃取，合并有机相用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度：PE:ETOAC＝2:1)纯化，得到目标中间体D42(170mg，产率：88.2％,黄色油状液体)。
LCMS:Rt:1.502min；MS m/z(ESI):224.3[M+H]。
中间体制备例43：中间体D43的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000072
室温下向化合物D42(170mg，0.73mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入Pd/C(30mg)，反应体系用氢气置换3次后在室温下搅拌反应2h。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D43(150mg，产率：100％，黄色油状液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.303min；MS m/z(ESI):196.4[M+H]。
中间体制备例44：中间体D44的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000073
室温下将化合物4-硝基吡唑(2.0g，17.7mmol)，化合物1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl methanesulfonate(4.17g,17.7mmol)和碳酸钾(4.9g，35.4mmol)加到乙腈(50mL)中，反应体系在氩气保护下升温至80℃搅拌反应过夜。反应完全后，反应混合物减压浓缩除去乙腈，残余物用水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释；两相分离后水相用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取，有机相合并后，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度PE/ETOAC＝10/1)纯化，得到目标化合物D44(3g，产率：67％，白色固体)。
LCMS:Rt:1.198min；MS m/z(ESI):254[M+H]。
中间体制备例45：中间体D45的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000074
氩气保护下将化合物D44(2g，8.66mmol)的THF(30mL)溶液降温到-78℃，然后向体系中缓慢滴加LiHMDS(13mL，1M，13mmol)；滴加完毕后反应液在此温度下搅拌反应30分钟，然后再滴加六氯乙烷(4.1g，17.3mmol)的THF(14mL)溶液，滴完后反应液继续搅拌反应3小时。待反应完全后向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭反应，混合物用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取；有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度PE/EtOAc＝15/1～12/1)纯化，得到目标化合物D45(1.8g，产率：78％，白色固体)。
LCMS:Rt:1.772min；MS m/z(ESI):288[M+H]。
中间体制备例46：中间体D46的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000075
室温下将化合物D45(1.5g,5.23mmol)，甲基硼酸(5.5g,91.7mmol)，Pd(dppf)Cl 2(450mg,0.61mmol)和碳酸钠(5g,47.2mmol)加到1,4-二氧六环和水的混合溶剂(20/4mL)中，反应体系用氩气置换三次后加热至90℃搅拌反应24小时。待反应完全后，将反应液冷却至室温，然后反应液用水(50mL)和乙酸乙酯(20mL)稀释，两相分离后水相用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取；有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度PE/ETOAC＝20/1～12/1)纯化，得到目标产品D46(1.2g，产率：97％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.906min；MS m/z(ESI):268[M+H]。
中间体制备例47：中间体D47的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000076
室温下将化合物D46(1.2g,4.5mmol)溶于THF(20mL)并加入Pd/C(含量10wt％，600mg)，反应体系用氢气置换三次后在氢氛下室温搅拌过夜。待反应完全后混合物过滤，滤液减压浓缩，得到目标产品D47(1.1g，产率：98％，白色固体)。
LCMS:Rt:0.373min；MS m/z(ESI):238[M+H]。
中间体制备例48：中间体D48的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000077
室温下将化合物D12(900mg，3.8mmol)，化合物D47(640mg，3.8mmol)和氯化铵(2.1g,38mmol)溶于乙醇(15mL)中，反应体系在氩气保护下升温至80℃反应48小时。待反应完全后,反应液冷却至室温，混合物过滤，滤液减压浓缩，残余物用DCM/MeOH(20/1,100mL)溶解后用水(30mL X 2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物D48(1.6g，产率：80％,红色固体)。
LCMS:Rt:1.30min；MS m/z(ESI):517[M+H]。
中间体制备例49：中间体D49的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000078
冰浴保护下将盐酸二氧六环(4M，5mL)溶液加入到化合物D48(1.6g)的甲醇(5mL)溶液中，反应液在室温下搅拌反应过夜。反应完全后将反应液降温至0℃，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液中和反应液至pH>7，所得混合物减压浓缩，残余物用DCM/MeOH(20/1,100mL)溶解，混合物用水(30mL x 3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度DCM/MeOH＝40/1)得到目标化合物D49(1.4g，95％,红色固体)。
LCMS:Rt:1.244min；MS m/z(ESI):473[M+H]。
中间体制备例50：中间体D50的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000079
在0℃下将NaH(60mg，1.5mmol)分批加入到化合物D7(230mg，1.0mmol)的DMF(10mL)溶液中。加完以后，反应液在0℃下搅拌反应30分钟，然后加入MeOH(48mg，1.5mmol)。加完以后，反应液在0℃下搅拌反应3小时。反应结束后用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭反应，所得混合物用乙酸乙酯(20mL X 3)萃取，有机相用水(50mL)，饱和食盐水(50mL X 2)洗涤后，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。得到粗品目标产品D50(110mg,产率:48.4.1％,黄色液体)直接用于下一步。
LCMS:Rt:1.208min；MS m/z(ESI):228.4[M+H]。
中间体制备例51：中间体D51的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000080
室温下将化合物D33(200mg，0.54mmol，化合物环丙基硼酸(52mg，0.61mmol)，K 2CO 3(228mg，1.662mmol)和Pd(dppf)Cl 2(40mg,0.054mmol)加入到1,4二氧六环(5mL)和H 2O(0.1mL)中。反应液用氩气置换三次后，加热至100℃搅拌反应8小时，LCMS检测反应完全。反应液冷却至室温后加入水(20mL)稀释，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过薄层色谱层析法(洗脱剂梯度PE：EtOAc＝1:100，R f＝0.3)纯化，得到目标化合物D51(120mg，产率：68％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.28min；MS m/z(ESI):322.2[M+H]。
中间体制备例52：中间体D52的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000081
在0℃下，将MsCl(2.9g,25mmol)缓慢加入化合物7-羟基-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(5.0g,21mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中，反应液在室温下搅拌反应2小时。反应完全后，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)淬灭反应；两相分离后，水相用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取，有机相合并后用水和饱和食盐水(100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标产品D52(5.0g，产率：70％,白色固体)。粗产品直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：4.63(brs,1H),3.53-3.50(m,4H),3.16(s,3H),1.82-1.75(m,4H),1.59-1.56(m,4H),1.37(s,9H)。
中间体制备例53：中间体D53的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000082
室温下在三口瓶中依次加入4-硝基吡唑(4.1g，12.8mmol)，D52(1.6g，14.1mmol)，K 2CO 3(2.7g，19.2mmol)和DMF(50mL)。反应液在120℃条件下搅拌反应2小时。反应结束后，将反应液冷却至室温，然后在反应液中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，两相分离后，水相用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩,残余物用反相色谱柱层析(330g柱子,洗脱剂梯度：水/乙腈＝0～100％,时间＝100分钟)纯化，得到目标产品D53(2.4g，产率：50％,白色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ：8.93(s,1H),8.24(s,1H),4.27-4.20(m,1H),3.62-3.51(m,4H),1.95-1.92(m,4H),1.83-1.76(m,2H)，1.63-1.55(m,2H),1.38(s,9H)。
中间体制备例54：中间体D54的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000083
在-60℃下将LiHMDS(18ml,18mmol)缓慢加入化合物D53(2.4g,7.1mmol)的THF(50mL)溶液中，加完后，反应液在此温度下搅拌反应30分钟。向反应体系中分批加入六氯乙烷(2.1g,8.7mmol)，反应继续搅拌2小时。向反应体系中加入饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭反应，所得混合物用乙酸乙酯(20mL X 3)萃取。有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度：PE:ETOAC＝10:1-4:1)纯化，得到目标产品D54(2.0g，产率：70％,白色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ：8.47(s,1H),4.43-4.37(m,1H),3.64-3.52(m,4H),1.99-1.95(m,2H),1.80-1.73(m,2H),1.68-1.60(m,4H),1.38(s,9H)。
中间体制备例55：中间体D55的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000084
室温下在单口瓶中依次加入D54(800mg，2.2mmol)，铁粉(300mg，4.4mmol)，氯化铵(600mg，10mmol)和乙醇(10mL)。反应液在80℃下搅拌反应16小时。反应完全后反应液趁热过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D55(400mg，产率:50％,绿色固体)直接用于下一步。
LCMS:Rt:1.168min；MS m/z(ESI):285.3[M-56+H]。
中间体制备例56：中间体D56的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000085
将化合物D55(255mg，0.84mmol)，化合物D12(300mg，0.90mmol)和氯化铵(510mg，8.4mmol)的乙醇(30mL)混合物加热至80℃搅拌反应72小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，然后减压浓缩，残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度DCM/MeOH＝50/1～10/1)纯化，得到目标化合物D56(600mg，产率：>100％,绿色固体)直接用于下一步。
LCMS:Rt:1.075min；MS m/z(ESI):620.4[M+H]。
中间体制备例57：中间体D57的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000086
室温下在100mL的三口瓶中分别加入化合物2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯(2.0g，9mmol)，化合物2-氨基苯基-二甲基膦氧化物(1.9g，10.8mmol)，DIEA(3.5g，27mmol)和DMF(20mL)。将混合物加热至25℃搅拌反应16小时。反应完全后将反应混合物倒入水(50mL)中。混合物用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度DCM/MeOH＝80:1-40:1)纯化，得到目标产品D57(1.5g，产率：45％,黄色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ：11.0(s,1H),8.80(s,1H),7.88-7.84(m,1H),7.71-7.59(m,2H),7.37-7.33(m,1H),4.37(q,J＝6.8Hz,2H),1.74(s,3H),1.71(s,3H),1.36(t,J＝6.8Hz,3H).
中间体制备例58：中间体D58的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000087
室温下在100mL的单口瓶中依次加入化合物D15(611.7mg,2mmol)，MeOH(5mL)和Pd/C(61.2mg，10％)。反应体系在氢气氛下室温搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩，得到粗品目标产品D58(551.7mg,产率：100％)。粗产品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):276.9[M+H]。
中间体制备例59：中间体D59的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000088
室温下将化合物D50(116mg，0.51mmol)溶解于MeOH(20mL)中，然后加入Pd/C(20mg)；加完后反应体系用氢气置换3次，然后体系在室温下搅拌反应2h。LCMS检测反应完全，反应液过滤除去Pd/C，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D59(100.6mg，产率：100％)。粗产品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):198.2[M+H]。
中间体制备例60：中间体D60的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000089
室温下，将D4(1.0g,3.2mmol)溶于氯化氢气体的二氧六环溶液(6N，10mL)中,固体完全溶解后，反应液在室温下继续搅拌反应2小时。薄层色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝1:1，R f＝0.2)显示原料消失，产物生成。反应液减压浓缩，得到目标化合物D60(1.1g，粗品,白色固体)。粗产物直接用于下一步反应。
中间体制备例61：中间体D61的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000090
室温下，在100mL的单口瓶中加入D60(500mg，2.36mmol)和1,2-二氯乙烷(10mL)，然后再加入甲醛水溶液(3mL)；混合物在室温下搅拌1小时后加入三醋酸硼氢化钠(995mg，4.72mmol)和醋酸5滴，加完后反应混合物在室温下继续反应10小时。LCMS检测反应完全，反应液用水(20mL)稀释，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取；有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用制备薄层色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷/甲醇＝20:1,R f＝0.2)纯化，得到目标化合物D61(200mg，Yield：37.8％,白色固体)。
LCMS:Rt:0.32min；MS m/z(ESI):225.3[M+H]。
中间体制备例62：中间体D62的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000091
室温下,将D61(200mg，0.89mmol)溶于乙醇(5mL)中并加入钯/碳催化剂(20mg),反应体系在氢氛下加热至60℃搅拌2小时。LCMS检测反应完全，混合物冷却后过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物D62(150mg，Yield：86％,白色固体)。
LCMS:Rt:0.32min；MS m/z(ESI):195.3[M+H]。
中间体制备例63：中间体D63的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000092
室温下，在50mL的单口瓶中依次加入(R)-四氢呋喃-3-基甲磺酸甲酯(2.0g，12.03mmol)，4-硝基吡唑(1.5g，13.24mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)，再加入碳酸钾(4.99g，36.10mmol),反应液加热至120℃搅拌过夜。LCMS检测反应完全，将反应液冷至室温后，再加入水(30mL)和乙酸乙酯(30mL)，两相分离后有机相用水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D63(2.5g,收率：70％,白色固体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:1.253min；MS m/z(ESI):184.4[M+H]。
中间体制备例64：中间体D64的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000093
在25mL的三口瓶中分别加入D63(300.0mg，1.64mmol)，1,2-二氯乙烷(425.6mg，1.80mmol)和四氢呋喃(5mL)，反应体系在氮氛下降温至-60℃，然后缓慢滴加双三甲基硅基胺基锂(1.64mL，1.64mmol)。滴加完毕，反应混合物在-60℃下继续搅拌2小时。LCMS检测反应完全，向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(25mL)淬灭反应，混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取，有机相用无水Na 2SO 4干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚：乙酸乙酯＝10:1，Rf＝0.1)纯化，得到目标产品D64(110mg，收率：31.0％,白色固体)。
LCMS:Rt:2.463min；MS m/z(ESI):217.4[M+H]。
中间体制备例65：中间体D65的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000094
室温下,将D64(110.0mg，0.51mmol)，甲基硼酸(303.0mg，5.1mmol)溶于二氧六环/水(2mL/0.5mL)中，然后加入碳酸钠(265.0mg，2.5mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(36.6mg，0.05mmol)。反应体系用氮气保护后加热至100℃搅拌过夜。反应完全后,将反应混合物冷却过滤，滤液用水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)稀释，两相分离后水相用乙酸乙酯(20mL)萃取，乙酸乙酯相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚：乙酸乙酯＝10:1，Rf＝0.2)纯化，得到目标产物D65(60.0mg，收率：60％,棕色固体物)。
中间体制备例66：中间体D66的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000095
室温下,将D65(60.0mg，0.3mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，然后加入钯碳催化剂(30.0mg，50％)。反应体系在氢氛下室温搅拌2h。LCMS检测反应完全,将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到目标产品 D66(50.0mg，收率：100％,黄色固体)。
LCMS:Rt:0.273min；MS m/z(ESI):168.5[M+H]。
中间体制备例67：中间体D67的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000096
室温下,向5-氯-4-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑(500mg，2.16mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4.3mL)溶液中加入***(212mg，4.32mmol)，反应体系在氩气保护下加热至80℃搅拌反应7小时；反应完全后,将反应体系冷却至室温，然后加入水(20mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(10mL X 3)萃取。有机相合并后用水(30mL)洗涤，有机溶液用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D67(400mg，Yield 60％,黄色固体)。
LCMS:Rt:1.635min；MS m/z(ESI):461[M+H 2O-H]。
中间体制备例68：中间体D68的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000097
室温下,向D67(200mg，0.9mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入钯碳(规格10wt％,100mg)，反应体系在氢氛下,室温搅拌6小时。反应完全后,反应液过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D68(150mg，Yield：80％，黄色固体)。
LCMS:Rt:1.254min；MS m/z(ESI):402[2M+NH 4]。
中间体制备例69：中间体D69的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000098
室温下,将D33(200mg，0.55mmol),4,4,5,5-四甲基-2-(异丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧硼酸酯(93mg,0.55mmol),碳酸钾(227mg，1.65mmol)和1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(40mg,0.05mmol)溶于二氧六环(10mL)中。反应体系在氮气保护下加热至100℃，搅拌反应8小时。LCMS检测反应完全，反应液冷却后用水(20mL)稀释，混合物用二氯甲烷(30mL×5)萃取，有机相用硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层制备色谱法(洗脱剂梯度：二氯甲烷/甲醇＝20/1,Rf＝0.4)纯化，得到目标化合物D69(110mg，收率：62.5％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.653min；MS m/z(ESI):322.2[M+H]。
中间体制备例70：中间体D70的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000099
室温下,将D69(100mg，0.3mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中，然后加入钯/碳催化剂(20mg)。反应体系在氢氛室温条件下搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残余物通过薄层制备色谱法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.6)纯化，得到目标化合物D70(30mg，收率：30％,白色固体)。
LCMS:Rt:1.49min；MS m/z(ESI):324.2[M+H]。
中间体制备例71：中间体D71的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000100
室温下，将D2(640mg，2.16mmol)溶解于甲醇(30mL)中，再加入钯碳催化剂(120mg)，反应体系在氢氛室温下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D71(550mg，收率：95.6％，黄色油状液体)。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.933min；MS m/z(ESI):267.4[M+H]。
中间体制备例72：中间体D72的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000101
室温下,将D71(225mg，0.834mmol)和D33(150mg，0.417mmol)溶于乙醇(30mL)中，向反应体系中加入氯化铵(225mg，4.2mmol)；然后将反应液加热至80℃搅拌16小时。反应结束后，将反应液冷却过滤,滤饼用乙醇(10mLx2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物通过制备薄层色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得到目标中间体D72(55mg,收率:22.3％,黄色固体)。
LCMS:Rt:1.425min；MS m/z(ESI):592.4[M+3]。
中间体制备例73：中间体D73的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000102
室温下,将D72(55mg，0.093mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液溶液(4M，10mL)中，反应在室温下进行2小时。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩，得到目标中间体D73的盐酸盐(50mg，收率：100％，黄色固体)。
LCMS:Rt:0.717min；MS m/z(ESI):490.2[M+H]。
中间体制备例74：中间体D74的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000103
室温下，将D3(1.5g，5mmol)，铁粉(1.4g，25mmol)，氯化铵(2.16g，40mmol)加到乙醇(28mL)和水(7mL)的混合液中，反应液在氩气下加热至80℃搅拌1小时。反应完全后，将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到目标粗产品D74(1.3g，收率：96％)，性状：红色固体。
LCMS:Rt:1.395min；MS m/z(ESI):245.2[M-56+H]。
中间体制备例75：中间体D75的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000104
室温下,将D74(1.16g，3.7mmol)，D12(1g，3.7mmol)，氯化铵(951mg，18.5mmol)溶于乙醇(30mL)中，反应在80℃下搅拌12小时。反应完全后,将反应混合物倒入水(100mL)中，混合物用二氯甲烷/甲醇(10/1，30mLX3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.7)纯化，得到目标产品D75(1.2g，收率：54％)，性状：白色固体。
LCMS:Rt:1.539min；MS m/z(ESI):580.4[M+H]。
中间体制备例76：中间体D76的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000105
室温下,将D75(220mg,0.38mmol)和4M的氯化氢二氧六环(0.95mL,3.8mmol)溶液溶于无水乙醇(4mL)中，反应液在室温搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全，将反应混合物减压浓缩，得到粗品目标产品D76(182mg,收率：95％)，性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:1.62min；MS m/z(ESI):480.1[M+H]。
中间体制备例77：中间体D77的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000106
室温下，将7-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷(156mg，0.66mmol)，1-溴-2-甲氧基乙烷(109mg，0.79mmol)和碳酸钾(96mg，0.79mmol)加到乙腈(5mL)中，然后将反应液加热至80℃搅拌16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D77(120mg，收率：91％),性状：黄色固体。
LCMS:Rt:0.716min；MS m/z(ESI):295.2[M+H]。
中间体制备例78：中间体D78的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000107
室温下,将湿钯碳(12mg)加入到D77(120mg，041mmol)的乙醇(5mL)溶液中，反应体系在氢氛下加热至30℃搅拌16小时。反应完全后,将反应液冷却至室温并过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D78(100mg，收率：93％),性状：白色固体
LCMS:Rt:0.312min；MS m/z(ESI):265.4[M+H]。
中间体制备例79：中间体D79的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000108
室温下,将三氟乙酸(2mL)加入到D53(300mg,0.86mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液中，反应液在室温下搅拌反应2小时。反应完全后，将反应液减压浓缩，得到目标化合物D79(312mg，收率:100％),性状：白色固体，直接用于下一步。
LCMS:Rt:0.727min；MS m/z(ESI):237.2[M+H]。
中间体制备例80：中间体D80的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000109
D79(156mg，0.66mmol)和甲醛水溶液(198mg，37％水溶液，10.0mmol)的甲醇(5mL)溶液在室温下加入三乙胺(66.7mg,0.66mmol)，搅拌反应5小时后加入三乙酸硼氢化钠(699.6mg，3.3mmol)，反应液继续在室温下搅拌反应2小时。反应完全后反应液减压浓缩，残余物通过薄层制备色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到目标化合物D80(100mg，收率：60％),性状：白色固体
LCMS:Rt:0.808min；MS m/z(ESI):321.5[M+H]。
中间体制备例81：中间体D81的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000110
室温下，将湿钯碳(8.0mg)加入到D80(80mg，0.32mmol)的乙醇(5mL)溶液中，反应体系在氢氛下加热至30℃搅拌4小时。反应完全后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物D81(56mg，收率：80％),性状：黄色固体
LCMS:Rt:0.291min；MS m/z(ESI):221.2[M+H]。
中间体制备例82：中间体D82的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000111
室温下,将D77(1066mg，6.16mmol)和二异丙基乙胺(751mg，6.16mmol)溶于乙腈(10mL)中，然后将反应液加热至80℃搅拌16小时。反应完全后,将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩得到粗品目标化合物D82(560mg，收率：65％),性状：黄色固体。
LCMS:Rt:0.885min；MS m/z(ESI):283.3[M+H]。
中间体制备例83：中间体D83的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000112
室温下，将湿钯碳(56mg)加入到D82(560mg，1.98mmol)的乙醇(10mL)溶液中，反应体系在氢氛下加热至30℃搅拌16小时。反应完全后,将反应液冷却至室温并过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D83(360mg，收率：93％),性状：黄色固体。
LCMS:Rt:0.259min；MS m/z(ESI):253.1[M+H]。
中间体制备例84：中间体D84的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000113
室温下，将叔丁基5-氧代环戊烷基[c]吡咯烷-2(1H)-羧酸酯(10g，44.4mmol)溶于乙醇(200mL)中，然后降温至0℃，向反应体系中缓慢加入硼氢化钠(5.1g，133.2mmol)，反应在室温反应过夜。TLC检测反应完全，向反应液中缓慢滴加水(100mL)，化合物用乙酸乙酯(50mL X 4)萃取，有机相合并用饱和食盐水(50mL X 3)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得粗品目标化合物D84(9g，收率：95％),性状：黄色液体。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ4.28-4.21(m,1H),3.43-3.41(m,2H),3.29-3.26(m 2H),2.53(br,2H),2.10-2.06(m,2H),1.48-1.43(m,1H),1.42-1.40(m,1H),1.39(s,9H).
中间体制备例85：中间体D85的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000114
室温下,将D84(10.0g，44.4mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，然后加入三乙胺(9.0g，88.8mmol)，将反应液降温至-5℃后再向体系中缓慢加入甲基磺酰氯(10.2g，88.8mmol)，控制体系温度不超过5℃，滴加完后让反应在室温搅拌过夜。LCMS检测反应完全，加入饱和碳酸氢钠谁溶液(100mL)，再搅拌10分钟，混合物用二氯甲烷(50mL X 3)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标产物D85(1.5g，收率：70％),性状：黄色固体。粗产品直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ5.17-5.04(m,1H),3.56-3.53(m,2H),3.36-3.33(m,2H),3.09-2.96(m,5H),2.67(br,2H),2.35-2.32(m,2H),1.88-1.85(m,2H),1.46(s,9H).
中间体制备例86：中间体D86的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000115
室温下，将D85(5.2g，46mmol)，4-硝基-1H-吡唑(14g，46mmol)，碳酸钾(12.7g，92mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，将反应液加热至120℃搅拌过夜。LCMS检测反应完全，向反应液中加入水(100mL)，混合物用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL X 5)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝10：1-乙酸乙酯)纯化，得目标化合物D86(6g，收率：40％),性状：黄色油状物。
LCMS:Rt:1.231min；MS m/z(ESI):267[M-55]。
中间体制备例87：中间体D87的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000116
室温下,将D86(1.5g，4.6mmol)溶于甲醇(10mL)中，然后加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(10mL，4N)，反应在室温搅拌2小时。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩，得粗品目标化合物D87(1.1g，收率：100％)，性状：白色固体。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.599min；MS m/z(ESI):223[M+H]。
中间体制备例88：中间体D88的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000117
室温下，将D87(1.1g，4.9mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入甲醛(1.5g，15mL，37％)后反应液在室温搅拌过夜。LCMS显示反应完全，加入三醋酸硼氢化钠(3.2g，15mmol)，反应液在室温继续搅拌15分钟。LCMS显示反应完全，反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝10：1；1,2-二氯甲烷:甲醇＝10：1)纯化，得到目标化合物D88(800mg，收率68％),性状：黄色油状物。
LCMS:Rt:0476min；MS m/z(ESI):236[M+H]。
中间体制备例89：中间体D89的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000118
室温下，将D88(800mg，3.4mmol)溶于乙醇(20mL)中，加入钯碳催化剂(200mg)，体系用氢气置换三次,在氢气环境下室温搅拌反应3小时。LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D89(500mg，收率：66％),性状：黄色油状物。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.233min；MS m/z(ESI):207[M+H]。
中间体制备例90：中间体D90的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000119
室温下，将D124(1.2g,2.2mmol)和劳森试剂(1.78g,4.4mmol)溶于甲苯(50mL)中，反应液于120℃搅拌3小时。LCMS检测产物生成，将反应液过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇：二氯甲烷＝0～10％)纯化，得到目标产物D90(350mg,收率：30％),性状：浅黄色固体。
LCMS:Rt:1.84min；MS m/z(ESI):562.5[M+H]。
中间体制备例91：中间体D91的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000120
室温下,将D90(350mg,0.62mmol)溶于4M的氯化氢二氧六环(1.55mL,6.2mmol)溶液中，反应液室温 搅拌2小时。LCMS检测反应完全后，将反应混合物减压浓缩，得到粗品目标产品D91(310mg,收率：98％),性状：浅黄色固体。
LCMS:Rt:1.15min；MS m/z(ESI):462.3[M+H]。
中间体制备例92：中间体D92的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000121
室温下，将叔丁基6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(3.0g，14.1mmol)溶于1,2-二氯甲烷(30mL)中，再加入三乙胺(2.9g，28.2mmol)，将反应液降温至0℃后向***中缓慢加入甲基磺酰氯(1.6g，14.1mmol)；将反应液升温至室温搅拌过夜。TLC检测反应完全，向反应液中加水(100mL)并搅拌15分钟，混合物用二氯甲烷(50mL X 4)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(50mLX3)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D92(2.8g，收率：70％),性状：黄色固体。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:MS m/z(ESI):N/A。
中间体制备例93：中间体D93的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000122
室温下,将D92(3.5g，12mmol)，4-硝基-1H-吡唑(1.4g，12mmol)，碳酸钾(3.3g，24mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，将反应液加热至120℃反应过夜。LCMS检测反应完全，向反应液中加入水(100mL)，混合物用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取，有机相合并用饱和食盐水(50mL X 5)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D93(2.0g，收率：70％),性状：黄色固体。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:1.585min；MS m/z(ESI):309[M+H]。
中间体制备例94：中间体D94的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000123
室温下，将叔丁基6-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯(500g，1.6mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入盐酸气的1,4-二氧六环溶液(10mL，4N)，反应在室温下搅拌2小时。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩，得粗品目标化合物D94(430mg，收率：100％),性状：白色固体。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0.353min；MS m/z(ESI):209[M+H]。
中间体制备例95：中间体D95的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000124
室温下，将D94(430mg，2.1mmol)溶于甲醇(20mL)中，再加入甲醛(511g，6.3ml，37％)并在室 温下搅拌过夜。LCMS显示反应完全后,加入三醋酸硼氢化钠(1.4g，6.3mmol)，反应在室温下继续搅拌15分钟。LCMS显示反应完全，反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚:乙酸乙酯＝10：1，2-二氯甲烷:甲醇＝10：1)纯化，得到目标化合物D95(250mg，收率：55％)，性状：黄色油状物。
LCMS:Rt:0.463min；MS m/z(ESI):223[M+H]。
中间体制备例96：中间体D96的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000125
室温下，将D95(200mg，0.9mmol)溶于乙醇(10mL)中，加入钯碳催化剂(100mg)，体系用氢气置换三次后在氢气环境下室温搅拌反应3小时。LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D96(150mg，收率：80％)。性状：黄色油状物。粗产品直接用于下一步反应。
LCMS:Rt:0312min；MS m/z(ESI):193[M+H]。
中间体制备例97：中间体D97的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000126
室温下，将3-(苄氧基)环丁酮(3.52g,20.0mmol)和1-甲基哌嗪(2.20g,22.0mmol)溶于1,2-二氯乙烷(300mL)中，然后分批加入三醋酸硼氢化钠(8.46g,40.0mmol)；反应液于室温搅拌3小时。LCMS检测反应完全，向体系中加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，化合物用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，有机相合并用饱和食盐水(100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇/二氯甲烷＝0～10％)纯化，得到目标产物D97(4.2g,收率：81％)，性状:无色油状物。
LCMS:Rt:1.75min；MS m/z(ESI):261.3[M+H]。
中间体制备例98：中间体D98的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000127
室温下，将D97(2.0g,7.7mmol)溶于三氟乙酸(9mL)中，反应液于80℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全,将反应混合物减压浓缩，得到粗品目标产品D98(1.31g),性状:浅黄色液体。
LCMS:Rt:0.31min；MS m/z(ESI):171.4[M+H]。
中间体制备例99：中间体D99的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000128
冰浴下，将D98(1.31g,7.7mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，先加入三乙胺(3.85g,38.5mmol)，然后加入甲基磺酰氯(0.9mL,11.55mmol)。反应液于室温下搅拌反应12小时。向体系中加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，化合物用乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标产品D99(1.9g),性状:浅黄色液体。
LCMS:Rt:0.43min；MS m/z(ESI):249.3[M+H]。
中间体制备例100：中间体D100的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000129
室温下，将D99(1.9g,7.7mmol)，4-硝基-1H-吡唑(1.31g,11.55mmol)和碳酸钾(3.20g,23.1mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，反应液于120℃搅拌12小时。LCMS检测产物生成，将反应液用水(50mL)稀释，化合物用乙酸乙酯(40mLX2)萃取，有机相合并用饱和食盐水(100mL X2)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇/二氯甲烷＝0～10％)纯化，得到目标产物D100(120mg,三步收率：6％)，性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:0.43min；MS m/z(ESI):266.4[M+H]。
中间体制备例101：中间体D101的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000130
室温下,将D100(120mg,0.45mmol)和钯碳催化剂(60mg)加到无水乙醇/四氢呋喃(10mL/1mL)中，反应液用氢气置换三次后,在室温搅拌反应1小时。LCMS检测反应完全,将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标产品D101(106mg,收率：98％)，性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:0.43min；MS m/z(ESI):236.3[M+H]。
中间体制备例102：中间体D102的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000131
将D18(153mg，0.63mmol)和D12(200mg，0.63mmol)溶于异丙醇(10mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，反应液于100℃反应10小时。LCMS检测反应完全，将反应液减压浓缩，残余物用薄层制备色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷/甲醇＝10:1,Rf＝0.3)纯化，得到目标化合物D102(190mg，收率：73.9％)，性状：黄色固体。
LCMS:Rt:1.261min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):407.3[M+H]。
中间体制备例103：中间体D103的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000132
将D102(100mg，0.24mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入二氯亚砜(0.5mL)，将反应液加热至70℃反应4小时。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩后残余物用水(20mL)稀释，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物D103(80mg，收率：76.9％)，性状：棕色固体。
LCMS:Rt:1.421min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):425.2[M+H]。
中间体制备例104：中间体D104的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000133
室温下，将D71(500mg,0.85mmol)和劳森试剂(688mg,1.70mmol)溶于甲苯(10mL)中，反应液于120℃搅拌反应3小时。LCMS检测产物生成，将反应液过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度甲醇/二氯甲烷＝0～10％)纯化，得到目标产物D104(330mg,收率：50％)，性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:1.85min；MS m/z(ESI):608.2[M+H]。
中间体制备例105：中间体D105的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000134
室温下,将D104(330mg,0.54mmol)和三氟乙酸(2.0mL)溶于二氯甲烷(5mL)中，反应液在室温搅拌2小时。LCMS检测反应完全,将反应混合物减压浓缩，得到粗品目标产品D105(210mg,收率：76％)，性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:1.16min；MS m/z(ESI):508.2[M+H]。
中间体制备例106：中间体D106的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000135
室温下，将叔丁基3-羟基哌啶-1-羧酸酯(10g，49.7mmol)，三乙胺(15g,149mmol)加入到二氯甲烷(150mL)中。混合液用氩气置换3次后冷却至-20℃，然后向体系中缓慢滴加甲烷磺酰氯(11.38g,99.4mmol)，加完后反应在室温下搅拌4小时。反应完全后将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)中，混合物用乙酸乙酯(100mL X 3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标产品D106(12g，收率：87％)，性状：红色液体。
LCMS:Rt:1.615min；MS m/z(ESI):224.1[M-56+H]。
中间体制备例107：中间体D107的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000136
室温下,将D106(12g，42.96mmol)，4-硝基-1H-吡唑(9.71g，85.91mmol)，碳酸钾(17.81g，128.88mmol)，溶于N’N-二甲基甲酰胺(160mL)中，反应在110℃下搅拌12小时。反应完全后将反应混合物倒入水(500mL)中，混合物用乙酸乙酯(100mL X 3)萃取，有机相用饱和碳酸钠水溶液(300mL X 8)洗涤，再用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚：乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.4)纯化，得到目标产品D107(7.5g，收率：59％)，性状：黄色液体。
LCMS:Rt:1.772min；MS m/z(ESI):297.1[M+H]。
中间体制备例108：中间体D108的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000137
室温下,将D107(200mg，0.67mmol)和钯碳催化剂(100mg)加到甲醇(10mL)中，反应体系用氢气置换3次后在室温下搅拌4小时。反应完全后,将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到目标产品D108(170mg，收率：95％)，性状：黄色液体。
LCMS:Rt:1.007min；MS m/z(ESI):267.2[M+H]。
中间体制备例109：中间体D109的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000138
室温下,将D108(170mg，0.64mmol),D12(202mg，0.64mmol)和氯化铵(171mg，3.19mmol)溶于乙醇(8mL)中，反应在80℃下搅拌12小时。反应完全后，将反应混合物倒入水(40mL)中。混合物用二氯甲烷/甲醇(10/1，30mLX3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.5)纯化，得到目标产品D109(110mg，收率：32％)，性状：白色液体。
LCMS:Rt:1.488min；MS m/z(ESI):546.2[M+H]。
中间体制备例110：中间体D110的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000139
室温下,将D109(110mg，0.2mmol)溶于氯化氢的二氧六环(4M，0.6mL)溶液和甲醇(1mL)的混合液中，反应在室温下搅拌1小时后将混合物减压浓缩，得到粗品目标化合物D110(80mg，收率：89％)，性状：无色液体。
LCMS:Rt:0.804min；MS m/z(ESI):446.1[M+H]。
中间体制备例111：中间体D111的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000140
室温下，将7-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷(100mg，0.42mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(160mg，0.84mmol)和二异丙基乙基胺(102mg，0.84mmol)溶于乙腈(5mL)中，然后将反应液加热至80℃搅拌16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D111(100mg，收率：91％),性状：黑色液体
LCMS:Rt:0.823min；MS m/z(ESI):301.3[M+H]。
中间体制备例112：中间体D112的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000141
室温下，将湿钯碳(12mg)加入到D111(45mg，015mmol)的乙醇(5mL)溶液中，反应体系在氢气氛下加热至30℃搅拌16小时。反应完全后,将反应液冷却至室温并过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D112(30mg，收率：75％),性状：黑色固体。
LCMS:Rt:1.028min；MS m/z(ESI):271.2[M+H]。
中间体制备例113：中间体D113的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000142
室温下，将湿钯碳(50mg)加入到D53(0.5g，1.49mmol)的乙醇(30mL)溶液中，反应体系在氢氛下加热至30℃搅拌6小时。反应完全后,将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D113(1.8g，收率：100％),性状：白色固体。
LCMS:Rt:0.858min；MS m/z(ESI):307.1[M+H]。
中间体制备例114：中间体D114的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000143
室温下,将D12(1.65g，5.2mmol)，D113(1.6g，5.2mol)和氯化铵(2.76g，5.2mmol)溶于乙醇(5mL)中，然后将反应液加热至80℃搅拌过夜。反应完全后,将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，残留用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷:甲醇＝1:0～10:1)纯化，得到目标中间体D114(1.2g,收率:40％),性状:白色固体。
LCMS:Rt:1.442min；MS m/z(ESI):586.5[M+H]。
中间体制备例115：中间体D115的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000144
室温下,将劳森试剂(276mg,0.683mmol)加入到D114(400mg，0.683mmol)的甲苯(10mL)溶液中，反应液在110℃搅拌4小时。反应完全后,将反应液冷却到室温，过滤，滤液减压浓缩，残余物硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷:甲醇＝1:0～10:1)纯化，得到目标中间体D115(250mg,收率:49％),性状:白色固体。
LCMS:Rt:1.845min；MS m/z(ESI):602.4[M+H]。
中间体制备例116：中间体D116的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000145
室温下，将三氟乙酸(3mL)加入到D115(250mg,0.41mmol)的二氯甲烷(12mL)溶液中，反应液在室温下搅拌2小时。反应完全后,将反应液减压浓缩，得到粗品目标化合物D116(180mg，收率:86％),性状：白色固体，直接用于下一步。
LCMS:Rt:1.006min；MS m/z(ESI):502.3[M+H]。
中间体制备例117：中间体D117的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000146
室温下,将D84(2.0g,8.47mmol)和钯/碳催化剂(300mg)加到乙醇(30mL)中，反应液用氢气置换三次，然后在50℃搅拌1小时。LCMS检测反应完全，反应液过滤，滤液减压浓缩，得到目标化合物D117(1.6g,粗品)，性状:黄色固体。
LCMS:Rt:0.49min；MS m/z(ESI):237.2[M+H]。
中间体制备例118：中间体D118的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000147
将D117(1.52mg，7.91mmol)，和D12(2.5g，7.91mmol)和氯化铵(2.09g,39.55mmol)溶于乙醇(30mL)。反应液在100℃条件下搅拌8小时，LCMS检测反应完全,将反应液过滤，滤液减压浓缩，得目标化合物D118(4.0g，粗品),性状:黄色固体。
LCMS:Rt:1.665min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):572.5[M+H]。
中间体制备例119：中间体D119的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000148
将D118(2.0g,3.5mmol)溶于氯化氢的二氧六环(20mL)溶液和甲醇(5mL)中,将反应混合物于室温下搅拌2小时。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩，得到粗品目标化合物D119(2.1g，粗品)，性状:黄色固体。
LCMS:Rt:1.165min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):472.2[M+H]。
中间体制备例120：中间体D120的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000149
室温下，将三氟乙酸(2mL)加入到D114(100mg,0.17mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液中，反应液在室温下搅拌2小时。反应完全后,将反应液减压浓缩，得到粗品目标化合物D120(72mg，收率:86％),ZZ性状：白色固体，直接用于下一步。
LCMS:Rt:0.748min；MS m/z(ESI):486.2[M+H]。
中间体制备例121：中间体D121的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000150
将D54(200mg,0.54mmol)溶于三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(5mL)中,将反应混合物于室温下反应2小时。LCMS检测反应完全,将反应液减压浓缩，得到目标化合物D121(140mg，粗品),性状:黄色固体。
LCMS:Rt:0.94min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-CAN)＝90:10；MS m/z(ESI):271.1[M+H]。
中间体制备例122：中间体D122的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000151
将D121(100mg，0.37mmol)，1-溴-2-甲氧基乙烷(101mg，0.74mmol)和N,N-二异丙基乙胺(143mg, 1.11mmol)溶于乙腈(5mL)，反应液在70℃下搅拌10小时。LCMS检测反应完全，将反应液减压浓缩，残余物用薄层制备色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:1,R f＝0.6)纯化，得到目标化合物D122(95mg，收率：78.5％)，性状：白色固体。
LCMS:Rt:1.08min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-CAN)＝90:10；MS m/z(ESI):329.1[M+H]。
中间体制备例123：中间体D123的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000152
将D122(90mg,0.27mmol)，氯化铵(14mg,0.27mmol)和铁粉(15mg,0.27mmol)加入水(2mL)和乙醇(10mL)中,将反应混合物加热至80℃反应8小时。LCMS检测反应完全，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D123(70mg，粗品),性状:棕色固体。
LCMS:Rt:0.375min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-CAN)＝90:10；MS m/z(ESI):299.4[M+H]。
中间体制备例124：中间体D124的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000153
室温下,将D71(1.7g，6.38mmol)，D12(2g，6.38mmol)和氯化铵(3.4g，63.8mmol)溶于乙醇(30mL)中，反应在80℃下搅拌12小时。反应完全后，将反应混合物倒入水(100mL)中。混合物用二氯甲烷/甲醇(二氯甲烷/甲醇＝10/1，30mLX3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.5)纯化，得到目标产品D124(2g，收率：57％)，性状：黄色固体。
LCMS:Rt:1.562min；MS m/z(ESI):546.5[M+H]。
中间体制备例125：中间体D125的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000154
室温下,将D124(1g，1.8mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(4M，10mL)和甲醇(10mL)的混合液中，反应在室温下搅拌1小时后，混合物减压浓缩，得到目标化合物D125(800mg，收率：94％)，性状：白色固体。
LCMS:Rt:0.796min；MS m/z(ESI):446.3[M+H]。
中间体制备例126：中间体D126的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000155
室温下，将2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐(3g，21.23mmol)，4-硝基-1H-吡唑(2g，17.69mmol)，碳酸铯(17.29g，53mmol)和二异丙基乙基胺(4.56g，35.38mmol)混于N’N-二甲基甲酰胺(30mL)中，反应在130℃下搅拌12小时。反应完全后，将反应混合物倒入水(300mL)中；混合物用二氯甲烷/甲醇(10/1，100mL X 3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.4)纯化，得到目标产品D126(2.2g，收率：68％)，性状：黄色固体。
LCMS:Rt:0.394min；MS m/z(ESI):185.3[M+H]。
中间体制备例127：中间体D127的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000156
室温下,将D126(500mg，2.71mmol)，钯碳催化剂(150mg)加到甲醇(10mL)中，反应体系用氢气置换3次，然后反应液在氢气下室温搅拌4小时。反应完全后，将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到目标产品D127(400mg，收率：96％)，性状：黄色固体。
LCMS:Rt:0.285min；MS m/z(ESI):155.2[M+H]。
中间体制备例128：中间体D128的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000157
室温下,将D21(400mg,0.71mmol)和劳森试剂(578mg,1.42mmol)溶于甲苯(10mL)中，反应液于120℃搅拌3小时。LCMS检测产物生成,将反应液过滤，滤液减压浓缩，残余物硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇/二氯甲烷＝0～10％)纯化，得到目标产物D128(200mg,收率：50％),性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:2.25min；MS m/z(ESI):576.2[M+H]。
中间体制备例129：中间体D129的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000158
室温下,将D128(100mg,0.17mmol)溶于4M的氯化氢的二氧六环溶液(0.4mL,1.7mmol)中，反应液在室温下搅拌12小时。LCMS检测反应完全,将反应混合物减压浓缩，得到粗品目标产品D129(81mg,收率：98％)，性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:2.10min；MS m/z(ESI):476.2[M+H]。
中间体制备例130：中间体D130的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000159
室温下,将D118(600mg，1.0mmol)，劳森试剂(808mg，2.0mmol)溶于甲苯(30mL)中，将反应液加热至110℃搅拌4小时。反应完全后，将反应混合物倒入水(100mL)中，混合物用二氯甲烷/甲醇(10/1，30mLX3)萃取，有机相用无水Na 2SO 4干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.8)纯化，得到目标产品D130(300mg，收率：49％)，性状：白色固体。
LCMS:Rt:1.894min；MS m/z(ESI):588.5[M+H]。
中间体制备例131：中间体D131的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000160
室温下,将D130(100mg，0.17mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(4M，2mL)和甲醇(1mL)的混合液中，反应在室温下搅拌1小时后，混合物减压浓缩，得到目标化合物D131(80mg，收率：95％)，性状：黄色固体。
LCMS:Rt:1.225min；MS m/z(ESI):488.1[M+H]。
中间体制备例132：中间体D132的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000161
室温下，将叔丁基9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸酯(500mg,1.87mmol)溶于甲醇(10mL)中，然后分批加入硼氢化钠(171mg,4.5mmol)，反应液于室温下搅拌1小时。LCMS检测反应完全，向体系中加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，然后用乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标产物D132(500mg,收率：60％)，性状:无色油状物。
LCMS:Rt:1.75min；MS m/z(ESI):214.5[M-56+H]。
中间体制备例133：中间体D133的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000162
冰浴下,将D132(500mg,1.87mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三乙胺(0.77mL,5.61mmol)，然后加入甲基磺酰氯(0.29mL,3.74mmol)；反应液于室温搅拌反应12小时。饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)淬灭反应，二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到目标产物D133(100mg,收率：16％),性状:无色油状物。
LCMS:Rt:1.89min；MS m/z(ESI):292.4[M-56+H]。
中间体制备例134：中间体D134的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000163
室温下,将D133(90mg,0.26mmol),4-硝基-1H-吡唑(58g,0.52mmol)和碳酸钾(108mg,0.78mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，反应液于110℃搅拌12小时。LCMS检测产物生成，反应液用水(20mL)稀释，化合物用乙酸乙酯(40mLX4)萃取，有机相合并用饱和食盐水(100mL X2)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用制备薄层色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇/二氯甲烷＝1:10)纯化，得到目标产物D134(50mg,收率：52％),性状:白色固体。
LCMS:Rt:2.04min；MS m/z(ESI):309.3[M-56+H]。
中间体制备例135：中间体D135的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000164
Figure PCTCN2019113608-appb-000165
室温下,将叔丁基9-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸酯(50mg,0.14mmol)和钯碳催化剂(30mg)加入无水乙醇(3mL)中，反应液用氢气置换三次在室温搅拌2小时。LCMS检测反应完全,将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D135(48mg,收率：98％),性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:1.16min；MS m/z(ESI):335.2[M+H]。
中间体制备例136：中间体D136的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000166
室温下,将D135(48mg,0.14mmol)，D12(44mg,0.14mmol)和氯化铵(38mg,0.70mmol)溶于异丙醇(3mL)，反应液于80℃搅拌3小时。LCMS检测反应完全,将反应液用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)稀释，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用制备薄层色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇/二氯甲烷＝1:10)纯化，得到目标产物D136(32mg,收率：37％),性状:白色固体。
LCMS:Rt:1.89min；MS m/z(ESI):614.2[M-56+H]。
中间体制备例137：中间体D137的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000167
室温下,将D136(32mg,0.05mmol)溶于4M的氯化氢的二氧六环溶液(0.13mL,0.5mmol)中，反应液在室温搅拌3小时。LCMS检测反应完全,将反应混合物减压浓缩，得到粗品目标产品D137(30mg,收率：98％),性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:0.37min；MS m/z(ESI):514.2[M+H]。
中间体制备例138：中间体D138的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000168
室温下,将3-(苄氧基)环丁酮(5g,28.4mmol)和叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(5.28g,28.4mmol)溶于1,2-二氯乙烷中(500mL)，分批加入三醋酸硼氢化钠(11.98g,56.8mmol)，反应液于室温搅拌8小时。LCMS检测反应完全，向体系中加入水(100mL)，混合物用二氯甲烷(200mL×4)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，粗品通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚/乙酸乙酯＝100:1～2:1)纯化， 得到目标化合物D138(8.25g,收率：83.9％)，性状:白色固体。
LCMS:Rt:1.345min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):347.5[M+H]。
中间体制备例139：中间体D139的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000169
室温下,将D138(6.0g,17.34mmol)溶于三氟乙酸(20mL)中，反应液于80℃搅拌6小时。LCMS检测反应完全，将反应混合物浓缩得到粗品，将粗品溶于二氯甲烷(5mL)中再加入三乙胺(5.25g,52.02mmol)和二碳酸二叔丁酯(7.56g,34.68mmol)，反应混合物于室温下搅拌2小时。LCMS检测到产物,向体系中加入水(100mL)，化合物用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相合并减压浓缩，得到的粗品通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷/甲醇＝100:1～10:1)纯化，得到目标化合物D139(3.9g,收率：88.04％)，性状:黄色油状物。
LCMS:Rt:1.006min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):257.5[M+H]。
中间体制备例140：中间体D140的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000170
将D139(3.0g,11.71mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中并加入三乙胺(3.5g,35.13mmol)，然后加入甲基磺酰氯(2.6mg,23.43mmol)；反应液于室温搅拌10小时。向体系中加入水(50mL)，混合物用二氯甲烷(50mL×4)萃取，合并有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL×3)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到粗品目标化合物D140(4.0g,粗品)，性状:浅黄色液体。
LCMS:Rt:1.145min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):335.3[M+H]。
中间体制备例141：中间体D141的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000171
室温下,将D140(1.5g,4.49mmol)和4-硝基-1H-吡唑(507mg,4.49mmol)，碳酸钾(1.85g,4.49mmol)加入N’N-二甲基甲酰胺(20mL)中，反应液于110℃搅拌10小时。LCMS检测反应完全,用水(50mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(30mL×4)萃取，合并有机相用饱和碳酸钾水溶液(50mL X3)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，所得粗品通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯/石油醚＝1:5～乙酸乙酯/甲醇＝10:1)纯化，得到目标化合物D141(650mg,收率：43.33％)，性状:白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.63(s,1H),8.16(s,1H),4.94-4.86(m,1H),3.46(brs,4H),3.29-3.16(m,1H),2.63-2.57(m,4H),2.39-2.36(m,4H),1.47(s,9H).
中间体制备例142：中间体D142的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000172
室温下,将D141(650mg,1.834mmol)和钯/碳催化剂(300mg)加入四氢呋喃(30mL)中，反应液用氢气置 换三次，然后在室温下搅拌10小时。LCMS检测反应完全,将钯/碳滤除，滤液减压浓缩，得到目标化合物D142(610mg,粗品)，性状:浅黄色固体。
LCMS:Rt:0.303min；(0.1％FA-H 2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):322.2[M+H]。
中间体制备例143：中间体D143的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000173
将D142(509mg，1.58mmol)，D12(500g，1.58mmol)和氯化铵(334g,6.32mmol)溶于乙醇(5mL)中；反应液在110℃条件下搅拌10小时。LCMS检测反应完全，将反应液过滤，滤液减压浓缩，所得粗品通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷/甲醇＝100:1～10:1)纯化，得到目标化合物D143(400mg,收率：42.1％)，性状:白色固体。
LCMS:Rt:1.250min；(0.1％FA-H2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):601.2[M+H]。
中间体制备例144：中间体D144的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000174
将D143(150mg,0.25mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(5mL)和甲醇(1mL)中，反应在室温下搅拌1.5小时。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩，得到目标化合物D144(130mg，粗品),性状:黄色固体。
LCMS:Rt:0.780min；(0.1％FA-H2O):(0.1％FA-ACN)＝90:10；MS m/z(ESI):501.2[M+H]。
中间体制备例145：中间体D145的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000175
室温下,将D143(200mg，0.33mmol)和劳森试剂(271mg，0.67mmol)溶于甲苯(10mL)中，反应在110℃下搅拌4小时。反应完全后，将反应混合物倒入水(100mL)中，二氯甲烷/甲醇(10/1，30mLX3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩；残余物通过硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：二氯 甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.6)纯化，得到目标产品D145(120mg，收率：59％),性状：黄色固体。
LCMS:Rt:1.019min；MS m/z(ESI):517.1[M-100+H]。
中间体制备例146：中间体D146的制备
Figure PCTCN2019113608-appb-000176
室温下,将D145(120mg，0.19mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(4M，4mL)和甲醇(1mL)的混合液中，反应在室温下搅拌1小时后，混合物减压浓缩，得到粗品目标化合物D146(100mg，收率99％),性状：黄色固体。
LCMS:Rt:2.118min；MS m/z(ESI):517.2[M+H]。
实施例1和实施例1’
二甲基(2-((2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)氧化 膦和二甲基(2-((4-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基) 氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000177
将化合物D10和D10’(140mg，0.42mmol)的混合物和化合物D9(79mg，0.44mmol)溶于EtOH(10mL)中，向反应体系中加入氯化铵(106.9mg，2.0mmol)后，反应在105℃搅拌16小时。反应结束后，将反应液过滤，滤饼用乙醇(20mL)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
梯度条件：
Figure PCTCN2019113608-appb-000178
)纯化得纯品产物E1’(三氟乙酸盐，14.5mg，产率：7.3％)和产物E1(三氟乙酸盐，74.5mg，产率：37.6％)。 E1’:
HPLC：99.152％@214nm，99.42％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):495.3[M+H]
19F NMR(400MHz,CD 3OD)δ：-62.90,-63.28,-77.23.
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ：8.38(brs,1H),8.15(brs,1H),7.87-7.68(m,2H),7.52-7.35(m,2H),4.43-4.27(m,1H),4.08-4.04(m,2H),2.58(brs,2H),2.24-2.12(m,5H),1.87-1.76(m,8H).
E1:
HPLC：99.468％@214nm，99.228％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):495.3[M+H]
19F NMR(400MHz,CD 3OD)δ：-64.17,-77.37.
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ：8.35(s,1H),7.94-7.90(m,1H),7.60-7.54(m,1H),7.49(s,1H),7.41-7.37(m,1H)7.28-7.24(m,1H),4.40-4.33(m,1H),4.10-4.06(m,2H),3.62-3.56(m,2H),2.27-2.16(m,2H),2.14(s,3H),1.84-1.81(m,8H).
实施例2
二甲基(2-((2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)氧化 膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000179
室温下将化合物D11(100mg，0.6mmol)和中间体D12(158mg，0.5mmol)溶于异丙醇(20mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(1.14g，10.0mmol)后，将反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000180
)纯化，得到目标产物E2(三氟乙酸盐，29.1mg，产率：13％，白色固体)。
HPLC：99.83％@214nm，99.81％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):447.4[M+H]
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ-74.71(s)
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.94(brs,1H),9.42(brs,1H),8.17(brs,1H),7.65-7.45(m,4H),7.25(brs,1H),4.26(brs,1H),3.97-3.93(m,2H),3.45(t,J＝11.2Hz,2H),1.89-1.75(m,10H).
实施例3
(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(E3)
Figure PCTCN2019113608-appb-000181
室温下将化合物D58(165mg，0.6mmol)和中间体D12(158mg，0.5mmol)溶于异丙醇(20mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(1.14g，10.0mmol)后，将反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000182
)纯化得到目标产物E3(三氟乙酸盐，15.3mg，产率：16％)，性状：白色固体。
HPLC：99.11％@214nm，98.96％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):441.3[M+H]
1H NMR(400MHz,甲醇-d 4)δ8.4(br,1H),8.07(s,1H),7.68-7.58(m,3H),7.37-7.33(m,1H),4.27(t,J＝5.6Hz,2H),3.92(t,J＝5.6Hz,2H),1.89(s,3H),1.85(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ-77.25(s)
实施例4
(5-氯-2–(2–(1–(2-羟乙基)-1-氢吡唑-4-氨基)嘧啶4-氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000183
室温下将化合物D17(100mg，0.70mmol)和中间体D12(223.0mg，0.7mmol)溶于异丙醇(5mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(1596.0mg，14.0mmol)后，反应在120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液过滤,滤饼用乙醇(20mL)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000184
Figure PCTCN2019113608-appb-000185
)纯化，得目标产物E4(三氟乙酸盐，47.4mg，产率：16％，白色固体)。
HPLC：99.84％@214nm，99.83％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):421.2[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.98(brs,1H),9.38(s,1H),9.05–7.84(m,1H),7.96–7.30(m,4H),7.22(brs,1H),4.03(brs,2H),3.69(t,J＝5.3Hz,2H),1.76(s,3H),1.79(s,3H),
实施例5
(2-(5-氯-2-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000186
室温下将化合物D18(100mg，0.4mmol)和中间体D12完后反应液在80℃下搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤，滤饼用乙醇(20mL)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000187
)纯化，得目标产物E5(三氟乙酸盐，27.4mg，产率：9.7％)性状：白色固体。
HPLC：90.63％@214nm，96.38％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):407.1[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(br,1H),9.42(s,1H),8.17(brs,2H),7.89–7.52(m,3H),7.45(s,1H),7.24(brs,1H),4.15(brs,2H),3.63(t,J＝5.2Hz,2H),3.20(s,3H),1.79(s,3H),1.76(s,3H).
实施例6
(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑-4-基)嘧啶-4-基)吡唑-4-基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000188
室温下将化合物D20(100mg，0.57mmol)和中间体D12(150mg，0.475mmol)溶于异丙醇(20mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(1.1g，9.5mmol)后将反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000189
)纯化得到目标产物E6(盐酸盐，29.4mg，产率：13.6％)，性状：白色固体。
HPLC：98.83％@214nm，99.17％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):455.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.5～8.11(m,2H),7.73-7.60(m,3H),7.44-7.41(m,1H),4.35(brs,2H),3.79(brs,2H),3.30(s,3H),1.90(s,3H),1.87(s,3H)
实施例7
(2-((5-甲基-2-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000190
室温下将化合物D21(180mg，0.32mmol)溶于HCl-二氧六环(3mL)和甲醇(1mL)的混合溶剂中,反应在室温下搅拌反应1小时。LCMS检测反应完全后，反应液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000191
Figure PCTCN2019113608-appb-000192
)纯化，得纯品产物E7(HCl盐，16mg，产率：32％)，性状：白色固体；
HPLC：99.084％@214nm，99.750％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):460.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ：8.56(brs,1H),8.12-7.98(m,1H),7.68(brs,2H),7.55(s,1H),7.40(brs,1H),4.60(brs,1H),3.58(d,J＝12.8Hz,2H),3.26-3.30(m,2H),2.22-2.34(m,7H),1.91(s,3H),1.88(s,3H).
实施例8
(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000193
室温下将化合物D23(100mg，0.5mmol)和中间体D12(131mg，0.42mmol)溶于异丙醇(20mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(960mg，8.4mmol)后将反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000194
)纯化，得到目标产物E8(盐酸盐，35.9mg，产率：17.8％)性状：白色固体。
HPLC：98.84％@214nm，99.86％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):481.3[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.6-8.1(m,2H),7.74-7.67(m,3H),7.44-7.41(m,1H),4.61(brs,1H),
4.10-4.06(m,2H),3.63-3.56(m,2H),2.23-2.16(m,2H),1.91-1.87(m,8H).
实施例9
(((5-氯-2–(2–(1–(2-羟乙基)-5-甲基-1-氢吡唑-4-氨基)嘧啶4-氨基)苯基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(E9)
Figure PCTCN2019113608-appb-000195
室温下将化合物D25(100mg，0.39mmol)和中间体D12(148mg，0.47mmol)溶于异丙醇(10mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(889.2mg，7.8mmol)后反应在120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液过滤，滤饼用乙醇(20mL)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000196
)纯化，得目标产物E9(三氟乙酸盐，22.4mg，产率：11％)，性状：白色固体。
HPLC：99.20％@214nm，99.82％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):421.2[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.47(brs,1H),7.95(s,1H),7.64–7.42(m,3H),7.19-7.22(m,1H),4.15(t,J＝5.4Hz,2H),3.87(t,J＝5.4Hz,2H),2.18(s,3H),1.86(s,3H),1.83(s,3H)
实施例10
(2-((5-氯-2-((1-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000197
室温下将化合物D27(155mg，1.0mmol)和中间体D12(158mg，0.5mmol)溶于异丙醇(20mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(1.14g，10.0mmol)后将反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000198
Figure PCTCN2019113608-appb-000199
)纯化得到目标产物E10(三氟乙酸盐，35.1mg，产率：16.2％)，性状：白色固体。
HPLC：96.49％@214nm，98.48％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):435.4[M+H]
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d4)：δ-77.21(s)
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.6-8.0(m,2H),7.67-7.52(m,3H),7.38(brs,1H),4.27-4.25(m,2H),3.75(brs,2H),3.30(s,3H),2.21(s,3H),1.90(s,3H),1.86(s,3H).
实施例11
(2-(5-氯-2-(1-(1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基)氨基苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000200
室温下将化合物D28(30mg,0.056mmol)溶于四氢呋喃/甲醇(1mL/1mL)中，冰浴条件下向反应液中加入硼氢化钠(11mg,0.28mmol)。反应液在室温下搅拌反应两小时。LCMS检测反应已经完全后将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液(5mL)中，混合物用乙酸乙酯(10mLX4)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000201
)纯化，得纯品产物E11(三氟乙酸盐，20mg，产率：50％)。性状：无色油状物。
HPLC：93.04％(214nm)，93.66％(254nm)
LCMS:Rt:0.70min；MS m/z(ESI):504.5[M-H]。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.43(brs,1H),8.02(brs,1H),7.64(dd,J＝12.0Hz,8.0Hz,1H),7.55(brs,2H),7.33(brs,1H),4.67-4.54(m,1H),3.93-3.91(m,2H),3.83-3.80(m,2H),3.65-3.40(m,1H),3.26-3.24(m,3H),2.49-2.45(m,2H),2.24-2.17(m,5H),1.89(s,3H),1.85(s,3H).
实施例12
(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(4-氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000202
室温下将化合物D12(95mg，0.30mmol)，化合物D29(50mg,0.27mmol)和NH 4Cl(72mg,1.35mmol)溶于EtOH(3mL),反应液在100℃下搅拌反应10小时。LCMS检测反应完全后将反应液冷却至室温，混合物过滤除去NH 4Cl，滤液减压浓缩。残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000203
)纯化,得到目标产物E12(HCl盐，15mg，产率：12％)。性状：白色固体；
HPLC：99.574％@214nm，99.705％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):461.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ：8.59(brs,1H),8.12-7.97(m,1H),7.70-7.68(m,2H),7.54(s,1H),7.42(brs,1H),4.45(brs,1H),4.05-4.09(m,2H),3.56-3.62(m,2H),2.20-2.26(m,5H),1.88-1.92(m,8H).
实施例13
(2-((5-氯-2-((5-环丙基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000204
室温下将化合物D31(80mg，0.386mmol)和中间体D12(101mg，0.322mmol)溶于异丙醇(20mL)中，向反应体系中加入三氟乙酸(734mg，6.44mmol)，然后将反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000205
Figure PCTCN2019113608-appb-000206
)纯化，得到目标产物E13(盐酸盐，3.1mg，产率：2％)，性状：白色固体。
HPLC：97.42％@214nm，97.22％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):487.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.56-7.97(m,2H),7.70-7.43(m,4H),4.86-4.84(m,1H),4.12-4.07(m,2H),3.61(t,J＝12.0Hz,2H),2.30-2.19(m,2H),1.93-1.89(m,8H),1.85-1.79(m,1H),1.02-1.00(m,2H),0.73-0.71(m,2H).
实施例14
(2-((5-氯-2-((5-乙基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000207
室温下将化合物D32(36mg，0.12mmol)和中间体D29(43mg，0.24mmol)溶于异丙醇(10mL)中，再向反应体系中加入三氟乙酸(274mg，2.4mmol)；加完后将反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000208
)纯化得到目标产物E14(盐酸盐，24.7mg，产率：46.3％)性状：白色固体。
HPLC：97.09％@214nm，96.73％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):477.4[M+H]
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ161.97(s)
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.70-7.91(m,2H),7.71-7.57(m,3H),7.42-7.38(m,1H),4.51-4.43(m,1H),4.11–4.06(m,2H),3.61(t,J＝11.6Hz,2H),2.27(s,3H),2.27-2.18(m,2H),1.92-1.86(m,8H).
实施例15
(2-((5-溴-2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000209
室温下在100mL的单口瓶中将化合物D33(100mg，0.28mmol)和化合物D29(51mg，0.28mmol)溶于EtOH(10mL)中，再加入三氟乙酸(5mL)，然后将反应液加热至80℃搅拌反应过夜。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩，残留物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000210
)纯化，得目标化合物E15(三氟乙酸盐，8mg,产率：10％,)，性状：白色固体。
HPLC：99.487％@214nm,99.739％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):507[M+H]
19F NMR(376.5MHz,DMSO)δ74.35(s)
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.11(brs,1H),8.73(brs,1H),8.16(s,1H),7.53-7.57(m,1H),7.45(s,1H),7.15(brs,1H),7.01(brs,1H),4.37-4.31(m,1H),3.97-3.94(m,2H),3.49-3.46(m,2H),2.15(s,3H),2.09-1.99(m,2H),1.79-1.75(m,2H),1.79(s,3H),1.75(s,3H).
实施例16
(2-((5-溴-2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000211
室温下将化合物D34(80mg,0.25mmol),化合物D29(45mg,0.25mmol)和氯化铵(110mg,2.5mmol)溶于乙醇(5mL)中。反应液在100℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应已经完全后将反应混合物减压浓缩。残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000212
Figure PCTCN2019113608-appb-000213
)纯化，得纯品产物E16(盐酸盐，6mg，产率：5％)，性状：黄色固体
HPLC：97.65％(214nm)，99.39％(254nm)
LCMS:Rt:1.04min；MS m/z(ESI):457.4[M+H]。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.66(brs,1H),7.72–7.64(m,1H),7.57(s,2H),7.36(t,J＝7.2Hz,2H),4.47(t,J＝11.6Hz,1H),4.09(dd,J＝11.4,4.0Hz,2H),3.94(s,3H),3.61(t,J＝11.7Hz,2H),2.31–2.17(m,5H),1.89(m,8H).
实施例17
二甲基(2-((5-甲基-2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000214
室温下将化合物D35(50mg，0.169mmol)，化合物D29(30mg,0.169mmol)和NH 4Cl(27mg,0.507mmol)溶于EtOH(3mL)中,将反应液加热至100℃搅拌反应8小时。LCMS检测反应完全，混合物过滤，滤液减压浓缩；残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000215
)纯化，得纯品目标产物E17(HCl盐，15mg，产率：20％)。性状：油状液体；
HPLC：98.434％@214nm，98.466％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):441.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ：8.70(br,1H),7.66-7.52(m,4H),7.35(br,1H),4.43(br,1H),4.08(dd,J＝11.2Hz,4.4Hz,2H),3.63-3.56(m,2H),2.29-2.18(m,8H),1.94-1.84(m,8H).
实施例18
2-(4-(4-(5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基乙酰胺
Figure PCTCN2019113608-appb-000216
室温下将化合物D37(104mg,0.2mmol),氯化铵(22mg,0.4mmol),HATU(114mg,0.3mmol)溶于DMF(2mL)中。反应液在室温搅拌反应12小时。LCMS检测反应已经完全后将反应混合物倒入水(5mL)中。混合物用乙酸乙酯(10mL X 4)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000217
)纯化，得纯品产物E18(盐酸盐，20mg，产率：20％)，性状：浅黄色固体
HPLC：99.79％(214nm)，99.89％(254nm)
LCMS:Rt:0.66min；MS m/z(ESI):517.5[M-H]。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.57(brs,1H),7.99(brs,1H),7.71(brs,2H),7.56(brs,1H),7.43(brs,1H),4.65-4.55(m,1H),4.05(s,2H),3.81-3.78(m,2H),3.44-3.38(m,2H),2.53-2.50(m,2H),2.35-2.25(m,5H),1.92-1.89(m,6H).
实施例19和实施例20
二甲基(2-((2-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)氧化膦和二甲 基(2-((4-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000218
室温下将化合物D40(450mg，0.76mmol)溶于4M HCl/二氧六环(20mL)中，反应液在室温下搅拌反应2h，LCMS检测反应完全。反应液减压浓缩，得到目标粗产品(400mg)，取50mg粗产品用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000219
Figure PCTCN2019113608-appb-000220
)纯化得到纯品目标产物E19(盐酸盐，12.3mg，产率：24.6％)性状：白色固体。
HPLC：99.58％@214nm，99.85％@254nm,Rt:6.543min
LCMS：MS m/z(ESI):494.4[M+H],Rt:1.094min
1H NMR(400MHz,甲醇-d 4)δ8.44(br,1H),7.79-7.77(m,1H),7.69-7.64(m,1H),7.53-7.46(m,2H),7.43-7.41(m,1H),4.57(br,1H),3.61-3.57(m,2H),3.32-3.24(m,2H),2.36-2.32(m,2H),2.16(s,3H),2.13-2.09(m,2H),1.86(s,3H),1.83(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ64.68(s).
室温下将化合物D41(420mg，0.76mmol)溶于4M HCl/二氧六环(20mL)中，反应液在室温下搅拌反应2h，LCMS检测反应完全。反应液减压浓缩，得到目标粗产品(400mg)，取50mg粗产品用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000221
)纯化得到纯品目标产物E20(盐酸盐，14.6mg，产率：29.2％,)性状：白色固体。
HPLC：99.79％@214nm，99.93％@254nm,Rt:5.625min
LCMS：MS m/z(ESI):494.5[M+H],Rt:0.915min
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ63.652(s).
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.44(brs,1H),7.79-7.77(m,1H),7.68-7.64(m,1H),7.53-7.46(m,2H),7.43-7.41(m,1H),4.57(brs,1H),3.61-3.58(m,2H),3.32-3.24(m,2H),2.35-2.32(m,2H),2.16(s,3H),2.12-2.09(m,2H),1.86(s,3H),1.83(s,3H).
实施例21
(2-(5-氯-2-((1-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基)氨基苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000222
室温下将化合物E7(180mg,0.36mmol),1-氟-2碘乙烷(75mg,0.43mmol),DIEA(140mg,1.08mmol)溶于DMF(3mL)中。反应液于室温下搅拌反应12小时。LCMS检测反应已经完全后将反应液直接用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000223
)纯化，得纯品产物E21(30mg，产率：17％)。性状：白色固体
HPLC：97.37％(214nm)，97.47％(254nm)
LCMS:Rt:0.76min；MS m/z(ESI):506.4[M+H]。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.18(s,1H),8.48(s,2H),8.05(s,1H),7.60–7.49(m,1H),7.43(s,1H),7.31(brs,1H),7.11(brs,1H),4.61(t,J＝4.9Hz,1H),4.50(t,J＝4.9Hz,1H),4.13–3.98(m,1H),3.00(d,J＝11.4Hz,2H),2.70(t,J＝4.9Hz,1H),2.63(t,J＝4.9Hz,1H),2.20-2.17(m,2H),2.13(s,3H),2.06-2.04(m,2H),1.79-1.76(m,8H).
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.11(br,1H),9.42(s,1H),8.17(brs,2H),7.89–7.52(m,3H),7.45(s,1H),7.24(brs,1H),4.15(brs,2H),3.63(t,J＝5.2Hz,2H),3.20(s,3H),1.79(s,3H),1.76(s,3H).
实施例22
(2-((5-氯-2-((5-乙基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000224
室温下将化合物D43(150mg，0.73mmol)和中间体D12(158mg，0.5mmol)溶于异丙醇(30mL)中，再向反应体系中加入三氟乙酸(1.14g，10.0mmol)；加完后将反应液加热升温至120℃并搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000225
Figure PCTCN2019113608-appb-000226
)纯化,得到目标产物E22(盐酸盐，14.6mg，产率：6.2％)性状：黄色固体。
HPLC：95.92％@214nm，97.59％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):475.4[M+H]
1H NMR(400MHz,甲醇-d 4)δ：8.45-7.97(m,2H),7.71-7.43(m,4H),4.49-4.46(m,1H),4.09–4.06(m,2H),3.62(t,J＝12.0Hz,2H),2.78-2.72(m,2H),2.32-2.21(m,2H),1.92-1.88(m,8H),1.17-1.15(m,3H).
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ：N/A
实施例23和实施例24
(2-((5-氯-2-((1-((1s,4s)4-(羟基)环己基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)吡啶-4-基)胺基)苯基)二甲基膦氧化合 物(顺式和反式)
Figure PCTCN2019113608-appb-000227
用冰浴将化合物D49(200mg，0.42mmol)的甲醇(5mL)溶液冷却，然后向反应液中缓慢加入硼氢化钠(160mg，0.42mmol)；加完后反应在室温下进行2小时。反应完全后向反应体系中加入饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭反应，混合物减压浓缩，残余物用二氯甲烷/甲醇(20/1,10mL x 3)萃取。有机相合并后直接减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000228
)纯化，得纯品目标产物E23(40mg，20％产率)。性状：白色固体。
HPLC：99.51％@214nm，99.26％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):475.4[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.18(s,1H),8.46(brs,2H),8.05(s,1H),7.57-7.52(m,1H),7.40(s,1H),7.20(br,1H),7.13-7.10(m,1H),4.65(d,J＝4.4Hz,1H),4.06-4.03(m,1H),3.50-3.48(m,1H),2.12(s,3H),1.93-1.75(m,6H),1.79(s,3H),1.75(s,3H),1.38-1.34(m,2H).
另一异构体纯度不好，再用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000229
)纯化，得到纯品目标产物E24(三氟乙酸盐，10mg，产率：5％)性状：白色固体。
HPLC：96.45％@214nm，96.83％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):475.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOH-d6)δ：8.57(br,1H),8.20(br,1H),7.95-9.68(m,2H),7.52-7.35(m,2H),4.20-4.05(m,1H),4.03(br,1H),2.42-2.32(m,2H),2.23-2.18(m,3H),1.98-1.87(m,8H),1.76-1.68(m,4H).
19F NMR(376.5MHz,MeOH-d6)δ：-77.33(s)
实施例25和实施例26
(2-((2-((1-(1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)基)二甲基膦氧 化物和(2-((4-((1-(1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)二 甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000230
室温下将化合物E19(盐酸盐，100mg，0.2mmol)和溴乙醇(38mg，0.3mmol)溶于MeCN(30mL)中，向反应体系中加入K 2CO 3(110mg，0.8mmol)后将反应液加热至80℃搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤,滤饼用乙腈(10mL X 2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000231
Figure PCTCN2019113608-appb-000232
)纯化，得到目标产物E25(16.9mg，产率：15.5％)性状：白色固体。
HPLC：95.79％@214nm，95.88％@254nm,Rt:6.415min.
LCMS：MS m/z(ESI):538.5[M+H],Rt:1.096min
1H NMR(400MHz,甲醇-d 4)δ8.23(s,1H),8.14-8.10(m,1H),7.51-7.46(m,2H),7.29(t,J＝8.0Hz,1H),7.11-7.08(m,1H),4.14(br,1H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H),3.14-3.11(m,2H),2.59(t,J＝6.0Hz,2H),2.30-2.24(m,4H),2.13(s,3H),1.91-1.88(m,2H),1.82(s,3H),1.79(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ-63.388(s).
室温下将化合物E20(100mg，0.2mmol)和溴乙醇(38mg，0.3mmol)溶于乙腈(30mL)中，向反应体系中加入K 2CO 3(110mg，0.8mmol)后将反应液加热至80℃搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液过滤,滤饼用乙腈(10mL X 2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000233
)纯化得到目标产物E26(23.4mg，产率：21.4％)性状：白色固体。
HPLC：98.56％@214nm，98.34％@254nm，Rt:5.485min.
LCMS：MS m/z(ESI):538.6[M+H],Rt:0.916min.
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d 4)δ-61.933(s).
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.23(s,1H),8.14-8.10(m,1H),7.51-7.46(m,2H),7.32-7.27(m,1H),7.11-7.08(m,1H),4.14(br,1H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H),3.14-3.11(m,2H),2.59(t,J＝6.0Hz,2H),2.30-2.24(m,4H),2.13(s,3H),1.91-1.88(m,2H),1.82(s,3H),1.79(s,3H).
实施例27
(2-(5-氯-2-(5-甲氧基-1-(4-氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基)氨基苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000234
室温下将化合物D59(50mg，0.25mmol)和中间体D12(79.0mg，0.25mmol)溶于EtOH(5mL)中，向反应体系中加入NH 4Cl(81mg，1.5mmol)后，反应液加热升温至80℃搅拌反应16小时。反应结束后，反应液过滤,滤饼用乙醇(10mL)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000235
)纯化，得目标产物E27(三氟乙酸盐，15.3mg，产率：16％)性状：白色固体。
HPLC：95.66％@214nm，97.91％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):477.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ7.96-8.45(m,2H),7.58-7.81(m,2H),7.33(brs,2H),4.34-4.48(m,1H),3.94–3.99(m,5H),3.48(t,J＝12.0Hz,2H),2.03-2.12(m,2H),1.83(s,3H),1.79(s,3H),1.76-1.79(m,2H)
实施例28和实施例29
(2-((5-氯-2-((1-((1s,4s)4-(二甲氨基)环己基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)胺基)吡啶-4-基)胺基)苯基)二甲基膦氧化 合物(顺式和反式)
Figure PCTCN2019113608-appb-000236
室温下将二甲胺盐酸盐(257mg，3.2mmol)和三乙胺(646mg，6.4mmol)加到无水二氯甲烷(20mL)中室温搅拌半小时后加入化合物D49(150mg，0.32mmol)，再室温搅拌半小时后加入氰基硼氢化钠(340mg,1.6mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后反应液用饱和氯化铵水溶液(10mL X 2)洗涤后有机相减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000237
纯化，得到目标产物E28(三氟乙酸盐，40mg,产率:25％,白色固体)和产物E29(三氟乙酸盐，40mg，产率:25％,白色固体)。
E28:
HPLC：99.24％@214nm，99.00％@254nm,Rt:3.983min
LCMS：MS m/z(ESI):501[M+H],Rt:1.104min
19F NMR(376.5MHz,甲醇-d4)δ-76.98(s)
1H NMR(400MHz,MeOH-d6)δ：8.60-7.90(m,2H),7.68-7.66(m,2H),7.52(s,1H),7.38(br,1H),4.24(br,1H),3.39-3.30(m,1H),2.90(s,6H),2.22-2.10(m,5H),2.09-2.05(m,4H),1.90-1.78(m,8H).
E29:
HPLC：98.76％@214nm，98.62％@254nm,Rt:4.165min
LCMS：MS m/z(ESI):501[M+H],Rt:1.124min
19F NMR(376.5MHz,DMSO-d6)δ-74.70(s)
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ：11.84(br,1H),9.80-9.50(m,2H),8.80-8.30(m,2H),7.68-7.62(m,1H),7.50(s,1H),7.25(br,2H),4.46(br,1H),3.34(br,1H),2.82(s,3H),2.81(s,3H),2.26-2.06(m,3H),2.15(s,3H),1.91-1.85(m,4H),1.83(s,3H),1.80(s,3H).
实施例30
(2-(5-氯-2-((5-甲基-1-(4-氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基)氨基苯基)二甲基硫化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000238
室温下将化合物E12(100mg，0.15mmol)和劳森试剂(122mg，0.3mmol)溶于甲苯(5mL)中，将反应液加热至110℃搅拌反应4小时。反应结束后，将反应液冷却到室温，有黄色固体析出，悬浊液过滤，滤饼用甲苯(5mL)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000239
)纯化，得目标产物E30(三氟乙酸盐，20.7mg，产率：29.1％)。性状：白色固体。
HPLC：97.38％@214nm，97.75％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):477.3[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.20–7.66(m,2H),7.46(brs,2H),4.40(brs,1H),4.06(dd,J＝11.4,4.1Hz,2H),3.58(t,J＝11.6Hz,2H),2.20(brs,5H),2.06(s,3H),2.03(s,3H),1.83(brs,2H).
实施例31
(2-((5-环丙基-2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000240
室温下将化合物D51(50mg，0.15mmol)，化合物D29(28mg,0.15mmol)和NH 4Cl(24mg,0.45mmol)溶于EtOH(5mL)中,然后将反应液加热至100℃下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全，混合物过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000241
)纯化，得纯品目标产物E31(盐酸盐，15mg,产率：12％)，性状：白色固体；
HPLC：98.731％@214nm，98.291％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):467.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ：8.64(br,1H),7.70-7.64(m,2H),7.57(s,1H),7.57-7.40(m,1H),7.39-7.35(m,1H),4.47-4.45(m,1H),4.10-4.06(m,2H),3.64-3.57(m,2H),2.26-2.17(m,5H),1.92-1.88(m,2H),1.91(s,3H),1.88(s,3H),1.76-1.72(m,1H),1.12-1.07(m,2H),0.71-0.67(m,2H).
实施例32
(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(2-氮杂唑[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化 物
Figure PCTCN2019113608-appb-000242
室温下将三氟乙酸(300mg，2.42mmol)加入到化合物D56(300mg，0.48mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，混合物在室温下搅拌反应1小时。反应完全后将反应液减压浓缩，取三分之一，用制备高效液相色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000243
Figure PCTCN2019113608-appb-000244
)纯化，得纯品目标产物E32(三氟乙酸盐，40mg，产率：25％，白色固体)。
HPLC：95.34％@233nm，95.85％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):520.3[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.30(br，1H),8.10(br,1H),7.69-7.64(m,2H),7.53(br,1H),7.35(t,J＝7.2Hz,1H),4.39-4.30(m,1H),3.96(s,2H),3.82(s,2H),2.27-2.23(m,2H),1.94-1.85(m,4H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.79-1.73(m,2H).
实施例33
4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)-2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯
Figure PCTCN2019113608-appb-000245
室温下在100mL的三口瓶中分别加入化合物D57(710mg，2.0mmol)，中间体D29(400mg，2.2mmol)，氯化铵(1.1g，20mmol)和乙醇(20mL)。将混合物加热至回流搅拌反应16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，然后将反应液减压浓缩，残余物通过柱色谱层析法(洗脱剂梯度DCM/甲醇＝80:1-40:1)纯化，得到目标产品E33(600mg，产率：60％,白色固体)。
HPLC：96.12％@214nm，97.10％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):499.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.71-8.65(m,1H),7.79-7.51(m,3H),7.46-7.31(m,2H),4.36(q,J＝7.2Hz,2H),4.23(br,1H),4.07-4.02(m,2H),3.58-3.52(m,2H),.2.17-2.05(m,2H),2.05(s,3H),1.78-1.72(m,8H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例34
(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000246
室温下,将1-甲基-4-(5-甲基-4-氨基-1H-吡唑-1-基)哌啶(100mg，0.32mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(120mg，0.64mmol)和三氟乙酸(2mL)溶于乙醇(3mL)中。反应液加热至100℃,搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全，反应液冷却后减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000247
)纯化，得纯品目标产物E34(3mg，Yield：1.9％,白色固体)。
HPLC：87.09％@214nm，86.80％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):474.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.39(br,1H),7.96(brs,1H),7.57-7.52(m,1H),7.45(brs,2H),7.22-7.17(m,1H),4.13-4.10(m,1H),3.01-2.98(m,2H),2.33(s,3H),2.26-2.24(m,4H),2.16(s,3H),1.92-1.90(m,2H),1.86(s,3H),1.82(s,3H).
实施例35
(S)-(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000248
室温下,将(S)-5-甲基-4-氨基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑(50.0mg，0.3mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(104.0mg，0.33mmol)溶于异丙醇(2mL)中，然后加入三氟乙酸(680.0mg，6.0mmol)，将混合物加热至120℃搅拌反应4分钟，LCMS检测反应完全。反应液冷却至室温后减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000249
)纯化，得纯品产物E35(35.0mg，收率：26％,白色固体)。
HPLC：98.44％@214nm，99.37％@254nm
LCMS：Rt:1.1.3min；MS m/z(ESI):447.4[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.19(s,1H),8.51(brs,1H),8.06(s,1H),7.54(dd,J＝12.0Hz,8.0Hz,1H),7.45(s,1H),7.31(br,1H),7.12-7.09(m,1H),5.05-4.89(m,1H),4.12-3.94(m,2H),3.82-3.80(m,2H),2.30-2.27(m,2H),2.14(s,3H),1.79(s,3H),1.75(s,3H).
实施例36
4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-5-甲腈
Figure PCTCN2019113608-appb-000250
室温下,将5-氰基-4-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑(150mg,0.78mmol)和(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(250mg，0.78mmol)溶于乙醇(10mL)中，然后向溶液中加入氯化铵(530mg，10mmol)；反应体系在氩气保护下加热至80℃,搅拌反应过夜。反应完全后将反应液冷却至室温，混合物过滤，滤液减压浓缩，所得残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000251
)纯化，得终产物E36(三氟乙酸盐)。将产物溶于二氯甲烷/甲醇(20/1,5mL)中，溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(2mL X 3)和水(2mL X 2)洗涤，残余物干燥，得到游离态目标产物E36(40mg，yield 11％,白色固体)
HPLC：97.21％@214nm，96.07％@254nm,Rt:8.807min.
LCMS：MS m/z(ESI):472.4[M+H],Rt:7.395min.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.23(brs,1H),9.64(s,1H),8.51(br,1H),8.19(s,1H),7.83(s,1H),7.63-7.57(m,1H),7.47-7.44(m,1H),7.20-7.17(m,1H),4.57-7.53(m,1H),4.00-3.96(m,2H),3.54-3.47(m,2H),2.05-1.90(m,4H),1.80(s,3H),1.77(s,3H).
实施例37
(2-(5-环丙基-2-(5-甲基-(四氢吡喃-4-2-基)-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)氧化双甲基磷
Figure PCTCN2019113608-appb-000252
室温下,将(2-((2-氯-5-异丙基嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(30mg，0.09mmol)，和5-甲基-1-(四 氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-胺(17mg,0.09mmol)和氯化铵(24mg,0.45mmol)溶于乙醇(5mL)中，将反应混合物加热至100℃搅拌反应10小时。LCMS检测反应完全。将反应液冷却至室温后过滤，滤液减浓缩，残余物通过高效液相制备色谱(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000253
)纯化，得到纯品产物E37(盐酸盐，8.1mg，收率：12％,黄色固体)；
HPLC：98.624％@214nm，98.489％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):469.5[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4)δ：8.73(br,1H),7.70-7.64(m,2H),7.65-7.55(m,2H),7.36(br,1H),4.46-4.40(m,1H),4.11-4.06(m,2H),3.64-3.57(m,2H),3.16-3.12(m,1H),2.26-2.17(m,5H),1.91-1.87(m,8H),1.31(d,J＝6.4Hz,6H).
实施例38
(2-((2-((1-叔丁基-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000254
室温下,将(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(230mg,0.7mmol),1-叔丁基-1H-吡唑-4-胺(100mg,0.7mmol)和氯化铵溶于乙醇(3mL)中。反应液加热至85℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全，将反应液冷却过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000255
)纯化，得纯品目标产物E38(170mg，Yield：58％,淡红色固体)
HPLC：99.31％@214nm，99.56％@254nm。
LCMS:Rt:1.327min；MS m/z(ESI):419.4[M+H]。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.11-10.82(m,1H),9.21(s,1H),8.15(s,1H),7.75(br,1H),7.61(dd,J＝16.0Hz,8.0Hz,1H),7.53-7.45(m,2H),7.19(t,J＝8.0Hz,1H),1.80(s,3H),1.76(s,3),1.45(s,9H).
实施例39
(2-((5-溴-2-((1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000256
室温下，将1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-胺(80mg，0.48mmol)溶于乙醇(10mL)，然后加入(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(173mg，0.48mol)和氯化铵(260mg，4.8mmol)。反应液加热至80℃搅拌过夜，LCMS检测反应完全，反应液冷却过滤，滤液减压浓缩，残留物通过高效液相制备色谱法(脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000257
)纯化，得到产物E39(25mg，收率：20％，类白色固体)。
HPLC：98.296％@214nm，98.785％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):491.3[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.20-10.20(m,1H),9.27(brs,1H),8.79-7.90(m,2H),7.63-7.54(m,3H),7.41(br,1H),7.24(br,1H),4.21(br,1H),3.95-3.93(m,2H),3.45-3.42(m,2H),1.86(br,2H),1.77-1.74(m,8H).
实施例40
1-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基-1-酮
Figure PCTCN2019113608-appb-000258
室温下，将(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg,0.2mmol),羟基乙酸(30mg,0.4mmol)，HATU(114mg,0.3mmol)和二异丙基乙胺(72mg,0.6mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中。反应液在室温下搅拌反应2小时。反应完全后将反应液用水(5mL)稀释，然后用二氯甲烷/甲醇(10:1，10mL X 3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000259
)纯化，得纯品产物E40(15mg，Yield：15％,白色固体)。
HPLC：97.85％@214nm，97.82％@254nm
LCMS:MS m/z(ESI):518.5[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.18(s,1H),8.49(brs,2H),8.06(s,1H),7.60-7.50(m,1H),7.45(s,1H),7.32(brs,1H),7.11(t,J＝8.0Hz,1H),4.58-4.55(m,1H),4.51-4.35(m,2H),4.22-4.06(m,2H),3.83-3.81(m,1H),3.14-3.12(m,1H),2.80-2.77(m,1H),2.16(s,3H),2.02-1.81(m,4H),1.79(s,3H),1.75(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,DMSO)δ-73.63,-75.51.
实施例41
2-((5-氯-2-((1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000260
室温下，将(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg,0.2mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(58mg,0.3mmol)和二异丙基乙胺(72mg,0.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。将反应液加热至70℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全,将反应混合物冷却过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000261
Figure PCTCN2019113608-appb-000262
)纯化，得纯品产物E41(甲酸盐，15mg，收率：15％,白色固体)。
HPLC：94.86％@214nm，96.38％@254nm
LCMS:MS m/z(ESI):524.3[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.42(brs,1H),8.17(brs,1H),7.96(s,1H),7.55(dd,J＝16.0Hz,8.0Hz,1H),7.46(s,1H),7.46(br,1H),7.19(t,J＝8.0Hz,1H),6.01(tt,J＝56.0Hz,4.0Hz,1H),4.17-4.11(m,1H),3.16-3.13(m,2H),2.90-2.82(m,2H),2.53-2.47(m,2H),2.26-2.22(m,2H),2.16(s,3H),1.89-1.80(m,8H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)δ-120.55
实施例42
2-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙酸甲酸盐
Figure PCTCN2019113608-appb-000263
室温下，将甲基2-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙酸酯(50mg,0.096mmol)和氢氧化锂(7mg,0.29mmol)溶于甲醇(2mL)和水(1mL)中。反应液在室温下搅拌反应12小时。LCMS检测反应已经完全，将反应液过滤，滤液直接通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000264
)纯化，得纯品目标产物E42(甲酸盐，40mg，Yield：80％,无色油状液体)
HPLC：97.90％@214nm，98.25％@254nm。
LCMS:Rt:0.83min；MS m/z(ESI):518.4[M+H]。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.58(br,1H),8.25-7.95(m,1H),7.71(br,2H),7.56(s,1H),7.43(br,1H),4.66(br,1H),4.28-7.19(m,2H),3.86-3.83(m,2H),3.64-3.38(m,2H),2.55-2.50(m,2H),2.50 2.10(m,5H),1.93-1.89(m,6H).
实施例43
4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)-2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-5-腈
Figure PCTCN2019113608-appb-000265
室温下，将(2-((5-溴-2-((5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg，0.19mmol)，氰化锌(22mg,0.19mmol),三(二亚苄基丙酮)二钯(17.3mg,0.02mmol)和双(二苯基膦)二茂铁(10.5mg,0.02mmol)混合加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中,反应体系在氮氛下加热至100℃搅拌反应8小时。LCMS检测反应完全后将反应液降温至室温，混合物用水(20mL)稀释，然后用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000266
)纯化，得到产物E43(20mg，Yield：23.5％,白色固体)
HPLC：99.068％@214nm，99.421％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):452.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD-d 4):δ8.50-8.07(m,2H),7.61-7.23(m,4H),4.37-4.33(m,1H),4.09-4.04(m,2H),3.61-3.54(m,2H),2.25-2.15(m,2H),2.15(s,3H),1.87-1.78(m,2H),1.82(s,3H),1.79(s,3H).
实施例44
2-((5-氯-2-((5-氯-1-(2-甲基-2-偶氮[3.5]壬基-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000267
(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(2-氮杂唑[3.5]壬烷-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(MED-SIM-2-157)(200mg，0.38mmol)和甲醛水溶液(100mg，37％水溶液，1.2mmol)的甲醇(20mL)溶液在室温下搅拌反应16小时,然后加入三乙酸硼氢化钠(270mg，1.2mmol)，反应液继续在室温下搅拌反应30分钟。反应完全后反应液减压浓缩，残余物分散在水(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，两相分离后，水相用二氯甲烷(20mL X 3)萃取。有机相合并，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000268
)纯化，得纯品目标产物E44(所得TFA盐用碳酸钾游离)(50mg，Yield：23％,白色固体)
HPLC：97.66％@233nm，98.87％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):534.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.36(br,1H),8.01(s,1H),7.63(m,2H),7.48-7.46(m,1H),7.24-7.20(m,1H),4.30-4.23(m,1H),3.28(s,2H),3.13(s,2H),2.42(s,3H),2.12-2.08(m,2H),1.93-1.82(m,4H),1.85(s,3H),1.82(s,3H),1.67-1.61(m,2H).
实施例45
(2-(5-溴-2-((1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000269
室温下,将1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-胺(47.0mg，0.33mmol)和(2-((5-修-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100.0mg，0.28mmol)溶于异丙醇(5mL)中，然后再向反应体系中加入三氟乙酸(319.2mg，2.80mmol)；反应液加热至120℃搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液冷却过滤,滤饼用异丙醇(20毫升)洗涤，滤液减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000270
)纯化，得目标产物E45(29.9mg，Yield：23％,褐色固体)。
HPLC：99.62％@214nm，99.78％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):467.2[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ9.26(brs,1H),8.59-8.21(m,2H),7.63-7.55(m,3H),7.41(brs,1H),7.22(brs,1H),4.12(brs,2H),3.61(brs,2H),3.32(s,3H),1.79(s,3H),1.76(s,3H).
实施例46
(2-((5-溴-2-((1-(1-(2-氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000271
室温下,将(2-((5-溴-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物盐酸盐(50mg，0.095mmol)和N,N-二异丙基乙胺(49mg，0.38mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，再向反应体系中滴加1-氟-2-碘乙烷(25mg，0.143mmol)；反应液加热至70℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温后用水(50mL)稀释，混合物用乙酸乙酯(20mL X 4)萃取，有机相合并用饱和氯化钠溶液(50mL X 2)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000272
)纯化,得目标产物E46(4.3mg，收率：7.9％,白色固体)。
HPLC：95.2％@214nm，95.8％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):536.5[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.14(brs,2H),7.73-7.63(m,3H),7.41(br,2H),4.68-4.64(m,1H),4.56-4.52(m,1H),3.99-3.95(m,1H),3.11-3.07(m,2H),2.81-2.78(m,1H),2.74-2.71(m,1H),2.33-2.25(m,2H),1.96(br,4H),1.83(s,3H),1.80(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,MeOH-d 4)δ-200.00.
实施例47
3-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙腈
Figure PCTCN2019113608-appb-000273
室温下,将(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(72mg，0.16mmol)溶于N,N,-二甲基甲酰胺(10mL)中，再加入丙烯腈(10mg，0.16mol)和碳酸钠(34mg，0.32mmol)；反应液在65℃搅拌过夜,LCMS检测反应完全，将反应液冷却过滤，滤液减压浓缩，残留物通过高效液相制备色谱法(脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000274
)纯化，得到产物E47(25mg，收率：20％,类白色固体)。
HPLC：93.920％@214nm，94.278％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):513.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.42(brs,1H),7.96(s,1H),7.58-7.40(m,3H),7.20-7.17(m,1H),4.16-4.09(m,1H),3.11-3.08(m,2H),2.75-2.60(m,4H),2.31-2.17(m,4H),2.16(s,3H),1.90-1.88(m,2H),1.86(s,3H),1.82(s,3H).
实施例48
(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(1-(2-(甲基磺酰基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基 氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000275
室温下，将(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(57mg，0.124mmol)溶于N,N,-二甲基甲酰胺(5mL)中，再加入甲基乙烯基砜(13mg，0.124mol)和碳酸钠(26mg，0.248mmol)，将反应液加热至65℃搅拌反应过夜。LCMS检测反应完全，将反应液冷却过滤，滤液减压浓缩，残留物通过高效液相制备色谱法(脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000276
Figure PCTCN2019113608-appb-000277
)纯化，得到产物E48(25mg，收率：20％,类白色固体)。
HPLC：93.512％@214nm，96.920％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):566.4[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.43(br,1H),8.17(br,1H),7.96(br,1H),7.56-7.41(m,1H),7.47(s,1H),7.19(t,J＝8.0Hz,1H),4.22-4.15(m,1H),3.36-3.34(m,2H),3.25-3.20(m,2H),3.11(s,3H),2.98-2.96(m,2H),2.40-2.37(m,2H),2.28-2.19(m,2H),2.17(s,3H),1.95-1.92(m,2H),1.86(s,3H),1.82(s,3H).
实施例49
2-((5-修-2-((1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000278
室温下,将(2-((5-溴-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物盐酸盐(60mg，0.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(52mg，0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，再向反应体系中滴加1,1-二氟-2-碘乙烷(30mg，0.15mmol)；反应液加热至70℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温，用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL X 4)萃取，有机相合并，饱和氯化钠溶液(50mL X 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000279
)纯化，得到目标产物E49(4.6mg，收率：6.8％，Lot#白色固体)。
HPLC：93.9％@214nm，95.5％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):554.3[M+H]
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ8.14-7.80(m,2H),7.77-7.65(m,2H),7.55-7.38(m,3H),6.15-5.86(m,1H),3.93(br,1H),3.09-3.05(m,2H),2.85-2.75(m,2H),2.43-2.35(m,2H),1.91(br,4H),1.83(s,3H),1.80(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,MeOH-d 4)δ-120.82
实施例50
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2-甲基磺酰基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000280
将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(120mg，0.27mmol)溶于N,N,-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后加入(甲基磺酰基)乙烯(30mg，0.27mol)和碳酸钠(60mg，0.54mmol)。反应液加热至60℃，搅拌过夜。LCMS检测反应完全，将反应液过滤，滤液减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000281
)纯化，得目标产物E50(25mg，收率：20％)。性状：类白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.5-10.5(m,1H),9.24(s,1H),8.13(s,1H),7.65-7.52(m,3H),7.42(br,1H),7.22(br,1H),3.99(br,1H),3.30-3.29(m,2H),3.04(s,3H),3.01-2.98(m,2H),2.75-2.73(m,2H),2.15-2.10(m,2H),1.91-1.75(m,4H),1.78(s,3H),1.75(s,3H).
HPLC：96.947％@214nm，97.696％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):552.4[M+H]
实施例51
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000282
将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg，0.22mmol)，1-溴-2-甲氧基乙烷(31mg，0.22mmol)，和N,N-二异丙基乙胺(28mg,0.22mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)。反应液在室温下搅拌反应10小时，LCMS检测到反应完全。反应液直接用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000283
)纯化，得纯品产物E51(25.5mg，收率：23％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.05(m,1H),8.05(s,1H),7.71-7.61(m,3H),7.43(s,1H),7.35(br,1H),3.97-3.93(m,1H),3.58-3.55(m,2H),3.36(s,3H),3.10-3.06(m,2H),2.65-2.61(m,2H),2.27-2.21(m,2H),1.98-1.88(m,4H),1.84(s,3H),1.81(s,3H).
HPLC：97.049％@214nm，98.876％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):504.4[M+H]
实施例52
(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(1-(2-(甲基磺酰基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧 化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000284
室温下,将(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(90mg,0.19mmol),甲磺酰基乙烯(24mg,0.23mmol)和二异丙基乙胺(49mg,0.38mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(2mL)中。反应液于60℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完全，反应混合物减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000285
Figure PCTCN2019113608-appb-000286
)纯化，得纯品产物E52(45mg,收率:35％)，性状：米黄色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.37(brs,1H),8.01(s,1H),7.65(s,1H),7.58(dd,J＝12.0Hz,8.0Hz,1H),7.50-7.46(m,1H),7.22(t,J＝8.0Hz,1H),4.38-4.28(m,1H),3.33-3.30(m,2H),3.14-3.10(m,2H),3.10(s,3H),2.92-2.90(m,2H),2.31-2.11(m,4H),1.94-1.91(m,2H),1.86(s,3H),1.82(s,3H).
HPLC：99.83％@214nm，99.96％@254nm
LCMS:Rt:0.96min；MS m/z(ESI):586.4[M+H]。
实施例53
2-((5-氯-2-((1-(2-(2-甲氧基乙基)-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧 化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000287
室温下,将2-(2-甲氧基乙基)-7-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷(100mg，0.37mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(120mg，0.37mmol)和氯化铵(196mg，3.7mmol)溶于乙醇(5mL)中，反应体系加热至回流，搅拌反应16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000288
)纯化，得到目标纯品产物E53(30.9mg，收率：15.4％),性状：白色固体
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.30-10.75(m,1H),9.24(s,1H),8.85-8.13(m,2H),7.92-6.44(m,5H),3.94(brs,1H),3.29-3.27(m,2H),3.22(s,3H),2.97(s,2H),2.89(s,2H),2.56-2.54(m,2H),1.93-1.90(m,2H),1.82-1.75(m,2H),1.79(s,3H),1.75(s,3H),1.68-1.39(m,4H).
HPLC：97.47％@214nm，98.72％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):544.4[M+H]
实施例54
(2-((5-氯-2-((1-(2-甲基-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000289
室温下,将(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(3)(80mg，0.25mmol)，1-(2-甲基-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-胺(8)(56mg，0.25mol)和氯化铵(132.5mg，2.5mmol)溶于乙醇(5mL)中，然后将反应液加热至80℃搅拌反应过夜。反应完全后将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000290
)纯化，得到目标纯品产物E54(11mg，收率：8.8％),性状：白色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.45(br,1H),8.06(s,1H),7.69-7.35(m,5H),3.90(brs,1H),3.22(s,2H),3.12(s,2H),2.41(s,3H),2.08-2.05(m,2H),1.90-1.85(m,2H),1.81(s,3H),1.75(s,3H),1.68-.58(m,4H).
HPLC：97.44％@214nm，98.29％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):500.2[M+H]
实施例55
2-((5-氯-2-((1-(2-(2-氟乙基)-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000291
室温下,将2-(2-氟乙基)-7-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷(360mg，1.43mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(450mg，1.43mmol)和三氟乙酸(1600mg，14.3mmol)溶于异丙醇(10mL)中，将反应体系加热至回流，搅拌反应16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000292
Figure PCTCN2019113608-appb-000293
)纯化，得到目标纯品产物E55(三氟乙酸盐，62.2mg，收率：8.1％)，性状：白色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.09(brs,2H),7.93-6.79(m,5H),4.80-4.75(m,1H),4.69-4.63(m,1H),4.23(brs,1H),4.06-4.00(m,4H),3.73-3.56(m,2H),2.27-2.16(m,2H),1.99(br,2H),1.86(s,3H),1.82(s,3H),1.86-1.80(m,4H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)：δ-77.14,-218.41
HPLC：95.27％@214nm，97.41％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):532.4[M+H]
实施例56
(2-((5-氯-2-((1-甲基环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000294
室温下，将2-甲基-5-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)环戊烷基[c]吡咯烷(430mg，2.07mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(650mg，2.07mmol)溶于乙醇(10mL)中，再加入氯化铵(1.3g，20.7mmol)；反应液加热至80℃，搅拌反应过夜。LCMS检测反应完全，反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000295
)纯化，得目标产物E56(103.7mg，收率：10.6％)。性状：类白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.40-8.05(m,2H),7.72-7.62(m,3H),7.41-7.36(m,2H),4.64(brs,1H),2.81(d,J＝5.2Hz,4H),2.36(s,3H),2.26(d,J＝4.0Hz,2H),2.08(br,2H),1.91(br,2H),1.85(s,3H),1.81(s,3H).
HPLC：94.994％@214nm，96.542％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):486.4[M+H]
实施例57
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦硫化 物
Figure PCTCN2019113608-appb-000296
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦硫化物(310mg,0.62mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(447mg,6.2mmol)和碳酸钾(427mg,3.1mmol)溶于乙醇/水(6mL/1.5mL)中。反应液用微波反应器加热至110℃，搅拌反应20分钟。LCMS检测反应完全，将反应混合物减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000297
)纯化，得到纯品产物E57(30mg,收率:21％),性状：白色固体
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.39-9.27(m,2H),8.16(brs,1H),7.94(brs,1H),7.72(brs,2H),7.48(brs,1H),7.22(brs,2H),4.14(s,1H),3.74(brs,1H),3.33(br,2H),3.03-3.00(m,2H),2.23(s,2H),2.22(br,2H),1.99(s,3H),1.95(s,3H),1.69(brs,4H),1.13(s,6H).
HPLC：99.62％@214nm，99.73％@254nm
LCMS:Rt:1.16min；MS m/z(ESI):534.5[M+H]。
实施例58
(2-((5-氯-2-((1-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000298
室温下,将2-甲基-6-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷(150mg，0.78mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(8)(245mg，0.78mmol)溶于乙醇(10mL)中，再加入氯化铵(560g，7.8mmol)，将反应液加热至80℃搅拌反应过夜。LCMS检测反应完全，反应液过滤，滤液减压浓缩，残 留物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000299
)纯化，得到目标产物E58(19.4mg，收率：20％),性状：类白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.35-11.10(m,1H),8.70-8.50(m,1H),8.03-7.74(m,3H),7.67-7.50(m,2H),7.30-7.10(m,2H),5.05(brs,1H),4.44(br,2H),3.83(br,2H),3.11(s,3H),2.65-2.50(m,2H),1.96(br,2H),1.79(s,3H),1.76(s,3H).
HPLC：95.553％@214nm，97.271％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):472.4[M+H]
实施例59和60
(2-((5-氯-2-((1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物 (实施例59单一异构体1：Rt：5.078min；实施例60单一异构体2：Rt：5.106min)
Figure PCTCN2019113608-appb-000300
室温下，将1-甲基-4-(3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)环丁基)哌嗪(106mg,0.45mmol),(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(157mg,0.5mmol)和氯化铵(240mg,4.5mmol)溶于异丙醇(3mL)中。反应液于80℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全，反应混合物减压浓缩，残余物然后用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000301
)纯化，得纯品产物E59(单一异构体1：Rt：5.078min)(31.5mg,收率:12％)，性状：白色固体；和
E60(单一异构体2：Rt：5.106min)(4.1mg,收率:2％)，性状：白色固体。
E59(单一异构体1：Rt：5.078min)
1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.25(br,1H),8.06(s,1H),7.80-7.60(m,3H),7.48(brs,1H),7.34(brs,1H),4.69(brs,1H),3.10-3.05(m,1H),2.72-2.26(m,12H),1.85(s,3H),1.82(s,3H).
HPLC：99.71％@214nm，99.81％@254nm,Rt:5.078min
LCMS:Rt:0.855min；MS m/z(ESI):515.4[M+H]。
E60(单一异构体2：Rt：5.106min)
1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.37(br,1H),8.06(s,1H),7.83-7.54(m,3H),7.48-7.45(m,1H),7.33-7.30(m,1H),4.41(br,1H),3.08(br,1H),2.65-2.30(m,12H),1.86(s,3H),1.82(s,3H).
HPLC：96.28％@214nm，96.20％@254nm,Rt:5.106min
LCMS:Rt:0.889min；MS m/z(ESI):515.4[M+H]。
实施例61
2-((5-氯-2-((1-(2-***啉基乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000302
将(2-((5-氯-2-((1-(2-氯乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(70mg，0.16mmol)，***啉(27mg，0.32mmol)和二异丙基乙基胺(66mg,0.48mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，反应液在室温下搅拌反应10小时，LCMS检测反应完全。反应液过滤，滤液用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000303
)纯化，得纯品产物E61(三氟乙酸盐，43.4mg，收率：57.1％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.12(brs,1H),7.78-7.40(m,6H),4.49(brs,2H),3.91(brs,4H),3.68-3.64(m,2H),3.37-3.31(m,4H),1.86(s,3H),1.83(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)：δ-77.18
HPLC：94.558％@214nm，94.857％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):476.4[M+H]
实施例62
(2-((5-溴-2-((1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦硫化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000304
室温下，将(2-((5-溴-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦硫化物(120mg,0.24mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(60mg,0.31mmol)和碳酸钾(98mg,0.71mmol)加入N’N-二甲基甲酰胺(5mL)；反应液加热至70℃，搅拌反应24小时。LCMS检测反应完全，反应混合物浓缩。残余物然后用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000305
)纯化，得到E62(三氟乙酸盐，10mg,收率:5％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.24(brs,1H),7.98-7.41(m,6H),6.57-6.29(m,1H),4.19(brs,1H),3.74-3.69(m,4H),3.44-3.33(m,2H),2.24(brs,4H),2.04(s,3H),2.00(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD):δ-77.12,-122.16.
HPLC：98.17％@214nm，98.28％@254nm
LCMS:Rt:1.30min；MS m/z(ESI):572.3[M+H]。
实施例63
2-((5-溴-2-((1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦硫化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000306
室温下，将(2-((5-溴-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦硫化物(85mg,0.17mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(120mg,1.67mmol)和碳酸钾(115mg,0.85mmol)溶于乙醇/水(2mL/0.5mL)中；反应液用微波反应器加热至110℃，搅拌反应20分钟。LCMS检测反应完全，反应混合物浓缩。残余物然后用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000307
Figure PCTCN2019113608-appb-000308
)纯化，得到E63(三氟乙酸盐，10mg,收率:6％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.24(brs,1H),7.99-7.40(m,6H),4.18(brs,1H),3.90(d,J＝11.2Hz,1H),3.53(brs,1H),3.33-3.23(m,4H),2.32(br,2H),3.19(br,2H),2.04(s,3H),2.00(s,3H),1.37(s,6H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD):δ-77.13(s).
HPLC：93.70％@214nm，93.71％@254nm
LCMS:Rt:1.20min；MS m/z(ESI):580.3[M+H]。
实施例64
(2-((5-氯-2-((1-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000309
将(2-((5-氯-2-((1-(2-氯乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(70mg，0.16mmol)，吡咯烷(6)(35mg，0.49mmol)和二异丙基乙胺(63mg,0.49mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。反应液在室温下搅拌反应10小时，LCMS显示反应完全。反应液过滤，滤液用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000310
)纯化，得纯品产物E64(19.3mg，收率：26.4％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.51-8.05(m,2H),7.68-7.34(m,5H),4.14(brs,2H),2.86(br,2H),2.54(brs,4H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.85-1.76(m,4H).
HPLC：98.925％@214nm，98.812％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):460.4[M+H]
实施例65
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000311
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(80mg，0.18mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(52mg，0.28mmol)和碳酸钾(74mg，0.54mmol)加入到N’N-二甲基甲酰胺(4mL)中，反应在80℃下搅拌反应16小时；反应完全后，将反应液冷却至室温，混合物过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000312
)纯化，得纯品目标产物E65(三氟乙酸盐，9.3mg，收率：10％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.15-10.67(m,1H),9.28(brs,1H),8.33(br,1H),8.14(s,1H),7.63(br,1H),7.57-7.53(m,1H),7.43(br,1H),7.22(br,1H),6.30-6.02(m,1H),4.11(br,1H),3.10-3.07(m,1H),2.89-2.75(m,3H),2.50-2.40(m,1H),2.27-2.20(m,1H),1.94(br,1H),1.79(s,3H),1.76(s,3H),1.75-1.67(m,1H),1.62-1.55(m,2H).
19F NMR(376.5MHz,DMSO-d6)δ：-118.78
HPLC：97.84％@214nm，99.36％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):510.5[M+H]
实施例66
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2,2-二氟乙基)-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧 化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000313
室温下，将2-(2,2-二氟乙基)-7-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷(30mg，0.11mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(35mg，0.11mmol)和三氟乙酸(125mg，1.1mmol)溶于异丙醇(5mL)中，反应体系加热至回流，搅拌反应16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温过滤， 滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000314
)纯化，得到目标纯品产物E66(三氟乙酸盐，6.0mg，收率：11％),性状：白色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.25-8.19(m,4H),7.69-7.67(m,2H),7.36(brs,1H),6.40-5.94(m,1H),4.58(s,2H),4.24-3.74(m,1H),3.38-3.34(m,2H),2.98(s,2H),2.35-2.05(m,4H),1.91-1.54(m,10H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)：δ-76.13,-123.39
HPLC：94.41％@214nm，96.64％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):550.4[M+H]
实施例67
(2-((5-氯-2-((1-(2-甲基-2-氮螺环[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦硫化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000315
室温下,在(2-((2-((1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)直接)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦(60mg，0.12mmol)和甲醛水溶液(97mg，37％水溶液，1.2mmol)的甲醇(5mL)溶液加入三乙胺(12.1mg,0.12mmol)，搅拌反应5小时后加入三乙酸硼氢化钠(101.8mg，0.48mmol)，反应液继续在室温下搅拌反应2小时。反应完全后，反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000316
)纯化，得到目标化合物E67(三氟乙酸盐，20.1mg，收率：33％),性状：白色固体.
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.15(brs,1H),7.97-7.38(m,6H),4.20(d,J＝8.0Hz,1H),4.04(d,J＝8.0Hz,1H),3.90-3.82(m,3H),2.96(s,3H),2.45-2.09(m,2H),2.04(s,3H),2.00(3H,)2.04-1.93(m,2H),1.77-1.64(m,4H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)：δ-77.17
HPLC：99.64％@214nm，99.52％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):516.1[M+H]
实施例68
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2,2,2-三氟乙基)-2-氮杂螺[3.5]人-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基 氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000317
室温下，将(2-((2-((1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(48.5mg，0.1mmol)，1,1,1-三氟-2-碘乙烷(41.8mg，0.2mol)和二异丙基乙基胺(24.4mg，0.2mmol)溶于乙腈(5mL)中，反应液加热至80℃，搅拌反应16小时。反应完全后，反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000318
)纯化，得到目标纯品产物E68(三氟乙酸盐，32mg，收率：56％),性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.13(br,2H),7.87-6.96(m,5H),4.40-4.06(m,6H),3.98(brs,1H),2.25(brs,2H),1.99(brs,2H),1.87-1.76(m,10H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)：δ-70.15,-76.84
HPLC：98.26％@214nm，98.59％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):568.5[M+H]
实施例69
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2-羟基-2-甲基丙基)环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基) 二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000319
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(160mg,0.30mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(216mg,3.0mmol)和碳酸钾(207mg,5.0mmol)溶于乙醇/水(2mL/0.5mL)中。反应液用微波反应器加热至110℃，搅拌反应20分钟。LCMS检测反应完全，将反应混合物减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000320
)纯化，得纯品产物E69(盐酸盐，30mg,收率:21％)，性状：白色固体
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.27(brs,1H),8.14(s,1H),7.63-7.52(m,3H),7.37(brs,1H),7.22(brs,1H),4.72(brs,1H),4.09(s,1H),2.68-2.51(m,6H),2.27(s,2H),2.02(brs,2H),1.85-1.75(m,2H),1.78(s,3H),1.75(s,3H),1.12(s,6H).
HPLC：96.18％@214nm，97.23％@254nm
LCMS:Rt:0.96min；MS m/z(ESI):544.5[M+H]。
实施例70
(2-((5-氯-2-((1-乙基环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000321
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(160mg,0.30mmol)，碘乙烷(56mg,0.36mmol)和二异丙基乙胺(116mg,0.90mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(1mL)中。反应液于70℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全，将反应混合物减压浓缩。残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000322
Figure PCTCN2019113608-appb-000323
)纯化，得纯品产物E70(14mg,收率:10％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.28(brs,1H),8.14(s,1H),7.65-7.54(m,3H),7.36(brs,1H),7.23(brs,1H),4.67(brs,1H),2.66(brs,2H),2.50-2.40(m,6H),2.02(brs,2H),1.90-1.75(m,2H),1.78(s,3H),1.75(s,3H),1.06(t,J＝8.0Hz,3H).
HPLC：95.05％@214nm，96.19％@254nm
LCMS:Rt:0.96min；MS m/z(ESI):500.5[M+H]。
实施例71
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2-氟乙基)环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧 化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000324
将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(100mg，0.21mmol)，1-氟-2-碘乙烷(36mg，0.21mmol)和N,N-异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。反应液在100℃下，搅拌反应8小时，LCMS检测反应完全，反应液通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000325
)纯化，得纯品产物E71(25.5mg，收率：20.4％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.05(m,2H),7.68-7.62(m,3H),7.41-7.35(m,2H),4.65-4.62(m,2H),4.53-4.50(m,1H),2.90-2.73(m,6H),2.38-2.34(m,2H),2.07-2.06(m,2H),1.94-1.93(m,2H),1.84(s,3H),1.81(s,3H).
19H NMR(376.5MHz,MeOD)δ：-221.02
HPLC：99.172％@214nm，99.196％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):518.4[M+H]
实施例72
2-((5-氯-2-((1-(2-(2,2-二氟乙基)环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基 氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000326
将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(150mg，0.31mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(60mg，0.31mmol)和N,N-异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)溶于乙腈(3mL)。反应液在70℃下,搅拌反应8小时，LCMS检测反应完全，反应液通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000327
)纯化，得纯品产物E72(13.2mg，收率：7.8％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.10(br,2H),7.70-7.63(m,3H),7.49-7.40(m,2H),6.51-6.15(m,1H),3.90-3.77(m,5H),3.14(br,4H),2.10(br,2H),2.07-2.06(m,2H),1.86(s,3H),1.83(s,3H).
19H NMR(376.5MHz,MeOD)δ：-123.16
HPLC：96.968％@214nm，97.660％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):536.5[M+H]
实施例73
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2,2,2-三氟乙基)环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲 基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000328
将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(100mg，0.21mmol)，1,1,1-三氟-2-碘乙烷(48mg，0.21mmol)和N,N-异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)溶于乙腈(3mL)。反应液在70℃下,搅拌反应8小时，LCMS检测反应完全，反应液通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000329
Figure PCTCN2019113608-appb-000330
)纯化，得纯品产物E73(20.2mg，收率：20.4％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.04(m,2H),7.75-7.60(m,3H),7.40-7.35(m,2H),4.69(br,1H),3.15-3.07(m,2H),2.76-2.72(m,4H),2.64-2.62(m,2H),2.09(br,2H),1.95-1.87(m,2H),1.84(s,3H),1.81(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)δ：-71.05
HPLC：99.125％@214nm，99.196％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):554.4[M+H]
实施例74
2-((5-氯-2-((1-(2-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-氮杂螺[3.5]人-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲 基硫化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000331
在氩气保护下,向微波管中依次加入(2-((2-((1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)直接)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦(60mg，0.12mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(86.4mg，1.2mol),碳酸钾(66.2mg，0.48mmol)和乙醇/水(4mL/1mL)。将反应液用微波加热至110℃，搅拌反应1小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，混合物过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000332
)纯化，得到目标纯品产物E74(10.6mg，收率：14.7％,白色固体)
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.07(s,1H),7.85(brs,2H),7.70-7.23(m,4H),3.81(brs,1H),3.25(s,2H),3.15(s,2H),2.54(s,2H),2.24-1.92(m,2H),1.99(s,3H),1.93(s,3H),1.84(brs,2H),1.58-1.56(m,4H),1.09(s,6H).HPLC：98.21％@214nm，98.26％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):574.1[M+H]
实施例75
2-((5-氯-2-((1-(2-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-氮杂螺[3.5]人-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲 基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000333
在氩气保护下,向微波管中依次加入(2-((2-((1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(150mg，0.31mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(89.3mg，1.24mol),碳酸钾(171mg，1.24mmol)和乙醇/水(8mL/2mL)。反应液用微波加热至110℃反应1小时。反应完全后，将反应液冷却至室温，混合物过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000334
)纯化，得到目标纯品产物E75(三氟乙酸盐,108mg，收率：62.8％),性状：白色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.35-8.10(m,2H),7.89-6.54(m,5H),4.30-4.28(m,1H),4.21-3.70(m,4H),2.35-2.33(m,1H),2.19-2.17(m,1H),2.15-1.34(m,14H),1.29(s,6H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)：δ-76.91
HPLC：97.90％@214nm，98.01％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):558.2[M+H]
实施例76
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2-甲氧基乙基)环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基 氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000335
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(160mg,0.30mmol)，溴乙基乙烷(50mg,0.36mmol)和二异丙基乙胺(116mg,0.90mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。将反应液加热至70℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全，反应混合物减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000336
Figure PCTCN2019113608-appb-000337
)纯化，得纯品产物E76(7mg,收率:5％),性状：白色固体
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.26(s,1H),8.13(s,1H),7.65-7.53(m,3H),7.37(brs,1H),7.22(brs,1H),4.69(brs,1H),3.46-3.43(m,2H),3.26(s,3H),2.64(brs,2H),2.54(br,2H),2.50-2.38(m,4H),2.02(brs,2H),1.84-1.75(m,2H),1.78(s,3H),1.75(s,3H).
HPLC：98.55％@214nm，99.82％@254nm
LCMS:Rt:1.00min；MS m/z(ESI):530.5[M+H]。
实施例77
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2-甲氧基乙基)-2-氮杂螺[3.5]人-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫 化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000338
室温下，将(2-((2-((1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1H-吡唑-4-基)直接)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦(60mg，0.12mmol)，1-溴-2-甲氧基乙烷(33.1mg，0.24mol)和二异丙基乙基胺(29.3mg，0.24mmol)溶解于乙腈(5mL)中，然后将反应液加热至80℃，搅拌反应16小时。反应完全后，将反应液冷却至室温并过滤，滤液减压浓缩，残留物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000339
)纯化，得到目标纯品产物E77(三氟乙酸盐，8.7mg，收率：13％),性状：白色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.07(s,1H),7.86(brs,2H),7.74-6.99(m,4H),3.81(brs,1H),3.45-3.42(m,2H),3.34(s,3H),3.20(s,2H),3.09(s,2H),2.72(t,J＝4.0Hz,2H),2.15-1.92(m,2H),2.02(s,3H),1.99(s,3H),1.87-1.85(m,2H),1.59-1.55(m,4H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)：δ-76.94
HPLC：94.66％@214nm，94.71％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):560.2[M+H]
实施例78
(2-((5-氯-2-((5-氯-1-(2-(2-甲氧基乙基)-2-氮螺环[3.5]壬烷-7-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二 甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000340
将7-(5-氯-4-氨基-1H-吡唑-1-基)-2-(2-甲氧基乙基)-2-氮螺环[3.5]壬烷(70mg，0.23mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(88mg，0.28mmol)和氯化铵(36mg，0.69mmol)溶于乙醇(3mL)。反应液在100℃搅拌反应8小时，LCMS检测反应完全，反应液冷却至室温，过滤，滤液用制备型高效液相色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000341
)纯化，得纯品目标产物E78(三氟乙酸盐，9.4mg，收率：7.1％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.05(m,2H),7.68-7.54(m,3H),7.35-7.31(m,1H),4.36-4.34(m,1H),4.21-4.18(m,1H),4.04-3.90(m,3H),3.64-3.60(m,2H),3.47-3.40(m,2H),3.40(s,3H),2.32-2.17(m,2H),1.98-1.78(m,12H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)δ：-77.30
HPLC：97.723％@214nm，98.827％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):578.4[M+H]
实施例79
(2-((5-氯-2-((1-(1,2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化 物
Figure PCTCN2019113608-appb-000342
室温下,将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg，0.22mmol)，2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(102mg，0.44mmol)和二异丙基乙基胺(142mg，1.1mmol)溶于乙腈(4mL)中，反应在70℃下搅拌12小时；反应完全后,将反应液冷却并减压浓缩，残余物通过 高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000343
)纯化，得纯品目标产物E79(18.5mg，收率：16％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.25-10.52(m,1H),9.28(s,1H),8.14(s,1H),7.64-7.55(m,3H),7.41(brs,1H),7.22(brs,1H),4.01(brs,2H),3.28-3.22(m,2H),3.01-2.98(m,2H),2.53(m,1H),1.88(br,4H),1.78(s,3H),1.75(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD)δ：-68.18
HPLC：97.62％@214nm，98.64％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):528.4[M+H]
实施例80
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000344
室温下,将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg，0.22mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(84mg，0.44mmol)和碳酸钾(121mg，0.88mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，反应在80℃下搅拌12小时；反应完全后,将反应液冷却并减压浓缩，残余物通过用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000345
)纯化，得纯品目标产物E80(40mg，收率：36％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.50-10.50(m,1H),9.27(s,1H),8.14(s,1H),7.75-7.65(m,2H),7.58-7.54(m,1H),7.41(br,1H),7.23(br,1H),6.17(t,J＝56.0Hz,1H),3.99(br,1H),3.00-2.97(m,2H),2.80-2.73(m,2H),2.35-2.32(m,2H),1.88(br,4H),1.78(s,3H),1.75(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,DMSO-d6)δ：-118.83
HPLC：97.49％@214nm，97.87％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):510.4[M+H]
实施例81
2-((5-氯-2-((1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000346
室温下,将N,N-二甲基-2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙胺(100mg，0.65mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(205mg，0.65mmol)，三氟乙酸(661mg，6.5mmol)，溶于乙醇(5mL)中，反应液在50℃下搅拌12小时；反应完全后将反应液冷却并减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000347
)纯化，得纯品目标产物E81(三氟乙酸盐,93mg，收率：33％)，性状：黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.19-10.79(m,1H),9.31(s,1H),8.76(br,0.4H),8.14(s,1H),7.83-7.40(m,4H),7.21(brs,1H),4.19(brs,2H),2.88(brs,2H),2.35(brs,6H),1.79(s,3H),1.76(s,3H).
19F NMR(376.5MHz,DMSO-d6)δ：-73.42
HPLC：99.68％@214nm，99.80％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):434.4[M+H]
实施例82
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基 膦硫化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000348
室温下,将(2-((5-氯-2-((5-甲基-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦(81mg,0.17mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(125mg,1.7mmol)和碳酸钾(120mg,0.87mmol)溶于乙醇/水(2 mL/0.5mL)中。反应液用微波反应器加热至110℃,搅拌反应20分钟。LCMS检测反应完全,反应混合物减压浓缩。残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000349
)纯化，得纯品产物E82(6mg,收率:6％),性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.38(s,1H),8.57(br,1H),8.11(s,1H),7.93(br,1H),7.74-7.63(m,1H),7.51(brs,1H),7.35-7.30(m,2H),4.07(s,1H),3.94(brs,1H),3.04-3.01(m,2H),2.28-2.18(m,4H),2.07-1.92(m,11H),1.67-1.60(m,2H),1.10(s,6H).
HPLC：97.59％(214nm)，97.15％(254nm)
LCMS:Rt:1.16min；MS m/z(ESI):548.4[M+H]。
实施例83
(2-((5-氯-2-((1-(2-羟基-2-甲基丙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化 物
Figure PCTCN2019113608-appb-000350
室温下,将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg，0.22mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(162mg，2.2mmol)，碳酸钾(155mg，1.1mmol)溶于乙醇(3mL)和水(0.75mL)的混合液中，反应用微波加热至110℃搅拌反应20分钟。反应完全后,将反应液冷却并减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000351
)纯化，得纯品目标产物E83(58mg，收率：50％),性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.35-10.50(m,1H),9.28(s,1H),8.76(br,1H),8.14(s,1H),8.10-7.57(m,3H),7.39(brs,1H),7.22(brs,1H),4.10(s,1H),3.94(brs,1H),3.04-3.01(m,2H),2.23(br,4H),1.84(br,4H),1.78(s,3H),1.75(s,3H),1.12(s,6H).
HPLC：99.66％@214nm，99.85％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):518.4[M+H]
实施例84
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化 物
Figure PCTCN2019113608-appb-000352
室温下,将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(100mg，0.22mmol)，2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐(32mg，0.22mmol)，碳酸钠(70mg，0.66mmol)和钠化碘(7mg，0.044mmol)加到N’N-二甲基甲酰胺(4mL)中，反应在80℃下搅拌12小时；反应完全后将反应液冷却并减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000353
)纯化，得纯品目标产物E84(58mg，收率：50％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.16-10.68(m,1H),9.27(s,1H),8.77(br,0.3H),8.13(s,1H),7.63-7.54(m,3H),7.40(br,1H),7.22(br,1H),3.97(br,1H),2.96-2.93(m,2H),2.41-2.35(m,4H),2.15(s,6H),2.09-2.03(m,2H),1.88(br,4H),1.78(s,3H),1.75(s,3H).
HPLC：97.85％@214nm，98.65％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):517.6[M+H]
实施例85
2-((5-氯-2-((1-(2-甲基-环戊并[c]吡咯-5-酰基)-1h-吡唑-4-酰基)氨基)嘧啶-4-酰基)氨基)苯基)二甲基膦硫
Figure PCTCN2019113608-appb-000354
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦 (80mg，0.16mmol)溶于甲醇(4mL)中，滴加三乙胺使溶液呈碱性，再加入30％甲醛水溶液(300mg，3.2mmol)，反应在室温下搅拌12小时；再加入三乙酸硼氢化钠(339mg，1.6mmol)并在室温下搅拌1小时；反应完全后将反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000355
)纯化，得纯品目标产物E85(34mg，收率：42％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.32-9.26(m,2H),8.15(brs,1H),7.99(brs,1H),7.69(brs,2H),7.49(brs,1H),7.18(brs,2H),4.46(brs,1H),2.63(brs,2H),2.37(brs,4H),2.25(s,3H),1.98(s,3H),1.85(s,3H),1.85(brs,2H),1.73(brs,2H).
HPLC：97.79％@214nm，98.11％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):502.4[M+H]
实施例86
(2-((5-溴-2-((1-甲基环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000356
室温下,将2-甲基-5-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)环戊烷基[c]吡咯烷(62mg,0.3mmol)，(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(108mg,0.3mmol)和氯化铵(160mg,3.0mmol)溶于异丙醇(3mL)中。反应液于80℃搅拌反应12小时。LCMS检测反应完全后,将反应混合物减压浓缩,残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000357
)纯化，得纯品产物E86(15mg,收率:10％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.90-10.31(m,1H),9.28(brs,1H),8.20(s,1H),8.02(brs,1H),7.65-7.54(m, 3H),7.30-7.25(m,2H),4.61(brs,1H),2.65(brs,2H),2.41-2.34(m,4H),2.23(s,3H),1.99(brs,2H),1.77-1.73(m,2H),1.76(s,3H),1.73(s,3H).
HPLC：94.28％@214nm，94.22％@254nm
LCMS:Rt:0.93min；MS m/z(ESI):532.4[M+H]。
实施例87
(2-((5-三氟甲基-2-((1-(2-(2,2,2-三氟乙基)环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基) 二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000358
室温下,将(2-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(119mg，0.34mmol)，(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(70mg，0.34mmol)和氯化铵(180mg，3.4mmol)溶于乙醇(5mL)中，将反应体系加热至回流,搅拌反应16小时。反应完全后,将反应液冷却至室温过滤，滤液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000359
)纯化，得到目标纯品产物E87(19.6mg，收率：11.1％,白色固体)
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.30-8.26(m,1H),7.91(brs,1H),7.73-7.55(m,3H),7.27(brs,1H),7.21(brs,1H),4.21(brs,1H),2.79(brs,4H),2.37(brs,3H),2.25(brs,2H),1.95-1.74(m,10H).
19F NMR(400MHz,MeOD)δ：-62.90
HPLC：98.165％@214nm，99.338％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):520.1[M+H]
实施例88
(2-((5-氯-2-((1-(3-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦 氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000360
将(2-((5-氯-2-((1-(3-(哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)胺基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(40mg，0.079mmol)，溴乙基甲醚(21mg，0.158mmol)和N,N-异丙基乙胺(30mg,0.237mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。反应液在室温下搅拌反应10小时，LCMS检测反应完全，反应液直接用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000361
)纯化，得纯品产物E88(8mg，收率：18.2％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.05(m,1H),8.05(s,1H),7.68-7.59(m,3H),7.49(br,1H),7.33(br,1H),4.71(brs,1H),3.55(t,J＝5.6Hz,2H),3.34(s,3H),3.07-3.04(m,1H),2.63-2.47(m,14H),1.85(s,3H),1.81(s,3H).
HPLC：82.874％@214nm，99.553％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):559.3[M+H]
实施例89和实施例90
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物 (实施例89,单一未知构型异构体，Rt:3.313min；实施例90,单一未知构型异构体，Rt:3.949min)
Figure PCTCN2019113608-appb-000362
室温下,将叔丁基3-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦氧基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸酯(400mg，0.73mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(4M,5mL)和甲醇(0.5mL)中,反应混合物在室温下反应0.5小时。LCMS检测反应完全，将反应液减压浓缩，然后用N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶解,再加入溴乙基甲醚(100mg，0.73mmol)和N,N'-二异丙基乙胺(283mg，2.19mmol),反应混合物于室温反应10小时后，LCMS检测反应完全，反应液通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000363
Figure PCTCN2019113608-appb-000364
)纯化，得消旋体纯品产物(150mg,收率：40.8％)性状：黄色固体,目标产品进行手性分离：
将消旋产物(150mg，0.3mmol)进行手性分离(分离条件:
仪器信号:Waters-SFC80
色谱柱型号:IA-H(2.5×25cm,10μm)
流动相A:超临界二氧化碳,
流动相B:乙醇/氨气
A:B＝70/30，流速：70g/min
检测波长:214nm
柱温:25℃
柱压:100bar)
得到目标产物E89(单一未知构型异构体，Rt:3.313min)(54.93mg，收率：36.6％,性状：黄色固体)和目标产物E90(单一未知构型异构体，Rt:3.949min)(59.64mg，收率：39.766％,性状：黄色固体)。
E89
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.05(m,2H),7.70-7.62(m,3H),7.46(br,1H),7.35(br,1H),4.24(br,1H),3.60-3.57(m,2H),3.35(s,3H),3.31-3.28(m,3H),3.06-3.03(m,1H),2.81(br,2H),2.03(br,1H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.85-1.75(m,3H).
Chiral HPLC：ee 100％，254nm，Rt:3.313min
HPLC：99.701％@214nm，99.548％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):504.3[M+H]
E90
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.05(m,2H),7.70-7.61(m,3H),7.46(s,1H),7.35(br,1H),4.24(s,1H),3.60-3.57(m,2H),3.35(s,3H),3.31-3.30(m,3H),3.04-3.02(m,1H),2.81(br,2H),2.03(br,1H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.85-1.75(m,3H).
Chiral HPLC：ee 99.16％，254nm，Rt:3.949min
HPLC：97.808％@214nm，99.787％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):504.3[M+H]
实施例91和实施例92
(2-((5-氯-2-((1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦 (实施例91,未知单一异构体1，Rt：2.784min；实施例92,未知单一异构体2，Rt：4.559min)
Figure PCTCN2019113608-appb-000365
室温下,将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(310mg，0.7mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(62mg，0.84mmol)，碳酸钾(193mg，1.4mmol)溶于乙醇/水(4/1，10mL)混合溶剂中，体系用微波加热至110℃反应3小时。LCMS检测反应完全后,将反应液过滤，滤液直接用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000366
)纯化，得到消旋目标产物(160mg，收率：20％)，性状：白色固体
LCMS:Rt:1.168min；MS m/z(ESI):518[M+H]。
消旋的目标产品(160mg，0.3mmol)用超临界手性高效液相分离(分离条件:
仪器信号:Waters-SFC80
色谱柱型号:IA-H(2.5*25cm,10μm)
流动相A:超临界二氧化碳,
流动相B:乙醇/氨气
A:B＝60/40，流速：70g/min
检测波长:214nm
柱温:25℃
柱压:100bar)，得到两个单一异构体：
E91(未知单一异构体1，Rt：2.784min)(10mg，收率：6％),性状：类白色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.20(br,1H),8.06(s,1H),7.68-7.63(m,3H),7.44-7.35(m,2H),4.21(brs,1H),3.13(br,1H),2.93(br,1H),2.55-2.30(m,4H),1.97(br,1H),1.85-1.75(m,10H),1.21(s,6H).
Chiral HPLC：ee:100％，Rt:2.784min
HPLC：98.051％@214nm；99.530％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):518.4[M+H]
E92(未知单一异构体2，Rt：4.559min)(50mg，收率：30％),性状：类白色固体
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.20(br,1H),8.06(s,1H),7.68-7.62(m,3H),7.44-7.35(m,2H),4.21(brs,1H),3.13(br,1H),2.96(br,1H),2.55-2.30(m,4H),1.97(br,1H),1.85-1.75(m,10H),1.21(s,6H).
Chiral HPLC：ee:100％，Rt:4.559min
HPLC：97.927％@214nm；99.808％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):518.4[M+H]
实施例93
(2-((5-氯-2-((1-(3-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基) 二甲基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000367
室温下，将(2-((2-((1-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(30mg,0.05mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(36mg,0.5mmol)和碳酸钾(42mg,0.25mmol)溶于乙醇/水(2mL/0.5mL)中。反应液用微波反应器加热至110℃搅拌反应20分钟。LCMS检测反应完全,将反应混合物减压浓缩,残余物然后用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000368
)纯化，得纯品产物E93(盐酸盐，6mg,收率:20％),性状：白色固体；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.25(brs,1H),8.05(s,1H),7.70-7.60(m,3H),7.43(s,1H),7.34(brs,1H),3.92(brs,1H),2.74-2.71(m,4H),2.48(s,2H),1.89-1.82(m,12H),1.72(brs,2H),1.54-1.46(m,2H),1.35-1.27(m,2H),1.21(s,6H).
HPLC：98.99％@214nm，99.38％@254nm
LCMS:Rt:0.98min；MS m/z(ESI):586.3[M+H]。
实施例94
(2-((5-氯-2-((1-(3-(4-(2-羟基-2-甲基丙基)哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲 基硫化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000369
室温下,将(2-((5-氯-2-((1-(3-(哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)胺基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦(33mg，0.064mmol)，2,2-二甲基环氧乙烷(46mg，0.64mmol)，碳酸钾(45mg，0.32mmol)溶于乙醇(2mL)和水(0.5mL)的混合液中，反应用微波加热至110℃搅拌反应20分钟；反应完全后将反应液冷却至室温，然后减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000370
)纯化，得纯品目标产物E94(2mg，收率：5％),性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD–d4)δ：8.08(s,1H),7.85(brs,2H),7.65(t,J＝8.0Hz,1H),7.46(br,1H),7.42(s,2H),4.61(brs,1H),3.03(brs,1H),2.69(brs,4H),2.45(br,8H),2.34(s,2H),2.02(s,3H),1.98(s,3H),1.19(s,6H).
HPLC：98.11％@214nm，98.74％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):589.1[M+H]
实施例95
2-((5-氯-2-((1-(3-(4-乙基哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000371
室温下,将(2-((5-氯-2-((1-(3-(哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)胺基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦(33mg，0.064mmol)溶于乙醇(3mL)中，滴加三乙胺使溶液呈碱性，再加入1M乙醛四氢呋喃溶液(1.3mL，1.28mmol)，反应在室温下搅拌12小时；再加入三乙酸硼氢化钠(136mg，0.64mmol)，反应在室温下继续搅拌1小时；反应完全后将反应液减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000372
)纯化，得纯品目标产物E95(三氟乙酸盐，4mg，收率：11％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)：δ8.14(s,1H),7.92(br,1H),7.82(br,1H),7.70-7.67(m,1H),7.54-7.42(m, 3H),4.62(brs,1H),3.32(br,4H),3.31-3.25(m,4H),3.20-2.60(m,3H),2.53(br,4H),2.04(s,3H),2.00(s,3H),1.36(t,J＝8.0Hz,3H).
19F NMR(376.5MHz,MeOD-d4)：δ-77.25
HPLC：96.29％@214nm，97.86％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):545.4[M+H]
实施例96
(2-((5-氯-2-((1-(3-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫 化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000373
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(3-(哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)胺基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基硫化膦(33mg，0.064mmol)，溴乙基甲醚(11mg，0.077mmol)，二异丙基乙基胺(41mg，0.32mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(3mL)中，反应在50℃下搅拌12小时；反应完全后将反应液减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000374
)纯化，得纯品目标产物E96(2mg，收率：5％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD–d4)δ：8.08(s,1H),7.87(brs,2H),7.67-7.63(m,1H),7.42(br,3H),4.59(br,1H),3.55(t,J＝5.6Hz,2H),3.34(s,3H),3.03(br,1H),2.62(t,J＝5.6Hz,2H),2.62(br,2H),2.45(brs,6H),2.02(s,3H),1.99(s,3H),1.33-1.29(m,4H).
HPLC：88.62％@214nm，89.04％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):575.5[M+H]
实施例97
2-((5-氯-2-((1-(1-甲基哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000375
室温下，将(2-((5-氯-2-((1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物(320mg，0.72mmol)溶于甲醇(4mL)中，滴加三乙胺使溶液呈碱性，再加入30％甲醛水溶液(1.3g，14.4mmol)，反应在室温下搅拌12小时；再加入三乙酰基硼氢化钠(916mg，4.32mmol)，然后继续在室温下搅拌1小时。反应完全后将反应减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000376
)纯化，得纯品目标产物E97(110mg，收率：34％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.30-10.65(m,1H),9.26(s,1H),8.14(m,2H),7.62(br,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.42(br,1H),7.21(br,1H),4.11(br 1H),2.92-2.90(m,1H),2.70-2.68(m,1H),2.19(s,3H),2.10(br,1H),1.93-1.90(m,2H),1.79(s,3H),1.75(s,3H),1.70(br,1H),1.59(br,2H).
HPLC：98.94％@214nm，99.41％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):460.3[M+H]
实施例98
(2-((5-氯-2-((1-(3-(4-乙基哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基膦氧化物
Figure PCTCN2019113608-appb-000377
在100mL的单口瓶中加入(2-((5-氯-2-((1-(3-(哌嗪-1-基)环丁基)-1H-吡唑-4-基)胺基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(80mg，0.16mmol)并溶于乙醇(5mL)中,再加入乙醛的四氢呋喃溶液(0.64mL，0.64mmol)，化合物搅拌10小时后加入三醋酸硼氢化钠(67mg，0.32mmol)，反应混合物在室温下继续反应1小时，LCMS检测反应完全。反应液用乙腈(2mL)稀释，然后用高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000378
Figure PCTCN2019113608-appb-000379
)纯化，得纯品产物E98(4mg,收率:4.7％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.41-8.05(m,1H),8.05(s,1H),7.71-7.60(m,3H),7.49(br,1H),7.34(br,1H),4.70-4.68(m,1H),3.09-3.05(m,1H),2.65-2.45(m,14H),1..85(s,3H),1.82(s,3H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H).
HPLC：95.261％@214nm，95.304％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):529.4[M+H]
实施例99
(2-((5-氯-2-((1-(2-(2-氧杂环丁-3-基)环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲 基氧化膦
Figure PCTCN2019113608-appb-000380
将(2-((5-氯-2-((1-(环戊烷并[c]吡咯烷-5-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(100mg，0.212mmol)溶于甲醇(5mL),然后加入氧杂环丁-3-酮(76mg，1.06mmol)和氰基硼氢化钠(65mg，1.06mmol)，反应混合物在室温下反应10小时，LCMS检测反应完全，反应液通过高效液相制备色谱法(洗脱剂梯度：
Figure PCTCN2019113608-appb-000381
)纯化，得纯品产物E99(22mg，收率：20.4％)，性状：白色固体。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.41-8.05(m,2H),7.69-7.60(m,3H),7.40-7.35(m,2H),4.75-4.71(m,3H),4.65-4.61(m,2H),3.58-3.54(m,1H),2.79(brs,2H),2.65-2.60(m,2H),2.33-2.29(m,2H),2.15-2.03(m,2H),1.96-1.93(m,2H),1.84(s,3H),1.81(s,3H).
HPLC：98.816％@214nm，98.867％@254nm
LCMS：MS m/z(ESI):528.4[M+H]
LCMS：MS m/z(ESI):463.1[M+H]。
测试例1：酶学EGFR磷酸化抑制实验
实验材料：
HTRF KinEASE-TK kit购自于CisBio(France)。
384-well assay plate板购自于greiner bio-one(Germany)。
384-well source plate板购自于LABCYTE(USA)。
MgCl 2，MnCl 2，DTT，TritonX-100，HEPES，BSA购自于Sigma(USA)。
EGFR WT-WT，EGFR WT-del19/T790M/C797S，EGFR WT-L858R/T790M/C797S，EGFR WT-del19/T790M，EGFR WT-L858R/T790M由江苏先声药业有限公司提供。
实验仪器：
自动微孔移液器：Precision PRC384U(BioTek，USA)
纳升级声波移***：
Figure PCTCN2019113608-appb-000382
HANDLE RS(LABCYTE，USA)
多标记检测分析仪：Envision Multilabel Reader(PerkinElmer，USA)
实验方法：
1.配制激酶缓冲溶液(20mM HEPES pH7.5，0.01％TritonX-100，0.01％BSA，1mM DTT，1mM MnCl 2，5mM MgCl 2)。
2.化合物的准备。化合物的检测终浓度为10μM，配制成100倍浓度，即1mM。使用自动微孔移液器(Precision PRC384U)将待测化合物做4倍梯度稀释，获得浓度从1mM到3.8nM的10个剂量浓度，使用Echo将待测化合物转移到384孔板中，每孔100nL化合物。
3.激酶反应。使用激酶缓冲液配制酶反应溶液，转移5μl酶反应溶液到384孔板反应孔中，阴性对照孔加入5μl激酶缓冲液。450rpm振荡混匀，室温下静置孵育10分钟。使用激酶缓冲液配制底物溶液，转移5μl底物溶液到384孔板反应孔中起始反应，450rpm振荡混匀，室温下孵育60分钟。
4.终止反应。向384孔反应板中加入10μl反应终止液(Streptaridin-XL665，TK Antibody-Cryptate)，1000rpm离心1分钟，室温下放置60分钟，Envision读板
5.曲线拟合。从Envision程序上复制发光读数的数据，将发光读数665nM/615nM的比值通过公式转换为抑制百分率：Percent inhibition＝(max-signal ratio)/(max-min)*100。“min”为不加酶进行反应的对照样荧光读数比值；“max”为加入DMSO作为对照的样品荧光读数比值。将数据导入MS Excel并使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合：Y＝Bottom+(TopBottom)/(1+(IC 50/X)^HillSlope)。
本发明化合物的BaF 3(WT-WT)的酶学活性抑制IC 50，BaF3(WT-del19/T790M/C797S)的酶学活性抑制IC 50，BaF 3(WT-L858R/T790M/C797S)的酶学活性抑制IC 50，BaF 3(WT-del19/T790M)的酶学活性抑制IC 50，BaF 3(WT-L858R/T790M)的酶学活性抑制IC 50如下所示。
由如下结果可以看出，本发明的大部分化合物对四种突变的酶有着很好的抑制效果，抗增殖活性都在100nM以下。本发明的大部分化合物对野生型的EGFR有着很好的选择性，例如化合物E1’、E26、E30对BaF3(WT-del19/T790M/C797S)的酶学活性抑制IC 50是对BaF3(WT-WT)的酶学活性抑制IC 50的150倍以上，明显优于Brigatinib。
Figure PCTCN2019113608-appb-000383
Figure PCTCN2019113608-appb-000384
Figure PCTCN2019113608-appb-000385
Figure PCTCN2019113608-appb-000386
测试例2细胞抗增殖实验
实验材料：
RPMI1640购自Gibco(USA)。
FBS购自Hyclone(USA)。
IL-3购自R&D(USA)。
DMSO购自Amresco(USA)。
Figure PCTCN2019113608-appb-000387
Luminescent Cell Viability kit购自Promega(USA)。
BaF3细胞购自Riken(Japan)。
BaF3/EGFR-WT，BaF3/EGFR-Del19/T790M/C797S和BaF3/EGFR-L858R/T790M/C797S细胞由中美冠科生物技术(太仓)有限公司构建。
BaF3培养基：RPMI1640+10％FBS+8ng/ml IL-3。
BaF3/EGFR-WT，BaF3/EGFR-Del19/T790M/C797S和BaF3/EGFR-L858R/T790M/C797S培养基：RPMI1640+10％FBS。
读板仪器：EnVision(PerkinElmer,USA)。
实验方法：
调整细胞浓度，96孔板每孔种2000个BaF 3，BaF 3/EGFR-WT，BaF 3/EGFR-Del19/T790M/C797S或BaF 3/EGFR-L858R/T790M/C797S细胞，90μl体积，用DMSO配制1000X待测化合物母液，并用DMSO将待测化合物做3倍梯度稀释(共9个浓度)，再用相应细胞培养基做100倍稀释后，每孔加入10μl(10X浓度)的待测化合物(每个化合物每个浓度三个复孔)，5％CO 2，37℃培养72小时。72小时后，每孔加入50μl Cell Titer-Glo，在摇板仪上2min混匀，孵育10min后，用EnVision读数。
数据分析：
细胞活性用GraphPad Prism version 5作图，曲线用nonlinear regression model with a sigmoidal dose response拟合，由此计算IC 50数据。
本发明大部分化合物在细胞BaF3(EGFR-del19/T790M/C797S)的增殖抑制IC 50和BaF 3(EGFR-L858R/T790M/C797S)的细胞增殖抑制IC 50都有很好的表现，显著优于对标化合物Brigatinib。测试结果如下表所示：
Figure PCTCN2019113608-appb-000388
Figure PCTCN2019113608-appb-000389
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

  1. 式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2019113608-appb-100001
    其中，E选自
    Figure PCTCN2019113608-appb-100002
    Y选自O或S；R 1、R 2、R 3、R 4相同或不同，彼此独立地选自C 1-12烷基；
    A选自N或C-Q；
    B选自N或C-D；
    Q和D相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个R a取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 2-12烯基、C 2-12杂烯基、C 2-12炔基、C 2-12杂炔基、C 1-12烷氧基、C 3-20环烷基、3-20元杂环基、C 6-20芳基、5-20元杂芳基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基；
    每一个R a相同或不同，彼此独立地选自卤素、氰基、氨基、羟基、无取代或任选被一个、两个或更多个Rs取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 1-12烷氧基、C 3-20环烷基、3-20元杂环基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基；
    V和Z相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个R b取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 2-12烯基、C 2-12杂烯基、C 2-12炔基、C 2-12杂炔基、C 1-12烷氧基、C 3-20环烷基、3-20元杂环基、C 6-20芳基、5-20元杂芳基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基、-N(C 1-12烷基) 2、-NHC 1-12烷基；
    每一个R b相同或不同，彼此独立地选自卤素、氰基、羟基、氨基、无取代或任选被一个、两个或更多个Rs取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12烷氧基、C 1-12杂烷基、C 3-20环烷基、3-20元杂环基；
    每一个Rs相同或不同，彼此独立地选自卤素、CN、OH、C 1-12烷基；
    W选自氢、无取代或任选被一个、两个或更多个R c取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12杂烷基、C 1-12烷酰基、C 1-12杂烷酰基、3-20元杂环酰基、C 3-20环烷基、3-20元杂环基、C 6-18芳基、5-20元杂芳基、C 3-20环烷基与C 3-20环烷基形成的螺环基、C 3-20环烷基与3-20元杂环基形成的螺环基、3-20元杂环基与3-20元杂环基形成的螺环基、C3-20环烷基与C3-20环烷基的并环基、C3-20环烷基与3-20元杂环基的并环基、3-20元杂环基与3-20元杂环基的并环基、C 5-14桥环基、5-14元杂桥环基；
    每一个R c相同或不同，彼此独立地选自＝O、卤素、氰基、羟基、氨基、羧基、无取代或任选被一个、两个或更多个R d取代的下列基团：C 1-12烷基、C 1-12烷氧基、C 1-12杂烷基、-S(O) 2C 1-12烷基、-C(O) 2C 1-12烷基、-COC 1-12烷基、C 3-20环烷基、3-20元杂环基；
    每一个R d相同或不同，彼此独立地选自卤素、＝O、卤素、氰基、羟基、-S(O) 2C 1-12烷基、-COOC 1-12烷基、-COC 1-12烷基、C 1-12烷基；当W选自3-20元杂环基、C 3-20环烷基与3-20元杂环基形成的螺环基、3-20元杂环基与3-20元杂环基形成的螺环基、5-14元杂桥环基时，所述取代R c可以杂原子或碳原子相连。
  2. 根据权利要求1所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐，其特征在于，
    每个R a、R b、R c相同或不同，彼此独立地选自-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-CN、-NH 2、-CH 3、CH 3CH 2-、 -CF 3、-CHF 2、-CH 2F、NH 2CH 2-、-NH(CH 3) 2、-OCH 3、CH 3CH 2O-、CH 3OCH 2-、MeSO 2-、-CH 2CH 2F、-CH 2CHF 2、-CH 2C(CH 3) 2OH、-CH 2CH 2SO 2Me、-CH 2OH、-CH 2CH 2OH、-CH 2CH 2CN、-CH 2CH 2OCH 3、-COOCH(CF 3) 2、-COCH 2OH、-CH 2COOH、-CH 2CONH 2、2-(1-吗啉基)乙基、1-甲基哌啶-4-酰基、3-吡啶基、2-(吡咯烷-1-基)乙基、3-氧杂环丁基、四氢吡咯基、吗啉基、4-甲基-1-哌嗪基、1-甲基-4-哌啶基；
    每一个Rs相同或不同，彼此独立地选自卤素、CN、OH、C 1-6烷基；
    E选自
    Figure PCTCN2019113608-appb-100003
    Y选自O或S；R 1、R 2、R 3、R 4相同或不同，彼此独立地选自C 1-6烷基；A选自N或C-Q；B选自N或C-D；A和B中至少有一个为N，且A和B不同时为N；
    Q和D相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、C 1-6烷基、卤素取代的C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 1-6烷氧基、C 3-12环烷基、3-12元杂环基、-COOC 1-6烷基、-COC 1-6烷基；
    V和Z相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3-6环烷基；
    W选自无取代或任选被一个、两个或更多个R c取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6杂烷基、C 3-12环烷基、3-12元杂环基、C 6-12芳基、5-12元杂芳基、C 3-6环烷基与C 3-6环烷基形成的螺环基、C 3-12环烷基与3-12元杂环基形成的螺环基、3-12元杂环基与3-12元杂环基形成的螺环基、C 3-6环烷基与C3-6杂环基的并环基、C3-6杂环基与C3-6杂环基的并环基、C 5-14桥环基、5-14元杂桥环基。
  3. 根据权利要求1所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐，其特征在于，E选自
    Figure PCTCN2019113608-appb-100004
    Y选自O或S；
    A和B至少有一个为N，且A和B不同时为N；
    Q和D相同或不同，彼此独立地选自H、F、Cl、Br、三氟甲基、氰基、异丙基、甲氧基、环丙基、-COOC 2H 5；
    V和Z相同或不同，彼此独立地选自H、F、Cl、Br、甲基、甲氧基、环丙基；
    W选自：叔丁基、
    Figure PCTCN2019113608-appb-100005
    Figure PCTCN2019113608-appb-100006
  4. 根据权利要求1所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、 氮氧化物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式(I)化合物选自如下化合物或其药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2019113608-appb-100007
    Figure PCTCN2019113608-appb-100008
    Figure PCTCN2019113608-appb-100009
    Figure PCTCN2019113608-appb-100010
    Figure PCTCN2019113608-appb-100011
    Figure PCTCN2019113608-appb-100012
    Figure PCTCN2019113608-appb-100013
    Figure PCTCN2019113608-appb-100014
    Figure PCTCN2019113608-appb-100015
  5. 根据权利要求1所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述盐为盐酸盐、三氟乙酸盐或甲酸盐。
  6. 一种药物组合物，其特征在于，包含治疗有效量的权利要求1-5任一项所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐中的至少一种。
  7. 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的赋形剂。
  8. 权利要求1-5任一项所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物或其药学上可接受的盐中的至少一种在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
  9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述癌症为非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、胰腺癌、头颈癌、乳腺癌、结肠直肠癌、上皮癌、卵巢癌、***癌、腺癌或鳞状细胞癌。
  10. 权利要求1-5任一项所述式(I)所示的化合物、其立体异构体、消旋体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、或其药学上可接受的盐中的至少一种在制备用于治疗EGFR突变导致的疾病的药物中的应用。
  11. 根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述EGFR突变为一个、两个或多个选自以下的突变：(1)Del19；(2)T790M；(3)C797S；(4)L858R；(5)T790M；(6)C797S。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023168203A1 (en) * 2022-03-04 2023-09-07 Kinnate Biopharma Inc. Inhibitors of mek kinase

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115636831A (zh) * 2022-10-27 2023-01-24 中国药科大学 稠合嘧啶二酮类化合物、其用途以及药物组合物

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005016894A1 (en) * 2003-08-15 2005-02-24 Novartis Ag 2, 4-pyrimidinediamines useful in the treatment of neoplastic diseases, inflammatory and immune system disorders
WO2010146133A1 (en) * 2009-06-18 2010-12-23 Cellzome Limited Heterocyclylaminopyrimidines as kinase inhibitors
CN102105150A (zh) * 2008-05-21 2011-06-22 阿里亚德医药股份有限公司 用作激酶抑制剂的磷衍生物
CN106188060A (zh) * 2015-04-29 2016-12-07 厦门大学 嘧啶并吡咯类化合物、其制备方法、药用组合物及其应用
CN110305161A (zh) * 2018-03-20 2019-10-08 暨南大学 2-氨基嘧啶类化合物及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005016894A1 (en) * 2003-08-15 2005-02-24 Novartis Ag 2, 4-pyrimidinediamines useful in the treatment of neoplastic diseases, inflammatory and immune system disorders
CN102105150A (zh) * 2008-05-21 2011-06-22 阿里亚德医药股份有限公司 用作激酶抑制剂的磷衍生物
WO2010146133A1 (en) * 2009-06-18 2010-12-23 Cellzome Limited Heterocyclylaminopyrimidines as kinase inhibitors
CN106188060A (zh) * 2015-04-29 2016-12-07 厦门大学 嘧啶并吡咯类化合物、其制备方法、药用组合物及其应用
CN110305161A (zh) * 2018-03-20 2019-10-08 暨南大学 2-氨基嘧啶类化合物及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG, RUIFENG ET AL.: "Design, synthesis and biological evaluation of novel 7H-pyrrolo[2,3-d] pyrimidine derivatives as potential FAK inhibitors and anticancer agents.", EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 183, 18 September 2019 (2019-09-18), XP085892914, DOI: 20200106153211PX *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023168203A1 (en) * 2022-03-04 2023-09-07 Kinnate Biopharma Inc. Inhibitors of mek kinase
US11780862B2 (en) 2022-03-04 2023-10-10 Kinnate Biopharma Inc. Inhibitors of MEK kinase

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