WO2018155947A1 - 혈액 뇌관문을 통과할 수 있는 화합물을 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

혈액 뇌관문을 통과할 수 있는 화합물을 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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최환근
박종배
고은화
손정범
김남두
이승훈
남도현
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    • A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of brain cancer containing a compound capable of passing the blood brain barrier as an active ingredient.
  • Protein kinases are enzymes that catalyze the reaction that transfers the terminal phosphate groups of adenosine triphosphate (ATP) to specific residues of the protein, tyrosine, serine or threonine, which regulate the activity, growth and differentiation of cells against changes in cell mediators and the environment. Involved in the signal.
  • ATP adenosine triphosphate
  • Inappropriately high protein kinase activity is directly or indirectly associated with many diseases resulting from abnormal cell action.
  • a disease may be caused by failure of appropriate regulatory mechanisms of kinases related to mutations, over-expression or inappropriate enzyme activity, or overproduction or lack of factors involved in the signaling of cytokines, upstream or downstream of kinases. Can be.
  • selective inhibition of kinase activity can be a beneficial target of drug development for disease treatment.
  • LRRK2 leucin-rich repeat kinase-2
  • LRRK2 protein belongs to the leucin-rich repeat kinase family and consists of 2527 amino acid sequences with high similarity between species.
  • LRRK2 protein is characterized by having both GTPase and Serine-threonine kinase activity in one protein.
  • the expressed LRRK2 protein is observed in various organs and tissues, including the brain, and is present in the cytoplasm or cell membrane and mitochondrial outer membrane at the cellular level.
  • the LRRK2 protein has five functionally important domains, and is expected to regulate cell function through self-activation regulation by protein autophosphorylation, protein interaction and enzymatic action.
  • chaperone machinery, cytoskelecton arrangement, protein translational machinery, synaptic vesicle endocytosis, mitogen-activated protein kinase signal transduction processes Activated protein kinases signaling cascades and ubiquitin / autophage protein degradation pathways are known to be regulated by LRRK2 proteins.
  • LRRK2 protein has been reported to be associated with the imputation of mild cognitive impairment associated with Alzheimer's disease, L-Dopa induced dyskinesia, and CNS disorders associated with neuronal precursor differentiation.
  • G2019S mutations of the LRRK2 protein have been reported to increase the incidence of acute myeloid leukemia (AML) as well as non-skin cancers such as kidney cancer, breast cancer, lung cancer, prostate cancer and the like.
  • AML acute myeloid leukemia
  • non-skin cancers such as kidney cancer, breast cancer, lung cancer, prostate cancer and the like.
  • the G2019S mutation of the LRRK2 protein increases the catalytic activity of the LRRK2 kinase domain.
  • LRRK2 protein has also been reported to be associated with amyotrophic lateral sclerosis, rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis (WO 2011/038572).
  • the treatment of brain tumors include surgical surgery, radiation therapy, chemotherapy (chemotherapy), hormone therapy and the like.
  • the surgery has been mainly reliant on surgery and radiation treatment, but radiation treatment in particular has a problem that is accompanied by side effects such as neurotoxicity and dementia. Therefore, anti-cancer drug therapy (chemotherapy) is receiving attention to solve such problems, but drug therapy for the treatment of brain tumors is blocked by a special protection system called 'blood-brain barrier (BBB)' to the brain.
  • BBB blood-brain barrier
  • Many drugs cannot be delivered and are limited due to cancer's resistance to anticancer drugs.
  • the present inventors first identified through the in vivo experiment that the compound used as an inhibitor of the LRRK2 protein can be effectively used for the prevention and treatment of brain cancer through the blood brain barrier (BBB) and completed the present invention. .
  • BBB blood brain barrier
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer containing an LRRK2 protein inhibitor as an active ingredient.
  • the present invention comprises a first component containing a pharmaceutically treatable amount of the LRRK2 protein inhibitor as an active ingredient; And it provides a pharmaceutical kit for preventing or treating brain cancer comprising a second component containing a pharmaceutically treatable amount of Avastin as an active ingredient.
  • the present invention also provides a method of treating brain cancer comprising administering an LRRK2 protein inhibitor to a subject.
  • the present invention comprises the steps of administering to the subject an LRRK2 protein inhibitor; And administering avastin to the subject.
  • the present invention provides the use of an LRRK2 protein inhibitor for use in the manufacture of a pharmaceutical composition for the treatment of brain cancer.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer according to the present invention contains an LRRK2 protein inhibitor as an active ingredient, and has an effect of remarkably inhibiting tumor formation by easily passing a blood brain barrier that is difficult for general drugs to pass.
  • FIG 1 is an image showing the results confirmed by Western Blot that LRRK2 protein is expressed in cancer tissues obtained from brain tumor patients.
  • Figure 2 is an image showing the result of confirming the correlation between the phosphorylation of the LRRK2 protein and the malignancy of brain tumors.
  • Figure 3 is an image showing the results of analyzing the nucleic acid sequence encoding the LRRK2 protein expressed in brain tumor cells.
  • 4A is a schematic diagram showing the structure of a lentiviral vector expressing the LRRK2 protein.
  • Figure 4b is an image confirming the overexpression of LRRK2 protein in cells infected with a lentiviral vector expressing LRRK2 protein.
  • Figure 4c is an image confirming the self-replicating ability of tumor cells in cells infected with a lentiviral vector expressing the LRRK2 protein.
  • Figure 5a is an image showing the results of Western Blot evaluation when the Example 10, 11, 12, 20 and 22 compound was treated to NCC01 cells, a cell line derived from a brain tumor patient.
  • Figure 5b is an image showing the results of Western Blot evaluation confirmed when the Example 11, 12, 20, 21 and 22 compound was treated to NCC01 cells, a cell line derived from a brain tumor patient.
  • Figure 6 is a graph showing the results of Western Blot evaluation when the Example 10, 11, 12, 20 and 22 compound was treated to NCC01 cells, a brain tumor patient-derived cell line.
  • NCC01 cells which are brain cell patient-derived cell lines.
  • FIG 9 and 10 are images showing the results of Western Blot evaluation confirmed when the compound of Example 12 was treated at various concentrations in NCC01 cells, which are brain cell patient-derived cell lines.
  • 11 and 12 are images showing Western Blot evaluation results obtained by treating the NCC01 cells, which are cell lines derived from brain tumor patients, with the compound of Example 12 at a concentration of 100 nM, and confirmed with time.
  • 13 to 15 is an image showing the results of Western Blot evaluation confirmed after 1 day treatment of the compound of Example 12 in a concentration range of 50 nM to 2,000 nM to NCC01 cells.
  • Example 16 is an image confirming that the compound of Example 12 induces the death of brain tumor cells by inhibiting the activity of mitochondria.
  • Example 17 is an image confirming that the compound of Example 12 inhibits the activity of mitochondria present in brain tumor stem cells.
  • 19A is an image confirming that the growth of spheres formed from NCC01 cell line exposed to hypoxic conditions is inhibited by shRNA for LRRK2 gene.
  • Figure 19b is an image showing the results confirmed by Western Blot expression of LRRK2 protein in NCC01 cell line exposed to hypoxic conditions.
  • 19C is an image confirming that the growth of spheres formed from 528NS cell line exposed to hypoxic conditions is inhibited by shRNA for LRRK2 gene.
  • Figure 19d is an image showing the results confirmed by Western Blot expression of LRRK2 protein in 528NS cell line exposed to hypoxic conditions.
  • 20 and 21 are images showing cell cycle FACS evaluation results confirmed after 1 day of treatment of the compounds of Examples 11, 12, and 21 at the concentration of 100 nM in NCC01 cells, respectively.
  • Example 22 is an image showing the results of observing the change of survival days when orally administered the compound of Example 12 in the mouse tumor-induced mouse model.
  • Figure 23 is an image showing the result of measuring the change in tumor size when oral administration of the compound of Example 12 in the mouse tumor-induced mouse model.
  • FIG. 24 is an image confirming that the effect of treating brain tumors is increased when the compound of Example 12 is combined with Avastin.
  • FIG. 25 is an image showing Western Blot evaluation results confirmed when NCC01 cells, which are cell lines derived from brain tumor patients, were treated with a comparative compound.
  • FIG. 25 is an image showing Western Blot evaluation results confirmed when NCC01 cells, which are cell lines derived from brain tumor patients, were treated with a comparative compound.
  • Figure 26 is an image showing the results of Western Blot evaluation when the Example 10, 11, 12, 20 and 21 compound was treated to 448T cells, a cell line derived from a brain tumor patient.
  • FIG. 27 is an image showing Western Blot evaluation results confirmed when the compound of Example 12 was treated at various concentrations in 448T cells, which are a brain tumor patient-derived cell line.
  • FIG. 27 is an image showing Western Blot evaluation results confirmed when the compound of Example 12 was treated at various concentrations in 448T cells, which are a brain tumor patient-derived cell line.
  • FIG. 28 is an image showing the results of observation of changes in survival days when orally administered the compounds of Examples 12, 20, and 21 in the mouse tumor-induced mouse model.
  • FIG. 29 is an image showing Western Blot evaluation results confirmed when 448T cells, which are cell lines derived from a brain tumor patient, are treated with the compound of Comparative Example and the compounds of Examples 1, 11, and 12.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer containing LRRK2 (Leucine Rich Repeat Kinase 2) protein inhibitor as an active ingredient.
  • LRRK2 Leucine Rich Repeat Kinase 2
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 1, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • R 1 is —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, C 1-10 straight or branched alkyl, C 1-10 straight or branched alkoxy, C 1-5 straight or branched alkylamino, or di linear or branched C 1 -5 alkyl amino;
  • R 2 is —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, or C 1-10 unsubstituted or substituted one or more halogen, straight or branched chain alkyl, or linked together with R 3 to include one or more N;
  • R 3 to include one or more N;
  • substituted 5 to 8 hexacyclic heterocycloalkyl and substituted 5 to 6 hexacyclic heteroaryl are independently 1 selected from the group consisting of —OH, ⁇ O, halogen and C 1-5 linear or branched alkyl. At least 5 substituents are substituted 5 to 8 ring heterocycloalkyl and 5 to 6 ring heteroaryl,
  • fused 5- to 8 -membered heterocycloalkyl is a 5- to 8 -membered heterocycloalkyl fused with an unsubstituted C 6-10 aryl;
  • R 3 is —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, C 1-10 straight or branched chain alkyl, C 1-10 straight or branched chain alkoxy, C 1-5 straight or branched chain alkylamino, diC 1 -5 straight or branched chain alkylamino, C 1-5 straight or branched chain alkylsulfonyl C 6-10 arylamino, or C 1-5 straight or branched chain alkylsulfonylamino C 6-10 arylamino, or R Linked together with 2 to form an unsubstituted, substituted or fused 5 to 8 octaheteroheterocycloalkyl comprising one or more N,
  • fused 5- to 8 -membered heterocycloalkyl is a 5- to 8 -membered heterocycloalkyl fused with an unsubstituted C 6-10 aryl;
  • R 4 , R 5 and R 6 are independently —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, C 1-10 straight or branched chain alkyl, C 1-10 straight or branched alkoxy, N and O Unsubstituted or substituted 5 to 8 octacyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of unsubstituted or substituted comprising 5 or more heteroatoms selected from the group consisting of N and O Heterocyclic alkylcarbonyl having 8 to 8 rings,
  • each unsubstituted heterocycloalkyl di C 1 -5 straight or branched alkylamino or comprises at least one N and at least one C 1-5 straight or branched alkyl substituted by hetero ring, each 6 Cycloalkyl is substituted 5 to 8 heterocyclic heterocycloalkyl,
  • R 7 , R 8 and R 9 are independently —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, C 1-10 straight or branched chain alkyl substituted with unsubstituted or one or more hydroxy, or N and O Unsubstituted or substituted 5 to 8 angular heterocycloalkyl containing at least one hetero atom selected from the group consisting of
  • R 1 is -H, or -NH (CH 3 );
  • R 2 is —H, halogen, or —CF 3 , or is linked with R 3 To form;
  • R 3 is —H, —NH (CH 3 ), —NH (CH 2 CH 3 ), , or Or connected with R 2 or To form;
  • R 4 , R 5 and R 6 are independently -H, methoxy, halogen, , , or ego,
  • R 7 , R 8 and R 9 are independently -H, methyl, halogen, or to be.
  • the compound represented by Formula 1 may be any one selected from the following compound group:
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 2, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • L 1 and L 2 are independently —O—, —CH 2 —, —NH—, or —S—;
  • a 1 is an unsubstituted or substituted C 3-10 cycloalkyl, in, this case, the substituted cycloalkyl, the C 3- 10 is a -OH, a halogen, nitrile, nitro, linear or branched alkyl of 1-5 C And C 3-10 cycloalkyl substituted with at least one substituent selected from the group consisting of C 1-5 straight or branched alkoxy;
  • a 2 is an unsubstituted or substituted 5-6 hexacyclic heteroaryl containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S, wherein the substituted 5-6 hexacyclic heteroaryl is- OH, halogen, nitrile, nitro, C 1-5 straight or branched alkyl, and C 1-5 straight or branched alkoxy are one or more substituents selected from the group consisting of substituted 5 to 6 each ring heteroaryl ;
  • a 3 , A 4 and A 5 are independently —H, C 1-5 straight or branched alkyl or C 1-5 straight or branched alkoxy.
  • L 1 and L 2 are independently —CH 2 —, —NH—, or —S—;
  • a 1 is or ego
  • a 2 is ego
  • a 3 , A 4 and A 5 are independently —H or methyl.
  • the compound represented by Formula 2 may be any one selected from the following compound group:
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 3, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • L 3 is absent, -NH-, or -O-;
  • L 4 is N, or C
  • E 1 is —H, —OH, halogen, nitrile, nitro, C 1-5 straight or branched alkyl, or C 1-5 straight or branched alkoxy;
  • E 2 is absent when L 4 is N, and when L 4 is C E 5 is C 1-5 straight or branched alkyl;
  • E 3 is -H, -OH, halogen, nitrile, nitro, straight-chain or branched alkyl of C 1-5, C 1- 5 straight or branched alkoxy, cycloalkyl, unsubstituted or substituted C 6-10 alkyl, Or an unsubstituted or substituted 5 to 8 angular heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of N and O,
  • substituted C 6-10 cycloalkyl and substituted 5-8 octacyclic heterocycloalkyl are independently —OH, halogen, C 1-3 straight or branched chain alkyl, and C 1-3 straight or branched chain At least one substituent selected from the group consisting of alkoxy is substituted C6-10 cycloalkyl and 5 to 8 heterocyclic heterocycloalkyl;
  • E 4 is an unsubstituted or substituted 6-8 octacyclic heterocycloalkylcarbonyl C 1-5 straight or branched chain alkyl containing one or more N, an unsubstituted or substituted 6-8 octacyclic ring containing one or more N Heteroaryl,
  • substituted 6 to 8-membered heterocycloalkyl and substituted 6 to 8-membered heteroaryl include one or more heteroatoms independently selected from the group consisting of C 6-10 aryl, N and O.
  • Unsubstituted or substituted six-membered heterocycloalkyl is substituted six to eight-membered heterocycloalkyl,
  • the substituted hexagonal heterocycloalkyl is hexahexacyclic heterocycloalkyl substituted with -OH, halogen, or C 1-5 unsubstituted or substituted one or more straight chain or branched alkyl of C 1-5 .
  • L 3 is absent, -NH-, or -O-;
  • L 4 is N, or C
  • E 1 is -H, or methyl
  • E 2 is absent when L 4 is N, and when L 4 is C ego;
  • E 3 is -H, , or ego
  • E 4 is , , or to be.
  • the compound represented by Formula 3 may be any one selected from the following compound group:
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 4, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • G 1 is —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, C 1-5 straight or branched alkyl, C 1-5 straight or branched alkoxy, or unsubstituted or substituted 5 containing one or more N Heteroarylamino of 8 to 8 rings,
  • substituted 5- to 8-membered heteroaryl is 5- to 8-membered heteroaryl substituted with -OH, halogen or C 1-3 linear or branched alkyl;
  • G 2 is —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, C 1-5 straight or branched alkyl, C 1-5 straight or branched alkoxy, unsubstituted or substituted C 6-10 aryl, or Unsubstituted or substituted 5 to 8 angular heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of N and O,
  • substituted C 6-10 aryl and substituted 5-8 octacyclic heterocycloalkyl are independently C 1-5 straight or branched alkyl, C 1-5 straight or branched alkoxy, and N and O C 6-10 aryl and 5 to 8 hexaheterocycloalkyl substituted with one or more substituents selected from the group consisting of linear or branched alkyl of 6-membered unsubstituted heterocycloalkyl C 1-3 ;
  • G 3 is —H, —OH, halogen, nitro, nitrile, C 1-5 straight or branched alkyl, C 1-5 straight or branched alkoxy, unsubstituted or substituted with one or more nitriles C 6- Aryl of 10 or unsubstituted or substituted 5 to 10 each ring heteroaryl containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S,
  • the substituted 5 to 10 cyclic heteroaryl is a 5 to 10 cyclic heteroaryl substituted with one or more substituents selected from the group consisting of halogen, C 1-5 linear or branched alkyl and nitrile.
  • G 1 is -H, or ego
  • G 2 is or ego
  • G 3 is nitrile, , or to be.
  • the compound represented by Formula 4 may be any one selected from the following compound group:
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 5, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • M 1 is C 6-10 aryl unsubstituted or substituted with one or more halogens
  • M 2 is unsubstituted 6 to 8 angular heteroaryl containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S;
  • M 3 is an unsubstituted 6 to 8 pentagonal heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms selected from the group consisting of N, O and S.
  • the compound represented by Formula 5 may be the following compound:
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 6, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • Q 1 is —H, amino, C 1-5 straight or branched alkyl, or C 1-5 straight or branched alkoxy;
  • Q 2 is —H, unsubstituted C 6-10 cycloalkyl
  • Q 3 is —H, C 1-5 straight or branched alkyl, or C 1-5 straight or branched alkoxy
  • Q 4 is at least one N, and is a 5-membered heteroaryl substituted with one methyl.
  • the compound represented by Formula 6 may be the following compound:
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 7, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • T 1 is —H, C 1-5 straight or branched alkyl, or unsubstituted C 3-8 cycloalkylcarbonyl.
  • the compound represented by Formula 7 may be the following compound:
  • the LRRK2 protein inhibitor may be a compound represented by Formula 8, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • Z 1 is —H, amino, C 1-5 straight or branched alkyl, or C 1-5 straight or branched alkoxy;
  • Z 2 comprises at least one N, and is 5 to 8 angular heteroaryl substituted with one C 1-5 straight or branched alkyl;
  • Z 3 is a straight or branched chain alkoxy of straight or branched chain alkyl, or C 1-5 of -H, or C 1-5.
  • the compound represented by Formula 8 may be the following compound:
  • the pharmaceutical composition according to the present invention can be used to treat brain cancer, specifically brain cancer in which LRRK2 protein is expressed or activated.
  • the activity of the LRRK2 protein may be indicated by phosphorylation of the LRRK2 protein.
  • the LRRK2 protein inhibitor according to the present invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, in which acid addition salts formed by pharmaceutically acceptable free acid are useful.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid, phosphorous acid, aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes.
  • Non-toxic organic acids such as dioate, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, and the like, and organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid and the like.
  • Such pharmaceutically nontoxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide and iodide.
  • the acid addition salts according to the present invention can be prepared by conventional methods, for example, by dissolving derivatives of LRRK2 protein inhibitors in organic solvents such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile and adding organic or inorganic acids.
  • organic solvents such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile and adding organic or inorganic acids.
  • the precipitate may be prepared by filtration and drying, or the solvent and excess acid may be distilled under reduced pressure, dried, and crystallized in an organic solvent.
  • the LRRK2 protein inhibitors of the present invention can be made as pharmaceutically acceptable metal salts using bases.
  • the alkali metal or alkaline earth metal salts can be obtained, for example, by dissolving the compound in an excess alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt.
  • Corresponding salts may also be obtained by reacting alkali or alkaline earth metal salts with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).
  • the LRRK2 protein inhibitor, the optical isomer thereof, or the pharmaceutically acceptable salt thereof can be administered in various dosage forms, orally or parenterally, in the case of clinical administration.
  • Formulations for oral administration include, for example, tablets, pills, hard / soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, granules, elixirs, troches, and the like. , Dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and / or glycine), glidants such as silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salts and / or polyethylene glycols.
  • Tablets may contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine and the like, optionally disintegrating agents such as starch, agar, alginic acid or its sodium salt or the like, or Boiling mixtures, absorbents, colorants, flavoring agents, and sweetening agents.
  • binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine and the like
  • disintegrating agents such as starch, agar, alginic acid or its sodium salt or the like, or Boiling mixtures, absorbents, colorants, flavoring agents, and sweetening agents.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a first component containing a pharmaceutically treatable amount of an LRRK2 protein inhibitor as an active ingredient; And it provides a pharmaceutical kit for preventing or treating brain cancer comprising a second component containing a pharmaceutically treatable amount of Avastin as an active ingredient.
  • the first component and the second component may be administered sequentially or simultaneously.
  • the second component may be administered about 30 minutes to 180 minutes, 60 minutes to 120 minutes, 80 minutes to 100 minutes before or after administration of the first component.
  • the second component may be administered 90 minutes after the administration of the first component.
  • Concomitant administration of the first component and the second component included in the pharmaceutical kit can increase anticancer activity against brain cancer.
  • the administration may be to a mammal, specifically to a human.
  • the present invention also provides a method of treating brain cancer comprising administering an LRRK2 protein inhibitor to a subject.
  • the LRRK2 protein may have the characteristics as described above, and a detailed description thereof will be omitted.
  • the subject may be a mammal, specifically a human.
  • compositions comprising an LRRK2 protein inhibitor, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient according to the present invention may be administered parenterally, and parenteral administration may be administered by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or It can be administered via intrathoracic injection.
  • the LRRK2 protein inhibitor, its optical isomer, or pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed with water with a stabilizer or buffer to prepare a solution or suspension into a solution or suspension in order to be formulated into a parenteral formulation. It may be prepared in a dosage form.
  • the composition is sterile and may further contain preservatives, stabilizers, emulsifiers or emulsifiers, auxiliaries such as salts and buffers for the control of osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, and mixing, granulating or It may be formulated according to the coating method.
  • the dosage to the human body of a pharmaceutical composition comprising the LRRK2 protein inhibitor of the present invention, its optical isomer, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient is determined by the age, weight, sex, dosage form, health condition and Depending on the extent of the disease, based on an adult patient weighing 70 Kg, generally 0.1-1000 mg / day, preferably 1-500 mg / day, and also at the discretion of the physician or pharmacist It may be administered once a day to divided doses at regular time intervals.
  • the present invention comprises the steps of administering to the subject an LRRK2 protein inhibitor; And administering avastin to the subject.
  • the LRRK2 protein may have the characteristics as described above, and a detailed description thereof will be omitted.
  • LRRK2 protein inhibitor and avastin may be administered sequentially or simultaneously.
  • Avastin may be administered about 30 minutes to 180 minutes, 60 minutes to 120 minutes, and 80 minutes to 100 minutes of the LRRK2 protein inhibitor.
  • avastin may be administered 90 minutes after the LRRK2 protein inhibitor.
  • Concomitant administration of the LRRK2 protein inhibitor and Avastin can increase anticancer activity against brain cancer.
  • the administration may be to a mammal, specifically to a human.
  • the present invention provides the use of an LRRK2 protein inhibitor for use in the manufacture of a pharmaceutical composition for the treatment of brain cancer.
  • the present invention was first identified that the LRRK2 protein inhibitor has an effect capable of significantly inhibiting tumor formation by easily passing through the blood brain barrier, which is difficult for general drugs to pass, and the experimental results related thereto will be described in detail through the following experimental examples. do.
  • Step 1 After dissolving 2,4-dichloro-5-iodopyrimidine (1.0 equiv) in THF, methylamine (3.5 wt% in EtOH, 1.1 equiv) was added at 0 ° C. The mixture was stirred at 0 ° C. for 2 hours, then the solvent was removed and used in the next step without further purification (yield: 100%).
  • Step 2 After filling the two-necked round-bottom flask with nitrogen, CuI (5.0 equiv) and KF (5.0 equiv) were added. The mixture was heated to 150 ° C. and then stirred under reduced pressure for 2 hours. After the reaction, the temperature was lowered to room temperature and trimethyl (trifluoromethyl) silane (5.0 equiv) dissolved in DMF / NMP (1: 1) under nitrogen was added using a syringe. After reacting for 30 minutes, 2-chloro-5-iodo-N-methylpyrimidin-4-amine (1.0 equiv) dissolved in DMF / NMP (1: 1) was added using a syringe, and 50 ° C. Reaction was carried out for 18 hours.
  • Table 1 shows the structure of the compound prepared in Example 1-22.
  • Example Chemical structure Example Chemical structure One 12 2 13 3 14 4 15 5 16 6 17 7 18 8 19 9 20 10 21 11 22
  • LRRK2 protein can be used as a target for the treatment of brain tumors.
  • LRRK2 protein exhibits its activity by phosphorylation. Therefore, the prognostic changes of brain tumor patients due to phosphorylation of LRRK2 protein in brain tumor cells were confirmed.
  • tissue samples were obtained from about 200 patients with stage 3 and 4 brain tumors, and expression of phosphorylated LRRK2 protein in the obtained tissue samples was confirmed by immunostaining.
  • the phosphorylation of the LRRK2 protein increased as the malignancy of the brain tumor, that is, as the brain tumor progressed from stage 3 to stage 4. Therefore, it can be seen from the above that the phosphorylated LRRK2 protein can be used as a target protein for the treatment of brain tumors with high malignancy.
  • the nucleic acid sequence encoding the LRRK2 protein expressed in brain tumor cells was free of specific mutations such as those found mainly in Parkinson's disease, with the exception of previously known monobasic polymorphisms (SNPs). . Therefore, it was confirmed from the above that unlike Parkinson's disease and other types of cancer, in the case of brain tumors, cancer occurs due to overexpression of normal LRRK2 protein.
  • SNPs monobasic polymorphisms
  • a lentiviral vector comprising a polynucleotide encoding the LRRK2 protein (pLenti CMV GFP DEST (736-1), Addgene # 19732) and then infected with 528NS, 464T (Samsung Seoul Hospital, South Korea) and ex-vivo cell lines to confirm the formation of tumors.
  • a lentiviral vector not expressing the LRRK2 protein was infected as a control.
  • the size of the glioma stem cell (GSC) spheres in the 528NS, 464T or ex-vivo cell line infected with the lentiviral expressing the LRRK2 protein compared to the control. From this, it can be seen that the tumor is formed by overexpression of the LRRK2 protein.
  • 7.5x10 5 to 1.0x10 6 NCC01 cells were treated with the compounds prepared in Examples 10, 11, 12, 20, 21 and 22 at concentrations of 100 or 1,000 nM, respectively, and then after 1 day Was collected to evaluate the phosphorylation inhibitory activity against LRRK2 protein via Western Blot.
  • the group which was not treated with the compound of Example was set as a vehicle. The results are shown in FIGS. 5 and 6.
  • the compounds of Examples 10, 11, 12, 20, 21 and 22 according to the present invention is phosphorylated for LRRK2 protein in NCC01 cells, brain cell patient-derived cell line compared to the vehicle (Vehicle) was significantly inhibited.
  • the compound according to the present invention inhibits the phosphorylation of LRRK2 protein expressed in brain tumor patient derived cell line.
  • the experiment was carried out similarly to the evaluation of phosphorylation inhibitory activity against the LRRK2 protein of ⁇ Experimental Example 1>, but the experiment was carried out to confirm in particular the concentration range of the compound of the embodiment according to the present invention is excellent in efficacy.
  • the compound of Example 10 detected phosphorylated LRRK2 protein even at a concentration of 100 nM, while the compound of Example 12 inhibited most of the phosphorylation of LRRK2 protein at concentrations of 50 and 100 nM. .
  • the compound according to the present invention significantly inhibits phosphorylation of LRRK2 protein even at low concentrations of nM units.
  • the experiment was carried out similarly to the evaluation of phosphorylation inhibitory activity of the LRRK2 protein of ⁇ Experimental Example 1>, but the experiment was carried out to determine how the activity changes over time after treating the example compound according to the present invention. .
  • Example A group not treated with a compound was treated as a vehicle. The results are shown in FIGS. 11 and 12.
  • the phosphorylation level of LRRK2 protein rapidly decreased from 1 day after the compound of Example 12 was treated to NCC01 cells, a brain tumor patient-derived cell line, which persisted even after time.
  • the compound of the example according to the present invention inhibits phosphorylation of LRRK2 protein continuously for a long time.
  • 1.0x10 6 NCC01 cells were treated with compounds prepared in Example 12 at concentrations of 50, 100, 500, 1,000 and 2,000 nM, and after one day, samples were collected and collected through Western Blot. Expression of NESTIN protein, a cancer stem cell marker involved in intracellular signal transduction, was confirmed. The group which was not treated with the compound of Example was set as a vehicle. The results are shown in FIGS. 13 to 15.
  • Example 12 inhibits the signal transduction by LRRK2 protein in brain tumor patient derived cells, thereby inhibiting the growth of cells by reducing the expression of NESTIN protein involved in tumor stem cell growth It was confirmed.
  • the LRRK2 protein is located on the outer membrane of the mitochondria and has been reported to be involved in mitochondrial fragmentation and regulation of membrane potential. Therefore, an experiment was performed to determine how the compound that inhibits the LRRK2 protein prepared in the above example affects the function of mitochondria.
  • TMRE tetramethylrhodamine ethylester
  • cells of the control group maintained the activity of mitochondria present in the cells, so that the color development of TMRE dye was clearly seen.
  • the cells treated with the compound of Example 12 were found to not only reduce the color development of the TMRE dye, but also to cause nucleation of the cells present in the cells. From this, the compound of Example 12 according to the present invention was found to affect the death of brain tumor cells by inhibiting the activity of mitochondria.
  • Example 12 the compound prepared in Example 12 is added to the NCC01 cell line, a brain tumor stem cell line at a concentration of 0.1 or 1 ⁇ M, and after 1 day, the mitochondria are stained as described in ⁇ Experiment 9> to function thereof. Change was confirmed. At this time, the group not treated with the compound of the example was treated as a vehicle (Vehicle). The stained results are shown in Figure 17 by a microscope.
  • Example 12 the compound prepared in Example 12 was added to the NCC01 cell line, a brain tumor stem cell line, at a concentration of 100 or 1,000 nM, and after 1 day, TRAP1 protein expression was confirmed by Western Blot. At this time, the group not treated with the compound of the example was treated as a vehicle (Vehicle).
  • the expression of TRAP1 protein was inhibited by the compound of Example 12. From this, it can be seen that the compound according to the present invention inhibits mitochondrial activity by inhibiting the expression of TRAP1 protein.
  • shRNA for the LRRK2 gene was treated therein, and the size of the spheres was confirmed.
  • shRNA for luciferase was used as a control.
  • the sphere size of the NCC01 (a and b) and 528NS (c and d) cell lines exposed to hypoxic conditions was increased compared to the control group, but this was LRRK2 shRNA-1 and shRNA for the LRRK2 gene. It was inhibited by LRRK2 shRNA-2. From this, it was found that GSC produced under hypoxic conditions was inhibited in growth by inhibiting the expression of LRRK2 protein.
  • FACS Fluorescence-activated cell sorting
  • the compounds of Examples 11, 12 and 21 induced apoptosis of NCC01 cells.
  • the compound of Example 12 showed about three times higher cell death rate than the Examples 11 and 21 compounds. From this, it can be seen that the compound of Example 12 according to the present invention is significantly superior to the apoptosis inducing effect compared to the compound of the other examples.
  • NCC01 a brain tumor patient-derived cell line NCC01
  • NCC01 a brain tumor patient-derived cell line NCC01
  • the compound prepared in Example 12 was 10 mg / kg or 60 Oral administration at mg / kg.
  • the survival rate of the mice and the size of tumors generated in the mice were measured using MRI.
  • the group which was not treated with the compound of Example was set as a vehicle. The results are shown in FIGS. 22 and 23.
  • the mean survival time of the mice was 54 days, whereas the group in which the compound of Example 12 was orally administered at 10 mg / kg had an average survival day of 71 days.
  • the compound was not treated, the tumor was formed at the position injected with NCC01 cells, in the group of oral administration of the compound of Example 12 10mg / kg or 60mg / kg of the tumor No formation was observed.
  • orthotopic mouse models were prepared using 5-week old Balb / c-nude mice.
  • U87MG cells ATCC, USA
  • mice were injected with a stereotaxic device at a left side of 2.2 mm, a rear side of 0.5 mm, and a depth of 3.5 mm based on bregma.
  • mice were divided into four groups (Vehicle, Avastin-administered group, or Compound of Example 12 and Avastin-administered group) by 5 mice, and the drug was administered.
  • the compound of Example 12 was orally administered at a dose of 30 mg / kg and Avastin was injected intraperitoneally at a dose of 10 mg / kg. Subsequently, the survival time was measured when the mice showed tumorigenicity such as a reduction of 20% or more of the total body weight or abnormal behavior. As a result, the survival graph shown using the statistical program is shown in FIG.
  • 7.5x10 5 to 1.0x10 6 cells were treated with the compound prepared in Comparative Example at a concentration of 0.1 or 1.0 ⁇ M, respectively, and after 1 day, samples were collected and phosphorylated to LRRK2 protein via Western Blot. Inhibitory activity was evaluated. The group which was not treated with the compound of Example was set as a vehicle. The results are shown in FIG.
  • the comparative compound according to the present invention was known to inhibit LRRK2 protein, but did not inhibit phosphorylation of LRRK2 protein.
  • the compounds of Examples 10, 11, 12, 20, and 21 according to the present invention was compared to the vehicle treated group (Vehicle) compared to phosphorylation of LRRK2 protein in 448T cells, which is a cell line derived from a brain tumor patient Significantly inhibited.
  • the compounds according to the present invention were reconfirmed that they inhibit the phosphorylation of LRRK2 protein expressed in brain tumor patient derived cell lines.
  • the compound of Example 12 mostly inhibited phosphorylation of LRRK2 protein at a concentration of 50 nM.
  • the tumor was formed at the position where 448T cells were injected in the untreated group, which was not treated with the compound, but the tumor was formed in the orally administered compound prepared in Examples 12, 20 and 21 This was not observed.
  • the comparative compound is known to inhibit the LRRK2 protein, unlike the compounds of Examples 1, 11 and 12 according to the present invention was confirmed that it does not inhibit the phosphorylation of LRRK2 protein.
  • the above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
  • tablets are prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
  • the above ingredients are mixed and filled into gelatin capsules to prepare capsules.
  • the amount of the above ingredient is prepared per ampoule (2 ml).
  • each component is added to the purified water to dissolve, the lemon flavor is added appropriately, the above components are mixed, purified water is added, the whole is adjusted to 100 ml by the addition of purified water, and then filled into a brown bottle. Sterilize to prepare the liquid.

Abstract

본 발명은 혈액 뇌관문을 통과할 수 있는 화합물을 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 뇌의 혈액 뇌관문을 효율적으로 통과하여 LRRK2 단백질을 효과적으로 억제하므로, 뇌암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

혈액 뇌관문을 통과할 수 있는 화합물을 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 혈액 뇌관문을 통과할 수 있는 화합물을 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
단백질 키나제는 아데노신삼인산(ATP)의 말단 인산기를 단백질의 특정 잔기인 타이로신, 세린 또는 트레오닌에 전이시키는 반응을 촉매하는 효소로서, 세포 매개체 및 환경의 변화에 대한 세포의 활성이나 성장 및 분화를 조절하는 신호에 관여한다.
부적절하게 높은 단백질 키나제 활성은 비정상적인 세포의 작용으로부터 기인하는 다수의 질병과 직접적 또는 간접적으로 연관이 있다. 예를 들면, 돌연변이, 과잉-발현 또는 부적절한 효소 활성에 관련된 키나제의 적절한 조절 메카니즘의 실패나, 사이토카인, 키나제의 업스트림 또는 다운스트림의 신호 전달에 참여하는 인자들의 과잉생성 또는 결핍에 의해 질병이 야기될 수 있다. 따라서, 키나제 활성의 선택적인 억제는 질병 치료를 위한 신약 개발의 유익한 표적이 될 수 있다.
LRRK2(leucin-rich repeat kinase-2) 단백질은 류신 풍부 반복 키나제 집단(leucin-rich repeat kinase family)에 속하는 단백질이며, 종간 유사성이 높은 2527개의 아미노산 배열로 구성되어 있다. LRRK2 단백질은 하나의 단백질 안에 GTP 가수분해효소(GTPase)와 세린-트레오닌 키나제(Serine-threonine kinase) 활성을 모두 갖는 특징이 있다. 발현된 LRRK2 단백질은 뇌를 포함한 다양한 기관과 조직에서 관찰되고 있으며, 세포수준에서는 세포질 또는 세포막 및 미토콘드리아 외막에서 존재한다.
또한, LRRK2 단백질은 기능상 중요한 5개의 도메인(domain)을 가지고 있어, 자가 인산화 작용(Autophosphorylation)에 의한 자가활성조절작용과 단백질 상호작용 및 효소작용을 통해 세포의 기능을 조절할 것으로 예상된다. 특히, 샤페론 기전(chaperone machinery), 세포골격 배열(cytoskelecton arrangement), 단백질번역기전(protein translational machinery), 시냅스 소포의 세포 내 유입(synaptic vesicle endocytosis), 미토젠-활성화 단백질 키나제 신호 전달과정(mitogen-activated protein kinases signaling cascades) 및 유비퀴틴/오토파지단백질 분해과정(ubiquitin/autophage protein degradation pathways) 등이 LRRK2 단백질에 의해 조절되는 것으로 알려졌다.
LRRK2 단백질은 알츠하이머병과 관련된 경도인지 손상의 전가, L-도파(Dopa) 유도된 운동 이상증, 및 뉴런 전구 분화와 관련된 CNS 장애와 관련됨이 보고되었다. 또한, LRRK2 단백질의 G2019S 돌연변이는 급성 골수성 백혈병(AML)뿐만 아니라, 신장암, 유방암, 폐암, 전립선암 등과 같은 비-피부 암의 발생을 증가시키는 것이 보고되었다. 구체적으로, LRRK2 단백질의 G2019S 돌연변이는 LRRK2 키나제 도메인의 촉매 활성을 증가시킨다. 나아가, LRRK2 단백질은 근위축성 측삭 경화증, 류마티스 관절염 및 강직 척추염과도 관련된 것이 보고되어 있다(국제공개특허 WO 2011/038572).
한편, 뇌종양의 치료방법으로는 외과적 수술, 방사선 치료, 항암약물요법(화학요법), 호르몬 요법 등이 있다. 그 중에서 주로 외과적 수술과 방사선 치료에 의존해 왔으나, 특히 방사선 치료는 신경 독성과 치매 등 부작용이 동반되는 문제가 있다. 따라서, 이와 같은 문제점을 해소하기 위하여 항암 약물요법(화학요법)이 주목받고 있으나, 뇌종양의 치료를 위한 약물요법은 '혈액 뇌관문(Blood-brain barrier, BBB)'이라는 특수보호체계에 막혀 뇌까지 전달될 수 없는 약물이 다수이고, 항암제에 대한 암의 저항성 등으로 인해 제한적이다.
한편, 본 발명자는 LRRK2 단백질의 저해제로 사용되는 화합물이 혈액 뇌관문(BBB)을 효율적으로 통과하여 뇌암의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 in vivo 실험을 통해 최초로 규명하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 혈액 뇌관문을 효율적으로 통과하여 뇌암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 LRRK2 단백질 저해제를 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 약제학적으로 치료가능한 양의 LRRK2 단백질 저해제를 유효성분으로 함유하는 제1성분; 및 약제학적으로 치료가능한 양의 아바스틴을 유효성분으로 함유하는 제2성분을 포함하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 LRRK2 단백질 저해제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 뇌암을 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 LRRK2 단백질 저해제를 개체에 투여하는 단계; 및 아바스틴을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 뇌암을 치료하는 방법을 제공한다.
나아가, 본 발명은 뇌암의 치료를 위한 약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 LRRK2 단백질 저해제의 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 LRRK2 단백질 저해제를 유효성분으로 함유하며, 일반적인 약물이 통과하기 어려운 혈액 뇌관문을 용이하게 통과하여 종양 형성을 현저히 억제하는 효과가 있다.
도 1은 뇌종양 환자로부터 수득된 암 조직에서 LRRK2 단백질이 발현되는 것을 Western Blot으로 확인한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 2는 LRRK2 단백질에 대한 인산화와 뇌종양의 악성도와의 상관관계를 확인한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 3은 뇌종양 세포에서 발현된 LRRK2 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 분석한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 4a는 LRRK2 단백질을 발현하는 렌티바이러스 벡터의 구조를 나타내는 모식도이다.
도 4b는 LRRK2 단백질을 발현하는 렌티바이러스 벡터로 감염된 세포에서 LRRK2 단백질의 과발현을 확인한 이미지이다.
도 4c는 LRRK2 단백질을 발현하는 렌티바이러스 벡터로 감염된 세포에서 종양세포의 자기복제능을 확인한 이미지이다.
도 5a는 실시예 10, 11, 12, 20 및 22 화합물을 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 5b는 실시예 11, 12, 20, 21 및 22 화합물을 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 6은 실시예 10, 11, 12, 20 및 22 화합물을 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 7 및 8은 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 실시예 10의 화합물을 다양한 농도로 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 9 및 10은 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 실시예 12의 화합물을 다양한 농도로 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 11 및 12는 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 실시예 12의 화합물을 100 nM 농도로 처리하고, 시간이 경과함에 따라 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 13 내지 15는 NCC01 세포에 실시예 12의 화합물을 50 nM 내지 2,000 nM의 농도 범위로 처리하고 1일이 경과한 후 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 16은 실시예 12의 화합물이 미토콘드리아의 활성을 억제함으로써 뇌종양 세포의 사멸을 유도함을 확인한 이미지이다.
도 17은 실시예 12의 화합물이 뇌종양 줄기세포에 존재하는 미토콘드리아의 활성을 억제하는 것을 확인한 이미지이다.
도 18은 실시예 12의 화합물 TRAP1 단백질의 발현을 억제함으로써 미토콘드리아의 할성을 억제함을 확인한 이미지이다.
도 19a는 저산소 조건에 노출된 NCC01 세포주로부터 형성된 구의 성장이 LRRK2 유전자에 대한 shRNA에 의해 억제되는 것을 확인한 이미지이다
도 19b는 저산소 조건에 노출된 NCC01 세포주에서 LRRK2 단백질의 발현을 Western Blot으로 확인한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 19c는 저산소 조건에 노출된 528NS 세포주로부터 형성된 구의 성장이 LRRK2 유전자에 대한 shRNA에 의해 억제되는 것을 확인한 이미지이다
도 19d는 저산소 조건에 노출된 528NS 세포주에서 LRRK2 단백질의 발현을 Western Blot으로 확인한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 20 및 21은 NCC01 세포에 실시예 11, 12 및 21 화합물을 각각 100 nM의 농도로 처리하고 1일이 경과한 후 확인되는 cell cycle FACS 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 22는 뇌종양이 유도된 마우스 모델에 대하여 실시예 12 화합물을 경구투여하였을 때 생존일 변화를 관찰한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 23는 뇌종양이 유도된 마우스 모델에 대하여 실시예 12 화합물을 경구투여하였을 때 종양 크기의 변화를 측정한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 24는 실시예 12의 화합물을 아바스틴과 병용처리하였을 때, 뇌종양 치료 효과가 증가하는 것을 확인한 이미지이다.
도 25는 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 비교예 화합물을 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 26은 실시예 10, 11, 12, 20 및 21 화합물을 뇌종양 환자 유래 세포주인 448T 세포에 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 27은 뇌종양 환자 유래 세포주인 448T 세포에 실시예 12의 화합물을 다양한 농도로 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
도 28은 뇌종양이 유도된 마우스 모델에 대하여 실시예 12, 20 및 21 화합물을 경구투여하였을 때 생존일 변화를 관찰한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 29는 뇌종양 환자 유래 세포주인 448T 세포에 비교예 화합물과 실시예 1, 11 및 12의 화합물을 처리하였을 경우 확인되는 Western Blot 평가 결과를 나타내는 이미지이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 LRRK2(Leucine Rich Repeat Kinase 2) 단백질 저해제를 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
하나의 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000001
상기 화학식 1에서,
R1은 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노, 또는 디C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노이고;
R2는 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, 또는 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이거나, R3와 함께 연결되어 N을 하나 이상 포함하는 비치환, 치환 또는 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬, 또는 N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴을 형성하고,
여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬 및 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴은 독립적으로 -OH, =O, 할로겐 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬 및 5 내지 6 각환의 헤테로아릴이고,
여기서, 상기 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 비치환된 C6-10의 아릴이 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
R3는 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노, 디C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬설포닐 C6-10 아릴아미노, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬설포닐아미노 C6-10 아릴아미노이거나, R2와 함께 연결되어 N을 하나 이상 포함하는 비치환, 치환 또는 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬을 형성하고,
여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 독립적으로 -OH, =O, 할로겐 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
여기서, 상기 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 비치환된 C6-10의 아릴이 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
Y는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000002
또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000003
이고,
상기 R4, R5 및 R6은 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬, N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬카보닐이고,
여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 디C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노 또는 하나 이상의 N을 포함하며 하나 이상의 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬이 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
상기 R7, R8 및 R9는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, 비치환 또는 하나 이상의 하이드록시가 치환된 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 -OH, =O, 할로겐 및 O를 하나 포함하는 4 내지 5 각환의 비치환된 헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이다.
바람직하게,
R1은 -H, 또는 -NH(CH3)이고;
R2는 -H, 할로겐, 또는 -CF3이거나, R3와 함께 연결되어
Figure PCTKR2018002241-appb-I000004
를 형성하고;
R3는 -H, -NH(CH3), -NH(CH2CH3),
Figure PCTKR2018002241-appb-I000005
, 또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000006
이거나, R2와 함께 연결되어
Figure PCTKR2018002241-appb-I000007
또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000008
를 형성하고;
Y는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000009
또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000010
이고,
상기 R4, R5 및 R6은 독립적으로 -H, 메톡시, 할로겐,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000011
,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000012
,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000013
또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000014
이고,
상기 R7, R8 및 R9는 독립적으로 -H, 메틸, 할로겐,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000015
또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000016
이다.
더욱 바람직하게, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다:
(1) 5-클로로-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)-N2-(2-메톡시-4-(4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일)페닐)피리미딘-2,4-디아민;
(2) N-(2-(2-(3-클로로-4-메톡시페닐아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일아미노)페닐)메탄설폰아미드;
(6) (4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)(3-메톡시-4-(4-(메틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)페닐)메타논;
(8) N4-에틸-N2-(1-(3-플루오로-1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일)-3-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2,4-디아민;
(10) 2-[(2-메톡시-4-[[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]카보닐]페닐)아미노]-5,11-디메틸-5,11-디하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]벤조디아제핀-6-온;
(11) (4-(4-(에틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)(모폴리노)메타논;
(12) (3-메톡시-4-(4-(메틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)페닐)(모폴리노)메타논;
(14) 1-(5-클로로-4-(4-(메틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판-2-올; 및
(16) N2-(5-클로로-1-((3S,4R)-3-플루오로-1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-N4-메틸-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2,4-디아민.
다른 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
[화학식 2]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000017
상기 화학식 2에서,
L1 및 L2는 독립적으로 -O-, -CH2-, -NH-, 또는 -S-이고;
A1은 비치환 또는 치환된 C3-10의 사이클로알킬이고, 여기서, 상기 치환된 C3-10의 사이클로알킬은 -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C3-10의 사이클로알킬이고;
A2는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴이고, 여기서, 상기 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴은 -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴이고;
A3, A4 및 A5는 독립적으로 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이다.
바람직하게, L1 및 L2는 독립적으로 -CH2-, -NH-, 또는 -S-이고;
A1은
Figure PCTKR2018002241-appb-I000018
또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000019
이고;
A2는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000020
이고;
A3, A4 및 A5는 독립적으로 -H 또는 메틸이다.
더욱 바람직하게, 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다:
(7) (S)-3-(사이클로프로필티오)-7-메틸-1-(1H-피라졸-3-일)-6,7-디하이드로티에노[3,4-c]피리딘-4(5H)-온; 및
(9) 3-(사이클로펜틸티오)-6,6-디메틸-1-(1H-피라졸-3-일)-6,7-디하이드로벤조[c]티오펜-4(5H)-온.
또 다른 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
[화학식 3]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000021
상기 화학식 3에서,
L3은 부재, -NH-, 또는 -O-이고;
L4는 N, 또는 C이고;
E1은 -H, -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
E2는 상기 L4가 N일 경우 부재이고, 상기 L4가 C일 경우
Figure PCTKR2018002241-appb-I000022
이고, 상기 E5는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
E3은 -H, -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6-10의 사이클로알킬, 또는 N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
여기서, 상기 치환된 C6-10의 사이클로알킬 및 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 독립적으로 -OH, 할로겐, C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 및 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C6-10의 사이클로알킬 및 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
E4는 N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬카보닐 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로아릴이고,
여기서, 상기 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬 및 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로아릴은 독립적으로 C6-10의 아릴, N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬이 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
여기서, 상기 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬은 -OH, 할로겐, 또는 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬이다.
바람직하게, L3은 부재, -NH-, 또는 -O-이고;
L4는 N, 또는 C이고;
E1은 -H, 또는 메틸이고;
E2는 상기 L4가 N일 경우 부재이고, 상기 L4가 C일 경우
Figure PCTKR2018002241-appb-I000023
이고;
E3은 -H,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000024
, 또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000025
이고;
E4는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000026
,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000027
,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000028
, 또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000029
이다.
더욱 바람직하게, 상기 화학식 3으로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다:
(3) (R)-3-(4-(사이클로헥실아미노)-1H-피라졸[4,3-c]피리딘-3-일)-1-(3-페닐피페리딘-1-일)프로판-1-온;
(5) 4-(4-(6-메틸-4-(테트라하이드로-2H-파이란-4-일옥시)-1H-피라졸[4,3-c]피리딘-3-일)피리딘-2-일)모르폴린;
(18) 3-(6-(4-(2-플루오로에틸)피페라진-1-일)피리미딘-4-일)-5-(1-메틸사이클로프로폭시)-1H-인다졸; 및
(20) (2S,6R)-2,6-디메틸-4-(6-(5-(1-메틸사이클로프로폭시)-1H-인다졸-3-일)피리미딘-4-일)모르폴린.
또 다른 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 4로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
[화학식 4]
[화학식 4]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000030
(상기 화학식 4에서,
α는 -CH=, 또는 -N=이고;
G1은 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴아미노이고,
여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴은 -OH, 할로겐 또는 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴이고;
G2는 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6-10의 아릴, 또는 N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
여기서, 상기 치환된 C6-10의 아릴 및 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 독립적으로 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 및 N 및 O를 포함하는 6 각환의 비치환된 헤테로사이클로알킬 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C6-10의 아릴 및 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
G3은 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 하나 이상의 나이트릴이 치환된 C6-10의 아릴, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 10 각환의 헤테로아릴이고,
여기서, 상기 치환된 5 내지 10 각환의 헤테로아릴은 할로겐, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 나이트릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환체가 치환된 5 내지 10 각환의 헤테로아릴이다.
바람직하게,
G1은 -H, 또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000031
이고;
G2는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000032
또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000033
이고;
G3은 나이트릴,
Figure PCTKR2018002241-appb-I000034
, 또는
Figure PCTKR2018002241-appb-I000035
이다.
더욱 바람직하게, 상기 화학식 4로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다:
(19) 6-(1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-4-(3-메틸-4-(모폴리노메틸)페닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보나이트릴;
(21) 3-(4-모르포리노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)벤조니트릴; 및
(22) 1-메틸-4-(4-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-1H-피롤-2-카보나이트릴.
또 다른 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 5로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
[화학식 5]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000036
상기 화학식 5에서,
M1은 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C6-10의 아릴이고;
M2는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환된 6 내지 8 각환의 헤테로아릴이고; 및
M3는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이다.
바람직하게는, 상기 화학식 5로 표시되는 화합물은 하기 화합물일 수 있다:
(4) 2-(4-플루오로벤질옥시)-5-(1-(2-모폴리노에틸)-1H-피라졸-4-일)-N-(피리딘-3-일)벤즈아미드.
또 다른 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 6으로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
[화학식 6]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000037
상기 화학식 6에서,
Q1은 -H, 아미노, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
Q2는 -H, 비치환된 C6-10의 사이클로알킬이고;
Q3은 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고; 및
Q4는 N을 하나 이상 포함하며, 하나의 메틸이 치환된 5 각환의 헤테로아릴이다.
바람직하게, 상기 화학식 6으로 표시되는 화합물은 하기 화합물일 수 있다:
(13) (R)-4-(1-사이클로프로필에틸아미노)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)신놀린-3-카복스아미드.
또 다른 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 7로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다.
[화학식 7]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000038
상기 화학식 7에서,
T1은 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 비치환된 C3-8의 사이클로알킬카보닐이다.
바람직하게, 상기 화학식 7로 표시되는 화합물은 하기 화합물일 수 있다:
(15) 사이클로프로필[10,11,14,15-테트라하이드로-1,16-에테노-4,8-(메테노)피라졸[3,4-j][1,4,7,9]옥사트리아자사이클로헥사데신-12(13H)-일]메타논.
또 다른 일례로, 상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 8로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
[화학식 8]
Figure PCTKR2018002241-appb-I000039
상기 화학식 8에서,
Z1은 -H, 아미노, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
Z2는 N을 하나 이상 포함하며, 하나의 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴이고; 및
Z3는 -H, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이다.
바람직하게, 상기 화학식 8로 표시되는 화합물은 하기 화합물일 수 있다:
(17) (4-(6-아미노-5-(1-이소프로필-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-3-일)-2-메톡시페닐)(모폴리노)메타논.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 뇌암, 구체적으로 LRRK2 단백질이 발현되거나 활성화된 뇌암을 치료하는데 사용될 수 있다. 상기 LRRK2 단백질의 활성을 LRRK2 단백질이 인산화됨으로써 나타날 수 있다.
본 발명에 따른 LRRK2 단백질 저해제는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 이때 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다.
산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻을 수 있다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류에는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등이 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 LRRK2 단백질 저해제의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 LRRK2 단백질 저해제는 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염으로서 만들어질 수 있다. 구체적으로, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에서, 상기 LRRK2 단백질 저해제, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유할 수 있다. 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 등과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.
나아가, 본 발명은 약제학적으로 치료가능한 양의 LRRK2 단백질 저해제를 유효성분으로 함유하는 제1성분; 및 약제학적으로 치료가능한 양의 아바스틴을 유효성분으로 함유하는 제2성분을 포함하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 키트를 제공한다.
본 발명의 약학적 키트는 뇌암의 예방 또는 치료를 위하여, 제1성분 및 제2성분이 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 제1성분 및 제2성분이 순차적으로 투여되는 경우, 제1성분의 투여 30분 내지 180분, 60분 내지 120분, 80분 내지 100분 전후로 제2성분을 투여할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면 제1성분의 투여 90분 후에 제2성분을 투여할 수 있다.
상기 약학적 키트에 포함된 제1성분 및 제2성분을 병용 투여하면 뇌암에 대한 항암 활성을 증대시킬 수 있다. 상기 투여는 포유동물, 구체적으로 인간에게 투여되는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 LRRK2 단백질 저해제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 뇌암을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 LRRK2 단백질은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있으며 상세한 설명은 생략한다. 상기 개체는 포유동물, 구체적으로 인간일 수 있다.
본 발명에 따른 LRRK2 단백질 저해제, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여될 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 통해 투여될 수 있다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 LRRK2 단백질 저해제, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질이 추가로 함유될 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화될 수 있다.
또한, 본 발명의 LRRK2 단백질 저해제, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 Kg인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1-1000 mg/일이며, 바람직하게는 1-500 mg/일이며, 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여될 수도 있다.
또한, 본 발명은 LRRK2 단백질 저해제를 개체에 투여하는 단계; 및 아바스틴을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 뇌암을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 LRRK2 단백질은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있으며 상세한 설명은 생략한다.
본 발명의 뇌암을 치료하는 방법은 뇌암의 치료를 위하여, LRRK2 단백질 저해제 및 아바스틴이 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 LRRK2 단백질 저해제 및 아바스틴이 순차적으로 투여되는 경우, LRRK2 단백질 저해제의 투여 30분 내지 180분, 60분 내지 120분, 80분 내지 100분 전후로 아바스틴을 투여할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면 LRRK2 단백질 저해제의 투여 90분 후에 아바스틴을 투여할 수 있다.
상기 LRRK2 단백질 저해제 및 아바스틴을 병용 투여하면 뇌암에 대한 항암 활성을 증대시킬 수 있다. 상기 투여는 포유동물, 구체적으로 인간에게 투여되는 것일 수 있다.
나아가, 본 발명은 뇌암의 치료를 위한 약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 LRRK2 단백질 저해제의 용도를 제공한다.
본 발명은 LRRK2 단백질 저해제가 일반적인 약물이 통과하기 어려운 혈액 뇌 관문을 용이하게 통과하여 종양 형성을 현저히 억제할 수 있는 효과가 있음을 최초로 규명하였으며, 이와 관련한 실험 결과는 후술하는 실험예를 통해 상세히 설명한다.
이하, 본 발명을 후술하는 실시예와 실험예를 통해 상세히 설명한다.
단, 후술하는 실시예와 실험예는 본 발명을 일부 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 5- 클로로 -N4-(2-( 이소프로필설포닐 )페닐)-N2-(2- 메톡시 -4-(4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일)페닐)피리미딘-2,4-디아민의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000040
표제 화합물을 WO 2004080980, WO 2005016894, WO 2009102446, WO 2012019132 또는 WO 2015077602 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 2> N-(2-(2-(3- 클로로 -4- 메톡시페닐아미노 )-5- 플루오로피리미딘 -4-일아미노)페닐)메탄설폰아미드의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000041
표제 화합물을 WO 2009127642 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 3> (R)-3-(4-( 사이클로헥실아미노 )-1H- 피라졸[4,3-c]피리딘 -3-일)-1-(3-페닐피페리딘-1-일)프로판-1-온의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000042
표제 화합물을 WO 2010106333 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 4> 2-(4- 플루오로벤질옥시 )-5-(1-(2- 모폴리노에틸 )-1H- 피라졸 -4-일)-N-(피리딘-3-일)벤즈아미드의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000043
표제 화합물을 WO 2011038572 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 5> 4-(4-(6- 메틸 -4-( 테트라하이드로 -2H-파이란-4- 일옥시 )-1H- 피라졸[4,3-c]피리딘 -3-일)피리딘-2-일)모르폴린의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000044
표제 화합물을 WO 2011141756 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 6> (4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)(3- 메톡시 -4-(4-( 메틸아미노 )-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)페닐)메타논의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000045
표제 화합물을 WO 2011151360 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 7> (S)-3-( 사이클로프로필티오 )-7- 메틸 -1-(1H- 피라졸 -3-일)-6,7- 디하이드로티에노[3,4-c]피리딘 -4(5H)-온의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000046
표제 화합물을 WO 2012058193 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 8> N4-에틸-N2-(1-(3- 플루오로 -1-( 옥세탄 -3-일)피페리딘-4-일)-3-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2,4-디아민의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000047
표제 화합물을 WO 2012062783 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 9> 3-( 사이클로펜틸티오 )-6,6-디메틸-1-(1H- 피라졸 -3-일)-6,7- 디하이드로벤조[c]티오펜 -4(5H)-온의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000048
표제 화합물을 WO 2012118679 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 10> 2-[(2-메톡시-4-[[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]카보닐]페닐)아미노]-5,11-디메틸-5,11-디하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]벤조디아제핀-6-온의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000049
표제 화합물을 WO 2010080712 또는 WO 2015176010 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 11> (4-(4-( 에틸아미노 )-5-( 트리플루오로메틸 )피리미딘-2- 일아미노 )-2-플루오로-5-메톡시페닐)(모폴리노)메타논의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000050
표제 화합물을 WO 2011151360 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 12> (3- 메톡시 -4-(4-( 메틸아미노 )-5-( 트리플루오로메틸 )피리미딘-2-일아미노)페닐)(모폴리노)메타논의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000051
12-1. (3- 메톡시 -4-(4-( 메틸아미노 )-5-( 트리플루오로메틸 )피리미딘-2- 일아미노 )페닐)(모폴리노)메타논의 제조-1
표제 화합물을 WO 2011151360 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
12-2. (3- 메톡시 -4-(4-( 메틸아미노 )-5-( 트리플루오로메틸 )피리미딘-2- 일아미노 )페닐)(모폴리노)메타논의 제조-2
Figure PCTKR2018002241-appb-I000052
단계 1. 2,4-디클로로-5-요오도피리미딘(1.0 당량)을 THF에 녹인 후, 0℃에서 메틸아민(3.5 wt% in EtOH, 1.1 당량)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 뒤, 용매를 제거하고 더 이상의 정제과정 없이 다음 단계에서 사용하였다(수율: 100%).
단계 2. Two-necked round-bottom flask를 질소 기채로 채운 후, CuI(5.0당량) 및 KF(5.0 당량)를 넣었다. 상기 혼합물을 150℃로 온도를 가열한 뒤, 감압 상태에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 후, 온도를 상온으로 낮추고 질소하에서 DMF/NMP(1:1)에 용해된 트리메틸(트리플로로메틸)실란(5.0 당량)을 실린지(syringe)를 이용하여 첨가하였다. 30분 동안 반응시킨 뒤, DMF/NMP(1:1)에 용해된 2-클로로-5-요오도-N-메틸피리미딘-4-아민(1.0 당량)을 실린지를 이용하여 첨가하고, 50℃에서 18시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 상기 반응물에 물을 첨가하여 침전물을 형성시키고, 형성된 침전물을 여과하여 제거하였다. 수득된 여과액으로부터 EtOAc를 이용하여 유기물을 추출하였다(x3). 모아진 유기층은 브라인(brine)으로 세척하고, Na2SO4로 남은 물을 제거하였다. 물이 제거된 혼합물을 MPCL(EtOAc:Hex)를 이용하여 정제함으로써, 노란빛 고체의 목적 화합물을 수득하였다(수율: 70%).
단계 3. 2-클로로-N-메틸-5-(트리프루오로메틸)피리미딘-4-아민(1.0 당량)과 (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논(1.0 당량)을 다이옥세인(dioxane)에 녹이고, 상온에서 p-톨루엔술폰산(p-toluensulfonic acid)(1.0 당량)을 첨가하였다. 이를 100℃에서 16시간 교반한 뒤, 상온으로 식힌다음 용매를 제거하고 얼음물을 첨가하였다. 유기물은 EtOAc를 이용하여 추출하였다(x3). 모아진 유기층은 브라인으로 세척하고, Na2SO4로 남은 물을 제거하였다. 물이 제거된 혼합물을 MPCL(EtOAc:Hex)를 이용하여 정제함으로써, 흰색 고체의 목적 화합물을 수득하였다(수율: 70%).
< 실시예 13> (R)-4-(1- 사이클로프로필에틸아미노 )-7-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)신놀린-3-카복스아미드의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000053
표제 화합물을 WO 2012162254 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 14> 1-(5- 클로로 -4-(4-( 메틸아미노 )-5-( 트리플루오로메틸 )피리미딘-2-일아미노)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판-2-올의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000054
표제 화합물을 WO 2012062783 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 15> 사이클로프로필[10,11,14,15-테트라하이드로-1,16-에테노-4,8-(메테노)피라졸[3,4-j][1,4,7,9]옥사트리아자사이클로헥사데신-12(13H)-일]메타논의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000055
표제 화합물을 WO 2013046029 특허문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 16> N2-(5- 클로로 -1-(( 3S,4R )-3- 플루오로 -1-( 옥세탄 -3-일)피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-N4-메틸-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2,4-디아민의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000056
표제 화합물을 Journal of Medicinal Chemistry (2014), 57(3), 921-936 문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 17> (4-(6-아미노-5-(1-이소프로필-1H-1,2,3- 트리아졸 -4-일)피리딘-3-일)-2-메톡시페닐)(모폴리노)메타논의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000057
표제 화합물을 WO 2014106612 문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 18> 3-(6-(4-(2- 플루오로에틸 )피페라진-1-일)피리미딘-4-일)-5-(1-메틸사이클로프로폭시)-1H-인다졸의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000058
표제 화합물을 WO 2014137723 문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 19> 6-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -3- 일아미노 )-4-(3- 메틸 -4-( 모폴리노메틸 )페닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보나이트릴의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000059
표제 화합물을 WO 2014170248 문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 20> ( 2S,6R )-2,6-디메틸-4-(6-(5-(1- 메틸사이클로프로폭시 )-1H- 인다졸 -3-일)피리미딘-4-일)모르폴린의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000060
표제 화합물을 WO 2014137723 문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 21> 3-(4- 모르포리노 -1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -3-일)벤조니트릴의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000061
표제 화합물을 WO 2015092592 문헌을 참조하여 준비하였다.
< 실시예 22> 1- 메틸 -4-(4- 모르폴리노 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -5-일)-1H-피롤-2-카보나이트릴의 제조
Figure PCTKR2018002241-appb-I000062
표제 화합물을 USA 20140005183 A1 문헌을 참조하여 준비하였다.
하기 표 1에 상기 실시예 1-22에서 준비한 화합물의 구조를 나타내었다.
실시예 화학구조 실시예 화학구조
1
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 12
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2
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 13
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3
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 14
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4
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 15
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5
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 16
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6
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7
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 18
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8
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 19
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9
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 20
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10
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 21
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11
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 22
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< 비교예 > 2- 메틸 -2-[3- 메틸 -4-[[4-( 메틸아미노 )-5-( 트리플루오로메틸 )피리미딘-2-일]아미노]피라졸-1-일]프로판나이트릴
Figure PCTKR2018002241-appb-I000085
표제 화합물을 WO 2012062783 문헌을 참조하여 준비하였다.
<실험예 1> 뇌종양 환자의 암 줄기세포에서 LRRK2 단백질의 발현 확인
뇌종양의 치료를 위한 표적 단백질로서 LRRK2 단백질의 가능성을 확인하기 위해, 19명의 뇌종양 환자로부터 수득한 암조직을 이용하여 Western Blot을 수행하여 LRRK2 단백질의 발현을 확인하였다.
구체적으로, 뇌종양 환자로부터 암조직을 수득한 뒤, Western Blot을 수행하여 LRRK2 단백질의 발현을 확인하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타난 바와 같이, 뇌종양 환자로부터 수득된 암 조직에서 LRRK2 단백질이 발현되는 것을 확인하였고, 이는 뇌종양의 악성도가 높을수록 발현량이 증가하였다. 따라서, 상기로부터 LRRK2 단백질이 뇌종양의 치료에 표적으로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
< 실험예 2> LRRK2 단백질에 대한 인산화에 따른 뇌종양 환자의 예후 변화 확인
LRRK2 단백질은 인산화가 됨으로써 그 활성을 나타낸다. 이에, 뇌종양 세포에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화로 인한 뇌종양 환자의 예후 변화를 확인하였다.
구체적으로, 약 200여 명의 뇌종양 3기 및 4기 환자로부터 조직 샘플을 수득하고, 수득된 조직 샘플에서 인산화된 LRRK2 단백질의 발현을 면역염색을 통해 확인하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, LRRK2 단백질에 대한 인산화는 뇌종양의 악성도가 증가할수록, 다시 말해서 3기에서 4기로 뇌종양이 진행되면서 증가하였다. 따라서, 상기로부터 악성도가 높은 뇌종양의 치료를 위해 인산화된 LRRK2 단백질을 표적 단백질로 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
<실험예 3> LRRK2 단백질의 돌연변이와 뇌종양과의 상관관계 확인
종래의 연구에 의하면, LRRK2 단백질에 발생한 돌연변이에 의해서 다양한 암종이 발생할 수 있고, LRRK2 단백질과 관련된 것으로 알려진 파킨슨 병 또한 LRRK2 단백질의 돌연변이에 의해 발생하는 것이 보고되었다. 이에, 상기 실험예에서 뇌종양 세포에서 과발현된 것으로 확인된 LRRK2 단백질이 이의 돌연변이인지를 확인하였다. 구체적으로, 5명의 환자로부터 수득한 뇌종양 세포를 이용하여 서열분석을 수행하였고, 이때 하기 표 2에 기재된 바와 같은 프라이머를 사용하였다.
명칭 서열(5'→3') 서열번호
LRRK2_F1_For gagcagcggacgttcatg 서열번호 1
LRRK2_F1_rev tatgagctgggaaatggcca 서열번호 2
LRRK2_F1_For_2 gcgggttggaagcaggtg 서열번호 3
LRRK2_F1_rev_2 tcagcatggagagcatcact 서열번호 4
LRRK2_F2_For agtacccagagaatgcagca 서열번호 5
LRRK2_F2_rev gctcccaatagaagcaagca 서열번호 6
LRRK2_F3_For gaactggacatctgctggc 서열번호 7
LRRK2_F3_rev ctcgtgagtgcattctggtg 서열번호 8
LRRK2_F3_For_2 cataggaactggacatctgc 서열번호 9
LRRK2_F3_rev_2 cattctggtgaagctccagc 서열번호 10
LRRK2_F4_For ctcaggcagcgatggaaatt 서열번호 11
LRRK2_F4_rev gacagccaatctcaggagga 서열번호 12
LRRK2_F5_For gctatgcctttcttgcctcc 서열번호 13
LRRK2_F5_rev gcagtgctgggtcttgaaaa 서열번호 14
LRRK2_F6_For cctgtgattctcgttggcac 서열번호 15
LRRK2_F6_rev aggctgctcggtaaactgat 서열번호 16
LRRK2_F7_For ttcctgggttgctggagatt 서열번호 17
LRRK2_F7_rev tcccagacacaatccagctt 서열번호 18
LRRK2_F8_For acttctgcccaggtctttga 서열번호 19
LRRK2_F8_rev tgtgagtaccctttccatgtga 서열번호 20
LRRK2_F1_500F gatctcctcctaacttcag 서열번호 21
LRRK2_F1_700r caatgcagcacatgaagc 서열번호 22
LRRK2_F2_500F gaagtggctgaaagtggctg 서열번호 23
LRRK2_F2_700r gaatatcattcttgaaacac 서열번호 24
LRRK2_F3_500F catcagcttgctcttaagg 서열번호 25
LRRK2_F3_700r gaggctgttccttcttcc 서열번호 26
LRRK2_F5_500F cttataaccgaatgaaac 서열번호 27
LRRK2_F5_700r ctatagaattcctcacgac 서열번호 28
LRRK2_F7_500F ggatcgcctgcttcagcag 서열번호 29
LRRK2_F7_700r cattctacagcagtactg 서열번호 30
LRRK2_F8_500F gctgctcctttgaagatac 서열번호 31
LRRK2_F8_700r gtctaccaccactgttatg 서열번호 32
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 뇌종양 세포에서 발현된 LRRK2 단백질을 코딩하는 핵산 서열은 종래에 알려진 단일염기다형성(SNP)을 제외하고는, 파킨슨병에서 주로 확인되는 것과 같은 특이적인 돌연변이가 없었다. 따라서, 상기로부터 파킨슨 병이나 다른 종류의 암과 달리, 뇌종양의 경우 정상 LRRK2 단백질이 과발현됨으로써 암이 발생하는 것을 확인할 수 있었다.
<실험예 4> LRRK2 단백질의 과발현에 의한 종양 형성능 확인
실험예 3에서 확인된 바와 같이, 뇌종양이 LRRK2 단백질의 과발현에 의해 발생되는지 여부를 확인하기 위해, LRRK2 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 렌티바이러스 벡터(pLenti CMV GFP DEST(736-1), Addgene #19732)를 제조한 뒤, 이를 528NS, 464T(삼성서울병원, 대한민국) 및 ex-vivo 세포주에 각각 감염시켜 종양의 형성을 확인하였다. 이때, LRRK2 단백질을 발현하지 않는 렌티바이러스 벡터를 대조군으로서 감염시켰다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 대조군에 비해 LRRK2 단백질을 발현하는 렌티바이러스로 감염된 528NS, 464T 또는 ex-vivo 세포주에서 GSC(glioma stem cell) 구의 크기가 증가하였다. 이로부터 LRRK2 단백질의 과발현으로 종양이 형성되는 것을 알 수 있었다.
< 실험예 5> 화합물의 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가 ( in vitro)-(1)
in vitro에서 약물 효능 평가를 위해 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포를 이용하여 Western Blot 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, 7.5x105 내지 1.0x106개의 NCC01 세포에 실시예 10, 11, 12, 20, 21 및 22에서 제조된 화합물을 100 또는 1,000 nM의 농도로 각각 처리하고 1일이 경과한 후 샘플을 수집하여 Western Blot을 통해 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제 활성을 평가하였다. 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다. 그 결과를 도 5 및 6에 나타내었다.
도 5 및 6에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 10, 11, 12, 20, 21 및 22의 화합물은 무처리군(Vehicle)에 비해 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 현저히 억제하였다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물이 뇌종양 환자 유래 세포주에서 발현되는 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 억제함을 확인하였다.
< 실험예 6> 화합물의 농도에 따른 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가 (in vitro)-(1)
앞선 <실험예 1>의 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가와 유사하게 실험을 수행하되, 본 발명에 따른 실시예의 화합물이 구체적으로 어떤 농도범위에서 효능이 우수한지를 확인하기 위하여 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, 7.5x105 내지 1.0x106개의 NCC01 세포에 실시예 10 및 12에서 제조된 화합물을 0.5, 1, 5, 10, 50 및 100 nM의 농도로 처리하고, 1일이 경과한 후 샘플을 수집하여 Western Blot을 통해 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제 활성을 평가하였다. 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다. 그 결과를 도 7 내지 10에 나타내었다.
도 7 내지 10에 나타난 바와 같이, 실시예 10의 화합물은 100 nM의 농도에서도 인산화된 LRRK2 단백질이 탐지되었지만, 실시예 12의 화합물은 50 및 100 nM의 농도에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 대부분 억제시켰다.
이로부터, 본 발명에 따른 화합물이 nM 단위의 낮은 농도에서도 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 현저히 억제하는 것을 확인하였다.
< 실험예 7> 화합물의 처리 시간에 따른 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가 (in vitro)
앞선 <실험예 1>의 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가와 유사하게 실험을 수행하되, 본 발명에 따른 실시예 화합물을 처리한 뒤 시간 경과에 따라 활성이 어떻게 변화하는지 확인하기 위하여 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, 7.5x105 내지 1.0x106개의 NCC01 세포에 실시예 12에서 제조된 화합물을 100 nM 농도로 처리하고, 1일, 4일, 8일이 경과한 후, 샘플을 수집하여 Western Blot을 통해 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제 활성을 평가하였다. 실시예 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다. 그 결과를 도 11 및 12에 나타내었다.
도 11 및 12에 나타난 바와 같이, 실시예 12의 화합물을 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포에 처리하고 1일이 경과한 후부터 LRRK2 단백질의 인산화 수준이 급격히 감소하였으며, 이는 시간이 경과한 후에도 지속되었다.
이로부터, 본 발명에 따른 실시예의 화합물이 장기간 지속적으로 LRRK2 단백질의 인산화를 억제하는 것을 확인하였다.
< 실험예 8> LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제로 인한 세포 내 신호전달 경로변화 평가 (in vitro)
암 줄기세포 성장을 위한 세포 내 신호 전달 경로에서 본 발명에 따른 실시예의 화합물이 미치는 영향을 확인하기 위하여 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, 1.0x106개의 NCC01 세포에 실시예 12에서 제조된 화합물을 50, 100, 500, 1,000 및 2,000 nM의 농도로 처리하고, 1일이 경과한 후, 샘플을 수집하여 Western Blot을 통해 세포 내 신호 전달 경로에 관여하는 암 줄기세포 마커인 NESTIN 단백질의 발현을 확인하였다. 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다. 그 결과를 도 13 내지 15에 나타내었다.
도 13 내지 15에 나타난 바와 같이, 실시예 12의 화합물에 의해 NCC01 세포에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화가 억제되었고, 이는 처리된 화합물의 농도에 의존적으로 감소하였다.
이로부터, 본 발명에 따른 실시예 12의 화합물이 뇌종양 환자 유래 세포에서 LRRK2 단백질에 의한 신호 전달을 저해시키고, 이로 인해 종양 줄기세포 성장에 관여하는 NESTIN 단백질의 발현을 감소시켜 세포의 성장을 억제함을 확인하였다.
< 실험예 9> LRRK2 단백질의 활성 억제를 통한 미토콘드리아의 기능 변화 확인
LRRK2 단백질은 미토콘드리아의 외막에 위치하며, 미토콘드리아의 절편화 및 막 막전위(membrane potential)의 조절에 관여하는 것이 보고되어 있다. 따라서, 상기 실시예에서 제조된 LRRK2 단백질을 저해하는 화합물이 미토콘드리아의 기능에 어떠한 영향을 미치는지 확인하는 실험을 수행하였다.
구체적으로, NCC01 세포주에 1 μM의 실시예 12의 화합물을 처리하고 1일이 경과한 후, 활성화된 미토콘드리아에 염색되는 TMRE(tetramethylrhodamine ethylester) 염색약을 첨가하여 미토콘드리아의 기능 변화를 확인하였다. 이때, 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(control)으로 하였다. 염색된 결과를 현미경으로 촬영하여 도 16에 나타내었다.
도 16에 나타난 바와 같이, 대조군의 세포는 세포 내에 존재하는 미토콘드리아의 활성이 유지되어 TMRE 염색약의 발색이 명확하게 나타났다. 그러나, 실시예 12의 화합물을 처리한 세포는 TMRE 염색약의 발색 정도가 감소되었을 뿐만 아니라, 세포 내 존재하는 핵의 절편화가 일어나는 것을 확인하였다. 이로부터 본 발명에 따른 실시예 12의 화합물이 미토콘드리아의 활성을 억제함으로써 뇌종양 세포의 사멸에 영향을 미치는 것을 알 수 있었다.
< 실험예 10> 뇌종양 줄기세포주에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제 활성 평가
종양의 전이와 연관된 것으로 알려진 종양 줄기세포에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 억제함으로써, 줄기세포의 세포사멸을 유도하는지 확인하기 위한 실험을 수행하였다.
구체적으로, 뇌종양 줄기세포주인 NCC01 세포주에 실시예 12에서 제조된 화합물을 0.1 또는 1 μM의 농도로 첨가하고, 1일이 경과한 후, <실험예 9>에 기재된 바와 같이 미토콘드리아를 염색하여 이의 기능 변화를 확인하였다. 이때, 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다. 염색된 결과를 현미경으로 촬영하여 도 17에 나타내었다.
도 17에 나타난 바와 같이 대조군에 비해 실시예 12의 화합물을 처리한 군에서는 뇌종양 줄기세포에 존재하는 미토콘드리아의 활성이 억제되었다. 따라서, 상기로부터 본 발명에 따른 화합물이 미토콘드리아의 활성을 억제함으로써 뇌종양 줄기세포의 사멸을 유도함으로써 종양의 전이를 억제할 수 있음을 확인하였다.
< 실험예 11> 뇌종양 줄기세포주에서 LRRK2 단백질 저해제에 의한 TRAP1 발현 억제 활성 평가
<실험예 10>에서 확인된 본 발명에 따른 LKKR2 단백질의 저해제의 뇌종양 줄기세포주에서 미토콘드리아의 활성을 억제하는 것이, 미토콘드리아의 기능조절에 관여하는 것으로 알려진 TRAP1(TNF receptor associated protein 1) 단백질의 발현 변화에 관여하는지 확인하는 실험을 하였다.
구체적으로, 뇌종양 줄기세포주인 NCC01 세포주에 실시예 12에서 제조된 화합물을 100 또는 1,000 nM의 농도로 첨가하고, 1일이 경과한 후, Western Blot의 방법을 통해 TRAP1 단백질의 발현 변화를 확인하였다. 이때, 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다.
그 결과, 도 18에서 나타난 바와 같이, 실시예 12의 화합물에 의해 TRAP1 단백질의 발현이 억제되었다. 이로부터 본 발명에 따른 화합물이 TRAP1 단백질의 발현을 억제함으로써 미토콘드리아의 활성을 억제함을 알 수 있었다.
<실험예 12> 저산소 조건에서의 LRRK2 단백질 발현 변화 확인
종래의 연구를 통해 GSC의 기능에서 저산소 조건이 중요함이 알려졌다. 따라서, 저산소 조건에서의 LRRK2 단백질의 발현변화와 이의 발현을 억제하였을 때 GSC 구의 크기를 확인하였다.
구체적으로, NCC01 및 528NS 세포주를 저산소 조건에 노출시킨 뒤, 여기에 LRRK2 유전자에 대한 2종류의 shRNA를 처리한 뒤, 구의 크기 변화를 확인하였다. 이때, 대조군으로서는 루시러파제에 대한 shRNA(shNT)를 사용하였다.
이름 서열(5'→3') 서열번호
LRRK2 shRNA-1 CCGGCCACAAATTCAACGGAAAGAACTCGAGTTCTTTCCGTTGAATTTGTGGTTTTT 서열번호 33
LRRK2 shRNA-2 CCGGCCCAAATTGGTGGAACTCTTACTCGAGTAAGAGTTCCACCAATTTGGGTTTTT 서열번호 34
luciferase shRNA CCGGCGCTGAGTACTTCGAAATGTCCTCGAGGACATTTCGAAGTACTCAGCGTTTTT 서열번호 35
그 결과, 도 19에 나타난 바와 같이 저산소 조건에 노출된 NCC01(a 및 b) 및 528NS(c 및 d) 세포주의 구 크기가 대조군에 비해 증가하였으나, 이는 LRRK2 유전자에 대한 shRNA인 LRRK2 shRNA-1 및 LRRK2 shRNA-2에 의해 억제되었다. 이로부터 저산소 조건에서 생성된 GSC가 LRRK2 단백질의 발현 억제에 의해 성장이 억제됨을 알 수 있었다.
< 실험예 13> LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제를 통한 세포사멸 유도 활성 평가 (in vitro)
LRRK2 단백질에 대한 인산화를 억제함으로써 뇌종양 세포의 세포사멸을 유도하는지 여부를 평가하기 위해 FACS(Fluorescence-activated cell sorting)를 이용하여 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, 7.5x105 내지 1.0x106개의 NCC01 세포에 실시예 11, 12 및 21에서 제조된 화합물을 100 nM의 농도로 각각 처리하고, 1일이 경과한 후, 샘플을 수집하여 FACS를 수행함으로써 세포사멸 유도 활성을 평가하였다. 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Control)으로 하였다. 그 결과를 도 20 및 21에 나타내었다.
도 20 및 21에 나타난 바와 같이, 실시예 11, 12 및 21의 화합물이 NCC01 세포의 세포사멸을 유도하였다. 특히, 실시예 12의 화합물이 실시예 11 및 21 화합물에 비해 약 3배 높은 세포사멸률을 보였다. 이로부터, 본 발명에 따른 실시예 12의 화합물이 다른 실시예의 화합물에 비해 세포사멸 유도 효과가 현저히 우수함을 알 수 있었다.
< 실험예 14> 동물 모델에서 화합물의 뇌종양 세포에 대한 성장 억제 활성 평가-(1)
본 발명에 따른 실시예의 화합물이 동물 모델에서 뇌종양 세포에 대한 성장 억제 활성을 나타내는지 확인하기 위하여 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, Balb/c-nude 마우스 모델에 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01를 1.0x104개가 되도록 뇌속에 주입하고, 3일이 경과한 후, 실시예 12에서 제조된 화합물을 10 mg/kg 또는 60 mg/kg으로 경구투여하였다. 화합물을 투여한 이후 생존 기간에 따른 마우스의 생존율과 MRI를 이용하여 상기 마우스에 생성된 종양의 크기를 측정하였다. 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다. 그 결과를 도 22 및 23에 나타내었다.
도 22에 나타난 바와 같이, 무처리군 그룹에서는 마우스의 평균 생존기간이 54일인 반면, 실시예 12의 화합물을 10 mg/kg으로 경구투여한 그룹은 평균 생존일이 71일이고, 실시예 12의 화합물을 60 mg/kg으로 경구투여한 그룹은 모든 개체가 100일까지 생존하였다(Vehicle vs 10mg/kg : p=0.032, Vehicle vs 60mg/kg : p<0.001).
또한, 도 23에 나타난 바와 같이, 화합물을 처리하지 않은 무처리군에서는 NCC01 세포를 주입한 위치에 종양이 형성되었으나, 실시예 12의 화합물을 10mg/kg 또는 60mg/kg 경구투여한 군에서는 종양의 형성이 관찰되지 않았다.
이로부터, 본 발명에 따른 실시예의 화합물은 뇌종양 세포로부터 유래한 종양의 형성을 동물 모델에서 현저히 억제함을 알 수 있었다.
<실험예 15> 화합물 및 아바스틴의 병용처리에 의한 뇌종양 치료 효과 평가
본 발명에 따른 실시예의 화합물을 뇌종양 치료 약물로 처방되고 있는 아바스틴과 병용처리하였을 때, 동물모델에서 그 효과를 확인하기 위해 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, 5주령의 Balb/c-nude 마우스를 이용하여 직립성 마우스 모델(orthotopic mouse model)을 제조하였다. 이때, 뇌종양 세포주인 U87MG 세포(ATCC, 미국)를 정위 방법의 장치(stereotaxic device)를 이용하여 브레그마(bregma)를 기준으로 왼쪽 2.2 ㎜, 뒤쪽 0.5 ㎜ 및 깊이 3.5 ㎜로 주입하였다. 세포를 주입하고 3일 뒤에 마우스를 5마리씩 4개의 군(대조군(Vehicle), 아바스틴 투여군, 또는 실시예 12의 화합물 및 아바스틴 투여군)으로 나누고, 약물을 투여하였다. 실시예 12의 화합물은 30 ㎎/㎏의 투여량을 경구투여하였고, 아바스틴은 10 ㎎/㎏의 투여량을 복강 내로 주사하였다. 이후, 상기 마우스가 전체 몸무게의 20% 이상이 감소하거나 이상행동을 나타내는 등의 종양형성 소견을 보이면 생존기간을 측정하였다. 그 결과, 통계 프로그램을 이용하여 나타낸 생존 그래프를 도 24에 나타내었다.
그 결과, 도 24에 나타난 바와 같이, 실시예 12의 화합물을 아바스틴과 병용처리하는 경우, 아바스틴에 의한 뇌종양 치료 효과가 더욱 현저히 증가하는 것을 알 수 있었다.
< 실험예 16> 비교예 화합물의 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가 (in vitro)
LRRK2 단백질 억제제로서 공지된 화합물인 비교예 화합물의 in vitro에서 약물 효능 평가를 위해 뇌종양 환자 유래 세포주인 NCC01 세포를 이용하여 Western Blot 실험을 수행하였다.
보다 구체적으로, 7.5x105 내지 1.0x106개의 세포에 비교예에서 제조된 화합물을 0.1 또는 1.0 μM의 농도로 각각 처리하고 1일이 경과한 후 샘플을 수집하여 Western Blot을 통해 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제 활성을 평가하였다. 실시예의 화합물을 처리하지 않은 군을 무처리군(Vehicle)으로 하였다. 그 결과를 도 25에 나타내었다.
도 25에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 비교예 화합물은 LRRK2 단백질을 억제하는 것으로 알려져 있으나, LRRK2 단백질의 인산화는 억제하지 못함을 확인하였다.
< 실험예 17> 화합물의 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제 활성 평가 ( in vitro)-(2)
in vitro에서 약물 효능 평가를 위해 뇌종양 환자 유래 세포주인 448T를 이용하여 Western blot 실험을 수행하였다. 실험은 NCC01 세포 대신 448T 세포(삼성서울병원, 대한민국)를 사용하고, 실시예 10, 11, 12, 20 및 21에서 제조된 화합물을 처리한 것을 제외하고는 실험예 5와 동일한 조건 및 방법으로 수행되었다.
그 결과, 도 26에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 10, 11, 12, 20 및 21의 화합물은 무처리군(Vehicle)에 비해 뇌종양 환자 유래 세포주인 448T 세포에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 현저히 억제하였다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물이 뇌종양 환자 유래 세포주에서 발현되는 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 억제함을 재확인하였다.
< 실험예 18> 화합물의 농도에 따른 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가 (in vitro)-(2)
본 발명에 따른 실시예의 화합물이 448T 세포에 대해 구체적으로 어떤 농도범위에서 효능이 우수한지를 확인하기 위하여 실험을 수행하였다. 실험은 NCC01 세포 대신 448T 세포를 사용하고, 실시예 12에서 제조된 화합물을 50, 100, 500, 1,000, 2,000 nM의 농도로 처리한 것을 제외하고는 실험예 6과 동일한 조건 및 방법으로 수행되었다.
그 결과, 도 27에 나타난 바와 같이, 실시예 12의 화합물은 50 nM의 농도에서 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 대부분 억제시켰다.
이로부터, 본 발명에 따른 화합물이 nM 단위의 낮은 농도에서도 LRRK2 단백질에 대한 인산화를 현저히 억제하는 것을 재확인하였다.
< 실험예 19> 동물 모델에서 화합물의 뇌종양 세포에 대한 성장 억제 활성 평가-(2)
본 발명에 따른 실시예의 화합물이 동물 모델에서 뇌종양 세포에 대한 성장 억제 활성을 나타내는지 확인하기 위하여 실험을 수행하였다. 실험은 NCC01 세포 대신 448T 세포를 사용하고, 실시예 12, 20 및 21에서 제조된 화합물을 60 mg/kg으로 경구투여한 것을 제외하고는 실험예 14와 동일한 조건 및 방법으로 수행되었다.
그 결과, 28에 나타난 바와 같이, 화합물을 처리하지 않은 무처리군에서는 448T 세포를 주입한 위치에 종양이 형성되었으나, 실시예 12, 20 및 21에서 제조된 화합물을 경구투여한 군에서는 종양의 형성이 관찰되지 않았다.
이로부터, 본 발명에 따른 실시예의 화합물은 뇌종양 세포로부터 유래한 종양의 형성을 동물 모델에서 현저히 억제함을 재확인하였다.
< 실험예 20> 실시예 및 비교예 화합물의 LRRK2 단백질에 대한 인산화 억제활성 평가 (in vitro)
LRRK2 단백질 억제제로서 공지된 화합물인 비교예 화합물의 in vitro에서 약물 효능을 평가하기 위하여 실험을 수행하였다. 실험은 NCC01 세포 대신 448T 세포를 사용하고, 실시예 1, 11 및 12에서 제조된 화합물을 처리한 것을 제외하고는 실험예 16과 동일한 조건 및 방법으로 수행되었다.
그 결과, 도 29에 나타난 바와 같이, 비교예 화합물은 LRRK2 단백질을 억제하는 것으로 알려져 있으나, 본 발명에 따른 실시예 1, 11 및 12 화합물과 달리 LRRK2 단백질의 인산화는 억제하지 못함을 확인하였다.
<제제예 1> 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
본 발명의 LRRK2 단백질 저해제 500 ㎎
유당 100 ㎎
탈크 10 ㎎
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
1-2. 정제의 제조
본 발명의 LRRK2 단백질 저해제 500 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
1-3. 캅셀제의 제조
본 발명의 LRRK2 단백질 저해제 500 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
1-4. 주사제의 제조
본 발명의 LRRK2 단백질 저해제 500 ㎎
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
1-5. 액제의 제조
본 발명의 LRRK2 단백질 저해제 100 ㎎
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액체를 제조한다.

Claims (26)

  1. LRRK2(Leucine Rich Repeat Kinase 2) 단백질 저해제를 유효성분으로 함유하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000086
    (상기 화학식 1에서,
    R1은 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노, 또는 디C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노이고;
    R2는 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, 또는 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이거나, R3와 함께 연결되어 N을 하나 이상 포함하는 비치환, 치환 또는 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬, 또는 N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴을 형성하고,
    여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬 및 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴은 독립적으로 -OH, =O, 할로겐 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬 및 5 내지 6 각환의 헤테로아릴이고,
    여기서, 상기 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 비치환된 C6-10의 아릴이 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
    R3는 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노, 디C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬설포닐 C6-10 아릴아미노, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬설포닐아미노 C6-10 아릴아미노이거나, R2와 함께 연결되어 N을 하나 이상 포함하는 비치환, 치환 또는 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬을 형성하고,
    여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 독립적으로 -OH, =O, 할로겐 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
    여기서, 상기 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 비치환된 C6-10의 아릴이 융합된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
    Y는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000087
    또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000088
    이고,
    상기 R4, R5 및 R6은 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬, N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬카보닐이고,
    여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 디C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬아미노 또는 하나 이상의 N을 포함하며 하나 이상의 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬이 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
    상기 R7, R8 및 R9는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, 비치환 또는 하나 이상의 하이드록시가 치환된 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
    여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 -OH, =O, 할로겐 및 O를 하나 포함하는 4 내지 5 각환의 비치환된 헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이다).
  3. 제2항에 있어서,
    R1은 -H, 또는 -NH(CH3)이고;
    R2는 -H, 할로겐, 또는 -CF3이거나, R3와 함께 연결되어
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000089
    또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000090
    를 형성하고;
    R3는 -H, -NH(CH3), -NH(CH2CH3),
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000091
    , 또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000092
    이거나, R2와 함께 연결되어
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000093
    를 형성하고;
    Y는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000094
    또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000095
    이고,
    상기 R4, R5 및 R6은 독립적으로 -H, 메톡시, 할로겐,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000096
    ,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000097
    ,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000098
    또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000099
    이고,
    상기 R7, R8 및 R9는 독립적으로 -H, 메틸, 할로겐,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000100
    또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000101
    인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (1) 5-클로로-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)-N2-(2-메톡시-4-(4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일)페닐)피리미딘-2,4-디아민;
    (2) N-(2-(2-(3-클로로-4-메톡시페닐아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일아미노)페닐)메탄설폰아미드;
    (6) (4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)(3-메톡시-4-(4-(메틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)페닐)메타논;
    (8) N4-에틸-N2-(1-(3-플루오로-1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일)-3-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2,4-디아민;
    (10) 2-[(2-메톡시-4-[[4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일]카보닐]페닐)아미노]-5,11-디메틸-5,11-디하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]벤조디아제핀-6-온;
    (11) (4-(4-(에틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)(모폴리노)메타논;
    (12) (3-메톡시-4-(4-(메틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)페닐)(모폴리노)메타논;
    (14) 1-(5-클로로-4-(4-(메틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일아미노)-1H-피라졸-1-일)-2-메틸프로판-2-올; 및
    (16) N2-(5-클로로-1-((3S,4R)-3-플루오로-1-(옥세탄-3-일)피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-N4-메틸-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2,4-디아민.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000102
    (상기 화학식 2에서,
    L1 및 L2는 독립적으로 -O-, -CH2-, -NH-, 또는 -S-이고;
    A1은 비치환 또는 치환된 C3-10의 사이클로알킬이고, 여기서, 상기 치환된 C3-10의 사이클로알킬은 -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C3-10의 사이클로알킬이고;
    A2는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴이고, 여기서, 상기 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴은 -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5 내지 6 각환의 헤테로아릴이고;
    A3, A4 및 A5는 독립적으로 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이다).
  6. 제5항에 있어서,
    L1 및 L2는 독립적으로 -CH2-, -NH-, 또는 -S-이고;
    A1은
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000103
    또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000104
    이고;
    A2는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000105
    이고;
    A3, A4 및 A5는 독립적으로 -H 또는 메틸인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (7) (S)-3-(사이클로프로필티오)-7-메틸-1-(1H-피라졸-3-일)-6,7-디하이드로티에노[3,4-c]피리딘-4(5H)-온; 및
    (9) 3-(사이클로펜틸티오)-6,6-디메틸-1-(1H-피라졸-3-일)-6,7-디하이드로벤조[c]티오펜-4(5H)-온.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000106
    (상기 화학식 3에서,
    L3은 부재, -NH-, 또는 -O-이고;
    L4는 N, 또는 C이고;
    E1은 -H, -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
    E2는 상기 L4가 N일 경우 부재이고, 상기 L4가 C일 경우
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000107
    이고, 상기 E5는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
    E3은 -H, -OH, 할로겐, 나이트릴, 나이트로, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6-10의 사이클로알킬, 또는 N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
    여기서, 상기 치환된 C6-10의 사이클로알킬 및 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 독립적으로 -OH, 할로겐, C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 및 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C6-10의 사이클로알킬 및 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
    E4는 N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬카보닐 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로아릴이고,
    여기서, 상기 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬 및 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로아릴은 독립적으로 C6-10의 아릴, N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬이 치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
    여기서, 상기 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬은 -OH, 할로겐, 또는 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 6 각환의 헤테로사이클로알킬이다).
  9. 제8항에 있어서,
    L3은 부재, -NH-, 또는 -O-이고;
    L4는 N, 또는 C이고;
    E1은 -H, 또는 메틸이고;
    E2는 상기 L4가 N일 경우 부재이고, 상기 L4가 C일 경우
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000108
    이고;
    E3은 -H,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000109
    , 또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000110
    이고;
    E4는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000111
    ,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000112
    ,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000113
    , 또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000114
    인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 화학식 3으로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (3) (R)-3-(4-(사이클로헥실아미노)-1H-피라졸[4,3-c]피리딘-3-일)-1-(3-페닐피페리딘-1-일)프로판-1-온;
    (5) 4-(4-(6-메틸-4-(테트라하이드로-2H-파이란-4-일옥시)-1H-피라졸[4,3-c]피리딘-3-일)피리딘-2-일)모르폴린;
    (18) 3-(6-(4-(2-플루오로에틸)피페라진-1-일)피리미딘-4-일)-5-(1-메틸사이클로프로폭시)-1H-인다졸; 및
    (20) (2S,6R)-2,6-디메틸-4-(6-(5-(1-메틸사이클로프로폭시)-1H-인다졸-3-일)피리미딘-4-일)모르폴린.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 4로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 4]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000115
    (상기 화학식 4에서,
    α는 -CH=, 또는 -N=이고;
    G1은 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 N을 하나 이상 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴아미노이고,
    여기서, 상기 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴은 -OH, 할로겐 또는 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴이고;
    G2는 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6-10의 아릴, 또는 N 및 O로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고,
    여기서, 상기 치환된 C6-10의 아릴 및 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬은 독립적으로 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 및 N 및 O를 포함하는 6 각환의 비치환된 헤테로사이클로알킬 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C6-10의 아릴 및 5 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이고;
    G3은 -H, -OH, 할로겐, 나이트로, 나이트릴, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 하나 이상의 나이트릴이 치환된 C6-10의 아릴, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5 내지 10 각환의 헤테로아릴이고,
    여기서, 상기 치환된 5 내지 10 각환의 헤테로아릴은 할로겐, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 나이트릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환체가 치환된 5 내지 10 각환의 헤테로아릴이다).
  12. 제11항에 있어서,
    G1은 -H, 또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000116
    이고;
    G2는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000117
    또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000118
    이고;
    G3은 나이트릴,
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000119
    , 또는
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000120
    인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  13. 제11항에 있어서,
    상기 화학식 4로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (19) 6-(1-메틸-1H-피라졸-3-일아미노)-4-(3-메틸-4-(모폴리노메틸)페닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카보나이트릴;
    (21) 3-(4-모르포리노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)벤조니트릴; 및
    (22) 1-메틸-4-(4-모르폴리노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)-1H-피롤-2-카보나이트릴.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 5로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 5]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000121
    (상기 화학식 5에서,
    M1은 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C6-10의 아릴이고;
    M2는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환된 6 내지 8 각환의 헤테로아릴이고; 및
    M3는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로원자를 포함하는 비치환된 6 내지 8 각환의 헤테로사이클로알킬이다).
  15. 제14항에 있어서,
    상기 화학식 5로 표시되는 화합물은 하기 화합물인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (4) 2-(4-플루오로벤질옥시)-5-(1-(2-모폴리노에틸)-1H-피라졸-4-일)-N-(피리딘-3-일)벤즈아미드.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 6으로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 6]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000122
    (상기 화학식 6에서,
    Q1은 -H, 아미노, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
    Q2는 -H, 비치환된 C6-10의 사이클로알킬이고;
    Q3은 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고; 및
    Q4는 N을 하나 이상 포함하며, 하나의 메틸이 치환된 5 각환의 헤테로아릴이다).
  17. 제16항에 있어서,
    상기 화학식 6으로 표시되는 화합물은 하기 화합물인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (13) (R)-4-(1-사이클로프로필에틸아미노)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)신놀린-3-카복스아미드.
  18. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 7로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 7]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000123
    (상기 화학식 7에서,
    T1은 -H, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 비치환된 C3-8의 사이클로알킬카보닐이다).
  19. 제18항에 있어서,
    상기 화학식 7로 표시되는 화합물은 하기 화합물인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (15) 사이클로프로필[10,11,14,15-테트라하이드로-1,16-에테노-4,8-(메테노)피라졸[3,4-j][1,4,7,9]옥사트리아자사이클로헥사데신-12(13H)-일]메타논.
  20. 제1항에 있어서,
    상기 LRRK2 단백질 저해제는 하기 화학식 8로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 8]
    Figure PCTKR2018002241-appb-I000124
    (상기 화학식 8에서,
    Z1은 -H, 아미노, C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
    Z2는 N을 하나 이상 포함하며, 하나의 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이 치환된 5 내지 8 각환의 헤테로아릴이고; 및
    Z3는 -H, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이다).
  21. 제20항에 있어서,
    상기 화학식 8로 표시되는 화합물은 하기 화합물인 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    (17) (4-(6-아미노-5-(1-이소프로필-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)피리딘-3-일)-2-메톡시페닐)(모폴리노)메타논.
  22. 약제학적으로 치료가능한 양의 LRRK2 단백질 저해제를 유효성분으로 함유하는 제1성분; 및
    약제학적으로 치료가능한 양의 아바스틴을 유효성분으로 함유하는 제2성분을 포함하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 키트.
  23. 제23항에 있어서,
    상기 제1성분 및 제2성분이 순차 또는 동시로 투여되는 것을 특징으로 하는 뇌암의 예방 또는 치료용 약학적 키트.
  24. LRRK2 단백질 저해제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 뇌암을 치료하는 방법.
  25. LRRK2 단백질 저해제를 개체에 투여하는 단계; 및
    아바스틴을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 뇌암을 치료하는 방법.
  26. 뇌암의 치료를 위한 약학적 조성물의 제조에 사용하기 위한 LRRK2 단백질 저해제의 용도.
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