EA035013B1 - Анти-lag-3 антитело, обладающее повышенной стабильностью - Google Patents

Анти-lag-3 антитело, обладающее повышенной стабильностью Download PDF

Info

Publication number
EA035013B1
EA035013B1 EA201590138A EA201590138A EA035013B1 EA 035013 B1 EA035013 B1 EA 035013B1 EA 201590138 A EA201590138 A EA 201590138A EA 201590138 A EA201590138 A EA 201590138A EA 035013 B1 EA035013 B1 EA 035013B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
antibodies
lag
antigen binding
antigen
Prior art date
Application number
EA201590138A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201590138A1 (ru
Inventor
Нилс Лонберг
Мохан Сринивасан
Original Assignee
Бристол-Майерс Сквибб Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=48795938&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA035013(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Бристол-Майерс Сквибб Компани filed Critical Бристол-Майерс Сквибб Компани
Publication of EA201590138A1 publication Critical patent/EA201590138A1/ru
Publication of EA035013B1 publication Critical patent/EA035013B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

Изобретение относится к выделенным моноклональным антителам, которые специфично связывают LAG-3 и обладают оптимизированными функциональными свойствами по сравнению с ранее описанными анти-LAG-3 антителами, такими как антитело 25F7 (заявка на изобретение США 2011/0150892 А1). Данные антитела включают удаленные сайты деамидирования и в то же время сохраняют высокую аффинность связывания LAG-3 человека и физическую (то есть термическую и химическую) стабильность. Также описаны молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела по изобретению, векторы экспрессии, клетки-хозяева и способы экспрессии антител по изобретению, а также иммуноконъюгаты, биспецифические молекулы и фармацевтические композиции, включающие данные антитела. Настоящее изобретение также относится к способам детектирования LAG-3, а также к способам лечения на основе стимулирования иммунных реакций с применением анти-LAG-3 антитела по изобретению. Также описана комбинированная терапия, при которой антитела вводят совместно по меньшей мере с одним дополнительным иммуностимулирующим антителом.

Description

Уровень техники
Терапевтические антитела представляют особой один из наиболее быстрорастущих сегментов фармацевтической индустрии. Для поддержки эффективности (то есть активности) и минимизации иммуногенности антитела и другие белковые лекарства должны быть защищены от физического и химического распада при производстве и хранении. Действительно, одна из основных трудностей при разработке лекарственных средств на основе антител представляет собой потенциальный иммуногенный ответ при введении субъекту, что может приводить к быстрому клиренсу или даже вызывать угрожающие жизни побочные эффекты, включая анафилактический шок. На иммуногенность антитела оказывают влияние различные факторы, такие как его физиохимические свойства (например, чистота, стабильность или растворимость), клинические факторы (например, доза, способ введения, гетерогенность заболевания или характеристики пациента) и сопутствующее лечение другими средствами (Swann et al. (2008) Curr Opinion Immunol 20:493-499).
Иммуногенность антител и/или потеря активности антителами часто связана с деамидированием. Деамидирование представляет собой процесс химического распада, который спонтанно возникает в белках (например, антителах). Деамидирование удаляет амидную функциональную группу из аминокислотного остатка, такого как аспарагин и глутамин, таким образом повреждая его амидсодержащие боковые цепи. Это, в свою очередь, вызывает структурные и биологические изменения по всему белку, таким образом создавая гетерогенные формы антитела. Деамидирование представляет собой одну из наиболее распространенных посттрансляционных модификаций, которые возникают в полученных рекомбинантными способами терапевтических антителах. Например, гетерогенность в тяжелой цепи моноклонального антитела h1B4 (гуманизированное анти-CD18 антитело) вследствие деамидирования при культивировании клеток была отмечена Tsai et al. (Pharm Res 10(11):1580 (1993)). Кроме того, снижение/потеря биологической активности вследствие деамидирования являлась известной проблемой и ранее. Например, Kroon et al. характеризовали различные сайты деамидирования в терапевтическом антителе OKT3 и сообщали, что образцы из партии OKT3 (возрастом от 14 месяцев до 3 лет) имели активность менее 75% (Pharm Res 9(11): 1386 (1992), стр.1389, вторая колонка). Кроме того, образцы OKT3 с большими количествами окисленных пептидов в их картах имели значительно сниженную активность при проведении анализа эффективности связывания антигена (стр.1390, первая колонка). Авторы сделали вывод о том, что определенные сайты химической модификации, которая происходит при хранении OKT3, были идентифицированы с помощью пептидного картирования и коррелировали с наблюдаемыми изменениями при химических анализах и биологических анализах антитела (стр. 1392, первая колонка). Потеря биологической активности также была отмечена в отношении ряда других деамидированных терапевтических белков, включая рекомбинантную ДНазу человека (Cacia et al. (1993) J. Chromatogr. 634: 229-239) и рекомбинантный растворимый CD4 (Teshima et al. (1991) Biochemistry 30: 3916-3922).
В целом, деамидирование представляет значительную и непредсказуемую проблему для фармацевтической индустрии. Усилия, связанные с мониторингом вариабельности, вызываемой деамидированием в лекарственных средствах на основе антител, в частности, как и связанные с FDA опасения, связанные с данной вариабельностью, увеличивают затраты и задерживают проведение клинических испытаний. Более того, связанные с данной проблемой модификации, включая изменяющиеся условия (например, температуру, рН и тип клеток), связанные с рекомбинантным получением и/или изменением аминокислот, которые подвержены деамидированию (например, сайт-направленному мутагенезу), могут негативно влиять на стабильность и активность, особенно при внесении изменений в определяющие комплементарность участки (CDR) антитела. Соответственно, существует потребность в более стабильных версиях терапевтических антител.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к выделенным моноклональным антителам (например, моноклональным антителам человека), которые связывают LAG-3 (например, LAG-3 человека) и обладают оптимизированной физической стабильностью по сравнению с описанными ранее анти-LAG-3 антителами. В частности, изобретение относится к модифицированной форме антитела 25F7 (US 2011/0150892 A1), которое обладает значительно увеличенной термической и химической стабильностью по сравнению с немодифицированным антителом. В частности, с помощью изменения критического связывающего участка домена CDR2 тяжелой цепи антитела 25F7 было показано, что модифицированное антитело демонстрировало значительно более высокую физическую и термическую стабильность, сниженный уровень деамидирования, более высокую термическую обратимость и более низкую агрегацию. В то же время неожиданно было обнаружено, что модифицированное антитело сохраняет ту же высокую аффинность связывания с LAG-3 человека и функциональную активность немодифицированного антитела, включая способность ингибировать связывание LAG-3 с молекулами главного комплекса гистосовместимости II класса и стимулировать антигенспецифичные Т-клеточные ответы. Совместное существенное повышение стабильности и сохранение эффективности связывания/биологической активности модифицированного антитела являлось неожиданным, особенно в свете критичности CDR участков для функционирования антител.
Антитела по изобретению могут применяться для различных целей, включая детектирование LAG-3
- 1 035013 белка и стимулирования антигенспецифичных Т-клеточных ответов у субъектов с опухолями или вирусами.
Соответственно в одном аспекте изобретение относится к выделенному моноклональному антителу (например, антителу человека) или его антигенсвязывающей части с вариабельным участком тяжелой цепи, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12. В другом варианте осуществления антитело также включает вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14. В другом варианте осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть включает CDR1, CDR2 и CDR3 участки вариабельного участка тяжелой цепи, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12 (например, SEQ ID NO: 15, 16 и 17 соответственно). В другом варианте осуществления антитело также включает CDR1, CDR2 и CDR3 участки вариабельного участка легкой цепи, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12 (например, SEQ ID NO: 18, 19 и 20 соответственно).
В предпочтительном варианте осуществления антитело обладает повышенными физическими свойствами (т.е. термической и химической стабильностью) по сравнению с антителом 25F7, в то же время сохраняя, по меньшей мере, ту же аффинность связывания LAG-3 человека, что и 25F7. Например, антитело обладает сниженной вариабельностью последовательности в участке CDR2 тяжелой цепи вследствие деамидирования по сравнению с антителом 25F7, например приблизительно 2,5% или менее модификацией аминокислотной последовательности спустя 12 недель при 4°C (то есть при анализах стабильности в реальном времени, как описано здесь) и/или приблизительно 12,0% или менее модификацией аминокислотной последовательности спустя 12 недель при 40°C (то есть при ускоренных стрессовых условиях, как описано здесь), в то же время сохраняя аффинность связывания LAG-3 человека на уровне, по меньшей мере, KD около 1х10-7 М или менее (более предпочтительно KD 1х10-8 М или менее, KD 5х 10-9 М или менее или KD 1 х 10-9 М или менее). В другом варианте осуществления антитело обладает термической обратимостью около 40% в PBS при рН 8,0.
В другом варианте осуществления антитело обладает более высокой температурой плавления (что свидетельствует о более высокой общей стабильности in vivo) по сравнению с немодифицированным антителом (Krishnamurthy R and Manning MC (2002) Curr Pharm Biotechnol 3:361-71). В одном варианте осуществления антитело обладает значением TM1 (температура первоначального анфолдинга) более 60°C, например более 65°C или более 70°C. Точка плавления антитела может быть определена с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (Chen et al. (2003) Pharm Res 20:1952-60; Ghirlando et al. (1999) Immunol Lett 68:47-52) или методом кругового дихроизма (Murray et al. (2002) J. Chromatogr Sci 40: 343-9).
В другом варианте осуществления антитело характеризуется его сопротивляемостью быстрому распаду. Распад антител можно определить способом капиллярного электрофореза (СЕ) и MALDI-MS (Alexander AJ and Hughes DE (1995) Anal Chem 67:3626-32).
В другом варианте осуществления антитело обладает минимальными агрегационными свойствами, например агрегацией 25% или менее, например 20% или менее, 15% или менее, 10% или менее, 5% или менее или 4% или менее. Агрегация может приводить к запуску нежелательного иммунного ответа и/или измененным или нежелательным фармакокинетическим свойствам. Агрегация может быть измерена с помощью различных способов, включая эксклюзионную колонку (SEC), высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) и рассеяние света.
В другом варианте осуществления антитело также обладает, по меньшей мере, одним из следующих свойств:
(a) связывание с LAG-3 обезьяны;
(b) отсутствие связывания с LAG-3 мыши;
(c) ингибирование связывания LAG-3 с молекулами главного комплекса гистосовместимости II класса и (d) стимулирование иммунных ответов, в частности антигенспецифичных Т-клеточных ответов.
Предпочтительно антитело обладает по меньшей мере двумя свойствами из (a), (b), (c) и (d). Более предпочтительно антитело обладает по меньшей мере тремя из свойств (a), (b), (c) и (d). Еще более предпочтительно антитело обладает всеми четырьмя из свойств (a), (b), (c) и (d).
В другом варианте осуществления антитело стимулирует антигенспецифичный Т-клеточный ответ, такой как продуцирование интерлейкина-2 (IL-2) при антигенспецифичном Т-клеточном ответе. В других вариантах осуществления антитело стимулирует иммунный ответ, такой как противоопухолевый ответ (например, ингибирование роста опухоли в in vivo модели опухоли с ксенотрансплантатом) или аутоиммунный ответ (например, развитие диабета у NOD мышей).
В другом варианте осуществления антитело связывает эпитоп LAG-3 человека, включающий аминокислотную последовательность PGHPLAPG (SEQ ID NO: 21). В другом варианте осуществления антитело связывает эпитоп LAG-3 человека, включающий аминокислотную последовательность HPAAPSSW (SEQ ID NO: 22) или PAAPSSWG (SEQ ID NO: 23).
В других вариантах осуществления антитело окрашивает гипофизную ткань с помощью иммуноги
- 2 035013 стохимии или не окрашивает гипофизную ткань с помощью иммуногистохимии. Антитела по изобретению могут представлять собой полноразмерные антитела, например изотипа IgG1, IgG2 или IgG4, необязательно с мутацией с заменой серина на пролин в шарнирном участке константного участка тяжелой цепи (в положении, соответствующем положению 241, как описано у Angal et al. (1993) Mol. Immunol. 30:105-108), так что гетерогенность дисульфидного мостика между тяжелыми цепями снижена или устранена. В одном аспекте изотипом константного участка является IgG4 с мутацией в аминокислотных остатках 228, например S228P. Альтернативно, антитела могут представлять собой фрагменты антител, такие как Fab, Fab' или Fab'2 фрагменты или одноцепочечные антитела.
В другом аспекте изобретения антитело (или его антигенсвязывающая часть) представляет собой часть иммуноконъюгата, который включает терапевтический агент, например цитотоксин или радиоактивный изотоп, связанный с антителом. В другом аспекте антитело представляет собой часть биспецифичной молекулы, которая включает вторую функциональную группу (например, второе антитело), обладающую иной специфичностью связывания, чем указанное антитело или его антигенсвязывающая часть.
Также в объем изобретения включены композиции, включающие антитела или их антигенсвязывающие части, иммуноконъюгаты или биспецифичные молекулы по изобретению, необязательно соединенные с фармацевтически приемлемым носителем. Также в объем изобретения включены молекулы нуклеиновой кислоты по изобретению, кодирующие антитела или их антигенсвязывающие части (например, вариабельные участки и/или CDR), а также векторы экспрессии, включающие данные нуклеиновые кислоты и клетки-хозяева, включающие данные векторы экспрессии. Также в объем изобретения включены способы получения анти-LAG-3 антител с помощью клеток-хозяев, включающих данные векторы экспрессии, которые могут включать следующие этапы: (i) экспрессию антитела в клетке-хозяине и (ii) выделение антитела из клетки-хозяина.
В другом аспекте изобретение относится к способам стимулирования иммунных ответов с помощью анти-LAG-3 антител по изобретению. В одном варианте осуществления способ включает стимулирование антигенспецифичного Т-клеточного ответа путем контактирования Т-клеток с антителом по изобретению, таким образом, что осуществляется стимулирование антигенспецифичного Т-клеточного ответа. В предпочтительно варианте осуществления стимулируется продуцирование интерлейкина-2 с помощью антигенспецифичной Т-клетки. В другом варианте осуществления субъект представляет собой субъект с опухолью, при этом стимулируется иммунный ответ против опухоли. В другом варианте осуществления субъект представляет собой субъект с вирусом, при этом стимулируется иммунный ответ против вируса.
В другом варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования роста опухолевых клетках у субъекта, включающему введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части по изобретению, так что ингибируется рост опухоли у субъекта. В другом варианте осуществления изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции у субъекта, включающему введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части по изобретению, так что вирусная инфекция подвергается лечению у субъекта. В другом варианте осуществления данные способы включают введение композиции, биспецифичного антитела или иммуноконъюгата по изобретению. В другом варианте осуществления изобретение относится к способу стимулирования иммунного ответа у субъекта, включающему введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части по изобретению и по меньшей мере одного дополнительного иммуностимулирующего антитела, такого как анти-PD-1 антитело, анти-PD-L1 антитело и/или анти-CTLA-4 антитело, так что у субъекта стимулируется иммунный ответ, например для ингибирования роста опухоли или стимулирования противовирусного ответа. В одном варианте осуществления дополнительное иммуностимулирующее антитело представляет собой анти-PD-1 антитело. В другом варианте осуществления дополнительный иммуностимулирующий агент представляет собой анти-PD-L1 антитело. В другом варианте осуществления дополнительный иммуностимулирующий агент представляет собой анти-CTLA-4 антитело. В другом варианте осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть по изобретению вводится с цитокином (например, IL-2 и/или IL-21) или костимулирующим антителом (например, анти-CD137 и/или анти-GITR антителом). Антитела могут представлять собой, например, антитела человека, химерные или гуманизированные антитела. В другом аспекте изобретение относится к анти-LAG-3 антителам и композициям по изобретению для применения в рамках вышеуказанных способов или для производства лекарственного средства для применения в рамках вышеуказанных способов (например, для лечения).
Другие особенности и преимущества настоящего описания будут понятны из следующего подробного описания и примеров, которые не должны рассматриваться в качестве ограничивающих. Содержание всех ссылок, баз данных Genbank, патентов и опубликованных патентных заявок, цитируемых в настоящей заявке, полностью приведено здесь для ссылки.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А показана нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 1) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 2) вариабельного участка тяжелой цепи моноклонального антитела 25F7 человека. CDR1 (SEQ ID NO: 5), CDR2 (SEQ ID NO: 6) и CDR3 (SEQ ID NO: 7) участки показаны прерыви- 3 035013 стой линией и указаны деривации зародышевой линии V, D и J. CDR участки показаны прерывистой линией с использованием системы Kabat (Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,
5-е изд., U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242).
На фиг. 1B показана нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 3) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 4) вариабельного участка каппа лёгкой цепи моноклонального антитела 25F7 человека. CDR1 (SEQ ID NO: 8), CDR2 (SEQ ID NO: 9) и CDR3 (SEQ ID NO: 10) участки показаны прерывистой линией и указаны деривации зародышевой линии V и J. Полноразмерные аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи антитела 25F7 показаны в SEQ ID NO: 32 и 34 соответственно.
На фиг. 2А показана нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 12) вариабельного участка тяжёлой цепи моноклонального антитела LAG-3.5. CDR1 (SEQ ID NO: 15), CDR2 (SEQ ID NO: 16) и CDR3 (SEQ ID NO: 17) участки выделены контуром.
Полноразмерные аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи антитела LAG3.5 показаны в SEQ ID NO: 35 и 37 соответственно.
На фиг. 2В показана нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 13) и аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 14) вариабельного участка каппа лёгкой цепи моноклонального антитела LAG3.5. CDR1 (SEQ ID NO: 18), CDR2 (SEQ ID NO: 19) и CDR3 (SEQ ID NO: 20) участки выделены контуром.
На фиг. 3 показаны аминокислотные последовательности CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи вариантов LAG-3 LAG3.5 (SEQ ID NO: 42), LAG3.6 (SEQ ID NO: 43), LAG3.7 (SEQ ID NO: 44) и LAG3.8 (SEQ ID NO: 45) по сравнению с аминокислотной последовательностью CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи антитела 25F7 (LAG3.1) (SEQ ID NO: 41) и соответствующей последовательностью зародышевой линии человека (SEQ ID NO: 27). CDR2 вариабельный участок тяжелой цепи LAG3.5 отличается от CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи 25F7 аргинином (R) в положении 54 (против аспарагина (N)) и серина (S) в положении 56 (против аспарагина (N)). Остальные CDR LAG3.5 25F7 являются идентичными. На фиг. 3 также показана SEQ ID NO: 40.
Фиг. 4А и 4В представляют собой графики, показывающие активность связывания (EC50 и аффинность соответственно) антител LAG3.1 (25F7), LAG3.2, LAG3.5, LAG3.6, LAG3.7 и LAG3.8 с активированными CD4+ Т-клетками человека. На фиг. 4В показаны SEQ ID NOS 41, 42, 45, 44 и 43 соответственно в порядке следования.
Фиг. 5А, В, С, D и Е представляют собой графики, показывающие кривые термического плавления (то есть термической стабильности) антител LAG3.1 (25F7), LAG3.5, LAG3.6, LAG3.7 и LAG3.8 соответственно.
Фиг. 6A, В, С, D и Е представляют собой графики, показывающие кривые термической обратимости (то есть термической стабильности) антител LAG3.1 (25F7), LAG3.5, LAG3.6, LAG3.7 и LAG3.8 соответственно.
Фиг. 7 представляет собой график, показывающий активность связывания антител LAG3.1 (25F7) и LAG3.5 с активированными CD4+ Т-клетками человека и связывание антигена (Biacore).
На фиг. 8 показаны результаты пептидного картирования с применением масс-спектрометрии (химические модификации/молекулярная стабильность) для антител LAG3.1 (25F7) и LAG3.5, отражающие деамидирование и изомеризацию после культивирования в течение 5 дней при ускоренных стрессовых условиях, как описано здесь. На фиг. 8 показаны SEQ ID NO: 46-52 соответственно в порядке следования.
Фиг. 9 представляет собой график сравнения профилей гидрофобности антител LAG3.1 (25F7) и LAG3.5.
Фиг. 10A, В, С и D представляют собой графики сравнения аффинности и физической стабильности (то есть термической и химической стабильности) антител LAG3.1 и LAG3.5 при 4 и 40°C, то есть обоих ускоренных стрессовых условиях и анализы стабильности в реальном времени, как описано здесь.
Фиг. 11A и B представляют собой графики сравнения доли модифицирования аминокислотных последовательностей антител LAG3.1 и LAG3.5 при 4 и 40°C.
Подробное описание изобретения
Для лучшего понимания настоящего описания ниже приводится определение некоторых терминов. Дополнительные определения приведены по тексту подробного описания. Термины 25F7, антитело 25F7, антитело LAG3.1 и LAG3.1 означают специфичное к LAG-3 человека антитело, описанное в US 2011/0150892 А1. Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 1), кодирующая вариабельный участок тяжелой цепи 25F7 (LAG3.1) и соответствующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 2), показана на фиг. 1A (с CDR последовательностями, обозначенными как SEQ ID NO: 4, 5 и 7 соответственно). Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 3), кодирующая вариабельный участок легкой цепи 25F7 (LAG3.1), и соответствующая аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 4) показаны на фиг. 1В (с CDR последовательностями, обозначенными как SEQ ID NO: 8, 9 и 10 соответственно). Термин LAG-3 означает ген активации лимфоцитов 3. Термин LAG-3 включает варианты, изоформы, гомологи, ортологи и паралоги. Например, антитела, специфичные к белку LAG-3 человека, могут, в некоторых случаях вступать в перекрестную реакцию с белком LAG-3 видов, отличных от чело- 4 035013 века. В других вариантах осуществления антитела, специфичные к белку LAG-3 человека, могут быть полностью специфичными к белку LAG-3 человека и могут не обладать видовой или иными типами перекрестной реактивности или могут вступать в перекрестную реакцию с LAG-3 некоторых других видов, но не всех других видов (например, вступать в перекрестную реакцию с LAG-3 обезьяны, но не LAG-3 мыши). Термин LAG-3 человека означает последовательность LAG-3 человека, такую как полная аминокислотная последовательность LAG-3 человека, имеющая номер NP 002277 в базе данных Genbank (SEQ ID NO: 29). Термин LAG-3 мыши означает последовательность LAG-3 мыши, такую как полная аминокислотная последовательность LAG-3 мыши, имеющая номер NP 032505 в базе данных Genbank. LAG-3 также известен из уровня техники как, например, CD223. Последовательность LAG-3 человека может отличаться от LAG-3 человека, имеющего номер NP 002277 в базе данных Genbank, за счет наличия, например, сохраненных мутаций или мутаций в несохраненных участках, при этом LAG-3 обладает в значительной степени той же биологической функцией, что и LAG-3, имеющий номер NP 002277 в базе данных Genbank. Например, биологическая функция LAG-3 человека заключается в наличии эпитопа во внеклеточном домене LAG-3, который специфично связана антителом по настоящему описанию или биологическая функция LAG-3 человека заключается в связывании с МНС молекулами II класса.
Термин LAG-3 обезьяны предназначен для описания LAG-3 белков, экспрессируемых обезьянами Старого и Нового Света, включая, без ограничения, LAG-3 обезьяны циномолгус и LAG-3 макаки резус. Соответствующая аминокислотная последовательность LAG-3 обезьяны представляет собой аминокислотную последовательность LAG-3 макаки резус, которая также депонирована в Genbank под номером ХМ 001108923. Другая соответствующая аминокислотная последовательность LAG-3 обезьяны представляет собой альтернативную последовательность макаки резус клона pa23-5, как описано в US 2011/0150892 А1. Альтернативная последовательность резус обладает одним отличием в аминокислоте в положении 419 по сравнению с депонированной в Genbank последовательностью.
Конкретная последовательность LAG-3 человека в целом будет, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности LAG-3 человека Genbank NP 002277 и содержит аминокислотные остатки, которые позволяют идентифицировать аминокислотную последовательность как относящуюся к человеку при сравнении с аминокислотными последовательностями LAG-3 других видов (например, мыши). В определенных случаях LAG-3 человека может быть по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99% идентичен по аминокислотной последовательности LAG-3 Genbank NP 002277. В определенных вариантах осуществления последовательность LAG-3 человека будет демонстрировать разницу не более чем 10 аминокислот от последовательности LAG-3 Genbank NP 002277. В определенных вариантах осуществления LAG-3 человека может демонстрировать не более 5 или даже не более 4, 3, 2 и 1 отличий по аминокислотам от последовательности LAG-3 Genbank NP 002277. Доля идентичности может быть определена, как описано здесь.
Термин иммунный ответ означает действие, например, лимфоцитов, антиген-презентирующих клеток, фагоцитарных клеток, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых вышеуказанными клетками или печенью (включая антитела, цитокины и комплемент), что приводит к селективному поражению, деструкции или удалению из организма человека инвазивных патогенов, клеток или тканей, инфицированных патогенами, раковых клеток или, в случае аутоиммунного или патологического воспаления, нормальных клеток или тканей человека. Антигенспецифичный Т-клеточный ответ означает ответы, опосредуемые Т-клетками, которые возникают вследствие стимулирования Т-клетки антигеном, по отношению к которому Т-клетка обладает специфичностью. Неограничивающие примеры ответов Тклетки при антигенспецифичном стимулировании включают пролиферацию и продуцирование цитокинов (например, продуцирование IL-2).
В соответствии с используемым здесь значением термин антитело означает цельные антитела и их любой антигенсвязывающий фрагмент (то есть антигенсвязывающую часть) или их отдельные цепи. Цельные антитела представляют собой гликопротеины, включающие, по меньшей мере, две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, связанные между собой дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка тяжелой цепи (обозначаемого здесь как VH) и константного участка тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельного участка легкой цепи (обозначаемого здесь как VL) и константного участка легкой цепи. Константный участок легкой цепи состоит из одного домена, CL. VH и VL участки могут быть дополнительно подразделены на участки гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность участками (CDR), разбросанные между участками, которые являются более консервативными, называемыми каркасными участками (FR). Каждый VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбоксильного конца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные участки легкой и тяжелой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные участки антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями хозяина или факторами, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки), и первым компонентом (Clq) классической системы комплемента.
Термин антигенсвязывающая часть антитела (или просто часть антитела) в соответствии с используемым здесь значением означает один или несколько фрагментов антитела, которые сохраняют
- 5 035013 способность специфически связываться с антигеном (например, белком LAG-3). Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может осуществляться фрагментами полноразмерного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином антигенсвязывающая часть антитела, включают: (i) Fab-фрагмент, моновалентный фрагмент, состоящий из VL, VH, CL и CH1 доменов; (ii) Ь^'Ц-фрагмент, бивалентный фрагмент, включающий два Fab-фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирном участке; (iii) Fd-фрагмент, состоящий из VH и CH1 доменов; (iv) Fv-фрагмент, состоящий из VH и CH1 доменов; (v) Fv-фрагмент, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела; (vi) dAb-фрагмент (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), который состоит из VH домена; (vii) выделенный определяющий комплементарность участок (CDR); и (viii) нанотело, вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий один вариабельный домен и два константных домена. Более того, несмотря на то, что два домена Fv-фрагмента, VL и VH, кодируются разными генами, они могут быть соединены с применением рекомбинантных способов с использованием синтетического линкера, который дает возможность получать их в виде единой белковой цепи, в которой VL и VH участки спариваются с образованием моновалентных молекул (известных как одноцепочечный Fv (scFv); см, например, Bird et al. (1988) Science 242: 423-426 и Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883). Данные одноцепочечные антитела также охватываются термином антигенсвязывающая часть антитела. Данные фрагменты антител получают с применением общепринятых способов, известных специалистам в данной области, при этом данные фрагменты подвергают скринингу для оценки применимости таким же образом, что и интактные антитела.
В соответствии с используемым здесь значением выделенное антитело означает антитело, являющееся практически свободным от других антител, обладающих другими антигенными специфичностями (например, выделенное антитело, которое специфически связывает белок LAG-3, является практически свободным от антител, которые специфически связывают антигены, отличные от белков LAG-3). Однако выделенное антитело, которое специфически связывает белок LAG-3 человека, может обладать перекрестной реактивностью по отношению к другим антигенам, таким как белки LAG-3 других видов. Более того, выделенное антитело может являться практически свободным от иного клеточного материала и/или химических соединений. В соответствии с используемым здесь значением термины моноклональное антитело или композиция моноклональных антител означают препарат молекул антитела, имеющих один и тот же молекулярный состав. Композиция моноклонального антитела проявляет единственную специфичность связывания и аффинность в отношении конкретного эпитопа.
В соответствии с используемым здесь значением термин антитело человека включает антитела, имеющие вариабельные участки, в которых каркасные и CDR участки образованы из иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии человека. Более того, если антитело содержит константный участок, то константный участок также происходит из иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии человека. Антитела человека по изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые иммуноглобулиновыми последовательностями зародышевой линии человека (например, мутации, введенные случайным или сайт-специфическим мутагенезом in vitro, или соматическая мутация in vivo). Однако термин антитело человека в соответствии с используемым здесь значением не включает антитела, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии других видов млекопитающих, таких как мышь, были пересажены в каркасные последовательности человека.
Термин моноклональное антитело человека означает антитела, проявляющие единственную специфичность связывания, которые имеют вариабельные участки, в которых каркасные участки и участки CDR получены из иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии человека. В одном варианте осуществления моноклональные антитела человека получают с применением гибридомы, которая включает В-клетку, полученную из трансгенного не являющегося человеком животного, например трансгенной мыши, имеющей геном, включающий трансген тяжелой цепи и трансген легкой цепи человека, слитые с иммортализованной клеткой. Термин рекомбинантное антитело человека, в соответствии с используемым здесь значением, включает все антитела человека, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют рекомбинантными способами, такие как (a) антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным в отношении генов иммуноглобулинов человека, или из гибридомы, полученной на основе этого (описано ниже), (b) антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированной для экспрессии антитела человека, например из трансфектомы, (c) антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител человека, и (d) антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими способами, которые включают сплайсинг генных последовательностей иммуноглобулина человека с другими последовательностями ДНК. Данные рекомбинантные антитела человека включают вариабельные участки, в которых каркасные и CDR участки получены из последовательностей зародышевой линии иммуноглобулина человека. Однако в определенных вариантах осуществления данные рекомбинантные антитела человека могут быть подвергнуты in vitro мутагенезу (или, когда применяют животное, трансгенное в отношении последовательностей Ig человека, in vivo соматическому мутагенезу), и, таким образом, аминокислотные последовательности VH и VL участков рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и получены из последовательностей VH и VL зародышевой линии
- 6 035013 человека или являются родственными им, могут не существовать в природе в репертуаре зародышевой линии антител человека in vivo. Термин изотип означает класс антител (например, IgM или IgG1), который кодируется генами константного участка тяжелой цепи.
Выражения антитело, распознающее антиген и антитело, специфическое к антигену применяются здесь взаимозаменяемо с выражением антитело, которое специфически связывается с антигеном.
Термин производные антител человека означает любую модифицированную форму антитела человека, например конъюгат антитела и другого агента или антитела. Термин гуманизированное антитело предназначен для обозначения антител, в которых в CDR последовательности, полученные из зародышевой линии другого вида млекопитающих, такого как мышь, были трансплантированы в каркасные последовательности человека. В каркасных последовательностях человека могут быть произведены дополнительные модификации каркасного участка.
Термин химерное антитело предназначен для обозначения антител, в которых последовательности вариабельного участка получены от одного вида, а последовательности константного участка получены от другого вида, такие как антитело, у которого последовательности вариабельного участка получены из антитела мыши, а последовательности константного участка получены от антитела человека. В соответствии с используемым здесь значением антитело, которое специфически связывает LAG-3 человека означает антитело, которое связывает белок LAG-3 человека (и, возможно, белок LAG-3 одного или нескольких не являющихся человеком видов), но по существу не связывается с не являющимися LAG-3 белками. Предпочтительно, антитело связывается с белком LAG-3 человека с высокой аффинностью, более конкретно со значением KD 1 х 10-7 М или менее, более предпочтительно 1 х 10-8 М или менее, более предпочтительно5х 10-9 М или менее, более предпочтительно 1х 10-9 М или менее.
Термин по существу не связывается с белком или клетками, в соответствии с используемым здесь значением, означает не связывается или не связывается с высокой аффинностью с белком или клетками, то есть связывается с белком или клетками с KD 1х10-6 М или выше, более предпочтительно 1х10-5 М или выше, более предпочтительно 1х 10-4 М или выше, более предпочтительно 1х 10-3 М или выше и еще более предпочтительно 1 х 10-2 М или выше.
Термин Kaccc4 или Ka, в соответствии с используемым здесь значением, предназначен для обозначения скорости ассоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген, тогда как термин KOTc или K/, в соответствии с используемым здесь значением, предназначен для обозначения скорости диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Термин KD в соответствии с используемым здесь значением предназначен для обозначения константы диссоциации, которую вычисляют, исходя из отношения Kd к Ka (то есть Kd/Ka), и выражают в виде молярной концентрации (М). Значения KD для антител могут быть определены с применением способов, хорошо известных из уровня техники. Предпочтительный способ определения KD антитела представляет собой поверхностный плазменный резонанс, предпочтительно с применением биосенсорной системы, такой как система Biacore®.
Термин высокая аффинность в отношении антитела IgG означает антитело, обладающее KD в отношении антигена-мишени 1х 10-7 М или менее, более предпочтительно 5х10-8 М или менее, еще более предпочтительно 1 х 10-8 М или менее, еще более предпочтительно 5х10-9 М или менее и еще более предпочтительно 1х 10-9 М или менее. Однако высокая аффинность связывания может отличаться для антител других изотипов. Например, высокая аффинность связывания изотипа IgM означает антитело с KD 10-6 М или менее, более предпочтительно 10-7 М или менее, более предпочтительно 10-8 М или менее.
Термин деамидирование означает процесс химического распада, который спонтанно возникает в белках (например, антителах). Деамидирование удаляет амидную функциональную группу из аминокислотного остатка, такого как аспарагин и глутамин, таким образом повреждая его амидсодержащие боковые цепи. В частности, боковая цепь аспарагина атакует близлежащую пептидную группу, образуя симметричное сукцинимидное производное. Симметрия производного приводит к получению двух продуктов гидролиза, аспартата или изоаспартата. Аналогичная реакция может возникать в боковых цепях аспартата, приводя к частичному переходу в изоаспартат. В случае глутамина скорость деамидирования в целом составляет в десять раз менее, чем в случае аспарагина, однако механизм по существу является аналогичным и требующим только молекул воды.
Термин субъект включает любое животное, являющееся или не являющееся человеком. Термин не являющееся человеком животное включает всех позвоночных, например млекопитающих и немлекопитающих, таких как не являющиеся человеком приматы, овцы, собаки, кошки, коровы, лошади, куры, земноводные и пресмыкающиеся, хотя млекопитающие являются предпочтительными, например не являющиеся человеком приматы, овцы, собаки, кошки, коровы и лошади.
Различные аспекты изобретения описаны более подробно в нижеследующих подразделах.
Aiitii-LAG-3 антитела с повышенной стабильностью и полезными функциональными свойствами
Антитела по изобретению специфически связываются с LAG-3 человека и обладают оптимизированной стабильностью по сравнению с описанными ранее анти-LAG-3 антителами, в частности по сравнению с антителом 25F7 (LAG3.1). Данная оптимизация включает пониженное деамидирование (напри- 7 035013 мер, повышенную химическую стабильность) и повышенный термический рефолдинг (например, повышенную физическую стабильность) при сохранении в то же время высокой аффинности связывания
LAG-3 человека.
Способы идентификации сайтов деамидирования известны из уровня техники (см., например хроматографию на основе ионного обмена, обратной фазы и гидрофобного взаимодействия и пептидное картирование протеолитического расщепления (ВЭЖХ-МС)). Подходящие анализы для измерения физической стабильности включают, например, анализ точек плавления и/или рефолдинга структуры антитела после денатурации (например, долевая обратимость, как описано, например, в примере 3, раздел 3).
Связывание с LAG-3 человека может быть проанализировано с применением одного или нескольких способов, хорошо известных из уровня техники. Например, антитело может быть протестировано с применением анализа на основе проточной цитометрии, при котором антитело реагирует с клеточной линией, которая экспрессирует LAG-3 человека, такой как СНО клетки, которые были трансфицированы для экспрессии LAG-3 (например, LAG-3 человека или LAG-3 обезьяны (например, резус или циномолгус) или LAG-3 мыши) на их клеточной поверхности. Другие подходящие клетки для применения в рамках анализа на основе проточной цитометрии включают анти-CD3-стимулируемые CD4+ активированные Т-клетки, которые экспрессируют нативный LAG-3. Дополнительно или альтернативно, связывание антитела, включая кинетические показатели связывания (например, значение KD), могут быть протестированы с помощью анализов BIAcore. Другие подходящие анализы связывания включают анализы ELISA, например с применением рекомбинантного белка LAG-3.
Антитела по изобретению предпочтительно связываются с белком LAG-3 человека со значением KD 1 х 10-7 М или менее, более предпочтительно 1х 10-8 М или менее, 5х10-9 М или менее или 1 х 10-9 М или менее.
Как правило, антитело связывается с LAG-3 в лимфоидных тканях, таких как миндалина, селезенка или тимус, что может быть детектировано с помощью иммуногистохимического анализа. В одном варианте осуществления антитело окрашивает гипофизную ткань (например, накапливается в гипофизе), что выявляется с помощью иммуногистохимического анализа. В другом варианте осуществления антитело не окрашивает гипофизную ткань (то есть не накапливается в гипофизе), что выявляется с помощью иммуногистохимического анализа.
Дополнительные функциональные свойства включают перекрестную реактивность с LAG-3 других видов. Например, антитело может связываться с LAG-3 обезьяны (например, обезьяны циномолгус, макаки резус), но практически не связывается с LAG-3 мыши. Предпочтительно антитело по изобретению связывается с LAG-3 человека с высокой аффинностью.
Другие функциональные свойства включают способность антитела стимулировать иммунный ответ, такой как антигенспецифичный Т-клеточный ответ. Это может быть определено, например, с помощью анализа способности антитела стимулировать продуцирование интерлейкина-2 (IL-2) при антигенспецифичном Т-клеточном ответе. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с LAG-3 человека и стимулирует антигенспецифичный Т-клеточный ответ. В других вариантах осуществления антитело связывается с LAG-3 человека, но не стимулирует антигенспецифичный Т-клеточный ответ. Другие средства для оценки способности антитела стимулировать иммунный ответ включают тестирование его способности ингибировать рост опухоли, такой как in vivo модель опухоли с ксенотрансплантатом (см., например, пример 6) или способности стимулировать аутоиммунный ответ, такой как способность промотировать развитие аутоиммунного заболевания в аутоиммунной модели, например способность промотировать развитие диабета в модели с NOD мышами.
Предпочтительные антитела по изобретению представляют собой моноклональные антитела человека. Дополнительно или альтернативно, антитела могут представлять собой, например, химерные или гуманизированные моноклональные антитела.
Моноклональное антитело LAG3.5
Предпочтительное антитело по изобретению представляет собой моноклональное антитело человека, LAG3.5, структурно и химически характеризуемое, как описано ниже в нижеприведенных примерах. Аминокислотная последовательность VH LAG3.5 показана в SEQ ID NO:12 (фиг. 2А). Аминокислотная последовательность VL LAG3.5 показана в SEQ ID NO: 14 (фиг. 2В).
VH и VL последовательности (или CDR последовательности) других анти-LAG-аитител, которые связывают LAG-3 человека, могут быть смешаны и спарены с VH и VL последовательностями (или CDR последовательностями) антитела LAG3.5. Предпочтительно при смешивании и спаривании VH и VL цепей (или CDR в данных цепях) VH последовательность из конкретного V| |/VL-спаривания замещается структурно сходной VH последовательностью. Аналогичным образом, VL последовательность из конкретного VH |/VL-спаривания замещается структурно сходной VL последовательностью.
Соответственно в одном варианте осуществления антитела по изобретению или их антигенсвязывающие части включают:
(a) вариабельный участок тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 (то есть VH LAG3.5); и (b) вариабельный участок легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID
- 8 035013
NO: 14 (то есть VL LAG3.5) или VL другого hhtu-LAG3 антитела (то есть отличного от LAG3.5);
при этом антитело специфично связывает LAG-3 человека.
В другом варианте осуществления антитела по изобретению или их антигенсвязывающие части включают:
(a) CDR1, CDR2 и CDR3 участки вариабельного участка тяжелой цепи, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 (то есть CDR последовательности LAG3.5, SEQ ID NO:15, 16 и 17 соответственно); и (b) CDR1, CDR2 и CDR3 участки вариабельного участка легкой цепи, включающего аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 14 (то есть CDR последовательности LAG3.5, SEQ ID NO:18, 19 и 20, соответственно) или CDR другого анти-кЛС3 антитела (то есть отличного от LAG3.5);
при этом антитело специфично связывает LAG-3 человека.
В другом варианте осуществления антитело или его антигенсвязывающая часть включает вариабельный CDR2 участок тяжелой цепи LAG3.5, объединенный с CDR других антител, которые связывают LAG-3 человека, например CDR1 и/или CDR3 из вариабельного участка тяжелой цепи и/или CDR1, CDR2 и/или CDR3 из вариабельного участка легкой цепи другого hhtu-LAG-3 антитела.
Кроме того, из уровня техники хорошо известно, что CDR3 домен независимо от CDR1 и/или CDR2 домена(нов) самостоятельно может определять специфичность связывания антитела в отношении его антигена и что множество антител с одной и той же специфичностью связывания могут быть прогнозируемо получены на основе общей CDR3 последовательности. См., например, Klimka et al., British J. of Cancer 83(2):252-260 (2000); Beiboer et al., J. Mol. Biol. 296:833-849 (2000); Rader et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:8910-8915 (1998); Barbas et al., J. Am. Chem. Soc. 116: 2161-2162 (1994); Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92: 2529-2533 (1995); Ditzel et al., J. Immunol. 157: 739-749 (1996); Berezov et al., BIAjournal 8:Scientific Review 8 (2001); Igarashi et al., J. Biochem (Tokyo) 117:452-7 (1995); Bourgeois et al., J. Virol 72: 807-10 (1998); Levi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 4374-8 (1993); Polymenis and Stoller, J. Immunol. 152:5218-5329 (1994) и Xu and Davis, Immunity 13:37-45 (2000). См. также патенты США 6951646; 6914128; 6090382; 6818216; 6156313; 6827925; 5833943; 5762905 и 5760185. Каждая из этих публикаций полностью приведена здесь для ссылки.
Соответственно в другом варианте осуществления антитела по изобретению включают CDR2 вариабельного участка тяжелой цепи LAG3.5 и, по меньшей мере, CDR3 вариабельного участка тяжелой и/или легкой цепи LAG3.5 (SEQ ID NO: 17 и/или 20) или CDR3 вариабельного участка тяжелой и/или легкой цепи другого LAG-3 антитела, при этом антитело способно специфично связываться с LAG-3 человека. Данные антитела предпочтительно (a) конкурируют за связывание; (b) сохраняют функциональные характеристики; (c) связываются с одним эпитопом и/или (d) обладают той же аффинностью связывания, что и LAG3.5. В другом варианте осуществления антитела также могут включать CDR2 вариабельного участка легкой цепи LAG3.5 (SEQ ID NO: 17 и/или 20) или CDR2 вариабельного участка легкой цепи другого LAG-3 антитела, при этом антитело способно специфично связываться с LAG-3 человека. В другом варианте осуществления антитела по изобретению также могут включать CDR1 вариабельного участка тяжелой и/или легкой цепи LAG3.5 (SEQ ID NO: 17 и/или 20) или CDR1 вариабельного участка тяжелой/или легкой цепи другого LAG-3 антитела, при этом антитело способно специфично связываться с LAG-3 человека.
Консервативные модификации
В другом варианте осуществления антитела по изобретению включают последовательности вариабельного участка тяжелой и/или легкой цепи CDR1, CDR2 и CDR3 последовательностей, которые отличаются от данных последовательностей LAG3.5 одной или несколькими консервативными модификациями. Однако в предпочтительном варианте осуществления остатки 54 и 56 CDR2 VH сохраняются в виде аргинина и серина соответственно (то есть не подвергаются мутации). Очевидно, что могут быть осуществлены такие консервативные модификации последовательностей, которые не приводят к потере способности связывать антиген. См., например, Brummell et al. (1993) Biochem 32:1180-8; de Wildt et al. (1997) Prot. Eng. 10:835-41; Komissarov et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:26864-26870; Hall et al. (1992) J. Immunol. 149:1605-12; Kelley and O'Connell (1993) Biochem. 32:6862-35; Adib-Conquy et al. (1998) Int. Immunol. 10:341-6 and Beers et al. (2000) Clin. Can. Res. 6:2835-43. Соответственно в одном варианте осуществления антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи, включающий CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности и/или вариабельный участок легкой цепи, включающий CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности, при этом:
(a) CDR1 последовательность вариабельного участка тяжелой цепи включает SEQ ID NO: 15 и/или ее консервативные модификации, за исключением положений 54 и 56; и/или (b) CDR3 последовательность вариабельного участка тяжелой цепи включает SEQ ID NO: 17 и ее консервативные модификации; и/или (c) CDR1 и/или CDR2 и/или CDR3 последовательности вариабельного участка легкой цепи включают SEQ ID NO: 18 и/или SEQ ID NO: 19 и/или SEQ ID NO: 20 и/или их консервативные модификации и (d) антитело специфически связывает LAG-3 человека.
- 9 035013
Дополнительно или альтернативно, антитело может обладать одним или несколькими из следующих функциональных свойств, описанных выше, таких как связывание LAG-3 человека с высокой аффинностью, связывание LAG-3 обезьяны, отсутствие связывания LAG-3 мыши, способность ингибировать связывание LAG-3 с МНС молекулами II класса и/или способности стимулировать антигенспецифичные Т-клеточные ответы. В различных вариантах осуществления антитело может представлять собой, например, антитело человека, гуманизированное антитело или химерное антитело. В соответствии с используемым здесь значением термин консервативные модификации последовательности означает аминокислотные модификации, которые незначительно влияют или изменяют характеристики связывания антитела, содержащего аминокислотную последовательность. Данные консервативные модификации включают аминокислотные замещения, добавления или делеции. Модификации могут быть введены в антитело по изобретению стандартными способами, известными из уровня техники, такими как сайтнаправленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Консервативные аминокислотные замещения представляют собой замещения, при которых аминокислотный остаток замещается другим аминокислотным остатком с аналогичной боковой цепью. В уровне техники определены семейства аминокислотных остатков, имеющие аналогичные боковые цепи. Такие семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин), бетаразветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или несколько аминокислотных остатков в CDR участках антитела по изобретению могут быть заменены на другие аминокислотные остатки семейства с теми же боковыми цепями, при этом изменённое антитело может быть проверено на предмет сохранения функции (а именно функций, указанных выше) с применением описанных здесь функциональных анализов.
Сконструированные и модифицированные антитела
Антитела по изобретению могут быть получены с применением антитела, имеющего одну или несколько VH и/или VL последовательностей LAG3.5 в качестве исходного материала для конструирования модифицированного антитела. Антитело может быть сконструировано с помощью модификации одного или нескольких остатков в одном или обоих вариабельных участках (то есть VH и/или VL), например в одном или нескольких CDR участках и/или в одном или нескольких каркасных участках. Дополнительно или альтернативно, антитело может быть сконструировано путем модификации остатков в константном участке(ах), например для изменения эффекторной функции(й) антитела. В определенных вариантах осуществления может применяться трансплантирование CDR для конструирования вариабельных участков антител. Антитела взаимодействуют с антигенами-мишенями преимущественно через аминокислотные остатки, которые расположены в шести определяющих комплементарность участках (CDR) тяжелой и легкой цепи. По этой причине аминокислотные последовательности в CDR являются более разнообразными между отдельными антителами, чем последовательности вне CDR. Поскольку CDR последовательности отвечают за большинство взаимодействий антитело-антиген, является возможным экспрессировать рекомбинантные антитела, которые имитируют свойства специфических встречающихся в природе антител, конструированием экспрессирующих векторов, которые включают CDR последовательности из специфического встречающегося в природе антитела, трансплантированные в каркасные последовательности из другого антитела с иными свойствами (см., например, Riechmann et al. (1998) Nature 332:323-327; Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Queen et al. (1989) Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86:10029-10033; патенты США 5225539; 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370).
Соответственно, другой вариант осуществления изобретения относится к выделенному моноклональному антителу, его антигенсвязывающей части, включающей вариабельный участок тяжелой цепи, включающий CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности, включающие SEQ ID NO: 15, 16, 17, соответственно, и/или вариабельный участок легкой цепи, включающий CDR1, CDR2 и CDR3 последовательности, включающие SEQ ID NO: 18, 19, 20, соответственно (то есть CDR LAG3.5). В то время как данные антитела содержат CDR последовательности VH и VL моноклонального антитела LAG3.5, они могут содержать иные каркасные последовательности.
Данные каркасные последовательности могут быть получены из общедоступных баз данных ДНК или опубликованных источников, которые включают последовательности генов антител зародышевой линии. Например, последовательности ДНК зародышевой линии для генов вариабельного участка тяжёлой и лёгкой цепей человека можно найти в базе данных последовательностей зародышевой линии человека VBase (на сайте в www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), а также в публикациях Kabat et al. (1991), цитированных выше; Tomlinson et al. (1992) The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops J. Mol. Biol. 227:776-798; and Cox et al. (1994) A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage Eur. J. Immunol. 24: 827-836; содержание каждой из которых полностью приведено здесь для ссылки. В качестве другого примера ДНК последовательности зародышевой линии генов вариабельных участков тяжелой и легкой
- 10 035013 цепей человека могут быть найдены в базе данных Genbank. Например, следующие последовательности тяжелой цепи зародышевой линии, входящие в состав НСо7 HuMAb мыши, доступны в базе Genbank под номерами: 1-69 (NG 0010109, NT 024637 & BC070333), 3-33 (NG 0010109 & NT 024637) и 3-7 (NG 0010109 & NT 024637). В качестве другого примера следующие последовательности зародышевой линии тяжелой цепи, входящие в состав HCo12 HuMAb мыши, доступны в GenBank под номерами: 1-69 (NG 0010109, NT 024637 & BC070333), 5-51 (NG 0010109 & NT 024637), 4-34 (NG 0010109 & NT 024637), 330.3 (CAJ556644) & 3-23 (AJ406678). Белковые последовательности антитела сравниваются с последовательностями белков, имеющихся в компилированной базе данных, с применением одного из способов поиска сходства последовательностей, называемых Gapped BLAST (Altschul et al. (1997), выше), которые хорошо известны из уровня техники.
Предпочтительные каркасные последовательности для применения в антителах по изобретению представляет собой антитела, которые структурно сходны с каркасными последовательностями, применяемыми в выбранных антителах по изобретению, например сходные с VH 4-34 каркасными последовательностями и/или VK L6 каркасными последовательностями, применяемыми в предпочтительных моноклональных антителах по изобретению. CDR1, CDR2 и CDR3 VH последовательности и CDR1, CDR2 и CDR3 VK последовательности могут быть трансплантированы в каркасные участки, которые имеют последовательность, идентичную последовательности, обнаруженной в гене иммуноглобулина зародышевой линии, из которой получена указанная каркасная последовательность, или такие CDR последовательности могут быть трансплантированы в каркасные участки, которые содержат одну или несколько мутаций в сравнении с последовательностями зародышевой линии. Например, было обнаружено, что в некоторых случаях предпочтительно осуществить мутацию остатков в каркасных участках для сохранения или повышения антигенсвязывающей способности антитела (см., например, патенты США 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370).
Другой тип модификации вариабельного участка представляет собой мутирование аминокислотных остатков в CDR1, CDR2 и/или CDR3 VH и/или VL участках для обеспечения, таким образом, улучшения одного или нескольких свойств связывания (например, аффинности) представляющего интерес антитела. Для введения мутации(й) может быть осуществлен сайт-специфический мутагенез или ПЦРопосредованный мутагенез, при этом влияние на связывание антитела или другое интересующее функциональное свойство может быть оценено в in vitro или in vivo анализах, описанных здесь и указанных в разделе примеры. Предпочтительно вводятся консервативные модификации (обсуждаемые выше). Мутации могут представлять собой аминокислотные замещения, добавления или делеции, но предпочтительно они представляют собой замещения. Более того, обычно не более чем один, два, три, четыре или пять остатков в CDR участке являются модифицированными.
Соответственно в другом варианте осуществления изобретение относится к выделенным анти-LAG3 моноклональным антителам или их антигенсвязывающим частям, включающим вариабельный участок тяжелой цепи, включающий: (a) VH CDR1 участок, включающий SEQ ID NO: 15 или аминокислотную последовательность, имеющую одно, два, три, четыре или пять аминокислотных замещений, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 15; (b) VH CDR2 участок, включающий SEQ ID NO: 16 или аминокислотную последовательность, имеющую одно, два, три, четыре или пять аминокислотных замещений, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 16 (предпочтительно где положения 54 и 56 такие же, что и в SEQ ID NO:16); (c) VH CDR3 участок, включающий SEQ ID NO: 17 или аминокислотную последовательность, имеющую одно, два, три, четыре или пять аминокислотных замещений, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 17; (d) VL CDR1 участок, включающий SEQ ID NO: 18 или аминокислотную последовательность, имеющую одно, два, три, четыре или пять аминокислотных замещений, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 18; (е) VL CDR2 участок, включающий SEQ ID NO: 19 или аминокислотную последовательность, имеющую одно, два, три, четыре или пять аминокислотных замещений, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 19; и (f) VL CDR3 участок, включающий SEQ ID NO: 20 или аминокислотную последовательность, имеющую одно, два, три, четыре или пять аминокислотных замещений, делеций или добавлений по сравнению с SEQ ID NO: 20.
Сконструированные антитела по изобретению включают антитела, в которых были сделаны модификации в каркасных остатках в VH и/или VL, например для улучшения свойств антитела. Как правило, такие модификации в каркасном участке осуществляют для снижения иммуногенности антитела. Например, один подход заключается в том, чтобы мутировать обратно один или несколько каркасных остатков в соответствующие остатки последовательности зародышевой линии. Более конкретно, антитело, которое было подвергнуто соматической мутации, может содержать каркасные остатки, которые отличаются от последовательности зародышевой линии, из которой получено данное антитело. Такие остатки могут быть идентифицированы сравнением каркасных последовательностей антитела с последовательностями зародышевой линии, из которой получено данное антитело.
Другой тип каркасной модификации включает мутацию одного или нескольких остатков в каркасном участке или даже в одном или нескольких CDR участках для удаления Т-клеточных эпитопов, чтобы тем самым понизить потенциальную иммуногенность антитела. Данный подход также обозначают как
- 11 035013 деиммунизация, и он более подробно описан в патентной публикации США 20030153043.
В качестве дополнения или альтернативы модификациям, производимым в каркасных или CDR участках, антитела по изобретению могут быть сконструированы таким образом, что они включают модификации в Fc участке, обычно для изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела, таких как период полужизни в сыворотке, фиксация комплемента, связывание Fc рецептора и/или антигензависимая клеточная цитотоксичность. Более того, антитело по изобретению может быть также химически модифицировано (например, к антителу могут быть присоединены одна или несколько химических групп) или может быть модифицировано для изменения его гликозилирования, опять для изменения одного или нескольких функциональных свойств данного антитела. Каждый из данных вариантов описан более подробно ниже. Нумерация остатков в Fc участке соответствует нумерации по EU-индексу Kabat. В предпочтительном варианте осуществления антитело представляет собой антитело изотипа IgG4, включающее мутацию с замещением серина на пролин в положении, соответствующем положению 228 (S228P; EU индекс) в шарнирном участке константного участка тяжелой цепи. Было отмечено, что данная мутации устраняет гетерогенность дисульфидных мостиков между тяжелыми цепями в шарнирном участке (Angal et al. выше; положение 241 на основе системы нумерации Kabat). В одном варианте осуществления шарнирный участок CH1 модифицирован таким образом, что количество остатков цистеина в шарнирном участке изменено, например увеличено или уменьшено. Данный подход также описан в патенте США 5677425. Количество остатков цистеина в шарнирном участке CH1 изменяют, например, для облегчения сборки легких и тяжелых цепей или для увеличения или уменьшения стабильности антитела.
В другом варианте осуществления мутация в Fc шарнирном участке антитела понижает биологический период полужизни антитела. Более конкретно, одну или несколько мутаций аминокислот вводят в участок контакта CH2-CH3 домена Fc-шарнирного фрагмента таким образом, чтобы ослаблялось связывание антитела с Staphylococcyl белком A (SpA) по сравнению со связыванием нативного Fc-шарнирного домена SpA. Данный подход также описан в патенте США 6165745.
В другом варианте осуществления антитело модифицируют для повышения его биологического периода полужизни. Возможны различные подходы. Например, могут быть введены одна или несколько следующих мутаций: T252L, T254S, T256F, как описано в патенте США 6277375. Альтернативно, для увеличения биологического периода полужизни антитело может быть изменено в CH1 или CH2 участке таким образом, что оно содержит эпитоп связывания рецептора реутилизации, образованного из двух петель CH2 домена Fc участка IgG, как описано в патентах США 5869046 и 6121022.
В других вариантах осуществления Fc участок изменяют заменяя по меньшей мере один аминокислотный остаток на другой аминокислотный остаток для изменения эффекторной функции(й) антитела. Например, одна или несколько аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 и 322, могут быть заменены другим аминокислотным остатком таким образом, что антитело имеет измененную аффинность в отношении эффекторного лиганда, но сохраняет антигенсвязывающую способность исходного антитела. Эффекторным лигандом, в отношении которого аффинность изменяется, может представлять собой, например, Fc рецептор или С1-компонент комплемента. Данный подход также описан в патентах США 5624821 и 5648260.
В другом примере одна или несколько аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 329, 331 и 322, могут быть заменены другим аминокислотным остатком таким образом, что антитело имеет измененное связывание C1q и/или уменьшенную или устраненную комплементзависимую цитотоксичность (CDC). Данный подход также описан в патенте США 6194551.
В другом примере изменяют один или несколько аминокислотных остатков в положениях аминокислот 231 и 239, таким образом изменяя способность антитела фиксировать комплемент. Данный подход также описан в публикации РСТ WO 94/29351.
В другом примере Fc участок модифицируют для повышения способности антитела опосредовать антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и/или для повышения аффинности антитела по отношению к Fcy рецептору путем модификации одной или нескольких аминокислот в следующих положениях: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 или 439. Данный подход также описан в публикации РСТ WO 00/42072. Более того, сайты связывания на IgG1 человека для FcyR1, FcyRII, FcyRIII и FcRn были картированы, при этом были описаны варианты с улучшенным связыванием (см. Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604). Было показано, что определенные мутации в положениях 256, 290, 298, 333, 334 и 339 улучшают связывание с FcyRIII. Кроме того, было показано, что следующие сочетанные мутации улучшают связывание FcyRIII: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A и S298A/E333A/K334A. В другом варианте осуществления гликозилирование антитела является модифицированным. Например, может быть получено агликозилированное антитело (то есть антитело без гликозилирования). Гликозилирование может быть изменено с целью, например, увеличения аффинности антитела к антигену. Такие модификации углеводов могут
- 12 035013 быть осуществлены, например, путем изменения одного или нескольких сайтов гликозилирования в последовательности антитела. Например, могут быть осуществлены одно или несколько аминокислотных замещений, которые приводят к устранению одного или нескольких сайтов гликозилирования каркасного участка вариабельного участка, благодаря чему устраняется гликозилирование в данном сайте. Данное агликозилироание может увеличивать аффинность антитела в отношении антигена. См., например, патенты США 5714350 и 6350861.
Дополнительно или альтернативно, антитело может быть получено таким образом, чтобы оно имело измененный тип гликозилирования, например гипофукозилированное антитело, содержащее сниженное количество остатков фукозы, или антитело, содержащее повышенное количество двухантенных GlcNac структур. Было показано, что такие измененные паттерны гликозилирования повышают ADCCспособность антител. Данные модификации углеводов могут быть выполнены, например, путем экспрессии антитела в клетке-хозяине с измененным механизмом гликозилирования. Клетки с измененным механизмом гликозилирования были описаны в уровне техники и могут применяться в качестве клетокхозяев для экспрессии в них рекомбинантных антител по изобретению, чтобы таким образом получить антитело с измененным гликозилированием. Например, в линиях клеток Ms704, Ms705 и Ms709 отсутствует ген фукозилтрансферазы, FUT8 (а(1,6)-фукозилтрансфераза), так что в антителах, экспрессируемых в Ms704, Ms705 и Ms709 клеточных линиях, отсутствует фукоза в углеводах. FUT8-/- клеточные линии Ms704, Ms705 и Ms709 были созданы таргетированным разрушением гена FUT8 в CHO/DG44 клетках с применением двух замещающих векторов (см. публикацию патента США 20040110704 и Yamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol Bioeng 87:614-22). В качестве другого примера в ЕР 1176195 описана клеточная линия с функционально разрушенным геном FUT8, который кодирует фукозилтрансферразу, так что у антител, экспрессируемых в такой клеточной линии, наблюдается гипофукозилирование за счет снижения или устранения фермента, имеющего отношение к а-1,6-связи. В ЕР 1176195 также описаны клеточные линии, которые имеют низкую ферментативную активность в отношении присоединения фукозы к N-ацетилглюкозамину, который связывается с Fc участком антитела или не имеет ферментативной активности, например клеточная линия миеломы крысы YB2/0 (АТСС CRL 1662). В публикации РСТ WO 03/035835 описан вариант клеточной линии СНО, Lec13 клетки, с уменьшенной способностью присоединять фукозу к Asn(297)-связанным углеводам, что также приводит к гипофукозилированию антител, экспрессируемых в данной клетке-хозяине (см. также Shields et al. (2002) J. Biol. Chem. 277: 2673326740). Антитела с модифицированным профилем гликозилирования могут быть получены в яйцах кур, как описано в РСТ публикации WO 06/089231. Альтернативно, антитела с модифицированным профилем гликозилирования могут быть получены в клетках растений, таких как Lemna. Способы получения антител в растительной системе описаны в заявке США, соответствующей номеру дела в книге записей поверенного Alston & Bird LLP 040989/314911, поданной 11 августа 2006. В публикации РСТ WO 99/54342 описаны клеточные линии, сконструированные для экспрессии гликопротеин-модифицирующих гликозилтрансфераз (например, в(1,4)-Л-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII)) таким образом, что антитела, экспрессируемые в таких сконструированных клеточных линиях, проявляют увеличенное разделение на две половины GlcNac структур, что приводит к увеличенной ADCC активности антител (см. также Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180). Альтернативно, остатки фукозы антитела могут быть отщеплены с помощью фермента фукозидазы, например фукозидаза a-L-фукозидаза удаляет фукозильные остатки из антител (Tarentino et al. (1975) Biochem. 14: 5516-23).
Другая модификация антител по изобретению представляет собой пэгилирование. Антитело может быть пэгилировано, например, для повышения биологического периода полужизни антитела (например, в сыворотке). Для пэгилирования антитела антитело или его фрагмент, как правило, подвергают реакции с полиэтиленгликолем (ПЭГ), таким как реакционноспособный сложный эфир или альдегидное производное ПЭГ, в условиях, при которых одна или несколько ПЭГ групп присоединяются к антителу или фрагменту антитела. Предпочтительно пэгилирование осуществляют посредством реакции ацилирования или реакции алкилирования с реакционноспособной молекулой ПЭГ (или с аналогичным реакционноспособным водорастворимым полимером). В соответствии с используемым здесь значением термин полиэтиленгликоль охватывает любую из форм ПЭГ, которые применялись для дериватизации других белков, такую как моно^-^Далкокси- или арилоксиполиэтиленгликоль или малеимид полиэтиленгликоля. В некоторых вариантах осуществления пэгилируемое антитело представляет собой агликозилированное антитело. Способы пэгилирования белков известны из уровня техники и могут применяться к антителам по изобретению. См., например, ЕР 0154316 и ЕР 0401384.
Физические свойства антител
Антитела по изобретению могут быть охарактеризованы их различными физическими свойствами для детектирования и/или различения их классов.
Например, антитела могут содержать один или несколько сайтов гликозилирования в вариабельном участке тяжелой или легкой цепи. Данные сайты гликозилирования могут обеспечивать повышенную иммуногенность антитела или изменение pK антитела вследствие изменения связывания антигена (Marshall et al. (1972) Annu Rev Biochem 41: 673-702; Gala and Morrison (2004) J Immunol 172:5489-94; Wallick
- 13 035013 et al (1988) J Exp Med 168: 1099-109; Spiro (2002) Glycobiology 12:43R-56R; Parekh et al. (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al. (2000) Mol Immunol 37:697-706). Было показано, что гликозилирование происходит в мотивах, содержащих N-X-S/T последовательность. В некоторых случаях предпочтительно иметь анти-LAG-3 антитело без гликозилирования вариабельного участка. Это может быть достигнуто либо путем отбора антител, которые не содержат мотив гликозилирования в вариабельном участке, либо путем осуществления мутаций остатков в участке гликозилирования.
В предпочтительном варианте осуществления антитела не содержат сайтов изомерии аспарагина. Деамидирование аспарагина может возникать в N-G или D-G последовательностях и приводить к образованию остатка изоаспарагиновой кислоты, который вызывает образование петли полипептидной цепи или снижение ее стабильности (эффект изаспарагиновой кислоты).
Каждое антитело обладает уникальной изоэлектрической точкой (pI), которая обычно лежит в диапазоне рН от 6 до 9,5. pI антитела IgG1 обычно лежит в диапазоне рН 7-9,5, а pI антитела IgG4 обычно лежит в диапазоне рН 6-8. Существует предположение, что антитела, pI которых находится за пределами нормального диапазона, могут обладать некоторым нарушением фолдинга и нестабильностью при in vivo условиях. Таким образом, предпочтительно получать анти-LAG-3 антитела, значение pI которых лежит в нормальном диапазоне. Это может быть достигнуто либо путем отбора антитела с pI в нормальном диапазоне, либо путем осуществления мутаций заряженных поверхностных остатков.
Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитела изобретения
В другом аспекте изобретение относится к молекулам нуклеиновых кислот, которые кодируют вариабельные участки тяжелой и/или легкой цепи, или CDR, антител по изобретению. Нуклеиновые кислоты могут присутствовать в цельных клетках, в клеточном лизате или в частично очищенной или практически чистой форме. Нуклеиновая кислота является выделенной или по существу чистой, если она очищена от других клеточных компонентов или других примесей, например от других клеточных нуклеиновых кислот или белков, стандартными способами, включая обработку щелочью/ДСН, центрифугирование в градиенте плотности CsCl, колоночную хроматографию, электрофорез на агарозном геле и другие способы, хорошо известные из уровня техники. См., Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York. Нуклеиновая кислота по изобретению может представлять собой, например, ДНК или РНК, и может содержать или не содержать интронные последовательности. В предпочтительном варианте осуществления нуклеиновая кислота представляет собой молекулу кДНК. Нуклеиновые кислоты по изобретению могут быть получены с применением стандартных способов молекулярной биологии. В случае антител, экспрессированных в гибридомах (например, гибридомах, полученных от трансгенных мышей, имеющих гены иммуноглобулина человека, как более подробно описано ниже), кДНК, кодирующие лёгкую и тяжёлую цепи антитела, полученного с применением гибридомы, могут быть получены обычными способами ПЦР-амплификации или кДНК клонирования. В случае антител, полученных из библиотеки генов иммуноглобулинов (например, с применением способов фагового дисплея), кодирующая такие антитела нуклеиновая кислота может быть получена из библиотеки генов.
Предпочтительные нуклеиновые кислоты по изобретению включают нуклеиновые кислоты, которые кодируют VH и VL последовательности моноклонального антитела LAG3.5 (SEQ ID NO: 12 и 14, соответственно) или CDR. После получения фрагментов ДНК, кодирующих VH и VL сегменты, данные фрагменты ДНК могут быть далее обработаны стандартными способами рекомбинантных ДНК, например для превращения генов вариабельного участка в полноразмерные гены цепи антитела, в гены Fab фрагмента или в ген scFv. При данных манипуляциях фрагмент ДНК, кодирующий VL или VH, функционально связывают с другим фрагментом ДНК, кодирующим другой белок, такой как константный участок антитела или гибкий линкер. Термин оперативно связан, используемый в данном контексте, предназначен для обозначения того, что два фрагмента ДНК связаны так, что аминокислотные последовательности, кодируемые двумя фрагментами ДНК, остаются в рамке считывания.
Выделенная ДНК, кодирующая ι-участок, может быть превращена в полноразмерный ген тяжелой цепи функциональным связыванием ^-кодирующей ДНК с другой молекулой ДНК, кодирующей константные участки тяжелой цепи (CH1, CH2 и CH3). Последовательности генов константных участков тяжелой цепи человека известны из уровня техники (см., Kabat et al. (1991), выше), а фрагменты ДНК, включающие такие участки, могут быть получены с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константный участок тяжелой цепи может представлять собой константный участок IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM или IgD, но наиболее предпочтительно представляет собой константный участок IgG1 или IgG4. Для гена Fab фрагмента тяжелой цепи ^-кодирующая ДНК может быть оперативно связана с другой молекулой ДНК, кодирующей только константный участок CH1 тяжелой цепи. Выделенная ДНК, кодирующая VL участок, может быть превращена в полноразмерный ген легкой цепи (а также ген легкой цепи Fab) путем функционального связывания ^-кодирующей ДНК с другой молекулой ДНК, кодирующей константный участок легкой цепи CL. Последовательности генов константных участков легкой цепи человека известны из уровня техники (см., например, Kabat et al., выше), а фрагменты ДНК, включающие такие участки, могут быть получены путем стандартной ПЦР-амплификации. В предпочтительных вариантах осуществления константный участок легкой цепи может представлять собой константный
- 14 035013 участок каппа или лямбда. Для создания гена scFv VH- и Уь-кодирующие фрагменты ДНК функционально связывают с другим фрагментом, кодирующим гибкий линкер, например, кодирующим аминокислотную последовательность (Gly4-Ser)3 (SEQ ID NO: 28), так что VH и VL последовательности могут быть экспрессированы в виде непрерывного одноцепочечного белка с VH и VL участками, соединенными гибким линкером (см., например, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348: 552-554).
Получение моноклональных антител по изобретению
Моноклональные антитела (mAb) по настоящему изобретению могут быть получены с применением хорошо известного способа на основе гибридизации соматических клеток (гибридом) по Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495. Другие варианты получения моноклональных антител включают способы на основе вирусной или онкогенной трансформации В-лимфоцитов и фаговый дисплей. Химерные или гуманизированные антитела также хорошо известны из уровня техники. См., например, патенты США 4816567; 5225539; 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370, содержание которых полностью приведено здесь для ссылки.
В предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению представляют собой моноклональные антитела человека. Такие моноклональные антитела человека, направленные против LAG-3 человека, могут быть получены с применением трансгенных или трансхромосомных мышей, имеющих части иммунной системы человека вместо системы мыши. Данные трансгенные или трансхромосомные мыши включают мышей, обозначаемых здесь как HuMAb Mouse® и KM Mouse®, соответственно, и совместно обозначаются здесь как мыши с Ig человека.
HuMAb Mouse® (Medarex®, Inc.) содержит мини-локусы гена иммуноглобулина человека, которые кодируют переаранжированные последовательности тяжёлой (μ и γ) и лёгкой к цепей иммуноглобулина человека, вместе с таргетированными мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы μ ик цепей (см., например, Lonberg, (1994) Nature 368(6474): 856-859).
Таким образом, данные мыши обнаруживают сниженную экспрессию IgM мыши или к, при этом в ответ на иммунизацию введенные трансгены тяжелой и легкой цепей человека подвергаются переключению класса и соматической мутации с продуцированием моноклонального IgGK человека с высокой аффинностью (Lonberg et al. (1994), выше; описано у Lonberg (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93, и Harding and Lonberg (1995) Ann. NY. Acad. Sci. 764:536-546). Получение и применение HuMAb Mouse®, а также геномные модификации, имеющиеся у таких мышей, также описаны у Taylor et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:62876295; Chen et al. (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al. (1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor et al. (1994) International Immunology 6:579-591; и Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851, содержание которых полностью приведено здесь для ссылки. См. также патенты США 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299; 5770429; и 5545807; РСТ публикации WO 92/03918; WO 93/12227; WO 94/25585; WO 97/13852; WO 98/24884; WO 99/45962 и WO 01/14424, содержание которых полностью приведено здесь для ссылки.
В другом варианте осуществления антитела человека по изобретению могут быть продуцированы с применением мышей, имеющих последовательности иммуноглобулина человека в трансгенах и трансхромосомах, например мышей, имеющих трансген тяжелой цепи человека и трансхромосому легкой цепи человека. Данные мыши обозначаются здесь как KM mouse® и подробно описаны в РСТ публикации WO 02/43478. Модифицированная форма такой мыши, которая также характеризуется гомозиготным нарушением эндогенного Fc'/RIIB рецепторного гена, также описана в РСТ публикации WO 02/43478 и обозначается здесь как KM/FCGR2D mouse®. Кроме того, могут применяться мыши с НСо7 или НСо12 трансгенами тяжелой цепи или ими обоими.
Дополнительные варианты трансгенных животных включают Xenomouse (Abgenix, Inc., патенты США 5939598; 6075181; 6114598; 6150584 и 6162963). Другие варианты включают ТС мышей (Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727) и коров, имеющих трансхромосомы тяжелой и легкой цепи человека (Kuroiwa et al. (2002) Nature Biotechnology 20: 889-894; PCT публикация WO 02/092812). Содержание данных патентов и публикаций полностью приведено здесь для ссылки.
В одном варианте осуществления моноклональные антитела человека по изобретению получают с применением способов фагового дисплея для скрининга библиотек генов иммуноглобулинов человека. См., например, патенты США 5223409; 5403484; 5571698; 5427908; 5580717; 5969108; 6172197; 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915; и 6593081, содержание которых полностью приведено здесь для ссылки. Моноклональные антитела человека по изобретению могут быть также получены с применением SCID мышей, в которых иммунные клетки человека были реконструированы таким образом, что после иммунизации могла быть получена реакция антител человека. См., например, патенты США 5476996 и 5698767, содержание которых полностью приведено здесь для ссылки.
В другом варианте осуществления анти-LAG-3 антитела человека получают с применением фагово- 15 035013 го дисплея, при котором фаги включают нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела, продуцируемые в трансгенных животных, ранее иммунизированных LAG-3. В предпочтительном варианте осуществления трансгенное животное представляет собой HuMab, KM или Kirin мышь. См., например, патент США
6794132, содержание которого полностью приведено здесь для ссылки.
Иммунизация мышей Ig человека
В одном варианте осуществления изобретения мышей с Ig человека иммунизируют очищенным или обогащенным препаратом на основе LAG-3 антигена, рекомбинантного LAG-3 белка или клеток, экспрессирующих LAG-3 белок. См., например, Lonberg et al. (1994), выше; Fishwild et al. (1996), выше; PCT публикации WO 98/24884 или WO 01/14424, содержание которых полностью приведено здесь для ссылки. В предпочтительном варианте осуществления мышей возрастом 6-16 недель иммунизируют 5-50 мкг LAG-3 белка. Альтернативно, применяют слитый полипептид из части LAG-3 и части, не являющейся LAG-3.
В одном варианте осуществления трансгенных мышей иммунизируют интраперитонеально (I/P) или внутривенно (I/V) LAG-3 антигеном в полном адъюванте Фрейнда с последующими I/P или I/V иммунизациями антигеном в неполном адъюванте Фрейнда. В других вариантах осуществления применяют адъюванты, не являющиеся адъювантом Фрейнда, или цельные клетки без адъюванта. Плазма может быть подвергнута скринингу с применением ELISA, при этом клетки мышей с достаточными уровнями титра анти-LAG-3 иммуноглобулина человека могут применяться для получения слитых конструктов.
Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела человека по изобретению
Для получения гибридом, продуцирующих моноклональные антитела человека по изобретению, спленоциты и/или клетки лимфатических узлов иммунизированных мышей могут быть выделены и слиты с подходящей иммортализованной клеточной линией, такой как линия миеломных клеток мыши. Полученные гибридомы могут быть подвергнуты скринингу на продуцирование антигенспецифичных антител. Получение гибридом хорошо известно из уровня техники. См., например, Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York.
Получение трансфертом, продуцирующих моноклональные антитела по изобретению
Антитела по изобретению могут быть также получены в трансфектоме клетки-хозяина, например с применением комбинирования способов рекомбинантных ДНК и способов трансфекции генов, как хорошо известно из уровня техники (например, Morrison, S. (1985) Science 229: 1202). В одном варианте ДНК, кодирующую части или полноразмерные легкие и тяжелые цепи, полученную стандартными молекулярно-биологическими способами, вставляют в один или несколько векторов экспрессии, так что гены являются функционально связанными с транскрипционными и трансляционными регуляторными последовательностями. В данном контексте термин функционально связан означает, что ген антитела лигирован в вектор таким образом, что последовательности контроля транскрипции и трансляции в векторе осуществляют свою функцию, заключающуюся в регулировании транскрипции и трансляции гена антитела.
Термин регуляторная последовательность включает промоторы, энхансеры и другие элементы контроля экспрессии (например, сигналы полиаденилирования), которые контролируют транскрипцию или трансляцию генов цепей антитела. Данные регуляторные последовательности описаны, например, у Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)). Предпочтительные регуляторные последовательности для экспрессии в клетке-хозяине млекопитающего включают вирусные элементы, которые приводят к высоким уровням экспрессии белка в клетках млекопитающих, такие как промоторы и/или энхансеры, полученные из цитомегаловируса (CMV), вируса обезьян 40 (SV40), аденовируса (например, основной поздний промотор аденовируса (AdMLP)) и вируса полиомы. Альтернативно, могут применяться невирусные регуляторные последовательности, такие как промотор убиквитина или промотор β-глобина. Кроме того, могут применяться регуляторные элементы, составленные из последовательностей из разных источников, такие как промоторная система SRa, которая содержит последовательности из раннего промотора SV40, и длинный концевой повтор вируса Тклеточного лейкоза человека типа 1 (Takebe et al. (1988) Mol. Cell. Biol. 8: 466-472). Вектор экспрессии и контрольные последовательности экспрессии выбирают таким образом, чтобы они были совместимы с применяемой клеткой-хозяином.
Г ен легкой цепи антитела и ген тяжелой цепи антитела могут быть вставлены в один или различные векторы экспрессии. В предпочтительных вариантах осуществления применяют вариабельные участки для создания полноразмерных генов антитела любого изотипа путем их встраивания в векторы экспрессии, которые уже кодируют константный участок тяжелой цепи и константный участок легкой цепи требуемого изотипа, так что VH сегмент функционально связан с CH сегментом(ами) в векторе, а VL сегмент функционально связан с CL сегментом в векторе. Дополнительно или альтернативно, рекомбинантный вектор экспрессии может кодировать сигнальный пептид, обеспечивающий секрецию цепи антитела из клетки-хозяина. Ген цепей антитела может быть клонирован в вектор, так что сигнальный пептид связан в рамке считывания с аминоконцом гена цепей антитела. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (то есть сигнальный пеп- 16 035013 тид из неиммуноглобулинового белка). В дополнение к генам цепей антитела и регуляторным последовательностям рекомбинантные векторы экспрессии по изобретению могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клеткаххозяевах (например, ориджины репликации) и селектируемые маркерные гены. Селектируемый маркерный ген обеспечивает отбор клеток-хозяев, в которые был введен вектор (см., например, патенты США 4399216, 4634665 и 5179017). Например, в типичном случае селектируемый маркерный ген обусловливает устойчивость к лекарственным веществам, таким как G418, гигромицин или метотрексат, клеткихозяина, в которую был введен вектор. Предпочтительные селектируемые маркерные гены включают в ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) (для применения в dhfr-клетках-хозяевах с отбором/амплификацией в присутствии метотрексата) и ген пео (для отбора в присутствии G418).
Для экспрессии легких и тяжелых цепей экспрессирующий вектор(ы), кодирующие тяжелые и легкие цепи, трансфицируют в клетку-хозяина с помощью стандартных способов. Различные формы термина трансфекция охватывают широкий спектр способов, широко применяемых для введения экзогенной ДНК в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяин, например электропорацию, кальцийфосфатную преципитацию, ДЭАЭ-декстрановую трансфекцию и им подобные. Хотя теоретически возможно экспрессировать антитела по изобретению в прокариотических или эукариотических клеткаххозяевах, наиболее предпочтительной является экспрессия антител в эукариотических клетках и, наиболее предпочтительно, в клетках-хозяевах млекопитающих, поскольку такие эукариотические клетки, и в особенности клетки млекопитающих, скорее чем прокариотические, подходят для сборки и секретирования соответствующим образом сложенного и иммунологически активного антитела. Предпочтительные клетки-хозяева млекопитающих для экспрессии рекомбинантных антител по изобретению включают клетки яичника китайского хомячка (СНО клетки) (включая dhfr- CHO клетки, описанные у Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220, применяемые с селектируемым маркером DHFR, например как описано у R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) J. Mol. Biol. 159: 601-621), NSO клетки миеломы, COS клетки и SP2 клетки. В частности, для применения с NSO клетками миеломы другая предпочтительная система экспрессии представляет собой систему экспрессии на основе GS генов, описанную в WO 87/04462, WO 89/01036 и ЕР 338,841. Если рекомбинантные векторы экспрессии, кодирующие гены антитела, вводят в клетки-хозяева млекопитающего, антитела продуцируют путем культивирования клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для обеспечения экспрессии антитела в клеткаххозяевах, или, более предпочтительно секреции антитела в культуральную среду, в которой выращиваются клетки-хозяева. Антитела могут быть выделены из культуральной среды с применением стандартных способов очистки белков.
Иммуноконъюгаты
Антитела по изобретению могут быть конъюгированы с терапевтическим агентом для образования иммуноконъюгата, такого как конъюгат антитело-лекарство (ADC). Подходящие терапевтические агенты включают антиметаболиты, алкилированные агенты, связывающие малую бороздку ДНК агенты, ДНК интеркалаты, агенты для поперечного связывания ДНК, ингибиторы гистонацетилазы, ингибиторы ядерного экспорта, ингибиторы протеасомы, ингибиторы топоизомеразы I или II, ингибиторы белков теплового шока, ингибиторы тирозинкиназы, антибиотики и антимитотические агенты. В ADC антитела и терапевтический агент предпочтительно конъюгированы через расщепляемый линкер, такой как пептидильный, дисульфидный или гидразонный линкер. Более предпочтительно, линкер представляет собой пептидильный линкер, такой как Val-Cit, Ala-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Pro-Val-Gly-Val-Val (SEQ ID NO: 39), Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Ala-Ala-Asn, Cit-Cit, Val-Lys, Lys, Cit, Ser или Glu. ADC могут быть получены как описано в патентах США 7087600; 6989452 и 7129261; РСТ публикациях WO 02/096910; WO 07/038658; WO 07/051081; WO 07/059404; WO 08/083312 и WO 08/103693; патентных публикациях США 20060024317; 20060004081 и 20060247295, описание которых приведено здесь для ссылки.
Биспецифические молекулы
В другом аспекте настоящее описание раскрывает биспецифические молекулы, включающие одно или несколько антител по изобретению, связанные по меньшей мере с одной другой функциональной молекулой, например другим пептидом или белком (например, другим антителом или лигандом для рецептора) для получения биспецифической молекулы, которая связывается, по меньшей мере, с двумя различными сайтами связывания или молекулами-мишенями. Таким образом, в соответствии с используемым здесь значением термин биспецифическая молекула включает молекулы, обладающие тремя или более специфичностями. В предпочтительном варианте осуществления биспецифическая молекула включает первую специфичность связывания по отношению к LAG-3 и вторую специфичность связывания для инициации молекулы, которая захватывает цитотоксические эффекторные клетки, которые могут уничтожать экспрессирующую LAG-3 клетку-мишень. Примеры подходящих инициирующих молекул представляют собой CD64, CD89, CD16 и CD3. См., например, Kufer et al., TRENDS in Biotechnology, 22 (5), 238-244 (2004).
В одном варианте осуществления биспецифическая молекула обладает помимо анти-Fc специфичности связывания и анти-LAG-3 специфичности связывания третьей специфичностью. Третья специфичность может быть направлена в отношении фактора усиления (EF), например молекула, которая связыва- 17 035013 ется с поверхностным белком, вовлеченным в цитотоксическую активность, и за счет этого повышает иммунный ответ против клетки-мишени. Например, фактор против усиления может связывать цитотоксическую Т-клетку (например, через CD2, CD3, CD8, CD28, CD4, CD40 или ICAM-1) или другую иммунную клетку, что приводит к увеличенному иммунному ответу против клетки-мишени.
Биспецифические молекулы могут иметь различные формат и размер. На одной границе спектра размеров биспецифическая молекула сохраняет традиционный формат антитела за исключением того, что вместо обладания двумя участками связывания с идентичной специфичностью, оно обладает двумя участками связывания, каждый из которых имеет различную специфичность.
На другой границе находятся биспецифические молекулы, состоящие из двух одноцепочечных фрагментов антитела (scFv's), связанных пептидной цепью - так называемый Bs(scFv)2 конструкт. Биспецифические молекулы с промежуточным размером включают два различных F(ab) фрагмента, связанных пептидным линкером. Биспецифические молекулы этого и иных форматов могут быть получены с помощью генетической модификации, соматической гибридизации или химическим способов. См., например, Kufer et al., cited supra; Cao and Suresh, Bioconjugate Chemistry, 9 (6), 635-644 (1998); и van Spriel et al., Immunology Today, 21 (8), 391-397 (2000), и приведенные здесь ссылки.
Фармацевтические композиции
В другом аспекте настоящее описание включает фармацевтическую композицию, включающую одно или несколько антител по настоящему изобретению, соединенные вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Композиция может необязательно содержать один или несколько дополнительных фармацевтически активных ингредиентов, таких как другое антитело или лекарство. Фармацевтические композиции по изобретению также могут быть введены в рамках комбинационной терапии, например, с другим иммуностимулирующим агентом, противораковым агентом, противовирусным агентом или вакциной, так что анти-LAG-3 антитело стимулирует иммунный ответ против вакцины.
Фармацевтическая композиция может включать любое количество эксципиентов. Эксципиенты, которые могут применяться, включают носители, поверхностно-активные агенты, загустители или эмульгирующие агенты, твердые связующие, средства для диспергирования или суспендирования, растворители, красители, отдушки, оболочки, распадающиеся агенты, любриканты, подсластители, консерванты, изотонические агенты и их комбинации. Отбор и применение подходящих эксципиентов описан у Gennaro, ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 2003), описание которого приведено здесь для ссылки. Предпочтительно фармацевтическая композиция является подходящей для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинномозгового или эпидермального введения (например, с помощью инъекции или инфузии). В зависимости от пути введения активное соединение может быть покрыто материалом для его защиты от воздействия кислот и других естественных условий, которые могут привести к его инактивации. Выражение парентеральное введение в соответствии с используемым здесь значением означает способы введения, отличные от энтерального и топического введения, обычно с помощью инъекции, и включает, без ограничения, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, внутрикапсульную, внутриглазничную, внутрисердечную, интрадермальную, интраперитонеальную, транстрахеальную, подкожную, внутрикожную, внутрисуставную, подкапсульную, субарахноидальную, интракапсульную, эпидуральную и надчревную инъекцию и инфузию. Альтернативно, антитело по изобретению может вводиться непарентеральным способом, таким как топический, эпидермальный способ или способ введения через слизистую оболочку, например интраназально, перорально, вагинально, ректально, сублингвально или местно. Фармацевтические композиции по изобретению могут включать фармацевтически приемлемые соли. Термин фармацевтически приемлемая соль означает соль, которая сохраняет желаемую биологическую активность исходного соединения и не привносит никаких нежелательных токсикологических эффектов. Примеры таких солей включают кислотно-аддитивные соли и основно-аддитивные соли. Кислотноаддитивные соли включают соли, полученные из нетоксичных неорганических кислот, таких как соляная, азотная, фосфорная, серная, бромистоводородная, йодистоводородная, фосфористая и им подобные, а также из нетоксичных органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, гидроксиалкановые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты и им подобные. Основно-аддитивные соли включают соли, полученные на основе щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, магний, кальций и им подобных, а также на основе нетоксичных органических аминов, таких как N.N'-дибензилэтилендиамин. N-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, прокаин и им подобных.
Фармацевтические композиции могут быть в форме стерильных водных растворов или дисперсий. Они также могут быть получены в форме микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации лекарственного средства.
Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с материалом-носителем для приготовления отдельной лекарственной формы, будет варьироваться в зависимости от подвергаемого лечению субъекта и конкретного способа введения и в целом будет соответствовать количеству композиции, оказывающему терапевтический эффект. Обычно в расчете на сто процентов это количество будет находиться в диапазоне от около 0,01 до около 99% процентов активного ингредиента, предпочти- 18 035013 тельно от около 0,1 до около 70%, наиболее предпочтительно от около 1 до около 30% активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
Режимы дозирования подбирают для обеспечения оптимального желаемого отклика (например, реакции на терапию). Например, может быть введен один болюс или могут быть введены несколько раздельных доз с течением времени или доза может быть пропорционально снижена или увеличена в зависимости от терапевтической ситуации. Особенно предпочтительным является составление парентеральных композиций в виде дозированной лекарственной формы для облегчения введения и единообразия дозировки. Термин дозированная лекарственная форма в соответствии с используемым здесь значением означает физически дискретные единицы, подходящие в качестве единичных дозированных форм для подвергаемых лечению субъектов; каждая единица содержит предварительно определенное количество активного соединения, подсчитанное таким образом, чтобы обеспечивать достижение желаемого терапевтического эффекта вместе с требуемым фармацевтическим носителем. Альтернативно, антитело может быть введено в виде состава с замедленным высвобождением, в случае которого требуется менее частое введение. Для введения антитела доза находится в диапазоне от около 0,0001 до 100 мг/кг и чаще от 0,01 до 5 мг/кг массы тела хозяина. Например, дозы могут составлять 0,3 мг/кг массы тела, 1 мг/кг массы тела, 3 мг/кг массы тела, 5 мг/кг массы тела или 10 мг/кг массы тела или находиться в диапазоне 110 мг/кг. Примерная схема лечения включает введение один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз каждые четыре недели, один раз в месяц, один раз каждые 3 месяца или один раз каждые 3-6 месяцев. Предпочтительные схемы введения доз анти-LAG-3 антитела по изобретению включают 1 мг/кг массы тела или 3 мг/кг массы тела при внутривенном введении, причем данное антитело вводят с применением одной из следующих схем введения доз: (i) каждые четыре недели первые шесть доз, далее каждые три месяца; (ii) каждые три недели; (iii) 3 мг/кг массы тела однократно и далее 1 мг/кг массы тела каждые три недели. В некоторых способах дозировку корректируют для достижения концентрации антитела в плазме около 1-1000 мкг/мл, а в некоторых способах - около 25-300 мкг/мл.
Терапевтически эффективная доза анти-LAG-3 антитела по изобретению предпочтительно приводит к снижению тяжести симптомов заболевания, увеличению частоты и продолжительности бессимптомных периодов заболевания или предупреждению ухудшения или нетрудоспособности вследствие заболевания. Например, для лечения субъектов с опухолью терапевтически эффективная дозировка предпочтительно ингибирует рост опухоли по меньшей мере на 20%, более предпочтительно по меньшей мере на 40%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 60% и более предпочтительно по меньшей мере на 80% относительно субъекта в отсутствие лечения. Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения может снижать размер опухоли или иным способом облегчать симптомы у субъекта, который, как правило, представляет собой человека или другое млекопитающее.
Фармацевтическая композиция может представлять собой состав с контролируемым высвобождением, включая имплантаты, чрескожные пластыри и микроинкапсулированные системы для доставки. Могут применяться биодеградируемые биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. См., например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Терапевтические композиции могут вводится с помощью медицинских устройств, таких как устройства для подкожных инъекций без иглы (например, патенты США 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 и 4596556); (2) помпы для микроинфузий (патент США 4487603); (3) чрескожные устройства (патент США 4486194); (4) инфузионные аппараты (патенты США 4447233 и 4447224) и (5) осмотические устройства (патенты США 4439196 и 4475196); описание которых приведено здесь для ссылки.
В некоторых вариантах осуществления моноклональные антитела человека по изобретению могут быть получены так, чтобы обеспечивалось правильное распределение in vivo. Например, для обеспечения преодоления гематоэнцефалического барьера терапевтическими соединениями по изобретению они могут входить в состав липосом, которые могут дополнительно включать таргетирующие остатки для обеспечения селективного транспорта в определенные клетки или органы. См., например, патенты США 4522811; 5374548; 5416016 и 5399331; V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685; Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038; Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180; Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134; Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090; Keinanen and Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123 и Killion and Fidler (1994) Immunomethods 4: 273.
Варианты применения и способы по изобретению
Антитела (композиции, биспецифические антитела и иммуноконъюгаты) по настоящему изобретению обладают множеством in vitro и in vivo вариантов применения, включая, например, детектирование LAG-3 или стимулирование иммунных ответов за счет блокады LAG-3. В предпочтительном варианте осуществления антитела представляют собой антитела человека. Такие антитела могут вводиться в клетки в культуре, in vitro или ex vivo, или представляющих собой людей субъектам, например in vivo для
- 19 035013 стимулирования иммунитета в различных ситуациях. В соответствии с этим в одном аспекте изобретение относится к способу модификации иммунного ответа у субъекта, включающему введение субъекту антитела или его антигенсвязывающей части по изобретению для модификации иммунного ответа у субъекта.
Предпочтительно, ответ усиливается, стимулируется или подвергается ап-регулированию.
Предпочтительные субъекты включают представляющих собой людей пациентов, нуждающихся в усилении иммунного ответа. Данные способы предпочтительно являются подходящими для лечения представляющих собой людей пациентов, имеющих нарушение, которое может подвергаться лечению за счет усиления иммунного ответа (например, опосредованного Т-клетками иммунного ответа). В конкретном варианте осуществления указанные методы являются особенно подходящими для лечения рака in vivo. Для достижения антигенспецифичного стимулирования иммунитета анти-ТЛО-3 антитела могут вводиться совместно с представляющим интерес антигеном или антиген может уже присутствовать у подвергаемого лечению субъекта (например, субъекта с опухолью или вирусом). При введении антител к LAG-3 совместно с другим агентом указанные два агента могут вводиться в любом порядке или одновременно. Изобретение также относится к способам детектирования присутствия антигена в образце или измерения количества антигена LAG-3 человека, включающим контактирование образца и контрольного образца с моноклональным антителом человеком или его антигенсвязывающей частью, которая специфично связывается с LAG-3 человека при условиях, которые обеспечивают образования комплекса между антителом или его частью и LAG-3 человека. Образование комплекса далее подвергается детектированию, при этом различие между образованием комплекса между образцом и контрольным образцом указывает на присутствие антигена LAG-3 человека в образце. Более того, анти-LЛG-3 антитела по изобретению могут применяться для очистки LAG-3 человека за счет иммуноаффинной очистки.
С учетом способности анти-LЛG-3 антител по изобретению ингибировать связывание LAG-3 с МНС молекулами II класса и стимулировать антигенспецифичные Т-клеточные ответы, изобретение также относится к in vitro и in vivo способам применения антител для стимулирования, усиления или апрегулирования антигенспецифичных Т-клеточных ответов. Например изобретение относится к способу стимулирования антигенспецифичного Т-клеточного ответа, включающему контактирование указанной Т-клетки с антителом по изобретению таким образом, что антигенспецифичный Т-клеточные ответ подвергается стимулированию. Для измерения антигенспецифичного Т-клеточного ответа может применяться любой подходящий индикатор антигенспецифичного Т-клеточного ответа. Неограничивающие примеры данных подходящих индикаторов включают увеличенную Т-клеточную пролиферацию в присутствии антитела и/или увеличение продуцирования цитокинов в присутствии антитела. В предпочтительно варианте осуществления стимулируется продуцирование интерлейкина-2 с помощью антигенспецифичной Т-клетки.
Изобретение также относится к способу стимулирования иммунного ответа (например, антигенспецифичного Т-клеточного ответа) у субъекта, включающему введение антитела по изобретению субъекту таким образом, что иммунный ответ (например, антигенспецифичный Т-клеточный ответ) субъекта подвергается стимулированию. В предпочтительном варианте осуществления субъект представляет собой субъект с опухолью, при этом стимулируется иммунный ответ против опухоли. В другом предпочтительном варианте осуществления субъект представляет собой субъект с вирусом, при этом стимулируется иммунный ответ против вируса.
В другом варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта, включающему введение субъекту антитела по изобретению, так что рост опухоли у субъекта подвергается ингибированию. В другом варианте осуществления изобретение относится к способам лечения вирусной инфекции у субъекта, включающим введение субъекту антитела по изобретению, так что вирусная инфекция у субъекта подвергается лечению.
Эти и другие способы по изобретению описаны более подробно ниже.
Рак
Блокада LAG-3 антителами может усиливать иммунный ответ пациента на раковые клетки. В одном аспекте настоящее изобретение относится к лечению субъекта in vivo с применением анти-LЛG-3 антитела таким образом, что рост раковых опухолей подвергается ингибированию. Анти-LЛG-3 антитело может применяться самостоятельно для ингибирования роста раковых опухолей. Альтернативно, антиLAG-3 антитело может применяться совместно с другими иммуногенными агентами, стандартными способами лечения рака или другими антителами, как описано ниже. В соответствии с этим в одном варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества анти-LЛG-3 антитела или его антигенсвязывающей части. Предпочтительно антитело представляет собой анти-LЛG-3 антитело человека (такое как любое из описанных здесь антител человека против LAG-3 человека). Дополнительно или альтернативно данное антитело может представлять собой химерное или гуманизированное антиLAG-3 антитело.
Предпочтительные виды раковых опухолей, рост которых может быть ингибирован с применением антител по изобретению, включают опухоли, обычно восприимчивые к иммунотерапии. Неограничивающие примеры предпочтительных типов рака для лечения включают меланому (например, метастати- 20 035013 ческую злокачественную меланому), рак почки (например, гипернефрому), рак предстательной железы (например, не отвечающую на гормоны аденокарциному предстательной железы), рак молочной железы, рак ободочной кишки и рак легкого (например, немелкоклеточный рак легкого). Кроме того, изобретение включает трудноизлечимые или рецидивирующие злокачественные опухоли, рост которых может быть ингибирован с применением антител по изобретению.
Примеры других видов рака, которые могут быть подвергнуты лечению с применением способов по изобретению, включают рак кости, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы и шеи, злокачественную меланому кожи или внутриглазную меланому, рак матки, рак яичника, рак прямой кишки, рак заднего прохода, рак желудка, рак яичка, карциному фаллопиевых труб, карциному эндометрия, карциному шейки матки, карциному влагалища, карциному вульвы, болезнь Ходжкина, неходжкинскую лимфому, рак пищевода, рак тонкого кишечника, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак коры надпочечника, саркому мягких тканей, рак уретры, рак пениса, хронический или острый лейкоз, включая острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, солидные опухоли у детей, лимфоцитарную лимфому, рак мочевого пузыря, рак почек или мочеточника, карциному почечной лоханки, опухоль центральной нервной системы (ЦНС), первичную лимфому ЦНС, опухолевый ангиогенез, опухоль позвоночника, глиому ствола головного мозга, аденому гипофиза, саркому Капоши, эпидермоидный рак, плоскоклеточный рак, Т-клеточную лимфому, злокачественные опухоли, индуцированные влиянием окружающей среды, включая злокачественные опухоли, индуцированные асбестом, и комбинации указанных видов рака. Настоящее изобретение также может применяться для лечения метастатических видов рака, в частности метастатических видов рака, сопровождающихся экспрессией PD-L1 (Iwai et al. (2005) Int. Immunol. 17: 133-144).
Антитела к LAG-3 могут быть необязательно объединены с иммуногенным агентом, таким как раковые клетки, очищенные опухолевые антигены (включая рекомбинантные белки, пептиды и углеводные молекулы), клетки и клетки, трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины (Не et al. (2004) J. Immunol. 173: 4919-28). Неограничивающие примеры опухолевых вакцин, которые могут применяться, включают пептиды антигенов меланомы, такие как пептиды gp100, MAGE антигены, Trp-2, MART1 и/или тирозиназу, или опухолевые клетки, трансфицированные для экспрессии цитокина GM-CSF (описаны дополнительно ниже).
Было обнаружено, что некоторые опухоли человека, такие как меланомы, являются иммуногенными. Ответы против опухоли у хозяина могут быть активированы за счет повышения порога Т-клеточной активации с помощью блокады LAG-3.
Блокада LAG-3 является, по-видимому, более эффективной при комбинировании с протоколом вакцинации. Были разработаны многие экспериментальные стратегии противоопухолевого вакцинирования (см. Rosenberg S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; см. также Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, стр. 3023-3043 в DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, 5-е изд.). В одной из таких стратегий вакцину готовят с применением аутологичных или аллогенных опухолевых клеток. Было показано, что такие клеточные вакцины являются наиболее эффективными при трансдукции опухолевых клеток для экспрессии GM-CSF. Было показано, что GM-CSF является сильным активатором презентации антигена для опухолевой вакцинации (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43).
Исследование экспрессии генов и паттернов широкомасштабной экспрессии генов при различных опухолях позволило идентифицировать так называемые опухоль-специфичные антигены (Rosenberg, SA (1999) Immunity 10: 281-7). Во многих случаях опухоль-специфичные антигены представляют собой антигены дифференцировки, экспрессируемыми в опухолях и в клетке, из которой возникла данная опухоль, например антигены меланоцитов gp100, антигены MAGE и Trp-2. Особенно важно, что было показано, что многие из данных антигенов представляют собой мишени опухоль-специфичных Т-клеток, обнаруженных в хозяине. Блокада LAG-3 может применяться совместно с набором рекомбинантных белков и/или пептидов, экспрессируемых в опухоли, для продуцирования иммунного ответа на данные белки. Данные белки в норме рассматриваются иммунной системой как аутоантигены и, следовательно, являются толерантными к ней. Опухолевый антиген может также включать белок теломеразу, который необходим для синтеза теломеров хромосом и который экспрессируется при более чем 85% типов рака человека и только в ограниченном количестве соматических тканей (Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013). (Данные соматические ткани могут быть защищены от иммунной атаки различными способами). Опухолевый антиген также может представлять собой неоантигены, экспрессируемые в раковых клетках вследствие соматических мутаций, которые изменяют последовательность белка или создают слитые белки между двумя неродственными последовательностями (например, bcr-abl в хромосоме Philadelphia) или идиотип из В-клеточных опухолей.
Другие опухолевые вакцины могут включать белки из вирусов, участвующих в раковых заболеваниях человека, таких как папилломавирусы человека (HPV), вирусы гепатита (HBV и HCV) и вирус сар- 21 035013 комы Капоши (KHSV). Другая форма опухолеспецифического антигена, которая может применяться совместно с блокадой LAG-3, представляет собой очищенные белки теплового шока (HSP), выделенные из самой опухолевой ткани. Белки теплового шока содержат фрагменты белков из опухолевых клеток, при этом данные HSP являются высокоэффективными в доставке антигенпрезентирующих клеток для индукции противоопухолевого иммунитета (Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120).
Дендритные клетки (DC) являются сильными антигенпрезентирующими клетками, которые могут применяться для прайминга антигенспецифических ответов. DC могут продуцироваться ex vivo и загружаться различными белковыми и пептидными антигенами, а также экстрактами опухолевых клеток (Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). DC могут также быть подвергнуты генетической трансдукции для экспрессии данных опухолевых антигенов. DC были также слиты непосредственно с опухолевыми клетками для целей иммунизации (Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6: 332-336). В качестве способа вакцинации, DC иммунизация может быть эффективно объединена с блокадой LAG-3 для активации более сильных противоопухолевых ответов.
Блокада LAG-3 быть объединена со стандартными способами лечения рака. Блокада LAG-3 может быть эффективно объединена с курсами химиотерапевтического лечения. В этих случаях является возможным уменьшить дозу вводимого химиотерапевтического реагента (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Пример такой комбинации представляеть собой анти-LAG-3 антитело в комбинации с декарбазином для лечения меланомы. Другой пример данной комбинации представляет собой анth-LAG-З антитело в комбинации с интерлейкином-2 (IL-2) для лечения меланомы. Научным обоснованием комбинированного применения блокады LAG-3 и химиотерапии является то, что гибель клеток, которая является следствием цитотоксического действия большинства химиотерапевтических соединений, должна приводить к повышенным уровням опухолевого антигена в пути презентации антигена. Другие комбинированные способы лечения, которые могут приводить к синергизму с блокадой LAG-3 посредством гибели клеток, представляют собой облучение, хирургию и выключение эндокринной функции. Каждый из этих протоколов позволяет создавать источник опухолевого антигена у хозяина. Ингибиторы ангиогенеза могут также комбинироваться с блокадой LAG-3. Ингибирование ангиогенеза приводит к гибели опухолевых клеток, которые могут подавать опухолевый антиген в пути презентации антигенов хозяина. Блокирующие LAG-3 антитела могут также применяться в комбинации с биспецифическими антителами, которые таргетируют экспрессирующие Fca или Fcy рецептор эффекторные клетки на опухолевые клетки (см., например, патенты США 5922845 и 5837243). Биспецифические антитела могут применяться для таргетирования двух отдельных антигенов. Например, биспецифические антитела против рецептора Fc/опухолевого антигена (например, Her-2/neu) применяли для таргетирования макрофагов на участки опухоли. Такое таргетирование может более эффективно активировать опухольспецифичные ответы. Т-клеточная ветвь данных ответов может увеличиваться благодаря применению блокады LAG-3. Альтернативно, антиген может доставляться непосредственно к DC с применением биспецифичных антител, которые связываются с опухолевым антигеном и специфическим в отношении дендритных клеток маркером поверхности клеток.
Опухоли избегают иммунного контроля благодаря большому количеству механизмов. Многие из таких механизмов могут быть преодолены инактивацией белков, которые экспрессируются опухолями и которые являются иммуносупрессивными. Они включают, среди прочего, TGF-β (Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200), и Fas лиганд (Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365). Антитела к каждому из указанных агентов могут применяться в комбинации с анти-LAG-3 антителом для противодействия эффектам иммуносупрессивного агента и содействия иммунным ответам хозяина против опухоли. Другие антитела, которые активируют иммунный ответ хозяина, могут применяться в комбинации с анти-LAG-3 антителом. Они включают молекулы на поверхности дендритных клеток, которые активируют функцию DC и презентацию антигена. АнтиCD40-антитела способны эффективно заменять активность Т-клеток-хелперов (Ridge et al. (1998) Nature 393: 474-478) и могут применяться совместно с hoth-LAG^ антителами (Ito et al. (2000) Immunobiology 201 (5) 527-40). Активация антител к костимулирующим Т-клетки молекулам, таким как CTLA-4 (например, патент США 5811097), ОХ-40 (Weinberg et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997), и ICOS (Hutloff et al. (1999) Nature 397: 262-266) может также обеспечивать повышенные уровни активации Т-клеток.
В настоящее время для лечения различных опухолей гемопоэтического происхождения применяется трансплантация костного мозга. В то время как реакция отторжения трансплантата является следствием такого лечения, благоприятное терапевтическое воздействие может быть достигнуто за счет реакции трансплантат против опухоли. Блокада LAG-3 может применяться для повышения эффективности пересаженных опухоль-специфичных Т-клеток донора.
Также существует несколько экспериментальных протоколов лечения, которые предусматривают ex vivo активацию и экспансию антигенспецифичных Т-клеток и адаптивный перенос этих клеток реципиентам для стимулирования антигенспецифичных Т-клеток против опухоли (Greenberg & Riddell (1999)
- 22 035013
Science 285: 546-51). Такие способы могут быть также применяться для активации Т-клеточных ответов на инфекционные агенты, такие как CMV. Ex vivo активация в присутствии анти-ЕЛО-3 антител может увеличивать встречаемость и активность адоптивно перенесенных Т-клеток.
Инфекционные болезни
Для лечения пациентов, инфицированных конкретными токсинами или патогенами, применяются другие способы по изобретению. Таким образом, другой аспект изобретения относится к способу лечения инфекционного заболевания у субъекта, включающему введение субъекту анти-ЕЛО-3 антитела или его антигенсвязывающей части таким образом, что субъект подвергается лечению в отношении указанного инфекционного заболевания. Предпочтительно, антитело представляет собой анти-ЕЛО-3 антитело человека (например, любое из описанных здесь анти-ЕЛО-3 антител человека). Дополнительно или альтернативно, данное антитело может представлять собой химерное или гуманизированное антитело.
Подобно ее применению в отношении опухолей, как обсуждалось выше, опосредованная антителом блокада ЕЛО-3 может применяться самостоятельно или в качестве дополнения в комбинации с вакцинами для стимулирования иммунного ответа на патогенны, токсины и аутоантигены. Примеры патогенов, против которых применение указанного терапевтического подхода может быть особенно эффективным, включают патогены, которые не поддаются уничтожению с применением существующих в настоящее время вакцин, или патогены, против которых действие стандартных вакцин не является достаточно эффективным. Они включают, без ограничения, ВИЧ, вирусы гепатита (А, В и С), вирусы гриппа, герпесвирусы, возбудителей гиардиоза, возбудителей малярии, лейшманиоза, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. Блокада ЕЛО-3 особенно полезна против распространенных инфекций с агентами, такими как ВИЧ, которые презентируют измененные антигены в течение периода инфицирования.
Данные новые эпитопы распознаются как чужеродные в момент введения анти-ЕЛО-3 антител, таким образом провоцируя сильный Т-клеточный ответ, который не заглушается негативными сигналами через ЕЛО-3.
Некоторые примеры патогенных вирусов, вызывающих инфекции, которые могут подвергаться лечению способами по изобретению, включают ВИЧ, вирус гепатита (Л, B или C), герпесвирус (например, VZV, HSV-1, HЛV-6, HSV-II и CMV, вирус Эпштейна-Барра), аденовирус, вирус гриппа, флавивирусы, эховирус, риновирус, вирус Коксаки, коронавирус, респираторно-синцитиальный вирус, вирус эпидемического паротита, ротавирус, вирус кори, вирус коревой краснухи, парвовирус, вирус коровьей оспы, HTEV-вирус, вирус Денге, папилломавирус, вирус контагиозного моллюска, полиовирус, вирус бешенства, JC-вирус и вирус арбовирусного энцефалита. Некоторые примеры патогенных бактерий, вызывающих инфекции, которые могут подвергаться лечению способами по изобретению включают хламидии, бактерии рода Rickettsia, микобактерии, стафилококки, стрептококки, пневмококки, менингококки и гонококки, Klebsiella, Proteus, Serratia, Pseudomonas, Legionella, дифтерийные бактерии, Salmonella, бациллы, возбудитель холеры, возбудитель столбняка, возбудитель ботулизма, возбудитель сибирской язвы, возбудитель чумы, возбудитель лептоспироза и бактерии, вызывающие болезнь Лайма.
Некоторые примеры патогенных грибов, вызывающих инфекции, которые могут подвергаться лечению способами по изобретению, включают Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis и т.д.), Cryptococcus neoformans, Лspergillus (fumigatus, niger и т.д.), род Mucorales (mucor, absidia, rhizophus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis и Histoplasma capsulatum. Некоторые примеры патогенных паразитов, вызывающих инфекции, которые могут подвергаться лечению способами по изобретению, включают Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri, Лcanthamoeba sp., Oiardia lambia, Cryptosporidium sp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Eeishmania donovani, Toxoplasma gondii, Nippostrongylus brasiliensis. Во всех вышеуказанных способах блокада ЕЛО-3 может комбинироваться с другими формами иммунотерапии, такими как лечение цитокинами (например, интерферонами, GM-CSF, О-CSF, IE-2) или терапия с применением биспецифических антител, которая обеспечивает усиленную презентацию опухолевых антигенов (см., например, Holliger (1993) Proc. Natl. Лcad. Sci. 90: 6444-6448; Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123).
Аутоиммунные реакции
Анти-ЕЛО-3 антитела могут провоцировать и усиливать аутоиммунные ответы. Действительно, индукция противоопухолевых ответов с применением вакцин на основе опухолевых клеток и пептидов выявила, что многие противоопухолевые реакции включают реактивности против собственных антигенов (van Elsas et al. (2001) J. Exp. Med. 194:481-489; Overwijk, et al. (1999) Proc. Natl. Лcad. Sci. U.SA. 96: 2982-2987; Hurwitz, (2000) выше; Rosenberg & White (1996) J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19 (1): 81-4). Таким образом, можно рассматривать применение блокады против ЕЛО-3 совместно с различными аутологичными белками для создания протоколов вакцинации для эффективного продуцирования иммунных ответов против данных аутологичных белков для лечения заболеваний. Например, болезнь Альцгеймера включает нежелательное накопление Δβ пептида в амилоидных отложениях в головном мозге; реакции антител против амилоида способны очищать данные амилоидные отложения (Schenk et al., (1999) Nature 400: 173-177).
Другие аутологичные белки, такие как IgE, также могут применяться в качестве мишеней для лече- 23 035013 ния аллергии и астмы, a TNFa могут применяться для лечения ревматоидного артрита. Наконец, реакции антител на различные гормоны могут быть индуцированы применением анти-ЕЛС-З антитела. Нейтрализующие реакции антител против репродуктивных гормонов могут применяться для контрацепции. Нейтрализующая реакция антител против гормонов и других растворимых факторов, необходимых для роста определенных видов опухолей, также может рассматриваться в качестве возможных мишеней вакцинации.
Способы, аналогичные описанным выше способам, для применения анти-ЕЛС-З антитела, могут применяться для индуцирования терапевтических аутоиммунных реакций для лечения пациентов, имеющих нежелательное накапливание других аутоантигенов, таких как амилоидные отложения, включая Λβ при болезни Альцгеймера, цитокинов, таких как TNFa, и IgE.
Вакцины
Анти-ЕЛС-З антитела могут применяться для стимулирования антигенспецифических иммунных реакций путем совместного введения анти-ЕЛС-З антитела с представляющим интерес антигеном (например, вакциной). Таким образом, в другом аспекте настоящее изобретение относится к способу стимулирования иммунной реакции на антиген у субъекта, включающему введение указанному субъекту: (i) антигена и (ii) анти-ЕЛС-З антитела или его антигенсвязывающей части таким образом, что иммунная реакция на данный антиген у субъекта усиливается. Предпочтительно антитело представляет собой антиЕЛС-З антитело человека (например, любое из описанных здесь анти-ЕЛС-З антител человека). Дополнительно или альтернативно, данное антитело может представлять собой химерное или гуманизированное антитело. Антиген может представлять собой, например, опухолевый антиген, вирусный антиген, бактериальный антиген или антиген из патогена. Неограничивающие примеры таких антигенов включают антигены, описанные в вышеприведенных разделах, такие как опухолевые антигены (или противоопухолевые вакцины), описанные выше, или антигены из вирусов, бактерий или других патогенов, описанных выше.
Подходящие пути введения композиций антител (например, моноклональных антител человека, полиспецифических и биспецифических молекул или иммуноконъюгатов) по изобретению in vivo и in vitro хорошо известны из уровня техники и могут быть выбраны специалистами в данной области. Например, композиции антител могут быть введены с помощью инъекции (например, внутривенной или подкожной). Подходящие дозы применяемых молекул будут зависеть от возраста и массы тела субъекта и концентрации и/или состава композиции антител.
Как описано выше, анти-ЕЛС-З антитела человека по изобретению могут вводиться совместно с одним или несколькими другими терапевтическими агентами, например цитотоксическим агентом, радиотоксическим агентом или иммуносупрессивным агентом. Антитело может быть связано с агентом (в виде иммунокомплекса) или оно может быть введено отдельно от агента. В последнем случае (в случае отдельного введения) антитело может вводиться до, после или совместно с указанным агентом или может вводиться совместно с другими известными видами терапиями, например противораковой терапией, например облучением. Такие терапевтические агенты включают, среди прочего, противоопухолевые агенты, такие как доксорубицин (адриамицин), цисплатин, блеомицин сульфат, кармустин, хлорамбуцил, дакарбазин и циклофосфамидгидроксимочевину, которые сами по себе эффективны только при уровнях, являющихся токсичными или субтоксичными для пациента. Цисплатин вводят внутривенно в виде 100 мг/мл дозы один раз каждые четыре недели, а адриамицин вводят внутривенно в виде 60-75 мг/мл дозы один раз каждые 21 день. Совместное введение анти-ЕЛС-З антител человека или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению с химиотерапевтическими агентами обеспечивает два противораковых агента, которые действуют посредством различных механизмов, которые оказывают цитотоксическое действие в отношении опухолевых клеток человека. Такое совместное введение может решить проблемы, вызванные развитием резистентности к лекарствам или изменением антигенности опухолевых клеток, что делает их нереактивными в отношении антитела.
В объем настоящего изобретения входят также наборы, включающие композиции антител по изобретению (например, антител человека, биспецифических или полиспецифических молекул или иммуноконъюгатов) и инструкции по применению. Набор также может содержать по меньшей мере один дополнительный реагент или один или несколько дополнительных антител человека по изобретению (например, антитело человека, имеющее комплементарную активность, которое связывается с эпитопом в антигене ЕЛС-З, отличающимся от эпитопа первого антитела человека). Наборы обычно включают этикетку, указывающую предполагаемое применение содержимого данного набора. Термин этикетка включает любой текст или отпечатанный материал, наклеенный на упаковку или вложенный в упаковку данного набора, или прилагаемый к данному набору в какой-либо иной форме.
Комбинированная терапия
В другом аспекте изобретение относится к способам комбинированной терапии, при которых антиЕЛС-З антитело (или его антигенсвязывающая часть) по настоящему изобретению вводится совместно с одним или несколькими дополнительными антителами, которые являются эффективными при стимулировании иммунных реакций для дополнительного усиления, стимулирования или ап-регулирования та
- 24 035013 ким образом иммунных реакций у субъекта. В одном варианте осуществления изобретение относится к способу стимулирования иммунного ответа у субъекта, включающему введение субъекту анти-ВЛО-3 антитела и одного или нескольких дополнительных иммуностимулирующих антител, таких как анти-PD1 антитело, анти-PD-Ll антитело и/или анти-СТЬЛ-4 антитело, так что у субъекта стимулируется иммунный ответ, например для ингибирования роста опухоли или стимулирования противовирусного ответа. В другом варианте осуществления субъекту вводят анти^ЛО-3 антитело и анти-PD-l антитело. В другом варианте осуществления субъекту вводят анти^ЛО-3 антитело и анти-PD-Ll антитело. В другом варианте осуществления субъекту вводят анти-РЛС-3 антитело и анти-СТРЛ-4 антитело. В одном варианте осуществления анти-РЛС-3 антитело представляет собой антитело человека, такое как описанное антитело. Альтернативно, анти-РЛС-3 антитело может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело (например, полученное из анти-РЛС-3 тЛЬ мыши). В другом варианте осуществления, по меньшей мере, одно дополнительное иммуностимулирующее антитело (например, анти-PD1, анти-PD-Ll и/или анти-СТРЛ-4 антитело) представляет собой антитело человека. Альтернативно, по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело (например, полученное из анти-PD-l, анти-PD-Ll и/или анти-СТРЛ-4 антитела мыши).
В другом варианте осуществления изобретение относится к способу лечения гиперпролиферативного заболевания (например, рака), предусматривающему введение антитела против LЛG-3 и антитела против СТВЛ-4. В других вариантах осуществления анти-LЛG-3 антитело вводят в субтерапевтической дозе, анти-СТВЛ-4-антитело вводят в субтерапевтической дозе или оба из них вводят в субтерапевтической дозе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу изменения побочного эффекта, связанного с лечением гиперпролиферативного заболевания иммуностимулирующим агентом, включающему введение анти-LЛG-3 антитела и субтерапевтической дозы анти-СТВЛ-4 антитела субъекту. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой человека. В других вариантах осуществления анти-СТВЛ-4 антитело представляет собой моноклональное антитело с последовательностью человека l0Dl (описанное в РСТ публикации WO 01/14424), а анти-LЛG-3 антитело представляет собой моноклональное антитело с последовательностью человека, такое как описанное здесь LЛG3.5. Другие анти-СТРЛ-4 антитела в рамках способов по настоящему изобретению включают, например, способы, описанные в: WO 98/42752; WO 00/37504; патенте США 6207156; Hurwitz et al. (1998) Proc. Natl. Леаб. Sci. 95(17): l0067-l007l; Сатасйо et al. (2004) J. Qin. Oncology 22(145): ЛЬstract No. 2505 (антитело СР-675206) и у Mokyr et al. (1998) Сапсег Res. 58:530l-5304. В некоторых вариантах осуществления анти-СТкЛ-4 антитело связывается с СТкЛ-4 человека при значении KD 5х10-8 М или менее, связывается с СТРЛ-4 человека при значении KD 1 х 10-8 М или менее, связывается с СТкЛ-4 человека при значении KD 5х l0-9 М или менее или связывается с СТСЛ-4 человека при значении KD от lx l0-8 М до 1х10-10 М или менее.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения гиперпролиферативного заболевания (например, рака), включающему введение LAG-3 антитела и PD-1 антитела субъекту. В других вариантах осуществления анти-LAG-3 антитело вводят в субтерапевтической дозе, анти-PD-l антитело вводят в субтерапевтической дозе или оба из них вводят в субтерапевтической дозе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу изменения побочного эффекта, связанного с лечением гиперпролиферативного заболевания иммуностимулирующим агентом, включающему введение анти-LAG-3 антитела и субтерапевтической дозы анти-PD-l антитела субъекту. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой человека. В некоторых вариантах осуществления анти-PD-l антитело представляет собой моноклональное антитело с последовательностью человека и анти-LAG-3 антитело представляет собой моноклональное антитело с последовательностью человека, такое как описанное здесь LAG3.5. Примеры анти-PD-l антител с последовательностью человека включают 17D8, 2D3, 4Н1, 5С4 и 4А11, которые описаны в РСТ публикации WO 06/121168. Другие анти-PD-l антитела включают, например, ламбролизумаб (WO 2008/156712) и АМР514 (WO 2010/027423, WO 2010/027827, WO 2010/027828, WO 2010/098788). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-l антитело связывается с PD-1 человека при значении KD 5х10-8 М или менее, связывается с PD-1 человека при значении KD lx 10-8 М или менее, связывается с PD-1 человека при значении KD 5х 10-9 М или менее или связывается с PD-1 человека при значении KD от 1х10-8М до 1х10-10 М или менее. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения гиперпролиферативного заболевания (например, рака), включающему введение LAG-3 антитела и PD-L1 антитела субъекту. В дополнительных вариантах осуществления анти-PD-1-антитело вводят в субтерапевтической дозе, анти-PD-Ll антитело вводят в субтерапевтической дозе или оба из них вводят в субтерапевтической дозе. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу изменения побочного эффекта, связанного с лечением гиперпролиферативного заболевания иммуностимулирующим агентом, предусматривающему введение анти-LAG-3 антитела и субтерапевтической дозы анти-PD-Ll антитела субъекту. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой человека. В других вариантах осуществления анти-PD-Ll антитело представляет собой моноклональное антитело с последо
- 25 035013 вательностью человека и анти-ЬЛО-3 антитело представляет собой моноклональное антитело с последовательностью человека, такое как описанное здесь LAG3.5. Примеры анти-ГП-Ы антител с последовательностью человека включают 3G10, 12А4, 10А5, 5F8, 10Н10, 1В12, 7Н1, 11Е6, 12В7 и 13G4, которые описаны в РСТ публикации WO 07/005874. Другие анти-PD-L! антитела включают, например MPDL3280A (RG7446) (WO 2010/077634), MEDI4736 (WO 2011/066389) и MDX1105 (WO 2007/005874). В некоторых вариантах осуществления анти-PD-L1 антитело связывается с PD-L1 человека при значении KD 5х10-8 М или менее, связывается с PD-L1 человека при значении KD 1 х 10-8 М или менее, связывается с PD-L1 человека при значении KD 5х10-9 М или менее или связывается с PD-L1 человека при значении KD от 1х 10-8 М до 1х 10-10 М или менее.
Блокада LAG-3 и одного или нескольких вторых антигенов-мишеней, таких как CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1, антителами может стимулировать иммунный ответ против раковых клеток у пациента. Типы рака, рост которых может быть ингибирован антителами по настоящему изобретению, включают типы рака, являющиеся обычно чувствительными к иммунотерапии. Соответствующие примеры видов рака для лечения с применением комбинированной терапии по настоящему изобретению включают виды рака, перечисленные выше при описании монотерапии анти-LЛG-3 антителами. В некоторых вариантах осуществления комбинация описанных здесь терапевтических антител может вводиться одновременно в виде единой композиции в фармацевтически приемлемом носителе или одновременно в виде отдельных композиций, при этом каждое антитело находится в фармацевтически приемлемом носителе. В другом варианте осуществления комбинация терапевтических антител может вводиться последовательно. Например, анти-СТЕЛ-4 антитело и анти-LЛG-3 антитело могут вводиться последовательно, так что антиCTLA-4 антитело вводится первым, a анти-LЛG-3 антитело вводится вторым или анти-LЛG-3 антитело вводится первым, а анти-СТЕЛ-4 антитело вводится вторым. Дополнительно или альтернативно, антиPD-1 антитело и hoth-LAG^ антитело могут быть введены последовательно, так что анти-PD-1 антитело вводится первым, а anra-LAG-l антитело вводится вторым или anra-LAG-l антитело вводится первым, а aнти-PD-1 антитело вводится вторым. Дополнительно или альтернативно, aнти-PD-L1 антитело и антиLAG-3 антитело могут быть введены последовательно, так что aнти-PD-L1 антитело вводится первым, а aнти-LЛG-3 антитело вводится вторым или aнти-LЛG-3 антитело вводится первым, а aнти-PD-L1 антитело вводится вторым.
Кроме того, если вводят последовательно более чем одну дозу комбинированной терапии, порядок последовательного введения может быть обратным или может сохраняться один и тот же порядок введения в каждой временной точке введения, последовательные введения могут комбинироваться с совместными введениями или любой их комбинацией. Например, первое введение комбинации aнти-CTLЛ-4 антитела и aнти-LЛG-3 антитела может быть одновременным, второе введение может быть последовательным с введением aнти-CTLЛ-4 и далее aнти-LЛG-3, а третье введение может быть последовательным с введением aнти-LЛG-3 и далее aнти-CTLЛ-4 и т.д.
Дополнительно или альтернативно, первое введение комбинации aнти-PD-1 антитела и aнти-LЛG-3 антитела может быть одновременным, второе введение может быть последовательным с введением антиPD-1 и далее amu-LAGR а третье введение может быть последовательным с введением aнти-LЛG-3 и далее aнти-PD-1 и т.д. Дополнительно или альтернативно, первое введение комбинации aнти-PD-L1 антитела и aнти-LЛG-3 антитела может быть одновременным, второе введение может быть последовательным с введением aнти-PD-L1 и далее amu-LAGR а третье введение может быть последовательным с введением aнти-LЛG-3 и далее aнти-PD-L1 и т.д. Другая репрезентативная схема введения доз может включать первое введение, которое является последовательным, с введением aнти-LЛG-3 первым и антиCTLA-4 антителом (и/или aнти-PD-1 и/или aнти-PD-L1) вторым, при этом последующие введения могут быть одновременными.
Необязательно, комбинация aнти-LЛG-3 и одного или нескольких дополнительных антител (например, aнти-CTLЛ-4 и/или aнти-PD-1 и/или aнти-PD-L1 антител) может дополнительно комбинироваться с иммуногенным агентом, таким как раковые клетки, очищенные опухолевые антигены (включая рекомбинантные белки, пептиды и молекулы углеводов), клетки и клетки, трансфицированные генами, коднрующими иммуностимулирующие цитокины (Не et al. (2004) J. Immunol. 173: 4919-28). Неограничивающие примеры опухолевых вакцин, которые могут применяться, включают пептиды антигенов меланомы, например пептиды gp100, антигены MAGE, Trp-2, MART1 и/или тирозиназу или опухолевые клетки, трансфицированные для экспрессии цитокина GM-CSF (описаны дополнительно ниже). Комбинированная блокада LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 может также комбинироваться с протоколом вакцинирования, таким как любой из подробно описанных выше протоколов вакцинирования с учетом монотерапии aнти-LЛG-3 антителами.
Комбинированная блокада LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 может также комбинироваться со стандартными видами терапии рака. Например, комбинированная блокада LAG-3 и CTLA-4 и/или PD1 и/или PD-L1 может эффективно комбинироваться с химиотерапевтическими схемами лечения. В этих случаях является возможным снизить дозировку другого химиотерапевтического агента, вводимого с комбинацией по настоящему изобретению (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). Пример
- 26 035013 такой комбинации представляет собой комбинацию анти-ЬЛС-З и анти-СТЕА-4 и/или анти-PD-l и/или анти-PD-Ll антител также в комбинации с декарбазином для лечения меланомы. Другой пример представляет собой комбинацию анти-LЛG-3 и анти-CTLЛ-4 и/или анти-PD-! и/или анти-PD-L1 антител также в комбинации с интерлейкином-2 (IL-2) для лечения меланомы. Научным обоснованием комбинированного применения блокады LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 с химиотерапией является то, что гибель клеток, которая является следствием цитотоксического действия большинства химиотерапевтических соединений, должна приводить к увеличенным уровням опухолевого антигена в пути презентации антигена. Другими комбинированными видами терапии, которые могут приводить к синергизму с комбинированной блокадой LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 посредством смерти клеток, являются облучение, хирургия и выключение эндокринной функции. Каждый из этих протоколов позволяет создавать источник опухолевого антигена у хозяина. Ингибиторы ангиогенеза могут также комбинироваться с комбинированной блокадой LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1. Ингибирование ангиогенеза приводит к гибели опухолевых клеток, которые могут представлять собой источник опухолевого антигена, подаваемого в пути презентации антигенов хозяина.
Комбинация блокирующих LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 антител может также применяться в комбинации с биспецифическими антителами, которые таргетируют экспрессирующие Fca или Fey рецептор эффекторные клетки на опухолевые клетки (см., например, патенты США 5922845 и 5837243). Биспецифические антитела могут применяться для таргетирования двух отдельных антигенов. Эффективность Т-клеток при данных реакциях будет увеличена за счет применения комбинированной блокады LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1. Как другой пример, комбинации анти-LAG-3 и антиCTLA-4 и/или анти-PD-1 антител и /или анти-PD-L1 антител могут применяться в комбинации с противораковыми антителами, такими как Rituxan® (ритуксимаб), Herceptin® (трастузумаб), Bexxar® (тоситумомаб), Zevalin® (ибритумомаб), Campath® (алемтузумаб), Lymphocide® (эпртузумаб), Avastin® (бевацизумаб) и Tarceva® (эрлотиниб) и им подобными. В качестве примера и без связи с теорией, лечение противораковым антителом и противораковым антителом, конъюгированным с токсином, может приводить к гибели раковых клеток (например, опухолевых клеток), которые могут усиливать иммунную реакцию, опосредованную CTLA-4, PD-1, PD-L1 или LAG-3. В другом варианте осуществления изобретения лечение гиперпролиферативного заболевания (например, раковой опухоли) может включать противораковое антитело в комбинации с анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антителами, одновременно или последовательно или в любой их комбинации, которые могут усиливать противоопухолевые иммунные реакции хозяина.
Опухоли избегают иммунного контроля благодаря большому количеству механизмов. Многие из таких механизмов могут быть преодолены инактивацией белков, которые экспрессируются опухолями и которые являются иммуносупрессивными. Они включают, среди прочего, TGF-β (Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200) и Fas лиганд (Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365). В другом примере антитела к каждому из указанных агентов могут быть также комбинированы с комбинацией анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антител для противодействия эффектам иммуносупрессивных агентов и содействия иммунным реакциям хозяина против опухоли.
Другие антитела, которые могут быть применяться для активации иммунологической откликаемости хозяина, могут дополнительно применяться в комбинации с комбинацией анти-LAG-3 и анти-CTLA4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антител. Они включают молекулы на поверхности дендритных клеток, которые активируют функцию DC и презентацию антигена. Ακ™-ΕΟ40 антитела (Ridge et al., выше) могут применяться в комбинации с комбинацией анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антител (Ito et al., выше). Другие активирующие антитела против Т-клеточных костимулирующих молекул (Weinberg et al., выше, Melero et al. supra, Hutloff et al., выше) также могут обеспечивать увеличенные уровни Т-клеточной активации. Как описано выше, в настоящее время для лечения различных опухолей гемопоэтического происхождения применяется трансплантация костного мозга. Комбинированная блокада LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 может применяться для увеличения эффективности пересаженных опухоль-специфических Т-клеток донора. Несколько экспериментальных протоколов лечения включают ex vivo активацию и экспансию антигенспецифичных Т-клеток и адаптивный перенос этих клеток реципиентам для стимулирования антигенспецифичных Т-клеток против опухоли (Greenberg & Riddell, выше). Такие способы могут применяться для активации Т-клеточных ответов на инфекционные агенты, такие как CMV. Ожидается, что ex vivo активация в присутствии анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антител увеличивает встречаемость и активность адаптивно перенесенных Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу изменения побочного эффекта, связанного с лечением гиперпролиферативного заболевания иммуностимулирующим агентом, включающему введение субъекту анти-LAG-3 антитела и субтерапевтической дозы анти-CTLA-4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антител. Например, способы по настоящему изобретению относятся к способам уменьшения встречаемости индуцированного иммуностимулирующим антителом колита или диареи с помощью введения неабсорбируемого стероида пациенту. По
- 27 035013 скольку любой пациент, который будет получать иммуностимулирующее терапевтическое антитело, имеет риск развития колита или диареи, индуцированной таким антителом, вся популяция пациентов подходит для терапии в соответствии со способами по настоящему изобретению. Хотя стероиды вводили для лечения воспалительного заболевания пищеварительного тракта (IBD) и предотвращения обострений IBD, их не применяли для профилактики (уменьшения встречаемости) IBD у пациентов, которые не имели диагноза IBD. Существенные побочные эффекты, связанные со стероидами, даже неабсорбируемыми стероидами, считались препятствием для профилактического применения.
В других вариантах осуществления комбинированная блокада LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 (т.е. иммуностимулирующих терапевтических антител анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или антиPD-1 антител и/или анти-PD-L1 антител) может дополнительно комбинироваться с применением любого неабсорбируемого стероида. В соответствии с используемым здесь значением, термин неабсорбируемый стероид означает глюкокортикоид, который демонстрирует экстенсивный метаболизм первого прохождения, так что по завершении метаболизма в печени биодоступность стероида является низкой, т.е. менее чем около 20%. В одном варианте осуществления изобретения неабсорбируемый стероид представляет собой будесонид. Будесонид представляет собой локально действующий глюкокортикостероид, который экстенсивно метаболизируется, прежде всего печенью, после пероральнрого введения. ENTOCORT ЕС® (Astra-Zeneca) представляет собой зависимую от рН и времени пероральную форму будесонида, разработанную для оптимизации доставки лекарственного средства в подвздошную кишку и через ободочную кишку. ENTOCORT EC® одобрен в США для лечения от мягкой до умеренной болезни Крона, затрагивающей подвздошную и/или восходящую ободочную кишку. Обычная пероральная доза ENTOCORT EC® для лечения болезни Крона составляет 6-9 мг/день. ENTOCORT EC® высвобождается в кишечнике перед абсорбцией и сохраняется в слизистой оболочке кишечника. После прохождения через ткань-мишень слизистой оболочки кишечника ENTOCORT EC® экстенсивно метаболизируется системой цитохрома Р450 в печени до метаболитов с незначительной глюкокортикоидной активностью. Таким образом, биодоступность является низкой (приблизительно 10%). Такая низкая биодоступность будесонида приводит к улучшенному терапевтическому индексу по сравнению с другими глюкокортикоидами с менее экстенсивным метаболизмом первого прохождения. Будесонид приводит к меньшим побочным эффектам, включая меньшую гипоталамическую-гипофизарную супрессию, чем системно действующие кортикостероиды. Однако продолжительное введение ENTOCORT ЕС® может приводить к системным глюкокортикоидным эффектам, таким как гиперкортицизм и супрессия надпочечников. См. PDR 58-е изд. 2004; 608-610.
В других вариантах осуществления комбинированная блокада LAG-3 и CTLA-4 и/или PD-1 и/или PD-L1 (т.е. иммуностимулирующих терапевтических антител анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или антиPD-1 и/или анти-PD-L1 антител) в комбинации с неабсорбируемым стероидом может дополнительно комбинироваться с салицилатом. Салицилаты включают 5-ASA агенты, такие как, например сульфасалазин (AZULFIDINE®, Pharmacia & UpJohn); олсалазин (DIPENTUM®, Pharmacia & UpJohn); балсалазид (COLAZAL®, Salix Pharmaceuticals, Inc.); и месаламин (ASACOL®, Procter & Gamble Pharmaceuticals; PENTASA®, Shire US; CANASA®, Axcan Scandipharm, Inc.; ROWASA®, Solvay).
В соответствии со способами по настоящему изобретению, салицилат, вводимый в комбинации с анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антителами и неабсорбируемым стероидом, может включать любое перекрывающееся или последовательное введение салицилата и неабсорбируемого стероида с целью уменьшения заболеваемости колитом, индуцируемой иммуностимулирующими антителами. Таким образом, например, способы уменьшения заболеваемости колитом, индуцируемой иммуностимулирующими антителами по настоящему изобретению, включают введение салицилата и неабсорбируемого стероида одновременно или последовательно (например, салицилат вводят спустя 6 часов после введения неабсорбируемого стероида) или любой их комбинации. Кроме того, в соответствии с настоящим изобретением, салицилат и неабсорбируемый стероид могут вводиться одним и тем же способом (например, оба вводят перорально) или различными способами (например, салицилат вводят перорально, и неабсорбируемый стероид вводят ректально), которые могут отличаться от способа(ов), применяемых для введения анти-LAG-3 и анти-CTLA-4 и/или анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 антител.
Данное описание далее проиллюстрировано следующими примерами, которые не должны рассматриваться в качестве ограничивающих. Содержание всех фигур и ссылок, последовательность из базы данных Genbank, патенты и опубликованные заявки на изобретение, ссылки на которые содержатся в настоящем описании, полностью включены здесь для ссылки. В частности, описания РСТ публикаций WO 09/045957, WO 09/073533, WO 09/073546 и WO 09/054863 полностью включены здесь для ссылки.
Примеры
Пример 1. Дизайн вариантов LAG3.1 (антитело 25F7)
Варианты описанного выше анти-LAG-3 антитела, 25F7, обозначаемые здесь как LAG3.1, были созданы на основе первоначального анализа аминокислотной последовательности антитела на потенциальные сайты распада. Экспрессию сайт-направленного мутагенеза VH участка LAG3.1 осуществляли с помощью набора для сайт-направленного мутагенеза QuikChange II XL® (Agilent Technologies). Изменен
- 28 035013 ные VH участки затем субклонировали в векторы UCOE® (EMD Millipore), которые содержат константный участок IgG4-S228P человека. Каждый из различных векторов тяжелой цепи котрансфицировали вектором, экспрессирующим каппа-цепь LAG3.1, в CHO-S клетки, при этом отбирали стабильные пулы на предмет экспрессии. Идентифицировали пять потенциальных мотивов деамидирования в вариабельном участке тяжелой цепи CDR2. Данные сайты находились в положениях 52, 54, 56, 58 и 60 вариабельного участка тяжелой цепи LAG3.1 (SEQ ID NO: 2) (см. фиг. 1A). В частности, деамидирование NG последовательности в CDR2 VH (SEQ ID NO: 6) наблюдалось при любых условиях, как и дополнительная изомеризация последовательности. Деамидирование исходного материала составляло около 10%. Кроме того, было обнаружено, что данная NG последовательность не соответствует последовательности зародышевой линии (см. фиг. 3). Однако, консенсусная последовательность зародышевой линии представляла собой потенциальный сайт гликозилирования и, таким образом, не присутствовала среди вариантов антител.
Были получены четыре варианта (обозначаемые здесь как LAG3.5, LAG3.6, LAG3.7 и LAG3.8), которые соответствовали двум потенциальным мотивам деамидирования (положения 54 и 56), как показано на фиг. 3. Данные варианты были подвергнуты матрице состояний, как указано в табл. 1 ниже, при этом анализировали следующие характеристики: химическая и термическая стабильность (физическая стабильность); (b) эксклюзионная хроматография (агрегирование); (c) гель для изоэлектрического фокусирования (IEF) (гетерогенность зарядов); (d) активность в рамках анализа Biacore (связывание и функциональная активность); и (е) картирование пептидов с помощью масс-спектрометрии (химические модификации/молекулярная стабильность).
Таблица 1
Буфер Ацетат (100 нМ NaCI, 3% масса/объем маннитола, 0,03% Твин-20) Цитрат (100 нМ NaCI, 3% масса/объем маннитола, 0,03% Твин-20)
pH 5,5, 6,0, 6,5, 7,0 5,5, 6,0, 6,5, 7,0
Температура 4°С и 37°С 4°С и 37°С
Время 0, 4, 8, 12 недель 0, 4, 8, 12 недель
Пример 2. Характеристика вариантов LAG-3
1. Связывание активированных CD4+ Т-клеток человека
Для тестирования способности вариантов антител связываться с нативным LAG-3 человека на поверхности активированных Т-клеток человека мононуклеарные клетки из периферической крови нормального здорового донора стимулировали на 15 см планшетах для культивации ткани при плотности 2х106 клеток/мл с комбинацией анти-CD3 (eBioscience, каталожный номер 16-0037-85) и анти-CD28 (BD Bioscience, каталожный номер 555725) антителами, присутствующими в растворе при 5 мкг/мл и 3 мкг/мл соответственно. Спустя трое суток стимулирования клетки собирали, промывали 1 раз 1х PFAE буфером (1х FBS + 2% FBS, 0,02% азид натрия, 2 мМ Na ЭДТА) и ресуспендировали в 1х PFAE буфере для окрашивания.
Для реакции связывания варианты LAG3.1 подвергали серийному разбавлению холодным 1х PFAE буфером, затем смешивали 50 мкл разбавленного раствора с антителами с 50 мкл меченого Fitc CD4 против антител человека (BD Bioscience, каталожный номер 555346), разбавленного 1:16 в 1х PFAE буфере. Для реакции связывания 100 мкл этой разбавленной смеси антител добавляли в 2х105 клеток, при этом смесь культивировали при 4°C в течение 30 мин. Затем клетки промывали два раза 1 х PFAE буфером. Добавляли 1:200 раствор меченого РЕ Fcy-специфичного антитела козы против антител человека (Jackson ImmunoResearch, каталожный номер 109-116-170) и культивировали смесь в течение 30 мин при 4°C с последующим промыванием два раза холодным 1х PFAE буфером. После последнего промывания добавляли 150 мкл холодного 1х PFAE в каждый раствор и проводили анализ связывания антител с помощью проточной цитометрии с применением проточного цитометра FACSCanto (BD Bioscience).
Результаты анализа с применением проточной цитометрии обобщены на фиг. 4А, которая представляет собой график, показывающий значение EC50 для связывания антител с активированными CD4+ Т-клетками человека. Фиг. 4В представляет собой график, показывающий связывание антител с растворимым LAG-3/Fc антигеном человека с применением BIACORE. Как показано, значения аффинности связывания LAG3.5 и LAG3.8 являются немного более низкими по сравнению с LAG3.1, в то время как их константы диссоциации немного выше по сравнению с LAG3.1.
2. Физическая стабильность
Термическую стабильность и термическую денатурацию вариантов определяли с помощью Microcal VP-DSC. В частности, каждый вариант разбавляли PBS (Mediatech, каталожный номер 21-040-CV, лот 21040139). Итоговая концентрация образца составляла 250 мкг/мл после разбавления PBS. Образец нагревали до 74°C, охлаждали до 25°C и подвергали повторному нагреву до 74°C. PBS буфер применяли в качестве нулевого контроля. Данные подводили под модель без 2 состояний и осуществляли аппрокси- 29 035013 мацию кривую с помощью программного обеспечения Origin.
Как указано в табл. 2 и показано на фиг. 5, LAG3.5 обладал более высокой температурой плавления
ТМ2, чем LAG3.1, что свидетельствует о более высокой общей стабильности.
Таблица 2
МАЬ Tml (°C) Соответствует СН2 и/или Fab доменам Тт2 (°C) Соответствует СНЗ и/или Fab доменам
LAG3.1 70,7 75,7
LAG3.5 70,5 76,3
LAG3.6 67,8 70,8
LAG3.7 69,4 73,5
LAG3.8 70,3 75,4
Рефолдинг антител после денатурирования является обратной величиной долговременного потенциала агрегации. Таким образом, варианты LAG-3 также тестировали и сравнивали в плане термической обратимости. В частности, антитела нагревали до 74°C и охлаждали до комнатной температуры перед повторным нагревом до 74°C. Соотношение площади под кривыми второй и первой термограммы позволяет оценить термическую обратимость, которая прямо пропорциональна конформационной обратимо сти.
Как указано в табл. 3 и показано на фиг. 6, LAG3.5 обладал значительно более высокой термической обратимостью, чем все другие варианты. Следует отметить, что процентная обратимости LAG3.5 (47%) была более чем в два раза выше, чем процентная обратимость LAG3.1 (20%). Термическая обратимость строго коррелировала с долговременным потенциалом агрегации. Более низкая обратимость соответствует более высокой потенциальной агрегации. На основании данного наблюдения LAG3.1 потенциально будет обладать значительно более высокой агрегацией с течением времени по сравнению с LAG3.5. Аналогичным образом, все другие варианты могут потенциально обладать более высокой агрегацией с течением времени по сравнению с LAG3.5.
Таблица 3
МАЬ Термическая обратимость (%)
LAG3.1 20
LAG3.5 47
LAG3.6 0
LAG3.7 11
LAG3.8 26
3. Агрегация
Варианты также тестировали на стабильность в виде величины агрегации белка с применением стандартной эксклюзионной ВЭЖХ (SEC-HPLC) в соответствии со следующим протоколом: тестируемые образцы антител разбавляли до 1,0 мг/мл фосфатно-солевым буфером (PBS) и подвергали 10 мкл ВЭЖХ (Waters, model 2795). Сепарацию осуществляли на колонке с гель-фильтрацией (TOSOH Bioscience, TSKgel G3000 SWxl, 7,8 ммх300 мм, продукт 08541) с применением мобильной фазы 0,1 М фосфата натрия, 0,15 М хлорида натрия, 0,1 М сульфата натрия, рН 7,2. Определяемое в рамках анализа вещество детектировали с помощью мониторинга УФ абсорбции при 280 нм, а процентную площадь пика композиции антител определяли с помощью программного обеспечения Empower. Как показано в табл. 4, LAG3.5 обладал существенно сниженной агрегацией по сравнению с LAG3.1.
Таблица 4
Образец IgG мономер (% площади пика) IgG агрегат (% площади пика)
LAG3.1 90 10
LAG3.5 96 4
LAG3.6 96 4
LAG3.7 95 5
LAG3.8 95 5
Пример 3. Отбор вариантов
На основе описанных выше исследований вариант антитела LAG3.5 был отобран для проведения дальнейшего анализа в свете его значительно увеличенной физической и химической стабильности по сравнению с его немодифицированной формой (LAG3.1), в частности его высокой способности в плане конформационного рефолдинга (термической обратимости). Данный анализ включал двухэтапный подход с (а) усиленной нагрузкой, (b) и оценкой стабильности в реальном времени в течение 12 недель. В частности, LAG3.5 культивировали при 1,0 мг/мл в рН 8,0, 50 мМ бикарбонате аммония в течение 5 дней
- 30 035013 при 40°C. Анализировали степень модификаций спустя 5 дней, а также влияние на активность и стабильность. Затем вариант LAG3.5 подвергали анализу стабильности в реальном времени в PBS в течение 12 недель и дальнейшему анализу. Результаты данных исследований описаны ниже.
1. Связывание антигена
Как показано на фиг. 7 (и в табл. 5), изменение связывания антигена спустя 5 дней не наблюдалось. Как также показано на фиг. 10А и В, LAG3.5 демонстрировал отсутствие изменения связывания антигена или физической стабильности спустя 12 недель. В частности, LAG3.5 сохраняет более высокую аффинность, чем LAG3.8, в течение всего периода продолжительностью 12 недель при 4 и 40°C.
Таблица 5
ID клона Антиген Kd х ΙΟ'9 (Μ) konx 104 (1/Ms) Koffx ΙΟ'4 (1/s)
Lag3.1 PBS 0,21 166 3,44
рН8 0,20 184 3,61
Lag3.5 PBS 0,25 130 3,22
рН8 0,20 148 2,98
Lag3.8 PBS 0,25 147 3,68
рН8 0,25 162 4,02
2. Химические модификации/Молекулярная стабильность
Пептидное картирование с помощью масс-спектрометрии применяли для анализа химической / молекулярной стабильности LAG3.5 по сравнению с LAG3.1. В частности, очищенное тело фрагментировали, алкилировали, диализировали и расщепляли трипсином (Promega кат. V5111) и GluC (Roche Кат. 11047817001). Продукты расщепления анализировали с помощью нано-ЖХ с тандемной массспектрометрией (Thermo Fisher LTQ Orbitrap).
Как показано на фиг. 8, LAG3.1 обладал повышенной гетерогенностью в VH по сравнению с LAG3.5 при анализе повышения стабильности стабильности при более высоком значении рН, что приводит к деамидированию аспарагиновых остатков (этап 1). Изменение массы вследствие изомеризации не могло быть определено при текущих экспериментальных условиях. Процентная доля изменения выражена в виде соотношения всех изменений и исходного пика.
Кроме того, как показано на фиг. 11, LAG3.1 обладал увеличенной гетерогенностью в VH по сравнению с LAG3.5 при продолжительном анализе стабильности в реальном времени в течение 12 недель при 4C и 40°C (этап 2).
3. Физическая стабильность
Термическую обратимость измеряли в PBS и при рН 8,0. При обоих условиях LAG3.5 снова демонстрировал примерно вдвое увеличенный уровень фолдинга по сравнению с LAG3.1. В частности, как показано в табл. 6-8, LAG3.5 демонстрировал уровень рефолдинга 43% по сравнению с 18% в случае LAG3.1 в PBS. LAG3.5 также демонстрировал уровент рефолдинга 48% по сравнению с уровнем рефолдинга 29% в случае LAG3.1 при рН 8,0.
Таблица 6. ДСК:плавление
MAb Условие Tml ΙΊ112
Lag3.1 PBS 70,7 75,7
Lag3.1 pH8 70,4 75,6
Lag3.5 PBS 70,8 76,4
Lag3.5 pH8 70,5 76,3
Таблица 7. Fluorolog-2:анфолдинг
Mab/мутанты Средняя точка (Μ) Агрегация (Μ)
Lag3.1 PBS 1,99 -
Lag3.1 pH8 2,08 -
Lag3.5 PBS 1,86 -
Lag3.5 pH8 2,00 -
Таблица 8. ДСК:рефолдинг
MAb % обратимости, PBS % обратимости, pH 8
Lag3.1 18 29
Lag3.5 43 48
4. Гетерогенность зарядов
Для анализа гетерогенности зарядов варианты анализировали с применением изоэлектрофокусирования (ИЭФ) со стандартными маркерами со значением изоэлектрической точки белка 5,5 и 10,0 по сравнению с LAG3.1. Кратко, растворы антител наносили на предварительно изготовленный гель для изоэлектрофокусирования толщиной 1 мм со значением изоэлектрической точки белка 3-7 (Invitrogen, каталожный номер ЕС6648ВОХ) вместе с маркерами со значением изоэлектрической точки белка 3-10 (SERVA, каталожный номер 39212). Электрофорез осуществляли с применением ИЭФ 3-7 катодного
- 31 035013 буфера (Invitrogen, каталожный номер LC5370) и ИЭФ анодного буфера (Invitrogen, каталожный номер LC5370) и с применением электрического тока с постоянным значением напряжения 100 В в течение 1 часа, постоянным значением напряжения 200 В в течение 1 ч и постоянным значением напряжения 500 В в течение 30 мин. ИЭФ гели окрашивали кумасси синим для детектирования полосок белка и устраняли окраску раствором метанола и уксусной кислоты. Затем ИЭФ гели анализировали с помощью программного обеспечения ImageQuant TL. На основе данного анализа (данные не показаны) LAG3.5 демонстрировал значительно меньшую гетерогенность по сравнению с L AG3.1.
5. ХГВ-ВЭЖХ
Для анализа растворимости варианты анализировали с применением стандартной хроматографии гидрофобного взаимодействия (ХГВ-ВЭЖХ) в соответствии со следующим протоколом: 50 мкл 2 М сульфата аммония добавляли в 50 мкл тестируемого образца антител при 1 мг/мл. затем 80 мкл тестируемого образца наносили на ВЭЖХ колонку (Waters, модель 2795), последовательно соединенную с ХГВ колонкой (TOSOH Bioscience, эфир-5PW TSK-гель, 7,5 ммх 75 мм, номер продукта 07573). Образец элюировали при скорости потока 1,0 мл/мин градиентом из 100% буфера А (2М сульфат аммония, 0,1М фосфат натрия, рН 7,0) до 100% буфера В (0,1М фосфата натрия, рН 7,0) в течение 50 мин. Антитело детектировали путем отслеживания УФ-абсорбции при 280 нм и анализировали данные с помощью программного обеспечения Empower. Как показано на фиг. 9, гидрофильность LAG3.5 обеспечивала растворимость при высоких концентрациях сульфата аммония.
Пример 4. Обращение ингибирования иммунной реакции, опосредованного Т-клетками
Активность LAG3.5 определяли с помощью функционального анализа, в рамках которого применяли антигенспецифичную Т-клеточную гибридому мыши (3A9). Гибридома 3A9 экспрессирует Тклеточный рецептор, специфичный в отношении пептида из лизозима яйца курицы (HEL48-62) и секретирует IL-2 при совместном культивировании с культивированными с пептидами совпадающими по МНС антиген-презентирующими клетками (LK35.2). Поскольку huLAG-3-Fc способен связывать с линиями МНС В-клеток класса II мышей, экспрессия huLAG-3 в 3A9 линии может оказывать ингибирующий эффект благодаря взаимодействию с классом II на презентирующей линии мышей. Сравнение пептидного профиля реакции источника 3A9 с профилем трансдуцированных LAG-3 3A9 клеток, совместно культивируемых с совпадающими по МНС антиген-презентирующими клетками, показало, что экспрессия LAG-3 человека ингибировала пептидные реакции по сравнению с контрольными 3A9 клектами. Данное ингибирование обращалось с помощью блокады LAG-3 с применением LAG3.5. Таким образом, в отношении LAG3.5 была показана блокада опосредованного LAG-3 ингибирования.
Пример 5. Активация Т-клеток с помощью LAG3.5
Функциональное влияние LAG3.5 на первичные Т-клетки анализировали с применением культур мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) человека, стимулируемых супер антигеном SEB. Весь объем РВМС выделяли из крови восемнадцати доноров, представляющих собой людей, и стимулировали в течение 72 ч в рамках любого из двух форматов анализа:
(i) фиксированное количество антитела (20 мкг/мл) и последовательные разбавления SEB или (ii) фиксированное количество SEB (85 нг/мл) и последовательные разбавления антитела. Уровень секретируемого IL-2, в качестве меры активности Т-клеток, отслеживали с помощью ELISA. Анти-PD-1 антитело и ипилимумаб применяли в качестве положительных контролей, при этом также оценивали активность LAG3.5 в комбинации с анти-PD-1 или анти-CTLA-4 для подмножества доноров.
Повышенную секрецию IL-2 наблюдали в рамках диапазона концентраций SEB у пятнадцати из восемнадцати доноров, подвергаемых лечению только LAG3.5, по сравнению с лечением антителом с контрольным изотипом.
В большинстве случаев уровень стимулирования был меньшим, чем уровень, наблюдаемый при лечении анти-PD-1 или ипилимумабом. С учетом LAG3.5 результаты двух форматов анализа (описаны выше) соответствовали друг другу. Более того, у 5 из 6 исследованных доноров комбинирование LAG3.5 с анти-PD-1 или ипилимумабом приводило к более высоким уровням стимулирования, чем уровни, наблюдаемые для антитела с контрольным изотипом, комбинированного с анти-PD-1 или ипилимумабом. Эти данные показали, что LAG3.5 может функционировать в рамках анализов нормальных Т-клеток человека и может также активировать реакции, опосредованные ингибированием функции PD-1 и CTLA-4.
- 32 035013
Перечень последовательностей
SEO ID NO: ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
1 Vh n.a. 25F7 (LAG3.1)
>1408_LAG-3_403_25F7.1_VH1_NT
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGT
CCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGATTACTACTGGAACTGGATC CGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAATGGA AACACCAACTCCAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCCTATCACTAGACACGT CCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGGTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGT GTATTACTGTGCGTTTGGATATAGTGACTACGAGTACAACTGGTTCGACCCCTGG GGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
2 Vh a.a. 25F7
>1408_LAG-3_403_25F7.1_VH1_AA
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHNGN
TNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQ
GTLVTVSS
3 Vk n.a. 25F7
>1408_LAG-3_403_25F7.1_VK1_NT
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAG CCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCA ACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCC ACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCA CCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAG CAACTGGCCTCTCACTTTTGGCCAGGGGACCAACCTGGAGATCAAA
4 Vk a.a. 25F7
>1408_LAG-3_403_25F7.1_VK1_AA
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP
ARF SGSGSGTDFTLTIS SLEPEDF AVYYCQQRSNWPLTFGQGTNLEIK
- 33 035013
5 Vh CDR1 a.a. 25F7 DYYWN
6 Vh CDR2 a.a. 25F7 EINHNGNTNSNPSLKS
7 Vh CDR3 a.a. 25F7 GYSDYEYNWFDP
8 Vk CDR1 a.a. 25F7 RASQSISSYLA
9 Vk CDR2 a.a. 25F7 DASNRAT
10 Vk CDR3 a.a. 25F7 QQRSNWPLT
11 Vh n.a. LAG3.5
Vh n.a. LAG3.5 caggtgcagctacagcagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcag tgattactactggaactggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattggggaaatcaatcatcgtggaagcaccaactc caacccgtccctcaagagtcgagtcaccctatcactagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgaggtctgtgaccgccgcg gacacggctgtgtattactgtgcgtttggatatagtgactacgagtacaactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtc tcctca
12 Vh a.a. LAG3.5
Vh a.a. LAG3.5
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGE
INHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYS
D YEYNWFDPWGQGTL VT VS S
13 Vk n.a. LAG3.5
Vk n.a. LAG3.5 gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtattagc agctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccag ccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagca gcgtagcaactggcctctcacttttggccaggggaccaacctggagatcaaa
14 Vk a.a. LAG3.5
Vk a.a. LAG3.5
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD
ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQ
GTNLEIK
- 34 035013
15 Vh CDR1 а.а. LAG3.5 DYYWN
16 Vh CDR2 а.а. LAG3.5 EINHRGSTNSNPSLKS
17 Vh CDR3 а.а. LAG3.5 GYSDYEYNWFDP
18 Vk CDR1 а.а. LAG3.5 RASQSISSYLA
19 Vk CDR2 а.а. LAG3.5 DASNRAT
20 Vk CDR3 а.а. LAG3.5 QQRSNWPLT
21 LAG-3 эпитоп PGHPLAPG
22 LAG-3 эпитоп HPAAPSSW
23 LAG-3 эпитоп PAAPSSWG
24 Vh CDR2 а.а. LAG3.6 EIIHSGSTNSNPSLKS
25 Vh CDR2 а.а. LAG3.7 EINHGGGTNSNPSLKS
26 Vh CDR2 а.а. LAG3.8 EINHIGNTNSNPSLKS
27 Vh CDR2 a.a.HUMAN GERMLINE GEINHSGSTNY
28 (Gly4-Ser)3
29 LAG-3 человека а.а.
последовательность LAG-3 человека а.а.
MWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPLQPGAEVPVVWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLR RAGVTWQHQPDSGPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRL PLQPRVQLDERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQAS MTASPPGSLRASDWVILNCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPHHHLAESFLFL PQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNVSIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPA GVGTRSFLTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGDFTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQLN ATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPVSGQERFVWSSLDTPSQRSFSGPWLEAQE AQLLSQPWQCQLYQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPGALPAGHLLLFLTLGVL SLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPEPEPEPEPEPEPE PEPEQL*
30 Vh CDR2 a.a. LAG3.2 VIWYDGSNKYYADSVKG
31 VHLAG3.1 n.a.
LAG3.1HC
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGT
CCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGATTACTACTGGAACTGGATC
CGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAATGGA
- 35 035013
AACACCAACTCCAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCCTATCACTAGACACGT
CCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGGTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGT GTATTACTGTGCGTTTGGATATAGTGACTACGAGTACAACTGGTTCGACCCCTGG GGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCCGTCT TCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTG CCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCC CTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTC
CCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACC
TGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCC AAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCAT CAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTC
AACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAG GAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGG ACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGT CCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGG TGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGAC CTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAAT
GGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGC TCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGA ATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAA GAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATGA
32 VhLAG3.1 a.a.
TRANSLATION\OF\LAG3.1HC
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHNGN TNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQ GTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFP AVLQ S SGL YSLS S WT VP S S SLGTKT YTCNVDHKP SNTKVDKRVESK YGPPCPP CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQFNSTYRVVS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP S SIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
- 36 035013
I 33_______________________I VlLAG3,1 n.a._______________|____________________________________|
LAG3.1LC
GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAG CCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCA ACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCC ACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCA CCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAG CAACTGGCCTCTCACTTTTGGCCAGGGGACCAACCTGGAGATCAAACGTACGGTG GCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAAC
TGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGT GGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGC AGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
I 34 I VlLAG3.1 a.a. | |
TRANSLATION\OF\LAG3.1LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQGTNLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC* j 35 j VHLAG3.5 a.a. | |
LAG3.5 последовательность тяжелой цепи - полностью
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGE INHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYS
DYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK
D YFPEP VT VS WNSGALTSGVHTFP AVLQ S S GL YSLS SWT VP S S SLGTKT
YTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDT
LMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYT
LPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK*
I 36 I VHLAG3.5 n.a. | |
LAG3.5 последовательность тяжелой цепи - полностью
- 37 035013 caggtgcagctacagcagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcag tgattactactggaactggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattggggaaatcaatcatcgtggaagcaccaactc caacccgtccctcaagagtcgagtcaccctatcactagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgaggtctgtgaccgccgcg gacacggctgtgtattactgtgcgtttggatatagtgactacgagtacaactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtc tcctcagctagcaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgc ctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcc tacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagat cacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccaccatgcccagcacctgagttcctg gggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtgga cgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggag gagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaag gtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctg cccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtgga gtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcag gctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacag aagagcctctc cctgtctctgggtaaatga
37 VlLAG3.5 а. а.
LAG3.5 последовательность каппа цепи - полностью
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQ GTNLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQG LSSPVTKSFNRGEC*
38 VlLAG3.5 η.а.
LAG3.5 - последовательность каппа цепи - полностью gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtattagc agctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccag ccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagca gcgtagcaactggcctctcacttttggccaggggaccaacctggagatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgcc atctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtg gataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccct gacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaaga gcttcaacaggggagagtgttag

Claims (55)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, которое(ый) связывает LAG-3 человека, содержащее CDR1, CDR2 и CDR3 участки тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 15, 16, 17, и SEQ ID NO: 18, 19, и 20 соответственно.
  2. 2. Антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1, отличающее(ий)ся тем, что вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
  3. 3. Антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1 или 2, отличающее(ий)ся тем, что вариабельный участок легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
  4. 4. Выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, которое(ый) связывает LAG-3 человека, включающее вариабельные участки тяжелой и легкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 12 и 14 соответственно.
  5. 5. Антитело по п.1 или 4, которое представляет собой полноразмерное антитело.
  6. 6. Выделенное моноклональное антитело, которое связывает LAG-3 человека, содержащее тяжелую и легкую цепи, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO:35 и 37 соответственно.
  7. 7. Выделенное полноразмерное моноклональное антитело IgG4 человека, которое связывает LAG-3 человека, в котором вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 и вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14.
  8. 8. Выделенное полноразмерное моноклональное антитело IgG4 человека, которое связывает LAG-3 человека, в котором тяжелая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35 и легкая цепь состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37.
  9. 9. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, обладаю
    - 38 035013 щее(ий) одним или комбинацией следующих свойств:
    (a) связывание LAG-3 обезьяны;
    (b) отсутствие связывания LAG-3 мыши;
    (c) связывание LAG-3 с молекулами главного комплекса гистосовместимости II класса;
    (d) ингибирование связывания LAG-3 с молекулами главного комплекса гистосовместимости II класса или (e) стимулирование иммунного ответа.
  10. 10. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, которое(ый) стимулирует продуцирование интерлейкина-2 ((IL-2) при антигенспецифичном Т-клеточном ответе.
  11. 11. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, которое(ый) стимулирует противоопухолевый иммунный ответ.
  12. 12. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, которое(ый) связывает эпитоп LAG-3 человека, включающий аминокислотную последовательность HPAAPSSW (SEQ ID NO: 22).
  13. 13. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, которое(ый) связывает LAG-3 человека при значении KD 0,27х 10-9 М или менее.
  14. 14. Антитело по любому из предыдущих пунктов, которое(ый) представляет собой антитело человека или химерное антитело.
  15. 15. Антитело по пп.1-6, которое(ый) относится к изотипу IgG1, IgG2 или IgG4.
  16. 16. Антигенсвязывающий участок антитела по любому из пп.1-7 или 9-15, который(ое) представляет собой Fab, Fab', Fab2 или одноцепочечное антитело.
  17. 17. Биспецифическая молекула, включающая антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, которое(ый) связывает LAG-3 человека, и второе антитело, которое(ый) связывается с эффекторной клеткой.
  18. 18. Иммуноконъюгат, включающий антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-16, связанное(ый) с цитотоксином.
  19. 19. Иммуноконъюгат, содержащий антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-16, связанное(ый) с радиоактивным изотопом.
  20. 20. Фармацевтическая композиция для стимулирования иммунного ответа, содержащая антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-16, биспецифическую молекулу по п.17 или иммуноконъюгат по п.18 или 19, и фармацевтически приемлемый носитель.
  21. 21. Фармацевтическая композиция по п.20, дополнительно содержащая противораковый агент.
  22. 22. Фармацевтическая композиция по п.21, отличающаяся тем, что агент представляет собой противораковое антитело или химиотерапевтический агент.
  23. 23. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельный участок тяжелой и легкой цепи антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-8.
  24. 24. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельный участок легкой цепи антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-8.
  25. 25. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельный участок тяжелой цепи антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-8.
  26. 26. Вектор экспрессии, включающий нуклеиновую кислоту по любому из пп.23-25.
  27. 27. Клетка-хозяин для экспрессии антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-16, включающая вектор экспрессии по п.26.
  28. 28. Способ получения анти-LAG-3 антитела, включающий экспрессию антитела в клетке-хозяине по п.27 и выделение антитела из клетки-хозяина.
  29. 29. Способ стимулирования иммунного ответа у субъекта, включающий введение антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-16, биспецифической молекулы по п.17 или иммуноконъюгата по п.18 или 19.
  30. 30. Способ по п.29, отличающийся тем, что субъект представляет собой субъект с опухолью, при этом стимулируется иммунный ответ против опухоли.
  31. 31. Способ по п.29, отличающийся тем, что субъект представляет собой субъект с вирусом, при этом стимулируется иммунный ответ против вируса и вводится антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-16 или биспецифическая молекула по п.27.
  32. 32. Способ по п.29, отличающийся тем, что иммунный ответ представляет собой антигенспецифичный Т-клеточный ответ.
  33. 33. Способ по п.32, отличающийся тем, что осуществляется стимулирование продуцирования интерлейкина-2 антигенспецифичной Т-клеткой.
  34. 34. Способ ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта, включающий введение субъекту антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-16, биспецифической молекулы по п.17, фармацевтической композиции по любому из пп.20-22 или иммуноконъюгата по п.18 или 19.
  35. 35. Способ лечения вирусной инфекции у субъекта, включающий введение субъекту антитела или
    - 39 035013 его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-16, биспецифической молекулы по п.17 или фармацевтической композиции по любому из пп.20-22.
  36. 36. Способ стимулирования иммунного ответа у субъекта, включающий введение антитела, или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-16, или биспецифической молекулы по п.17 и по меньшей мере одного дополнительного иммуностимулирующего антитела или его антигенсвязывающего участка.
  37. 37. Способ по п.36, отличающийся тем, что по меньшей мере одно иммуностимулирующее дополнительное антитело представляет собой анти-PD-1 антитело или его антигенсвязывающий участок.
  38. 38. Способ по п.26, отличающийся тем, что по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело представляет собой анти-PD-L1 антитело или его антигенсвязывающий участок.
  39. 39. Способ по п.36, отличающийся тем, что по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело представляет собой анти-С1ЪЛ-4 антитело или его антигенсвязывающий участок.
  40. 40. Способ по п.37, отличающийся тем, что анти-PD-L! антитело, или его антигенсвязывающий участок, выбрано из группы антител, состоящей из ниволумаба (MDX1106), ламбролизумаба и антитела АМР514.
  41. 41. Способ по п.40, отличающийся тем, что анти-РП-Ы антитело, или его антигенсвязывающий участок, представляет собой ниволумаб (MDX1106).
  42. 42. Способ по п.40 или 41, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся последовательно как отдельные композиции с каждым антителом в фармацевтически приемлемом носителе.
  43. 43. Способ по п.40 или 41, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся одновременно как отдельные композиции в фармацевтически приемлемом носителе.
  44. 44. Способ по п.40 или 41, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся одновременно как единая композиция в фармацевтически приемлемом носителе.
  45. 45. Способ по п.38, отличающийся тем, что анти-РП-Ы антитело, или его антигенсвязывающий участок, выбрано из группы, состоящей из MDX1105 (BMS-936559), MPDL3280A и MEDI4736.
  46. 46. Способ по п.45, отличающийся тем, что анти-PD-L1 антитело, или его антигенсвязывающий участок, представляет собой MDX1105 (BMS-936559).
  47. 47. Способ по п.45 или 46, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся последовательно как отдельные композиции с каждым антителом в фармацевтически приемлемом носителе.
  48. 48. Способ по п.45 или 46, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся одновременно как отдельные композиции с каждым антителом в фармацевтически приемлемом носителе.
  49. 49. Способ по п.45 или 46, отличающийся тем, что что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся одновременно как единая композиция в фармацевтически приемлемом носителе.
  50. 50. Способ по п.39, отличающийся тем, что анти-С^Л-4 антитело, или его антигенсвязывающий участок, выбран из группы, состоящей из иплимумаба (MDX010), антитела, продуцируемого гибридомой А3.6В10, депонированной под депозитным номером АТСС No. НВ-12318, антитела, продуцируемого гибридомой А3.6В10, депонированной под депозитным номером АТСС No. НВ-12319, и СР-675206.
  51. 51. Способ по п.39, отличающийся тем, что анти-С^Л-4 антитело, или его антигенсвязывающий участок, представляет собой иплимумаб (MDX010).
  52. 52. Способ по п.50 или 51, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся последовательно как отдельные композиции с каждым антителом в фармацевтически приемлемом носителе.
  53. 53. Способ по п.50 или 51, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся одновременно как отдельные композиции в фармацевтически приемлемом носителе.
  54. 54. Способ по п.50 или 51, отличающийся тем, что антитела, или их антигенсвязывающие участки, вводятся одновременно как единая композиция в фармацевтически приемлемом носителе.
  55. 55. In vitro способ активации Т-клетки, включающий приведение в контакт выделенной Т-клетки с антителом, или его антигенсвязывающим участком, по любому из пп.1-16.
EA201590138A 2012-07-02 2013-07-02 Анти-lag-3 антитело, обладающее повышенной стабильностью EA035013B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261667058P 2012-07-02 2012-07-02
PCT/US2013/048999 WO2014008218A1 (en) 2012-07-02 2013-07-02 Optimization of antibodies that bind lymphocyte activation gene-3 (lag-3), and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201590138A1 EA201590138A1 (ru) 2015-07-30
EA035013B1 true EA035013B1 (ru) 2020-04-17

Family

ID=48795938

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA202090227A EA202090227A1 (ru) 2012-07-02 2013-07-02 Анти-lag-3 антитело, обладающее повышенной стабильностью
EA201590138A EA035013B1 (ru) 2012-07-02 2013-07-02 Анти-lag-3 антитело, обладающее повышенной стабильностью

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA202090227A EA202090227A1 (ru) 2012-07-02 2013-07-02 Анти-lag-3 антитело, обладающее повышенной стабильностью

Country Status (38)

Country Link
US (6) US9505839B2 (ru)
EP (3) EP3795592A1 (ru)
JP (5) JP6320376B2 (ru)
KR (5) KR20220150417A (ru)
CN (2) CN108101991B (ru)
AR (2) AR091649A1 (ru)
AU (4) AU2013286914B2 (ru)
BR (1) BR112014032999B1 (ru)
CA (2) CA2877746C (ru)
CL (1) CL2014003637A1 (ru)
CO (1) CO7170127A2 (ru)
CY (2) CY1119563T1 (ru)
DK (2) DK2867258T3 (ru)
EA (2) EA202090227A1 (ru)
ES (2) ES2638545T3 (ru)
FI (1) FIC20230009I1 (ru)
FR (1) FR22C1057I2 (ru)
HK (2) HK1207386A1 (ru)
HR (2) HRP20171315T1 (ru)
HU (3) HUE034553T2 (ru)
IL (1) IL236517B (ru)
LT (3) LT3275899T (ru)
MX (2) MX365417B (ru)
MY (3) MY197544A (ru)
NL (1) NL301205I2 (ru)
NO (2) NO2023008I1 (ru)
NZ (1) NZ628528A (ru)
PE (3) PE20191759A1 (ru)
PH (1) PH12014502854A1 (ru)
PL (1) PL2867258T3 (ru)
PT (2) PT2867258T (ru)
RS (2) RS61084B1 (ru)
SG (2) SG10201610960YA (ru)
SI (2) SI2867258T1 (ru)
TN (1) TN2014000536A1 (ru)
TW (6) TWI576355B (ru)
UY (1) UY34887A (ru)
WO (1) WO2014008218A1 (ru)

Families Citing this family (455)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2607147C (en) * 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
JP5252635B2 (ja) * 2005-07-01 2013-07-31 メダレックス インコーポレーティッド プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
LT3702371T (lt) 2009-03-25 2023-01-10 Genentech, Inc. Anti-fgfr3 antikūnai ir jų panaudojimo būdai
JP6105578B2 (ja) 2011-07-21 2017-03-29 トレロ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 複素環式プロテインキナーゼ阻害剤
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
US10280221B2 (en) * 2013-03-15 2019-05-07 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-LAG-3 binding proteins
JP6433085B2 (ja) 2013-04-09 2018-12-05 ボストン バイオメディカル， インコーポレイテッド がんの処置に使用するための２−アセチルナフト［２，３−ｂ］フラン−４，９−ジオン
AU2014323523B2 (en) * 2013-09-20 2020-02-20 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-LAG-3 antibodies and anti-PD-1 antibodies to treat tumors
EP3757130A1 (en) 2013-09-26 2020-12-30 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
WO2015066413A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Novartis Ag Oxazolidinone hydroxamic acid compounds for the treatment of bacterial infections
US10344090B2 (en) 2013-12-12 2019-07-09 Shanghai Hangrui Pharmaceutical Co., Ltd. PD-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof
LT3087071T (lt) 2013-12-24 2018-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Tricikliniai junginiai kaip priešvėžiniai agentai
JO3517B1 (ar) 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
TWI680138B (zh) * 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
CA2937503A1 (en) * 2014-01-28 2015-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Anti-lag-3 antibodies to treat hematological malignancies
US10611829B2 (en) 2014-01-31 2020-04-07 Aimm Therapeutics B.V. Means and methods for producing stable antibodies
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10144778B2 (en) 2014-03-12 2018-12-04 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
BR112016018408A2 (pt) * 2014-03-14 2017-12-26 Immutep Sas moléculas de anticorpo à lag-3 e usos das mesmas
WO2015148379A1 (en) 2014-03-24 2015-10-01 Novartis Ag Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
KR101923326B1 (ko) 2014-06-06 2018-11-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 글루코코르티코이드-유도 종양 괴사 인자 수용체 (gitr)에 대한 항체 및 그의 용도
CA2951259A1 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Flexus Biosciences, Inc. Immunoregulatory agents
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
EP3177593A1 (en) 2014-08-06 2017-06-14 Novartis AG Quinolone derivatives as antibacterials
JO3663B1 (ar) * 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
WO2016040882A1 (en) 2014-09-13 2016-03-17 Novartis Ag Combination therapies of egfr inhibitors
EP3662903A3 (en) 2014-10-03 2020-10-14 Novartis AG Combination therapies
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
SG11201702401RA (en) 2014-10-14 2017-04-27 Novartis Ag Antibody molecules to pd-l1 and uses thereof
UY36390A (es) 2014-11-05 2016-06-01 Flexus Biosciences Inc Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido), sus métodos de síntesis y composiciones farmacéuticas que los contienen
EP3215141A4 (en) 2014-11-05 2018-06-06 Flexus Biosciences, Inc. Immunoregulatory agents
UY36391A (es) 2014-11-05 2016-06-01 Flexus Biosciences Inc Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido1), sus métodos de síntesis y composiciones farmacèuticas que las contienen
UY36404A (es) 2014-11-21 2016-06-01 Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware ANTICUERPOS MONOCLONALES (Ab) COMO DETECTORES DE CD73 E INHIBIDORES DE SU ACTIVIDAD ENZIMÁTICA, Y COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN
US9827308B2 (en) 2014-12-10 2017-11-28 Wisconsin Alumni Research Foundation Mini-intronic plasmid DNA vaccines in combination with LAG3 blockade
ES2756300T3 (es) 2014-12-16 2020-04-27 Novartis Ag Compuestos de ácido isoxazol hidroxámico como inhibidores de LpxC
WO2016100882A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
AR103232A1 (es) 2014-12-22 2017-04-26 Bristol Myers Squibb Co ANTAGONISTAS DE TGFbR
EP4249066A3 (en) 2014-12-23 2023-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to tigit
KR20170106453A (ko) * 2015-01-29 2017-09-20 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 관문 억제제 및 백신 조합 및 면역요법을 위한 이들의 사용
MA41463A (fr) * 2015-02-03 2017-12-12 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre le gène d'activation 3 des lymphocytes (lag-3)
US10983128B2 (en) 2015-02-05 2021-04-20 Bristol-Myers Squibb Company CXCL11 and SMICA as predictive biomarkers for efficacy of anti-CTLA4 immunotherapy
MX2017010595A (es) * 2015-02-19 2018-11-12 Bioclin Therapeutics Inc Métodos, composiciones, y equipos para tratamiento de cáncer.
MX371167B (es) 2015-03-02 2020-01-21 Rigel Pharmaceuticals Inc Inhibidores de inhibidores del factor beta de crecimiento de transformacion (tgf-beta).
JO3746B1 (ar) 2015-03-10 2021-01-31 Aduro Biotech Inc تركيبات وطرق لتنشيط الإشارات المعتمدة على "منبه أو تحفيز جين انترفيرون"
KR20170134981A (ko) 2015-04-03 2017-12-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 암의 치료를 위한 인돌아민-2,3-디옥시게나제의 억제제
EP3283527B1 (en) 2015-04-13 2021-01-13 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer
RS60753B1 (sr) 2015-04-17 2020-10-30 Bristol Myers Squibb Co Kompozicije koje sadrže kombinaciju ipilimumaba i nivolumaba
EP3294736B1 (en) 2015-05-11 2020-07-22 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic compounds as anticancer agents
US10174024B2 (en) 2015-05-12 2019-01-08 Bristol-Myers Squibb Company 5H-pyrido[3,2-B]indole compounds as anticancer agents
US9725449B2 (en) 2015-05-12 2017-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic compounds as anticancer agents
MA53355A (fr) 2015-05-29 2022-03-16 Agenus Inc Anticorps anti-ctla-4 et leurs procédés d'utilisation
MY188049A (en) 2015-05-29 2021-11-12 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against ox40 and uses thereof
AU2016271475A1 (en) 2015-06-03 2017-12-21 Boston Biomedical, Inc. Compositions comprising a cancer stemness inhibitor and an immunotherapeutic agent for use in treating cancer
EA039293B1 (ru) * 2015-06-05 2021-12-30 Мерк Шарп И Доум Корп. Антитела против lag3 и антигенсвязывающие фрагменты
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
EP3313886A1 (en) 2015-06-29 2018-05-02 The Rockefeller University Antibodies to cd40 with enhanced agonist activity
US10786547B2 (en) 2015-07-16 2020-09-29 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions, articles of manufacture and methods for treating cancer
EP3325009A4 (en) * 2015-07-22 2018-12-05 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind lag3
US10399987B2 (en) 2015-07-28 2019-09-03 Bristol-Myer Squibb Company TGF beta receptor antagonists
US20180207273A1 (en) 2015-07-29 2018-07-26 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
EP3964528A1 (en) 2015-07-29 2022-03-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to lag-3
GEP20227419B (en) 2015-07-30 2022-10-10 Macrogenics Inc Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
US20180250303A1 (en) 2015-08-25 2018-09-06 Bristol-Myers Squibb Company Tgf beta receptor antagonists
RU2760582C2 (ru) 2015-09-02 2021-11-29 Иммутеп С.А.С. Анти-LAG-3 антитела
JP6952028B2 (ja) * 2015-09-29 2021-10-20 シャンハイ チャンジアン バイオテクノロジー カンパニー リミテッド Ｐｄ−１抗体およびその使用
MX2018003630A (es) 2015-10-02 2018-08-01 F Hoffmann ­La Roche Ag Anticuerpos biespecificos para pd1 y tim3.
TWI756187B (zh) * 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
US10149887B2 (en) 2015-10-23 2018-12-11 Canbas Co., Ltd. Peptides and peptidomimetics in combination with t cell activating and/or checkpoint inhibiting agents for cancer treatment
CN108289951A (zh) * 2015-10-30 2018-07-17 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-因子d抗体和缀合物
PE20181300A1 (es) 2015-11-02 2018-08-09 Five Prime Therapeutics Inc Polipeptidos del dominio extracelular de cd80 y su uso en el tratamiento del cancer
US11401509B2 (en) 2015-11-09 2022-08-02 Bristol-Myers Squibb Company Methods of minimizing glycoprotein agregation in CHO cell production
JP6945456B2 (ja) * 2015-11-13 2021-10-06 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｌａｇ‐３結合分子及びその使用方法
MY189018A (en) 2015-11-18 2022-01-19 Merck Sharp & Dohme Pd1 and/or lag3 binders
EP3377532B1 (en) 2015-11-19 2022-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
WO2017087780A1 (en) * 2015-11-20 2017-05-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a humanized lymphocyte-activation gene 3
BR112018010410A8 (pt) 2015-11-23 2019-02-26 Five Prime Therapeutics Inc método para tratar câncer em um sujeito, composição e métodos de aumento do número de células nk e de aumento do número de uma ou mais células positivas para pd-l1
WO2017106061A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules having immunoreactivity with pd-1 and ctla-4, and methods of use thereof
US10450318B2 (en) 2015-12-15 2019-10-22 Bristol-Myers Squibb Company CXCR4 receptor antagonists
KR20180086502A (ko) * 2015-12-16 2018-07-31 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-lag3 항체 및 항원-결합 단편
CN108495651A (zh) 2015-12-17 2018-09-04 诺华股份有限公司 抗pd-1的抗体分子及其用途
KR20180089510A (ko) 2015-12-18 2018-08-08 노파르티스 아게 CD32b를 표적화하는 항체 및 그의 사용 방법
JP6993699B2 (ja) 2016-01-11 2022-02-03 ウニヴェルズィテート・ツューリヒ ヒトインターロイキン－２に対する免疫刺激性ヒト化モノクローナル抗体及びその融合タンパク質
BR112018016842A2 (pt) 2016-02-19 2018-12-26 Novartis Ag compostos de piridona tetracíclica como antivirais
CN109071655B (zh) * 2016-03-04 2022-08-12 洛克菲勒大学 具有增强的激动剂活性的cd40的抗体
KR20230038311A (ko) 2016-03-04 2023-03-17 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-cd73 항체와의 조합 요법
WO2017163186A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Novartis Ag Alkynyl nucleoside analogs as inhibitors of human rhinovirus
JP7038353B2 (ja) 2016-04-13 2022-03-18 ヴィヴィア バイオテック，エス．エル エクスビボのｂｉｔｅ活性化ｔ細胞
CN109071665B (zh) 2016-04-18 2022-11-01 塞德斯医疗公司 结合人cd40的激动性抗体及其用途
KR20190003686A (ko) 2016-05-04 2019-01-09 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 인돌아민 2,3-디옥시게나제의 억제제 및 그의 사용 방법
KR20190003687A (ko) 2016-05-04 2019-01-09 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 인돌아민 2,3-디옥시게나제의 억제제 및 그의 사용 방법
WO2017192811A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
CN109415320A (zh) 2016-05-04 2019-03-01 百时美施贵宝公司 吲哚胺2,3-双加氧酶的抑制剂及其使用方法
WO2017192813A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
IL262892B2 (en) 2016-05-18 2024-04-01 Boehringer Ingelheim Int Anti-PD-1 and anti-LAG3 antibodies for cancer treatment
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
ES2905823T3 (es) 2016-05-20 2022-04-12 Biohaven Therapeutics Ltd Uso de riluzol, profármacos de riluzol o análogos de riluzol con inmunoterapias para tratar cánceres
JP7185530B2 (ja) 2016-06-13 2022-12-07 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫細胞機能を促進するための方法および組成物
WO2017216705A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Novartis Ag Crystalline form of (r)-4-(5-(cyclopropylethynyl)isoxazol-3-yl)-n-hydroxy-2-methyl-2-(methylsulfonyl)butanamide as an antibacterial agent
WO2017216686A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
WO2017216685A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017220988A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Kymab Limited Multispecific antibodies for immuno-oncology
KR20190019144A (ko) 2016-06-20 2019-02-26 에프-스타 델타 리미티드 Pd-l1 및 lag-3에 결합하는 결합 분자
BR112018076525A2 (pt) 2016-06-20 2019-04-02 F-Star Beta Limited membros de ligação a lag-3
AU2017282892B2 (en) 2016-06-23 2023-10-26 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. LAG-3 antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical application thereof
JP7054681B2 (ja) 2016-06-24 2022-04-14 インフィニティー ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 組合せ療法
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
TWI780057B (zh) 2016-07-14 2022-10-11 美商必治妥美雅史谷比公司 針對tim3之抗體及其用途
EP3484516A4 (en) 2016-07-14 2020-03-18 Fred Hutchinson Cancer Research Center MULTIPLE CONSTRUCTIONS OF BI-SPECIFIC LINK AREAS HAVING A DIFFERENT EPITOPE LINK TO TREAT CANCER
GB201612520D0 (en) 2016-07-19 2016-08-31 F-Star Beta Ltd Binding molecules
WO2018017633A1 (en) 2016-07-21 2018-01-25 Bristol-Myers Squibb Company TGF Beta RECEPTOR ANTAGONISTS
JP7054144B2 (ja) * 2016-08-15 2022-04-13 国立大学法人北海道大学 抗ｌａｇ－３抗体
CN109843322A (zh) 2016-08-26 2019-06-04 百时美施贵宝公司 吲哚胺2,3-双加氧酶的抑制剂及其使用方法
WO2018047109A1 (en) 2016-09-09 2018-03-15 Novartis Ag Polycyclic pyridone compounds as antivirals
US11673971B2 (en) 2016-09-23 2023-06-13 Marengo Therapeutics, Inc. Multispecific antibody molecules comprising lambda and kappa light chains
JOP20190061A1 (ar) 2016-09-28 2019-03-26 Novartis Ag مثبطات بيتا-لاكتاماز
TWI773694B (zh) 2016-10-11 2022-08-11 美商艾吉納斯公司 抗ｌａｇ－３抗體及其使用方法
AU2017342071A1 (en) 2016-10-13 2019-04-18 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd Anti-LAG-3 antibodies and compositions
TW201819380A (zh) 2016-10-18 2018-06-01 瑞士商諾華公司 作為抗病毒劑之稠合四環吡啶酮化合物
US10660909B2 (en) 2016-11-17 2020-05-26 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
CA3045306A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Boston Biomedical, Inc. Naphthofuran derivatives, preparation, and methods of use thereof
JP6992068B2 (ja) 2016-12-07 2022-02-03 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｃｔｌａ－４抗体およびそれらの使用方法
US10961239B2 (en) 2017-01-05 2021-03-30 Bristol-Myers Squibb Company TGF beta receptor antagonists
AU2018210272B2 (en) 2017-01-20 2022-02-24 Arcus Biosciences, Inc. Azolopyrimidine for the treatment of cancer-related disorders
SG11201907208XA (en) 2017-02-10 2019-09-27 Regeneron Pharma Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging
US20200291089A1 (en) 2017-02-16 2020-09-17 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof
JP6929951B2 (ja) * 2017-02-22 2021-09-01 アイ−エムエービー バイオファーマ （ハンジョウ） カンパニー リミテッド 抗ｌａｇ−３抗体およびその使用
US20200031944A1 (en) 2017-03-31 2020-01-30 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer using anti-gitr antibodies
EP3601355A1 (en) 2017-03-31 2020-02-05 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
AU2018247765B2 (en) 2017-04-03 2023-11-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates of an Anti-PD-1 antibody with a mutant IL-2 or with IL-15
TWI690538B (zh) 2017-04-05 2020-04-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 特異性結合至pd1至lag3的雙特異性抗體
US11939380B2 (en) 2017-04-05 2024-03-26 Les Laboratoires Servier Combination therapies targeting PD-1, TIM-3, and LAG-3
DK3606954T3 (en) * 2017-04-05 2022-09-26 Hoffmann La Roche Anti-LAG3-antistoffer
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
US20200071417A1 (en) 2017-04-19 2020-03-05 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules and uses thereof
JP7232244B2 (ja) 2017-04-21 2023-03-08 イケナ オンコロジー， インコーポレイテッド インドールａｈｒ阻害剤およびその使用
JP2020517699A (ja) 2017-04-26 2020-06-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ジスルフィド結合の還元を最小限にする抗体製造法
CA3059468A1 (en) * 2017-04-27 2018-11-01 Tesaro, Inc. Antibody agents directed against lymphocyte activation gene-3 (lag-3) and uses thereof
AR111419A1 (es) 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
US20200385472A1 (en) 2017-04-28 2020-12-10 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules comprising a non-immunoglobulin heterodimerization domain and uses thereof
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
JP2020517913A (ja) 2017-04-28 2020-06-18 ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｃｄ８０細胞外ドメインポリペプチドによる治療方法
AR111658A1 (es) 2017-05-05 2019-08-07 Novartis Ag 2-quinolinonas tricíclicas como agentes antibacteriales
CN110621337B (zh) * 2017-05-10 2021-11-09 浙江时迈药业有限公司 抗lag3人单克隆抗体及其用途
WO2018209049A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
CN113896792A (zh) 2017-05-12 2022-01-07 哈普恩治疗公司 间皮素结合蛋白质
WO2018213424A1 (en) 2017-05-17 2018-11-22 Boston Biomedical, Inc. Methods for treating cancer
ES2951809T3 (es) 2017-05-17 2023-10-25 Arcus Biosciences Inc Derivados de quinazolina-pirazol para el tratamiento de trastornos relacionados con el cáncer
SI3631454T1 (sl) 2017-05-30 2023-12-29 Bristol-Myers Squibb Company Zdravljenje lag-3 pozitivnih tumorjev
JP7301002B2 (ja) * 2017-05-30 2023-06-30 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗ｌａｇ－３抗体または抗ｌａｇ－３抗体および抗ｐｄ－１もしくは抗ｐｄ－ｌ１抗体を含む組成物
EP4245375A3 (en) 2017-05-30 2023-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
WO2018222901A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules that bind to myeloproliferative leukemia (mpl) protein and uses thereof
WO2018223004A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd20 and cd3
KR20200041834A (ko) 2017-06-01 2020-04-22 젠코어 인코포레이티드 Cd123 및 cd3에 결합하는 이중특이성 항체
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
EP3642240A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CR20190593A (es) 2017-06-22 2020-05-10 Novartis Ag Moléculas de anticuerpo que se unen a cd73 y usos de las mismas
WO2018234879A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag USE OF IL-1β BINDING ANTIBODIES IN THE TREATMENT OF CANCER
KR20200022447A (ko) 2017-06-27 2020-03-03 노파르티스 아게 항-tim-3 항체의 투여 요법 및 그의 용도
EA202090119A1 (ru) 2017-06-30 2020-04-21 Бристол-Маерс Сквибб Компани Аморфные и кристаллические формы ido-ингибиторов
JP6896989B2 (ja) * 2017-07-13 2021-06-30 ナンジン リーズ バイオラブズ カンパニー リミテッド 抗体結合ｌａｇ−３及びその使用
AU2018302283A1 (en) 2017-07-20 2020-02-06 Novartis Ag Dosage regimens of anti-LAG-3 antibodies and uses thereof
EP3658565B1 (en) 2017-07-28 2022-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
WO2019036657A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Kyn Therapeutics AHR INHIBITORS AND USES THEREOF
AU2018317865B2 (en) 2017-08-18 2023-03-16 Cothera Bioscience, Inc. Polymorphic form of TG02
AU2018323955A1 (en) * 2017-08-30 2020-03-19 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-LAG-3 antibodies and uses thereof
JP7208225B2 (ja) 2017-08-31 2023-01-18 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗癌剤としての環状ジヌクレオチド
WO2019046498A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
JP7316263B2 (ja) 2017-08-31 2023-07-27 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗癌剤としての環状ジヌクレオチド
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
CA3076613A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 Kymera Therapeutics, Inc. Protein degraders and uses thereof
WO2019060693A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND USES THEREOF
JP7384668B2 (ja) * 2017-10-05 2023-11-21 第一三共株式会社 細胞傷害性ｔ細胞枯渇用組成物
WO2019074822A1 (en) 2017-10-09 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
WO2019074824A1 (en) 2017-10-09 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
EP3694552A1 (en) 2017-10-10 2020-08-19 Tilos Therapeutics, Inc. Anti-lap antibodies and uses thereof
US11660311B2 (en) 2017-10-10 2023-05-30 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
MX2020003856A (es) 2017-10-13 2020-08-13 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas de union a antigenos de maduracion de celulas b.
JP2020536894A (ja) 2017-10-15 2020-12-17 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 腫瘍処置法
WO2019079261A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
CA3079310A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Vivia Biotech, S.L. Bite-activated car-t cells
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
US11603410B2 (en) 2017-11-01 2023-03-14 Bristol-Myers Squibb Company Immunostimulatory agonistic antibodies for use in treating cancer
US11166959B2 (en) 2017-11-06 2021-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Isofuranone compounds useful as HPK1 inhibitors
JP2021503478A (ja) 2017-11-16 2021-02-12 ノバルティス アーゲー 組み合わせ治療
US20210079015A1 (en) 2017-11-17 2021-03-18 Novartis Ag Novel dihydroisoxazole compounds and their use for the treatment of hepatitis b
JP2021509009A (ja) 2017-11-30 2021-03-18 ノバルティス アーゲー Ｂｃｍａターゲティングキメラ抗原受容体及びその使用
US20200377571A1 (en) 2017-12-08 2020-12-03 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules and uses thereof
CN111741976A (zh) 2017-12-19 2020-10-02 F星贝塔有限公司 包括pd-l1抗原结合位点的fc结合片段
JP2021507906A (ja) 2017-12-20 2021-02-25 ノバルティス アーゲー 抗ウイルス剤としての融合三環式ピラゾロ−ジヒドロピラジニル−ピリドン化合物
CN111356476B (zh) 2017-12-22 2023-03-10 江苏恒瑞医药股份有限公司 Lag-3抗体药物组合物及其用途
BR112020012997A2 (pt) 2017-12-26 2020-12-01 Kymera Therapeutics, Inc. degradadores de irak e usos dos mesmos
WO2019129137A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
US11306149B2 (en) 2017-12-27 2022-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Anti-CD40 antibodies and uses thereof
WO2019129136A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
CN115925943A (zh) 2017-12-27 2023-04-07 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
WO2019136112A1 (en) 2018-01-05 2019-07-11 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
CN112218651A (zh) 2018-01-08 2021-01-12 诺华公司 用于与嵌合抗原受体疗法组合的免疫增强rna
JP7358361B2 (ja) 2018-01-12 2023-10-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｔｉｍ３に対する抗体およびその使用
US11512080B2 (en) 2018-01-12 2022-11-29 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN ligands and uses thereof
EP3737666A4 (en) 2018-01-12 2022-01-05 Kymera Therapeutics, Inc. PROTEIN DEGRADANTS AND USES THEREOF
WO2019141092A1 (zh) * 2018-01-18 2019-07-25 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗lag-3抗体及其用途
AU2019211485A1 (en) 2018-01-29 2020-08-06 Merck Patent Gmbh GCN2 inhibitors and uses thereof
BR112020015396A2 (pt) 2018-01-29 2020-12-08 Merck Patent Gmbh Inididores de gcn2 e usos dos mesmos
CN111655730A (zh) 2018-01-31 2020-09-11 豪夫迈·罗氏有限公司 包含与lag3结合的抗原结合位点的双特异性抗体
JP2021511782A (ja) 2018-01-31 2021-05-13 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 安定化された免疫グロブリンドメイン
WO2019152660A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
WO2019160956A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
US10519187B2 (en) 2018-02-13 2019-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019165315A1 (en) 2018-02-23 2019-08-29 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists alone or in combination
WO2019166951A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Novartis Ag Indole-2-carbonyl compounds and their use for the treatment of hepatitis b
WO2019173587A1 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
US20210009711A1 (en) 2018-03-14 2021-01-14 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules and uses thereof
WO2019178362A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
WO2019179365A1 (en) * 2018-03-20 2019-09-26 WuXi Biologics Ireland Limited Novel anti-lag-3 antibody polypeptide
TW201945393A (zh) 2018-03-21 2019-12-01 美商戊瑞治療有限公司 在酸性pH結合至VISTA之抗體
US11242393B2 (en) 2018-03-23 2022-02-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against MICA and/or MICB and uses thereof
JP2021519771A (ja) 2018-03-30 2021-08-12 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 腫瘍を処置する方法
US11840568B2 (en) 2018-04-02 2023-12-12 Mab-Venture Biopharm Co., Ltd. Lymphocyte activation gene-3 (LAG-3) binding antibody and use thereof
CN110343178B (zh) * 2018-04-03 2022-07-22 上海开拓者生物医药有限公司 抗人lag-3单克隆抗体及其应用
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
AU2019255196A1 (en) 2018-04-16 2020-11-12 Arrys Therapeutics, Inc. EP4 inhibitors and use thereof
EP3781596A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Il-15/il-15ra heterodimeric fc fusion proteins and uses thereof
AU2019256539A1 (en) 2018-04-18 2020-11-26 Xencor, Inc. PD-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra Fc-fusion proteins and PD-1 antigen binding domains and uses thereof
US20230339891A1 (en) 2018-05-03 2023-10-26 Bristol-Myers Squibb Company Uracil derivatives as mer-axl inhibitors
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CN112512578A (zh) 2018-06-01 2021-03-16 诺华股份有限公司 结合cd123和cd3的双特异性抗体的给药
CR20200571A (es) 2018-06-01 2021-01-18 Novartis Ag Moléculas de únion contra bcma y usos de las mismas
WO2019241098A1 (en) 2018-06-11 2019-12-19 Yale University Novel immune checkpoint inhibitors
CN110606892B (zh) * 2018-06-14 2023-09-26 华博生物医药技术（上海）有限公司 一种高亲和力高生物活性的lag-3抗体及其应用
CN110615840A (zh) * 2018-06-19 2019-12-27 信达生物制药(苏州)有限公司 全人源的抗lag-3抗体及其应用
US11180531B2 (en) 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
EP3814348B9 (en) 2018-06-27 2023-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Substituted naphthyridinone compounds useful as t cell activators
HUE062412T2 (hu) 2018-06-27 2023-10-28 Bristol Myers Squibb Co Naftiridinon vegyületek mint T-sejt aktivátorok
US11945864B2 (en) 2018-06-29 2024-04-02 Y-Biologics Inc. Monoclonal antibody specifically binding to LAG-3 and use thereof
AU2019297451A1 (en) 2018-07-03 2021-01-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
WO2020010177A1 (en) 2018-07-06 2020-01-09 Kymera Therapeutics, Inc. Tricyclic crbn ligands and uses thereof
CN113056483A (zh) 2018-07-09 2021-06-29 戊瑞治疗有限公司 结合到ilt4的抗体
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
FI3820573T3 (fi) 2018-07-10 2023-11-01 Novartis Ag 3-(5-hydroksi-1-oksoisoindolin-2-yyli)piperidiini-2,6-dionijohdannaisia ja niiden käyttö ikaros-perheen sinkkisormi 2 (ikzf2) -riippuvaisten sairauksien hoidossa
CA3104536A1 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to vista at acidic ph
AU2019306628A1 (en) 2018-07-20 2021-02-11 Surface Oncology, Inc. Anti-CD112R compositions and methods
US20210355113A1 (en) 2018-07-23 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US20210299126A1 (en) 2018-07-23 2021-09-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
US20210238287A1 (en) * 2018-07-26 2021-08-05 Bristol-Myers Squibb Company LAG-3 Combination Therapy for the Treatment of Cancer
CN110172099B (zh) * 2018-08-16 2020-03-03 上海健信生物医药科技有限公司 抗lag-3人源化单克隆抗体分子，抗原结合片段及其医药用途
US10959986B2 (en) 2018-08-29 2021-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US11253525B2 (en) 2018-08-29 2022-02-22 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US20220089587A1 (en) 2018-09-07 2022-03-24 PIC Therapeutics, Inc. Eif4e inhibitors and uses thereof
JP7273951B2 (ja) 2018-09-12 2023-05-15 ノバルティス アーゲー 抗ウイルス性ピリドピラジンジオン化合物
EP3854805A4 (en) 2018-09-21 2022-08-24 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. NOVEL INTERLEUKIN 2 AND ITS USE
WO2020057646A1 (zh) 2018-09-21 2020-03-26 信达生物制药(苏州)有限公司 新型白介素2及其用途
CA3114038A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
WO2020069372A1 (en) 2018-09-27 2020-04-02 Elstar Therapeutics, Inc. Csf1r/ccr2 multispecific antibodies
AU2019350592A1 (en) 2018-09-29 2021-04-01 Novartis Ag Process of manufacture of a compound for inhibiting the activity of shp2
EP3861016A2 (en) 2018-10-03 2021-08-11 Xencor, Inc. Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
TW202035445A (zh) 2018-10-10 2020-10-01 美商帝洛斯療法股份有限公司 抗lap抗體變異體及其用途
KR20210091710A (ko) 2018-10-12 2021-07-22 젠코어 인코포레이티드 PD-1 표적화 IL-15/IL-15Rα Fc 융합 단백질 및 병용요법에서의 이의 용도
AU2019361124A1 (en) * 2018-10-19 2021-06-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for melanoma
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
JP2022509942A (ja) 2018-11-16 2022-01-25 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗ｎｋｇ２ａ抗体およびその使用
US11352350B2 (en) 2018-11-30 2022-06-07 Kymera Therapeutics, Inc. IRAK degraders and uses thereof
KR20210099066A (ko) 2018-12-04 2021-08-11 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 암의 치료를 위한 작용제로서 사용하기 위한 cdk9 억제제 및 그의 다형체
EP3670659A1 (en) 2018-12-20 2020-06-24 Abivax Biomarkers, and uses in treatment of viral infections, inflammations, or cancer
EP3897853A1 (en) 2018-12-20 2021-10-27 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric fc fusion proteins containing il-15/il-15ra and nkg2d antigen binding domains
WO2020128972A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Novartis Ag Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
WO2020128613A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
AU2019406840A1 (en) 2018-12-21 2021-06-03 Novartis Ag Use of IL-1 beta antibodies in the treatment or prevention of myelodysplastic syndrome
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
EP3898674A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Novartis AG Use of il-1beta binding antibodies
EP3898974A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2020167990A1 (en) 2019-02-12 2020-08-20 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Formulations comprising heterocyclic protein kinase inhibitors
WO2020165834A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
CA3124935A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
CN111620949A (zh) 2019-02-28 2020-09-04 三生国健药业（上海）股份有限公司 结合人lag-3的抗体、其制备方法和用途
CN113795264A (zh) 2019-03-19 2021-12-14 瓦尔希伯伦私人肿瘤研究基金会 采用Omomyc和结合PD-1或CTLA-4的抗体治疗癌症的联合疗法
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
MX2021011289A (es) 2019-03-22 2021-11-03 Sumitomo Pharma Oncology Inc Composiciones que comprenden moduladores de isoenzima m2 muscular de piruvato cinasa pkm2 y metodos de tratamiento que usan las mismas.
JP2022527298A (ja) 2019-03-26 2022-06-01 ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァシティ オブ ミシガン Ｓｔａｔ３の低分子分解誘導剤
US20220185831A1 (en) 2019-03-29 2022-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Stat3 protein degraders
AU2020253990A1 (en) 2019-04-02 2021-10-28 Bicycletx Limited Bicycle toxin conjugates and uses thereof
BR112021019748A2 (pt) 2019-04-05 2021-12-07 Kymera Therapeutics Inc Degradadores de stat e usos dos mesmos
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
WO2020231766A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
BR112021021713A2 (pt) 2019-05-13 2022-04-19 Regeneron Pharma Método de tratamento de câncer ou inibição do crescimento de um tumor
WO2020231713A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
WO2020243563A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
CN114174537A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 细胞定位特征和组合疗法
EP3976832A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
MX2021014441A (es) 2019-05-31 2022-01-06 Ikena Oncology Inc Inhibidores del dominio asociado mejorador de la transcripcion (tead) y usos de los mismos.
EP3983377A1 (en) 2019-06-12 2022-04-20 Vanderbilt University Dibenzylamines as amino acid transport inhibitors
CA3141405A1 (en) 2019-06-12 2020-12-17 H. Charles Manning Amino acid transport inhibitors and the uses thereof
EP3991747A4 (en) * 2019-06-24 2023-07-05 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. PREPARATIONS WITH ANTI-LAG-3 ANTIBODIES, PROCESS FOR THEIR PRODUCTION AND THEIR USE
KR20220028075A (ko) 2019-07-03 2022-03-08 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 티로신 키나제 비-수용체 1 (tnk1) 억제제 및 그의 용도
IT201900011676A1 (it) 2019-07-12 2021-01-12 St Superiore Di Sanita Anticorpo ricombinante umano contro il recettore di membrana LAG3, suoi usi medici e diagnostici.
EP3999510A1 (en) 2019-07-16 2022-05-25 The Regents Of The University Of Michigan Imidazopyrimidines as eed inhibitors and the use thereof
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
WO2021026179A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
AU2020336381A1 (en) 2019-08-27 2022-03-03 The Regents Of The University Of Michigan Cereblon E3 ligase inhibitors
AR119821A1 (es) 2019-08-28 2022-01-12 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de piridopirimidinonilo sustituidos útiles como activadores de células t
MX2022002877A (es) 2019-09-13 2022-08-08 Nimbus Saturn Inc Antagonistas de cinasa progenitora hematopoyetica 1 (hpk1) y sus usos.
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
CN114729043A (zh) 2019-09-19 2022-07-08 百时美施贵宝公司 在酸性pH下结合至VISTA的抗体
CN115023267A (zh) 2019-09-19 2022-09-06 密歇根大学董事会 螺环雄激素受体蛋白质降解剂
EP4031873A1 (en) 2019-09-22 2022-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
KR20220070005A (ko) 2019-09-26 2022-05-27 노파르티스 아게 항바이러스성 피라졸로피리디논 화합물
WO2021067863A2 (en) 2019-10-03 2021-04-08 Xencor, Inc. Targeted il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
US20220356248A1 (en) * 2019-10-09 2022-11-10 Stcube & Co Antibodies specific to glycosylated lag3 and methods of use thereof
TW202128757A (zh) 2019-10-11 2021-08-01 美商建南德克公司 具有改善之特性的 PD-1 標靶 IL-15/IL-15Rα FC 融合蛋白
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
WO2021079188A1 (en) 2019-10-21 2021-04-29 Novartis Ag Combination therapies with venetoclax and tim-3 inhibitors
EP4054591A1 (en) 2019-11-04 2022-09-14 Astrazeneca AB Combination therapy for treating cancer
MX2022005474A (es) 2019-11-08 2022-06-02 Bristol Myers Squibb Co Tratamiento de melanoma con antagonistas del gen 3 de activacion de linfocitos (lag-3).
CA3158976A1 (en) 2019-11-19 2021-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Compounds useful as inhibitors of helios protein
WO2021108528A1 (en) 2019-11-26 2021-06-03 Ikena Oncology, Inc. Polymorphic carbazole derivatives and uses thereof
EP4065226A1 (en) 2019-11-26 2022-10-05 Bristol-Myers Squibb Company Salts/cocrystals of (r)-n-(4-chlorophenyl)-2-((1s,4s)-4-(6-fluoroquinolin-4-yl)cyclohexyl)propanamide
MX2022007576A (es) 2019-12-17 2022-09-23 Kymera Therapeutics Inc Degradadores de cinasas asociadas al receptor de interleucina-1 (irak) y usos de los mismos.
EP4076524A4 (en) 2019-12-17 2023-11-29 Kymera Therapeutics, Inc. IRAQ DEGRADERS AND USES THEREOF
US20230056470A1 (en) 2019-12-20 2023-02-23 Novartis Ag Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases
AR120823A1 (es) 2019-12-23 2022-03-23 Bristol Myers Squibb Co Compuestos bicíclicos sustituidos útiles como activadores de células t
IL294269A (en) 2019-12-23 2022-08-01 Bristol Myers Squibb Co Substitute quinolinyl piperazine compounds are useful as t-cell activators
KR20220119454A (ko) 2019-12-23 2022-08-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 T 세포 활성화제로서 유용한 치환된 퀴나졸리닐 화합물
AU2020412472A1 (en) 2019-12-23 2022-08-18 Bristol-Myers Squibb Company Substituted heteroaryl compounds useful as T cell activators
EP4081522A1 (en) 2019-12-23 2022-11-02 Bristol-Myers Squibb Company Substituted piperazine derivatives useful as t cell activators
EP4081308A4 (en) 2019-12-23 2024-01-24 Kymera Therapeutics Inc SMARCA DEGRADERS AND USES THEREOF
WO2021138407A2 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof
TW202143993A (zh) 2020-01-06 2021-12-01 香港商高誠生物醫藥（香港）有限公司 抗tnfr2抗體及其用途
AU2021205143A1 (en) 2020-01-07 2022-07-28 Hifibio, Inc. Anti-Galectin-9 antibody and uses thereof
EP4090663A1 (en) 2020-01-15 2022-11-23 Blueprint Medicines Corporation Map4k1 inhibitors
US20230058489A1 (en) 2020-01-17 2023-02-23 Novartis Ag Combination comprising a tim-3 inhibitor and a hypomethylating agent for use in treating myelodysplastic syndrome or chronic myelomonocytic leukemia
CN111205371B (zh) * 2020-01-22 2022-03-29 北京吉尔麦迪生物医药科技有限公司 一种抗淋巴细胞激活基因3的抗体及应用
WO2021171264A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Novartis Ag Dosing of a bispecific antibody that binds cd123 and cd3
KR20220164706A (ko) 2020-03-03 2022-12-13 피아이씨 테라퓨틱스 인코포레이티드 Eif4e 억제제 및 이의 용도
CN115485302A (zh) 2020-03-09 2022-12-16 百时美施贵宝公司 具有增强的激动剂活性的针对cd40的抗体
TW202200543A (zh) 2020-03-19 2022-01-01 美商凱麥拉醫療公司 Mdm2降解劑及其用途
AU2021240068A1 (en) 2020-03-19 2022-09-08 Arcus Biosciences, Inc. Tetralin and tetrahydroquinoline compounds as inhibitors of hif-2alpha
TW202140441A (zh) 2020-03-23 2021-11-01 美商必治妥美雅史谷比公司 經取代之側氧基異吲哚啉化合物
WO2021195481A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule stat protein degraders
US20230272056A1 (en) 2020-04-09 2023-08-31 Merck Sharp & Dohme Llc Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
US20230192867A1 (en) 2020-05-15 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
MX2022015157A (es) 2020-06-02 2023-01-16 Arcus Biosciences Inc Anticuerpos para tigit.
TW202210483A (zh) 2020-06-03 2022-03-16 美商凱麥拉醫療公司 Irak降解劑之結晶型
AR122644A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Onxeo Nuevas moléculas de ácido nucleico conjugado y sus usos
WO2021258010A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime compounds useful as t cell activators
JP2023531676A (ja) 2020-06-23 2023-07-25 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピぺリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与レジメン
CA3182579A1 (en) 2020-07-07 2022-01-13 Ugur Sahin Therapeutic rna for hpv-positive cancer
WO2022011205A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Androgen receptor protein degraders
WO2022011204A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule androgen receptor protein degraders
MX2023001217A (es) 2020-07-30 2023-03-03 Kymera Therapeutics Inc Metodos de tratamiento de linfomas mutantes.
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
MX2023001707A (es) 2020-08-10 2023-05-04 Shanghai Xunbaihui Biotechnology Co Ltd Composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y cánceres por direccionamiento al miembro 8 de la superfamilia de inmunoglobulinas.
EP4196502A1 (en) 2020-08-13 2023-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of redirecting of il-2 to target cells of interest
IL300450A (en) 2020-08-17 2023-04-01 Bicycletx Ltd Bicyclic conjugates specific to nectin-4 and uses thereof
CN116761818A (zh) 2020-08-26 2023-09-15 马伦戈治疗公司 检测trbc1或trbc2的方法
WO2022047189A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
WO2022043558A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
EP4204453A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
WO2022081718A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof
CA3196496A1 (en) 2020-10-23 2022-04-28 Laurence David TOMS Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
WO2022097060A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
WO2022120354A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
JP2024508207A (ja) 2020-12-02 2024-02-26 ブイアイビー ブイゼットダブリュ がんに対する組み合わせ治療におけるｌｔｂｒアゴニスト
WO2022120353A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
CA3204091A1 (en) 2020-12-08 2022-06-16 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Eganelisib for use in the treatment of pd-l1 negative cancer
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
CN114621344B (zh) * 2020-12-10 2022-08-30 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗lag-3单克隆抗体的纯化方法
WO2022133083A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Gossamer Bio Services, Inc. Compounds useful as t cell activators
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
US20220233693A1 (en) 2020-12-28 2022-07-28 Bristol-Myers Squibb Company Antibody Compositions and Methods of Use Thereof
AU2021416156A1 (en) 2020-12-28 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumors
KR20230146528A (ko) 2021-01-11 2023-10-19 바이사이클티엑스 리미티드 암을 치료하기 위한 방법
JP2024506557A (ja) 2021-01-29 2024-02-14 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 修飾された腫瘍浸潤リンパ球を作製する方法及び養子細胞療法におけるそれらの使用
JP2024505571A (ja) 2021-02-02 2024-02-06 リミナル・バイオサイエンシーズ・リミテッド Ｇｐｒ８４アンタゴニストおよびその使用
KR20230152692A (ko) 2021-02-02 2023-11-03 리미널 바이오사이언시스 리미티드 Gpr84 길항제 및 이의 용도
US20240109899A1 (en) 2021-02-04 2024-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Benzofuran compounds as sting agonists
AU2022221124A1 (en) 2021-02-12 2023-08-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives for the treatment of cancer
JP2024506657A (ja) 2021-02-15 2024-02-14 カイメラ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｉｒａｋ４分解剤およびその使用
WO2022187423A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Cereblon ligands
WO2022187419A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule degraders of androgen receptor
EP4301756A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Nimbus Saturn, Inc. Hpk1 antagonists and uses thereof
EP4305041A1 (en) 2021-03-08 2024-01-17 Blueprint Medicines Corporation Map4k1 inhibitors
WO2022197641A1 (en) 2021-03-15 2022-09-22 Rapt Therapeutics, Inc. 1h-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl-amine derivatives as hematopoietic progenitor kinase 1 (hpk1) modulators and/or inhibitors for the treatment of cancer and other diseases
EP4313127A1 (en) 2021-03-29 2024-02-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
EP4314068A1 (en) 2021-04-02 2024-02-07 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
IL307338A (en) 2021-04-05 2023-11-01 Bristol Myers Squibb Co Pyridinyl substituted oxisoisoindoline compounds for cancer therapy
TW202304881A (zh) 2021-04-06 2023-02-01 美商必治妥美雅史谷比公司 經吡啶基取代之側氧基異吲哚啉化合物
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
AU2022255506A1 (en) 2021-04-08 2023-11-09 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules binding to tcr and uses thereof
KR20230170039A (ko) 2021-04-13 2023-12-18 뉴베일런트, 아이엔씨. Egfr 돌연변이를 지니는 암을 치료하기 위한 아미노-치환된 헤테로사이클
AU2022258968A1 (en) 2021-04-16 2023-10-19 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2022240741A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lag3 and gal3 inhibitory agents, xbp1, cs1, and cd138 peptides, and methods of use thereof
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
TW202313603A (zh) 2021-05-21 2023-04-01 美商阿克思生物科學有限公司 Axl抑制劑化合物
TW202313602A (zh) 2021-05-21 2023-04-01 美商阿克思生物科學有限公司 Axl化合物
AU2022312698A1 (en) 2021-07-13 2024-01-25 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
CN117940438A (zh) 2021-07-14 2024-04-26 缆图药品公司 作为map4k1抑制剂的杂环化合物
TW202321238A (zh) 2021-07-15 2023-06-01 美商纜圖藥品公司 Ｍａｐ４ｋ１抑制劑
US20230134932A1 (en) 2021-08-25 2023-05-04 PIC Therapeutics, Inc. Eif4e inhibitors and uses thereof
CA3229560A1 (en) 2021-08-25 2023-03-02 Christopher L. Vandeusen Eif4e inhibitors and uses thereof
WO2023039089A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Twentyeight-Seven, Inc. Papd5 and/or papd7 inhibiting 4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid derivatives
CA3233205A1 (en) * 2021-09-29 2023-04-06 Yu Xia Anti-lag3 antibody, pharmaceutical composition and use
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023077090A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
TW202325279A (zh) 2021-10-29 2023-07-01 美商阿克思生物科學有限公司 HIF-2α抑制劑及其使用方法
WO2023111203A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2023114984A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2023122778A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Pyridazinone derivatives useful as t cell activators
WO2023122772A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime derivatives useful as t cell activators
WO2023122777A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime derivatives useful as t cell activators
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2023150186A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Arvinas Operations, Inc. Dgk targeting compounds and uses thereof
WO2023154905A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Gilead Sciences, Inc. Antiviral pyrazolopyridinone compounds
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023173057A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023173053A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023178192A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023211889A1 (en) 2022-04-25 2023-11-02 Ikena Oncology, Inc. Polymorphic compounds and uses thereof
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
CN114874324B (zh) * 2022-05-13 2023-02-03 苏州旭光科星抗体生物科技有限公司 一种检测可溶性lag-3蛋白含量的酶联免疫检测试剂盒及应用
TW202404581A (zh) 2022-05-25 2024-02-01 美商醫肯納腫瘤學公司 Ｍｅｋ抑制劑及其用途
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2024015251A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Arcus Biosciences, Inc. Inhibitors of hpk1 and methods of use thereof
WO2024020034A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Arcus Biosciences, Inc. Cbl-b inhibitors and methods of use thereof
WO2024028364A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Aryl-triazolyl and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028363A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Heteroaryl carboxamide and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028365A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Substituted pyridone gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024036100A1 (en) 2022-08-08 2024-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Substituted tetrazolyl compounds useful as t cell activators
WO2024036101A1 (en) 2022-08-09 2024-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Tertiary amine substituted bicyclic compounds useful as t cell activators
WO2024033389A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033457A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033388A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033458A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives
WO2024059142A1 (en) 2022-09-14 2024-03-21 Arcus Biosciences, Inc. Dispersions of etrumadenant
WO2024081385A1 (en) 2022-10-14 2024-04-18 Arcus Biosciences, Inc. Hpk1 inhibitors and methods of use thereof
WO2024086718A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Arcus Biosciences, Inc. Lyophilized formulations of cd73 compounds
WO2024089418A1 (en) 2022-10-24 2024-05-02 Cancer Research Technology Limited Tumour sensitisation to checkpoint inhibitors with redox status modifier
WO2024089417A1 (en) 2022-10-24 2024-05-02 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Tumour stratification for responsiveness to an immune checkpoint inhibitor
CN115819595B (zh) * 2023-01-03 2023-05-16 上海百英生物科技股份有限公司 一种抗lag3纳米抗体及其制备方法与应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010019570A2 (en) * 2008-08-11 2010-02-18 Medarex, Inc. Human antibodies that bind lymphocyte activation gene-3 (lag-3), and uses thereof
WO2012054438A1 (en) * 2010-10-22 2012-04-26 Schering Corporation Anti-pcsk9

Family Cites Families (158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1081681A (en) 1910-08-31 1913-12-16 Otis Elevator Co Alternating-current-motor control.
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
DE68925966T2 (de) 1988-12-22 1996-08-29 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
FR2656800B1 (fr) 1990-01-08 1992-05-15 Roussy Inst Gustave Nouvelles proteines produits par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques.
US5976877A (en) 1990-01-08 1999-11-02 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Proteins produced by human lymphocytes DNA sequence encoding these proteins and their pharmaceutical and biological uses
ATE356869T1 (de) 1990-01-12 2007-04-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9108652D0 (en) 1991-04-23 1991-06-12 Antisoma Ltd Immunoreactive compounds
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
CA2144043C (en) 1992-09-16 2005-01-18 Dennis R. Burton Human neutralizing monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus
JP3919830B2 (ja) 1992-11-28 2007-05-30 財団法人化学及血清療法研究所 抗ネコヘルペスウイルス−１組換え抗体および該抗体をコードする遺伝子断片
AU6819494A (en) 1993-04-26 1994-11-21 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
WO1995018634A1 (en) 1994-01-04 1995-07-13 The Scripps Research Institute Human monoclonal antibodies to herpes simplex virus and methods therefor
CN1110557C (zh) 1994-05-06 2003-06-04 古斯达威罗斯研究所 Lag－3蛋白的可溶性多肽组分;生产方法、治疗组合物、抗独特型抗体
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
PT843557E (pt) 1995-07-21 2003-03-31 Applied Research Systems Metodos para detectar indentificar isolar e etiquetar e abordar selectivamente linfocitos th1 por intermedio da proteina lag-3
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
AU2071597A (en) 1996-03-07 1997-09-22 Eastman Chemical Company Near infrared fluorescent security thermal transfer printing and marking ribbons
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
EP0942973B1 (fr) 1996-11-28 2006-03-15 Institut Gustave Roussy Mutants de la proteine lag-3, leur expression et utilisation
CA2272130C (en) 1996-11-29 2007-10-23 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Methods for preventing graft rejection in transplantation and for producing a universal gene therapy host cell using lymphocyte activation (lag-3)
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
AU6703198A (en) 1997-03-21 1998-10-20 Brigham And Women's Hospital Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
AU736549B2 (en) 1997-05-21 2001-08-02 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung Method for the production of non-immunogenic proteins
EP0900841A1 (en) 1997-06-18 1999-03-10 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) LAG-3 splice variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE458007T1 (de) 1998-04-20 2010-03-15 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
GB9814383D0 (en) 1998-07-02 1998-09-02 Cambridge Antibody Tech Improvements relating to antibodies
US6951646B1 (en) 1998-07-21 2005-10-04 Genmab A/S Anti hepatitis C virus antibody and uses thereof
JP3793693B2 (ja) 1998-12-23 2006-07-05 ファイザー インコーポレーテッド Ｃｔｌａ−４に対するヒトモノクローナル抗体
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
EP2264166B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
GB9911569D0 (en) 1999-05-18 1999-07-21 Oxford Biomedica Ltd Antibodies
HU228477B1 (en) 1999-08-23 2013-03-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
CN1371416B (zh) 1999-08-24 2012-10-10 梅达里克斯公司 人ctla-4抗体及其应用
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
US6794132B2 (en) 1999-10-02 2004-09-21 Biosite, Inc. Human antibodies
WO2002002641A1 (en) 2000-06-16 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to blys
US6818216B2 (en) 2000-11-28 2004-11-16 Medimmune, Inc. Anti-RSV antibodies
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
CN1277843C (zh) 2001-02-22 2006-10-04 巴斯德研究院 分枝杆菌比较基因组学作为鉴定分枝杆菌病的诊断、预防或治疗靶的工具
US20020146753A1 (en) 2001-04-06 2002-10-10 Henrik Ditzel Autoantibodies to glucose-6-phosphate isomerase and their participation in autoimmune disease
CA2508763C (en) 2001-05-11 2012-01-24 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Human antibody producing mouse and method for producing human antibody using the same
US7129261B2 (en) 2001-05-31 2006-10-31 Medarex, Inc. Cytotoxic agents
EP1295895B1 (en) 2001-09-19 2011-08-10 Institut Gustave Roussy Peptides and proteins binding to glu-pro motifs, therapeutical compositions containing the same and applications thereof
AU2002341752B2 (en) 2001-09-19 2008-04-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Engineered templates and their use in single primer amplification
WO2003035835A2 (en) 2001-10-25 2003-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
EP1575480A4 (en) 2002-02-22 2008-08-06 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO THE IMMUNE SYSTEM
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
JP2005536190A (ja) 2002-04-16 2005-12-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
DK2206517T3 (da) 2002-07-03 2023-11-06 Ono Pharmaceutical Co Immunpotentierende sammensætninger omfattende af anti-PD-L1-antistoffer
EP2322200A3 (en) 2002-10-29 2011-07-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20050009136A1 (en) 2003-02-19 2005-01-13 Dyax Corporation PAPP-A ligands
PT1897548E (pt) 2003-02-28 2013-11-19 Univ Johns Hopkins Regulação de células t
EP1678195A4 (en) 2003-10-08 2008-04-23 The Feinstein Inst Medical Res TECHNIQUES AND COMPOSITIONS FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF CHRONIC LYMPHOCYTIC LEUKEMIA OF BETA CELLS
CA2546054C (en) * 2003-12-10 2014-05-13 Medarex, Inc. Interferon alpha antibodies and their uses
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
EP1740946B1 (en) 2004-04-20 2013-11-06 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
CA2564076C (en) 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
RU2402548C2 (ru) 2004-05-19 2010-10-27 Медарекс, Инк. Химические линкеры и их конъюгаты
EP1771483A1 (en) 2004-07-20 2007-04-11 Symphogen A/S Anti-rhesus d recombinant polyclonal antibody and methods of manufacture
JP2008515774A (ja) 2004-08-03 2008-05-15 ダイアックス コーポレイション ｈＫ１結合タンパク質
US20090252741A1 (en) 2004-09-08 2009-10-08 Ohio State University Research Foundation Human monoclonal anti-ctla4 antibodies in cancer treatment
CN101056655A (zh) 2004-10-01 2007-10-17 米德列斯公司 治疗cd30阳性淋巴瘤的方法
AU2005295038B2 (en) 2004-10-06 2012-05-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1 and methods of diagnosis, prognosis, and treatment of cancer
BRPI0607796A2 (pt) 2005-02-18 2009-06-13 Medarex Inc composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, processo para preparação e uso do mesmo, e, composição farmacêutica
EP1868644A1 (en) 2005-03-23 2007-12-26 Pfizer Products Incorporated Therapy of prostate cancer with ctla4 antibodies and hormonal therapy
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
JP5252635B2 (ja) 2005-07-01 2013-07-31 メダレックス インコーポレーティッド プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体
WO2007038658A2 (en) 2005-09-26 2007-04-05 Medarex, Inc. Antibody-drug conjugates and methods of use
JP5116686B2 (ja) 2005-10-26 2013-01-09 メダレックス インコーポレイテッド Ｃｃ−１０６５類似体の調製方法及び調製用化合物
WO2007056441A2 (en) 2005-11-07 2007-05-18 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007059404A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
EP2314619A1 (en) 2005-12-05 2011-04-27 Symphogen A/S Anti-orthopoxvirus recombinant polyclonal antibody
EP2078732B1 (en) 2006-07-10 2015-09-16 Fujita Health University Method of identifying a candidate diagnostic or therapeutic antibody using flow cytometry
WO2008073160A2 (en) 2006-08-17 2008-06-19 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for converting or inducing protective immunity
CL2007002412A1 (es) * 2006-08-18 2008-06-20 Novartis Ag Xoma Technology Lt Anticuerpo especifico para el dominio extracelular del receptor de prolactina (prlr); molecula de acido nucleico que lo codifica; vector de expresion y celula huesped que la comprenden; metodo de produccion; composicion farmaceutica que comprende al
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
JP2010519310A (ja) 2007-02-21 2010-06-03 メダレックス インコーポレイテッド 単一のアミノ酸を有する化学リンカーおよびその複合体
EP2068923A4 (en) 2007-03-30 2010-11-24 Medimmune Llc ANTIBODIES HAVING REDUCED DEAMIDATION PROFILES
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
CN104945508B (zh) 2007-06-18 2019-02-22 默沙东有限责任公司 针对人程序性死亡受体pd-1的抗体
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
PT2201100E (pt) 2007-09-14 2016-06-03 Univ Brussel Vrije Aperfeiçoamento da capacidade estimulatória de células t das células que apresentam antígeno humano e o seu uso na vacinação
PL2195017T3 (pl) 2007-10-01 2015-03-31 Bristol Myers Squibb Co Ludzkie antyciała, które wiążą mezotelinę i ich zastosowania
CN101939028A (zh) 2007-11-30 2011-01-05 百时美施贵宝公司 针对蛋白酪氨酸激酶7(ptk7)的单克隆抗体伴侣分子偶联物
JP2011505372A (ja) 2007-11-30 2011-02-24 ブリストル−マイヤーズ スクウィブ カンパニー 抗ｂ７ｈ４モノクローナル抗体−薬物コンジュゲートおよび使用方法
BRPI0917891A2 (pt) 2008-08-25 2015-11-24 Amplimmune Inc antagonistas de pd-1 e métodos de utilização dos mesmos
EP2350129B1 (en) 2008-08-25 2015-06-10 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
LT4209510T (lt) 2008-12-09 2024-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd-l1 antikūnai ir jų panaudojimas t ląstelių funkcijos pagerinimui
AU2010271582B2 (en) * 2009-07-15 2016-07-28 Aimm Therapeutics B.V. Gram-positive bacteria specific binding compounds
PT2504364T (pt) 2009-11-24 2017-11-14 Medimmune Ltd Agentes de ligação direcionados contra b7-h1
JP5934203B2 (ja) * 2010-07-14 2016-06-15 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 抗ａｄｄｌモノクローナル抗体およびこの使用
CA2873402C (en) 2012-05-15 2023-10-24 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
US10280221B2 (en) 2013-03-15 2019-05-07 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-LAG-3 binding proteins
JP2016531907A (ja) 2013-08-02 2016-10-13 アデュロ・バイオテック・ホールディングス・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップＡｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ， Ｅｕｒｏｐｅ Ｂ．Ｖ． 免疫刺激のためのｃｄ２７アゴニストと免疫チェックポイント阻害との組み合わせ
AU2014323523B2 (en) 2013-09-20 2020-02-20 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-LAG-3 antibodies and anti-PD-1 antibodies to treat tumors
CA2937503A1 (en) 2014-01-28 2015-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Anti-lag-3 antibodies to treat hematological malignancies
RS60753B1 (sr) 2015-04-17 2020-10-30 Bristol Myers Squibb Co Kompozicije koje sadrže kombinaciju ipilimumaba i nivolumaba
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010019570A2 (en) * 2008-08-11 2010-02-18 Medarex, Inc. Human antibodies that bind lymphocyte activation gene-3 (lag-3), and uses thereof
WO2012054438A1 (en) * 2010-10-22 2012-04-26 Schering Corporation Anti-pcsk9

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHELIUS DIRK ET AL: "Identification and characterization of deamidation sites in the conserved regions of human immunoglobulin gamma antibodies.", ANALYTICAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 77, no. 18, 15 September 2005 (2005-09-15), US, pages 6004 - 6011, XP002407962, ISSN: 0003-2700, DOI: 10.1021/ac050672d *
D. KROON ET AL.: "Identification of sites of degradation in a therapeutic monoclonal antibody by peptide mapping.", PHARMACEUTICAL RESEARCH, SPRINGER NEW YORK LLC, US, vol. 09., no. 11., 1 November 1992 (1992-11-01), US, pages 1386 - 1393., XP002079908, ISSN: 0724-8741, DOI: 10.1023/A:1015894409623 *
TSAI P K, ET AL.: "ORIGIN OF THE ISOELECTRIC HETEROGENEITY OF MONOCLONAL IMMUNOGLOBULIN H1B4", PHARMACEUTICAL RESEARCH, SPRINGER NEW YORK LLC, US, vol. 10, no. 11, 1 November 1993 (1993-11-01), US, pages 1580 - 1586, XP009020338, ISSN: 0724-8741, DOI: 10.1023/A:1018912417607 *

Also Published As

Publication number Publication date
MY197544A (en) 2023-06-22
AU2019204803A1 (en) 2019-07-25
PE20191324A1 (es) 2019-09-24
AU2021225177A1 (en) 2021-09-30
MY197322A (en) 2023-06-13
PE20191759A1 (es) 2019-12-12
SI2867258T1 (sl) 2017-10-30
PL2867258T3 (pl) 2017-11-30
FR22C1057I1 (fr) 2023-01-06
MX365417B (es) 2019-06-03
DK3275899T3 (da) 2020-11-30
TW202313688A (zh) 2023-04-01
CN108101991B (zh) 2022-02-11
JP2024041966A (ja) 2024-03-27
JP2015527880A (ja) 2015-09-24
EP2867258A1 (en) 2015-05-06
EP3275899A1 (en) 2018-01-31
JP2020103301A (ja) 2020-07-09
TWI576355B (zh) 2017-04-01
US20170137514A1 (en) 2017-05-18
PT2867258T (pt) 2017-08-31
HUE034553T2 (en) 2018-02-28
TW201726743A (zh) 2017-08-01
LT3275899T (lt) 2020-12-10
DK2867258T3 (en) 2017-10-02
WO2014008218A1 (en) 2014-01-09
AR091649A1 (es) 2015-02-18
NO2023008I1 (no) 2023-02-07
CL2014003637A1 (es) 2015-03-27
HUE052406T2 (hu) 2021-04-28
EA202090227A1 (ru) 2020-05-31
CY1123609T1 (el) 2022-03-24
KR20220150417A (ko) 2022-11-10
KR102290633B1 (ko) 2021-08-19
US20180371087A1 (en) 2018-12-27
HK1249535A1 (zh) 2018-11-02
IL236517B (en) 2018-06-28
CA3161329A1 (en) 2014-01-09
AR125268A2 (es) 2023-06-28
KR20210102485A (ko) 2021-08-19
CA2877746C (en) 2022-07-19
JP6668405B2 (ja) 2020-03-18
KR102461102B1 (ko) 2022-10-31
JP7009531B2 (ja) 2022-02-10
LT2867258T (lt) 2017-09-11
SG10201610960YA (en) 2017-02-27
JP2022064901A (ja) 2022-04-26
BR112014032999A2 (pt) 2017-08-01
AU2019204803C1 (en) 2023-06-29
CN104411723A (zh) 2015-03-11
LTPA2022015I1 (ru) 2022-12-12
EA201590138A1 (ru) 2015-07-30
US20140093511A1 (en) 2014-04-03
NZ628528A (en) 2016-07-29
CA2877746A1 (en) 2014-01-09
US20190256594A1 (en) 2019-08-22
KR102126596B1 (ko) 2020-06-24
HRP20171315T1 (hr) 2017-10-20
NO2023020I1 (no) 2023-05-03
NL301205I1 (ru) 2023-04-19
ES2638545T3 (es) 2017-10-23
TW201406784A (zh) 2014-02-16
CN104411723B (zh) 2018-01-30
IL236517A0 (en) 2015-02-26
US10266591B2 (en) 2019-04-23
EP3795592A1 (en) 2021-03-24
FIC20230009I1 (fi) 2023-02-09
PH12014502854B1 (en) 2015-02-23
TN2014000536A1 (en) 2016-03-30
TW201831515A (zh) 2018-09-01
PT3275899T (pt) 2020-11-17
KR20230159625A (ko) 2023-11-21
CO7170127A2 (es) 2015-01-28
KR20150023909A (ko) 2015-03-05
EP2867258B1 (en) 2017-06-28
AU2013286914A1 (en) 2015-01-29
NL301205I2 (nl) 2023-05-24
MX2015000116A (es) 2015-04-14
HRP20201852T8 (hr) 2021-06-25
MY169383A (en) 2019-03-26
SG11201408780XA (en) 2015-01-29
TW202118789A (zh) 2021-05-16
US11345752B2 (en) 2022-05-31
US9505839B2 (en) 2016-11-29
ES2831406T3 (es) 2021-06-08
AU2019204803B2 (en) 2021-06-10
TWI662046B (zh) 2019-06-11
EP3275899B1 (en) 2020-08-26
TWI617581B (zh) 2018-03-11
TWI771721B (zh) 2022-07-21
JP2018126149A (ja) 2018-08-16
SI3275899T1 (sl) 2020-11-30
RS61084B1 (sr) 2020-12-31
US20150307609A1 (en) 2015-10-29
PH12014502854A1 (en) 2015-02-23
CY1119563T1 (el) 2018-03-07
BR112014032999B1 (pt) 2022-10-18
PE20150221A1 (es) 2015-02-19
KR20200075891A (ko) 2020-06-26
US10377824B2 (en) 2019-08-13
CN108101991A (zh) 2018-06-01
AU2013286914B2 (en) 2017-06-29
HRP20201852T1 (hr) 2021-01-08
HUS2300002I1 (hu) 2023-01-28
UY34887A (es) 2013-12-31
HK1207386A1 (en) 2016-01-29
US20230077348A1 (en) 2023-03-16
TW201938198A (zh) 2019-10-01
TWI701045B (zh) 2020-08-11
MX2019006411A (es) 2019-08-14
RS56398B1 (sr) 2017-12-29
AU2017221874B2 (en) 2019-05-02
AU2017221874A1 (en) 2017-09-21
FR22C1057I2 (fr) 2023-12-15
JP6320376B2 (ja) 2018-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11345752B2 (en) Optimization of antibodies that bind lymphocyte activation gene-3 (LAG-3), and uses thereof
WO2019011306A1 (en) LAG-3 BINDING ANTIBODIES AND USES THEREOF
EA044665B1 (ru) Фармацевтическая композиция, содержащая анти-lag-3 антитело и анти-pd-1 антитело

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM