TW202322824A - 抗病毒化合物 - Google Patents
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Abstract
本發明提供用於治療各種疾病之化合物，該等疾病係由諸如呼吸道融合性病毒(RSV)、HRV、hMPV、伊波拉病毒(Ebola virus)、茲卡病毒(Zika virus)、西尼羅病毒(West Nile virus)、登革熱病毒(Dengue virus)及HCV感染所引起。
Description
本發明係關於用於治療各種疾病之抗病毒化合物。
肺病毒科(
Pneumoviridae)病毒為造成許多流行性人類及動物疾病之反義單股RNA病毒。肺病毒科病毒家族包括人類呼吸道融合性病毒(HRSV)及人類間質肺炎病毒。幾乎所有兒童在兩歲前都會經歷HRSV感染。HRSV為嬰兒期及孩童期中下呼吸道感染之主要原因，其中0.5%至2%的感染者需要住院。
目前還沒有可用於預防HRSV感染的疫苗。單株抗體帕利珠單抗(palivizumab)可用於免疫預防，但其使用限於高風險的嬰兒，例如早產嬰兒或患有先天性心臟或肺部疾病之嬰兒，並且就一般使用而言成本通常過高。另外，核苷類似物利巴韋林(ribavirin)已作為唯一的用於治療HRSV感染之抗病毒劑審批通過，但功效有限。因此，需要抗肺病毒科治療劑。
適用於治療病毒感染的吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物之實例描述於以下文獻中：美國2012/0009147 A1 (Cho等人)、美國2012/0020921 A1 (Cho等人)、WO 2008/089105 A2 (Babu等人)、WO 2008/141079 A1 (Babu等人)、WO 2009/132135 A1 (Butler等人)、WO 2010/002877 A2 (Francom)、WO 2011/035231 A1 (Cho等人)、WO 2011/035250 A1 (Butler等人)、WO 2011/150288 A1 (Cho等人)、WO 2012/012465 (Cho等人)、WO 2012/012776 A1 (Mackman等人)、WO 2012/037038 (Clarke等人)、WO 2012/087596 A1 (Delaney等人)及WO 2012/142075 A1 (Girijavallabhan等人)。
因此，需要有效且具有可接受毒性概況的用於治療肺病毒科病毒感染(諸如HRSV感染)、黃病毒科(
Flaviviridae)感染(包括登革熱(dengue))及EBOV感染的組合物及方法。本發明解決此等及其他需要。
在一些實施例中，本發明提供一種式(II)化合物：
式(II)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：
鹼基為：
；
R
1A及R
2A各自獨立地為：
(A) 視情況經1至3個R
1B取代之C
1-12烷基，
(B) 具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，其中該3員至6員雜環基視情況經1至3個R
1C取代，或
(C) 苯基，其中各R
1B獨立地為鹵素；-OH；-NH
2；C
1-6烷氧基；甲氧基乙氧基；C
3-8環烷基；或具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，且各R
1C獨立地為C
1-3烷基；
R
3為-N(H)R
3A或-N=C(R
3B)(R
3C)；R
3A為H、-CH
2OP(O)(OH)
2或-C(O)R
3D，其中R
3D為視情況經1個甲氧基取代之C
1-6烷基，或視情況經C
1-3烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；R
3B為H或C
1-3烷基；R
3C為-N(R
3C1)(R
3C2)；R
3C1及R
3C2各自獨立地為H或C
1-6烷基；或R
3C1及R
3C2與其所連接之原子一起形成視情況經C
1-6烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；
R
4A為O或S；
R
4B及R
4C各自獨立地為
(A) -OH；
(B) -OR
4B1，其中R
4B1為視情況經1至3個R
4B2基團取代的C
1-6烷基，或C
6-12芳基，其中各R
4B2基團獨立地為C
1-6烷氧基、-S-R
4B3或-S(O)
2-R
4B3，且各R
4B3基團獨立地為C
1-6烷基；
(C)
，其中m為0、1、2、3、4或5；且各R
4D獨立地為視情況經1至3個R
4D1基團取代之C
1-3烷基、視情況經1至3個R
4D2基團取代之C
1-3烷氧基或-C(O)N(R
4D3)
2，其中各R
4D1基團獨立地為-NH
2或-C(O)OR
4D3，各R
4D2獨立地為C
1-3烷氧基，且各R
4D3獨立地為C
1-3烷基；
(D)
，其中R
4E1及R
4E2各自獨立地為H或C
1-6烷基，R
4F1及R
4F2各自獨立地為H或C
1-6烷基，或R
4F1及R
4F2組合一起為側氧基，R
4G為視情況經1至3個R
4G1取代之C
1-12烷基；視情況經1至3個R
4G2取代之C
3-7環烷基；視情況經1至3個R
4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或-C(O)R
4G4，各R
4G1獨立地為-OH；C
1-6烷基；C
1-3烷氧基；-(CH
2OCH
2)
1-5-CH
3；-N(R
4G8)
2；-OP(O)(OH)
2；視情況經1至3個R
4G9取代之C
3-7環烷基；視情況經1至3個R
4G10取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；或苯基，各R
4G2獨立地為C
1-6烷基、C
1-3鹵烷基、-OH或-NH
2；各R
4G3獨立地為鹵素或C
1-3烷基；各R
4G4獨立地為C
1-12烷基，各R
4G8獨立地為C
1-6烷基，各R
4G9獨立地為C
1-3鹵烷基、-OH或-NH
2，且各R
4G10獨立地為C
1-3鹵烷基；或
(E) -(OP(O)(OH))
1-2-OH；且
R
5A及R
5B各自為經-OP(O)(OH)
2取代之C
1-6烷基。
在另一實施例中，本發明提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之肺病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之小核糖核酸病毒科(
Picornaviridae)病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之黃病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之絲狀病毒科(
Filoviridae)病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染用的藥劑。
在另一實施例中，本發明提供用於治療有需要之人類之肺病毒科病毒感染的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之黃病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染。
在另一實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2020年2月18日申請且名稱為「ANTIVIRAL COMPOUNDS」的美國臨時專利申請案第62/977,881號之優先權益，該申請案之全部內容以引用的方式併入本文中。
序列表
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式以電子方式提交且其以全文引用之方式併入本文中。該ASCII複本於2021年2月17日創建，命名為1223-WO-PCT_SL.txt且大小為800個位元組。
I. 綜述
本發明提供用於治療病毒感染之2',3'-二酯-4'-氰基核苷化合物，該等病毒感染諸如伊波拉(Ebola)、茲卡(Zika)、西尼羅(West Nile)、黃熱病(Yellow Fever)、登革熱(Dengue)、HCV、RSV及其他病毒感染。
II. 定義
「烷基」為直鏈或分支鏈飽和單價烴。舉例而言，烷基可具有1至18個碳原子(亦即，C
1-18烷基)、或1至8個碳原子(亦即，C
1-8烷基)、或1至6個碳原子(亦即，C
1-6烷基)、或1至4個碳原子(亦即，C
1-4烷基)。烷基之實例包括(但不限於)甲基(Me、-CH
3)、乙基(Et、-CH
2CH
3)、1-丙基(
n-Pr、正丙基、-CH
2CH
2CH
3)、2-丙基(
i-Pr、異丙基、-CH(CH
3)
2)、1-丁基(
n-Bu、正丁基、-CH
2CH
2CH
2CH
3)、2-甲基-1-丙基(
i-Bu、異丁基、-CH
2CH(CH
3)
2)、2-丁基(
s-Bu、二級丁基、-CH(CH
3)CH
2CH
3)、2-甲基-2-丙基(
t-Bu、三級丁基、-C(CH
3)
3)、1-戊基(正戊基、-CH
2CH
2CH
2CH
2CH
3)、2-戊基(-CH(CH
3)CH
2CH
2CH
3)、3-戊基(-CH(CH
2CH
3)
2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH
3)
2CH
2CH
3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH
3)CH(CH
3)
2)、3-甲基-1-丁基(-CH
2CH
2CH(CH
3)
2)、2-甲基-1-丁基(-CH
2CH(CH
3)CH
2CH
3)、1-己基(-CH
2CH
2CH
2CH
2CH
2CH
3)、2-己基(-CH(CH
3)CH
2CH
2CH
2CH
3)、3-己基(-CH(CH
2CH
3)(CH
2CH
2CH
3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH
3)
2CH
2CH
2CH
3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH
3)CH(CH
3)CH
2CH
3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH
3)CH
2CH(CH
3)
2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH
3)(CH
2CH
3)
2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH
2CH
3)CH(CH
3)
2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH
3)
2CH(CH
3)
2)及3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH
3)C(CH
3)
3)。其他烷基包括庚基、辛基、壬基、癸基、十一基、十二基、十五基、十六基、十七基及十八基。
「烷氧基」係指具有將烷基連接至連接點之氧原子的烷基：烷基-O-。就烷基而言，烷氧基可具有任何合適數目個碳原子，諸如C
1-6。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基等。烷氧基可進一步經本文所描述之各種取代基取代。烷氧基可經取代或未經取代。
「烷氧基-烷氧基」係指連接至第二烷氧基之烷氧基，該第二烷氧基連接至化合物之其餘部分。烷氧基如上文所定義，且可包括(但不限於)甲氧基-甲氧基(CH
3OCH
2O-)、甲氧基-乙氧基(CH
3OCH
2CH
2O-)及其他基團。
「羥基」係指-OH。
如本文所使用，「鹵基」或「鹵素」係指氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)及碘(-I)。
如本文所使用，「鹵烷基」係指烷基之一或多個氫原子獨立地經鹵基取代基置換的如本文所定義之烷基，該鹵基取代基可相同或不同。舉例而言，C
1-4鹵烷基係C
1-4烷基之一或多個氫原子已經鹵基取代基置換的C
1-4烷基。鹵烷基之實例包括(但不限於)氟甲基、氟氯甲基、二氟甲基、二氟氯甲基、三氟甲基、1,1,1-三氟乙基及五氟乙基。
「環烷基」係指具有3至20個環碳原子(亦即，C
3-20環烷基)，例如3至12個環原子，例如3至10個環原子，或3至8個環原子，或3至6個環原子，或3至5個環原子，或3至4個環原子之單飽和或部分不飽和全碳環。術語「環烷基」亦包括多重縮合、飽和及部分不飽和全碳環系統(例如包含2、3或4個碳環之環系統)。因此，環烷基包括多環碳環，諸如雙環碳環(例如，具有約6至12個環碳原子之雙環碳環，諸如雙環[3.1.0]己烷及雙環[2.1.1]己烷)，及多環碳環(例如具有多達約20個環碳原子之三環及四環碳環)。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。單環環烷基之非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基及1-環己-3-烯基。
如本文所使用，「雜環基」或「雜環」或「雜環烷基」係指在環中具有至少一個雜原子(亦即，選自氧、氮及硫之至少一個環雜原子)之單飽和或部分不飽和非芳環或非芳族多環系統。除非另外說明，否則雜環基具有3至約20個環原子，例如3至12個環原子，例如3至10個環原子，或3至8個環原子，或3至6個環原子，或3至5個環原子，或4至6個環原子，或4至5個環原子。因此，術語包括在環中具有約1至6個環碳原子及約1至3個選自由氧、氮及硫組成之群的環雜原子之單飽和或部分不飽和環(例如3員、4員、5員、6員或7員環)。多重縮合環(例如雙環雜環基)系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。雜環包括(但不限於)氮雜環丁烷、氮丙啶、咪唑啶、嗎啉、環氧乙烷(環氧化物)、氧雜環丁烷、硫雜環丁烷、哌𠯤、哌啶、吡唑啶、哌啶、吡咯啶、吡咯啶酮、四氫呋喃、四氫噻吩、二氫吡啶、四氫吡啶、
啶、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、6-氧雜-1-氮雜螺[3.3]庚-1-基、2-硫雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基、2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、2-氮雜雙環[2.1.1]己基、2-氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基、4-氮雜螺[2.4]庚基、5-氮雜螺[2.4]庚基及其類似物。
如本文所使用之「芳基」係指單全碳芳環或多重縮合全碳環系統，其中至少一個環為芳環。舉例而言，在一些實施例中，芳基具有6至20個碳原子、6至14個碳原子或6至12個碳原子。芳基包括苯基。芳基亦包括具有約9至20個碳原子之多重縮合環系統(例如包含2、3或4個環之環系統)，其中至少一個環係芳環且其中其他環可為芳環或不為芳環(亦即碳環)。該等多重縮合環系統於多重縮合環系統之任何碳環部分上視情況經一或多個(例如1、2或3個)側氧基取代。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。亦應理解，當提及某一原子範圍之員數之芳基(例如6員至10員芳基)時，原子範圍係針對芳基之總環原子。舉例而言，6員芳基將包括苯基且10員芳基將包括萘基及1,2,3,4-四氫萘基。芳基之非限制性實例包括(但不限於)苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氫萘基、蒽基及其類似基團。
如本文所使用之「雜芳基」係指環中具有至少一個除碳以外的原子之單芳環，其中該原子選自由氧、氮及硫組成之群；「雜芳基」亦包括具有至少一個此類芳環之多重縮合環系統，該等多重縮合環系統進一步描述於下文中。因此，「雜芳基」包括具有約1至6個碳原子及約1至4個選自由氧、氮及硫組成之群的雜原子之單芳環。硫及氮原子亦可以氧化形式存在，其限制條件為環為芳環。例示性雜芳環系統包括(但不限於)吡啶基、嘧啶基、㗁唑基或呋喃基。「雜芳基」亦包括多重縮合環系統(例如包含2、3或4個環之環系統)，其中如上文所定義之雜芳基與一或多個選自雜芳基(形成例如1,8-㖠啶基)、雜環(形成例如1,2,3,4-四氫-1,8-㖠啶基)、碳環(形成例如5,6,7,8-四氫喹啉基)及芳基(形成例如吲唑基)之環縮合形成多重縮合環系統。因此，雜芳基(單芳環或多重縮合環系統)在雜芳環內具有約1至20個碳原子及約1至6個雜原子。該等多重縮合環系統可於縮合環之碳環或雜環部分上視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)側氧基取代。多重縮合環系統之環在價數要求允許時可經由稠合、螺環及橋聯鍵彼此連接。應理解，多重縮合環系統之個別環可相對於彼此以任何次序連接。應理解，雜芳基或雜芳基多重縮合環系統之連接點可在雜芳基或雜芳基多重縮合環系統之任何適合原子處，包括碳原子及雜原子(例如氮)。亦應理解，當提及某一原子範圍之員數之雜芳基(例如5員至10員雜芳基)時，原子範圍係針對雜芳基之總環原子且包括碳原子及雜原子。舉例而言，5員雜芳基將包括噻唑基且10員雜芳基將包括喹啉基。例示性雜芳基包括(但不限於)吡啶基、吡咯基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、呋喃基、㗁二唑基、噻二唑基、喹啉基、異喹啉基、苯并噻唑基、苯并㗁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基、5,6,7,8-四氫異喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、硫茚基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3H)-酮及***基。
「本發明化合物」包括本文所揭示之化合物，例如本發明化合物包括式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)及(IIn)之化合物，包括以下實例之化合物。
「醫藥學上有效量」係指提供所希望之治療或醫藥結果的調配物或其組合中本發明化合物的量。
「醫藥學上可接受之賦形劑」包括(但不限於)任何佐劑、載劑、賦形劑、助滑劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、風味增強劑、界面活性劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑，其已經美國食品與藥物管理局(the United States Food and Drug Administration)批准為可接受用於人類或家畜。
如本文所使用，「治療(treatment/treat/treating)」係指用於獲得有益或所希望之結果的方法。出於本發明之目的，有益或所希望之結果包括(但不限於)症狀緩解及/或症狀程度減輕及/或預防與疾病或病況相關之症狀的惡化。在一個實施例中，「治療(treatment/treating)」包括以下中之一或多者：(a)抑制疾病或病況(例如，減少由疾病或病況引起之一或多種症狀，及/或減弱疾病或病況之程度)；(b)減緩或遏制與疾病或病況相關之一或多種症狀的發展(例如，使疾病或病況穩定、延緩疾病或病況之惡化或進展)；及(c)緩解疾病或病況，例如使臨床症狀消退、改善疾病狀態、延緩疾病進展、提高生活品質及/或延長存活期。
「預防」係指預防或延遲患有病毒感染之患者之臨床疾病之發展。
「呼吸道病況」係指一種疾病或病況，諸如由病毒感染引起之呼吸道感染、過敏性鼻炎、鼻塞、鼻漏、常年性鼻炎、鼻發炎、所有類型之哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性或急性支氣管收縮、慢性支氣管炎、小氣道阻塞、肺氣腫、慢性嗜酸性肺炎、成人呼吸窘迫症候群、由其他藥物療法所致之氣道高反應性惡化、肺部血管疾病(包括肺動脈高血壓)、急性肺損傷、支氣管擴張、竇炎、過敏性結膜炎、特發性肺部纖維化或異位性皮膚炎，尤其哮喘或過敏性鼻炎或異位性皮膚炎或過敏性結膜炎。
「呼吸道病況之惡化」係指由病毒感染誘發之惡化。代表性病毒感染包括(但不限於)呼吸道融合性病毒(RSV)、鼻病毒及間質肺炎病毒。
如本文所使用之「治療有效量」或「有效量」係指有效地引發所需生物學或醫學反應之量，包括在向個體投與以用於治療疾病時足以實現此類疾病治療之化合物的量。有效量將視化合物、待治療個體之疾病及其嚴重程度及年齡、體重等而變化。有效量可包括一定範圍之量。如所屬領域中所瞭解，有效量可以是一或多次劑量，亦即，達成所需治療終點可能需要單次劑量或多次劑量。因此，在投與一或多種治療劑之情形下可考慮有效量，且若與一或多種其他藥劑結合可獲得或已獲得所希望或有利的結果，則單一藥劑可視為以有效量投與。任何共投與化合物之適合劑量可視情況因化合物之組合作用(例如累加或協同效應)而減少。
如本文所使用，「共同投與」包括在投與單位劑量之一或多種額外治療劑之前或之後投與單位劑量之本文所揭示化合物，例如在投與一或多種額外治療劑的數秒、數分鐘或數小時內投與本文所揭示化合物。舉例而言，在一些實施例中，首先投與單位劑量之本發明化合物，隨後在數秒或數分鐘內投與單位劑量之一或多種額外治療劑。或者，在其他實施例中，首先投與單位劑量之一或多種其他治療劑，接著在數秒或數分鐘內投與單位劑量之本發明化合物。在一些實施例中，首先投與單位劑量之本發明化合物，接著在數小時(例如1至12小時)之後投與單位劑量之一或多種其他治療劑。在其他實施例中，首先投與單位劑量之一或多種其他治療劑，接著在數小時(例如1至12小時)之後投與單位劑量之本發明化合物。本文所揭示化合物與一或多種其他治療劑之共同投與通常係指同時或依序投與本文所揭示化合物及一或多種其他治療劑，使得在患者體內存在治療有效量之每種藥劑。
亦提供本文所描述之化合物的醫藥學上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、互變異構形式、多晶型物及前藥。「醫藥學上可接受」或「生理學上可接受」係指適用於製備適用於獸醫學或人類醫藥用途之醫藥組合物的化合物、鹽、組合物、劑型及其他物質。
本文所描述之化合物可製備及/或調配為醫藥學上可接受之鹽或在適當時製備及/或調配為游離鹼。醫藥學上可接受之鹽為具有游離鹼之所需藥理學活性的化合物之游離鹼形式之無毒鹽。此等鹽可衍生自無機或有機酸或鹼。舉例而言，含有鹼氮之化合物可藉由使該化合物與無機酸或有機酸接觸而製備為醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽之非限制性實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸單氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽及杏仁酸鹽(mandelate)。其他適合的醫藥學上可接受之鹽的清單見於Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, Lippincott Wiliams and Wilkins, Philadelphia, Pa., 2006中。
本文所揭示化合物之「醫藥學上可接受之鹽」的實例亦包括衍生自適當鹼之鹽，該鹼諸如鹼金屬(例如，鈉、鉀)、鹼土金屬(例如，鎂)、銨及NX
4 +(其中X為C
1-C
4烷基)。亦包括諸如鈉鹽或鉀鹽之鹼加成鹽。
亦提供本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、異構體或混合物，其中連接至碳原子之1至n個氫原子可經氘原子或D置換，其中n為分子中之氫原子的數目。如此項技術中已知，氘原子為氫原子之非放射性同位素。該等化合物可增加代謝抗性，且因此當向哺乳動物投與時，可適用於增加本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、異構體或混合物之半衰期。參見例如，Foster, 「Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism」, Trends Pharmacol. Sci., 5(12):524-527 (1984)。藉由此項技術中熟知之手段，例如藉由採用其中一或多個氫原子已經氘置換之起始物質，合成此等化合物。
可併入所揭示化合物中之同位素之實例亦包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯及碘之同位素，諸如分別為
2H、
3H、
11C、
13C、
14C、
13N、
15N、
15O、
17O、
18O、
31P、
32P、
35S、
18F、
36Cl、
123I及
125I。經正電子發射同位素(諸如
11C、
18F、
15O及
13N)取代可適用於正電子發射斷層攝影術(PET)研究，以檢查受質受體佔用率。經同位素標記之式(I)化合物可通常藉由熟習此項技術者已知的習知技術或藉由與如下文闡述之實例中所描述之方法類似的方法，使用合適的經同位素標記之試劑代替先前所用之未經標記之試劑來製備。
本文所揭示之實施例之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可含有一或多個不對稱中心，且可因此產生對映異構體、非對映異構體及其他立體異構形式，該等立體異構形式就絕對立體化學而言可定義為(
R)-或(
S)-，或針對胺基酸定義為(D)-或(L)-。本發明意謂包括所有該等可能的異構體，以及其外消旋及光學純形式。具光學活性之(+)及(-)、(
R)-及(
S)-或(D)-及(L)-異構體可使用對掌性合成子或對掌性試劑來製備，或使用習知技術(例如層析及分步結晶)來解析。用於製備/分離個別對映異構體之習知技術包括自適合之光學純前驅體進行對掌性合成或使用例如對掌性高壓液相層析(HPLC)對外消旋體(或鹽或衍生物之外消旋體)進行解析。當本文所描述之化合物含有烯系雙鍵或其他幾何不對稱中心時且除非另外說明，否則意欲化合物包括E與Z型幾何異構體。同樣，亦意欲包括所有互變異構形式。在化合物以其對掌性形式表示時，應理解，實施例涵蓋但不限於特定非對映異構性或對映異構性增濃形式。在未指定但存在對掌性時，應理解，實施例係針對特定非對映異構性或對映異構性增濃形式；或此類化合物之外消旋或非外消旋混合物。如本文中所使用，「非外消旋混合物」為比率不為1:1的立體異構體之混合物。
「外消旋體」係指對映異構體之混合物。該混合物可包含相等或不相等量之各對映異構體。
「立體異構體(stereoisomer/stereoisomers)」係指一或多個立體中心之對掌性不同的化合物。立體異構體包含對映異構體及非對映異構體。若化合物具有一或多個不對稱中心或不對稱取代之雙鍵，則其可以立體異構形式存在且因此可以單獨的立體異構體或以混合物形式產生。除非另外指明，否則該描述意欲包括個別立體異構體以及混合物。判定立體化學及分離立體異構體之方法為此項技術中所熟知(參見例如Advanced Organic Chemistry, 第4章, 第4版, 3月期刊, John Wiley及Sons, 紐約, 1992)。
「互變異構體」係指質子位置不同的化合物之替代形式，諸如烯醇-酮基及亞胺-烯胺互變異構體，或含有連接至環-NH-及環=N-兩者之環原子之雜芳基的互變異構形式，諸如吡唑、咪唑、苯并咪唑、***及四唑。
除非另有定義，否則本文中所用的所有技術及科學術語均具有與一般熟習此項技術者通常所理解相同的意義。在化學基團之前端或末端處之短劃線為出於方便之目的；可在具有或不具有一或多個短劃線之情況下描繪化學基團而不會丟失其普通含義。穿過結構中之線所繪製的波浪線指示基團之連接點。虛線指示視情況存在之鍵。除非在化學上或結構上需要，否則書寫化學基團之次序或其與分子其餘部分之連接點不指示或暗示方向。舉例而言，基團「-SO
2CH
2-」等效於「-CH
2SO
2-」，且兩者可沿任一方向連接。類似地，「芳基烷基」例如可在該基團之芳基或烷基部分處連接至分子之其餘部分。諸如「C
u-v」或(C
u-C
v)之前綴指示以下基團具有u至v個碳原子。舉例而言，「C
1-6烷基」及「C
1-C
6烷基」均指示烷基具有1至6個碳原子。
如本文所使用，「溶劑合物」係指溶劑與化合物之相互作用之產物。亦提供本文所描述之化合物之鹽的溶劑合物。亦提供本文所描述之化合物之水合物。
如本文所使用之「前藥」係指藥物之衍生物，其在投與人體時根據一些化學或酶促路徑轉化成母體藥物。
III.
化合物
本發明提供式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)及(IIn)之化合物。
在一些實施例中，本發明提供一種式(II)化合物：
式(II)
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：
鹼基為
；
R
1A及R
2A各自獨立地為：
(A) 視情況經1至3個R
1B取代之C
1-12烷基，
(B) 具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，其中該3員至6員雜環基視情況經1至3個R
1C取代，或
(C) 苯基，其中各R
1B獨立地為鹵素；-OH；-NH
2；C
1-6烷氧基；甲氧基乙氧基；C
3-8環烷基；或具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，且各R
1C獨立地為C
1-3烷基；
R
3為-N(H)R
3A或-N=C(R
3B)(R
3C)；R
3A為H、-CH
2OP(O)(OH)
2或-C(O)R
3D，其中R
3D為視情況經1個甲氧基取代之C
1-6烷基，或視情況經C
1-3烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；R
3B為H或C
1-3烷基；R
3C為-N(R
3C1)(R
3C2)；R
3C1及R
3C2各自獨立地為H或C
1-6烷基；或R
3C1及R
3C2與其所連接之原子一起形成視情況經C
1-6烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；
R
4A為O或S；
R
4B及R
4C各自獨立地為
(A) -OH；
(B) -OR
4B1，其中R
4B1為視情況經1至3個R
4B2基團取代的C
1-6烷基，或C
6-12芳基，其中各R
4B2基團獨立地為C
1-6烷氧基、-S-R
4B3或-S(O)
2-R
4B3，且各R
4B3基團獨立地為C
1-6烷基；
(C)
，其中
m為0、1、2、3、4或5；且各R
4D獨立地為視情況經1至3個R
4D1基團取代之C
1-3烷基、視情況經1至3個R
4D2基團取代之C
1-3烷氧基或-C(O)N(R
4D3)
2，其中各R
4D1基團獨立地為-NH
2或-C(O)OR
4D3，各R
4D2獨立地為C
1-3烷氧基，且各R
4D3獨立地為C
1-3烷基；
(D)
，其中R
4E1及R
4E2各自獨立地為H或C
1-6烷基，R
4F1及R
4F2各自獨立地為H或C
1-6烷基，或R
4F1及R
4F2組合一起為側氧基，R
4G為視情況經1至3個R
4G1取代之C
1-12烷基；視情況經1至3個R
4G2取代之C
3-7環烷基；視情況經1至3個R
4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或-C(O)R
4G4，各R
4G1獨立地為-OH；C
1-6烷基；C
1-3烷氧基；-(CH
2OCH
2)
1-5-CH
3；-N(R
4G8)
2；-OP(O)(OH)
2；視情況經1至3個R
4G9取代之C
3-7環烷基；視情況經1至3個R
4G10取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；或苯基，各R
4G2獨立地為C
1-6烷基、C
1-3鹵烷基、-OH或-NH
2；各R
4G3獨立地為鹵素或C
1-3烷基；各R
4G4獨立地為C
1-12烷基，各R
4G8獨立地為C
1-6烷基，各R
4G9獨立地為C
1-3鹵烷基、-OH或-NH
2，且各R
4G10獨立地為C
1-3鹵烷基；或
(E) -(OP(O)(OH))
1-2-OH；及
R
5A及R
5B各自為經-OP(O)(OH)
2取代之C
1-6烷基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中鹼基為
。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中鹼基為
。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中鹼基為
。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中鹼基為
。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為：(A)視情況經1至3個R
1B取代之C
1-12烷基，(B)具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，其中該3員至6員雜環基視情況經1至3個R
1C取代，或(C)苯基，其中各R
1B獨立地為-OH；-NH
2；C
1-6烷氧基；甲氧基乙氧基；C
3-8環烷基；或具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，且各R
1C獨立地為C
1-3烷基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A為視情況經1至3個R
1B取代之C
1-12烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自選自由以下組成之群：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基及異戊基，其各自視情況經1至3個R
1B取代。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
1B可獨立地為甲氧基、甲氧基乙氧基、嗎啉基、-OH或-NH
2。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為視情況經甲氧基、甲氧基乙氧基或嗎啉基取代之甲基；視情況經甲氧基、正丙基、異丙基、正丁基取代之乙基；視情況經-OH或-NH
2取代之異丁基；三級丁基；或異戊基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基或異戊基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為甲基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為乙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為異丙基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，其中該3員至6員雜環基視情況經1至3個R
1C取代，其中各R
1C獨立地為C
1-3烷基、羥基或鹵素。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為具有選自1個N及O之雜原子的4員至6員雜環基，其中該4員至6員雜環基視情況經1個R
1C取代，其中各R
1C獨立地為C
1-3烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為氧雜環丁烷基、四氫哌喃基或哌啶基，其各自視情況經1個R
1C取代，其中各R
1C獨立地為C
1-3烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
1C為甲基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為視情況經甲基取代之氧雜環丁烷基、四氫哌喃基或哌啶基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為苯基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
3為-N(H)R
3A或-N=C(R
3B)(R
3C)，R
3A為H、-CH
2OP(O)(OH)
2或-C(O)R
3D，其中R
3D為視情況經1個甲氧基取代之C
1-6烷基或視情況經C
1-3烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基R
3B為H或C
1-3烷基，R
3C為-N(R
3C1)(R
3C2)，R
3C1及R
3C2各自獨立地為H或C
1-6烷基，或R
3C1及R
3C2與其所連接之原子一起形成視情況經C
1-6烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
3為-N(H)R
3A，且R
3A為H、-CH
2OP(O)(OH)
2或-C(O)R
3D，其中R
3D為視情況經1個甲氧基取代之C
1-6烷基或視情況經C
1-3烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
3為-N(H)R
3A且R
3A為H、-CH
2OP(O)(OH)
2或-C(O)R
3D，其中R
3D為視情況經1個甲氧基取代之C
1-3烷基或視情況經甲基取代之哌啶。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
3A為H。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
3為-NH
2。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
3為-N=C(R
3B)(R
3C，其中R
3B為H或甲基，R
3C為-N(R
3C1)(R
3C2)，R
3C1及R
3C2各自獨立地為H或甲基，或R
3C1及R
3C2與其所連接之原子一起形成視情況經甲基取代之哌𠯤。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4A為O或S。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4A為O。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4A為S。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為-OH。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為-OR
4B1，其中R
4B1為視情況經1至3個R
4B2基團取代之C
1-6烷基，或C
6-12芳基，其中各R
4B2基團獨立地為C
1-6烷氧基、-S-R
4B3或-S(O)
2-R
4B3，且各R
4B3基團獨立地為C
1-6烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B1為視情況經1至3個R
4B2基團取代之C
1-6烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4B2基團獨立地為C
1-6烷氧基、-S-R
4B3或-S(O)
2-R
4B3，且各R
4B3基團獨立地為C
1-6烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B1為視情況經1至3個R
4B2基團取代之C
1-6烷基，其中各R
4B2基團獨立地為C
1-6烷氧基、-S-R
4B3或-S(O)
2-R
4B3，且各R
4B3基團為甲基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為視情況經甲氧基、甲硫基或甲磺醯基取代之-O-C
1-6烷基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為
，
其中
m為0、1、2、3、4或5；且各R
4D獨立地為視情況經1至3個R
4D1基團取代之C
1-3烷基、視情況經1至3個R
4D2基團取代之C
1-3烷氧基或-C(O)N(R
4D3)
2，其中各R
4D1基團獨立地為-NH
2或-C(O)OR
4D3，各R
4D2獨立地為C
1-3烷氧基，且各R
4D3獨立地為C
1-3烷基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中m為0、1或2；且各R
4D獨立地為視情況經1個R
4D1基團取代之C
1-3烷基、視情況經甲氧基取代之C
1-3烷氧基或- C(O)N(R
4D3)
2，其中各R
4D1基團獨立地為-NH
2或-C(O)OR
4D3，且各R
4D3獨立地為C
1-3烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中
m為0或1。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中
m為0。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為：
其中R
4E1及R
4E2各自獨立地為H或C
1-6烷基，R
4F1及R
4F2各自獨立地為H或C
1-6烷基，或R
4F1及R
4F2組合一起為側氧基，R
4G為視情況經1至3個R
4G1取代之C
1-12烷基；視情況經1至3個R
4G2取代之C
3-7環烷基；視情況經1至3個R
4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或-C(O)R
4G4，各R
4G1獨立地為-OH；C
1-6烷基；C
1-3烷氧基；-(CH
2OCH
2)
1-5-CH
3；-N(R
4G8)
2；-OP(O)(OH)
2；視情況經1至3個R
4G9取代之C
3-7環烷基；視情況經1至3個R
4G10取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；或苯基，各R
4G2獨立地為C
1-6烷基、C
1-3鹵烷基、-OH或-NH
2；各R
4G3獨立地為鹵素或C
1-3烷基；各R
4G4獨立地為C
1-12烷基，各R
4G8獨立地為C
1-6烷基，各R
4G9獨立地為C
1-3鹵烷基、-OH或-NH
2，且各R
4G10獨立地為C
1-3鹵烷基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為：
；且
R
4B及R
4C中之另一者為：
。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4E1及R
4E2各自獨立地為H或C
1-6烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4E1及R
4E2各自獨立地為H或甲基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4F1及R
4F2各自獨立地為H或C
1-6烷基，或R
4F1及R
4F2組合一起為側氧基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4F1及R
4F2各自獨立地為H或甲基，或R
4F1及R
4F2組合一起為側氧基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4F1及R
4F2組合一起為側氧基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為：
。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為：
。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為視情況經1至3個R
4G1取代之C
1-12烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基或2-乙基-丁基，其各自視情況經1至3個R
4G1取代。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G1獨立地為-OH；C
1-6烷基；C
1-3烷氧基；-(CH
2OCH
2)
1-5-CH
3；-N(R
4G8)
2；-OP(O)(OH)
2；視情況經1至3個R
4G9取代之C
3-7環烷基；視情況經1至3個R
4G10取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；或苯基，其中各R
4G8獨立地為C
1-6烷基，各R
4G9獨立地為C
1-3鹵烷基或-NH
2，且各R
4G10獨立地為C
1-3烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G1獨立地為-OH；C
1-6烷基；C
1-3烷氧基；-(CH
2OCH
2)
1-5-CH
3；-N(R
4G8)
2；-OP(O)(OH)
2；視情況經1至3個R
4G9取代之C
4-6環烷基；視情況經1至3個R
4G10取代的具有1至2個獨立地選自N及O之雜原子的4員至6員雜環基；或苯基，其中各R
4G8獨立地為C
1-6烷基，各R
4G9獨立地為C
1-3鹵烷基或-NH
2，且各R
4G10獨立地為C
1-3鹵烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G1獨立地為-OH；甲基；OMe；-(CH
2OCH
2)
2-CH
3；-N(iPr)
2；-OP(O)(OH)
2；環丙基；環丁基；視情況經-NH
2或CF
3取代之環己基；氧雜環丁烷基；視情況經CF
3或CH
2CF
3取代之哌啶基；四氫哌喃基；嗎啉基；或苯基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為視情況經R
4G1取代之甲基；視情況經嗎啉基或-N(R
4G8)
2取代之乙基；視情況經甲氧基或嗎啉基取代之正丙基；異丙基；視情況經C
1-3烷基取代之正丁基；視情況經-OH或-OP(O)(OH)
2取代之異丁基，其中R
4G1為環丙基；環丁基；視情況經R
4G9取代之環己基；氧雜環丁烷基；視情況經R
4G10取代之哌啶基；四氫哌喃基；或苯基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G8為C
1-3烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G8為異丙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G9為C
1-3鹵烷基或-NH
2。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G9為-CF
3或-NH
2。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G10為C
1-3鹵烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G10為-CF
3或2,2,2-三氟乙基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為視情況經R
4G1取代之甲基；視情況經嗎啉基或-N(C
1-3烷基)
2取代之乙基；視情況經甲氧基或嗎啉基取代之正丙基；異丙基；視情況經C
1-3烷基取代之正丁基；視情況經-OH或-OP(O)(OH)
2取代之異丁基，其中R
4G1為環丙基；環丁基；視情況經-NH
2或C
1-3鹵烷基取代之環己基；氧雜環丁烷基；視情況經C
1-3烷基或C
1-3鹵烷基取代之哌啶基；四氫哌喃基；或苯基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為視情況經1至3個R
4G2取代之C
3-7環烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為環丙基、環丁基、環戊基或環己基，其各自視情況經1至3個R
4G2取代。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G2獨立地為C
1-6烷基、C
1-3鹵烷基或-NH
2。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G2為三級丁基、-CF
3或-NH
2。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為視情況經1至3個R
4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為視情況經1至3個R
4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為視情況經1至3個R
4G3取代的具有1至2個選自N及O之雜原子的4員至6員雜環基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為氧雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、四氫呋喃基或四氫哌喃基，其各自視情況經1至3個R
4G3取代。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G3獨立地為鹵素或C
1-3烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G3獨立地為F、甲基或乙基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為-C(O)R
4G4。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中各R
4G4獨立地為C
1-12烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為-C(O)C
1-6烷基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為-C(O)-三級丁基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為-(OP(O)(OH))
1-2-OH。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4B及R
4C中之一者為-(OP(O)(OH))
1-2-OH，且R
4B及R
4C中之一者為-OH。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)或(IIb表示，其中R
5A及R
5B各自為-CH
2OP(O)(OH)
2。在一些實施例中，化合物可由式(II)或(IIa)表示，其中R
5A為-CH
2OP(O)(OH)
2。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)或(IIb)表示，其中R
5B為-CH
2OP(O)(OH)
2。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(IIa)表示：
式(IIa)，
其中R
5A為-CH
2OP(O)(OH)
2。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽由式(IIb)表示：
式(IIb)
其中R
5B為-CH
2OP(O)(OH)
2。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中
R
1A及R
2A各自獨立地為視情況經甲氧基、甲氧基乙氧基或嗎啉基取代之甲基；視情況經甲氧基取代之乙基；正丙基；異丙基；正丁基；視情況經-OH或-NH
2取代之異丁基；三級丁基；異戊基；氧雜環丁烷基；四氫哌喃基；視情況經甲基取代之哌啶基；或苯基；
R
3為-N(H)R
3A或-N=C(R
3B)(R
3C)；R
3A為H、C(H)
2OP(O)(OH)
2或-C(O)R
3D；R
3D為甲基；視情況經甲氧基取代之乙基；異丙基；或視情況經甲基取代之哌啶基；R
3B為H或甲基；R
3C為-N(R
3C1)(R
3C2)；R
3C1及R
3C2獨立地為H或甲基；或R
3C1及R
3C2與其所連接之原子一起形成視情況經甲基取代之哌𠯤基；
R
4A為O或S；且
R
4B及R
4C各自獨立地為
(A) -OH；
(B) 視情況經甲氧基、甲硫基或甲磺醯基取代之-O-C
1-6烷基；
(C)
，
其中
m為0、1或2；且各R
4D獨立地為視情況經1個R
4D1基團取代之C
1-3烷基、視情況經甲氧基取代之C
1-3烷氧基或-C(O)N(R
4D3)
2，其中各R
4D1基團獨立地為-NH
2或-C(O)OR
4D3，且各R
4D3獨立地為C
1-3烷基；或
(D)
，
其中R
4E1及R
4E2各自獨立地為H或甲基，R
4F1及R
4F2各自獨立地為H或甲基，或R
4F1及R
4F2組合一起為側氧基，R
4G為視情況經R
4G1取代之甲基；視情況經嗎啉基或-N(C
1-3烷基)
2取代之乙基；視情況經甲氧基或嗎啉基取代之正丙基；異丙基；視情況經C
1-3烷基取代之正丁基；視情況經-OH或-OP(O)(OH)
2取代之異丁基；環丙基；環丁基；環戊基；視情況經1至3個各自獨立地為-NH
2、C
1-6烷基或C
1-3鹵烷基之基團取代的環己基；氧雜環丁烷基；視情況經1至3個甲基取代之吡咯啶基；視情況經鹵素或C
1-3烷基取代之哌啶基；四氫呋喃基；四氫哌喃基；或-C(O)C
1-6烷基，且R
4G1為環丙基；環丁基；視情況經-NH
2或C
1-3鹵烷基取代之環己基；氧雜環丁烷基；視情況經C
1-3鹵烷基取代之哌啶基；四氫哌喃基；或苯基。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIc)表示：
式(IIc)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IId)表示：
式(IId)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IId)表示：
式(IIe)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIf)表示：
式(IIf)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIg)表示：
式(IIg)
其中
m為0或1。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIh)表示：
式(IIh)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIi)表示：
式(IIi)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIj)表示：
式(IIj)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIk)表示：
式(IIk)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIm)表示：
式(IIm)。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(IIn)表示：
式(IIn)。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基或異戊基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為乙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為異丙基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為甲基\乙基\正丙基\異丙基\正丁基\三級丁基或2-乙基-丁基。在一些實施例中，化合物可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R
4G為甲基。在一些實施例中，化合物可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R
4G為乙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為正丙基。在一些實施例中，化合物可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R
4G為異丙基。在一些實施例中，化合物可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R
4G為正丁基。在一些實施例中，化合物可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，或其醫藥學上可接受之鹽，其中R
4G為三級丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
4G為2-乙基-丁基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基或異戊基，R
4G為視情況經R
4G1取代之甲基；視情況經嗎啉基或-N(C
1-3烷基)
2取代之乙基；視情況經甲氧基或嗎啉基取代之正丙基；異丙基；視情況經C
1-3烷基取代之正丁基；視情況經-OH或-OP(O)(OH)
2取代之異丁基；環丙基；環丁基；環戊基；視情況經1至3個各獨立地為-NH
2、C
1-6烷基或C
1-3鹵烷基之基團取代的環己基；氧雜環丁烷基、視情況經1至3個甲基取代之吡咯啶基；視情況經鹵素或C
1-3烷基取代之哌啶基；四氫呋喃基；四氫哌喃基；或-C(O)C
1-6烷基，且R
4G1為環丙基、環丁基、視情況經-NH
2或C
1-3鹵烷基取代之環己基、氧雜環丁烷基、視情況經C
1-3烷基或C
1-3鹵烷基取代之哌啶基、四氫哌喃基或苯基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，R
4G為視情況經R
4G1取代之甲基；視情況經嗎啉基或-N(C
1-3烷基)
2取代之乙基；視情況經甲氧基或嗎啉基取代之正丙基；異丙基；視情況經C
1-3烷基取代之正丁基；視情況經-OH或-OP(O)(OH)
2取代之異丁基；環丙基；環丁基；環戊基；視情況經1至3個各獨立地為-NH
2、C
1-6烷基或C
1-3鹵烷基之基團取代的環己基；氧雜環丁烷基；視情況經1至3個甲基取代之吡咯啶基；視情況經鹵素或C
1-3烷基取代之哌啶基；四氫呋喃基；四氫哌喃基；或-C(O)C
1-6烷基，且R
4G1為環丙基、環丁基、視情況經-NH
2或C
1-3鹵烷基取代之環己基、氧雜環丁烷基、視情況經C
1-3烷基或C
1-3鹵烷基取代之哌啶基、四氫哌喃基或苯基。
在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基或異戊基，且R
4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基或2-乙基-丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，且R
4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基或2-乙基-丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基，且R
4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基或2-乙基-丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為乙基，且R
4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基或2-乙基-丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自為異丙基，且R
4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基或2-乙基-丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，且R
4G為甲基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，R
4G為乙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，R
4G為正丙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基R
4G為異丙基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，R
4G為正丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，R
4G為三級丁基。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中R
1A及R
2A各自獨立地為甲基、乙基或異丙基，R
4G為2-乙基-丁基。
本發明化合物包括表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H及表1I之化合物。在一些實施例中，化合物或其醫藥學上可接受之鹽可由式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)表示，其中化合物係選自由以下組成之群：表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H及表1I中之化合物：
表1A.化合物
表1B.化合物
表1C.化學式
表1D.化合物
表1E.化合物
表1F.化合物
表1G.化合物
表1H.化合物
表1I.化合物
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽具有以下結構：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
在一些實施例中，本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物為：
。
就本文所描述之化合物之活體內代謝產物相對於先前技術為新穎且不顯著的而言，此類產物亦在本文之範疇內。此類產物可例如由所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、酯化及其類似作用產生，主要由於酶促過程產生。因此，包括藉由包含使化合物與哺乳動物接觸足以產生其代謝產物的時間段之製程而製備的新穎及非顯著化合物。此類產物通常由製備放射性標記(例如
14C或
3H)之化合物，將其以可偵測劑量(例如大於約0.5 mg/kg)非經腸投與動物(諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴)或人類，使代謝進行充足的時間(通常約30秒至約30小時)且自尿液、血液或其他生物樣品分離其轉化產物來鑑別。此等產物因為其經標記而容易分離(其他藉由使用能夠結合代謝物中留存之抗原決定基的抗體進行分離)。代謝物結構係以習知方式，例如藉由MS或NMR分析確定。一般而言，以與熟習此項技術者熟知之習知藥物代謝研究相同之方式進行代謝物之分析。轉化產物只要未以其他方式在活體內發現，則適用於診斷分析以用於化合物之治療性給藥，即使其自身不具有HSV抗病毒活性。
用於測定替代性胃腸道分泌物中化合物之穩定性的配方及方法為已知的。化合物在本文中定義為在胃腸道中穩定，其中在37℃下培育1小時後，在替代性腸液或胃液中少於約50莫耳%之受保護基團脫除保護基。僅因為化合物對胃腸道穩定並不意謂其無法活體內水解。前藥通常在消化系統中將為穩定的，但可在消化腔、肝臟、肺或其他代謝器官中或一般在細胞內實質上水解成母體藥物。如本文所用，前藥應理解為化學設計成在克服經口遞送的生物學障壁之後有效釋放母體藥物之化合物。
IV.
醫藥調配物
在一些實施例中，本發明提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。本文亦提供一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物及/或酯，及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
本文之化合物與習知載劑及賦形劑一起調配，該等載劑及賦形劑將根據普通實踐選擇。錠劑將含有賦形劑、助滑劑、填充劑、黏合劑及其類似物。水性調配物以無菌形式製備，且在意欲藉由除經口投與以外的方式遞送時通常為等滲的。所有調配物將視情況含有賦形劑，諸如「Handbook of Pharmaceutical Excipients」(1986)中所闡述之賦形劑。賦形劑包括抗壞血酸及其他抗氧化劑、螯合劑(諸如EDTA)、碳水化合物(諸如聚葡萄糖)、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素、硬脂酸及其類似物。調配物之pH值在約3至約11範圍內，但通常為約7至10。
儘管活性成分可單獨投與，但其較佳可呈醫藥調配物形式。用於獸醫及人類用途之調配物均包含至少一種如上文所定義之活性成分，以及一或多種可接受之載劑及視情況選用之其他治療成分，尤其如本文所論述之彼等額外治療成分。載劑必須在與調配物之其他成分相容及對其受體生理學無害之意義上為「可接受」的。
調配物包括適用於前述投藥途徑之調配物。調配物可宜以單位劑型呈現且可利用藥劑學技術中熟知之任何方法來製備。技術及調配物通常見於Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)中。該等方法包括使活性成分與構成一或多種附屬成分之載劑結合的步驟。一般而言，藉由使活性成分與液體載劑或細粉狀固體載劑或兩者均勻且緊密結合且隨後視需要使產物成形來製備調配物。
適合於經口投與的調配物可呈現為離散單元形式，諸如各含有預定量之活性成分的膠囊、扁囊劑或錠劑；粉末或粒子形式；於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或水包油液體乳液或油包水液體乳液形式。活性成分亦可以推注、舐劑或糊劑形式投與。
錠劑可藉由視情況與一或多種附屬成分一起壓縮或模製來製造。壓縮錠劑可藉由在適合機器中壓縮視情況與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的呈自由流動形式之活性成分(諸如粉末或粒子)來製備。模製錠劑可藉由在適合機器中模製經惰性液體稀釋劑濕潤之粉末狀活性成分之混合物來製備。可將錠劑視情況包覆包衣或刻痕且視情況調配，以便提供活性成分自其之緩慢或控制釋放。
對於眼部或其他外部組織(例如口腔及皮膚)感染，調配物較佳以含有例如0.075至20% w/w (包括以0.1% w/w (諸如0.6% w/w、0.7% w/w等)遞增之在0.1%與20%之間的範圍內的活性成分)，較佳0.2至15% w/w且最佳0.5至10% w/w之量的活性成分的局部軟膏或乳膏形式施用。當調配成軟膏時，活性成分可與石蠟或水可混溶性軟膏基劑一起使用。或者，活性成分可與水包油乳膏基劑一起調配成乳膏。
視需要，乳膏基劑之水相可包括例如至少30% w/w之多元醇，亦即具有兩個或更多個羥基之醇，諸如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、丙三醇及聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部調配物宜包括增強活性成分經由皮膚或其他受影響區域吸收或滲透之化合物。該等經皮滲透增強劑之實例包括二甲亞碸及相關類似物。
乳液之油相可由已知成分以已知方式構成。儘管該相可僅包含乳化劑(或稱為利泄劑)，但其宜包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪及油之混合物。較佳地，包括親水性乳化劑以及充當穩定劑之親脂性乳化劑。較佳亦包括油與脂肪。乳化劑與穩定劑一起或不與穩定劑一起構成所謂乳化蠟，且蠟與油及脂肪一起構成所謂乳化軟膏基劑，其形成乳膏調配物之油性分散相。
適用於調配物之利泄劑及乳液穩定劑包括Tween® 60、Span® 80、鯨蠟硬脂醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯及月桂基硫酸鈉。
用於調配物之適合的油或脂肪之選擇係基於實現所需化妝品特性。乳膏應較佳為非油膩、非染色及可洗產物，具有適合的稠度以避免自試管或其他容器洩漏。可使用直鏈或分支鏈、單元或二元烷基酯，諸如二異己二酸酯、硬脂酸異鯨蠟酯、椰子脂肪酸之丙二醇二酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或分支鏈酯之摻合物(稱為Crodamol CAP)，最後三者為較佳酯。視所需特性而定，此等酯可單獨或組合使用。或者，使用高熔點脂質，諸如白色軟石蠟及/或液體石蠟或其他礦物油。
本文之醫藥調配物包含與一或多種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及視情況使用之其他治療劑的組合。含有活性成分之醫藥調配物可呈適用於所欲投藥方法之任何形式。當用於例如經口投與時，可製備錠劑、糖衣錠、***錠、水性或油性懸浮液、可分散粉末或粒子、乳液、硬或軟膠囊、溶液、糖漿或酏劑。可根據製造醫藥組合物之技術中已知的任何方法製備意欲用於經口使用的組合物，且該等組合物可含有一或多種劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以便提供可口製劑。含有與適用於製造錠劑之醫藥學上可接受無毒賦形劑混合的活性成分之錠劑為可接受的。此等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化及崩解劑，諸如玉米澱粉或褐藻酸；黏合劑，諸如澱粉、明膠或***膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可未經包覆或可利用已知技術(包括微囊封裝)包覆以延緩在胃腸道中之崩解及吸附，且因此提供較長時段的持久作用。舉例而言，可單獨或與蠟一起使用諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之延時材料。
用於經口使用之調配物亦可呈硬明膠膠囊形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如磷酸鈣或高嶺土)混合，或呈軟明膠膠囊形式，其中活性成分與水或油介質(諸如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。
水性懸浮液含有與適用於製造水性懸浮液之賦形劑摻合的活性材料。此類賦形劑包括懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、褐藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及***膠；及分散劑或潤濕劑，諸如天然存在之磷脂(例如卵磷脂)、環氧烷與脂肪酸之縮合產物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產物(例如十七伸乙氧基鯨蠟醇)、環氧乙烷與衍生自脂肪酸之偏酯及己糖醇酐之縮合產物(例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯)。水性懸浮液亦可含有一或多種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯；一或多種著色劑；一或多種調味劑及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可藉由使活性成分懸浮於植物油(諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)中或礦物油(諸如液體石蠟)中來調配。口服懸浮液可含有增稠劑，諸如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟基醇。可添加甜味劑(諸如上述甜味劑)及調味劑，以提供適口之口服製劑。此等組合物可藉由添加抗氧化劑(諸如抗壞血酸)來保存。
適合於藉由添加水來製備水性懸浮液的可分散粉末及粒子提供活性成分與分散劑或潤濕劑、懸浮劑及一或多種防腐劑之混合物。合適之分散劑或潤濕劑及懸浮劑由上文所揭示之彼等試劑例示。亦可存在額外賦形劑，例如甜味劑、調味劑及著色劑。
醫藥組合物亦可呈水包油乳液形式。油相可為植物油，諸如橄欖油或花生油，礦物油，諸如液體石蠟，或此等物質之混合物。適合的乳化劑包括天然存在之膠，諸如***膠及膠狀黃蓍；天然存在之磷脂，諸如大豆卵磷脂；來源於脂肪酸及己糖醇酐之酯或偏酯，諸如脫水山梨糖醇單油酸酯；及此等偏酯與環氧乙烷之縮合產物，諸如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。乳液亦可含有甜味劑及調味劑。糖漿及酏劑可與甜味劑(諸如丙三醇、山梨糖醇或蔗糖)一起調配。此類調配物亦可含有緩和劑、防腐劑、調味劑或著色劑。
醫藥組合物可呈無菌可注射或靜脈內製劑形式，諸如呈無菌可注射水性或油性懸浮液形式。此懸浮液可根據已知技術使用上文已提及之彼等適合分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配。無菌可注射或靜脈內製劑亦可為於無毒非經腸可接受稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，諸如於1,3-丁二醇中之溶液；或製備成凍乾粉末。在可接受之媒劑及溶劑中，可採用的有水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等滲氯化鈉溶液。另外，無菌不揮發性油可常用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成性單甘油酯或二甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸同樣可用於製備可注射劑。
可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分的量將視所治療之主體及特定投藥模式而變化。舉例而言，意欲用於向人類經口投與之延時釋放調配物可含有大約1至1000 mg活性材料與適當且適宜量之載劑材料的混配物，該量可在總組合物之約5%至約95% (重量:重量)範圍內變化。醫藥組合物可製備成提供容易量測之量以供投與。舉例而言，意欲用於靜脈內輸注之水溶液每毫升溶液可含有約3至500 μg活性成分，以便可以約30 mL/hr之速率進行適合體積之輸注。
適用於局部投與至眼睛之調配物亦包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮於適合載劑中，尤其用於活性成分之水性溶劑中。活性成分較佳以0.5至20%，有利地0.5至10%且尤其約1.5% w/w之濃度存在於此類調配物中。
適用於在口腔中局部投與之調配物包括在調味基劑(通常為蔗糖及***膠或黃蓍)中包含活性成分之***錠；在惰性基劑(諸如明膠及甘油或蔗糖及***膠)中包含活性成分之片劑；以及在適合液體載劑中包含活性成分之漱口水。
用於直腸投與之調配物可以具有適合的基劑(包含例如可可脂或水楊酸酯)之栓劑形式呈現。
適用於肺內或經鼻投與之調配物具有例如在0.1至500微米範圍內之粒度，諸如0.5、1、30、35等，其藉由經鼻孔快速吸入或藉由經口腔吸入以便達到肺泡來投與。適合的調配物包括活性成分之水性或油性溶液。適用於以氣霧劑或乾燥粉末形式投與之調配物可根據習知方法製備且可與其他治療劑一起遞送，該等治療劑諸如迄今為止用於治療或預防如下文所描述之肺病毒科感染的化合物。
另一實施例提供一種新穎、有效、安全、無刺激性及生理學上相容的包含式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的可吸入組合物，其適用於治療肺病毒科感染及潛在相關的細支氣管炎。較佳醫藥學上可接受之鹽為無機酸鹽，包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽或磷酸鹽，因為其可引起較少肺部刺激。較佳地，可吸入調配物係以包含質量中數氣動直徑(MMAD)在約1與約5 µm之間的粒子的氣霧劑遞送至支氣管內間隙。較佳地，式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物經調配以供使用噴霧器、加壓定劑量吸入器(pMDI)或乾粉吸入器(DPI)進行氣霧劑遞送。
噴霧器之非限制性實例包括霧化、噴射、超音波、加壓、振動多孔板或等效噴霧器，包括利用適應性氣霧劑遞送技術之彼等噴霧器(Denyer,
J. Aerosol medicine Pulmonary Drug Delivery2010,
23增刊1, S1-S10)。噴射式噴霧器利用空氣壓力將溶液破碎成氣霧劑液滴。超音噴霧器藉由壓電晶體將液體剪切成小氣霧劑液滴來起作用。加壓噴霧系統在壓力下迫使溶液穿過小孔以產生氣霧劑液滴。振動式多孔板裝置利用快速振動將液體流剪切成適當液滴大小。
在一較佳實施例中，用於噴霧之調配物係以包含MMAD主要介於約1 µm與約5 µm之間的粒子的氣霧劑之形式，使用能夠使式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物之調配物霧化為所需MMAD之粒子的噴霧器遞送至支氣管內空間。為達到最佳治療效果且避免上呼吸道及全身副作用，大多數霧化粒子之MMAD不應大於約5 µm。若氣霧劑含有大量MMAD大於5 µm之粒子，則該等粒子沈積於上呼吸道中，由此減少遞送至炎症部位之藥物的量及下呼吸道中之支氣管收縮。若氣霧劑之MMAD小於約1 µm，則該等粒子傾向於保持懸浮於吸入之空氣中且隨後在呼氣期間呼出。
當根據本文中之方法調配及遞送時，用於噴霧之氣霧劑調配物將足以治療肺病毒科感染的治療有效劑量之式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物遞送至肺病毒科感染部位。必須調節所投與之藥物之量以反映治療有效劑量之式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物之遞送效率。在一較佳實施例中，視噴霧器而定，水性氣霧劑調配物與霧化、噴射、加壓、振動多孔板或超音波噴霧器之組合准許約至少20%至約90%，通常約70%所投與劑量之式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物遞送至呼吸道中。在一較佳實施例中，遞送至少約30%至約50%之活性化合物。更佳地，遞送約70%至約90%之活性化合物。
在另一實施例中，式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽以乾燥可吸入粉末形式遞送。該等化合物係使用乾燥粉末或定劑量吸入器以乾燥粉末調配物形式經支氣管內投與以將化合物之細粒有效遞送至支氣管內空間。對於藉由DPI遞送，藉由研磨噴霧乾燥、臨界流體處理或自溶液沈澱將式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物處理為MMAD主要介於約1 µm與約5 µm之間的粒子。能夠製造MMAD在約1 µm與約5 µm之間的粒度的介質研磨、噴射研磨及噴霧乾燥裝置及程序係此項技術中熟知的。在一個實施例中，賦形劑在加工成所需大小之粒子之前添加至式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物中。在另一實施例中，將賦形劑與所需大小之粒子共混合以幫助藥物粒子之分散，例如藉由使用乳糖作為賦形劑。
粒度測定係使用此項技術中熟知之裝置進行。舉例而言，多級Anderson級聯衝擊器或其他適合方法，諸如美國藥典第601章內特別引用的方法，作為表徵定劑量及乾燥粉末吸入器內之氣霧劑的裝置。
在另一較佳實施例中，式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物係使用諸如乾燥粉末吸入器之裝置或其他乾燥粉末分散裝置以乾燥粉末形式遞送。乾燥粉末吸入器及裝置之非限制性實例包括揭示於以下文獻中之彼等者：US5,458,135；US5,740,794；US5775320；US5,785,049；US3,906,950；US4,013,075；US4,069,819；US4,995,385；US5,522,385；US4,668,218；US4,667,668；US4,805,811；及US5,388,572。乾燥粉末吸入器有兩種主要設計。一種設計係計量裝置，其中藥物之儲集器置放於該裝置內且患者將一定劑量藥物添加至吸入腔室中。第二種設計係工廠計量裝置，其中各個別劑量係在獨立容器中製造。兩種系統均取決於將藥物調配成MMAD為約1 µm至約5 µm之小粒子且通常涉及與較大賦形劑粒子(諸如但不限於乳糖)共調配。將藥物粉末置放於吸入腔室(藉由裝置計量或藉由工廠計量劑量耗損)中且患者之吸氣流體加快粉末離開裝置且進入口腔。粉末路徑之非層流特徵使賦形劑-藥物聚集物分散，且大賦形劑粒子之質量造成其衝擊喉底，而較小藥物粒子於肺中深部沈積。在較佳實施例中，式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以乾燥粉末形式使用如本文所描述之任一類型的乾燥粉末吸入器遞送，其中不包括任何賦形劑之乾燥粉末之MMAD主要在1 µm至約5 µm範圍內。
在另一實施例中，式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物係以乾燥粉末形式使用定劑量吸入器遞送。定劑量吸入器及裝置之非限制性實例包括以下文獻中所揭示之彼等者：US5,261,538；US5,544,647；US5,622,163；US4,955,371；US3,565,070；US3,361306；及US6,116,234。在較佳實施例中，式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以乾燥粉末形式使用定劑量吸入器遞送，其中不包括任何賦形劑之乾燥粉末之MMAD主要在約1至5 µm範圍內。
適用於經***投與之調配物可呈現為子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊狀物、發泡體或噴霧調配物形式，該等調配物除了含有活性成分以外，亦含有諸如此項技術中已知為合適之載劑。
適於非經腸投與之調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者之血液等滲之溶質的水性及非水性無菌注射溶液；及可包括懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。
調配物可於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中呈現，且可在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，其僅需要在臨使用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。自先前所描述種類之無菌粉末、粒子及錠劑製備即用型注射溶液及懸浮液。較佳單位劑量調配物為含有如上文中所述之日劑量或單位每日子劑量或其適當部分之活性成分的彼等調配物。
應理解，除上文特定提及之成分之外，該等調配物亦可包括關於所討論調配物之類型的此項技術中習知的其他藥劑，例如適用於經口投與之調配物可包括調味劑。
進一步提供包含至少一種如上文所定義之活性成分以及其相關獸醫用載劑之獸醫用組合物。
獸醫用載劑為適用於投與組合物之目的的物質且可為固體、液體或氣體物質，其另外為惰性的或在獸醫領域中可接受且與活性成分相容。此等獸醫用組合物可經口、非經腸或藉由任何其他所需途徑投與。
本文中之化合物用於提供控制釋放醫藥調配物，其含有一或多種化合物(「控制釋放調配物」)作為活性成分，其中該活性成分之釋放經控制及調節以實現不太頻繁地給藥或改良給定活性成分之藥物動力學或毒性概況。
活性成分之有效劑量至少取決於所治療之病狀之性質、毒性、預防性(較低劑量)或針對活性病毒感染使用化合物、遞送方法及醫藥調配物，且將由臨床醫師使用習知劑量遞增研究決定。其可預期為每天約0.0001至約100毫克/公斤體重；通常為每天約0.01至約10毫克/公斤體重；更通常每天約0.01至約5毫克/公斤體重；最通常每天約0.05至約0.5毫克/公斤體重。舉例而言，用於約70 kg體重之成人之日候選劑量將在1 mg至1000 mg範圍內，較佳在5 mg與500 mg之間，且可呈單劑量或多劑量形式。
V. 投藥途徑
式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物中之一或多者(在本文中稱為活性成分)藉由適合於待治療之病況的任何途徑投與。適合的途徑包括經口、經直腸、經鼻、經肺、局部(包括頰內及舌下)、經***及非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內及硬膜外)及其類似途徑。應瞭解，較佳途徑可隨例如接受者之病況而變化。本文中之化合物之優勢在於其為經口生物可用的且可經口給藥。
本發明之化合物(在本文中亦稱為活性成分)可藉由適用於待治療之病況之任何途徑投與。適合途徑包括經口、經直腸、經鼻、局部(包括經頰及舌下)、經皮、經***及非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內及硬膜外)及其類似途徑。應瞭解，較佳途徑可隨例如接受者之病況而變化。本文所揭示之某些化合物之優勢為其為經口生物可用的且可經口給藥。
本發明化合物可根據有效給藥方案向個體投與持續所需時間段或持續時間，諸如至少約一個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約6個月或至少約12個月或更久。在一個變化形式中，化合物按每日或間歇性時程投與個體生命之持續時間。
本發明之化合物之劑量或給藥頻率可在治療療程內基於投藥醫師之判斷來調節。
可向個體(例如，人類)投與有效量之化合物。在一些實施例中，化合物每日投與一次。
化合物可藉由任何適用途徑及方式，諸如藉由經口或非經腸(例如靜脈內)投與來投與。化合物之治療有效量可包括每日每公斤體重約0.00001 mg至每日每公斤體重約10 mg，諸如每日每公斤體重約0.0001 mg至每日每公斤體重約10 mg，或諸如每日每公斤體重約0.001 mg至每日每公斤體重約1 mg，或諸如每日每公斤體重約0.01 mg至每日每公斤體重約1 mg，或諸如每日每公斤體重約0.05 mg至每日每公斤體重約0.5 mg，或諸如每日約0.3 mg至約30 mg，或諸如每日約30 mg至約300 mg。
本發明化合物可以任何劑量之本發明化合物(例如，1 mg至1000 mg化合物)與一或多種額外治療劑組合。治療有效量可包括每劑量約1 mg至每劑量約1000 mg，諸如每劑量約50 mg至每劑量約500 mg，或諸如每劑量約100 mg至每劑量約400 mg，或諸如每劑量約150 mg至每劑量約350 mg，或諸如每劑量約200 mg至每劑量約300 mg。本發明化合物之其他治療有效量係每劑量約100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475或約500 mg。本發明化合物之其他治療有效量為每劑量約100 mg，或每劑量約125、150、175、200、225、250、275、300、350、400、450或約500 mg。單次劑量可每小時、每日或每週投與。舉例而言，單次劑量可每隔1小時、2小時、3小時、4小時、6小時、8小時、12小時、16小時投與一次或每隔24小時投與一次。單次劑量亦可每隔1天、2天、3天、4天、5天、6天投與一次或每隔7天投與一次。單次劑量亦可每隔1週、2週、3週投與一次或每隔4週投與一次。在一些實施例中，單次劑量可每週投與一次。單次劑量亦可每月投與一次。
本發明化合物之其他治療有效量係每劑量約20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或約100 mg。
本發明化合物之給藥頻率將由個別患者之需求確定，且可為例如每日一次或每日兩次或更多次。化合物之投與持續治療病毒感染所必需的時長。舉例而言，可向感染病毒之人類投與化合物持續20天至180天之時間段，或例如20天至90天之時間段，或例如30天至60天之時間段。
投與可為間歇性的，其中在數天或更多天之時段期間患者接受日劑量之本發明化合物，接著在數天或更多天之時段期間患者不接受日劑量之化合物。舉例而言，患者可每隔一天或每週三次接受一劑量之化合物。再次藉助於實例，患者可每天接受一劑量之化合物持續1至14天之時段，隨後在7至21天之時段期間患者不接受一劑量之化合物，隨後在後續時段(例如，1至14天)期間患者再次接受日劑量之化合物。可視治療患者之臨床需要來重複交替時段之化合物投與，繼而化合物不投與。
在一個實施例中，提供醫藥組合物，其包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種(例如，一種、兩種、三種、四種、一或兩種、一至三種或一至四種)額外治療劑的組合，及醫藥學上可接受之賦形劑。
在一個實施例中，提供套組，其包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種(例如一種、兩種、三種、四種、一或兩種、一至三種或一至四種)額外治療劑的組合。
在一些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一種、兩種、三種、四種或更多種額外治療劑組合。在一些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與兩種額外治療劑組合。在其他實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與三種額外治療劑組合。在其他實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與四種額外治療劑組合。一種、兩種、三種、四種或更多種額外治療劑可為選自相同類別之治療劑的不同治療劑及/或其可選自不同類別之治療劑。
在一些實施例中，當本發明之化合物與如本文所述之一或多種額外治療劑組合時，組合物之組分按同時或依序方案投與。當依序投與時，該組合可以兩次或更多次投與形式投與。
在一些實施例中，本發明之化合物與一或多種額外治療劑以單一劑型組合以用於同時向患者投與，例如呈用於經口投與之固體劑型。
在一些實施例中，本發明之化合物與一或多種額外治療劑共同投與。
為延長本發明化合物之作用，通常需要減慢化合物自皮下或肌肉內注射吸收。此可藉由使用具有不良水溶性之結晶或非晶形材料之液體懸浮液來達成。則化合物之吸收率視其溶解率而定，溶解率又可視晶體尺寸及結晶形態而定。或者，藉由將化合物溶解或懸浮於油媒劑中來實現非經腸投與之化合物之延遲吸收。藉由在諸如聚丙交酯-聚乙交酯之生物可降解聚合物中形成化合物之微膠囊基劑來製造可注射積存形式。視化合物與聚合物之比率及所使用之特定聚合物的性質而定，可控制化合物釋放速率。其他可生物降解之聚合物的實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。亦藉由將化合物包覆於與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備儲槽式可注射調配物。
VI. 組合療法
本文所提供之式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合用於治療病毒感染，諸如肺病毒科、小核糖核酸病毒科、黃病毒科或絲狀病毒科病毒感染。
用於治療肺病毒科之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療肺病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗肺病毒科病毒感染，尤其呼吸道融合性病毒感染及/或間質肺炎病毒感染之活性。具有抗RSV活性的此等其他活性治療劑之非限制性實例為利巴韋林、帕利珠單抗、莫維珠單抗(motavizumab)、RSV-IGIV (RespiGam
®)、MEDI-557、A-60444 (亦稱作RSV604)、MDT-637、BMS-433771、ALN-RSV0、ALX-0171及其混合物。具有抗呼吸道融合性病毒感染活性的其他活性治療劑之其他非限制性實例包括呼吸道融合性病毒蛋白F抑制劑，諸如AK-0529、RV-521、ALX-0171、JNJ-53718678、BTA-585及普沙托韋(presatovir)；RNA聚合酶抑制劑，諸如盧米西他濱(lumicitabine)及ALS-8112；抗RSV G蛋白抗體，諸如抗G蛋白mAb；病毒複製抑制劑，諸如硝唑沙奈(nitazoxanide)。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防RSV之疫苗，包括(但不限於) MVA-BN RSV、RSV-F、MEDI-8897、JNJ-64400141、DPX-RSV、SynGEM、GSK-3389245A、GSK-300389-1A、RSV-MEDI δM2-2疫苗、VRC-RSVRGP084-00VP、Ad35-RSV-FA2、Ad26-RSV-FA2及RSV融合醣蛋白次單元疫苗。
具有抗間質肺炎病毒感染活性的其他活性治療劑之非限制性實例包括唾液酸酶調節劑，諸如DAS-181；RNA聚合酶抑制劑，諸如ALS-8112；及用於治療間質肺炎病毒感染之抗體，諸如EV-046113。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防間質肺炎病毒感染之疫苗，包括(但不限於) mRNA-1653及rHMPV-Pa疫苗。
用於治療小核糖核酸病毒科之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療小核糖核酸病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗小核糖核酸病毒科病毒感染，尤其腸病毒(Enterovirus)感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為衣殼結合抑制劑，諸如普來可那立(pleconaril)、BTA-798 (伐彭達韋(vapendavir))以及Wu等人(US 7,078,403)及Watson (US 7,166,604)所揭示之其他化合物；融合唾液酸酶蛋白，諸如DAS-181；衣殼蛋白VP1抑制劑，諸如VVX-003及AZN-001；病毒蛋白酶抑制劑，諸如CW-33；磷脂酸肌醇4激酶β抑制劑，諸如GSK-480及GSK-533；抗EV71抗體。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防小核糖核酸病毒科病毒感染之疫苗，包括(但不限於) EV71疫苗、TAK-021及基於EV-D68腺病毒載體之疫苗。
用於呼吸道感染之組合療法
許多肺病毒科及小核糖核酸病毒科病毒感染為呼吸道感染。因此，用於治療呼吸道症狀及感染後遺症之額外活性治療劑可與本文所提供之化合物組合使用。該等額外藥劑較佳經口投與或藉由直接吸入投與。舉例而言，與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染的其他較佳額外治療劑包括(但不限於)支氣管擴張劑及皮質類固醇。
糖皮質素
在1950年作為哮喘療法首次引入(Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950)的糖皮質素對於此疾病而言一直為最強效且始終有效的療法，但其作用機制尚不完全清楚(Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985)。令人遺憾的係，口服糖皮質素療法引起深遠的非所需副作用，諸如軀幹性肥胖、高血壓、青光眼、葡萄糖不耐、白內障形成加速、骨礦流失及心理影響，其皆限制口服糖皮質素療法用作長期治療劑(Goodman及Gilman, 第10版, 2001)。針對全身性副作用之解決方案係將類固醇藥物直接遞送至炎症部位。已研發出吸入型皮質類固醇(ICS)來減輕口服類固醇之嚴重不良作用。可與本文所提供之化合物組合使用的皮質類固醇之非限制性實例為***(dexamethasone)、***磷酸鈉、氟米龍(fluorometholone)、乙酸氟米龍、氯替潑諾(loteprednol)、依碳氯替潑諾(loteprednol etabonate)、氫化可的松(hydrocortisone)、潑尼松龍(prednisolone)、氟氫可的松(fludrocortisone)、曲安西龍(triamcinolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、倍他米松(betamethasone)、丙酸倍氯米松(beclomethasone diproprionate)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)、氟輕松(fluocinolone)、乙酸氟輕松(fluocinolone acetonide)、氟尼縮松(flunisolide)、氟可丁-21-丁酯(fluocortin-21-butylate)、氟米松(flumethasone)、特戊酸氟米松(flumetasone pivalate)、布***(budesonide)、丙酸鹵倍他松(halobetasol propionate)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、氟替卡松(fluticasone)、AZD-7594、環索奈德(ciclesonide)；或其醫藥學上可接受之鹽。
抗發炎劑
經由抗發炎級聯機制起作用的其他抗發炎劑亦適用作與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染的額外治療劑。應用「抗發炎信號轉導調節劑」(在本文中稱為AISTM)，如磷酸二酯酶抑制劑(例如，PDE-4、PDE-5或PDE-7特異性抑制劑)、轉錄因子抑制劑(例如，經由IKK抑制阻斷NFκB)或激酶抑制劑(例如，阻斷P38 MAP、JNK、PI3K、EGFR或Syk)，係一種切斷炎症的邏輯方法，因為此等小分子靶向有限數目個共同細胞內路徑(作為抗發炎治療性干預之關鍵點的彼等信號轉導路徑) (綜述參見P.J. Barnes, 2006)。此等非限制性額外治療劑包括：5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-異丁基-1H-吲唑-6-甲酸(2-二甲基胺基-乙基)-醯胺(P38 Map激酶抑制劑ARRY-797)；3-環丙基甲氧基-N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-4-二氟甲氧基-苯甲醯胺(PDE-4抑制劑羅氟司特(Roflumilast))；4-[2-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-乙基]-吡啶(PDE-4抑制劑CDP-840)；N-(3,5-二氯-4-吡啶基)-4-(二氟甲氧基)-8-[(甲基磺醯基)胺基]-1-二苯并呋喃甲醯胺(PDE-4抑制劑奧利司特(Oglemilast))；N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苯甲基)-5-羥基-1H-吲哚-3-基]-2-側氧基-乙醯胺(PDE-4抑制劑AWD 12-281)；8-甲氧基-2-三氟甲基-喹啉-5-甲酸(3,5-二氯-1-氧基-吡啶-4-基)-醯胺(PDE-4抑制劑Sch 351591)；4-[5-(4-氟苯基)-2-(4-甲亞磺醯基-苯基)-1H-咪唑-4-基]-吡啶(P38抑制劑SB-203850)；4-[4-(4-氟-苯基)-1-(3-苯基-丙基)-5-吡啶-4-基-1H-咪唑-2-基]-丁-3-炔-1-醇(P38抑制劑RWJ-67657)；4-氰基-4-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-環己烷甲酸2-二乙基胺基-乙酯(西洛司特(Cilomilast)之2-二乙基-乙酯前藥，PDE-4抑制劑)；(3-氯-4-氟苯基)-[7-甲氧基-6-(3-嗎啉-4-基-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-胺(吉非替尼(Gefitinib)，EGFR抑制劑)；及4-(4-甲基-哌𠯤-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基胺基)-苯基]-苯甲醯胺(伊馬替尼(Imatinib)，EGFR抑制劑)。
β2- 腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑
包含吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑(諸如福莫特羅(formoterol)、沙丁胺醇(albuterol)或沙美特羅(salmeterol))與本文所提供化合物之組合亦為適用於治療呼吸道病毒感染之適合(但非限制性)組合。
吸入型β2-腎上腺素受體促效劑支氣管擴張劑(諸如福莫特羅或沙美特羅)與ICS之組合亦用於治療支氣管收縮及發炎(分別為Symbicort®及Advair®)。包含此等ICS及β2-腎上腺素受體促效劑組合以及本文所提供化合物之組合亦為適用於治療呼吸道病毒感染之適合(但非限制性)組合。
β2腎上腺素受體促效劑之其他實例為貝多拉君(bedoradrine)、維蘭特羅(vilanterol)、茚達特羅(indacaterol)、奧達特羅(olodaterol)、妥洛特羅(tulobuterol)、福莫特羅、阿貝特羅(abediterol)、沙丁胺醇、阿福特羅(arformoterol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、非諾特羅(fenoterol)及TD-5471。
抗膽鹼劑
對於治療或預防肺部支氣管收縮，抗膽鹼劑具有潛在效用，且因此適用作與本文所提供之化合物組合用於治療病毒性呼吸道感染之額外治療劑。此等抗膽鹼劑包括(但不限於)蕈毒鹼受體(尤其M3亞型)之拮抗劑，其在人類中展現出控制COPD之膽鹼能基調(cholinergic tone)的治療功效(Witek, 1999)；1-{4-羥基-1-[3,3,3-參-(4-氟-苯基)-丙醯基]-吡咯啶-2-羰基}-吡咯啶-2-甲酸(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-醯胺；3-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-8-異丙基-8-甲基-8-氮鎓-雙環[3.2.1]辛烷(異丙托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Ipratropium-N,N-diethylglycinate))；1-環己基-3,4-二氫-1H-異喹啉-2-甲酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯(索利那新(Solifenacin))；2-羥甲基-4-甲亞磺醯基-2-苯基-丁酸1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基酯(瑞伐托酯(Revatropate))；2-{1-[2-(2,3-二氫-苯并呋喃-5-基)-乙基]-吡咯啶-3-基}-2,2-二苯基-乙醯胺(達非那新(Darifenacin))；4-氮雜環庚烷-1-基-2,2-二苯基-丁醯胺(甲碘布卓(Buzepide))；7-[3-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2-苯基-丙醯氧基]-9-乙基-9-甲基-3-氧雜-9-氮鎓-三環[3.3.1.02,4]壬烷(氧托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Oxitropium-N,N-diethylglycinate))；7-[2-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-9,9-二甲基-3-氧雜-9-氮鎓-三環[3.3.1.02,4]壬烷(噻托銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Tiotropium-N,N-dimethylglycinate))；二甲基胺基-乙酸2-(3-二異丙基胺基-1-苯基-丙基)-4-甲基-苯酯(托特羅定-N,N-二甲基甘胺酸酯(Tolterodine-N,N-dimethylglycinate))；3-[4,4-雙-(4-氟-苯基)-2-側氧基-咪唑啶-1-基]-1-甲基-1-(2-側氧基-2-吡啶-2-基-乙基)-吡咯啶鎓；1-[1-(3-氟-苯甲基)-哌啶-4-基]-4,4-雙-(4-氟-苯基)-咪唑啶-2-酮；1-環辛基-3-(3-甲氧基-1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基)-1-苯基-丙-2-炔-1-醇；3-[2-(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙醯氧基]-1-(3-苯氧基-丙基)-1-氮鎓-雙環[2.2.2]辛烷(阿地溴銨-N,N-二乙基甘胺酸酯(Aclidinium-N,N-diethylglycinate))；或(2-二乙基胺基-乙醯氧基)-二-噻吩-2-基-乙酸1-甲基-1-(2-苯氧基-乙基)-哌啶-4-基酯；瑞芬那新(revefenacin)、格隆溴銨(glycopyrronium bromide)、蕪地溴銨(umeclidinium bromide)、噻托溴銨(tiotropium bromide)、阿地溴銨(aclidinium bromide)、苯環喹溴銨(bencycloquidium bromide)。
黏液溶解劑
本文所提供之化合物及本文所提供之組合物亦可與黏液溶解劑組合以治療呼吸道感染之感染及症狀兩者。黏液溶解劑之非限制性實例為胺溴素(ambroxol)。類似地，式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物可與祛痰劑組合以治療呼吸道感染之感染及症狀兩者。除痰劑之非限制性實例為愈創甘油醚(guaifenesin)。
霧化的高滲鹽水用於改善患有肺病之患者體內小氣道之即時及長期清理(Kuzik,
J. Pediatrics2007, 266)。因此，尤其當肺病毒科病毒感染併發有細支氣管炎時，本文所提供之化合物亦可與霧化的高滲鹽水組合。式(I)或式(II)之化合物與高滲鹽水之組合亦可包含上文所論述之額外藥劑中之任一者。在一個實施例中，使用霧化的約3%高滲鹽水。
用於治療COPD之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療COPD之呼吸道惡化，其他活性治療劑包括具有抗COPD活性的其他活性治療劑。此等其他活性治療劑之非限制性實例包括抗IL5抗體，諸如苯拉組單抗(benralizumab)、美泊珠單抗(mepolizumab)；二肽基肽酶I (DPP1)抑制劑，諸如AZD-7986 (INS-1007)；DNA回旋酶抑制劑/拓樸異構酶IV抑制劑，諸如鹽酸環丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride)；MDR相關蛋白4/磷酸二酯酶(PDE) 3及4抑制劑，諸如RPL-554；CFTR刺激劑，諸如艾伐卡托(ivacaftor)、QBW-251；MMP-9/MMP-12抑制劑，諸如RBx-10017609；腺苷A1受體拮抗劑，諸如PBF-680；GATA 3轉錄因子抑制劑，諸如SB-010；蕈毒鹼受體調節劑/菸鹼性乙醯膽鹼受體促效劑，諸如ASM-024；MARCKS蛋白抑制劑，諸如BIO-11006；kit酪胺酸激酶/PDGF抑制劑，諸如馬賽替尼(masitinib)；磷酸二酯酶(PDE) 4抑制劑，諸如羅氟司特(roflumilast)、CHF-6001；磷酸肌醇-3激酶δ抑制劑，諸如奈米利塞(nemiralisib)；5-脂肪加氧酶抑制劑，諸如TA-270；蕈毒鹼受體拮抗劑/β 2腎上腺素受體促效劑，諸如琥珀酸巴芬特羅(batefenterol succinate)、AZD-887、異丙托溴銨(ipratropium bromide)；TRN-157；彈性蛋白酶抑制劑，諸如厄多司坦(erdosteine)；金屬蛋白酶-12抑制劑，諸如FP-025；介白素18配體抑制劑，諸如他德介白素α (tadekinig alfa)；骨骼肌鈣蛋白活化劑，諸如CK-2127107；p38 MAP激酶抑制劑，諸如阿庫馬莫德(acumapimod)；IL-17受體調節劑，諸如CNTO-6785；CXCR2趨化激素拮抗劑，諸如達尼立辛(danirixin)；白血球彈性蛋白酶抑制劑，諸如POL-6014；環氧化物水解酶抑制劑，諸如GSK-2256294；HNE抑制劑，諸如CHF-6333；VIP促效劑，諸如阿肽地爾(aviptadil)；磷酸肌醇-3激酶δ/γ抑制劑，諸如RV-1729；補體C3抑制劑，諸如APL-1；及G蛋白偶聯受體-44拮抗劑，諸如AM-211。
活性治療劑之其他非限制性實例亦包括布***、阿地普塞(adipocell)、一氧化氮、PUR-1800、YLP-001、LT-4001、阿奇黴素(azithromycin)、伽木奈克(gamunex)、QBKPN、丙酮酸鈉、MUL-1867、甘露糖醇、MV-130、MEDI-3506、BI-443651、VR-096、OPK-0018、TEV-48107、多索茶鹼(doxofylline)、TEV-46017、OligoG-COPD-5/20、Stempeucel®、ZP-051、離胺酸乙醯水楊酸。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為具有抗COPD活性的疫苗，包括(但不限於) MV-130及GSK-2838497A。
用於治療登革熱之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療黃病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗黃病毒科病毒感染，尤其登革熱感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為宿主細胞因子調節劑，諸如GBV-006；芬維A胺(fenretinide) ABX-220、BRM-211；α-葡萄糖苷酶1抑制劑，諸如西戈斯韋(celgosivir)；血小板活化因子受體(PAFR)拮抗劑，諸如莫地帕泛(modipafant)；鈣黏蛋白-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；NS4B抑制劑，諸如JNJ-8359；病毒RNA剪接調節劑，諸如ABX-202；NS5聚合酶抑制劑；NS3蛋白酶抑制劑；及TLR調節劑。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防登革熱之疫苗，包括(但不限於) TetraVax-DV、Dengvaxia ®、DPIV-001、TAK-003、減毒活登革熱疫苗、四價登革熱疫苗、四價DNA疫苗、rDEN2δ30-7169及DENV-1 PIV。
用於治療伊波拉之組合療法
本文所提供之化合物及組合物亦與其他活性治療劑組合使用。對於治療絲狀病毒科病毒感染，其他活性治療劑較佳具有抗絲狀病毒科病毒感染，尤其馬堡病毒(Marburg virus)、伊波拉病毒及奎瓦病毒(Cueva virus)感染之活性。此等其他活性治療劑之非限制性實例為：利巴韋林、帕利珠單抗、莫維珠單抗、RSV-IGIV (RespiGam
®)、MEDI-557、A-60444、MDT-637、BMS-433771、胺碘酮(amiodarone)、屈奈達隆(dronedarone)、維拉帕米(verapamil)、伊波拉康復者血漿(Ebola Convalescent Plasma；ECP)、TKM-100201、BCX4430 ((2S,3S,4R,5R)-2-(4-胺基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羥甲基)吡咯啶-3,4-二醇)、TKM-Ebola、T-705單磷酸酯、T-705二磷酸酯、T-705三磷酸酯、FGI-106 (1-N,7-N-雙[3-(二甲基胺基)丙基]-3,9-二甲基喹啉并[8,7-h]喹啉酮-1,7-二胺)、rNAPc2、OS-2966、布林西多福韋(brincidofovir)、瑞德西韋(remdesivir)；RNA聚合酶抑制劑，諸如加利司韋(galidesivir)、法維拉韋(favipiravir) (亦被稱作T-705或Avigan)、JK-05；宿主細胞因子調節劑，諸如GMV-006；鈣黏蛋白-5/因子Ia調節劑，諸如FX-06；及用於治療伊波拉之抗體，諸如REGN-3470-3471-3479及ZMapp。
具有抗伊波拉活性的其他非限制性活性治療劑包括α-葡萄糖苷酶1抑制劑、組織蛋白酶B抑制劑、CD29拮抗劑、樹突狀ICAM-3撰取非整合素1抑制劑、***受體拮抗劑、因子VII拮抗劑HLA II類抗原調節劑、宿主細胞因子調節劑、干擾素α配體、中性α葡萄糖苷酶AB抑制劑、尼曼-匹克C1蛋白(niemann-Pick C1 protein)抑制劑、核蛋白抑制劑、聚合酶輔因子VP35抑制劑、絲胺酸蛋白酶抑制劑、組織因子抑制劑、TLR-3促效劑、病毒套膜醣蛋白抑制劑及伊波拉病毒進入抑制劑(NPC1抑制劑)。
在一些實施例中，其他活性治療劑可為用於治療或預防伊波拉之疫苗，包括(但不限於) VRC-EBOADC076-00-VP、基於腺病毒之伊波拉疫苗、rVSV-EBOV、rVSVN4CT1-EBOVGP、MVA-BN Filo + Ad26-ZEBOV方案、INO-4212、VRC-EBODNA023-00-VP、VRC-EBOADC069-00-VP、GamEvac-combi疫苗、SRC VB載體、HPIV3/EboGP疫苗、MVA-EBOZ、伊波拉重組醣蛋白疫苗、基於Vaxart腺病毒載體5之伊波拉疫苗、FiloVax疫苗、GOVX-E301及GOVX-E302。
本文所提供之化合物及組合物亦可與胺基磷酸酯嗎啉代寡聚物(PMO)組合使用，該等胺基磷酸酯嗎啉代寡聚物係經設計以藉由與特定RNA序列形成鹼基對雙螺旋體而干擾轉譯過程的合成反義寡核苷酸類似物。PMO之實例包括(但不限於) AVI-7287、AVI-7288、AVI-7537、AVI-7539、AVI-6002及AVI-6003。
本文所提供之化合物及組合物亦意欲與向患有絲狀病毒科病毒感染之患者提供之一般護理一起使用，包括非經腸流體(包括右旋糖鹽水及林格氏乳酸鹽)及營養物、抗生素(包括甲硝噠唑(metronidazole)及頭孢菌素抗生素，諸如頭孢曲松(ceftriaxone)及頭孢呋辛(cefuroxime))及/或抗真菌預防物、發熱及止痛藥、抗嘔劑(諸如甲氧氯普胺(metoclopramide))及/或止瀉劑、維生素及礦物質補充劑(包括維生素K及硫酸鋅)、抗發炎劑(諸如布洛芬(ibuprofen))、疼痛藥物及用於患者群體中之其他常見疾病的藥物，諸如抗瘧疾劑(包括蒿甲醚及青蒿琥酯-苯茀醇組合療法)、傷寒(包括喹啉酮抗生素(諸如環丙沙星)、巨環內酯抗生素(諸如阿奇黴素)、頭孢菌素抗生素(諸如頭孢曲松)或胺基青黴素(諸如胺苄西林(ampicillin)))或志賀桿菌病(shigellosis)。
VII. 治療病毒感染之方法
本發明提供使用式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)之化合物來治療多種疾病，諸如呼吸道融合性病毒(RSV)、伊波拉、茲卡、西尼羅、登革熱及HCV之方法。
副黏液病毒科(
Paramyxoviridae)
在一些實施例中，本發明提供用於治療副黏液病毒科感染之方法，其包含向感染副黏液病毒科病毒之個體(例如人類)投與治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。副黏液病毒科病毒包括(但不限於)立百病毒(Nipah virus)及副流感病毒。
肺病毒科(
Pneumoviridae)
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之肺病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。肺病毒科病毒包括(但不限於)呼吸道融合性病毒及人類間質肺炎病毒。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之肺病毒科病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。在一些實施例中，肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供用於治療RSV感染之方法，其包含向感染呼吸道融合性病毒之個體(例如人類)投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。通常，個體患有慢性呼吸道融合性病毒感染，但治療急性感染RSV之人係在本發明之範疇內。
在一些實施例中，提供一種抑制RSV複製之方法，其包含向個體(例如人類)投與本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，本發明提供一種降低與RSV感染相關之病毒負荷的方法，其中該方法包含向感染RSV之個體(例如人類)投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該治療有效量足以降低個體中之RSV病毒負荷。
如本文更充分描述，本發明化合物可與一或多種額外治療劑一起向感染RSV之個體(例如人類)投與。額外治療劑可與本發明化合物同時或在投與本發明化合物之前或之後向經感染個體(例如人類)投與。
在一些實施例中，提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防RSV感染。在一些實施例中，提供本發明化合物(例如式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ij)、(Ik)、(Im)或(In)化合物)或其醫藥學上可接受之鹽，其用於製造供治療或預防RSV感染所用之藥劑。
如本文更充分描述，本發明化合物可與一或多種額外治療劑一起向感染RSV之個體(例如人類)投與。此外，在一些實施例中，當用於治療或預防RSV時，本發明化合物可與一或多種(例如一種、兩種、三種、四種或多於四種)選自由以下組成之群的額外治療劑一起投與：RSV組合藥物、RSV疫苗、RSV DNA聚合酶抑制劑、免疫調節劑、鐸樣受體(TLR)調節劑、干擾素α受體配體、玻尿酸酶抑制劑、呼吸道融合性表面抗原抑制劑、細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4 (ipi4)抑制劑、親環蛋白抑制劑、RSV病毒進入抑制劑、靶向病毒mRNA之反義寡核苷酸、短干擾RNA (siRNA)及ddRNAi、核酸內切酶調節劑、核糖核苷酸還原酶抑制劑、RSV E抗原抑制劑、共價閉合環狀DNA (cccDNA)抑制劑、法尼醇X受體(farnesoid X receptor)促效劑、RSV抗體、CCR2趨化激素拮抗劑、胸腺素促效劑、細胞介素、核蛋白調節劑、視黃酸誘導性基因1刺激劑、NOD2刺激劑、磷脂酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑、吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)路徑抑制劑、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、重組胸腺素α-1、布魯頓氏酪胺酸激酶(bruton's tyrosine kinase；BTK)抑制劑、KDM抑制劑、RSV複製抑制劑、精胺酸酶抑制劑及其他RSV藥物。
小核糖核酸病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。小核糖核酸病毒科病毒為引起異質感染群之腸病毒，該等感染包括疱疹性咽峽炎、無菌性腦膜炎、普通感冒樣症候群(人類鼻病毒感染)、無麻痹性脊髓灰白質炎樣症候群、流行性肋肌痛(一般在流行病中出現的急性、發熱性、感染性疾病)、手足口症候群、兒童及成人胰臟炎及嚴重心肌炎。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之小核糖核酸病毒科病毒感染。在一些實施例中，小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
黃病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之黃病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。代表性黃病毒科病毒包括(但不限於)登革熱病毒、黃熱病病毒、西尼羅病毒、茲卡病毒、日本腦炎病毒及C型肝炎病毒(HCV)。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為日本腦炎病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之黃病毒科病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。在一些實施例中，黃病毒科病毒感染為C型肝炎病毒感染。
絲狀病毒科
在一些實施例中，本發明提供一種治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。代表性絲狀病毒科病毒包括(但不限於)伊波拉病毒及馬堡病毒。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染所用的藥劑。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療有需要人類之絲狀病毒科病毒感染。在一些實施例中，絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
VIII. 治療或預防由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法
式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIm)或(IIn)之化合物亦可用於治療或預防有需要人類之病毒感染的呼吸道病況之惡化。
在一些實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的方法，該方法包含向該人類投與治療有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製造供治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑的方法，其特徵在於使用本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供一種本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化所用的藥劑，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
在一些實施例中，本發明提供本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防有需要人類之由病毒感染引起的呼吸道病況之惡化，其中該呼吸道病況為哮喘。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒、腸病毒或間質肺炎病毒引起。
IX. 實例
縮寫 .使用某些縮寫及頭字語描述實驗細節。儘管大部分縮寫及頭字語為熟習此項技術者理解，但表2含有許多此等縮寫及頭字語之清單。
表2. 縮寫及頭字語之清單.
| 縮寫 | 含義 |
| Ac | 乙酸鹽 |
| ACN | 乙腈 |
| AIBN | 偶氮二異丁腈 |
| Bn | 苯甲基 |
| Bu | 丁基 |
| Bz | 苯甲醯基 |
| BzCl | 苯甲醯氯 |
| CDI | 1,1'-羰基二咪唑 |
| DAST | 三氟化二乙基胺基硫 |
| DBU | 1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯 |
| DCE | 1,2-二氯乙烷 |
| DCM | 二氯甲烷 |
| DIC | N,N'-二異丙基碳化二亞胺 |
| DIPEA | N,N-二異丙基乙胺 |
| DMAP | 4-二甲基胺基吡啶 |
| DMDO | 二甲基二氧環丙烷 |
| DMSO | 二甲亞碸 |
| DMF | 二甲基甲醯胺 |
| DMTrCl | 4,4'-二甲氧基三苯甲基氯 |
| DMTr | 4,4'-二甲氧基三苯甲基 |
| EDCI | N-(3-二甲基胺基丙基)- N′-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽 |
| Et | 乙基 |
| EtOAc | 乙酸乙酯 |
| Imid | 咪唑 |
| KOtBu | 三級丁醇鉀 |
| LC | 液相層析法 |
| MCPBA | 間氯過苯甲酸 |
| Me | 甲基 |
| m/z | 質荷比 |
| MS或ms | 質譜 |
| NIS | N-碘丁二醯亞胺 |
| NMP | N-甲基-2-吡咯啶酮 |
| Ph | 苯基 |
| Ph 3P | 三苯膦 |
| PMB | 對甲氧基苯甲基 |
| PMBCl | 對甲氧基苯甲基氯 |
| PhOC(S)Cl | 氯硫代甲酸苯酯 |
| (PhO) 3PMeI | 碘化甲基三苯氧基鏻 |
| Pyr | 吡啶 |
| RT | 室溫 |
| SFC | 超臨界流體層析法 |
| TBAF | 氟化四丁銨 |
| TBME | 三級丁基甲基醚 |
| TBS | 三級丁基二甲基矽基 |
| TBSCl | 氯化三級丁基二甲基矽烷 |
| TMSN 3 | 疊氮化三甲基矽烷 |
| TEA | 三乙胺 |
| TES | 三乙基矽烷 |
| TFA | 三氟乙酸 |
| THF | 四氫呋喃 |
| TMS | 三甲基矽基 |
| TMSCl | 氯化三甲基矽烷 |
| t R | 滯留時間 |
| Ts | 4-甲苯磺醯基 |
| TsOH | 對甲苯磺酸 |
| δ | 參考殘餘非氘化溶劑峰之百萬分率 |
化合物可經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，含0.1% TFA之30-70%乙腈/水梯度)。一些化合物在此製備型HPLC製程之後以TFA鹽獲得。
使用「P
a」或「P
b」命名之化合物結構係指其中未指定彼位置之特定立體化學的(R)-異構體或(S)-異構體。
A. 中間物中間物1. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-3,4-二羥基-2-(羥甲基)四氫呋喃-2-甲腈
產物可根據WO2015/069939製備。舉例而言，WO2015/069939之第43至54頁提供用於製備化合物(在WO2015/069939中標識為化合物1)之方法。
中間物2. (7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-氰基-6-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-4-基)胺基甲酸三級丁酯
使含WO2015/069939之化合物14j (21.79 g，39.93 mmol)之THF (400 mL)在冰浴中冷卻。一次性添加含1.0 M TBAF之THF (50.0 mL，50.0 mmol)。使混合物達到環境溫度且攪拌約30 min。藉由LCMS判定反應完成。反應混合物用水淬滅且減壓移除有機物。將粗產物分配於EtOAc與水之間。分離各層且用EtOAc洗滌水層。合併有機相，且經硫酸鈉乾燥。濾出固體且減壓移除溶劑。粗產物藉由矽膠層析(330 g管柱，30-100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。MS
m/z= 431.74 [M+1]。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.03 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.77 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.27 (dd, J = 6.7, 4.1 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.66 (dd, J = 6.1, 2.4 Hz, 2H), 1.62 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.33 (s, 3H)。
中間物3. (3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(((三級丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]間二氧雜環戊烯-4-甲腈
產物可根據WO2015/069939製備。舉例而言，WO2015/069939之第127至138頁提供用於製備化合物(在WO2015/069939中標識為化合物14k)之方法。
中間物4. (3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]間二氧雜環戊烯-4-甲腈
將中間物3 (8.41 g，18.87 mmol)溶解於THF (100 mL)中。在環境溫度下一次性添加含1.0 M TBAF之THF (28.31 mL，28.31 mmol)。在環境溫度下攪拌10 min。藉由LCMS判定反應完成。反應混合物用水淬滅且減壓移除有機物。將粗產物分配於EtOAc與水之間。分離各層且用EtOAc洗滌水層。合併有機相，且經硫酸鈉乾燥。濾出固體且減壓移除溶劑。粗產物藉由矽膠層析(120 g管柱，0-10% CH
3OH/CH
2Cl
2)純化，得到產物。LC/MS：t
R= 0.76 min，MS
m/z= 332.14 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 7.87-7.80 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5Hz, 1H), 6.82 (d, J = 4.5Hz, 1H), 5.74 (t,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.52 (d,
J= 4.2 Hz, 1H), 5.24 (dd,
J= 6.8, 4.2 Hz, 1H), 4.92 (d,
J= 6.8 Hz, 1H), 3.65 (dd,
J= 6.1, 1.7 Hz, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.33 (s, 3H)。
中間物5. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-(((三級丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-甲腈
將中間物1 (2 g，6.18 mmol)溶解於50 mL DMF中，向該溶液中添加三級丁基氯二甲基矽烷(1 g，7 mmol)及咪唑(1.26 g，19 mmol)。在RT下攪拌所得混合物2 h，且反應物用EtOAc稀釋，用NH
4Cl溶液洗滌，蒸發有機溶劑，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% EtOAc/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 406.36 [M+1]，t
R= 1.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.25 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
中間物6. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-(((三級丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
將中間物5 (1.8 g，4.44 mmol)溶解於15 mL THF中，向該溶液中添加異丁酸酐(1.54 g，9.8 mmol)及DMAP (179 mg，1.45 mmol)。在RT下攪拌所得混合物5 min，且反應物用MeOH淬滅且接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經Na
2SO
4乾燥且真空蒸發。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% EtOAc/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 546.16 [M+1]，t
R= 1.92 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.88 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
中間物7. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在100 mL塑膠瓶中將中間物6 (3.2 g，5.86 mmol)溶解於25 mL THF中，向該溶液中添加HF-吡啶(10 g，0.35 mmol)。在RT下攪拌所得混合物3 h，且反應物用NaHCO
3淬滅且接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經Na
2SO
4乾燥且真空蒸發。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% EtOAc/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 6.83 - 6.74 (m, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.84 - 5.74 (m, 2H), 5.62 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 3.94 (dd, J = 12.2, 5.0 Hz, 1H), 3.87 (dd, J = 12.2, 8.4 Hz, 1H), 2.70 (七重峰, J = 7.0 Hz, 1H), 2.56 (七重峰, J = 7.0 Hz, 1H), 1.28 - 1.17 (m, 6H), 1.12 (dd, J = 15.1, 7.0 Hz, 6H)。LCMS：MS
m/z= 432.24 [M+1]，t
R= 1.47 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.74 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
中間物8. L-丙胺酸環戊酯HCl鹽
向(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(3.95 g，20.9 mmol)、環戊醇(1.5 g，17.4 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (3.5 g，22.6 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，3.2 g，26.1 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，且接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物，將其溶解於10 mL DCM中，向該溶液中添加含4 N HCl之二㗁烷(3 mL)。在RT下攪拌反應混合物30 min，接著蒸發溶劑，且殘餘物經高真空乾燥，得到粗產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.75 - 8.42 (m, 2H), 5.20 (tt, J = 5.6, 2.5 Hz, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 1H), 1.87 - 1.58 (m, 8H), 1.54 (dd, J = 12.6, 7.2 Hz, 3H)。
中間物9. L-丙胺酸環丙酯HCl鹽
向(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(5.86 g，31 mmol)、環丙醇(1.5 g，25.8 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (5.2 g，33.6 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，4.7 g，38.7 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，且接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到中間物，將其溶解於10 mL DCM中，向該溶液中添加含4 N HCl之二㗁烷(3 mL)。在RT下攪拌反應混合物30 min，接著蒸發溶劑，且殘餘物經高真空乾燥，得到粗產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.68 (s, 2H), 4.22 (tt, J = 6.3, 3.2 Hz, 1H), 1.68 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 1.42 (s, 1H), 0.86 - 0.69 (m, 2H), 0.70 (dd, J = 7.1, 3.6 Hz, 2H)。
中間物10. 甲縮醛(formacetal) 1及2：1,1-二甲氧基-
N,
N-二甲基甲胺及1-(二甲氧基甲基)-4-甲基哌𠯤
將
N-甲基哌𠯤(1.5 mL，15.93 mmol)及DMF-二甲基縮醛(1 mL，7.50 mmol)之混合物在密封管中在100℃下加熱3天，在60℃下高真空濃縮以移除過量的
N-甲基哌𠯤，且接著用於下一反應中。基於下一反應之產物組成，產物為約1:2比率的甲縮醛1及甲縮醛2混合物。
中間物 11. 2- 胺基丙酸 (S)- 環己酯鹽酸鹽 
向L-丙胺酸(5 g，56.12 mmol)及環己醇(56 g，561 mmol)之混合物中添加TMSCl (20 mL)。所得混合物在約70℃下攪拌約15 h，且在約80℃下真空濃縮，與甲苯共蒸發，溶解於己烷中，且在約室溫下攪拌，在此期間沈澱出固體。藉由過濾收集固體，且濾餅用含5% EtOAc之己烷洗滌若干次，且高真空乾燥約15 h，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.76 (s, 3H), 4.85 (tt,
J= 8.7, 3.8 Hz, 1H), 4.17 (p,
J= 6.5 Hz, 1H), 1.84 (dd, J = 9.9, 5.5 Hz, 2H), 1.70 (d,
J= 7.3 Hz, 5H), 1.57 - 1.42 (m, 3H), 1.32 (ddddd,
J= 20.3, 12.8, 9.9, 6.4, 3.1 Hz, 3H)。
中間物 12. 2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊酸 (S)-2- 乙基丁酯 
將(S)-2-((三級丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酸(1.09 g，4.71 mmol)溶解於乙腈(10 mL)中，且添加2-乙基-1-丁醇(2.88 mL，23.56 mmol)，接著一次性添加EDCI (878 mg，5.66 mmol)及DMAP (863 mg，7.07 mmol)。在室溫下攪拌隔夜。濃縮且用CH
2Cl
2稀釋。藉由矽膠層析(0-40% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.00-3.84 (m, 3H), 1.67-1.22 (m, 17H), 0.91-0.80 (m, 12H)。
中間物 13. 2- 胺基 -4- 甲基戊酸 (S)-2- 乙基丁酯鹽酸鹽 
將2-((三級丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酸(S)-2-乙基丁酯溶解於CH
2Cl
2(10 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(10 mL，40 mmol)中。在環境溫度下攪拌1 h。減壓濃縮且與己烷共蒸發。在高真空下放置1 h，且產物不經純化按原樣用於下一步驟。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 8.43 (s, 3H), 4.08 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.92 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.61 (m, 2H), 1.47 (m, 1H), 1.34 (m, 4H), 0.83 (m, 12H)。
中間物 14. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯 
向Boc-L-丙胺酸(1.26 g，6.66 mmol)、2-苯甲氧基-2-甲基丙醇(1.0 g，5.55 mmol)及EDCI (1.12 g，7.21 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (2.04 g，8.32 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到Boc-L-丙胺酸丙酯，將其溶解於DCM (10 mL)中，且在室溫下添加含4 N HCl之二㗁烷(5.5 mL，22.19 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，真空濃縮，再溶解於ACN (10 mL)中，凍乾隔夜，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.82 (s, 3H), 7.42 - 7.07 (m, 5H), 4.44 (s, 2H), 4.24 (m, 2H), 4.08 (d,
J= 11.2 Hz, 1H), 1.70 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.28 (d,
J= 2.4 Hz, 6H)。LCMS
m/z= 251.97 (游離鹼M +H)，t
R= 0.85 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯 .在-78℃下向L-丙胺酸2-(苯甲氧基)-2-甲基丙酯HCl鹽(832 mg，2.89 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.43 mL，2.89 mmol)，且在-78℃下經5 min逐滴添加三乙胺(0.80 mL，5.76 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃，並且在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(402 mg，2.89 mmol)且經5 min添加三乙胺(0.40 mL，2.89 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物50 min，接著用DCM稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.23 - 8.13 (m, 2H), 7.41 - 7.27 (m, 3H), 7.28 - 7.14 (m, 4H), 4.45 (m, 2H), 4.27 - 4.15 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 1.41 (m, 3H), 1.27 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.10, -3.18。LCMS
m/z= 528.78 (M+H)，t
R= 1.70 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物 15. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環丁基甲酯 
將L-丙胺酸環丁基甲酯-HCl (1.2 g，7.16 mmol)懸浮於亞甲基氯(10 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(1.07 mL，7.16 mmol)。在-78℃下經60 min添加三乙胺(2.0 mL，14.32 mmol)，且在室溫下攪拌所得混合物3 h。將反應混合物冷卻至0℃，且一次性添加4-硝基苯酚(996 mg，7.16 mmol)。接著經60 min添加三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物3 h，過濾，將濾液濃縮至三分之一體積，且再次過濾。濃縮濾液，且殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至35% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.28 - 8.16 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.23 - 4.01 (m, 3H), 3.95 - 3.83 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.98 - 1.80 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.42 (d,
J= 3.2 Hz, 1.5H), 1.40 (d,
J= 3.3 Hz, 1.5H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.06, -3.11。
中間物 16. (( 苯甲氧基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 
在氬氣氛圍下在0℃下，將二氯磷酸4-硝基苯酯(2.00 g，7.81 mmol)及三乙胺(2.18 mL，15.6 mmol)依序添加至L-丙胺酸2-乙基丁酯鹽酸鹽(1.091 g，18.9 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加苯甲醇(0.810 mL，7.81 mmol)及三乙胺(1.09 mL，7.81 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 8.30 - 8.07 (m, 2H), 7.42 - 7.28 (m, 7H), 5.18 - 5.09 (m, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 3.68 (q,
J= 9.4 Hz, 1H), 1.55 - 1.18 (m, 8H), 0.87 (t,
J= 7.4 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 2.32 (s), 2.28 (s)。LCMS：MS
m/z= 463.00 [M-1]，t
R= 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
中間物 17. ((S)-(4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 )( 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2- 乙基丁酯 
如WO 2016/069825中所描述來製備。
中間物 18. ((S)-(4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸異丙酯 
如Cho等人, J. Med. Chem. 2014, 57, 1812-1825中所描述來製備。
中間物 19. ((S)-(4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸乙酯 
如US20120009147A1中所描述來製備。
中間物 20. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸環丙基甲酯 
將L-丙胺酸環丙基甲酯-HCl (1.0 g，5.57 mmol)懸浮於亞甲基氯(10 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.83 mL，5.57 mmol)。在-78℃下經30 min添加含三乙胺(1.54 mL，11.13 mmol)之DCM (1.5 mL)，且攪拌30 min。在-78℃下一次性添加4-硝基苯酚(774 mg，5.57 mmol)。接著經30 min添加含三乙胺(0.77 mL，7.16 mmol)之DCM (2 mL)。接著將混合物在相同溫度下攪拌30 min，用水、飽和Na
2CO
3溶液及鹽水洗滌，且經硫酸鈉乾燥，並且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至20% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.22 (m, 2H), 7.58 - 7.29 (m, 4H), 7.32 - 7.14 (m, 3H), 4.25 - 4.07 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 1.44 (d, J = 2.9 Hz, 1.5H), 1.42 (d, J = 2.9 Hz, 1.5H), 1.26 - 1.01 (m, 1H), 0.66 - 0.49 (m, 2H), 0.42 - 0.15 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.07, -3.11。MS
m/z= 420.97。
中間物 21. 特戊酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 
特戊酸 2- 胺基乙酯鹽酸鹽 .在RT下將特戊醯氯(3.82 mL，31.0 mmol)添加至(2-羥乙基)胺基甲酸三級丁酯(4.8 mL，31.0 mmol)及二異丙基乙胺(5.4 mL，31.0 mmoL)於二氯甲烷(150 mL)中之溶液中。4 h後，所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(150 mL)及鹽水(150 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將粗無色油狀物溶解於含鹽酸之二㗁烷溶液(4 M，50 mL)中，且在RT下攪拌，並且自溶液緩慢沈澱出白色固體。3 h後，藉由真空過濾收集固體，得到產物。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ 4.32 - 4.25 (m, 2H), 3.26 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.23 (s, 9H)。
特戊酸 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向特戊酸2-胺基乙酯鹽酸鹽(0.861 g，4.74 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.705 mL，4.74 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.2 mL，9.4 mmol)。使所得混合物升溫至RT且攪拌1.5 h。接著添加4-硝基苯酚(660 mg，4.74 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(40 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ 8.23 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.18 - 4.06 (m, 2H), 3.45 - 3.31 (m, 2H), 1.17 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, DMSO-d
6) δ -1.48 (s)。MS
m/z= 422.95 [M+1]。
中間物 22. 2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯 
2- 胺基丙酸 (S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯鹽酸鹽 .向L-丙胺酸(500 mg，5.61 mmol)及四氫-2H-哌喃-4-醇(5 g，49.0 mmol)之混合物中添加TMSCl (2 mL)。在70℃下攪拌所得混合物15 h並真空濃縮，且所得固體用含5% EtOAc之己烷濕磨，過濾，且用含5% EtOAc之己烷洗滌若干次，並且高真空乾燥15 h，得到產物，其不經任何表徵即用於下一反應中。
2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙酸 (2S)- 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 酯 .將2-胺基丙酸(S)-四氫-2H-哌喃-4-基酯鹽酸鹽(1.33 g，6.34 mmol)溶解於亞甲基氯(15 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(1.137 mL，7.61 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(2.2 mL，15.2 mmol)，且在-78℃下攪拌所得混合物30 min。接著在-78℃下一次性添加4-硝基苯酚(882 mg，6.34 mmol)且經30 min添加三乙胺(1.1 mL，7.61 mmol)。在-78℃下攪拌混合物30 min，用水洗滌兩次並用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至70% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.06 (m, 7H), 4.95 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 3.52 (m, 2H), 1.95 - 1.81 (m, 2H), 1.64 m, 2H), 1.42 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.09, -3.13。MS
m/z= 451 (M+H)
+。
中間物 23. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將Boc-L-丙胺酸(2.1 g，11 mmol)及(R)-3-羥基-1-甲基吡咯啶(1.1 mL，10 mmol)溶解於無水THF (20 mL)中。一次性添加三苯膦(3.4 g，13 mmol)。逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(2.4 mL，12 mmol)。攪拌反應物2小時。逐滴添加更多偶氮二甲酸二異丙酯(240 μL，1.2 mmol)，且攪拌反應物16小時。反應物用EtOAc (10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌。接著用5%檸檬酸水溶液(30 mL)萃取有機物。用EtOAc (2×5 mL)洗滌檸檬酸萃取物。檸檬酸部分用1 N NaOH水溶液鹼化，得到pH值9，且用EtOAc (2×10 mL)萃取。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且接著減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 5.24 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 2.88 - 2.69 (m, 2H), 2.64 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.29 (m, 1H), 1.96 - 1.80 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (d,
J= 7.2 Hz, 3H)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(S)-1-甲基吡咯啶-3-基酯(545 mg，2 mmol)與10 mL含4 N HCl之二㗁烷混合，並攪拌1小時。減壓濃縮反應物，得到泡沫狀物，接著將其與20 mL無水DCM混合，並且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將二氯磷酸苯酯(298 μL，2 mmol)一次性添加至反應物中。攪拌反應物15 min。將三乙胺(837 μL，6 mmol)逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。將三乙胺(279 μL，2 mmol)逐滴添加至反應物中，且接著攪拌30 min。一次性添加對硝基苯酚(250 mg，1.8 mmol)。攪拌反應混合物16小時。反應物用DCM (20 mL)稀釋且用水(5 × 20 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.28 - 8.15 (m, 2H), 7.46 - 7.28 (m, 4H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 5.17 (m, 1H), 4.21 - 4.04 (m, 1H), 4.01 - 3.85 (m, 1H), 2.81 (m, 1H), 2.70 - 2.55 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 2H), 1.84 - 1.70 (m, 1H), 1.39 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.16, -3.21。LCMS：MS
m/z= 450.3 [M+1]；448.1 [M-1]，t
R= 1.15 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.61 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
中間物 24. ((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將Boc-L-丙胺酸(5.2 g，27.5 mmol)及(R)-3-羥基-1-甲基吡咯啶(2.74 mL，25 mmol)溶解於無水THF (25 mL)中。逐滴添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(4.67 mL，30 mmol)。攪拌反應物2小時。逐滴添加更多N,N'-二異丙基碳化二亞胺(467 μL，3 mmol)，且攪拌反應物2小時。逐滴添加更多N,N'-二異丙基碳化二亞胺(467 μL，3 mmol)，且攪拌反應物16小時。
將反應物用EtOAc (25 mL)稀釋並攪拌10 min。濾出固體且用少量EtOAc洗滌。用飽和碳酸氫鈉水溶液(3×10 mL)洗滌濾液。接著用5%檸檬酸水溶液(50 mL)萃取有機物。用EtOAc (5 mL)洗滌檸檬酸萃取物。檸檬酸部分用1 N NaOH水溶液鹼化，得到pH值9，且接著用EtOAc (3×15 mL)萃取。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且接著減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 5.28 - 5.18 (m, 1H), 5.02 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 2.84 - 2.75 (m, 1H), 2.69 (d,
J= 4.2 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.34 - 2.22 (m, 2H), 1.87 - 1.76 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (d,
J= 7.2 Hz, 3H)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基 酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸(R)-1-甲基吡咯啶-3-基酯(3.9 g，14.3 mmol)與30 mL含4 N HCl之二㗁烷混合，並攪拌3小時。減壓濃縮反應物，得到泡沫狀物，接著將其與30 mL無水DCM混合，並且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將二氯磷酸苯酯(2.34 mL，15.75 mmol)一次性添加至反應物中。攪拌反應物15 min。將三乙胺(4.4 mL，31.5 mmol)與無水DCM (5 mL)混合且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。將三乙胺(2.2 mL，15.75 mmol)與無水DCM (3 mL)混合且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物15 min。一次性添加對硝基苯酚(1.8 g，12.87 mmol)。攪拌反應混合物2小時。
反應物用DCM (20 mL)稀釋，且用碳酸氫鈉水溶液(3×20 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(40 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.48 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 5.20 (m, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.37 (m, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 2H), 1.86 - 1.73 (m, 1H), 1.40 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.12, -3.14。LCMS：MS
m/z= 450.3 [M+1]；448.1 [M-1]，t
R= 1.24 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.63 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
中間物25. 2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環己酯
將中間物11 (3.4 g，16.37 mmol)溶解於亞甲基氯(45 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(2.45 mL，16.37 mmol)。在-78℃下經60 min添加三乙胺(4.54 mL，32.74 mmol)，且接著一次性添加4-硝基苯酚(2277 mg，16.37 mmol)。在-78℃下經60 min添加三乙胺(2.27 mL，16.37 mmol)。在-78℃下攪拌所得混合物2 h，用亞甲基氯(100 mL)稀釋，用水洗滌兩次並用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至20% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.22 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 4H), 7.29 - 7.09 (m, 3H), 4.76 (m, 1H), 4.20 - 4.02 (m, 1H), 3.92 (m, 1H), 1.87 - 1.64 (m, 4H), 1.54 (m, 2H), 1.46 - 1.18 (m, 7H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -2.94, -3.00。MS
m/z= 449 (M+H)
+。
中間物26. 4-(((2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙醯基)氧基)哌啶-1-甲酸三級丁酯
4-((L- 丙胺醯基 ) 氧基 ) 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯 .向((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(1.26 g，5.65 mmol)、4-羥基哌啶-1-甲酸三級丁酯(5.68 g，28.22 mmol)及EDCI (1.05 g，6.77 mmol)於乙腈(15 mL)中之混合物中添加DMAP (1.03 g，8.47 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到Cbz-L-丙胺酸哌啶基酯，將其溶解於THF (10 mL)中，且添加20%氫氧化鈀(400 mg)/碳。在H
2氣體下攪拌所得混合物2 h，過濾，且真空濃縮濾液。高真空乾燥所獲得殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.95 (tt,
J= 7.9, 3.8 Hz, 1H), 3.79 - 3.62 (m, 2H), 3.56 (q,
J= 7.0 Hz, 1H), 3.25 (ddd,
J= 13.6, 8.5, 3.7 Hz, 2H), 1.85 (ddd,
J= 13.4, 6.4, 3.4 Hz, 2H), 1.73 (s, 2H), 1.62 (ddq,
J= 12.7, 8.7, 4.3, 3.9 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.34 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。MS
m/z= 273 [M+H]。
4-(((2S)-2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 氧基 ) 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯 .將4-((L-丙胺醯基)氧基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(0.9 g，3.31 mmol)溶解於亞甲基氯(10 mL)中，冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.49 mL，3.31 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.46 mL，3.31 mmol)，且一次性添加4-硝基苯酚(460 mg，3.31 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.49 mL，3.31 mmol)。在-78℃下攪拌所得混合物2 h，用亞甲基氯稀釋，用水洗滌兩次並用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至70% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.23 (m, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 4.93 (m, 1H), 4.26 - 4.03 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.75 - 3.56 (m, 2H), 3.21 (m, 2H), 1.91 - 1.75 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.38 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.07, -3.13。MS
m/z= 550 (M+H)
+。
中間物27. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯
L- 丙胺酸反式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-l-丙胺酸(900 mg，4.03 mmol)及反式-4-(三氟甲基)環己-1-醇(1.02 g，6.05 mmol)製備產物。MS
m/z= 240 [M+H]。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -4-( 三氟甲基 ) 環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯(974 mg，4.07 mmol)製備呈異構混合物之產物(840 mg)。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 - 8.19 (m, 2H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 4.68 (m, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 2.02 (m, 4H), 1.50 - 1.27 (m, 8H)。
19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -73.91 (d,
J= 7.7 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.08, -3.12。MS
m/z= 517 [M+H]。
產物藉由Chiralpak SFC (Chiralpak IF 20×250 mm管柱，30%異丙醇)分離，得到中間物28及中間物29：
中間物28. ((R)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯. 中間物27之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.22 (d,
J= 9.1 Hz, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.69 (tt,
J= 10.7, 4.2 Hz, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 3.90 (dd,
J= 11.9, 9.5 Hz, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 5H), 1.52 - 1.21 (m, 7H)。
19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -73.90 (d,
J= 7.7 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.07。
中間物29. ((S)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式4-(三氟甲基)環己酯. 中間物27之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.21 (d,
J= 9.08 Hz, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 4.67 (tt,
J= 10.8, 4.2 Hz, 1H), 4.11 (ddt,
J= 15.8, 8.9, 7.1 Hz, 1H), 3.97 (dd,
J= 12.0, 9.4 Hz, 1H), 2.07 - 1.91 (m, 5H), 1.51 - 1.19 (m, 7H)。
19F NMR (376 MHz, 氯仿-
d) δ -73.90 (d,
J= 7.9 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.08。
中間物30. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-甲基哌啶-4-基酯
L- 丙胺酸 1- 甲基哌啶 -4- 基 酯 .向N-Cbz-L-丙胺酸(1.047 g，4.688 mmol)、4-羥基-N-甲基哌啶(450 mg，3.907 mmol)及EDCI (788 mg，5.079 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (716 mg，5.861 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至10% MeOH/DCM)純化，得到Cbz-L-丙胺酸4-哌啶基酯，將其溶解於THF (10 mL)中，且在室溫下添加20% Pd(OH)
2( 300 mg，0.427 mmol)。在室溫下在H
2氣體下攪拌所得混合物2 h，過濾，真空濃縮，與DCM共蒸發若干次，且高真空乾燥隔夜，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.81 (td,
J= 8.3, 7.7, 3.8 Hz, 1H), 3.52 (q,
J= 7.0 Hz, 1H), 2.63 (s, 2H), 2.29 (s, 5H), 2.14 - 1.86 (m, 4H), 1.73 (ddt,
J= 12.9, 8.8, 4.5 Hz, 2H), 1.32 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。LCMS：MS
m/z= 187.09 [M+1]；t
R= 0.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 1- 甲基哌啶 -4- 基 酯 .在-78℃下向L-丙胺酸1-甲基哌啶-4-基酯(360 mg，1.706 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.255 mL，1.706 mmol)，且接著在-78℃下經30 min添加含三乙胺(0.24 mL，1.706 mmol)之DCM (2.76 mL)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且接著將其再冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(0.237 g，1.706 mmol)且經30 min添加三乙胺(0.237 mL，1.706 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，接著用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至10% MeOH/DCM)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.28 - 8.15 (m, 2H), 7.36 (m, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 3H), 4.80 (s, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 2.64 (s, 2H), 2.31 (m, 5H), 1.90 (m, 2H), 1.78 - 1.67 (m, 2H), 1.47 - 1.33 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.04, -3.07。LCMS：MS
m/z= 464.32 [M+1]；t
R= 0.74 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物31. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(四氫-2H-哌喃-4-基)甲酯
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 ( 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 ) 甲酯 .將Cbz-L-Ala (446 mg，2 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。一次性添加EDCI (422 mg，2.2 mmol)，且攪拌反應物15 min。添加四氫哌喃-4-甲醇(279 μL，2.4 mmol)。接著一次性添加DMAP (269 mg，2.2 mmol)。攪拌反應物16小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋反應物，且用5%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且最後用鹽水(10 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.28 (d,
J= 7.9 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.39 (t,
J= 7.4 Hz, 1H), 4.07 - 3.84 (m, 4H), 3.38 (t,
J= 11.7 Hz, 2H), 1.92 (s, 1H), 1.68 - 1.50 (m, 3H), 1.39 (m, 4H)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ( 四氫 -2H- 哌喃 -4- 基 ) 甲酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(四氫-2H-哌喃-4-基)甲酯(530 mg，1.65 mmol)溶解於無水THF (12 mL)中。添加Degussa型10% Pd/C，且在氫氣氛圍下攪拌反應混合物2小時。過濾催化劑，且濾液不經純化即使用。
將二氯磷酸苯酯(294 μL，1.98 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將上述THF溶液逐滴添加至反應物中，且接著攪拌10 min。逐滴添加三乙胺(300 μL，2.15 mmol)，且接著攪拌30 min。添加對硝基苯酚(207 mg，1.49 mmol)及三乙胺(300 μL，2.15 mmol)。移除冰浴，且在RT下攪拌反應混合物14小時。
反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且用0.2 M碳酸鈉溶液(2 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.23 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 3.97 (m, 4H), 3.85 (t, J = 10.5 Hz, 1H), 3.35 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 1.99 - 1.79 (m, 1H), 1.56 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 1.48 - 1.29 (m, 4H
)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.13(s), -3.16 (s)。MS
m/z= 464.9 [M+1]；463.1 [M-1]。
中間物32. ((S)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
L- 丙胺酸反式 -4-( 三級丁基 ) 環己酯 .以與針對中間物26所描述類似的方式，由Cbz-l-丙胺酸(960 mg，4.03 mmol)及反式-4-(三級丁基)環己醇(1.0 g，6.45 mmol)製備產物(845 mg)。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.65 (tt,
J= 11.2, 4.5 Hz, 1H), 3.51 (q,
J= 7.1 Hz, 1H), 2.07 - 1.93 (m, 2H), 1.87 - 1.73 (m, 4H), 1.40 - 1.23 (m, 4H), 1.19 - 0.94 (m, 4H), 0.85 (d,
J= 2.6 Hz, 9H)。MS
m/z= 228 [M+H]。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸反式 -4-( 三級丁基 ) 環己酯 .以與針對中間物25所描述類似的方式，由L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯(420 mg，1.85 mmol)製備呈異構混合物之產物(520 mg)。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 - 8.19 (m, 2H), 7.37 (m, 4H), 7.28 - 7.16 (m, 3H), 4.62 (m, 1H), 4.17 - 4.00 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.39 (m, 3H), 1.35 - 1.22 (m, 2H), 1.15 - 0.92 (m, 3H), 0.85 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -2.98, -3.04。MS
m/z= 505 [M+H]。
中間物33. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-
L-丙胺酸((1r,4S)-4-(三氟甲基)環己基)甲酯
((1s,4s)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲醇 .在30 min內向(1s,4s)-4-(三氟甲基)環己烷甲酸(3 g，15.29 mmol)於無水四氫呋喃(40 mL)中之冰***液中分批添加氫化鋰鋁(0.871 g，22.94 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物3 h。冷卻至0℃，且用水(0.8 mL)、5 N氫氧化鈉水溶液(0.8 mL)、接著水(2.4 mL)淬滅。過濾分離之固體，且濾液用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋。分離有機層，用鹽水洗滌，且經硫酸鈉乾燥。過濾乙酸乙酯且減壓濃縮，得到產物。將所獲得殘餘物高真空乾燥1 h，且按原樣用於後續反應中。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.47 (dd, J = 6.3, 1.9 Hz, 2H), 2.08 - 1.77 (m, 5H), 1.62 - 1.18 (m, 4H), 0.99 (qd, J = 13.0, 3.2 Hz, 2H)。
19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -74.33 (d, J = 8.2 Hz)。
( 三級丁氧基羰基 )-
L-
丙胺酸 ((1r,4S)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲酯 .以與針對中間物12所描述類似的方式來製備產物(1.48 g)。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.00 (s, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.04 - 3.89 (m, 2H), 2.08 - 1.79 (m, 5H), 1.74 - 1.57 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.30 (m, 2H), 1.12 - 0.93 (m, 2H)。
19F NMR (376 MHz, 氯仿-d) δ -74.38 (d, J = 7.8 Hz)。
氯化 (S)-1- 側氧基 -1-(((1r,4S)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲氧基 ) 丙 -2- 銨 .以與針對中間物13所描述類似的方式來製備產物(1.184 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.55 (s, 3H), 4.17 - 3.88 (m, 3H), 2.21 (dtd, J = 12.2, 8.8, 3.3 Hz, 1H), 1.83 (ddd, J = 29.5, 13.4, 3.4 Hz, 4H), 1.63 (tdd, J = 11.9, 6.0, 3.3 Hz, 1H), 1.41 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.32 - 0.93 (m, 4H).
19F NMR (377 MHz, DMSO-d6) δ -72.84 (d,
J= 8.8 Hz)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-
L-
丙胺酸 ((1r,4S)-4-( 三氟甲基 ) 環己基 ) 甲酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備產物(1.4 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 - 8.22 (m, 2H), 7.56 - 7.31 (m, 4H), 7.30 - 7.14 (m, 2H), 6.72 (ddd, J = 13.7, 10.1, 8.6 Hz, 1H), 4.10 - 3.91 (m, 1H), 3.88 - 3.75 (m, 2H), 2.20 - 1.99 (m, 1H), 1.86 - 1.63 (m, 4H), 1.54 - 1.41 (m, 1H), 1.29 - 1.06 (m, 5H), 0.98 (td, J = 12.7, 3.2 Hz, 2H)。MS
m/z= 531.02 [M+1]。
中間物34. ((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸乙酯
在-78℃下向L-丙胺酸乙酯-HCl (631 mg，2.465 mmol)於DCM (15 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.368 mL，2.465 mmol)，且在-78℃下經5 min逐滴添加三乙胺(0.68 mL，4.93 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且接著將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加五氟苯酚(454 mg，2.465 mmol)且經5 min添加三乙胺(0.34 mL，2.465 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物1 h，接著用DCM稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至60% EtOAc/己烷)純化，得到非對映異構混合物，向其中添加二異丙基醚(4 mL)。對懸浮液進行超音波處理且過濾。濾餅之
1H NMR顯示其為3:1比率之混合物。將二異丙基醚(5 mL)添加至濾餅中，且將懸浮液在70℃下加熱至澄清溶液。在移除加熱浴之後，開始形成針狀晶體，且在10 min之後，過濾混合物，且濾餅經高真空乾燥30 min，得到Sp異構體。
非對映異構混合物 ： 1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.32 - 7.17 (m, 3H), 4.29 - 4.11 (m, 3H), 3.94 (m, 1H), 1.52 - 1.42 (m, 3H), 1.28 (q,
J= 7.0 Hz, 3H)。
Sp 異構體 ： 1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.50 - 7.36 (m, 2H), 7.32 - 7.21 (m, 3H), 4.75 (t,
J= 11.5 Hz, 1H), 4.17 - 3.98 (m, 3H), 1.37 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.22 (t,
J= 7.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ -0.51。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -155.48 - -155.76 (m), -162.73 (td,
J= 21.3, 3.7 Hz), -165.02 - -165.84 (m)。LCMS
m/z= 440.5 (M-乙基+H)，t
R= 1.57 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物35. 2-環己基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酸(2S)-2-乙基丁酯
2- 胺基 -2- 環己基乙酸 (S)-2- 乙基丁酯鹽酸鹽 .將L-環己基甘胺酸(0.90 g，5.75 mmol)溶解於2-乙基-1-丁醇(20 mL)中，且一次性添加氯三甲基矽烷(1.31 mL，10.30 mmol)。將其在預加熱之60℃油浴中放置16 h。濃縮，且在60℃旋轉蒸發器浴器中與甲苯共蒸發5次。在高真空下放置隔夜，得到產物。該物質按原樣用於下一步驟。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 8.38 (s, 3H), 4.17 - 3.96 (m, 2H), 3.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 1.90 - 1.40 (m, 5H), 1.41 - 0.88 (m, 11H), 0.83 (t,
J= 7.3 Hz, 6H)。
2- 環己基 -2-(((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 胺基 ) 乙酸 (2S)-2- 乙基丁酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向2-胺基-2-環己基乙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(1.50 g，5.39 mmol)及二氯磷酸苯酯(0.803 mL，5.39 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.56 mL，11.16 mmol)。使所得混合物升溫至RT並攪拌1 h。接著添加4-硝基苯酚(713 mg，5.13 mmol)及三乙胺(0.81 mL，5.63 mmol)。2 h後，用Et
2O (100 mL)稀釋反應混合物，且濾出固體。減壓濃縮粗產物，且藉由矽膠層析(120 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，接著藉由無改質劑20-100% ACN/水之逆相HPLC純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 8.28 (br d,
J= 9.3 Hz, 2H), 7.55 - 7.28 (m, 4H), 7.28 - 7.01 (m, 3H), 6.61 - 6.52 (m, 1H), 3.85 (d, J = 4.0 Hz, 2H) 3.75 - 3.53 (m, 1H), 1.67 - 1.31 (m, 7H), 1.25 (m, 6H), 1.16 - 0.67 (m, 9H)。LC/MS：t
R= 1.48 min，MS
m/z= 519.03 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
中間物36. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯
( 三級丁氧基羰基 ) 丙胺酸 (1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲酯 .以與針對中間物12所描述類似的方式來製備產物(3.8 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ) δ 7.25 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.08 - 3.72 (m, 3H), 3.10 (q, J = 10.3 Hz, 2H), 2.88 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 2.37 - 2.18 (m, 2H), 1.66 - 1.47 (m, 3H), 1.36 (s, 9H), 1.21 (d, J = 7.5 Hz, 5H).
19F NMR (376 MHz, DMSO-
d
6 ) δ -68.52 (t, J = 10.3 Hz)。
丙胺酸 (1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲酯二鹽酸鹽 .以與針對中間物13所描述類似的方式來製備產物(3.52 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6 ) δ 8.67 (s, 3H), 4.44 - 3.75 (m, 5H), 3.49 - 2.81 (m, 4H), 2.00 - 1.61 (m, 5H), 1.43 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
19F NMR (376 MHz, DMSO-
d 6 ) δ -63.30 (d, J = 443.2 Hz)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 丙胺酸 (1-(2,2,2- 三氟乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲酯 .以與針對中間物35所描述類似的方式來製備產物(4.25 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6 ) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.53 - 7.40 (m, 2H), 7.39 (ddd,
J= 8.1, 6.8, 3.1 Hz, 2H), 7.24 (ddd,
J= 17.4, 6.5, 1.6 Hz, 3H), 6.69 (ddd,
J= 13.7, 10.0, 8.4 Hz, 1H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.88 - 3.77 (m, 2H), 3.08 (qd,
J= 10.3, 1.6 Hz, 2H), 2.87 - 2.79 (m, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.56 - 1.39 (m, 3H), 1.26 - 1.08 (m, 5H)。
31P NMR (162 MHz, DMSO-
d 6 ) δ -1.26, -1.49。
19F NMR (376 MHz, DMSO-
d 6 ) δ -68.45 (td, J = 10.2, 2.4 Hz)。LCMS：MS
m/z= 546.27 [M+1]；t
R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物37. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯
4-(((( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺醯基 ) 氧基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯 .向
N-Cbz-L-丙胺酸(2.0 g，8.96 mmol)、3,3-二氟-4-羥基哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.12 g，8.96 mmol)及EDCI (1.67 g，10.75 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (1.64 g，13.44 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(50至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -114.32 (m), -117.73 - -121.11 (m)。LCMS：MS
m/z= 343.14 [M+1-Boc], 386.82 (M+1-
t-Bu)；t
R= 1.23 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .在室溫下向4-((((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺醯基)氧基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸三級丁酯(330 mg，0.746 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物中緩慢添加含4 M HCL之二㗁烷(0.9 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，真空濃縮，與DCM共蒸發若干次，且高真空乾燥15 h，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.33 (m, 5H), 5.59 (m, 1H), 5.27 - 5.01 (m, 3H), 4.53 - 4.25 (m, 1H), 3.12 (m, 1H), 3.03 - 2.76 (m, 2H), 2.73 (s, 1H), 1.94 (s, 1H), 1.80 (s, 1H), 1.41 (d,
J= 7.2 Hz, 3H)。
19F NMR (376 MHz, 氯仿-
d) δ -114.66 (dd,
J= 245.9, 61.8 Hz), -119.63。
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸3,3-二氟哌啶-4-基酯(450 mg，1.190 mmol)、乙醛(0.194 mL，2.629 mmol)及乙酸(0.15 mL，2.629 mmol)於DCM (9 mL)中之混合物在室溫下攪拌20 min，且添加氰基硼氫化鈉(330 mg，5.258 mmol)。攪拌所得混合物1 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，20-80%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d3) δ 10.18 (bs, 2H), 7.38 (m, 5H), 6.19 (m, 1H), 5.47 - 5.26 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 3.82 - 2.98 (m, 6H), 2.30 (s, 1H), 2.16 (s, 1H), 1.42 (m, 3H), 1.31 (td,
J= 7.3, 1.5 Hz, 3H)。LCMS：MS
m/z= 371.27 [M+1]；t
R= 0.66 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
L- 丙胺酸 1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯(450 mg，0.929 mmol)及20% Pd(OH)
2/C於THF (10 mL)中之混合物在H
2氣體下在室溫下攪拌1 h，過濾，真空濃縮，與DCM共蒸發若干次，且高真空乾燥1 h，得到產物。LCMS：MS
m/z= 237.09 [M+1]；t
R= 0.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm，溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 酯 .將亞甲基氯(10 mL)添加至L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯(480 mg，1.37 mmol)之糊漿中，且添加TEA (0.190 mL，0.370 mmol)，得到溶液，將其冷卻至-78℃，且快速添加二氯磷酸苯酯(0.205 mL，1.370 mmol)。在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.190 mL，1.37 mmol)。在相同溫度下攪拌所得混合物30 min，且一次性添加4-硝基苯酚(191 mg，1.370 mmol)。接著在-78℃下經30 min添加三乙胺(0.190 mL，1.370 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。接著殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.44 - 7.28 (m, 4H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 5.03 (m, 1H), 4.34 - 4.14 (m, 1H), 3.94 - 3.75 (m, 1H), 2.88 (s, 1H), 2.63-2.49 (m, 4H), 2.39 (m, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 1H), 1.93 - 1.77 (m, 1H), 1.44 (m, 3H), 1.09 (td, J = 7.2, 1.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.21, -3.26, -3.32, -3.46。
19F NMR (377 MHz, 氯仿-d) δ -110.50 (d,
J= 244.0 Hz), -116.76 (m)。LCMS：MS
m/z= 514.29 [M+1]；t
R= 0.80 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物38. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-乙酯
向L-丙胺酸乙酯HCl鹽(1.8 g，11.72 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5 g，5.86 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(2.37 g，23.44 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且攪拌隔夜。接著將反應混合物用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 417.93 [M+1]，t
R= 1.23 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.02 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
中間物39. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸苯甲酯
將二氯磷酸苯酯(1.49 mL，10 mmol)溶解於20 mL無水二氯甲烷中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將L-丙胺酸苯甲酯HCl (2.2 g，10 mmol)一次性添加至反應溶液中，並攪拌10 min。將三乙胺(3 mL，22 mmol)溶解於5 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物2 h。一次性添加對硝基苯酚(1.25 g，9 mmol)。將三乙胺(1.5 mL，11 mmol)溶解於3 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物1 h，且用二氯甲烷(10 mL)稀釋，並且用水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-30%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.24 - 8.10 (m, 2H), 7.40 - 7.10 (m, 12H), 5.14 (m, 2H), 4.19 (m, 1H), 3.87 (m, 1H), 1.47 - 1.36 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.15, -3.29。LCMS：MS
m/z= 457.1 [M+1]；455.1 [M-1]，t
R= 1.45 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.03 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
中間物40. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-甲酯
在氬氣氛圍下在0℃下，將三乙胺(3.68 mL，26.4 mmol)添加至L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(1.63 g，12.0 mmol)及二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5 g，5.9 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之溶液中。3 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d
1 ) 8.25 - 8.16 (m, 2H), 7.38 (dd,
J =9.3, 1.0 Hz, 2H), 4.17 - 3.95 (m, 2H), 3.73 (br s, 6H), 3.61 (br t,
J =10.0 Hz, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.40 (s, 1H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 7.82 (s)。LCMS：MS
m/z= 389.98 [M+1]，t
R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.81 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。
中間物41. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
在0℃下，將二氯磷酸苯酯(2.81 mL，18.9 mmol)及三乙胺(5.38 mL，37.9 mmol)依序添加至L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(2.64 g，18.9 mmol)於二氯甲烷(100 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(2.64 g，18.9 mmol)及三乙胺(2.64 mL，18.9 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。2.5 h之後，反應混合物用二氯甲烷(100 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 8.25 - 8.18 (m, 2H), 7.43 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 4.24 - 4.07 (m, 1H), 3.97 (br q,
J =9.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 1.45 - 1.35 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ -3.12 (s), -3.17 (s)。LCMS：MS
m/z= 380.98 [M+1]，t
R= 1.59 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.49 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。
中間物42. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
在氬氣氛圍下在0℃下，將二氯磷酸4-硝基苯酯(2.00 g，7.81 mmol)及三乙胺(2.18 mL，15.6 mmol)依序添加至L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(1.091 g，18.9 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之懸浮液中。1 h之後，接著在0℃下依序添加苯甲醇(0.810 mL，7.81 mmol)及三乙胺(1.09 mL，7.81 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。1 h之後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 8.32 - 8.09 (m, 2H), 8.32 - 8.09 (m, 7H), 5.15 (app t,
J= 8.4 Hz, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 1H), 3.73 - 3.65 (m, 3H), 1.42 - 1.31 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 2.23 (s), 2.15 (s)。LCMS：MS
m/z= 394.9[M+1]，t
R= 1.34 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。
中間物43. ((4-(二甲基胺甲醯基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
在-78℃下經30 min向二氯磷酸4-硝基苯酯(620 mg，2.422 mmol)及異丙基L-丙胺酸-HCl (406 mg，2.422 mmol)於DCM-THF (10:3 mL)中之溶液中添加含TEA (0.68 mL，4.844 mmol)之DCM (3.32 mL)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃，並且在-78℃下一次性添加
N,N-二甲基-4-羥基苯甲醯胺(400 mg，2.422 mmol)且經30 min添加含TEA (0.34 mL，2.422 mmol)之DCM (3.66 mL)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物1 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 3H), 7.27 (m, 2H), 6.76 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.17 - 3.94 (m, 2H), 3.19 - 2.84 (m, 6H), 1.39 (m, 3H), 1.27 - 1.16 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.13, -3.21。MS
m/z= 480 (M+H)。LCMS：MS
m/z= 480.26 [M+1]；t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物44. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯 .向((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(1.8 g，8.1 mmol)、3-羥基氧雜環丁烷(0.5 g，6.75 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (1.68 g，8.77 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，1.24 g，10.12 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.47 (p, J = 5.9 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.88 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 4.62 (ddd, J = 17.5, 7.7, 5.3 Hz, 2H), 4.41 (p, J = 7.3 Hz, 1H), 1.44 (d, J = 7.3 Hz, 3H)。LCMS：MS
m/z= 280.04 [M+1]，t
R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.82 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(0.1 g，0.36 mmol)溶解於DCM (5 mL)中，向該溶液中添加15 mg Pd-C (10%，濕潤)，將反應燒瓶脫氣且接著向其中裝入H
2氣球，在RT下攪拌2 h，接著過濾反應混合物，真空蒸發溶劑，高真空乾燥殘餘物5 min，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.42 (p, J = 5.7 Hz, 1H), 4.87 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 4.65 - 4.54 (m, 2H), 3.58 (qd, J = 7.0, 2.1 Hz, 1H), 1.49 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.34 (dd, J = 7.2, 2.1 Hz, 3H)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯 .向L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(120 mg，0.83 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(175 mg，0.83 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(252 mg，2.49 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至0℃，並且一次性添加對硝基苯酚(115 mg，0.83 mmol)且逐滴添加三乙胺(252 mg，2.49 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 423.06 [M+1]，t
R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.15 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
中間物45. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丙酯
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸丙酯 .在RT下將N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(6.08 g，31.71 mmol)添加至Boc-Ala-OH (5 g，26.43 mmol)及正丙醇(6.02 mL，80.6 mmol)於乙腈(125 mL)中之溶液中。15 min之後，添加4-(二甲基胺基)吡啶(3.23 g，26.43 mmol)。16 h後，將反應混合物濃縮至一半體積，且用乙酸乙酯(250 mL)稀釋混合物，並且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20% EtOAc/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 5.57 (s, 1H), 4.19 - 3.92 (m, 3H), 1.63 (h,
J= 7.1 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.30 (d,
J= 7.3 Hz, 3H), 0.93 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。LCMS：MS
m/z= 231.60 [M+1]，t
R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
L- 丙胺酸丙酯鹽酸鹽 .在RT下將含4 M鹽酸溶液之二㗁烷(16.91 mL)添加至含(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸丙酯(3.91 g，16.91 mmol)之二氯甲烷(10 mL)中。16 h後，將反應混合物減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 8.45 (s, 3H), 4.22 - 4.11 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 1.68 (dtd,
J= 14.0, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.60 (d,
J= 7.2 Hz, 3H), 0.95 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。LCMS：MS
m/z= 131.94 [M+1]，t
R= 0.32 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸丙酯 .在0℃下經15分鐘將含二氯磷酸苯酯(0.89 mL，5.97 mmol)之二氯甲烷(12 mL)逐滴添加至L-丙胺酸丙酯鹽酸鹽(1.0 g，5.97 mmol)於二氯甲烷(12 mL)中之溶液中。在添加完成之後，經5分鐘添加含三乙胺(2.0 mL，14.32 mmol)之二氯甲烷(2.5 mL)。3.5 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.83 g，5.97 mmol)及三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。2 h之後，將反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用水(2 × 100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 8.28 - 8.20 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 7.31 - 7.19 (m, 3H), 4.72 - 4.56 (m, 1H), 4.14 - 4.02 (m, 1H), 3.99 (td,
J= 6.6, 2.5 Hz, 2H), 1.58 (dtdd,
J= 13.9, 7.4, 6.5, 0.9 Hz, 2H), 1.31 (ddd,
J= 7.1, 4.2, 1.1 Hz, 3H), 0.88 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ -2.12, -2.22。LCMS：MS
m/z= 409.12 [M+1]，t
R= 1.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.73 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
中間物46. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基甲酯 .向((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(6.08 g，27.24 mmol)、氧雜環丁烷-3-基甲醇(2 g，22.7 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺HCl鹽(EDCI) (5.66 g，29.51 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加4-(二甲基胺基)吡啶(DMAP，4.16 g，34.05 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物2 h，接著反應混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，有機溶劑經硫酸鈉乾燥，且接著真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 280.04 [M+1]，t
R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.88 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基甲酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯(2.2 g，8 mmol)溶解於DCM (25 mL)中，向該溶液中添加500 mg Pd-C (10%，濕潤)，將反應燒瓶脫氣且接著向其中裝入H
2氣球，在RT下攪拌2 h，接著過濾反應混合物，真空蒸發溶劑，高真空乾燥殘餘物5 min，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.77 (dd, J = 7.9, 6.3 Hz, 2H), 4.44 (td, J = 6.1, 2.5 Hz, 2H), 4.38 - 4.23 (m, 2H), 3.55 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.34 - 3.19 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基甲酯 .向L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯(1.19 g，7.11 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(1.5 g，7.11 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(1.44 g，14.22 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至0℃，並且一次性添加對硝基苯酚(0.99 g，7.1 mmol)且逐滴添加三乙胺(1.44 g，14.22 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 437.14 [M+1]，t
R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.36 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
中間物47. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環丁酯
在冰浴中在氮氣氛圍下，向L-丙胺酸環丁酯(1.8 g，10 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(2.1 g，10 mmol)。接著逐滴添加三乙胺(1.11 g，11 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物2 h，且將其冷卻至0℃，並且一次性添加對硝基苯酚(2.5 g，18 mmol)且逐滴添加三乙胺(1.11 g，11 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物2 h，用EtOAc稀釋，用5%檸檬酸水溶液洗滌兩次，接著用鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。MS
m/z= 422.0 (M+H)
+。
Sp 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%，IPA 30%)純化，形成中間物48及中間物49：
中間物48. 中間物47之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.33-8.23 (m, 2H), 7.52 -7.33 (m, 4H), 7.33-7.17 (m, 3H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.07-3.96 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 1H), 1.32 (ddd,
J= 7.2, 5.3, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 1.36。LCMS：MS
m/z= 421.05 [M+1]，t
R= 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 8.07 min；HPLC系統：Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，5微米，CN=IC00CD-QC005，1 CV=2.49 mL，CV#1，管柱閥：位置3，15 mL/15 min，1 mL/min。Pmax=300巴；溶劑閥：D：庚烷70%，#6：IPA 30%。
中間物49. 中間物47之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.33-8.23 (m, 2H), 7.52 -7.33 (m, 4H), 7.33-7.17 (m, 3H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.07-3.96 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 1H), 1.32 (ddd, J = 7.2, 5.3, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 1.59。LCMS：MS
m/z= 420.90 [M+1]，t
R= 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 11.50 min；HPLC系統：Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，5微米，CN=IC00CD-QC005，1 CV=2.49 mL，CV#1，管柱閥：位置3，15 mL/15 min，1 mL/min。Pmax=300巴；溶劑閥：D：庚烷70%，#6：IPA 30%。
中間物50. ((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
將L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(14 g，100 mmol)與50 mL無水DCM混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將二氯磷酸苯酯(16.4 mL，110 mmol)逐滴添加至反應物中，且攪拌反應混合物30 min。將三乙胺(29.4 mL，210 mmol)與20 mL無水DCM混合且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1小時。一次性添加五氟苯酚(18.4 g，100 mmol)。將三乙胺(14.7 mL，105 mmol)與30 mL無水DCM混合且逐滴添加至反應物中。在RT下攪拌反應混合物16小時。
反應物用DCM (50 mL)稀釋且用水(5×10 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥，且接著減壓濃縮，得到固體。將異丙基醚(130 mL)添加至固體中。將大塊固體分解，且接著用超音波處理20 min，之後攪拌混合物24小時。
收集固體且用少量異丙基醚(30 mL)洗滌。高真空乾燥固體，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 3H), 4.20 (m, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 1.47 (d,
J= 7.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -1.62。
19F NMR (376 MHz, 氯仿-
d) δ -153.82 (dd,
J= 18.5, 2.7 Hz), -159.99 (td,
J= 21.8, 3.8 Hz), -162.65 (dd,
J= 22.2, 17.6 Hz)。LCMS：MS
m/z= 425.9 [M+1]，423.9 [M-1]，t
R= 1.68 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.76 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
中間物51. ((4-(2-甲氧基乙氧基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(503 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(329 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。90分鐘之後，在0℃下依序添加4-(2-甲氧基-乙氧基)苯酚(331 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.51 - 7.39 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 2H), 6.97 - 6.90 (m, 2H), 4.94 (七重峰雙峰,
J= 6.2, 3.2 Hz, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d,
J= 0.5 Hz, 3H), 1.32 (td,
J= 7.1, 1.2 Hz, 3H), 1.19 (dt,
J= 6.3, 2.0 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ -0.86, -1.06。LCMS：MS
m/z= 483.06 [M+1]，t
R= 1.39 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.58 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
中間物52. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丁酯
在0℃下經15分鐘將含二氯磷酸苯酯(0.89 mL，5.97 mmol)之二氯甲烷(12 mL)逐滴添加至L-丙胺酸丁酯鹽酸鹽(CAS號81305-85-3，1.0 g，5.97 mmol)於二氯甲烷(12 mL)中之溶液中。在添加完成之後，經5分鐘添加含三乙胺(2.0 mL，14.32 mmol)之二氯甲烷(2.5 mL)。3.5 h之後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(0.83 g，5.97 mmol)及三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。2 h之後，將反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用水(2 × 100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.31 - 8.23 (m, 1H), 7.52 - 7.34 (m, 2H), 7.32 - 7.18 (m, 2H), 4.04 (td,
J= 6.6, 2.7 Hz, 2H), 1.60 - 1.48 (m, 1H), 1.40 - 1.26 (m, 3H), 0.89 (t,
J= 7.4 Hz, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ -1.36, -1.59。LCMS：MS
m/z= 423.13 [M+1]，t
R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物53. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-甲氧基丙酯
L- 丙胺酸 3- 甲氧基丙酯 .向Cbz-L-丙胺酸(2.80 g，12.54 mmol)、3-甲氧基丙醇(1.00 mL，10.45 mmol)及EDCI (2.11 g，13.59 mmol)於乙腈(40 mL)中之混合物中添加DMAP (1.92 g，15.68 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至50% EtOAc/己烷，35 min運行)純化，得到Cbz-L-丙胺酸酯(2.78 g)，將其溶解於THF (20 mL)中，且在室溫下添加20% Pd(OH)
2(800 mg，1.14 mmol)。在氫氣氛圍下在室溫下攪拌所得混合物4 h，過濾，真空濃縮，且高真空乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.28 - 4.14 (m, 2H), 3.55 (q,
J= 7.0 Hz, 1H), 3.43 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 3.32 (s, 3H), 1.98 - 1.85 (m, 4H), 1.33 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。LCMS
m/z= 161.98 (M+H)，t
R= 0.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 3- 甲氧基丙酯 .在-78℃下向L-丙胺酸3-甲氧基丙酯(1.32 g，8.20 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中快速一次性添加二氯磷酸苯酯(1.23 mL，8.20 mmol)。接著在-78℃下經5 min添加三乙胺(1.14 mL，8.20 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(1.14 g，8.20 mmol)且經5 min添加三乙胺(1.14 mL，8.20 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物2 h。在用DCM稀釋之後，將混合物用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.26 - 8.19 (m, 2H), 7.36 (m, 4H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 4.20 (m, 2H), 4.17 - 4.06 (m, 1H), 3.91 (m, 1H), 3.40 (m, 2H), 3.30 (m, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.40 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.07, -3.10。LCMS：
m/z= 439.11 (M+H)。t
R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min
中間物54. (2S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(4-(((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)苯基)丙酸甲酯
在0℃下，經10分鐘將含L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(275 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至二氯磷酸4-硝基苯酯(504 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。60分鐘之後，在0℃下依序添加
N-苯甲氧羰基-L-酪胺酸甲酯(649 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。3小時後，反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.34 - 8.17 (m, 2H), 7.53 - 7.37 (m, 2H), 7.37 - 7.09 (m, 9H), 5.02 (s, 2H), 4.43 (dd,
J= 9.4, 5.2 Hz, 1H), 4.19 - 3.97 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.62 (d,
J= 4.4 Hz, 3H), 3.16 (dd,
J= 14.0, 5.4 Hz, 1H), 2.93 (dd,
J= 14.1, 9.8 Hz, 1H), 1.32 (td,
J= 7.3, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ -1.30, -1.51。LCMS：MS
m/z= 616.03 [M+1]，t
R= 1.63 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.81 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
中間物55. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)- 四氫呋喃-3-基酯
(S)- 四氫呋喃 -3- 基 -L- 丙胺酸酯 .向
N-Cbz-L-丙胺酸(3.31 g，14.83 mmol)、(S)-THF-3-醇(1.0 mL，12.34 mmol)及EDCI (2.49 g，16.04 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (2.26 g，18.51 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至80% EtOAc/己烷)純化，得到Cbz-L-丙胺酸4-THF酯，將其溶解於THF (20 mL)中，且在室溫下添加20%氫氧化鈀(433 mg，0.617 mmol)。在H
2氣體下在室溫下攪拌所得混合物2 h，過濾，且真空濃縮，與DCM共蒸發多次，並且高真空乾燥15 h，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.37 - 5.29 (m, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 4H), 3.61 - 3.52 (m, 1H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 2.02 (dt,
J= 12.8, 5.6 Hz, 1H), 1.76 (s, 2H), 1.34 (dd,
J= 7.1, 1.5 Hz, 3H)。LCMS
m/z= 159.94 (M+H)，t
R= 0.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (S)- 四氫呋喃 -3- 基 酯 .在-78℃下向(S)-四氫呋喃-3-基-L-丙胺酸酯(1.45 g，9.10 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中快速一次性添加二氯磷酸苯酯(1.37 mL，9.10 mmol)。接著在-78℃下經5 min添加三乙胺(1.27 mL，9.10 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(1.27 g，9.10 mmol)且經5 min添加三乙胺(1.27 mL，9.10 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物2 h。在用DCM稀釋之後，將混合物用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.31 (m, 4H), 7.30 - 7.12 (m, 3H), 5.29 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.00 - 3.79 (m, 4H), 3.82 - 3.60 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.40 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.18, -3.20。LCMS：
m/z= 437.05 (M+H)，t
R= 1.41 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物56. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-(N-嗎啉基)丙酯
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(503 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸3-(N-嗎啉基)丙酯鹽酸鹽(496 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。90分鐘後，在0℃下依序添加苯酚(185 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，將反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.51 - 7.39 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 2H), 6.97 - 6.90 (m, 2H), 4.94 (m, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d,
J= 0.5 Hz, 3H), 1.32 (td,
J= 7.1, 1.2 Hz, 3H), 1.19 (dt,
J= 6.3, 2.0 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ -2.12, -2.22。LCMS：MS
m/z= 494.35 [M+1]，t
R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物57. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(R)-四氫呋喃-3-基酯
(R)- 四氫呋喃 -3- 基 -L- 丙胺酸酯 .向
N-Cbz-L-丙胺酸(3.31，14.83 mmol)、(R)-THF-3-醇(1.0 mL，12.34 mmol)及EDCI (2.49 g，16.04 mmol)於乙腈(20 mL)中之混合物中添加DMAP (2.26 g，18.51 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物15 h，接著用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。所獲得殘餘物藉由矽膠層析(0至50% EtOAc/己烷，35 min運行)純化，得到Cbz-L-丙胺酸酯(2.78 g)，將其溶解於THF (20 mL)中，且在室溫下添加20% Pd(OH)
2(433 mg，0.617 mmol)。在氫氣氛圍下在室溫下攪拌所得混合物4.5 h，過濾，真空濃縮，且高真空乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.32 (ddt,
J= 6.5, 4.3, 1.9 Hz, 1H), 3.98 - 3.78 (m, 4H), 3.56 (q,
J= 7.0 Hz, 1H), 2.19 (dtd,
J= 13.7, 8.4, 6.4 Hz, 1H), 2.05 - 1.92 (m, 1H), 1.79 (s, 2H), 1.34 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。LCMS：
m/z= 159.92 (M+H)，t
R= 0.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)- 四氫呋喃 -3- 基 酯 .在-78℃下向(R)-四氫呋喃-3-基-L-丙胺酸酯(1.66 g，10.44 mmol)於DCM (40 mL)中之溶液中快速一次性添加二氯磷酸苯酯(1.56 mL，10.44 mmol)。接著在-78℃下經5 min添加三乙胺(1.45 mL，10.44 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且將其冷卻至-78℃。在-78℃下一次性添加對硝基苯酚(1.45 g，10.44 mmol)且經5 min添加三乙胺(1.45 mL，10.44 mmol)。在移除乾冰浴之後攪拌所得混合物2 h。在用DCM稀釋之後，將混合物用鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(0至100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 5.29 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 3.93 - 3.79 (m, 4H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.97 - 1.85 (m, 1H), 1.44 - 1.37 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ -3.24, -3.26。LCMS：
m/z= 437.02 (M+H)，t
R= 1.42 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
中間物58. (氯(苯氧基)硫代磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
在氬氣氛圍下在−78℃下，將硫代磷醯氯(5.08 mL，50.0 mmol)及三乙胺(6.97 mL，50.0 mmol)依序添加至苯酚(4.70 mg，50.0 mmol)於TBME (72 mL)中之溶液中。接著使反應混合物升溫至RT。1 h後，過濾所得混合物，且減壓濃縮濾液。將殘餘物溶解於二氯甲烷(72 mL)中，並添加L-丙胺酸甲酯鹽酸鹽(6.97 mg，50.0 mmol)。將所得懸浮液冷卻至−78℃，且逐滴添加三乙胺(13.9 mL，100 mmol)。接著使反應混合物升溫至RT。16 h後，減壓濃縮反應混合物，且將TBME (100 mL)添加至殘餘物中。藉由真空過濾移除所產生的白色固體，且減壓濃縮濾液，得到產物，其直接用於下一步驟中。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 7.45 - 7.12 (m, 5H), 4.67 - 4.44 (m, 1H), 4.44 - 4.24 (m, 1H), 3.81 (s, 1.5H), 3.78 (s, 1.5H), 1.53 (app t,
J= 6.8 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 64.78 (s), 64.63 (s)。
中間物59. ((((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯及((((S)-1-環己氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
向氯化(S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-銨中間物11 (680 mg，3.27 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(838 mg，3.27 mmol)。使所得混合物在冰浴中冷卻，且經30 min添加含三乙胺(1.0 mL，6.54 mmol)之THF (2 mL)。在冰浴下攪拌所得混合物1.5 h，並且在冰浴下一次性添加氯化(S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-銨(687 mg，3.27 mmol)且經30 min添加含三乙胺(1.0 mL，6.54 mmol)之THF (2 mL)。在冰浴下攪拌所得混合物1.5 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮，且所得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.20 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.15 - 3.91 (m, 4H), 3.60 (m, 2H), 1.91 - 1.77 (m, 2H), 1.75 - 1.67 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.45 - 1.23 (m, 15H), 0.88 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-d) δ 8.04。LCMS：MS
m/z= 528.10 [M+1]。
中間物60. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-環己酯
2- 胺基丙酸 (S)- 環己酯鹽酸鹽 .將L-丙胺酸(891 mg，10 mmol)與環己醇(10 mL)混合。逐滴添加氯化三甲基矽烷(12.7 mL，100 mmol)，並攪拌20 min。將反應混合物加熱至60℃並攪拌16小時。將反應物減壓濃縮，且與甲苯共沸(5×)，得到油狀物。添加己烷(100 mL)並攪拌15小時，得到固體，收集該固體，用己烷(100 mL)洗滌，且高真空乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 8.45 (s, 3H), 4.77 (tt,
J= 8.4, 3.7 Hz, 1H), 4.02 (q,
J= 7.2 Hz, 1H), 1.71 (m, 4H), 1.53 - 1.17 (m, 9H)。
L- 丙胺酸二胺基磷酸 4- 硝基苯基 -N,N'- 環己酯 .將二氯磷酸4-硝基苯酯(256 mg，1 mmol)溶解於無水二氯甲烷(10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加2-胺基丙酸(S)-環己酯鹽酸鹽(415 mg，2 mmol)。逐滴添加三乙胺(698 μL，5 mmol)並攪拌2小時。反應物用二氯甲烷(15 mL)稀釋，且用2%檸檬酸水溶液(20 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 8.30 - 8.13 (m, 2H), 7.49 - 7.27 (m, 2H), 5.50 (m, 2H), 4.62 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 1.67 (m, 8H), 1.51 - 1.18 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, DMSO-
d 6) δ 9.50。MS
m/z= 526.0 [M+1], 524.1 [M-1]。
中間物61. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-異丙酯
向L-丙胺酸異丙酯HCl鹽(1.97 g，11.72 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5 g，5.86 mmol)。將所得混合物冷卻至約0℃，且逐滴添加三乙胺(2.37 g，23.44 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物約30 min，且攪拌隔夜。反應混合物接著用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 445.96 [M+1]。
中間物62. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-環丁基甲酯
向L-丙胺酸環丁基甲酯HCl鹽(1.51 g，7.8 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1 g，3.9 mmol)。將所得混合物冷卻至0℃，且逐滴添加三乙胺(1.58 g，15.6 mmol)。在移除冰浴之後攪拌所得混合物30 min，且攪拌隔夜。反應混合物接著用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮有機溶劑，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 497.98 [M+1]。
中間物63. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己酯
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己酯 .在RT下將4-二甲基胺基吡啶(2.84 g，23 mmol)添加至((1r,4r)-4-羥基環己基)胺基甲酸三級丁酯(4.00 g，19.0 mmol)及((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(4.98 g，22.0 mmol)以及EDCI (3.13 g，20.0 mmol)於乙腈(100 mL)中之溶液中。4 h後，反應混合物用二氯甲烷(200 mL)稀釋，用鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-50%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.29 (br d,
J= 7.7 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.78 - 4.60 (m, 1H), 4.47 - 4.19 (m, 2H), 3.45 (s, 1H), 2.08 - 1.89 (m, 4H), 1.54 - 1.34 (m, 14H), 1.28 - 1.16 (m, 2H)。LCMS：MS
m/z= 420.99 [M+1]。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己酯 .在氬氣氛圍下在RT下將氫氣氣球連接至燒瓶，該燒瓶含有((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己酯(1.96 g，4.66 mmol)及鈀/碳(10%重量，2.0 g)於四氫呋喃(50 mL)中之溶液。將容器抽成真空並用氫氣氛圍重新填充(3 ×)，且劇烈攪拌反應混合物。1.5 h後，經由矽藻土墊過濾反應混合物，且減壓濃縮濾液，得到粗產物Cbz脫除保護基物質。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷(23 mL)中，且使所得混合物冷卻至0℃。依序添加二氯磷酸苯酯(0.70 mL，4.7 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1 h後，接著添加4-硝基苯酚(660 mg，4.74 mmol)及三乙胺(0.66 mL，4.7 mmol)。1.5 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 3H), 4.77 - 4.58 (m, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.18 - 3.99 (m, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 3.44 (br s, 1H), 2.07 - 1.87 (m, 4H), 1.52 - 1.36 (m, 14H), 1.30 - 1.16 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ -3.15 (s)。LCMS：MS
m/z= 563.88 [M+1]。
中間物64. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯
方法1.
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將Cbz-L-丙胺酸(223 mg，1.00 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。將反式-1-(Boc-胺基)-4-(羥甲基)環己烷(229 mg，1.00 mmol)及EDCI (230 mg，1.2 mmol)添加至反應物中，接著攪拌25 min。一次性添加DMAP (122 mg，1 mmol)，且攪拌反應物4 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(2 × 5 mL)洗滌，接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.41 - 7.27 (m, 5H), 5.29 (d,
J= 7.6 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.47 - 4.24 (m, 2H), 3.96 (d,
J= 6.6 Hz, 2H), 3.37 (bs, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.58 (m, 2H), 1.44 (m, 12H), 1.10 (m, 4H)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(348 mg，0.800 mmol)溶解於12 mL無水四氫呋喃中。將Degussa型10%鈀/碳(25 mg)添加至反應物中，且接著在氫氣氛圍下攪拌3 h。濾出鈀/碳，且濾液不經進一步純化即用於下一反應中。將二氯磷酸苯酯(119 µL，0.800 mmol)溶解於15 mL無水二氯甲烷中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。接著將上述濾液逐滴添加至反應溶液中，且接著攪拌30 min。逐滴添加三乙胺(120 µL，0.88 mmol)並攪拌1 h。一次性添加對硝基苯酚(100 mg，0.72 mmol)。逐滴添加三乙胺(123 µL，0.88 mol)，且在RT下攪拌反應混合物2 h。反應混合物接著用二氯甲烷(10 mL)稀釋且用水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-40%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 4H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 4.35 (s, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 3.99 - 3.88 (m, 2H), 3.85 (t,
J= 10.6 Hz, 1H), 3.36 (s, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 1.48 - 1.36 (m, 12H), 1.15 - 0.98 (m, 4H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 3.12, 3.13。LCMS：MS
m/z= 478.2 [M+1]。
方法2.
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .在RT下向Z-Ala-OH (489 g，2.18 mmol)於乙腈(22 mL)中之溶液中添加反式-1-((三級丁氧基羰基)胺基)-4-(羥甲基)環己烷(510 mg，2.18 mmol)，接著添加
N-(3-二甲基胺基丙基)-
N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(509 g，2.62 mmol)。30 min後，添加4-(二甲基胺基)吡啶(267 mg，2.18 mmol)。18 h後，反應物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且所得混合物用10%檸檬酸水溶液(2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-50%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.41 - 7.29 (m, 5H), 5.28 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.46 - 4.27 (m, 2H), 3.96 (d,
J= 6.6 Hz, 2H), 3.37 (s, 1H), 2.03 (s, 2H), 1.78 (s, 2H), 1.56 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.42 (d,
J= 7.2 Hz, 3H), 1.08 (t,
J= 9.7 Hz, 4H)。LCMS：MS
m/z= 434.87 [M+1]，t
R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.96 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .將鈀/碳(198 mg，10 wt%)添加至經氬氣吹掃的((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(719 g，1.65 mmol)於四氫呋喃(24 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物且在RT下攪拌。1 h後，經由矽藻土過濾混合物，用四氫呋喃沖洗過濾器，且減壓移除揮發物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 4.38 (s, 1H), 4.02 - 3.85 (m, 2H), 3.55 (q,
J= 7.0 Hz, 1H), 3.38 (s, 1H), 2.04 (d,
J= 7.1 Hz, 2H), 1.83 - 1.73 (m, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.44 (s, 10H), 1.34 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.09 (t,
J= 10.0 Hz, 4H)。LCMS：MS
m/z= 300.93 [M+1]，t
R= 0.65 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .在0℃下經15 min向含L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(553 mg，1.65 mmol)之四氫呋喃(24 mL)中緩慢添加二氯磷酸苯酯(247 μL，1.65 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之溶液。在添加完成之後，逐滴添加三乙胺(0.26 mL，1.82 mmol)。1 h後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(240 mg，1.65 mmol)及三乙胺(0.26 mL，1.82 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。1 h後，反應混合物用二氯甲烷(50 mL)稀釋，且用水(3 × 75 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.23 (ddd,
J= 9.3, 1.3, 0.6 Hz, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 4.36 (s, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 3.96 - 3.90 (m, 2H), 3.84 (t,
J= 10.6 Hz, 1H), 3.36 (s, 1H), 2.02 (s, 2H), 1.83 - 1.68 (m, 2H), 1.57 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (dd,
J= 7.1, 3.2 Hz, 3H), 1.06 (t,
J= 9.6 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -3.13 (d,
J= 2.9 Hz)。LCMS：MS
m/z= 577.8 [M+1]，t
R= 1.28 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.35 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
中間物65. L-丙胺酸二胺基磷酸4-硝基苯基-N,N'-丁酯
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸丁酯 .將Boc-L-丙胺酸(380 mg，2.0 mmol)溶解於無水MeCN (10 mL)中。將1-丁醇(920 µL，10.0 mmol)及EDCI (460 mg，2.4 mmol)添加至反應物中，接著攪拌15 min。一次性添加DMAP (240 mg，2.0 mmol)，且攪拌反應物14 h。反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-20%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 5.04 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.18 - 4.07 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (m, 5H), 0.93 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
L- 丙胺酸二胺基磷酸 4- 硝基苯基 -N,N'- 丁 酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸丁酯(291 mg，1.18 mmol)溶解於7 mL含4 M HCl之二㗁烷中，並攪拌1 h。將反應混合物減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於無水二氯甲烷(10 mL)中，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(152 mg，0.59 mmol)，且攪拌反應物10 min。將三乙胺(270 µL，1.95 mmol)溶解於1 mL無水二氯甲烷中，且逐滴添加至反應溶液中。攪拌反應混合物1 h。將三乙胺(270 µL，1.95 mmol)用700 µL無水二氯甲烷溶解，且逐滴添加至反應物中。在RT下攪拌反應混合物16 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋，且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.27 - 8.15 (m, 2H), 7.43 - 7.34 (m, 2H), 4.19 - 3.98 (m, 5H), 3.80 - 3.61 (m, 1H), 3.58 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 4H), 1.45 - 1.30 (m, 10H), 0.93 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 7.93。LCMS：MS
m/z= 474.0 [M+1]。
中間物66. (2S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(4-(((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)苯基)丙酸甲酯
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(504 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(330 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。60分鐘後，在0℃下依序添加
N-苯甲氧羰基-L-酪胺酸甲酯(649 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，將反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.32 - 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.37 (m, 2H), 7.35 - 7.13 (m, 9H), 5.02 (s, 2H), 4.93 (pd,
J= 6.3, 1.1 Hz, 1H), 4.43 (dd,
J= 9.4, 5.2 Hz, 1H), 4.00 (dtd,
J= 10.1, 7.7, 6.5 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.15 (dd,
J= 14.0, 5.4 Hz, 1H), 2.93 (dd,
J= 13.9, 9.6 Hz, 1H), 1.32 (td,
J= 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.20 - 1.16 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ -1.26, -1.49。LCMS：MS
m/z= 644.11 [M+1]，t
R= 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.21 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
中間物67. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(N-嗎啉基)乙酯
在0℃下，經10分鐘將含二氯磷酸4-硝基苯酯(505 mg，1.97 mmol)之二氯甲烷(20 mL)逐滴添加至L-丙胺酸2-(N-嗎啉基)乙酯鹽酸鹽(496 mg，1.97 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.55 mL，3.93 mmol)。90分鐘後，在0℃下依序添加苯酚(185 mg，1.97 mmol)及三乙胺(0.28 mL，1.97 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。30分鐘後，將反應混合物用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ 8.28 - 8.14 (m, 2H), 7.41 - 7.29 (m, 4H), 7.24 - 7.16 (m, 4H), 6.87 - 6.81 (m, 1H), 4.14-4.04 (bs, 2H), 2.61-2.57 (bs, 4H), 2.45 - 3.40 (bs, 4H), 1.42 (dt,
J= 6.3, 2.0 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, CDCl
3) δ -2.70。LCMS：MS
m/z= 480.27 [M+1]，t
R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.23 min; HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Kinetx 2.6μ 100A C18，100 mm × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。
中間物68. ((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 丙胺酸 2-( 二異丙基胺基 ) 乙酯 .在RT下將
N-(3-二甲基胺基丙基)-
N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(2.06 g，10.8 mmol)添加至Z-Ala-OH (2.00 g，8.96 mmol)及2-(二異丙基胺基)乙醇(3.2 mL，17.9 mmol)於乙腈(125 mL)中之溶液中。10 min後，添加4-(二甲基胺基)吡啶(1.09 g，8.96 mmol)。2天後，將反應混合物濃縮至一半體積，且用乙酸乙酯(100 mL)稀釋混合物，並且用飽和碳酸鈉水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.48 - 7.23 (m, 5H), 5.96 (s, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.30 - 4.00 (m, 3H), 2.28 (t,
J= 7.1 Hz, 2H), 2.14 (s, 6H), 1.73 (p,
J= 6.9 Hz, 2H), 1.34 (d,
J= 7.3 Hz, 3H)。LCMS：MS
m/z= 351.26 [M+1]，t
R= 1.05 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.10 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
L- 丙胺酸 2-( 二異丙基胺基 ) 乙酯 .將鈀/碳(587 mg，10 wt%)添加至經氬氣吹掃的((苯甲氧基)羰基)-L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯(1.93 g，5.52 mmol)於乙醇(50 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物且在RT下攪拌。18小時後，經由矽藻土過濾混合物，用乙酸乙酯沖洗過濾器，且減壓移除揮發物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 4.06 - 3.90 (m, 2H), 3.43 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.01 (七重峰, J = 6.5 Hz, 2H), 2.65 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.22 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.6 Hz, 12H)。LCMS：MS
m/z= 217.01 [M+1]，t
R= 0.17 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 二異丙基胺基 ) 乙酯 .在0℃下，經15分鐘將含L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯(511 mg，2.43 mmol)之四氫呋喃(7 mL)逐滴添加至二氯磷酸苯酯(0.36 mL，2.43 mmol)於四氫呋喃(25 mL)中之溶液中。在添加完成之後，逐滴添加三乙胺(0.36 mL，2.43 mmol)。90 min後，接著在0℃下依序添加4-硝基苯酚(337 mg，2.43 mmol)及三乙胺(1.0 mL，7.16 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。17 h後，反應混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用水(2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 8.29 - 8.18 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 7.30 - 7.21 (m, 3H), 4.71 - 4.52 (m, 1H), 4.12 - 3.99 (m, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 3H), 3.06 - 2.86 (m, 2H), 2.56 (td,
J= 7.0, 3.8 Hz, 2H), 1.31 (ddd,
J= 7.1, 4.7, 1.1 Hz, 4H), 0.94 (d,
J= 6.5 Hz, 13H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ -2.15, -2.30。LCMS：MS
m/z= 494.25 [M+1]，t
R= 1.27 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.97 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
中間物69. (2S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(4-(((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)氧基)苯基)丙酸異丙酯
(( 苯甲氧基 ) 羰基 )-L- 酪胺酸異丙酯 .將氯甲酸苯甲酯(0.94 mL，6.58 mmol)逐滴添加至L-酪胺酸異丙酯(1.0 g，4.48 mmol)於丙酮(4.5 mL)及7 wt%碳酸鈉水溶液(4.5 mL)中之混合物中。2小時後，反應混合物用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且所得混合物用水(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.39 - 7.20 (m, 5H), 7.06 - 6.97 (m, 2H), 6.74 - 6.62 (m, 2H), 5.05 (d,
J= 2.6 Hz, 2H), 4.94 (p,
J= 6.3 Hz, 1H), 4.31 (dd,
J= 8.6, 6.1 Hz, 1H), 2.99 (dd,
J= 13.9, 6.1 Hz, 1H), 2.84 (dd,
J= 13.9, 8.6 Hz, 1H), 1.22 (d,
J= 6.3 Hz, 3H), 1.14 (d,
J= 6.3 Hz, 3H)。LCMS：MS
m/z= 357.87 [M+1]，t
R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.19 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
(2S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3-(4-(((((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )(4- 硝基苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 苯基 ) 丙酸異丙酯 .在0℃下將含L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(97.2 mg，0.70 mmol)之二氯甲烷(8.0 mL)添加至二氯磷酸4-硝基苯酯(179.7 mg，0.70 mmol)於二氯甲烷(7.5 mL)中之溶液中。添加完成後，逐滴添加三乙胺(0.22 mL，1.57 mmol)。60分鐘後，在0℃下依序添加含((苯甲氧基)羰基)-L-酪胺酸異丙酯(250.9 mg，0.70 mmol)之二氯甲烷(8.0 mL)及三乙胺(0.11 mL，0.78 mmol)，且接著使所得混合物升溫至RT。20分鐘後，反應混合物用水(2 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.43 (ddd,
J= 16.0, 9.2, 1.1 Hz, 2H), 7.36 - 7.09 (m, 9H), 5.03 (s, 2H), 4.97 (p,
J= 6.2 Hz, 1H), 4.35 (d,
J= 8.2 Hz, 1H), 4.14 - 3.95 (m, 1H), 3.62 (d,
J= 4.5 Hz, 3H), 3.12 (dt,
J= 12.6, 5.9 Hz, 1H), 2.92 (t,
J= 11.6 Hz, 1H), 1.35 - 1.30 (m, 3H), 1.22 (d,
J= 6.2 Hz, 3H), 1.16 (d,
J= 6.2 Hz, 4H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ -1.31, -1.52。LCMS：MS
m/z= 644.07 [M+1]，t
R= 1.56 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.17 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
中間物70. ((2-(甲硫基)乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
將二氯磷酸4-硝基苯酯(512 mg，2 mmol)與10 mL無水二氯甲烷混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(335 mg，2 mmol)溶解於無水二氯甲烷(3 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物30 min。將三乙胺(927 µL，6.6 mmol)溶解於無水二氯甲烷(1 mL)中，且逐滴添加至反應物中，並且攪拌反應物60 min。一次性添加2-(甲硫基)乙醇(74 µL，2 mmol)，且攪拌反應混合物16 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋且用水(3 × 20 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.33 (m, 2H), 5.02 (m, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.07 - 3.94 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 2.84 - 2.73 (m, 2H), 2.14 (m, 3H), 1.40 (m, 3H), 1.29 - 1.19 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.08, 2.20。LCMS：MS
m/z= 834.5 [2M+Na]；405.1 [M-1]，t
R= 1.33 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.60 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
中間物71. ((2-甲氧基乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
將二氯磷酸4-硝基苯酯(512 mg，2 mmol)與10 mL無水二氯甲烷混合，且在冰浴中在氮氣氛圍下攪拌。將L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(335 mg，2 mmol)溶解於無水二氯甲烷(3 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應混合物30 min。將三乙胺(927 µL，6.6 mmol)溶解於無水二氯甲烷(1 mL)中，且逐滴添加至反應混合物中。攪拌反應混合物60 min。一次性添加2-甲氧基乙醇(158 µL，2 mmol)，且攪拌反應混合物16 h。反應混合物用二氯甲烷(15 mL)稀釋且用水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-50%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.25 - 8.15 (m, 2H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 5.00 (m, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 2H), 4.06 - 3.82 (m, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 2H), 3.37 (m, 3H), 1.41 - 1.34 (m, 3H), 1.27 - 1.18 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.52, 2.69。LCMS：MS
m/z= 391.0 [M+1]；389.1 [M-1]，t
R= 1.24 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.29 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
中間物72. ((2-(甲基磺醯基)乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
將***(280 µL，3 mmol)溶解於無水四氫呋喃(10 mL)中，且在氮氣氛圍下在冰浴中攪拌。將2-(甲基磺醯基)乙醇(280 µL，3 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物1 h。一次性添加L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(503 mg，3 mmol)，且攪拌反應混合物1 h。將三乙胺(1.38 mL，9.9 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2 mL)中，且逐滴添加至反應物中。攪拌反應物90 min。一次性添加對硝基苯酚(417 mg，3 mmol)。添加三乙胺(460 µL，3.3 mmol)。攪拌反應混合物16 h。
反應混合物接著用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用水(5 × 15 mL)洗滌，接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.28 - 8.16 (m, 2H), 7.44 - 7.32 (m, 2H), 5.00 (m, 1H), 4.71 - 4.51 (m, 2H), 4.06 - 3.85 (m, 2H), 3.51 - 3.33 (m, 2H), 2.96 (m, 3H), 1.40 - 1.35 (m, 3H), 1.27 - 1.20 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.06, 2.29。LCMS：MS
m/z= 439.0 [M+1]；t
R= 1.18 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.08 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。
中間物73. ((全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-
L-丙胺酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯單一異構體
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯 .在氬氣氛圍下在0℃下，向(三級丁氧基羰基)-
L-丙胺酸(12.41 g，66 mmol)及2-(2-乙氧基乙氧基)乙-1-醇(8.00 g，60 mmol)於無水二氯甲烷(100 mL)中之經攪拌溶液中添加
N-甲基嗎啉(19.67 mL，179 mmol)、4-(二甲基胺基)吡啶(0.15 g，1.2 mmol)及三丙基膦酸環酐(42.6 mL，72 mmol，50%於乙酸乙酯中)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時。反應混合物用水(50 mL)洗滌，用10%檸檬酸溶液(2 × 40 mL)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 40 mL)洗滌兩次，且用鹽水(50 mL)洗滌一次，經硫酸鈉乾燥，經由3 cm矽膠層過濾，用另外的二氯甲烷洗滌該矽膠層。合併之有機物經減壓濃縮，與二氯甲烷共蒸餾，且高真空乾燥隔夜，得到產物。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 7.27 (d,
J= 7.4 Hz, 1H), 4.23 - 4.14 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.64 - 3.56 (m, 2H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.39 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 1.23 (d,
J= 7.4 Hz, 3H), 1.09 (t,
J= 7.0 Hz, 3H)。
(( 全氟苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-
L-
丙胺酸 2-(2- 乙氧基乙氧基 ) 乙酯單一異構體 .將中間物(三級丁氧基羰基)-
L-丙胺酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯(18.3 g，59.93 mmol)溶解於50 mL含4 M HCl之1,4-二㗁烷中，且將反應混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮，並與甲苯共蒸餾，得到固體，高真空乾燥該固體1小時。將固體懸浮於二氯甲烷(100 mL)中，且在-78℃下依序添加二氯磷酸苯酯(9.81 mL，65.92 mmol)及三乙胺(18.28 mL，131.84 mmol)，並且在室溫下攪拌所得混合物2小時。將反應混合物冷卻至0℃，且接著依序添加五氟苯酚(11.03 g，59.93 mmol)及三乙胺(10.80 mL，78.05 mmol)，且接著使所得混合物升溫至室溫。3小時後，將反應混合物冷卻至0℃並濾出固體，用飽和氯化銨水溶液(100 mL)、水(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌濾液。有機物經硫酸鈉乾燥，且經由3 cm矽膠層過濾，用1:1乙酸乙酯及二氯甲烷混合物(100 mL)洗滌該矽膠層。合併之有機物經減壓濃縮，得到21.7 g粗產物(基於NMR，呈關於磷之兩種異構體之混合物)。將固體溶解於最少量的沸騰二異丙基醚中，且在室溫下劇烈攪拌混合物隔夜。濾出固體產物，且用冷的二異丙基醚(2 × 20 mL)及己烷(3 × 40 mL)洗滌，得到產物(基於NMR，關於磷之單一異構體)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 7.47 - 7.36 (m, 2H), 7.30 - 7.20 (m, 3H), 6.92 (dd,
J= 14.2, 9.9 Hz, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 2H), 3.53 - 3.47 (m, 2H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 1.29 (d,
J= 7.1 Hz, 3H), 1.07 (t,
J= 7.0 Hz, 3H)。
19F NMR (376 MHz, DMSO-
d 6) δ -154.24 (d,
J= 21.5 Hz, 2F), -160.86 (t,
J= 23.1 Hz, 1F), -163.68 (t,
J= 21.7 Hz, 2F)。
31P NMR (162 MHz, DMSO-
d 6) δ 0.40。LCMS：MS
m/z= 528.06 [M+1]，t
R= 1.64 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。
中間物74. ((S)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
將中間物25 (1.3 g，2.90 mmol)懸浮於二異丙基醚(3 mL)中，且在RT下添加對硝基苯酚(14 mg，0.1 mmol)及DBU (0.05 mL，0.335 mmol)。攪拌所得混合物4 h，且添加1 N鹽酸水溶液及乙酸乙酯。分離有機層，且經無水硫酸鈉乾燥，並且減壓濃縮。將所得殘餘物溶解於二異丙基醚(2 mL)中，且用超音波處理以使固體分散。藉由真空過濾收集固體，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.27 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.28 - 7.17 (m, 3H), 4.68 (dt, J = 8.9, 4.6 Hz, 1H), 4.02 (dq, J = 9.9, 7.2 Hz, 1H), 1.80 - 1.64 (m, 5H), 1.52 (s, 1H), 1.57 - 1.46 (m, 1H), 1.44 - 1.22 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ -1.32。MS
m/z= 449 (M+H)
+。
B. 化合物前驅體實例1. 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(S)-異丙酯
將中間物1 (50 mg，0.172 mmol)及中間物18 (84 mg，0.206 mmol)混合於無水N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。一次性添加氯化鎂(36 mg，0.378 mmol)。將反應混合物在50℃下加熱。添加N,N-二異丙基乙胺(75 μL，0.43 mmol)，且在50℃下攪拌反應物4.5小時。使反應混合物冷卻，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-2-5%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d,
J= 5.1 Hz, 1H), 4.91 - 4.84 (m, 1H), 4.62 (dd,
J= 5.6, 5.0 Hz, 1H), 4.47 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.85 (dq,
J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 1.25 (d,
J= 7.2 Hz, 3H), 1.15 (t,
J= 6.4 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.31。MS
m/z= 561.0 [M+1], 559.0 [M-1]。
實例2. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環丁基甲酯
將中間物2 (50 mg，0.116 mmol)及中間物15 (60 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(17 mg，0.174 mmol)。使反應物升溫至60℃並攪拌20 min。添加N,N-二異丙基乙胺(50 μL，0.29 mmol)，且在60℃下攪拌反應物17 h。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(330 μL)且攪拌20 h。反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加1 N氫氧化鈉溶液，得到pH值10。收集有機層，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (dd,
J= 4.5, 2.3 Hz, 1H), 6.73 (dd,
J= 4.5, 2.4 Hz, 1H), 5.53 - 5.45 (m, 1H), 4.62 (q,
J= 5.5 Hz, 1H), 4.54 - 4.28 (m, 3H), 4.10 - 3.80 (m, 3H), 2.65 - 2.45 (m, 1H), 2.08 - 1.62 (m, 6H), 1.26 (d,
J= 7.2Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.25, 3.24。MS
m/z= 587.2 [M+1], 585.2 [M-1]。
實例3. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)-3-苯基丙酸(2S)-乙酯
在RT下向中間物4 (52.0 mg，0.121 mmol)、中間物19 (68.0 mg，0.145 mmol)及氯化鎂(17.2 mg，0.181 mmol)之混合物中添加THF (1.0 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌10 min。接著添加
N,N-二異丙基乙胺(0.052 mL，0.301 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物30 min。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.200 mL，2.4 mmol)。1 h後，使反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉水溶液淬滅至pH = 7。粗混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini NX 10μ C18 250 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。LC/MS：t
R= 1.27 min，MS
m/z= 623.00 [M+1]；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC。MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.00 mm。溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水。梯度：0 min-2.4 min 2-100% ACN，2.4 min-2.80 min 100% ACN，2.8 min-2.85 min 100%-2% ACN，2.85 min-3.0 min 2% ACN，1.8 mL/min。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 7.88 (m, 3H), 7.37 - 6.84 (m, 12H), 6.71 (t,
J= 4.2 Hz, 2H), 6.22 (ddd,
J= 23.7, 12.9, 10.5 Hz, 1H), 5.36 (dd,
J= 9.2, 6.1 Hz, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.16 (dd,
J= 16.2, 5.3 Hz, 1H), 4.09 - 3.83 (m, 5H), 2.93 (dt,
J= 14.3, 7.3 Hz, 1H), 2.78 (td,
J= 13.2, 12.2, 8.6 Hz, 1H), 1.01 (t, 7.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, DMSO-
d 6) δ 3.85 (s), 2.86 (s)。
實例4. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環己酯
在室溫下向中間物4 (99 mg，0.30 mmol)、中間物25 (201 mg，0.45 mmol)及MgCl
2(43 mg，0.45 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.75 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物15 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到中間物，將其溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.1 mL)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-80%乙腈/水梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.5H), 7.78 (s, 0.5H), 7.42 - 7.05 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.64 (m, 2H), 4.57 - 4.25 (m, 3H), 3.86 (m, 1H), 1.91 - 1.61 (m, 4H), 1.61 - 1.09 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.3。MS
m/z= 601 (M+H)
+。
非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷70%乙醇30%)純化。
實例5. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
實例4之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.23 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.69 (td,
J= 8.8, 4.2 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.53 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd,
J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.86 (dq,
J= 9.4, 7.1 Hz, 1H), 1.85 - 1.62 (m, 4H), 1.58 - 1.20 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.31。
實例6. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
實例4之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.71 - 4.56 (m, 2H), 4.46 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.87 (dq,
J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 1.80 - 1.61 (m, 4H), 1.55 - 1.21 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.31。
實例7.
將中間物2 (60 mg，0.139 mmol)溶解於無水四氫呋喃(2 mL)中。一次性添加***(25 μL，0.278 mmol)並攪拌30 min。添加更多***(100 μL)並攪拌30 min。添加2-胺基丙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(87 mg，0.417 mmol)及三乙胺(116 μL，0.834 mmol)，並攪拌30 min。添加更多2-胺基丙酸(S)-2-乙基丁酯鹽酸鹽(500 mg)。添加三乙胺，得到pH值9。攪拌反應物16小時，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×20 mL)、5%檸檬酸水溶液(20 mL)、接著用鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，添加12 M鹽酸(400 μL)，且攪拌混合物4小時。反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×10 mL)、接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗產物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 1H), 4.49 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 4.31 (dd,
J= 11.1, 7.1 Hz, 1H), 4.21 (dd,
J= 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 4H), 3.94 - 3.84 (m, 2H), 1.58 - 1.29 (m, 10H), 0.98 - 0.82 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 13.61。MS
m/z= 682.1 [M+1], 680.1 [M-1]。
實例8. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙酸(2S)-環丙基甲酯
在室溫下向中間物4 (70 mg，0.211 mmol)、中間物20 (133 mg，0.32 mmol)及MgCl
2(30 mg，0.32 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.092 mL，0.53 mmol)。在60℃下攪拌所得混合物15 h，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。將所得殘餘物溶解於ACN (3 mL)中，且添加濃HCl (0.3 mL)。在室溫下攪拌混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-70%乙腈/水梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.10 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.62 (m , 1H), 4.58 - 4.24 (m, 3H), 4.00 - 3.69 (m, 3H), 1.27 (m, 3H), 1.17 - 0.95 (m, 1H), 0.49 (m, 2H), 0.29 - 0.15 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.29, 3.22。MS
m/z573 (M+H)
+。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物藉由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)分離，得到非對映異構體：
實例 9. 實例8之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (dd,
J= 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.22 - 7.06 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd,
J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 3H), 1.26 (dd,
J= 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.15 - 1.04 (m, 1H), 0.58 - 0.45 (m, 2H), 0.32 - 0.18 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.30。
實例 10. 實例8之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.29 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d,
J= 5.1 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.47 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.34 (dd,
J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.98 - 3.82 (m, 2H), 3.78 (dd,
J= 11.4, 7.3 Hz, 1H), 1.27 (dd,
J= 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.11 - 0.98 (m, 1H), 0.52 - 0.45 (m, 2H), 0.25 - 0.14 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。
實例11. 特戊酸2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)乙酯
在RT下向中間物4 (22.0 mg，0.066 mmol)、中間物21 (28.1 mg，0.066 mmol)及氯化鎂(6.3 mg，0.166 mmol)之混合物中添加乙腈(0.50 mL)。使所得懸浮液升溫至50℃，且攪拌5 min。接著添加
N,N-二異丙基乙胺(0.03 mL，0.066 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物1 h。接著使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(12 M，0.077 mL，0.93 mmol)。1 h後，反應混合物用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及乙酸乙酯(20 mL)稀釋。分離各層，且有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，40-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。MS
m/z= 575.00 [M+H]。
(S)及(R)非對映異構體之分離. 產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IC，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
實例 12. 實例11之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.29 (m, 2H), 3.96 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.14 (dt, J = 11.8, 5.7 Hz, 2H), 1.12 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, CD
3OD) δ 5.24 (s)。MS
m/z= 575.00 [M+H]。
實例 13. 實例11之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ 7.77 (s, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 10.9, 6.1 Hz, 1H), 4.33 (dd, J = 10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 1.15 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, CD
3OD) δ 5.05 (br s)。MS
m/z= 575.00 [M+H]。
實例14.
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物60 (95 mg，0.18 mmol)溶解於無水四氫呋喃(3 mL)中。一次性添加氯化鎂(21 mg，0.225 mmol)。使反應物升溫至50℃並攪拌30 min。添加N,N-二異丙基乙胺(65 μL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。將反應物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用5%碳酸鈉水溶液(3×20 mL)洗滌，並且接著用鹽水(20 mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中且在冰浴中攪拌。逐滴添加12 M鹽酸(300 μL)，且在冰浴中攪拌60 min。將反應物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且在冰浴中冷卻。逐滴添加飽和碳酸氫鈉水溶液，得到pH值16。收集有機層，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。粗產物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-3-8%甲醇/二氯甲烷)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於乙腈及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 4.70 (m, 2H), 4.61 (dd,
J= 5.7, 4.9 Hz, 1H), 4.49 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 1.88 - 1.63 (m, 8H), 1.58 - 1.25 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 13.64。MS
m/z= 678.1 [M+1], 676.2 [M-1]。
實例15. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-1-甲基吡咯啶-3-基酯
將中間物4 (99 mg，0.3 mmol)及中間物23 (162 mg，0.36 mmol)混合且溶解於2 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(86 mg，0.9 mmol)。添加DIPEA (131 μL，0.75 mmol)，且在50℃下攪拌反應物5小時。
將反應物用EtOAc (15 mL)稀釋，且用水(4×15 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10-20%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (7 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(500 μL)。在冰浴中攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用EtOAc (2×10 mL)萃取水性部分。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.18 - 4.98 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 3H), 3.89 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.69 - 2.54 (m, 2H), 2.32 (m, 4H), 2.23 - 2.08 (m, 1H), 1.78 (m, 1H), 1.27 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.28, 3.14。LCMS：MS
m/z= 602.2 [M+1], 600.2 [M-1]，t
R= 0.99 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 1.84 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.868 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例16. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯
以與針對實例3所描述類似的方式，由中間物27 (129 mg，0.25 mmol)及中間物4 (55 mg，0.25 mmol)獲得產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 ( m, 1H), 5.50 (dd,
J= 5.1, 1.9 Hz, 1H), 4.69 - 4.49 (m, 2H), 4.49 - 4.32 (m, 3H), 3.93 - 3.75 (m, 1H), 2.23 - 1.71 (m, 5H), 1.44 - 1.20 (m, 7H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.28, 3.22。
19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.31 -75.40 (m)。MS
m/z= 669 [M+H]。
產物藉由使用30%乙醇之SFC (AD-H4.6X100m管柱)分離。
實例17. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯.
實例16之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (t,
J= 7.9 Hz, 2H), 7.21 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (q,
J= 5.2 Hz, 2H), 4.52 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd,
J= 10.9, 6.0 Hz, 1H), 4.35 (dd,
J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 3.83 (dq,
J= 9.1, 7.1 Hz, 1H), 2.10 (m, 1H), 1.96 (m, 4H), 1.38 (m, 4H), 1.23 (dd,
J= 7.1, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.29。
19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.41 (d,
J= 8.6 Hz)。
實例18. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三氟甲基)環己酯
實例16之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.58 (m, 2H), 4.43 (m, 2H), 4.35 (dd,
J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.86 (dq,
J= 9.9, 7.4 Hz, 1H), 2.14 - 1.81 (m, 5H), 1.32 (m, 4H), 1.24 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22。
19F NMR (377 MHz, 甲醇-d4) δ -75.33 (d,
J= 8.5 Hz)。
以與針對實例3所描述類似的方式，亦由中間物29 (701 mg，1.36 mmol)及中間物4 (300 mg，0.91 mmol)獲得產物。
實例19. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-甲基哌啶-4-基酯
在室溫下向中間物4 (70 mg，0.211 mmol)、中間物30 (293 mg，0.317 mmol)及MgCl
2(30 mg，0.317 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.09 mL，0.528 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於乙腈(3 mL)中，且添加濃HCl (0.5 mL)。攪拌所得混合物2 h，真空濃縮且凍乾，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.85 (m, 1H), 7.41 - 7.12 (m, 5H), 6.97 (m, 1H), 6.79 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.31 (m, 3H), 3.98 (m, 1H), 3.66(m, 5H), 2.82 (m, 2H), 2.10 (m, 4H), 1.30 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32, 3.10。LCMS：MS
m/z= 616.24 [M+1-HCl]；t
R= 0.54 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
實例20. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(四氫-2H-哌喃-4-基)甲酯
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物31 (84 mg，0.18 mmol)混合且溶解於無水THF (5 mL)中。一次性添加氯化鎂(86 mg，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物10 min。添加DIPEA (158 μL，0.906 mmol)，且在50℃下攪拌反應物2小時，添加更多氯化鎂(50 mg)，且在50℃下攪拌16小時。
將反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)洗滌，並且用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮，接著將其溶解於MeCN (5 mL)中。逐滴添加12 M HCl (水溶液) (300 μL)。攪拌反應物1小時。反應物用EtOAc (25 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.41 - 7.07 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.57 - 5.40 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.56 - 4.28 (m, 3H), 3.87 (m, 5H), 3.31 (m, 2H), 1.94 - 1.72 (m, 1H), 1.63 - 1.46 (m, 2H), 1.34 - 1.16 (m, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d4) δ 3.23 (s), 3.19 (s)。MS
m/z= 617.1 [M+1]；615.0 [M-1]。
實例21. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
以與針對實例3所描述類似的方式，由中間物32 (116 mg，0.23 mmol)及中間物4 (51 mg，0.15 mmol)獲得產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.18 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.76 - 6.69 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.47 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.93 - 3.76 (m, 1H), 1.93 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.24 (m, 5H), 1.13 - 0.89 (m, 3H), 0.84 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.35, 3.28。MS
m/z= 657 [M+H]。
混合物藉由Chiralpak SFC (Chiralpak ID 21×250 mm管柱，30%甲醇)分離。
實例22. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
實例21之第一溶離非對映異構體。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d,
J= 4.9 Hz, 1H), 4.59 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.51 (tt,
J= 11.3, 4.5 Hz, 1H), 4.46 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (dd,
J= 10.9, 5.6 Hz, 1H), 3.89 - 3.81 (m, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 2H), 1.75 (t,
J= 12.0 Hz, 2H), 1.31 - 1.18 (m, 5H), 1.12 - 0.89 (m, 3H), 0.83 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25。
實例23. ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸反式-4-(三級丁基)環己酯
實例21之第二溶離非對映異構體。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.18 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.59 - 4.43 (m, 3H), 4.36 (dd,
J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.82 (q,
J= 7.9 Hz, 1H), 1.94 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.36 - 1.20 (m, 5H), 1.13 - 0.94 (m, 3H), 0.85 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.32。
實例24. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-乙基丁酯
在RT下將乙腈(2.5 mL)添加至中間物4 (200 mg，0.604 mmol)、中間物16 (280 mg，0.604 mmol)及氯化鎂(57 mg，0.60 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持5 min，且添加
N,N-二異丙基乙胺(0.263 mL，0.604 mmol)。22 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.5 mL)。1 h後，反應混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.78 (s, 0.6H), 7.75 (s, 0.4H), 7.40 - 7.26 (m, 5H), 6.85 - 6.80 (m, 1H), 6.75 - 6.69 (m, 1H), 5.54 - 5.48 (m, 2H), 5.06 (d,
J= 7.5 Hz, 1.2H), 4.99 (d,
J= 7.3 Hz, 0.8H), 4.64 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.46 (m, 1H), 4.41 - 4.20 (m, 2H), 4.07 - 3.77 (m, 2H), 1.54 - 1.21 (m, 8H), 0.95 - 0.77 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.90 (s), 7.82 (s)。LCMS：MS
m/z= 617.14 [M+1]，t
R= 1.26 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.057 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。
實例25. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸2-乙基丁酯
在室溫下向中間物4 (700 mg，2.113 mmol)、中間物17 (998 mg，2.218 mmol)及氯化鎂(302 mg，3.169 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(8.5 mL)，接著添加
N,N-二異丙基乙胺(0.92 mL，5.282 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(80 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷-14%甲醇/二氯甲烷作為溶離劑)純化。將所獲得的純物質溶解於無水乙腈(10 mL)中，且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(4 mL，48 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用水稀釋。用3 N氫氧化鈉中和溶液，且用二氯甲烷萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。所獲得殘餘物藉由SiO
2管柱層析(40 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷- 20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.49 - 4.29 (m, 3H), 4.04 - 3.82 (m, 3H), 1.43 (dq, J = 12.5, 6.1 Hz, 1H), 1.37 - 1.23 (m, 7H), 0.84 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.73。MS
m/z= 603 [M+1]。
實例26. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸((1r,4S)-4-(三氟甲基)環己基)甲酯
在室溫下向中間物4 (0.06 g，0.181 mmol)、中間物33 (0.115 g，0.217 mmol)及氯化鎂(0.028 g，0.29 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(1.5 mL)，接著添加
N,N-二異丙基乙胺(0.079 mL，0.453 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用飽和氯化鈉溶液及二氯甲烷稀釋。分離各層，且有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(40 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷- 14%甲醇/二氯甲烷作為溶離劑)純化。將所獲得的純物質溶解於無水乙腈(2 mL)中，且在冰浴中冷卻，接著逐滴添加濃鹽酸(0.1 mL，1.2 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1 h。1 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用飽和碳酸氫鈉溶液(1 mL)稀釋。所得混合物藉由製備型HPLC (Phenominex Synergi 4μ Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，15%-85%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.82 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 5H), 6.81 - 6.67 (m, 2H), 6.54 (s, 2H), 5.50 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.72 - 4.26 (m, 6H), 4.05 - 3.69 (m, 3H), 2.17 - 1.93 (m, 1H), 1.88 (dt, J = 13.3, 3.6 Hz, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H), 1.55 (dtq, J = 12.0, 5.8, 3.0 Hz, 1H), 1.33 - 1.14 (m, 5H), 1.10 - 0.86 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.77, - 2.68。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -74.72 (d, J = 8.7 Hz)。MS
m/z= 683.20 [M+1]。
(S) 及 (R) 非對映異構體之分離 .產物經由對掌性製備型HPLC (AD-H 5μm 21 × 250mm，庚烷70%，乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 27.實例26之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.88 (s, 1H), 7.35 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.79 - 6.71 (m, 2H), 6.23 (s, 2H), 5.48 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.66 - 4.55 (m, 1H), 4.50 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.1, 6.5 Hz, 1H), 4.37 - 4.17 (m, 3H), 4.07 - 3.83 (m, 4H), 1.93 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 1.81 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 1.62 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 1.40 - 1.20 (m, 6H), 1.03 (q, J = 12.9 Hz, 2H)。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -74.83 (d, J = 8.8 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.59。MS
m/z= 683.20 [M+1]。
實例 28.實例26之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.37 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.31 - 7.14 (m, 3H), 6.75 (s, 2H), 6.24 (s, 2H), 5.47 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.58 (q, J = 5.1 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.43 - 4.20 (m, 4H), 4.05 - 3.73 (m, 4H), 1.91 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 1.78 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 1.65 - 1.47 (m, 1H), 1.39 - 1.19 (m, 6H), 1.01 (t, J = 13.0 Hz, 2H)。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -74.83 (d, J = 8.8 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.67。MS
m/z= 683.20 [M+1]。
實例29. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸乙酯
向中間物4 (150 mg，0.45 mmol)、中間物34 (298 mg，0.68 mmol)及MgCl
2(65 mg，0.68 mmol)於THF (6 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.20 mL，1.13 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，用EtOAc (150 mL)稀釋，用鹽水(50 mL ×2)洗滌，乾燥，真空濃縮，再溶解於乙腈(6 mL)中，且在冰浴中添加濃HCl (0.3 mL)。將所得混合物在冰浴中攪拌1 h且在室溫下攪拌1 h，用飽和NaHCO
3(2 mL)處理，藉由HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，5-70%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.31 (d,
J= 7.7 Hz, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.49 (d,
J= 5.1 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 10.9, 6.2 Hz, 1H), 4.33 (dd,
J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 4.11 - 3.98 (m, 2H), 3.87 (dd,
J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 1.25 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.16 (t,
J= 7.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.26。LCMS：MS
m/z= 547.12 [M+1]；t
R= 0.76 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.03 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例30. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)-L-丙胺酸環己酯
向中間物4 (65 mg，0.196 mmol)、中間物59 (124 mg，0.235 mmol)及MgCl
2(40 mg，0.42 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.085 mL，0.490 mmol)。在約50℃下攪拌所得混合物約2 h，冷卻，藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於乙腈(2 mL)中，且在冰浴下添加濃HCl (0.1 mL)。接著在冰浴下攪拌所得混合物約2 h，且緩慢添加飽和NaHCO
3(2 mL)。所得混合物接著藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-80%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.86 (s, 1H), 6.81 - 6.67 (m, 2H), 6.48 (s, 2H), 5.53 - 5.44 (m, 2H), 4.71 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.13 - 3.69 (m, 7H), 1.72 (m, 4H), 1.58 - 1.19 (m, 17H), 0.88 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.68, 12.66。LCMS：MS
m/z= 680.31 [M+1]。
實例31. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)丙胺酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯
向中間物4 (0.5 g，1.509 mmol)、中間物36 (0.905 g，1.66 mmol)及氯化鎂(0.206 g，2.264 mmol)之混合物中添加四氫呋喃(7 mL)，接著添加
N,N-二異丙基乙胺(0.657 mL，3.773 mmol)，且在50℃下攪拌所得混合物3 h。接著減壓濃縮反應混合物，且所獲得殘餘物用乙腈(11 mL)稀釋，且冷卻至0℃。添加濃鹽酸(1 mL，12 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物2 h。2 h後，將反應混合物在冰浴中冷卻，且用5 N氫氧化鈉水溶液中和。所得混合物用乙酸乙酯萃取。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(80 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，100%二氯甲烷- 20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.38 - 7.12 (m, 5H), 6.85 (dd, J = 4.5, 1.8 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 4.5, 3.2 Hz, 1H), 5.49 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.63 (q, J = 5.5 Hz, 1H), 4.55 - 4.30 (m, 3H), 3.98 - 3.86 (m, 3H), 3.91 - 3.76 (m, 2H), 3.07 - 2.86 (m, 4H), 2.32 - 2.17 (m, 2H), 1.61 (t, J = 12.5 Hz, 4H), 1.26 (ddd, J = 7.1, 3.5, 1.1 Hz, 4H)。
19F NMR (377 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ -71.22 (td, J = 9.8, 4.6 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.23, 3.18。LCMS：MS
m/z= 349.86 [M+1]；t
R= 0.70 min (次要異構體) - 0.72 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.525 min (次要異構體), 3.56 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例32. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯
向中間物4 (50 mg，0.151 mmol)、中間物37 (116 mg，0.226 mmol)及MgCl
2(22 mg，0.226 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.574 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於ACN (2 mL)中，且添加濃HCl (0.1 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h，用5 N NaOH中和，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10μ C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，20-65%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度)純化。濃縮後，將殘餘物溶解於EtOAc中，且用飽和NaHCO
3溶液洗滌，真空濃縮，再溶解於DCM中，且添加一滴濃HCl，產生白色沈澱。濃縮後，將殘餘物溶解於水-乙腈中且凍乾，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.91 (m, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 6H), 6.86 (m, 1H), 5.55 - 5.47 (m, 1H), 5.30 (m , 1H), 4.57 (m, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 3H), 4.06 (m, 1H), 3.68 (m, 2H), 3.32 - 3.09 (m, 2H), 2.19 (s, 2H), 1.40 - 1.23 (m, 8H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.19, 3.01, 2.97, 2.96。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d 4) δ -77.5。LCMS：MS
m/z= 666.23 [M+1]，呈中性形式；t
R= 0.68 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.35, 3.37, 3.38, 3.41 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例33. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-胺基環己酯
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己酯 .在RT下將乙腈(4.5 mL)添加至中間物4 (300 mg，0.91 mmol)、中間物63 (510 mg，0.91 mmol)及氯化鎂(86 mg，0.91 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持20 min，且添加
N,N-二異丙基乙胺(0.39 mL，2.26 mmol)。3.5 h後，使反應混合物冷卻至RT，且用乙酸乙酯(200 mL)稀釋反應混合物，並且用飽和碳酸鈉水溶液(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-10%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ 7.92 (s, 0.25H), 7.91 (s, 0.75H), 7.35 - 7.08 (m, 5H), 6.71 - 6.68 (m, 1H), 6.66 - 6.62 (m, 1H), 5.92 (br s, 2H), 5.65 - 5.60 (m, 1H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 5.10 (d,
J= 6.7 Hz, 0.25H), 5.00 (d,
J= 6.6 Hz, 0.75H), 4.69 - 4.57 (m, 1H), 4.51 - 4.27 (m, 3H), 4.06 - 3.92 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 1H), 3.41 (br s, 1H), 2.03 - 1.84 (m, 4H), 1.76 (br s, 3H), 1.44 (br s, 9H), 1.41 - 1.29 (m, 8H), 1.24 - 1.12 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d
1 ) δ -3.15 (s)。LCMS：MS
m/z= 756.11 [M+1]。
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (1r,4S)-4- 胺基環己酯 .在RT下將濃鹽酸溶液(12 M，0.47 mL)添加至((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己酯(470 mg，0.62 mmol)於乙腈(4.7 mL)中之溶液中。1 h後，將反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用飽和碳酸鈉水溶液中和至pH=7。減壓濃縮所得混合物，且將甲醇(4 mL)添加至殘餘物中。接著添加乙酸乙酯(2 mL)，且藉由過濾移除所產生固體。減壓濃縮濾液，且粗殘餘物藉由製備型HPLC (Gemini 5μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度0.1% TFA)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 8.03 (s, 0.75H), 7.99 (s, 0.25H), 7.42 - 7.12 (m, 6H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 5.57 - 5.51 (m, 1H), 4.74 - 4.60 (m, 1H), 4.56 - 4.49 (m, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 3H), 3.96 - 3.84 (m, 1H), 3.18 - 3.04 (m, 1H), 2.12 - 1.99 (m, 4H), 1.57 - 1.42 (m, 4H), 1.33 - 1.28 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.36 (s), 3.24 (s)。LCMS：MS
m/z= 616.07 [M+1]。
實例34.
向中間物61 (161 mg，0.36 mmol)、中間物4 (100 mg，0.3 mmol)及MgCl
2(43 mg，0.45 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(98 mg，0.76 mmol)。在約50℃下攪拌所得混合物約2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在約室溫下攪拌約2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO
3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 5.00 - 4.92 (m, 1H), 4.91 - 4.85 (m, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.35 - 4.12 (m, 2H), 3.91 - 3.72 (m, 2H), 1.34 - 1.13 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.61。LCMS：MS
m/z= 598.05 [M+1]。
實例35. 雙L-丙胺酸乙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯
向中間物38 (100 mg，0.3 mmol)、中間物4 (151 mg，0.36 mmol)及MgCl
2(43 mg，0.45 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(98 mg，0.76 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO
3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 7.0 Hz, 1H), 4.23 - 3.99 (m, 5H), 3.86 (ddq, J = 19.6, 9.4, 7.1 Hz, 2H), 1.35 - 1.13 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.61。LCMS：MS
m/z= 570.10 [M+1]，t
R= 0.99 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.19 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例36. 雙L-丙胺酸環丁基甲酯磷酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲酯
向中間物62 (132 mg，0.27 mmol)、中間物4 (80 mg，0.24 mmol)及MgCl
2(34 mg，0.36 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(78 mg，0.6 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈(2 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO
3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 7.1 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.14 - 3.98 (m, 3H), 3.98 - 3.80 (m, 3H), 2.60 (dp, J = 22.0, 7.4 Hz, 2H), 2.10 - 1.95 (m, 4H), 1.94 - 1.64 (m, 8H), 1.39 - 1.17 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.54。LCMS：MS
m/z= 650.12 [M+1]。
實例37. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸苯甲酯
將中間物4 (83 mg，0.25 mmol)與中間物39 (126 mg，0.275 mmol)混合且溶解於2 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(71 mg，0.75 mmol)。接著添加DIPEA (87 μL，0.5 mmol)，且在60℃下攪拌反應物16 h。
添加更多中間物39 (30 mg)及DIPEA (52 µL)。在60℃下攪拌反應混合物6 h。接著將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)、接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液) (300 µL)，且在冰浴中攪拌反應物2 h。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，並且接著用鹽水洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.77 (m, 1H), 7.35 - 7.08 (m, 10H), 6.83 (m, 1H), 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.48 (m, 1H), 5.14 - 4.93 (m, 2H), 4.61 (m, 1H), 4.53 - 4.27 (m, 3H), 4.01 - 3.87 (m, 1H), 1.26 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.22, 3.19。LCMS：MS
m/z= 609.1 [M+1]；607.4 [M-1]，t
R= 1.19 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.78 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.626 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例38.
在RT下將乙腈(1 mL)添加至中間物4 (150 mg，0.453 mmol)、中間物40 (176 mg，0.453 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.453 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持10 min，且添加
N,N-二異丙基乙胺(0.197 mL，1.13 mmol)。2 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.25 mL)。1 h後，反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d,
J =4.5 Hz, 1H), 6.77 (d,
J =4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J =4.9 Hz, 1H), 4.64 (dd,
J =5.6, 5.0 Hz, 1H), 4.51 (d,
J =5.7 Hz, 1H), 4.30 (dd,
J =11.1, 6.9 Hz, 1H), 4.19 (dd,
J =11.1, 5.6 Hz, 1H), 3.86 (ddd,
J =14.7, 9.4, 7.2 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 1.30 (dd,
J =7.2, 1.0 Hz, 3H), 1.25 (dd,
J =7.2, 0.8 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 13.58 (s)。LCMS：MS
m/z= 542.08 [M+1]，t
R= 0.88 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 1.87 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.052 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例39. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
在RT下將乙腈(5 mL)添加至中間物4 (348 mg，1.05 mmol)、中間物41 (399 mg，1.05 mmol)及氯化鎂(100 mg，1.05 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持10 min，且添加
N,N-二異丙基乙胺(0.475 mL，2.63 mmol)。2.5 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.5 mL)。1 h後，反應混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且所得混合物用飽和碳酸鈉水溶液(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.80 (s, 0.65H), 7.78 (s, 0.35H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 6.75 - 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.47 (m, 1H), 4.66 - 4.60 (m, 1H), 4.55 - 4.29 (m, 3H), 3.95 - 3.80 (m, 1H), 3.64 (s, 1H), 3.60 (s, 2H), 1.27 - 1.22 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.24 (s)。LCMS：MS
m/z= 533.13 [M+1]，t
R= 1.02 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.28 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.712 min (次要異構體), 3.775 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例40. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(2-(甲硫基)乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物70 (67 mg，0.165 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.75 mmol)，且在RT下攪拌反應物36 h。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-3%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(300 µL)。在冰浴中攪拌反應混合物2 h。用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應混合物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.81 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.92 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.40 - 4.21 (m, 2H), 4.17 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.85 - 3.72 (m, 1H), 2.72 (m, 2H), 2.09 (m, 3H), 1.29 (m, 3H), 1.25 - 1.21 (m, 3H), 1.17 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.74, 7.82。LCMS：MS
m/z= 559.0 [M+1]；557.2 [M-1]，t
R= 1.04 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.36 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.976, 4.022 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例41. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(2-甲氧基乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物71 (64 mg，0.165 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.375 mmol)，且在RT下攪拌反應物20 h。
反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-3%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得物質溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(300 µL)。在冰浴中攪拌反應混合物2 h。用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液。攪拌混合物10 min。有機萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.89 - 6.83 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.01 - 4.84 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 1H), 4.19 - 4.13 (m, 2H), 3.77 (m, 1H), 3.63 - 3.51 (m, 2H), 3.35 (m, 3H), 1.28 (m, 3H), 1.17 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.98, 8.04。LCMS：MS
m/z= 543.1 [M+1]；541.2 [M-1]，t
R= 0.96 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.18 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.599, 3.619 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例42. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(2-(甲基磺醯基)乙氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
將中間物4 (66 mg，0.2 mmol)及中間物72 (100 mg，0.22 mmol)混合且溶解於2 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(57 mg，0.6 mmol)。添加DIPEA (87 µL，0.5 mmol)，且在35℃下攪拌反應物16 h。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100% B/己烷(B = 含3% MeOH之乙酸乙酯))純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。
將所得物質溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(250 µL)。在冰浴中攪拌反應物2 h。用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應物，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)。攪拌混合物10 min。有機萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.82 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.77 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.03 - 4.85 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.54 - 4.44 (m, 2H), 4.43 - 4.21 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.57 - 3.36 (m, 2H), 2.97 (m, 3H), 1.30 (m, 3H), 1.26 - 1.14 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.79, 7.92。LCMS：MS
m/z= 591.1 [M+1]，t
R= 0.92 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.07 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.435 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例43. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(二甲基胺甲醯基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
在室溫下向中間物4 (70 mg，0.211 mmol)、中間物43 (160 mg，0.317 mmol)及MgCl
2(30 mg，0.317 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.528 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於乙腈(2 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。攪拌混合物2 h，在冰浴下添加NaHCO
3水溶液(2 mL)，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (m, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.23 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.00 - 4.81 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.54 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.92 - 3.79 (m, 1H), 3.07 (d,
J= 3.4 Hz, 3H), 2.95 (m, 3H), 1.28 (m, 3H), 1.22 - 1.12 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.18。LCMS：MS
m/z= 632.32 [M+1]；t
R= 0.67 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.84 min (18%), 3.85 (81%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min
實例44. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯
((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4- 胺基吡咯并 [2 ,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-4- 氰基 -2,2- 二甲基四氫呋喃并 [3,4-d][1,3] 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯. 向中間物44 (133 mg，0.31 mmol)、中間物4 (130 mg，0.39 mmol)及MgCl
2(45 mg，0.47 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(127 mg，0.98 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 615.18 [M+1]，t
R= 1.18 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.40 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸氧雜環丁烷 -3- 基酯. 將((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基酯(500 mg，0.81 mmol)溶解於10 mL ACN中，將20 mL TFA與10 mL水混合，接著將該TFA溶液添加至上述反應混合物中，在RT下攪拌30 min，用NaHCO
3水溶液淬滅，用EtOAc萃取，蒸發有機溶劑，藉由製備型HPLC純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.38 - 7.11 (m, 5H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 5.6, 4.5 Hz, 1H), 5.50 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 5.32 (dtt, J = 23.9, 6.3, 5.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 2H), 4.63 (td, J = 5.3, 4.1 Hz, 1H), 4.60 - 4.44 (m, 4H), 4.44 - 4.26 (m, 2H), 4.01 - 3.85 (m, 1H), 1.29 (dt, J = 7.2, 1.3 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.3, 3.29。LCMS：MS
m/z= 575.11 [M+1]，t
R= 0.98 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.63及3.70 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例45. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丙酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.33 mL，1.89 mmol)及氯化鎂(107.8 mg，1.13 mmol)添加至中間物4 (250.0 mg，0.76 mmol)及中間物45 (462.16 mg，1.13 mmol)於四氫呋喃(7.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.53 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(7.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(75 mL)及鹽水(75 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (d,
J= 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd,
J= 4.5, 2.9 Hz, 1H), 6.74 (dd,
J= 4.6, 2.1 Hz, 1H), 5.50 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.63 (q,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.31 (m, 3H), 4.07 - 3.82 (m, 3H), 1.68 - 1.49 (m, 2H), 1.31 - 1.26 (m, 3H), 0.90 (dt,
J= 9.9, 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.27。LCMS：MS
m/z= 561.20 [M+1]，t
R= 0.78 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.70 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性SFC (Chiralpak AD-H，5μm，21 × 250 mm，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 46.實例45之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.33 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.53 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.48 (dd,
J= 10.9, 6.0 Hz, 1H), 4.36 (dd,
J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.88 (dq,
J= 9.4, 7.1 Hz, 1H), 1.62 (h,
J= 7.3 Hz, 2H), 1.26 (dd,
J= 7.1, 1.3 Hz, 3H), 0.91 (t,
J= 7.5 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.26。LCMS：MS
m/z= 561.21 [M+1]，t
R= 0.76 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.63 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例 47.實例45之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (dd,
J= 5.6, 5.1 Hz, 1H), 4.47 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.34 (dd,
J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 4.02 - 3.85 (m, 3H), 1.58 (dtd,
J= 14.0, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.27 (dd,
J= 7.2, 1.1 Hz, 3H), 0.88 (t,
J= 7.5 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.27。LCMS：MS
m/z= 561.26 [M+1]，t
R= 0.77 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.74 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例48. ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯
向中間物46 (350 mg，1.06 mmol)、中間物4 (507 mg，1.16 mmol)及MgCl
2(130 mg，1.37 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(341 mg，2.64 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。LCMS：MS
m/z= 629.10 [M+1]，t
R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例49. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸氧雜環丁烷-3-基甲酯
將實例48 (385 mg，0.61 mmol)溶解於12 mL ACN中，將17 mL TFA與12 mL水混合，接著將該TFA溶液添加至上述反應混合物中，在RT下攪拌30 min，用NaHCO
3水溶液淬滅，用EtOAc萃取，蒸發有機溶劑，藉由製備型HPLC純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.31 (dt, J = 16.0, 7.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.10 (m, 3H), 6.86 (dd, J = 4.6, 2.8 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 5.49 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 4.72 (dddd, J = 11.0, 7.9, 6.3, 3.6 Hz, 2H), 4.67 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.29 (m, 5H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.24 - 4.09 (m, 1H), 3.91 (td, J = 9.4, 8.9, 6.9 Hz, 1H), 3.28 - 3.10 (m, 1H), 1.27 (ddd, J = 7.2, 2.7, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22, 3.15。LCMS：MS
m/z= 589.15 [M+1]，t
R= 1.01 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.66及3.72 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例50. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環丁酯單一非對映異構體
向中間物48 (330 mg，0.79 mmol)、中間物4 (260 mg，0.79 mmol)及MgCl
2(97 mg，1.02 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(254 mg，1.96 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到縮丙酮化物中間物，接著將其溶解於乙腈(10 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO
3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且將殘餘物溶解於DCM中，並且藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.22 (dt, J = 8.6, 1.3 Hz, 2H), 7.20 - 7.08 (m, 1H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.51 (dt, J = 5.0, 1.4 Hz, 1H), 4.82-4.80 (m, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.53 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (ddd, J = 10.3, 5.0, 1.4 Hz, 1H), 3.86 (dq, J = 9.7, 7.1 Hz, 1H), 2.32 - 2.09 (m, 2H), 2.04 - 1.89 (m, 2H), 1.79 - 1.64 (m, 1H), 1.64 - 1.46 (m, 1H), 1.29 - 1.18 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.25。LCMS：MS
m/z= 573.11 [M+1]，t
R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.395 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例51. (((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸環丁酯單一非對映異構體
向中間物49 (355 mg，0.85 mmol)、中間物4 (280 mg，0.85 mmol)及MgCl
2(105 mg，1.1 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(273 mg，2.1 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到縮丙酮化物中間物，接著將其溶解於乙腈(10 mL)中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO
3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且將殘餘物溶解於DCM中，並且藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (dd, J = 8.8, 7.0 Hz, 2H), 7.20 - 7.08 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.97 - 4.86 (m, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J = 10.9, 5.9 Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.1 Hz, 1H), 3.84 (dq, J = 9.2, 7.1 Hz, 1H), 2.34 - 2.19 (m, 2H), 2.13 - 1.91 (m, 2H), 1.84 - 1.69 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.2, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.21。LCMS：MS
m/z= 573.10 [M+1]，t
R= 1.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.364 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例52. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
方法 1.在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.12 mL，0.68 mmol)及氯化鎂(38.8 mg，0.41 mmol)添加至中間物4 (100.0 mg，0.30 mmol)及中間物50 (141.2 mg，0.33 mmol)於四氫呋喃(3 mL)中之混合物中。將混合物加熱至50℃。1 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且用水(5 × 10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.2 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(3 mL)中。使混合物升溫至RT。3 h後，反應混合物用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.87 (s, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.73 (s, 2H), 6.20 (s, 2H), 5.46 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.35 (dd,
J= 11.1, 6.6 Hz, 2H), 4.28 (dd,
J= 11.1, 6.4 Hz, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.64。LCMS：MS
m/z= 533.15 [M+1]，t
R= 0.65 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.03 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
方法 2.將中間物4 (150 mg，0.5 mmol)及中間物50 (234 mg，0.55 mmol)混合且溶解於4 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(143 mg，1.5 mmol)。添加DIPEA (218 μL，1.25 mmol)，且在50℃下攪拌反應物4小時。
將反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且用水(5×15 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (10 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(500 μL)。在冰浴中攪拌反應物4小時。反應物用EtOAc (30 mL)稀釋，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(12 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/DCM)純化。合併具有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.83 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d,
J= 5.1 Hz, 1H), 4.63 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.48 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.90 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 1.25 (d,
J= 7.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.24。LCMS：MS
m/z= 533.0 [M+1], 531.0 [M-1]，t
R= 1.31 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.29 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.791 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例53. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.06 mL，0.33 mmol)及氯化鎂(12.0 mg，0.13 mmol)添加至中間物4 (41.8 mg，0.13 mmol)及中間物51 (60.9 mg，0.13 mmol)於四氫呋喃(1.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。5 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用水(5 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.06 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(1.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (d,
J= 3.7 Hz, 1H), 7.14 (dd,
J= 9.0, 1.4 Hz, 1H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.90 - 6.80 (m, 3H), 6.73 (dd,
J= 4.8, 1.0 Hz, 1H), 5.50 (dd,
J= 7.8, 5.0 Hz, 1H), 4.99 - 4.86 (m, 1H), 4.62 (q,
J= 5.1 Hz, 1H), 4.53 - 4.29 (m, 3H), 4.10 - 4.01 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.77 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d,
J= 2.1 Hz, 3H), 1.26 (ddd,
J= 7.1, 3.7, 1.1 Hz, 3H), 1.23 - 1.13 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.71。LCMS：MS
m/z= 635.19 [M+1]，t
R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.68 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例54. ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸丁酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.76 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)添加至中間物4 (100.0 mg，0.30 mmol)及中間物52 (191 mg，0.45 mmol)於四氫呋喃(7.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.53 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(7.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(75 mL)及鹽水(75 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.79 (d,
J= 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 4H), 6.84 (dd,
J= 4.5, 2.8 Hz, 1H), 6.73 (dd,
J= 4.5, 2.0 Hz, 1H), 5.49 (t,
J= 5.2 Hz, 1H), 4.62 (q,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 3H), 4.15 - 3.80 (m, 3H), 1.68 - 1.46 (m, 2H), 1.46 - 1.22 (m, 5H), 0.99 - 0.83 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.25。LCMS：MS
m/z= 575.14 [M+1]，t
R= 0.83 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.50 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-19.0 min 2-95% ACN，19.0 min-20.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例55. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸四氫-2H-哌喃-4-基酯
向中間物22 (1.7 g，3.77 mmol)、中間物4 (1 g，3 mmol)及MgCl
2(359 mg，3.77 mmol)於乙腈(40 mL)中之混合物中逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(0.98 g，8 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，將反應混合物冷卻，用EtOAc稀釋，用水及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑，接著將殘餘物溶解於乙腈中，在冰浴中冷卻，且逐滴添加濃HCl。將所得混合物在室溫下攪拌2 h，在冰浴中冷卻，藉由逐滴添加2 N NaOH及NaHCO
3溶液中和，用EtOAc (150 mL)稀釋，用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。用EtOAc (50 mL ×2)萃取水相，且合併之有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-100% MeOH/DCM溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.97 - 3.80 (m, 3H), 3.56 - 3.44 (m, 2H), 1.89 - 1.81 (m, 2H), 1.60 (dtd, J = 12.9, 8.6, 3.9 Hz, 2H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.3 Hz, 4H), 1.14 (d, J = 6.1 Hz, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。LCMS：MS
m/z= 603.14 [M+1]，t
R= 1.20 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.87 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例56. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸四氫-2H-哌喃-4-基酯之單一非對映異構體
實例55之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (dd,
J= 8.7, 7.0 Hz, 2H), 7.16 (ddd,
J= 7.1, 2.1, 1.1 Hz, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.88 (dq,
J= 9.4, 5.1, 4.7 Hz, 1H), 4.63 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.55 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd,
J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.86 (m, 3H), 3.50 (dtd,
J= 11.3, 5.4, 2.7 Hz, 2H), 1.94 - 1.76 (m, 2H), 1.60 (dtd,
J= 12.9, 8.4, 3.9 Hz, 2H), 1.27 (dd,
J= 7.1, 1.3 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。MS
m/z= 603 (M+H)
+。
實例57. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸四氫-2H-哌喃-4-基酯之單一非對映異構體
實例55之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (dd,
J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.61 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (dd,
J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 3.90 (dq,
J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 3.85 - 3.75 (m, 2H), 3.46 (dddd,
J= 11.8, 8.9, 6.0, 3.2 Hz, 2H), 1.81 (tdd,
J= 9.6, 4.6, 2.5 Hz, 2H), 1.57 (dtd,
J= 12.7, 8.4, 3.9 Hz, 2H), 1.27 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.23。MS
m/z= 603 (M+H)
+。
實例58. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-3-甲氧基丙酯
在室溫下向中間物4 (127 mg，0.38 mmol)、中間物53 (252 mg，0.58 mmol)及MgCl
2(55 mg，0.58 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.17 mL，0.97 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化。將所獲得殘餘物溶解於ACN (8 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，在冰浴下冷卻，且緩慢添加NaHCO
3水溶液(4 mL)。將混合物濃縮至一半體積，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.64H), 7.78 (s, 0.36H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.62 (m,1H), 4.53 - 4.38 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 4.17 - 4.00 (m, 2H), 3.93 - 3.83 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 3.27 (m, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.26 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。LCMS：
m/z= 591.18 (M+H)，t
R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.96 min (35%)及4.02 min (64%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物藉由IA SFC 5 μm 21×250 mm (30% 2-丙醇)分離，得到非對映異構體：
實例 59.實例58之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.51 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.52 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd,
J= 10.9, 6.0 Hz, 1H), 4.35 (dd,
J= 10.9, 5.1 Hz, 1H), 4.12 (td,
J= 6.5, 2.1 Hz, 2H), 3.89 (ddd,
J= 14.4, 10.8, 6.6 Hz, 1H), 3.39 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 3.26 (s, 3H), 1.83 (m, 2H), 1.25 (dd,
J= 7.1, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。HPLC：t
R= 3.96 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例 60. 實例58之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.32 (dd,
J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.22 (dt,
J= 8.6, 1.3 Hz, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 1H), 6.83 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.47 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.41 (dd,
J= 10.9, 6.3 Hz, 1H), 4.34 (dd,
J= 10.9, 5.5 Hz, 1H), 4.07 (qt,
J= 10.9, 6.4 Hz, 2H), 3.90 (dq,
J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 3.37 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.26 (dd,
J= 7.2, 1.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.24。HPLC：t
R= 4.02 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例 61. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 (R)-1- 甲基吡咯啶 -3- 基酯 
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)及中間物24 (81 mg，0.18 mmol)混合且溶解於1.5 mL無水THF中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.375 mmol)，且在50℃下攪拌反應物16小時。
將反應物用EtOAc (15 mL)稀釋，且用水(6×10 mL)洗滌，並且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-5-10-20%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃鹽酸水溶液(300 μL)。在冰浴中攪拌反應物2小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋，且添加飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)。攪拌混合物10 min。收集有機萃取物，且用EtOAc (2×10 mL)萃取水性部分。合併有機萃取物，經無水硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.80 (m, 1H), 7.41 - 7.09 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.33 - 5.15 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 1H), 4.56 - 4.28 (m, 3H), 4.00 - 3.86 (m, 1H), 3.28 - 3.07 (m, 3H), 3.03 - 2.83 (m, 1H), 2.69 (m, 3H), 2.35 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.28 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.39, 3.05。LCMS：MS
m/z= 602.2 [M+1], 599.9 [M-1]，t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 1.85 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.142, 3.190 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例62. (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯
(2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 苯基 )-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸甲酯 .在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.11 mL，0.604 mmol)及氯化鎂(23 mg，0.24 mmol)添加至中間物4 (80 mg，0.24 mmol)及中間物54 (178 mg，0.29 mmol)於四氫呋喃(3.8 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，且用水(5 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.11 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(3.8 mL)中。使混合物升溫至RT。3.5 h後，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-25%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.78 (d,
J= 9.1 Hz, 1H), 7.38 - 7.25 (m, 5H), 7.19 - 7.09 (m, 3H), 7.06 (dd,
J= 8.7, 1.2 Hz, 1H), 6.84 (dd,
J= 4.5, 1.3 Hz, 1H), 6.72 (dd,
J= 7.2, 4.5 Hz, 1H), 5.56 - 5.46 (m, 1H), 5.03 (d,
J= 2.9 Hz, 2H), 4.63 (td,
J= 5.3, 4.4 Hz, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 4H), 3.87 (ddq,
J= 16.7, 9.4, 7.1 Hz, 1H), 3.69 (d,
J= 3.0 Hz, 3H), 3.61 (d,
J= 15.9 Hz, 4H), 3.20 - 3.06 (m, 1H), 2.91 (dt,
J= 14.0, 8.4 Hz, 1H), 1.24 (td,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.27 (d,
J= 2.1 Hz)。LCMS：MS
m/z= 768.49 [M+1]，t
R= 1.12 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.95 min, 4.02 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
(2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 苯基 )-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸甲酯 .將鈀/碳(10.3 mg，10 wt%)添加至經氬氣吹掃的(2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(30.6 mg，0.04 mmol)於乙醇(5 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物，且在RT下攪拌。18小時後，經由矽藻土過濾混合物，用乙醇沖洗過濾器，且減壓移除揮發物。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4μm Polar-RP 80Å 150 × 21.2 mm管柱，含0.1% TFA之10-60%乙腈/水梯度)，得到呈TFA鹽之產物。
實例 62.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.95 (s, 1H), 7.29 - 7.16 (m, 5H), 6.93 (s, 1H), 5.53 (d,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.59 (t,
J= 5.4 Hz, 1H), 4.52 - 4.43 (m, 2H), 4.37 (dd,
J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 4.30 (dd,
J= 7.6, 6.1 Hz, 1H), 4.03 - 3.87 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.25 (dd,
J= 14.5, 6.1 Hz, 1H), 3.13 (dd,
J= 14.6, 7.4 Hz, 1H), 1.34 (dd,
J= 7.4, 1.2 Hz, 3H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d 4) δ -77.68。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.54。LCMS：MS
m/z= 634.18 [M+1]，t
R= 0.77 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 2.30 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例 63.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.94 (s, 1H), 7.32 - 7.22 (m, 4H), 7.14 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.52 (d,
J= 4.9 Hz, 1H), 4.58 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 12.5, 5.8 Hz, 2H), 4.37 - 4.28 (m, 2H), 3.92 (dd,
J= 10.0, 7.3 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.27 - 3.08 (m, 2H), 1.31 (d,
J= 7.1 Hz, 3H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d 4) δ -77.65。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.48。LCMS：MS
m/z= 634.24 [M+1]，t
R= 0.80 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 2.43 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例64. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-四氫呋喃-3-基酯
在室溫下向中間物4 (132 mg，0.40 mmol)、中間物55 (234 mg，0.54 mmol)及MgCl
2(46 mg，0.48 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.10 mL，0.60 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化。將所獲得殘餘物溶解於ACN (4 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，在冰浴下冷卻，用5 N NaOH中和，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (s, 0.67H), 7.78 (s, 0.33H), 7.37 - 7.13 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.25 - 5.20 (m, 0.33H), 5.18 - 5.10 (m, 0.67H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.30 (m, 3H), 3.93 - 3.63 (m, 5H), 2.20 - 1.99 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.25 (m, 3H)。LCMS：
m/z= 589.02 (M+H)，t
R= 1.06 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.75 min (29%), 3.81 min (68%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .混合物藉由Chiralpak AD-H 150 × 4.6 mm 5 μm (100% EtOH)分離。
實例65. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-四氫呋喃-3-基酯之單一非對映異構體
實例64之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (m, 2H), 7.16 (dt,
J= 8.1, 1.3 Hz, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 5.23 (t,
J= 5.5 Hz, 1H), 4.63 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.51 (d,
J= 5.5 Hz, 1H), 4.47 (dd,
J= 10.9, 5.9 Hz, 1H), 4.35 (dd,
J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.92 - 3.68 (m, 5H), 2.23 - 2.06 (m, 1H), 2.01 - 1.91 (m, 1H), 1.25 (dd,
J= 7.1, 1.3 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22。LCMS：
m/z= 589.02 (M+H)，t
R= 1.06 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.75 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例66. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(S)-四氫呋喃-3-基酯之單一非對映異構體
實例64之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (dd,
J= 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.25 - 7.21 (m, 2H), 7.20 - 7.15 (m, 1H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.48 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 5.14 (dd,
J= 6.0, 4.1 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 4.41 (dd,
J= 10.9, 6.4 Hz, 1H), 4.33 (dd,
J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.95 - 3.65 (m, 5H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 1H), 1.25 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.19。LCMS：
m/z= 589.02 (M+H)，t
R= 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.82 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例67. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸3-(N-嗎啉基)丙酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.11 mL，0.62 mmol)及氯化鎂(23.8 mg，0.25 mmol)添加至中間物4 (82.7 mg，0.25 mmol)及中間物56 (133 mg，0.27 mmol)於四氫呋喃(2.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。4.5 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且用水(2 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將濃鹽酸水溶液(0.12 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(5 mL)中。4.5 h後，減壓濃縮反應混合物。20 mg所得粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10μ C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，含0.1% TFA之30-70%乙腈/水梯度)，接著經歷矽膠層析，用0-25%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.94 (s, 1H), 7.43 - 7.19 (m, 6H),5.51 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.55 - 4.43 (m, 3H), 4.43 - 4.33 (m, 2H), 4.09 (dt, J = 9.4, 4.9 Hz, 2H), 3.95 (d, J = 13.1 Hz, 3H), 3.77 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.13 (q, J = 8.7, 7.9 Hz, 2H), 2.08 - 1.99 (m, 2H), 1.30 (t, J = 8.6 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 2.70, 2.40。LCMS：MS
m/z= 646.35 [M+1]，t
R= 1.05 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.23 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Kinetx 2.6μ 100A C18，100 mm × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。
實例68. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸(R)-四氫呋喃-3-基酯
在室溫下向中間物4 (130 mg，0.40 mmol)、中間物57 (256 mg，0.59 mmol)及MgCl
2(46 mg，0.48 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.10 mL，0.60 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化。將所獲得殘餘物溶解於ACN (4 mL)中，且添加濃HCl (0.2 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，在冰浴下冷卻，用5 N NaOH中和，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 0.71H), 7.78 (s, 0.29H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.23 (s, 0.29H), 5.20 - 5.14 (m, 0.71H), 4.66 - 4.59 (m, 1H), 4.53 - 4.30 (m, 3H), 3.95 - 3.69 (m, 5H), 2.22 - 2.05 (m, 1H), 1.99 - 1.85 (m, 1H), 1.25 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22, 3.17。LCMS：
m/z= 589.03 (M+H)，t
R= 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.77 min (25%), 3.82 min (75%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .混合物藉由Chiralpak IA (150×4.6 mm，5微米，100% EtOH)分離，得到非對映異構體：
實例 69.實例68之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 7.19 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.50 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 5.26 - 5.20 (m, 1H), 4.62 (t,
J= 5.3 Hz, 1H), 4.50 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (dd,
J= 11.0, 6.0 Hz, 1H), 4.35 (dd,
J= 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.94 - 3.69 (m, 5H), 2.15 (td,
J= 14.5, 8.3 Hz, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 1H), 1.25 (dd,
J= 7.2, 1.2 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.22。LCMS：
m/z= 589.09 (M+H)，t
R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.76 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min
實例 70.實例68之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.40 - 7.25 (m, 3H), 7.28 - 7.12 (m, 2H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.49 (d,
J= 5.1 Hz, 1H), 5.17 (td,
J= 4.1, 2.1 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.46 (d,
J= 5.6 Hz, 1H), 4.41 (dd,
J= 10.9, 6.4 Hz, 1H), 4.34 (dd,
J= 10.9, 5.4 Hz, 1H), 3.98 - 3.68 (m, 5H), 2.18 - 2.03 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.25 (dd,
J= 7.2, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.17。LCMS：
m/z= 589.10 (M+H)，t
R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.81 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例71. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)硫代磷醯基)-L-丙胺酸甲酯
在RT下將三乙胺(170 µl，1.2 mmol)添加至中間物4 (0.40 g，1.2 mmol)及中間物58 (0.35 g，1.2 mmol)於乙腈(6 mL)中之溶液中。使反應混合物升溫至65℃。3 h後，使反應混合物冷卻至RT，且添加濃鹽酸水溶液(300 μL)。1 h後，緩慢添加飽和碳酸氫鈉水溶液(5 mL)，且用二氯甲烷(3 × 5 mL)萃取所得混合物。合併之有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.95 (br s, 1H), 7.40 - 7.02 (m, 5H), 6.90 - 6.72 (m, 2H), 5.52 - 5.45 (m, 1H), 4.58 - 4.49 (m, 1H), 4.43 - 4.30 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 2H), 3.71 - 3.54 (m, 3H), 1.38 - 1.29 (m, 3H)。LCMS：MS
m/z= 549.27 [M+1]，t
R= 1.23 min (次要異構體), 1.25 (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.21 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.124 min (次要異構體), 5.221 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例72. (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.06 mL，0.33 mmol)及氯化鎂(12.3 mg，0.13 mmol)添加至中間物4 (42.7 mg，0.13 mmol)及中間物66 (82.9 mg，0.13 mmol)於四氫呋喃(1.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。4 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用水(5 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.06 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(1.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.79 (d,
J= 8.0 Hz, 1H), 7.31 (ddd,
J= 11.2, 6.2, 3.3 Hz, 5H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 7.06 (d,
J= 8.3 Hz, 1H), 6.87 - 6.80 (m, 1H), 6.72 (dd,
J= 5.5, 4.7 Hz, 1H), 5.56 - 5.44 (m, 1H), 5.03 (d,
J= 3.6 Hz, 2H), 4.91 (ddd,
J= 24.9, 12.6, 6.3 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 5.4 Hz, 1H), 4.48 (dd,
J= 11.8, 5.5 Hz, 1H), 4.45 - 4.28 (m, 3H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.69 (d,
J= 3.5 Hz, 3H), 3.16 - 3.05 (m, 1H), 2.91 (dt,
J= 14.0, 8.8 Hz, 1H), 1.25 (dt,
J= 7.2, 1.4 Hz, 3H), 1.20 (d,
J= 6.3 Hz, 3H), 1.16 (t,
J= 6.3 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.36, 3.33。LCMS：MS
m/z= 796.45 [M+1]，t
R= 1.17 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.44 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例73. (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)苯基)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)丙酸異丙酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.11 mL，0.62 mmol)及氯化鎂(23.8 mg，0.25 mmol)添加至中間物4 (82.7 mg，0.25 mmol)及中間物69 (176.6 mg，0.27 mmol)於四氫呋喃(2.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。4.5 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且用水(2 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將濃鹽酸水溶液(0.12 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(5 mL)中。4.5 h後，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-25%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.79 (d,
J= 9.3 Hz, 1H), 7.36 - 7.21 (m, 5H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.84 (dd,
J= 4.5, 1.0 Hz, 1H), 6.73 (dd,
J= 7.4, 4.5 Hz, 1H), 5.51 (t,
J= 4.8 Hz, 1H), 5.04 (d,
J= 2.2 Hz, 2H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 4.66 - 4.60 (m, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 4H), 3.87 (ddd,
J= 16.3, 9.6, 7.1 Hz, 1H), 3.61 (d,
J= 16.9 Hz, 3H), 3.09 (dt,
J= 14.2, 5.8 Hz, 1H), 2.91 (dt,
J= 15.3, 8.2 Hz, 1H), 1.24 (dtd,
J= 9.4, 4.9, 4.3, 1.6 Hz, 6H), 1.16 (dd,
J= 6.3, 3.8 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.27。LCMS：MS
m/z= 796.51 [M+1]，t
R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.331 min, 4.395 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例74. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(二異丙基胺基)乙酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.20 mL，1.17 mmol)及氯化鎂(44.7 mg，0.47 mmol)添加至中間物4 (155.6 mg，0.47 mmol)及中間物68 (231.8 mg，0.47 mmol)於四氫呋喃(5.47 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，將反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，且用水(2 × 50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.40 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(5 mL)中。使混合物升溫至RT。20 h後，減壓移除揮發物。將水溶液凍乾，得到產物，其不經進一步純化即使用。LCMS：MS
m/z= 635.19 [M+1]，t
R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
實例75. ((((2
R,3
S,4
R,5
S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-
f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-
L-丙胺酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯單一異構體
在室溫下將四氫呋喃(1.4 mL)添加至中間物4 (202 mg，0.610 mmol)、中間物73 (418 mg，0.793 mmol)及氯化鎂(87 mg，0.914 mmol)之混合物中。將混合物加熱至40℃後保持10 min，且添加
N,N-二異丙基乙胺(0.265 mL，1.524 mmol)。在40℃下攪拌2小時之後，將反應混合物冷卻至室溫，且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙酸乙酯(40 mL)中，且用水(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌所得混合物。分離有機層，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將粗殘餘物溶解於乙腈(10 mL)中，且在0℃下逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.508 mL)。在0℃下4小時之後，用0℃之乙酸乙酯(50 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5µm C18 110Å 100 × 30 mm管柱)使用10-100%乙腈/水梯度純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 7.86 (s, 1H), 7.77 (bs, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.25 - 6.07 (m, 2H), 5.50 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.38 (d,
J= 6.2 Hz, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 2H), 4.22 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.95 (m, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 1H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.44 (m, 2H), 3.43 - 3.36 (m, 4H), 1.20 (d,
J= 7.1 Hz, 3H), 1.07 (t,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, DMSO-
d 6) δ 3.24。LCMS：MS
m/z= 635.07 [M+1]，t
R= 1.17 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.45 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.09 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6μ 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：2-98% B，8.5 min梯度，1.5 mL/min。
實例76. ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸甲酯.
在RT下將乙腈(2.5 mL)添加至中間物4 (150 mg，0.453 mmol)、中間物42 (179 mg，0.453 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.453 mmol)之混合物中。將混合物加熱至50℃後保持5 min，且添加
N,N-二異丙基乙胺(0.197 mL，0.453 mmol)。22 h後，使反應混合物冷卻至RT，且逐滴添加濃鹽酸水溶液(0.5 mL)。1 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.78 (s, 0.7H), 7.73 (s, 0.3H), 7.41 - 7.22 (m, 5H), 6.88 - 6.79 (m, 1H), 6.76 - 6.67 (m, 1H), 5.56 - 5.43 (m, 1H), 5.09 - 4.93 (m, 2H), 4.69 - 4.18 (m, 4H), 3.92 - 3.72 (m, 1H), 3.61 (s, 0.9H), 3.60 (s, 2.1H), 1.31 - 1.22 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.88 (s), 7.81 (s)。LCMS：MS
m/z= 547.06 [M+1]，t
R= 1.04 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.381 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。
C. 化合物實例77.雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例6 (10 mg，0.0167 mmol)溶解於無水DMF (1 mL)中。將異丁酸(6.2 μL，0.0667 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(10.4 μL，0.0667 mmol)添加至反應物且攪拌20 min。添加DMAP (2 mg，0.0167 mmol)，且攪拌反應物16小時。將更多異丁酸(7 μL，0.067 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(11 μL，0.067 mmol)添加至反應物，接著攪拌6小時。將更多異丁酸(4 μL，0.034 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(6 μL，0.034 mmol)添加至反應物，攪拌18小時。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.91 (s, 1H), 7.35 - 7.22 (m, 2H), 7.22 - 7.08 (m, 3H), 6.68 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.58 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.98 - 5.71 (m, 3H), 5.67 (d,
J= 3.7 Hz, 1H), 4.73 (dq,
J= 8.7, 4.2 Hz, 1H), 4.40 (d,
J= 6.3 Hz, 2H), 4.07 - 3.83 (m, 2H), 2.64 (dq,
J= 13.8, 6.9 Hz, 2H), 1.98 - 1.59 (m, 7H), 1.57 - 1.08 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.42 (s)。MS
m/z= 741.1 [M+1]; 739.2 [M-1]。
實例78. 雙(4-甲基戊酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例6 (10 mg，0.016 mmol)溶解於無水DMF (1 mL)中。將4-甲基戊酸(10.4 μL，0.083 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(13 μL，0.083 mmol)添加至反應物，且攪拌20 min。添加DMAP (2 mg，0.0167 mmol)，且攪拌反應物16小時。
將更多4-甲基戊酸(10.4 μL，0.083 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(13 μL，0.083 mmol)添加至反應物，接著攪拌5小時。反應物用EtOAc (20 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機溶離份經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-70%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d4) δ 7.82 (s, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.89 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.79 (t,
J= 5.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.9 Hz, 1H), 4.68 (dt,
J= 8.8, 4.5 Hz, 1H), 4.51 - 4.36 (m, 2H), 3.95 - 3.79 (m, 1H), 2.54 - 2.26 (m, 4H), 1.83 - 1.45 (m, 10H), 1.45 - 1.26 (m, 10H), 0.97 - 0.82 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d4) δ 3.07 (s)。MS
m/z= 797.1 [M+1]; 795.4 [M-1]。
實例79. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-側氧基-1-((反式-4-(三氟甲基)環己基)氧基)丙-2-基)胺基) (苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例18 (355 mg，0.50 mmol)、異丁酸(0.23 mL，2.51 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.40 mL，2.51 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (61.2 mg，0.50 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物2.5 h，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，且真空濃縮。所得殘餘物藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
A 250 × 30 mm管柱，0%-70%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (dd,
J= 8.6, 7.3 Hz, 2H), 7.23 - 7.14 (m, 3H), 6.75 (m, 2H), 6.37 (s, 2H), 5.86 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.80 (dd,
J= 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.60 (tt,
J= 10.6, 4.2 Hz, 1H), 4.52 - 4.27 (m, 3H), 3.87 (tq,
J= 9.6, 7.1 Hz, 1H), 2.64 (m, 2H), 2.18 - 2.05 (m, 1H), 2.02 - 1.86 (m, 4H), 1.49 - 1.12 (m, 19H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.46。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -74.35 (d,
J= 8.7 Hz)。LCMS: MS
m/z= 809.32 [M+1]；t
R= 1.41 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.56 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例80. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((S)-(((S)-1-(((1r,4S)-4-(三級丁基)環己基)氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例22之(S)-異構體(40 mg，0.061 mmol)、異丁酸(0.023 mL，0.244 mmol)及N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.038 mL，0.244 mmol)於DMF (1 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (8 mg，0.065 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物6 h，且添加另外的異丁酸(0.023 mL，0.244 mmol)及DIC (0.038 mL，0.244 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250×30 mm管柱，0%-70%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.89 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.77 (dd,
J= 5.8, 4.8 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 4.55 (tt,
J= 11.2, 4.4 Hz, 1H), 4.45 (dd,
J= 5.8, 1.2 Hz, 2H), 3.86 (dq,
J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 2.64 (七重峰,
J= 17.2, 7.0 Hz, 2H), 1.94 (d,
J= 10.6 Hz, 2H), 1.82 - 1.71 (m, 2H), 1.31 - 1.13 (m, 17H), 1.12 - 0.91 (m, 3H), 0.84 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.03。LCMS：MS
m/z= 797.37 [M+1]；t
R= 1.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50×3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 7.33 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例81. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例6 (25 mg，0.0416 mmol)溶解於無水THF (1 mL)中。將乙酸(12 μL，0.208 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(32 μL，0.208 mmol)添加至反應物，且攪拌20 min。添加DMAP (5 mg，0.0416 mmol)，且攪拌反應物4小時。減壓濃縮反應物。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.88 (s, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.09 (m, 3H), 6.63 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.52 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.93 (bs, 2H), 5.85 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 5.79 (dd,
J= 5.7, 4.1 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.1 Hz, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.42 (d,
J= 6.4 Hz, 2H), 4.20 - 4.01 (m, 2H), 2.13 (s, 6H), 1.82 - 1.61 (m, 4H), 1.50 (m, 1H), 1.45 - 1.28 (m, 8H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.49 (s)。MS
m/z= 685.3 [M+1]; 683.3 [M-1]。
實例82. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例6 (25 mg，0.0416 mmol)溶解於無水THF (1 mL)中。將丙酸(16 μL，0.208 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(32 μL，0.208 mmol)添加至反應物，且攪拌20 min。添加DMAP (5 mg，0.0416 mmol)，且攪拌反應物4小時。減壓濃縮反應物。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.89 (s, 1H), 7.35 - 7.22 (m, 2H), 7.22 - 7.09 (m, 3H), 6.65 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.54 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.95 (bs, 2H), 5.87 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.81 (dd,
J= 5.7, 3.9 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 3.9 Hz, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.41 (d,
J= 6.3 Hz, 2H), 4.08 - 3.92 (m, 2H), 2.49 - 2.34 (m, 4H), 1.83 - 1.61 (m, 4H), 1.56 - 1.45 (m, 1H), 1.45 - 1.21 (m, 8H), 1.17 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.46 (s)。MS
m/z= 713.1 [M+1]; 711.2 [M-1]。
實例83. 二苯甲酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例6 (50 mg，0.083 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加苯甲酸(31 mg，0.25 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.039 mL，0.25 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(10 mg，0.083 mmol)。繼續攪拌4 h，隨後用乙腈(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 8.00 (dt, J = 8.4, 1.1 Hz, 4H), 7.95 (s, 1H), 7.63 (td, J = 7.4, 5.7 Hz, 2H), 7.45 (t, J = 7.7 Hz, 4H), 7.30 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 7.9 Hz, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.38 - 6.15 (m, 4H), 5.95 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.74 - 4.44 (m, 3H), 4.23 (t, J = 11.0 Hz, 1H), 3.98 - 3.80 (m, 1H), 1.82 - 1.58 (m, 5H), 1.50 (s, 1H), 1.42 - 1.21 (m, 7H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 2.49。LCMS：MS
m/z= 809.32 [M+1]；t
R= 1.28 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.539 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例84. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例1 (10 mg，0.0178 mmol)溶解於無水THF (1 mL)中。將異丁酸(6.6 μL，0.0714 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(11 μL，0.0714 mmol)添加至反應物且攪拌15 min。添加DMAP (2 mg，0.0178 mmol)，且攪拌反應物2小時。添加更多異丁酸(7 μL，0.0714 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(11 μL，0.0714 mmol)且攪拌反應物2小時。添加甲醇(500 μL)且攪拌10 min。將反應物用EtOAc稀釋(15 mL)且用鹽水(2 × 10 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.91 (s, 1H), 7.33 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.09 (m, 3H), 6.66 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.54 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.88 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.85 - 5.70 (m, 2H), 5.66 (d,
J= 3.7 Hz, 1H), 4.95 (p,
J= 6.3 Hz, 1H), 4.40 (d,
J= 6.3 Hz, 2H), 4.03 - 3.89 (m, 2H), 2.64 (m, 2H), 1.36 - 1.28 (m, 3H), 1.25 - 1.17 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.41 (s)。MS
m/z= 701.3 [M+1]; 699.4 [M-1]。
實例85. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((苯甲氧基)(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將異丁酸酐(0.073 mL，0.44 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(4 mg，0.03 mmol)依序添加至實例24 (135 mg，0.219 mmol)於2-甲基-四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中。3.5 h後，反應混合物直接經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (s, 0.6H), 7.78 (s, 0.4H), 7.38 - 7.26 (m, 5H), 6.84 - 6.82 (m, 1H), 6.78 - 6.74 (m, 1H), 5.95 (d,
J= 5.8 Hz, 0.4H), 5.91 (d,
J= 5.9 Hz, 0.6H), 5.86 - 5.79 (m, 1H), 5.71 - 5.66 (m, 1H), 5.06 - 4.98 (m, 2H), 4.45 - 4.28 (m, 2H), 4.05 - 3.75 (m, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.49 - 1.13 (m, 20H), 0.87 - 0.81 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.73 (s), 7.64 (s)。LCMS：MS
m/z= 757.04 [M+1]，t
R= 1.57 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.787 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min -6.0 min 98% ACN，2 mL/min。
實例86. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例25 (15 mg，0.025 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(0.4 mL)中之溶液中添加異丁酸(22 mg，0.25 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.039 mL，0.25 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(3 mg，0.025 mmol)。繼續攪拌4 h，隨後用乙腈(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 7.91 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.20 (dd, J = 8.3, 6.8 Hz, 3H), 6.78 (s, 2H), 6.49 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.67 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.49 - 4.33 (m, 2H), 4.31 - 4.16 (m, 1H), 4.04 - 3.84 (m, 3H), 2.64 (dp, J = 28.2, 7.0 Hz, 2H), 1.46 (dt, J = 12.6, 6.3 Hz, 1H), 1.38 - 1.21 (m, 8H), 1.24 - 1.11 (m, 11H), 0.86 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 2.45。LCMS：MS
m/z= 743.79 [M+1]；t
R= 1.5 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.547 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例87. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基-1-((((1r,4S)-4-(三氟甲基)環己基)甲氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例26 (72 mg，0.105 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加異丁酸(93 mg，1.055 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.164 mL，1.055 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(13 mg，0.105 mmol)。繼續攪拌4 h，隨後用乙腈(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 7.90 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.18 (dd, J = 12.9, 8.1 Hz, 3H), 6.81 - 6.73 (m, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.93 - 5.75 (m, 2H), 5.68 (dd, J = 6.8, 4.5 Hz, 1H), 4.53 - 4.33 (m, 2H), 4.26 (m, 1H), 3.95 - 3.73 (m, 2H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.91 (d, J = 13.2 Hz, 3H), 1.79 (s, 2H), 1.35 - 1.11 (m, 15H), 1.05 - 0.95 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 2.40, 2.35。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ -74.83 (d, J = 8.6 Hz)。LCMS：MS
m/z= 823.59 [M+1]；t
R= 1.27 min (次要異構體)，1.28 (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.599 min (次要異構體)，6.658 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例88. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例25 (15 mg，0.025 mmol)溶解於1 mL無水四氫呋喃中。將乙酸(7 µL，0.12 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(19 µL，0.12 mmol)添加至反應物且攪拌20 min。添加DMAP (3 mg，0.025 mmol)且攪拌反應物14 h。將甲醇(1 mL)添加至反應物中且攪拌5 min。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用鹽水(3 × 5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.90 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.22 - 7.10 (m, 3H), 6.65 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.53 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.85 (m, 3H), 5.79 (dd,
J= 5.7, 4.1 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.0 Hz, 1H), 4.42 (d,
J= 6.3 Hz, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 3H), 3.95 (m, 1H), 2.14 (s, 6H), 1.53 - 1.43 (m, 1H), 1.38 - 1.26 (m, 7H), 0.85 (t,
J= 7.5 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.41 (s)。LCMS：MS
m/z= 701.3 [M+1]；699.4 [M-1]，t
R= 1.32 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.39 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.738 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例89. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例1 (70 mg，0.125 mmol)、乙酸(0.04 mL，0.624 mmol)及N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.06 mL，0.400 mmol)於THF (1 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (17 mg，0.139 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.23 - 7.15 (m, 3H), 6.76 (q,
J= 4.6 Hz, 2H), 6.38 (s, 2H), 5.86 - 5.75 (m, 2H), 5.68 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.87 (p,
J= 6.3 Hz, 1H), 4.47 (dd,
J= 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.42 - 4.30 (m, 2H), 3.86 (tq,
J= 9.6, 7.1 Hz, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.26 (dd,
J= 7.1, 0.9 Hz, 3H), 1.16 (d,
J= 6.4 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 6.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.54。LCMS：MS
m/z= 645.24 [M+1]；t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.03 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例90. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例1 (70 mg，0.125 mmol)、丙酸(0.047 mL，0.624 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.06 mL，0.400 mmol)於THF (1 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (17 mg，0.139 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，乾燥，真空濃縮，且殘餘物藉由矽膠管柱層析(40-100% EtOAc/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 6.80 - 6.72 (m, 2H), 6.45 (s, 2H), 5.90 - 5.80 (m, 2H), 5.69 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.87 (p,
J= 6.3 Hz, 1H), 4.53 - 4.44 (m, 2H), 4.40 (dt,
J= 11.2, 5.6 Hz, 1H), 3.87 (tq,
J= 9.6, 7.1 Hz, 1H), 2.51 - 2.36 (m, 4H), 1.26 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.19 - 1.07 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.57。LCMS：MS
m/z= 673.29 [M+1]；t
R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.45 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例91. 二丙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環丁基甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例2 (60 mg，0.102 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加丙酸(38 mg，0.511 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.08 mL，0.511 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(12 mg，0.102 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋。藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 7.90 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.34 (td, J = 8.0, 3.2 Hz, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.83 - 6.73 (m, 2H), 6.30 (s, 2H), 5.91 - 5.77 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 6.8, 4.6 Hz, 1H), 4.54 - 4.32 (m, 2H), 4.24 (q, J = 12.3, 11.9 Hz, 1H), 4.10 - 3.80 (m, 3H), 2.62 - 2.44 (m, 1H), 2.48 - 2.33 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 1.95 - 1.79 (m, 1H), 1.74 (q, J = 8.3 Hz, 2H), 1.25 (ddd, J = 17.0, 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.13 (dtd, J = 17.3, 7.5, 2.6 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 2.42, 2.36 LCMS：MS
m/z= 699.26 [M+1]；t
R= 1.13 min(次要)，1.28 (主要)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.763 min (次要異構體)，5.8 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 92.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.16 (ddd, J = 8.1, 2.2, 1.1 Hz, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 4.10 - 3.94 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 1H), 2.58 (p, J = 7.5 Hz, 1H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 2.06 - 1.67 (m, 6H), 1.31 - 1.09 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.05 LCMS：MS
m/z= 699.30 [M+1]；t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.736 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 93.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 5.8, 4.3 Hz, 2H), 4.01 (dd, J = 10.9, 6.8 Hz, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 2H), 2.62 - 2.43 (m, 2H), 2.47 - 2.34 (m, 3H), 1.99 (ddd, J = 10.6, 8.2, 4.8 Hz, 2H), 1.96 - 1.77 (m, 2H), 1.80 - 1.66 (m, 2H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.15 (dt, J = 13.8, 7.5 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.01 LCMS：MS
m/z= 699.29 [M+1]；t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.793 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例94. 二乙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環丁基甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例2 (60 mg，0.102 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加乙酸(31 mg，0.511 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.08 mL，0.511 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(12 mg，0.102 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋。藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d
3 )δ 7.90 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.83 - 6.73 (m, 2H), 6.30 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 6.5, 4.6 Hz, 1H), 4.47 (ddd, J = 17.5, 11.2, 6.5 Hz, 1H), 4.38 (ddd, J = 11.2, 8.8, 5.6 Hz, 1H), 4.24 (q, J = 12.5, 12.0 Hz, 1H), 4.10 - 3.83 (m, 3H), 2.56 (tt, J = 14.7, 7.3 Hz, 1H), 2.15 (d, J = 3.3 Hz, 6H), 1.95 - 1.79 (m, 1H), 1.80 - 1.68 (m, 2H), 1.25 (ddd, J = 17.2, 7.1, 1.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 2.42, 2.36 LCMS：MS
m/z= 671.25 [M+1]；t
R= 1.49 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.346 min (次要異構體)，5.38 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 95.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.93 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.83 (dd, J = 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 4.10 - 3.94 (m, 2H), 3.91 - 3.73 (m, 1H), 2.57 (dq, J = 14.6, 7.3 Hz, 1H), 2.13 (d, J = 19.4 Hz, 6H), 2.06 - 1.67 (m, 6H), 1.23 (dd, J = 7.1, 1.3 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.04。LCMS：MS
m/z= 671.43 [M+1]；t
R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.343 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 96.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.9 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.01 (dd, J = 10.9, 6.7 Hz, 1H), 3.90 (ddd, J = 10.1, 8.7, 6.8 Hz, 2H), 2.55 (七重峰, J = 7.4 Hz, 1H), 2.12 (d, J = 19.7 Hz, 6H), 2.06 - 1.66 (m, 6H), 1.27 (dd, J = 7.1, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.02。LCMS：MS
m/z= 671.30 [M+1]；t
R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.376 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例97. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-(((苯氧基((2-(特戊醯氧基)乙基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.14 mL，0.87 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(21.0 mg，0.174 mmol)添加至實例11 (100 mg，0.174 mmol)及異丁酸(0.081 mL，0.87 mmol)於四氫呋喃(1.0 mL)中之溶液中。2 h後，添加甲醇(0.2 mL)且減壓濃縮所得混合物。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 0.55H), 7.80 (s, 0.45H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.21 - 7.12 (m, 3H), 6.88 - 6.82 (m, 1H), 6.78 - 6.73 (m, 1H), 5.94 (t,
J =5.8 Hz, 1H), 5.85 - 5.77 (m, 1H), 5.68 (d,
J =4.5 Hz, 1H), 4.49 - 4.36 (m, 2H), 4.01 - 3.93 (m, 2H), 3.20 - 3.07 (m, 2H), 1.25 - 1.12 (m, 27H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 5.02 (s), 4.86 (s)。LCMS：MS
m/z= 715.47 [M+1]，t
R= 1.38 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.53 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min -6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.96 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例98. 二丙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環丙基甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例8 (65 mg，0.112 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加丙酸(38 mg，0.511 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.042 mL，0.568 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(14 mg，0.114 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 7.90 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.34 (td, J = 8.0, 3.4 Hz, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.25 - 7.14 (m, 2H), 6.83 - 6.72 (m, 2H), 6.28 (s, 2H), 5.92 - 5.77 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 7.2, 4.5 Hz, 1H), 4.55 - 4.33 (m, 2H), 4.23 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.97 - 3.74 (m, 3H), 2.54 - 2.33 (m, 4H), 1.26 (ddd, J = 17.5, 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.13 (dtd, J = 17.6, 7.5, 2.6 Hz, 7H), 0.51 (ddt, J = 8.4, 5.9, 4.4 Hz, 2H), 0.24 (dq, J = 6.2, 4.5 Hz, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 2.41, 2.37。LCMS：MS
m/z= 685.26 [M+1]；t
R= 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.476 min (次要異構體)，5.515 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 99.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.71 (s, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 7.08 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 6.68 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.76 (dd, J = 5.8, 4.5 Hz, 1H), 5.60 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 11.0, 5.0 Hz, 1H), 3.86 - 3.68 (m, 3H), 2.46 - 2.26 (m, 4H), 1.14 (dd, J = 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.06 (dt, J = 13.0, 7.5 Hz, 7H), 0.45 - 0.36 (m, 2H), 0.19 - 0.12 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.1。LCMS：MS
m/z= 685.26 [M+1]；t
R= 1.06 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.464 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 100.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 5.8, 2.9 Hz, 2H), 3.96 - 3.74 (m, 3H), 2.55 - 2.35 (m, 4H), 1.29 (dd, J = 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.16-1.08 (dd, J = 13.9, 7.5 Hz, 7H), 0.54 - 0.45 (m, 2H), 0.26 - 0.19 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.01。LCMS：MS
m/z= 685.22 [M+1]；t
R= 1.06 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.506 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例101. 二乙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環丙基甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例8 (65 mg，0.114 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加乙酸(34 mg，0.568 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.088 mL，0.568 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(14 mg，0.114 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 7.90 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.83 - 6.72 (m, 2H), 6.29 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 6.9, 4.5 Hz, 1H), 4.55 - 4.33 (m, 2H), 4.23 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.99 - 3.74 (m, 3H), 2.12 (m, 6H), 1.26 (ddd, J = 17.7, 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.13 - 0.97 (m, 1H), 0.51 (ddd, J = 8.2, 4.5, 1.6 Hz, 2H), 0.25 (ddt, J = 9.2, 6.0, 4.4 Hz, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d
3 ) δ 2.42, 2.36。LCMS：MS
m/z= 657.20 [M+1]；t
R= 0.98 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.051 min (次要異構體)，5.088 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 102.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.58 (s, 1H), 7.08 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 2H), 6.98 - 6.89 (m, 3H), 6.63 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.62 (dd, J = 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 11.1, 5.0 Hz, 1H), 3.73 - 3.55 (m, 3H), 1.91 (d, J = 19.4 Hz, 6H), 1.01 (dd, J = 7.1, 1.3 Hz, 3H), 0.86 (dddd, J = 15.2, 12.3, 7.8, 4.8 Hz, 1H), 0.32 - 0.23 (m, 2H), 0.05 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.09。LCMS：MS
m/z= 657.23 [M+1]；t
R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.040 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 103.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.61 (s, 1H), 7.13 - 7.04 (m, 2H), 7.02 - 6.90 (m, 3H), 6.62 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.57 (dd, J = 5.9, 4.9 Hz, 1H), 5.46 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.29 - 4.14 (m, 2H), 3.74 - 3.58 (m, 2H), 3.57 (dd, J = 11.4, 7.3 Hz, 1H), 1.90 (d, J = 20.1 Hz, 6H), 1.07 (dd, J = 7.2, 1.0 Hz, 3H), 0.91 - 0.76 (m, 1H), 0.32 - 0.21 (m, 2H), 0.05 (m, 2H);
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.04。LCMS：MS
m/z= 657.28 [M+1]；t
R= 0.97 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.080 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例104. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例29 (70 mg，0.128 mmol)、乙酸(0.04 mL，0.64 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.06 mL，0.39 mmol)於THF (1 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (16 mg，0.128 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 6.76 (d,
J= 3.8 Hz, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.86 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (d,
J= 4.3 Hz, 1H), 4.47 (dd,
J= 11.2, 6.6 Hz, 1H), 4.38 (dd,
J= 11.2, 5.7 Hz, 1H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.90 (tq,
J= 9.6, 7.1 Hz, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.26 (dd,
J= 7.1, 0.9 Hz, 3H), 1.16 (t,
J= 7.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.48。LCMS：MS
m/z= 631.18 [M+1]；t
R= 0.94 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.80 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例105. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例29 (70 mg，0.128 mmol)、丙酸(0.05 mL，0.64 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.06 mL，0.39 mmol)於THF (1 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (16 mg，0.128 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.20 (ddd,
J= 8.1, 2.4, 1.2 Hz, 3H), 6.81 - 6.69 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.87 - 5.76 (m, 2H), 5.68 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 21.1, 6.0 Hz, 2H), 4.12 - 3.96 (m, 2H), 3.89 (td,
J= 9.6, 7.0 Hz, 1H), 2.45 (qd,
J= 7.5, 3.4 Hz, 2H), 2.38 (q,
J= 7.6 Hz, 2H), 1.29 - 1.24 (m, 3H), 1.15 (td,
J= 7.4, 4.3 Hz, 6H), 1.10 (t,
J= 7.6 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.49。LCMS：MS
m/z= 659.30 [M+1]；t
R= 1.04 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含有0.1%甲酸之乙腈，含有0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.25 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例106. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例1 (40 mg，0.071 mmol)溶解於3 mL無水四氫呋喃中。將異丁酸(26 µL，0.27 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(44 µL，0.29 mmol)添加至反應物，攪拌15 min。添加DMAP (8.7 mg，0.71 mmol)，且攪拌反應混合物4 h。添加更多異丁酸(26 µL，0.29 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(44 µL，0.286 mmol)且攪拌反應物1 h。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用鹽水(4 × 5 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.12 (s, 1H), 7.32 - 7.20 (m, 3H), 7.20 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 5.81 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.77 (dd,
J= 5.8, 3.8 Hz, 1H), 5.71 (d,
J= 3.7 Hz, 1H), 4.95 (m, 1H), 4.41 (d,
J= 6.1 Hz, 2H), 4.05 - 3.91 (m, 2H), 3.02 (m, 1H), 2.63 (m, 2H), 1.32 (d,
J= 6.4 Hz, 3H), 1.30 - 1.25 (m, 6H), 1.21 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.41。LCMS：MS
m/z= 771.3 [M+1]；769.5 [M-1]，t
R= 1.46min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 6.686 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例107. 二丙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)甲氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例20 (75 mg，0.122 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加丙酸(45 mg，0.608 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.095 mL，0.608 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(15 mg，0.122 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.31 (s, 2H), 7.18 (dd, J = 15.0, 7.9 Hz, 3H), 6.88 - 6.72 (m, 2H), 5.93 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 4.54 - 4.37 (m, 2H), 3.95 - 3.79 (m, 5H), 3.3 (m, 2H), 2.50 - 2.35 (m, 4H), 1.85 (s, 1H), 1.55 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 1.31 - 1.08 (m, 11H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 2.99, 3.04。LCMS：MS
m/z= 729.25 [M+1]；t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.159 min (次要異構體)，5.216 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 108.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.86 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.46 (ddd, J = 36.1, 11.1, 5.5 Hz, 2H), 3.94 - 3.79 (m, 5H), 3.3 (m, 2H), 2.54 - 2.36 (m, 4H), 1.86 (dp, J = 10.6, 3.8 Hz, 1H), 1.64 - 1.46 (m, 2H), 1.35 - 1.09 (m, 11H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.03。LCMS：MS
m/z= 729.30 [M+1]；t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.151 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 109. 第二溶離非對映異構體 ： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.50 - 4.37 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 5H), 3.34 (m, 2H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 1.95 - 1.68 (m, 1H), 1.55 (d, J = 13.3 Hz, 2H), 1.34 - 1.22 (m, 5H), 1.15 (dt, J = 14.3, 7.5 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 2.98。LCMS：MS
m/z= 729.27 [M+1]；t
R= 1.01 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.214 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例110. 二乙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)甲氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例20 (75 mg，0.122 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加乙酸(37 mg，0.608 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.095 mL，0.608 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(15 mg，0.122 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.88 - 6.71 (m, 2H), 5.90 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 4.8, 3.7 Hz, 1H), 4.56 - 4.37 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 2.13 (dd, J = 20.6, 4.2 Hz, 6H), 1.84 (s, 1H), 1.55 (d, J = 13.1 Hz, 2H), 1.34 - 1.20 (m, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 2.99, 3.03。LCMS：MS
m/z= 701.27 [M+1]；t
R= 0.90-0.91 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.726 min (次要異構體)，4.786 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 111.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.94 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.9 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 3.94 - 3.80 (m, 5H), 3.34 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 2.13 (d, J = 20.4 Hz, 6H), 1.86 (s, 1H), 1.56 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 1.35 - 1.20 (m, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.02。LCMS：MS
m/z= 701.28 [M+1]；t
R= 0.89 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.721 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 112.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.2 Hz, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.78 (dd, J = 5.9, 4.9 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.44 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 5H), 3.35 (dt, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.83 (ddd, J = 11.6, 7.8, 5.0 Hz, 1H), 1.55 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 1.34 - 1.18 (m, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 2.99。LCMS：MS
m/z= 701.28 [M+1]；t
R= 0.90 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.779 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例113. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例30 (47 mg，0.069 mmol)、乙酸(0.05 mL，0.874 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.05 mL，0.319 mmol)於THF (3 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (16 mg，0.131 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.82 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.48 (s, 2H), 5.80 (d,
J= 2.4 Hz, 2H), 5.71 - 5.64 (m, 1H), 4.70 (qd,
J= 8.5, 3.8 Hz, 1H), 4.33 (dd,
J= 11.3, 7.1 Hz, 1H), 4.22 (ddd,
J= 11.3, 5.8, 2.3 Hz, 1H), 4.05 (td,
J= 11.0, 5.7 Hz, 1H), 3.94 (ddd,
J= 20.8, 10.9, 5.6 Hz, 1H), 3.88 - 3.72 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.73 - 1.65 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.35 (m, 9H), 1.26 (m, 6H), 0.88 (m, 6H)。LCMS：MS
m/z= 764.54 [M+1]；t
R= 1.19 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.05 min (37%)，6.07 min (60%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例114. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(((2S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例7 (60 mg，0.088 mmol)、乙酸(0.05 mL，0.874 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.05 mL，0.319 mmol)於THF (3 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (16 mg，0.131 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.82 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.46 (s, 2H), 5.84 - 5.76 (m, 2H), 5.72 - 5.63 (m, 1H), δ 4.33 (dd,
J= 11.3, 7.1 Hz, 1H), 4.22 (dd,
J= 11.3, 5.8 Hz, 1H), 4.10 - 3.89 (m, 4H), 3.88 - 3.73 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.57 - 1.43 (m, 2H), 1.34 (hd,
J= 7.3, 2.0 Hz, 8H), 1.29 - 1.23 (m, 6H), 0.88 (td,
J= 7.5, 4.6 Hz, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.10。LCMS：MS
m/z= 766.51 [M+1]；t
R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.25 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例115. 二丙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例31 (100 mg，0.143 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加丙酸(53 mg，0.717 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.112 mL，0.717 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(18 mg，0.143 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.88 - 6.71 (m, 2H), 5.92 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.95 - 3.78 (m, 3H), 3.09 - 2.88 (m, 4H), 2.49 - 2.35 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 1.61 (d, J = 12.3 Hz, 3H), 1.35 - 1.08 (m, 11H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 2.99, 3.05。LCMS：MS
m/z= 405.90 [M+1]；t
R= 1.01-1.02 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.633 min (次要異構體)，4.677 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 116.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.56 - 4.37 (m, 2H), 3.94 - 3.78 (m, 3H), 3.04 - 2.87 (m, 4H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 2.26 (t, J = 12.0 Hz, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.35 - 1.20 (m, 5H), 1.15 (dt, J = 13.2, 7.5 Hz, 6H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ -71.22 (t, J = 10.0 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.05。LCMS：MS
m/z= 405.89 [M+1]；t
R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.628 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 117.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.6, 7.1 Hz, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.50 - 4.37 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.04 - 2.88 (m, 4H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 1.65 - 1.51 (m, 3H), 1.34 - 1.08 (m, 11H).
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ -71.22 (t, J = 9.9 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 2.99。LCMS：MS
m/z= 405.88 [M+1]；t
R= 1.04 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.673 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例118. 二乙酸(2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例31 (100 mg，0.143 mmol)於無水N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加乙酸(43 mg，0.717 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(0.112 mL，0.717 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5 min，隨後添加4-二甲基胺基吡啶(18 mg，0.143 mmol)。繼續攪拌1 h，隨後用N,N'-二甲基甲醯胺(1 mL)稀釋且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，25%-95%乙腈/水梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J = 10.2, 7.4, 2.9 Hz, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.89 - 6.72 (m, 2H), 5.90 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 4.56 - 4.38 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.05 - 2.83 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 2.13 (dd, J = 20.1, 4.5 Hz, 6H), 1.65 - 1.51 (m, 3H), 1.26 (ddd, J = 20.1, 7.2, 1.2 Hz, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.02, 3.06。
19F NMR (377 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ -71.22 (t, J = 9.9 Hz) LCMS：MS
m/z= 391.90 [M+1]；t
R= 0.89 min(次要異構體)-0.91 min (主要異構體)；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.217 min (次要異構體)，4.258 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (SFC AD-H，5 μm 21 × 250 mm庚烷70%乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 119.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.94 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.9 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 3.94 - 3.78 (m, 3H), 2.95 (dd, J = 28.2, 10.6 Hz, 4H), 2.26 (t, J = 11.9 Hz, 2H), 2.13 (d, J = 19.8 Hz, 6H), 1.60 (s, 3H), 1.34 - 1.20 (m, 5H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ -71.21 (t, J = 10.0 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.04。LCMS：MS
m/z= 391.83 [M+1]；t
R= 0.91 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.212 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 120.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 5.0 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.44 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.04 - 2.88 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.60 (d, J = 12.8 Hz, 3H), 1.35 - 1.20 (m, 5H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ -71.22 (t, J = 9.9 Hz)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.00。LCMS：MS
m/z= 391.87 [M+1]；t
R= 0.92 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.256 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例121. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(((S)-1-環己氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例14 (52 mg，0.077 mmol)、乙酸(0.0544 mL，0.762 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.044 mL，0.278 mmol)於THF (3 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (15 mg，0.124 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.92 (s, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.45 (s, 2H), 5.80 (m, 2H), 5.68 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 4.69 (qd, J = 8.7, 3.8 Hz, 2H), 4.33 (dd, J = 11.3, 7.2 Hz, 1H), 4.22 (dd, J = 11.3, 5.8 Hz, 1H), 3.88 - 3.67 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.86 - 1.59 (m, 8H), 1.51 (m, 2H), 1.38 (m, 10H), 1.25 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.16。LCMS：MS
m/z= 762.53 [M+1]；t
R= 1.14 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.86 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例122. (2S,2'S)-雙(2-胺基-3-甲基丁酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例6 (50 mg，0.083 mmol)溶解於1 mL無水四氫呋喃中。將Boc-L-纈胺酸(72 mg，0.33 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(52 µL，0.33 mmol)添加至反應物，且攪拌所得混合物20 min。添加DMAP (10 mg，0.083 mmol)且攪拌混合物16 h。將甲醇(0.5 mL)添加至反應物中且攪拌25 min。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用2%檸檬酸水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (5 mL)中且在大氣壓氮下於冰浴中進行攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液)(300 µL)，且攪拌反應混合物4 h。將粗反應混合物直接裝載至製備型HPLC管柱上且用不含酸改質劑之5-100% MeCN線性梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且冷凍乾燥。用TFA作為改質劑之製備型HPLC (5-100% MeCN/水)再純化所得物質。合併含有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 8.03 (s, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 7.27 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 6.99 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 6.32 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 6.04 (dd,
J= 5.8, 3.2 Hz, 1H), 5.87 (d,
J= 3.2 Hz, 1H), 4.59 (m, 1H), 4.50 (qd,
J= 11.5, 6.4 Hz, 2H), 4.14 (dd,
J= 9.7, 4.1 Hz, 2H), 3.79 (dq,
J= 10.1, 7.1 Hz, 1H), 2.51 (m, 2H), 1.79 - 1.60 (m, 4H), 1.57 - 1.44 (m, 1H), 1.44 - 1.20 (m, 8H), 1.20 - 1.06 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.15 (s)。LCMS：MS
m/z= 799.3 [M+1]；797.6 [M-1]，t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.65 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.472 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例123. 雙L-丙胺酸異丙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二丙酸酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例34 (20 mg，0.033 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加丙酸(20 mg，0.27 mmol)及DIC (17 mg，0.13 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (8.2 mg，0.07 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.91 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 4.90 - 4.83 (m, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.8 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.2 Hz, 1H), 3.82 (dp, J = 9.2, 7.1 Hz, 2H), 2.56 - 2.34 (m, 4H), 1.35 - 1.07 (m, 24H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.51。LCMS：MS
m/z= 710.29 [M+1]，t
R= 1.34 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.14 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例124. 雙L-丙胺酸乙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二丙酸酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例35 (21 mg，0.037 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加丙酸(22 mg，0.30 mmol)及DIC (19 mg，0.15 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (9 mg，0.07 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.93 (s, 1H), 7.00 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.1 Hz, 1H), 4.11 (dp, J = 18.8, 7.1 Hz, 4H), 3.89 - 3.75 (m, 2H), 2.58 - 2.32 (m, 4H), 1.37 - 1.04 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.49。LCMS：MS
m/z= 682.14 [M+1]，t
R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.92 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例125. 雙L-丙胺酸環丁基甲酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二丙酸酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例36 (17 mg，0.026 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加丙酸(15.5 mg，0.21 mmol)及DIC (13 mg，0.11 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (6 mg，0.05 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.83 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 11.2, 5.1 Hz, 1H), 4.15 - 3.81 (m, 6H), 2.65 - 2.34 (m, 6H), 2.02 (dq, J = 13.7, 7.0 Hz, 4H), 1.96 - 1.65 (m, 8H), 1.29 (d, J = 7.1 Hz, 6H), 1.16 (dt, J = 21.0, 7.5 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.44。LCMS：MS
m/z= 762.36 [M+1]，t
R= 1.47 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例126. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例37 (25 mg，0.041 mmol)溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。將乙酸(12 µL，0.205 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(32 µL，0.205 mmol)添加至反應物，攪拌30 min。添加DMAP (5 mg，0.041 mmol)且攪拌反應物14 h。添加更多乙酸(5 µL)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(12 µL)且攪拌反應物45 min。反應物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，且用鹽水(2 × 5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，接著將其溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 7.86 (m, 1H), 7.36 - 7.21 (m, 7H), 7.21 - 7.07 (m, 3H), 6.63 (m, 1H), 6.50 (m, 1H), 6.02 (bs, 2H), 5.95 - 5.75 (m, 2H), 5.68 (m, 1H), 5.16 - 4.98 (m, 2H), 4.58 - 4.19 (m, 3H), 4.11 - 3.97 (m, 1H), 2.14 (m, 6H), 1.31 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ 2.32, 2.33。LCMS：MS
m/z= 693.2 [M+1]；691.4 [M-1]，t
R= 1.32 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含有0.1%乙酸之水，B：含有0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.16 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.287，5.309 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例127.
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.086 mL，0.55 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(14.0 mg，0.11 mmol)添加至實例38 (60 mg，0.110 mmol)及乙酸(0.032 mL，0.55 mmol)於四氫呋喃(1.0 mL)中之溶液中。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)且減壓濃縮所得混合物。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物及實例128三乙酸酯化合物之混合物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.87 (s, 1H), 6.86 (d,
J =4.6 Hz, 1H), 6.86 (d,
J =4.6 Hz, 1H), 5.93 - 5.80 (m, 2H), 5.69 (d,
J =4.8 Hz, 1H), 4.35 (dd,
J =11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.26 (dd,
J =11.2, 5.1 Hz, 1H), 3.91 - 3.76 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.31 - 1.22 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 13.49 (s)。LCMS：MS
m/z= 626.32 [M+1]，t
R= 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.38 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min -6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.93 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例128.
藉由實例 127 之方法製備之三乙酸酯.
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 8.25 (s, 1H), 7.21 (d,
J =4.8 Hz, 1H), 7.05 (d,
J =4.7 Hz, 1H), 5.89 - 5.82 (m, 2H), 5.78 (d,
J =3.9 Hz, 1H), 4.36 (dd,
J =11.2, 6.6 Hz, 1H), 4.28 (dd,
J =11.2, 5.1 Hz, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.32 - 1.23 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 13.48 (s)。LCMS：MS
m/z= 668.08 [M+1]，t
R= 1.11 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.66 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min -6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.28 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例129. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.307 mL，1.97 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(48.0 mg，0.394 mmol)添加至實例39 (210 mg，0.394 mmol)及乙酸(0.113 mL，1.97 mmol)於四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)且減壓濃縮所得混合物。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (s, 0.66H), 7.80 (s, 0.33H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.22 - 7.12 (m, 3H), 6.86 - 6.81 (m, 1H), 6.78 - 6.71 (m, 1H), 5.96 (d,
J =5.9 Hz, 0.33H), 5.89 (d,
J =5.9 Hz, 0.66H), 5.87 - 5.78 (m, 1H), 5.71 - 5.68 (m, 1H), 4.54 - 4.35 (m, 2H), 3.95 - 3.75 (m, 1H), 3.62 (s, 1H), 3.60 (s, 2H), 2.16 (s, 1H), 2.15 (s, 2H), 2.11 (s, 1H), 2.10 (s, 2H), 1.27 (dd,
J =7.2, 1.1 Hz, 2H), 1.21 (dd,
J =7.2, 1.3 Hz, 1H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.02 (s), 3.00 (s)。LCMS：MS
m/z= 617.16 [M+1]，t
R= 1.18 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.74 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min -6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.513 min (次要異構體)，4.570 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .經由對掌性製備型SFC (Chiralpak ADH，30%乙醇)純化產物。
實例130. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((R)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例129之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.95 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd,
J= 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.70 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.52 (dd,
J= 11.1, 5.9 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 11.1, 4.9 Hz, 1H), 3.80 (dq,
J= 9.4, 7.1 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.21 (dd,
J= 7.2, 1.3 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.00 (s)。LCMS：MS
m/z= 617.16 [M+1]，t
R= 1.18 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例131. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例129之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.82 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.89 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.81 (dd,
J= 5.9, 4.9 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.9 Hz, 1H), 4.49 - 4.37 (m, 2H), 3.96 - 3.83 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.27 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.02 (s)。LCMS：MS
m/z= 617.16 [M+1]，t
R= 1.18 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.57 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例132. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-乙醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.307 mL，1.97 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(48.0 mg，0.394 mmol)添加至實例39 (210 mg，0.394 mmol)及乙酸(0.113 mL，1.97 mmol)於四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)且減壓濃縮所得混合物。粗殘餘物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 8.20 (s, 0.6H), 8.18 (s, 0.4H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.99 (d,
J= 4.8 Hz, 0.4H), 6.95 (d,
J= 4.7 Hz, 0.6H), 5.93 - 5.76 (m, 2H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.95 - 3.75 (m, 1H), 3.63 (s, 1.2H), 3.61 (s, 1.8H), 2.38 (d,
J= 1.7 Hz, 3H), 2.17 (s, 1.2H), 2.16 (s, 1.8H), 2.11 (s, 1.2H), 2.10 (s, 1.8H), 1.28 (dd,
J= 7.2, 1.1 Hz, 1.8H), 1.23 (dd,
J= 7.2, 1.3 Hz, 1.2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.04 (s), 3.02 (s)。LCMS：MS
m/z= 659.24 [M+1]，t
R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含有0.1%乙酸之乙腈，含有0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.38 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min -6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.92 min (次要異構體)，4.95 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例133. 雙L-丙胺酸異丙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二乙酸酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例34 雙L-丙胺酸異丙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二乙酸酯四氫呋喃-2-基)甲酯(40 mg，0.067 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加乙酸(32 mg，0.54 mmol)及DIC(34 mg，0.27 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (16 mg，0.13 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 6.0, 4.8 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.92 (dp, J = 27.0, 6.3 Hz, 2H), 4.36 (dd, J = 11.2, 6.8 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.2 Hz, 1H), 3.82 (dt, J = 9.1, 7.2 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.34 - 1.09 (m, 18H).
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.52。LCMS：MS
m/z= 682.40 [M+1]，t
R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.02 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例134. 雙L-丙胺酸乙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二乙酸酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例35 (30 mg，0.053 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加乙酸(25 mg，0.42 mmol)及DIC (27 mg，0.21 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (13 mg，0.11 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.83 (dd, J = 6.0, 4.8 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 11.2, 5.1 Hz, 1H), 4.19 - 3.99 (m, 4H), 3.84 (dq, J = 9.2, 7.1 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.27 (dt, J = 7.1, 1.1 Hz, 6H), 1.22 (dt, J = 14.1, 7.1 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.50。LCMS：MS
m/z= 654.35 [M+1]，t
R= 1.17 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含有0.1%乙酸之乙腈，含有0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.58 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例135. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((2S)-1-((1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基)氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸酯 .向中間物4 (70 mg，0.211 mmol)、中間物37 (130 mg，0.254 mmol)及MgCl
2(30 mg，0.317 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.14 mL，0.574 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h，冷卻，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，5%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到縮丙酮化物中間物，將其溶解於ACN (3 mL)中且添加c-HCl (0.1 mL)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO
3溶液洗滌，真空濃縮，與氯化甲烷共蒸發若干次，且用於下一反應中。
二 丙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -2-((((((2S)-1-((1- 乙基 -3,3- 二氟哌啶 -4- 基 ) 氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .在室溫下攪拌((((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺醯基)氧基)-1-乙基哌啶(44 mg，0.066 mmol，粗物質)、丙酸(0.026 mL，0.331 mmol)及
N,N-二異丁基碳化二亞胺(0.03 mL，0.193 mmol)於THF (2 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (8.08 mg，0.066 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (m, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.82 - 6.71 (m, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.93 - 5.76 (m, 2H), 5.73 - 5.66 (m, 1H), 5.08 - 4.89 (m, 1H), 4.53 - 4.32 (m, 3H), 4.00 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.70 - 2.51 (m, 1H), 2.50 - 2.28 (m, 8H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.33 - 1.24 (m, 3H), 1.13 (m, 6H), 1.06 - 0.99 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.34, 2.31, 2.25。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-d3) δ -110.35 (d,
J= 51.7 Hz), -110.99 (d,
J= 54.2 Hz), 166.55。LCMS：MS
m/z= 778.27 [M+1]；t
R= 1.01 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.38，4.41，4.44 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例136. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-胺基環己基)氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例33 (142 mg，0.195 mmol)溶解於5 mL二㗁烷及5 mL水中且在室溫下攪拌。添加0.1 M碳酸鈉溶液，使得pH為9-10。將Boc酸酐(47 mg，0.214 mmol)溶解於1 mL二㗁烷中且添加至反應混合物中。2 h後，反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用鹽水(2 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到經單Boc保護之物質。將經單Boc保護之物質(57 mg，0.08 mmol)溶解於2 mL無水四氫呋喃中。將異丁酸(30 µL，0.32 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(50 µL，0.32 mmol)添加至反應物中且攪拌25 min。添加DMAP(10 mg，0.08 mmol)且攪拌16 h。添加更多異丁酸(30 µL)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(50 µL)至反應物且攪拌1 h。接著添加甲醇(0.5 mL)且攪拌30 min。反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用鹽水(4 × 5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得物質溶解於二氯甲烷(2 mL)中且於冰浴中攪拌。逐滴添加TFA (200 µL)且攪拌混合物1.5 h。接著逐滴添加三乙胺，使得pH為3-4。減壓濃縮混合物且將粗殘餘物溶解於MeOH中並在中性條件下藉由製備型HPLC純化。合併含有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.84 (m, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.91 (m, 1H), 6.77 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.68 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 4.67 (m, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.96 - 3.78 (m, 1H), 3.08 (m, 1H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 2.13 - 1.94 (m, 4H), 1.57 - 1.37 (m, 4H), 1.34 - 1.06 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.00, 3.07。LCMS：MS
m/z= 756.4 [M+1]；754.5 [M-1]，t
R= 1.19 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含有0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.80 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.671，4.727 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例137. 雙L-丙胺酸乙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二異丁酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例35 (36 mg，0.063 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加異丁酸(45 mg，0.51 mmol)及DIC (32 mg，0.04 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (15 mg，0.13 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.34 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.71 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.37 (dd, J = 11.3, 6.6 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.3, 5.2 Hz, 1H), 4.21 - 4.02 (m, 4H), 3.90 - 3.75 (m, 2H), 2.78 - 2.66 (m, 1H), 2.66 - 2.55 (m, 1H), 1.31 (ddd, J = 6.9, 5.7, 0.9 Hz, 6H), 1.27 - 1.09 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.47。LCMS：MS
m/z= 710.36 [M+1]，t
R= 1.34 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.12 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例138. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例39 (54 mg，0.1 mmol)溶解於2 mL無水四氫呋喃中。添加異丁酸(37 µL，0.4 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(62 µL，0.4 mmol)，且攪拌反應混合物30 min。添加DMAP (12 mg，0.1 mmol)且攪拌反應混合物16 h。添加甲醇(0.5 mL)，且攪拌反應混合物20 min。藉由不含酸改質劑之製備型HPLC (5-100% MeCN/水)純化反應混合物。合併含有所需產物之溶離份且用乙酸乙酯(15 mL)萃取。有機萃取物用鹽水(2 × 10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.81 (m, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.75 (m, 1H), 5.95 (m, 1H), 5.83 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.58 - 4.34 (m, 2H), 3.98 - 3.74 (m, 1H), 3.61 (m, 3H), 2.74 - 2.52 (m, 2H), 1.33 - 1.09 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.04。LCMS：MS
m/z= 673.2 [M+1]；671.3 [M-1]，t
R= 1.37 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.24 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.415，5.469 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak AD-H，150 × 4.6 mm，SFC 35%異丙醇等度)純化產物。
實例139. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((R)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例138之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.16 (m, 3H), 6.88 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.97 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.85 (dd,
J= 5.8, 4.3 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.3 Hz, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.27 - 1.06 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.02 (s)。MS
m/z= 673.2 [M+1]。HPLC：t
R= 5.406 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例140. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例138之第二溶離非對映異構體.
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.36 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.91 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.80 (dd,
J= 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.52 - 4.37 (m, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.73 - 2.55 (m, 2H), 1.35 - 1.07 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.03 (s)。MS
m/z= 673.2 [M+1] HPLC：t
R= 5.463 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例141. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例39 (54 mg，0.1 mmol)溶解於2 mL無水四氫呋喃中。添加丙酸(30 µL，0.4 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(62 µL，0.4 mmol)且攪拌30 min。添加DMAP (12 mg，0.1 mmol)且攪拌16 h。添加甲醇(0.5 mL)且攪拌20 min。藉由不含酸改質劑之製備型HPLC (5-100% MeCN/水)純化粗物質。合併含有所需產物之溶離份且用乙酸乙酯(15 mL)萃取。有機萃取物用鹽水(2 × 10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.86 (m, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.97 (m, 1H), 6.81 (m, 1H), 5.99 - 5.75 (m, 2H), 5.71 (m, 1H), 4.57 - 4.38 (m, 2H), 3.96 - 3.71 (m, 1H), 3.62 (m, 3H), 2.55 - 2.34 (m, 4H), 1.34 - 1.03 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.03。LCMS：MS
m/z= 645.2 [M+1]；643.3 [M-1]，t
R= 1.24 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.00 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.986，5.041 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IF，150 × 4.6 mm，SFC 30%乙醇等度)純化產物。
實例142. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((R)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例141之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.35 - 7.23 (m, 2H), 7.21 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.98 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.87 (dd,
J= 5.8, 4.4 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.56 - 4.37 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.55 - 2.36 (m, 4H), 1.24 - 1.10 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.01 (s)。HPLC：t
R= 4.982 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例143. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例141之第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.82 (dd,
J= 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.51 - 4.36 (m, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 1.27 (d,
J= 7.1, 3H), 1.20 - 1.09 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.02 (s)。HPLC：t
R= 5.043 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例144. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下在氬氣下將實例29之二醇(54 mg，0.099 mmol)及異丁酸(70 mg，0.8 mmol)溶解於THF (3 mL)及N,N'-二環己基碳化二亞胺(82 mg，0.4 mmol)中。攪拌溶液5 min，且接著添加DMAP (24 mg，0.19 mmol)。攪拌50 min後，用MeOH (0.5 mL)淬滅反應物，移除揮發物，且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.5, 7.3 Hz, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 5.7, 2.6 Hz, 2H), 4.11 - 3.97 (m, 2H), 2.64 (dp, J = 17.4, 7.0 Hz, 2H), 1.32 - 1.06 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.05。LCMS：MS
m/z= 687.42 [M+1]，t
R= 1.41 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含有0.1%乙酸之乙腈，含有0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.353 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例145. 雙L-丙胺酸乙酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-異丁醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二異丁酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例35 (36 mg，0.063 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加異丁酸(45 mg，0.51 mmol)及DIC (32 mg，0.04 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (15 mg，0.13 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.22 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.91 - 5.80 (m, 2H), 5.76 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.43 - 4.30 (m, 1H), 4.32 - 4.20 (m, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 4H), 3.84 (p, J = 7.6 Hz, 2H), 2.66 (dp, J = 29.7, 7.0 Hz, 2H), 1.35 - 1.07 (m, 30H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.49。LCMS：MS
m/z= 780.15 [M+1]，t
R= 1.44 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.26 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例146. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例55 (27 mg，0.066 mmol)、異丁酸(0.020 mL，0.224 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.022 mL，0.143 mmol)於THF (2 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (5.47 mg，0.045 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.90 (m, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.81 - 6.71 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.92 - 5.77 (m, 2H), 5.68 (m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.54 - 4.32 (m, 3H), 3.98 - 3.84 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.46 (m, 2H), 2.75 - 2.55 (m, 2H), 1.88 - 1.74 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.30-1.14 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.50, 2.41。LCMS：MS
m/z= 743.42 [M+1]；t
R= 1.18 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .藉由SFC (IF，5 μ，21 × 250 mm，20% MeOH)分離產物，得到非對映異構體：
實例1
47.實例146之第一溶離異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.34 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.81 - 6.75 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.89 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.83 (dd,
J= 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.87 (tt,
J= 8.4, 4.1 Hz, 1H), 4.49 (dd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 11.2, 5.3 Hz, 1H), 4.29 (d,
J= 11.0 Hz, 1H), 3.92 - 3.73 (m, 3H), 3.52 - 3.42 (m, 2H), 2.64 (dh,
J= 28.0, 7.0 Hz, 2H), 1.82 (d,
J= 8.9 Hz, 2H), 1.56 (dtd,
J= 12.9, 8.6, 3.9 Hz, 2H), 1.25 - 1.20 (m, 9H), 1.18 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.39。HPLC：t
R= 5.43 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例1
48.實例146之第二溶離異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (t,
J= 7.9 Hz, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 6.76 (d,
J= 1.2 Hz, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.86 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.80 (dd,
J= 6.0, 4.6 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.84 (tt,
J= 8.3, 4.0 Hz, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 3H), 3.91 (ddt,
J= 16.8, 9.6, 7.1 Hz, 1H), 3.78 (dt,
J= 10.7, 4.9 Hz, 2H), 3.45 (ddt,
J= 12.0, 8.0, 3.7 Hz, 2H), 2.64 (dp,
J= 29.4, 7.0 Hz, 2H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.53 (dtd,
J= 12.7, 8.4, 4.0 Hz, 2H), 1.28 (dd,
J= 7.1, 0.9 Hz, 3H), 1.21 (t,
J= 7.0 Hz, 6H), 1.17 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.14 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.48。HPLC：t
R= 5.50 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例149. 雙L-丙胺酸甲酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二異丁酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例38 (58 mg，0.11 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加異丁酸(76 mg，0.86 mmol)及DIC (54 mg，0.43 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (26 mg，0.21 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.6 Hz, 1H), 4.25 (dd, J = 11.2, 5.0 Hz, 1H), 3.92 - 3.75 (m, 2H), 3.65 (d, J = 10.8 Hz, 6H), 2.65 (dp, J = 26.5, 7.0 Hz, 2H), 1.32 - 1.09 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.48。LCMS：MS
m/z= 682.32 [M+1]，t
R= 1.27 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.92 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例150. 雙L-丙胺酸甲酯磷酸((2R,3S,4R,5S)-5-(4-異丁醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二異丁酯四氫呋喃-2-基)甲酯
將實例38 (58 mg，0.11 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加異丁酸(76 mg，0.86 mmol)及DIC (54 mg，0.43 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (26 mg，0.21 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.24 (s, 1H), 7.22 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 5.90 - 5.81 (m, 2H), 5.76 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 11.2, 6.5 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.0 Hz, 1H), 3.84 (dt, J = 9.3, 7.0 Hz, 2H), 3.65 (d, J = 8.9 Hz, 6H), 2.96 (h, J = 6.8 Hz, 1H), 2.66 (dp, J = 30.4, 7.0 Hz, 2H), 1.34 - 1.10 (m, 24H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 13.48。LCMS：MS
m/z= 752.24 [M+1]，t
R= 1.37 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.51 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例151. 雙(2-甲氧基乙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.27 mmol)添加至實例1 (40.0 mg，0.07 mmol)及2-甲氧基乙酸(52 mg，0.57 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(18.0 mg，0.15 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 × 30.0 mm管柱，5-75%乙腈/水梯度)，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.36 - 7.27 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 2H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.94 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.47 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 4.26 - 4.03 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 1H), 3.43 (d, J = 16.4 Hz, 6H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.16 (dd, J = 6.2, 5.4 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.14。LCMS：MS
m/z= 705.45 [M+1]；t
R= 0.94 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.96 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6µ C18 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-8.5.0 min 2-98% ACN，8.5 min-10.0 min 98% ACN，1.5 mL/min。
實例152. 雙(3-羥基-3-甲基丁酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.27 mmol)添加至實例1 (40 mg，0.07 mmol)及3-羥基-3-甲基丁酸(67 mg，0.57 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(15.0 mg，0.11 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 × 30.0 mm管柱，5-75%乙腈/水梯度)，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.82 (s, 1H), 7.30 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.73 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.92 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 6.0, 5.0 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 5.0 Hz, 1H), 4.87 (q,
J= 6.2 Hz, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 1H), 2.67 - 2.50 (m, 4H), 1.35 (d,
J= 1.7 Hz, 6H), 1.33 - 1.20 (m, 9H), 1.15 (t,
J= 5.9 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.14。LCMS：MS
m/z= 761.65 [M+1]；t
R= 0.91 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.54 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例153. (2R,2'R)-雙(2-胺基-3-甲基丁酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(環己氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例6 (10 mg，0.0166 mmol)溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。添加Boc -D-纈胺酸(14 mg，0.067 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(10 µL，0.067 mmol)且攪拌30 min。添加DMAP (2 mg，0.017 mmol)，且攪拌反應混合物16 h。添加更多Boc -D-纈胺酸(14 mg)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(10 µL)。攪拌反應混合物2 h。添加甲醇(200 µL)，且攪拌所得混合物30 min。混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)及鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，且溶解於二氯甲烷(2 mL)中並於冰浴中攪拌。逐滴添加TFA (200 µL)，且攪拌反應混合物2 h。添加更多TFA (200 µL)，且攪拌反應混合物2 h。將三乙胺溶解於二氯甲烷中且逐滴進行添加，使得pH為3-4。減壓濃縮所得混合物且藉由不含酸改質劑之製備型HPLC (5-100% MeCN/水)純化。合併含有所需產物之溶離份且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.42 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.12 (m, 3H), 7.06 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.90 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.20 - 6.00 (m, 2H), 5.79 - 5.66 (m, 1H), 4.68 - 4.45 (m, 3H), 4.06 (m, 2H), 3.85 (m, 1H), 2.51 - 2.34 (m, 2H), 1.84 - 1.59 (m, 4H), 1.59 - 1.23 (m, 11H), 1.18 (dd,
J= 9.4, 6.9 Hz, 6H), 1.00 (dd,
J= 17.8, 7.0 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.45。LCMS：MS
m/z= 799.3 [M+1]；797.6 [M-1]，t
R= 1.06 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.66 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.478 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例154. (2R,2'R)-雙(2-甲氧基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.29 mmol)添加至實例1 (43 mg，0.07 mmol)及(R)-(+)-2-甲氧基丙酸(68.3 mg，0.66 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(18.3 mg，0.14 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 × 30.0 mm管柱，5-75%乙腈/水梯度)，得到產物及實例155之2-甲氧基丙醯胺基化合物。
產物：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.32 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.23 (d,
J= 8.1 Hz, 2H), 7.18 (t,
J= 7.4 Hz, 1H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.97 - 5.89 (m, 2H), 5.67 (t,
J= 2.6 Hz, 1H), 4.93 - 4.88 (m, 1H), 4.50 (qd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 2H), 4.08 (q,
J= 6.8 Hz, 1H), 3.92 (q,
J= 6.8 Hz, 1H), 3.87 (dd,
J= 9.9, 7.2 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 1.46 (d,
J= 6.9 Hz, 3H), 1.33 (d,
J= 6.9 Hz, 3H), 1.28 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.18 (d,
J= 4.6 Hz, 3H), 1.16 (d,
J= 4.6 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.17。LCMS：MS
m/z= 733.46 [M+1]；t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.65 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例155. (2R,2'R)-雙(2-甲氧基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-((R)-2-甲氧基丙醯胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例154之第一溶離實例：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 8.26 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.27 - 7.20 (m, 3H), 7.20 - 7.14 (m, 1H), 7.02 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 5.93 (d,
J= 5.4 Hz, 2H), 5.79 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.92 - 4.88 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 2H), 4.15 (q,
J= 6.5 Hz, 1H), 4.09 (q,
J= 6.9 Hz, 1H), 3.93 (q,
J= 6.8 Hz, 1H), 3.87 (dd,
J= 10.1, 7.3 Hz, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 1.48 (d, J = 2.5 Hz, 3H), 1.47 (d,
J= 2.7 Hz, 3H), 1.34 (d,
J= 6.9 Hz, 3H), 1.29 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.18 (d,
J= 3.7 Hz, 3H), 1.16 (d,
J= 3.8 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.20。LCMS：MS
m/z= 819.43 [M+1]；t
R= 1.15 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.84 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例156. 雙(四氫-2H-哌喃-4-甲酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.29 mmol)添加至實例1 (40 mg，0.071 mmol)及四氫-2H-哌喃-4-甲酸(74 mg，0.57 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(15.0 mg，0.11 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 × 30.0 mm管柱，5-75%乙腈/水梯度)，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 16.1, 7.9 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.87 - 5.79 (m, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.47 - 4.41 (m, 2H), 3.95 - 3.78 (m, 4H), 3.52 - 3.46 (m, 2H), 3.45 (s, 1H), 2.70 (dt, J = 10.9, 4.2 Hz, 2H), 1.88 (q, J = 15.7, 14.5 Hz, 4H), 1.82 - 1.66 (m, 4H), 1.26 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.16 (t, J = 5.8 Hz, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.12。LCMS：MS m/z = [M+1]；t
R= 0.94 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.68 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例157. (2S,2'S)-雙(2-胺基-3-甲基丁酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將Boc-L-纈胺酸(87 mg，0.4 mmol)與
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(62 µL，0.4 mmol)混合且溶解於1 mL無水四氫呋喃中。攪拌混合物20 min。將實例1(55 mg，0.1 mmol)溶解於1 mL無水四氫呋喃中且添加至以上混合物中。添加DMAP (12 mg，0.1 mmol)且攪拌2 h。
添加甲醇(0.5 mL)且攪拌12 h。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-50-80%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮成油狀物，將物質溶解於二氯甲烷(4 mL)中並於冰浴中攪拌。逐滴添加TFA (300 µL)。攪拌反應物1 h。添加更多TFA (200 µL)且攪拌反應物2 h。減壓濃縮反應物。將殘餘物溶解於無水二㗁烷中，且減壓濃縮若干次，得到泡沫。將物質溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 8.08 (s, 1H), 7.43 - 7.26 (m, 3H), 7.26 - 7.10 (m, 3H), 7.03 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 6.27 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 6.04 (dd,
J= 5.8, 3.3 Hz, 1H), 5.89 (d,
J= 3.3 Hz, 1H), 4.83 (m, 1H), 4.50 (m, 2H), 4.16 (m, 2H), 3.88 - 3.73 (m, 1H), 3.69 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 1.34 - 1.22 (m, 3H), 1.22 - 1.05 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.18。LCMS：MS
m/z= 759.3[M+1]；757.5 [M-1]，t
R= 0.99min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.42 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.068 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例158. (2S,2'S)-雙(2-甲氧基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.03 mL，0.21 mmol)添加至實例1 (30.0mg，0.05 mmol)及(S)-(−)-2-甲氧基丙酸(46.6 mL，0.43 mmol)於四氫呋喃(4.5 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(14.3 mg，0.11 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，40-80%乙腈/水梯度，含0.1%TFA)，且將所得物質溶解於EtOAc (25 mL)中並用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.86 (s, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.79 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.13 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.92 (dd,
J= 5.9, 4.1 Hz, 1H), 5.75 (d,
J= 4.1 Hz, 1H), 4.87 - 4.82 (m, 1H), 4.45 (d,
J= 5.7 Hz, 2H), 4.01 (dq,
J= 17.4, 6.9 Hz, 2H), 3.85 (dq,
J= 9.5, 6.9 Hz, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 1.45 (dd,
J= 9.6, 6.9 Hz, 6H), 1.27 (d,
J= 7.1 Hz, 3H), 1.16 (dd,
J= 6.2, 5.1 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.10。LCMS：MS
m/z= 733.49 [M+1]；t
R= 0.99 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.51 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例159. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-胺基環己基)甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
將中間物4 (71 mg，0.214 mmol)與中間物64 (124 mg，0.214 mmol)混合，溶解於3 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(61 mg，0.642 mmol)。添加DIPEA (187 µL，1.07 mmol)且在50℃下攪拌反應物16 h。
反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋且用水(5 × 10 mL)洗滌，且接著用鹽水(10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將所得物質溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液)(300 µL)且接著於冰浴中攪拌2 h。逐滴添加更多濃HCl (水溶液)(200 µL)，且接著於冰浴中攪拌2 h。將1 M碳酸鈉水溶液添加至反應物中，使得pH為9-10。添加Boc酸酐(47 mg，0.14 mmol)且在RT下攪拌反應物16 h。
反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於二㗁烷(5 mL)及水(3 mL)中且在120℃下攪拌2 h。使反應物冷卻且用乙酸乙酯(15 mL)稀釋並用鹽水(3 × 5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於無水四氫呋喃(4 mL)中。將丙酸(37 µL，0.493 mmol)溶解於無水四氫呋喃(1 mL)中。將
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(77 µL，0.493 mmol)一次性添加至丙酸溶液中且攪拌30 min。將所得混合物一次性添加至反應物中。添加DMAP (15 mg，0.123 mmol)，且攪拌反應物16 h。
反應混合物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋且用鹽水(3 × 10 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將所得物質溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中且在大氣壓氮下於冰浴中進行攪拌。逐滴添加TFA (500 µL)，且在0℃下攪拌反應物3 h。反應混合物用無水MeCN稀釋且減壓濃縮。殘餘物與無水二㗁烷(3×)共蒸發。殘餘物與無水MeCN (3×)共蒸發。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 8.04 (m, 1H), 7.43 - 7.25 (m, 3H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.97 (m, 1H), 5.88 - 5.69 (m, 1H), 4.59 - 4.40 (m, 2H), 4.01 - 3.84 (m, 3H), 3.73 - 3.49 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.54 - 2.37 (m, 4H), 2.02 (m, 2H), 1.92 - 1.79 (m, 2H), 1.64 (m, 1H), 1.44 - 1.27 (m, 5H), 1.22 - 1.05 (m, 8H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.00, 3.10。LCMS：MS
m/z= 742.3 [M+1]；740.5 [M-1]，t
R= 1.06 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.59 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.389，4.429 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例160. 雙(氧雜環丁烷-3-甲酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.29 mmol)添加至實例1 (40 mg，0.071 mmol)及氧雜環丁烷-3-甲酸(58 mg，0.57 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(15.0 mg，0.11 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 × 30.0 mm管柱，5-75%乙腈/水梯度)，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d
4) δ 7.84 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.10 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.94 (dd, J = 5.8, 4.2 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.95 - 4.72 (m, 7H), 4.54 - 4.40 (m, 2H), 4.09 - 3.77 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 2.02 (s, 2H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.27 - 1.07 (m, 8H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.31。LCMS：MS
m/z= 729.50 [M+1]；t
R= 0.89 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.11 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例161. 雙(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.27 mmol)添加至實例1 (31.0 mg，0.05 mmol)及2-(2-甲氧基乙氧基)乙酸(0.05 mL，0.43 mmol)於四氫呋喃(4.5 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(15.0 mg，0.11 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 × 30.0 mm管柱，5-75%乙腈/水梯度)，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.90 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.22 - 7.14 (m, 3H), 6.77 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.28 (s, 2H), 5.92 (d,
J= 6.2 Hz, 1H), 5.88 (dd,
J= 6.1, 4.6 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.84 (p,
J= 6.3 Hz, 1H), 4.46 (dd,
J= 11.2, 6.8 Hz, 1H), 4.37 (dd,
J= 11.2, 5.8 Hz, 1H), 4.29 - 4.17 (m, 4H), 4.15 (d,
J= 0.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.69 - 3.64 (m, 2H), 3.64 - 3.58 (m, 2H), 3.52 - 3.48 (m, 2H), 3.48 - 3.43 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 1.23 (dd,
J= 7.1, 0.9 Hz, 3H), 1.13 (dd,
J= 7.0, 6.2 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.56。LCMS：MS m/z = 739.63 [M+1]；t
R= 0.94 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.29 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例162. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例19 (50 mg，0.069 mmol)、異丁酸(0.031 mL，0.343 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.053 mL，0.343 mmol)於THF (2 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (25.12 mg，0.206 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且添加另外的
N,N-二異丁基碳化二亞胺(0.053 mL，0.343 mmol)。攪拌2 h後，藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅反應物，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10u C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，20-65%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度，30 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.95 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 4H), 6.88 (m, 1H), 5.90 - 5.73 (m, 2H), 5.70 (m, 1H), 5.04 (m, 0.7H), 4.09 (m, 0.3H), 4.50 (m, 2H), 3.97 (s, 1H), 3.54 (m, 0.7H), 3.34 (m, 1.3H), 3.14 (m, 2H), 2.91 - 2.76 (m, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 2.20 (m, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.83 (m, 1H ), 1.41 - 1.27 (m, 3H), 1.26 - 1.08 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.44。LCMS：MS
m/z= 756.32 [M+1-TFA]；t
R= 0.84 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.66 (29%)，4.70 min (69%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例163. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例55 (53 mg，0.083 mmol)、乙酸(0.023 mL，0.415 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.15 mL，0.963 mmol)於THF (2 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (20.27 mg，0.166 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.90 (m, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.81 - 6.73 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.56 - 4.29 (m, 3H), 3.98 - 3.84 (m, 1H), 3.83 - 3.72 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 2.16 (s, 1H), 2.15 (s, 2H), 2.08 (s, 1H), 2.07 (s, 2H), 1.87 - 1.73 (m, 2H), 1.62 - 1.47 (m, 2H), 1.28 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 2H), 1.24 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 1H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.51, 2.39。LCMS：MS
m/z= 687.39 [M+1]；t
R= 0.84，0.86 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .藉由SFC (IF，5 μ，21 × 250 mm，20% MeOH)分離產物，得到非對映異構體：
實例 164. 第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.34 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.82 - 6.74 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.88 - 5.78 (m, 2H), 5.70 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 4.87 (tt,
J= 8.6, 4.2 Hz, 1H), 4.50 (dd,
J= 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 11.2, 5.4 Hz, 1H), 4.27 (t,
J= 11.1 Hz, 1H), 3.93 - 3.75 (m, 3H), 3.52 - 3.42 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.82 (q,
J= 6.4, 5.2 Hz, 2H), 1.56 (dtd,
J= 12.8, 8.7, 3.9 Hz, 2H), 1.23 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.37。LCMS：MS
m/z= 687.35 [M+1]；t
R= 0.85 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50×3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2%ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.62 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 165.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.35 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.21 (ddd,
J= 8.3, 2.6, 1.4 Hz, 3H), 6.77 (q,
J= 4.6 Hz, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.83 - 5.74 (m, 2H), 5.68 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.84 (tt,
J= 8.2, 4.0 Hz, 1H), 4.46 (dd,
J= 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.42 - 4.26 (m, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 1H), 3.78 (dt,
J= 10.6, 4.8 Hz, 2H), 3.51 - 3.39 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.80 (q,
J= 10.4, 7.4 Hz, 2H), 1.53 (dtd,
J= 12.7, 8.4, 3.9 Hz, 2H), 1.28 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.49。LCMS：MS
m/z= 687.37 [M+1]；t
R= 0.86 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.69 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例166. (2R,2'R)-雙(2-甲氧基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.05 mL，0.31 mmol)添加至實例52 (40.0 mg，0.08 mmol)及(R)-(+)-2-甲氧基丙酸(62.6 mg，0.60 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(18.4 mg，0.14 mmol)。2 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，30-60%乙腈/水梯度，含0.1% TFA)，得到呈TFA鹽之產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.93 (s, 1H), 7.34 (t,
J= 7.9 Hz, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 4H), 6.93 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 5.82 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.50 (dd,
J= 11.4, 6.8 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 11.3, 6.1 Hz, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 1H), 4.05 (q,
J= 6.9 Hz, 1H), 3.97 - 3.86 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 1.42 (d,
J= 6.9 Hz, 3H), 1.32 (d,
J= 6.8 Hz, 3H), 1.29 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H)。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-
d 3) δ -77.14。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.47。LCMS：MS m/z = 705.43 [M+1]；t
R= 0.89 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.12 min；HPLC系統：Agilent 1100系列；管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例167. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例55 (54 mg，0.085 mmol)、丙酸(0.032 mL，0.423 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.132 mL，0.423 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (20.65 mg，0.169 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物及實例170之丙醯胺。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.90 (dd,
J= 4.7, 1.6 Hz, 1H), 7.44 - 7.27 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.77 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.95 - 5.76 (m, 2H), 5.68 ( m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.56 - 4.33 (m, 3H), 4.03 - 3.69 (m, 3H), 3.52 - 3.38 (m, 2H), 2.57 - 2.29 (m, 4H), 1.88 - 1.75 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.26 (m, 3H), 1.13 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.50, 2.40。LCMS：MS
m/z= 715.33 [M+1]；t
R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .藉由SFC (IF，5 μ，21 × 250 mm，30% EtOH)分離產物，得到非對映異構體：
實例 168.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.22 - 7.14 (m, 3H), 6.79 (q,
J= 4.6 Hz, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.88 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.83 (dd,
J= 6.1, 4.7 Hz, 1H), 5.70 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.87 (tt,
J= 8.3, 4.1 Hz, 1H), 4.50 (dd,
J= 11.2, 6.3 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 11.2, 5.4 Hz, 1H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 3.83 (ddt,
J= 21.2, 10.5, 5.9 Hz, 3H), 3.55 - 3.38 (m, 2H), 2.46 (qd,
J= 7.6, 3.3 Hz, 2H), 2.39 (q,
J= 7.5 Hz, 2H), 1.81 (s, 2H), 1.56 (dtd,
J= 12.7, 8.6, 3.9 Hz, 2H), 1.23 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.15 (t,
J= 7.5 Hz, 3H), 1.11 (t,
J= 7.6 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.37。LCMS：MS
m/z= 715.46 [M+1]；t
R= 0.95 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.07 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 169.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.35 (t,
J= 7.9 Hz, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.81 - 6.72 (m, 2H), 6.38 (s, 2H), 5.87 - 5.77 (m, 2H), 5.68 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.84 (tt,
J= 8.4, 4.1 Hz, 1H), 4.46 (dd,
J= 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.41 - 4.26 (m, 2H), 3.91 (ddt,
J= 16.9, 9.8, 7.1 Hz, 1H), 3.78 (dt,
J= 10.6, 4.9 Hz, 2H), 3.46 (ddd,
J= 9.5, 8.1, 4.1 Hz, 2H), 2.45 (qd,
J= 7.5, 3.3 Hz, 2H), 2.38 (q,
J= 7.5 Hz, 2H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.53 (dtd,
J= 12.7, 8.4, 3.9 Hz, 2H), 1.28 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.15 (t,
J= 7.5 Hz, 3H), 1.10 (t,
J= 7.6 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.48。LCMS：MS
m/z= 715.48 [M+1]；t
R= 0.96 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.14 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例170. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-丙醯胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)四氫呋喃-3,4-二基酯
經由實例167製備之丙醯胺.
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 8.90 (s, 1H), 8.27 - 8.09 (m, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 4H), 6.96 (m, 1H), 5.90 - 5.74 (m, 3H), 4.96 - 4.69 (m, 1H), 4.59 - 4.27 (m, 3H), 4.05 - 3.69 (m, 3H), 3.55 - 3.34 (m, 2H), 2.72 (m, 2H), 2.55 - 2.34 (m, 4H), 1.81 (s, 2H), 1.66 - 1.49 (m, 2H), 1.39 - 0.93 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.49, 2.35。LCMS：MS
m/z= 771.52 [M+1]；t
R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含有0.1%甲酸之乙腈，含有0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.77 min (22%)，5.79 min (71%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例171. 雙(2,2-二甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例55 (54 mg，0.066 mmol)、特戊酸(0.049 mL，0.423 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.132 mL，0.845 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物20 min，且添加DMAP (21 mg，0.172 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物80 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.89 (m, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.76 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.91 (m, 1H), 5.80 (m, 1H), 5.65 (m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 3.98 - 3.84 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 1.89 - 1.74 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.28 (m, 12H), 1.22 (m, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.48, 2.42。LCMS：MS
m/z= 771.52 [M+1]；t
R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含有0.1%甲酸之乙腈，含有0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .藉由SFC (IF，5 μ，21 × 250 mm，30% 2-丙醇)分離產物，得到非對映異構體：
實例 172.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.77 (s, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.93 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.86 - 5.77 (m, 1H), 5.66 (d,
J= 4.0 Hz, 1H), 4.87 (tt,
J= 8.4, 4.1 Hz, 1H), 4.48 (dd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 11.2, 5.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.18 (m, 1H), 3.91 - 3.75 (m, 3H), 3.47 (ddt,
J= 11.7, 8.8, 3.0 Hz, 2H), 1.89 - 1.76 (m, 2H), 1.56 (dtd,
J= 12.8, 8.7, 4.0 Hz, 2H), 1.28 (s, 9H), 1.23 (s, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.41。LCMS：MS m/z = 771.47 [M+1]；t
R= 1.14 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.90 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 173.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 3H), 6.76 (s, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.89 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.79 (dd,
J= 5.8, 4.1 Hz, 1H), 5.64 (d,
J= 4.2 Hz, 1H), 4.84 (tt,
J= 8.3, 4.1 Hz, 1H), 4.49 - 4.36 (m, 2H), 4.33 (dd,
J= 12.0, 9.9 Hz, 1H), 3.97 - 3.86 (m, 1H), 3.78 (dt,
J= 10.6, 4.8 Hz, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 2H), 1.88 - 1.72 (m, 2H), 1.54 (dtd,
J= 12.7, 8.5, 3.9 Hz, 2H), 1.28 (s, 12H), 1.22 (s, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.47。LCMS：MS
m/z= 771.51 [M+1]；t
R= 1.14 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.97 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例174. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(氧雜環丁烷-3-基氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例44 (20 mg，0.035 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加丙酸(10 mg，0.14 mmol)及DIC (22 mg，0.17 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (8.5 mg，0.07 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 8.5, 4.6 Hz, 1H), 5.94 (dd, J = 24.6, 5.9 Hz, 1H), 5.84 (ddd, J = 18.2, 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 4.7, 2.7 Hz, 2H), 5.32 (dtt, J = 16.5, 6.3, 5.1 Hz, 1H), 4.81 - 4.71 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 4H), 3.92 (ddq, J = 23.9, 9.5, 7.1 Hz, 1H), 2.54 - 2.33 (m, 4H), 1.28 (ddd, J = 16.2, 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.15 (dtd, J = 15.1, 7.6, 2.8 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.95 , 2.89。LCMS：MS
m/z= 687.18 [M+1]，t
R= 1.24 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.88及4.95 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
實例 175.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.30 (tt, J = 6.3, 5.1 Hz, 1H), 4.78 (tdd, J = 7.5, 6.4, 1.0 Hz, 2H), 4.57 - 4.47 (m, 2H), 4.43 (dt, J = 11.1, 5.9 Hz, 2H), 4.02 - 3.84 (m, 1H), 2.50 - 2.33 (m, 4H), 1.30 (dd, J = 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.20 - 1.07 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.95。LCMS：MS
m/z= 687.15 [M+1]，t
R= 1.26 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.94 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 176.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.8, 7.0 Hz, 2H), 7.21 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.86 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.34 (tt, J = 6.3, 5.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.75 (m, 2H), 4.56 - 4.48 (m, 3H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.0 Hz, 1H), 3.97 - 3.80 (m, 1H), 2.54 - 2.32 (m, 4H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.3 Hz, 3H), 1.21 - 1.05 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.89。LCMS：MS
m/z= 687.14 [M+1]，t
R= 1.25 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.88 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例177. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((4-(二甲基胺甲醯基)苯氧基)(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例43 (48 mg，0.076 mmol)及異丁酸酐(0.028 mL，0.167 mmol)於THF (4 mL)中之混合物中添加DMAP (3 mg，0.323 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物5 min，藉由添加甲醇(1 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-80%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (m, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.20 (m, 2H), 6.76 (m, 2H), 6.47 (s, 2H), 5.89 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.89 (m, 1H), 4.56 - 4.36 (m, 3H), 3.97 - 3.74 (m, 1H), 2.96 (m, 6H), 2.76 - 2.50 (m, 2H), 1.28 - 1.10 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.43, 2.34。LCMS：MS
m/z= 772.48 [M+1]；t
R= 1.02 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.39 min (18%)，3.85 (81%)；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
S p 及 R p 非對映異構體之解析 .藉由SFC (AD-H，5 μ，21 × 250 mm，30% 2-丙醇)分離產物，得到非對映異構體：
實例 178.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.35 (d,
J= 8.5 Hz, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 2H), 6.77 (t,
J= 3.4 Hz, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.89 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.83 (dd,
J= 5.9, 4.4 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.3 Hz, 1H), 4.91 (p,
J= 6.3 Hz, 1H), 4.50 (dd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 1H), 4.43 (dd,
J= 11.2, 5.6 Hz, 1H), 4.36 (dd,
J= 12.3, 10.0 Hz, 1H), 3.80 (ddt,
J= 16.5, 9.5, 7.1 Hz, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.66 (m, 2H), 1.35 - 1.08 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.31。LCMS：MS
m/z= 772.48 [M+1]；t
R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.39 min；HPLC系統：Agilent 1290 II；管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min
實例 179.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 2H), 7.22 (dd,
J= 8.7, 1.2 Hz, 2H), 6.79 - 6.70 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.87 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.87 (七重峰,
J= 6.3 Hz, 1H), 4.47 (dd,
J= 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.39 (ddd,
J= 12.0, 8.2, 2.5 Hz, 2H), 3.87 (tq,
J= 9.5, 7.0 Hz, 1H), 3.02 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.30 - 1.06 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.40。LCMS：MS
m/z= 772.42 [M+1]；t
R= 1.02 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.39 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例180. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將丙酸酐(13 µL，0.10 mmol)添加至實例25 (30 mg，0.050 mmol)於2-甲基四氫呋喃(1.0 mL)中之溶液中。接著添加4-二甲基胺基吡啶(1 mg，0.007 mmol)。40 min後，反應混合物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d,
J =4.6 Hz, 1H), 6.74 (d,
J =4.6 Hz, 1H), 5.90 (d,
J =5.9 Hz, 1H), 5.80 (dd,
J =5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.68 (d,
J =4.7 Hz, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 2H), 4.01 (dd,
J =10.9, 5.7 Hz, 1H), 3.95 - 3.85 (m, 2H), 2.53 - 2.34 (m, 5H), 1.51 - 1.39 (m, 1H), 1.37 - 1.25 (m, 9H), 1.15 (dt,
J =13.8, 7.5 Hz, 7H), 0.86 (td,
J =7.5, 1.1 Hz, 7H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.04 (s)。LCMS：MS
m/z= 715.44 [M+1]，t
R= 1.50 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.61 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 6.22 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例181. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)甲氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將異丁酸酐(32 µL，0.19 mmol)添加至實例20 (60 mg，0.10 mmol)於2-甲基四氫呋喃(1.0 mL)中之溶液中。接著添加4-二甲基胺基吡啶(2 mg，0.02 mmol)。40 min後，反應混合物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.84 (s, 0.55H), 7.81 (s, 0.45H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.88 - 6.82 (m, 1H), 6.79 - 6.72 (m, 1H), 5.97 (d,
J= 5.9 Hz, 0.45H), 5.90 (d,
J= 5.9 Hz, 0.55H), 5.85 (dd,
J= 5.9, 4.5 Hz, 0.45H), 5.79 (dd,
J= 5.9, 4.7 Hz, 0.55H), 5.69 - 5.65 (m, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.98 - 3.79 (m, 5H), 3.38 - 3.30 (m, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 2H), 1.91 - 1.78 (m, 1H), 1.62 - 1.50 (m, 2H), 1.33 - 1.11 (m, 17H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.06 (s), 2.97 (s)。LCMS：MS
m/z= 757.45 [M+1]，t
R= 1.40 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.33 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.60 min (次要異構體)，5.66 min (主要異構體)；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 R p 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型SFC (Chiralpak ADH，20%異丙醇)純化，得到非對映異構體：
實例 182.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.97 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd,
J= 5.9, 4.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.51 (dd,
J= 11.0, 5.7 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 11.1, 5.0 Hz, 1H), 3.95 - 3.79 (m, 5H), 3.38 - 3.29 (m, 2H), 2.75 - 2.55 (m, 2H), 1.94 - 1.78 (m, 1H), 1.62 - 1.50 (m, 2H), 1.35 - 1.11 (m, 17H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.05 (s)。LCMS：MS
m/z= 757.30 [M+1]，t
R= 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.33 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.59 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 183.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.90 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.90 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.79 (dd,
J= 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 2H), 3.96 - 3.79 (m, 5H), 3.37 - 3.27 (m, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 2H), 1.91 - 1.77 (m, 1H), 1.58 - 1.52 (m, 2H), 1.33 - 1.11 (m, 17H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 2.97 (s)。LCMS：MS
m/z= 757.50 [M+1]，t
R= 1.45 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.34 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.65 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例184. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(氧雜環丁烷-3-基氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例44 (99 mg，0.17 mmol)溶解於10 mL THF中，向溶液中添加異丁酸(38 mg，0.43 mmol)及DIC (65 mg，0.52 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (42 mg，0.34 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J = 8.2, 6.7, 4.1 Hz, 2H), 7.25 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 8.2, 4.6 Hz, 1H), 5.94 (dd, J = 23.8, 5.9 Hz, 1H), 5.82 (ddd, J = 19.6, 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 4.6, 2.2 Hz, 1H), 5.32 (dtt, J = 16.6, 6.4, 5.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 2H), 4.52 (dddd, J = 12.6, 7.4, 5.0, 1.2 Hz, 2H), 4.42 (ddd, J = 11.2, 5.9, 4.4 Hz, 2H), 3.99-3.84 (m, 1H), 2.72 - 2.56 (m, 2H), 1.34 - 1.09 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.94 , 2.90。LCMS：MS
m/z= 715.22 [M+1]，t
R= 1.34 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.31及5.38 min；Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
實例 185. 第一溶離非對映異構體： 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 5.30 (tt, J = 6.4, 5.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 2H), 4.52 (dddd, J = 12.9, 7.6, 5.1, 1.0 Hz, 2H), 4.46 - 4.38 (m, 2H), 3.95 (dq, J = 10.3, 7.2 Hz, 1H), 2.64 (dp, J = 17.3, 7.0 Hz, 2H), 1.35 - 1.26 (m, 3H), 1.24 - 1.08 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.94。LCMS：MS
m/z= 715.21 [M+1]，t
R= 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.38 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 186. 第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.4 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.37-5.31 (m, 1H), 4.83 - 4.78 (m, 2H), 4.57 - 4.47 (m, 3H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.0 Hz, 1H), 3.96 - 3.81 (m, 1H), 2.64 (dq, J = 15.2, 7.0 Hz, 2H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.3 Hz, 3H), 1.25 - 1.13 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.90。LCMS：MS
m/z= 715.28 [M+1]，t
R= 1.34 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.30 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例187. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將丙酸酐(23.5 μL，0.18 mmol)添加至實例45 (51.2 mg，0.09 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1.8 mg，0.1 mmol)於四氫呋喃(1.8 mL)中之溶液中。20 min後，用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.82 (d,
J= 9.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (dd,
J= 7.1, 4.6 Hz, 1H), 6.76 (dd,
J= 11.7, 4.6 Hz, 1H), 6.02 - 5.87 (m, 1H), 5.88 - 5.79 (m, 1H), 5.69 (t,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 4.07 - 3.76 (m, 3H), 2.55 - 2.26 (m, 4H), 1.59 (dtd,
J= 14.0, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.26 (ddd,
J= 18.1, 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.16 (dtd,
J= 14.0, 7.6, 2.9 Hz, 6H), 0.90 (td,
J= 7.4, 2.9 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.05。LCMS：MS
m/z= 673.40 [M+1]，t
R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.83 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性SFC (Chiralpak AD-H，5 um，21 × 250 mm，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 188.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.97 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.86 (dd,
J= 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.70 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.52 (dd,
J= 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.43 (dd,
J= 11.1, 5.0 Hz, 1H), 4.08 - 3.94 (m, 2H), 3.84 (dq,
J= 9.4, 7.2 Hz, 1H), 2.55 - 2.35 (m, 4H), 1.61 (dtd,
J= 14.1, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.24 (dd,
J= 7.1, 1.3 Hz, 3H), 1.16 (dt,
J= 13.4, 7.5 Hz, 6H), 0.90 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.05。LCMS：MS
m/z= 673.41 [M+1]，t
R= 1.03 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.82 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例 189.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.91 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.82 (dd,
J= 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.51 - 4.37 (m, 2H), 4.06 - 3.83 (m, 3H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 1.59 (dtd,
J= 14.0, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.29 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.15 (dt,
J= 14.0, 7.6 Hz, 6H), 0.89 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.05。LCMS：MS
m/z= 673.34 [M+1]，t
R= 1.04 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.87 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例190. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將異丁酸酐(30.3 μL，0.18 mmol)添加至實例45 (51.2 mg，0.09 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1.8 mg，0.1 mmol)於四氫呋喃(1.8 mL)中之溶液中。30 min後，用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d,
J= 9.5 Hz, 1H), 7.30 (tt,
J= 6.9, 1.9 Hz, 2H), 7.25 - 7.06 (m, 3H), 6.85 (dd,
J= 7.3, 4.5 Hz, 1H), 6.76 (dd,
J= 11.6, 4.6 Hz, 1H), 5.94 (dd,
J= 23.8, 5.9 Hz, 1H), 5.83 (ddd,
J= 20.0, 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.68 (t,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.60 - 4.35 (m, 2H), 4.08 - 3.75 (m, 3H), 2.75 - 2.52 (m, 2H), 1.59 (dtd,
J= 14.0, 7.5, 6.6 Hz, 2H), 1.33 - 1.14 (m, 15H), 0.89 (td,
J= 7.4, 2.7 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.06 , 3.04。LCMS：MS
m/z= 701.47 [M+1]，t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.23 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性SFC (Chiralpak AD-H，5 um，21 × 250 mm，異丙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 191.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.86 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.97 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd,
J= 5.9, 4.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.52 (dd,
J= 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 11.0, 4.9 Hz, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 3.84 (dq,
J= 9.4, 7.2 Hz, 1H), 2.65 (雙七重峰,
J= 14.0, 7.0 Hz, 2H), 1.61 (dtd,
J= 14.0, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.26 - 1.16 (m, 15H), 0.90 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.07。LCMS：MS
m/z= 701.48 [M+1], t
R= 1.14 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.21 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例 192.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.80 (dd,
J= 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 2H), 4.05 - 3.84 (m, 3H), 2.64 (雙七重峰,
J= 17.1, 7.0 Hz, 2H), 1.59 (dtd,
J= 13.9, 7.4, 6.6 Hz, 2H), 1.29 (dd,
J= 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.26 - 1.14 (m, 12H), 0.89 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.04。LCMS：MS
m/z= 701.47 [M+1], t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.24 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例193.
將中間物4 (50 mg，0.15 mmol)與中間物65 (85 mg，0.18 mmol)混合，且溶解於1.5 mL無水四氫呋喃中。一次性添加氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)。添加DIPEA (65 µL，0.375 mmol)且在35℃下攪拌反應物48 h。
反應物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且用水(5 × 10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。將殘餘物溶解於5 mL MeCN中，且在冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液)(250 µL)，且接著於冰浴中攪拌2 h。反應物用乙酸乙酯稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌，且接著用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。
將殘餘物溶解於無水四氫呋喃(5 mL)中。添加丙酸酐(26 µL，0.2 mmol)。添加DMAP (1.8 mg，0.014 mmol)且攪拌30 min。反應物用乙酸乙酯(15 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 10 mL)洗滌，且隨後用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100% B/己烷(B = 3% MeOH/乙酸乙酯))純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.82 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.90 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 6.0, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.41 - 4.23 (m, 2H), 4.08 - 3.95 (m, 3H), 3.92 - 3.80 (m, 2H), 2.58 - 2.34 (m, 4H), 1.66 - 1.51 (m, 4H), 1.36 (m, 4H), 1.29 (m, 6H), 1.16 (m, 6H), 0.91 (m, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 13.47。LCMS：MS
m/z= 738.5 [M+1], 736.5 [M-1], t
R= 1.43 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.41 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.862 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例194. 二戊酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-(((雙(((S)-1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例35 (64 mg，0.112 mmol)、戊酸(0.05 mL，0.455 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.040 mL，0.255 mmol)於THF (4 mL)中之混合物中添加DMAP (14 mg，0.115 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且添加另外的
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.255 mmol)。攪拌2 h後，添加另外的戊酸(0.05 mL，0.455 mmol)。接著攪拌混合物30 min，藉由添加甲醇(1 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.81 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.55 (s, 2H), 5.86 - 5.80 (m, 2H), 5.67 (dd,
J= 2.8, 1.8 Hz, 1H), 4.33 (dd,
J= 11.3, 7.0 Hz, 1H), 4.22 (dd,
J= 11.3, 5.5 Hz, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 4H), 3.95 - 3.73 (m, 4H), 2.46 (td,
J= 7.4, 4.7 Hz, 2H), 2.36 (t,
J= 7.4 Hz, 2H), 1.70 - 1.50 (m, 4H), 1.36 (m, 4H), 1.27 - 1.17 (m, 12H), 0.94 (t,
J= 7.4 Hz, 3H), 0.89 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.18。LCMS：MS
m/z= 738.49 [M+1]；t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.86 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例195. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-環丁氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例50 (50 mg，0.087 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加丙酸(16 mg，0.218 mmol)及DIC (33 mg，0.262 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (21 mg，0.175 mmol)。在RT下攪拌所得混合物1 h，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.81 (ddd, J = 7.9, 7.1, 1.0 Hz, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 3.85 (dq, J = 10.0, 7.1 Hz, 1H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 2.31 - 2.13 (m, 2H), 2.09 - 1.90 (m, 2H), 1.74 (tddt, J = 11.6, 9.0, 2.8, 1.4 Hz, 1H), 1.67 - 1.49 (m, 1H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.14 (dt, J = 13.5, 7.5 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.07。LCMS：MS
m/z= 685.27 [M+1], t
R= 1.40 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 msm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.59 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例196. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((R)-(((S)-1-環丁氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例51 (40 mg，0.07 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加丙酸(13 mg，0.18 mmol)及DIC (26 mg，0.21 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (17 mg，0.14 mmol)。在RT下攪拌所得混合物1 h，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 8.7, 7.0 Hz, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.95 - 4.86 (m, 1H), 4.52 (dd, J = 11.0, 5.8 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 3.80 (dq, J = 9.2, 7.1 Hz, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 4H), 2.27 (ddt, J = 10.8, 7.0, 2.1 Hz, 2H), 2.09 - 1.92 (m, 2H), 1.76 (dtdt, J = 11.6, 8.9, 2.7, 1.4 Hz, 1H), 1.67 - 1.54 (m, 1H), 1.23 (dd, J = 7.2, 1.3 Hz, 3H), 1.15 (dt, J = 13.7, 7.6 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.04。LCMS：MS
m/z= 685.33 [M+1]，t
R= 1.40 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.55 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例197. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-環丁氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例50 (50 mg，0.087 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加異丁酸(31 mg，0.35 mmol)及DIC (55 mg，0.44 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (21 mg，0.18 mmol)。在RT下攪拌所得混合物1 h，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.22 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.83-4.79 (m, 1H), 4.43 (dd, J = 5.8, 4.3 Hz, 2H), 3.85 (dq, J = 9.9, 7.1 Hz, 1H), 2.64 (dp, J = 16.1, 7.0 Hz, 2H), 2.31 - 2.14 (m, 2H), 1.99 (dtdd, J = 11.1, 9.9, 8.9, 7.8 Hz, 2H), 1.82 - 1.65 (m, 1H), 1.67 - 1.49 (m, 1H), 1.30 - 1.11 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.05。LCMS：MS
m/z= 713.37 [M+1]，t
R= 1.48 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 6.02 min; Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例198. 二乙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-環丁氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例50 (50 mg，0.087 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加乙酸(21 mg，0.35 mmol)及DIC (55 mg，0.44 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (21 mg，0.18 mmol)。在RT下攪拌所得混合物1 h，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (s, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.83 - 5.75 (m, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.81 (dd, J = 7.5, 6.6 Hz, 1H), 4.51 - 4.35 (m, 2H), 3.85 (dq, J = 10.0, 7.1 Hz, 1H), 2.30 - 2.17 (m, 2H), 2.15 (d, J = 3.8 Hz, 4H), 2.10 (d, J = 1.2 Hz, 4H), 2.06 - 1.91 (m, 2H), 1.80 - 1.67 (m, 1H), 1.59 (dddd, J = 18.2, 11.0, 10.2, 8.1 Hz, 1H), 1.30 - 1.19 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.07。LCMS：MS
m/z= 657.23 [M+1]，t
R= 1.31 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.15 min; Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例199.
在RT下將丙酸酐(19 µL，0.19 mmol)添加至實例38 (40 mg，0.07 mmol)於2-甲基四氫呋喃(1.0 mL)中之溶液中。接著添加4-二甲基胺基吡啶(1 mg，0.07 mmol)。30 min後，反應混合物經歷矽膠層析，用0-20%甲醇/二氯甲烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.87 (s, 1H), 6.87 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.83 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.92 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.86 (dd,
J= 6.0, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.35 (dd,
J= 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.26 (dd,
J= 11.2, 5.0 Hz, 1H), 3.92 - 3.76 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 2.58 - 2.34 (m, 4H), 1.31 - 1.23 (m, 6H), 1.19 (t,
J= 7.5 Hz, 3H), 1.13 (t,
J= 7.6 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 13.49 (s)。LCMS：MS
m/z= 654.28 [M+1]，t
R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.70 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.46 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例200. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例49 (60 mg，0.1 mmol)溶解於5 mL THF中，向溶液中添加異丁酸(50 mg，0.6 mmol)及DIC (80 mg，0.6 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (50 mg，0.6 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.17 (dddd, J = 13.7, 7.3, 3.5, 2.3 Hz, 3H), 6.84 (dd, J = 7.2, 4.5 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 11.2, 4.5 Hz, 1H), 5.93 (dd, J = 24.5, 5.8 Hz, 1H), 5.82 (ddd, J = 23.2, 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 4.5, 3.6 Hz, 1H), 4.72 (ddd, J = 8.0, 6.2, 4.2 Hz, 2H), 4.42 (dh, J = 7.2, 3.4, 2.4 Hz, 4H), 4.31 - 4.11 (m, 2H), 3.89 (ddq, J = 26.9, 9.2, 7.1 Hz, 1H), 3.23 (dtt, J = 12.5, 8.0, 6.2 Hz, 1H), 2.72 - 2.54 (m, 2H), 1.31 - 1.10 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.01, 2.94。LCMS：MS
m/z= 729.27 [M+1], t
R= 1.37 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.30及5.36 min；Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
實例 201.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 15.0, 7.7 Hz, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.79 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.71 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.9 Hz, 2H), 4.51 - 4.35 (m, 4H), 4.20 (qd, J = 11.3, 6.3 Hz, 2H), 3.93 (dq, J = 9.6, 7.2 Hz, 1H), 3.22 (tt, J = 7.6, 5.9 Hz, 1H), 2.63 (dp, J = 17.6, 7.0 Hz, 2H), 1.29 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.26 - 1.06 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.94。LCMS：MS
m/z= 729.22 [M+1]，t
R= 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.36 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 202.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.7, 7.0 Hz, 2H), 7.16 (ddd, J = 8.1, 2.4, 1.2 Hz, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.72 (ddd, J = 7.9, 6.3, 4.2 Hz, 2H), 4.51 (dd, J = 11.0, 5.7 Hz, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 3H), 4.33 - 4.19 (m, 2H), 3.86 (dq, J = 9.2, 7.1 Hz, 1H), 3.27 - 3.19 (m, 1H), 2.64 (dp, J = 15.4, 7.0 Hz, 2H), 1.26 - 1.10 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.01。LCMS：MS
m/z= 729.21 [M+1]，tR = 1.34 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.30 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例203. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(氧雜環丁烷-3-基甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例49 (92 mg，0.16 mmol)溶解於5 mL THF中，向溶液中添加丙酸(46 mg，0.63 mmol)及DIC (99 mg，0.78 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (95 mg，0.78 mmol)。在RT下攪拌所得混合物1 h，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.37 - 7.23 (m, 2H), 7.24 - 7.08 (m, 3H), 6.83 (dd, J = 7.2, 4.5 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 11.1, 4.5 Hz, 1H), 5.94 (dd, J = 25.1, 5.9 Hz, 1H), 5.84 (ddd, J = 21.2, 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.69 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 4.71 (ddd, J = 7.9, 6.1, 4.0 Hz, 2H), 4.55 - 4.35 (m, 4H), 4.31 - 4.10 (m, 2H), 3.99 - 3.79 (m, 1H), 3.22 (dddd, J = 12.8, 7.9, 6.3, 1.8 Hz, 1H), 2.52 - 2.32 (m, 4H), 1.34 - 1.21 (m, 3H), 1.14 (dtd, J = 13.8, 7.5, 3.1 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.99, 2.95。LCMS：MS
m/z= 701.28 [M+1]，t
R= 1.27 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.87及4.94 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，庚烷80%乙醇20%)純化，得到非對映異構體：
實例 204.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.8 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.72 (ddd, J = 8.1, 6.3, 1.9 Hz, 2H), 4.48 - 4.35 (m, 4H), 4.20 (qd, J = 11.3, 6.3 Hz, 2H), 3.99 - 3.86 (m, 1H), 3.22 (tt, J = 8.0, 6.1 Hz, 1H), 2.53 - 2.33 (m, 4H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.2 Hz, 3H), 1.15 (dt, J = 14.9, 7.5 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.95。LCMS：MS
m/z= 701.12 [M+1]，t
R= 1.31 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.94 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 205.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.81 (s, 1H), 7.34 - 7.22 (m, 2H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.86 (dd, J = 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.72 (ddd, J = 7.9, 6.2, 4.1 Hz, 2H), 4.51 (dd, J = 11.0, 5.8 Hz, 1H), 4.42 (tdd, J = 6.0, 4.7, 2.0 Hz, 3H), 4.33 - 4.19 (m, 2H), 3.93 - 3.79 (m, 1H), 3.29 - 3.20 (m, 1H), 2.56 - 2.33 (m, 4H), 1.24 (dd, J = 7.1, 1.3 Hz, 3H), 1.15 (dt, J = 14.2, 7.6 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.99。LCMS：MS
m/z= 701.20 [M+1]，t
R= 1.30 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.87 min; Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例206. 雙(2,2-二甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(氧雜環丁烷-3-基氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例44 (67 mg，0.12 mmol)溶解於5 mL THF中，向溶液添加特戊酸(96 mg，0.94 mmol)及DIC (148 mg，1.16 mmol)。在RT下攪拌反應混合物10 min，接著添加DMAP (142 mg，1.16 mmol)。在75℃下攪拌所得混合物隔夜，且接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 6.5, 4.5 Hz, 1H), 5.95 (dd, J = 21.5, 5.8 Hz, 1H), 5.79 (ddd, J = 19.6, 5.7, 4.2 Hz, 1H), 5.68 - 5.59 (m, 1H), 5.32 (dtt, J = 16.6, 6.3, 5.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.74 (m, 2H), 4.52 (dddd, J = 13.9, 7.8, 3.7, 1.0 Hz, 3H), 4.45 - 4.34 (m, 1H), 3.91 (ddq, J = 32.6, 9.2, 7.1 Hz, 1H), 1.28 (d, J = 0.8 Hz, 12H), 1.22 (d, J = 4.0 Hz, 9H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 2.93, 2.91。LCMS：MS
m/z= 743.22 [M+1]，t
R= 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.71及5.78 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例207. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-胺基環己基)甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 ((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲酯 .在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.19 mL，1.06 mmol)及氯化鎂(61.5 mg，0.63 mmol)添加至中間物4 (68.8 mg，0.21 mmol)及中間物64 (130.9 mg，0.21 mmol)於四氫呋喃(3.0 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。90 min後，使反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋，且所得混合物用水(2 × 20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.20 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(5 mL)中。使混合物升溫至RT。1 h後，將混合物置於冰箱中。16 h後，反應物用飽和碳酸氫鈉溶液(6 mL)鹼化，且升溫至RT。向混合物添加二碳酸二三級丁酯(49.8 mg，0.21 mmol)。6 h後，添加更多二碳酸二三級丁酯(31.4 mg，0.14 mmol)。16 h後，混合物用乙酸乙酯(25 mL)稀釋且分離各相。有機層用飽和碳酸氫鈉溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，隨後用0-10%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (d,
J= 8.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (dd,
J= 4.5, 1.4 Hz, 1H), 6.74 (dd,
J= 4.6, 2.8 Hz, 1H), 5.53 - 5.45 (m, 1H), 4.66 - 4.58 (m, 1H), 4.55 - 4.38 (m, 2H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 3.96 - 3.70 (m, 3H), 3.23 (s, 1H), 1.93 - 1.84 (m, 2H), 1.78 - 1.67 (m, 2H), 1.43 (d,
J= 1.3 Hz, 9H), 1.28 - 1.25 (m, 3H), 1.18 - 0.95 (m, 4H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.22。LCMS：MS
m/z= 730.18 [M+1]，t
R= 0.92 min, 0.93 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.47 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環己基 ) 甲氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基 酯 .在RT下將異丁酸酐(46.2 μL，0.28 mmol)添加至((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲酯(101.7 mg，0.14 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(3.3 mg，0.03 mmol)於2-甲基四氫呋喃(3.0 mL)中之溶液中。10 min後，用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.83 (d,
J= 10.3 Hz, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (dd,
J= 5.9, 4.5 Hz, 1H), 6.77 (dd,
J= 12.0, 4.6 Hz, 1H), 5.94 (dd,
J= 27.9, 5.9 Hz, 1H), 5.82 (ddd,
J= 24.4, 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.68 (t,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.98 - 3.72 (m, 3H), 3.23 (s, 1H), 2.74 - 2.51 (m, 2H), 1.89 (d,
J= 13.7 Hz, 2H), 1.73 (d,
J= 12.5 Hz, 3H), 1.62 - 1.48 (m, 2H), 1.43 (d,
J= 1.1 Hz, 9H), 1.30 - 1.15 (m, 15H), 1.13 - 0.94 (m, 5H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.00。LCMS：MS
m/z= 870.36 [M+1]，t
R= 1.24 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.66 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4- 胺基環己基 ) 甲氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基 酯 .在0℃下將三氟乙酸(0.5 mL)添加至雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-((三級丁氧基羰基)胺基)環己基)甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯(92.4 mg，0.11 mmol)於二氯甲烷(5.0 mL)中之溶液中。4.5小時後，反應混合物用乙腈(15 mL)稀釋且減壓濃縮。物質與2,4-二㗁烷(2 × 10 mL)及乙腈(10 mL)共蒸發，得到呈TFA鹽之產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.92 (d,
J= 9.4 Hz, 1H), 7.38 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 7.08 (s, 1H), 6.92 - 6.81 (m, 1H), 5.93 - 5.73 (m, 2H), 5.70 (d,
J= 4.9 Hz, 1H), 4.58 - 4.38 (m, 2H), 4.01 - 3.83 (m, 3H), 3.07 - 2.94 (m, 1H), 2.77 - 2.57 (m, 2H), 2.03 (d,
J= 12.4 Hz, 2H), 1.86 (d,
J= 13.1 Hz, 2H), 1.63 (s, 1H), 1.46 - 1.27 (m, 5H), 1.27 - 1.15 (m, 12H), 1.12 (d,
J= 13.3 Hz, 2H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d 4) δ -77.65。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.08。LCMS：MS
m/z= 770.27 [M+1]。t
R= 0.91 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.11 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性SFC (Chiralpak IA，5 um，4.6 × 150 mm，甲醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 208.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.88 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.14 (m, 3H), 7.00 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.84 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.93 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 6.0, 4.5 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.53 (dd,
J= 11.1, 5.5 Hz, 1H), 4.44 (dd,
J= 11.0, 5.1 Hz, 1H), 3.99 - 3.84 (m, 3H), 3.07 - 2.93 (m, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 2H), 2.01 (d,
J= 12.7 Hz, 2H), 1.85 (d,
J= 13.4 Hz, 2H), 1.63 (s, 1H), 1.34 (d,
J= 12.3 Hz, 2H), 1.28 (dd,
J= 7.2, 1.2 Hz, 3H), 1.26 - 1.16 (m, 12H), 1.12 (d,
J= 11.8 Hz, 2H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d 4) δ -77.59。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.05。LCMS：MS
m/z= 770.29 [M+1]，t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Dionex UltiMate 3000 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.02 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例 209.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.97 (s, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.24 - 7.18 (m, 3H), 7.14 (s, 1H), 6.87 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 5.85 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 5.79 - 5.74 (m, 1H), 5.71 (d,
J= 4.9 Hz, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 2H), 4.00 - 3.85 (m, 3H), 3.06 - 2.94 (m, 1H), 2.65 (dp,
J= 19.3, 7.0 Hz, 2H), 2.03 (d,
J= 12.4 Hz, 2H), 1.86 (d,
J= 13.3 Hz, 2H), 1.64 (s, 1H), 1.41 - 1.30 (m, 5H), 1.26 - 1.15 (m, 12H), 1.13 (d,
J= 13.7 Hz, 2H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d 4) δ -77.67。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.09。LCMS：MS
m/z= 770.35 [M+1]，t
R= 1.14 min；LC系統：Thermo Dionex UltiMate 3000 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.08 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例210. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(2-(甲基磺醯基)乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將異丁酸(4 µL，0.0446 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(6.6 µL，0.0426 mmol)混合且溶解於1 mL無水四氫呋喃中並攪拌30 min。添加實例42 (5 mg，0.0085 mmol)。添加DMAP (1 mg，0.0085 mmol)且攪拌4 h。
添加甲醇(0.2 mL)且攪拌20 min。粗殘餘物藉由製備型HPLC在中性條件(5-100% MeCN/水)下純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.87 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.82 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.84 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.01 - 4.85 (m, 1H), 4.50 - 4.30 (m, 4H), 3.85 - 3.71 (m, 1H), 3.52 - 3.38 (m, 2H), 2.97 (m, 3H), 2.78 - 2.53 (m, 2H), 1.35 - 1.12 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.64, 7.78。LCMS：MS
m/z= 731.3 [M+1]，t
R= 1.60 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.05 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.139，5.199 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例211. 二戊酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-(((雙(((S)-1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例35 (64 mg，0.112 mmol)、戊酸(0.05 mL，0.455 mmol)及N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.040 mL，0.255 mmol)於THF (4 mL)中之混合物中添加DMAP (14 mg，0.115 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1 h，且添加另外的
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.255 mmol)。攪拌2 h後，添加另外的戊酸(0.05 mL，0.455 mmol)。接著攪拌混合物30 min，藉由添加甲醇(1 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.81 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.55 (s, 2H), 5.86 - 5.80 (m, 2H), 5.67 (dd,
J= 2.8, 1.8 Hz, 1H), 4.33 (dd,
J= 11.3, 7.0 Hz, 1H), 4.22 (dd,
J= 11.3, 5.5 Hz, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 4H), 3.95 - 3.73 (m, 4H), 2.46 (td,
J= 7.4, 4.7 Hz, 2H), 2.36 (t,
J= 7.4 Hz, 2H), 1.70 - 1.50 (m, 4H), 1.36 (m, 4H), 1.27 - 1.17 (m, 12H), 0.94 (t,
J= 7.4 Hz, 3H), 0.89 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.18。LCMS：MS
m/z= 738.49 [M+1]；t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.86 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例212. 二丁酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-(((雙(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
向實例38 (46 mg，0.085 mmol)、丁酸(0.109 mL，1.189 mmol)及
N,N-二異丙基碳化二亞胺(0.033 mL，0.212 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中添加DMAP (11 mg，0.090 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物2 h且藉由添加甲醇(1 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini-NX 10µ C18 110
oA 250 × 30 mm管柱，0%-100%乙腈/水梯度，25 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.81 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d,
J = 4.5 Hz, 1H), 6.50 (s, 2H), 5.87 - 5.83 (m, 2H), 5.67 (dd,
J= 3.2, 1.3 Hz, 1H), 4.33 (dd,
J = 11.3, 7.0 Hz, 1H), 4.22 (dd,
J= 11.3, 5.6 Hz, 1H), 3.83 (m, 4H), 3.65 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 2.51 - 2.37 (m, 2H), 2.34 (t,
J= 7.3 Hz, 2H), 1.65 (dq,
J= 25.7, 7.4 Hz, 4H), 1.30 - 1.19 (m, 6H), 0.98 (t,
J= 7.4 Hz, 3H), 0.92 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 12.04。LCMS：MS
m/z= 682.40 [M+1]；t
R= 0.94 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.97 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例213. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(2-(甲硫基)乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將異丁酸(5 µL，0.0525 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(8 µL，0.05 mmol)溶解於1 mL無水四氫呋喃中且攪拌30 min。添加實例40 (5.6 mg，0.01 mmol)及DMAP (1.2 mg，0.01 mmol)且攪拌4 h。
添加甲醇(0.2 mL)且攪拌20 min。粗殘餘物藉由製備型HPLC在中性條件(5-100% MeCN/水)下純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.86 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.81 (m, 1H), 5.93 (m, 1H), 5.84 (m, 1H), 5.67 (m, 1H), 5.02 - 4.84 (m, 1H), 4.45 - 4.27 (m, 2H), 4.20 - 4.04 (m, 2H), 3.84 - 3.68 (m, 1H), 2.79 - 2.55 (m, 4H), 2.09 (m, 3H), 1.33 - 1.12 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.57, 7.67。LCMS：MS
m/z= 699.3 [M+1]，697.4 [M-1]，t
R= 1.70 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.33 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.662, 5.687 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例214. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(2-甲氧基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將異丁酸(4 µL，0.045 mmol)及
N,N'-二異丙基碳化二亞胺(7 µL，0.045 mmol)溶解於1 mL無水四氫呋喃中且攪拌30 min。添加實例41 (5.1 mg，0.009 mmol)及DMAP (1 mg，0.009 mmol)且攪拌4 h。
添加甲醇(0.2 mL)且攪拌20 min。粗殘餘物藉由製備型HPLC在中性條件(5-100% MeCN/水)下純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.86 (m, 1H), 6.90 - 6.84 (m, 1H), 6.81 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.83 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.91 (m, 1H), 4.44 - 4.27 (m, 2H), 4.19 - 4.06 (m, 2H), 3.77 (m, 1H), 3.56 (m, 2H), 3.35 (m, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.32 - 1.12 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.79, 7.88。LCMS：MS
m/z= 683.2 [M+1]，681.3 [M-1]，t
R= 1.65 min；LC系統：Thermo Dionex ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.18 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.362 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例215. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將丙酸酐(16.2 μL，0.13 mmol)添加至實例53 (45.0 mg，0.07 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1.3 mg，0.01 mmol)於四氫呋喃(1.5 mL)中之溶液中。10 min後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，隨後用0-25%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.83 (d,
J= 3.6 Hz, 1H), 7.09 (ddd,
J= 13.9, 9.2, 1.4 Hz, 2H), 6.89 - 6.81 (m, 3H), 6.75 (dd,
J= 18.1, 4.5 Hz, 1H), 5.92 (dd,
J= 13.2, 5.9 Hz, 1H), 5.82 (ddd,
J= 21.0, 5.8, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (dd,
J= 7.0, 4.7 Hz, 1H), 4.98 - 4.85 (m, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 4.07 (ddd,
J= 6.2, 3.0, 1.5 Hz, 2H), 3.90 - 3.75 (m, 1H), 3.72 (ddt,
J= 4.5, 3.1, 1.4 Hz, 2H), 3.41 (d,
J= 1.0 Hz, 3H), 2.54 - 2.34 (m, 4H), 1.26 (ddd,
J= 20.2, 7.2, 1.1 Hz, 3H), 1.22 - 1.11 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.49。LCMS：MS
m/z= 747.45 [M+1]，t
R= 1.31 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.66 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例216. 雙(2-嗎啉基乙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.04 mL，0.29 mmol)添加至實例1 (40 mg，0.071 mmol)及2-嗎啉基乙酸鹽酸鹽(107 mg，0.57 mmol)於四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。5 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(15.0 mg，0.11 mmol)。1.5 h後，添加甲醇(0.2 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 × 30.0 mm管柱，5-75%乙腈/水梯度)，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d
4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.2 Hz, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.90 (dd, J = 5.9, 4.9 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.88 (q, J = 6.3 Hz, 4H), 4.54 - 4.40 (m, 2H), 3.91 - 3.82 (m, 1H), 3.82 - 3.63 (m, 6H), 3.45 - 3.32 (m, 4H), 2.69 - 2.53 (m, 7H), 1.98 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 1.30 - 1.17 (m, 5H), 1.17 - 1.09 (m, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.17。LCMS：MS
m/z= 815.35 [M+H]，t
R= 1.00 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.11 min, HPLC system: Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例217. 二丙酸(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-胺基-3-甲氧基-3-側氧基丙基)苯氧基)(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
二丙酸 (2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲氧基 -3- 側氧基丙基 ) 苯氧基 )(((S)-1- 異丙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .在RT下將丙酸酐(20.5 μL，0.16 mmol)添加至實例72 (63.4 mg，0.08 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1.5 mg，0.01 mmol)於四氫呋喃(1.5 mL)中之溶液中。15 min後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，隨後用0-25%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.81 (d,
J= 12.8 Hz, 1H), 7.36 - 7.20 (m, 5H), 7.17 - 7.04 (m, 4H), 6.83 (t,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.74 (dd,
J= 4.5, 1.0 Hz, 1H), 5.93 (dd,
J= 11.1, 5.9 Hz, 1H), 5.83 (ddd,
J= 10.5, 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.69 (t,
J= 4.9 Hz, 1H), 5.02 (d,
J= 5.3 Hz, 2H), 4.97 - 4.85 (m, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 3H), 3.81 (ddq,
J= 21.0, 9.1, 7.0 Hz, 1H), 3.69 (d,
J= 1.2 Hz, 3H), 3.12 (dd,
J= 13.9, 5.3 Hz, 1H), 2.92 (ddd,
J= 14.0, 9.1, 2.2 Hz, 1H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 1.28 - 1.09 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.13 (d,
J= 4.0 Hz)。LCMS：MS
m/z= 908.59 [M+1]，t
R= 1.44 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.21 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
二丙酸 (2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2- 胺基 -3- 甲氧基 -3- 側氧基丙基 ) 苯氧基 )(((S)-1- 異丙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .將鈀/碳(17.7 mg，10 wt%)添加至用氬氣吹掃的二丙酸(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((4-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)苯氧基)(((S)-1-異丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯(62.5 mg，0.07 mmol)於乙醇(5 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物且在RT下進行攪拌。17小時後，混合物經矽藻土過濾，濾紙用乙醇沖洗，且減壓移除揮發物。凍乾殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.82 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 4H), 6.85 (dd,
J= 6.9, 4.6 Hz, 1H), 6.76 (t,
J= 4.7 Hz, 1H), 5.92 (dd,
J= 9.5, 5.9 Hz, 1H), 5.88 - 5.78 (m, 1H), 5.69 (dd,
J= 8.6, 4.6 Hz, 1H), 4.98 - 4.85 (m, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.82 (ddd,
J= 17.7, 9.4, 7.0 Hz, 1H), 3.70 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 3.67 (d,
J= 3.2 Hz, 3H), 2.99 (ddd,
J= 13.5, 6.1, 4.1 Hz, 1H), 2.89 (dd,
J= 13.6, 7.0 Hz, 1H), 2.54 - 2.36 (m, 4H), 1.26 (ddd,
J= 15.1, 7.1, 1.2 Hz, 3H), 1.22 - 1.11 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.14。LCMS：MS
m/z= 774.20 [M+1]，t
R= 1.08 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.70 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例218. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-5-(4-(((E)-(二甲基胺基)亞甲基)胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯之單一非對映異構體
向
實例 148(50 mg，0.067 mmol)之溶液中逐滴添加N,N-二甲基甲醯胺二甲縮醛(16 mg，0.14 mmol)。攪拌所得混合物隔夜，接著藉由製備型HPLC純化反應混合物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.90 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 2H), 7.20 (dddd, J = 8.2, 4.4, 1.8, 0.9 Hz, 3H), 6.87 - 6.78 (m, 2H), 5.91 - 5.79 (m, 2H), 5.70 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.83 (tt, J = 8.3, 4.1 Hz, 1H), 4.43 (qd, J = 11.2, 6.3 Hz, 2H), 4.26 (dd, J = 12.0, 9.9 Hz, 1H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.78 (dt, J = 11.3, 5.5 Hz, 1H), 3.45 (ddt, J = 11.6, 8.5, 3.0 Hz, 2H), 3.25 - 3.19 (m, 6H), 2.64 (ddq, J = 31.2, 13.9, 7.0 Hz, 2H), 2.16 (s, 4H), 1.79 (ddp, J = 8.0, 5.9, 4.0 Hz, 1H), 1.60 - 1.46 (m, 1H), 1.53 (s, 1H), 1.32 - 1.10 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.54。LCMS：MS
m/z= 798.61 [M+1]，t
R= 1.72 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.77 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例219. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-5-(4-(((E)-1-(二甲基胺基)亞乙基)胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯之單一非對映異構體
向
實例 147(65 mg，0.088 mmol)於DMF中之溶液中逐滴添加N,N-二甲基乙醯胺二甲縮醛(26 mg，0.19 mmol)。攪拌所得混合物隔夜，接著藉由製備型HPLC純化反應混合物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.06 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 6.77 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.92 - 5.79 (m, 2H), 5.69 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.84 (tt, J = 8.3, 4.1 Hz, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 4.30 - 4.20 (m, 1H), 3.78 (dt, J = 10.6, 4.9 Hz, 2H), 3.45 (ddt, J = 11.8, 8.4, 3.3 Hz, 2H), 3.20 (t, J = 9.9 Hz, 6H), 2.65 (dp, J = 30.7, 7.0 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.53 (dtd, J = 12.6, 8.9, 8.4, 3.7 Hz, 2H), 1.31 - 1.11 (m, 16H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.52。LCMS：MS
m/z= 812.48 [M+1]，t
R= 1.47 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.52 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例220. 雙(1-甲基哌啶-4-甲酸)(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-(1-甲基哌啶-4-甲醯胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例52 (22 mg，0.04 mmol)溶解於2 mL無水THF中。將1-甲基哌啶-4-甲酸鹽酸鹽(29 mg，0.16 mmol)及EDAC (31 mg，0.16 mmol)添加至反應物且攪拌10 min。添加碳酸氫鈉(200 mg)，且添加DMAP (5 mg，0.04 mmol)至反應物並在RT下攪拌20小時。將更多1-甲基哌啶-4-甲酸鹽酸鹽(29 mg，0.16 mmol)及EDAC (31 mg，0.16 mmol)添加至反應物。將碳酸氫鈉(200 mg)及DMAP (10 mg)添加至反應物，接著在RT下攪拌16小時。反應物用EtOAc (15 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(3 × 10 mL)洗滌，且隨後用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且接著減壓濃縮。將粗物質溶解於於DCM (10 mL)中。1-添加甲基哌啶-4-甲酸鹽酸鹽(29 mg，0.16 mmol)、EDAC (31 mg，0.16 mmol)及DMAP (50 mg)。攪拌反應物3小時。反應物用DCM (10 mL)稀釋，且用碳酸氫鈉溶液(2 × 5 mL)洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10-20%甲醇/DCM，含1%三乙胺)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 8.19 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 4H), 6.96 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 5.91 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 5.83 (dd,
J= 5.7, 4.6 Hz, 1H), 5.78 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.54 - 4.36 (m, 2H), 3.90 (dq,
J= 10.2, 7.1 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.98 (m, 2H), 2.93 - 2.72 (m, 5H), 2.47 (m, 2H), 2.36 - 2.23 (m, 9H), 2.23 - 2.07 (m, 6H), 2.07 - 1.64 (m, 13H), 1.28 (d,
J= 7.2, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.08。LCMS：MS
m/z= 908.3 [M+1], 906.7 [M-1]，t
R= 0.94 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.08 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.473 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例221. (2S,2'S)-雙(2-胺基-3-甲基丁酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-((四氫-2H-哌喃-4-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯之單一非對映異構體
向實例57 (30 mg，0.05 mmol)於THF中之溶液中添加Boc-Val (43 mg，0.2 mmol)及N,N'-二異丙基碳化二亞胺(25 mg，0.2 mmol)，在室溫下攪拌反應混合物20 min，之後添加DMAP (6 mg，0.05 mmol)。接著攪拌反應混合物隔夜。接著用MeOH淬滅反應物，接著用EtOAc稀釋，且用2%檸檬酸水溶液洗滌，且接著用鹽水洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。藉由矽膠管柱(0-100% EtOAc/己烷)純化殘餘物。接著將經純化中間物溶解於MeCN (5 mL)中且在大氣壓氮下於冰浴中攪拌。逐滴添加濃HCl (水溶液)(300 μL)。攪拌反應物4小時。將粗反應混合物裝載至製備型HPLC管柱上且用含TFA改質劑之5-100% MeCN的線性梯度溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.87 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.6, 7.2 Hz, 2H), 7.25 - 7.10 (m, 3H), 6.90 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.86 - 6.75 (m, 1H), 6.44 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 6.04 (dd, J = 5.9, 3.1 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 4.77 (tt, J = 8.2, 4.0 Hz, 1H), 4.49 (dd, J = 6.1, 2.4 Hz, 2H), 4.11 (dd, J = 12.2, 4.1 Hz, 2H), 3.90 - 3.72 (m, 3H), 3.44 (dtd, J = 11.9, 8.8, 3.3 Hz, 2H), 2.49 (dtt, J = 14.1, 7.0, 4.0 Hz, 2H), 1.85 - 1.69 (m, 2H), 1.54 (dddd, J = 13.5, 8.7, 6.8, 4.1 Hz, 2H), 1.34 - 1.21 (m, 3H), 1.19 - 1.02 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.65。LCMS：MS
m/z= 801.14 [M+1]，t
R= 1.07 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 2.48 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例222. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(3-甲氧基丙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
向
實例 60(30 mg，0.051 mmol)及異丁酸酐(0.019 mL，0.164 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中添加DMAP (2 mg，0.016 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物5 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (dd,
J= 8.4, 7.4 Hz, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.76 (d,
J= 0.8 Hz, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.87 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.81 (dd,
J= 6.0, 4.5 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 3H), 4.13 - 3.98 (m, 2H), 3.91 (m, 1H), 3.36 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.27 (dd,
J= 7.1, 0.9 Hz, 3H), 1.22 (t,
J= 6.9 Hz, 6H), 1.18 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.48。LCMS
m/z= 731.36 (M+H)，t
R= 1.37 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.66 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例223. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(2-嗎啉基乙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.76 mmol)及氯化鎂(43 mg，0.45 mmol)添加至中間物4 (100.0 mg，0.30 mmol)及中間物67 (216 mg，0.45 mmol)於四氫呋喃(7.5 mL)中之混合物中。將混合物加熱至55℃。2 h後，使反應混合物冷卻至RT，用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，且用水(5 × 20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在0℃下將濃鹽酸水溶液(0.53 mL)逐滴添加至含粗殘餘物之乙腈(7.5 mL)中。使混合物升溫至RT。2 h後，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(75 mL)及鹽水(75 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。在RT下將80 mg所得粗殘餘物添加至含N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.76 mmol)、
N,N′-二異丙基碳化二亞胺(0.113 g，1.0 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(33 mg，0.27 mmol)及異丁酸(89 mg，1.01 mmol)之四氫呋喃(6 mL)中。在RT下20 h後，添加甲醇(0.5 mL)，且反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且所得混合物用水(15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，30-70%乙腈/水梯度，含0.1% TFA)，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.99 (d,
J= 11.7 Hz, 1H), 7.34 (dt,
J= 15.6, 8.1 Hz, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 2H), 6.99 - 6.83 (m, 2H), 5.87 (dd,
J= 8.6, 5.9 Hz, 1H), 5.83 - 5.75 (m, 1H), 5.73 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 4.80 - 4.14 (m, 6H), 3.85 (s, 6H), 3.56 - 3.31 (m, 7H), 2.79 - 2.50 (m, 3H), 1.56 - 0.74 (m, 13H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.36, 3.42。LCMS：MS
m/z= 772.47 [M+1]，t
R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.66 min, HPLC system: Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例224. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(2-(二異丙基胺基)乙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將異丁酸酐(36 μL，0.39 mmol)添加至粗物質實例74 (50 mg，約0.08 mmol)於四氫呋喃(3 mL)及乙腈(1 mL)中之溶液中。10 min後，添加4-二甲基胺基吡啶(1.8 mg，0.1 mmol)。30 min，用水(3.5 mL)稀釋反應混合物。粗溶液經歷製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4 um Polar-RP 80Å 150 × 21.2 mm管柱，35-55%乙腈/水梯度，含0.1% TFA)，得到呈TFA鹽之產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 8.89 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.33 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 4H), 6.89 (dd,
J= 8.6, 4.7 Hz, 1H), 5.76 (dq,
J= 9.9, 5.9 Hz, 2H), 5.69 (dd,
J= 5.9, 4.0 Hz, 1H), 4.65 (ddd,
J= 49.2, 12.4, 9.2 Hz, 1H), 4.54 - 4.26 (m, 4H), 3.91 (h,
J= 8.5, 7.9 Hz, 1H), 3.63 (s, 2H), 3.28 (s, 2H), 2.73 - 2.52 (m, 3H), 1.33 - 1.25 (m, 15H), 1.22 - 1.13 (m, 12H)。
19F NMR (376 MHz, 乙腈-
d 3) δ -76.83。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-
d 3) δ 2.31。LCMS：MS
m/z= 786.22 [M+1]，t
R= 1.31 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.00 min, 4.06 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例225. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-丁氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將異丁酸酐(30 μL，0.14 mmol)添加至實例54 (40 mg，0.07 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(5.5 mg，0.05 mmol)於2-甲基四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。30 min後，用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, CD
3CN) δ 7.82 (d,
J= 9.9 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd,
J= 7.5, 4.5 Hz, 1H), 6.76 (dd,
J= 11.1, 4.6 Hz, 1H), 5.95 (dd,
J= 23.4, 5.9 Hz, 1H), 5.83 (ddd,
J= 19.6, 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.68 (t,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 2H), 4.16 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.76 (m, 1H), 2.77 - 2.55 (m, 2H), 1.31 - 1.14 (m, 20H)。
31P NMR (162 MHz, CD
3CN) δ 2.49, 2.37。LCMS：MS
m/z= 715.05 [M+1]，t
R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.34 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .實例225經由對掌性SFC (Chiralpak IF，5 um，4.6 ×150 mm，甲醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 226.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.96 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 5.9, 4.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.51 (dd,
J= 11.0, 5.7 Hz, 1H), 4.41 (dd,
J= 11.1, 4.9 Hz, 1H), 4.05 (td,
J= 6.6, 5.6 Hz, 1H), 3.94 - 3.74 (m, 1H), 2.64 (dp,
J= 14.0, 7.0 Hz, 2H), 1.64 - 1.50 (m, 3H), 1.43 1.13 (m, 16H), 0.89 (t,
J= 7.4 Hz, 4H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.07。LCMS：MS
m/z= 715.14 [M+1]，t
R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.183 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例 227.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.85 (s, 1H), 7.30 (t,
J= 7.9 Hz, 2H), 7.23 - 7.10 (m, 3H), 6.94 - 6.84 (m, 1H), 6.75 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.89 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.78 (dd,
J= 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.43 (dd,
J= 5.8, 2.4 Hz, 2H), 4.09 - 3.83 (m, 1H), 2.64 (dp,
J= 16.7, 7.0 Hz, 2H), 1.60 - 1.48 (m, 2H), 1.43 - 1.29 (m, 4H), 1.29 - 1.25 (m, 3H), 1.25 - 1.12 (m, 12H), 0.89 (t,
J= 7.4 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.03。LCMS：MS
m/z= 715.14 [M+1]，t
R= 1.21 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 6.185 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Kinetx 2.6u C18，100mm × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例228. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(((S)-1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例15 (15 mg，0.025 mmol)溶解於2 mL無水THF中且在RT下進行攪拌。添加異丁酸酐(8.3 μL，0.05 mmol)及DMAP (0.3 mg，0.0025 mmol)，且攪拌反應物60 min。添加更多異丁酸酐(3 μL)，且攪拌反應物45 min。
添加甲醇(500 μL)且攪拌30 min。接著，反應物用EtOAc (10 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 5 mL)洗滌，且隨後用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且接著減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10-20%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN中，用水稀釋且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.83 (m, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.23 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.67 (m,1H), 5.16 - 4.99 (m, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.88 (m, 1H), 2.76 (m, 1H), 2.72 - 2.53 (m, 4H), 2.32 (m, 4H), 2.25 - 2.06 (m, 1H), 1.86 - 1.70 (m, 1H), 1.37- 1.06 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.04, 2.99。LCMS：MS
m/z= 742.3 [M+1]，740.3 [M-1]，t
R= 1.34 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.75 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.669, 4.701 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IA，150 × 4.6 mm，SFC 30%乙醇等度)純化，得到非對映異構體：
實例 229.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.21 - 7.11 (m, 3H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.94 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 5.8, 4.6 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.13 (m, 1H), 4.59 - 4.36 (m, 2H), 3.86 (dq,
J= 9.3, 7.1 Hz, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.78 - 2.55 (m, 4H), 2.42 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.23 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.35 - 1.10 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.04 (s)。HPLC：t
R= 4.655 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 230. 第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.75 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.90 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.83 - 5.75 (m, 1H), 5.67 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.52 - 4.35 (m, 2H), 3.89 (dq,
J= 9.8, 7.1 Hz, 1H), 2.76 (m, 1H), 2.71 - 2.54 (m, 4H), 2.30 (m, 4H), 2.22 - 2.06 (m, 1H), 1.77 (m, 1H), 1.36 - 1.07 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 2.99 (s)。HPLC：t
R= 4.703 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例231. 雙(3-甲氧基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例52 (20 mg，0.038 mmol)溶解於1.5 mL無水THF中。3-添加甲氧基丙酸(14 μL，0.15 mmol)。添加N,N'-二異丙基碳化二亞胺(23 μL，0.15 mmol)，且攪拌反應物30 min。接著添加DMAP (5 mg，0.038 mmol)，且攪拌反應物2小時。
添加甲醇(0.5 mL)且攪拌2小時。反應物用EtOAc (10 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 5 mL)洗滌，隨後用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-5%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN及水中且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.83 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.97 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd,
J= 6.0, 4.4 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.50 - 4.36 (m, 2H), 3.89 (dq,
J= 10.0, 7.1 Hz, 1H), 3.73 - 3.63 (m, 4H), 3.59 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 2.71 (t,
J= 6.1 Hz, 2H), 2.65 (td,
J= 6.0, 1.7 Hz, 2H), 1.26 (dd,
J= 7.2, 1.1 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.01。LCMS：MS
m/z= 705.3 [M+1]，703.2 [M-1]，t
R= 1.43 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.83 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.748 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例232. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(((R)-1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例61 (23 mg，0.038 mmol)溶解於4 mL無水THF中且在RT下進行攪拌。添加異丁酸酐(12 μL，0.076 mmol)及DMAP (0.5 mg，0.0038 mmol)，且攪拌反應物60 min。添加更多異丁酸酐(3 μL)，且攪拌反應物45 min。
添加甲醇(500 μL)且攪拌30 min。接著，反應物用EtOAc (10 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 5 mL)洗滌，且隨後用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且接著減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-10-20%甲醇/DCM)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN中，用水稀釋且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.83 (m, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.81 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.16 - 5.00 (m, 1H), 4.56 - 4.36 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 2.79 (m, 1H), 2.73 - 2.49 (m, 4H), 2.31 (m, 4H), 2.26 - 2.12 (m, 1H), 1.85 - 1.67 (m, 1H), 1.33 - 1.10 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.03, 3.01。LCMS：MS
m/z= 742.5 [M+1]，740.4 [M-1]，t
R= 1.29 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 2.74 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 4.687, 4.706 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性製備型HPLC (Chiralpak IF，150 × 4.6 mm，SFC 30%乙醇等度)純化，得到非對映異構體：
實例 233.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.36 - 7.22 (m, 2H), 7.22 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.95 (d,
J= 5.8 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 5.8, 4.5 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.11 (m, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.85 (dq,
J= 9.2, 7.1 Hz, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.71 - 2.56 (m, 4H), 2.39 - 2.32 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.22 (m, 1H), 1.76 (m, 1H), 1.30 - 1.13 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.03 (s)。HPLC：t
R= 4.681 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 234.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.75 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.90 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.79 (dd,
J= 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 5.06 (ddt,
J= 8.1, 5.4, 2.5 Hz, 1H), 4.51 - 4.37 (m, 2H), 3.89 (dq,
J= 9.9, 7.1 Hz, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.74 - 2.50 (m, 4H), 2.32 (m, 4H), 2.20 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.28 (d,
J= 7.1 Hz, 3H), 1.26 - 1.12 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.01 (s)。HPLC：t
R= 4.706 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例235. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-胺基-3-甲氧基-3-側氧基丙基)苯氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲氧基 -3- 側氧基丙基 ) 苯氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .在RT下將異丁酸酐(20.0 μL，0.12 mmol)添加至實例62 (53.3 mg，0.07 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1.3 mg，0.01 mmol)於2-甲基四氫呋喃(1.5 mL)中之溶液中。5 min後，用乙酸乙酯(25 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-25%甲醇/乙酸乙酯溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (d,
J= 16.5 Hz, 1H), 7.36 - 7.22 (m, 5H), 7.17 - 7.04 (m, 4H), 6.84 (t,
J= 4.8 Hz, 1H), 6.74 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.94 (dd,
J= 20.9, 5.8 Hz, 1H), 5.83 (ddd,
J= 15.4, 5.8, 4.5 Hz, 1H), 5.68 (dd,
J= 4.5, 1.6 Hz, 1H), 5.02 (d,
J= 3.9 Hz, 2H), 4.58 - 4.34 (m, 3H), 3.96 - 3.72 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.61 (d,
J= 8.9 Hz, 3H), 3.12 (dd,
J= 14.0, 5.3 Hz, 1H), 2.91 (dd,
J= 14.0, 9.2 Hz, 1H), 2.75 - 2.54 (m, 2H), 1.29 - 1.14 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.07, 3.02。LCMS：MS
m/z= 908.56 [M+1]，t
R= 1.47 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.424 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2- 胺基 -3- 甲氧基 -3- 側氧基丙基 ) 苯氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .將鈀/碳(10.6 mg，10 wt%)添加至用氬氣吹掃的雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((4-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)苯氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯(37.3 mg，0.04 mmol)於乙醇(5 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物且在RT下進行攪拌。17小時後，混合物經矽藻土過濾，濾紙用乙醇沖洗，且減壓移除揮發物。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4 um Polar-RP 80Å 150 × 21.2 mm管柱，20-70%乙腈/水梯度，含0.1% TFA)，得到呈TFA鹽之產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.94 (dd,
J= 21.1, 1.3 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 4H), 7.17 - 7.09 (m, 1H), 6.93 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.96 - 5.79 (m, 2H), 5.71 (dd,
J= 4.6, 2.2 Hz, 1H), 4.62 - 4.39 (m, 2H), 4.37 - 4.24 (m, 1H), 3.88 (ddd,
J= 19.6, 9.8, 7.1 Hz, 1H), 3.81 (d,
J= 3.0 Hz, 3H), 3.65 (d,
J= 17.3 Hz, 3H), 3.25 (ddd,
J= 14.4, 6.2, 4.4 Hz, 1H), 3.14 (dd,
J= 14.6, 7.5 Hz, 1H), 2.66 (dpd,
J= 21.1, 7.2, 4.7 Hz, 2H), 1.34 - 1.27 (m, 3H), 1.27 - 1.15 (m, 12H)。
19F NMR (376 MHz, 甲醇-
d 4) δ -77.65。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.34 (d, J = 2.3 Hz)。LCMS：MS
m/z= 774.25 [M+1]，t
R= 1.10 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.82 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例236. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-(苯甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
將實例37 (15 mg，0.024 mmol)溶解於1.5 mL無水THF中且在RT下攪拌。添加異丁酸酐(8 μL，0.048 mmol)及DMAP (0.3 mg，0.0024 mmol)，且攪拌反應物30 min。
添加甲醇(500 μL)且攪拌30 min。接著，反應物用EtOAc (10 mL)稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 5 mL)洗滌，且隨後用鹽水(5 mL)洗滌。有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥且接著減壓濃縮。粗殘餘物經由SiO
2管柱層析(4 g SiO
2Combiflash HP Gold管柱，0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。合併溶離份且減壓濃縮。將殘餘物溶解於MeCN中，用水稀釋且冷凍乾燥，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 7.81 (m, 1H), 7.36 - 7.22 (m, 7H), 7.21 - 7.08 (m, 3H), 6.83 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.93 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.67 (m, 1H), 5.11 - 4.94 (m, 2H), 4.53 - 4.34 (m, 2H), 4.01 - 3.81 (m, 1H), 2.72 - 2.54 (m, 2H), 1.33 - 1.10 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4 ) δ 3.03, 2.97。LCMS：MS
m/z= 749.5 [M+1]，747.1 [M-1]，t
R= 1.75 min；LC系統：Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A，50 × 3 mm；溶劑：A：含0.1%乙酸之水，B：含0.1%乙酸之乙腈；梯度：0 min-0.3 min 5% B，0.3 min-1.5 min 5-100% B，1.5 min-2 min 100% B，2 min-2.2 min 100-5% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 3.57 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Phenomenex Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：5 min內2-98% B，2 mL/min。HPLC：t
R= 6.128, 6.162 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例237. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(3-嗎啉基丙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將異丁酸酐(29.0 μL，0.17 mmol)添加至實例67 (78.4 mg，0.10 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1.8 mg，0.02 mmol)於2-甲基四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中。10 min後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。100 mg所得粗殘餘物經歷製備型HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 × 21.2 mm管柱，30-70%乙腈/水梯度，含0.1% TFA)，進行矽膠層析，用0-25%甲醇/二氯甲烷溶離，得到呈三氟乙酸鹽之產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.96 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.27 (m, 3H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.95 (dd, J = 6.1, 4.7 Hz, 2H), 5.75 (m, 4H), 4.57 - 4.38 (m, 4H), 4.16 - 3.98 (m, 3H), 3.94 (d, J = 12.9 Hz, 2H), 3.79 (s, 1H), 3.38 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 3.10 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.94 (s, 1H), 2.75 - 2.57 (m, 2H), 2.00 (d, J = 13.8 Hz, 3H), 1.38 - 1.13 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, CD
3CN) δ -1.45, -1.59。LCMS：MS
m/z= 786.41 [M+1]，t
R= 1.24 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.72 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Kinetx 2.6u 100A C18，100mm × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例238. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環丙基甲氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將
實例 10(84 mg，0.15 mmol)溶解於3 mL THF中，向溶液中添加異丁酸酐(51 mg，0.32 mmol)及DMAP (6 mg，0.05 mmol)。在RT下攪拌所得混合物30 min，且反應物用MeOH淬滅並接著蒸發溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 5.7, 1.3 Hz, 2H), 3.96 - 3.74 (m, 3H), 2.63 (dp, J = 17.0, 7.0 Hz, 2H), 1.34 - 1.12 (m, 15H), 1.05 (dqd, J = 12.5, 7.6, 3.8 Hz, 1H), 0.54 - 0.44 (m, 2H), 0.26 - 0.19 (m, 2H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.00。LCMS：MS
m/z= 713.12 [M+1]，t
R= 1.72 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.44 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例239. ((S)-1-(2-乙基丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基磷酸((2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-雙(異丁醯氧基)四氫呋喃-2-基)甲酯
在RT下將碳酸氫鈉(50 mg)及Pd/C (10% wt，40 mg)添加至實例85 (38 mg，0.050 mmol)於甲醇(2.0 mL)中之溶液中。抽空反應容器且用氫氣再填充(3×)。10 min後，所得混合物經由矽藻土過濾且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC(Gemini 5 μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱)，用10-100%乙腈/水溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 6.87 (app q,
J= 4.6 Hz, 2H), 5.81 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 5.76 (t,
J= 5.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 5.2 Hz, 1H), 4.19 - 4.10 (m, 2H), 4.02 (dd,
J= 10.9, 5.7 Hz, 1H), 3.91 - 3.81 (m, 2H), 2.68 (h,
J= 7.0 Hz, 1H), 2.58 (h,
J= 7.0 Hz, 1H), 1.51 - 1.20 (m, 14H), 1.16 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.13 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 0.86 (td,
J= 7.5, 1.1 Hz, 6H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 5.04 (s)。LCMS：MS
m/z= 667.05 [M+1]，t
R= 1.55 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.955 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例240. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-(((S)-四氫呋喃-3-基)氧基)丙-2-基)胺基) (苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯之單一非對映異構體
向實例66 (28 mg，0.048 mmol)及異丁酸酐(0.034 mL，0.38 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中添加DMAP (5.8 mg，0.048 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物5 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 6.82 - 6.69 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.86 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.81 (dd,
J= 6.0, 4.5 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.14 (ddt,
J= 6.3, 4.5, 1.8 Hz, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 3.90 (m, 1H), 3.81 - 3.62 (m, 5H), 2.64 (m, 2H), 2.05 (m, 1H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.25 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.21 (m, 6H), 1.18 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.47。LCMS：
m/z= 729.17 (M+H)，t
R= 1.37 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.47 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例241. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-(((S)-四氫呋喃-3-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯之單一非對映異構體
向實例65 (37 mg，0.063 mmol)及異丁酸酐(0.031 mL，0.190 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中添加DMAP (4 mg，0.033 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物5 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.22 - 7.15 (m, 3H), 6.77 (q,
J= 4.6 Hz, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.90 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 6.0, 4.4 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.49 (dd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 1H), 4.44 - 4.34 (m, 2H), 3.92 - 3.62 (m, 5H), 2.65 (m, 2H), 2.12 (m, 1H), 1.92 - 1.83 (m, 1H), 1.22 (m, 9H), 1.18 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.37。LCMS：
m/z= 729.16 (M+H)，t
R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.41 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例242. ((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基磷酸((2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-雙(異丁醯氧基)四氫呋喃-2-基)甲酯
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-(((( 苯甲氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .在RT下將異丁酸酐(0.055 mL，0.33 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(3 mg，0.03 mmol)依序添加至實例76 (91 mg，0.167 mmol)於2-甲基-四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中。3.5 h後，反應混合物直接經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.82 (s, 0.7H), 7.75 (s, 0.3H), 7.38 - 7.23 (m, 5H), 6.85 - 6.81 (m, 1H), 6.78 - 6.74 (m, 1H), 5.98 (d,
J= 5.8 Hz, 0.3H), 5.91 (d,
J= 5.9 Hz, 0.7H), 5.88 - 5.81 (m, 1H), 5.70 - 5.66 (m, 1H), 5.06 - 4.97 (m, 2H), 4.44 - 4.27 (m, 2H), 3.86 - 3.64 (m, 1H), 3.61 (s, 2.1H), 3.60 (s, 0.9H), 2.71 - 2.53 (m, 2H), 1.31 - 1.11 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.72 (s), 7.60 (s)。LCMS：MS
m/z= 687.22 [M+1]，t
R= 1.38 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.27 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% CAN，5.0 min-6.0 min 98% CAN，2 mL/min。
((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基磷酸 ((2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 雙 ( 異丁醯氧基 ) 四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯. 在RT下將碳酸氫鈉(50 mg)及Pd/C (10% wt，50 mg)添加至雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((苯甲氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯(70 mg，0.102 mmol)於甲醇(2.0 mL)中之溶液中。抽空反應容器且用氫氣再填充(3×)。10 min後，所得混合物經由矽藻土過濾且減壓濃縮。粗殘餘物經歷製備型HPLC(Gemini 5 μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱)，用10-100%乙腈/水溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 7.83 (s, 1H), 6.88 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 6.86 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.82 (d,
J= 5.7 Hz, 1H), 5.77 (t,
J= 5.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 5.2 Hz, 1H), 4.14 (qd,
J= 10.8, 4.4 Hz, 2H), 3.87 - 3.75 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.68 (h,
J= 7.0 Hz, 1H), 2.58 (p,
J= 7.0 Hz, 1H), 1.27 - 1.21 (m, 9H), 1.16 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.13 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 5.02 (s)。LCMS：MS
m/z= 597.17 [M+1]，t
R= 1.19 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 5.013 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例243. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-(((R)-四氫呋喃-3-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯之單一非對映異構體
向
實例 70(32 mg，0.054 mmol)及異丁酸酐(0.027 mL，0.163 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中添加DMAP (6.6 mg，0.048 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物5 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 2H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 6.78 - 6.74 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.86 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.81 (dd,
J= 6.0, 4.5 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.16 (ddt,
J= 6.2, 4.1, 1.8 Hz, 1H), 4.51 - 4.34 (m, 3H), 3.91 (ddt,
J= 16.8, 9.8, 7.1 Hz, 1H), 3.83 - 3.63 (m, 4H), 2.65 (m, 2H), 2.10 (dtd,
J= 14.5, 8.3, 6.4 Hz, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 1H), 1.26 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.22 (t,
J= 6.9 Hz, 6H), 1.18 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.44。LCMS：
m/z= 729.16 (M+H)，t
R= 1.37 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.47 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例244. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-側氧基-1-(((R)-四氫呋喃-3-基)氧基)丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯之單一非對映異構體
向
實例 69(19 mg，0.032 mmol)及異丁酸酐(0.016 mL，0.097 mmol)於THF (2 mL)中之混合物中添加DMAP (4 mg，0.033 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物5 min且藉由添加甲醇(0.5 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 × 30 mm管柱，10-100%乙腈/水梯度)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.41 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.86 - 6.71 (m, 2H), 6.37 (s, 2H), 5.89 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 6.0, 4.4 Hz, 1H), 5.69 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 5.21 (ddt,
J= 6.3, 4.6, 1.7 Hz, 1H), 4.49 (dd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 1H), 4.43 - 4.27 (m, 2H), 3.92 - 3.64 (m, 5H), 2.65 (m, 2H), 2.19 - 2.07 (m, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.22 (m, 9H), 1.19 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.38。LCMS：
m/z= 729.20 (M+H)，t
R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.41 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例245. 實例162之
Sp及
Rp非對映異構體之解析
藉由SFC IA (12 × 250 mm，5 µm，15% MeOH)分離實例162之混合物，得到非對映異構體：
實例 246.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.83 - 6.65 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.90 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.83 (dd,
J= 6.0, 4.5 Hz, 1H)。5.69 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.67 (dq,
J = 8.5, 4.2 Hz, 1H), 4.49 (dd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 11.2, 5.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.23 (m, 1H), 3.84 (ddd,
J= 10.0, 9.0, 7.1 Hz, 1H), 2.65 (dp,
J= 26.9, 7.0 Hz, 2H), 2.58 - 2.39 (m, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 5H), 1.79 (d,
J= 6.8 Hz, 2H), 1.61 (dtd,
J= 12.6, 8.6, 3.8 Hz, 2H), 1.22 (m, 9H), 1.19 (d,
J= 7.0 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) 2.41。LCMS：
m/z= 756.17，t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.68 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 247.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.34 (dd,
J= 8.9, 6.9 Hz, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.76 (s, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.86 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.82 - 5.77 (m, 1H), 5.67 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.65 (dt,
J= 8.0, 3.9 Hz, 1H), 4.45 (dd,
J= 11.2, 6.7 Hz, 1H), 4.39 (dd,
J= 11.3, 5.8 Hz, 1H), 4.33 (dd,
J= 12.1, 10.0 Hz, 1H), 3.97 - 3.81 (m, 1H), 2.78 - 2.36 (m, 4H), 2.20 (s, 5H), 1.87 - 1.73 (m, 2H), 1.59 (dp,
J= 12.7, 4.3 Hz, 2H), 1.27 (dd,
J= 7.1, 0.9 Hz, 3H), 1.22 m, 6H), 1.18 (d,
J= 7.1 Hz, 3H), 1.15 (d,
J= 7.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.48。LCMS：
m/z= 756.18，t
R= 1.13 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.71 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 248. 雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -2-((((((S)-1- 乙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二基酯 
在RT下將異丁酸酐(85.2 μL，0.51 mmol)添加至WO2015/069939之實例35 (165.2 mg，0.30 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(5.5 mg，0.05 mmol)於2-甲基四氫呋喃(6 mL)中之溶液中。30 min後，用乙酸乙酯(15 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.82 (d,
J= 9.9 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd,
J= 7.5, 4.5 Hz, 1H), 6.76 (dd,
J= 11.1, 4.6 Hz, 1H), 5.95 (dd,
J= 23.4, 5.9 Hz, 1H), 5.83 (ddd,
J= 19.6, 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.68 (t,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 2H), 4.16 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.76 (m, 1H), 2.77 - 2.55 (m, 2H), 1.31 - 1.14 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.06。LCMS：MS
m/z= 687.13 [M+1]，t
R= 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.94 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .經由對掌性SFC (Chiralpak IF，5 um，4.6 × 150 mm，甲醇30%)純化產物。
實例249. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((R)-(((S)-1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
實例248之第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.78 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.97 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd,
J= 5.8, 4.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.52 (dd,
J= 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.42 (dd,
J= 11.1, 4.9 Hz, 1H), 4.10 (qd,
J= 7.2, 2.5 Hz, 2H), 3.81 (dq,
J= 9.5, 7.3 Hz, 1H), 2.65 (dp,
J= 13.9, 7.0 Hz, 2H), 1.26 - 1.16 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.07。LCMS：MS
m/z= 687.14 [M+1]，t
R= 1.43 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.89 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例248之第二溶離非對映異構體為實例144。
實例250. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在RT下將異丁酸酐(11 µL，0.066 mmol)添加至實例71 (18 mg，0.33 mmol)於2-甲基四氫呋喃(1.0 mL)中之溶液中。接著添加4-二甲基胺基吡啶(1 mg，0.006 mmol)。3 h後，反應混合物經歷矽膠層析，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 8.21 - 7.78 (m, 1H), 7.38 - 6.98 (m, 5H), 7.00 - 6.65 (m, 2H), 5.99 - 5.42 (m, 3H), 4.66 - 4.20 (m, 3H), 3.75 - 3.41 (m, 3H), 2.75 - 2.53 (m, 2H), 1.47 - 1.02 (m, 15H)。LCMS: MS
m/z= 688.98 [M+1]，t
R= 1.50 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 4.195 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。
實例251. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-胺基-3-異丙氧基-3-側氧基丙基)苯氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((4-((S)-2-((( 苯甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 異丙氧基 -3- 側氧基丙基 ) 苯氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .在RT下將異丁酸酐(29.0 μL，0.17 mmol)添加至實例73(78.4 mg，0.10 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(1.8 mg，0.02 mmol)於2-甲基四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中。10 min後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋反應混合物，且用飽和碳酸鈉水溶液(2 × 15 mL)及鹽水(20 mL)洗滌所得混合物。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由矽膠層析純化，用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.81 (d,
J= 17.1 Hz, 1H), 7.36 - 7.23 (m, 5H), 7.19 - 7.13 (m, 2H), 7.13 - 7.04 (m, 2H), 6.84 (t,
J= 4.4 Hz, 1H), 6.75 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.94 (dd,
J= 21.4, 5.9 Hz, 1H), 5.83 (ddd,
J= 15.4, 5.7, 4.6 Hz, 1H), 5.68 (dd,
J= 4.5, 1.4 Hz, 1H), 5.03 (d,
J= 4.1 Hz, 2H), 4.97 (p,
J= 12.2, 6.1 Hz, 1H), 4.57 - 4.28 (m, 3H), 3.97 - 3.73 (m, 1H), 3.62 (d,
J= 9.7 Hz, 3H), 3.10 (dd,
J= 14.1, 6.0 Hz, 1H), 2.91 (dd,
J= 14.0, 8.9 Hz, 1H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.31 - 1.13 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.04 (d,
J= 7.6 Hz)。LCMS：MS
m/z= 936.26 [M+1]，t
R= 1.57 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.55 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2- 胺基 -3- 異丙氧基 -3- 側氧基丙基 ) 苯氧基 )(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .將鈀/碳((18.6 mg，10 wt%)添加至用氬氣吹掃的雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((4-((S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-異丙氧基-3-側氧基丙基)苯氧基)(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯(67.6 mg，0.07 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之溶液中。接著用氫氣吹掃混合物且在RT下進行攪拌。23小時後，混合物經矽藻土過濾，濾紙用四氫呋喃沖洗，且減壓移除揮發物。粗殘餘物經歷製備型HPLC (Phenomenex Synergi 4um Polar-RP 80Å 150 × 21.2 mm管柱，20-70%乙腈/水梯度，含0.1% TFA)。合併含有相關產物之溶離份且減壓移除揮發物。將碳酸氫鈉(3 g)添加至水溶液中，且用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取所得混合物。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥並且減壓濃縮。凍乾殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.82 (d,
J= 11.6 Hz, 1H), 7.20 - 7.06 (m, 4H), 6.86 (dd,
J= 7.2, 4.6 Hz, 1H), 6.77 (t,
J= 4.7 Hz, 1H), 5.94 (dd,
J= 21.4, 5.9 Hz, 1H), 5.83 (ddd,
J= 18.0, 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.68 (t,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 4.60 - 4.34 (m, 2H), 3.96 - 3.74 (m, 1H), 3.71 - 3.59 (m, 4H), 3.06 - 2.84 (m, 2H), 2.75 - 2.54 (m, 2H), 1.31 - 1.14 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.07。LCMS：MS
m/z= 802.13 [M+1]，t
R= 1.16 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 3.97 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .產物經由對掌性SFC (Chiralpak IF，5 um，4.6 × 150 mm，乙醇30%)純化，得到非對映異構體：
實例 252.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.20 - 7.13 (m, 2H), 7.13 - 7.07 (m, 2H), 6.86 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 5.96 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.85 (dd,
J= 5.8, 4.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 4.94 (p,
J= 6.2 Hz, 1H), 4.51 (dd,
J= 11.1, 5.8 Hz, 1H), 4.39 (dd,
J= 11.1, 4.8 Hz, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 1H), 3.69 - 3.58 (m, 4H), 2.93 (qd,
J= 13.6, 6.6 Hz, 2H), 2.65 (dp,
J= 16.1, 7.0 Hz, 2H), 1.26 - 1.13 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.07。LCMS：MS
m/z= 802.14 [M+1]，t
R= 1.19 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.04 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例 253.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.20 - 7.08 (m, 4H), 6.85 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.76 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 5.91 (d,
J= 5.9 Hz, 1H), 5.81 (dd,
J= 5.9, 4.7 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 4.94 (p,
J= 6.2 Hz, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 2H), 3.90 (dq,
J= 9.9, 7.4 Hz, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 4H), 3.02 - 2.84 (m, 2H), 2.65 (dp,
J= 20.9, 7.0 Hz, 2H), 1.28 (dd,
J= 7.1, 1.0 Hz, 3H), 1.26 - 1.14 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d 4) δ 3.06。LCMS：MS
m/z= 802.17 [M+1]，t
R= 1.18 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 4.01 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-9.0 min 2-95% ACN，9.0 min-10.0 min 95% ACN，2 mL/min。
實例254. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(環戊氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將中間物8 (75 mg，0.27 mmol)及二氯磷酸苯酯(57 mg，0.27 mmol)溶解於5 mL DCM中，在0℃下向溶液中添加TEA (110 mg，1 mmol)。移除冰浴後，攪拌所得混合物30 min。使反應物再次冷卻至0℃，且添加中間物7 (45 mg，0.1 mmol)，之後添加三級丁基溴化鎂(0.27 mL，1 M THF溶液)。移除冰浴後，攪拌反應物10 min。反應物用NH
4Cl淬滅，且接著用EtOAc稀釋，用NaHCO
3及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.41 - 7.24 (m, 4H), 7.24 - 7.05 (m, 6H), 6.75 (dd, J = 11.8, 4.6 Hz, 1H), 5.93 (dd, J = 18.2, 5.9 Hz, 1H), 5.81 (ddd, J = 18.9, 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 6.1, 4.6 Hz, 1H), 5.20 - 4.98 (m, 3H), 4.56 - 4.32 (m, 2H), 3.87 (dddd, J = 38.4, 16.3, 9.3, 7.1 Hz, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.93 - 1.75 (m, 6H), 1.75 - 1.49 (m, 17H), 1.38 - 1.28 (m, 5H), 1.28 - 1.11 (m, 17H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 9.85, 3.09。LCMS：MS
m/z= 727.27 [M+1]，t
R= 1.77 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.56 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例255. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-環丙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
將中間物9 (90 mg，0.55 mmol)及二氯磷酸苯酯(115 mg，0.55 mmol)溶解於5 mL DCM中，在0℃下向溶液中添加TEA (165 mg，2 mmol)。移除冰浴後，攪拌所得混合物30 min。使反應物再次冷卻至0℃，且添加中間物7 (24 mg，0.05 mmol)，之後添加三級丁基溴化鎂(0.06 mL，1 M THF溶液)。移除冰浴後，攪拌反應物10 min。反應物用NH
4Cl淬滅，且接著用EtOAc稀釋，用NaHCO
3及鹽水洗滌，真空蒸發有機溶劑。藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 7.82 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 2H), 7.17 (dddd, J = 15.3, 6.7, 2.5, 1.2 Hz, 3H), 6.86 (dd, J = 7.9, 4.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 9.7, 4.6 Hz, 1H), 5.93 (dd, J = 19.6, 5.9 Hz, 1H), 5.82 (ddd, J = 17.6, 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 4.5, 2.6 Hz, 1H), 4.54 - 4.34 (m, 2H), 3.88 - 3.70 (m, 1H), 2.75 - 2.53 (m, 2H), 1.28 - 1.09 (m, 15H), 0.70 - 0.51 (m, 4H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.02, 3.00。LCMS：MS
m/z= 699.09 [M+1]，t
R= 1.69 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-2.0 min 2-100%乙腈，2.0 min-3.05 min 100%乙腈，3.05 min-3.2 min 100%-2%乙腈，3.2 min-3.5 min 2% ACN，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.36 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例256. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
((((2R,3S,4R,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -3,4- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲氧基 ) ( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙酯.
在室溫下向中間物1 (50 mg，0.172 mmol)、中間物14 (143 mg，0.223 mmol)及MgCl
2(20 mg，2.54 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物中逐滴添加
N,N-二異丙基乙胺(0.045 mL，0.257 mmol)。將所得混合物在50℃下攪拌15 h，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。LCMS
m/z= 681.07 (M+H)，t
R= 1.22 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1-(2-( 苯甲氧基 )-2- 甲基丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) -2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯.在室溫下向((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-(苯甲氧基)-2-甲基丙酯(60 mg，0.060 mmol)於THF (3 mL)中之溶液中添加異丁酸酐(30 µL，0.181 mmol)且接著添加DMAP (4 mg，0.033 mmol)。攪拌所得混合物10 min，藉由LCMS監測，藉由添加甲醇淬滅，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。LCMS
m/z= 821.18 (M+H)，t
R= 1.63 min: LC system: Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -2-((((((S)-1-(2- 羥基 -2- 甲基丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .向雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-(2-(苯甲氧基)-2-甲基丙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯(30 mg，0.037 mmol)於THF (1 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (19 mg，0.018 mmol)。在H
2氣體下在室溫下攪拌所得混合物15 h，經由矽藻土過濾，用甲醇洗滌濾餅若干次，且真空濃縮濾液，溶解於ACN中，且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250× 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.91 (s, 0.4H), 7.90 (s, 0.6H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 6.77 (m, 2H), 6.40 (m, 2H), 5.91 (m, 0.6H), 5.88 - 5.77 (m, 1.4H), 5.68 (m, 1H), 4.56 - 4.34 (m, 3H), 4.03 - 3.78 (m, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.33 - 1.11 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.55, 2.48。MS
m/z= 731.14，t
R= 1.35 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.30 min (53%)及5.34 min (44%)；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
Sp 及 Rp 非對映異構體之解析 .藉由IE SFC 5 μm，21 × 250 mm (30%乙醇)分離產物(20 mg)，得到非對映異構體：
實例 257.第一溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.33 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.82 - 6.71 (m, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.90 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.84 (dd,
J= 5.9, 4.4 Hz, 1H), 5.68 (d,
J= 4.3 Hz, 1H), 4.50 (dd,
J= 11.2, 6.1 Hz, 1H), 4.40 (dd,
J= 11.2, 5.3 Hz, 1H), 4.35 - 4.23 (m, 1H), 3.90 (m, 3H), 2.64 (m, 2H), 1.30 - 1.08 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.45。LCMS
m/z= 731.14 (M+H)，t
R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.32 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例 258.第二溶離非對映異構體：
1H NMR (400 MHz, 乙腈-
d 3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (dd,
J= 8.6, 7.1 Hz, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.80 - 6.73 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.86 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.81 (dd,
J= 5.9, 4.5 Hz, 1H), 5.67 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 4.03 - 3.87 (m, 2H), 3.82 (d,
J= 10.8 Hz, 1H), 2.64 (m, 2H), 1.30 (dd,
J= 7.2, 1.0 Hz, 3H), 1.26 - 1.09 (m, 21H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.52。LCMS
m/z= 731.14 (M+H)，t
R= 1.36 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.36 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例259. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-5-(4-亞胺基-3-((膦醯氧基)甲基)-3,4-二氫吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
其中R
5A及R
5B各自獨立地為H或-CH
2OP(O)(O-苯甲基)
2，
其中R
5A及R
5B中之至少一者為-CH
2OP(O)(O-苯甲基)
2。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(3-((( 雙 ( 苯甲氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-4- 亞胺基 -3,4- 二氫吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2- 氰基 -2-((((S)-(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .在室溫下攪拌實例140 (115 mg，0.171 mmol)、二苯甲基磷酸氯甲酯(67 mg，0.205 mmol)及碘化鈉(77 mg，0.514 mmol)於HMPA (3 mL)中之混合物24 h，用DCM稀釋，用飽和氯化銨水溶液洗滌，且用DCM反萃取水層。真空濃縮合併之有機層且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 × 30 mm管柱，10至100% ACN/水)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 7.96 (s, 1H), 7.56 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 7.37 - 7.12 (m, 11H), 6.77 (d,
J= 4.7 Hz, 1H), 5.76 - 5.67 (m, 3H), 5.67 - 5.63 (m, 1H), 5.60 (d,
J= 4.3 Hz, 1H), 4.92 (d,
J= 7.7 Hz, 2H), 4.80 (t,
J= 11.2 Hz, 1H), 4.45 (qd,
J= 11.4, 6.1 Hz, 2H), 4.04 - 3.84 (m, 1H), 2.63 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 1.30 (d,
J= 7.1 Hz, 3H), 1.23 - 1.13 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.68, -0.49。LCMS
m/z= 873.17 (M+H)，t
R= 1.38 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
其中R
5A及R
5B各自獨立地為H或-CH
2OP(O)(OH)
2，
其中R
5A及R
5B中之至少一者為-CH
2OP(O)(OH)
2：
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-2- 氰基 -5-(4- 亞胺基 -3-(( 膦醯氧基 ) 甲基 )-3,4- 二氫吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((S)-(((S)-1- 甲氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .將雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(3-(((雙(苯甲氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-亞胺基-3,4-二氫吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯(69 mg，0.079 mmol)溶解於THF (5 mL)中，且添加10% Pd/C (40 mg，0.038 mmol)。在室溫下在H
2氣體下攪拌所得混合物2 h，過濾，且用MeOH洗滌濾餅若干次。真空濃縮合併之濾液且藉由製備型HPLC (Phenominex Gemini 10u C18 110Å 250 × 21.2 mm管柱，30-85%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度，30 min運行)再純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.28 (s, 1H), 7.43 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 7.33 (t,
J= 7.8 Hz, 2H), 7.19 (dd,
J= 14.4, 7.6 Hz, 3H), 6.96 (d,
J= 4.8 Hz, 1H), 5.90 - 5.54 (m, 5H), 4.46 (dt,
J= 8.8, 4.7 Hz, 2H), 3.92 (dq,
J= 10.3, 7.1 Hz, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.32 (d,
J= 7.1 Hz, 3H), 1.28 - 1.06 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-d4) δ 3.07, 0.66 (broad)。LCMS
m/z= 783.12 (M+H)，t
R= 1.27 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。HPLC：t
R= 5.81 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
實例260. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-5-(4-(((E)-(二甲基胺基)亞甲基)胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例140 (80 mg，0.119 mmol)及中間物10 (62 mg，0.357 mmol)之混合物1.5 h，真空濃縮，且藉由矽膠管柱層析(0至15% MeOH/DCM，50 min運行)純化，得到第一溶離產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.89 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.34 (dd,
J= 8.8, 7.0 Hz, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 6.83 (q,
J= 4.5 Hz, 2H), 5.88 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.83 (dd,
J= 5.9, 4.6 Hz, 1H), 5.71 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.50 - 4.33 (m, 2H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 3.99 - 3.82 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 3.22 (d,
J= 0.7 Hz, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.36 - 1.02 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.39。LCMS
m/z= 728.25 (M+H)，t
R= 1.44 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
實例261. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-2-氰基-2-((((S)-(((S)-1-甲氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-5-(4-(((E)-(4-4-甲基哌𠯤-1-基)亞甲基)胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)四氫呋喃-3,4-二基酯
在室溫下攪拌實例140 (80 mg，0.119 mmol)及中間物10 (62 mg，0.357 mmol)之混合物1.5 h，真空濃縮，且藉由矽膠管柱層析(0至15% MeOH/DCM，50 min運行)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 乙腈-d3) δ 8.92 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.34 (dd,
J= 8.8, 7.0 Hz, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 6.82 (s, 2H), 5.88 (d,
J= 6.0 Hz, 1H), 5.86 - 5.82 (m, 1H), 5.71 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 4.49 - 4.35 (m, 2H), 4.32 - 4.23 (m, 1H), 3.99 - 3.78 (m, 3H), 3.62 (dd,
J= 5.9, 4.3 Hz, 2H), 3.58 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 2.47 (dt,
J= 12.1, 5.1 Hz, 4H), 2.29 (s, 3H), 1.34 - 1.10 (m, 15H)。
31P NMR (162 MHz, 乙腈-d3) δ 2.39。LCMS
m/z= 783.27 (M+H)，t
R= 1.30 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Phenomenex Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 3.0 mm；溶劑：含0.1%甲酸之乙腈，含0.1%甲酸之水；梯度：0 min-1.8 min 2-100%乙腈，1.8 min-1.85 min 100%-2%乙腈，1.85 min-2.00 min 2% ACN，1800 µL/min。
實例262. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(2-甲基-2-(膦醯氧基)丙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 2- 羥基 -2- 甲基丙酯 .向Boc-L-丙胺酸(2.53 g，13.38 mmol)、2-羥基-2-甲基丙醇(1.0 mL，11.15 mmol)及EDCI (2.25 g，14.50 mmol)於乙腈(40 mL)中之混合物中添加DMAP (2.04 g，16.73 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物15 h，接著濃縮，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物藉由矽膠層析(0至80%乙酸乙酯/己烷)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.00 (s, 1H), 4.45 - 4.24 (m, 1H), 4.15 - 3.91 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.25 (d, J = 2.4 Hz, 6H)。MS m/z = 283.99 (M+Na)。
( 三級丁氧基羰基 )-L- 丙胺酸 2-(( 雙 ( 苯甲氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 )-2- 甲基丙酯 .在室溫下攪拌(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸2-羥基-2-甲基丙酯(1500 mg，5.74 mmol)、胺基亞磷酸二苯甲基-N,N-二異丙酯(3.64 mL，11.48 mmol)及1H-四唑(1.21 g，17.22 mmol)於DCM (20 mL)中之混合物30 min。使所得混合物在冰水浴下冷卻，且添加t-BuOOH (2.3 mL，11.48 mmol，5-6 M於癸烷中)。攪拌所得混合物1 h，且用DCM稀釋，用NH
4Cl溶液及鹽水洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，真空濃縮，且藉由經0.1% TFA改質之製備型HPLC純化，得到產物。MS m/z = 521.80 (M+H)。
(S)-2-( 氯 -l5- 氮烷基 ( 氮烷基 )) 丙酸 2-(( 雙 ( 苯甲氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 )-2- 甲基丙酯 .將(三級丁氧基羰基)-L-丙胺酸2-((雙(苯甲氧基)磷醯基)氧基)-2-甲基丙酯(460 mg，純度60%，0.529 mmol)溶解於二氯甲烷(10 mL)中且在冰水浴下冷卻。添加含4 M-HCl之二㗁烷(2.65 mL，10.58 mmol)。在冰水浴下攪拌所得混合物3 h，用DCM稀釋，用水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且濃縮，得到產物。MS m/z 422.01 (M+H)。
((4- 硝基苯氧基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 )-L- 丙胺酸 2-(( 雙 ( 苯甲氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 )-2- 甲基丙酯 .在-78℃下向(S)-2-(氯-l5-氮烷基)丙酸2-((雙(苯甲氧基)磷醯基)氧基)-2-甲基丙酯(434 mg，0.948 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加二氯磷酸苯酯(0.142 mL，0.948 mmol)及三乙胺(0.26 mL，1.90 mmol)。移除乾冰浴且攪拌所得混合物40 min。將混合物冷卻至-78℃且一次性添加對硝基苯酚(132 mg，0.948 mmol)，且在-78℃下逐滴添加三乙胺(0.13 mL，0.948 mmol)。移除乾冰浴後，攪拌所得混合物60 min，接著用乙酸乙酯稀釋，用水及鹽水洗滌，真空濃縮，且藉由矽膠管柱層析(EtOAc至90%於己烷中)純化所得殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 氯仿-
d) δ 8.18 (dd, J = 9.2, 3.4 Hz, 2H), 7.43 - 7.13 (m, 19H), 4.98 (ddd, J = 8.0, 6.2, 2.7 Hz, 4H), 4.61 (dd, J = 12.0, 9.6 Hz, 1H), 4.25 - 4.03 (m, 3H), 1.47 - 1.40 (m, 6H), 1.37 (dd, J = 7.1, 5.0 Hz, 3H)。
31P NMR (162 MHz, 氯仿-
d) δ -2.66, -2.74, -5.44, -5.46。MS m/z 698.87 (M+H)。
雙 (2- 甲基丙酸 )(2R,3S,4S,5S)-5-(4- 胺基吡咯并 [2,1-f][1,2,4] 三 𠯤 -7- 基 )-2-((((((S)-1-(2-(( 雙 ( 苯甲氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 )-2- 甲基丙氧基 )-1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 )( 苯氧基 ) 磷醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-2- 氰基四氫呋喃 -3,4- 二基酯 .在室溫下向中間物7 (73 mg，0.169 mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸2-((雙(苯甲氧基)磷醯基)氧基)-2-甲基丙酯(165 mg，0.237 mmol)及MgCl
2(21 mg，0.220 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中逐滴添加二異丙基乙胺(0.047 mL，0.271 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物2 h。藉由製備型HPLC (10至90%MeCN/水，含0.1% TFA改質劑)純化所得混合物，得到中間物。MS m/z = 991.04 (M+H)。
將雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-((((((S)-1-(2-((雙(苯甲氧基)磷醯基)氧基)-2-甲基丙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-2-氰基四氫呋喃-3,4-二基酯溶解於THF (10 mL)中，且添加10% Pd/C (140 mg，0.131 mmol)。在RT下在氫氣氛圍下攪拌所得混合物30 min。過濾所得混合物且減壓濃縮濾液。使用含有0.1% TFA改質劑之10-90%乙腈/水梯度藉由製備型HPLC純化粗殘餘物，得到產物。
1H NMR (400 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 8.04 (s, 0.5H), 8.03 (s, 0.5H), 7.38 - 7.26 (m, 3H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.97 (m, 1H), 5.88 - 5.69 (m, 3H), 4.56 (dd, J = 11.2, 5.6 Hz, 0.5H), 4.51 - 4.41 (m, 1.5H), 4.21 - 4.08 (m, 1.5H), 4.03 (dd, J = 11.2, 1.1 Hz, 0.5H), 3.92 (ddt, J = 16.2, 9.0, 7.1 Hz, 1H), 2.81 - 2.48 (m, 2H), 1.51 - 1.42 (m, 6H), 1.35 (dd, J = 7.2, 1.0 Hz, 0.5H), 1.31 (dd, J = 7.2, 1.3 Hz, 0.5H)., 1.27 - 1.09 (m, 12H)。
31P NMR (162 MHz, 甲醇-
d
4 ) δ 3.07 , -3.72。MS m/z = 811.06 (M+H)。
實例263. 雙(2-甲基丙酸)(2R,3S,4S,5S)-5-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三𠯤-7-基)-2-氰基-2-((((((S)-1-(2-(2-乙氧基乙氧基)乙氧基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3,4-二基酯單一異構體
在氬氣下將實例75 (232 mg，0.366 mmol)溶解於無水四氫呋喃(10.0 mL)中。添加異丁酸酐(121 mg，0.768 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(4 mg，0.04 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物。4小時後，反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)洗滌兩次並用鹽水(10 mL)洗滌一次。有機層經無水硫酸鈉乾燥且減壓濃縮。粗殘餘物藉由使用10-100%乙腈/水梯度之製備型HPLC (Phenomenex Gemini 5 μ C18 100Å 100 × 30 mm管柱)純化，得到產物。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 8.02 - 7.78 (m, 3H), 7.42 - 7.28 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.87 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.81 (d,
J= 4.5 Hz, 1H), 6.22 (dd,
J= 13.5, 10.0 Hz, 1H), 5.81 - 5.70 (m, 2H), 5.67 - 5.62 (m, 1H), 4.48 - 4.41 (m, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 1H), 4.16 - 4.08 (m, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 1H), 3.92 - 3.76 (m, 1H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.44 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 4H), 2.71 - 2.52 (m, 2H), 1.26 - 0.98 (m, 18H)。
31P NMR (162 MHz, DMSO-
d 6) δ 3.08。LCMS：MS
m/z= 775.09 [M+1]，t
R= 1.54 min；LC系統：Thermo Accela 1250 UHPLC；MS系統：Thermo LCQ Fleet管柱：Kinetex 2.6µ XB-C18 100A，50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1%乙酸之乙腈，含0.1%乙酸之水；梯度：0 min-0.2 min 2%乙腈，0.2 min-1.5 min 2-100%乙腈，1.5 min-2.2 min 100%乙腈，2.2 min-2.4 min 100%-2%乙腈，2.4 min-2.5 min 2%乙腈，2 µL/min。HPLC：t
R= 3.31 min；HPLC系統：Agilent 1100系列管柱：Gemini 5µ C18 110A, 50 × 4.6 mm；溶劑：含0.1% TFA之乙腈，含0.1% TFA之水；梯度：0 min-5.0 min 2-98% ACN，5.0 min-6.0 min 98% ACN，2 mL/min。HPLC：t
R= 5.67 min；HPLC系統：Agilent 1290 II管柱：Phenomenex Kinetex C18，2.6u 110A，100 × 4.6 mm；溶劑：A：含0.1% TFA之水，B：含0.1% TFA之乙腈；梯度：8.5 min內2-98% B梯度，1.5 mL/min。
D. 生物學實例實例264. DENV Pol IC50
在DENV2-NS5聚合酶分析中，具有序列5'-(UCAG)20(UCCAAG)14(UCAG)20-3'(SEQ ID NO:1)之244個核苷酸二級無結構雜聚RNA (sshRNA)用作具有5'-CUG-3'引子之模板。將自200 nM開始的六種化合物兩倍稀釋液及無抑制劑對照物接種於96孔盤中。在室溫下將100 nM DENV2 NS5在含有40 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM NaCl、3 mM DTT、0.2單位/微升RNasin加RNase抑制劑、200 ng/µL sshRNA、20 μM CUG及2 mM MgCl
2之反應混合物中預培育5分鐘。將酶混合物添加至化合物稀釋液中，且藉由添加含有20 µM三種天然NTP加上2 μM含有1:100 α-33P-NTP之類似物:鹼基配對競爭性天然NTP的混合物來起始反應。在30℃下90分鐘之後，將5 µL反應混合物點樣於DE81陰離子交換紙上。過濾紙用Na
2HPO
4(125 mM，pH 9)洗滌三次，持續5分鐘，用水及乙醇沖洗，隨後風乾且暴露於磷光成像儀。合成RNA使用Typhoon Trio成像儀及Image Quant TL軟體定量，且使用GraphPad Prism 5.0藉由線性回歸計算反應速率。使用劑量-反應(可變斜率)方程式(四參數對數方程式)，藉由非線性回歸分析在Prism中計算IC50值：Y = Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogIC
50-X)*HillSlope))。
實例265. RSV RNP製備
根據自Mason等人(1)修改之方法製備RSV核糖核蛋白(RNP)複合物。以7.1 × 10
4個細胞/平方公分之密度將HEp-2細胞接種於MEM + 10%胎牛血清(FBS)中，且使其在37℃ (5% CO
2)下附著隔夜。在附著之後，在35 mL MEM + 2% FBS中用RSV A2 (MOI=5)感染細胞。感染後20小時，用補充有2 μg/mL放線菌素D之MEM + 2% FBS更換培養基，且返回37℃持續一小時。細胞隨後用PBS洗滌一次且用35 mL PBS + 250 μg/mL溶血卵磷脂處理一分鐘，其後抽吸所有液體。藉由將細胞刮削至1.2 mL緩衝液A [50 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、100 mM乙酸鉀、1 mM DTT及2 μg/mL放線菌素D]中收集細胞，且藉由重複通過18號針頭(10次)使其溶解。將細胞溶解物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。移除上清液(S1)，且藉由重複通過18號針頭(10次)使沈澱物(pellet) (P1)在600 μL補充有1% Triton X-100之緩衝液B [10 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、10 mM乙酸鉀及1.5 mM MgCl
2]中破碎。將再懸浮的沈澱物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。移除上清液(S2)，且使沈澱物(P2)在600 μL補充有0.5%去氧膽酸鹽及0.1% Tween 40之緩衝液B中破碎。將再懸浮的沈澱物在冰中置放10分鐘，且隨後在4℃下以2400 g離心10分鐘。收集含有富集的RSV RNP複合物之上清液(S3)溶離份，且藉由280 nm下之UV吸光度測定蛋白質濃度。將等分的RSV RNP S3溶離份儲存在-80℃下。
實例266. RSV RNP分析
轉錄反應含有含25 μg粗RSV RNP複合物之30 μL反應緩衝液[50 mM TRIS乙酸鹽(pH 8.0)、120 mM乙酸鉀、5%丙三醇、4.5 mM MgCl
2、3 mM DTT、2 mM乙二醇-雙(2-胺基***)-四乙酸(EGTA)、50 μg/mL BSA、2.5 U RNasin (Promega)、ATP、GTP、UTP、CTP及1.5 uCi [α-32P] NTP (3000 Ci/mmol)]。選擇在轉錄分析中使用之放射性標記核苷酸以匹配針對RSV RNP轉錄之抑制進行評估的核苷酸類似物。冷的競爭性NTP以二分之一其Km之最終濃度添加(ATP = 20 μM、GTP = 12.5 μM、UTP = 6 μM且CTP = 2 μM)。三種其餘核苷酸以100 μM之最終濃度添加。
為了判定核苷酸類似物是否抑制RSV RNP轉錄，使用6步連續稀釋以5倍增量添加化合物。在30℃下培育90分鐘之後，用350 μL Qiagen RLT溶解緩衝液停止RNP反應，且使用Qiagen RNeasy 96套組純化RNA。純化後的RNA在RNA樣品加樣緩衝液(Sigma)中在65℃下變性10分鐘，且在含有2 M甲醛之1.2%瓊脂糖/MOPS凝膠上進行。將瓊脂糖凝膠乾燥並暴露於Storm磷光成像儀螢幕，且使用Storm磷光成像儀(GE Healthcare)顯影。藉由兩次重複實驗之非線性回歸分析計算將總放射性標記轉錄物減少50%之化合物濃度(IC
50)。
實例267. DENV moDC EC50
人類單核球衍生之樹突狀細胞(moDC)係衍生自在含有GM-CSF及IL-4之人類Mo-DC分化培養基(Miltenyi Biotec)中培養的CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破碎收集moDC，洗滌，且將其懸浮於無血清RPMI中。在37℃下在輕緩攪拌下，moDC在無血清RPMI中用Vero衍生之登革熱2型新幾內亞病毒株(New Guinea strain；NGC)以MOI = 0.1感染兩小時。洗滌細胞，且將其再懸浮於含10%血清之RPMI (Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素)中。一式三份地將10^5個細胞接種於96孔盤中，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。在48小時時，將細胞用1× PBS洗滌且移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)提取總RNA，且使用總RNA使用XLT cDNA 5×超混合液(QuantaBio)產生第一股cDNA。cDNA用作對DENV2病毒及GAPDH基因表現具有特異性之Taqman qPCR雙螺旋反應中之模板。使用Prism Graphpad軟體測定EC
50值，相對於陽性對照及無化合物陰性對照孔正規化。
實例268. moDC CC50
人類單核球衍生之樹突狀細胞(moDC)係衍生自在含有GM-CSF及IL-4之人類Mo-DC分化培養基(Miltenyi Biotec)中培養的CD14+單核球(AllCells)。在第7天，藉由機械破碎收集moDC，洗滌，且一式三份地在96孔盤中以1×10^5至5×10^4個細胞/孔進行培養，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。48小時後，添加CellTiter Glo (Promega)且在室溫下培育10分鐘，隨後在光度計上讀數。針對無化合物及無細胞對照孔計算活力%曲線。使用Prism Graphpad軟體測定CC
50值。
實例269. DENV-2 Huh-7 EC50
Huh7 (人類肝癌7)細胞維持於含有10% FCS之DMEM完全培養基中。在分析當天，將細胞胰蛋白酶化(0.1% 胰蛋白酶-EDTA)，洗滌，且在37℃下在輕緩攪拌下，在無血清DMEM中用登革熱血清型2新幾內亞C (NGC)病毒株以MOI = 0.1感染2小時。2小時後，將細胞用無血清培養基洗滌，且懸浮於含有10% FCS之DMEM (Gibco，補充有丙酮酸鈉、NEAA、青黴素-鏈黴素)中。一式三份地將10^5個細胞接種於96孔盤中，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。在48小時時，將細胞用1× PBS洗滌且移除所有上清液。使用RNEasy 96盤(Qiagen)提取總RNA，且使用總RNA使用XLT cDNA 5×超混合液(QuantaBio)產生第一股cDNA。cDNA用作對DENV2病毒及GAPDH基因表現具有特異性之Taqman qPCR雙螺旋反應中之模板。使用Prism Graphpad軟體測定EC
50值，相對於陽性對照及無化合物陰性對照孔正規化。
實例270. Huh-7 CC50
人類肝癌7 (Huh7)細胞維持於含有10% FCS之完全DMEM中。^在分析當天，將細胞用0.1%胰蛋白酶-EDTA胰蛋白酶化，洗滌，且一式三份地在96孔盤中以1-2×104個細胞/孔進行培養，其中化合物以分級劑量分配(Hewlett-Packard D300數位分配器)。所有孔均相對於0.25% DMSO正規化。48小時後，添加CellTiter Glo (Promega)且在室溫下培育10分鐘，隨後在光度計上讀數。針對無化合物及無細胞對照孔計算活力%曲線。使用Prism Graphpad軟體測定CC
50值。
實例271. RSV HEp-2 EC50
在HEp-2細胞中使用感染性細胞病變細胞保護分析來測定針對RSV之抗病毒活性。在此分析中，抑制病毒感染及/或複製之化合物產生對抗病毒誘導之細胞殺滅的細胞保護作用，其可使用細胞活力試劑定量。此處使用之技術為公開文獻(Chapman等人, Antimicrob Agents Chemother. 2007, 51(9):3346-53)中所描述方法之新穎修改。
HEp-2細胞獲自ATCC (Manassas，VI)，且維持於補充有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之MEM培養基中。細胞一週傳代兩次，且保持在近匯合階段。在化合物測試之前滴定RSV病毒株A2 (Advanced Biotechnologies，Columbia，MD)之市售儲備液，以測定在HEp-2細胞中產生所需細胞病變效應的病毒儲備液之適當稀釋。
對於抗病毒測試，HEp-2細胞在大細胞培養燒瓶中生長至接近匯合，但並未完全匯合。以8或40樣品/盤標準化劑量反應形式，在384孔化合物稀釋盤中將待測試化合物預稀釋於DMSO中。在盤中製備各測試化合物之3倍連續遞增稀釋液，且經由聲學轉移設備(Echo，Labcyte)以每孔100 nL將測試樣品轉移至細胞培養物分析384孔盤中。將各化合物稀釋液以單一或一式四份樣品之形式轉移至乾分析盤中，其經儲存直至準備好進行分析。陽性及陰性對照相對地置放在盤之豎直區塊(1行)之末端上。
隨後，使用先前藉由用50,000/mL密度之細胞滴定所測定的病毒儲備液之適當稀釋液製備感染性混合物，且經由自動化(uFlow，Biotek)以20微升/孔添加至具有化合物之測試盤中。各盤包括陰性及陽性對照(各16個複本)以分別產生0%及100%病毒抑制標準。在感染RSV之後，將測試盤在37℃細胞培養培育箱中培育4天。在培育之後，將細胞活力試劑Cell TiterGlo (Promega，Madison，WI)添加至簡單培育之分析盤中，且量測(Envision，Perkin Elmer)所有分析盤中之發光讀數。根據剩餘細胞活力之水準測定RSV誘導之細胞病變效應(抑制百分比)。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算此等數值，且藉由非線性回歸測定各化合物之EC
50值作為抑制RSV誘導之細胞病變效應達50%之濃度。各種強效抗RSV工具化合物用作抗病毒活性之陽性對照。
實例272. HEp-2 CC50
以與先前針對其他細胞類型所描述類似的方式，使用細胞活力試劑與抗病毒活性並行地在未感染之HEp-2細胞中測定所測試化合物之細胞毒性(Cihlar等人, Antimicrob Agents Chemother. 2008,52(2):655-65.)。使用與抗病毒活性之測定相同的方案來量測化合物細胞毒性，不同之處為細胞不感染RSV。替代地，將相同密度的未感染細胞混合物以20微升/孔添加至含有預稀釋化合物之盤中，該等化合物亦為100 nL/樣品。隨後將分析盤培育4天，接著使用相同CellTiter Glo試劑添加進行細胞活力測試且量測發光讀數。未處理細胞及以2 μM嘌呤黴素(Sigma，St. Louis，MO)處理之細胞分別充當100%及0%細胞活力對照。針對各所測試化合物濃度，相對於0%及100%對照計算細胞活力百分比，且藉由非線性回歸測定CC
50值作為降低細胞活力達50%之化合物濃度。
實例273. RSV NHBE EC50
正常人類支氣管上皮(NHBE)細胞購自Lonza (Walkersville，MD，目錄號CC-2540)，且在支氣管上皮生長培養基(BEGM) (Lonza，Walkersville，MD，目錄號CC-3170)中培養。使細胞每週傳代1至2次以維持＜80%匯合。在培養物中6次傳代之後丟棄NHBE細胞。
為了進行RSV A2抗病毒分析，將BEGM中之NHBE細胞以7,500個細胞/孔之密度接種於96孔盤中，且使其在37℃下附著隔夜。附著之後，移除100 μL細胞培養基，且使用Hewlett-Packard D300數位分配器添加3倍連續稀釋之化合物。將最終DMSO濃度正規化至0.05%。在添加化合物之後，在BEGM中藉由添加100 μL效價為每毫升1 × 10
4.5個組織培養感染劑量之RSV A2來感染NHBE細胞，且隨後在37℃下培育4天。隨後使NHBE細胞平衡至25℃，且藉由移除100 μL培養基並添加100 μL Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物在25℃下培育10分鐘，且在Envision發光盤讀取器上定量發光信號。
實例274. hMPV (A1，A2，B1，B2) EC50
將LLC-MK2細胞以90%細胞覆蓋於MEM + 10% FBS中接種於24孔盤中。將盤用PBS洗滌，且在37℃、5% CO
2下將含有40 PFU/mL之500 µL hMPV (菌株CAN99-81 (gr. A1)、CAN97-83 (gr. A2)、CAN97-82 (B1)或CAN98-75 (gr. B2))以及4種化合物之不同稀釋液添加在細胞上，保持1 h 30 min。在吸附週期之後，移除培養基，且用PBS洗滌細胞。將含有與吸附週期相同濃度之化合物的Opti-MEM 2× + 甲基纖維素1.6% (1:1)之疊加物添加至孔中。亦以1 µM至100 µM範圍內之濃度測試由利巴韋林組成之陽性對照。在37℃、5%CO
2下培育盤3-5 天。培育期之後，在室溫下用7%福馬林固定細胞1 h。使用1/10 000稀釋的對F蛋白具有特異性之Mab (純系hMPV24，ABD Serotec, Inc.)及1/2500稀釋的第二抗小鼠IgG HRP抗體(GeneScriptCorp)測定hMPV效價。最後，將KPL True Blue用於顯出受感染細胞。
實例275. HRV16 HeLa EC
50
在給與化合物及感染前一天，將在含有10%熱滅活FBS及1%青黴素/鏈黴素之完全DMEM培養基中培養的H1-HeLa細胞以3000個細胞/孔接種於96孔盤中。重複三次量測各化合物之抗病毒活性。在即將感染前使用HP300數位分配器(Hewlett Packard，Palo Alto，CA)將化合物之3倍連續稀釋液直接添加至細胞培養物中。將盤轉移至BSL-2容器中，且將預先藉由滴定法測定且在細胞培養基中製備的病毒儲備液之適當稀釋液添加至含有細胞及連續稀釋化合物之測試盤中。各盤包括6個受感染未處理細胞孔及6個未感染細胞孔，其分別充當0%及100%病毒抑制對照。在感染之後，在設置為33℃/5% CO
2之組織培養培育箱中培育測試盤96 h。培育後，將H1-HeLa細胞自培育中移除，且使其平衡至25℃。藉由移除100 μL培養基並添加100 μL Cell-Titer Glo活力試劑來測定細胞活力。將混合物在震盪器上在25℃下培育10分鐘，且在Envision發光盤讀取器上定量發光信號。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算病毒感染抑制百分比，且藉由4參數非線性回歸測定各化合物之EC
50值作為化合物抑制細胞病變效應達50%之有效濃度。
實例 276. DENV-2 Huh-7 Rep EC
50
以8化合物劑量反應形式(4次重複實驗)或40化合物劑量反應形式(3次重複實驗)，將化合物以每孔200 nl聲學轉移在384孔盤(Greiner，目錄號781091)中。對於所有測試盤，除0%抑制的僅DMSO陰性對照孔外，亦包括巴拉匹韋(Balapiravir)、GS-5734及NITD008作為陽性抑制對照。添加化合物之後，根據標準細胞培養程序收集含有DENV2複製子構築體之Huh-7細胞，並且在由cDMEM構成且不含慶大黴素(genticin)的細胞培養基中調整至1.25E5個細胞/毫升之濃度。隨後將40 μL細胞儲備液添加至各孔，達到5,000個細胞/孔之最終細胞密度。細胞及化合物混合物在37℃/5% CO
2下培育48小時。在收集細胞之前，EnduRen活細胞基質(Promega，目錄號E6481)藉由將3.4 mg懸浮於100 μL DMSO中以產生60 mM儲備溶液來進行準備。隨後將儲備溶液1:200稀釋於預溫熱之cDMEM中，且將10 μL此稀釋溶液添加至384孔盤之各孔中。盤隨後以500 rpm短暫離心，且在盤震盪器上放置2 min。混合後，將盤在7℃/5% CO
2下培育1.5小時，之後在Envision光度計上量測發光。針對各測試濃度，相對於0%及100%抑制對照計算複製子信號之抑制百分比，且藉由4參數非線性回歸測定各化合物之EC
50值作為化合物抑制複製子信號達50%之有效濃度。
實例277. HCV Rep 1B及2A EC
50
在384孔盤中以十個步驟之1:3稀釋連續稀釋化合物。所有連續稀釋均在同一384孔盤內每化合物重複四次地進行。添加100 μM之HCV蛋白酶抑制劑ITMN-191作為100% HCV複製抑制之對照，同時包括10 mM之嘌呤黴素作為100%細胞毒性之對照。利用Biotek μFlow工作站向黑色聚苯乙烯384孔盤(Greiner Bio-one，Monroe，NC)之各孔中添加90 μL含有2000個懸浮HCV複製子細胞之細胞培養基(不含遺傳黴素(Geneticin))。對於化合物轉移至細胞培養盤中，將0.4 μL來自化合物連續稀釋盤之化合物溶液轉移至Biomek FX工作站上之細胞培養盤中。最終分析孔中之DMSO濃度為0.44%。將盤在37℃以及5% CO
2及85%濕度下培育3天。HCV複製子分析為多重分析，能夠評估來自同一孔之細胞毒性及抗複製子活性兩者。首先進行CC
50分析。抽吸384孔細胞培養盤中之培養基，且使用Biotek ELX405盤洗滌器各用100 μL PBS洗滌孔四次。利用Biotek μFlow工作站將50 μL體積的於1 × PBS中的含有400 nM鈣黃綠素AM (Anaspec，Fremont，CA)之溶液添加至盤之各孔中。將盤在室溫下培育30 min，之後用Perkin-Elmer Envision盤讀取器量測螢光信號(激發490 nm，發射520 nm)。在與CC
50分析相同的孔中進行EC
50分析。用Biotek ELX405盤洗滌器抽吸384孔細胞培養盤中之鈣黃綠素-PBS溶液。利用Biotek μFlow工作站將20 μL體積的Dual-Glo螢光素酶緩衝液(Promega，Madison，WI)添加至盤之各孔中。將盤在室溫下培育10 min。利用Biotek μFlow工作站將20 μL體積的含有Dual-Glo Stop & Glo基質(Promega，Madison，WI)與Dual-Glo Stop & Glo緩衝液(Promega，Madison，WI)之1:100混合物的溶液添加至盤之各孔中。隨後將盤在室溫下培育10 min，之後用Perkin-Elmer Envision盤讀取器量測發光信號。
實例278.人類粒線體RNA聚合酶(POLRMT)之抑制
所有反應混合物含有50 mM Tris-HCl緩衝液(pH 8.0)、0.2 mg/ml BSA、2 mM DTT、0.05 mg/ml活化魚***DNA、10 mM MgCl2、1.3 µCi[α-
33P]dTTP (3,000 Ci/mmol)及各2 µM的dATP、dGTP及TTP。在酶濃度([E])與活性之線性範圍內選擇最佳酶濃度，且選擇反應時間以確保消耗10%之受質。在37℃下運行所有反應。在含有10 mM HEPES (pH 7.5)、20 mM NaCl、10 mM DTT、0.1 mg/ml BSA及10 mM MgCl
2之緩衝液中，使用藉由含有POLRMT輕鏈啟動子區及線粒體轉錄因子A (mtTFA) (100 nM)及mt-TFB2 (20 nM)之20 nM模板質體(pUC18-LSP)預培育的20 nM POLRMT來評估線粒體RNA聚合酶(POLRMT)之抑制。將反應物加熱至32℃且藉由添加各2.5 µM的四種天然NTP及1.5 µCi之[
33P]GTP起始。在32℃下培育30 min後，將反應物點樣於DE81紙上，之後處理以供定量。
實例279.藉由人類粒線體RNA聚合酶(POLRMT)之單核苷酸併入
將MTCN緩衝液(50 mM MES、25 mM Tris-HCl、25 mM CAPS及50 mM NaCl，pH 7.5)、200 nM 5'-
32P-R12/D18、10 mM MgCl
2、1 mM DTT及376 nM POLRMT之混合物在30℃下預培育1 min。藉由添加500 μM (最終)天然NTP或NTP類似物來開始反應。在所選時間點，移除反應混合物且用含有100 mM EDTA、80%甲醯胺及溴酚藍之凝膠負載緩衝液淬滅，且在65℃下加熱5 min。在20%聚丙烯醯胺凝膠(8 M脲)上運行樣品，且使用Typhoon Trio成像儀及Image Quant TL軟體(GE Healthcare，Piscataway，NJ)對產物形成進行定量。藉由使用單指數方程式：[R13] = A(1−e
kt )擬合產物形成來計算mt RNA pol之單核苷酸併入速率，其中[R13]表示形成之細長產物的量(以nM為單位)，
t表示反應時間，k表示觀測到的速率，且A表示指數之振幅。
表3.活性
表4. 活性
表5. 比較活性
表6. hMPV活性
表7. 比較核苷酸三磷酸酯活性
| 實例編號 | RSV HEp-2 EC 50 | RSV NHBE EC 50 | HRV16 HeLa EC 50 | DENV-2 Huh7 REP EC 50 | DENV moDC EC 50 | DENV-2 Huh7 EC 50 |
| 77 | 57 | 24 | 152 | 5394 | 185 | 1486 |
| 78 | 1354 | 710 | 6523 | 31757 | ||
| 79 | 105 | 19 | 217 | 12413 | ||
| 80 | 1175 | 158 | 1573 | 5302 | ||
| 81 | 194 | 22 | ||||
| 82 | 58 | 32 | 201 | 7627 | 786 | 3980 |
| 83 | ＞100000 | ＞5000 | 17417 | 5155 | ||
| 84 | 58 | 16 | 121 | 12962 | ||
| 86 | 100 | 24 | 192 | 8949 | 239 | 1407 |
| 87 | 119 | 23 | 220 | 12285 | ||
| 88 | 108 | 42 | 8818 | |||
| 89 | 195 | 126 | 785 | 49679 | ||
| 90 | 109 | 45 | 259 | 24271 | 677 | 2157 |
| 91 | 67 | 23 | 10178 | |||
| 92 | 41 | 33 | 104 | 13590 | ||
| 93 | 48 | 25 | 171 | 12801 | ||
| 94 | 189 | 41 | 13702 | |||
| 95 | 90 | 20 | 429 | 19774 | ||
| 96 | 63 | 20 | 417 | 16825 | ||
| 97 | 366 | ＞5000 | 1119 | 9053 | ||
| 98 | 48 | 17 | ||||
| 99 | 58 | 14 | 116 | 6313 | ||
| 100 | 58 | 13 | 147 | 18799 | 1131 | |
| 101 | 94 | 19 | 25788 | |||
| 102 | 178 | 18 | 526 | 39094 | ||
| 103 | 94 | 32 | 10509 | |||
| 104 | 147 | 32 | 703 | 29115 | ||
| 105 | 57 | 13 | 182 | 12929 | ||
| 106 | 173 | 15 | 805 | 14575 | ||
| 107 | 98 | 31 | 388 | 22356 | ||
| 108 | 217 | 6 | 385 | 39252 | ||
| 109 | 103 | 32 | 379 | 26293 | ||
| 110 | 327 | 40 | 2509 | 56337 | ||
| 111 | 873 | 44 | ＞100000 | |||
| 112 | 284 | 40 | 2896 | 36452 | ||
| 113 | 1942 | 0 | 4677 | 31949 | ||
| 114 | 1659 | 201 | 3853 | 26332 | ||
| 115 | 112 | 22 | 20422 | |||
| 116 | 273 | 15 | 303 | 19706 | ||
| 117 | 113 | 20 | 462 | 19079 | ||
| 118 | 224 | 26 | 736 | 54417 | ||
| 119 | 541 | 27 | 1050 | 71445 | ||
| 120 | 163 | 0 | 1140 | 35235 | ||
| 121 | 5450 | 498 | 6656 | 44401 | ||
| 122 | 79 | 90 | 301 | 5537 | ||
| 123 | 2276 | 175 | 7566 | ＞50000 | ||
| 124 | 2104 | 150 | 8387 | ＞50000 | ||
| 125 | 700 | 79 | 2028 | 48728 | 20700 | |
| 126 | 121 | 45 | 514 | 15971 | ||
| 127 | 8056 | 3363 | ＞50000 | ＞50000 | ||
| 128 | 18792 | ＞4138 | ＞50000 | ＞50000 | ||
| 129 | 154 | 77 | 1110 | 15453 | ||
| 130 | 198 | 59 | 1777 | 20998 | ||
| 131 | 103 | 47 | 782 | 19235 | ||
| 132 | 434 | 145 | 3480 | 29443 | ||
| 133 | 18092 | ＞4071 | ＞48866 | ＞50000 | ||
| 134 | 7345 | 1589 | ＞50000 | ＞50000 | ||
| 135 | 738 | 33 | 1080 | 30578 | ||
| 136 | 2954 | 244 | 15000 | 38238 | ||
| 137 | 467 | 65 | 1038 | 38426 | ||
| 138 | 63 | 17 | 101 | 5199 | ||
| 139 | 39 | 8 | 97 | 5237 | ||
| 140 | 42 | 14 | 83 | 5273 | 90 | 1215 |
| 141 | 80 | 23 | 253 | 7493 | ||
| 142 | 93 | 16 | 352 | 11148 | ||
| 143 | 92 | 18 | 221 | 5571 | 164 | 3129 |
| 144 | 34 | 22 | 93 | 6168 | 31 | 1185 |
| 145 | 40 | |||||
| 147 | 44 | 20 | 17564 | |||
| 148 | 44 | 12 | 92 | 6814 | 26 | 1239 |
| 149 | 1154 | 84 | 3193 | ＞35760 | ||
| 150 | 1399 | 70 | 3485 | ＞50000 | ||
| 151 | 226 | 751 | 946 | 19481 | ||
| 152 | 2934 | ＞5000 | ＞50000 | ＞50000 | ||
| 153 | 110 | 283 | 470 | 6677 | ||
| 154 | 185 | 114 | 874 | 20524 | ||
| 155 | 437 | 294 | 2685 | 29240 | ||
| 156 | 456 | ＞5000 | 21681 | ＞50000 | ||
| 157 | 227 | 1588 | 1794 | 25763 | ||
| 158 | 139 | 52 | 731 | 15707 | ||
| 159 | 7990 | 1546 | 33106 | ＞50000 | ||
| 160 | 204 | 860 | 37440 | |||
| 161 | 151 | 1160 | 1228 | 22475 | ||
| 162 | 179 | 28 | 1619 | |||
| 164 | 1692 | 148 | ＞100000 | |||
| 165 | 405 | 165 | 1909 | ＞99677 | ||
| 166 | 157 | 112 | 1657 | 21685 | ||
| 168 | 261 | 64 | 34932 | |||
| 169 | 43 | 23 | 175 | 7625 | ||
| 170 | 267 | 80 | 863 | 15930 | ||
| 172 | 1101 | 145 | 16818 | |||
| 173 | 256 | 75 | 519 | 16062 | ||
| 174 | 100 | 20 | 97 | 8312 | ||
| 175 | 87 | 17 | 85 | 9512 | ||
| 176 | 182 | 16 | 142 | 9444 | ||
| 177 | 120 | 49 | 27224 | |||
| 178 | 633 | 163 | 1066 | 53226 | ||
| 179 | 161 | 100 | 731 | 29385 | ||
| 180 | 62 | 31 | 178 | 8310 | ||
| 181 | 84 | 30 | 6629 | |||
| 182 | 88 | 17 | 177 | 3499 | ||
| 183 | 69 | 50 | 88 | 3654 | 142 | 1113 |
| 184 | 79 | 13 | 57 | 5955 | ||
| 185 | 26 | 19168 | ||||
| 186 | 41 | 4 | 44 | 4220 | 1733 | |
| 187 | 24 | 17 | 88 | 5930 | ||
| 188 | 31 | 28 | 102 | 6922 | ||
| 189 | 36 | 51 | 114 | 8838 | ||
| 190 | 40 | 29 | 110 | 4910 | ||
| 191 | 23 | 8 | 64 | 2696 | ||
| 192 | 29 | 45 | 101 | 8666 | ||
| 193 | 610 | 125 | 1624 | 29965 | ||
| 194 | 391 | 529 | 2091 | 30890 | ||
| 195 | 23 | 59 | 126 | 6445 | ||
| 196 | 42 | 27 | 96 | 1958 | ||
| 197 | 28 | 33 | 94 | 4458 | ||
| 198 | 48 | 37 | 319 | 6625 | ||
| 199 | 4113 | 235 | 19488 | ＞50000 | ||
| 200 | 58 | 12 | 120 | 2175 | ||
| 201 | 92 | 14 | 177 | 7692 | 57 | 317 |
| 202 | 90 | 14 | 120 | 10051 | ||
| 203 | 95 | 38 | 359 | 9500 | ||
| 204 | 100 | 17 | 348 | 16905 | ||
| 205 | 164 | 21 | 286 | 18953 | ||
| 206 | 338 | 36 | 308 | 7589 | ||
| 207 | 1076 | 149 | ＞37509 | |||
| 208 | 2116 | 215 | 15202 | ＞50000 | ||
| 209 | 1566 | 168 | 8519 | 31388 | ||
| 210 | 36283 | 3415 | ＞35359 | |||
| 211 | 653 | 946 | 1968 | 28929 | ||
| 212 | 1179 | 451 | 6124 | ＞71350 | ||
| 213 | 11779 | 2251 | 13065 | 22967 | ||
| 214 | ＞41731 | ＞3888 | 31313 | ＞50000 | ||
| 215 | 378 | 142 | 1021 | 27232 | ||
| 216 | 262 | 3867 | 3499 | 31180 | ||
| 217 | 9842 | 2063 | 11919 | ＞50000 | ||
| 218 | 30 | 17 | 112 | 5509 | ||
| 219 | 67 | 82 | 356 | 16427 | ||
| 220 | 167 | 4857 | 13474 | |||
| 221 | 660 | 1171 | 8990 | |||
| 222 | 27 | 25 | 146 | |||
| 223 | 1721 | 223 | ||||
| 224 | 378 | 986 | 1704 | |||
| 225 | 14 | |||||
| 226 | 9 | 9 | ||||
| 227 | 17 | 12 | ||||
| 228 | 84 | 59 | 956 | |||
| 229 | 16 | 23 | 676 | |||
| 230 | 102 | 47 | 864 | |||
| 231 | 124 | 75 | 1728 | |||
| 232 | 95 | 53 | 880 | |||
| 233 | 127 | 29 | ||||
| 234 | 57 | 30 | ||||
| 235 | 742 | 113 | 2265 | |||
| 236 | 49 | 24 | 136 | |||
| 237 | 106 | 43 | 478 | |||
| 238 | 27 | 28 | 99 | |||
| 239 | ＞9830 | 2260 | ＞50000 | |||
| 240 | 20 | 24 | 125 | |||
| 241 | 25 | 13 | 131 | |||
| 242 | 7190 | ＞5000 | ||||
| 243 | 15 | 11 | ||||
| 244 | 63 | 21 | ||||
| 246 | 132 | 25 | ||||
| 247 | 113 | 25 | ||||
| 248 | 23 | |||||
| 249 | 47 | 24 | ||||
| 250 | 3932 | 2421 | ||||
| 251 | 186 | 37 | ||||
| 252 | 87 | 26 | ||||
| 253 | 470 | 27 | ||||
| 254 | 36 | 24 | 29428 | |||
| 255 | 38 | 18 | 2911 | |||
| 256 | 20 | |||||
| 257 | 72 | 24 | 7469 | |||
| 258 | 91 | 34 | 18314 | |||
| 259 | 36 | 11 | 5362 | 1861 | ||
| 260 | 41 | 12 | 2795 | |||
| 261 | 42 | 13 | 2341 | |||
| 262 | 163 | |||||
| 263 | 23 |
| 實例編號 | HCV Rep 1B EC 50 | HCV Rep 2A EC 50 |
| 77 | 608 | 936 |
| 82 | 359 | 813 |
| 86 | 929 | 1481 |
| 90 | 579 | 1143 |
| 99 | 313 | 599 |
| 100 | ||
| 144 | 442 | 1271 |
| 139 | ||
| 140 | 369 | 542 |
| 143 | ||
| 148 | ||
| 162 | ||
| 185 | 217 | 730 |
| 186 | 306 | 836 |
| 201 | ||
| 232 | ||
| 239 | ||
| 242 | ||
| 234 | 905 | 1825 |
| 259 | 1119 | 2081 |
| 261 | 524 | 1223 |
| 2',3'- 取代 | 實例編號 | RSV HEp-2 EC 50 | RSV NHBE EC 50 | HRV16 HeLa EC 50 | DENV Rep EC 50 | DENV Huh7 EC 50 | HCV Rep1B EC 50 | HCV Rep2A EC 50 |
| -OH | 52 | 252 | 1253 | 5483 | 3956 | 7457 | ||
| -OC(O)iPr | 140 | 14 | 83 | 1214 | 368 | 542 | ||
| -OH | 29 | 932 | 678 | 36056 | 1884 | |||
| -OC(O)iPr | 144 | 22 | 92 | 6168 | 1284 | |||
| -OH | 44 | 997 | 1799 | 4260 | ||||
| -OC(O)iPr | 184 | 79 | 13 | 57 | ||||
| -OH | 19 | 4185 | ＞5000 | 50000 | ||||
| -OC(O)iPr | 162 | 179 | 28 | 1619 | ||||
| -OH | 15 | 4328 | 3255 | 11442 | ||||
| -OC(O)iPr | 228 | 84 | 59 | 956 | ||||
| -OH | 35 | 4066 | 1308 | 29560 | ||||
| -OC(O)iPr | 137 | 467 | 65 | 1038 | ||||
| -OH | 20 | 877 | 2233 | ＞50000 | ||||
| -OC(O)iPr | 181 | 84 | 30 | 6629 |
| 實例編號 | hMPVA1 LLC-MK2 EC 50 | hMPVB2 LLC-MK2 EC 50 | hMPVA2 LLC-MK2 EC 50 | hMPVB1 LLC-MK2 EC 50 |
| 140 | 0.16 | 0.23 | 0.19 | 0.21 |
 | |||
| R | -CN | -N 3 | -CH 2Cl |
| RSV IC 50[µM] | 0.044 | 0.12 | 1.1 |
| DENV IC 50[µM] | 0.83 | 0.14 | 7.1 |
| POLRMT SNI% | 0.6 | 132 | 0.11 |
| POLRMT IC 50[µM] | ＞200 | 0.9 | - |
儘管出於清楚地理解之目的已藉助於說明及實例相當詳細地描述前述發明，但熟習此項技術者應瞭解，可在所附申請專利範圍之範疇內實踐某些改變及修改。此外，本文中所提供之各參考文獻係以全文引用的方式併入本文中，其併入程度如同各參考文獻單獨地以引用的方式併入之程度相同。當本申請案與本文所提供之參考文獻之間存在衝突時，應以本申請案為凖。
<![CDATA[<110> 美商基利科學股份有限公司(GILEAD SCIENCES, INC.)]]>
<![CDATA[<120> 抗病毒化合物]]>
<![CDATA[<130> TW110105126]]>
<![CDATA[<150> US 62/977,881]]>
<![CDATA[<151> 2020-02-18]]>
<![CDATA[<160> 1 ]]>
<![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]>
<![CDATA[<210> 1]]>
<![CDATA[<211> 244]]>
<![CDATA[<212> RNA]]>
<![CDATA[<213> 人工序列]]>
<![CDATA[<220>]]>
<![CDATA[<221> source]]>
<![CDATA[<223> /注=「人工序列之描述：合成聚核苷酸」]]>
<![CDATA[<400> 1]]>
ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag 60
ucagucaguc agucagucag uccaagucca aguccaaguc caaguccaag uccaagucca 120
aguccaaguc caaguccaag uccaagucca aguccaaguc caagucaguc agucagucag 180
ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag 240
ucag 244
Claims (73)
- 一種式(II)化合物：式(II) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 鹼基為
； R 1A及R 2A各自獨立地為： (A) 視情況經1至3個R 1B取代之C 1-12烷基， (B) 具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，其中該3員至6員雜環基視情況經1至3個R 1C取代，或 (C) 苯基，其中 各R 1B獨立地為-OH；-NH 2；C 1-6烷氧基；甲氧基乙氧基；或具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基，且 各R 1C獨立地為C 1-3烷基； R 3為-N(H)R 3A或-N=C(R 3B)(R 3C)； R 3A為H、-CH 2OP(O)(OH) 2或-C(O)R 3D，其中 R 3D為視情況經1個甲氧基取代之C 1-6烷基，或視情況經C 1-3烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基； R 3B為H或C 1-3烷基； R 3C為-N(R 3C1)(R 3C2)； R 3C1及R 3C2各自獨立地為H或C 1-6烷基；或 R 3C1及R 3C2與其所連接之原子一起形成視情況經C 1-6烷基取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基； R 4A為O或S；且 R 4B及R 4C各自獨立地為 (A) -OH； (B) -OR 4B1，其中 R 4 B1為視情況經1至3個R 4B2基團取代的C 1-6烷基，或C 6-12芳基，其中 各R 4B2基團獨立地為C 1-6烷氧基、-S-R 4B3或-S(O) 2-R 4B3，且 各R 4B3基團獨立地為C 1-6烷基； (C)
，其中 m為0、1、2、3、4或5；且 各R 4D獨立地為視情況經1至3個R 4D1基團取代之C 1-3烷基；視情況經1至3個R 4D2基團取代之C 1-3烷氧基；-C(O)OR 4D3；或-C(O)N(R 4D3) 2，其中 各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OR 4D3， 各R 4D2獨立地為C 1-3烷氧基，且 各R 4D3獨立地為C 1-3烷基； (D)
，其中 R 4E1及R 4E2各自獨立地為H或C 1-6烷基， R 4F1及R 4F2各自獨立地為H或C 1-6烷基，或R 4F1及R 4F2組合一起為側氧基， R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-12烷基；視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-7環烷基；視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至8員雜環基；或-C(O)R 4G4， 各R 4G1獨立地為-OH；C 1-6烷基；C 1-3烷氧基；-(CH 2OCH 2) 1-5-CH 3；-N(R 4G8) 2；-OP(O)(OH) 2；視情況經1至3個R 4G9取代之C 3-7環烷基；視情況經1至3個R 4G10取代的具有1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基；或苯基， 各R 4G2獨立地為C 1-6烷基、C 1-3鹵烷基或-NH 2； 各R 4G3獨立地為鹵素或C 1-3烷基； 各R 4G4獨立地為C 1-12烷基， 各R 4G8獨立地為C 1-6烷基， 各R 4G9獨立地為C 1-3鹵烷基或-NH 2，且 各R 4G10獨立地為C 1-3鹵烷基；或 (E) -(OP(O)(OH)) 1-2-OH；且 R 5A及R 5B各自為經-OP(O)(OH) 2取代之C 1-6烷基。
- 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1A及R 2A為視情況經1至3個R 1B取代之C 1-12烷基。
- 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1A及R 2A各自選自由以下組成之群：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基及異戊基，其各自視情況經1至3個R 1B取代。
- 如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4B及R 4C中之一者為：；且 R 4B及R 4C中之另一者為：
。
- 如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4F1及R 4F2組合一起為側氧基。
- 如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為視情況經1至3個R 4G1取代之C 1-12烷基。
- 如請求項6之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基或2-乙基-丁基，其各自視情況經1至3個R 4G1取代。
- 如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為視情況經1至3個R 4G2取代之C 3-7環烷基。
- 如請求項8之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為環丙基、環丁基、環戊基或環己基，其各自視情況經1至3個R 4G2取代。
- 如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至3個選自N、O及S之雜原子的3員至6員雜環基。
- 如請求項10之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為視情況經1至3個R 4G3取代的具有1至2個選自N及O之雜原子的4員至6員雜環基。
- 如請求項10之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為氧雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、四氫呋喃基或四氫哌喃基，其各自視情況經1至3個R 4G3取代。
- 如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 5A及R 5B各自為-CH 2OP(O)(OH) 2。
- 如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIa)表示：式(IIa)， 其中R 5A為-CH 2OP(O)(OH) 2。
- 如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIb)表示：式(IIb) 其中R 5B為-CH 2OP(O)(OH) 2。
- 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1A及R 2A各自獨立地為 視情況經甲氧基、甲氧基乙氧基或嗎啉基取代之甲基， 視情況經甲氧基取代之乙基， 正丙基， 異丙基， 正丁基， 視情況經-OH或-NH 2取代之異丁基， 三級丁基， 異戊基， 氧雜環丁烷基， 四氫哌喃基， 視情況經甲基取代之哌啶基，或 苯基； R 3為-N(H)R 3A或-N=C(R 3B) (R 3C)； R 3A為H、-C(H) 2OP(O)(OH) 2或-C(O)R 3D； R 3D為 甲基， 視情況經甲氧基取代之乙基， 異丙基，或 視情況經甲基取代之哌啶基； R 3B為H或甲基； R 3C為-N(R 3C1)(R 3C2)； R 3C1及R 3C2獨立地為H或甲基；或 R 3C1及R 3C2與其所連接之原子一起形成視情況經甲基取代之哌𠯤基； R 4A為O或S；且 R 4B及R 4C各自獨立地為 (A) -OH； (B) 視情況經甲氧基、甲硫基或甲磺醯基取代之-O-C 1-6烷基； (C)，其中 m為0、1或2；且 各R 4D獨立地為視情況經1個R 4D1基團取代之C 1-3烷基；視情況經甲氧基取代之C 1-3烷氧基；或-C(O)N(R 4D3) 2，其中 各R 4D1基團獨立地為-NH 2或-C(O)OR 4D3，且 各R 4D3獨立地為C 1-3烷基；或 (D)
，其中 R 4E1及R 4E2各自獨立地為H或甲基； R 4F1及R 4F2各自獨立地為H或甲基，或R 4F1及R 4F2組合一起為側氧基； R 4G為 視情況經R 4G1取代之甲基， 視情況經嗎啉基或-N(C 1-3烷基) 2取代之乙基， 視情況經甲氧基或嗎啉基取代之正丙基， 異丙基， 視情況經C 1-3烷基取代之正丁基， 視情況經-OH或-OP(O)(OH) 2取代之異丁基， 環丙基， 環丁基， 環戊基， 視情況經1至3個獨立為-NH 2、C 1-6烷基或C 1-3鹵烷基之基團取代的環己基， 氧雜環丁烷基， 視情況經1至3個甲基取代之吡咯啶基， 視情況經鹵素或C 1-3烷基取代之哌啶基， 四氫呋喃基， 四氫哌喃基，或 -C(O)C 1-6烷基；且 R 4G1為 環丙基， 環丁基， 視情況經-NH 2或C 1-3鹵烷基取代之環己基， 氧雜環丁烷基， 視情況經C 1-3鹵烷基取代之哌啶基， 四氫哌喃基，或 苯基。
- 如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIc)表示：式(IIc)。
- 如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IId)表示：式(IId)。
- 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIe)表示：式(IIe)。
- 如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIf)表示：式(IIf)。
- 如請求項1至20中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIg)表示：式(IIg) 其中 m為0或1。
- 如請求項1至21中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIh)表示：式(IIh)。
- 如請求項1至16及20中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIi)表示：式(IIi)。
- 如請求項1至23中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIj)表示：式(IIj)。
- 如請求項1至16及20中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIk)表示：式(IIk)。
- 如請求項1至22及25中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIm)表示：式(IIm)。
- 如請求項1至22、25及26中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其由式(IIn)表示：式(IIn)。
- 如請求項1至27中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1A及R 2A各自為甲基、乙基或異丙基。
- 如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1A及R 2A各自為異丙基。
- 如請求項1至29中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、三級丁基或2-乙基-丁基。
- 如請求項1至30中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 4G為甲基。
- 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其選自由表1A、表1B、表1C、表1D、表1E、表1F、表1G、表1H及表1I中之該等化合物組成之群。
- 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：
。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 如請求項33之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物為：。
- 一種醫藥調配物，其包含醫藥學上有效量的如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
- 一種用於製造供治療有需要人類之肺病毒科( Pneumoviridae)病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
- 如請求項44之方法，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
- 如請求項44之方法，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒( metapneumovirus)感染。
- 一種用於製造供治療有需要人類之小核糖核酸病毒科( Picornaviridae)病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
- 如請求項47之方法，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
- 一種用於製造供治療有需要人類之黃病毒科( Flaviviridae)病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
- 如請求項49之方法，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒(dengue virus)感染。
- 如請求項49之方法，其中該黃病毒科病毒感染為黃熱病毒(Yellow fever virus)感染。
- 如請求項49之方法，其中該黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒(West Nile virus)感染。
- 如請求項49之方法，其中該黃病毒科病毒感染為茲卡病毒(Zika virus)感染。
- 如請求項49之方法，其中該黃病毒科病毒感染為HCV感染。
- 一種用於製造供治療有需要人類之絲狀病毒科( Filoviridae)病毒感染的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
- 如請求項55之方法，其中該絲狀病毒科絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒(Ebola virus)感染。
- 一種如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之肺病毒科病毒感染之藥劑。
- 如請求項57之用途，其中該肺病毒科病毒感染為呼吸道融合性病毒感染。
- 如請求項57之用途，其中該肺病毒科病毒感染為人類間質肺炎病毒感染。
- 一種如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之小核糖核酸病毒科病毒感染之藥劑。
- 如請求項60之用途，其中該小核糖核酸病毒科病毒感染為人類鼻病毒感染。
- 一種如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之黃病毒科病毒感染之藥劑。
- 如請求項62之用途，其中該黃病毒科病毒感染為登革熱病毒感染。
- 如請求項62之用途，其中該黃病毒科病毒感染為黃熱病病毒感染。
- 如請求項62之用途，其中該黃病毒科病毒感染為西尼羅病毒感染。
- 如請求項62之用途，其中該黃病毒科病毒感染為茲卡病毒感染。
- 如請求項62之用途，其中該黃病毒科病毒感染為HCV感染。
- 一種如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療人類之絲狀病毒科病毒感染之藥劑。
- 如請求項68之用途，其中該絲狀病毒科病毒感染為伊波拉病毒感染。
- 一種用於製造供治療或預防有需要人類因病毒感染所引起的呼吸道病況之惡化的藥劑之方法，其中係使用如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
- 如請求項70之方法，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
- 一種如請求項1至42中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療或預防人類因病毒感染引起的呼吸道病況之惡化的藥劑，其中該呼吸道病況為慢性阻塞性肺病。
- 如請求項72之用途，其中該病毒感染係由呼吸道融合性病毒、鼻病毒或間質肺炎病毒引起。
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