HU230515B1 - Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai - Google Patents

Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai Download PDF

Info

Publication number
HU230515B1
HU230515B1 HU1500179A HUP1500179A HU230515B1 HU 230515 B1 HU230515 B1 HU 230515B1 HU 1500179 A HU1500179 A HU 1500179A HU P1500179 A HUP1500179 A HU P1500179A HU 230515 B1 HU230515 B1 HU 230515B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
antibody
human
antibodies
binding
seq
Prior art date
Application number
HU1500179A
Other languages
English (en)
Inventor
Deborah J Allen
Hendricus R. J. M Hoogenboom
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A Mankovich
Brian T Mcguiness
Andrew J. Roberts
Paul Shrewsbury Sakorafas
Jochen G Salfeld
David Schoenhaut
Tristan J Vaughan
Michael White
Alison J. Wilton
Original Assignee
Abbvie Biotechnology Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU230515(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Abbvie Biotechnology Ltd filed Critical Abbvie Biotechnology Ltd
Publication of HUP1500179A2 publication Critical patent/HUP1500179A2/hu
Publication of HU230515B1 publication Critical patent/HU230515B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Description

Humán TNFa-kötő antitestek alkalmasásai
A találmány izolált humán anti-TNFo antitestek vagy antigén-kötő részeinek alkalmazására vonatkozik más terápiás szexekkel kenibinációfean rheumatoid arthritis vagy gyulladásos feéibetegségek kezelésére alkalmas gyógyszexkészítmények előállításában .
A tómét naktonis faktor a (THF«| egy titokin, amelyet számos sejt típus — beleértve a monicitákat és makrofágokat — térmel. A ?8Εα-ε eredetileg annak alapján azonos!rótták, hogy bizonyos egér tumorok, nekrózisát (elhalását; tudta indukálni [lásd például: L. Old., Soienoe, 230, 63C-S32 (19:85)}.. Ezt követően egy
C « C h e x 1 á v a 1 ö s s z e £ ü g g ö, c a c h e c t i η n e k n e v e a a t v. f a k t o r r ό 1 k i d e r i testek, hogy ez a molekula azonos a TREu-val. A. Ti: Fa rész tvesz a sokk közvetítésében slásd például: R, Bent ler., A.Cerami, Ama. Rév. Blocher., 57, öOÓ-ölB (1988}; B.Seutler, A.Cerami, Annu. Rét. Imuno’l., 7f 625-655 (1989)1. A TNFa szerepet játszik még számos humán betegség és rendellenesség gatof iziolőgiá-yában, beleértve a szepszist, a fertőzéseket., ..z jui '.nu.ot tv ; eg.~eg<^<vi , a transzplantátum kilökődést és a graft-versus-host betegséget [lásd például: A.Acéller, et al., Cytokine, 2, 102-163 (1990) ;
5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moellex et al»')·; 2 60 Old B1 számon közzétett európai szabadalmi iratok (A.Mceller, et al <} ; P.Vasilli, Anno. Rév. Immunoi., 10, 411-452 (1992); k.J.lracey, A.Ceraml, Anno. Rév. kod., 45, 491503 (1994HMivel a humán TdFa (hlBWi a legkülönbözőbb humán betegséν * ί *“ gekben káros hatást fejt ki,· terápiás stratégiát dolgoztak ki a Wu *; ..-.. . o <. >.. v - » < . . Főképpen olyan antitestek segítségével kísérelték meg a ηΤΝϊ'α. aktivitását gátolni., amelyek kötőének a hTNFu-hoz és azt neutral izál.ják. A legkorábbi ilyen antitestek köze tartottak az egér ítonoklönálie antitestek (mát-ekj f amelyeket hTbbu-val immunizált egerek limrccrnáiból előállított hibrídómák szekretálnak [lásd példás!:
i.Hahn et al., Proc. Na ti.. átad- Sc.i.., 82, 3811-381® (19851; C-b. Hang et al., Biochem. Biophya. Rés. C onnan., 137 f 847-851 Í1988;; M.Hírei, et sl.; J. Immunoi. éetnods., 98, 57-62 (1587:;
B.k.Fendly et ai . , Hybridoma, y, 3Ö3-378 (19871; A.Moeller et
Cytokine, 2, 162-169 (1996;; 5,231,824 szám; amerikai egyeséit államokbeli szabadalmi leírás (Hoeller et ai.}; 186 833 SÍ számon közzétett európai szabadalmi iratok (D.Wallaoh} ; 218 868
Al számon közzétett európai szabadalmi bejelentés: (Old et al.}; 360 610 51 számod közzétett európai ',. . dalmi iratok (A.Moeller et al J 1 · Bár ezek az egér anti-hTNFa antitestek gyakran, erős affinitást fejtettek ki a hTNFu-val szemben (például: Κώ. < 1G^ é) és képesek voltak a hTNFp aktivitás neutralizálására, in vivő használatukat olyan problémák korlátozhatják, amelyek az egér antitestek, embereknél való alkalmazásából fakadnak. Ilyen probléma a szérum felezési idő, továbbá, hogy az egér antitest nem képes bizonyos humán effekto.r funkciók beindítására és hogy nem kívánt immunválasz jön létre emberben az egér antitest ellen ;[ .„humán anti-egér antitest'' reakció; humán anti-mouse antibody íHMl) teát ti őri ,
A teljes egér antitest emberben való használatával kapcsainV tus .problémák leküzdése végett megkísérelték az egér .anti-hT^F® antitestek genetikai manipulálását:, ezek „ambetszerúbbé változtatása -sl·iából. Előállítottak például olyan kimér» antitesteket, amelyekben az antitest láncok variábilis szakaszai egér eredetűek és az antitest láncok konstans szakaszai emberi eredetűek voltak [D,B.Khi.g:h.'t et al., Hol.Immunoi>, 30, 14 43-1433
19:33? ;· B0 92/18353 szaron közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (F.EDaddona et al.)j. Előállítottak ezenkívül olyan humanizált antitesteketf amelyekben az antitest variábilis szakaszainak hipervariábilis dóménál egér eredetűek voltak, de a megmaradt variábilis szakaszok és az antitest konstans szakaszai emberből szármázzák JWO 92/11333 számon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (O.R.Adair et al.;:). Azonban, mivel ezek a kiméra és humanizált antitestek még mindig tartalmaznak néhány egér szekvenciát, ezek még mindig ki.vá.lth.atuak nem-kávánk itmiuri.reakólókat humán suti-kiméra antitest reakciót (humán anti-chlmenie
a n t i .0 o d y (H AC A j reáction) — különösen ha hosszú időn át alkai-
mázzák, például krónikus ind ikációk esetén. mint a rheumatoid
arthritis (lásd például: H..I. Elliot et al.. Láncét, 344, 1125-
1127 (1991); M.é .Elltot et al. , láncot, 344, 1 10 3- :1110 (1994} ] .
Előnyös hlN Fa: inhibitor lenne az egér n íAt-ekkel vagy ezek
származékaival szemben /például a kiméra vagy humanizált antitestekkel szemben; egy teljesen humán anti-hTNFa antitest, mivel egy ilyen szer nem váltaná ki a HAHA reakciót még hosszú időn át való használat esetén sem. Humán hibridóma technikákkal előállítottak hTEFa elleni humán monoklonális autó-antitesteket [P.Boyle et al., Cell Immunoi,, 152, 556-368 (1993); F.Boyle et al., Cell Immunoi 152, 562-581 (1993); 614 984 számon közzétett európai szabadalmi be jelentés (Boyle et al ,|1. Megállapirótták áronban, hogy ezea hibridóma eredetű mönoklonális' antitestek affinitása hTFFa-noz tűi alacsony — hagyományos módszerekkel ezt nem lehetett kiértékelni — és hogy nem tudják megkötni az oldható TNJ<x-t és nem. tudják neutralizálni a hldFa-indukált citotoxi.citási (Boyle et al., lásd előbb; Másrészt a humán hibridóma technika sikere a hTNFa-specif iku.s autoantitesteket termelő límt.oeíták humán perifériás vérben való természetes jelenlététől függ, Méhány tanulmány beteg emberekben hTNFa elleni szérum-autoantitesteket mutatott ki [Á> Fomsgaard, et al., Szánd, d Immunoi.,. 30, 219-223 (1939; ; K. Bendtzen, et al., Prog. Leukocyte Bioi., 10b, 447-452 (1990)], míg mások ezt nem.
erősítették meg (H-G. teáson, et al., ü. Immunöl. Methods, 139, 140-147 (1991) ].
A természetben előforduló humán anti-hThFa. antitestek alternatívája egy rekombináns humán anti-hTNFa antitest lenne, leírtak (Ά.Ο. Griff iths et al., EMBO J., 12, 725-734 (1993)1 olyan rekombináns humán antitesteket, amelyek viszonylag alacsony affinitással (pálcául; 10' M) és gyors f elbomlási sebesség (off ratej mellett (például K;:.íf ICd sec1) kötik a hINFa-5. Viszonylag gyors dlsszcciációs kinetikájuk miatt azonban ezek az antitestek valószínűleg nem alkalmasak terápiás használatra. Leírták ezenkívül, hogy a rekombináns humán enmí-hlMFa nem neutráliséi ja a hTNFa aktivitást, inkább elősegíti a hTMFa sejtek felületéhez való kötődését és fokozza a hTMFa internalízácíbját [A. Lidbury et al., Biotechnoi. Ther., 5, 27-45 (1994); WO * * «
92/03145 ssámon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (R.Aston e t a i.) ] ..
Fentiek alapján még mindig igény van olya·· humán antitestek, például olyat rekomhi náns humán, antitestek iránt, amelyek erős affinifással és lassú disszociációé kinetikával kötik meg az old ható hThlW-t és képesek a hTNFa aktivitás, beleértve a nTKFa indukált citotoz.icitás (in vitro és in vivő' gátlására, továbbá
alkalmazhatók olyan betegségek kezelésére szolgáló győgyszerké-
szitmenyek előállítására, melyekben hThFa aktivitás káxos hatá-
sú..
Ά P 9 9 öl « 74 s rám: 1 (hő- 97/29131 számon közzétett PCT bejelen-
rés) alapbejeienxésönkhen olyan itol ált humán ant itesteket Írunk le, előnyösen rekombínáns húsún antitesteket, amelyek sgeoifikusas kötődnek humán T’-iFu-hoz. Ereket az antitesteket, az jellemzi, hogy erős affinitással, és alacsony disszociáclós kinetikával kö tődnek a hTNFa-hoz és hogy nentralizálják a hThFa aktivitását:, beleértve a hl'lu'a-iudskált ci totoxi cl fást (in vitro és in vivő) és a hőd Fa-ind utált sejt aktiválást.. Továbbá jellemző· rájuk.
hogy a hőéFa-hoz kötődnek, de a hfh Εβ-ho z (li.mf otozin) nem és a humán TNFa-n kívül más: főemlős
T\ca-\:vr - en ΐ<'^τ 'S tn fákhoz is képesek kötődni.
Ezek ez antitestek hosszún ágba k 1 eh e t n ok (például lg Öl vagy IgGá antitest) vagy csak egy antigénkötő részt (példáfragmentumot; tartalmazhatnak.
ú újonnan izolált harsán antitest vagy antigén-kcto része azzal jellemezhető, hogy
a) a humán TFFa-tól 1 x 10'·5 cr/' vagy ennél kisebb érték méllett és 1 z 103 M vagy esnél Kisebb érték mellett disszociál, mindkettőt felületi plazmon rezonanciával meghatározva;
b; könnyű lánc CDR3 dóménje 3. számú aminosavsz&kvsnciát vagy az
1., 4., 5., 7. vagy 8, pozícióban egyetlen alaninhelyetteáiléssel, vagy az 1., 3,,· t.< 7., 8. és/vagy 9. pozícióban l-S konzervatív aminGsav-helyettesitéssel módosított 3. számú aminöaavszekvenciát tartalmaz;
c; nehéz lánc CDR3 dóménje 4, számú aminosavszekveneiát vagy a
2., 3., 4., 5.., 6., 8.., 9., IS., vagy 13. pozícióban egyetlen alanín-helyettesítéssel, vagy a z.f 3., 4,, 5,f 3., S., 3.,
10., 11. és/vagy 12. pozícióban í-5 konzervatív amizosavhelyettesítéasel módosított amíncsav-zekvencdát tartalmaz; és oi 1 z 10“' M vagy ennél kisebb IC® értekkel rendelkezik.
Ezek az antitestek a humán TNEa oítotoxioltását egy standard ín vitro L929 assay-ben neutralízálják a megadott IC?(j vagy ennél kisebb értékkel.
Ά találmány szempontjából előnyös az az antitest vagy anzrgén-kötő része, mely a barnán TdFfx-töl 5 x 10A .seo'^ vagy kisebb K.í£í; érték mellett disszociál. Még előnyösebb, ha az antitest vagy antigén-kotÓ része a humán TdFa-tóI 1 x lö4 sec:'1 vagy kisebb Kofí érték mellett disszociál és ICRo értéke a fenti tesztben 1 x lú~t; -Íz IQ-1'·’ M vagy ennél kisebb,
A találmány szempontjából előnyős továbbá az a humán antitestet vagy ennek antigén-kötő része, amelyben a könnyű lánc variábilis szakaszának <LCVRj CDR3 dóménje a 3. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát vagy az 1<, 4., b<, 7» vagy 8. po~ zicicban egyetlen alanin-helyettesitéssel módosított 3. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, és a nehéz iáne variábilis szakaszának í.HCVR; CDR.3 doménje a 4. számú szekvencia szerinti amimosavszekvenei.á t vagy a 2., 3., 4. , 5., 6., 8., 9., 10. vagy .11. pozícióban egyetlen alanin-helyettesi Léssel módosított 4. számú amimosavszekvenciát tartalmazza.
Előnyösebb, ha az LCVR még egy 3. szórná aminosavszekvenoiát tartalmazó CDR2 eocénnel és a HCV3 egy 3. számú aminosavszekveneiát tartalmazó CDRz doménnel is rendelkezik. Meg előnyösebb, ha az LílVR egy ?. számú aminosavszekvenciác tartalmazd ODRI 0ov:rel és a HCVR egy 8. számú amimosavszékvéneiét tartalmazó CDR1 doménnel is rendelkezik,
Egy másik kiviteli alakban az izolált humán TBFa-kötő antitestnek vagy sutigén-kotö részének könnyű lánc variábilis szakasza ÍLCVR) az 1. számú amizosavszekvenciát és nehéz lánc variábilis szakasza íHúvR; a 2. számú aminosavszékvensiót tartalmazza, K,< értéke 1 x 1.0“® H vagy ennél kisebb és I.C:s.e értéke 1 x 10; M vagy ennél kisebb. Bizonyos kiviteli formákban az antitest egy IgGl nehéz lánc konscans szakaszt vagy egy Igéd nehéz lánc konstans szakaszt tartalmaz. További kiviteli formákban az antitest egy Fab fragmentum, vagy egy FWh. fragmentum, vagy egy egyetlen láncból álló Ft fragmentum, lehet.
Továbbá előnyös az az antitest vagy ennek antigén-kötő része, amelyben a LÖVR CDR3 dómenje a 3., 11., 12., 13., 14., 15.,
18., 17., 18., iá., 20., 21., 22., 23., 24., 25. vagy 26. ami.nosavszekvenciát tartalmazza, vagy a HCVR CDR3 dóménje a 4.,
27., 28., 2 9., 30., 31., 32., 33. vagy 34 arai η o s a v s z e k v s n c i á t tartalmsasa.
A találmány céljaira eiőnyöser a rekombináns antitestek. A legelőnyösebb re komblnáns antitest, melyet D2E7-nek neveztünk el; egy könnyű lánc CDF3 dcménból s mely a '3. számú amínosavszekvenulát tartalmazza és egy nehéz lánc CDK3 doménből á.ll.# mely a 4. számú am?inosavszekvenciát tartalmazza. Előnyös, ha a D2E7 antitest könnyű lánc variábilis szakasza O7VR ::: ligát chain variabls region) az 1. számú amiuosavszekvemciát tartalmazza és nehéz lánc variábilis szakasza (.HCVR - heavy onaln variable regioni a 1. számú aminosavszekvenciát tartalmazza.
A fenti izolált hamar· antitest vagy ennek antigén-kötő része lmp\- n< .. nd'. s » ítx..' de a humán TKFp-et jlimfotozin) nem. Előnyösen a humán antitest vagy antigén-kötő része neutralizálja a humán TRF®, csimpánz THFcx aktivitását és legalább még egy további, a következő- csoportból kiválasztott főemlős Th'Fa aktivitását: pávián TFFa, selyemmajóm Tála, közönséges makákö Τ,ΝΕα és rhesus imakákói ThFa. Az antitest előnyösen egy nem-főemlős, például kutya, sertés vagy egér fflfö aktivitását is neutralizalja.
A P9901374 számú a lapbej elöntésben á fenti humán TkFa-kötö antitesteket vagy antigén-kötő részüket kódoló nukleinsav molekulákat is ismertetjük. Egyik előnyös nuklelnsav nukleotidszekvenciáját; amely a F2E7 LCVR-jét kódolja, a 7. ábra és a 36. számú nuklsctid-szekvencia mutatja he. Egy másik előnyös, D2E7 HCVR-jét kódoló nukieinsav nükleotid-szekvenciáját a 8. ábra és a 37. számú nukleotid-szekvenoia mutatja be. Az antitestet kódoló n-jkleinsavakat hordozó rekombináns expressziős vektorok és azok a gazdasejtek;, amelyekbe özeket a vektorokat bevittűk, valamint az eljárások, melyek során a fenti antitesteket a gazdasejtek tenyésztésével áll ltjuk elő., szintén a leírás részét képezik.
Az új, izolált humán TNEa-kötő antitest vagy «ntigén-kőtő résre előnyös tulajdonságai alapján felhasználható egy eljárásban humán ThFo aktivitás gátlására, melynek során a homár; TlFu-t úgy hozzuk érintkezésen egy izolált humán Tdká-kötó antitesttel vagy antigén-kötő részével, hogy a humán TNFa aktivitás gátlása végbemenjen.
A fentiek alapján a találmány tárgya egy in vitro eljárás humán TNFa aktivitás gátlására, amely abban áll, hogy a humán ThFa-t érintkezésbe hozzuk egy izolált humán TFFu-kötö antitesttel vagy antigén-kötő részével, amely a} a humán ü'NFa-tcl 1 x lö“3 sec3· vagy ennél kisebb Koi-·*· érték mellett és. 1 x ΙΟ*3 M vagy ennél kisebb Kd érték mellsőt disszociál, mindkettőt felületi plazmon rezonanciával meghatározva;
b} könnyű lánc CDR3 dómenje 3. számú ami no savszekvenciát vagy az.
1., 4., 5., 7, vagy ú. póz isi óban egyetlen aianin- helyettesitéssel, vagy az 1. , 3., 4., 6., 7. , 8. és/vagy 9,.
ρ ο ζ i c i óba η 1 -5 kο n z e r v a t i. v a.m i η o s a v - h e 1 y e 11 e s .11. őssel mó d o s i tott 3. számú atónosavszekvenoiát tartalmaz;
tó nehéz lánc CŐR3 neménje 4. számú amincsavszekvencián vagy a
2.* 3<z 4.,. 5., X, 8., 9., 18, vagy 11. pozícióban egyetlen alanin-helyettesa.téssei, vagy a 2..., 3.,. 4., 5., 6.r 8., 9.,
10., 11. és/vagy 12, pozícióban 1-5 konzervatív ardnosav he 1 yattesitéssel modosított ami.nosavszekven.eiát tartalmaz; és d; 1 x 1Q“; M vagy ennél kisebb i:Qe értékkel rendelkezik.
A találmány további tárgyát képezi egy in vitro eljárás humán THFa akt i vitás gátlására, amely abban áll, hogy a humán TKFa-z egy izolált humán T'MFa-kdtő antitesttel vagy antigén-kötö rw.O'-'l· s jn‘ \ee, amelynek könnyű lánc variábilis szakasza fLCW) az 1. számú aminosavsnekvenciát és nehéz lánc variábilis szakasza (H’CVKi a 2. számú aminosavszekveneiát tartalmazza, ?'a értéke 1 x 10s H vagy ennél kisebb és IC··;·; értéke 1 x 10”' b vagy ennél kisebb.
A találmány további tárgyát izolált, has-ián TNFa-kötő antitest vagy antígén-kötörévzensk alkalmazása képezi egy olyan .betegség kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására·., amely betegségben a TNFa aktivitás káros hatású. Ilyen betegségek például a szepszis, autoimmun betegség (például rheumatoid arthritis, allergia, szklerózis multiplex, autoimmun diabstes, autoimmun uveitis és nefrózisos szindróma), fertőző betegség, r o s s> z in dú l a t ú d a g a n.a t o s be t e g s é g, t r a n s z p 1 a n t á t u.m k 11 ö k ö dé s (rnjekciól vagy graft-versus-host betegség, tüdőbetegség, csontrendellenesság, bélbetegség, szívbetegség. Az antitestek felhasználási területeit részletesen ismertetjük az V. fejezetben.
Az alábbiakban az ábrák rövid leírása. következik.
Az 1A és IS ábra a D2E7 könnyű, lánc variábilis szakasz aminosavszekvenciáit (C2E7 VI; lásd az 1. számú szekvenciát is), a D2E7 VL alanin mutánsait (LDzE'A.Al, LDzEluAÓ, LD2E7''.A4, lD2E7\At, LD2E7';'.A7: és LD2E7*.Ab), a D2E7-zel rokon 2SD4 antitest könnyű lánc variábilis szakaszát (2SD4 71; lásd a 9. számú szekvenciát is} és a többi D2E7-te.l rokon könnyű lánc variábilis szakaszokat (EP 312 f VLLÖE4, VLlcOAP, VL1Ö0D2, VL10R, LOB5, VhúCFíh VOóFlö, VBLÜG7, WbOfíő, VLÚOKlj ¥3X031 VUBFj VblC'l, VL1C7, VL0.1F4, VW.,ÍH.8>· Wf L0E7.A és .LOE7.T) ábrázolja. Az
IA ábra az Fül, CBRlf FB.2 és CDR2 dómén eket. tartalmazza. Az 1B ábra az FR3f CD3 és FR4 doMéneket. tarUlirazza. A könnyű lánc CDR1 („CDs bl}f CDR2 („CDR 1.2) és CDB3 („CDi L3) ό <...' k békéretestűk.
A 2A és 23 ábra a D2E7 nehéz lánc variábilis szaka.se amlnosavszekvencláit (D2E7 VH; lásd a 2. számú szekvenciát is, a D2E7 VB alauin mutánsait (HD2S7 + .Alf HD2E7ÚA2, HD2E7’.A3, HD2ETÚA4, HD2E7ÁAS, HD2E7ÚAS, HD2E7\h7f HD2E7\A8 és HD22'\A9), a D2E7-tel rokon 2$Dt antitest nehéz lánc variábilis szakaszt (2ED4 VH; lásd, a lö. számú szekvenciát is; és a többi D2E7-tel rokon nehéz lánc variábil.ia szakasz (VH1B11, VE1E3, V.hIAU, VB1B12, Vnl-M, W1E4, VEIBE, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N és VH1-D2.Y) ábrázolja. A 2A ábra az FAI, CüPl, FR2 és CDR2 dorfiéneket mutatja. A 2B ábra az FR 3, CDE3 és FB4 dóménekét .mutatja. A nehéz lánc CDR1 UCDR Hl}, CD.R2: UCDR H2) és CDR.3 Í,,CDR :H3} deméneket bekeretez tűn .
A .3. ábrán grafikusan ábrázoljuk a CDFa-indukált L929 cltotoxioltás E2E7 humán anti rűEFa-val való gátlását, MÁK 195 egér a n t i ~ h T N Fa- va 1 áss z eh a s ο n 111 á s b a.n..
A 4. ábrán grafikusan ábrázoljuk az rhTh-Fa-nak az 0-937 sejteken lévő hTNEo receptorokhoz való kötődésének D2E7 humán anti-hTEFa antitest által történő gátlását, MÁK 195 egér anti hTN Fa-ve 1 ös s zeh a sonl i tótban.
Az 5. ábrán grafikusan ábrázoljak az ELAM-1 HdVCEC-en való TNFa-indükált expressziójxának D2E7 humán anfi-hTíxTa antitest által történő gátlását m 195 egér antí-hTNFo-val összehasoriitáaban.
A r. ábrán láttató diagramm ós szénáson ütja, hogy S-galaktózamin-szenzitizált egerekben a ΤΚΕα-indukált letalitás elleni véneimen miként biztosítja a D2E7 humán anti-TbFa antitest (pontozott hasábok) és a MÁK 195 egér anti-nikba híres hasábok) .
A 7, ábra a D2E7 könnyű lánc variábilis szakasz nukleotid szekvenciáját masaja, a nukleoniá szekvencia alatt az aminosavszekvenciával . A CDR Ll, CEA 12 és CDR 13 szakaszokat aláhúztuk.
A 8. ábra a D2E7 nehéz lánc variábilis szakasz nukleotld szekvenciáját mutatja, a nukleotid szekvencia alatt az aminosavszekvenciával. A CDR Hl, C1R H2 és CDI Hl szakaszokat aláhúztuk.
A 9. ábra grafikusan ábrázolja a D2E7 antitest kezelés hatását Tg 197 transzgeniktb egerek, mint poliazthritises modellek, á slag í z U1e t mér étért.
A találmányban alkalmazott izolált humán antitestek vagy ezek antigén-kötő részei a humán TRFg-hoz nagy azfleírással,
3.„vS'?zv u“ ssrrctazzcs saocssno?.;- neztzs_i^xz .pm... _l tss-i kvl· zenét. Az ,.ní.t<s.í< lhsszuz„ása a bura:. ’X£a kitctatására vagy a humán TNFa aktivitás gátlására szolgáló módszerekben —- akár in vltro, akár in vivő — a találmány oltalmi közéhez tartozik.
A találmány könnyebb megértése érdekében először néhány kife j e z é s t d e f i n i a 1 u n k.
A „humán TDFa„ (rövidítve: hiú Fa vagy egyszerűen hFNFi kifejezés használatával egy olyan humán citokinre utalunk, amely 17 kü tömegű. szekretált formában és 2u hl tömegű membrán-asszocíált formábau fordul elő', amelynek biológiailag aktív formáját nem kovalensen kötött 17 k.D tömegű molekulákból álló trímer alkot ja, (A hTHFa szerkezetének további leírását például a következő közlemények tartalmazzák: D.FennIca, et al., Natúré 312, 724-729 fi98i j ; J.b.Davis, et al., Bíochemistry, 2J), 1 322-1221 (1997); E.F.Jones, et al., Natúré, 338, 225-228 :1989)(. A humán
ΤΙΌ’α meghatározás magába foglalja a rekombináns humán TNFa-t (rtíTNFa) , amely standard r s kombi mán s ezpresszios: módszerekkel állítható elő vagy beszerezhető a kereskedelemből (ÍR and Ώ Systems, Minneapolis, MN., kar. szám:: 218-77).
Az „antitest sző használatával immunglobulin molekulákra utalunk, amelyek négy poilpeptid láncból állnak, mégpedig két nehéz :(H, heavy) láncból és két könnyű (L, ligát) láncból, amelyek belső diszulfíd kötésekkel kapcsolódnak össze, Mindegyik nehéz lánc egy nehéz lánc variábilis szakaszból (rövidítve: 11CVR vagy VH) és egy nehéz lánc konstans szakaszból áll, A nehéz lánc konstans szakaszt három, dómén alkotja: 2. 1, 71.2 393. Mindegyik könnyű lánc egy könnyű lánc variábilis szakaszból (rövidítve: LCVF vagy VI,) és egy könnyű lánc konstans szakaszból áll. A könnyű lánc konstans szakasz egy domént — CL ....... tartalmaz. 7
VH és VL szakaszokat tovább osztályozhatjuk hipervariábilis szakaszokra, amelyeket komplementaritást meghatározó szakaszoknak (CDR ~ comp1nmentarity determiting region) nevezünk. A CDR-eket átszövik olyan szakaszok, amelyek még állandóbbak (konzervár 1 vabbak: és székét fxamswoik szakaszoknak :[ framework region - FR ::: konstans szakasz: váz) nevezzük. Minden egyes VH-t és Vl~t báron CDR és négy FF. álkor. Sorrendjük az amino-terminális: végtől a karboxi-tarminális végig a kővetkező: FR1, CDR1, FR2, CLR2, Fűi, CÜR3, FF4.
Egy antitest ,,ant ígén-kötő: részé'' ívagy egyszerűen „antitest rest) alatt egy antitest egy vagy több olyan fragmentumát érijéé, amelyek megtartották azt a képességüket,< hogy specifikusan kötődjenek egy antigénhez (például hTNla-hozj . Kimutatták,. hogy egy antitest antigén-kötő funkciója a teljes hosszúságú antitest fragmentumaival is teljesíthető. Egy antitest ,,antigén-kötő része kifejezés például a következő kötő fragmentumokra vonatkozik: [íj Fab fragmentum, amely VE, VH, CL és CH1 doménekből álló monoválene fragiheutum; (iij RíahMr fragmentüm égy biveiéna fragmentum, amely a kapocs szakasznál egy diszulfid híddal összekötött két Fab fragmentumot tartalmaz; Ilii) Fd fragmentum, amely a VH és CH1 dománből áll; (ívj Fv fragmentum, amely az antitest egyik karjának vL és VH. doménjét tartalmazza; ívj dat fragmentum: (Ward et al., hators, 341, 54 4-316 í 19 8 9) ], amely egy VH dóménhői áll; és (vi) izolált komplementaritást meghatározó szakasz (CDRj. Ezenkívül, jóllehet az Fv fragmentum két doménjét — VI és VH — két külön gén kódolja, rskombináns módszerek használatával, egy szintetikus: linker segítségével ezek összekapcsolhatok és Így lehetővé válik, hogy egyetlen olyan protein lánc keletkezzék, amelyben a VL és VH szakasz-pár monovalens molekulákat alkot: iegyiáncu Fv névén ismert; sing le chain Fv - scFvj . [Lásd például: Bírd et al., Scienoe, 342, 423-426 419891; Huston et ai., Proc. Nátl. Acad. Sci., 35, 5379-5383 U'S-BS'·· ] . Az ilyen egyláncú antitestekre is vonatkoztatjuk az antit est „.antigénkötő része kifejezést. ide tartoznak. az eqyláucú antitestek más főméi is, íny példáéi a diatestek íoiabodres). A diatestek bi~ valens, blspeoifikus antitestek, amelyekben a VH és VL dóménak egyetlen yeligentid láncon fejeződnek ki, de olyan linket használata mellett, amely túl rövid ahhoz, hegy ugyanezen a láncon a két doménből pár képződjék, ezáltal késztetvén a doméneket arra, hogy egy másik lánc komplementer dóménjelvei alkossanak párt és Így két. antigénkötő helyet hozzanak létre {lásd például: P. Hol üget et al., Proc. háti. lead. Sói., 90., &4M4-5443 -(1993) ; R.2.Pofjuk, Struuttre, 2, 1121-1123 (1994)1.
Továbbá, egy antitest vagy ennek antigén-kötő része olyan nagyobb írnia unadhéziós molekula része lehet, amely az antitest vagy az antitest-rész és egy vagy több más .protein vagy peptid kovalens vagy nem. kovalens társulása révén jött létre·.. Ilyen adhéziós molekulákra példa a sztreptavidin mag-régió használatával előállított tstramer scFv molekula {Flpriyanov, S.H. et al., Humán Antibodíes and Hybridomas, b, 93-101 (1995)1, és ilyenek például egy tisztein maradék, egy markét peptid és egy C- terminális polihiszéléin toldalék használatával előállított bivalens és biotinezett scFv molekulák [ S ,M.Kipriyanov, ét al., Mól. Immuno.1., 31, 1047-1058 (1994) ] . Az antitest részeket, mint az Fab-t és F(ab?)u-t előállíthatjuk teljes antitestekből a szokásos technikákkal, a teljes: antitest papainos, illetve pepszines emésztésével. Az antitestek, antitestrészek és imraurradhézlós mo lekulák ezenkívül előállíthatok standard rekomblnáns DNS techní kik használatával, ahogy itt leírjak.
A „hemáh antitest kifejezés — ahogy itt használjuk — olyan antitestekre vonatkozik, amelyek humán csiravonal immunglobulin szekvenciákból származó variábilis és konstans szakaszokat tartalmznak. A találmány szerinti humán antitestekben lehetnek olyan amírosav csoportok -— például a CDR-ekben és különösen a ODRI-bán — amelyeket nem csiravonal humán immunglobulin szekvenciák kódolnak (például: mutációkat viszünk be találomra (rendem; vagy hely-specifikus mutagenezissel in vitro, vagy szomatikus mutációval in vivő) . A „humán antitest kifejezést azonban nem használtuk azokra az antitestekre, amelyekben a humán frameuork szekvenciákba más emlős: faj — például egér — csiravonalból származó GDP szekvenciákat ültettünk be.
A „xekomhlnáns humán antitest kifejezés alatt minden olyan humán antitestet értünk, amelyeknek az előállítását, kifejezését, létrehozását vagy Izolálását rekomnináns eszközökkel végeztük, Például: az antitestek kifejezéséhez rekombínáns expreszsziós vektort használunk, amelyet gazdasejtbe txanszformálunk (a további leírást lásd alább, a II. fejezetben), az antitesteket rekombináns, kombinatorikus humán antitest gyűjteményből izoláljuk (a további leírást lásd alább, a III. fejezetben), az antitestet olyan állatból (például egérből) izoláljuk, amely humán immunglobulin génekre nézve transzgenikus (lásd például:: L,D.Taylor et al., duci. Acids Pes., 20, Olt'?-6295 (1392)], vagy pedig az antitestek előállítását, kifejezését, létrehozását vagy izolálását bármilyen más olyan módszerrel, végezzük, amely humán immunglobulin génszekvenciáknak más DNS szekvenciákkal való őszsz«íllesztését ísplináng) tartalmazna.. Ezek a rekombináns bwn antitestek humán csira vonal immunglobulin szekvenciákból azármazó variábilis és konstans szakaszokat tartalmaznak. Bizonyos megvalósítások esetén azonban., az ilyen rekcmbináns humán antitesteket in vitrö mutageni.záljuk (vagy, ha humán. lg szekvenciák révén transzgenikus állatot használunk, in vivő szomatikus mutagenezist végzünk) , amikoris a re kombi náns antitestek VM és VL szakaszainak aminosavszekvenoiái olyan szekvenciák, amelyek ........ noha humán csiravonal. VH és VI, szekvenciákból vagy ezekkel rokon szekvenciákból származnak — a humán antitest esi re vonal repertoárban a természetben in vivő valószínűleg nem fordulnak elő.
.Az „izolált antitest kifejezés használatával elvan antitestre utalunk, amely lényegében a különböző antigén specificítású más antitestektől, mentes (például: egy izolál t antitest, amely specifikusan köti a hTNFa-t, lényegében mentes olyan antitestektől, amelyek: a hTáka-tól eltérő antigéneket kötnek meg)· . Egy izolált antitest azonban, amely specifikusan köti a hTEFd-t, keresztreagálhat más antigénekkel, például más fajból származó TNr’a. molekulákkal (alább részletesen tárgyaljuk; ... Az izolált antitest ezenkívül lényegéten mentes lehet más celluláris anyagtól és/vagy kémiai, anyagoktól.
A „neutral1záló antitest kifejezés (vagy egy „antitest, amely neutráliséi ja a hThFa aktivitást; egy olyan antitestre vonatkozik, amely, ha a πΤΝΕα-hoz kötődik, a hTFFíx biológiai aktivitásának gátlását eredményezi. .A hTNFa biológiai aktivitásának gátlása a hWFa -· biológiai aktivitás egy vagy több indikátorának mérésével állapítható meg, ilyen aktivitás például a óTkFa-indukált citctoxicitás· (akár in vítro, akár in vivő; , a hTNFa-indukált sejt aktiválás és a hTHFa hTNFa~recept.orok.hoz való kötődése. A hőSFa biológiai aktivitásának ezen indikátorait a szakterületen ismert számos standard in vitro vagy in vivő assay közül agy vagy több assay elvégzésével vizsgálhatjak (lásd a z. példáz; . szt, hogy egy antitest képes-e neukralizálni a hTNFa aktivitását;, előnyösen a hTNFa-indukált oitötozicitás gátlásával állapíthatjok meg, L929 sejteket, 1 hl'NFa aktivitás egy további, vagy alternatív paraméterekéntf meghatározhatjuk; hogy egy antitest képes-e meggátolni az ELAM-l hTNFa-indukált expresssióját HPVEC-en, ugyanis ez, a hTFFa-indukált celluláris aktiválás mért é kéé1 szolgál.
A „felületi, piámon rezonancia kifejezés egy olyan optikai jelenségre vonatkozik, amely lehetővé teszi a valóságos idő alatt lezajló biospecifikus kölcsönhatások analízisét azáltal, hogy egy bioszenzot mátrixban detektálja a protein koncentrációkba:·· végbemenő változásokat, például a Sliccre system (Iharosula Biosenspr AB, üppsala, Svédország ás Piscatapay, NJ<, dSAj használatával. A módszer további ismertetését lásd az 1. példában és a következő közleményekben: U.Jönsson et al.., Ann. Bíol,Clin., öl, 19-26 (1993;; ü.Jönsson et al., Biotechnlques, 11, oző-627 (1991}; 3. dobasson et al., J. Hol. kocogni t., 8., 125131 (1995) ; B. Johnesön et al., Anal. Bíochem. , 198, 26:8-237 (1991),
Az itt használt Κ;.ι·:/? rövidítés egy antitestnek az antigén/antitest komplexből való disszociációjánál a felbomlási se bességi állandót jelenti • Xj
Az itt használt rövidítés agy adott antitest-antigén kölcsönhatás disssociációs konstansára vonatkozik.
A. ,, neki el sav molekula kifejezés alatt DNS és 11 f ηοlakalakat értünk. Sgy nukleinsav molekula lehet egyszázé vagy kétszálú, de előnyösen két szálú DES-re vonatkozik,
Az „izolált nukleinsav molekula kifejezés ........ itt olyan nukleinsavaz vonatkozásában használjuk, amelyek h:ThFd-t kötő antitesteket vagy antitest részeket (például: V«, VI, ODRI) kódolnak — olyan nukleinsav molekulára vonatkozik, amelyben az antitest vagy antitest-részt ködeid nnkleotld szekvenciák nem tartalmaznak más antigént <— azaz nem hTRFa-t ·— kötő antitesteket vagy antitest-részeket kódol© nukleotid szekvenciákat. Ezalatt olyan szekvenciákat értünk, amelyek normái körülmények között határoljak a nukleinsavat a humán genomiális DhS-bem. Tehát, például egy találmány szerinti izolált nukleinsav, amely egy anti-TdFb antitest VH szakaszát kódolja, nem tartalmaz más olyan szekvenciákat, amelyek nem a TNFa~t, hanem más antigéneket kötő VE szakaszokat kódolnak.
A „vektor kifejezés: egy olyan nukleinsav molekulára vonatkozik, amely egy másik nukleinsavat — amelyhez hozzákötötték ....... képes transzportálni. Az egyik vektor típus a „plazmád, amely egy olyan köralakú kétszálú DÚS huroknak felel meg, amelybe további DhS szegmentumok ligáihatók. Egy másik típusú vektor a virális vektor, ahol a virális genomba további DKS szegmentumok ligáihatók. Bizonyos vektorok abban a gazdasejtben, amelybe bevezették, autonóm módon replikáiódnak (például a bakteriális vektorok, amelyek bakteriális replikáciős origót tartalmaznak és az episzőmálís emlős vektorok).. Más vektorok (például a nem episzómália vektorok) a gazdasejt genomjáfaa integrálhatok a gazdasejtbe való bevezetésükkor és ezáltal a gazda gencmmal együtt replikái ódnak.. Ezenfelül bizonyos vektorok azoknak a géneknek az expresszióját tudják irányítani, amelyekhez működőképes módon kapcsolódnak, Az ilyen vektorokát „rekombináns expresszíós vektorok-nak (vagy egyszerűen „expresszibe vektorök-nak) nevezzük. A re kombi nán.s nyu technikákban általában használatos expresszíós vektorok gyakran plazmidok. Ebben a leírásban a „plazmád és „vektor megjelölést egymással felcserélve használhatjuk, minthogy a plazmád a vektor legáltalánosabban használt formája. A találmányban azonban más expresszíós formák is szerepelnek, Így virális vektorok is (például: replikációjuk vonatkozásában hiányos^ funkciójú re éröv írások, adenovi rusok és adeno~asszociált vírusok), amelyek azonos funkciókat töltenek be.
é „rekomblnáns gazdasejt (vagy egyszerűen „gazdasejt) Kifejezés használatával egy olyan sejtre kívánunk utalni, amelybe egy rekombináns expresszíós vektort vezettünk be. Magától értetődik, hogy ezek a kifejezések nemcsak a. konkrét szóba.n.f orgó sejtre, hanem egy ilyen sejt azaporulatára is vonatkoznak. Minthegy a következő generációkban előfordulhatnak bizonyos módosulások, akár mutáció, akár környezeti befolyások követ kéziében, nem biztos, hogy a. szaporulat ténylegesen azonos a szülői sejttel, de még mindig a „gazdasejt fogai orr körébe tartozónak tekintjük.
A találmány számos szempontját részletesen ismertetjük a következő al téi etetekben.
I. Humán TNFcmt kötő humán antitestek
A találmányban alkalmazott Izolált humán antitestek vagy ezek antigén-kötő részei a humán TMFa-hoz magas affinitással kötődnek, továbbá alacsony disszocíációs sebességgel és magas neutralizáló kapacitással rendelkeznek. A találmányban alkalmazott antitestek előnyösen rékoXaiuáhs, n estre 11 rá 16 humán anti-TNFa antitestek. A legelőnyösebb rekombináns centralizáló antitestnek D2E7 elnevezést adtunk es VL és VH szekvenciáit az 1A, 18', illetve 2A, 11 ábrákon mutatjuk he fa D2E7 VL szakasz aminosavszekvenciágát az 1. számú szekvenciáját az 1. számú szekvencia is bemutatja; a D2E7 VF szakasz aminőssészökvén-ráját a 2. számú szekvencia is bemutatja) . A. D2.E7 kötési tulajdonságait, Összehasonlítva a magas affinitást és alacsony disszocíációs kinetikát mutató MÁK Ili egér anti-hTNFu mAt-tel, és egy DzEl-tel rokon szekvenciája másik humán anti-hTMFa antitesttel, a 2SD4gyel, az alábbiakban foglaljuk össze.
Antitest be secX M”1 sec1 Ka M Sztöchxo- metrxa
D2E7 igül ú,8í x irs 1,91 z 105 1,00 x 10lc' 1,.2
2094 8,4 x 10·~3 4,2 0 z 10s 2, CG x 10':' 0,8
MÁK 195 F íahf )2 j Ő , X 1XS 1,90 x lő5 íjáé z ír- 1,4
A D2E7 antitest és a rokon antitestek is, nagy hatásfokkal centralizálják a hlKFa aktivitást számos in vitro és in vivő assay-vel (lásd a 4. példátj végzett meghatározás szerint. Például, ezek az antitestek neutralizáljak L929 sejteken a hTMFa
-indukált cirotoxioitásr. körülbelül 1G7 M — 10”';Ό M tartományba eső ICá'5 értékekkel (IC ~ rnhititory concentrstíon gátló konoentrácíői . A D2E7, ha mint teljes hosszúságú IgGl antitest fejeződik ki, 192$ sejteken körülbelül 1,25 z 10'’^ M IC^-nel nettrali salja a hTNFa-indukált citotoxicitást. Ezenkívül, a D2E7 megőrzi neütralizáló képességét, na az antitest Eab, Fiab'1? vagy scFv fragmentum formában fejeződik ki. A D2E7 a TEFa-indukált céllezárás aktiválást is gátolja, amelyet az ELAM-1 HCVÉC-en való hCNFa-indukál r. expressziója segítségével (ICzc :::; körülbelül 1,35 x ló~i<: M) mérünk és gátolja a hTNFa kötődését az v-937 sejteken lévő hTNFa receporokhoz (ICjű körülbelül 1,5 3 x líT1'' Ej . Ez utóbbi esetben a D2E7 a hTNEa-nak mind a ρ55, mind a p7 5 hTNEa receptorokhoz való kötődését gátolja. Az antitest gátolja továbbá a hTNFd-ínőnkéit lehalitást in vívó egerekben (Főző -
ez fékeivé dósa hatásos dós iaj,: (gá fi - sodorna1ial se 11.
leukocyte adhesion col esnie; HUVEC - h urna n umb11ica1 vein
endothallal teli;.
A D2E7 kötő spéciflei fását tekintve. ez az antitest a humán
TNFa különböző formáihoz, így az oldható hTNFa-hoz, transzmembrán hTNEa-hoz és a oeliuláris receptorokhoz kötött hTNFa-hoz is kötődik. A D2E7 nen· kötődik specifikusan más cítoklnekhez, azaz ham kötődik a következőkhöz: .1 imfotoxiη (ΤΝΕβ; f it-lu, IL-Ιβ, II2, IL-4, 1L--6, 11-8, IFNv és ΤόΕβ {IL - interleukin; IFN interfe.....ron; IGE ~ transzformáló növekedési faktor). A D2E7 azonban más fajokból származó tumor nekrőzis faktorokkal keresztreagá1. Például: az antitest legalább őt főemlős IN Fajának (csimpánz, pávián, selyemmaj o.m, közönséges makéké és rhesus majom) aktivitását neutralizálja közel azonos IC 5^ értékkel, mint a hTNFd neutralizáclós értéke kiásó a 4. példa E. alfa jezerét; , A 02E7 az: egér lüFn. aktivitását is nestzalisalja, bár körülbelül ezerszer kézé ebbe eredményesen, mint a humán TNFa-ét (lásd a 4 . példa E. alfaj ecetét) . A D2E7 a kutya és a sertés TFEa-hoz is kötődik.
A találmányban alkalmazhatjuk a DlE7 antitesteket és antitest részeket, a DlEl-tel rokon antitesteket és antitest részeket., és más olyan humán antitesteket és antitest részeket, amelyek a D2E7~tel azonos aulajsorságokká 1 rendelkeznek, ilyen a ηΤΝΕα-ncz való kötődés erős affinitással és alacsony disszouiáciős kinetikával és magas neutralizácios kapaoifással. A találmány szerint alkalmazott izolált humán antitest vagy antigénkötő része a humán TNl'a-tól 1 x 10 M, vagy ennél kisebb K·· értékkel disszociál, Ko.ff sebességi állandója 1 x 1(T“ sec: vagy kisebb — mindkét értéket felületi plazmon rezonaneiával határoztuk meg -...... és a humán TEFa citotoxicifását standard in vitro LF29 assay-ben I z 10; M vagy kisebb IC5Ü mellett neutral izálja. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része a humán T.0Fa-tél Í0.íi; - 5 x 10* sec* vagy kisebb sebességgel bomlik fel. és meg előnyös ebben K;:i·;·· - 1 x 10': sec”* vagy kisebb sebességgel. Előnyösebb, ha. az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része a humán TEFa oitotoxicitást egy standard in vitro 1029 assay-ben IC5C « 1 x: 10”!J H vagy kisebb érték mellett, meg előnyösebben IC§ö: ~ 1 x lő* M vagy kisebb érték mellett és igen előnyösen IC^ö - 5 x .10~iV M vagy kisebb érték mellett neutráliséija. Egy előnyös alkalmazás esetében ®z antitest egy izolált humán rekombináns antitest vagy ennek antigén-kötő része. égy másik előnyős megvalósításban az antitest a TRFá-indukált telinláris aktiválódást is neutráliséi ja, amelyet standard in vízre assayben határozunk meg; amikor is harsán köldökvena endot eliális sejteken (HUvEC - humán umbílírai vein éndötbelial oellj a TNFaindukált E1AM-1 (endothelial coll leuoocyte adhasson molecule-lj expressz it! j á t vizsgál j ak.
A K., és Kcí£ meghatározására szolgáló felületi plazmán rezonancia analízist az 1, példában leírtak szerint végezhetjük el> Az IC«g meghatározására szolgáló sztandard in vízre 1529 assay-t a 4. példa A. fejezetében írtuk le. A 4. példa C. fejezete egy olyan, standard in vízre assay-t ír le, amely az ELAM-1 humán köldökvéna endoteliális sejteken való ídFa-rndukált kifejeződését méri. Az előbbiekben említett kinetikának és centralizációs kritériumoknak például a következő rekombináns humán antitestek felelnek reg. illetve előreláthatóan meg fognak felelni: [VH/VL] párok, amelyeknek a szekvenciáit az 1A. ÍB, 2A és 2B ábrák mutatják be (lásd a 2.f 3. és 4. példát is a kinetikai és neutralizádós analízisek vonatkozásában}: 7D2E7 VH/D2E7 VL};
[HD2'E7 + ,A1/D2E7 pej. y:iu2E7sÍA2/ó2E7^ Vaj; [Ηό2:Ε7*. A3/V2E7db]·;
[Hb2E7Í.A4:/Ö2E7 W ; }HD2a7Ó,B/®O VIJ; (HD2E7'7 AODzOWd [BD2E7\A7/D2E7 VI.] ; (HD2E7t.Au/D2E7 VL] ; í HD2E7 A A5/D2F7Vb] ;
[D2E7 VH/LD2E7AA1 ] ; (D2E7 VH/LD2E7 7. A4 1 ; (D2E7 W/LD2£7t.A5] ;
fD2E7 VH/LD2E7+. A7 ] ; (D2E7 VR/LD2E7.A® ; (HD2E7. A9/1D2E?Ó Alj ;
[VH1-D2/LQE7J ; (VH1-D2.H/LOE7.7}; Í.W1-D2.7/10E7A] ; ; VBÍ“D2.d/LűE7 . A] ;
lVHI-DÍ/ÜP 312j és [3C-H2/LOÉ7].
A szakterületen jól ismert; hogy az antitest nehéz lánc és könnyű lánc CDR3- domenjei fontos szerepet játszanak egy antigénnel szembeni soecifitatásébanfaliinitásában. Ennek megfelelően egy másik szempont szerint a találmányban olyan humán antitesteket alkalmazunk; amelyek alacsony disszociációé kinetikával rendelkeznek a. hTNFa-val való asszociáció tekintetében ás olyan könnyű és nehéz lánc CDR3 domén-sket tartalmaznak; amelyek struktúrálisan azonosak vagy rokonságban vannak a D2E7 CDR3 doménekkel. dint a 3. példában bemutatjuk; a D2E? V‘L CDR3 9. pozícióját elfoglalhatja egy Alá vagy Thr csoport anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a Koi;f értéket. Ennélfogva a D2E'7 VI CDR3 számára általánosan elfogadott motívum amlnosavszekvenciája a
következő: Q - R - Y -.: b-E-l-A -P-Ι- :)T/A) (3. számú szekvenciaj. Ezen-
kívül a D2E7 VH Cl 3R3 12. pozícióját Tyr vagy Asn csoport foglal-
ha. t j a el a n é 1 k ú 1, hogy lényegesen befolyásolná a KGíi- értéket.
Ennek megfelelóén a D2E7 VH €DR3-ra a. V-S-Y-E-5-T-A-S-S-L-D-?Υ/Ν)
iá.- száma szekvencia) aminosavszekvencla az általánosan elfogadott motívum. Ezenfelül, mint a 2. példában bemutatjuk; a D2.E? nehéz és könnyű láncok CER3 doméje elviseli, hogy egyetlen alanin csoporttal szubsztituáljak ia Vb CöR3~ban ez 1., 4., 5.,
7. vagy 8. pozícióban és a VH CoRS-ban a 2., 3.., 4., 5., .61, S.,
9., 70. vagy 11. pozícióban) anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a KGfí értéket. A gyakorlattal rendelkező szakember ezenkívül azzal is tisztában van, hogy mivel a D2E7 VE és VH CöR3 dóménak elviselik az alaninnal való szubsztitúciót, végezhető volna más aminosavak szubsztitúciója is ........ főképpen konzer- vatív amznosavak szubsztitúciója a CDR3 doméneken belül úgy, hogy eközben az antitest még megtartsa alacsony sebességi állandóját. A „konzervatív aminosavval való szubsztitúció alatt itt azt értjük, hogy egy amznosavat olyan aminosavakkal helyettesitünk, amelyeknek hasonló az oldallánca. A. szakma meghatározta a hasonló oldalláncokat tartalmazó amínosayak csaladját. Izek a következők: tázikus olőallánook (például: lizín, arginin, hisztidiní, savas kémhatása oldalláncok (például: aszparaginsav, glntaminsav;, töltetlen poláris oldalláncúk [például: giiciu, aszparagin, glutamih, széria, treonin, tirozin, öíszteíré, nem poláris oldalláncok [például: alanin, valin, lesein, izoleuoin, prolin, feni1alaniu, metionln, kriptádén;, béta elágazást tartalmazó oldalláncúk (például: treonin, valin, izeIssein; és aromás oldalláncúk (például: tirozin, fetilalanin, triptofán, hisztidin}. Előnyös, ha ötnél több konzervatív amintsavval, való szubsztitúoiót nem alkalmazunk a Ö2E7 VI, es/vagy VH C0R3 doméneken balul. Még előnyösebb, ha háromnál több .konzervatív aminosavval való szabsz ti tüci&i nem alkalmazunk a D2E7 VL és/vagy VH CDR3 domenekben, Ezenfelül nem szabad konzervatív ami no savat s.zubaztítuálni azokban az a mi sósav póz isi ókban, amelyek kritikusak a hlNFa-hoz való kötődés szempontjából, Hint a
3. példában kimutatjuh, ügy tűnik, hogy a D2E7 VL GDR3 2. ás 5. pozíciói és a D2E7 VH CDR.3 1. és 7. pozíciói kritikusak a höNFa-val való kölcsönhatás szempontjából, tehát előnyösen nem: végzünk szubsztitúciókat ezekben a pozíciókban (bár, mint fent leírtuk, az alanin szubsztitúciója a E2E7 VL CLR3 5. pozíciójában elfogadható;,
A találmányban alkalmazható izolált humán antitest vagy ennek antigén-kötő része előnyösen az alábbi tulajdonságokkal ren * *·.;* délkézik:
aj a humán THFa-tcl Ιχΐΰ3 sec'1 értékkel és IxlCT'' M vagy ennél kisebb K- értékkel disszociált mindkettőt felületi plazmcn rezonanciával meghatározva;
bj könnyű lánc CDR3 dcménje a 3. számú szekvencia által leirt aminosavszekvencíát tartalmazza, vagy egy módosított
3, számú szekvenciát, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz az 1., 4., 5>, 7. vagy 8, pozícióban, vagy
1-5 konzervatív aminosav szubsztitúciót az 1., 3., 4.,
8., 7., 8... és/vagy 7. pozícióban;
c; nehéz lánc CDR3 doménje a 4. számú szekvencia által leírt aminosavszekveneiát tartalmazza vagy egy módosított 4.. számú szekvenciát, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz a 2., 3., 4., 5., 6», 8., lón vagy 11. pozícióban, vagy 1-5 konzervatív amlnosav szubsztitúoiöt a 2.,
3., 4., 5., 1, 8., lü., 11. és /vagy 12. pozícióban..
Előnyösebb, ha az antitest vagy ennek antigén-kötő része a humán IbFa-tól 3 x 10~4 ηοο’1 sebességi állandó mellett dísszociál. léc előnyösebb, ha az antitest, vagy ennek antigén-kötő része a humán TüFa-tól 1 x 104 .seb1 sebességi állandó me11e 11 d i a szón1á1,
A találmány egy következő kiviteli alakjában olyan izolált humán antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzak., amelyben a könnyű lánc variábilis szakasz íLCvsj olyan Cili dómért tartalmaz, amelynek az aminosavstekveuciáját a 3. számú szekvencia írja le vagy egy olyan. módosított 3. számú szekvencia, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz az 1., 4.,
Β
5., 7. vagy 8. ροζleióvan, és amelyben a nehéz lánc variábilis szakasz (MCVR) olyan CDR3 bement tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját a 4·. számú szekvencia árja le, vagy egy olyan módosított 4. számú szekvencia, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz a 2., 3., 4,, 5., ú., 8., 9.f 10. vagy 11, pozícióban. Előnyösen az LCvR agy olyan CDR2 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját az 5. számú szekvencia (azaz: a ű2E7 VL CLR2) írja le és a HC'VR egy olyan CDR2 dornént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját a 6. számé szekvencia, (azaz a D2E7 Vü CDR2) írja le. Még előnyösebb, ha az LCVR €DBÍ dóménja a 7. számú szekvencia szerinti (azaz a D2E7 VL CDRlj aminosavszekvencíát tartalmazza és ha a HCVR ODRI dóménje a 8. számú szekvencia szerinti (azaz a D2E7 VB CílRl) aminosavszekvéneiét tartalmazza, A. VL framework szakaszok előnyösen a Vi;l humán csíravonal családból származnak, előnyösebben az A2C humán csirámnál Vk génből és legelőnyösebben az 1A és 1B ábrákon j.ázható B2E7 VL framevork szekvenciákból. A VH framework szakaszok előnyösen a. V33 humán csiravonal családból, származnak, előnyösebben a DP-31 humán csirámnál V8 génből és legelőnyösebben a 2A és 2B ábrákon látható D.2B7 VH framework szekvenciákból.
A találmány egy még további kiviteli alakjában olyan izolált barnái; antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzuk, amelyben a könnyű lánc variábilis szakasza (LCVR) az 1, számú szekvencia szerinti ar in: m.vmo\vmrm·. .a „ L','~ m :«j t a mázzá, és a nehéz lánc variábilis szakasz (mCVR) a 2, számú szekvencia szerinti aminosavszekveneíát (azaz a D2E7 VH) tartalmazza . Bizonyos kiviteli formákban az antitest agy olyan nehéz lánc konstans szakaszt tartalmaz, mint egy IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, Ig£, laE, Igb vagy IgD konstans szakasz. A nehéz lánc konstans szakasz előnyösen egy IgGl nehéz lánc konstans szakasz vagy egy IgG4 nehéz lánc konstans szakasz. Ezenkívül az antitest olyan könnyű lánc konstans szakaszt tartalmazhat, amely vagy egy kapna könnyű lánc konstans szakasz vagy egy lambda könnye láng: konstans szakasz. Az antitest előnyösen kappa könnyű lánc kcnstana szakaszt tartalmaz. Az antitest rész például vagy egy láb fragmentum vagy egy egyláncú Fv fragmentum lehet.
A találmány további kiviteli formáiban olyan izolált humán antitestet vagy ennek antlgén-khtő formáját alkalmazzuk, amelyben D2E7-tel rokon VL és VE CDÜ3 bőmének vannak. Itt például olyan antitestekről vagy ezek antigén-kötő részeiről van sző, amelyekben a könnyű lánc variábilis szakaszának ÍLCV'RÚ CDR3 dóménje olyan aminosavszekvenoiát tartalmaz, amelyet a következő csoportból választunk ki: 3. számú szekvencia, 11. számú szekvencia, 12. számú szekvencia, 13. számú szekvencia, 14. számú szekvencia, 15. számú szekvencia, 16. számú szekvencia, 17, számú szekvencia, IS. számú szekvencia, 19. számú szekvencia, 20. számú snekvenoia, 21. számú szekvencia, 22. számú szekvencia,
23. számú szekvencia, 24. számú szekvencia, 25. számú szekvencia, 25. számú szekvencia, vagy amelyekben a nehéz lánc variábilis szakaszának (üCVRj 222.3 dcménje olyan amincsavszekvenciát tartalmaz, amelyet a következő csoportból választunk ki: í. seámú szekvencia, 27. számú szekvencia, 28. számú szekvencia, 29, számú szekvencia, 30. számú szekvencia, 31. számú szekvencia,
32. számú szekvencia, 33. számú szekvencia, 34, számú szekvencia vagy 35. számú szekvencia.
Egy meg további kiviteli formában olyan rekombináns humán antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzuk, amely a humán TdFa-t neutráliséija, de a humán TdFp-t nem. Az antitest vagy ennek antigén-kőtő része előnyösen a csimpánz TE Faakti vitását is neutrálisaija és még legalább egy további főemlős TFFo.-t, amely lehet pávián WFa, selyemma j <w TNFa, közönséges makiké TkFrx, vagy rácsos majom: Téten ás antitest vagy antigén-
kötő része előnyösen humán,· os impánz és /vagy egy további fősmiős
TbFu-t neutralizál eg :y standard in vitae i.929 1 assay-ben.. i x irs
M vagy kisebb IC5S mellett, előnyösebben 1 x ICT3 d vagy kisebb,
még előnyösebben 5 x ιο~° i 4 vagy kisebb 1¾ me1lett. Egy más1k
kiviteli alakban az antitest a kutya TKFa aktivitást is neutralizálja, előnyösen egy standard in vidra 1.929 assa.y-ben I x ΚΓ' M vagy kisebb I-Cs.§ mellett, előnyösebben 1 x 10* M vagy kisebb, még előnyösebben 5 z 10 M vagy kisebb IC.§!0 mellett. Egy másik kiviteli alakban az antitest a sertés TŐFcx aktivitást is neutráliséi ja, előnyösen 1 x ΊΟ3 M vagy kisebb ICS-O. mellett, előnyösebben 1 x ΊΟ0· M vagy kisebb és még előnyösebben 5 x 10' M vagy kisebb IC&3 mellett. Egy további kiviteli alakban az antitest az egér TNFo. akti vi tást is nesz ral inál j a, előnyösen 1 x ΙΟ4 M vagy kisebb ICso mellett, előnyösebben 1 x ΙΟ3 M vagy kisebb és még előnyösebben 5 x y vagy kisebb IC—nel.
találmányban felhasznált antitestnek vagy antitest résznek előállíthatjuk a származékait, vagy az antitestet, vagy antitest-részt hozzáköthetjük más funkciós molekulához {például más geptidhez vagy proteinhez) . Ennek megfelelőért a találmány sze3ν rinti antitestek és antitest-részek magukba foglalják az itt leírt humán anti-Th'Fd antitestek származékait és más módon módosított formáit, beleértve az immunadhéziós molekulákat is. Például;: egy találmány szerinti, antitest vagy antitest-rész működőképesen kapcsolódhat (kémiai kötéssel, genetikai fúriával, nem-kovalens asszociációval vagy másként} egy vagy több más molekuláris entitáshoz, ilyen egy másik antitest (például egy bíspecifikus antitest vagy diatest}, egy detektálható anyag, egy oitotoxikus anyag, egy gyógyszer hatóanyag és/vagy egy olyan, protein vagy pepiid, amely közvetítheti, az antitest vagy antitest-rész egy másik molekulával való asszociációját (ilyen egy sztreptávidin mag-szakasz vagy egy polihiszcídin. toldalék} .
az antitest származékok egyik típusát két vagy több (azonos típusa vagy különböző típusú? antitest keresatkötésével állítják elő (például bispecífikus antitestek előállítása céljából} .· Ke. 3 linkerek lehetnek olyan hever obifunkciós linkerek, amelyek két határozottan eltérő, olyan reaktív csoportot tartalmaznak, amelyeket megfelelő betét-szakasz (spacer; példáulr m-maleimido-benzoil-N-hidroxi-szukcinimid észter) választ el. egymástól, vagy homcbi funkciós linkerek (például: dlszukcinimtdil ·· szuberát; . Ilyen linketek a Píerce Chemical Company-tól (Rookford, 11.) beszerezhetők.
Egy tel a Leányban felhasznált antitest vagy antitest-rész módosításához használható kimutatható reagensek közé tartoznak a fluoreszcens vegyeletek. Ilyen kimutatható fluoreszcens reagens például a fluoreszoein., f luoreszcein-izotio-cianát, rodamin, 5-dimet il“am.irí-l~naf taiin-szulfonil-klörid, fikoari trón és hasonlók. Egy antitestet detektálható enzimekkel is módosíthatunk. Ilyenek például ax alkalikus foszfatáz, torma-peroxidáz, glükóz oxidáz és hasonlói. Eqy antitestnek egy kiműtatható enzimmel alkotott származékát további olyan reagensek hozzáadásával mutatjuk ki, amelyeket az enzim kimutatható reakciótérmék előállítására használ. Például: ha a kimutatható anyag torma-peroxldáz, a hidzogén-peroxid és diamino-benzidin hozzáadása olyan színes reakciót érmékét eredményez, ami kimutatható. Egy antitest biotinnal is módosítható, amely az avidin vagy sztreptavidí.n kötődés inairekt mérésével detektálható.
IX. Antitestek kifejezése
Egy találmányban alkalmazott antitestet vagy antitest-részt előállíthatunk immunglobulin könnyű és nehéz lán.o gének gazdasejtben való rekombináns kifejezésével. annak érdekében, hogy egy antitestet rekomolnáns technikával fejezzünk ki, egy gazdasejtet egy vagy több olyan rekomolnáns expressziéi; vektorral, amelyek az antitest immunglobulin könnyű és nehéz, láncokat kódoló DNS fragmentumokat hordozzák, olyan módon transzfa uralunk, hogy a könnyű és nehéz láncok a gazdasejtben kifejeződjenek. Előnyös, ha a kifejeződött láncok abba a táptalajba szekretálődmak, amelyben a gazdasejtehet tenyésztjük és amelyből az antitesteket kinyerhetjük. Standard rekombináns metodikákat használunk az antitest nehéz és könnyű lánc gének izolálásához, e gének rékombi-náns expressziós vektorokba való beépítéséhez, a vektorok gazdasejtekbe való bevezetéséhez. A metodikák leírása megtalálható a kővetkező kiadványokban: Sambrook, ürítsen és Maniatis [szerű.), Molecular Cloning: A. Laboratory Manual, 2.
kiadás, Cöld· Spring Harbor, df. (1989); dd Ausubel et al., (szart.J Curzent Protocols in Md.ecd.ar Hzd.ogy, Greene rubllshing Assooiatss (1989); 4,815,39? számú amerikai egyesült áilamokbel szabadalmi leírás: (B-oss et al..).
A 221 antitest vagy egy D2E7-tel rokon antitest kifejezéséhez 'v %. e s '' c z ' s. i j s u_ >· d ^s- K a. \K s '
ÖND fragmentumokat izoláljuk. ezeket a DNS-eket polimeráz láncreakció (PCR) használatával a osíravonal könnyű és nehéz lánc variábilis szekvenciák sokszorozásávul és módosításával kaphatjuk. meg. A humán nehéz és könnyű lánc variábilis szakasz gének csíravonal DNS szekvenciái ismertek ezen a szakterületen [lásd p é Idául: „Vesse h ama u csira von. a 1 s z e k v én e i a a d a: t b á z i st o v á bb á : E.AlKabat et al., Seguehces of Proteins of Immuhologioal Interest, 5. kiadás, ö. S. Dauer'tment of ilealth and Humán Servioes; NIH Publlcation No. 91-3242 (1991) ; I.M.Tomlinson et al., „The
Repertoáré of Humán Gerdine Sequsnces Reved s aoout Fitty Grocps of vh Segíteni s eith Diffezent Hypervariable Loops, J.Mcl. Híd., 227, 776-798 (1992); J. E.. n.. Cox et al., „A Sirectory cf
Humán Germline V,. Segments leved.s a. Strong Blas in their Usage, Eur .J. Immunoi. , 24, 22 7-239 (1924); az ed... tett kiadványok tartalmát referenciának tekintjük). A «2Ε7, vagy egy DzEü-tel rokon antitest nehéz lánc: variábilis szakaszát kódolő egy DNS fragmentum izolálása céljából, a humán csiravonal V®, gének Vd családjának egy tagját standard PCR-rd sokszorozzuk. A legelőnyösebb:, ha a ÖP-31 V;í csiravond szekvenciát sokszorozzuk:. A D2E7, vagy egy D2E7-tel rokon antitest könnyű lánc variábilis szakaszát, kó doló egy d fragmentum izolálása céljából a humán csér«vonal VL gének VKI családjának egy tagját standard PCa-re'l sokszorozzuk. A legelőnyösebb, ha az A20 VL cszravonal szekvenciát sokszorozzuk„ A DP-31 csiravonal VH és A2& csiravonal VL szekvenciák sokszoros zásához alkalmas P€R prímeteket a fent említett kiadványokban szereplő nukleotid szekvenciák alapján tervezhetjük meg, standard módszerek használatával..
Mihelyt megkaptuk a csíravonal V.H és VL f raguén tanokat, ezeket a szekvenciákat úgy mutagenizálhatjuk, hogy azok az itt leírt D2E7 vagy D2E7-tel rokon aminosavszekvencíákat kódoljak. A csíra vonal VH és VL DNS szekvenciák által kódolt aminosavszekvenoiákat először összehasonlítjuk a D2E7 vagy D2E7-tel rokon VE és VL amiuosavszekvenciákkal, hogy azonosítsuk a DzEl-ben vagy a D2E7-tel rokon szekvenciában azokat az aminosavakat, amelyek különböznek a csíra verd tói. Ezután a csiravonal DNS szekvenciák megfelelt nukleotidja.it úgy mutagenitáljuk, hogy a mutált csíravonalszekvencia a D2E7 vagy a D2E7-td rokon axninosavszekvenciát. kódolja, amikori s: a genetikai kódot használjuk annak meghatározására, hogy milyen nukleotid változtatásókat kell végezni. A csiravonal szekvenciák mctaqenizálásához standard módszereket használónk, ilyen a ECE-közvetített mutagenezis (Itt a mutált nukleotidokat olyan .módon visszük be a PCP printerekbe, hogy a PCR termék már tartalmazza a mutációkat} vagy a helyre~irányulo mutagenezis.
Ezenkívül meg kell jegyeznünk, hegy ha a PCR amp11fikadóval kapott „csíravonal. szekvenciák olyan avíucsavakar kódolnak a franework szakaszokban, amelyek különböznek a valódi csíravonal konfigurációtól (azaz: a sokszorozott szekvenciában a valódi csíravonal szekvenciához képest előforduló különbségeket például szomatikus mutáció eredményezi) , kívánatos lehet, hogy visszaváltoztassuk ezeket az amincsav különbségeket az eredeti csíravonal szekvenciákra (azaz a framexork csoportok „visszamutálása a csixavonal konfigurációra).
Mihelyt megkaptuk a D2E7 vagy D2E7-tel rokon VH és VI szegmentumokat kódoló DNS f ragmeritumokat Γ& csiravonal. VH és VI, gének sokszorozásóval és outagénizéIásavai, mint fent leírtuk), ezeket a DNS fragmentumokat tovább manipulálhatjuk standard rekomhinána DNS te'nn_ückal, például: a variábilis szakasz géneket teljes hosszúságú antitest láno génekké. Sah fragmentum génekké vagy soFv génekké konvertálhatjuk. Ezekben a manipulációkban a VL- vagy Vb-kódoló DNS fragmentumot működőképesen egy más proteint — például antitest konstans szakaszt vagy egy flexibilis linkért kódoló más DNS fragmentumhox kapcsoljuk. A „működőképesen összekapcsolt kifejezés — ahogy ebben a kontextusban használjuk ·— azt jelenti, hogy a két DNS fragmentumot úgy kapcsoljuk össze, hogy a két DNS fragmentum áltál kódolt aminosavszekvenciák működőképesek maradjanak.
A VH szakaszt: kódoló izolált DNS-t teljes hosszúságú nehéz lánc génné változtathatjuk azáltal, hogy a VH-kcuoló DNS-t egy másik olyan DNS molekulához kapcsoljuk — működőképes módon amely nehéz lánc konstans szakaszokat (CH1, CH2 és CH31 kódol. A humán nehéz lánc konstans szakaszok ismertek a szakterületen [lásd például: E.A.Kábát et al. „Sequences cf Proteins cf Immunolcgicel Interest, 5. kiadás, ölS.Department cf Health and Humán Services, NIH Publieation No. 91-3242 (1991)1 és az ezen szakaszokat tartalmazó DNS f'ragmentunokát standard PCH sokszorosassal kaphatjuk meg, A nehéz lánc konstans szakasz lehet IgGL, IgGz, IgG3, lgG4, IgA, TgE., IgH vagy IgD konstans szakasz, de a legelőnyöseob egy IgGl vagy IgGl konstans szakasz. Ami a Fan fragmentu' nehéz lánc gént illeti, a VH-kődolő DhG-t egy másik olyan DNS molekulához kapcsolta j uk — működőképesen ·· amely csak a nehéz lánc CH1 konstans szakaszt kódolja.
A VL szakaszt kódoló izolált DÚS-t teljes hosszúságú könnyé lánc génné (valamint Fab könnye lánc génné; konvertálhatjuk azáltal, hogy ha a FNS-t nzc Λ egy másik h .Οχ i s. x 5 \V\s-'l'i\ v χ' , .m x \ a CL .könnyű, lánc konstans szakaszt kódolja. A humán könnyű lánc konstans szakasz gének ismertek ezen a szakterületem [lásd például: E.A.Kábát et ai , „Sequences of Proteint of immuno légi cal Interest'·, 3. kiásás, ü.S. Department of Healrh and. Humán Sarvlces, NIH Publi.cation No. 91-3142 (1991; (i és az ezen szakaszokat tartalmazó: DNS fragmentumokat standard PCK söfesicrozásával kaphatjuk, meg. A könnyű lánc konstans szakasz lehet kappa vagy 1amoda konstans szakasz, de legelőnyösebb egy kappa konstans szakasz.
Egy scFv gén létrehozása céljából a VH- és VL-kódcló DNS fragmentumokat működőképes módon hozzákapcsoljuk egy flexibilis linkért kódoló másik fragmentumhoz — például (Gly4-Soz; 3 adassa vakut kódoló szekvenciához —< mégpedig úgy, hogy a Vfí és VL szekvenciák folytonos egyláncú proteinként —a flexibilis linkezrei összekötött VL és Vh szakaszokkal —- fejeződhessenek ki [lásd például: Bird et al., Science, 2 42, 423-426 [1938) ; Has tón. et el., Proc. Háti. Acad. Sci. , 83, 5ö7:9~5 8ő3 (1988? ; McCafforzy et al·., Natúré, 345 , 552-554 Γ1990;].
A találmányban felhasznált antitestek vagy antitest-részek kifejezése végett a részleges vagy teljes hossz óságé könnyű: és nehéz láncokat kódoló EdS-eket — amelyeket a fentiekben leírt módon kaptunk — expressziős vektorokba építjük be úgy, hogy a gének működőképesen kapcsolódjanak transzkripciós és transzlációs szabályozó szekvenciákhoz. Ebben a kontextusban a „működőképesen esszéikapcsolt kifejezéssel azt kívánjuk jelezni, hogy egy antitest gént sigy ligáinak a vektorba, hogy a transzkripciós és transzlációs szabályozó szekvenciák a vektoron belül funkciójuknak megfelelően működjenek, azaz irányítsák az antitest gén transzkripcióját és transzlációját. Az ezpressziós vektort és az expressziós szabályozó szekvenciákat ügy választjuk meg, hogy a használt gázdasejttéi kompatibilisek legyenek. Az antitest kénynyű. lánc gént és aiz antitest nehéz lánc gént külön vektorokba is beépíthetjük, de általánosabban ügy járunk el, hogy mindkét gént ugyanabba az expressziós vektorba építjük be. Az antitest géneket standard módszerekkel (például· az antitest génen és a vektoron lévő komplementer restrikciós helyek Uralásával, vagy, ha nincsenek restrikciós helyek, a tompa végek ligálasával) epirjük be az expressziós vektorba. A D2E7 vagy a D2E7~tel rokon könnyű vagy nehéz lánc szekvenciák beépítését megelőzően az expressoiós vektor már tartalmazhat antitest konstans szakasz szekvenciákat. Például: a D2E7 vagy a D2E7-tel rokon V.H és VE szekvenciák teljes hosszúságú antitest génekké való konvertálásának egyik megoldása abból áll, hogy a nehéz lánc: konstans, illetve könnyű lánc konstans szakaszokat már kódoló expressziós vektorokba
FA építjük be őket úgy, hogy a VH szegmentum működőképesen kapcsolöd jen a CH szegmentum(ok)hoz a vektoron belül és a VI szegmentum működőképesen kapcsolódjon a CL szegmentumhoz a vektoron belül. Egy további, vagy alternatív megoldás szerint a rekcmbináns expresszién vektor egy olyan szignál papáidét kódolhat, amely elősegíti az antitest lánc gazdasejtbői való szekréciójáé. Az antitest lánc gént a vektorba úgy klónozhatjuk be, hogy a szignál peptid működőképesen kapcsolódjék az antitest lánc gén aminoterminális végéhez. A szignál peptid lehet egy immunglobulin szignál peptid vagy egy heterológ szignál peptid (azaz egy nem immunglobulin proteinből származó szignál peptid)
Az itt alkalmazott rskombináns expresszién vektoruk az antitest lánc géneken kívül olyan szabályozó szekvenciákat hordoznak, amelyek az antitest lánc gének expressziéját irányir.ják. A „szabályozó szekvencia kifejezés alatt promotereket, enh:ancete-ket és más olyan expresszíó irányító· elemeket (például: pcliadeniláciős szignál) értünk, amelyek át antitest lánc gének transzkripcióját vagy transzlációját irányítják. Ilyen szabályozó szekvenciákat ír le például a következő kiadány: éneddel: Gene Ezyressíou Technology, Methods in Enzymclogy, ISI, Academlc Éress, San Elege, CA. (1910). A szakterületen jártas szakemberek tudják, hogy 3£ expresszios vektor tervezése, beleértve a szabályozó szekvenciák, kiválasztását, olyan faktoroktól függhet, mint a transzformálandó gazda sejt kiválasztása, a kívánt protein expresszlójának szintje, stb. Emlős gazdasejtben történő expresszióhoz előnyös szabályozó szekvenciák közé sorolhatók az olyan vitális elemek, amelyek earlős sejtekben a magas színtű pro— teán expressziét vezérük, ilyenek a citomegalovirus (CMV) (mint a CMV prcmotrr/enhencer} , s Simian vírus 40 (SVáö) (minő az OVd promcierdnhancer), adencvírus (például az adenovlrns fő késői pxomder (AdMLPj] és a pdyoma eredetű prcmoterek és/vagy enhancerek.. A virális szabályozó elemeknek és ezek szekvenciáinak további leírását lásd: 5,168,862 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Stínskiü 4,510,245 (Bell et áld és 4,968,615 (Schaffner et al. ) száma amerikai egyesült államokbeli s z aba dal mi leírás.
A találmány szerinti vektorok az antitest lánc géneken és szabályozó szekvenciákon kívül további szekvenciákat tartalmazhatnak, például olyan szekvenciákat, amelyek a vekrer replikáciogát szabályozzák a gazdasejtben (például a rsplikációs cri< κ „ e. ü n . m m i pm ü . ' c z z * m r= v\rr se segítik azoknak a gazdasejteknek a szelektálását, amelyekbe a vektort bevezettük (lásd példáül a üü-ü; 4,634,665 és 5,179,817 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat, ezek mind Axel és munkatársaitól származnak) . Például a szelekciós markor gén rendszerint gyógyszerek — Ilyenek a G418, higxomicin vagy metotrexát — elleni rezisztenciát kölcsönöz annak a gazdasejtnek, amelybe a vektort bevezettük. Előnyös szelekciós markor gén például, a dihidrofolát-reduktáz (DHFA) gén (dhfx~ gazda sejtekben való felhasználáshoz: metotrexát szelekoió/ampíd lkadé esetén) és: a neo gén (Gála szelekcióhoz:; .
Könnyű és nehéz láncok expressziéja végett a könnyű és nehéz láncokat kódoló expresszíós vektort, (vektorokat} egy gazdasejtbe transzfektáljuk standard technikákkal. A „transzaekció kifejezés különböző formái Gl.y&n technikák széles változatát foglalják magukba, amelyeket általánosan használnak szögén DNS bevezetésére egy prckarlóta vagy eukariőta gazdasejtbe. Ilyen technika például az elektronőrásió, kalcium-foszt átcs preoipitáciő, DEAE- dext rá nos transzé ekéi© és hasonlók. Bár a találmány szerinti, antitesteket elméletileg lehetséges akár prckarióta, akár eukarióta gazdasejtekben: kifejezni, mégis a legelőnyösebbnek tartjuk, ha az antitesteket eukarióta sejtekben és leginkább emlős gazdasejbekben fejezzük ki, mivel valószínűbb, hogy a prokatiéta sejtekkel ellentétben az eukarióta sejtek és főképpen az emlős sejtek tudják összeszerelni és saekretálni a megfelelően fal gombolyedott és immunológiailag aktív antitestet. Közölték, hogy az antitest gének pröka.rióta expressziója képtelen magas kihozataliéi aktív antitest termelésére (H.A.. Basa, C.R.Eood, Immunology Today, 6, 11-13 (1985)].
A találmány szerinti rekombináms antitestek kifejezéséhez előnyös emlős gazdasejtek köze tartoznak a kínai hörcsög petefészek (Chinese Ramster Ovary ~ ChöV sejtek (beleértve a dhfr CHO V- . ~'í ax.-., ''S Chasin, Pzoc. háti. Acad. Sói., 77,
4210-4220 (1:980 b], amelyeket DHBR szelekciós markertel használnak például R.J.Kaufmann és P.A.Sharp leírása szerint: Hol. Bioi., 159, 001-021 (19823, az NSC mielóma sejtek, COS sejtek és SP2 sejtek. Amikor antitest géneket kódoló rekcmbínáns vektorokat vezetnek be emlős gazda.sejtekbs, az antitestek termelése úgy történik, hogy a gazdasejtekét annyi ideig tenyésztik, amennyi elégséges ahhoz, hogy az antitest kifejeződjék a gazdasejtben, előnyösebben, az antitest abba a táptalajba szekretálődjék, amelyben a ál o szdas μ+ er rov^ w on^u. -r &r t'f ez i ~ is.' :
módszerek használatával nyerhetők ki a táptalajból.
A gazdasejtek arra is felhasználhatók, hogy az ép áttetsszek részeit — ilyenek a Fab fragmentumok, vagy scEv molekulák — megtermeljék. Magától értetődík, hogy a fenti eljárásban végrehajtottváltoztatások a találmány oltalmi köréhez tartoznak. Például kívánatos lehet, hogy az antitest akár könnyű láncát, akár nehéz láncát ide nem mindkettőtj kódoló ütS-sel egy gazdasejtet transzforrnál.jónk. A rekombináns ö8S technológiát arra is használhatjuk, hogy azt a könnyű láncot, vagy azt a nehéz láncot kódoló DNS részt eltávolítsák, amelyre nincs szükség a hTNFa megkötéséhez, de használhatjuk mind a könnyű, mind a nehéz láncot kódoló teljes DKS eltávolítására is, ha a hidra kötésénél e z e k r e sincs s z üks é g. A z i1ye n c sοnka DNS-ηó1 ki fejeződ ö mο1e kuIákat szinten a találmány szerinti antitesteknsk tekintjük. Ezenkívül, termelhetünk olyan bifunkciős antitesteket, amelyekben egy nehéz lánc és egy könnyű lánc a találmány szerinti antitestnek felel meg. és a másik nehéz és könnyű lánc nem a hTtFífra, hanem egy másik antigénre specifikus, ha úgy járunk el, hogy standard kémiai kötési módszerekkel egy találmány szerinti antitestet egy másik antitesthez kapcsolunk.
Egy előnyös rendszerben a találmány szerinti antitestnek, vagy antigén-kötő részének rekcmblnáns expresczíója végett mind az antitest nehéz láncot, mind az antitest könnyű láncot ködeié rekombináns expressziós vektort dhfr CHO sejtekbe vezetjük be k a 1 c í um f os z fát - k ö z v e t í t e 11 t r a n s a f e k c i ó v a 1. A r e k orab i n á n s expressziós vektorban az antitest nehéz és könnyű lánc gének ή ζ mindegyikét működőképesen kapcsoljuk össze enhancer/promoter szabályozó elemekkel {ezek például SV4G, GMV, adencvirus, stb, eredetűek lehetnek, mint egy dl euhance.r/AdMLE ptromoter szabályozó elem, vagy egy SV4 0 enhancer/AdklP promoter szabályozó elem;, hogy a gének magas színtű transzkripcióját irányítsák, A rekom-oináns ezpressziós vektor DHFR gént is tartalmaz, amely a vektorral tlanszfektált CHO sejtek szelekcióját teszi lehetővé metotrexát szelexció/amplifikáció használatával. A szelektált transzéorrnált gazdasejteket tenyészthetjük, hogy lehetővé tegyük az antitest nehéz és könnyű láncok expresszidj át, majd az antitestet kinyerjük a táptalajból. Standard molekuláris biológiai technikákat használunk a rekombináns expressziós vektor előállításához, a gazdasejtek transafektálásához, a transzformált sejtek szelekciójához, a gazdasejtek, tenyésztéséhez és az antitest tápt aia jbdű valt> el hű lőni t és a heg.
Tekintettel az előbbiekre, a továbbiakban leírjuk azokat a nukleinsav, vektor és gazdaséjt összetételeket, amelyek az antitestek és antitest részek rekombináns expressziójához használhatók. A D1E7 könnyű lánc variábilis szakaszt a 7. ábra és a 36.
szánd szekvencia mutat jn be. Az LCVR CDR1 dóménja a 70-102 nukleotidokat foglalja magába, CbR2 dóménje a 148-168 nukleotidokat foglalja. magába, CFR3 dóménje a 265-291 nukleotidokat foglalja magába. A D2E7 nehéz lánc variábilis szakaszt kódoló nukleotid szekvenciát a 3. ábra és a 37. számú szekvencia mutatja be. A HCVR CÖ-R1 doménje a 91-105 nukleotidokat foglalja magába, a CÜR2 dumánje a 148-193 nukleotidokat foglalja magába és a CDR3 doménje a 295-339 nukleotidokat foglalja magába.
·* « £
A gyakorlott szakemberek számár» magától értetődik, hogy a D2E7-tel rokon antitesteket vagy ezek részeit (például egy CER domént, mini egy CDB.3 domént) a. D2E7 LCVR-t és HCV'R-t kódoló tukleotid szekvenciákból leszármaztathatják a genetikai kód és standard molekuláris biológiai technikák alkalmazásával.
Egy kiviteli alakban a találmány olyan izolált nvkleinsavat biztosit, amely egy könnyű lánc: CCR3 dóment kódol. Ez a dómén a
3. számú szekvencia, szerinti aminosavszekvenciát, azaz a D2E7 VL
CDR3~at tartalmazza, vagy egy egyetlen alahín szubsztitúcióval — az 1., 4>, Ο., 7. vagy 8. pocié lóban — vagy 1-5 konzervatív amíncsav szubsztitúcióval — az. 1., 3., 4., 7., 8. és/vagy 5.
pozícióban — rendelkező módosított 3. számú szekvenciát tartalmaz. Ez a nukleíusav csak a CDR3 szakaszt, vagy előnyösebben, egy teljes antitest könnyű lánc variábilis szakaszt (LCVRj tud kódolni. Például: a nukleineav egy olyan LCvR-t tud kódolni, amelynek a CDR3 dóménje az 5,. számú szekvencia szerinti aminosavszekvencíác /azaz a ElEl VL CDPl-t: tartalmazza és CDR1 dóménje a 7, számú szekvencia szerinti amincsavszekvenciát (azaz a b2E7 VL ΕΓ·ΕΙ··οζ> t ?rtalmozza.
Egy másik kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavat biztosít, amely nehéz lánc CDR3 dómént kódol. Ez a dómén a
4. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH CDR3-SZ) tartalmazza, vagy egy egyetlen alanin szubsztitúcióval —
a. 2., 3., 4., 5., 8., 8., θ., 10., 11. pozícióban — vagy 1-5 konzervatív amínosav szubsztitúcióval — a 2., 3., 4., 5., 5., 8., ú<, lü.,, 11. és/vagy 12 . pozícióban — rendelkező módosított 4. számú szekvenciái tartalmaz. Ez a nukleinsav csak, a CDP3 sza kaszt, vagy előnyösebbért egy teljes ara itest nehéz lánc variábilis szakaszt (HCVR): tud kódolni. Például.: a nukleinsav egy olyan HCVR-t kódolhat, amelynek a CDR2 dóménja a 6. számú szekvencia szerinti amínosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH CDR2--t) tartalmazza és €DR1 doménje a 3. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 Vü CpRl-et.) tartalmazza,
Egy további kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukle-
insavakát biztosit, amelyek 71:E7 -tel rokon C DR 3 d ómen t kódolnak,
például amelyeknek .ú a m i no s a v s z e k v e n cl á j á t a következő csoport-
böl. választjuk ki: 3 , s z ámú szekvencia, 4 . s zamu szekvencia, 11,
s zámú szekvencia. 12. s zárná szökvéncis. 13. s z ámú szekvencia. 14.
s zamu szekvencia. 11. számú szekvencia, 16. számú szekvencia, 17 .
s zárná szekvencia. 18 . számú Svifö iúViu ΓΙΟ.'! a f 19. szárú szekvencia, .21,
számú s z a k ve η c x a, 21 . s zárni szekvencia, 21, számú szekvencia, .·\ ·Λ
s zárná szekvencia, 2 4 . számú szekvencia, 25. számú szekvencia, 26.
számú szekvencia, — < . számú szekvencia, 28 . számú szekvencia, 29.
számú szekvencia, 30. számú szekvencia, 11, számú szekvencia. 32.
számú szekvencia, 33. számú szekvencia, 38 . számú szekvencia és
35, számú: szekvencia.
Egy még másik kiviteli alakban a találmány egy 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a Ώ2Ε7 LCVR-tj tartalmazó antitest könnyű lánc variábilis szakaszt kódoló izolált nukleinsavat biztosit.. Ez a nukleinsav előnyösen a 76. számú szekvencia szerinti nukleinsavszervesei át tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudták, hogy a genetikai köd degeneráltsága következtében más nukleotid szekvenciák is kódolhatják az 1, számú szekvencia szerinti amlnosavszekvenciát. A nukleinsav csak az
LCVR-t kódolhatja vagy kódolhat egy olyan antitest könnyű lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik az LCvR-hez. Egy kiviteli alakban ez a nukleinsav egy xekombináns expressziós vektorban, van.
Egy még további kiviteli alakban, a találmány egy 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 HCVR-t; tartalmazó antitest nehéz lánc variábilis szakaszt kódoló izolált nukleinsavat biztosit. Ez a nukleinsav előnyösen a 37. számú szekvencia szerinti nukleinsa^szekvenciát tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudják, hogy a genetikai kőd. degeneráltsága következtében más nukleotid szekvenciák is kódolhatják a 2. számú szekvencia szerinti aminosavsxekvenciát. A nukleinsav csak a HCVR-t kódolhatja, vagy kódolhat egy olyan, antitest nehéz lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik a ECVR-hez. Például a nukleinsav egy IgGl vagy IgG'4 konstans szakaszt, tartalmazhat. Egyik kiviteli alakban ez a nukleinsav egy rekombináns expresszios vektorban van.
Olyan expressziós vektorokat is Ismertetünk, amelyek antitest nehéz láncot és antitest könnyű láncot is kódolnak. így például egy kiviteli alakban az expressziós vektor a? olyan antitest könnyű láncot kódol, amelynek a variábilis szakasza az 1. számú, szekvencia szerinti animosavszekvenclát (azaz a D2E7 LCVR-t) tartalmazza; és
b) olyan antitest, nehéz láncot kódol, amelynek a variábilis szakasza a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 HCVR-t; tattalmázza.
X- ,-
Ö találmányban alkalmazott antitestek kifejezésére szolgálnak azok, a gazdasejtek, amelyekbe egy vagy több fenti, rekombináns expresszibe vektort vezetünk he. Előnyös, ha a gazdasejt emlős gazdasejt., előnyösebb, ha a gazdasejt egy CHQ sejt, egy NSQ sejt vagy egy COS sejt.
A találmány továbbá módszert ad egy találmány szerinti rekombináns humán antitest szintetizálásához, amikoris a fenti gazdasejtet megfelelő táptalajban addig tenyésztjük, amíg egy találmány szerinti rekomtlnáns humán antitest nem szintetizalőüik. A módszer tartalmazhatja még a rekombináns humán antitest táptalajból való izolálását is.
XII. Rekombináns humán antxtestek szelektálása
A D2E7 vagy :ü2E7-tel rokon antitesteken kívül a találmányban felhasznált rekomblnáns humán antitesteket rekombináns kombinatorikus antitest gyűjtemény szűrése révén izolálhatjuk, előnyösen olyan tág által bemutatott scFv gyűjtemény (phage display libraryj szűrésével, amelyet humán limfonltákbol származó mmES-ből készített humán VL és Eh cDNS-ek használatával állítottunk elő. Az ilyen gyűjtemények készítésének és szűrésének metodikái ismertek ezen a szakterületen. Fág által bemutatott gyűjtemények létesítéséhez a kereskedelemben rendelkezésre álló kiteken (például: a Pharmacia által gyártott Recombinant Phage Antibody System, kát.szám: 27-9400-01; és a Stratagene féle SurfEAP^ phage display kit, kát.szám: 240612i kívül az antitest bemutató gyűjtemények létrehozásában és szűrésében különösen alkalmas reagensekre és módszerekre találhatunk példákat a következő szabadalmi leírásokban és közleményekben: 5,223,409 számú amerikai egyesült » * államokbeli szabadalmi leírás (ladner et al.); WG 92/16619 számú nemzetközi 'KIT közzétételi iratok (Rang et sij; WC 91/17271 számú nemzet kézi PC 7' közzétételi iratok (Dózer et a.l.); 70 92/20791 számú nemzetközi PCí közzétételi iratok (Wintsr et al.); 70
92/15679 számú nemzetközi PCT közzétételi íratok (Mazkland et al..); MG 93/01288 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Bxeitling et. al.} ; 70 92701017 számé nemzetközi PCT közzétételi iratok (GcCafferty et al.); WO 92/09690 számú nemzetközi PCT közzétételi íratok (öaxrard et al.); Fuchs ét al. f Bio/Teohnology 9. 1370-1372 (1991); Hay et al., Bum. Ή .: , d . Jyb, rc.su 3< 81-?o (1992;; Foss et al., Scieuce, 246, 1275-1281. (1989); McGafferty et al., bature, 34.8, 552-557 (1990); Griffiths et al., BŐBO J.f
12, 725-7 34 (1993); Hawkina et al., J. Mól. Bioi., 22 6, 33 9-6 96 (1992).; Claokson et al.., Matere, 352, 624-623 (1991); Oram et al., PNAS, 8 9, 357 6-3590 (1992); Garrad et al., BiodTechnology,
9, 1373-1377 (1991); Hoogenboom et al., Muci. Aelds. Rés., 19,
4133-4137 (1991).; Baross et al., PNA3, 6.6, 7978-7982 (1991).
égy előnyős kiviteli alakban a hTMFa vonatkozásában magas affinitással és alacsony felbomlási sebességi állandóval (off rats coca tant) rendelkező· humán antitestek izolálása céljából egy, a hl’MFa vonatkozásában magas affinitásé és alacsony felbomlási sebességi állandóval .rendelkező egér antí-hTRFa-t (pl. MAE 195, a hibr idoma. letéti száma: 3 Ón CG 87050801; 1.987) használtunk z~.c ^zor o > jDcu ez es wi -e ό o_ a < -, . í sához, amelyeknek hasonló a kötési aktivitása hTNFa-val szemben. A szelektálásra a üoogenboom és munkatársai által leirt (70 93/06213 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok) epitóp lenyoma-
tus (ep 1. topé i m p r i n t í n g) vagy irányított szelekciós iguided
selection) módszereket has znál tünk . Az ebi )en az eljárást ;an hasz-
nált antitest gyűjtemények előnyösen scFv tárak voltak : tárakat
a következő szerzők által leírtak szerint hoztuk létre és szűr-
tűk: McCafferty et el., HO 9 2:/01. Ö47' számú nemzetközi PC'T közzété-
teli iratok; tícCaff érti ΐ st al., ka tűre. 348, 552-554 (19901;
•Grffiths et: al., EMEC u.. 12, 725-734 (1< i93j ] . Az scFv antitest
tárak szűréséhez elöriyösen rekombináns humán hTRFí?. antigént használ tűnk .
Mihelyt az el só humán VL és VH szegmentumokat kiszűrtük, „min and matek (keverés és Iliésztés) kísérleteket végeztünk. Ezekben a kísérletekben az elsőként szelektált vL és VH szegmentumokat különböző párosításban uTNFa kötésre szűrtük, hogy kiválasszuk az előnyös V'L/vH pár-kombinációkat. Ezenkívül, hogy tovább javíthassuk az affinitást es/vagy hogy csökkentsük a felbomlás! sebességi állandó értékét a hTMFa vonatkozásában, az előnyös VL/VH pétiek} VL és VH szegmentumait találomra mstagenizálhatjuk, előnyösen a VH és/vagy Vő CDR3 szakaszacan, egy olyan eljárásban, amely analóg az .in vivő szomatikus mutációs folyamattal. Ez az in vivő folyamat felelős az antitestek affinitásának éréséért a természetes immunválasz folyamán. Ilyen in vivő affinitás érést úgy viteleztűnk ki, hogy a VH és Vb szakaszokat olyan PCR primerek használatával sokszoroztuk, amelyek a VH CöRl-mal, illetve VL CDR3-mal komplementerek.. Ezeket a prlmereket bizonyos petíciókban a négy nukleotld bázis egy random keverékével úgy „spékeltunk meg, hogy a kapott PCR termékek olyan VH és VL szegmentumokat kódoljanak, amelyekbe random mutációk, kerülnek bevezetésre, éspedig a VH
é.s/vagy VL CDR3 szakaszokban. Ezeket a véletlenszerűen mutagén izált VB és VI szegmentumokat újra szűrhetjük hidra kötésre és kiválaszthatjuk azokat a szekvenciákat, amelyek magas affinitást és alacsony felbomlási sebességet, mutatnak a hThóa-val való kötődés vonat koz a sóban.
A kiválasztott antitest nehéz és könnyű láncok aminsavszekvenciáit összehasonlíthatjak a csiravonal nehéz es könnyű lánc aminosavszekvenciákkal. Azokban az esetekben, amelyekben a szelektált Vb és/vagy VH láncok némely framework csoportja különbözik a csiravonal konfigurációtól (például a fág gyűjtemény létesítéséhez használt immunglobulin, gének szomatikus mutációja következményeként) , kívánatos lehet., rogy „visszamutáljuk'7 a szelektált antitestek megváltozott framework csoportjait a csiravonal konfigurációhoz (azaz, hogy ügy változtassuk meg a szelektált antitestek framevork. aminosavszekvencíáít, kegy azok a. csiravonal framework aminoaavszekvenciákka.1 egyezzenek meg) . A framework csoportok ezen „visszamutálását (vagy esiravonalnoz igazítását: „germlining) standard molekuláris biológiai módszerekkel., specifikus mutációk bevezetésével (például: helyre irányuló mutageneziso PCK-közvetitett műtagenezis; és hasonlók) végezhetjük el.
Mintáin egy megfelelő antitestet egy rekombináns^ immunglobulin bemutató gyűjteményből kiszűrtünk és izoláltunk, a kiválasztott antitestet kódoló nukleinsavat kinyerhetjük a display csomagból (például a fág genomból) és tós expressziós vektorokba klónozhatjuk be standard rekombináns DNü technikák segítségével. Ha kívánt, a nukleinsavat tovább manipulálhatjuk, hogy más találmány szerinti antitest: formákat hozzunk létre (például: további immun globulin domé';eksn. — például további konstans szakaszokat — kódold nukleinsavhoz kapcsolhatjuk). agy kombinátótikus gyűjteményből szűrés révén izolált rekgmhi.náns humán antitest kifejezéséhez s: antitestet kódold DNS-t zekombináns expresszibe vektorba klónozzuk be, majd adós gazdasejtbe vezetjük be, ahogyan fent, a
II. fejezétben leírtuk.
XV. és alkálwsésulc
A fenti antitesteket és antitest részeket betegnek való be adásra alkalmas gyógyszerkász1tményekbe vihetjük be. A gyógyszer készítmény általában egy találmány szerinti antitestet vagy antitest-részt és egy gyógyszerészeti.lég elfogadható vlvóanyagct tartalmaz. A. „győgyszexészetlleg elfogadható vivőanyag alatt bármilyen és minden olyan oldószer, diszpergháló szer, bevonó szer, antlbakteriális és antifungális szer, izotonicitást biztosító és abszorpciót késleltető szer és hasonló értendő, amelyek fiziológiailag kompatibilisek. Gyógyszerészeti szempontból elfogadott vivőanyag például a víz, konyhasó oldat, foszfáttal pufféról! konyhasó oldat, dextróz oldat, glicerin, eranol és hasonlók, valamint ezek, kombinációi. Sok esetben előnyös lehet, ha tonicitást befolyásoló szereket adunk a készítményhez, például cukrokat, polialkoholokat — mént a mannát és szerbi t — vagy nátriumkloridot. A gyógyszerészed lég elfogadható vivőanyagok tartalmazhatnak még kis mennyiségű segédanyagókat is, mint például nedvesítő vagy emulgeáló szereket, konzerváló szereket vagy puffezeket, amelyek az antitest vagy antitest-rész tárolási idejét növe lik és hatásosságát fékezzék.:
A találmány szerinti gyógyszerkészítmény változatos formákban állhat rendelkezésire, Ilyenek például a folyadék, félig szilárd és szilárd dózis formák, azaz a folyékony oldatok (például injekdós és infúziós oldatok}, diszperziók vagy sznszpezziók, tabletták, pirulák, porok, liposzórnák és kúpok. Az előnyös forma a bevitel és a terápiás alkalmazás tervezett módjától dgg. Az előnyös készítmények rendszerint injekciós vagy infúziós oldatok formájában állnak rendelkezésre. Az ilyen készítmények hasonlóak azokhoz, amelyeket emberek más antitestekkel való passzív lomodzálésahcz használnak. A beadás előnyösen parenterálisan (példád intravénásán, azubkután, intraperitoneálísan, íntramuszkdárísan} történik. Egy előnyös kiviteli forma szerint az antitestet intravénás infúzióval vagy injekcióval juttatjuk be. Egy másik előnyös kiviteli forma szerint az antitestet int ráosszkaláris vagy szar kdén injekcióban adjuk be.
A terápiás készítményeknek az előállítás és tárolás körülményei között sterilnek és stabilnak kell lenniük- A készítmény oldat, midoemdzió, orszperzió, lipcszóma győgyszerformában formulázható, vagy más olyan formában, amely alkalmas magas hatóanyagkoncentrációhoz . Stedl injekciós oldatokat úgy készítünk, hogy az aktív vegyüld (azaz antitest vagy antitest-rész} előírt menynyíségét bevisszük megfelelő oldószerbe, a fent fédered egy vagy több alkotórésszel kombinálva és ha szükséges, ezután szűréssel sterilizáljuk. A diszperziókat általában úgy készítjük, hogy az aktív vegyületet olyan steril vivőanyagba visszük be, amely egy házikus: diszpergáló anyagot és a fent felsoroltak közül a szükséges egyéb alkotórészeket tartalmazza. Steril porok esetében, amelyekből steril injekciós oldatokat készítünk, a készítés előnyős módszere a vákuum szárítás és liofilizálás. A liofilizálással part állítunk elő az aktív hatóanyag plusz az összes többi kívánt alkotórész előzőleg sterilre szűrt oldatából. Egy oldat megfelelő^ fluiőitása például bevcnó-anyag —- ilyen a lsei tán — használatával tartható fenn, továbbá diszperziók esetében a kívánt részecske-nagyság fenntartásával és felületaktív anyagok használatával.. Az injekciós készítmények meghosszabbított abszorpciója úgy biztosítható, hogy a kasza mnéuyoe egy olyan szert, viszünk be, amely késlelteti az abszorpciót, például monosztearát-sókkal és zselatinnal.
A humán INEa-kőhö antitestek és antitest-részek a szakma által ismert számos módszerrel alkalmazhatok, bár ami a sokféle terápiás használatot, illeti, az alkalmazás előnyben részesített módja az intravénás injekció vagy infúzió. Ά szakterületen szakemberek tudják, hogy az alkalmazás útja és/vagy módja a kívánt eredményektől függően változik. Bizonyos kivitéli alakokban az aktív vegyületet- olyan vivőanyaggal készíthetjük, amely megvédi a vegyületet a gyors felszabadulástői. Ilyenek a szabályozott leadást biztosító gyógyszer formák, például az implantátúrnak, a transzdermáiis tapaszok és a mikrokapszulás leadó rendszerek. Használnatők híodcgradálhatő, biokompatibilis polimerek, ilyenek az et.ílén-vinil-acetát, polianhidridek, poliglíkol savak, kollagén, poli-orto-észterek és polf-tejsav. Ezen gyógyszertorrnak élőéi 11fásának számos módszerét szabadalmaztatták vagy pedig általánosan ismertek a gyakorlott szakemberek előtt. Lásd például: Sustaíned and Controiled Release Drug Deli very Systems, J.R. Robinson (szert.) Marcsi Dekker, Inc., New lork, 1978.
A humán ThFa-köto antitestet vagy arítigén-kötő rés tét olyan gyógyszerkészitmények előállÍrására használhatjuk, amelyek orálisan alkalmazhatók, például inért oldatban vagy asszImiiáIhatok ehető vivöanyagban... Az antitestet .(és más alkotórészeket is, ha kívánt) bevihetjük kemény vagy lágy falu zselatin kapszulákba, tablettázhatjnk, vagy közvetlenül a beteg ételébe is bekeverhetjük. Orális terápiás alkalmazáshoz az antitesteket kötőanyagokkal együtt formulázhatjuk és lenyelhető^ tabletták, bukkálls tabletták, pasztillák, kapszulák, ellxirek, szuszpenziók, szirupok·, ostyák és hasonló formákban használhatjuh. Amennyiben az előáll!tptt gyógyszerkészítményt nem parenterálzsan alkalmazzuk, szükség lehet arra, hogy a vegyőletet olyan anyaggal vonjuk be, vagy a vegyületet olyan anyaggal együtt adjuk be, amely megvédi az inaktivá1ődás1ól.
Kiegészítő aktív vegyülsteket is bevihetünk, a készítményekbe. Bizonyos kiviteli formákban a találmány szerinti antitest vagy antitest-részt együtt fozmulázzuk. és/vagy együtt alkalmazzuk egy vagy több további olyan terápiás szerrel, amelyek hasznosak az olyan rendellenességek kezelésében, amelyekben a ThFa aktivitás ártalmas. Például: a találmány szerinti anti-hTNFa antitestet vagy antitest-részt együtt formulázhatjuk egy vagy több további olyan antitesttel, amelyek más célantigénekhez kötődnek igeidéül: olyan antitestekkel, amelyek más citokineket kötnek meg, vagy amelyek sejt felületi molekulákhoz kötődnek;·, például egy vagy több oitoklnhez, oldható TNFa receptorhoz (pl. bő 94/06476 irat) és/vagy egy vagy több olyan kémiai, anyaghoz, amelyek gátolják a hTNFa termelődést vagy aktivitást (ilyenek a cikiohexán-illdén származékok, amelyeket a NO 93/19751 számon közzétett nemzetközi PÓT szabadalmi irat ismertet). Ezenkívül, egy vagy több találmány szerinti antitest két vagy több előzőekben említett terápiás szerzel kombinálva használható. Az ilyen kombinált ter-;y:^rban az alkalmazott terápiás szerekből eredményesen használhatunk alacsonyabb adagokat, miáltal elkerüljük a lehetséges toxikus: tüneteket, vagy azokat a szövődményeket, amelyek a különböző mzuote rúpiákhoz: társulnak.
A találmány szerinti antitest vagy antitest-rész például a következő {nem kizárólag) rheumatoid arthritis-nél használt terápiás szerekkel kombinálható:: nem szteroid gyűl ladásgátlő szerek (non-stsroiddal suti-intlammatory drug{s) -· NSAIDs); ultokin szuppressaiv gyulladásgátlö szerek (öytokine suppressive antí-inflammatory drugísi ::: OAlbs); CBP-571/BAv~ig~3356 {humariizált anti-TdPa antitest; Cél 1 teoh/Bayer) ; oA2 (kiméra antl-TEFa antitest; Centocor) ; 75 xdINFR-IgG (75 kD TNF reoeptor-IgG fúziós protein; Immunon; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37, 3295 {1994); J - Invesc. bed., 49, 23ŐA {1993)]; 55 kdTNFR-IgG (55 kD IMF receptor-IgG fűzfős protein; Hotfmann-LaRoohe); IbEC~CE9.1/SB 210396 (nem kimerített príma Zitáit anti-CD4 antitest; IDEC/SmithKiine, lásd például: Arthritis and Rheumatim, 38, 8135 (1995)); FAR 486-XL-2 és/vagy ÖAR 389-1L-2 {11-2 fúziós proteinek; Seragen; lásd például:: Arthritis and Rheumatism, 3€, 1223 (1993); Anti-Tac (humanizált anti-IL-2Ra; Protein Desing Lahs/Roche) ; IL-4 {gyulladásgátló oitokin; ONAX/Sohering) ; 11-1:0 {SCH. 52000; rekombináns 11-10, gyulladásgátló cltokin; ONAX/Scnering); IL-4, II.-10 és/vagy IL-4 agonisták {például agcrdsts «η; ·<: ette <'IL--19A. <11,-1. receptor antagonista;
Synergen/Amgen); T9F-bp/s-TKFR [ο1adató TNF kötő protein; lásd
például: Arthru tís and Rheumatism, 39, 9. s zupp1ementum, 3 234;
Amer.0'.Rhysiol.- Heart and Cireulatory Physiplogy, 269, 37-42
(1995)]; R97340 1 [ foszfö-diészteráz IV típusú inhibitor; lásd
például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. :í . „c y lement un, C ·> í< αχ.' U·: xí
(1996)]; W---966 ÍCCX-2 inhibitor; lásd például:; Arthritis and
Rh a urna 11s m, 3 9, 9. s z upplemen t um, S 91 (199 6) ] ; I lapra st [lásd
például: Arthritis- and Rheumatism, 39, 9« szupplumentum, 382 (3 996)]; metötraxát; tál ideadd (lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementem, S282 (1996) ] és a talidomid-dal rokon gyógyszerek λ<-Οχ.„„: ik ; ' x ” n. -.u x és citckin inhibitor; lásd például: Arthritis and nheumati.sm, 39, 9. szupplemen rum, 313 (1996); lo fiamra t Ion Hssoarch, 45, 103-107 (199611; tranexamin sav [a plazminogén aktiválódás inhibitora; lásd például: Arthritis and Rheumatism^ 39, 9. szuppleu ..',
32B4 (1995)]; 7-614 (citokin inhibitor, lásd például: Arthritis and Rheumatism., 39, 9. szupplementum, 32 93 (1996)]; prosztaglandin Él. [lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplementem, 3232 (1996;]; Tenldap [ nem-szteroid gyűliadásgátló szer; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9. szupplemehtűm, 3230 (1996)]; Kapromén (nem-szteroid gyulladásgátlb szer; lásd például: Keuro Report, 7, 1209-1213 (1996;]; Melcxioam (ner“sztercid gyulladás-gátló szer); Ibuprofen (nem-szteroid gyulladásgátló szer); űiroxicam (nem-szteroid gyulladásgátló szeri; Díclofenac (nem-szteroid gyulladásgátló szer); Indomethacin. (nem-szteroid gyulladásgátló szer); Sül fasala ölne (lásd például:
Arthritis and Rheumatisnp 39 f 9< szupplementum,: 3281 :1996)]; Azáthióprine [lásd például: Arthritis and Rheum.atism:? 39., 9.
szupplem:entw> Szól 11996}] ; ICA inhibitor (az intet len kin-13 konvertáld enzim inhibitora) ; zap-Ή és/vagy lek inhibitor (zeg-Os vagy lek tirozin kiráz inhibitor); ¥EGF inhibitor és/vagy VEGF-? inhibitor {vaszkuláris endoteliális sejt növekedési faktor vagy vaszkuláris endoteliáiis sejt növekedési faktor receptor inhibitorok; angiogenezls inhibitorok; ; kortzkoszteroid gyulladás·^ gátló szerek (például SB203580:); TNF-konvertáz inhibitorok; anti-IL-12 antitestek; lnterleukin-11 [lásd például: Arthritis: and Rheumatism.f 39, 9. szupplementum, 3293 (19-9S/1; imterleukin-11 [lásd például: Arthritis and Rhe urnát ism, 39. 9. s zupp 1 eaesti®., 33 08 [1996]]; intoricukin -17 inhibitοxok [iás d péIdául: Arthritis and Rheumatism, 39f 9. szupplementum, 3120 (1996)]; gold; pániéi Havin; kiorokín; hidrozikloxokin; klorsz:.buczl; ciki of osztania; ciklosporzn, teljes limfoid besugárzás; anti--tivóéita globulán; anti-C£M antitestek; CDS-tozinok; orálisan alkalmazott .peptidek és kollagén; lobenzarlt dinátrium só; Cytokine Regula ting Agents [CRAs) HR228 és HP46t :í H ...z . - ' vceuticals, Inc.).; ICAM-l antiszensz f oszt orot ioá t oligodezoxlnukleotidok (ISIS 2302; Isis Pharmaoeuticals, Inc.); oldható komplement receptor 1 (TPit; T Coll Sciences, Inc.); prednlzon; orgotein; glükozamincglükáh pollszalfáz; minocikiin; anti-Iü2R antitestek; hal-félékből származó és botanikai lipidek [hal és növényi mag eredetű zsírsavak; például Deinon et al., Rhenm. Gis. Cl in. North. Am.f 21, 75:2-777 [19951]; a ura no fin; feni Ibut azon;
meklofenamin sav; flufenamin sav; intravénás immunglobulin;
» * ·> X ziloutor; mikofenol sav i RS-S14 4 3i; t&kro1ima s z szirti irtasz (raparaicit í ; «'tipr Hoz (terafektin); kladribin (2-klór-dezoxi-adeuozin); és azsribin.
Egy humán TNFd-kötö .antitest vagy antitest-rész például a következő (nem kizárólag.; gyulladásos bélbetegségnél használt ten.t as í zárok o dd ^adtio: b. ar'cr a; un 1 s ”.uok?uC^'.
faktor; kortikoszteroidok; clklosporin; szulfaszalóéin; aminoszalicilátok; 5-mer kapto-pur in; azatioprin; metronidazol; .lipoxigenáz inhibitorok; mezalamin; olszalazin; balszálszid; antioxidánsok; tromboxán inhibitorok; IL-1 receptor antagonisták; anti-TL-lís monoklonális antitestek; anti-IL-E monokiovális antitestek; növekedési faktorok; elosztás inhibitorok; prldinilimidazol vegyületak; CBf-571/B.A7-335:6 (humanizált anol-TNFa antitest; CélltéthlBáyézl; cA2' (klméra ánti-TlIFd antitest; € ént.p coli ; 7 5 kdTNFR-IgG [75 kD INT receptor-IgG fúziós protein; Immunén, lásd például: Arthritis anő Ihesmatism, 37, 8295 (1394); 31
Invest. led., 4 4, 2351 (1995)1; 55 kdTNFR-lgG (55 ki TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffmann-fa Rocne) ; i.nter 1.euk 1 η-10 (BOR 52000; Schering-Plough); Iu-4, 11-10 és/vagy IL-4 antagonisták (például: agonists antitestek) ; interleuKin-.il; a pzednizolon, dexametazon vagy budezoníd gluku.reni.ddal vagy dsxtránnal kenj·.·gál.t gyógyszer élőt érmékéi; ICAM-1 antiszensz foszforoticát ollgodezozinukleotidok (ISIS 2302; Isis! rharmaceutiea.l s:, Iné.); oldható komplement receptor 1 (ΤΡΙΟ; T Teli S elemes, Inc,); lassan felszabaduló meszalazin; metotrexát; Fiatelet Activati.ng Faotor iPA.F) antagonisták; oiprofloxacin; és lignokain.
·« *
Egy humán TúFa-kőtő antitest vagy antitest-rész például a következő (nem kizárólag: szklerózis rt.iltlplsx-n.il használt terápiás szerekkel komoruaiistó; kortikosztureidok; prednlzolon; re t i 1 p r e dn1 z ο 1 ο u; azati opri n; c1k1o f o s z z ami d; cikicsρor1n ? matotrexát; 4-aminopiridin; tizanidin; inter feron-hla Auz-xé Bongsz;; izzerfercn-510 (Betaaeron^; Chiron/Berl.ex); Ccpolymer 1 (Gop-1; Gopaxcne'; Tava Fbarmaceutical Industrica, Inc. > ; magas nyomású oxigén; intravénás immunglobulin; klabribin; CDF-571/ΒΑϊ-10-3356 (humanizált a'.F .-'‘K.a ardxtzst; Ceiltech/'Bayeri ; cAl (kimére anti-TNFa antitest; Centccor; ; 7S kdTRFR-IgG [73 kD T1F receptor-IgG fúziós protein; Immunex; lásd például Arthritis and Rheumatism, 37, S293 (1994) ; j, lovast, Fed., 4 4, 2 3 5A (399611 ;
kdTRFR-IgG (55 kő TNF receptor-IgG fúziós protein; Hoffmann-La Boche:; Il-lú, Tl-4; és 11-10 és/vagy 11-4 ágonisták (például agonista antitestek;.
Egy humán ΤΝΐα * . : antitest vagy antitest-rész például a kővetkező (nem kizárólag szepszisnél használt terápiás szerekkel kombinálható: hipertóniás só-oldatok; an.t Ibiétikonok; intravénás gazunaglobilln; folyamatos hemofiltráció; ka rbapeneme k (például: meropeneml; olt okin ant ágonisták, mint Ibi Fa, 11-15, IL-t és/vagy TL-8 antagon.istáb; CDP-571/BAT-10-33S6 (humanizált anti-TWa antitest; Gelltech/Bayer); cR2 :(kiméra anti-TFFa antitest; Centocor?; 75 kdTúFR-Igó [75 kb recsptcr-IgG fúziós protein;
Immunén; lásd például: Arthritis and Rheumatlsm, 37, S295 (1994); J. levest, bed., 44, 235A (199S) 1; 55 kdTAFB-IgG [55 ki TEF receptor-IgG fúziós protein; Hoffmann-laRoche' ; Cytokine Regulating Agents (CRAs) HF228 és HP456 (Houghten Fharmaceuticals, Inc.};
SK&F 107647 (alacsony molekulatömegű pepiid; Smith-Kliue Beechara); tetravalens guanil-hidrazon CNI-1493 (Picowez Institute:; Tlssue Factor Pathxay Inhibitor ÍTFPI, Chiron); PHP íkérni áriig módosított hemoglobin; APEX Eicsciencej; vas kelátképzők és kólátok, beleértve a dietiién-triamin-pentaecetsav-vas(III) komplexet (BTPA vas(III); Molichem Medicines]; llzofillín (szintetikus kis molekulájú met11-xantin; Cell Thexapeutioo, Inéi ; PGGGlucan (vízben oldódó ól,? gin kár; Aipha-Beta Teohnology); apolipcprotern A-l, lipidekkel feltöltve; királis hidroxám savak (szintetikus a.nti-bakteriális szerek, amelyek gátolják a lipid A bíoszintézisét;; anti-endotoxin antitestek; Eo531 (szintetikus lipíd Ά antagonis-iák;
Fisai America, Inc.);
zBlI-u (humán a c: t e r leid: a 1 / P e nme a b 11 i t y termlnális fragmentuma);
-Inoreasíng Protein rekombináns R és Synthetin Anti-Erdőtovin Papáides (SAEP; BiosYnth Research Laboratoriás),
Egy ralalmány szerinti antitest vagy antitest-rész például a következő (nem kizárólag; felnőttkori respirációs disztressz szindróma (aduit respíratory dístress syndrome - ARDS) esetén használt terápiás szerekkel kombinálható: anti-IL-ő antitestek; felületaktív anyag bejuttatásával (pótlásával) végzett terápia; CDF-571/BAY-10-3:356 (humanizált anti-TRFd antitest; Ceiitech/Bay&r]; oA2 (kiméra anti-TEFa antitest; Centocor); 75 kdTNFB-IgG Γ75 kD TNF receptor-ige fúziós protein; Immunex, lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37, S295 (19943, J. lövést.
Med., 4.4, 235A (1996) j ; és 35 kdTNFR-IgG (55 kD TNF receptor IgG fúziós protein; Hoffmann-La Rcchej.
A találmányban alkalmazott antitestek vagy antitest-részek más terápiás szerekkel való kombinálását a továbbiakban a IVÓ alfa j e zet b en tárgyaljuk.
A találmány szerinti készítmények egy találmány szerinti antitest vagy antitest-rész „terápiásam hatásos mennyiségét vagy „profHektikusan hatásos mennyiségét tartalmazhatják. A „terápiásán hatásos mennyiség olyan hatásos mennyiségre utal, amelyiyel a szükséges adagolás mellett és 1 nőtársam alatt elérhető a kívánt terápiás eredmény. Az antitest vagy antitest-rész terápiásán hatásos mennyisége például a következő faktorok szerint változhat: a betegség státusától, az egyén korától, nemétől, súlyától és az antitest vagy antitest-rész azon képességétől, hogy kiváltja-e a kívánt választ az egyénben- A terápiásán hatásos menynyiség olyan mennyiség, amelyben az antitest vagy ahtitest-rési minden toxikus vagy károg hatását ellensúlyozzák a terápiásam jótékony hatások.. Egy „profilaktikusan hatásos mennyiség olyan hatásos mennyiséget jelent, amellyel a szükséges adagolás mellett és időtartam alatt elérhető a kívánt profilaktikre eredmény. Minthogy profHektikus dózist a betegeknél a betegség előtt vagy a betegség egy korai szakaszában használunk, a profílaktlkusan hatásos mennyiség általában kevesebb lesz, mint a terápiáson hatásos mennyiség.
A dozirozási protokollt úgy állíthatjuk be, hogy az: az optimálisan kívánt választ nyújtsa (például egy terápiás vagy profilaktikus választ) . Például alkalmazhatunk egyetlen, boluszz, alkalmazhatunk több osztott dózist egy bizonyos ideig, vagy pedig arányosan csökkenthetjük vagy növelhetjük a dózist a terápiás snye κ helyzet követe)vényeknek megfelelően. A parenteralis kés egysdagos fórmulázása különösen előnyös az alkalmazás megkönnyítése és az adagolás egyenletessége· miatt. Az ezen leírásban szereplő egyadagoa forma fizikailag különálló egységeket jelent, amelyek, mint egységes· adagok, megfelelőek a kezelendő emlős betegek számára; mindegyik egység az aktív vegyület egy előre meghatározott mennyiségét tartsbrazze, amely számítás szerint a kívánt terápiás hatást eredményezi az előírt gyógyszerészeti vivőanyaggal együtt. A találmány szerinti egyadagos formákra vonatkozó· előírást (a) az aktív vegyület jellemző tulajdonságai és az elérendő speciális: terápiás vagy prof Hektikus hatás és (b) az egyének érzékenységének megfelelő kezeléshez szolgáló ezen aktív ' c, ' ' x< .-a - ' p n - együttjáró megszorítások szabják meg és az említett előírás ezektől függ.
A találmány szerinti antitest vagy antitest-rész terápiásán vagy profilaktikusan hatásos mennyisége — nem kizárólag — -3,1-20 mg/kg, előnyösen 1-10 mg/kg tartományban van. Megjegyzendő, hegy az adagolási értékek az enyhítendő állapot típusa és súlyossága szerint >. 'a\. Továbbá .magától értetődik, hogy minden konkrét beteg számára specifikus dozirozasi protokollt kell lödre beállítani az egyén szükséglete szerint és az alkalmazást végző vagy a készítmény alkalmazását ellenőrző személy szakszerű megítélése szerint. Magától értetődik továbbá, hogy az itt ismertetett adagtaxtományok csupán példák, amelyekkel nem óhajtjuk korlátozni a találmány szerinti készítmény alkalmazási területét vagy gyakorlatát .
X *
V. A humán WFa-kötő antitestek alkalmasáéi területei
A. bevezetőben megadott tulajdonságokkal rendelkező humán ThFü-kötő antitestek és antitest-részek képesek a hTNFa aktivitás neu.tra.liválására mind. in vlr.ro, mind in vivő (lásd a 4. példát). Ezenfelül, legalább néhány antitest —- ilyen a Ιί)2Ε7 ··— más- fajok TEFa aktivitását is képes neutrallzálni. Ennek megfelelően a fenti antitesteket és antitest-részeket fel tudjuk használni a TNFa aktivitás gátlására például hThFa-t tartalmazó sejt tenyészetekben, és olyan TEFa-kat tartalmazó emberekben és más emlősökben {ilyenek a csimpánz, pávián, selyemmajóm, közönséges mamáké és rhesus majom, a sertés vagy egér) , amelyekkel egy fenti, antitest teraszzreagál, Egy kiviteli formában a találmány módszert ad a TKFot aktivitás gátlására. Ez abból áll, hogy a TEFu-t olyan módon hozzák érintkezésbe egy humán Ida-kötő antitesttel vagy antitest-résszel, hogy ez gátolja a TKFa aktivitását. Előnyös, ha a 'TN'Fa humán TNFo. kelőid egy olyan se j t-tenyészet esetén, amely hTÉFa-t tartalmas, vagy gyanítjuk, hogy nTNFa-t tartalmaz, egy humán TdFa-kötő' antitestet vagy antitest-részt adhatunk a táptalajhoz, hogy a tenyészetben meggátoljuk a hTNFa aktivitását.
A. találmány tárgya továbbá egy humán TNFa-kötő antitest vagy antigén-kötő részének alkalmazása gyógyszer készítmény előállítására olyan rendellenesség kezelésére, amelyben a TUFg aktivitás káros hatású, A TNFa a rendellenességek széles változatának patof izíológiáj óban szerepel [lásd például: Adoeller et el.., Cytokize, 2, 162-169 (1990)x 6,221,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás: (Moeller et al.), 260 610 El számon wzdcO ou'tpa. czdda.mi leírás (A. Moeller) r . A találmány » * módszert ismertet a TNFa aktivitás gátlására egy olyat betegben, aki ilyen rendellenességben szenved. A módszer szerint a betegnél egy találmány szerinti antitestet vagy antitest-részt olyan módon alkalmazunk, hogy a betegben a TNFa aktivitását gátolják. Előnyös, ha a TRFu. humán TNFd és ha a beteg egy beteg ember. A beteg egy TNFa-t kifejezd olyan emlős is lehet, amellyel a találmány szerinti antitest keresztreakciót ad. A beteg egy olyan emlős is lehet, amelybe hTFEa-t vittek be (például hTBFa bevitelével vagy egy hWa trauszgen expressziója révéni. Egy találmány szerinti antitest beteg c'..' rnél is alkalmazható terápiás célból (alább még tárgyaljuk··. A humán TMFa---kötő antitestet ezenkívül ThFa-t kifejező nem humán emlősnél (ilyen egy főemlős, sertés vagy egér) is alkalmazhatjuk -..... amennyiben ezen antitest a TFFa-val keresztreagál ....... állatorvosi céllal, vagy, ha az emlős egy humán betegség állat-moóal.1 je.. Ami ez utóbbit il.loti, az ilyen állatmodellek hasznosak lehetnek az antitestek t- ·.órás hatékonyságának kiértékelésében (például:: az adagolás és az alkalmazás időtartaménak tesztelésében:.
„Egy rendellenesség, amelyben a Thio aktivitás káros hatású'' megállapítással olyan betegségekre és más rendellenességekre utalunk, amelyekben kimutatták, hogy a rendellenességben szenvedd betegben jelenlévő TNFa felelős: vagy feltételezhetően felelős a zavar kórélettani okáért, vagy egy olyan faktor, amely hozzájárul a rendellenesség rosszabbodásához. Ennek megfelelően egy rendellenesség, amelyben a TdFd aktivitás káros hatást fejt ki, egy olyan rendellenesség, amelyben a TNFa aktivitás gátlása feltehetően. enyhíteni fogja a tüneteket és/vagy a kórfolyamat súlyosbodósát. Az ilyen fajta zavarokat például azzal támaszthatjuk alá, ha a betegségben szenvedő beteg egy biológiai folyadékában a TNFd koncentráció megnő [például: egy beteg szérumában, plazmájában, szinoviális folyadékában, stb. megnő a TNFu. kezesül rácio;, és ez például a fent leírtak szerint — egy antí-lFFa antitesttel kimutathatő. Az olyan betegségekre számos példa van, amelyekben a TNFa aktivitás káros hatású. A hlFFu-kőző antitestek és antitestrészek használatát speciális betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények előállítására az alábbiakban tárgyaljuk.:
A. ámepsaír
A tumor nekrózis faktornak meghatározó szerepe van a szepszis patofiziolőgíájóban, amely olyan biológiai hatásokkal jár, mint az alacsony vérnyomás, míokardlálís szuppresszió (szívizom, gátlás) , érrendszeri szivárgási szindróma, szerv elhalás, toxikus, másodlagos medíátorok felszabadulásának stimulálása, és az alvadóéi kaszkád aktiválódása [lásd például: A. Moeller et al:., Cytokine, 2, 162-165 (1990); 5, 231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmii leírás (Moeller et al ,J 262 úlQ B1 számon közzétett európai szabadalmi leírás (A. Moeller;; K.J.Tracey, ArCerami, Anna.. Rév. Med 45, 491-503 (1994); D.Russel, R. C .. Thompsón, Curr.Qpin. Riotech., 4, 714-721 (1993) J. A fenti TRFa-kőtő humán antitestek és antírest-részek tehát felhasználhatók a szépszís kezelésére, annak minden klinikai megnyilvánulásánál, beleértve a szeptikus .sokkot, endotozikus sokkot, gram negatív szépszist és a toxikus sokk szindrómát.
A szepszis kezelésében ezenkívül egy fenti Ibid.-kötő humán, antitestet vagy antitest-részt együtt alkalmazhatunk egy vagy több egyéb olyan terápiás szerrel, amelyek tovább enyhíthetik a szepszdt. ilyen egy Intetleukin-1 inhibitor (lásd a Wü 92/26222 és WO 92/17583 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírásokat; , a citokin doededd-6 (lásd a. WC 93/11795 számon Közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírást;, vagy egy trombocita aktiváló faktor antagonista (lásd például az EP 374 510 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést) . A. szepszis kezelésére szolgáló kombinációs terápiákat a 171. alfejezetben tárgyaljuk.
Egy előnyös kiviteli alakban a bCNFa-köto antitestet vagy antitest-részt olyan gyógyszer előállítására alkalmazzuk, melyet a szepszises betegek egy alcsoportjához tartozó olyan betegnek adunk be, akinek a szérumában vagy plazmájában a kezelés időpontjában az 1L~€ koncentrációja 500 pg/ml felett van és elörvösebben ÍÖüO pg/ml (lásd a WO 05/20979 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírást :(T.üaum et al.)1.
B. Au toímmun he dg® égek
Megállapították, hogy a tumor nekrózis faktor szerepet játszik a. különböző autoimmun. betegségek kórélettanában. A TNFa résztvesz például a szövet-gyulladás aktiválásában és rheumatoid arthritis-ben izüléti károsodást okoz [lásd például: A.Moeller et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeller et al.:; 2 60 61.0 81 számon közzétett európai szabadalmi leírás (Adceller) ; Tracey és Cerami, lásd fentebb; W.F.Arend, J.MfDaysr, Arth.Rheum., 38, 151-160 (1995); R.A.Fava et ad, Clln. Exp. immunod, 94, 261-266 (1,993)]. A TNFa-nak szerepe van a szigetsejtek elhalásának előmozdításában és az inzulin rezisztencia közvetítésében cukorbetagságban [lásd például: Traoey és Garami, lásd 94/08609 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi leírás]. TOFa játszik szerepet az oligodendrocitákkal szembeni citotoxicitás közvetítésében és a gyulladásos plakk.uk indukácíöjában szkl.erdz.is multiplexben (például:: Tracey és Carami, lásd fentebbi . Kimére és humanizált egér antl-b.TKFa antitesteket teszteltek már klinikán rheumatoid arthritis kezeléséber (lásd például: M.Ő.Ellictt et al., Láncét, 844, 1125-1127 (1994}; M.J.Eiliott et ál.. Láncét,
4, 1105-1110 (1994); E..C. Rúnáin et al., Br . J, Rheumatol, 34,
33.4-342: (1995 í ) ,
A humán TKFa-kÖtő antitestek és antitest-részek felhasználhatók autoimmun betegségek kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmenyék előállítására, különösen szókéra, amelyek gyulladással járnák. Ilyenek a rheumatoid arthritis, rheumatoid spondylitis, osteoarthrilÍs és köszvény-arthrítis, allergia, szélerózió multiplex, autoimmun diabetes, autoimmun uveitis és vese szindróma. Az antitestet vagy antitest-részt általában szisztémásán alkalmazzuk, bár néhány betegség esetén: a:z antitest vagy antitest-rész lokális alkalmazása a gyulladás helyén, jótékony hatású lehet (ilyen például rheumatoid arthritis-ben az ízületekben való lokális adás, vagy helyi alkalmazás diabetikus fekélyekre, vagy egyedül, vagy egy ez klórezán-ilidán s zármazékkal kombinál va , ahogyan ezt a áO :93/19751 számon közzétett Ed nemzetközi szabadalmi iratban ismertetik) . Egy hlhFa-kötő antitest, vagy antitest-rész egy vagy több további olyan terápiás szerrel együtt is alkalmazható, amelyek az autoimmun betegségek kezelésére alkalmasak, mint ezt alább a III. fejezetben tárgyaljuk.
fentebb; WG
Megállapították, hogy a tumor nekrózls faktor egy sor fertőző betegségben észlelt biológiai hatást közvetít. A TNFa résztvasz. például maláriában az agyvelőgyulladás, kapilláris trombózis és infarktus kialakulásának közvet Ízesében. TNFa szerepei meningltisbsn az agyvelőgyulludas közveti térésében, a vér-llqúnrgát összeomlás indukciójában, a szeptikus sokk szindróma kiváltásában és a vénás infarktus aktiválásában. A TNF«. résztvesz a oachexia indukciójában, a vitális proliiéráció sóimulálásóban és szerzett imm.mhianyós szindromaoau (AlDS-ben) a központi idegrendszer károsodás medíálásáhan. Tehát a humán TNFa-kötő: antitestek és antitest-részek fertőző betegségek beleértve a meningitis-t (lásd például a EP 585 705 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést; , a cerehrális maláriát, az AIDS-r és AlPS-szel összefüggő kom.plox-a:t (ARI; (lásd például az EP 230 574 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést), valamint a transzplantáció utáni szekunder oítcmegolovírus fertőzést [lásd például: E.Fietze et al., Transplantation, 58, 675-580 (1994)] — kezelésére szolgáló, továbbá a. fertőző betegségekkel járó tünetek ....... beleértve a lázat és a fertőzés okozta (például influenza) izomfájdalmat - enyhítésére és a fertőzés utáni (például az AIDS vagy ARC utáni) másodlagosan kialakult caehezia csökkentésére alkalmas gyógyszerkészítmények. előállítására is felhasználhatok.
D. 'Zrrsnsgplaíjfcácdó
Megállapították., hogy a tumor nekrózis faktor kulcs-ved iá torként vesz részt az allográft kilökődésében, a graft versus hőst betegségben (GVDhj és egy olyan adverz reakció közvetítésében, amelyet akkor figyeltek meg, amikor a I sejt receptor-CD3 komplex elleni Oh’ll patkány antitestet használták transzplantált vesék kilökődésének gátlására [lásd például: J.D.Eason ét
Transplantatlpn, 59, 3uö-3ö5 (1995); M.Suthanthiran, T. 5.Sorom,
New Engl.J.MecL, 3 31, 365-375 (1994) ]. így a humán INFa-kötŐ antitesteket és antitest-részeket felhasználhatjuk a transzplan~ tabum kilökődésének gátlására — beleértve az allograftokát és xenograftokát — és a GCDH gátlásra. Jóllehet az antitestet és antitest-részt magában is használhat juk, előnyösebb, ha egy vagy több más olyan szerrel együtt használjuk, amelyek az allograft elleni immunválaszt gátolják, vagy a GvDH-t gátolják. Például: az: egyik kiviteli alakban egy humán TCFa-kÖtő antitestet vagy antitest-részt ΟΚΙ'3-mal kombinál va használunk az QKT-indukált reá kólók gátlására. Egy másik kiviteli alakban a humán ThFn-köto antitestet és antitest-részt egy vagy több olyan antitesttel kombinálva használjuk, amelyek más — az immunválaszok szabályozásában résztvevő — célok ellen irányulnak, ilyenek a sejtfal sieti molekulák, a CDI 5 (. inteti eukin-2 receptor-a) , CDI la fuFA~l), CD 5 4 (ICAM-l), CA. CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) és/vagy tC (B7-2) . Egy még további kiviteli formában a humán TNFa-kÖtő antitestet vagy antitest-részt egy vagy több általános immunszuppresszív szerrel, mint a ciklosporin A vagy az EK506 kombinálva használjuk.
r.
Rosszindulatú betegségekben a tumor nekrózis faktor a cachexia megindításában, a tumor növekedés szimulálásában, a mezasztazikus potenciát fokozásában és a citotoxicitás közvetítésében vesz részt. Tehát a humán TWn-kötŐ antitesteket és anti test-részeket felhasználhatjak a rosszindulatú daganatos betegségek kezelésében a tumor növekedés vagy metasztázis gátlására és/vagy a malignitás másodlagos betegségének, a oachexiának az enyhítésére. Az antitest vagy antitest-rész szisztémásán vihető be vagy lokálisan, a tumor helyére adható.
Tumor nekrőzis faktor szerepel a felnőttkori distress szindróma (ARDS) patofizlológiáIában, beleértve a leukocitaendöteliális aktiválás stimulációját, a pneumooiták elleni, cítotomioitás irányítását és a vaszkuláris szivárgási szindróma indukcióját. A humán TNFa-kŐtó antitesteket és antitest-részeket tehát fel lehet használni a különböző pulmonális zavarok kezelésére, beleértve a felnőttkori respirációs distresss szindrómát (lásd például a Wö 91/04054 számon közzétett nemzetközi FCT szabadalmi leírást), a sokk tüdőt, a krónikus tüdőgyulladást, a psimonális sarooidosis-t, pulmenális fibrőzist és szilikózist. Az antitest vagy antitest-rész szisztémásán adható, vagy lokálisan vihető be a tüdő felszínére, például aeroszol formában, A humán TNFa-kötő antitest vagy antitest-rész egy vagy több olyan további terápiás szerrel alkalmazható, amelyeket pulmonális zavarok kezelésében használnak. A továbbiakra vonatkozóan lásd a III. alfa
A tumor nekrózis faktor a gyulladásos bélbetegségek pata-
fiziológiái iában is szerepel [lás d például: d.úíTracy et al., Sci-
ence, 2 34 , 470-474 /1986); X-M. Sün et al., d. Cl in.. Invest., 81,
132:8-1331 /19880; 7 . I . Ma coona id et el. , Ciin, Exp, Immunoi., 81,
3Ö1-305 (.1390}] . A sirúéra egér an~ i-hlWe antitestek klinikai tesztelése a örohn. betegség kezelésében [H.M. vau Deliemen et ál. , Gastroentarology, 109, 12 9-135 {1.995)1 már megtörtént. A humán TRFa-kötő antitestek és antitest-részek a bélrendszer zavarainak kezelésére is használhatók. Ilyen a gyulladásos bélbetegség, amelyet két tünetegyüttes jellemez: a Cxohn betegség és a oolitis ulcerosa. Egy humán TdFa-kötŐ antitest vagy antitest-rész egy vagy több olyan további terápiás szerrel együtt alkalmazható, amelyeket bélrendszeri zavarok kezelésében használnak. A továbbiakra vonatkozóan lásd a 111. alte(esetet.
A humán TüFu-kötő antitestek és antitest-részek különböző szívbetegségek kezelésére is használhatók. Ilyen a szív i sémi a {lásd például az FF 453 298 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést) és a szívelégtelenség (a szívizom gyengesége) (lásd például a bö 95/20139 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentést) .
A humán TNFd.-kötü antitesteket és antitest-részeket különböző más olyan betegségek kezelésére ugyancsak használhatjuk, amelyekben. a Tála aktivitásnak káros hatása van. A patofiziolögia szamár tart más olyan betegségekre és rendellenasségekre vonatkozó példákat, amelyekben szerepet játszik a TNFa aktivitás, így ezek Is kezelhetők a találmány szerinti antitest vagy antitest-rész használatával, ilyenek például a. gyulladásos osont betegségek és a csont reszorpciós betegség flásd például: D.R. .Bertolini et aí., hatu.re, 319, 516-318 (1986); A.Konig et al., ű.tsone * χ
Miner.Rés., 3, 621-4 120 (1989); ü.H,barnar, A.Oh1in, J. 90 ne diner.:
Rés., 8, 1 47-1.55 (1993); és 0 „Stankar . P.HOtero Boné, 14,
871-876 (19 3310 a hepatíti s, beleértve az al. non el os hepatítis-t
[lásd oéldá «1?. C.3. Ma Cl a in, id Obobén , fíepatolcgy, 9, 349-351
(19890 M.E .Felver et al., ’Oe okol.Cl in.Ezo.Rés., 1 O 255-259
( 1990); >J. η a n s e n e t ai., 9epet oio gy? 2.0, 481-474 (1994 ; O a vírus
hepatitis-t [lásd: N.Sheron et al. , T.Répától., 12, 2 41-24 5
(19911; O t Jussain tó > f d. Cl in. Pathol., 47, 1112-1115
(1994}1, és a f uImi n ana h apati t is-1; továbbá az olvadási zavarok
[lásd például: T. van dér 'Roll et al., N. Énül. J. bed 322,
1622-1627 (199 3) ; T. van dér Eo 1.1. e t al., üreg. Cl in .. Bioi . Rés. ,
367, 55-65 [13 uO [ f az égesem ['lásd például: B . PtGiroir et ai.,
Am. J. Physiol 267, HO.8-124 (1994 ; X.S.Liu e t al.. Burás, 20,
40-44 (1994;;, a zeperfuniós sérülés (lásd például: iOE.Bcales et al., Am. J. Physiol., 267, 01122-1127 (1994J ; C.Serriek et al., Traúsplantatzon, 59 , 1158-1162 (1994); Ybf.Yac et al, , Resusoltatic?';, 2 9, 157-168 (1995.) o a kelőid képződés [lásd például : á.L.RoCauley et al., J. Óin. Immunoi., 12, 209-308 (1992) j, a hegszövet képződés, pyrezia, a periodontális betegség, a kóros elhízás és a besugárzásos tozicitás.
A találmányt a következő példákkal szemléltetjük. Ezek azonban nem értelmezendok ügy, hogy korlátozzák a találmány oltalmi közét. Az idézett szakirodalmi közleményeket és szabadalmi iratokat ebben a bejelentésben referenciaként tekintjük.
Húsáén antitestek való kötődésének kinetikai anallxise
A ligandum Lbioszenzor mátrixun immobi1izált bíctinezett rekombináns dumán TNFa írhTNFa)] és a vizsgált anyag (oldatban lévő antitestek) között valós idő alatt lezajló kölcsönhatásokat freal-time interaotions) felületi plazmán rezonancia (SPR surface plasmon resonance) segítségével mértük, EIAcore rendszer (Pharmacie, Fiscataway, NJ., USA) használatával. /Flazmon - egy sejt teljes eztrakromoszómáiis állományának gyűjtőneve;. A rendszer egy dextrán híuszenzor mátrixban a bekövetkező protein koncentráció változások észlelésére a SPR optikai tulajdonságait használja fel. A proteineket — ismert koncentrációk, mellett .......
kuvalens kötéssel kötjük a dextrán mátrixhoz. Amikor antitestekét injektálunk a dextrán mátrixon át, az injektált antitestek és az immobilizéit ligandum között létrejött specifikus kötés megnőveksdett mátrix protein koncentrációt eredményez, amely változást idéz elő az SFR szignálban. Az S.PR szignál, ezen változatait rezonancia egységként (RU :::: resonance unit) regisztráljuk. és egy szenzogramm y~tengslyén az idő függvényében ábrázoljuk.
Annak érdekében, hogy a blotinezett rhTNFa. immobilszálasát a bioszenzor mátrixon elősegítsük, sztreptavidínt kapcsolunk kovalens kötéssel a dextrán mátrixhoz szabad amin csoportokon keresztül agy, tégy először aktiváljuk a mátrix karbox.il csoportjait 106 mM N-hidroxí-szuköi.nimid-del (NHS) és 400 mM d-etil-N’-Odietil-amino-propil)-karbodiimid hídrokloríd-dal (EDCj. Ezután sztreptavidínt nyomatunk át az aktivált mátrixon. Harmincöt mikről!tér szereptavidint — 25 pg/ml; nátrium-acetátban oldva, pH
4,5 — nyomunk át az aktivált bioszenzoron és a proteinen lévő szabad aminek közvetlenül kötődnek az aktivált karhoz!1 csupor'Χ ?
tokhoz. A 1eresgálatlan EoC-észtetokét 1 M etanolamin Injektálásával északt íváljuk. A sztreptavi dinnel konjegált bioszenzor csípek a kereskedelemből is beszerezhetők (Rharmacia, BR-luöQ-16; Pbarmacía Bíosensor, Plscataway, Nú. USA).
A biotinezett rhTNFa-t a következőképpen készítjük: először feloldunk 5,0 mg biotint FD-biot írni 1-s-amino-kapucnsa v - N-szukcinimid észfar; Boahringez Mannheim., kát.szám: 1008 960) 5QG pl.
dimetí1-szuifoxidban, és így egy 10 mg/ml koncentrációjú oldatot kapunk. Tíz mikro!iker biotint adunk az rhTNFöi 1 ml-éhez (.2,65 mg/ml mellett}, hogy egy 2:1 folton: rhTNFo. arányt kapjunk. A reakcióelegyev óvatosan elkeverjük és 2 órán át szobahőmérsékleten., sötét helyen inkubáijak. Egy PD-10 oszlopot — töltet: Sephadex G-25M (aharmacia, kát.szám: 17:-0851-01) — 25 ml hideg PBS-sel hozunk egyensúlyba és felvíszünk rá 2 ml rhTNFa-blotin-t. Az oszlopot 10 x .1 ml hideg: PBS-sel eluáljuk. A leszedett frakciókat OáWg-on olvassuk le (1,0 öö - 1,25 mg/ml). A megfelelő frakciókat egyesítjük és felhasználásig -80'Ί-οη tároljuk. Biotinezett rhTNFa szintén kapható a kereskedelemben (R&D Systems, Minneapclis, MN., USA; kát.szám: FTA00).
A mátrixon sztreptavidln útján immobilizálandö biotinezett rhINFa-t 0,05 % iBIAcpre) P2Ö felületaktív szerrel :(Fharmaola
BR-1000-54, Pharmacía Biossnsor, Fisoataway, NJ. , USA) kiegészített PBS futtató pufferrel (rünníng buffer) (Glbco BEL, árazd Isised, NE., USA; kát. szám: 14190:-144) hígítjuk. Az rhTNFa-speclfikus antitestek meghatározására kötési vizsgálatot végzünk a következőképpen: a biotinezett rh'TNFa részleteit (2.5 nM; 10 pl-es részletek) átnyomaf.juk a sztreptavídinnel közjogait dextrán mát rl.xon 5 ul/perc átfolyási sebességgel. A protein injekciója előtt és közvetlenül utána egyedül PBS puffért folyatunk át minden célIán. Az alap-szignál és a biotinezett rhTNFa injekció befejezése után, körülbelül 30 másodperccel kapott szignál közötti nettó különbséget tekintjük á kötési érték (körülbelül 5ü0 ΗΠ mértékének. Mértük az rhlNFa-specifikus antitestek immobil1zált biotinezetx rbTNFa-hoz való közvetlen kötődését is. Az antitesteket PBS futtató pufférben {2Ό gg/mlj hígítottuk és 2 5 μΐ-es részleteket nyomattunk át az immobil!zált protein mátrixokon 5 μΐ/perc átfolyási, sebességgel. Az antitest injekciója előtt és közvetlenül utána: csak PSS puffért folyattunk át az egyes esilakon. Az alap szignál és az antitest injekció befejezése utáni szignál nettó különbsége mutatja a szóbanfcrgó: minta kötési értékét. A bioszenzor mátrixokat 100 mM sósav oldattal rog< nor..!'.k a következő minta injektálása előtt. A felbomlási sebességi állandó (off rate; Κ·::·ί;· constant), a kötődési sebességi állandó^ jen rate; ΚΟϊί Constanta f az asszociációs sebességi állandó (associátlón rate; K.< ocnstant) és a disszociációs sebességi állandó (dissocíaticn rate; K. constant) rsegha tarozására BiÁcore kinetikai kiértékelő software-t í2.1 verzió; használtunk.
A D2E7 (Igéé teljes hosszúságú antitest) híotinezett rhTNFa-hoz való kötődésének reprezentatív eredményeit összehasonlítva az egér MÁK 135 mát [F(ab')s fragmentum] használatával kapott eredményekkel, az 1. táblázatban foglaljuk össze.
1. táblázat
A D2E7 XgG4 vagy a MÁK 195 kötődés® blotinesett rhTNFa-hoz
; ént itest Az, eh rhTnFa, ke- p } At., közözz PH rhlnla/Az K ;; Sec (középért.. i
D2E7 267 373 1215......... ..............1.014........... 8,4 5 x 10
133 420 1569 1 . 30 10;.s
67 434 1633 1.31 4,7 5 x ΙΟ'
33 4 50 1532 ..............1.19........... 4,4 6 x 103
17 460 1230 0.98 3,4 7 x 10s
3 486 936 0:..67 2,63 x 10;'
á 433 536 0.3 8 Hit x 10“s :
Ü 4 70 244 0 .18 _
(4,38 x 4 0 ·':
ΜΛΚ 193 300 375 881 1.20 5,3 3 x 10
20 j 4 70 1030 1.38 4,54 x 10'·
iom 41? 1141 1.39 3,54 x 10'?
50 4 27 1106 1.32 3,67 x 10~“
? - 4,- H 446 957 1.09 4,41 x ΙΟ
1 3 4 6 4 708 0.79 3,66 x 10
6 474 433 0.4 7 7,37 x 1C;:
3 4 51 231 0.26 6,95 x 10
..................................... (4,94 x 10 ;
Egy második kísérletscrczatban a D2E7 egy Igéi teljes hosszúsága formája és a biotinezett rhTRFa közötti molekuláris kinetikai kölcsönhatások kvantitatív analízisét végeztük el a BIAcore technológiát használva, mint fent leírtuk, A kinetikai sebességi állandókat a 2.. 3. és 4. táblázatban foglaljuk össze.
2. táblásat
A D2E7 és a. bíotinezett rhTNFa közötti kölcsönhatása kiszámított disszocíációs sebességi állandók
Kísérlet Κ.ά (sec-1)
1. 9,53 x W'5
9,?< x 38“5
3 ? o x ír 5 |
Középárlék 3,81 :± 1,91 z ír
3.. táblásat
A D2E7 és a bietinezett rhTXFrx közötti kölcsönhatásra kis sági te t t a sszociáclós , állandók
Kísérlet Ks (M“3·. sec3)
1,33 x lé
•Z :1,81 x lés
•J -> — 3, 36 X lé5 )
Középérték 1,93 i 3,26 x 18s
4. táblásat
A D2M7-rs és hietlnezett rhWFa~ra kissémitett reakció sebességi és affinitást állandók
| Kísérlet K* (M:. sec’1 Ká (secT1) 9, 58 x 105 Kd (M>________ 7,20 x 10i0
[ 2 l,0Ű ,x Irt 9,26 x 10~δ 8,82 x 10Γ1*
: .............. v, --Í .,·*> 5 ; Ó, 60 X 1b 2,2 6 x
| Középérték .1,9.1 1 1,26 x 10- 8,81 ± 1, 06 x 10 6,09 ±3,42 x 10<ö
A dísszoeiácíós és: asszociációs sebességi állandókat égy számi tol tok ki, hegy B1A analízis software-rel analizáltuk a szenzo~ gramm disszociácics és asszociációs szakaszait. Fel tételeztük, hogy a D2B7 és a bictinezett rhTNFo. molekula közötti kölcsönhatás a szokásos kémiai reákelókinét lkát követi: a disszociáció zérus rendű reakció és az asszociáció elsőrendű reakció szerint megy végbe. A kinetikai adatok analíziséhez szükséges molekuláris modellek megválasztásában, az analízis kedvéért, csak a bívalens E12E7 antitssz ?zyi> >3; es s tir.m t 7\Fu cm mm sége közötti kölcsönhatást vettük számításba. Három egymástól t-sgetlen kísérletet végeztünk és az eredményeket külön analizáltak. A D2E7 és a biotinezett rhliJFo közötti kölcsönhatás számított dl sszociác íós sebességi állandójának [KM középértéke 8,81 ± 1,06 x 10;'.ssc''· és az asszociációs sebességi állandó Ka - 1,91 ± 1,26 z 10'“h M“'\sec~;i volt. Az íntrinszik disszociációs állandó (K-.-t; ezután a K:< k;./k,s képlettel számítottuk ki. Tehát a D2E7 antitest rhTüFa-ra vonat koz tetőit közepes K<; értékére a kinetikai paraméterekből 6, OS ± 3,42 x lp“i5í M értéket kaptunk. A F2E7 igGX formájára (lásd a 2., 3. és 4. táblázatot) és a L2E7
IgG4 formájára (lásd az 1. táblázatot és a 2. és 3. példát) Ιοί . mtAc'-'cr kis különbségeket nem tekintjük valódi olyan különbségeknek, amelyeket vagy egy IgGl vagy egy igéi konstans szakasz jelenléte okoz, inkább azt gondoljuk, hogy ez a. pontosabb antitest koncentráció méréseknek tulajdonitható, amelyeket az IgGl kinetikai analízisénél használtunk. Ezért azt gondoljuk, hogy a D2E7 IgGl formájára kapott kinetikai értekek a D2E7 antitest legpontosabb kinetikai paramétereinek tekinthetők,
A D2E7 CDF.3 demének alanxmial végzett pásztáz» mstagenxzálása
Standard technikák használatával a D2E7 VL és D2E7 VH szakaszok C2R3 dóménjel hosszában egyetlen alanin bevezetésével egy sorozat mutagenizálást végeztünk. A könnyű lánc mutációkat az 1B ábra mutatja be fáz LDiEV’dAl, LD3E7+.A3, LL2E7dA4, LD2E7+.A3, LD2E7dA7 és L22E7·.Αδ szekvenciák egy alanin mutációt tartalmaznak. a D2E7 VL CDE3 dómén 1., 3., 4., 5., 7. illetve 3. poziciójában) , A nehéz lánc mutációk a 2'B ábrán láthatók [a HDlEh'dAl, HD2E7+.A2, HD2A7+.A3, HD2E7+,A4, HD2E7*.A5, HD2E7+.A6, HD2E7dA7, HDlEhdAü és HL2E7';'.A3 szekvenciák egy alanin mutációt tartalmaznak. a D2E7 VH CIíR3 dómén 2., 3., 4., S., 6., 3., 3., 10. illetve:
11. pozíciójában. Az rhlNEd vad típusú D2E7 VL-bÖl és VH-ból álló antitesttel végbemenő reakciójának a kinetikáját csszehasonlltct tűk olyan antitestekkel történő reakciójának a kinetikájával.
amelyekben 1)· egy vad típusú D2 E7: VI. egy alant unni szubsztituált D2E7' Víl-val párosodott? 2) egy vad típusú D2E7 vH egy alaninnal szubsztituált D2E7 VL-lel párosodott; vagy 3) egy alaninual szubsztituált D2E7 VI egy alaninnal szabsz ti tuált. D2E7 VE-val párosodon,. Mindegyik antitestet teljes hosszúságú Igéi molekulakant t e s z te I tú k
Az antitestek rúENFa-vai való kölcsönhatásának kinetikáját felületi plazmán rezonanciával határoztuk meg az 1. példában leírt módon.. A különböző VH/VL párok felbomlási sebességi állandóját íKmJ az 5. táblázatban foglaljuk össze.
. •hA'Hl
D2E7 alanxn-.s<san Mutánsok kötődése bioti aexett rhTKFa-hoz.
V- VL C-sm”.
D2E'? VE C2E7 VL 9,65 x IC5
HD2E7CA1 Ú2S7 VL ' 1,4 x IC4
HD2E7*. A2 D2E7 VL 4,6 x 10'
HD2E7*.A3 D2E7 VL 8,15 x 104
ED2E7’ . A4 D2E7 VL 1,8 x 104
HD2E7-. Aö 22El VL 2,3 5 x IC4
HD2E7 *.A6 Ú1E7 Vá j ''' j j: 2,9 x IC
húihVCAV .......... ::...........................b2ú7 VL......................... 1,0x10
HD2E7 *· , A8 Ώ2Ε2 VL ^.. χ Ι0-ϊ
ED2E7*.A9 D2E7 VL 8,1 x 10
D2E7 Vü LD2E7*.A1 6,6 x IC'
Dl£7 VH LD2E7*,A3
D2E7 VE LD2E7 *. A4 1,7 x 7 0'·
D2E7 VH 11227’· . A5 1,8 x 10*
D2E7 VE LD2E7*.A7 1,4 x le4
D2E7 VH L.D2.E7* .A8 7,65 z ÚT4
E12E7-, A3 LD2E7*.A1 1,05 x ír4
Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a 02E7 VL és VE szaka<·> >κ d ' ' tn i < > {. k x n ' v «hi ni csoporttal való szubsztituálásra. Egyetlen alanin szubsztltuclpja
a 22£7 VL CER3 dómén 1., 4 ., 5. vagy 7. pozíciójában vagy a D2E7
VH CDF3 2., 3. , e., 8 . , 9 ,. vagy 1 0. pozíciójában lényegesen nem
befolyásolja a rhTNFn kÖZé; fa 2 hóm lási sebességét, ö s s z e h a s on 1 í t -
va a vad típusú : szülő: 1 132 EV entitás ttei . A D2EV VL CDR3 8. poziel-
ójában vagy a ö2E7 VH CER3 .3. pozíciójában vé gz e 11 a 1 a n i n
s z cosz t i~t ú c1ó 4-szer gyorsabb K;>í: értéket és- egy alariin szubszti-
rációja a őzEV VE GRí 23 4. vagy 12 . pózicíójában 8-szór gyorsabb
értéket adott, ami azt mutatja, hogy ezek a pozíciók a kritikusahhak a rcTNFc-hoz való kötődésre nézve. Egyetlen alanin szubsztitúció a D2E7 VL CDR3 dómén 1., 4,, 5., 7. vagy 8. pozíciójában, vagy a E2E'7 VE CDR3 dómén 2., 3,, 4., 5., 6., 8., 9., 20. vagy 11. pozíciójában még mindig olyan antí-rhTEFa antitestet eredményez, amelynek rd* értéke 1 x .10s sec”: vagy ennél kisebb.
D2E7-t.el rokon antitestek kötési analízise
Az 1, példában leírt felületi plazmon rezonancia segítségével egy sor D2E7-tel rokon szekvenciajú antitestet analizáltunk — a D2E7-tel összehasöhlitva ‘—* rnTWa-hcz való kötődésükre nézve, A vizsgált VL szakaszok aminosavszekvenciáit az. 2A és 18 ábra mutatja. A vizsgált VH szakaszok aminosavszekvenciáit a 2A és 2B ábra mutatja. A különböző VH/VL párok (a jelzett formában, vagy mint teljes hosszúságú IgGl vagy IgG4 antitest, vagy mint egy scFv) KGfr sebességi állandóit a 6. táblázatban foglaljuk össze.
. 0015105.253.1:
0287-tel roköjt anti testek, kötődése 'bxetinesett. rh.TNFa~hos
VH VL Fci ma knffláév Ej:
22E7 VH Ü2E7 VI. IgGl/IgG4 .....~ΊΓό5~ζ ír5......
VH3-D2 EGE 7 IgGl/IgG4 7,7 x 1C;>
VH1-D2 EGE 7 scFv 4, 6 z IC'
VH1-D2/N EGEI. T lgG4: 2,1 x 102
VH1-D2.Y LGE7 .A IgG4 2,7 z }('·
VH1-32 . Ϊ EGE 7 ,.A 3gG4 3,2 X 10 — '
VH1-22 EP E12 s c Fv 8,0 z 10·
VH1-D2 23D4 VL scFv 1 . 94 x 10~';
3C-H2 L0E7 S C Fv 1,5 z 10”;
2SD4 VH EGE7 se Ev 6,07 x 10'3
2224 VH 2324 VL scFv 1,37 x ΙΟ·'2
VH1A1 1 2204 VL .5 c Fv 1,34 x 10~3
VH1E12 2SD4 VL scFv 1,01 x 10z
VH1B11 2BEA VL scFv 9,3 z 103
VH1E4 ' 130V VE ' ' ' seFv 1,59 x 10~2
VH1F6 33 24 VI: scFv 2,2 9 x 10-
VH1 28 2234 VL scFv 9,5 x 103
VH1G1 2324 VL scFv 2,14 x 103
2SD4 VH ΕΞ- 212 ScFv 6,'· z 10'
2SD4 VH VL10E4
2234 vp VL10QA9 <Λ Yj y s; 1,33 x 12:
2324 VH VEI0022 scFv 1,4 1 x 10'·
2224 VH VL10F4 soFv 1,11 x 10~3
2SD4 VH VALÖEB ' ' s c Fv 1,16 x 10~3
2214 VH VEL0F9 scFv 6,09 x 10'3
2SD4 VH VLL0F10 acFv 1,34 x 16;
2324 VH VELGG7 scFv 1,56 x 103 1
2SD4 VH ..................VLLGG9 scFv 1,46 x 107
2SD4 VH V1.LGH1 s C g'Y 1,17 x 10~3
2SD4 VH vLEGH10 sefv 1,12 x 10'3
22D4 VH VL1E7 s e Fv 1,3 x 1.0-
2SD4 VH VL1CL scFv 1,3 6 x 103
2 2D4 VH ' ' VLI'0’7 scFv 2,0 x 102
2334 VH VL0.1F4 scFv 1,76 x 103
2324 VH VEO.1H8 seFs? 1,14 x 10'2
·» *
A teljes hosszúságú antitesteknél (azaz IgG formáknál; — amelyekben a VL-t a D2E7, LD.L7, L0E7.T és L0E7.A szekvenciák közül választottuk, amelyekben vagy egy treenin vagy egy alanin van a
9.. pozícióban — kapott alacsony Kű££ sebességi állandók (például:
x 10‘4 .sec1! azt mutatják, hogy a D2E7 VL CDR3 9. pozícióját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásosak a Kü-u értékét. Ennek megfelelően a Ü2E7 yb CDR3-ra általánosan elfogadott motívum a Q-R-7--:-3.-0-?-ϊ-(T/A) (3. számú szekvencia; aminosávszekvencia. Továbbá a kapott alacsony Kc.f·· sebességi állandók (például: K;íf 1 x 10“’ secb azoknál az: antitesteknél, amelyeknél a Vn-t a D2E7, VH1-D2N és VEI~D2. 4-bél választottuk ......- amelyek vagy egy tirozint vagy egy aazparagint tartalmaztak a 12. pozícióban — azt mutatják, hogy a D2E7 VH CDR3 12. pozícióját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a Ε,;·; értékét... Ennek megfelelően a D2E7 VH CDR3-ra általánosan elfogadott motívum a V-S-V-L-S-T-A-S-S-L-D-(V/NÍ (4. számú szekvenciái aminosavszekvenica.
A 6. táblázatban bemutatott eredmények azt bizonyítják, hogy soFv formában a 2SLA VL vagy VH CüRí szakaszt tartalmazó: antitestek gyorsabb K,- érzéket (például: 3L:·. 1 x. 1Q“5 seb', mutatnak, összehasonlítva a D2E7 VL vagy VH CDF3 szakaszt tart a ima zó antitestekkel . A 2SÍM a VL CDR3-ban a D2E7-től a 2., 5. és 9. pozíciónál különbözik. Mint fent megtárgyaltuk, a 9. pozíciót azonban elfoglalhatja az alanin (mint a 2SD4~ben) vagy a treonin (mint a D2E7-ben; anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a Kof£ é Tehát, a 2SD4 és D2E7 osszehasonlitásáhól kitűnik, hogy a D2E7 VL < κ
CDR3 2. és ö. pozíciójában lévő két argininnel kapcsolatban megáll spinhez jak, hogy ezek kritikusak az antitest ü'TNFa-val való as-szocíációja szempontjából, Ezek, a csoportok, mint kontakt csepert ok, valószínűleg közvetlen szerepet játszanak az antitest Kötőn el. yen vagy komoly mértékben járulnak hozzá az antitestmolekula ezen szakaszának szerkezeti felépítéséhez. Ami a 2. pozíció fontosságát illeti.: az. Arg csoport helyettesítése (a LöE7~ -ben, amelyben a VE CDR3 azonos a D2E7—ével) Lys csoporttal (az EP Bll-ben) kétszeresére gyorsítja a f elbomlási. sebességet. And. az 5. pozíció fontosságát illeti r az Arg csoport helyettesítése (a D2E7-ben) Alá csoporttal (az LD2E7*..Ao-ben? , mint a 2. példában leírjuk, szintén kétszeresére gyorsítja a felbomlási sebességet. Továbbá, Arg csoport nélkül ügy a 2., mint az ö. pozícióban {a 2SDá-hen) a felbomlási sebesség ötször gyorsabb. Meg kell jegyezni azonban, hegy bár az 5. pozíció fontos a hTNFá-hoz való kötődés javítása szempontjóból, egy ebben a pozícióban végrehajtott változtatás más pozícióknál, végzett változtatásokkal hatálytalanítható, mint ezt a VlLGEi, VLLGül, vagy VLO.1RS szekvenciák esetén láthatjuk.
A VH Cili szakaszban a 2SD4 a B2E7-től az 1., 7. és 12. pozícióban különbözik. Azonban, mint fent megbeszéltük, a 12. pozíciót elfoglalhatja az Asn (mint a 2:SD4-hen} vagy a Tyr (mint a D2E7-beri} anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a értékét. A 2SD4 és a 12E7 összehasonlításából magáilepi zható tehát, hogy a D2E7 VH CDK3 1. és: 7.. pczíaici kritikusak a hTNFa kötése szempontjából. Mint fent említettük, ezek a csoportok közvetlen szerepet játszhatnak kontakt csoportok gyanánt az antitest kötőbe
4t !>.
lyén vagy komoly mértékben járulhatnak hozzá az antitest molekula szerkezeti felépítéséhez ebben a szakaszban. Mind a két pozíció fontos a hTNFíx-hoz való kötődésre nézve, mivel ha 3C-H2 VH CDR3-ah (ebben egy vallat cseréltünk alaninra az 1-es pozícióban a D2E7 VH CDR3-ra vonatkozóan) használunk, az soFv-nek háromszor gyorsabb a relbomlási sebessége, mint amikor D-2E7 VH ClR3~at használunk, de én a felbomlási sebesség meg mindig négyszer lassúbb, mint amikor 2SD4 VH CE)R3-at használunk (amely a D2E7 VH CDR3-hoz viszonyítva, mind az 1., mind a 7. pozíciósán változtatásokat tarraIma z}.
A D2E7 fcnkciós aktivitása & D2E7 funkciós aktivitásának vizsgálata céljából számos assay-ben mértaz antitest hTMFa aktivitást gátló képességét mind in vitro, mint in vivő.
A. THFU-indukált citotoxlcitás neutrallzálás L929 sejtekben
A humán rekombinans TNFíx -rnldFa) se jt~eXtotoxicitást idéz aló egér 1929 sejteken 18-24 órás inkubációs időtartam után. Humán anti-hTNF<x antitesteket értékeltünk 1929 assay-kben úgy, hogy az antitesteket rhTHFa-val és a sejtekkel együtt ínkuháltuk a következőképpen : 96-tartályos mikrotitráló lemezeken 120 ul auti- hTNFa antitestből 1/3-os párhuzamos sorozatáigáfásokat készítettünk 10 % fatális marha szérumot (FBS) tartalmazó RPMT táptalaj használatával. Minden mintát tartalmazó tartályba. 50 μΐ zhTMa-t mértünk, és így 500 pg/ml végső koncentrációt kaptunk. A lemezeket ezután 30 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ect követően μΐ-bsn TNFa- szenzitív L929 egér fibroblaszt sejteket adtunk minden tartályhoz —· így 5 x ΙΟ4 sejt/tartály végső koncentrációt értünk el — és 1 pg/ml aktinomícin-O-t. A kontrollok táptalajt plusz sejteket és rhTNFa-t plusz sejteket tartalmaztak. Ezek a kontrollok és egy TNFa standard görbe — 2 ng/mi-tol 8,2 pg/ml-ig — biztosították az assay minőségét és azt, hogy rálátást kapjunk a neutra.lizációna. A lemezeket egy éjszakán át (18-24 órán át; 37cC“ön, S % Ü tartalmú atmoszférában in kábáitok..
Minden tartályból löd pl táptalajt vettünk ki és hozzáadtunk 50 pl PBS-ben 50 mg/ml koncontrációjü 3- (4,4-deretií~ti azol-2-íi)-2,S-dizenil-tetrazolium bromidot (MTT; beszerezhető a kereskedelemben, a Sigma Chemical Co., cégtől; St.Louis, M0<, USM , A lemezeket ezután 4 órán át 37°C~ó.n ínkubáltuk. Minden tartályba 50 pl 20 l-os uátrium-dodecil-szuifátot (SÜSÜ mértünk, majd a lemezeket egy éjszakán át 37*C-on inkubáltuk. Az optikai sűrűséget 570/630 nm-en mértük, minden mintára görbét vettünk fel és az 72·. értekét standard módszerekkel határoztuk meg.
A különböző: Vb és Vh párokat tartalmazó humán antitestek reprezentatív eredményein a MÁK 195 mét-tel kapott eredményekkel összehasonlítva, a 3. ábrán és az alábbi 7. táblázatban mutatjuk be.
A 3. ábra és a 7. táblázat adatai bizonyítják, hogy a D2E7 humán antí-hTNFa antitest és a különböző D2E7-tei rokon antitestek, a TNFa-izdukál.r L929 citotoxicitást megközelítőleg hasonló kapacitással neutralízálják, mint a MÁK 195 egér anti- hTNFa mAt.
7. táblásat
A -indukált I«92'> ei.tot©xxcxtás neutralizálása
VH VL Szerkezet IC5Ö, M
D2E7 I?2E7 scFv 1,1 x irí3
D2E7 D2E7 igéé 4,7 x Kb:;
zSos 2SÜ4 scFv .o? ,oC. 3,0 z 107
2ED4 L2E7 Sötv 4,3 x 10 s
VH1-D2 2004 ecEv 1,0 x 10~s
Vül-ffi: 1ÖE7 s elv/1g G1/1gG4 5,4 x 1(Γΰ
W1.E2.Y IOE71.T IgG4 8,1 z 10';i
Wíl-K.K 1ÖE7.T IgG4 1,3 x 1Γ®
ÜH1-IS.Y LÖE'l.A .i.go4 2,3 z IC1·11
W1.-E2.N LOE7,A IgG4 6,2 x 19n·
MÁK 195 MÁK: 195 .scEv 1,9 x 1ÜS
Bt 195 MÁK 195 F (a bf | ;> 6,2 x 10'
Egy másik kísérletsorozatbán a D2E7 Igéi formájának TRFa-indukált L.929 cl totOxicitás t neuurslizálö képességét vizsgáltuk a fentiek szerint. Három: független vizsgálat eredményét és ezek átlagát a 8.. táblázat foglalja össze.
·< Λ
8. táblázat
A W«-indultai b L929 citcboxxöitás neutralixálása D2K? IgGl
Kísérlet. XC5e [M]
1 1, Zéj x lüií5
2 1,33 x 10~ic;
3 1,15 x 10~w
ko-’^ps rzek 1,25 ± ű , 01 x 1Ü1S
Ez a ki sérletsorozat raegerősioette, hogy a D2E7 teljes hőstszüságú IgGl formája 1,25 ± 0,ül x 10'v M IC5S átlagérték mellett neutralízál ja a TMEa-indukált 1.929 citotozicitást..
B. Λ tEtFo d-£37 netteken lévő SSOkí-xeoep torokhoz való kötődésének kláné
Megvizsgáltuk, hogy a humán antl~hTNFa antitestek képesek-e gátolni a hTNFa kötődését a sejtek felületén levő hTÜ’kx-receptorokhoz. A vizsgálatban Ü-937 sejtvenalat (ATCC ERE 1593; 1974; használtunk, amely egy hlhF<x-recepsorokaz kifejező humán hisztiéoltás sejtvonal. Az ü-937 sejteket 10 % fatális marha szérummal (Hyclpne A-llll.; Hycgne Lahorazorles, fogan, UT,., USA;, L-glutaminnal (4 nM) , HEFES pufserrel (10 mM), penicillinnel (100 ug/ml; és sztreptomicinnel Í100 gg/ml; kiegészített REMI táptalajon tenyésztettük. A teljes hosszúságú IgG antitestek aktivitásának vizsgálata végett az U-937 sejteket 1 mg/ml humán IgG-vel (Sigma
1-4 50 0; Sigma Guernica! Go., St.Üouis, MG., tíSAl kiegészítést PBS-ben 45 percig jégen előinkubáltuk és ezután a sejteket háromszor mostuk köre pufféiról. A receptor-kötési assay-tez a ü-937 sejteket hő-tartályos miknotitráló: Lemezeken (Costar 3739; Costar Corp., Cambridge, MA., USA} (5 x. 10c aejt/tartály; kötő-pufferben (0,2 % marha szérum, albuminnal kiegészített FBűj '-I-jelzett rhTNFa-val együtt (3 x 10J:íí M; 23 uCi/ml; NŐN Research Pröducts, NiImingtón, DE,, ÖSA( inkubáltuk anti-hTNFa antitestek jelenlétében, vagy anélkül, összesen G,2 ml-hen. s lemezeket jégen inkubáltuk másáéi őrén át. Ezután minden mintából 75 μΐ-t vittünk át dibutil-ffalát ISigma D-Z270; Bigéé Chemical €o., Bt.Louis, NiO., USA) és óinonil-ftálát (I€M 2107.33; ICN, Irvine., Cá., üSA; keverékét tartalmazó 1,0 mi-es teszt-csövekbe. A teszt-csövek a dibutil-ftalát és dinonil-ftalát 2:1 arányú keverékéből 300 ui-t tartalmaztak. A szabad (azaz kötetlen} “’l-jelzett rhTNFa-t 5 perces mikrócentrifugái ássál távoli róttuk al. Ezután minden egyes teszt-cső végét, amely a sejt-üledéket tartalmazza, egy mikrocsőollő (Eel-Art 210130001; Bel-Art Eroducts, Peguauncck NO., üöá; segítségével levágtuk. A sejt-üledék pOO vagy ρδΟ 70Fa-receptorhoz kötött I-jedzett rhTNFa-t tartalmaz, mig az olajos keverék feletti vizes fázis a feleslegben lévő szabad jelzett rhTNFa-t tartalmazza. A sejt üledékeket számláló u . (Falcon 2052; Beütöm Dlokinson Labware, Lincoln Park, NJ., USA) gyűjtöttük össze és szointilláeiős számláiéban számláltuk.
A 4. ábrán láthatók a reprezentatív eredmények. Ezekben a vizsgálatokban a niNFa-nak ü-937 sejteken megjelenő hTNFa-rexa > a r> ” _' N 13 ' . rn. i * .
gátolta. Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2E7 humán antihTNFa antitestek olyan koncéntráölök mellett gátolják az rhTNFa
kötődését U-937 sejteken lévő hTNEa-receptorokhoz, amelyek azono-
sek az egér RAK 135 anti-hTNFa keúeen:trációival.
Egy másik kísérletsorozatban a D2E7 IgGl formájának a hTKFa
0-937 sejteken levő hTóFa-receptözekhez való kötődése elleni gát-
lö hatását v.izs igáitok., mint fent leírtuk. Bárom független vizsga-
lát eredményét és ezek átlagát a 9. táblázat foglalja össze.
Kisaviét ICSo [Ml
1 1,70 x 10'M
1,7 3 x 1025
3^ 1,50 x ΙΟ···'
Középérték 1,56 ± 0,12 x 10υ:ι
Ez a kísérletsorozat igazolta, hogy a D2E7 teljes hosszúságú IgGl formája átlag 1,S6 ± 0,12 jí 103/ö sió ICgs értékkel gátolja: E-937 sejteken a TNE-receptorhoz való kötődést.
A D2E7 gátló hatását a ^I-rhTNFa individuális : óó és p75 tv ' \ < K <v to t ’ V r fRIA): vizsgáltuk. A D2E7-n.sk a. különböző TFF-receptörokra vonatkozó ICsö·· értékeinek méréséhez az antitest változó koncentrációit a ^I-rhTBF 3 x lv'it! koncentrációjával rnkubáltuk. A keveréket ezután külön lemezeken — az egyik a p55, a másik a p75 TÓF-re * X ceptom tartalmazta — teszteltük dózis függő módon. Az eredményeket a 10. táblázat foglalja össze.
10.. táblázat
D2B7 '
ICS3 1
Reagens poő TNFR P7 5 TEFR
02E7 1, 47 x W's 1,2 δ x 10'
rhTNF 2,31 x líA 2,70 x 10*
A **Π···ζηΤΑΕ 0-937 sejteken kifejeződő pH és pH TáF-receptorhoz való kötődésének gátlása D2E7-tel egy egyszerű S alakú gömbét ír le, ami az egyes receptoroknál hasonló IC50 értékekre
utal. A rekomfoináns TNF-receptorokka1 szilárd fázisé rádióimmun-
assay-vel (RXA) végzett kísérletezzen a 33s-X-zhEFF^ púd és p75 re-
ceptorokhoz való kötődésének D2E7-tsl v aló gátlására 7 x 10~
M, illetve 1,26 x Ív' A ICas erzekeket számítottunk ki. AZ íC:,;·)
értékek csökkenését a szilárd fázisban valószínűleg az 0 koz. t a,
hogy a receptorok sűrűsége nagyobb a R1A alakban, > •igya n.igy az
rhfdF-é, amely hasonló* ICU; értékekkel volt gátolt. A ' I-rhTNF p55 és p75 receptorhoz való kötődésének gátlása jelzet len rhTbF-fel a következő ICss értékeket adta: 2,11 7 103 A, illetve 2,7 0 x 10': M.
C. FXAMH expresszié gátlása
A humán köldőkvéna endotel iális sejtek '(HöVEC ~ humán umbilical vein endothelial cell) sejtjeik felületén sodora 11álla sejt ieukocita adhéziós molekula-1. (ELAh-l - endothelíal cell íeukopyte adhesion molecuia 1) kifejezésére indukálhatok rhTNFa kezeléssel. A jelenséget úgy tudjuk kimutatni, hogy az ríTíFa-vai kezelt HEVEC-et egy egér anti-humán ELAM-1 antitesttel· reágéltatjuk. A humán anti-hTKFa. antitestek azon képességét, miszerint az ELAk-1 HUVEC-en történő TRFa-indukált uxprssszióját gátolják, a következőképpen határozzuk meg: nüVEC-et [ATCC ERE 1730; viszünk 96-tartályos lemezekre (5 x 104 sejt/tartály) és a lemezeket egy éjszakán át cl^C-ou inkubáljuk. A következő napon égy mikrotitráló lemezen a humán anti-hTEFa antitestből· ser azaz >igitásokat t,.' ’ kv·*' ’mk A hiígítáaokat 2G-10Q pg/ml antitesttel kezdjük. Egy 4,5 ngZml koncertrációjü rhTFFa törzsoldatot készítünk, majd az antitestet tartalmazó tartályokhoz hozzáadjuk az rhlNFu alikvot részleteit és tartalmukat jól összekeverjük. A kontrollok csak táptalajt, táptalajt plusz anti-hTRFa antitestet és táptalajt plusz rhTNFa-t tartalmaznak. A HUVEC lemezeket kivesszük az inkubátorból (ahol egy éjszakán át 37°C-pn tartottuk) és a táptalajt óvatosan leszívarjuk a tartályokból·. Ekkor a EüVEC lemezek minden tartályához 2GG μΐ antitest - rhTNFa keveréket adunk. A HWEC lemezeket ezután, tovább inkubáljuk 37°C-on 4 órán át. Ezt követően egy egér art1-ELAM-l antitest törzsoldatot l:1000-re hígítunk RFEl-ben. A ÜGVEC lemez tartályaiból óvatosan kiszívjuk a táptalajt, az anti-ELAM-1 antitest oldatból 50 μΐ-t mérünk be tartályonként és a HübEC lemezeket SG percig szobahőmérsékleten inkubáljuk. Készítünk egy i4sz-jelzett anti-egér lg antitest cldav’^T“br,' x i . Ά0Π' t' μ fv . A HUVEC lemezek minden tartályából óvatosan kiszívjuk a táptalajt, a tartályokat kétszer mossuk RPMI-vel és minden tartályhoz 5£< ui 3Ή~jelzett anti-egér lg oldatot adunk. A lemezeket 1 óra hosszat szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd minden tartályt háromszor mosunk RPMI-vei. Ezután minden tartályhoz 18Q- pl 1 %-og SDS-t adunk a sejtek lisálása céljából. Ezután minden tartályból csőbe visszük át a. sejt lizátumokat és szcintillácíöa számlálóban számlálunk.
Az 5. ábrán a reprezentatív eredményeket, műtétjük be. Ezekben a kísérletekben a BLAM-1 HEVEC—en való hTNFa-indukált expressziójának E2E7~tul végzett gátlásának 1C-: értéke körülbelül 6 x IQ^ M. Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2E7 humán antl-hTNFa. antitest olyan koncentrációban gátolja az ELAA-1 HWEC-en való hTNFa-indukált expresszióját, amely megközelítőleg azonos a HAK 195 egér anti-hTNFa műt gázló koncentrációjavai.
Egy másik kisérlet sorozatban a E2E7 Igéi formájának az ELAM-1 HüVEC-en valt> hlNFa-indukált expressziója elleni gátló: hatását vizsgáltuk, mint fent leírtuk. Három független vizsgálat eredményét és ezek középértékét a 11. táblázat foglalja össze.
11. táblásat
Kísérlet ..................................... 1 [M] |
1 l,95x lu”'3 [
•u-
z rbő x rü :
<: 1,:9:0 X 1:0“3S |
Középérték 1,85 i ö,14 x ΙζΓ'3 1
·) 3
Ez a kí sér ké tsor osat megerősítette, tégy A D2E7, teljes hoszszúságú IgGl formában, a TWa-mdukál.t EuAM-1 expresszióját HL'vEC-su 1,35 ± 5,14 x 10' ICm (Mi értékkel gátolja,
A D2E7 Igéi centralizációs hatékonyságát két másik adhéziós molekula - ICAM-1 és VCAM-l - rhlhEa-zncukált expressziójára is megvizsgáltuk. (ICÁM intercellular adhesion molecule; VCAM = vsáéulaz cell adheyign molecuie). Minthogy az xhEMF titráXási görbe ICAM-l expzesszióra a 16, órában nagyon hasonló volt, az ELAM-l expressziós görbéhez, az rhTRF ugyanazon koncentrációját használtuk az antitest neutxalizációa kísérletekben, A HUVEC-et rhTNE-fel in.kubá.ltuk a D2E7 különböző koncentrációival egy 37 ;:C hőmérsékletű Cö—ínkubáturban 16 érán át:. Az ICAM-Í expressziót egér anti-ICAM-1 antitest, majd ^I-jelzett birka anti-egér antitest segítségével mertük. Két független kísérletet végeztünk és kiszámítottuk az rc5ö értékeket.. Egy nem-rokon hunén IgGl antitest nem gátolta az ICAM-1 expressziót.
A VCAM-1 expresszió gátlását tesztelő kísérleti eljárás azonos volt az ELAM-1 expresszi ót tesztelő eljárással, kivéve, hogy anti-VCAM-1 mAu-at használtunk ant 1.-ELAM-1 mAt helyett. Három független kísérletet végeztünk és kiszámítottuk az IC5y értékeket. Egy nem-rokon IgGl antitest nem gátolta a VCAM-1 expresszióját.
Az eredményeket a 12. táblázatban foglaljuk össze.
ICAM-1 gátlás gátlás
hí ser let ICs§ ÓM} Kísérlet | IC^ fO |
2: 2,0 x lö·30 2 j z .· 2 6 x 1 ü |
i | a | 1, OE x: 130'
Középérték j 2,17 ± 0,43 x ίΟ~Λυ Középérzék | 1,01 ± 0,01 x. 1G*V )
Ezek a kísérletek azt bizonyították, hogy a primer humán köldökvéna endotelíális sejtek kezelése rhlliF-fel az adhéziós molekulák optimális expresszióját eredményezi. EEAM-1 és ΌΑΜ-1 esetén a 3. óránál, ICÁM-1-néi pedig a 16. óránál éri el maximumát a felerősített expresszió. A D2E7 meg tudta gátolni dózis függően a három adhéziós molekula ezeresszíóját. Az ELAM-1, ICAM-1 és VCAM--1 jcOasaia tato;; _? .. vo_tak> 1,85 x 100% 2,17 x líOS illetve l,ül x 10~iU M. Ezek az értékek nagyon hasonlóak, ami arra utal, hogy az ElAM-1, ICAM-1 és VCAM-1 expresszit indukálásához. szükséges aktiválási szignál az rhlNF dózisa iránt hasonló igényeket támaszt. Érdekes módon, a D2.E7 az ICAM-1 hoszszabó inhibíciós vizsgálatában hasonlóan hatásos volt. Az ICAM-1 gátiász assay-ben az rhTNF-et és D2E7-et 13 órán át kellett együtt inkubálnr HuVEC-oei, ezzel szemben « órára volt szükség az ELAM-1 és VCAM-1 gátlás! assay-kben. Minthogy a I2E7-nek alacsony a disszocíációs sebessége rhlNF vonatkozásában, elképzelhető, hogy a 16 órás kc-inkübációs: időtartam alatt nem volt jelentős versengés a HüVEC-en lévő TNF-reneptorok iránt.
X>. Λ hWa in víto :sentrali«álá«a
Három különböző in vivő rendszert használtunk annak bizonyítására, hogy a D2E7 hatékonyan gátolja a híNFd aktivitást in vix? kJ v
I. 1’MF-lndn.ká:.? t lata.iitás gátlása D-galaktőzamínnal szenzít í zált ege rekben
Rehombináns TNFa (rhTNFa) injekciója D-galaktózaminnal szeneitízált egereknek 24 órán belül halált okoz. Kimutatták, hogy a Wa centralizáló szerek meggátolják a letelitást ebben a modellben. Vizsgáltuk ebben a modellben a humán anti-hTNFa antitestek hTNFa neutrallzáló képességét in vivő. Ennek orcákéban 23731/6 egereknek 1ntraperítöhéális tí.p.V injekcióval különböző koncentrációjú I2E7-IgGl-et, vagy egy kontroll proteint adtunk PBO-hen. Az egeteket 32 perccel később 1 μη hídFa-val és 20 mg D-galaktózaminnal — RBG-ben í.p. — challengeltuk, majd 2:4 órával később megfigyeltük az állatokat. Előzőleg meghatároztuk, hogy ezen rhlNFg és D-galaktózamin mennyiségek 80-90 % letalitást értek el ezekben az egerekben.
A 6. ábrán azokat a reprezentatív eredményeket mutatjuk be — hasáb diagramm formában — amelyek a %-cs túlélést az antitest koncentráció függvényében ábrázolják. A pontozott hasábok képviselik a D2E7-st, míg az üres hasábok a MÁK 195-öt. Egerenként
2,5-25 pg D2E7 injekciója megvédte az állatokat a TNFd-indukált leteli hastól. Az ED:C érték körülbelül 1-2,5 pg/egér. A pozitív kontroll anti test, a MÁK 195, hasonlóan protektív hatást fáj tett ·<
kí. A D2E7 in jekciója rhTNFö távollétében nem hatott károsan az egerekre. Az «specifikus humán IgGl antitest in;etolója nem nyújtott védelmet a TWu-indnkált letalitás ellen.
Egy második kísérletben 49 egeret osztottunk 7 egyenlő csoportba. Mindegyik csoport különböző öózisú D2E7-et kapott, majd 80 perc múlva egy LIW dozísú rhTRF/D-'galaktőzamin keveréket {1,0 pg rhTÉF és 20 mg D-galaktózamin per egér). A 7-es kontroll csoport normál humán Igéi kappa antitestből 25 pg/egér dózist kapott. Az egereket 24 órával később ellenőriztük. Az egyes csoportokban talált túlélést az alábbi, 13. táblázatban, foglaljuk észsze.
. táblásat
órás túlélés D2B7~t<sl való keselés után
Csoport Túlélők (élő /össsas) Túlélők (%} i
:y [antitest nélkül? &
'? U pg 14
3 {2,6 pgl 71
4 {5,2 pg) 6/7 8 6
5 {26 pg} 6/7 8 6
6 {26 pg; rhTRF nélkül? 7/7 1O0
7 (25 pg Hz igGl) 14
11, ThF··· indukált nyúl pyreria gátlása
A 52E7 hatását rhTXF-indukáIt pirexia válasz gátlásában nyálakban vizsgáltuk. Három, körülbelül 2,5 kg-os FZE nőstény nyúlból álló csoportokat oltottunk intravénásán D2E7-tel, rhTbF-fel és D2£7~bő.l és rhlNF-ből álló immun Komplexek kel. Végbél hőmérsékleteket mértünk közel 4 órán át percenként, termisztár szondákkal , egy Kaye fele hőmérséklet regisztrálón. A rekembináns humán TMF-ből ........ normál konyhasó oldatban —- 5 pg/kq injekciója 0f4cC-nál nagyobb hőmérséklet <? e 1 - ; váltott ki az injekció után körülbelül 4.5 perc múlva. Maga az antitest készítmény — normál konyhasó oldatban -— 13 3 pg/kg dózisban való alkalmazás után 140 percen át nem váltott ki a nyarakban hőmérséklet emelkedést. Minden további kísérletben a D2£7-et. vagy a kontroll reagenseket (humán Igéi vagy a konyhasó oldat, mint vivőanyag) í.v. oltottuk a nyulakba, ezt 5 perccel később egy rhTFF injekció követte normál konyhasó oldatban — 5 pg/kg dózisban, i.v. Számos kísérletet végeztünk és a jellemző eredményeket a 14. táblázatban, alább, foglaljuk össze.
14. táblásat rhTFF-indukált pirexia gátlása D2E7~tel
Γ ------------------------- Hőmérséklet esselkedés* (cC) Csúcs hőm.
[D2S7 dózis rhTNF rhTW k : D2E7 Gátlás** D2B7:rhTS®· rhW inj.után
14 0:,53 :0.,25 53 1 50
24 0,43 0, 13 40 1,6 40
45 íi, 53 :Q,Ü3 94 3, 3 30
137 ' 0,53 0,00 100: ti 60
7 n ? 0,30 0,00 0 2 60
* csúcs hőmérséklet hőmér s. smelk.. rhlW-fel a El E 7-tel;) ~ gátlás % ::: ------ X 1 0 Q hőmért, ereik, csak rhTők-fel
A í>2E7~tel végzett előkezelés 14 gg/kg dózissal részlegesen gátolta a pirogén választ, azokhoz, a nyálakhoz képest, amelyek előkezelésként csak normál konyhasó oldatot, kaptak. A D2E7 137 pg/kg dózisban alkalmazva teljesen gátolta az rhThF-re adott pirogén választ ugyanebben a kísérletben. Egy második kísérletben a D2E7 alkalmazása 2 4 pg/kg-os dózisban szintén részlegesen szuperéaszalta a pirogén választ, azokhoz a nyálakhoz viszonyítva, amelyek előkezelésként csak normál konyhasó oldatot kaptak. Ebben a kísérletben a Ώ2Ε7 molaránya az rhTNF-hez 1/6:1 volt. Egy harmadik kísérletben 48 pg/kg (mőlarány: D2E7:rhTRF - 3,3:1) ©2E7
l.v. injekciója teljesen gátolta a pirogén hatást, összehasonlítva azokkal a nyálakkal, amelyek kontroll humán JgGl-et kaptak előkezelésként, éspedig 3v pg/kg-ct normál konyhasó oldatban. Az utolsó kísérletben a nyulak előkezelését DzEl-hel (732 pg/kg) az xhTNF-hez viszonyítva nagyon magas mól.arány mellett (55:1) végeztük. Itt nem. alakult ki hőmérséklet emelkedés egyszer sem a 4 órán át. tartó megfigyelés: alatt. A. nyulak immunkomplexekkel való kezelése további rhTEF alkalmazása nélkül szintén nem váltott ki hőmérséklet emelkedést ugyanebben a kísér aerben. Az immunkomplexet úgy állítottuk elő, hogy a D2E7 és az rhThF 55:1 mólarányú keverékét 37oC-on 1 órán át inkubaitok.
A A jí >
III. Pólyartwri tfa megelőzése^ Tgl97 transzgeníku.s egerekben
A D2E7-nek a betegség kialakulására gyakorolt hatását tanulmányoztuk egy a.. \;n ítis-es transzgénikus egér modellben. Olyan txanszgenikus egereket íTgl97; hozzak létre, amelyek humán vad típusú TNF-et (a kódold szekvencián belüli 3' szakasz módositottj fejeznek ki és ezekben az egerekben 4-7 hetes korukra 100 %-os gyakorisággal krónikus polyarthritis alakul ki (a Tgl97 polgár térit is modell további leírását lásd: EME© J., 10, 4025-4031 (1991)].
A tranazgenikus állatokat 3 napos korukban PCk-rel azonosított -.a . A transzgenikua egér almokat 6 csoportra osztottuk. A transzgenikus egereket 15 napos korukban „slot-blot hi&ridizáci— ás analízissel ellenőriztük. A hat csoportra vonatkozó kezelésű, protokoll a következő volt: 1-es csoport: kezelést nem kapott;
2-es csoport: normál konyhasó oldatot : vivőanyag) kapott; 3-as csoport: 1,5 pg/g bzE7; 4-es csoport: 15 ug/g D2E7; o-ös csoport: 33 pg/g D2.E7; 6-os csoport: 30 pg/g IgGl izotípus, kontrollként. Egy nem transzgeníkus egéralmot is bevontuk, o vizsgálatba kontroll gyanánt <7~es csoport: nem transzgeníkas állatok, kezelése nem kaptak). Mindegyik csoport hetenként három l.p. injekciót kapott az említett anyagokból. Az ínjekciózást 10: hétig folytattuk. Minden héten minden állatnál feljegyeztük az ízület morfológiájában végbement makroszkópos változásokat. A 10. héten minden állatot elöltünk és az egérszövetet formalinos tettük. A szövet vizsgálatát mikroszkóppal végeztük.
Minden hét elején lemértük az ízület méretét (mm-hen), amely a betegseg súlyosságának a mértékét adja meg. A jobb hátsó hóksizuleten mikrométerrel végzett három mérés átlaga adja mag az Ízület méretét. Az ártéritis-t hetenként, a követkelőképpen értékeltük ki: 0 - nincs arthritis (normál küllem és hajlékonyság); + - enyhe arthritis {izületi disztorzio) ; +e - mérsékelt arthritis (duzzanat, Ízület deformáció; ; -ua erős arthritis (ankilózls — izületi merevség — észlelhető hajlításkor és erősen csökkent mozgás). Az ízület metszeteinek hematoxilín/eozin festésen alapuló pontozás a következőképpen történt: δ - nincs észlelhető betegség; 1 - a szinoviálís membrán proliierációja észlelhető; 2' - erős szinoviálís zavarosodás; 3 - porc destrukció (lebomlás) és csont erózió (lepusztulás).
A Ő2E7 kezelés hatását a Tgl97 transzgeníkus arthrítis-es egerek Ízület méretének átlag értékére a 9. ábrán maratjuk be. A Tg 197 transzgéni kas egerek ........ 11 hetes — kórszövet tani és arthritis-es pontszámait alább, a 15. táblázat foglalja össze.
Tgl97 egereken
| Csoport n é .1 hu r n or m.kony h a t ő old.. Kór sss ö ve t tani Arthritis | pantorása |
*-5 2 *7 ' *7 Γ' \ (8/8)
r (8/8} ]
6 Igéi kontroll > (9/9; táv (7/9.)|
·$ 1,5 pg/g D2E7-nél 0 (6/8) 0 (8/8) |
á 15 pg/g D2E~-nél 3(7/8) 0 (8/8)
5 30 pg/g D2E7-nél 0 (8/8) 0 (8/8) 1
Ez a kísérlet azt szemlélteti, hogy a b2E7 antitestek határozott jótékony hatást gyakorolnák azon tranazgenikas egerekre, amelyek vad típusú humán TKF-et fejeznek ki (Tgl97). A. vizsgálati rác rtan mu.'X.mulá a:'Lir .< ne? se” . el ζ ,η.Ά.
Z. Ms -.fajcijfcb©! származó SFS’i sxeutralizálása ΣΤΟΑ 7-tel
A D2E7 kötő kapacitását úgy tanulmányoztak, hogy megvártak a különböző főemlős fajokból és egerekből származó tumor nekrózis faktorokra gyakorolt nentralizáló képességét L929 citotoxikus assay-t használva (lásd fentebb, a 4. példában az A. alfejesntet) . Az eredményeket a lő. táblázatban foglaljuk össze.
15. táblázat neutralxzalasása L929 assay-ban
WFa* Erődet D2E7 nsutralissálás XC5Ö értébe (M) **
Ember Rekombináns 7,8 X 10~M
Csimpánz LPS-atimaiáit PSKC 5,5 X 10-^
Pávián Pa kombi ná n s 5,Ú X ió~u
Selyemmajom L PS ~s 11muIáit P 3MC 4,0 X 10'
Közönséges makáké> tPS-stimuált P375C 8, 0 X 10<x
Rhéeus majom LPS-stimulált PBMC 3,0 X 10':
Kutya LPSStimulált WBC 2,2 X 10‘10
Sertés Rekombináns 1,0 X 1G~?
E'g é r Rekomblnáns >1, 0 X ír7
* [PBMC - perifériás vér mononukleáris sejt; SBC - teljes vér sejti.
132
A 16. táblázatban közölt eredmények igazolják, hogy a Ü2E7 öt főemlős TEFa aktivitását képes centralizálni, nagyjából azonos módon, mint a humán TllFa-t, ezenfelül neutralizálja a. kutya TNFa aktivitását (körülbelül tízszer kisebb mértékben, mint a humán TüFa-t) és a sertés és egér TdFa-t (körülbelül mintegy ezerszer kevésbé jól, mint a humán láFá-tj. Továbbá: a D2E7 kötődését az oldatban lévő rhTNFa-hoz nem. gátolták más citokinek, azaz a limfotoxín ( THF.S) , az IL-Ια, IL-lfi, IL-2, IL 4, Ip-6, 1L-3, IFNy és TGFÓ és ez arra utal, hogy a D2E7 erősen specifikus TE Fa ligaudumára.
F. A O2®7-t:e2 irxkobált hmsdn telje® várból asem szabadul fel aifekfe.
Ebben a példában azt tanulmányoztuk, hogy a D2E7 maga képes-e a normál humán vérsejteket citokinek szekretálására vagy a sejt felszíni molekulákat leválásra késztetni. Három különböző donortól levett és hígított teljes vért a D2E7 változó konoentráöióívei inkubáltuk 24 órán át. Ugyanakkor egy LPS pozitív kontrollt is futtattunk, olyan koncentrációval, amelyről előzőleg megállapítottuk, hogy az immunkompetens vérsejteket citokinek szekretá-
Iására stimulálja. A felül üszőkat learattuk és tízféle oldható
cltokín, receptor és adhéziós molekula. ELTSA kit panellel tesz-
teltük, úgymint 1 E-Ία, Ti-1Ó, IL-1 receptor antagoniáta, XL-6,
11.-8, IKFa, oldhat ó TNF receptor I, oldható IMF receptor II, old-
ható ICAM-l, és: oldható E-szelektin. A D2E7 antitesttel. — egészen 343 pg/ml.-ig — való k.o~inkubálás eredményeként szignifikáns menynyisegben sem eitokineket, sem levált sejt felületi molekulákat nem észleltünk. A kontroll tenyészetekben, antitest hozzáadása nélkül, egyetlen cltokinből sem kaptunk mérhető mennyiségakett míg az LPS kontroll tenyészetekben magas értékeket kaptunk, a magas pikogrammtől az alacsony - ve gramm tartományig. Űzőkből az eredményekből arra a következtetésre jutottunk, hogy a D2E7 nem ina. 'Alja a teljes vér sejtjeit citckin szekretálásra vagy sejt felületi proteinek elhallátására a normál értékeken felül, ex vivő t ényé s z a te kben.
A mellékelt szekvencia··· jegyzék — amely a találmány részét képezi — tartalmát az alábbi táblázatban foglaljuk Össze:
S z a kv eno i a s z ám.a .Antiite.'·;··. lánc: Szakasz Szekvencia zapus
1 D2E7 VL aminosav
Λ ; O2C7 VH amingsav
3 02 E 7 VL C0R3 amin os av
4 02 E~ VH CÜR3 amingsav
···· 02 E 7 VL CDR2 aminosav
6 0207 VH CDR2 anincsav
1 D2E7 VE CORI áriosav
...............................B........................... D2E7 VL CDR1 aminosav
9 2204 VL ara.inosav
lö 2304 VB aminosav
11 2304 VL CDR3 aminosav
12 EP 012 VL C0R1 aminosav
13 VL10E4 VL CDR3 aminosav
13 VL100A9 VL CDR3 aminosav
: 7 15 VLEI0002 VL. CDR3 aminosav
16 VLL2E3 VL C033 aminosav
17 ........................LQ15..................... VL CDR3 ami sósav
18 VLLÖG7 VL CBRB aminos>ay
19 VLL0G9 VL CDR3 aminosav
20 VLLÜiil VL C0R3 asinosav
21 VLLÖHIO^ VE CDR3 arainosav
-7 ··? Z. V.. VLIB'7 VL C0R3 aminosav
23 VEI 01 VL C0R3 aminosav
24 VLL.1E4 VL LOP3 aminosav
25 VLO.108 VL ODRI aminosav
26 LOE7.A VL C0R3 aming.say ;
•7-7 2304 VL CDR3 aminosav
28 VH1B11 VL CDR3 arainosav
29 VH1O3 VL 0073 aminosav
30 VE 1All VL CÜR3 aminosav
..........11 ΡΉ1Β12 VL CDR3 aminosav
32 VE1E4 VL 0DR3 aminosav
32 VH106 VL CDR3 aminosav
34 3C--H2 VL CDR3 aminosav
35 ®*WJ............. ...................VL ÖLRE aminosav
36 02 E 7 VL· nsklsinsav
·'> ~? _Λ x 02 E 7 VE nukleinsav
s ssrvenc m: agaiké
SEQFENGE LIFTING (1) GENERÁL INFORMATTON:
(ij ABPLIGANT:
(AJ ΚΑΜΕ: BASF Aktiengessl.1 sehait (B) STREET: Cari-Bosch St.r. 38 (C) CITY: 67 016 Lüdwigshafen (Ej STATE::: Rhelnland-Pzalz:
(Ej COONTRY: Federal Rapublic of Germany (dl 11 NSMBER GR SEOOENCES: 37 (iv:j CGNRESPONEENOE ADDRESS:
(Aj ABORESEEE: LAHIVE a OOGEFIELD (B) STREET: 60 State Strast, au.ite 510 (0) SITT: Boatön (ü) S T AT E: Ma s s a c h u s e tt s (E) COANTRY: 6SA (E) OTP:: 02:108-1875 ívj GOMPÜTER READABLE: FORR::
JA) MEDIÖM TTE: Floppy d;sk
JB) GONPÁTER: IBM: PC compatihie jC) OPERAIING BTETEM: PC -LO S/'NE-:003 (0) SOFTWARE: PatantIn Relesse #1.0, Version #1.25 ( vl'j GGRRENT APPIACATTON PATA:
(A) APRÍTGATTGR NGMBER:
(.Ej FHTNG ΒΑΤΕ:
( C ) ELÁSSI FT C ATTON :
(viLj PRI OR APPLICAIION DATA ::
(A) APPLICATIÖG NEMBEN:: GB 05/593,226 (B :j FILING ΒΑΤ E : S 3- FE B -19 9 6 :(0 :j C LAB Sí FI GÁTION :
(vii) PRIOR APRÉICAIΤΟΝ ΒΑΤΑ:
(A) APRÍT GÁTION NŐMBE R:: OS 07 OBI, 176 (B) ElLING LATÉ: 25-NOV-1396 (G) CLAESIFICRTIO/H (viiij ÁTTÖRNEY/AGENT INFORMÁCIÓN:
( A) NAME z OeEpnt i , 01 üllő A . , Ír.
(B) REGISTRATION NiBBER: 31,503 (Ci REFERENSE/ROCKÉT NEMBEN: BBI-043CPPC jix; TELECOMMONICATION IN FORMAITOK:
(A) TELE:PBONÉ: (617 ) 22V-7HR (B? TELEFAX: ( 617 j 227-59#1 (2) ΤΝFORMAIIOÚ FGR. SER ID NG : 1 :
(í} SEQOENCE GHARAGTERISTICSí
Mi: LENGTE: löö amint· acids (Β) ΤΥΡΕ : am i no amid (D) TWOEGGT:: lineax iii) MOLECULE ΤΥΡΕ: peptide (v) FPAGEENT ΤΥΡΕ: internál
ixi } SEQUE NCE EEE CRI RTIQN: SEQ ID Nö: 1:
Asp 11® Gin Net Tht Gin Ser Pro Sex Ser Len Ser Alá Ser Vei Gxy
7 5 10 15
Asp Arg Vei Tto I.la Fór Cys Arg Alá Sex Gin Gly 11® Arg Asn Tyr
20 Xs -sJ- 30
tea Alá Trp 35 Tyr Gin Gin Lys Pro 4S :x.'1 y Bys Alá Pro Bys 45 tea Len He
Sy r A..a Alá Ser Thr Bea Gin Ser Gly Val Pro Ser Rxg Mm Sex íny
50 SS SS
Sex Gly Ser Gly Tfer Αίφ Phe Thr Bea Thx He Ser Ser Leu Gin Pxo
65 70 7S SS
Gin Aep wi A1 a Tte: Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr
85 30 9^
w Fne Gly Gin Gly Tor Lys vei. U le Ly®
1:00 105
Ül INFORMAIION FÓR SEQ ID NO:2:
(i): GEQSMCE GHARAGTERIST.I.CS::;:
i NGL· , 'IBi: ΤΥΡΕ::: ami no amid ( D) TOPC-LOGY: ílnear (ii) MQLECGLE ΤΥΡΕ: peptide ivi FRAGMENT ΤΥΡΈ: internál íxi): SEQUENCE RESTRE PlION: SEQ ID NQ:2 :
Gin Val Gin. ima Val Gin Ser Gly Gly Gly Len Val Gin Pro GlyArg
5 1(Tis
Ser Len Arg tea Ser Cys Alá Alá Ser Gly Phe Thr Phe Asp AspTyr ' 253Ö
Alá Rét Hls Trp Val Ars Gin Alá Pro Gly Eve Oly boa Gia Trp Vei
35: ϋ 45
Ser Alá. Iie Tfer Trp Asn Ser Gry His de Asp Tyr: Alá Asp Ser Vei
50 55 60
01 a Gly Arg Rd Tar Ile Ser Ars Asp Asn Alá Lys Asn .Ser Len Tyr
65 TG 75 80
L.s·.; Gin Md Arc Ser Leu Arg Alá íb-l u Arp Thr Ara y az Tyr Tyr Cys
35 9:(f 15
Alá V~1 Ser cyr Ser Id Sex- Ser Les Asp Tyr Trp Oly
10R 110
Gin Oly Thr 115: Len vd Trir Val Ser 120: Ser
INC IRMÁTIC N Fi: d S EQ 10 1 <0:3
:ί 1 ) ΒΕζΜΙΕΝίΕ: C RARACT ERI ST IC S: í. iA) LENGTH: 3 amino acids (8) ΤΥΡΕ: amino add
Í d TOPGEOGT; linear
•MOLECOIE TERE:;: peptide
FRAGMENT ΤΥΡΕ:;: internál
FEATtlRE::
(A) NAME/KEY: Modified—s i t a
(B.> LOCAT1ON: 9
W) OTHER INFORMÁCIÓN·:: /nóta- !'Xaa is Thr öt Alá”
Ülj SEQŐENCE DESCRIFTIGN: SEQ IC NO:3:
Gin Arg Tyr Asn Ara Alá Pro Tyr Xaa
5
02) INFORMÁCIÓN POP SEQ CD NO: 4:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A' LENGTE: .12 amino acids
ÓE) ΤΥΡΕ: amino add [IN TQFOEOGT; linear (11) MQLECBLE ΤΥΡΕ: peptide ív) FRAGMENT ’FYPE: internál (ix) FEAINRE:
(A) NAME/KEY: Modified-s.ite (B) LÓGATION: 12 (D): OTÖEP IN FORMAI ION: /nóta- Ka a is Tyr or Asrd
Imii SEQlEKOE: PERGET FTrON:· SEQ ID NO: 4 :
Fal '1 Ser Tyr Len Ser Thr Alá Ser Ser 5 Leu Asp Xaa 10
2; INFORMATTON FÓR SEQ ID N0:5:
[1.1 SEQGENCR CHARACTERISTIOS: (Aj LENGTE: 7 ami n o acids iB; ΤΥΡΕ: amire auid jip tqpoaogT: linear
Lili MOEEGELR TIPR: yeptide
FRAGMENT ΤΥΡΕ: Internál
ixi ) SEQGENOR DEDGRDFTTDN: SÉD ID NO : S:
Alá 3. Alá Ser Th.r Len Gin Ser
{2) INFORMÁTION FÓR SEQ IR YO:6:
(i| SEpGENGE 7EARA7TERISTICS:
:A) LENGTE: 17 amire acids íEi T¥RE<: amid
ÍEÍ j TO'PGDÖGY: linear \ii) MOLECULE: ΤΥΡΕ: peptrde (v) FRAGMENT ΏΤΕ· internál ín íj SEQÖEMOR DEGORIFTrONí SEp 10 NO : 6 ;
Alá 11a Tbc Trp Aso Ser Oly Eis I1.& Asy Tyr Alá. Asp Ssr Mai Giu
Ő 10 15
Gly (2} INFORMATTON FÓR SEQ ID N0:7:
(1) LG 0'3 E N G E OH ARATÓ E FIST IC S :
(A) LENGTE: 11 amint acids ÍB3 ΤΥΡΕ: ami ne aeid (£» TOFOEOGo: linear •í il) MOLEGGLE. ΤΥΡΕ : péptide (v) FRAGMENT TY?E: 1nüezna1 (xij SEQTENGE DESGRIPTTQN: EEQ ID NO: 7:
Ara Alá Ser Gin Gly He Arq Asn Tyr Leu Alá 1 5 10 (2) INFOAMATION FÓR :SEQ ID NO:8:
(1; SEQEENGE' CHAFAO'TEÜIETTES·:
(A) LENGTE: 5 amino éOxds (Ej WS: affiinö: a c l ti (:D; TGPOLGGY:: linear
(i.il MŰIÉCGLE ΤΥΡΕ : pépti de
Ü FRAGMENI ΤΥΡΕ : Internál
(xl; S EQUENGE: DE SOR IPTION: SE) S ID 1 IO:8 :
Asp Tyr Alá Met Mis
G
Ü INFORMAIION FÓR SEQ 10 NO:9:
(ij SEQEENCE CíiARACTERISTICO·:
(A) LENGEM:: 107 amiho acide íB) ΤΥΡΕ: asdno anid (Dj TOPOLOGY: linear (:i.M MOLLTELE ΤΥΡΕ: pa p t i d e (vj FEAGMENT TYFE: internál íxí; SEQGENCP BESCRIPTION: SEC ED NO: 9:
Asp Ile Gin Mst. Tár Gin Ser Pro Ser Ser Lep Ser Ai.a Ser He Gly
1 5 10: 15
Asp Ara val Tar Ile Thr Oys Arg Alá Ser Gin Gly He A::g Asn Tyr
20 25 50
Len Alá Trp Tyr W.;.n Gin Lys Pro Gly tys Alá Pro tys len Len Hu
30 ü 45
Tyr Alá Alá Ser. Thr tea Gin Ser Gly Val Pro Ser Ars Phe Ser Gly
50 55 60
Ser. Gly Ser Oly Tfer Asp Phe Thr Len Thr: He Ser Ser Len Gin Pro
05 70 75 80
Gin Asp Val Alá Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Fro Tyr
85 90 95
Alá PhS: Gly Gin Gly Thr Lys Hl Gin He .:..ys
100 105 (2; INFORMAIION FÓR SEQ ID NO:10:
U.) SEQUENCE CHARACTERTSTICS:
{A> EENGTH: 121 w aoíds (B) ΤΥΡΕ:: amint acis {Dl TOPOLGGY: linear íii) MCLECŰLE ΤΥΡΕ.: péptide ívj FRAGAENT ΤΥΡΕ: internál
Ülj SEQTEECE DESORIRTION: SEQ ID NO:10:
Gin 1. Var Gin Ima Vei 5 Gin Ser Gly Giy Gly 10 tea Val Gin Pro Gxy 15 Arg
Sex: Len Arg Len GO Ser Cys Alá Alá Ser :> a Gly Phe Thr Phe Asp EÖ Asp Tyr
Alá Nex Hi.s SS Try Val Arg Gin Alá d Pro Gly Lys Gly Lea 45 Asp :rrp Va.l
Ser Ma 50 He Thr Trp Asn Ser .7-Ό Oly Fis: He Asp Tyr 60 J. c; Asp Ser Val
Gin· 05 Gly Arg Pha Alá val gg Sex :Arg Uep Asri Alá 75 Lys Ama Alá Len Tyr öü
Len Gin Hét Asn Ser SS Len Arg Pro Gin nép 9:ö Thr Alá Fal Tyr Tyr 95 Gye
Thr ays Alá Ser .10® Tyr Len Ser Tár Ser 105 Ser Ser Len Asp Asn 110 Trp Gly
&rn. G.i.y w len Val. Tár val Ser: Ser
110 120 (2} INFORGATION FÓR. SEQ rD 70:11:
(1; SEQUENCE CHARACTERISTICS:
GM LENGTH: 9 amino aoida
ÍE) ΤΥΡΕ: ami n o add
ÍD; TOPOLOGY; linear (iij MGLECüLE: ΤΥΡΕ: papi ide ív; FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (x.,1) SEQUENCE DESCRIPTIO.N: SEQ ED NO: 1.1:
Gin l.ya Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Alá
5
12; INFORMÁCIÓN FÓR SEQ ID NO:12:
:C.i) SEGYENCE CHARACTERISTXCS:
(A) LENGTE9 amine áóidé (B) TTHEv amin© étid (D) TGPOLGGY: linear (ii) «©LEGO'LE TERE: gépiidé (v) FRáGMENT ΤΥΡΕ: internál.
íol} SEWENCd DESGRLPTTÖNá: :SEO TD: NO:: 12::
Gin Lys Tér isti. Rag ele Fan Tyx Alá 1 R (21 TN FORMATTON: PGR T) TE WP :2.3:
(1} SE QG ENCE CHARAIT E R x S T IC S:
(Al LENGTE: 9 amint; ami.de (Ei ΤΥΡΕ:: amin© aeid (PR TOPOLOGY: lineat (il) MGLECÖLE T¥PE.: papi ide:
(v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál [ni} GEGÖEECE DECCRXPITON: BET IB NO :12::
Gin Lys Tyr Gin. Arg Als Pro Tyr Thr
5 [2} INFGRMATIÖN FÖR EEG IN NOxlá::
(11 regsence GHARACTERISTxCS:
A) ,LN«i : r z? tno z(B) ΤΥΡΕ: amin© acid (D; IQFOLTIGΥ: linear [11} :MGL ECETE TYBE:: péptide (v) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál.
[mii SEQUEECE DESCRIPTXON:: SEQ 1D NO:14:
Gin Lys Tyr Ser Ser A.la. Pro Tyr Tar
5 (2) XNFORMÁTION FÓR SEC IP NO:15:
(1} SEQEENCE CNARACTERISTICS:
(A} LENGTE: 9 amino aeids (BT ΤΥΡΕ: amire ucid.
(1) TQPOLOGY: linear (11} MOLECöLE ΤΥΡΕ: péptide
FRAGMERT^ FF FF: internül:
(XL. SBQUEKCE HHÍHÖN: SEQ ID 50:15:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Pro Tyr Thr
5 (2) ÍdFO»ATTlW FŐÉ SÉQ TE H:lé (ií SEQOEdCE GEARAGTERISTIG-S:
(Al EEMGTK::· 9 amino aeids (B'j ΠΙΕ: aiaínc aold (0) TG?0LÓG¥: 1i naa r (iii MÓLEODLE ΤΥΡΕ: paptide (H FRAGMEET ΤΥΡΕ: internál íxij W»S ISSCRIFTW- SEQ IE lidélS:
Gin Lys Tyr Asn Axg Alá Pro Tyx Tar
5 (21 lEFCOATIQK FOK SE© TD 50 :17 :
U) SEQUEECE CHAPACTERISTICS:
(Aj LEdGTH: 9 ami.no acida (EJ TYPEx aisin-o acíd (DJ TQPOLOGY: Hnear tííi MÖLEGULE ΤΥΡΕ:· paptide (v; ERÁGMEFT ΤΥΡΕ: internál (xi) EEQÖEWOE- GESGK.TPÍ1Q5: SSQ 10 W:17:
Gin Lys Tvx Asn Ser Alá Pro Tyr Tyr
5:
(2} IFFOBMATIOd FÓR SEQ ID 00:1::
(ij SEQÜELÍCF QHARACTERlGT7CS:
(Aj LEOGTn: 9 minő acids (B1 ΤΥΡΕ: «minő aoid (0(1 TOPOLOGE: linear
(iii MQLECGLE ΤΥΡΕ: pepiidé
ÍV) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xíj SEQÜE50E: DESCRTPT10E: SEQ 10 F 0:13:·
Gin ηρη Tyr &ss Ser Alá Pro Tyr Asn
5 {2} TNFPPMATION TOR SEQ ED B:lg (1) SEQDEWE eSBaWnKS:
(Aj LENGTE: 9 anino adds (8j ΤΥΡΕ- amid add (Pl TGBOEGGY: Idear
HlJ EOEEE0LE ΤΥΡΕ: pepiide ( v) FRAGMENT ETTE: i n te rnd
Ellj SETOERGE PESTRíFTION: GEO X® NE: 19:
Gin Eys Tyr The Ser Alá Pro Tyr Th.r ' 1 (2j INFORMATXON FÓR SEQ ID NO:20:
(i) EEQdNTE CRARAGTERISTTGS :
(ΑΪ LENGTE; 9 amint adds (B) TERE: a>i.n.ö add (Dí TGFOEGGY: dnear (11) SÖLEGdE TELE': pepiid® (vl FRAGNíENT ΤΥΡΕ: internál (xii sEOGENCE ©EdRIWEQN: GEO III Wd*
Gin Lys Tyr Asn Arg Alá Pro Tyr Asn (2) ENFOPNATION EGE d j I® NO :21:
_ OEjLENd ARdTdddd (Ai LENGTE: 9 ami no acids (Ei ΤΥΡΕ: ami no add (D> TOPOLOGY: linear (ii ) MOLECUIE ΤΥΡΕ: pepd.de tv) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál ( Mii SEOOENOE EESORIETTON: SEy ED NG:21:
Gin Lys Tyr Asn Ser Alá Alá Tyr Ser
I 0 (2} INFÖRMAITQN EGE EEG: IP NO: 22;
fi): SEQOWCE CHARACTERISTICS: fA) LENGTH: 9 aminc adds (B; ΤΥΡΕ: amino add í D) TO P0 LÓGY: 11nea. r
11·) MOLECBLE ΤΥΡΕ: pépti.de
fv) FRAGMEd ΤΥΡΕ: internál
xi) GECGEÉOE: DESCRIPTTON·: SEQ IP 1 iö : 22:
Sin 1 Gin Tyr Asu Ser Alá Pro Asp Thr 5
(2) INFGRMATTÖN FQR SER IN «:2Βί
(.1) S E Qd EN CE CHABACTEH IS TIC S :
(A) LENIT;·;: 9 ami no acíds (B) ΤΥΡΕ: ami n o acid
LB) TOPOLOGY: I innám (ii) MQLECilLE: ΤΥΡΕ·: pépti de (v) ERAGNEGT ΤΥΡΕ: internál íxi) SBQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 23:
Gin L.y$ Tyr Asz Sex Aap Pro Tyr Tor
5 (2) TWCRMATIGN EOR SEC' 1.0 NO :24::
(,i.) SBOCENCE CHARACTERISTICS:
[Aj LENGTE: 9 amino aoids (Ej ΤΥΡΕ* amino add
ΙΕ] TOPOLOGY: llneax
li ) WLECuLE: ΤΥΡΕ: peptide
(N } FRAGEENT ΤΥΡΕ:: intexna:·!
xi J SEOflENCE· OEíSGETPTION: GEO ΙΟ E 10:24:
Gin : Lys Tyr TI s Ser Alá Pro Tyr Tér
íz? TNFQRMATIOE FÓR SEQ ID NO: 25:
(1) SEQUENCE CHARACTERISTICS::
(A) LENGTE: 9 amimo .acIda íBÍ ΤΥΡΕ: amino add (01 TOPCLOGY: linear fii) MOLECULE ΤΥΡΕ: psptlde (d FRÁTERT ΤΥΡΕ: internál zi)
SEQOENCE
PIPIION: GEQ ID
NO:25 :
Gin
Eys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr
INEOREATION FÓR SEQ τρ ηθ:2δ:
SE Q NE EGE· G HARAG! ERI 5TIC 5 :
(A) LENGTE: 9 amino acids (B) ΤΥΡΕ: amino acid
d) TOPCLOGx: linear (xi;
MOEECÖLE
FRAGMENT
SEQEENCE
ΤΥΡΕ: péptide
ΤΥΡΕ: internál
DESCRIPTTON: SEQ ID
NQ: 2. β::
Gin
Arg Tyr Asn Arg A1& Pro Tyr Alá
TRFQERATIOR FÓR SEQ ID MG:27:
SEOEEROE CHARAOTERTSTIOS:
(A): LENGTE:: 12 ami ne aoids (Bj ΤΥΡΕ; ama no (Dj TÖPd.OGY:
ami. ne acid 1inéaz
11:1 j
ΜΟΐ,ΕΟΟΡΕ
WBh pép t. ide ívd
FRAGMENT
ΤΥΡΕ internál
SEQUENCE
Alá
ÖEFQEMATION FŐÉ EEQ ID NO:28:
tii
SEQEENCE. ChARACTERTSITOS :
[Aj LENGTE: 1:2 araino aci.de (Bj ΤΥΡΕ:: amino acid Ld TQőöIOGY:
línear
ROLEGGLE
ΤΥΡΕ:
peptide dl
FRAGMENT
ΤΥΡΕ:
internál
SEQüENCE
DESGRI PITON: SEQ ID
NO r28:
Alá Ser Tvr Len Ser T1.E Ser Ser Ser Len Ssp Lys 1 S 10
21 INFORMATYOR FÜR SEQ ID 00:29:
tij 3EQGEM0E CRARACTERISTICS: (A) LEMGTH: 12 ainrno aclds (B) TYFE:: ami.no acid (D) TQrQGOGY: linear
íii.) MOLECULE T¥PE: pepiidé
FRAGMERT ΤΥΡΕ: internál
4 X1) SEQÖENCE DE SORI PT TÓM: SEQ ID 1' 50:29:
Alá Ser Tyr tea Ser Thr Ser Ser Ser Le a Reg Tyr 1 .5 la
121 TN FORMAI ION FÓR SEQ 1D NO:20;
<1) SEQUENCE: CRARACTERISTICE:
(A) LERGTR: 12. amino acids (E) TYPEr ami no acid (0) TOPOLOGY: 1inéar <113 MOtECGEE· ΤΥΡΕ: pepi ide ív) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál [xil SEQFEEGB DEEGREFTIOF:: SEQ rp MOrRS:
Alá Ser Tyr Len Ser Thr Ser Ser Ser Len Asp Asp 1 1 10
121 EdFORMÁT1OR FÓR SEg· TE NO:31·:
íi) SEQOEEQE OHARAGTERISTICB::
[A? EEilGTHr 12 amlnm a old a
ÍB) ΤΥΡΕ: ami ne sóid (W TOiPOlOGYY llhear
Ilii MGEEOGLE TERE: paptide ív) FRAGMEMT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQvENCE ΒΕΕΤΕΙΡΤΙΟΝ: SEQ ID 00:31:
Alá Ser Tyr Let Sár Thr Sex Pne Sér Ima Aap Tyr 1 5 10 (2) 1NE0RMAT10N POR SEQ 10 110:32:
U) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 12 amino acids (B; ΤΥΡΕ: ami n o add:
(D Τ0 RO LÓG ¥: 1 i η. e a r (iil MOLEGBLE T¥FE:: pepti.de:
Bt FRAGEENT ΤΥΡΕ:: internál fri í BS-QöENGE ÖESCR3PT1GN:: BEQ IB NO ::32:
Alá Sor Tyr Lse Sár Thr Ser Ser Ser Len Fis Yyr 1 δ le (2) INEGBNBT IGN FÜR SEg ID NO: 33:
(1:) SEGBENEE ONARAOTERI ÉTIG:® ::
(A) · LENGTE: 12 ami no adds íSl WFB: amint adó (B) T OEurdd : Tina Sir fi12 NüLECOLE TTFR: papina lei FRAGMENT TYFE:: internál [zij SEOÖFEGE SEGGEI FTIOR: EEG 30: NO: 33:
Alá Ser ?d Lan Ser Tar Ser Ser Ser Leu Gin Tyr 1 S 13 (23 INFORMÁL ION FÜR SEQ 12 NO:34:
f: 1:} SEO-S ENCE GRARAÜTÉRIÉT 103:
(Al LENGTE: 12 ami.no adds (S) ΤΥΡΕ: ami no- a óid (0} TüPOLOGY: lineax íi.i) MOLEOd-E TTRE: peptide (vj fragmeni: Ti BE:: internál (xij SEGSENÜE WSCRIOlW:: GEO B NO :34::
Alá Ser Tyr Len Ser Thr Alá Ser Ser Len Gin Tyr
1. * S 10 (2; INFGRMATION FÜR SEQ IB NO:35:
(i) SEQjENCF CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 12 amint a a Ida (Ej ’IYFE: amimé add (0) TOPOLOGY: linear {i.i ) MOLEGSLE ΤΥΡΕ : pepiidé
FRAGMENT ΤΥΡΕ: .laterna
SEOÜENCE EESCPTPTIQN: SEO 1E
NO:35:
Fal
Ser .z Leu Ser Thr Alá Ser Ser a
Le a Asp Ase
LÓ (2.) INFÖOMATION FÓR SEQ ID NO:3b:
GEQüEEGE CΕΑΕΑΟΤΕηΐ ST1 0S::
(A)
ÍB1 \ C ?:
LENGTE: 321 hasa gairs
ΤΥΡΕ: náciéic add
STRANDÉDNES0: derbié
T 0 PGLOGY: 1 iné ar í J. x 3
FELE00LE ΤΥΡΕ: űDNA
FEQOENOE EESGRIPTlöN: SEX IE
NO:36:
GACATOCAGA
TGACCCAGTC
TOGATOCTOG: GTGTOTGCAT
CTGTÁGGGGA
CAGAGTCACC
AddTTGTC
GGGOATOAGA AATdOTd
CCTGGT.ATCA
GCAAAAACCA
120
GGGAAAGOOG
CTAAGOTCCT
GATCTATGC'T
GCATCCACTT
TGCAATCAGG
GGTCCCATCT
CGGTdAGTG
GGAGTGGAd
TGGGACAGAT
TTGACTOTCA
CGATCAGCAG
CCTAGAGCCT
240
CAACTTATTA
CTGTCAAAGG c’AAAdCe :
CAGCGTATAC
TTTTGGCCAG eGGACOAAGu
TGGAAATGAA
321 :2i IWOREATdN FÓR
SEQGENCE GHARACTER13TTC2:
OA) (Bí dl
W
LENGTE: 363 basa pairs ΤΥΡΕ: nucleic add STRANDEONESS: dd TOPD FOGY: 1. ina a r fílj
MOIÁOGÁE TERE·: c®
SEOFENCE DEOGRIPTION: SEQ W A:37;
GAGGTGCAGC
TGGTGGAGTC
YGG UíGGAGöC
TTGGdCAGC
CCGGCAGGTC CCTGAGACTC
IOGIOIgCGg
CCTGTGGATT
CAGGTTTGAT
GnTTATGOGA
TGCACTGGGT
CCGGCAAGCT
120
CCAcGGnAGö
GCCTGGAATG
GGTCTCAGCO
AEOAcEFgGA
ATAGTGGTCA
CaTAGAöE A 2
23®
GCGGACTCGG
TGGAGGGCCG
ATdAGGdC
TCCAGAGACA
AGGCCAAGAA
CTCCCTGTAT
242
CTGCXAATGA
ACAGTCTGAG
AGCTGAGGAT
ACGGCCGTAT
ATTACTGTGC
3AAAGTCTGG
TACCTTAGGA CCGCGTGOTC dTTGAdAT
TGGGGGGAAG· GTACCCTGGT
360
AGG
119

Claims (2)

1. Egy i-zoláit humán aiyti-lNW antitest vagy ennek egy antigén-kötő része amely tartalmaz egy könny» lánc variábilis régiöt (LCVR) , amely a S.EQ ID NO: 1 szerinti aminosav-szekvenciát tartalmazza, és egy nehéz lánc variábilis régiöt (HCVR), amely a SEQ 10 NO: 2 szerinti aminosavszekvenciát tartalmazza, ahol az antitest tartalmaz egy XgGl nehéz lánc konstans régiót és egy kappa könnyű lánc konstans régiót — autoimmun uveitis és bélbetegség kezelésében való alkalmazásra.
2, Antitest vagy ennek egy antigén-kötő része az I. igénypont szerinti alkalmazásra, ahol :a bélbetegséget a gyulladásos bélbetegség, az ismeretlen eredetű gyulladásos bélbetegség, a Crohn betegség és a colitis ulcerosa által alkotott csoportból választjuk ki.
HU1500179A 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai HU230515B1 (hu)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US08/599,226 1996-02-09
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
US60/031,476 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP1500179A2 HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
HU230515B1 true HU230515B1 (hu) 2016-10-28

Family

ID=26707297

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU1300152A HU230048B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása
HU1500179A HU230515B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai
HU0204115A HU228630B1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity
HU9901874A HU221984B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU1300152A HU230048B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0204115A HU228630B1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity
HU9901874A HU221984B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (hu)
EP (1) EP0929578B1 (hu)
JP (8) JP3861118B2 (hu)
KR (1) KR100317188B1 (hu)
CN (5) CN102070715A (hu)
AT (1) ATE239041T1 (hu)
AU (1) AU722077B2 (hu)
BG (7) BG64776B1 (hu)
BR (3) BRPI9707379B8 (hu)
CA (1) CA2243459C (hu)
CY (2) CY2463B1 (hu)
CZ (1) CZ292465B6 (hu)
DE (4) DE122004000004I1 (hu)
DK (1) DK0929578T3 (hu)
ES (1) ES2198552T3 (hu)
HK (8) HK1066860A1 (hu)
HU (4) HU230048B1 (hu)
IL (4) IL125697A (hu)
LU (1) LU91062I2 (hu)
MX (1) MX336813B (hu)
NL (1) NL300143I2 (hu)
NO (6) NO316711B1 (hu)
NZ (5) NZ512006A (hu)
PL (2) PL188192B1 (hu)
PT (1) PT929578E (hu)
RO (2) RO123028B1 (hu)
RU (3) RU2270030C2 (hu)
SI (1) SI9720020B (hu)
SK (1) SK284040B6 (hu)
TR (1) TR199801532T2 (hu)
UA (2) UA57726C2 (hu)
WO (1) WO1997029131A1 (hu)

Families Citing this family (460)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
RU2270030C2 (ru) * 1996-02-09 2006-02-20 Абботт Байотекнолоджи эЛтиди. СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО TNFα (ВАРИАНТЫ), ПРИМЕНЕНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ФРАГМЕНТА В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА (ВАРИАНТЫ) И ВЫДЕЛЕННОЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
AU7266898A (en) 1997-04-30 1998-11-24 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
MXPA01006006A (es) 1998-12-14 2004-08-12 Genetics Inst Cadena receptora de citocina.
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
EP1159003B1 (en) * 1999-03-02 2010-11-17 Centocor, Inc. Anti-tnf alpha antibodies in therapy of steroid resistant asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
EP1239877B1 (en) * 1999-10-06 2008-01-09 Abbott GmbH & Co. KG Composition comprising a tnf-alpha inhibitor and an integrin alphavbeta3 receptor antagonist
TWI373343B (en) 2000-02-10 2012-10-01 Abbott Gmbh & Co Kg Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
DE60137421D1 (de) 2000-06-29 2009-03-05 Abbott Lab Antikörper mit zwei spezifizitäten und verfahren zur deren herstellung und verwendung
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
ES2390425T3 (es) 2000-12-22 2012-11-12 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores
JP4323167B2 (ja) * 2001-01-16 2009-09-02 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 分泌タンパク質を発現する細胞の単離
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
WO2002076196A1 (en) 2001-03-22 2002-10-03 Abbott Gmbh & Co. Kg Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2868614A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
WO2003002187A2 (en) * 2001-06-26 2003-01-09 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
PL222211B1 (pl) 2001-06-26 2016-07-29 Amgen Fremont Inc Przeciwciało przeciwko OPGL, kompozycja je zawierająca, jego zastosowanie i sposób jego wytwarzania, sposób wykrywania poziomu OPGL, kompozycja obejmująca polinukleotydy i komórka gosodarza
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
AU2002341766A1 (en) * 2001-09-20 2003-04-01 Genstar Therapeutics Corporation Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
ES2629395T3 (es) 2001-10-04 2017-08-09 Genetics Institute, Llc Métodos y composiciones para modular la actividad de la interleucina-21
WO2003083071A2 (en) * 2002-03-26 2003-10-09 Centocor, Inc. Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AU2003267999B2 (en) * 2002-07-19 2010-03-11 Abbvie Biotechnology Ltd Treatment of TNFalpha related disorders
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
AU2003265361A1 (en) * 2002-08-28 2004-03-19 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
JP2006524036A (ja) * 2002-11-08 2006-10-26 アブリンクス エン．ヴェー． 腫瘍壊死因子αを標的とする単一ドメイン抗体およびその使用
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
AU2003298816C1 (en) * 2002-12-02 2010-12-16 Amgen Fremont, Inc. Antibodies directed to Tumor Necrosis Factor and uses thereof
WO2004060911A2 (en) * 2002-12-30 2004-07-22 Amgen Inc. Combination therapy with co-stimulatory factors
WO2004063335A2 (en) * 2003-01-08 2004-07-29 Applied Molecular Evolution TNF-α BINDING MOLECULES
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
EP2390270A1 (en) * 2003-01-10 2011-11-30 Ablynx N.V. Therapeutic polypeptides, homologues thereof, fragments thereof and for use in modulating platelet-mediated aggregation
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
EP2184298A1 (en) * 2003-03-14 2010-05-12 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Antibodies against human IL-21 receptor and uses therefor
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
EP1694301A4 (en) 2003-12-02 2009-11-18 Cytimmune Sciences Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR THE PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES
JP4943161B2 (ja) 2003-12-23 2012-05-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 新規抗ｉｌ１３モノクローナル抗体での癌の処置
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US7625549B2 (en) 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
CA2564989C (en) 2004-03-19 2014-05-27 Amgen, Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through v gene manipulation
TWI439284B (zh) * 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
JP2008508885A (ja) * 2004-08-05 2008-03-27 ワイス インターロイキン−２１受容体活性を中和すること
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
EP1799717B1 (en) * 2004-10-22 2015-05-20 Danisco US Inc. Isolating human antibodies
AU2005306399B2 (en) 2004-11-19 2012-02-09 Biogen Ma Inc. Treatment for multiple sclerosis
BRPI0607639B1 (pt) 2005-02-08 2022-04-05 Genzyme Corporation Moléculas de anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno das mesmas que se ligam e neutralizam tgf-beta1, 2 e 3, uso das mesmas e composição farmacêutica
AU2006214473A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Interleukin-17F antibodies and other IL-17F signaling antagonists and uses therefor
WO2006088925A2 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Use of il17-f in diagnosis and therapy of airway inflammation
US20090124993A1 (en) 2005-02-17 2009-05-14 Burkly Linda C Treating neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
WO2006122187A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Biogen Idec Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
NZ591701A (en) * 2005-05-16 2012-11-30 Abbott Biotech Ltd Use of tnf inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
US20070020660A1 (en) * 2005-06-06 2007-01-25 Burczynski Michael E Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
EP2390267B1 (en) 2005-06-07 2013-06-05 ESBATech - a Novartis Company LLC Stable and soluble antibodies inhibiting TNF(alpha)
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
JP2008543449A (ja) * 2005-06-17 2008-12-04 アボット・ラボラトリーズ 変性脊椎疾患の改良型治療方法
EP3725299A1 (en) * 2005-06-24 2020-10-21 Duke University A direct drug delivery system based on thermally responsive biopolymers
EP2468881A3 (en) 2005-07-21 2012-08-15 Abbott Laboratories Multiple gene expression including sorf contructs and methods with polyproteins, pro-proteins, and proteolysis
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
EP2500356A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
RU2515108C2 (ru) 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US8906864B2 (en) 2005-09-30 2014-12-09 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
EP1948235B1 (en) * 2005-11-01 2013-08-28 AbbVie Biotechnology Ltd Methods for determining efficacy of adalimumab in subjects having ankylosing spondylitis using ctx-ii and mmp3 as biomarkers
AR056806A1 (es) 2005-11-14 2007-10-24 Amgen Inc Moleculas quimericas de anticuerpo rankl- pth/ pthrp
AU2006319358B2 (en) 2005-11-30 2012-01-19 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Anti-Abeta globulomer antibodies, antigen-binding moieties thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing said antibodies, compositions comprising said antibodies, uses of said antibodies and methods of using said antibodies
KR101439828B1 (ko) 2005-11-30 2014-09-17 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
WO2007073486A2 (en) 2005-12-20 2007-06-28 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
EA017417B1 (ru) 2006-02-01 2012-12-28 Сефалон Астралия Пти Лтд. КОНСТРУКТ ОДНОДОМЕННОГО АНТИТЕЛА, КОТОРЫЙ СВЯЗЫВАЕТСЯ С ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ TNF-α, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
NZ611859A (en) 2006-04-05 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd Antibody purification
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
EP2666478A3 (en) 2006-04-10 2014-10-22 AbbVie Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriasis
WO2007120656A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US9624295B2 (en) 2006-04-10 2017-04-18 Abbvie Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2012586A4 (en) 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
TWI498137B (zh) 2006-06-30 2015-09-01 Abbvie Biotechnology Ltd 自動注射裝置
ES2902063T3 (es) 2006-09-08 2022-03-24 Abbvie Bahamas Ltd Proteínas de unión a interleucina-13
AU2007294731B2 (en) 2006-09-13 2014-04-17 Abbvie Inc. Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
BRPI0717335A2 (pt) * 2006-10-27 2013-12-10 Abbott Biotech Ltd Anticorpos anti-htnfalfa cristalinos
CA2669917A1 (en) 2006-11-17 2008-05-22 Dawn M. George Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
EP2402013A1 (en) 2006-11-21 2012-01-04 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods of Treating Chronic Inflammatory Diseases using a GM-CSF Antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
EP2114443A4 (en) 2006-12-29 2011-08-10 Abbott Lab IL-1A / IL-1B ANTIBODY WITH DOUBLE SPECIFICITY
NZ578065A (en) * 2007-01-16 2012-09-28 Abbott Lab Methods for treating psoriasis with an antibody which binds to an epitope
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
PL2148691T3 (pl) 2007-02-05 2015-12-31 Apellis Pharmaceuticals Inc Analogi kompstatyny do stosowania w leczeniu stanów zapalnych układu oddechowego
WO2008104386A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
US8280711B2 (en) 2007-03-12 2012-10-02 ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit, LLC. Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
EP2679996A1 (en) 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
KR20100040840A (ko) * 2007-06-06 2010-04-21 도만티스 리미티드 폴리펩티드，항체 가변 도메인 및 길항제
KR20100018040A (ko) * 2007-06-06 2010-02-16 도만티스 리미티드 프로테아제 내성 폴리펩티드를 선택하는 방법
US8999337B2 (en) * 2007-06-11 2015-04-07 Abbvie Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis by inhibition of TNFα
CN103977404A (zh) * 2007-06-14 2014-08-13 比奥根艾迪克Ma公司 抗体制剂
NZ581468A (en) 2007-06-25 2012-09-28 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
WO2009000098A2 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 Esbatech Ag Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
WO2009011782A2 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
US8753839B2 (en) 2007-08-08 2014-06-17 Abbvie Inc. Compositions and methods for crystallizing antibodies
US20090304719A1 (en) 2007-08-22 2009-12-10 Patrick Daugherty Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
EP2205249B1 (en) 2007-09-28 2018-11-07 Intrexon Corporation Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof
WO2009062151A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
CA2707483A1 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Wolfgang Fraunhofer Protein formulations and methods of making same
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
MX2010007728A (es) 2008-01-15 2010-12-21 Abbott Gmbh & Co Kg Composiciones proteinicas en polvo y metodos para elaborar las mismas.
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
WO2009121690A1 (en) 2008-03-13 2009-10-08 Biotest Ag Agent for treating disease
MX2010010026A (es) 2008-03-13 2011-03-21 Biotest Ag Agente para tratar enfermedad.
SG190627A1 (en) 2008-03-13 2013-06-28 Biotest Ag Agent for treating disease
NZ587765A (en) 2008-03-18 2013-02-22 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
SG190572A1 (en) 2008-04-29 2013-06-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
MY159667A (en) 2008-05-09 2017-01-13 Abbvie Inc Antibodies to receptor of advanced glycation end products (rage) and uses thereof
WO2009142186A1 (ja) * 2008-05-20 2009-11-26 株式会社カネカ 細胞障害性組成物
CA2726087A1 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Tariq Ghayur Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2010153578A (ru) 2008-06-03 2012-07-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение
RU2653753C1 (ru) 2008-06-25 2018-05-14 ИЭсБиЭйТЕК, ЭН АЛЬКОН БАЙОМЕДИКАЛ РИСЕРЧ ЮНИТ ЭлЭлСи СТАБИЛЬНЫЕ И РАСТВОРИМЫЕ АНТИТЕЛА, ИНГИБИРУЮЩИЕ TNFα
CN110372792A (zh) 2008-06-25 2019-10-25 艾斯巴技术-诺华有限责任公司 抑制vegf的稳定和可溶的抗体
RU2514658C2 (ru) 2008-06-25 2014-04-27 ИЭсБиЭйТЕК, ЭН АЛЬКОН БАЙОМЕДИКАЛ РИСЕРЧ ЮНИТ ЭлЭлСи Оптимизация растворимости иммуносвязывающих средств
CA2953975C (en) 2008-06-27 2019-11-26 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
KR20110044992A (ko) * 2008-07-02 2011-05-03 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 ＴＧＦ-β 길항제 다중-표적 결합 단백질
TW201014602A (en) 2008-07-08 2010-04-16 Abbott Lab Prostaglandin E2 binding proteins and uses thereof
RU2011104348A (ru) 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
EP2337799A2 (en) * 2008-08-28 2011-06-29 Wyeth LLC Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
CA2739794A1 (en) * 2008-10-07 2010-04-15 National Cheng Kung University Use of il-20 antagonists for treating rheumatoid arthritis and osteoporosis
CA2739352C (en) 2008-10-29 2021-07-13 Wyeth Llc Methods for purification of single domain antigen binding molecules
KR101581986B1 (ko) 2008-10-29 2016-01-04 아블린쓰 엔.브이. 단일 도메인 항원 결합 분자의 제형
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
WO2010062896A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-03 Abbott Laboratories Stable antibody compositions and methods for stabilizing same
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
JP5684724B2 (ja) 2008-12-30 2015-03-18 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 強直性脊椎炎を有する患者における抗−ＴＮＦα抗体に対する臨床応答を予測する血清マーカー
RU2636046C2 (ru) 2009-01-12 2017-11-17 Сайтомкс Терапьютикс, Инк Композиции модифицированных антител, способы их получения и применения
BRPI1011384A2 (pt) 2009-02-23 2016-03-15 Cytomx Therapeutics Inc pro-proteinas e seus metodos de uso
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
EP2810652A3 (en) 2009-03-05 2015-03-11 AbbVie Inc. IL-17 binding proteins
US8722860B2 (en) 2009-04-16 2014-05-13 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-TNF-α antibodies and their uses
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
JP5677411B2 (ja) 2009-04-29 2015-02-25 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 自動注入機器
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
KR101943420B1 (ko) * 2009-08-14 2019-04-17 파세비오 파마수티컬스 인코포레이티드 변형된 혈관활성 장 펩티드
KR20120054077A (ko) * 2009-08-21 2012-05-29 길리아드 바이오로직스, 인크. 폐 섬유증 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
KR20120060877A (ko) 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
KR20140048229A (ko) * 2009-09-14 2014-04-23 애브비 인코포레이티드 건선을 치료하는 방법
WO2011038069A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Xbiotech, Inc. Methods, compositions, and kits for reducing anti-antibody responses
US9885711B2 (en) 2009-09-25 2018-02-06 Xoma Technology Ltd. Screening methods
AU2010306677B2 (en) 2009-10-15 2013-05-23 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
NZ621655A (en) * 2009-10-26 2015-08-28 Nestec Sa Assays for the detection of anti-tnf drugs and autoantibodies
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2493923A1 (en) 2009-10-30 2012-09-05 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
WO2011053707A1 (en) 2009-10-31 2011-05-05 Abbott Laboratories Antibodies to receptor for advanced glycation end products (rage) and uses thereof
US9244063B2 (en) 2009-11-11 2016-01-26 Gentian As Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
SG181563A1 (en) 2009-12-08 2012-07-30 Abbott Gmbh & Co Kg Monoclonal antibodies against the rgm a protein for use in the treatment of retinal nerve fiber layer degeneration
RU2582401C2 (ru) 2009-12-15 2016-04-27 Эббви Байотекнолоджи Лтд Усовершенствованная пусковая кнопка для автоматического инъекционного устройства
AU2010330907A1 (en) 2009-12-16 2012-06-14 Bosch, Phillip Methods of treating interstitial cystitis
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
US9096655B2 (en) 2010-01-27 2015-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
US20120014956A1 (en) 2010-02-02 2012-01-19 Hartmut Kupper Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
EP2542582A4 (en) 2010-03-02 2013-12-04 Abbvie Inc THERAPEUTIC PROTEINS LINKING TO DLL4
JP2013523153A (ja) 2010-04-07 2013-06-17 アッヴィ・インコーポレイテッド ＴＮＦ−α結合タンパク質
CA2796339C (en) 2010-04-15 2020-03-31 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
SG10201502967RA (en) 2010-04-16 2015-05-28 Biogen Ma Inc Anti-vla-4 antibodies
SG10201503130UA (en) 2010-04-21 2015-06-29 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
SI2571532T1 (sl) 2010-05-14 2017-10-30 Abbvie Inc. Proteini, ki vežejo IL-1
WO2011146727A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of treating interstitial cystitis
US8747854B2 (en) 2010-06-03 2014-06-10 Abbvie Biotechnology Ltd. Methods of treating moderate to severe hidradenitis suppurativa with anti-TNF-alpha antibodies
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
KR20130100118A (ko) 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP3533803B1 (en) 2010-08-14 2021-10-27 AbbVie Inc. Anti-amyloid-beta antibodies
HUE058226T2 (hu) 2010-08-19 2022-07-28 Zoetis Belgium S A NGF elleni antitestek és alkalmazásuk
CA2809433A1 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY33679A (es) 2010-10-22 2012-03-30 Esbatech Anticuerpos estables y solubles
KR20180059560A (ko) 2010-10-29 2018-06-04 애브비 인코포레이티드 아폽토시스―유도제를 포함하는 고체 분산체
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
CA2816803A1 (en) * 2010-11-02 2012-05-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2815689C (en) 2010-11-11 2016-11-22 Abbvie Biotechnology Ltd. Improved high concentration anti-tnf.alpha. antibody liquid formulations
DK2642999T3 (en) 2010-11-23 2017-01-09 Abbvie Ireland Unlimited Co METHODS OF TREATMENT FOR USING selectivity-VE BCL-2 INHIBITORS
RU2628560C2 (ru) 2010-11-23 2017-08-18 Эббви Инк. Соли и кристаллические формы индуцирующего апоптоз агента
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
KR20130133247A (ko) 2010-12-21 2013-12-06 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ-1-알파 및 -베타 이특이적 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US20120275996A1 (en) 2010-12-21 2012-11-01 Abbott Laboratories IL-1 Binding Proteins
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
US8992477B2 (en) 2011-01-24 2015-03-31 Elcam Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
MX337208B (es) 2011-01-24 2016-02-17 Abbvie Biotechnology Ltd Dispositivos de inyeccion automaticos que tienen superficies de agarre sobremoldeadas.
WO2012103140A1 (en) 2011-01-24 2012-08-02 Abbott Biotechnology Ltd Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
CA2829773A1 (en) 2011-03-18 2012-09-27 Abbvie Inc. Systems, devices and methods for assembling automatic injection devices and sub-assemblies thereof
TWI622597B (zh) 2011-03-28 2018-05-01 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
JP2014515658A (ja) 2011-03-29 2014-07-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 自動注射装置における改善されたシュラウド展開
EP3020428A1 (en) 2011-04-21 2016-05-18 AbbVie Inc. Wearable automatic injection device for controlled administration of therapeutic agents
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
EP2714738B1 (en) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
RS58967B1 (sr) 2011-05-31 2019-08-30 Biogen Ma Inc Metod evaluacije rizika za pml
US9561262B2 (en) 2011-06-06 2017-02-07 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
EP2734236A4 (en) 2011-07-13 2015-04-15 Abbvie Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR TREATING ASTHMA WITH ANTI-IL-13 ANTIBODIES
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
JP2014527957A (ja) * 2011-08-01 2014-10-23 アヴァクシア バイオロジクス，インコーポレーテッド ヒトｔｎｆに特異的なウシポリクローナル抗体
EP3431495A1 (en) * 2011-10-20 2019-01-23 ESBATech - a Novartis Company LLC Stable multiple antigen-binding antibody
RU2014121043A (ru) 2011-10-24 2015-12-10 Эббви Инк. Биспецифические иммуносвязывающие средства, направленные против tnf и il-17
MX2014004977A (es) 2011-10-24 2014-09-11 Abbvie Inc Inmunoaglutinantes dirigidos contra esclerostina.
JP2014534218A (ja) 2011-10-24 2014-12-18 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｔｎｆを標的とする免疫結合剤
EP2786156A2 (en) 2011-11-30 2014-10-08 AbbVie Deutschland GmbH & Co KG Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
US10118958B2 (en) 2011-12-14 2018-11-06 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
CA2855570A1 (en) 2011-12-14 2013-06-20 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
WO2013087913A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
TW201333033A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 雙可變域免疫球蛋白及其用途
TW201333035A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 針對ｉｌ－１３及／或ｉｌ－１７之雙特異性結合蛋白
MY176695A (en) 2012-01-27 2020-08-19 Abbvie Inc Composition and method for the diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration
EP3412310B1 (en) 2012-03-07 2022-09-07 Cadila Healthcare Limited Pharmaceutical formulations of tnf-alpha antibodies
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
EP2859018B1 (en) 2012-06-06 2021-09-22 Zoetis Services LLC Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2014011955A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie, Inc. Il-1 binding proteins
ES2907763T3 (es) 2012-08-31 2022-04-26 Sutro Biopharma Inc Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido
KR20150043523A (ko) 2012-09-02 2015-04-22 애브비 인코포레이티드 단백질 불균일성의 제어 방법
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
KR102238677B1 (ko) 2012-09-07 2021-04-12 코히러스 바이오사이언시즈, 인코포레이티드 아달리무맙의 안정한 수성 제형
MX2015003541A (es) * 2012-09-19 2015-10-26 Abbvie Biotherapeutics Inc Metodos para identificar los anticuerpos con inmunogenia reducida.
CA2890263C (en) 2012-11-01 2020-03-10 Abbvie Inc. Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG10201802044RA (en) 2012-11-01 2018-05-30 Abbvie Inc Stable dual variable domain immunoglobulin protein formulations
TWI675044B (zh) 2012-11-14 2019-10-21 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
CA2898354C (en) 2013-01-25 2017-11-21 Thymon, Llc Compositions for selective reduction of circulating bioactive soluble tnf and methods for treating tnf-mediated disease
EP2956480B1 (en) * 2013-02-13 2019-09-04 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-alpha antibodies and uses thereof
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
SG11201504260UA (en) 2013-03-14 2015-10-29 Abbvie Inc Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
JP6739329B2 (ja) 2013-03-14 2020-08-12 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｈｃｖコア脂質結合ドメインモノクローナル抗体
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
JP2016512241A (ja) 2013-03-14 2016-04-25 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 改良された抗体検出のためのｈｃｖｎｓ３組換え抗原およびこの突然変異体
WO2014159554A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
EP2968526A4 (en) 2013-03-14 2016-11-09 Abbott Lab ANTIGEN-ANTIBODY COMBINATION ASSAY OF HEPATITIS C VIRUS AND METHODS AND COMPOSITIONS FOR USE THEREWITH
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
EA201890895A1 (ru) 2013-03-15 2019-02-28 Зинджения, Инк. Мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы и их применение
EP2970457A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins directed against tnf
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
EP3000827B1 (en) * 2013-05-22 2020-04-22 Seoul National University Hospital Anti-tnf-alpha/cxcl10 double-targeting antibody and use thereof
ES2753419T3 (es) 2013-06-07 2020-04-08 Univ Duke Inhibidores del factor H del complemento
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
US20150038454A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Mary Malast Antimicrobial compositions and methods of use
RU2016107435A (ru) 2013-09-13 2017-10-18 Дженентек, Инк. Композиции и способы обнаружения и количественного определения белка клеток-хозяев в клеточных линиях и рекомбинантные полипептидные продукты
NZ756749A (en) 2013-09-13 2022-05-27 Genentech Inc Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
WO2015051379A2 (en) 2013-10-06 2015-04-09 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
AU2014337263B2 (en) 2013-10-16 2019-12-12 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2931978A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
EP3757224A3 (en) 2014-02-27 2021-03-17 Biogen MA Inc. Method of assessing risk of pml
CN106103465B (zh) 2014-03-10 2021-01-08 吉瑞工厂 使用预清洗步骤的免疫球蛋白纯化
TW202214691A (zh) 2014-03-21 2022-04-16 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
US10688187B2 (en) 2014-04-02 2020-06-23 Intas Pharmaceuticals Ltd. Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
CA2947982C (en) 2014-05-08 2022-11-29 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
ES2572919T3 (es) 2014-05-23 2016-06-03 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
EP2946767B1 (en) 2014-05-23 2016-10-05 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
ES2600488T3 (es) 2014-05-23 2017-02-09 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
US20170183376A1 (en) 2014-06-24 2017-06-29 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
US10183994B2 (en) * 2014-06-30 2019-01-22 Merck Patent Gmbh Anti-TNFα antibodies with pH-dependent antigen binding for improved target clearence
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
US20160185848A1 (en) 2014-07-09 2016-06-30 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using sugars
AR101753A1 (es) 2014-09-03 2017-01-11 Boehringer Ingelheim Int COMPUESTO DE OBJETIVO A IL-23A Y TNF-a Y USO DEL MISMO
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
WO2016103093A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Pfizer Inc. Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
WO2016118707A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
AU2016219513B2 (en) 2015-02-09 2021-09-30 Immunoforge Co., Ltd. Methods and compositions for treating muscle disease and disorders
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
HUE048284T2 (hu) 2015-05-29 2020-07-28 Abbvie Inc Anti-CD40 antitestek és alkalmazásuk
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
WO2017136433A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
RS61374B1 (sr) * 2016-03-17 2021-02-26 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti
US10774140B2 (en) 2016-03-17 2020-09-15 Numab Therapeutics AG Anti-TNFα-antibodies and functional fragments thereof
US20170306050A1 (en) 2016-04-08 2017-10-26 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
WO2017184880A1 (en) 2016-04-20 2017-10-26 Coherus Biosciences, Inc. A method of filling a container with no headspace
EP3448391A4 (en) 2016-04-27 2019-12-18 AbbVie Inc. METHODS OF TREATING DISEASES IN WHICH IL-13 ACTIVITY IS HARMFUL WITH ANTI-IL-13 ANTIBODIES
MY194619A (en) 2016-06-02 2022-12-07 Abbvie Inc Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
CN109563167A (zh) 2016-06-08 2019-04-02 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
CA3027103A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015280A (es) 2016-06-08 2019-08-12 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo y farmaco anti-egfr.
WO2017214335A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
WO2017214456A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
AU2017277422A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
US11098107B2 (en) 2016-06-15 2021-08-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered CH2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
WO2018045258A1 (en) * 2016-09-02 2018-03-08 The University Of Chicago TREATMENT OF TNF-alpha CYTOTOXICITY
JP2020501508A (ja) * 2016-09-15 2020-01-23 クアドルセプト バイオ リミテッド 多量体、四量体および八量体
EP3519824A1 (en) 2016-10-03 2019-08-07 Abbott Laboratories Improved methods of assessing uch-l1 status in patient samples
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
MX2019004580A (es) 2016-10-21 2019-08-12 Amgen Inc Formulaciones farmaceuticas y metodos para prepararlas.
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
US20180164221A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
WO2018112240A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
EP3554544A4 (en) * 2016-12-16 2020-07-29 Bluefin Biomedicine, Inc. ANTI-PROTEIN 1 ANTIBODY CONTAINING AN ANTI-CUB DOMAIN (CDCP1), ANTIBODY-DRUG CONJUGATES AND THEIR METHODS OF USE
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
WO2018131893A1 (ko) 2017-01-11 2018-07-19 ㈜셀트리온 안정한 액체 제제
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
TW202313678A (zh) 2017-01-20 2023-04-01 法商賽諾菲公司 抗TGF-β抗體及其用途
CA3052095A1 (en) 2017-01-30 2018-08-02 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active psoriatic arthritis
MA47442A (fr) 2017-02-07 2019-12-18 Janssen Biotech Inc Anticorps anti-tnf, compositions et méthodes pour le traitement de la spondylarthrite ankylosante active
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
US11016092B2 (en) 2017-03-23 2021-05-25 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1
WO2018178973A1 (en) 2017-03-26 2018-10-04 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
US10877048B2 (en) 2017-04-15 2020-12-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
AU2018272054A1 (en) 2017-05-25 2019-09-26 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
JP7269183B2 (ja) 2017-05-30 2023-05-08 アボット・ラボラトリーズ 心臓トロポニンｉを使用する、ヒト対象における軽度外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
WO2019010131A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Abbott Laboratories IMPROVED METHODS FOR MEASURING CARBOXY TERMINATION HYDROLASE LEVELS OF UBIQUITIN L1 IN BLOOD
US11761963B2 (en) 2017-09-27 2023-09-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
CN111417410B (zh) 2017-12-01 2023-06-23 艾伯维公司 糖皮质激素受体激动剂及其免疫缀合物
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
US11022617B2 (en) 2017-12-09 2021-06-01 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (TBI), using glial fibrillary acidic protein (GFAP) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1 (UCH-L1)
BR112020010085A2 (pt) 2017-12-09 2020-10-13 Abbott Laboratories métodos para auxiliar no diagnóstico e avaliar uma lesão cerebral traumática em um indivíduo humano usando uma combinação de gfap e uch-l1
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
WO2019177690A1 (en) 2018-03-12 2019-09-19 Zoetis Services Llc Anti-ngf antibodies and methods thereof
EP3775900A1 (en) 2018-03-26 2021-02-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement c3 convertase
EP3800999A4 (en) 2018-06-04 2022-06-01 Biogen MA Inc. ANTI-VLA-4 ANTIBODIES WITH REDUCED EFFECTOR FUNCTION
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CN112654350A (zh) 2018-07-03 2021-04-13 诺华股份有限公司 使用nlrp3拮抗剂治疗对tnf抑制剂有抗性的受试者或针对所述患者选择治疗的方法
WO2020076849A1 (en) 2018-10-11 2020-04-16 The Scripps Research Institute Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates
WO2020086728A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
TWI825214B (zh) * 2018-11-05 2023-12-11 中國大陸商北京韓美藥品有限公司 抗TNFα/抗IL-17A天然抗體結構樣異源二聚體形式雙特異抗體及其製備
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
EP3880673B1 (en) 2018-11-13 2024-01-03 Novartis AG Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
ES2957692T3 (es) 2018-11-13 2024-01-24 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de afecciones asociadas a la actividad de NLRP
CN116726361A (zh) 2018-11-19 2023-09-12 比奥拉治疗股份有限公司 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置
WO2020118011A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
CN114729354A (zh) 2018-12-25 2022-07-08 中国医学科学院基础医学研究所 炎性相关疾病防治的小rna药物及其组合
JP2022533287A (ja) 2019-01-22 2022-07-22 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
HUP1900112A1 (hu) 2019-04-04 2020-10-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelõzõ flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
JP2022534020A (ja) 2019-05-23 2022-07-27 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｉｌ－２３及びｔｎｆアルファに対する抗体の併用療法による炎症性腸疾患の治療方法
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
EP3997124A4 (en) * 2019-07-09 2024-01-03 Nat Institute For Biotechnology In The Negev Ltd ANTIBODIES WITH REDUCED IMMUNOGENICITY
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
CA3167027A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
EP4114852A1 (en) 2020-03-03 2023-01-11 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
WO2021211331A1 (en) 2020-04-13 2021-10-21 Abbott Point Of Care Inc. METHODS, COMPLEXES AND KITS FOR DETECTING OR DETERMINING AN AMOUNT OF A ß-CORONAVIRUS ANTIBODY IN A SAMPLE
US20220043000A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Abbott Laboratories Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
JP2023554200A (ja) 2020-12-09 2023-12-26 エイチケー イノ．エヌ コーポレーション 抗ＯＸ４０Ｌ抗体、抗ＯＸ４０Ｌ及び抗ＴＮＦαの二重特異性抗体、並びにこれらの用途
US20240101715A1 (en) * 2020-12-18 2024-03-28 Kindred Biosciences, Inc. Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
IL308404A (en) 2021-04-27 2024-01-01 Generation Bio Co Non-viral DNA vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
AU2022279156A1 (en) 2021-05-18 2023-11-02 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
CA3222291A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Jaime MARINO Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
AU2022298665A1 (en) * 2021-06-22 2024-01-04 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
WO2023034777A1 (en) 2021-08-31 2023-03-09 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
AU2022354059A1 (en) 2021-09-30 2024-03-28 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023114978A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
WO2023129942A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
AU560087B2 (en) 1981-09-08 1987-03-26 Rockefeller University, The Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
EP0212489B1 (en) 1985-08-16 1994-11-30 The Rockefeller University Anabolic activity modulator and uses thereof
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
JP2638652B2 (ja) 1988-07-18 1997-08-06 カイロン・コーポレーション カケクチンと反応するモノクロナール抗体
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
DE68914244T2 (de) 1988-10-24 1994-10-27 Otsuka Pharma Co Ltd Monoklonaler Antikörper.
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
EP0486526B2 (en) 1989-08-07 2001-03-07 Peptech Limited Tumour necrosis factor binding ligands
US6448380B2 (en) * 1989-08-07 2002-09-10 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2246502T3 (es) 1990-08-29 2006-02-16 Genpharm International, Inc. Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US7084260B1 (en) 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US5698195A (en) 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) * 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20060246073A1 (en) * 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US6277969B1 (en) * 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
DK0610201T4 (da) * 1991-03-18 2008-02-04 Centocor Inc Monoklonale og kimære antistoffer, der er specifikke for human tumornekrosefaktor
US5656272A (en) * 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20070298040A1 (en) * 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
DK0605522T3 (da) * 1991-09-23 2000-01-17 Medical Res Council Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
WO1994008619A1 (en) * 1992-10-08 1994-04-28 The Kennedy Institute Of Rheumatology Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
US6270766B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
DK0614984T4 (da) 1993-03-05 2010-12-20 Bayer Healthcare Llc Humane monoklonale anti-TNF-alfa-antistoffer
JPH08510642A (ja) 1993-05-12 1996-11-12 ゾマ コーポレイション ゲロニンおよび抗体から成る免疫毒素
GB2294267B (en) 1993-06-03 1996-11-20 Therapeutic Antibodies Inc Anti-TNFalpha Fab fragments derived from polyclonal IgG antibodies
AU8083594A (en) 1993-10-19 1995-05-08 Scripps Research Institute, The Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
WO1995023813A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
NZ288997A (en) 1994-06-24 1999-01-28 Immunex Corp Controlled release pharmaceutical formulation comprising polypeptide encapsulated in alginate
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
RU2270030C2 (ru) 1996-02-09 2006-02-20 Абботт Байотекнолоджи эЛтиди. СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО TNFα (ВАРИАНТЫ), ПРИМЕНЕНИЕ ВЫДЕЛЕННОГО АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ФРАГМЕНТА В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА (ВАРИАНТЫ) И ВЫДЕЛЕННОЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ
AU3633000A (en) * 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050249735A1 (en) * 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20060018907A1 (en) * 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20030012786A1 (en) * 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2868614A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) * 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AU2003267999B2 (en) * 2002-07-19 2010-03-11 Abbvie Biotechnology Ltd Treatment of TNFalpha related disorders
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI439284B (zh) 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
NZ591701A (en) * 2005-05-16 2012-11-30 Abbott Biotech Ltd Use of tnf inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
EP1948235B1 (en) * 2005-11-01 2013-08-28 AbbVie Biotechnology Ltd Methods for determining efficacy of adalimumab in subjects having ankylosing spondylitis using ctx-ii and mmp3 as biomarkers
NZ611859A (en) * 2006-04-05 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd Antibody purification
US20090317399A1 (en) 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2012586A4 (en) 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US9624295B2 (en) 2006-04-10 2017-04-18 Abbvie Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
WO2007120656A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
TWI498137B (zh) 2006-06-30 2015-09-01 Abbvie Biotechnology Ltd 自動注射裝置
AU2007294731B2 (en) * 2006-09-13 2014-04-17 Abbvie Inc. Cell culture improvements
BRPI0717335A2 (pt) 2006-10-27 2013-12-10 Abbott Biotech Ltd Anticorpos anti-htnfalfa cristalinos
NZ598881A (en) 2007-03-29 2013-11-29 Abbvie Inc Crystalline anti-human il-12 antibodies
EP2679996A1 (en) * 2007-05-31 2014-01-01 AbbVie Inc. Biomarkers predictive of the responsiveness to TNF-alfa inhibitors in autoimmune disorders
WO2008150490A2 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
US8999337B2 (en) 2007-06-11 2015-04-07 Abbvie Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis by inhibition of TNFα
WO2009011782A2 (en) 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa INHIBITOR
US8753839B2 (en) 2007-08-08 2014-06-17 Abbvie Inc. Compositions and methods for crystallizing antibodies
CA2707483A1 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Wolfgang Fraunhofer Protein formulations and methods of making same
WO2009086550A1 (en) 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
MX2010007728A (es) 2008-01-15 2010-12-21 Abbott Gmbh & Co Kg Composiciones proteinicas en polvo y metodos para elaborar las mismas.
EP2784089A1 (en) 2008-01-15 2014-10-01 AbbVie Inc. Improved mammalian expression vectors and uses thereof
CA2713342A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
MX2010010503A (es) 2008-03-24 2010-11-09 Abbott Biotech Ltd Metodos y composiciones para tratar perdida osea.
JP5677411B2 (ja) 2009-04-29 2015-02-25 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 自動注入機器
RU2560701C2 (ru) 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
US20120014956A1 (en) 2010-02-02 2012-01-19 Hartmut Kupper Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
US8747854B2 (en) 2010-06-03 2014-06-10 Abbvie Biotechnology Ltd. Methods of treating moderate to severe hidradenitis suppurativa with anti-TNF-alpha antibodies
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
BG112042A (bg) 2015-10-30
NZ536216A (en) 2006-08-31
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
NO316711B1 (no) 2004-04-13
US8372400B2 (en) 2013-02-12
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
NZ562935A (en) 2009-06-26
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
CN103275221B (zh) 2016-08-17
BG102755A (en) 1999-05-31
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
NO319955B1 (no) 2005-10-03
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
NO983627D0 (no) 1998-08-07
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
CN101712720A (zh) 2010-05-26
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
SK106298A3 (en) 1999-03-12
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
CN1300173C (zh) 2007-02-14
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
US8206714B2 (en) 2012-06-26
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
CY2463B1 (en) 2005-06-03
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
US8753633B2 (en) 2014-06-17
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
NZ331579A (en) 2001-06-29
AU722077B2 (en) 2000-07-20
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
NO20026202L (no) 1998-10-07
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
US7541031B2 (en) 2009-06-02
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
IL125697A0 (en) 1999-04-11
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
IL151641A0 (en) 2003-04-10
MX9806347A (es) 1998-10-31
NO320657B1 (no) 2006-01-09
SI9720020A (sl) 1999-10-31
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
NO983627L (no) 1998-10-07
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
NO20040052L (no) 1998-10-07
NO20040154L (no) 1998-10-07
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
AU2122997A (en) 1997-08-28
CN103275221A (zh) 2013-09-04
IL125697A (en) 2005-03-20
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
NO322755B1 (no) 2006-12-04
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
CN102070715A (zh) 2011-05-25
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
HU228630B1 (en) 2013-04-29
US7223394B2 (en) 2007-05-29
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
PL328411A1 (en) 1999-01-18
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
BG109311A (en) 2006-03-31
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
MX336813B (es) 2016-02-02
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
IL218518A0 (en) 2012-04-30
BG107537A (en) 2003-09-30
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
UA82823C2 (en) 2008-05-26
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
CN1215407A (zh) 1999-04-28
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
SI9720020B (en) 2001-12-31
PT929578E (pt) 2003-09-30
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
NZ576716A (en) 2011-02-25
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
CA2243459C (en) 2002-09-17
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
US6258562B1 (en) 2001-07-10
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
IL206994A0 (en) 2010-12-30
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
BR9707379A (pt) 1999-04-13
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
NZ512006A (en) 2005-05-27
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
CN1504752A (zh) 2004-06-16
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
BG110703A (en) 2010-10-29
CN100429232C (zh) 2008-10-29
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU230515B1 (hu) Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai
CN101343324B (zh) 体外抑制人TNFα活性的方法
CN102083858B (zh) 抗il-17a/il-17f交叉反应性抗体及其使用方法
CN102458437B (zh) 抗il-17f抗体及其使用方法
US20040253638A1 (en) Immunoglobulins devoid of light chains
NO343721B1 (no) Sammensetning omfattende anti-TNF-alfa-antistoff for behandling av reumatoid artritt
MXPA98006347A (en) Human antibodies that link human tnfalfa