CZ292465B6 - Lidské protilátky k lidskému TNFalfa - Google Patents

Lidské protilátky k lidskému TNFalfa Download PDF

Info

Publication number
CZ292465B6
CZ292465B6 CZ19982476A CZ247698A CZ292465B6 CZ 292465 B6 CZ292465 B6 CZ 292465B6 CZ 19982476 A CZ19982476 A CZ 19982476A CZ 247698 A CZ247698 A CZ 247698A CZ 292465 B6 CZ292465 B6 CZ 292465B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
seq
antibody
amino acid
human
tnfα
Prior art date
Application number
CZ19982476A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ247698A3 (cs
Inventor
Jochen G. Salfeld
Deborah J. Allen
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A. Mankovich
Brian T. Mcguinness
Andrew J. Roberts
Paul Sakorafas
Hendricus R. J. M. Hoogenboom
David Schoenhaut
Tristan J. Vaughan
Michael White
Alison J. Wilton
Original Assignee
Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ292465(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. filed Critical Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd.
Publication of CZ247698A3 publication Critical patent/CZ247698A3/cs
Publication of CZ292465B6 publication Critical patent/CZ292465B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Abstract

Jsou pops ny lidsk protil tky, v²hodn rekombinantn lidsk protil tky, kter se specificky v na lidsk² faktor nekrosy n dor .alfa. (TNF.alfa.). Tyto protil tky maj vysokou afinitu pro hTNF.alfa. (nap°. K.sub.d.n.=10.sup.-8.n. M nebo menÜ ), pomalou rychlost disociace pro hTNF.alfa. disociaci (nap°. K.sub.off.n.=10.sup.-3.n.s.sup.-1.n. nebo menÜ ) a neutralizuj aktivitu hTNF.alfa. in vivo a in vitro. Protil tka podle p°edkl dan ho vyn lezu m e b²t kompletn protil tka nebo jej antigen-vazebn st. Protil tky, nebo sti protil tek, podle °eÜen jsou pou iteln pro detekci hTNF.alfa. a pro inhibici hTNF.alfa., nap° klad u lidsk²ch subjekt trp c ch onemocn n m, u kter ho je aktivita hTNF.alfa. Ükodliv . eÜen tak zahrnuje nukleov kyseliny, vektory a hostitelsk bu ky pro expresi rekombinantn ch lidsk²ch protil tek a zp soby pro synt zu rekombinantn ch lidsk²ch protil tek.\

Description

Lidské protilátky k lidskému TNFa
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká lidských protilátek k lidskému faktoru nekrosy nádorů a. TNFa. Dále se předkládaný vynález týká nukleových kyselin, vektorů a hostitelských buněk pro expresi rekombinantních lidských protilátek as způsobů pro syntézu rekombinantních lidských protilátek.
Dosavadní stav techniky
Faktor nekrosy nádorů a (TNFa) je cytokin produkovaný mnoha typy buněk, včetně monocytů a makrofágů, který byl původně identifikován díky jeho schopnosti indukovat nekrosu jistých typů nádorů u myší (viz například Old, L. (1985), Science 230: 630 až 632). Následně byl faktor nazývaný kachexin, asociovaný s kachexií, identifikován jako stejná molekula jako TNFa. Předpokládala se účast TNFa ve zprostředkování šoku (viz například Beutler, B a Cerami, A (1988) Annu. Rev. Biochem., 57: 505 až 518; Beutler, B a Cerami, A (1989) Annu. Rev. Immunol. 7: 625 až 655). Dále, předkládá se účast TNFa v patofyziologii mnoha dalších lidských onemocnění a poruch, včetně sepse, infekcí, autoimunitních onemocnění, rejekce transplantátu a reakce štěpu proti hostiteli (viz například Moeller, A. et al., Cytokine 2: 162 až 169 (1990); patent US 5 231 024, Moeller et al.; Evropská patentová přihláška publikační č. 260610 Bl, Moeller, A. et al.; Vasilli, P. Annu, Rev. Immunol., 10: 411 až 452 (1992); Tracey, K.J. a Cerami, A. Annu. Rev. Med. 45: 491 až 503 (1994).
Vzhledem ke škodlivé úloze lidského TNFa (hTNFa) v mnoha lidských onemocněních byly navrženy terapeutické strategie pro inhibici nebo zrušení aktivity hTNFa. Konkrétně, byly navrženy protilátky, které se váží na a neutralizují hTNFa jako prostředek pro inhibici aktivity hTNFa. Jedněmi z prvních takových protilátek byly myší monoklonální protilátky (mAb), secemované hybridomy připravenými z lymfocytů myší imunizovaných hTNFa (voz například Hahn, T. et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 82: 3814 až 3818 (1985); Liang, C. M. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 137: 847 až 854 (1986); Hirai, M a et al., J. Immunol. Methods 96: 57 až 62 (1987); Fendly, Β. M. et al., Hybridoma 6: 359 až 370 (1987); Moeller, A. et al., Cytokine 2: 162 až 169 (1990); patent US 5 231 024, Moeller et al., Evropská patentová přihláška publikační č. 186833 Bl, Wallach, D.; Evropská patentová přihláška publikační č. 218868 Al, Old et al.; Evropská patentová přihláška publikační č. 260610 Al, Moeller et al.). Ačkoliv tyto myší anti-hTHFa protilátky často vykazovaly vysokou afinitu pro hTNFa (například Kj < 10'9M) a byly schopné neutralizovat aktivitu hTHFa, jejich použití in vivo je omezeno problémy spojenými s podání myších protilátek lidem, jako je krátký poločas v séru, neschopnost spouštět určité lidské efektorové funkce a vyvolání nežádoucí imunitní odpovědi proti myším protilátkám u lidí („lidská anti-myší protilátka“ (HAMA) reakce).
Při pokusu o překonání těchto problémů spojených s úplnými myšími protilátkami u lidí byly myší anti-hTHFa protilátky geneticky zpracovány tak, aby byly více podobné lidským. Například, byly připraveny chimérické protilátky, ve kterých jsou variabilní regiony protilátkových řetězců odvozeny od myší a konstantní regiony protilátkových řetězců jsou odvozeny od lidí (Knight, D.M. et al., Mol. Immunol. 30: 1443 až 1453 (1993); PCT přihláška č. WO 92/16553 od Daddona, P.E. et al.). Dále byly také připraveny humanizované protilátky, ve kterých jsou hypervariabilní domény variabilních regionů protilátky odvozené od myší, ale zbytek variabilních regionů a konstantní regiony protilátky jsou lidské (PCT přihláška č. WO 92/11383, Adair, J.R. et al.). Nicméně, jelikož mají tyto chimérické a humanizované protilátky stále ještě nějaké myší sekvence, mohou stále vyvolat nežádoucí imunitní reakci, lidskou reakci proti chimérické protilátce (HACA), zejména pokud jsou podávány dlouhodobě, například v chronických indika
-1 CZ 292465 B6 cích, jako je revmatoidní artritida (viz například Elliot, M. J. et al. Lacencet 344: 1125 až 1127 (1994); Elliot, M. J. et al., Lancet 344: 1105 až 1110 (1994).
Výhodným inhibitorem hTNFa k myším mAb nebo jejich derivátům (například chimérickým nebo humanizovaným protilátkám) může být zcela lidská anti-hTNFa protilátka, protože takové agens by nemělo vyvolávat HAMA reakci, ani když bude užíváno dlouhodobě. Lidské monoklonální autoprotilátky proti hTHFa byly připraveny za použití lidské hybridomní techniky (Boyle, P. et al., Cell. Immunol. 152: 556 až 558, (1993); Boyle, P. et al., Cell. Immunol. 152: 569 až 581, (1993); Mezinárodní patentová přihláška publikační č. 614984 A2, Boyle et al.). Nicméně, u těchto od hybridomů odvozených monoklonálních autoprotilátek bylo popsáno, že mají afinitu k hTNFa, která je příliš nízká pro určení běžnými způsoby, nebyly schopné vázat se na solubilní hTNFa (viz Boyle et al., výše). Kromě toho, úspěch těchto hybridomních technik závisí na přirozené přítomnosti lymfocytů produkujících autoprotilátky specifické pro hTHFa v lidské periferní krvi. Některé studie detekovaly sérové autoprotilátky proti hTNFa u lidských subjektů (Fomsgaard, A. et al., Scand. J. Immunol. 30: 219 až 223 (1989); bendtzen, K. et al., Prog. Leukocyte Biol. 10B: 447 až 452 (1990), zatímco jiné nikoliv (Leusch, H-G, et al., J. Immunol. Methods 139: 145 - 147 (1991).
Alternativou k přirozeně se vyskytujícím lidským anti-hTNFa protilátkám by měla být rekombinantní hTNFa protilátka. Rekombinantní lidské protilátky, které váží hTNFa s relativně nízkou afinitou (tj. Kd » 10'7 M) a rychlostí (tj. Koff » 10~2 s’1) byly popsány (Griffiths, A.D. et al., EMBO J., 12: 725 až 734 (1993)). Nicméně, vzhledem kjejich relativně rychlé disociační kinetice nejsou tyto protilátky vhodné pro terapeutické použití. Kromě toho, byla popsána rekombinantní lidská anti-hTNFa protilátka, která neutralizuje aktivitu hTNFa, ale dosti zvyšuje vazbu hTNFa na povrch buněk a zvyšuje intemalizaci hTNFa, (Lidbury, A. et al., Biotechnol. Ther. 5: 27 až 45 (1994); PCT přihláška č. WO 92/03145 od Aston, R. et al.).
V souladu s tím stále existuje potřeba lidských protilátek, jako jsou rekombinantní lidské protilátky, které se váží na solubilní hTNFa s vysokou afinitou a které mají pomalou disociační kinetiku, a které mají kapacitu pro neutralizaci aktivity hTNFa, včetně cytotoxicity indukované hTNFa (in vitro a in vivo) a včetně aktivace buněk indukované hTNFa.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje lidské protilátky, výhodně rekombinantní lidské protilátky, které se specificky vážu na lidský TNFa. Protilátky podle předkládaného vynálezu jsou charakterizovány vazbou na hTNFa s vysokou afinitou a pomalu disociační kinetikou a neutralizací aktivitu hTNFa, včetně cytotoxicity indukované hTNFa (in vitro a in vivo) a včetně aktivace buněk indukované hTNFa. Protilátky podle předkládaného vynálezu jsou dále charakterizovány vazbou na hTNFa, ale nikoli na hTNFJp (lymfotoxin) a tím, že mají schopnost vazby na TNFa od jiných primátů a TNFa od jiných zvířat, než jsou primáti, kromě vazby na lidský TNFa.
Protilátky podle předkládaného vynálezu mohou být kompletní (například IgGl až IgG4 protilátky) nebo mohou být omezeny pouze na část vážící antigen (např. Fab, F(ab')2 nebo scFv fragment). Nejvýhodnější rekombinantní protilátka podle předkládaného vynálezu, nazvaná D2E7, má CDR3 doménu lidského řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3 a CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4. Výhodně má D2E7 protilátka variabilní region lehkého řetězce (LCVR) obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 a variabilní region těžkého řetězce (HCVR) obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2.
Předmětem vynálezu je izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s těmito charakteristikami:
a. disociuje z lidského TNFa s rychlostní konstantou Koff 1 x 10'3s4 nebo menší, stanoveno povrchovou plazmovou rezonancí,
b. má CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO:
3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1,
4, 5, 7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1,3,4, 6, 7, 8 a/nebo 9,
c. má CDR3 doménu řetězce obsahující aminokyselinou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12.
Výhodné je, jestliže lidská protilátka, nebo její antigen vazebná část, podle vynálezu disociuje z lidského TNFa s K<i 1 x ΙΟ’8 M nebo nižší a rychlostní konstantou Koff 1 x 10'3 s'1 nebo menší, obojí stanoveno povrchovou plazmovou rezonancí, a neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standardním in vitro L929 testu s IC50 1 x 10'7 M nebo menší.
Protilátka přednostně neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa, ve standardním in vitro L929 testu s IC50 1 x ΙΟ'8 M nebo menší, zejména 1 x ΙΟ-9 M nebo menší, nejlépe 1 x ΙΟ'10 M nebo menší.
Výhodně je protilátkou rekombinantní protilátka nebo její antigen-vazebná část.
Je výhodné, jestliže protilátka inhibuje lidským TNFa, indukovanou expresi ELAM-1 na endotelových buňkách lidské pupečníkové žíly.
Přednostně protilátka disociuje z lidského TNFa s rychlostní konstantou Koff 5 x 104s4 nebo menší, zejména 1 x 104 s'1 nebo menší.
Přednostní je podle vynálezu lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou alaninovou substitucí v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 a s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) majícím CDR3 domému obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou alaninovou substitucí v pozici 2, 3,4, 5, 6, 8, 9,10 nebo 11.
Výhodné je, jestliže LCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5 a HCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6.
Výhodně rovněž LCVR má dále CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7 a HCVR má dále CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8.
Přednostní je protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 a s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2.
Výhodná je protilátka, která má konstantní region těžkého řetězce IgGl, nebo která má konstantní region těžkého řetězce IgG4.
-3CZ 292465 B6
Výhodně je protilátko Fab fragment, zejména jednořetězcový Fv fragment.
přednostní je též protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s variabilním regionem lehkého řetězce, (LCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 nebo s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se ze SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 a SEQ ID NO: 34.
Ve výhodném provedení je předmětem vynálezu rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, která neutralizuje aktivitu lidského INFa, ale ne aktivitu lidského TNFp, a má výše uvedené identifikační charakteristiky.
Je výhodné, jestliže rekombinantní lidská protilátka také neutralizuje aktivitu šimpanzího INFa a alespoň jednoho dalšího primátího TNFa vybraného ze skupiny skládající se z paviáního TNFa, kosmaního TNFa, TNFa makaka (cynomolgus) a TNFa makaka rhesus.
Výhodná je rekombinantní protilátka, která také neutralizuje aktivitu psího TNFa, a rovněž která také neutralizuje aktivitu prasečího TNFa.
Předmětem vynálezu je rovněž molekula nukleové kyseliny kódující protilátku nebo její antigen-vazebnou část podle vynálezu. Preferovaná nukleová kyselina podle vynálezu, kódující D2E7 LCVR, má nukleotidovou sekvenci ukázanou na obrázku 7 a SEQ ID NO: 36. Jiná preferovaná nukleová kyselina podle předkládaného vynálezu, kódující D2E7 HCVR, má nukleotidovou sekvenci ukázanou na obrázku 8 a SEQ ID NO: 37. Vynález také zahrnuje rekombinantní expresní vektor nesoucí nukleovou kyselinu kódující protilátky a hostitelskou buňku, do kterých může být takový vektor zaveden, stejně jako způsob produkce protilátek podle vynálezu kultivací hostitelských buněk podle vynálezu.
Dále vynález zahrnuje použití protilátky podle vynálezu pro výrobu léčiva pro léčbu onemocnění, při kterém je aktivita TNFa škodlivá. Onemocnění může být například sepse, autoimunitní onemocnění (například revmatoidní artritida, alergie, roztroušená skleróza, autoimunitní diabetes, autoimunitní uveitida a nefrotický syndrom), infekční onemocnění, malignita, rejekce transplantátu nebo reakce štěpu proti hostiteli, plicní onemocnění, onemocnění kostí, střevní onemocnění nebo onemocnění srdce.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1A a 1B ukazují aminokyselinové sekvence variabilního regionu lehkého řetězce D2E7 (D2E7 VL; též ukázáno v SEQ ID NO: 1), alanin-vyhledávací mutanty D2E7 VL (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A7 a LD2E7*.A8), variabilní region lehkého řetězce příbuzné protilátky 2SD4 (2SD4 VL; též ukázáno v SEQ ID NO: 9) a další variabilní regiony lehkého řetězce příbuzné kD2E7 (EP B12, VL10E4, VL100A9, VL100D2, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLLOF10, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, VLLOH10, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VL0.1H8, LOE7, LOE7.A a LOE7.T). Obrázek 1A ukazuje FR1, CDR1, FR2 a CDR2 domény. Obrázek 1B ukazuje FR3, CDR3 a FR4 domény. CDR1 („CDR LI“), CDR2 („CDR L2“) a CDR3 („CDR L3) domény lehkého řetězce jsou v rámečku.
Obrázky 2A a 2B ukazují aminokyselinové sekvence variabilního regionu těžkého řetězce D2E7 (D2E7 VH; též ukázáno v SEQ ID NO: 2), alanin-vyhledávací mutanty D2E7 VH (HD2E7*.A1,
-4CZ 292465 B6
HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6 HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 aHD2E7*.A9), variabilní region těžkého řetězce příbuzné protilátky 2SD4 (2SD4 VH; též ukázáno v SEQ ID NO: 10) a další variabilní regiony těžkého řetězce příbuzné kD2E7 (VH1B11, VH1D8, VH1A11, HV1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, HV1G1, 3C-H2, VH1-D2.N a VH1-D2.Y). Obrázek 2A ukazuje FR1, CDR1, FR2 a CDR2 domény. Obrázek 2B ukazuje FR3, CDR3 a FR4 domény. CDR1 („CDRL1“), CDR2 („CDR L2“) a CDR3 („CDR L3) domény těžkého řetězce jsou v rámečku.
Obrázek 3 je graf znázorňují inhibici TFNa indukované L929 cytotoxicity lidskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, ve srovnání a myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázek 4 je graf znázorňující inhibici rhTNFa vazby na hTNFa receptory na U-937 buňkách lidskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, ve srovnání s myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázek 5 je graf znázorňující inhibici TNFa-indukované exprese ELAM-1 na HUVEC lidskou anti-hTNFa protilátkou D2E7, ve srovnání s myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195.
Obrázek 6 je sloupcový graf znázorňující ochranu před TNFa-indukovanou letalitou u D-galaktosaminem senzitizovaných myší podáním lidské anti-hTNFa protilátky D2E7 (černé sloupce), ve srovnání s myší anti-hTNFa protilátkou MAK 195 (šrafované sloupce).
Obrázek 7 ukazuje nukleotidovou sekvenci variabilního regionu lehkého řetězce D2E7, s předpokládanou aminokyselinovou sekvencí pod nukleotidovou sekvencí. CDR Ll, CDR L2 a CDR L3 regiony jsou podtrženy.
Obrázek 8 ukazuje nukleotidovou sekvenci variabilního regionu těžkého řetězce D2E7, s předpokládanou aminokyselinovou sekvencí pod nukleotidovou sekvencí. CDR Hl, CDR H2 a CDR H3 regiony jsou podtrženy.
Obrázek 9 je graf znázorňující účinek léčby D2E7 protilátkou na průměrnou velikost kloubu u Tgl97 transgenních myší jako modelu polyartritidy.
Tento vynález se týká izolovaných lidských protilátek, nebo jejich antigen-vazebných částí, které se vážou na lidský TNFa s vysokou afinitou, nízkou rychlostí disociace a s vysokou neutralizační kapacitou. Různé aspekty vynálezu se týkají protilátek a protilátkových fragmentů a jejich farmaceutických přípravků, stejně jako nukleových kyselin, rekombinantních expresních vektorů a hostitelských buněk pro výrobu takových protilátek a fragmentů. Vynález také obsahuje způsoby použití protilátek podle předkládaného vynálezu pro detekci lidského TNFa nebo pro inhibici aktivity lidského TNFa, jak in vitro, tak in vivo.
Pro snadnější pochopení předkládaného vynálezu jsou nejprve definovány určité termíny.
Termín „lidský TNFa“ (zkratka hTNFa, nebo jednoduše hTNFa), jak je zde použit, označuje lidský cytokin, který existuje jako 17 kDa secemovaná forma a 26 kDa membránová forma, jehož biologicky aktivní forma je složena ztrimetru nekovalentně vázaných 17 kDa molekul. Struktur hTNFa je popsána dále v, například, Pennica, D. et al., Nátuře 312: 724 až 729, (1984); Davis, J. M. et al., Biochemistry 26: 1322 až 1326 (1987); a Jones Ε. Y. et al., Nátuře 338: 225 až 228 (1989). Termín lidský TNFa je míněn tak, že zahrnuje rekombinantní lidský TNFa (rhTNFa), který může být získán standardními rekombinantními expresními metodami nebo může být získán komerčně (R & D Systems, katalogové č. 210-TA, Minneapolis, MN).
Termín „protilátka“, jak je zde použit, označuje imunoglobulinové molekuly složení ze čtyř polypeptidových řetězců, dvou těžkých (H) a dvou lehkých (L) řetězců mezi sebou spojených disulfidovou vazbou. Každý těžký řetězec je složen z variabilního regionu těžkého řetězce (zde
-5CZ 292465 B6 zkráceno jako HCVR nebo HV) a konstantního regionu těžkého řetězce. Konstantní region těžkého řetězce je složen ze tří domén, CH1, CH2 a CH3. Každý lehký řetězec je složen z variabilního regionu lehkého řetězce (zde zkráceno jako LCVR nebo VL) a konstantního regionu řetězce (zde zkráceno jako LCVR nebo VL) a konstantního regionu lehkého řetězce. Konstantní region lehkého řetězce je složen z jedné domény, CL. VH a VL regiony mohou být dále děleny na regiony hypervariability, které se nazývají komplementaritu určující regiony (CDR), mezi kterými jsou vmezeřeny regiony, které jsou více konzervované a nazývají se regiony pracovních rámečků (FR). Každý VH a VL se skládá ze tří CDR a čtyř FR, které jsou uspořádány z aminokonce v následujícím pořadí: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Termín „antigen-vazebná část“ protilátky (nebo prostě „část protilátky“) jak je zde použit, označuje jeden nebo více fragmentů protilátky, které si zachovávají schopnost specifické vazby na antigen (např. hTNFa). Bylo ukázáno, že funkce vazby antigenu protilátky může být prováděna fragmenty kompletní protilátky. Příklady vazebných fragmentů zahrnutý ch v termínu „antigen-vazebná část“ protilátky zahrnují (i) Fab fragment, monovalentní fragment skládající se zVL, VH, Cl a CH1 domén; (ii) F(ab')2 fragment, bivalentní fragment obsahující dva Fab fragmenty vázané disulfidovým můstkem v patentovém regionu; (iii) Fd fragment skládající se z VH a CH1 domén; (iv) Fv fragment skládající se z VL a VH domén jednoho ramena protilátky; (v) dAb fragment (Ward et al., Nátuře 641: 544 až 546 (1989)), který se skládá z VH domény; a(vi) izolovaný komplementaritu určující region (CDR). Dále, ačkoliv dvě domény Fv fragmentu, VI a VH, jsou kódovány různými geny, mohou být za použití rekombinantních metod spojeny syntetickým linkerem, který umožňuje jejich výrobu jako jediného proteinu, ve kterém jsou VL a VH regiony spárovány za tvorby monovalentních molekul (známé jako jednořetězcová Fv (scFv); viz například bird et al Science 242: 423 až 426 (1988); a Huston et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85: 5879 až 5883 (1988)). Takové jednořetězcové protilátky jsou také zahrnuty termínem „antigen-vazebná část“ protilátky. Jiné formy jednořetězcových protilátek, jako jsou dialátky, jsou tímto termínem také obsaženy, dialátky jsou bivalentní, bispecifické protilátky, ve kterých jsou HV a VL domény exprimovány na jednom polypeptidovém řetězci, ale využívají linkeru, který je příliš krátký pro umožnění párování mezi dvěma doménami stejného řetězce, což nutí domény k párování s komplementárními doménami jiného řetězce a tak ke tvorbě dvou vazebných míst pro antigen (viz například hollinger, P. et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444 až 6448 (1993); Poljak, R. J. et al., Structure 2: 1121 až 1123 (1994)).
Ještě dále může být protilátka nebo její antigen-vazebná část částí větších imunoadhezivních molekul, tvořených kovalentní nebo nekovalentní asociací protilátky nebo část protilátky s jedním nebo více proteiny nebo peptidy. Příklady takových imunoadhezních molekul zahrnují použití jaderného regionu streptavidinu pro tvorbu tetramemí scFv molekuly (Kipriyanov, S.M. et al., Human Antibodies and Hybridomes 6: 93 až 101 (1995)) a použití cysteinového zbytku, markerového peptidů a C-koncové polyhistidinové smyčky pro tvorbu bivalentních abiotinylových scFV molekul (Kipriyanov, S.M. et al., Mol. Immunol. 31: 1047 až 1058 (1994)). Části protilátky, jako jsou Fab a F(ab')2 fragmenty, mohou být připraveny z celých protilátek za použití běžných technik, jako je štěpení celých protilátek papainem, resp. pepsinem. Kromě toho, protilátky, části protilátek a imunoadhezní molekuly mohou být získány za použití standardních rekombinantních DNA technik, jak je zde popsáno.
Termín „lidská protilátka“, jak je zde použit, je míněn tak, že zahrnuje protilátky mající variabilní a konstantní regiony odvozené do lidských imunoglobulinových sekvencí zárodečné linie. Lidské protilátky podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat aminokyselinové zbytky, které nejsou kódované lidskými imunoglobulinovými sekvencemi zárodečné linie (např. mutace zavedené náhodnou nebo místně řízenou mutagenezí in vitro nebo somatickou mutací in vivo), například v CDR a zejména v CDR3. Nicméně, termín „lidská protilátka“ jak je zde použit, není míněn tak, aby zahrnoval protilátky, ve kterých byly CDR sekvence odvozené ze zárodečných linií jiných savčích druhů, jako jsou myši, přeneseny k sekvencím lidského pracovního rámečku.
-6CZ 292465 B6
Termín „rekombinantní lidská protilátka“, jak je zde použit, je míněn tak, že zahrnuje všechny protilátky, které jsou připraveny, exprimovány, vytvořeny nebo izolovány rekombinantními prostředky, jako jsou protilátky exprivované za použití rekombinantního expresního vektoru přeneseného do hostitelské buňky (toto je popsáno v části II, dále), protilátky izolované z rekombinantní, kombinastoriální knihovny lidských protilátek (toto je popsáno v části III, dále), protilátky izolované od zvířete (například od myši), která je transgenní pro lidské geny pro imunoglobuliny (viz například Taylor, L.D. et al., Nucl Acids Res. 20: 6287 až 6295 (1992)) nebo protilátky připravené, exprimované, vytvořené nebo izolované jakýmikoliv jinými prostředky obsahujícími sestřih sekvencí genů pro lidské imunoglobuliny s jinými DNA sekvencemi. Takové rekombinantní lidské protilátky mají variabilní a konstantní regiony odvozené od lidských imunoglobulinových sekvencí zárodečné linie. V určitých provedeních jsou, nicméně, takové rekombinantní lidské protilátky podrobeny jsou, nicméně, takové rekombinantní lidské protilátky podrobeny in vitro mutagenezi (nebo, pokud je použito zvíře transgenní pro lidské IgG sekvence, in vido somatické mutagenezi) a tak jsou aminokyselinové sekvence HV a VL regionů rekombinantních protilátek sekvence které, ačkoliv jsou odvozeny od a jsou příbuzné k lidským VH a VL sekvencím, nemusí přirozeně existovat v lidském protilátkovém zárodečném repertoáru in vivo.
„Izolovaná protilátka“ zde určuje protilátku, která je v podstatě prostá dalších protilátek majících jinou antigenní specifitu (například izolovaná protilátka, která specificky váže hTNFa, je v podstatě prostá protilátek, které specificky vážou antigeny jiné než hTNFa). Izolovaná protilátka, která specificky váže hTNFa může, nicméně, mít zkříženou reaktivitu s jinými antigeny, jako jsou molekuly TNFa z jiných druhů (toto je podrobněji probráno dále). Kromě toho, izolovaná protilátka je významně prostá dalšího buněčného materiálu a/nebo chemikálií.
„Neutralizační protilátka“, jak je zde použito, (nebo „protilátka, která neutralizuje aktivitu hTNFa“), označuje protilátku, jejíž vazba na hTNFa vede k inhibici biologické aktivity hTNFa. Tato inhibice biologické aktivity hTNFa může být hodnocena měřením jednoho nebo více indikátorů biologické aktivity hTNFa, jako je hTNFa-indukovaná cytotoxicita (jak in vitro, tak in vivo), hTNFa indukovaná buněčná aktivace a vazba hTNFa na receptory pro hTNFa. Tyto indikátory biologické aktivity hTNFa mohou být hodnoceny jedním nebo více z několika standardních testů známých z oboru (viz příklad 4). Výhodně je schopnost protilátky neutralizovat aktivitu hTNFa hodnocena inhibici hTNFa-indukované cytotoxicity L929 buněk. Jako další nebo alternativní parametr aktivity hTNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na HUVEC, jako míru hTNFa-indukované buněčné aktivace.
Termín „povrchová plazmonová rezonance“, jak je zde použit, označuje optický jev, který umožňuje analýzu biospecifických interakcí v reálném čase detekcí změn v koncentracích proteinů v biosenzorové matrici, například za použití BIAcore systému (Pharmacia Bosensor AB, Uppsala, Sweden a Piscataway, NJ). Pro další popis viz příklad 1 a Jonsson, U. et al., Ann. Biol. Clin 51: 19 až 26 (1993); Jonsson, U. et al., Biotechniques 11: 620 až 627 (1991); Johnson, B. etal., J. Mol. Recognit. 8: 125 až 131 (1995); a Johnson, B. et al., Anal. Biochem. 198: 268 až 277(1991).
Termín „Koff“, jak je zde použit, označuje rychlostní konstantu pro disociaci protilátky z komplexu protilátka/antigen.
Termín „Kd“, jak je zde použit, označuje disociační konstantu pro určitou interakci antigenprotilátka.
Termín „molekula nukleové kyseliny“, jak je zde použit, zahrnuje DNA molekuly a RNA molekuly. Molekula nukleové kyseliny může být jednořetězcová nebo dvouřetezcová, ale výhodně to je dvouřetezcová DNA.
-7CZ 292465 B6
Termín „izolovaná molekula nukleové kyseliny“, jak je zde použit v souvislosti s nukleovými kyselinami kódujícími protilátky nebo části protilátek (např. VH, VL, CDR3), které se vážou na hTNFa, označuje molekulu nukleové kyseliny, ve které jsou neuotidové sekvence kódující protilátku nebo části protilátky prosté jiných nukleotidových sekvencí kódujících protilátky nebo části protilátek, které se vážou na jiný antigen, než na hTNFa, kde tyto jiné sekvence mohou přirozené sousedit s nukleovou kyselinou v lidské genomové DNA. Tak, například, izolovaná nukleová kyselina podle předkládaného vynálezu kódující VH region anti-TNFa protilátky neobsahuje další sekvence kódující jiné VH regiony, které se vážou na antigeny jiné než TNFa.
Termín „vektor“, jak je zde použit, označuje molekulu nukleové kyseliny schopnou transportu jiné nukleové kyseliny, na kterou je navázán. Jedním typem vektoru je „plazmid, což označuje cirkulámí dvouřetězcovou DNA smyčku, do které mohou být ligovány další DNA segmenty. Jiným typem vektoru je virový vektor, ve kterém mohou být další DNA segmenty ligovány do virového genomu. Určité vektory jsou schopné autonomní replikace v hostitelské buňce, do které jsou vloženy (například bakteriální vektory mající bakteriální zdroj replikace a episomální savčí vektory). Další vektory (například neepisomální savčí vektory) mohou být integrovány do genomu hostitelské buňky po zavedení do hostitelské buňky a tak jsou replikovány spolu s genomem. Kromě toho, určité vektory jsou schopné řízení exprese genů, na které jsou navázány. Takové vektory jsou zde označovány jako „rekombinantní expresní vektory“ (nebo jednoduše „expresní vektory“). Obecně, expresní vektory použitelné v rekombinantních DNA technikách jsou často ve formě plazmidů. V předkládané přihlášce, „plazmid“ a „vektor“ mohou být zaměnitelné, protože plazmid je nejběžněji používanou formou vektoru. Nicméně, vynález je míněn tak, že zahrnuje také jiné formy expresních vektorů, jako jsou virové vektory (například replikace - deficientní retroviiy, adenoviiy a adeno-asociované viry), které slouží ekvivalentní funkci.
Termín „rekombinantní hostitelská buňka“ (nebo jednoduše „hostitelská buňka“, jak je zde použit, označuje buňku, do které byl vložen rekombinantní expresní vektor. Mělo by být jasné, že tyto termíny označují nejenom určitou jednotlivou buňku, ale potomstvo takové buňky. Protože v dalších generacích může dojít k určitým modifikacím díky mutacím nebo vlivu prostředí, nemusí být takové potomstvo ve skutečnosti identické s rodičovskou buňkou, ale stále spadá do významu termínu „hostitelská buňka“ jak je zde použit.
Různé aspekty vynálezu jsou dále podrobněji popsány v následujících sekcích.
I. Lidské protilátky, které se vážou na lidský TNFa
Tento vynález poskytuje izolované lidské protilátky, nebo jejich antigen-vazebné části, které se vážou na lidský TNFa s vysokou afinitou, nízkou rychlostní konstantou a vysokou neutralizační kapacitou. Vhodně jsou lidské protilátky podle předkládaného vynálezu rekombinantní, neutralizační lidské anti-hTNFa protilátky. Nejvýhodnější rekombinantní, neutralizační protilátky podle předkládaného vynálezu je zde určena D2E7 a má VL a VH sekvence jak jsou ukázány na obrázcích ΙΑ, IB a obrázcích 2A, 2B, v příslušném pořadí (aminokyselinová VL regionu D2E7 je také ukázána v SEQ ID NO: 1; aminokyselinová VH regionu D2E7 je také ukázána v SEQ ID NO: 2). Vazebné charakteristiky D2E7 ve srovnání smyší anti-hTNFa MAK 195 mAb, která vykazuje vysokou afinitu a pomalu disociační kinetiku a s další lidskou anti-hTNFa protilátkou se sekvencí příbuznou D2E7,2SD4, jsou shrnuty níže:
Protilátka Koff S1 Kon MV Ka M Stechiometrie
D2E7 IgGl 8,81 x 10‘5 1,91 x 105 6,09 xlO'10 1,2
2SD4 IgG4 8,4x10’3 4,20 x 105 2,00x10'8 0,8
MAK 195 F (ab')2 8,70x10'5 1,90 xlO5 4,60x10’10 1,4
-8CZ 292465 B6
D2E7 protilátka a příbuzné protilátky, také vykazují silnou kapacitu pro neutralizaci aktivity hTNFa, jak je hodnoceno několika in vitro a in vivo testy (viz příklad 4). Například, tyto protilátky neutralizují hTNFa-indukovanou cytotoxicitu L929 buněk s hodnotami IC50 v rozmezí od asi 10'7 M do asi 10‘10 M. D2E7, pokud je exprivována jako kompletní IgGl protilátka, neutralizuje hTNFa-indukovanou cytotoxicitu L929 buněk sIC50 asi 1,25 x ΙΟ'10 M. Navíc, neutralizační kapacita D2E7 je uchovávána, pokud je protilátka exprivována jako Fab, F(ab')2 nebo scFv fragment. D2E7 také inhibuje TNFa-indukovanou buněčnou aktivaci, jak je měřena hTNFa-indukovanou ELÁM expresí na HUVEC (IC50 = si 1,85 x 10‘10 M), a vazbu hTNFa na receptory pro hTNFa na U-937 buňkách (IC50 = asi 1,56 x ΙΟ'10 M). S ohledem na poslední uvedené D2E7 inhibuje vazbu hTNFa jak na p55, tak na p75 receptory pro hTNFa. Kromě toho, protilátka inhibuje hTNFa-indukovanou letalitu in vivo u myší (ED50 =1-2,5 pg/myš).
Co se týká vazebné specificity D2E7, tato protilátka se váže na lidský TNFa v různých formách, včetně solubilního hTNFa, transmembránového hTNFa a hTNFa navázaného na buněčné receptory. D2E7 se neváže specificky na jiné cytokiny, jako je lymfotoxin (TNFp), IL-la, IL-Ιβ, IL-2, IL—4, IL-6, IL-8, IFNt a TGF-β. Nicméně, D2E7 vykazuje zkrácenou reaktivitu s faktorem nekrosy nádorů z jiných druhů. Například, protilátka neutralizuje aktivitu alespoň pěti TNFa od jiných primátů (šimpanzího, paviáního, kosmaního, makaka (cynomolgus) a makaka rhesus) s přibližně stejnými hodnotami IC50 jako pro neutralizaci hTNFa, (viz příklad 4, sekce 4). D2E7 také neutralizuje aktivitu myšího TNFa, asi 1000-krát hůře, než lidského TNFa (viz příklad 4, sekce E). D2E7 se také váže na psí a prasečí TNFa.
V jednom aspektu se vynález týká D2E7 protilátek a částí protilátek a dalších lidských protilátek a částí protilátek se shodnými vlastnostmi jako má D2E7, tak, jako je vysoce afinitní vazba na hTNFa s pomalou disociační kinetikou a vysokou neutralizační kapacitou. V jednom provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, která disociuje z lidského TNFa s Kj 1 x 10‘8 M nebo nižší IQf rychlostní konstantou 1 x 10'3s'1 nebo nižší, kde obě tyto hodnoty jsou určeny povrchovou plazmovou rezonancí, a která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standardním in vitro L929 testu sIC5o 1 x 10'7 M nebo nižší. Lépe, izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFa sKoff 5 x lO^s'1 nebo nižší. Lépe, izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standardním in vitro L929 testu sIC5o 1 x ΙΟ’8 M nebo nižší, ještě lépe s IC50 1 x ΙΟ’9 M nebo nižší, a nejlépe s IC50 1 x ΙΟ’10 M nebo nižší. Ve výhodných provedeních je protilátka izolovaná lidská rekombinantní protilátka, nebo její antigen-vazebná část. V dalším výhodném provedení protilátka také neutralizuje TNFa-indukovanou buněčnou aktivaci, jak je hodnocena za použití standardního in vivo testu pro TNFaindukovanou expresi ELAm-1 na endotelových buňkách lidské pupeční žíly (HUVEC).
Analýza povrchovou plazmovou rezonancí pro určení Kj a K<>ff může být provedena tak, jak je popsáno v příkladu 1. Standardní in vitro L929 test pro určení hodnot IC50 je popsán v příkladu 4, sekci A. Standardní in vitro test pro TNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na endotelových buňkách lidské pupeční žíly (HUVEC) je popsán v příkladu 4, sekci C. Příklady rekombinantních lidských protilátek, které splňují výše uvedená kriteria kinetiky a neutralizace, zahrnují protilátky mající následující (VH/VL) páry, jejichž sekvence jsou ukázány na obrázcích ΙΑ, B, 2A a 2B (viz také příklady 2, 3 a 4 pro analýzu kinetiky a neutralizace): (D2E7 VH/D2E7 VL); (HD2E7*.A1/D2E7 VL); (HD2E7*.A2/D2E7 VL); (HD2E7*.A3/D2E7 VL); (HC2E7*.A4/D2E7 VL); (HD2E7*.A5/D2E7 VL); (HD2E7*.A6/D2E7 VL); (HD2E7*.A7/D2E7 VL); (HD2E7*.A8/D2E7 VL); (HD2E7*.A9/D2E7 VL); (D2E7 VH/LD2E7*.A1); (D2E7 VH/LD2E7*.A4); (D2E7*.A9/LD2E7*.A1); (VH1-D2/LOE7); (VH1-D2.N/LOE7.T);
(VH1-D2.Y/LOE7.A); (VH-D2.N/LOE7.A); (VH1-D2/EP B12); a (3C-H2/LOE7A). V
V oboru je dobře známo, že CDR3 domény těžkého a lehkého řetězce protilátky mají významnou úlohu ve vazebné specificitě/afinitě protilátky pro antigenu. V souladu s tím, že jiném aspektu, se
-9CZ 292465 B6 vynález týká lidských protilátek, které mají pomalou disociační kinetiku pro asociaci s hTNFa a které mají CDR3 domény těžkého a lehkého řetězce, které jsou strukturálně identické nebo příbuzné k doménám D2E7. Jak je ukázáno v příkladu 3, pozice 9 D2E7 VL CDR3 může být obsazena Ala nebo Thr bez významného ovlivnění KOff. V souladu s tím konsensuální motiv pro D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NO: 3). Dále, pozici 12 D2E7 VL CDR může být obsazena Tyr nebo Asn bez významného ovlivnění KOff. V souladu s tím, konsensuální motiv pro D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4). Kromě toho, jak je ukázáno v příkladu 2, CDR3 doména těžkých a lehkých řetězců D2E7 je vhodná pro substituce jedním alaninovým zbytkem (v pozicích 1, 4, 5, 7 nebo 8 ve VL CDR3 nebo v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 ve VH CDR3) bez významného ovlivnění Koff. Ještě dále, odborníci v oboru ocení, že při dané přístupnosti D2E7 VL a VH CDR3 domén k substitucím alaninem mohou být možné substituce jiných aminokyselin v CDR3 doménách za zachování nízké rychlostní konstanty disociace protilátky7, zejména substituce konzervativními aminokyselinami. „Konzervativní aminokyselinová substituce“, jak je zde použito, je substituce, při které je jeden aminokyselinový zbytek nahrazen jiným aminokyselinovým zbytkem majícím podobný postranní řetězec. Rodiny aminokyselinových zbytků majících podobné postranní řetězce byly v oboru identifikovány a zahrnují bazické postranní řetězce (například lysin, artinin, histidin), kyselé postranní řetězce (například kyselina aspartová, kyselina glutamová), nenabité polární postranní řetezce (například glycin, asparagin, glutamin, serin, threonin, tyrosin, cystein), nepolární postranní řetězce (například alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, fenylalanin, methionin, tryptofan), beta-větvené postranní řetězce (například threonin, valin, izoleucin) a aromatické postranní řetězce (například threonin, valin, izoleucin) a aromatické postranní řetězce (například tyrosin, fenylalanin, tryptofan, histidin). Výhodně je provedeno ne více než pět konzervativních aminokyselinových substitucí v D2E7 VL a/nebo VH CDR3 doménách. Lépe je provedeno ne více než jedna až tři konzervativní aminokyselinové substituce v D2E7 VL a/nebo VH CDR3 doménách. Dále by neměly být provedeny konzervativní aminokyselinové substituce v aminokyselinových pozicích kritických pro vazbu na hTNFa. Jak je ukázáno na obrázku 3, pozice 2 a 5 D2E7 VL CDR3 a pozice 1 a 7 DE27 VH CDR3 se zdají být kritické pro interakci s hTNFa a proto by výhodně neměly být konzervativní aminokyselinové substituce uvedeny v těchto pozicích (ačkoliv alaninová substituce v pozici 5 D2E7 VL CDR3 je přijatelná, jak je popsáno výše).
V souladu stím, v jiném provedení, poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigen-vazebnou část, s následujícími charakteristikami:
a) disociuje z lidského TNFa s Koff rychlostní konstantou 1 x 10'3 s'1 nebo menší, jak je určeno povrchovou plazmovou rezonancí;
b) má CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1,4, 5,7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/nebo 9.
c) má CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2,3,4,5,6, 8, 9,10,11 a/nebo 12.
Lépe, protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFa s Koff 5 x ΙΟΎ1 nebo menší. Ještě lépe, protilátka, nebo její antigen-vazebná část, disociuje z lidského TNFa s Koff 1 x lOV nebo menší. V
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigenvazebnou část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) majícím CDR3 doménu
-10CZ 292465 B6 obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5 nebo 8 a s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11. Lépe, LCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5 (tj. D2E7 VL CDR2) a HCVR má dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6 (tj. D2E7 VH CDR2). Ještě lépe, LCVR má dále CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7 (tj. D2E7 VL CDR1) a HCVR má dále CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8 (tj. D2E7 VH CDR1). Regiony pracovního rámečku pro VL jsou výhodně z Vkappal lidské zárodečné rodiny, lépe z Vk genu A20 lidské zárodečné linie a nejlépe z D2E7 VL sekvencí pracovního rámečku pro VH jsou výhodně z VH3 lidské zárodečné rodiny, lépe z VH genu DP-31 lidské zárodečné linie a nejlépe z D2E7 VH sekvencí pracovního rámečku ukázaných na obrázcích 2A a 2B.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigenvazebnou část, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 (tj. D2E7 VL) a variabilní regionem těžkého řetězce (HCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2 (tj. D2E7 VH). V určitých provedeních má protilátka konstantní region těžkého řetězce, jak je konstantní region IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM nebo IgD. Výhodně je konstantní region těžkého řetězce konstantní region těžkého řetězce IgGl nebo konstantní region těžkého řetězce IgG4. Navíc, protilátka může obsahovat konstantní region lehkého řetězce, buď konstantní region kappa lehkého řetězce, nebo konstantní region lambda lehkého řetězce. Výhodně protilátka obsahuje konstantní region kappa lehkého řetězce. Alternativně, částí protilátky může být například Fab fragment nebo jednořetězcový Fv fragment.
V ještě jiných provedeních poskytuje vynález izolovanou lidskou protilátku, nebo její antigenvazebnou část, mající s D2E7-příbuzné VL a VH CDR3 domény, například protilátky nebo jejich antigen-vazebné části, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) obsahujícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25 a SEQ ID NO: 26 nebo s variabilní regionem těžkého řetězce (HCVR) obsahujícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 a SEQ ID NO: 35.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález rekombinantní lidskou protilátku, nebo její antigenvazebnou část, která neutralizuje aktivitu lidského TNFa, ale nikoli lidského ΤΝΡβ. Výhodně protilátka, nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje také aktivitu šimpanzího TNFa a alespoň jednoho dalšího TNFa od primátů, který je vybrán ze skupiny skládající se z paviáního TNFa, kosmaního TNFa, makak (cynomolgus) TNFa a makak rhesus TNFa. Výhodně protilátka, nebo její antigen-vazebná část, neutralizuje lidský, šimpanzí a/nebo další primáti TNFa ve standardním in vitro L929. testu s IC5o 1 χ 10'8 M nebo menší, lépe 1 χ ΙΟ'9 M nebo menší a ještě lépe 5 x 10‘10M nebo menší. V jednom podprovedení protilátka také neutralizuje aktivitu psího TNFa, výhodně ve standardním in vitro L929 testu s IC50 1 χ ΙΟ'7 M nebo menší, lépe 1 χ 10'8 M nebo menší a ještě lépe 5 x 10‘9 M nebo menší. V jiném podprovedení protilátka také neutralizuje aktivitu prasečího TNFa, výhodně s IC50 1 x 10’5M nebo menší, lépe 1 χ 10-6 M nebo menší a ještě lépe 5 χ 10'7 M nebo menší. V ještě jiném podprovedení protilátka také neutralizuje aktivitu myšího TNFa, výhodně s IC5o 1 x 10‘4 M nebo menší, lépe 1 χ ΙΟ’5 M nebo menší a ještě lépe 5 x 104M nebo menší.
- 11 CZ 292465 B6
Protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být derivatizována nebo může být navázána na jinou funkční (například na jiný peptid nebo protein). V souladu stím protilátky a Části protilátek podle předkládaného vynálezu zahrnují derivatizované a jinak modifikované formy lidských anti-hTNFa protilátek zde popsané, včetně imunoadhezních molekul.
Například, protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být funkčně navázána (např. chemickou vazbou, genetickou fúzí, nekovalentní asociací nebo jinak) na jednu nebo více molekulových entit, jako je jiná protilátka (například, bispecifická protilátka nebo dialátka), detekovatelné činidlo, cytotoxické činidlo, farmaceutické činidlo a/nebo protein, nebo peptid, který může zprostředkovat asociaci protilátky nebo části protilátky s jinou molekulou (jako je jaderný region streptavidinu nebo polyhistidinová smyčka).
Jeden typ derivatizované protilátky je produkován zkrácenou vazbou mezi dvěma nebo více protilátkami (stejného nebo různého typu, například pro tvorbu bispecifických protilátek). Vhodná činidla způsobující zkříženou vazbu jsou tak, která jsou heterobifunkční a mají dvě 15 různě reaktivní skupiny separované vhodnou vmezeřenou skupinou (například m-meleimidobenzoyl-N-hydroxysukcimid ester) nebojsou homobifunkční (například disukcinimidilsuberat). Taková činidla je možno získat od Pierce Chemical Company, Rockford, IL.
Použitelná detekovatelná činidla, se kterými může být protilátka nebo část protilátky vázána, zahrnují flurescentní sloučeniny. Příklady fluorescentních detekovatelných činidel zahrnují fluorescein, fluorescein isothiokyanat, rhodamin, 5-dimethylamin-l-naftalensulfonylchlorid, fykoeiytrin a podobně. Protilátka může být také navázána na detekovatelné enzymy, jako je alkalická fosfatasa, křenová peroxidasa, glukosa-oxidasa a podobně. Pokud je protilátka navázána na detekovatelný enzym, pak je detekována přidáním dalších činidel, která enzym využívá pro produkci detekovatelného reakčního produktu. Například, když je jako detekovatelné činidlo použita křenová peroxidasa, pak přidání peroxidu vodíku diaminobenzidinu vede ke vzniku barevného produktu reakce, který je detekovatelný. Protilátka může být také navázána na biotin a detekována pomocí nepřímého měření vazby avidinu nebo streptavidinu.
II. Exprese protilátek
Protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu, může být připravena rekombinantní expresí genů pro lehké a těžké řetězce imunoglobulinu v hostitelské buňce. Pro rekombinantní expresi protilátky je hostitelská buňka transfektována jedním nebo více rekombinantními 35 expresními vektory nesoucími DNA fragmenty kódujícími lehké a těžké řetězce imunoglobulinové protilátky, takže lehké a těžké řetězce jsou exprivovány v hostitelské buňce a, výhodně, secemovány do média, ve kterém jsou hostitelské buňky kultivovány. Pro získání genů pro lehké a těžké řetězce protilátky, inkorporaci těchto genů do rekombinantních expresních vektorů a pro vložení vektorů do hostitelských buněk jsou použity standardní rekombinantní DNA metody, 40 jako jsou ty, které jsou popsány v Sambrook, Fritsch a Maniatis (vyd), Molecular Clonint: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989), Ausubel, F. M. et al. (vyd.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989), a patentu US 4 816 397 od Boss et al..
Pro expresi D2E7 a D2E7-příbuzných protilátek jsou nejprve získány DNA fragmenty kódující variabilní regiony lehkého a těžkého řetězce. Tyto DNA mohou být získána amplifikací a modifikací variabilních sekvencí lehkého a těžkého řetězce zárodečné linie za použití polymerasové řetězové rekce (PCR). DNA sekvence zárodečné linie pro geny pro variabilní regiony lehkého a těžkého řetězce jsou v oboru známé (viz například „Vbaze“ databáze sekvencí lidské zárodečné 50 linid; viz též Kabat, E. A. et al., (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. vydání, U.S. Department of Health and Human Services, NIH publikace č. 91-3242; Tomlison, I.M. et al (1992), „The Repertoire of Human Germline Vh Sequences reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops“, J. Mol. Biol. 227: 776 až 798; a Cox., J. P.
L. et al., (1994), „A Directory of Human Germline Kkappa Segments Reveals a Strong Bias in their 55 Usage“, Eur. J. Immunol. 24: 827 až 836; jejichž obsah je zde uveden jako odkaz). Pro získání
-12CZ 292465 B6
DNA fragmentu kódujícího variabilní region těžkého řetězce D2E7, nebo D2E7 příbuzné protilátky je člen VH3 rodiny lidských zárodečných VH genů amplifikován standardním PCR. Nejlépe je amplifikována DP-31 VH sekvence zárodečné linie. Pro získání DNA fragmentu kódujícího variabilní region lehkého řetězce, nebo D2E7 příbuzné protilátky je člen Vkapal 5 rodiny lidských zárodečných VL genů amplifikován standardní PCR. Nejlépe je amplifikována A20 VL sekvence zárodečné linie. PCR primery vhodné pro použití při amplifikaci sekvencích DP-31 VH a A20 VL zárodečné linie mohou být navrženy na základě nukleotidových sekvencí popsaných v odkazech citovaných výše, za použití standardních metod.
ío Po získání VH a VL fragmentů zárodečné linie mohou být tyto sekvence mutovány tak, aby kódovaly D2E7 nebo D2E7-příbuzné aminokyselinové sekvence, které jsou zde popsány. Aminokyselinové sekvence kódované zárodečnými VH a VL DNA sekvencemi jsou nejprve srovnávány s D2E7 a D2E7-příbuznými VH a VL aminokyselinovými sekvencemi pro identifikaci aminokyselinových zbytků v D2E7 a D2E7-příbuzných sekvencích, které se liší od záro15 dečné linie. Potom jsou vhodné nukleotidy v zárodečné DNA sekvenci mutovány tak, aby mutovaná zárodečná sekvence kódovala D2E7 nebo D2E7-příbuznou aminokyselinovou sekvenci, za použití genetického kódu pro určení toho, které nukleotidové změny mají být provedeny. Mutageneze zárodečných sekvencí je provedena standardními metodami, jako je PCRzprostředkovaná mutageneze (ve které jsou mutované nukleotidy inkorporovány do PCR primerů 20 tak, že PCR produkt obsahuje mutace) nebo místně řízená mutageneze.
Kromě toho, mělo by být uvedeno, že pokud „zárodečné“ sekvence získané PCR amplifikaci kódují aminokyselinové rozdíly v regionech pracovního rámečku vzhledem ke správné zárodečné konfiguraci (tj. odlišnosti v amplifikované sekvenci při srovnání se správnou zárodečnou sekven25 cí, například v důsledku somatických mutací), může být žádoucí změna těchto aminokyselinových odlišností zpět na správné zárodečné sekvence (tj. „zpětná mutace“ zbytků v pracovním rámečku na konfiguraci zárodečné sekvence).
Po získání DNA fragmentů kódujících D2E7 nebo D2E7-příbuzné Vh a VL segmenty (amplifikaci nebo mutagensí ze zárodečných VH a VL genů, jak je popsáno výše), mohou být tyto DNA fragmenty dále upravovány standardními rekombinantními DNA technikami, například pro konverzi genů pro variabilní region na geny pro kompletní řetězec protilátky, ne geny pro Fab fragment nebo na geny pro scFv. Při těchto úpravách je VL- nebo VH- kódující DNA fragment operativně navázán na jiný DNA fragment kódující jiný protein, jako je konstantní region protilátky nebo flexibilní linker. Termín „operativně navázán“, jak je zde použit, znamená, že dva DNA fragmenty jsou spojeny tak, že aminokyselinová sekvence kódovaná dvěma DNA fragmenty zůstává v rámečku.
Izolovaná DNA kódující VH region může být přeměněna na kompletní gen pro těžký řetězec operativní vazbou VH-kódující DNA na jinou molekulu DNA kódující konstantní regiony těžkého řetězce (CH1, CH2 a CH3). Sekvence lidských genů pro konstantní regiony těžkého řetězce jsou v oboru známé (Kabat, E. A. et al., (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. vydání. U.S. Department of Health and Human Services, NIH publikace č. 91-3242) a DNA fragment obsahující tyto regiony mohou být získány standardní PCR amplifikaci.
Konstantní regiony těžkého řetězce mohou být konstantní regiony IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM nebo IgD, ale nejlépe to jsou konstantní regiony IgGl nebo IgG4. Pro gen pro Fab fragment těžkého řetězce může být VH-kódující DNA operativně navázána na jinou DNA molekulu kódující pouze CH1 konstantní region těžkého řetězce.
Izolovaná DNA kódující VL region může být přeměněna na kompletní gen pro lehký řetězec operativní vazbou VL-kódující DNA na jinou molekulu DNA kódující konstantní region lehkého řetězce (CL). Sekvence lidských genů pro konstantní regiony lehkého řetězce jsou v oboru známé (Kabatm, E.a. et al., (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. vydání. U.S. Department of health and Human Services, NIH publikace č. 91-3242) a DNA fragmenty 55 obsahující tyto regiony mohou být získány standardní PCR amplifikaci. Konstantní region lehké
-13CZ 292465 B6 ho řetězce může být konstantní region kappa nebo lambda, ale nejlépe to je konstantní region kappa.
Pro vytvoření scFV genu jsou VH- a VL- kódující DNA fragmenty Operativně navázány na jiný fragment kódující flexibilní linker, například kódující aminokyselinovou sekvenci (Glyj - Ser)3 tak, že VL a VH sekvence mohou být exprimovány jako pokračující jednořetězcový protein, s VH a VL regiony spojenými flexibilním linkerem (viz například Bird et al., (1988) Science 242. 423 až 426; Houston et al. (1988) Proč. nati. Acad. Sci. USA 85: 5879 až 5883; McCafferty et al., Nátuře (1990) 348: 552 až 554).
Pro expresi protilátek nebo částí protilátek podle předkládaného vynálezu je DNA kódující částečné nebo úplné těžké a lehké řetězce, získaná jak je popsáno výše, insertována do expresních vektorů tak, že geny jsou operativně vázány na transkripční a translační kontrolní sekvence. V tomto ontexu termín „operativně vázány“ znamená, že gen pro protilátku je ligován do takového vektoru tak, že transkripční a translační kontrolní sekvence ve vektoru slouží jako regulátory transkripce a translace genu pro protilátku. Expresní vektor a expresní kontrolní sekvence jsou vybrány tak, aby byly kompatibilní s expresí v použité hostitelské buňce. Gen pro lehký řetězec protilátky a gen pro těžký řetězec protilátky mohou být insertovány do jednotlivých vektorů, nebo, častěji, jsou oba geny insertovány do stejného expresního vektoru. Geny pro protilátku jsou insertovány do expresního vektoru standardními metodami (např. ligací komplementárních restrikčních míst na fragmentu genu pro protilátku a vektoru, nebo ligací tupých konců, pokud nejsou přítomna žádná restrikční místa). Před insercí D2E7 nebo D2E7-příbuzných sekvencí lehkých a těžkých řetězců může již expresní vektor nést sekvence pro konstantní region protilátky. Například, jeden přístup pro konversi D2E7 nebo D2E7-příbuzných VH a VI sekvencí na geny pro kompletní protilátku je jejich inserce do expresního vektoru již kódujícího konstantní regiony lehkého a těžkého řetězce, v příslušném pořadí, takže VH segment je operativně vázán na CH segment ve vektoru a VL segment je operativně vázán na CL segment ve vektoru. Další nebo alternativní rekombinantní expresní vektory mohou kódovat signální peptid, který usnadňuje sekreci protilátkového řetězce z hostitelské buňky. Gen pro řetězec protilátky může být klonován do vektoru tak, že signální peptid je navázán v rámečku s amino-koncem genu pro řetězec protilátky. Signální peptidem může být imunoglobulinový signál peptid nebo heterologní signální peptid (tj. signální peptid z neimunoglobulinového proteinu).
Kromě genů pro řetězce protilátky mohou rekombinantní expresní vektory podle předkládaného vynálezu nést regulační sekvence, které kontrolují expresi genů pro řetězce protilátky v hostitelské buňce. Termín „regulační sekvence“ zahrnuje promotory, enhancery a jiné expresní kontrolní elementy (například polyadenylační signály), které kontrolují transkripci a translaci genů pro řetězce protilátky. Takové regulační sekvence jsou popsány, například, v Goeddel: Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academie Press, San Diego, CA (1990). Odborníkům v oboru bude jasné, že vývoj expresního vektoru, včetně selekce regulačních sekvencí, může záviset na takových faktorech, jako je volba hostitelské buňky, která má být transformována, požadované hladině exprese proteinu, atd. Výhodné regulační sekvence pro expresi v savčí hostitelské buňce zahrnují virové elementy, které řídí vysokou hladinu proteinové exprese v savčích buňkách, jako jsou promotory a/nebo enhanceiy odvozené od cytomegaloviru (CMV) (jako CMV promotor/enhancer), Simian Virus 40 (SV40) (jako je SV40 promotor/enzancer), adenoviru (například adenovirový hlavní pozdní promotor (AdMLP)) a od polyomaviru. Pro další popis virových regulačních elementů a jejich sekvencí viz například patent US 5 168 062 od Stinski, patent US 4 510 245 od Bell et al. a patent US 4 968 615 od Schaffner et al..
Kromě genů pro řetězce protilátek a regulačních sekvencí mohou rekombinantní expresní vektory podle předkládaného vynálezu nést další sekvence, jako jsou sekvence, které regulují replikaci vektoru v hostitelské buňce (například zdroje replikace) a geny pro selektovatelné markéry. Gen pro selektovatelné markér usnadňuje selekci hostitelských buněk, do kterých byl vektor zaveden (viz například patent US 4 399 216, 4 634 665 a 5 179 017 od Axel et al.). Například, typicky
-14CZ 292465 B6 způsobuje selektovatelný markerový gen rezistenci hostitelské buňky, do které byl vektor zaveden, na léky, jako je G418, hygromycin nebo methotrexat. Výhodné geny pro selektovatelný markér zahrnují gen pro dihydrofolatreduktasu (DHFR) (pro použití u dhfr“ hostitelských buněk se selekcí/amplifikací methotrexatem) a nebo gen (pro selekci G418).
Pro expresi těžkých a lehkých řetězců je expresní vektor(y) kódující těžké a lehké řetězce přenesen do hostitelských buněk standardními technikami. Různé formy termínu „transfekce“ zahrnují širokou škálu technik běžně používaných pro vložení exogenní DNA do prokaryotických nebo eukaryotických hostitelských buněk, například elektroporaci, srážení fosforečnanem vápenatým, DEAE-dextranovou transfekci a podobně. Ačkoliv je teoreticky možné exprivovat protilátky podle předkládaného vy nálezu jak v prokaryotických, tak v eukaryotických hostitelských buňkách, je exprese protilátek v eukaryotických buňkách, a zejména v savčích hostitelských buňkách, nejvíce preferována, jelikož takové eukaryotické buňky, a zejména savčí buňky, jsou s větší pravděpodobností než prokaryotické buňky schopny sestavit a secemovat řádně složenou a imunologicky aktivní protilátku. Prokaryotická exprese genů pro protilátky byla popsána jako neúčinná pro produkci větších množství aktivních protilátek (Boss, M. A. a Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6: 12 až 13).
Výhodné savčí hostitelské buňky byly expresi rekombinantních protilátek podle předkládaného vynálezu zahrnují Ovariální buňky čínského křečka (CHO) (včetně dhfr CHO buněk, které popisuje Urlaub a Chasin, (1980) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 77: 4216 až 4220, Použitých s DHFR selektovatelným markérem, například jak to popisuje R.J. Kaufman a P. A. Sharp (1982), Mol. Biol. 159: 601 až 621), NSO myelomové buňky, COS buňky a SP2 buňky. Když jsou rekombinantní expresní vektory kódující protilátkové geny vloženy do savčích hostitelských buněk, tak jsou protilátky produkovány kultivací hostitelských buněk po dobu dostatečnou pro expresi protilátky v hostitelských buňkách, nebo, lépe, pro sekreci protilátky do kultivačního média, ve kterém jsou hostitelské buňky kultivovány. Protilátky mohou být získány z kultivačního média za použití standardních metod pro přečištění proteinů.
Hostitelské buňky mohou být také použity pro produkci částí intaktních protilátek, jako jsou Fab fragmenty nebo scFv molekuly. Mělo by být jasné, že variace výše uvedeného postupu spadají do rozsahu předkládaného vynálezu. Například, může být žádoucí transfekce hostitelské buňky DNA kódující buď lehký řetězec, nebo těžký řetězec (ale ne oba) protilátky podle předkládaného vynálezu. Rekombinantní DNA technologie může být také použita pro odstranění některých nebo všech DNA kódujících jeden nebo oba z těžkých a lehkých řetězců, které nejsou nezbytné pro vazbu na hTNFa. Molekuly exprimované z takových zkrácených molekul DNA jsou také obsaženy v protilátkách podle předkládaného vynálezu. Kromě toho, mohou být produkovány bifunkční protilátky, ve kterých je jeden lehký a jeden těžký řetězce z protilátky podle předkládaného vynálezu a jiný těžký a lehký řetězec jsou specifické pro antigen jiný než hTNFa řízenou vazbou protilátky podle překládaného vynálezu s druhou protilátkou standardními metodami chemické zkřížené vazby.
Ve výhodném systému pro rekombinantní expresi protilátky nebo její antigen-vazebné části podle předkládaného vynálezu je rekombinantní expresní vektor kódující jak těžký řetězec protilátky, tak lehký řetězec protilátky zaveden do dhfr CHO buněk transfekci zprostředkovanou fosforečnanem vápenatým. V rekombinantním expresním vektoru jako geny pro lehké a těžké řetězce protilátky operativně navázány na enhancerové/promotorové regulační elementy (například odvozené od SV40, CMV, adenoviru a podobně, jako je CMV enhancerový/AdNLP promotorový regulační element nebo SV40 enhancerový/AdNLP promotorový regulační element) pro řízení vysokých hladin transkripce genů. Rekombinantní expresní vektor také nese DHRF gen, který umožňuje selekci CHO buněk, které byly transfektovány vektorem, za použití selekce/amplifikace methotraxatem. Selektované transformované hostitelské buňky jsou kultivovány pro umožnění exprese lehkých a těžkých řetězců protilátky a intaktní protilátka získána z kultivačního média. Standardní techniky molekulární biologie jsou použity pro přípravu rekom
-15CZ 292465 B6 binantního expresního vektoru, transfekce hostitelských buněk, selekci transformantů, kultivaci hostitelských buněk a získání protilátky z kultivačního média.
Z pohledu dříve uvedeného se další aspekt vynálezu týká přípravků nukleových kyselin, vektorů a hostitelských buněk, které mohou být použity pro rekombinantní expresi protilátek a částí protilátek podle předkládaného vynálezu. Nukleotidová sekvence kódující variabilní region lehkého řetězce D2E7 je ukázána na obrázku 7 a v SEQ ID NO: 36. CDR1 doména LCVR obsahuje nukleotidy 70 - 102, CDR2 doména obsahuje nukleotidy 148 - 168 a CDR3 doména obsahuje nukleotidy 265 - 291. Nukleotidová sekvence kódující variabilní region těžkého řetězce D2E7 je ukázána na obrázku 8 a v SEQ ID NO: 37. CDR1 doména HCVR obsahuje nukleotidy 91 - 105, CDR2 doména obsahuje nukleotidy 148 - 198 a CDR3 doména obsahuje nukleotidy 295 - 330. Odborníkům v oboru bude jasné, že nukleotidová sekvence kódující D2E7-příbuzné protilátky nebo části protilátek (například CDR doménu, jako je CDR3 doména), mohou být odvozeny od nukleotidových sekvencí kódujících D2E7 LCVR a HCVR za použití genetického kódu a standardních technik molekulární biologie.
V jednom provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3 (tj. D2E7 VL CDR3), nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1,4, 5, 6 nebo 8 a nebo pěti konzervativními aminokyselinami substitucemi v pozicích 1, 3, 4, 6, 7,8 a/nebo 9. Tato nukleová kyselina může kódovat pouze CDR3 region, nebo výhodněji, kdo je celý variabilní region lehkého řetězce protilátky (LCVR). Například, nukleová kyselina může kódovat LCVR mající CDR2 doména obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5 (tj. D2E7 VL CDR2) a CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7 (tj. D2E7 VL CDR1).
V jiném provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4 (tj. D2E7 VH CDR3),. nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 a nebo pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12. Tato nukleová kyselina může kódovat pouze CDR3 region, nebo výhodněji, kóduje celý variabilní region těžkého řetězce protilátky (HCVR). Například, nukleová kyselina může kódovat HCVR mající CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6 (tj. D2E7 VH CDR2) a CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8 (tj. D2E7 VH CDR1).
V ještě jiném provedení vynález poskytuje izolované nukleové kyseliny kódující D2E7-příbuzné CDR3 domény, například obsahující aminokyselinové sekvence vybrané ze skupiny skládající se z: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 a SEQ ID NO: 35.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující variabilní region lehkého řetězce protilátky obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 (tj. D2E7 LCVR). Výhodná nukleová kyselina obsahuje nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 36, ačkoliv odborníkům v oboru bude jasné, že vzhledem k degeneraci genetického kódu mohou další nukleotidová sekvence kódovat aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1. Nukleová kyselina může kódovat pouze LCVR, nebo může také kódovat konstantní region lehkého řetězce protilátky, operativně navázaný na LCVR. V jednom provedení je tato nukleová kyselina v rekombinantním expresním vektoru.
V ještě jiném provedení poskytuje vynález izolovanou nukleovou kyselinu kódující variabilní region těžkého řetězce protilátky obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2 (tj. D2E7
-16CZ 292465 B6
HCVR). Výhodná nukleová kyselina obsahuje nukleotidovou sekvenci SEQ ID NO: 37, ačkoliv odborníkům v oboru bude jasné, že vzhledem k degeneraci genetického kódu mohou další nukleotidové sekvence kódovat aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2. Nukleová kyselina může kódovat pouze HCVR, nebo může také kódovat konstantní region těžkého řetězce protilátky, operativně navázaný na HCVR. Například, nukleová kyselina může obsahovat konstantní region IgGl nebo IgG4. V jednom provedení je také nukleová kyselina v rekombinantním expresním vektoru.
Vynález také poskytuje rekombinantní expresní vektory kódující jak lehký řetězec protilátky, tak těžký řetězec protilátky. Například, v jednom provedení, vynález poskytuje rekombinantní expresní vektor kódující:
a) lehký řetězec protilátky mající variabilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 (tj. D2E7 LCVR); a
b) těžký řetězec protilátky mající variabilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2 (tj. D2E7 HCVR).
Vynález dále poskytuje hostitelské buňky, do kterých může být jeden nebo více z rekombinantních expresních vektorů podle předkládaného vynálezu zaveden. Vhodně je hostitelskou buňkou CHO buňka, NSO buňka nebo COS buňka.
Ještě dále vynález poskytuje způsob pro syntézu rekombinantní lidské protilátky podle předkládaného vynálezu kultivací hostitelských buněk podle předkládaného vynálezu ve vhodném kultivačním médiu do té doby, dokud není syntetizována rekombinantní lidská protilátka podle předkládaného vynálezu. Způsob může dále obsahovat izolaci rekombinantní lidské protilátky z kultivačního média.
III. Selekce rekombinantních lidských protilátek
Rekombinantní lidské protilátky podle předkládaného vynálezu jiné než D2E7 nebo D2E7příbuzné protilátky zde popsané mohou být izolovány vyšetřením rekombinantní kombinatoriální knihovny protilátek, výhodně scFv fágové zobrazovací knihovny, připravené za použití lidské VH a VL cDNA připravených z mRNA odvozené od lidských lymfocytů. Způsoby pro přípravu a vyšetřování takových knihoven jsou v oboru známé. Kromě komerčně dostupných kitů pro generování fágových zobrazovacích knihoven (například Pharmacia Recombinant Phage Antibody Systém, katalogové č. 27-9400-01; a Stratagene SurfZAP™ phage display kit, katalogové č. 240612), mohou být připraveny způsobů a činidel zejména vhodných pro použití při generování a vyšetřování protilátkových zobrazovacích knihoven nalezeny v, například, Ladner et al., Patent US 5 223 409; Kang et al., PCT přihláška WO 92/18619; Dower et al., PCT přihláška WO 91/17271; Winter et al., PCT přihláška WO 92/20791; Markland et al., PCT přihláška WO 92/15679; Breitling et al., PCT přihláška WO 93/01288; McCafferty et al., PCT přihláška WO 92/01047; Garrad et al., PCT přihláška Wo 92/09690; Fuchs et al., (1991), Bio/Technology 9. 1370 až 1372; Hay et al., (1992), Hum Antibod. Hybridomas 3: 81 až 85; Huse et al., (1989), Science 246: 1275 až 1281; McCafferty et al., Nátuře (1990), 348. 552 až 554; Griffiths et al (1993), EMBO J. 12: 725 až 734; Hawkins et al., (1992), J. Mol. Biol. 2226: 889 až 896; Clackson et al., (1991), nátuře 352: 624 až 628; Gram et al., (1992) Pnas 89: 3576 až 3580; Garrad et al., (1991) Bio/Technology 9. 1373 až 1377; Hoogenboom et al., (1991) Nuc. Acids Res. 19: 4133 až 4137; a Barbas et al., (1991) PNAS 88: 7978 až 7982.
Ve výhodném provedení, pro izolaci lidských protilátek s vysokou afinitou a nízkou rychlostní konstantou pro hTNFa je nejprve použita myší anti-hTNFa protilátka mající vysokou afinitu a nízkou rychlostní konstantu pro hTNFa (například MAK 195, jejíž hybridom má přírůstkové č. ECACC 87 050801) pro selekci sekvencí pro lidské těžké a lehké řetězce majících podobnou vazebnou aktivitu pro hTNFa, za použití epitopového imprintingu a řízené selekce, což jsou
-17CZ 292465 B6 metody, které popsal Hoogenboom et al., PCT přihláška WO 93/06213. Protilátkovou knihovnou použitou v této metodě jsou výhodně scFv knihovny připravené a vyšetřované jak je popsáno v McCafferty et al., PCT přihláška WO 92/01047, McCafferty et al., Nátuře (1990), 348: 552 až 554; Griffiths et al (1993), EMBO J. 12: 725 až 734. scFv protilátkové knihovny jsou výhodně vyšetřovány za použití rekombinantního lidského TNFa jako antigenu.
Po selekci počátečných lidských VH a VL segmentů jsou provedeny „smíchej a páruj“ pokusy, ve kterých jsou různé páry počátečně vybraných VL a VH segmentů vyšetřovány na vazbu na hTNFa, pro selekci vybraných kombinací VL/VH párů. Kromě toho, pro další zvýšení afinity a/nebo snížení rychlostní konstanty pro vazbu na hTNFa mohou být VI a VH segmenty výhodných VL/VH párů náhodně mutovány, výhodně v CDR3 regionu VH a/nebo VL, v procesu analogickém i in vivo procesu somatických mutací odpovědnému za afmitní dozrávání protilátek v průběhu přirozené imunitní odpovědi. Toto in vitro afinitní dozrávání může být provedeno amplifikací VH a VL regionů za použití PCR primerů komonementámích kVH CDR3 nebo VL CDR3, v příslušném pořadí, kdy primery jsou „napíchnuty“ náhodnou směsí čtyř nukleotidových bází v určitých pozicích, takže vzniklé PCR produkty kódují VH a VL segmenty, ve kterých byly náhodné mutace vloženy do VH a/nebo VI CDR3 regionů. Tyto náhodně mutované VH a VL segmenty mohou být znovu vyšetřovány na vazbu na hTNFa a mohou být vybrány sekvence, které vykazují nejvyšší afinitu a nejnižší rychlostní konstantu pro vazbu na hTNFa.
Aminokyselinové sekvence vybraných těžkých a lehkých řetězců protilátky mohou být srovnávány s aminokyselinovými sekvencemi zárodečných těžkých a lehkých řetězců. V případech, kdy se určité zbytky pracovních rámečků vybraných VL a/nebo VH řetězců liší od zárodečné konfigurace (například v důsledku somatické mutace imunoglobulinových genů použitých v přípravě fágové knihovny), může být žádoucí „zpětná mutace“ změněných zbytků pracovního rámečku vybraných protilátek na zárodečnou konfiguraci (tj. změna aminokyselinové sekvence pracovního rámečku vybraných protilátek tak, aby byla stejná jako aminokyselinová sekvence pracovního rámečku v zárodečné linii). Takové „zpětné mutace“ (nebo „germlining“) zbytků pracovního rámečku může být provedena standardními metodami molekulární biologie pro zavedení specifických mutací (například místně řízenou mutagenezí; PCR-zprostředkovanou mutagenezí a podobně).
Po vyšetření a izolaci anti-hTNFa protilátky podle předkládaného vynálezu z rekombinantní imunoglobulinové zobrazovací knihovny může být nukleová kyselina kódující vybranou protilátku získána z zobrazovacího balíčku (například z fágového genomu) a může být subklonována do jiných expresních vektorů standardními rekombinantními DNA technikami. Pokud je to žádoucí, může být nukleová kyselina dále upravována za tvorby jiné formy protilátky podle předkládaného vynálezu (například může být navázána na nukleovou kyselinu kódující další imunoglobulinové domény, jako jsou další konstantní regiony). Pro expresi rekombinantní lidské protilátky izolované vyšetřováním kombinatoriální knihovny je DNA kódující protilátku klonována do rekombinantního expresního vektoru a vložena do savčích hostitelských buněk, jak bylo podrobněji popsáno v části II, výše.
IV. Farmaceutické přípravky a farmaceutické podání
Protilátky nebo části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být součástí farmaceutických přípravků vhodných pro podání subjektu. Typický farmaceutický přípravek obsahuje protilátku nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu a farmaceuticky přijatelný nosič. Jak je zde použit, zahrnuje termín „farmaceuticky přijatelný nosič“ jakákoliv rozpouštědla, dispersní média, potahy, antibakteriální a antimykotická činidla, izotonická činidla a činidla zpomalující absorpci a podobně, která jsou fyziologicky kompatibilní. Příklady farmaceuticky přijatelných nosičů zahrnují jeden nebo více z vody, salinického roztoku, fosfátem pufrovaného salinického roztoku, dextrosy, glycerolu, ethanolu a podobně, stejně jako jejich kombinace. V mnoha případech bude výhodné zahrnout do přípravku izotonická činidla, například cukry,
-18CZ 292465 B6 polyalkoholy jako je manitol, sorbitol, nebo chlorid sodný. Farmaceuticky přijatelné nosiče mohou dále obsahovat malá množství pomocných substancí jako jsou zvlhčující nebo emulzifikační činidla, konzervační činidla nebo pufry, která zvyšují poločas nebo účinnost protilátky nebo části protilátky.
Přípravky podle předkládaného vynálezu mohou být v různých formách. Tyto zahrnují, například, kapalné, semisolidní nebo solidní dávkové formy, jako jsou kapalné roztoky (například injikovatelné nebo infusibilní roztoky), disperse nebo suspense, tablety, pilulky, prášek, liposomy a čípky. Výhodná forma závisí na zamýšleném způsobu podání a terapeutické aplikaci. Typické preferované přípravky jsou ve formě injikovatelných nebo infusibilních roztoků, jako jsou přípravky, které se podobají přípravkům používaným pro pasivní imunizaci lidí jinými protilátkami. Výhodný způsob podání je parenterálně (například Intravenózně, subkutánně, intraperitoneálně, intramuskulámě), ve výhodném provedení je protilátka podána Intravenózní injekcí nebo infusí. V jiném výhodném provedení je protilátka podána intramuskulámí nebo subkutánní injekcí.
Terapeutické přípravky musí typicky být sterilní a stabilní za podmínek výroby a skladování. Přípravek může být formulován jako roztok, mikroemulze, disperse, liposomový přípravek, nebo jiná řádná struktura vhodná ro vysokou koncentraci léčiva. Sterilní injikovatelné roztoky mohou být připraveny inkorporací aktivní sloučeniny (tj. protilátky nebo části protilátky) v požadovaném množství do vhodného rozpouštědla s jednou nebo s kombinací přísad vyjmenovaných výše, jak je potřeba, a potom filtrační sterilizací. Obecně, disperse jsou připraveny inkorporací aktivní sloučeniny do sterilního vehikula, které obsahuje základní dispersní médium a další požadované přísady z těch, které byly uvedeny výše. V případě sterilních prášků pro přípravu sterilních injikovatelných roztoků jsou výhodnými způsoby přípravy sušení vakuem a sublimace ze zmrazeného stavu, kterými se získá prášek aktivní složky plus jakékoliv další požadované přísady z jejich předem filtrovaného sterilního roztoku. Rádná tekutost roztoku může být udržována, například, použitím potahu jako je lecitin, udržováním požadované velikosti částic v případě disperse a použitím surfaktantu. Prolongovaná absorpce injikovatelných přípravků může být dosažena přidáním činidla zpomalujícího absorpci do přípravku, například solí monosteratu a želatiny.
Protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být podány různými metodami známými v oboru, ačkoliv pro mnoho terapeutických aplikací je výhodnou cestou/způsobem podání Intravenózní injekce nebo infuse. Jak bude odborníkům v oboru jasné, cesta a/nebo způsobe podání se bude velmi lišit, v závislosti na požadovaném výsledku. V určitých provedeních může být aktivní sloučenina připravena s nosičem, který bude bránit rychlému uvolňování sloučeniny, tak, jako je tomu v přípravcích s kontrolovaným uvolňováním, včetně implantátů, transdermálních náplastí a mikroenkapsulovaných systémů pro podání. Mohou být použity biodegradovatelné, biokompatibilní polymery, jako jsou ethylenvinylacetat, polyanhydridy, polyglykolové kyseliny, kolagen, polyortoestery a polymléčná kyselina. Mnoho metod pro přípravu takových přípravků je patentováno nebo je odborníkům v oboru obecně známo. Viz například Sustained and Conntrolled Release drug Delivery Systems, J. R. Robinson, vyd., Marcel Dekker, lne., New York, 1978.
V některých provedeních může být protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu podána orálně, například, s inertním ředidlem nebo s asimilovatelným poživatelným nosičem. Sloučenina (nebo další přísady, pokud jsou žádoucí), může být také obsažena v kapsli z měkké nebo tuhé želatiny, komprivovaná do tablet nebo přímo obsažena v dietě subjektu. Pro orální terapeutické podání může být sloučenina smísena s přísadami a použita ve formě tablet pro gastrointestinální podání, bukálních tablet, pastilek, kapslí, elixírů, suspenzí, sirupů, oplatek a podobně. Pro podání sloučenin podle předkládaného vynálezu jiným způsobem, než parenterálně, je nezbytné potáhnout sloučeninu, nebo podat sloučeninu současně s, materiálem, který zabrání její inaktivaci.
-19CZ 292465 B6
V přípravcích mohou být také obsaženy doplňkové aktivní sloučeniny. V některých provedeních je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vy nálezu formulována spolu s a/nebo podána spolu s jedním nebo více dalších terapeutických činidel, která jsou užitečná při léčbě onemocnění, při kteiých je aktivita TNFa poškozující. Například, anti-hTNFa protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být formulována spolu s a/nebo podána spolu s jednou nebo svíce dalšími protilátkami, které se vážou na jiné cíle (například protilátkami, které se vážou na jiné cytokiny, nebo které se vážou na buněčné povrchové molekuly), jedním nebo více cytokiny, solubilním recetorem pro TNFa (viz například PCT přihláška WO 94/06476) a/nebo s jedním nebo více chemickými činidly, které inhibují produkci nebo aktivitu hTNFa (jako jsou deriváty cykohexan-ylidenu jak je popisuje PCT přihláška WO 93/19751). Kromě toho, jedna nebo více protilátek podle předkládaného vynálezu může být použita v kombinaci s jedním nebo více uvedených terapeutických činidel. Takové kombinované terapii mohou výhodně používat nižších dávek podaného terapeutického činidla a tak je možné se vyhnout možné toxicitě nebo komplikacím spojeným s různými monoterapiemi.
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu revmatoidní artritidy, se kterými může být protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: nesteroidní protizánětlivá léčiva (NSAID); cytokiny potlačující protizánětlivá léčiva (CSAID); CDP571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fuzní protein; Immunex, viz Artritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44. 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúzní protein, Hoffman-LaRoche); IDECCE9.1/SB 210396 (nedepletující primátizovaná anti-CD4 protilátka, IDEC/SmithKline, viz například Arthritis & Rheumatism (1995), svazek 38: SI85); DAB 486-IL-2 a/nebo DAB 389— IL-2 (IL-2 fůzní proteiny, Seragen, viz například Arthritis & Rheumatism (1993), svazek 36: 1223), Anti-Tac (humanizovaná anti-IL-2Ra, Protein Design Labs/Roche); IL-4 (protizánětlivý cytokin, DNAX/Scherint); IL—10 (SCH 52000, rekombinantní IL-10, protizánětlixý cytokin, DNAX/Schering); agonisté IL-4, IL-10 a/nebo IL—4 (například agonistické protilátky); IL-1RA (receptorový antagonista UIL-1, Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR (solubilní TNF vazebný rotein, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S284; Amer. J. Physiol. - heart and Circulatory Physiology (1995), svazek 268: str. 37 až 42); R973401 (inhibitor fosfodiesterasy typu IV, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S282); MK-966 (COX-2 inhibitor, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S81); Iloprost (viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S82); methotrexat; thalidomid (viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S282) a léky příbuzné thalidomidu (například Celgen); leflunomid (protizánětlivý a inhibitor cytokinů, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S131); kyselina tranexamová (inhibitor aktivace plazminogenu, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S284); T-614 (inhibito cytokinů, viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement, S282); prostaglandin El (viz Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S282); Tenidap (nesteroidní protizánětlivý lék, viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S280); Naproxen (nesteroidní protizánětlivé léčivo, viz například Neuro Report (1996), svazek 7, str. 1209 až 1213); Meloxicam (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Ibuprofen (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Piroxicam (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Diclofenac (nesteroidní protizánětlivé léčivo);, Indometacin (nesteroidní protizánětlivé léčivo); Sulfasalazin (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement, S281); Azethiprin (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (suplement), ICE inhibitor (inhibitor enzymu interleukin-1 β-konvertasy); zap-70 a/nebo lek inhibitor (inhibitor tyrosin kinasy zap-70 nebo lek); VEGF inhibitor a/nebo VEGF-R inhibitor (inhibitory růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk nebo receptoru růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk, inhibitory angiogenese); kortikoidní protizánětlivá léčiva (například SB203580); inhibitoryTNF-konvertasy; anti-IL-12 protilátky; interleukin 11 (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, č. 9 (supplement), S296); interleukin-13
-20CZ 292465 B6 (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 9, č. 9 (supplement), S308); interleukin-17 (viz například Arthritis & Rheumatism (1996), svazek 39, 4. 9 (supplement), S120); zlato, penicilamin; chlorokin; hydroxyclokin; chlorambucil; cyklofosfamid. cyklosporin; ozáření veškeré lymfatické tkáně; anti-thymocytámí globulin; anti-CD-4 protilátky; CD5-toxiny; orálně podané peptidy nebo kolagen; lobenzarid dvojsodný; Cytokiny regulující činidla (CRA) HP228 aHP466 (Houghten Pharmaceuticals, lne.); ICAm-1 antisense fosforothioatové oligodeoxynukleotidy (ISIS 2302; Isis Pharmatical, lne.); solubilní komplementový receptor 1 (ΤΡΙΟ, T Cell sciences, lne.); prednison; orgotein; glykosaminoglykan polysulfat; minocyklin; anti-IL-2R protilátky; mořské a botanické lipidy (mastné kyseliny zrym a rostlinných semen, viz například DeLucca et al. (1995), Rheum. Dis. Clin. North Am. 21: 759 - 777); auranofin; fenylbutazon; zileuton; kyselina mykofenolová (RS-61443); takrolimus (FK-506); sirolimus (rapamcin); amiprilon (therafektin); kladribin (2-chloredeoxyadenosin); a azeribin.
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu zánětlivých střevních onemocnění, se kterými může být protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: budenosid; epidermální růstový faktor; kortikosteroidy; cyklosporin; sulfasalazin; aminosalicylaty; 6-merkaptopurin; azathioprin; metronidazol; inhibitory lipooxygenasy; mesalamin; olsalazin; balsalazin; antioxidanty; inhibitory thromboxanu; antagonisté IL-1 receptoru; anti-IL-Ιβ monoklonální protilátky; anti-IL-6 monoklonální protilátky; růstové faktory; inhibitory elastasy; pyridinyl-imidazolové sloučeniny; CDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka, Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fúzní protein, Immunex, vou Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúzní protein, Hoffmann-LaRoche); IL-10 (SCH 52000, Schering Plough); agonisté IL-4, IL-10 a/nebo IL-10 (SCH 52000, Schering Plough); atonisté IL-4, IL-10 a/nebo IL—4 (například agonistické protilátky), interleukin 11; proléčiva prenisolonu, dexamethasonu nebo budesonidu konjugovaná s glukuronidem nebo dextrinem; ICAM-1 antisense fosforothioatové oligodeoxykleotidy (ISIS 2302; Isis Pharmaceutical, lne.); solubilní komplementový receptor 1 (ΤΡΙΟ, T Cell Sciences, lne.) mesalazin se zpomaleným uvolňováním; methotrexat; antagonisty destičkového aktivačního faktoru (PAF); ciprofloxacin a lignokain.
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu roztroušené sklerózy, se kterými může být protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují: kortikosteroidy; prednisolon; methylprednisolon; azathioprin; cyklofosfamid; cyklosporin; methotrexat; 4aminopyridin; tizanidin; interferon-pia (Avonex™, Biogen); interferon-pib (Betaseron™, Chiron/Berlex); Copylymer 1 (Cop-1, Copaxon™, Teva Pharmaceutical Industries, lne.); hyperbarický kyslík; Intravenózní imunoglobulin; kladribin; PDP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa protilátka; Centocor); 75 kd TNFR-IgG (75 kD TNF-receptor - IgG fuzní protein, Immunex, viz Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); 55kd TNFR-IgG (55 kD INF-receptor - IgG fúzní protein, Hoffmann-LaRoche); IL-10 (SCH 52000, Schering Plogh); agonisté IL-10, IL-4, IL-10 a/nebo IL-4 (například agonistické protilátky).
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu sepse, se kterými může být protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinovaná, zahrnují: hypertonické salinické roztoky, antibiotika; Intravenózní gamaglobulin; kontinuální hemofiltraci; karbapenemy (například meronem); antagonisty cytokinů jako je TNFa, IL-Ιβ, IL-6 a/nebo IL—8; DP-571/BAY-10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNF protilátka; Centocor); 75 kd TNRF-IgG (75 kd TNF-recetor - IgG fúzní protřen, Immunex, viz Arthritis & Rheumatism (1994), svazek 37: S295; J. Invest. Med. (1996), svazek 44: 235A); 55 kd TNFR-IgG (55 kD TNF-receptor - IgG fúzní protřen, Hoffmann-LaRoche); Cytokiny regulující činidla (CRA) HP228 a HP466 (Houghten Pharmaceuticals, lne.); SK&F 107647 (nízkomolekulámí peptid, SmithKline Beecham); tetravalentní guanylhydrazon CNI-1493 (Picower Institute); inhibitor dráhy tkáňového faktoru (TFPI, Chiron); PHP (chemicky
-21 CZ 292465 B6 modifikovaný hemoglobulin, APEX Bioscience); chelatační činidla železa a cheláty, včetně komplexu diethylentriaminpentaoctové kyseliny - železo (III) (DTPA iron (III), Molichem Medicines); lisofylin (syntetická malá molekula methylxantinu, Cell Therapeutics, lne.); PGG-Glukan (β1,3 glukan rozpustný ve vodě, Alpha-Beta Technology) apoolipoprotein A-l rekonstituovaný lipidy; chirální hydroxamové kyseliny (syntetická antibakteriální činidla, která inhibují biosyntézu lipidu A); protilátky proti endotoxinu; E5531 (syntetický anatagonista lipidu A, Eisai America, lne.); rBPLi (rekombinantní N-koncový fragment lidského baktericidního/permeabilitu zvyšujícího proteinu); a syntetické anti-endotoxinové peptidy (SAEP, BiosYnth Research Laboratories).
Neomezující příklady terapeutických činidel pro léčbu syndromu respirační tísně dospělých (ARDS), se kterými může byt protilátka, nebo část protilátky, podle předkládaného vynálezu kombinována, zahrnují, anti-IL-8 protilátky; surfaktantovou substituční terapii; CDP-571/BAY10-3356 (humanizovaná anti-TNFa protilátka; Celltech/Bayer); cA2 (chimérická anti-TNFa 15 protilátka; Centocor); 75 kD TNFR-IgG fuzní protein, Hoffmann-LaRoche).
Použití protilátek, nebo částí protilátek, podle předkládaného vynálezu v kombinaci s jinými terapeutickými činidly, je dále probíráno v části IV.
Farmaceutické přípravky podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat „terapeuticky účinné množství“ nebo „profylakticky účinné množství“ protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu. „Terapeuticky účinné množství“ označuje množství, které je při nezbytných dávkách a době podávání účinné pro dosažení požadovaného terapeutického výsledku. Terapeuticky účinné množství protilátky nebo části protilátky se může velmi lišit podle faktorů jako je typ onemocnění, věk, pohlaví a hmotnost jedince, a podle schopnost protilátky nebo části protilátky vyvolat požadovanou odpověď u jedince. Terapeuticky účinné množství je také takové, u kterého jsou jakékoliv toxické nebo škodlivé účinky protilátky nebo části protilátky převáženy terapeuticky výhodnými účinky. „Profylakticky účinné množství“ označuje množství, které je při nezbytných dávkách a době podávání účinné pro dosažení požadovaného profylaktického výsled30 ku. Typicky, protože profylaktická dávka je použita u subjektu před onemocněním nebo v časných stadiích onemocnění, bude profylakticky účinné množství nižší než terapeuticky účinné množství.
Dávkové režimy mohou být upraveny tak, aby dávaly optimální požadovanou odpověď (napřík35 lad terapeutickou nebo profylaktickou odpověď). Například, může být podána jedna bolusová dávka, může být podáno několik rozdělených dávek za určitou dobu nebo může být dávka proporcionálně redukována nebo zvyšována podle terapeutické situace. Zejména výhodné je formulování parenterálních přípravků v jednotkové dávkové formě pro snadnost podání a pro uniformitu dávky. Dávková jednotková forma, jak je zde použito, označuje fyzikálně samos40 tatnou jednotku jako unitární dávku pro savčí subjekty, které jsou léčeny; každá jednotka obsahuje předem určené množství aktivní sloučeniny vypočítané pro produkci požadovaného terapeutického účinku spolu s požadovaným farmaceutickým nosičem. Požadavky pro jednotkové dávkové formy podle předkládaného vynálezu jsou určovány a jsou přímo závislé na: (a) jedinečných charakteristikách aktivní sloučeniny a na určitém terapeutickém nebo profylaktic45 kém výsledku, který má být dosažen, a (b) na omezení daných v oboru připravených takových aktivních sloučenin pro léčbu senzitivity u jedinců.
Příkladným, neomezujícím rozmezí pro terapeuticky nebo profylakticky účinné množství protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu je 0,1 až 20 mg/kg, lépe 1 až 10 mg/kg. 50 Mělo by být uvedeno, že hodnoty dávky se mohou velmi lišit, v závislosti na typu a závažnosti stavu, který je léčen. Mělo by být dále jasné, že pro jakýkoliv jednotlivý subjekt by měly být specifické režimy dávkovány upravovány podle potřeb jedince a podle profesionálních úvah osoby podávající přípravek nebo dohlížející na podání přípravku, a že dávky zde uvedené jsou pouze příkladné a neomezují rozsah nebo použití nárokovaného přípravku.
-22CZ 292465 B6
IV. Použití protilátek podle předkládaného vynálezu
Na základě své schopnosti vázat hTNFa mohou být anti-hTNFa anti-hTNFa protilátky nebo jejich části, použity pro detekci hTNFa (například v biologických vzorcích, jako je sérum nebo plazma), za použití běžných imunotestů, jako je enzymově vázaný imunosorbentní test (ELISA), radioimunotest (RIA) nebo tkáňová imunohistochemi. Vynález poskytuje způsob pro detekci hTNFa v biologických vzorcích, kde tento způsob obsahuje kontaktování biologického vzorku s protilátkou, nebo s částí protilátky, podle předkládaného vynálezu, a detekování buď protilátky (nebo části protilátky) navázané na hTNFa, nebo nenavázané protilátky (nebo části protilátky), a tím detekování hTNFa v biologickém vzorku. Protilátka je přímo nebo nepřímo značena detekovatelnou substancí pro usnadnění detekce navázané nebo nenavázané protilátky. Vhodné detekovatelné substance zahrnují různé enzymy, protetické skupiny, fluorescentní materiály, luminiscentní materiály a radioaktivní materiály. Příklady vhodných enzymů zahrnují křenovou peroxidasu, alkalickou fosfatasu, β-galaktosidasu, nebo acetylcholinesterasu; příklady vhodných komplexů protetických skupin zahrnují streptavidin/biotin a avidin/biotin; příklady vhodných fluorescentních materiálů zahrnují umbelliferon, fluorescein, fluorescein isothiokyanat, rhodamin, dichlorotriazinylamin fluorescein, dansylchloride nebo fykoerytrin; příklady luminiscentních materiálů zahrnují luminol; a příklady radioaktivních materiálů zahrnují 125I, bII,3iS nebo 3H.
Alternativně ke značení protilátky může být hTNFa testován v biologických tekutinách kompetičních imunotestem využívajícím rhTNFa standardů značených detekovatelnou substancí a neznačené anti-hTNFa standardy a anti-hTNFa protilátka kombinovány a je určeno množství značeného rhTNFa standardu navázaného na neznačenou protilátku. Množství hTNFa v biologickém vzorku je nepřímo úměrné množství značeného rhTNFa standardu navázaného na anti-hTNFa protilátku.
D2E7 protilátka podle předkládaného vynálezu může být také použita pro detekci TNFa od jiných druhů než od lidí, zejména pro určení TNFa od primátů (například šimpanzů, paviánů, kosmanů, makaků (cynomolgus) a makaků rhesus), prasat a myší, protože D2E7 se může vázat na TNFa od každého z těchto druhů (podrobně uvedeno v příkladu 4, sekci E).
Protilátka nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu jsou schopné neutralizace aktivity hTNFa jak in vitro, tak in vivo (viz příklad 4). Kromě toho, alespoň některé z protilátek podle předkládaného vynálezu, jako je D2E7, mohou neutralizovat aktivitu TNFaz jiných druhů.
V souladu s tím, protilátka nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro inhibování aktivity TNFa, například v buněčné kultuře obsahující hTNFa, u lidí nebo u jiných savců majících TNFa, se kterým je protilátka podle předkládaného vynálezu reaktivní (například u šimpanzů, paviánů, kosmanů, makaků (cynomolgus) a makaků rhesus, prasat nebo myší). V jednom provedení poskytuje vynález způsob pro inhibicí aktivity TNFa provedením kontaktu TNFa s protilátkou nebo částí protilátky podle předkládaného vynálezu tak, že aktivita TNFa je inhibována. Výhodně je TNFa lidský TNFa. Například, do buněčné kultury obsahující, nebo předpokládané obsahující hTNFa může být přidána protilátka nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu do kultivačního média pro inhibicí aktivity hTNFa v kultuře.
V jiném provedení poskytuje vynález způsob pro inhibici aktivity TNFa u subjektu trpícího onemocněním, při kterém je aktivita TNFa škodlivá. Účast TNFa se předpokládá v patofyziologii mnoha onemocnění (viz například Moeler, A. et al., (1990), Cytokjine 2: 162 až 169; patent US 5 231 024 od Moeller et al.; Evropská patentová přihláška 260610 B1 od Moeller, A.). Vynález poskytuje způsob pro inhibici aktivity TNFa u subjektu trpícího takovým onemocněním, kde tento způsob obsahuje podání protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu subjektu, takže je inhibována aktivita TNFa u subjektu. Výhodně je TNFa lidský TNFa a subjektem je člověk. Alternativně, subjektem může být savec exprimující TNFa, se
-23CZ 292465 B6 kterým je protilátka podle předkládaného vynálezu reaktivní. Ještě dalším subjektem může být savec, do kterého byl vložen hTNFa (například podáním hTNFa nebo expresí hTNFa transgenu). Protilátka podle předkládaného vy nálezu může být podána člověku za terapeutickým účelem (dále uvedeno výše). Kromě toho, protilátka podle předkládaného vynálezu může být podána savcům jiným než lidem exprivujícím TNFa, se kterým je protilátka reaktivní (např. primátům nebo prasatům nebo myším) pro veterinární účely nebo jako zvířecí model lidského onemocnění. Z ohledem na dále uvedené jsou takové zvířecí modely užitečné pro hodnocení terapeutické účinnosti protilátek podle předkládaného vynález (například protestování dávek a načasování podávání).
Jak je zde použito, znamená termín „onemocnění, ve kterém je aktivita TNFa škodlivá“ zahrnuje onemocnění nebo jiné poruchy, u kterých je přítomnost TNFa u subjektu trpícího onemocnění prokázané nebo pravděpodobně odpovědná za patofyziologii onemocnění, nebo je faktorem, který zhoršuje onemocnění. Podle toho, onemocnění, při kterém je aktivita TNFa škodlivá je onemocnění, u kterého se předpokládá, že inhibice aktivity TNFa zmírní příznaky a/nebo progresi onemocnění. Takové onemocnění může byl prokázáno, například, zvýšením koncentrace TNFa v biologických tekutinách subjektu trpícího onemocněním (například zvýšením koncentrace TNFa v séru, plazmě, synoviální tekutině atd. od subjektu), které může být detekováno, například, za využití anti-TNFa protilátky jak je popsáno výše. Existuje mnoho příkladů onemocnění, u kterých je aktivita TNFa škodlivá. Použití protilátek a částí protilátek podle překládaného vynálezu v léčbě jednotlivých onemocnění je popsáno podrobněji dále.
A. Sepse
Faktor nekrosy nádorů má stanovenou úlohu v patofyziologii sepse, s biologickými účinky, které zahrnují hypotensi, myokardiální supresi, syndrom propustnosti kapilár, orgánovou nekrosu, stimulaci uvolňování sekundárních mediátorů a aktivace kaskády srážení krve (viz například Moeler, A. et al., (1990), Cytokine 2: 162 až 169; patent US 5 231 02 4 od Moeller et al; Evropská patentová přihláška 260610 Bl od Moeller, A.; Tracey, K.J. a Cerami, A. (1994), Annu. Rev. Med. 45: 491 až 503; Russell, D. a Thompson, R.C. (1993) Curr. Opin. Biotech. 4: 714 až 721). V souladu stím, lidské protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro sepse v jakékoliv její klinické formě, včetně septickéh šoku, endotoxinového šoku, gram-negativní sepse a syndromu toxického šoku.
Kromě toho, pro léčbu sepse může být anti-hTNFa protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu podána společně s jedním nebo více terapeutickými činidly, které mohou dále zmírňovat sepsi, jak je inhibitor interleukinu-1 (jak je popsán v PCT přihláška WO 92/16221 a WO 92/17583), cytokin interleukin-6 (viz například PCT přihlášku WO 93/11793) nebo antagonista destičkového aktivačního faktoru (viz například Evropská patentová přihláška EP 374 510). Další kombinované terapie pro léčbu sepse jsou podrobněji uvedeny v sekci III.
Kromě toho, ve výhodném provedení, anti-hTNFa protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu je podány lidskému subjektu patřícímu do podskupiny septických pacientů majících v době léčby sérovou nebo plazmatickou koncentraci IU-6 vyšší než 500 pg/nl a lépe 1000 pg/ml (viz PCT přihláška č. WO 95/20978, Daum, L. et al.).
B. Autoimunitní onemocnění
Předpokládá se účast faktoru nekrosy nádorů v patofyziologii různých autoimunitních onemocnění. Například, TNFa se předpokládá při aktivaci tkáňového zánětu a předpokládá se, že způsobuje destrukci kloubů u revmatoidní artritidy, například Moeler, A. et al., (1990), Cytokine 2: 162 až 169; patent US 5 231 024, Moeller et al.; Evropská patentová přihláška 260610 Bl, Moeller, A.; Tracey, K. J. a Cerami, A. výše; Arend, W.P. a Dayer, J. M. (1995) Arth. Rheum. 38: 151 až 160; Fava, R. A. et al. (1993) Clin. Exp. Immunol. 94, 261 až 266). TNFa se také předpokládá
-24CZ 292465 B6 v indukci smrti buněk Langerhansových ostrůvků a ve zprostředkování insulinové resistence u diabetů (viz například Tracey a Cerami, výše; PCT přihláška WO 94/08609). TNFa se také předpokládá ve zprostředkování cytotoxicity oligodendroglií a v indukci zánětlivých plaků u roztroušené sklerózy (viz například Tracey a Cerami, výše). V současnosti probíhá klinické testování chimérických a humanizovaných myších anti-hTNFa protilátek pro léčbu revmatoidní artritidy (viz například Eliott, M. J. et al., (1994) Lancet 344. 1125 až 1127; Elliott, M. J. et al., (1994) Lancet 344: 1105 až 1110; Rankin, E. C. et al., (1995) Br. J. Rheumatol. 34. 334 až 342).
Lidské protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro léčbu autoímunitních onemocnění, zejména těch, které jsou asociované se zánětem, včetně revmatoidní artritidy, revmatoidní spondylitidy, osteoartritidy a dnové artritidy, alergie, roztroušené sklerózy, autoimunního diabetů, autoimunní uveitidy a nefrotického syndromu. Typicky je protilátka nebo část protilátky podána systémově, ačkoliv u některých onemocnění může být výhodné lokální podání protilátky nebo části protilátky do místa zánětu (například, lokální podání do kloubů v revmatoidní artritidy nebo lokální podání do diabetických vředů, samostatně nebo v kombinaci s cyklohexan-ylidenovými deriváty jak je popsáno v PCT přihlášce WO 93/19751). Protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu může být také podána společně s jedním nebo více terapeutickými činidly užitečnými při léčbě autoímunitních onemocnění, jak je podrobněji uvedeno v sekci III.
C. Infekční onemocnění
Faktor nekrosy nádorů se předpokládá při zprostředkování biologických účinků u mnoha infekčních onemocnění. Například, TNFa se předpokládá při zprostředkování mozkového zánětu a kapilární trombózy a infarktu u malárie. TNFa se také předpokládá při zprostředkování mozkového zánětu, při indukci porušení hematoencefalické bariery, při spouštění syndromu septického šoku a při aktivaci venosního infarktu u meningitidy. TNFa se také předpokládá v indukci kachexie, stimulaci proliferace viru a při poškození centrálního nervového systému u syndromu získané imunodeficience (AIDS). V souladu s tím, protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být použity při léčbě infekčních onemocnění, včetně bakteriální meninitidy (viz například Evropská patentová přihláška publik. EP 585 705), mozkové malárie, AIDS a AIDS - příbuzného komplexu (ARC) (viz například Evropská patentová přihláška publik, č. EP 230 574), stejně jako cytomegalovirové infekce sekundární po transplantaci (viz například Fietze, E. et al., (1994), Transplantation 58: 675 až 680). Protilátky a části protilátek podle předkládaného vynálezu mohou být také použity pro zmírnění příznaků spojených s infekčními onemocněními, včetně horečky a myalgie způsobené infekcí (jako je chřipka) a kachexie způsobené infekcí (například spojené s AIDS nebo ARC).
D. Transplantace
Předpokládá se, že faktor nekrosy nádorů je klíčovým mediátorem při rejekci alotransplantátu a reakci štěpu proti hostiteli (GVHD) a ve zprostředkování nežádoucích reakcí, které byly pozorovány, když byla krysí protilátka OKT3, namířena proti CD3 komplexu T receptoru, použita pro inhibici rejekce ledvinových transplantátů (viz například Eason, J. D. et al., (1995) Transplantation 59: 300 až 305; Suthanthiran, M. a Strom, T. B. (1994) New Engl. J. Med. 331: 365 až 375. V souladu s tím mohou být protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu, použity pro inhibici rejekce transplantátu, včetně rejekce alotransplantátů a xenotransplantátů a k inhibici GVHD. Ačkoliv může být protilátka nebo část protilátky použita samostatně, výhodněji je použita v kombinaci s jedním nebo více činidly, která inhibují imunitní odpověď namířenou proti alotransplantátu nebo která inhibují GVHD. Například, v jednom provedení je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu použita v kombinaci s OKT3 pro inhibici reakcí indukovaných OKT3. V jiném provedení je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu použita v kombinaci s jednou nebo více protilátkami proti jiných cílům účastnících se v regulaci imunitní odpovědi, jako jsou povrchově buněčné molekuly CD25 (a
-25CZ 292465 B6 receptor pro interleukin -2), CDlla (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) a/nebo CD86 (7-2). V ještě jiném provedení je protilátka nebo část protilátky podle předkládaného vynálezu použita v kombinaci s jedním nebo více imunosupresivními činidly, jako je cyklosporin A nebo FK506.
E. Malignity
Předpokládá se úloha faktoru nekrosy nádorů v indukci kachexie, stimulaci nádorového růstu, zvýšení metastatického potenciálu a ve zprostředkování cytotoxicity u malignit. V souladu s tím mohou být protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu použity v léčbě malignit, v inhibici nádorového růstu a/nebo při zmírnění sekundární kachexie při malignitách. Protilátka, nebo část protilátky může být podána systémově nebo lokálně do místa nádoru.
F. Plicní onemocnění
Předpokládá se úloha faktoru nekrosy nádorů v patofyziologii syndromu respirační tísně dospělých (ARDS), a to ve stimulaci leukocytámí-endotelové aktivace, v přímé cytotoxicitě na pneumocyty a v syndromu propustnosti kapilár. V souladu s tím mohou být protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu použity v léčbě různých plicních onemocnění, včetně syndromu respirační tísně dospělých (viz například PCT přihláška WO 91/04054), šokové plíce, chronických zánětlivých onemocnění plic, plicní sarkoidy, plicní fíbrosy a silikosy. Protilátka, nebo část protilátky, může být podána systémově nebo lokálně do plic, například ve formě aerosolu. Protilátka, nebo část protilátky, může být také podána s jedním nebo více terapeutickými činidly použitelnými u léčbě plicních onemocnění, jak je podrobněji uvedeno v sekci III.
G. Střevní onemocnění
Předpokládá se úloha faktoru nekrosy nádorů v patofyziologii zánětlivých střevních onemocnění (viz například Tracy, K. J. et al. (1986) Science 234: 470 až 474; Sun, X. M. et al., (1988), J. Clin. Invest. 81. 1328 až 1331; MacDonald, T.T. et. al., (1990) Clin. Exp. Immunol. 81: 301 až 305). Probíhá klinické testování chimérických myších anti-hTNFa protilátek pro léčbu Crohnovy nemoci (van Dullemen, Η. M. et al., (1995), Gastroenterology 109: 129 až 135). Lidské protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu, mohou být také použity pro léčbu střevních onemocnění, jako jsou idiopatické zánětlivé střevní onemocnění, které zahrnují dva syndromy: Crohnova nemoc a ulcerosní kolitidu. Protilátka, nebo část protilátky, může být také podána s jedním nebo více terapeutickými činidly použitelnými v léčbě střevních onemocnění, jak je podrobněji uvedeno v sekci III.
H. Onemocnění srdce
Protilátky, nebo Části protilátek, podle předkládaného vynálezu, mohou být také použity pro léčbu různých onemocnění srdce, včetně srdeční ischemie (viz například Evropská patentová přihláška publikační EP 453 898) a srdeční insuficience (slabost srdečního svalu) (viz například PCT přihláška WO 94/20139).
I. Jiné
Protilátky, nebo části protilátek, podle předkládaného vynálezu, mohou být také použity pro léčbu různých dalších onemocnění, při ktefych je aktivita TNFa škodlivá. Příklady dalších onemocnění, u kterých se předpokládá účast aktivity TNFa v patofyziologii, a které tak mohou být léčeny za použití protilátky nebo části protilátky podle předkládaného vynálezu, zahrnují zánětlivá onemocnění kostí a onemocnění kostí spojené s jejich resorpcí (viz například Bertolini, D. R. et al., (1986) Nátuře 319: 516 až 518; Konig, A. et al., (1988) J. Bone Moner. Res. 3: 621 až 627; Lemer, U.H. a Ohlin. A. (1993) J. Bone Miner. Res. 8: 147 až 155; a Shankar, G. a Stem, P. H. (1993) Bone 14: 871 až 876), hepatitidu, včetně alkoholové hepatitidy (viz například McClain,
-26CZ 292465 B6
C.J. a Cohen, D.A. (1989) hepatology 9: 349 až 351; Felver, M.E. et al. (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14: 255 až 259; a Hansen, J. et al. (1994) Hepatology 20: 461 až 474), virovou hepatitidu (Sheron, N. et al. (1991) J. Hepatol. 12: 241 až 245; a Hussain, M. J., et al. (1994),
J. Clin. Pathol. 47: 1112 až 1115), a fulminantní hepatitidy; poruchy koagulace (viz například van der Poli, T. et al. (1990) N. Engl. J. Med. 322: 1622 až 162ý; a ven der Poli, T. et al. (1991) Prog. Clin. Biol. Resl 367: 55 až 60), popáleniny (viz například Giroir, Β. P. et al. (1994) Am. J. Physiol. 267: H118 až 124; a Liu, X.S. et al. (1994) Bums 20: 40 až 44), reperfusní poškození (viz například Scales, W. E. et al. (1994), Am. J. Physiol. 267: G1122 až 1127; Serrick, C. et al. (1994) Transplantation 58: 1158 až 1162; a Yao, Y. M. et al. (1995) Resuscitation 29: 157 až 168), tvorbu keloidů (viz například McCauley, R. L. et al. (1992) J. Clin. Immunol. 12: 300 až 308); tvorbu jizematé tkáně; pyrexii; onemocnění peroidontu; obezitu a radiační toxicitu.
Vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které nejsou nijak omezující. Obsah všech referencí, patentů a publikovaných patentových přihlášek citovaných v této přihlášce je zde uveden jako odkaz.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Analýza kinetiky vazby lidských protilátek na hTNFa
Vazebné interakce - v reálném čase - mezi ligandem (biotinylovaným rekombinantním lidským TNFa (rhTNFa) imobilizovaným na biosenzorové matrici) a analytem (protilátkami v roztoku) byly měřeny povrchovou plazmonovou rezonancí (SPR) za použití BIAcore systému (Pharmacia Biosenzor, Piscataway, NJ). Systém využívá optických vlastností SPR pro detekci změn v koncentraci proteinů v dextranové biosenzorové matrici. Proteiny jsou kovalentně navázány na dextranovou matrici ve známých koncentracích. Protilátky jsou injikovány do dextranové matrice a specifická vazba mezi injikovanými protilátkami a imobilizovanými ligandy vede ke zvýšené koncentraci proteinů v matrici a tím ke změně SPR signálu. Tyto změny SPR signálu jsou zaznamenávány jako jednotky rezonance (RU) a jsou vyjádřeny v závislosti na čase na Y-ose sensorgramu.
Pro usnadnění imobilizace biotinylovaného rhTNFa na biosenzorovou matrici je spreptavidin kovalentně navázán přes volné aminokyseliny na dextranovou matrici nejprve aktivací karboxylových skupin matrice 100 mM N-hydroxysukcinimidu (NHS) a 400 mM N-ethyl-N'-(3diethylaminopropyl)karbodiimidhydrochloridu (EDC). Potom je streptavidin injikován do aktivované matrice. Třicet pět mikrolitrů streptavidinu (25 pg/ml), ředěného v octanu sodném, pH 4,5, je injikováno do aktivovaného biosenzoru a volné aminy na proteinu jsou navázány přímo na aktivované inaktivovány injekcí 1 M ethanolaminu. Biosenzorové čipy s navázaným streptavidinem jsou také komerčně dostupné (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biosenzor, Piscataway, NJ).
Biotinylovaný rhTNFa byl připraven nejprve rozpuštěním 5,0 mg biotinu (N-hydroxysukcinimid ester D-biotinyl-epsilon-aminokapronové kyseliny; Boehringer Mannheim katalogové č. 1008 960) v 500 μΐ dimethylsulfoxidu pro výrobu roztoku 10 mg/ml. 10 μΐ biotinu se přidá na ml rhTNFa (při 2,65 mg/ml) pro získání molámího poměru 2:1 biotinu k rhTNFa. Reakce se jemně mísí a inkubuje se po dobu dvou hodin při pokojové teplotě ve tmě. PD-120 kolona, Sephadex G-25M (Pharmacia katalogové č. 17-0851-01) se ekvilibruje 25 ml chladného PBS a plní se 2 ml rhTNFa-biotin na kolonu. Kolona se eluuje 10 x 1 ml chladným PBS. Odeberou se frakce a odečítají se při OD280 (1,0 OD = 1,25 mg/ml). Vhodné frakce se shromáždí a skladují se při -80 °C do použití. Biotinylovaný rthTNFa je také komerčně dostupný (R & D Systems, katalogové č. FTA00, Minneapolis, MN).
-27CZ 292465 B6
Biotinylovaný rhTNFa, který má být imobilizován na matrici pomocí streptavidinu, se ředí vPBS nosném pufru (Gibco, katalogové č. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) doplněném 0,05% (BIAcore) surfaktantem P20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosenzor, Piscataway, NJ). Pro určení kapacity rhTNFa-specifických protilátek vázat se na imobilizovaný rhTNFa je proveden následujícím způsobem vazebný test. Aliquoty biotinylovaného rhTNFa (25 mM; 10 μΐ aliquoty) se injikují přes dextranovou matrici s navázaným steptavidinem rychlostí 0,5 μΐ/min. Před injekcí proteinu a ihned po se nechá přes každou průtokovou kyvetu projít PBS pufr samotný. Rozdíl v signálu mezi základním stavem a asi 30s po dokončení injekce biotinylovaného rhTNFa se bere jako hodnoty vazby (přibližně 500 RU). Měří se přímá rhTNFa-specifická protilátka vážící se na imobilizovaný biotinylovaný rhTNFa. Protilátky (20 pg/ml) se ředí v PBS nosném pufru a 25 μΐ aliquity se injikují přes matrici s imobilizovaným proteinem rychlostí 5 μΐ/min. Před injekcí protilátky a ihned po se nechá přes každou průtokovou kyvetu projít PBS pufr samotný. Rozdíl v signálu mezi základním stavem a signálem po dokončení injekce protilátky se bere jako hodnota vazby pro určitý vzorek. Biosenzorové matrice se regenerují 100 mM HC1 před injekcí dalšího vzorku. Pro určení rychlosti disociace (K<>ff), rychlosti asociace (K^), asociační konstanty (Ka) a disociační konstanty (Ka) byl použit BIAcore kinetic evaluation software (verze 2.1).
Reprezentativní výsledky vazby D2E7 (IgG4 kompletní protilátka) na biotinylovaný rhTNFa, ve srovnání s myší mAB MAK 195 (F(ab')2 fragment), jsou ukázány v tabulce 1 dále.
-28CZ 292465 B6
Tabulka 1: Vazba D2E7 IgG4 nebo MAK 195 na biotinylovaný rhTNFa
Protilátka (Ab), nM rhTNFa vazba, RU Ab, vazba RU rhTNFa/AB K0ff, s 1 (průměr)
D2E7 267 373 1215 1,14 8,45x10’3
133 420 1569 1,30 5,42x10’5
67 434 1633 1,31 4,75 x 10‘5
33 450 1532 1,19 4,46 x 10’5
17 460 1296 0,98 3,47x10’5
8 486 936 0,67 2,63x10’3
4 489 536 0,38 2,17 x 10'5
2 470 244 0,18 3,68x10’5 (4,38 x 10'5)
MAK 195 400 375 881 1,20 5,38 x 10’5
200 400 1080 1,38 4,54 x 10’5
100 419 1141 1,39 3,54 x 10'5
50 427 1106 1,32 3,67x10'5
25 446 959 1,09 4,41 x 10'5
13 464 708 0,78 3,66 x 10'5
6 474 433 0,47 7,37 xlO’5
3 451 231 0,26 6,95 x 10’5 (4,94x10’5)
Ve druhé sérii pokusů byly kvantitativně analyzovány molekulárně kinetické interakce mezi
IgGl kompletní D2E7 a biotinylovaným rhTNFa, za použití BIAcore technologie, jak je popsána výše, a byly odvozeny kinetické rychlostní konstanty, shrnuté dále v tabulkách 2, 3 a 4.
Tabulka 2: Určené disociační rychlostní konstanty interakcí mezi D2E7 a biotinylovaným ío rhTNFa
Pokus Řa^)
1 9,58x10’5
2 9,26x10’5
3 7,60 x 10‘5
průměr 8,81 + 1,06 x 10'5
Tabulka 3: Určené asociační rychlostní konstanty interakcí mezi D2E7 a biotinylovaným 15 rhTNFa
Pokus MMV1)
1 1,33 x 105
2 1,05 xlO5
3 3,36 x 105
průměr 1,91 +l,26xl05
-29CZ 292465 B6
Tabulka 4: Určené rychlostní a afinitní konstanty D2E7 a biotinylovaného rhTNFa
Pokus Ka(M’’, s'1) Kd(s-') Kd(M)
1 1,33 x 105 9,58 x 10‘5 7,20 x 10‘10
2 1,05 x 105 9,26x10’5 8,82 x 10'10
3 3,36 xlO5 7,60 x 10~5 2,26 x 10’10
průměr 1,91 + 1,26 x 105 8,81 + 1,06 x 10'5 6,09 ±3,42x1010
Disociační a asociační rychlostní konstanty byly kalkulovány na základě analýzy disociačních a asociačních oblastí sensorgramů za použití BIA analysis softwaru. Pro interakce mezi D2E7 a biotinylovanou molekulou rtTNFa byly předpokládány běžné kinetiky chemických reakcí: kinetika nultého řádu pro disociaci a kinetika prvního řádu pro asociaci. Pro analýzu byly uvažovány interakce pouze mezi jedním ramenem bivalentní D2E7 protilátky a jednou jednotkou trimerického biotinylovaného rhTNFa, při vybírání molekulového modelu pro analýzu kinetiky. Byly provedeny tři nezávislé pokusy a výsledky byly analyzovány jednotlivě. Průměrná určená disociační konstanta (k<i) interakcí mezi D2E7 a biotinylovaným rhTNFa byla 8,18 ± 1,06 x 10'5 s'1 a průměrná určená asociační konstanta (ka) byla 1,91 ± 1,26 x 10'5 M^s1. Průměrná skutečná disociační konstanta (Kd) byla počítána podle vzorce Ka = kd/ka. Tak, průměrná Ka D2E7 protilátky pro rhTNFa odvozená z parametrů kinetiky byla 6,09 ± 3,42 x ΙΟ’10 M. Malé rozdíly v hodnotách kinetiky pro IgGl formu D2E7 (uvedeno v tabulkách 2, 3, a 4) a IgG4 formu D2E7 (uvedeno v tabulce 1 a v příkladech 2 a 3) nejsou pravděpodobně rozdíly vycházející z přítomnosti buď IgGl, nebo IgG4 konstantního regionu, ale spíše je možné je přisoudit přesnějšímu měření koncentrace protilátky použitému pro analýzu kinetiky IgGl. V souladu stím hodnoty kinetiky pro IgGl formu D2E7 zde uvedené se považují za nejpřesnější parametry kinetiky pro D2E7 protilátku.
Příklad 2: Alanin vyhledávací mutageneze D2E7 CDR3 domén
Série mutací jednoho alaninu byly standardními metodami vloženy do CDR3 domén D2E7 VL aD2E7 VH regionů. Mutace v lehkém řetězce jsou zobrazeny na obrázku IB (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 a LD2E7*.A8 mající alaninovou mutaci v pozici 1, 3, 4, 5, 7 nebo 8, v příslušném pořadí, D2E7 VL CDR3 domény). Mutace v těžkém řetězci jsou zobrazeny na obrázku 2B (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 a HD2E7*A9 mající alaninovou mutaci v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11, v příslušném pořadí, D2E7 VH CDR3 domény). Kinetika rhTNFa interakcí s protilátkou složenou z přirozených D2E7 VL a VH byla srovnávána skinetikou protilátek složených z 1) D2E7 VL přirozeného typu salaninem substituovaným D2E7 VH; 2) D2E7 VHL přirozeného typu s alaninem substituovaným D2E7 VLH; nebo 3) alaninem substituovaného D2E7 VL s alaninem substituovaným D2E7 VH. Všechny protilátky byly testovány jako kompletní IgG4 molekuly.
Kinetika interakcí protilátek s rhTHFa byla určena povrchovou plazmonovou rezonancí jak je popsána v příkladu 1. Koff rychlosti pro různé VH/VL páry jsou shrnuty v tabulce 5.
-30CZ 292465 B6
Tabulka 5: Vazba D2E7 Alanin-vyhledávacích mutantů na biotinylovaný rhTNFa
VH VL Koff(s-')
D2E7 VH D2E7 VL 9,65 x 10’5
HD2E7*.A1 D2E7 VL 1,4 x W4
HD2E7*.A2 D2E7 VL 4,6 x 10'4
HD2E7*.A3 D2E7 VL 8,15 x1ο·4
HD2E7*.A4 D2E7 VL 1,8 x W4
HD2E7*.A5 D2E7 VL 2,35 x 1 θ’4
HD2E7*.A6 D2E7 VL 2,9 x 1 θ’4
HD2E7*.A7 D2E7 VL 1,0 x ΙΟ4
HD2E7*.A8 D2E7 VL 3,1 x 10·4
HD2E7*.A9 D2E7 VL 8,1 x 10'4
D2E7 VH LD2E7*.A1 6,6 x 10'5
D2E7 VH LD2E7*.A3 nedetekovatelné
D2E7 VH LD2E7*.A4 1,75 x 104
D2E7 VH LD2E7*.A5 1,8 x 10-4
D2E7 VH LD2E7*.A7 1,4 x 10·4
D2E7 VH LD2E7*.A8 3,65 x 1 θ’4
HD2E7*.A9 LD2E7*.A1 1,05 x1ο·4
Tyto výsledky ukazují, že většina z pozic v CDR3 doménách D2E7 VL a VH regionů je vhodná pro substituci jedním alaninovým zbytkem. Substituce jedním alaninovým zbytkem v pozici 1, 4, 5 nebo 7 D2E7 VL CDR3 domény nebo v pozici 2, 5, 6, 8, 9 nebo 10 D2E7 VH CDR3 domény neovlivňuje signifikantně rychlost disociace vazby na hTNFa oproti přirozené původní D2E7 protilátce. Substituce alaninu v pozici 8 D2E7 VL CDR3 nebo v pozici 3 D2E7 VH CDR3 dává 4-krát rychlejší Koff a alaninová substituce v pozici 4 nebo 11 D2E7 VH CDR3 dává 8-krát rychlejší Ko8m což naznačuje, že tyto pozice jsou významnější pro vazbu na hTNFa. Nicméně, substituce jednoho alaninu v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 D2E7 VL CDR3 domény nebo v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 D2E7 VH CD3 domény stále vede k anti-hTNFa protilátce mající Koff 1 x 10'3 s'1 nebo menší.
Příklad 3: Analýza vazby D2E7-příbuzných protilátek
Série protilátek příbuzných ve své sekvenci k D2E7 byla analyzována na svou vazbu na rhTNFa a byla srovnávána s D2E7, pomocí povrchové plazmonové rezonance jak byla popsána v příkladu 1. Aminokyselinové sekvence testovaných VL regionů jsou kázány na obrázcích IA a IB. Aminokyselinové sekvence testovaných VH regionů jsou ukázány na obrázcích 2A a 2B. Koff rychlosti pro různé páry VH/VL (jak je ukázáno ve sloupci formát, buď jako kompletní IgGl nebo IgG4 protilátky, nebo jako scFv) jsou shrnuty v tabulce 6, dále.
-31 CZ 292465 B6
Tabulka 6: Vazba D2E7-příbuzných protilátek na biotynylovaný rhTNFa
VH VL Formát Koff(s·*)
D2E7 D2E7 VI IgGl/IgG4 9,65 x 10'5
VH1-D2 LOE7 IgGl/IgG4 7,7 x 10’3
VH-D2 LOE7 scFV 4,6 x1ο·4
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 2,1 x 10’5
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,7 x 10’5
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 3,2xl0‘5
VH1-D2 EPB12 scFv 8,0 x W4
VH1-D2 2SD4 VL scFv 1,94 x 10’3
3C-H2 LOE7 scFv 1,5 x 10’3
2SD4 VH LOE7 scFv 6,07 x 10’3
2SD4 VH 2SD4 VL scFv 1,37 x 10'2
VH1A11 2SD4 VL scFv 1,34 x 10'2
VH1B12 2SD4 VL scFv 1,01 x 10‘2
VH1B11 2SD4 VL scFv 9,8 x 10’3
VH1E4 2SD4 VL scFv 1,59 x 10'2
VH1F6 2SD4 VL scFv 2,29 x 10’2
VH1D8 2SD4 VL scFv 9,5x10’3
VH1G1 2SD4 VL scFv 2,14 x 10‘2
2SD4 VH EPB12 scFv 6,7x10'3
2SD4 VH VL10E4 scFv 9,6x10'3
2SD4 VH VL100A9 scFv 1,33 x 10'2
2SD4 VH VL100D2 scFv 1,41 x 10’2
2SD4 VH VLLOE5 scFv 1,11 xlO'2
2SD4 VH VLLOE5 scFv 1,16 x 10'2
2SD4 VH VLLOF9 scFv 6,09x10’3
2SD4 VH VLLOF10 scFv 1,34 x 10’2
2SD4 VH VLLOG7 scFv 1,56x10’2
2SD4 VH VLLOG9 scFv 1,46 x 10’2
2SD4 VH VLLOH1 scFv 1,17 x 10'2
2SD4 VH VLLOHIO scFv 1,12 x 10'2
2SD4 VH VL1B7 scFv 1,3 xlO’2
2SD4 VH VL1C1 scFv 1,36 x 10’2
2SD4 VH VL1C7 scFv 2,0x10’2
2SD4 VH VL0.1F4 scFv 1,76 x 10’2
2SD4VH VL0.1H8 scFv 1,14 xlO’2
Pomalé rychlosti disociace (tj. K<>ff < 1 x 10~*s’) pro kompletní protilátky (tj. IgG formát) mající 5 VL vybraný z DE27, LOE7, LOE7.T a L0E7.A, kterém mají buď threonin, nebo alanin v pozici
9, naznačuje, že pozice 9 D2E7 VL CDR3 může být obsazena jedním z těchto dvou zbytků bez významného ovlivnění Koff. V souladu s tím, konsensuální motiv pro D2E7 VL CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NO: 3). Dále, pomalé rychlosti disociace (tj. Κο«·< 1 x lO^s'1) pro protilátky mající VH vybraný zDE27, VH1.D2.N 10 a VH1-D2.Y, které mají buď tyrosin, nebo asparagin v pozici 12, naznačuje, že pozice 12 D2E7
VH CDR3 může být obsazena jedním z těchto dvou zbytků bez významného ovlivnění KOff.
V souladu s tím, konsensuálním motiv pro D2E7 VH CDR3 obsahuje aminokyselinovou sekvenci: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO: 4).
Výsledky ukázané v tabulce 6 ukazují, že v scFv formátu, protilátky obsahující 2SD4 VI nebo VH CDR3 regiony vykazují rychlejší Κο«· (tj. Koff > 1 x 10’3 s’1) ve srovnání s protilátkami obsahujícími D2E7 VL nebo VH CDR3 region. Ve VL CDR3 se 2SD4 liší od D2E7 v pozicích
2, 5 a 9. Nicméně, jak bylo uvedeno výše, pozice 9 může být obsazena Ala (jak je tomu u 2SD4)
-32CZ 292465 B6 nebo Thr (jak je tomu u D2E7) bez významného ovlivnění KOff. Tak, srovnáním 2SD4 a D2E7 mohou být pozice 2 a 5 D2E7 VL CDR3, obě obsazené argininem, identifikovány jako kritické pro asociaci protilátky s hTNFa. Tyto zbytky mohou přímo účastnit jako kontaktní zbytky ve vazebném místě protilátky, nebo mohou být zásadní pro udržení architektury molekuly protilátky 5 v tomto regionu. Vzhledem k významu pozice 2 akceleruje nahrazení Arg (v LOE7, která má stejný VL CDR3 jako D2E7) Lys (v EP B12) rychlost disociace dvakrát. Vzhledem k významu pozice 5 akceleruje nahrazení Arg (v D2E7) Ala (v LD2E7*.A5) B12) rychlost disociace dvakrát, jak je popsáno v příkladu 2. Kromě toho, bez argininu v pozicích 2 a 5 (v 2SD4) je rychlost disociace pětkrát rychlejší. Nicméně, mělo by být uvedeno, že ačkoliv je pozice 5 významná pro ío vylepšení vazby na hTNFa, může být změna v této pozici negována změnami v jiných pozicích, jako tomu je v VLLOE4, VLLOH1 a VLO.1H8.
Ve VH CDR3 se 2SD4 liší od D2E7 v pozicích 1,7 a 12. Nicméně, jako bylo uvedeno výše, pozice 12 může být odsazeno Asn (jak je tomu u 2SD4) nebo Tyr (jak je tomu u D2E7) bez 15 významného ovlivnění KOff. Tak, srovnání 2SD4 a D2E7 mohou být pozice 1 a 7 D2E7 VH
CDR3 identifikovány jako kritické pro asociaci protilátky s hTNFa. Jak bylo uvedeno výše, tyto zbytky se mohou přímo účastnit jako kontaktní zbytky ve vazebném místě protilátky, nebo mohou být zásadní pro udržení architektury molekuly protilátky v tomto regionu. Obě pozice jsou významné pro vazbu na hTNFa, protože když je použita 3C-H2 VH CDR3 (která má 20 změnu valinu na alanin v pozici 1 vzhledem k D2E7 VH CDR3), tak má scFv 3-krát rychlejší rychlost disociace, než když je použita D2E7 VH CDR3, ale tato rychlost disociace je stále čtyřikrát pomalejší, než když je použita S2D4 VH CDR3 (která má změnu v obou pozicích 1 a 7 vzhledem k D2E7 VH CDR3).
Příklad 4: Funkční aktivita D2E7
Pro vyšetření funkční aktivity D2E7 byla protilátka použita v několika testech pro měření schopnosti protilátky inhibovat aktivitu hTNFa, buď in vitro, nebo in vivo.
A. Neutralizace TNFa-indukované cytotoxicity u L929 buněk
Lidský rekombinantní TNFa (rhTNFa) způsobuje buněčnou cytotoxicitu u myších L929 buněk pro inkubační době 18 až 24 hodin. Lidské anti-hTNFa protilátky byly hodnoceny v L929 35 testech společnou inkubací protilátek s rhTNFa a buňkami následujícím způsobem. 96-jaková mikrotitrační plotna obsahující 100 μΐ anti-hTNFa Ab byla sériově ředěna 1/3 směrem dolů v plotně v dvojím provedení za použití RPMI média obsahující 10% fetální hovězí sérum (FBS). Padesát mikrolitrů rhTNFa bylo přidáno do konečné koncentrace 500 pg/ml do každé jamky.
Plotny byly potom inkubovány po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Dále bylo přidáno 50 μΐ 40 TNFa-senzitivních L929 myších fibroblastů v konečné koncentraci 5 x 10^ buněk na jamku spolu s 1 pg/ml Aktinomycinu D. Kontroly obsahovaly médium plus buňky a rhTNFa plus buňky. Tyto kontroly, a TNFa standardní křivka, v rozmezí od 2 ng/ml do 8,2 pg/ml, byly použity pro určení kvality testu a pro získání okénka pro neutralizaci. Plotny byly potom inkubovány přes nos (18 až 24 hodin) při 37 °C v 5% CO2.
100 μΐ média bylo odebráno z každé jamky a bylo přidáno 50 μΐ 5 mg/ml 3, (4,4-dimethylthiazol-2-yl)2,5-difenyl-tetrazolimbromidu (MTT; komerčně dostupný do Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) v PBS. Plotny byly potom inkubovány po dobu 4 hodin při 37 °C. Potom bylo přidáno do každé jamky 50 μΐ 20% dodecyl síranu sodného (SDS) a plotny byly inkubovány přes 50 noc při 37 °C. Byla měřena optická hustota při 570/630 nm, křivky byly pro každý vzorek zapsány do grafu a hodnoty IC50 byly určeny standardními způsoby.
-33 CZ 292465 B6
Reprezentativní výsledky pro lidské protilátky mající různé VH a VL páry, ve srovnání s myší MAK 195 mAb, jsou ukázány na obrázku 3 a v tabulce 7, dále.
Tabulka 7: Neutralizace TNFa-indukované L929 cytotoxicity
VH VL Struktura IC50, M
D2E7 D2E7 scFv 1,1 χ 10'10
D2E7 D2E7 IgG4 4,7x10·”
2SD4 2SD4 scFv/IgGl/IgG4 3,0 xlO’7
S2D4 LOE7 scFv 4,3x10’8
VH1-D2 2SD4 scFv 1,0 xlO’8
VH1-D2 LOE7 scFv/IgGl/IgG4 3,4xlO‘10
VH1-D2.Y LOE7.T IgG4 8,1 x 10”
VH1-D2.N LOE7.T IgG4 1,3 x 10’10
VH1-D2.Y LOE7.A IgG4 2,8 x 10'”
VH1-D2.N LOE7.A IgG4 6,2 x 10’”
MAK 195 MAK 195 scFv 1,9 xlO'8
MAK 195 MAK 195 F(ab')2 6,2x10”
Výsledky na obrázku 3 a v tabulce 7 ukazují, že D2E7 lidská anti-hTNFa protilátka, a různé D2E7-příbuzné protilátky, mohou neutralizovat TNFa-indukovanou L929 cytotoxicitu s kapacitou přibližně ekvivalentní kapacitě myší anti-hTNFa mAb MAK 195.
V jiné sérii pokusů byl atestována schopnost IgGl formy D2E7 neutralizovat TNFa-indukovanou L929 cytotoxicitu způsobem, který byl popsán výše. Výsledky ze tří nezávislých pokusů a jejich průměr jsou shrnuty v tabulce 8, dále.
Tabulka 8: Neutralizace TNFa-indukované L929 cytotoxicity způsobená D2E7 IgGl.
Pokus IC50(M)
1 1,26 xlO’10
2 1,33 xlO'10
3 1,15 xlO’10
průměr 1,25 ±0,01 χ 10'10
Tato série pokusů potvrdila, že D2E7, ve formě kompletního IgGl, neutralizuje TNFa-indukovanou L929 cytotoxicitu s průměrnou hodnotu IC50 (M), 1,25 ± 0,01 χ 10’10.
B. Inhibice vazby TNFa na receptory pro TNFa na U-937 buňkách
Schopnost lidských anti-hTNFa protilátek inhibovat vazbu hTNFa na receptory pro hTNFa na povrchu buněk byla ošetřována za použití buněčné linie U-937 (ATCC č. CRL 1593), lidské histiocytámí linie, která exprivuje receptory pro hTNFa. U-937 buňky byly kultivovány v RPMI 164é médiu doplněném 10% fetálním hovězím sérem (Hyclone A-llll, Hyclone Laboratorie, Logan, UT), L-glutaminem (4 nM), HEPES pufrovacím roztokem (10 mM), penicilinem (100 pg/ml) a streptomycinem (10 pg/ml). Pro vyšetření aktivity kompletních IgG protilátek byly U-937 buňky předem inkubovány s PBS doplněným 1 mg/ml lidského IgG (Sigma 1-4506, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) po dobu 45 minut na ledu a potom byly buňky třikrát promyty vazebným pufrem. Pro test vazby na receptor byly U-937 buňky (5 χ 106 buněk na jamku) inkubovány ve vazebném pufru (PBS doplněný 0,2% hovězím sérovým albuminem) v96-jamkový mikrotitračních plotkách (Costar 3799, Costar Corp. Cambridge, MA), spolu s 125I-značeným rhTNFa (3 χ ΙΟ'10 M; 25 pCi/ml; získán od NEN Research Products,
-34CZ 292465 B6
Wilmington, DE), s nebo bez anti-hTNFa protilátek, v celkovém objemu 0,2 ml. Plotny byly inkubovány na ledu po dobu 1,5 hodiny. Potom byly 75 μΐ každého vzorku přenese do 1,0 ml testovacích trubiček (Sarsted 72.700, Sarsted Corp. Princeton, NJ) obsahujících dibutylftalat (Sigma D-2270, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) a dinonylftalat (ICN 210733, ICN, Irvine, CA). Testovací trubičky obsahovaly 300 μΐ směsi dibutylftalatu a dinonylftalatu, v objemovém poměru 2:1, v příslušném pořadí. Volný (tj. nenavázaný) 125I-značený rhTNFa byl odstraněn mikrocentrifugací po dobu 5 minut. Potom byl konec každé testovací trubičky obsahující buněčnou peletu odstřižen za pomoci nůžek na trubičky (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, Pequannock, NJ). Buněčná peleta obsahovala 125I-značený rhTNFa vázaný na p60 nebo p80 receptor pro TNFa, zatímco vodná fáze nad olejovou směsí obsahovala přebytek volného 125I-značeného rhTNFa. Všechny buněčné pelety byly shromážděny v odečítací trubici (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) a odečítány ve scintilační komůrce.
Reprezentativní výsledky jsou ukázány na obrázku 4. Hodnota IC50 pro D2E7 inhibici vazby hTNFa na receptory pro hTNFa na U-937 buňkách je v těchto pokusech přibližně 3 χ ΙΟ’10 M. Tyto výsledky ukazují, že D2E7 lidská anti-hTNFa protilátka inhibuje vazbu rhTNFa na receptory pro hTNFa na U-937 buňkách v koncentracích přibližně ekvivalentních koncentracím myší anti-hTNFa mAb MAK 195.
V jiné sérii pokusů byla testována schopnost IgGl formy D2E7 inhibovat vazbu rhTNFa na receptory pro hTNFa na U-937 buňkách způsobem, který byl popsán výše. Výsledky ze tří nezávislých pokusů a jejich průměr jsou shrnuty v tabulce 9, dále.
Tabulka 9: Inhibice vazby na TNF receptor na U-937 buňkách způsobena D2E7 IgGl.
Pokus IC5o(M)
1 1,70 χ 10’lu
2 1,49x1010
3 1,50 x 10'10
průměr 1,56 ± 0,12 χ 10'10
Tato série pokusů potvrdila, že D2E7, ve formě kompletního IgGl, inhibuje vazbu na receptor pro TNF na U-937 buňkách s průměrnou hodnotu IC50 (M), 1,56 ± 0,12 χ 10'10.
Pro výzkum inhibičního potenciálu D2E7 ve vazbě 125I-rhTNFavazby na jednotlivé p55 a p75 receptory byl proveden radioimunotest na pevné fázi. Pro měření IC50 hodnot D2E7 pro jednotlivé receptory pro FNT byly různé koncentrace protilátky inkubován s 3 χ 10'10 koncentracemi 125I-rhTNFa. Směs byla potom testována na separátních plotnách obsahujících buď p55, nebo p75 receptory pro TNF v závislosti na dávce. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 10, dále.
Tabulka 10: Inhibice vazby na TNF receptor pro p55 a p75 TNFR způsobená D2E7 IgGl
Reagens IC50(M)
p55 TNFR p75 TNFR
D2E7 1,47x10’9 1,26x10’9
rhTNF 2,31 xlO'9 2,70x10‘9
Inhibice vazby 125I-rhTNF na p55 a p75 receptory na U-937 buňkách způsobená D2E7 sledovala jednoduchou esovitou křivku, což ukazuje na podobné IC5o hodnoty pro oba receptory. V radioimunotestu na pevné fázi (RIA) pro rekombinantní TNF receptory byly hodnoty IC5o pro inhibici vazby l25I-rhTNF na p55 a p75 receptory způsobenou D2E7 vypočítány jako 1,47 χ 10’9 a 1,26 χ 10’9, v příslušném pořadí. Snížení hodnot IC50 v pevné fázi bylo pravděpodobně způso
-35CZ 292465 B6 beno vyšší hustotou receptorů v RIA formátu, protože neznačený rhTNF také inhiboval se stejnými hodnotami IC50 . IC50 hodnoty pro inhibici vazby 125I-rhTNF na p55 a p75 receptory podle neznačeného rhTNF byly 2,31 x 109 a 2, 70 x ΙΟ'9 M, v příslušném pořadí.
C. Inhibice ELAM-1 exprese na HUVEC
Endotelové buňky lidské pupečníkové žíly (HUVEC) mohou být indukovány k expresi leukocytové adhezní molekuly endotelových buněk 1 (ELAm-1) na svém povrchu ošetření rhTNFa, kde tyto molekuly mohou být detekovány reakcí HUVEC ošetřených rhTHFa s myší protilátkou proti lidské ELAM-1. Schopnost lidských anti-hTNFa protilátek inhibovat tuto TNFa-indukovanou expresi ELAM-1 a HUVEC byla vyšetřována následujícím způsobem: HUVEC (ATCC č. CRL 1730) byly umístěny v 96 jamkových plotnách (5 x 104 buněk na jamku) a byly inkubovány přes noc při 37 °C. Následující den byla v mikrotitrační plotně připravena sériová ředění lidské anti-hTNFa protilátky (1:10), počínaje 20-10 gg/ml protilátky. Zásobník roztok rhTNFa byl připraven v koncentraci 4,5 ng/ml, aliquoty rhTNFa byly přidány do každé jamky obsahující protilátku a obsahy jamek byly dobře promíchány. Kontroly obsahovaly médium samotné, médium plus anti-hTNFa protilátku a médium plus rhTNFa. HUVEC plotny byly vyndány z inkubace přes noc při 37 °C a médium bylo opatrně aspirováno z každé jamky. 200 μΐ směsi protilátka-rhTNFa byly přeneseno do každé jamky HUVEC ploten. HUVEC plotny byly dále inkubovány při 37 °C po dobu 4 hodin. Potom byla myší anti-ELAM-1 protilátka ředěna 1:1000 vRPMI. Médium v každé jamce HUVEC plotny bylo opatrně aspirováno, přidalo se 50 μΐ/jamku roztoku anti-ELAM-1 protilátky a HUVEC plotny se inkubovaly po dobu 60 minut při pokojové teplotě. Roztok ,25I-značené anti-myší lg protilátky byl připraven vRPMI (přibližně 5000 cpm v 50 μΐ). Médium v každé jamce HUVEC ploten bylo opatrně aspirováno, jamky byly dvakrát promyty RPMI a do každé jamky se přidalo 50 μΐ roztoku ,25I-značeného anti-myšího lg. Plotny byly inkubovány po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě a každá jakam byla potom promyta třikrát RPMI. Do každé jamky se přidalo se 180 μΐ 5% SDS pro lýzu buněk. Lyzák buněk z každé jamky se potom přenesl do zkumavky a byl odečítán ve scintilační komůrce.
Reprezentativní výsledky jsou ukázány na obrázku 5. IC5o hodnota pro D2E7 inhibici NTNFaindukované exprese ELAM-1 na HUBEC je těchto pokusech přibližně 6 x 10'11 M. Tyto výsledky ukazují, že lidská anti-hTNFa protilátka D2E7 inhibuje hTNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na HUVEC v koncentracích přibližně ekvivalentních koncentracím myší anti-hTNFa mAbMAK195.
V jiné sérii pokusů byla testována schopnost IgGl formy D2E7 inhibovat hTNFa-indukovanou expresi ELAm-1 na HUVEC způsobem, který byl popsán výše. Výsledky ze tří nezávislých pokusů a jejich průměr jsou shrnuty v tabulce 11, dále.
Tabulka 11: Inhibice TNFa-indukované exprese ELAm-1 na HUVEC způsobena D2E7 IgGl.
Pokus IC50(M)
1 1,95 x 10‘10
2 1,69 x 1010
3 1,90 x 1010
průměr 1,85 ± 0,14 x 10'14
Tato série pokusů potvrdila, že D2E7, ve formě kompletního IgGl, inhibuje TNFa-indukovanou expresi ELAM-1 na HUVEC s průměrnou hodnotou IC5o (M) 1,85 ± 0,14 x 10’10.
-36CZ 292465 B6
Neutralizační potenciál D2E7 IgGl byl také testován pro rhTNFa indukovanou expresi dvou dalších adhezních molekul, ICAM-1 a VCAM-1. Protože rhTNF titrační křivka pro ICAM-1 expresi byla v 16 hodinách velmi podobná křivce pro ELAM-1 expresi, byly v testu neutralizace protilátkou použity stejné koncentrace rhTNF. HUVEC byly inkubovány s rhYNF za přítomnosti různých koncentrací D2E7 při 37 °C v CO2 inkubátoru po dobu 16 hodin a exprese ICAM-1 byla měřena myší anti-ICAM-1 protilátkou následovanou 125I-značenou ovčí anti-myší protilátkou. Byly provedeny dva nezávislé pokusy a byly vypočítány hodnoty IC50. Nepříbuzná lidská IgGl protilátka neinhibovala expresi ICAM-1.
Postup pro testování inhibice exprese VCAM-1 byl stejný jako postu pro expresi ELAM-1 s tou výjimkou, že místo anti-ELAM-1 MAb byla použita anti-VCAM-1 MAb. Byly provedeny tři nezávislé pokusy a byly vypočítány hodnoty IC5o. Nepříbuzná lidská IgGl protilátka neinhibovala expresi VCAM-1.
Výsledky jsou shrnuty v tabulce 12, dále.
Tabulka 12: Inhibice exprese ICAM-1 a VCAM-1 způsobenáD2E7 IgGl.
Inhibice ICAM-1 Inhibice VCAM-1
Pokus IC50 (M) Pokus IC50(M)
1 1,84 x 10’Ιϋ 1 1,03 x 1010
2 2,49x10'10 2 9,26x10·”
3 3 1,06x10'10
průměr 2,17 ± 0,46 x 10'10 průměr 1,01 ± 0,01 x 1010
Tyto pokusy ukazují, že ošetření endotelových buněk primární lidské pupečníkové žíly rhTNF vede k optimální expresi adhezním molekul: ELAM-1 a VCAM-1 ve čtvrté hodině a k maximálnímu zvýšení exprese ICAM-1 v 16 hodině. D2E7 byla schopná inhibovat expresi tří adhezních molekul způsobem závislým na dávce. Hodnoty IC50 pro inhibici ELAM-1, ICAM-1 a VCAM-1 byly 1,85 x 1O'10, 2,17 x 1O10 a 1,01 x ΙΟ'10 M, v příslušném pořadí. Tyto hodnoty jsou velmi podobné, což ukazuje na podobné požadavky pro dávku rhTNF aktivačního signálu pro indukci exprese ELAM-1, ICAM-1 a VCAM-1. Je zajímavé, že D2E7 byla podobně účinná v delším testu inhibice exprese ICAM-1. Test inhibice ICAM-1 vyžaduje 16 hodinovou společnou inkubaci rhTNF a D2E7 s HUVEC, oproti 4 hodinám nutným pro test inhibice ELAM-1 a VCAM-1. Protože má D2E7 pomalou rychlost disociace pro rhTNF je představitelné, že během 16 hodinové inkubační doby zde nebyla signifikantní kompetice TNF receptorů na HUVEC.
D. In vivo neutralizace hTNFa
Tři různé in vivo systémy byly použity pro demonstraci toho, že D2E7 je účinná v inhibici aktivity hTNFa in vivo.
1. Inhibice letality inkubované TNF u D-galaktosaminem senzitizovaných myší.
Injekce rekombinantního lidského TNFa (rhTNFa) myším semitizovaným D-galaktosaminem způsobuje letalitu během 24 hodin. Činidla neutralizující TNFa brání letiště v tomto modelu. Pro vyšetření schopnosti lidských anti-hTNFa protilátek neutralizovat hTNFa in vivo v tomto modelu byly C57B1/6 myším injikovány různé koncentrace D2E7 IgGl, nebo kontrolní protein, v PBS intraperitoneálně (i.p.). Myším byl o 30 hodin později podán I pg rhTNFa a 20 mg D-galaktosaminu v PBS i.p. a pozorování myší bylo provedeno o 24 hodin později. Toto množství rhTNFa a D-galaktosaminu bylo předem určeno pro dosažení 80 až 90% letality u těchto myší.
-37CZ 292465 B6
Reprezentativní výsledky, znázorněné jako sloupcový graf % přežívání versus koncentrace protilátky, jsou ukázány na obrázku 6. Černé sloupce představují D2E7, zatímco šrafované sloupce představují MAK 195. Injekce 2,5 až 25 pg D2E7 protilátky na myš chrání zvířata před TNFa-indukovanou letalitou. Hodnota ED50 je přibližně 1 až 2,5 pg/myš. Pozitivní kontrolní protilátka, MAK 195, byla podobná ve své protektivní schopnosti. Injekce D2E7 za absence rhTNFa neměla na myš žádné škodlivé účinky. Injekce nespecifické lidské IgG protilátky nezpůsobovala žádnou ochranu před TNFa-indukovanou letalitou.
Ve druhém pokusu bylo 49 myší rozděleno do 7 stejných skupin. Každá skupina dostala různé dávky D2E7 třicet minut před podáním LD8o dávky směsi rhTNF/D-galaktosaminu (1 pg rhTNF a 20 mg D-galaktosaminu na myš). Kontrolní skupina č. 7 dostala normální lidskou IgGl kappa protilátku v dávce 25 pg/myš. Myši byly vyšetřovány o 24 hodin později. Přežívání pro každou skupinu je shrnuto v tabulce 13.
Tabulka 13: 24 hodinové přežívání po podání D2E7
Skupina Přežívání (živé/celkem) Přežívání (%)
1 (bez protilátky) 0/7 0
2(1 pg) 1/7 14
3 (2,6 pg) 5/7 71
4(5,2 pg) 6/7 86
5(26pg; bez rhTNF) 7/7 100
7 (25 pg Hu IgGl) 1/7 14
2. Inhibice pyrexie u králíků indukované TNF
Byla vyšetřována účinnost D2E7 v inhibici rhTNF indukované pyretické odpovědi u králíků. Skupině tří samic NZW králíků, každá o hmotnosti přibližně 2,5 kg, byla podána injekčně D2E7, rhTNF a imunitní komplexy D2E7 a rhTNF. Termistorovou sondou byla měřena rektální teplota na Kayeově snímači teplot každou minutu po dobu přibližně 4 hodin. Rekombinantní lidský TNF v salinickém roztoku, injikovaný v koncentraci 5 pg/kg, zvyšoval teplotu o více než 0,4 °C v asi 45 minutě po injekci. Přípravek protilátky samotné, v salinickém roztoku v dávce 138 pg/kg, nezvyšoval teplotu u králíků do 140 minuty po podání. Ve všech dalších pokusech byla D2E7 nebo kontrolní činidlo (lidský IgGl nebo salinické vehikulum) podána injekčně i.v. králíkům a potom následovala po 15 minutách injekce rhTNF v salinickém roztoku v dávce 5 pg/kg i.v. Reprezentativní výsledky z několika pokusů jsou shrnuty v tabulce 14, dále.
Tabulka 14. DE27 zprostředkovaná inhibice pyrexie indukované rhTNF u králíků
Vzestup teploty* °C Molámí poměr Vrcholná teplota
dávka D2E7 rhTNF rhTNF+D2E7 % inhibice** D2E7: rhTNF minuty po
(Mg/kg) rhTNF
14 0,53 0,25 53 1 60
24 0,43 0,13 70 1,6 40
48 0,53 0,03 94 3,3 50
137 0,53 0,00 100 9,5 60
792 0,80 0,00 100 55 60
-38CZ 292465 B6 * = Vrcholná teplota ** = % inhibice = (1- (vzestup teploty s rh TNF a D2E7/vzestup teploty srhTNF samotným)) x 100
Intravenózní předošetření D2E7 v dávce 14 pg/kg částečně inhibovalo pyrotenní odpověď ve srovnání s králíky ošetřenými samotným salinickým roztokem. D2E7 podaná v dávce 137 pg/kg zcela potlačila pyrogenní odpověď na rhTNF ve stejném pokusu. Ve druhém pokus D2E7 podaná v dávce 24 pg/kg také částečně potlačovala pyrogenní odpověď, ve srovnání s králíky ošetřenými pouze salinickým roztokem. Molámí poměr D2E7 k rhTNF byl v tomto pokusu 1/6:1. Ve třetím pokusu zcela potlačována D2E7 injikovaná i.v. v dávce 48 pg/kg (molámí poměr D2E7:rhTNF = 3,3:1) pyrogenní odpověď, ve srovnání s králíky ošetřenými kontrolním lidským IgGl v salinickém roztoku v dávce 30 pg/kg. V posledním pokusu, králíci ošetření D2E7 (792 pg/kg) ve velmi vysokém molámím poměru k rhTNF (55:1) nevykazovali jakékoliv zvýšení teploty během 4 hodin pozorování. Ošetření králíků imunitními komplexy generovanými ze směsi D2E7 a rhTNF inkubované po dobu 1 hodiny při 37 °C v molámím poměru 55:1, bez následného podání rhTNF, také nevyvolalo jakýkoliv vzestup teploty ve stejném pokusu.
3. Prevence polyartritidy u Tg 197 transgenních myší
Účinek D2E7 na vývoj onemocnění byl zkoumán v transgenním myším modelu artritidy. Byly vyvinuty transgenní myši (Tgl97), které exprivují lidský přirozený TNF (modifikovaný ve 3' regionu za kódující sekvencí) a u těchto myší se vyvíjela chronická polyartritida se 100% incidencí ve věku 4 až 7 týdnů (pro další popis Tgl97 modelu polyartritidy viz EMBO J. (1991) 10: 4025-4031).
Transgenní zvířata byla identifikována PCR ve věku 3 dní. Vrhy transgenních myší byly rozděleny do šesti skupin. Léčebné protokoly pro šest skupin byly následující: Skupina 1 = bez léčby; Skupina 2 = salinický roztok (vehikulum); skupina 3 = D2E7 v dávce 1,5 pg/g; skupina 4 = D2E7 v dávce 15 pg/g; skupina 5 = D2E7 v dávce 30 pg/g; a Skupina 6 = IgGl kontrola v dávce 30 pg/g. Do studie byly vzaty také vrhy netransgenních myší a sloužily jako kontroly (Skupina 7 = netransgenní; bez léčby). Každá skupina dostávala tři injekce za týden i.p. ukázané léčby. Injekce probíhaly po dobu 10 týdnů. Každý týden byly pro každé zvíře zaznamenávány makroskopické změny v morfologii kloubů. V 10 týdnech byly myši utraceny a tkáň byla uchovávána ve formalinu. Bylo provedeno mikroskopické vyšetření tkáně.
U každé myši byl na začátku každého týdne zaznamenána hmotnost v gramech. Ve stejnou dobu bylo také provedeno měření velikosti kloubů (v mm), jako měření závažnosti onemocnění. Velikost kloubů byla určena jako průměr tří měření na kotníku pravé tlapky za použití mikrometru. Artritické skóre bylo zaznamenáváno týdně následujícím způsobem: 0 = žádná artritida (normální vzhled a flexe); + = mírná artritida (deformace kloubu); ++ = střední artritida (otok, deformace kloubu) a +++ = těžká artritida (detekována ankylosa při flexi a závažná porucha hybnosti). Na základě barvení řezů kloubu haematoxylinem/oesinem bylo stanoveno histopatologické skóre: 0 = bez detekovatelného onemocnění; 1 = proliferace synoviální membrány; 2 = těžké ztluštění synoviální membrány; 3 = destrukce chrupavky a erose kosti.
Účinek ošetření D2E7 na průměrnou velikost kloubu Tgl97 transgenních artritických myší je ukázán graficky na obrázku 9. Histopatologické a artritické skóre Tgl97 transgenních myší, ve věku 11 týdnů, je uvedeno v tabulce 15, dále.
-39CZ 292465 B6
Tabulka 15: Účinek D2E7 na histopatologické a artritické skóre u Tgl97 myší
Skupina Léčba Histopatologické skóre Artritické skóre
1 žádná 3 (7/7) +++ (7/7)
2 šalin, roztok 3 (8/8) +++ (8/8)
6 IgGl kontrola 3 (9/9) +++ (7/9)
3 D2E7 1,5 pg/g 0(6/8) 0 (8/8)
4 D2E7 15 pg/g 0 (7/8) 0(8/8)
5 D2E7 30 pg/g 0 (8/8) 0(8/8)
Tento pokus ukazuje, že D2E7 protilátka má výrazné pozitivní účinky na transgenní myši 5 exprimující přirozený lidský TNF (Tgl97) bez přítomnosti artritidy na konci studované doby.
E. DE27 neutralizace TNFa od jiných druhů
Vazebná specificita D2E7 byla vyšetřována měřením její schopnosti neutralizovat faktor nekrosy ío nádorů od jiných druhů primátů a od myší, za použití testu L929 cytoxicity (jak je popsán v příkladu 4, sekci A, výše). Výsledky jsou shrnuty v tabulce 16, dále.
Tabulka 16: Schopnost D2E7 neutralizovat TNF od jiných druhů v L929 testu
TNFa* Zdroj IC5o pro D2E7 neutralizaci (M)**
člověk Rekombinantní 7,8 x 10’
šimpanz LPS-stimulované PBMC 5,5 x 10'”
pavián rekombinantní 6,0 x 10”
kosman LPS-stimulované PBMC 4,0 x 10’10
makak (cynomolgus) LPS-stimulované PBMC 8,0 x ÍO’
makak rhesus LPS-stimulované PBMC 3,0 x 10'
pes LPS-stimulované PBMC 2,2 x 10’10
prase rekombinantní 1,0 x 10'7
myš rekombinantní > 1,0 x 10'7
Výsledky v tabulce 16 ukazují, že D2E7 může neutralizovat aktivitu pěti primátích TNFa přibližně stejně jako lidského TNFa a, navíc, může neutralizovat aktivitu psího TNFa (přibližně desetkrát méně než lidského TNFa) a prasečího a myšího TNFa (přibližně 1000-krát méně než 20 lidského TNFa). Kromě toho, vazba D2E7 na rhTNFa ve fázi roztoku nebyla inhibována dalšími cytokiny, jako je lyfotoxin (TNFP), IL-Ια, IL—1 β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNt a TGFp, což ukazuje, že D2E7 je velmi specifická pro svůj ligand TNFa.
F. Chybění uvolňování cytokinů lidskou plnou krví inkubovanou s D2E7
V tomto příkladu byla vyšetřována schopnost D2E7 inkubovat, samostatně, sekreci cytokinů nebo exprexi povrchových molekul na normálních buňkách lidské krve. D2E7 byla inkubována s ředěnou plnou krví od tří různých normálních dárců v různých koncentracích po dobu 24 hodin. LPS pozitivní kontrola byla provedena ve stejnou dobu, v koncentraci předem určené pro 30 stimulaci sekrece cytokinů, imunokompetentními buňkami. Byly získány supematanty a byly testovány v panelu deseti solubilních cytokinů, receptorů a adhezních molekul v ELISA kitu: IL-Ια, IL—1 β, antagonista IL—I receptoru, IL-6, IL-8, TNFa, solubilní TNF receptor I, solubilní TNF receptor II, solubilní ICAM-1 a solubilní E-selektin. Žádná signifikantní množství cytokinů nebo povrchových buněčných molekul nebyla měřena v důsledku společné inkubace D2E7 35 protilátky, v koncentraci 343 pg/ml. Kontrolní kultury bez přidání protilátky také nevykazovaly žádná měřitelná množství cytokinů, zatímco LPS-kontrola vykazovala zvýšené hladiny v rozmezí mnoha pikogramů až nanogramů. Tyto výsledky ukazují, že D2E7 neindukuje sekreci cytokinů
-40CZ 292465 B6 nebo povrchových buněčných proteinů buňkami plné krve nad normální hladinu v kulturách ex vivo.
Částí předkládané přihlášky je připojený seznam sekvencí, jehož obsah je shrnut v následující 5 tabulce:
SEQ ID NO: V ' --------------------- Řetězec protilátky Region Typ sekvence
1 D2E7 VL aminokyselina
2 D2E7 VH aminokyselina
3 D2E7 VL CDR3 aminokyselina
4 D2E7 VL CDR3 aminokyselina
5 D2E7 VL CDR2 aminokyselina
6 D2E7 VH CDR2 aminokyselina
7 D2E7 VL CDR1 aminokyselina
8 D2E7 VH CDR1 aminokyselina
9 2SD4 VL aminokyselina
10 2SD4 VH aminokyselina
11 2SE4 VL CDR3 aminokyselina
12 EPB12 VL CDR3 aminokyselina
13 VL10E4 VL CDR3 aminokyselina
14 VL100A9 VL CDR3 aminokyselina
15 VLL100D2 VL CDR3 aminokyselina
16 VLL0F4 VL CDR3 aminokyselina
17 LOE5 VL CDR3 aminokyselina
18 VLLOG7 VL CDR3 aminokyselina
19 VLLOG9 VL CDR3 aminokyselina
20 VLLOH1 VL CDR3 aminokyselina
21 VLLOHIO VL CDR3 aminokyselina
22 VL1B7 VL CDR3 aminokyselina
23 VL1C1 VL CDR3 aminokyselina
24 VL0.1F4 VL CDR3 aminokyselina
25 VL0.1H8 VL CDR3 aminokyselina
26 LOE7.A VL CDR3 aminokyselina
27 2SD4 VH CDR3 aminokyselina
28 VH1B11 VH CDR3 aminokyselina
29 VH1D8 VH CDR3 aminokyselina
30 VH1A11 VH CDR3 aminokyselina
31 VH1B12 VH CDR3 aminokyselina
32 VH1E4 VH CDR3 aminokyselina
33 VH1F6 VH CDR3 aminokyselina
34 3C-H2 VH CDR3 aminokyselina
35 VH1-D2.N VH CDR3 aminokyselina
36 D2E7 VL nukleová kyselina
37 D2E7 VH nukleová kyselina
Odborníci v oboru poznají, nebo budou schopni zjistit běžným experimentováním nebo ekvivalentů specifických provedení vynálezu, která jsou zde popsána. Takové ekvivalenty jsou zahrnuty 10 následujícími patentovými nároky.
-41 CZ 292465 B6
Seznam sekvencí:
(1) Obecné informace:
(i) Přihlašovatel:
(A) Jméno: BASF Aktiengesellschaft (B) Ulice: Carl-Bosch Str. 38 (C) Město: 67056 Ludwigshafen (D) Země: Rheinladn-Pfalz (E) Stát: Německá Spolková Republika (ii) Název vynálezu: Lidské protilátky k lidskému TNFa (iii) Počet sekvencí: 37 (iv) Adresa pro korespondenci (A) Adresa: Lahive & Cocfield (B) Ulice: 60 Statě Street, suitě 510 (C) Město: Boston (D) Stát: Massachusetts (E) Země: USA (F) ZIP: 02109-1875 (v) Počítačová čtecí forma:
(A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilní (C) Operační systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentln Release # 1.0, verse # 1.25 (vi) Údaje o současné přihlášce:
(A) Číslo přihlášky:
(B) Datum podání:
(C) Klasifikace:
(vii) Předchozí data přihlášky:
(A) Číslo přihlášky: US 08/599226 (B) Datum podání: 9. 2. 1996 (C) Klasifikace:
(vii) Předchozí data přihlášky (A) Číslo přihlášky: US 60/031476 (B) Datum podání: 25.11.1996 (C) Klasifikace:
-42CZ 292465 B6 (viii) Zástupce/agent - informace (A) Jméno: DeConti, Giulio A., Jr.
(B) Registrační číslo: 31503 (C) Reference/číslo rejstříku: BB1-043CPPC (ix) Telekomunikační informace:
(A) Telefon: (617)227-7400 (B) Telefax: (617)227-5941 (2) Informace pro SEQ ID NO: 1:
(i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 107 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 1:
Asp ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
(2) Informace pro SEQ ID NO: 2:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 121 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární
-43CZ 292465 B6 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 2:
Glu 1 Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg
5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala 50 Ile Thr Trp Asn Ser 55 Gly His Ile Asp Tyr 60 Ala Asp Ser Val
Glu 65 Gly Arg Phe Thr Ile 70 Ser Arg Asp Asn Ala 75 Lys Asn Ser Leu Tyr BO
Leu Gin Met Asn Ser 65 Leu Arg Ala Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
Ala Lys Val Ser 100 Tyr Leu Ser Thr Ala 105 Ser Ser Leu Asp Tyr 110 Trp Gly
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 (2) Informace pro SEQ ID NO: 3:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (ix) Vlastnosti:
(A) Jméno/klíč: modifikované místo (B) Umístění: 9 (C) Jiné informace: /“Xaa je Thr nebo Ala“ (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 3:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa 1 5
-44CZ 292465 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 4:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (ix) Vlastnosti:
(A) Jméno/klíč: modifikované místo (B) Umístění: 12 (C) Jiné informace: /“Xaa je Thr nebo Ala“ (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 4:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa
10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 5:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 7 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 5:
Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser
5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 6:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 17 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní
-45CZ 292465 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 6:
Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile 1 5
Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu
15
Gly (2) Informace pro SEQ ID NO: 7:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 11 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 7:
Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 8:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 5 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 8:
Asp Tyr Ala Met His
5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 9:
(i) Charakteristika sekvence:
-46CZ 292465 B6 (A) Délka: 107 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 9:
Asp Ile Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro
es 70 7S B0
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 10S
(2) Informace pro SEQ ID NO: 10:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 121 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 10:
-47CZ 292465 B6
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gin Pro Gly 15 Arg
1 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr
€5 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr cys
85 90 95
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 (2) Informace pro SEQ ID NO: 11:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 11:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala
5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 12:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní
-48CZ 292465 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 12:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 13:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 13:
Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 14:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 14:
Gin Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 15:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní
-49CZ 292465 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 15:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 16:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina io (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 16:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 17:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 17:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr 1 S (2) Informace pro SEQ ID NO: 18:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid
-50CZ 292465 B6 (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 18:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 19:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 19:
Gin Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr
5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 20:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 20:
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 21:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární
-51 CZ 292465 B6 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 21:
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 22:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 22:
Gin Gin Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr 1 S (2) Informace pro SEQ ID NO: 23:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 23:
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 24:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin
-52CZ 292465 B6 (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 24:
Gin Lys Tyr Ile Ser Ala Pro Tyr Thr 1 S (2) Informace pro SEQ ID NO: 25:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 25:
Gin Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr 1 5 (2) Informace pro SEQ ID NO: 26:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 9 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 26:
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5
-53CZ 292465 B6 (2) Informace pro SEQ ID NO: 27:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 27:
Ala ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 28:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 28:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys
10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 29:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 29:
-54CZ 292465 B6
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 30:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 30:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser 1 5
Ser Leu Asp Asp (2) Informace pro SEQ ID NO: 31:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 31:
'Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 32:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní
-55CZ 292465 B6 (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 32:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 33:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 33:
Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr
10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 34:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 34:
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr 15 10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 35:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 12 aminokyselin (B) Typ: aminokyselina (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: peptid
-56CZ 292465 B6 (v) Typ fragmentu: vnitřní (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 35:
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn
10 (2) Informace pro SEQ ID NO: 36:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 321 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 36:
GACATCCAGA TGACCCAGTC TCCATCCTCC CTGTCTGCAT CTGTAGGGGA CAGAGTCACC €0
ATCACTTGTC GGGCAAGTCA GGGCATCAGA AATTACTTAG CCTGGTATCA GCAAAAACCA 120
GGGAAAGCCC CTAAGCTCCT GATCTATGCT GCATCCACTT TGCAATCAGG GGTCCCATCT 180
CGGTTCAGTG GCAGTGGATC TGGGACAGAT TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTACAGCCT 240
GAAGATGTTG CAACTTATTA CTGTCAAAGG TATAACCGTG CACCGTATAC TTTTGGCCAG 300
GGGACCAAGG TGGAAATCAA A 321
(2) Informace pro SEQ ID NO: 37:
(i) Charakteristika sekvence:
(A) Délka: 363 párů bází (B) Typ: nukleová kyselina (C) Řetězec: dvojitý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 37:
-57CZ 292465 B6
GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC TGGGGGAGGC TTGGTACAGC CCGGCAGGTC CCTGAGACTC 60
TCCTGTGCGG CCTCTGGATT CACCTITGAT GATTATGCCA TGCACTGGGT CCGGCAAGCT 120
CCAGGGAAGG GCCTGGAATG GGTCTCAGCT ATCACTTGGA ATAGTGGTCA CATAGACTAT 1Θ0
GCGGACTCTG TGGAGGGCCG ATTCACCATC TCCAGAGACA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAT 240
CTGCAAATGA ACAGTCTGAG AGCTGAGGAT ACGGCCGTAT ATTACTGTGC GAAAGTCTCG 300
TACCTTAGCA CCGCGTCCTC CCTTGACTAT TGGGGCCAAG GTACCCTGGT CACCGTCTCG 360
AGT 363
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (58)

1. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, s těmito charakteristikami:
a. disociuje z lidského TNFa s rychlostní konstantou Koff 1 x 10'3s_1 nebo menší, stanove-
10 no povrchovou plazmonovou rezonancí,
b. má CDR3 doménu lehkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou substitucí alaninu v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými
15 substitucemi v pozicích 1, 3,4, 6, 7, 8 a/nebo 9,
c. má CDR3 doménu těžkého řetězce obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou substitucí alaninu v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselino-
20 vými substitucemi v pozicích 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12.
2. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, která disociuje z lidského TNFa s Kd 1 x 10'8 M nebo nižší a rychlostní konstantou Koff 1 x 10‘3 s’1 nebo menší, obojí stanoveno povrchovou plazmovou rezonancí, a neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve
25 standardním in vitro L929 testu s IC5o 1 x 10‘7 M nebo menší.
3. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 2, která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standardním in vitro L929 testu s IC501 x ΙΟ’8 M nebo menší.
30
4. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 2, která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standardním in vitro L929 testu s IC50 1 x ΙΟ'9 M nebo menší.
5. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 2, která neutralizuje cytotoxicitu lidského TNFa ve standardním in vitro L929 testu s IC501 x 10’I0M nebo menší.
6. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 2, kterou je rekombinantní protilátka nebo její antigen-vazebná část.
7. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 2, která inhibuje
40 lidským TNFa indukovanou expresi ELAM-1 na endotelových buňkách lidské pupečníkové žíly.
-58CZ 292465 B6
8. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 1 nebo 2, nebo její antigen-vazebná část, která disociuje z lidského TNFa s rychlostní konstantou Koff 5 x 1OV nebo menší.
9. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 1 nebo 2, nebo její antigen vazebná část, která 5 disociuje z lidského TNFa s rychlostní konstantou Κοα 1 x 10-4 s’1 nebo menší.
10. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou alaninovou substitucí io v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 a s variabilním regionem těžkého řetězce HCVR majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou alaninovou substitucí v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 nebo 11.
11. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 10, kde LCVR má 15 dále CDR2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5 a HCVR má dále
CDR 2 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6.
12. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 11, kde LCVR má dále CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7 a HCVR má dále
20 CDR1 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8.
13. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, s variabilním regionem lehkého řetězce (LCVR) obsahujícím aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1 a s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) obsahujícím aminokyselinou sekvenci SEQ ID
25 NO: 2.
14. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 13, která má konstantní region těžkého řetězce IgGl.
30
15. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 13, která má konstantní region těžkého řetězce IgG4.
16. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 13, kterou je Fab fragment.
35
17. Izolovaná lidská protilátka podle nároku 13, kterou je jednořetězcový Fv fragment.
18. Izolovaná lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 1, s variabilním regionem lehkého řetězce LCVR majícím CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO:12,
40 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO:17,
SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO:22,
SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 nebo s variabilním regionem těžkého řetězce (HCVR) majících CDR3 doménu obsahující aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se ze SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 45 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 a SEQ ID NO: 34.
19. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, která neutralizuje aktivitu lidského TNFa, ale ne aktivitu lidského TNFP, a má identifikační charakteristiky protilátky podle kteréhokoli z nároků 1 až 18.
20. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 19, která také neutralizuje aktivitu šimpanzího TNFa a alespoň jednoho dalšího primátího TNFa vybraného ze skupiny skládající se z paviáního TNFa, kosmaního TNFa, TNFa makaka (cynomolgus) a TNFa makaka rhesus.
-59CZ 292465 B6
21. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 20, která také neutralizuje aktivitu psího TNFa.
22. Rekombinantní lidská protilátka, nebo její antigen-vazebná část, podle nároku 20, která také neutralizuje aktivitu prasečího TNFa.
23. Izolovaná nukleová kyselina kódující lehký řetězec protilátky podle nároku 1, kde CDR3 doména obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 3, nebo sekvenci modifikovanou ze SEQ ID NO: 3 jednou alaninovou substituci v pozici 1, 4, 5, 7 nebo 8 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 1, 3, 4, 6, 7, 8 a/nebo 9.
24. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 23, která kóduje variabilní region lehkého řetězce LCVR protilátky.
25. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 24, kde CDR2 doména LCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 5.
26. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 25, kde CDR1 doména LCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 7.
27. Izolovaná nukleová kyselina kódující těžký řetězec protilátky podle nároku 1, kde CDR3 doména obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 4, nebo modifikovanou ze SEQ ID NO: 4 jednou alaninovou substitucí v pozici 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 nebo 11 nebo jednou až pěti konzervativními aminokyselinovými substitucemi v pozicích 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 a/nebo 12.
28. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 27, která kóduje variabilní region těžkého řetězce HCVR protilátky.
29. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 28, kde CDR2 doména HCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 6.
30. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 29, kde CDR1 doména HCVR protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 8.
31. Izolovaná nukleová kyselina kódující lehký nebo těžký řetězec protilátky podle nároku 1, kde CDR3 doména obsahuje aminokyselinovou sekvenci vybranou ze skupiny skládající se z:
c) SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 11-26 lehkého řetězce,
d) SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 27-34 těžkého řetězce.
32. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 24, kde variabilní region lehkého řetězce protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1.
33. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 32, která kóduje variabilní region lehkého řetězce protilátky a konstantní region lehkého řetězce protilátky.
34. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 33, která je v rekombinantním expresním vektoru.
35. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 28, kde variabilní region těžkého řetězce protilátky obsahuje aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2.
-60CZ 292465 B6
36. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 35, která kóduje variabilní region těžkého řetězce protilátky a konstantní region těžkého řetězce protilátky.
37. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 36, kde konstantní regionem těžkého řetězce protilátky je konstantní region IgGl.
38. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 36, kde konstantní regionem těžkého řetězce protilátky je konstantní region IgG4.
39. Izolovaná nukleová kyselina podle nároku 37, která je v rekombinantním expresním vektoru.
40. Rekombinantní expresní vektor kódující:
a) lehký řetězec protilátky mající variabilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 1.
b) těžký řetězec protilátky mající variabilní region obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID NO: 2.
41. Hostitelská buňka, do které byl vložen rekombinantní expresní vektor podle nároku 40.
42. Způsob syntézy lidské protilátky, která se váže na lidský TNFa, podle nároku 13, v y z n a čující se tím, že zahrnuje kultivaci hostitelské buňky podle nároku 41 v kultivačním médiu, dokud není lidská protilátka, která se váže na lidský TNFa, syntetizována buňkou.
43. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že zahrnuje protilátku, nebo její antigen vazebnou část, podle kteréhokoli z nároků 1 až 22 a farmaceuticky přijatelný nosič.
44. Farmaceutický přípravek podle nároku 43, vyznačující se tím, že dále zahrnuje alespoň jedno další terapeutické činidlo pro léčbu onemocnění, při kterém je aktivita TNFa škodlivá.
45. Použití protilátky nebo její antigen-vazebné části podle kteréhokoli z nároků 1 až 22 pro výrobu léčiva pro léčbu onemocnění, při kterém je aktivita TNFa škodlivá.
46. Použití podle nároku 45, kde onemocněním je sepse.
47. Použití podle nároku 45, kde onemocnění je autoimunitní onemocnění.
48. Použití podle nároku 45, kde autoimunitní onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se z revmatoidní artritidy, revmatoidní spondylitidy, osteoartritidy a dravé artritidy.
49. Použití podle nároku 45, kde autoimunitní onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se z alergie, roztroušené sklerózy, autoimunitního diabetů, autoimunitní uveitidy a nefrotického syndromu.
50. Použití podle nároku 45, kde onemocnění je infekční onemocnění.
51. Použití podle nároku 45, kde onemocnění je rejekce transplantátu nebo reakce štěpu proti hostiteli.
52. Použití podle nároku 45, kde onemocnění je malignita.
53. Použita podle nároku 45, kde onemocnění je plicní onemocnění.
-61 CZ 292465 B6
54. Použití podle nároku 45, kde onemocnění je střevní onemocnění.
55. Použití podle nároku 45, kde onemocnění je srdeční onemocnění.
56. Použití podle nároku 45, kde onemocnění je vybráno ze skupiny skládající se ze zánětlivých onemocnění kostí, resorpčních onemocnění kostí, alkoholické hepatitidy, virové hepatitidy, fulminantní hepatitidy, poruch koagulace, popálenin, reperfusního poškození, tvorby keloidů, tvorby jizevnaté tkáně, pyrexie, onemocnění periodontu, obezity a radiační toxicity.
57. Protilátka nebo její antigen vazebná část podle kteréhokoli v nároků 1 až 22 pro použití v terapii.
58. Protilátka nebo její antigen vazebná část podle kteréhokoliv z nároků 1 až 22 v kombinaci s alespoň jedním dalším terapeutickým činidlem pro použití při léčbě onemocnění, při kterém je aktivita TNFa škodlivá.
CZ19982476A 1996-02-09 1997-02-10 Lidské protilátky k lidskému TNFalfa CZ292465B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ247698A3 CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
CZ292465B6 true CZ292465B6 (cs) 2003-09-17

Family

ID=26707297

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19982476A CZ292465B6 (cs) 1996-02-09 1997-02-10 Lidské protilátky k lidskému TNFalfa

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (cs)
EP (1) EP0929578B1 (cs)
JP (8) JP3861118B2 (cs)
KR (1) KR100317188B1 (cs)
CN (5) CN103275221B (cs)
AT (1) ATE239041T1 (cs)
AU (1) AU722077B2 (cs)
BG (7) BG107537A (cs)
BR (3) BRPI9707379B8 (cs)
CA (1) CA2243459C (cs)
CY (2) CY2463B1 (cs)
CZ (1) CZ292465B6 (cs)
DE (4) DE122004000003I1 (cs)
DK (1) DK0929578T3 (cs)
ES (1) ES2198552T3 (cs)
HK (8) HK1066860A1 (cs)
HU (4) HU230048B1 (cs)
IL (4) IL125697A (cs)
LU (1) LU91062I2 (cs)
MX (1) MX336813B (cs)
NL (1) NL300143I2 (cs)
NO (6) NO316711B1 (cs)
NZ (5) NZ536216A (cs)
PL (2) PL188192B1 (cs)
PT (1) PT929578E (cs)
RO (2) RO119831B1 (cs)
RU (3) RU2270030C2 (cs)
SI (1) SI9720020B (cs)
SK (1) SK284040B6 (cs)
TR (1) TR199801532T2 (cs)
UA (2) UA57726C2 (cs)
WO (1) WO1997029131A1 (cs)

Families Citing this family (460)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
DE10399036I1 (de) * 1989-08-07 2004-04-01 Peptide Technology Ltd Bindeligande für Tumornekrosisfaktor.
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6830751B1 (en) 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
CN103275221B (zh) * 1996-02-09 2016-08-17 艾伯维生物技术有限公司 结合人TNFα的人抗体
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
CA2288994C (en) * 1997-04-30 2011-07-05 Enzon, Inc. Polyalkylene oxide-modified single chain polypeptides
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
EP1141286B1 (en) 1998-12-14 2006-10-18 Genetics Institute, LLC Cytokine receptor chain
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
AU756677B2 (en) * 1999-03-02 2003-01-23 Centocor Inc. Anti-TNFalpha antibodies in therapy of asthma
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
DE60037750T2 (de) * 1999-10-06 2009-01-08 Abbott Gmbh & Co. Kg Zusammensetzung enthaltend einen tnf-alpha inhibitor und einen integrin alphavbeta3 rezeptorantagonist
HUP0300423A3 (en) 2000-02-10 2008-07-28 Abbott Lab Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
KR100919593B1 (ko) 2000-06-29 2009-09-29 아보트 러보러터리즈 이중 특이성 항체 및 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 조성물
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
ES2390425T3 (es) 2000-12-22 2012-11-12 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores
ATE325865T1 (de) * 2001-01-16 2006-06-15 Regeneron Pharma Isolierung von sezernierte proteine exprimierenden zellen
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
WO2002076196A1 (en) 2001-03-22 2002-10-03 Abbott Gmbh & Co. Kg Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
SG173211A1 (en) 2001-06-26 2011-08-29 Amgen Inc Antibodies to opgl
AU2002316384A1 (en) * 2001-06-26 2003-03-03 Photomed Technologies, Inc. Multiple wavelength illuminator
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI334439B (en) 2001-08-01 2010-12-11 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
AU2002341766A1 (en) * 2001-09-20 2003-04-01 Genstar Therapeutics Corporation Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
WO2003028630A2 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Genetics Institute Llc. Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
AU2003218432A1 (en) * 2002-03-26 2003-10-13 Centocor, Inc. Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
CN102755646A (zh) * 2002-07-19 2012-10-31 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
AU2003265361A1 (en) * 2002-08-28 2004-03-19 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
EP2316852B1 (en) * 2002-11-08 2014-03-05 Ablynx N.V. Stabilized single domain antibodies
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
CN100434440C (zh) * 2002-12-02 2008-11-19 阿布格尼克斯公司 针对肿瘤坏死因子的抗体及其用途
EP1578782A4 (en) * 2002-12-30 2007-09-12 Amgen Inc COSTIMULATING FACTORIAL THERAPY
EP1590431A4 (en) * 2003-01-08 2009-12-23 Applied Molecular Evolution ALPHA TUMOR NECROSIS FACTOR MOLECULES
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
KR20050092029A (ko) * 2003-01-10 2005-09-16 아블린쓰 엔.브이. 폰 빌레브란트 인자(ｖＷＦ) 또는 콜라겐에 대한낙타과로부터의 재조합 ＶＨＨ 단일 도메인 항체
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
DE602004025332D1 (de) * 2003-03-14 2010-03-18 Wyeth Corp Antikörper gegen il21-rezeptor und deren verwendung
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
CN1925843A (zh) 2003-12-02 2007-03-07 细胞免疫科学公司 生产单克隆抗体的方法和组合物
PL1711528T3 (pl) 2003-12-23 2012-11-30 Genentech Inc Leczenie nowotworu nowymi przeciwciałami monoklonalnymi anty-IL13
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US7625549B2 (en) * 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
AU2005227313A1 (en) 2004-03-19 2005-10-06 Amgen Inc. Reducing the risk of human and anti-human antibodies through V gene manipulation
TWI439284B (zh) * 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
EP1773394A2 (en) * 2004-08-05 2007-04-18 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Antagonizing interleukin-21 receptor activity
US20060083741A1 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Hoffman Rebecca S Treatment of respiratory syncytial virus (RSV) infection
WO2007001420A2 (en) * 2004-10-22 2007-01-04 Genencor International, Inc. Isolating human antibodies
CN103169965A (zh) 2004-11-19 2013-06-26 比奥根艾迪克Ma公司 治疗多发性硬化
PL1850873T3 (pl) 2005-02-08 2019-06-28 Genzyme Corporation Przeciwciała przeciwko tgfbeta
EP1848743A2 (en) * 2005-02-14 2007-10-31 Wyeth Interleukin-17f antibodies and other il-17f signaling antagonists and uses therefor
CA2596986A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Use of il-17f in diagnosis and therapy of airway inflammation
US20090124993A1 (en) 2005-02-17 2009-05-14 Burkly Linda C Treating neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
WO2006122187A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Biogen Idec Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
KR101465456B1 (ko) 2005-05-16 2014-11-27 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 미란성 다발관절염의 치료를 위한 ｔｎｆ 억제제의 용도
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
WO2006133287A2 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
AU2006255415B2 (en) 2005-06-07 2011-10-06 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Stable and soluble antibodies inhibiting TNFalpha
WO2006138181A2 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Amgen Inc. Self-buffering protein formulations
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
AU2006261357A1 (en) * 2005-06-17 2006-12-28 Zimmer Spine Austin, Inc. Improved method of treating degenerative spinal disorders
CN101500606B (zh) * 2005-06-24 2013-12-04 杜克大学 基于热反应生物聚合物的直接药物送递***
JP2009508470A (ja) * 2005-07-21 2009-03-05 アボット・ラボラトリーズ Ｓｏｒｆ構築物並びにポリタンパク質、プロタンパク質及びタンパク質分解による方法を含む複数の遺伝子発現
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
EP2500356A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
MY169746A (en) 2005-08-19 2019-05-14 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
ES2542501T3 (es) 2005-09-30 2015-08-06 Abbvie Deutschland Gmbh & Co Kg Dominios de unión de proteínas de la familia de proteínas de moléculas de orientación repulsiva (RGM) y fragmentos funcionales de las mismas, así como su uso
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
TWI424161B (zh) * 2005-11-01 2014-01-21 Abbvie Biotechnology Ltd 利用生物標記診斷關節黏連脊椎炎之方法及組合物
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
AU2006320392B2 (en) 2005-11-30 2013-01-17 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Monoclonal antibodies against amyloid beta protein and uses thereof
ES2527661T3 (es) 2005-11-30 2015-01-28 Abbvie Inc. Método de exploración, proceso para purificar oligómeros Abeta no difundibles, anticuerpos selectivos contra dichos oligómeros Abeta no difundibles y un proceso para fabricar dichos anticuerpos
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
CA2634034A1 (en) 2005-12-20 2007-06-28 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
NZ569988A (en) 2006-02-01 2011-09-30 Cephalon Australia Pty Ltd Domain antibody construct which binds to human TNF-alpha and contains a modified hinge region sequence and a truncated CH1 domain
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
EP3088410A3 (en) * 2006-04-05 2016-12-28 AbbVie Biotechnology Ltd Antibody purification
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
EP2666478A3 (en) 2006-04-10 2014-10-22 AbbVie Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriasis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
EP2012586A4 (en) * 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
EP2043711A4 (en) 2006-06-30 2017-08-30 AbbVie Biotechnology Ltd Automatic injection device
CN101512008B (zh) 2006-09-08 2015-04-01 艾伯维巴哈马有限公司 白介素-13结合蛋白
SG174804A1 (cs) 2006-09-13 2011-10-28 Abbott Lab
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
EP2684895A1 (en) 2006-10-27 2014-01-15 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-hTNFalpha antibodies
EP2099454A4 (en) 2006-11-17 2010-11-10 Abbott Lab AMINOPYRROLIDINES AS CHEMOKINE RECEPTOR ANTAGONISTS
NZ598345A (en) 2006-11-21 2013-09-27 Kalobios Pharmaceuticals Inc Methods of treating chronic inflammatory diseases using a gm-csf antagonist
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
EP2114443A4 (en) 2006-12-29 2011-08-10 Abbott Lab IL-1A / IL-1B ANTIBODY WITH DOUBLE SPECIFICITY
KR20150038227A (ko) * 2007-01-16 2015-04-08 애브비 인코포레이티드 건선의 치료방법
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
PL2148691T3 (pl) 2007-02-05 2015-12-31 Apellis Pharmaceuticals Inc Analogi kompstatyny do stosowania w leczeniu stanów zapalnych układu oddechowego
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
CN101668771B (zh) 2007-03-12 2013-08-21 艾斯巴技术,爱尔康生物医药研究装置有限责任公司 单链抗体的基于序列的工程改造和最优化
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
EP2165194A4 (en) 2007-05-31 2010-09-08 Abbott Lab BIOMARKERS FOR PREDICTING RESPONSABILITY TO TNF ALPHA INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISEASES
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
CA2683801A1 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
EA200901494A1 (ru) * 2007-06-06 2010-06-30 Домантис Лимитед Способы селекции протеазоустойчивых полипептидов
EP2171451A4 (en) 2007-06-11 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd METHOD FOR TREATING JUVENILIAN IDIOPATHIC ARTHRITIS
TWI614028B (zh) 2007-06-14 2018-02-11 百健Ｍａ公司 抗體調配物
EP2158315B1 (en) * 2007-06-25 2016-03-23 ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit LLC Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
EP2164961B1 (en) * 2007-06-25 2015-01-07 ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit LLC Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
CN101848733A (zh) * 2007-07-13 2010-09-29 艾博特生物技术有限公司 用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物
MX2010001488A (es) 2007-08-08 2010-03-01 Abbott Lab Composiciones y metodos para cristalizar anticuerpos.
WO2009025846A2 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
JP5759722B2 (ja) * 2007-08-28 2015-08-05 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド アダリムマブの結合蛋白質を含む組成物及び方法
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
BRPI0817233A2 (pt) 2007-09-28 2012-11-06 Intrexon Corp construções terapêuticas de gene de trca e bireatores para a expressão de moléculas bioterapêuticas, e usos das mesmas
CA2706700A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
KR20190045414A (ko) 2007-11-30 2019-05-02 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 단백질 제형 및 이의 제조방법
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
CN101965514A (zh) * 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
WO2009090189A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co.Kg Powdered protein compositions and methods of making same
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
SG190627A1 (en) 2008-03-13 2013-06-28 Biotest Ag Agent for treating disease
CN102027017A (zh) 2008-03-13 2011-04-20 生物测试股份公司 一种治疗疾病的试剂
JP5795167B2 (ja) 2008-03-13 2015-10-14 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 疾患治療剤
US8178092B2 (en) 2008-03-18 2012-05-15 Abbott Laboratories Methods of treating psoriasis by administration of antibodies to the p40 subunit of IL-12 and/or IL-23
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
KR20110014607A (ko) 2008-04-29 2011-02-11 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
NZ588713A (en) 2008-05-09 2012-10-26 Abbott Gmbh & Co Kg Antibodies to receptor of advanced glycation end products (rage) and uses thereof
JPWO2009142186A1 (ja) * 2008-05-20 2011-09-29 株式会社カネカ 細胞障害性組成物
TW201008580A (en) 2008-06-03 2010-03-01 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
BRPI0913366A8 (pt) 2008-06-03 2017-07-11 Abbott Lab Imunoglobulinas de domínio variável duplo e seus usos
EP3722310A1 (en) 2008-06-25 2020-10-14 Novartis AG Stable and soluble antibodies inhibiting vegf
PT3241843T (pt) 2008-06-25 2021-09-10 Novartis Ag Otimização da solubilidade de imunoligantes
ES2861592T3 (es) 2008-06-25 2021-10-06 Novartis Ag Anticuerpos estables y solubles que inhiben el TNF
EP3412300A1 (en) 2008-06-27 2018-12-12 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
NZ590667A (en) * 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
WO2010006059A1 (en) 2008-07-08 2010-01-14 Abbott Laboratories Prostaglandin e2 binding proteins and uses thereof
US8822645B2 (en) 2008-07-08 2014-09-02 Abbvie Inc. Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2011002153A (es) * 2008-08-28 2011-03-29 Wyeth Llc Usos de citocinas de las familias de interleucina-22, interleucina-17 e interleucina-1 en enfermedades autoinmunitarias.
DK2340039T3 (en) * 2008-10-07 2016-02-29 Univ Nat Cheng Kung Use of IL-20 antagonists for treating osteoporosis
CN102272154A (zh) 2008-10-29 2011-12-07 惠氏有限责任公司 单域抗原结合性分子的纯化方法
KR101581986B1 (ko) 2008-10-29 2016-01-04 아블린쓰 엔.브이. 단일 도메인 항원 결합 분자의 제형
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
CN104398471A (zh) * 2008-11-28 2015-03-11 Abbvie公司 稳定的抗体组合物和用于稳定其的方法
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
BRPI0923806A2 (pt) 2008-12-30 2015-07-14 Centocor Ortho Biotech Inc Marcadores séricos para previsão da resposta clínica a anticorpos anti-tnfa em pacientes com espondilite anquilosante
EP3543256A1 (en) 2009-01-12 2019-09-25 Cytomx Therapeutics Inc. Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
EP2398494A4 (en) * 2009-02-23 2015-10-28 Cytomx Therapeutics Inc Proproteins and their methods of use
US8030026B2 (en) 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
EP2772269A3 (en) 2009-03-05 2015-01-14 Abbvie Inc. IL-17 binding proteins
US8722860B2 (en) 2009-04-16 2014-05-13 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-TNF-α antibodies and their uses
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
WO2010127146A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Abbott Biotechnology Ltd Automatic injection device
CN102458469B (zh) * 2009-05-04 2014-12-24 艾伯维生物技术有限公司 人抗TNF-α抗体的稳定高蛋白质浓度制剂
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
CA2804755C (en) * 2009-08-14 2018-06-05 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Modified vasoactive intestinal peptides
NZ598464A (en) * 2009-08-21 2014-07-25 Gilead Biologics Inc Methods and compositions for treatment of pulmonary fibrotic disorders
KR20120089659A (ko) 2009-08-29 2012-08-13 아보트 러보러터리즈 치료용 ｄｌｌ4 결합 단백질
WO2011028811A2 (en) 2009-09-01 2011-03-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2012114854A (ru) * 2009-09-14 2013-10-27 Эбботт Лэборетриз Способы лечения псориаза
US20110071054A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-24 Xbiotech, Inc. Panel of monoclonal antibody containing pharmaceutical compositions
EP3187877A1 (en) 2009-09-25 2017-07-05 XOMA Technology Ltd. Screening methods
CN102666875A (zh) 2009-10-15 2012-09-12 雅培制药有限公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
CN104634955B (zh) * 2009-10-26 2016-09-14 雀巢产品技术援助有限公司 检测抗-tnf药物和自身抗体的试验
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2493923A1 (en) * 2009-10-30 2012-09-05 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
US8420083B2 (en) 2009-10-31 2013-04-16 Abbvie Inc. Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
EP2499491B1 (en) 2009-11-11 2015-04-01 Gentian AS Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
CN113717286A (zh) 2009-12-08 2021-11-30 Abbvie德国有限责任两合公司 用于在视网膜神经纤维层变性治疗中使用的针对rgm a蛋白质的单克隆抗体
BR112012014710A2 (pt) 2009-12-15 2017-07-25 Abbott Biotech Ltd botão de ignição aperfeiçoado para dispositivo de injeção automática
US20110150891A1 (en) * 2009-12-16 2011-06-23 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
WO2011097301A2 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PREDICTING RESPONSIVENESS TO TREATMENT WITH TNF-α INHIBITOR
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
MX348312B (es) 2010-03-02 2017-06-06 Abbvie Inc Proteínas terapéuticas de enlace dll4.
NZ603045A (en) 2010-04-07 2014-11-28 Abbvie Inc Tnf-alpha binding proteins
EP2558494B1 (en) 2010-04-15 2018-05-23 AbbVie Inc. Amyloid-beta binding proteins
ME03813B (me) 2010-04-16 2021-04-20 Biogen Ma Inc Anti-vla-4 antitela
JP5809242B2 (ja) 2010-04-21 2015-11-10 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド 治療薬の制御送達のための装着型自動注入装置
KR101539684B1 (ko) 2010-05-14 2015-07-27 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ－１ 결합 단백질
WO2011146727A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of treating interstitial cystitis
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
US20120009196A1 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20120100166A1 (en) 2010-07-15 2012-04-26 Zyngenia, Inc. Ang-2 Binding Complexes and Uses Thereof
CN103298834A (zh) 2010-08-03 2013-09-11 Abbvie公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途
MX358739B (es) 2010-08-14 2018-09-03 Abbvie Inc Star Proteinas de union a amiloide beta.
HRP20220405T1 (hr) 2010-08-19 2022-05-27 Zoetis Belgium S.A. Protutijela protiv ngf i njihova upotreba
US9046513B2 (en) 2010-08-26 2015-06-02 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY33679A (es) 2010-10-22 2012-03-30 Esbatech Anticuerpos estables y solubles
CA2811805A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Abbvie Inc. Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
UY33702A (es) * 2010-11-02 2012-05-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
NZ609469A (en) 2010-11-11 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved high concentration anti-tnfα antibody liquid formulations
HUE031267T2 (en) 2010-11-23 2017-06-28 Abbvie Ireland Unlimited Co Methods of treatment using selective BCL-2 inhibitors
SI2643322T1 (en) 2010-11-23 2018-01-31 Abbvie Inc. Salts and crystalline forms of an apoptosis induction agent
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
CA2821976A1 (en) 2010-12-21 2012-09-13 Abbvie Inc. Il-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
TW201307388A (zh) 2010-12-21 2013-02-16 Abbott Lab Ｉｌ－１結合蛋白
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
KR101702339B1 (ko) 2011-01-24 2017-02-03 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 주사기로부터 니들 실드의 제거 및 자동 주사 디바이스들
WO2012101629A1 (en) 2011-01-24 2012-08-02 Elcam Medical Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
EP2667918B1 (en) 2011-01-24 2017-03-01 AbbVie Biotechnology Ltd Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
WO2012129174A1 (en) 2011-03-18 2012-09-27 Abbott Laboratories Systems. devices and methods for assembling automatic injection devices and sub-asseblies thereof
TWI803876B (zh) 2011-03-28 2023-06-01 法商賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
WO2012135524A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Abbott Laboratories Improved shroud deployment in automatic injection devices
WO2012145752A2 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Abbott Laboratories Wearable automatic injection device for controlled administration of therapeutic agents
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
DK2714738T3 (en) 2011-05-24 2019-01-28 Zyngenia Inc MULTIVALENT AND MONOVALENT MULTISPECIFIC COMPLEXES AND THEIR APPLICATIONS
PT3575792T (pt) 2011-05-31 2023-02-28 Biogen Ma Inc Método de avaliação do risco de lmp
US9561262B2 (en) 2011-06-06 2017-02-07 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
EP3574919A1 (en) 2011-07-13 2019-12-04 AbbVie Inc. Methods and compositions for treating asthma using anti-il-13 antibodies
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
CN103917555A (zh) * 2011-08-01 2014-07-09 艾瓦夏生物制剂公司 人tnf特异性的牛科动物多克隆抗体
AR088403A1 (es) * 2011-10-20 2014-05-28 Esbatech A Novartis Co Llc Anticuerpo de union a multiples antigenos estable
BR112014009810A2 (pt) 2011-10-24 2017-04-25 Abbvie Inc imunoligantes biespecíficos dirigidos contra tnf e il-17
JP2014534218A (ja) 2011-10-24 2014-12-18 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｔｎｆを標的とする免疫結合剤
CN104203978A (zh) 2011-10-24 2014-12-10 艾伯维股份有限公司 针对硬化蛋白的免疫结合剂
EP2786156A2 (en) 2011-11-30 2014-10-08 AbbVie Deutschland GmbH & Co KG Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
CA2855840C (en) 2011-12-14 2023-08-29 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
EP2791175A2 (en) 2011-12-14 2014-10-22 Abbvie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
US20150010544A1 (en) 2011-12-16 2015-01-08 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
JP2015508994A (ja) 2011-12-30 2015-03-26 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｉｌ−１３および／またはｉｌ−１７に対する二重可変ドメイン免疫グロブリン
EP2915818A3 (en) 2011-12-30 2015-11-11 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20130330347A1 (en) 2012-01-27 2013-12-12 Abbvie Inc. Composition and method for the diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration
SG10201609982PA (en) 2012-03-07 2017-01-27 Cadila Healthcare Ltd Pharmaceutical formulations of tnf-alpha anitbodies
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
JP6629069B2 (ja) 2012-06-06 2020-01-15 ゾエティス・エルエルシー イヌ化抗ｎｇｆ抗体およびその方法
SG11201408161RA (en) 2012-06-08 2015-01-29 Sutro Biopharma Inc Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
AR091755A1 (es) 2012-07-12 2015-02-25 Abbvie Inc Proteinas de union a il-1
EP2890402B1 (en) 2012-08-31 2019-04-17 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
CA2883272A1 (en) 2012-09-02 2014-03-06 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
ES2784861T3 (es) 2012-09-07 2020-10-01 Coherus Biosciences Inc Formulaciones acuosas estables de adalimumab
SI2897978T1 (sl) * 2012-09-19 2017-05-31 Abbvie Biotherapeutics Inc. Postopki za identifikacijo protiteles z zmanjšano imunogenostjo
TW202033215A (zh) 2012-11-01 2020-09-16 美商艾伯維有限公司 穩定雙重可變區域免疫球蛋白蛋白質調配物
RU2636043C2 (ru) 2012-11-01 2017-11-17 Эббви Инк. Анти-vegf/dll4-иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применения
TWI745610B (zh) 2012-11-14 2021-11-11 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
US9550986B2 (en) 2012-12-21 2017-01-24 Abbvie Inc. High-throughput antibody humanization
US20140219913A1 (en) 2012-12-28 2014-08-07 Abbvie, Inc. Dual Specific Binding Proteins Having a Receptor Sequence
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
CN104955480A (zh) 2013-01-25 2015-09-30 西蒙有限公司 用于选择性减少循环的生物活性可溶性tnf的组合物以及用于治疗tnf介导的疾病的方法
CN105308068A (zh) 2013-02-13 2016-02-03 法国化学与生物科技实验室 高度半乳糖基化的抗TNF-α抗体及其用途
CA2905010A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
EP2971046A4 (en) 2013-03-14 2016-11-02 Abbott Lab MONOCLONAL ANTIBODIES WITH LIPID BINDING TO THE HEART OF HCV
CA2899308C (en) 2013-03-14 2017-04-18 Abbvie Inc. Low acidic species adalimumab compositions and uses thereof
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
CN105209616A (zh) 2013-03-14 2015-12-30 雅培制药有限公司 用于改进的抗体检测的hcv ns3重组抗原及其突变体
CA2899449A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US9194873B2 (en) 2013-03-14 2015-11-24 Abbott Laboratories HCV antigen-antibody combination assay and methods and compositions for use therein
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
AU2014227732A1 (en) 2013-03-15 2015-09-17 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 beta and IL-17
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
EP2968541A4 (en) 2013-03-15 2017-02-08 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
TW201446800A (zh) 2013-03-15 2014-12-16 Abbvie Inc 針對ＴＮＦα之雙特異性結合蛋白
AU2014269287B2 (en) * 2013-05-22 2016-08-25 Seoul National University Hospital Anti-TNF-alpha/CXCL10 double-targeting antibody and use thereof
ES2753419T3 (es) 2013-06-07 2020-04-08 Univ Duke Inhibidores del factor H del complemento
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
WO2015017683A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Malast Mary Antimicrobial compositions and methods of use
KR102332302B1 (ko) 2013-09-13 2021-12-01 제넨테크, 인크. 세포주에서 숙주 세포 단백질 및 재조합 폴리펩티드 생성물을 검출 및 정량화하기 위한 조성물 및 방법
CN105722532A (zh) 2013-09-13 2016-06-29 豪夫迈·罗氏有限公司 包含纯化的重组多肽的方法和组合物
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
BR112016007592A2 (pt) 2013-10-06 2018-01-23 Abbvie Inc proteína de ligação biespecífica que se liga a pelo menos dois alvos, conjugado de proteína de ligação biespecífica, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, método para produzir uma proteína de ligação biespecífica, método para determinar a reatividade de um paciente a um agente terapêutico que tem capacidade para modular a atividade de um tlr, método para ativar ou inibir células responsivas a tlr9, método para tratar um paciente que precisa de ativação de tlr9 ou inibição de tlr e método para identificar um inibidor ou estimulador de sinalização de tlr
EP3055298B1 (en) 2013-10-11 2020-04-29 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP3057616B1 (en) 2013-10-16 2020-03-11 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
JP2016540761A (ja) 2013-12-02 2016-12-28 アッヴィ・インコーポレイテッド 変形性関節症を治療するための組成物及び方法
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
ES2818823T3 (es) 2014-02-27 2021-04-14 Biogen Ma Inc Método de evaluación del riesgo de LMP
PT3116891T (pt) 2014-03-10 2020-05-18 Richter Gedeon Nyrt Purificação de imunoglobulina utilizando passos de pré-limpeza
CA2942101A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Abbvie Inc. Anti-egfr antibodies and antibody drug conjugates
AR099625A1 (es) * 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
US10688187B2 (en) 2014-04-02 2020-06-23 Intas Pharmaceuticals Ltd. Liquid pharmaceutical composition of adalimumab
CA2947982C (en) 2014-05-08 2022-11-29 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
EP3050557A1 (en) 2014-05-23 2016-08-03 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
WO2015198320A1 (en) 2014-06-24 2015-12-30 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
JP7037885B2 (ja) * 2014-06-30 2022-03-17 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ｐＨ依存性抗原結合を示す抗ＴＮＦａ抗体
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
US20160185848A1 (en) 2014-07-09 2016-06-30 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using sugars
TWI711629B (zh) * 2014-09-03 2020-12-01 德商包林格因蓋爾漢國際股份有限公司 靶向IL-23A與TNF-α之化合物及其用途
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
WO2016103093A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Pfizer Inc. Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
US10696735B2 (en) 2015-01-21 2020-06-30 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
US10688156B2 (en) 2015-02-09 2020-06-23 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating muscle disease and disorders
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
AR104809A1 (es) 2015-05-29 2017-08-16 Abbvie Inc Anticuerpos anti-cd40 y usos de los mismos
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
AU2017213775A1 (en) 2016-02-03 2018-08-16 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
EP3430044A1 (en) 2016-03-17 2019-01-23 Numab Innovation AG Anti-tnf alpha -antibodies and functional fragments thereof
DK3219726T3 (da) * 2016-03-17 2020-12-07 Tillotts Pharma Ag Anti-TNF-alfa-antistoffer og funktionelle fragmenter deraf
EP3440113A1 (en) 2016-04-08 2019-02-13 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
AU2017258097B2 (en) 2016-04-27 2019-10-24 Abbvie Inc. Methods of treatment of diseases in which IL-13 activity is detrimental using anti-IL-13 antibodies
BR112018074922B1 (pt) 2016-06-02 2022-10-25 Abbvie Inc Compostos agonistas de receptores de glucocorticoides, composição farmacêutica compreendendo ditos compostos e uso terapêutico dos mesmos
US20190153108A1 (en) 2016-06-08 2019-05-23 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
US20190153107A1 (en) 2016-06-08 2019-05-23 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
BR112018075653A2 (pt) 2016-06-08 2019-08-27 Abbvie Inc anticorpos anti-b7-h3 e conjugados anticorpo fármaco
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
AU2017277914A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
IL300274A (en) 2016-06-08 2023-04-01 Abbvie Inc Antibodies against B7–H3 and conjugates of drug and antibody
WO2017218698A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
US10751324B2 (en) 2016-09-02 2020-08-25 The University Of Chicago Treatment of TNF- alpha cytotoxicity
WO2018050902A2 (en) * 2016-09-15 2018-03-22 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers & octamers
AU2017339858B2 (en) 2016-10-03 2022-02-17 Abbott Laboratories Improved methods of assessing GFAP status in patient samples
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
EP3528787A4 (en) 2016-10-21 2020-05-06 Amgen Inc. PHARMACEUTICAL FORMULATIONS AND PROCESSES FOR THEIR PREPARATION
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
EP3551034A1 (en) 2016-12-07 2019-10-16 Progenity, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
BR112019011689A2 (pt) 2016-12-14 2019-10-22 Progenity Inc tratamento de uma doença do trato gastrointestinal com um inibidor de tnf
MA50134A (fr) 2016-12-16 2020-07-29 Bluefin Biomedicine Inc Anticorps anti-protéine 1 contenant un domaine anti-cub (cdcp1), conjugués anticorps-médicament et leurs méthodes d'utilisation
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
WO2018131893A1 (ko) 2017-01-11 2018-07-19 ㈜셀트리온 안정한 액체 제제
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
TWI832600B (zh) 2017-01-20 2024-02-11 美商健臻公司 骨靶向抗體
KR20190113858A (ko) 2017-01-30 2019-10-08 얀센 바이오테크 인코포레이티드 활성 건선성 관절염의 치료를 위한 항-tnf 항체, 조성물, 및 방법
WO2018147915A1 (en) 2017-02-07 2018-08-16 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active ankylosing spondylitis
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
JP7346300B2 (ja) 2017-03-23 2023-09-19 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーであるユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼｌ１を使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷の程度の診断及び決定の一助となるための方法
CA3050086A1 (en) 2017-03-26 2018-10-04 Mapi Pharma Ltd. Glatiramer depot systems for treating progressive forms of multiple sclerosis
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3610268A1 (en) 2017-04-15 2020-02-19 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
JP7416625B2 (ja) 2017-05-25 2024-01-17 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーを使用する、頭部への損傷を負ったヒト対象又は負った可能性があるヒト対象に対して、イメージングを実施するかどうかの決定の一助となるための方法
JP7269183B2 (ja) 2017-05-30 2023-05-08 アボット・ラボラトリーズ 心臓トロポニンｉを使用する、ヒト対象における軽度外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
EP3649474A1 (en) 2017-07-03 2020-05-13 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
WO2019067499A1 (en) 2017-09-27 2019-04-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. BIOMARKER SIGNATURE FOR PREDICTING A TUMOR RESPONSE TO ANTI-CD200 THERAPY
US10772970B2 (en) 2017-12-01 2020-09-15 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
BR112019028254A2 (pt) 2017-12-09 2020-07-14 Abbott Laboratories métodos para ajudar no diagnóstico e avaliação de um paciente que sofreu uma lesão ortopédica e que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, tal como uma lesão cerebral traumática (lct) leve, usando a proteína ácida fibrilar glial (gfap) e/ou a hidrolase carbóxi-terminal da ubiquitina l1 (uch-l1)
CA3067055A1 (en) 2017-12-09 2019-06-13 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a traumatic brain injury in a human subject using a combination of gfap and uch-l1
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
WO2019126536A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals Inc. Humanized anti-cd200 antibodies and uses thereof
KR20200130696A (ko) 2018-03-12 2020-11-19 조에티스 서비시즈 엘엘씨 항-ngf 항체 및 이의 방법
JP7331000B2 (ja) 2018-03-26 2023-08-22 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体ｃ３転換酵素のプロテアーゼ活性を測定するためのスループットの高い方法
WO2019236417A1 (en) 2018-06-04 2019-12-12 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
WO2019246313A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
WO2020010118A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Novartis Inflammasome Research, Inc. Methods of treating or selecting a treatment for a subject resistant to tnf inhibitor using a nlrp3 antagonist
WO2020076849A1 (en) 2018-10-11 2020-04-16 The Scripps Research Institute Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates
CN113347970A (zh) 2018-10-24 2021-09-03 诺华股份有限公司 用于治疗与nlrp活性相关的病症的化合物和组合物
JP2022506411A (ja) * 2018-11-05 2022-01-17 北京韓美薬品有限公司 抗ＴＮＦα／抗ＩＬ－１７Ａ天然抗体構造様ヘテロダイマー二重特異性抗体及びその製造方法
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
JP2022506891A (ja) 2018-11-13 2022-01-17 ノバルティス アーゲー Ｎｌｒｐ活性に関連する状態を処置するための化合物及び組成物
WO2020102100A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
WO2020106757A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
US20220098310A1 (en) 2018-12-06 2022-03-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
EP3960858A4 (en) 2018-12-25 2023-02-15 Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences SMALL RNA DRUG USED TO PREVENT AND TREAT INFLAMMATION-RELATED DISEASES AND COMBINATIONS THEREOF
CN113316566A (zh) 2019-01-22 2021-08-27 诺华股份有限公司 用于治疗与nlrp活性相关的病症的化合物和组合物
HUP1900112A1 (hu) 2019-04-04 2020-10-28 Richter Gedeon Nyrt Immunglobulinok affinitás kromatográfiájának fejlesztése kötést megelõzõ flokkulálás alkalmazásával
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
AU2020279987A1 (en) 2019-05-23 2021-11-18 Janssen Biotech, Inc. Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to IL-23 and TNF alpha
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CA3143478A1 (en) * 2019-07-09 2021-01-14 Tomer Hertz Antibodies with reduced immunogenicity
EP3870261B1 (en) 2019-12-13 2024-01-31 Biora Therapeutics, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
US20230061973A1 (en) 2020-02-05 2023-03-02 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
US20230095053A1 (en) 2020-03-03 2023-03-30 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
EP4136459A1 (en) 2020-04-13 2023-02-22 Abbott Laboratories Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample
US20220043000A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Abbott Laboratories Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
WO2022119841A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
CN117440967A (zh) 2020-12-09 2024-01-23 怡诺安有限公司 抗OX40L抗体、抗OX40L/抗TNFα双特异性抗体及其用途
KR20230154300A (ko) * 2020-12-18 2023-11-07 킨드레드 바이오사이언시스, 인코포레이티드 수의학용 tnf 알파 및 ngf 항체
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
IL308404A (en) 2021-04-27 2024-01-01 Generation Bio Co Non-viral DNA vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
WO2022232286A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
CA3216320A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Abbott Laboratories Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject
US20240118279A1 (en) 2021-06-14 2024-04-11 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
EP4341298A1 (en) * 2021-06-22 2024-03-27 University of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
AU2022354059A1 (en) 2021-09-30 2024-03-28 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023114978A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
US20230213536A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
EP0609722A1 (en) 1981-09-08 1994-08-10 The Rockefeller University An in vitro method for detecting the presence of invasive stimuli in mammals
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
ATE114673T1 (de) 1985-08-16 1994-12-15 Univ Rockefeller Modulator der anabolischen aktivität und seine verwendungen.
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
NZ229922A (en) 1988-07-18 1992-04-28 Chiron Corp Monoclonal antibodies specifically binding cachectin (tumor necrosis factor) and compositions
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
ZA902949B (en) * 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6498237B2 (en) * 1989-08-07 2002-12-24 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
DE10399036I1 (de) 1989-08-07 2004-04-01 Peptide Technology Ltd Bindeligande für Tumornekrosisfaktor.
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US7084260B1 (en) 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US20060246073A1 (en) * 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
AU668864B2 (en) * 1991-03-18 1996-05-23 Centocor Inc. Chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US5698195A (en) 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) * 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US6277969B1 (en) * 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US20070298040A1 (en) * 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US5328985A (en) 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
WO1993006213A1 (en) * 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
WO1994026910A1 (en) 1993-05-12 1994-11-24 Xoma Corporation Immunotoxins comprising gelonin and an antibody
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
WO1994008619A1 (en) * 1992-10-08 1994-04-28 The Kennedy Institute Of Rheumatology Treatment of autoimmune and inflammatory disorders
PT614984E (pt) * 1993-03-05 2001-12-28 Bayer Ag Anticorpos humanos anti-tnf
ES2138662T3 (es) 1993-06-03 2000-01-16 Therapeutic Antibodies Inc Produccion de fragmentos de anticuerpos.
WO1995011317A1 (en) 1993-10-19 1995-04-27 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
WO1995023813A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
WO1996000081A1 (en) 1994-06-24 1996-01-04 Immunex Corporation Controlled release polypeptide compositions and methods of treating inflammatory bowel disease
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
CN103275221B (zh) 1996-02-09 2016-08-17 艾伯维生物技术有限公司 结合人TNFα的人抗体
AU3633000A (en) * 1999-03-26 2000-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050249735A1 (en) * 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20030012786A1 (en) * 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) * 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) * 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
CN102755646A (zh) * 2002-07-19 2012-10-31 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US20090280065A1 (en) 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI439284B (zh) * 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
US20060083741A1 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Hoffman Rebecca S Treatment of respiratory syncytial virus (RSV) infection
KR101465456B1 (ko) * 2005-05-16 2014-11-27 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 미란성 다발관절염의 치료를 위한 ｔｎｆ 억제제의 용도
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
TWI424161B (zh) * 2005-11-01 2014-01-21 Abbvie Biotechnology Ltd 利用生物標記診斷關節黏連脊椎炎之方法及組合物
EP3088410A3 (en) * 2006-04-05 2016-12-28 AbbVie Biotechnology Ltd Antibody purification
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2012586A4 (en) 2006-04-10 2010-08-18 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF ANKYLOSANTE SPONDYLARTHRITIS
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
EP2043711A4 (en) 2006-06-30 2017-08-30 AbbVie Biotechnology Ltd Automatic injection device
SG174804A1 (cs) * 2006-09-13 2011-10-28 Abbott Lab
EP2684895A1 (en) 2006-10-27 2014-01-15 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-hTNFalpha antibodies
NZ598881A (en) 2007-03-29 2013-11-29 Abbvie Inc Crystalline anti-human il-12 antibodies
EP2165194A4 (en) * 2007-05-31 2010-09-08 Abbott Lab BIOMARKERS FOR PREDICTING RESPONSABILITY TO TNF ALPHA INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISEASES
WO2008150490A2 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
EP2171451A4 (en) 2007-06-11 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd METHOD FOR TREATING JUVENILIAN IDIOPATHIC ARTHRITIS
CN101848733A (zh) 2007-07-13 2010-09-29 艾博特生物技术有限公司 用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物
MX2010001488A (es) 2007-08-08 2010-03-01 Abbott Lab Composiciones y metodos para cristalizar anticuerpos.
KR20190045414A (ko) 2007-11-30 2019-05-02 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 단백질 제형 및 이의 제조방법
CN101965514A (zh) 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
WO2009090189A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Gmbh & Co.Kg Powdered protein compositions and methods of making same
WO2009091912A2 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Abbott Laboratories Improved mammalian expression vectors and uses thereof
CA2713342A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibody fragments
JP2011517672A (ja) 2008-03-24 2011-06-16 アボツト・バイオテクノロジー・リミテツド 骨損失を治療するための方法及び組成物
WO2010127146A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Abbott Biotechnology Ltd Automatic injection device
CN102458469B (zh) 2009-05-04 2014-12-24 艾伯维生物技术有限公司 人抗TNF-α抗体的稳定高蛋白质浓度制剂
WO2011097301A2 (en) 2010-02-02 2011-08-11 Abbott Biotechnology Ltd. METHODS AND COMPOSITIONS FOR PREDICTING RESPONSIVENESS TO TREATMENT WITH TNF-α INHIBITOR
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
NZ576716A (en) 2011-02-25
CY2463B1 (en) 2005-06-03
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
US8206714B2 (en) 2012-06-26
NZ512006A (en) 2005-05-27
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
CN1300173C (zh) 2007-02-14
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
NO20040052L (no) 1998-10-07
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
US7541031B2 (en) 2009-06-02
CN100429232C (zh) 2008-10-29
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
MX336813B (es) 2016-02-02
IL125697A0 (en) 1999-04-11
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
US7223394B2 (en) 2007-05-29
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
NO20040154L (no) 1998-10-07
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
CN1215407A (zh) 1999-04-28
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
NZ536216A (en) 2006-08-31
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
BG109311A (en) 2006-03-31
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
CN103275221A (zh) 2013-09-04
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
CN1504752A (zh) 2004-06-16
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
IL125697A (en) 2005-03-20
NO322755B1 (no) 2006-12-04
NZ562935A (en) 2009-06-26
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
UA82823C2 (en) 2008-05-26
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
IL218518A0 (en) 2012-04-30
AU2122997A (en) 1997-08-28
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
CA2243459C (en) 2002-09-17
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
CN103275221B (zh) 2016-08-17
NZ331579A (en) 2001-06-29
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
SI9720020B (en) 2001-12-31
MX9806347A (es) 1998-10-31
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
IL151641A0 (en) 2003-04-10
BG102755A (en) 1999-05-31
NO983627L (no) 1998-10-07
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
CN101712720A (zh) 2010-05-26
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
IL206994A0 (en) 2010-12-30
BR9707379A (pt) 1999-04-13
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
HU228630B1 (en) 2013-04-29
SI9720020A (sl) 1999-10-31
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
PL328411A1 (en) 1999-01-18
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
PT929578E (pt) 2003-09-30
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
NO316711B1 (no) 2004-04-13
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
SK106298A3 (en) 1999-03-12
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
BG112042A (bg) 2015-10-30
US8372400B2 (en) 2013-02-12
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
NO320657B1 (no) 2006-01-09
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
NO319955B1 (no) 2005-10-03
BG107537A (en) 2003-09-30
CN102070715A (zh) 2011-05-25
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
NO983627D0 (no) 1998-08-07
BG110703A (en) 2010-10-29
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
US6258562B1 (en) 2001-07-10
AU722077B2 (en) 2000-07-20
NO20026202L (no) 1998-10-07
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
US8753633B2 (en) 2014-06-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5951056B2 (ja) ヒトＴＮＦαに結合するヒト抗体
EP2397494B1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU775499B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769A1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
MXPA98006347A (en) Human antibodies that link human tnfalfa

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20170210