HU230048B1 - Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása - Google Patents

Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása Download PDF

Info

Publication number
HU230048B1
HU230048B1 HU1300152A HUP1300152A HU230048B1 HU 230048 B1 HU230048 B1 HU 230048B1 HU 1300152 A HU1300152 A HU 1300152A HU P1300152 A HUP1300152 A HU P1300152A HU 230048 B1 HU230048 B1 HU 230048B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
antibody
human
less
antigen
binding portion
Prior art date
Application number
HU1300152A
Other languages
English (en)
Inventor
Deborah J Allen
Hendricus R. J. M Hoogenboom
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A Mankovich
Brian T Mcguiness
Andrew J Roberts
Paul Sakorafas
Jochen G Salfeld
David Schoenhaut
Tristan J Vaughan
Michael White
Alison J Wilton
Original Assignee
Abbvie Biotechnology Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU230048(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Application filed by Abbvie Biotechnology Ltd filed Critical Abbvie Biotechnology Ltd
Publication of HU230048B1 publication Critical patent/HU230048B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Description

Humán INFü-kotő antitestek alkalmazásai
A találmány izolált humán anti-TÓFu antitestek vagy antigén-kötő részeinek alkaimazárára vonatkozik más terápiás szerekkel kombinációban rheumatoid arthritis vagy gyulladásos bélfoetecségek kezelésére alkalmas győgy szer készítmények. előállításában .
A tumor nekróxis faktor v. (TNFa) egy cirokén, amelyet számos sejt típus — beleértve a monicitákat a® makröfágokat — termel. A TNFú-t eredetileg annak alapján azonosították, hogy bizonyos egér tumorok nekrózisát (elhalását; tudta indukálni [lásd például: L, Old, Science, 130, 630-632 (1935) 1., Azt kova tőén egy eacheniával összefüggő, cacheotinnsk nevezett faktorról kiderítették, hogy ez a molekula azonos -a TKPa-val, A 77 7o résztvesz a sekk kczvetifásében [lásd például: B.Beutler, A.Garami, hont. Rév. Sioehem.., 57), 505-516 71/7(77; B.Bsutier, A.Cerami, Anno. Rév,
Immunoi., 7, 625-655 (1589}). A Tála szerepet játszik még számos humán betegség és rendellenesség patoíiziciógiájában, beleértve a szepszist, a fertőzéseket, az autoimmun betegségeket, a trar s. ρ, atuo: (kilökődést és a grazt-versus-bost betegséget [lásd például: A.Moeiler, et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990};
5,231,023 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás IMoeller et ai.); 263 610 31 számon közzétett európai szabadalmi iratok (A.Moeiier, et al.;; R.Vasilli, Anna. Rév. Immunoi., 10, éli-«52 (1992); R.ü7Tracey, A.Cerami, Annu. Rév, bed,, 35, 391.503 (1934)1,
Mivel a humán TNFa ChTNFa) a legkülönbözőbb humán betegsé2
-ν * gexfoerí káros hatást fejt terápiás stratégiát dolgoztak ki a hThFa aktivitásának gátlására vagy elhárításáraFőképpen olyan antitestek segítségével 'kísérelték szeg a hTKFa aktivitását gátelni, amelyek kötődnek a hTkba-hoz és art nettralizáiják. A legkorábbi ilyen antitestek közé tartoztak az egér monoklonális antitestek [mki-ek} , amelyeket hTNFcx-val immunizált egerek Iim~ rocrtáiböi előállított hibri dőmák szekretálnak [lásd például:;
TiHahn et ai,, Froc, habi, Acad. Sel., 62, 3814-3818 [1985}; G-M, Li&ng et al., Bioohem. Biophys. kés. Commun., 137, 847-654 (1986}; bhHirai, et ai . f J. Immunoi., Methods. , 96, 57-62 [1987} ; 3.M. Fendl.y et ai., Kybridoma, 6, 359-370: [1967); A.Mcelier et al., Gytokine, 2, 162-169 t1990}; 5,211,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás [Moaller et el.}; 186 833 81 számon, közzétett európai szabadalmi iratok [D,Öaliaoh}; 118 868
M számon közzétett európai szabadalmi bejelentés [Old et al,}; 260 610: Bi számon közzétett európai szabadalmi íratok (A,Moeller et al.,} j: , Bár ezek az egér anti-hTNFa antitestek gyakran erős affinitást fejtettek ki a hTNFa-vai szemben [például: Ke; < 10 M} és képesek voltak a hTNFa aktivitás neatraUralására, in vivő használatukat olyan problémák korlátozhatják, amelyek az egér antitestek embereknél valö alkalmazásából fakadnak. Ilyen, probléma a szérum felezési idd, továbbá, hogy az egér antitest nem képes bizonyos humán effektor funkciók beindítására és hogy nem kívánt immunválasz jön létre emberben az egér antitest ellen .„•''«r, anti-egér antitest'' reakció; humán anti-mouse antibody > KAMI > 'U azt m } .
A teljes egér antitest emberben való használatával kaposolato-s problémák leküzdése végett megkísérelték az egér anti-hTHFa. antitestek genetikai manipulálását, ezek .„embsrszerűfcbé^ változtatása. céljából, Előállítottak például olyan tinóra antitestelet, amelyekben az antitest láncok variábilis szakaszai egér eredetűek és ez antitest láncok konstans szakaszai emberi eredetűek voltak jD.HíKnlght et al., Hol,Immunoi., 30, 1443-1453 (1333;? 10 32/16553 számon kőszénéit nemzetközi szabadalmi iratok ;Ρ.E.Dadáéra et al.Η, Előállátottak ezenkívül olyan humanizált antitesteket, amelyekben az antitest variábilis szakaszainak hiparvariábilís dóménei egér eredetűek voltak, de a megmaradt variábilis szakaszok és az antitest konstans szakaszai emberből származtak (WO 32/1133 3 számon közzétett nemzetközi szabadalmi iratok f313.Ideir et ai>};< űzónban, mivel ezek a kimerő és humanizált antitestek még mindig tartalmaznak néhány egér szekvenciát, ezek még mindig kiválthatnak nem-kívánt immunreekoidkat - humán anti-kíméra antitest reakciót (humán anti-chimer:c antíbody (üACFü reactionl — különösen ha hosszá időn át alkalmazzák, például krónikus indikációk esetén, mint a rheumatoid arthritis (lásd például: M.J.Ellict et al., bánóét, 344, 11Ιοί 12 7 <13341? M.J. E li lö t et a 1., Láncét, 34 4, 1105-1110 (1994;].
Előnyös h'T’NBa inhibitor lenne az egér mát-ek kei vagy ezek származékaival szemben (például a kimére vagy humanizált antitestekkel szemben; egy teljesen humán anti-hTŰFa antitest, mivel egy ilyen szer nem váltaná ki a HAHA reakciót még hosszú időn át valő használat esetén sem. Humán cibridőma technikákkal előállítottak hTHEo. elleni humán monokionális autó-antitesteket (P.Boyíe et ál., Coll. Immunoi., 132, 556-568 (193.3;; P.Boyíe et ai. , te 11 lrz?-unoi 152,. 563-535 fi 553 ) ; 614 ff 4 szlmon közzétett európai szabadaizc. bejeléntés (uoyle et al.i:j. Megél lapították azonban, hogy ezen hibridoma eredetű monokionáiis antitestek affinitása hlMFa-hor túl aiacscny — ut&ru táv .nem lehetett kiértékelni — és hogy nem tudják megkötni az oldható ΤΜΓα-t és nem fc nőd ék neutraiizálni a hTNFa-indükéit citotoxicitást (Soyie et ni.:< lásd előbb). Másrészt a humán hzbridőma tectnika sikere a tFNFa-specitikos autoantitesteket termelő Ximfocltsk humán perifériás vérben való természetes jelenlététől függ. Néhány tanulmány beteg emberekben hTNFa elleni szérum-autoant r testeket mutatott ki FA, Fomsgaard., et ai.,
Scand, u. Immunoi..., 30, 219-223 (1999); K. Seuátzen, et al.,
Proe. Leuköcyte Bioi. , 10b, 447-452 (1990)1, mig mások ezt nem erbsitették meg (H-G. Leusch, et al , J„ immunoi. Methcds, 133,
145-117 ·199ΙΗ,
A természetben előforduló humán anti-hTMFa antitestek alternatívája egy rekombináns humán anti-hlNFa antitest lenne, leírtak FA. D. Gr lf f ifchs. et ai., FASO 51, 12, 725-734 (1993)] olyan rekombináns humán antitesteketamelyek viszonylag alacsony affinitással. ipáidéul: it, - 5.(0' M) és gyors felbomlásé sebesség foff rate) mellett (például 5,í< ' 10' sec'') kötik a b:THFa~t. Viszonylag gyors disszociácrös kinetikájuk miatt azonban ezek az antitestek vaicazinőieg nem alkalmasak terápiás használatra, Leírták ezenkívül, hogy a rekombináns humán soti-hldFa nem neufcraiizálja a hTNFa. aktivitást, inkább elősegíti a hTNFa sejtek felületéhez való kötődését és fokozza a hTNFa internálórációját
FA, Lídbury et al,, Sioteehnoi, Ther., 5, 27-45 (I994); NO
X r
'-x §'2/031.45 ss-ámoe közzétett nemzetközi szabadalmi iratok (B,Aston et al,)j.
Fentiek alapján még mindig igény van olyan humán antitestek, például olyan rekomblnáns humán antitestek iránt, amelyek erős affinitással es lassú disszooiáoiős kinetikával kötik meg az oldható hidFe-t és képesek a hTőFít aktivitás, beleértve a hTWFa indukált olt otoxicitás (in. nitro és in vivő; gátlására, továbbá, alkalmazhatók olyan betegségek kezelésére szolgáié gyógyszerkészítmények előállítására., melyekben hWP® aktivitás káros hatásé .
A P9901374 számú {WO 97/29131 számon közzétett PCT bejelentésj alapbejoientésünkben olyan izolált humán antitesteket írunk is, előnyösen rekombináns humán antitesteket, amelyek specifikusan kötődnek humán TNFa-hoz. Ezeket az antitesteket az jellemzi, hogy erős affinitássál és alacsony dí uszodáéi és kinézi kával kötődnek a hThFa-hoz és hogy neutralizálják a hTNFa aktivitását, beleértve a hTNFa-Indukált eltotoeieításí Un vitro és ín vivő) és a hTFFö-indukáit sejt aktiválást. Továbbá jellemző rájuk, hogy a hTöFa-hoz kötődnek, de a hTbFp-hoz { limrotced.n) nem és a humán TNFa-n kívül más főemlős ThFcx-khoz és nem főemlős TNFa~ khoz: is képesek kötődni.
őzek az antitestek, teljes hosszúságúak lehetnek (például Igái vagy igéd antitest? vagy csak agy antigénkötő részt (például Fab, F{ab?)2 vagy scFv fragmentumot) tartalmazhatnak.
áz újonnan izolált humán antitest vagy antigén-kötő része azzal jellemezhető, hogy aj a humán TbFe-tól 1 χ 10'3 sec1 vagy ennél kisebb érték
Λ „, kV mellett és 1 x ÍO'i: M: vagy ennél kisebb Ké érték mellett dísszooiél, mindkettőt felületi plazma rezonanciával meghatőrózva?
bj könnyű lánc 033 nőménje 3, szánó aminosavszekvenciát vagy az 1. , 4., S„, 7. vagy 8, pozícióban egyetlen alaninhelyettesít éssei, vagy az í., 3.., 4., t., 7„, S. és/vagy 1.
pozícióban .1-5 konzervatív anínosav-helyettesítéssei módosított 3. számé aminosavszekveneiát tartalmaz;
cl nehéz lánc COó doménje 4. számú amínosavszekvencíát vagy a
O 3., 4., 5., 6., §., 9., 10. vagy 11, pozícióban egyetlen aianin-helyettesítéssel, vagy a 2., 3,, 4., 5..* o. , 3,, 9.,
10., 11, és/vagy 12, pozícióban 1-5 konzervatív aminosavhelyettesítéssel módosított aminosavszekvenciát tartalmaz; és c) 1 x lö’ b vagy ennél kisebb l'C54 értékkel rendelkezik.
Ezek sz antitestek a humán TNFa oitotoxicítását egy standard in vitro L92 9 assay-ben neotrali zárják a megadott TC5e vagy ennél kisebb értékkel.
A találmány szempontjából előnyös az az antitest vagy antigén-kötő része, mely a hómén imFa-tol 3 x IO* -sec''1' vagy kisebb K,?;f érték mellet z disszociál , Még előnyösebb, ha az antitest vagy antigén-kötő része a hómén TNFa-től 1 x lö'5 sec'1 vagy kisebb érték mellett disszociál és ICao értéke a fenti tesztben x íö~ - 1 x 10Μ vagy ennél kisebb,
A találmány szempontjáböl előnyös továbbá az á hómén antitestet vagy ennek antigén-kötő része, amelyben a könnyű lánc variábilis szakaszának (1CV3; CDH3 doménje a 1, számé szekvencia szerinti aminosavszekvenciát vagy az 1., 4,, 5,, 7. vagy s, pozicióban egyetlen aLenin-he1.yettesltőssel módositott 3. szánó aminosavszekvenciát tartalmazza, és a nehéz lánc variábilis szakaszának (HCVR) CDE3 doménje a 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát vagy a 2,, 3,, 4. f 5., €., 8., 9., IQ. vagy 11. pozícióban egyetlen a lenin-helyettesítéssel módosított d, s ζámű am 1 η o sa vs z skyen c 1 á t te r t a írna ζ z a .
Előnyösebb,, ha az LCVR még egy 5. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CDR2 tömésnél és a HCVR egy á. számú aminosavszekvengiát tartalmazó CDH2 tömésnél is rendelkezik. Még előnyösebb, ha az LCVR egy 7. számú aminosevszekvenclát tartalmazó CDR1 doménnel és a HCVR egy 3. számú aminosavszekvenciát tartalmazó CDR1 doménnel Is rendelkezik..
Egy másik kiviteli alakban az izolált humán TEFa-kötő antitestnek vagy antigén-kötő részének könnyű lánc variábilis szakasza íEGVRj az 1. számú aminossvszekvsncrát és nehéz lánc variábilis szakasza ÚTCVR) a 2. számú aminosavszekvenciát tartalmazza, Eá értéke 1 x lö~á M vagy ennél kisebb és ICsp értéke 1 x lö' b vagy ennél kisebb, Eizonyos kiviteli formákban az antitest egy igGl nehéz lánc konstans szakaszt vagy egy IgGd nehéz lánc konstans szakaszt tartalmaz, További kiviteli formákban az antitest egy Fab fragmentum, vagy egy Fiab^)^ fragmentum, vagy egy egyetlen láncból álló Fv fragmentum lehetTovábbá előnyös az az antitest vagy ennek antigén-kötő re-
sze, amelyben a LCVR CDR3 doménje a 3,, 11., 12 .., 13., 14., 15.,
lö., 17., 19., 19., 20., 21 ,, 22., 23 ., 29. , 25. vagy 26.
am i nos av s z e k v en c iát t art a Ima ζ z a, va g y a : HCVR CDR 3 doménje a 9.,
27., 28., 29., 30., 21., 32., 33. vagy 39.
aminosav» zekvenciat ,Χ tart alz'azza<
A találmány céljaira előnyösek a rekosünéns antitestek. A legelönyásebb rekombináns antitest, melyet 32E7-nek neveztünk •el, egy könnyű lánc C.0R3 doménből, mely a '3. számú aminosavszekvenciái tartalmazza, és egy nehéz lánc CDR3 dómé ízből áll, mely a 4. számú amínosavszekvenciát tartalmazza. Előnyös, ba a D2E7 antitest könnyű lánc variábilis szakasza Í1CVR ·- ligát chain variable regien) az számú aminosavszekveneiát tartalmazza és nehéz lánc variábilis szakasza ;HCVR - heavy chain variable region) a 2, számú amioessvszekvenclái tartalmazza.,
A fenti izolált barnán antitest vagy ennek anticén-kötö része képes neutralizální a humán TNFa aktivitását, de a humán TNFp-ét liimíotoxirl Előnyösen a humán antitest vagy asm igén-kötö része centralizálja a humán TNEa, csimpánz leu aktivitását és legalább még egy további, a következő csoportból kiválasztott főemlős TNFa aktivitását:: pávián TNFu, selyemmajom TNFa, közönséges makákó TNFa és rhesus imakákó: Illő. Az antitest előnyösen egy nem-föemlos, például kutya, sertés vagy egér TRFé. aktivitását is neutra1izáIga.
A FáRöIálá számú alapbejelentésben a fenti humán TNEu-kete antitesteket vagy snuigén-kctö részüket ködeié nukleinsav molekulákat is ismertetjük, Egyik előnyös nukleinsav nukleotídszekveheiáját, amely a D2E? ECRR-jét kódolja, a ?, ábra és a 361 számú nnk.leotid-szekvencia mutatja be. Egy másik előnyős, D2E/ üCVR-jét kidőlő nukleinsav nukleotlő-szekvenolágat a 8, ábra és a 31, számú nukleotid-szekvencia mutatja be. Az antitestet kódoló nukleinsavakat hordozd rekombináns expressziős vektorok és *
azok a gazdasejtek, amelyekbe ezeket a vektorokat bevettük, valamint 32 eljárások,- melyek során a festi antitesteket a gazdasejtek tenyésztésével állítják elő, szinten a leírás részét képezik ,
Az nj, izolált humán TPFu-kbtő antitest vagy antigén-kötő része előnyös tulajdonságai alapján felhasználható agy eljárásben humán ’TNFíx aktivitás gátlására, melynek során a humán ThFa-z úgy hozzuk érintkezésbe egy izolált humán TbFá-kbtő antitesttel vagy antigén-kötő részévei, hogy & humán TNTa aktivitás gátlása v é gbeme n j e n .
é fentiek alapján a találmány tárgya agy in vitro eljárás humán ThFa aktivitás gátlására, amely abban áll, hogy a humán TbFo-t érintkezésbe hozzuk egy izolált humán TNFa-kötő antitesttel vagy antigén-kötő részével, amely
a) a humán TKFu-tol i x lp“J sec'1 vagy ennél kisebb érték mellett és í x ICF* b vagy ennél kisebb /- érték: mellett dissxociál, mindkettőt felületi piazmon rezonanciával meghatározva ;
fof könnyű lánc C0.R3 deménja 3. számú aménosavszekvenciát vagy az 1. , át, 5,, 7. vagy 8. pozícióban egyetlen alaninheiyettesltéssal, vagy az 1., 3«, 4,, é., 7,, 8, és/vagy 9, pózleióban 1-5 konzervatív aminősav-helyetteaítéasei módosított 3. számú aminoaavszekvenciát tartalmaz;
cl nehéz lánc CD// dómén ja 4, számú amzncsavszekvéneiét vagy a
2., 3., á<, :5., 6., 8,, 9,.., 10, vagy .11, pozícióban egyetlen aianin-helyetzasiteszel, vagy a 2., 3«, 4., 5,, 3., 8z, 9.,
10., 11, és/vagy 12, pozícióban 1-5 konzervatív aminosavX
helyet lesi léssel módositott aminosavszekvenciát tartalmaz; és d) 1 x 10 d vagy ennél kisebb 1CS3 értékkel rendelkezik,
A találmány további tárgyat képezi. egy in. vitro eljárás humán TOFa aktivitás gátlására, amely abban áll, hegy a búmén TOFa-t egy Izeiéit hnmén TNFa-kötő antitesttel vagy antigén-kötő részévei hozzuk érintkezésbe, amelynek könnyű lánc variábilis szakasza (EGVO.) az 1.. számú aminosavszekvenciát és nehéz lánc variábilis szakasza (hCVK) a 2, számú axainosavszekvanöiát tartalmazza, b<j értéke 1 x 10”á H vagy ennél kisebb és IC§s értéke 1 x 1G~' b vagy ennél kisebb.
A találmány további tárgyát, izolált, humán TbFa-köto antitest vagy antigén-kötőrészének alkalmazása képezi egy olyan betegség kezelésére szolgain gyógyszerkészítmény -el ősi. irtására, .amely betegségben a TFFá aktivitás káros hatású. Ilyen betegségek például a szepszis, autoimmun betegség (például rheumatoid arthritis, allergia, szklerózis multiplex, autoimmun diabeies, autoimmun uveitls és nsfrózisos szindrómák, fertőző betegség, rosszindulatú daganatot betegség, transzpientátum kilökődés (rajakció) vagy graft-versus-host betegség, tüdőbetegség, csontrender reuesség, db rfesfegseg, szivbetegseg. Az. antmtesr.eu fez — hasznáiási. területeit részletesen ismertetjük az V, fejezetben.
Az alábbiakban az ábrák rövid leírása következik.
Az 1A és IS ábra a 02 S 7 könnyű lánc variábilis szakasz aminosavszekvenciáit (O2E7 Vb; lásd az I, számú, szekvenciát is), a 02 S 7 VL alanin mutánsait (LDzFvmAl, LD2S7'.A3, LbzBvmAá,
LE2E71.AŐ, LD2E71E7 és 1D2E7'.AS), a 02E7-tei rokon 2314 antitest könnyű lánc variábilis szakaszát (2SD4 VI; lásd a 5. számú szekvenciát is) és a többi D2E7-tel rokon könnyű lánc variábilis szakaszokat 1E8 812, VLlGFá, VzlööAS, 7F120D2, VEÍÖF4, LOFi,
VILOfío VbbOFlÖ, VLLÖG'b VLLOG9, VLLQHl, VEEÖHiCb VL1B7, VblCl, VE1C7, VW.lFi, VLO.iHl, LOE7, EOF,A és LOE7/T) ábrázolja. Az IA. ábra az FAI, CD81, FR2 és CSA2 doménekeé tartalmazza < Az IB ábra az FE3, CDS és FR4 aoméneket tartalmazza, A könnyé lánc
C9A1 UCDR irt, b&2 UC7E L2) és CDR3 UCDR L3) doméneket b e ke r a t e z t ü k.
A 2A és 2B ábra a D287 nehéz lánc variábilis szakasz aminosavszekvenciáit (D.2S7 VB; lásd a 27 számú szekvenciát is, a D2S7 Vü alanín mutánsait ;EE2E7üAl, BF2E7\a2, HD2E7\A3, HD2E?\A4,
BD2E7+,AS, 81217216, BD2F7\A7, HD2F7üA3 és BD2S7 uA9) , a D2S7~tei rokon 2SD4 antitest nehéz lánc variábilis szakaszt ízSGé
Víz; lásd a lö, számú szekvenciát is) és a többi D2E7-te.l rokon nehéz lánc variábilis szakasz (VHlBil, VH1E3, 7ΗΙΑΪ1, VH1B12,
VH1-E2, VB1E4, VH1FÖ, VH1G1, 3C-H2, VHI-D2.N és VB1-D2.Y) ábrázolja. A 2A ábra az FR1, CDR1, FR2. és CDR2 doméneket mutatja, A 23 ábra az FR3, ÜDR3 es FAI dóménekét mutatja, A nehéz lánc ODRI UGAR Bi'öf CDA2 G,CDR R2j és CSR3 („CDR JO'b doméneket bekereteztük,
A 3, ábrán qr a fikusan ábrázoljak a TB Fa ••indukált 1,929 cítoéoxieitás G2r)7 humán anti-hTKFa-vai. való gátlását, RAK 195 egér anti-h T B Fa-va1 ös szehason1i t ásban.
A 4, ábrán grafikusan ábrázoljuk az rhlFFcx-nak az 0-937 sejteken .lévő hTNFa receptorokhoz való kötődésének D2E-7 humán anti-hTFFa antitest által történd gátlását, RAK 193 egér antihTKFa-va i összehasoniÍrásban,
Az 5, ábrán grafikusan ábrázoljuk az. FlaM-1 HüVCFC-en való TNFö-indukált expresszién árak D2E7 humán enti-nTNEo antitest által történő gátlását MAI Irt egér arti-tThFa-vai οδδζηηοοοηϋζ ásban ,
A S, ábrán láttató diagramm összehasonlítja, hogy D-galaktózamin-szenzitizált egerekben a ?HE«~indukáit ietaiitás elleni védelmet miként biztositja a D2£! hunén anti-TNFa antitest ipontozott hasábok) és a MÁK 195 egér anti-hTHFo. (tirés hasábot; .
A ?, ábra a D2E7 könnyű lánc variábilis szakasz nukleotid szekvenciáé át mutatja, a nukleotid: szekvencia alatt az aminosavszekvenciával. & CBR lí, CDI 11 és CDR 13 szakaszokat aláhúztuk, .?·. 8, ábra a DzE'? nehéz lánc variábilis szakasz nukleotid szekvenciáé át mutat la, a nukleotid szekvencia alatt az smlaosavszekvenciával, A. CDs Hl, CDE Hl és CDR Ή3 szakaszokat aláhúztuk ,
A 9, ábra grafikusan ábrázolja a D217 antitest kezelés hatását Tg 137 transzgenikus egerek, mint poliarthritíses modellek, átlag Ízület méretére,
A találmányban aikaimazott: .izolált humán antitestek vagy ezek entigén~kötö részei a humán ThFa-hoz nagy affinitással, alacsony disszociációs sebességgel és magas neutraiizáió kapacitással kötődnek. Az antitestek £elhasználása a humán TFFa kimutatására vagy a humán TNFa. aktivitás gátlására szolgáló módszerekben — akár in: vízre, akár in vivő —-· a találmány oltalmi köréhez tartozik.
A találmány könnyebb megértése érdekében először néhány kifejezést definiálunk..
A „humán TteFa,, (rövidítve: hite Fa vagy egyszerűen hlNF) kifejezés használt távéi egy olyan humán crfokinre utalunk, amely 1? kD tömegű szekretált tormában és 2% kD toréul membrán-asszocláif formában fordul elő. amelynek biológiailag: aktív formáját nem kovalensen kötött .17 ki tömegű molekulákba! álló trimer alkotja. (A hTteFa szerkezetének további leírását oeloaui a következő közlemények tartalmazzák: D. kennioa, et al., testűre 312? 724-729 (1984); üte.Davis, et al ,, Diochemistry, 26, 1322-1326 (1987) ; ü¥uJones:, et al . , teature, 333, 223-223 (1938}}. A humán
TteFa meghatározás megába foglalja a rekombináns humán TteFa-t (rhiteFa}, amely standard rekombináns ©jspressziős módszerekkel ál üthető elő vagy beszerezhető a kereskedelemből (8 and 9
Sysfems, teinneapolis, tetei, kát. szám: 21C-TA).
Az „antitest' szó használatával immunglobulin molekulákra utalónk, amelyek négy polipeptid táncból állnak, mégpedig két nehéz (lg heavy) láncból és két könnyű (L, Ilont) láncból, amelyek belső diszuifid kötésekkel kapcsolódnak össze. Mindegyik nehéz lánc egy nehéz lánc variábilis szakaszbői (rövidítve: HCVR vagy 711} és egy nehéz lánc konstans szakaszból áll. A nehéz lánc konstans szakaszt három dómén alkotja: CB1, CH2 és CH8. Mindegyik könnyű lánc agy könnyű lánc variábilis szakaszból (rövidítve: LCVF vagy Vi} és egy könnyű lánc konstans szakaszból áll, A könnyű lánc konstans szakasz egy domént — CL — tartalmaz, A VH és VL szakaszokat tovább osztályozhatjuk hipervariábllis szakaszokra, amelyeket komplementaritást meghatározó szakaszoknak •CD8 - complementarity őetermining region} nevezünk- A CDF-eket átszövik olyan ezakaszok, amelyek még állandóbbak (konzervatí14 vaóbak) és ezeket framework szakaszoknak (framework region - FH - konstans szakasz váz) nevezzük. Minden egyes VH-t ée Vl-t három CDR és négy FF alkot, Sorrendjük az. amino-terminál is végtől s karbozi-termtnális végig a kővetkező: Fűi, CDP1, FR2, CDP2, FP3, CDR3, FR4 .
Egy antitest „antigén-kötő része (vagy egyszerűen „antitest rész) alatt egy antitest egy vagy több olyan fragmentumát értjük, amelyek megtartották azt a képességüket, hegy specifikusan kötődjenek egy antigénhez (például hTHFa-noz). Kimutatták; hogy egy antitest antigén-kötő funkciója a teljes hosszúságú antitest fragmentumaival is teljesíthető, Sgy antitest „antigén-kötő része kifejezés például a következő kötő fraguértrmokra vonatkozik: (i) Fab fragmentum, amely VL, VH, CL és CH! doménekbői álló roonovalens fragmentum; (ii) F(abf); fragmentum egy bivaiens fragmentum, amely a kapocs szakasznál egy disznlfid híddal összekötőét két Fab fragmentumot tartalmaz; (iíi) Fd fragmentum, amely a VH és CHI öómenből áll; (iv) Fv fragmentum, amely az antitest egyik karjának VI. és VH doménjét tartalmazza; (v; dét fragmentum IFard et a i , , Fatúre, 341, 544-546 (1989)], ama1y egy VH dóménhői áll; és (váj izolált komplementaritást meghatározó .szakasz (CDR) , Ezenkívül,, jóllehet az Fv fragmentum két doménjét — Vh és VH — két külön gén kódolja, rekombináns módszerek használatával, egy szintetikus linken segítségévei ezek összekapcsolhatók és igy lehetővé válik, hogy egyetlen olyan protein lánc keletkezzék, amelyben a VL és VH szakasz-pár monovalens molekulákat alkot (egyláncú Fv néven ismert; single chain Fv - scFv). (Lásd például:: Bírd et al., Science, 242, 423-426 (1988); Hús tón et •X
Proc. Nati. Átad. Sex., 85, S839- 588 3 (1983; 1, az ilyen •egy láncú antitestekre is vonatkoztatjuk az: antitest „antigénköt o része kifejezést, ide tartoznak az egyláncú antitestek más formái is, igy pálcául a diatestek (diabodies;. á diatestek bivalens, blspéciixkus antitestek, amelyekben a VH és VL hőmének egyetlen polipeptid láncon fejeződnek ki, de olyan linket használata mellett, amely tűi rövid ahhoz, hogy ugyanezen a láncon a két doménbői pár képződjék, ezáltal késztetvén a doraéneket arra, hogy egy másik lánc korgjieeenter doméndelvei alkossanak párt és igy két antigénkötő helyet hozzanak létre [lásd például: F.hoiliger et al., Proc. Natl. átad. Sói., 90, 6144-0118 (1993); R. 01 Pol jak, Struoture, 2, 1121-1123 11994 p).
Továbbá, egy antitest vagy ennek antigén-kötő része olyan nagyobb inaru nádházié a molekula része lehet, amely az antitest vagy az antitest-rész és egy vagy több más protein vagy pepiid kovalens vagy nem kovalens társulása révén jött létre. Ilyen adhéziós molekulákra példa a sztreptavidln mag-régid használatával előállított tetramer sérv molekula [Kipriyancv, S.R. et ai., Humán éntibodies and HyfcrIdoma?, €, 93-101 0995)1, és ilyenek például egy tisztein maradék,, egy markor peptid és egy C~ terminális polihisztidin toldalék használatával előállított bivalens és biorinezett s<ePv molekulák [S.H.Kipriyanov, et al., hol,
Immunoi., 31, 1043-1058 (1994;j. Az antitest részeket, mint az
Fab-t és F(ab'n-t előállíthatjuk teljes antitestekből a szokásos technikákkal, a teljes antitest papa inon, illetve pepszines emésztésével. Az antitestek, antitestrészek és immonadhéziős molekulák ezenkívül előáll!thatók standard rekombináns DNS technoah ogy 11t has z ná 1 j u k kák bas-zo.á latéval, ahogy itt leírjuk
A „humán antitest' kifejezés olyan, antitestekre vonatkozik, amelyek tornán esiravonal immunglobulin szekvenciákból származó variábilis és konstans szakaszokat tartalmaznak. á naláioány szerinti tornán antireslekben letetnek olyan aminosav csoportok —- például, a CDR-ekben és különösen a C0R3-ban — amelyeket nem esiravonal humán immunglobulin szekvenciák kódolnak (például; mutációkat viszünk be találomra (tandem) vagy hely-specifikus rautagenezissel in vitro, vagy szomatikus mutációval in vivő), A „humán antitest kifejezést azonban nem használjuk azokra az antitestekre, amelyekben a humán frameuerk szekvenciákba más emlős faj — például egér — csiravonaibói. származő ÜDR szekvenciákat ültettünk ne.
A „.rekombináns humán antitest kifejezés alatt minden olyan humán antitestet értünk, amelyeknek az előállítását, kifejezését., létrehozását vagy izolálását rekombináns eszközökkel végeztük. Például: az antitestek kifejezéséhez rekombináns expreszsziős vektort használunk, amelyet gazö.ase j tbe transz formaiunk (á további leírást lásd alább, a Ili fejezetben), az antitesteket rekombináns, kombinatorikus humán anxetest gyűjteményből izoláljuk (a további leírást lásd alább, a XXI, fejezetben):, az antitestet olyan állatból (például egérből) izoláljuk, amely humán immunélobulin génekre nézve transzgenikus (lásd például: L.D.üayior et ai., buci. Acids Rés., 20, 0237-0295 11992)1, vagy pedig az antitestek előállítását, kifejezését, létrehozását vagy izolálását bármilyen más olyan módszerrel végezzük, amely humán immunglobulin génszekvenciáknak más DhS szekvenciákkal való Őszszeillesztését (spliclng) tartalmazza. Etek a rekomblnáns humán antitestek humán csiravonal immunglobulin szekvenciákból származó variábilis- és konstans szakaszokat tartalmaznak. Bizonyos megvalósitásck esetén, azonban, at ilyen rekomblnáns humán antitesteket in vitro mutagenitáljuk (vagy, ha humán lg szekvenciák révén transzgénikas állatot használunk, in. vivő szomatikus műtagenezist végzünk), amikoris a rekombináns antitestek VE és v'L szakaszainak aminosavszekvenoiái olyan szekvenciák, amelyek — noha humán csira vonal Vb és VI szekvenciákból vagy ezekkel rokon szekvenciákból származnak — a humán antitest csiravonal repertoárban a természetben in vivő valószínűleg nem fordulnak elő.
Az „izolált antitest kifejezés használatával olyan antitestre utalunk, amely lényegében, a különböző antigén spéci ti oltásé más antitestektől mentes (például: egy izolált antitest, amely specifikusan köti. a :,TbFa~t, lényegében mentes olyan antitestektől, amelyek a hídfő-tői eltérő antigéneket kötnek meg} . Egy izolált antitest azonban, amely specifikusan köti a hThFu-t, mm „vi m-m m; crmome’AU, tóidéul más fajból szarmata TFF« molekulákkal (alább részletesen tárgyaljuk), Az izolált antitest ezenkívül lényegében mentes lehet más ceilulárls anyagtól és/vagy kémiai anyagoktól
A „neut ralizáló antitest kifejezés (vagy egy „antitest, amely neutraiizáija a hTNFa aktivitást) egy olyan antitestre '/Ιο: ·> / } a cm ->d ' a - >« i o a . ~ tivításának gátlását eredményezi. A hTNFc. biológiai aktivitásának gátlása a hlbFu - biológiai aktivitás egy vagy több indikátorának mérésével állapítható meg, ilyen aktivitás például a hldFo-indukált oitotoxlcífás (akár in. vifro, akár in vivő} , a hTNFa~Indukált sejt aktiválás és a hldFer hlFFövreceptorokhoz való kötődése. A bTFFa biológiát aktivitásának ezen indikátorait a szakterületen Ismert számos Standard in vitro vagy in vivő assay közül egy vagy több assay elvégzésével vizsgálhatjuk (lásd a 4. példái; . Azt, hogy egy antitest képes-e neutraiízálni a hTNFa aktivitását, előnyösen a hTüFu-Indukált citotoxíoi.tás gátlásával állapíthat juk .meg, 1929 sejteken.. A bTFFd. aktivitás egy további, vagy alternatív paramétereként, meghatározhatjuk, hogy egy antitest képes-e meggátolni az FLAFI-l hJMFa-indukált expresszloját hUVSC-en, ugyanis ez, a hTNFa-indukált cellulárls aktiválás mértékéül szolgál.
A „felületi piazmon rezonancia'' kifejezés egy olyan optikai jelenségre vonatkozik, amely lehetővé teszi a valóságos idő alatt lezajló biospeo í f ikus kői. osonhat ás ok analízisét azáltal, hogy egy oioszenzor mátrixban detektálja a protein konoentrációkban végbemenő változásokat, például a BIAoore system íPharmacia Eiosensor AB, üppsaia, Svédország és Piscaiavay, tej ,,
ISA; használatával. A módszer további Ismertetését lásd az 1, példában és a következő közleményekben: Ö.Jönsson et al ., Ann, Bioi, Cl ír·., 51, 19-26 í19935; Ö.Jönsson et al. , Bioteehnzques, .11, 620-62'? 11991; ; 8. Jöhessen et al., J, bői. kocogni t., 8, 125.131 ( 1395} ; B> Johnsson et al,:, Anai. Bioohem., 199, 258-277 :1921} ,
Az itt használt rövidités egy antitestnek az antlgén/antitest komplexből való disszociációjánál a reibemiási sebes se g í állandót j elentI,
Az Itt használt .„K* rövidítés egy adott antitest-antigén kölcsönhatás disszociációs bu stansára vonatkozik.
A „nukleínsav molekula kifejezés alatt ÖHS és BHS molekulákat értünk.. Egy nukleínsav molekula lehet egy szálú vagy kétszálú, de előnyösen kétszázé ÜdS-re vonatkozik.
Az „izolált nukleínsav molekula kifejezés ........ itt olyan nuklei.nsavak vonatkozáséban használjuk, amelyek h?N?a~z kötő antitesteket vagy antitest részeket (például; VH, VL, CDB3; kódolnak — olyan nukleínsav molekulára vonatkozik, amelyben az antitest vagy antitest-reszt kódoló nukieotid szekvenciák nem tartalmáénak más antigént — azaz nem hTHfa-t — kotó antitesteket vagy antitest-részeket kódoló nukieotid szekvenciákat. Ezalatt olyan szekvenciákat értünk, amelyek normái körülmények között határolják a nuklei.nsa.vat a humán genomiáíis DHS-oen. Tehát, például egy találmány szerinti Izolált nurieinsav, amely egy anti-Thlo. antitest VH szakaszát kódolja, nem tartalmaz más olyan szekvenciákat, amelyek nem a TNFa-t, hanem más antigéneket kötő VH szaka» ζ o kát. kódolnak,
A „vektor kifejezés egy olyan nukleínsav molekulára vonatkozik, amely egy másik nukieinsavat — amelyhez hozzákötöttek ........
képes transzportálni. Az egyik vektor típus a „plazmád, amely egy olyan körslakú kétszáza ödS huroknak felel meg, amelybe további DNS szegmentumok ligáibatok. Így másik típusú vektor a vitális vektor, ahoi a vitális genomha további DbS szegmentumok ligaIhatök. Bizonyos vektorok abban a gazdasejtben, amelybe bevezették, autonóm módon repiikálódnak «például a bakteriális vektorok, amelyen bakteriális repiikáoiós origót tartalmaznak és a: episzőmáiis emlős vektorok) , Más vektorok (például a nem epiazómális vektorok) a gazdasejt genomjáfea integrálhatok a gardasejtbe való bevezetésükkor és ezáltal a ga2«áa genommai együtt replikalódnak. ezenfelül bizonyos vektorok azoknak a géneknek az expnesszidjét rúgják: irányítani, amelyekhez működőképes módon kapcsolódnak„ Az ilyen vektorokat „rskoritináns expresszios vektorok~-nak (vagy egyszerűen „expressz lés vektorok-nak) nevezzük. é rekomhínáns DhS technikákban általában használatos expressziós vektorok gyakran piazmidok. Épben a leírásban a „plazmid és „vektor megjelölést egymással felcserélve használhatjuk, minthogy a plazmád a vektor legáltalánosabban használt formája. & találmányban azonban más expresszios formák is szerepelnek, igy virális vektorok is (például; repi1káoiöjnk vonatkozásában hiányos funkciójú retroví rusok, adenovírusok -és adeno-asszociált vírusok), amelyek azonos funkciókat töltenek de,
A „rekombináns gazdasejt (vagy egyszerűen „gazossejt; kifejezés használatával agy olyan sejtre kívánunk utalni, amelybe egy rekombináns expressziős vektort vezettünk de, bugától értetődik, hogy ezek a kifejezések nemcsak a konkrét szébanforgó sejtre, hanem egy ilyen sejt szaporulatára is vonatkoznak, Minthogy a kővetkező: generációkban előfordulhatnak bizonyos módosulások, akár rotáció, akar környezeti befolyások következtében, nem biztos, hogy a szaporulat: ténylegesen azonos a szülői, sejttel, de még mindig a „gazdasejt fogalomkörébe tartozónak tekintjük, é találmány számos szempontját részletesen ismertetjük a köve: f. k e z é a 1 fej e zet e kbe n...
X, Humán ΤΝΡα-t kötő humán antitestek i <4 'Ί'?· - izolált humán, antitestek vagy ezek ant igén-kő tő: részei a humán IKFa-hoz magas aftinitássak kötődnek, továbbá alacsony dlsszociáoiős sebességgel és magas neutraiizáiő kapacitással rendelkeznek, A találmányban alkalmazott antitestek előnyösen rekömbinans, neutralizélc humán anti-TNFö. antitestek. A legelőnyösebb xekombináns neutralizáló antitestnek D2E7 elnevezést adtunk és Vb és VH szekvenciáit az 1A, 1B:, illetve 2A, 2B ábrákén mutatjuk be (a F2E? VL szakasz aminosavszekvenciáját az 1. számú szekvenciáját az 1. számú szekvencia is bemutatja; a D2E7 Vb szakasz aminosavszekvenciéját a 1. számú szekvencia is bemutatja). A D5E'? kötési toia~o.onságali, összehseoniitva a magas affinitást és alacsony disszociációé kinetikát mutató 777 195 egér s.ssi-hTbFa mAt-iel, és egy D2E7-tel rokon szekvenoiájú másik humán anti-hTúFa antitesttel, a 2SD4gyel, az alábbiakban fogra Íjuk össze.
Antitest •Kő??: sac“* k,ft H1 sec'·' ( Ka SztÖCfeiO wsfctea
D2E7 IgGl 8,81 x 10s 1,91 x 10® 6, 09 X Wíö 1,2
2SD4 8,4 χ 10® 4,20 x 10® 2,00 X 103 ; 0,8
MÁK 195 F(ab?}£ 8,70 x 1.0'5 1,90 x 10’ 4,69 X 1010 1, 4
A D2S7 antitest és a rokon antitestek is, nagy hatásfokkal neutráliséiják a hTHEh aktivitást számos in vitro és in vivő assay-vei. (lásd a 4, példát) végzett meghatérczés szerint. Például, ezek az antitestek neutralizáiják L929 sejteken a bibFe22 “indukált citotoxicitást körülbelül 10 b —- ií)“;C M tartományba eső 1C5S: értékekkel (IC - inhibitory cöncentration ~ gátló kéncentráció). A D2E7, ha mint teljes hosszúságú Igéi antitest fejeződik ki, 1522 sejteken körülbelül 1,25 x 17 d IC^-nei neutrálisa i ja a hTKEa-indakait citotoxicitást, Ezenkívül, a D2E7 megőrzi centralizáló képességét, ha az antitest Fab, Fi ab’)- vagy scEv fragmentum formában fejeződik ki, A. D2E7 a TüFa-indukált ealiuiáris aktiválást Is gátolja, amelyet az E1AM-1 HüVEC-en varé hTNEa-inőnkéi t expressziéj a segítségévei {TCl.o - körülbelül 1,85 χ 1CTW: M} mérünk és gátolja a hTNEcx kötődését az 5-537 sejteken lévő hl’NFa reoeporokhoz í IClc ~ körülbelül Ι,5β χ 10“Λ° H) . Ez utóbbi esetben a D2S7 a hlNFa-nak mind a pőa, mind a p75 nldFu receptorokhoz való kötődését gátolja. Az antitest gátolja továbbá a hTNEa- indukált letalitást ín vivő egerekben (SO;,o af.fektive dose - hatásos dózis) . (FIAM ~ endothelial ceii. leokocyte adhesion moiecuie; Ht3V.BC - humán umbiiical vein endothelial teli),
A 32E7 kötő spécié leírását tekintve, ez az antitest a humán ThFu különböző formáihoz, igy az oldható hTEFcn-noz, transzmembrán hTISFíX-hoz és a oeliularis receptorokhoz kötött hTEFa-hoz is kötődik.. A D2E7 nem kötődik specifikusan más citokinekbez, azaz nem kötődik a következőkhöz: limfctoxin (ΤΕΕβι, IE-Ία, IL-lp, II2, 11-4, 11-6, 1L-8, IFby és Τ<1?β (Il - inter lentin; IFk interfe-ron; TG? - t ranszformáló növekedési, faktor). A D2E7 azonban más fajokból származó^ tumor nekrőzis faktorokká)}, keresztreagái. Például: az antitest legalább öt főemlős Tárájának (csimpánz, pávián, selyemmajom, közönséges makákő és .·\ Ο rhesus majom.) aktivitását xzeutralizárja közei azonos IC5§ értékkei, mint a h.TNFa neuttalizáciás értéke (lásd a 1. példa E, alfejezetét). A D2E7 az egét TNFa aktivitásét is aeutralizalja, bár körülbelül ezerszer kevésbbé eredményesen, mini a humán TNFa~ét (lásd a 4.. példa E. alfejezetét) . A D2B7 a kutya és a sertés TNFa-hoz is kötődik.
A. találmányban alkalmazhatjak a D2E7 antitesteket és antitest részeket, a DSBv-tei rokon antitesteket és antitest részeket, és más olyan harsán antitesteket és antitest részeket, amelyek a D2S7-tel azonos tulajdonságokkal rendelkeznek, ilyen a hTHEa-hoz való kötődés erős affinitással és alacsony disszociáoiős kinetikával és magas aentrslizáciös kapacitással. A találmány szerint alkalmazott izolált humán antitest vagy antigénköti része a humán TEEm-tél 1 z lö* 11, vagy ennél kisebb tő érlekkel disszociál, Κ.-ο sebességi állandója 1 x Itt sec*' vagy kisebb — mindkét értéket felületi piazmon rezonanciával határoztuk, meg — és a humán TNEs citotoxieltását standard in vitro Lázi assay-ben 1 x 1G~' A vagy kisebb itt·;· mellett neutrálisaija. Előnyösebb, ha az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része a humán TNfa-tői Koff - 5 x lő'4 sec~A vagy kisebb sebességgel bomlik fel és még előnyösebben KOff I χ 10''4 sec1 vagy kisebb sebességgel, Előnyösebb, ha az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része a humán WFa citotoxioltást egy standard in vitro L92A assay-ben IC^ - 1 x 10á A vagy kisebb érték mellett, még előnyösebben XCsa - 1 x lö* H vagy kisebb értek mellett és Ígért előnyösen ICss - 5 χ Ι.δ5ά A vagy kisebb érték mellett neutráliséi ja. Egy előnyös alkalmazás esetében az antitest egy izolált humán rskombináns antitest vagy ennek antigén-kötő réssé, Egy másik előnyős megvalósításban az antitest a WFa-indukált. celluláris aktiválódást is neutrálisé íja, amelyet standard in. vitro asssyben határozunk meg, amikoris humán kőldökvéna endoteliálís sejteken (HÜVEC === humán ambiiicai vein endotheiiál cell; a TM.En~ indnkáit ELAb~l (endothelisl cell leucocyte edhesiou moleoule-i? e xp re ss 2 id j á t viz sgáÍjuk,
A Kti és ΚΛίγ meghatározására szolgáló felületi pisámon rezonancia analízist az 1, példában leírtak szerint végezhetjük el. Az ICsc, meghatározására szolgáló sztandard in vitro 8929 assay-t a 4, példa A, fejezetében írjuk le, A 4, példa C. fejezete egy olyan standard ín vitro assay~t ír le, amely az E.EAM-1 humán köldökvéna undoréi iális sejteken való ThEa-indukált kifejeződését méri. Az előbbiekben eni. itett kinetikának és nesz rali záoiós kritériumoknak például a következő rekombináns humán antitestek felelnek meg, illetve előrelátnateán meg fognak felelni; g/H/VId
párok, amelyeknek a ί 2 ökre te iáit <.t 1A, 18, 2A és .28 ábrák Sr
tarják be iiasd a 2, , 3, és 4, példát is a. kinetikai és neutra-
.1.1 Z 3 C.':. ás analízisek vonatkozásábani; iD2E7 VH/D2E7 VEI ;
1KD2S7 EA1/D2E7 kbl; [HD2S7 VA2/D2E7 VE] ? (HD2E7'', A3/E2S7 aj ;
iaskkv bA4/D2E7 VE] ; CkD2k7'7, AS/D2S7 vél ; [HD2E7’1, A6/D2E7 VE] ;
ÍHD2E7 EA7/D2E7 VEj ; [HD2E71AS/D2E7 kid / í HD2E7 g A9/D2E7 VE];
ÍD2E7 VH./W2S? ó Al) ; (D2E7 VH/1D2S7 é Aí] ; 1D2E7 VH/LD2E7V A5] ;
IbiEi VK/LD2EVÍ,A7ó [DrE7 VH/LD2E7 , A 8 ] ÍÖD2S7VA9/LD2E7Ó Aí ] ;
Ikhí-ré :/EOE7]; ÍVH1-02 .h/LOS7,T]; ÓHi-E 12 . Y/LOE7A] ; rv«l-D2 , N/LCE?, A];
2/E? Si2] és f. 1C-H2/EOE7] .
A szakterületen jól ismert, hogy az antitest nehéz lánc és zo könnyű lánc CDR3 doménjei fontos szerepet játszanak egy antitest antigénnel szembeni spécitizitáséban/affinitásában. Ennek megfelelően egy másik szempont szerint a találmányban olyan humán anti t este: két a 1 ka. .Ima zen k, a m e 1 vek a 1 a c s ο n y d i s s ζ ο e 1 é c i ó s k i ne t i kávai rendelkeznek a .hTN Fa-vai való asszociáció tekintetében és olyan könnyű és nehéz lánc CSR3 doméneket tartalmaznak, amelyek sirnktúráiisan azonosak vagy rokonságban vannak a D2E7 CDE3 doménekkelx Mint a 3. példában bemutatjuk, a D2E7 VL CDE3 9. pozícióját elfoglalhatja egy Alá vagy Thr csoport anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a Kof£ értéket. Ennélfogva a D2E7 VL CDR3 szamára általánosan elfogadott motívum amu.nosavszekvenclá ja a következő: Q-k-Y-l-S-T-A-P-Y-(T/A) (3. számú szekvencia) ... Ezenkívül a E2E7 VH 7LR3 12. pozícióját lyr vagy Azn csoport foglalhatja el anélkül, hogy lényegesen befolyásolná a lőff értéket. Ennek megfelelően a D2E7 VH CDR3-ra. a V-S-Y-L-3-T-A-S-E-L-ö-1Y/hí ís. számú szskvenzza' aminossvszekvencia az általánosan elfogadott motívum. Ezenfelül, mint a 2, példában bemutatjuk, a D2E7 nehéz és könnyű láncok CDE3 doméje elviseli., hogy egyetlen alanin csoporttal szubsztituáljvfc (a VL CERÁ-ban az 1. , 4,, S„, 7. vagy B, pozioiéfean éa a VH CDES-han a 21, 3. , 4., S,, 6>, 8,,
3., 10. vagy 11, pozícióban) anélkül, hogy ez lényegesen befolyásolná a érteket. A gyaktfiattal rendelkező szakember ezenkívül azzal is tisztában van, hogy mivel a D2S.7 VL és VH CDR3 domének elviselik az aianinnai való szubsztitúciót, végezhető volna más aminosavak szubsztitúciója, is — főképpen konzervatív aminosavak szubsztitúciója — a CER3 dcméneken belül úgy, hogy eközben az antitest még megtartsa alacsony sebességi
,.
/ 0· állandóját. A „konzervatív aminosavval való szubszzitúció alatt itt azt értjük, hegy egy arninosavat olyan amánosavakkal helyettesitünk, amelyeknek hasonló az cica(lánca. A szakma meghatározta a hasonló oldalláncokat tartalmazó aminosavak csalánját. Etek a következők: bázikus oldalláncok (például: iizin, sruinin, hisztidin),· savas kémhatásé oldal láncok {például: aszparaginsav, glutammsav) , töltetlen poláris oldaliáncok {például: glicin, aszparagin, giutanin, szerin, treonin, tirozin, cisztáin) , nem poláris oldaliáncok (például: alanin, vaiin, leuein, izoíeucin, prolin, feníialsnin, mát ionín, tríptofán), béta elágazást tartalmazó oldaliáncok (például: treonin, valín, izoieucin) és aromás oldaliáncok (például: tirozin, fenilalanin, tríptofán, hisztidin), Előnyös, na ötnél több konzervatív arninoíswai való szubsztitúciói nem alkalmazunk a öl El VL és/vagy VH CDI? doméneken beiül. Még előnyösebb, ha háromnál több konzervatív aminesavvai való szubszt i tudót nem alkalmazunk a ö2E7 Vb és/vagy VH CEK3 doménekben, Ezenfelül nem szabad konzervatív arninosavat szuoszti tuálni azokban az aminosav poziciőköan, amelyek kritikusak a hVNEa-hoz való kötődés szempontjából. hint a 3. példában kimutatjuk, 'úgy tűnik, hogy a D2E7 Vb CDR3 2, és 5. pozíciói és a D2E7 VH CöRŐ 1. és: 7. pozioíói kritikusak a hTNEo-val való ko osonnatas szenptnt;ábt1, tehat előnyösen nem végzünk szubsztitudókat ezekben á pozíciókban (bár, mint fent leírtuk, ar alanin szubsztitúciója a D2E7 VL CDA3 5. pozíciójában elfogadható).
A találmányban alkaImazható izolált humán antitest vagy ennek antlgén~kbtö: része előnyösen az alábbi, tulajdcnsagokfcal fendelkézi k:
a) a humán TÖFa-toi 1x10~J sec'1 értékkel és 1x10* H vagy ennél kisebb ik értékkel disszociái, mindkettőt felül e t i ρ 1 a zmo n r a ζ ο n an c í á va I me gh a t á r ο z va;
b) könnyű lánc Cchl dóménje a 3. szemű szekvencia által leírt amínossvszakvenciát tartalmazza, vagy egy módosított 3, számú szekvenciát, amely eegyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz az 1,, 4., 5.., 7. vagy 8. pozícióban, vagy
1-5 konzervatív aminosav szubsztitúciót az 3,, 4,,
5., l.f 8. és/vagy 3-, pozícióban;
c) nehéz lánc CDR3 doménja a 4, számé szekvencia által leért, aminosavszekvenoiát tartalmazza vagy egy módosított 4, számú szekvenciát, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz a 2., 3., 4., 5.., 6., 8-, 10, vagy 11. pozícióban, vagy 1-5 konzervatív aminosav szubsztitúciót a 2.,
3., 4,, 5., €,, 8., 3., lök, 11. és/vagy 12. pozícióban,
Előnyösebb, ha az antitest vagy ennek antigén-kötő része a humán TKEn-tői 5 x Í0'<1 sec'' sebességi állandó mellett óisszöcíál.Még előnyösebb, ha az antitest, vagy ennek antigén—kötő része a humán TbFd-tól 1 x 10’ sec1 K0:fce sebességi állandó mellett dísszocíál.
A találmány egy kővetkező kiviteli alakjában olyan izolált humán antitestet vagy ennek anr. igén-kőtő részét alkalmazzuk, amelyben a könnyű lánc variábilis szakasz (LCVRí olyan CDR3 dómént tartalmaz,, amelynek az amlnosevszekvenoiágát a 3, számú szekvencia írja le vagy egy olyan módosított 3. számú szekvencia, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz az 1., 4,,
5,., 7. vagy 8. pozícióban, és amel yben a a a néz lánc variábilis szakasz (BüVR) olyan CDR3 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját a 4. számú szekvencia Írja ie, vagy egy olyan módosított 4. számú szekvencia, amely egyetlen alanin szubsztitúciót tartalmaz a 2., 3-, «., 5,, 6., 9.< 10. vagy 11.. pozícióban. Előnyösen az LCVR egy olyan C0R2 domént tartalmaz, amelynek az aminosavszekvenciáját az 5, számú szekvencia (azaz: a D2E7 VL. CDRáj írja le és a HCVR egy olyan CDR.2 domént tartalmaz, amelynek ai aminosavszekvenciáját a 61 számú szekvencia (azaz a D2E7 VH GÓR2) Írja le. Még előnyösebb, ha az LCVR COR1 doménje a 7. számú szekvencia szerinti (azaz a D2R7 VL CDRi) aminosavszekvenciát: tartalmazza éa ba a HCVR CDRi doménje a 5.
számú szekvencia szerinti (azaz a ú2E7 VH CDRi) aminosavszekvéneiét tartalmazza. A. Vl frameoork szakaszok előnyösen a Vfcl humán csiravonai családból származnak, előnyösebben az A20 humán csíravonal Vk génből és legelőnyösebben az lé és 13 ábrákon látható D2E7 VL ftameeork szekvenciákbéi, A VH trameuork szakaszok előnyösen a VK3 humán csíravonal családból származnak, előnyösebben a DR-3I humán csiravonai VH génből éa legelőnyösebben a 2A és 2B ábrákon látható D2E7 VH framevork szekvenciákból.
A találmány egy még további kiviteli alakjában olyan izolált humán antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzuk, amelyben a könnye lánc variábilis szakasza (LCVR) az 1, számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VL) tartalmazza, és a nehéz lánc variábilis szakasz (HCVR) a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2E7 VH) tartalmazza, Bizonyos kiviteli formákban az antitest egy olyan nehéz *
lánc konstans szakaszt tartalmaz, mint agy IgGl, IgG2, !gG3, IgG4, IgA, XgS, IgE, lob vagy IgD konstans szakasz-, & nehéz lánc konstans szakasz előnyösen egy IgGl nehéz Isse konstans szakasz vagy egy IgGl nehéz lánc konstans szakasz. Ezenkívül az antitest olyan könnyé lánc konstans szakaszt tartalmazhat, amely vagy egy kapna könnyű lánc konstans szakasz vagy egy lombos könnyű lánc konstans szakasz. Az antitest előnyösen kappa könnyű lánc konstans szakaszt tartalmaz, az antitest rész példán! vagy egy Fan fragmentum, vagy egy egyléncú Fv fragmentum lehet, a találmány további kiviteli formáiban olyan Izolált humán antitestet vagy ennek antigén-kötő formáját alkalmazzuk, amelyben Üli'-z cl rokon VL és VH CDs 3 domb nos vannak. Itt például olyan, antitestekről, vagy ezek antigén-kötő részeiről van szó, amelyekben a könnyű lánc variábilis szakaszának. (LGVR’s GDR3 ooménje olyan aminosavszekveneiat tartalmaz, amelyet a következő csoportból választunk ki: 3. számú szekvencia, 11. számú szekvencia, 12. számú szekvencia, 13. számú .s^-ekven-cia, 14. számú szekvencia, 15. számú szekvencia, lő. számú szekvencia, 17, számú szekvencia., 13. számú szekvencia, 12. számú szekvencia,. 23, számú szekvencia, 21.. számú szekvencia, 22. számú szekvencia, 23. számú szekvencia, 24. számú szekvencia, 25. számú szekvencia, 26. számú szekvencia, vagy amelyekben a nehéz lánc variábilis szakaszának (HCVR; GÜRI dóménje olyan aminesavazekvenorát tartalmaz, amelyet a következő csoportból választunk ki: 4. számú szekvencia, 27. számú szekvencia, 23. számú szekvenciái, 29. számú szekvencia, 3ű. számú szekvencia, 31. számé szekvencia,
32. számú szekvencia, 33. számú, szekvencia, 34, számú .szekvencia vagy 35. számü szekvencia.
Egy még további kiviteli formában olyan rekombínáns barnán antitestet vagy ennek antigén-kötő részét alkalmazzuk, amely a humán TNFa-t neutrálisát/a, de a humán ΤΝΤβ-t nem. Az antitest vagy ennek antigén-kötő része előnyösen a csimpánz TNFaaktivitását is neut ralitálja. és még legalább egy további főemlős TNFa-t, amely lehet pávián TNFa, selyemma gom TNFa, közönséges makákö TNFa, vagy rhesus magom TNFa. át antitest vagy antigénkötő része előnyösen burán, csimpánz és/vagy egy további főemlős TNFa-t neutrálisai egy standard in vitro 1329 assay-ben, 1 x rö~:S M vagy kisebb lü/o mellett, előnyösebben I x íő”& N vagy kisebb, még előnyösebben ο χ 1Ο’χυ N vagy kisebb ICNo mellett. Egy másik kiviteli alakban az antitest a kutya TNFa aktivitást is centralizálja, előnyösen egy standard in vitro 1923 assay-ben 1 x kh' N vagy kisebb ICsg: mellett, előnyösebben 1 x 1CTS M vagy kisebb, még előnyösebben 5 χ 10's M vagy kisebb 1CS3 mellett. Egy másik kiviteli alakban az antitest a sertés TNFa aktivitást is neutralizáija, előnyösen 1 x lö5 N vagy kisebb ICjj mellett, előnyösebben 1 x lö”5 Fi vagy kisebb és még előnyösebben 5 x 10' d vagy kisebb ICős ízel lett. Egy további kiviteli alakban az antitest az egér TNFa aktivitást is neutráliséija, előnyösen 1 χ ΙΟ'5 d vagy kisebb ICso mellett, előnyösebben 1 x lö5 N vagy kisebb és még előnyösebben 5 χ M vagy kisebb ICkj-nei.
A. találmányban felhasznált antitestnek vagy antitest résznek é.ca*.’t '«t^a szármáz»kait, vagy az antitestet vagy antítest-részt hozzáköthetiük más funkciós molekulához (például más pepiidhez vagy proteínhezi. Ennek megfelelően a találmány sze* rinti antitestek és antitest-részek magukba foglalják az itt leírt hűmén anii-TPFu antitestek származékait és más mádon módosttott forrná it, beleértve u immunadhézios molekulákat k. Például: egy találmány szerinti antitest vagy antitest-rész működőképesen kapcsolödhat (kémiai kötéssel, genetikai fúzióval, szem-kova!lene asszociációval vagy másként) egy vagy több más molekuláris entitáshoz, ilyen egy másik antitest (például egy bispecifikuá· antitest vagy diatest>, egy detektálható anyag, egy citotoxikus anyag, egy gyógyszer hatóanyag és/vagy egy olyan protein vagy peptld, amely közvetítheti ez. antitest vagy antitest-rész egy másik molekulával veid asszociációját (ilyen egy sztreptavidin mag-szakasz vagy egy noil.hiszt 1 din toldalék; , éz antitest származékok egyik típusát két vagy több (azonos típusé vagy különböző típusé) antitest kereszt kötésével áiiitják elő {például bispeci fi kas antitestek előállítása, céljából: , Kerészi kötést létesítő alkalmas linzerek lehetnek olyan heserobifunkciós linkerek, amelyek két határozóttan eltérd, olyan reaktív csoportot tartalmaznak, amelyeket megfelelő betét-szakasz (spacer; például: m-maleimído-bénzoii-b-hidroxi-szukcinimíd észter) választ el egymástól, vagv r '-obi u”\o c* ' . r 'Ό tn-k tpuldául; diszukcinimidii-sznberát). Ilyen linkerek a Piarc® Chemical Company-tói {Rockford, Π..beszerezhetők.
Egy találmányban felhasznált antitest vagy antitest-rész módosít ásához használható kimutatható reagensek közé tartoznak a fluoreszcens vegyületek. ilyen kímutathatő fluoreszcens reagens például a fiuoreszcein, fluoresZcein-ízotio-cianát, rodamln,
S - d i metil - a m 1 η -1 - na ft a 1 ín - s z c 1 f on 11 - k 1 o r i d, f í ko e r 11 r i n és ha * sonlők, Sgy antitestet detektálható enzimekkel Is módosíthatunk, Ilyenek péidánl az alkalikas foszfatáz, torma-peroxidáz, glukóz oxidáz és hasonlók. Egy antitestnek agy kimutatható enzimmel alkotott származékát további olyan reagensek hozzáadáséval mutatjuk ki, amelyeket az enzim kimutatható reakciótermék elöáilitására használ. Féldául: ha a kimutatható: anyag torma-psroxidáz, a hídrogén-peroxid és diamíno-henzidin hozzáadása olyan színes teakcxoterméket eredményez, ami kimutatható. Egy antitest biotinnal is módos átható, amely az avídin vagy sztreptaVidin Ιοί ödé s i nd íre k t mé résével dete kt á1h a t6.
II. Avirtestek kifejezése
Egy találmányban alkalmazott antitestet vagy antitest-részt elöállithaiunk immunglobulin könnyé és nehéz lánc gének gazdasejtben való rekombináns kifejezésével. Annak érdekében, hogy egy antitestet rekombináns technikával fejezzünk ki, egy gazdasejtet egy vagy több olyan rekombináns expresszien vektorral, amelyek az antitest immunglobulin könnyű és nehéz láncokat ködeié ödS fragmentumokat hordozzák, olyan módon transzfektálunk, hogy a könnyű és nehéz láncok a gázdásejtben kifejeződjenek. Előnyös, ha a kifejeződött láncok abba a táptalajba szekretálódnak, amelyben a gazdasejteket tenyésztjük és amelyből az antitesteket kinyerhetluk. Standard rekombináns metodikákat használunk az antitest nehéz és könnyé lánc gének izolálásához, e gének rekombi-aáns sxpressziös vektorokba való beépítéséhez, a vektorok gazdasejtekbe való bevezetéséhez, A metodikák leírása megtalálható a következő kiadványokban: Sambrook, Friteoh és Mániát is (szerk.;, Moieouiar CIoning; A Laboratory Manual, 2.
kiadás, Cola Spring Harbor, M.Y. (1939); F.M.Ausubei et el., (szerk.í Current Protooois ir Molecular Bioiogy, Greene Bublrshiou Associates (1939;; 4,316,397 számú amerikai egyesült áilamokhei szabadalmi leírás bites et al,; >
A D2.B7 antitest vagy egy D2Eb-tel rokon antitest kifejezéséhez először a könnyé és nehéz lánc variábilis szakaszokét kódoló DNS fragmentumokat izoláljak.. Ezeket a DNS-eket polimeráz láncreakció (PCR) használatával a csiravonal könnyű és nehéz lánc variábilis szekvenciák sokszorozásával és módos Írásával kaphatjuk meg, A humán nehéz és könnyű lánc variábilis szakasz gének csiravonal DÚS szekvenciái ismertek ezen a szakterületen (lásd például.: ,,VPese humán csiravonal szekvencia adatbázis; továbbá:: E.A,babét et al.., Sem:emoss of Frotelne of ImmunoiogIcai Interest, 5. kiadás, U.S. Department of Health and hűmen Services; MIH Bublication teo. 91-3242 í 1921b; I.M,Tomlínson et al., „The tepertőire of Humán Germline V;, Seguenoes Reveais about Fífty Groups of Segmenfcs wihh Different Hypervari.abie Loops, J.Mol. Bioi., 227, 776-798 (1992b J.P.L.Cox et al., ,,A Directory of Humán Germline 17; Segments Peveals a Strong Eias in tbelr Dsage, Eur .J, Immunoi.., 24, 827-S3& (1974); az említett kiadványok tartalmát referenciának tekintjük). A D2B7, vagy egy D2S7-tel rokon snittest nehéz lánc variábilis szakaszát kbdoiő egy DNS fragmentum izolálása céljából a humán esiravonai VH gének Va3 családjának egy tagját standard PCH-rel sokszorozzuk. A legelAnyósahb, ha a DB-31 Vg csiravonal szekvenciát sokszorozzuk. A D2E7, vagy egy D2E7~cel rokon antitest könnyű lánc variábilis szakaszát kódoló egy DNS fragmentum rzüt ^a. céljából a humán esiravonai Vb *
··$ Λ gének VKx családjának egy tagját standard PCP-rel sokszorozzuk. A legelőnyösebb, ha az A20 VL csíravonal szekvenciát sokszorozzuk.
A DP-3I csiravonal VB. és A20 csíra vonal VL szekvenciák sokssorozásához alkalmas PCP prímereket- a fent említett kiadványokban szereplő nukleotid szekvenciák. alapján tervezhetjük meg, standard m öeszerek ha s z n á 1arava1.
Mihelyt megkaptuk a csíravonal VH és VL fragmentumokat, ezeket a szekvenciákat ágy mutagenizáihatjak, hegy azok az Itt leirt. D2E7 vagy D2ő7-tel rokon a.mi.nosavszekvenciákat kódolják. A csiravonal VB és VL LBS szekvenciák által ködeit aminesavszekvenexákat először összehasonlít juk a Ώ2Ε7 vagy ö2E7~tel rokon VB. es VL aminosavsrekvenciákkal, hogy azonosítsuk a D2E7~ben vagy a D2L7-toi rokon szekvenciában azokat az aminosavakat, amelyek különböznek a csíravonaltői. őzeién a esiravonal DNS szekvenciák megfelelő nukleotidjait úgy mutagenizáijak, hogy a mutált csíravonal szekvenoia a CSE7 vagy a ö2E7~tei rokon aminosavszekveneiát kedeija, amikoris a genetikai kódot használjuk annak meghatározására, hegy milyen nukieotio változtatásokat kell végezni. A csiravonal szekvenciák mutagenizálásához standard módszereket használunk, ilyen a FCB-közvetí.tett mutagenezis (i.fct a mutált nukieotidokat olyan, módon visszük be a PCP primerskbe, hogy a PCR termék már tartalmazza a mutációkat) vagy a heiyre-irányuxő mutagenezis.
Ezenkívül, meg keli jegyeznünk, hogy ha a PCP ampl ifi rációval kapott „csiravonalszekvenciák. olyan aminosavakat £r smeverk s za ka s z o kóa n, ama1ye k kü i ö nb e znak a v al ódí konfigurációtól (azaz: a
X\ s z or c z o11 s ze kvenc iában kódolnak a esiravonal a valódi csiravonal szekvenciához kénest előforduló különbségeket például szomatikus mutáció eredményezi), kívánatos lehet, hogy visszaváltoztassuk ezeket az amínosav különbségeket az eredeti csiravonal szekvenciákra (azaz a framework csoportok „visszamutáiésa a csiravonal konfigurációra) ,
Mihelyt megkaptuk a D2ü7 vagy DlEv-tel rokon VB és VE szegmentumokat kódoló DNé fragmentumokat (a csiravonal Vü és VI gének. ookszorozásával és mutagenizáiásávai, mint fent leírtuk), ezeket a DBS fragmentumokat tovább manipulálhatjuk standard rekombináns DBS technikákkal, például:: a variábilis szakasz géneket teljes hosszúságú antitest lánc zenekké, Fab fragmentum génekké vagy scFv génekké konvertálhatjuk, Ezekben a manipulációkban a VL- vagy VH-kódolő DBS fragmentumot működőképesen egy más proteint ........ például antitest konstans szakaszt vagy egy flexibilis linkért -..... kódoló más DNS fragmentumhoz kapcsoljuk, &
„működőképesen összekapcsolt kifejezés — ahogy ebben a kontextusban használjuk — azt jelenti, hogy a két DBS fragmentumot ügy kapcsoljuk össze, hogy a két DBS fragmentum által kódolt, aminosavszekvenoiák mű.ködöképesek maradjanak.
A VH szakaszt kódoló izolált DNS~f teljes hosszúságú nehéz lánc génné vá!toztathsfcjuk azáltal, hogy a VH-kódolő DBS-t egy másik olyan DNS molekulához kapcsoljuk — működőképes módon — amely nehéz lánc konstans szakaszokat (CHI, CH2 és CH3) kódol, A humán nehéz lánc konstans szakaszok ismertek a szakterületen [lásd például: E,A,Nafeat et al, „Seguenoes of Frcteíns of inotunologioal. inter est, 5. kiadás, ú,3.Department of Health a.ne Humán Services, N1H Fublioatien No, 31-3142 (1991)) és az ezen
Ζ szakaszokat tartalmazó DNS' fragmentárnokát standard PCP sokszokozással kaptat jak meg, & nehéz .Lánc konstans szakasz lehet Igei, IgG3, IgG3, IgGi, IgA, IgD, IgN vagy IgD konstans szakasz, de a lege ionyösehb agy IdCl vagy IgGa konstans szakasz, Ami a Fab fragmentum nehéz lánc gént illeti, a VH-kődoiö DNS-5 egy másik olyan DNS molekulához kapcsolhatjuk — működőképesen ........ amely csak a nehéz lánc CHl konstans szakaszt kódolja.
A VL szakaszt kódoló izolált BN'S-'t teljes hosszúságú könnyű, lánc génné (valamint Fab könnyű lánc génné) konvertálhatjuk azáltal, hogy ha a VL-ködoló DNS-t. működőképes módon egy másik olyan DNS molekulával kapcsoljuk össze, amely a CL könnyű lánc konstans szakaszt kódolja. A humán könnyű lánc konstans szakasz gének ismertek ezen a szakterületen (lásd például; S.A.kábát et al. „Sequences of Proteiné of Innenologlcal Interest, 3, kiadás, V.S. Department of Health and Humán Services, ΝΪΗ Publicaiíon No. 91-3232 (1991)1 és az ezen szakaszokat tartalmazó DNS fragmentumokat standard Ili sokszorozásávai kaphatjuk meg;, a könnyű lánc konstans, szakasz lehet kúppá vagy lambda konstans szakasz, de legelőnyösebb egy kappa konstans szakasz, tgy sePv gén létrehozása céljából a VH- é.s VL-kódoló DNS fragmentumokat működőképes módon hozzákapcsoljuk egy flexibilis linkért kódoló másik fragmentumhoz — például (Cly^-Ser)3 aminosavakat kódoló szekvenciához ....... mégpedig úgy, hogy a VH és VI, szekvenciák folytonos sgyiáncű proteinként a flexibilis linkerrel összekötött ¥h és VH szakaszokkal — fejeződhessenek ki (lásd például: Sírd et ai., Science, 242, 42,3-426 <1933b; Hanton et al., Proe. Natl. bead. Sci,, 85, 5873-5883 (1388); hoCafferty et ai,, Mattra, 343, S52-553 (1130)1, találmányban felhasznált antitestek vagy antitest-részek kifejezése végett a részleges vagy telise hosszúságú könnyű és nehéz láncokat kódold űNS-eket --- aveiysket a fentiekben leirt módon kaptunk —- expresszIda vektorokba építjük oe úgy, hogy a gének működőképesen kapcsolódjanak transzkripciós és transzlációs szabályozó szekvenciákhoz. Ebben a kontextusban a „működőképesen összekapcsolt.' 'kifékezéssel azt kívánjuk jelezni, hogy egy antitest gént úgy rigaiunk a vektorba, hogy a transzkripcióé és transzlációs szabályozó szekvenciák a vektoron, belül funkciójuknak. megfelelően működjenek, azaz irányítsák az antitest gén transzkripciógát és transzlációját. Az expréssziós vektort és az expréssziós szabályozó szekvenciákat úgy választjuk meg, hogy a használt gazdasejttel kompatibilisek legyenek. Az antitest kőnynyü lánc gént és az antitest nehéz lánc gént külön vektorokba is be ép j r nerr.uk, de általánosabban úgy járunk el, hogy mindkét gént ugyanabba az expressziős vektorba építjük be..· Az antitest géneket: standard módszerekkel fpéldául az antitest génen és a vektoron lévő komplementer restrikciós helyek ligálásával, vagy, ha nincsenek restrikciós helyek, a tompa végek 1nyálasával) építjük be az expréssziós vektorba. A D2E7 vagy a D2S7-tel rokon könnyű vagy nehéz lánc szekvenciák beépítését megelőzően az expresszíős vektor már tartalmazhat antitest konstans szakasz szekvenciákat.
Például: a D2E7 vagy a ű2E7-tel rokon VH és Vh szekvenciák teljes hosszúságú antitest génekké rabi konvertálásának egyik megoldása abból áll, hogy a nehéz lánc konstans, illetve könnyű lánc konstans szakaszokat már kódoló expressziős vektorokba építjük Pe őket úgy, hogy a VO szegmentum működőképesen kapcsolódjon a CB szegmentum(okúhoz a vektoron belül és a vb szegmentum működőképesen kapcsolódjon a CL szegmentumhoz a vektoron belül , Egy további, vagy alternatív megoldás szerint a rekombínáns expresszien vektor egy olyan szignál pepiidet kódolhat, amely elősegíti az antitest lánc gazdasejtböl való szekrécióját. Az antitest lánc gént a vektorba úgy klónozhatjuk be, hogy a szignál· peptid működőképesen kapcsolódjék az antitest lánc gén aminotermináiis végéhez. A: szignál peptid lehet egy immunglobulin szignál· peptid vagy egy heterolög szignál· peptid (azaz egy nem immunglobulin proteinből· szármázó szignál· peptid; .
Az itt alkalmazott rekombínáns expressziás vektorok az antitest lánc géneken kívül olyan szabályozó szekvenciákat hordoznak, amelyek az antitest lánc gének expresszióját irányítják. .A „szabályozó szekvencia kifejezés alatt premiereket, enhanoere-ket és más olyan expresszié irányító elemeket (például: poliadeniiációs szignál; értünk, amelyek az antitest lánc gének transzkripcióját vagy transzlációját irányítják. Ilyen szabályozó szekvenciákat ír le például, a következő kiadány: Soeddel: Gene Expression Technology, bethods in Enzymölogy, 185, Academic Press, San Diego, CA. (1990; . A szakterületen jártas szakemberek tudják, hogy az expressziós vektor tervezése, beleértve a szabáiyezö szekvenciák kiválasztását, olyan faktoroktól függhet, mint a transzé omolandó gazdasejt kiválasztása, a kivánt protein expressziéjának szintje, stb. Emlős gazdasejtben történő expresszldhos előnyös szabályozó: szekvenciák köze sorolhatók az olyan virálís elemek, amelyek emlős sejtekben a magas szintű proteín exprassziőt vezérlik, ilyenek a citnmegaloví rus: (Cdt) (mint a CMC promoter/enhancer:, a Simian vírus 40 (SViQ) (mint at S740 promoter/enhaneer), adenovirus [például at adenovirus fő késői orcmoter (AdMIPí} es e pólyámé eredetű promoterek és/vagy «·'' -cscerek., A virális szabályozó elemeknek és etek szekvenciáinak: további leírásét lásd; 5,168,062 számú amerikai egyesült államokbeli. szabadalmi leírás (Stinskí); 4,510,245 (Bell et ai.) áss 4,968,615 (Schaiiner et al ,) számú amerikai egyesült államokbeli s t ab ad aImi leírás.
A. találmány szerinti vektorok ss antitest lánc géneken és s z a: b á 1 y o z ó a z. e k ve η ο 1 á ko n ki val t ovább í s z e fc ve η o iáké t t a r t a Ima z hatnak, például olyan szekvenciákat, amelyek a vektor replikínzóját szabályozzak a gazdasejtben (például a replikáeiős origók) és szelekciós markar géneket. A szelekciós marker gének elősegítik azoknak a gazdasejiefcnek a szelektálását, amelyekbe a vektort bevezettük (lásd például a 4,399,216; 4,634,665 és
5,179,017 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat,, ezek mind Axel és munkatársaitól származnak), Például a szelekciós marker gén rendszerint gyógyszerek — ilyenek a G418, higromiein vagy metotrexát — elleni rezisztenciát kölcsönöz annak a gazdasejének, amelybe a vektort bevezettük. Előnyös szelekciós marker gén például a dihidrotolát-reouktáz (DHPRi gén íöhfr' gazda s e j t e kbe η v a I ő £ e 1 h a s z n á .1 á s h o z me t o t r e x á t s z e 1 e k c i 6 / amp 11 .£ i k á elő esetén) és a neo gén (G418 szelekcióhoz),
Könnyű és nehéz iánook expresszlőj a végett a könnyű és nehéz láncokat kódoló expresszibe vektort (vektorokat) egy gazdasejtbe transzíektáijuk standard technikákkal, A „transzískeio kifejezés
7Í különböző: formái olyan technikák széles változatát foglaljak magukba, amelyeket általánosan használnak exogén ÖMS bevezetésére egy prokaricta vagy eukarióta gazdasejtbe. Ilyen technika például az elektroporáoió, kalcium-feszfstos preoipitáoio, DEA.E~dextrános trasszfekcxó ée hasonlók, Bár a találmány szerinti antitesteket elméletileg lehetséges akár prokarióta, akár enkariota gazdaaejtekben kifejezni, mégis a legelőnyösebbnek tartjuk, ha az antitesteket énkariófeá sejtekben és leginkább emlős gazdasejtekben fejezzük ki, mivel valószínűbb, hogy a prokarióta sejtekkel ellentétben az eukaríőta sejtek és főképpen az emlős sejtek tudják összeszerelni és szekretální a megfelelően felgombolyodott as immunolögíaiisg aktív antitestet. Közölték, hogy az antitest gének prokariőts expresszinga képtelen magas kihozataliéi aktív antitest termelésére (A.A. Boss, C.A.koca, Immunology Today, 6, 12-13 (1935)),
A találmány szerinti rekombináns antitestek kifejezéséhez előnyös emlős gsxdasejtek közé tartoznak a kínai hörcsög petefészek. (Chinese Hamster Ovary ::: CHO) sejtek (beleértve a dhír~ CHO sejteket; lásd: Oriaub és Chasin, Proo. Kati. Aead. Soi<, 77:, 4216-4220 (1980)j, amelyeket DEEP szelekciós markerrel használnak például R.J.Kaufmaan és ?*A.Sharp leí rása szerint : Möl. Bioi<, lök, 601-621 (1931), az HSO míelőma sejtek, COS sejtek és SF2 sejtek. Amikor antitest géneket kódoló rekombináns vektorokat veretnek be em os lazdass-tekoe, az antitestek termelése úgy történik, hogy a qezdasojteket annyi ideig tenyésztik, amennyi elégséges ahhoz, begy oz antitest kifejeződjék a gazdasejtben, előnyösebben, az antitest abba a táptalajba szekretálcdjék, amelyben a gazdasejtök növekednek. Az antitestek standard protein tisztítási módszerek használatéval nyerhetők ki a táptalajból.
A yazdasejiek arra is felhasznáihatbk, hogy az ép antitestek részeit — ilyenek a Fafe fragmentumok, vagy scW molekulák — megtermeljék, Ragéról értetődik, hogy a fenti eljárásban végrehajtotiváltoztatások a taláimány oltalmi köréhez tartoznak. Példáéi kívánatos lehet, hogy az antitest akár könnye láncát, akár nehéz láncét (de nem mindkettőt) kódoló DhS-sel egy gazdasejtet transzformáljunk. A rekombináns DNS technológiát, arra is használhatjuk, hogy azt a könnyű láncot, vagy azt a nehéz láncot kódoló DhS részt el távolítsuk,, amelyre nincs szükség a hTNFa megkötéséhez, de használhatjuk mind a könnyé, mind a nehéz láncot kódoló teljes DNS eitávolírására is, ha a hTNFa kötésénél ezekre sincs szükség. Az ilyen csonka DNS-bői kifejeződő molekulákat szintén a találmány szerinti antitesteknek tekintjük. Ezenkívül, termelhetünk olyan btfunkciós antitesteket, amelyekben egy nehéz lánc és egy kénnyé lánc a találmány szerinti antitestnek felel meg és a másik nehéz és könnyé lánc nem a hTNFara, hanem egy másik antigénre specifikus, ha ügy járunk ei, hogy standard kémiai kötési módszerekkel egy taláimány szerinti antitestet egy másik antitesthez kapcsolunk.
Egy előnyös rendszerben a találmány szerinti antitestnek, vagy antigén-kötő rés zének rekombinana expressz ló ja végett mind az antitest nehéz láncot, mind az antitest könnyé láncot kódoló rekombináns expresszios vektort dhfr' CHO sejtekbe vezetjük be kalcium!őszfút-közvet itett transz!ekcióval, A rekombináns exptessziós vektorban az antitest nevez és könnyű lánc gének m i .n d egy 1 k é t mű kö deképa s en kapus o 1 j u fc ö s s z e e n h a n c e r / p r omo tar szabályozó elemékkel (ezek például sváig CRV, adenovirns, stb, eredetűek letetnek, mint egy C3V enbsncer/AdMlP ptrometer szabályozó elem, vagy egy SViű enhancer/AöRLR orométer szabályozd elem), hogy a gének magas szintű transzkripcióját irányítsák, A rekom-bináns expresszibe vektor D.HFR gént is tartalmaz, amely a vektorral transzéaktáit CHO sejtek szelekcióját teszi lehetővé me t ot r ex á t s ze 1 e ke iö /amp 11 f i k.áο í ő has z n á Ia t á va 1, A s z e 1 e fctál t transzformált gazdasejtekét tenyészthetjük, hogy lehetővé tegyük az antitest nehéz és könnyű láncok expressziöját, majd az antitestet kinyerjük a táptalajból. Standard molekuláris biológiai >. tk ' 1 ' t/”' ' κ 1 — n u k 1e ot i dő k a t nukleotidokat
Páséhoz, a gazdasejtek transzfektálásshoz, a transzformált sejtek szelekciójához, a gazdasejtek tenyésztéséhez és az antitest táptalaj bé 1 va. 1. ó el küI ön izé s éhez .
Tekintettel az előbbiekre, a továbbiakban leírjuk azokat a nukleinsav, vektor és gazdasejt összetételeket, amelyek az antitestek és antitest részek rekombináns expressziójához használhatók, A D2S7 könnyű lánc variábilis szakaszt a 7. ábra és a 36. számú szekvencia mutatja be, Az LCvk CDR1 doménje a 70-.1Ö2 foglalja magába, CDRz dóménje a foglalja megába, CDP3 doménje a nukleotidokat foglalja magába, A 0zE7 nehéz lánc variábilis szakaszt kódoló .nukleotid szekvenciát a 8, ábra és a 37, számú szekvencia mutatja be, A HCVP CDki doménje a 91-103 nukleotidokat
143-168
265-291 foglalja magába, a CDR2 doménje a 148-198 nukleotidokat foglalja magába és a CDR3 doménje a 295-339 nukleotidokat foglalja magába.
A gyakorlott szakemberek számára magától értetődik, hegy a D2S7-tel rokon antitesteket vagy erek részeit (például egy CDR domént, mint egy Col 3 d orr éntj a 02 El LOVP~r és ECVR-t kódoló nukleotíd szekvenciákból ieszármaztathatjak. a genetikai kód és standard molekuláris biológiai technikák alkalmazásával ,
Egy kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavat biztosit, amely egy könnyű lánc CDR3 domént kódol. Ez a dómén a
3. számú szekvencia szerinti aminosavszekveneiát, azaz a D2E7 VL
CDkl-at tartalmazza, vagy egy egyetlen alanin szubsztitúcióval — az 1,, 4., 5-, 7, vagy 8, pozícióban ........ vagy 1-5 konzervatív aminosav szubsztitúcióval — az 1., 3-, 4,, 7,, 8. és/vagy 9, pozícióban — rendelkező módosított 3, számú szekvenciát tartalmaz. Ez a nukleinsav csak a CEE3 szakaszt, vagy előnyösebben egy teljes antitest könnyű lánc variábilis szakaszt (LÜVR) tud kódolni, Például: a nukleinsav egy olyan LGVR-t tud kódolni, amelynek a €bR3 cocán je az 5. számú szekvencia szerinti, aminosavszekvenelét (azaz a D2S7 VL CDRG-tj tartalmazza és ODRI dómén je a 3.
számú szekvencia szerinti aminosavszekveneiát (azaz a E2E7 VL,
CDR1 - e t) La r te. I ma z za..
Sgy másik kivitelt alakban a találmány olyan Izolált nukleinsavat biztosit, amely nehéz lánc CDE3 domént kódol. Ez a dómén a
4. számú szekvencia szerinti sminosavszekvenoiát (azaz a E2E7 v.H
CDR3~at) tartalmazta, vagy egy egyetlen alanin szubsztitúcióval .......
a 2., 31, 4,, 5,, 6,, 8., őt, 10., 11. pozícióban — vagy 1-3 konzervatív aminosav szubsztitúcióval — az,, 3., 4 <, 3,, 6., 8.,
3., 10., 11. és/vagy 12, pozícióban — rendelkező módosított 4.
számú szekvenciát tartalmaz. Sz a nukleinsav csak a CER3 sza4 4 kaszt, vagy előnyösebben egy teljes antitest nehéz lánc variábilis; szakaszt (HCVR; tud kódolni. Például; a nukleinsav egy olyan HCVR-t kódolhat, amelynek a CD82 dóménje a 8. számé szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2S7 vH CéRz-t) tartalmazza és ODRI dómén je a 8, számé szekvencia szerinti aminosav^szekvenciát (azaz a Ώ2Ε7 VH CDRl-eti tartalmazza.
Egy további kiviteli alakban a találmány olyan izolált nukleinsavakat biztosít, amelyek D2E7-tel rokon CDH3 dóméne kódolnak, például amelyeknek az aminosavszekvenciáját a következő csoport-
bői választjuk ki ; 3. 12. számú számú szekvencia,, szekvencia, 4. 13. számú s zámú szekvencia, szekvencia, 11. 14,
számú szekvencia,
s z cim u szekvencia 15. számú szekvencia, 18. s zárna szekvencia, 17,
számú szekvencia. 18, számú szekvencia, 18. s zámú szekvencia, 20.
számú szekvencia, •k k £ k < s zámú szekvencia. . , η>. ár < számú szekvencia,, 23.
s zárná szekvencia, 24. s zámú szekvencia, 25. számé szekvencia, 28.
s s ámn szekvencia. -> a zárná szekvencia, 28. számú szekvencia, k. ..· «
számú szekvencia,: 30, s zámú szekvencia, 31, számú szekvencia. 32,
szama sze uv emez a, SS. s zárná szekvencia, : 34 , s z ám ú szé k v e nc i a és
os, számú, szekvencia.
Egy még másik kiviteli alakban a találmány egy 1. számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát (azaz a D2S7 nCVü-t) tartalmazd antitest könnyű lánc variábilis szakaszt kódoló izolált nuklelnsavat biztosit. Ez a nukleinsav előnyösen a 38, számé szekvencia szerinti nukieinsavszekvenciát tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudták, hogy a genetikai kód degeneráltsága következtében más nukleotid szekvenciák is ködeihatják az 1, számú szekvencia szerinti aminosavszekvenciát. A nukleinsav csak az
5
LCVE-t kódolhatja, vagy kódolhat egy olyan antitest könnyű lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik az ICVR-hez. Egy kiviteli alakban ez a nnkleinsav egy rekombináns expressziét vektorban van.
Egy még további kiviteli alakban a találmány egy 2. számú szekvencia szerinti amlnoeavszekveneiát (azaz a D2E'? HCVR-t) tartalmazó antitest nehéz lánc variábilis szakaszt kódoló izolált nckleínsavat biztosit, Ez a nakiéinsav előnyösen a 37. számú szekvencia szerinti nukleínsavszekvenolát tartalmazza, bár a gyakorlott szakemberek tudják, hogy a genetikai kód degeneráitsága következtében más nukleotid szekvenciák is kódolhatják a 2.· számú szekvencia szerinti amínosavszekvenciát. A nnkleinsav csak a
HCVR-t kódolhatja, vagy kódolhat egy olyan antitest nehéz lánc konstans szakaszt is, amely működőképesen kapcsolódik a Hc7h-hez. Például a nnkleinsav egy IgSI vagy IgGá konstans szakaszt tartalmazhat. Egyik kiviteli alakban et a nnkleinsav egy rekombináns expxesstiós vektorban van.
űűyan expressziós vektorokat ta ismertetünk, amelyek antitest, nehéz láncot és antitest könnyű láncot is kódolnak. így például egy kiviteli alakban az expresszibe vektor aj olyan antitest könnyű láncot kódol., amelynek a variábilis szakasza az 1. számú szekvencia szerinti amínosavszekvenciát taráz a D2E7 LCVR-íg tart alma tea; és
b) olyan antitest nehéz láncot kódol, amelynek a variábilis szakasza a 2. számú szekvencia szerinti aminosavszekveneiát (azaz a űzni HŰVE-tí tartalmazza.
A találmányban alkalmazott antitestek kifejezésére szolgálnak azok a gazdasejtek, amelyekbe egv vagy több fenti rekombínáns expresszién vektort vezetünk be. Előnyös,- ha a gazdasejt emlős garassejt, előnyösebb, ha a gazdasejt egy CHC sejt, egy bSO sejt. vagy egy COS sejt.
A taláimány továbbá módszert ad egy találmány szerinti rekomfoináns humán antitest szintetizálásához, amikorra a fenti gardasejtet megfelelő: táptalajban addig tenyésztjük, amíg egy találmány szerinti rekdmbináns humán antitest nem szintet»záródik. A módszer tartalmazhatja még a rekomfoináns humán antitest táptalajból való Izolálását is.
XXX . Rekoxsfeánáns hwaán anbxtestek sseXsktálssa
A D2E7 vagy DiEu-tel rokon antitesteken kívül a találmányban felhasznált rekomfoináns humán antitesteket rekomfoináns kombinatorikus antitest gyűjtemény szűrése revén izolálhatjuk, előnyösen olyan fog által bemutatott sort gyűjtemény (phage display library) szűrésével, amelyet humán limfoeitákbŐI származó mRPS-bóI készített humán VL és VH cbbS-ek használatával áilitottünk elő. Az ilyen gyűjtemények készítésének és szűrésének metodikái ismertek ezen a szakterületen. Fág által bemutatott gyűjtemények létesítéséhez a kereskedelemben rendelkezésre álló kiteken (például:: a eharmaoia által gyártott Eecombinant Ehage Antibody System, kát.szám:: 27~(Hűö~öl; és a Stratagena féle SurfűAPÍSÍ phage display kit, kát,szám; 240612} kívül az antitest bemutató gyűjtemények létrehozásában és szűrésében különösen alkalmas reagensekre és módszerekre találhatunk példákét a következő szabadalmi leír ásókban és közleményekben ·: 0,223,409 számú amerikai egyesült i
államokbeli szabadalmi ieirás (Ladner et ai,); Wö 92/1:3619 számú nemzetközi PC? közzététel.;, iratok (hang et ai.); WO 91/17271 számú nemzetközt PC? közzétételi iratok (Donor et al.); WO 92/29731 számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (Pintér et al,}; kö
92/15679 számú nemzetközi PC? közzétételi iratok (Marklsod et al.); WO 93/9128« számú nemzetközi PCT közzétételi iratok (úréitring et al.); WO 92/01047 számú nemzetközi PC? közzétételi iratok (McCafferty et ai .); WO 32/09690 számú nemzetközi PC? közzétételi iratok (Gazra rd et al.); Fuchs et ai., Bio/?ec.hno.logy y, 1370-1372 (1991); Hay et al., Ham. énribod. öybrzdornas, 3, 81-85
(1992) ; Hu.se et a1., 5 c ie nce, 246, 1275-1281 ( 1989 ); MeCaffertv
et ai., bátoré, 348, 552-554 (1990 ) .; Griffiths et i ;1. , EMBO J.,
12, 725-734 (199 3); Hawkins et a).. , ő. A ol. Pb ol..., 226, 889-«96
(19925; Clacksοn et ai., Natúré, 35:2, í (2 4-628 (19 91) ; Gram et
ai,, INAS, 99, 3576-3580 (1992); Carrad et ai., Sro/Teahnoloyy,
9, i. 37 3-1377 (1991); Pocgenboom et ar,, buci, ne ide. Les., 19,
4133-4137 (1991); Barbas et al., INAS, 88, 7978-7982 (1991).
Egy előnyös kiviteli alakban a hTWFa vonatkozásában magas affinitással és alacsony felbomlási sebességi állandóval (off rate constant) rendelkező humán antitestek izolálása céljából egy, a hTWFo. vonatkozásában magas affinitása és alacsony felbomlás i sebességi álrángóval rendelkező egér anti-h?bFa-t (pl, Mák
195, a hibridoma letéti száma:: ECACC 87050801; 1987) használtunk először olyan humán nehéz és könnyű lánc szekvenciák szelektálásához, amelyeknek hasonló a kötési aktivitása hTHEa-val szemben. A. szelektálásra a üoogenboom és munkatársai által leirt (Wö 93/06213 számú. nemzetközi PC? közzétételi iratok) építőn lenyoma4« tos (epi top-e imprintlng) vagy irányított szelekciós (guided seleetion) módszereket használtunk. Az ebben az eljárásban használt antitest gyűjtemények előnyösen zcFv tárak voltak ha tárakat a kővetkező szerzők által leírtak szerint hoztuk létre és szűrtök.:; CcCafferty et al., VO 92/ölG-i7 szemű nemzetközi PCT közzétételi iratok; hoCafferti et al., betűre, 343, 552-554 (1993);
Grffiths et ai., EKBO 2., 12, 72 3--ő?3i 099330 Az eoFv antitest tárak szűréséhez előnyösen rekombináns humán hTNFa antigént használt unk .
Mihelyt az első humán VL és VH szegmentumokat kiszűrtük, „min and match'' (keverés és: illesztés) kísérleteket végeztünk. Ezekben a kísérletekben az elsőként szelektált VL és Va szegmentumokat különböző párosításban hTHFa kötésre szűrtük, hogy kiválasszuk az előnyös VL/VH pár-kombinációkat, Ezenkivüi , hogy tovább javlthassok az affinitást és/vagy hogy csökkentsük a felbomlás! sebességi állandó értékéi a hTFFu vonatkozásában, az előnyős VL/VH pár(ok) VL és VH szegmentumait találomra mutagenizáihatjuk, előnyösen a Vh és/vagy VL CDR3 szakaszában, egy olyan ei járásban, amely analóg az in vívó szomatikus mutációs folyamattal. Ez az in vivő folyamat felelős az antitestek affOltásának éréséért a természetes Immunválasz folyamán. Ilyen in vivő affinitás érést ügy vitelentünk ki, hogy a VH és VL szakaszokat olyan PCP primerek basználatávai sokazoroztuk, amelyek a VH CÉR3-mai, illetve VL CLP3-rnnl komplementerek. Ezeket a primereket bizonyos pozíciókban a négy nukleotiő bázis egy ráncom keverékével ügy „spóroltunk meg, hogy a kapott PCR termékek olyan VH és VL szegmentumokat kódoljanak, amelyekbe rendem mutációk kerülnek bevezetésre, éspedig a VH és/vagy VL CDR3 szakaszokban. Ezeket a véletlenszerűen nutagenizáit VH és VL szegmentumokat újra szűrhetjük h'THFa kötésre és kiválaszthatjuk azokat a szekvenciákat> amelyek magas affinitást és alacsony felbomlást sebességen mutatnak a hTHFo.-val való kötődés νona t ko zá s éber.
A kiválasztott antitest nehéz és könnyű láncok aminsavszekvenciátt Összehasonlíthatjuk a csiravonal nehéz és könnyű lánc amlnosavszakvencíákkai. Azokban az esetekben, amelyekben a szelektált VL és/vagy VH láncok némely framework csoportja különbözik a csiravonal konfigurációtól (például a tág gyűjtemény létesítéséhez ha^/'u^le immunglobulin gének szomatikus mutációja következményeként), kívánatos lehet, hogy „visszárnátáljuk a szelektált antitestek megváltozott framework csoportjait a csiravonal konfiguráoi.óhoz (azaz, hogy úgy változtassuk meg a szelektált antitestek framework aminnsavszekvenciált, hogy azok a csiravonal framework aminosavszekvenciákkal egyezzenek meg) , A. framework csoportok ezen „visszamutálását (vagy csiravonalhoz igazítását* „germllning) standard molekuláris biológiai módszerekkelf specifikus mutációk bevezetésével (például: helyre irányuló mutagenezis; PdR-közvefciteit mutagenezis; és hasonlók) végezhetjük el.
Miután egy megfelelő antitestet egy rekombináns immunglobulin bemutató gyűjteményből kiszűrtünk és izoláltunk, a kiválae/ua*1 antitestet kódoló nukleinsavat kinyerhetjük a display csomagból (például a fác génemből) és más expressziős vektorokba klónozhatjuk be standard rekombináns DBS technikák segítségévei. Ha kívánt, a nukleinsavat tovább manipulálhatjuk, hogy más találmány szerinti antitest formákat hozzunk létre (például: további immunου giobuiin. doméneket ....... például további konstans szakaszokat — kódoló nukieínsavnoz kapcsolhatjuk · , Egy kombinatorikus gyűjteményből. szűrés révén izeiéit rekombináns humán antitest kifejezéséhez· az antitestet kódoló ŐNS-t rekombinéns expresssíós vektorba klónozzuk be, majd emlős gazdasejtbe vezetjük be, ahogyan fent, a
11. f e j e z a f ben. leírtuk.
A fenti antitesteket és antitest részeket betegnek való beadásra alkalmas gyógyszerkészítményekbe vihetjük be. A gyógyszerkészítmény általában egy találmány szerinti, antitestet vagy antitest-részt és egy gyögyszerészétileg elfogabbatő vlvöanyagof tartalmaz:. A. „gyögyszerészetileg elfogadható vivöanyag alatt bármilyen és minden olyan oidőszer, diszperghélö szer, bevonó szer, antibakteriális és antifungáiis szer, izotonicitást biztositő és abszorpciót késlelteti szer és hasonló értendő, amelyek fiziológiailag kompatibilisek. Gyógyszerészetr szempontból elfogadott vivöanyag például a víz, konyhasó oldat, foszfáttal pufférőit konyhasó oldat, dextróz oldat, glicerin., etanol. és hasonlók, valamint ezek kombinációi. Sok. esetben előnyös lehet, ha tonícitást befolyásoló szereket adunk a készítményhez, például cukrokat, polialkoholokat — mint a mannát és szerbit ....... vagy nátriumkloridot. A gyögyszerészetileg eifoyadnstö vivóanyagok tartalmazhatnak még kis mennyiségű segédanyagokat zs, mint például nedvesítő vegy emuigeélo szereket, konzerváló szereket vagy pufferekét, amelyek az antitest vagy antitest-rész tárolási idegét növelik és hatásosságét fokozzak.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmény változatos formákban állhat rendelkezésre, Ilyenek például a folyadék, félig szilárd és szilárd dózis formák, azaz a folyékony oldatok {például injekciós és infúziós oldatok;, diszperziók vagy szuszpenziók, rabi attak, pirulák, porok, liposzómák és kúpok. Az előnyős forma a bevitel és a terápiáé alkalmazás tervezett módjárói függ. Az előnyös készitmények rendszerint injekciós vagy infúziós oldatok formájában állnak rendelkezésre, Az ilyen készítmények hasonlóak azokhoz, amelyeket emberek más antitestekkel való passzív immunizálásához használnak. A beadás előnyösen párénterállsan (például intravénásán, szubkután, intraperitonnáiisan, intramuszkulárísan] történik. Sgy előnyös kiviteli forma szerint az antitestet intravénás infúzióval vagy injekcióval juttatjuk be. Sgy másik előnyős kiviteli forma szerínz az antitestet intramuszkuláris vagy szubkután injekcióban adjuk be.
A terápiás készítményeknek az előállítás és tárolás körülményei között sterilnek és stabilnak kell lenniük. A készítmény oldat, mikroemuiztó, diszperzió, liposzöma gyógystérformában formula zhat d, vagy más olyan formában, amely alkalmas magas hatóanyagkoncentrációhoz. Steril injekciós oldatokat ágy készítünk, hogy az aktív vegyület (azaz antitest vagy antitest-rész) előírt menynyiségét bevisszük megfeleld oldószerbe, á fent felsorolt egy vagy több alkotórésszel kombinálva és ha szükséges, ezután szűréssel sterilizáljuk. A diszperziókat általában úgy készítjük, hogy az aktív vegyűletet olyan steril vlvöanyagba visszük be, amely egy bázikus diszpergálő anyagot és a fent felsoroltak közül a szükséges egyéb alkotórészeket tartalmazza. Steril porok, esetében, amalvckcc- steril injekciós oldatokat készítünk, a készítés
A iiöfiilzá~ előnyös módszere a vákuum szárítás és iiofiiizáiás lássál pert állítunk ele az aktív hatóanyag plusz az Összes többi kívánt alkotórész előzőleg sterilre: szúrt oldatából. Egy oldat megfelelő fluid.;, zása példáz! bevont-anyag — ilyen a iecitln. .......
használatával, tartható fenn., továbbá diszperziók esetében a kivánt részecske-nagyság fenntartásával és felületaktív anyagok heeznáiafávai. Az injekciós készítmények meghosszabbított abszórpólója úgy biztosítható, hogy a készítménybe egy olyan szert viszünk be, amely késlelteti az abszorpciót, például morcsztearát-sökkal és zselatinnal.
A humán TbEa-kötö: antitestek és anti. test-részek a szakma által ismert számos módszerrel alkalmazhatók, bár ami. a sokféle terápiás használatot illeti, az alkalmazás előnyben részesítést módja az intravénás injekció vagy infúzió. & szakterületen jártas szakemberek tudják, kegy az alkalmazás útja és/vagy módja a kivánt eredményektől függően változik. Bizonyos kiviteli alakokban az aktív vegyüíetet olyan vivőanyaggal készíthetjük, amely megvédi. a vegyüíetet a gyors felszabadulástól, Ilyenek a szabályozott leadást biztosító gyógyszertorrnak, például az implantátumok, a transzdermálís tapaszok és a mikrokapszulás leadó rendszerek, használhatók biodegradálbafő,· biokompati.bi.lls polimerek, ilyenek az etilén-vinll-acoiát, poiiaohidrzuek, pollgiikoi savak, kollagén, poii-orte-észterek és poii-tejsav. Ezen gyógyszertermék előállításának számos módszerét szabadalmaztatták vagy pedig általánosan ismertek a gyakorlott szakemberek előtt. Lásd például: Sast a inad and Controlied Release Drug Delivery Systems, d,h. Robinson (szerk,) karcéi Dekker, Inc., New York, I97R.
A humán ThFn.-kőtó antitestet vagy antigén-kötő részét olyan ty ?tyszor<ézttím-nyek e ^1 u.c t•'elhat' tk, amelyek orálisan alkaimazhatök, például inért oldatban vagy asszimilálhatok ehető vívóanyagban,, Az antitestet (és mén alkotórészeket is, ha kívánt) bevihetjók kemény vagy lágy fala zselatin kapszulákba, tablettánkatjak, vagy közvetlenül a beteg ételébe is bekeverhetjük. Orális terápiás alkalmazáshoz az antitesteket kötőanyagokkal együtt formuiázbatjuk és lenyelhető tabletták, bukkális tabletták, pasztillák, kapszulák, el.ixirek, szuszpenzíók, szirupok, ostyák és hasonló formákban használhat juk,. Amennyiben az előállit ot1 gyógy sze r kés ζ i tményt nem pa r ént érái hsán. alkalma z zuk, szükség lehet arra, hogy a vegyuletet olyan anyaggal, vonjuk be, vuc\ a vegyületet olyan anyaggal együtt adjuk be, amely megvédi az inaktív a 1 odastői.
Kiégészitő aktív vegyületeket is bevihetünk a koszitményekhe. Bizonyos kiviteli formákban, a találmány szerinti antitest vagy antitest-részt együtt formulátzuk és/vagy együtt alkalmazzuk egy vagy tbbo további olyan terápiás ezerrel, amelyek hasznosak az olyan, rendellenességek kezelésében, amelyekben a TMFa aktivitás ártalmas, Például: a találmány szerinti anti-nTNFa antitestet vagy antitest-részt együtt fermulázhatjuk egy vagy több további olyan antitesttel, amelyek más célantigénekhez kötődnek (például: olyan antitestekkel, amelyek más citekineket kötnek meg, vagy amelyek sejt felületi molekulákhoz kötődnek;, például egy vagy több citokinnez, oldható TNFa receptorhoz (pl- WO Sá/övOő irat) és/vagy egy ' :gy több olyan kémiai anyaghoz, s t a hTNFa termelődést vagy aktivitást (ilyenek a ciklohexán-iltőén származékok, amelyeket a NO 93/19751 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi irat ismertet). Ezenkívül, egy vagy több találmány szerinti antitest két vagy több előzőekben említett terápiás szerrel kombinálva kaszaálható, Az ilyen kombinált terápiákban az alkalmazott terápiás szerekből eredményesen használhatunk alacsonyabb adagokat, miáltal elkerüljük a lehetséges toxikus tüneteké t, vagy azokat a szövődményeket, amelyek a különböző: mo no fce rápiá kh ο z t a r suInak.
A taiáimány szerinti antitest vagy antitest-rész például a következő (nem kizárólag) rheumatoid arthritls-nél használt terápiás szerekkel kombinálható: nem szteroíd gyulladásgátlő szerek (non-staroiddal anti-infiammatory drugis> - hSAIDs); oitekin szuppressziv gyulladásgátlő szerek (oytckine suppressive anti- int iámmá tor y drug(s) ::: CSAlDs) ; CDP~S7Í/BAY~10~33S6 (humanizált arti-TNFa antitest; Cslizech/layer)/ oA2 (kimére anti-TNFd antitest; Centooor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF reoeptor-lgG íóziős protein; Immunén; lásd például; Arthritis and Rheumatism, 37, 3295 (1394); J, Invesz .Med., 44, 235A (1936) ] ; 55 kdllFR-IgG (55 kD TNF receptor~TgG fúziós protein; Hotímann-LaRoche); IDrC-ÖS9.1/3B 2103 96 [nem kimeritett prímát izéit anti-CDi antitest;
IDEC/Smithőiine, lásd például; Arthritis and Rheurnatism, 38, 5185 (1935)}; OAB 486-11-2 és/vagy DAB 383-11-2: ili-z fúziós proteinek; Seregen; lásd példáéi: Arthritis and Eheumatism, 36, 1223 (1993)? Anti-Tac (humanizált anti-11-2Ra; Drótéin Desing Labs/Rpche); 11-4 (gyniladásgátlo cltokin; DNAN/Sehering); 11-10 (SCü 52000; rekombináns TL-IO, gyulladásgátlő cltokin; DNAX/Schering) ; 11-4, Ii-10 és/vagy 11-4 agonisták ·például agonista antitestek}; li-lRA (11-1 receptor antegonista; Synergen/Amgen); TNF-bp/s-7kFR (oldható l’FE kötő protein; lásd például: Arthritis and Rheamatism, 39, 9, szupplementum, 52 54;
Amer„Okzhysiol.-Eeart and Circulazory Ehysiology, 2 6$, 37-42 (1995)]; B973401 (roszic-diészteréz lk típusú Inhibitor; lásd például: Arthritis and EheumatIsm, 39, 9. szupplementum, 5999 (1396}]? MK-966 [CöX-2 inhibitor; lásd például: Arthritis and
Eneumatism, 39, 3- szupp lement ura, 581 (1996}); iioprost (lásd például: Arthritis and Rheumatlsm, 3 9, 9. sruppiementum, 582 (1996}]; mefcotrexát; talidomid (lásd például; Arthritis and Rhenmatism, 39, 9, szupplemsntum, S2S2 (1996)] és a taiidozdd-dsl rokon gyógyszerek (például: Colgén); leflunomid [gyulladásgátló és oitokin inhibitor; lásd például; Arthritis and Eheumatism, 39, 9. szuppiementum, 513 (1936); Inflammation Resesrch, 46, 103-107 (1996}}; tranexamin sav (a piazmnnogén aktiválódás inhibitora;
lásd például; Arthritis and Rheurtattsm, 39, 9 . s znpp1ement un,
52 84 (1996) ]; T-614 [oltokin inhibitór. lásd pélOá ui: Arthr i t i s
and Rheumatlsm, 33, 8, szupρIóment um , 52.82. (1936)}; oroszta-
giandin FI }1< isd például; Arthritis and Eheumatism, 39, 9. szupp-
ismentam, 5282 (1996}]; Tonidap (nem-srteroid dyulladásgátló szer; lásd például; Arthritis and Eheunatism, 39, 3. szupplementűm, 5 2 8 0 [1996))}; ha.p r o xe n [ nem - a a te r o i d gyűl I a d á s ga 11 ó szer; lásd például: Eeuro Eeport, 7, 1203-1213 (1996}]; Meloxicsu (nom“Szteroíd gyulladás-gátló szer); Ibnprofen (nam-szterold gyulladás gátló szer}; 31rominam (nem-sziaroló gyűliadásgátló szer);
Ficloienac (nem-szteroid gyuiladásgátlő szer}; Inúomethacin (nem-szteroíd gyűlladásgátló szer); Suitasalazine (lásd például;
s δ
Arthritis and Rheumatism, 39, 3. azupplementum, 3231 (1396; ] ; .Aza.thdopri.ne (lásd például: Arthritis and űheumatism, 39, 9.
szuppieneutun, 3291 :1 396}j ; ICE inhibitor (az interleukin-lk konvertáló enzim, inhibitora?; zap~?0 és/vagy lek inhibitor (zap-70 vagy lek rirozin kinéz inhibitor); VEGE inhibitor és/vagy VESE-R inhibitor (vaszkuláris endoteiiál.is sejt növekedési faktor vagy vaszkuláris endotsliális sejt növekedési- faktor receptor inhibitorök; angiogenezis Inhibitorok); kortikoszteroid gyulladásgátló szerek (például SS2035SQ); TNE-konverfáz Inhibitorok; anti-IL-Í2 antitestek; imterlenkin-ll (lásd például: Arthritis and Rheumatism, 39, 9., szupp lemen tűm., 3236 (1996}j ; Inzerieukin-l 3 (lásd például: Arthritis and Ehesmatism, 39, 9„ szupplemenfum,
2308 (1996??; interleukin- 17 inhibitorok fisad például: Arthritis and Hhenuazisn, 39, 9. szuppiementum, 21.20 (1996? ;; gold;
peniciliamin; ki.orckin; hidroxíklorokin; kiorambucii; crklofoszfamid; cdklosporin, teljes limfoid besugárzás; anti-tlmodts globulin; antí-CDi antitestek; CD5~toxinok; orálisan alkalmazott pepiidet és kollagén; lobenzarit dinátri.um sö; Cytokine Reguiating Agents (CRAs) H.P228 és HP466 (Houybten Pharma·· ceutrcals, Inc.}; ICAM-l antiszensz foszforotioát oligodezoxinukieotídok (ISIS 2332; Isis Pharmaceutioais, Inc,}; oldható komplement receptor 1 :(TPlö; T Cei.I Sciences, Inc.?; prednizon; orgonáin; glükozamínoglükán poliszulfát; minocikün; antl~IL2R antitestek; hal -félékből szármázd és botanikai ii.pi.dek. fhal és növényi mag eredetű zsírsavak; például Dehuta et al., Rheum, Dís. din. North. Am,, 21, 159-777 (1995/|; auranofin; renílbutezon;
Získlof enamin sav; flufens.mrn sav; intravénás immunglobulin;
zíleuton; mikofenol ssv (RS-ui/43;; fakroltmusz (FR-S06); sziroiimusz {zapamlcin} ; amiprii.óz {ferafektin} ; kiadribin (2-klór-dezoxi-adenozin} ; és azaribin,
Bgy humán TNFa-kötó antitest vagy antitest-rést például, a kővetkező (nem kizárólag} gyulladásos bélbetagságnál használt terápiás szerekkel kombinálható: buóenozid; epióermálrs növekedési faktor; kortikoszteroidok; eiklosporin; szulfaszalazin; azu.noszalicillá tök; o-mctkapto-purin.; arstloprin; metronidazol; liptaigenáz inhibitorok; mezaiamin; oisxalazin; balszslazid; anticxcoánsok; tromboxán inhibitorok; IL-l receptor antagonisták;
anti-In-lh monoklonáiis antitestek; anti-IL-6 monoklonáiis antitestek; növekedési faktorok; elaaztáz inhibitorok; prid.r’imidazoi vegyületek; CD7-57I/BAY-3356 {humanizált anti-TFF« antitest; Celitech/Bayer); tsz {kimére anti-TNFu antitest; Centooor); 75 kdTBFR-lgG [75 ki TPF receptor-IgG fúziós protein; immunex, lásd például; Arthritis and Rheonatisn, 37, 3255 (155«}; J.
invest. hot., 44, 2352 (1996) ] ; 55 kóTCFR-lgG (55 kb TRF reteptor-IgG fúziós protein; Hofinann-La Roota); interieukrn-10 (SCK 12000; Schering-Rlöugh); 15,-4, IL-iO és/vagy IL-4 antagonisták (például: agonista antitestek}; interleukin-ll; a prednizolon, dexasietazon vagy budezonid giukuroniddai vagy dextránnai konjugált gyógyszer e lót érmékéi.; ICAR-l antlszemsz ioezíoroticát oligodezoxínukleotidok (I51S 23G2; is isi Fharmaceuticals, Inc.;; oldható komplement receptor 1 (ΤΡΙΟ; I Coli Sciences, Inc.}; lassan felszabaduló meszelazin; metotrezét; Piatelet Activating Factor (RAF) antagonisták; oiprofloxacin; és iígnokam.
Sgy humán TNFa-kötő antitest vagy antitest-rész például a kővetkező (nem kizárólag; szklerózis multiplex-nél használt terápiás s z e r e k k s 1 komp ζ n ázható: kert z kosz terez ο o k; p r enni z ölen;
metziprednizoion; azatioprin; ciklusoszfarnid; ciklosporzn; metotrexát; 4-aminopiridi··; tizanidzn; zr.ter reren-3 1 a u'u?zzmz':h Fingén;; interfaron-AIP (Betaser on'ríg Chiron/Beriex); Copoiymez 1 (Cop~l; Copaxone;?'i Teve Phermaceut icaz Industries, Inc.); magas nyomású oxigéné intravénás immunglobulin; klaforibin; CD:R~57'z/SA¥~ -10-3356 (humanizált ahti-TNFa antitest; Celitech/S-ayer 1; cA2 Okiméra anti-TNFa antitest; Centooor); 75 kdTNFR-TgG [75 kD TNF receptor-IgG fúziós protein; Immunex? lásd például. Arthritis and
Rheumetísm, 37, Szád (1934); dl levest. Ned., 44, 235A (1396)1;
kdTNFR-IgG: (55 kD TNF receptor-Ige fúziós protein; Hoffmann-La Foohe); IL-zö, IA-A? és IA-I9 és/vagy II-4 ágonisták (például agonista antitestek).
Sgy humán TNFa-köto antitest vagy antitest-rész például a következe (nem kizárólag szepszzsnéi használt terápiás szerekkel kombinéiható: hipertóniás só-oldatok; antibiotikumok; intravénás gammaglohulin; folyamatos hámoz 1 It ráció; karbapenemak (például:: meropenem); oitokin antagonisták, mint TNFa, .T.L-IB, 11-6 és/vagy zh-8 antagonisták; CDR-S71/SAY-i0-3356 (humanizált anti-TNFa antitest; Celltech/Bsyer); cA2 (kimérs anti-TNFa antitest; Centoccr); 71 kdTNFR-lgu (75 ko receptor-ige fúziós protein;
Immonex; lásd például: Arthritis and Rheumatism, 37, S2 95 (1994];
ú. Invsst, Msd., 44, 235A (1995)); 55 xC^x/l-lgG (55 kD TNF receptor-lgG fúziós protein; Kofímaen-LaRoehe) ; Cytokine Regularing Agents (CRAs) HF228 és HF466 (Houghten Pharmaeeufieals, Inc.);
SFÚF 107647 (.alacsony molekulatömegű pepiid; Smich-XIine Beechsm); tetravalens guanü-hidrazon CNI-Ü93 (Picower Inetitn— te;; Tissue Factor Fathuay Inhibitor (TFFi, Chiron); FHP (kémiailag módosított hemoglobin; APEX Bicsciense); vas kaiét képzők és ke iátok, beleértvé a ói atil.én-tr iamln-pentasoetoav-vas(ITT) komplexet (DIBA vas(III); Moiioheb Medieines]; lízofIliin (szintetikus kis molekulájú metil-xantín; Gall I’herapenti.cs, Inc.); FGSGluoan (vízben oldódó ki ,3 glukén; Alpha-Seta Technology); apolipoproteln A-l, lipldekkel feltöltve; királís hidroxám savak (szintetikus anti-bakteriális szerek, amelyek gátolják a tinid A bioszintézisét); anti-endotoxín antitestek; £5531 (szintetikus
Hpid A antagonís-ték; Fisai America, Iné,); rBPIsi (humán Bactericídal/Permeábility- -Increasing Protein rekombináns Ntermu.nális fragmentuma); és Synthetic Anti-Endotoxin Peptides (SAEP; BiosYnth Resesreh Laboratories) .
Egy találmány szerinti antitest vagy antitest-rész például, s következő (nem: kizárólag) felnőttkori respirációs dísztrossz szintroma (aduit respirátöry distress ayndrome - AEDS; esetén, használt terápiás szerekkel kombinálható; anti-TŐ-8 antitestek; felüietaktiv anyag bejuttatásával (pótlásával) végzett terápia; CDE~571/BAY-iO~1356 (humanizált antl-TEFa antitest;
Celitscb/Sayer); cAz (kiméra anti-ΤΥΕα antitest; Centocor); 75 kd'TKFH-IgG (75 ko TFF receptor-IgG fúziós protein; Immunén, lásd: például; Arthritis and Rhenmatism, .37, S2 95 (1.994), 7, invest,
Med,, ti, 235A (1996)]; és 55 kóTNFE-igG (55 kO IMF receptor IgG fúziós protein; Hofzmsnn~La Fenne) <
κ· *
A találmányban alkalmazott antitestek vagy antitest-részek más terápiás etetekkel való kombitálésát a továbbiakban a IV, s 1fejezetben tárgyaljuk,
A találmány szerinti készítmények egy találmány szerinti antitest vagy antitest-rése „terápiásán hatásos mennyiségét/' vagy „proftlakiikosán hatásos mennyiségét tarba has zhatjak. A „terápiásán hatásos mennyiség Olyan hatásos mennyiségre utal, amelyÍvel a szükséges adagolás mellett és időtartam alatt elérhető a kívánt terápiás eredmény, Az antitest vagy antitest-rész terápiásán hatásos mennyisége például a következő faktorok szerint változhat: a betegség státusától, az egyén korától, nemétől, sólyától és az antitest vagy enni tesz-rész azon képességétől, hogy kiváltja-e a kivánt választ az egyénben. A terápiásán hatásos menynyíség olyan mennyiség, amelyben az antitest vagy antitest-rész minden toxikus vagy káros hatását ellensúlyozzák a terápiásán jótékony hatások. Egy „profilakta tusán hatásos mennyiség olyan hatásos mennyiséget jelent, amellyel a szükséges adagolás mellett és időtartam, alatt elérhető a kívánt prof iXa.ktifcus eredmény, minthogy profHektikus dózist a betegeknél a betegség előtt vagy a betegség egy korai szakaszában használunk, a profilértikusan hatásos mennyiség általában kevesebb lesz, mint a terápiásán haté s o s menny iség,
A dozirozási protokollt úgy állíthatjuk be, hogy az az optimálisan kivánt választ nyújtsa (például egy terápiás vagy profi lakúikus választ). Például alkalmazhatunk egyetlen boluszt, alkalmazhatunk több osztott dózist egy bizonyos ideig, vagy pedig arányosan csökkenthetjük vagy növelhetjük a dózist a terápiás helyzet követelményeinek megfelelően. A parenterális készítmények egyadagos formniázása különösen előnyös ez alkalmazás megkönnyítése és ez adagolás egyenletessége miatt. Az ezen leírásban szereplő egyadagos forma fizikailag különálló egységeket jelent, amelyek, mint egységes adagok, megfelelőek a kezelendő emlős betegek százéra; mindegyik egység az aktív vegyület egy előre meghatározott mennyiségét tartalmazza, amely számítás szerint a kívánt terápiás hatást eredményezi az előirt gyógyszerészeti vivőanyaggal együtt. A találmány szerinti egyadagos formákra vonatkozó előírást faj az aktív vegyület jellemző tulajdonságéi és az elérendő speciális terápiás vagy profÁlakéikas hatás es (fc) az egyenek érzékenységének megfelelő kezeléshez szolgálö ezen aktív vegyületek elkészítési módjával együttjárő megszorítások szabják meg ás ao említett, élői rés ezektől függ.
A találmány szerinti antitest vagy antitest-rész terápiásán vagy profitaktikusan hatásos mennyisége —- nem kizárólag ........ (1,1-20 rag/kg, előnyösen '1 — 10 rag/kg tartományban van. Megjegyzendő, hogy az adagolási értékek az enyhítendő állapot típusa es súlyossága szerint, változhatnak. Továbbá magától értetődik, hogy minden konkrét beteg számára specifikus dozirozási protokollt kell időre beállítani az egyén szükséglete szerint és az alkalmazást végző vagy a készítmény alkalmazását ellenőrző személy szakszerű megítélése szerint. Magától értetődik továbbá, hogy az itt ismertetett adagtartományok csupán példák, amelyekkel nem óhajtjuk korlátozni a találmány szerinti készítmény alkalmazási területét vagy gyakorlatát .
s ί * *
V. Λ humán Tfc?Fa-~k<>te antitestek alkalmazású területei
A bevezetőben megadott: f alajoonságokkal rendelkező humán
7X u ·\ζΐ> ι-u vcs: .. hfEFo ll'.\..as neutralizáiására minő: in vitro, mind in vivő (lásd a 4, példáid. Ezenfelül legalább néhány antitest — ilyen a D2E3 — más fajok TNFu aktivitását is képes centralizálni. Ennek megfelelően a fenti. antitesteket és antitest-részeket fel tudjuk használni a TNFa aktivitás gátlására például hTEFa-t tartalmaző sejt tenyészetekben, és olyan TEF«-kat tartalmazó emberekben és más erdősökben (ilyenek a. csimpánz, pávián, saiyemmajom, közönséges makákó és rheses majom., a. sertés vagy egér), amelyekkel egy fenti antitest keresztreagéX. Sgy kiviteli formában a találmány módszert ad a TNEa aktivitás gátlására. Ez abból áll, hogy a lEFa-t olyan módon kozzuk érintkezésbe egy humán TkFa-kőtö antitesttel vagy antitest-résszel , hogy ez gátolja a TüFo aktivitását. Előnyös, ha a TE Pa humán TE Fa. Például egy olyan sejt-tenyészet esetén, amely nTNFa-t tartalmaz, vagy gyanítjuk, hogy hTNFa-fc tartalmaz, egy humán TEPd-kőtő anti. testet vagy antitest -részt adhatunk a táptalajhoz, hogy a tenyészetben meggátoljuk a hTNFa aktivitását.
A találmány tárgya továbbá egy humán TNEa-kötő antitest vagy an t i gén-kötö r és zene k aIka1ma zá sa gyóg ys z e r ké s z i tmény e 1 ő á11i t ására olyan rendel·lenesség kezelésére, amelyben a TNFa aktivitás káros hatású. A ThFa a rendellenességek széles változatának patofizíoXőgiajóban szerepel [lásd például: A.Moeiler et al., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,924 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Moeiler et ai.), 260 610 81 számon közzétett európai szabadalmi leírás (A. koeiler)]. A találmány
X X * '* módszert ismertet a FNFa aktivitás gátlására egy olyan betegben, aki ilyen rendeiienességbet szenved. A módszer szerint a betegnél egy taláimány szerinti antitestet vagy antitest“reszt olyan nődön alkalmazunk, hogy a betegben a TREu aktivitását gátolják. Előnyös, ha a TNFa humán TFPa és ha a beteg egy beteg ember. A beteg egy ?NFa~t kifejező olyan emlős is lehet, amellyel a találmány szerinti antitest keresztreakelőt ad. A beteg egy olyan emlős is lehet, amelybe hTNEa-t vittek be (például hTRFa bevitelével vagy egy hTNFa transzgén expressziőga révén). Egy találmány szerinti antitest beteg embernél is alkalmazható: terápiás célbői (alább még tárgyaljuk?, A humán TdFa-kötő antitestet ezenkivül TWa-t kifejező nem. humán emlősnél (ilyen egy főemlős, sertés vagy egér) is alkalmazhatjuk — amennyiben ezen antitest a ThFv-vei keresztreagál — állatorvosi céllal, vagy, ha az emlős egy humán betegség állat-modellje. Ami ez utóbbit Illeti, az ilyen állatmodellek hasznosak lehetnek az antitestek terápiás hatékonyságának kiértékelésében (például: az adagolás és az alkalmazás időtartamának tesztelésében).
„Egy rendellenesség, amelyben a ’IRFa aktivitás káros hatású megállapítással olyan betegségekre és más rendellenességekre utalunk, amelyekben kimutatták, begy a rendellenességben szenvedő betegben jelenlévő TNFa felelős vagy feltételeznetőén felelős a zavar kórélettani okáért, vagy egy olyan faktor, amely hozzájárul a rendellenesség rosszabbodásához. Ennek megfelelően egy rendellenesség, amelyben a TFFa aktivitás káros hatást fejt ki, egy olyan ren.de ileneseég, amelyben a TRFcx aktivitás gátlása feltehetően enyhíteni, fogja a tüneteket és/vagy a körfolyamat súlyosbadósát, Az ilyen fajta zavarokat például aszal támaszthatjuk alá, ha a betegségben szenvedő beteg egy biológiai folyadékában a TEFo. koncentráció megnő (példát): egy beteg szérumában, plazmájában , szinov,iális: folyadékában, stb, megnő a TtFc koncentráció), és ez .....- például a fent leírtak szerint — egy auti-TbFd antitesttel kimutatható. Az olyan betegségekre számos példa van, amelyekben a TNF« aktivitás káros hatású. A hTNFa-kőtö antitestek és antitestrészek használatát speciális betegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészitmények előállítására az alábbiakban tárgyaljuk.
A tumor nekrőzis faktornak meghatározó: szerepe van a szepesis patofrziolőgiájóban, amely olyan biológiai hatásokkal jár, mint az alacsony vérnyomás, miokardiáiis szuppresszio (szívizom gátlás),, érrendszeri szivárgási szindróma, szerv elhalás, toxikus, másodlagos medrátorok felszabadulásának szimulálása, ás 22 alvadási. kaszkád aktiválódása [lásd például: A. moeiler et ai., Cytokine, 2, 162-169 (1990); 5,231,024 számú amerikai, egyesült államokbeli szaoadalmi. leírás (Hoeiier et ai.) 260 610 Bl számon közzétett, európai szabadalmi leírás (A. boeiler); K.J.Traoey, A.Cerami, Annu.Rév .Fed. 45, 491-503 (1934); D.Russel, F,C. Thompson, Curr.Opin. Siotech., 4, 714-721 (1993)1. A fenti ThFa-kotŐ humán antitestek és antitest-részek tehát felhasználhatók a szopszís kezelésére, annak minden klinikai megnyilvánulásánál, beleértve a szeptikus sokkot,, endct ox.í kas sokkot, gram negatív azepszist és a toxikus sokk szindrómát..
A szepszis kezelésében ezenkívül egy fenti TNFa-kótő humán antitestet vagy antitest-részt együtt alkalmazhatunk egy vagy
-fc ’í χ Λ.
őb több egyéb olyan terápiás szerrel, amelyek tovább enyhíthetik a szepszist, ilyen egy Interleukín-l inhibitor (lásd a W 92/16221 és 22 92/17583 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírásokat) , a citokin ínterleukin-ő (lásd a 20 93/11793 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi leírást), vagy egy orombocita aktiváló faktor antagonista (lásd példáéi az EP 374 310 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést}. A szepszis kezelésére szolgáló kombinációs terápiákat a 111, alfejezetben tárgyaljuk.
Egy előnyös kiviteli alakban a hTNEa-kötŐ antitestet vagy antitest-részt olyan gyógyszer előállítására alkalmazzuk, melyet a szepszises betegek egy alesöpörtiához tartozó olyan betegnek adunk be, akinek a szérumában vagy plazmájában a kezelés időpontjában as 71.-6 'koncentrációja 5ö6 pg/mi lelett ven és előnyösebben 1600 pg/mi [lásd a 90 95/2Ö973 számon közzétett 9CT nemzetközi szabadalmi leírást [1,. Paso et al.)}.
:S„ Autoimmun betegségek
Megállapították, hogy a tumor nekrózis faktor szerepet játszik a különböző attoimmtn betegségek kórélettanában, A ilb'a résztvesz például a szövet-gyulladás aktiválásában és rheumatoid arthritis-ben izületi károsodást okoz [lásd például: A.koeiier et ai,, Cytokine, 2, 162-169 (1990:); 5,231,024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Mosiler et ál.}; 260 610 Sl számon közzétett európai szabadalmi leírás (A.boeller)í Tracey és
Cerami, lásd fentebb; W.P.Arend, J.2.haver, Arth.Rheum,, 38,
151-160 (1995); R. A. Tava et al., Cün. Exp. immunoi., 99, 261-266 (1993} } . A TüEc-nak szerepe van. a sziget sejtek elhalásának előmozdításában és az inzulin rezisztencia közvetitésében cukorbeX Ül· öb fegaégbeu [lásd például: Tracay és Cerami, lásd fentebb; MO 94/35609 számon közzétett nemzetközi PCT szabadalmi leírás). ThFu játszik szerepet az oligodendrocifákkai szembeni citotoxizitea közvetítésében és a gyulladásos piakkok indnkáoiőjában szkierőzis multiplexben (például: Trscsy és Cetami, lásd fentebb), Kínéra és humanizált egér antx-hTbPm antitesteket teszteltek már klinikán rheumatoid: arthritis kezelésében [lásd például: M, o.Bllioét et al., , Lencet, 344, 1125-112? (1991); C.J.ElIictt et al. , Láncét,
3-44, 1105-1110 (1994) ; F,C,Fankin et ai., Br. 2. Pheumatol., 54,
334-342 (1995)),
A humán TkíF'a-kötő antitestek és antitest-részek felhasználhatók autoimmun betegségek kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények elöáiiitására, különösen szókéra, amelyek gyulladással járnak. Ilyenek a rheumatoid arthritis, rheumatoid spondyi.i fis, osteosrtbritis és köszvény-arthritis, allergia, szkierőzís multiplex, autcímmun diabetes, autoimmun uveitis és vese szindróma. Az antitestet vagy antitest-részt általában szisztémásán alkalmazzuk, bár néhány betegség esetén az antitest vagy antízest-rész lokális alkalmazása a gyulladás helyén, jótékony hacasú lehet (ilyen példáni rheumatoid arthritis-ben az ízületekben veid lokális adás, vagy helyi alkalmazás diabetikus fekélyekre, vagy egyedől, vagy egy oiklchexán-ilidén származékkal kombinálva, ahogyan ezt a hO 93/19751 számon közzétett PCT nemzetközi szabadalmi iratban ismertetik). Egy ηΤΚΡα-kötc antitest vagy antitest-rész egy vagy több további olyan terápiás szerrel együtt is alkalmazható, amelyek ez autoimmun betegségek kezelésére alkalmasak, mint ezt alább a Ili, fejezetben tárgyaljuk.
* * ó, Vaz-tózd betegségek
Megállapították, hogy a tumor nekrózis faktor egy oor fertőző betegségben észlelt .biológiai hatást közvetít. A igya résztvesz például maláriában az agyvelegyeiladás, kapilláris trombózis ée infarktus kialakulásának közvetrrésében, boa szerepel meningitisben az ag^ve„ ^gy.,( laoas közvet Ítélésében,- a vér-liguorgát összeomlás indnkciőjában, a szeptikus sokk szindróma kiváltásában és a vénás .infarktus aktiválásában, A TóFd. részfvesz a caobezia indukciódában, a virslis pro!iferáció stimulálásásán és szerzett Immunhiányos szindrómában (AIDS-ban) a központi idegrendszer károsodás^ mediálásábau.. Tehát a humán TREa-kötö antitestek és antitest-részek fértömő betegségek —· beleértve a meni.ngitis-f (lásd például, a EE 585 705 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést; , a eerebráiis maláriát, az AlDS-t és AlDS-szel összefüggd kompiex-ei (ARC; (lásd például az EP 230 574 számon közzétett európai szabadalmi be jelentést), valamint a transzplantáció utáni szekunder citomegoiovírus fertőzést (lásd például: E.Fietze et al., Transpiantation, 58, 875-680 (1.9 9 4 ) j -...... kezelésére szolgáié, továbbá a fertőző betegségekkel járó tünetek — beleértve a lázat és a fertőzés okozta (például influenza) izommájdaimat — enyhítésére és a fertőzés utáni {például az AIDÓ vagy ARC utáni) másodlagosan kialakult caohexia csökkentésére alkalmas gyógyszer készítmények előállítására is felhasználhatók.
£h Transxplantaciö
Hegállapitofták, hogy a tumor nekrózis faktor kulcs-nedlátorként vesz részt az ailográft kilökődésében, a grófi verses hőst betegségben (GVDH) és egy olyan adverz reakció közvetitésében,
χ. , amelyet akkor figyeltek mag, árékor a T sejt reoeptor-CDo komplex ellené OKT3 patkány antitestet használták transzplantált vesék kilökődésének gátlására (lásd például: J.D,Sason et ai., Tran.splentat.ion, 51, 500--395 (1951/·; k. Sutbanthiran, T.B.Strom,, dev Engl./.bed,, 331, 365-373 (199á>j. Így a humán ThEa-kötö antitesteket es antitest-részeket felhasználhatjuk a transzpiandátum kilökődésének gátlására — beleértve az ailograftokát és xenograftokát — és a CVDH gátlásra. Jóllehet. az antitestet és antitest-részt magában is használhatjók, előnyösebb, ha egy vagy több más olyan szerrel együtt használjuk, amelyek az &.1 lograff elleni immunválaszt gátolják, vagy a CVBH-t gátolják, leidéül; az egyik kiviteli alakban egy humán TbFa-köfö antitestet vagy antitest-részt OKTl-mai kombinálva használunk az OKT-imdukálz reakciók gátlására. Egy másik kiviteli alakban a humán IFéx-kbtő antitestet és antitest-részt egy vagy több olyan antitesttel kombinálva használjuk, amelyek más — sz immunválaszok szabályozásában résztvevő — célúk ellen irányulnak, ilyenek a sejttelüéeéi molekulák, a CD25 (interieukín-2 receptor-nj, CDire (LFA-i}, CDS1 (ICAb-1), CDi, CD45, CP28/CTLA4, CD30 (BT-lj és/vagy CD85 }B7~2}, Sgy még további kiviteli formában a. humán TDFa-kötő antitestet vagy antitest-részt egy vagy több általános imaujnszuporesszi v szerrel, mint a siklosporin A vagy az EF5Q6 kombinálva használjuk.
JS. MaXigeitás
Rosszindulatú betegségekben a tumor nekrözis faktor a cachsxia megindításában, a tumor növekedés stimuláiásában, a metasztatíkus potenciái fokozásában és a oítotoxioitás közvetítésében vesz részt. Tehát a humán TDEa-kötő antitesteket és antids‘ ~^ósoo\.of fzlhsszns a t osezxc 5ul;tú dsgane'ov vOdq:ú>gsk kezelésében a furnér növekedés vagy metasztázls gátlására és/vagy a mai igeitás másodlagos betegségének, a cachexiáuak az enyhítésére. Az antitest vagy anzitest-rész szisztémásán vihető te vagy lokálisan, a tumor helyére adható,
F. Tudóbetegvévek
Tumor neurózis faktor szerepel a felnőttkori őistress szindróma (AEDS) patofiziológiájáhan, beleértve a ieukooitaendoteliáiis aktiválás stimulációját, a pneumociták elleni öltötonicítás Irányifáaáf és a vaszkuláris szivárgási szindróma indukcióját:. A humán TNFu-kötö antitesteket és antitest-részeket tehát fel lehet használni a különböző pulmonáiis zavarok kezelésére, beleértve a felnőttkori respirációs: distressz szindrómát (lásd például a WO Ül/Ö4u54 számon közzétett nemzetközi TCT szabadalmi leírást;, a sokk tüdőt, a krónikus tüdőgyulladást, a pulmonáiis sarcoidosis-t, puimonáiis fibrőzlst és szilikózist, Az antitest vagy antitest-rész szisztémásán adható, vagy lokálisan vihető be a tüdő felszínére:, például aeroszol formában, A humán ΤΝΤα-kötő antitest vagy antitest-rész egy vagy több olyan további terápiás szerrel alkalmazható, amelyeket pulmonáiis zavarok kezelésében használnak, A továbbiakra vonatkozóan lásd a 111, síié j esetet .
A tumor nokrőzrs faktor a gyulladásos bélbetegségek patofizlolőgiájában is szerepei [lásd például: K.J.lracy et al., Sorenne, 234, 470-474 (1936); X-M, Sun et al,, J, Cián. levest,, 81, 1328-1331 (1988); Τ,T.MacDonald et ai., din. Exp. Immunoi. , 81,
J* * / hí
30)-33: (1990):. A kiméra egér anii-hTFPa antitestek klinikáé tesztelése a Ctstn betegség kezelésében [H.M. van Deliemen et ai., Gastrcenterology.·· 103, 129-1 :5 (1995)) már megtörtént. A humán INFa-kötő antitestek és antitest-részek a bélrendszer zavarainak kezelésére is használhatok. Ilyen a gyulladásos béibetegség, amelyet két tünetegyüttea jellemez: a Crohn betegség és a ooiitis uloerosa. Egy humán TBEa-koté antitest vagy antitest·--rész egy vagy több olyan további terápiás szerrel együtt alkalmazható, amelyeket bélrendszeri zavarok kezelésében használnak. .A továbbiakra vonatkozóan lásd a III, airejezetet.
Ah Szívbetegségek
A humán IFFa-kdtö antitestek és antitest-részek különböző szívbetegségek kezelésére is használhatók. Ilyen a szív is-émía (lásd például az EP 453 898 számon közzétett európai szabadalmi bejelentést) és a szívelégtelenség (a szívizom gyengesége) (lásd például a WO 94/20139 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentést): ,
Σ, bgyéb
A humán TNFa-köto antitesteket és antitest-részeket különböző más olyan betegségek kezelésére ugyancsak használhatjuk, amelyekben a TBFu aktivitásnafc káros hatása van. A patofizieiőgia számon tart más olyan betegségekre és rendellenességekre vonatkozó példákat, amelyekben szerepet játszik a TNEfö aktivitás, igy ezek is kezelhetők a találmány szerinti antitest vagy antitest-rész használatával. Ilyenek például a gyulladásos csont betegségek és a csont reszorpciós betegség [lásd például: D.R. Sertoiini et al . , Matere, 319, .519-519 (1996); A.Komig et al., J.Bone > ·*
X *
M i ne r. E e s ., j), 621-627 (1988); 6 > Η, Le r ne r, A, 0 h 1 i η, J, δ ρ n e Ml η o r ,
Rés., 9, 147-255 (2953;; és G.Shankar, P.H. Stert, Sons, 14,
671-876 (1393;), a hepatitis, beleértve az alkoholos hepatitis-t [lásd például: Cili MoClain, 0. A, Cehén, Pepatology, 9, 349-351 (198 3); RLE. Felver et al. , Aioohol.ClIn.Εχρ,Rés,, 14, 255-253 (1 990); J.Ransen et al., Pepatology, 20, 461-474 (1994)), a vírus hepaoltis-t [lásd: R.Sheron et ai., G.Hepatcl., 12, 241-245 (1931); M.O.Hussain et ai., 7. Ciln. Patkói,, 47, 1112-1115 (19:94;:}, és a fulmináns hepatitis-t; továboá az alvadási zavarok [lásd például: T. van dér Roll et al., M. Engi . 0, Med, , 322,
1622-1627 (1990;; T. van dér Roll et al., Prog. din, Bioi, Rés,, 36, 55-60 (1991;:), az égések [lásd például :; B.P.Grroir et al,,
Am. J. Physíol.. , 267, Eli 8-124 (1594;:; X.G.liu st al., BurnS, 20,
40-44 (1994;), a reperfuzios sérülés (lásd például:: W.E,3oales et
ai. , Am. 0. Rhyslf ;).., dlíS S3.122-Í127 [1594} ; C.Serrick et al,,
Iráns p1ant at i on, 58, 1138-2162 (1394}; Y.M.Yao et al.,
Re suscí ta ti on, 29, 157-168 (1995;), a kelőid képződés (lásd pél-
dául; R. dXcCauiey et al,, u, Clin. Immunoi., 12, 300-308 (1992)), a hegszövet képződés, pyrexla, a peniodontálís betegség, a kóros elhízás és a besugárzáson toxicitás.
A találmányt a koverkezö példákkal szemléltetjük. Ezek azonban nem érteimezendők úgy, hogy korlátozzák a találmány oltalmi, kórét. Az idézett szakirodalmi közleményeket és szabadalmi írató· kát ebben a bejelentésben referenciaként tekintjük.
Humán antitestek hTMEn-hoz való kötődésének kinetikai anaii aise
A irgandum ibioszenzor mátrixon immoöi lizált biotinesett rekomhináns humán TxEu. irhThFíx) ] és a vizsgáit anyag (oldatban lévő antitestek) között valós idő alatt lezajló kölcsönhatásokat (reai-time í.nteractious) felületi piazmon rezonancia ÍSPR surfaoe plasmon reéonánoé) segitségével mértük, BlAoore rendszer (Pharmacia, Fiscataway, NJ., USA)· használatával, /Plazmon - egy sejt teljes extxakromoszőmális állományának gyűjtőneve), A rendszer egy dextrán bioszenzor mátrixban a bekövetkező protein koncentráció változások észlelésére a SFR optikai tulajdonságait használja fel. A proteineket -~·· ismert koncentrációk mellett ........
kovalens kötéssel kötjük a dextrán mátrixhoz. Amikor antitesteket, injakrélcnk a dextrán mátrixon át, az injektált antitestek és az immobiiizált Ugandám között létrejött specifikus kötés megnövekedett mátrix protein koncértrációt eredményez, amely változást idéz elő az SPR szignálban. Az SPR szignál ezen változatait rezonancia egységként (Rü ;;; resonance onitl regisztráljuk és egy ssenzogramm y-tengelyén az idő függvényében ábrázoljuk.
Annak érőekében, hogy a bioiinezett rhTNFö immobiiizáiását a bioszenzor mátrixon elősegítsük, sztreptavidint kapcsolunk kovalens kötéssel a dextrán mátrixhoz szabad amin csoportokon keresztül úgy, hogy először aktiváljuk a mátrix karboxil csoportjait
100 mb H~hidroxi-szukeinImid-bei (NHS; és ICO mb H-eiii-thdietil-amlno-propil)-karbodlimid hiőrofclorid-dal (EDC) Ezután sztreptavidint nyomatunk át az aktivált mátrixon. Harmincöt mikrolzter sztreptavidint — 25 gg/mi; nátrium-aoetátban oldva, pH 4,5 — nyomunk át az aktivált, bioszenzoron és a proteinen lévő szabad aminek közvetlenül kötődnek az aktivált karboxil csopor9 9 tokhoz. A lereagáiatian EOG-észtereket 1 d etanolamln injektálásával dezaktiváijuk. A sztrsptsvidinnel konjugált bioszenzor csípek a kereskedelemből is beszerezhetők ;Pharmacia, PR-1000-16; Pharmacia Bfosensor, Biseataway, KJ. öSA).
,& biotinezett rhTOűa-t a kővetkezőképpen készítjük; először feloldunk 5,0 mg őiotint öD-bioiinii-s-smino-kapronsav - N-szukolnimld észter; Boehringer Hannheim, kát.szám; 1001 960) 500 pi dimetii-szültovidban, és így egy lö ng/ml koncéntrációjó oldatot kapunk. Tiz mi.kroli.ter biotint adunk az rhTNBm 1 ml-éhez (2,65 mg /ml mellett), hogy egy 2:1. biten; rhTKFo arányt kapjunk. A reakciőelegyet óvatosan elkeverjük és 2 órán át szobahőmérsékleten, sötét helyen in kábái. juk. Egy PD-10 oszlopot — törtet: Bephadex G-25M {Pharmacia, kát.szám; 17-0851-01) ........ 25 mi hideg PBS-sei hozunk egyensúlyba és felviszünk rá. 2 ml rhTKEa-biotio-t. Az oszlopot lö χ 1 mi hideg PBS-sel eiuáljuk, A leszedett frakciókat öibao-on olvassuk le 01,0 OO - 1,25 mg/ml) , A megfelelő frakciókat egyes lejük ás felhasználásig -8ö°G-on tároljuk:. Biotinezett rh'TNfa szintén kapható a kereskedelemben {Rég Systems, Minneapolis, db., USA; kát.szám; ETA00).
Á mát-^xon sztreptavidih utján iraraobilizála-odö biotinezett rhTNFa-t 0,05 % (BXAeors) 220 felületaktiv szerrel íPharmacia
82-1000-54, Pharmacia Bíeeensor, Piscataway, Hu., GSA) kiegészített BBS futtató pufferrel írunulng buffer) (Gibco 3RL, Stand !siand, KE., GSA; kát.szám: 14190-144) higitjük. Az rhTNEa-specifikus antitestek meghatározására kötési vizsgálatot végzünk a következőképpen: a biotinezett rh’fNFa részleteit (25 nd; Xö kl-es részletek): átnyomatjuk a sztreptavidinnel konjugált dextrán mátríxon ü ni/perc átfolyási sebességgel. A protetn Injekciója előtt és közvetlenül utána. egyedül ?BS puffért folyatunk ét minden cél.5 A’ elüt es 5 > ί. „ Ή ΐη’ΙΑλ . V ~ Ό ' ,e ^0-'“·után körülbelül 3b másodperccel kapott szignál közötti nettó különbséget tekintjük a kötési érték (körülbelül Süli ríj) mértékének, Mértük az rhTKFa-speoifikus antitestek immobilt zárt biotincsett rhldFu-hoz: való közvetlen kötődését is. .Az antitesteket BBS futtató pufferben (20 pg/mli hígítottuk és 25 gl-es részleteket. nyomattunk át az immobilIzéit protein mátrixokon 5 μΐ/pero átfolyási sebességgel. Az antitest injekciója előtt és közveflenül utána csak BBS puffért folyattunk át az egyes cellákon. Az alap szignál és az antitest injekció befejezése utáni szignál nettó különbsége mutatja a szőbanforgó minta kötési értékét. A bioszenzor mátrixokat ICO mM sósav oldatzal regeneráljuk a következő minta injektálása előtt. A feibomiási sebességi: állandó (off rate; F,»· zenetant), a kötődési sebességi állandó ;on rabé; K.,, eonstantj, az asszociációs sebességi állandó (associaticn rate; Ks constant) és a disszociácids sebessegr állandó íüissooiation rate; Ká- constant] mégha tározására BlAcore kinetikai kiértékelő software-t (2.1 verzió) használtunk.
A ’ (Ízül ’s _ t-s ovuszusó ηηζΆο,Ή .A'uezott rb7K~u-hoz való kötődésének reprezentatív eredményeit összehasonlítva az egér MÁK OS mát (F>ab' |2 fragmentum] használatával kapott eredményekkel, az I. táblázatban foglaljuk össze.
/
1, táblásat
A D2E? IgG4 vagy a MAE 19S kötődés® biotiaasett rhTNFa-hoz
Antitest At, nÁ rhlnkUx kötött íRü) At, kötött V u > rh'iuFa/Av. E-tf sec' íközépért,)
02E7 26 373 1215 1,14 8,45 x 10'
133 420 1569 2,30 5,42 x lö
67 434 1633 1.31 4,75 x 1Q~
33 450 1532 1-19 4,46 x 10
17 460 1296 7,98 3,47.....x.....lö5”
8 48 6 936 0.67 2,63 x 13'
4 48 3 536 8.38 2,17 x 17
z 47 7 244 0.18 3,68 x r 0
3θ χ ,θ-νΟ
8 .....
MÁK 195 400 37 5 ..............335............ ..............3,.22.......... 5,38 x 10
27 2 400 1030 1.38 4, 54 x 10
170 419 :: 1391........: 1.3S 3,54 x 10'
00 42 7 1106 1,32 'ijjö χ - AV
25 446 157 1.09 4,41 x IC''
:.................13 464 7 73 0.78 3, 66 x 10'
6 4“4 433 7.47 7, 37 χ :.7':;
3 451 231 0.26 6, 95 x 10'
(4,94 x 10*3
Egy második kisérlatsorozatban a 02S7 egy Igái teljes hcsszűságú termája és a biotinezett rhTKFo. közötti molekuláris kinetikai kölcsönhatások kvantitatív analízisét végeztük ei a BIAcore technológiát használva, mint fent leírtuk, A kinetikai sebességi állandókat a 2,, 3. és 4. táblázatban foglaljuk össze.
Λ « φ Φ’· Τ ά χκ 25^¼ «V ν «& «*£& «γ·
Α B2B? és a biotinezett rhTGFíX kösstts kölcsönhatasa kiszacitott disszoeiáciös sebességi állandók
3. táblásat
A D2S7 és a biot ina zett. rhTNFfí közötti kölcsönhatásra kiszámított asszociációs sebességi állandók
$ Kísérlet K«<M‘~ < ............ ..........................: .sec5}
i -
1 X í X y .?·’ 3 x .:. u
j 2 I v ·· d··’
1 ~ y ~· s-
i ........
:· k 5 *, /-
1 :» áfXO ,Λ »v V.·
4. feátbXár afe
A D2S7-re és feiotinesefcfe rbTNFa-ra kíssánifeöfefc reakció sebességi és affinitás! állandók
KisérXefe CM1, sec1 Ká <5®ο'ϋ
1 1,33 x iü1 3,58 χ lö3 7,20 x lö10
•d 1,05 x 1Ö5 3,26 χ 10 8,82 χ lö”10
3 3,36 χ 101 7,60 χ 10· 2,26 x 1OÍS
Középérték 1,21 i 1,26 x 105 8,81 ± 1,06 x lü~5 6,03 ± 3,42 x lö~ls
A disszoclácíós és asszociációs sebességi állandókat úgy számi. tottuk ki, hogy Szá analízis softvare-rei analizáltuk a szenzogramm disszcciáciős és asszociációs szakaszait. Feltételeztük, hogy a D2E7 és a biot lse zott rbTföFot molekula közötti kölcsönhatás a szokásos kémiai rsskcíékinetikét követi: a disszociáció zérus rendű reakció és az asszociáció elsőrendű reakció szerint megy végbe. A kinetikai adatok analíziséhez szükséges molekuláris modellek megvéiásatásában, ez analízis kedvéért, csak a bivaiens Q2E7 antitest egyik karja és a trlmer ’oíotinezett rhTNFa egy egysége közöm kölcsönhatást vettük számításba, bárom egymástól független kísérletet végeztünk és az eredményeket külön analízaituk. A 02E7 és a bíofi.nezett rhTPFa közötti kölcsönhatás számított disszocráciös sebességi. állandójának (Ké) középértéke 8, 81 -fc 1,06 x löt.sec3‘ és az asszociációs sebességi állandó K3 - 1,21 ± 1,26 x 10'; Μ3,sec3 volt. Az intrinszik disszoclácíós állandó (K^-t) ezután a K,· === k^/k., képlettel számítottuk ki. Tehát '-ϊ a D2E7 antitest rhTNEa-ra vonatkoztatott közepes 7, értekére a kinetikai peremé terekből 6,2:9 ±: 3,42: χ iö'1·'’ M: értéket kaptunk. á, 32E7 ígGl formájára (lásd a 2., 3, ás 4. táblázatot) és a D2S7 lcG4 formájára (lásd az 1. táblázatot ás a 2, és 3. példát) kapott kinetikai értekekben lévő kis különbségeket nem tekintjük valódi olyan különbségeknek, amelyeket vagy egy IgGI vagy egy T.gG4 konstans szakasz jelenléte okoz, inkább azt gondollak, hogy ez a pontosabb antitest koncentráció méréseknek tulajdonítható, amelyeket az IgGl kinetikai anaiizisénél használtunk. Ezért azt gondoljuk, hogy a D2E7 igéi formájára kapott kinetikai, értékek a D2E7 antitest legpontosabb kinetikai paramétereinek tekinthetők.
példa:
& D2B7 CDR3 dioméaek alaníanal végzett pásxfcá.xó mutagenisaiása
Standarc technikák használatával a 3237 VL és D2E7 VE szakaszok CDH3 dóménjel hosszában egyetlen alanin bevezetésével egy sorozat mutadenizálást végeztünk. A könnyé lánc mutációkat az IS ábra mutatja be (az LD2E?'őAl, LD3S74', A.3, LD2E7';'.A4, LDzE'Ő'.AC,
L22E77. A7 és ηο2Ε~'ΊΑ8 szekvenciák egy alanin mutációt tartalmaznak a D2É7 VL €Dü3 dómén 1,, 3., 4-, 5., 7, illetve 8. pozíciódéban;: . A nehéz lánc mutációk a 23 ábrán láthatók (a Η02Ε7ΆΑ1, HD2E7+.A2, Hu2A74iA3;, HD2E741A4, HD2E7mAőf KD2E7*.A£, Hü2E7~AA7, ΗΏ2Ε7ψ.α.3 és HSuEVnAS szekvenciák egy alanin mutációt tartalmaznak a D2E7 VH CuR3 dómén 2., 3., 4., 5., 6., 3., v., 12. illetve 11, pozíciójában. Az rhTPFa vad típusú D2E7 VL-bcl és VH-bői álló antitesttel végbemenő reakciójának a kinetikáját ősszehaSoni.ítot tűk olyan antitestekkel történő reakciójának a kinetikájával, amelyekben 1) egy ved tiposú D2E7 VL egy aisninnai szubsztítuált D2E7 VH-val pázosodoto; 2) egy ved típusú D2S7 VH egy alaninnal szubszt!toáif D2E7 VL-lnl párosodott; vagy 37 egy alaninnal szubsztituáit D2E7 VL egy alarmmal szubsztituáit D2E7 VH-vai párosodott. Mindegyik antitestet teljes hosszúságú lgG4 molekulaként teszteltük.
Az antitestek rhlNFa-val való kölcsönhatásának kinetikáját felületi piazmon rezonanciával határoztuk meg az 1. példában leirt módon. A különböző VH/VL párok felbomlást sebességi állandój át (Ken) « z ú. t a b 1 á z a t bán f o g 1 aljuk o ss a e
5. táblázat
D2E7 alanin-scan mutánsok kötődése biotánezett rhTNFa-bos
VH .........VE.................... KoHÍsec'’1)
D2E7 W C2E7 VL 9, 61 x 1C:;
HD2E7*.AI ó2E7: VLj^^IZ 1,4 x'IF
HD2E7-,Al 02Ξ7 VL 4, 6 x 10
HD2E~*,A3 D2E7 VL Lux 10'
HD2E7*. A4 D2E7 VL 1,3 x 104
HD2E7-.A5 D2E7 VL 2,35 x 10'
Ho2S7.Aő D2S7 VL 2,9 x IO4
HD2E7*.A7 D2E7 VL 1,0 x I0';
HD2E7*,A8 D2E7 VL 3,1 x 10·
HD2E7*.A9 O2E7 VL 8,1 x 104
D2E7 VH LD2E7*,A1 6,6 x IO7
D2E7 VH LD2E7mA3
D2E7 VH LD2E7*.A4 ................1,7'''X lú~:4·
Ö2E7 VH LD2E~*.A5 1,8 x lö4
D2E7 VH Lo2E7mA7 1,4 ITTct^
02E7 VH LD2E7-.A8 3,65 x lö4
HD2E7*.A9 LD2E7’.Al 1,05 x 1Ö4
η η
Ezek az eredmények azt rutatják, hegy a 02E7 VE és VH szakaszok CD.R3 doméjáben a pozíciók többsége alkalmas egyetlen alanín c s ο ρ o r v. t. a} v a 1 6 s z ub sztituáiá s r a. E g y éti e n a 1 a η ί n s z u b s z t i t ϋ c i ő j a a D2E'? VL CDR3 bőmén. 1,, 4„, 1. vagy 7, pozíciójában vagy « Q2E7 VH. CDR3 2., o., fe., 3., §,. vagy 10» pozioié j ában lényegesen nem befolyásolja a rhiHEo kötés felbomlási, sebességét, összehasonlítva a vad fíposú szülői D2E7 antitesttel, A D2E7 VL CDR3 3, pozíciójában vagy a D2E7 VH CDRÓ 3. pozíciójában végzett aianin szubszti-túoiá 4—szer gyorsabb értéket és égy alanín szubsztitünde;; a D3E7 vy 7ö?3 z, vagy 1., pozltrojábnn t-szor jvcrsabo kV.,;: értéket adott, ami azt mutatja, hogy ezek a pozíciók a kritikusabbak a rhTRFa-höZ való kötődésre nézve, Rgyetlen aianin szubsztitúció a D2E7 VL CDR3 dómén 1,, 4., 3., 7, vagy 8, pozíciójában, vagy a D2E7 VH CER3 dómén 2,, 3», 4., 0-, ói, S.f 9., ló, vagy 11. pozíciójában még mindig olyan anfi-rhTFFa antitestet eredményez, amelynek R^ értéke 1 x ii”'' sec vagy ennél, kisebb.
Az 1. példában leírt felületi plazmon rezonancia segitségével egy sor DVEf-tal rokon szekvenciája antitestet analizáltunk — a
D2S7”fei összehasonlítva ........ rhTRFa-hoz való kötődésükre nézve. 2 vizsgált Vb szakaszok aminosavszekvenclárt az lő és 1.8 ábra mutatja, 2 vizsgáit VH szakaszok amínosavszekvenciáit a 22 és 23 ábra mutatja. 2 különböző VH/Vi. párok 1® jelzett formában, vagy mint teljes hosszúságú igúl vagy leli antitest, vagy mint egy soFv} Kofí sebességi állandóit a 6, táblázatban foglaljuk össze.
> *
6. táblázat t32B7-tol rokon arái testek kötődése bxoflnezett rhTHFa-hoz
VH VL: Forma Ko í v (seeV
32 E 7 VH D2E7 VL IgGl/XgG4 3,05 x 13
VH1--D2 LOE 7 lgGl/lgG4 7,7 x 10^
VH1-D2 LOE7 scFv 4,6 x 10·
VHI-32 EH LOE 7.I IgG 4 2, I x 2<*K':.......
:..................SSSJ LOE 7, A IgG4 2,7 x 13
VHI ~ 32 El LOE7.2 IgG4 3,2 x lö-5
VH1-D2 E? S12 acFv 8,0 x
VH1--D2 2304 VL scí'v E.94 x lő'3
3C-R2 LOS? scFv 1,5 x 1Ö“
2SD4 VH EDE 7 scFv 6,07 x 105
2SD4 VH 2304 VE scFv 1,37 x lö3
VH1A11 2SD4 VE scFv 1,34 x IC2
VHI 3.12 2334 VL scFv .......Ι',ΟΓ'χ WZK.......
VH1311 2SD4 VL scFv 9, 9 x lö~’s
VH1E4 2SD1 VE s e EV 1,59 x 10“
VHi F6 S3D4 VL scFv 2,29 x lö“2
VHI 30 2514 VL scFv 9,5 x 10'3
VRIGl 2334 VE s e Fv 2,14 x lö''2
2SD4 VH EP 312 scFv 6,7 χ 10'···
2334 VH VL10F4 se EV 9, 6 x fő3
2SC4 VH VL1QGA9 s c F v 1,33 x 10:
2334 VH VL100D2 scFv 1,41 x IO2
2334 VH VE1OF4 scFv 1,11 x 13'2
2SD4 VH VLLOE5 scFv 1,16 κ lö2
2334 VH VLEOFS scFv 6,09 x 10' ·'
2SE4 VH VELŐFI 0 scFv 1,34 χ IO2
2334 VH .................-VLeDÍV................. scFv 1,56 x I02
2SD4 VH VELŐSE scFv 1,4 6 x 10~2
£334 VH 7LL0RI 5 c F V 1,17 χ IO2
2534 VH VLLOH1C scFv 1,12 x lö2
2334 VH VL1B7 scFv 1,3 x ICL'2
2334 VH VL1CL scFv 1,36 x ICO)
23D4 VH VE IC7 scFv 2,0 x lö2
2334 VH VLÖ.1F4 •scFv 1,76 χ lö2
2334 VH VL0E1H2 scFv 1,14 x IC2
A teljes hosszúságú antitesteknél (azaz IgG formáknál) — amelyekben a VL-t a DiE't L0L7, LGE?,! és 1.0E7 , A szekvenciák közöl választottuk, amelyekben vagy egy treonin vagy egy alanin van a 9. pozícióban — kapott alacsony ?tÍS sebességi állandók (pélo-u,: tkjf 1 55 10'5 seC'H ezt mutatják, hogy a D2E7 VL C0R3 9, pozrozóját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásonák a Köf£ értékét. Ennek megfelelően a D2E7 VL CDR3~ra. általánosan, elfogadott motívum a Q-R-Y-N-R-A-R-y- (7/A) (3 , számú szekvencia) am.i.nosavszekvenci.a, Továbbá .á kapott alacsony Híg sebességi állandók (például.:: Κ:.ί£ί 1 x IG“* sec~h azoknál ez antitesteknél, amelyeknél a VH.-t. a D2E7, VHl-GLN és VEl-Dz.é-böl választottuk — amelyek vagy egy tírozínt vagy egy aszparagínt tartalmaztak a 12, pozícióban .......: azt mutatják, hogy a
D2E7 VE CDRÓ 12, pozícióját e két csoport közül bármelyik elfoglalhatja anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a értékét. Ennek megfelelően a D2E7 VB C2R3~ra általánosan elfogadott motívum a V-S-Y-L-S-Y-A-S-S-t-D-(Y/M; (4, számú szekvencia) aminosavszekveeica,
A ó. táblázatban bemutatott eredmények azt bizonyítják, hogy soFv formában. a 2SD4 VL vagy VH. CDF3 szakaszt tartalmazó antitestek gyorsabb K-; értéket (például; K::..?í 1 x líH sec“t mutatnak, bs szénásonlátva a D2E7 VL vagy VH CDR3 szakaszt tartalmazó antitestekkel, A 2SD4 a VL CDEó-ban a 023?-tői a 2,, 5, és 9. pozíciónál különbözik. Mint fent megtárgyaltuk, a 9, pozíciót azonban elfoglalhatja az alanin (mint a 2504-ben) vagy a treonin (mint a DiEl-ben) anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a KOf£- értékét. Tehát, a 2SD4 és D2S7 összehasonlításéból kitűnik, hogy a L2E7 VL it >.
CDR3 2. és 5. pozíciójában lévő két argi.ninr.ei kapcsolatban megállapíthat juk, hogy ezek kritikusak az antitest hTRBa-vai való asszociációja szempontjáből. Ezek a csoportok, mint kontakt csoportok,, valós z.. nsloo közvetlen szerepet játszanak az antitest kötőhelyén vagy komoly mérnökben járóinak hozzá az antitestmolekula ezen szakaszának szerkezeti felépítéséhez. Ami a 2. pozíció fontosságát illeti: az Arg csoport helyettesítése fa LOE7-ben, amelyben a VL CDR3 azonos a D2S7~evei) Lys csoporttal (az EP Elz-beni ke tsz eresére gyorsítja a felbomiási sebességet. Ami az 5, pozíció fontosságát illeti: az Arg csoport helyettesítése fa T2E7-ben; Alá csoporttal [az 1D2E7~.A5-nen; , mint a 2. példában leírjuk, szintén kétszeresére gyorsítja a íelbomiási sebességet, Továbbá, Arg csoport nélkül úgy a 2., mmt az o. pozícióban ja. zSLé-ben) a felbomlást sebesség ötször gyorsabb, bég kell jegyezni azonban, hogy bár az 5. pozíció fontos a hTHEa-hoz való kötődés javítása szempontjából, egy ebben a pózrolóban végrehajtott változtatás más pozícióknál végzett változtatásokkal hatálytalantthatö, mint ezt a VLLOE4, VLLOH1, vagy vlO.iHS szekvenciák esetén láthatjuk.
A Vü CDP3 szakaszban a 2SD4 a D2E7-től az 1., 7. és 12, pozícióban különbözik. Azonban, mint fent megbeszél bük, a 12. Pozíciót elfoglalhatja az Asn (teint a 2 SDá -ben) vagy a Tyr (mint a D2E7~beoj anélkül, hogy lényegesen befolyásolnák a értékét, A 2 S D1 é s a D 2 E 7 o s s z e 1; a s ο η 1 i t á s a b 61 me g ál Lap 11 h a t ő te h át, h o g y a S2E7 VH CDR3 1. és 7. pozíciói kritikusak a hTNFu. kötése szempontjából. Hint fent említettek, ezek a csoportok közvetlen szerepet játszhatnak kontakt csoportok gyanánt az antitest kötőbeivén vagy komoly mértékben járultatnsk hozzá az antitest molekula szerkezeti. felépítéséhez ebben a szakaszban. Mind a két p-o zl előfont os a hTNFa-hoz való kötődésre nézve, mivel ha 3C-H2 VH CDH3--st (ebben egy valint cseréltünk alantom az 1-es pozícióban a D2E7 VH CtP3~ra vonatkozóan) használónk, az scr’v-nek háromszor gyorsabb a feibomlásí sebessége, mint amikor D2E~ VH CDR3-at használunk, de ez a felbomlási sebesség még mindig négyszer lassúbb, mint amikor 2SD4 VH CDko-at használunk' (amely a D2E7 VH CDE3~hoz viszonyítva, mind az: 1., mind a 7, pozícióban változtatásokat tartalmaz),
A D2E7 funkciós aktivitása
A D2E7 funkciós aktivitásának vizsgálata céljából számos assay-ben mértük az antitest nlbEv aktivitást gátló képességét mind in vítro, mint ín vívó.
A. SasFa-indukáit citotoxicítás néufcr&Xizálás LS2S sejtekben .A humán rekombináns TNfa (rhidFa) se j t-eztotoxíoltást idéz elő egér L92 9 sejteken 18-24 órás inkubációs időtartam után. Humán ant1-hTNFa antitesteket értékeltünk L929 assay-kben úgy, hogy az antitesteket rhTHFa-val és a sejtekkel együtt Inku&áltuk a következőképpen: öö-zartályos mikrotitráió remeteken 100 pi anti- hlNFc antitestből 1/3-os párhuzamos sorozathigításokat készítettünk 10 % fatális marha szérumot (FBS) tartalmazó RPH1 táptalaj használatával. Minden mintát tartalmazó tartályba Sö ul rhTNFa-t mértünk, és így 500 pg/zd végső koncértrácsét kaptunk. A lemezeket ezután 30 percig szobahőmérsékleten inkubaitűk. Ezt kővetően μ1-ben TMFu.-szenei tiv L329 egér fibrobiászt sej teket adtunk minden tartályhoz — igy 5 a 10 sejt/tartály végső koncéul rád őt értünk el — és 1 yq/ni aktinomi.cin~D~t. A kontrollok táptalajt plusz sejteket és rhTBFm-t plusz sejteket tartalmaztak. Erek a kontrollok és egy TNFa standard görbe — 2 ng/mi-től 3,5 pg/xzl-ig — biztosították az assay minőségét és azt, hogy rálátást kapjunk a neutralizácidra. A lemezeket egy éjszakái’!, át (18-24 órán át) 37°C-on, 5 % CO2 tartalma atmoszférában inkubáltuk.
Minden tartályból 100 pl táptalajt vettünk ki és hozzáadtunk SÖ yl FBS-ben 50 mg/mxl koncentrációjú: 3-(4, 4-dixzstiI~tiazoi-2~ -il1-2,5-difenii-tetrszoiiun orotiőot (MTT; beszerezhető a kereskedő lemben, a Ságra Chemical Co., cégtől; 5t.Louis, MO., USA). A lemezeket ezután 4 órán át 37°C-on inkubáltuk. Minden tartályba 55 yl 25 %-os nátrrun-dodeci1-szülfátot (SDS) mertünk, majd a lemezeket egy éjszakán át 37°C-on inkubáltuk. Az optikai sűrűséget 570/630 nin-en mórtük, minden mintára görbét vettünk fel és az ICsr értékét standard módszerekkel határoztuk meg.
A különböző VI és VB párokat tartalmazó humán antitestek reprezentatív eredményeit a MÁK 195 mAt-tei kapott eredményekkel összehasoniitva, a 3. ábrán és az alábbi 7. táblázatban mutatjuk be,
A 3. ábra és a 7, táblázat adatai bizonyítják, hogy a D2E7 humán antí-hTMFa antitest és a különböző D2F7~tel rokon antitestek, a TKfa-imdukált L92 5 ciéotoxioltást megközelitőieg hasonló kapaoizással centralizálják, mint a MÁK 135 egér anti- bTNKa xzAz .
7. -táblásat
Λ WFa-xPdukálfe L-929 oitptoxioítás neetrelizáláse
VH VL Szerkezet IC5?, M
D2E7 D2E7 soEv 1,1 X lu'’i;5
D2E7 D2E7 leli ·>· 4,7 X 1<·^ ;
2SD4 zSD4 scFv/IgGl/IgG4 3, 0 X ír® ι
2S34 1GE7 SóFv 4,3 X 3.3® »
«1-1 2314 scFv 1,2 X 3.8®
WIi~u2 10E7 scEv/lgG'i/Igéd 3,4 X 13λδ:
Vi-ii . D2 , v 10 E 7 ,.T 7gG4 3,1 X IO®1
VHI-D2.N LOE 7 , T IgG4 1,3- X 18'-
VH1-02 11 10ΕΪ.A igGá 2,3 X 3.80·
VH1-D2,N LOE 7.A IgGá 3,2 X 3.8a
MÁK lát MÁK 195 terv 1,9 X xr8
i HAH iát MÁK 195 F1W;, 6, 2 X iirn (
Egy másik kisérletsorozatban a D2E7 Igéi formájának ?NFa-indukált L929 oltotOKfcitásfc neotxaiisálo képességét vizsgáltuk a fentiek szerint. Három független vizsgálat eredményét és ezek átlagát a 8. táblázat foglalja össze.
A TNFa-.redukált LS29 citotoxicitás neutrelrzáiása D2F7 IgSl-gyei
............ Kísérlet .............. XC50 [M]
[...........................................................1........................................................... 1,26 x lö13
'**;} <- 1,33 x IC;3
3 1,15 x lé13
Középérték 1,25 1 0,c η. x i o10
Ez a kisérietsorozat megerősítette, hogy a O2E7 teljes hoszszuságú IgGl formája 1,25 ± ü,Ül x 10'i:ö H IC5Í> átlagérték mellett centralizálja a Ttf;.;-indukált 1.929 oitot oxlcit ást.
veid kötődeá«n©k gátlása
Megvizsgáltuk, hogy a humán anti-kTNFa antitestek képesek-e gátolni a hlFBc kötődését a sejtek felületén lévő hTHEa-receptorokhez. A vizsgálatban F-237 sejtvonalat (ATCC CűL 1593; 1974; használtunk, amely egy hTNFa-receptorokat kifejező humán hisztlooitás: .sejtvonal. Az 3-337 sejteket 10 % fatális marha szérummal (Hyoione A-llil; Hycone Labcratcrles, Fogan, FT,, FSA;, 1-giuta•ninnai [4 nH) , HETES puf ferrel (ÍÖ zlC , penicillinnel (199 yg/mi:· és szireptomleinnel (109 yg/ml; kiegészített R.PMX táptalajon tenyésztettük, A teljes hosszúságú. IgG antitestek akt ivitásának vizsgálata végett az 3-537 sejteket 1 mg/mi humán IgG-vei (Slgma 1-4506; Szórta Chemical Co,, St.lczis, HO,, FSA5 kiegészített BBS-ben 45 percig jégen eiőinkubáltuk és ezután a sejteket háromszor mos kuk kötő pufferrel. A receptor-kötési assav-hez s- 7-937 sejteket 96-fartáiyos mikrotitráló lemezeket (Costar 3799; Costar üorp., Cambridge, MA., 73A) 15 x 1ÍÖ sejt/tartály) kóló-puszerben (0,2 % marha szérum aibuminnal kiegészített P3S; i2?-l-jelzett rrCNFa-val együtt (3 x lö'w M; 25 uCi/ml; MÉH Research Products, Eiimington, EC,, USA) inkubáltuk anti-hlWa antitestek jelenlétében,, vagy anélkül, összesen 0,2 mi-ben. A femeteket jeget inkubáltuk másfél órát át. Ezután minden mintából 75 gl-t vittünk át dibutil-ftalát (Sigma 9-2270; Sigma Chemical Co., St.Lcuis, Műn, USA) és dincnil-italát (ICM 21Q733; ICE, Xtvine, CA., CSA) keverékét tartalmazó 1,0 ml-es teszt-csövekbe. A teszt-csövek á dibutil-ftalát és dinonil-ftaiát 2:1 arányú keverékéből 300 pi~t tartalmaztak. A szabad :ezaz kötetlen} 151-j éltért rtTHFa-t 5 perces mikrocentrif;ga ássál távolítottak el. Ezután minden egyes teszt-csc végét, amely a sejt-üledéket tartalmazza, egy mikrocscoiid (Bel-Art 210190001; Eel-Art Products, Peguannock Hl., USA) segítségével levágtuk. A sejt-üledék p6Q vagy pdö TEFa-receptorhoz kötött ^i-jelzett rhl’NF'a-t tartalmat, mig az. olajos keverék feletti vizes fázis a feleslegben lévő szabad jelzett rhTMF«~t tartalmazza. A sejt üledékeket számláié csőbe (Falcon
2052; Becton Cickinson Labvare, Lincoln Park, Hő., USA) gyűjtöttük össze és szeletilláciös számlálóban számláltuk.
A 4. ábrán láthatok a reprezentál iv eredmények. Ezekben a vizsgálatokban a hTMFa-nak 7-937 netteken megjelenő hTMFíx-recégtárokhoz való kötődését a 02 E7 3 x 10''' M IQ,? érték mellett gátolta. Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2E7 humán antihlNFa antitestek olyan koncentrációk mellett gátolják az rhTHFm kötődését d-537 sejzekeo tévé h'iN 7a~recepl örökhöz. amelyek azonosak az egér MÁK 195 anti-fTifa koncentrációival.
Egy másik ki sáriét sorozat bán a D2E7 Igei formájának a hTNEm D-937 sejteken lévé hTiFa-receptörökhöz velő kötődése elleni gátló hatását vizsgáitok, mint fent leírtuk. Három független vizsgalat eredményét és ezek átlagát a 5. táblázat foglalja össze.
9, feábláz&t
Fz a kisérletsorozat igazolta, hogy a Ώ2Ε7 teljes hosszúságú Igái formája átlag 1,56 1 5,12 x IO”'1' (Mj IC&s értékkel gátolja 5-53? sejteken a Thr-receptorhoz való kötődést.
A D2E7 gátló hatását a 'I-rhThFa individuális pőS és p75 receptorokhoz való kötődéeére szilárd fázisú radioimmnnassay-ben (Elá: vizsgáltuk. A DzE7-nek a különböző TdF-reoeptorokra vonatkozó ICm értékeinek méréséhez az antitest változó konoentrációit a X-rhlhF 3 x ICP koncentráció j ávai inkubáituk, A keveréket ezután külön lemezeken — az egyik a p55, a másik a p75 TbF-re50 cector tartalmazta — teszteltűr dózis függd módon. Az eredménye két a lö. táblátat foglalja össze.
10. táblásat
U8F -receptor — pSS és p?S TNFR — kétes gátlása S2S7 IgSl-gyel
XCss [M J !
Reagens: p55 TNFE | ?ls TűFF
D2F7 ------------------------------------- 1,4 7 x lö* 1, 26
rhiFF 2,31 x lö* | 2, 70 z lö'
A 5/bl-rhTMF U-737 sejtekenz kifejeződé p55 és p75 TNF-receptorhoz való kötődésének gátlása D2F7~teI egy egyszerű 0 alakú görbét Ír le, ami az agyas recepterőknél hasonló IQs értékekre utal. A rekömóináns TNF-receptorokkal szilárd fázisú radioimmnn3S sav-vei íRlA) végzett kísérletekben a u'''~I~r hTFF p55 és p?5 recepfcerekhoz való kötődésének D2E7~tal való gátlására 1,4? x ló' M, illetve 1,2¾ χ 1θ~* b TC5Ö értékeket számítottunk ki. Az ICm értékek csökkenését a szilárd fázisban valószínűleg az okozta, hogy a receptorok sűrűsége nagyobb a 717 alakban, ugyanígy az rhTFF-é, amely hasonló t7i értékekkel volt gátolt. A 'l-rhTNF pűo és p7S receptorhoz velő kötődésének gátlása jel zenien rhTNF-fal a következő 1C?.;. értekeket adta: 2,31 x lö~;í Ti, illetve 1,70 x lö'
M,
C. KAAM-1 exprasszrn gátlása HtWC-cn
A humán köldökvéna endoteliális sejtek (HUVEC ::: hamar umbiiioaí vein eadotheliel ceílű sejtjeik felúletén endoteliális sejt leukoeíta adhéziós molekula-! 1ΕΕΑΜ-Ϊ - endothelial cell leukobyte adhesicn mólvonla 1) kifejezésére indokéInatok kh-TNFa kezeléssel.. A jelenséget ágy tudjuk kimutatni, togy az rhldFa-vai. kezelt HUVEC-et egy egér antí-humán SüAM-l antitesttel reagáltatjuk. A humán ant1-hTRFa antitestek azon képességét, miszerint az ELAH-1 HUVEC-eu történő Wa-indukált expresszidját gátolják, a következőképpen határozzuk meg: HüVEC-et (ATCC CÉL 1730) visztek 96-tartályos lemezekre (5 x lő* se jt/tartály) és a lemezeket egy éjszakán át 3'7C-on inkából juk,. A következő: napon sgy mikrotítrá ló lemezen a humán ar.t..~h?NFa antitestből sorozathígitásokat (1:10) készítőnk. A hiígitásokat lO-löö pg/rd. antitesttel kezdjük. Egy 4,5 no/ml koncentrációjú rblhEa törzsoldatoí készrtunx, majd az antitestet tartalmazó tartályokhoz hozzáadjuk az rhlKFö. aiikvot részleteit és tartalmukat jói összekeverjük. A kontrollok csak táptalajt, táptalajt plusz anti-hTEFa antitestet és táptalajt plusz rhTRFa-t tartalmaznak. A HÖVSC lemezeket kivesszük az inkubátorból (ahol egy éjszakán át 3~°C~cn tartottuk) és a táptalajt óvatosan részi varjuk a tartályokból. Ekkor a öúVEC lemezek renden tartályához 200 p.l antitest - rhTNFa keveréket adunk. A KÜVEG. lemezeket ezután tovább inkubáljuk 37:'ő-on 4 órán át. Ezt követően egy egér auti-ELAb-l antitest törzsoldatot IrlEClü-re hígítunk KEMl-ben. A HüVEC lemez tartályaiból óvatosan kiszívjuk a táptalajt,· az anri-ELAM-i antitest oldatból SS μΐ-t mérünk be tartályonként és a HUVSC lemezeket oö pe>cig szobahőmérsékleten inkubáljuk. Készítőnk egy I-jelzett anti-egér lg antitest oldatot KÉM1-ben (körüibelül 50,000 cpm öö pl-ben), A ilVlÜ lemezek minden rartáiyából óvatosan kiszívjuk a táptalajt, a tartályokat kétszer mossuk RPMI-vel és minden tartályhoz 50 μΐ ;Ή-jelzett anti-egér lg oldatot adunk. A lemezeket 1 óra hosszat szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd minden tartályt háromszor mosunk RPM1~vel. Ezután minden tartályhoz 180 μΐ S k-os SDS-t adunk a sejtek lizáláss táljából. Ezután minden tartályból csőbe visszük át a sejt lizátumoksz és szcintiliáozős számlálóban számlálunk.
Az 5, ábrán a reprezentatív eredmény - ct; műtétjükbe. Ezekben a ki sár letekben a SLAM-1 HükEC-en való hTdld-índaká.it expressz lójának D2E?-tei végzett gátlásának JC50· értéke körülbelül 6 x 10'i: Mi Ezek az eredmények igazolják, hogy a D2E7 humán anti-hldDo. antitest olyan koncentrációban gátolja az SlAM-i HDVEC-en való hTkEo-inóakáit expressziéjst, amely megközelítőleg azonos a Mák 191 egér anti -hlKFe. mát gátié konoent rációjával,
Egy másik kisérietsorozatban a DzE:7 igéi formájának az DDAM-1 HüVEC-en való hTMEa-indukált expressziája elleni gátló hatását vizsgáltuk, mint fent leírtuk. Három független vizsgálat eredményét ás ezek kózépértékét a 11. táblázat foglalja össze.
TKFa-indukált ELAM-l ©aspresssíó gátlása D2E7
Kísérlet XCSO (M]
1 l,95x iá1
·) •CÜ 1,69 x lái0
3 1,90 x ÍOi0
Középérték 1,85 ± 0,11 x llTiö
* *
Fz a kisérietsorozat megerősiterze, hogy a. D2:E7, teljes koszszúságö Igái formában, a TUFa-írvdukált, EbAh-1 expresazioját HüVEC-en 1,85 ± 0,11 x i0?á IK (M) értékkel gátolja.
A D2E7 IgGl neutralizációs hatékonyságát két másik adhéziós molekula - X-G&M-l és VCAM-I - rbTEEd,·--indukált expressziéjára I.s megvizsgáltuk, flC&M - interceilular atíhesicn molecuie; VCAM vaacular cell adhesion molecuie), Minthogy az rhTMF títráláei görbe fCAh-1 expressziára a 16. órában nagyon hasonló volt az EhAM-l expressziős görbéhez, az. rh'fbF ugyanazon koncentrációját használtuk az antitest neutraiizáciős kisérietekben. A HöbEC-et rhTNF-fel inkubáituk a S2E7 különböző koncentrációival egy 3'?cC hőmérsékletű C02~ inkubátorban 16 órán át. Az ICAM-Í expressziét egér anti-JCAk-l antitest, majd 'K-jelzett birka anti-egér antitest segítségével mértük. Két független kísérletet végeztünk és kiszámítottuk az KK értékeket. Egy nem-rokon humán IgG'i antitest nem. gátolta az 1CAM-1 expresszi öt.
A VCAb-1 expresszié gátlását tesztelő kísérleti eljárás azonos volt az IKK expressziét tesztelő eljárással, kivéve, hogy ant i-VCAM-1 mAt-et használtunk anti-FLAM-1 mAt helyett. Három független, kísérletet végeztünk és ki számítottuk az IC5G értékeket. Egy nemi-rokon IgGl antitest nem gátolta a VCAM--1 expresszi éj át,
A z ere dménye ket a I2. t á b1á z a tban fouraljuk össze.
* >
1GÁM-1 és VCAM-1 expresszi©
D2E7
Ezek a kísérletek azt bizonyították, hogy a primer honán kőiőőkvéna endctelráiis sejtek kezelése rhThF-fel az adhézrós molekulák optimális expresszi©ját eredményezi. SLAM-1 és VGAM-l esetén a 4. óránál, iCAb-l-néi pedig a 16. óránál éri el maximumát a felerősített expresszien A D2S7 meg tudta gátolni dózis függően a hárem adhéziós molekula expressziórát. Az BLAA-i, ICAM-i és vCAM~r gátlására kapott ICso értékek a következők voltak: 1,85 x 1Q~:% 2,1? X IQ10, illetve 1,51 x 10ra A. Ezek az értékek nagyon hasonlóak, ami arra utal, hogy az ELAA-i, ICAM-1 és VC&M-I expresszró redukálásához szükséges aktiválási szignál az zhTAF dózisa iránt hasonló igényeket támaszt. Érdekes módon, a D2E7 az 1CAM-1 koszszabó rnhIbierős vizsgalatéban hasonlóan hatásos volt. Az 1CAA-1 gátiász assay-ben az rhlkF-et és 02E?~et lő órán át kellett együtt inkubálnr HdviC-cei, ezzel szemben 4 órára volt szükség az ELAA-1 és VCAM-1 gátlás! assay-kese. Minthogy a 52E?~nek alacsony a disszociációé sebessége rhlMF vonatkozásában, elképzelhető, * >
hogy a 16 órás Ro-inkubáciős Időtartam alatt nem volt jelentős versengés a IbVEC-er lévő FOE-receptcrok iránt.
S. A hSüFa i.n vivő íse»t»a2i.ará2á«a
Három különböző in vivő rendszert használtunk annak bizonyítására, hogy a D2É7 hatékonyan gátolja a hTRFo aktivitást in viI. TFF-indukált isésiitas gátlása D-gaiaktősaminriai szenz.ití zál t ege.re.kbsr·
Rekombináns 'TRFo. (rhTHFaj injekciója 7-ca íd.oanmra'.
szeneitizéit egereknek 24 órán belül halált okot. Kimutatták, hogy a TKFe neutráliséló szerek maggátolják a Ietalitást ebben a modellben, vizsgáltuk ebben a modellben a humán suti-hTÜFu. antitestek hlKlíx neotralizálő képességét in vivő, Ennek érdekében
C57B1/Í egereknek i útraper i tone á1is (i.p,) ing ekei óva1 k u 1 .önbözc
koncéntrációj ú öli iv-lgSi-et, vagy egy kontroll proteint adtunk
BBS-ben. Az egere) rét 20 perccel ké sőbb 1 μο hTNEa-vai és 20 mg
D - g a 1 a k. t 6 z a m innal — PES-ben i.p. — challengeltük, majd 24 óiéval
később megfigyeltük az állatokat. Előzőleg meghatároztuk, hogy ezen rhTHFo és 0-galaktözamin mennyiségek 30-90 % ietalitást értek el ezekben az egerekben.
A 6. ábrán azokat a reprezentatív eredményeket mutatjuk be — hasáb diagramm formában — amelyek a %-os túlélést as antitest koncentráció függvényében ábrázolják, A pontozott hasábok képviselik a r.:>.2E'?~et, mig az üres hasábok a MÁK. 195-öt. Egerenként 2,.5:-2S pg D2F7 injekciója megvédte az állatokat a. THFd,-ínöukáIt lerántástól. Az BDso: értek körülbelül 1-2,5 ug/egér. A. pozitív kontroli antitest, a MÁK 195, hasonlóan prctektiv hatást fejtett
Λ Λ ki. A D2S7 injekciója rhTóka távol·létében nem hatott károsan az egerekre. Az aspecifikus humán IgGl antitest injekciója nem nyújtott védelmet a Ibié-indukált Íetaütés ellen,
Ecy második kísérletben 49 egeret osztottunk 7 egyenlő csoportba. Mindegyig csoport kolennézö dózist D2F7-et kapott, majd perc múlva ecy LDr dózist rhlKF/D-gaiaktőzamin keveréket ;l,0 pg rhTHF és 20 mg D-gaiaktőzamin per egér} , A 7-es kontroll csoport normál humán IgGl kappa antitestből 25 pg/ecér dózist kapott, Az egereket 24 érával később ellenőriztük. Az egyes csoportokban talált túlélést az alábbi, 13, táblázatban foglaljuk ŐszC; O e,
13, táblázat
Huszonnégy órás túlélés D2E7-tel való kezelés után
11. ÍW-indukál c nyél pyrezia gátlása:
A D2S7 hatását rhTGF-ínőukalt plrexia válasz gátlásában nyulakban vizsgáltuk. Három, körüibeiui 2,5 kg-os Ili nőstény nyúlhói álló csoportokat oltottunk intravénáson D2E7--tel, rhTNF-iel és D2E?~boi és rhTii-oői álló iz-mun komp letekkel. Végbél. hőmérsékleteket mértünk közei 4 érán át percenként, terelsz tor szondákkal, agy Esve féle hőmérséklet regisztrálón. á rekombináns humán TNE-bói — normál konyhasó óidéiban — 8 pg/kg injekciója 0,4ÓC~nái nagyobb hőméree -t emelkedést váltott ki az injekció után körülbelül 45 perc múlva. Maga az antitest készítmény — normái konyhasó oldatban — 138 pg/kg dózisban való alkalmazás után 140 percen át nem váltott ki a nyólakban hőmérséklet emelkedést, biodén további fcisérietben a B2E7-eb vagy a kontroll reagenseket (humán IgGl vagy a konyhasó oldat, mint vivőanyag) i.v., oltottuk a nyulakba, ezt 5 porcod zc-sobb egy rhTNE injekció követte — normál konyhasó^ oldatban — 5 pg/kg dózisban, i,v, Számos kísérletet végeztünk és a jellemző eredményeket a 14. táblázatban, alább, zogiaijnk össze.
14, táblásat rhTNF-indukált pirenia gátlása D2E7-tel nyulakban
* csúcs hőmérséklet ereik. rnTbF-íel + D2E7~teI) ** - gátlás % ~ .......................................................................................... x 100 hőnérs. emsék, csak rhTME-fel
A E2E?~tel végzett előkezelés 14 pg/kg dózissal részlegesen gátolta a pirogén választ., azokhoz a nyálakhoz képest, amelyek előkezelésként csak normál, konyhasó oldatot kaptak. A D2E7 137 ug/kq dózisban alkalmazva teljesen gátolta az rhTHs-re adott pirogén választ ugyanebben a kísérletben. Egy második kísérletben a D.2E7 alkalmazása 24 pg/kg-os dózisban szintén részlegesen szuppresszálta a pirogén választ, azokhoz a nyilakhoz viszonyítva, amelyek előkezelésként eeak normál konyhasó oldatot kaptak. Ebben a kisérleiben a D2E7 mólaránya az rőThE-bez 1/8:1 volt. Egy harmadik kísérletben 18 ug/kq (mólarány: D2F7;rhTNF == 3,3:1) D2F7 i,v. injekciója teljesen gátolta a pirogén hatást, ossze.tcaso.nlitva azokkal a nyálakkal, amelyek kontroli, humán IgSl-et kaptak előkezelésként, éspedig 30 pg/kg-ot normál konyhasó oldatban. Az utolsó kisérletben. a nyuiak előkezelését D2E7-tel (792 pg/kg) az rhTEE-hez viszonyítva nagyon magas mőiarány mellett (55:1) végeztük. Itt nem alakult ki hőmérséklet emelkedés egyszer sem a 4 órán át tartó megfigyelés alatt. A nyuiak immunkomplexekkel való kezelése további rbTKF alkalmazása nélkül szintén nem váltott ki hőmérséklet emelkedést ugyanebben a kísérletben.. Az immunkomplexet úgy állítottuk elő, hogy a D2E7 és az rhTKF 55:1 rabiarányú keverékét 3?°C-on 1 órán át Inkubáituk.
fc »·
Jil, PolyartMrítis megc; reze Tpug? transzgenikus egerekben
A D2E7-nek a betegség kialakulására gyakorolt hatásét tanulmányoztuk egy arzhritis-es transzgenikus egér modellben. Olyan transzgenikus egereket íTglu?) hoztak létre, amelyek humán vad típusú TMF-et (a kódold szekvencián belüli 31 szakasz módosított; fejeznek ki és ezekben sz egerekben 4-7 hetes rorukra 100 %-os gyakorisággal krónikus polyarthritís: alakul ki fa lg 197 poiyarthrítis modell további leírását iásc: EM3O J., 10, 4025-4031
Π 991) 1...
A transzgenikus állatokat 3 napos korukban EÜK-rei azonosítottuk. A. transzgenikus egér almokat 6 csoportra osztottuk. A transzgenikus egereket 15 napos korukban „slct-blot hibrrdizsciés analízissel ellenőriztük. A hat csoportra vonatkozó kezelési protokoll a következő volt; 1-es csoport: kezelést nem kapott; 2-es csoport: normái konyhasó oldatot (vivöanyag) kapott; 3-as csoport: 1,5 pg/g F2E7; 4-es csoport:: 15 pg/g F2E7; 5-ös csoport; 30 pg/g D2E7; δ-ós csoport: 30 pg/g IgGl izotípus, kontrollként. Egy nem. transzgenikus egéralmot is bevontuk a vizsgálatba kontroll gyanánt (7-es csoport:; nem transzgenikus állatok, kezelést nem kaptak). Mindegyik csoport hetenként három i.p. injekciót ka;-t H a - ('ml.; ζ.; amaqJo.ú. A. injefcciőzást lú hétig folytattuk. Minden héten minden állatnál feljegyeztük az Ízület morfológiájában végbement makroszkópos változásokat. A 10.«. héten minden állatot elöltünk és az egérszövetet. formaiinba tettük, A szövet vizsgálatát mikroszkóppal végeztük.
Minden hét elején lemértük az ízűiét méretét (rm-benj, amely a betegség súlyosságának a mértékét adja. meg. A jobb hátsó bokáizületen mikrométerrel végzett kérem mérés átlaga adja meg az
Ízület méretét.. ' ηΆ t * t ' * , ~ <c ’ '+· <e - 'kCk p< »t >'elkeltük ki; ö ::: nincs arthritis (normái küiiem és hajlékonyság;; + enyhe arthritis {izületi diszterziól; f+ - mérs ékeit arthritis (duzzanat, ízűiét deformáció); -ere - erős arthritis (anki.lőzís ··-- izületi merevség -— észlelhető haj Irtáskor és erősen csökkent mozgás), áz Ízület metszeteinek hematoxiiin/eezin festésén alapuló pontozás a következőképpen történt; 0 ::: nincs észlelhető betegség; 1 ::: a szlnoviális membrán preliferáciéja észlelhető; 2 - erős szlnoviális zavarosodás; 3 - porc destrukció (lebomlás) és csont erózió :leossz múlás) ,
A ö2E7 kezelés hatását a. Tglűt transzgenikus ar thr it ls~es egerek Ízület méretének átlag értékére a 9. ábrán mutatjuk be. A ü’gi:37: transzgenikus egerek — 11 hetes — körszövettani és arthritis-es pontszámait alább, a IS. táblázat foglalja össze.
A >2B? hatása Aórssövattani ás arthritis-os pontozásra
í.................................. Csoport Kezelés Márssövabtani pontozás Arthritis pontozása
1 né1kü1 3 {7/70) -13/7) J
·/ <1. norm.konyhatő old. 2 (8/S) 18/8/
8 IgG) kontroll 3 (9/9) 'Τ-'Τ-'Τ' (7/9;
3 1,5 gg/g DIEl-neí 0 (€/8) o (S/δ)
4 15 ug/g DlEl-nél C (7/8) 0 (8/8)
5 30 pg/g DzSl-nél Ö (3/8) 0 (8/8)
k λ
Ez a kísérlet azt szemlélteti, hogy a D2E7 antitestek határozott jótékony hatást gyakorolnak azon transzgenikus egerekre, amelyek vad típusú humán Thf-et fejeznek ki íTgl97) A vizsgálati idő után nyilvánvaló arthritist nem észleltűnk, fb Mi# fájókból azérssazé tut-k neotzaléaalé## £>£M7~fc:el
A D2E7 kötő kapacitását úgy tanulmányoztuk, hogy megmértük a különböző főemlős fajokból és egerekből származó tumor nekrőzis faktorokra gyakorolt neutrali zá1ó képességét E92 9 oltotoxiku s assay-t használva (lásd fentebb, a 4. példában ez A. a1fejezetet ) . Az eredményeket a 16. táblázatban foglaljuk össze.
IS, táblázat képes a D2E7 a különböző fajokból szármázó TNP neutzalizálásara 1929 assay-ben
TNFa* Erődet D2S7 neutx&líz&i&S XCsq értéke (M)**
Ember Rekombináns 7,8 X IC11
Csimpánz EPS-stimulált PBMC 5,5 X I0~u
Pávián Rekombináns k , Ö \ iCb
Selyemmajom LPS-strmaiált PBbü 4,0 X ír1®
Köz ön s égés ma kákó LES-sIrmáit P BEC 8, 0 X lö'’1-
Rbesne majom E R S - s t i mu lé 11 EBE C 3,ö X löB
ti.b EP$-stimulált uBC 2,2 X xrw
Sertés Rekombináns 1,0 X EO7
Egér Rekombináns >l,d ? X ló7
* [P'BMC ~ perifériás vér mononukleáris sejt; WBC ~ teljes vér sejt]
A 16. táblázatban közölt eredmények ige zol ják,. hogy a ö2E7 Öt főemlős TRFoc aktivitását képes neutraüzálni, nagyjat^ módon, mint a humán lNF«.~f, ezen felöl neutráliséija a kutya Tála aktivitását {körűidéiül tízszer kisebb mértékben, mint a humán TBFa-z; és a sertés és egér ThFa-t (körülbelül mintegy ezerszer kevésbé léi, mint a humán TdEkx-tj , Továbbá: a D2E7 kötődését az oldatban lévő: rblWFa-hoz nem gátolták más citokínek, azaz a limfotoxin (INTŐ), az TL-iu, IL-iő, IL-2, 11---4, IL-6, 1L-3, IFdy és TGFő és ez arra utal, hogy a D1F7 erősen specifikus TMFa iígandumára.
F. A £?2F?~feei i.nktíí>&2fc érámén teljes vérből sfis nrebadhX bel értőkén.
Ebben a példában, azt tanulmányoztuk, hogy a D2E7 maga képes-e a normái humán vérsejteket citokinek szekretalásara vagy a sejt felszíni molekulákat leválásra késztetni. Három, különböző donortól levett és hígított teljes vért a D2E7 változó koncentrációival Ínkubáltuk 24 órán ét. Ugyanakkor egy LF3 pozitív kontrollt is futtattunk, olyan koncentrációval, amelyről előzőleg megállapítottuk, hogy az immunkompetens vérsejteket citokinek szokretálására stimulálja. A felül úszókat learattuk és tízféle oldható citokin, receptor és adhéziós molekula EilSA kit panellel teszteltük, úgymint IL-Ία, ib-li, IL--T receptor sntagonista, 1L-6, IL-8, TBFa, oldható THE receptor I, oldható TUF receptor II, oldható ICAd-i, és oldható S-szeiektfn. A S2E7 antitesttel — egészen 343 μη/ml-lg való ko-lnkubélás eredményeként szignifikáns menynyiségben sem oitokinefcet, sem levált sejt felületi molekulákat nem észleltünk. A kontroli tenyészetekben, antitest hozzáadása ·> .* nélkül, egyetlen oitokinbol sem kaptunk mérhető mennyiségeket, mig at LPS kontroll tenyészetokban magas értekeket kaptunk, a magas pikogrammtói az alacsony nanogramm tartományig. Ezekből az ereemányékfeoi arra a következtetésre jutottunk, hogy a D2E7 nem indukálja a teljes vér sejtjeit oitekin szekretálásra vagy sejt felületi proteinek slhuliatására a normál értékeken felül, ex viνo fenvés z e tekb e η,
A mellékelt szekvencia-jegysek — amely a találmány részét képezi -·· tartalmát az alábbi táblázatban foglaljuk össze:
ϊ Λ .1- ν -ί
Szekvencia száma Árui rest lánc ; Szakasz Szekvencia típus
1 O2E7 CL aminosav
Λ5. 2- D2E7 VH aminosav
3 02 E 7 VL CDR3 aml.no sav
4 02 E 7 VH CDR3 aminosav
D2E7 vL CDR2 aminosav
6 D2E7 VH C0R2 aminosav
'7 ; D2E7 VL CDR1 aminosav
s C2E™ VL CDR1 aminosav
9 2SD4 VL aminosav
10 2504 VH aminosav
11. 2SD4 ..... CL CIO aminosav
V> .1 ςί. EP 312 VL CDR3 aminosav
13 VL10E4 VL CDR3 aminosav
................14.......................... VL10CA9 VL CDE3 aminosav
15 vLEI0002 CL CDR3 aminosav
16 7LL0E4 VL COR.3 aminosav
17 LCE5 VL CDR3 aminosav
13 VLLOG7 VL CDR3 aminosav
'·’ '“ί 7LLOG9 VL CDR3 aminosav
............................20'........................ VLLOH1 VL CDE.3 aminosav
-s ....,i. VLLOH1C VL CDR3 aminovav
22 VLIB'7 Vl CDR7 aminosav
23 VL1C1 VL CDR3 aminosav
24 VLO. 1F4 VL CDR3 amanosav
25 VLO.1K8 VL CDR3 an : n^a\
2 6 L0E7.A VL CDR3 aminosav
27 2SD4 VL CDR3 aminosav
22 VH1311 ...................CL. .CSŐ............. aminosav
2$ VEI 03 VL CDR3 aminosav
30 VH1A11 VL C0H3 aminosav
31 VH1B12 VL CDR3 aminosav
32 .....................7H1.E4................... VL CDR3 aminosav
33 VH1F6 VL CDR.3 aminosav
34 3C-H2 VL CDE3 aminosav
35 7H1--D2.0 VL CDR3 aminosav
36 02 E 7 VL nukleinsav
37 D2E7 CR nukleinsav
SZEKVENCIÁK «JEGYZÉKE
SEGORMCB AlGTTMG (!) GENERAL TNBGRMRTTON:
fi) AFR1.1CANT:
(A) NAMB: BASF Aktlengesálisohaft (B) STREET: Carl-Bosch Str. SS (Cl CITY: 670(36 itdnigshafen (D) STATE:;: Ak:eE:nla:ad~EEáiz:
(E) CQUNTRT: Peder a 1. Republic of Germany (iii) RUMBER CE SEQUBOCSS: 37
Clv) CORREEPÖRDEACE AODOFSS:
(A) ADDRESSEE:; LAHIVE S COORFTEEB:
CB) STREET:. 60 State Street, sülte 510
CC) CITY: Boston
CD) STATE; MénéncAunetis
CE) CGGNTRT:: TEA CE) ETE:; OGCOD-lBvG (v) COMPUTER READABLE FORR;
CA) AEDTÖRC TTEE::: Eiopby ölek
CB) COMPUTER:: IBM PC cnmyalibie
CG) OBERATTMS: ETETEM: EG-EQ:S/BE~BC:S:
CB) SOETUARE: Patent In Releass 91.6, Version #6.2 (vi) CURRENT APFLIGATION ΒΑΤΑ:
(Aj SREETGATTON NSMEER::
CR) FIATIG ΒΑΤΕ;
CG) CLAS El FTC AT ION ;
Ovii) PRIOR ARPETCATTOM DATA::
(A) A P FL1 CAT 1 GE ,N OMB ES: U S 08 i 5 99, 2 2 &
(B) FTLING DATE: Ö3-FEB-Í996 (C) CLASSIE1GATTCN:
Cvxi) PRIOR APRATGATTGE PATA:;
(A) APPLICATION NUMBER: US 6' ,)1,4 76 {B) FitTNG DATE: 25-NOV1996
CC) : CLASSIFTCATTOM:
Mü) AITGRUETAAGBNT INFöRMAT-IGN:::
CA) MART: DeCenti, Giulío A., Or.
CB) RRGISTRATION NUM3ER: 31,903
CC) REFS.RENCS/DOCKET RUBBER: B3T-043CPRC (ix) TELECOMRUNiCATlON INFORMATION::
C A) TELBFBÖNS : (617)227-7000 (B) TELEFAX: (617)227-5941
BÚ TNFORNATT'ON :BG®: GFQ l-F NG: 1:
(í) SEQö FNCS CHAPACTFPIST1CS:
(A· LENGTE: 107 amino acids (B) TYPSí amino aóid (G) TGPOIOOY; linear
(ii) NOLECÜ1F ΤΥΡΕ: pepiide
ív) FAAGYÉN? ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQÜEBCE DESORI FIION: : SEQ ID NO:1:
Asp He Gin Get 7 Thr Gin Ser Pro 5 Ser Ser 10 Len Ser Alá Ser Val 15 Gly
Asp Arg Val Var 20 Lle Thr Cys Arg Alá Ser 25 Sin Giy lie Arg 30 Aan ?vr
Lee Alá Top Tyr 35 Gin Cin lys ive AO: Gly lys Ars Pro Lys 4> tea Len 5 ÍS:
Tyr Alá Alá Ser 50 Thr Lee Gin Ser SS Giy Val Pro Ser 00 Arg PLe Ser Oly
.Ser oly Ser Giy 05 Thr Asp Ele Thr 70 Len Thr He. A5 Ser Ser Len. Gin Fro 80
Gin Asp Val Alá: Thr Tyr Tyr Cys 35 Gin Arg 90 Tyr Aon Arg Als Pro 95 Tyr
Thr· Rhe Gly Gin IGE Giy Thr lys Val Gin Ile 105 lys:
INFORGATTOL FÓR SEQ ID KO:2
< .1) S EQUENC E CKARACT ERI ST I CS : (A) LENGTE: 121 amino adás (E) TIRE: smlng goid í D) I0R01OGY: 11n e a r
>11) MO1ECBLE TYPF: pepiibe
ívj FBAGGENT ΤΥΡΕ: internál
(xi) CEQTFNCE FESCFIRTICE: SEQ 17 EO: * d.. >
Gin Val Gin len 1 val Gin Ser Gly S Gly Oly 10 Les vai Gin Pro Oly Arg is
Ser Len Arg len 20 Ser Cys Alá Alá Ser Oly 25 Phe Thr Phe A.sp 30' Asp Tyr
Alá :Met H.ís Trp Vai Arg Gin Alá Pro O.y Lys Oly Let Sin Trp Val
4ö 45
Ser Aia 55 ::ie TNr Trp Asn Ser 55 Gíy his Ile Asp Tyr 50 Aia Asp Ser Val
Gin Oly Ars Phe Thr Xx Ser Arg Asp Asn Ara Lys Asn Ser Len Tyr
SS 75 75 50
tan Pxp Mát Asn Ser Leu Arg Axa Glu Asp Thr Aia Vai Tyr Tyr Cys
SS 90 95
Aia Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Aia. Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Oly
199 195 110
Gin Giy Thr Len Val Thr Vei Ser Ser
115 120 '2; INFORMATION FÓR SEQ ID XX: (X (ii SEQDENOE CHARACTDRIST1CS:
(A) LIUGTH: 9 amino a elás (Bi TYFB: amino acid íDi TO 2 OL DGY: I i nea r (xx) MOLEGOLF TYPBx pepiibe (v) FRAGMFNT ΤΥΡΕ: internál fix) FEATORE;
(Ai NAME/XEY: Modifled-slte (3: LÓGATION: 9 (Di OTHBE INFORMATION: /note- Xxx is Thr or Aia (xi) SEQÜENCE DESCAIPIION; SEQ TD NO:3:
Sin Arg Tyr Asn. Arg Aia .'Pro Tyr Xaa 1 5 <2 · .INFORMATION FÓR SEQ TD NO:4:
(i.i SEQXENCE CHARACTEFiETICS:
(Ai LENGTE; 12 amino acrds (Bi ΤΥΡΕ: amino sóid (D( TOBOLOGT: linear (ii) MOLSCDLE TYFE: peptide (vl FEAGMBMT TYFB: internál.
fix) FSATŐRE;
(A i NAΜΕ/KΕY; Μodi f x eσ-SÍ t e (Hi LOCATION; 12 (D( OTHEB INFORMATION: /note- Xxx is Tyr or Asn
198 (xr: SEQEENCE DSSCRIpTIÖN: SEQ IS NO ; 4 :
Vd ser t« len Ser Thr Alá Ser Ser len Asp Xaa 1 * S 19 (2) INEÖPMATIÖN KE OEQ IP NOdn (1) SEQÜENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 7 arrdno aeids (3) TYEE: amino edd (D) TOPOLOGY: llneer
(11) MOLECULE ΤΥΡΕ; peptlde
ív) FRAGMENT TYEE: Internéi
(xi) SEQÜENCE DESCRIPTIöN: SEQ:
Alá Aia Sár Thr lea Gin Ser
I 5 (2) INEORNATIQ'N FÓR SEQ ID NQ;6:í
Él) SRQQENCS· GHAERCTERISTTCS:
(A) LENGTE; 17 amin© ad.de QS) TYEE: ami n o acid (0) TCFC1CGY: linear (ii) MOLECUEE ΤΥΡΕ: pepii de (v) FRAGNENT ΤΥΡΕ; internál íd) SEQGENCE DESCE1.EITON: SEQ ID NO:6:
Alá lle Thr Trp Asn Ser Gly Eis Ils Asp Tyr Alá Asp Ser Vei Glu I 'l lö' * IS
Gly (2) INFORMÁCIÓN FOG SEQ ID NO: 7 ;
(i) SEQURNCE CHARACTERISTICS:
•A) LENGTE: 11 amlno adás (Β) ΤΥΡΕ: »ίηο acid (D) TOPOLOGY: llneer (ii) NOLEC9LE TYEE: peptlde ívj FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQÜENCE DSSCRTETTON: SEQ ID NO:7:
Arg Ara Ser Sin Gly II© Arg Asn Tyr Len Alá 1 5 1C (2: INFORMATION EOR SSQ ID NO;S:
(1) SEQUBNCE CHARACTEPISTTCS:
ÍA) LENGTE: 5 arain© acids
(B) TIRE: amin© acíd ÍD) TO DOLOGY: 1inea r
iii} MGLECELE ΤΥΡΕ; pepiide
iv? ERAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xl) SEQOENCE OESCRIBTION: S
Asp Tyr Alá Met EIs
I 5 (2) INTORMÁTION TOR SER 10 NO:i:
Π ) SEQRRNCT CHARACTERI.STT.es:
(A) LENGTE: 10'? amin?© acids (E) TYFE: amine a síd CD} TOPOLOGY: drnear (ii) MCLTCULE TiPE: peptide ív) FRAGMENT ΤΥΡΕ: internál
(xl) SSQOBNCE RTS Asp Iie Gin Met Thr CPIPT1ON: SEQ TD NO; 9: Ser Aia Ser Iie 15 Gly
Gin Ser Pm Ser Ser Lee 10
1 5
Asn Arg Val Thr 20 Ide Thr Gys Arg Alá 25 Ser Gin Gly 1 le Arg 30 Asn Tyr
Len Ara Trp 35 Tyr Gin Gin Lys Pm Td Gly Lys Alá Pro Lys 45 Len Len Iie
Tyr Air 10: Ara Ser Thr Len Gin 55 Ser Gly Vai Pr© Ser 00 Ar© Phe Ser oiy
Ser 61 Oly Ser Oly Thr Asp YÜ Ph© Thr Lei; Thr He 75 Ser Ser Len Gin Pro 80
Gin Asn Vai Alá Thr 51 Tyr Tyr Cys Gin Lys 00 Tyr Asn Ser Alá Pro 95 Tyr
Alá Phe Oly Gin Gly Thr Lys Vai Gin Iie Lys
100 105 (2) INFORMÁCIÓN TOR SEQ ID NO:10 ns (1) SE Q□EEGE G EAEAC TERIS TICS:
(A; LELGTR: 121 amino acids (E) ΤΥΡΕ: amin.ó aoíd
Τ' A'PCKy:
Iii) MOLECCLE ΤΥΡΕ: paptide (v) FAAGMELT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQÖENCE DESCRTE7I0N: SEQ IC KO:10:
Cin val Gin Leu Val Glo Ser Gly Gly Gly Leó Val Gin Pro Gly Arg
1 5 1.0 1.5
Ser Leu Arg Len 20 Ser Cys Ala Ala Ser T t Gly Phs Thr Pte Asp 3θ” Asp Tvr
A.·. s Mar Ri 3 Trp Val. Arg Gin Alá Pro Gly Lys Gly Leó Asp Trp Val
35 AA 45
Ser Ala la Tar Trp Asn Ser Gly Kis Er Asp Tyr Al a Asp Ser Val
5© 55· 60
Cin Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Alá Lys Asn Ala Len Tyr
65 70 T5 80
Lea um Met Asn Ser Leu Arg Ere Glo Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 50 95
Tin: Lys Aie Ser Tyr Lar Sex' Thr Ser Ser Se · eo Asp Asn Trp Gly
ISO: 105 ITT
Gin Gly Thr Len Tál Thr Val Ser Ser
115 12 0
(2) LNEOEMATION POP SEQ ID NO; II;
ii) GEQOGNCE CKAEACTEK1 STICE: : (.A) LENGTE: 9 mint acids (B) TYEE: ant.no anid (D) TOEGLOGY: línear
Ei 11 MOLECULE ΤΥΡΕ: pepiIde
Tv) FRAGMENT ΤΥΡΕ; internál
(xi) SEQUENCE DESCR1RTT0N: SEQ ID
Gin i Lys Tyr As n Ser Ala Pro Tyr Ala 5
INFO RMATIOK E( ÍR SEQ ID NO :1.2:
(i) SBQEENGE CBARACTRETSTICB:
(A) LENGTE: 9 amino acids (Β) TYPE: amino acid (E) TOPOLOGY: iinear (ii) NOLECULS ΤΥΡΕ: popsidé ív) FRAGNENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQÜENOE DPSCR1PIION; SEQ ID NO:12:
Gin Lys Tyr Áss Ar·:: Ala Pro Tyr Ala 1 S (2) INFORMATION FÓR SEQ IB NO:IS:
ti) SEQOFNGE CEARACTFEISTICS;
(A) IENGTH: 3 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino sóid (0) TO ?0LÓG Y : 1 inear ílí) PíOlEOLLE TYPB·: peptide tv) FEAGMENI ΤY PR: internál (xi) SEQOENOB DESCRiΡΓΙΟΝ: SEQ IE NO:13;
Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr 1 S (2) INFORMATION POR SEQ Ii NO;14;
(1) SEQUENGE 0RARACTERIST!CS:
(A) LENGTE: 9 amino aoiás (Β) ΤΥΡΕ: amino add (E) TOPOEOGY: Iinear (i.ij MOLECULE ΤΥΡΕ; pepiide (ti FEAGMEMT ΤΥΡΕ: intetsál (xi) SEQUE.NCE OESCPIPITON: SEQ IB NO:li
GIs Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr 1 ' ' ö (2) INECRMATION POR SEQ Ti NO:ld;
il): SEQOENCE CHAPACTERISTICS:
(A) LENGTE: 3 amise acids LB) ΤΥΡΕ; amise acid (B) TOPÖLOGY; iinear:
Ad LDBECCLE TYRF: pepCKB (v) FEAGNIENT ΤΥΡΕ: internál (xi) SEQGENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 15
Gin Lys Tyr Asn Ssr Als Pro Tyr Thr 1 E (2) INFORMATION TOR SEQ ID 90:16:
(i) SEQUENCE CHAEACTERISTIOS:
(A) LENGIK: 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino add (L) TOPOLOGY: O.inear (ii) MOLECOLÉ ΤΥΡΕ: pOQtide (vl FRAGYEMI ΤΥΡΕ: inretaa.l (xi) SSQDENCE DESCRIPTION: SEQ 10 NÖ:16
Gin Lys Tyr Aon Arr Alá Pro Tyr Thr 1 ' 5 (2) INFORMATION POR SEQ ID NO:I7 :
fii SEQUENCE CHARACTERiSTTGS : (A) LENGTE: 9 amino adds (Β) TYPE: amino acin (D) TOPOLOGY: linear
(ii) MQLECQLE ΤΥΡΕ: peptide
m PEAGMENT ΤΥΡΕ; Internál
(xi) SEQUENCE DESCPIPIION: SEQ ID I dl)
erő 1 (LyA Tyr Am a. Sem Alá- Pro Tyr Tyr 6
INFO PYAYYON POR SEQ ID NOrlB:
(1) SEQUENCE CBARACTERISTTCS:
(A) LENGIH:: 9 amino acids (Ε) TYPE: amino add D) TOPOLOGY: Idear (il) NOLECLLE ΤΥΡΕ: pepdde (v) PEAGNENT ΤΥΡΕ; internál (xi) SEQUENCE DES0R1PT1CN: SEQ 10 NdIS
Gin Lys Tyr Asm Ser Alá Pro Tyr Asn 1 S
Í2) INFORMATION FÓR SEO IF NO:19:
(.1) EEQN ENCE CHARACTFR1 STICS : ÍA) LENGIK: I amino a cicis ÍR) ΤΥΡΕ: amino add
(0) TOFOLOGY: Ilmear
(ii) MGLECCLE ΤΥΡΕ : pepiide
(V) FRAGMENT ΤΥΡΕ : internál
(xi) SEQBENCE DESCEIFIION: SEQ TB I 10:IS :
Gin Lys Tyr Thr Ser Alá Pro Tyr Tir
s fi) TNEGFMATTGN FÓR SEC. TB NOá2G:
(Íí SEQCFNIE CEARACIFRISIiCS:
(A) LENGTE; 9 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino aoid íDj I0F0LO G Y: 1ίnear fii) MGLECULF ΤΥΡΕ: pepiidé ív) FRAGMENT ΤΥΡΕ: iri nmei ixi) SFQcENOF BESGEIPTTOM: seq TD NG:2Ö:
Gin Lys Tyr Asm Arg Alá Pro Tyr Aon 1 5 (2) INFORMATION EOR GFQ 10 NGril:
í i) SEQBENCE OHAEACIFR1STÍOS :
(A) LENGTEc 9 smimG acids 03; ΤΥΡΕ: amino sóid (D) TGPöiOGY: iinear (ii) NOLFCÖLE ΤΥΡΕ: pepi).de (V) FRAGMENT TERE: internál
ÍXÍ) SEQFENCE OESCRIPTION: SEQ ID NG:21:
Gin Lys Tyr Asn Ser AIs Rls Tyr Ser i. ' ........ s.........................
(2) INFORMÁTION EGE SEQ IO NO:22:
(1) SEQUENCE CHARACTERISTiOS;
(A) LENGTH: 9 amino acids <HG ΤΥΡΕ: amino acíd (Dj TOPOLOGY: ionnár (ii} NOLECOLF ΤΥΡΕ: peptlda (vi FRAGMENT ΤΥΡΕ: Internál (xi) SEQUENCE DE 5 ERI FIT DN: SEQ 10 NO: 2 2
Gin Gin Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr 1. P (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:23:
(1) SEQUENCE GHARFGTEFISTICS:
(Al LENGTH:: R amim© acidn (Bi TYP.ÉL amlnd apid.
(Dj TOPOLOGY::: linaar (11) MOLGCNLE ΤΥΡΕ; pépeidé (v) FRAGNENT ΤΥΡΕ:: Internál (xi) SEQOENCE CISC?IPITON: SEQ ID NO:23
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp O:o Tyr Thr I d (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO:24:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTE: 3 ami.no acids íB) ΤΥΡΕ: amino acid (D TG POLOGY: 1inéar
(112 (vi MOEFCOLE FRAGMSNT ΤΥΡΕ: pepiide ΤΥΡΕ: internál
(xi) SEQUENCE OESCRIPITON: SEQ ID N IT
Gin Les Tyr: Ti: s Ser Ala Pro Tyr Thr
I 5 (2) INFORMATION POR SEQ ID NO:25:
(1) SEQUFNCE CHARPSTEFI$TICS: (A) LENGTH: $ amine acica (Β) ΤΥΡΕ; amino aeid (D) TOPOLOGY: iinsar (ii) NOLECBLF: ΤΥΡΕ; peptids ív) FRAGYÉRT ΤΥΡΕ: internál íxi: SEQGFROE DESGRIPTIQH: SEQ ID GO:25:
Gin Lys Tyr Asn Arc Pro Pro Tyr Thr j. r (2) Ih FORGAT ION POR SEQ ID 70:27:
(i) SEQGERCE CHARACTERIST1G S;
(A) DERGTH: 9 atd.no acids (B) TYPE: and no add (D) TOPOLOGY: Iinear iii) ROLFOUTI TYPE; peptide ívj PRÁGÁÉRT TYPE: internál íxi) SEQDSBCE DBECRTPTTGEe SEQ: ID RG;26:
Gin Arg Tyr Asn Arg Aia Pro Tyr Aia I 5 (2) IRFOPMATIGh POP SEQ IG 50:27:
fi) SFQDEhCB GRARACTERISTTCS:
(A) DERET8: 12 ad no add® (B) TYPE: amino add (D) TOPOLOGY: iinear (ii) MÖLSCCLE TYPE: peptide (v) ERAGMEET TYPE: internál
ÍXT) SEQEERGB LESCPlPTTOhí SEQ TD hO:27:
Aia Ser Tyr Len Ser Thr Ser Ser Ser Len Asp Αθη I S IÖ (2) IREQEHATIQh EQB SEQ ID E0;2S;
(1) SFQUEhCF CRARACTERISTTCS:
Bi LERGIH: 12 atu.no acids (B) TYPE; amino add ?D) TOPOLOGY: Iinear iii) YOLECDLE TYPE: peptide ív) PBAGMERT TYPE: internál íxi) SFQUEhCF DESCRTRTTOh: SEQ 10 NO:28:
(2)
Aie Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys 1 5 10
INFORMATION FÓR SEQ XO NO:29:
ír; SEQUENGE CRARACTEP1STTC3:
ÍA; LENGTE: 12 amino acrds (B) TYPE: amino sóid ÍD'} TOPOLOOY: línear (ii) YOLECULF TYPE: peptid© ív; FEAGYEKT TYPE: internál :xi: SEQOEKOE DEECETETTEK: SEQ ID KO:29:
Ara Sor Tyr Leu Ser Tar Ser Ser Ser Leu Asp Tyr I S TS íd INFORGATTOK POP GEO 10 KOuuS:
(I) SFOG EKGF 0 FARAGTEAISTIC S:
{Ai LEKGTF: 12 sstino aoids CB) TYPE: amino aula (D) TOPGLOGY: linear (ii) YGLECULR TYPE: pepiide ív) FRAGYENT TYPE: ruternai (χχ) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:30:
Alá Ser Tyr Let Ser Thr Ser Ser Ser Len Asp Asp 1 ~ S IS (2) TKFORMATIOK EOF SEQ IO NO: 31:
íi) SEQuFNCF CHAHAOTFRrSTXCS::
(A) LEKGTR:· 12 amin© «iss (E) TYPE: amino edd <p: T0PCL1GY: ixnear (Ti; YOLECULE TYPE: psptlde (ν) FRAGYENT TYPE: internál íxi) SFQuENCE DESCRIFTXON: SEQ ΪΟ NO:31r
Alá Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr I 5 1 δ (2; INFORMATION FÓR SEQ 10 KO:32:
fi) S.EQOBNCE 0RARAG1FR.ISI1GS :
(A) LBHGTB: 12 arnino acids (fö) 1IEE: amíno szid (D) TOROLODY: iinear
(ii) ROLEODLE TIRE: pepiido
ÍV) FRAGFENT II PB: internál
(xi. 5 SEQDFNCE DERGR12TI0N: SEQ 10 GO:22:
.A- λ a I Ser Tyr Leu Ser ( 5 P&r Ssr Ser S • s.r Leu Kis 10
2) IHFORMÁTION FÓR SEQ ID 30:33:
(ii EEQÜEFCE CRARAC1FR3 513 OS: (A) LENGTE·;: 12: arnino acids főj: TYBEi aiinc amid dl) TG DOLOG: Y : iinear
(: i i ) Ro L E C Lux I .í .3: pe p t i c
(v) FEAGNBNT TG BEI internál
(xi 5 SEQNENCE deSGRIRTION: SEQ ID NO:33:
AI a Ser Ede Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Sir
I 5 10
INFORMATION FOK SEQ 10 NO: 31:
(i) SEQGEECE· CEAHACTERISTICS::
(A) LENGTE: 12 amíno acids (B) TYBE: arnino acid (D) TGFOLGGY: linear fíí) FŐLEGOLE ΤΥΡΕ; pepiide (v) ERAOEW IYPEi indádnál (xi) SEGDEFCE OLSCR;PT30N: EEG LO NO:33;
Al.a Ser Tyr teu Ser Idr Alá Ser Ser Leu Gin lyr I 5 ii
2; INFORMATION FÓR EEG TG 00:25:
(A) SEQOBNCE CHARACTER1ST1CS:
(Á) LENGIK: 12 anino acids (Β) TYFE: arnino sóid (D) TOEOLOGT; llncar (íí) FŐLEGÖLE TIRE: pépirde (vQ F3AGMENT ΤΥΡΕ: cccerccl (xi): SEQGENGE DESCEIP7T0N: SEQ ID 70; 35:
Val Ser Tyr Len Ser Thr Ala Ser Ser Len Asn Asn .1 ' 1 10
INFORMATION EOF SEQ ID NO:36:
(lí SBQOENCE CHARAGTERISTICS:
(A) LENGTH: 321 foase pairs (E} T Y p£:: η u c 1 e i c a c i d (C) S7RAN0EDNSSS: donbie (D) TOPOLOGF: ixnear (ii) MOLECGLB TYPE; cDNA (xí) SEQSENCE SESCRTPTION: SEQ 10 NO:36:
GAGATGGAQA TQAöOGASIB IGOTSGTGG GISTGTGCAT GTGTR®GSGA: OGAGTGACG
ATOACTTGTC GGGCAAC7CA GGGCA1CAGA AATIAC7CAG CGTGGTATCA GCAAAAACGA
GGGAAAGCGC CTAAGGTOCT GATCTATGOT GCATCCACTT TGCAATCAGG GGTCCCATCT
CGGTTOAGTG GCAGTGGATC TGGGACAGAI TTCACTCTCA CCATCAGCAG COTACAGCCT
GAAGATGTTG GAAGTTATTA CTGTGAAAGG TATAACCGIB GAGGGTAIAC TTTTGGGOAG
W v, -r’A’VV , (2) INFORMÁTION FÓR SEQ IS 10 37:
(i) SEQUENGE CEARACTER7ST1CS:
(A) LENGTE: 363 base pairs (E) ΤΥΡΕ:: ncclexc acid ( C) STRANDÉENS 3S: cccb1e (D) TOPOGOGY: iinear
Óiéi MOLECIBR ΤΥΡΕ: dQNA (xi) SEQUENGE GEEGRIFTiON: SEQ IS NO:37;
GAGGTGGAGC TGGTGGASTC TGGGGGAGGC TTGGTACAGC GGGGGAGGTG CCIGAGAC7C
TGCTGTGCGG CGTGTGGATI CACCTTTGAT GATTAOGCCA TGCACTGGGI CCGGCAAGC7
CGAGGGAAGG GCCTGGAATG GGIC7CAGCT ATGA77TGGA AIAGTGGTCA CATAGAGTAT
GCGGACTCTG TGGAGGGGGG ATTCAGCATC TCCAGAGAGA ACGCCAAGAA CTCCCTGTAT
GIGGAAAIGA AGAGTCTGAG AGCTGASGAT ACGGGCGTAT ATIACTGTGC GAAAGTCTOG
7ACCTTASCA GCGCGTCGTG CCTTGACTAT TGGGGGCAAG GTACGGTGGT CACCSTCTCG

Claims (21)

1. Egy izolált igád humán antí-FhFd antitest vagy egy antigénkötő részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában egy nem-szzeroid gye1ládáncsökkentő szerrel (HSAID) kombinációban, ahol az antitest vagy antigénkötc része a humán ?NF«~röi 1 x 10M vagy ennél kisebb kö értékkel és I z X0‘-5 £g:· vagy ennél kisebb E.vt sebességi állandóval Olaszosléi, mindkettőt lelőlett pisámon rezonanciával meghatározva, és a humán TN'Fa ci to tóul ci tást egy standard in vitro L923 esszében 1 x 10“;’ b vagy ennél kisebb ICse értekkel, nentraizzalja.
2. Fog’ izolált IgGl humán anti-TKFct antitest vagy egy antigénkötő részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállítására retetrezét tál kombinációban, ahol az antitest vagy sut igén-kötő része a humán TdFO.-ről 1 χ ΙΟ* M vagy ennél ki.sebb X; értékkel és 1 x 10’ é vagy ennél kisebb Χοίί sebességi állandóval disszociál, mindkettőt felületi pisámon rezonanciával meghatározva, és a humán ThFu oi toioxicÍrást standard, in viiro L9 29 esszében 1 x 10'' M vagy kisebb ICyn értékkel neutralizni ja.
3. Egy izolált Igéi humán anti-TFEa antitest vagy egy antigénkötó: részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában metotrexáttal kombinációban, ahol az antitest vagy anti gén-kötő része a humán TbFa-rél 1 x 10“á It vagy ennél kisebb K,3. értékkel és 1. x 1.05 s' vagy enne! kisebb K,.;· sebességi állandóval disszociál, mindkét tőt felületi piazmoc humán ThFarezonanciával meghatározva, és gátolja az ELAk-l indukált expresszi óját humán kölőökvena eudcteiiáiis sejrsken.
4, ügy izolált igái humán anti-lbFe antitest vagy egy antigénkötő részének alkalmazása gyulladásos bélbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer előáll!zásában egy kort!kosztérpáddal komblaáóléban, ahol az antitest vagy antigén-kötő része a humán TbFerol 1 χ í0';' M vagy ennél kisebb ti értékkel es 1 x 10 s' ' vagy ennél kisebb Kí;iv sebességi állandóval disszooiái, mindkettőt felületi plgamon. rezonanciával meghatározva, és gátolja az Eb.kH-1 humán TliFa-indukálf expressziőját humán köldökvéna eudotelíális sejteken,
5. ügy izolált Igéi humán anti-FKFg antitest vagy egy antigénkötő részének alkalmazása gyűli adáson bélbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában egy kortikoszteroidőal kombinációban, ahol az antitest vagy antigén-kötő része a homárt TkFaról 1 x lö* M vagy ennél kisebb F.,< értékkel és 1 x 10'? s'; vagy ennél kisebb Κ,,,γ sebességi állandóval dleszociál, minőkettőt felületi plazmon rezonanc iával meghatározva, és a humán ööF« ci tót oxi ti tssr standard ín vitro iá 2 3 esszében 1 x 10'7 M vagy ennél kisebb big értékkel neutrálisátja.
ő. bgy izolált JgGl humán anti-TFFe antitest vagy egy antigénkötő részének, alkalmazása gyulladásos bélbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában amino-szallcilattal kombinációban, ahol az antitest vagy antigén-kötő része a humán TbFa-rol 1 x 10:· m vagy ennél kisebb értekkel és 1 x 10“5 s” vagy ennél kisebb Kt,íf sebességi állandóval disszooiái, mindkettőt, felületi
121 pisámon rozouancl.ával vvvg.m taros ry és gázolja az SLAE-1 humán T'KF«- indukál t expresszié jelt humán kóidökvéna endoteliális sej he·* ken.
7. ágy izolált IgGl humán. anri-TGFcx antitest vagy egy antigénkötő részének alkalmazása gyulladásos bélbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában anino-szaliciiáttal kombinációban, ahol az anti. test vagy ant igen-köti része a rámán TbFa-röi 1 x lö” b vagy ennél kisebb K(j értékkel és 1 x 18“* s vagy ennél kisebb Ko.»f· sebességi állandóval disszociái < mindkettőt felületi elázz oo. rezonanciával meghatározva, és a humán '11-tt ci tetőzi, oltást standard in v.itro 1,929 esszében I x 11' M vagy ennél kisebb 1¾ értékkel neu t ral i tál ja .
8 , Egy izolált IgGl húsán antá-TEFa antitest vagy egy antigénkötő részének alkalmazás,a gyulladásos belbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer eiöál1itásábamó-merkapto-pun innal kombinációban. ahol az antitest vagy anti gén-kötő része a humán TbFcx-ról 1 ··' lö M vagy ennél kisebb K,; értekkel és 1 r. 13'' s'' vagy ennél, kisebb Κο?.,= sebességi, állandóval disszociái, mindkettőt felületi plazmán. rezonanciával meghatározva, és gátolja az Ebhb-1 humán IbEd-indukált expresszioját humán kóidökvéna enáoteiiálss sejteken.
1 - Egy izolált Igéi humán anti-ThEe antitest vagy agy antigénkötő részének alkalmazása gyulladásos bélbetegség késelésére alku 1 más gy égy s z er e .1 ö á. 11 i t á s aha n 6 - m e r kap t. o - pu r i nna 1 k omb i n á c i ó bán, ahol az antitest vagy antigén-kötő része a humán ThFo-rol 1.
x I0B b vagy ennél kisebb K,? értékkel és 1 x lö5 s~ vagy ennél
122 kisebb Χ,,.£έ·: sebességi állandóval disezooiái, mindkettőt felületi, plassson rezonanciával meghatározva. és a humán TBFd cítotoxicitást s»andavd ín vitre 1/32
9 esszében 1 x lö' b vagy önnél kisebb Ily, értékkel neutráliséija.
lö · Egy izolált igéd humán anti-EWa antitest vagy egy antigén-kötő részének alkalmazása, gyulladásos bélbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer előállításéban azathiogrinnal kombinációban, ahol au antitest vagy anrigen-kötő része a humán TNFa-rői 1 x
10'·' g vagy ennél kisebb Kc. értékkel es 1 x IO'-5 s'' vagy enned, kisebb bo£f sebességi állandóval disszocíál, mindkettőt felületi plazmon rezonanciával meghatározva, és a humán TbFü citctoxioltást standard in nitro L32S esszében 1 x 10' hl vagy ennél kisebb 11¾ értékkel néntralizaija,
11 Egy izolált igGl humán anti-TNFa antitest vagy egy anti gén-kore részének alkalmazása gyulladásos bél betegség kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában azathioprlnnél kombinációban. ahol. az antitest vagy antigén-kötő része a. humán TbFtx-rói 1 x lö* fi vagy ennél kisebb kd értékkel és 1 x lö1 s' vagy ennél kisebb Xau sebességi állandóval disszociál, mindkettőt felületi piámon rezonanciával, meghatározva, és gátolja az ELáhi-1 humán ThEd-indukált expressziöját humán köldökvéna endoteíiálís sejteken .
11, Egy izolált igéi humán anti-TnFh antitest vagy egy artigén-kötő részének alkalmazása gyulladásos bélbetegség kezelésűre alkalmas gyógyszer eloáilitássbaxi mezőtrexáttal kozstöu;ációban, ahol. az antitest vagy antigén-kötő része a humán TnFa-ről 1 χ lö* M vagy ennél kisebb értékkel és 1 χ IO”7 s”J' vagy ennél kisebb ,KCjfi. sebességi állandóval drrrrorial, mindkettőt. felületi piazmon rezonanciával meghatározva, és a humán 3Wu ci te texasi tást standard in vitro L929 esszében 1 x 10”1 M vagy ennél kisebb I(k3: értékkel neutráliséi ja..
13. ügy Íróiéit Igéi humán anti~3'KF<( antitest vagy egy attigén-kötő restének alkalmazása gyulladásos bélbetegség kezelésére alkalmas gyógys ser előállításában. netttrexáttál kombinációben, ahol az antitest vagy antigén-ketó része a humán TNFU-roI 1 x i.ö 'í: b vagy ennél kisebb Xá értékkel és 1 x 10'J s' vagy ennél kisebb K sebességi állandóval disszociál, mindkettőt felületi plazmán. rezonanciával meghatározva, és gátol ja az SLád-1 humán ThFa-indukált expressziéját humán, köldökvéna endoteliális sejteken.
1.4. agy izolált IgGl humán an.ti-Tk.ka antitest vagy egy antigén-kóto részének alkalmazása gyulladásos bélbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer előállitásában további terápiás ezerrel kombinációban., ahol az antitest, vagy antigén-kötő része a humán ikra-rol. 1 x IO”3 h vagy ennél kisebb K.s értékkel és 1 x 10”J s'· vagy ennél, kisebb X,mí sebességi állandóval oisszocíál, mindkettőt felületi piazmon rezonanciával meghatározva, és gátolja az üLáü~i humán THFíx-- indukált expresszié jár barnán kőidökvéna endoteliális sejteken, és ahol a további terápiás sz-u a következőkből álló csoportból kerül kiválasztásra: budenozid, ciklosporin, szulfaszalazin, metronl.dazol, mezalamin, oiszalazin, balszalazid, cioro.t 1 oxasin és lignokain..
124
Íz, Egy izolált XgGl. humán aati-TNFa antitest vagy egy antigén-kötő részének alkalmazása gyulladásos bélbetegség kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában további terápiás szerrel kombinációbanahol az antitest vagy antigén-kötő része a humán ThFa-ről 1 n lő* M vagy ennél kisebb F,< értékkel és 1 x 10'' s' vagy ennél kisebb Koíí sebességi állandóval disszoclál, mindkettőt féltheti piámon rezonanciával meghatározva, és a humán TNFa oitotoxioltást standard in vitro tilt esszében 1 x 10; M vagy enne! kisebb rqSÍJ értékkel neuh-,..l ·. x. un a további terápiás szer a következőkből álló csoportbői kerül kiválasztásra:; budenozid, ciklosporln, szuIfaszalsziu, metronidazol. zsezalamin, ciszalazin, beiszalazio, ciprofloxacin és lignokain.
lő. Ά 4-IS, igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, amelyben a gyulladásos bélbetegség Cronn-féle betegség.
17, A 4-15, igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, amelyben a gyulladásos bélbetegség oolitis ulcerosa,
18. Egy izolált IgGl humán anti-TWd antitest vagy egy antigén-kötő részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában egy nem-szterőid gyulladáscsökkentő szerrel íNSFIIő kombinációban, ahol az antitest vagy antigén-kötő része a humán ThFu-rői I x 10” ti. vagy ennél kisebb értekkel és 1 x 10“ s! vagy erűnél kisebb sebességi állandóval. disszoclál, mindkettőt felületi plazmon rezonanciával meghatározva, és gátolja az ELAM-I humán TNFa-indukált expressziöiát humán köldökvéna. endoteliáiis sejteken.
19. Egy izolált IgGl humán anti-TNFa antitest vagy egy antiyéu-köol részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában. egy kortikoezteroid gyulladás csökkenté szerrel kombinációbanahol az. antitest vagy antigénközé része a humán TNFa-ről 1 x 10 M vagy ennél kisebb értokkal es 1 x lö””' s’ vagy ennél kisebb sebességi állandóval disszooiál, mindkettőt felületi piazmon rezonanciával meghatározva,. és gátolja az EhAM-l humán öNFa-indukált expressziójáf humán kóldökvéna endoteliális sejteken..
20. Sgy izolált IgGl humán anti-TNFa antitest vagy egy ant. ige·:-· kő tó részének a 1 kalmazá s a egy kor tikos z tere i d gyulladás csökkenté szerrel kombinációban rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában, ahol az antitest vagy antigén-kötő része a humán TNFa-rol 1 x ii N vagy ennél kisebb y. értékkel· és 1 x 10' s“: vagy ennél kisebb X,.u.·; sebességi állandóval disszooiál, mindkettőt felületi píazmon. rezonanciával meghatározva, és a humán TNFa eitotoxicitest standard in vitro L929 esszében 1 x 10'’ N vagy ennél kisebb IC?O értékkel neutraiizálja.
21. Egy izolált igái humán anti-TNFa antitest, vagy egy antigén-kötő részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállításában egy további szerrel, kombinációban, ahol az antitest vagy antigen-kötő része a humán TNFd-rői 1 x 10' M vagy ennél kisebb Kö értékkel és 1 x 10' s' vagy ennél kisebb fésű sebességi állandóval disszooiál, mindkettőt felületi plazmcn rezonanciával meghatározva, és gátolja az ELAY--1 humán TNFa-indukált expressziéját humán kóldökvéna endoteliális sejteken, és ahol a további szer a kővetkezőkből állő csoportból kerül kiválasztásra: cltokin-szuppressz 1 v gyűllaoáscs ökkentŐ szar(ok; íőSAiD-k;, tal.ídomid, lenlunomld, traztexamir: sav, naproxeu, meioxtcam, ibeprofan, piroxicam, diciofenao, indomauatin, szuifaszalszin , azai.hr opr in, arany, pénzei Hazán, klorokin, hídroxi-klorokin, kiorambucii, ciklokoszfamid, oikiosporin, teljes 1 infoid besugárzás, anti-tinóéi ta globulin, eredni zen, crgoteín, giükozarő.no-glukán-poiiszul fát, mlnocíklin, auranoiin, feniIbusazon, meklofeh-aminsav, flufenamínsav, intravénás iumiunglobul in , zí teuton, mskofenolsav, takrolim.asz, rapamícin, terafekszn, z-kiör-dezoxiadenozin és azaribin.
22. Egy izolált igéi burán anti-lMF« antitest vagy egy antigén-kötő részének alkalmazása rheumatoid arthritis kezelésére alkalmas gyógyszer előállósásában egy további szerrel kombinációban, ahol az antitest vagy ontigén-kötő része a humán TNFa-ról 1 x 10'' M vagy ennél kisebb K<; értékkel és 1 x iQ~;i s'L vagy ennél, kisebb ihíf sebességi állandóval disszociái, mindkettőt felnietr plarmon rezonanciával meghatározva, és neutraiizáija a inznán
ThFu cl tetőzi cl tás t standard in vitro L929 esszében 1 x 10:' M vagy ennél kisebb TO&3 értékkel, és ahol a további szer a következőkből álló csoportból kerül kiválasztásra: citokinszupprésszív gyulladáscsökkentő szeriek; (CSAID-ki, tállóerő, d, leflunomid, tranexamin sav, naprexem meloxicam., ibnp.ro. fan., piroxicam, dlciofenae, indometacrn, szuifaszalazin, azathioprixy arany, peniciliamin, klorokin, hídroxi-klórokén, kiorambucii.
cikiofoszfamid, oikiosporin, teljes Iimfold besugárzás, antitimoci.ta. globnlin, eredni zen, ergovein, glükozamino-glükánpoliszuifát, minociki. in, auranotiu, remi ©utazón, mekioienaminsav, f lurenAtiínssv, intravénás immunglobulin,- zi leütöm mikofenoisav, takrolimusz, rapamicin, terafektin, 2-klőrdezoxiadenozin és azáriéin.
2 9. A 2-1, vagy 25- igénypont szerinti alkalmazás, amelyben az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része a humán ikFízrél 5 x 1€~* s' vagy ennél kisebb K;;··. sebességi állandóval· diszzvoiá1.
21, A 21, vagy 22, igénypont szerinti alkalmazás, amelyben az izolált hónán antitest vagy antigén-kötő része a humán TNFnrol 1 x 10* s1 vagy ennél, kisebb F,,:.; sebességi állandóval ál s ssool al,
25. A 22, igénypont szerinti alkalmazás, amelyben az izolált humán, antitest vagy antigén-kőtő része a humán Ikre cit©toxioitant egy standard in vitro 1929 esszeben 1 x iö' k vagy ennél, kisebb IC;,q értékkel neutrálisai ja,
26. A 22. igénypont szerinti alkalmazás, amelyben az izolált humán, antitest vagy antigén-kötő része a humán INFe citötoxieitást egy standard in vitro L929 esszében 1 x 10' k vagy ennél kise.b.b ΣΟ,ο értékkel neutráliséi ja.
27. a 22, igénypont, szerinti alkalmazás, amelyben az izolált humán antitest vagy 3t_o?u kos' 4,<s o a humán. TNPe citotoxieitást egy standard in vitro 2929 esszében
5 x 10k vagy ennél kisebb ICns értékkel neetralizálja..
Az 1-27.
igénypont ok bármelyi ke er i n t í a 1 .kai ma zás , amelyben az izolált humán antitest vagy antigén-kötő része tartal.maz egy könnyű lánc variábilis szakaszt (LCVEo , amely tartalmaz egy CDR3 ionénz, amely a SEQ ID kö; 3 aminosav-szekvenciát tartalmazza; egy CDR2 öomént, amely a SEQ ID kö: 5 aminosavszekvenciát tartalmazza és egy CDRl dornént, amely a SEQ ID NO: 7 aminösav-szekvenolát tartalmazza, és tartalmas egy nehéz lánc variábilis szakaszt ÍHCVR), amely tartalmaz egy CDR3 öomént, amely a SEQ ID kö ? i aminosav-szekvenciát tartalmazza, egy CDR2 öomént, amely a SEQ ID kö:6 aminosav-szekvenciát tartalmazza ée egy CSRl öomént, amely a SEQ ID kö: 8 aminosav-szekvenciát tartalmazza ,
29. Az 1-28, igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás amelyben, az izolált humán antitest vagy antigén-köré része tartalmaz egy DCVE-t, amely a SEQ IS kö; 1 aminosav-szekvenciát tartalmazza és egy hCVR-t, amely a SEQ ID DD; 2 aminosavζ z e k vető 1 á t tarta Ima ζ z a...
HU1300152A 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása HU230048B1 (hu)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 1996-02-09
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
US60/031,476 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU230048B1 true HU230048B1 (hu) 2015-06-29

Family

ID=26707297

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9901874A HU221984B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
HU1500179A HU230515B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai
HU1300152A HU230048B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása
HU0204115A HU228630B1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9901874A HU221984B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-t kötő antitestek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
HU1500179A HU230515B1 (hu) 1996-02-09 1997-02-10 Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0204115A HU228630B1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 Use of human anti bodies that bind human tnf-alpha and process for inhibiting of human tnf-alpha activity

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (hu)
EP (1) EP0929578B1 (hu)
JP (8) JP3861118B2 (hu)
KR (1) KR100317188B1 (hu)
CN (5) CN101712720A (hu)
AT (1) ATE239041T1 (hu)
AU (1) AU722077B2 (hu)
BG (7) BG64564B1 (hu)
BR (3) BRPI9707379C8 (hu)
CA (1) CA2243459C (hu)
CY (2) CY2463B1 (hu)
CZ (1) CZ292465B6 (hu)
DE (4) DE122004000004I1 (hu)
DK (1) DK0929578T3 (hu)
ES (1) ES2198552T3 (hu)
HK (8) HK1066860A1 (hu)
HU (4) HU221984B1 (hu)
IL (4) IL125697A (hu)
LU (1) LU91062I2 (hu)
MX (1) MX336813B (hu)
NL (1) NL300143I2 (hu)
NO (6) NO316711B1 (hu)
NZ (5) NZ576716A (hu)
PL (2) PL188192B1 (hu)
PT (1) PT929578E (hu)
RO (2) RO123028B1 (hu)
RU (3) RU2270030C2 (hu)
SI (1) SI9720020B (hu)
SK (1) SK284040B6 (hu)
TR (1) TR199801532T2 (hu)
UA (2) UA57726C2 (hu)
WO (1) WO1997029131A1 (hu)

Families Citing this family (461)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
AU640400B2 (en) * 1989-08-07 1993-08-26 Peptide Technology Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US6706264B1 (en) 1994-03-14 2004-03-16 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of conditions promoted by an increase in levels of IFN-y
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
PL188192B1 (pl) * 1996-02-09 2004-12-31 Abbott Lab Bermuda Ltd Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
CA2288992C (en) * 1997-04-30 2012-06-12 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
US7507706B1 (en) 1998-12-14 2009-03-24 Genetics Institute, Llc Cytokine receptor chain
WO2000051637A1 (en) * 1999-03-02 2000-09-08 Centocor, Inc. ANTI-TNFα ANTIBODIES IN THERAPY OF ASTHMA
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
MXPA02003420A (es) * 1999-10-06 2002-08-20 Basf Ag Inhibidores de la via de senalizacion de endotelina y antagonistas de los receptores de alfav°3 integrina para el tratamiento en combinacion.
US7767207B2 (en) 2000-02-10 2010-08-03 Abbott Laboratories Antibodies that bind IL-18 and methods of inhibiting IL-18 activity
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN1451043A (zh) 2000-06-29 2003-10-22 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
ES2390425T3 (es) 2000-12-22 2012-11-12 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores
AU2002245272B2 (en) * 2001-01-16 2006-06-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
EP1379125A4 (en) 2001-03-22 2004-12-08 Abbott Gmbh & Co Kg TRANSGENIC ANIMALS THAT EXPRESS SPECIFIC ANTIBODIES FOR INTERESTING GENES AND THEIR USE
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2868614A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
EP1414517A4 (en) * 2001-06-26 2008-02-06 Photomed Technologies Inc MULTIPLE WAVELENGTH ILLUMINATOR
EP3492100B1 (en) 2001-06-26 2021-12-08 Amgen Inc. Antibodies to opgl
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
AU2002341766A1 (en) * 2001-09-20 2003-04-01 Genstar Therapeutics Corporation Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
WO2003028630A2 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Genetics Institute Llc. Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
US20040018195A1 (en) * 2002-03-26 2004-01-29 Griswold Don Edgar Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040136991A1 (en) * 2002-07-19 2004-07-15 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of anemia using TNFalpha inhibitors
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
NZ563471A (en) 2002-11-08 2009-04-30 Ablynx Nv Camelidae antibodies against imminoglobulin E and use thereof for the treatment of allergic disorders
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
MXPA05005921A (es) 2002-12-02 2005-10-19 Abgenix Inc Anticuerpos dirigidos a factor de necrosis tumoral y sus usos.
CA2511823A1 (en) * 2002-12-30 2004-07-22 Amgen Inc. Combination therapy with co-stimulatory factors
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
EP1590431A4 (en) * 2003-01-08 2009-12-23 Applied Molecular Evolution ALPHA TUMOR NECROSIS FACTOR MOLECULES
KR20050092029A (ko) * 2003-01-10 2005-09-16 아블린쓰 엔.브이. 폰 빌레브란트 인자(ｖＷＦ) 또는 콜라겐에 대한낙타과로부터의 재조합 ＶＨＨ 단일 도메인 항체
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
BRPI0408315A (pt) * 2003-03-14 2006-03-07 Wyeth Corp anticorpo isolado, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de gerar um anticorpo ou fragmento de ligação de antìgeno, de regular uma resposta imune, de tratar ou prevenir um distúrbio associado com célula imune em um paciente, de tratar ou prevenir um distúrbio hiperproliferativo em um paciente, e, kit de diagnóstico
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
CN1925843A (zh) 2003-12-02 2007-03-07 细胞免疫科学公司 生产单克隆抗体的方法和组合物
ATE552850T1 (de) 2003-12-23 2012-04-15 Genentech Inc Neue anti-il 13-antikörper und verwendungen dafür
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US20050260679A1 (en) * 2004-03-19 2005-11-24 Sirid-Aimee Kellerman Reducing the risk of human anti-human antibodies through V gene manipulation
US7625549B2 (en) * 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
TWI556829B (zh) 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
MX2007001509A (es) * 2004-08-05 2007-03-27 Wyeth Corp Antagonismo de la actividad del receptor de interleuquina 21.
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
JP2008517914A (ja) * 2004-10-22 2008-05-29 ジェネンコー・インターナショナル・インク ヒトの抗体の分離方法
AU2005306399B2 (en) 2004-11-19 2012-02-09 Biogen Ma Inc. Treatment for multiple sclerosis
LT1850873T (lt) 2005-02-08 2019-04-10 Genzyme Corporation Antikūnas prieš tgf beta
CN101160528A (zh) * 2005-02-14 2008-04-09 惠氏公司 Il17-f在诊断和治疗气道炎症中的用途
RU2007129263A (ru) * 2005-02-14 2009-03-20 Вайет (Us) Антитела к интерлейкину-17f и другие антагонисты опосредуемой il-17f передачи сигналов и их применение
DK2529619T3 (en) 2005-02-17 2016-01-11 Biogen Ma Inc Treatment of neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
JP5339901B2 (ja) * 2005-05-10 2013-11-13 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 炎症傷害の処置および評価
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
TWI399384B (zh) 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
CA2610960A1 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
EP2390267B1 (en) 2005-06-07 2013-06-05 ESBATech - a Novartis Company LLC Stable and soluble antibodies inhibiting TNF(alpha)
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
AU2006261357A1 (en) * 2005-06-17 2006-12-28 Zimmer Spine Austin, Inc. Improved method of treating degenerative spinal disorders
EP2664340B1 (en) * 2005-06-24 2020-02-12 Duke University A direct drug delivery system based on thermally responsive biopolymers
WO2007014162A2 (en) * 2005-07-21 2007-02-01 Abbott Laboratories Multiple gene expression including sorf constructs and methods with polyproteins, pro-proteins, and proteolysis
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
EP2500355A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
AU2006283532B2 (en) 2005-08-19 2012-04-26 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
EP1928905B1 (de) 2005-09-30 2015-04-15 AbbVie Deutschland GmbH & Co KG Bindungsdomänen von proteinen der repulsive guidance molecule (rgm) proteinfamilie und funktionale fragmente davon sowie deren verwendung
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
RS53055B (en) 2005-11-01 2014-04-30 Abbvie Biotechnology Ltd PROCEDURES FOR DETERMINING THE EFFICIENCY OF ADALIMUMAB IN RESPONDENTS WHO HAVE ANKILLOSATIVE SPONDILITIS USING CTX-II AND MMP3 AS BIOMARKERS
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
PL1954718T3 (pl) 2005-11-30 2015-04-30 Abbvie Inc Przeciwciała skierowane przeciwko A globulomerowi, ich reszty wiążące antygeny, odpowiednie hybrydomy, kwasy nukleinowe, wektory, komórki gospodarze, sposoby wytwarzania tych przeciwciał, kompozycje zawierające te przeciwciała, zastosowania tych przeciwciał i sposoby stosowania tych przeciwciał
JP5486808B2 (ja) 2005-11-30 2014-05-07 アッヴィ・インコーポレイテッド アミロイドベータタンパク質に対するモノクローナル抗体及びその使用
ES2779992T3 (es) 2005-12-20 2020-08-21 Univ Duke Métodos y composiciones para suministrar agentes activos con propiedades farmacológicas potenciadas
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US7846439B2 (en) 2006-02-01 2010-12-07 Cephalon Australia Pty Ltd Domain antibody construct
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
EP2738179A1 (en) 2006-04-05 2014-06-04 AbbVie Biotechnology Ltd Antibody purification
EP2666479A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
WO2008063213A2 (en) 2006-04-10 2008-05-29 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CA2651992A1 (en) 2006-06-30 2008-01-10 Abbott Biotechnology Ltd. Automatic injection device
PL3339445T3 (pl) 2006-09-08 2020-12-14 Abbvie Bahamas Ltd. Białka wiążące interleukinę 13
NZ597334A (en) 2006-09-13 2014-02-28 Abbott Lab Cell culture improvements
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
KR20150002896A (ko) 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
MX2009005252A (es) 2006-11-17 2009-05-28 Abbott Lab Aminopirrolidinas como antagonistas del receptor de quimiocina.
ES2432173T3 (es) 2006-11-21 2013-12-02 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Métodos de tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas usando un antagonista de GM-CSF
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
US8324350B2 (en) 2006-12-29 2012-12-04 Abbott Laboratories Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies
RU2475265C2 (ru) * 2007-01-16 2013-02-20 Эбботт Лэборетриз Способы лечения псориаза
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
PL2148691T3 (pl) 2007-02-05 2015-12-31 Apellis Pharmaceuticals Inc Analogi kompstatyny do stosowania w leczeniu stanów zapalnych układu oddechowego
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
EP3202786A3 (en) 2007-03-12 2017-10-11 ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit LLC Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
CA2688433A1 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Methods for selecting protease resistant polypeptides
JP2010528647A (ja) * 2007-06-06 2010-08-26 ドマンティス リミテッド ポリペプチド、抗体可変ドメインおよびアンタゴニスト
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP2170390B1 (en) 2007-06-14 2018-11-07 Biogen MA Inc. Natalizumab antibody formulations
CA2689941C (en) * 2007-06-25 2019-10-29 Esbatech Ag Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
JP5506670B2 (ja) * 2007-06-25 2014-05-28 エスバテック − ア ノバルティス カンパニー エルエルシー 単鎖抗体の配列に基づくエンジニアリング及び最適化
CN101848733A (zh) * 2007-07-13 2010-09-29 艾博特生物技术有限公司 用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物
CN101980722A (zh) 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CA2697032C (en) * 2007-08-22 2021-09-14 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) * 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
KR101666228B1 (ko) 2007-09-28 2016-10-13 인트렉손 코포레이션 생물치료학적 분자를 발현시키기 위한 치료학적 유전자-스위치 작제물 및 생물반응기, 및 이의 용도
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
US7960145B2 (en) 2007-11-08 2011-06-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
SG10201604258YA (en) 2007-11-30 2016-07-28 Abbvie Biotechnology Ltd Anti-tnf antibody formulations
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
CN104188911A (zh) 2008-01-15 2014-12-10 Abbvie德国有限责任两合公司 粉末状蛋白质组合物及其制备方法
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
JP5795167B2 (ja) 2008-03-13 2015-10-14 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 疾患治療剤
JP5604311B2 (ja) 2008-03-13 2014-10-08 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 疾患治療剤
BRPI0909048A2 (pt) 2008-03-13 2015-11-24 Biotest Ag composição farmacêutica, e, método de tratamento de uma doença autoimune
US8178092B2 (en) 2008-03-18 2012-05-15 Abbott Laboratories Methods of treating psoriasis by administration of antibodies to the p40 subunit of IL-12 and/or IL-23
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
JP5646457B2 (ja) 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
JP5890174B2 (ja) 2008-05-09 2016-03-22 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 終末糖化産物受容体（ｒａｇｅ）に対する抗体及びその使用
EP2311493A4 (en) * 2008-05-20 2012-09-26 Kaneka Corp CYTOTOXIC COMPOSITION
BRPI0913366A8 (pt) 2008-06-03 2017-07-11 Abbott Lab Imunoglobulinas de domínio variável duplo e seus usos
KR20110016958A (ko) 2008-06-03 2011-02-18 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP3241843B1 (en) 2008-06-25 2021-07-28 Novartis AG Solubility optimization of immunobinders
WO2009155724A2 (en) 2008-06-25 2009-12-30 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Stable and soluble antibodies inhibiting vegf
CN102076716A (zh) 2008-06-25 2011-05-25 艾斯巴技术,爱尔康生物医药研究装置有限责任公司 抑制TNFα的稳定和可溶的抗体
WO2009158704A2 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
NZ590667A (en) * 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
JP2011527579A (ja) 2008-07-08 2011-11-04 アボット・ラボラトリーズ プロスタグランジンｅ２結合タンパク質およびこの使用
RU2011104348A (ru) 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
EP2337799A2 (en) * 2008-08-28 2011-06-29 Wyeth LLC Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
WO2010042634A1 (en) * 2008-10-07 2010-04-15 National Cheng Kung University Use of il-20 antagonists for treating rheumatoid arthritis and osteoporosis
CA2739352C (en) 2008-10-29 2021-07-13 Wyeth Llc Methods for purification of single domain antigen binding molecules
EP4104821A1 (en) 2008-10-29 2022-12-21 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
JP2012510468A (ja) * 2008-11-28 2012-05-10 アボット・ラボラトリーズ 安定な抗体組成物およびこれを安定させるための方法
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
EP2384367A4 (en) 2008-12-30 2013-07-10 Janssen Biotech Inc SERUM MARKERS TO PREDICT THE CLINICAL RESPONSE TO ANTI-TNF ANTIBODIES IN PATIENTS WITH MORBUS BECHTEREW
CN106995495A (zh) 2009-01-12 2017-08-01 希托马克斯医疗有限责任公司 修饰抗体组合物及其制备和使用方法
BRPI1011384A2 (pt) 2009-02-23 2016-03-15 Cytomx Therapeutics Inc pro-proteinas e seus metodos de uso
US8030026B2 (en) * 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
KR101579771B1 (ko) * 2009-03-05 2015-12-28 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ-17 결합 단백질
SG175181A1 (en) * 2009-04-16 2011-11-28 Abbott Biotherapeutics Corp ANTI-TNF-a ANTIBODIES AND THEIR USES
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
KR20120038406A (ko) * 2009-05-04 2012-04-23 애보트 바이오테크놀로지 리미티드 인간 항?ＴＮＦ?α 항체의 안정한 고 단백질 농도 제형
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
RU2589255C2 (ru) 2009-08-14 2016-07-10 Фейзбайо Фармасьютикалз, Инк. Модифицированные вазоактивные интестинальные пептиды
US20110044981A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-24 Spangler Rhyannon Methods and compositions for treatment of pulmonary fibrotic disorders
RU2570639C2 (ru) 2009-08-29 2015-12-10 Эббви Инк Терапевтические dll4-связывающие белки
MX2012002651A (es) 2009-09-01 2012-05-22 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
CA2773556A1 (en) * 2009-09-14 2011-03-17 Abbott Laboratories Methods for treating psoriasis
WO2011038069A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Xbiotech, Inc. Methods, compositions, and kits for reducing anti-antibody responses
CN102597775A (zh) 2009-09-25 2012-07-18 佐马技术有限公司 筛选方法
WO2011047262A2 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2012004877A (es) * 2009-10-26 2012-05-23 Prometheus Lab Inc Analisis para la deteccion de farmacos anti-tnf y autoanticuerpos.
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
TW201124535A (en) * 2009-10-30 2011-07-16 Abbott Lab SORF constructs and multiple gene expression
US8420083B2 (en) 2009-10-31 2013-04-16 Abbvie Inc. Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
EP2499491B1 (en) 2009-11-11 2015-04-01 Gentian AS Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
WO2011068927A2 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 Abbott Laboratories 11-β-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE TYPE 1 (11B-HSD1) INHIBITORS AND USES THEREOF
MX2012006560A (es) 2009-12-08 2012-10-05 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos monoclonales contra la proteina rgm a para utilizarse en el tratamiento de degeneracion de capa de fibra de nervio retinal.
US8758301B2 (en) 2009-12-15 2014-06-24 Abbvie Biotechnology Ltd Firing button for automatic injection device
JP2013514388A (ja) 2009-12-16 2013-04-25 フィリップ ボッシュ， 間質性膀胱炎の処置の方法
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
MY160628A (en) 2010-03-02 2017-03-15 Abbvie Inc Therapeutic DLL4 Binding Proteins
MX2012011629A (es) 2010-04-07 2013-03-05 Abbvie Inc Proteinas de union a tnf-alfa.
CN104744591B (zh) 2010-04-15 2022-09-27 Abbvie德国有限责任两合公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
LT3202789T (lt) 2010-04-16 2020-06-10 Biogen Ma Inc. Antikūnai prieš vla-4
KR102071212B1 (ko) 2010-04-21 2020-01-30 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 치료제의 제어된 전달을 위한 착용형 자동 주사 디바이스
TWI615405B (zh) 2010-05-14 2018-02-21 艾伯維有限公司 Ｉｌ-１結合蛋白
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
RS57543B1 (sr) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Primene i kompozicije za lečenje hidradenitis suppurativa (hs)
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
CA2807014A1 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN105348387B (zh) 2010-08-14 2020-08-25 Abbvie 公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
WO2012024650A2 (en) 2010-08-19 2012-02-23 Abbott Laboratories Anti-ngf antibodies and their use
RU2013113225A (ru) 2010-08-26 2014-10-10 Эббви Инк. Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение
UY33679A (es) 2010-10-22 2012-03-30 Esbatech Anticuerpos estables y solubles
AU2011319842B2 (en) 2010-10-29 2014-05-29 Abbvie Inc. Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
WO2012061374A2 (en) * 2010-11-02 2012-05-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PT2637690T (pt) 2010-11-11 2016-12-27 Abbvie Biotechnology Ltd Formulações líquidas de anticorpo anti-tnf-alfa de concentração elevada
KR101923364B1 (ko) 2010-11-23 2018-11-30 애브비 인코포레이티드 아폽토시스­유도제의 염 및 결정형
ES2603129T3 (es) 2010-11-23 2017-02-23 Abbvie Ireland Unlimited Company Métodos de tratamiento utilizando inhibidores selectivos de Bcl-2
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
WO2012088094A2 (en) 2010-12-21 2012-06-28 Abbott Laboratories Il-1 binding proteins
AU2011361720B2 (en) 2010-12-21 2017-04-27 Abbvie Inc. IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
US8992477B2 (en) 2011-01-24 2015-03-31 Elcam Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
SG192119A1 (en) 2011-01-24 2013-08-30 Abbvie Biotechnology Ltd Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces
PE20141543A1 (es) 2011-01-24 2014-11-23 Abbvie Biotechnology Ltd Extraccion de protectores de aguja desde jeringas y dispositivos de inyeccion automatica
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
MX2013010699A (es) 2011-03-18 2014-03-27 Abbvie Inc Sistemas, dispositivosy metodos para ensamblar dispositivos de inyeccion automaticos y sub-ensambles de los mismos.
TWI622597B (zh) 2011-03-28 2018-05-01 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
AU2012236405B2 (en) 2011-03-29 2015-07-30 Abbvie Inc. Improved shroud deployment in automatic injection devices
JP6066995B2 (ja) 2011-04-21 2017-01-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 装着型自動注射装置
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AU2012258637B2 (en) 2011-05-24 2017-07-20 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
ES2729945T3 (es) 2011-05-31 2019-11-07 Biogen Ma Inc Procedimiento para valorar el riesgo de LMP
CA2873553C (en) 2011-06-06 2020-01-28 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
CN103857411A (zh) 2011-07-13 2014-06-11 阿布维公司 使用抗il-13抗体治疗哮喘的方法和组合物
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
WO2013019889A2 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Avaxia Biologics, Inc. Bovine polyclonal antibody specific for human tnf
UY34404A (es) * 2011-10-20 2013-05-31 Esbatech A Novartis Co Llc Anticuerpo estable unido a múltiples antígenos
TW201323440A (zh) 2011-10-24 2013-06-16 Abbvie Inc 抗骨硬化素（ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）之免疫結合物
UY34410A (es) 2011-10-24 2013-05-31 Abbvie Inc Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf
AU2012328921B2 (en) 2011-10-24 2017-05-11 Abbvie Inc. Immunobinders directed against TNF
CA2857597A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
AU2012352168C1 (en) 2011-12-14 2018-01-25 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
CN104136462B (zh) 2011-12-14 2017-06-09 艾伯维德国有限责任两合公司 用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法
EP2791171A1 (en) 2011-12-16 2014-10-22 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
EP2797955A2 (en) 2011-12-30 2014-11-05 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins against il-13 and/or il-17
TW201333033A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 雙可變域免疫球蛋白及其用途
MX352772B (es) 2012-01-27 2017-12-07 Abbvie Deutschland Composición y método para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades asociadas con la degeneración de neuritas.
CA2866692A1 (en) 2012-03-07 2013-07-11 Cadila Healthcare Limited Formulations which prevent formation of antibody aggregates
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
WO2013184871A1 (en) 2012-06-06 2013-12-12 Zoetis Llc Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
TW201402608A (zh) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie Inc Ｉｌ－１結合蛋白質
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
SG11201504249XA (en) 2012-09-02 2015-07-30 Abbvie Inc Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
RS60226B1 (sr) 2012-09-07 2020-06-30 Coherus Biosciences Inc Stabilne vodene formulacije adalimumaba
BR112015005857A2 (pt) * 2012-09-19 2017-08-08 Abbvie Biotherapeutics Inc métodos para identificação de anticorpos com imunogenicidade reduzida
TW202210507A (zh) 2012-11-01 2022-03-16 美商艾伯維有限公司 抗-vegf/dll4雙重可變區域免疫球蛋白及其用途
EP2914626A2 (en) 2012-11-01 2015-09-09 Abbvie Inc. Stable dual variable domain immunoglobulin protein formulations
TWI675044B (zh) 2012-11-14 2019-10-21 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
WO2014100542A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Abbvie, Inc. High-throughput antibody humanization
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
EP2948178A4 (en) 2013-01-25 2016-07-20 Thymon Llc COMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE REDUCTION OF CIRCULATING BIOACTIVE SOLUBLE TNF AND METHODS OF TREATING A TNF MEDIATION DISEASE
CA2900909A1 (en) * 2013-02-13 2014-08-21 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-.alpha. antibodies and uses thereof
WO2014143205A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
EP2968526A4 (en) 2013-03-14 2016-11-09 Abbott Lab ANTIGEN-ANTIBODY COMBINATION ASSAY OF HEPATITIS C VIRUS AND METHODS AND COMPOSITIONS FOR USE THEREWITH
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
WO2014159554A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
KR20150129033A (ko) 2013-03-14 2015-11-18 애브비 인코포레이티드 저 산성 종 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
CN105209616A (zh) 2013-03-14 2015-12-30 雅培制药有限公司 用于改进的抗体检测的hcv ns3重组抗原及其突变体
CN113549148A (zh) 2013-03-14 2021-10-26 雅培制药有限公司 Hcv核心脂质结合结构域单克隆抗体
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
US9062108B2 (en) 2013-03-15 2015-06-23 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 and/or IL-17
EP2968541A4 (en) 2013-03-15 2017-02-08 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
CN105209491A (zh) 2013-03-15 2015-12-30 艾伯维公司 针对TNFα的双重特异性结合蛋白
KR101671955B1 (ko) * 2013-05-22 2016-11-07 메타볼랩(주) 항 ＴＮＦ-α/ＣＸＣＬ10 이중 타겟 항체 및 그의 용도
EP3003372B1 (en) 2013-06-07 2019-10-09 Duke University Inhibitors of complement factor h
EP3019522B1 (en) 2013-07-10 2017-12-13 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US20150038454A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Mary Malast Antimicrobial compositions and methods of use
WO2015038884A2 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for detecting and quantifying host cell protein in cell lines and recombinant polypeptide products
CA2921999C (en) 2013-09-13 2023-03-21 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising an anti-il13 antibody and residual hamster phospholipase b-like 2
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
EP3052524A2 (en) 2013-10-06 2016-08-10 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and tlr signaling autoantigens
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
AU2014337263B2 (en) 2013-10-16 2019-12-12 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2931978A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
ES2818823T3 (es) 2014-02-27 2021-04-14 Biogen Ma Inc Método de evaluación del riesgo de LMP
KR101921552B1 (ko) 2014-03-10 2018-11-23 리히터 게데온 닐트. 사전 세정 단계를 이용하는 면역글로불린 정제
SG10201908460YA (en) 2014-03-21 2019-11-28 Abbvie Inc Anti-egfr antibodies and antibody drug conjugates
AR099625A1 (es) 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
IN2014MU01248A (hu) * 2014-04-02 2015-10-09 Intas Pharmaceuticals Ltd
WO2015172046A1 (en) 2014-05-08 2015-11-12 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
DK2946765T3 (en) 2014-05-23 2016-10-31 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
WO2015198320A1 (en) 2014-06-24 2015-12-30 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
ES2926376T3 (es) * 2014-06-30 2022-10-25 Merck Patent Gmbh Anticuerpos anti-TNFa con unión al antígeno dependiente del pH
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
BR112017004169A2 (pt) * 2014-09-03 2017-12-05 Boehringer Ingelheim Int composto direcionado à il-23a e ao tnf-alfa e usos do mesmo
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
WO2016118707A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN107427556B (zh) 2015-02-09 2022-02-25 费斯生物制药公司 用于治疗肌肉疾病和病症的方法和组合物
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
EP3303395B1 (en) 2015-05-29 2019-12-11 AbbVie Inc. Anti-cd40 antibodies and uses thereof
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
US11285210B2 (en) 2016-02-03 2022-03-29 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
RS61374B1 (sr) * 2016-03-17 2021-02-26 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti
CN109153718B (zh) * 2016-03-17 2022-02-08 努玛治疗有限公司 抗TNFα抗体及其功能片段
JP2019513737A (ja) 2016-04-08 2019-05-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド がん、炎症性疾患および自己免疫疾患を処置するための組成物および方法
WO2017184880A1 (en) 2016-04-20 2017-10-26 Coherus Biosciences, Inc. A method of filling a container with no headspace
EP3448391B1 (en) 2016-04-27 2024-05-29 AbbVie Manufacturing Management Unlimited Company Methods of treatment of diseases in which il-13 activity is detrimental using anti-il-13 antibodies
ES2877548T3 (es) 2016-06-02 2021-11-17 Abbvie Inc Agonista del receptor de glucocorticoides e inmunoconjugados del mismo
RS61828B1 (sr) 2016-06-08 2021-06-30 Abbvie Inc Anti-b7-h3 antitela i antitelske konjugacije lekova
AU2017277534A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
MX2018015284A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo anti-egfr y fármaco.
WO2017214456A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
AU2017279539A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-B7-H3 antibodies and antibody drug conjugates
US11098107B2 (en) 2016-06-15 2021-08-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered CH2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
WO2018045258A1 (en) * 2016-09-02 2018-03-08 The University Of Chicago TREATMENT OF TNF-alpha CYTOTOXICITY
EP3512875A2 (en) * 2016-09-15 2019-07-24 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers&octamers
CN110249226B (zh) 2016-10-03 2023-08-25 雅培实验室 评估患者样品中gfap状态的改进方法
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
US20180110856A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Amgen Inc. Pharmaceutical Formulations and Methods of Making the Same
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
EP4252629A3 (en) 2016-12-07 2023-12-27 Biora Therapeutics, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
MX2019006864A (es) 2016-12-14 2019-10-15 Progenity Inc Tratamiento de una enfermedad del tracto gastrointestinal con un inhibidor de factor de necrosis tumoral (tnf).
MA50134A (fr) 2016-12-16 2020-07-29 Bluefin Biomedicine Inc Anticorps anti-protéine 1 contenant un domaine anti-cub (cdcp1), conjugués anticorps-médicament et leurs méthodes d'utilisation
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
AU2018207367B2 (en) 2017-01-11 2024-02-15 Celltrion Inc. Stable Liquid Formula
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
WO2018140121A1 (en) 2017-01-30 2018-08-02 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active psoriatic arthritis
AU2017398101A1 (en) 2017-02-07 2019-08-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, and methods for the treatment of active Ankylosing Spondylitis
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA3052513A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
JP2020515530A (ja) 2017-03-26 2020-05-28 マピ ファーマ リミテッド 進行型の多発性硬化症を治療するためのグラチラマーデポシステム
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
BR112019021612A2 (pt) 2017-04-15 2020-05-12 Abbott Laboratories Métodos para auxiliar o diagnóstico hiperagudo e determinação de traumatismo crânioencefálico em um indivíduo humano com o uso de biomarcadores precoces
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
JP7416625B2 (ja) 2017-05-25 2024-01-17 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーを使用する、頭部への損傷を負ったヒト対象又は負った可能性があるヒト対象に対して、イメージングを実施するかどうかの決定の一助となるための方法
JP7269183B2 (ja) 2017-05-30 2023-05-08 アボット・ラボラトリーズ 心臓トロポニンｉを使用する、ヒト対象における軽度外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
CA3068041A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
US11761963B2 (en) 2017-09-27 2023-09-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
SI3658192T1 (sl) 2017-12-01 2021-08-31 Abbvie Inc. Agonist glukokortikoidnega receptorja in njegovi imunokonjugati
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
JP7379165B2 (ja) 2017-12-09 2023-11-14 アボット・ラボラトリーズ Ｇｆａｐとｕｃｈ－ｌ１との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
EP3721233A2 (en) 2017-12-09 2020-10-14 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (tbi), using glial fibrillary acidic protein (gfap) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (uch-l1)
US20210087267A1 (en) 2017-12-20 2021-03-25 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
JP2021517461A (ja) 2018-03-12 2021-07-26 ゾエティス・サービシーズ・エルエルシー 抗ｎｇｆ抗体およびその方法
JP7331000B2 (ja) 2018-03-26 2023-08-22 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体ｃ３転換酵素のプロテアーゼ活性を測定するためのスループットの高い方法
US20210238289A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
WO2019246313A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
KR20210030947A (ko) 2018-07-03 2021-03-18 노파르티스 아게 Nlrp3 길항제를 사용한 tnf 억제제 저항성 대상체를 위한 치료 방법 또는 치료제의 선택 방법
US20210340277A1 (en) 2018-10-11 2021-11-04 The Scripps Research Institute Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates
WO2020086728A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
KR20210088611A (ko) * 2018-11-05 2021-07-14 베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 항TNFα/항IL-17A 천연항체 구조 형태의 헤테로다이머 이중특이성 항체 및 그 제조방법
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
US20230024859A1 (en) 2018-11-13 2023-01-26 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
WO2020102098A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
EP3883635A1 (en) 2018-11-19 2021-09-29 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US20220098310A1 (en) 2018-12-06 2022-03-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
EP3960858A4 (en) 2018-12-25 2023-02-15 Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences SMALL RNA DRUG USED TO PREVENT AND TREAT INFLAMMATION-RELATED DISEASES AND COMBINATIONS THEREOF
US20220227707A1 (en) 2019-01-22 2022-07-21 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
HU231498B1 (en) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Improvement of affinity chromatography of immunoglobulins by using pre-capture flocculation
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
CN113874073A (zh) 2019-05-23 2021-12-31 詹森生物科技公司 用针对IL-23和TNFα的抗体的联合疗法治疗炎性肠病的方法
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CN114401988A (zh) * 2019-07-09 2022-04-26 国家生物技术研究所公司 具有降低的免疫原性的抗体
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
CA3167027A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
EP4136459A1 (en) 2020-04-13 2023-02-22 Abbott Laboratories Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample
CA3188349A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 A. Scott Muerhoff Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
WO2022123293A1 (ko) 2020-12-09 2022-06-16 에이치케이이노엔 주식회사 항 OX40L 항체, 항 OX40L 및 항 TNFα 이중 특이성 항체 및 이들의 용도
WO2022133325A2 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Kindred Biosciences, Inc. Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
EP4329884A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
IL308404A (en) 2021-04-27 2024-01-01 Generation Bio Co Non-viral DNA vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
BR112023024169A2 (pt) 2021-05-18 2024-02-06 Abbott Lab Métodos para avaliar lesão cerebral em um indivíduo pediátrico
AU2022293389A1 (en) 2021-06-14 2024-01-04 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
WO2022271782A1 (en) * 2021-06-22 2022-12-29 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
CA3230038A1 (en) 2021-08-31 2023-03-09 Hongwei Zhang Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023056268A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023114978A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
US20230213536A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
AU560087B2 (en) 1981-09-08 1987-03-26 Rockefeller University, The Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
EP0613006A1 (en) 1985-08-16 1994-08-31 The Rockefeller University Antibodies to cachectin and immunoassays
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
NZ229922A (en) 1988-07-18 1992-04-28 Chiron Corp Monoclonal antibodies specifically binding cachectin (tumor necrosis factor) and compositions
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
AU640400B2 (en) 1989-08-07 1993-08-26 Peptide Technology Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6451983B2 (en) * 1989-08-07 2002-09-17 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) * 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US6277969B1 (en) * 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20070298040A1 (en) * 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) * 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
AU668864B2 (en) * 1991-03-18 1996-05-23 Centocor Inc. Chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) * 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5328985A (en) 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
EP0605522B1 (en) * 1991-09-23 1999-06-23 Medical Research Council Methods for the production of humanized antibodies
WO1994026910A1 (en) 1993-05-12 1994-11-24 Xoma Corporation Immunotoxins comprising gelonin and an antibody
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
ATE155043T1 (de) * 1992-10-08 1997-07-15 Kennedy Inst Of Rheumatology Behandlung von autoimmun- und entzundungskrankheiten
ATE204299T1 (de) 1993-03-05 2001-09-15 Bayer Ag Humane monoklonale anti-tnf alpha antikörper
ES2108460T3 (es) 1993-06-03 1997-12-16 Therapeutic Antibodies Inc Fragmentos de anticuerpos en terapeutica.
DE69435126D1 (de) 1993-10-19 2008-10-02 Scripps Research Inst Synthetische humane neutralisierende monoklonale antikörper gegen hiv
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
WO1995023813A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
CA2192821A1 (en) 1994-06-24 1996-01-04 Wayne R. Gombotz Controlled release polypeptide compositions and methods of treating inflammatory bowel disease
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
PL188192B1 (pl) * 1996-02-09 2004-12-31 Abbott Lab Bermuda Ltd Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen
WO2000058362A1 (en) * 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20050249735A1 (en) * 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
BR0206160A (pt) * 2001-05-25 2004-10-26 Abbott Gmbh & Co Kg Uso de anticorpos anti-tnf como medicamentos no tratamento de distúrbios sépticos de pacientes anêmicos
CA2868614A1 (en) 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) * 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040136991A1 (en) * 2002-07-19 2004-07-15 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of anemia using TNFalpha inhibitors
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI556829B (zh) * 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
RS53055B (en) 2005-11-01 2014-04-30 Abbvie Biotechnology Ltd PROCEDURES FOR DETERMINING THE EFFICIENCY OF ADALIMUMAB IN RESPONDENTS WHO HAVE ANKILLOSATIVE SPONDILITIS USING CTX-II AND MMP3 AS BIOMARKERS
EP2738179A1 (en) 2006-04-05 2014-06-04 AbbVie Biotechnology Ltd Antibody purification
WO2008063213A2 (en) * 2006-04-10 2008-05-29 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CA2651992A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-10 Abbott Biotechnology Ltd. Automatic injection device
NZ597334A (en) * 2006-09-13 2014-02-28 Abbott Lab Cell culture improvements
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
WO2008121301A1 (en) 2007-03-29 2008-10-09 Abbott Laboratories Crystalline anti-human il-12 antibodies
WO2008150491A2 (en) * 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
CN101848733A (zh) * 2007-07-13 2010-09-29 艾博特生物技术有限公司 用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物
CN101980722A (zh) * 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
SG10201604258YA (en) * 2007-11-30 2016-07-28 Abbvie Biotechnology Ltd Anti-tnf antibody formulations
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
CN104188911A (zh) * 2008-01-15 2014-12-10 Abbvie德国有限责任两合公司 粉末状蛋白质组合物及其制备方法
JP5635912B2 (ja) * 2008-01-15 2014-12-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 改善された哺乳動物発現ベクター及びその使用
CN102065892A (zh) 2008-01-30 2011-05-18 雅培制药有限公司 用于使抗体片段结晶的组合物和方法
EP2271671A2 (en) * 2008-03-24 2011-01-12 Abbott Biotechnology Ltd. Tnf-alpha inhibitors for treating bone loss
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
KR20120038406A (ko) * 2009-05-04 2012-04-23 애보트 바이오테크놀로지 리미티드 인간 항?ＴＮＦ?α 항체의 안정한 고 단백질 농도 제형
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
RS57543B1 (sr) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Primene i kompozicije za lečenje hidradenitis suppurativa (hs)
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
NO20026202L (no) 1998-10-07
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
CN103275221A (zh) 2013-09-04
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
AU722077B2 (en) 2000-07-20
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
BG109311A (en) 2006-03-31
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
CN102070715A (zh) 2011-05-25
CN1504752A (zh) 2004-06-16
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
NZ512006A (en) 2005-05-27
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
US6258562B1 (en) 2001-07-10
BR9707379A (pt) 1999-04-13
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
NO983627D0 (no) 1998-08-07
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
SI9720020B (en) 2001-12-31
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
NZ536216A (en) 2006-08-31
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
MX9806347A (es) 1998-10-31
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
BG110703A (en) 2010-10-29
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
UA82823C2 (en) 2008-05-26
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
CN1300173C (zh) 2007-02-14
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
CN101712720A (zh) 2010-05-26
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
SI9720020A (sl) 1999-10-31
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
NZ331579A (en) 2001-06-29
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
NO322755B1 (no) 2006-12-04
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
US8753633B2 (en) 2014-06-17
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
BG112042A (bg) 2015-10-30
PT929578E (pt) 2003-09-30
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
IL151641A0 (en) 2003-04-10
MX336813B (es) 2016-02-02
IL206994A0 (en) 2010-12-30
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
SK106298A3 (en) 1999-03-12
CA2243459C (en) 2002-09-17
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
NO316711B1 (no) 2004-04-13
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
BG102755A (en) 1999-05-31
US7223394B2 (en) 2007-05-29
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
NO320657B1 (no) 2006-01-09
IL218518A0 (en) 2012-04-30
PL328411A1 (en) 1999-01-18
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
US8372400B2 (en) 2013-02-12
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
IL125697A (en) 2005-03-20
NO20040052L (no) 1998-10-07
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
NZ562935A (en) 2009-06-26
CN100429232C (zh) 2008-10-29
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
NZ576716A (en) 2011-02-25
US8206714B2 (en) 2012-06-26
IL125697A0 (en) 1999-04-11
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
NO319955B1 (no) 2005-10-03
NO983627L (no) 1998-10-07
AU2122997A (en) 1997-08-28
HU228630B1 (en) 2013-04-29
CY2463B1 (en) 2005-06-03
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
CN103275221B (zh) 2016-08-17
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
US7541031B2 (en) 2009-06-02
NO20040154L (no) 1998-10-07
CN1215407A (zh) 1999-04-28
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
BG107537A (en) 2003-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU230048B1 (hu) Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazása
CN1935260B (zh) 结合人TNFα的人抗体
NO334490B1 (no) Sammensetning omfattende anti-TNF-alfa-antistoff for anvendelse ved behandling av autoimmune sykdommer, samt forhåndsfylt sprøyte omfattende nevnte sammensetning.
MXPA98006347A (en) Human antibodies that link human tnfalfa

Legal Events

Date Code Title Description
HC9A Change of name, address

Owner name: ABBVIE BIOTECHNOLOGY LTD, BM

Free format text: FORMER OWNER(S): ABBOT BIOTECHNOLOGY LTD., BM