NO322755B1 - Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer. - Google Patents

Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer. Download PDF

Info

Publication number
NO322755B1
NO322755B1 NO20040052A NO20040052A NO322755B1 NO 322755 B1 NO322755 B1 NO 322755B1 NO 20040052 A NO20040052 A NO 20040052A NO 20040052 A NO20040052 A NO 20040052A NO 322755 B1 NO322755 B1 NO 322755B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
human
seq
antibodies
amino acid
Prior art date
Application number
NO20040052A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20040052L (no
Inventor
Jochen G Salfeld
Deborah J Allen
Hendricus R J M Hoogenboom
Zehra Kaymakcalan
Boris Labkovsky
John A Mankovich
Brian T Mcguinnes
Andrew J Roberts
Paul Sakorafas
David Schoenhaut
Tristan J Vaughan
Michael White
Alison Jane Wilton
Original Assignee
Basf Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26707297&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO322755(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/599,226 external-priority patent/US6090382A/en
Publication of NO20040052L publication Critical patent/NO20040052L/no
Application filed by Basf Ag filed Critical Basf Ag
Publication of NO322755B1 publication Critical patent/NO322755B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse omhandler anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer.
Tumor-nekrosefaktor a (TNFcc) er et cytokin produsert av en rekke celletyper, inkludert monocytter og makrofager, som opprinnelig ble identifisert basert på dets kapasitet til å fremkalle nekrose av visse musetumorer (se f. eks. Old, L. (1985) Science 230:630-632). En faktor betegnet kakektin, knyttet til kakeksi, ble deretter vist å være det samme molekyl som TNFa. TNFa er implisert i mediering av sjokk (se Leks. Beutler, B. og Cerami, A. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:505-518; Beutler, B. og Cerami, A. (1989) Annu. Rev. Immunol. 7:625-655). Videre er TNFa implisert i patofysiologien til en rekke andre human-sykdommer og lidelser, inkludert sepsis, infeksjoner, autoimmune sykdommer, transplantat-awisning og «graft-versus-host» sykdom (se f. eks. Moeller, A., et al.
(1990) Cyfo/c/ne2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moeller era/.; europeisk
patentpublikasjon nr. 260 610 B1 til Moeller, A., er a/.Vasilli, P. (1992) Annu. Rev. Immunol. 10:411-452; Tracey, K.J. og Cerami, A. (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503).
På grunn av den skadelige rollen til human TNFa (hTNFa) ved en rekke lidelser hos mennesker, er terapeutiske strategier laget for å hemme eller motvirke hTNFa-aktivitet. Spesielt er det søkt etter antistoffer som binder til og nøytraliserer hTNFa, som et middel for å hemme hTNFa-aktivitet. Noen av de tidligste av slike antistoffer var mus-monoklonale antistoffer (mAb), utskilt av hybridomer produsert av lymfocytter fra mus immunisert med hTNFa (se f. eks. Hann T; et ai, (1985) Proe Nati Acad Sei USA 82: 3814-3818; Liang, C-M., et al.
(1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137:847-854: Hirai, M., et al. (1987) J.
Immunol. Methods 96:57-62; Fendly, B.M., et al. (1987) Hybridoma 6:359-370;
Moeller, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moeller et al. ; europeisk patent- publikasjon nr. 186 833 B1 av Wallach, D.; europeisk patentsøknad publikasjon nr. 218 868 A1 av Old et al. ; europeisk patentpublikasjon nr. 260 610 B1 av Moeller, A., et al.). Selv om disse mus-anti-hTNFa-antistoffer ofte viser høy affinitet for hTNFa ( f. eks. Kd < 10"<9>M) og er i stand til å nøytralisere hTNFa-aktivitet, kan anvendelse av dem in vivo være begrenset av problemer forbundet med administrering av mus-antistoffer til mennesker, så som kort serum-halveringstid, en manglende evne til å utløse visse human-effektorfunksjoner og fremkalling av uønsket immunrespons mot musLantistoff hos et menneske ("human-anti-mus-antistoff" (HAMA)-reaksjon).
I et forsøk på å overkomme problemene forbundet med anvendelse av fullt murine antistoffer på mennesker, er murine anti-hTNFoc-antistoffer blitt konstruert genetisk for å bli mer "human-lignende." For eksempel er kimære antistoffer, hvor de variable områdene i antistoffkjedene er murin-avledet og de konstante
områdene av antistoffkjedene er human-avledet, blitt fremstilt (Knight, D.M, et al.
(1993) Mol. Immunol. 30:1443-1453; PCT- publikasjon nr. WO 92/16553 av Daddona, P.E., et al.). Dessuten er også humaniserte antistoffer, hvor de hypervariable domenene av antistoffvariabel-områdene er murin-avledet, mens de resterende variabel-områder og antistoffets konstante områder er human-avledet, fremstilt (PCT-publikasjon nr. WO 92/11383 av Adair, J.R., er al.). Fordi disse kimære og humaniserte antistoffer fremdeles beholder noen murin-sekvenser, kan de imidlertid fortsatt utløse en uønsket immunreaksjon, en human anti-kimær antistoff- (HACA) reaksjon, spesielt når de blir administrert over lenger tid, f.eks. ved kroniske indikasjoner, så som revmatoid artritt (se f. eks. Elliott, M.J., et al.
(1994) Lancef 344:1125-1127: Elliot, M.J., et al. (1994) Lancef 344:1105-1110).
Et foretrukket hTNFa-hemmende middel for murine mAb eller derivater derav ( f. eks. kimære eller humaniserte antistoffer) vil være et fullstendig human-anti-hTNFa-antistoff, ettersom et slikt middel ikke vil utløse en HAMA-reaksjon, selv om det anvendes over lengere tid. Human-monoklonale autoantistoffer mot hTNFa er blitt fremstilt ved anvendelse av human-hybridomteknikker (Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:556-568; Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:569-581: europeisk patentsøknad, publikasjon nr. 614 984 A2 av Boyle, et al.). Imidlertid er disse hybridomavledete monoklonale autoantistoffer rapportert å ha en affinitet for hTNFa som var for lav til å beregne ved konvensjonelle metoder, de var ikke i stand til å binde oppløselig hTNFa og var ikke i stand til å nøytralisere hTNFa-fremkalt cytotoksisitet (se Boyle, era/.; supra). Dessuten avhenger suksessen av human-hybridom-teknikken av naturlig tilstedeværelse av lymfocytter som produserer autoantistoffer spesifikke for hTNFa i humant perifert blod. Visse undersøkelser har detektert serum-autoantistoffer mot hTNFa hos mennesker (Fomsgaard, A., er a/. (1989) Scand. J. Immunol. 30:219-223; Bendtzen, K., et al. (1990) Prog. Leukocyte Biol. 10B:447-452). mens andre har ikke (Leusch, H-G., et al. (1991) J. Immunol. Methods 139:145-147).
Et alternativ til naturlig forekommende human-anti-hTNFa-antistoffer ville være et rekombinant hTNFa-antistoff. Rekombinante human-antistoffer som binder til hTNFa med relativt lav affinitet (dvs. Kd~10-<7>M) og rask frigjøringshastighet (dvs. K0ff~ 10"<2> sek-<1>) er beskrevet (Griff iths, A.D., er al.
(1993) EMBO J. 12:725-734). På grunn av deres relativt hurtige
dissosiasjonskinetikk, vil imidlertid disse antistoffer ikke være egnet for terapeutisk anvendelse. Videre er en rekombinant human anti-hTNFa beskrevet, som ikke nøytraliserer hTNFa-aktivitet, men heller forsterker binding av hTNFa til overflaten av celler og forsterker internalisering av hTNFa (Lidbury, A., et al. (1994) Biotechnol. Ther. 5:27-45; PCT- publikasjon nr. WO 92/03145 av Aston, R. et al.)
Følgelig er det fortsatt et behov for human-antistoffer, så som rekombinante human-antistoffer som binder oppløselig hTNFa med høy affinitet og langsom dissosiasjons-kinetikk og som har kapasitet til å nøytralisere hTNFa-aktivitet, omfattende hTNFa-fremkalt cytotoksisitet ( in vitro og in vivo) og hTNFa-fremkalt celleaktivering.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, hvor antistoffet er et isolert human-antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en K<j på 1
x 10"<8> M eller mindre og en K0ff hastighetskonstant på 1 x 10"<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in vitro L929-testanalyse med en IC50 på 1 x 10"<7> M eller mindre, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for inhibering av human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse hvor TNFa-aktivitet er skadelig.
I et annet aspekt av oppfinnelsen tilveiebringes en anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, hvor antistoffet er et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, med de følgende karakteristika:
a) dissosierer fra human TNFa med en K0ff hastighetskonstant på
1 x 10"<3> s-<1> eller mindre, bestemt ved overflate-plasmon-resonans;
b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR : 3 eller modifisert fra SEKV ID NR : 3 med en enkel
alaninsubstitusjon i stilling 1, 4, 5, 7 eller 8 eller med én til fem konservative åmiiiosyre-substitusjoner i stillingene 1, 3, 4, 6, 7, 8 og/eller 9;
c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR : 4 eller modifisert fra SEKV ID NR : 4 med en enkel
alaninsubstitusjon i stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11 eller med én til fem konservative aminosyre-substitusjoner i stillingene 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10,11 og/eller 12, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for inhibering av human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse hvor TNFoc-aktivitet er skadelig.
I et tredje aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en anvendelse av et antistoff og i det minste ett ytterligere terapeutisk middel, hvor antistoffet er et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR : 1 og en tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR : 2, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for å inhibere human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse i hvilken TNFa-aktivitet er skadelig.
I et fjerde aspekt av foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel slik at human TNFa-aktivitet inhiberes, hvor antistoffet er D2E7, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for å inhibere human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse hvor TNFa-aktivitet er skadelig.
I en foretrukket anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 eller 4 er det ytterligere terapeutiske middel valgt fra gruppen bestående av ibuprofen, total lymfoid bestråling, interleukin-1-inhibitor, OKT3, anti-CD25-antistoff, anti-CD11a-antistoff, anti-CD54-antistoff, anti-CD45-antistoff, anti-CD28-antistoff, anti-CD80-antistoff, anti-CD86-antistoff, ikke-steroide anti-inflammatoriske legemidler, cytokin-suppressive anti-inflammatoriske legemidler, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4-agonister, IL-10-agonister, IL-1 RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, lloprost, metotreksat, thalidomid, thalidomid-relaterte legemidler, leflunomid, traneksaminsyre, T-614, prostaglandin E1, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indomethacin, Sulfasalazine, Azathioprince, ICE-inhibitorer, zap-70-rnhibitorer, Ick-inhibitorer, VEGF-inhibitorer, VEGF-R-inhibitorer, kortikosteroider, TNF-konvertaseinhibitorer, anti-IL-12-antistoffer, interleukin-11, interleukin-13, interleukin-17-inhibitorer, gull, penicillamin, klorokin, hydroksyklorokin, klorambucil.cyklofosfamid, cyklosporin, anti-tymocyttglobulin, anti-CD4-antistoffer, CD5-toksiner, oralt administrerte peptider, kollagen, lobenzaritt-dinatrium, cytokinregulerende midler HP228 og HP466, ICAM-1 - antisens-fosforotioat-oligodeoksynukleotider, løselig komplementreseptor 1, prednison, orgotein, glykosaminoglykan-polysulfat, minocyklin, anti-IL2R-antistoffer, marine lipider, botaniske lipider, auranofin, fenylbutazon, meklofenaminsyre, flufenaminsyre, intravenøs immunglobulin, zileuton, mykofenolsyre, takrolimus, sirolimus, amiprilose, kladribin, azabrin, budenosid, epidermal vekstfaktor, aminosalicylater, 6-merkaptopurin, metronidazol, lipoksygenaseinhibitorer, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioksidanter, tromboksan-inhibitorer, lL-1-reseptorantagonister, anti-IL-1 p-monoklonale antistoffer, anti-IL-6-monoklonale antistoffer, vekstfaktorer, elastaseinhibitorer, pyridinyl-imidazol-forbindelser, glukuronid-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, dekstran-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, løselig komplementreseptor 1, langsomt-frigjørende mesalazin, antagonister av plateaktiverende faktor (PAF), ciprofloksacin, lignokain, prednisolon, metylprednisolon, cyklofosfamid, 4-aminopyridin, tizanidin, interferon-p1a, interferon-p1 b, kopolymer 1, hyperbarisk oksygen, intravenøs immunglobulin, klabribin, hypertoniske saltløsninger, antibiotika, kontinuerlig hemofiltrering, karbapenemer, antagonister av cytokiner slik som TNFa, IL-lp, IL-6 og/eller IL-8, SK&F 107647, tetravalent guanylhydrazon CNI-1493, vevsfaktor-reaksjonsveiinhibitor, PHP, jern-chelatorer og chelater, inkludert dietyfentriaminpGntaeddiksyre-jern(lll)komplGkst lisofyllin, PGG-glukan, apolipoprotein A-1 rekonstituert med lipider, chirale hydroksaminsyrer, anti-endotoksinantistoffer, E5531, rBPI2i, syntetiske anti-endotoksinpeptider, overflate-erstatningsterapi og anti-IL-8-antistoffer.
En foretrukken anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse er en anvendelse, hvor lidelsen er reumatoid artritt. Foretrukket ytterligere terapeutisk middel velges da fra gruppen bestående av ibuprofen, total lymfoid bestråling, ikke<L>steroide anti-inflammatoriske legemidler, cytokin suppressive anti-inflammatoriske legemidler, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4-agonister, IL-10-agonister, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966,11op rost, metotreksat, thalidomid, thalidomid-relaterte legemidler, leflunomid, traneksaminsyre, T-614, prostaglandin E1, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indomethacin, Sulfasalazine, Azathioprince, ICE-inhibitorer, zap-70-inhibitorer, Ick-inhibitorer, VEGF-inhibitorer, VEGF-R-inhibitorer, kortikosteroider, kortikosteroid-anti-inflammatoriske legemidler, TNF-konvertaseinhibitorer, anti-IL-12-antistoffer, interleukin-11, interleukin-13, interleukin-17-inhibitorer, gull, penicillamin, klorokin, hydroksyklorokin, klorambucil.cyklofosfamid, cyklosporin, anti-tymocyttglobulin, anti-CD4-antistoffer, CD5-toksiner, oralt administrerte peptider, kollagen, lobenzaritt-dinatrium, cytokinregulerende midler HP228 og HP466, ICAM-1-antisens-fosforotioat-oligodeoksynukleotider, løselig komplementreseptor 1, prednison, orgotein, glykosaminoglykan-polysulfat, minocyklin, anti-IL2R-antistoffer, marine lipider, botaniske lipider, auranofin, fenylbutazon, meklofenaminsyre, flufenaminsyre, intravenøs immunglobulin, zileuton, mykofenolsyre, takrolimus, sirolimus, amiprilose, kladribin, azabrin.
En annen foretrukken anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse er en anvendelse, hvor lidelsen er inflammatorisk tarmsykdom. Foretrukket ytterligere terapeutisk middel velges da fra gruppen bestående av kortikosterioider, cyklosporin, sulfasalazin, azatioprin, CDP-571/BAY-10-3356, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IL-10, IL-4, IL-10-agonist, IL-4-agonist, IL-11, ICAM-1-antisense-fosforotioat-oligodeoksynukleotider, metotrexat, budenosid, epidermal vekstfaktor, aminosalicylater, 6-merkaptopurin,metronidazol, lipoksygenaseinhibitorer, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioksidanter, tromboksaninhibitorer, IL-1-reseptorantagonister, anti-IL-1 p-monoklonale antistoffer, anti-IL-6-monoklonale antistoffer, vekstfaktorer, elastaseinhibitorer, pyridinylimidazolforbindelser, glukuronid-konjugerte prodroger av prednisol, deksametason eller budesonid, dekstran-konjugerte prodroger av prednisolon, deksametason eller budesonid, løselig komplement-reseptor 1, langsomt-frigjørende mesalazin, antagonister av blodplateaktiverende faktor (PAF), ciprofloksacin og lignokain.
En annen foretrukket anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse er en anvendelse, hvor lidelsen er multippel sklerose. Foretrukket ytterligere terapeutisk middel velges da fra gruppen bestående av kortikosteroider, prednisolon, metylprednisolon, asatioprin, cyklofosfamid, cyklosporin, metotreksat, 4-aminopyridin, tizanidin, interferon-|31a, interferon-|31b, kopolymer 1, hyperbarisk oksygen, intravenøs immunglobulin, klabribin, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IL-10, IL-4 og IL-10-agonister, og IL-4-agonister.
En annen foretrukket anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse er en anvendelse, hvor lidelsen er sepsis. Foretrukket ytterligere terapeutisk middel velges da fra gruppen bestående av hypertoniske såltløsninger, antibiotika, intravenøs gammaglobulin, kontinuerlig hemofiltrering, karbapenemer, antagonister av TNFa, antagonister av IL-ip, antagonister av IL-6, antagonister av IL-8, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, cytokinregulerende midler (Cras) HP228 og HP466, SK&F 107647, tetravalent guanylhydrazon CNI-1493, vevsfaktorreaksjonsvei-inhibitor, PHP, jemchelatorer og chelater, inklusiv dietylentriamin-penta-eddiksyre-jern(iii)kompleks, lisofyllin, Pgg-glukan, apolipoprotein A-1 rekonstituert med lipider, chirale hydroksaminsyrer, anti-endotoksin-antistoffer, E5531, rBPl2 og syntetiske anti-endotoksinpeptider.
En annen foretrukket anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse er en anvendelse, hvor lidelsen er voksen respiratorisk nødsyndrom (ARDS). Foretrukket ytterligere terapeutisk middel velges da fra gruppen bestående av anti-IL-8-antistoffer, surfaktant erstatningsterapi, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG og 55 kdTNFR-IgG.
En annen foretrukket anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse er en anvendelse, hvor lidelsen er en autoimmun sykdom, mer foretrukket er den autoimmune lidelsen valgt fra gruppen bestående av reumatoid artritt, reumatoid spondylitt, osteoartritt, giktartritt, allergi, multippel sklerose, autoimmun diabetes, autoimmun uveitt og nefrotisk syndorm.
Andre foretrukne anvendelser ifølge foreliggende oppfinnelse er anvendelser, hvor lidelsen er valgt fra gruppen gruppen bestående av en intestinal lidelse, en infektiøs sykdom, transplantatawisning eller transplantat-mot-vert-sykdom, malignitet, en pulmonær lidelse eller en hjertelidelse.
Andre aktuelle lidelser som kan behandles er valgt fra gruppen bestående j av inflammatorisk benlidelse, benresorpsjonslidelse, hepatitt, alkoholisk hepatitt, viral hepatitt, fulminant hepatitt, koagulasjonsforstyrrelser, brannreperfusjonsskade, keloiddannelse, arrvevsformasjon, pyrexi, periodontal sykdom, fedme og strålingstoksisitet, septisk sjokk, endotoksisk sjokk, gram negativ sepsis, toksisk sjokksyndrom, malaria, meningitt, cakexi, AIDS, bakteriell meningitt og AIDS-relatert kompleks (ARC), cytomegalivirusinfeksjon sekundær til transplantasjon, feber, myalgi forårsaket av infeksjon, cakexi sekundær til infeksjon, allotransplantatawisning og xenotransplantatawisning, stimulering av tumorvekst, forsterke metastatisk potensial og mediering av cytotoksisitet i maligniteter og tumorvekst eller metastaser, voksen respiratorisk distress-syndrom, sjokklunge, kronisk pulmonær inflammatorisk sykdom, pulmonær sarkoidose, pulmonær fibrose og silikose, inflammatorisk tarmlidelse, idiopatisk inflammatorisk tarmsykdom, Crohn's sykdom og ulcerøs kolitt, ischemi i hjerte, hjertesvikt og hepatitt.
I foretrukne utførelser av anvendelsen ifølge foreliggende oppfinnelse kombineres det isolerte humane antistoffet med en farmasøytisk akseptabel bærer.
Videre tilveiebringer foreliggende oppfinnelse et isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl, kjennetegnet ved at det humane antistoffet dissosierer f ra human TNFa med en Kd på 1 x 10'<8> M eller mindre, og en Kotrhastighetskonstant på 1 x 10"<3> s"<1 >eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"7 M eller mindre.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også et isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl, kjennetegnet ved at det humane antistoffet har følgende karakteristika: a) dissosierer fra human TNFa med en K0ff-nastighetskonstant på 1 x 10"<3> s"<1 >eller mindre, bestemt ved overflate-plasmon-resonans;
b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel
alaninsubstitusjon i stilling 1, 4, 5, 7 eller 8 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1, 3, 4, 6, 7, 8 og/eller 9;
c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel
alaninsubstitusjon i stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11, eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3, 4, 5, 6„ 8, 9,10,11
og/eller 12.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer i et ytterligere aspekt et isolert human-antistoff, eller antigen bindingsdel derav, derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl, hvor det humane antistoffet omfatter en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 1 og tungkjede variabel regionen (HCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO: 2.
Foreliggende opfinnelse tilveiebringer D2E7-antistoffet, eller antigen bindingsdel derav derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl.
Antistoffet ifølge foreliggende oppfinnelse kan foretrukket derivatiseres eller bindes til et funksjonelt molekyl valgt fra gruppen bestående av et andre antistoff,
et detekterbart middel, et cytotoksisk middel, et farmasøytisk middel og et protein eller peptid som kan mediere assosiasjon av antistoffet eller en antistoffdel med et annet molekyl.
Foretrukne utførelsesformer dekker dem hvor det detekterbare midlet er valgt fra gruppen bestående av en fluorescerende forbindelse, et detekterbart enzym og biotin, spesielt hvor den fluorescerende forbindelsen er valgt fra gruppen bestående av fluorescein, fluorescein isotiocyanat, rodamin, 5-dimetylamin-1-naftalensulfonylklorid og fykoerytrin og hvor det detekterbare enzymet er valgt fra gruppen bestående av alkalisk fosfatase, pepperrot peroksydase og glukoseoksydase.
Andre aspekter ved foreliggende oppfinnelse dekker;
Fd eller F(ab')2-fragment av et isolert human-antistoff, kjennetegnet ved at antistoffet dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1x10~<8> M eller mindre og en
Koff hastighetskonstant på 1 x10"<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans, og nøytraliserer human TNFa cytotoksisitet i et standard in vitro L929 analyse med en IC5o på 1x10'<7> M eller mindre;
Fd eller F(ab')2-fragment av et isolert human-antistoff, kjennetegnet ved at a) . dissosierer fra human TNFa med en Koft-hastighetskonstant på 1 x 10"3 s"1 eller mindre, bestemt ved overflate-plasmon-resonans; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 1, 4, 5, 7 eller 8 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1, 3, 4, 6, 7, 8 og/eller 9;
c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel
alaninsubstitusjon i stilling 2, 3,4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11, eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2, 3, 4, 5, 6,, 8, 9,10,11 og/eller 12;
Fd eller F(ab')2-fragment av et isolert human-antistoff som omfatter en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 1 og tungkjede variabel regionen (HCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 2 og
Fd eller F(ab')2-fragment av et D2E7 antistoff.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også;
isolert human-antistoff, eller en antigen-bindende del derav som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1x10"<8> M eller mindre og en K0ff hastighetskonstant på 1x10~3 s"1 eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans, og nøytraliserer TNFa-indusert cellulær aktivering i en standard in vitro analyse for TNFa-indusert ELAM-1 ekspresjon på human navlestrengvene-endotelceller
(HUVEC);
isolert human-antistoff, eller en antigen-bindende del derav som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1 x10"8 M eller mindre og en K0ff hastighetskonstant på 1x10"<3> s'<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans, og inhiberer binding av human TNFa til både p55 og p75 human TNFa-reseptorer; og
isolert human-antistoff, eller antigen bindingsdel derav, som omfatter en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO: 9 og tungkjede variabel regionen (HCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO: 10.
Isolerte nukleinsyrer omfattende SEKV ID NO : 9, SEKV ID NO : 10, SEKV ID NO : 36 og SEKV ID NO : 37 utgjør andre aspekter ved den foreliggende oppfinnelsen.
Kort beskrivelse av tegningene
Figurene 1A og 1B viser aminosyresekvenser i lettkjede variabel-regionen til D2E7 (D2E7 VL; også vist i SEKV ID NR: 1), alanin-scan-mutanter av D2E7 VL (LD2E7<*>.A1, LD2E7\A3, LD2E7<*>.A4, LD2E7<*>.A5, LD2E7<*>.A7 og LD2E7\A8), lettkjede variabel-regionen til det D2E7-beslektede antistoff 2SD4 (2SD4 VL; også vist i SEKV ID NR: 9) og andre D2E7-beslektede lettkjede variabel-regioner (EP B12, VL10E4, VL100A9, VL100D2, VL10F4, LOE5, VLLOF9, VLL0F10, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, VLLOH10, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VL0,1H8, LOE7, LOE7.A og LOE7.T). Figur 1A viser FR1-, CDR1-, FR2- og CDR2-domener. Figur 1B viser FR3-, CDR3- og FR4-domener. Lettkjede CDR1- ("CDR L1"), CDR2- ("CDR L2") og CDR3- ("CDR L3") domener er innrammet. Figurene 2A og 2B viser aminosyresekvenser av tungkjede variabel-regionen av D2E7 (D2E7 VH; også vist i SEKV ID NR: 2), alanin-scan-mutanter av D2E7 VH (HD2E7<*>.A1, HD2E7\A2, HD2E7<*>.A3, HD2E7<*>.A4, HD2E7<*>.A5, HD2E7<*>.A6, HD2E7<*>.A7, HD2E7\A8 og HD2E7<*>.A9), tungkjede variabel-regionen av det D2E7-beslektede antistoff 2SD4 (2SD4 VH; også vist i SEKV ID NR: 10) og andre D2E7-beslektede tungkjede variabel-regioner (VH1B11, VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N og VH1-D2.Y). Figur 2A viser FR1-, CDR1-, FR2- og CDR2-domenene. Figur 2B viser FR3-, CDR3- og FR4-domenene. Tungkjede CDR1- ("CDR H1"), CDR2-("CDR H2") og CDR3- ("CDR H3") domenene er innrammet. Figur 3 er en kurve som viser hemning av TNFa-fremkalt L929 cytotoksisitet med human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7, sammenlignet med det murine anti-hTNFa-antistoff MAK 195. Figur 4 er en kurve som viser hemning av rhTNFa-binding til hTNFa-reseptorer på U-937-celler av human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7, sammenlignet mecl murint anti-hTNFa-antistoff MAK 195. Figur 5 er en kurve som viser hemning av TNFa-fremkalt ELAM-1 -
ekspresjon på HUVEC av human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7, sammenlignet i
méd murin-anti-hTNFa-antistoffet MAK 195.
Figur 6 er et stolpediagram som viser beskyttelse mot TNFa-fremkalt dødelighet hos D-galaktosamin-sensibiliserte mus ved administrering av human-anti-hTNFa-antistoffet D2E7 (sorte stolper), sammenlignet med murin-anti-hTNFa- antistoffet MAK 195 (skraverte stolper). Figur 7 viser nukleotidsekvensen av lettkjede variabel-regionen av D2E7, med den forutsatte aminosyresekvens nedenfor nukleotidsekvensen. CDR L1-, CDR L2- og CDR L3-regionene er understreket. Figur 8 viser nukleotidsekvensen av tungkjede variabel-regionen i D2E7, med den forutsatte aminosyresekvens nedenfor nukleotidsekvensen. CDR H1-, CDR H2- og CDR H3-regionene er understreket. Figur 9 er en kurve som viser virkningen av D2E7-antistoffbehandling på gjennomsnittlig leddstørrelse hos Tg197 transgene mus som en polyartritt modell.
Foreliggende oppfinnelse angår isolerte human-antistoffer eller antigen-bindingsdeler derav, som binder til human TNFa med høy affinitet, lav frigjøringshastighet og høy nøytraliseringskapasitet. Forskjellige aspekter av oppfinnelsen angår anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer.
For at foreliggende oppfinnelse lettere skal forstås, er visse betegnelser først definert.
Betegnelsen "human TNFa" (forkortet her som hTNFa eller ganske enkelt hTNF), som anvendt her, skal referere til et human-cytokin som eksisterer som en 17 kD sekretert form og en 26 kD membran-assosiert form, idet den biologisk aktive form av denne består av en trimer av ikke kovalent bundne17 kD molekyler. Strukturen til hTNFa er videre beskrevet i for eksempel Pennica, D., er al. (1984) Nature 312:724-729: Davis, J.M., et al. (1987) Biochemistry 26:1322-1326; og Jones, E.Y., et al. (1989) Nature 338:225-228. Betegnelsen human TNFa skal omfatte rekombinant human TNFa (rhTNFa), som kan fremstilles ved standard rekombinante ekspresjons-metoder eller anskaffes kommersielt (R & D Systems, Katalog Nr. 210-TA, Minneapolis, MN).
Betegnelsen "antistoff", som anvendt her, skal referere til immunoglobulin-molekyler bestående av fire polypeptidkjeder, to tung- (H) kjeder og to lett- (L) kjeder inter-forbundet med disulfid-bindinger. Hver tungkjede består av en tungkjede variabel-region (forkortet her som HCVR eller VH) og en tungkjede konstant-region. Tungkjede konstant-regionen består av tre domener, CH1, CH2 og CH3. Hver lettkjede består av en lettkjede variabel-region (forkortet her som LCVR eller VL) og en lettkjede konstant-region. Lettkjede konstant-regionen består av ett domene, CL. VH- og VL-regionene kan være ytterligere underoppdelt i regioner av hypérvariabilitet, betegnet komplementaritets-bestemmende regioner (CDR), innflettet med regioner som er mer konserverte, betegnet rammeverk-regioner (FR). Hver VH og VL er sammensatt av tre CDR og fire FR, arrangert fra amino-terminus til karboksy-terminus i den følgende rekkefølge: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Betegnelsen "antigen-bindingsdel" av et antistoff (eller enkelt "antistoff-del"), som anvendt her, angir ett eller flere fragmenter av et antistoff som opprettholder evnen til spesifikt å binde til et antigen { f. eks. hTNFa). Det er vist at antigen-bindings-funksjonen til et antistoff kan utføres med fragmenter av et full-lengde antistoff. Eksempler på bindings-fragmenter omfattet av betegnelsen "antigen-bindingsdel" av et antistoff omfatter (i) et Fab-fragment, et monovalent fragment bestående av VL-, VH-, CL- og CH1-domener; (ii) et F(ab')2-fragment, et bivalent fragment omfattende to Fab-fragmenter lenket av en disulfid-bro i hengsel-regionen; (iii) et Fd-fragment bestående av VH- og CH1 -domener; (iv) et Fv-fragment bestående av VL- og VH-domener av en enkel arm av et antistoff, (v) et dAb-fragment (Ward et al., (1989) Nature 34J.:544-546), som består av et VH-domene; og (vi) en isolert komplementaritets-bestemmende region (CDR). Videre, selv om de to domener av Fv-fragmentet, VL og VH, er kodet for av separate gener, kan de forbindes, ved anvendelse av rekombinante metoder, med en syntetisk linker som lar dem fremstilles som en enkel proteinkjede hvor VL- og VH-regionene pares for å danne mohovalente molekyler (kjent som enkel-kjede
Fv (scFv); se f. eks. Bird et al. (1988) Science 242:423-426; og Huston et al. '(198é) Proe. A/af/. yAcad. Sc/. L/S/\ 85:5879-5883). Slike enkel-kjede antistoffer skal også omfattes av betegnelsen "antigen-bindingsdel" av et antistoff. Andre former for enkel-kjede antistoffer, så som diabodies omfattes også. Diabodies er
bivalente, bispesifikke antistoffer hvor VH- og VL-domener er uttrykt på en enkel i
polypeptid-kjede, men har en linker som er for kort til å tillate paring mellom de to domener på samme kjede, for derved å tvinge domenene til å pare med komplementære domener i en annen kjede og skape to antigen-bindingsseter (se f. eks. Holliger, P., et al. (1993) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., etal. (1994) Sfructore2:1121-1123).
Videre kan et antistoff eller antigen-bindingsdel derav være del av større immunoadhesjonsmolekyler, dannet ved kovalent eller ikke-kovalent tilknytning av antistoffet eller antistoffdelen til ett eller flere andre proteiner eller peptider. Eksempler på slike immunoadhesjonsmolekyler omfatter anvendelse av streptavidin-kjerne-regionen for å fremstille et tetramert scFv-molekyl (Kipriyanov, S.M., etal. (1995) Human Antibodies andHybridomas6:93-101) og anvendelse av en cystein-rest, et markør-peptid og et C-terminalt polyhistidin-merke for å fremstille bivalente og biotinylerte scFv-molekyler (Kipriyanov, S.M., etal. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058). Antistoffdeler, så som Fab- og F(ab')2-fragmenter, kan fremstilles fra hele antistoffer ved anvendelse av konvensjonelle teknikker, så som henholdsvis papain- eller pepsinfordøyelse av hele antistoffer. Videre kan antistoffer, antistoffdeler og immunoadhesjonsmolekyler oppnås ved anvendelse av standard rekombinante DNA-teknikker, som beskrevet her.
Betegnelsen "human-antistoff", som anvendt her, skal omfatte antistoffer som har variable og konstante regioner avledet fra human-kimlinje-immunoglobulinsekvenser. Human-antistoffene ifølge oppfinnelsen kan omfatte aminosyrerester som ikke kodes for av human-kimlinje-immunoglobulin-sekvenser { f. eks. mutasjoner innført ved tilfeldig eller sete-spesifikk mutagenese in vitro eller ved somatisk mutasjon in vivo), for eksempel i CDR og spesielt CDR3. Imidlertid skal betegnelsen "human-antistoff", som anvendt her, ikke omfatte antistoffer hvor CDR-sekvenser avledet fra kimlinje fra en annen pattedyrart, så som en mus, er podet i human-rammeverksekvenser.
Betegnelsen "rekombinant human-antistoff", som anvendt her, skal omfatte alle human-antistoffer som blir fremstilt, uttrykt, skapt eller isolert ved rekombinante metoder, så som antistoffer uttrykt ved anvendelse av en rekombinant ekspresjons-vektor transfektert i en vertscelle (ytterligere beskrevet i Seksjon II, nedenfor), antistoffer isolert fra et rekombinant, kombinatorisk human-antistoff-bibliotek (ytterligere beskrevet i Seksjon III nedenfor), antistoffer isolert fra et dyr { f. eks. en mus) som er transgent for human-immunoglobulingener (se f. eks. Taylor, L.D., et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) eller antistoffer fremstilt, uttrykt, skapt eller isolert ved hvilke som helst andre metoder som involverer spleising av human-immunoglobulingensekvenser med andre DNA-sekvenser. Slike rekombinante human-antistoffer har variable og konstante regioner avledet fra human-kimlinje-immunoglobulinsekvenser. Ved visse utførelsesformer blir imidlertid slike rekombinante human-antistoffer underkastet in vitro mutagenese (eller når et dyr transgent for human-lg-sekvenser blir anvendt, in vivo somatisk mutagenese) og aminosyresekvensene i VH- og VL-regionene av de rekombinante antistoffer er således sekvenser som, selv om de er avledet fra og relatert til human-kimlinje-VH- og VL-sekvenser, ikke kan eksistere naturlig i human-antistoff kimlinjerepertoar in vivo.
Et "isolert antistoff", som anvendt her, skal referere til et antistoff som er i alt vesentlig fritt for andre antistoffer som har forskjellig antigenspesifisitet { f. eks. er et isolert antistoff som spesifikt binder til hTNFa, i det vesentlige fritt for antistoffer som spesifikt binder til antigener forskjellig fra hTNFa). Et isolert antistoff som spesifikt binder til hTNFa kan imidlertid ha kryssreaktivitet til andre antigener, så som TNFa-molekyler fra andre arter (beskrevet mer detaljert nedenfor). Videre kan et isolert antistoff være i alt vesentlig fritt for annet cellulært materiale og/eller kjemikalier.
Et "nøytraliserende antistoff", som anvendt her (eller et "antistoff som nøytraliserer hTNFa-aktivitet"), skal referere til et antistoff hvis binding til hTNFa resulterer i hemning av den biologiske aktiviteten til hTNFa. Denne hemning av den biologiske aktiviteten til hTNFa kan bestemmes ved måling av én eller flere indikatorer for hTNFa biologisk aktivitet, så som hTNFa-fremkalt cytotoksisitet (enten in vitro eller in vivo), hTNFa-fremkalt cellulær aktivering og hTNFa-binding til hTNFa-reseptorer. Disse indikatorer for hTNFa biologisk aktivitet kan bedømmes ved én eller flere av mange standard in vitro- eller in wVo-forsøk kjent på området (se Eksempel 4). Fortrinnsvis blir evnen til et antistoff til å nøytralisere hTNFa-aktivitet bedømt ved hemning av hTNFa-fremkalt cytotoksisitet av L929 celler. Som en ytterligere eller alternativ parameter for hTNFa-aktivitet, kan evnen til et antistoff til å hemme hTNFa-fremkalt ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC, som et mål på hTNFa-fremkalt cellulær aktivering, bestemmes.
Betegnelsen "overflate plasmon-resonans", som anvendt her, angir et optisk fenomen som tillater analyse av sanntids biospesifikke interaksjoner ved deteksjon av endringer i proteinkonsentrasjoner i en biosensor-matriks, for eksempel ved anvendelse av BIAcore-systemet (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sverige og Piscataway, NJ). For ytterligere beskrivelser, se Eksempel 1 og Jonsson, U., etal. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jonsson, U., etal. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., etal. (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131; og Johnnson, B., etal. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
Betegnelsen "K0ff", som anvendt her skal referere til frigjøringskonstanten for dissosiering av et antistoff fra antistoff/antigen-komplekset.
Betegnelsen "Kd", som anvendt her, skal referere til dissosiasjpns-konstanten for en spesiell antistoff-antigen-interaksjon.
Betegnelsen "nukleinsyremolekyl", som anvendt her, skal omfatte DNA-molekyler og RNA-molekyler. Et nukleinsyremolekyl kan være enkelttrådet eller dobbelttrådet, men er fortrinnsvis dobbelttrådet DNA.
Betegnelsen "isolert nukleinsyremolekyl", som anvendt her i forbindelse med nukleinsyrer som koder for antistoffer eller antistoffdeler { f. eks. VH, VL, CDR3) som binder til hTNFa, skal angi et nukleinsyremolekyl hvor nukleotid-sekvenser som koder for antistoffet eller antistoff delen er fri for andre nukleotid-sekvenser som koder for antistoffer eller antistoffdeler som binder til antigener forskjellig fra hTNFa, hvilke andre sekvenser naturlig kan flankere nukleinsyren i humant genomisk DNA. For eksempel inneholder en isolert nukleinsyre ifølge oppfinnelsen som koder for en VH-region av et anti-TNFa-antistoff således ingen andre sekvenser som koder for andre VH-regioner som binder til antigener forskjellig fra TNFa.
Betegnelsen "vektor", som anvendt her, skal referere til et nukleinsyremolekyl som kan transportere en annen nukleinsyre til hvilken den er lenket. En type vektor er et "plasmid", som angir en sirkulær dobbelttrådet DNA-løkke til hvilken ytterligere DNA-segmenter kan være ligert. En annen type vektor er en viral vektor, hvor ytterligere DNA-segmenter kan være ligert i det virale genom. Visse vektorer er i stand til autonom replikasjon i en vertscelle i hvilken de er innført ( f. eks. bakterielle vektorer som har bakteriell replikasjonsopprinnelse og episomale pattedyr-vektorer). Andre vektorer ( f. eks. ikke-episomale pattedyr-vektorer) kan integreres i genomet til en vertscelle ved innføring i vertscellen og blir derved replikert sammen med vertsgenomet. Videre er visse vektorer i stand til å dirigere uttrykket av gener som de er operativt bundet til. Slike vektorer er referert til her som "rekombinante ekspresjonsvektorer" (eller enklere, "ekspresjons-vektorer"). Generelt er ekspresjonsvektorer som er nyttige ved rekombinante DNA-teknikker ofte i form av plasmider. I foreliggende beskrivelse kan "plasmid" og "vektor" anvendes om hverandre, ettersom plasmidet er den mest vanlig anvendte form av vektor. Imidlertid skal oppfinnelsen omfatte slike andre former for ekspresjonsvektorer, så som virale vektorer ( f. eks. replikasjons-defekte retrovirus, adenovirus og adeno-assosierte virus), som tjener ekvivalente funksjoner.
Betegnelsen "rekombinant vertscelle" (eller enklere "vertscelle"), som anvendt her, skal referere til en celle i hvilken en rekombinant ekspresjonsvektor er innført. Det skal forstås at slike betegnelser skal angi ikke bare den spesielle aktuelle celle men også avkommet til en slik celle. Fordi visse modifikasjoner kan forekomme i påfølgende generasjoner på grunn av enten mutasjon eller påvirkning fra omgivelsene, trenger ikke slikt avkom i realiteten være identisk med moder-cellen, men omfattes allikevel av betegnelsen "vertscelle" som anvendt her.
Forskjellige aspekter ved oppfinnelsen er beskrevet mer detaljert i de følgende underavsnitt.
I. Human- antistoffer som binder human TNFa
Det beskrives isolerte human-antistoffer eller antigen-bindingsdeler derav, som binder til human TNFa med høy affinitet, lav frigjøringshastighet og høy nøytraliseringskapasitet. Fortrinnsvis er human-antistoffene rekombinante, nøytraliserende human-anti-hTNFa- antistoffer. Det mest foretrukne rekpmbinante, nøytraliserende antistoff ifølge oppfinnelsen er referert til her som D2É7 og har VL- og VH-sekvenser som vist i henholdsvis Figur 1 A, IB og Figur 2Å, 2B (aminosyresekvensen til D2E7 VL-regionen er også vist i SEKV ID NR: 1; aminosyresekvensen til D2E7 VH-regionen er også vist i SEKV ID NR: 2). Bindingsegenskapene til D2E7, sammenlignet med det murine anti-hTNFoc MAK 195 mAb som oppviser høy affinitet og langsom dissosiasjonskinetikk og et annet human-anti-hTNFa-antistoff-beslektet i sekvens med D2E7,2SD4, er oppsummert nedenfor:
D2E7-antlstoffet og beslektede antistoffer har også stor kapasitet til å nøytralisere hTNFa-aktivitet, som bestemt ved flere in vitro- og in vivo- forsøk (se Eksempel 4). For eksempel nøytraliserer disse antistoffer hTNFa-fremkalt cytotoksisitet av L929- celler med ICso-verdier i området omtrent 10~<7> M til omtrent 10"10 M. D2E7, når det er uttrykt som et full-lengde lgG1 -antistoff, nøytraliserer hTNFa-fremkalt cytotoksisitet av L929-celler med IC50 på omtrent 1,25 x 10~<10> M. Dessuten blir den nøytraliserende kapasiteten til D2E7 opprettholdt når antistoffet er uttrykt som et Fab-, F(ab')2- eller scFv-fragment. D2E7 hemmer også TNFa-fremkalt cellulær aktivering, som målt ved hTNFa-fremkalt ELAM-1-ekspresjon på HUVEC (IC50 = omtrent 1,85 x 10>10 M) og binding av hTNFa til hTNFa-reseptorer på U-937-celler (IC50 = omtrent 1,56 x 10" <10> M). Når det gjelder sistnevnte, hemmer D2E7 binding av hTNFa til både p55 og p75 hTNFa-reseptorer. Videre hemmer antistoffet hTNFa-fremkalt dødelighet in vivo hos mus (ED50 - "1-2,5 mg/mus).
Når det gjelder bindingsspesifisiteten av D2E7, binder dette antistoffet til human TNFa i forskjellige former, omfattende oppløselig hTNFa, transmembran-hTNFa og hTNFa bundet til cellulære reseptorer. D2E7 binder ikke spesifikt til andre cytokiner, så som lymfotoksin (TNFp), IL-1a, IL-1p\ IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNyog TGFpV Imidlertid oppviser ikke D2E7 kryssreaktivitet til tumornekrose-faktorer fra andre arter. For eksempel nøytraliserer antistoffet aktiviteten til minst fem primat TNFa (sjimpanse, bavian, marmosett, cynomolgus og rhesus) med omtrent ekvivalente IC5fj-verdier som for nøytralisering av hTNFa (se Eksempel 4, underavsnitt E). D2E7 nøytraliserer også aktiviteten til mus-TNFa, selv om det er omtrent 1000-ganger mindre godt enn human TNFa (se Eksempel 4, underavsnitt E). D2E7 binder også til hund- og gris-TNFa.
Ved ett aspekt angår oppfinnelsen D2E7-antistoffer og antistoffdeler, derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl. Ved én utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl hvor det humane antistoffet dissosierer f ra human-TNFa med en på 1 x 10"<8> M eller mindre og en K0ff-hastighetskonstant på 1 x 10"3 s"1 eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa-cytotbksisitet i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"<7> M eller mindre. Mer foretrukket dissosierer det isolerte human-antistoff eller antigen-bindingsdelen derav, fra human TNFa med en K0ff på 5 x 10"<4> s"<1> eller mindre eller enda mer foretrukket, med en K0ff på 1 x 10"<4>s'<1> eller mindre. Mer foretrukket nøytraliserer det isolerte human-antistoff eller antigen-bindingsdelen derav, human TNFa-cytotoksisitet i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"<8> M eller mindre, enda mer foretrukket med en IC50 på 1 x 10"<9> M eller mindre og spesielt foretrukket med en IC50 på 5 x 10"<10> M eller mindre. Ved en foretrukket utførelsesform er antistoffet et isolert humant rekombinant antistoff eller en antigen-bindingsdel derav. Ved en annen foretrukket utførelsesform nøytraliserer også antistoffet TNFa-fremkalt cellulær aktivering, som bedømt ved anvendelse av et standard in vitro- forsøk med TNFa-fremkalt ELAM-1 -ekspresjon på human umbilikalvene-endotelceller (HUVEC).
Overflate-plasmon-resonansanalyse for bestemmelse av Kj og K0ff kan utføres som beskrevet i Eksempel 1. Et standard in vitro L929-forsøk for bestemmelse av ICsrj-verdier er beskrevet i Eksempel 4, underavsnitt A. Et standard in vitro forsøk for TNFa-fremkalt ELAM-1-ekspresjon på human-umbilikalvene-endotel-celler (HUVEC) er beskrevet i Eksempel 4, underavsnitt C. Eksempler på rekombinante human-antistoffer som imøtekommer eller er forventet å imøtekomme, ovennevnte kinetiske og nøytraliserende kriterier omfatter antistoffer som har de følgende [VHA/L] par; sekvensene for hvilke er vist i Figurene 1 A, 1B, 2A og 2B (se også Eksempler 2, 3 og 4 for kinetikk- og nøytraliserings-analyser): [D2E7 VH/D2E7 VL]; [HD2E7<*>.A1/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A2/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A3/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A4/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A5/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A6/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A7/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A8/D2E7 VL], [HD2E7<*>.A9/D2E7 VL], [D2E7 VH/LD2E7*.A1 ], [D2E7 VH/LD2E7<*>.A4], [D2E7 VH/LD2E7<*>.A5], [D2E7 VH/LD2E7<*>.A7], [D2E7 VH/LD2E7\A8], [HD2E7<*>.A9/LD2E7<*>.A1], [VH1-D2/LOE7], [VH1-D2.N/LOE7.T], [VH1-D2.Y/LOE7.A], [VH1-D2.N/LOE7.A], [VH1-D2/EP B12] og [3C-H2/LOE7].
Det er velkjent på området at antistoff-tung- og lettkjede CDR3-domener spiller en viktig rolle i bindings-spesifisitet/affinitet av et antistoff for et antigen. Følgelig angår oppfinnelsen anvendelse av, human-antistoffer som har langsom dissosiasjonskinetikk for assosiering med hTNFa og som har lett- og tungkjede CDR3-domener som strukturelt er identiske med eller beslektet med de til D2E7. Som vist i Eksempel 3, kan stilling 9 av D2E7 VL CDR3 være okkupert av Ala eller Thr uten i særlig grad å påvirke K0ff. Følgelig omfatter et konsensus-motiv for D2E7 VL CDR3, aminosyresekvensen: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEKV ID NR: 3). Videre kan stilling 12 i D2E7 VH CDR3 være okkupert av Tyr eller Asn, uten i særlig grad å påvirke K0ff. Følgelig omfatter et konsensus-motiv for D2E7 VH CDR3 aminosyresekvensen: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEKV ID NR: 4). Videre, som demonstrert i Eksempel 2, er CDR3-domenet av D2E7 tung- og lettkjeder mottagelig for substitusjon med en enkel alaninrest (i stilling 1, 4, 5, 7 eller 8 i VL CDR3 eller i stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 eller 11 i VH CDR3) uten i særlig grad å påvirke K0ff. Videre vil fagfolk på området forstå at, gitt mottageligheten til D2E7 VL- og VH-CDR3- domener for substitusjoner med alanin, kan substitusjon av andre aminosyrer i CDR3- domenene være mulig mens den lave frigjøringshastighetskonstanten til antistoffet opprettholdes, spesielt substitusjoner med konservative aminosyrer. En "konservativ aminosyresubstitusjon", som anvendt her, er én hvor én aminosyrerest blir erstattet med en annen aminosyrerest som har en lignende sidekjede. Familier av aminosyrerester som har lignende sidekjeder er definert i litteraturen, omfattende basiske sidekjeder [ f. eks. lysin, arginin, histidin), sure sidekjeder ( f. eks. asparaginsyre, glutaminsyre), uladede polare sidekjeder ( f. eks. glycin, asparagin, glutamin, serin, treonin, tyrosin, cystein), ikke-polare sidekjeder ( f. eks. alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, fenylalanin, metionin, tryptofan), beta-forgrenede sidekjeder ( f. eks. treonin, valin, isoleucin) og aromatiske sidekjeder ( f. eks. tyrosin, fenylalanin, tryptofan, histidin). Fortrinnsvis blir ikke mer enn én til fem konservative aminosyre-substitusjoner utført i D2E7 VL- og/eller VH-CDR3-domener. Mer foretrukket blir ikke mer enn én til tre konservative aminosyre-substitusjoner utført i D2E7 VL- og/eller VH-CDR3-domener. Videre bør ikke konservative aminosyresubstitusjoner gjøres i aminosyrestillinger som er kritiske for binding til hTNFa. Som vist i Eksempel 3 synes stillingene 2 og 5 i D2E7-VL-CDR3 og stillinger 1 og 7 i D2E7-VH-CDR3 å være kritiske for interaksjon med hTNFa og konservative aminosyresubstitusjoner blir således fortrinnsvis ikke gjort i disse stillinger (selv om en alaninsubstitusjon i stilling 5 av D2E7-VL-CDR3 er godtagbar, som beskrevet ovenfor).
Ved en annen utførelse av oppfinnelsen tilveiebringes følgelig anvendelse av et isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, med de følgende karakteristika:
a) dissosierer fra human TNFa med en K0ff-hastighetskonstant på
1 x 10"<3> s"<1> eller mindre, som bestemt ved overflate-plasmon-resonans;
b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel
alaninsubstitusjon i stilling 1, 4, 5, 7 eller 8 eller ved én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1, 3, 4, 6, 7, 8 og/eller 9;
c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel
alaninsubstitusjon i stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11 eller ved én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10,11 og/eller 12, og minst ett ytterligere terapeutisk middel for fremstilling av en farmasøytisk blanding for inhibering av human TNF a-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse hvor TNF a-aktivitet er skadelig.
Mer foretrukket dissosierer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav, fra humån-TNFa med en K0ff på 5 x 10"<4> s"<1> eller mindre. Enda mer foretrukket dissosierer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav, fra human-TNFa med en K0ff <på 1 x 10"<4> s"<1> eller mindre.
Det beskrives et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel t
derav, med en lettkjede variabel-region (LCVR) som har et CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV
ID NR: 3 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 1, 4, 5,7 eller 8 og med en tungkjede variabel-region (HCVR) som har et CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 2, 3,4, 5,6, 8, 9,10 eller 11. Fortrinnsvis har LCVR ytterligere et CDR2-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV
ID NR: 5 (dvs. D2E7 VL CDR2) og HCVR har ytterligere et CDR2-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 6 (dvs. D2E7 VH CDR2).
Enda mer foretrukket har LCVR ytterligere et CDR1-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 7 (dvs. D2E7 VL CDR1) og HCVR har et CDR1-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 8 (dvs. D2E7 VH CDR1). Rammeverk-regioner for VL er fortrinnsvis fra V^l human kimlinjefamilie, mer foretrukket fra A20 human kimlinje Vk-gen og mest foretrukket fra D2E7 VL-rammeverk-sekvensene vist i Figurene 1A og 1B. Rammeverk-regionene for VH er fortrinnsvis fra Vh3 human-kimlinjefamilien, mer foretrukket fra DP-31 human kimlinje VH-gen og mest foretrukket fra D2E7 VH-rammeverksekvensene vist i Figurene2A og 2B.
Ved enda en annen utførelses tilveiebringes et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel-region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 1 (dvs. D2E7 VL) og en tungkjede variabel-region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen med SEKV
ID NR: 2 (dvs. D2E7 VH). I visse utførelsesformer omfatter antistoffet en tungkjede konstant-region, så som en lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgE, IgM eller IgD konstant-region. Fortrinnsvis er tungkjede konstant-regionen en lgG1 tungkjede konstant-region eller en lgG4 tungkjede konstant-region. Videre kan antistoffet omfatte en lettkjede konstant-region, enten en kappa lettkjede konstant-region eller en lambda lettkjede konstant-region. Fortrinnsvis omfatter antistoffet en kappa lettkjede konstant-region. Alternativt kan antistoff-delen for eksempel være et Fab-fragment eller et enkel-kjede Fv-fragment.
Det tilveiebringes også et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, som har D2E7-beslektede VL- og VH- CDR3-domener, for eksempel antistoffer eller antigen-bindingsdeler derav, med en lettkjede variabel-region (LCVR) som har et CDR3-domene omfattende en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR: 3, SEKV ID NR: 11, SEKV ID NR: 12, SEKV ID NR: 13, SEKV ID NR: 14, SEKV ID NR: 15, SEKV ID NR: 16, SEKV ID NR: 17, SEKV ID NR: 18, SEKV ID NR: 19, SEKV ID NR: 20, SEKV ID NR: 21, SEKV ID NR: 22, SEKV ID NR: 23, SEKV ID NR: 24, SEKV ID NR: 25 og SEKV ID NR: 26 eller med en tungkjede variabel-region (HCVR) som har et CDR3-domene omfattende en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR: 4, SEKV ID NR: 27, SEKV ID NR: 28, SEKV ID NR: 29, SEKV ID NR: 30, SEKV ID NR: 31, SEKV ID NR: 32, SEKV ID NR: 33, SEKV ID NR: 34 og SEKV ID NR: 35.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes et rekombinant human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, som nøytraliserer aktiviteten til human TNFa men ikke human TNFJ3. Fortrinnsvis nøytraliserer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav også aktiviteten av sjimpanse-TNFa og minst én ytterligere primat-TNFa valgt fra gruppen bestående av bavian-TNFa, marmosett-TNFa, cynomolgus-TNFa og rhesus-TNFa. Fortrinnsvis nøytraliserer antistoffet eller antigen-bindingsdelen derav, human-, sjimpanse- og/eller ytterligere primat-TNFa i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"<8> M eller mindre, mer foretrukket 1x 10~<9> M eller mindre og enda mer foretrukket 5 x 10~<10> M eller mindre. I én subutførelsesform nøytraliserer antistoffet også aktiviteten til hund-TNFa, fortrinnsvis i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10"<7> M eller mindre, mer foretrukket 1x 10'<8> M eller mindre og enda mer foretrukket 5 x 10"<9> M eller mindre. I en annen subutførelsesform nøytraliserer antistoffet også aktiviteten til gris-TNFa, fortrinnsvis med en IC50 på 1 x 10"<5> M eller mindre, mer foretrukket 1x 10"<6> M eller mindre og enda mer foretrukket 5 x 10"<7> M eller mindre. Ved enda en annen utførelsesform nøytraliserer antistoffet også aktiviteten til mus-TNFa, fortrinnsvis med en IC50 på 1 x 10"<4> M eller mindre, mer foretrukket 1x 10"<5> M eller mindre og enda mer foretrukket 5x10"<6> M eller mindre.
Et antistoff eller en antistoffdel kan derivatiseres eller knyttes til et annet funksjonelt molekyl (f.eks. et annet peptid eller protein). Følgelig skal antistoffene og antistoffdelene omfatte derivatiserte og på annen måte modifiserte fonner av j
human-anti-hTNFa-antistoffene beskrevet her, omfattende immunoadhesjonsmolekyler. For eksempel kan et antistoff eller en antistoffdel derivatisert eller bundet til minst et funksjonelt molekyl ifølge oppfinnelsen være funksjonelt bundet (ved kjemisk kobling, genetisk kondensering, ikke-kovalent assosiering eller på annen måte) til én eller flere andre molekylgrupper, så som et annet antistoff ( f. eks. et bispesifikt antistoff eller et diabody), et detekterbart middel, et cytotoksisk middel, et farmasøytisk middel og/eller et protein eller peptid som kan mediere tilknytning av antistoffet eller antistoff-delen til et annet molekyl (så som en streptavidin-kjerneregion eller et polyhistidin-merke).
En type derivatisert antistoff blir produsert ved kryssbinding av to eller flere antistoffer (av samme type eller av forskjellige typer, f. eks. for å danne bispesifikke antistoffer). Egnede kryssbindingsmidler omfatter de som er heterobifunksjonelle, som har to distinkte reaktive grupper separert av en passende spacer ( f. eks. m-maleimidobenzoyl-N-hydroksysuccinimid-ester) eller homobifunksjonelle ( f. eks. disuccinimidyl-suberat). Slike linkere er tilgjengelig fra Pierce Chemical Company, Rockford, IL.
Nyttige detekterbare midler med hvilke et antistoff eller en antistoffdel derivatisert eller bundet til minst et funksjonelt molekyl ifølge oppfinnelsen kan være derivatisert, omfatter fluorescerende forbindelser. Eksempler på fluorescerende detekterbare midler omfatter fluorescein, fluorescein-isotiocyanat, rhodamin, 5-dimetylamin-1-naftalensulfonylklorid, fykoerytrin og lignende. Et antistoff kan også derivatiseres med detekterbare enzymer, så som alkalisk fosfatase, pepperrot-peroksydase, glukose-oksydase og lignende. Når et antistoff er derivatisert med et detekterbart enzym, blir det detektert ved tilsetning av ytterligere reagenser som enzymet anvender for å produsere et detekterbart reaksjonsprodukt. Når for eksempel det detekterbare middel pepperrot-peroksydase er til stede, fører tilsetning av hydrogenperoksyd og diaminobenzidin til et farget reaksjonsprodukt, som er detekterbart. Et antistoff kan også derivatiseres med biotin og detekteres gjennom indirekte måling av avidin- eller streptavidinbinding.
i ,
' v*' •
■■. i ■'
I).; Ekspresjon av antistoffer
Et antistoff eller en antistoffdel kan fremstilles ved rekombinant ekspresjon av immunoglobulin lett- og tungkjede-gener i en vertscelle. For å uttrykke et antistoff rekombinant, blir en vertscelle transfektert med én eller flere rekombinante ekspresjonsvektorer som bærer DNA-f ragmenter som koder for immunoglobulin lett- og tung-kjeder av antistoffet slik at lett- og tungkjedene blir uttrykt i vertscellen og, fortrinnsvis, utskilt i det medium hvor vertscellene blir dyrket, fra hvilket medium antistoffene kan gjenvinnes. Standard rekombinante DNA-metoder blir anvendt for å oppnå antistoff tung- og lettkjede gener, innføre disse gener i rekombinante ekspresjonsvektorer og innføre vektorene i vertsceller, så som de beskrevet i Sambrook, Fritsch og Maniatis (ed.), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F.M. et al. (ed.) Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates, (1989) og i U.S.-patent nr. 4,816,397 av Boss etal.
For å uttrykke D2E7 eller et D2E7-beslektet antistoff, blir DNA-fragmenter som koder for lett- og tungkjede variable regioner først oppnådd. Djsse DNAer kan oppnås ved amplifisering og modifikasjon av kimlinje lett- og tungkjede variable sekvenser ved anvendelse av polymerase kjedereaksjon (PCR). Kimlinje DNA-sekvenser for human-tung- og lettkjede variabel-region gener er kjent på området (se f. eks. "Vbase" human kimlinje sekvens database; se også Kabat, E.A., etal. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publikasjon Nr. 91-3242; Tomlinson, I.M., etal. (1992) "The Repertoire of Human Germline Vh Sequences Reveals about Fifty Groups of Vh Segments with Different Hypervariable Loops" J. Mol. Biol. 227:776-798; og Cox, J.P.L. etal. (1994) "A Directory of Human Germ-line V|< Segments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur. J. Immunol. 24:827-836; idet innholdet av hver av disse inntas her ved referanse). For å oppnå et DNA-fragment som koder for den tungkjede variable region av D2E7 eller et D2E7-beslektet antistoff, blir et medlem av V|-|3- familien human-kimlinje VH-gener amplifisert ved standard PCR. Mest foretrukket blir DP-31 VH-kimlinjesekvensen amplifisert. For å oppnå et DNA- fragment som koder for lettkjede variabel-regionen i D2E7 eller et D2E7-beslektet antistoff, blir et medlem av V|<l-familien av human-kimlinje VL-gener amplifisert ved standard PCR. Mest foretrukket amplifiseres A20 VL-kimlinjesekvensen. PCR-primere egnet for anvendelse ved amplifisering av DP-31 kimlinje VH- og A20 kimlinje VL-sekvenser kan konstrueres på basis av nukleotidsekvensené beskrevet i referansene referert til ovenfor, ved anvendelse av standard metoder.
Når kimlinje VH- og VL-fragmenter blir oppnådd, kan disse sekvenser muteres til å kode for D2E7 eller D2E7-beslektede aminosyresekvenser beskrevet her. Aminosyresekvenser kodet for av kimlinje VH- og VL-DNA- sekvenser blir først sammenlignet med D2E7 eller D2E7-beslektede VH- og VL-aminosyresekvenser for å identifisere aminosyrerestene i D2E7 eller den D2E7-beslektede sekvens som skiller seg fra kimlinjen. Deretter blir de passende nukleotider i kimlinje DNA-sekvenser mutert slik at den muterte kimlinjesekvens koder for D2E7 eller en D2E7-beslektet aminosyresekvens, ved anvendelse av den genetiske koden for å bestemme hvilke nukleotidendringer som skal gjøres. Mutagenese av kimlinjesekvenser blir utført ved standard metoder, så som PCR-mediert mutagenese (hvor de muterte nukleotider blir innført i PCR-primere slik at PCR-produktet inneholder mutasjonene) eller sete-styrt mutagenese.
Videre skal det bemerkes at hvis "kimlinje"-sekvenser oppnådd ved PCR-amplifisering koder for aminosyreforskjeller i rammeverk regioner fra den riktige kimlinje-konfigurasjon (dvs. forskjeller i den amplifiserte sekvens sammenlignet med den riktige kimlinjesekvens, for eksempel som et resultat av somatisk mutasjon), kan det være ønskelig å endre disse aminosyreforskjeller tilbake til de riktige kimlinjesekvenser (dvs. "tilbakemutasjon" av rammeverkrester til kimlinje-konfigurasjon).
Når DNA-fragmenter som koder for D2E7 eller D2E7-beslektede VH- og VL- segmenter er oppnådd (ved amplifisering og mutagenese av kimlinje VH- og VL- gener, som beskrevet ovenfor), kan disse DNA-fragmenter ytterligere manipuleres ved standard rekombinante DNA-teknikker, for eksempel for å omdanne variabel-region-gener til full-lengde antistoffkjede-gener, til Fab-fragment-gener eller til et scFv-gen. Ved disse manipulasjonene blir et VL- eller VH-kodende DNA-fragment operativt lenket til et annet DNA-fragment som koder for et annet protein, så som en antistoff konstant-region eller en fleksibel linker. 'Betegnelsen "operativt lenket", som anvendt i denne sammenheng skal bety at de to DNA-fragmenter er knyttet sammen slik at aminosyre-sekvenser som kodes av dé to DNA-fragmenter forblir i rammen.
Det isolerte DNA som koder for VH-regionen kan omdannes til et full-lengde tungkjede gen ved operativ lenking av VH-kodende DNA til et annet DNA-molekyl som koder for tungkjede konstante regioner (CH1, CH2 og CH3). Sekvensene av humane tungkjede konstant-region-gener er kjent i litteraturen (se f. eks. Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publikasjon Nr. 91-3242) og DNA-fragmenter som omfatter disse regioner kan oppnås ved standard PCR-amplifisering. Tungkjede konstant-regionen kan være en lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgE, IgM eller IgD konstant-region, men er mest foretrukket en lgG1 eller lgG4 konstant-region. For et Fab-fragment tungkjede gen, kan VH-kodende DNA være operativt lenket til et annet DNA-molekyl som koder for bare tungkjede CH1-konstant-regionen.
Det isolerte DNA som koder for VL-regionen kan omdannes til et full-lengde lettkjede gen (så vel som et Fab-lettkjede gen) ved operativ lenking av VL-kodende DNA til et annet DNA-molekyl som koder for lettkjede konstant-regionen, CL. Sekvenser av human lettkjede konstant-region-gener er kjent på området (se f. eks. Kabat, E.A., etal. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publikasjon nr. 91-3242) og DNA-fragmenter som omfatter disse regioner kan oppnås ved standard PCR-amplifisering. Lettkjede konstant-regionen kan være en kappa-eller lambda-konstant-region, mén mest foretrukket er den en kappa-konstant-region.
For å danne et scFv-gen, blir VH- og VL-kodende DNA-fragmenter operativt lenket til et annet fragment som koder for en fleksibel linker, f. eks. som koder for aminosyresekvensen (Gly4-Ser)3, slik at VH- og VL-sekvenser kan uttrykkes som et tilstøtende enkel-kjede protein, med VL- og VH-regioner knyttet sammen av en fleksibel linker (se f. eks. Bird etal. (1988) Science242:423-426; Huston etal. (1988) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 85:5879-5883; McCafferty etal., Nature (1990) 348:552-554).
For å uttrykke antistoffene eller antistoffdelene blir DNA som koder for partielle eller full-lengde lette og tunge kjeder, oppnådd som beskrevet ovenfor, innført i ekspresjonsvektorer slik at genene blir operativt lenket til transkripsjonene og translasjonene kontrollsekvenser. I denne sammenheng skal betegnelsen "operativt lenket" bety at et antistoff-gen er ligert i en vektor slik at transkripsjonene og translasjonene kontrollsekvenser innen vektoren tjener deres tiltenkte funksjon av regulering av transkripsjon og translasjon av antistoff-genet. Ekspresjonsvektor- og ekspresjonskontrollsekvenser er valgt slik at de er kompatible med den anvendte ekspresjonsvertscelle. Antistoff-lettkjede genet og antistoff-tungkjede genet kan innføres i separate vektorer eller, mer typisk, begge gener blir innsatt i den samme ekspresjonsvektor. Antistoff-gener blir innsatt i ekspresjonsvektoren ved standard metoder [ f. eks. ligering av komplementære restriksjonsseter på antistoff-genfragment og vektor eller butt-ende ligering hvis ingen restriksjonsseter er til stede). Før innføring av D2E7 eller D2E7-beslektede lett- eller tung-kjedesekvenser, kan ekspresjonsvektoren allerede bære antistoff-konstant-regionsekvenser. For eksempel er en metode for omdannelse av D2E7 eller D2E7-beslektede VH- og VL-sekvenser til full-lengde antistoff-gener å innføre dem i ekspresjonsvektorer som allerede koder for henholdsvis tungkjede konstante og lettkjede konstante regioner, slik at VH-segmentet er operativt lenket til CH-segment(er) i vektoren og VL-segmentet er operativt lenket til CL-segmentet i vektoren. I tillegg eller alternativt kan den rekombinante ekspresjonsvektor kode for et signalpeptid som letter sekresjon av antistoff-kjeden fra en vertscelle. Antistoffkjede-genet kan klones i vektoren slik at signal- peptidet blir lenket innen rammen til amino-terminus i antistoffkjede-genet. Signalpeptidet kan være et immunoglobulin-signalpeptid eller et heterologt signalpeptid (dvs. et signalpeptid fra et ikke-immunoglobulinprotein).
I tillegg til antistoffkjede-gener, bærer de rekombinante ekspresjonsvektorer ifølge oppfinnelsen regulerende sekvenser som kontrollerer ekspresjon av antistoff-kjede-gener i en vertscelle. Betegnelsen "regulerende sekvens" skal omfatte promotere, enhancere og andre ekspresjonskontroll- elementer ( f. eks. polyadenyleringssignaler) som kontrollerer transkripsjon eller translasjon av antistoffkjede-gener. Slike regulerende sekvenser er for eksempel beskrevet i Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic
Press, San Diego, CA (1990). Det vil forstås av fagfolk på området at design av 'ekspresjonsvektor, omfattende seleksjon av regulerende sekvenser, kan avhenge
■av slike faktorer som valget av vertscelle som skal transformeres, det ønskede nivå1 av ekspresjon av protein, etc. Foretrukne regulerende sekvenser for
pattedyrvertscelle-ekspresjon omfatter virale elementer som styrer høye nivåer av i proteinekspresjon i pattedyrceller, så som promotere og/eller enhancere avledet fra cytomegalovirus (CMV) (så som CMV- promoter/enhancer), Simian Virus 40 (SV40) (så som SV40 promoter/enhancer), adenovirus, { f. eks. adenovirus siste hoved-promoter (AdMLP)) og polyoma. For videre beskrivelse av virale regulerende elementer og sekvenser derav, se f. eks. U.S.-patent nr. 5,168,062 av Stinski, U.S.-patent nr. 4,510,245 av Bell etal. og U.S.-patent nr. 4,968,615 av Schaffner ef al.
I tillegg til antistoffkjede-gener og regulerende sekvenser, kan de rekombinante ekspresjonsvektorer bære ytterligere sekvenser, så som sekvenser som regulerer replikasjon av vektoren i vertsceller ( f. eks. replikasjons-opprinnelser) og selekterbare markørgener. Det selekterbare markørgen letter utvelgelse av vertsceller i hvilke vektoren blir innført (se f. eks. U.S.-patenter nr. 4,399,216,4,634,665 og 5,179,017, alle til Axel et al.). For eksempel gir typisk det selekterbare markørgen resistens for medikamenter, så som G418, hygromycin eller methotrexat, til en vertscelle i hvilken vektoren er innført. Foretrukne selekterbare markørgener omfatter dihydrofolat-reduktase- (DHFR) gen (for anvendelse i dhfrvertsceller med methotrexat-seleksjon/amplifisering) og neogen (for G418 seleksjon).
For ekspresjon av lett- og tungkjeder, blir ekspresjons-vektor(er) som koder for tung- og lettkjeder transfektert i en vertscelle ved standard teknikker. De forskjellige former av betegnelsen "transfeksjon" skal omfatte en rekke forskjellige teknikker som er vanlig anvendt for innføring av eksogent DNA i en prokaryot eller eukaryot vertscelle, f. eks. elektroforering, katsiumfosfat-felling, DEAE-dekstrantransfeksjon og lignende. Selv om det teoretisk er mulig å uttrykke antistoffene i enten prokaryote eller eukaryote vertsceller, er ekspresjon av antistoffer i eukaryote celler og mest foretrukket pattedyrvertsceller, mest foretrukket fordi slike eukaryote celler og spesielt pattedyrceller, mer sannsynlig enn prokaryote celler, vil sette sammen og sekretere et riktig foldet og immunologisk aktivt antistoff. Prokaryot ekspresjon av antistoffgener er angitt å være ineffektiv for produksjon av høye utbytter av aktivt antistoff (Boss, M.A. og Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6:12-13).
Foretrukne pattedyrvertsceller for ekspresjon av de beskrevne rekombinante antistoffer omfatter Chinese Hamster Ovary (CHO-celler)
(omfattende dhfr-CHO-celler, beskrevet i Urlaub og Chasin, (1980) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 77:4216-4220, anvendt med en DHFR selekterbar markør, f. eks. som beskrevet i R.J. Kaufman og P.A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621). NSO-myelom-celler, COS-celler og SP2-celler. Når rekombinante ekspresjonsvektorer som koder for antistoffgener blir innført i pattedyrvertsceller, blir antistoffene produsert ved dyrkning av vertscellene i en tidsperiode som er tilstrekkelig til å tillate ekspresjon av antistoffet i vertscellene eller, mer foretrukket, sekresjon av antistoffet i kultur-mediet hvor vertscellene blir dyrket. Antistoffer kan gjenvinnes fra dyrkningsmediet ved anvendelse av standard proteinrensningsmetoder.
Vertsceller kan også anvendes for å produsere deler av intakte antistoffer, så som Fab-f ragmenter eller scFv-molekyler. Det vil forstås at variasjoner av metodene ovenfor er mulig. For eksempel kan det være ønskelig å transfektere en vertscelle med DNA som koder for enten lettkjeden eller tungkjeden (men ikke begge) av et antistoff. Rekombinant DNA-teknologi kan også anvendes for å fjerne noe eller alt DNA som koder for en eller begge lett- og tungkjedene som ikke er nødvendig for binding til hTNFa. Molekylene uttrykt fra slike avkortede DNA-molekyler er også omfattet av antistoff en. I tillegg kan bifunksjonelle antistoffer produseres hvor én tung- og én lettkjede er et antistoff ifølge oppfinnelsen og den andre tung- og lettkjede er spesifikk for et antigen forskjellig fra hTNFa ved kryssbinding av et antistoff til et andre antistoff ved standard kjemiske kryssbindingsmetoder.
I et foretrukket system for rekombinant ekspresjon av et antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, blir en rekombinant ekspresjonsvektor som koder for både antistoff-tungkjeden og antistoff-lettkjeden innført i dhfr-CHO-celler ved kalsiumfosfat-mediert transfeksjon. I den rekombinante ekspresjonsvektor, blir antistoff-tung- og lettkjede-gener hver operativt lenket til enhancer/promoter regulerende elementer (f.eks. avledet fra SV40, CMV, adenovirus og lignende, så som et CMV-enhancer/AdMLP-promoter regulerende element eller et SV40-éhhancer/AdMLP-promoter regulerende element) for å fremme høye nivåer av transkripsjon av genene. Den rekombinante ekspresjonsvektor bærer også et DHFR-gen, som tillater seleksjon av CHO-celler som er transfektert med vektoren ved anvendelse av methotrexat- seleksjon/amplifisering. De valgte transformant-vertsceller blir dyrket for å tillate ekspresjon av antistoff-tung- og lettkjeder og intakt antistoff blir gjenvunnet fra dyrkningsmediet. Standard molekylærbiologiteknikker blir anvendt for å fremstille den rekombinante ekspresjonsvektor, transfektere vertscellene, velge transformanter, dyrke vertscellene og gjenvinne antistoffet fra dyrkningsmediet.
På bakgrunn av det foregående beskrives nukleinsyre-, vektor- og vertscellepreparater som kan anvendes for rekombinant ekspresjon av antistoffene og antistoffdelene. Nukleotid-sekvensen som koder for D2E7-lettkjede variabel-regionen er vist i Figur 7 og SEKV ID NR: 36. CDRi-domenet til LCVR omfatter nukleotidene 70-102, CDR2- domenet omfatter nukleotidene 148-168 og CDR3-domenet omfatter nukleotidene 265-291. Nukleotidsekvensen som koder for D2E7-tungkjede variabel-regionen er vist i Figur 8 og SEKV ID NR: 37. CDR1-domenet til HCVR omfatter nukleotidene 91-105, CDR2-domenet omfatter nukleotidene 148-198 og CDR3-domenet omfatter nukleotidene 295-330. Det vil forstås av fagfolk på området at nukleotidsekvenser som koder for D2E7-relaterte antistoffer eller deler derav ( f. eks. et CDR-domene, så som et CDR3-domene), kan avledes fra nukleotid-sekvenser som koder for D2E7 LCVR og HCVR ved anvendelse av den genetiske kode og standard molekylærbiologiteknikker.
Ved én utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som koder for et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 (dvs. D2E7 VL CDR3) eller modifisert fra SEKV iD NR: 3 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 1, 4, 5, 7 eller 8 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1, 3, 4, 6, 7, 8 og/eller 9. Denne nukleinsyre kan kode bare for CDR3-regionen eller, mer foretrukket, for en hel antistoff-lettkjede variabel-region (LCVR). For eksempel kan nukleinsyren kode for en LCVR som har et CDR2-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 5 (dvs. D2E7 VL CDR2) og et CDR1-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 7 (dvs. D2E7 VL CDR1).
Ved en annen utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som koder for et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 (dvs. D2E7 VH CDR3) eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel alaninsubstitusjon i stillingene 2, 3,4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillinger 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10,11 og/eller 12. Denne nukleinsyre kan kode bare for CDR3-regionen eller mer foretrukket, for en hel antistoff-tungkjede variabel-region (HCVR). For eksempel kan nukleinsyren kode for en HCVR som har et CDR2- domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 6 (dvs. D2E7 VH CDR2) og et CDR1-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 8 (dvs. D2E7 VH CDR1).
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes isolerte nukleinsyrer som koder for et D2E7-relatert CDR3-domene, f. eks. omfattende en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av: SEKV ID NR: 3, SEKV ID NR 4, SEKV ID NR: 11, SEKV ID NR: 12, SEKV ID NR: 13, SEKV ID NR: 14, SEKV ID NR: 15, SEKV ID NR: 16, SEKV ID NR: 17, SEKV ID NR: 18, SEKV ID NR: 19, SEKV ID NR: 20, SEKV ID NR: 21, SEKV ID NR: 22, SEKV ID NR: 23, SEKV ID NR: 24, SEKV ID NR: 25, SEKV ID NR: 26, SEKV ID NR: 27, SEKV ID NR: 28, SEKV ID NR: 29, SEKV ID NR: 30, SEKV ID NR: 31, SEKV ID NR: 32, SEKV ID NR: 33, SEKV ID NR: 34 og SEKV ID NR: 35.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som koder for en antistoff-lettkjede variabel-region omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 1 (dvs. D2E7 LCVR). Fortrinnsvis omfatter denne nukleinsyren nukleotidsekvensen med SEKV ID NR: 36, selv om fagfolk på området vil forstå at på grunn av degenerasjon av den genetiske koden kan andre nukleotidsekvenser kode for aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 1. Nukleinsyren kan kode bare for LCVR eller kan også kode for en antistoff-lettkjede konstant-region, operativt lenket til LCVR. Ved én utførelsesform er denne nukleinsyren i en rekombinant ekspresjonsvektor.
Ved enda en annen utførelse tilveiebringes en isolert nukleinsyre som koder for en antistoff-tungkjede variabel-region omfattende denne aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 2 (dvs. D2E7 HCVR). Fortrinnsvis omfatter denne nukleinsyren-nukleotidsekvensen med SEKV ID NR: 37, selv om fagfolk på området vil forstå at på grunn av degenerasjon av den genetiske 'koden, kan andre nukleotidsekvenser kode for aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 2. Nukleinsyren kan kode bare for HCVR eller kan også kode for en tungkjede konstant-region, operativt lenket til HCVR. For eksempel kan nukleinsyren omfatte en lgG1- eller lgG4-konstant-region. Ved én utførelsesform er denne nukleinsyren i en rekombinant ekspresjonsvektor.
Det beskrives også rekombinante ekspresjonsvektorer som koder for både en antistoff-tungkjede og en antistoff-lettkjede. Ved en utførelse tilveiebringes for eksempel en rekombinant ekspresjonsvektor som koder for: a) en antistoff-lettkjede som har en variabel-region omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 1 (dvs. D2E7 LCVR); og b) en antistoff-tungkjede som har en variabel-region omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 2 (dvs. D2E7 HCVR).
Det beskrives også vertsceller i hvilke én eller flere av de beskrevne rekombinante ekspresjonsvektorer er innført. Fortrinnsvis er vertscellen en pattedyrvertsceile, mer foretrukket er vertscellen en CHO-celle, en NSO-celle eller en COS-celle.
Det beskrives videre en metode for syntetisering av et rekombinant human-antistoff ved dyrkning av en vertscelle i et egnet dyrkingsmedium inntil et rekombinant human-antistoff er syntetisert. Metoden kan videre omfatte isolering av det rekombinante human-antistoff fra dyrkningsmediet.
III. Seleksjon av rekombinante human- antistoffer
Rekombinante human-antistoffer, i tillegg til de D2E7- eller D2E7-beslektede antistoffer beskrevet her, kan isoleres ved screening av et rekombinant kombinatorisk antistoff-bibliotek, fortrinnsvis et scFv-fag-display-bibliotek, fremstilt ved anvendelse av human VL- og VH-cDNA fremstilt fra mRNA avledet fra human-lymfocytter. Metoder for fremstilling og screening av slike biblioteker er kjent på området. I tillegg til kommersielt tilgjengelige sett for generering av fag-display-biblioteker ( f. eks. the Pharmacia Recombinant Phage AnUbody System, katalog nr. 27-9400-01; og Stratagene SurfZAP™ fag display settet, katalog nr. 240612), kan eksempler på metoder og reagenser spesielt egnet for anvendelse for generering og screening av antistoff display-biblioteker, for eksempel finnes i Ladner et al. U.S.-patent nr. 5,223,409; Kang et al. PCT-publikasjon nr. WO 92/18619; Dower etal. PCT-publikasjon nr. WO 91/17271; Winter et al. PCT-publikasjon nr. WO 92/20791; Markland et al. PCT-publikasjon nr. WO 92/15679; Breitling etal. PCT-publikasjon nr. WO 93/01288; McCafferty et al. PCT-publikasjon nr. WO 92/01047; Garrard etal. PCT-publikasjon nr. WO 92/09690; Fuchs etal. (1991) Bio/ Technology9:1370-1372; Hay etal. (1992) Hum AntibodHybridomas3:81 -85; Huse etal. (1989) Science246:1275-1281: McCafferty et al., Nature (1990) 348:552-554; Griffiths er al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins etal. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson etal. (1991) Nature352:624-628; Gram etal. (1992) PNAS89:3576-3580; Garrad etal. (1991) Bio/ Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; og Barbas etal. (1991) PNAS88:7978-7982.
Ved en foretrukket utførelsesform for å isolere human-antistoffer med høy affinitet og en lav frigjøringskonstant for hTNFa, blir et murint anti-hTNFa-antistoff som har høy affinitet og lav frigjøringshastighetskonstant for hTNFa { f. eks. MAK 195, hvis hybridoma har deponeringsnummer ECACC 87 050801) først anvendt for å velge human-tung- og lettkjede-sekvenser som har lignende bindingsaktivitet mot hTNFa, ved anvendelse av epitop-imprint eller styrt seleksjon, hvilke metoder er beskrevet i Hoogenboom etal., PCT-publikasjon nr. WO 93/06213. Antistoff-biblioteker anvendt ved denne metoden er fortrinnsvis scFv-biblioteker fremstilt og screenet som beskrevet i McCafferty etal., PCT-publikasjon nr. WO 92/01047, McCafferty ef al., sNature (1990) 348:552-554; og Griff iths etal., (1993) EMBOJ 12:725-734. scFv-antistoff-bibliotekene blir fortrinnsvis screenet ved anvendelse av rekombinant human TNFa som antigen.
Når de initielle human-VL- og VH-segmenter er valgt, blir "mix og match" forsøk, hvor forskjellige par av de initielt valgte VL- og VH-segmenter blir screenet for hTNFa-binding, utført for å velge foretrukne VL/VH-par- kombinasjoner. Videre, for ytterligere å forbedre affiniteten og/eller nedsette frigjøringshastighets-konstanten for hTNFa-binding, kan VL- og VH-segmenter av det (de) foretrukne VL/VH-par muteres tilfelding, fortrinnsvis i CDR3-regionen av VH og/eller VL, ved en fremgangsmåte analog med den in vivo somatiske mutasjonsprosess som er ansvarlig for affinitetsmodning av antistoffer under en naturlig immunrespons. Denne in vitro affinitetsmodning kan oppnås ved amplifisering av VH- og VL-regioner ved anvendelse av PCR-primere komplementære med henholdsvis VH 'GDR3 eller VL CDR3, hvilke primere er "spritet opp" med en tilfelding blanding av de fire nukleotidbaser i visse stillinger slik at de resulterende PCR-produkter koder for VH- og VL-segmenter i hvilke tilfeldige mutasjoner er innført i VH- og/eller VL-CDR3-regionene. Disse tilfeldig muterte VH- og VL-segmenter kan screenes påny for binding til hTNFa og sekvenser som oppviser høy affinitet og en lav frigjøringshastighet for hTNFa- binding kan velges.
Aminosyre-sekvensene i valgte antistoff-tung- og lettkjeder kan sammenlignes med kimlinje-tung- og lettkjede aminosyresekvenser. I tilfeller hvor visse rammeverk-rester i de valgte VL- og/eller VH-kjeder skiller seg fra kimlinje-konfigurasjonen { f. eks. som et resultat av somatisk mutasjon av immunoglobulin-genene anvendt for å fremstille fag-biblioteket), kan det være ønskelig å "tilbakemutere" de endrede rammeverk-rester i de valgte antistoffer til kimlinje-konfigurasjonen (dvs. endring av rammeverk-aminosyresekvenser i de valgte antistoffer slik at de blir de samme som kimlinje-rammeverk-aminosyre-sekvensene). Slik "tilbakemutering" (eller "kimlinjedannelse") av rammeverk-rester kan oppnås ved standard molekylærbiologiske metoder for innføring av spesifikke mutasjoner ( f. eks. sete-styrt mutagenese; PCR-mediet rmutagenese og lignende).
Etter screening og isolering av et anti-hTNFa-antistoff fra et rekombinant immunoglobulin-display-bibliotek, kan nukleinsyre som koder for det valgte antistoff gjenvinnes fra display-pakken ( f. eks. fra fag-genomet) og subklones i andre ekspresjonsvektorer ved standard rekombinante DNA-teknikker. Om ønsket kan nukleinsyren manipuleres videre for å danne andre antistoff-former ( f. eks. lenket til nukleinsyre som koder for ytterligere immunoglobulin-domener, så som ytterligere konstante regioner). For å uttrykke et rekombinant human-antistoff isolert ved screening av et kombinatorisk bibliotek blir DNA som koder for antistoffet klonet i en rekombinant ekspresjonsvektor og innført i pattedyrvetrsceller, som beskrevet mer detaljert i Seksjon II ovenfor.
IV. Farmasøytiske preparater oa farmasøytisk administrering
Antistoffene og antistoff delene beskrevet heri kan innføres i farmasøytiske preparater egnet for administrering til et individ. Typisk omfatter det farmasøytiske preparatet et antistoff eller en antistoffdel og en farmasøytisk godtagbar bærer. Som anvendt her omfatter "farmasøytisk godtagbar bærer" hvilke som helst og alle oppløsningsmidler, dispersjonsmedier, belegg, antibakterielle og antifungale midler, isotoniske og absorpsjons-forsinkende midler og lignende som er fysiologisk kompatible. Eksempler på farmasøytisk godtagbare bærere omfatter én eller flere av vann, saltvann, fosfat- bufret saltvann, dekstrose, glycerol, etanol og lignende, så vel som kombinasjoner derav. I mange tilfeller vil det være foretrukket å inkludere isotoniske midler, for eksempel sukkere, polyalkoholer så som mannitol, sorbitol eller natriumklorid i preparatet. Farmasøytisk godtagbare bærere kan videre omfatte mindre mengder av hjelpestoffer, så som fukte- eller emulgeringsmidler, konserveringsmidler eller buffere, som forbedrer lagringstiden eller effektiviteten av antistoffet eller antistoff-delen.
Preparatene kan være i en rekke former. Disse omfatter for eksempel flytende, halvfaste og faste doseformer, så som flytende løsninger [ f. eks. injiserbare og infuserbare løsninger), dispersjoner eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, liposomer og suppositorier. Den foretrukne form avhenger av den tilsiktede administreringsmetode og terapeutiske anvendelse. Typiske foretrukne preparater er i form av injiserbare eller infuserbare løsninger, så som preparater lignende de som anvendes for passiv immunisering av mennesker med andre antistoffer. Den foretrukne administreringsmetode er parenteral ( f. eks.
intravenøs, subkutan, intraperitoneal, intramuskulær). Ved en foretrukket utførelsesform blir antistoffet administrert ved intravenøs infusjon eller injeksjon. Ved en annen foretrukket utførelsesform blir antistoffet administrert ved intramuskulær eller subkutan injeksjon.
Terapeutiske preparater må typisk være sterile og stabile under fremstillings-og lagringsbetingelsene. Preparatet kan formuleres som en løsning, mikroemulsjon, dispersjon, liposom eller annen ordnet struktur egnet for høy medikamentkonsentrasjon. Sterile injiserbare løsninger kan fremstilles ved innføring av den aktive forbindelse (dvs. antistoff eller antistoffdel) i den nødvendige mengde i et passende oppløsningsmiddel med én eller en kombinasjon av bestanddelene angitt ovenfor, som nødvendig, fulgt av filtrersterilisering. Generelt blir dispersjoner fremstilt ved innføring av den aktive forbindelse i en sterile bærer som inneholder et basisk dispersjonsmedium og de nødvendige andre 'bestanddeler angitt ovenfor. I tilfellet av sterile pulvere for fremstilling av sterile injiserbare løsninger, er de foretrukne fremstillingsmetoder vakuumtørring og frysetørring som gir et pulver av den aktive bestanddel pluss hvilken som helst ytterligere ønsket bestanddel fra en tidligere sterilfiltrert løsning derav. Den i passende fluiditet av en løsning kan for eksempel opprettholdes ved anvendelse av et belegg så som lecitin, ved opprettholdelse av den ønskede partikkelstørrelse i tilfellet av dispersjon og ved anvendelse av overflateaktive midler. Forlenget absorpsjon av injiserbare preparater kan tilveiebringes ved å inkludere i preparatet et middel som forsinker absorpsjon, foreksempel monostearatsalter og gelatin.
Antistoffene og antistoffdelene kan administreres ved en rekke metoder kjent på området, selv om for mange terapeutisk anvendelser, den foretrukne vei/metode for administrering er intravenøs injeksjon eller infusjon. Som det vil forstås av fagfolk på området vil veien og/eller metoden for administrering variere avhengig av de ønskede resultater. Ved visse utførelsesformer kan den aktive forbindelse fremstilles med en bærer som vil beskytte forbindelsen mot rask frigjøring, så som et kontrollert frigjøringspreparat, omfattende implantater, transdermale plastere og mikroinnkapslede avleverings-systemer. Bio-nedbrytbare, biokompatible polymerer kan anvendes, så som etylenvinylacetat, polyanhydrider, polyglykolsyre, kollagen, polyortoestere og polymelkesyre. Mange metoder for fremstilling av slike preparater er patentert eller generelt kjent for fagfolk på området. Se f. eks. Sustainedand Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
Ved visse utførelsesformer kan et antistoff eiler en antistoffdel administreres oralt, for eksempel med et inert fortynningsmiddel eller en assimilerbar spiselig bærer. Forbindelsen (og om ønsket andre bestanddeler) kan også innføres i en hard eller myk gelatinkapsel, presses til tabletter eller innføres direkte i individets diett. For oral terapeutisk administrering kan forbindelsene blandes med tilsetningsmidler og anvendes i form av svelgbare tabletter, buckale tabletter, pastiller, kapsler, eliksirer, suspensjoner, siruper, kjeks og lignende. For å administrere en forbindelse ved en annen metode enn parenteral administrering, kan det være nødvendig å belegge forbindelsen med eller sam-administrere forbindelsen med, et materiale for å hindre inaktivering.
Supplerende aktive forbindelser kan også innføres i preparatene. Ved visse utførelsesformer formuleres et antistoff eller en antistoffdel sammen med og/eller administreres sammen med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler som er nyttige for behandling av lidelser hvor TNFa-aktivitet er skadelig. For eksempel kan et anti-hTNFa-antistoff eller en antistoffdel formuleres sammen med og/eller administreres sammen med ett eller flere ytterligere antistoffer som binder til andre mål ( f. eks. antistoffer som binder til andre cytokiner eller som binder til celleoverflate-molekyler), ett eller flere cytokiner, oppløselig TNFa-reseptor (se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 94/06476) og/eller ett eller flere kjemiske midler som hemmer hTNFa-produksjon eller -aktivitet (så som cyklohéksan-yliden-derivater som beskrevet i PCT-publikasjon nr. WO 93/19751). Videre kan ett eller flere antistoffer anvendes i kombinasjon med to eller flere av de foregående terapeutiske midler. Slike kombinasjonsterapier kan fordelaktig anvende lavere doser av de administrerte terapeutiske midler, og således unngå eventuelle toksisiteter eller komplikasjoner forbundet med de forskjellige monoterapiene.
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot revmatoid artritt med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: ikke-steroide anti-inflammatoriske medikament(er) (NSAID); cytokin-suppressive anti-inflammatoriske medikament(er) (CSAID); CDP-571/BAY-10-3356 (humanisert anti-TNFa- antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med.
(1996) Vol. 44, 235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF reseptor-lgG-fusjons-protein; Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.1/SB 210396 (ikke-reduserende primatisert anti-CD4-antistoff; IDEC/SmithKline; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1995) Vol. 38, S185); DAB 486-IL-2 og/eller DAB 389-IL-2 (IL-2 fusjonsproteiner; Seragen; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36,1223); Anti-Tac (humanisert anti-IL-2Ra; Protein Design Labs/Roche); IL-4 (anti-inflammatorisk cytokin; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; rekombinant IL-10, anti-inflammatorisk cytokin; DNAX/Schering); IL-4-; IL-10- og/eller IL-4-agonister ( f. eks. agonist-antistoffer); IL-1RA (IL-1 reseptor-antagonist; Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR (oppløselig TNF-bindingsprotein; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, rir. 9 (supplement), S284; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology '(i'995) Vol. 268. s. 37-42); R973401 (fosfodiesterase Type IV-inhibitor; se f. eks. • Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S282); MK-966 (COX-2-irihibitor; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), 581) ; lloprost (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), 582) ; methotrexat; thalidomid (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr.
9 (supplement), S282) og thalidomid-beslektede medikamenter ( f. eks. Celgen); leflunomid (anti-inflammatorisk og cytokin-inhibitor; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S131; Inflammation Research
(1996) Vol. 45, pp. 103-107); tranexaminsyre (inhibitor av plasminogen-aktivering; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S284); T-614 (cytokin-inhibitor; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S282); prostaglandin E1 (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S282); Tenidap (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S280); Naproxen (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament; se f. eks. Neuro Report (1996) Vol. 7, s. 1209-1213); Meloxicam (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Ibuprofen (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Piroxicam (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Diclofenac (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Indomethacin (ikke-steroid anti-inflammatorisk medikament); Sulfasalazin (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S281); Azatioprin (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S281); ICE-inhibitor (inhibitor av enzymet interleukin-1 [}-omdannende enzym); zap-70 og/eller lek- inhibitor (inhibitor av tyrosinkinasen zap-70 eller lek); VEGF-inhibitor og/eller VEGF-R-inhibitor (inhibitorer av vaskulær endotelcelle-vekstfaktor eller vaskulær endotelcelle-vekstfaktor-reseptor; inhibitorer av angiogenese); kortikosteroide anti-inflammatoriske medikamenter ( f. eks. SB203580); TNF-konvertase-inhibitorer; anti-IL-12-antistoffer; interleukin-11 (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S296); interleukin-13 (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S308); interleukin-17-inhibitorer (se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, nr. 9 (supplement), S120); gull; penicillamin; chloroquine; hydroksychloroquine; chlorambucil; cyklofosfamid; cyklosporin; total lymfoid bestråling; anti-thymocytt-globulin; anti-CD4-antistoffer; CD5-toksiner; oralt-administrerte peptider og kollagen; lobenzarit-dinatrium; cytokin-regulerende midler (CRA) HP228 og HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); ICAM-1-antisense-fosfortioat-oligodeoksynukleotider (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); oppløselig komplement-reseptor 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); prednison; orgotein; glykosaminoglykan-polysulfat; minocyklin; anti-IL2R-antistoffer; marine og botaniske lipider (fiske- og plantefrø-fettsyrer; se f. eks. DeLuca et al. (1995) Rheum. Dis. Clin. North Am. 21:759-777); auranofin; fenylbutazon; meclofenaminsyre; flufenaminsyre; intravenøst immunoglobulin; zileuton; mycofenolsyre (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamycin); amiprilose (therafectin); cladribine (2-klordeoksyadenosin); og azaribine.
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot inflammatorisk tarmsykdom med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: budenosid; epidermal vekstfaktor; kortikosteroider; cyklosporin, sulfasalazin; aminosalicylater; 6-merkaptopurin; azatioprin; metronidazol; lipoksygenase-inhibitorer; mesalamin; olsalazin; balsalazid; antioksydasjonsmidler; tromboksan-inhibitorer; IL-1-reseptor-antagonister; anti-IL-1P monoklonale antistoffer; anti-IL-6-monoklonale antistoffer; vekstfaktorer; elastase-inhibitorer; pyridinyl-imidazol-forbindelser; CDP-571/BAY-10-3356
(humanisert anti-TNFa-antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 3_Z, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF- reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffmann-LaRoche); interleukin-10 (SCH 52000; Schering Plough); IL-4; IL-10 og/eller IL-4-agonister ( f. eks. agonist-antistoffer); interleukin-11; glukuronid- eller dekstran-konjugerte prodrug for prednisolon, deksametason eller budesonid; ICAM-1-antisense-fosfortioat-oligodeoksynukleotider (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); oppløselig komplement-reseptor 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); langsomt-frigjørende mesalazin; methotrexat; antagonister for blodplate-aktiverende factor (PAF); ciprofloxacin; og lignokain.
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot multippel sklerose med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: kortikosteroider; prednisolon; metylprednisolon; azatioprin; cykiofosfamid;
cyklosporin; metotreksat; 4-aminopyridin; tizanidin; interferon-p"1a (Avonex™; Bidgen); interferon-p1b (Betaseron™; Chiron/Beriex); kopolymer 1 (Cop-1; Copaxon™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); hyperbarisk oksygen; intravenøst immunoglobulin; clabribin; CDP-571/BAY-10-3356 (humanisert, anti-TNFa- antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44,235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffmann-LaRoche); IL-10; IL-4; og IL-10 og/eller IL-4-agonister ( f. eks. agonist-antistoffer).
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot sepsis med hvilke et antistoff efler en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: hypertoniske saltvannsløsninger; antibiotika; intravenøst gamma-globulin; kontinuerlig hemoftltrering; karbapenemer ( f. eks. meropenem); antagonister for cytokiner så som TNFa, IL-1 p, IL-6 og/eller IL-8; CDP-571/BAY-10-3356 (humanisert anti-TNFa-antistoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF-reseptor-lgG-fusjons-protein; Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. invest. Med. (1996) Vol. 44,235A); 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffmann-LaRoche); Cytokin-regulerende midler (CRA) HP228 og HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); SK&F 107647 (lav-molekylært peptid; SmithKline Beecham); tetravalent guanylhydrazon CNI-1493 (Picower Institute); Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI; Chiron); PHP (kjemisk modifisert hemoglobin; APEX Bioscience); jem-chelatorer og chelater, omfattende dietylentriamin-pentaeddiksyre - jern(lll)-kompleks (DTPA jem(lll); Molichem Medicines); lisofyllin (syntetisk små-molekyl metylxantin; Cell Therapeutics, Inc.); PGG-Glucan (vandig oppløselig (51,3glukan; Alpha-Beta Technology); apolipoprotein A-1 rekonstituert med lipider; kirale hydroksamsyrer (syntetiske antibakterielle midler som hemmer lipid A-biosyntese); anti-endotoksin-antistoffer; E5531 (syntetisk lipid A-antagonist; Eisai America, Inc.); rBPl2i (rekombinant N-terminal-fragment av human-baktericid/permeabilitetsøkende protein); og syntetiske anti-endotoksinpeptider (SAEP; Biosynth Research Laboratories);
Ikke-begrensende eksempler på terapeutiske midler mot voksen respiratorisk lidelsessyndrom (ARDS) med hvilke et antistoff eller en antistoffdel kan kombineres, omfatter de følgende: anti-IL-8-antistoffer; surfaktant-erstatningsterapi; CDP-571/BAY-10-3356 (humanisert anti-TNFa- antjstoff; Celltech/Bayer); cA2 (kimært anti-TNFa-antistoff; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Immunex; se f. eks. Arthritis & Rheumatism
(1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A); og 55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF-reseptor-lgG-fusjonsprotein; Hoffmann-LaRoché).
Anvendelse av antistoffene eller antistoffdelene i kombinasjon med andre terapeutiske midler er ytterligere beskrevet i underavsnitt IV.
De farmasøytiske preparater kan omfatte en "terapeutisk effektiv mengde" eller en "profylaktisk effektiv mengde" av et antistoff eller en antistoffdel. En "terapeutisk effektiv mengde" angir en mengde som ved doser og i den nødvendige tidsperiode er effektiv for å oppnå det ønskede terapeutiske resultat. En terapeutisk effektiv mengde av antistoffet eller antistoffdelen kan variere i henhold til faktorer så som sykdomstilstanden, alder, kjønn og vekt til individet og evnen til antistoffet eller antistoffdelen til å utløse en ønsket respons hos individet. En terapeutisk effektiv mengde er også én hvor hvilke som helst toksiske eller skadelige effekter av antistoffet eller antistoff-delen blir oppveiet av de terapeutisk fordelaktige effekter. En "profylaktisk effektiv mengde" angir en mengde som ved doser og i nødvendige tidsperioder er effektiv for å oppnå det ønskede profylaktiske resultat. Typisk vil, ettersom en profylaktisk dose blir anvendt hos individer før eller på et tidlig stadium av en sykdom, den profylaktisk effektive mengde være mindre enn den terapeutisk effektive mengde.
Doseregimer kan reguleres for å gi den optimale ønskede respons { f. eks. en terapeutisk eller profylaktisk respons). For eksempel kan en enkel bolus administreres, flere oppdelte doser kan administreres overtid eller dosen kan reduseres eller økes proporsjonalt i henhold til hva som kreves etter den terapeutiske situasjon. Det er spesielt fordelaktig å formulere parenterale preparater i en doseenhetsform som letter administrering og jevnhet av dosen. Doseenhetsform som anvendt her betyr fysisk adskilte enheter egnet som enhetsdoser for pattedyret som skal behandles; idet hver enhet inneholder en forutbestemt mengde av aktiv forbindelse beregnet å gi den ønskede terapeutiske effekt sammen med den nødvendige farmasøytiske bærer. Spesifikasjonen av doseenhetsformer ifølge oppfinnelsen er diktert av og direkte avhengig av (a) de unike karakteristika av den aktive forbindelse og den spesielle terapeutiske eller profylaktiske effekt som skal oppnås og (b) de iboende begrensningene for formulering av en slik aktiv forbindelse for behandling av sensitivitet hos individer. En illustrasjon på en terapeutisk eller profylaktisk effektiv mengde av et antistoff eller en antistoffdel er 0,1 -20 mg/kg, mer foretrukket 1-10 mg/kg. Det skål bemerkes at doseverdier kan variere med typen og alvorlighetsgraden av lidelsen som skal lindres. Det vil videre forstås at for et hvilket som helst spesielt individ, bør det spesifikke doseregime reguleres overtid i henhold til det individuelle behov og den profesjonelle bedømmelse av personen som administrerer eller overvåker administreringen av preparatene.
V. Anvendelser av antistoffene
Gitt deres evne til å binde til hTNFa, kan anti-hTNFa-antistoffer eller deler derav, anvendes for å detektere hTNFa ( f. eks. i en biologisk prøve, så som serum eller plasma), ved anvendelse av et konvensjonelt immunoforsøk, så som "enzyme linked immunosorbent assays" (ELISA), et radioimmunoforsøk (RIA) eller vev-immunohistokjemi. Det tilveiebringes en metode for deteksjon av hTNFa i en biologisk prøve som omfatter å bringe en biologisk prøve i kontakt med et antistoff eller en antistoffdel og deteksjon av enten antistoffet (eller antistoffdelen) bundet til hTNFa eller ubundet antistoff (eller antistoffdel), for derved å detektere hTNFa i den biologiske prøven. Antistoffet er direkte eller indirekte merket med et detekterbart stoff for å lette deteksjon av bundet eller ubundet antistoff. Egnede detekterbare stoffer omfatter forskjellige enzymer, profetiske grupper, fluorescerende materialer, luminescerende materialer og radioaktive materialer. Eksempler på egnede enzymer omfatter pepperrot-peroksydase, alkalisk fosfatase, p-galaktosidase eller acetylcholinesterase; eksempler på egnede profetiske komplekser omfatter streptavidin/biotin og avidin/biotin; eksempler på egnede fluorescerende materialer omfatter umbelliferon, fluorescein, fluorescein-isotiocyanat, rhodamin, diklortriazinylamin-fluorescein, dansylklorid eller fykoerytrin; et eksempel på et luminescerende materiale omfatter luminol; og eksempler på egnede radioaktive materialer omfatter 12^l,1^ I, ^S eller ^H.
Alternativt til merking av antistoffet, kan hTNFa undersøkes i biologiske væsker ved et konkurranse-immunoforsøk ved anvendelse av rhTNFa-standarder merket med et detekterbart stoff og et umerket anti-hTNFa-antistoff. I dette forsøket, kombineres den biologiske prøven, de merkede rhTNFa-standarder og anti-hTNFa-antistoff, og mengden av merket rhTNFoc-standard bundet til det umerkede antistoff blir bestemt. Mengden av hTNFa i den biologiske prøve er omvendt proporsjonal med mengden av merket rhTNFa-standard bundet til anti-hTNFa-antistoffet.
Et D2E7-antistoff kan også anvendes for å detektere TNFa fra andre arter enn mennesker, spesielt TNFa fra primater ( f. eks. sjimpanse, bavian, marmosett, cynomolgus og rhesus), gris og mus, ettersom D2E7 kan binde til hver av disse TNFa (ytterligere beskrevet i Eksempel 4, underavsnitt E).
Antistoffene og antistoffdelene kan nøytralisere hTNFa-aktivitet både in
vitro og in vivo (se Eksempel 4). Videre kan minst noen av antistoffene, så som D2E7, nøytralisere TNFa-aktivitet fra andre arter. Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes for å hemme TNFa-aktivitet, f. eks. i en cellekultur inneholdende hTNFa, hos mennesker eller andre pattedyr som har TNFa med hvilke et antistoff kryssreagerer ( f. eks. sjimpanse, bavian, marmosett, cynomolgus og rhesus, gris eller mus). Ved én utførelse tilveiebringes en metode for hemning av TNFa-aktivitet som omfatter å bringe TNFa i kontakt med et antistoff eller antistoffdel, slik at TNFa-aktivitet blir hemmet. Fortrinnsvis er TNFa human-TNFa. For eksempel kan, i en cellekultur som inneholder eller mistenkes for å inneholde hTNFa, et antistoff eller en antistoffdel settes til kulturmediet for å hemme hTNFa-aktivitet i kulturen.
Det beskrives en metode for hemning av TNFa-aktivitet hos et individ som har en lidelse hvor TNFa- aktivitet er ugunstig. TNFa er implisert ved patofysiologien til en rekke forskjellige lidelser (se f. eks. Moeller, A., etal. (1990) Cytokine 2:162-169; U.S.- patent nr. 5,231,024 til Moeller etal. ; europeisk patent-publikasjon nr. 260 610 B1 av Moeller, A.). Metoder for hemming av TNFa-aktivitet hos et individ som har en slik lidelse, kan omfatte administering til individet av et antistoff eller en antistoffdel, slik at TNFa-aktivitet hos individet blir hemmet. Fortrinnsvis er TNFa human-TNFa og individet et menneske.
Alternativt kan individet være et pattedyr som uttrykker en TNFa med hvilken et antistoff kryssreagerer. Videre kan individet være et pattedyr i hvilket hTNFa er innført ( f. eks. ved administrering av hTNFa eller ved ekspresjon av et hTNFa-transgen). Et antistoff kan administreres til et menneske for terapeutiske formål '(ytterligere beskrevet nedenfor). Videre kan et antistoff administreres til et ikke-1 humant pattedyr som uttrykker en TNFa med hvilken antistoffet kryssreagerer ( heks. en primat, gris eller mus) for veterinærformål eller som en dyremodell av en
human sykdom. Når det gjelder sistnevnte, kan slike dyremodeller være nyttige i
for evaluering av den terapeutiske effektivitet til antistoffene ( f. eks. ved testing av doser og tidsforløp for administrering).
Som anvendt her skal betegnelsen "en lidelse hvor TNFa-aktivitet er ugunstig" omfatte sykdommer og andre lidelser hvor tilstedeværelse av TNFa hos et individ som har lidelsen er vist å være eller mistenkt å være enten ansvarlig for patofysiologien til lidelsen eller en faktor som bidrar til å forverre lidelsen. Følgelig er en lidelse hvor TNFa-aktivitet er ugunstig, en lidelse hvor hemning av TNFa-aktivitet er forventet å lindre symptomene og/eller utvikling av lidelsen. Slike lidelser kan for eksempel vises ved en økning i konsentrasjonen av TNFa i en biologisk væske hos et individ som har lidelsen ( f. eks. en økning i konsentrasjonen av TNFa i serum, plasma, leddvæske etc. hos individet), som for eksempel kan detekteres ved anvendelse av et anti-TNFa-antistoff som beskrevet ovenfor. Det er en rekke eksempler på lidelser hvor TNFa-aktivitet er skadelig. Anvendelse av antistoffene og antistoffdelene ved behandling av spesifikke lidelser er beskrevet mer omfattende nedenfor:
A. Sepsis
Tumor-nekrosefaktor har en etablert rolle i patofysiologien til sepsis, med biologiske effekter som omfatter hypotensjon, myokardial suppresjon, vaskulær lekkasje-syndrom, organ-nekrose, stimulering av frigjøring av toksiske sekundære mediatorer og aktivering av størkningskaskaden (se f. eks. Moeller, A., etal.
(1990) Cytokine 2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moeller et al. ; europeisk patent-publikasjon nr. 260 610 B1 av Moeller, A.; Tracey, K.J. og Cerami, A.
(1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503; Russell, D og Thompson, R.C. (1993) Curr. Opin. Biotech. 4:714-721). Følgelig kan human-antistoffene og antistoffdelene anvendes for behandling av sepsis i hvilken som helst av dens kliniske former, omfattende septisk sjokk, endotoksisk sjokk, gram-negativ sepsis og toksisk sjokk-syndrom.
For behandling av sepsis kan videre et anti-hTNFa-antistoff eller antistoffdel administreres sammen med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler som ytterligere kan lindre sepsis, så som en interleukin-1-inhibitor (så som de beskrevet i PCT-publikasjonene nr. WO 92/16221 og WO 92/17583), cytokinet interleukin-6 (se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 93/11793) eller en antagonist for blodplate-aktiverende faktor (se f. eks. europeisk patentsøknad, publikasjon nr. EP 374 510). Andre kombinasjonsterapier for behandling av sepsis er ytterligere beskrevet i underavsnitt III.
Videre, ved en foretrukket utførelsesform, blir et anti-TNFa-antistoff eller antistoffdel administrert til et menneske innen en undergruppe av sepsis-pasienter som har en serum- eller plasmakonsentrasjon av IL-6 over 500 pg/ml og mer foretrukket 1000 pg/ml ved tidspunktet for behandling (se PCT-publikasjon nr. WO 95/20978 av Daum, L, etal.).
B. Autoimmune sykdommer
Tumornekrosefaktor er implisert i patofysiologien til en rekke autoimmune sykdommer. For eksempel har TNFa vært implisert i aktivering av vev-inflammasjon og forårsaking av ledd-destruksjon ved revmatoid artritt (se f. eks. Moeller, A., etal. (1990) Cytokine2:162-169; U.S.-patent nr. 5,231,024 til Moeller et al. ; europeisk patent-publikasjon nr. 260 610 B1 av Moeller, A.; Tracey og Cerami, supra; Arend, W.P. og Dayer, J-M. (1995) Arth. Rheum. 38:151-160; Fava, R.A., etal. (1993) Clin. Exp. Immunol. 94:261-266). TNFa har også vært implisert i å fremme død av øyceller og i mediering av insulinresistens ved diabetes (se f. eks. Tracey og Cerami, supra; PCT-publikasjon nr. WO 94/08609). TNFa har også vært implisert i mediering av cytotoksisitet til oligodendrocytter og induksjon av inflammatorisk plakk ved multippel sklerose (se f. eks. Tracey og Cerami, supra). Kimære og humaniserte murine anti-hTNFa-antistoffer har vært underkastet klinisk testing for behandling av revmatoid artritt (se f. eks. Elliott, M.J., etal. (1994) Lancef344:1125-1127: Elliot, M.J., etal. (1994) Lancet 344:1105-1110; Rankin, E.C., etal. (1995) Br. J. Rheumatol. 34:334-342).
Human-antistoffene og antistoffdelene kan anvendes for å behandle autoimmune sykdommer, spesielt de som er forbundet med inflammasjon, omfattende revmatoid artritt, revmatoid spondylitt, osteoartritt og giktisk artritt, allergi, multippel sklerose, autoimmun diabetes, autoimmun uveitt og nefrotisk 'syndrom. Typisk blir antistoffet eller antistoffdelen administrert systemisk, selv om lokal administrering av antistoffet eller antistoffdelen på stedet for inflammasjonen kåri være fordelaktig for visse lidelser ( f. eks. lokal administrering i leddene ved revmatoid artritt eller topisk påføring ved diabetiske ulcere, alene eller i kombinasjon med et cykloheksanyliden-derivat som beskrevet i PCT-publikasjon nr. WO 93/19751). Et antistoff eller en antistoffdel kan også administreres med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler som er nyttige ved behandling av autoimmune sykdommer, som ytterligere beskrevet i underavsnitt III.
C. Infeksiøse sykdommer
Tumornekrosefaktor har vært implisert i mediering av biologiske effekter observert ved en rekke infeksiøse sykdommer. For eksempel har TNFa vært implisert i mediering av hjemeinflammasjon og kapillær trombose og infarkt ved malaria. TNFa har også vært implisert i mediering av hjemeinflammasjon, idet den fremkaller nedbrytning av blod-hjernebarrieren, utløsning av septisk sjokk-. syndrom og aktivering av venøst infarkt ved meningitt. TNFa har også vært implisert i fremkalling av kakeksi, stimulering av viral proliferasjon og mediering av sentralnervesystemskade ved ervervet immunsvikt syndrom (AIDS). Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes ved behandling av infeksiøse sykdommer, omfattende bakteriell meningitt (se f. eks. europeisk patentsøknad, publikasjon nr. EP 585 705), cerebral malaria, AIDS og AIDS-relatert kompleks (ARC) (se f. eks. europeisk patentsøknad, publikasjon nr. EP 230 574), så vel som cytomegalovirus-infeksjon etter transplantasjon (se f. eks. Fietze, E., etal. (1994) Transplantation 58:675-680). Antistoffene og antistoffdelene ifølge oppfinnelsen kan også anvendes for å lindre symptomer forbundet med infeksiøse sykdommer, innbefattet feber og myalgier på grunn av infeksjon (så som influensa) og kakeksi etter infeksjon ( f. eks. etter AIDS eller ARC).
D. Transplantasjon
Tumornekrosefaktor har vært implisert som en nøkkel-mediator ved «allograft»-awisning og «graft versus host» sykdom (GVHD) og ved mediering av en ugunstig reaksjon som har vært observert når rotte-antistoff OKT3, rettet mot T-celle-reseptor-CD3-kompleks, blir anvendt for å hemme avvisning av nyre-transplantater (se f. eks. Eason, J.D., etal. (1995) Transplantation59:300-305; Suthanthiran, M. og Strom, T.B. (1994) New Engl. J. Med. 331:365-375). Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes for å hemme transplantat-awisning, omfattende avvisning av «allografter» og «xenografter» og for å hemme GVHD. Selv om antistoffet eller antistoffdelen kan anvendes alene, ér det mer foretrukket at det blir anvendt i kombinasjon med ett eller flere andre midler som hemmer immunrespons mot «allograftet» eller hemmer GVHD. For eksempel blir i én utførelsesform, et antistoff eller en antistoffdel, anvendt i kombinasjon med OKT3 for å hemme OKT3-fremkalte reaksjoner. Ved en annen utførelsesform blir et antistoff eller en antistoffdel anvendt i kombinasjon med ett eller flere antistoffer rettet mot andre mål som er involvert i regulering av immun-responser, så som celleoverflate-molekylene CD25 (interleukin-2-reseptor-a), CD11a (LFA-1), CD54 (ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1) og/eller CD86 (B7-2). Ved enda en annen utførelsesform blir et antistoff eller en antistoffdel anvendt i kombinasjon med ett eller flere generelle immunosuppressive midler, så som cyklosporin A eller FK506.
E. Ondartet sykdom
Tumornekrosefaktor har vært implisert i fremkalling av kakeksi, stimulering av tumorvekst, forsterkning av metastatisk potensiale og mediering av cytotoksisitet ved ondartede sykdommer. Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes ved behandling av ondartede sykdommer, for å hemme tumorvekst eller metastase og/eller for å bedre kakeksi etter en ondartet sykdom. Antistoffet eller antistoffdelen kan administreres systemisk eller lokalt til tumor-stedet.
F. Pulmonale lidelser
Tumornekrosefaktor har vært implisert i patofysiologien til voksen respiratorisk lidelsessyndrom (ARDS), som omfatter stimulering av leukocytt-endotel-aktivering, dirigering av cytotoksisitet til pneumocytter og fremkalling av vaskulært lekkasje-syndrom. Følgelig kan antistoffene og antistoffdelene anvendes for å behandle forskjellige pulmonale lidelser, voksen respiratorisk lidelsessyndrom (se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 91/04054), sjokk-lunge, kronisk pulmonal inflammatorisk sykdom, pulmonal sarkoidose, pulmonal fibrose og silikose. Antistoffet eller antistoffdelen kan administreres systemisk eller lokalt til lunge-overflaten, for eksempel som en aerosol. Et antistoff eller en antistoffdel kan også administreres med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler nyttige
j
ved behandling av pulmonale lidelser, som ytterligere beskrevet i underavsnitt III.
G. Intestinale lidelser
Tumornekrosefaktor har vært implisert i patofysiologien til inflammatoriske tarmlidelser (se f. eks. Tracy, K.J., etal. (1986) Science 234:470-474; Sun, X-M., etal. (1988) J. Clin. Invest. 81:1328-1331; MacDonald, T.T., etal. (1990) Clin. Exp. Immunol. 81:301-305). Kimære murine anti-hTNFa-antistoff er har vært underkastet klinisk testing for behandling av Crohn's sykdom (van Dullemen, H.M., etal. (1995) Gastroenteroloav 109:129-135). Human-antistoffene og antistoffdelene kan også anvendes for å behandle intestinale lidelser, så som idiopatisk inflammatorisk tarmsykdom, som omfatter to syndromer, Crohn's sykdom og ulcerativ kolitt. Et antistoff eller en antistoffdel kan også administreres med ett eller flere ytterligere terapeutiske midler nyttige ved behandling av intestinale lidelser, som ytterligere beskrevet i underavsnitt III.
H. Hjertelidelser
Antistoffene og antistoffdelene kan også anvendes for å behandle forskjellige hjertelidelser, omfattende ischemi i hjertet (se f. eks. europeisk patentsøknad, publikasjon nr. EP 453 898) og hjertesvikt (svakhet ved hjertemuskelen)(se f. eks. PCT-publikasjon nr. WO 94/20139).
I. Andre
Antistoffene og antistoffdelene kan også anvendes for å behandle forskjellige andre lidelser hvor TNFa-aktivitet er ugunstig. Eksempler på andre sykdommer og lidelser hvor TNFa-aktivitet har vært implisert i patofysiologien og således kan behandles ved anvendelse av et antistoff eller antistoff-del ifølge foreliggende oppfinnelse, omfatter inflammatoriske benlidelser og ben-resorpsjonssykdom (se f. eks. Bertolini, D.R., etal. (1986) Nature319:516-518:
Konig, A., etal. (1988) J. Bone Miner. Res. 3:621-627; Lemer, U.H. og Ohlin, A. ■' '(f99d) J. Bone Miner. Res. 8:147-155; og Shankar, G. og Stem, P.H. (1993) Bone ■1.4:871-876). hepatitt, omfattende alkoholisk hepatitt (se f. eks. McClain, C.J. og Cohén, D.A. (1989) Hepatology 9:349-351; Felver, M.E., et al. (1990) Alcohol.
Clin. Exp. Res. 14:255-259; og Hansen, J., et al. (1994) Hepatology20:461 -474), i
virål hepatitt (Sheron, N., etal. (1991) J. Hepatol. 12:241-245; og Hussain, M.J., et al. (1994) J. Clin. Pathol. 47:1112-1115) og fulminant hepatitt; koaguleringsforstyrrelser (se f. eks. van der Poll, T., etal. (1990) N. Engl. J. Med. 322:1622-1627; og van der Poll, T., etal. (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367:55-60), forbrenning (se f. eks. Giroir, B.P., etal. (1994) Am. J. Physiol. 267:H118-124; og Liu, X.S., etal. (1994) Burns20:40-44), reperfusjons-skade (se f. eks. Scales, W.E., etal. (1994) Am. J. Physiol. 267.G1122-1127; Serrick, C, etal. (1994) Transplantation58:1158-1162; og Yao, Y.M., etal. (1995) Resuscitation29:157-168), keloid-dannelse (se f. eks. McCauley, R.L., etal. (1992) J. Clin. Immunol. 12:300-308). arrvevsdannelse; pyreksi; periodontal sykdom; obesitet og strålingstoksisitet.
Foreliggende oppfinnelse illustreres videre av de følgende eksempler.
EKSEMPEL 1: Kinetisk analyse av binding av human-antistoffer til hTNFa
Sanntids bindingsinteraksjoner mellom ligand (biotinylert rekombinant human-TNFa (rhTNFa) immobilisert på en biosensor-matriks) og analytt (antistoffer i løsning) ble målt ved overflate-plasmon-resonans (SPR) ved anvendelse av BIAcore-systemét (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Systemet anvender de optiske egenskapene til SPR til å detektere endringer i protein-konsentrasjoner i en dekstran-biosensor-matriks. Proteiner blir kovalent bundet til dekstran-matriksen i kjente konsentrasjoner. Antistoffer blir injisert gjennom dekstran-matriksen og spesifikk binding mellom injiserte antistoffer og immobilisert ligand resulterer i en øket matriks-proteinkonsentrasjon og resulterende endring i SPR-signalet. Disse endringer i SPR-signal blir registrert som resonans-enheter (RU) og blir vist i forhold til tiden på y-aksen av et sensorgram.
For å lette immobilisering av biotinylert rhTNFa på biosensor-matriksen, blir streptavidin kovalent bundet via frie amingrupper til dekstran-matriksen ved først å aktivere karboksylgrupper på matriksen med 100 mM N-hydroksysuccinimid (NHS) og 400 mM N-etyl-N'-(3-dietylaminopropyl)-karbodiimid-hydroklorid (EDC). Deretter blir streptavidin injisert i den aktiverte matriks. 35 mikroliter streptavidin (25 mg/ml), fortynnet i natriumacetat, pH 4,5, blir injisert gjennom den aktiverte biosensor og frie aminer på proteinet blir bundet direkte til de aktiverte karboksylgrupper. Uomsatte matriks-EDC-estere blir deaktivert ved injeksjon av 1 M etanolamin. Streptavidin-koblede biosensor-chips er også kommersielt tilgjengelige (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ).
Biotinylert rhTNFa ble fremstilt ved først å oppløse 5,0 mg biotin (D-biotinyl-e-aminokapronsyre-N-hydroksysuccinimidester; Boehringer Mannheim Kat. Nr. 1008 960) i 500 uJ dimetylsulfoksyd for å fremstille en 10 mg/ml løsning. 10 mikroliter biotin ble tilsatt pr. ml rhTNFa (i 2,65 mg/ml) for et 2:1 molforhold av biotin til rhTNFa. Reaksjonsblandingen ble forsiktig blandet og inkubert i to timer ved romtemperatur i mørke. En PD-10 kolonne, Sephadex G-25M (Pharmacia Katalog Nr. 17-0851-01) ble ekvilibrert med 25 ml kald PBS og lastet med 2 ml rhTNFa-biotin pr. kolonne. Kolonnen ble eluert med 10x1 ml kald PBS. Fraksjoner ble oppsamlet og lest ved OD280 (1,0 OD = 1,25 mg/ml). De passende fraksjoner ble samlet og lagret ved -80° C før anvendelse. Biotinylert rhTNFa er også kommersielt tilgjengelig (R & D Systems Katalog Nr. FTA00, Minneapolis, MN).
Biotinylert rhTNFa som skal immobiliseres på matriksen via streptavidin ble fortynnet i PBS løpende buffer (Gibco Kat. No. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) supplert med 0,05% (BIAcore) surfaktant P20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). For å bestemme kapasiteten til rhTNFa-spesifikke antistoffer til å binde til immobilisert rhTNFa, ble et bindings-forsøk utført som følger. Alikvoter av biotinylert rhTNFa (25 nM; 10 ul alikvoter) ble injisert gjennom den streptavidin-koblede dekstranmatriks med en strømningshastighet på 5 jil/min. Før injeksjon av proteinet og umiddelbart etterpå, ble bare PBS-buffer strømmet gjennom hver strømningscelle. Netto-differansen i signal mellom baselinje og omtrent 30 sek. etter fullførelse av biotinylert rhTNFa-injeksjon ble tatt for å representere bindingsverdien (omtrent 500 RU). Direkte rhTNFoc-spesifikk antistoffbinding til immobilisert biotinylert 'rHTNFa ble målt. Antistoffer (20 ug/ml) ble fortynnet i PBS løpende buffer og 25
' m| aliquoter ble injisert gjennom de immobiliserte proteinmatrikser med en strømningshastighet på 5 uJ/min. Før injeksjon av antistoff og umiddelbart etter, ble bare PBS-buffer strømmet gjennom hver strømningscelle. Netto-differansen i baselinje-signal og signal etter fullførelse av antistoffinjeksjon ble antatt å representere bindingsverdien av den spesielle prøven. Biosensor-matrikser ble regenerert ved anvendelse av 100 mM HCI før injeksjon av neste prøve. For å bestemme frigjøringshastigheten (K0ff), bindingshastigheten (Kon), assosierings-hastighets- (Ka) og dissosieringshastighet- (Kd) konstanter, ble BIAcore kinetisk evalueringssoftware (versjon 2,1) anvendt.
Representative resultater av D2E7 (lgG4 full-lengde antistoff) som binder til biotinylert rhTNFa, sammenlignet med mus mAb MAK 195 (F(ab')2 fragment), er vist nedenfor i Tabell 1.
Ved en andre serie eksperimenter ble de molekylære kinetiske interaksjoner mellom en IgGl full-lengde-form av D2E7 og biotinylert rhTNF kvantitativt analysert ved anvendelse av BIAcore teknologi, som beskrevet ovenfor og kinetiske hastighetskonstanter ble avledet, som oppsummert i
Tabellene 2, 3 og 4.
Dissosiasjons- og assosiasjonshastighetskonstanter ble beregnet ved analysering av dissosiasjons- og assosiasjonsregioner av sensorgrammene ved BIA-analyse-programvare. Konvensjonell kjemisk reaksjonskinetikk ble antatt for interaksjon mellom D2E7 og biotinylert rhTNF-molekyl: en nullte orden dissosiasjon og første orden assosiasjonskinetikk. For analysen ble interaksjon bare mellom én arm av det bivalente D2E7-antistoff og én enhet av det trimere biotinylerte rfiTNF tatt i betraktning ved valg av molekylmodeller for analyse av de kinetiske data. Tre uavhengige eksperimenter ble utført og resultatene ble analysert separat. Gjennomsnittlig åpenbar dissosiasjonshastighetskonstant (kd) av interaksjonen mellom D2E7 og biotinylert rhTNF var 8,81 ± 1,06 x 10"5 s"<1> og gjennomsnittlig åpenbar assosiasjonshastighets- konstant, ka var 1,91 ±1,26 x 105 M"<1> s"<1>. Den åpenbare reelle dissosiasjons- konstant (Kd) ble deretter beregnet ved formelen: Kd= kd/ ka. Således var gjenomsnittlig Kd av D2E7 antistoff for rhTNF avledet fra kinetiske parametere 6,09 ± 3,42 x 10"<10> M. Mindre differanser i de kinetiske verdier for lgG1-formen av D2E7 (presentert i
Tabellene 2, 3 og 4) og lgG4-formen av D2E7 (presentert i Tabell 1 og i Eksemplene 2 og 3) er ikke antatt å være riktige differanser som er et resultat av tilstedeværelse av enten lgG1 eller lgG4 konstante regioner, men er heller antatt å skyldes å skyldes mer nøyaktige antistoff-konsentrasjons-målinger anvendt for den lgG1 kinetiske analyse. Følgelig er de kinetiske verdier for lgG1 -formen av D2E7 presentert her antatt å være de mest nøyaktige kinetiske parametere for D2E7-antistoffet.
EKSEMPEL 2: Alanin-scanning-mutagenese av D2E7 CDR3-domener
En serie av enkle alaninmutasjoner bie innført ved standardmetoder i CDR3-domenet av D2E7 VL- og D2E7 VH-regioner. Lettkjedemutasjoner er illustrert i Figur 1B (LD2E7<*>.A1, LD2E7<*.>A3, LD2E7<*>.A4, LD2E7<*>.A5, LD2E7<*.>A7 og LD2E7<*.>A8, som har en alaninmutasjon i henholdsvis stilling 1, 3,4, 5, 7 eller 8, av D2E7 VL-CDR3-domenet). Tungkjedemutasjoner er illustrert i Figur 2B (HD2E7<*>.A1, HD2E7<*.>A2, HD2E7<*.>A3, HD2E7<*.>A4, HD2E7<*.>A5, HD2E7<*>.A6, HD2E7<*>.A7, HD2E7<*>.A8 og HD2E7<*>.A9, som har en alaninmutasjon i henholdsvis stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11, av D2E7 VH CDR3-domenet). Kinetikken av rhTNFa-interaksjon med et antistoff sammensatt av villtype D2E7 VL og VH ble sammenlignet med den til antistoffer sammensatt av 1) en villtype D2E7 VL paret med en alanin-substituert D2E7 VH; 2) en villtype D2E7 VH paret med en alaninsubstituert D2E7 VL; eller 3) en alaninsubstituert D2E7 VL paret med en alaninsubstituert D2E7 VH. Alle antistoffer ble testet som full-lengde, lgG4-molekyler.
Kinetikken til interaksjonen av antistoffer med rhTNFa ble bestemt ved overflate-plasmon-resonans som beskrevet i Eksempel 1. K0ff-hastigheter for de forskjellige VHA/L-par er oppsummert nedenfor i Tabell 5:
Disse resultater demonstrerer at hoveddelen av stillingene av CDR3-domener i D2E7 VL-regionen og VH-regionen er mottagelige for substitusjon med en enkel alaninrest. Substitusjon av et enkelt alanin i stilling 1, 4, 5 eller 7 av D2E7 VL-CDR3-domenet eller i stilling 2, 5, 6, 8, 9 eller 10 av D2E7 VH-CDR3-domenet påvirker ikke i særlig grad frigjøringshastigheten av hTNFa-binding sammenlignet med vill-type parentalt D2E7 antistoff. Substitusjon av alanin i stilling 8 av D2E7 VL-CDR3 eller i stilling 3 av D2E7 VH-CDR3 gir en 4-ganger raskere K0ff og en alaninsubstitusjon i stilling 4 eller 11 av D2E7 VH-CDR3 gir en
8-ganger raskere K0ff, hvilket indikerer at disse stillinger er mer kritiske for binding til hTNFa. Imidlertid resulterer fortsatt en enkel alaninsubstitusjon i stilling 1,4, 5, 7 eller 8 av D2E7 VL-CDR3 domenet eller i stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11 av D2E7 VH-CDR3-domenet i et anti-hTNFa-antistoff som har en K0ff på 1 x 10'3 sek-<1> eller mindre.
EKSEMPEL 3: Bindingsanalyse av D2E7-beslektede antistoffer
En serie antistoffer beslektet i sekvens med D2E7 ble analysert for deres binding til rhTNFa, sammenlignet med D2E7, ved overflate-plasmon-resonans som beskrevet i Eksempel 1. Aminosyresekvensene av de testede VL-regioner er vist i Figurene 1A og 1B. Aminosyresekvensene av de testede VH-regioner er vist i Figurene 2A og 2B. K0ff-hastigheter for forskjellige VhWL-par (i det angitte format, enten som et full-lengde IgGT- eller lgG4-antistoff eller som en scFv) er oppsummert nedenfor i Tabell 6:
De langsomme f rigjøringshastigheter (dvs. K0ff < 1 x 10"<4> sek-<1>) for f ull-lengde-antistoffer (dvs. IgG-format) som har en VL valgt fra D2E7, LOE7, LOE7.T og LOE7.A, som har enten treonin eller alanin i stilling 9, indikerer at stilling 9 i D2E7 VL-CDR3 kan være okkupert av hvilken som helst av disse to rester uten i særlig grad å påvirke K0ff. Følgelig omfatter et konsensus-motiv for D2E7 VL-CDR3 aminosyresekvensen: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEKV ID NR: 3). Videre indikerer de langsomme f rigjøringshastigheter (dvs. K0ff < 1 x 10"<4> sek-<1>) for antistoffer som har en VH valgt fra D2E7, VH1-D2.N og VH1-D2.Y, som har enten tyrosin eller asparagin i stilling 12, at stilling 12 av D2E7 VH-CDR3 kan være okkupert av hvilken som helst av disse to rester uten i særlig grad å påvirke K0ff. Følgelig omfatter et konsensus-motiv for D2E7 VH-CDR3 aminosyresekvensen:
V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEKV ID NR: 4).
Resultatene vist i Tabell 6 demonstrerer at i scFv format oppviser antistoffer inneholdende 2SD4 VL- eller VH-CDR3-regionen en raskere K0ff (dvs. K0ff > 1 x 10"<3> sek-<1>) sammenlignet med antistoffer inneholdende D2E7 VL- eller VH-CDR3-regionen. I VL-CDR3 skiller 2SD4 seg fra D2E7 i stillingene 2, 5 og 9. Som beskrevet ovenfor, kan imidlertid stilling 9 være okkupert av Ala (som i 2SD4) eller Thr (som i D2E7) uten i særlig grad å påvirke K0ff. Ved sammenligning av 2SD4 og D2E7, kan således stillingene 2 og 5 i D2E7 VL-CDR3, begge argininer, identifiseres som kritiske for assosieringen av antistoffet med hTNFa. Disse restene kan være direkte involvert som kontakt-rester på antistoffbindingssetet eller kan kritisk bidra til å opprettholde stillas-arkitekturen til antistoffmolekylet i denne regionen. Når det gjelder betydningen av stilling 2, akselererer erstatning av Arg (i LOE7, som har samme VL-CDR3 som D2E7) med Lys (i EP B12) f rigjøringshastigheten med en faktor på to. Når det gjelder betydningen av stilling 5, akselererer også erstatning av Arg (i D2E7) med Ala (i LD2E7<*.>A5), som beskrevet i Eksempel 2 frigjøringshastigheten to ganger. Videre, uten Arg i begge stillinger 2 og 5 (i 2SD4), blir frigjøringshastigheten fem ganger raskere. Imidlertid skal det bemerkes at selv om stilling 5 er viktig for forbedret binding til hTNFa, kan en endring i denne stilling oppheves ved endringer i andre stillinger, som det sees i VLLOE4, VLLOH1 eller VL0.1 H8.
I VH-CDR3, skilller 2SD4 seg fra D2E7 i stillingene 1, 7 og 12. Som angitt ovenfor, kan imidlertid stilling 12 være okkupert av Asn (som i 2SD4) eller Tyr (som i D2E7) uten i særlig grad å påvirke K0ff. Ved sammenligning av 2SD4 og D2E7, kan således stillingene 1 og 7 i D2E7 VH-CDR3 identifiseres som kritiske for binding til hTNFa. Som beskrevet ovenfor kan disse rester være direkte involvert som kontakt-rester på antistoffbindingssetet eller kritisk bidra til å opprettholde stillas-arkitekturen til antistoffmolekylet i denne region. Begge stillinger er viktige for binding til hTNFa, ettersom når 3C-H2 VH-CDR3 (som har en valin til alanin endring i stilling 1 i forhold til D2E7 VH-CDR3) blir anvendt, har scFv en 3 ganger raskere frigjøringshastighet enn når D2E7 VH-CDR3 blir anvendt, men denne frigjøringshastigheten er enda fire ganger langsommere enn når 2SD4 VH-CDR3 blir anvendt (som har endringer i begge stillingene 1 og 7 i forhold til D2E7 VH-CDR3).
EKSEMPEL 4: Funksjonell aktivitet av D2E7
For å undersøke den funksjonelle aktiviteten til D2E7 ble antistoffet anvendt i flere forsøk som måler evnen til antistoffet til å hemme hTNFa-aktivitet, enten in vitro eller in vivo.
A. Nøytralisering av TNFa- fremkalt cytotoksisitet i L929- celler
Human-rekombinant TNFa (rhTNFa) forårsaker celle-cytotoksisitet hos murine L929-celler etter en inkuberingsperiode på 18-24 timer. Human-anti-hTNFa-antistoffer ble bedømt i L929-forsøk ved medinkubering av antistoffer med rhTNFa og cellene som følger. En 96-brønn mikrotiterplate inneholdende 100 u.l ariti-hTNFa Ab ble serielt fortynnet 1/3 nedover platen i duplikater ved
I
anvendelse av RPMI-medium inneholdende 10% føtalt bovint serum (FBS).
50 mikroliter rhTNFa ble tilsatt for en endelig konsentrasjon på 500 pg/ml i hver prøve-brønn. Platene ble deretter inkubert i 30 minutter ved romtemperatur. Deretter ble 50 uJ TNFa-sensitive L929 muse-fibroblastceller tilsatt for en endelig konsentrasjon på 5 x 10<4> celler pr. brønn, omfattende 1 mg/ml Actinomycin-D. Kontroller omfattet medium pluss celler og rhTNFa pluss celler. Disse kontroller og en TNFa-standardkurve, fra 2 ng/ml til 8,2 pg/ml, ble anvendt for å bestemme kvaliteten av forsøket og gi et nøytralitetsperspektiv. Platene ble deretter inkubert natten over (18-24 timer) ved 37° C i 5% CCtø.
Ett hundre mikroliter av medium ble fjernet fra hver brønn og 50 u,l
5 mg/ml 3,(4,4-dimetyltiazol-2-yl)2,5-difenyl-tetrazolium-bromid (MTT; kommersielt tilgjengelig fra Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) i PBS ble tilsatt. Platene ble deretter inkubert i 4 timer ved 37° C. Femti mikroliter 20% natriumdodecylsulfat (SDS) ble deretter satt til hver brønn, og platene ble inkubert natten over ved 37° C. Den optiske densitet ved 570/630 nm ble målt, kurver ble plottet for hver prøve og IC50 ble bestemt ved standard metoder.
Representative resultater for human-antistoffer som har forskjellige VL- og VH-par, sammenlignet med det murine MAK 195 mAb, er vist i Figur 3 og i Tabell 7 nedenfor.
Resultatene i Figur 3 og Tabell 7 demonstrerer at D2E7 human-antr-hTNFa-antistoff og forskjellige D2E7-beslektede antistoffer, nøytraliserer TNFa-fremkalt L929-cytotoksisitet med en kapasitet omtrent ekvivalent med den til murint anti-hTNFa mAb MAK 195.
Ved en annen serie eksperimenter ble evnen til IgGl-formen av D2E7 til å nøytralisere TNFa-fremkalt L929-cytotoksisitet undersøkt som beskrevet ovenfor. Resultatene fra tre uavhengige eksperimenter og gjennomsnittet av disse er oppsummert nedenfor i Tabell 8:
Denne serie av eksperimenter bekreftet at D2E7, i full-lengde lgG1-form, nøytraliserer TNFa-fremkalt L929-cytotoksisitet med en gjennomsnittlig IC50 [M] på 1,25 ±0,01 x10-<1>°.
B. Hemning av TNFa- bindina til TNFa- reseptorer på U- 937- celler
Evnen til human-anti-hTNFa-antistoffer til å hemme binding av hTNFa til hTNFa-reseptorer på overflaten av celler ble undersøkt ved anvendelse av U-937-
célle-linje (ATCC No. CRL1593), en human histiocytisk cellelinje som uttrykker Wf NFa-reseptorer. U-937-celler ble dyrket i RPMI 1640-medium supplert med ' t0% føtalt bovint serum (Hyclone A-1111, Hyclone Laboratories, Logan, UT), L-giufåmin (4 nM), HEPES-buffer-løsning (10 mM), penicillin (100 (ig/ml) og streptomycin (100 mg/ml). For å undersøke aktiviteten til full-lengde IgG-antistoffer, ble U-937-celler preinkubert med PBS supplert med 1 mg/ml human IgG (Sigma I-4506, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) i 45 minutter på is og deretter ble cellene vasket tre ganger med bindingsbuffer. For reseptor-bindingsforsøk ble U-937-celler (5 x 10<6> celler/brønn) inkubert i en bindingsbuffer (PBS supplert med 0,2% bovint serumalbumin) i 96-brønn mikrotiter-plater (Costar3799, CostarCorp., Cambridge, MA) sammen med <125>l-merket rhTNFa (3 x 10-<1>0 M; 25 uCi/ml; anskaffet fra NEN Research Products, Wilmington, DE), med eller uten anti-hTNFa-antistoffer, i et totalt volum på 0,2 ml. Platene ble inkubert på is i 1,5 timer. Deretter ble 75 fil av hver prøve overført til 1,0 ml test-rør (Sarstedt 72,700, Sarstedt Corp., Princeton, NJ) inneholdende dibutylftalat (Sigma D-2270, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) og dinonylftalat (ICN 210733, ICN, Irvin, CA). Testrørene inneholdt en 300 pj blanding av dibutylftalat og dinonylftalat, i henholdsvis et volumfomold på 2:1. Fritt (dvs. ubundet) øl-merket rhTNFa ble fjernet ved mikrosentrifugering i fem minutter. Deretter ble hver testrør-ende inneholdende en celle-pellet kuttet ved hjelp av en mikrorør-saks (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, Pequannock, NJ). Celle-pelleten inneholder <125>l-merket rhTNFa bundet til p60 eller p80 TNFa-reseptor, mens den vandige fasen ovenfor oljeblandingen inneholder overskudd av fritt <125>|-merket rhTNFa. Alle celle-pellets ble oppsamlet i et tellerør (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) og tellet i en scintillasjonsteller.
Representative resultater er vist i Figur 4. ICsn-verdien for D2E7-hemning av hTNFa-binding til hTNFa-reseptorer på U-937-celler er omtrent 3 x 10*10 M i disse eksperimentene. Disse resultater demonstrerer at D2E7 human-anti-hTNFa-antistoff hemmer rhTNFa-binding til hTNFa-reseptorer på U-937-celler i konsentrasjoner omtrent ekvivalente med de til miirint anti-hTNFa mAb MAK 195.
Ved en annen serie av eksperimenter ble evnen til IgG 1-formen av D2E7 til å hemme rhTNFa-binding til hTNFa-reseptorer på U-937-celler undersøkt som beskrevet ovenfor. Resultatene fra tre uavhengige eksperimenter og gjennomsnittet derav, er oppsummert nedenfor i Tabell 9:
Denne serie av eksperimenter bekreftet at D2E7, i full-lengde lgG1-form, hemmer TNF-reseptor-binding på U-937-celler med en gjennomsnittlig IC50 [M] på 1,56 ±0,12 x 10" TO.
For å undersøke den hemmende kapasiteten til D2E7 for binding av <12>5|_ rhTNF som binder til individuelle p55- og p75-reseptorer, ble et fast fase radioimmunoforsøk utført. For å måle ICsrj-verdiene for D2E7 for separate TNF-reseptorer ble varierende konsentrasjoner av antistoffet inkubert med 3 x 10"<10 >konsentrasjon av 125|.mTNF. Blandingen ble deretter testet på separate plater inneholdende enten p55- eller p75-TNF-reseptorer på en doseavhengig måte. Resultatene er oppsummert nedenfor i Tabell 10:
Hemning av <125>l-rhTNF-binding til p55- og p75-TNF-reseptorer på U937-celler av D2E7 fulgte en enkel S-formet kurve, hvilket indikerer lignende ICso-verdier for hver reseptor. I fast-fase radioimmunoforsøks- (RIA) eksperimenter med rekombinante TNF-reseptorer, ble ICso-verdier for hemning av <125>l-rhTNF-'biiiding til p55- og p75-reseptorer av D2E7, beregnet som henholdsvis 1,47 x 10-<9 >pq -\ ,26 x 10-<9> M. Reduksjonen av ICso-verdier i den faste fasen var sannsynligvis på grunn av høyere densitet av reseptorer i RIA-formatet, ettersom umerket rhTNF også hemmet med lignende ICso-verdier. ICso-verdiene for hemning av l-rhTNF-binding til p55- og p75-reseptorer av umerket rhTNF var henholdsvis 2,31 x 10"<9> og 2,70 x 10"9 M.
C. Hemning av ELAM- 1 - ekspresjon på HUVEC
Human-navlevene-endotelceller (HUVEC) kan fås til å uttrykke endotelcelle-leukocytt-adhesjonsmolekyl 1 (ELAM-1) på deres celleoverflate ved behandling med rhTNFa, hvilket kan detekteres ved å reagere rhTNFa-behandlet HUVEC med et mus-anti-human-ELAM-1 -antistoff. Evnen til human-anti-hTNFa-antistoffer til å hemme denne TNFa-fremkalte ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC ble undersøkt som følger: HUVEC (ATCC Nr. CRL 1730) ble platet ut i 96-brønn-plater (5 x 10<4> celler/brønn) og inkubert natten over ved 37 °C. Den følgende dag ble seriefortynninger av human-anti-hTNFa-antistoff (1:10) fremstilt i en mikrotiterplate, ved å starte med 20-100 ug/ml antistoff. En lagerløsning av rhTNFa ble fremstilt med 4,5 ng/ml, aliquoter av rhTNFa ble satt til hver antistoff-inneholdende brønn, og innholdet ble godt blandet. Kontroller omfattet medium alene, medium pluss anti-hTNFa-antistoff og medium pluss rhTNFa. HUVEC-platene ble fjernet fra inkuberingen natten over ved 37° C, og mediet ble forsiktig aspirert fra hver brønn. To hundre mikroliter av antistoff-rhTNFa-blandingen ble overført til hver brønn i HUVEC-platene. HUVEC-platene ble deretter videre inkubert ved 37° C i 4 timer. Deretter ble et murint anti-ELAM-1-antistoff-lager fortynnet 1:1000 i RPMI. Mediet i hver brønn av HUVEC-platen ble forsiktig aspirert, 50 uJ/brønn av anti-ELAM-1-antistoffløsning ble tilsatt og HUVEC-platene ble inkubert 60 minutter ved romtemperatur. En 125|.mer|<et anti-mus-lg-antistoff-løsning ble fremstilt i RPMI (omtrent 50,000 cpm i 50 |il). Mediet i hver brønn av HUVEC-platene ble forsiktig aspirert, brønnene ble vasket to ganger med RPMI og 50 ul av <125>l-merket anti-mus-lg-løsning ble satt til hver brønn. Platene ble inkubert i én time ved romtemperatur og deretter ble hver brønn vasket tre ganger med RPMI. 180 mikroliter 5% SDS ble satt til hver brønn for å lyse cellene. Cellelysatet fra hver brønn ble deretter overført til et rør og tellet i en scintillasjonsteller.
Representative resultater er vist i Figur 5. ICsrj-verdien for D2E7-hemning av hTNFa-fremkalt ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC er omtrent 6 x 10"<11> M i disse eksperimenter. Disse resultater demonstrerer at D2E7 human-anti-hTNFa-antistoff hemmer hTNFa-fremkalt ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC i konsentrasjoner omtrent ekvivalente med de til murint anti-hTNFa mAb MAK 195.
Ved en annen serie av eksperimenter ble evnen til IgG 1-formen av D2E7 til å hemme hTNFa-fremkalt ekspresjon av ELAM-1 på HUVEC undersøkt som beskrevet ovenfor. Resultatene fra tre uavhengige eksperimenter og gjennomsnittet derav, er oppsummert nedenfor i Tabell 11:
Denne serien av eksperimenter bekreftet at D2E7, i full-lengde lgG1 -form, hemmer TNFa-fremkalt ELAM-1-ekspresjon på HUVEC med en gjennomsnittlig IC50 [M] på 1,85 ± 0,14 x 10"10.
Nøytraliseringskapasiteten av D2E7-lgG1 ble også undersøkt for rhTNF-fremkalt ekspresjon av to andre adhesjonsmolekyler, ICAM-1 og VCAM-1. Ettersom rhTNF-titreringskurven for ICAM-1-ekspresjon etter 16 timer var meget lignende kurven for ELAM-1-ekspresjon, ble samme konsentrasjon av rhTNF anvendt i antistoff-nøytraliseringseksperimenter. HUVEC ble inkubert med rhTNF i nærvær av varierende konsentrasjoner av D2E7 i en 37°C C02-inkubator i 16 timer og ICAM-1-ekspresjon ble målt ved mus-anti-ICAM-1-antistoff fulgt av 125I-merket sau-anti-mus-antistoff. To uavhengige eksperimenter ble utført og IC50--verdier ble beregnet. Et ubeslektet human-lgGi -antistoff hemmet ikke ICAM-1 - ^ekspresjon.
Den eksperimentelle metoden for å teste hemning av VCAM-1-ekspresjon Vår den samme som metoden for ELAM-1 -ekspresjon, bortsett fra at anti-VCAM-1 MÅb ble anvendt istedenfor anti-ELAM-1 MAb. Tre uavhengige eksperimenter ble utført og ICso-verdier ble beregnet. Et ubeslektet human -1 gG1-antistoff hemmet ikke VCÅM-1 -ekspresjon.
Resultatene er oppsummert nedenfor i Tabell 12:
Disse eksperimenter demonstrerte at behandling av primære human-navlevene-endotelceller med rhTNF fører til optimal ekspresjon av adhesjonsmolekyler: ELAM-1 og VCAM-1 etter fire timer og maksimum opp-regulert ekspresjon av ICAM-1 etter 16 timer. D2E7 var i stand til å hemme ekspresjon av de tre adhesjonsmolekyler på en doseavhengig måte. ICso-verdiene for hemning av ELAM-1, ICAM-1 og VCAM-1 var henholdsvis 1,85 x 10'<10>,2,17 x KT™ og
1,01 x 1(H <0> M. Disse verdier er meget like, hvilket indikerer lignende krav til dose av rhTNF-aktiveringssignal for å fremkalle ELAM-1-, ICAM-1- og VCAM-1-ekspresjon. Interessant var D2E7 tilsvarende effektivt i det lenger inhiberings-forsøk for ICAM-1 -ekspresjon. ICAM-1 -inhiberingsforsøk krevet 16 timer sam-inkubering av rhTNF og D2E7 med HUVEC i motsetning til 4 timer som var nødvendig for ELAM-1- og VCAM-1 -inhibeirngsforsøkene. Ettersom D2E7 har en langsom frigjøringshastighet for rhTNF, antas det at under den 16 timer lange
sam-inkuberingsperioden var det ingen konkurranse av betydning av TNF-reseptorer på HUVEC.
D; In vivo nøytralisering av hTNFa
Tre forskjellige in v/Vo-systemer ble anvendt for å demonstrere at D2E7 er effektiv for hemning av hTNFa-aktivitet in vivo.
I. Hemning av TNF- fremkalt- dødelighet hos D- oalaktosamin- sensibiliserte mus
Injeksjon av rekombinant human TNFa (rhTNFa) til D-galaktosamin-sensibiliserte mus forårsaker død innenfor en periode på 24 timer. TNFa-nøytraliserende midler er vist å forhindre dødelighet ved denne modellen. For å undersøke evnen til human-anti-hTNFa-antistoffer til å nøytralisere hTNFa in vivo i denne modellen, ble C57BI/6 mus injisert med varierende konsentrasjoner av D2E7-lgG1 eller et kontroll-protein, i PBS intraperitonealt (i.p.). Musene ble utfordret 30 minutter senere med 1 ug rhTNFa og 20 mg D-galaktosamin i PBS i.p. og observert 24 timer senere. Disse mengder av rhTNFa og D-galaktosamin var tidligere funnet å gi 80-90% dødelighet i disse musene.
Representative resultater, angitt som et stolpediagram av % overlevelse mot antistoffkonsentrasjon, er vist i Figur 6. De sorte stolpene representerer D2E7, mens de skraverte stolpene representerer MAK 195. Injeksjon av 2,5-25 |ig D2E7 antistoff pr. mus beskyttet dyrene fra TNFa-fremkalt død. EDsrj-verdien er omtrent 1-2,5 jig/mus. Det positive kontroll-antistoff, MAK 195, hadde tilsvarende beskyttelsesevne. Injeksjon av D2E7 i fravær av rhTNFa hadde ikke noen skadelig virkning på musene. Injeksjon av et ikke-spesifikt human-lgG1-antistoff ga ikke noen beskyttelse mot TNFa-fremkalt dødelighet.
Ved et andre eksperiment ble 49 mus delt inn i 7 like grupper. Hver gruppe mottok varierende doser av D2E7 30 minutter før de fikk en LDsrj-dose av en rhTNF/D-galaktosaminblanding (1,0 mg rhTNF og 20 mg D-galaktosamin pr. mus. Kontroll-gruppe 7 fikk normalt human-lgG1-kappa-antistoff i en 25 ug/mus dose. Musene ble undersøkt 24 timer senere. Overlevelse for hver gruppe er oppsummert nedenfor i Tabell 13.
II. Hemning av TNF- fremkalt kanin- pyreksi
Effektiviteten av D2E7 til å hemme rhTNF-fremkalt pyreksi-respons hos kaniner ble undersøkt. Grupper på tre NZW-hunnkaniner som veide omtrent 2,5 kg hver ble injisert intravenøst med D2E7, rhTNF og immunkomplekser av D2E7 og rhTNF. Rektale temperaturer ble målt med termistorsonder på en Kaye varme registrator hvert minutt i omtrent 4 timer. Rekombinant human-TNF i saltvann, injisert med 5 ug/kg, frembragte en temperaturøkning over 0,4°C omtrent 45 minutter etter injeksjonen. Antistoff-preparatet selv, i saltvann i en dose på 138 ug/kg, frembragte ikke en temperaturøkning hos kaninene opptil 140 minutter etter administrering. Ved alle andre eksperimenter ble D2E7 eller kontrollreagenser (human lgG1 eller en saltvannbærer) injisert i.v. i kaninene, 15 minutter senere fulgt av en injeksjon av rhTNF i saltvann med 5 ug/kg i.v. Representative resultater fra flere eksperimenter er oppsummert nedenfor i Tabell 14:
Intravenøs forbehandling med D2E7 i en dose på 14 ug/kg hemmet delvis den pyrogene respons, sammenlignet med kaniner forbehandlet med saltvann alene. D2E7 administrert med 137 ug/kg undertrykket fullstendig den pyrogene respons på rhTNF i samme eksperiment. Ved et andre eksperiment undertrykket D2E7 administrert med 24 ug/kg også delvis den pyrogene respons, sammenlignet med kaniner forbehandlet med saltvann alene. Molforholdet av D2E7 til rhTNF var 1/6:1 i dette eksperiment. Ved et tredje eksperiment undertrykket D2E7 injisert i.v. med 48 ug/kg (mol-forhold D2E7:rhTNF = 3,3:1) fullstendig den pyrogene respons, sammenlignet med kaniner forbehandlet med kontroll-human lgG1 i saltvann med 30 ug/kg. I det endelige eksperiment, utviklet kaniner forbehandlet med D2E7 (792 ug/kg) i et meget høyt molforhold til rhTNF (55:1) ikke noen temperaturstigning på noe tidspunkt innenfor 4 timers observasjon. Behandling av kaniner med immunkomplekser dannet fra en blanding av D2E7 og rhTNF inkubert ved 37°C i 1 time med et molforhold på 55:1, uten påfølgende itiTNF-administrering frembragte heller ingen temperaturstigning ved det samme eksperiment.
III. Forhindring av polvartritt i Ta197 transgene mus
Virkningen av D2E7 på sykdomsutvikling ble undersøkt i en transgen murin 'modell av artritt. Transgene mus (Tg197) er frembragt som uttrykker human villtype TNF (modifisert i 3'-regionen etter de kodende sekvenser) og disse mus utvikler kronisk polyartritt med 100% forekomst, 4-7 uker gamle (se EMBO J
(1991) 10:4025-4031 for ytterligere beskrivelse av Tg197-modellen av polyartritt).
transgene dyr ble identifisert med PCR da de var 3 dager gamle. Kull med transgene mus ble delt inn i seks grupper. Transgene mus ble verifisert ved "slot-blot" hybridiserings-analyse da de var 15 dager gamle. Behandlingsprotokollene for de seks grupper var som følger: Gruppe 1= ingen behandling; Gruppe
2=saltvann (bærer); Gruppe 3=D2E7 med 1,5 ug/g; Gruppe 4=D2E7 med 15 u,g/g; Gruppe 5=D2E7 med 30 ug/g; og Gruppe 6=lgG1-isotype-kontroll med 30 (ig/g. Et kull med ikke-transgene mus ble også inkludert i undersøkelsen for å tjene som kontroll (Gruppe 7 - ikke-transgene; ingen behandling). Hver gruppe mottok tre i.p. injeksjoner pr. uke av de angitte behandlinger. Injeksjonene ble fortsatt i 10 uker. Hver uke ble makroskopiske endringer i leddmorfologi registrert for hvert dyr. Etter 10 uker ble alle musene avlivet og musevev ble oppsamlet i formalin. Mikroskopisk undersøkelse av vevet ble utført.
Dyre-vekt i gram ble notert for hver mus ved begynnelsen av hver uke. På samme tid ble målinger av leddstørrelse (i mm) også registrert, som en måling av alvorlighetsgraden av sykdommen. Leddstørrelsen ble bestemt som et gjennomsnitt av tre målinger av høyre bakankel ved anvendelse av en mikrometer-anordning. Artrittisk score ble registrert hver uke som følger: 0 = Ingen artritt, (normalt utseende og fleksjon); + = mild artritt (ledd-distorsjon); ++ = moderat artritt (hevelse, ledddeformasjon) og +++ = sterk artritt (ankylose detektert på fleksjon og alvorlig svekket bevegelse). Histopatologisk scoring basert på hematoksylin/eosin-merking av leddseksjoner var basert som følger; 0 = ingen detekterbar sykdom; 1 = proliferasjon av synovialmembranen; 2 = sterk synovialfortykning 3 = bruskdestruksjon og benerosjon.
Virkningen av D2E7-behandling på den gjennomsnittlige leddstørrelsen hos Tg 197 transgene artrittiske mus er vist i kurven på Figur 9. Histopatologisk og artrittisk scoring for Tg197 transgene mus, 11 uker gamle, er oppsummert nedenfor i Tabell 15:
Dette eksperimentet demonstrerte at D2E7-antistoffet har en klar gunstig effekt på transgene mus som uttrykker villtype human TNF (Tg197) uten noen påvist artritt etter undersøkelsesperioden.
E. D2E7- nøvtraliserina av TNFa fra andre arter
Bindingsspesifisitet til D2E7 ble undersøkt ved å måle dets evne til å nøytralisere tumomekrosefaktorer fra forskjellige primat-arter og fra mus, ved anvendelse av et L929-cytotoksisitetsforsøk (som beskrevet i Eksempel 4, underavsnitt A, ovenfor). Resultatene er oppsummert i Tabell 16 nedenfor:
Resultatene i Tabell 16 demonstrerer at D2E7 kan nøytralisere aktiviteten til fem primat-TNFa omtrent ekvivalent med human TNFa og, videre, kan nøytralisere aktiviteten til kanint TNFa (omtrent ti-ganger mindre bra enn human-TNFa) og porcint og murint TNFa (omtrent -1000-ganger mindre bra enn human-TNFa). Videre ble binding av D2E7 til løsningsfase rhTNFa ikke hemmet av andre cytokiner, så som lymfotoksin (TNF|3), IL-1a, IL-1p\ IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, I FN y og TGFp\ hvilket indikerer at D2E7 er meget spesifikk for dens ligand TNFa.
F. Mangel på cvtokinfrigjørinq av menneske- fullblod inkubert med D2E7
I dette eksemplet ble evnen til D2E7 til selv å bevirke at normale human-blodceller utskiller cytokiner eller sprer celleoverflatemolekyler undersøkt. D2E7 ble inkubert med fortynnet fullblod fra tre forskjellige normale donorer i varierende konsentrasjoner i 24 timer. En LPS-positiv kontroll ble kjørt samtidig, i en konsentrasjon som tidligere var funnet å stimulere immunokompetente blod-celler til å utskille cytokiner. Supematantene ble høstet og testet i et panel på ti oppløselige cytokin-, reseptor- og adhesjonsmolekyl-ELISA-sett: IL-1a, IL-1p, IL-1 reseptor-antagonist, IL-6, IL-8, TNFa, oppløselig TNF-reseptor I, oppløselig TNF reseptor li, oppløselig ICAM-1 og oppløselig E-selektin. Ingen betydelige mengder av cytokiner eller spredde celleoverflate-molekyler ble målt som et resultat av D2E7-antistoff sam-inkubering, ved konsentrasjoner opptil 343 ug/ml. Kontroll-kulturer uten tilsetning av antistoffet ga heller ikke noen målbare mengder av cytokiner, mens LPS sam-kultur-kontrollen ga forhøyede verdier i området høy pikogram til lav nanogram. Disse resultater indikerer at D2E7 ikke får fullblodceller til å skille ut cytokiner eller spre celle-overflateproteiner over normale nivåer i ex wVokulturer.
Den følgende sekvensliste utgjør del av foreliggende beskrivelse, og innholdet er oppsummert i tabellen nedenfor:

Claims (47)

1. Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, hvor antistoffet er et isolert human-antistoff, eller en antigen-bindingsdel derav, som dissosierer fra human TNFa med en K$ på 1 x 10*<8> M eller mindre og en K0ff hastighetskonstant på 1 x 10'3 s*1 eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i en standard in vitro L929-testanalyse med en IC50 på 1 x 10"<7> M eller mindre, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for inhibering av human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse hvor TNFa-aktivitet er skadelig.
2. Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, hvor antistoffet er et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, med de følgende karakteristika: a) dissosierer fra human TNFa med en K0ff hastighetskonstant på 1 x 10"<3> s~<1> eller mindre, bestemt ved overflate-plasmon-resonans; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 1,4,5,7 eller 8 eller med én til fem konservative aminosyre-substitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7,8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR : 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 2,3,4,5,6, 8,9,10 eller 11 eller med én til fem konservative aminosyre-substitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6,8,9,10,11 og/eller 12, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for inhibering av human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse hvor TNFa-aktivitet er skadelig.
3. Anvendelse av et antistoff og i det minste ett ytterligere terapeutisk middel, hvor antistoffet er et isolert human-antistoff eller en antigen-bindingsdel derav, med en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 1 og en tungkjede variabel region (HCVR) omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 2, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for å inhibere human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse i hvilken TNFa-aktivitet er skadelig.
4. Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel slik at human TNFa-aktivitet inhiberes, hvor antistoffet er D2E7, for fremstilling av en farmasøytisk blanding for å inhibere human TNFa-aktivitet i et menneskeindivid som lider av en forstyrrelse hvor TNFa-aktivitet er skadelig.
5. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 eller 4, hvor det ytterligere terapeutiske middel er valgt fra gruppen bestående av ibuprofen, total lymfoid bestråling, interleukin-1-inhibitor, OKT3, anti-CD25-antistoff, anti-CD11a-antistoff, anti-CD54-antistoff, anti-CD45-antistoff, anti-CD28-antistoff, anti-CD80-antistoff, anti-CD86-antistoff, ikke-steroide anti-inflammatoriske legemidler, cytokin-suppressive anti-inflammatoriske legemidler, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4-agonister, IL-10-agonister, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, lloprost, metotreksat, thalidomid, thalidomid-relaterte legemidler, leflunomid, traneksaminsyre, T-614, prostaglandin E1, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indomethacin, Sulfasalazine, Azathioprince, ICE-inhibitorer, zap-70-inhibitorer, Ick-inhibitorer, VEGF-inhibitorer, VEGF-R-inhibitorer, kortikosteroider, TNF-konvertaseinhibitorer, anti-IL-12-antistoffer, interleukin-11, interleukin-13, interleukin-17-inhibitorer, gull, penicillamin, klorokin, hydroksyklorokin, klorambucil.cyklofosfamid, cyklosporin, anti-tymocyttglobulin, anti-CD4-antistoffer, CD5-toksiner, oralt administrerte peptider, kollagen, lobenzaritt-dinatrium, cytokinregulerende midler HP228 og HP466, ICAM-1-antisens-fbsforotioat-oligodeoksynukleotider, løselig komplement-reseptor 1, prednison, orgotein, glykosaminoglykan-polysulfat, minocyklin, anti-IL2R-antistoffer, marine lipider, botaniske lipider, auranofin, fenylbutazon, meklofenaminsyre, flufenaminsyre, intravenøs immunglobulin, zileuton, mykofenolsyre, takrolimus, sirolimus, amiprilose, kladribin, azabrin, budenosid, epidermal vekstfaktor, aminosalicylater, 6-merkaptopurin, metronidazol, lipoksygenaseinhibitorer, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioksidanter, tromboksan-inhibitorer, IL-1-reseptorantagonister, anti-IL-1 ^-monoklonale antistoffer, anti-IL-6-monoklonale antistoffer, vekstfaktorer, elastaseinhibitorer, pyridinyl-imidazol-forbindelser, glukuronid-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, dekstran-konjugerte prolegemidler av prednisolon, deksametason eller budesonid, løselig komplementreseptor 1, langsomt-frigjørende mesalazin, antagonister av plateaktiverende faktor (PAF), ciprofloksacin, lignokain, prednisolon, metylprednisolon, cyklofosfamid, 4-aminopyridin, tizanidin, interferon-P1a, interferon-pib, kopolymer 1, hyperbarisk oksygen, intravenøs immunglobulin, klabribin, hypertoniske saltløsninger, antibiotika, kontinuerlig hemofiltrering, karbapenemer, antagonister av cytokiner slik som TNFa, IL-1p\ IL-6 og/eller IL-8, SK&F 107647, tetravalent guanylhydrazon CNI-1493, vevsfaktor-reaksjonsveiinhibitor, PHP, jern-chelåtorer og chelater, inkludert dietyientriaminpentaeddiksyre-jern(lll)kompleks, lisofyllin, PGG-glukan, apolipoprotein A-1 rekonstituert med lipider, chirale hydroksaminsyrer, anti-endotoksinantistoffer, E5531, rBPI2i, syntetiske anti-endotoksinpeptider, overflate-erstatningsterapi og anti-IL-8-antistoffer.
6. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 eller 4, hvor lidelsen er reumatoid artritt.
7. Anvendelse ifølge krav 6, hvor det ytterligere terapeutiske middelet er valgt fra gruppen bestående av ibuprofen, total lymfoid bestråling, ikke-steroide anti-inflammatoriske legemidler, cytokin suppressive anti-inflammatoriske legemidler, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB 486-IL-2, DAB 389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, IL-4-agonister, IL-10-agonister, IL-1RA, TNF-bp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, lloprost, metotreksat, thalidomid, thalidomid-relaterte legemidler, leflunomid, traneksaminsyre, T-614, prostaglandin E1, Tenidap, Naproxen, Meloxicam, Piroxicam, Diclofenac, Indomethacin, Sulfasalazine, Azathioprince, ICE-inhibitorer, zap-70-inhibitorer, Ick-inhibitorer, VEGF-inhibitorer, VEGF-R-inhibitorer, kortikosteroider, kortikosteroid-anti-inflammatoriske legemidler, TNF-konvertaseinhibitorer, anti-IL-12-antistoffer, interleukin-11, interleukin-13, interleukin-17-inhibitorer, gull, penicillamin, klorokin, hydroksyklorokin, kibrambucil.cyklofosfamid, cyklosporin, anti-tymocyttglobulin, anti-CD4-antistoffer, ' ebS-toksiner, oralt administrerte peptider, kollagen, lobenzaritt-dinatrium, cytpkinregulerende midler HP228 og HP466, ICAM-1-antisens-fosforotioat-oligpdeoksynukleotider, løselig komplementreseptor 1, prednison, orgotein, glykosaminoglykan-polysulfat, minocyklin, anti-IL2R-antistoffer, marine lipider, i botaniske lipider, auranofin, fenylbutazon, meklofenaminsyre, flufenaminsyre, intravenøs immunglobulin, zileuton, mykofenolsyre, takrolimus, siroiimus, amiprilose, kladribin, azabrin.
8. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 eller 4, hvor lidelsen er inflammatorisk tarmsykdom.
9. Anvendelse ifølge krav 8, hvor det ytterligere terapeutiske middelet er valgt fra gruppen bestående av kortikosterioider, cyklosporin, sulfasalazin, azatioprin, CDP-571/BAY-10-3356, 75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IL-10, IL-4, IL-10-agonist, IL-4-agonist, IL-11, ICAM-1-antisense-fosforotioat-oligodeoksynukleotider, metotrexat, budenosid, epidermal vekstfaktor, aminosalicylater, 6-merkaptopurin,metronidazol, lipoksygenaseinhibitorer, mesalamin, olsalazin, balsalazid, antioksidanter, tromboksaninhibitorer, IL-1-reseptorantagonister, anti-IL-1 ^-monoklonale antistoffer, anti-IL-6-monoklonale antistoffer, vekstfaktorer, elastaseinhibitorer, pyridinylimidazolforbindelser, glukuronid-konjugerte prodroger av prednisol, deksametason eller budesonid, dekstran-konjugerte prodroger av prednisolon, deksametason eller budesonid, løselig komplement-reseptor 1, langsomt-frigjørende mesalazin, antagonister av blodplateaktiverende faktor (PAF), ciprofloksacin og lignokain.
10. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1, 2, 3 eller 4, hvor lidelsen er multippel sklerose.
11. Anvendelse ifølge krav 10, hvor det ytterligere terapeutiske middelet er valgt fra gruppen bestående av kortikosteroider, prednisolon, metylprednisolon, asatioprin, cyklofosfamid, cyklosporin, metotreksat, 4-aminopyridin, tizanidin, interferon-pia, interferon-pib, kopolymer 1, hyperbarisk oksygen, intravenøs immunglobulin, klabribin, CDP-571/BAY-10-3356, cA2,75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, IL-10, IL-4 og IL-10-agonister, og IL-4-agonister.
12. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er sepsis.
13. Anvendelse ifølge krav 12, hvor det ytterligere terapeutiske middelet er valgt fra gruppen bestående av hypertoniske saltløsninger, antibiotika, intravenøs gammaglobulin, kontinuerlig hemofiltrering, karbapenemer, antagonister av TNFa, antagonister av IL-1J3, antagonister av IL-6, antagonister av IL-8, CDP-571/BAY-10-3356, cA2,75 kdTNFR-IgG, 55 kdTNFR-IgG, cytokinregulerende midler (Gras) HP228 og HP466, SK&F 107647, tefravalent guanylhydrazon CNI-1493, vevsfaktorreaksjonsvei-inhibitor, PHP, jemchelatorer og chelater, inklusiv dietylentriamin-penta-eddiksyre-jem(iii)kompleks, lisofyllin, Pgg-glukan, apolipoprotein A-1 rekonstituert med lipider, chirale hydroksaminsyrer, anti-endotoksin-antistoffer, E5531, rBP12og syntetiske anti-endotoksinpeptider.
14. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 eller 4, hvor lidelsen er voksen respiratorisk nødsyndrom (ARDS).
15. Anvendelse ifølge krav 14, hvor det ytterligere terapeutiske middelet er valgt fra gruppen bestående av anti-IL-8-antistoffer, surfaktant erstatningsterapi, CDP-571/BAY-10-3356, cA2, 75 kdTNFR-IgG og 55 kdTNFR-IgG.
16. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er en autoimmun sykdom.
17. Anvendelse ifølge krav 16, hvor den autoimmune lidelsen er valgt fra gruppen bestående av reumatoid artritt, reumatoid spondylitt, osteoartritt, giktartritt, allergi, multippel sklerose, autoimmun diabetes, autoimmun uveitt og nefrotisk syndorm.
18. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av en intestinal lidelse, en infektiøs sykdom, trarlsplantatawisning eller transplantat-mot-vert-sykdom, malignitet, en pulmonær lidelse eller en hjertelidelse.
19. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen ér sepsis.
20. Anvendelse ifølge krav 19, hvor antistoffet administreres til et menneske sammen med cytokinet interleukin-6 (IL-6) eller administreres til et menneske med et serum eller plasmakonsentrasjon av IL-6 over 500 pg/ml.
21. Anvendelse av et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av inflammatorisk benlidelse, benresorpsjonslidelse, hepatitt, alkoholisk hepatitt, viral hepatitt, fulminant hepatitt, koagulasjonsforstyrrelser, brannreperfusjonsskade, keloiddannelse, arrvevsformasjon, pyrexi, periodontal sykdom, fedme og strålingstoksisitet.
22. Anvendelse av et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av septisk sjokk, endotoksisk sjokk, gram negativ sepsis, toksisk sjokksyndrom, malaria, meningitt, cakexi, AIDS, bakteriell meningitt og AIDS-relatert kompleks (ARC).
23. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av cytomegalovirusinfeksjon sekundær til transplantasjon, feber, myalgi forårsaket av infeksjon, cakexi sekundær til infeksjon, aliotransplantatawisning og xenotransplantatawisning.
24. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av stimulering av tumorvekst, forsterke metastatisk potensial og mediering av cytotoksisitet i maligniteter og tumorvekst eller metastaser.
25. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av voksen respiratorisk distress-syndrom, sjokkiunge, kronisk pulmonær inflammatorisk sykdom, pulmonær sarkoidose, pulmonær fibrose og silikose.
26. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen bestående av inflammatorisk tarmlidelse, idiopatisk inflammatorisk tarmsykdom, Crohn's sykdom og ulcerøs kolitt.
27. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor lidelsen er valgt fra gruppen besåtende av ischemi i hjerte, hjertesvikt og heptatitt.
28. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1,2,3 og 4, hvor det isolerte humane antistoffet kombineres med en farmasøytisk akseptabel bærer.
29. Isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl, karakterisertvedatdet humane antistoffet dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1 x 10"<8> M eller mindre, og en rWhastighetskonstant på 1 x 10'<3> s'<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans og nøytraliserer human TNFa-cytotoksisitet i et standard in vitro L929-forsøk med en IC50 på 1 x 10'<7> M eller mindre.
30. Isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, derivatisert elter bundet til i det minste et funksjonelt molekyl, karakterisert ved at det humane antistoffet har følgende karakteristika: a) dissosierer fra human TNFa med en Kofrhastighetskonstant på 1 x 10'<3> s'<1 >eller mindre, bestemt ved overflate-plasmon-resonans; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 1,4,5,7 eller 8 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1,3,4,6,7,8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 2, 3,4,5,6,8,9,10 eller 11, eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2,3,4,5,6„ 8,9,10,11 og/eller 12. i■■
'3,1.. Isolert human-antistoff, eller antigen bindingsdel derav, derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl, hvor det humane antistoffet omfatter en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 1 og tungkjede variabel regionen (HCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 2.
32. D2E7-antistoff, eller antigen bindingsdel derav derivatisert eller bundet til i det minste et funksjonelt molekyl.
33. Antistoff i følge et hvilket som helst av kravene 29 til 32, hvor det funksjonelle molekylet er valgt fra gruppen bestående av et andre antistoff, et detekterbart middel, et cytotoksisk middel, et farmasøytisk middel og et protein eller peptid som kan mediere assosiasjon av antistoffet eller en antistoffdel med et annet molekyl.
34. Antistoff ifølge krav 33, hvor det detekterbare middelet er valgt fra gruppen bestående av en fluorescerende forbindelse, et detekterbart enzym og biotin.
35. Antistoff ifølge krav 34, hvor den fluorescerende forbindelsen er valgt fra gruppen bestående av fluorescein, fluorescein isotiocyanat, rodamin, 5-dimetylamin-1-naftalensulfonylklorid og fykoerytrin.
36. Antistoff ifølge krav 34, hvor det detekterbare enzymet er valgt fra gruppen bestående av alkalisk fosfatase, pepperrot peroksydase og glukoseoksydase.
37. Fd eller F(ab')2 -fragment av et isolert human-antistoff, karakterisert ved at antistoffet dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1x10'8 M eller mindre og en Koff hastighetskonstant på 1x10'<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans, og nøytraliserer human TNFa cytotoksisitet i et standard in vitro L929 analyse med en IC50 på 1x10~<7> M eller mindre.
38. Fd eller F(ab')2 -fragment av et isolert human-antistoff, karakterisert ved at i a) . dissosierer fra human TNFa med en Koff-nastighetskonstant på 1 x 10"<3> s"<1>.eller mindre, bestemt ved overflate-plasmon-resonans; b) har et lettkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 3 eller modifisert fra SEKV ID NR: 3 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 1, 4, 5, 7 eller 8 eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 1, 3, 4, 6, 7, 8 og/eller 9; c) har et tungkjede CDR3-domene omfattende aminosyresekvensen med SEKV ID NR: 4 eller modifisert fra SEKV ID NR: 4 med en enkel alaninsubstitusjon i stilling 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9,10 eller 11, eller med én til fem konservative aminosyresubstitusjoner i stillingene 2, 3, 4, 5, 6„ 8, 9, 10,11 og/eller 12.
39. Fd eller F(ab')2-fragment av et isolert human-antistoff som omfatter en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 1 og tungkjede variabel regionen (HCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO: 2.
40. Fd eller F(ab')2-fragment av et D2E7 antistoff.
41. Isolert human-antistoff, eller en antigen-bindende del derav som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1x10"<8> M eller mindre og en K0ff hastighetskonstant på 1x10"<3> s"<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans, og nøytraliserer TNFa-indusert cellulær aktivering i en standard in vitro analyse for TNFa-indusert ELAM-1 ekspresjon på human navlestrengvene-endotelceller (HUVEC).
42. Isolert human-antistoff, eller en antigen-bindende del derav som dissosierer fra human TNFa med en Kd på 1x10"<8> M eller mindre og en K0« hastighetskonstant på 1 x10'3 s'<1> eller mindre, begge bestemt ved overflate-plasmon-resonans, og inhiberer binding av human TNFa til både p55 og p75 human TNFa-reseptorer.
43. Isolert nukleinsyre omfattende SEKV ID NO : 36.
44. Isolert nukleinsyre omfattende SEKV ID NO : 37.
45. Isolert human-antistoff, eller antigen bindingsdel derav, som omfatter en lettkjede variabel region (LCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO: 9 og tungkjede variabel regionen (HCVR) omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO: 10.
46. Isolert nukleinsyre som koder for et antistoff lettkjede variabel region omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 9.
47. Isolert nukleinsyre som koder for et antistoff tungkjede variabel region omfattende aminosyresekvensen til SEKV ID NO : 10.
NO20040052A 1996-02-09 2004-01-07 Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer. NO322755B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
PCT/US1997/002219 WO1997029131A1 (en) 1996-02-09 1997-02-10 HUMAN ANTIBODIES THAT BIND HUMAN TNF$g(a)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20040052L NO20040052L (no) 1998-10-07
NO322755B1 true NO322755B1 (no) 2006-12-04

Family

ID=26707297

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19983627A NO316711B1 (no) 1996-02-09 1998-08-07 Isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav som binder human TNF<alfa>, rekombinant human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, isolert nukleinsyre som koder for en lett eller tungkjede av antistoffet, eventuelt en region derav, rekombina
NO20026202A NO319955B1 (no) 1996-02-09 2002-12-23 Anvendelse av isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa, fremgangsmate for inhibering av TNF-alfa-aktivitet in vitro, samt isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa og farmasoytisk blanding som omfatter nevnte antistoff.
NO20040052A NO322755B1 (no) 1996-02-09 2004-01-07 Anvendelse av et antistoff og minst ett ytterligere terapeutisk middel, isolerte human-antistoffer inkludert D2E7, derivatisert eller bundet til minst ett funksjonelt molekyl, isolerte human-antistoffer og fragmenter derav, samt isolerte nukleinsyrer.
NO20040154A NO320657B1 (no) 1996-02-09 2004-01-13 Farmasoytisk blanding omfattende human-antistoffer som binder TNFalfa, samt anvendelser derav
NO2004002C NO2004002I2 (no) 1996-02-09 2004-04-15 Adalimumab
NO2017038C NO2017038I2 (no) 1996-02-09 2017-08-01 Adalimumab - Forlenget SPC

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19983627A NO316711B1 (no) 1996-02-09 1998-08-07 Isolert human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav som binder human TNF<alfa>, rekombinant human-antistoff eller antigen-bindingsdel derav, isolert nukleinsyre som koder for en lett eller tungkjede av antistoffet, eventuelt en region derav, rekombina
NO20026202A NO319955B1 (no) 1996-02-09 2002-12-23 Anvendelse av isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa, fremgangsmate for inhibering av TNF-alfa-aktivitet in vitro, samt isolert human-antistoff som binder human-TNF-alfa og farmasoytisk blanding som omfatter nevnte antistoff.

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20040154A NO320657B1 (no) 1996-02-09 2004-01-13 Farmasoytisk blanding omfattende human-antistoffer som binder TNFalfa, samt anvendelser derav
NO2004002C NO2004002I2 (no) 1996-02-09 2004-04-15 Adalimumab
NO2017038C NO2017038I2 (no) 1996-02-09 2017-08-01 Adalimumab - Forlenget SPC

Country Status (32)

Country Link
US (9) US6258562B1 (no)
EP (1) EP0929578B1 (no)
JP (8) JP3861118B2 (no)
KR (1) KR100317188B1 (no)
CN (5) CN101712720A (no)
AT (1) ATE239041T1 (no)
AU (1) AU722077B2 (no)
BG (7) BG64564B1 (no)
BR (3) BRPI9707379C8 (no)
CA (1) CA2243459C (no)
CY (2) CY2463B1 (no)
CZ (1) CZ292465B6 (no)
DE (4) DE122004000004I1 (no)
DK (1) DK0929578T3 (no)
ES (1) ES2198552T3 (no)
HK (8) HK1066860A1 (no)
HU (4) HU221984B1 (no)
IL (4) IL125697A (no)
LU (1) LU91062I2 (no)
MX (1) MX336813B (no)
NL (1) NL300143I2 (no)
NO (6) NO316711B1 (no)
NZ (5) NZ576716A (no)
PL (2) PL188192B1 (no)
PT (1) PT929578E (no)
RO (2) RO123028B1 (no)
RU (3) RU2270030C2 (no)
SI (1) SI9720020B (no)
SK (1) SK284040B6 (no)
TR (1) TR199801532T2 (no)
UA (2) UA57726C2 (no)
WO (1) WO1997029131A1 (no)

Families Citing this family (461)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
AU640400B2 (en) * 1989-08-07 1993-08-26 Peptide Technology Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
ZA95960B (en) * 1994-03-14 1995-10-10 Genetics Inst Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases
US6706264B1 (en) 1994-03-14 2004-03-16 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of conditions promoted by an increase in levels of IFN-y
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
PL188192B1 (pl) * 1996-02-09 2004-12-31 Abbott Lab Bermuda Ltd Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
CA2288992C (en) * 1997-04-30 2012-06-12 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US7229841B2 (en) 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6407218B1 (en) 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
US7553487B2 (en) 1998-12-14 2009-06-30 Genetics Institute, Llc Method and compositions for treating asthma
US7507706B1 (en) 1998-12-14 2009-03-24 Genetics Institute, Llc Cytokine receptor chain
WO2000051637A1 (en) * 1999-03-02 2000-09-08 Centocor, Inc. ANTI-TNFα ANTIBODIES IN THERAPY OF ASTHMA
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
MXPA02003420A (es) * 1999-10-06 2002-08-20 Basf Ag Inhibidores de la via de senalizacion de endotelina y antagonistas de los receptores de alfav°3 integrina para el tratamiento en combinacion.
US7767207B2 (en) 2000-02-10 2010-08-03 Abbott Laboratories Antibodies that bind IL-18 and methods of inhibiting IL-18 activity
GB0013810D0 (en) 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
CN1451043A (zh) 2000-06-29 2003-10-22 艾博特公司 双特异性抗体及其制备方法和用途
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20050196755A1 (en) * 2000-11-17 2005-09-08 Maurice Zauderer In vitro methods of producing and identifying immunoglobulin molecules in eukaryotic cells
ES2390425T3 (es) 2000-12-22 2012-11-12 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores
AU2002245272B2 (en) * 2001-01-16 2006-06-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
US20090137416A1 (en) 2001-01-16 2009-05-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating Cells Expressing Secreted Proteins
EP1379125A4 (en) 2001-03-22 2004-12-08 Abbott Gmbh & Co Kg TRANSGENIC ANIMALS THAT EXPRESS SPECIFIC ANTIBODIES FOR INTERESTING GENES AND THEIR USE
US6410955B1 (en) * 2001-04-19 2002-06-25 Micron Technology, Inc. Comb-shaped capacitor for use in integrated circuits
CA2868614A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
EP1414517A4 (en) * 2001-06-26 2008-02-06 Photomed Technologies Inc MULTIPLE WAVELENGTH ILLUMINATOR
EP3492100B1 (en) 2001-06-26 2021-12-08 Amgen Inc. Antibodies to opgl
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
TWI327597B (en) 2001-08-01 2010-07-21 Centocor Inc Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
AU2002341766A1 (en) * 2001-09-20 2003-04-01 Genstar Therapeutics Corporation Improved methods for treatment with viral vectors
US20030065382A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-03 Fischell Robert E. Means and method for the treatment of coronary artery obstructions
WO2003028630A2 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Genetics Institute Llc. Methods and compositions for modulating interleukin-21 receptor activity
US20040018195A1 (en) * 2002-03-26 2004-01-29 Griswold Don Edgar Diabetes-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20040136991A1 (en) * 2002-07-19 2004-07-15 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of anemia using TNFalpha inhibitors
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
WO2004019861A2 (en) * 2002-08-28 2004-03-11 Pharmacia Corporation Stable ph optimized formulation of a modified antibody
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
NZ563471A (en) 2002-11-08 2009-04-30 Ablynx Nv Camelidae antibodies against imminoglobulin E and use thereof for the treatment of allergic disorders
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
MXPA05005921A (es) 2002-12-02 2005-10-19 Abgenix Inc Anticuerpos dirigidos a factor de necrosis tumoral y sus usos.
CA2511823A1 (en) * 2002-12-30 2004-07-22 Amgen Inc. Combination therapy with co-stimulatory factors
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
EP1590431A4 (en) * 2003-01-08 2009-12-23 Applied Molecular Evolution ALPHA TUMOR NECROSIS FACTOR MOLECULES
KR20050092029A (ko) * 2003-01-10 2005-09-16 아블린쓰 엔.브이. 폰 빌레브란트 인자(ｖＷＦ) 또는 콜라겐에 대한낙타과로부터의 재조합 ＶＨＨ 단일 도메인 항체
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
BRPI0408315A (pt) * 2003-03-14 2006-03-07 Wyeth Corp anticorpo isolado, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de gerar um anticorpo ou fragmento de ligação de antìgeno, de regular uma resposta imune, de tratar ou prevenir um distúrbio associado com célula imune em um paciente, de tratar ou prevenir um distúrbio hiperproliferativo em um paciente, e, kit de diagnóstico
EP1460088A1 (en) 2003-03-21 2004-09-22 Biotest AG Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties
WO2004098578A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Altana Pharma Ag Composition comprising a pde4 inhibitor and a tnf-alfa antagonist selected from infliximab, adalimumab, cdp870 and cdp517
FR2856075B1 (fr) * 2003-06-16 2007-10-12 Monoclonal Antibodies Therapeu Procede essentiellement automatise de criblage a grande echelle de cellules secretant des anticorps monoclonaux
FR2859725B1 (fr) * 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
KR100772800B1 (ko) * 2003-11-17 2007-11-01 주식회사유한양행 인간 종양괴사인자 α를 인식하는 단일클론항체의가변영역 및 이를 코딩하는 유전자
CN1925843A (zh) 2003-12-02 2007-03-07 细胞免疫科学公司 生产单克隆抗体的方法和组合物
ATE552850T1 (de) 2003-12-23 2012-04-15 Genentech Inc Neue anti-il 13-antikörper und verwendungen dafür
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US20050260679A1 (en) * 2004-03-19 2005-11-24 Sirid-Aimee Kellerman Reducing the risk of human anti-human antibodies through V gene manipulation
US7625549B2 (en) * 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
TWI556829B (zh) 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
CN100427504C (zh) * 2004-06-02 2008-10-22 北京天广实生物技术有限公司 TNFα高亲和力嵌合抗体及其用途
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
MX2007001509A (es) * 2004-08-05 2007-03-27 Wyeth Corp Antagonismo de la actividad del receptor de interleuquina 21.
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
JP2008517914A (ja) * 2004-10-22 2008-05-29 ジェネンコー・インターナショナル・インク ヒトの抗体の分離方法
AU2005306399B2 (en) 2004-11-19 2012-02-09 Biogen Ma Inc. Treatment for multiple sclerosis
LT1850873T (lt) 2005-02-08 2019-04-10 Genzyme Corporation Antikūnas prieš tgf beta
CN101160528A (zh) * 2005-02-14 2008-04-09 惠氏公司 Il17-f在诊断和治疗气道炎症中的用途
RU2007129263A (ru) * 2005-02-14 2009-03-20 Вайет (Us) Антитела к интерлейкину-17f и другие антагонисты опосредуемой il-17f передачи сигналов и их применение
DK2529619T3 (en) 2005-02-17 2016-01-11 Biogen Ma Inc Treatment of neurological disorders
GT200600148A (es) * 2005-04-14 2006-11-22 Metodos para el tratamiento y la prevencion de fibrosis
JP5339901B2 (ja) * 2005-05-10 2013-11-13 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 炎症傷害の処置および評価
AU2012254978C1 (en) * 2005-05-16 2017-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
TWI399384B (zh) 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
CA2610960A1 (en) * 2005-06-06 2006-12-14 Wyeth Expression profiles of peripheral blood mononuclear cells for inflammatory bowel diseases
EP2390267B1 (en) 2005-06-07 2013-06-05 ESBATech - a Novartis Company LLC Stable and soluble antibodies inhibiting TNF(alpha)
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
US20060286108A1 (en) * 2005-06-16 2006-12-21 Bell Katherine A Topical compositions for the treatment of chronic wounds
AU2006261357A1 (en) * 2005-06-17 2006-12-28 Zimmer Spine Austin, Inc. Improved method of treating degenerative spinal disorders
EP2664340B1 (en) * 2005-06-24 2020-02-12 Duke University A direct drug delivery system based on thermally responsive biopolymers
WO2007014162A2 (en) * 2005-07-21 2007-02-01 Abbott Laboratories Multiple gene expression including sorf constructs and methods with polyproteins, pro-proteins, and proteolysis
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
EP2500355A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US20090215992A1 (en) * 2005-08-19 2009-08-27 Chengbin Wu Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
AU2006283532B2 (en) 2005-08-19 2012-04-26 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
EP1928905B1 (de) 2005-09-30 2015-04-15 AbbVie Deutschland GmbH & Co KG Bindungsdomänen von proteinen der repulsive guidance molecule (rgm) proteinfamilie und funktionale fragmente davon sowie deren verwendung
WO2007049286A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Tata Memorial Centre A system for ex-vivo separation of apoptotic chromatin particles from blood or plasma
RS53055B (en) 2005-11-01 2014-04-30 Abbvie Biotechnology Ltd PROCEDURES FOR DETERMINING THE EFFICIENCY OF ADALIMUMAB IN RESPONDENTS WHO HAVE ANKILLOSATIVE SPONDILITIS USING CTX-II AND MMP3 AS BIOMARKERS
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
PL1954718T3 (pl) 2005-11-30 2015-04-30 Abbvie Inc Przeciwciała skierowane przeciwko A globulomerowi, ich reszty wiążące antygeny, odpowiednie hybrydomy, kwasy nukleinowe, wektory, komórki gospodarze, sposoby wytwarzania tych przeciwciał, kompozycje zawierające te przeciwciała, zastosowania tych przeciwciał i sposoby stosowania tych przeciwciał
JP5486808B2 (ja) 2005-11-30 2014-05-07 アッヴィ・インコーポレイテッド アミロイドベータタンパク質に対するモノクローナル抗体及びその使用
ES2779992T3 (es) 2005-12-20 2020-08-21 Univ Duke Métodos y composiciones para suministrar agentes activos con propiedades farmacológicas potenciadas
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US7846439B2 (en) 2006-02-01 2010-12-07 Cephalon Australia Pty Ltd Domain antibody construct
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
TW200744634A (en) 2006-02-21 2007-12-16 Wyeth Corp Methods of using antibodies against human IL-22
EP2738179A1 (en) 2006-04-05 2014-06-04 AbbVie Biotechnology Ltd Antibody purification
EP2666479A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
WO2008063213A2 (en) 2006-04-10 2008-05-29 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
EP2010214A4 (en) 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CA2651992A1 (en) 2006-06-30 2008-01-10 Abbott Biotechnology Ltd. Automatic injection device
PL3339445T3 (pl) 2006-09-08 2020-12-14 Abbvie Bahamas Ltd. Białka wiążące interleukinę 13
NZ597334A (en) 2006-09-13 2014-02-28 Abbott Lab Cell culture improvements
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
KR20150002896A (ko) 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
MX2009005252A (es) 2006-11-17 2009-05-28 Abbott Lab Aminopirrolidinas como antagonistas del receptor de quimiocina.
ES2432173T3 (es) 2006-11-21 2013-12-02 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Métodos de tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas usando un antagonista de GM-CSF
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
US8324350B2 (en) 2006-12-29 2012-12-04 Abbott Laboratories Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies
RU2475265C2 (ru) * 2007-01-16 2013-02-20 Эбботт Лэборетриз Способы лечения псориаза
JP2008209378A (ja) * 2007-01-31 2008-09-11 Fujifilm Corp バイオセンサー基板
PL2148691T3 (pl) 2007-02-05 2015-12-31 Apellis Pharmaceuticals Inc Analogi kompstatyny do stosowania w leczeniu stanów zapalnych układu oddechowego
US20100311767A1 (en) 2007-02-27 2010-12-09 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
EP3202786A3 (en) 2007-03-12 2017-10-11 ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit LLC Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
TW200902064A (en) * 2007-03-28 2009-01-16 Wyeth Corp Methods and compositions for modulating IL-17F/IL-17A biological activity
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008124858A2 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
CA2688433A1 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Methods for selecting protease resistant polypeptides
JP2010528647A (ja) * 2007-06-06 2010-08-26 ドマンティス リミテッド ポリペプチド、抗体可変ドメインおよびアンタゴニスト
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP2170390B1 (en) 2007-06-14 2018-11-07 Biogen MA Inc. Natalizumab antibody formulations
CA2689941C (en) * 2007-06-25 2019-10-29 Esbatech Ag Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
JP5506670B2 (ja) * 2007-06-25 2014-05-28 エスバテック − ア ノバルティス カンパニー エルエルシー 単鎖抗体の配列に基づくエンジニアリング及び最適化
CN101848733A (zh) * 2007-07-13 2010-09-29 艾博特生物技术有限公司 用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物
CN101980722A (zh) 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
CA2697032C (en) * 2007-08-22 2021-09-14 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
MX2010002269A (es) * 2007-08-28 2010-03-25 Abbott Biotech Ltd Composiciones y metodos que comprenden proteinas de union para adalimumab.
KR101666228B1 (ko) 2007-09-28 2016-10-13 인트렉손 코포레이션 생물치료학적 분자를 발현시키기 위한 치료학적 유전자-스위치 작제물 및 생물반응기, 및 이의 용도
JP2009082033A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Kaneka Corp 完全ヒト型抗体生産法
US7960145B2 (en) 2007-11-08 2011-06-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
SG10201604258YA (en) 2007-11-30 2016-07-28 Abbvie Biotechnology Ltd Anti-tnf antibody formulations
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
CN104188911A (zh) 2008-01-15 2014-12-10 Abbvie德国有限责任两合公司 粉末状蛋白质组合物及其制备方法
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
JP5795167B2 (ja) 2008-03-13 2015-10-14 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 疾患治療剤
JP5604311B2 (ja) 2008-03-13 2014-10-08 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 疾患治療剤
BRPI0909048A2 (pt) 2008-03-13 2015-11-24 Biotest Ag composição farmacêutica, e, método de tratamento de uma doença autoimune
US8178092B2 (en) 2008-03-18 2012-05-15 Abbott Laboratories Methods of treating psoriasis by administration of antibodies to the p40 subunit of IL-12 and/or IL-23
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
JP5646457B2 (ja) 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
EP2113568A1 (en) 2008-04-30 2009-11-04 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Knock-in mouse for modelling blockade of human TNFalpha
JP5890174B2 (ja) 2008-05-09 2016-03-22 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 終末糖化産物受容体（ｒａｇｅ）に対する抗体及びその使用
EP2311493A4 (en) * 2008-05-20 2012-09-26 Kaneka Corp CYTOTOXIC COMPOSITION
BRPI0913366A8 (pt) 2008-06-03 2017-07-11 Abbott Lab Imunoglobulinas de domínio variável duplo e seus usos
KR20110016958A (ko) 2008-06-03 2011-02-18 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP3241843B1 (en) 2008-06-25 2021-07-28 Novartis AG Solubility optimization of immunobinders
WO2009155724A2 (en) 2008-06-25 2009-12-30 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Stable and soluble antibodies inhibiting vegf
CN102076716A (zh) 2008-06-25 2011-05-25 艾斯巴技术,爱尔康生物医药研究装置有限责任公司 抑制TNFα的稳定和可溶的抗体
WO2009158704A2 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
NZ590667A (en) * 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
JP2011527579A (ja) 2008-07-08 2011-11-04 アボット・ラボラトリーズ プロスタグランジンｅ２結合タンパク質およびこの使用
RU2011104348A (ru) 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
EP2337799A2 (en) * 2008-08-28 2011-06-29 Wyeth LLC Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases
WO2010042634A1 (en) * 2008-10-07 2010-04-15 National Cheng Kung University Use of il-20 antagonists for treating rheumatoid arthritis and osteoporosis
CA2739352C (en) 2008-10-29 2021-07-13 Wyeth Llc Methods for purification of single domain antigen binding molecules
EP4104821A1 (en) 2008-10-29 2022-12-21 Ablynx N.V. Formulations of single domain antigen binding molecules
US8415291B2 (en) 2008-10-31 2013-04-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Anti-TNF alpha fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
CN101419224B (zh) * 2008-11-06 2012-08-22 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人血浆中霉酚酸酯、霉酚酸及其代谢物的方法
JP2012510468A (ja) * 2008-11-28 2012-05-10 アボット・ラボラトリーズ 安定な抗体組成物およびこれを安定させるための方法
CN101766602B (zh) * 2008-12-30 2012-01-11 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） 取代芳香基腙类化合物在作为肿瘤坏死因子抑制剂药物方面的应用
EP2384367A4 (en) 2008-12-30 2013-07-10 Janssen Biotech Inc SERUM MARKERS TO PREDICT THE CLINICAL RESPONSE TO ANTI-TNF ANTIBODIES IN PATIENTS WITH MORBUS BECHTEREW
CN106995495A (zh) 2009-01-12 2017-08-01 希托马克斯医疗有限责任公司 修饰抗体组合物及其制备和使用方法
BRPI1011384A2 (pt) 2009-02-23 2016-03-15 Cytomx Therapeutics Inc pro-proteinas e seus metodos de uso
US8030026B2 (en) * 2009-02-24 2011-10-04 Abbott Laboratories Antibodies to troponin I and methods of use thereof
KR101579771B1 (ko) * 2009-03-05 2015-12-28 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ-17 결합 단백질
SG175181A1 (en) * 2009-04-16 2011-11-28 Abbott Biotherapeutics Corp ANTI-TNF-a ANTIBODIES AND THEIR USES
CN101875694B (zh) * 2009-04-28 2014-04-02 中国医学科学院基础医学研究所 TNFα的抗体及其用途
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
KR20120038406A (ko) * 2009-05-04 2012-04-23 애보트 바이오테크놀로지 리미티드 인간 항?ＴＮＦ?α 항체의 안정한 고 단백질 농도 제형
WO2010132872A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Novimmune S.A Combination therapies and methods using anti-cd3 modulating agents and anti-tnf antagonists
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
RU2589255C2 (ru) 2009-08-14 2016-07-10 Фейзбайо Фармасьютикалз, Инк. Модифицированные вазоактивные интестинальные пептиды
US20110044981A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-24 Spangler Rhyannon Methods and compositions for treatment of pulmonary fibrotic disorders
RU2570639C2 (ru) 2009-08-29 2015-12-10 Эббви Инк Терапевтические dll4-связывающие белки
MX2012002651A (es) 2009-09-01 2012-05-22 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
CA2773556A1 (en) * 2009-09-14 2011-03-17 Abbott Laboratories Methods for treating psoriasis
WO2011038069A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Xbiotech, Inc. Methods, compositions, and kits for reducing anti-antibody responses
CN102597775A (zh) 2009-09-25 2012-07-18 佐马技术有限公司 筛选方法
WO2011047262A2 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX2012004877A (es) * 2009-10-26 2012-05-23 Prometheus Lab Inc Analisis para la deteccion de farmacos anti-tnf y autoanticuerpos.
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
TW201124535A (en) * 2009-10-30 2011-07-16 Abbott Lab SORF constructs and multiple gene expression
US8420083B2 (en) 2009-10-31 2013-04-16 Abbvie Inc. Antibodies to receptor for advanced glycation end products (RAGE) and uses thereof
EP2499491B1 (en) 2009-11-11 2015-04-01 Gentian AS Immunoassay for assessing related analytes of different origin
GB0920944D0 (en) 2009-11-30 2010-01-13 Biotest Ag Agents for treating disease
WO2011068927A2 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 Abbott Laboratories 11-β-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE TYPE 1 (11B-HSD1) INHIBITORS AND USES THEREOF
MX2012006560A (es) 2009-12-08 2012-10-05 Abbott Gmbh & Co Kg Anticuerpos monoclonales contra la proteina rgm a para utilizarse en el tratamiento de degeneracion de capa de fibra de nervio retinal.
US8758301B2 (en) 2009-12-15 2014-06-24 Abbvie Biotechnology Ltd Firing button for automatic injection device
JP2013514388A (ja) 2009-12-16 2013-04-25 フィリップ ボッシュ， 間質性膀胱炎の処置の方法
USRE49251E1 (en) 2010-01-04 2022-10-18 Mapi Pharma Ltd. Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof
WO2011092715A2 (en) * 2010-01-27 2011-08-04 Tata Memorial Centre Method for in-vivo binding of chromatin fragments
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
CN102167741B (zh) * 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体、其制备方法及用途
MY160628A (en) 2010-03-02 2017-03-15 Abbvie Inc Therapeutic DLL4 Binding Proteins
MX2012011629A (es) 2010-04-07 2013-03-05 Abbvie Inc Proteinas de union a tnf-alfa.
CN104744591B (zh) 2010-04-15 2022-09-27 Abbvie德国有限责任两合公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
LT3202789T (lt) 2010-04-16 2020-06-10 Biogen Ma Inc. Antikūnai prieš vla-4
KR102071212B1 (ko) 2010-04-21 2020-01-30 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 치료제의 제어된 전달을 위한 착용형 자동 주사 디바이스
TWI615405B (zh) 2010-05-14 2018-02-21 艾伯維有限公司 Ｉｌ-１結合蛋白
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
RS57543B1 (sr) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Primene i kompozicije za lečenje hidradenitis suppurativa (hs)
WO2012006500A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Abbott Laboratories Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
CA2807014A1 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN105348387B (zh) 2010-08-14 2020-08-25 Abbvie 公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
WO2012024650A2 (en) 2010-08-19 2012-02-23 Abbott Laboratories Anti-ngf antibodies and their use
RU2013113225A (ru) 2010-08-26 2014-10-10 Эббви Инк. Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение
UY33679A (es) 2010-10-22 2012-03-30 Esbatech Anticuerpos estables y solubles
AU2011319842B2 (en) 2010-10-29 2014-05-29 Abbvie Inc. Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
WO2012061374A2 (en) * 2010-11-02 2012-05-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
PT2637690T (pt) 2010-11-11 2016-12-27 Abbvie Biotechnology Ltd Formulações líquidas de anticorpo anti-tnf-alfa de concentração elevada
KR101923364B1 (ko) 2010-11-23 2018-11-30 애브비 인코포레이티드 아폽토시스­유도제의 염 및 결정형
ES2603129T3 (es) 2010-11-23 2017-02-23 Abbvie Ireland Unlimited Company Métodos de tratamiento utilizando inhibidores selectivos de Bcl-2
AR084210A1 (es) * 2010-12-08 2013-05-02 Abbott Lab PROTEINAS DE UNION AL TNF-a
WO2012088094A2 (en) 2010-12-21 2012-06-28 Abbott Laboratories Il-1 binding proteins
AU2011361720B2 (en) 2010-12-21 2017-04-27 Abbvie Inc. IL-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
US8992477B2 (en) 2011-01-24 2015-03-31 Elcam Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
SG192119A1 (en) 2011-01-24 2013-08-30 Abbvie Biotechnology Ltd Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces
PE20141543A1 (es) 2011-01-24 2014-11-23 Abbvie Biotechnology Ltd Extraccion de protectores de aguja desde jeringas y dispositivos de inyeccion automatica
RU2455025C1 (ru) * 2011-02-10 2012-07-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений
JP2014508715A (ja) 2011-03-07 2014-04-10 国立大学法人徳島大学 筋萎縮性側索硬化症の治療方法
MX2013010699A (es) 2011-03-18 2014-03-27 Abbvie Inc Sistemas, dispositivosy metodos para ensamblar dispositivos de inyeccion automaticos y sub-ensambles de los mismos.
TWI622597B (zh) 2011-03-28 2018-05-01 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
AU2012236405B2 (en) 2011-03-29 2015-07-30 Abbvie Inc. Improved shroud deployment in automatic injection devices
JP6066995B2 (ja) 2011-04-21 2017-01-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 装着型自動注射装置
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AU2012258637B2 (en) 2011-05-24 2017-07-20 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
ES2729945T3 (es) 2011-05-31 2019-11-07 Biogen Ma Inc Procedimiento para valorar el riesgo de LMP
CA2873553C (en) 2011-06-06 2020-01-28 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension
CN103857411A (zh) 2011-07-13 2014-06-11 阿布维公司 使用抗il-13抗体治疗哮喘的方法和组合物
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
WO2013019889A2 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Avaxia Biologics, Inc. Bovine polyclonal antibody specific for human tnf
UY34404A (es) * 2011-10-20 2013-05-31 Esbatech A Novartis Co Llc Anticuerpo estable unido a múltiples antígenos
TW201323440A (zh) 2011-10-24 2013-06-16 Abbvie Inc 抗骨硬化素（ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）之免疫結合物
UY34410A (es) 2011-10-24 2013-05-31 Abbvie Inc Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf
AU2012328921B2 (en) 2011-10-24 2017-05-11 Abbvie Inc. Immunobinders directed against TNF
CA2857597A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
AU2012352168C1 (en) 2011-12-14 2018-01-25 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders
CN104136462B (zh) 2011-12-14 2017-06-09 艾伯维德国有限责任两合公司 用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法
EP2791171A1 (en) 2011-12-16 2014-10-22 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
EP2797955A2 (en) 2011-12-30 2014-11-05 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins against il-13 and/or il-17
TW201333033A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 雙可變域免疫球蛋白及其用途
MX352772B (es) 2012-01-27 2017-12-07 Abbvie Deutschland Composición y método para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades asociadas con la degeneración de neuritas.
CA2866692A1 (en) 2012-03-07 2013-07-11 Cadila Healthcare Limited Formulations which prevent formation of antibody aggregates
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
EP2657334B1 (en) 2012-04-26 2016-07-06 GeneFrontier Corporation Efficient method for displaying protein multimer
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
WO2013184871A1 (en) 2012-06-06 2013-12-12 Zoetis Llc Caninized anti-ngf antibodies and methods thereof
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
TW201402608A (zh) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie Inc Ｉｌ－１結合蛋白質
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
SG11201504249XA (en) 2012-09-02 2015-07-30 Abbvie Inc Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
RS60226B1 (sr) 2012-09-07 2020-06-30 Coherus Biosciences Inc Stabilne vodene formulacije adalimumaba
BR112015005857A2 (pt) * 2012-09-19 2017-08-08 Abbvie Biotherapeutics Inc métodos para identificação de anticorpos com imunogenicidade reduzida
TW202210507A (zh) 2012-11-01 2022-03-16 美商艾伯維有限公司 抗-vegf/dll4雙重可變區域免疫球蛋白及其用途
EP2914626A2 (en) 2012-11-01 2015-09-09 Abbvie Inc. Stable dual variable domain immunoglobulin protein formulations
TWI675044B (zh) 2012-11-14 2019-10-21 美商再生元醫藥公司 重組細胞表面捕捉蛋白質
WO2014100542A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Abbvie, Inc. High-throughput antibody humanization
EP2938634A2 (en) 2012-12-28 2015-11-04 AbbVie Inc. Dual specific binding proteins having a receptor sequence
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
EP2948178A4 (en) 2013-01-25 2016-07-20 Thymon Llc COMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE REDUCTION OF CIRCULATING BIOACTIVE SOLUBLE TNF AND METHODS OF TREATING A TNF MEDIATION DISEASE
CA2900909A1 (en) * 2013-02-13 2014-08-21 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Highly galactosylated anti-tnf-.alpha. antibodies and uses thereof
WO2014143205A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
EP2968526A4 (en) 2013-03-14 2016-11-09 Abbott Lab ANTIGEN-ANTIBODY COMBINATION ASSAY OF HEPATITIS C VIRUS AND METHODS AND COMPOSITIONS FOR USE THEREWITH
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
WO2014159554A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
KR20150129033A (ko) 2013-03-14 2015-11-18 애브비 인코포레이티드 저 산성 종 조성물 및 이의 제조 및 사용 방법
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
CN105209616A (zh) 2013-03-14 2015-12-30 雅培制药有限公司 用于改进的抗体检测的hcv ns3重组抗原及其突变体
CN113549148A (zh) 2013-03-14 2021-10-26 雅培制药有限公司 Hcv核心脂质结合结构域单克隆抗体
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
US9062108B2 (en) 2013-03-15 2015-06-23 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 and/or IL-17
EP2968541A4 (en) 2013-03-15 2017-02-08 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
CN105209491A (zh) 2013-03-15 2015-12-30 艾伯维公司 针对TNFα的双重特异性结合蛋白
KR101671955B1 (ko) * 2013-05-22 2016-11-07 메타볼랩(주) 항 ＴＮＦ-α/ＣＸＣＬ10 이중 타겟 항체 및 그의 용도
EP3003372B1 (en) 2013-06-07 2019-10-09 Duke University Inhibitors of complement factor h
EP3019522B1 (en) 2013-07-10 2017-12-13 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US20150038454A1 (en) * 2013-07-31 2015-02-05 Mary Malast Antimicrobial compositions and methods of use
WO2015038884A2 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for detecting and quantifying host cell protein in cell lines and recombinant polypeptide products
CA2921999C (en) 2013-09-13 2023-03-21 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising an anti-il13 antibody and residual hamster phospholipase b-like 2
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
EP3052524A2 (en) 2013-10-06 2016-08-10 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and tlr signaling autoantigens
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
AU2014337263B2 (en) 2013-10-16 2019-12-12 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2931978A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating osteoarthritis
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
ES2818823T3 (es) 2014-02-27 2021-04-14 Biogen Ma Inc Método de evaluación del riesgo de LMP
KR101921552B1 (ko) 2014-03-10 2018-11-23 리히터 게데온 닐트. 사전 세정 단계를 이용하는 면역글로불린 정제
SG10201908460YA (en) 2014-03-21 2019-11-28 Abbvie Inc Anti-egfr antibodies and antibody drug conjugates
AR099625A1 (es) 2014-03-21 2016-08-03 Lilly Co Eli Anticuerpos de il-21
IN2014MU01248A (no) * 2014-04-02 2015-10-09 Intas Pharmaceuticals Ltd
WO2015172046A1 (en) 2014-05-08 2015-11-12 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating cystic fibrosis
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
DK2946765T3 (en) 2014-05-23 2016-10-31 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
ES2607489T3 (es) 2014-05-23 2017-03-31 Ares Trading S.A. Composición farmacéutica líquida
FR3022462B1 (fr) * 2014-06-18 2018-04-27 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Composition orale d'anticorps anti-tnfalpha
WO2015198320A1 (en) 2014-06-24 2015-12-30 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
ES2926376T3 (es) * 2014-06-30 2022-10-25 Merck Patent Gmbh Anticuerpos anti-TNFa con unión al antígeno dependiente del pH
WO2016004197A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
BR112017004169A2 (pt) * 2014-09-03 2017-12-05 Boehringer Ingelheim Int composto direcionado à il-23a e ao tnf-alfa e usos do mesmo
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
WO2016118707A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Oncobiologics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
EP3053572A1 (en) 2015-02-06 2016-08-10 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CN107427556B (zh) 2015-02-09 2022-02-25 费斯生物制药公司 用于治疗肌肉疾病和病症的方法和组合物
CN105777905B (zh) * 2015-03-24 2019-06-25 广东东阳光药业有限公司 一种全人源抗TNF-α单克隆抗体及其应用
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
WO2016179469A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Abbvie Inc. Methods and compositions for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
EP3303395B1 (en) 2015-05-29 2019-12-11 AbbVie Inc. Anti-cd40 antibodies and uses thereof
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HU231463B1 (hu) 2015-08-04 2024-01-28 Richter Gedeon Nyrt. Módszer rekombináns proteinek galaktóz tartalmának növelésére
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
GB201522394D0 (en) 2015-12-18 2016-02-03 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
US11285210B2 (en) 2016-02-03 2022-03-29 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
RS61374B1 (sr) * 2016-03-17 2021-02-26 Tillotts Pharma Ag Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti
CN109153718B (zh) * 2016-03-17 2022-02-08 努玛治疗有限公司 抗TNFα抗体及其功能片段
JP2019513737A (ja) 2016-04-08 2019-05-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド がん、炎症性疾患および自己免疫疾患を処置するための組成物および方法
WO2017184880A1 (en) 2016-04-20 2017-10-26 Coherus Biosciences, Inc. A method of filling a container with no headspace
EP3448391B1 (en) 2016-04-27 2024-05-29 AbbVie Manufacturing Management Unlimited Company Methods of treatment of diseases in which il-13 activity is detrimental using anti-il-13 antibodies
ES2877548T3 (es) 2016-06-02 2021-11-17 Abbvie Inc Agonista del receptor de glucocorticoides e inmunoconjugados del mismo
RS61828B1 (sr) 2016-06-08 2021-06-30 Abbvie Inc Anti-b7-h3 antitela i antitelske konjugacije lekova
AU2017277534A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
MX2018015284A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo anti-egfr y fármaco.
WO2017214456A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
AU2017279539A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-B7-H3 antibodies and antibody drug conjugates
US11098107B2 (en) 2016-06-15 2021-08-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered CH2 domains, compositions thereof and methods of using the same
WO2018018613A1 (zh) 2016-07-29 2018-02-01 广东东阳光药业有限公司 一种提高抗体纯度的细胞培养基和培养方法
WO2018045258A1 (en) * 2016-09-02 2018-03-08 The University Of Chicago TREATMENT OF TNF-alpha CYTOTOXICITY
EP3512875A2 (en) * 2016-09-15 2019-07-24 Quadrucept Bio Limited Multimers, tetramers&octamers
CN110249226B (zh) 2016-10-03 2023-08-25 雅培实验室 评估患者样品中gfap状态的改进方法
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
US20180110856A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Amgen Inc. Pharmaceutical Formulations and Methods of Making the Same
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
EP4252629A3 (en) 2016-12-07 2023-12-27 Biora Therapeutics, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
MX2019006864A (es) 2016-12-14 2019-10-15 Progenity Inc Tratamiento de una enfermedad del tracto gastrointestinal con un inhibidor de factor de necrosis tumoral (tnf).
MA50134A (fr) 2016-12-16 2020-07-29 Bluefin Biomedicine Inc Anticorps anti-protéine 1 contenant un domaine anti-cub (cdcp1), conjugués anticorps-médicament et leurs méthodes d'utilisation
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
AU2018207367B2 (en) 2017-01-11 2024-02-15 Celltrion Inc. Stable Liquid Formula
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
WO2018140121A1 (en) 2017-01-30 2018-08-02 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active psoriatic arthritis
AU2017398101A1 (en) 2017-02-07 2019-08-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, and methods for the treatment of active Ankylosing Spondylitis
US11608357B2 (en) 2018-08-28 2023-03-21 Arecor Limited Stabilized antibody protein solutions
EP3372241A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
EP3372242A1 (en) 2017-03-06 2018-09-12 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
CA3052513A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
JP2020515530A (ja) 2017-03-26 2020-05-28 マピ ファーマ リミテッド 進行型の多発性硬化症を治療するためのグラチラマーデポシステム
WO2018184692A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
BR112019021612A2 (pt) 2017-04-15 2020-05-12 Abbott Laboratories Métodos para auxiliar o diagnóstico hiperagudo e determinação de traumatismo crânioencefálico em um indivíduo humano com o uso de biomarcadores precoces
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
JP7416625B2 (ja) 2017-05-25 2024-01-17 アボット・ラボラトリーズ 早期バイオマーカーを使用する、頭部への損傷を負ったヒト対象又は負った可能性があるヒト対象に対して、イメージングを実施するかどうかの決定の一助となるための方法
JP7269183B2 (ja) 2017-05-30 2023-05-08 アボット・ラボラトリーズ 心臓トロポニンｉを使用する、ヒト対象における軽度外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
CA3068041A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Abbott Laboratories Improved methods for measuring ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 levels in blood
US11761963B2 (en) 2017-09-27 2023-09-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
SI3658192T1 (sl) 2017-12-01 2021-08-31 Abbvie Inc. Agonist glukokortikoidnega receptorja in njegovi imunokonjugati
CN109879962B (zh) * 2017-12-06 2022-10-11 北京科立思维生物科技有限公司 抗tnf单链抗体、抗il-6单链抗体及其融合蛋白及其应用
JP7379165B2 (ja) 2017-12-09 2023-11-14 アボット・ラボラトリーズ Ｇｆａｐとｕｃｈ－ｌ１との組合せを使用する、ヒト対象における外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法
EP3721233A2 (en) 2017-12-09 2020-10-14 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (tbi), using glial fibrillary acidic protein (gfap) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (uch-l1)
US20210087267A1 (en) 2017-12-20 2021-03-25 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
JP2021517461A (ja) 2018-03-12 2021-07-26 ゾエティス・サービシーズ・エルエルシー 抗ｎｇｆ抗体およびその方法
JP7331000B2 (ja) 2018-03-26 2023-08-22 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 補体ｃ３転換酵素のプロテアーゼ活性を測定するためのスループットの高い方法
US20210238289A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Biogen Ma Inc. Anti-vla-4 antibodies having reduced effector function
WO2019246313A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
KR20210030947A (ko) 2018-07-03 2021-03-18 노파르티스 아게 Nlrp3 길항제를 사용한 tnf 억제제 저항성 대상체를 위한 치료 방법 또는 치료제의 선택 방법
US20210340277A1 (en) 2018-10-11 2021-11-04 The Scripps Research Institute Antibody compounds with reactive arginine and related antibody drug conjugates
WO2020086728A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
KR20210088611A (ko) * 2018-11-05 2021-07-14 베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 항TNFα/항IL-17A 천연항체 구조 형태의 헤테로다이머 이중특이성 항체 및 그 제조방법
HUP1800376A2 (hu) 2018-11-07 2020-05-28 Richter Gedeon Nyrt Sejttenyészetben elõállított rekombináns glikoprotein glikozilációs-mintázatának megváltoztatására szolgáló módszer
US20230024859A1 (en) 2018-11-13 2023-01-26 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
WO2020102098A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
EP3883635A1 (en) 2018-11-19 2021-09-29 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US20220098310A1 (en) 2018-12-06 2022-03-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
EP3960858A4 (en) 2018-12-25 2023-02-15 Institute of Basic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences SMALL RNA DRUG USED TO PREVENT AND TREAT INFLAMMATION-RELATED DISEASES AND COMBINATIONS THEREOF
US20220227707A1 (en) 2019-01-22 2022-07-21 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
HU231498B1 (en) 2019-04-04 2024-05-28 Richter Gedeon Nyrt Improvement of affinity chromatography of immunoglobulins by using pre-capture flocculation
KR102323342B1 (ko) * 2019-04-26 2021-11-08 주식회사 와이바이오로직스 IL-17A 및 TNF-α에 특이적으로 결합하는 이중표적 항체
CN113874073A (zh) 2019-05-23 2021-12-31 詹森生物科技公司 用针对IL-23和TNFα的抗体的联合疗法治疗炎性肠病的方法
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CN114401988A (zh) * 2019-07-09 2022-04-26 国家生物技术研究所公司 具有降低的免疫原性的抗体
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
FR3104582A1 (fr) 2019-12-17 2021-06-18 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Variants de l’adalimumab au potentiel immunogène réduit
CA3167027A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 Larimar Therapeutics, Inc. Tat peptide binding proteins and uses thereof
WO2021178597A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
EP4136459A1 (en) 2020-04-13 2023-02-22 Abbott Laboratories Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample
CA3188349A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 A. Scott Muerhoff Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN111944052B (zh) * 2020-08-26 2022-02-11 中国药科大学 抗TNF-α/PD-1双特异性抗体及其应用
CN112010970B (zh) * 2020-10-30 2021-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 一种去除重组表达抗体聚体和降解产物的方法
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
WO2022123293A1 (ko) 2020-12-09 2022-06-16 에이치케이이노엔 주식회사 항 OX40L 항체, 항 OX40L 및 항 TNFα 이중 특이성 항체 및 이들의 용도
WO2022133325A2 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Kindred Biosciences, Inc. Tnf alpha and ngf antibodies for veterinary use
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
EP4329884A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
IL308404A (en) 2021-04-27 2024-01-01 Generation Bio Co Non-viral DNA vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
BR112023024169A2 (pt) 2021-05-18 2024-02-06 Abbott Lab Métodos para avaliar lesão cerebral em um indivíduo pediátrico
AU2022293389A1 (en) 2021-06-14 2024-01-04 Abbott Laboratories Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
WO2022271782A1 (en) * 2021-06-22 2022-12-29 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling
CN117500816A (zh) 2021-08-26 2024-02-02 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体化合物及其缀合物
CA3230038A1 (en) 2021-08-31 2023-03-09 Hongwei Zhang Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023056268A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023114978A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Abbott Laboratories Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
US20230213536A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2024006681A1 (en) * 2022-06-28 2024-01-04 Adafre Biosciences, Llc Anti-tnf-αlpha antibodies and compositions
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途
WO2024054934A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4680276A (en) * 1977-05-25 1987-07-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Metal polypeptides
AU560087B2 (en) 1981-09-08 1987-03-26 Rockefeller University, The Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US5672347A (en) 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US4661016A (en) * 1985-04-11 1987-04-28 Mobil Oil Corporation Subsea flowline connector
EP0613006A1 (en) 1985-08-16 1994-08-31 The Rockefeller University Antibodies to cachectin and immunoassays
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
GB8630273D0 (en) * 1986-12-18 1987-01-28 Til Medical Ltd Pharmaceutical delivery systems
NZ229922A (en) 1988-07-18 1992-04-28 Chiron Corp Monoclonal antibodies specifically binding cachectin (tumor necrosis factor) and compositions
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US4940723A (en) * 1988-10-20 1990-07-10 University Of North Carolina, Chapel Hill Use of bis-(5-amidino-2-benzimidazolyl) methane (BABIM) to treat arthritis
EP0366043B1 (en) 1988-10-24 1994-03-30 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibody
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IE63847B1 (en) * 1989-05-05 1995-06-14 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
DE3918082A1 (de) * 1989-06-02 1991-01-24 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen autoimmunerkrankungen
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
AU640400B2 (en) 1989-08-07 1993-08-26 Peptide Technology Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6451983B2 (en) * 1989-08-07 2002-09-17 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US7084260B1 (en) * 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) * 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) * 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB9109645D0 (en) 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
GB2279077B (en) 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9028123D0 (en) 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
US6277969B1 (en) * 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20070298040A1 (en) * 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) * 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US7192584B2 (en) 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US5656272A (en) 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
AU668864B2 (en) * 1991-03-18 1996-05-23 Centocor Inc. Chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US5698195A (en) * 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
US20040120952A1 (en) * 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5328985A (en) 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
EP0605522B1 (en) * 1991-09-23 1999-06-23 Medical Research Council Methods for the production of humanized antibodies
WO1994026910A1 (en) 1993-05-12 1994-11-24 Xoma Corporation Immunotoxins comprising gelonin and an antibody
US5869619A (en) * 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
US6270766B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
ATE155043T1 (de) * 1992-10-08 1997-07-15 Kennedy Inst Of Rheumatology Behandlung von autoimmun- und entzundungskrankheiten
ATE204299T1 (de) 1993-03-05 2001-09-15 Bayer Ag Humane monoklonale anti-tnf alpha antikörper
ES2108460T3 (es) 1993-06-03 1997-12-16 Therapeutic Antibodies Inc Fragmentos de anticuerpos en terapeutica.
DE69435126D1 (de) 1993-10-19 2008-10-02 Scripps Research Inst Synthetische humane neutralisierende monoklonale antikörper gegen hiv
EP0659766A1 (en) 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
WO1995023813A1 (en) 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
JPH07289288A (ja) * 1994-04-27 1995-11-07 L T T Kenkyusho:Kk 抗リウマチ薬の効果評価方法
CA2192821A1 (en) 1994-06-24 1996-01-04 Wayne R. Gombotz Controlled release polypeptide compositions and methods of treating inflammatory bowel disease
US5561053A (en) 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
GB9416721D0 (en) * 1994-08-18 1994-10-12 Short Brothers Plc A bias yarn assembly forming device
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
PL188192B1 (pl) * 1996-02-09 2004-12-31 Abbott Lab Bermuda Ltd Izolowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, rekombinowane ludzkie przeciwciało albo jego część wiążąca antygen, kompozycje farmaceutyczne, izolowane kwasy nukleinowe, rekombinowany wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób syntetyzowania przeciwciała ludzkiego, które wiąże ludzki TNFalfa, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, przeciwciało albo jego częśćwiążąca antygen, zastosowanie przeciwciała albo jego części wiążącej antygen
WO2000058362A1 (en) * 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha binding proteins and methods based thereon
US20050249735A1 (en) * 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20060018907A1 (en) 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
BR0206160A (pt) * 2001-05-25 2004-10-26 Abbott Gmbh & Co Kg Uso de anticorpos anti-tnf como medicamentos no tratamento de distúrbios sépticos de pacientes anêmicos
CA2868614A1 (en) 2001-06-08 2002-12-08 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) * 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040136991A1 (en) * 2002-07-19 2004-07-15 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of anemia using TNFalpha inhibitors
US20040033228A1 (en) * 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040054414A1 (en) * 2002-09-18 2004-03-18 Trieu Hai H. Collagen-based materials and methods for augmenting intervertebral discs
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI556829B (zh) * 2004-04-09 2016-11-11 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
TWI399384B (zh) * 2005-05-16 2013-06-21 Abbott Biotech Ltd ＴＮＦα抑制劑於治療侵蝕型多發性關節炎之用途
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
RS53055B (en) 2005-11-01 2014-04-30 Abbvie Biotechnology Ltd PROCEDURES FOR DETERMINING THE EFFICIENCY OF ADALIMUMAB IN RESPONDENTS WHO HAVE ANKILLOSATIVE SPONDILITIS USING CTX-II AND MMP3 AS BIOMARKERS
EP2738179A1 (en) 2006-04-05 2014-06-04 AbbVie Biotechnology Ltd Antibody purification
WO2008063213A2 (en) * 2006-04-10 2008-05-29 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
CA2651992A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-10 Abbott Biotechnology Ltd. Automatic injection device
NZ597334A (en) * 2006-09-13 2014-02-28 Abbott Lab Cell culture improvements
KR20150002896A (ko) * 2006-10-27 2015-01-07 애브비 바이오테크놀로지 리미티드 결정형 항-ｈＴＮＦ알파 항체
WO2008121301A1 (en) 2007-03-29 2008-10-09 Abbott Laboratories Crystalline anti-human il-12 antibodies
WO2008150491A2 (en) * 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
WO2008150490A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriasis and crohn's disease
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
CN101848733A (zh) * 2007-07-13 2010-09-29 艾博特生物技术有限公司 用于肺部给予TNFα抑制剂的方法和组合物
CN101980722A (zh) * 2007-08-08 2011-02-23 雅培制药有限公司 结晶抗体的组合物和方法
SG10201604258YA (en) * 2007-11-30 2016-07-28 Abbvie Biotechnology Ltd Anti-tnf antibody formulations
WO2009086550A1 (en) * 2008-01-03 2009-07-09 Abbott Laboratories Predicting long-term efficacy of a compound in the treatment of psoriasis
CN104188911A (zh) * 2008-01-15 2014-12-10 Abbvie德国有限责任两合公司 粉末状蛋白质组合物及其制备方法
JP5635912B2 (ja) * 2008-01-15 2014-12-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 改善された哺乳動物発現ベクター及びその使用
CN102065892A (zh) 2008-01-30 2011-05-18 雅培制药有限公司 用于使抗体片段结晶的组合物和方法
EP2271671A2 (en) * 2008-03-24 2011-01-12 Abbott Biotechnology Ltd. Tnf-alpha inhibitors for treating bone loss
BRPI1012162A2 (pt) 2009-04-29 2016-01-12 Abbott Biotech Ltd dispositivo de injeção automática
KR20120038406A (ko) * 2009-05-04 2012-04-23 애보트 바이오테크놀로지 리미티드 인간 항?ＴＮＦ?α 항체의 안정한 고 단백질 농도 제형
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
RS57543B1 (sr) 2010-06-03 2018-10-31 Abbvie Biotechnology Ltd Primene i kompozicije za lečenje hidradenitis suppurativa (hs)
US9085618B2 (en) * 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
US20100040604A1 (en) 2010-02-18
HK1214610A1 (zh) 2016-07-29
NO2017038I2 (no) 2017-11-17
JP2007045828A (ja) 2007-02-22
BRPI9707379B8 (pt) 2015-07-07
NO20026202L (no) 1998-10-07
JP4890997B2 (ja) 2012-03-07
CZ247698A3 (cs) 1998-11-11
HK1125972A1 (en) 2009-08-21
CN103275221A (zh) 2013-09-04
BG66509B1 (bg) 2015-11-30
DE122004000003I1 (de) 2004-09-23
DE69721548D1 (de) 2003-06-05
BRPI9707379C8 (pt) 2017-12-12
JP2010209119A (ja) 2010-09-24
KR19990082430A (ko) 1999-11-25
AU722077B2 (en) 2000-07-20
CY2005011I1 (el) 2011-06-08
BG109311A (en) 2006-03-31
HK1214607A1 (zh) 2016-07-29
US20120258114A1 (en) 2012-10-11
CN102070715A (zh) 2011-05-25
CN1504752A (zh) 2004-06-16
JP2003177130A (ja) 2003-06-27
HU221984B1 (hu) 2003-03-28
RU2270030C2 (ru) 2006-02-20
NL300143I2 (nl) 2004-07-01
HK1214609A1 (zh) 2016-07-29
US20090155205A1 (en) 2009-06-18
RO123028B1 (ro) 2010-07-30
NZ512006A (en) 2005-05-27
LU91062I2 (fr) 2004-04-26
HK1019452A1 (en) 2000-02-11
BG64776B1 (bg) 2006-03-31
US6258562B1 (en) 2001-07-10
BR9707379A (pt) 1999-04-13
US20130330357A1 (en) 2013-12-12
EP0929578B1 (en) 2003-05-02
NO983627D0 (no) 1998-08-07
JP5422501B2 (ja) 2014-02-19
SI9720020B (en) 2001-12-31
NL300143I1 (nl) 2004-05-03
NZ536216A (en) 2006-08-31
JP5759526B2 (ja) 2015-08-05
RU2012102323A (ru) 2013-07-27
SK284040B6 (sk) 2004-08-03
UA57726C2 (uk) 2003-07-15
MX9806347A (es) 1998-10-31
DK0929578T3 (da) 2003-08-25
US20130330356A1 (en) 2013-12-12
HU0204115D0 (en) 2003-02-28
BG110703A (en) 2010-10-29
HK1066860A1 (en) 2005-04-01
UA82823C2 (en) 2008-05-26
JP3861118B2 (ja) 2006-12-20
BG64564B1 (bg) 2005-07-29
NO2004002I2 (no) 2008-02-04
US20130115224A1 (en) 2013-05-09
ES2198552T3 (es) 2004-02-01
CN1300173C (zh) 2007-02-14
NO2017038I1 (no) 2017-08-01
CN101712720A (zh) 2010-05-26
EP0929578A1 (en) 1999-07-21
PL188192B1 (pl) 2004-12-31
RU2003120859A (ru) 2005-01-10
BG66195B1 (bg) 2012-01-31
SI9720020A (sl) 1999-10-31
KR100317188B1 (ko) 2002-02-19
RU2458704C2 (ru) 2012-08-20
NZ331579A (en) 2001-06-29
HK1125951A1 (en) 2009-08-21
JP5689902B2 (ja) 2015-03-25
HK1214608A1 (zh) 2016-07-29
HUP9901874A2 (hu) 1999-09-28
RU2005113954A (ru) 2006-11-20
US20030092059A1 (en) 2003-05-15
HU230048B1 (hu) 2015-06-29
JP2000507810A (ja) 2000-06-27
DE122004000003I2 (de) 2007-03-29
US8753633B2 (en) 2014-06-17
HUP9901874A3 (en) 2000-05-29
JP2015108011A (ja) 2015-06-11
BG112042A (bg) 2015-10-30
PT929578E (pt) 2003-09-30
CZ292465B6 (cs) 2003-09-17
BR9715219B1 (pt) 2010-02-23
IL151641A0 (en) 2003-04-10
MX336813B (es) 2016-02-02
IL206994A0 (en) 2010-12-30
WO1997029131A1 (en) 1997-08-14
JP2016104798A (ja) 2016-06-09
SK106298A3 (en) 1999-03-12
CA2243459C (en) 2002-09-17
PL193499B1 (pl) 2007-02-28
RO119831B1 (ro) 2005-04-29
NO316711B1 (no) 2004-04-13
CA2243459A1 (en) 1997-08-14
JP2014055150A (ja) 2014-03-27
BG102755A (en) 1999-05-31
US7223394B2 (en) 2007-05-29
ATE239041T1 (de) 2003-05-15
NO320657B1 (no) 2006-01-09
IL218518A0 (en) 2012-04-30
PL328411A1 (en) 1999-01-18
US20070249813A1 (en) 2007-10-25
US8372400B2 (en) 2013-02-12
NO20026202D0 (no) 2002-12-23
BRPI9715219B8 (pt) 2015-07-07
IL125697A (en) 2005-03-20
NO20040052L (no) 1998-10-07
DE69721548T2 (de) 2004-04-01
NZ562935A (en) 2009-06-26
CN100429232C (zh) 2008-10-29
RU2458704C9 (ru) 2012-12-10
NZ576716A (en) 2011-02-25
US8206714B2 (en) 2012-06-26
IL125697A0 (en) 1999-04-11
HUP1500179A2 (en) 1999-09-28
NO319955B1 (no) 2005-10-03
NO983627L (no) 1998-10-07
AU2122997A (en) 1997-08-28
HU228630B1 (en) 2013-04-29
CY2463B1 (en) 2005-06-03
JP5951056B2 (ja) 2016-07-13
JP2013091666A (ja) 2013-05-16
CN103275221B (zh) 2016-08-17
BR9707379B1 (pt) 2009-08-11
HU230515B1 (hu) 2016-10-28
DE122004000004I1 (de) 2004-08-12
US7541031B2 (en) 2009-06-02
NO20040154L (no) 1998-10-07
CN1215407A (zh) 1999-04-28
TR199801532T2 (xx) 1998-11-23
JP4404181B2 (ja) 2010-01-27
BG107537A (en) 2003-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5951056B2 (ja) ヒトＴＮＦαに結合するヒト抗体
EP2397494A1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2013203420B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2013257402B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2012261708B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2006241387B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha

Legal Events

Date Code Title Description
FC2A Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application
ERR Erratum

Free format text: I PATENTTIDENDE NR. 46/05 BLE PATENTSOKNAD NR. 20040052 FEILAKTIG KUNNGJORT HENLAGT. SOKNADEN ER FORTSATT UNDER BEHANDLING.

CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: ABBOTT BIOTECHNOLOGY LTD, BM

CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: ABBVIE BIOTECHNOLOGY LTD, BM

MK1K Patent expired