BRPI0918841B1

BRPI0918841B1 - Derivados de dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol, seus cristais, composições farmacêuticas e usos

Info

Publication number: BRPI0918841B1
Application number: BRPI0918841-0A
Authority: BR
Inventors: Vincent Mascitti; Benjamin Micah Collman
Original assignee: Pfizer Inc.
Priority date: 2008-08-28
Filing date: 2009-08-17
Publication date: 2019-10-08
Also published as: CL2011000394A1; AP2011005616A0; BRPI0918841A2; ES2380408T3; AR073138A1; CY2018024I2; JP2012500842A; MX2011002166A; TW201014863A; KR20130116078A; DK2334687T5; NO2018019I2; MY155418A; CR20110077A; FR18C1036I1; FR18C1036I2; HK1156616A1; EP2334687B9; CA2733795A1; AU2009286380A8

Abstract

derivados de dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol, seus cristais, composições farmacêuticas e usos a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (i) e aos usos dos mesmos para o tratamento de doenças, condições e/ou transtornos mediados por inibidores de transportador de sódio-glicose (em particular, inibidores de sglt2). os compostos aqui descritos são úteis para a prevenção e tratamento de obesidade e suas comorbidades associadas, em particular diabetes tipo ii (tipo 2).

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para DERIVADOS DE DIOXA-BICICLO[3.2.1]OCTANO-2,3,4-TRIOL, SEUS CRISTAIS, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E USOS.

CAMPO DA INVENÇÃO [001] A presente invenção refere-se a derivados de dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol, estruturas de cristal, composições farmacêuticas e os usos dos mesmos como inibidores de cotransportador de sódio-glicose (SGLT).

ANTECEDENTE [002] Obesidade é um problema de saúde significante devido a suas sérias complicações médicas que incluem comorbidades tais como hipertensão, resistência à insulina, diabetes, doença arterial coronária e insuficiência cardíaca (coletivamente chamada Síndrome Metabólica). Obesidade e suas comorbidades relacionadas continuam causando questões de saúde crescentes no mundo desenvolvido e também estão começando a afetar o mundo em desenvolvimento. As consequências à saúde negativas da obesidade torna-a a segunda causa principal de morte evitável nos Estados Unidos e confere um efeito econômico e psicossocial significante sobre a sociedade. Vide, McGinnis M, Foege WH., Actual Causes of Death in the United States, JAMA, 270, 2207-12 (1993). Há uma necessidade para identificar e desenvolver novos medicamentos que tratam e/ou previnem obesidade e suas comorbidades associadas, em particular diabetes tipo II (tipo 2).

[003] Mais recentemente, inibidores de cotransporte de sódioglicose (SGLT), particularmente inibidores de SGLT2, mostraram bloquear a reabsorção de glicose do filtrado renal no glomérulo, que induz, portanto, a excreção de glicose na urina. Quando a glicose em excesso é excretada, há uma diminuição no nível de glicose no sangue, armazenamento hepático diminuído de glicose, secreção de insulina diminuída

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 5/154

2/141 e, subsequentemente, conversão de carboidrato em gordura diminuída e, por último, gordura acumulada reduzida. É esperado que a inibição seletiva de SGLT2 normalize a glicose de plasma, aumentando-se a excreção de glicose. Por conseguinte, inibidores de SGLT2 fornecem um meio atrativo para a melhoria das condições diabéticas sem aumentar o peso corporal ou o risco de hipoglicemia. Vide, Isaji, M., Current Opinion Investigational Drugs, 8(4), 285-292 (2007). Para uma revisão geral de SGLT como um alvo terapêutico, vide, também, Asano,

T., e outros, Drugs of the Future, 29(5), 461-466 (2004).

[004] exemplos representativos de glicosídeos que mostraram ser úteis para o tratamento de NIDDM e obesidade, podem ser encontrados nas seguintes descrições: Patente U.S. N° 6.515.117; 6.414.126; 7.101.856; 7.169.761; e 7.202.350; Publicação U.S. N°

US2002/0111315; US2002/0137903; US2004/0138439;

US2005/0233988; US2006/0025349; US2006/0035841; e

US2006/0632722; e Publicação PCT N° WO01/027128; WO02/044192; WO02/088157; WO03/099836; WO04/087727;

WO05/021566; WO05/085267; WO06/008038; WO06/002912;

WO06/062224; WO07/000445; WO07/093610; e WO08/002824.

[005] Certos glicosídeos são genotóxicos e impactam o material genético de uma célula, tal que eles podem ser potencialmente mutagênicos ou carcinogênicos. Materiais genotóxicos podem ser detectados usando ensaios padrões tais como In Vitro Mammalian Cell Micronuleus Test (MNvit), Organization for Economic Co-Operation and Development (OECD) Draft Test Guideline (Draft TG) 487 (2007); In vitro Mammalian Chromosomal Aberration Test, OECD TG 473 (1997 ); Bacterial Reverse Mutation Test, OECD TG 471 (1997); Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test, OECD TG 474 (1997); ou similares. Por conseguinte, ainda existe uma necessidade por um tratamento terapêutico mais eficaz e seguro e/ou prevenção de obesidade e suas

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 6/154

3/141 comorbidades associadas, em particular, diabetes Tipo 2 e transtornos relacionados.

SUMÁRIO [006] Foi constatado que os compostos de fórmula (A) e fórmula (B) agem como inibidores de cotransporte de sódio-glicose (SGLT), em particular, inibidores de SGLT2; portanto, pode ser usado no tratamento de doenças mediadas por tal inibição (por exemplo, doenças relacionadas a obesidade, diabetes Tipo 2 e comorbidades relacionadas a obesidade e relacionadas ao diabetes). Estes compostos podem ser representados pelas fórmulas (A) e (B) como mostrado abaixo:

(B) (A) em que R¹ é H, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, Cl, F, ciano, (C1C2)alquila substituída por fluoro, (C1-C4)alquil-SO2- ou (C3C6)cicloalquila; e [007] R² é (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C2-C4)alquinila, 3 oxetanilóxi, 3-tetra-hidrofuranilóxi, Cl, F, ciano, (C1-C2)alquila substituída por fluoro, (C1-C4)alquil-SO2-, (C3-C6)cicloalquila, ou um (C5C6)heterociclo que tem 1 ou 2 heteroátomos, cada qual independentemente selecionado a partir de N, O ou S [008] É geralmente compreendido por aqueles versados na técnica que vários substituintes podem ser adicionados aos compostos de fórmula (A) ou fórmula (B) contanto que o(s) substituinte(s) seleciona do(s) adversamente não afete(m) as características farmacológicas do composto ou adversamente interfira com o uso do medicamento.

[009] Compostos específicos de fórmula (A) incluem:

(1S,2S,3S,4R,5S)-1-hidroximetil-5-[3-(4-metóxi-benzil)-4-metil-fenil]Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 7/154

4/141

6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4- etóxi-benzil)-4-metil-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-

2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1- hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (1 S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-fluoro-3(4-metóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-

2,3,4-triol; 2-(4-metoxibenzil)-4-((1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidróxi-1(hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)benzonitrila; 2-(4- etoxibenzil)-4-((1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidróxi-1-(hidroximetil)-6,8dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)benzonitrila; (1 S,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-etóxibenzil)-4-fluoro-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-

2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furan-3-ilóxi)- benzil]-fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-1-hidroximetil-6,8dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4(oxetan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; e (1S,2S,3S,4R,5S)-5-{4-cloro-3-[4(oxetan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol.

[0010] Compostos específicos de fórmula (B) incluem:

(15.25.35.45.55) -1-hidroximetil-5-[3-(4-metóxi-benzil)-4-metil-fenil]-

6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4- etóxi-benzil)-4-metil-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-

2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1- hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(15.25.35.45.55) -5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8- dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol; (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[4-fluoro-3-(4metóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4triol; (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-1Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 8/154

5/141 hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol; e (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-1-hidroximetil-6,8dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol.

[0011] Um outro aspecto da presente invenção é um cristal que compreende um composto tendo a fórmula (4A):

(4A).

[0012] Outro aspecto da presente invenção é uma composição farmacêutica que compreende (1) um composto da presente invenção, e (2) um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Preferivelmente, a composição compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. A composição também pode conter pelo menos um agente farmacêutico adicional (aqui descrito). Agentes preferidos incluem agentes antiobesidade e/ou agentes antidiabéticos (aqui descrito abaixo).

[0013] Em ainda outro aspecto da presente invenção, um método para tratar uma doença, transtorno ou condição modulada por inibição de SGLT2 em animais é, contanto que inclua a etapa de administrar a um animal (preferivelmente, um ser humano) em necessidade de tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção (ou uma composição farmacêutica do mesmo). Doenças, condições, e/ou transtornos modulados por inibição de SGLT2 incluem, por exemplo, Diabetes tipo II, nefropatia diabética, síndrome de resistência à insulina, hiperglicemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, tolerância à glicose prejudicada, obesidade (inclusive

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 9/154

6/141 controle de peso ou manutenção de peso), hipertensão e redução do nível de glicose no sangue.

[0014] Os compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação com outros agentes farmacêuticos (em particular, agentes antiobesidade e antidiabéticos aqui descritos abaixo). A terapia de combinação pode ser administrada como (a) uma única composição farmacêutica que compreende um composto da presente invenção, pelo menos um agente farmacêutico adicional aqui descrito e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável; ou (b) duas composições farmacêuticas separadas que compreendem (i) uma primeira composição compreendendo um composto da presente invenção e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável, e (ii) uma segunda composição compreendendo pelo menos um agente farmacêutico adicional aqui descrito e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. As composições farmacêuticas podem ser administradas simultaneamente ou sequencialmente e em qualquer ordem.

[0015] Deve ser entendido que a descrição geral precedente, e a descrição detalhada seguinte, são apenas exemplares e explicativas e não são restritivas da invenção, como reivindicado.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0016] A figura 1 representa a estrutura de cristal refinada para o composto do exemplo 8A, que foi plotado usando o pacote de plotagem SHELXTL.

[0017] A figura 2 representa a estrutura de cristal refinada para o composto do exemplo 9^a, que foi plotado usando o pacote de plotagem SHELXTL.

[0018] A figura 3 representa um padrão de difração de pó de raios

X observado para o exemplo 22: cocristal do exemplo 18 do composto do exemplo 4A e L-prolina.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 10/154

7/141 [0019] A figura 4 representa um padrão de difração de pó de raios

X observado para o exemplo 22: cocristal do exemplo 20 do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico.

[0020] A figura 5 representa um termograma de calorimetria de varredura diferencial observado para o exemplo 23: cocristal do exemplo 18 do composto do exemplo 4A e L-prolina.

[0021] A figura 6 representa um termograma de calorimetria de varredura diferencial observado para o exemplo 23: cocristal do exemplo 20 do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico.

[0022] A figura 7 representa a estrutura de cristal refinada para o exemplo 24: cocristal do composto do exemplo 4A e L-prolina, que foram plotados usando o pacote de plotagem SHELXTL.

[0023] A figura 8 representa a estrutura de cristal refinada para o exemplo 25: cocristal do composto do exemplo 4A e ácido Lpiroglutâmico, que foram plotados usando o pacote de plotagem SHELXTL.

[0024] A figura 9 representa um espectro de ressonância magnética nuclear em estado sólido ¹³C observado para o exemplo 26: cocristal do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico. Os picos marcados por asteriscos são faixas adjacentes giratórias.

DESCRIÇÃO DETALHADA [0025] A presente invenção pode ser entendida ainda mais facilmente por referência à seguinte descrição detalhada de modalidades exemplares da invenção e aos exemplos aqui incluídos.

[0026] Antes dos compostos presentes, composições e métodos serem descobertos e descritos, deve ser entendido que esta invenção não está limitada aos métodos sintéticos específicos de preparação, que podem, claro, variar. Também será entendido que a terminologia aqui usada está com a finalidade de apenas descrever modalidades particulares e não se pretende que seja limitante. O plural e singular

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 11/154

8/141 deveriam ser tratados como intercambiáveis, diferente da indicação do número:

[0027] Como aqui usado, o termo alquila refere-se a um radical de hidrocarboneto da fórmula geral CnH2n+1. O radical de alcano pode ser direto ou ramificado. Por exemplo, o termo (C1-C6)alquila referese a um grupo alifático monovalente, direto ou ramificado que contém 1 a 6 átomos de carbono (por exemplo, metila, etila, n-propila, ipropila, n-butila, i-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, 1-metilbutila, 2metilbutila, 3-metilbutila, neopentila, 3,3-dimetilpropila, hexila, 2metilpentila, e similares). Similarmente, a parte de alquila (isto é, porção de alquila) de um grupo alcóxi, acila (por exemplo, alcanoila), alquilamino, dialquilamino, alquilsulfonila e alquiltio têm a mesma definição como acima. Quando indicado como sendo opcionalmente substituído, o radical de alcano ou porção de alquila pode ser não substituído ou substituído com um ou mais substituintes (geralmente, um a três substituintes menos no caso de substituintes de halogênio tais como percloro ou perfluoroalquilas) independentemente selecionados a partir do grupo de substituintes listado abaixo na definição para substituído. Alquila substituída por halo refere-se a um grupo de alquila substituído com um ou mais átomos de halogênio (por exemplo, fluorometila, difluorometila, trifluorometila, perfluoroetila, 1,1-difluoroetila e similares).

[0028] O termo cicloalquila refere-se a anéis não aromáticos que são hidrogenados completamente e podem existir como um único anel, anel bicíclico ou um espiroanel. A menos que especificado de outra maneira, o anel carbocíclico geralmente é um anel de 3 a 8 membros. Por exemplo, cicloalquila incluem grupos tais como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, norbornil(biciclo[2.2.1]heptila), biciclo[2.2.2]octila, e similares.

[0029] O termo heterociclo refere-se a anéis não aromáticos que

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 12/154

9/141 são hidrogenados completamente e podem existir como um único anel, anel bicíclico ou um espiroanel. A menos que especificado de outra maneira, o anel heterocíclico geralmente é um anel de 3 a 6 membros que contém 1 a 3 heteroátomos (preferivelmente 1 ou 2 heteroátomos) independentemente selecionados a partir de enxofre, oxigênio e/ou nitrogênio. Anéis heterocíclicos incluem grupos tais como epóxi, aziridinila, tetra-hidrofuranoíla, pirrolidinila, M-metilpirrolidinila, piperidinila, piperazinila, pirazolidinila, 4H-piranila, morfolino, tiomorfolino, tetra-hidrotienila, 1,1-dióxido de tetra-hidrotienila, e similares.

[0030] A frase quantidade terapeuticamente eficaz significa uma quantidade de um composto da presente invenção que (i) trata a doença, condição ou transtorno particular, (ii) atenua, melhora ou elimina um ou mais sintomas da doença, condição ou transtorno particular, ou (iii) previne ou retarda o início de um ou mais sintomas da doença, condição ou transtorno particular aqui descrito.

[0031] O termo animal refere-se a seres humanos (homem ou mulher), animais de companhia (por exemplo, cachorros, gatos e cavalos), animais fonte de alimento, animais de jardim zoológico, animais marinhos, pássaros e outras espécies de animal similares. Animais comestíveis refere-se a animais fonte de alimento tais como vacas, porcos, ovelha e aves.

[0032] A frase farmaceuticamente aceitável indica que a substância ou composição deve ser compatível quimicamente e/ou toxicologicamente, com os outros ingredientes que compreendem uma formulação, e/ou o mamífero que é tratado com isto.

[0033] Os termos tratando, tratar ou tratamento abrange igualmente preventivo, isto é, tratamento profilático e paliativo.

[0034] Os termos modulado ou modulando ou modula(r), quando aqui usado, a menos que de outra maneira indicado, refere-se à inibição do transportador de sódio-glicose (em particular, SGLT2)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 13/154

10/141 com compostos da presente invenção que desse modo previnem parcialmente ou completamente o transporte de glicose pelo transportador.

[0035] O termo compostos da presente invenção (a menos que especificamente identificado de outra maneira) refere-se a compostos de fórmula (A), fórmula (B) e todos os estereoisômeros puros e misturados (inclusive diastereoisômeros e enantiômeros), tautômeros e compostos isotopicamente rotulados. Hidratos e solvatos dos compostos da presente invenção são considerados composições da presente invenção, em que o composto está em associação com água ou solvente, respectivamente. Os compostos também podem existir em um ou mais estados cristalinos, isto é como cocristais, polimorfos, ou eles podem existir como sólidos amorfos. Todas as tais formas são abrangidas pelas reivindicações.

[0036] Em uma modalidade, R¹ é H, metila, etila, propila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3, ciclopropila ou ciclobutila. Em outra modalidade, R¹ é H, metila, etila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3 ou ciclopropila. Em uma outra modalidade, R¹ é H, metila, etila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3 ou ciclopropila. Em ainda uma outra modalidade, R¹ é metila, etila, F, Cl, ciano, CF3 ou ciclopropila.

[0037] Em uma modalidade, R2 é metila, etila, propila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinila, 3-oxetanilóxi, 3-tetrahidrofuranoilóxi ou ciclopropila. Em outra modalidade, R² é metila, etila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinila, 3oxetanilóxi, 3-tetra-hidrofuranoilóxi ou ciclopropila. Em uma outra modalidade, R² é metila, etila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinila, 3-oxetanilóxi, 3-tetra-hidrofuranoilóxi ou ciclopropila. Em ainda uma outra modalidade, R2 é metóxi ou etóxi.

[0038] Em uma modalidade, o cristal compreende o composto 4A e L-prolina ou ácido L-piroglutâmico.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 14/154

11/141 [0039] Em uma outra modalidade, o cristal tem um ou mais do seguinte:

a) grupo espacial de P2(1)2(1)2(1) e parâmetros de célula unitária substancialmente igual ao seguinte:

a = 7,4907(10) Αα = 90°.

b = 12,8626(15) Αβ = 90°.

c = 28,029(4) Αγ = 90°;

b) um padrão de difração de pó de raios X que compreende valores de 2-teta de (radiação de Cu^, comprimento de onda de 1,54056A) 6,4 ± 0,2, 16,7 ± 0,2, 17,4 ± 0,2 e 21,1 ± 0,2;

c) um espectro de 13C RMN em estado sólido que tem posições de pico em 16,5 ± 0,2, 131,1 ± 0,2, 158,7 ± 0,2, e 181,5 ± 0,2 ppm como determinado em um espectrômetro de 500 MHz relativo a adamantino cristalino de 29,5 ppm; ou

d) um termograma de calorimetria de varredura diferencial que tem uma endotermia de cerca de 142,5 ± 2°C.

[0040] Em uma outra modalidade, o cristal é um cocristal que compreende o composto de fórmula (4A) e ácido L-piroglutâmico em uma relação 1:1 de estequiométrica.

[0041] Compostos da presente invenção podem ser sintetizados por rotas sintéticas que incluem processos análogos àqueles bem conhecidos nas técnicas químicas, particularmente levando em conta a descrição aqui contida. Os materiais de partida estão geralmente disponíveis a partir de fontes comerciais tais como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) ou são facilmente preparados usando métodos bem conhecidos por aqueles versados na técnica (por exemplo, preparados por métodos geralmente descritos em Louis F. Fieser e Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.), ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, inclusive suplementos (também disponível por

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 15/154

12/141 meio do banco de dados on-line Beilstein)).

[0042] Para propósitos ilustrativos, os esquemas de reação descritos abaixo fornecem rotinas potenciais para sintetizar os compostos da presente invenção bem como intermediários fundamentais. Em uma descrição mais detalhada das etapas de reação individuais, vide a seção de exemplos abaixo. Aqueles versados na técnica apreciarão que outras rotinas sintéticas podem ser usadas para sintetizar os compostos inventivos. Embora os materiais de partida específicos e reagentes sejam descritos nos esquemas e discutidos abaixo, outros materiais de partida e reagentes podem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de derivados e/ou condições de reação. Além disso, muitos dos compostos preparados pelos métodos descritos abaixo, também podem ser modificados levando em conta esta descrição, usando química convencional bem conhecida por aqueles versados na técnica.

[0043] Na preparação de compostos da presente invenção, a proteção de funcionalidade remota de intermediários pode ser necessária. A necessidade para tal proteção variará, dependendo da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. Um grupo de proteção de hidróxi refere-se a um substituinte de um grupo hidróxi que bloqueia ou protege a funcionalidade de hidróxi. Grupos de proteção de hidroxila adequados (O-Pg) incluem, por exemplo, alila, acetil (Ac), silila (como trimetilasilia (TMS) ou tercbutildimetilasilila (TBS)), benzila (Bn), para-metoxibenzila (PMB), tritila (Tr), para-bromobenzoíla, para-nitrobenzoíla e similares (benzilideno para proteção de 1,3-dióis). A necessidade para tal proteção é facilmente determinada por alguém versado na técnica. Em uma descrição geral de grupos de proteção, e seu uso, vide T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

[0044] O esquema 1 esboça os procedimentos gerais que poderiPetição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 16/154

13/141

am usados para fornecer compostos da presente invenção.

OH

L „o.

etapa 2

Pg¹O i bPg¹

OPg¹

Pg²O

OPg²

Pg¹' (I-a)

Pg²O

OPg²

N-O

OH

Pg¹ etapa 5 bPg¹OPg¹ (i-f)

Pg²O

OPg²

O

Pg¹

OPg¹

OPg¹ (I-e) etapa 3 bPg¹OPg¹(I-c)

OPg² etapa 4 Pg²O

OH

Pg'O

OPg¹

OPg¹(I-d) ^OPg2 ^Pg etapa 6

I I OPg¹ ______ >k Λ Jk O

H<T N

OPg¹OPg¹ I (I-g)

R²

Esquema 1 [0045] Alil 2,3,4-tri-O-benzila-D-glucopiranosídeo (I-a, onde Pg¹ é um grupo benzila) pode ser preparado por procedimentos descritos por Shinya Hanashima, e outros, em Bioorganic & Medicinal Chemistry, 9, 367 (2001); Patricia A. Gent e outros, em Journal of the Chemical Society, Perkin 1, 1835 (1974); Hans Peter Wessel no Journal of Carbohydrate Chemistry, 7, 263, (1988); ou Yoko Yuasa, e outros, em Organic Process Research & Development, 8, 405-407 (2004). Na etapa

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 17/154

14/141 do esquema 1, o grupo hidroximetileno pode ser introduzido no glicosídeo por meio de uma oxidação de Swern, seguida por tratamento com formaldeído na presença de um hidróxido de metal de álcali (por exemplo, hidróxido de sódio). Isto é chamado uma reação de aldolCannizzaro. A oxidação de Swern é descrita por Kanji Omura e Daniel Swern em Tetrahedron, 34, 1651 (1978). Modificações deste processo conhecidas por aqueles versados na técnica também podem ser usadas. Por exemplo, outros oxidantes, como ácido 2-iodoxibenzoico estabilizado descrito por Ozanne, A., e outros em Organic Letters, 5, 2903 (2003), bem como outros oxidantes conhecidos por aqueles versados na técnica também pode ser usado. A sequência de aldol Cannizzaro foi descrita por Robert Schaffer no Journal of The American Chemical Society, 81, 5452 (1959) e Amigues, E.J., e outros, em Tetrahedron, 63, 10042 (2007).

[0046] Na etapa 2 do esquema 1, grupos de proteção (Pg²) podem ser adicionados tratando-se o intermediário (I-b) com os reagentes apropriados e procedimentos para o grupo de proteção particular desejado. Por exemplo, grupos p-metoxibenzila (PMB) podem ser introduzidos por tratamento do intermediário (I-b) com brometo de pmetoxibenzila ou cloreto de p-metoxibenzila na presença de hidreto de sódio, hidreto de potássio, ferc-butóxido de potássio em um solvente como tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano ou M,M-dimetilformamida (DMF). Condições que envolvem para-metoxibenziltricloroacetimidato na presença de uma quantidade catalítica de ácido (por exemplo, ácido trifluorometanossulfônico, ácido metanossulfônico, ou ácido canforsulfônico) em um solvente tal como diclorometano, heptano ou hexanos também podem ser usados. Grupos benzila (Bn) podem ser introduzidos por tratamento do intermediário (I-b) com brometo de benzila ou cloreto de benzila na presença de hidreto de sódio, hidreto de potássio, ferc-butóxido de potássio em um solvente como tetraPetição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 18/154

15/141 hidrofurano, 1,2-dimetoxietano ou Μ,Μ-dimetilformamida. Condições que envolvem benziltricloroacetimidato na presença de uma quantidade catalítica de ácido (por exemplo, ácido trifluorometanossulfônico, ácido metanossulfônico ou ácido canforsulfônico) em um solvente tal como diclorometano, heptano ou hexanos também podem ser usados. [0047] Na etapa 3 do esquema 1, o grupo de proteção alila é removido (por exemplo, por tratamento com cloreto de paládio em metanol; cossolvente como diclorometano também pode ser usado; outras condições conhecidas por aqueles versados na técnica, também poderiam ser usadas, vide T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991), para formar o lactol (I-φ.

[0048] Na etapa 4 do esquema 1, oxidação do grupo hidroxila desprotegido para um grupo oxo (por exemplo, oxidação de Swern) em seguida forma a lactona (I-e).

[0049] Na etapa 5 do esquema 1, a lactona (I-e) é reagida com cloridrato de N,O-dimetil hidroxilamina, para formar a amida de Weinreb correspondente, que pode existir em equilíbrio em uma forma fechada/aberta. (I-f/I-g). A amida de Weinreb (I-g) pode ser preparada usando procedimentos bem conhecidos por aqueles de experiência na técnica. Vide, Nahm, S, e S.M. Weinreb, Tetrahedron Letters, 22 (39), 3815-1818 (1981). Por exemplo, intermediário (I-f/I-g) pode ser preparado a partir do cloridrato de N,O-dimetil-hidroxilamina comercialmente disponível e um agente ativador (por exemplo, trimetilalumínio).

[0050] Na etapa 6 do esquema 1, o grupo arilbenzila (Ar) é introduzido usando o reagente organometálico desejado (por exemplo, composto de organolítio (ArLi) ou composto de organomagnésio (ArMgX)) em tetra-hidrofurano (THF) a uma temperatura que varia de cerca de -78°C a cerca de 20°C, seguido por hidrólise (ao se levantar em condições próticas) para o lactol correspondente (I-i) que pode es

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 19/154

16/141 tar em equilíbrio com a cetona correspondente (I-h). O motivo cetal em ponte constatado em (A) e (B) pode ser preparado removendo-se os grupos de proteção (Pg²) usando os reagentes apropriados para os grupos de proteção empregados. Por exemplo, os grupos de proteção de PMB podem ser removidos por tratamento com ácido trifluoroacético na presença de anisol e diclorometano (DCM) a cerca de 0°C a cerca de 23°C (temperatura ambiente). Os grupos de proteção restantes (Pg¹) podem ser em seguida removidos usando a química apropriada para os grupos de proteção particulares. Por exemplo, grupos de proteção benzila podem ser removidos tratando-se com ácido fórmico na presença de paládio (negro de Pd) em um solvente prótico (por exemplo, etanol/THF) a cerca da temperatura ambiente para produzir os produtos finais (A) e (B). Quando R¹ é CN, o uso de um ácido de Lewis como tricloreto de boro a uma temperatura que varia de cerca de 78°C a cerca da temperatura ambiente em um solvente como diclorometano ou 1,2-dicloroetano também pode ser usado para remover grupos protetores benzila e/ou protetores para-metoxibenzila.

[0051] Quando R¹ é CN e R² é (C1-C4)alcóxi no intermediário (I-i) ou nos produtos (A) ou (B), em tratamento com um ácido de Lewis tal como tricloreto de boro ou tribrometo de boro, desalquilação parcial a completa para o fenol correspondente pode ocorrer para levar ao composto correspondente (A) ou (B), onde R¹ é CN e R² é OH. Se isto ocorre, o grupo (C1-C4)alcóxi pode ser reintroduzido por meio de alquilação seletiva usando um iodeto de (C1-C4) alquila sob condições ligeiramente básicas, por exemplo, carbonato de potássio em acetona a uma temperatura que varia em torno da temperatura ambiente a cerca de 56 graus Celsius.

[0052] Quando R¹ e/ou R² é (C1-C4)alquil-SO2-, é compreendido por alguém versado na técnica que a etapa 6 de adição organometálica (esquema 1) será realizado no (C1-C4)alquil-S- correspondente con

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 20/154

17/141 tendo reagente organometálico. A tio-alquila é em seguida oxidada em um estágio posterior para a sulfona correspondente usando métodos convencionais conhecidos por aqueles versados na técnica.

[0053] Os compostos da presente invenção podem ser preparados como cocristais usando qualquer método adequado. Um esquema representativo para preparar tais cocristais é descrito no esquema 2.

etapa 6

HO .O >^Ar etapa 2

Ar /O. / ^TMSO^^^ p~OMe

TMSO''' ^0'^Z/OTMS

OTMS

HO''' •oJ ' '' 'h

OH ii-g

	^.Cl	\/OEt
Ar = i., 0	L Λ	JJ

Esquema 2 [0054] No esquema 2, em que Me é metila e Et é etila, na etapa 1,

1-(5-bromo-2-clorobenzil)-4-etoxibenzeno é dissolvido em 3:1, tolueno: tetra-hidrofurano seguido por resfriamento da solução resultante para <-70°C. A esta solução é adicionado hexillítio ao mesmo tempo que mantendo a reação a <-65°C seguido por agitação durante 1 hora. (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(trimetilasililóxi)-6-((trimetilasililóxi)metil)-tetrahidropiran-2-ona (Il-a) é dissolvido em tolueno, e a solução resultante

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 21/154

18/141 é resfriada a -15°C. Esta solução é em seguida adicionada à solução de arillítio a -70°C, seguido por agitação durante 1 hora. Uma solução de ácido metanossulfônico em metanol é em seguida adicionada, seguido por aquecimento em temperatura ambiente e agitação durante 16 a 24 horas. A reação é julgada completa quando o nível de αanômero é < 3%. A reação é em seguida basificada pela adição de solução de hidróxido de sódio aquosa a 5 M. Os sais resultantes são filtrados, seguido por concentração da solução do produto bruta. 2metiltetra-hidrofurano é adicionado como um cossolvente, e a fase orgânica é extraída duas vezes com água. A fase orgânica é em seguida concentrada em 4 volumes em tolueno. Este concentrado é em seguida adicionado a uma solução 5:1, heptano:tolueno, fazendo com que forme-se o precipitado. Os sólidos são coletados e secos sob vácuo para proporcionar um sólido.

[0055] Na etapa 2 do esquema 2, a (II-b) em cloreto de metileno é adicionado imidazol seguido por resfriamento a 0°C, e em seguida adição de cloreto de trimetilasilila para produzir o produto persililado. A reação é aquecida em temperatura ambiente e extinguida pela adição de água, e a fase orgânica é lavada com água. Esta solução de cloreto de metileno bruta de (II-c) é seca em sulfato de sódio e em seguida empregado bruto na próxima etapa.

[0056] Na etapa 3 do esquema 2, a solução bruta de (II-c) em cloreto de metileno é concentrada em baixo volume, e em seguida o solvente é trocado para metanol. A solução de metanol de (II-c) é resfriada a 0°C, em seguida 1% em mol de carbonato de potássio é adicionado como uma solução em metanol, seguido por agitação durante 5 horas. A reação é em seguida extinguida por adição de 1 % em mol de ácido acético em metanol, seguido por aquecimento em temperatura ambiente, troca do solvente para acetato de etila, e em seguida filtração da quantidade menor de sólidos inorgânicos. A solução de acetato

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 22/154

19/141 de etila bruta de (Il-d) é empregada diretamente na próxima etapa. [0057] Na etapa 4 do esquema 2, a solução bruta de (II-d) é concentrada em baixo volume, em seguida diluída com cloreto de metileno e dimetilsulfóxido. Trietilamina é adicionada, seguida por resfriamento a 10°C e em seguida complexo de enxofre trióxido piridina é adicionado em 3 porções como um sólido em intervalos de 10 minutos. A reação é agitada durante um adicional de 3 horas a 10°C antes de extinguir com água e aquecer em temperatura ambiente. As fases são separadas seguidas por lavagem da camada de cloreto de metileno com cloreto de amônio aquoso. A solução de cloreto de metileno bruta de (II-e) é empregada diretamente na próxima etapa.

[0058] Na etapa 5 do esquema 2, a solução bruta de (II-e) é concentrada em baixo volume, e em seguida o solvente é trocado para etanol. Trinta equivalentes de formaldeído aquoso são adicionados, seguido por aquecimento a 55°C. Uma solução aquosa de 2 equivalentes de fosfato de potássio tribásico é adicionada seguida por agitação durante 24 horas a 55°C. A temperatura de reação é em seguida elevada para 70°C durante um adicional de 12 horas. A reação é resfriada em temperatura ambiente, diluída com ferc-butilmetiléter e salmoura. As fases são separadas, seguido por troca de solvente da fase orgânica a acetato de etila. A fase de acetato de etila é lavada com salmoura e concentrada em baixo volume. O concentrado bruto é em seguida purificado através de cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com metanol a 5%, tolueno a 95%. O produto que contém frações é combinado e concentrado em baixo volume. Metanol é adicionado, seguido por agitação até que a precipitação ocorra. A suspensão é resfriada, e os sólidos são coletados e enxaguados com heptano, seguido por secagem. O produto (II-f) é isolado como um sólido.

[0059] Na etapa 6 do esquema 2, o composto (II-f) é dissolvido em volumes de cloreto de metileno, seguido pela adição de 1% em mol

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 23/154

20/141 de ácido tósico SiliaBond® e agitação durante 18 horas em temperatura ambiente. O catalisador ácido é filtrado, e a solução de cloreto de metileno de (II-g) é empregada diretamente no procedimento de cocristalização da próxima etapa.

[0060] Na etapa 7 do esquema 2, a solução de cloreto de metileno de (II-g) é concentrada e em seguida o solvente é trocado para 2propanol. É adicionada água, seguido por aquecimento a 55°C. Uma solução aquosa de ácido L-piroglutâmico é adicionada, seguido por resfriamento da solução resultante em temperatura ambiente. A solução é em seguida semeada e granulada durante 18 horas. Depois de resfriar, os sólidos são coletados e enxaguados com heptano, seguido por secagem. O produto (II-h) é isolado como um sólido.

[0061] Uma rotina de síntese alternativa para compostos (A) da presente invenção é descrita no esquema 3 e descrita abaixo.

OH

OH (III-a) _D etapa 1 ^R3

Ar ,1

O ''OH

OPg3

HO'''

OH (III-b)

OH

Ar _XR₃

O' ''OH

HO''’

OEt

HO

Pg4O''‘

Ar o·

OPg4 (III-e)

Ar =

etapa 5

etapa 7

Esquema 3 [0062] A síntese de (III-a), onde R³ é uma alquila ou alquila substituída por flúor (com exceção do carbono adjacente ao átomo de oxi

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 24/154

21/141 gênio) pode ser preparada de um modo similar como descrito na etapa 1 do esquema 2. Na etapa 1 do esquema 3, o grupo hidroxila primário é seletivamente protegido por um grupo protetor apropriado. Por exemplo, um grupo tritila (Pg3 = Tr) pode ser introduzido por tratamento do intermediário (III-a) com clorotrifenilmetano na presença de uma base como piridina em um solvente como tolueno, tetra-hidrofurano ou diclorometano a uma temperatura que varia de cerca de 0 graus Celsius a cerca da temperatura ambiente. Exemplos adicionais de tais grupos protetores e condições experimentais são conhecidos por aqueles versados na técnica e podem ser constatados em T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

[0063] Na etapa 2 do esquema 3, os grupos hidroxila secundários podem ser protegidos pelos grupos de proteção apropriados. Por exemplo, grupos benzila (Pg4 é Bn) podem ser introduzidos por tratamento do intermediário (III-b) com brometo de benzila ou cloreto de benzila na presença de hidreto de sódio, hidreto de potássio, tercbutóxido de potássio em um solvente como tetra-hidrofurano, 1,2dimetoxietano ou Μ,Μ-dimetilformamida a uma temperatura que varia de cerca de 0 graus Celsius a cerca de 80 graus Celsius. Grupos acetila ou benzoíla (Pg4 = Ac ou Bz) podem ser introduzidos por tratamento do intermediário (III-b) com cloreto de acetila, brometo de acetila ou anidrido acético ou cloreto de benzoíla ou anidrido benzoico na presença de uma base como trietilamina, M,M-di-isopropiletilamina ou 4(dimetilamino)piridina em um solvente como tetra-hidrofurano, 1,2dimetoxietano ou diclorometano a uma temperatura que varia de cerca de 0 graus Celsius a cerca de 80 graus Celsius.

[0064] Na etapa 3 do esquema 3, o grupo hidroxila primário é desprotegido para levar ao intermediário (III-d). Quando Pg3 é Tr, o intermediário (III-c) é tratado na presença de um ácido como ácido para

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 25/154

22/141 toluenossulfônico em um solvente alcoólico como metanol a uma temperatura que varia de cerca de -20 graus Celsius a cerca de temperatura ambiente para fornecer o intermediário (III-d). Cossolventes como clorofórmio podem ser usados.

[0065] Na etapa 4 do esquema 3, um grupo hidroximetileno é introduzido por um processo similar àquele já descrito no esquema 1 (etapa 1) e no esquema 2 (etapas 4 e 5). Outras fontes de formaldeído, como paraformaldeído em um solvente como etanol a uma temperatura que varia de cerca da temperatura ambiente a cerca de 70 graus Celsius na presença de um alcóxido de metal de álcali, também podem ser usadas nesta etapa. Quando Pg4 é Bn, esta etapa fornece o intermediário (III-e) e quando Pg4 é Ac ou Bz, esta etapa fornece o intermediário (III-f).

[0066] Na etapa 5 do esquema 3, o intermediário (III-e) é tratado com um ácido como ácido trifluoroacético ou uma resina ácida em um solvente como diclorometano a uma temperatura que varia de cerca de -10 graus Celsius a cerca de temperatura ambiente para produzir o intermediário (III-g).

[0067] Na etapa 6 do esquema 3, o grupos de proteção restantes (Pg4) podem ser em seguida removidos usando a química apropriada para os grupos de proteção particulares. Por exemplo, os grupos de proteção benzila podem ser removidos por tratamento com ácido fórmico na presença de paládio (negro de Pd) em um solvente prótico (por exemplo, etanol/THF) a cerca da temperatura ambiente para produzir o produto final (A).

[0068] Na etapa 7 do esquema 3, o intermediário (III-f) é tratado com um ácido como ácido trifluoroacético ou uma resina ácida em um solvente como diclorometano a uma temperatura que varia de cerca de -10 graus Celsius a cerca de temperatura ambiente para produzir o produto final (A).

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 26/154

23/141 [0069] Outro esquema alternativo para sintetizar o produto (A) é descrito no esquema 4 e descrito abaixo.

OH

HO''

'OH

OH (III-a)

Ar _D etapa 1

O ³----HO''

O

W /S-R₄

O'll

O

OH (IV-a)

Ar ^R₃o ³ 'OH

HO'''

OH

----O O -

Ar ''OH

OH (A)

Ar =

Esquema 4 [0070] Na etapa 1 do esquema 4, o intermediário (III-a) é tratado com o cloreto de arilsulfonila apropriado R4SO2Cl ou anidrido arilsulfônico R4S(O)2OS(O)2R4 (em que R4 é um grupo arila opcionalmente substituído, tais como encontrados nos cloreto de arilsulfonila, cloreto de 4-metil-benzenossulfonila, cloreto de 4-nitro-benzenossulfonila, clo reto de 4-fluoro-benzenossulfonila, cloreto de 2,6-dicloro benzenossulfonila, cloreto de 4-fluoro-2-metil-benzenossulfonila e cloreto de 2,4,6-tricloro-benzenossulfonila, e no anidrido arilsulfônico, anidrido p-toluenossulfônico) na presença de uma base como piridina, trietilamina, M,M-di-isopropiletilamina em um solvente como tetrahidrofurano, 2-metiltetra-hidrofurano a uma temperatura que varia de cerca de -20 graus Celsius a cerca de temperatura ambiente. Um pouco de ácido de Lewis como brometo de zinco(II) pode ser usado como aditivos.

[0071] Na etapa 2 do esquema 4, o intermediário (IV-a) é submetido a uma oxidação tipo Kornblum (vide, Kornblum, N., e outro, Journal of The American Chemical Society, 81, 4113 (1959)) para produzir o aldeído correspondente que pode existir em equilíbrio com a forma de hidrato e/ou hemiacetal correspondente. Por exemplo, o intermediário (IV-a) é tratado na presença de um base como piridina, 2,6-lutidina,

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 27/154

24/141

2,4,6-colidina, M,M-di-isopropiletilamina, 4-(dimetilamino)piridina em um solvente como dimetilsulfóxido a uma temperatura que varia de cerca de temperatura ambiente a cerca de 150 graus Celsius. O intermediário de aldeído produzido é em seguida submetido a condições de aldol/Cannizzaro descritas para a etapa 1 (esquema 1) e etapa 5 (esquema 2) para produzir o intermediário (IV-b).

[0072] Na etapa 3 do esquema 4, o intermediário (IV-b) é tratado com um ácido como ácido trifluoroacético ou uma resina ácida em um solvente como diclorometano a uma temperatura que varia de cerca de -10 graus Celsius a cerca de temperatura ambiente para produzir o produto final (A).

[0073] Quando R² é (C2-C4)alquinila, o processo pode ser realizado usando o esquema 5, em que R⁶ é H ou (C1-C2)alquila.

etapa 1 (I-g)

OPg²OPg²

I I OPg1O , ~

ÕPgOPg¹ (V-h)

OPg² \zt/R5

Pg²O^^rí p^OH

Pg1O yoPg OPg¹ (V-i)

OH etapa 3

HO

OH (V-k)

Esquema 5

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 28/154

25/141 [0074] Na etapa 1 do esquema 5, que fornece o intermediário (V-i), a etapa de adição organometálica é realizada de um modo similar ao descrito no esquema 1, etapa 6, usando o reagente organometálico derivado de (V-a), onde Pg5 é um grupo protetor adequado para o grupo hidroxila. Por exemplo, Pg5 pode ser um grupo ferc-butildimetilasilila (TBS) (vide US2007/0054867 para preparação de por exemplo {4-[(5bromo-2-cloro-fenil)-metil]-fenóxi}-ferc-butil-dimetil-silano).

[0075] Na etapa 2 do esquema 5, quando Pg² = PMB, o intermediário (V-i) é tratado com um ácido como ácido trifluoroacético, ácido metanossulfônico ou uma resina ácida na presença de anisol em um solvente como diclorometano a uma temperatura que varia de cerca de -10 graus Celsius a cerca de temperatura ambiente para produzir o intermediário (V-j).

[0076] Na etapa 3 do esquema 5, grupos de proteção (Pg5) e (Pg¹) podem ser removidos para fornecer (V-k). Tipicamente (Pg5) é TBS e Pg¹ é Bn. Nesta circunstância, os grupos de proteção são removidos por tratamento sequencial de (V-j) com 1) fluoreto de tetrabutilamônio em um solvente como tetra-hidrofurano ou 2-metiltetra-hidrofurano a uma temperatura que varia de 0 graus Celsius a cerca de 40 graus Celsius e 2) tratamento com ácido fórmico na presença de paládio (negro de Pd) em um solvente prótico (por exemplo, etanol/THF) a em torno da temperatura ambiente. Neste sequência, a ordem das 2 reações é intercambiável.

[0077] Na etapa 4 do esquema 5, o intermediário (V-k) é tratado com N,N-bis-(trifluorometanossulfonil)-anilina na presença de uma base como trietilamina ou 4-dimetiaminopiridina em um solvente como diclorometano ou 1,2-dicloroetano a uma temperatura que varia de 0 graus Celsius a cerca de 40 graus Celsius para produzir o intermediário (V-l).

[0078] Na etapa 5 do esquema 5, o intermediário (V-l) é submetido

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 29/154

26/141 a uma reação tipo Sonogashira (vide, Sonogashira, K. Coupling Reactions Between sp² and sp Carbon Centers. In Comprehensive Organic Synthesis (eds. Trost, B. M., Fleming, I.), 3, 521-549, (Pergamon, Oxford, 1991)). Por exemplo, (V-l) é tratado com a alcina terminal apropriada HCCR⁶ na presença de iodeto de cobre(I), um catalisador como dicloreto de bis-(trifenilfosfina)-paládio ou tetracis(trifenilfosfina)paládio(0) na presença de uma base como trietilamina ou N,N-di-isopropiletilamina em um solvente como N,Ndimetilformamida a uma temperatura que varia de cerca de temperatura ambiente a cerca de 120 graus Celsius para produzir o produto desejado (A) e (B). Quando R⁶ é H, é mais conveniente usar trimetilasililacetileno. Neste caso, material bruto obtido da reação descrita acima é tratado com um base como carbonato de potássio em um solvente alcoólico como MeOH em torno da temperatura ambiente para produzir depois da preparação clássica conhecida por aqueles versados na técnica, o produto desejado (A) e (B) onde R² é -CCH.

[0079] Alguém versado na técnica entenderia que a química descrita acima nos esquemas 1 a 5, representa diferentes modos de acessar o intermediário (V-k). Por sua vez, particularmente quando R¹é Cl, (V-k) pode ser tratado com agente de alquilação de escolha sob condições clássicas para seletivamente alquilar o grupo fenol para produzir (A) e (B) nos esquemas 1 e 5) onde R² é (C1-C4)alcóxi.

[0080] Os compostos da presente invenção contêm centros assimétricos ou quirais, e, portanto, existem em formas estereoisoméricas diferentes. A menos que especificado de outra maneira, entende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da presente invenção, bem como misturas dos mesmos, inclusive misturas racêmicas, formam parte da presente invenção. Além disso, a presente invenção abrange todos os isômeros geométricos e posicionais. Por exemplo, se um composto da presente invenção incorpora uma liga

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 30/154

27/141 ção dupla ou um anel fundido, ambas as formas cis e trans, bem como misturas, estão incluídas dentro do escopo da invenção.

[0081] Misturas diastereoméricas podem ser separadas em seus diastereoisômeros individuais com base em suas diferenças físicoquímicas por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, tal como por cromatografia e/ou cristalização fracionária, destilação, sublimação. Enantiômeros podem ser separados convertendo-se a mistura enantiomérica em uma mistura diastereomérica por reação com um composto ativo opticamente apropriado (por exemplo, auxiliar quiral tal como um álcool quiral ou cloreto ácido de Mosher), separando os diastereoisômeros e convertendo (por exemplo, hidrolisando) os diastereoisômeros individuais para os enantiômeros puros correspondentes. Da mesma forma, alguns dos compostos da presente invenção podem ser atropisômeros (por exemplo, biarilas substituídas) e são considerados como parte desta invenção. Enantiômeros também podem ser separados por uso de uma coluna de HPLC quiral (cromatografia líquida de alta pressão).

[0082] Também é possível que os intermediários e compostos da presente invenção possam existir em formas tautoméricas diferentes, e todas as tais formas estão incluídas dentro do escopo da invenção. O termo tautômero ou forma tautomérica refere-se a isômeros estruturais de energias diferentes, que são interconversíveis por meio de uma barreira de baixa energia. Por exemplo, tautômeros de próton (também conhecidos como tautômeros prototrópicos) incluem interconversões por meio de migração de um próton, tais como isomerizações de ceto-enol e imina-enamina. Um exemplo específico de um tautômero de próton é a porção de imidazol, onde o próton pode migrar entre os dois nitrogênios de anel. Tautômeros de valência incluem interconversões por reorganização de alguns dos elétrons de ligação. O equilíbrio entre as formas fechada e aberta de alguns intermediários

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 31/154

28/141 (e/ou misturas de intermediários) é reminiscente do processo de mutarrotação que envolve aldoses, conhecido por aqueles versados na técnica.

[0083] A presente invenção também abrange compostos isotopicamente rotulados da presente invenção, que são idênticos àqueles aqui relacionados, porém pelo o fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo que tem uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor, iodo e cloro, tais como ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F, ¹²³I, ¹²⁵I e ³⁶Cl, respectivamente.

[0084] Certos compostos isotopicamente rotulados da presente invenção (por exemplo, aqueles rotulados com ³H e ¹⁴C) são úteis em ensaios de distribuição de tecido de substrato e/ou composto. Isótopos triciados (isto é, ³H) e carbono-14 (isto é, ¹⁴C) são particularmente preferidos por sua facilidade de preparação e detectabilidade. Também, a substituição com isótopos mais pesados tal como deutério (isto é, ²H) pode proporcionar certas vantagens terapêuticas que são o resultado da maior estabilidade metabólica (por exemplo, exigências de dosagem reduzida e/ou meia-vida in vivo aumentada) e consequentemente pode ser preferida em algumas circunstâncias. Isótopos emissores de pósitron tais como ¹⁵O, ¹³N, ¹¹C e ¹⁸F são úteis para estudos de tomografia de emissão de pósitrons (PET) para examinar a ocupação de substrato. Compostos isotopicamente rotulados da presente invenção geralmente podem ser preparados seguindo procedimentos análogos àqueles descritos nos esquemas e/ou nos exemplos aqui abaixo, substituindo-se um reagente isotopicamente rotulado para um reagente não isotopicamente rotulado.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 32/154

29/141 [0085] Compostos da presente invenção são úteis para tratar doenças, condições e/ou transtornos modulados pela inibição dos transportadores de sódio-glicose (em particular SGLT2); portanto, outra modalidade da presente invenção é uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Os compostos da presente invenção (inclusive as composições e processos aqui usados) podem da mesma forma ser usados na fabricação de um medicamento para os pedidos terapêuticos aqui descritos.

[0086] Uma formulação típica é preparada misturando-se um composto da presente invenção e um veículo, diluente ou excipiente. Veículos adequados, diluente e excipientes são bem conhecidos por aqueles versados na técnica e incluem materiais tais como carboidrato, ceras, polímeros solúveis em água e/ou dilatáveis, materiais hidrofílicos ou hidrofóbicos, gelatina, óleos, solventes, água, e similares. O veículo, diluente ou excipiente particular usado dependerão dos meios e propósitos para o qual o composto da presente invenção está sendo aplicado. Os solventes geralmente são selecionados com base em solventes, reconhecidos por pessoas versadas na técnica, como seguros (GRAS) a serem administrados a um mamífero. Em geral, os solventes seguros são solventes aquosos não tóxicos tais como água e outros solventes não tóxicos que são solúveis ou miscíveis em água. Os solventes aquosos adequados incluem água, etanol, propileno glicol, polietileno glicóis (por exemplo, PEG400, PEG300), etc. e misturas dos mesmos. As formulações também podem incluir um ou mais tampões, agentes de estabilização, tensoativos, agentes de umectação, agentes de lubrificação, emulsificadores, agentes de suspensão, conservantes, antioxidantes, agentes opacificantes, fluidificante, auxiliares de processamento, corantes, adoçantes, agentes perfumantes, agenPetição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 33/154

30/141 tes flavorizantes e outros aditivos conhecidos para fornecer uma apresentação elegante do fármaco (isto é, um composto da presente invenção ou composição farmacêutica dos mesmos) ou auxiliares na fabricação do produto farmacêutico (isto é, medicamento).

[0087] As formulações podem ser preparadas usando dissolução convencional e misturando os procedimentos. Por exemplo, a substância de fármaco em volume (isto é, composto da presente invenção ou forma estabilizada do composto (por exemplo, complexo com um derivado de ciclodextrina ou outro agente de complexação conhecido)) é dissolvido em um solvente adequado na presença de um ou mais dos excipientes descritos acima. O composto da presente invenção é formulado tipicamente em formas de dosagem farmacêuticas para fornecer uma dosagem facilmente controlável do fármaco e produzir ao paciente um produto elegante e facilmente manuseável.

[0088] As composições farmacêuticas também incluem solvatos e hidratos dos compostos de fórmula (I). O termo solvato refere-se a um complexo molecular de um composto representado por fórmula (I) (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos) com uma ou mais moléculas solventes. Tais moléculas solventes são aquelas geralmente usadas na técnica farmacêutica que é conhecida como sendo inócua ao recipiente, por exemplo, água, etanol, etileno glicol, e similares, O termo hidrato refere-se ao complexo onde a molécula solvente é água. Os solvatos e/ou hidratos preferivelmente existem em forma cristalina. Outros solventes podem ser usados como solvatos intermediários na preparação de solvatos mais desejáveis, tais como metanol, metil t-butiléter, acetato de etila, acetato de metila, (S)propileno glicol, (R)-propileno glicol, 1,4-butina-diol, e similares. As formas cristalinas também podem existir como complexos com outras moléculas pequenas inócuas, tais como L-fenilalanina, L-prolina, ácido L-piroglutâmico e similares, como cocristais ou solvatos ou hidratos do

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 34/154

31/141 material cocristalino. O solvatos, hidratos e compostos cocristalinos podem ser preparados usando procedimentos descritos na Publicação PCT N° WO 08/002824, incorporada aqui por referência, ou outros procedimentos conhecidos por aqueles versados na técnica.

[0089] A composição farmacêutica (ou formulação) para aplicação pode ser embalada em uma variedade de modos dependendo do método usado para administrar o fármaco. Geralmente, um artigo para distribuição inclui um recipiente que tem depositado nele a formulação farmacêutica em uma forma apropriada. Recipientes adequados são bem conhecidos por aqueles versados na técnica e incluem materiais tais como frascos (plástico e copo), sachês, ampolas, sacolas plásticas, cilindros de metal, e similares. O recipiente também pode incluir um dispositivo à prova de violação para prevenir o acesso indiscreto aos conteúdos do pacote. Além disso, o recipiente tem depositado nele um rótulo que descreve os conteúdos do recipiente. O rótulo também pode incluir advertências apropriadas.

[0090] A presente invenção também fornece um método de tratar doenças, condições e/ou transtornos modulados pela inibição de transportadores de sódio-glicose em um animal, que inclui administrar a um animal em necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção ou uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. O método é particularmente útil para tratar doenças, condições e/ou transtornos que beneficiam-se da inibição de SGLT2.

[0091] Um aspecto da presente invenção é o tratamento da obesidade, e transtornos relacionados à obesidade (por exemplo, sobrepeso, ganho de peso, ou manutenção de peso).

[0092] Obesidade e sobrepeso são geralmente definidos por índi

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 35/154

32/141 ce de massa corporal (BMI) que está correlacionado com gordura corporal total e estima o risco relativo da doença. BMI é calculado por peso em quilogramas dividido por altura em metros quadrados (kg/m²). O sobrepeso é tipicamente definido como um BMI de 25-29,9 kg/m², e obesidade é tipicamente definida como um BMI de 30 kg/m². Vide, por exemplo, National Heart, Lung, and Blood Institute, Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults, The Evidence Report, Washington, DC: U.S. Department of Health and Human Services, NIH publication n° 98-4083 (1998).

[0093] Outro aspecto da presente invenção é para o tratamento ou atraso do progresso ou início do diabetes ou transtornos relacionados ao diabetes incluindo diabetes Tipo 1 (diabetes melito insulino dependente, também chamado IDDM) e Tipo 2 (diabetes melito não insulino dependente, também chamado NIDDM), tolerância à glicose prejudicada, cicatrização de ferimento atrasada, hiperinsulinemia, níveis de sangue elevados de ácidos graxo, hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, Síndrome X, níveis de lipoproteína de alta densidade aumentados, resistência à insulina, hiperglicemia, e complicações diabéticas (tais como aterosclerose, cardiopatia coronária, acidente vascular cerebral, doença vascular periférica, nefropatia, hipertensão, neuropatia, e retinopatia).

[0094] Em ainda outro aspecto da presente invenção é o tratamento de comorbidades de obesidade, tais como síndrome metabólica. Síndrome metabólica inclui doenças, condições ou transtornos tais como dislipidemia, hipertensão, resistência à insulina, diabetes (por exemplo, diabetes Tipo 2), doença arterial coronária e insuficiência cardíaca. Para informação mais detalhada sobre Síndrome Metabólica, vide, por exemplo, Zimmet, P.Z., et al., The Metabolic Syndrome: Perhaps an Etiologic Mystery but Far From a Myth - Where Does the In

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 36/154

33/141 ternational Diabetes Federation Stand?, Diabetes & Endocrinology, 7(2), (2005); and Alberti, K.G., et al., The Metabolic Syndrome - A New Worldwide Definition, Lancet, 366, 1059-62 (2005).

[0095] Preferivelmente, a administração dos compostos da presente invenção fornece uma redução estatisticamente significante (p < 0,05) em pelo menos um fator de risco de doença cardiovascular, tais como redução de leptina de plasma, proteína C-reativa (CRP) e/ou colesterol, quando comparado a um controle de veículo não contendo fármaco. A administração de compostos da presente invenção também pode fornecer uma redução estatisticamente significante (p < 0,05) em níveis de soro de glicose.

[0096] Para um humano adulto normal tendo um peso corporal de cerca de 100 kg, uma dosagem na faixa de cerca de 0,001 mg a cerca de 10 mg por quilograma de peso corporal é tipicamente suficiente, preferivelmente de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 5,0 mg/kg, mais preferivelmente de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 1 mg/kg. Entretanto, alguma variabilidade na faixa de dosagem geral pode ser requerida dependendo da idade e peso do indivíduo a ser tratado, da rotina planejada de administração, do composto particular a ser administrado e similares. A determinação de faixas de dosagem e dosagens ideais para um paciente particular está bem dentro da capacidade de alguém de experiência ordinária na técnica que tem o benefício da presente descrição. Também é notado que os compostos da presente invenção podem ser usados nas formulações de liberação prolongada, liberação controlada, e liberação atrasada, cujas formas são também bem conhecidas por alguém comumente versado na técnica.

[0097] Os compostos desta invenção também podem ser usados junto com outros agentes farmacêuticos para o tratamento das doenças, condições e/ou transtornos aqui descritos. Portanto, os métodos de tratamento que incluem a administração dos compostos da presenPetição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 37/154

34/141 te invenção em combinação com outros agentes farmacêuticos também são fornecidos. Agentes farmacêuticos adequados que podem ser usados em combinação com os compostos da presente invenção incluem os agentes antiobesidade (incluindo supressores de apetite), agentes antidiabéticos, agentes anti-hiperglicêmicos, agentes de redução de lipídio, agentes anti-inflamatórios e agentes anti-hipertensivos. [0098] Agentes antiobesidade adequados incluem antagonistas do canabinoide-1 (CB-1) (tal como rimonabante), inibidores de 113-hidroxi esteróide desidrogenase-1 (113-HSD tipo 1), inibidor de estearoil-CoA desaturase-1 (SCD-1), agonistas de MCR-4, agonistas de colecistocinina-A (CCK-A), inibidores de recaptação de monoamina (tais como sibutramina), agentes simpatomiméticos, agonistas β3 adrenérgicos, agonistas de dopamina (tais como bromocriptina), análogos de hormônio estimulador de melanócito, agonistas de 5HT2c, antagonistas do hormônio concentrador de melanina, leptina (a proteína de OB), análogos de leptina, agonistas de leptina, antagonistas de galanina, inibidores de lipase (tais como tetra-hidrolipstatina, isto é, orlistate), agentes anoréxicos (tal como um agonista de bombesina), antagonistas de neuropeptídeo-Y (por exemplo, antagonistas de NPY Y5), PYY3-36 (incluindo os análogos dos mesmos), agentes tiromiméticos, deshidroepiandrosterona ou um análogo do mesmo, agonistas ou antagonistas de de glicocorticoide, antagonistas de orexina, agonistas do peptídeo-1 glucagon-símile, fatores neurotróficos ciliares (tais como Axokine® disponível de Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY and Procter & Gamble Company, Cincinnati, OH), inibidores da proteína relacionada à aguti humana (AGRP), antagonistas de grelina, antagonistas ou agonistas inversos de histamina 3, agonistas de neuromedina U, inibidores de MTP/ApoB (por exemplo, inibidores de MTP seletivos do intestino, tais como dirlotapide), antagonista opioide, antagonista de orexina, e similares.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 38/154

35/141 [0099] Agentes antiobesidade preferidos para uso nos aspectos de combinação da presente invenção incluem os antagonistas de CB-1 (por exemplo, rimonabante, taranabante, surinabante, otenabante, SLV319 (CAS N° 464213-10-3) e AVE1625 (CAS N° 358970-97-5)), inibidores de MTP seletivos de intestino (por exemplo, dirlotapide, mitratapide e implitapide, R56918 (CAS N° 403987) e CAS N° 91354147-6), agonistas de CCKa (por exemplo, M-benzil-2-[4-(1H-indol-3ilmetil)-5-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-2,3,6,10b-tetraaza-benzo[e]azulen-6il]W-isopropil-acetamida descrito na Publicação PCT N°

WO 2005/116034 ou Publicação US N° 2005-0267100 A1), agonistas de 5HT2c (por exemplo, lorcasserina), agonista de MCR4 (por exemplo, compostos descritos em US 6.818.658), inibidor de lipase (por exemplo, Cetilistate), PYY3-36 (como usado aqui PYY3-36 inclui análogos, tal como PYY3-36 pegilado por exemplo, aqueles descritos em Publicação U.S. 2006/0178501), antagonistas de opioide (por exemplo, naltrexona), oleoil-estrona (CAS N° 180003-17-2), obinepitida (TM30338), pranlintida (Simlin®), tesofensina (NS2330), leptina, liraglutida, bromocriptina, orlistate, exenatida (Bietta®), AOD-9604 (CAS N° 221231-10-3) e sibutramina. Preferivelmente, compostos da presente invenção e terapias de combinação são administrados juntamente com exercício e uma dieta sensata.

[00100] Agentes antidiabéticos adequados incluem um inibidor de acetil-CoA carboxilase-2 (ACC-2), um inibidor de fosfodiesterase (PDE)-10, um inibidor 1 ou 2 de diacilglicerol aciltransferase (DGAT), uma sulfonilureia (por exemplo, aceto-hexamida, clorpropamida, diabinese, glibenclamida, glipizida, gliburida, glimepirida, gliclazida, glipentida, gliquidona, glisolamida, tolazamida, e tolbutamida), uma meglitinida, um inibidor de α-amilase (por exemplo, tendamistate, trestatina e AL-3688), um inibidor de α-glicosídeo hidrolase (por exemplo, acarbose), um inibidor de α-glicosidase (por exemplo, adiposina, camiglibose,

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 39/154

36/141 emiglitate, miglitol, voglibose, pradimicina-Q, e salbostatina), um agonista de PPARy (por exemplo, balaglitazona, ciglitazona, darglitazona, englitazona, isaglitazona, pioglitazona, rosiglitazona e troglitazona), um agonista de PPAR α/γ (por exemplo, CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 e SB-219994), uma biguanida (por exemplo, metformina), um agonista do peptídeo 1 glucagon-símile (GLP-1) (por exemplo, exendina-3 e exendina-4), um inibidor da proteína tirosina fosfatase-1B (PTP-1B) (por exemplo, trodusquemina, extrato de hirtiosal, e compostos descritos por Zhang, S, e outro, Drug Discovery Today, 12(9/10), 373-381 (2007)), inibidor de SIRT-1 (por exemplo, reservatrol), um inibidor de dipeptidil peptidase IV (DPP-IV) (por exemplo, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina e saxagliptina), um secretagogo de insulina, um inibidor de oxidação de ácido graxo, um antagonista A2, um inibidor de cinase amino-terminal c-jun (JNK), insulina, um mímico de insulina, um inibidor de glicogênio fosforilase, um antagonista do receptor de VPAC2 e um ativador de glicocinase. Agentes antidiabéticos preferidos são metformina e inibidores de DPP-IV (por exemplo, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina e saxagliptina).

[00101] Agentes anti-inflamatórios adequados incluem tratamentos e preventivos da infecção do trato genital/trato urinário. Agentes exemplares incluem oxicocos (isto é, Vaccinium macrocarpon) e derivados de oxicoco tal como suco de oxicoco, extrato de oxicoco ou flavonóis de oxicoco. Extratos de oxicoco podem incluir um ou mais flavonóis (isto é, antocianinas e proantocianidinas) ou um composto de flavonol de oxicoco purificado, incluindo miricetin-3-3-xilopiranosídeo, quercetin-3-p-glicosídeo, quercetin-3-3-arabinopiranosídeo, 3'metoxiquercetin-3-a-xilopiranosídeo, quercetin-3-O-(6-p-cumaroil)-3galactosídeo, quercetin-3-O-(6-benzoil)-p-galactosídeo, e/ou quercetin-3-a-arabinofuranosídeo.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 40/154

37/141 [00102] Modalidades da presente invenção são ilustradas pelos seguintes exemplos. Deve ser entendido, entretanto, que as modalidades da invenção não são limitadas aos detalhes específicos destes exemplos, visto que outras variações dos mesmos serão conhecidas, ou evidentes levando em consideração a presente descrição, por alguém de experiência ordinária na técnica.

EXEMPLOS [00103] A menos que especificado de outra maneira, materiais de partida estão geralmente disponíveis de fontes comerciais tais como Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, WI), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH), Acros Organics (Fairlawn, NJ), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, England), Tyger Scientific (Princeton, NJ), AstraZeneca Pharmaceuticals (London, England), and Accela ChemBio (San Diego, CA).

Procedimentos Experimentais Gerais [00104] Espectros de RMN foram registrados em um Varian Uniti® 400 (disponível de Varian Inc., Palo Alto, CA) em temperatura ambiente em 400 MHz para próton. Desvios químicos são expressos em partes por milhões (delta) em relação ao solvente residual como uma referência interna. As formas de pico são denotadas como segue: s, singleto; d, dubleto; dd, dubleto de dubleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; bs ou br.s., singleto amplo; 2s, dois singletos; br.d., dubleto amplo. Espectros de massa de ionização por eletrovaporização (ES) foram obtidos em um instrumento Waters® ZMD (gás de veículo: nitrogênio; solvente A: água/ácido fórmico a 0,01%, solvente B: acetonitrila/ácido fórmico a 0,005%; disponível de Waters Corp., Milford, MA). Espectros de massa de alta resolução (HRMS) foram obtidos em um tempo de trajetória Agilent® Modelo 6210. Onde a intensidade de íons contendo bromo isolados ou cloro isolados é descrita, a relação de intensidade esperada foi observada (aproximadamente 3:1 para íons

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 41/154

38/141 contendo ³⁵Cl/³⁷Cl e 1:1 para íons contendo ⁷⁹Br/⁸¹Br), e a intensidade apenas do íon de massa inferior é determinada. Em alguns casos apenas os picos de ¹H RMN representativos são determinados.

[00105] Cromatografia de coluna foi realizado com sílica-gel Baker® (40 microm; J.T. Baker, Phillipsburg, NJ) ou sílica-gel 50 (EM Sciences®, Gibbstown, NJ) em colunas de vidro ou em colunas Flash 40 Biotage® (ISC, Inc., Shelton, CT). MPLC (cromatografia líquida de média pressão) foi realizada usando um sistema de purificação Biotage® SP ou um Combiflash® Companion® de Teledyne® Isco®; cartucho Biotage® SNAP KPsil ou sílica Redisep Rf (de Teledine® Isco®) sob baixa pressão de nitrogênio foi usado. HPLC (cromatografia líquida de alta pressão) foi realizada usando um Shimadzu® 10A LC-UV ou uma HPLC preparatória Agilent® 1100.

[00106] Exceto onde de outra maneira notado, todas as reações foram conduzidas sob uma atmosfera inerte de gás de nitrogênio usando solventes anidrosos. Também, exceto onde de outra maneira notado, todas as reações foram conduzidas em temperatura ambiente (~23°C).

[00107] Ao realizar TLC (cromatografia de camada fica), Rf está definido como a relação da distância percorrida pelo composto dividido pela distância percorrida pelo eluente.

Tr (tempo de retenção).

Materiais de Partida [00108] Geralmente, qualquer dos seguintes materiais de partida podem ser preparados usando os procedimentos descritos no esquema 7 ou 8 da Publicação US N° 2008/0132563, ou alternativamente, esquema 2, 3 ou 8 da Publicação US N° 2007/0259821. Mais especificamente, os seguintes materiais de partida usados nos exemplos seguintes podem ser preparados usando os procedimentos descritos nas referências correspondentes ou adquiridas do vendedor corresponden

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 42/154

39/141 te.

4-Bromo-2-(4-metóxi-benzil)-1-metil-benzeno pode ser preparado pelos procedimentos descritos no exemplo 8 da Publicação PCT N° WO 01/027128.

4-Bromo-2-(4-etóxi-benzil)-1-metil-benzeno pode ser preparado pelos procedimentos descritos no exemplo de preparação 17 de US2008/0132563.

4-Bromo-1-cloro-2-(4-metóxi-benzil)-benzeno pode ser preparado pelos procedimentos descritos no exemplo de preparação 19 de US2008/0132563 ou exemplo V de US2007/0259821.

4-Bromo-1-cloro-2-(4-etóxi-benzil)-benzeno pode ser adquirido de Shanghai HaoYuan Chemexpress Co., Ltd., Shanghai, People's Republic of China.

4-Bromo-2-(4-metóxi-benzil)-benzonitrila pode ser preparado pelos procedimentos descritos no exemplo XXII de US2007/0259821.

[00109] Os seguintes materiais de partida foram preparados como descrito abaixo.

Preparação de 4-bromo-1-fluoro-2-(4-metóxi-benzil)-benzeno:

[00110] Cloreto de oxalila (11,0 mL, 126 mmols) foi adicionado gota a gota a uma suspensão bem agitada de ácido 5-bromo-2-fluorobenzoico (25,0 g, 114 mmols) em diclorometano (150 mL) e N,Ndimetilformamida (1,5 mL) a 0°C. A mistura resultante foi permitida gradualmente aquecer em temperatura ambiente. Depois de 18 horas, o sólido foi na solução. A solução laranja-claro resultante foi concentrada sob pressão reduzida e foi cinzelada duas vezes com dietil éter para proporcionar cloreto de 5-bromo-2-fluoro-benzoíla (27,0 g, rendimento quantitativo) como um óleo laranja-claro.

[00111] Em uma solução de cloreto de 5-bromo-2-fluoro-benzoíla (27,0 g, 114 mmols) e anisol (12,9 g, 13,0 mL, 119 mmols) em diclo

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 43/154

40/141 rometano (150 mL) a 0°C, foi adicionado tricloreto de alumínio (16,2 g, 119 mmols) porção a porção de forma que a temperatura interna permaneça abaixo de 10°C. Depois de agitar durante 4 horas a 0°C, a solução foi vertida em gelo moído, e a mistura resultante foi agitada. Depois de 30 minutos, a fase orgânica foi removida, e a fase aquosa foi extraída duas vezes com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram lavadas uma vez com solução de ácido clorídrico aquosa a 1M, uma vez com solução de hidróxido de sódio aquosa a 1M, e uma vez com salmoura. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi recristalizado a partir de etanol para proporcionar (5-bromo-2-fluoro-fenil)-(4metóxi-fenil)-metanona (22,5 g, 64%) como um sólido branco.

[00112] Em uma solução bem agitada de (5-bromo-2-fluoro-fenil)(4-metóxi-fenil)-metanona (22,5 g, 72,80 mmols) e trietilsilano (27,9 mL, 20,3 g, 175,0 mmols) em diclorometano (20 mL) e acetonitrila (60 mL) a 0°C, foi adicionado eterato de trifluoreto de boro (32,0 mL, 36,2 g, 255,0 mmols) gota a gota. Eterato de trifluoreto de boro foi adicionado a uma taxa, de forma que a temperatura interna não exceda 20°C. A solução reacional foi aquecida em temperatura ambiente e agitada durante a noite. Depois de um total de 18 horas, uma solução de hidróxido de potássio (5,0 g) em água (15,0 mL) foi adicionada, e a mistura resultante foi agitada durante 2 horas. A fase orgânica foi separada, e a fase aquosa foi extraída duas vezes com dietil éter. As fases orgânicas combinadas foram lavadas uma vez com solução de hidróxido de sódio aquosa a 1M e uma vez com salmoura. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Ao adicionar etanol ao resíduo resultante, formou-se um sólido branco. O sólido foi coletado e seco sob alto vácuo, para proporcionar 4-bromo-1-fluoro-2-(4-metóxi-benzil)-benzeno (20,1 g, 93% rendimento) como um sólido branco.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 44/154

41/141 ¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 3,79 (s, 3 H), 3,89 (s, 2 H), 6,85 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,91 (t, 1 H), 7,12 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,21 - 7,31 (m, 2 H).

Preparação do material de partida 4-bromo-2-(4-etóxi-benzil)benzonitrila:

[00113] Uma solução de (4-etóxi-fenil)acetato de etila (2,68 g, 12,87 mmols), 4-bromo-2-fluoro-benzonitrila (2,74 g, 13,70 mmols) em Nmetilpirrolidona (4 mL) foi adicionada lentamente a uma suspensão de terc-butóxido de potássio (3,14 g, 27,98 mmols) em N-metilpirrolidona (13 mL) a 0°C. Na adição, a solução tornou-se vermelho-escura. A mistura vermelho-escura foi agitada a 0°C durante 30 minutos, e em seguida em temperatura ambiente durante 1 hora. Metanol (10 mL) e solução de hidróxido de sódio a 1 M aquosa (13,7 mL) foi adicionado, e a mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. O pH foi ajustado em ~ 4 com ácido clorídrico (solução aquosa a 1 M), e a mistura foi extraída com acetato de etila (50 mL x 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio e evaporadas até a secura. N,N-dimetilformamida (5 mL) e carbonato de potássio (7 g) foram adicionados, a mistura foi aquecida a 100°C durante 1 hora e resfriada em temperatura ambiente. Água foi adicionada, e a mistura foi extraída com acetato de etila (60 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio e evaporadas até a secura. O bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 0 a 14% de acetato de etila em heptano), para proporcionar 2,26 g de produto bruto (contendo o produto desejado e outro produto). O produto bruto foi precipitado com metanol, proporcionando 4-bromo-2(4-etóxi-benzil)-benzonitrila (1,2 g, contendo 5% de outro composto com picos de RMN em quarteto de 4,15 ppm, e tripleto de 1,5 ppm).

¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta 7,48-7,38 (m, 3 H),

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 45/154

42/141

7,13 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,08 (s, 2H), 4,03 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,41 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Preparação do material de partida 4-bromo-2-(4-etóxi-benzil)-1-fluorobenzeno [00114] Em uma solução de 4-bromo-1-fluoro-2-(4-metóxi-benzil)benzeno (4,2 g, 14,2 mmol) em diclorometano (20 mL) a 0°C, uma solução a 1M de tribrometo de boro foi adicionada lentamente em diclorometano (15,7 mL, 16,0 mmol) gota a gota durante 10 minutos. Uma vez que a adição de tribrometo de boro foi concluída, a mistura reacional foi aquecida em temperatura ambiente gradualmente. Depois de 4 horas, a mistura reacional foi resfriada a 0°C, e extinguida por adição lenta de solução a 1 N de ácido clorídrico aquosa (20 mL). A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos, e extraída duas vezes com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar um sólido rosa claro (3,83 g, 96%). O produto bruto 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenol foi usado na próxima etapa sem outra purificação.

¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 3,88 (s, 2 H),

4,76 (br. s., 1 H), 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 6,91 (t, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,07 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 7,23 (dd, J = 6,8, 2,3 Hz, 1 H), 7,26 - 7,31 (m, 1 H).

[00115] Em uma solução de 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenol (6,0 g, 21,0 mmols) em Μ,Μ-dimetilformamida anidrosa (20 mL) resfriada a 0°C, foi adicionado hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 1,02 g, 25,6 mmols). Depois de agitar a 0°C durante 45 minutos, iodoetano (2,08 mL, 25,6 mmols) foi adicionado gota a gota, e a mistura resultante foi permitida aquecer até a temperatura ambiente. Depois de 18 horas, a mistura reacional foi extinguida com água e extraída duas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 46/154

43/141 foram lavadas duas vezes com água e uma vez com salmoura, secas em sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografía rápida em sílicagel eluindo com um gradiente de 0 a 10% de acetato de etila em heptano para proporcionar 4,6 g (58% de rendimento) do produto desejado como um óleo amarelo.

1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 1,40 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 3,89 (s, 2 H), 4,01 (q, J = 6,9 Hz, 2 H), 6,83 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,91 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,20 - 7,30 (m, 2 H).

Preparação de tetra-hidro-furan-3-il éster de ácido tolueno-4-sulfônico [00116] Em uma solução de 3-hidroxitetra-hidrofurano (2,5 g, 28,0 mmols) em piridina anidrosa (60 mL) em temperatura ambiente, foi adicionado cloreto de 4-toluenossulfonila (6,49 g, 34,0 mmols). Depois de agitar a mistura reacional durante 18 horas em temperatura ambiente, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de 0 a 30% de acetato de etila em heptano para proporcionar 3,5 g (51% de rendimento) do produto desejado como um óleo incolor.

¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 2,05 - 2,12 (m, 2 H), 2,45 (s, 3 H), 3,77 - 3,92 (m, 4 H), 5,09 - 5,14 (m, 1 H), 7,35 (d, J = 8,00 Hz, 2 H), 7,79 (d, 2 H).

Preparação do oxetan-3-il éster de ácido tolueno-4-sulfônico [00117] Em uma solução de oxetan-3-ol (1,0 g, 13,0 mmols) em piridina anidrosa (25 mL) em temperatura ambiente foi adicionado cloreto de 4-toluenossulfonila (3,09 g, 16,2 mmols). Depois de agitar a mistura reacional durante 18 horas em temperatura ambiente, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 47/154

44/141 gradiente de 0 a 30% de acetato de etila em heptano para proporcionar 1,9 g (62% de rendimento) do produto desejado como um sólido branco.

1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 2,46 (s, 3 H), 4,63 - 4,75 (m, 4 H), 5,26 - 5,34 (m, 1 H), 7,36 (d, J = 8,00 Hz, 2 H), 7,78 (d, J = 8,40 Hz, 2 H).

Preparação do material de partida 3-[4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)fenóxil-tetra-hidro-furano [00118] Em uma solução de 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenol (1,5 g,

5,3 mmols) e carbonato de césio (2,61 g, 8,0 mmols) em N,Ndimetilformamida (15,0 mL) em temperatura ambiente, foi adicionada uma solução de tetra-hidro-furan-3-il éster de ácido tolueno-4-sulfônico (1,94 g, 8,0 mmols) em N,N-dimetiformamida (10,0 mL). A mistura reacional foi em seguida agitada durante a noite a 50°C. Depois de um total de 18 horas, a mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente, diluída com salmoura e extraída 3 vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com água e uma vez com salmoura, secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto resultante foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de 0 a 30% de acetato de etila em heptano para proporcionar 1,66 g (89% de rendimento) do produto desejado como um óleo incolor.

¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 2,09 - 2,24 (m, 2 H), 3,86 - 4,01 (m, 6 H), 4,86 - 4,91 (m, 1 H), 6,80 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,91 (t, J = 9 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 7,23 (dd, J = 6,8,

2,5 Hz, 1 H), 7,26 - 7,31 (m, 1 H).

Preparação do material de partida 3-[4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)fenóxil-oxetano [00119] Em uma solução de 4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenol (1,1 g,

3,9 mmols) e carbonato de césio (1,91 g, 5,87 mmols) em N,N

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 48/154

45/141 dimetilformamida (15,0 mL) em temperatura ambiente, foi adicionada uma solução de oxetan-3-il éster de ácido tolueno-4-sulfônico (1,34 g, 8,0 mmols) em M,M-dimetilformamida (10,0 mL). A mistura reacional foi em seguida agitada durante a noite a 65°C. Depois de um total de 18 horas, a mistura reacional foi resfriada em temperatura ambiente, diluída com salmoura e extraída 3 vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com água e uma vez com salmoura, secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de 0 a 30% de acetato de etila em heptano para proporcionar 0,948 g (72% de rendimento) do produto desejado como um sólido branco.

¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 3,88 (s, 2 H),

4,76 (dd, J = 7,22, 5,3 Hz, 2 H), 4,95 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 5,14 - 5,21 (m, 1 H), 6,63 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,92 (dd, 1 H), 7,10 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 7,23 (dd, J = 6,6, 2,15 Hz, 1 H), 7,26 - 7,31 (m, 1 H).

Preparação do 3-(4-(5-bromo-2-clorobenzil)fenóxi)oxetano:

[00120] 4-bromo-1-cloro-2-(4-metoxibenzil)-benzeno (10 g, 32 mmols) foi dissolvido em diclorometano (32 mL) e resfriado a 0°C sob nitrogênio. Uma solução de tribrometo de boro a 1,0 M em diclorometano (35,3 mL, 34,3 mmols) foi adicionada gota a gota durante 10 minutos. Depois da adição, o banho de gelo foi removido, e a solução foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi resfriada a 0°C e extinguida por adição de solução a 1N de ácido clorídrico aquosa (45 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos, transferida para um funil separador, a camada orgânica foi coletada, e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (45 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados em vácuo para proporcionar 4-(5-bromo-2clorobenzil)fenol (9,5 g, 99% de rendimento) como um sólido branco.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 49/154

46/141 [00121] Em uma solução de 4-(5-bromo-2-clorobenzil)fenol bruto (3,0 g, 10 mmols) e carbonato de césio (4,9 g, 15 mmols) em N,Ndimetilformamida (77,5 mL) em temperatura ambiente, foi adicionada uma solução de oxetan-3-il éster de ácido tolueno-4-sulfônico (3,5 g, 15 mmols) em N,N-dimetilformamida (8 mL). A mistura foi aquecida a 65°C durante 22 horas, ao que uma alíquota adicional de carbonato de césio (3,3 g, 10 mmols) foi adicionada. A mistura reacional foi agitada durante um adicional de 12 horas a 120°C, resfriada em temperatura ambiente, ao que foram adicionados água e acetato de etila, e a mistura foi acidificada cuidadosamente com solução a 1N de ácido clorídrico aquosa. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura (3 vezes) e concentrada em vácuo. Purificação por meio de Biotage MPLC (sílica-gel, eluindo com um gradiente de 0 a 25% de acetato de etila em heptano) proporcionou 3-(4-(5-bromo-2-clorobenzil)fenóxi)oxetano (2,5 g, 70% de rendimento) como um sólido branco.

¹H RMN (400 MHz, diclorometano-d2) delta ppm 7,34 - 7,28 (m, 2 H), 7,26 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,14-7,09 (m, 2 H), 6,69-6,35 (m, 2 H), 5,22-5,16 (m, 1 H), 4,96-4,91 (m, 2H), 4,72-4,68 (m, 2H), 4,01 (s, 2H).

Preparação do 4-bromo-2-(4-cloro-benzil)-1-fluoro-benzeno [00122] Uma solução de 5-bromo-2-fluorobenzaldeído (10,2 g, 50 mmols) em tetra-hidrofurano anidroso (200 mL) foi resfriada a -78°C. Uma solução de brometo de 4-clorofenil-magnésio (1M em dietil éter, 60 mL, 60 mmols) foi adicionada por meio de seringa durante 8 minutos. A agitação foi continuada em baixa temperatura durante 5 minutos, e a reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 1 hora a esta temperatura. A solução foi resfriada em um banho de gelo-água e extinguida por adição de solução de cloreto de amônio aquosa saturada (40 mL). A fase orgânica foi decantada, e o resíduo aquoso foi concentrado sob pressão reduzida para remover qualquer

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 50/154

47/141 solvente orgânico restante. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (200 mL χ 2), e os extratos foram combinados com a solução de tetra-hidrofurano decantada. Esta solução foi lavada com salmoura (25 mL) e foi seca (sulfato de sódio), filtrada e concentrada sob pressão reduzida, produzindo (5-bromo-2-fluorofenil)-(4-clorofenil)-metanol bruto (15,2 g, 96% de rendimento) como um sólido amarelo.

[00123] Em uma solução do (5-bromo-2-fluorofenil)-(4-clorofenil)metanol acima (15,0 g, 48 mmols) e trietilsilano (18,5 mL, 116 mmols) em diclorometano (40 mL) e acetonitrila (20 mL) a 0°C sob nitrogênio, foi adicionado eterato de dietila de trifluoreto de boro lentamente (22,7 mL, 181 mmols). A solução resultante foi agitada durante 18 horas, ao mesmo tempo que aquecendo em temperatura ambiente lentamente. A reação foi resfriada em um banho de gelo-água, extinguida por adição lenta de solução a 7 M de hidróxido de potássio aquosa (30 mL) e extraída com metil terc-butil éter (200 mL χ 2). A solução orgânica combinada foi lavada com água (25 mL χ 2), salmoura (25 mL χ 2), seca (sulfato de sódio), filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Purificação por cromatografia de coluna rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de acetato de etila em heptano produziu 2-(4clorobenzil)-4-bromo-1-fluorobenzeno (5,0 g, 35% de rendimento) como um óleo incolor. ¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 7,337,22 (m, 4H), 7,13 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,93 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 3,92 (s, 2H).

Preparação de Intermediários

Preparação do Intermediário ((2R,3R,4S,5R)-6-alilóxi-3,4,5-trisbenzilóxi-tetra-hidro-piran-2-il)-metanol (I-1a):

(Iz1al

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 51/154

48/141 [00124] Uma suspensão de D-glicose (1,2 kg, 6,6 mols), ácido trifluorometanossulfônico (12 mL) e álcool alílico (5 L) foi aquecida a 80°C durante 3 dias. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos em vácuo, e o resíduo dissolvido em M,M-dimetilformamida (8 L). Isto foi dividido em quatro reações iguais, e a cada uma foi adicionado cloreto de tritila (463 g, 1,67 mol) e trietilamina (231 mL, 1,67 mol). Uma leve exotermia foi observada ao adicionar a trietilamina. A mistura reacional foi agitada durante 2 dias a 30°C, e em seguida cada reação dividida pela metade, produzindo oito reações iguais. A cada uma destas reações foi adicionado cloreto de benzila (300 mL, 2,60 mols), seguido por adição porção a porção de hidreto de sódio (102,5 g, 2,60 mols), mantendo a temperatura de reação entre 40 a 50°C. Depois da adição completa, as misturas reacionais foram agitadas em temperatura ambiente durante 20 horas. Cada reação foi em seguida vertida em gelo/água (2 L) e extraída com acetato de etila (2,5 L). As fases orgânicas de cada uma foram lavadas com salmoura saturada/água (1:1, 2 x 2 L), combinadas e secas em sulfato de magnésio (produto Rf 0,85 em 3:1 hexanos/acetato de etila). Depois de filtração e evaporação, o resíduo foi dissolvido em uma mistura de diclorometano (16 L) e metanol (4 L). A mistura foi dividida em 5 porções iguais, e a cada uma foi adicionado ácido sulfúrico (32 mL). As reações foram agitadas durante 3 horas, lavadas com salmoura/ solução de hidróxido de sódio aquosa a 2M (1:1, 2 x 2 L), combinadas e secas em sulfato de magnésio. Depois de filtração e concentração em vácuo, o resíduo também foi purificado em sílica-gel eluindo com 30% de acetato de etila em tolueno para produzir o composto intermediário (I-1a) como uma mistura de anômeros (1,77 kg, 54% de rendimento de D-glicose). Rf 0,15 em 3:1 hexanos/acetato de etila.

Preparação do Intermediário ((3S,4S,5R)-6-alilóxi-3,4,5-tris-benzilóxi2-hidroximetil-tetra-hidro-piran-2-il)-metanol (I-1b):

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 52/154

49/141

OH

OCH₂Ph (Mb) [00125] Uma solução de dimetilsulfóxido (87 mL, 1,22 mol) em diclorometano (160 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de cloreto de oxalila (64,7 mL, 0,76 mol) em diclorometano (2,5 L) a -78°C. Depois da adição completa, uma solução de intermediário (I-1a) (287 g, 0,59 mol) em diclorometano (500 mL) foi adicionada gota a gota a -78°C. Depois da adição completa, a mistura reacional foi agitada durante 30 minutos, e trietilamina (417 mL, 2,9 mols) foi adicionada gota a gota. Depois da adição completa, a mistura reacional foi permitida autoaquecer em temperatura ambiente. A reação foi em seguida lavada com solução a 1M de ácido clorídrico aquosa (2 L) e água (2 L), e em seguida seca em sulfato de magnésio. Este procedimento de reação foi repetido em seis reações equivalentes e depois de secar elas foram combinadas e evaporadas para produzir o aldeído como um óleo amarelo (1,71 kg). Este óleo foi dissolvido em isopropanol (2,57 L) e dividido em sete reações iguais. A cada um destas foi adicionada uma solução de formaldeído aquosa a 37% (0,79 L, 10 mols), seguido pela adição gota a gota de uma solução de hidróxido de sódio (32 g, 0,8 mol) em água (130 mL). Depois da adição completa, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. A mistura reacional foi diluída com salmoura (2 L) e extraída com acetato de etila (2 L). A fase orgânica também foi lavada com solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (2 L), salmoura (2 L) e em seguida seca em sulfato de magnésio. As fases orgânicas das sete reações foram combinadas, evaporadas, e o resíduo purificado em sílica-gel (eluindo com 4 para 1 até 1 para 1 hexanos em acetato de etila) para produzir o composto intermediário (I-1b) como uma mistura de anômeros (980 g,

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 53/154

50/141

53% de rendimento durante duas etapas). Rf 0,57 e 0,60 em 1:1 hexanos/acetato de etila.

(3S.4S. 5R)-6-alilóxi-3,4,5-tris-benzilóxi-2,2-bis-(4-metóxibenziloximetil)-tetra-hidropirano (I-1c):

OMe

BnO ] OBn

OBn (Mc) [00126] O diol de partida [((3S,4S,5R)-6-alilóxi-3,4,5-tris-benzilóxi-2hidroximetil-tetra-hidro-piran-2-il)-metanol (I-1b: 10 g, 19,208 mmols) foi dissolvido em M,M-dimetilformamida (70 mL) e resfriado a 0°C. Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 1,69 g, 42,3 mmols) foi adicionado, e a reação foi permitida agitar a 0°C durante 1 hora, antes da adição de 1-bromometil-4-metóxi-benzeno (5,96 mL, 40,3 mmols). A reação foi em seguida aquecida durante a noite a 60°C. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, e a reação foi extinguida com água e extraída com acetato de etila (2 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. A reação foi em seguida cromatografada em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 0 a 80% de acetato de etila em heptano) produzindo 7,55 g (52% de rendimento) de produto (I-1c). MS 778,8 (M + NH4+; modo positivo).

(3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetrahidro-piran-2-ol (I-1d):

MeO.

MeO

OH

BnO'' J 'OBn

OBn (Md)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 54/154

51/141 [00127] Em uma solução de material de partida ((3S,4S,5R)-6alilóxi-3,4,5-tris-benzilóxi-2,2-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidropirano, (I-1c: 7,55 g, 9,92 mmols) em metanol (60 mL) e diclorometano (20 mL) em temperatura ambiente foi adicionado em cloreto de paládio (II) (528 mg, 2,98 mmols), e a mistura resultante foi agitada a esta temperatura durante 4 horas. TLC indicou a formação limpa de um produto mais polar. A reação foi filtrada através de Celite^® e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi cromatografado em sílica-gel eluindo com um gradiente de 0 a 80% de acetato de etila em heptano, produzindo 5,6 g (78% de rendimento) de produto (I-1d). MS 738,8 (M + NH4+; modo positivo).

(3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetrahidro-piran-2-ona (I-1e):

MeO

O

A .o O

Ox^A^A

Ό

(Μθ) [00128] Em uma solução de dicloreto de oxalila (1,9 mL, 23 mmols) em diclorometano (65 mL) a -78°C, foi adicionada uma solução de dimetilsulfóxido (3,3 mL, 47 mmols) em diclorometano (5 mL), e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante 30 minutos. Uma solução de material de partida ((3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-6,6-bis(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol, (I-1d, 5,6 g, 7,7 mmols) em diclorometano (15,0 mL) foi em seguida adicionada gota a gota, e a mistura resultante foi agitada durante 30 minutos, permitindo a temperatura subir para -60°C. Trietilamina (9,7 mL, 69,5 mmols) foi adicionada gota a gota, e a mistura permitida aquecer até 0°C durante 1 hora. A reação foi extinguida por adição de solução de cloreto de amônio aquosa saturada, e a fase orgânica foi seca em sulfato de magnésio,

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 55/154

52/141 filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de 0 a 60% de acetato de etila em heptano para produzir o produto (I1e) (4 g, 72% de rendimento).

1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 3,24 (d, J = 10

Hz, 1 H), 3,40-3,47 (m, 2 H), 3,74 (s, 3 H), 3,77 (s, 3 H), 3,86 (d, J = 10

Hz, 1 H), 4,07 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 4,15 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,35-4,55 (m, 6 H), 4,65 - 4,72 (m, 2 H), 4,82 (d, J = 11 Hz,1 H), 4,87 (d, J = 11,2

Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 11,1 Hz, 1 H), 6,74-6,79 (m, 2 H), 6,81-6,85 (m, 2

H), 7,11 (dd, J = 7,0, 2,5 Hz, 2 H), 7,17 - 7,41 (m, 17 H).

Metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-hidróxi-6(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I-1g) e/ou (3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-2(metóxi-metil-amino)-tetra-hidro-piran-2-ol (I-1f):

(I-1g) (I-1f) [00129] Em uma solução de lactona ((3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-

6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ona (I-1e: 10,4 g,

14,5 mmols) e cloridrato de M,O-dimetil-hidroxilamina (1,77 g, 29,0 mmols) em diclorometano (100 mL) a 0°C, foi adicionada gota a gota uma solução a 2,0 M de trimetilalumínio em hexanos (14,5 mL, 29,0 mmols), e a solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura reacional foi resfriada a 0°C e extinguida por adição lenta de solução a 1N de ácido clorídrico aquosa. A mistura resultante foi permitida agitar durante 1 hora. A fase orgânica foi separada e lavada com solução a 1N de ácido clorídrico aquosa, seca em

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 56/154

53/141 sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por cromatografia de média pressão (gradiente de 5 a 40% de acetato de etila em heptano) produzindo 6,5 g (58%) de produto.

1H RMN (400 MHz, clorofórmio-ó) delta ppm 2,62 (br. s, 1 H), 2,94 (br. s., 3 H), 3,23 (br. s., 3 H), 3,42 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 3,50 -

3,60 (m, 3 H), 3,75 (s, 3 H), 3,77 (s, 3 H), 4,03 (d, J = 6,9 Hz, 1 H), 4,20 (dd, J = 6,9, 3,3 Hz, 1 H), 4,31 - 4,44 (m, 5 H), 4,46-4,51 (m, 2H), 4,53 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,66 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,80 (br. d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,87 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 6,77 - 6,83 (m, 4 H), 7,15 - 7,35 (m, 19 H). ([M+H+] 780,8, modo positivo; [M+HCO2^-] 824,7, modo negativo). HRMS calculada para C46H54NO10 (M+H⁺) 780,3742, encontrado 780,3708.

Metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4,6-tetracis-benzilóxi-5benziloximetil-5-hidróxi-hexanoico (I-6g) e/ou (3R,4S,5S)-3,4,5-trisbenzilóxi-6,6-bis-benziloximetil-2-(metóxi-metil-amino)-tetra-hidropiran-2-ol (I-6f):

dz6fl)

[00130] Este composto foi preparado a partir de [((3S,4S,5R)-6alilóxi-3,4,5-tris-benzilóxi-2-hidroximetil-tetra-hidro-piran-2-il)-metanol (I-1b) usando um procedimento similar àquele descrito para a síntese de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I1g) e/ou (3R,4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-6,6-bis-(4-metóxi benziloximetil)-2-(metóxi-metil-amino)-tetra-hidro-piran-2-ol (I-1f), a não

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 57/154

54/141 ser que o agente de alquilação usado na parte experimental que descreve a conversão de (I-1b) a (I-1c) tenha sido brometo de benzila em vez de brometo de para-metoxibenzila.

1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta ppm 2,66 (br. s, 1 H), 2,94 (br. s., 3 H), 3,23 (br. s., 3 H), 3,48 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 3,55 3,66 (m, 3 H), 4,05 (d, J = 6,9 Hz, 1 H), 4,21 (dd, J = 6,9, 3,3 Hz, 1 H), 4,36 (d, 1H, J = 11,7 Hz), 4,41 - 4,58 (m, 7 H), 4,68 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,81 (br. d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,89 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 7,15 - 7,35 (m, 25 H). MS [M+H+] 720,7, modo positivo; [M+HCO2^-] 764,7, modo negativo).

(4S'5S)-3'4'5-tris-benzilóxi-2-r3-(4-metóxi-benzil)-4-metil-fenill-6'6-bis(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol

(Mi) [00131] n-Butillítio (0,97 mL, 2,5 M/hexanos, 3,15 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio (colocada em um frasconete de microondas Biotage® pré-seco de 10-20 mL, selado com sua tampa e colocado sob uma corrente positiva de gás de nitrogênio) de 4-bromo-2-(4metóxi-benzil)-1-metil-benzeno (690 mg, 3 equivalentes) em tetrahidrofurano anidroso (2,7 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante uma hora adicional. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-hidróxi-6(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I-1g) (608 mg) em tetra-hidrofurano anidroso (1,35 mL) foi em seguida adiciona

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 58/154

55/141 da gota a gota durante 1,5 hora, usando uma bomba de seringa, e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante 1 hora, antes de ser permitida aquecer a -20°C durante 14 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada; tamanho de Dewar: diâmetro externo de 10 cm, diâmetro interno de 8 cm, altura de 9 cm). Dietil éter foi adicionado, e a reação foi extinguida por adição gota a gota de solução a 1M de ácido clorídrico aquosa. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. Cromatografia em sílica-gel usando um gradiente de 20 a 50% de acetato de etila em heptano produziu o produto como uma mistura de isômeros (440 mg, 61% de rendimento).

HRMS calculada para C59H62OwNa (M+Na+) 953,4235, encontrado 953,4236.

{(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[3-(4-metóxi-benzil)-4-metil-fenil1-6,8dioxa-biciclo[3.2.11oct-1 -il}-metanol (I-1k):

(I-1k) [00132] Em uma solução do intermediário I-1i (150 mg) em diclorometano (3 mL) foi adicionado anisol (90 microL, 5 equivalentes), seguido por 3 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano, e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante cerca de 1 hora. A mistura foi concentrada, e o bruto foi cromatografado em sílica-gel (usando um gradiente de 10 a 30% de

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 59/154

56/141 acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto desejado como uma mistura de isômeros (66 mg, 61% de rendimento). MS (LCMS) 673,9 (M+H+; modo positivo).

(4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-2-[3-(4-etóxi-benzil)-4-metil-fenill-6,6-bis-(4metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (l-2i):

OBn

PMBO

OBn

0-211 [00133] n-Butillítio (0,312 mL, 2,5 M/hexanos, 3,05 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio (colocada dentro um por frasconete de micro-ondas Biotage® pré-seco de 10-20 mL, selado com sua tampa e colocado sob uma corrente positiva de gás de nitrogênio) de 4-bromo2-(4-etóxi-benzil)-1-metil-benzeno (238 mg, 3,05 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidroso (0,9 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante uma hora adicional. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I1g) (200 mg) em tetra-hidrofurano anidroso (0,6 mL) foi em seguida adicionada gota a gota durante 1,5 hora usando uma bomba de seringa, e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante 1 hora antes de ser permitida aquecer em temperatura ambiente durante 16 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada; tamanho de Dewar: diâmetro externo de 10 cm, diâmetro interno de 8 cm, altura de 9 cm). Dietil éter foi adicionado, e a reação foi extinguida por adição gota a gota de solução de

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 60/154

57/141 ácido clorídrico aquosa a 1M. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O material bruto foi cromatografada usando a unidade de cromatografia automatizada Biotage® (duas colunas de sílica-gel de 10 g empilhadas; eluindo com um gradiente de 0 a 60% de acetato de etila em heptano) para produzir o produto como uma mistura de isômeros (136 mg, 56% de rendimento). MS (LCMS) 968 (M+Na+; modo positivo).

{(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-metil-fenil1-6,8dioxa-biciclo[3.2.11oct-1-il}-metanol (I-2k):

O^ 0 0J ,OBn ^O O0

HO.

OBn

OBn (I-2k) [00134] Em uma solução do intermediário I-2i (136 mg, 0,145 mmol) em diclorometano (4 mL), foi adicionado anisol (310 microL, ~5 equivalentes) seguido por 4 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano, e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1,5 hora. A mistura foi concentrada, e o bruto foi cromatografado usando a unidade de cromatografia automatizada ISCOTM combiflash^® companion^® (coluna em sílica-gel de 4g) e eluindo com um gradiente de 0 a 70% de acetato de etila em heptano, para proporcionar o produto desejado como uma mistura de isômeros (85 mg, 85% de rendimento). MS (LCMS) 687,7 (M+H+; modo positivo).

(4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-2-[4-cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil1-6,6-bis(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (l-3i):

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 61/154

58/141

0=31 [00135] n-Butillítio (0,97 mL, 2,5 M/hexanos, 3,15 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio (colocada dentro um por frasconete de micro-ondas Biotage® pré-seco de 10-20 mL, selado com sua tampa e colocado sob uma corrente positiva de gás de nitrogênio) de 4-bromo1-cloro-2-(4-metóxi-benzil)-benzeno (725 mg, 2,95 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidroso (2,7 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante uma hora adicional. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I1g) (616 mg) em tetra-hidrofurano anidroso (1,35 mL) foi em seguida adicionada gota a gota durante 1,5 hora usando uma bomba de seringa, e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante 1 hora antes de ser permitida aquecer a -20°C durante 14 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada; tamanho de Dewar: diâmetro externo de 10 cm, diâmetro interno de 8 cm, altura de 9 cm). Dietil éter foi adicionado, e a reação foi extinguida por adição gota a gota de solução de ácido clorídrico aquosa a 1M. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. Cromatografia em sílica-gel usando um gradiente de 10 a 40% de acetato

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 62/154

59/141 de etila em heptano produziu o produto como uma mistura de isômeros (530 mg, 71% de rendimento).

{(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[4-cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil1-6,8dioxa-biciclo[3.2.11oct-1-il}-metanol (I-3k):

a-3k.

[00136] Em uma solução do intermediário I-3i (530 mg) em diclorometano (11 mL) foi adicionado anisol (300 microL, 5 equivalentes) seguido por 11 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano, e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi concentrada, e o bruto foi cromatografado em sílica-gel usando um gradiente de 10 a 40% de acetato de etila em heptano para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (229 mg, 59% de rendimento).

MS (LCMS) 693,6 (M+H+; modo positivo).

(4S, 5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-2-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil1-6,6-bis-(4metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (l-4i):

(141

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 63/154

60/141 [00137] n-Butillítio (1,0 mL, 2,5 M/hexanos, 3,25 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio (colocada dentro um por frasconete de micro-ondas Biotage® pré-seco de 10-20 mL, selado com sua tampa e colocado sob uma corrente positiva de gás de nitrogênio) de 4-bromo1-cloro-2-(4-etóxi-benzil)-benzeno (815 mg, 3,25 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidroso (2,9 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante uma hora adicional. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I1g) (600 mg) em tetra-hidrofurano anidroso (1,45 mL) foi em seguida adicionada gota a gota durante 1,3 hora usando uma bomba de seringa, e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante 1 hora antes de ser permitida aquecer a -25°C durante 14 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada; tamanho de Dewar: diâmetro externo de 10 cm, diâmetro interno de 8 cm, altura de 9 cm). Dietil éter foi adicionado, e a reação foi extinguida por adição gota a gota de solução de ácido clorídrico aquosa a 1M. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. Cromatografia em sílica-gel usando um gradiente de 10 a 40% de acetato de etila em heptano produziu o produto como uma mistura de isômeros (280 mg, 38% de rendimento).

HRMS calculada para Cõ9H61OwClNa (M+Na⁺) 987,3845, encontrado 987,3840.

{(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil1-6,8dioxa-biciclo[3.2.11oct-1-il}-metanol (I-4k):

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 64/154

61/141

(14) [00138] Em uma solução do intermediário I-4i (1,46 g) em diclorometano (31 mL) foi adicionado anisol (900 microL, ~5 equivalentes) seguido por 31 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano, e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi concentrada, e o bruto foi cromatografado em sílica-gel usando um gradiente de 10 a 30% de acetato de etila em heptano para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (670 mg, 63% de rendimento).

HRMS calculada para C43H44O?Cl (M+H+) 707,2770, encontrado

707,2765.

(4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-2-[4-fluoro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-6,6-bis(4metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (I-5i):

(15) [00139] n-Butillítio (462 microL, 2,5 M/hexanos, 3,0 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio (colocada dentro um por frasconete de micro-ondas Biotage® pré-seco de 10-20 mL, selado com sua tampa e

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 65/154

62/141 colocado sob uma corrente positiva de gás de nitrogênio) de 4-Bromo1-fluoro-2-(4-metóxi-benzil)-benzeno (341 mg, 3 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidroso (1,4 mL) a -78°C sob nitrogênio. A solução resultante foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. Em seguida, uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-trisbenzilóxi-5-hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)hexanoico (I-1g) (300 mg, 0,385 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (0,70 mL) foi adicionada gota a gota muito lentamente (1 gota a cada 5 segundos), e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante uma hora adicional antes de aquecer a 10°C durante 12 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio, para manter a temperatura gelada; tamanho de Dewar: diâmetro externo de 10 cm, diâmetro interno de 8 cm, altura de 9 cm). A reação foi diluída com dietil éter e extinguida pela adição gota a gota de solução a 1N de ácido clorídrico aquosa. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 40% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (199 mg, 55% de rendimento).

{(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[4-fluoro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil1-6,8dioxa-biciclo[3.2.11oct-1-il}-metanol (I-5k):

Ü51

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 66/154

63/141 [00140] Em uma solução de (4S,5S)-3,4,5-Tris-benzilóxi-2-[4-fluoro3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-6,6-bis-(4metóxi-benziloximetil)-tetra-hidropiran-2-ol (I-5i; 191 mg, 0,204 mmol) em diclorometano (3,75 mL) foi adicionado anisol (0,178 mL, 1,63 mmol) seguido por uma solução a 20% de ácido trifluoroacético em diclorometano (3,75 mL) em temperatura ambiente sob nitrogênio. Depois de agitar durante 1 hora em temperatura ambiente, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 30% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (115 mg, 83% de rendimento). MS (LCMS) 677,7 (M+H+; modo positivo).

(4S'5S)-3'4'5-tris-benzilóxi-2-r3-(4-etóxi-benzil)-4-fluoro-fenill-6'6-bis(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (I-10i)

(1-1011 [00141] n-Butillítio (508 microL, 2,5 M/hexanos, 3,0 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio de 4-Bromo-2-(4-etóxi-benzil)-1-fluorobenzeno (392,0 mg, 1,27 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (1,5 mL) a -78°C sob nitrogênio. A solução resultante foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. Em seguida, uma solução de metóximetil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-hidróxi-6-(4metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico I-1g (330,0 mg, 0,423 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (0,75 mL) foi adicionada

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 67/154

64/141 gota a gota muito lentamente (1 gota a cada 5 segundos), e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante uma hora adicional antes de aquecer a 10°C durante 12 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada). A reação foi diluída com dietil éter e extinguida pela adição gota a gota de solução a 1N de ácido clorídrico aquosa. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 40% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (180 mg, 44% de rendimento). {(2S.3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-fluoro-fenil1-6,8dioxa-biciclo[3.2.11oct-1 -il}-metanol (I-10k)

(I-10k) [00142] Em uma solução de intermediário I-10i (180,0 mg, 0,19 mmol) em diclorometano (2,0 mL) foi adicionado anisol (0,175 mL,

1,60 mmol) seguido por uma solução a 20% de ácido trifluoroacético em diclorometano (2,0 mL) em temperatura ambiente sob nitrogênio. Depois de agitar durante 1 hora, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 30% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (85,0 mg, 64% de rendimento).

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 68/154

65/141 (4S, 5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-2-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furan-3-ilóxi)benzil]-fenil}-6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (I-11i)

0-111 [00143] n-Butillítio (1,0 mL, 2,5 M/hexanos, 3,0 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio de 3-[4-(5-bromo-2-fluoro-benzil)-fenóxi]tetra-hidro-furano (878 mg, 2,50 mmols) em tetra-hidrofurano anidroso (3,0 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4metóxi-benziloximetil)-hexanoico I-1g (650 mg, 0,833 mmol) em tetrahidrofurano anidroso (1,5 mL) foi em seguida adicionada muito lentamente gota a gota (0,9 mL/hora), e a mistura resultante foi agitada a 78°C durante uma hora adicional antes de aquecer a 10°C durante 12 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada). A reação foi diluída com dietil éter e extinguida pela adição gota a gota de solução a 1N de ácido clorídrico aquosa. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 40% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (287 mg, 34% de rendimento) ((2S,3S)-2,3,4-tris-benzilòxi-5-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furan-3-ilòxi)Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 69/154

66/141

benzil]-fenil}-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il)-metanol (I-11k) [00144] Em uma solução de (4S,5S)-3,4,5-Tris-benzilóxi-2-{4-fluoro3-[4-(tetra-hidro-furan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-6,6-bis-(4-metóxibenziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol I-11i (275 mg, 0,28 mmol) em diclorometano (2,0 mL) foi adicionado anisol (0,250 mL, 2,29 mmol) seguido por uma solução a 20% de ácido trifluoroacético em diclorometano (8,0 mL) em temperatura ambiente sob nitrogênio. Depois de agitar durante 1 hora, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 30% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (168 mg, 83% de rendimento).

(4S.5S)-3.4.5-tris-benzilóxi-2-[3-(4-cloro-benzil)-4-fluoro-fenil]-6.6-bis(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (l-12i):

Cl

.OBn

PMBO

OBn d'OBn [00145] n-Butillítio (1,0 mL, 2,5 M/hexanos, 3,1 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio (colocada dentro um por frasconete de micro-ondas Biotage® pré-seco de 10-20 mL, selado com sua tampa e

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 70/154

67/141 colocado sob uma corrente positiva de gás de nitrogênio) de 4-Bromo2-(4-cloro-benzil)-1-fluoro-benzeno (702 mg, 2,9 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidroso (3,0 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante 25 minutos. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-hidróxi-6-(4metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I-1g) (621 mg) em tetra-hidrofurano anidroso (1,5 mL) foi em seguida adicionada gota a gota usando uma bomba de seringa (0,9 mL/hora), e a mistura resultante foi agitada a baixa temperatura durante um adicional de 17 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada; tamanho de Dewar: diâmetro externo de 10 cm, diâmetro interno de 8 cm, altura de 9 cm). A reação foi extinguida por adição gota a gota de solução de ácido clorídrico aquosa a 1M (1,5 mL). A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi diluída com cloreto de amônio aquoso saturado (15 mL) e extraída com acetato de etila (15 mL x 3). A solução orgânica combinada foi lavada com salmoura (30 mL), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. Cromatografia em sílica-gel usando um gradiente de 10 a 40% de acetato de etila em heptano produziu o produto como uma mistura de isômeros (477 mg, 64% de rendimento).

{(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[3-(4-cloro-benzil)-4-fluoro-fenil1-6,8dioxa-biciclo[3.2.11oct-1 -il}-metanol (I-12k):

Cl ô F (Y

A. ,OBn

HO. ΑΥΑ.

OBn

OBn (I-12k)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 71/154

68/141 [00146] Em uma solução do intermediário I-12i (243 mg) em diclorometano (9 mL) foi adicionado anisol (0,15 mL, 5,3 equivalentes) seguido por ácido trifluoroacético (1,0 mL, 50 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi concentrada, e o bruto foi cromatografado em sílica-gel usando um gradiente de 10 a 30% de acetato de etila em heptano para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (102 mg, 58% de rendimento).

(4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-2-{4-fluoro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzillfenil}-6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (I-13i)

0-131 [00147] n-Butillítio (1,12 mL, 2,5 M/hexanos, 3,0 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio de 3-[4-(5-Bromo-2-fluoro-benzil)-fenóxi]oxetano (942,0 mg, 2,79 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (3,0 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4tris-benzilóxi-5-hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxibenziloximetil)-hexanoico I-1g (725,0 mg, 0,930 mmol) em tetrahidrofurano anidroso (1,5 mL) foi em seguida adicionada muito lentamente gota a gota (0,9 ml/hora), e a mistura resultante foi agitada a 78°C durante uma hora adicional antes de aquecer a 10°C durante 12 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada). A reação foi diluída com dietil éter

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 72/154

69/141 e extinguida pela adição gota a gota de solução a 1N de ácido clorídrico aquosa. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 40% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (535 mg, 59% de rendimento).

((2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-{4-fluoro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzillfenil}-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1loct-1-il)-metanol (I-13k)

(I-13k) [00148] Em uma solução de (4S,5S)-3,4,5-Tris-benzilóxi-2-{4-fluoro3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetrahidro-piran-2-ol I-13i (535 mg, 0,548 mmol) em diclorometano (2,0 mL) foi adicionado anisol (0,480 mL, 4,38 mmols) seguido por uma solução a 20% de ácido trifluoroacético em diclorometano (8,0 mL) em temperatura ambiente sob nitrogênio. Depois de agitar durante 1 hora, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 10 a 30% de acetato de etila em heptano) para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (300 mg, 76% de rendimento).

(dSõSJ-^^d^t^^íenzilóxi-^-íd-çloro-^-ld-íoxetan-^-ilõxiJ-benzilJ-íenil}6,6-bis-(4-metóxi-benziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol (I-14i):

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 73/154

70/141

Ü1H [00149] n-Butillítio (0,97 mL, 2,5 M/hexanos, 3,15 equivalentes) foi adicionado gota a gota (1 gota a cada 5 segundos) a uma solução desgaseificada de oxigênio (colocada dentro um por frasconete de micro-ondas Biotage® pré-seco de 10-20 mL, selado com sua tampa e colocado sob uma corrente positiva de gás de nitrogênio) de 3-(4-(5bromo-2-clorobenzil)fenóxi)oxetano (824 mg, 2,95 equivalentes) em tetra-hidrofurano anidroso (2,7 mL) a -78°C, e a solução resultante foi agitada a esta temperatura durante uma hora adicional. Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5hidróxi-6-(4-metóxi-benzilóxi)-5-(4-metóxi-benziloximetil)-hexanoico (I1g) (616 mg) em tetra-hidrofurano anidroso (1,35 mL) foi em seguida adicionada gota a gota durante 1,5 hora usando uma bomba de seringa, e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante 1 hora antes de ser permitida aquecer a -20°C durante 14 horas (colocada em um Dewar fundo revestido com chapa de alumínio para manter a temperatura gelada; tamanho de Dewar: diâmetro externo de 10 cm, diâmetro interno de 8 cm, altura de 9 cm). Dietil éter foi adicionado, e a reação foi extinguida por adição gota a gota de solução de ácido clorídrico aquosa a 1M. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, seca em sulfato de sódio, filtrada e concentrada. Cromatografia em sílica-gel

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 74/154

71/141 usando um gradiente de 0-50% de acetato de etila em heptano produziu o produto como uma mistura de isômeros (563 mg, 72% de rendimento).

((2S.3S)-2.3.4-Tris-benzilóxi-5-{4-cloro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzillfenil}-6,8-dioxa-biciclo[3.2.11oct-1-il)-metanol (I-14k):

(I-14k) [00150] Em uma solução do intermediário (4S,5S)-3,4,5-trisbenzilóxi-2-{4-cloro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-6,6-bis-(4-metóxibenziloximetil)-tetra-hidro-piran-2-ol I-14i (282 mg) em diclorometano (2,84 mL), foi adicionado anisol (200 microL, ~7 equivalentes) seguido por 3,07 mL de uma solução de ácido trifluoroacético a 20% em diclorometano, e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1,5 hora. A mistura foi concentrada, e o bruto foi cromatografado em sílica-gel usando um gradiente de 10 a 50% de acetato de etila em heptano para proporcionar o produto como uma mistura de isômeros (186 mg, 89% de rendimento).

Exemplo 1 (1S,2S, 3S,4R,5S)-1-hidroximetil-5-[3-(4-metóxi-benzil)-4-metil-fenil16,8-dioxa-biciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (1A) e (1S,2S,3S,4S,5S)-1hidroximetil-5-[3-(4-metóxi-benzil)-4-metil-fenil1-6,8-dioxabiciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (1B):

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 75/154

72/141

(1A) (1B) [00151] Em uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[3-(4metóxi-benzil)-4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il}-metanol (I1k: 236 mg) em etanol/tetra-hidrofurano (7 mL, volume de 4/1) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (270 microL, 19 equivalentes) e negro de paládio (150 mg, 4 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. O paládio foi filtrado, e a mistura bruta obtida depois da evaporação do solvente foi purificada por cromatografia em sílica-gel eluindo com um gradiente de 85 a 100% de acetato de etila em heptano. A mistura de produtos obtida foi purificada por HPLC preparativa.

[00152] Método de HPLC preparativa: coluna C18 phenomenex Luna de 5 micrômetros de fase reversa de 150 x 21,20 mm, 20 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 20 a 60% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 20 minutos. Detecção de UV: 254 nm. A HPLC indicou uma relação de diastereoisômeros de 3:1 (1A:1B).

1A: (55 mg, 39% de rendimento); Tr = 10,9 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e seco sob pressão reduzida. MS (LCMS) 403,3 (M+H+; modo positivo) 447,3 (M+HCO2^-, modo negativo).

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 76/154

73/141 ¹H RMN (400 MHz, metanol-cU) delta 7,33 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,30 (dd, 1H, J = 7,6 e 1,6 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,02-6,98 (m, 2H), 6,79-6,75 (m, 2H), 4,13 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 3,90 (s, 2H), 3,82 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,77 (dd, 1H, J = 8,2 e 1,2 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,66 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,65 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 3,59 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 3,58 (dd, 1H, J = 7,5 e 1,5 Hz), 2,16 (s, 3H). HRMS calculada para C22H27O7 (M+H+) 403,1751, encontrado 403,1737.

1B: (20 mg, 14% de rendimento); Tr = 11,5 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e seco sob pressão reduzida. MS (LCMS) 403 (M+H+; modo positivo) 447 (M+HCO2^-, modo negativo).

¹H RMN (400 MHz, metanol-cU) delta 7,38 (d, 1H, J = 1,8 Hz) 7,33 (dd, 1H, J = 7,9 e 1,8 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,02-6,97 (m, 2H), 6,79-6,74 (m, 2H), 4,02 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 3,93 (t, 1H, J = 2,2 Hz), 3,91 (br. s, 2H), 3,88 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,84 (d, 2H, J = 2,4 Hz), 3,75 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,71 (s, 3H), 3,49 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 2,16 (s, 3H). Exemplo 2 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-í3-(4-etóxi-benzil)-4-metil-fenil]-1-hidroximetil-6,8dioxa-biciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (2A) e (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4etóxi-benzil)-4-metil-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano2,3,4-triol (2B)

(2A) (2B)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 77/154

74/141 [00153] Em uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[3-(4etóxi-benzil)-4-metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il}-metanol (I-2k: 85 mg, 0,12 mmol) em etanol/tetra-hidrofurano (7 mL, ~volume de 4/1) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (95 microL, 19 equivalentes) e negro de paládio (53 mg, 4 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. O paládio foi filtrado, e a mistura bruta obtida depois da evaporação do solvente foi purificada por HPLC preparativa.

[00154] Método de HPLC preparativa: coluna C18 phenomenex Luna de 5 micrômetros de fase reversa de 150 x 21,20 mm, 20 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 20 a 60% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 20 minutos. Detecção de UV: 254 nm. A HPLC indicou uma relação de diastereoisômeros de 4:1 (2A:2B).

2A: (20 mg; 38% de rendimento) Tr = 12,7 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e seco sob pressão reduzida.

MS (LCMS) 417,3 (M+H+; modo positivo); 461,4 (M+HCO2^-; modo negativo). ¹H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta ppm 1,34 (t, J =

6,9 Hz, 3 H), 2,18 (s, 3 H), 3,60 (d, J = 8 Hz, 2 H), 3,66 (t, J = 8 Hz, 1 H), 3,68 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,78 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 3,84 (d, J = 12,4 Hz, 1 H), 3,92 (s, 2 H), 3,97 (q, J = 7 Hz, 2 H), 4,15 (d, J = 7,5 Hz, 1 H),

6,77 (m, 2 H), 7,00 (m, 2 H), 7,12 (d, J = 7,7 Hz, 1 H), 7,31 (dd, J = 7,9 e 1,4 Hz, 1 H), 7,34 (s, 1 H).

2B: (5 mg; 9% de rendimento) Tr = 13,2 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e seco sob pres

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 78/154

75/141 são reduzida.

MS (LCMS) 417,3 (M+H+; modo positivo); 461,4 (M+HCO2^-; modo negativo). 1H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta ppm 1,34 (t, J =

6,9 Hz, 3 H), 2,18 (s, 3 H), 3,52 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 3,77 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 4,00-3,84 (m, 8 H), 4,04 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,79-6,75 (m, 2 H), 7,03-6,98 (m, 2 H), 7,12 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,35 (dd, J = 7,7 e 1,9 Hz, 1 H), 7,39 (d, J = 1,9 Hz, 1 H).

Exemplo 3 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (3A) e (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[4cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2.3.4-triol (3B):

(3A) (3B) [00155] Em uma solução de {(2S_!3S)-2_!3,4-tris-benzilóxi-5-[4-cloro-

3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il}-metanol (I-3k: 229 mg) em etanol/tetra-hidrofurano (7 mL, volume de 4/1) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (270 microL, 20 equivalentes) e negro de paládio (140 mg, 4 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 1 hora, ácido fórmico adicional (270 microL, 20 equivalentes) e negro de paládio (140 mg, 4 equivalentes) foram adicionados, e a mistura foi permitida agitar durante uma hora adicional em temperatura ambiente. O paládio foi filtrado, e a mistura bruta obtida depois da evaporação do solvente foi purificada por HPLC preparativa.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 79/154

76/141 [00156] Método de HPLC preparativa: coluna C18 phenomenex Luna de 5 micrômetros de fase reversa de 150 x 21,20 mm, 20 mL/minutos, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 20 a 60% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 20 minutos. Detecção de UV: 254 nm. A HPLC indicou uma relação de diastereoisômeros de 1,4:1 (3A:3B).

3A: (50 mg; 36% de rendimento) Tr = 12,1 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e concentrado sob pressão reduzida.

MS (LCMS) 423,3 (M+H⁺; modo positivo); 467,3 (M+HCO2^-; modo negativo). ¹H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta 7,43 (s, 1H), 7,38-7,30 (m, 2H), 7,08 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 4,12 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 4,01 (s, 2H), 3,81 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,75 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,73 (s, 3H), 3,66 (d, 1H, J = 11,7 Hz), 3,63 (t, 1H, J = 8,2 Hz), 3,57 (d, 1H, J =

7,4 Hz), 3,52 (d, 1H, J = 7,8 Hz). HRMS calculada para C21H24O7CI (M+H+) 423,1205, encontrado 423,1192.

3B: (37 mg; 27% de rendimento) Tr = 12,8 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e concentrado sob pressão reduzida.

MS (LCMS) 423,3 (M+H⁺; modo positivo) 467,3 (M+HCO2^-, modo negativo). ¹H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta 7,50 (d, 1H, J =

1,9 Hz) 7,42 (dd, 1H, J = 8,3 e 1,9 Hz), 7,35 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,127,07 (m, 2H), 6,83-6,78 (m, 2H), 4,06-4,01 (m, 3H), 3,91-3,83 (m, 4H), 3,78-3,72 (m, 4H), 3,51 (d, 1H, J = 7,5 Hz).

Exemplo 4 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 80/154

77/141 dioxa-biciclor3.2.11octano-2'3'4-triol (4A) e (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[4cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (4B):

	OCH CH	OCH CH
Cl	O	Cl
θ O J	,,OH	O ,,J
X o^	/ -OH O
HO	HO..
	OH
OH		OH
(4A)		(4B)
[00157] Em uma	solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[4-cloro-

3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il}-metanol (I-4k:

335 mg) em etanol/tetra-hidrofurano (10 mL, volume de 4/1) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (420 microL, 22 equivalentes) e negro de paládio (208 mg, 4 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 1 hora, ácido fórmico adicional (420 microL, 22 equivalentes) e negro de paládio (208 mg, 4 equivalentes) foram adicionados, e a mistura foi permitida agitar durante uma hora adicional em temperatura ambiente. O paládio foi filtrado, e a mistura bruta obtida depois da evaporação do solvente foi purificada por HPLC preparativa.

[00158] HPLC preparativa: coluna C18 Gemini de 5 micrômetros de fase reversa de 30 x 100 mm, 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico: água/0,1% de ácido fórmico; 25 a 50% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 18 minutos; detecção de UV: 220 nm. A HPLC indicou uma relação de diastereômeros de 1,1:1 (4A:4B).

4A: (60 mg, 29% de rendimento); Tr = 12,4 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 81/154

78/141 sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e secado sob pressão reduzida.

MS (LCMS) 437,3 (M+H+; modo positivo); 481,3 (M+HCO2^-; modo negativo). 1H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta 7,43 (d, 1H, J =

1,9 Hz), 7,36 (dd, 1H, J = 8,3 e 2 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,087,04 (m, 2H), 6,79-6,75 (m, 2H), 4,12 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 4,00 (s, 2H), 3,96 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 3,81 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,75 (dd, 1H, J = 8,3 e 1,3 Hz), 3,65 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,63 (t, 1H, J = 8,2 Hz), 3,57 (dd, 1H, J = 7,5 e 1,3 Hz), 3,52 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 1,33 (t, 3H, J = 6,9 Hz). HRMS calculada para C22H26O?Cl (M+H+) 437,1361, encontrado

437.1360.

4B: (30 mg, 15% de rendimento); Tr = 13,2 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e secado sob pressão reduzida.

MS (LCMS) 437,3 (M+H+; modo positivo) 481,3 (M+HCO2^-, modo negativo). ¹H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta 7,48 (d, 1H, J =

1,9 Hz) 7,40 (dd, 1H, J = 8,1 e 1,9 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,087,03 (m, 2H), 6,80-6,74 (m, 2H), 4,04-3,99 (m, 3H), 3,95 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,89-3,81 (m, 4H), 3,73 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 3,49 (d, 1H, J = 7,3 Hz), 1,32 (t, 3H, J = 7 Hz). HRMS calculada para C22H26O?Cl (M+H+)

437.1361, encontrado 437,1358.

Exemplo 5 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-[4-fluoro-3-(4-metóxi-benzil)-fenill-1-hidroximetil6,8-dioxa-biciclo[3.2.1loctano-2,3,4-triol (5A) e (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[4fluoro-3-(4-metóxi-benzil)-fenill-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1loctano-2,3,4-triol (5B):

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 82/154

79/141

(5A) (5B) [00159] Em uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-Tris-benzilóxi-5-[4fluoro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il}-metanol (115 mg, 0,170 mmol) em uma solução 4:1 de etanol/tetra-hidrofurano (10 mL) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (137 microL, 3,42 mmols) e negro de paládio (73 mg, 0,687 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 3 horas, ácido fórmico adicional (137 microL, 3,42 mmols) e negro de paládio (73 mg, 0,687 mmol) foram adicionados. Depois de 18 horas, a mistura reacional foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto resultante foi purificado por cromatografia rápida em sílicagel (eluindo com um gradiente de 0 a 15% de metanol em diclorometano) para proporcionar 64 mg de um sólido branco. A mistura de isômeros foi purificada por HPLC preparativa.

[00160] Método de HPLC preparativa: coluna C18 phenomenex Luna de 5 micrômetros de fase reversa de 150 x 21,20 mm, 20 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico:água/0,1% de ácido fórmico; 20 a 80% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 20 minutos). Detecção de UV: 254 nm. A HPLC indicou uma relação de diastereômeros de 1:1 (5A:5B).

5A: (6 mg; 9% de rendimento) Tr = 8,5 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e secado sob pressão reduzida.

¹H RMN (400 MHz, metanol-cU) delta ppm 3,55 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,58 (dd, J = 7,5, 1,2 Hz, 1 H), 3,64 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 3,67

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 83/154

80/141 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,74 (s, 3 H), 3,77 (dd, J = 8,3, 1,2 Hz, 1 H), 3,83 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,91 (s, 2 H), 4,14 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,76 - 6,84 (m, 2 H), 7,02 (dd, J = 9,9, 8,3 Hz, 1 H), 7,09 - 7,13 (m, 2 H), 7,37 7,44 (m, 2 H); MS: 407,4 (M+ H⁺; modo positivo); 451,3 (M+HCO2^-; modo negativo)

5B: (12 mg; 17% de rendimento) Tr = 9 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida. O material bruto foi precipitado a partir de acetato de etila e heptano. O sólido branco resultante foi lavado com heptano 2 vezes e secado sob pressão reduzida.

¹H RMN (400 MHz, metanol-cU) delta ppm 3,51 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 3,74 (s, 3 H), 3,75 (d, 1H, J = 13 Hz), 3,83-3,93 (m, 6 H), 4,03 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,78-6,82 (m, 2 H), 7,02 (dd, J = 9,9, 8,5 Hz, 1 H), 7,09-7,13 (m, 2 H), 7,42-7,49 (m, 2 H); MS: 407,4 (M+ H⁺; modo positivo); 451,3 (M+HCO2^-; modo negativo)

Exemplo 6

2-(4-metoxibenzil)-4-((1S,2S, 3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidróxi-1(hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)-benzonitrila (6A):

(6A) [00161] n-Butil lítio (1,04 mL, 2,6 mmols, 2,5 M em hexano) foi adicionado a uma solução de brometo de isopropilmagnésio (1,27 mL, 1,27 mmol, 1 M em tetra-hidrofurano) a 0°C. Depois de ser agitada durante 30 minutos, a mistura resultante foi resfriada a -78°C, e uma solução de 4-bromo-2-(4-etóxi-benzil)-benzonitrila (380 mg, 1,20 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (1 mL) foi adicionada. A mistura esverdeada foi agitada durante 1 hora a -78°C, e uma solução de metóxiPetição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 84/154

81/141 metil-amida de ácido (2R,3S,4S)-2,3,4,6-tetracis-benzilóxi-5benziloximetil-5-hidróxi-hexanoico (I-6g) (700 mg, 0,972 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (2 mL) foi adicionada muito lentamente (durante 20 minutos, 1 gota a cada 5 segundos). A solução foi agitada a 78°C durante 1 hora e lentamente aquecida até a temperatura ambiente durante 3 horas. A reação foi extinguida por adição gota a gota de solução de ácido clorídrico aquosa a 1M, e em seguida diluída com acetato de etila. A mistura bifásica resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada, proporcionando o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de 0 a 20% de acetato de etila em heptano proporcionando o intermediário desejado 2-(4-etóxi-benzil)-4-((4S,5S)-3,4,5-tris-benzilóxi-6,6-bisbenziloximetil-2-hidróxi-tetra-hidro-piran-2-il)-benzonitrila (300 mg; 34% de rendimento). MS 918,8 (M+Na+, modo positivo).

[00162] Tricloreto de boro (4,18 mL, 4,18 mmols, solução a 1 M em hexano) foi adicionado à solução do intermediário acima (250 mg, 0,279 mmol) em CH2Cl2 (2 mL) a -78°C. A mistura foi agitada a -78°C durante 10 minutos, e em seguida aquecida durante a noite até a temperatura ambiente. A mistura foi extinguida com água (10 mL) e extraída com acetato de etila (50 mL). A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio e evaporada até a secura. Purificação por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com metanol em diclorometano: 1 a 9 em volume) produziu o intermediário desejado 2-(4-hidróxi-benzil)-4((1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidróxi-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-5-il)-benzonitrila (35 mg, 30% de rendimento).

[00163] Carbonato de potássio (28 mg, 0,2 mmol) foi adicionado a uma solução do intermediário acima (34 mg, 0,077 mmol) em acetona (0,4 mL), seguido por iodometano (7 microL, 0,11 mmol) em tempera

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 85/154

82/141 tura ambiente. A mistura foi agitada durante a noite a 45°C. A mistura foi diluída com acetato de etila (60 mL) e lavada com água. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio e evaporada até a secura. Purificação por cromatografia em camada fina preparativa em sílica-gel (eluindo com metanol em diclorometano : 1 a 9 em volume) permitiu o isolamento do produto desejado 6A (18 mg; 57% de rendimento).

1H RMN (400 MHz, metanol-cU) delta 7,69 (d, J = 8 Hz, 1H),

7,61 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,19-7,14 (m, 2H), 6,87-6,82 (m, 2H), 4,18 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,14 (s, 2H), 3,86 (d, J = 12,7 Hz, 1H); 3,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,69 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 3,67 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,54 (d, J = 8 Hz, 1H); MS

458,4 (M+HCO2^-; modo negativo).

Exemplo 7

2-(4-etoxibenzil)-4-((1S,2S,3S,4R, 5S)-2,3,4-tri-hidróxi-1-(hidroximetil)6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)-benzonitrila (7A):

(7A) [00164] Carbonato de potássio (8 mg, 0,058 mmol) foi adicionado a uma solução do intermediário 2-(4-hidróxi-benzil)-4-((1S,2S,3S,4R,5S)-

2,3,4-tri-hidróxi-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)benzonitrila (vide o exemplo 6; 8,9 mg, 0,022 mmol) em acetona (0,4 mL), seguido por iodoetano (4 microL, 0,044 mmol) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante a noite a 45°C. A mistura foi diluída com acetato de etila (60 mL) e lavada com água. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio e evaporada até a secura. Purificação por Cromatografia em Camada Fina preparativa em sílica-gel (eluindo com metanol em diclorometano: 1 a 9 em volume) permitiu o

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 86/154

83/141 isolamento do produto desejado 7A (2,4 mg; 26% de rendimento).

¹H RMN (metanol-cU) delta 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 1H), 7,17-7,13 (m, 2H), 6,866,81 (m, 2H), 4,18 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,14 (s, 2H), 4,01 (q, J = 7,0 Hz, 2H); 3,86 (d, J = 12,5 Hz, 1H); 3,80 (dd, J = 8,0 e 1,2 Hz, 1H), 3,70 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,67 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,61 (dd, J = 7,5 e 1,2 Hz, 1H), 3,54 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 1,37 (t, J = 7,0 Hz, 3H); MS 472,1 (M+HCO2^-; modo negativo).

[00165] O exemplo 8 ilustra a preparação de um derivado cristalino do composto do exemplo 3B para confirmar a estrutura e estereoquímica do exemplo 3B.

Exemplo 8

Por 4-bromobenzoilação de (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metóxibenzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (3B) para produzir (8A):

(8A) [00166] Em uma solução de (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[4-cloro-3-(4metóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4triol (3B) (11 mg, 0,026 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (600 microL) foram adicionados em temperatura ambiente M,M-diisopropiletilamina (32 microL, 7 equivalentes) e 4-dimetilaminopiridina (3 mg, 0,9 equivalentes) seguido por cloreto de para-bromobenzoíla

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 87/154

84/141 (35 mg, 6 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 62 horas. Acetato de etila e água foram adicionados, e a fase orgânica foi lavada sucessivamente com solução de ácido clorídrico aquosa a 0,5M e salmoura. A fase orgânica foi secada em sulfato de magnésio, filtrada, concentrada, e o bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de 15 a 30% de acetato de etila em heptano para proporcionar 27 mg do produto (90% de rendimento).

1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta 7,82 (m, 2H), 7,747,64 (m, 4H), 7,58-7,46 (m, 8H), 7,42-7,34 (m, 4H), 7,29 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,89 (m, 2H), 6,63 (m, 2H), 6,04 (dd, 1H, J = 9,6 e 1 Hz), 5,98 (dd, 1H, J = 9,6 e 4,4 Hz), 5,89 (d, 1H, J = 4,4 Hz), 4,70 (d, 1H, J = 12,4 Hz), 4,65 (d, 1H, J = 12,4 Hz), 4,60 (d, 1H, J = 8 Hz), 3,98-3,88 (m, 3H), 3,73 (s, 3H).

[00167] Cristais únicos foram obtidos por técnicas de difusão de vapor usando heptano e acetato de etila como solventes. Ponto de fusão = 191°C. Cristaloanálise de Raios X Simples. Um cristal representativo foi inspecionado e um conjunto de dados de 1 A (sin máxima Θ/λ (=0,5) foi coletado em um Difractômetro Bruker APEX II/R. Pares de Friedel foram coletados para facilitar a determinação da configuração absoluta. fatores de dispersão atômicos foram tirados das tabelas Internacionais por cristalografia. Vide International Tables for Crystallography, Vol. C, pp. 219, 500, Kluwer Academic Publishers,1992. Todos os cálculos cristalográficos foram facilitados pelo sistema SHELXTL. Vide, SHELXTL, Versão 5.1, Bruker AXS, (1997). Todos os dados do difratômetro foram coletados em temperatura ambiente. Cristal pertinente, coleta de dados e refinamento são resumidos na tabela 1 abaixo.

Tabela 1 (tradução)

Dados de cristal e refinamento de estrutura para o exemplo 8A.

Fórmula empírica C49H35ÜnBr4Cl

Peso de fórmula 1154,86

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 88/154

85/141

Temperatura 296(2) K Comprimento de onda Sistema de Cristal	1,54178 Â Monoclínico
Grupo espacial Dimensões de célula unitária	C2 a = 23,7485(6) Â α = 90°. b = 6,3175(2) Â β = 104,4910(10)°. c = 32,3167(8) Â γ = 90°.
Volume	4694,3(2) Â³
Z	4
Densidade (calculada) Coeficiente de absorção F(000) Tamanho do cristal	1,634 Mg/m³ 5,216 mm' 2296 0,12 x 0,03 x 0,02 mm³
Faixa de teta para coleta de dados Reflexões coletadas	3,75 a 50,43°. 8339
Reflexões independentes Perfeição para teta = 50,43° Correção de absorção Método de refinamento	3932 [R(int) = 0,0491] 89,7% Correção de Absorção Empírica Quadrados mínimos de matriz total em F²
Dados / restrições / parâmetros Boa qualidade-de-ajuste em F²Indices de R final [I>2sigma(I)] Parâmetro de estrutura absoluto	3932 / 1 / 587 0,967 R1 = 0,0371, wR2 = 0,0854 -0,03(2)
Coeficiente de extinção Orifício e pico de difração maior	0,00011(3) 0,297 e -0,294 e.Â-3

[00168] Uma estrutura de teste foi obtida por métodos diretos. Esta estrutura de teste refinou habitualmente. Posições de hidrogênio foram calculadas onde quer que possível. Os metil hidrogênios foram localizados por técnicas de Fourier de diferenças e em seguida idealizados. Os parâmetros de hidrogênio foram adicionados aos cálculos de fator de estrutura, porém não foram refinados. Os desvios calculados nos ciclos finais de refinamento de quadrados mínimos foram todos menos do que 0,1 dos desvios-padrão correspondentes. O Índice de R final foi 3,71%. Uma Fourier de diferença final não revelou densidade de elétron perdida ou extraviada. A estrutura refinada foi plotada usando o pacote de plotagem SHELXTL (figura 1). A configuração absoluta foi

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 89/154

86/141 determinada pelo método de Flack. Vide Flack, H.D., Acta Crystallogr., A39, 876, (1983).

[00169] O exemplo 9 ilustra a preparação de um derivado cristalino do composto do exemplo 4A para confirmar a estrutura e estereoquímica do exemplo 4A.

Exemplo 9

Por 4-nitrobenzoilação de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxibenzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (4A) para produzir (9A):

(9A) [00170] Em uma solução de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxibenzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (4A: 10,6 mg, 0,024 mmol) em tetra-hidrofurano anidroso (300 microL) resfriada a 0°C, foram adicionados M,M-di-isopropiletilamina (30 microL, 7 equivalentes) e 4-dimetilaminopiridina (3 mg, 1 equivalentes) seguido por cloreto de para-nitrobenzoíla (27 mg, 6 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada a 60° C durante 6 horas. A mistura foi resfriada em temperatura ambiente, acetato de etila e água foram adicionados, e a fase orgânica foi lavada sucessivamente com solução de ácido clorídrico aquosa a 0,5M e salmoura. A fase orgânica foi secada em sulfato de magnésio, filtrada, concentrada, e o bruto foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel eluindo com um gradiente de 10 a 50% de acetato de etila em heptano para proporcionar 18 mg do

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 90/154

87/141 produto (73% de rendimento).

¹H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) delta 8,33 (m, 2H), 8,288,12 (m, 8H), 8,07 (m, 2H), 8,00 (m, 2H), 7,91 (m, 2H), 7,45-7,40 (m, 2H), 7,34 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,87 (m, 2H), 6,64 (m, 2H), 6,13 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,06 (t, 1H, J = 8,3 Hz), 5,86 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 4,81 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,75 (d, 1H, J = 12,7 Hz), 4,60 (d, 1H, J = 12,8 Hz), 4,06 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 3,98-3,90 (m, 4H), 1,39 (t, 3H, J = 7 Hz).

[00171] Os cristais únicos foram obtidos por recristalização lenta de acetonitrila / isopropanol como solventes. Ponto de fusão = 211°C. Um cristal representativo foi inspecionado e um conjunto de dados de 0,88 Â (sin máxima Θ/λ (=0,57) foi coletado em um Difractômetro Bruker APEX II/R. Pares de Friedel foram coletados para facilitar a determinação da configuração absoluta. Fatores de dispersão atômicos foram tirados das tabelas Internacionais por Cristalografia. Vide International Tables for Crystallography, Vol. C, pp. 219, 500, Kluwer Academic Publishers,1992. Todos os cálculos cristalográficos foram facilitados pelo sistema SHELXTL. Vide, SHELXTL, Versão 5.1, Bruker AXS, (1997). Todos os dados de difratômetro foram coletados em temperatura ambiente. Cristal pertinente, coleta de dados e refinamento são resumidos na tabela 2 abaixo.

Tabela 2

Dados de cristal e refinamento de estrutura para o exemplo 9A.

Fórmula empírica	C50H37N4Ü19Cl
Peso de fórmula	1033,29
Temperatura	296(2) K
Comprimento de onda	1,54178 A
Sistema de Cristal	Monoclínico
Grupo espacial	P2(1)
Dimensões de célula unitária	a = 17,5050(4) A	α = 90°.
	b = 6,2303(2) A	β = 97,6580(10)°
	c = 21,9545(5) A	γ = 90°.
Volume	2373,03(11) A3
Z	2
Densidade (calculada)	1,446 Mg/m³

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 91/154

88/141

Coeficiente de absorção

F(000)

Tamanho do cristal

Faixa de teta para coleta de dados

Reflexões coletadas

Reflexões independentes Perfeição para teta = 61,76°

Correção de absorção transmissão max. e min.

Método de refinamento

Dados / restrições / parâmetros Boa qualidade de ajuste em F2 Indices de R final [I>2sigma(I)] Parâmetro de estrutura absoluto Coeficiente de extinção

Orifício e pico de difração maior

1,452 mm^-1

1068

0,18 x 0,02 x 0,01 mm³

2,55 a 61,76°.

8972

5062 [R(int) = 0,0236]

85,8%

Correção de Absorção Empírica

0,9856 e 0,7801

Quadrados mínimos de matriz total em F²

5062 / 1 /668

1,009

R1 = 0,0436, wR2 = 0,1090

0,02(3)

0,0015(2)

0,217 e -0,173 e.Â-3 [00172] Uma estrutura de teste foi obtida por métodos diretos. Esta estrutura de teste refinada habitualmente. Posições de hidrogênio foram calculadas onde quer que possível. Os metil hidrogênios foram localizados por técnicas de Fourier de diferenças, e em seguida idealizados. Os parâmetros de hidrogênio foram adicionados aos cálculos de fator de estrutura, porém não foram refinados. Os desvios calculados nos ciclos finais de refinamento de quadrados mínimos foram todos menos do que 0,1 dos desvios-padrão correspondentes. O Índice de R final foi 4,36%. Uma Fourier de diferença final não revelou densidade de elétron perdida ou extraviada.

[00173] A estrutura refinada usando o pacote de plotagem SHELXTL foi plotada (figura 2). A configuração absoluta foi determinada pelo método de Flack; Vide Flack, H.D., Acta Crystallogr., A39, 876, (1983).

Exemplo 10 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-1-hidroximetil-6,8dioxa-biciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (10A) e (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4etóxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano2,3,4-triol (10B)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 92/154

89/141

(10A) (10B) [00174] Em uma solução de {(2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-[3-(4etóxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il}-metanol l· 10k (80,0 mg, 0,120 mmol) em uma solução 4:1 de etanol/tetrahidrofurano (10 mL) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (93 microL, 2,32 mmols) e negro de paládio (62 mg, 0,580 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 3 horas, ácido fórmico adicional (93 microL, 2,32 mmols) e negro de paládio (62 mg, 0,580 mmol) foram adicionados. Depois de 5 horas, a mistura reacional foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto resultante foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 0 a 15% de metanol em diclorometano) para proporcionar 35,0 mg de um sólido branco (mistura de isômeros). A mistura de isômeros foi purificada por HPLC preparativa.

[00175] Método de HPLC preparativa: coluna C18 Gemini de fase reversa, 5 micrômetros 30x100mm, taxa de fluxo de 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico: água/0,1% de ácido fórmico; 25 a 50% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 18 minutos; detecção de UV: 220 nm.

[00176] Método analítico de HPLC: coluna C18 Gemini de fase reversa, 5 pm 4,6x150mm, taxa de fluxo de 1 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido trifluoroacético: água/0,1% de ácido trifluoroacético; 5 a 100% de acetonitrila/0,1% de ácido trifluoroacético durante 12 minutos; detecção de UV: 220 nm.

10A: (2,2 mg, 4,5% de rendimento) Tr = 7 minutos (método

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 93/154

90/141 analítico); as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida.

MS (LCMS) 421,4 (M+H+; modo positivo) 465,3 (M+HCO2^-, modo negativo). 1H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta ppm 1,33 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 3,53 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 3,57 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1 H), 3,60 - 3,67 (m, 2 H), 3,75 (dd, J = 8,3, 1,3 Hz, 1 H), 3,81 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,89 (s, 2 H), 3,96 (q, J = 6,9 Hz, 2 H), 4,12 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,77 (m, 2 H), 7,00 (dd, J = 9,4, 8,2 Hz, 1 H), 7,08 (m, 2 H), 7,36 7,41 (m, 2 H).

10B: (1,8 mg, 3,7% de rendimento) Tr = 7,13 minutos (método analítico); as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida.

MS (LCMS) 421,4 (M+H+; modo positivo) 465,3 (M+HCO2^-, modo negativo). ¹H RMN (400 MHz, metanol-cfo) delta ppm 1,34 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 3,51 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 3,75 (d, 1 H, J = 12,5 Hz), 3,82 4,01 (m, 8 H), 4,03 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,79 (m, 2 H), 7,02 (dd, J = 9,8,

8,4 Hz, 1 H), 7,10 (m, 2 H), 7,41 - 7,49 (m, 2 H).

Nota: depois da HPLC preparativa, a fração contendo estes produtos foram concentrados e repurificados por cromatografía rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 0 a 10% de metanol em diclorometano).

Exemplo 11 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furan-3-ilóxi)-benzil]fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (11A)

OH (11A)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 94/154

91/141 [00177] A uma solução de ((2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-{4-fluoro-3[4-(tetra-hidro-furan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1il)-metanol I-11k (160,0 mg, 0,218 mmol) em uma solução 4:1 de etanol/tetra-hidrofurano (10 mL) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (185 microL, 4,64 mmols) e negro de paládio (148 mg, 1,39 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 3 horas, ácido fórmico adicional (185 microL, 4,64 mmols) e negro de paládio (148 mg, 1,39 mmol) foram adicionados. Depois de 5 horas, a mistura reacional foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto resultante foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 0 a 15% de metanol em diclorometano) para proporcionar 100 mg de um sólido branco (mistura de isômeros). A mistura de isômeros foi purificada por HPLC preparativa.

[00178] Método de HPLC preparativa: coluna C18 Gemini de fase reversa, 5 micrômetros 30x100mm, taxa de fluxo de 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico: água/0,1% de ácido fórmico; 25 a 50% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 18 minutos; detecção de UV: 220 nm.

[00179] Método analítico de HPLC: coluna C18 Gemini de fase reversa, 5 micrômetros 4,6x150mm, taxa de fluxo de 1 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido trifluoroacético: água/0,1% de ácido trifluoroacético; 5 a 100% de acetonitrila/0,1% de ácido trifluoroacético durante 12 minutos; detecção de UV: 220 nm.

11A: (19 mg, 19% de rendimento) Tr = 6,43 minutos (método analítico); as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida.

¹H RMN (400 MHz, metanol-cU) delta ppm 2,03 - 2,11 (m, 1 H), 2,15 - 2,25 (m, 1 H), 3,55 (d, 1 H, J = 8 Hz), 3,59 (dd, 1 H, J = 7,4 e 1 Hz), 3,61 - 3,69 (m, 2 H), 3,77 (dd, J = 8,2 e 1 Hz, 1 H), 3,81 - 3,96

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 95/154

92/141 (m, 7 H), 4,14 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,94 - 4,98 (m, 1 H), 6,79 (m, 2 H), 7,02 (dd, J = 9,9, 8,5 Hz, 1 H), 7,12 (m, 2 H), 7,37 - 7,45 (m, 2 H).

Exemplo 12 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-1-hidroximetil-6,8dioxabiciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (12A) e (1S,2S,3S,4S,5S)-5-[3-(4clorobenzil)-4-fluorofenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1 ]octano2,3,4-triol (12B)

(12A) (12B) [00180] Em uma mistura do intermediário I-12k (102 mg) e negro de paládio (98 mg, 6,1 equivalentes) em etanol/tetra-hidrofurano (2 mL, volume de 4/1) foi adicionado ácido fórmico (0,9 mL), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 1 hora, negro de paládio adicional (67 mg, 4,2 equivalentes) foi adicionado, e a mistura foi permitida agitar durante uma hora adicional em temperatura ambiente. O paládio foi removido por filtração através de Celite®, e o filtrado foi concentrado, produzindo a mistura de produto. Este material foi combinado com uma segunda batelada de material bruto (preparado do intermediário I-12k (80 mg) seguindo o procedimento descrito acima) para purificação por HPLC preparativa.

[00181] Condições de HPLC preparativa: coluna C18 Gemini de 5 micrômetros de fase reversa de 30 x 100 mm, taxa de fluxo 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico: água/0,1% de ácido fórmico; 25 a 50% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 18 minutos), detecção de UV: 220 nm.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 96/154

93/141 [00182] Método analítico de HPLC: coluna C18 Gemini de fase reversa, 5 pm 4,6x150mm, taxa de fluxo de 1 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido trifluoroacético: água/0,1% de ácido trifluoroacético; 5 a 100% de acetonitrila/0,1% de ácido trifluoroacético durante 12 minutos; detecção de UV: 220 nm.

12A: (18 mg, 16% de rendimento) Tr = 7,11 minutos (método analítico); MS (LCMS) 411,3 (M+H+; modo positivo); 409,2 (M-H⁺; modo negativo). ¹H RMN (400 MHz, metanol-d4) delta ppm 7,45-7,42 (m, 2H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,05 (dd, J = 9,6, 9,2 Hz, 1H), 4,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,84 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 8,4, 1,2 Hz, 1H), 3,68 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,66 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 3,60 (dd, J = 7,4, 1,4 Hz, 1H), 3,56 (d, J = 7,6 Hz, 1H).

12B: (12 mg, 11% de rendimento) Tr = 7,25 minutos (método analítico); MS (LCMS) 411,3 (M+H+; modo positivo); 409,1 (M-H+; modo negativo). ¹H RMN (400 MHz, metanol-d4) delta ppm 7,52-7,45 (m, 2H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,05 (dd, J = 9,8, 8,6 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,91-3,84 (m, 4H), 3,76 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,52 (d, J = 7,6 Hz, 1H).

Exemplo 13 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzill-fenil}-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (13A)

(13A)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 97/154

94/141 [00183] A uma solução de ((2S,3S)-2,3,4-tris-benzilóxi-5-{4-fluoro-3[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-1-il)-metanol I-13k (300 mg, 0,417 mmol) em uma solução 4:1 de etanol/tetrahidrofurano (10 mL) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (333 microL, 8,34 mmol) e negro de paládio (266 mg, 2,50 mmols). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 3 horas, ácido fórmico adicional (333 microL, 8,34 mmols) e negro de paládio (266 mg, 2,50 mmols) foram adicionados. Depois de 5 horas, a mistura reacional foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto resultante foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (eluindo com um gradiente de 0 a 15% de metanol em diclorometano) para proporcionar 153,0 mg de um sólido branco (mistura de isômeros). A mistura de isômeros foi purificada por HPLC preparativa.

[00184] Método de HPLC preparativa: coluna C18 Gemini de fase reversa, 5 micrômetros 30x100mm, taxa de fluxo de 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico: água/0,1% de ácido fórmico; 25 a 50% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 18 minutos; detecção de UV: 220 nm.

13A: (23 mg, 12% de rendimento) Tr = 7,9 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida.

¹H RMN (400 MHz, metanol-cU) delta ppm 3,52 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,57 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 3,60 - 3,68 (m, 2 H), 3,75 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 3,81 (d, J = 12,5 Hz, 1 H), 3,89 (s, 2 H), 4,12 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,63 (dd, J = 7,3, 4,8 Hz, 2 H), 4,95 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 5,16 - 5,23 (m, 1 H), 6,63 (m, 2 H), 7,00 (dd, J = 9,7, 8,5 Hz, 1 H), 7,10 (m, 2 H), 7,36 - 7,42 (m, 2 H).

Exemplo 14 (1S,2S, 3S,4R,5S)-5-{4-cloro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzill-fenil}-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1loctano-2,3,4-triol (14A)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 98/154

95/141

(14A) [00185] A uma solução do intermediário ((2S,3S)-2,3,4-trisbenzilóxi-5-{4-cloro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzil]-fenil}-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il)-metanol I-14k (182 mg) em etanol/tetrahidrofurano (14 mL, volume de 4/1) foram adicionados sucessivamente ácido fórmico (190 microL, 20 equivalentes) e negro de paládio (106 mg, 4 equivalentes), e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Depois de 2 horas um 1 mL adicional de tetra-hidrofurano foi adicionado, e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante uma hora adicional. Neste momento, ácido fórmico adicional (190 microL, 20 equivalentes) e negro de paládio (106 mg, 4 equivalentes) foram adicionados, e a mistura foi permitida agitar durante uma hora adicional em temperatura ambiente. O paládio foi filtrado, e a mistura bruta obtida depois da evaporação do solvente (contendo uma mistura de isômeros) foi purificada por HPLC preparativa.

[00186] Método de HPLC preparativa: coluna C18 Xbridge de fase reversa de 5 micrômetros 100 x 30 mm, taxa de fluxo 40 mL/minuto, gradiente de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico: água/0,1% de ácido fórmico; 30 a 55% de acetonitrila/0,1% de ácido fórmico durante 11 minutos; detecção de UV: 220 nm.

14A: (20 mg, 17% de rendimento); Tr = 4,43 minutos; as frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida, resultando em um sólido branco.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 99/154

96/141

MS (LCMS) 465,3 (M+H+; modo positivo); 509,2 (M+HCO2^-; modo negativo). 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) delta ppm 3,53 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 3,58 (dd, J = 7,4, 1,4 Hz, 1 H), 3,64 (t, J = 8,2 Hz, 1 H), 3,67 (d, J = 12,4 Hz, 1 H), 3,77 (dd, J = 8,4, 1,4 Hz, 1 H), 3,83 (d, J =

12,6 Hz, 1 H), 4,03 (s, 2 H), 4,14 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,65 (m, 2H),

4,97 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 5,22 (m, 1 H), 6,65 (m, 2 H), 7,11 (m, 2H),

7,34 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,38 (dd, J = 8,4, 2,2 Hz, 1 H), 7,45 (d, J =2,0

Hz, 1 H).

Exemplo 15

Cocristalização de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]1 -hidroximetil- 6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) com L-prolina para produzir (15):

[00187] L-prolina dissolvida em água (aproximadamente 480 mg/mL) foi adicionada ao composto do exemplo 4A (aproximadamente 80 moles de L-prolina por mol (composto do exemplo 4A)). O volume foi dobrado com etanol, e a solução foi tampada e agitada durante aproximadamente 12 horas. O volume foi reduzido pela metade por evaporação sobre a bancada. O volume foi dobrado usando etanol, e o volume de solução foi novamente reduzido pela metade usando evaporação. O sólido foi recuperado usando filtração centrífuga.

Exemplo 16

Cocristalização de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]1 -hidroximetil- 6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2.3.4-triol (composto do exemplo 4A) com L-prolina para produzir (16):

[00188] L-prolina dissolvida em água (aproximadamente 480 mg/mL) foi adicionada ao composto do exemplo 4A (aproximadamente 59 mols de L-prolina por mol do composto do exemplo 4A). O volume foi dobrado com metanol e a solução ficou clara. O volume foi aumentado por 25% usando acetona. A solução foi tampada e agitada durante aproximadamente 12 horas. O volume foi reduzido por aproxima

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 100/154

97/141 damente 60% de através de evaporação sobre a bancada. O volume foi dobrado usando metanol e solvente restante foi evaporado deixando precipitdo branco sólido.

Exemplo 17

Cocristalização de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]1 -hidroximetil- 6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) com L-prolina para produzir (17):

[00189] Uma solução de etanol saturada com L-prolina foi adicionada ao composto do exemplo 4A (aproximadamente 2,2 mols de Lprolina por mol do composto do exemplo 4A) em um frasconete de vidro. A solução clara foi tampada e agitada durante aproximadamente 72 horas. O volume foi reduzido pela metade por evaporação em temperatura ambiente. O precipitado foi visto, e o frasconete foi tampado e agitado durante aproximadamente 12 horas. O sólido branco foi coletado usando filtração centrífuga.

Exemplo 18

Cocristalização de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]1 -hidroximetil- 6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2.3.4-triol (composto do exemplo 4A) com L-prolina para produzir (18):

[00190] L-prolina dissolvida em água (330 mg/mL) foi gotejada em aproximadamente 2 mL do composto do exemplo 4A dissolvido em isopropanol (98 mg/mL) até que a solução tornou-se nublada. Depois de 15-20 minutos, precipitação foi observada e a suspensão tornou-se espessa. Aproximadamente 8 mL de água foi adicionado, e a solução foi tampada e agitada durante a noite. Sólido branco usando filtração a vácuo foi coletado e secado em um forno a vácuo a 50°C durante aproximadamente 2 horas.

Exemplo 19

Cocristalização de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]1 -hidroximetil- 6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2.3.4-triol (composto do

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 101/154

98/141 exemplo 4A) com ácido L-piroglutâmico para produzir (19):

[00191] 153 microL do composto (4A) em álcool isopropílico (97,97 mg/mL) foram pipetados em 500 microL de ácido L-piroglutâmico em água (213,0 mg/mL). A solução foi tampada e agitada durante a noite. Aproximadamente 5-10 mg mais ácido L-piroglutâmico sólido foram adicionados. 100 microL de etanol foram adicionados. A solução foi tampada e agitada durante a noite. Etanol foi adicionado até que o volume total fosse ajustado em aproximadamente 2 mL. A solução foi destampada e deixada durante a noite em coifa. Aproximadamente 1030 mg mais composto do exemplo 4A foram adicionados. A solução foi tampada e agitada durante aproximadamente 2 dias. Precipitado branco foi visto. A suspensão foi pipetada em um tubo de microcentrífuga Co-star equipado com uma inserção de membrana de filtro de náilon de 0,45 microm. A solução foi centrifugada até que o sólido fosse separado da solução. Cocristal (19) foi recuperado.

Exemplo 20

Cocristalização de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]1 -hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) com ácido L-piroglutâmico para produzir (20):

[00192] 4-5 mL de uma solução 1:1 de etanol/água foram saturados com ácido L-piroglutâmico (412,1 mg/mL). 730 mg do composto do exemplo 4A foram adicionados a 3,2 mL do solução de ácido Lpiroglutâmico. Depois de aproximadamente 1 minuto, foi vista precipitação. A solução foi muito espessa para agitar, portanto 2 mL de uma solução 1:1 de etanol/água foram adicionados. A solução foi agitada durante a noite. O sólido foi coletado usando filtração a vácuo em uma membrana de filtro de náilon de 0,45 microm. O sólido foi secado em um forno a vácuo a 50°C durante aproximadamente 2 horas. Aproximadamente 960 mg do complexo de cocristal (20) foram recuperados. A relação estequiométrica do composto do exemplo 4A para ácido L

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 102/154

99/141 piroglutâmico foi determinada usando RMN quantitativa como sendo 1:1,63. Ácido L-piroglutâmico em excesso foi removido suspendendose o material em etanol produzindo 1:1 cocristal (20).

Exemplo 21

Cocristalização de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]1 -hidroximetil- 6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) com ácido L-piroglutâmico para produzir (21):

[00193] 494 mg do composto do exemplo 4A foram dissolvidos em

1,5 mL de solução de isopropanol e etanol (4:1 respectivamente). 917,2 mg de ácido L-piroglutâmico foram dissolvidos em 3 mL de água. Ambas as soluções foram aquecidas a 40°C. 200 microL de solução de ácido L-piroglutâmico foram adicionados à solução do composto do exemplo 4A a cada minutos, até que toda a solução tenha sido transferida (ambas as soluções tampadas, a menos que a solução estivesse sendo transferida). O frasconete com solução de ácido Lpiroglutâmico foi lavado com 200 microL de etanol, e a solução foi transferida para a solução do composto do exemplo 4A. A solução foi agitada durante 5 minutos, e em seguida o aquecimento foi desligado (solução resfriada a aproximadamente 1 grau Celsius a cada 3 minutos). A 30°C, a solução foi colocada em agitador em temperatura ambiente e agitada a 20°C durante 20 minutos. A solução ficou clara. Aproximadamente 2 mL de sementes secas foram adicionados. A suspensão tornou-se espessa durante as próximas 2 horas. A solução foi agitada durante a noite. O sólido foi recuperado usando filtração a vácuo em um filtro de funil de vidro sinterizado a 10-15M de 2 mL Pirex. O sólido foi secado durante 24 horas em um forno a vácuo a 50°C.

Exemplo 22

Cocristal de (1S,2S,3S, 4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2.3.4-triol (composto do exemplo 4A) e L-prolina e cocristal de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 103/154

100/ 141 (4-etóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4triol (composto do exemplo 4A) e ácido L-piroglutâmico:

[00194] Análise de Difração de Pó de Raios X: Os padrões de difração de pó de raios X do cocristal do composto do exemplo 4A com L-prolina, e o cocristal do composto do exemplo 4A com ácido Lpiroglutâmico foram realizados em um difratômetro Bruker D5000 usando radiação de cobre (comprimento de onda: 1,54056Â). A voltagem e amperagem do tubo foram fixadas em 40 kV e 40mA, respectivamente. A divergência e fendas de dispersão foram fixadas em 1 mm, e a fenda receptora foi fixada em 0,6 mm. A radiação difratada foi detectada por um detector Kevex PSI. Uma varredura contínua de tetadois teta a 2,4° por minuto (1 segundo por 0,04° etapa) de 3,0 a 40° 2Θ foi usada. Um padrão de alumina foi analisado para conferir o alinhamento do instrumento. Os dados foram coletados e analisados usando o software Bruker axis Versão 7.0. As amostras foram preparadas colocando-as em um suporte de quartzo. Deveria ser notado que os Instrumentos Bruker adquiridos de Siemens; por conseguinte, instrumento Bruker D5000 é essencialmente igual a um Siemens D5000. O software Eva Application 13.0.0.3 foi usado para visualizar e avaliar espectros de PXRD. Arquivos de dados PXRD (.raw) não foram processados antes da pesquisa de pico. Geralmente, um valor limiar de 2 e um valor de amplitude de 0,3 foi usado para fazer designações de pico preliminares. A produção de designações automatizadas foi visualmente conferida para assegurar a validez e ajustes feitos manualmente se necessário.

[00195] Para realizar uma medida de difração de Raios X em um instrumento Bragg-Brentano como o sistema Bruker usado para medidas aqui relatadas, a amostra é colocada tipicamente em um suporte que tem uma cavidade. O pó de amostra é prensado por uma lâmina de vidro ou equivalente, para assegurar uma superfície aleatória e al

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 104/154

101/ 141 tura de amostra própria. O suporte de amostra é em seguida colocado no instrumento. O feixe de raios X incidente é dirigido à amostra, inicialmente a um ângulo pequeno relativo ao plano do suporte, e em seguida movido através de um arco que continuamente aumenta o ângulo em a feixe incidente, e o plano do suporte. As diferenças de medida associadas com tais análises de pó de raios X são o resultado de uma variedade de fatores que incluem: (a) erros na preparação da amostra (por exemplo, altura da amostra), (b) erros de instrumento (por exemplo, erros de amostra plana), (c) erros de calibração, (d) erros de operador (incluindo aqueles erros apresentados ao determinar os locais de pico), e (e) a natureza do material (por exemplo, orientação preferida e erros de transparência). Erros de calibração e erros de altura de amostra resultam frequentemente em um desvio de todos os picos na mesma direção. Diferenças pequenas na altura da amostra ao usar um suporte plano conduzirão a grandes deslocamentos em posições de pico de XRPD. Um estudo sistemático mostrou que, usando um Shimadzu XRD-6000 na configuração de Bragg-Brentano típica, a diferença de altura de amostra de 1 mm conduz a desvios de pico tão altos quanto 1 °2θ (Chen e outro; J Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2001; 26,63). Estes desvios podem ser identificados a partir do Difratograma de raios X e podem ser eliminados compensando-se para o desvio (aplicando um fator de correção sistemático a todos os valores de posição de pico) ou recalibrando-se o instrumento. Como mencionado acima, é possível retificar medidas das várias máquinas aplicando-se um fator de correção sistemático para trazer as posições de pico em acordo. Em geral, este fator de correção trará as posições de pico medidas de Bruker de acordo com as posições de pico esperadas e pode estar na faixa de 0 a 0,2 °2θ.

[00196] Os valores de difração de pó de raios X são geralmente precisos a dentro de ± 0,2 2-teta graus, devido a variações leves de

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 105/154

102/ 141 instrumento e condições de teste.

[00197] Cocristal do composto do exemplo 4A e L-prolina do exemplo 18 caracterizados pelo padrão de difração de pó de raios X seguinte, fornecidos na figura 3, expressos em termos do grau 2Θ e intensidades relativas com uma intensidade relativa de > 2,7% medida em um difratômetro Bruker D5000 com radiação de CuKa:

Ângulo (Grau 2Θ)	Intensidade relativa* (> 2,7%)
46	5,1
5,5	12,8
7,6	40,2
8,5	11,9
10,3	9,1
11,0	4,5
12,1	22,3
12,6	13,5
14,4	13,1
14,8	16,1
15,3	2,7
15,9	10,4
16,5	3,0
16,8	8,2
17,0	16,6
17,4	33,9
18,1	2,9
18,4	10,3
18,9	16,8
19,5	12,2
20,3	100,0
21,0	6,5

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 106/154

103/ 141

22,0	5,5
22,2	7,1
22,6	11,5
22,9	29,3
23,5	4,5
24,3	13,8
24,8	14,2
25,4	14,7
25,7	23,2
26,0	6,9
26,8	5,9
27,0	5,8
27,5	21,2
28,8	15,5
29,4	6,5
29,8	8,2
30,2	5,3
30,7	14,1
31,7	5,2
32,1	7,4
32,5	7,7
33,0	9,9
33,3	7,5
33,8	5,5
34,4	5,8
35,5	3,4
35,8	4,0
36,9	3,1
37,4	2,9

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 107/154

104/ 141

38,2	4,7
38,3	6,0
39,3	8,0

* As intensidades relativas podem mudar dependendo do tamanho do cristal e morfologia.

[00198] Picos de 2Θ característicos ou combinações de cocristal do

piroglutâmico do Exemplo 20 caracterizados pelo padrão de difração de pó de raios X seguinte, fornecidos na figura 4, expressos em termos do grau 2Θ e intensidades relativas com uma intensidade relativa de > 2,7% medida em um difratômetro Bruker D5000 com radiação de CuKa:

Ângulo (Grau 2Θ)	Intensidade relativa* (> 4,3%)
6,4	31,0
7,6	5,9
11,8	4,3
12,3	8,8
12,7	11,0
13,5	10,4
14,2	31,3
14,4	24,0
15,2	13,9
16,7	66,8
17,4	57,1

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 108/154

105/ 141

18,3	10,5
18,7	53,3
19,1	24,2
19,3	32,0
19,8	9,2
20,3	75,6
21,1	100,0
22,5	9,2
23,6	11,7
24,3	18,7
24,7	22,2
25,0	14,2
26,2	53,4
27,2	4,6
27,9	10,0
28,3	26,3
29,0	14,5
29,5	31,3
30,7	16,2
31,5	5,4
32,0	23,2
33,0	9,9
34,2	19,9
35,2	5,4
35,9	13,6
37,3	8,3
37,9	9,5
38,4	6,1
39,2	10,3

* As intensidades relativas podem mudar dependendo do tamanho do

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 109/154

106/ 141 cristal e morfologia.

[00200] Picos de 2Θ característicos ou combinações de cocristal do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico:

Ângulo (Grau 2Θ) “6,4

16,7

17,4 “2Ϊ7Ϊ Exemplo 23 Cocristal de (1 S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol (composto do

Exemplo 4A) e L-prolina e cocristal de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3(4-etóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4triol (composto do exemplo 4A) e ácido L-piroglutâmico:

Análise de Termograma de Calorimetria de Varredura Diferencial: [00201] Termogramas foram obtidos em um Calorímetro de Varredura Diferencial (DSC) TA Instruments Q1000. 1-2 mg de amostra foram colocados em panelas de amostra de alumínio e em seguida revestidos com uma tampa perfurada. A energia foi medida contra uma panela vazia como a temperatura aumentada de 25°C a 200-300°C a 10°C por minuto. A temperatura inicial da endotermia de fusão foi relatada como a temperatura de fusão. A temperatura inicial da endotermia de fusão é dependente na taxa de aquecimento, da pureza da amostra, tamanho de cristal e amostra, entre outros fatores. Tipicamente, os resultados de DSC são precisos a dentro cerca de ± 2°C, preferivelmente a dentro ± 1,5°C.

Exemplo 18 resultados de DSC de cocristal do composto do exemplo 4A e L-prolina são mostrados na figura 5.

Exemplo 20 resultados de DSC de cocristal do composto do exemplo 4A e ácido L-piroglutâmico são mostrados na figura 6.

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 110/154

107/ 141

Exemplo 24

Cocristal de (1S,2S,3S, 4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenill-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 loctano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) e L-prolina

Cristaloanálise de Raios X Simples. Um cristal representativo usando o filtrado do exemplo 17 e concentrando por meio de evaporação lenta foi inspecionado e um conjunto de dados de 0,85 A (sin máxima Θ/λ (=0,60) foi coletado em um difratômetro Bruker APEX. Pares de Friedel foram coletados para facilitar a determinação da configuração absoluta. Fatores de dispersão atômicos foram tirados das International Tables for Crystallography, Vol. C, pp. 219, 500, Kluwer Academic Publishers, 1992. Todos os cálculos cristalográficos foram facilitados pelo sistema SHELXTL, Versão 5.1, Bruker AXS, 1997. Todos os dados de difratômetro foram coletados em temperatura ambiente. Cristal pertinente, coleta de dados e refinamento são resumidos na tabela 24-

1.

[00202] Uma estrutura de teste foi obtida por métodos diretos. Esta estrutura de teste refinada habitualmente menos a molécula de água inesperada, e o transtorno conformacional com a L-prolina. A L-prolina foi modelada com ocupação de ~60/40 nas conformações semicadeira e em envelope. Um transtorno bem parecido foi observado em H. D. Flack, Acta Crystallogr., A39, 876, 1983.

[00203] Os átomos de hidrogênio ligados a N1, O6 e O7 localizados por técnicas de Fourier de diferença e permitidos refinar com distâncias reprimidas. Os átomos de hidrogênio pertinentes ligados a O5 foram localizados a partir de técnicas de Fourier, porém foram deletados e colocados em local idealizado (HFIX 83). O átomo de hidrogênio pertinente ligado a O4 não pôde ser encontrado com técnicas de Fourier e foram colocados em um local idealizado (HFIX 83). Os átomos de hidrogênio sobre a molécula de água não puderam ser localizados e po

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 111/154

108/ 141 deriam ser omitidos da solução. Os parâmetros de hidrogênio foram adicionados aos cálculos de fator de estrutura, porém não foram refinados. Os desvios calculados nos ciclos finais de refinamento de quadrados mínimos foram todos menos do que 0,1 dos desvios-padrão correspondentes. O índice de R final foi 5,15%. Uma Fourier de diferença final não revelou densidade de elétron perdida ou extraviada.

[00204] A estrutura refinada foi plotada usando o pacote de plotagem SHELXTL (figura 7). A configuração absoluta foi determinada pelo método de Flack⁴. Coordenadas, fatores de temperatura anisotrópicos, distâncias e ângulos, estão disponíveis como material suplementar (tabelas 24-2 a 24-5).

Tabela 24-1 Dados de cristal e refinamento de estrutura para o exem plo 24

Fórmula empírica Peso de fórmula Temperatura Comprimento de onda Sistema de Cristal Grupo espacial Dimensões de célula unitária	C22 H25 Cl O7, C5 H9 N O2, H2O, 570,02 298(2) K 1,54178 A Monoclínico C2 a = 32,8399(16) A α = 90°. b = 7,2457(4) A β = 101,268(5)°. c = 11,8023(6) A γ = 90°.
Volume Z Densidade (calculada) Coeficiente de absorção F(000) Tamanho do cristal Faixa de teta para coleta de dados Faixas de índice Reflexões coletadas Reflexões independentes Perfeição para teta = 65,58° Correção de absorção Método de refinamento Dados / restrições / parâmetros Boa qualidade-de-ajuste em F² Indices de R final [I>2sigma(I)]	2754,2(2) A3 4 1,375 Mg/m³ 1,729 mm-¹ 1208 0,08 x 0,16 x 0,92 mm³ 2,74 a 65,58°. -38<=h<=37, -8<=k<=6, -13<=l<=13 6261 2922 [R(int) = 0,0526] 74,9% Nenhuma Quadrados mínimos de matriz total em F² 2922 / 5/380 0,953 R1 = 0,0515, wR2 = 0,1304

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 112/154

109/ 141

Indices de R (todos os dados) Parâmetro de estrutura absoluto Coeficiente de extinção Orifício e pico de difração maior

R1 = 0,0581, wR2 = 0,1334 0,02(3) 0,0027(2) 0,252 e -0,210 e.A^-3

Tabela 24-2. Coordenadas atômicas (x 10⁴) e parâmetros de deslocamento isotrópico equivalentes (A²x 10³) para o exemplo 24. U(eq) é definido como um terço do traço do tensor Uij ortogonalizado.

	X	y	z	U(eq)
Cl(01)	7251(1)	14669(2)	1220(1)	73(1)
N(1)	5586(1)	4836(6)	1285(3)	52(1)
O(1)	6821(1)	9986(6)	5726(3)	66(1)
C(1)	6691(2)	13136(9)	6328(5)	78(2)
O(2)	6311(1)	7637(5)	-1948(2)	50(1)
C(2)	6929(2)	11374(9)	6600(4)	66(1)
O(3)	5936(1)	10106(4)	-2723(2)	46(1)
C(3)	6973(1)	10182(7)	4725(4)	55(1)
O(4)	5415(2)	10596(7)	-4969(4)	89(1)
C(4)	7278(2)	11410(8)	4564(4)	62(1)
C(5)	7411(2)	11447(8)	3506(4)	59(1)
O(5)	5145(1)	6652(5)	-3818(3)	66(1)
C(6)	7237(1)	10299(7)	2618(4)	53(1)
O(6)	5092(1)	7027(5)	-1397(3)	63(1)
O(7)	5878(1)	7968(5)	33(3)	54(1)
C(7)	6932(2)	9079(7)	2793(4)	59(1)
O(8)	5009(1)	2361(6)	1421(4)	78(1)
C(8)	6804(2)	8992(8)	3838(5)	59(1)
O(9)	5409(1)	-82(6)	1265(4)	76(1)
C(9)	7365(1)	10429(8)	1443(4)	59(1)
C(10)	7014(1)	11175(7)	533(4)	51(1)
C(11)	6926(1)	13040(7)	382(4)	52(1)
C(12)	6592(2)	13693(7)	-395(4)	58(1)
C(13)	6331(1)	12460(7)	-1057(3)	52(1)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 113/154

110/ 141

C(14)	6401(1)	10583(6)	-950(3)	44(1)
C(15)	6744(1)	9959(7)	-151(3)	49(1)
C(16)	6104(1)	9260(6)	-1659(4)	47(1)
C(17)	6125(1)	7179(7)	-3112(4)	51(1)
C(18)	5775(1)	8575(6)	-3448(4)	49(1)
C(19)	5720(2)	9220(7)	-4695(4)	59(1)
C(20)	5363(1)	8012(7)	-3103(4)	51(1)
C(21)	5455(1)	7344(7)	-1843(4)	50(1)
C(22)	5739(1)	8727(6)	-1085(4)	46(1)
C(23)	5335(2)	1609(8)	1299(4)	62(1)
C(24)	5698(2)	2825(8)	1186(5)	63(1)
C(25)	6072(2)	2583(12)	2141(9)	105(3)
C(26)	5826(2)	5594(10)	2391(5)	74(2)
C(35A)	6000(5)	4000(30)	3036(13)	126(7)
C(35B)	6229(4)	4430(20)	2538(15)	71(5)
O(99A)	5382(2)	3257(7)	6727(5)	101(2)

Tabela 24-3. Comprimentos de ligação [A] e ângulos [°] para o exemplo 24

Cl(01)-C(11) 1,761(4)

N(1)-C(26) 1,492(7)

N(1)-C(24) 1,513(7)

N(1)-H(98A) 0,977(18)

N(1)-H(98B) 1,00(2)

O(1)-C(3) 1,377(5)

O(1)-C(2) 1,434(7)

C(1)-C(2) 1,499(8)

C(1)-H(03C) 0,9600

C(1)-H(03D) 0,9600

C(1)-H(03E) 0,9600

O(2)-C(17) 1,430(5)

O(2)-C(16) 1,434(5)

C(2)-H(03F) 0,9700

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 114/154

111/141

C(2)-H(03G)	0,9700
O(3)-C(16)	1,409(5)
O(3)-C(18)	1,437(5)
C(3)-C(4)	1,379(7)
C(3)-C(8)	1,386(7)
O(4)-C(19)	1,405(7)
O(4)-H(4A)	0,8200
C(4)-C(5)	1,401(7)
C(4)-H(025)	0,9300
C(5)-C(6)	1,371(7)
C(5)-H(2)	0,9300
O(5)-C(20)	1,400(6)
O(5)-H(5)	0,8200
C(6)-C(7)	1,383(7)
C(6)-C(9)	1,528(6)
O(6)-C(21)	1,413(5)
O(6)-H(99A)	0,95(2)
O(7)-C(22)	1,420(5)
O(7)-H(99B)	0,93(2)
C(7)-C(8)	1,380(7)
C(7)-H(026)	0,9300
O(8)-C(23)	1,235(7)
C(8)-H(033)	0,9300
O(9)-C(23)	1,251(7)
C(9)-C(10)	1,513(7)
C(9)-H(02A)	0,9700
C(9)-H(02B)	0,9700
C(10)-C(11)	1,386(7)
C(10)-C(15)	1,392(7)
C(11)-C(12)	1,369(7)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 115/154

112/ 141

C(12)-C(13)	1,373(7)
C(12)-H(027)	0,9300
C(13)-C(14)	1,381(7)
C(13)-H(021)	0,9300
C(14)-C(15)	1,394(6)
C(14)-C(16)	1,501(6)
C(15)-H(030)	0,9300
C(16)-C(22)	1,536(6)
C(17)-C(18)	1,526(6)
C(17)-H(02C)	0,9700
C(17)-H(02D)	0,9700
C(18)-C(19)	1,520(6)
C(18)-C(20)	1,540(6)
C(19)-H(03H)	0,9700
C(19)-H(03I)	0,9700
C(20)-C(21)	1,537(6)
C(20)-H(4)	0,9800
C(21)-C(22)	1,533(6)
C(21)-H(015)	0,9800
C(22)-H(013)	0,9800
C(23)-C(24)	1,510(7)
C(24)-C(25)	1,506(10)
C(24)-H(029)	0,9800
C(25)-C(35B)	1,479(17)
C(25)-C(35A)	1,52(2)
C(25)-H(34A)	0,9700
C(25)-H(34B)	0,9700
C(26)-C(35A)	1,440(19)
C(26)-C(35B)	1,548(14)
C(26)-H(03A)	0,9700

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 116/154

113/ 141

C(26)-H(03B) 0,9700
C(35A)-H(35A) 0,9700
C(35A)-H(35B) 0,9700
C(35B)-H(35C) 0,9700
C(35B)-H(35D) 0,9700
C(26)-N(1)-C(24)	109,1(4)
C(26)-N(1)-H(98A)	107(2)
C(24)-N(1)-H(98A)	109(3)
C(26)-N(1)-H(98B)	97(3)
C(24)-N(1)-H(98B)	119(3)
H(98A)-N(1)-H(98B)	114(4)
C(3)-O(1)-C(2)	117,7(4)
C(2)-C(1)-H(03C)	109,5
C(2)-C(1)-H(03D)	109,5
H(03C)-C(1)-H(03D)	109,5
C(2)-C(1)-H(03E)	109,5
H(03C)-C(1)-H(03E)	109,5
H(03D)-C(1)-H(03E)	109,5
C(17)-O(2)-C(16)	106,6(3)
O(1)-C(2)-C(1)	113,4(5)
O(1)-C(2)-H(03F)	108,9
C(1)-C(2)-H(03F)	108,9
O(1)-C(2)-H(03G)	108,9
C(1)-C(2)-H(03G)	108,9
H(03F)-C(2)-H(03G)	107,7
C(16)-O(3)-C(18)	103,3(3)
O(1)-C(3)-C(4)	125,4(4)
O(1)-C(3)-C(8)	115,1(4)
C(4)-C(3)-C(8)	119,4(4)
C(19)-O(4)-H(4A)	109,5

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 117/154

114/ 141

C(3)-C(4)-C(5) 119,7(5)

C(3)-C(4)-H(025)120,2

C(5)-C(4)-H(025)120,2

C(6)-C(5)-C(4) 121,0(5)

C(6)-C(5)-H(2)119,5

C(4)-C(5)-H(2)119,5

C(20)-O(5)-H(5)109,5

C(5)-C(6)-C(7) 118,6(4)

C(5)-C(6)-C(9) 120,7(4)

C(7)-C(6)-C(9) 120,7(4)

C(21)-O(6)-H(99A) 105(3)

C(22)-O(7)-H(99B) 108(3)

C(8)-C(7)-C(6) 121,2(4)

C(8)-C(7)-H(026)119,4

C(6)-C(7)-H(026)119,4

C(7)-C(8)-C(3) 120,0(4)

C(7)-C(8)-H(033)120,0

C(3)-C(8)-H(033)120,0

C(10)-C(9)-C(6) 111,2(3)

C(10)-C(9)-H(02A)109,4

C(6)-C(9)-H(02A)109,4

C(10)-C(9)-H(02B)109,4

C(6)-C(9)-H(02B)109,4

H(02A)-C(9)-H(02B)108,0

C(11)-C(10)-C(15) 116,7(4)

C(11)-C(10)-C(9) 123,4(4)

C(15)-C(10)-C(9) 119,8(4)

C(12)-C(11)-C(10) 122,9(4)

C(12)-C(11)-Cl(01) 117,6(4)

C(10)-C(11)-Cl(01) 119,5(4)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 118/154

115/ 141

C(11)-C(12)-C(13)

C(11)-C(12)-H(027)

C(13)-C(12)-H(027)

C(12)-C(13)-C(14)

C(12)-C(13)-H(021)

C(14)-C(13)-H(021)

C(13)-C(14)-C(15)

C(13)-C(14)-C(16)

C(15)-C(14)-C(16)

C(10)-C(15)-C(14)

C(10)-C(15)-H(030)

C(14)-C(15)-H(030)

O(3)-C(16)-O(2)

O(3)-C(16)-C(14)

O(2)-C(16)-C(14)

O(3)-C(16)-C(22)

O(2)-C(16)-C(22)

C(14)-C(16)-C(22)

O(2)-C(17)-C(18)

O(2)-C(17)-H(02C)

C(18)-C(17)-H(02C)

O(2)-C(17)-H(02D)

C(18)-C(17)-H(02D)

H(02C)-C(17)-H(02D)

O(3)-C(18)-C(19)

O(3)-C(18)-C(17)

C(19)-C(18)-C(17)

O(3)-C(18)-C(20)

C(19)-C(18)-C(20)

C(17)-C(18)-C(20)

119,1(5)

120,5

120.5

121,0(4)

119.5

119,5

118,6(4)

119,9(4)

121,4(4)

121,8(5)

119,1

105,4(3)

108,5(4)

111,6(3)

107,4(3)

110,3(4)

113,2(3)

104,8(3)

110,8

108,9

107,4(4)

100,7(3)

113,4(4)

106,7(3)

113,1(4)

114,3(4)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 119/154

116/ 141

O(4)-C(19)-C(18)	112,7(4)
O(4)-C(19)-H(03H)	109,0
C(18)-C(19)-H(03H)	109,0
O(4)-C(19)-H(03I)	109,0
C(18)-C(19)-H(03I)	109,0
H(03H)-C(19)-H(03I)	107,8
O(5)-C(20)-C(21)	110,0(4)
O(5)-C(20)-C(18)	113,5(4)
C(21)-C(20)-C(18)	108,9(3)
O(5)-C(20)-H(4)	108,1
C(21)-C(20)-H(4)	108,1
C(18)-C(20)-H(4)	108,1
O(6)-C(21)-C(22)	110,6(3)
O(6)-C(21)-C(20)	113,1(4)
C(22)-C(21)-C(20)	109,9(4)
O(6)-C(21)-H(015)	107,7
C(22)-C(21)-H(015)	107,7
C(20)-C(21)-H(015)	107,7
O(7)-C(22)-C(21)	109,7(4)
O(7)-C(22)-C(16)	111,8(3)
C(21)-C(22)-C(16)	110,3(3)
O(7)-C(22)-H(013)	108,3
C(21)-C(22)-H(013)	108,3
C(16)-C(22)-H(013)	108,3
O(8)-C(23)-O(9)	127,9(5)
O(8)-C(23)-C(24)	118,1(5)
O(9)-C(23)-C(24)	114,1(5)
C(25)-C(24)-C(23)	114,1(5)
C(25)-C(24)-N(1)	103,3(5)
C(23)-C(24)-N(1)	110,3(4)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 120/154

117/ 141

C(25)-C(24)-H(029)109,6

C(23)-C(24)-H(029)109,6

N(1)-C(24)-H(029)109,6

C(35B)-C(25)-C(24) 108,3(8)

C(35B)-C(25)-C(35A) 42,4(8)

C(24)-C(25)-C(35A) 103,1(8)

C(35B)-C(25)-H(34A)70,3

C(24)-C(25)-H(34A)111,2

C(35A)-C(25)-H(34A) 111,2

C(35B)-C(25)-H(34B) 137,2

C(24)-C(25)-H(34B)111,2

C(35A)-C(25)-H(34B) 111,1

H(34A)-C(25)-H(34B) 109,1

C(35A)-C(26)-N(1) 104,8(9)

C(35A)-C(26)-C(35B) 42,5(9)

N(1)-C(26)-C(35B) 101,1(7)

C(35A)-C(26)-H(03A) 110,8

N(1)-C(26)-H(03A) 110,8

C(35B)-C(26)-H(03A) 73,1

C(35A)-C(26)-H(03B) 110,8

N(1)-C(26)-H(03B) 110,8

C(35B)-C(26)-H(03B) 144,0

H(03A)-C(26)-H(03B) 108,9

C(26)-C(35A)-C(25) 105,8(10)

C(26)-C(35A)-H(35A) 110,6

C(25)-C(35A)-H(35A) 110,6

C(26)-C(35A)-H(35B) 110,6

C(25)-C(35A)-H(35B) 110,6

H(35A)-C(35A)-H(35B) 108,7

C(25)-C(35B)-C(26) 102,7(8)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 121/154

118/ 141

C(25)-C(35B)-H(35C) 111,2

C(26)-C(35B)-H(35C) 111,2

C(25)-C(35B)-H(35D) 111,2

C(26)-C(35B)-H(35D) 111,2

H(35C)-C(35B)-H(35D) 109,1

Tabela 24-4. Parâmetros de deslocamento anisotrópico (Â²x 10³) para o exemplo 24. O expoente do fator de deslocamento anisotrópico leva

a forma: -2π2 [h² a²Uu +... + 2 h K a b* U12]
	U11	U22	U33	U23	U13	U12
Cl(01)	77(1)	69(1)	69(1)	-11(1)	1(1)	-27(1)
N(1)	56(2)	40(2)	60(2)	0(2)	12(2)	0(2)
O(1)	70(2)	70(3)	62(2)	2(2)	23(2)	-3(2)
C(1)	80(3)	76(4)	77(3)	-2(3)	13(3)	8(3)
O(2)	47(1)	52(2)	49(1)	-1(1)	3(1)	12(1)
C(2)	63(3)	84(4)	52(2)	1(2)	13(2)	7(3)
O(3)	46(1)	43(2)	45(1)	2(1)	3(1)	-1(1)
C(3)	48(2)	59(3)	57(2)	5(2)	12(2)	8(2)
O(4)	111(3)	83(3)	62(2)	8(2)	-10(2)	23(3)
C(4)	59(3)	72(4)	53(2)	-10(2)	10(2)	-12(2)
C(5)	54(2)	66(3)	55(2)	-6(2)	4(2)	-11(2)
O(5)	69(2)	59(2)	59(2)	2(2)	-12(2)	-8(2)
C(6)	41(2)	55(3)	59(2)	-2(2)	4(2)	4(2)
O(6)	58(2)	47(2)	87(2)	-6(2)	25(2)	-9(1)
O(7)	62(2)	49(2)	51(2)	2(1)	12(1)	-1(1)
C(7)	54(2)	59(3)	58(2)	-11(2)	-4(2)	-2(2)
O(8)	63(2)	63(3)	116(3)	-22(2)	36(2)	-12(2)
C(8)	52(2)	57(3)	69(3)	-1(2)	12(2)	-7(2)
O(9)	90(2)	52(3)	98(2)	-8(2)	44(2)	-7(2)
C(9)	45(2)	72(4)	58(2)	-12(2)	5(2)	1(2)
C(10)	45(2)	61(3)	46(2)	-4(2)	11(2)	-3(2)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 122/154

119/ 141

C(11)	57(2)	48(3)	50(2)	-8(2)	11(2)	-16(2)
C(12)	75(3)	43(3)	57(2)	2(2)	12(2)	-1(2)
C(13)	50(2)	54(3)	49(2)	7(2)	4(2)	-2(2)
C(14)	48(2)	44(2)	41(2)	1(2)	10(2)	0(2)
C(15)	47(2)	54(3)	45(2)	-5(2)	8(2)	5(2)
C(16)	45(2)	49(3)	47(2)	-1(2)	8(2)	3(2)
C(17)	54(2)	47(3)	52(2)	-10(2)	8(2)	-2(2)
C(18)	52(2)	44(3)	47(2)	-6(2)	1(2)	0(2)
C(19)	63(3)	60(3)	50(2)	-7(2)	1(2)	-3(2)
C(20)	45(2)	45(3)	56(2)	-3(2)	-3(2)	4(2)
C(21)	51(2)	37(2)	60(2)	-1(2)	11(2)	3(2)
C(22)	48(2)	40(2)	50(2)	-2(2)	10(2)	5(2)
C(23)	79(3)	46(3)	65(3)	-12(2)	24(2)	-3(2)
C(24)	63(3)	49(3)	84(3)	3(2)	30(2)	4(2)
C(25)	70(4)	63(5)	176(8)	13(5)	8(4)	14(3)
C(26)	68(3)	79(4)	68(3)	-3(3)	-3(3)	8(3)
C(35A)	104(11)	178(19)	79(8)	29(10)	-26(8)	-30(11)
C(35B)	43(6)	73(10)	90(9)	-3(7)	-1(6)	4(6)
O(99A)	130(4)	76(4)	95(3)	14(2)	18(3)	9(3)

Tabela 24-5. Coordenadas de hidrogênio (x 10⁴) e parâmetros de deslocamento isotrópico (A²x 10³) para o exemplo 24

	X	y	z	U(eq)
H(98A)	5291(6)	4930(60)	1320(30)	33(9)
H(98B)	5680(13)	5750(50)	760(30)	51(12)
H(03C)	6764	13698	5659	117
H(03D)	6757	13962	6973	117
H(03E)	6398	12877	6176	117
H(03F)	7223	11637	6698	80
H(03G)	6878	10893	7327	80
H(4A)	5481	11497	-4553	134
H(025)	7394	12210	5155	74

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 123/154

120/ 141

H(2)	7619	12262	3404	71
H(5)	5097	7017	-4489	98
H(99A)	4974(16)	8220(40)	-1350(50)	64(15)
H(99B)	5744(13)	8610(60)	540(30)	54(13)
H(026)	6810	8302	2195	71
H(033)	6604	8136	3947	71
H(02A)	7604	11232	1504	71
H(02B)	7443	9215	1214	71
H(027)	6544	14955	-474	70
H(021)	6103	12894	-1584	62
H(030)	6793	8697	-74	59
H(02C)	6017	5929	-3159	61
H(02D)	6325	7285	-3614	61
H(03H)	5982	9696	-4830	71
H(03I)	5643	8173	-5204	71
H(4)	5187	9111	-3149	61
H(015)	5605	6171	-1818	59
H(013)	5578	9843	-1009	55
H(029)	5776	2606	438	76
H(34A)	6327	2839	1870	126
H(34B)	6084	1342	2453	126
H(03A)	6044	6414	2248	89
H(03B)	5645	6267	2805	89
H(35A)	5809	3518	3496	152
H(35B)	6259	4310	3548	152
H(35C)	6415	4913	2066	85
H(35D)	6372	4404	3339	85

Exemplo 25

Cocristal do exemplo 20 de (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxibenzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.11octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) e ácido L-piroglutâmico:

[00205] Cristaloanálise de Raios X Simples. Um cristal representativo de uma amostra do exemplo 20 foi inspecionado e um conjunto

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 124/154

121/ 141 de dados de 0,90 A (sin máximo Θ/λ=0,56) foi coletado em um difratômetro Bruker APEX. Pares de Friedel foram coletados para facilitar a determinação da configuração absoluta. A estereoquímica determinada a partir do parâmetro de publicidade e também da quiralidade conhecida a partir do coformador (ácido L-piroglutâmico). Fatores de dispersão atômicos foram tirados das tabelas Internacionais para Cristalografia, Vol. C, pp. 219, 500, Kluwer Academic Publishers, 1992. Todos os cálculos cristalográficos foram facilitados pelo sistema SHELXTL Versão 5.1, Bruker AXS, 1997. Todos os dados de difratômetro foram coletados em temperatura ambiente. Cristal pertinente, coleta de dados e refinamento são resumidos na tabela 25-1.

[00206] Uma estrutura de teste foi obtida por métodos diretos. Esta estrutura de teste refinada habitualmente, com exceção de um baixo pico residual que foi refinado como água estequiométrica a 0,1. A estequiometria de água foi constatada deletando-se primeiro um grupo hidroxila na molécula, refinando e medindo o pico de q resultante; em seguida comparando este pico ao pico residual da molécula de água. Usando este método, uma relação de 1 para 0,1 (molécula para água) foi estimada. Adicionalmente, a remoção da molécula de água da solução e a procura de espaços nulos no cristal com Material Studio, Platon, and Mercury revelou um volume plausível de 33 angstroms cúbicos para uma molécula de água (água tipicamente tem cerca de 40 angstroms cúbicos do espaço). Os átomos de hidrogênio no nitrogênio e oxigênio foram localizados por técnicas de Fourier de diferença e permitidos refinar livremente sem restrições. Alguns dos prótons ligados aos heteroátomos (H97a, H97b, H97c, e H97c) exibiram um pouco de comprimentos de ligação curtos (~0,8 angstrom encontrado vs. ~0,96 esperado), todavia as distâncias foram deixadas sem restrições. Os átomos de hidrogênio em O99 (água) não foram encontrados no mapa de diferença e omitidos da solução de estrutura. Os parâmetros

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 125/154

122/ 141 de hidrogênio foram adicionados aos cálculos do fator de estrutura porém não foram refinados. Os desvios calculados nos ciclos finais de refinamento de mínimos quadrados foram todas menores do que 0,2 dos desvios-padrão correspondentes. O Índice R final foi 3,58%. Um Fourier de diferença final não revelou densidade de elétron perdida ou extraviada. Dos resíduos deixados, um está em uma posição razoável para um próton ligado a O39 (ácido carboxílico). Este resíduo poderia ser uma posição de ocupação adicional para o próton de H98a (próton ligado a O39), porém não foi refinado como tal.

[00207] A estrutura refinada foi plotada usando o pacote de plotagem de SHELXTL (figura 8). A configuração absoluta foi determinada pelo método de Flack (H. D. Flack, Acta Crystallogr., A39, 876, 1983). Coordenadas, fatores de temperatura anisotrópicos, distâncias e ângulos estão disponíveis como material adicional (tabelas 25-2 a 25-5).

Tabela 25-1. Dados de cristal e refinamento de estrutura para o exemplo 25.

Fórmula empírica Peso de fórmula Temperatura Comprimento de onda Sistema de Cristal Grupo espacial Dimensões de célula unitária	C22 H25 Cl1 O7 * C5 H7 N1 O3 * 0,1(H2O) 567,79 570(2) K 1,54178 A Ortorrômbico P2(1)2(1)2(1) a = 7,4907(10) A α = 90°. b = 12,8626(15) A β = 90°. c = 28,029(4) A γ = 90°.
Volume Z Densidade (calculada) Coeficiente de absorção F(000) Tamanho do cristal	2700,6(6) A³ 4 1,396 Mg/m³ 1,767 mm-¹ 1196 0,03 x 0,2 x 0,2 mm³

Faixa de teta para coleta de dados 3,15 a 59,28°.

Faixas de índice Reflexões coletadas Reflexões independentes Perfeição para teta = 59,28° Correção de absorção

-6<=h<=7, -13<=k<=14, -31<=l<=29 9116 3759 [R(int) = 0,0275] 96,5% Empírico

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 126/154

123/ 141

Método de refinamento Dados / restrições / parâmetros Boa qualidade-de-ajuste em F²Índices de R finais [I>2sigma(I)] Índices de R (todos os dados) Parâmetro de estrutura absoluto	Mínimos quadrados de matriz total em F² 3759 / 0/387 1,032 R¹ = 0,0358, wR² = 0,0885 R¹ = 0,0418, wR² = 0,0920 0,010(18)
Coeficiente de extinção Orifício e pico de difração maior	0,00067(17) 0,171 e -0,136 e.Â-3

Tabela 25-2. Coordenadas atômicas (x 10⁴) e parâmetros de deslocamento isotrópicos equivalentes (Â²x 10³) para o exemplo 25. U(eq) é definido como um terço do traço do tensor Uij ortogonalizado.

X y z

U(eq)

C(1)	1385(7)	9812(3)	634(2)	89(1)
C(2)	1302(6)	8776(3)	399(2)	81(1)
O(3)	2546(3)	8104(1)	625(1)	55(1)
C(4)	2553(4)	7080(2)	489(1)	43(1)
C(5)	1555(5)	6676(2)	117(1)	54(1)
C(6)	1669(4)	5630(2)	13(1)	50(1)
C(7)	2745(4)	4966(2)	268(1)	42(1)
C(8)	3723(4)	5385(2)	639(1)	50(1)
C(9)	3643(4)	6423(2)	749(1)	49(1)
C(10)	2839(5)	3807(2)	157(1)	49(1)
C(11)	2248(4)	3159(2)	577(1)	40(1)
C(12)	467(4)	3074(2)	708(1)	44(1)
Cl(13)	-1197(1)	3652(1)	362(1)	59(1)
C(14)	-56(4)	2535(2)	1112(1)	46(1)
C(15)	1219(4)	2055(2)	1391(1)	44(1)
C(16)	3014(4)	2095(2)	1265(1)	36(1)
C(17)	3502(4)	2652(2)	864(1)	38(1)
C(18)	4335(3)	1493(2)	1560(1)	36(1)
O(19)	3862(2)	420(1)	1544(1)	38(1)
C(20)	5478(4)	-95(2)	1690(1)	39(1)
C(21)	5397(4)	-1208(2)	1525(1)	50(1)
O(22)	4012(4)	-1782(2)	1739(1)	62(1)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 127/154

124/ 141

C(23)	5592(4)	18(2)	2233(1)	40(1)
O(24)	7085(3)	-534(2)	2419(1)	52(1)
C(25)	5750(4)	1168(2)	2361(1)	43(1)
O(26)	5536(3)	1267(2)	2861(1)	61(1)
C(27)	4393(4)	1816(2)	2086(1)	39(1)
O(28)	4750(3)	2904(2)	2136(1)	50(1)
O(29)	6093(3)	1545(1)	1363(1)	44(1)
C(30)	6903(4)	529(2)	1425(1)	47(1)
O(31)	8289(3)	3646(2)	2167(1)	62(1)
C(32)	8567(4)	4451(3)	1935(1)	50(1)
C(33)	7407(5)	4857(3)	1544(1)	60(1)
C(34)	8309(7)	5813(3)	1364(2)	100(2)
C(35)	10008(5)	5962(3)	1666(1)	60(1)
N(36)	9939(4)	5092(2)	1990(1)	62(1)
C(37)	10097(5)	7035(3)	1889(1)	62(1)
O(38)	10174(4)	7793(2)	1636(1)	94(1)
O(39)	10136(4)	7059(2)	2353(1)	72(1)
O(99)	470(40)	9300(20)	1968(10)	97(10)

Tabela 25-3. Comprimentos de ligação [Â] e ângulos [°] para o exemplo 25.

C(1)-C(2) 1,486(5)

C(2)-O(3) 1,419(4)

O(3)-C(4) 1,371(3)

C(4)-C(9) 1,382(4)

C(4)-C(5) 1,385(4)

C(5)-C(6) 1,379(4)

C(6)-C(7) 1,375(4)

C(7)-C(8) 1,381(4)

C(7)-C(10) 1,525(4)

C(8)-C(9) 1,371(4)

C(10)-C(11) 1,509(4)

C(11)-C(12) 1,388(4)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 128/154

125/ 141

C(11)-C(17)	1,398(4)
C(12)-C(14)	1,382(4)
C(12)-Cl(13)	1,746(3)
C(14)-C(15)	1,381(4)
C(15)-C(16)	1,391(4)
C(16)-C(17)	1,381(4)
C(16)-C(18)	1,504(4)
C(18)-O(19)	1,426(3)
C(18)-O(29)	1,430(3)
C(18)-C(27)	1,532(4)
O(19)-C(20)	1,440(3)
C(20)-C(21)	1,507(4)
C(20)-C(23)	1,529(4)
C(20)-C(30)	1,529(4)
C(21)-O(22)	1,408(4)
C(23)-O(24)	1,424(3)
C(23)-C(25)	1,527(4)
C(25)-O(26)	1,418(3)
C(25)-C(27)	1,523(4)
C(27)-O(28)	1,430(3)
O(29)-C(30)	1,452(3)
O(31)-C(32)	1,239(4)
C(32)-N(36)	1,327(4)
C(32)-C(33)	1,494(4)
C(33)-C(34)	1,491(5)
C(34)-C(35)	1,539(5)
C(35)-N(36)	1,443(4)
C(35)-C(37)	1,517(5)
C(37)-O(38)	1,206(4)
C(37)-O(39)	1,301(4)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 129/154

126/ 141

O(3)-C(2)-C(1)	108,8(3)
C(4)-O(3)-C(2)	117,8(2)
O(3)-C(4)-C(9)	116,4(3)
O(3)-C(4)-C(5)	124,5(2)
C(9)-C(4)-C(5)	119,1(3)
C(6)-C(5)-C(4)	119,5(3)
C(7)-C(6)-C(5)	122,1(3)
C(6)-C(7)-C(8)	117,4(3)
C(6)-C(7)-C(10)	121,9(3)
C(8)-C(7)-C(10)	120,7(3)
C(9)-C(8)-C(7)	121,8(3)
C(8)-C(9)-C(4)	120,1(3)
C(11)-C(10)-C(7)	111,6(2)
C(12)-C(11)-C(17)	117,2(2)
C(12)-C(11)-C(10)	122,1(3)
C(17)-C(11)-C(10)	120,6(3)
C(14)-C(12)-C(11)	121,9(3)
C(14)-C(12)-Cl(13)	117,8(2)
C(11)-C(12)-Cl(13)	120,4(2)
C(15)-C(14)-C(12)	119,5(3)
C(14)-C(15)-C(16)	120,5(3)
C(17)-C(16)-C(15)	118,8(3)
C(17)-C(16)-C(18)	122,7(2)
C(15)-C(16)-C(18)	118,4(2)
C(16)-C(17)-C(11)	122,2(3)
O(19)-C(18)-O(29)	105,1(2)
O(19)-C(18)-C(16)	108,5(2)
O(29)-C(18)-C(16)	111,6(2)
O(19)-C(18)-C(27)	107,5(2)
O(29)-C(18)-C(27)	109,5(2)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 130/154

127/ 141

C(16)-C(18)-C(27)	114,1(2)
C(18)-O(19)-C(20)	103,16(19)
O(19)-C(20)-C(21)	108,4(2)
O(19)-C(20)-C(23)	106,7(2)
C(21)-C(20)-C(23)	113,5(2)
O(19)-C(20)-C(30)	101,9(2)
C(21)-C(20)-C(30)	112,1(2)
C(23)-C(20)-C(30)	113,3(2)
O(22)-C(21)-C(20)	113,3(3)
O(24)-C(23)-C(25)	109,6(2)
O(24)-C(23)-C(20)	111,2(2)
C(25)-C(23)-C(20)	109,3(2)
O(26)-C(25)-C(27)	112,1(2)
O(26)-C(25)-C(23)	108,1(2)
C(27)-C(25)-C(23)	111,1(2)
O(28)-C(27)-C(25)	111,2(2)
O(28)-C(27)-C(18)	111,4(2)
C(25)-C(27)-C(18)	110,9(2)
C(18)-O(29)-C(30)	107,28(19)
O(29)-C(30)-C(20)	103,8(2)
O(31)-C(32)-N(36)	126,0(3)
O(31)-C(32)-C(33)	125,4(3)
N(36)-C(32)-C(33)	108,6(3)
C(34)-C(33)-C(32)	105,9(3)
C(33)-C(34)-C(35)	106,9(3)
N(36)-C(35)-C(37)	116,5(3)
N(36)-C(35)-C(34)	102,8(3)
C(37)-C(35)-C(34)	112,1(3)
C(32)-N(36)-C(35)	115,8(3)
O(38)-C(37)-O(39)	124,4(4)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 131/154

128/ 141

O(38)-C(37)-C(35) 119,8(3)

O(39)-C(37)-C(35) 115,8(3)

Tabela 25-4. Parâmetros de deslocamento anisotrópicos (Â²x 10³) para o exemplo 25. O expoente do fator de deslocamento anisotrópico

toma a forma: -2π² [h² a*²Un +..	. + 2 h k a* b* U12]
	U11	U22	U33	U23	U13	U12
C(1)	115(4)	49(2)	104(3)	-20(2)	-54(3)	31(2)
C(2)	95(3)	52(2)	95(3)	-12(2)	-47(2)	23(2)
O(3)	62(1)	36(1)	68(1)	-3(1)	-17(1)	6(1)
C(4)	45(2)	35(2)	49(2)	1(1)	1(1)	0(1)
C(5)	61(2)	43(2)	59(2)	4(2)	-16(2)	9(2)
C(6)	61(2)	43(2)	47(2)	2(1)	-13(1)	0(2)
C(7)	50(2)	36(2)	41(1)	6(1)	7(1)	-2(1)
C(8)	58(2)	44(2)	49(2)	9(1)	-9(2)	7(2)
C(9)	54(2)	43(2)	50(2)	2(1)	-12(1)	3(1)
C(10)	63(2)	40(2)	43(2)	6(1)	5(1)	6(1)
C(11)	52(2)	27(1)	41(1)	0(1)	4(1)	-2(1)
C(12)	50(2)	29(2)	52(2)	0(1)	-4(1)	-4(1)
Cl(13)	59(1)	51(1)	66(1)	7(1)	-16(1)	4(1)
C(14)	40(2)	35(2)	64(2)	7(1)	4(1)	-2(1)
C(15)	44(2)	39(2)	50(2)	11(1)	7(1)	-4(1)
C(16)	41(2)	25(1)	42(1)	3(1)	2(1)	-3(1)
C(17)	36(2)	31(2)	45(2)	0(1)	5(1)	-3(1)
C(18)	36(2)	28(1)	43(1)	3(1)	4(1)	-7(1)
O(19)	40(1)	28(1)	45(1)	2(1)	-5(1)	-5(1)
C(20)	40(2)	30(2)	47(2)	1(1)	-6(1)	2(1)
C(21)	57(2)	33(2)	60(2)	-3(2)	-12(2)	6(1)
O(22)	77(2)	37(1)	73(2)	6(1)	-21(1)	-14(1)
C(23)	42(2)	32(2)	47(2)	2(1)	-8(1)	-2(1)
O(24)	58(1)	37(1)	62(1)	8(1)	-18(1)	-3(1)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 132/154

129/ 141

C(25)	52(2)	36(2)	42(2)	0(1)	-7(1)	-8(1)
O(26)	100(2)	40(1)	43(1)	-1(1)	-9(1)	-9(1)
C(27)	45(2)	28(1)	43(1)	-2(1)	0(1)	-6(1)
O(28)	55(2)	28(1)	69(1)	-6(1)	-7(1)	-3(1)
O(29)	36(1)	39(1)	56(1)	8(1)	7(1)	-4(1)
C(30)	48(2)	38(2)	56(2)	2(1)	-1(1)	8(1)
O(31)	62(2)	56(1)	70(1)	7(1)	-9(1)	-12(1)
C(32)	48(2)	45(2)	57(2)	-9(2)	-3(2)	1(2)
C(33)	57(2)	64(2)	58(2)	-7(2)	-12(2)	2(2)
C(34)	135(4)	78(3)	87(3)	18(2)	-58(3)	-19(3)
C(35)	55(2)	61(2)	64(2)	5(2)	7(2)	-3(2)
N(36)	53(2)	61(2)	72(2)	11(2)	-22(2)	-9(2)
C(37)	49(2)	65(2)	72(2)	5(2)	-1(2)	6(2)
O(38)	116(2)	70(2)	95(2)	19(2)	-2(2)	-11(2)
O(39)	79(2)	69(2)	70(2)	2(1)	0(1)	3(1)
O(99)	90(20)	110(20)	89(19)	-60(18)	-2(15)	29(17)

Tabela 25-5. Coordenadas de hidrogênio (x 10⁴) e parâmetros de deslocamento isotrópicos (Â2x 10³) para o exemplo 25.

	X	y	z	U(eq)
H(1A)	1080	9742	965	134
H(1B)	557	10275	482	134
H(1C)	2571	10087	606	134
H(2A)	107	8492	427	97
H(2B)	1587	8843	63	97
H(5)	813	7106	-61	65
H(6)	998	5365	-239	60
H(8)	4455	4952	819	60
H(9)	4323	6685	999	59
H(10A)	2083	3655	-115	58
H(10B)	4055	3623	73	58
H(14)	-1256	2497	1194	56

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 133/154

130/ 141

H(15)	875	1701	1665	53
H(17)	4703	2691	782	45
H(21A)	5235	-1219	1181	60
H(21B)	6528	-1543	1595	60
H(97D)	3240(80)	-1700(40)	1620(20)	120(20)
H(23)	4498	-261	2375	48
H(97C)	6720(50)	-1040(30)	2557(13)	78(14)
H(25)	6950	1407	2275	52
H(97B)	5570(50)	1910(30)	2942(14)	79(13)
H(27)	3214	1680	2224	46
H(97A)	5800(50)	2990(30)	2137(12)	60(12)
H(30A)	7992	577	1611	57
H(30B)	7175	214	1119	57
H(33A)	7294	4347	1291	71
H(33B)	6226	5021	1664	71
H(34A)	7528	6411	1397	120
H(34B)	8616	5735	1030	120
H(35)	11047	5874	1457	72
H(99)	10740(50)	4950(20)	2171(11)	49(10)
H(98A)	9670(60)	6410(30)	2507(15)	95(14)

Exemplo 26

Cocristal de (1S,2S,3S, 4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenill-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 loctano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) e ácido L-piroglutâmico:

RMN em estado sólido:

[00208] Aproximadamente 80 mg de cocristal de (1S,2S,3S,4R,5S)-

5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa- biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol (composto do exemplo 4A) e ácido Lpiroglutâmico preparado usando o processo descrito no esquema 2 foi firmemente acondicionado em um rotor de ZrO2 de 4 mm. Espectros foram coletados em temperatura ambiente e pressão em uma sonda BL CPMAS de 4 mm de Bruker-Biospin posicionada em um espectrô

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 134/154

131/141 metro de RMN de 500 MHz de Bruker-Biospin DSX de cavidade ampla (¹H de frequência). O rotor acondicionado foi orientado no ângulo mágico e girado em 15,0 kHz. O espectro em estado sólido de ¹³C foi coletado usando uma experiência de rotação de ângulo mágico de polarização cruzada desacoplado de próton (CPMAS). O tempo de contato da polarização cruzada foi marcado a 2,0 ms. Um campo de desacoplamento de próton de aproximadamente 85 kHz foi aplicado. 1448 varreduras foram coletadas com atraso de reciclo de 14 segundos. O espectro de carbono foi referenciado usando um padrão externo de adamantano cristalino, fixando sua ressonância a montante em 29,5 ppm. Os dados de desvio químico são dependentes das condições de teste (isto é, velocidade de giro e suporte de amostra), material de referência, e parâmetros de processamento de dados, entre outros fatores. Tipicamente, os resultados de ss-RMN são precisos a dentro de cerca de + 0,2 ppm.

Desvios químicos de carbono observados.

Picos característicos são marcados com asterisco.

Todos os picos são (+0,2 ppm)

Desvios Químicos de ¹³C [ppm]^a	Intensidade⁰
16,5*	9,3
23,1	4,8
30,5	4,5
42,5	4,9
56,7	4,5
61,0	6,2
63,0	7,6
69,4	8,0
70,0	7,2
74,7	8,4
80,2	6,0

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 135/154

132/141

85,3	11,4
110,1	10,0
110,4	7,9
117,7	7,1
127,9	5,7
128,7	6,2
130,0	6,9
131,1*	12,0
132,2	6,5
134,4	0,8
137,8	5,9
140,3	5,3
158,7*	7,9
174,7	4,5
181,5*	5,0

(a) Referenciado para amostra externa de adamantano de fase sólida em 29,5 ppm.

(b) Definido como alturas de pico. Intensidades podem vari- ar, dependendo da organização atual dos parâmetros experimentais de CPMAS, e a história térmica da amostra. Intensidades de CPMAS não são necessariamente quantitativas.

[00209] O espectro de SSRMN ¹³C CPMAS do exemplo 26 é mostrado na figura 9. Os picos marcados por asteriscos na figura 9 são faixas adjacentes giratórias.

TESTE FARMACOLÓGICO [00210] A prática da presente invenção para o tratamento de doenças moduladas pela inibição de SGLT2 pode ser comprovada por atividade em pelo menos um dos protocolos descritos aqui abaixo.

Ensaios Biológicos

Ensaio In Vitro

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 136/154

133/ 141 [00211] O ensaio funcional de SGLT2 foi projetado para detectar a inibição da captação de metil-alfa-D glucopiranosídeo (AMG - uma forma não metabolizável de glicose) por meio do transportador de SGLT2. O transportador de SGLT2 recupera a glicose dos túbulos proximais do rim; sua inibição resulta no açúcar desperdiçado na urina. O composto de controle positivo, Phlorizin, é um inibidor conhecido de captação de glicose para SGLT2 e foi usado para comparar o efeito do percental elevado da inibição de SGLT2 dos compostos de teste.

[00212] Células CHO-FlpIn (Invitrogen, Carlsbad, CA) estavelmente expressando SGLT2 humano (pcDNA5/FRT) foram semeadas em placas de 96 poços Iso-TC 96 (Perkin Elmer, Waltham, MA) em uma densidade de 100.000 células/poço em 100 microL de meios de crescimento (1:1 de meios de F-12/DMEM (Gibco, Carlsbad, CA), 10% de FBS (Sigma, St., Louis MO), 1X Pen/Estrep. (Gibco, Carlsbad, CA), 600 microg/mL de Higromicina (Invitrogen, Carlsbad, CA)). Antes de tratar com o composto de teste, as células confluentes foram privadas de soro durante 2 horas a 37°C em 1:1 de meios de F-12/DMEM, substituindo com meios de F-12/DMEM frescos depois de 1 hora. Os compostos de teste em dimetilsulfóxido (Sigma, St., Louis, MO) foram diluídos 100 vezes no tampão de captação (NaCl a 140mM (Promega, Madison, WI), KCl a 2mM (Teknova, Hollister, CA), CaCl2 a 1mM (Teknova, Hollister, CA), MgCl2 a 1mM (Teknova, Hollister, CA), e HEPES a 10mM (Gibco, Carlsbad, CA) em placas de célula préenxaguadas com tampão de captação. As células foram pré-incubadas com o composto teste durante 15 minutos antes da adição de 50 microL de AMG (40 nCi de AMG [U-¹⁴C] (Perkin Elmer, Waltam, MA) em AMG não rotulado (Aldrich, St., Louis, MO)) por poço produzindo uma concentração final de 11,33 microM de AMG. As placas de célula foram em seguida incubadas durante 3 horas a 37°C para captação de AMG. Depois da incubação, as células foram lavadas duas vezes com

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 137/154

134/ 141 tampão de lavagem gelado (tampão de captação contendo 200 microM de Phlorizin (Sigma), secadas a ar e lisadas em 30 microL de NaOH a 200 mM e tampão de SDS a 1% em um agitador orbital. Microscint 40 (Perkin Elmer, Waltam, MA) foi adicionado às células lisadas (dando um volume final de 200 microL) e misturado por agitação orbital durante 30 minutos. As placas foram armazenadas durante a noite no escuro e quantificadas no 1540 Microbeta Trilux (Wallac, Waltam, MA) usando um protocolo normalizado para detecção de ¹⁴C. O percentual do efeito dos compostos teste para inibir a captação de AMG foi calculado usando o seguinte cálculo:

% de Efeito = ((ZPE-T)/(ZPE-HPE)) x 100%] em que ZPE é as contagens corrigidas por minuto (CCPM) em cavidades de controle contendo DMSO a 0,5%, T é as CCPM em poços contendo o composto de teste em várias concentrações da curvapadrão, e HPE é o percentual do efeito elevado que refere-se às CCPM em poços de controle contendo 10 microM de Phlorizin. Os valores de IC50 foram calculados usando uma equação de dose resposta e são resumidos para os compostos testados na tabela 3.

Abreviações usadas na descrição de teste in vitro incluem: SGLT2 cotransportador de sódio/glicose tipo 2

AMGmetil-a-D Glucopiranosídeo

DMEM Meio de Eagle Modificada de Dulbecco

IC50 Concentração de Inibição a 50%

FBS Soro Bovino fetal DMSO Dimetilsulfóxido SDS Dodecil Sulfato de sódio

CHO-FlpIn Célula de Ovário de Hamster Chinês contendo o sítio de FRT

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 138/154

135/ 141

Tabela 3

Composto Teste	Ciclo N°	hSGLT1 IC50 nM	hSGLT2 IC50 nM
1A	1	1080	1,55
2	454	1,15
3	327	0,779
4	562	0,715
5	262	0,654
6	359	1,61
2A	1	1240	0,827
2	>1000	1,53
3	>1000	0,942
4	>1000	0,741
5	679	1,58
	6	indeterminado	1,05
3A	1	543	0,479
2	397	0,972
3	550	1,39
4	757	0,811
5	523	0,602
6	672	0,588
7	380	1,35
3B	1	>10000	41,6
2	>10000	40,8
3	>10000	27,9
4	indeterminado	62,2
4A	1	1590	1,27
2	1010	0,816
3	1750	0,57
4	>1000	0,922
5	>1000	1,85
6	2090	0,812
7	1810	0,7
8	2860	0,737
9	2480	0,846
10	2840	0,768
4B	1	>1000	122
2	>10000	66,8
3	indeterminado	81,7
5A	1	>10000	4,5
2	>1000	81,7
3	5790	2,42

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 139/154

136/ 141

Composto Teste	Ciclo N°	hSGLT1 IC50 nM	hSGLT2 IC50 nM
	4	indeterminado	1,77
5B	1	>10000	186
6A	1	>10000	18,7
2	>1000	9,99
3	>1000	13,5
4	>1000	13,4
5	8930	5,71
6	indeterminado	7,67
7A	1	>1000	10,6
2	>10000	6,38
3	>1000	5,88
4	indeterminado	6,11
10A	1	>10,000	4,08
2	>3330	33,4
3	>3160	2,54
10B	1	>10,000	127
2	>10,000	103
11A	1	>10,000	9,6
2	>10,000	11,9
3	>10,000	19,8
4	>10,000	7,13
12A	1	>10,000	11,1
2	5780	7,41
3	>10,000	8,85
4	>10,000	0,802
5	>10,000	10,7
6	>10,000	14,1
12B	1	>3160	32,3
13A	1	>10,000	14,9
2	>10,000	17,8
14A	1	>10,000	2,28
2	>10,000	3,12
3	>10,000	2,39
4	>10,000	2,87
Ensaio In-Vivo

[00213] Exemplos 1A e 4A foram testados em ratos para avaliar a inibição do transporte de glicose por meio de excreção de glicose urinária. Ratos machos Sprague Dawley (~300 g) foi alojados isoladamente em gaiolas metabólicas para coleta de urina. Os ratos tiveram

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 140/154

137/141 acesso ad libitum à comida de laboratório padrão e água. Os ratos (n=2 para 5/grupo) receberam veículo ou composto por gavagem oral. As soluções de dosagem foram 0,03 mg/mL, 0,3 mg/mL, 0,9 mg/mL, 3 mg/mL, 9 mg/mL e 18 mg/mL para as doses de 0,1mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg e 60 mg/kg respectivamente. O volume da dosagem foi 1 mL/300 g de peso corporal para todas as doses. Um grupo recebeu uma dose de 10 mg/kg do exemplo 1A e outros receberam dose de 0,1, 1, 3, 10, 30 ou 60 mg/kg do exemplo 4A. O veículo foi 20% em v/v de PEG400 e 24% em v/v de hidroxipropil beta ciclodextrina; HPBCD. Após a administração oral, urina foi coletada durante 24 horas. A concentração de glicose foi medida na urina por espectrofotometria de absorvência de UV em 340 nm usando um espectrofotômetro Roche Hitachi 917 (Diamond Diagnostics, Holliston, MA). A quantidade total de glicose excretada na urina foi calculada como o produto de concentração de urina e volume de urina usando a fórmula abaixo:

glicose urinária excretada (mg)/200g de peso corporal = concentração de glicose urinária (mg/dL) x volume de urina (dL) x 200/peso corporal do rato (g). Quantidades de glicose urinária excretada (UGE) foram obtidas de ratos para o exemplo 1A e exemplo 4A pelo método descrito acima e são mostradas na tabela 4. Sangue (0,1 mL) foi coletado dos animais de grupo satélite PK em 1,2, 4, 7, 24 horas pós-dose para obter o plasma e analisado por LC-MS/MS. Parâmetros PK são mostrados nas várias doses testadas na tabela 4.

Tabela 4

Composto	Dose (mg/kg)	UGE médio (mg/200g de peso corporal) ± SEM (n=5)	Parâmetros PK Médios (n=2)
Cmáx (ng/mL)	tmáx (h)	AUC(0-24) (ng*h/mL)
Exemplo 1A	10	2049 ±382,2	1260	1,00	6630
Exemplo 4A	o,1	389,0 ±62,54	43,4	1,50	188
Exemplo 4A	1	1519 ±52,02	372	1,00	2000

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 141/154

138/ 141

Exemplo 4A	3	1937 ± 101,1	1320	1,00	7080
Exemplo 4A	10	2145 ± 132,3	3100	2,50	26400
Exemplo 4A	30	2554 ± 141,1	10500	1,00	10700
Exemplo 4A	60	2437 ± 116,7	25300	2,00	233000
SEM: Erro padrão da média.

Teste Farmacocinético em Ratos [00214] Exemplos 1A, 2A, 4A, 12A, e 14A foram testados em ratos para avaliar os parâmetros farmacocinéticos incluindo a concentração máxima (Cmáx), área sob a curva de concentração tempo plasmática (AUC), depuração (CL), volume em estado estável de distribuição (Vss), meia-vida (t1/2), e biodisponibilidade (F). Ratos Sprague Dawley machos (~ 300 g) foram usados. Os ratos receberam o composto por administração intravenosa (IV) ou gavagem oral (PO) e as doses testadas incluindo o veículo para formular as soluções de dosagem são listadas na tabela 5.

[00215] Após a administração IV ou PO, 0,2 mL de sangue foi testada da veia jugular em vários pontos de tempo (tabela 5). Vinte microL de alíquotas de amostras de plasma e padrões foram submetidos à precipitação de proteína com acetonitrila contendo um padrão interno. As amostras foram vortexadas e centrifugadas para obter o sobrenadante que foi analisado por LC-MS/MS. Analista (Versão 1.4.1) foi usado para medir área de pico e as relações de áreas de pico do analisado para padrão interno foram calculadas. As condições de LCMS/MS são como segue: Espectrômetro de Massa + Tipo de Fonte foi Sciex API 4000-Turbo Spray; bomba de HPLC foi Shimadzu; Amostrador automático foi Amostrador automático CTC PAL; volume de Injeção foi 3,0 a 10 microL; gradiente A foi usado com fase móvel A: acetato de amônia a 10 mM e álcool isopropílico a 1% em água; B: Acetonitrila; Taxa de fluxo 0,300 mL por minuto (Coluna 2,0 x 30 mm 5 microm LUNA C18 (phenomenex)). Modo de detecção foi negativo.

[00216] Uma curva de calibre foi construída das relações de área de pico dos padrões para o padrão interno aplicando-se uma regres

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 142/154

139/ 141 são linear ponderada (1/x ou 1/x2). A faixa dinâmica da curva padrão foi 5.00 ng/mL a 5000 ng/mL.

[00217] Parâmetros farmacocinéticos foram determinados de dados de animal individuais usando análise não compartimental em Watson (versão 7.2). As concentrações abaixo do limite de quantificação (BLQ) foram registradas como 0 ng/mL para uso em cálculos.

[00218] Os cálculos seguintes foram usados:

AUC(0-t) = Determinada usando o método trapezoidal linear

AUC(0-to) = AUC(0-t) mais área extrapolada determinada dividindo-se a concentração de plasma em τ pelo declive da fase de log-linear terminal

CL = Dose/AUC(0- /)

Vdss = CL x MRT

Cmáx = Registrada diretamente da curva de concentração-tempo de plasma

Tmáx = Registrado diretamente da curva de concentração-tempo de plasma t1/2 = Em(0,5)/declive da fase de log-linear terminal

F% de = AUC(0-to) PO por dose/AUC(0-«)IV por dose

C(0) = Extrapolado por regressão linear da fase de distribuição aparente após a administração IV

MRT = AUMC (AUC(0- / )/AUC(0- /)

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 143/154

Tabela 5

Ex.	Dose (mg/kg)	Rotina/ n	Formulação	Pontos de Tempo (h)	Cmáx (pg/m L)	AUCinf (pg*h/ml_)	CL (mL/min/ kg)	V_ss(L/kg)	t-l/2 (h)	F (%)
4A	2	IV / (n=2)	DMSO/ PEG400/ 30% de SBECD (10/30/60 v/v/v)	0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 20	-	8,48	4,04	1,1	4,1	-
2	PO / (n=3)	Tween 80/ 0,5% de MC (0,1/99,9 v/v)	0,5, 1, 2, 4, 7, 20	0,772	5,65	-	-	3,7	67
5	PO / (n=5)	20% de PEG/24% de HBCD	1, 4, 7, 24	1,19	16,8	-	-	-	79
12A	2	IV / (n=2)	DMSO/ PEG400/ 30% de SBECD (5/10/85 v/v/v)	0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 5, 6, 7, 20	-	2,20	15,9	3,68	3,90	-
1A	2	IV / (n=2)	DMA/ PG/ Base de Tris a 50 mM (5/10/85 v/v/v)	0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 20	-	0,947	37,1	1,71	0,962	-
10	PO / (n=2)	PEG200/ 0,5% de MC (5/95 v/v)	0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 4, 6, 8, 20	1,65	2,68	-	-	2,82	56,5
14A	2	IV / (n=2)	DMSO/ PEG400/ 30% de SBECD (5/10/85 v/v/v)	0,25, 0,5, 1, 2, 4, 7, 20, 22	-	1,06	31,7	1,69	1,36	-
10	PO / (n=2)	PEG200/ 0,5% de MC (5/95 v/v)	0,5, 1, 2, 4, 7, 20, 22	0,551	2,29	-	-	1,71	43,5
2A	2	IV / (n=2)	DMA/ PG/ Base de Tris a 50 mM (5/10/85 v/v/v)	0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 20	-	1,34	27,7	1,03	0,94	-
3A	2	IV/ (n=2)	DMA/ PG/ Base de Tris a 50 mM (5/10/85 v/v/v)	0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 20	-	1,41	23,8	1,82	1,58	-

- = Dados não disponíveis ou não aplicáveis; DMSO = Dimetil Sulfóxido; HBCD = Hidroxipropil beta ciclodextrina; PEG = Polietileno Glicol; PG = Propileno Glocol; SBECD = Sulfobutiléster beta ciclodextrina; MC = Metilcelulose; DMA = Dimetilanilina

140/141

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 144/154

141/141 [00219] Ao longo deste pedido de patente, várias publicações são referenciadas. As descrições destas publicações em suas totalidades estão por este meio incorporadas por referência a seu pedido para todos os propósitos.

[00220] Ficará evidente para aqueles versados na técnica que várias modificações e variações podem ser feitas na presente invenção sem afastarem-se do escopo ou espírito da invenção. Outras modalidades da invenção ficarão evidentes para aqueles versados na técnica a partir da consideração do relatório descritivo e prática da invenção descritos aqui. É pretendido que o relatório descritivo incluindo os exemplos seja considerado apenas como exemplar, com um verdadeiro escopo e espírito da invenção que são indicados pelas seguintes reivindicações.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (A) ou fórmula (B):

π O. Al A. J <O 11 LJ ho ης hO^Z^ k—O m—O HO^X 'OH HO''' VJH OH OH (A) (B) na qual R¹ é H, (C1 -C4)alquila, (C1- C4)alcóxi, Cl, F, ciano, (C1- C2)alquila substituída por fluoro, (C1-C4)alquil-SO:- ou (C3-

C6)cicloalquila; e

R2 é (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C2-C4)alquinila, 3oxetanilóxi, 3-tetra-hidrofuranoilóxi, Cl, F, ciano, (C1-C2)alquila substituída por fluoro, (C1-C4)alquil-SO2-, (C3-C6)cicloalquila, ou um (C5C6)heterociclo que tem 1or 2 heteroátomos, cada qual independentemente selecionado a partir de N, O ou S.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto é um composto de fórmula (A).
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que:

R¹ é H, metila, etila, propila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3, ciclopropila ou ciclobutila; e

R² é metila, etila, propila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinila, 3-oxetanilóxi, 3-tetra-hidrofuranoilóxi ou ciclopropila.
4. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que:

R¹ é H, metila, etila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, CF3 ou ciclopropila; e

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 146/154

2/5

R² é metila, etila, isopropila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, CF3,

-CF2CH3, etinila, 3-oxetanilóxi, 3-tetra-hidrofuranoilóxi ou ciclopropila.
5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que:

R1 é H, metila, etila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3 ou ciclopropila; e

R² é metila, etila, metóxi, etóxi, F, Cl, ciano, -CF3, -CF2CH3, etinila, 3-oxetanilóxi, 3-tetra-hidrofuranoilóxi ou ciclopropila.
6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que:

R1 é metila, etila, F, Cl, ciano, CF3 ou ciclopropila; e

R² é metóxi ou etóxi.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir do grupo que consiste em:

(1S,2S,3S,4R,5S)-1-hidroximetil-5-[3-(4-metóxi-benzil)-4metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-metil-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-fluoro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

2-(4-metoxibenzil)-4-((1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidróxi-1(hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)benzonitrila;

2-(4-etoxibenzil)-4-((1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-tri-hidróxi-1(hidroximetil)-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]oct-5-il)benzonitrila;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-1

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 147/154

3/5 hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(tetra-hidro-furan-3-ilóxi)benzil]-fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-1hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol;

(1S,2S,3S,4R,5S)-5-{4-fluoro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzil]fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol; e (1S,2S,3S,4R,5S)-5-{4-cloro-3-[4-(oxetan-3-ilóxi)-benzil]fenil}-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser (1S,2S,3S,4R,5S)-5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)fenil]-1-hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir do grupo que consiste em:

(15.25.35.45.55) -1-hidroximetil-5-[3-(4-metóxi-benzil)-4metil-fenil]-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol;

(15.25.35.45.55) -5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-metil-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(15.25.35.45.55) -5-[4-cloro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(15.25.35.45.55) -5-[4-cloro-3-(4-etóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(15.25.35.45.55) -5-[4-fluoro-3-(4-metóxi-benzil)-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol;

(15.25.35.45.55) -5-[3-(4-etóxi-benzil)-4-fluoro-fenil]-1hidroximetil-6,8-dioxa-biciclo[3.2.1 ]octano-2,3,4-triol; e (15.25.35.45.55) -5-[3-(4-clorobenzil)-4-fluorofenil]-1hidroximetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3,4-triol.
10. Cristal, caracterizado pelo fato de que compreende um composto apresentando a fórmula (4A):

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 148/154

4/5

(4A) em que (a) grupo espaçador P2(1)2(1)2(1) e parâmetros de célula unitária substancialmente igual ao seguinte:

a = 7,4907(10) Αα = 90°.

b = 12,8626(15) Αβ = 90°.

c = 28,029(4) A γ = 90°; e/ou (b) padrão de difração de raio-X pelo método do pó, que compreende valores de 2-teta de (radiação de Cu^, comprimento de onda de 1,54056A) 6,4 ± 0,2, 16,7 ± 0,2, 17,4 ± 0,2 e 21,1 ± 0,2;

que compreende ainda ácido L-piroglutâmico, sendo que o cristal é um cocristal, que compreende o composto de fórmula (4A) e ácido L-piroglutâmico em uma relação estequiométrica 1:1.
11. Cristal de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende ainda ácido L-piroglutâmico e possui um ou mais do seguinte:

(c) espectro de ¹³C RMN em estado sólido que compreende posições de pico a 16,5 ± 0,2, 131,1 ± 0,2, 158,7 ± 0,2, e 181,5 ± 0,2 ppm, como determinado em um espectrômetro de 500 MHz relativo a adamantino cristalino de 29,5 ppm.
12. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende (i) um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um cristal, como definido na reivindicação 10 ou

Petição 870190072900, de 30/07/2019, pág. 149/154

5/5

11; e (ii) um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
13. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou de um cristal, como definido na reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratar obesidade e transtornos relacionados à obesidade em animais.
14. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou de um cristal, como definido em qualquer uma das reivindicações 10 ou 11, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão ou início de diabetes Tipo 2 e transtornos relacionados a diabetes em animais.
15. Uso de uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 12, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratar obesidade e transtornos relacionados à obesidade em animais.
16. Uso de uma composição farmacêutica como definida na reivindicação 12, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão ou início de diabetes Tipo 2 e transtornos relacionados a diabetes em animais.