RU2587616C2 - Двухвалентные биспецифические антитела - Google Patents
Двухвалентные биспецифические антитела Download PDFInfo
- Publication number
- RU2587616C2 RU2587616C2 RU2010129549/10A RU2010129549A RU2587616C2 RU 2587616 C2 RU2587616 C2 RU 2587616C2 RU 2010129549/10 A RU2010129549/10 A RU 2010129549/10A RU 2010129549 A RU2010129549 A RU 2010129549A RU 2587616 C2 RU2587616 C2 RU 2587616C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- heavy chain
- domain
- igf
- antibodies
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к иммунологии и представляет собой способ получения двухвалентного биспецифического антитела, где указанное антитело содержит первую легкую цепь и первую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH второй легкой цепи и второй тяжелой цепи заменены друг на друга, где СН3-домен одной тяжелой цепи и СН3-домен другой тяжелой цепи соприкасаются друг с другом поверхностями, которые изменены для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела. Способ включает следующие этапы: трансформацию клетки-хозяина экспрессионными векторами и культивирование клетки-хозяина в условиях, которые позволяют синтезировать указанное двухвалентное биспецифическое антитело, и выделение указанного двухвалентного биспецифического антитела из культуры. Изобретение позволяет эффективно получать биспецифические антитела к двум антигенам. 1 з.п. ф-лы, 15 ил., 4 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к новым двухвалентным биспецифическим антителам, их получению и применению.
Предпосылки создания изобретения
В данной области известны сконструированные белки, такие как би- и мультиспецифические антитела, которые могут связываться с двумя или большим количеством антигенов. Указанные мультиспецифические связывающие белки можно создавать на основе методов клеточного слияния, химической конъюгации или рекомбинантной ДНК.
В последние годы создано широкое разнообразие форматов рекомбинантных биспецифических антител, например, четырехвалентные биспецифические антитела, полученные путем слияния, например, антитела IgG-формата и одноцепочечных доменов (см., например, Morrison S.L. и др., Nature Biotech 15, 1997, cc.159-163; WO 2001/077342; и Coloma M.J., Nature Biotech 25, 2007, cc.1233-1234).
Разработано также несколько других новых форматов, в которых уже не сохранялась основная структура антитела (IgA, IgD, IgE, IgG или IgM), таких как диа-, триа- или тетратела, минитела, несколько одноцепочечных форматов (scFv, бис-scFv), которые могут связывать два или большее количество антигенов (Holliger Р. и др., Nature Biotech 23, 2005, cc.1126-1136; Fischer N., Leger О., Pathobiology 74, 2007, cc.3-14; Shen J и др., Journal of Immunological Methods 318, 2007, cc.65-74; Wu С. и др., Nature Biotech 25, 2007, cc.1290-1297)
Во всех указанных форматах используют линкеры либо для слияния основной структуры антитела (IgA, IgD, IgE, IgG или IgM) с дополнительным связывающим белком (например, scFv), либо для слияния, например, двух Fab-фрагментов или scFv (Fischer N., Leger О., Pathobiology 74, 2007, cc.3-14). Хотя очевидно, что линкеры имеют преимущество при создании биспецифических антител, с ними могут быть связаны также проблемы терапевтического плана. Фактически эти чужеродные пептиды могут вызывать иммунный ответ против самого линкера или области стыка между белком и линкером. Кроме того, гибкая природа этих пептидов делает их более чувствительными к протеолитическому расщеплению, что может приводить к плохой стабильности, агрегации и повышению иммуногенности антитела. Кроме того, может существовать необходимость в поддержании эффекторных функций, таких как комплементзависимая цитотоксичность (CDC) или антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (ADCC), которые опосредуются Fc-областью, путем сохранения высокой степени сходства с встречающимися в естественных условиях антителами.
Таким образом, в идеальном варианте необходимо создавать биспецифические антитела, которые обладают очень сходной общей структурой с встречающимися в естественных условиях антителами (типа IgA, IgD, IgE, IgG или IgM), с минимальным отклонением от человеческих последовательностей.
В соответствии с одним из подходов биспецифические антитела с высокой степенью сходства с встречающимися в естественных условиях антителами создавали с помощью технологии квадром (квадрогибридом) (см. Milstein С. и А.С.Cuello, Nature, 305, 1983, cc.537-540) на основе соматического слияния двух различных клеточных линий гибридом, экспрессирующих мышиные моноклональные антитела с требуемыми специфичностями биспецифического антитела. В результате случайного спаривания тяжелых и легких цепей двух различных антител в образующейся линии клеток гибрида гибридомы (или квадромы) получают вплоть до 10 различных видов антител, из которых только одно представляет собой требуемое функциональное биспецифическое антитело. Из-за присутствия ошибочно спаренных побочных продуктов и в значительной степени сниженного выхода продукта, требуются более сложные процедуры очистки (см., например, Morrison S.L., Nature Biotech 25, 2007, cc.1233-1234). В целом, эта же проблема, связанная с ошибочно спаренными побочными продуктами, сохраняется при применении методов рекомбинантной экспрессии.
Подход, с помощью которого можно обойти проблему, связанную с имеющими ошибочные спаривания побочными продуктами, известный под названием «knobs-into-holes» (взаимодействие по типу «выступ-впадина»), направлен на усиление спаривания двух различных тяжелых цепей антитела путем интродукции мутаций в СН3-домены для модификации поверхности раздела в области контакта. На одной цепи имеющие большие размеры аминокислоты заменяли на аминокислоты с короткими боковыми цепями для создания «впадины». И, наоборот, аминокислоты с более крупными боковыми цепями интродуцировали в другой СН3-домен, создавая «выступ». Путем совместной экспрессии этих двух тяжелых цепей (и двух идентичных легких цепей, которые должны соответствовать обеим тяжелым цепям), получали высокий выход гетеродимерной формации («выступ-впадина») относительно гомодимерной формации («впадина-впадина» или «выступ-выступ») (Ridgway J. В., Presta L.G., Carter P. и WO 1996/027011). Процентное содержание гетеродимера можно дополнительно повышать путем ремоделирования поверхностей раздела двух СН3-доменов с помощью технологии фагового дисплея и интродукции дисульфидного мостика для стабилизации гетеродимеров (Merchant А.М, и др., Nature Biotech 16, 1998, cc.677-681; Atwell S., Ridgway J.B., Wells J.A., Carter P., J Mol Biol 270, 1997, cc.26-35). Новые подходы к технологии «knobs-into-holes» описаны, например, в ЕР 1870459А1. Хотя указанный формат, вероятно, является очень привлекательным, в настоящее время отсутствуют данные о его развитии в направлении клинического применения. Одним из важных ограничений этой стратегии является то, что легкие цепи двух родительских антител должны быть идентичными для предупреждения ошибочных спариваний и формирования неактивных молекул. Таким образом, эта технология не пригодна для более легкого создания рекомбинантных двухвалентных биспецифических антител к двум антигенам с использованием в качестве исходных двух антител к первому и второму антигену, поскольку должны быть оптимизированы или тяжелые цепи этих антител, и/или идентичные легкие цепи.
У Xie Z., и др., J Immunol Methods 286, 2005, cc.95-101 описан новый формат биспецифического антитела на основе использования scFv в комбинации с технологией «knobs-into-holes» для получения Fc-области.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к двухвалентному биспецифическому антителу, содержащему:
а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и
б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга.
Следующим вариантом осуществления изобретения является способ получения двухвалентного биспецифического антитела, предлагаемого в изобретении, заключающийся в том, что
а) трансформируют клетку-хозяина
- векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается с первым антигеном,
- векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга;
б) культивируют клетку-хозяина в условиях, которые позволяют синтезировать указанную молекулу антитела; и
в) выделяют молекулу антитела из культуры.
Следующим вариантом осуществления изобретения является клетка-хозяин, содержащая
- векторы, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается с первым антигеном,
- векторы, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга.
Следующим вариантом осуществления изобретения является композиция, предпочтительно фармацевтическая или диагностическая композиция антитела, предлагаемого в изобретении.
Следующим вариантом осуществления изобретения является фармацевтическая композиция, которая содержит антитело, предлагаемое в изобретении, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.
Следующим вариантом осуществления изобретения является способ лечения пациента, который нуждается в терапии, отличающийся тем, что вводят пациенту в терапевтически эффективном количестве антитело, предлагаемое в изобретении.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к двухвалентному биспецифическому антителу, содержащему:
а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и
б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга.
Таким образом, двухвалентное биспецифическое антитело содержит:
а) первую легкую цепь и первую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и
б) вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH второй легкой цепи и второй тяжелой цепи заменены друг на друга.
Таким образом, для создания антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, применяют следующие процессы:
в легкой цепи
вариабельный домен VL легкой цепи заменяют на вариабельный домен VH тяжелой цепи указанного антитела;
и в тяжелой цепи
вариабельный домен VH тяжелой цепи заменяют на вариабельный домен VL легкой цепи указанного антитела.
Понятие «антитело» к контексте настоящего описания относится к полным моноклональным антителам. Такие полные антитела состоят из двух пар, каждая из которых включает «легкую цепь» (LC) и «тяжелую цепь» (НС) (указанные пары легкая цепь (LC)/тяжелая цепь сокращенно обозначают в контексте настоящего описания как LC/HC). Легкие цепи и тяжелые цепи указанных антител представляют собой полипептиды, состоящие из нескольких доменов (областей). В полном антителе каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно обозначена в контексте настоящего описания как HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит константные СН1-, СН2- и СН3-домены тяжелой цепи (в антителе, которое относится к классам IgA, IgD и IgG) и необязательно константный СН4-домен тяжелой цепи (в антителе, которое относится к классам IgE и IgM). Каждая легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи VL и константный домен легкой цепи CL. Структура одного из классов встречающихся в естественных условиях антител, а именно антитела класса IgG, показана, например, на фиг.1. Вариабельные домены VH и VL можно дополнительно подразделять на области гипервариабельности, обозначенные как гипервариабельные участки (CDR), перемежающиеся более консервативными областями, которые называют каркасными участками (FR). Каждая VH- и VL-область состоит из трех CDR и четырех FR, которые расположены в направлении от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 ((Janeway С.A., Jr. и др., Immunobiology., 5-ое изд., изд-во Garland Publishing, 2001; и Woof J., Burton D., Nat Rev Immunol 4, 2004, cc.89-99). Две пары, каждая из которых включает тяжелую цепь и легкую цепь (HC/LC), обладают способностью специфически связываться с одним и тем же антигеном. Таким образом, полное антитело представляет собой двухвалентное моноспецифическое антитело. Указанные «антитела» представляют собой, например, мышиные антитела, человеческие антитела, химерные антитела, гуманизированные антитела и созданные с помощью генной инженерии антитела (варианты антител или мутантные антитела), если они сохраняют свои характерные свойства. Наиболее предпочтительными являются человеческие или гуманизированные антитела, прежде всего в виде рекомбинантных человеческих или гуманизированных антител.
Известно пять типов тяжелых цепей антител млекопитающих, которые обозначают греческими буквами: α, δ, ε, γ и µ (Janeway С.A., Jr. и др., Immunobiology,, 5-ое изд., изд-во Garland Publishing, 2001). Присутствующий тип тяжелой цепи определяет класс антитела; указанные цепи обнаружены в антителах типа IgA, IgD, IgE, IgG и IgM соответственно (Rhoades R.A., Pflanzer R.G., Human Physiology, 4-ое изд., изд-во Thomson Learning, 2002). Различные тяжелые цепи отличаются по размеру и составу; α и γ содержат примерно 450 аминокислот, а µ и ε состоят примерно из 550 аминокислот.
Каждая тяжелая цепь содержит две области, т.е. константную область и вариабельную область. Константная область является идентичной во всех антителах одного и того же изотипа, но отличается в антителах различного изотипа. Тяжелые цепи γ, α и δ содержат константную область, которая состоит из трех константных доменов СН1, СН2 и СН3 (выстроены в ряд) и шарнирной области, которая придает гибкость (Woof J., Burton D., Nat Rev Immunol 4, 2004, cc.89-99); тяжелые цепи µ и ε содержат константную область, которая состоит из четырех константных доменов СН1, СН2, СН3 и СН4 (Janeway С.А., Jr. и др., Immunobiology., 5-ое изд., изд-во Garland Publishing, 2001). Вариабельная область тяжелой цепи отличается у антител, которые продуцируются различными В-клетками, но является одинаковой у всех антител, продуцируемых индивидуальной В-клеткой или В-клеточным клоном. Вариабельная область каждой тяжелой цепи антитела содержит примерно 110 аминокислот и состоит из одного домена.
У млекопитающих известно только два типа легких цепей, которые обозначают как лямбда (λ) и каппа (κ). Легкая цепь состоит из двух последовательно расположенных доменов: один константный домен CL и один вариабельный домен VL. Примерная длина легкой цепи составляет 211-217 аминокислот. Предпочтительно легкая цепь представляет собой легкую каппа (κ)-цепь, а константный домен CL предпочтительно выводят из легкой каппа (κ)-цепи (константный домен Сκ)
Понятия «моноклональное антитело» или «композиция моноклонального антитела» в контексте настоящего описания относится к препарату молекул антител одинакового аминокислотного состава.
«Антитела» согласно изобретению могут представлять собой антитела любого класса (например, IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, предпочтительно IgG или IgE) или подкласса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2, предпочтительно IgG1), при этом оба антитела, из которых выводят двухвалентное биспецифическое антитело, предлагаемое в изобретение, имеют Fc-область одного и того же подкласса (например, IgG1, IgG4 и т.п., предпочтительно IgG1), предпочтительно одного и того же аллотипа (например, кавказского).
Понятие «Fc-область (фрагмент) антитела» хорошо известно специалистам в данной области и ее определяют на основе расщепления антител папаином. Антитела, предлагаемые в изобретении, содержат в качестве Fc-области предпочтительно Fc-область, полученную из человеческого антитела, и предпочтительно все другие части человеческих константных областей. Fc-область антитела непосредственно участвует в активации комплемента, C1q-связывании, С3-активации и связывании Fc-рецептора. В то время как влияние антитела на систему комплемента зависит от определенных условий, связывание с C1q обусловлено определенными сайтами связывания в Fc-области. Указанные сайты связывания известны в данной области и описаны, например, у Lukas T.J. и др., J. Immunol. 127, 1981, cc.2555-2560; Brunhouse R. и Cebra J.J., Mol. Immunol. 16, 1979, cc.907-917; Burton D.R. и др., Nature 288, 1980, cc.338-344; Thommesen J.E. и др., Mol. Immunol. 37, 2000, cc.995-1004; Idusogie E.E. и др., J. Immunol. 164, 2000, cc.4178-4184; Hezareh М. и др., J. Virol. 75, 2001, cc.12161-12168; Morgan А. и др., Immunology 86, 1995, cc.319-324; и ЕР 0307434. Указанные сайты связывания представляют собой, например, L234, L235, D270, N297, Е318, K320, K322, Р331 и Р329 (нумерация дана согласно нумерации EU Кэбота, см. ниже). Антитела подклассов IgG1, IgG2 и IgG3, как правило, характеризуются способностью к активации комплемента, C1q-связыванию и С3-активации, в то время как IgG4 не активируют систему комплемента, не связываются с C1q и не активируют С3. Предпочтительно Fc-область представляет собой человеческую Fc-область.
Понятие «химерное антитело» относится к антителу, содержащему вариабельную область, т.е. связывающую область, полученную из одного источника или из одних и тех же видов, и по меньшей мере часть константной области, полученную из другого источника или других видов, и его, как правило, получают с использованием методов рекомбинантой ДНК. Предпочтительными являются химерные антитела, которые содержат мышиную вариабельную область и человеческую константную область. Другими предпочтительными формами «химерных антител», подпадающих под объем настоящего изобретения, являются антитела, константная область которых модифицирована или изменена по сравнению с исходным антителом с целью получения свойств, предлагаемых в изобретении, прежде всего касательно связывания C1q и/или связывания Fc-рецептора (FcR). Такие химерные антитела обозначают также как «антитела переключенного класса». Химерные антитела являются продуктом экспрессии генов иммуноглобулинов, содержащих сегменты ДНК, которые кодируют вариабельные области иммуноглобулинов, и сегменты ДНК, которые кодируют константные области иммуноглобулинов. Методы получения химерных антител включают обычные методы рекомбинантной ДНК и генной трансфекции, которые хорошо известны в данной области (см., например, Morrison S.L. и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 1984, cc.6851-6855; US 5202238 и US 5204244).
Понятие «гуманизированное антитело» относится к антителам, в которых каркасные или «гипервариабельные участки» (CDR) модифицированы так, что они содержат CDR иммуноглобулина другой специфичности по сравнению со специфичностью родительского иммуноглобулина. В предпочтительном варианте осуществления изобретения для получения «гуманизированного антитела» мышиный CDR трансплантируют в каркасный участок человеческого антитела (см., например, Riechmann L. и др., Nature 332, 1988, cc.323-327; и Neuberger M.S. и др., Nature 314, 1985, cc.268-270). Особенно предпочтительные CDR соответствуют CDR, которые представляют собой последовательности, распознающие антигены, указанные выше для химерных антител. Другими формами «гуманизированных антител», подпадающих под объем настоящего изобретения, являются антитела, константная область которых дополнительно модифицирована или изменена по сравнению с исходным антителом с целью получения свойств, предлагаемых в изобретении, прежде всего касательно связывания C1q и/или связывания Fc-рецептора (FcR).
Понятие «человеческое антитело» в контексте настоящего описания относится к антителам, вариабельные и константные области которых выведены из последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышей линии. Человеческие антитела хорошо известны в данной области (van Dijk M.A. и van de Winkel J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5, 2001, cc.368-374). Человеческие антитела можно получать также в трансгенных животных (например, мышах), которые в результате иммунизации могут продуцировать полный спектр или определенную часть человеческих антител при отсутствии производства эндогенного иммуноглобулина. Перенос набора генов иммуноглобулинов человеческой зародышевой линии в такую мутантную зародышевую линию мышей должен приводить к производству человеческих антител после антигенной стимуляции (см., например, Jakobovits А., и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1993, cc.2551-2555; Jakobovits А. и др., Nature 362, 1993, cc.255-258; Bruggemann M. и др., Year Immunol. 7, 1993, cc.33-40). Человеческие антитела можно получать также с помощью фаговых дисплейных библиотек (Hoogenboom H.R. и Winter, G., J. Mol. Biol. 227, 1992, cc.381-388; Marks J.D. и др., J. Mol. Biol. 222, 1991, cc.581-597). Для получения человеческих моноклональных антител можно использовать также методы Cole с соавторами и Boerner с соавторами (Cole и др., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, под ред. Alan R. Liss, 1985, с.77; и Boerner Р., и др., J. Immunol. 147, 1991, cc.86-95). Как уже было отмечено для химерных и гуманизированных антител, предлагаемых в изобретении, понятие «человеческое антитело» включает также такие антитела, константная область которых модифицирована с целью получения свойств, предлагаемых в изобретении, прежде всего касательно связывания C1q и/или связывания FcR, например, путем «переключения класса», т.е. замены или мутации Fc-областей (например, IgG1 на IgG4 и/или IgG1/IgG4-мутация).
Понятие «рекомбинантное человеческое антитело» в контексте настоящего описания относится ко всем человеческим антителам, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют с помощью методов рекомбинации, например, к антителам, выделенным из клетки-хозяина, такой как NSO- или СНО- клетка, или из животного (например, мыши), которое является трансгенным из-за присутствия человеческих генов иммуноглобулинов или антител, экспрессируемых с использованием рекомбинантного экспрессионного вектора, которым трансфектирована клетка-хозяин. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельную и константную области, которые находятся в преобразованной форме. Рекомбинантные человеческие антитела, предлагаемые в изобретении, подвергают соматической гипермутации in vivo. Таким образом, аминокислотные последовательности VH- и VL-областей рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и выведены из последовательностей VH и VL человеческой зародышевой линии и родственных им линий, могут не существовать в естественных условиях в спектре зародышевой линии человеческих антител in vivo.
Понятие «вариабельная область (домен)» (вариабельный домен легкой цепи (VL), вариабельная область тяжелой цепи (VH)) в контексте настоящего описания относится к областям каждой из пары легких и тяжелой цепей, которые участвуют непосредственно в связывании антитела с антигеном. Домены вариабельных человеческих легких и тяжелых цепей имеют одинаковую общую структуру, и каждый домен содержит четыре каркасных участка (FR), последовательности которых являются весьма консервативными, связанных тремя «гипервариабельными участками» (или определяющими комплементарность участками, CDR). Каркасные участки адоптированы к β-складчатой конформации, а CDR могут образовывать петли, соединяющие β-складчатую структуру. CDR в каждой цепи сохраняют их трехмерную структуру с помощью каркасных участков и образуют вместе с CDR из других цепей антигенсвязывающий центр. CDRS-участки тяжелой и легкой цепей антитела играют особенно важную роль в специфичности связывания/аффинности антител, предлагаемых в изобретении, и поэтому являются дополнительным объектом изобретения.
Понятия «гипервариабельный участок» или «антигенсвязывающий центр антитела» в контексте настоящего описания относятся к аминокислотным остаткам антитела, которые ответственны за связывания антигена. Гипервариабельный участок содержит аминокислотные остатки из «определяющих комплементарность участков» или «CDR». «Каркасные» или «РК»-участки представляют собой участки вариабельной области, отличные от указанных в настоящем описании остатков гипервариабельного участка. Таким образом, легкие и тяжелые цепи антитела содержат в направлении от N- к С-концу участки FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. CDR каждой цепи разделены аминокислотами указанного каркасного участка. В частности, CDR3 тяжелой цепи представляют собой участок, который вносит наибольший вклад в связывание с антигеном. CDR- и FR-участки определяют с помощью стандартной номенклатуры Кэбота (Kabat и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-изд., изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).
«Константные области (домены)» тяжелой цепи и легкой цепи не принимают непосредственного участия в связывании антитела с антигеном, но обладают различными эффекторными функциями. В зависимости от аминокислотной последовательности константной области их тяжелых цепей антитела или иммуноглобулины подразделяют на указанные выше классы.
Понятие «двухвалентное биспецифическое антитело» в контексте настоящего описания относится к антителу, как оно описано выше, в котором каждая из двух пар, включающая тяжелую цепь и легкую цепь (HC/LC), специфически связывается с различным антигеном, т.е. первая тяжелая и первая легкая цепь (полученные из антитела к первому антигену) специфически связываются обе с первым антигеном, а вторая тяжелая и вторая легкая цепь (полученные из антитела ко второму антигену) специфически связываются обе со вторым антигеном (как показано на фиг.2); указанные двухвалентные биспецифические антитела обладают способностью специфически связываться одновременно с двумя различными антигенами и не более чем с двумя антигенами, в отличие, во-первых, от моноспецифического антитела, которое обладает способностью связываться только с одним антигеном, и, во-вторых, от четырехвалентного тетраспецифического антитела, которое обладает способностью связываться одновременно с четырьмя молекулами антигенов.
Согласно изобретению соотношение между требуемым двухвалентным биспецифическим антителом и нежелательными побочными продуктами можно улучшать путем замены некоторых доменов только в одной паре, включающей тяжелую цепь и легкую цепь (HC/LC). Хотя первая из двух HC/LC-пар, полученная из антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, остается практически не измененной, вторую из двух HC/LC-пар, полученную из антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, изменяют с помощью следующей замены:
легкая цепь: замена вариабельного домена VL легкой цепи на вариабельный домен VH тяжелой цепи указанного антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, и
тяжелая цепь: замена вариабельного домена VH тяжелой цепи на вариабельный домен VL легкой цепи указанного антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном.
Таким образом, образовавшиеся двухвалентные биспецифические антитела представляют собой искусственные антитела, которые содержат
а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и
б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном,
где указанная легкая цепь (антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном) содержит вариабельный домен VH вместо VL, и где указанная тяжелая цепь (антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном) содержит вариабельный домен VL вместо VH.
Согласно еще одному объекту изобретения указанное улучшенное соотношение между требуемым двухвалентным биспецифическим антителом и нежелательными побочными продуктами можно дополнительно улучшать с помощью одного из указанных ниже двух альтернативных подходов:
А) Первый альтернативный подход (см. фиг.3):
СН3-домены указанного двухвалентного биспецифического антитела, предлагаемого в изобретении, можно изменять с помощью технологии «knob-into-holes», которая описана подробно на нескольких примерах, например, в WO 96/027011, Ridgway J.B. и др., Protein Eng 9, 1996, cc.617-621; и у Merchant A.M. и др., Nat Biotechnol 16, 1998, cc.677-681. При использовании этого метода взаимодействующие поверхности двух СН3-доменов изменяют с целью повышения гетеродимеризации обеих тяжелых цепей, содержащих эти два СН3-домена. Каждый из двух СН3-доменов (двух тяжелых цепей) может представлять собой «выступ», а другой представлять собой «впадину». Введение дисульфидного мостика стабилизирует гетеродимеры (Merchant A.M, и др., Nature Biotech 16, 1998, cc.677-681; Atwell S., Ridgway J.B., Wells J.A, Carter P., J Mol Biol 270, 1997, cc.26-35) и повышает выход продукта.
Таким образом, согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения СН3-домены двухвалентного биспецифического антитела, в котором первый СН3-домен и второй СН3-домен каждый соприкасается друг с другом на поверхности раздела, которая представляет собой исходную поверхность раздела между СН3-доменами антитела, изменяют с помощью технологии «knob-into-holes», включая дополнительную стабилизацию путем интродукции дисульфидного мостика в СН3-домены (как описано в WO 96/027011, Ridgway J.B. и др., Protein Eng 9, 1996, cc.617-621; Merchant A.M и др., Nature Biotech 16, 1998, cc.677-681; и Atwell S, Ridgway J.B., Wells J.A., Carter P., J Mol Biol 270, 1997, cc.26-35) для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела.
Таким образом, согласно одному из объектов изобретения двухвалентное биспецифическое антитело отличается тем, что СН3-домен одной тяжелой цепи и СН3-домен другой тяжелой цепи каждый соприкасается друг с другом на поверхности раздела, которая представляет собой исходную поверхность раздела между СН3-доменами антитела; при этом поверхность раздела изменяют для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела, где изменение отличается тем, что:
а) изменяют СН3-домен одной тяжелой цепи так, что на исходной поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела СН3-домена второй тяжелой цепи в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, создавая тем самым выпуклость на поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость на поверхности раздела СН3-домена другой тяжелой цепи, и
б) изменяют СН3-домен другой тяжелой цепи так, что на исходной поверхности раздела второго СН3-домена, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела первого СН3-домена в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, создавая тем самым полость на поверхности раздела второго СН3-домена, в которую может помещаться выпуклость на поверхности раздела первого СН3-домена.
Предпочтительно указанный аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, выбирают из группы, включающей аргинин (R), фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W).
Предпочтительно указанный аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, выбирают из группы, включающей аланин (А), серин (S), треонин (Т), валин (V).
Согласно одному из объектов изобретения оба СН3-домена дополнительно изменяют путем интродукции цистеина (С) в качестве аминокислоты в соответствующих положениях каждого СН3-домена так, чтобы мог образоваться дисульфидный мостик между обоими СН3-доменами.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения оба СН3-домена изменяют, используя остатки R409D; K370E (K409D) в качестве образующих «выступ» остатков и D399K; E357K в качестве образующих «впадину» остатков, как описано, например, в ЕР 1870459А1.
Или
Б) Второй альтернативный подход (см. фиг.4):
Этот подход предусматривает замену СН3-домена константной области одной тяжелой цепи на СН1-домен константной области тяжелой цепи; и замену СН3-домена константной области другой тяжелой цепи на CL-домен константной области легкой цепи. СН1-домен константной области тяжелой цепи, на который заменяют СН3-домен тяжелой цепи, может представлять собой домен любого Ig-класса (например, IgA, IgD, IgE, IgG и IgM) или подкласса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2).
CL-домен константной области легкой цепи, на который заменяют СН3-домен тяжелой цепи, может быть лямбда- (λ) или каппа- (κ) типа, предпочтительно каппа- (κ) типа.
Таким образом, одним из предпочтительных вариантов осуществления изобретения является двухвалентное биспецифическое антитело, которое содержит:
а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и
б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга,
и необязательно
в) СН3-домен одной тяжелой цепи и СН3-домен другой тяжелой цепи, каждый из которых соприкасается друг с другом на поверхности раздела, которая представляет собой исходную поверхность раздела между СН3-доменами антитела;
при этом поверхность раздела изменяют для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела, где изменение отличается тем, что:
ва) изменяют СН3-домен одной тяжелой цепи так, что на исходной поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела СН3-домена второй тяжелой цепи в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, создавая тем самым выпуклость на поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость на поверхности раздела СН3-домена другой тяжелой цепи,
и
вб) изменяют СН3-домен другой тяжелой цепи
так, что на исходной поверхности раздела второго СН3-домена, которая соприкасается с исходной поверхностью раздела первого СН3-домена в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, создавая тем самым полость на поверхности раздела второго СН3-домена, в которую может помещаться выпуклость на поверхности раздела первого СН3-домена;
или
г) СН3-домен константной области одной тяжелой цепи заменяют на СН1-домен константной области тяжелой цепи; и СН3-домен константной области другой тяжелой цепи заменяют на CL-домен константной области легкой цепи.
Понятия «антиген» или «молекула антигена» в контексте настоящего описания применяют взаимозаменяемо, и они относятся ко всем молекулам, которые могут специфически связываться антителом. Двухвалентное биспецифическое антитело специфически связывается с первым антигеном и вторым отличным от первого антигеном. Понятие «антигены» в контексте настоящего описания включают, например, белки, различные эпитопы белков (в качестве различных антигенов согласно изобретению) и полисахариды. Они главным образом включают части (покрытия, капсулы, клеточные оболочки, жгутики, фимбрии и токсины) бактерий, вирусов и других микроорганизмов. Липиды и нуклеиновые кислоты являются антигенами только при их объединении с белками и полисахаридами. Не относящиеся к микробам экзогенные (чужеродные) антигены могут включать пыльцу, белок яиц и белки из трансплантированных тканей или органов или антигены, находящиеся на поверхности трансфузируемых кровяных клеток. Предпочтительно антиген выбирают из группы, включающей цитокины, белки клеточной поверхности, ферменты и рецепторы цитокинов, белков клеточной поверхности, ферментов и другие рецепторы.
Опухолевые антигены представляют собой антигены, которые презентуются молекулами ГКГ I или ГКГ II на поверхности опухолевых клеток. Иногда эти антигены презентуются опухолевыми клетками и никогда здоровыми клетками. В этом случае их называют специфическими для опухоли антигенами (TSA), и они, как правило, являются результатом специфической для опухоли мутации. Более распространенными являются антигены, которые презентуются опухолевыми клетками и здоровыми клетками, и их называют ассоциированными с опухолью антигенами (ТАА). Цитотоксические Т-лимфоциты, которые распознают эти антигены, могут обладать способностью разрушать опухолевые клетки до их пролиферации или метастазирования. Опухолевые антигены могут находиться также на поверхности опухоли в форме, измененного в результате мутации рецептора, в этом случае они должны распознаваться В-клетками.
В одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретения по меньшей мере один из двух различных антигенов (первый и второй антиген), с которым двухвалентное биспецифическое антитело специфически связывается, представляет собой опухолевый антиген.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения оба различных антигена (первый и второй антиген), с которыми двухвалентное биспецифическое антитело специфически связывается, представляют собой опухолевые антигены; в этом случае первый и второй антиген могут представлять собой также два различных эпитопа одного и того же специфического для опухоли белка.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения по меньшей мере один из двух различных антигенов (первый и второй антиген), с которым двухвалентное биспецифическое антитело специфически связывается, представляет собой опухолевый антиген, а другой представляет собой антиген эффекторной клетки, такой, например, как Т-клеточный рецептор, CD3, CD16 и т.п.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения по меньшей мере один из двух различных антигенов (первый и второй антиген), с которым двухвалентное биспецифическое антитело специфически связывается, представляет собой опухолевый антиген, а другой представляет собой противораковую субстанцию, такую как токсин или ингибитор киназы.
В контексте настоящего описания понятие «специфически связывается» или «связывается специфически с» относится к антителу, специфически связывающемуся с антигеном. Предпочтительно аффинность к связыванию антитела, специфически связывающегося с указанным антигеном, характеризуется значением KD 10-9 молей/л или ниже (например, 10-10 молей/л), предпочтительно значением KD 10-10 молей/л или ниже (например, 10-12 молей/л). Аффинность к связыванию определяют с помощью стандартного анализа связывания, такого как поверхностный плазменный резонанс (Biacore®).
Понятие «эпитоп» включает любую полипептидную детерминанту, обладающую способностью специфически связываться с антителом. В некоторых вариантах осуществления изобретения эпитопная детерминанта включает химически активные поверхностные группы молекул, такие как аминокислоты, боковые цепи Сахаров, фосфорил или сульфонил, и в некоторых вариантах осуществления изобретения могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики и/или специфические характеристики заряда. Эпитоп представляет собой область антигена, которая связывается антителом. В некоторых вариантах осуществления изобретения считается, что антитело специфически связывается с антигеном, когда оно преимущественно распознает его антиген-мишень в сложной смеси белков и/или макромолекул.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является способ получения двухвалентного биспецифического антитела, предлагаемого в изобретении, заключающийся в том, что
а) трансформируют клетку-хозяина
- векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном,
- векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга;
б) культивируют клетку-хозяина в условиях, которые позволяют синтезировать указанную молекулу антитела; и
в) выделяют молекулу антитела из культуры.
В целом, применяют два вектора, кодирующих легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, и еще два вектора, кодирующих легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном. Один из двух векторов кодирует соответствующую легкую цепь, а другой из двух векторов кодирует соответствующую тяжелую цепь. Однако в альтернативном варианте способа получения двухвалентного биспецифического антитела, предлагаемого в изобретении, можно применять для трансформации клетки-хозяина только один первый вектор, кодирующий легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном, и только один второй вектор, кодирующий легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном.
Изобретение относится также к способу получения антител, заключающемуся в том, что культивируют соответствующие клетки-хозяева в условиях, которые позволяют синтезировать молекулы антител, и выделяют антитела из культуры, например, предусматривающему экспрессию
- первой нуклеотидной последовательности, которая кодирует легкую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном,
- второй нуклеотидной последовательности, которая кодирует тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном,
- третьей нуклеотидной последовательности, которая кодирует легкую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельный домен VL легкой цепи заменен на вариабельный домен VH тяжелой цепи, и
- четвертой нуклеотидной последовательности, которая кодирует тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельный домен VH тяжелой цепи заменен на вариабельный домен VL легкой цепи.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является клетка-хозяин, содержащая
- векторы, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном,
- векторы, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является клетка-хозяин, которая содержит
а) вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует легкую цепь, и вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном,
б) вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует легкую цепь, и вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует тяжелую цепь, антитела специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является композиция, предпочтительно фармацевтическая или диагностическая композиция двухвалентного биспецифического антитела, предлагаемого в изобретении.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая двухвалентное биспецифическое антитело, предлагаемое в изобретении, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является способ лечения пациента, который нуждается в терапии, отличающийся тем, что вводят пациенту в терапевтически эффективном количестве двухвалентное биспецифическое антитело, предлагаемое в изобретении.
Понятие «нуклеиновая кислота или молекула нуклеиновой кислоты» в контексте настоящего описания относится к молекулам ДНК и молекулам РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной, но предпочтительно представляет собой двухцепочечную ДНК.
В контексте настоящего описания понятия «клетка», «клеточная линия» и «клеточная культура» используются взаимозаменяемо, и все такие определения включают потомство. Так, понятия «трансформанты» и «трансформированные клетки» относятся к первичной рассматриваемой клетке и полученным из нее культурам безотносительно к количеству переносов. Следует понимать также, что все потомство может не быть полностью идентичным по составу ДНК из-за преднамеренных или случайных мутаций. Под объем изобретения подпадает вариант потомства, имеющего такую же функцию или биологическую активность, которая обнаружена у исходной трансформированной клетки. Если используются другие определения, то это будет очевидно из контекста.
Понятие «трансформация» в контексте настоящего описания относится к процессу переноса вектора/нуклеиновой кислоты в клетку-хозяина. Если в качестве клеток-хозяев применяют клетки без труднопреодолимых барьеров клеточных оболочек, то трансфекцию осуществляют, например, с помощью метода осаждения фосфатом кальция, который описан у Graham и Van der Eh, Virology 52, 1978, сс.546 и далее. Однако можно применять также другие методы интродукции ДНК в клетки, такие как инъекция ядер или слияние протопластов. Если применяют прокариотические клетки или клетки, которые содержат выраженные конструкции клеточных оболочек, можно применять, например, метод трансфекции, основанной на обработке кальцием, с использованием хлорида кальция, который описан у Cohen F. N, и др., PNAS. 69, 1972, сс.7110 и далее.
Рекомбинантное получение антител с помощью трансформации хорошо известно в данной области и описано, например, в обзорных статьях Makrides S.C., Protein Expr. Purif. 17, 1999, сс.183-202; Geisse S. и др., Protein Expr. Purif. 8, 1996, сс.271-282; Kaufman R.J., Mol. Biotechnol. 16, 2000, сс.151-161; Werner R.G. и др., Arzneimittelforschung 48, 1998, сс.870-880, а также в US 6331415 и US 4816567.
В контексте настоящего описания понятие «экспрессия» относится к процессу, при котором нуклеиновая кислота транскрибируется в мРНК, и/или к процессу, при котором транскрибируемая мРНК (которую обозначают также как транскрипт) затем может транслироваться в пептиды, полипептиды или белки. И транскрипты, и кодируемые полипептиды обозначают в целом как генный продукт. Если полинуклеотид выводят из геномной ДНК, то экспрессия в эукариотической клетке может включать сплайсинг мРНК.
«Вектор» представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, в частности самореплицирующуюся, которая переносит встроенную молекулу нуклеиновой кислоты в клетки-хозяева и/или между клетками-хозяевами. Понятие включает векторы, функция которых прежде всего состоит во встраивании ДНК или РНК в клетку (например, хромосомная интеграция), в репликационные векторы, функция которых прежде всего состоит в репликации ДНК или РНК, и в экспрессионные векторы, функция которых прежде всего состоит в транскрипции и/или трансляции ДНК или РНК. Под понятие подпадают также векторы, которые обладают несколькими указанными функциями.
«Экспрессионный вектор» представляет собой полинуклеотид, который при интродукции в соответствующую клетку-хозяина может транскрибироваться и транслироваться в полипептид. Понятие «экспрессионная система», как правило, относится к приемлемой клетке-хозяину, содержащей экспрессионный вектор, функцией которой может быть выход требуемого продукта экспрессии.
Двухвалентные биспецифические антитела, предлагаемые в изобретении, предпочтительно получают методами рекомбинации. Указанные методы хорошо известны в данной области и предусматривают экспрессию белка в прокариотических и эукариотических клетках с последующим выделением полипептида антитела и, как правило, очисткой до фармацевтически приемлемой чистоты. Для экспрессии белка нуклеиновые кислоты, кодирующие легкие и тяжелые цепи или их фрагменты, встраивают в экспрессионные векторы с помощью стандартных методов. Экспрессию осуществляют в приемлемых прокариотических или эукариотических клетках-хозяевах типа СНО-клеток, NS0-клеток, SP2/0-клеток, HEK293-клеток, COS-клеток, дрожжей или клеток E.coli, и антитело выделяют из клеток (из супернатанта или клеток после лизиса). Двухвалентные биспецифические антитела могут присутствовать в целых клетках, в клеточном лизате или в частично очищенной или практически очищенной форме. Очистку осуществляют для удаления других клеточных компонентов или других загрязнителей, например, других клеточных нуклеиновых кислот или белков, стандартными методами, которые включают обработку щелочью/ДСН, хроматографию на колонках и другие методы, хорошо известные в данной области (см. в Current Protocols in Molecular Biology, под ред. Ausubel F., и др., изд-во Greene Publishing and Wiley Interscience, New York, 1987).
Экспрессия в NSO-клетках описана, например, у Barnes L.M. и др., Cytotechnology 32, 2000, cc.109-123; и Barnes L.M. и др., Biotech. Bioeng. 73, 2001, cc.261-270. Кратковременная экспрессия описана, например, у Durocher Y. и др., Nucl. Acids. Res. 30, 2002, с. Е9. Клонирование вариабельных областей описано у Orlandi R. и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 1989, cc.3833-3837; Carter P. и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 1992, cc.4285-4289; и Norderhaug L. и др., J. Immunol. Methods 204, 1997, cc.77-87. Предпочтительная система кратковременной экспрессии (HEK 293) описана у Schlaeger E.-J. и Christensen K., в Cytotechnology 30, 1999, cc.71-83 и у Schlaeger E.-J. в J. Immunol. Methods 194, 1996, cc.191-199.
Контролирующие последовательности, которые можно применять для прокариот, представляют собой, например, промотор, необязательно последовательность оператора и сайт связывания рибосом. Известно, что эукариотические клетки могут использовать промоторы, энхансеры и сигналы полиаденилирования.
Нуклеиновая кислота «функционально связана», когда она помещена под функциональный контроль другой нуклеотидной последовательности. Например, ДНК предпоследовательности или лидера секреции функционально связана с ДНК, кодирующей полипептид, если она экспрессируется в виде предбелка, который участвует в секреции полипептида; промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью, если он оказывает воздействие на транскрипцию последовательности; или сайт связывания рибосом функционально связан с кодирующей последовательностью, если он помещен так, чтобы он облегчал трансляцию. Как правило, «функционально связаны» означает, что последовательности ДНК, будучи связаны, являются смежными, а в случае лидера секреции, смежными в рамке считывания. Однако не требуется, чтобы энхансеры были смежными. Связывание осуществляют путем лигирования в пригодных сайтах рестрикции. Если такие сайты не существуют, то согласно общепринятой практике используют синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры.
Двухвалентные биспецифические антитела можно отделять от культуральной среды с помощью общепринятых методов очисти иммуноглобулинов, таких, например, как хроматография на протеин А-сефарозе, хроматография на гидроксилапатите, гель-электрофорез, диализ или аффинная хроматография. ДНК или РНК, которые кодируют моноклональные антитела, легко выделять и секвенировать с помощью общепринятых методов. Источником таких ДНК и РНК могут служить клетки гибридом. После выделения ДНК можно встраивать в экспрессионные векторы, которыми затем трансфектируют клетки-хозяева, такие как клетки HEK 293, СНО-клетки или клетки миеломы, которые иначе не могут продуцировать белок иммуноглобулина, для синтеза рекомбинантных моноклональных антител в клетках-хозяевах.
Варианты аминокислотной последовательности (или мутанты) двухвалентного биспецифического антитела получают путем интродукции соответствующих нуклеотидных замен в ДНК антитела или путем синтеза нуклеотидов. Однако такие модификации можно осуществлять только в очень ограниченном диапазоне, например, как описано выше. Например, модификации не должны изменять вышеуказанные характеристики антитела, такие как изотип IgG и связывание с антигеном, но могут повышать выход продукта рекомбинации, стабильность белка или облегчать очистку.
Следующие примеры, перечень последовательностей и чертежи даны с целью лучшего понимания настоящего изобретения, полный объем которого представлен в приведенной ниже формуле изобретения. Очевидно, что могут быть сделаны модификации в изложенных процедурах без отклонения от сути изобретения.
Перечень последовательностей
SEQ ID NO:1 аминокислотная последовательность тяжелой цепи антитела <IGF-1R> дикого типа.
SEO ID NO:2 аминокислотная последовательность легкой цепи антитела <IGF-1R> дикого типа.
SEQ ID NO:3 аминокислотная последовательность тяжелой цепи *** (НС***) антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, в котором VH-домен тяжелой цепи заменен на VL-домен легкой цепи - вариант А.
SEQ ID NO:4 аминокислотная последовательность легкой цепи *** (LC***) антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, в котором VL-домен легкой цепи заменен на VH-домен тяжелой цепи - вариант А.
SEQ ID NO:5 аминокислотная последовательность эктодомена (ECD) IGF-1R, несущего метку, которая представляет собой His-стрептавидин-связывающий пептид (ECD IGF-1R-His-SBP).
SEQ ID NO:6 аминокислотная последовательность тяжелой цепи антитела к ангиопоэтину-2 <ANGPT2> дикого типа.
SEQ ID NO:7 аминокислотная последовательность легкой цепи антитела к ангиопоэтину-2 <ANGPT2> дикого типа.
SEQ ID NO:8 аминокислотная последовательность СН3-домена («выступы») с заменой T366W для применения в технологии «knobs-into-holes».
SEQ ID NO:9 аминокислотная последовательность СН3-домена («впадина») с заменой T366S, L368A, Y407V для применения в технологии «knobs-into-holes».
SEQ ID NO:10 аминокислотная последовательность тяжелой цепи *** (НС***) антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, в котором VH- домен тяжелой цепи заменен на VL-домен легкой цепи - вариант Б.
SEQ ID NO:11 аминокислотная последовательность легкой цепи *** (LC***) антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, в котором VL- домен легкой цепи заменена на VH- домен тяжелой цепи - вариант Б.
SEQ ID NO:12 аминокислотная последовательность эктодомена IGF-1R, несущего метку, которая представляет собой His-стрептавидин-связывающий пептид (ECD IGF-1R-His-SBP).
Описание чертежей
На чертежах показано:
на фиг.1 - схематическое изображение встречающегося в естественных условиях полного антитела типа IgG, специфического в отношении одного антигена, с двумя парами тяжелых и легких цепей, каждая из которых содержит расположенные в общепринятом порядке вариабельные и константные домены;
на фиг.2 - схематическое изображение двухвалентного биспецифического антитела, содержащего: а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается с первым антигеном; и б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга;
на фиг.3 - схематическое изображение двухвалентного биспецифического антитела, содержащего: а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается с первым антигеном; и б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга и в котором СН3-домены обеих тяжелых цепей изменены с помощью технологии «knobs-into-holes»;
на фиг.4 - схематическое изображение двухвалентного биспецифического антитела, содержащего: а) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается с первым антигеном; и б) легкую цепь и тяжелую цепь антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга и в котором один из СН3-доменов константной области обеих тяжелых цепей заменен на СН1-домен константной области тяжелой цепи; а другой СН3-домен константной области тяжелой цепи заменен на CL-домен константной области легкой цепи;
на фиг.5 - схематическое изображение белковой последовательности тяжелой цепи ***<IGF-1R> НС*** антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH;
на фиг.6 - схематическое изображение белковой последовательности легкой цепи *** <IGF-1R> LC*** антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH (с CL-доменом константной области легкой каппа-цепи);
на фиг.7 - плазмидная карта экспрессионного вектора pUC-HC***-IGF-1R тяжелой цепи *** <IGF-1R> НС***;
на фиг.8 - плазмидная карта экспрессионного вектора pUC-LC***-IGF-1R легкой цепи *** <IGF-1R> LC***;
на фиг.9 - плазмидная карта экспрессионного вектора 4700-Hyg-OriP;
на фиг.10 - принцип осуществления клеточного FACS-анализа, позволяющего выявлять образование мостиковой связи типа IGF-1R-ANGPT2 с использованием клеток линии I24, экспрессирующих IGF-1R, с целью выявления присутствия функционального биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH;
на фиг.11 - схематическое изображение принципа осуществления Biacore-анализа с использованием ECD IGF-1R;
на фиг.12 - результаты, полученные с помощью ДСН-ПААГ и гель фильтрации, для очищенного моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH (IgG1*), у которого НС* и LC* выделены из супернатантов клеточных культур после кратковременной трансфекции клеток линии HEK293-F;
на фиг.13 - данные о связывании моноспецифического антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, и антитела дикого типа <IGF-1R> с ECD IGF-1R, полученные на основе оценки связывания с помощью ELISA;
на фиг.14 - результаты, полученные с помощью ДСН-ПААГ, для смеси, которая содержит антитело <ANGPT2-IGF-1R>, несущее замену VL-VH, очищенной из супернатантов клеточных культур после кратковременной трансфекции клеток линии HEK293-F;
на фиг.15 - результаты, полученные для образцов А-Е, с помощью FACS-анализа, позволяющего выявлять образование мостиковой связи типа IGF-1R-ANGPT2 с использованием клеток линии I24, экспрессирующих IGF-1R, с целью выявления присутствия функционального биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH, в очищенной смеси антител.
Очищенные белки образцов А-Е:
А = клетки линии I24, необработанные,
Б = I24+2 мкг/мл hANGPT2 + изотип hIgG,
Г = I24+2 мкг/мл hANGPT2 + смесь, полученная в результате совместной экспрессии антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, и антитела <ANGPT2> дикого типа, содержащая биспецифическое антитело <ANGPT2-IGF-1R>, несущее замену VL-VH,
Д = I24+2 мкг/мл hANGPT2 + антитело <ANGPT2> дикого типа,
Е = I24+2 мкг/мл hANGPT2 + антитело <IGF-1R> дикого типа.
Примеры
Материалы и общие методы
Общая информация, касающаяся нуклеотидных последовательностей легких и тяжелых цепей человеческого иммуноглобулина, представлена у: Kabat Е.А. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-ое изд., изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991. Аминокислоты цепей антител пронумерованы согласно нумерации EU (Edelman G.M. и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63, 1969, ее. 78-85; Kabat Е.А. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-ое изд., изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991).
Методы рекомбинантной ДНК
Для манипуляций с ДНК использовали стандартные методы, описанные у Sambrook J. и др., Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989. Реагенты для молекулярной биологии использовали согласно инструкциям производителей.
Синтез генов
Требуемые сегменты генов получали из олигонуклеотидов, созданных путем химического синтеза. Генные сегменты длиной 600-1800 т.п.н., которые фланкированы уникальными сайтами рестрикции, собирали путем отжига и лигирования олигонуклеотидов, включая ПЦР-амплификацию и последующее клонирование через указанные сайты рестрикции, например, KpnI/SacI или AscI/PacI в клонирующем векторе pGA4, основой которого является плазмида pPCRScript (фирма Stratagene). Последовательности ДНК субклонированных генных фрагментов подтверждали путем секвенирования ДНК. Синтез генных фрагментов осуществляли в порядке, представленном в спецификации фирмы Geneart (Регенсбург, Германия).
Определение последовательностей ДНК
Последовательности ДНК определяли путем секвенирования двух цепей на фирме MediGenomix GmbH (Мартинсрид, Германия) или фирме Sequiserve GmbH (Фатерштеттен, Германия).
Анализ последовательностей ДНК и белков и обработка данных о последовательностях
Применяли пакет программ фирмы GCG (Genetics Computer Group, Мэдисон, шт.Висконсин), версия 10.2 и Infomax's Vector NT1 Advance suite, версия 8.0 для создания, картирования, анализа, аннотирования и иллюстрации последовательностей.
Экспрессионные векторы
Для экспрессии описанных антител применяли варианты экспрессионных плазмид, предназначенных для кратковременной экспрессии (например, в клетках HEK293 EBNA или HEK293-F), либо на основе кДНК-конструкции с использованием промотора CMV-интрона А, либо на основе геномной конструкции с использованием промотора CMV.
Помимо кассеты экспрессии антитела векторы содержали:
- сайт инициации репликации, обеспечивающий репликацию указанной плазмиды в Е.coli, и
- ген β-лактамазы, который придает устойчивость в Е.coli к ампициллину.
Транскрипционная единица гена антитела состояла из следующих элементов:
- уникальный(ые) сайт(ы) рестрикции на 5'-конце,
- немедленно-ранний энхансер и промотор из человеческого цитомегаловируса,
- расположенная за ним последовательность интрона А в случае экспрессии на основе кДНК-конструкции,
- 5'-нетранслируемая область гена человеческого антитела,
- сигнальная последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина,
- цепь человеческого антитела (дикого типа или с заменой доменов) либо в виде кДНК-конструкции, либо в виде геномной конструкции с экзон-интронной конструкцией иммуноглобулина,
- 3'-нетранслируемая область с сигнальной последовательностью полиаденилирования и
- уникальный(ые) сайт(ы) рестрикции на 3'-конце.
Слияние генов, содержащих описанные цепи антитела, как указано ниже, осуществляли с помощью ПЦР и/или синтеза и сборки генов с использованием известных методов и процедур рекомбинации путем соединения соответствующих сегментов нуклеиновых кислот, например, с использованием уникальных сайтов рестрикции в соответствующих векторах. Субклонированные нуклеотидные последовательности подтверждали секвенированием ДНК. Для кратковременных трансфекций создавали большие количества плазмид посредством получения плазмид из трансформированных культур Е.coli (набор Nucleobond AX, фирма Macherey-Nagel).
Методики культивирования клеток
Применяли стандартные методики культивирования клеток, описанные в Current Protocols in Cell Biology, под ред. Bonifacino J.S., Dasso M., Harford J.B., Lippincott-Schwartz J. и Yamada K.M., изд-во John Wiley & Sons, Inc., 2000. Биспецифические антитела экспрессировали путем кратковременной котрансфекции соответствующими экспрессионными плазмидами выращенных в виде прикрепленных культур клеток HEK293-EBNA или выращенных в виде суспензионных культур клеток HEK29-F, как будет описано ниже.
Кратковременные трансфекции в системе HEK293-EBNA
Биспецифические антитела экспрессировали путем кратковременной котрансфекции соответствующими экспрессионными плазмидами (например, кодирующими тяжелую цепь и модифицированную тяжелую цепь, а также соответствующую легкую цепь и модифицированную легкую цепь) выращенных в виде прикрепленных культур клеток HEK293-EBNA (линия клеток почки человеческого эмбриона 293, экспрессирующая ядерный антиген вируса Эпштейна-Барра; Американская коллекция типовых культур, депонирована под номером АТСС № CRL-10852, партия 959 218), которые культивировали в среде DMEM (модифицированная по методу Дульбекко среда Игла, фирма Gibco), дополненной 10% FCS (фетальная телячья сыворотка, фирма Gibco) с ультра низким содержанием IgG (Ultra Low IgG FCS), 2 мМ L-глутамином (фирма Gibco) и 250 мкг/мл генетицина (фирма Gibco). Для трансфекции применяли реагент для трансфекции типа FuGENE™ 6 (фирма Roche Molecular Biochemicals), используя соотношение реагента FuGENE™ (мкл) и ДНК (мкг) 4:1 (диапазон от 3:1 до 6:1). Белки экспрессировали, применяя соответствующие плазмиды, с использованием молярного соотношения плазмид, кодирующих (модифицированные и дикого типа) легкую цепь и тяжелую цепь, 1:1 (эквимолярное соотношение), в диапазоне от 1:2 до 2:1 соответственно. Клетки подпитывали в день 3 L-глутамином до концентрации 4 мМ, глюкозой (фирма Sigma) и NAA (амид никотиновой кислоты) (фирма Gibco). Собирали супернатанты клеточных культур, содержащие биспецифическое антитело, в дни с 5 по 11 после трансфекции путем центрифугирования и хранили при -20°С. Общую информацию, касающуюся рекомбинантной экспрессии человеческих иммуноглобулинов, например, в HEK293-клетках, см. у Meissner P. и др., Biotechnol. Bioeng. 75, 2001, cc.197-203.
Кратковременные трансфекции в системе HEK293-F
Биспецифические антитела получали путем кратковременной трансфекции соответствующими плазмидами (например, кодирующими тяжелую цепь и модифицированную тяжелую цепь, а также соответствующую легкую цепь и модифицированную легкую цепь), используя систему HEK293-F (фирма Invitrogen) согласно инструкции производителя. В целом, метод состоял в следующем: HEK293-F-клетки (фирма Invitrogen), выращенные в виде суспензионной культуры либо во встряхиваемой колбе, либо в ферментере с мешалкой в бессывороточной среде для экспрессии типа FreeStyle 293 (фирма Invitrogen), трансфектировали смесью четырех экспрессионных плазмид и 293-фектином или фектином (фирма Invitrogen). В 2-литровую встряхиваемую колбу (фирма Corning) высевали клетки HEK293-F с плотностью 1,0×106 клеток/мл в 600 мл и инкубировали при 120 об/мин, 8% СО2. Через 1 день клетки трансфектировали при плотности клеток примерно 1,5×106 клеток/мл с помощью примерно 42 мл смеси А), содержащей 20 мл Opti-MEM (фирма Invitrogen) с 600 мкг общей плазмидной ДНК (1 мкг/мл), которая кодирует тяжелую цепь или модифицированную тяжелую цепь соответственно и соответствующую легкую цепь, в эквимолярном соотношении, и смеси Б), содержащей 20 мл Opti-MEM+1,2 мл 293-фектина или фектина (2 мкл/мл). В зависимости от поглощения глюкозы в процессе ферментации добавляли раствор глюкозы. Через 5-10 дней собирали супернатант, содержащий секретированное антитело, и либо из супернатанта непосредственно очищали антитела, либо супернатант замораживали и хранили.
Определение белка
Концентрацию белков очищенных антител и их производных определяли на основе оптической плотности (ОП) при 280 нм, используя коэффициент молярной экстинкции, рассчитанный на основе аминокислотной последовательности согласно методу, который описан у Расе и др., Protein Science, 1995, 4, cc.2411-1423.
Определение концентрации антител в супернатантах
Концентрацию антител и их производных в супернатантах клеточных культур определяли путем иммунопреципитации с белок А-агарозными гранулами (фирма Roche). 60 мкл белок А-агарозных гранул отмывали трижды в TBS-NP40 (50 мМ Трис, рН 7,5, 150 мМ NaCl, 1% Nonidet-P40). Затем 1-15 мл супернатанта клеточной культуры наносили на белок А-агарозные гранулы, предварительно уравновешенные в TBS-NP40. После инкубации в течение 1 ч при комнатной температуре гранулы отмывали на фильтрующей колонке типа Ultrafree-MC (фирма Amicon), используя однократно 0,5 мл TBS-NP40, дважды 0,5 мл двукратного (2×) забуференного фосфатом физиологического раствора (2×ЗФР, фирма Roche) и быстро четыре раза 0,5 мл 100 мМ Na-цитратным буфером, рН 5,0. Связанное антитело элюировали, добавляя 35 мкл буфера для образцов NuPAGE® LDS (фирма Invitrogen). Половину образца объединяли с восстановителем для образцов NuPAGE® или оставляли в невосстановленной форме соответственно и выдерживали в течение 10 мин при 70°С. Затем по 5-30 мкл применяли для осуществления ДСН-ПААГ с использованием 4-12% бис-Трис-гелей NuPAGE® (фирма Invitrogen) (применяя буфер MOPS для осуществлении ДСН-ПААГ в невосстанавливающих условиях и буфер MES в виде подвижного буфера с антиоксидантной добавкой NuPAGE® (фирма Invitrogen) для осуществлении ДСН-ПААГ в восстанавливающих условиях) и окрашивали кумасси бриллиантовым голубым.
Концентрацию антител и их производных в супернатантах клеточных культур оценивали количественно с помощью аффинной ЖХВР-хроматографии. В целом, метод состоял в следующем: супернатанты, содержащие антитела и их производные, которые связывались с белком А, вносили на колонку Applied Biosystems Poros А/20 в 200 мМ KH2PO4, 100 мМ натрий-цитратный буфер, рН 7,4 и элюировали из матрикса с помощью 200 мМ NaCl, 100 мМ лимонной кислоты, рН 2,5 с использованием системы Agilent HPLC 1100. Элюированный белок оценивали количественно с помощью УФ-абсорбции и интегрирования площадей пиков. Очищенное стандартное антитело в виде IgG1 служило в качестве стандарта.
В альтернативном варианте концентрацию антител и их производных в супернатантах клеточных культур оценивали с помощью «сэндвич»-IgG-ELISA. В целом, метод состоял в следующем: 96-луночные титрационные микропланшеты, обладающие высокой способностью связывать стрептавидин А (планшеты типа StreptaWell High Bind Strepatavidin А (фирма Roche)), сенсибилизировали из расчета 100 мкл/лунку биотинилированным античеловеческим IgG F(ab')2<h-Fcγ>BI, применяемым в качестве иммобилизованной молекулы (фирма Dianova), в концентрации 0,1 мкг/мл в течение 1 ч при комнатной температуре или в другом варианте в течение ночи при 4°С и затем отмывали трижды, используя 200 мкл/лунку ЗФР, 0,05% Твин (ЗФРТ, фирма Sigma). Добавляли в лунки по 100 мкл/лунку серийных разведений в ЗФР (фирма Sigma), содержащих соответствующее антитело супернатантов клеточных культур, и инкубировали в течение 1-2 ч на шейкере для титрационных микропланшетов при комнатной температуре. Лунки отмывали трижды, используя 200 мкл/лунку ЗФРТ, и связанное антитело выявляли с помощью 100 мкл F(ab')2<hFcγ>POD (фирма Dianova) в концентрации 0,1 мкг/мл в качестве идентифицирующего антитела в течение 1-2 ч на шейкере для титрационных микропланшетов при комнатной температуре. Несвязанное идентифицирующее антитело отмывали трижды, используя 200 мкл/лунку ЗФРТ, и связанное идентифицирующее антитело выявляли, добавляя 100 мкл ABTS/лунку. Определение абсорбции осуществляли на спектрометре типа Tecan Fluor при длине волны 405 нм (длина референс волны 492 нм).
Очистка белков
Белки очищали из профильтрованных супернатанов клеточных культур согласно стандартным протоколам. В целом, метод состоял в следующем: белки наносили на колонку, заполненную белок А-сефарозой (фирма GE Healthcare), и отмывали ЗФР. Элюцию антител осуществляли при рН 2,8 с последующей немедленной нейтрализацией образца. Агрегированный белок отделяли от мономерных антител гель-фильтрацией (Superdex 200, фирма GE Healthcare) в ЗФР или в 20 мМ гистидине, 150 мМ NaCl, рН 6,0. Фракции мономерных антител объединяли, при необходимости концентрировали, используя, например, центрифужный концентратор типа MILLIPORE Amicon Ultra (30 MWCO (молекулярновесовой предел), замораживали и хранили при -20°С или -80°С. Часть образцов оставляли для последующего аналитического изучения белка и его аналитической характеризации, например, с помощью ДСН-ПААГ, гель-фильтрации или масс-спектрометрии.
ДСН-ПААГ
Применяли систему геля NuPAGE® Pre-Cast (фирма Invitrogen) согласно инструкции производителя. В частности использовали 10% или 4-12% бис-Трис Pre-Cast-гели NuPAGE®, Novex® (рН 6,4) и подвижные буферы, такие как NuPAGE® MES (гели, применяемые в восстанавливающих условиях, подвижный буфер с антиоксидантной добавкой NuPAGE®) или MOPS (гели, применяемые в невосстанавливающих условиях).
Аналитическая гель-фильтрация
В качестве гель-фильтрации, предназначенной для определения агрегированного и олигомерного состояния антител, применяли ЖХВР-хроматографию. В целом, метод состоял в следующем: очищенные на белке А антитела вносили в колонку типа Tosoh TSKgel G3000SW в 300 мМ NaCl, 50 мМ KH2PO4/K2HPO4, рН 7,5 в системе Agilent HPLC 1100, или в колонку Superdex 200 (фирма GE Healthcare) в 2 хЗФР в ЖХВР-системе Dionex. Количество элюированного белка определяли на основе УФ-абсорбции и интегрирования площадей пиков. В качестве стандарта применяли стандарт для гель-фильтрации фирмы BioRad (Gel Filtration Standard 151-1901).
Масс-спектрометрия
Общую дегликозилированную массу антител, полученных в результате кроссинговера, определяли и подтверждали с помощью масс-спектрометрии с ионизацией электроспреем (ESI-MC). В целом, метод состоял в следующем: 100 мкг очищенных антител дегликозилировали с помощью 50 мед. N-гликозидазы F (PNGaзаF, фирма ProZyme) в 100 мМ KH2PO4/K2HPO4, рН 7 при 37°С в течение 12-24 ч при концентрации белка вплоть до 2 мг/мл и затем обессоливали с помощью ЖХВР на колонке Sephadex G25 (фирма GE Healthcare). Массу соответствующих тяжелых и легких цепей определяли с помощью ESI-MC после дегликозилирования и восстановления. В целом, метод состоял в следующем: 50 мкг антитела в 115 мкл инкубировали с 60 мкл 1М ТСЕР и 50 мкл 8М гидрохлорида гуанидида после обессоливания. Общую массу и массу восстановленных тяжелых и легких цепей определяли с помощью ESI-MC с использованием МС-системы Q-Star Elite, снабженной источником NanoMate.
ELISA для оценки связывания ECD IGF-1R
Особенности связывания созданных антител с внеклеточным доменом (ECD) IGF-1R анализировали с помощью ELISA. Для этой цели внеклеточный домен IGF-1R (остатки 1-462), содержащий встречающуюся в естественных условиях лидерную последовательность и 12 богатых LI-цистеином доменов эктодомена альфа-цепи человеческого IGF-1R (согласно McKern и др., 1997; Ward и др., 2001), слитый с N-концевой меткой, представляющей собой His-стрептавидин-связывающий пептид (His-SBP), клонировали в производном вектора pcDNA3 и кратковременно экспрессировали в HEK293F-клетках. Белковая последовательность ECD IGF-1R-His-SBP представлена в SEQ ID NO:12. 96-луночные титрационные микропланшеты, обладающие высокой способностью связывать стрептавидин А (планшеты типа StreptaWell High Bind Strepatavidin А (фирма Roche)), сенсибилизировали, используя 100 мкл/лунку супернатанта клеточной культуры, содержащего растворимый слитый белок IGF-1R-ECD-SBP, в течение ночи при 4°С и отмывали трижды, используя 200 мкл/лунку ЗФР, 0,05% Твин (ЗФРТ, фирма Sigma). Затем добавляли в лунки из расчета 100 мкл/лунку серийные разведения соответствующего антитела и в качестве референс-антитела антитело дикого типа <IGF-1R> в ЗФР (фирма Sigma), который включал 1% БСА (фракция V, фирма Roche), и инкубировали в течение 1-2 ч на шейкере для титрационных микропланшетов при комнатной температуре. При осуществлении серийных разведении в лунки вносили одинаковое количество очищенного антитела. Лунки отмывали трижды, используя 200 мкл/лунку ЗФРТ, и связанное антитело выявляли, используя 100 мкл/лунку F(ab')2<hFcγ>POD (фирма Dianova) в концентрации 0,1 мкг/мл (1:8000) в качестве идентифицирующего антитела, в течение 1-2 ч на шейкере для титрационных микропланшетов при комнатной температуре. Несвязанное идентифицирующее антитело отмывали трижды, используя 200 мкл/лунку ЗФРТ, и связанное идентифицирующее антитело выявляли, добавляя 100 мкл ABTS/лунку. Определение абсорбции осуществляли на спектрометре Tecan Fluor при длине волны 405 нм (длина референс волны 492 нм).
Biacore-анализ с использованием ECD IGF-1R (1GF-1R-ECD)
Связывание созданных антител с человеческим 1GF-1R-ECD исследовали также с помощью поверхностного плазмонного резонанса, используя устройство типа BIACORE T100 (фирма GE Healthcare Biosciences AB, Упсала, Швеция). В целом, метод состоял в следующем: для оценки аффинности козьи античеловеческие антитела типа IgG JIR 109-005-098 иммобилизовывали на СМ5-чипе посредством аминового сочетания для презентации антител к человеческому 1GF-1R-ECD, несущих Fc. Связывание оценивали в HBS-буфере (HBS-P (10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 0,005% Твин 20, рН 7,4) при 25°С. IGF-1R-ECD (фирма R&D Systems или полученный при создании изобретения) добавляли в раствор в различных концентрациях. Ассоциацию оценивали путем инъекции IGF-1R-ECD в течение промежутка времени от 80 с до 3 мин; диссоциацию оценивали путем отмывки поверхности чипа HBS-буфером в течение 3-10 мин и значение KD определяли, используя модель связывания Ленгмюра при соотношении 1:1. Из-за низкой плотности загрузки и уровня захвата антител <IGF-1R> получали данные о связывании одновалентного IGF-1R-ECD. Данные, полученные для отрицательного контроля (например, кривые, полученные только для буфера) вычитали из кривых, полученных для образца, для коррекции присущего системе сдвига основного уровня и для снижения шумовых сигналов. Применяли программу Biacore T100 Evaluation, версия 1.1.1 для анализа сенсограмм и для расчета данных, касающихся аффинности. На фиг.11 представлено схематическое изображение Biacore-анализа.
Примеры 1
Получение, экспрессия, очистка и характеризация моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, в котором вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга (сокращенно обозначено в контексте настоящего описания как антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH)
Пример 1А
Создание экспрессионных плазмид для моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH
Последовательности вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, включая соответствующие лидерные последовательности, описанные в данном примере, выводили из тяжелой цепи человеческого антитела <IGF-1R> (SEQ ID NO:1, плазмида 4843-pUC-HC-IGF-1R) и его легкой цепи (SEQ ID NO:2, плазмида 4842-pUC-LC-IGF-1R), которые описаны в WO 2005/005635, и константные домены тяжелой и легкой цепи выводили из человеческого антитела (С-каппа и IgG1).
Генные сегменты, кодирующие лидерную последовательность, вариабельный домен легкой цепи (VL) и домен 1 константной области человеческой тяжелой цепи (СН1) антитела <IGF-1R> сцепляли и сливали с 5'-концом Fc-доменов константных областей человеческой тяжелой γ1-цепи (шарнир-СН2-СН3). ДНК, кодирующую соответствующий слитый белок, полученный в результате замены VH-домена на VL-домен (замена VH-VL), создавали путем синтеза гена и обозначали далее как <IGF-1R> НС*** (SEQ ID NO:10). Первоначально VL-CH1-домены сливали с несущей небольшие изменения последовательностью (SEQ ID NO:3); из-за снижения вследствие этого выхода продуктов экспрессии, была выбрана SEQ ID NO:10, для которой обнаружен выход продуктов экспрессии, сопоставимый с выходом антител дикого типа.
Генные сегменты, кодирующие лидерную последовательность, вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и константный домен человеческой легкой цепи (CL) антитела <IGF-1R> сцепляли в виде независимой цепи. ДНК, кодирующую соответствующий слитый белок, полученный в результате замены VL-домена на VH-домен (замена VL-VH), создавали путем синтеза гена и обозначали далее как <IGF-1R> LC*** (тяжелая цепь***) (SEQ ID NO:11). Первоначально VH-CL-домены сливали с несущей небольшие изменения последовательностью (SEQ ID NO:4); из-за снижения вследствие этого выхода продуктов экспрессии, была выбрана SEQ ID NO:11, для которой обнаружен выход продуктов экспрессии, сопоставимый с выходом антител дикого типа.
На фиг.5 и фиг.6 представлено схематическое изображение белковой последовательности модифицированной тяжелой цепи <IGF-1R> НС*** и модифицированной легкой цепи <IGF-1R> LC***.
Ниже кратко описаны соответствующие экспрессионные векторы:
Вектор pUC-HC***-IGF-1R
Вектор pUC-HC***-IGF-1R представляет собой экспрессионную плазмиду, например, предназначенную для кратковременной экспрессии несущей замену VL-VH тяжелой цепи <IGF-1R> НС*** (кассета экспрессии на основе кДНК-конструкции; с CMV-интроном А), в клетках линии HEK293 (EBNA) или стабильной экспрессии в СНО-клетках.
Помимо экспрессионной кассеты <IGF-1R> НС*** этот вектор содержал:
- сайт инициации репликации из pUC18, обеспечивающий репликацию указанной плазмиды в Е.coli, и
- ген β-лактамазы, который придает устойчивость в Е.coli к ампициллину.
Транскрипционная единица гена <IGF-1R> НС*** содержала следующие элементы:
- сайт рестрикции AscI на 5'-конце,
- немедленно-ранний энхансер и промотор из человеческого цитомегаловируса,
- расположенную за ним последовательность интрона А,
- 5'-нетранслируемую область гена человеческого антитела,
- сигнальную последовательность легкой цепи иммуноглобулина,
- ген человеческой зрелой НС***-цепи <IGF-1R>, который кодирует слияние вариабельного домена человеческой тяжелой цепи (VH) и константного домена человеческой легкой каппа-цепи (CL), слитый на 5'-конце Fc-доменов константных доменов человеческой тяжелой γ1-цепи (шарнир-СН2-СН3),
- 3'-нетранслируемую область с сигнальной последовательностью полиаденилирования и
- сайт рестрикции SgrAI на 3'-конце.
Плазмидная карта экспрессионного вектора pUC-HC***-IGF-1R, предназначенного для несущей замену VL-VH тяжелой цепи *** <IGF-1R> НС***, представлена на фиг.7. Аминокислотная последовательность <IGF-1R> НС*** (включая сигнальную последовательность) представлена в SEQ ID NO:10.
Вектор pUC-LC***-IGF-1R
Вектор pUC-LC***-IGF-1R представляет собой экспрессионную плазмиду, например, предназначенную для кратковременной экспрессии несущей замену VL-VH легкой цепи <IGF-1R> LC*** ((кассета экспрессии на основе кДНК-конструкции; с CMV-интроном А), в клетках линии HEK293 (EBNA) или стабильной экспрессии в СНО-клетках.
Помимо экспрессионной кассеты <IGF-1R> LC*** этот вектор содержал:
- сайт инициации репликации из pUC18, обеспечивающий репликацию указанной плазмиды в Е.coli, и
- ген β-лактамазы, который придает устойчивость в Е.coli к ампициллину.
Транскрипционная единица гена <IGF-1R> LC*** содержала следующие элементы:
- сайт рестрикции Sse8387I на 5'-конце,
- немедленно-ранний энхансер и промотор из человеческого цитомегаловируса,
- расположенную за ним последовательность интрона А,
- 5'-нетранслируемую область гена человеческого антитела,
- сигнальную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина,
- ген человеческой зрелой LC***-цепи <IGF-1R>, который кодирует слияние вариабельного домена человеческой легкой цепи (VL) и константных доменов человеческой тяжелой γ1-цепи (СН1),
- 3'-нетранслируемую область с сигнальной последовательностью полиаденилирования и
- сайты рестрикции SalI и FseI на 3'-конце.
Плазмидная карта экспрессионного вектора pUC-LC***-IGF-1R, предназначенного для несущей замену VL-VH легкой цепи *** <IGF-1R> LC***, представлена на фиг.8. Аминокислотная последовательность <IGF-1R> LC*** (включая сигнальную последовательность) представлена в SEQ ID NO:11.
Плазмиды pUC-HC***-IGF-1R и pUC-LC***-IGF-1R можно применять для кратковременных или стабильных котрансфекций, например, клеток HEK293, HEK293 EBNA или СНО (2-векторная система). С целью сравнения осуществляли кратковременную экспрессию антитела <IGF-1R> дикого типа из плазмид 4842-pUC-LC-IGF-1R (SEQ ID NO:2) и 4843-pUC-HC-IGF-1R (SEQ ID NO:1), аналогично методу, описанному в этом примере.
Для достижения более высоких уровней экспрессии при кратковременных экспрессиях в клетках HEK293 EBNA экспрессионную кассету <IGF-1R> НС*** можно субклонировать с использованием сайтов AscI, SgrAI, а экспрессионную кассету <IGF-1R> LC*** можно субклонировать с использованием сайтов Sse8387I и FseI в экспрессионном векторе 4700-pUC-Hyg_OriP, который содержит
- элемент OriP и
- ген, обусловливающий устойчивость к гигромицину, в качестве селектируемого маркера.
Транскрипционные единицы тяжелой и легкой цепи можно либо субклонировать в двух независимых векторах 4700-pUC-Hyg-OriP с целью котрансфекций (2-векторная система), либо их можно клонировать в одном общем векторе 4700-pUC-Hyg-OriP (1-векторная система) для последующих кратковременных или стабильных трансфекций с использованием образовавшихся векторов. На фиг.9 показана плазмидная карта основного вектора 4700-pUC-OriP.
Пример 1Б
Создание экспрессионных плазмид для моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH
Слитые гены <IGF-1R> (слитые гены НС*** и LC***), содержащие измененные Fab-последовательности относительно антитела <IGF-1R> дикого типа, собирали с помощью известных методов и процессов рекомбинации путем соединения соответствующих сегментов нуклеиновых кислот.
Каждую из нуклеотидных последовательностей, кодирующих НС*** и LC*** IGF-1R, синтезировали путем химического синтеза и затем клонировали в клонирующем векторе pGA4, основой которого является плазмида pPCRScript (фирма Stratagene), на фирме Geneart (Регенсбург, Германия). Кассету экспрессии, кодирующую IGF-1R НС***, встраивали путем лигирования в пригодную для Е.coli плазмиду, используя сайты рестрикции PvuII и BmgBI, с получением конечного вектора pUC-HC***-IGF-1R; кассету экспрессии, кодирующую соответствующую IGF-1R LC***, встраивали путем лигирования в пригодную для Е.coli плазмиду, используя сайты рестрикции PvuII и SalI, с получением конечного вектора pUC-LC***-IGF-1R. Субклонированные нуклеотидные последовательности подтверждали путем секвенирования ДНК. Для кратковременных и стабильных трансфекций использовали большие количества плазмид, которые получали из трансформированных культур Е.coli (набор Nucleobond AX, фирма Macherey-Nagel).
Пример 1В
Кратковременная экспрессия моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, его очистка и подтверждение идентичности с помощью масс-спектрометрии
Рекомбинантное антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, экспрессировали путем кратковременной котрансфекции плазмидами pUC-HC***-IGF-1R и pUC-LC***-IGF-1R находящихся в суспензии клеток линии HEK293-F согласно описанному выше методу.
Экспрессированное и секретированное моноспецифическое двухвалентное антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, очищали из профильтрованных супернатантов клеточной культуры с помощью аффинной хроматографии на белке А согласно описанному выше методу. В целом, метод состоял в следующем: содержащие антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, супернатанты клеточной культуры после кратковременных трансфекций осветляли центрифугированием и фильтрацией и вносили на содержащую белок А колонку HiTrap MabSelect Xtra (фирма GE Healthcare), уравновешенную ЗФР-буфером (10 мМ Na2HPO4, 1 мМ KH2PO4, 137 мМ NaCl и 2,7 мМ KCl, pH 7,4). Несвязанные белки отмывали уравновешивающим ЗФР-буфером, а затем 0,1М натрий-цитратным буфером, pH 5,5 и отмывали ЗФР. Для элюции антитела применяли 100 мМ натрий-цитратый буфер, pH 2,8, после чего образцы немедленно нейтрализовали, добавляя 300 мкл 2М Трис, pH 9,0 на 2-миллилитровую фракцию. Агрегированный белок отделяли от мономерных антител с помощью гель-фильтрации на колонке HiLoad 26/60 Superdex 200 prep grade (фирма GE Healthcare) в 20 мМ гистидине, 150 мМ NaCl, pH 6,0, а фракцию мономерных антител затем концентрировали с помощью центрифужного концентратора MILLIPORE Amicon Ultra-15. Антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, замораживали и хранили при -20°С или -80°С. Целостность антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, анализировали с помощью ДСН-ПААГ в присутствии восстановителя или без него и затем окрашивали кумасси бриллиантовым голубым согласно описанному выше методу. Мономерное состояние антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, подтверждали аналитической гель-фильтрацией (фиг.12). Охарактеризованные образцы использовали для дальнейшего аналитического исследования белка и изучения функциональных характеристик. С помощью ESI-масс-спектрометрии подтверждали теоретическую молекулярную массу полностью дегликолизированного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH.
Пример 1Г
Анализ способности моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, связывать IGF-1R с помощью применяемого для оценки связывания IGF-1R-ECD ELISA и Biacore-анализа
Связывающие способности моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, оценивали с помощью ELISA с использованием внеклеточного домена (ECD) IGF-1R согласно описанному выше методу. Для этой цели внеклеточный домен IGF-1R (остатки 1-462), содержащий встречающуюся в естественных условиях лидерную последовательность и 12 богатых LI-цистеином доменов эктодомена альфа-цепи человеческого IGF-IR (согласно McKern и др., 1997; Ward и др., 2001), слитый с N-концевой меткой, представляющей собой His-стрептавидин-связывающий пептид (His-SBP), клонировали в производном вектора pcDNA3 и кратковременно экспрессировали в HEK293F-клетках. Белковая последовательность ECD IGF-1R-His-SBP представлена выше. Из полученной титрационной кривой видно, что антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, обладало функциональной активностью и для него выявлены характеристики связывания и кинетические характеристики, сопоставимые с характеристиками антитела <IGF-1R> дикого типа в пределах ошибки метода, и поэтому оно является полностью функциональным (фиг.13).
Эти данные подтверждены с помощью Biacore-анализа, для которого использовали соответствующие очищенные антитела.
Пример 1Д
Анализ способности моноспецифического двухвалентного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, связывать IGF-1R с помощью FACS с использованием сверхэкспрессирующих IGF-1R I24-клеток
Для подтверждения активности связывания антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, с IGF-1R, сверхэкспрессируемым на поверхности I24-клеток (NIH3T3-клетки, экспрессирующие рекомбинантный человеческий IGF-1R, фирма Roche), использовали FACS-анализ. В целом, метод состоял в следующем: 5×105 I24-клеток на каждую трубку, предназначенную для осуществления FACS, инкубировали с разведением очищенного антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, и антитела <IGF-1R> дикого типа в качестве референс-антитела и инкубировали на льду в течение 1 ч. Несвязанный белок отмывали с помощью 4 мл охлажденного на льду ЗФР (фирма Gibco)+2% FCS (фирма Gibco). Затем клетки центрифугировали (5 мин при 400 g) и связанное антитело выявляли с помощью конъюгата F(ab')2<hFcγ>PE (фирма Dianova) на льду в течение 1 ч, защищая от действия света. Выявленное несвязанное антитело отмывали с помощью 4 мл охлажденного на льду ЗФР + 2% FCS. Затем клетки центрифугировали (5 мин при 400 g), ресуспендировали в 300-500 мкл ЗФР и выявленное связанное антитило оценивали количественно с помощью устройства FACSCalibur или FACS Canto (фирма BD (FL2-канал, 10000 клеток на процесс). В эксперимент включали в качестве контролей антитела соответствующего изотипа для исключения любых неспецифических случаев связывания. Связывание антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, и антитела <IGF-1R> дикого типа с IGF-1R на поверхности I24-клеток характеризовалось сопоставимым зависящим от концентрации сдвигом средней интенсивности флуоресценции.
Примеры 2
Описание моноспецифического двухвалентного антитела <ANGPT2> дикого типа
Пример 2А
Создание экспрессионных плазмид для моноспецифического двухвалентного антитела <ANGPT2> дикого типа
Последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепи моноспецифического двухвалентного антитела к ANGPT2 (<ANGPT2>) дикого типа, включая соответствующие лидерные последовательности, описанные в данном примере, выводили из тяжелой цепи человеческого антитела <ANGPT2> (SEQ ID NO:6) и его легкой цепи (SEQ ID NO:7), которые описаны в WO 2006/045049, а константные домены тяжелой и легкой цепи выводили из человеческого антитела (С-каппа и IgG1).
Антитело <ANGPT2> дикого типа клонировали в плазмидах SB04-pUC-HC-ANGPT2 (SEQ ID NO:6) и SB06-pUC-LC-ANGPT2 (SEQ ID NO:7), которые являются аналогами векторов, описанных выше в примере 1А.
С целью сравнения и для осуществления экспериментов по совместной экспрессии (см. пример 3) антитело <ANGPT2> дикого типа кратковременно (ко-)экспрессировали с использованием плазмид SB04-pUC-HC-ANGPT2 и SB06-pUC-LC-ANGPT2.
Пример 2Б
Создание экспрессионных плазмид для моноспецифического двухвалентного антитела <ANGPT2> дикого типа
Каждую из нуклеотидных последовательностей, кодирующих НС и LC <ANGPT2>, синтезировали с помощью химического синтеза и затем клонировали в клонирующем векторе pGA4, основой которого является плазмида pPCRScript (фирма Stratagene), на фирме Geneart (Регенсбург, Германия). Экспрессионную кассету, кодирующую НС <ANGPT2>, клонировали в пригодной для Е.coli плазмиде, получая конечный вектор SB04-pUC-HC-ANGPT2; экспрессионную плазмиду, кодирующую соответствующую LC <ANGPT2>, клонировали в пригодной для Е.coli плазмиде, получая конечный вектор SB06-pUC-LC-ANGPT2. Субклонированные нуклеотидные последовательности подтверждали путем секвенирования ДНК. Для кратковременных и стабильных трансфекций использовали большие количества плазмид, которые получали из трансформированных культур Е.coli (набор Nucleobond AX, фирма Macherey-Nagel).
Примеры 3
Экспрессия биспецифического двухвалентного антитела <ANGPT2-IGF-1R>, в котором тяжелая и легкая цепь специфически связывается с IGF-1R, вариабельные домены VL и VH заменены друг на друга (сокращенно обозначено в контексте настоящего описания как антитело <ANGPT2-IGF-1R>, несущее замену VL-VH)
Пример 3А
Кратковременная совместная экспрессия и очистка антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, и антитела <ANGPT2> дикого типа в клетках линии HEK293 EBNA с получением биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH
Для создания функционального биспецифического антитела, распознающего IGF-1R, на основе Fab-фрагмента антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, с одной стороны, и распознающего ANGPT2 на основе Fab-фрагмента антитела <ANGPT2> дикого типа, с другой стороны, две экспрессионные плазмиды, кодирующие антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH (пример 1А), совместно экспрессировали с двумя экспрессионными плазмидами, кодирующими антитело <ANGPT2> дикого типа (пример 2А). С учетом подтвержденной статистикой ассоциации тяжелых цепей (НС) дикого типа и несущих замену тяжелых цепей VL-VH НС*** это приводило к получению биспецифического и двухвалентного антитела <IGF-1R-ANGPT2>, несущего замену VL-VH. Учитывая, что оба антитела одинаково хорошо экспрессировались и при этом не образовывались побочные продукты в количестве, которое может повлиять на результат, можно ожидать, что этот процесс должен приводить к получению ниже указанных трех основных продуктов в соотношении 1:2:1: А) антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, Б) биспецифическое антитело <IGF-1R-ANGPT2>, несущее замену VL-VH, и В) антитело <ANGPT2> дикого типа. Можно было ожидать присутствия нескольких побочных продуктов. Однако из-за замены только VL-VH-доменов частота встречаемости побочных продуктов должна быть снижена по сравнению с Fab, полученными в результате полного кроссинговера. Следует отметить, что для антитела <ANGPT2> дикого типа обнаружен более высокий выход продукта кратковременной экспрессии по сравнению с антителом <IGF-1R> дикого типа и антителом <IGF-1R>, несущим замену VL-VH, соотношение плазмид, кодирующих антитело <ANGPT2> дикого типа, и плазмид, кодирующих антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, сдвигалось в сторону экспрессии антитела <ANGPT2> дикого типа.
Для создания смеси основных продуктов, таких как: А) антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, Б) биспецифическое антитело <IGF-1R-ANGPT2>, несущее замену VL-VH, и В) антитело <ANGPT2> дикого типа, четырьмя плазмидами pUC-HC***-IGF-1R и pUC-LC***-IGF-1R и плазмидами SB04-pUC-HC-ANGPT2 и SB06-pUC-LC-ANGPT2 кратковременно котрансфектировали находящиеся в виде суспензионной культуры HEK293-F-клетки согласно описанному выше методу. Собранный супернатант, содержащий смесь основных продуктов: А) антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, Б) биспецифическое антитело <IGF-1R-ANGPT2>, несущее замену VL-VH, и В) антитело <ANGPT2> дикого типа, обозначили как «смесь, содержащая биспецифическое антитело, несущее замену VL-VH». Супернатанты клеточной культуры, которые включали смесь, содержащую биспецифическое антитело, несущее замену VL-VH, собирали центрифугированием и затем очищали согласно описанному выше методу.
Целостность смеси антител анализировали с помощью ДСН-ПААГ в присутствии восстановителя или без него и затем окрашивали кумасси бриллиантовым голубым и подвергали гель-фильтрации согласно описанному выше методу. Полученные с помощью ДСН-ПААГ результаты свидетельствуют о том, что, как и ожидалось, в препарате присутствовали 2 различные тяжелые и легкие цепи (гель в присутствии восстановителя) (фиг.14). Охарактеризованные образцы использовали для дальнейшего аналитического исследования белка и изучения его функциональных характеристик.
Пример 3Б
Выявление функционального биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH, с помощью клеточного FACS-анализа, позволяющего выявлять образование мостиковой связи, с использованием экспрессирующих IGF-1R клеток линии I24
Для подтверждения присутствия функционального биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH, в очищенной смеси, которая содержала: биспецифическое антитело, несущее замену VL-VH, включающую следующие основные продукты: А) антитело <IGF-1R>, несущее замену VL-VH, Б) биспецифическое антитело <IGF-1R-ANGPT2>, несущее замену VL-VH, и В) антитело <ANGPT2> дикого типа, полученной после кратковременной совместной экспрессии согласно методу, описанному в примере 3А, проводили клеточный FACS-анализ, позволяющий выявлять образование мостиковой связи, такой как IGF-1R-ANGPT2, с использованием клеток линии I24 (NIH3T3-клетки, экспрессирующих рекомбинантный человеческий IGF-1R, фирма Roche). Принцип анализа показан на фиг.10. Биспецифическое антитело <ANGPT2-IGF-1R>, несущее замену VL-VH, которое присутствовало в очищенной смеси антител, обладало способностью связываться с IGF-1R на поверхности I24-клеток и одновременно с ANGPT2; и таким образом обладало способностью соединять мостиковой связью два его антигена-мишени с двумя противоположными Fab-фрагментами.
В целом, метод состоял в следующем: 5×105 клеток линии I24 на трубку, предназначенную для осуществления FACS, инкубировали с общей смесью очищенных антител на льду в течение 1 ч (титрация 160 мкг/мл смеси). Соответствующие очищенные антитела дикого типа <IGF-1R> и <ANGPT2> наносили на I24-клетки в качестве контролей. Несвязанное антитело отмывали 4 мл охлажденного на льду ЗФР (фирма Gibco)+2% FCS (фирма Gibco), клетки центрифугировали (5 мин при 400 g) и связанное биспецифическое антитело выявляли с помощью 50 мкл (2 мкг/мл) человеческого ANGPT2 (фирма R&D Systems) в течение 1 ч на льду. Затем несвязанный ANGPT2 отмывали один или два раза 4 мл охлажденного на льду ЗФР (фирма Gibco)+2% FCS (фирма Gibco), клетки центрифугировали (5 мин при 400 g) и связанный ANGPT2 выявляли с помощью 50 мкл (5 мкг/мл) антитела <ANGPT2> mIgG1-биотин (BAM0981, фирма R&D Systems) в течение 45 мин на льду; в альтернативном варианте клетки инкубировали с 50 мкл (5 мкг/мл) конъюгата mIgG1-биотин в качестве контроля изотипа (фирма R&D Systems). Несвязанное идентифицирующее антитело отмывали 4 мл охлажденного на льду ЗФР (фирма Gibco)+2% PCS (фирма Gibco), клетки центрифугировали (5 мин при 400 g) и связанное идентифицирующее антитело выявляли с помощью 50 мкл конъюгата 1:400 стрептавидин-РЕ (SA-PE) (фирма Invitrogen/Zymed) в течение 45 мин на льду, защищая от действия света. Несвязанный конъюгат стрептавидин-РЕ отмывали 4 мл охлажденного на льду ЗФР+2% FCS. Затем клетки центрифугировали (5 мин при 400 g), ресуспендировали в 300-500 мкл ЗФР и связанный конъюгат стрептавидин-РЕ оценивали количественно с помощью устройства FACSCalibur (фирма BD (FL2-канал, 10000 клеток на процесс). В эксперимент включали в качестве контролей антитела соответствующего изотипа для исключения любых неспецифических случаев связывания. Кроме того, в качестве контролей включали очищенные моноспецифические двухвалентные антитела типа IgG1, такие как <IGF-1R> и <ANGPT2>.
Результаты, представленные на фиг.15, демонстрируют, что инкубация со смесью, которая содержала очищенное возникшее в результате кроссинговера антитело (<ANGPT2-IGF-1R>, несущее замену VL-VH), полученное после совместной экспрессии возникшего в результате кроссинговера антитела (<IGF-1R>, несущего замену VL-VH) с антителом дикого типа (антитело <ANGPT2> дикого типа), приводила к существенному сдвигу флуоресценции, что свидетельствует о присутствии функционального биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH, которое обладает способностью связываться одновременно с IGF-1R на поверхности I24-клеток и с ANGPT2; и таким образом обладает способностью соединять мостиковой связью два его антигена-мишени с двумя противоположными Fab-фрагментами. В отличие от этого соответствующие контрольные антитела <IGF-1R> и <Ang-2> не приводили к сдвигу флуоресценции при FACS-анализе, позволяющем выявлять образование мостиковой связи.
В сочетании эти данные свидетельствуют о том, что путем совместной экспрессии соответствующих плазмид дикого типа и полученных в результате кроссинговера плазмид можно создавать функциональные биспецифические антитела. Выход правильного биспецифического антитела можно повышать, увеличивая правильную гетеродимеризацию тяжелых цепей дикого типа и модифицированных полученных в результате кроссинговера тяжелый цепей, например, используя технологию «knobs-into-holes», а также стабилизацию с помощью дисульфидного мостика (см. пример 4).
Пример 4
Экспрессия двухвалентного биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH, с модифицированными СН3-доменами (технология «knobs-into-holes»)
Для дополнительного повышения выхода биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH, применяли технологию «knobs-into-holes» для совместной экспрессии антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, и антитела дикого типа <ANGPT2> для получения препарата гомогенного и функционального биспецифического антитела. Для этой цели СН3-домен в тяжелой цепи* НС* антитела <IGF-1R>, несущего замену VL-VH, заменяли на СН3-домен («выступы»), имеющий последовательность SEQ ID NO:8 с заменой T366W, а СН3-домен в тяжелой цепи антитела дикого типа <ANGPT2> заменяли на СН3-домен («впадина»), имеющий последовательность SEQ ID NO:9 с заменами T366S, L368A, Y407V, или наоборот. Кроме того, можно интродуцировать дисульфидный мостик для повышения стабильности и выхода, а также в качестве дополнительных остатков, формирующих ионные связи и повышающих выход продукта гетеродимеризации (ЕР 1870459А1).
Кратковременную совместную экспрессию и очистку образовавшегося двухвалентного биспецифического антитела <ANGPT2-IGF-1R>, несущего замену VL-VH, с модифицированными СН3-доменами (технология «knobs-into-holes») осуществляли согласно методу, описанному в примере 3.
Следует отметить, что для оптимизации гетеродимеризации можно применять, например, различные технологии «knobs-in-holes», такие как интродукция дополнительного дисульфидного мостика в СН3-домен, например, Y349C в несущую «выступ» цепь» и D356C в несущую «впадину» цепь, и/или их объединение с применением остатков R409D; K370E (K409D) в качестве образующих «выступы» остатков и D399K; E357K в качестве образующих «впадину» остатков, которые описаны в ЕР 1870459А1.
Аналогично методу, описанному в примере 4, можно получать другие двухвалентные биспецифические антитела, несущие замену VL-VH, с модифицированными СН3-доменами (технология «knobs-into-holes»), мишенью которых является ANGPT2 и другой антиген-мишень (используя описанные выше тяжелую и легкую цепь антитела к ANGPT2 и тяжелую и легкую цепь** НС** и LC** антитела, несущего замену VL-VH, к указанной другой мишени, посредством чего обе тяжелые цепи модифицировали с помощью технологии «knobs-into-holes»), или мишенью которых является IGF-1R и другой антиген-мишень (используя тяжелую и легкую цепь антитела к указанной другой мишени и описанные выше тяжелую и легкую цепь** НС** и LC** антитела к IGF-1R, несущего замену VL-VH, посредством чего обе тяжелые цепи модифицировали с помощью технологии «knobs-into-holes»).
Claims (2)
1. Способ получения двухвалентного биспецифического антитела, где указанное антитело содержит:
а) первую легкую цепь и первую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и
б) вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH второй легкой цепи и второй тяжелой цепи заменены друг на друга
где СН3-домен одной тяжелой цепи и СН3-домен другой тяжелой цепи соприкасаются друг с другом поверхностями, которые изменены для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела;
причем эти изменения отличаются тем, что:
а) СН3-домен одной тяжелой цепи изменен
так, что на поверхности СН3-домена одной тяжелой цепи, которая соприкасается поверхностью СН3-домена второй тяжелой цепи в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, что приводит к созданию выпуклости на поверхности СН3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость на поверхности СН3-домена другой тяжелой цепи,
и
б) СН3-домен другой тяжелой цепи изменен
так, что на поверхности СН3-домена второй тяжелой цепи, которая соприкасается с поверхностью СН3-домена первой тяжелой в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, что приводит к созданию полости на поверхности СН3-домена второй тяжелой цепи, в которую может помещаться выпуклость на поверхности раздела СН3-домена первой тяжелой цепи;
где указанный аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, выбран из группы, включающей аргинин (R), фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W),
и где указанный аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, выбран из группы, включающей аланин (А), серии (S), треонин (Т), валин (V),
а способ включает следующие этапы:
а) трансформации клетки-хозяина
- экспрессионными векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие первую легкую цепь и первую тяжелую цепь, причем поверхности СН3-доменов тяжелых цепей, которыми они соприкасаются друг с другом при формировании двухвалентного биспецифического антитела, содержат вышеуказанные изменения,
- экспрессионными векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь, причем поверхности СН3-доменов тяжелых цепей, которыми они соприкасаются друг с другом при формировании двухвалентного биспецифического антитела, содержат вышеуказанные изменения,
б) культивирования клетки-хозяина в условиях, которые позволяют синтезировать указанное двухвалентное биспецифическое антитело; и
в) выделения указанного двухвалентного биспецифического антитела из культуры.
а) первую легкую цепь и первую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося с первым антигеном; и
б) вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь антитела, специфически связывающегося со вторым антигеном, в котором вариабельные домены VL и VH второй легкой цепи и второй тяжелой цепи заменены друг на друга
где СН3-домен одной тяжелой цепи и СН3-домен другой тяжелой цепи соприкасаются друг с другом поверхностями, которые изменены для активации формирования двухвалентного биспецифического антитела;
причем эти изменения отличаются тем, что:
а) СН3-домен одной тяжелой цепи изменен
так, что на поверхности СН3-домена одной тяжелой цепи, которая соприкасается поверхностью СН3-домена второй тяжелой цепи в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, что приводит к созданию выпуклости на поверхности СН3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость на поверхности СН3-домена другой тяжелой цепи,
и
б) СН3-домен другой тяжелой цепи изменен
так, что на поверхности СН3-домена второй тяжелой цепи, которая соприкасается с поверхностью СН3-домена первой тяжелой в двухвалентном биспецифическом антителе, аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, что приводит к созданию полости на поверхности СН3-домена второй тяжелой цепи, в которую может помещаться выпуклость на поверхности раздела СН3-домена первой тяжелой цепи;
где указанный аминокислотный остаток, который имеет большую по объему боковую цепь, выбран из группы, включающей аргинин (R), фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W),
и где указанный аминокислотный остаток, который имеет меньшую по объему боковую цепь, выбран из группы, включающей аланин (А), серии (S), треонин (Т), валин (V),
а способ включает следующие этапы:
а) трансформации клетки-хозяина
- экспрессионными векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие первую легкую цепь и первую тяжелую цепь, причем поверхности СН3-доменов тяжелых цепей, которыми они соприкасаются друг с другом при формировании двухвалентного биспецифического антитела, содержат вышеуказанные изменения,
- экспрессионными векторами, которые содержат молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие вторую легкую цепь и вторую тяжелую цепь, причем поверхности СН3-доменов тяжелых цепей, которыми они соприкасаются друг с другом при формировании двухвалентного биспецифического антитела, содержат вышеуказанные изменения,
б) культивирования клетки-хозяина в условиях, которые позволяют синтезировать указанное двухвалентное биспецифическое антитело; и
в) выделения указанного двухвалентного биспецифического антитела из культуры.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что СН3-домены антитела дополнительно изменены путем интродукции цистеина (С) в качестве аминокислоты в соответствующие положения каждого СН3-домена, так что дисульфидный мостик может образовываться между обоими СН3-доменами.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP07024864.6 | 2007-12-21 | ||
EP07024864 | 2007-12-21 | ||
PCT/EP2008/010703 WO2009080252A1 (en) | 2007-12-21 | 2008-12-16 | Bivalent, bispecific antibodies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010129549A RU2010129549A (ru) | 2012-01-27 |
RU2587616C2 true RU2587616C2 (ru) | 2016-06-20 |
Family
ID=39093026
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010129549/10A RU2587616C2 (ru) | 2007-12-21 | 2008-12-16 | Двухвалентные биспецифические антитела |
Country Status (22)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US20090162359A1 (ru) |
EP (1) | EP2225279B1 (ru) |
JP (1) | JP5281097B2 (ru) |
KR (1) | KR101249607B1 (ru) |
CN (1) | CN101903404B (ru) |
AR (1) | AR071547A1 (ru) |
AU (1) | AU2008340693A1 (ru) |
BR (1) | BRPI0821791B1 (ru) |
CA (1) | CA2709023C (ru) |
CL (1) | CL2008003781A1 (ru) |
CO (1) | CO6280542A2 (ru) |
CR (1) | CR11460A (ru) |
EC (1) | ECSP10010270A (ru) |
ES (1) | ES2469791T3 (ru) |
IL (1) | IL206161A0 (ru) |
MA (1) | MA31904B1 (ru) |
MX (1) | MX2010006396A (ru) |
NZ (1) | NZ585627A (ru) |
PE (1) | PE20091172A1 (ru) |
RU (1) | RU2587616C2 (ru) |
TW (1) | TWI359027B (ru) |
WO (1) | WO2009080252A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2779602C2 (ru) * | 2017-03-27 | 2022-09-12 | Биомюнё Фармасьютикалз | Устойчивые мультиспецифические антитела |
US11987644B2 (en) | 2017-06-12 | 2024-05-21 | Novartis Ag | Method of manufacturing bispecific antibodies, bispecific antibodies and therapeutic use of such antibodies |
Families Citing this family (432)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE514717T1 (de) | 2002-07-18 | 2011-07-15 | Merus B V | Rekombinante produktion von antikörpermischungen |
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
EP4218801A3 (en) | 2006-03-31 | 2023-08-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody modification method for purifying bispecific antibody |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US8242247B2 (en) * | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US8268314B2 (en) | 2008-10-08 | 2012-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies |
EP2414391B1 (en) * | 2009-04-02 | 2018-11-28 | Roche Glycart AG | Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments |
PL2417156T3 (pl) | 2009-04-07 | 2015-07-31 | Roche Glycart Ag | Trójwartościowe, bispecyficzne przeciwciała |
WO2010115553A1 (en) | 2009-04-07 | 2010-10-14 | Roche Glycart Ag | Bispecific anti-erbb-2/anti-c-met antibodies |
BRPI1012589A2 (pt) | 2009-04-07 | 2016-03-22 | Roche Glycart Ag | anticorpos bi-específicos anti-erbb-3/anti-c-met |
AU2010252284A1 (en) * | 2009-05-27 | 2011-11-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tri- or tetraspecific antibodies |
US9676845B2 (en) * | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
US8703132B2 (en) | 2009-06-18 | 2014-04-22 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific, tetravalent antigen binding proteins |
RU2573915C2 (ru) | 2009-09-16 | 2016-01-27 | Дженентек, Инк. | Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применение |
US8685524B2 (en) | 2010-01-29 | 2014-04-01 | Toray Industries, Inc. | Polylactic acid-based resin sheet |
TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
TWI426920B (zh) | 2010-03-26 | 2014-02-21 | Hoffmann La Roche | 雙專一性、雙價抗-vegf/抗-ang-2抗體 |
WO2011147834A1 (en) | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Roche Glycart Ag | Antibodies against cd19 and uses thereof |
EP2848940A1 (en) | 2010-07-19 | 2015-03-18 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy |
EP2596359A1 (en) | 2010-07-19 | 2013-05-29 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy |
WO2012010582A1 (en) | 2010-07-21 | 2012-01-26 | Roche Glycart Ag | Anti-cxcr5 antibodies and methods of use |
CA2805564A1 (en) | 2010-08-05 | 2012-02-09 | Stefan Jenewein | Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein |
BR112013001847A2 (pt) | 2010-08-24 | 2016-05-31 | Hoffmann La Roche | anticorpo biespecífico, método de preparação do anticorpo biespecífico, do anticorpo biespecífico trivalente, métodos e composição farmacêutica |
EP2647707B1 (en) | 2010-11-30 | 2018-09-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cytotoxicity-inducing therapeutic agent |
SG191153A1 (en) | 2010-12-23 | 2013-07-31 | Hoffmann La Roche | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
MX342034B (es) | 2011-02-28 | 2016-09-12 | Hoffmann La Roche | Proteinas monovalentes que se unen a antigenos. |
EP2681239B8 (en) * | 2011-02-28 | 2015-09-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antigen binding proteins |
TWI588156B (zh) * | 2011-03-28 | 2017-06-21 | 賽諾菲公司 | 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白 |
BR112013026423A2 (pt) | 2011-04-20 | 2016-11-29 | Roche Glycart Ag | método e construtos para a passagem de pendente do ph da barreira sangue-cérebro |
ES2704038T3 (es) * | 2011-05-24 | 2019-03-13 | Zyngenia Inc | Complejos multiespecíficos multivalentes y monovalentes y sus usos |
CA2837914A1 (en) | 2011-06-15 | 2012-12-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-human epo receptor antibodies and methods of use |
AR086982A1 (es) | 2011-06-22 | 2014-02-05 | Hoffmann La Roche | Eliminacion de celulas diana por parte de celulas t citotoxicas especificas de virus utilizando complejos que comprenden mhc de clase i |
MX349095B (es) * | 2011-08-23 | 2017-07-11 | Roche Glycart Ag | Moleculas biespecificas de union a antigeno. |
KR101870555B1 (ko) | 2011-08-23 | 2018-06-22 | 로슈 글리카트 아게 | T 세포 활성화 항원 및 종양 항원에 대해 특이적인 이중특이적 항체 및 이의 사용 방법 |
CN104302668A (zh) | 2011-09-23 | 2015-01-21 | 罗氏格黎卡特股份公司 | 双特异性的抗-egfr/抗igf-1r抗体 |
KR102398736B1 (ko) | 2011-10-31 | 2022-05-16 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 중쇄와 경쇄의 회합이 제어된 항원 결합 분자 |
EP2795335B1 (en) | 2011-12-19 | 2017-09-06 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for the detection of free binding partner of a multispecific binder |
RU2625033C2 (ru) | 2011-12-22 | 2017-07-11 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Система индикации на основе полноразмерного антитела для эукариотических клеток и ее применение |
CN113881702A (zh) | 2011-12-22 | 2022-01-04 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途 |
EP2794878B1 (en) | 2011-12-22 | 2020-03-18 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Expression vector organization, novel production cell generation methods and their use for the recombinant production of polypeptides |
WO2013113663A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-08-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the detection of a binding partner of a multispecific binder |
US10633451B2 (en) | 2012-02-03 | 2020-04-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific antibody molecules with antigen-transfected T-cells and their use in medicine |
EP2812357B1 (en) | 2012-02-10 | 2020-11-04 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Single-chain antibodies and other heteromultimers |
CA2860600C (en) | 2012-02-15 | 2022-07-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fc-receptor based affinity chromatography |
JP6007310B2 (ja) | 2012-04-05 | 2016-10-12 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | ヒトtweak及びヒトil17に対する二重特異性抗体並びにその使用 |
PT2838917T (pt) | 2012-04-20 | 2019-09-12 | Merus Nv | Métodos e meios para a produção de moléculas similares a ig heterodiméricas |
US9062120B2 (en) | 2012-05-02 | 2015-06-23 | Janssen Biotech, Inc. | Binding proteins having tethered light chains |
BR112014026990A2 (pt) * | 2012-05-24 | 2017-07-11 | Hoffmann La Roche | anticorpo , ácido nucleico , vetores , célula hospedeira , composição farmacêutica , uso de um anticorpo e método para o tratamento de um paciente com necessidade de terapia. |
JP6203838B2 (ja) | 2012-06-27 | 2017-09-27 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 少なくとも2つの異なる結合実体を含む、テーラーメイドの高度に選択的かつ多重特異的なターゲティング実体を選択および作製するための方法、ならびにその使用 |
WO2014001325A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof |
CN104428006B (zh) | 2012-07-04 | 2017-09-08 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 共价连接的抗原‑抗体缀合物 |
WO2014006123A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-biotin antibodies and methods of use |
WO2014006118A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-theophylline antibodies and methods of use |
CN104471397B (zh) | 2012-07-13 | 2018-03-23 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 用于检测多特异性结合物的方法 |
ES2896493T3 (es) | 2012-07-13 | 2022-02-24 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos biespecíficos anti-VEGF/anti-ANG-2 y su uso en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares |
JP6405311B2 (ja) | 2012-09-14 | 2018-10-17 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 少なくとも2つの異なる実体を含む分子を作製および選択するための方法ならびにその使用 |
DK2900694T3 (en) | 2012-09-27 | 2018-11-19 | Merus Nv | BISPECIFIC IGG ANTIBODIES AS T-CELL ACTIVATORS |
RU2015117393A (ru) * | 2012-10-08 | 2016-12-10 | Роше Гликарт Аг | Лишенные fc антитела, содержащие два Fab-фрагмента, и способы их применения |
SG11201502538TA (en) | 2012-11-08 | 2015-05-28 | Hoffmann La Roche | Her3 antigen binding proteins binding to the beta-hairpin of her3 |
TWI675044B (zh) * | 2012-11-14 | 2019-10-21 | 美商再生元醫藥公司 | 重組細胞表面捕捉蛋白質 |
WO2014122143A1 (en) | 2013-02-05 | 2014-08-14 | Engmab Ag | Method for the selection of antibodies against bcma |
EP2762497A1 (en) | 2013-02-05 | 2014-08-06 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
EP2762496A1 (en) | 2013-02-05 | 2014-08-06 | EngMab AG | Method for the selection of antibodies against BCMA |
KR20210094673A (ko) | 2013-02-26 | 2021-07-29 | 로슈 글리카트 아게 | 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자 |
CN105143270B (zh) | 2013-02-26 | 2019-11-12 | 罗切格利卡特公司 | 双特异性t细胞活化抗原结合分子 |
KR20150122203A (ko) * | 2013-02-26 | 2015-10-30 | 로슈 글리카트 아게 | T 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자 |
BR112015023752B1 (pt) | 2013-03-15 | 2023-11-14 | Zyngenia, Inc. | Domínio de reconhecimento modular (mrd), complexo compreendendo mrd e cetuximabe, usos do complexo para inibir a angiogênese e tratar câncer e composição farmacêutica compreendendo o dito complexo |
UA118028C2 (uk) | 2013-04-03 | 2018-11-12 | Рош Глікарт Аг | Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування |
EP2789630A1 (en) | 2013-04-09 | 2014-10-15 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3e and ROR1 |
EP2992011B1 (en) | 2013-04-29 | 2017-12-13 | F. Hoffmann-La Roche AG | Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases |
MY172430A (en) | 2013-04-29 | 2019-11-25 | Hoffmann La Roche | Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use |
RU2019108429A (ru) | 2013-04-29 | 2019-05-06 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Модифицированные асимметричные антитела, связывающие fc-рецептор, и способы их применения |
WO2015025054A1 (en) | 2013-08-22 | 2015-02-26 | Medizinische Universität Wien | Dye-specific antibodies for prestained molecular weight markers and methods producing the same |
JP6534615B2 (ja) | 2013-09-27 | 2019-06-26 | 中外製薬株式会社 | ポリペプチド異種多量体の製造方法 |
JP6422956B2 (ja) | 2013-10-11 | 2018-11-14 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体 |
CN111499742B (zh) | 2013-11-21 | 2024-05-07 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗-α-突触核蛋白抗体及使用方法 |
CA2925677A1 (en) * | 2013-12-20 | 2015-06-25 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific her2 antibodies and methods of use |
BR112016013562A2 (pt) | 2013-12-20 | 2017-10-03 | Hoffmann La Roche | Anticorpos anti-tau(ps422) humanizados, seus usos, e formulações farmacêuticas |
JP6521464B2 (ja) | 2014-01-03 | 2019-05-29 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート |
RU2694981C2 (ru) | 2014-01-03 | 2019-07-18 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Ковалентно связанные конъюгаты хеликар-антитело против хеликара и их применения |
EP3960768A1 (en) | 2014-01-03 | 2022-03-02 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles |
BR112016015589A2 (pt) | 2014-01-06 | 2017-10-31 | Hoffmann La Roche | módulos de trânsito monovalentes para a barreira hematoencefálica |
KR20160107190A (ko) | 2014-01-15 | 2016-09-13 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 변형된 FcRn-결합 및 유지된 단백질 A-결합 성질을 갖는 Fc-영역 변이체 |
JOP20200094A1 (ar) | 2014-01-24 | 2017-06-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها |
JOP20200096A1 (ar) | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
EP3786186A1 (en) | 2014-02-28 | 2021-03-03 | Merus N.V. | Antibodies that bind egfr and erbb3 |
EP3110849B9 (en) | 2014-02-28 | 2021-04-07 | Merus N.V. | Antibody that binds erbb-2 and erbb-3 |
AU2015229103C9 (en) | 2014-03-14 | 2020-11-26 | Immutep S.A.S | Antibody molecules to LAG-3 and uses thereof |
WO2015142675A2 (en) | 2014-03-15 | 2015-09-24 | Novartis Ag | Treatment of cancer using chimeric antigen receptor |
SG10202107077QA (en) | 2014-04-02 | 2021-07-29 | Hoffmann La Roche | Method for detecting multispecific antibody light chain mispairing |
UA117289C2 (uk) * | 2014-04-02 | 2018-07-10 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Мультиспецифічне антитіло |
TWI726842B (zh) | 2014-04-07 | 2021-05-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 免疫活化抗原結合分子 |
CA2943707A1 (en) | 2014-05-06 | 2015-11-12 | Genentech, Inc. | Production of heteromultimeric proteins using mammalian cells |
US11505605B2 (en) | 2014-05-13 | 2022-11-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | T cell-redirected antigen-binding molecule for cells having immunosuppression function |
AR100978A1 (es) | 2014-06-26 | 2016-11-16 | Hoffmann La Roche | LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS |
MX2016015280A (es) | 2014-06-26 | 2017-03-03 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-bromodesoxiuridina(brdu) y metodos de uso. |
TW201623329A (zh) | 2014-06-30 | 2016-07-01 | 亞佛瑞司股份有限公司 | 針對骨調素截斷變異體的疫苗及單株抗體暨其用途 |
CN106661119A (zh) | 2014-07-01 | 2017-05-10 | 辉瑞公司 | 双特异性异二聚化双抗体及其用途 |
WO2016005545A1 (en) | 2014-07-10 | 2016-01-14 | Affiris Ag | Substances and methods for the use in prevention and/or treatment in huntington's disease |
SG10201913765YA (en) | 2014-07-21 | 2020-03-30 | Novartis Ag | Treatment of cancer using a cd33 chimeric antigen receptor |
US11542488B2 (en) | 2014-07-21 | 2023-01-03 | Novartis Ag | Sortase synthesized chimeric antigen receptors |
SG11201700476VA (en) | 2014-07-21 | 2017-02-27 | Novartis Ag | Treatment of cancer using humanized anti-bcma chimeric antigen receptor |
EP3193915A1 (en) | 2014-07-21 | 2017-07-26 | Novartis AG | Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars |
EP4205749A1 (en) | 2014-07-31 | 2023-07-05 | Novartis AG | Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing cells |
HUE044814T2 (hu) | 2014-08-04 | 2019-11-28 | Hoffmann La Roche | Bispecifikus, T-sejt-aktiváló antigénkötõ molekulák |
EP2982692A1 (en) | 2014-08-04 | 2016-02-10 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
WO2016025880A1 (en) | 2014-08-14 | 2016-02-18 | Novartis Ag | Treatment of cancer using gfr alpha-4 chimeric antigen receptor |
DK3183268T3 (da) | 2014-08-19 | 2020-05-11 | Univ Pennsylvania | Behandling af cancer ved anvendelse af en cd123-kimær antigenreceptor |
CN114621969A (zh) | 2014-09-17 | 2022-06-14 | 诺华股份有限公司 | 用于过继免疫疗法的具有嵌合受体的靶向细胞毒性细胞 |
MA40764A (fr) | 2014-09-26 | 2017-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité |
CA2963692A1 (en) * | 2014-10-09 | 2016-04-14 | Engmab Ag | Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1 |
TWI716362B (zh) | 2014-10-14 | 2021-01-21 | 瑞士商諾華公司 | 針對pd-l1之抗體分子及其用途 |
CN107108720A (zh) | 2014-11-06 | 2017-08-29 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有改变的FCRN结合的Fc区变体及其使用方法 |
WO2016071377A1 (en) | 2014-11-06 | 2016-05-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fc-region variants with modified fcrn- and protein a-binding properties |
CA2963175A1 (en) | 2014-11-10 | 2016-05-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies and methods of use in ophthalmology |
WO2016075035A1 (en) * | 2014-11-10 | 2016-05-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-ang2 antibodies and methods of use |
EP3023437A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-25 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
PL3789402T3 (pl) | 2014-11-20 | 2022-10-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Terapia skojarzona składająca się z dwuswoistych cząsteczek wiążących antygen aktywujących limfocyty T oraz antagonistów wiązania osi PD-1 |
WO2016087514A1 (en) | 2014-12-02 | 2016-06-09 | Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh | Anti-mutant calreticulin antibodies and their use in the diagnosis and therapy of myeloid malignancies |
ES2764111T3 (es) | 2014-12-03 | 2020-06-02 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos multiespecíficos |
US20180334490A1 (en) | 2014-12-03 | 2018-11-22 | Qilong H. Wu | Methods for b cell preconditioning in car therapy |
BR112017011170A2 (pt) | 2014-12-18 | 2018-02-27 | Hoffmann La Roche | método para determinar a citotoxicidade dependente do complemento de uma composição |
MX2017012939A (es) | 2015-04-08 | 2018-05-22 | Novartis Ag | Terapias cd20, terapias cd22 y terapias de combinacion con una celula que expresa un receptor quimerico de antigeno (car) de cd19. |
WO2016172583A1 (en) | 2015-04-23 | 2016-10-27 | Novartis Ag | Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker |
CN107787332B (zh) | 2015-04-24 | 2022-09-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 多特异性抗原结合蛋白 |
EP3744732A1 (en) | 2015-06-24 | 2020-12-02 | F. Hoffmann-La Roche AG | Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use |
IL302486A (en) * | 2015-06-24 | 2023-06-01 | Hoffmann La Roche | Antibodies against the transnephrine receptor with adapted affinity |
CN108026174B (zh) | 2015-07-10 | 2023-02-17 | 美勒斯公司 | 人cd3结合抗体 |
DK3319993T3 (da) | 2015-07-10 | 2020-04-20 | Genmab As | AXL-SPECIFIKKE antistof-lægemiddelkonjugater til kræftbehandling |
US20180222982A1 (en) | 2015-07-29 | 2018-08-09 | Novartis Ag | Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1 |
EP3316902A1 (en) | 2015-07-29 | 2018-05-09 | Novartis AG | Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3 |
LT3317301T (lt) | 2015-07-29 | 2021-07-26 | Novartis Ag | Kombinuotos terapijos, apimančios antikūno molekules prieš lag-3 |
EA202092435A3 (ru) | 2015-08-03 | 2021-06-30 | Энгмаб Сарл | Моноклональные антитела против bcma |
US10544229B2 (en) | 2015-09-30 | 2020-01-28 | Janssen Biotech, Inc. | Agonistic antibodies specifically binding CD40 and methods of use |
AR106188A1 (es) | 2015-10-01 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización |
AR106365A1 (es) | 2015-10-02 | 2018-01-10 | Hoffmann La Roche | Moléculas biespecíficas de unión a antígeno activadoras de células t |
WO2017055392A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xcd44v6 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
EP3150637A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-05 | F. Hoffmann-La Roche AG | Multispecific antibodies |
EP3913000A1 (en) | 2015-10-02 | 2021-11-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispecific anti-cd19xcd3 t cell activating antigen binding molecules |
MA43017A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Anticorps bispécifiques spécifiques d'un récepteur de co-stimulation du tnf |
WO2017055385A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xgd2 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
AR106189A1 (es) | 2015-10-02 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO |
HUE056033T2 (hu) | 2015-10-02 | 2022-01-28 | Hoffmann La Roche | Anti-pd1 antitestek és felhasználási módszerek |
WO2017055393A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xtim-3 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
CA2990755A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffman-La Roche Ag | Bispecific anti-ceaxcd3 t cell activating antigen binding molecules |
LT3356411T (lt) | 2015-10-02 | 2021-09-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecifiniai antikūnai, specifiniai pd1 ir tim3 |
CN107949574A (zh) * | 2015-10-02 | 2018-04-20 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 双特异性t细胞活化性抗原结合分子 |
EP3150636A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-05 | F. Hoffmann-La Roche AG | Tetravalent multispecific antibodies |
US20180282410A1 (en) | 2015-10-02 | 2018-10-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Anti-cd3xrob04 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
MX2018003822A (es) | 2015-10-02 | 2018-06-22 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso. |
CN108139394B (zh) | 2015-10-02 | 2020-10-30 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于确定同时结合的基于细胞的fret测定法 |
PE20181349A1 (es) | 2015-10-07 | 2018-08-22 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos biespecificos con tetravalencia para un receptor de fnt coestimulador |
CN108602888B (zh) | 2015-10-23 | 2022-10-04 | 美勒斯公司 | 抑制癌症生长的结合分子 |
EP3184547A1 (en) | 2015-10-29 | 2017-06-28 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-tpbg antibodies and methods of use |
EP4015533A1 (en) | 2015-10-29 | 2022-06-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-variant fc-region antibodies and methods of use |
KR20180069066A (ko) | 2015-10-30 | 2018-06-22 | 갤럭시 바이오테크, 엘엘씨 | 사멸 수용체 4 및 사멸 수용체 5에 결합하는 매우 강력한 항체 |
JP2019500893A (ja) | 2015-11-03 | 2019-01-17 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | Pd−1及びtim−3に特異的に結合する抗体及びそれらの使用 |
US11660340B2 (en) | 2015-11-18 | 2023-05-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Combination therapy using T cell redirection antigen binding molecule against cell having immunosuppressing function |
WO2017086419A1 (ja) | 2015-11-18 | 2017-05-26 | 中外製薬株式会社 | 液性免疫応答の増強方法 |
CA2997406C (en) | 2015-12-09 | 2024-05-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies or cytokine release |
EP3178848A1 (en) | 2015-12-09 | 2017-06-14 | F. Hoffmann-La Roche AG | Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies |
US20180371093A1 (en) | 2015-12-17 | 2018-12-27 | Novartis Ag | Antibody molecules to pd-1 and uses thereof |
RU2018125603A (ru) | 2015-12-17 | 2020-01-21 | Новартис Аг | Комбинация ингибитора с-мет с молекулой антитела к pd-1 и ее применения |
US11447575B2 (en) | 2015-12-18 | 2022-09-20 | Biogen Ma Inc. | Bispecific antibody platform |
EP3398965A4 (en) | 2015-12-28 | 2019-09-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION |
WO2017118675A1 (en) | 2016-01-08 | 2017-07-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods of treating cea-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-cea/anti-cd3 bispecific antibodies |
EP3405492B1 (en) | 2016-01-21 | 2020-10-21 | Novartis AG | Multispecific molecules targeting cll-1 |
AU2017225733A1 (en) | 2016-03-04 | 2018-09-27 | Novartis Ag | Cells expressing multiple chimeric antigen receptor (CAR) molecules and uses therefore |
MX2018010988A (es) | 2016-03-14 | 2019-01-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Farmaco terapeutico que induce lesion celular para usarse en terapia de cancer. |
HRP20230528T1 (hr) | 2016-03-22 | 2023-08-04 | F. Hoffmann - La Roche Ag | Bispecifične molekule t stanica aktivirane proteazom |
EP3432924A1 (en) | 2016-03-23 | 2019-01-30 | Novartis AG | Cell secreted minibodies and uses thereof |
SG11201809041TA (en) | 2016-04-15 | 2018-11-29 | Novartis Ag | Compositions and methods for selective protein expression |
CN109071635B (zh) | 2016-05-02 | 2023-09-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Contorsbody-单链靶标结合物 |
EP3458608A1 (en) | 2016-05-17 | 2019-03-27 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Stromal gene signatures for diagnosis and use in immunotherapy |
CA3059010A1 (en) | 2016-06-02 | 2018-12-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer |
EP3252078A1 (en) | 2016-06-02 | 2017-12-06 | F. Hoffmann-La Roche AG | Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer |
US20210177896A1 (en) | 2016-06-02 | 2021-06-17 | Novartis Ag | Therapeutic regimens for chimeric antigen receptor (car)- expressing cells |
EP3472177A2 (en) | 2016-06-17 | 2019-04-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Purification of multispecific antibodies |
CA3030841A1 (en) | 2016-07-14 | 2018-01-18 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Multiple bi-specific binding domain constructs with different epitope binding to treat cancer |
JP7219376B2 (ja) | 2016-07-15 | 2023-02-08 | ノバルティス アーゲー | キメラ抗原受容体をキナーゼ阻害薬と併用して使用したサイトカイン放出症候群の治療及び予防 |
KR20190034588A (ko) | 2016-07-28 | 2019-04-02 | 노파르티스 아게 | 키메라 항원 수용체 및 pd-1 억제제의 조합 요법 |
KR20190036551A (ko) | 2016-08-01 | 2019-04-04 | 노파르티스 아게 | Pro-m2 대식세포 분자의 억제제를 병용하는, 키메라 항원 수용체를 이용한 암의 치료 |
WO2018031258A1 (en) | 2016-08-12 | 2018-02-15 | Janssen Biotech, Inc. | Engineered antibodies and other fc-domain containing molecules with enhanced agonism and effector functions |
US20180044430A1 (en) | 2016-08-12 | 2018-02-15 | Janssen Biotech, Inc. | FC Engineered Anti-TNFR Superfamily Member Antibodies Having Enhanced Atonistic Activity and Methods of Using Them |
CN116731197A (zh) | 2016-09-19 | 2023-09-12 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 基于补体因子的亲和层析 |
EP3519437B1 (en) | 2016-09-30 | 2021-09-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispecific antibodies against p95her2 |
WO2018060035A1 (en) | 2016-09-30 | 2018-04-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Spr-based dual-binding assay for the functional analysis of multispecific molecules |
US10525083B2 (en) | 2016-10-07 | 2020-01-07 | Novartis Ag | Nucleic acid molecules encoding chimeric antigen receptors comprising a CD20 binding domain |
WO2018083204A1 (en) | 2016-11-02 | 2018-05-11 | Engmab Sàrl | Bispecific antibody against bcma and cd3 and an immunological drug for combined use in treating multiple myeloma |
TW201829463A (zh) | 2016-11-18 | 2018-08-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 抗hla-g抗體及其用途 |
US20230192896A1 (en) | 2016-11-23 | 2023-06-22 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Bispecific antibodies binding to coagulation factor ix and coagulation factor x |
CA3039430A1 (en) | 2016-12-19 | 2018-06-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy with targeted 4-1bb (cd137) agonists |
KR20190093588A (ko) | 2016-12-20 | 2019-08-09 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체 및 4-1bb(cd137) 작용물질의 병용 요법 |
BR112019009839A2 (pt) | 2016-12-21 | 2019-09-17 | Hoffmann La Roche | método para a produção enzimática de um anticorpo e anticorpo |
AU2017384276B9 (en) | 2016-12-21 | 2020-11-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | In vitro glycoengineering of antibodies |
MX2019006123A (es) | 2016-12-21 | 2019-08-12 | Hoffmann La Roche | Metodo para glicomanipulacion in vitro de anticuerpos. |
BR112019013189A2 (pt) | 2017-01-03 | 2019-12-10 | Hoffmann La Roche | moléculas de ligação ao antígeno biespecífica, polinucleotídeo, célula hospedeira, método de produção da molécula de ligação ao antígeno biespecífica, composição farmacêutica, uso, métodos para inibir o crescimento de células tumorais em um indivíduo e para tratar o câncer ou uma doença infecciosa |
WO2018140725A1 (en) | 2017-01-26 | 2018-08-02 | Novartis Ag | Cd28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy |
WO2018160731A1 (en) | 2017-02-28 | 2018-09-07 | Novartis Ag | Shp inhibitor compositions and uses for chimeric antigen receptor therapy |
SG11201908127WA (en) | 2017-03-10 | 2019-10-30 | Hoffmann La Roche | Method for producing multispecific antibodies |
EP3601346A1 (en) | 2017-03-29 | 2020-02-05 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor |
EP3601345A1 (en) | 2017-03-29 | 2020-02-05 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor |
KR20200074915A (ko) | 2017-03-31 | 2020-06-25 | 젠맵 홀딩 비.브이. | 이중특이적 항-cd37 항체, 모노클로날 항-cd37 항체 및 그의 사용 방법 |
AU2018246873B2 (en) | 2017-03-31 | 2021-05-06 | Merus N.V. | ErbB-2 and ErbB3 binding bispecific antibodies for use in the treatment f cells that have an NRG1 fusion gene |
CN110382525B (zh) | 2017-04-03 | 2023-10-20 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 免疫缀合物 |
JP7247101B2 (ja) | 2017-04-03 | 2023-03-28 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Steap-1に結合する抗体 |
MA49039A (fr) | 2017-04-04 | 2020-02-12 | Hoffmann La Roche | Nouvelles molécules bispécifiques de liaison à l'antigène capables de se lier spécifiquement à cd40 et à fap |
HUE060019T2 (hu) | 2017-04-05 | 2023-01-28 | Hoffmann La Roche | Anti-LAG3 antitestek |
SG11201909154SA (en) | 2017-04-05 | 2019-10-30 | Hoffmann La Roche | Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3 |
US20200055948A1 (en) | 2017-04-28 | 2020-02-20 | Novartis Ag | Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor |
US20200179511A1 (en) | 2017-04-28 | 2020-06-11 | Novartis Ag | Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor |
KR20200008148A (ko) | 2017-05-18 | 2020-01-23 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 치료용 항체의 적용-관련된 부반응의 감소 |
AU2018282094B2 (en) | 2017-06-05 | 2024-06-27 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies that specifically bind PD-1 and methods of use |
MA49259A (fr) | 2017-06-07 | 2020-04-15 | Genmab Bv | Anticorps thérapeutiques à base d'hexamères d'igg mutées |
CN110785187B (zh) | 2017-06-22 | 2024-04-05 | 诺华股份有限公司 | 针对cd73的抗体分子及其用途 |
US20200223924A1 (en) | 2017-06-27 | 2020-07-16 | Novartis Ag | Dosage regimens for anti-tim-3 antibodies and uses thereof |
EP3652209A2 (en) | 2017-07-11 | 2020-05-20 | Compass Therapeutics LLC | Agonist antibodies that bind human cd137 and uses thereof |
KR20200031659A (ko) | 2017-07-20 | 2020-03-24 | 노파르티스 아게 | 항-lag-3 항체의 투여 요법 및 그의 용도 |
CN107325184A (zh) * | 2017-08-08 | 2017-11-07 | 安徽大学 | 一种靶向egfr和her2的双特异性抗体及其应用 |
BR112020002695A2 (pt) | 2017-08-09 | 2020-08-25 | Merus N.V. | anticorpos que se ligam à egfr e cmet |
MX2020003497A (es) | 2017-10-20 | 2020-07-22 | Hoffmann La Roche | Metodo para generar anticuerpos multiespecificos a partir de anticuerpos monoespecificos. |
US11161911B2 (en) | 2017-10-23 | 2021-11-02 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-MUC1 antibodies and their uses |
AU2018358883A1 (en) | 2017-10-30 | 2020-04-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for in vivo generation of multispecific antibodies from monospecific antibodies |
US20210179709A1 (en) | 2017-10-31 | 2021-06-17 | Novartis Ag | Anti-car compositions and methods |
US11718679B2 (en) | 2017-10-31 | 2023-08-08 | Compass Therapeutics Llc | CD137 antibodies and PD-1 antagonists and uses thereof |
US20210324108A1 (en) | 2017-11-01 | 2021-10-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific 2+1 contorsbodies |
EP3704155A2 (en) | 2017-11-01 | 2020-09-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Combination therapy with targeted ox40 agonists |
KR20200089286A (ko) | 2017-11-16 | 2020-07-24 | 노파르티스 아게 | 조합 요법 |
US11851497B2 (en) | 2017-11-20 | 2023-12-26 | Compass Therapeutics Llc | CD137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof |
AU2018374469B2 (en) | 2017-11-29 | 2022-06-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Target interference suppressed anti-drug antibody assay |
BR112020011469A2 (pt) | 2017-12-21 | 2020-11-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | anticorpos, molécula de ligação ao antígeno biespecífica, um ou mais polinucleotídeos isolados, um ou mais vetores, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, composição farmacêutica, uso do anticorpo, método de tratamento de uma doença e invenção |
US11945839B2 (en) | 2017-12-22 | 2024-04-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Depletion of light chain mispaired antibody variants by hydrophobic interaction chromatography |
WO2019129677A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-vegf antibodies and methods of use |
JP7394767B2 (ja) | 2018-01-12 | 2023-12-08 | ジェンザイム・コーポレーション | ポリペプチドの定量化方法 |
US20210038659A1 (en) | 2018-01-31 | 2021-02-11 | Novartis Ag | Combination therapy using a chimeric antigen receptor |
EP3746470A1 (en) | 2018-01-31 | 2020-12-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Stabilized immunoglobulin domains |
WO2019149716A1 (en) | 2018-01-31 | 2019-08-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies comprising an antigen-binding site binding to lag3 |
CA3089287A1 (en) | 2018-02-08 | 2019-08-15 | Genentech, Inc. | Bispecific antigen-binding molecules and methods of use |
TWI829667B (zh) | 2018-02-09 | 2024-01-21 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 結合gprc5d之抗體 |
EP3765489A1 (en) | 2018-03-13 | 2021-01-20 | F. Hoffmann-La Roche AG | Therapeutic combination of 4-1 bb agonists with anti-cd20 antibodies |
AU2019235330A1 (en) | 2018-03-13 | 2020-07-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy with targeted 4-1BB (CD137) agonists |
EP3775184A1 (en) | 2018-03-29 | 2021-02-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Modulating lactogenic activity in mammalian cells |
US20210147547A1 (en) | 2018-04-13 | 2021-05-20 | Novartis Ag | Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof |
AR114789A1 (es) | 2018-04-18 | 2020-10-14 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos |
AR115052A1 (es) | 2018-04-18 | 2020-11-25 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos |
WO2019210153A1 (en) | 2018-04-27 | 2019-10-31 | Novartis Ag | Car t cell therapies with enhanced efficacy |
CN112166196A (zh) | 2018-05-18 | 2021-01-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 大核酸的靶向细胞内递送 |
AU2019272575A1 (en) | 2018-05-21 | 2020-12-10 | Compass Therapeutics Llc | Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by NK cells |
WO2019226658A1 (en) | 2018-05-21 | 2019-11-28 | Compass Therapeutics Llc | Multispecific antigen-binding compositions and methods of use |
WO2019226761A1 (en) | 2018-05-23 | 2019-11-28 | Celgene Corporation | Antiproliferative compounds and bispecific antibody against bcma and cd3 for combined use |
CR20200564A (es) | 2018-05-24 | 2021-06-21 | Janssen Biotech Inc | Anticuerpos anti-tmeff2 monoespecificos y multiespecificos y sus usos |
JOP20200303A1 (ar) | 2018-05-24 | 2020-11-23 | Janssen Biotech Inc | عوامل ربط psma واستخداماتها |
CN112912397A (zh) | 2018-05-24 | 2021-06-04 | 詹森生物科技公司 | 抗cd3抗体及其用途 |
WO2019227003A1 (en) | 2018-05-25 | 2019-11-28 | Novartis Ag | Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies |
WO2019232244A2 (en) | 2018-05-31 | 2019-12-05 | Novartis Ag | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
WO2019233842A1 (en) | 2018-06-08 | 2019-12-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Peptidic linker with reduced post-translational modification |
SG11202011830SA (en) | 2018-06-13 | 2020-12-30 | Novartis Ag | Bcma chimeric antigen receptors and uses thereof |
CA3104295A1 (en) | 2018-06-19 | 2019-12-26 | Atarga, Llc | Antibody molecules to complement component 5 and uses thereof |
AU2019290198A1 (en) * | 2018-06-21 | 2021-01-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific anti-PSMA x anti-CD28 antibodies and uses thereof |
EP3818082A1 (en) | 2018-07-04 | 2021-05-12 | F. Hoffmann-La Roche AG | Novel bispecific agonistic 4-1bb antigen binding molecules |
AR116109A1 (es) | 2018-07-10 | 2021-03-31 | Novartis Ag | Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos |
BR112021001201A2 (pt) | 2018-07-25 | 2021-04-27 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | anticorpo anti-tigit e uso do mesmo |
WO2020021465A1 (en) | 2018-07-25 | 2020-01-30 | Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. | Method of treatment of neuroendocrine tumors |
CA3051549A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-09 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal fc receptor |
MX2021003548A (es) | 2018-10-01 | 2021-05-27 | Hoffmann La Roche | Moleculas de union a antigeno biespecificas que comprenden el clon 212 anti-fap. |
CN112654641A (zh) | 2018-10-01 | 2021-04-13 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子 |
MA53812A (fr) | 2018-10-04 | 2021-08-11 | Genmab Holding B V | Compositions pharmaceutiques comprenant des anticorps anti-cd37 bispécifiques |
JP7208380B2 (ja) | 2018-10-26 | 2023-01-18 | エフ.ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | リコンビナーゼ媒介性カセット交換を使用した多重特異性抗体スクリーニング法 |
WO2020089437A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Engmab Sàrl | Combination therapy |
KR20210124959A (ko) | 2018-11-06 | 2021-10-15 | 젠맵 에이/에스 | 항체 제제 |
MX2021005594A (es) | 2018-11-13 | 2021-10-22 | Compass Therapeutics Llc | Constructos multiespecificos de union contra moleculas de puntos de control y usos de los mismos. |
CN113271945A (zh) | 2018-12-20 | 2021-08-17 | 诺华股份有限公司 | 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案和药物组合 |
WO2020128898A1 (en) | 2018-12-20 | 2020-06-25 | Novartis Ag | Pharmaceutical combinations |
TWI829831B (zh) | 2018-12-21 | 2024-01-21 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 結合cd3之抗體 |
WO2020127628A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tumor-targeted superagonistic cd28 antigen binding molecules |
SG11202106198YA (en) | 2018-12-21 | 2021-07-29 | Hoffmann La Roche | Antibody that binds to vegf and il-1beta and methods of use |
CN113286821A (zh) | 2018-12-21 | 2021-08-20 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 靶向肿瘤的激动性cd28抗原结合分子 |
CN111378045B (zh) * | 2018-12-28 | 2022-08-02 | 长春金赛药业有限责任公司 | 二价双特异性抗体及其制备方法、编码基因、宿主细胞、组合物 |
JP2022515473A (ja) | 2018-12-28 | 2022-02-18 | エフ.ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 免疫応答が増幅された患者における治療的使用のためのペプチド-mhc-i-抗体融合タンパク質 |
JP7241888B2 (ja) | 2018-12-30 | 2023-03-17 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | pH勾配SPRに基づく結合アッセイ |
US10871640B2 (en) | 2019-02-15 | 2020-12-22 | Perkinelmer Cellular Technologies Germany Gmbh | Methods and systems for automated imaging of three-dimensional objects |
KR20210129671A (ko) | 2019-02-15 | 2021-10-28 | 노파르티스 아게 | 3-(1-옥소-5-(피페리딘-4-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체 및 이의 용도 |
EA202192029A1 (ru) | 2019-02-15 | 2021-10-27 | Новартис Аг | Замещенные производные 3-(1-оксоизоиндолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона и варианты их применения |
EP3927371A1 (en) | 2019-02-22 | 2021-12-29 | Novartis AG | Combination therapies of egfrviii chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors |
CN113840842A (zh) | 2019-02-26 | 2021-12-24 | 詹森生物科技公司 | 利用双特异性抗EGFR/c-Met抗体的联合疗法和患者分层 |
EP3947440A1 (en) | 2019-03-29 | 2022-02-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for generating avid-binding multispecific antibodies |
EP3948281A1 (en) | 2019-03-29 | 2022-02-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Spr-based binding assay for the functional analysis of multivalent molecules |
AU2020253833A1 (en) | 2019-03-29 | 2021-10-28 | Atarga, Llc | Anti FGF23 antibody |
BR112021020532A2 (pt) | 2019-04-19 | 2022-03-15 | Janssen Biotech Inc | Métodos para tratamento de câncer de próstata com um anticorpo anti-psma/cd3 |
BR112021022089A2 (pt) | 2019-05-08 | 2022-02-08 | Janssen Biotech Inc | Materiais e métodos para modulação da imunidade mediada por células t |
WO2020226502A2 (en) | 2019-05-09 | 2020-11-12 | Merus N.V. | Variant domains for multimerizing proteins and separation thereof |
EP3966244A1 (en) | 2019-05-09 | 2022-03-16 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods of making antibodies |
WO2020229378A1 (en) | 2019-05-13 | 2020-11-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Interference-suppressed pharmacokinetic immunoassay |
JOP20210304A1 (ar) | 2019-05-14 | 2023-01-30 | Janssen Biotech Inc | علاجات مركبة باستخدام الأجسام المضادة ثنائية النوعية المضادة لمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR)/ مستقبل عامل نمو خلايا الكبد (c-Met) ومثبطات كيناز التيروسين الخاصة بمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) من الجيل الثالث |
CN114008081A (zh) * | 2019-06-19 | 2022-02-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生二价双特异性抗体表达细胞的方法 |
CN114008212A (zh) | 2019-06-19 | 2022-02-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生三价抗体表达细胞的方法 |
MX2021015648A (es) | 2019-06-19 | 2022-02-03 | Hoffmann La Roche | Metodo para la generacion de una celula que expresa un anticuerpo multiespecifico multivalente mediante integracion dirigida de multiples casetes de expresion en una organizacion definida. |
BR112021025425A2 (pt) | 2019-06-19 | 2022-02-01 | Hoffmann La Roche | Método para produzir uma célula de mamífero recombinante e uso de mrna de recombinase cre |
AU2020297940A1 (en) | 2019-06-19 | 2021-12-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the generation of a multivalent, bispecific antibody expressing cell by targeted integration of multiple expression cassettes in a defined organization |
JP7450647B2 (ja) | 2019-06-26 | 2024-03-15 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | Sirt-1遺伝子ノックアウトを有する哺乳類細胞株 |
AR119393A1 (es) | 2019-07-15 | 2021-12-15 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos que se unen a nkg2d |
CN114174342A (zh) | 2019-07-31 | 2022-03-11 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 与gprc5d结合的抗体 |
CN114174338A (zh) | 2019-07-31 | 2022-03-11 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 与gprc5d结合的抗体 |
JP2022547297A (ja) | 2019-09-09 | 2022-11-11 | エフ.ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | グルコセレブロシダーゼ変異体 |
EP4031579A2 (en) | 2019-09-18 | 2022-07-27 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use |
CN112574308A (zh) | 2019-09-30 | 2021-03-30 | 和铂医药(苏州)有限公司 | 靶向bcma的抗体、双特异性抗体及其用途 |
AU2020370086A1 (en) | 2019-10-21 | 2022-05-19 | Novartis Ag | Combination therapies with venetoclax and TIM-3 inhibitors |
BR112022007179A2 (pt) | 2019-10-21 | 2022-08-23 | Novartis Ag | Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos |
CN114641270A (zh) | 2019-11-15 | 2022-06-17 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 防止水性蛋白质溶液中可见颗粒的形成 |
AR120566A1 (es) | 2019-11-26 | 2022-02-23 | Novartis Ag | Receptores de antígeno quiméricos y sus usos |
MX2022007635A (es) | 2019-12-18 | 2022-07-19 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos que se unen a hla-a2/mage-a4. |
KR20220113791A (ko) | 2019-12-18 | 2022-08-16 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 이중특이적 항-ccl2 항체 |
EP4076660A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-10-26 | Novartis AG | Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases |
IL294131A (en) | 2019-12-23 | 2022-08-01 | Genentech Inc | Antibodies specific for apolipoprotein l1 and methods of use |
WO2021136772A1 (en) | 2020-01-02 | 2021-07-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for determining the amount of a therapeutic antibody in the brain |
AR121061A1 (es) | 2020-01-15 | 2022-04-13 | Hoffmann La Roche | Métodos para disminuir impurezas de los procesos de fabricación de proteínas recombinantes |
US20230058489A1 (en) | 2020-01-17 | 2023-02-23 | Novartis Ag | Combination comprising a tim-3 inhibitor and a hypomethylating agent for use in treating myelodysplastic syndrome or chronic myelomonocytic leukemia |
US20210222244A1 (en) | 2020-01-17 | 2021-07-22 | Becton, Dickinson And Company | Methods and compositions for single cell secretomics |
CN115397460A (zh) | 2020-02-27 | 2022-11-25 | 诺华股份有限公司 | 制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法 |
US20230126689A1 (en) | 2020-03-06 | 2023-04-27 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses |
EP4127153A2 (en) | 2020-03-26 | 2023-02-08 | Genentech, Inc. | Modified mammalian cells having reduced host cell proteins |
EP4126940A1 (en) | 2020-03-30 | 2023-02-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use |
AR121706A1 (es) | 2020-04-01 | 2022-06-29 | Hoffmann La Roche | Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap |
JP2023524068A (ja) | 2020-04-30 | 2023-06-08 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | サイトカイン関連有害事象を治療する方法 |
EP4149421A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | Prevention of visible particle formation in parenteral protein solutions |
EP4153130A1 (en) | 2020-05-19 | 2023-03-29 | F. Hoffmann-La Roche AG | The use of chelators for the prevention of visible particle formation in parenteral protein solutions |
EP4153315A1 (en) | 2020-05-21 | 2023-03-29 | Merus N.V. | Methods and means for the production of ig-like molecules |
US20230340081A1 (en) | 2020-06-08 | 2023-10-26 | Hoffmann-La Roche Inc. | Anti-hbv antibodies and methods of use |
AU2021294222A1 (en) | 2020-06-16 | 2023-01-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for determining the free antigen of an antibody in a sample |
AR122658A1 (es) | 2020-06-19 | 2022-09-28 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos que se unen a cd3 |
CN115916826A (zh) | 2020-06-19 | 2023-04-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 与CD3和FolR1结合的抗体 |
WO2021255146A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies binding to cd3 and cea |
US11780920B2 (en) | 2020-06-19 | 2023-10-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibodies binding to CD3 and CD19 |
JP2023530760A (ja) | 2020-06-23 | 2023-07-19 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Her2を標的とするアゴニストCD28抗原結合分子 |
MX2022015852A (es) | 2020-06-23 | 2023-01-24 | Novartis Ag | Regimen de dosificacion que comprende derivados de 3-(1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona. |
WO2021262783A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Genentech, Inc. | Apoptosis resistant cell lines |
WO2021260064A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3/anti-cd28 bispecific antigen binding molecules |
EP4155320A4 (en) | 2020-06-30 | 2024-03-27 | Nona Biosciences (Suzhou) Co., Ltd. | ANTI-B7H4 ANTIBODIES AND BISPECIFIC ANTIBODIES AND USE THEREOF |
KR20230015957A (ko) | 2020-06-30 | 2023-01-31 | 하버 바이오메드 유에스, 아이엔씨. | 이중특이적 항체 및 이의 용도 |
EP4178529A1 (en) | 2020-07-07 | 2023-05-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Alternative surfactants as stabilizers for therapeutic protein formulations |
EP4182025A1 (en) | 2020-07-16 | 2023-05-24 | Novartis AG | Anti-betacellulin antibodies, fragments thereof, and multi-specific binding molecules |
JP2023534458A (ja) | 2020-07-17 | 2023-08-09 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗Notch2抗体及び使用方法 |
CA3189520A1 (en) | 2020-07-24 | 2022-01-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the expression of an antibody-multimer-fusion |
WO2022026592A2 (en) | 2020-07-28 | 2022-02-03 | Celltas Bio, Inc. | Antibody molecules to coronavirus and uses thereof |
US20230271940A1 (en) | 2020-08-03 | 2023-08-31 | Novartis Ag | Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof |
CA3192344A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-03 | Genentech, Inc. | Crispr/cas9 multiplex knockout of host cell proteins |
EP4204021A1 (en) | 2020-08-31 | 2023-07-05 | Advanced Accelerator Applications International S.A. | Method of treating psma-expressing cancers |
US20230338587A1 (en) | 2020-08-31 | 2023-10-26 | Advanced Accelerator Applications International Sa | Method of treating psma-expressing cancers |
KR20230061458A (ko) | 2020-09-04 | 2023-05-08 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | Vegf-a 및 ang2에 결합하는 항체 및 사용 방법 |
AU2021342566A1 (en) | 2020-09-21 | 2023-03-02 | Genentech, Inc. | Purification of multispecific antibodies |
IL301366A (en) | 2020-09-24 | 2023-05-01 | Hoffmann La Roche | Mammalian cell lines with genetic knockout |
TW202233671A (zh) | 2020-10-20 | 2022-09-01 | 美商建南德克公司 | Peg結合抗mertk抗體及其使用方法 |
US20240002509A1 (en) | 2020-11-06 | 2024-01-04 | Novartis Ag | ANTIBODY Fc VARIANTS |
JP2023549504A (ja) | 2020-11-13 | 2023-11-27 | ノバルティス アーゲー | キメラ抗原受容体(car)発現細胞との組合せ療法 |
CN117916261A (zh) | 2020-11-16 | 2024-04-19 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 与靶向fap的cd40激动剂的组合疗法 |
EP4261225A1 (en) | 2020-12-10 | 2023-10-18 | Eutilex Co., Ltd. | Anti-pd-1 antibody and uses thereof |
KR20230120665A (ko) | 2020-12-17 | 2023-08-17 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항-hla-g 항체 및 이의 용도 |
CN116670282A (zh) | 2020-12-22 | 2023-08-29 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 靶向xbp1的寡核苷酸 |
CA3203257A1 (en) | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Li Li | Anti-b7-h3 antibody and uses thereof |
CN114716548A (zh) | 2021-01-05 | 2022-07-08 | (株)爱恩德生物 | 抗-fgfr3抗体及其用途 |
JP2024503826A (ja) | 2021-01-06 | 2024-01-29 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Pd1-lag3二重特異性抗体及びcd20 t細胞二重特異性抗体を用いる併用療法 |
MX2023008909A (es) | 2021-01-28 | 2023-10-23 | Janssen Biotech Inc | Proteínas de unión a psma y usos de estas. |
WO2022162569A1 (en) | 2021-01-29 | 2022-08-04 | Novartis Ag | Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof |
US20240101673A1 (en) | 2021-02-03 | 2024-03-28 | Mozart Therapeutics, Inc. | Binding agents and methods of using the same |
EP4288458A1 (en) | 2021-02-03 | 2023-12-13 | Genentech, Inc. | Multispecific binding protein degrader platform and methods of use |
US20240026019A1 (en) | 2021-02-04 | 2024-01-25 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Anti-tnfr2 antibody and use thereof |
WO2022175217A1 (en) | 2021-02-18 | 2022-08-25 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for resolving complex, multistep antibody interactions |
EP4301782A1 (en) | 2021-03-05 | 2024-01-10 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses |
US20220298248A1 (en) | 2021-03-09 | 2022-09-22 | Janssen Biotech, Inc. | Treatment of Cancers Lacking EGFR- Activating Mutations |
JP2024512377A (ja) | 2021-03-12 | 2024-03-19 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗klk7抗体、抗klk5抗体、多重特異性抗klk5/klk7抗体、及び使用方法 |
TW202304979A (zh) | 2021-04-07 | 2023-02-01 | 瑞士商諾華公司 | 抗TGFβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途 |
EP4320444A1 (en) | 2021-04-09 | 2024-02-14 | F. Hoffmann-La Roche AG | Process for selecting cell clones expressing a heterologous polypeptide |
WO2022217022A1 (en) | 2021-04-10 | 2022-10-13 | Profoundbio Us Co. | Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same |
IL307501A (en) | 2021-04-19 | 2023-12-01 | Hoffmann La Roche | Modified mammalian cells |
JP2024516631A (ja) | 2021-04-23 | 2024-04-16 | プロファウンドバイオ ユーエス カンパニー | 抗cd70抗体、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法 |
CA3217803A1 (en) | 2021-04-30 | 2022-11-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody |
AU2021443318A1 (en) | 2021-04-30 | 2023-09-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate |
TW202309094A (zh) | 2021-05-18 | 2023-03-01 | 美商健生生物科技公司 | 用於識別癌症患者以進行組合治療之方法 |
AR125874A1 (es) | 2021-05-18 | 2023-08-23 | Novartis Ag | Terapias de combinación |
WO2022243261A1 (en) | 2021-05-19 | 2022-11-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea |
CN117396599A (zh) | 2021-05-21 | 2024-01-12 | 基因泰克公司 | 用于生产目的重组产物的经修饰的细胞 |
CN113278071B (zh) | 2021-05-27 | 2021-12-21 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 抗人干扰素α受体1单克隆抗体及其应用 |
AR126009A1 (es) | 2021-06-02 | 2023-08-30 | Hoffmann La Roche | Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam |
TWI833244B (zh) | 2021-06-18 | 2024-02-21 | 大陸商和鉑醫藥(上海)有限責任公司 | 一種雙抗組合及其應用 |
KR20240021859A (ko) | 2021-06-18 | 2024-02-19 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 이중특이적 항-ccl2 항체 |
WO2023279092A2 (en) | 2021-07-02 | 2023-01-05 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for treating cancer |
US20230197278A1 (en) | 2021-07-13 | 2023-06-22 | Genentech, Inc. | Multi-variate model for predicting cytokine release syndrome |
EP4373859A1 (en) | 2021-07-22 | 2024-05-29 | F. Hoffmann-La Roche AG | Heterodimeric fc domain antibodies |
EP4377351A1 (en) | 2021-07-28 | 2024-06-05 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods and compositions for treating cancer |
WO2023012147A1 (en) | 2021-08-03 | 2023-02-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies and methods of use |
EP4380604A1 (en) | 2021-08-05 | 2024-06-12 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses |
WO2023016348A1 (en) | 2021-08-09 | 2023-02-16 | Harbour Biomed (Shanghai) Co., Ltd | Cldn18.2-targeting antibody, bispecific antibody and use thereof |
CN113683694B (zh) | 2021-09-03 | 2022-05-13 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 一种抗人tslp单克隆抗体及其应用 |
EP4395810A1 (en) | 2021-09-03 | 2024-07-10 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-cmet antibodies and their uses |
KR20240101546A (ko) | 2021-09-03 | 2024-07-02 | 고 테라퓨틱스, 인크. | 항-글리코-lamp1 항체 및 그의 용도 |
CN113603775B (zh) | 2021-09-03 | 2022-05-20 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 抗人白介素-33单克隆抗体及其应用 |
EP4148067A1 (en) | 2021-09-08 | 2023-03-15 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for the expression of an antibody-multimer-fusion |
EP4405396A2 (en) | 2021-09-20 | 2024-07-31 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer |
WO2023076876A1 (en) | 2021-10-26 | 2023-05-04 | Mozart Therapeutics, Inc. | Modulation of immune responses to viral vectors |
WO2023092004A1 (en) | 2021-11-17 | 2023-05-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders |
WO2023094282A1 (en) | 2021-11-25 | 2023-06-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Quantification of low amounts of antibody sideproducts |
US20230183360A1 (en) | 2021-12-09 | 2023-06-15 | Janssen Biotech, Inc. | Use of Amivantamab to Treat Colorectal Cancer |
AR127887A1 (es) | 2021-12-10 | 2024-03-06 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos que se unen a cd3 y plap |
AU2022423749A1 (en) | 2021-12-20 | 2024-06-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Agonistic ltbr antibodies and bispecific antibodies comprising them |
WO2023117325A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the determination of hydrolytic activity |
CA3241882A1 (en) | 2021-12-29 | 2023-07-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Generation of landing pad cell lines |
US20230322958A1 (en) | 2022-01-19 | 2023-10-12 | Genentech, Inc. | Anti-Notch2 Antibodies and Conjugates and Methods of Use |
US20230383010A1 (en) | 2022-02-07 | 2023-11-30 | Visterra, Inc. | Anti-idiotype antibody molecules and uses thereof |
TW202342057A (zh) | 2022-02-07 | 2023-11-01 | 美商健生生物科技公司 | 用於減少用egfr/met雙特異性抗體治療之患者的輸注相關反應之方法 |
US20230414750A1 (en) | 2022-03-23 | 2023-12-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy |
WO2023192850A1 (en) | 2022-03-29 | 2023-10-05 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Ilt3 and cd3 binding agents and methods of use thereof |
WO2023198661A1 (en) | 2022-04-12 | 2023-10-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fusion proteins targeted to the central nervous system |
WO2023198727A1 (en) | 2022-04-13 | 2023-10-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use |
WO2023202967A1 (en) | 2022-04-19 | 2023-10-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Improved production cells |
WO2023217933A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibody that binds to vegf-a and il6 and methods of use |
WO2023220695A2 (en) | 2022-05-13 | 2023-11-16 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer |
WO2023232961A1 (en) | 2022-06-03 | 2023-12-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Improved production cells |
WO2024003837A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Janssen Biotech, Inc. | Use of anti-egfr/anti-met antibody to treat gastric or esophageal cancer |
WO2024020564A1 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | Genentech, Inc. | Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof |
WO2024028386A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Ose Immunotherapeutics | Multifunctional molecule directed against cd28 |
WO2024030956A2 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-08 | Mozart Therapeutics, Inc. | Cd39-specific binding agents and methods of using the same |
WO2024030976A2 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for crossing the blood brain barrier |
WO2024079074A1 (en) | 2022-10-10 | 2024-04-18 | Universite D'aix Marseille | ANTI-sCD146 ANTIBODIES AND USES THEREOF |
WO2024079009A1 (en) | 2022-10-10 | 2024-04-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of a gprc5d tcb and proteasome inhibitors |
WO2024079015A1 (en) | 2022-10-10 | 2024-04-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of a gprc5d tcb and imids |
WO2024079010A1 (en) | 2022-10-10 | 2024-04-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of a gprc5d tcb and cd38 antibodies |
WO2024079069A1 (en) | 2022-10-12 | 2024-04-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for classifying cells |
WO2024089551A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Janssen Biotech, Inc. | Msln and cd3 binding agents and methods of use thereof |
WO2024094741A1 (en) | 2022-11-03 | 2024-05-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody |
WO2024110426A1 (en) | 2022-11-23 | 2024-05-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for increasing recombinant protein expression |
WO2024129594A1 (en) | 2022-12-12 | 2024-06-20 | Genentech, Inc. | Optimizing polypeptide sialic acid content |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2295537C2 (ru) * | 2000-10-20 | 2007-03-20 | Тугаи Сейяку Кабусики Кайся | Модифицированное агонистическое антитело |
Family Cites Families (221)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2, Inc., Danville, Calif. | Geänderte antikörper. |
US5677425A (en) | 1987-09-04 | 1997-10-14 | Celltech Therapeutics Limited | Recombinant antibody |
US5204244A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-20 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
US5202238A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-13 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
DE4118120A1 (de) | 1991-06-03 | 1992-12-10 | Behringwerke Ag | Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung |
US6511663B1 (en) | 1991-06-11 | 2003-01-28 | Celltech R&D Limited | Tri- and tetra-valent monospecific antigen-binding proteins |
EP0861893A3 (en) * | 1991-09-19 | 1999-11-10 | Genentech, Inc. | High level expression of immunoglobulin polypeptides |
EP0614375A1 (en) | 1991-11-26 | 1994-09-14 | Alkermes, Inc. | Process for the preparation of transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates |
GB9221657D0 (en) | 1992-10-15 | 1992-11-25 | Scotgen Ltd | Recombinant bispecific antibodies |
DE69233739D1 (de) | 1992-10-28 | 2008-08-07 | Genentech Inc | Verwendung von Antagonisten des Zellwachstumsfaktors VEGF |
US5747654A (en) | 1993-06-14 | 1998-05-05 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Recombinant disulfide-stabilized polypeptide fragments having binding specificity |
US6476198B1 (en) | 1993-07-13 | 2002-11-05 | The Scripps Research Institute | Multispecific and multivalent antigen-binding polypeptide molecules |
UA40577C2 (ru) | 1993-08-02 | 2001-08-15 | Мерк Патент Гмбх | Биспецифическая молекула, которая используется для лизиса опухолевых клеток, способ ее получения, моноклональное антитело (варианты), фармацевтический препарат, фармацевтический набор (варианты), способ удаления опухолевых клеток |
WO1995009917A1 (en) | 1993-10-07 | 1995-04-13 | The Regents Of The University Of California | Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies |
US5814464A (en) | 1994-10-07 | 1998-09-29 | Regeneron Pharma | Nucleic acids encoding TIE-2 ligand-2 |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
GB9504344D0 (en) | 1995-03-03 | 1995-04-19 | Unilever Plc | Antibody fragment production |
AU6873396A (en) | 1995-10-16 | 1997-05-07 | Unilever N.V. | A bifunctional or bivalent antibody fragment analogue |
US6750334B1 (en) | 1996-02-02 | 2004-06-15 | Repligen Corporation | CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor |
WO1997038102A1 (en) | 1996-04-04 | 1997-10-16 | Unilever Plc | Multivalent and multispecific antigen-binding protein |
WO1998045332A2 (en) | 1997-04-07 | 1998-10-15 | Genentech, Inc. | Humanized antibodies and methods for forming humanized antibodies |
PT1325932E (pt) | 1997-04-07 | 2005-06-30 | Genentech Inc | Anticorpos anti-vegf |
US7951917B1 (en) | 1997-05-02 | 2011-05-31 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
AU751659B2 (en) | 1997-05-02 | 2002-08-22 | Genentech Inc. | A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
US20020062010A1 (en) | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
DK1049787T3 (da) * | 1998-01-23 | 2005-04-04 | Vlaams Interuniv Inst Biotech | Antistofderivater med flere anvendelsesmuligheder |
DK2180007T4 (da) | 1998-04-20 | 2017-11-27 | Roche Glycart Ag | Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet |
DE19819846B4 (de) | 1998-05-05 | 2016-11-24 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Multivalente Antikörper-Konstrukte |
US7074405B1 (en) | 1998-06-22 | 2006-07-11 | Immunomedics, Inc. | Use of bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy |
US7138103B2 (en) | 1998-06-22 | 2006-11-21 | Immunomedics, Inc. | Use of bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy |
US6312689B1 (en) | 1998-07-23 | 2001-11-06 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor |
US20030035798A1 (en) | 2000-08-16 | 2003-02-20 | Fang Fang | Humanized antibodies |
AU1687500A (en) | 1998-12-16 | 2000-07-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Antihuman vegf monoclonal antibody |
US6897044B1 (en) | 1999-01-28 | 2005-05-24 | Biogen Idec, Inc. | Production of tetravalent antibodies |
CN1232039A (zh) | 1999-04-02 | 1999-10-20 | 中国人民解放军海军总医院 | 一种基因工程双特异抗体及其应用 |
ES2571230T3 (es) | 1999-04-09 | 2016-05-24 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional |
HUP0300919A2 (hu) | 2000-03-24 | 2003-07-28 | Micromet Ag | Többfunkciós polipeptidek NKG2D receptor komplex epitóp kötőhellyel |
EP1272647B1 (en) | 2000-04-11 | 2014-11-12 | Genentech, Inc. | Multivalent antibodies and uses therefor |
FR2807767B1 (fr) | 2000-04-12 | 2005-01-14 | Lab Francais Du Fractionnement | Anticorps monoclonaux anti-d |
US20020103345A1 (en) | 2000-05-24 | 2002-08-01 | Zhenping Zhu | Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production |
EP1294904A1 (en) | 2000-06-30 | 2003-03-26 | Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. | Heterodimeric fusion proteins |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
WO2002033073A1 (fr) | 2000-10-20 | 2002-04-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anticorps agoniste degrade |
AU2002327164A1 (en) | 2001-01-29 | 2002-12-09 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Engineered tetravalent antibodies and methods of use |
US20030099974A1 (en) | 2001-07-18 | 2003-05-29 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Novel genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer |
EP1293514B1 (en) | 2001-09-14 | 2006-11-29 | Affimed Therapeutics AG | Multimeric single chain tandem Fv-antibodies |
US7658924B2 (en) | 2001-10-11 | 2010-02-09 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
US7521053B2 (en) | 2001-10-11 | 2009-04-21 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
US7138370B2 (en) | 2001-10-11 | 2006-11-21 | Amgen Inc. | Specific binding agents of human angiopoietin-2 |
US7053202B2 (en) | 2001-10-19 | 2006-05-30 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Immunoglobulin DNA cassette molecules, monobody constructs, methods of production, and methods of use therefor |
HUP0600342A3 (en) | 2001-10-25 | 2011-03-28 | Genentech Inc | Glycoprotein compositions |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
US7317091B2 (en) | 2002-03-01 | 2008-01-08 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
KR20040088572A (ko) | 2002-03-01 | 2004-10-16 | 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 | 제거율 증강을 위한 양특이성 항체 점 돌연변이들 |
US8188231B2 (en) | 2002-09-27 | 2012-05-29 | Xencor, Inc. | Optimized FC variants |
US7332585B2 (en) | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The California University | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
US20070274998A1 (en) | 2002-04-29 | 2007-11-29 | Genpatzz Pharmacogentetics Ag | Novel Bispecific Molecules For Use In Therapy And Diagnosis |
US7081443B2 (en) | 2002-05-21 | 2006-07-25 | Korea Advanced Institutes Of Science And Technology (Kaist) | Chimeric comp-ang1 molecule |
ATE328906T1 (de) | 2002-06-28 | 2006-06-15 | Domantis Ltd | Dual-specifische liganden mit erhöhter halbwertszeit |
SI1549344T1 (sl) | 2002-10-10 | 2015-05-29 | Merck Patent Gmbh | FARMACEVTSKI SESTAVKI PROTI RECEPTORJEM ErbB1 |
US7534427B2 (en) | 2002-12-31 | 2009-05-19 | Immunomedics, Inc. | Immunotherapy of B cell malignancies and autoimmune diseases using unconjugated antibodies and conjugated antibodies and antibody combinations and fusion proteins |
ES2542885T3 (es) | 2003-01-22 | 2015-08-12 | Roche Glycart Ag | Constructos de fusión y uso de los mismos para producir anticuerpos con mayor afinidad de unión al receptor de Fc y función efectora |
EP1592713A2 (en) | 2003-02-13 | 2005-11-09 | Pharmacia Corporation | Antibodies to c-met for the treatment of cancers |
TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
KR20180014881A (ko) | 2003-05-30 | 2018-02-09 | 제넨테크, 인크. | 항-vegf 항체를 사용한 치료 |
WO2004106375A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Merus Biopharmaceuticals B.V. I.O. | Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs |
WO2005000898A2 (en) | 2003-06-27 | 2005-01-06 | Biogen Idec Ma Inc. | Use of hydrophobic-interaction-chromatography or hinge-region modifications for the production of homogeneous antibody-solutions |
EP1638510B1 (en) | 2003-07-01 | 2015-09-02 | Immunomedics, Inc. | Multivalent carriers of bi-specific antibodies |
US7579157B2 (en) | 2003-07-10 | 2009-08-25 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibody selection method against IGF-IR |
CA2534077A1 (en) | 2003-07-29 | 2005-02-10 | Morphotek Inc. | Antibodies and methods for generating genetically altered antibodies with enhanced effector function |
WO2005044853A2 (en) | 2003-11-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-vegf antibodies |
US20050106667A1 (en) | 2003-08-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
CA2536408A1 (en) | 2003-08-22 | 2005-03-03 | Biogen Idec Ma Inc. | Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same |
EP1663306A2 (en) | 2003-09-05 | 2006-06-07 | Genentech, Inc. | Antibodies with altered effector functions |
US20050064509A1 (en) | 2003-09-23 | 2005-03-24 | The Regents Of The University Of California | Use of templated self assembly to create novel multifunctional species |
CN1326881C (zh) | 2003-09-29 | 2007-07-18 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 一种三价双特异性抗体,其制备方法及用途 |
ME01775B (me) | 2003-11-05 | 2011-02-28 | Glycart Biotechnology Ag | Cd20 antitijela sa povećanim afinitetom vezivanja za fc receptor i efektornom funkcijom |
JP4833850B2 (ja) | 2003-11-21 | 2011-12-07 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | Il−17活性阻害による多発性硬化症を治療するための方法 |
BRPI0417107A (pt) | 2003-12-19 | 2007-02-06 | Genentech Inc | fragmento de anticorpo, métodos de preparação do fragmento de anticorpo, ácido nucléico isolado, composições, célula hospedeira e métodos de fabricação e de geração de fragmento de anticorpo |
EP1725585A2 (en) | 2004-03-10 | 2006-11-29 | Lonza Ltd | Method for producing antibodies |
EP2053062A1 (en) | 2004-03-24 | 2009-04-29 | Xencor, Inc. | Immunoglobin variants outside the Fc region |
WO2006020258A2 (en) | 2004-07-17 | 2006-02-23 | Imclone Systems Incorporated | Novel tetravalent bispecific antibody |
CN101052654A (zh) | 2004-08-19 | 2007-10-10 | 健泰科生物技术公司 | 具有改变的效应子功能的多肽变体 |
ES2579805T3 (es) | 2004-09-23 | 2016-08-16 | Genentech, Inc. | Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína |
JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
AU2005335714B2 (en) | 2004-11-10 | 2012-07-26 | Macrogenics, Inc. | Engineering Fc antibody regions to confer effector function |
US7973140B2 (en) | 2004-12-21 | 2011-07-05 | Medimmune Limited | Antibodies directed to angiopoietin-2 and uses thereof |
EP1871805B1 (en) | 2005-02-07 | 2019-09-25 | Roche Glycart AG | Antigen binding molecules that bind egfr, vectors encoding same, and uses thereof |
CN101163501A (zh) | 2005-02-23 | 2008-04-16 | 梅里麦克制药股份有限公司 | 调节生物活性的双特异性结合剂 |
CN101218251A (zh) | 2005-02-28 | 2008-07-09 | 森托科尔公司 | 异二聚体蛋白结合组合物 |
KR101374454B1 (ko) | 2005-03-31 | 2014-03-17 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 회합제어에 의한 폴리펩티드 제조방법 |
EP1870458B1 (en) | 2005-03-31 | 2018-05-09 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | sc(Fv)2 STRUCTURAL ISOMERS |
TW200720289A (en) | 2005-04-01 | 2007-06-01 | Hoffmann La Roche | Antibodies against CCR5 and uses thereof |
JP5838021B2 (ja) | 2005-04-15 | 2015-12-24 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | 共有結合型ダイアボディとその使用 |
EP1874816A4 (en) | 2005-04-26 | 2010-08-25 | Medimmune Inc | MODULATION OF THE ANTIBODY EFFECTOR FUNCTION BY "HINGE" DOMENGINE ENGINEERING |
JP5315489B2 (ja) | 2005-04-26 | 2013-10-16 | アール クレア アンド カンパニー | エフェクター機能が増強されたヒトIgG抗体を作製する方法 |
KR101360671B1 (ko) | 2005-06-10 | 2014-02-07 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | sc(Fv)2를 함유하는 의약조성물 |
WO2006132352A1 (ja) | 2005-06-10 | 2006-12-14 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | sc(Fv)2を含有する医薬組成物 |
US8008453B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
US7612181B2 (en) | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
CA2618482C (en) | 2005-08-19 | 2014-10-07 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobin and uses thereof |
TWI615407B (zh) | 2005-08-26 | 2018-02-21 | 羅齊克雷雅公司 | 具有經改變細胞傳訊活性之改質抗原結合分子 |
WO2007044887A2 (en) | 2005-10-11 | 2007-04-19 | Transtarget, Inc. | Method for producing a population of homogenous tetravalent bispecific antibodies |
US7666622B2 (en) | 2005-10-19 | 2010-02-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Monomeric self-associating fusion polypeptides and therapeutic uses thereof |
TW200732350A (en) | 2005-10-21 | 2007-09-01 | Amgen Inc | Methods for generating monovalent IgG |
CA2633211A1 (en) | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Astrazeneca Ab | Combination of angiopoietin-2 antagonist and of vegf-a, kdr and/or flt1 antagonist for treating cancer |
FR2894959B1 (fr) | 2005-12-15 | 2008-02-29 | Galderma Res & Dev | Derives biphenyliques agonistes selectifs du recepteur rar-gamma |
AR059066A1 (es) | 2006-01-27 | 2008-03-12 | Amgen Inc | Combinaciones del inhibidor de la angiopoyetina -2 (ang2) y el inhibidor del factor de crecimiento endotelial vascular (vegf) |
AU2007215013A1 (en) | 2006-02-15 | 2007-08-23 | Imclone Systems Incorporated | Functional antibodies |
EP2006305B1 (en) | 2006-03-03 | 2016-08-10 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Modified antibody with enhanced bioactivity |
AU2007227292B2 (en) | 2006-03-17 | 2012-04-12 | Biogen Ma Inc. | Stabilized polypeptide compositions |
WO2007108013A2 (en) | 2006-03-22 | 2007-09-27 | National Institute Of Immunology | Novel bioconjugates as therapeutic agent and synthesis thereof |
CA2646965C (en) | 2006-03-24 | 2016-06-21 | Jonathan H. Davis | Engineered heterodimeric protein domains |
US20070274985A1 (en) | 2006-05-26 | 2007-11-29 | Stefan Dubel | Antibody |
NZ574093A (en) | 2006-06-12 | 2011-03-31 | Symphogen As | Pan-cell surface receptor- specific therapeutics |
WO2007147901A1 (en) | 2006-06-22 | 2007-12-27 | Novo Nordisk A/S | Production of bispecific antibodies |
WO2008005828A2 (en) | 2006-06-30 | 2008-01-10 | Novo Nordisk A/S | PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE COMPOSITIONS COMPRISING ANTIBODY MOLECULES SPECIFIC TO LAMININ-5 α3 CHAIN DOMAINS G1G2 AND USE THEREOF |
AR062223A1 (es) | 2006-08-09 | 2008-10-22 | Glycart Biotechnology Ag | Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas |
AU2007285763B2 (en) | 2006-08-18 | 2011-12-15 | Armagen Technologies, Inc. | Agents for blood-brain barrier delivery |
DK2059533T3 (da) | 2006-08-30 | 2013-02-25 | Genentech Inc | Multispecifikke antistoffer |
CN101205255A (zh) | 2006-12-14 | 2008-06-25 | 上海中信国健药业有限公司 | 抗cd20四价抗体、其制备方法和应用 |
JP2010513566A (ja) | 2006-12-19 | 2010-04-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
US20080226635A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-09-18 | Hans Koll | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
PT2716301T (pt) | 2007-02-16 | 2017-07-04 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | Anticorpos contra erbb3 e suas utilizações |
US10259860B2 (en) | 2007-02-27 | 2019-04-16 | Aprogen Inc. | Fusion proteins binding to VEGF and angiopoietin |
AU2008282218A1 (en) | 2007-07-31 | 2009-02-05 | Medimmune, Llc | Multispecific epitope binding proteins and uses thereof |
JP5485152B2 (ja) | 2007-08-15 | 2014-05-07 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | 単一特異性および多特異性抗体ならびに使用方法 |
JP5702603B2 (ja) | 2007-08-15 | 2015-04-15 | アイエスピー インヴェストメンツ インコーポレイテッドIsp Investments Inc. | 重合可能な官能基を含むポリビニルアミドポリマー |
DE102007038753A1 (de) | 2007-08-16 | 2009-02-19 | Giesecke & Devrient Gmbh | Vorrichtung und Verfahren für die Kalibrierung eines Sensorsystems |
JP2010538012A (ja) | 2007-08-28 | 2010-12-09 | バイオジェン アイデック マサチューセッツ インコーポレイテッド | Igf−1rの複数のエピトープに結合する組成物 |
EP2050764A1 (en) | 2007-10-15 | 2009-04-22 | sanofi-aventis | Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
JP6157046B2 (ja) | 2008-01-07 | 2017-07-05 | アムジェン インコーポレイテッド | 静電的ステアリング(electrostaticsteering)効果を用いた抗体Fcヘテロ二量体分子を作製するための方法 |
JP2009181819A (ja) | 2008-01-31 | 2009-08-13 | Hitachi High-Technologies Corp | 荷電粒子線装置 |
JP4438875B2 (ja) | 2008-02-27 | 2010-03-24 | 三菱自動車工業株式会社 | 車両の貯蔵燃料量推定装置 |
DK2132228T3 (da) | 2008-04-11 | 2011-10-10 | Emergent Product Dev Seattle | CD37-immunterapeutisk middel og kombination med bifunktionelt kemoterapeutisk middel deraf |
KR20110031369A (ko) | 2008-07-08 | 2011-03-25 | 아보트 러보러터리즈 | 프로스타글란딘 e2 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
EP2342231A1 (en) | 2008-09-26 | 2011-07-13 | Roche Glycart AG | Bispecific anti-egfr/anti-igf-1r antibodies |
US8268314B2 (en) | 2008-10-08 | 2012-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies |
CN102300879A (zh) | 2008-12-04 | 2011-12-28 | 雅培制药有限公司 | 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途 |
CN102356092B (zh) | 2009-03-20 | 2014-11-05 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 双特异性抗-her抗体 |
WO2010112194A1 (en) | 2009-04-02 | 2010-10-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antigen-binding polypeptides and multispecific antibodies comprising them |
EP2414391B1 (en) | 2009-04-02 | 2018-11-28 | Roche Glycart AG | Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments |
BRPI1012589A2 (pt) | 2009-04-07 | 2016-03-22 | Roche Glycart Ag | anticorpos bi-específicos anti-erbb-3/anti-c-met |
WO2010115553A1 (en) | 2009-04-07 | 2010-10-14 | Roche Glycart Ag | Bispecific anti-erbb-2/anti-c-met antibodies |
PL2417156T3 (pl) | 2009-04-07 | 2015-07-31 | Roche Glycart Ag | Trójwartościowe, bispecyficzne przeciwciała |
EP3505636A1 (en) | 2009-04-27 | 2019-07-03 | OncoMed Pharmaceuticals, Inc. | Method for making heteromultimeric molecules |
AU2010252284A1 (en) | 2009-05-27 | 2011-11-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tri- or tetraspecific antibodies |
US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
US8703132B2 (en) | 2009-06-18 | 2014-04-22 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific, tetravalent antigen binding proteins |
US9493578B2 (en) | 2009-09-02 | 2016-11-15 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
RU2573915C2 (ru) | 2009-09-16 | 2016-01-27 | Дженентек, Инк. | Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применение |
CA2773515C (en) | 2009-09-29 | 2015-04-28 | Roche Glycart Ag | Bispecific death receptor agonistic antibodies |
LT2519543T (lt) | 2009-12-29 | 2016-10-10 | Emergent Product Development Seattle, Llc | Heterodimerus rišantys baltymai ir jų panaudojimas |
US8318406B2 (en) | 2010-02-03 | 2012-11-27 | Eastman Kodak Company | Method for fixing a flexographic plate |
JP5767207B2 (ja) | 2010-03-26 | 2015-08-19 | 協和発酵キリン株式会社 | 新規修飾部位導入抗体および抗体フラグメント |
TWI426920B (zh) * | 2010-03-26 | 2014-02-21 | Hoffmann La Roche | 雙專一性、雙價抗-vegf/抗-ang-2抗體 |
WO2011143545A1 (en) | 2010-05-14 | 2011-11-17 | Rinat Neuroscience Corporation | Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them |
JP5997154B2 (ja) | 2010-08-16 | 2016-09-28 | ノビミューン エスアー | 多重特異性多価抗体の生成方法 |
EP2609112B1 (en) | 2010-08-24 | 2017-11-22 | Roche Glycart AG | Activatable bispecific antibodies |
BR112013001847A2 (pt) | 2010-08-24 | 2016-05-31 | Hoffmann La Roche | anticorpo biespecífico, método de preparação do anticorpo biespecífico, do anticorpo biespecífico trivalente, métodos e composição farmacêutica |
US9187564B2 (en) | 2010-10-05 | 2015-11-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibodies against human TWEAK and uses thereof |
JP6167040B2 (ja) | 2010-11-05 | 2017-07-19 | ザイムワークス,インコーポレイテッド | Fcドメイン中に突然変異を有する、安定したヘテロ二量体抗体の設計 |
TW201305200A (zh) | 2010-11-30 | 2013-02-01 | Genentech Inc | 低親和力血腦障壁受體抗體及其用途 |
EP2647707B1 (en) | 2010-11-30 | 2018-09-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cytotoxicity-inducing therapeutic agent |
EP2681239B8 (en) | 2011-02-28 | 2015-09-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antigen binding proteins |
MX342034B (es) | 2011-02-28 | 2016-09-12 | Hoffmann La Roche | Proteinas monovalentes que se unen a antigenos. |
CN108285488B (zh) | 2011-03-25 | 2023-01-24 | 伊克诺斯科学公司 | 异二聚体免疫球蛋白 |
BR112013026423A2 (pt) | 2011-04-20 | 2016-11-29 | Roche Glycart Ag | método e construtos para a passagem de pendente do ph da barreira sangue-cérebro |
CN102302039B (zh) | 2011-06-16 | 2014-01-29 | 北京泛博化学股份有限公司 | 双阳离子季铵盐络合碘消毒剂及其应用 |
JP5997151B2 (ja) | 2011-06-30 | 2016-09-28 | 中外製薬株式会社 | ヘテロ二量化ポリペプチド |
WO2013012733A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto |
CA2844143C (en) | 2011-08-23 | 2018-07-31 | Roche Glycart Ag | Fc-free antibodies comprising two fab fragments and methods of use |
KR101870555B1 (ko) | 2011-08-23 | 2018-06-22 | 로슈 글리카트 아게 | T 세포 활성화 항원 및 종양 항원에 대해 특이적인 이중특이적 항체 및 이의 사용 방법 |
MX349095B (es) | 2011-08-23 | 2017-07-11 | Roche Glycart Ag | Moleculas biespecificas de union a antigeno. |
HUE038225T2 (hu) | 2011-08-23 | 2018-10-29 | Roche Glycart Ag | Bispecifikus, T-sejtaktiváló antigénkötõ, molekulák |
KR102398736B1 (ko) | 2011-10-31 | 2022-05-16 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 중쇄와 경쇄의 회합이 제어된 항원 결합 분자 |
LT2794658T (lt) | 2011-12-19 | 2017-05-10 | Synimmune Gmbh | Bispecifinė antikūno molekulė |
SI2794905T1 (sl) | 2011-12-20 | 2020-08-31 | Medimmune, Llc | Modificirani polipeptidi za ogrodja bispecifičnega protitelesa |
JP6007310B2 (ja) | 2012-04-05 | 2016-10-12 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | ヒトtweak及びヒトil17に対する二重特異性抗体並びにその使用 |
PT2838917T (pt) | 2012-04-20 | 2019-09-12 | Merus Nv | Métodos e meios para a produção de moléculas similares a ig heterodiméricas |
BR112014026990A2 (pt) | 2012-05-24 | 2017-07-11 | Hoffmann La Roche | anticorpo , ácido nucleico , vetores , célula hospedeira , composição farmacêutica , uso de um anticorpo e método para o tratamento de um paciente com necessidade de terapia. |
US20150239991A1 (en) | 2012-09-25 | 2015-08-27 | Glenmark Pharmaceuticals S.A. | Purification of hetero-dimeric immunoglobulins |
RU2015117393A (ru) | 2012-10-08 | 2016-12-10 | Роше Гликарт Аг | Лишенные fc антитела, содержащие два Fab-фрагмента, и способы их применения |
UY35148A (es) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Amgen Inc | Immunoglobulinas heterodiméricas |
CN105026430A (zh) | 2012-11-28 | 2015-11-04 | 酵活有限公司 | 工程化免疫球蛋白重链-轻链对及其用途 |
US10766960B2 (en) | 2012-12-27 | 2020-09-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Heterodimerized polypeptide |
US9605084B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-03-28 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
UA118028C2 (uk) | 2013-04-03 | 2018-11-12 | Рош Глікарт Аг | Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування |
JP6721505B2 (ja) | 2013-09-05 | 2020-07-15 | アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 定常領域が修飾された(constant chain modified)二重特異性五価及び六価Ig−M抗体 |
JP6422956B2 (ja) | 2013-10-11 | 2018-11-14 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体 |
CA2925677A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific her2 antibodies and methods of use |
BR112016015589A2 (pt) | 2014-01-06 | 2017-10-31 | Hoffmann La Roche | módulos de trânsito monovalentes para a barreira hematoencefálica |
KR20160107190A (ko) | 2014-01-15 | 2016-09-13 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 변형된 FcRn-결합 및 유지된 단백질 A-결합 성질을 갖는 Fc-영역 변이체 |
WO2015107025A1 (en) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fc-region variants with modified fcrn-binding properties |
RU2698969C2 (ru) | 2014-01-15 | 2019-09-02 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Варианты fc-области с улучшенной способностью связываться с белком а |
UA117289C2 (uk) | 2014-04-02 | 2018-07-10 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Мультиспецифічне антитіло |
CN106573986A (zh) | 2014-07-29 | 2017-04-19 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 多特异性抗体 |
EP2982692A1 (en) | 2014-08-04 | 2016-02-10 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
HUE044814T2 (hu) | 2014-08-04 | 2019-11-28 | Hoffmann La Roche | Bispecifikus, T-sejt-aktiváló antigénkötõ molekulák |
CA2962124A1 (en) | 2014-10-08 | 2016-04-14 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of bispecific antibodies specific for fap and dr5 and chemotherapeutic agents |
CA2963692A1 (en) | 2014-10-09 | 2016-04-14 | Engmab Ag | Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1 |
MX2017006626A (es) | 2014-11-20 | 2017-08-21 | Hoffmann La Roche | Cadenas ligeras comunes y metodos de uso. |
MX2017006571A (es) | 2014-11-20 | 2017-09-29 | Hoffmann La Roche | Moleculas de union a antigeno biespecificas activadoras de celulas t. |
WO2017055392A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xcd44v6 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
WO2017055385A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xgd2 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
CN107949574A (zh) | 2015-10-02 | 2018-04-20 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 双特异性t细胞活化性抗原结合分子 |
EP3150636A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-05 | F. Hoffmann-La Roche AG | Tetravalent multispecific antibodies |
WO2017055318A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Cd33xcd3 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
LT3356411T (lt) | 2015-10-02 | 2021-09-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecifiniai antikūnai, specifiniai pd1 ir tim3 |
WO2017055393A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xtim-3 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
WO2017055539A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Multispecific antibodies |
MA43017A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Anticorps bispécifiques spécifiques d'un récepteur de co-stimulation du tnf |
AR106365A1 (es) | 2015-10-02 | 2018-01-10 | Hoffmann La Roche | Moléculas biespecíficas de unión a antígeno activadoras de células t |
EP3913000A1 (en) | 2015-10-02 | 2021-11-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispecific anti-cd19xcd3 t cell activating antigen binding molecules |
CA2990755A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffman-La Roche Ag | Bispecific anti-ceaxcd3 t cell activating antigen binding molecules |
PE20181349A1 (es) | 2015-10-07 | 2018-08-22 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos biespecificos con tetravalencia para un receptor de fnt coestimulador |
-
2008
- 2008-12-11 US US12/332,486 patent/US20090162359A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-16 KR KR1020107013760A patent/KR101249607B1/ko active IP Right Grant
- 2008-12-16 CA CA2709023A patent/CA2709023C/en active Active
- 2008-12-16 AU AU2008340693A patent/AU2008340693A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-16 EP EP08864374.7A patent/EP2225279B1/en active Active
- 2008-12-16 JP JP2010538441A patent/JP5281097B2/ja active Active
- 2008-12-16 RU RU2010129549/10A patent/RU2587616C2/ru active
- 2008-12-16 WO PCT/EP2008/010703 patent/WO2009080252A1/en active Application Filing
- 2008-12-16 BR BRPI0821791-2A patent/BRPI0821791B1/pt active IP Right Grant
- 2008-12-16 ES ES08864374.7T patent/ES2469791T3/es active Active
- 2008-12-16 NZ NZ585627A patent/NZ585627A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-12-16 CN CN2008801219004A patent/CN101903404B/zh active Active
- 2008-12-16 MX MX2010006396A patent/MX2010006396A/es active IP Right Grant
- 2008-12-17 TW TW097149168A patent/TWI359027B/zh not_active IP Right Cessation
- 2008-12-17 AR ARP080105485A patent/AR071547A1/es not_active Application Discontinuation
- 2008-12-17 CL CL2008003781A patent/CL2008003781A1/es unknown
- 2008-12-17 PE PE2008002108A patent/PE20091172A1/es not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-05-25 CR CR11460A patent/CR11460A/es not_active Application Discontinuation
- 2010-05-31 CO CO10065316A patent/CO6280542A2/es not_active Application Discontinuation
- 2010-06-03 IL IL206161A patent/IL206161A0/en unknown
- 2010-06-09 MA MA32899A patent/MA31904B1/fr unknown
- 2010-06-18 EC EC2010010270A patent/ECSP10010270A/es unknown
-
2012
- 2012-01-31 US US13/362,000 patent/US10138293B2/en active Active
- 2012-01-31 US US13/362,010 patent/US20120164726A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-08-30 US US14/015,952 patent/US20140120613A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-11-26 US US16/200,295 patent/US10927163B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2295537C2 (ru) * | 2000-10-20 | 2007-03-20 | Тугаи Сейяку Кабусики Кайся | Модифицированное агонистическое антитело |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MERCHANT AM et.al. An efficient route to human bispecific IgG, Nat Biotechnol. 1998 Jul;16(7):677-81. CHAN LA et.al. Variable region domain exchange in human IgGs promotes antibody complex formation with accompanying structural changes and altered effector functions, Mol Immunol. 2004 Jul;41(5):527-38. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2779602C2 (ru) * | 2017-03-27 | 2022-09-12 | Биомюнё Фармасьютикалз | Устойчивые мультиспецифические антитела |
RU2795240C2 (ru) * | 2017-06-12 | 2023-05-02 | Новартис Аг | Способ получения биспецифических антител, биспецифические антитела и терапевтическое применение таких антител |
US11987644B2 (en) | 2017-06-12 | 2024-05-21 | Novartis Ag | Method of manufacturing bispecific antibodies, bispecific antibodies and therapeutic use of such antibodies |
RU2816476C2 (ru) * | 2018-12-21 | 2024-03-29 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитело, которое связывается с vegf и il-1бета, и способы применения |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2587616C2 (ru) | Двухвалентные биспецифические антитела | |
RU2547615C2 (ru) | Двухвалентные биспецифические антитела | |
JP5281098B2 (ja) | 二価の二重特異的抗体 | |
US8227577B2 (en) | Bivalent, bispecific antibodies | |
RU2575066C2 (ru) | Двухвалентные биспецифические антитела |