JPS5962527A - 成人ｔ細胞白血病関連抗原の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は成人′■゛細胞白血病関連抗原の製造方法並び
に同抗原を使用することを特徴とする成人′■゛細、胞
白１（１１病凹連抗体のτｊｌｌ定方法および同抗原が
含有される成人′ｒ細胞白面病門関連体の測定試薬に関
する。

成人Ｔ細胞白血病は１９７７年高月６によって提唱され
た新しい疾患＋ｒｒｔ念である。１なわち、臨床的に本
庁は成人が罹患し、核の不Ｔζ２分葉を示す′Ｆ細胞が
出現し、リンパ節腫大や肝・１Ｉｕｙ腫を伴シ）。

多くは亜急性に経過してしばしば皮膚病変をきｌこず。

つまり一般にリンパ性白血病は小児に多く。

ｎｏｎ　Ｔ　ｎｏｎ　Ｂ型のものが多いが、重症はもっ
ばら成人が罹患し、白血病細胞が末梢型Ｔ細胞の表面形
質をもつ点に特徴がある。

また発生分布については顕著なる地域偏在性があり、主
として九州、南四国に多発する傾向力≦ある。東京、大
阪などで発病した患者でもその出身地は九州、四国地方
であることが多いと言われる。

後記するように本庁は本庁に係るウィルス、すなわち成
人Ｔ細胞白血病ウィルス（ＡＴＬＶと略記する）の感染
によって発生することがＩＩＩ］らか番こなっており、
従って、当該感染に基づく成人Ｔ細胞白血病関連抗体を
検出することによって抗体陽性者の存在分布を調査する
ことができる。

その調査によると、九州、四国に患者が集中しているは
かさらに沖縄、紀伊半島にも分布しており、すた１Ｙ定
の家系に分布するところから家族内伝播の可ｒｊ！：性
も推定されるのである。

かかる成人ゴ細胞白血病の発生はＡＴＬＶがその病原体
となる。この事実の発見は本発明者の中の一部の者か成
人Ｔ細胞白血病患者末梢血よりへ４Ｔ−１ｉ＋＋＋胞と
指称する成人′Ｆ細胞白血病細胞株の培養樹立に成功し
たことに始まる。ずなわぢ他の研究者との共同研究によ
り当該細胞中に成人′Ｉ″細胞白血病患者血清と特異的
に反応する抗原とＣ型ウィルス粒子が存在し９両者が密
接に関連していることが見出され、この抗原を成人′ｒ
細胞自Ｊｆｎ病門関連原（ＡＴＬＡ）と板幅されるに至
ったのである。

上記発見について参考のために下記文献１）〜３）を列
挙する。

１　）　Ｍｉｙｏｓｈｉ、　１．　ｅｔ　ｍｌ　：　Ｇ
ａ、ｎｎ、　７１　：　１５５＋　１９８０２　）　Ｆ
ｖ４ｉｙｏｓｈｉ、　１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｊａｐ、
　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　０ｎｃｏ１．。

９　（５ｕｐｐ１．）　：４８５．１９７９３　　）　
　ＩＴｉｎｕ＋ｒ＋ｎ、　　Ｙ、　　ｅｔ　　ａｌ　：
　Ｉ”ｒｏｅ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、。

７８　：６４７（ｉ、　１９８１ 他方、　ＪＨぼ同時期に米ｖ１のＧａ１ｌｏグループは
。

ｍｙｃｏＳｉｓ　ｆｕｎｇｏｉｄｅｓおよび５ｅｚａｒ
ｙ症候看工患者よりＴ細胞増殖促進因子を用いてＴ細胞
株を樹立し、その培イー※細胞にＣ型レトロウィルス（
ＨＴＬＶ）を見出している。

ｍｙｃｏｓｉｓ　ｆｕｎ（Ｈｏｉｄｅｓ、　５ｅｚａｒ
ｙ症候群および成人Ｔ細胞白血病は相互に臨床的に類似
した疾患であり。

しかもそれぞれからの培養細胞にＣ型ウィルスが発見さ
れるということは、これらウィルスがヒトのある種のＴ
細胞性腫瘍の病因である可能性を示唆していることにな
る。

さて、成人１゛細胞白血病の発生はＡＴＬＶがその病原
体となることは上記のごとく明らかとなった。

しかしこのＡ’ｌ’ＬＶの伝播様式については、いまだ
明らかでない部分があり２例えば家族内で抗体陽性者が
多いことあるいは夫婦間で抗体陽性率が高いことから、
妊娠、出産、授乳による母がら子への感染あるいは接触
による夫婦間の水平感染が考えられるのである。しかし
ながら、伝播に門して防疫対策上とりわけ指摘されなけ
ればならない重要な点は２本発明者の中の一部の者がか
って証明し、指摘したことであるが、輸自供血者に成人
Ｔ細胞白血病関連抗体陽性者がみられ、しかもその供血
者がＡＴＬＶを保持１７ているということ、つまり輸血
がＡＴＬＶの伝播に極めて重要な役割を果している可能
性があるという事実である。さらに成人Ｔ細胞白血病以
外の疾患で頻回に輸血を受りた者に成人Ｔ細胞白血病関
連抗体陽性者が存在する事実も輸＋ｆ＋ｔによる伝播を
示唆するものである。」−記証明並びに指摘について参
考のために下記文献４）〜６）を列挙する。

４）　Ｍｉｙｏｓｈｉ、　１．　ｅｔ　ａ、ｌ　：　Ｇ
ａｎｎ、　７３　：３３９．１９８２５）　Ｍｉｙｏｓ
ｈｉ、　１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｌ＋ｎｎｃｅｔ　：　
６８３．１９８２５）　Ｓｈｉｍｏｙａｍａ、　Ｍ、　
ｅｔ　ａｌ　：　ｔａｌｌ）、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｑ
ｎｃｏｌ。

１２　：　１．０９．１．９８２ かかる実情から、現在においては輸血供簡者について成
人ゴ細胞白血病関連抗体の有無を検索し、それによって
抗体陽性者からのＡＴＬＶの感染を予防することがｊＹ
￥、な対策となっているのである。この対策を十分に遂
行するためににｌ、ぞの前提として、成人′Ｉ゛細胞白
血病関連抗体を高感度において測定することのできる測
定方法が確立されること並びに当該測定方法の実施のた
めに必要な成人Ｔ細胞白血病関連抗原が高活性なものと
して、また高収率において製造されることが要求されす
るのである。さらにまた当該測定方法を簡便に実施する
ためにあらかじめ調製された測定試薬が提供されること
が望まれるのである。

かかる目的のための先行技術としては、成人工細胞白血
病関連抗原産生細胞であるＭＴ−１細胞あるいはＭＴ−
２細胞をスライドグラスーヒに塗抹風乾し、アセトン固
定したものに患者血清を反応させ、蛍光抗体間接法によ
り成人Ｔ細胞白血病関連抗原を測定する方法が開発され
ている。しめ）シながら、この方法は特殊な装置を必要
とし、操作に熟練を要し、多数の検体を同時に処理する
ことが不可能であり、しかも検出感度において劣る。

かかる実情にかんがみ１本発明者は種々の検討をおこな
い、その結果、成人工細胞白＋（Ｉ［病凹連抗原産生細
胞を、界面活性剤を用いて処理することにより成人Ｔ細
胞白血病関連抗原を製造し、当該抗原を使用して酵素免
疫測定法、放射免疫測定法。

受側血球凝集法を実施することにより所期の目的が侘成
さイすること４知り９本発明を完成するに至った。

ずｆ、ｇわち２本発明の目的ＩＪ成人′１゛細胞白血病
門関連体を高ｆｉ５　Ｊｒ！：に−１５いて測定するこ
とのできる測定方法、当該測定方法の実施のために必要
な成人′ｊ゛細胞白、＋Ｉｎ病関連抗）炬が高活１′ｌ
、なものとしＣまた高収’ｔ、＋において製造される製
造方法並びに当該測定方法を簡便に実施するためにあら
かじめえ！、“Ｊ’、ｌ＋１１された測定試薬の提供で
あり、当該目的達成のために、成人′ｒ細胞白Ｊ（１１
病関連抗原産生細胞を界面活性剤を用い゛Ｃ処理するこ
と並びに得られた成人Ｔ細胞白血病開運抗原を使用して
酵素免疫測定法。

放射免疫測定法、受身血球凝集法を実施することを発明
の要件とする。

次に本発明の詳細な説明する。

成人１゛細胞白血病閂連抗原とは成人１゛細胞白血病患
者末梢血より採取した白血病細胞の培養細胞中に存在す
る抗原蛋白およびＣ型ウィルス粒子で／ｌ）って、成人
Ｔ細胞白血病患者血清との間に特異的な抗原抗体反応を
呈するものを言う。抗原蛋白は分子ｔ；；の異なる蛋白
質より構成されており９分子量２４，０００の蛋白質が
主要な成分である。またＣ型つィルスｆ１γ子は逆転写
酵素をもったＩえＮＡウィルス粒子であり、形状は電子
胃１微境下において球形を呈しており、比重は蔗糖’ｉ
ｐ：％度勾配法によって測定するとき１．１５２〜１．
１５５　ｇＡ：ｉである。なお、成人′ｒ細胞白血病門
関連原のさらに詳細なる性状を含めた特定については下
記文献７）における記載内容が引用される。

７　）　Ｙｏｓｈｉｄａ　Ｍ、、　ｅｔ　ａｌ　：　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、。

７９　：２０３１．１９８２ 本発明に係る成人Ｔ細胞白血病関連抗原は後記する成人
′ｒ細胞白血病関連抗原産生細胞を界面活性剤を用いて
処理することにより得られる成人Ｔ細胞白血病関連抗原
であって、その１コ１：状を含めた特定は前記したもの
と同一である。すなわち２水足の処理を実施したもので
ある点において特異であるが、物質自体は成人Ｔ細胞白
ｒｌｕ病関連抗原の前記’；Ｉｉ　Ｓ；ｑに′菖ｌ；れ
るものと同一である。

株のずべてを包含するイ：１念である。当該１１’ｆｆ
念に含」［れ、現在人手可能な細胞としては２例えばＭ
′Ｆ−１細＋ｌ；１．　Ｍ’ｒ−２細胞、ＭＴ−３細胞
、　ＭＴ−４Ｋ！Ｉ＋胞と呼称される一連の培：８゛（
ｇ＋Ｆｌ胞ｔ＋りを挙げることがで入る。これら（Ｊい
ずれも本発明者の中の一部の者がずてにｌｉ＋ｌ立した
培養細胞株てあり、こイ゛１らのう１．；　：：’ｊ４
産１−とりわけ有利な細胞はＭＴ　−２細胞て、し）る
ことか判明している。すなわち、ｒ、７１Ｔ−２ａ＋胞
はその１．０（ＩＬ：＋′）の１１１１胞が成人工細胞
白面病関連抗１ｊＪを保有して１６す、極めて大量のＣ
型ウィルス・を産生し続けるという特異な細胞であり、
この点において他のｉｆ！！Ｉ　ＩＩ’２より停れた１
１４．１．−徴を有していることがわかっている。そこ
で成人Ｔ細胞白面病関連抗ｐ：ｊ、産４１貢１１１胞の
代表例としてＭ１’　−２細胞を１−ｙに取りあげ、こ
れについて言￥細に仄１明ずイ【ば以下のととくでバ）
る。

Ｍ′ｒ−２６ｒｑ胞は成人下細胞白血病患者（女性）の
白血病３１１１胞と止′畠新生男児のｔｌ、ｆｆ　；１
１；白血球との混合培ｊ・６の結果として１１対立され
たＩｌｉ’？帯１ｒ月１１［球山来の細胞株であって、
染色体’１７９或は４６．　ＸＹて２１・）る。患者自
＋（＋１月ｒ　４ｍ胞からの成人工細胞自＋１！１球・
ンイルスゲノムが川゛・）帯Ｉ（目１１ＴＪζ１゛細胞
に伝達導入された結果の産物であるとＪｆｆ°定される
。性状は細胞隼塊を形成しつつ増殖し、羊赤血球とロゼ
ツトを形成し、′■゛細胞に対するモノクロナール抗体
と反応することである。また、　ＥＢウィルス核抗原陰
性である。なお。

Ｉ＼＝ＩＴ　−２細胞のさらに詳細なる性状を含めた特
定については下記文献８）および９）におＩｔ、３る記
載内容か引用される。

８）　Ｍｉｙｏｓｈｉ、　１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｇａ
ｎｎ、　７２　：９７８．１９８１９）へ心ｙｏｓｈｉ
、　１．　ｅｔ　ａｔ　：　Ｎａｔｕ、ｒｅ、　２９４
　：　７７０．１９８］次に本発明に１．−？いて使用
される界面活性剤は例えばデオキシコール酸ナトリウノ
１．オクヂルフエノキシボリエソキシェクノール、ポリ
オキシエチレン（ＩＣｉオクヂルフェニルエーテルであ
る。これらは本技術分野において通常に使用されるもの
であるが２本発明は特にこれらに限定されｆ、ｉい。ま
た。

１１；ｊ用１−　ルｌ””、度ｉｊ　Ｏ９′）、９６　
稈）’Ｊｌ　７Ｊ’　ｊ’、　＜　＋　倒Ｚ−ｉＪ　０
．２％　７オｉ−ンコールρタプートす・ント含有ベロ
ナール４Ｔ；　７．丁ｆｉ］シ（ｐｉ　ｌ　７．５．）
／、＝　Ｏ，１，／１５　）がｆ重用される。添加量は
例え（目＼１Ｔ−２細胞１（）７〜１０８個に対して１
−記載；′へ度の終１：ゴ液＋’ｌ　）ｑｌｙ：（−加
えれ（、シよい。しかしこＡ１らは本りｒ；明に４・け
ろ好−１−シいｉ：ｉｊ月ｒξ例を示すものであって９
本発明ぢ−’Ｉ”ｌ’に１（Ｉ（定するものでｊＡ’、
　ｉ、ｆ：　（、本発明の［１的を損うことかない限り
、４、↓ｆおよび添加量（嵯適宜Ｊ′妃：択することが
できる。

界面活性剤を用いておこなう処理の方法１．１例え（Ｌ
以下のごと（おこなう。

ｒ、、ｎ゛−２ｋｉｎ胞川７用１（Ａ３個に洗浄のため
に〔〕。１１５Ｍリンぐぢ〒′ｐｉ生理食塩液（ｐＴ（
７，２）を加え、ｊドを心り月’Ｓｉｔシ。

で細胞名′−バックに号−る。これに０．２％デオキシ
コール百′２ナトリウ１、α有ベロナール、１′浸ｉ・
再演（ｐＴＩ　７．ｓ　。

ｔｔ＝　（’１．１７１５）　５　ｍ、１．を加え２例
えは４　’Ｃ下で４時間撹拌する。次に１！：ｉ存分１
常して」二消をとり、透析チューブに詰め、　０．１５
１・、’Ｔリン酸系旧！噺生理食Ｊ、ｙＸ液（ｐＨ７，
２）に対して２例えば４てｊ下で２１１間透析する。こ
の透１１ｉｉ：ｔ　１１清中に含まれる界面活性剤を除
去する目的でおこなわれる。透析後、２凍心分子′、ｌ
ｒｔ、、　　ｌ漬をとれ（４当該１−泊中に本発明に係
る成人Ｔ細胞ト月ｆｌｔ病関連抗原が含まれる。

以」二のごとく、処理の主要な点は成人Ｔ細胞白血病関
連抗原産生細胞を界面活性剤を用いて撹拌処理すること
であり、その前後における洗浄および透析等の前処理お
よび後処理は９本発明の目的を損なわない程度において
適宜実施すればよい。

次に本発明測定方法について説明する。

原抗体反応を呈するものであると定義される。具体的に
は本発明測定方法によって測定されるべき被検血清（検
体血清）中に含有される。

本発明測定方法は酵素免疫測定法、放射免疫測定法、受
身血球凝集法のいずれかを利用するものである。これら
の方法における通常の手順自体はすてに一般に公知であ
る。従って９例えば酵素免疫測定法を利用する場合につ
いて本発明測定方法を説明すれば以下のごとくである。

測定系全体の４７．ｊ；成要素は同相９本発明に係る成
人１゛細Ｉ；ル白曲病凹連抗原、同抗体（被検血清）、
抗ヒト１ｇＧ抗体（標識用抗体：Ｌ　ｒＪ′ｆ素および
基質である。同相としてはエンザイムイムノア・ンセイ
用のマイクロタイタープレートのカップあるいはガラス
ピーズを用いればよい。測定に先立ち９本発明に係る成
人１゛細胞白血病関連抗原を０．１５ＭＩＪン酸緩衝生
理食塩液に溶解し９例えばポリスチロール製エンザイト
イムノアッセイ用カップに入れ。

４°Ｃ下で１時間放置すれば、同相表面は本発明に係る
成人Ｔ　、ｒａｎ胞白血病関連抗原によってコートされ
る。

被検血清はそのまま測定系の中へ加えられてもよいが、
ｐｆましくけ正常ウサギ血清（ＮＲ８）によって２例え
ば１００倍に希釈し、て加えるとよい。

抗ヒ）　ＩｇＧ抗体（桓識用抗体）としては例えば。

ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体あるいはマウス抗ヒトＦｃモノク
ロナール抗体を用いればよい。また酵素としては９例え
ばアルカリフォスファターゼ、グルコースオキシダーゼ
、ペルオキシダーゼ、ベータガラクトシターゼ等を使用
することができる。測定に先立ち、ゲルタールアルデヒ
ドのごとき結合剤をもって、標識用抗体に酵素を結合せ
しめてコンジュゲートとし９本発明測定方法の実施のた
めの試薬の一部としてあらかじめ準備しておくことがで
きる。

基質は選択した酵素に応じて適宜使用すればよい。例え
ば酵素としてアルカリフォスファターゼを選択した場合
においてはｐ−ニトロフェニルフ」スフエート等を使用
ずればよい。

測定系全体の構成要素のうち２本発明に係る成人Ｔ細胞
白血病関連抗原を除いた他の要素についてここに例示し
た選択は好ましい態様例を示すものであり２本発明測定
方法を特に限定するものではない。

測定は酵素免疫測定法におりる通常の手順に従っておこ
なえばよい。従って、後記実施例において示、されるご
とく９本発明に係る成人Ｔ細胞白血病関連抗原をコート
したカップに被検血清を加えてインキュベートし、続い
て酵素標識抗体２例えばヤキ゛抗ヒトｒｇ＜；−アルカ
リフオスファターゼコンジュゲ−１・を加えてインキュ
ベートし、ｒ・り後（こ基’？’ｉ　、　例工（、ｔ’
　ＩＪ−ニドｔｊフェニルフォスフェートを加えてイン
キュベートし、基１ｉ′ｉの分ＮＬｌ’ｔｔを分光光度
ｉｉＩを用いて辺す定ずればよい。

本発明測定方法による測定結果は、成人Ｔ細胞白面病関
連抗体の測定方法として従来よりおこなわれてきた蛍光
抗体間接法による測定結果との間によい相関性があり、
後記実験例において示されるごとく抗体陽性者と健常人
との判別および抗体ｒ１支の測定に１５いて蛍光抗体間
接法による場合と相関する結果が与えられるのである。

測定感度においては蛍光抗体間接法にりもイ夏れており
、蛍光抗体間接法に比べて少くとも１６倍は鋭敏である
。従って本発明測定方法は成人′Ｆ細胞白血病関連抗体
を高感度によ；いて測定することのできる方法である。

次に１本発明測定試薬は本発明に係る成人′ｒ　ａ＋＋
＋胞白血病門連抗関連必須のｔ＋ｑ成成分成分て含有す
る試薬でよ）る。

また２本発明測定試薬に係る測定方法は酵素免疫測定法
、放η・ｊ免疫測定法、受身血球ン賢集法のいずれかを
利用するものである。従って２例えば酵素免疫測定法を
利用する場合について本発明測定試セリ玉の具体的態様
を示せば次のごとくである。すなわち１本発明測定試薬
は本発明に係る成人Ｔ細胞白血病関連抗原それ自体ある
いは本発明に係る成人１゛細胞白血病関連抗原と同相Ｉ
　Ｉ’ｍ　Ｗｊｋ用抗体。

酵素および基質よりなる群から任意に選択された１乃至
４とを組合わせたセットである。ここにおいて、セット
中に同相が含まれる場合、当該同相が本発明に係る成人
Ｔ細胞白血病関連抗原によってコートされた状態で提供
されることあるいはセット中に標鴎ζ用抗体と酵素とが
含まれる場合に両者が結合したコンジュゲ−１・、すな
わち標識抗体として提供されることは自由であり、これ
らも同様に本発明測定試薬の態様に含まわる。また測定
操作の便益のために適当なるＥ衝液あるいは正常ウザギ
血清（ＮＲ３）等をセット中に添付することも自由であ
り、これらは本発明を限定するものではプ、ｆい。

以下に記載する実験例をもって本発明の効果４−・説明
ず乙。

実施例 Ｓ・（料 Ｆ記試１′：）　（、ｉ）〜（ｂ）・発用意した。

試料■：ＭＴ−２細胞２×１０７個を４°Ｃ下で１分間
ホモゲナイズし、　１０．００Ｏｒｐｍで２０分間遠心
分離し、その」１清を試料■ とした。

試オ゛・１（■：Ｍ’ｌ’−２細胞２Ｘ１０’個に対し
凍結１．Ｉ’ｉ！　ｆ’ｌＪζを３回繰返し、　１０，
０００ｒｐｔｎで２０分間シト心分Ｐｆｌ’シ＊　その
−１−清を試料■とした。

試料■：ＭＴ−２秀１１１胞２　Ｘ　１０”個に０．２
％ポリオ。

ヤシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル５　ｍ
Ｌを加えて４°Ｃ下で３時間して４°Ｃｊ下２０間透析
し、再び １０．００Ｏｒｐｍで２０分間ｊや心分叩し、その上清
を試料■とした。

試オ゛１■二０．２％ポリオキシエチレン０〔刃オクチ
ルフェニルエーテルの代わりに０．２％ オクチルフェノキシポリエソキシエ タノールを使用した点を除いて試料 ■における記載と同（：ηにおこない。

試料■とした。

試料■：０゜２９６ポリオキシエチレン（１０）オクチ
ルフェニルエーテルの代わりに０．２９６デオキシフー
ル酸ナトリウムを使用 した点を除いて試料■における記載 と同様におこない試料■とした。

方法 各試料についてＯＤ　２！（０値を測定して蛋白量を求
め、また高力価の成人゛Ｊ゛細胞白血病関連抗体を有す
る患者血清との１ｌＶＩ＋こおけるオフタロニー法によ
るテストをおこなった。

結果 表中オフクロニー法によるテストにおいで。

−は明瞭な沈降線の生成が認められなかったこと、また
−１−は１５１生成が認められたことを示す。

表１より９本発明製造方法の実施により従来方法の実ｈ
ｆｉｉに比較して成人′ｒ　ｓｉｎ胞白血病門連関連；
τ／）＜　：ｔ　／７タロニー法によるテストに１５い
ても反応を示す程度に高活性なものとして、また高収率
に製造されることが判明する。

実施例 試料 成人Ｔ細胞白血病関連抗体陽性者ｒｌｎ−清１３例およ
び健常人血清６例（蛍光抗体間接法の実施により成人１
゛細胞白血病関連抗体マイナスを確認済）を試料とした
。

方法 各試料例について下記の蛍光抗体間接法による測定およ
び本発明測定方法である酵素免疫測定法による測定をお
こなった。

蛍光抗体間接法 ＭＴ−２細胞をプレパラート」二に塗抹し、室温で風乾
し、ここにリン酸緩衝生理食塩液で１０倍に希釈した被
検血清を加えた。３７℃で３０分間放置し、その後リン
酸緩衝生理食塩液にてプレパラートを３回洗浄し、　Ｆ
ＩＴＣラベルした抗ヒトＩｇＧ抗体を加えた。３７℃で
３０分間放置し７．その後リン酸緩杓生理食塩液にてプ
レパラートを３回洗浄し、カバーグラスをかけ、蛍光顕
微鏡によ、ンてＶ見察した。

酵素免疫測定法 実Ｊｉｆｌｉ例１において得られた本発明に係る成人′
１す１１１胞白血病関連抗原含有上清を００１５Ｍ　’
）ンｆｆ２　ｆＹ’ｉｔ（・■１生理食ｊ＃Ｘ湾によっ
てＯＤ　２８０値が０．４となるように希釈し、ポリス
チロール製エンザイトイトノアッセイ用カップに１５０
７１．ｔずつ加えた。４°Ｃで１時間数ｆｉ１．’　シ
ｒ　その後脱イオン水にて力・ノブを洗浄し　ＮＲ８て
１００倍に希釈した被検血清１．００１ｔ、ｌを加えた
。３７°Ｃで１時間放置しその後脱イオン水にてカップ
を洗浄し、抗ヒトＩｇＧ−アルプ１リフォスファクーゼ
コンジュゲート（２５％ＮＲ３にて至適濃度に希釈した
もの）　１００７ｚ４を加えた。

３７°Ｃで１時間放置し、その後脱イオン水にてカッ７
’　洗浄Ｌ／、　基’７’ｊ　（１）−ニトロフェニル
フォスフニー１．を４　ｍｐ／ｍＬとなるように炭酸緩
衝液ｐＨ９，５，４７ｎ、Ｍ　ＭｇＣｌ２に溶解したも
の）１００μＬを加えた。３’７″Ｃで１時間放置し、
その後Ｉ　Ｎ　Ｎａ０Ｔ１１．００μｌを加えて反応を
停止し、　４０５　ｎｍの吸光度０１）　４０５値を測
定し、た。

結果 結果を図１に示す。図１は蛍光抗体間接法による測定結
果と酵素免疫測定法による測定結果との間の相関を示す
グラフであり、ヨコ軸は蛍光抗体間接法における測定力
価（蛍光抗体力価）を、またタテ軸は本発明に係る酵素
免疫測定法におけるＯＤ　ｉｒ＋５値を示す。図中×印
点は健常人血清についての、またの印点は成人′Ｆ細胞
白血病関連抗体陽性者血清についての結果を示す。

図１より次の諸点が判明する。

（１）蛍光抗体間接法による測定結果と本発明に係る酵
素免疫測定法による測定結果とは相関する。

（２）蛍光抗体力価が×２０である血清を３２０倍希釈
して測定した場合、蛍光抗体間接法によったときは測定
結果が不明瞭となるが。

本発明に係る酵素免疫測定法によったときは、陽性と判
定できる。従って、感度において不発明訓定方Ｕ、は従
来方法に比較して少くとも１６倍Ｌｔ　（’でれている
。

（３）不発１！７Ｊ　１ｌｌｌｌ定方法によって成人′
Ｆ細胞白血病門関連体陽性者と健常人との判別をするこ
とができる。

以下に記載する実施例をもって本発明をさらに−１、体
的に説明する。

実施例Ｊ Ｍ’ｒ’　−２１１１胞２．４　ｘ　Ｉ（１７個ニ０．
１５　Ｍ　！Ｊ　７　酸ｉ７［ｉ生理食塩液（ｐ１４　
’？　−２）を加え、遠心分ｉ！；ｌ！；　Ｌ／て細胞
をパックした。これに０．２％デオキシコール１１ヤナ
トリ　ｌ）　　ｌ、含有へ＋ｙ　　−３−−／ｌ／　ｇ
’ｊｑ　ｆｊ液　（ｐＨ７，’５．ｔｂ　−０，１４５
）５ｒｎｌを加えた。４℃下で４時間スターラーによっ
て撹拌し、その後１０．００Ｏｒｐｍで３０分間遠心分
子７＋シた。−１−清夕−とり９．ｉ〜伍チューブに詰
め。

Ｏｊ！”＋Ｍリン１ｆｉ（２級？ＩＭ生理食塩液に対し
て４゛Ｃ下で２１１間透析し、その後１０．００Ｏｒｐ
ｍで３０分間遠心分ｔ’ｉ’シた。−１−１清をとり本
発明に係る成人Ｔ細胞白１（１［病開運抗原含有」−清
とした。当該、、１１１清の０１’ｌ　２ｅ（１値は１
５／７１！、／、てあった。

実施例 実施例１において得られた本発明に係る成人Ｔ細胞白血
症開運抗原含有上清に０．１５ＭＩＪン酸緩衝生理食塩
液を加えてＯＤ　２ｓｏ値が０．４となるように希釈し
、ポリスチロール製エンザイムイムノアッセイ用カップ
に１５０７〕、Ｌずつ入れた。

４゛Ｃ下で１時間静置し、その後排液し、脱イオン水に
てカップを洗浄した。かくのごとく調で１つされたカッ
プにヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体−アルカリフォスファクーゼ
コンジュゲ−１・およびＰ−ニトロフェニルフォスフェ
ートを組合イつぜてセットとした。当該セットは酵素免
疫測定法を利用する測定試≧すＳである。なお、測定操
作の便益のために正常ウザギ血清（ＮＲ，Ｓ）および０
．０５Ｍ炭Ｗ／２　緩衝液（ｐＨ９，５，４７μｌＭ　
ＭｇＣ１２）をセット中に添付した。

実施例３ ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体またはマウス抗ヒ）　ＩｇＧ（Ｆ
ｃ）抗体をｐＨ７，５，０，０５Ｍリン酸ね衝液に溶解
し。

蛋白質濃度を１　ｍｇ／ｍｌに調製する。この液１０μ
ｌに１ミリキユーリーの”’ｌ−Ｎａ　５０７ｔ、Ｌを
加え、さらにクロラミンＴを前記リン酸緩Ｍｉｉ′／ｌ
’：にｉ、５ｕ＋４ゾｎｒｌの割合に溶解した液を１０
μ２１加えて３０秒間撹拌する。次いでメク爪亜硫酸ナ
トリウムを前記リン酸緩衝液に２７１１！７／ＩＩ＋７
．の割合に溶解した液・り１００１ｔ、ｌを加えて反応
を停止させる。ヨウ化カリウムを前記リンＦｉｔ　４衝
液にＪＯｍｑ／ｍ、ｌの割合に溶解した液１００ＩＬＬ
をこの反応／’３Ｈに加え、ただちにセファデックスＧ
−５０を用いたゲルｒ過により＋２５　Ｉ　Ｊ：Ｑｉ識
物質と１２′■とを分割゛ずろ。得られた１２″■標識
物質の比←放射能は約５〜２０μＣｉ／Ｉｔｇとなる。

この１２′Ｉ　ｆ’１！　’Ｘｎ’、物？＋’Ｔは放射
免疫測定法を利用する測定試薬に使用される。

実施例４ ヒツジ血液を遠心管にとり、生理食塩液を用いて２．０
０Ｏｒｐｍで１０分間の遠心分離を５回操返し。

赤＋ｆｒｔ球を洗浄した。この赤血球にｐｉ（’７．５
．０．１５Ｍのリン酸ｇ々衝生理食１甚液を加えて５％
濃度に調整した。同リン酸緩衝生理食塩液で２．５％濃
度に調整したゲルタールアルデヒド溶液を前記赤血球浮
遊液中に、その５分の１容加え、撹拌しながら室温で約
５時間反応させ、赤血球を固定した。ついでこの溶液を
遠心分ｉ’ｒｉｌシて固定赤拘球を得、さらに生理食塩
液を用い遠心分離により１２１回洗浄した。この固定赤
血球を前記リン酸Ｑ％　ＩＪｎｊ液で５％浮遊液に調整
し、これに同リン酸緩衝生理食塩液で５　ｍ、ｇ／ｄｉ
に調整したタンニン酸溶液を等［八、添加して３０分間
撹拌した。この溶液を速心分配してタンニン酸処理固定
赤血球を得さらに生理食」（、η液を用い遠心分Ｐ１１
［により数回洗浄した。得られたタンニン酸処理固定赤
血球に前記リン酸バ行ｆ液を加え、５％赤血球浮遊液と
しｊ二。

この赤血球浮遊液と本発明に係る成人ＴＫ１■１胞白１
（１［病関連抗原を前記リン酸緩再生理食塩液で蛋白７
７１１度が約５　ｒａａ／ｍ、ｌになるように希釈した
液とを同１１混合し、室温で６０分間撹拌して感作した
。この液を遠心分能して感作血球を得、さらに生理食塩
液を用い辿心分子）１（により数回洗浄した。得られた
感作赤血球に２％正常家児血清含ｒ丁リン酢ｒ冴％生（
；Ｉ’！食塩液を加えて７％浮遊液とした。この感作赤
ｔｒｏｔ球は、受身血球凝集′法を利用する測定試薬に
使用される。

【図面の簡単な説明】

図１は実験例２結采の項に記載の図１に相当し。 蛍光抗体間接法による蛍光抗体力価と本発明に係る酵素
免疫測定法によるＯＤ　４０５値との間の相関を示すグ
ラフである。 特許出願人 工−ザイ４″４−八合オ土 ×うＯＸ４０　　　Ｘ８０　　Ｘ１６０　　　Ｘ３２０
　　　Ｘ６４０　　Ｘｌｌ！８０東光抗体力価

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）成人′Ｆ細胞白（ｆａｔ病閂連抗厘の製造をおこ
   なうにあたり、成人１゛細胞白血病門連抗原産生細胞を
   界面活性剤を用いて処理することを特徴とする成人１゛
   細胞白血病関連抗原の製造方法 （２）界面活性剤がデオキシコール酸す）−ＩＪウム。 オクチルフェノキシポリエソキシエタノール。 ポリオキシエチレン（］０オクチルフェニルニーデルの
   い２１−れかである特許請求の範囲第１項記代の成人′
   １゛細胞白血病関連抗原の製造方法（３）成人′Ｆ細胞
   白血病関連抗原産生細胞がＭＴ−２細胞であるｑ−Ｙ許
   Ｎｉ’を求の範囲第１項または第２項記載の成人１細胞
   白血病関連抗原の製造方法 （４）酵素免疫測定法、放射免疫測定法、受身血球凝集
   法のいずれかにより、成人′Ｆ細胞白血病関連抗体の測
   定をおこなうにあたり、当該測定に係る抗原として、成
   人Ｔ細胞臼１（１１病関連抗原産生細胞を界面活性剤を
   用いて処理することにより得られる成人１細胞白血病関
   連抗原を使用することを特徴とする成人Ｔ細胞白血病関
   連抗体の測定方法 （５）界面活性剤がデオキシコール酸ナトリウム。 オクチルフェノキシポリエソキシエタノール。 ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル
   のいずれかである特許請求の範囲第４項記載の成人１゛
   細胞白血病関連抗体の測定方法（６）成人′ｒ細胞白血
   病関連抗原産生細胞がＭＴ−２細胞である特許請求の範
   囲第４項または第５項記戦の成人Ｔ細胞白血病関連抗体
   の測定方法（７）酵素免疫測定法、放射免疫測定法、受
   身血球凝集法のいずれかを利用する成人′Ｆ細胞白血病
   関連抗体の測定試薬において、当該測定試薬に係る抗原
   として、成人工ＩＩＩ胞白血病関連抗原産生ａ＋胞を界
   面活ｆｉ、剤を用いて処↓；）！することにより得られ
   る成人１細胞白血病関連抗原が含有される成人′■゛細
   胞白血病関連抗体の測定試薬 （８）界面活性剤がデオキシコール酸すトリウム。 オクヂルフエノキシボリエソキシエタノール。 ポリオキシエチレン００）オクチルフェニルニーデルの
   いずれかである特許請求の範囲第７項記載の成人Ｔ細胞
   白血病関連抗体の測定試薬（９）成人工細胞白血病関連
   抗原産生細胞がＭＴ−２細ｎ：ｖである（）゛Ｙ許請求
   の範囲第７項または第８項記載の成人１゛細胞白血病関
   連抗体の測定試薬