JPS6044870A - 成人t細胞白血病ウイルス抗体検出用試薬 - Google Patents

成人t細胞白血病ウイルス抗体検出用試薬

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JPS6044870A
JPS6044870A JP58152772A JP15277283A JPS6044870A JP S6044870 A JPS6044870 A JP S6044870A JP 58152772 A JP58152772 A JP 58152772A JP 15277283 A JP15277283 A JP 15277283A JP S6044870 A JPS6044870 A JP S6044870A
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virus
cell
atl virus
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辻 好克
Mikio Ikeda
池田 幹雄
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Fujirebio Inc
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Fujirebio Inc
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 又はその抗原成分を感作した担体粒子がATLウイルス
に感染したヒトの血清に含まれるATLウイルス抗体の
存在によって凝集する反応を利用してATLウイルス感
染の有無を診断するATLウイルス抗体検出用試薬に無
するものである。
ATLウイルスは白血病の一種であるT細胞リンパ腫を
ひきおこす原因ウィルスであることが最近確認された。
そこで、このウィルス感染の有無を検査することは臨床
上、疫学上そして輸血において重要である。
この検査方法として、螢光抗体法、酵素免疫測定法、放
射免疫測定法などが開発されているが、これらの方法は
操作が煩雑で時間がががりまた特別な測定機器を必要と
した。
本発明は、ATLウィルスの感染を簡便かつ安価に測定
する方法を提供するものであり、ATLウィルス又はそ
の抗原成分を感作した担体粒子( ATLV填原感作粒
子)がATLウィルス抗体の存在によって容易に凝集反
応し、かっこの凝集反応を利用した検査が特異性及び鋭
敏性に関して従来の螢光抗体法等に匹敵することを見出
してなされたものである。
すなわち本発明は、担体粒子にATLウィルス又はその
抗原成分が感作されてなるATLウィルス抗体検出用間
接凝集反応試薬に関するものである。
ATLウィルスはヒトのT細胞に感染するレトロウィル
スの一種であシヒトT細胞白血病( HTL )ウィル
スとも呼ばれている。ATLウィルスの取得方法は公知
の方法によって行なえばよく、例えばML−2、HUT
 − 1 0 2 すどの株化細胞を培養し、培養液か
ら細胞を分離してこの細胞あるいは培養上清からATL
ウィルスを分離すればよい。HUT −102は、例え
ばNCI (National Cancer In5
titute。
National In5titute of Hea
lth 5Betheada %Maryland 、
U、S、A )から分譲を受けることができる。培養後
、増殖したウィルスを細胞から取得する一場合には、培
養液を遠心して集めた沈渣をトリス−塩酸緩衝液−Na
C1−EDTA 、 !Jン酸緩衝生理食塩溶液などで
洗浄し、ノニデッ)P2O,)ライドンX100等の界
面活性剤で処理して細胞及びウィルスを破壊する。そし
て、遠心して沈澱物を除き、上清をウィルス抗原として
使用すればよい。
一方、培養上清からウィルスを取得する場合には、超遠
心密度勾配法によってATLウィルス画分を分離すれば
ATLウィルスを高純度で取得できるので好都合である
。分離したライ空スは通常はノニデットP40、トライ
トンX100等の界面活性剤などで破壊してウィルス抗
原として使用する。しかしながら、ウィルスの増殖機能
を失わせるだけで破壊することなくウィルス抗原として
使用することもできる。
担体粒子は間接凝集反応用のものを用いればよく、ヒト
、羊、ニワトリ等の動物の赤血球、セラチア楯などの微
生物菌体、ゼラチン粒子(特開昭57−153658号
)、ポリスチレンラテックス、カオリン、炭末などを使
用することができる。
ATLウィルス又はその抗原成分な担体粒子に感作する
方法も一般の抗原を感作する公知の方法によればよく、
例えば、タンニン酸、ゲルタールアルデヒド、ビスジア
ゾベンジジン、トリレンジイソシアナート、ジフロロジ
ニトロベンゼン、カルデジイミド類、キノン類、及び塩
化クロム等のいわゆるカップリング剤を使用する方法あ
るいは物理吸着させる方法などによって行なうことがで
きる。
こうして得られたATLV抗原感作粒子は通常は常法に
よ多連結乾燥し、復元液、血清希釈用液、標準血清、未
感作担体、非特異反応吸収液などと組合せて測定に供さ
れる。
本発明の試薬を用いてATLウィルス抗体を測定する方
法も間接凝集反応を利用した測定方法の常法によればよ
く、例えばマイクロプレートのウェルに被検血清を入れ
てその希釈列をつ<シ、各ウェルにATLV抗原感作粒
子を加えて攪拌し、通常1〜2時間程度静置してこの感
作粒子の凝集像を観察すればよい。この方法のほか、例
えば被検血清と感作粒子をスライド板上で混ぜ合わせ、
1〜2分後の凝集状態を観察することもできる。
本発明の試薬を用いることによって、ATLウィルス抗
体を従来の螢光抗体法等に匹敵する高感度でかつ高精度
で測定することができる。本発明の試薬を利用した測定
方法は簡便であシ、特殊な装置を必要としないところか
ら何処でも容易に実施しうるという利点がちる。
製造例1 (1) ATLウィルス抗原の調製 ATLウィルス産生株化細胞であるHUT −102細
胞を、ウシ胎児血清を10多含有するRPMI −16
40培地に接種し、5チ炭酸ガスを含む空気中で37℃
で4日間培養した。この培養液20tを300 Orp
mで10分間遠心して細胞を除去して上清液を得た。こ
の上清液を予め連続ゾーナルローター内に作成した20
〜55チの蔗糖密度勾配に重層し、循環しなから300
00rpmで超遠心分離を行なった。
得られたウィルス画分を再び遠心用チューブ内に作成し
た20〜55チの連続密度勾配に重層し、スイングロー
ターによ!+2500Orpmにて4時間超遠心分離を
行なった。得られたウィルス画分を4500Orpmに
て60分間遠心してウィルスヲ沈澱させ、この沈澱に0
.5%ノニデッ)P−40含有リン酸緩衝生理食塩液を
加えた。沈澱を浮遊させ、氷水中で30分間攪拌して溶
解させ、13000rpmにて30分間遠心分離して得
られた上清をATLウィルス抗原とした。
(2) 感作粒子の調製 リン酸水素二ナトリウム・12水塩1.920 &、リ
ン酸二水素カリウム0.291&s塩化ナトリウム0.
438&、アラビアゴム0.25,9.グリシン1.5
9、チメロサール0.01,9及び正常家兎血清1、0
 mlを全量1001nlになるように精製水に溶解し
て浮遊分散液とした。
リン酸水素二ナトリウム・12水塩1.920g、リン
酸二水素カリウム0.291g、塩化ナトリウム0.4
38.9、アラビアゴム0.25.9、アジ化ナトリウ
ム0.15g、正常家兎血清1.0 ml 、羊赤血球
膜破砕液2. □ ml及び牛赤血球膜破砕液1.0 
mlを全量100mA!になるように精製水に溶解して
血清希釈用液とした。
常法に従ってホルマリンで固定した羊赤血球を5 V/
V fAになるように…7.2の0.15Mリン酸塩緩
衝生理食塩液(0,15MPBS (7,2) )に浮
遊させた液に等量の0.001 w/v %タンニン酸
の0.15MPBS(7,2)溶液を加え、ときどき攪
拌しながら37℃で15分間反応させた。この血球を生
理食塩液で洗浄後、0.15MPBS (72)で5v
/vliになるように浮遊させてタンニン酸処理血球液
を得た。
(1)で調製したATLウィルス抗原に0.15MPB
S(7,2)を加えて50倍に希釈し、前記のタンニン
酸処理血球液に等量のこの希釈液を加えて37℃で30
分間加温した。血球を遠心分離して0゜15MPBS(
7,2)で2回洗浄し、浮遊分散液に浮遊させて凍結乾
燥した。
この凍結乾燥品に未感作血球の乾燥品、対照用陽性血清
及び血清希釈用液を組み合わせ、ATLウィルス抗体検
出用試薬キットとした。
製造例2 四ホウ酸ナトリウム・10水塩1.91g、乳酸0.8
5m1.塩化ナトリウム0.45J7.グリシン1.5
 F、 蔗糖4.0 &及び正常家兎血清1.0 ml
を全量100m1になるように精製水に溶解し、分散浮
遊液を調製した。
四ホウ酸ナトリウム・10水塩0.8g、リン酸二水素
カリウムo:sy、塩化ナトリウム、0.2g、ポリエ
チレングリコール6000 1.5,9、ポリビニルピ
ロリドンに−301,5,9、アジ化ナトリウム0.1
59 、正常家兎血清0.3 ml及び正常ニワトリ血
清0.4 mlを全量100+++lになるように精製
水を加えて溶解し、これを血清希釈用液とした。
ニワトリ赤血球を常法によシホルマリン処理して固定ニ
ワ) IJ赤血球を調製し、この血球を−7,2の0.
1Mリン酸塩緩衝液(0,I MPB(7,2))にて
5 v/v%に浮遊させた。この血球浮遊液にトリレン
ジイソシアナー) (−TDI )のエマルジョン液を
最終濃度0.05%になるように加え、37℃で40分
間攪拌した。血球を0.05MPR(6,4)にて2回
洗浄してTDI処理血球沈渣を得た。
製造例1の(1)において調製したATLウィルス抗原
を0.3MPB(8,5)で50倍に希釈し、この希釈
液を前記のTDI処理血球沈渣に血球濃度が5v/vチ
になるように加えてよく混和し、37℃で45分間加温
して反応させた。血球を遠心分離して、生理食塩液にて
1回、前記分散浮遊液にて1回洗浄し、分散浮遊液に浮
遊させて凍結乾燥した。
この凍結乾燥品に未感作血球の乾燥品、対照用陽性血清
及び血清希釈用液を組合せてATLウィルス抗体検出用
試薬キットとした。
製造例3 特開昭58−113754号公報の実施例1に記載され
た方法で製造したゼラチン粒子を5 ppmのタンニン
酸を含む0.15 MPBS (7,2)中に粒子濃度
が2.5係になるように分散させ、37℃で10分間加
温した。この粒子を遠心分離して回収し・生理食塩液で
3回遠心分離法で洗浄してから0.15MPBS(7,
2)に5チになるように分散させた。
一方、製造例1の(1)で調製したATLウィルス抗原
を0.15MPH3(7,2)で50倍に希釈し、前記
のタンーニン酸処理粒子分散液に等容のこの希釈液を混
合して37℃で40分間加温し、粒子にATLウィルス
抗原を感作させた。この感作粒子を生理食塩液で3回遠
心洗浄してから製造例1の(2)と同様にして調製した
分散浮遊液に分散させた。
この分散液を凍結乾燥し、ATLウィルス抗原感作ゼラ
チン粒子の凍結乾燥品を得た。
担体がゼラチン粒子であるので、羊赤血球膜破砕液及び
牛赤血球膜破砕液を加えなかったほかは製造例1の(2
)と同様にして血清希釈用液を調製した。また、未感作
粒子の凍結乾燥品及び対照用陽性血清の凍結乾燥品も別
途に調製し、これらを組み合わせて、ATLウィルス抗
体検出用試薬キットとした。
使用例 各製造例で得られた試薬キットを用い、各種被検血清に
ついて間接凝集反応テストを行なった。
得られた結果を下表に示す。
ATL″1640400128 十 2 1280 800 256’ + 3402432十 4 160 100 64 + 5 640 400 256 + 6256016005)2 + 7320200128 + 8320200128 + 9 320 200 128 + 1080、5064 + 11 160 1・00 64 + 12 320 200 128 + 13640400256 十 RA”1 <40 <20 <16 −2 − 3 − 4 〃 − 5− 6− 7− 8− 5Lt’1<40 <20 <16 、−2 − 3 〃 − 4− 5〃 − 6− 7− +1 成人T細胞白血病患者血清 +2 リウマチ様関節炎患者血清 +3 全身性エリテマトーデス患者血清性 表中の数字
は陽性を示した血清の最大希釈倍数特許出願人 富士レ
ビオ株式会社 同 味 の 素株式会社 代 理 人 弁理士 1)中 政 浩 手続補正書(方式) %式% 1事件の表示 特願昭58−152772号 2発明の名称 成人T細胞白血病ウィルス抗体検出用試薬3補正をする
者 事件との関係 特許出願人 名称富士レビオ株式会社 名称 (006)味の累株式会社 4代理人 7補正の内容 (1)願書及び明細書の浄書(内容に変更なし)別紙の
通り (2)願書を別紙の通シに補正する。
(3)味の素株式会社の委任状を別紙の通シ補充する。
(4)譲渡証書を別紙の通シ補充する。
(5)明細書の記載を以下の通シに補正する。
2頁 13行 「されて」 「されたものから」2頁1
9行 rML−2J rMT−2J3頁7−8行 「リ
ン酊甥紹吐を理負丸貯語夜」「すΔツガ認(社)貯を月
」け濡面」3頁15−16行 「ノニデット・傳の」 
「上記の」52−48168号など)」 4頁1ト17行 「標準血清」 「参照血清」4頁17
行 「吸収液」 「吸収剤」 5頁 3行 「攪拌」 「混合」 。
6頁11行 「リン酸」 「リン酸塩」6頁11行 「
えた、沈」 「えて、沈」8頁 5行 「血清及び」 
「血清(捌論清)薦」8頁15行 「15g、ポリ」 
「015g、ポリ」8頁16行 rl、5g、アジJ 
rO,15,9、アジ」(6)本手続補正書に添付した
明細書簡3真第8−9行に記載された「ノニデソト・・
・X100Jを以下の通シに補正する。
「非イオン系(例えばノニデッ)P2O,)ライドンX
100、ツイーン2o)、陰イオン系(例えばドデシル
硫酸ナトリウム、ラウリルベンゼンスルフォン酸、ナト
リウム、コール酸塩)J(7)特許請求の範囲を別紙の
通りに補正する。
特許請求の範囲

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 担体粒子に成人T細胞白血病ウィルス又はその抗原成分
    が感作されてなる成人T細胞白血病ウィルス抗体検出用
    間接凝集反応試薬
JP58152772A 1983-08-22 1983-08-22 成人t細胞白血病ウイルス抗体検出用試薬 Pending JPS6044870A (ja)

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Application Number Priority Date Filing Date Title
JP58152772A JPS6044870A (ja) 1983-08-22 1983-08-22 成人t細胞白血病ウイルス抗体検出用試薬
EP84305458A EP0135352B1 (en) 1983-08-22 1984-08-10 Reagent for use in detecting antibody to human t-cell leukaemia virus antigen
DE8484305458T DE3482924D1 (de) 1983-08-22 1984-08-10 Reagenz zur verwendung im nachweis des antikoerpers gegen menschliche t-zellen-leukemievirusantigene.
KR1019840005045A KR920002183B1 (ko) 1983-08-22 1984-08-21 성인 t세포 백혈병 바이러스 항체 검출용 시약의 제조방법
SG32/91A SG3291G (en) 1983-08-22 1991-01-17 Reagent for use in detecting antibody to human t-cell leukaemia virus antigen

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JP58152772A Pending JPS6044870A (ja) 1983-08-22 1983-08-22 成人t細胞白血病ウイルス抗体検出用試薬

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