ES2937952T3 - Análogos de N-fenilpirimidina-2-amina sustituidos como inhibidores de la cinasa AXL - Google Patents

Análogos de N-fenilpirimidina-2-amina sustituidos como inhibidores de la cinasa AXL Download PDF

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Alexis Mollard
Steven L Warner
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Abstract

En un aspecto, la invención se refiere a análogos de N-fenilpirimidin-2-amina sustituidos, derivados de los mismos y compuestos relacionados, que son útiles como inhibidores de la quinasa Axl; métodos sintéticos para hacer los compuestos; composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos; y métodos de uso de los compuestos y composiciones para el tratamiento de trastornos asociados con la disfunción de la quinasa Axl. Este resumen pretende ser una herramienta de exploración con fines de búsqueda en la técnica particular y no pretende ser una limitación de la presente invención. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Análogos de N-fenilpirimidina-2-amina sustituidos como inhibidores de la cinasa AXL
Antecedentes
Los receptores de las tirosina cinasas representan una superfamilia de proteínas transmembrana que retransmiten señales del entorno extracelular a la célula. Las señales son transmitidas por ligandos que se unen a los dominios extracelulares de estas cinasas, activando por tanto una ruta de señalización. En esta superfamilia, frecuentemente el ligando es un tipo de factor de crecimiento. Una subfamilia de cinasas comprendida en esta superfamilia son la subfamilia de cinasas TAM, que comprende los receptores de las tirosina cinasas Axl, Tyro3 y Mer (Hafizi S y Dahlback B. Cytokine Growth Factor Rev 2006; 17: 295-304; Linger RM, et al. Adv Cancer Res 2008; 100: 35-83). Esta subfamilia de las cinasas tiene un único dominio extracelular común con los dominios de inmunoglobulina del extremo N y dos estructuras de repetición de fibronectina de tipo III. La estructura de las repeticiones de fibronectina de tipo III tiene una similitud estructural con las moléculas de adhesión de células neurales (NCAM). Aunque caracterizada inicialmente como una única proteína transmembrana, Axl puede existir también como una proteína soluble (sAxl) que se genera por una proteolisis mediada por ADAM10 (una metaloproteinasa). El papel de sAxl menos bien caracterizado que el de la Axl transmembrana intacta.
El ligando natural común de las cinasas TAM es Gas6, un producto del gen 6 específico de la detención del crecimiento (Hafizi S y Dahlback B. FEBS J 2006; 273:5231-44; BeIIido-Martin L y de Frutos PG. Vitam Horm 2008; 78:185-209). La proteína denominada proteína S es también un ligando natural potencial de las cinasas TAM. Ambas proteínas, Gas6 y proteína S, son proteínas dependientes de la vitamina K y comparten aproximadamente un 43% de homología y algunos dominios de proteínas distintos. La unión de Gas6 con Axl conduce a la autofosforilación de Axl y la activación de las rutas de señalización en la dirección 3' que incluyen las rutas MAPK y PI3K/Akt (Angelillo-Scherrer A, et al. J Clin Invest 2008; Shankar SL, et al. J Neuorosci 2006, 26: 5638-5648; Keating AK, et al. Oncogene 2006, 25:6092-6100), aunque la ruta JAK/STAT puede ser importante para las respuestas inmunitarias mediadas por TAM (Rothlin CV, et al. Cell 2007, 131:1124— 1136).
El potencial oncogénico de Axl se descubrió en primer lugar en leucemia mielógena crónica (LMC), pero se ha demostrado que juega un papel en la progresión y metástasis de otros tipos de cánceres. La expresión aumentada de Axl y/o del ligando de Axl, Gas6, se ha mostrado en numerosas neoplasias malignas humanas, incluyendo las de ovario melanoma, carcinoma de células renales, leiomioma uterino, cáncer endometrial de útero, carcinoma de tiroides, cáncer gástrico, cáncer de mama, NSCLC. LMC, LMA, carcinoma colorrectal, cáncer de próstata, diversos linfomas, y cáncer de esófagos. Los efectos bioquímicos de la expresión aumentada de Axl se asocian con transformación oncogénica aumentada, supervivencia celular, proliferación, migración, angiogénesis, y adhesión celular. Los estudios de validación de diana de los modelos de cáncer in vivo muestran que la inhibición de la expresión de Axl por el ARNi bloqueó el crecimiento del tumor en aquellos modelos (por ejemplo, véase Li, Y. et al. Oncogene 2009, 28:3442-3455).
Además de la asociación con el cáncer y la tumorigénesis, las cinasas de la familia TAM en numerosas células diferentes y funciones fisiológicas, Estas incluyen la regulación de la homeostasis vascular del músculo liso (Korshunov VA, et al. Hypertension 2007, 50: 1057-1062; Korshunov VA, et al. Circ Res 2006, 98: 1446-1452), la función plaquetaria, la estabilización del trombo (Angelillo-Scherrer A, et al. J Clin Invest 2008, 118: 583-596; Gould WR, et al. J Thromb Haemost 2005, 3: 733-741), inmunidad innata (Lemke G y Rothlin CV. Nat Rev Immunol 2008, 8: 327-336) e inflamación (Rothlin CV, et al. Cell 2007, 131: 1124-1136; Sharif MN, et al. J. Exp Med 2006, 203: 1891-1901).
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas. En resumen, la proteína Axl parece tener un papel clave en numerosos trastornos humanos, incluyendo cáncer. La expresión de la proteína y/o el ligando se altera en estas células cancerosas. Así, la proteína Axl es una diana atractiva y valiosa para el descubrimiento y el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos para tratar el cáncer y otras dolencias. Existe una necesidad para el diseño de inhibidores específicos y selectivos para el tratamiento de trastornos mediados y/o asociados con una cinasa Axl. La invención proporciona un compuesto que tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000002_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención proporciona además una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto mostrado anteriormente. La invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende el compuesto mostrado anteriormente o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
La invención proporciona además un compuesto que tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000003_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en un método de tratamiento de un trastorno de proliferación celular incontrolada en un mamífero, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo al mamífero.
La invención proporciona además un método para preparar un compuesto que tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000003_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el método la siguiente etapa:
Figure imgf000003_0003
De acuerdo con el propósito o propósitos de la invención, como se incorpora y se describe ampliamente en el presente documento, la invención, en un aspecto, se refiere a compuestos útiles como inhibidores de la ruta PI3K/Akt, compuestos útiles como inhibidores de Axl, métodos para fabricar los mismos, composiciones farmacéuticas que los comprenden y métodos para tratar trastornos de proliferación celular incontrolada que los usan.
También se proporciona un método para preparar un compuesto como se define en las reivindicaciones adjuntas. También se proporcionan compuestos o productos para su uso en un método de tratamiento de un trastorno asociado con una disfunción cinasa, como se define en las reivindicaciones adjuntas.
Breve descripción de las figuras
Las figuras acompañantes, que se incorporan y forman parte de la presente memoria descriptiva, ilustran algunos aspectos, y junto con la descripción sirven para explicar los principios de la invención.
La Figura 1 muestra un estudio de acoplamiento de ciertos compuestos con un modelo de homología de la cinasa Axl.
La Figura 2 muestra un alineamiento de secuencia múltiple usado para desarrollar un modelo de homología de la cinasa Axl.
La Figura 3 muestra un estudio de acoplamiento de ciertos compuestos con un modelo de homología de la cinasa Axl.
La Figura 4 muestra datos representativos de la inhibición de las cinasas Axl y Mer por un compuesto divulgado representativo.
La Figura 5 muestra los datos representativos de la inhibición de las cinasas Axl y Mer por ciertos compuestos. La Figura 6 muestra datos representativos sobre la expresión del ARNm de Axl y la proteína sAxl en líneas de células.
La Figura 7 muestra datos representativos sobre la expresión de la proteína Axl en líneas de células.
La Figura 8 muestra datos representativos en el panel A sobre la inhibición de la fosforilación de Akt en líneas de células de cáncer de páncreas por ciertos compuestos, y en el panel B muestra datos representativos sobre la inhibición de la autofosforilación de AkT en líneas de células de cáncer por ciertos compuestos.
La Figura 9 muestra datos representativos sobre el perfilado de las cinasas de un compuesto divulgado representativo.
La Figura 10 muestra datos representativos sobre la inhibición de la migración celular por un compuesto divulgado representativo.
La Figura 11 muestra datos representativos sobre la inhibición de la liberación de sAxl por un compuesto divulgado representativos.
La Figura 12 muestra datos representativos sobre la inhibición de la viabilidad celular por ciertos compuestos.
La Figura 13 muestra datos representativos sobre la inhibición de la viabilidad celular las líneas de células de cáncer de páncreas por ciertos compuestos.
La Figura 14 muestra datos representativos del efecto de un compuesto divulgado o el peso corporal en un modelo animal de xenoinjerto tumoral.
La Figura 15 muestra datos del efecto de un compuesto divulgado o volumen tumoral en un modelo animal de xenoinjerto tumoral.
La Figura 16 muestra datos representativos sobre el perfil farmacocinético de un compuesto divulgado.
Otras ventajas de la invención se expondrán en parte en la descripción a continuación y en parte serán evidentes a partir de la descripción, o pueden llevarse a cabo al poner en práctica la invención. Las ventajas de la invención se realizarán y se alcanzarán mediante los elementos y combinaciones particularmente especificadas en las reivindicaciones adjuntas. Debe entenderse que tanto la descripción general anterior como la descripción detallada a continuación son únicamente a modo de explicación y ejemplo y no restrictivas de la invención, como se reivindica. Descripción
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
Todas las publicaciones mencionadas en el presente documento divulgan y describen los métodos y/o materiales junto con las publicaciones en las que se citan. Las publicaciones analizadas en el presente documento se proporcionar únicamente para su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Nada en el presente documento debe interpretarse como una admisión de que la presente invención no tiene derecho a anteceder dicha publicación en virtud de una invención anterior. Además, las fechas de publicación proporcionadas en el presente documento pueden ser diferentes de los datos reales de publicación, lo que puede requerir confirmación independiente.
A. DEFINICIONES
Como se usa en el presente documento, puede darse la nomenclatura de los compuestos, incluyendo los compuestos orgánicos, usando nombres comunes, IUPAC, IUBMB o recomendaciones para nomenclatura del CAS. Cuando están presentes una o más características estereoquímicas, pueden usarse las reglas Cahn-Ingold-Prelog para estereoquímica para designar la prioridad estereoquímica, la especificación EIZ y similares. Un experto en la técnica puede determinar con facilidad la estructura de un compuesto si se le da un nombre, ya sea mediante reducción sistémica de la estructura del compuesto usando convenciones de denominación o mediante un programa informático disponible en el mercado, tal como CHEMDRAW™ (Cambridgesoft Corporation, EE.UU.).
Tal como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el", "la", incluyen referencias al plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Así, por ejemplo, la referencia a "grupo funcional", "un alquilo" o "un resto" incluye mezclas de dos o más de dichos grupos funcionales, alquilos, restos o similares.
En el presente documento, los intervalos pueden expresarse como desde "aproximadamente" un valor particular y/o hasta "aproximadamente" otro valor particular. Cuando se expresa dicho intervalo, un aspecto más incluye desde el un valor particular y/o hasta el otro valor particular. De forma similar, cuando se expresan los valores en forma de aproximaciones, mediante el uso del antecedente "aproximadamente", se entenderá que los valores particulares forman otro aspecto más. Se entenderá además que los extremos de cada uno de los intervalos son significativos tanto en relación con el otro extremo como independientemente del otro extremo. También se entiende que en el presente documento se divulgan diversos valores y que cada valor también se divulga en el presente documento como "aproximadamente" ese valor particular además del valor en sí mismo. Por ejemplo, si se divulga el valor "10", entonces se divulga también "aproximadamente 10". También se entiende que cada unidad entre dos unidades particulares se divulga también. Por ejemplo, si se divulgan 10 y 15, entonces se divulgan también 11, 12, 13 y 14. Las referencias en la memoria descriptiva y las reivindicaciones finales a partes en peso de un elemento o componentes particular en una composición se refieren a la relación en peso entre el elemento o componente y cualquier otro elemento o componente en la composición o artículo para el cual está expresada una parte en peso. Así, en un compuesto que contiene 2 partes en peso del componente X y 5 partes en peso del componente Y, X e Y están presentes en una relación de peso de 2:5 y están presentes en dicha relación sin importar si el compuesto contiene otros componentes adicionales.
Un porcentaje en peso (% en peso) de un componente, a menos que se indique de forma específica lo contrario, se basa en el peso total de la formulación o composición en la que el componente está incluido.
Como se usa en el presente documento, los términos "opcional" o "opcionalmente" significan que la circunstancia o evento descrito a continuación puede o no ocurrir y que la descripción incluye casos en los que dicho evento tiene lugar y casos en los que no.
Tal como se utiliza en el presente documento, las expresiones "Axl", "AXL", "receptor de la tirosina cinasa Axl", y "receptor de la tiroxina cinasa AXL" se pueden usar de manera indistinta y referirse a una proteína cinasa codificada por el gen AXL, que tiene un locus de cartografía génica de 19ql3.1-ql3.2. La isoforma más grande de Axl tiene 894 aminoácidos, inclusivos del péptido de señalización. Existen dos isoformas del producto de proteína resultante de las isoformas de corte y empalme del ARNm ("isoforma larga" e "isoforma corta") El número CE de esta cinasa es 2.7.10.1. El término Axl incluye las isoformas de corte y empalme, y también incluye las mencionadas designaciones alternativas como el receptor UFO de la proteína tirosina cinasa, el oncogén Axl, el protooncogén Axl, el receptor de la tirosina cinasa AXL, la secuencia/gen transformante AXL, UFO, el oncogén AXL, y JTK11 debidas a los expertos en la materia.
Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" puede ser un vertebrado, tal como un mamífero, un pez, un pájaro, un reptil o un anfibio. En consecuencia, el sujeto de los métodos divulgados en el presente documento puede ser un sujeto humano, primate no humano, caballo, cerdo, conejo, perro, oveja, cabra, vaca, gato, cobaya o roedor. El término no indica sexo o edad en particular. En consecuencia, se pretende que estén incluidos sujetos adultos y recién nacidos, así como fetos, ya sean machos o hembras. En un aspecto, el sujeto es un mamífero. Un paciente se refiere a un sujeto afligido con una enfermedad o trastorno. El término "paciente" incluye sujetos humanos y veterinarios. En algunos aspectos de los métodos divulgados, el sujeto ha sido diagnosticados con una necesidad de tratamiento de un trastorno de proliferación incontrolada asociado con una disfunción de proteína cinasa antes de la etapa de administración. En algunos aspectos del método divulgado, el sujeto ha sido diagnosticado con una necesidad para inhibir una proteína cinasa antes de la etapa de administración.
Como se usa en el presente documento, el término "tratamiento" se refiere al manejo médico de un paciente con la intención de curar, mejorar, estabilizar o prevenir una enfermedad, condición patológica o trastorno. Este término incluye tratamiento activo, lo que es, tratamiento dirigido específicamente a la mejora de una enfermedad, afección patología o trastorno y también incluye tratamiento causal, lo que es, tratamiento dirigido a la eliminación de la causa de la enfermedad, afección patológica o trastorno asociado. Además, este término incluye tratamiento paliativo, lo que es, tratamiento diseñado para el alivio de los síntomas más que para la cura de la enfermedad, la afección patológica o el trastorno; y tratamiento de apoyo, lo que es, tratamiento empleado para complementar otra terapia específica dirigida a la mejora de la enfermedad, afección patológica o trastorno asociado. En diversos aspectos, el término cubre cualquier tratamiento a un sujeto, incluyendo un mamífero (por ejemplo un ser humano) e incluye: (i) prevenir la aparición de la enfermedad en un sujeto que puede estar predispuesto a la enfermedad pero al que aún no se le ha diagnosticado con la tenga; (ii) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo o (iii) aliviar la enfermedad, es decir, provocar regresión de la enfermedad. En un aspecto, el sujeto es un mamífero tal como un primarte y, en otro aspecto, el sujeto es un ser humano. El término "sujeto" también incluye animales domésticos ( por ejemplo gatos, perros, etc.), ganado (por ejemplo, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, etc.) y animales de laboratorio (por ejemplo, ratón, conejo, rata, cobaya, mosca de la fruta, etc.).
Como se usa en el presente documento, el término "prevenir" o "previniendo" se refiere a imposibilitar, evitar, obviar, imposibilitar, detener u obstaculizar que algo suceda, especialmente por acción anticipada. Debe entenderse que en donde se usan reducir, inhibir o prevenir en el presente documento, a menos que se indique específicamente lo contrario, el uso de las otras dos palabras está también expresamente divulgado.
Tal como se usa en el presente documento, el término "diagnosticado" significa que ha sido sometido a un examen físico por un experto en la técnica, por ejemplo, un médico, y se ha encontrado una afección que puede diagnosticarse o tratarse por los compuestos, composiciones o métodos divulgados en el presente documento. Por ejemplo, "diagnosticado con un trastorno de proliferación celular incontrolado" significa que ha sido sometido a examen físico por un experto en la técnica, por ejemplo, un médico, y se ha encontrado que tiene una afección que puede diagnosticarse o tratarse mediante un compuesto o composición que puede inhibir una proteína cinasa. Como otro ejemplo, "diagnosticado con una necesidad de inhibición de una proteína cinasa" se refiere a que se ha sometido a un examen físico por un experto en la técnica, por ejemplo, un médico, y se ha encontrado que tiene una afección caracterizada por una disfunción de proteína cinasa. Dicho diagnóstico puede hacer referencia a un trastorno, tal como un trastorno de proliferación celular incontrolada, cáncer y similares, tal como se ha analizado en el presente documento. Por ejemplo, la expresión "diagnosticado con una necesidad de inhibición de actividad de proteína cinasa" se refiere a que se ha sometido a examen físico por un experto en la técnica y se ha encontrado que tiene una afección que puede ser diagnosticada o tratada mediante inhibición de la actividad de proteína cinasa. Por ejemplo, "diagnosticado con una necesidad de tratamiento de uno o más trastornos de proliferación celular incontrolada asociados con una disfunción de proteína cinasa" significa que ha sido sometido a examen físico por un experto en la técnica, por ejemplo, un médico, y se ha encontrado uno o más trastornos de proliferación celular incontrolada asociados con una disfunción de proteína cinasa.
Como se usa en el presente documento, la frase "identificado que está en necesidad de tratamiento por un trastorno" o similares, se refiere a la selección de un sujeto basándose en la necesidad de tratamiento del trastorno. Por ejemplo, puede identificarse un sujeto que tiene una necesidad de tratamiento de un trastorno (por ejemplo, un trastorno relacionado con una disfunción de la actividad de proteína cinasa) basándose en un diagnóstico temprano de un experto en la técnica y posteriormente someterse a tratamiento para el trastorno. Se contempla que la identificación puede, en un aspecto, realizarse por una persona diferente de la persona que realiza el diagnóstico. También se contempla, en otro aspecto, que la administración puede realizarse por alguien que posteriormente va a realizar la administración.
Como se usa en el presente documento, los términos "administrar" y "administración" se refieren a cualquier método para proporcionar una preparación farmacéutica a un sujeto. Dichos métodos son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, administración oral, administración transdérmica, administración por inhalación, administración nasal, administración tópica, administración intravaginal, administración oftálmica, administración intraaural, administración intracerebral, administración rectal, administración sublingual, administración bucal y administración parenteral, incluyendo inyectable tal como administración intravenosa, administración intraarterial, administración intramuscular y administración subcutánea. La administración puede ser continua o intermitente. En diversos aspectos, puede administrarse una preparación de forma terapéutica; lo que es, administrada para tratar una enfermedad o una afección existente. En diversos aspectos más, puede administrarse una preparación de manera profiláctica; lo que es, administrada para prevenir una enfermedad o afección.
La expresión "poner en contacto" tal como se usa en el presente documento, se refiere a reunir un compuesto divulgado y una célula, proteína cinasa diana u otra entidad biológica, de tal manera que el compuesto puede afectar a la actividad de la diana (por ejemplo, espliceosoma, célula, etc.) ya sea directamente; es decir, interactuando con la diana en sí o, indirectamente; es decir, interactuando con otra molécula, cofactor, factor o proteína de la cual depende la actividad de la diana.
Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad que es suficiente para lograr el resultado deseado o para tener efecto en una afección indeseada. Por ejemplo, una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad que es suficiente para lograr el resultado terapéutico deseado o para tener efecto sobre los síntomas no deseados, pero que generalmente es insuficiente para provocar efectos secundarios adversos. La dosis eficaz terapéuticamente específica para cualquier paciente en particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo el trastorno a tratar y la gravedad del trastorno; la composición específica empleada; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración; la vía de administración; la velocidad de excreción del compuesto específico empleado y factores similares bien conocidos por los expertos en las técnicas médicas. Por ejemplo, es bueno dentro de la habilidad en la técnica empezar las dosis de un compuesto a niveles menores de los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado e incrementar de forma gradual la dosis hasta lograr el efecto deseado. Si se desea, la dosis diaria eficaz puede dividirse en dosis múltiples para los fines de administración. En consecuencia, las composiciones de dosis única pueden contener dichas cantidades o submúltiplos de las mismas para completar la dosis diaria. Las dosis pueden ajustarse por el médico particular en el caso de que aparezca cualquier contraindicación. Las dosis pueden variar y pueden administrarse en una o más dosis de administración diarias durante uno o varios días. Se puede encontrar orientación en la bibliografía para las dosis apropiadas de clases específicas de productos farmacéuticos. En diversos aspectos más, puede administrarse una preparación en una "cantidad profilácticamente eficaz"; lo que es, una cantidad eficaz para prevenir una enfermedad o afección.
Tal como se usa en el presente documento, "kit" significa una colección de al menos dos componentes que constituyen el kit. Juntos, los componentes constituyen una unidad funcional para un propósito dado. Los miembros individuales pueden empaquetarse físicamente juntos o por separado. Por ejemplo, un kit que comprende instrucciones para usar el kit puede o no incluir físicamente las instrucciones con otros componentes miembros individuales. En su lugar, las instrucciones pueden suministrarse como un componente miembro separado, ya sea en forma de papel o en forma electrónica que se puede proporcionar en un dispositivo de lectura legible en un ordenador descargable desde un sitio web de internet, o en forma de una presentación grabada.
Como se usa en el presente documento, "instrucción o (instrucciones)" significa documentos que describen materiales o metodologías relevantes pertenecientes a un kit. Estos materiales pueden incluir cualquier combinación de los siguientes: información de antecedentes, lista de componentes y su información de disponibilidad (información de compra, etc.), protocolos breves o detallados para usar el kit, resolución de problemas, referencias, soporte técnico y cualquier otro documento relacionado. Las instrucciones pueden suministrarse con el kit como un componente miembro separado, ya sea en forma de papel o en forma electrónica que puede suministrarse en un dispositivo de lectura legible en un ordenador o descargable desde un sitio web de internet o en forma de una presentación grabada. Las instrucciones pueden comprender uno o múltiples documentos y están diseñadas para incluir actualizaciones futuras.
Tal como se utiliza en el presente documento, la expresión "agente terapéutico" incluye cualquier compuesto o composición de materia biológicamente activa de origen sintético o natural que, cuando se administra a un organismo (un animal humano o no humano), induce un efecto farmacológico, inmunógeno, y/o fisiológico deseado mediante una acción local y/o sistémica. La expresión abarca por tanto aquellos compuestos o sustancias químicas tradicionalmente contemplados como fármacos, vacunas, y sustancias biofarmacéuticas que incluyen moléculas tales como proteínas péptidos, hormonas, ácidos nucleicos, construcciones génicas y similares. Se describen ejemplos de agentes terapéuticos en referencias bibliográficas bien conocidas tales como el Índice Merck (14a edición), el Physicians' Desk Reference (64a edición), y The Pharmacological Basis of Therapeutics (12a edición), e incluyen, aunque no de forma limitativa, medicamentos; vitaminas; suplementos minerales; sustancias usadas para el tratamiento prevención, diagnóstico, cura o mitigación de una enfermedad o dolencia; las sustancias que afectan a la estructura o función del cuerpo, o los profármacos, que se vuelven biológicamente activos o más activos después que se han colocado en un entorno fisiológico. Por ejemplo, la expresión "agente terapéutico" incluye compuestos o composiciones para su uso en todas las áreas terapéuticas principales incluyendo, aunque no de forma limitativa, adyuvantes; compuestos antiinfecciosos tales como antibióticos y agentes antivíricos; analgésicos y combinaciones analgésicas, anoréxicos, agentes antiinflamatorios, antiepilépticos, anestésicos locales y generales, hipnóticos, sedantes, agentes antipsicóticos, agentes neurolépticos, antidepresivos, ansiolíticos, antagonista, agentes bloqueantes de neuronas, agentes anticolinérgicos y colinomiméticos, agentes antimuscarínicos y muscarínicos, antiadrenérgicos, antiarrítmicos, agentes antihipertensivos, hormonas y nutrientes, antiartríticos, agentes antiasmáticos, anticonvulsivos, antihistamínicos, antieméticos, antineoplásicos, antipruríticos, antipiréticos; antiespasmódicos, preparaciones cardiovasculares (que incluyen bloqueantes del canal del calcio, betabloqueantes, beta-agonistas y antiarrítmicos), antihipertensivos, diuréticos, vasodilatadores; estimulantes del sistema nervioso central; preparaciones contra la tos y el frío; descongestivos; agentes de diagnóstico; hormonas; estimulantes del crecimiento óseo e inhibidores de la resorción ósea; inmunosupresores; relajantes musculares; psicoestimulantes; sedantes; tranquilizantes; proteínas, péptidos, y fragmentos de los mismos (de origen natural, sintetizados químicamente o producidos de forma recombinante); y moléculas de ácidos nucleicos (formas poliméricas de dos o más nucleótidos, tanto ribonucleótidos (ARN) o desoxirribonucleótidos (ADN) incluyendo moléculas bicatenarias y monocatenarias, construcciones génicas, vectores de expresión, moléculas de sentido contrario y similares), moléculas pequeñas (por ejemplo, doxorrubicina) y otras macromoléculas biológicamente activas tales como, por ejemplo, proteínas y enzimas. El agente puede ser un agente biológicamente activo usado en aplicaciones médicas, incluyendo aplicaciones veterinarias y en agricultura, tales como con plantas, así como otras áreas. La expresión agente terapéutico incluye también sin limitación medicamentos; vitaminas; suplementos minerales; sustancias usadas para el tratamiento prevención, diagnóstico, cura o mitigación de la enfermedad o dolencia; o sustancias que afectan a la estructura o función del cuerpo; o profármacos, que llegan a ser biológicamente activos o más activos después que se han situado en un entorno fisiológico predeterminado.
Tal como se utiliza en el presente documento, se pretende que "CE50", se refiera a la concentración de una sustancia (por ejemplo, un compuesto o un fármaco) que se requiere para un agonismo o activación del 50% de un proceso biológico, o un componente de un proceso, incluyendo una proteína, subunidad, orgánulo, ribonucleoproteína, etc. En un aspecto, una CE50 puede referirse a la concentración de una sustancia que se requiere para un agonismo o activación del 50% in vivo, como se define además en otras partes del presente documento. En un aspecto adicional, CE50 se refiere a la concentración de agonista o activador que provoca una respuesta intermedia entre el valor inicial y la máxima respuesta.
Tal como se utiliza en el presente documento, se pretende que "CI50", se refiera a la concentración de una sustancia (por ejemplo, un compuesto o un fármaco) que se requiere para una inhibición del 50% de un proceso biológico, o componente de un proceso, incluyendo una proteína, subunidad, orgánulo, ribonucleoproteína, etc. Por ejemplo, una CI 50 puede referirse a la concentración de una sustancia que se requiere para la inhibición del 50% in vivo o la inhibición se mide in vitro, como se define además en otras partes del presente documento. Como alternativa, La CI50 se refiere a la concentración inhibidora (CI) media máxima (50%) de una sustancia. La inhibición puede medirse en una línea de células tal como células K562, MCF-7, PL-45, PANC-1, PSN-1, HepG2, o A549. En un aspecto más adicional, la inhibición se mide en una línea de células, por ejemplo HBK-293 o HeLa, transfectada con una proteína cinasa de mamífero, mutante o natural, por ejemplo, Axl
La expresión "farmacéuticamente aceptable" describe un material que no es, biológicamente ni de otro modo, indeseable, es decir, que no provoca un nivel inaceptable de efectos biológicos no deseados ni interactúa de una forma deletérea.
Como se usa en el presente documento, la expresión "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a soluciones acuosas o no acuosas, dispersiones, suspensiones o emulsiones, así como a polvos estériles para reconstitución en soluciones o soluciones estériles inyectables justo antes de su uso. Los ejemplos de portadores, diluyentes, disolventes o vehículos, acuosos o no acuosos, adecuados, incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, etilenglicol y similares), carboximetilcelulosa y mezclas adecuadas de la misma, aceites vegetales (tal como aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Puede mantenerse una fluidez apropiada, por ejemplo, usando materiales de recubrimiento tales como lecitina, manteniendo el tamaño requerido de partícula en el caso de dispersiones y mediante el uso de tensioactivos. Estas composiciones pueden contener también adyuvantes tales como conservantes, agentes de humectación, agentes emulsionantes y agentes de dispersión. Puede asegurarse la prevención de la acción de microorganismos mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos tales como parabeno, clorobutanol, fenol ácido sórbico y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos tales como azúcares, cloruro de sodio y similares. Se puede conseguir absorción prologada de la forma farmacéutica inyectable mediante la inclusión de agentes tales como monoestearato de aluminio y gelatina, que retrasan la absorción. Las formas de depósito inyectables se fabrican formando matrices microencapsuladas del fármaco en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicolida, poli(ortoésteres) y poli (anhídridos). Dependiendo de la relación de fármaco con polímero y de la naturaleza del polímero particular empleado, puede controlarse la velocidad de liberación de fármaco. Las formulaciones de depósito inyectables también se preparan atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con los tejidos corporales. Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro que retiene las bacterias o mediante la incorporación de agentes de esterilización en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse o dispersarse en agua estéril u otro medio inyectable estéril justo antes de su uso. Los portadores inertes adecuados pueden incluir azúcares tales como la lactosa. De forma deseable, al menos el 95 % en peso de las partículas del principio activo tienen un tamaño de partícula eficaz en el intervalo de 0,01 a 10 micrómetros.
Los compuestos descritos en el presente documento pueden contener uno o más dobles enlaces y, por lo tanto, potencialmente dar lugar a isómeros cis/trans (E/Z), así como a otros isómeros conformacionales. A menos que se indique lo contrario, la invención incluye todos los posibles isómeros, así como mezclas de dichos isómeros.
A menos que se especifique lo contrario, una fórmula con enlaces químicos que se muestra solamente como líneas sólidas y no como cuñas o líneas punteadas, contempla cada isómero posible, por ejemplo, cada enantiómero y diastereómero y una mezcla de isómeros, tal como una mezcla racémica o escalémica. Los compuestos descritos en el presente documento pueden contener uno más centros asimétricos y, por lo tanto, potencialmente dar lugar a diastereómeros e isómeros ópticos. A menos que se indique lo contrario, la presente invención incluye todos dichos posibles diastereómeros así como sus mezclas racémicas, sus enantiómeros resueltos sustancialmente puros, todos los isómeros geométricos posibles y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Las mezclas de estereoisómeros, así como los estereoisómeros específicos aislados, están incluidos. Durante el curso de los procedimientos sintéticos usados para preparar dichos compuestos, o en el uso de procedimientos de racemización o epimerización conocidos por los expertos en la técnica, los productos de dichos procedimientos pueden ser una mezcla de estereoisómeros.
Muchos compuestos orgánicos pueden existir en formas ópticamente activas que tienen la habilidad de rotar el plano de la luz polarizada en el plano. Para describir un compuesto ópticamente activo, se usan los prefijos D y L o R y S para indicar la configuración absoluta de la molécula sobre de su centro o centros quirales. Los prefijos d y l o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotación de la luz polarizada en el plano por el compuesto. Por ejemplo, un compuesto con el prefijo (-) o l significa que el compuesto es levógiro, o un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos compuestos, denominados estereoisómeros, son idénticos salvo porque no son imágenes especulares superponibles entre sí. Un estereoisómero especifico también puede denominarse un enantiómero y una mezcla de dichos isómeros a menudo se denomina mezcla enantiomérica. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina mezcla racémica. Muchos de los compuestos descritos en el presente documento pueden tener uno más centros quirales y por lo tanto pueden existir en diferentes formas enantioméricas. Si se desea, un carbono quiral puede designarse con un asterisco (*). Cuando se representan los enlaces al carbono quiral como líneas rectas en las fórmulas divulgadas, se entiende que ambas configuraciones (R) y (S) del carbono quiral y por lo tanto, ambos enantiómeros y sus mezclas, están comprendidos en la fórmula. Como se usa en la técnica, cuando se desea especificar la configuración absoluta sobre el carbono quiral, uno de los enlaces al carbono quiral puede representarse como una cuña (enlaces a los átomos por encima del plano) y el otro puede representarse como una serie o cuña de líneas cortas paralelas (enlaces a los átomos por debajo del plano). Puede usarse el sistema Cahn-Inglod-Prelog para asignar la configuración (R) o (S) al carbono quiral.
Los compuestos descritos en el presente documento comprenden átomos tanto en su abundancia isotópica natural como en abundancia no natural. Los compuestos divulgados pueden ser compuestos marcados isotópicamente o sustituidos isotópicamente idénticos a los descritos, salvo por el hecho de que uno o más átomos están sustituidos por un átomo que tiene una masa atómica o un número másico diferentes a la masa atómica o el número másico que se encuentra habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 18F y 36Cl, respectivamente. Los compuestos comprenden además profármacos de los mismos y las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos o dichos profármacos que contienen los isótopos anteriormente mencionados y/u otros isótopos de otros átomos están dentro del alcance de esta invención. Ciertos compuestos de la presente invención marcados isotópicamente, por ejemplo en los que se incorporan isótopos radioactivos tales como 3H y 14C, son útiles en los ensayos de distribución de tejido de sustrato y/o fármaco. Se prefieren en particular isótopos tritiados, es decir, 3H y carbono 14, es decir 14C, por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir 2H, puede proporcionar ventajas terapéuticas que dan como resultado mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, semivida in vivo aumentada o requerimientos de dosificación reducidos y, por consiguiente, se pueden preferir en algunas circunstancias. Los compuestos marcados isotópicamente de la presente invención y los profármacos de los mismos en general pueden prepararse llevando a cabo los procedimientos siguientes, sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible por un reactivo no marcado isotópicamente.
Los compuestos descritos en la invención pueden estar presentes pueden estar presentes en forma de solvato. En algunos casos, el disolvente usado para preparar el solvato es una solución acuosa y entonces el solvato a menudo se denomina hidrato. Los compuestos pueden estar presentes en forma de hidrato, el cual se puede obtener, por ejemplo, mediante cristalización a partir de un disolvente o a partir de una solución acuosa. En asociación con esto, se pueden combinar una, dos, tres o cualquier número arbitrario de moléculas de disolvente o agua con los compuestos de acuerdo con la invención para formar solvatos e hitratos. A menos que se indique lo contrario, la invención incluye todos estos posibles solvatos.
El término "cocristal" significa una asociación física de dos o más moléculas que deben su estabilidad a interacción no covalente. Uno o más componentes de este complejo molecular proporciona un marco estable en la red cristalina. En ciertos casos, las moléculas huésped se incorporan a la red cristalina en forma de hidratos o solvatos, véase, por ejemplo, "Crystal Engineering of the Composition of Pharmaceutical Phases. Do Pharmaceutical Co-crystals Represent a New Path to Improved Medicines?" Almarasson, O., et. al., The Royal Society of Chemistry, 1889-1896, 2004. Los ejemplos de cocristales incluyen ácido p-toluenosulfónico y ácido bencenosulfónico.
Se apreciará también que ciertos compuestos descritos en el presente documento pueden estar presentes como un equilibrio de tautómeros. Por ejemplo, las cetonas con un a-hidrógeno pueden existir en un equilibrio de la forma ceto y la forma enol.
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Igualmente, pueden existir amidas con un N-hidrógeno en un equilibrio de la forma amida y la forma de ácido imídico. A menos que se indique lo contrario, la invención incluye todos los tautómeros posibles.
Se sabe que las sustancias químicas forman sólidos que están presentes en diferentes estados de orden que se denominas formas polimórficas o modificaciones. Las distintas modificaciones de una sustancia polimórfica pueden diferir mucho en sus propiedades físicas. Los compuestos de acuerdo con la invención pueden estar presentes en distintas formas polimórficas, siendo posible que modificaciones particulares sean metaestables. A menos que se indique lo contrario, la invención incluye todas las formas polimórficas posibles.
Ciertos materiales, compuestos, composiciones y componentes divulgados en el presente documento se pueden obtener en el comercio o sintetizar fácilmente usando técnicas habitualmente conocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, los materiales de partida y reactivos usados en la preparación de los compuestos y composiciones divulgados o están disponibles de proveedores comerciales tales como Aldrich Chemical Co., (Milwaukee, Wis.), Acros Organics (Morris Plains, N. J.), Fisher Scientific (Pittsburgh, Pa.) o Sigma (St. Louis, Mo.) o se preparan por métodos conocidos por los expertos en la técnica siguiendo procedimientos establecidos en referencias tales como Fieser y Fieser's Regentas for Organic Synthesis, volúmenes 1-17 (John Wiley and Sons, 1991); Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, volúmenes 1-5 y Supplementals (Elsevier Science Publishers, 1989); Organic Reactions, volúmenes 1-40 (John Wiley y Sons, 1991); March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley y Sons, 4a edición) y Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989).
A menos que se indique expresamente de otro modo, no se pretende de ninguna manera que cualquier método expuesto en el presente documento se interprete como que necesita que sus etapas se realicen en un orden específico. En consecuencia, cuando la reivindicación de un método no menciona realmente un orden a seguir por sus pasos o no se establece específicamente de otro modo en las reivindicaciones o descripciones que las etapas se deben limitar a un orden específico, no se pretende de ningún modo inferir un orden. Esto es válido para cualquier base de interpretación no expresa, incluyendo: cuestiones de lógica con respecto a la disposición de las etapas o flujo operativo; significado simple derivado de organización gramatical o puntuación y el número o la clase de realizaciones descritas en la especificación.
Se divulgan componentes que son usados para preparar las composiciones de la invención así como las composiciones en sí mismas para ser usadas con los métodos divulgados en el presente documento. Estos y otros materiales se divulgan en el presente documento y se entiende que cuando se divulgan combinaciones, subconjuntos, interacciones, grupos, etc. de estos materiales, si bien las referencias específicas de cada una de las diversas combinaciones individuales y colectivas y la permutación de estos compuestos no se pueden divulgar explícitamente, cada uno está específicamente contemplado y descrito en el presente documento. Por ejemplo, si un compuesto particular se divulga y se analiza y se analizan diversas modificaciones que pueden hacerse a diversas moléculas, incluyendo los compuestos, se contemplan específicamente cada una y todas las combinaciones y permutaciones del compuesto y las modificaciones que son posibles a menos que se indique específicamente lo contrario. Así, si se divulga una clase de moléculas A, B, y C así como una clase de moléculas D, E, y F y se divulga un ejemplo de una molécula combinada, A-D, entonces, incluso si cada una no se enumera de manera individual, cada una se contempla individual y colectivamente y las combinaciones significativas A-E, A-F, B-D, B-E, B-F, C-D, C-E, y C-F se consideran divulgadas. Igualmente, cualquier subconjunto o combinación de estos se divulga también. así, por ejemplo, el subgrupo de A-E, B-F y C-E podría considerarse divulgado. Este concepto se aplica a todos los aspectos de esta solicitud incluyendo, pero no limitándose a, etapas en métodos de fabricación usando las composiciones de la invención. Así, si hay una diversidad de etapas adicionales que pueden realizarse, se entiende que cada una de estas etapas adicionales puede realizarse con cualquier realización o combinación de realizaciones específica de los métodos de la invención.
Se entiende que las composiciones divulgadas en el presente documento tienen ciertas funciones. En el presente documento se divulgan ciertos requisitos estructurales para llevar a cabo las funciones divulgadas y se entiende que hay una diversidad de estructuras que pueden realizar la misma función que están relacionadas con las estructuras divulgadas y que estas estructuras normalmente conseguirán el mismo resultado.
B. COMPUESTOS
En un aspecto, los compuestos son útiles como inhibidores de las proteína cinasas. En otro aspecto adicional, el compuesto presenta inhibición de una proteína cinasa seleccionada entre las cinasa I del oncogén c-abl, cinasa I del oncogén c-abl (forma T315I) receptor de la tirosina cinasa ALK, aurora cinasa A, receptor de la tirosina cinasa AXL, cinasa 1 dependiente de ciclina, cinasa 2 dependiente de ciclina, proteína serina/treonina cinasa Chkl, cinasa del receptor I del factor estimulador de colonias de macrófagos, cinasa del receptor I de efrina de tipo A, proteína tirosina cinasa Fer, proteína tirosina cinasa Fes/Fps, receptor I del factor de crecimiento de fibroblastos, proteína tirosina cinasa Fgr, receptor I del factor de crecimiento análogo a insulina, receptor de la proteína cinasa estimuladora de macrófagos, receptor de la proteína tirosina cinasa del protooncogén Ret, proteína tirosina cinasa del protooncogén ROS proteína tirosina cinasa del protooncogén Src, proteína tirosina cinasa del protooncogén Yes proteína tirosina cinasa 2 beta de PTK2B, proteína serina/treonina cinasa MST4, proteína serina/treonina cinasa PAK 4, proteína tirosina cinasa JAK1, proteína tirosina cinasa JAK2, proteína tirosina cinasa JAK3, proteína tirosina cinasa Lck, proteína tirosina cinasa Lyn, proteína tirosina cinasa Mer, proteína tirosina cinasa SYK, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, y receptor 3 del factor de crecimiento endotelial vascular. En un aspecto más adicional, el compuesto presenta inhibición del receptor de la tirosina cinasa Axl ("Axl"),
En un aspecto adicional, la invención se refiere a compuestos útiles como inhibidores de la ruta PI3K/Akt. En un aspecto más adicional, el compuesto presenta inhibición de la fosforilación de Akt en una célula.
En un aspecto, los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento de trastornos de proliferaciones celulares sin controlar. En un aspecto adicional, el trastorno de la proliferación celular sin controlar sin controlar es un cáncer o un tumor. En otro aspecto adicional, el trastorno de la proliferación celular sin controlar está asociado con una disfunción en la ruta PI3K/Akt y otras enfermedades en las que está implicada una disfunción de Axl, como se describe adicionalmente en el presente documento.
1. ESTRUCTURA
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
La invención proporciona un compuesto que tiene la siguiente estructura:
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención proporciona además una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto mostrado anteriormente. La invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende el compuesto mostrado anteriormente o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
2. COMPUESTOS DE EJEMPLOS
En un aspecto, un compuesto puede estar presente como:
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En un aspecto adicional, el compuesto presenta inhibición de una proteína cinasa. En un aspecto adicional, el compuesto presenta inhibición de una proteína cinasa. En otro aspecto adicional, el compuesto presenta inhibición de una proteína cinasa seleccionada entre las cinasa I del oncogén c-abl, cinasa I del oncogén c-abl (forma T315I) receptor de la tirosina cinasa ALK, aurora cinasa A, receptor de la tirosina cinasa AXL, cinasa 1 dependiente de ciclina, cinasa 2 dependiente de ciclina, proteína serina/treonina cinasa Chkl, cinasa del receptor I del factor estimulador de colonias de macrófagos, cinasa del receptor I de efrina de tipo A, proteína tirosina cinasa Fer, cinasa de la proteína tirosina cinasa, cinasa del receptor I de efrina de tipo A, proteína tirosina cinasa Fer, proteína tirosina cinasa Fes/Fps, receptor I del factor de crecimiento de fibroblastos, proteína tirosina cinasa Fgr, receptor I del factor de crecimiento análogo a insulina, receptor de la proteína cinasa estimuladora de macrófagos, receptor de la proteína tirosina cinasa del protooncogén Ret, proteína tirosina cinasa del protooncogén ROS, proteína tirosina cinasa del protooncogén Src, proteína tirosina cinasa del protooncogén Yes, proteína tirosina cinasa 2 beta de PTK2B, proteína serina/treonina cinasa MST4, proteína serina/treonina cinasa PAK 4, proteína tirosina cinasa JAK1, proteína tirosina cinasa JAK2, proteína tirosina cinasa JAK3, proteína tirosina cinasa Lck, proteína tirosina cinasa Lyn, proteína tirosina cinasa Mer, proteína tirosina cinasa SYK, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, y receptor 3 del factor de crecimiento endotelial vascular. En un aspecto más adicional, el compuesto presenta inhibición del receptor de la tirosina cinasa Axl ("Axl"),
En un aspecto adicional, la invención se refiere a compuestos útiles como inhibidores de la ruta PI3K/Akt. En un aspecto más adicional, el compuesto presenta inhibición de la fosforilación de Akt en una célula.
En un aspecto adicional, los compuestos divulgados presentan inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M. En un aspecto más adicional, los compuestos divulgados presentan inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M. En otro aspecto más, los compuestos divulgados presentan inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M. En otro aspecto adicional, los compuestos presentan inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M. En un aspecto más adicional, los compuestos presentan inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M. En otro aspecto más, los compuestos presentan inhibición con una IC50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
Se contempla que uno o más compuestos puedan omitirse opcionalmente de la invención divulgada.
Se contempla que uno o más compuestos puedan omitirse opcionalmente de la invención divulgada.
3. INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA PROTEÍNA CINASA
En general, los compuestos divulgados presentan inhibición de la ruta PI3K/Akt. En un aspecto adicional, el compuesto presenta inhibición de una proteína cinasa. En otro aspecto adicional, el compuesto presenta inhibición de una proteína cinasa seleccionada entre la cinasa c-abl del oncogén 1, la cinasa c-abl del oncogén 1 (forma T315I) receptor de la tirosina cinasa ALK, aurora cinasa A, receptor de la tirosina cinasa AXL, cinasa 1 dependiente de ciclina, cinasa 2 dependiente de ciclina, proteína serina/treonina cinasa Chk1, cinasa del receptor 1 del factor estimulador de colonias de macrófagos, cinasa del receptor 1 de efrina de tipo A, proteína tirosina cinasa Fer, proteína tirosina cinasa Fes/Fps, receptor 1 del factor de crecimiento de fibroblastos, proteína tirosina cinasa Fgr, receptor 1 del factor de crecimiento análogo a insulina, receptor de la proteína cinasa estimuladora de macrófagos, receptor de la proteína tirosina cinasa del protooncogén Ret, proteína tirosina cinasa del protooncogén ROS, proteína tirosina cinasa del protooncogén Src, proteína tirosina cinasa del protooncogén Yes, proteína tirosina cinasa 2 beta de PTK2B, proteína serina/treonina cinasa MST4, proteína serina/treonina cinasa PAK 4, proteína tirosina cinasa JAK1, proteína tirosina cinasa JAK2, proteína tirosina cinasa JAK3, proteína tirosina cinasa Lck, proteína tirosina cinasa Lyn, proteína tirosina cinasa Mer, proteína tirosina cinasa SYK, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, y receptor 3 del factor de crecimiento endotelial vascular. En un aspecto adicional, un compuesto divulgado puede presentar inhibición de una de estas cinasas con una CI50 de menos de aproximadamente 10 pM, de menos de aproximadamente 1 pM, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM.
En un aspecto, los compuestos divulgados presentan inhibición de las cinasas que son miembros de la subfamilia de receptores de la tirosina cinasa TAM. En un aspecto adicional, el receptor de la tirosina cinasa se selecciona entre Axl, Tyro3 y Mer. Por ejemplo, un compuesto divulgado puede presentar la inhibición de Tyro3 con una CI50 de menos de aproximadamente 10 pM, de menos de aproximadamente 1 pM, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM. Como alternativa, un compuesto divulgado puede presentar la inhibición de Mer con una CI50 de menos de aproximadamente 10 pM, de menos de aproximadamente 1 pM, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM.
En un aspecto, los compuestos divulgados presentan inhibición del receptor de la tirosina cinasa Axl ("Axl"), Por ejemplo, un compuesto divulgado puede presentar la inhibición de Axl con una CI50 de menos de aproximadamente 10 pM, de menos de aproximadamente 1 pM, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM.
En un aspecto adicional, la inhibición se determina en un ensayo in vitro que mide la actividad catalítica de la proteína cinasa, por ejemplo, la desaparición de sustrato ATP o la conversión de ATP a ADP usando los métodos conocidos en la técnica. En un aspecto más adicional, el ensayo usa una proteína cinasa recombinante. En otro aspecto adicional, la proteína cinasa recombinante es Axl. En algunos casos, Puede ser útil etiquetar la proteína cinasa recombinante con una etiqueta de afinidad. Un ejemplo de etiquetas de afinidad útiles es la etiqueta His6. Un ensayo adecuado es el ensayo de la cinasa Axl Lathascreen™ (Invitrogen), cuyo uso se describe en los ejemplos. Por ejemplo, un compuesto divulgado puede presentar inhibición de la actividad catalítica de la proteína cinasa con una CI50 de menos de aproximadamente 10 pM, de menos de aproximadamente 1 pM, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM.
En un aspecto adicional, el ensayo in vitro mide la inhibición por un compuesto divulgado de la unión de un inhibidor competitivo de ATP en el sitio activo de la proteína cinasa. En un aspecto más adicional, el ensayo usa una proteína cinasa recombinante. En otro aspecto adicional, la proteína cinasa recombinante es Axl. En otro aspecto adicional, un compuesto divulgado puede presentar inhibición de la unión en el sitio de unión del ATP de la proteína cinasa con una CI50 de menos de aproximadamente 10 j M, de menos de aproximadamente 1 j M, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM. un ejemplo de dicho ensayo es en Ensayo de unión a la cinasa Eu LanthaScreen™ (Invitrogen Corporation, Carlsbad, Calif.) que se basa en la unión y el desplazamiento de la estructura principal del inhibidor de la cinasa con ATP marcado con Alexa Fluor® 647 (trazador de cinasa) a la cinasa de interés. La unión del trazador a la cinasa se detecta usando un anticuerpo antietiqueta marcado con europio, que se une a la cinasa de interés. La unión simultánea del trazador y el anticuerpo a la cinasa da como resultado un alto grado de FRET (transferencia de energía de resonancia mediante fluorescencia) desde el fluoróforo donante de europio (Eu) al fluoróforo aceptor de Alexa Fluor® 647 sobre el trazador de la cinasa. La unión de un inhibidor a la cinasa compite por la unión con el trazador, dando como resultado una pérdida de FRET. Este tipo de ensayo permite la detección de múltiples modos de interacción con la cinasa diana en el sitio de unión al ATP, incluyendo los inhibidores de "Tipo II", que se unen en el sitio del ATP y un segundo sitio denominado a menudo sitio "alostérico" los compuestos que se unen tanto a las formas activas como a las formas sin activar de una cinasa diana, y los compuestos con una baja cinética de unión.
C. INHIBICIÓN DE LA RUTA PI3K/AKT
La utilidad de los compuestos de acuerdo con la presente invención como inhibidores de la ruta de señalización PI3K/Akt, en particular mediante la inhibición de la actividad de Axl, se puede demostrar mediante la metodología conocida en la técnica. Por ejemplo, se puede determinar la inhibición de las etapas específicas en una ruta de señalización. En un aspecto, los compuestos de la presente invención inhiben la fosforilación de Akt. En un aspecto adicional, se puede determinar la fosforilación de Akt en Ser 473 como una medida de la inhibición de la ruta de señalización. Por ejemplo, un compuesto puede presentar inhibición de la fosforilación de Akt con una CI50 de menos de aproximadamente 10 j M, de menos de aproximadamente 1 j M, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM. En un aspecto adicional, la inhibición es de la fosforilación en Thr308 de Akt.
En un aspecto, los compuestos divulgados presentan la inhibición de la viabilidad celular. Por ejemplo, las células derivadas de tumores con una expresión aumentada de Axl y/o Gas6 son adecuadas para la determinación de la viabilidad celular. En un aspecto adicional, la inhibición se determina usando una línea de células seleccionada entre células PSN-1, PL45, y PANC-I. En otro aspecto adicional, la línea de células se selecciona entre las células K562, MCF-7, PL-45, PANC-1, PSN-1, HepG2, A549AN3-CA, RL95-2, SK-OV-3, NCCIT, HCT-116, AGS, BT549, RKO, Hec-1 A, 786-O, HCT-15, U87-MG, PC-3, MCF-7, H1975, HT-29, T47D, BT-20, y LNCap. Por ejemplo, un compuesto puede presentar inhibición de la viabilidad celular en una de estas líneas de células con una CI50 de menos de aproximadamente 10 j M, de menos de aproximadamente 1 j M, de menos de aproximadamente 500 nM, de menos de aproximadamente 100 nM, o de menos de aproximadamente 10 nM. Se conocen en la técnica los métodos para medir la viabilidad celular y se describen en el presente documento.
Se puede medir la eficacia in vivo de los compuestos divulgados en numerosos modelos preclínicos en donde se conocen, terapéuticas clínicamente útiles que muestran respuestas positivas similares. Por ejemplo, los compuestos divulgados pueden evaluarse en modelos de xenoinjertos de ratones en animales de laboratorio en dosis que varían de 1 a 100 mg/kg administradas por vía oral, mediante inyección intravenosa, inyección subcutánea, o inyección intraperitoneal. Aunque, se usan con más frecuencia ratones alotímicos en el modelo de xenoinjerto tumoral. se pueden usar otros animales de laboratorio según sea necesario por conveniencia de los objetivos del estudio. En el modelo de xenoinjerto tumoral, el volumen del tumor en varios puntos tras el implante del tumor y/o la mortalidad pueden usarse como criterios de valoración en el estudio. Las líneas de células adecuadas para establecer xenoinjertos tumorales incluyen las siguientes: PL45, PANC-1 o PSN-1. En otro aspecto adicional, la línea de células se selecciona entre las células K562, MCF-7, PL-45, PANC-1, PSN-1, HepG2, A549AN3-CA, RL95-2, SK-OV-3, NCCIT, HCT-116, AGS, BT549, RKO, Hec-1A, 786-O, HCT-15, U87-MG, PC-3, MCF-7, H1975, HT-29, T47D, BT-20, y LNCap.
D. IDENTIFICACIÓN BASADA EN LA ESTRUCTURA DE LOS INHIBIDORES DE AXL
Se usó una estrategia de diseño basada en la estructura en la identificación de los farmacóforos potenciales útiles como inhibidores de Axl. Los experimentos de acoplamiento virtuales identificaron pirimidinas 2,4-diaminas 2,4,6-trisustituidas como fragmentos activos. En la Figura I se muestra un estudio de acoplamiento representativo, que muestra el acoplamiento de la 2-((5-cIoro-2-((4-((4-metiIpiperazin-l-il)metiI)fenil)amino)pirimidin-4-iI)amino)-N,N-dimetilbenzamida con un modelo basado en la homología de la cinasa Axl. Los restos críticos están marcados y la bisagra, los genes gatekeeper (genes porteros), los sitios hidrófobos y del disolvente están resaltados con representaciones superficiales. Tal como se muestra, el nitrógeno de la pirimidina toma parte en la interacción de unión al hidrógeno de la cinasa con el NH de la amida de Met623. Para la descripción del enfoque basado en la estructura, se hace referencia a la estructura química proporcionada a continuación. Los sustituyentes se la pirimidina se extiende en la región expuesta al disolvente (posición Rb) y ocupa la cavidad hidrófoba (posición Rd).
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Se usó un modelo de homología debido a que no existe actualmente una estructura cristalina resuelta del dominio catalítico de la cinasa Axl. El modelo de homología se desarrolló a un alineamiento de múltiples secuencias usando el software de alineamiento de múltiples secuencias CLUSTAL 2.0.11 de tres proteínas relacionadas con estructuras cristalinas de rayos x resueltas. Las secuencias utilizadas en el alineamiento y que forman la base del modelo de homología fueron: MER (identidad/similitud de la secuencia del 69/83%, 1% de huecos), c-Met (46% de identidad) e IGF-IR (41% de identidad). El alineamiento se muestra en la Figura 2 y los restos están resaltados del siguiente modo: los restos idénticos se indican con un único punto elevado; los restos muy conservados con dos puntos alineados; y los restos similares con un punto individual más pequeño. Los restos de aminoácidos resaltados con letras grises más claras son los restos de sitios activos críticos y el resto en rojo es la cinasa portero.
En un enfoque sintético para mejorar los inhibidores de Axl, se instalaron heterociclos que contenían anilinas con propiedades farmacocinéticas deseables en la posición 2 y se unieron grupos arilo deficientes en electrones en la posición Rd. Los compuestos sintetizados en esta serie dieron como resultado compuestos con actividades en el intervalo de 10 pM. Se encontró que la sustitución en la posición 6 (Rb) alteró la unión en la región bisagra debido al impedimento estérico con el portero Leu620, dando como resultado pérdida de actividad.
Una 2a generación de compuestos preparada con pequeños grupos hidrófobos o grupos Ra básicos (alquilo, halógenos, CN) presentó actividades tan bajas como 750 nm. Se varió el sustituyente Rd hidrófobo con grupos oxígeno polarizables y grupos alquilo hidrófobos (por ejemplo, dialquilamida) para potenciar la coordinación de Mg2+ y favorecer las interacciones hidrófobas con el bucle DGF, dando como resultado una 3a generación de compuestos con actividades tan bajas como 20 nm.
La optimización adicional de la actividad y la selectividad de los inhibidores de Axl puede continuar mediante la síntesis de compuestos que tienen además en cuenta el portero, el bucle DFG, y la lámina p hidrófoba (véase la Figura 1). Por ejemplo, el alineamiento de múltiples secuencias de AXL y Aurora A y B que muestran un alto grado de identidad/similitud de la secuencia como se muestra a continuación.
Axl LGEGEFGVMRLILPFMGNDFG (SEQ ID NO: 1 )
Aurora A LGKGKFGVLRLYLEYAGNDFG (SEQ ID NO: 2)
Aurora B LGKGKFGVLRMYLEFAGNDFG (SEQ ID NO: 3)
k k * k » k k k * k * k * k k k k k
Se cree que los restos que están en negrita están implicados como la cinasa portero. AXL y las Auroras comparten un portero Leu, sin embargo, el siguiente resto es un Glu ácido polar (Auroras) o un Pro hidrófobo (Axl). Sin desear quedar ligado a teoría alguna, los 5 sustituyentes hidrófobos más voluminosos podrían desestabilizar la región bisagra de Aurora. Se descubrió que un volumen excesivo de trifluorometano desestabilizó también Axl, pero los sustituyentes CN más pequeños podrían mejorar la actividad cinasa selectiva.
La interacción entre la dialquilamida hidrófoba ligeramente básica y el Phe228 del bucle DFG pueden fortalecerse mediante la introducción de cicloalquilo más hidrófobos, que bloquean la conformación del inhibidor y "empujan" el resto Rd más próximo a la lámina-p. La introducción de electrones electroatrayente en este anillo puede favorecer la interacción para LGE de AXL frente a LGK de Auroras (véase la Figura 3 del modelo de acoplamiento).
E. MÉTODOS PARA FABRICAR LOS COMPUESTOS
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
La invención proporciona un método para preparar un compuesto que tiene la siguiente estructura:
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el método la siguiente etapa:
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En un aspecto adicional, el compuesto producido presenta inhibición de la ruta PI3K/Akt En un aspecto más adicional, el compuesto producido presenta inhibición de Axl. En otro aspecto adicional, el compuesto producido presenta inhibición de la viabilidad celular.
En un aspecto adicional, el compuesto producido presenta inhibición de una proteína cinasa. En otro aspecto adicional, el compuesto producido presenta inhibición de una proteína cinasa seleccionada entre las cinasa I del oncogén c-abl, cinasa I del oncogén c-abl (forma T315I) receptor de la tirosina cinasa ALK, aurora cinasa A, receptor de la tirosina cinasa AXL, cinasa 1 dependiente de ciclina, cinasa 2 dependiente de ciclina, proteína serina/treonina cinasa Chkl, cinasa del receptor I del factor estimulador de colonias de macrófagos, cinasa del receptor I de efrina de tipo A, proteína tirosina cinasa Fer, proteína tirosina cinasa Fes/Fps, receptor I del factor de crecimiento de fibroblastos, proteína tirosina cinasa Fgr, receptor I del factor de crecimiento análogo a insulina, receptor de la proteína cinasa estimuladora de macrófagos, receptor de la proteína tirosina cinasa del protooncogén Ret, proteína tirosina cinasa del protooncogén ROS, proteína tirosina cinasa del protooncogén Src, proteína tirosina cinasa del protooncogén Yes, proteína tirosina cinasa 2 beta de PTK2B, proteína serina/treonina cinasa MST4, proteína serina/treonina cinasa PAK 4, proteína tirosina cinasa JAK1, proteína tirosina cinasa JAK2, proteína tirosina cinasa JAK3, proteína tirosina cinasa Lck, proteína tirosina cinasa Lyn, proteína tirosina cinasa Mer, proteína tirosina cinasa SYK, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, y receptor 3 del factor de crecimiento endotelial vascular. En un aspecto más adicional, el compuesto presenta inhibición del receptor de la tirosina cinasa Axl ("Axl"),
En un aspecto adicional, el compuesto producido presenta inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M. En un aspecto más adicional, el compuesto producido presenta inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M. En otro aspecto más, el compuesto producido presenta inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M. En otro aspecto adicional, el compuesto producido presenta inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M. En un aspecto más adicional, el compuesto producido presenta inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M. En otro aspecto más, el compuesto producido presenta inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
Se contempla que cada método divulgado pueda comprender además etapas manipulaciones, y/o componentes adicionales, se contempla también que una cualquiera o más etapas, manipulaciones, y/o componentes pueden omitirse opcionalmente de la invención. Se entiende que los métodos divulgados se pueden usar para proporcionar los compuestos divulgados, Se entiende también que los productos de los métodos divulgados se pueden emplear en los métodos divulgados de utilización.
La Tabla I siguiente relaciona los compuestos específicos así como determina experimentalmente la actividad de la cinasa Axl determinada en el ensayo de actividad que se describe a continuación en los ejemplos. Se sintetizaron los compuestos en la Tabla I con métodos idénticos o análogos a aquellos que se muestran en el presente documento. Los materiales de partida necesarios estaban comercialmente disponibles, se describen en la bibliografía o se sintetizan fácilmente por un experto en la materia de la síntesis orgánica. Los compuestos 1-3 y 5-31 son ejemplos de referencia.
TABLA 1.
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continuación
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continuación
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continuación
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continuación
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F. COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS
En un aspecto, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad eficaz de un compuesto como se define en la reivindicación 1.
En un aspecto, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos divulgados como se define en las reivindicaciones adjuntas. Es decir, se puede proporcionar una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto divulgado o al menos un producto de un método divulgado y un portador farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto más, la cantidad eficaz es una cantidad terapéuticamente eficaz. En aún otro aspecto más, la cantidad eficaz es una cantidad profilácticamente eficaz. La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
En un aspecto adicional, la composición farmacéutica presenta inhibición de la ruta PI3K/Akt En otro aspecto adicional, la inhibición de la ruta PI3K/Akt presenta inhibición con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En otro aspecto adicional, la composición farmacéutica presenta inhibición de la ruta MAPK. En otro aspecto adicional, la inhibición de la ruta MAPK presenta es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M, una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto adicional, la composición farmacéutica presenta inhibición de la fosforilación de Akt. En otro aspecto adicional, la inhibición de la fosforilación de Akt es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M, una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto adicional, la composición farmacéutica presenta inhibición de una proteína cinasa. En otro aspecto adicional, la proteína cinasa se selecciona entre la proteína que se selecciona entre la cinasa I del oncogén c-abl, cinasa 1 del oncogén c-abl (forma T315I) receptor de la tirosina cinasa ALK, aurora cinasa A, receptor de la tirosina cinasa AXL, cinasa 1 dependiente de ciclina, cinasa 2 dependiente de ciclina, proteína serina/treonina cinasa Chk1, cinasa del receptor 1 del factor estimulador de colonias de macrófagos, cinasa del receptor I de efrina de tipo A, proteína tirosina cinasa Fer, proteína tirosina cinasa Fes/Fps, receptor I del factor de crecimiento de fibroblastos, proteína tirosina cinasa Fgr, receptor 1 del factor de crecimiento análogo a insulina, receptor de la proteína cinasa estimuladora de macrófagos, receptor de la proteína tirosina cinasa del protooncogén Ret, proteína tirosina cinasa del protooncogén ROS, proteína tirosina cinasa del protooncogén Src, proteína tirosina cinasa del protooncogén Yes, proteína tirosina cinasa 2 beta de PTK2B, proteína serina/treonina cinasa MST4, proteína serina/treonina cinasa PAK 4, proteína tirosina cinasa JAK1, proteína tirosina cinasa JAK2, proteína tirosina cinasa JAK3, proteína tirosina cinasa Lck, proteína tirosina cinasa Lyn, proteína tirosina cinasa Mer, proteína tirosina cinasa SYK, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, y receptor 3 del factor de crecimiento endotelial vascular. En otro aspecto adicional, la proteína cinasa que está inhibida es el receptor de la tiroxina cinasa AXL.
En otro aspecto adicional, la inhibición de la proteína cinasa es con una CI5 de menos de aproximadamente 1,0 x 10 -4 M. una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto adicional, la composición farmacéutica presenta inhibición de la viabilidad celular. En otro aspecto adicional, la inhibición de la viabilidad celular se determina usando una línea de células seleccionada entre células K562, MCF-7, PL-45, PANC-1, PSN-1, HepG2, y A549. En un aspecto más adicional, la inhibición de la viabilidad celular es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto más, la composición farmacéutica se administra a un mamífero. En otro aspecto más, el mamífero es un ser humano. En otro aspecto más, la composición farmacéutica se administra después de la identificación de un mamífero que necesita tratamiento de un trastorno de proliferación celular incontrolada. En otro aspecto más, el mamífero ha sido diagnosticado como que necesita tratamiento de un trastorno de proliferación celular incontrolada antes de la etapa de administración.
En un aspecto más, la composición farmacéutica se administra para tratar un trastorno de proliferación celular incontrolada. En otro aspecto más, el trastorno de proliferación celular incontrolada está asociado con una disfunción de proteína cinasa. En otro aspecto más, el trastorno de proliferación celular incontrolada es un cáncer. En otro aspecto más, el cáncer es una leucemia. En otro aspecto más, el cáncer es un linfoma. En otro aspecto más, el cáncer es un tumor sólido. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre cánceres de cerebro, tracto genitourinario, sistema endocrino, tracto gastrointestinal, colon, recto, mama, riñón, sistema linfático, estómago, pulmón, páncreas y piel. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre los cánceres de páncreas, pulmón, mama, cerebro, piel y sangre. El otro aspecto más, el cáncer es cáncer pancreático.
En un aspecto más, el cáncer es cáncer de cerebro. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre neuroma del acústico, glioma, meningioma, adenoma pituitario, schwannoma, linfoma del SNC, tumor neuroectodérmico primitivo, craneofaringioma, cordoma, meduloblastoma, neuroblastoma cerebral, neurocitoma central, pineocitoma, pineoblastoma, tumor teratoideo rabdoide atípico, condrosarcoma, condroma, carcinoma del plexo coroideo, papiloma del plexo coroideo, craneofaringioma, tumor neuroepitelial disembrioplásico, gangliocitoma, germinoma, hemangioblastoma, hemangiopercitoma, y célula tumoral cerebral metastásica.
En un aspecto más, el cáncer es un glioma. En otro aspecto más, el glioma es glioblastoma multiforme. En otro aspecto más, el glioma se selecciona entre un ependimoma, astrocitoma, oligodendroglioma y oligoastrocitoma. En otro aspecto más, el glioma se selecciona entre un astrocitoma pilocítico juvenil, astrocitoma subependimario de células gigantes, ganglioglioma, subependimoma, xantoastrocitoma pleomórfico, astrocitoma anaplásico, glioblastoma multiforme, glioma del tronco encefálico, oligodendroglioma, ependimoma, oligoastrocitoma, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma desmoplásico infantil, astrocitoma subependimario de células gigantes, astrocitoma difuso, glioma mixto, glioma óptico, gliomatosis cerebral, paraganglioma y células de ganglioglioma.
En determinados aspectos, las composiciones farmacéuticas divulgadas comprenden los compuestos divulgados (incluyendo la sal o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos) en forma de un ingrediente activo, un transportados farmacéuticamente activo y, opcionalmente, otros principios activos o adyuvantes. Las composiciones instantáneas incluyen las adecuadas para administración oral, rectal, tópica y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular e intravenosa), aunque la vía más adecuada en cualquier caso dado dependerá del anfitrión particular y de la naturaleza y gravedad de las afecciones para las que se administra el principio activo. Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar convenientemente en forma de dosificación unitaria y preparar por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases o ácidos no tóxicos, farmacéuticamente aceptables. Cuando el compuesto de la presente invención es ácido, su sal correspondiente se puede preparar convenientemente a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables, incluyendo bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas de dichas bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre (-ico y -oso), férricas, ferrosas, litio, magnesio, manganeso (-ico y -oso), potasio, sodio, cinc y similares. Se prefieren en particular las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primaria, secundaria y terciaria, así como aminas cíclicas y aminas sustituidas tales como aminas sustituidas que se dan en la naturaleza y sintetizadas. Otras bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables a partir de las cuales se pueden formar sales incluyen resinas de intercambio iónico tales como, por ejemplo, arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanoI, 2-dimetilaminoetanoI, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables" incluye ácidos inorgánicos, ácidos orgánicos y sales preparadas de los mismos, por ejemplo, ácido acético, bencenosulfónico, benzoico, alcanforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, músico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenosulfónico y similares. Se prefieren los ácidos cítrico, bromhídrico, clorhídrico, maleico, fosfórico, sulfúrico y tartárico.
En la práctica, los compuestos de la invención o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de esta invención, pueden combinarse como el principio activo en mezcla íntima con un portador farmacéutico de acuerdo con las técnicas convencionales de composición farmacéutica. El portador puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para su administración, por ejemplo, oral o parenteral (incluyendo intravenosa). Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden presentar en forma de unidades discretas adecuadas para administración oral, tales como cápsulas, obleas o comprimidos, conteniendo, cada una, una cantidad predeterminada del principio activo. Además, las composiciones pueden presentarse en forma de un polvo, en forma de gránulos, en forma de una solución, en forma de una suspensión en un líquido acuoso, en forma de un líquido no acuoso, en forma de una emulsión de aceite en agua o en forma de una emulsión líquida de agua en aceite. Además, a las formas de dosificación habituales expuestas anteriormente, los compuestos de la invención y/o la sal o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, también pueden administrarse mediante medios de liberación controlada y/o dispositivos de suministro. Las composiciones pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos de farmacia. En general, dichos métodos incluyen una etapa de poner en asociación el principio activo con el portador que constituye uno o más de los ingredientes necesarios. En general, las composiciones se preparan mezclando de forma íntima y uniforme el principio activo con portadores líquidos y con portadores sólidos finamente divididos o ambos. El producto se puede adaptar de forma conveniente a la presentación deseada.
Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden incluir un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos de la invención. Los compuestos de la invención, o sus sales farmacéuticamente aceptables, también pueden estar incluidos en composiciones farmacéuticas junto con uno o más de otros compuestos terapéuticamente activos.
El portador farmacéutico empleado puede, por ejemplo, ser un sólido, un líquido o un gas. Los ejemplos de portadores sólidos incluyen lactosa, terra alba, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, goma arábica, estearato de magnesio y ácido esteárico. Los ejemplos de portadores líquidos son jarabe de azúcar, aceite de cacahuete, aceite de oliva y agua. Los ejemplos de portadores gaseosos incluyen dióxido de carbono y nitrógeno.
Al preparar las composiciones para formas de dosificación orales, puede emplearse cualquier medio farmacéutico conveniente. Por ejemplo, pueden usarse agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes, agentes colorantes y similares para formar preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, elixires y soluciones; mientras que pueden usarse portadores tales como almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares para formar preparaciones sólidas orales tales como polvos, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y cápsulas son las unidades de dosificación oral preferidas, por lo que se emplean portadores farmacéuticos sólidos. Opcionalmente, los comprimidos pueden recubrirse mediante técnicas acuosas o no acuosas estándar
Un comprimido que contiene la composición de esta invención puede prepararse mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno más ingredientes o adyuvantes accesorios. Los comprimidos preparados por compresión pueden prepararse comprimiendo, en una máquina apropiada, el principio activo en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con un agente aglutinante, lubricante, diluyente inerte, tensioactivo o dispersante. Los comprimidos moldeados se pueden fabricar moldeando, en una máquina adecuada, una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden un compuesto de la invención (o sales farmacéuticamente aceptables del mismo) como principio activo, un portador farmacéuticamente aceptable y, opcionalmente, uno o más agentes terapéuticos o adyuvantes adicionales. Las composiciones instantáneas incluyen composiciones adecuadas para administración oral, rectal, tópica y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular e intravenosa), aunque la vía más adecuada en cualquier caso dado dependerá del anfitrión particular y la naturaleza y gravedad de las afecciones para las cuales se administra el principio activo. Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar convenientemente en forma de dosificación unitaria y prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención adecuadas para administración parenteral pueden prepararse en forma de soluciones o suspensiones de los compuestos activos en agua. Puede incluirse un tensioactivo adecuado tal como, por ejemplo, hidroxipropilcelulosa. También pueden prepararse dispersiones en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos en aceites. Además, puede incluirse un conservante para prevenir el crecimiento perjudicial de microorganismos.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles. Además, las composiciones pueden estar en forma de polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma inyectable final debe ser estéril y debe ser efectivamente fluida para una fácil inyectabilidad. Las composiciones farmacéuticas deben ser estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento; así, deben preservarse preferentemente contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El portador puede ser un disolvente o un medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), aceites vegetales y mezclas adecuadas de los mismos.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden estar en una forma adecuada para uso tópico tal como, por ejemplo, un aerosol, crema, pomada, loción, polvo para espolvorear, enjuagues bucales, gárgaras y similares. Además, las composiciones pueden estar en una forma adecuada para su uso en dispositivos transdérmicos. Estas formulaciones pueden prepararse utilizando un compuesto de la invención o sus sales farmacéuticamente aceptables, mediante métodos de procesamiento habituales. Como un ejemplo, se prepara una crema o una pomada mezclando material hidrófilo y agua, junto con aproximadamente del 5 % en peso a aproximadamente el 10 % en peso del compuesto, para producir una crema o pomada que tiene la consistencia deseada.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden estar en una forma de administración rectal en donde el portador es un sólido. Es preferible que la mezcla forme supositorios de dosis unitaria. Los portadores adecuados incluyen manteca de cacao y otros materiales usados habitualmente en la técnica. Los supositorios se pueden formar convenientemente mezclando primero la composición con el(los) portador(es) ablandado(s) o fundido(s) seguido de enfriamiento y moldeo en moldes.
Además de los ingredientes portadores anteriormente mencionados, las formulaciones farmacéuticas descritas anteriormente pueden incluir, si es apropiado, uno o más ingredientes portadores adicionales tales como diluyentes, tampones, agentes aromatizantes, aglutinantes, agentes tensioactivos, espesantes, lubricantes, conservantes (incluyendo antioxidantes) y similares. Además, pueden incluirse otros adyuvantes para hacer que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto. Las composiciones que contienen un compuesto de la invención y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, también pueden prepararse en forma de polvo o líquido concentrado. En las condiciones de tratamiento que requieren modulación alostérica negativa de la actividad del receptor metabotrópico de glutamato, un nivel apropiado de dosificación será habitualmente de aproximadamente 0,01 a 500 mg por kg de peso corporal del paciente al día y puede administrarse en una única o en múltiples dosis. Preferentemente, el nivel de dosificación será de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 250 mg/kg al día; más preferentemente de 0,5 a 100 mg/kg al día. Un nivel de dosificación adecuado puede ser de aproximadamente 0,01 a 250 mg/kg al día, de aproximadamente 0,05 a 100 mg/kg al día, o de aproximadamente 0,1 a 50 mg/kg al día. Dentro de este intervalo la dosificación puede ser de 0,05 a 0,5, de 0,5 a 5,0 o de 5,0 a 50 mg/kg al día. Para administración oral, las composiciones se proporcionan preferentemente en forma de comprimidos que contienen de 1,0 a 1000 miligramos del principio activo, en particular 1,0, 5,0, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 750, 800, 900 y 1000 miligramos del principio activo para el ajuste sintomático de la dosis del paciente a tratar. El compuesto puede administrarse en un régimen de 1 a 4 veces al día, preferentemente una o dos veces al día. Este régimen de dosificación puede ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima.
Se entiende, de cualquier modo, que el nivel de dosificación específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores. Dichos factores incluyen la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente. Otros factores incluyen el tiempo y la vía de administración, la velocidad de excreción, la combinación de fármacos y el tipo y gravedad de la enfermedad particular que se somete a terapia.
Además, se divulga un método para la fabricación de un medicamento para modular la actividad del receptor de glutamato (por ejemplo, tratamiento de uno o más trastornos neurológicos y/o psiquiátricos asociados con disfunción del glutamato) en mamíferos (por ejemplo, seres humanos) que comprende combinar uno o más compuestos, productos o composiciones divulgados con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En consecuencia, además, se divulga un método para fabricar un medicamento que comprende combinar al menos un compuesto divulgado o al menos un producto de un método divulgado con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones farmacéuticas divulgadas pueden comprender además otros compuestos terapéuticamente activos, que se aplican habitualmente en el tratamiento de las afecciones patológicas anteriormente mencionadas. Se entiende que las composiciones divulgadas pueden prepararse a partir de los compuestos divulgados. También se entiende que las composiciones divulgadas pueden emplearse en los métodos de uso divulgados.
G. MÉTODOS DE USAR LOS COMPUESTOS Y LAS COMPOSICIONES
La subfamilia del receptor de la tirosina cinasa TAM comprende Axl (conocido también como UFO, ARK, y Tyro7; números de registro de nucleótidos NM_021913 y NM_001699; números de registro de proteínas NP_068713 y NP_001 690), Mer (Stk, Nyk) y Tyro3 (Rse/Dtk/Sky). La subfamilia del receptor de la tirosina cinasa TAM se caracteriza por una estructura del dominio de proteínas común que comprende un dominio de unión a ligando extracelular del extremo C y una región citoplásmica en el extremo N que contiene el dominio catalítico. Los miembros poseen todos la combinación de dos dominios de tipo inmunoglobulina en el extremo N extracelular y dos dominios de fibronectina III, se extiende una única región transmembrana seguida por un dominio de la cinasa en el extremo C (por ejemplo, véase Hafizi, S., et al., Cytokine Growth Factor Rev., 2006, 17:295-304). Todos los miembros de esta subfamilia de cinasas se unen y están estimulados en grados variables por el mismo ligando, Gas6 (detención del crecimiento específico-6), una proteína secretada de aproximadamente 76 kDa con homología significativa con el regulador de la cascada de coagulación, la proteína S.
Gas6 actúa como un ligando de toda la subfamilia del receptor de la tirosina cinasa TAM, pero presenta afinidades diferentes por los receptores y activa las tres proteínas en grados variables. Gas6 es un miembro de la familia de proteínas dependiente de la vitamina K y muestra un 43% de identidad de la secuencia y la misma organización de dominio de la proteína S, una proteína sérica que se ha mostrado que es un regulador negativo de la coagulación de la sangre (por ejemplo, véase Hafizi, S., et al., FEBS J., 2006, 273: 5231-5244). Gas6 está regulado en exceso en células con el crecimiento detenido (por ejemplo, véase Manfioletti, G., Mol. Cell. Biol., 1993, 13: 4976-4985) que indica una función en la protección de la célula contra los estreses celulares. Desde entonces se ha demostrado que Gas6 puede reticular los monómeros Axl y promover la supervivencia celular, la proliferación y la migración (por ejemplo, véase Bellosta, P., et al., Oncogene, 1997, 15:2387-2397; Sainaghi, P. P., et al., 2005, J. Cell Physiol., 2005, 204:36-44; FrideII, Y. W., et al., J. Biol. Chem., 1998, 273:7123-7126).
Además de unirse a los ligandos, el dominio de Axl extracelular ha mostrado experimentar interacciones homófilas que median en la agregación celular, sugiriendo que una importante función de Axl puede ser mediar en la adhesión célula-célula. Esta unión homófila del dominio de Axl extracelular puede dar como resultado la agregación celular y este episodio es independiente de la actividad de la cinasa intracelular (por ejemplo, véase Bellosta, P., et al., Mol. Cell. Biol., 1995, 15:614-625.).
El dominio de Axl de la cinasa intracelular (Interacellular Kinase Domain, ICD) es responsable de la capacidad transformante oncogénica de Axl de RTK. La ruta de transducción de la señal Gas6/AxI funciona, aunque no de manera exclusiva, mediante la activación de la ruta de la fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) (por ejemplo, véase Shankar, S. L., et al, J. Neurosci. 2006, 26:5638-5648.). La red de señalización PI3K/Akt es crucial para procesos fisiológicos muy divergentes que incluyen la progresión del ciclo celular, la diferenciación, transcripción, traducción y apoptosis (por ejemplo, véase Hanada, M., Biochim. Biophys. Acta, 2004, 1697:3-16.), La activación de la señalización de PI3K/Akt da como resultado una perturbación del control de la proliferación celular y la apoptosis resultante en una ventaja de crecimiento competitivo para las células tumorales. La activación de Akt está asociada con la fosforilación de Ser 473 (por ejemplo, véase Alessi, D. R., EMBO J., 1996, 15:6541-6551) y los cambios en el control de los niveles de Akt totales y fosforilados en el interior de la célula permiten una evaluación de la eficacia de los fármacos que actúan en la dirección 5' de Akt. El dominio intracelular de la cinasa Axl ha mostrado asociarse con otras muchas proteínas, por ejemplo, subunidades p55gamma, p85alfa y beta de PI3K, fosfolipasa C-gamma, Grb2, c-Src, Lck, SOCS-1, Nck2, RanBMP, Cl-TEN y el propio Axl ICD (Hafizi, S., et al, Cytokine Growth Factor Rev., 2006, 17:295-304; Hafizi, S., et al, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002. 299:793-800; Braunger, J., et al, Oncogene, 1997, 14:2619-2631).
Axl se expresa predominantemente en la vasculatura en células endoteliales (EC) y células vasculares del músculo liso (Vascular Smooth Muscle Cells, VSMC) y en células del linaje mieloide y se detecta también en células epiteliales de mama. condriocitos, Células de Sertoli y neuronas. Axl se expresa de forma ubicua a bajos niveles y es detectable en una variedad de órganos (por ejemplo, Rescigno, J., et al, Oncogene, 1991, 6:1909-1913). Los modelos de expresión de los otros dos miembros de la familia (Mer y Tyro3) difieren del de la expresión Axh de Tyro3 que está predominantemente en el cerebro y el SNC (por ejemplo, véase Mark, M. R., et al, J. Biol. Chem., 1994, 269:10720-10728), y la expresión de Mer está casi exclusivamente en el linaje de células de monocitos (Graham, D. K., et al, Cell Growth Differ., 1994, 5: 647-657). Varias funciones se atribuyen a la señalización de Axl en el cultivo celular incluyendo, aunque no de forma limitativa, la protección de la apoptosis inducida por la privación de suero, TNF-a o la proteína vírica E1A, así como la migración y la diferenciación celular. Sin embargo, Los ratones Axl-/- no presentan un fenotipo de desarrollo manifiesto y la función fisiológica de Axl in vivo no está claramente establecida en la bibliografía.
La sobreexpresión de Axl y/o su ligando se ha notificado en una amplia variedad de tipos de tumores sólidos incluyendo, aunque no de forma limitativa, de mama, renal, endometrial, ovárico, tiroides, carcinoma pulmonar no microcítico, y melanoma uveal, así como en leucemias mieloides. Adicionalmente, posee actividad transformante en células NIH3T3 y 32D Se ha demostrado que la pérdida de expresión de Axl en células tumorales bloquea el crecimiento de neoplasmas sólidos humanos en un modelo de xenoinjerto de carcinoma de mama MDA-MB-231 in vivo. Se ha demostrado la sobreexpresión de Axl en numerosas líneas de células cancerosas, por ejemplo, de colon, gástricas, de mama, pulmonares, LMA, tiroides, oculares, de próstata, de melanoma ocular, ovárico, renales y SCC (por ejemplo, véase Sainaghi, P. P., et al., J. Cell Physiol., 2005, 204:36-44; Sawaby, T., et al, Mol. Carcinog., 2007, 46:155-164; Vajkoczy, P., et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 2006, 103:5799-5804; Shieh, Y. S., et al., Neoplasia, 2005, 7:1058-1064). Esta expresión se ha vinculado al desarrollo de un fenotipo celular oncogénico (por ejemplo, véase Shieh, Y. S., et al, Neoplasia, 2005,7:1058-1064). La sobreexpresión de Axl se ha vinculado a la etapa de enfermedad y al pronóstico (Sawaby, T., et al., Mol. Carcinog., 2007,46:155-164; Vajkoczy, P., et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 2006, 103:5799-5804; Shieh, Y. S., et al., Neoplasia, 2005, 7:1058-1064; Sun, W. S., et al., Mol. Hum. Reprod., 2003, 9:701-707; Green, J., Br. J Cancer, 2006,94:1446-1451). Tomados en conjunto, estos datos sugieren que la señalización de Axl puede regular independientemente la angiogénesis y el crecimiento tumoral y representa por tanto una novedosa clase de diana para el desarrollo terapéutico tumoral.
La angiogénesis (la formación de nuevos vasos sanguíneos) se limita a funciones tales como la cicatrización de heridas y el ciclo reproductor femenino en adultos sanos. Este proceso fisiológico ha sido cooptado por tumores, asegurando por tanto un suministro de sangre adecuado que alimenta el crecimiento tumoral y facilita la metástasis. La angiogénesis desregulada es también una característica de otras muchas enfermedades (por ejemplo, psoriasis, artritis reumatoide, endometriosis y ceguera debido a la degeneración macular relacionada con la edad (AMD), retinopatía del prematuro y diabetes) y a menudo contribuye a la progresión o patología de la dolencia.
La expresión de las proteínas Axl y Gas6 está regulada en exceso en una variedad de otros estados de enfermedad incluyendo la endometriosis, la lesión vascular y la enfermedad renal y la señalización de Axl está funcionalmente implicada en la última de las dos indicaciones. La señalización de Axl-Gas6 amplifica las respuestas plaquetarias y está implicada em la formación del trombo.
Los compuestos divulgados y de la invención pueden usarse como agentes individuales o en combinación con uno o más fármacos distintos para el tratamiento, prevención, control, mejora o reducción del riesgo de las enfermedades, trastornos y afecciones anteriormente mencionadas para la cuales los compuestos de fórmula I o los otros fármacos tienen utilidad, en donde la combinación de los fármacos juntos es más segura o más eficaz que cualquiera de los fármacos solo. El otro o los otros fármacos pueden administrarse por una vía y en una cantidad normalmente utilizada, por lo tanto, de forma contemporánea o secuencial con un compuesto divulgado. Cuando a compuesto divulgado o de la invención se usa de forma contemporánea con uno o más fármacos distintos, es preferible una composición farmacéutica en forma de dosis unitaria que contiene dichos fármacos y el compuesto divulgado. Sin embargo, la terapia de combinación también puede administrarse en horarios superpuestos. También se prevé que la combinación de uno o más principios activos y un compuesto divulgado será más eficaz que como agente individual.
Las composiciones farmacéuticas y los métodos de la presente invención pueden comprender además otros compuestos terapéuticamente activos tal como se ha indicado en el presente documento que se aplican habitualmente en el tratamiento de las afecciones patológicas anteriormente mencionadas.
1. MÉTODOS DE TRATAMIENTO
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
La invención proporciona un compuesto que tiene la siguiente estructura:
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno de proliferación celular incontrolada en un mamífero, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo al mamífero.
Los compuestos divulgados en el presente documento, son útiles para el tratamiento, prevención, mejora, control o reducción del riesgo de una diversidad de trastornos de proliferación celular incontrolada.
En un aspecto, el trastorno de proliferación incontrolada está asociado con una disfunción en la ruta de señalización de PI3K/Akt. En un aspecto más, el trastorno de proliferación celular incontrolada está asociado con una disfunción de la proteína cinasa. En un aspecto más, la disfunción de la proteína cinasa es desregulación de AxI.
Los ejemplos de trastornos asociados con una disfunción en la ruta de PI3K/Akt incluye cánceres tales como leucemias, linfomas y tumores sólidos. En un aspecto, el cáncer puede ser un cáncer seleccionado entre los cánceres de cerebro, tracto genitourinario, tracto gastrointestinal, colon, recto, mama, riñón, sistema linfático, estómago, pulmón, páncreas y piel. En un aspecto más, el cáncer se selecciona entre cáncer de próstata, glioblastoma multiforme, cáncer de endometrio, cáncer de mama y cáncer de colon.
En un aspecto, los compuestos divulgados en el presente documento, son útiles para tratar trastornos que incluyen tumores sólidos, incluyendo, pero sin limitarse a, mama, renal, endometrial, de tiroides, carcinoma de pulmón de células no pequeñas y melanoma uveal; tumores líquidos, incluyendo, pero sin limitarse a, leucemias (en particular leucemias mieloides) y linfomas; endometriosis, enfermedad/daño vascular (incluyendo, pero sin limitarse a, reestenosis, aterosclerosis y trombosis), psoriasis; discapacidad visual debido a degeneración macular; retinopatía diabética y retinopatía del prematuro; enfermedad renal (incluyendo, pero sin limitarse a, glomerulonefritis, nefropatía diabética y rechazo de trasplante renal), artritis reumatoide; osteoartritis y cataratas.
En un aspecto, los compuestos y composiciones de la invención tienen utilidad en una amplia gama de enfermedades y afecciones mediadas por proteínas cinasas, incluyendo enfermedades y afecciones mediadas por cinasa Axl. Dichas enfermedades pueden incluir, a modo de ejemplo y sin limitación, cánceres tales como cáncer de pulmón, NSCLC (cáncer de pulmón de células no pequeñas), cáncer de células de avena, cáncer de hueso, cáncer pancrático, cáncer de piel, dermatofibrosarcoma protuberante, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, tumores ginecológicos (por ejemplo, sarcomas uterinos, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cuello uterino, carcinoma de la vagina o carcinoma de la vulva), enfermedad de Hodgkin, cáncer hetapocelular, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino (por ejemplo, cáncer de tiroides, páncreas, paratiroides o glándulas adrenales), sarcomas de tejidos blandos, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata (en particular resistente a hormonas), leucemia aguda o crónica, tumores sólidos de la infancia, hipereosinofilia, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o de uréter (por ejemplo, carcinoma de células renales, carcinoma de pelvis renal), malignidad pediátrica, neoplasias del sistema nervioso central (por ejemplo linterna primario del SNC, tumores de la médula espinal, meduloblastoma, gliomas del tronco encefálico o adenomas pituitarios), esófago de Barrett (síndrome premaligno), enfermedad cutánea neoplásica, psoriasis, micosis fungoide e hipertrofia prostática benigna, enfermedades relacionadas con la diabetes tales como retinopatía diabética, isquemia retiniana y neovascularización retiniana, cirrosis hepática, angiogénesis, enfermedad cardiovascular tal como ateroesclerosis, enfermedad inmunológica tal como enfermedad autoinmune y enfermedad renal.
a. TRATAMIENTO DE UN TRASTORNO DE PROLIFERACIÓN CELULAR INCONTROLADA
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
b. Disminución de la actividad cinasa
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
En un aspecto adicional, la necesidad de disminuir la actividad cinasa está asociada con el tratamiento de un trastorno de proliferación celular descontrolada. En otro aspecto más, el trastorno de proliferación celular incontrolada es un cáncer. En otro aspecto más, el cáncer es una leucemia. En otro aspecto más, el cáncer es un linfoma. En otro aspecto más, el cáncer es un tumor sólido. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre los cánceres de cerebro, tracto genitourinario, sistema endocrino, tracto gastrointestinal, colon, recto, mama, riñón, sistema linfático, estómago, pulmón, páncreas y piel. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre los cánceres de páncreas, pulmón, mama, cerebro, piel y sangre. En otro aspecto más, el cáncer es cáncer pancreático. En un aspecto más, el cáncer es un cáncer de cerebro. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre neuroma acústico, glioma, meningioma, adenoma pituitario, schwannoma, linfoma del SNC, tumor neuroectodérmico primitivo, craneofaringioma, cordoma, meduloblastoma, neuroblastoma cerebral, neurocitoma central, pineocitoma, pineoblastoma, tumor teratoideo rabdoide atípico, condrosarcoma, condroma, carcinoma del plexo coroideo, papiloma del plexo coroideo, craneofaringioma, tumor neuroepitelial disembrioplásico, gangliocitoma, germinoma, hemangioblastoma, hemangiopercitoma y célula tumoral cerebral metastásica.
En un aspecto más, el cáncer es un glioma. En otro aspecto más, el glioma es glioblastoma multiforme. En otro aspecto más, el glioma se selecciona entre un ependimoma, astrocitoma, oligodendroglioma y oligoastrocitoma. En otro aspecto más, el glioma se selecciona entre un astrocitoma pilocítico juvenil, astrocitoma subependimario de células gigantes, ganglioglioma, subependimoma, xantoastrocitoma pleomórfico, astrocitoma anaplásico, glioblastoma multiforme, glioma del tronco encefálico, oligodendroglioma, ependimoma, oligoastrocitoma, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma desmoplásico infantil, astrocitoma subependimario de células gigantes, astrocitoma difuso, glioma mixto, glioma óptico, gliomatosis cerebral, paraganglioma y células de ganglioglioma. c. DISMINUCIÓN DE LA ACTIVIDAD CINASA EN LAS CÉLULAS
En un aspecto más, el compuesto es un compuesto divulgado o un producto de un método divulgado para fabricar un compuesto como se define en las reivindicaciones. En otro aspecto más, la cantidad eficaz es una cantidad terapéuticamente eficaz. En aún otro aspecto más, la cantidad eficaz es una cantidad profilácticamente eficaz. En un aspecto adicional, la disminución de la actividad cinasa es una inhibición de la ruta PI3K/Akt. En otro aspecto adicional, la inhibición de la ruta PI3K/Akt presenta es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 104 M, una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En otro aspecto adicional, la disminución de la actividad cinasa es una inhibición de la ruta MAPK. En otro aspecto adicional, la inhibición de la ruta MAPK presenta es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M, una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto adicional, la disminución de la actividad cinasa es una inhibición de la fosforilación de Akt. En otro aspecto adicional, la inhibición de la fosforilación de Akt es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-4 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, unaCI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto adicional, la disminución de la actividad cinasa es una inhibición de una proteína cinasa, se selecciona entre las cinasa 1 del oncogén c-abl, cinasa 1 del oncogén c-abl (forma T315I) receptor de la tirosina cinasa ALK, aurora cinasa A, receptor de la tirosina cinasa AXL, cinasa 1 dependiente de ciclina, cinasa 2 dependiente de ciclina, proteína serina/treonina cinasa Chkl, cinasa del receptor I del factor estimulador de colonias de macrófagos, cinasa del receptor 1 de efrina de tipo A, proteína tirosina cinasa Fer, proteína tirosina cinasa Fes/Fps, receptor 1 del factor de crecimiento de fibroblastos, proteína tirosina cinasa Fgr, receptor 1 del factor de crecimiento análogo a insulina, receptor de la proteína cinasa estimuladora de macrófagos, receptor de la proteína tirosina cinasa del protooncogén Ret, proteína tirosina cinasa del protooncogén ROS, proteína tirosina cinasa del protooncogén Src, proteína tirosina cinasa del protooncogén Yes, proteína tirosina cinasa 2 beta de PTK2B, proteína serina/treonina cinasa MST4, proteína serina/treonina cinasa PAK 4, proteína tirosina cinasa JAK1, proteína tirosina cinasa JAK2, proteína tirosina cinasa JAK3, proteína tirosina cinasa Lck, proteína tirosina cinasa Lyn, proteína tirosina cinasa Mer, proteína tirosina cinasa SYK, receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, y receptor 3 del factor de crecimiento endotelial vascular. En otro aspecto adicional, la proteína cinasa que está inhibida es el receptor de la tiroxina cinasa AXL.
En un aspecto adicional, la inhibición de la proteína cinasa es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10 -4 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 106 M, una CI 50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto adicional, la disminución de la actividad cinasa inhibe la viabilidad celular. En otro aspecto adicional, la inhibición de la viabilidad celular se determina usando una línea de células seleccionada entre células K562, MCF-7, PL-45, PANC-1, PSN-1, HepG2, y A549. En un aspecto más adicional, la inhibición de la viabilidad celular es con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 104 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-5 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-6 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-7 M, una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-8 M, o una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 x 10-9 M.
En un aspecto adicional, la célula es de mamífero. En otro aspecto más, la célula es humana. En un aspecto más adicional, el contacto se realiza mediante la administración a un mamífero. Incluso en un aspecto adicional, el contacto se realiza a través de la administración a un ser humano.
En un aspecto adicional, el método comprende además la etapa de identificar un mamífero que necesita disminuir la actividad cinasa en una célula. En otro aspecto adicional, al mamífero se le ha diagnosticado la necesidad de disminuir la actividad de la cinasa de la etapa de administración.
En un aspecto adicional, la necesidad de disminuir la actividad cinasa en una célula está asociada con un trastorno de descontrol celular. En otro aspecto adicional, el trastorno de proliferación celular descontrolada es un cáncer. En un aspecto más adicional, el cáncer es una leucemia. Incluso en un aspecto adicional, el cáncer es un linfoma. En otro aspecto adicional, el cáncer es un tumor sólido. En un aspecto adicional, el cáncer se selecciona entre cánceres de cerebro, tracto genitourinario, sistema endocrino, tracto gastrointestinal, colon, recto, mama, riñón, sistema linfático, estómago, hidrógeno, pulmón, páncreas y piel. En un aspecto más adicional, el cáncer se selecciona entre cánceres de páncreas, pulmón, mama, cerebro, piel y sangre. En otro aspecto adicional, el cáncer es cáncer de páncreas.
En un aspecto adicional, el cáncer es un cáncer del cerebro. En otro aspecto adicional, el cáncer se selecciona entre neuroma acústico, glioma, meningioma, adenoma hipofisario, schwannoma, linfoma del SNC, tumor neuroectodérmico primitivo, craneofaringioma, cordoma, meduloblastoma, neuroblastoma cerebral, neurocitoma central, pineocitoma, pineoblastoma, tumor teratoide rabdoide atípico, condrosarcoma, condroma, carcinoma de plexo coroideo, papiloma de plexo coroideo, craneofaringioma, tumor neuroepitelial disembrioplásico, gangliocitoma, germinoma, hemangioblastoma, hemangiopercitoma y células de tumor cerebral metastásico.
En un aspecto adicional, el cáncer es un glioma. En otro aspecto adicional, el glioma es un glioblastoma multiforme. En un aspecto más adicional, el glioma se selecciona entre ependimoma, astrocitoma, oligodendroglioma y oligoastrocitoma. En un aspecto más adicional, el glioma se selecciona entre un astrocitoma pilocítico juvenil, astrocitoma subependimario de células gigantes, ganglioglioma, subependimoma, xantoastrocitoma pleomórfico, astrocitoma anaplásico, glioblastoma multiforme, glioma del tronco encefálico, oligodendroglioma, ependimoma, oligoastrocitoma, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma desmoplásico infantil, astrocitoma subependimario de células gigantes, astrocitoma difuso, glioma mixto, glioma óptico, gliomatosis cerebral, paraganglioma y ganglioglioma de células.
En un aspecto adicional, la disminución de la actividad cinasa trata un trastorno de proliferación celular descontrolada en un mamífero. En otro aspecto adicional, el mamífero es un ser humano. En un aspecto más adicional, el trastorno de proliferación celular descontrolada está asociado con una disfunción de la proteína cinasa. Incluso en un aspecto adicional, el trastorno de proliferación celular descontrolada es un cáncer.
En un aspecto adicional, el cáncer es una leucemia. Incluso en un aspecto adicional, el cáncer es un linfoma. En un aspecto más adicional, el cáncer es un tumor sólido. En otro aspecto adicional, el cáncer es un linfoma. En otro aspecto más, el cáncer es un tumor sólido. En un aspecto más, el cáncer se selecciona entre los cánceres de cerebro, tracto genitourinario, sistema endocrino, tracto gastrointestinal, colon, recto, mama, riñón, sistema linfático, estómago, pulmón, páncreas y piel. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre los cánceres de páncreas, pulmón, mama, cerebro, piel y sangre. En otro aspecto más, el cáncer es cáncer pancreático.
En un aspecto más, el cáncer es un cáncer de cerebro. En otro aspecto más, el cáncer se selecciona entre neuroma acústico, glioma, meningioma, adenoma pituitario, schwannoma, linfoma del SNC, tumor neuroectodérmico primitivo, craneofaringioma, cordoma, meduloblastoma, neuroblastoma cerebral, neurocitoma central, pineocitoma, pineoblastoma, tumor teratoideo rabdoide atípico, condrosarcoma, condroma, carcinoma del plexo coroideo, papiloma del plexo coroideo, craneofaringioma, tumor neuroepitelial disembrioplásico, gangliocitoma, germinoma, hemangioblastoma, hemangiopercitoma y célula tumoral cerebral metastásica.
En un aspecto más, el cáncer es un glioma. En otro aspecto más, el glioma es glioblastoma multiforme. En otro aspecto más, el glioma se selecciona entre un ependimoma, astrocitoma, oligodendroglioma y oligoastrocitoma. En otro aspecto más, el glioma se selecciona entre un astrocitoma pilocítico juvenil, astrocitoma subependimario de células gigantes, ganglioglioma, subependimoma, xantoastrocitoma pleomórfico, astrocitoma anaplásico, glioblastoma multiforme, glioma del tronco encefálico, oligodendroglioma, ependimoma, oligoastrocitoma, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma desmoplásico infantil, astrocitoma subependimario de células gigantes, astrocitoma difuso, glioma mixto, glioma óptico, gliomatosis cerebral, paraganglioma y células de ganglioglioma 5. USOS NO MÉDICOS
Además, se divulgan los usos de los compuestos y productos divulgados como herramientas farmacológicas para el desarrollo y estandarización de sistemas de ensayo in vitro e in vivo para la evaluación de los efectos de los inhibidores de la actividad de Axl en animales de laboratorio tales como gatos, perros, conejos, monos, ratas y ratones, como parte de la búsqueda de nuevos agentes terapéuticos que inhiben Axl.
En una divulgación más, la invención se refiere al uso de un compuesto divulgado o un producto divulgado como herramienta farmacológica para el desarrollo y estandarización de sistemas de ensayo in vitro e in vivo para la evaluación de los efectos de los inhibidores de la ruta de PI3K/Akt en animales de laboratorio tales como gatos, perros, conejos, monos, ratas y ratones, como parte de la búsqueda de nuevos agentes terapéuticos que inhiben la ruta de PI3K/Akt.
H. EXPERIMENTAL
Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la técnica una divulgación y una descripción completas de cómo los compuestos, composiciones, artículos, dispositivos y / o métodos reivindicados en el presente documento se hacen y evalúan, y están destinados a servir únicamente a modo de ejemplo de la invención y no pretenden limitar el alcance de lo que los inventores consideran su invención. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.), pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, la temperatura es en °C o es a temperatura ambiente y la presión es en o cerca de la atmosférica.
En los ejemplos siguientes se ilustran diversos métodos para preparar los compuestos de esta invención. Los materiales de partida y los requisitos intermedios en algunos casos están disponibles en el comercio o pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos de la bibliografía o tal como se ilustran en el presente documento. Los compuestos ejemplares de la invención que siguen se sintetizaron. Los ejemplos se proporcionan en el presente documento para ilustrar la invención y no deben interpretarse como limitantes de la invención de ningún modo. Los ejemplos se representan habitualmente en forma de base libre, de acuerdo con la convención de nomenclatura de la IUPAC. Sin embargo, algunos de los ejemplos se obtuvieron o se aislaron en forma de sal.
Como se indicó, algunos de los ejemplos se obtuvieron en forma de mezclas racémicas de uno o más enantiómeros o diastereómeros. Un experto en la técnica puede separar los compuestos para aislar los enantiómeros individuales. La separación se puede realizar acoplando una mezcla racémica de los compuestos con un compuesto enantioméricamente puro para formar una mezcla diastereomérica, seguido de separación de los diastereómeros individuales mediante métodos estándar, tales como cristalización fraccionada o cromatografía. También puede separarse una mezcla racémica o diastereomérica de los compuestos directamente por métodos cromatográficos usando fases estacionarias quirales.
I. MÉTODOS GENERALES
Todos los reactivos y disolventes habituales se adquirieron de Sigma Aldrich y se usaron tal como se recibieron. Eran de grado reactivo, pureza >99 %. Los productos químicos especializados y los componentes básicos obtenidos de varios proveedores fueron de la más alta pureza ofrecida (siempre >95 %).
Se realizó la espectroscopía de la RMN en un Mercury 400 MHz que operaba a 400 MHz, equipado con una sonda de banda ancha de 5 mm y usando secuencias de pulso estándar. Los desplazamientos químicos (8) se indican en partes por millón (ppm) con respecto a las señales de disolvente residual. Las constantes de acoplamiento (valores J) se expresan en Hz.
Se realizó espectrometría de masas en un espectrómetro de masas triple cuadrupolo Waters Quattro-II. Todas las muestras se analizaron por ESI-MS positiva y se indica la relación masa a carga (m/z) del ion molecular protonado. Las reacciones asistidas con microondas se realizaron en un Biotage Initiator 2.5 a varias potencias.
Las reacciones de hidrogenación se realizaron en un aparato de hidrogenación Parr estándar.
Las reacciones se monitorizaron mediante TLC en placas con respaldo flexible Baker recubiertas con 200 pm de gel de sílice que contenía un indicador fluorescente. La TLC preparativa se realizó sobre Analtech Uniplate de 20 cm x 20 cm recubiertas con una capa de gel de sílice de 1000 o 2000 pm que contenía un indicador fluorescente (UV 254). Las mezclas de elución se indican en v:v. La visualización puntual se consigue usando luz UV.
La cromatografía ultrarrápida se realizó en un Isco CombiFlash RF 200 de Teledyne usando columna C-18 de fase normal de sílice o de fase inversa Redisep Rf Gold o Standar. Los compuestos en bruto se adsorbieron sobre el gel de sílice, 70-230 mesh 40 Á (para la fase normal) o celite 503 (para la fase inversa) y se cargaron en cartuchos sólidos. Las mezclas de elución se indican en v:v.
2. PROCEDIMIENTO GENERAL DE ACOPLAMIENTO CRUZADO DE SUZUKI (PROCEDIMIENTO DE SÍNTESIS A) Se disolvieron el análogo de cloruro de arilo sustituido deseado (1,0 equiv), análogo de ácido arilborónico sustituido (1,05 equiv) y trifenilfosfina (0.04 equiv) en una mezcla de THF (concentración final del reactivo limitante 0,1 mM) y carbonato sódico acuoso 1 M (2,0 equiv) tras lo cual se añadió acetato de paladio (II) (0,02 equiv) y la solución se calentó a reflujo durante 12 h. Después de enfriar, se eliminó el disolvente al vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se vertió en agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida. A continuación se proporciona un esquema ejemplar generalizado de la reacción, con las posiciones de los sustituyentes tal como se han definido en otras partes en la memoria descriptiva.
Figure imgf000030_0001
3. PROCEDIMIENTO GENERAL DE AMINACIÓN BUCHWALD-HARTWIG (PROCEDIMIENTO DE SÍNTESIS B) Se disolvieron análogo de cloruro de arilo sustituido (1,0 equiv), análogo de anilina sustituido (1,05 equiv) y carbonato potásico (1,5 equiv) en t-butanol (concentración del reactivo limitante 0,05 - 0,1 mM). La mezcla resultante se desgasificó completamente, tras lo cual se añadieron Pd2(dba)3 (0,05 equiv) y XantPhos (0,05 equiv) y la solución se calentó a reflujo durante 12 h. Después de enfriar, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se vertió en agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida. A continuación se proporciona un esquema ejemplar generalizado de la reacción, con las posiciones de los sustituyentes tal como se han definido en otras partes en la memoria descriptiva.
Figure imgf000030_0002
4. PROCEDIMIENTO GENERAL PARA LA AMINACIÓN DE 4-CLOROPIRIMIDINAS (PROCEDIMIENTO DE SÍNTESIS C)
Se disolvieron el análogo de 4-cloropirimidina sustituido deseado (1,00 equiv) y DIPEA (1,20 equiv) en alcohol isopropílico (concentración del reactivo limitante 0,05 - 0,1 mM). Se añadió el análogo de anilina sustituido deseado (1,05 equiv) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 12 h. Después de enfriar, se eliminó el disolvente al vacío y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se vertió en agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera; se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida. A continuación se proporciona un esquema ejemplar generalizado de la reacción, con las posiciones de los sustituyentes tal como se han definido en otras partes en la memoria descriptiva.
Figure imgf000031_0001
5. PROCEDIMIENTO GENERAL DE CLOROSULFONACIÓN (PROCEDIMIENTO DE SÍNTESIS D)
Se disolvió el análogo de arilo sustituido deseado (1,0 equiv) en ácido clorosulfónico (al menos 10,0 equiv. o el menor volumen necesario para asegurar la disolución completa) y la mezcla resultante se agitó durante 4 h (temperatura ambiente o 90 °C), tras lo cual se vertió cuidadosamente en hielo. La solución resultante se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida. A continuación se proporcionan esquemas ejemplares generalizados de la reacción, con las posiciones de los sustituyentes tal como se han definido en otras partes en la memoria descriptiva.
Figure imgf000031_0002
6. SÍNTESIS GENERAL DE SULFONAMIDA (PROCEDIMIENTO DE SÍNTESIS E)
Se disolvieron el análogo de cloruro de sulfonilo sustituido deseado (1,00 equiv) y DIPEA (2,50 equiv) en THF (concentración del reactivo limitante 0,05 - 0,1 mM). Se añadió la amina deseada (1,05 equiv) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. después de eliminar el disolvente, el material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida. A continuación se proporcionan esquemas ejemplares generalizados de la reacción, con las posiciones de los sustituyentes tal como se han definido en otras partes en la memoria descriptiva.
Figure imgf000031_0003
7. PREPARACIÓN DE 4-(3-CLORO-4-FLUOROFENIL)-5-METIL-N-(4-((4-METILPIPERAZIN-1 -IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000032_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-doro-4-(3-doro-4-fluorofenil)-5-metilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 84 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de purificación mediante cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCb): 58,30 (s, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,51 (m, 1H), 7,25 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 7,05 (s, 1H), 3,46 (s, 2H), 2,46 (s a, 8H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H); MS (ESI): 426,3 [M+H]+, 213,7 [M+2H]2+.
8. PREPARACIÓN DE 4-(4-FLUOROFENIL)-5-METIL-N-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000032_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento B a partir de 2-cloro-4-(4-fluorofenil)-5-metilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 79 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de purificación mediante cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCl3): 58,28 (s, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,55 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,22 (t, 2H, J = 8,7 Hz), 7,14 (t, 2H, J = 8,7 Hz), 3,44 (s, 2H), 2,42 (s a, 8H), 2,25 (s, 3H), 2,24 (s, 3H); MS (ESI): 392,0 [M+H]+, 196 [M+2H]2+.
9. PREPARACIÓN DE 4-(3-CLORO-4-FLUOROFENOXI)-5-METIL-W-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000032_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-4-(3-cloro-4-fluorofenoxi)-5-metilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 59 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCh): 5 H 8,10 (s, 1H), 7,43 (t, 1H, J = 8,4 Hz), 7,23 (d, 2H), 7,09 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,04 (dd, 1H, J = 9,6, 2,4 Hz), 6,94 (m, 1H), 3,42 (s, 2H), 2,46 (sa, 8H) 2,27 (s, 3H), 2,18 (s, 3H); MS (ESI): 442,3 [M+H]+, 221,7 [M+2H]2+.
10. PREPARACIÓN DE 6-(3-CLORO-4-FLUOROFENIL)-W2-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2,4-DIAMINA
Figure imgf000033_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-6-(3-cloro-4-fluorofenil)pirimidin-4-amina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 84 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). MS (ESI): 214,2 [M+2H]2+.
11. PREPARACIÓN DE W4-(3-CLORO-4-FLUOROFENIL)-5-METIL-N2-(4-((4-METILPIPERAZIN-1 -IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2,4-DIAMINA
Figure imgf000033_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-N-(3-cloro-4-fluorofenil)-5-metilpirimidin-4-amina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 78 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). MS (ESI): 440,4 [M+H]+.
12. PREPARACIÓN DE 5-METIL-W(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)-4-(3-(METILSULFONIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000033_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-5-metil-4-(3-(metilsulfoniI)feniI)pirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 63 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,35 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,03 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,93 (d, 1H, J= 7,8 Hz), 7,70 (t, 1H, J= 7,8 Hz), 7,56 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,26 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 3,45 (s, 2H), 3,09 (s, 3H), 2,43 (sa, 8H), 2,26 (s, 6H). MS (ESI): 452,3 [M+H]+, 226,8 [M+2H]2+.
13. PREPARACIÓN DE 4-(3-CLOROFENIL)-5-METIL-W-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000033_0004
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-doro-4-(3-dorofenil)-5-metilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 77 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,31 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,56 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,48 (m, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,25 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 3,45 (s, 2H), 2,45 (sa, 8H), 2,27 (s, 3H), 2,24 (s, 3H); MS (ESI): 408,4 [M+H]+, 204,7 [M+2H]2+.
14. PREPARACIÓN DE 2-METIL-5-(5-METIL-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)BENZONITRILO
Figure imgf000034_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 5-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-iI)-2-metilbenzonitrilo y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 93 % de rendimiento (sólido de color amarillo). Después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,31 (s, 1H), 7,88 (d, 1H, J= 1,7 Hz), 7,76 (dd, 1H, J= 8,0, 1,9 Hz), 7,55 (d, 2H, J= 8,6 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,25 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 3,45 (s, 2H), 2,62 (s, 3H), 2,45 (sa, 8H), 2,26 (s, 3H), 2,25 (s, 3H); MS (ESI): 413,5 [M+H]+, 207,4 [M+2H]2+.
15. PREPARACIÓN DE W(3-(5-METIL-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)FENIL)ACETAMIDA
Figure imgf000034_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de N-(3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-iI)feniI)acetamida y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 82 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,29 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,57 (d, 3H, J= 8,2 Hz), 7,42 (t, 1H, J= 7,9 Hz), 7,35 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,22 (m, 2H), 3,44 (s, 2H), 2,42 (sa, 8H), 2,26 (s, 3H), 2,19 (s, 3H); (ESI): 431,3 [M+H]+, 216,3 [M+2H]2+.
16. PREPARACIÓN DE 5-METIL-W(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)-4-(3-(TRIFLUOROMETOXI)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000034_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-5-metil-4-(3-(trifIuorometoxi)feniI)pirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 79 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2WCH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCh): 58,32 (s, 1H), 7,57 (d, 3H, J = 8,5 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,50 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 7,29 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,25 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 3,45 (s, 2H), 2,47 (sa, 8H), 2,28 (s, 3H), 2,26 (s, 3H); MS (ESI): 458,3 [M+H]+, 229,7 [M+2H]2+.
17. PREPARACIÓN DE 4-(3-CLORO-4-FLUOROFENIL)-5-CICLOPROPIL-W-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000035_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-doro-4-(3-doro-4-fluorofenil)-5-cidopropilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 51 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,22 (s, 1H), 7,90 (dd, 1H, J = 7,0, 2,0 Hz), 7,72 (m, 1H), 7,55 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,22 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,09 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 3,45 (s, 2H), 2,43 (sa, 8H), 2,26 (s, 3H), 1,86 (m, 1H), 0,92 (m, 2H), 0,63 (m, 2H); MS (ESI): 452,3 [M+H]+, 226,9 [M+2H]2+.
18. PREPARACIÓN DE 2-METIL-2-(4-(5-METIL-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)FENIL)PROPANONITRILO
Figure imgf000035_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-(4-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)feniI)-2-metilpropanonitrilo y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-anilina con un 39 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,30 (s, 1H), 7,66 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,58 (d, 2H, J= 4,7 Hz), 7,56 (d, 2H ,J= 4,7 Hz), 7,25 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 3,44 (s, 2H), 2,42 (sa, 8H), 2,26 (s, 6H), 1,76 (s, 6H); MS (ESI): 441,4 [M+H]* 221,4 [M+2H]2+.
19. PREPARACIÓN DE 4-(3-CLORO-5-(TRIFLUOROMETIL)FENIL)-5-METIL-W-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000035_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-4-(3-cloro-5-(trifluorometil)feniI)-5-metilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 76 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida(CH2Cl2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz. CDCI3): 58,35 (s, 1H), 7,79 (d, 2H, J= 7,8 Hz), 7,69 (s, 1H), 7,55 (d, 2H, J= 8,2 Hz), 7,26 (d, 2H, J= 8,6 Hz), 3,47 (s, 2H), 2,50 (sa, 8H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H); MS (ESI): 476,3 [M+H]+, 238,7 [M+2H]2+.
20. PREPARACIÓN DE 4-(3-METOXIFENIL)-5-METIL-W-{4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000036_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-doro-4-(3-metoxifenil)-5-metilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 20 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 5 8,29 (s, 1H), 7,59 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,37 (t, 1H, J = 8,0 Hz), 7,24 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 7,16 (m, 2H), 6,98 (d, 1H, J= 8,2 Hz), 3,85 (s, 3H), 3,49 (s, 2H), 2,57 (sa, 8H), 2,36 (s, 3H), 2,24 (s, 3H); MS (ESI): 404,4 [M+H]+, 202,9 [M+2H]2+.
21. PREPARACIÓN DE NM4-(3-CLORO-4-FLUOROFENIL)-5-METILPiRIMIDIN-2-IL)-N4-METHYL-N4-(1 -METILPIPERIDIN-4-IL)BENCEN-1,4-DIAMINA
Figure imgf000036_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-4-(3-cloro-4-fluorofenil)-5-metilpirimidina y N1-metil-N1-(1-metilpiperidin-4-iI)bencen-1,4-diamina con un 25 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2W C H 3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,24 (s, 1H), 7,69 (dd, 1H, J = 7,2, 1,7 Hz), 7,49 (m, 1H), 7,41 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 7,20 (d, 1H, 8,5 Hz), 6,79 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,49 (m, 1H), 3,00 (d, 2H, J = 10,6 Hz), 2,74 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,11 (m, 2H), 1,89 (m, 2H), 1,72 (d, 2H, J = 11,6 Hz); MS (ESI): 440,3 [M+H]+, 220,8 [M+2H]2+
22. PREPARACIÓN DE 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIPIMIDIN-4-IL)AMINO)-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
Figure imgf000036_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-((2,5-dicloropIrimidin-4-II)amino)-N,N-dimetilbenCenOsulfonamidA y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 62% de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,53 (d, 1H, 8,2 Hz), 8,11 (s, 1H), 7,84 (dd, 1H, J= 8,2, 1,3 Hz), 7,54 (m, 1H), 7,45 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,22 (m, 3H), 3,47 (s, 2H), 2,72 (s, 6H), 2,48 (sa, 8H), 2,29 (s, 3H); MS (ESI): 516,3 [M+H]+, 258,8 [M+2H]2+.
23. PREPARACIÓN DE 2-((5-CLORO-2-((4-(METIL(1-METILPIPERIDIN-4-IL)AMINO)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
Figure imgf000037_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-((2,5-dicloropirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbencenosulfonamida y N1-metil-N1-(1-metilpiperidin-4-il)bencen-1,4-diamina con un 34 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 59,45 (s, 1H), 8,60 (d, 1H, J= 8,2 Hz), 8,06 (s, 1H), 8,18 (d, 1H, J= 8,0 Hz), 7,47 (t, 1H, J = 7,7 Hz), 7,31 (d, 2H, J= 8,9 Hz), 7,16 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,77 (d, 2H, J= 8,9 Hz), 3,51 (tt, 1H, J = 11,3, 3,8 Hz), 3,00 (d, 2H, J = 10,6 Hz), 2,76 (s, 3H), 2,72 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,11 (t, 2H, J = 10,2 Hz), 1,90 (c, 2H, J= 11,3 Hz), 1,73 (d, 2H, J = 12,0 Hz); MS (ESI): 530,3 [M+H]+.
24. PREPARACIÓN DE W,W-DIMETIL-2-((2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)-5-(TRIFLUOROMETIL)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)BENZAMIDA
Figure imgf000037_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-((2-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbenzamida y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 12 % de rendimiento (aceite de color amarillo claro que se solidificar al reposar) después de cromatografía ultrarrápida eluyente (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,46 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,15 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,44(d, 2H, J= 8,5 Hz), 7,30 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,21 (t, 1H, J= 7,5 Hz), 7.02 (t, 1H, J = 7,4 Hz), 6,81 (s, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,09 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 2,49 (sa, 8H), 2,30 (s, 3H); MS (ESI): 514.2 [M+H]+.
25. PREPARACIÓN DE 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-W,W-DIMETILBENZAMIDA
Figure imgf000037_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-((2,5-dicloropirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbenzamida y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 32 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 59,07 (s, 1H), 8,35 (d, 1H J = 8,2 Hz), 8,05 (s, 1H), 7,46 (s, 2H, J = 8,2 Hz), 7,38 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,29 (d, 1H, J= 7,5 Hz), 7,21 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,10 (t, 1H, J= 7,5 Hz), 7,01 (s, 1H), 3,45 (s, 2H), 3,11 (s, 3H), 3,04 (s, 3H), 2,43 (sa, 8H), 2,27 (s, 3H); MS (ESI): 480,1 [M+H]+.
26. PREPARACIÓN DE (2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)FENIL)(PIRROLIDIN-1-IL)METANONA
Figure imgf000038_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de (2-((2,5-dicloropirimidin-4-il)amino)fenil)(pirrolidin-1-il)metanona y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 73 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 59,68 (s, 1H), 8,40 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 8,04 (s, 1H), 7,46 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,39- 7,34 (m, 2H), 7,21 (d, 2H, J= 8,2 Hz), 7,06 (t, 1H, J= 7,5 Hz), 3,65 (t, 2H, J= 7,0 Hz), 3,48 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,44 (s, 2H), 2,44 (sa, 8H), 2,26 (s, 3H), 1,95 (m, 2H), 1,83 (m, 2H); MS (ESI): 506,1 [M+H]+.
27. PREPARACIÓN DE 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-N-CiCLOPROPiLBENZAMIDA
Figure imgf000038_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de N-ciclopropilo-2-((2,5-dicloropirimidin-4-il)amino)benzamida y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 38 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida(CH2Cl2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,64 (d, 1H, J= 8,5 Hz), 8,11 (s, 1H), 7,50 (d, 2H, J= 8,2 Hz), 7,44 (m, 2H), 7,25 (d, 2H, J= 8,2 Hz), 7,07 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 6,38 (sa, 1H), 3,50 (s, 2H), 2,93 (c, 1H, J = 3,4 Hz), 2,55 (sa, 8H), 2,35 (s, 3H), 0,92 (m, 2H), 0,65 (m, 2H); MS (ESI): 492,1 [M+H]+.
28. PREPARACIÓN DE 5-CLORO-N4-(4-FLUORO-2-(MORFOLINSULFONIL)FENIL)-N2-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2,4-DIAMINA
Figure imgf000038_0003
El compuesto del título fue: preparado de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2,5-dicloro-N-(4-fIuoro-2-(morfolinosuIfonil)fenil)pirimidin-4-amina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 62 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 59,12 (s, 1H), 8,49 (dd, 1H, J = 4,8, 9,2 Hz), 8,10 (s, 1H), 7,54 (dd, 1H, J = 3,1, 7,9 Hz), 7,40 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,27-7,20 (m, 3H), 3,64 (m, 4H), 3,47 (s, 2H), 3,06 (m, 4H), 2,47 (sa, 8H), 2,28 (s, 3H); MS (ESI): 576,2 [M+H]+.
29. PREPARACIÓN DE 5-CLORO-N4-(4-FLUORO-2-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENIL) N2-(4-((4 METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2,4-DIAMINA
Figure imgf000039_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2,5-dicloro-N-(4-fluoro-2-(pirrolidin-1-ilsulfonil)fenil)pirimidin-4-amina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 78% de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 59,30 (s, 1H), 8,49 (dd, 1H, J= 9,2, 4,8 Hz), 7,60 (dd, 1H, J= 8,0, 2,9 Hz), 7,41 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,23 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,19 (m, 1H), 3,48 (s, 2H), 3,23 (m, 4H), 2,50 (sa, 8H), 2,31 (s, 3H), 1,78 (m, 4H); MS (ESI): 560,3 [M+H]+.
30. PREPARACIÓN DE 5-CLORO-N2-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)-W4-(2-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENIL)PIRIMIDIN-2,4-DIAMINA
Figure imgf000039_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2,5-dicloro-N-(2-(pirrolidin-1-ilsulfonil)feniI)pirimidin-4-amina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 50 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida eluyente (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 59,58 (s, 1H), 8,61 (d, 1H, J= 8,2 Hz), 8,18 (s, 1H), 7,96 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,58 (t, 1H, J= 7,7 Hz), 7,51 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,30 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,26 (m, 1H), 3,53 (s, 2H), 3,30 (m, 4H), 2,53 (sa, 8H), 2,34 (s, 3H), 1,84 (m, 4H); MS (ESI): 542,20 [M+H]+.
31. PREPARACIÓN DE 5-CLORO-4-(4-FLUORO-2-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENIL)-W-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000039_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2,5-dicloro-4-(4-fluoro-2-(pirrolidin-1-ilsulfonil)feniI)pirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il}metil)anilina con un 96 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida(CH2CL2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 59,48 (s, 1H), 8,55 (d, 1H, J= 8,9 Hz), 8,11 (s, 1H), 7,85 (d, 1H, J= 2,4 Hz), 7,42 (1H), 7,41 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,25 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 3,48 (s, 2H), 3,24 (m, 4H), 2,49 (sa, 8H), 2,29 (s, 3H), 1,79 (m, 4H); MS (ESI): 545,2 [M+H]+.
32. PREPARACIÓN DE 5-CLORO-W4-(4-CLORO-2-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENIL)-N2-{4-{(4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2,4-DIAMINA
Figure imgf000040_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de ,5-didoro-N-(4-doro-2-(pirrolidin-1-ilsulfonil)fenil)pirimidm-4-amina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-anilina con un 26% de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,46 (dd, 1H, J = 6,5, 2,1 Hz), 8,42 (s, 1H), 8,10 (m, 1H), 7,52 (d, 2H,/= 8,2 Hz), 7,31 (t, 1H, J = 9,2 Hz), 7,26 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 3,45 (s, 2H), 3,39 (m, 4H), 2,46 (sa, 8H), 2,27 (s, 3H), 1,85 (m, 4H); MS (ESI): 576,2 [M+H]+.
33. PREPARACIÓN DE 4-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-3-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENOL
Figure imgf000040_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 4-((2,5-dicloropirimidin-4-il)amino)-3-(pirrolidin-1-ilsulfonil)fenoI y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 27 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2W C H 3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,08 (s, 1H), 7,87 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,67 (s, 1H), 7,44 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,26 (1H), 7,23 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 3,53 (s, 2H), 3,33 (m, 4H), 2,63 (sa, 8H), 2,43 (s, 3H), 1,83 (m, 4H); MS (ESI): 558,1 [M+H]+.
34. PREPARACIÓN DE 5-CLORO-W4-(4-FLUORO-2-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENIL)-W4-METIL-N2-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2,4-DIAMINA
Figure imgf000040_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2,5-dicloro-N-(4-fluoro-2-(pirrolidin-1-ilsulfonil)fenil)-N-metilopirimidin-4-amina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 39 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2W C H 3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 57,92 (s, 1H), 7,58 (m, 1H), 7,45 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,25 (m, 1H), 7,21 (d, 2H, J= 8,4 Hz), 7,13 (t, 1H, J= 9,0 Hz), 7,10 (s, 1H), 3,43 (s, 3H),3,41 (s, 2H),3,31 (m, 4H), 2,38 (sa, 8H), 2,22 (s, 0,79 (m, 4H); MS (ESI): 574,2 [M+H]+.
35. PREPARACIÓN DE 5-FLUORO-4-(4-FLUORO-2-(PYRROLIDIN-1 -ILSULFONIL)FENIL)-W-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000041_0001
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-5-fluoro-4-(4-fIuoro-2-(pirroMdin-1-ilsulfonil)fenil)pirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 60 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,65 (dd, 1H, J = 6,8, 2,0 Hz), 8,30 (d, 1H, J = 3,3 Hz), 8,24 (m, 1H), 7,50 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,30-7,19 (m, 4H), 3,43 (s, 2H), 3,34 (m, 4H), 2,46 (sa, 8H), 2,26 (s, 1H), 1,79 (m, 4H); MS (ESI): 529,2 [M+H]+.
36. PREPARACIÓN DE 4-(4-FLUORO-2-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENIL)-5-METIL-W-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)PIRIMIDIN-2-AMINA
Figure imgf000041_0002
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-cloro-4-(4-fIuoro-2-(pirrolidin-1-ilsuIfoniI)fenil)-5-metilpirimidina y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-anilina con un 60 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2W C H 3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,32 (s, 1H), 8,21 (dd, 1H, J = 6,6, 2,2 Hz), 7,87 (m, 1H), 7,55 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,32 (t, 1H, J = 9,0 Hz), 7,25 (d, 2H, J: no calculado debido a picos superpuestos), 7,10 (sa, 1H), 3,45 (s, 2H), 3,39 (m, 4H), 2,46 (sa, 8H), 2,27 (s, 3H), 1,86 (m, 4H); MS (ESI): 525,2 [M+H]+.
37. PREPARACIÓN DE 2-(5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)-5-FLUORO-W,W-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
Figure imgf000041_0003
El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento de síntesis B descrito anteriormente, a partir de 2-(2,5-dicloropirimidin-4-il)-5-fluoro-N,N-dimetilobenzenesulfonamida y 4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)anilina con un 44 % de rendimiento (sólido de color amarillo) después de cromatografía ultrarrápida (CH2CI2/CH3OH 99:1 aumentando gradualmente a 95:5). RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 5 8,39 (m, 2H), 8,08 (m, 1H), 7,48 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,30-7,20 (m, 4H), 3,41 (s, 2H), 2,82 (s, 6H), 2,40 (sa, 8H), 2,22 (s, 3H); MS (ESI): 519,2 [M+H]+.
38. CULTIVOS CELULARES
Todas las líneas de células se cultivaron en medio como recomendaba la American Type Culture Collection ("ATCC"; suplementado con suero de feto de bovino al 10% ("FBS") y penicilina/estreptomicina al 1% (100 Ul/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina) a 27 °C y CO2 al 5%. Las líneas de células usadas en estos estudios incluyeron aquellas indicadas en la Tabla II siguiente.
TABLA II
Figure imgf000042_0001
39. ENSAYO DE ACTIVIDAD DE LACINASAAXL
Se diluyeron los compuestos de ensayo a las concentraciones deseadas en tampón de reacción de cinasa (HEPES 50 mM pH 7,5 MgCI210 mM, EGTA 1 mM, DTT 2 mM, y Tween-20 al 0,01% en v/v) y se incubaron de forma breve con una cinasa Axl (Invitrogen Corporation, Carlsbad, California). La cinasa Axl usada era cinasa Axl humana recombinante (dominio catalítico, aminoácidos 473-894) con una etiqueta histidina. La reacción se inició mediante la adición de ATP y sustrato poli-GT marcado con fluoresceína (poli GluiTyr, polímero 4:1; Invitrogen). Las concentraciones de los diversos componentes en el ensayo (10 j l de volumen de reacción) fueron: DMSO al 1%, 93 ng/ml de cinasa Axl, 20 jM de ATP, y 200 nM de sustrato de fluoresceína poli-GT. Tras la adición de ATP y sustrato poli-GT marcado con fluoresceína, la incubación fue durante 60 min a temperatura ambiente, la reacción enzimática se detuvo mediante la adición de 10 j l de anticuerpo PY20 dirigido contra fosfotirosina marcado con terbio en tampón que contenía EDTA. La concentración final de EDTA y anticuerpo tras la adición a la reacción es de 10 mM y 2 nM, respectivamente. El anticuerpo conjugado con terbio genera una señal FRET resuelta en el tiempo con la molécula de fluoresceína (unida al sustrato poli-GT) cuando el sustrato está fosforilado. Tras una hora de incubación a temperatura ambiente, se midió la fluorescencia con una excitación de 320 nm y una doble emisión de 495 y 500 nm en un lector de microplacas EnVision (Perkin Elmer), La señal se expresa en términos de relación TR-FRET (intensidad de la fluorescencia de 520 nm a 495 nm). En la Tabla I se proporcionan los datos de actividad usando este ensayo
40. ENSAYO DE ACTIVIDAD DE LA CINASA MER
El ensayo de la cinasa Mer se llevó a cabo de una manera idéntica a la descrita para el ensayo LanthaScreen™ de Axl, excepto que los componentes de la reacción que tenían las siguientes concentraciones en el ensayo fueron: DMSO al 1%, 53 ng/ml de cinasa Mer (Invitrogen), 15 jM de ATP, y 200 nM de sustrato poli-GT marcado con fluoresceína.
41. ENSAYO DE PROLIFERACIÓN CELULAR
Para los ensayos de proliferación celular, 45 j l que contenían 1000 células por pocillo se sembraron en placas de 384 pocillos blancas sólidas en un medio de crecimiento adecuado que contenía FBS al 10% y se incubaron durante la noche a 37 °C y CO2al 5%. Al día siguiente, los compuestos de ensayo se diluyeron en medio de crecimiento sin suero hasta 10x las concentraciones deseadas y se añadieron 5 j l a cada pocillo. El compuesto y las células combinados se incubaron durante 96 horas. Tras la incubación, se añadieron 40 j l de solución ATP-Lite (Perkin Elmer, Inc., Waltham, Massachusetts) a cada pocillo, se incubaron durante 10 minutos más a temperatura ambiente y se midió la luminiscencia en un lector de microplacas ERnVision, Se calculó el porcentaje de viabilidad celular para los compuestos de ensayo comparando los pocillos tratados con los controles adecuados (por ejemplo, vehículo tratado) incluidos en cada placa.
42. ENSAYO DE SEÑALIZACIÓN DE GAS6-AXL
Se sembraron líneas de células en 1 ml del medio de crecimiento adecuado con FBS al 10% en placas de 6 pocillos (8 x 105 células/pocillo) y se incubaron durante la noche a 37 °C y CO2 al 5%. Al día siguiente, el medio de crecimiento que contenía suero se sustituyó por medio sin suero y se incubo durante 4 h, y a continuación se añadieron los compuestos de ensayo a las células a las concentraciones deseadas y se incubaron durante 2 h más. Para estimular la señalización de Axl, se añadió Gas6 a cada pocillo a una concentración de jg/ml y se incubó durante 10 min. Las células se lisaron inmediatamente y los lisados se usaron en un kit ELISA multiplexado (Meso Scale Discovery, Gaithersburg, Maryland) para cuantificar la AKT fosforilada (en la posición Ser473' "pAkt") o la Axl fosforilada ("pAxl").
43. CÁLCULO DE LA CI50
Se determinaron los valores de la CI50 usando el software GraphPad Prism 5. Se introdujeron los datos como un gráfico X-Y en el software como un porcentaje de inhibición para cada concentración del fármaco. Los valores de la concentración del fármaco se transformaron logarítmicamente y se llevó a cabo la regresión no lineal usando la opción de "respuesta a la dosis sigmoidea" (pendiente variable) comprendida en el software GraphPad para modelar los datos y calcular los valores de la CI50. Los valores de la CI50 notificados so la concentración de fármaco a la cual se alcanzó la inhibición del 50%.
44. INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD CINASA: DETERMINACIÓN DE LA CI50 PARA LA 5-CLORO-N2-(4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)-N4-(2-(PIRROLIDIN-1-ILSULFONIL)FENIL)PIRIMIDINA-2,4-DIAMINA
Figure imgf000043_0001
Un ejemplo típico de inhibición dependiente de la dosis de la actividad de Axl y los datos utilizados para la determinación de la CI50 en el ensayo de actividad de Axl se muestra en la Figura 4A para el compuesto del título que se muestra anteriormente El porcentaje de inhibición de la actividad en comparación con el vehículo del control se proporciona como una función de la concentración logarítmica del compuesto (marcado como "Compuesto de Ensayo" en la figura). En los datos que se muestran, los compuestos se ensayaron por triplicado en el ensayo de unión basado den TR-FRET como se ha descrito anteriormente. Los valores de la CI50 generados a partir de este ensayo fueron aproximadamente de 20 nM. se observaron valores de CI50 comparables para este compuesto en el ensayo de viabilidad celular (véase la Tabla III siguiente). En la Figura 4B se proporciona una comparación de la inhibición de las cinasas Axl y Mer, ambas, miembros de la subfamilia TAM de las proteína cinasas. Se determinó la actividad como se ha descrito anteriormente para cada cinasa.
45. INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD CINASA
En la Figura 5 se muestran los datos típicos para la inhibición dependiente de la concentración de la actividad de Axl. Se determinó la actividad utilizando el ensayo de actividad de Axl descrito anteriormente. El porcentaje de inhibición de la actividad en comparación con el vehículo del control se proporciona como una función de la concentración logarítmica del compuesto (marcado como "Compuesto de Ensayo" en la figura). En los datos que se muestran, los compuestos se ensayaron por triplicado en el ensayo de unión basado den TR-FRET como se ha descrito anteriormente. Los compuestos de ensayo que se marcaron como TC1, TC2, etc., corresponden a los compuestos identificados como tales en la Tabla III siguiente.
Se calculó la energía de unión de los compuestos de ensayo identificados en la Tabla III (TC1, TC2, etc.) son del siguiente modo (en kcal/mol): TC1, -36,21; TC2, -31,29; TC3, -29,89; TC4, -37,21; TC5, -33,23; y TC6, -31,86.
46. EXPRESIÓN DE AXL EN LÍNEAS DE CÉLULAS DE CÁNCER DE PÁNCREAS
Se determinó la expresión del ARNm de Axl de las líneas de células de páncreas seleccionadas como se muestra en la Figura 6. Se cultivaron las células generalmente como se describe en el presente documento en las condiciones recomendadas por la ATCC. Se aisló el ARN de las líneas de células de cáncer de páncreas, convertido en ADNc mediante transcripción inversa, y se cuantificó la expresión de Axl mediante la PCR en tiempo real TaqMan. La expresión de Axl en cada muestra se normalizó para la expresión de HPRT1 y se muestra anteriormente (barra gris más clara, Figura 6) en relación con la expresión en la línea de células Hs700T.
Para el análisis de sAxl, se recogió el medio de cultivo celular de cada línea de células, se centrifugó para aclarar cualquier célula desunida o desecho, y se analizó usando un ELISA de sAxl (R&D Systems). Se cuantificaron los niveles de sAxl absolutos usando una curva patrón y se normalizaron los resultados hasta el porcentaje de confluencia de cada línea de células (barra gris más oscura, Figura 6).
Se generaron los lisados de proteínas a partir de cada línea de células y se analizaron mediante transferencia western (Figura 7). Se sondeó la membrana con un anticuerpo dirigido contra Axl (Novus) seguido por un anticuerpo dirigido contra GAPDH (Cell Signaling) para usar como control de la carga.
47. INHIBICIÓN DE AKT (S473) Y FOSFORILACIÓN DE AXL MEDIANTE 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
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Para explorar adicionalmente la actividad de un compuesto representativo, 2-((5-cloro-2-((4-((4-metilpiperazin-lil)metil)fenil)amino)pirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbencenosulfonamida, de inhibir Axl en un sistema de líneas celulares, se determinó el efecto del compuesto de ensayo sobre la fosforilación de Akt (en la posición Ser473) Se evaluó el efecto sobre la fosforilación de Akt en dos líneas de células (véase la Figura 8A): PSN-I y PL45. El método general fue como se ha descrito anteriormente. En resumen, se trataron las células como se ha indicado y los lisados de estos tratamientos se analizaron para la determinación de Akt (Ser473) como se ha descrito anteriormente. Los tratamientos son como se ha indicado en la Figura 8A, fueron los siguientes: control negativo (sin compuesto de ensayo o tratamiento con Gas6), tratamiento con Gas6 solo (sin compuesto de ensayo), y tratamiento con diferentes concentraciones del compuesto de ensayo en presencia de Gas6. En la Figura 8A se muestran los datos. Se puede observar que el compuesto de ensayo inhibió eficazmente los niveles de Akt fosforilada de una manera dependiente de la concentración con una CI50 de aproximadamente 300 nM.
El efecto de 2-((5-doro-2-((4-((4-metNpiperazin-1-il)metil)fenM)amino)pirimidin-4-M)amino)-N,N-dimetilbenzenosuIfonamida y 2-((5-doro-2-((4-((4-metilpiperazin-l-N)metN)fenil)amino)pirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbenzamida (marcados como t C1" y "TC2", respectivamente en la Figura 8b) sobre la inhibición de la autofosforilación de Axl se muestra en la Figura 8B.
En conjunto, los datos de estos ensayos de criterios de valoración farmacodinámicos muestran que el compuesto de ensayo inhibió drásticamente la señalización de Akt (pAKT S473) en la dirección 3' de estimulación de GAS6 en líneas de células de cáncer de páncreas, así como la autofosforilación del propio Axl.
48. PERFILADO DE LAS CINASAS DE 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
Se evaluó la especificidad de la inhibición cinasa con un compuesto representativo, 2-((5-cloro-2-((4-((4-metiIpiperazin-l-il)metil)feniI)amino)pirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbencenosulfonamida, determinando la actividad de este compuesto de ensayo frente a un panel de proteína cinasas. Se llevó a cabo el perfilado de las cinasas frente a un panel central de cinasas relevantes para la señalización de PDK1 y otras cinasas oncogénicas conocidas. El panel comprendía 75 proteína cinasas distintas, y se muestran los datos para un subconjunto de 39 cinasas (véase la Figura 9). El perfilado de la actividad se llevó a cabo en 200 nM del compuesto de ensayo con ATP a una Km aparente para cada cinasa, y se determinó el porcentaje de inhibición en esta concentración para cada uno. Los resultados de este cribado confirmaron una buena actividad frente a Axl y los miembros relacionados de la familia TAM de las cinasas. Además, se observó una actividad significativa frente a las familias de cinasas Aurora y JAK.
49. INHIBICIÓN DE LA MIGRACIÓN CELULAR POR LA 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
En la Figura 10 se muestra la inhibición de la migración celular por 2-((5-cloro-2-((4-((4-metiIpiperazinil)metil)fenil)amino)pirimidin-4-iI)amino)-N,N-dimetilbencenosuIfonamida (marcada como ‘Compuesto de Ensayo" en la figura) Se sembraron las células sobre placas Platypus de colágeno I (Platyplus Technologies, LLC, Madison, Wisconsin). En este sistema, un gel evita la unión de las células en un círculo. El gel se disuelve mediante la exposición al medio, permitiendo a las células migrar en el área abierta. Las células migraron durante 18 horas antes de la fijación y la tinción. Se prepararon los ensayos con y sin Gas6 (3 mg/ml) y los tratamientos de los compuestos de ensayo como se indica en la figura. Se determinó la extensión de la migración celular midiendo la superficie abierta en el círculo interno del pocillo. Los datos muestran que, consistentes con la función conocida de Axl, el compuesto de ensayo inhibió la migración inducida por Gas6 y la invasión de células de cáncer de páncreas en este sistema in vitro
50. INHIBICIÓN DE LA LIBERACIÓN DE SAXL POR 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
En la Figura 11 se muestra la inhibición la liberación de sAxI por 2-((5-cloro-2-((4-((4-metiIpiperazin-I-iI)metiI)feniI)amino)pirimidin-4-iI)amino)-N,N-dimetiIbencenosuIfonamida (marcada como ‘Compuesto de Ensayo" en la figura). Las líneas de células se sembraron en placas y se incubaron durante la noche como se ha descrito anteriormente. Se ensayó la inhibición sobre la liberación de sAxl en las líneas de células PL45 y PSN-1 de cáncer de páncreas como se ha indicado en la figura. el día siguiente se cambió el medio a exento de suero y las células se trataron como se ha indicado. Tras 24 horas, se analizaron los medios de los tratamientos para la determinación de sAxl (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota).
El procesamiento proteolítico del dominio extracelular del receptor de Axl es un evento conocido en la dirección 3' de la activación de Axl y da como resultado la liberación de Axl soluble (sAxl) en el medio de cultivo celular (in vitro) o en el torrente sanguíneo (in vivo). Los datos muestran que los niveles de sAxl pueden funcionar como un biomarcador para la inhibición diana. De hecho, El medio acondicionado a partir de líneas de células de cáncer de páncreas tratado con el compuesto de ensayo mostró reducciones significativas dependientes de la dosis en los niveles de sAxl para los controles tratados con vehículo.
51. INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO DE CÉLULAS DE CÁNCER DE PÁNCREAS (CULTIVO 2D Y 3D)
Se midió la viabilidad celular en tres líneas de células de cáncer de páncreas (PSN-1, PANC-1 y PL45). Se hicieron crecer células en condiciones como se ha descrito anteriormente en sistemas de cultivo convencionales (2-D) y en sistemas de cultivo 3-D (sistema de cultivo SCIVAX 3-D; InfiniteBio, Inc., San Jose, California). Se determinó la viabilidad celular tras el tratamiento con los compuestos usando el sistema de ensayo descrito anteriormente. Se trataron las células con los compuestos indicados durante 96 horas. se calcularon los valores de la CI50 como se ha descrito anteriormente y se proporcionan en mM. En la Figura 12 se proporcionan los datos. En la Figura 13 se muestra una curva de la CI50 para la 2-((5-cloro-2-((4-( (4-metiIpiperazin-1-il)metil)fenil)amino)pirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetiIbencenosuIfonamida para diversas líneas de células de cáncer de páncreas (el compuesto está indicado como TCI en la figura). Los compuestos de ensayo fueron como se muestra en la Tabla III siguiente. Los datos muestran en ambos ensayos proliferación de células 2D y 3D, los compuestos de ensayo inhibieron significativamente el crecimiento de células de cáncer de páncreas a concentraciones tan bajas como 30 nM.
TABLA III.
El compuesto TC1 está de acuerdo con la invención. Los otros compuestos deben considerarse únicamente como com uestos de referencia.
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continuación
Figure imgf000046_0001
_________________ ___________________
52. ACTIVIDAD DEL COMPUESTO EN EL ENSAYO DE VIABILIDAD CELULAR
Se determinó la capacidad de los compuestos para inhibir la viabilidad de las células cultivadas usando el ensayo de viabilidad celular descrito anteriormente. Los datos de actividad de los compuestos representativos que se muestran a continuación en la Tabla IV se ensayaron en las líneas de células indicadas (PL-45, PANC-1, PSN-1, HepG2 y A546). Se determinaron los valores de la CI50 como se ha descrito anteriormente. Si el valor de CI50se indica como "n.d.", significa que el compuesto se evaluó en la línea de células indicada. El número del compuesto corresponde a la numeración usada en la Tabla I.
Los compuestos 1-3 y 5-14 en la Tabla IV son compuestos de referencia.
TABLA IV
Figure imgf000047_0001
continuación
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53. ACTIVIDAD DE 2-((5-CLORO2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA EN UN MODELO ANIMAL DE XENOINJERTO
Se evaluó la actividad in vivo del compuesto anterior en un modelo de xenoinjerto de tumor en ratón. se cultivaron células PSN-1 como se ha descrito anteriormente y se recogieron. Las células 2 a 5 x 106 en 100 pl de medio de cultivo) se implantaron por vía subcutánea en el flanco trasero derecho de ratones nu/nu atímicos (5 a 6 semanas de edad, 18-22 g). Tras el implante, los tumores se dejaron crecer hasta 100 mm antes de que se aleatorizaran los animales en grupos de tratamiento (vehículo y compuesto de ensayo). El Día I del estudio corresponde al día en que los animales reciben su primera dosis del compuesto de ensayo (2-((5-cloro-2-((4-((4-metilpiperazin-I-iI)metil)fenil)amino)pirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbencenosuIfonamida). El vehículo para este estudio era 5% de EtOH, 45% de PEG 400 y 50% de agua, y se dosificó a los animales tanto con vehículo como con compuesto de ensayo disuelto en este vehículo mediante sonda oral. El nivel de la dosis era de 50 mg/kg y la frecuencia de dosificación fue diaria (M-F) con el compuesto de ensayo con recuperación el fin de semana.
Se midieron los volúmenes tumorales y los pesos corporales dos veces a la semana, y se proporcionan los datos en las Figuras 14 y 15. Los datos muestran que al nivel de dosis usado, el compuesto de ensayo no tuvo impacto aparente sobre el peso corporal, sugiriendo que este nivel de dosis no tuvo efecto adverso aparentemente significativo (Figura 14). El compuesto de ensayo fue eficaz en la limitación del crecimiento tumoral, consiguiendo aproximadamente un 50% de reducción en el volumen tumoral a este nivel de dosis durante este periodo de dosificación (Figura 15).
54. FARMACOCINÉTICA DE 2-((5-CLORO-2-((4-((4-METILPIPERAZIN-1-IL)METIL)FENIL)AMINO)PIRIMIDIN-4-IL)AMINO)-N,N-DIMETILBENCENOSULFONAMIDA
Se dosificó a los ratones por vía oral con 50 mg/kg del compuesto del título. Se recogió sangre en los puntos temporales indicados (véase la Figura 16). Se analizaron las muestras de plasma mediante espectrometría de masas y se calcularon los parámetros de PK normalizados a partir de estos datos como se muestra en la Tabla V siguiente.
TABLA V.
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55. ENSAYO PROFÉTICO DE INHIBICION DE LA UNION DE AXL
Aunque, se evaluó de forma rutinaria la actividad de los compuestos mediante el ensayo de actividad descrito anteriormente, la selección de un compuesto principal implica frecuentemente la evaluación del compuesto en ensayos secundarios, El siguiente ejemplo de un efecto in vitro de los compuestos divulgados es profético. Se proporcionan en el presente documento unos ejemplos de métodos de ensayo in vitro típicos para determinar la actividad de los compuestos divulgados en la inhibición de la unión en el sitio activo de la actividad de Axl. Los compuestos divulgados se pueden evaluar usando como ensayo secundario un Ensayo de unión a cinasa LanthaScreen FRET resuelto en el tiempo (Invitrogen Corporation, Carlsbad, California). Este ensayo evalúa la capacidad del compuesto de ensayo de competir con una molécula trazadora marcada fluorescentemente para unirse en el bolsillo de ATP de una cinasa. Se generó la señal del ensayo cuando un anticuerpo dirigido contra la etiqueta His conjugado con Europio (Invitrogen) unido a la cinasa etiquetada con His produce una señal TR-FRET con la molécula trazadora unida y el bolsillo de ATP de la cinasa. En esta reacción, 5 pl del compuesto de ensayo se incubaron con 5 pl de una mezcla de cinasa/anticuerpo, seguido por la adición de 5 pl de trazador 236 de cinasa (Invitrogen). Las concentraciones finales del ensayo fueron (15 pl de volumen total): DMSO al 1%, 5 nm de Axl, 2 nm de anticuerpo dirigido contra His-Eu, y 6 nM de trazador 236 de cinasa. La cinasa Axl usada en este ensayo es cinasa Axl humana recombinante (dominio catalítico, aminoácidos 473-894) con una etiqueta de histidina (Ivitrogen). Después de 60 minutos de incubación a temperatura ambiente, se midió la señal TR-FRET en un lector de microplacas EnVision.
56. ACTIVIDAD IN VIVO PROFÉTICA EN UN MODELO DE XENOINJERTO TUMORAL
los siguientes ejemplos del efecto in vivo de los compuestos divulgados son proféticos. En general, los agentes que inhiben la ruta PI3K/Akt, incluyendo los inhibidores de la cinasa Axl, muestran eficacia en modelos preclínicos de cáncer. Se espera que los efectos in vivo de los compuestos descritos en los ejemplos precedentes se muestren en diversos modelos animales de cáncer conocidos por las personas expertas, tales como en modelos de xenoinjertos tumorales. En el modelo de xenoinjerto tumoral. Estos modelos se llevan a cabo normalmente en roedores, más a menudo en ratón, pero pueden llevarse a cabo en otras especies animales y son convenientes para estudiar los objetivos. Se espera que los compuestos, productos, y composiciones divulgados en el presente documento muestren los efectos in vivo en diversos modelos animales de cáncer conocidos por la persona experta, tales como modelos de xenoinjerto tumoral en ratón.
Se pueden evaluar los efectos in vivo de los compuestos con un estudio de xenoinjerto tumoral de ratón, se describe en el presente documento un posible protocolo de estudio. En resumen, las células (2 a 5 x 106 en 100 pl de medio de cultivo) se implantaron por vía subcutánea en el flanco trasero derecho de ratones nu/nu atímicos (5 a 6 semanas de edad, 18-22 g). Para los compuestos de la presente invención, una línea de células típica usada para el estudio del xenoinjerto tumoral sería la de las células PSN-1. Otras líneas de células adecuadas para estos estudios son las células PANC-1 y PL45. Las células se cultivaron antes de recogerlas para este protocolo como se ha descrito en el presente documento.
Tras el implante, los tumores se dejaron crecer hasta 100 mm3 antes de que se aleatorizaran los animales en grupos de tratamiento (por ejemplo vehículo, control positivo y diversos niveles de dosis del compuesto de ensayo). el número de animales por grupo es normalmente de 8-12. El Día I del estudio corresponde al día en que los animales reciben la primera dosis. se puede determinar la eficacia de un compuesto de ensayo en estudios de diversa longitud dependiendo de los objetivos del estudio. Los periodos de estudio típicos son de 14, 21 y 28 días. La frecuencia de dosificación (por ejemplo, si se dosificó a los animales con el compuesto de ensayo diariamente, en días alternos, cada tres días u otras frecuencias) se determinó para cada estudio dependiendo de la toxicidad y la potencia del compuesto de ensayo. Un estudio de diseño típico implicaría la dosificación diaria (M-F) con el compuesto de ensayo con recuperación el fin de semana. A lo largo del estudio, se midieron los volúmenes tumorales y los pesos corporales dos veces a la semana. Al final del estudio los animales se sometieron a eutanasia y se recogieron los tumores y se congelaron para el análisis adicional.
Por otra parte, como se define en las reivindicaciones, se espera que los compuestos preparados usando los métodos sintéticos divulgados muestren dichos efectos in vivo.
Será evidente para los expertos en la técnica que pueden realizarse diversas modificaciones y variaciones en la presente invención dentro del alcance de las reivindicaciones. Para los expertos en la técnica serán evidentes otras realizaciones de la invención a partir de la consideración de la memoria descriptiva y la práctica de la invención divulgada en el presente documento. Se pretende que la memoria descriptiva y los ejemplos se consideren únicamente a modo de ejemplos, estando indicado el alcance de la invención por las siguientes reivindicaciones.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto que tiene la siguiente estructura:
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de la reivindicación 1.
3. La sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 2, en donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de adición de ácido.
4. La sal farmacéuticamente aceptable de la reivindicación 3, en donde la sal de adición de ácido es una sal del compuesto y un ácido seleccionado entre el grupo que consiste en ácido acético, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido alcanforsulfónico, ácido cítrico, ácido etanosulfónico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido isetiónico, ácido láctico, ácido maleico, ácido málico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido mucico, ácido nítrico, ácido pamoico, ácido pantoténico, ácido fosfórico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, ácido p-toluenosulfónico y combinaciones de los mismos.
5. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la reivindicación 1 o la sal farmacéuticamente aceptable de una cualquiera de las reivindicaciones 2-4 y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
6. Un compuesto que tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000051_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno de proliferación celular incontrolada en un mamífero, comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo al mamífero.
7. Una sal farmacéuticamente aceptable para su uso como en la reivindicación 6.
8. La sal farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de adición de ácido.
9. La sal farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la sal de adición de ácido es una sal del compuesto y un ácido seleccionado entre el grupo que consiste en ácido acético, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido alcanforsulfónico, ácido cítrico, ácido etanosulfónico, ácido fumárico ácido, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido isetiónico, ácido láctico, ácido maleico, ácido málico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido mucico, ácido nítrico, ácido pamoico, ácido pantoténico, ácido fosfórico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, ácido p-toluenosulfónico y combinaciones de los mismos.
10. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el trastorno de proliferación celular descontrolada es un cáncer.
11. El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo la reivindicación 10, en donde el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de células de avena, cáncer de huesos, cáncer de páncreas, cáncer de piel, dermatofibrosarcoma protuberanante, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer uterino cáncer, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, tumores ginecológicos, enfermedad de Hodgkin, cáncer hepatocelular, cáncer de esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, sarcomas de tejidos blandos, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, tumores sólidos de la infancia, hipereosinofilia, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o de uréter, o malignidad pediátrica.
12. El compuesto o sal farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el cáncer es un cáncer de páncreas, un cáncer de pulmón, un cáncer de mama, un cáncer de cerebro, un cáncer de piel o un cáncer de la sangre.
13. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el cáncer se selecciona entre un cáncer de cerebro, un cáncer del tracto genitourinario, un cáncer del tracto gastrointestinal, un cáncer de colon, un cáncer de recto, un cáncer de mama, un cáncer de riñón, un cáncer del sistema linfático, un cáncer de estómago, un cáncer de pulmón, un cáncer de páncreas y un cáncer de piel.
14. Un método para preparar un compuesto que tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000052_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el método la siguiente etapa:
Figure imgf000052_0002
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ES12763555T Active ES2759615T3 (es) 2011-04-01 2012-03-31 Análogos de N-fenilpirimidina-2-amina sustituidos como inhibidores de la quinasa AXL

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Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2011008362A (es) 2009-02-13 2011-08-24 Shionogi & Co Derivado novedoso de triazina y composicion farmaceutica que comprende el mismo.
MY191934A (en) 2010-05-20 2022-07-19 Array Biopharma Inc Macrocyclic compounds as trk kinase inhibitors
KR101867110B1 (ko) 2010-08-10 2018-06-12 시오노기 앤드 컴파니, 리미티드 트라이아진 유도체 및 그것을 함유하는 진통 작용을 갖는 의약 조성물
CN103140221A (zh) 2010-08-10 2013-06-05 盐野义制药株式会社 新型杂环衍生物和含有其的药物组合物
EP2694486B1 (en) 2011-04-01 2018-01-10 University of Utah Research Foundation Substituted n-(3-(pyrimidin-4-yl)phenyl)acrylamide analogs as tyrosine receptor kinase btk inhibitors
PL2693881T3 (pl) 2011-04-01 2020-03-31 University Of Utah Research Foundation Podstawione analogi N-fenylopirymidyno-2-aminy jako inhibitory kinazy AXL
JP6124351B2 (ja) 2012-02-09 2017-05-10 塩野義製薬株式会社 複素環および炭素環誘導体
KR102194611B1 (ko) 2012-10-04 2020-12-23 유니버시티 오브 유타 리서치 파운데이션 티로신 수용체 키나아제 btk 억제제로서 치환된 n-(3-(피리미딘-4-일)페닐)아크릴아미드 유사체
CN104822663B (zh) 2012-10-04 2017-03-08 犹他大学研究基金会 作为酪氨酸受体激酶btk抑制剂的取代的n‑(3‑(嘧啶‑4‑基)苯基)丙烯酰胺类似物
EP2970205B1 (en) 2013-03-14 2019-05-08 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Jak2 and alk2 inhibitors and methods for their use
TWI637949B (zh) 2013-06-14 2018-10-11 塩野義製藥股份有限公司 胺基三衍生物及含有其等之醫藥組合物
CA2929188C (en) 2013-11-20 2022-08-09 Signalchem Lifesciences Corp. Quinazoline derivatives as tam family kinase inhibitors
CA2930324C (en) 2013-11-27 2022-01-18 Signalchem Lifesciences Corporation Aminopyridine derivatives as tam family kinase inhibitors
US9840503B2 (en) 2015-05-11 2017-12-12 Incyte Corporation Heterocyclic compounds and uses thereof
DK3322706T3 (da) 2015-07-16 2021-02-01 Array Biopharma Inc Substituerede pyrazolo[1,5-a]pyridin-forbindelser som ret-kinaseinhibitorer
US20170038387A1 (en) * 2015-08-04 2017-02-09 Celgene Corporation Methods for treating chronic lymphocytic leukemia and the use of biomarkers as a predictor of clinical sensitivity to immunomodulatory therapies
US9708333B2 (en) 2015-08-12 2017-07-18 Incyte Corporation Fused bicyclic 1,2,4-triazine compounds as TAM inhibitors
WO2017035366A1 (en) 2015-08-26 2017-03-02 Incyte Corporation Pyrrolopyrimidine derivatives as tam inhibitors
EP3421039B1 (en) 2016-02-26 2021-10-06 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Drug for cancer therapy characterized by administering combination between axl inhibitor and immune checkpoint inhibitor
CN114456176A (zh) 2016-03-28 2022-05-10 因赛特公司 作为tam抑制剂的吡咯并三嗪化合物
DK3481826T3 (da) * 2016-07-08 2022-01-10 Rigel Pharmaceuticals Inc Tyrosinkinaseinhibitorer
TWI704148B (zh) 2016-10-10 2020-09-11 美商亞雷生物製藥股份有限公司 作為ｒｅｔ激酶抑制劑之經取代吡唑并[1,5-a]吡啶化合物
JOP20190077A1 (ar) 2016-10-10 2019-04-09 Array Biopharma Inc مركبات بيرازولو [1، 5-a]بيريدين بها استبدال كمثبطات كيناز ret
WO2018136663A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Array Biopharma, Inc. Ret inhibitors
US11168090B2 (en) 2017-01-18 2021-11-09 Array Biopharma Inc. Substituted pyrazolo[1,5-a]pyrazines as RET kinase inhibitors
KR101794695B1 (ko) * 2017-02-15 2017-11-07 한국바이오팜 주식회사 항염 효과가 우수한 기능성 식품 조성물
JOP20190213A1 (ar) 2017-03-16 2019-09-16 Array Biopharma Inc مركبات حلقية ضخمة كمثبطات لكيناز ros1
US20200197385A1 (en) 2017-08-23 2020-06-25 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for cancer containing axl inhibitor as active ingredient
PE20210002A1 (es) 2017-09-27 2021-01-05 Incyte Corp Sales de derivados de pirrolotriazina utiles como inhibidores tam
TWI812649B (zh) 2017-10-10 2023-08-21 美商絡速藥業公司 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之調配物
TWI791053B (zh) 2017-10-10 2023-02-01 美商亞雷生物製藥股份有限公司 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之結晶形式及其醫藥組合物
WO2019074116A1 (ja) 2017-10-13 2019-04-18 小野薬品工業株式会社 Ａｘｌ阻害剤を有効成分として含む固形がん治療剤
WO2019120121A1 (zh) * 2017-12-21 2019-06-27 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 用于抑制激酶活性的二苯氨基嘧啶类化合物
EP3740486A1 (en) 2018-01-18 2020-11-25 Array Biopharma, Inc. Substituted pyrazolyl[4,3-c]pyridinecompounds as ret kinase inhibitors
JP7060694B2 (ja) 2018-01-18 2022-04-26 アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド Ｒｅｔキナーゼ阻害剤としての置換ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン化合物
JP7061195B2 (ja) 2018-01-18 2022-04-27 アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド ＲＥＴキナーゼ阻害剤としての置換ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン化合物
BR112020020246A8 (pt) * 2018-04-05 2022-10-18 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology Inc Inibidores de cinase axl e uso dos mesmos
WO2019232225A1 (en) * 2018-05-30 2019-12-05 Promega Corporation Broad-spectrum kinase binding agents
SG11202013163TA (en) 2018-06-29 2021-01-28 Incyte Corp Formulations of an axl/mer inhibitor
CN112512597A (zh) 2018-07-26 2021-03-16 大日本住友制药肿瘤公司 用于治疗与acvr1表达异常相关的疾病的方法以及用于此的acvr1抑制剂
ES2922314T3 (es) 2018-09-10 2022-09-13 Array Biopharma Inc Compuestos heterocíclicos condensados como inhibidores de cinasa RET
JP2022526713A (ja) 2019-03-21 2022-05-26 オンクセオ がんの処置のための、キナーゼ阻害剤と組み合わせたＤｂａｉｔ分子
JP2022539208A (ja) 2019-07-03 2022-09-07 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド チロシンキナーゼ非受容体１（ｔｎｋ１）阻害剤およびその使用
US20220380348A1 (en) * 2019-10-04 2022-12-01 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Axl inhibitor formulations
CN114761006A (zh) 2019-11-08 2022-07-15 Inserm(法国国家健康医学研究院) 对激酶抑制剂产生耐药性的癌症的治疗方法
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
CN113061117B (zh) * 2021-03-30 2023-02-10 长治学院 一种2-((5-氯-2-(4-吗啉甲基苯胺基)嘧啶-4-基)氨基)苯甲酰胺衍生物
TW202304908A (zh) * 2021-04-14 2023-02-01 日商衛材R&D企管股份有限公司 四氫吡啶并嘧啶化合物

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9523675D0 (en) 1995-11-20 1996-01-24 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9924862D0 (en) 1999-10-20 1999-12-22 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB0206215D0 (en) * 2002-03-15 2002-05-01 Novartis Ag Organic compounds
GB0305929D0 (en) * 2003-03-14 2003-04-23 Novartis Ag Organic compounds
EP1737843B1 (en) 2004-04-09 2011-02-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibitors of akt activity
NZ592990A (en) * 2005-11-01 2013-01-25 Targegen Inc Bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
US8133900B2 (en) * 2005-11-01 2012-03-13 Targegen, Inc. Use of bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
AU2006311910A1 (en) * 2005-11-03 2007-05-18 Irm Llc Protein kinase inhibitors
CA2640398A1 (en) * 2006-01-30 2007-08-09 Exelixis, Inc. 4-aryl-2-amino-pyrimidines or 4-aryl-2-aminoalkyl-pyrimidines as jak-2 modulators and pharmaceutical compositions containing them
AR065015A1 (es) * 2007-01-26 2009-05-13 Smithkline Beecham Corp Derivados de antranilamida, composiciones farmaceuticas que los contienen, y usos para el tratamiento del cancer
WO2008124085A2 (en) * 2007-04-03 2008-10-16 Exelixis, Inc. Methods of using combinations of mek and jak-2 inhibitors
ATE544761T1 (de) 2007-05-04 2012-02-15 Irm Llc Pyrimidinderivate und zusammensetzungen als c-kit-und pdgfr-kinasehemmer
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
PL2389372T3 (pl) * 2009-01-23 2016-02-29 Rigel Pharmaceuticals Inc Kompozycje i sposoby hamowania szlaku JAK
AU2010210986A1 (en) 2009-02-09 2011-08-25 Supergen, Inc. Pyrrolopyrimidinyl Axl kinase inhibitors
US7718662B1 (en) 2009-10-12 2010-05-18 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo-pyrimidine inhibitors of bruton's tyrosine kinase
EP2488503A1 (en) * 2009-10-12 2012-08-22 Myrexis, Inc. Amino - pyrimidine compounds as inhibitors of tbkl and/or ikk epsilon
WO2012135641A2 (en) * 2011-03-30 2012-10-04 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Aurora kinase inhibitors and methods of making and using thereof
PL2693881T3 (pl) 2011-04-01 2020-03-31 University Of Utah Research Foundation Podstawione analogi N-fenylopirymidyno-2-aminy jako inhibitory kinazy AXL
EP2694486B1 (en) 2011-04-01 2018-01-10 University of Utah Research Foundation Substituted n-(3-(pyrimidin-4-yl)phenyl)acrylamide analogs as tyrosine receptor kinase btk inhibitors

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WO2012135800A1 (en) 2012-10-04
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