TW200424193A - Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use - Google Patents

Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use Download PDF

Info

Publication number
TW200424193A
TW200424193A TW092135955A TW92135955A TW200424193A TW 200424193 A TW200424193 A TW 200424193A TW 092135955 A TW092135955 A TW 092135955A TW 92135955 A TW92135955 A TW 92135955A TW 200424193 A TW200424193 A TW 200424193A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
doc
compound
pharmaceutically acceptable
acid
mmol
Prior art date
Application number
TW092135955A
Other languages
English (en)
Inventor
Allen John Borchardt
Robert Steven Kania
Cynthia Louise Palmer
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of TW200424193A publication Critical patent/TW200424193A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/416—1,2-Diazoles condensed with carbocyclic ring systems, e.g. indazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/54—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D231/56—Benzopyrazoles; Hydrogenated benzopyrazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings

Description

200424193 玖、發明說明： 相關專利之交又參考資料 本申請案主張2002年12月19曰申請之美國臨時專利申請 案第60/434,902號之權利，該案之全文以引用的方式併入本 文中。 【發明所屬之技術領域】 本發明係針對調節及/或抑制眼科疾病及某些蛋白質激 酶活性之吲唑化合物，及針對含有此等化合物之醫藥組合 物。本發明亦針對此化合物及組合物之治療或預防用途， 及藉由給予有效量之此類化合物，治療眼科疾病及癌症以 及其他相關於多餘的血管新生及/或細胞增殖之疾病狀態 之方法。 【先前技術】 眼睛後段的數種疾病及症狀威脅視力。老年黃斑病變 (ARMD 或 AMD，Agerelated macular degeneration)、脈絡膜 新生血管（CNV，choroidal neovascularization)、視網膜病變 (如糖尿病視網膜病變、玻璃體視網膜病變、早產兒視網膜 病變）、視網膜炎（如巨細胞病毒性（CMV，cytomegalovirus) 視網膜炎）、葡萄膜炎、黃斑水腫（macular edema)及青光眼 為數個實例。 老年黃斑病變（ARMD 或 AMD, Agerelated macular degeneration)為老人失明的主因。ARMD攻擊視野中心並模 糊之，造成閱讀、開車及其他精細的任務困難或無法實行。 光是美國每年約有200,000個新ARMD病例發生。目前判斷 O:\90\90027.DOC -9- 200424193 顯示大約40%超過75歲，及大約20%超過60歲，遭受某種程 度之黃斑病變。「濕性」ARMD為ARMD之一類，最常造成 失明。於濕性ARMD中，新近形成的脈絡膜血管（脈絡膜新 生血管（CNV，choroidal neovascularization))滲漏體液及造 成逐漸損害視網膜。於ARMD中CNV之特別情況中，兩個 主要治療方法目前正在發展：（a)雷射光凝結術及（b)利用血 管新生抑制劑。 然而，雷射光凝結術可能有害於視網膜且當CNV位於視 網膜中央窩附近時無法進行。再者，雷射光凝結術常造成 隨時間再發生CNV。抗-血管新生化合物之口服也被測試為 ARMD的全身性的治療。然而，由於藥物專一的代謝限制， 全身性給予通常提供對眼睛劑量不足之藥物濃度。所以， 為了達到有效眼内藥物濃度，需要不能接受地高劑量或反 覆習見劑量。也已發展許多植入法以局部傳遞抗-血管新生 化合物至眼睛。此植入法之實例係揭示於頒予Wong之美國 專利編號5,824,072、頒予Gwon等人之5,476,511及頒予 Ashton等人之5,773，019，將其各案之全文為所有目的以引 用的方式併入本文中。 眼睛之新生血管性疾病 如上述，本發明也提供治療眼睛之新生血管性疾病之方 法，包括例如，角膜新生血管、新生血管性青光眼、增殖 期糖尿病視網膜病變、晶體後組織增生症（retrolental fibroblasia)及黃斑病變。 簡而言之，前段受傷產生的角膜新生血管為降低視力敏 O:\90\90027.DOC -10- 200424193 銳性及失明的重要及阳， ’、 及角膜移植排斥的主要風險因 素。如Burger等人於Lah Tn 、，Invest· 48:169-180，1983 所述（將 為所有目的m料方式併人本文中），角膜新生血 二二階段：預先血管潛藏期、活躍新生血管及血管成 '”、及復原$夕新生血官因子的確認及機制，包括發炎反 ，。的件如白血球、血小板、細胞激素及二十烷酸 (eico⑽。id)，或尚未確認的▲漿成分仍未揭露。 目前無臨床上免疫的療法存在以抑制角膜新生▲管或復 原存在的角膜新血管。局部皮質類固醇nieGst⑽id)似乎 有一些臨床效用，推測藉由限制基質發炎。 因此^於本發明之—個觀點内提供—方法以治療眼睛的 :生血管性疾病如角膜新生血管(包括角膜移植新生血 管）’包含步驟有給予患者治療有效量之抗血管新生組合物 (如上述）至角膜，以便抑制血管的形成。簡而言之，角膜為 正常缺少血管的組織。然而於某些病理症狀中，微血管可 能由角膜緣（limbus)的角膜邊緣血管叢延伸入角膜。當角膜 變成血管增生化，其也變成混濁，造成患者視力敏銳性降 低。若角膜完全不透明，可變成完全失去視力。 血管可以許多模式及深度進入角膜，視激起新生血管的 過程而定。此等模式傳統上由眼科醫師定義為下列類型： 粒性血管翳（pannus trachomatosns)、痳瘋血管翳（pannus leprosus)、pannus phylctenulosus、變性血管翳（pannus degenerativus)及青光眼血管翳。角膜基質也可受前纖毛動 脈的分支侵入（稱為裂縫血管增生）其造成數種不同臨床損 O:\90\90027.DOC -11 - 200424193 害·終點核線、「刷狀」模式、繳狀花序形式、晶格形式、 裂縫長廊（來自外鞏膜血管）及畸變不規則血管。 許多不同失調可造成角膜的新生血管，包括例如角膜感 染（如砂眼、單純皰療性角膜炎（herpes simplex keratitis)、 黑熱病（leishmaniasis)及蟠尾絲蟲症（〇nch〇cerciasis))、免疫 過程（如移植排斥及史蒂芬氏強生徵候群 (Stevens-J〇hnson，s syndr〇me))、驗燒傷、外傷、（任何原因 之)發炎、中毒及營養缺乏狀態、及為配戴隱形眼鏡的併發 症0 雖然角膜的新生血管之原因可能不同，無論原因為何， 角膜對受損及隨後血管向内成長的反應類似。簡而言之， 受傷的位置看起來有其重要性，因僅有位於角膜緣⑽㈣ 的臨界距離内的彼等損害會激起企管新生反應。此可能是 由於負責引發血管入侵的血管新生因子係於損害位置產 生’且必賴散至最接近血f位置（角輯）以便發揮盆效果 之事實。由角膜緣通過某段距離，此將不再可能且將不引 發角膜緣内皮生長人角質。數種血管新生因子可能涉及此 過程’其中許多為發炎反應的產物。確實，角膜的新生血 官看起來僅發生於關聯發炎細胞滲透，且血管新生的程产 正比於發炎反應的程度。藉由放鬆角膜基質的骨架及提； 微血管可生長通過的「最少阻力」通路，角膜水腫二 促進血管向内成長。 ^ 開始的發炎反應後， 發生於其他組織的方式 微血管生長入角質持續進行如同其 。角臈緣微血管及小靜脈的正常不
O:\90\90027.DOC -12- 200424193 活動内皮細胞受刺激而***及遷移。内皮細胞自其起源血 官伸開，消化其將走過的周圍基膜（basement 狀)及 組織，及朝向血管新生刺激的源頭移動。封閉端新枝形成 内腔及而後吻合在—起而形成微血管環。最後結果為在角 膜水腫内建立血管叢。 本發明之抗血管新生因子及組合物藉由阻斷血管新生促 進劑的刺激效果，降低内皮細胞***、減少内皮細胞移動， 及削弱由内皮分泌的蛋白質水解酵素活性而有用。 【發明内容】 於本發明的特別較佳具體實施例中，可製備-種抗血管 新生因子以於鹽水中（與—般使用於眼科藥劑中的任何防 腐誠抗菌劑組合）局部給予，及以眼藥水形式給予。可將 =血官斯生因子溶液或懸浮液以其純式製備並每曰給予數 或者也可將如上述製備的抗血管新生組合物直接施 予至角膜。 於較佳具體實施例中，蔣故 寻抗血g新生組合物與結合至角 膜的黏膜黏著聚合物一耜制供认、> ^ 起衣備。於進一步具體實施例中， 可利用抗血管新生因子竣抬岛其 次抗血g新生組合物為習見類固醇 療法的附屬物。 /部療法也可能預防上有用於已知具有高可能性引發血 官新生反應之角膜損害（如化學燒傷）。於此等實例中，可將 治療（可能與類固醇組合）立g垂 )即μ苑以幫助避免隨後的併發 症0 於其他具體實施例中 可將上述抗血管新生組合物由眼
O:\90\90027.DOC -13- 200424193 =師㈣微鏡引導下直接注射人角膜水腫。注射的較佳 可此隨個別損害的形態而不同，但給予的目的應為放 置組合物於血管的#隹二 ^ 吕的推進别沿（即散佈於血管及正常角膜之 :)。於大部分情況中，此會包含外角膜緣角膜注射以「、保 4」角臈免於推進的血管。也可將此方法在角膜受損後立 刻使用以便預防上避免角膜新生血管。於此情況中，可將 材料注射於散佈於角膜損害及其不希望而可能的角膜緣血 液供應之間的外角膜緣角膜中。也可將此方法以類似的方 式運用以避免移植的角膜之微血管侵入。以緩釋形式，每 年僅需要注射2_3次。也可將類固醇加至注射溶液以降低由 注射本身造成的發炎。 於本發明的另一觀點中’提供治療新生血管性青光眼的 方法包含給予患者治療有效量之抗血管新生組合物至眼 睛的步驟，使得抑制血管的形成。 簡而言之，新生血管性青光眼為—種病理症狀其中新微 血管發展於眼睛的虹膜中。血管新生通常起源於位於瞳孔 邊緣的血管，並前進通過虹膜根及進入小梁組織網 ⑽beCular meshwork)。纖維組織母細胞及其他結締組織元 件與微血管生長有關且纖維血管膜發展，其散佈遍及虹膜 的W表面。最後此組織到達前房角（anteri〇r chamber angle)，於此其形成黏連（synechiae)。此等黏連之後癒合、 結疤及收縮至最終關閉前房角。疤痕形成避免足量排放水 樣液通過前房角及進入小梁組織網，造成增加眼内壓力， 其可能造成失明。 O:\90\90027.DOC -14- 200424193 新生血官性青光眼一般發生為疾病的併發症，其中視網 膜局部缺血為主要。特別是，具有此症狀的患者之三分之 —有糖尿病視網膜病變及28%具有中心視網膜靜脈阻塞。 其他原因包括慢性視辦膜剝離、末期青光眼、頸動脈阻塞 =病、晶狀體後纖維增生症（retr〇〗ental fibr〇plasia)、鐮刀 '求貝血（sick〗e_celianemia)、眼内腫瘤及頸動脈海綿竇 瘺管（C咖idea稽職s flstulas)。於其早期，藉由高倍數裂 隙燈顯微鏡可診斷新生血管性青光眼，於此顯示小的、擴 f的、混IL的微血管（其滲漏螢光黃）於虹膜的表面上。之後 前房角鏡(g〇ni〇scopy)由纖維血管條紋證實前房角的漸進 閉塞一雖然刖房角仍為開放，保守療法可能有幫助。然而， 一旦前房角關閉，需要手術介人以便減輕麼力。 斤、.於本毛明的一個具體實施例令，可將抗血管新生 因子（單獨或於抗血管新 &新生組合物中，如上述）局部給予至眼 3月以便治療新生血管性青光眼的早期形式。 其他具體實施例中’可將抗血管新生組合物 精由注射組合物進入前廣备 ⑼域内而植入。此提供抗血 二新：因子之持續局部增加’及避免血管生長進入此區 前二=射抗血f新生組合物於虹臈推進的㈣及 不於二血其保衛」開放的前房角免於新生企管。因微 角^力^官新生組合物的有效半後内生長，可將前房 角的效力、准持。於其他呈臀每 么人w W ^例中，也可將抗血管新生 何位置使得將抗…生因子持續釋放入水 樣液中。此會増加抗血管新生因子濃度於水樣液中，其隨
O:\90\90027.DOC -15- 200424193 因而提供另一機制藉 防上有用及與現存治 後浸浴虹膜表面及其不正常微血管， 此傳遞藥劑。此等治療形式也可為預 療組合。 π % 7直朋糖尿病視網膜 的！法，包含給予患者治療有效量之抗血管新生組合 物至眼知的步驟，使得抑制血管的形成。 間而吕之…般認為糖尿病視網膜病變的病理學類似於 上述新生血管性青光眼。特別 亏〜疋一般相信背景型糖尿病 性視網膜病變於視網膜缺氧的影響下轉變成增殖期糖尿病 視網膜病變。-般而言，新生灰管組織自視神經（通常於邊 緣10毫米内），及自組織灌注不良的區域中的視網膜表面長 出。一開始，微血管於視網膜的内限制膜及玻璃體的後表 面之間.生長。最後，血管生長進入玻璃體及通過内限制膜。 當玻璃體收縮，牵引力施加至企管，常造成血管的切斷及 由於出也而遮住玻璃體。由視網膜中結症的纖維牽引也可 能產生視網膜剝離。 習見療法之選擇為泛視網膜雷射光凝結（Panretinal Ph〇toc〇agUiatiGn)以減少視網膜組織，&因而減少視網膜氧 氣需求。耗-開始有效，有高復發㈣新損害形成於視 網膜的其他部分。此療法的併發症包括患者高達鳩周圍 視力減少、角膜的機械磨損、雷射引發的白内障形成、急 性青光眼、及刺激視網膜下新生血管的生長（其可造成失去 視力）。結果，此程序僅於數種風險因子存在且風險-效益比 例清楚地偏向介入時才進行。
O:\90\90027.DOC -16- 200424193 所以，於本發明的特別較佳具體實施例内，藉由注射抗 血管新生因子（或抗血管新生組合物）進入水樣液或玻^ 體，以便增加抗A管新生因子於視網膜中的局部濃度，可 治療增殖期糖尿病視網膜病變。較佳的是’於得到嚴重疾 病需要雷射光凝結之前應開始此治療。於 體實施财，可將供給新生血管損害的動脈栓塞（利用= 管新生組合物，如上述）。 於本么明的另一觀點中，提供治療晶體後組織增生症的 ^法，包含給予患者治療有效量之抗血管新生因子（或抗血 官新生組合物）至眼睛的步驟，使得抑制血管的形成。 間而言之’晶體後組織增生症為發生於接受氧氣療法的 早產兒中的症狀。周圍視網膜血管，特別是於顯側扣卿⑽^ s*) 直到胎兒期末期才變成完全形成。過量氧氣（即使為 $生時的生理性濃度）及氧自由基的形成被認為是重要的 猎=引起對不成熟視網膜的血管損害。此等血管壓縮，而 L交成、"構上'肖失於氧氣暴露。結果，周圍視網膜無法血 官化及視網膜局部缺血因而產生。回應於局部缺A，引發 新生血官於正常及局部缺血的視網膜接合點。 士；山/〇案例中血官自動復原。然而，於剩餘中，有持 二的微血官生長’ I縮纖維血管成分，及牵引血管及視網 膜者此造成玻璃體出血及/或視網膜剝離，其可導致失 明。新生血管角關閉青光眼也為此症狀的併發症。 因f吊無法決定何種情況將自動解決及何者將發展成嚴 重’習見治療（即手術）一般僅開始於具有已確立的疾病及已
O:\90\90027.DOC -17- 200424193 充分發展的病理之患者。此「等著瞧」方式排除早期介入， 及允許產生複雜進程的25%者疾病之發展。所以，於本發 明的一個具體實施例内，可將局部給予抗血管新生因子 抗血管新生組合物，如上述）完成於有發展此症狀高風險之 胎兒中，嘗試減少晶體後組織增生症發展的發生率。於其 他具體實施例中，可利用玻璃體内注射及/或眼内植入抗血 管新生組合物。在已確立疾病的情況中，此方法為特別較 佳，以便減少手術的必要。 蛋白質激酶 蛋白質激酶為一類酵素，其催化蛋白質中特定酪胺酸、 絲胺酸或酥胺酸基團的羥基之磷酸化。典型上，此磷酸化 大幅擾亂蛋白質的功能，及因此蛋白質激酶重要於調控許 多細胞.過程，包括新陳代謝、細胞增殖、細胞分化及細胞 存活。在已知需要蛋白質激酶活性的許多不同細胞功能 中，一些過程代表對某些疾病狀態的治療介入之引人目 標。兩個實例為血管新生及細胞週期控制，其中蛋白質激 酶扮决重要角色；此等過程對實體腫瘤的生長以及對其他 疾病為必要。 血管新生為藉此將新微血管由現存血管形成的機制。當 必颈日寸，血官系統有潛力產生新微血管網路以便保持組織 及器官的適當功能。然而於成人，血管新生頗為有限，僅 發生於傷口癒合的過程及月經期間子宮内膜的新生血管。 見Merenimes等人，Cell Gr〇wth &叫浪咖加⑽，&弘⑺ (1997) ’將其全文為所有目的以引用的方式併人本文中。另
O:\90\90027.DOC -18- 200424193 一方面，無用的血管新生為數種疾病的特徵，如視網膜病 變、牛皮癬、類風濕性關節炎、老年黃斑病變（AMD, age-related macular degeneration)及癌症（實體腫瘤）。 Folkman，Nature Med·，1，27-31 (1995)，將其全文為所有目 的以引用的方式併入本文中。已證實包含於血管新生過程 中的蛋白質激酶包括生長因子受體酪胺酸激酶家族之三成 員：血管内皮細胞生長因子受體2 (VEGF-R2，vascular endothelial growth factor receptor 2，也稱為激酶***區塊 受體（KDR，kinase insert domain receptor)及為 FLK-1);纖維 組織母細胞生長因子受體（FGF-R，fibroblast growth factor receptor);及 TEK (也稱為 Tie_2)。 VEGF_R2，僅表現於内皮細胞，結合有效的血管新生生 長因子iVEGF及經由活化其細胞内激酶活性調節隨後的訊 號傳導。因此，預期直接抑制VEGF-R2的激酶活性將造成 降低血管新生，即使存在有外生的VEGF (見Strawn等人， Cancer Research, 56，3540-3545(1996))，如已以VEGF-R2 之突變體證實其無法調節訊號傳導。Millauer等人，Cancer Research，56, 1615-1620 (1996)。再者，於成人中，VEGF-R2 看來除了調節VEGF的血管新生活性外不具有功能。所以， VEGF-R2激酶活性之選擇性抑制劑預期呈現極少毒性。 類似地，FGF-R結合血管新生生長因子aFGF及bFGF及調 節隨後的訊號傳導。最近，已建議生長因子如bFGF可能於 引發已達到某種大小之實體腫瘤中的血管新生扮演關鍵角 色。Yoshiji等人，Cancer Research，57, 3924-3928 (1997)。 O:\90\90027.DOC -19- 200424193 然而，不像VEGF-R2，FGF-R係表現於遍及全身許多不同 細胞類型中及可能或可能不扮演重要角色於成人其他正常 生理過程中。但是，已報導全身給予FGF-R激酶活性之小 分子抑制劑阻止小老鼠中bFGF引發的血管新生而無明顯 毒性。Mohammad 等人，EMBO Journal, 17, 5996-5904 (1998)。 TEK (也稱為Tie-2)為另一僅表現於内皮細胞之受體酪胺 酸激酶，其已證實於血管新生中扮演某角色。因子血管生 成素（angiopoietin)-1的結合造成TEK的激酶區塊之自我磷 酸化及造成一訊號傳導過程，其看起來為調節内皮細胞與 内皮周圍支持細胞的交互作用，因而促進新形成的金管之 成熟。另一方面，因子血管生成素-2看起來對抗血管生成 素_1的·作用於TEK及中斷血管新生。Maisonpierre等人， Science，277, 55-60 (1997)。 上述發展的結果，已提出藉由利用抑制VEGF-R2、FGF-R 及/或TEK的激酶活性之化合物來治療血管新生。例如， WIPO世界專利WO 97/34876揭示某些肉啉（cinnoline)衍生 物為VEGF-R2的抑制劑，其可用於治療關於不正常血管新 生及/或增加的血管滲透性的疾病狀態如癌症、糖尿病、牛 皮癬、類風濕性關節炎、卡波西氏腫瘤（Kaposi、sarcoma)、 血管瘤（haemangioma)、急性及慢性腎病、粥狀動脈硬化 (atheroma)、動脈再狹窄作用（arterial restinosis)、自體免 疫疾病、急性發炎及具有視網膜血管增殖的眼疾。 石粦解酶激酶活化肝糖石粦解酶（glycogen phosphorylase)，因 O:\90\90027.DOC -20- 200424193 此增加肝糖分解及肝臟的葡萄糖釋放。於第2型糖尿病中肝 臟的葡萄糖製造為無調控，且為空腹血糖過高症 (hyperglycemia)的主要原因，其造成許多續發性併發症 (secondary complication)影響此等患者。因此，降低自肝臟 釋放葡萄糖會降低升高的血糖濃度。所以磷解酶激酶的抑 制劑應降低磷解酶活性及肝糖分解作用（glyc〇gen〇lysis)， 因而降低患者的血糖過高症。 對VEGF的另一生理反應為增加血管的通透性，其已被提 出於血管新生早期中扮演某角色。於局部缺血組織中，如 發生於中風受害者的腦中，缺氧引發VEGF表現，導致增加 血管的通透性及最後於周圍組織中水腫。於大白鼠中風模 型中，由 van Bmggen等人，j· Clinical Invest·，1〇4, 1613_2〇 (1999)已證實給予VEGF的單株抗體降低梗塞體積。因此， 預期VEGFR的抑制劑有用於治療中風。 除了於血管新生中的角色，蛋白質激酶也扮演重要角色 於細胞週期控制。未受控制的細胞增殖為癌症的特性。細 胞增殖回應於許多刺激由細胞***週期的解除管制顯示， 由此過程細胞繁殖及***。腫瘤細胞典型具有直接或間接 調控前進通過細胞***循環的基因損害。 週期素依賴性激酶（CDK，cyclin_dependent kinase)為絲 胺酸-蘇胺酸蛋白質激酶，其於調控細胞週期不同階段之間 的過渡扮演關鍵角色。見，如依照Science，274，1643_ 1077 (1996)中的文章。CDK複合物係經由結合調控週期素次單元 (如週期素A、B1、B2、D1 ' D2、D3及E)及催化激酶次單 O:\90\90027.DOC -21 - 200424193 元（如 cdc2 (CDKl)、CDK2、CDK4、CDK5及 CDK6)而形成。 如名稱暗示，CDK呈現絕對依賴於週期素次單元以便磷酸 化其目標受質’且不同激酶/週期素配對作用以調控前進通 過細胞週期特定階段。 其為CDK4與D週期素複合扮演關鍵角色於自休息或靜止 階段至細胞變成處於細胞***階段中起始細胞***週期。 # 此前進經過許多生長調控機制，正向或負向兩者皆有。於 此控制系統中的異常，特別是影響CDK4的功能，已牽連於 _ 細胞的進展至惡性腫瘤之高度增殖狀態特性，特別是遺傳 _ 性黑色素瘤、食道癌及胰臟癌。見，如Kamb，Trends in Genetics，11，136-140 (1995) ; Kamb等人，Science, 264， 436-440 (1994) ° 無數.文獻說明許多化學化合物有用於針對許多治療目 標。例如，WIPO世界專利WO 99/23077及WO 99/23076說 明含吲唑（indazole)化合物具有第IV型磷雙酯水解酶抑制 活性，由σ引唾_為-鄰苯二紛（catechol)生物等排列體 Μ (bioisostere)置換產生。美國專利編號5,760,028揭示包含 3-[1-[3-(咪唑啉-2_基胺基）丙基]吲唑-5-基羰基胺基]-2-(苄 氧基羰基胺基）丙酸的雜環物，其有用為c^v/53整合素 (integrin)及相關細胞表面黏著蛋白質受體的拮抗劑。WIPO 世界專利WO 98/09961揭示某些吲唑衍生物及其使用作為 第IV型磷雙酯水解酶（PDE，phosphodiesterase)或產生腫瘤 壞死因子（TNF，tumor necrosis factor)的抑制劑於哺乳類 中。最近增加至已知化合物之虛擬資料庫包括說明為抑制 O:\90\90027.DOC -22- 200424193 CDK之抗增殖治療劑者。例如，xiong等人的美國專利編號 5,621，082揭示核酸編碼〔1)1^6之抑制劑及歐洲專利公告編 號0 666 270 A2說明胜肽及胜肽模擬物作用為CDKl及 0〇反2的抑制劑。1\¥1?〇世界專利界〇97/16447揭示某些色嗣 的類似物，其為週期素依賴性激酶的抑制劑’特別是CDK/ 週期素複合物如CDK4/週期素D1，其可用於抑制過量或不 正常細胞增殖，及所以可用於治療癌症。WIP0世界專利 WO 99/21845說明4-胺基噻唑衍生物，其有用於作為CDK抑 制劑。將上列各專利及/或文獻之全文為所有目的以引用的 方式併入本文中。 然而，仍有需要小分子化合物，其可輕易地合成及有效 抑制一或多種CDK或CDK/週期素複合物。因為CDK4可擔 任大部.分細胞中細胞***的通用活化劑，且CDK4及D型週 期素的複合物控制細胞週期的早期Gi階段，有需要 CDK4(及其D型週期素的複合物）的有效抑制劑以治療一或 多種腫瘤。同樣地，週期素E/CDK2及週期素B/CDK1激酶 分別於G1 /S階段及G2/M過渡之重要角色提供治療介入的其 他目標以抑止癌症中無調控的細胞週期進行。 另一蛋白質激酶CHK1於細胞週期進行中擔任為檢查點 的重要角色。檢查點為藉由影響週期素依賴性激酶之形 成、活化及隨後去活化而協調細胞週期前進的控制系統。 檢查點避免細胞週期進行於不適當時間，當將細胞遏止時 維持細胞的代謝平衡，及於一些情況中當檢查點的要求不 符合時可引發細胞凋零（計晝性細胞死亡）。見，如O’Connor， O:\90\90027.DOC -23- 200424193
Cancer Surveys，29，151-182 (1997) ; Nurse，Cell，91， 865-867 (1997) ; Hartwell等人，Science，266，1821-1828 (1994) ; Hartwell等人，Science，246，629-634 (1989) o 一系列檢查點監測基因組的完整性及，當偵測到DNA損 害，此等「DNA損壞檢查點」阻擋細胞週期於階段 的進行，及減慢通過S階段的進行。O’Connor, Cancer Surveys，29，151-182 (1997) ; Hartwell等人，Science，266, 1821-1828 (1994)。此動作使得DNA修復過程得以在基因組 複製前及隨後分開此基因材料進入新的子細胞發生前完成 其任務。重要的是，人類癌症中最常見突變的基因p53腫瘤 抑制基因產生一 DNA損壞檢查點蛋白質，其在DNA損壞後 阻擋細胞週期進行於Gi階段及/或引發細胞凋零（計畫性細 胞死亡·）。Hartwell等人，Science，266, 1821-1828 (1994)。 p53腫瘤抑制劑也已證實強化細胞週期的G2階段中DNA損 壞檢查點的作用。見，如Bunz等人，Science，28, 1497-1501 (1998) ; Winters 等人，Oncogene, 17，673-684 (1998); Thompson，Oncogene，15，3025-3035 (1997) 〇 已知p53腫瘤抑制劑途徑於人類癌症中的重要性，已積極 地搜尋利用於p53缺陷癌症中弱點的治療介入。一個新興弱 點在p5 3缺陷癌症細胞中G2檢查點的操作。癌症細胞因為缺 乏Gi檢查點控制，特別易受傷於消除最後剩餘屏障保護其 不受DNA-損害藥劑之殺死癌症效果：G2檢查點。G2檢查點 受由酵母菌至人類皆守恒的控制系統調控。於此守恒系統 中的重點為激酶CHK1，其傳導來自DNA損壞感受複合物的 O:\90\90027.DOC -24- 200424193 訊號以抑制活化週期素B/Cdc2激酶，其促進有絲***進 入。見，如 Peng 等人，Science, 277，1501-1505 (1997); Sanchez等人，Science，277, 1497-1501 (1997)。已證實 CHK1 的去活化取消由抗癌藥物給予的DNA損壞或内生性DNA損 壞而引發的G2遏止，以及造成優先殺死形成檢查點缺陷的 細胞。見，如Nurse, Cell，91，865-867 (1997) ; Weinert， Science，277, 1450-1451 (1997); Walworth等人，Nature，363, 368-371 (1993);及 Al-Khodairy 等人，Molec. Biol· Cell，5, 147-160 (1994)。 選擇性操縱檢查點控制癌症細胞中可提供廣泛運用於癌 症化學治療及放射線療法，此外可能提供人類癌症「基因 不穩定性」之共同標誌以開發成為毀滅癌症細胞的選擇基 礎。許多因子將CHK1作為DNA損壞檢查點控制中的重要目 標。此抑制劑之說明及功能上相關的激酶如Cdsl/CHK2為 最近發現與CHK1合作調控S階段進行的激酶（見Zeng等 人，Nature，395，507-510 (1998) ; Matsuoka，Science，282, 1893-1897 (1998))可提供珍貴新的治療本質以治療癌症。 整合素受體結合至ECM起始由黏附斑激酶（FAK，Focal adhesion kinase)調控的細胞内訊號，其有關於細胞能動 性、細胞增殖及存活。於人類癌症中，FAK過度表現透過 其於經整合素調控的訊號途徑的角色顯示於瘤化 (tumorigenesis)及轉移可能性。 酪胺酸激酶可為受體類型（具有細胞外、細胞膜間及細胞 内區塊）或非受體類型（為完全細胞内）。吾人相信至少一種 O:\90\9OO27.DOC -25- 200424193 非受體蛋白質酪胺酸激酶（即LCK)調節T細胞傳導來自細胞 表面蛋白質（Cd4)與交聯的抗_Cd4抗體交互作用的訊息。非 受體酪胺酸激酶的更詳細討論係提供於Bolen，Oncogene， 8, 2025-2031 (1993)，將其全文為所有目的以引用的方式併 入本文中。 除了上述確認的蛋白質激酶，許多其他蛋白質激酶也被 ， 視為治療目標，且許多文獻揭示激酶活性的抑制劑，如檢 閱於下列中··美國專利編號6,534,524 (發行於2003年3月18 φ 曰）、美國專利編號65531，491(發行於2003年3月11日）、？0：丁 , 世界專利WO 00/38665 (2001年7月6日公告）、PCT世界專利 WO 97/49688 (1997年12月31日公告）、PCT世界專利WO 98/23613 (1998年6月4日公告）、美國專利編號6,071，935(發 行於2000年6月6日）、PCT世界專利WO 96/30347 (1996年10 月3日公告）、PCT世界專利WO 96/40142 (1996年12月19曰 公告）、PCT世界專利WO 97/13771 (1997年4月17日公告）、 PCT世界專利WO 95/23141 (1995年8月31日公告）、PCT世界 < 專利WO 03/006059 (2003年1月23曰公告）、PCT世界專利 WO 03/035047 (2003年5月1日公告）、PCT世界專利WO 02/064170 (2002年8月22曰公告）、PCT世界專利WO 02/41882 (2002年 5月 30 日公告）、PCT世界專利 WO 02/30453 (2002年4月18日公告）、PCT世界專利WO 01/85796 (2001年 11月15日公告）、PCT世界專利WO 01/74360 (2001年10月11 曰公告）、PCT世界專利WO 01/74296 (2001年10月11日公 告）、PCT世界專利WO 01/70268 (2001年9月27日公告）、歐 O:\90N90027.DOC -26- 200424193 洲專魏娜705 (2001年3月28日公告）及町世界專利 W〇 98/51344 (1998年11们9日公告）。前述專利及申請宰之 各全文為所有目的以引用的方式併入本文中。 '、 然而仍有需要蛋白質激醢的 、文駟的有效抑制劑。再者，如孰籴 本技藝者所知，希望激酶抑制劑具有對目標激酶高親= 以及同時對其他蛋白質激酶具有高選擇性。 劑口此如’：:明：一個目的為發現治療眼科疾病的有效藥 年汽斑病變（armd， agerelated邮㈤虹
Ch〇r〇ldal . 產=:病視網膜病變、破璃體視網膜病變、早 產兒視網膜病變)、視網膜炎(如巨細胞病毒性(CMV cytomegalovlrus)視網膜炎 ， Μ叫及青光眼 葡_火、黃斑水―ar 之另-目的為發現蛋白質激酶之有效抑制劑。 ^明之另-目㈣發現具有強及性親 或夕個特定激酶之有效_抑制劑。 ^ 由下列說明將更為明白，本發明之此等 =二之Γ化合物、醫藥上可接受的先驅藥物π 有活性的代謝物及其醫藥上可接-糸 .鳴、代謝物及鹽類統稱為、二^ 調節及/或抑制蛋白質激酶活性。二^ 有用於治療、經激酶活性調節的 h❺西樂組合物 於無用的血管新生及如癌症’以及其他關 視網膜病變、新生血管性=;的±疾病狀態’如如糖尿病 月先眼、類風濕性關節炎及牛皮
O:\90\90027.DOC -27- 200424193 癣。再者，此藥劑具有優勢性質關於調控及/或抑制伴隨 VEGF-R、FGF_R、CDK複合物、CHK1、LCK、TEK、FAK 及/或磷解酶激酶的激酶活性。 於一般觀點中，本發明係關於具有下列結構之化合物：
O:\90\90027.DOC -28- 200424193
O:\90\90027.DOC -29- 200424193
CH,
O:\90\90027.DOC -30-
200424193 本發明亦關於調控及/或抑制VEGF-R、FGF-R、CDK複合 物、CHK1、LCK、TEK、FAK及/或磷解酶激酶的激酶活性 之方法，藉由給予式I、II、III或IV之化合物或醫藥上可接 O:\90\90027.DOC -31- 200424193 受的先驅藥物、醫藥上有活性的代謝物或其醫藥上可接受 的鹽類。本發明較佳的化合物具有選擇性激酶活性，即其 對一或多種特定激酶具有明顯活性同時對一或多種不同激 酶具有較少或極低活性。於本發明的一個較佳具體實施例 中，本發明之化合物為式I之化合物，其具有實質上對VEGF 受體酪胺酸激酶比對FGF-R1受體赂胺酸激酶較高效力。本 發明也針對調控VEGF受體酪胺酸激酶活性而無明顯調控 FGF受體酪胺酸激酶活性之方法。 可將本發明化合物有利地與其他已知治療藥劑組合使 用。例如，可將具有抗血管新生活性之式I、II、III或IV化 合物與細胞毒素化學治療藥劑一起給予，如紫杉醇 (taxol)、姓癌易（taxotere)、長春驗（vinblastine)、順始 (cis_platin)、阿黴素（doxorubicin)、阿黴素（adriamycin)等， 以產生強化的抗腫瘤效果。藉由共同給予具有抗血管新生 活性之式I、II、III或IV化合物與其他抗血管新生藥劑，如 康貝泰斯坦丁（combretastatin)A_4、内抑素（endostatin)、普 利諾麥斯特（prinomastat)、希樂葆（celecoxib)、羅菲可西保 (rofocoxib)、EMD121974 ' IM862、抗-VEGF單株抗體及抗 KDR單株抗體，可得到加成或協同增強治療效果。其他組 合舉例於W0 0038716、W0 00387171、WO 0038715、W0 0038730、WO 0038718、W0 0038665、W0 0037107、W0 0038786、WO 003 8719，所有皆同時於1999年12月22日申 請，將其各全文為所有目的以引用的方式併入本文中。
本發明亦關於醫藥組合物，各包含有效量之藥劑選自式I O:\90\90027.DOC -32- 200424193 化：：及其醫藥上可接受的鹽類、醫藥上有活性的代謝物 及酉某上可接又的先驅藥物；及為此藥劑醫藥上可接受的 載體或媒介。本發明更提供治療眼科疾病/症狀及癌症：及 其他關於無用的血管新生及/或細胞_殖的疾病狀態之方 法，包含給予需要此治療之病患有效量之此藥劑。 本發明之式及魔合物有用於治療眼科疾病及 調：蛋白質激酶活性。更明確而t，化合物有用於作為抗 血官新生劑及作為調控及/或抑制蛋白質激酶活性之藥 劑’因此提供治療眼科疾病及癌症或其他關於由蛋白質激 酶調節的細胞增殖之疾病。 本文中使用的用詞「烷基」意指具有一至十二個碳原子 之直-及支-鏈烷基基團。模範烷基基團包括甲基（Me)、乙基 (Et)、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、二級丁基、三級丁 基（t-Bu)、戊基、異戊基、三級戊基、己基、異己基等。用 詞「低烷基」表明具有1至8個碳原子之烷基（(：：1 烷基適 當經取代的烷基包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2_氣 乙基、3-氟丙基、羥甲基、2-羥乙基、3_羥丙基等。 用詞「伸烷基」意指具有一至十二個碳原子之二價基。 舉例的伸烧基基團包括CH2、CHCH3、（ch3)2等。 用詞「烯基」意指具有二至十二個碳原子之直-及支_鏈 稀基基團。舉例的烯基基團包括丙-2-烯基、丁 -2_稀基、丁 -3-烯基、2-甲基丙-2-烯基、己-2-烯基等。 用詞「炔基」意指具有二至十二個碳原子之直-及支_鏈 炔基基團。 O:\90\90027.DOC -33- 200424193 用闲「我基」意指具有三至十二個碳原子之飽和或部 分不飽和碳環，包括二環及三環妓基結構。適當的環燒 基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基等。-「雜環烷基」基團用來意指含有碳原子的飽和或部分不 飽和單環基團，較佳4或5環碳科，及至少—個雜原子選 自氮、氧及硫。 用㈣「芳基」及「雜芳基」意指單環及多環不飽和或芳 族環狀結構，其中「芳基」意指為碳環者而「雜芳基」意 指為雜環者。芳族環狀結構之實例包括苯基、萘基、 四氫萘基、呋嘀基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡唑基、 咪唑基、啦嗪基、噠嗪基、^，^三嗪基、丨，2，‘噁二唑基、 1，3,4-噁二唑基、i-H-四唑_5_基、吲哚基、喹啉基、苯并呋 喃基、.苯并硫苯基（噻萘基）等。可將此部分視情況以稠環 (fused-ring)結構或橋接取代，例如〇ch2-〇。 用詞「烧氧基」用來意指基團-〇-烧基。舉例的實例包括 曱氧基、乙氧基、丙氧基等。 用詞「芳氧基」代表-0-芳基，其中芳基定義於上。 用詞「環烷氧基」代表環烷基，其中環烷基定義於上。 用詞「鹵素」代表氯、氟、溴或碘。用詞「鹵化」代表 氣化、氟化、溴化或碟化。 一般而言，可將式中可變物之不同部分或官能基視情況 以一或多種適當取代基取代。模範取代基包括鹵素（F、C1、 Br 或 I)、低烷基、-oh、-n〇2、-CN、-C02H、_0-低烷基、 -芳基、-芳基-低烷基、-C〇2CH3、_CONH2、·ΟΟΗ2ί：ΟΝΗ2、 O:\90\90027.DOC -34- 200424193 -NH2、-S〇2t^h2、_ 燒基（如 -〇CF3、-〇CH ㈣。 cha)、^ 炫基（如 以開放、非限制性意義❹用詞「包含」及「 已知雖然式I化合物可能顯 匕」 * ^ , m . 文，、構的現象，於本說明 曰内式圖表現上僅騎其中―種可能的互變異構形式 以應瞭解於本發明内式用來代表描繪的化合物之任何互變 異構形式並不僅限於由式圖描繪的特定互變異構形式。 ::本發明化合物可能存在為單—立體異構體(即基本 "象：：：體異構體)、外消旋體及/或鏡像異構物及/或非 鏡像異構物之處合物。所有如此之單一立體異構體、外消 旋體及其混合物用於本發明範圍内。較佳的是，將有光學 活f生的本發明化合物以純的光學形式使用。 如熟.悉本技藝者-般瞭解’具有_個不對稱中心的光學 2純化合物為基本上由兩個可能鏡像異構物其中—個組成 者(即為鏡像異構物上純的），而具有多於一個不對稱中心的 、,4化σ物同^為非鏡像異構物上純的及鏡像異構物 上純的。較佳的是，以至少90%光學上純的形式使用本發 =合「物’亦即含有至少9〇%單一異構物(嶋鏡像異構物 匕里（「e.e·」）或非鏡像異構物過量（「de.」》之形式，更 佳的是至少95%(9G%e.e•或d e.)，更佳至少97 5%(95%e尤 或d.e.)，且最佳至少99%(98%ee或“）。 . 弋用來/函盍同一結構之溶劑化以及未溶劑化形 f。、例式1包括指示的結構化合物之水合及無水合兩種 形式。溶劑的其他實例包括結構與異丙醇、乙醇、甲醇、
O:\90\90027.DOC -35- 200424193 DMSO、乙酸乙酯、醋酸或乙醇胺組合。 除了式I、II、III及IV之化合物，本發明包括此類化合物 之醫藥上可接受的先驅藥物、醫藥上有活性的代謝物及醫 藥上可接受的鹽類。 「醫藥上可接受的先驅藥物」為一種化合物，其在生理 條件下可轉變或藉溶劑分解反應成指定的化合物或成此化 合物之醫藥上可接受的鹽類。 「醫藥上有活性的代謝物」用來意指一指定化合物或其 鹽於體内經由新陳代謝產生的醫藥上有活性的產物。利用 技藝中已知的常規技術可將一化合物的代謝物鑑定及利用 本為中說明的測試決定其活性。 利用技藝中已知的常規技術可將一化合物的先驅藥物及 代謝物.鑑定。見，如Bertolini，G等人，J· Med. Chem·，40, 2011-2016 (1997) ; Shan，D·等人，J· Pharm. Sci·，86 (7)， 765-767; Bagshawe K·，Drug Dev. Res·，34, 220-230 (1995); Bodor，N·，Advances in Drug Res.? 13, 224-331 (1984)； Bundgaard, H.? Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); 及 Larsen，I. K·，Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard- Larsen等人編輯， Harwood Academic Puplishers, 1991) o 「醫藥上可接受的鹽」用來意指一鹽，其保留指定化合 物之游離酸及驗的生物效力且無生物上或其他方式不良。 本發明化合物可具有充分酸性、充分驗性或兩者官能基， 及因此與任意許多無機或有機驗、及無機及有機酸反應而 O:\90\90027.DOC -36- 200424193 形成醫藥上可接受的鹽。模範醫藥上可接受的鹽類包括由 本發明化合物與礦物或有機酸或無機鹼反應製備的鹽類， 如包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸 氫鹽、鱗酸鹽、填酸氫鹽、鱗酸二氫鹽、偏鱗酸鹽、焦鱗 酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸鹽、丙酸鹽、癸酸 鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、曱酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚 酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸 鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基 苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥苯甲酸鹽、甲氧化苯曱酸 鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基醋酸鹽、 本基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、擰檬酸鹽、乳酸鹽、γ_經丁酸 鹽、乙·醇酸鹽、酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽、丙烷磺酸鹽、萘 -1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽及杏仁酸鹽。 若本發明化合物為鹼，藉由技藝中可得的任何適當方法 可將理想醫藥上可接受的鹽製備，例如，以無機酸處理游 離驗，如氫氯酸、氫漠酸、硫酸、頌酸、鱗酸等，或以有 機酸，如醋酸、順丁烯二酸、琥珀酸、杏仁酸、反丁烯二 酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水揚酸、吡喃糖苷 基酸，如葡糖醛酸（glucuronic acid)或半乳糖醛酸、…經基 酸，如檸檬酸或酒石酸、胺基酸，如天門冬胺酸或麩胺酸、 芳族酸，如苯曱酸或桂皮酸、石黃酸，如對曱笨絡酸或乙石答 酸等。 右本發明化合物為酸’错由任何適當方法可將理邦、醫藥 O:\90\90027.DOC -37- 200424193 上可接受的鹽製備，例如，以無機或有機鹼處理游離酸， 如胺（一級、二級或三級）、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧 化物等。適當鹽類之舉例的實例包括有機鹽類衍生自胺基 酸，如甘胺酸及精胺酸、氨、一級、二級及三級胺、及環 狀胺，如哌啶、嗎啉及哌嗪，及無機鹽類衍生自鈉、鈣、 钾、鎮、猛、鐵、銅、辞、紹及鐘。 在藥劑為固體的情況中，熟悉本技藝者已知本發明化合 物及鹽類可能存在於不同晶體或多晶體形式，其所有皆用 於本發明範圍及指定式内。 可使用本發明藥劑之治療有效量以治療由蛋白質激酶調 控或調節的疾病。「有效量」用來意指當給予需要此治療的 哺乳類時，藥劑的量足以實現治療由—或多種蛋 (如赂胺酸激酶）調節的疾病。因此，如式！化合物、其鹽、 活性代謝物或先驅藥物之治療有效量為足以調控、調節或 抑制-或多種蛋白質激酶的活性之量，以降低或緩和由該 活性調節的疾病狀況。 相當於此量之特定藥劑量將視因素如特定化合物、疾病 狀況及其嚴重性、需要治療哺乳類的特性（如體重）而不同， 仍可由A悉本技藝者常規地決^。「治療」用來意指至少 缓彳又或夕種蛋白質激酶（如酪胺酸激酶）活性影塑 部^之哺㈣(如人類）的疾病狀況，且包括：避免^病狀 況發生於哺摘中，特別是#發現哺乳類易患此疾病狀況 但尚未被診斷為已罹患；調控及/或抑制疾病狀況；及/或緩
和疾病狀況。 V
O:\90\90027.DOC -38- 200424193 用η兒月於下的反應途徑及合成計晝’利用輕易可得的 起始物運用技藝中可得的技術，可將發明的藥劑製備。 於一個一般合成方法中，根據下列反應計晝製備式：[化人 物： "
R1-M
2)-Pg
將6-硝基吲唑（化合物V)於水性/有機混合物中，較佳具有 二氧陸圜（dioxane)，以碘及鹼（如Na0H)處理。將混合物酸 化並由過;慮將產物分離。將形成的3 _峨_ 6 -硝基υ弓丨哇於二氯 甲烧-50%KOH水溶液於0°C加入保護基（「pg」）試劑（其中 鹵素），較佳為三甲基矽烷基乙氧化甲基氯（SEM-C1， O:\90\90027.DOC -39- 200424193 trimethylsilylethoxymethyl chloride)，及相轉移觸媒，如漠 化四 丁基銨（TBABr，tetrabuty 1 ammonium bromide)。1 - 4小時 後，將兩相稀釋，將有機層分開，以硫酸鈉乾燥，過濾及 濃縮。由矽膠色層分析將粗產物純化而產生式VI化合物。 在水性鹼的存在中，如碳酸鈉，及適當觸媒，較佳為 Pd(PPh3)4，於適當有機溶劑中以適當R1·有機金屬試劑（較 ·. 佳為R1-硼酸）處理式VI化合物，在萃取處理及矽膠色層分 ' 析後，產生式VII化合物。藉由氧化分解（如臭氧分解）之後 籲 再以魏梯希（Wittig)反應或縮合轉換加成至形成的醛官能 — 基，可交換R1取代基於式VII化合物或遍及本計晝之後的中 間體内（代表於實例42(a-e)中）。以還原劑（較佳為SnCl2)處 理式VII化合物，經習見水性處理及純化後，提供式VIII化 合物。·對於衍生物系列，其中Y=NH或N-低烷基，可將式 VIII化合物在鹼（較佳為Cs2C03)及觸媒（較佳為Pd-BINAP) 的存在下，以芳基或雜芳基氯化物、溴化物、碘化物或 triflate處理’（在Y=N -低院基的情況’具有之後烧基化步 驟）以提供式X化合物。為了產生其他Y連結，於冰的標準水 性酸性條件下將硝酸鈉加至式VIII化合物之後加入碘化鉀 並溫和加熱。標準處理及純化產生式IX之碘化合物。 以有機金屬試劑（如丁基鋰）處理式IX化合物促進鋰鹵素 交換。而後經由另外的金屬及觸媒（較佳的是氯化鋅及 Pd(PPh3)4)可能的調節將此中間體與R2親電子試劑（如羰基 或triflate)反應而提供式X化合物。或者，可將式IX化合物 以有機金屬試劑如有機硼酸於觸媒（如Pd(PPh3)4)存在下， O:\90\90027.DOC -40- 200424193 於氧化石反大氣中處理而產生式x化合物。或者，對於衍生 物其Y-NH或S，可將式Ιχ化合物在驗（較佳為Cs2C〇3或 3?〇4)及觸媒（較佳為Pd_BINAp或pd_(雙-環己基）聯苯膦） 2在中以適當胺或硫醇處理而提供式X化合物。而後可利用 驾見g此基父換，如氧化、還原、烷基化、醯化、縮合及 去保護以進一步衍生此系列產生最終式I化合物。 根據不於下列計晝之一般程序也可將本發明式〗化合物 製備：
將引哇（χι)於水性/有機混合物中，較佳具有二氧陸 圜，以碘及鹼（如NaOH)處理。將混合物酸化並由過濾將產 物XII刀離。將形成的3,6_二碘吲唑於二氯甲烷巧水
O:\90\90027.DOC -41 - 200424193 洛液於0 C加入保護夷 (如皿ΒΓ)。將兩相稀了 (較佳為㈣_C1)及相轉移觸媒 過滤及濃縮。由㈣色居將有機層分開，以硫酸鈉乾燥’ >色層分析將粗產物純化而產 化合物。在具有適去p2 士 ' 1 田R -有機金屬試劑（如R、ZnC1或硼R2 棚試劑）及適當觸媒（較佳為pd(pph3)4)的適當有機溶劑中處 理式XIII化合物，在其诉杏 在卞取處理及矽膠色層分析後，產生式
Xlv化合物。在具有適當R1-有機金屬試劑（如硼R1-硼試劑 或11 _ZnCl)的適當有機溶劑中，在水性鹼（碳酸納）及適當觸 媒（杈佳為Pd(PPh3)4)存在中，處理式χιν化合物，在萃取處 理及矽膠色層分析後，產生式χν化合物。而後可利用習見 官能基交換，如氧化、還原、烷基化、醯化、縮合及去保 護以進一步衍生此糸列產生最終式I化合物。 或者，，根據下列一般計畫可製備式I化合物，其中R2為經 取代或未經取代的Υ-Αι·，其中Υ為Ο或S :
XVI
XV
XVII M-B,XCO-R'
AT
DDQ A/ O:\90\90027.DOC -42-
XVI 200424193 將攪拌的3-氯-環己-2-烯酮（XV)、H-R2及無水碳酸鉀之丙 酮溶液回流15 -24小時，冷卻及過濾。濃縮及於石夕膠上色層 分析濾液產生3-R2-環己-2-烯酮（XVI)。 可將式XVI的酮與適當鹼（M-B)(較佳為雙（三甲基甲矽烷 基）醯胺鐘（lithium bis(trimethylsily)amide))反應，及與 R^CO-X (其中χ=鹵素）反應，其在標準酸處理及純化後提 供式XVII化合物。將此產物於HOAc/EtOH中與聯胺單水合 物結合’於適當溫度加熱一段適當時間（較佳2_4小時於 60-80 C )。冷卻後，將混合物倒入飽和碳酸氫鋼溶液，以有 機溶劑萃取，濃縮及於矽膠上純化而產生式χνιΐΙ化合物。 利用許多已知方法可將式χνπι化合物氧化以產生式j化合
O:\90\90027.DOC *43- 200424193 合成本發明化合物之另一方法遵照： 其中步驟a)至i)的條件為如下： a) NaN02，Br2， HBr，0°C —5°C ; 48%產率； b) Pd(OAc)2， Pd (鄰·甲苯基）3，二異丙基乙基胺（DIEA， Di-isopropyl ethyl amine)，DMF，H20，除氣，微波， 110°C，1小時；68%產率； c) 鐵粉，飽和NH4OH水溶液，EtOH，45°C ; 72%產率； d) 2-溴苯甲酸甲酯，R-BINAP，Pd2(dba)3，Cs2C03，甲 苯，除氣，110°C隔夜；74%產率； e) KOH，Me0H:THF:H20 (3:1:1) 70°C，2-3小時；定量； f) 保護的胺，HATU，NEt3，DMF，室溫2小時；80%產 率； g) T$OH (12%TsOH 於 HOAc中），EtOH (10% 水溶液）；44% 產率； h) 三丁基乙烯錫，Pd(PPh3)4，2,6-二第三丁基-4-甲基 酚，甲苯，除氣，105°C ; 31%產率； i) Pd(OAc)2，Pd(鄰-曱苯基）3，DIEA，DMF，除氣， 100°C ;大約70%產率。 可將其他式I之化合物以類似於上述一般程序或說明於 本文實例中的詳細程序之方式製備。藉由提供相近似配體 之多重複製體，較佳利用由載體基團提供的支架，可將本 發明化合物對受體的親合力增強。已證實提供具有基團間 適當間距的此多價化合物大幅改善對受體的結合。見如Lee 等人，Biochem，23, 4255 (1984)。多價及間距可由選擇適 O:\90\90027.DOC -44- 200424193 當載體基團或連接體單元而控制。此基團包括分子載體， 其含有可與伴隨本發明化合物之官能基反應之多重官能 基。當然，可使用許多載體，包括蛋白質如BSA或HAS、 多樣胜肽包括例如五胜肽、十胜肽、十五胜肽等。胜肽或 蛋白質可含有具有理想數目之游離胺基於其側鏈之胺基酸 基團；然而，可使用其他官能基，如巯基或羥基，以得到 穩定連結。 化合物有效地調節、調控或抑制關於受體VEGF、FGF、 CDK複合物、TEK、CHK1、LCK、FAK及尤其磷解酶激酶 之蛋白質激酶活性，及其抑制血管新生及/或細胞增殖為理 想且為本發明一個較佳具體實施例。本發明更針對藉由給 予發明的藥劑，例如於哺乳類組織中，調控或抑制蛋白質 激酶活.性之方法。本發明化合物作為蛋白質激酶活性的調 控劑之活性，如激酶的活性，可由熟悉本技藝者任何可得 的方法測量，包括活體内及/或試管中分析法。活性測量之 適當分析法實例包括說明於Parast C.等人，Biochemistry, 37, 16788-16801 (1998) ; Jeffrey等人，Nature，376, 313-320 (1995); WIPO世界專利 WO 97/34876;及 WIPO世界專利 WO 96/14843中的實例。例如藉由利用下面實例提出的一或多 種生物測試程序可將此等性質評估。 可將本發明之活性藥劑配置於下述之醫藥組合物中。本 發明之醫藥組合物包含有效調控、調節或抑制量之式I、II、 III或IV之化合物及惰性、醫藥上可接受的載體或稀釋劑。 醫藥組合物的一個具體實施例中，提供本發明藥劑之有效 O:\90\90027.DOC -45- 200424193 濃度以便提供關於調控蛋白f激酶之 濃度」意指將蛋白質激酶μMi 縻利进。由「有效 貝礅軛的效果調節於最 等組合物以適於給予模式如 的/辰度。將此 形式製備。 5 σ服給予之單位劑量 將由治療有效量之藥劑⑼以心 當醫藥載體或稀釋劑合併 為活性成为與適 以習見劑量形式給予。此等=見私序製備之發明的藥劑 此寺程序可包含混合、 地壓緊或溶解成分成理想製品。 仏粒及適吾 使用的醫藥載體可為固體 糖、斧糖m H夜體。固體载體之實例為乳 酸鎂、硬脂酸等。、夜果膠、***膠、硬脂 更“專&體載體之實例為糖漿、花生油 !、水4。類似地，载體或稀釋劑可包括技藝中已知延遲 _或.時間釋放材料，如單硬脂酸 ^ 醋單獨或與蠟、乙基纖维辛…或-硬脂酸甘油 稀酸甲醋等混合。經丙基甲基纖維素、甲基丙 品製成：：西、㈣式。因此’若使用固體载體，可將製 :、以粕末置於硬明膠膠囊中或藥丸形式或以片 =劑的形式。固體载體的量可不同，但一般將约為25 =\克°若❹液體載體’製品將為糖漿、乳液、滴 、:中:明膠勝囊、無菌可注射溶液或懸浮液於安親或藥水 瓿中或無水液體懸浮液之形式。 . 伃到水’合性劑1形式，將本發明藥劑之醫藥上可接 解於有機或無機酸的水溶液中，純3m仙酸或 丁豕31合液。若無法得到可溶性鹽形式，可將藥劑溶解於
O:\90\90027.DOC -46- 200424193 適當共溶劑或共溶劑組合中。適當共溶劑的實例包括（但不 限於）醇、丙二醇、聚乙二醇3〇〇、聚山梨醇醋80、甘油等 以濃度範圍為總體積的〇-6()%。於模範具體實施例中，將式 I化合物溶解於DMS〇並以水稀釋。也可將組合物以活性成 分鹽形式的溶液於適當媒介如水或等張鹽水或葡萄糖溶液 之形式。 應知用於本發明組合物中藥劑之實㈣量將根據特定使 用的複合物、配製的特定組合物、給予方式及特定位置、 治療的宿主及疾病而不同。由熟悉本技藝者利用習見劑量 決定測試考慮到藥劑的實驗數據可確定一特定條件組合之 最佳劑量。對於π服給予，—般使用的模範每日: 0.00丨至約1000毫克/公斤體重，更佳的是約〇〇〇1至約5〇毫 克/公斤體重’並以適當間隔重複治療程序。前驅藥物之給 予通常以化學上相當於完整活性形式的重量濃度之重量濃 度給藥。 可將本發明組合物以一般已知製備醫藥組合物的方式製 造，如利用習見技術如混合、溶解、造粒、製糖衣、磨細、 乳化、裝入膠囊、包埋或凍乾。可將醫藥組合物以習見方 式利用一或多種生理上可接受的載體配製，其可選自促進 加工活性化合物進入醫藥上可使用的製品中之軾形劑及附 屬劑。 適當的配方視選擇的給予途徑而定。對於注射，可將本 發明藥劑配製入水溶液，較佳於生理上相容的緩衝液如漢 克斯溶液（Hanks’s solution)、林格爾氏溶液⑻nger，s
O:\90\90027.DOC -47- 200424193 尸0ρΓοη)或生理食鹽水。對於經黏膜給使用適於欲透過 的穿透劑於配方中。此穿透劑-般為技藝中已知。 -對於Π服給予，H由合併活性化合物與技藝中已知的醫 =上可接㈣體可輕易地將化合物配製。此載體使得本發 日二化合物可配製為藥片、藥丸、糖衣藥丸、膠囊、液體、 膝體、糖漿、漿體、懸浮液等，由受治療的患者口服吸收。 :用固體賦形劑與活性成分（藥劑）混合，視情況研磨形成的 :合：’及是需要加入適當的附屬劑後加工細粒混合物以 侍到藥片或糖衣藥丸芯，可得到口服用的醫藥製品。適當 的賦形劑包括：填料如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇、： 山梨醇；及纖維素製品，例如，玉米澱粉、小麥澱粉、米 澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、膠、甲基纖維素、羥丙基甲基 纖維素、羧甲基纖維素鈉或聚乙烯叹咯烷酮（PVP， polyvinylpyrrolidone)。視需要，可加入崩解劑，如交聯的 聚乙烯吨咯烷酮、瓊脂或藻膠酸或其鹽如藻膠酸鈉。 糖衣藥丸芯具有適當塗層。為此目的，可使用濃縮的糖 溶液，其可視情況含有***膠、聚乙烯吡咯燒_、高分 子膠（Carbopol gel)、聚乙二醇及/或二氧化鈦、亮漆溶液、 及適當有機溶劑或溶劑混合物。可將染料或色素加至藥片 或。糖衣藥丸塗層作為識別或作為不同活性藥劑組合之特 徵。 可口服使用的醫藥製品包括由明膠製成的配合插人 (push-fit)膠囊，以及由明膠及塑化劑如甘油或山梨醇製成 的軟密封膠囊。配合***膠囊可含有活性成分與填料如乳 O:\90\90027.DOC -48- 200424193 糖、黏合劑如;殿粉、另/十、、叫 ^ ^ ^岣诏如滑石粉或硬脂酸鎂及視 定劑混合。於軟膠囊中’可將活性藥劑溶解或懸浮 副，如脂肪油、液體石壌或液體聚乙二醇。此外， 二口入女疋劑。所有口服給予的配方應為適用於此給予的 對於口類給予’組合物可採取藥片或錠劑的形式以 習見方式配製。 對於鼻内給予或由σ双λ _ _ , 卞次由及入，根據本發明使用的化合物方便 _用適當推進劑如二氯二氣甲烧、三氯氣甲烧、二氯四 氣乙烷、二氧化碳或其他適當氣體，以煙霧劑噴霧的形式 由加壓的包裝或噴霧器喷出而傳遞。在加壓煙霧劑的情況 中^將劑量單位由提供一闕傳遞計量之量而決定。用於 吸入器或吹藥器等的明膠之膝囊及藥厘可配製含有化合物 及適當粉末基質如乳糖或澱粉之粉末混合。 可將化合物配製為由注射非口服給予，如藉由彈丸式注 Obelus injection)或連續注入。可將注射用配方以單位劑 量形式呈現’如於安瓶中或於多劑量容器中，並添加防腐 劑。組合物可採取如懸浮液、溶液或乳液於油或水性媒介 之形式，且可含有配製劑如懸浮、安定及/或分散劑。 非口服給予的醫藥配方包括活性化合物於水溶性形式之 水溶液。此外，可將活性劑之懸浮液製備為適當油性注射 懸浮液。適當的親油性溶劑或媒介包括脂肪油如芝麻油、 或合成脂肪酸酯，如油酸乙酯或三酸甘油酯，或微脂粒。 水性注射懸浮液可含有增加懸浮液黏度的物質，如叛甲基 纖維素鈉、山梨醇、或葡萄聚糖。視情況，懸浮液也可含
O:\90\90027.DOC -49- 200424193 有適當安定劑或增加化合物溶解度的藥劑以使得可以製備 高濃度溶液。 為了給予眼睛，將式I、II、III或IV之化合物傳遞於醫藥 上可接受的眼科媒介中使得將化合物維持與眼睛表面接觸 充分時間長度以使化合物穿透角膜及/或鞏膜及眼睛的内 部區域，包括例如前房、後房、玻璃體、水樣液、玻璃液 (vitreous humor)、角膜、虹膜/睫狀體、晶體、脈絡膜/視網 膜及鞏膜。醫藥上可接受的眼科媒介可為軟膏、植物油、 或裝入膠囊材料。也可將本發明化合物直接注射入玻璃液 或水樣液中。 再者，也可將化合物以已熟知、可接受的方法給予，如 眼球筋下（subtebnon)及/或結膜下注射。如眼科技藝中已熟 头H.斑主要包含視網膜視錐且為視網膜中最大視覺敏銳 的區域。眼球筋囊或眼球筋膜位於鞏膜上。結膜覆蓋角膜 緣後方眼球之短區域（球結膜）並對摺向上（上凹管）或下（下 凹& )以分別覆盍上眼瞼及下眼瞼的内部區域。結膜位於眼 球筋囊上方上。 輩膜及眼球筋囊界定眼球的外表面。為了治療armd、 CNV、視網膜病變、視網膜炎、葡萄膜炎、黃斑部水腫（cme, Υ maeular edema)、青光眼及其他眼睛後半段的疾病 的醫藥上活性藥劑於鞏膜外表面上及眼球筋囊下。此外， 在RMD及CME的情況中’最佳直接放置投藥系統於輩膜 外表面上、眼球筋囊下、及—般於黃斑之上。在利用紐西 或症狀U土直接放置一特定量投藥系統之眼科上可接受
O:\90\90027.DOC -50- 200424193 蘭白兔的研究中，將4,9(11)-娠二烯_17〇!21一^ ·，-一醇 _3,2〇_二 酮-2卜醋酸酯（購自Steraloids公司的血管生成抑制類 之投藥系統直接置於鞏膜外表面上、眼球筋壹π 、 Κ肋曩下、及稍微 在兔眼中緯線之後部。此投藥系統造成血營夺 吕王攻抑制類固 醇之集中，對整個視網膜平均並於注射後一天測量，約 倍大於由位於兔眼結膜下但於眼球筋囊上之投藥系統傳、 之類似濃度。已知紐西蘭白兔的眼球筋囊非常薄，此等有 利的效果非常意外。需要注意人眼的眼球筋囊也非常薄 4,9(11)-娠二烯-17 · α，21-二醇·3,20-二酮 _21-醋酸酯、及相 關化合物4,9(11)-娠二烯-17_«.，21-二醇_3,2〇-二酮更完整地 說明於美國專利編號5,770,592及5,679,666，將其各全 引用的方式併入本文中。 或者’可將活性成分以粉末形式以與適當媒介如無菌水 於使用前配製。也可將化合物配製於直腸組合物中如栓气 或灌腸劑，如含有習見栓劑基質如可可脂或其他甘油酯f 除了上述配方，也可將化合物配製為投藥系統製品。此 長期作用配方可由植入（例如皮下或肌肉内）肌肉内注射或 藉上述眼球筋下或玻璃體内注射而給予。 於本發明特別較佳的具體實施例内，可將化合物製備於 鹽水中作為局部給予（與任何一般使用於眼睛製品的防腐 劑及抗微生物劑合併）並以眼藥水形式給予。可將抗血管新 生因子溶液或懸浮液於其純態形式製備並每日給予數次。 或者，也可將如上述製備的抗血管新生組合物直接給予至 角臈。
O:\90\90027.DOC -51 - 於lx佳具體實施例 著聚合物—起制備 ’、、且5物與結合至角膜的黏壤黏 或疏水性材料(例如。：&，例如，可將化合物與適當聚合 脂-起配f，編”L液於可接受的油中)或離子交換樹 〜趟 5成為幾乎不溶的衍生物，例如，為幾乎不 溶的鹽類。於進—牛认曰A 马成子不 因子或抗血其報 實施例中，可利用抗血管新生 :s ’、生組合物作為習見類固醇療法的附屬劑。 疏水性化合物之醫華 & 7萄y 醇、非極性界面活性劑可.、、=狀统，包含有苯甲 劑系統可為VPD共溶二：可洛有機聚合物及水相。羡溶 db ^ H 〇 、…、VPD為 3〇/ow/v苯甲醇、8%w/v ’ ’舌性劑聚山梨醇酯80及65%w/v聚乙二醇3〇〇， 於絕對乙醇中配至細俨 、〜#貝。VPD共溶劑系統（vpD : 5 有VPD以5%葡萄糖於水中 入〜”… 卩〜夜稀釋1 · 1。此共溶劑系統完 :? 化合物，且其本身於全身給予時產生低毒 紘广’可將共溶劑系統的比例變化許多而不破壞其溶 解度及毒性特徵。爯去，#~ ι 谷劑成分的個體可以改變：例 如’可使用其他低毒性非搞把$工1 η _桎ί±界面活性劑來代替聚山梨醇 西曰80 ’可改、义水乙一醇的比例大小；其他生物可相容的聚 合物可代替聚乙二醇，如聚乙烯吼_;及其他糖或多 醣可取代葡萄糖。 或者，可利用其他疏水性w藥化合物㈣m㈣ 粒及乳液為疏水性藥物的傳遞媒介或载體之已知實例。有 可利用某些有機溶劑如二甲基亞石風，雖,然通常有較大毒性 之代價。此外，利用緩㈣統如含有治療藥物之固體疏水 性聚合物之半滲透基質，可傳遞化合物。許多緩釋材料已
O:\90\90027.DOC ^52- 200424193 =且為熟悉本技藝者已知。視其化學性質而定，緩釋膠 、可釋放化合物數週至超過i⑻天。視治療試劑的化學性質 及安定性而定，可使用其他蛋白質安定化的策略。、 西樂組合物也可包含適當固體或膠體相載體或賦形劑。 :類载體或賦形劑之實例包括碳_、她弓、糖、殿粉、 纖維素衍生物、明膠及聚合物如聚乙二醇。 可將-些本發明化合物提供為具有醫藥上可相容的反離 —之鹽類。可以許多酸形成醫藥上可相容的鹽類，包括氫 :酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、破轴酸等。 鹽頰傾向於比相對應游離鹼形式更溶於水性或其他質子溶 劑0 、 將本發明較佳化合物之製品於下列實例中詳細說明，但 技術員.將瞭解說明的化學反應可輕易地改變以製備許多其 他本發明之蛋白質激酶抑制劑。例如，根據本發明非舉例 的合成可由對熟悉本技藝者明顯的修改而成功地進行，如 精由適當地保護干擾基團、藉由改變至其他技藝中已知的 適當試劑或藉由做反應條件之常規修改。或者，揭示於本 文中或技藝中已知的其他反應將視為具有對製備本發明其 他化合物之適用性。 、 【實施方式】 於下說明的實例中，除非另外指明，所有溫度皆以。口 出’及所有份數及百分比皆以重量計。試劑講自市面供』 商如Aldrich化學公司或Lancaster合成公司，且除非另外y 明’皆無進—步純化即使用。四氫咬喃（thf，t伽㈣她咖)
O:\90\90027.DOC -53- 200424193 N，N-二甲基甲醯胺（DMF，dimethylformamide)、二氯甲疒 甲本及二氧陸圜係購自Aldrich於密封瓶中且收到即使用。 所有溶劑利用熟悉本技藝者輕易可知的標準方法純化 非另外指明。 * 其於下提出較應一I皆於氬或氮氣正壓下或具有乾燥 官：於室溫(除非另外說明)，於無水溶劑中進行，且將反： «上橡膠橫隔以經針筒導人受質及試劑。玻璃器皿為洪 箱乾燥及/或加熱乾燥。分析的薄層色層分析（tlc，比1 layer Chr〇mat〇graPhy)係進行於玻璃襯背的矽膠6〇 F 254板 An山ech(0.25mm)並以適當溶劑比例（v/v)沖提，並於適當 處"主δ己。將反應以TLC^析並由起始物之消耗判定終止。 TLC板的觀看係、以對_菌#⑱噴霧試齊j或鱗鉬試劑 (Aldric.h化學公司2〇重量％於乙醇）並以加熱活化。處理通常 以反應溶劑或萃取溶劑加倍反應體積，而後以指示的水溶 液除非另外指明皆利用25%體積之萃取體積清洗。產物溶 液經無水硫酸鈉乾燥後過濾及於旋轉濃縮器減壓下蒸發溶 劑並註明為真空中移除溶劑。除非另外說明，利㈣版級 快速矽膠（47-61微米）及矽膠：粗材料比例約2〇 : 1至5〇 : i 進行快速管柱層析法（Still等人，〇rg. Chem.，仏期 (1978))。氫解反應於指示於實例中的壓力或於大氣壓力下 進行。 H-NMR光譜係記錄於Bruker儀器操作於3〇〇 μ沿而 13c-nmr係記錄操作於75 ΜΗζ。NMR光譜係以cDci3溶液 得到（以ppm報告），利用氯仿做為參考標準（7 25 及
O:\90\90027.DOC -54- 200424193 77·〇〇 ppm)或 CD3〇D (3.4及 4·8 時内部四甲基矽烷（〇〇〇ppm)。 當報告波峰多重性時，使用下歹, t (二峰）、m (多峰）、br (加寬）、 之雙峰）。當給予輕合常數時， PPm及49.3 ppm)，或當適合 視需要使用其他NMR溶劑。 使用下列縮寫·· s (單聲）、d (雙峰）、 (力口見）、dd (雙等之雙♦ )、dt (三♦ 以赫兹（Hz)報告。 、工外線（IR，infrared)光譜係紀錄於Perkin Elmer FT IR光 譜儀為純油、為KBr片或為CDC13溶液，且當給予，以波數 (⑽―〗）報告。質譜係利用^·或電灑得到。所有溶點（卿) 為未校正。 實例l(a)2_(4-氣·2_硝基-苯基）_丙二酸二甲酯
至Ν&Η (36.0克，1500毫莫耳）於ΝΜΡ (1·〇升）的授拌漿體 中逐滴加入丙二酸二甲酯（137·4毫升，12〇〇毫莫耳）。將反 應視需要冷卻以保持内溫於301以下。在氣體放出平息 後，將2,4-二氯硝基苯（192克，1〇〇〇毫莫耳）加至反應。小 心地將其加熱至65°C直到反應由HPLC決定為完成。將反應 冷卻至室溫，而後倒入5〇〇毫升冰混合150毫升濃鹽酸。利 用1 N NaOH調整水層的pH至中性。將固體經粗玻璃砂過濾 器過濾移出，並以水（3升）清洗。使黃色固體乾燥隔夜。得 到261.5克，91°/〇。 實例l(b)(4-氣·2-硝基·苯基）-醋酸甲酯
O:\90\90027.DOC -55- 200424193 將2-(4-氯-2-硝基-苯基）-丙二酸二甲酯（1 95克，679·4毫莫 耳）於水（100毫升）及NMP (1000毫升）的溶液加熱至回流3·5 小時。由旋轉濃縮將溶劑去除成油狀物。將油溶解於Et〇Ac 中，而後以水（5x3 00毫升）清洗。而後將水層以Et〇Ac (4x300 毫升）萃取。將有機層以水清洗。將有機層合併並經硫酸鎂 乾燥。由過濾去除固體後，將溶劑蒸發而得到理想產物為 橘色/棕色固體（160.0克，95%)。 實例l(c)(2-乙醯胺-4-氣-苯基）-醋酸甲酯
將充滿氬氣的瓶裝入（4-氯-2-硝基-苯基醋酸曱酯（40 克，175毫莫耳）、10%Pd/C (2.5克）、醋酸酐（64毫升，677 毫莫耳·）、水（9毫升）及醋酸（150毫升）。將瓶以30 PSI氫氣真 空沖洗並劇烈搖動。2小時後，加入更多10%Pd/C (2克）， 在總計4小時反應時間後反應完全。將10%Pd/C由過濾去 除，並將溶劑以旋轉濃縮去除。 實例l(d)6-氣-1H-吲唑-3-羧酸甲酯
至攪拌於90°C之（2-乙醯胺-4-氯-笨基醋酸甲醋（32·〇 克，133毫莫耳）於醋酸（200毫升）的溶液於1小時期間加入亞 石肖酸三級丁 S旨（2 0 · 5爱升’ 1 7 2 · 3毫莫耳）。將反應倒入水（υ 升）中並將固體以過濾回收。將黃色沈澱溶解於Et〇Ac中， 而後以飽和NaCl清洗。將有機層經疏酸鎮乾燥，過淚及濃 O:\90\90027.DOC -56- 200424193 縮成固體。將固體以己烷磨碎及過濾而得到所需物質（21 〇 克，77%)。 實例l(e)6_氣-1-(四氫·吼喃-2-基）-1Η_吲唑_3_叛酸甲醋
至6-氯-1H-吲唑-3-羧酸甲酯（8.3克，39.5毫莫耳）MMeCN (200毫升）的漿體加入3,4-二氫-2H-吡喃（5·4毫升，59·3毫莫 耳）及對曱苯磺酸（237毫克，1.25毫莫耳）。使反應攪拌1〇分 鐘後，將飽和NaHC〇3 (1毫升）加入並將溶劑藉旋轉濃縮移 除至100毫升體積。將混合物以Et〇Ac稀釋並以水（5〇毫升） 而後飽和NaCl (50毫升）清洗。而後將有機層經硫酸鈉乾 無。藉過濾將固體移除後’藉旋轉濃縮將有機層濃縮至油。 利用己烧自油將產物沈澱以產生所需產物（7 667克，66〇/〇產 率）。 ’ 實例l(f)6-(2•甲氧羰基·苯基胺基）-1(四氫_吡喃_2•基）_1H_ 吲唑-3-羧酸甲酯
至6-氯-1H-吲唑-3-魏酸甲酯（2.94克，1〇·〇毫莫耳）於！ 2_ 二甲氧化乙烷（30毫升）的溶液加入κ：3Ρ〇4 (5.32克，25·〇亳莫 耳）、Pd2(dba)3 (459毫克，〇.〇5毫莫耳）、2-(雙-環己基膦） 聯苯（701毫克，2.0毫莫耳）及胺基苯甲酸甲酯（2.59毫升， O:\90\90027.DOC -57- 200424193 20·0毫莫耳）。將溶液以氬氣真空沖洗三次而後加熱至8〇c?c 1 8小時。將反應冷卻至室溫而後將固體以過濾去除。以醋 酸乙醋清洗後，將溶劑藉旋轉濃縮移除。將殘留的油，色層 刀析（150克石夕膠’ 1 〇_3〇%Et〇Ac/Hex)而得到1,23克（5 1 %)戶斤 需產物。 實例l(g)6-(2-甲氧羰基·苯基胺基）-I(四氫_吡喃· 吲唑-3-羧酸
至6-(2 -甲氧幾基-苯基胺）_ 1 _(四氫π比喃-2-基）_ iH-叫丨哇- 3-羧酸甲酯（2.05克，5毫莫耳）於甲醇（18毫升）及四氫呋喃（8 毫升）的溶液加入氳氧化鈉（0.30克，7.5毫莫耳）於水（2·7毫 升）的溶液。將反應於室溫攪;摔3小時而後以1 N H C1中和至 pHl。將混合物以EtOAc (25毫升）及水（25毫升）稀釋。分層 後，將水層以CH2C12 (3x25毫升）清洗。將合併的有機層以 飽和NaCl (100毫升）清洗而後經硫酸鈉乾燥。將固體過應並 將液體濃縮至油。將產物自EtOAc及己烷結晶而得到所需產 物（1.616克，82%)。 實例l(h)2-[3-甲基胺甲醯基-1-(四氩-吡喃-2-基）-1Η-吲唾 _6_基胺基】-苯甲酸曱酯
O:\90\90027.DOC -58- 200424193 至6 (2曱氧.基-笨基胺基）q•(四氫比喃基）_^_吲 坐-3-羧酸（〇·50克，127毫莫耳）sdmf的溶液加入三乙胺 (〇·42毫升，3.04毫莫耳）、甲胺（1·9毫升，3·8ΐ毫莫耳）及ΗΑτυ (0.5 78克，1.52¾莫耳）。將反應攪拌3小時而後以旋轉蒸發 濃縮。將粗油色層分析（5〇克矽膠，25_5〇%Et〇Ac/己烷）而 得到所需產物（214毫克，42%)。 實例1(1)2-[3-甲基胺甲醯基q•(四氫_吡喃·2_基）4 H_吲唑 -6-基胺基卜苯曱酸
至2-.[3-甲基胺甲醯基(四氫-17比喃_2_基>1H-吲唑_6_基 胺基]-苯甲酸甲酯（0·20克，〇·49毫莫耳）於甲醇（14毫升）及 四氫呋喃（0.6毫升）的溶液加入氫氧化鈉（59毫克，147毫莫 耳）於水（0·3毫升）的溶液。將反應加熱至⑼它工小時而後冷 部至至溫。以2 N HC1將pH調整至pH2。將EtOAc (30毫升） 及水（3〇耄升）加入及分層。將水層以EtOAc (3x20毫升）萃取 並將有機層合併。以水（丨5毫升）清洗後，將有機層經硫酸鈉 乾爍。將固體過濾掉，並將有機溶劑蒸發以得到黃色油（丨93 毫克，100%)。 實例l(j)6_(2-丙-2-炔基胺甲醯基_苯基胺基）_^(四氫-吡喃 _2-基）-1Η_吲唑羧酸甲醯胺
O:\90\90027.DOC -59- 200424193
Η ^ 至2-[3 -甲基胺甲酸基- ΐ-(四氫-ϋ比喃-2-基）-1Η-吲唾-6-基 胺基]-苯甲酸（150毫克，〇·381毫莫耳）於DMF的溶液（3.6毫 ' 升）加入快丙胺（0.052毫升，0.761毫莫耳）、TEA (0.264毫 ** 升，1.90毫莫耳）、及HATU (217毫克，0.571毫莫耳）。將反 _ 應授拌4小時而後以EtOAc (30毫升）及水（3〇毫升）稀釋。分 一 層’將水層以EtOAc (2x20毫升）萃取。將合併的有機層以 飽和NaCl (15毫升）清洗，而後經硫酸鈉乾燥。將固體過滤 掉，並將液體以旋轉蒸發濃縮以得到黃色油（164毫克， 100%) 〇 實例l(k)6-(2-丙-2-快基胺甲醯基-苯基胺基）jj-吲峻-3-竣 酸甲醯胺
溶解6-(2-丙-2-炔基胺曱醯基-苯基胺基）-；u(四氫比喃 -2-基）-1Η-吲唑-3-羧酸曱醯胺（3〇毫克）於Κ5毫升之 CHAr TFA:三乙基矽烧90: 10: ；^昆合物中並加熱至 回流2小時。以甲苯（40毫升）稀釋溶液並以旋轉蒸發濃縮至 油。溶解油於DMF (1毫升），及利用〇·2微米針筒過濾器過 O:\90\90027.DOC -60- 200424193 濾。利用製備型HPLC以分離所需化合物（12毫克，50%)。 lR NMr (CDCl3-d) δ 9.96 ΠH,s).aDDIDs,??? 8.28 (1Η，d >8.85 Hz)，7·47 (1H，m)，7·34 (1H，m)，7·22 (1H，m)5 7·15 (1H，dd，J1 二8·76 Hz，J2 = 1.79 Hz)，6.99 (1H，m)，6.86 (iH，、 J二6·97Ηζ)，6.31 (1H，m)，4·23 (2H，dd，Jl=5.18 Hz，J2=2.54 Hz)，3·49 (3H，s)，2.29 (s，1H)。 C19H17N502*1.〇 MeOH.O.l TFA之分析計算值：c，62.08· H，5·44; N，17·92。實測值：C，61.78; H，5.45; N，18.04。 實例2(a)[6_氣-1-(四氫吡喃_2-基）_1H-吲唑·3_基】-甲醇
至冷.卻至-78°C的6-氯-1Η-吲唑-3-羧酸甲酯（2.94克，1〇.〇 耄莫耳）於無水CH2C12(50毫升）中之溶液緩慢加入DIBAL-H (3.56¾升’ 20·0毫莫耳）。在加入完成後，使反應回溫至室 溫，其中HPLC顯示有剩餘1〇%起始材料。而後將額外 DIBAL-H (0·35毫升）加入並攪拌10分鐘。將反應以Et〇Ac (1000毫升）稀釋並以1 NHC1 (2x100毫升）清洗。將其進一步 以1 N NaHC〇3(100^升）清洗，而後以飽和NaC1(i〇〇毫升） 清洗。將有機層經硫酸鎂乾燥，過濾，而後濃縮至白色固 體（2.65 克，99.5%)。 實例2(b)6-氣-1-(四氫-口比味-2-基）-ΐΗ-α5|峻甲搭
O:\90\90027.DOC -61- 200424193 至Ο氯-1-(四氫_吡喃_2_基）_1H_吲唑_3•基]-甲醇&乃 克，6.58毫莫耳）、Ιβχ (2·76克，9 87毫莫耳认⑽⑽（27 毫升）的/谷液授拌隔夜。將反應於Et〇Ac及水中稀釋。將層 分開，將水層以Et0Ac (3χ1〇〇毫升）萃取。將有機層合併並 以飽和NaCl (1 〇〇毫升）清洗。將有機層經硫酸鎂乾燥，過 瀘、，而後濃縮至固體。將固體溶解於Ci^CU中並過渡。將 ， 有機層蒸發而得到所需產物（1 ·707克，92%)。 - 實例2(c)l-(6-氣·1H-吲唑基）_h(5_乙基·吡啶_2_基）_乙醇 鲁
至4-乙基-2-甲基吡啶（0.458克，3_79毫莫耳）於THF (4毫 升）的攪拌溶液於-5(TC緩慢加入丁基鋰（1.5毫升，2.5 Μ， 3.79¾莫耳）並攪拌1〇分鐘。緩慢加入6 -氯-1^。引哇-3-曱盤 (0.5克’ 1·89毫莫耳）於THF (4毫升）的溶液於此反應中。攪 拌10分鐘後，將反應以1 Ν檸檬酸（10毫升）終止。將反應以 EtOAc (50毫升）、水（20毫升）及飽和NaCl (10毫升）稀釋。將 層分開，將水層以EtOAc (3x15毫升）萃取。將有機層合併 並以飽和NaCl (20毫升）清洗。將有機層經硫酸納乾燥後， 藉過濾將固體去除並將液體藉旋轉蒸發濃縮至油。色層分 析（40克石夕膠，60-100%EtOAc/hex)而得到所需產物（142毫 克，32%)及回收6-氯-1H-吲唑-3-曱醛（348毫克）。 實例2((1)6_氣_3-[2-(5 -乙基-σ比唆-2-基）-乙稀基]_1Η-β弓丨嗤 O:\90\90027.DOC -62- 200424193
至1-(6-氯-1H-吲唑-3_基）-2-(5 -乙基-吡啶-2-基）_乙醇 (232毫克，〇·6〇毫莫耳）於CH2C12中攪拌的溶液加入TEA -(0.25毫升，1.81毫莫耳）及甲磺醯氯（0.070毫升，〇·9〇毫莫 · 耳）。將反應攪拌30分鐘，而後將DBU (2毫升）加入。將反 _ 應回流1 8小時而後以40毫升1 Ν檸檬酸終止。將層分開，將 一 水層以20宅升CHWl2萃取。將合併的有機層經硫酸納乾 燥，過濾，並藉旋轉蒸發濃縮。由色層分析（12克矽膠， 50-70% EtOAc/已烷）純化得到所需化合物（135毫克，71%)。 實例2(.e)2-{3-[2_(5-乙基吡啶_2_基）_乙烯基】_1H_吲唑-6-基 胺基}-苯甲酸甲酯
將1,2-二曱氧化曱烷（2毫升）加至6_氯_3_[2-(5_乙基-吡啶 -2-基）-乙烯基]-1H-引唑（13〇毫克，〇·354毫莫耳）、pd2 (dba)3 (16毫克，0.〇18毫莫耳）、-(雙_環己基膦）聯苯（25毫克，〇〇71 耄莫耳）、1^?〇4(〇.188克，0885毫莫耳）及胺基苯甲酸曱酯 (0.092¾升，〇·71耄莫耳）。將反應以氬氣真空沖洗（4χ)而後
O:\90\90027.DOC -63- 200424193 加熱至80°C 19小時。將反應以EtOAc (20毫升）稀釋並經石夕 膠塞過濾。以EtOAc (50毫升）清洗後，將溶劑藉旋轉蒸發 移除。將粗油以色層分析（40克矽膠，30-40% EtOAc/己烧） 純化而得到所需產物（54毫克，32%)。 實例2(f)2-{3-[2-(5•乙基比咬-2-基）_乙烯基卜in-吲唑-6-基 胺基}-苯甲酸
至2-{3-[2-(5-乙基吡啶-2-基）-乙烯基]· 1H_吲唑-6_基胺 基卜苯甲酸甲酯（50毫克，0.104毫莫耳）於甲醇（〇·42毫升）及 THF (0.10毫升）的溶液加入氫氧化鈉（12毫克，〇·3ΐι毫莫耳） 於水（0_05毫升）的溶液。將溶液加熱至6〇。〇3.5小時而後以 飽和ΝΗβΙ中和。將反應以水（20毫升）稀釋，而後以Et〇Ac (2 X 2 0宅升）卒取。將合併的萃取液先經硫酸鈉乾燥，而後藉 過濾將固體去除。旋轉蒸發去除溶劑後回收所需產物（4$ 7 毫克，100%)。 實例2(g)2-{3-[2-(5-乙基-吼咬-2-基）-乙稀基卜丄弓丨嗤基 胺基卜N-丙-2-炔基-苯甲醯胺
O:\90\90027.DOC -64- 200424193 至2-{3-[2-(5-乙基比咬_2-基）_乙烯基]_ΐΗκ6_基胺 基卜苯曱酸（49毫克，G1G5毫莫耳）加人巧升之⑶仰： TFA:TES 90: 10: !混合物。將反應攪拌於回流i小時， 而後以曱苯（2G毫升）稀釋。藉旋轉蒸發將溶劑去除而得到黏 稠油。將油溶解於DMF(1毫升），及至此溶液加入TEA(0.072 耄升，〇·52毫莫耳）、炔丙胺（0.014毫升，0.208毫莫耳）及 HATU(59毫克，0·156毫莫耳）。將反應攪拌3小時，而後以 製備型HPLC純化而得到所需產物（29毫克，66%)。心麻 (CDCL3-d) δ 9.83 (1H?s)5 8.63 (2H?s)? 8.04 (2H? m)? 7.68
(2H，S)，7·47 (1H，m)，7·32 (1H，d，J=1.51 Hz)，7.U) (1H，dd， 8.67 Hz5 J2^l.88 Hz)? 6.93 (1H5 m)? 6.07 (2H? dd9 11=5.09 Hz5 12=2.26 Hz)5 3.15 (1H5 t? J=2.35 Hz)5 2.97 (2H S)，2·74 (1H，S)，2·29 ⑽，s)，1.27 (3H，t，J=7.44 Hz)。 C26H23N5O0.3 H2(M 2 皿之分析計算值：c，6〇 η; & 4.43; N，12·42。實測值：C，60·38; H，4·73; N，12 44。 實例2WN環丙基·2·{3·[⑻1(4-甲基“比咬I基）_乙烯 基]•則唾-6-基胺基卜苯甲随胺 席 Η
標題化合物係如類似於上述M3H(5m定_2·基: 乙烯基]_1Η-吲唑 基胺基}-Ν-丙-2-炔基-苯甲醯胺製備， 於基）-2♦乙基H2-基）·乙醇製偉 的y钵中以2,4-二曱基_吡啶取代4_乙基甲基比啶，及方
O:\90\90027.DOC -65- 200424193
順序之最後步驟中以環丙胺取代炔丙胺。1H NMR (DMSO-d6): δ 9·85 (1H，s)，8.56 (2H，m)，8·20 (3H，m)，7.53 (5H，m)，7·35 (1H，s)，7.2 (1H，d5 5 Hz)，7 〇 (1H，s)，2 83 (1H? m)? 0.70 (2H? m)? 0.56 (2H? m)〇ESIMS (M+H+):410.3 〇 實例3(a)N-甲氧基_2-[3_((Ε)_2^比啶-2-基_乙烯基）_1H_吲唑 -6-基胺基】-苯甲醯胺
克（67%)呈黃色固體。^ NMR (DMSO-d6): δ 9 23 (1H s)，
8.71 (1Η，d，J=2.2)，8.05 (4Η，m)，7.51 (5Η，m)，7·25 (1Η，s)， 7·10 (1H，d，J=7.7 Hz)，6.91 (1H，m)，5·98 (1H，m)，4.31 (1H， d，J=14.3)，7.20 (1H，d，J=7.3)，4.42 (2H，d5 J=3.2)。ESIMS (M+H+): 412·卜 實例3(b)N-Jf丙氧基-2-[3-((E)_2-吼啶_2-基-乙稀基）_1H-吲 唑-6-基胺基]-苯甲醯胺
O:\90\90027.DOC -66- 200424193 將2-[3-(2-吼啶-2-基-乙烯基）-lH-吲唑-6-基胺]苯甲酸 (5〇·0毫克’ 〇·〇84毫莫耳）、〇-烯丙基_經胺氯化氫鹽（丨83毫 克，0· 17毫莫耳）、三乙胺（5 8微升，0.42毫莫耳）溶解於DMF (〇·8毫升）之溶液以HATU(48毫克，0.13毫莫耳）處理。將混 合物攪拌隔夜，而後以逆相HPLC純化而得到標題化合物 25.5 毫克（74%)呈黃色固體。士 NMR (DMSO-d6): δ 9.28 (1Η，s)，8·67 (2Η，d，J=3.4)，8.05 (4Η，m)，7.48 (5Η，m)，7·23 (1H，s)，7.04 (1H，d，J=7.6 Hz)，6·91 (1H，m)，3·69 (3H，s)， ESIMS (M+H+): 386·卜 實例3(c)N-異丙氧基-2_[3-((E)·2-吡啶·2_基·乙烯基）_1H-吲 唑-6-基胺基】-苯甲醯胺
將2-[3-(2-吡啶-2-基-乙烯基）-111-吲唑-6-基胺基]-苯甲酸 (50.0毫克，0.084毫莫耳）、0-異丙基-羥胺氯化氫鹽（18.7毫 克，0.17毫莫耳）、三乙胺（5 8微升，0.42毫莫耳）溶解於DMF (0.8毫升）之溶液以HATU (48毫克，0.13毫莫耳）處理。將混 合物攪拌隔夜，而後以逆相HPLC純化而得到標題化合物 17.4 毫克（50%)呈黃色固體。4 NMR (DMSO-d6): δ 9.23 (1Η，s)，8.69 (2Η，d，J=2.1)，8·03 (4Η，m)，7·50 (5Η，m)，7.23 (1H，s)，7·04 (1H5 d，J=6.7 Hz)，6·92 (1H，m)，5·98 (1H，m)， 4·13 (1H，m)，1.29 (6H，d，J=8.1)。ESIMS (M+H+): 414·1。 實例3(d)N-環丙基-2_[3_((E)_2-吡啶基-乙烯基）_1H-吲唑 -6-基胺基苯甲醯胺 〇：\90\90〇27-D〇c -67 -
200424193 將2-[3-(2-吡啶-2-基-乙烯基）_1Η_σ引唑基胺基]-苯甲酸 (50·0毫克，0.084毫莫耳）、環丙胺（u.6微升，〇·17毫莫耳）、 三乙胺（58微升，0·25毫莫耳）溶解於DMF (0.8毫升）之溶液 以HATU (48毫克，0.13毫莫耳）處理。將混合物攪拌隔夜， 而後以逆相HPLC純化而得到標題化合物u.7毫克（35%)呈 黃色固體。1H NMR (DMSO-d6): δ 9·81 (1Η，s)5 8·68 (m，d， J=1.7)，8·51 (1H，s)，8.01 (4H，m)，7·50 (5H，m)，7.24 (1H， s)，7·03 (1H，d，J=5.3)，6·89 (1H，t，J=4.2)，2·84 (1H，m)， 0.72 (2H, m)，0.56 (2H，m)。ESIMS (M+H+): 396.1 0 實例 3(jf)l -甲基-1H-吡咯 _2_羧酸 n，-(1_{2-[3_((E)-2_吡啶-2-基-乙烯基）-1Η-吲唑-6-基胺基卜苯基卜甲醯氧醯肼
將243-(2-1^淀-2-基-乙細基）-1Η·ϋ弓卜坐-6-基胺基]-苯甲酸 (50.0毫克，0.084毫莫耳）、1-曱基-111-啦略-2-緩酸酿肼（23.3 毫克，0.17毫莫耳）、三乙胺（58微升，〇·42毫莫耳）溶解於 DMF (0.8毫升）之溶液以HATU (48毫克，0.13毫莫耳）處理。 將混合物攪拌隔夜，而後以逆相HPLC純化而得到標題化合 物 16.1 毫克（40%)呈黃色固體。b NMR (DMSCKd6): δ 10.39 (1Η，s)，10.00 (1Η，s)，9·52 (1Η，s)5 8·67 (1Η，d，J=2.4)，8 07 O:\9O\9O027.DOC -68- 200424193 (4H，m)，7·77 (1H，d，J=5.2)，7.51 (4H，m)，7.32 (1H，s)，7.09 (1H，d，J=6.3)，6.98 (3H，m)，6.13 (1H，m)，3.87 (3H，s)。 ESIMS (M+H+): 478.1。 實例3(g)N_苄基_2-[3-((E)_2-吡啶-2·基-乙烯基）-1Η_吲唑 -6-基胺基]-苯甲醯胺
將2-[3-(2-吡啶-2-基-乙烯基吲唑_6_基胺基]-苯甲酸 (50·0毫克，0.084毫莫耳）、苄胺（18·2微升，〇17毫莫耳）、 三乙胺（58微升’ 0.42毫莫耳）溶解於dmf (0.8毫升）之溶液 以HATU (48毫克’ 0.13毫莫耳）處理。將混合物攪拌隔夜， 而後认逆相HPLC純化而得到標題化合物45·2毫克（76%)為 TFA 鹽（1.5 Η20， 2.1TFA，有效 mw=711.98)。4 NMR
(2Η，m)，7·31 (5Η，m)，7 16 (1H，d，J=7 8)，6 93 (1Η，、 •丄）。ESIMS (M+H+): 446.5。 苄基）-2_[3_((Ε)-2-吡啶-2-基 _ 〇 歸 J=7.3)，4·46 (2H，d，Ju)。ESI 實例3(h)N-(2-甲氧基-苄基）_2_[ 基）-1Η_吲唑-6-基胺基卜苯甲醯胺
乙烯基）-1Η-吲唑-6-基胺基]-苯曱酸
O:\90\90027.DOC -69- 200424193 (50.0¾克，0.084¾莫耳）、〇-甲氧基苄胺（21·8微升，ο υ 毫莫耳）、三乙胺（58微升，0.42毫莫耳）溶解sDMF (〇8毫 升）之溶液以HATU(48毫克，〇·13毫莫耳）處理。將混合物= 拌隔夜’而後以逆相HPLC純化而得到標題化合物牝毫克
(81%)為 TFA鹽（1.5 Η20，1.5 TFA，有效mW=673.59)。lH
NMR (DMSO-d6)·· δ· 9·83 (1Η，s)，9·〇3 (1H，t5 卜3.4)，8 70 (1Η，d，J=3.7)，8.08 (4Η，m)，7·82 (1Η，d，J = 7.4), 7·49 (4Η m)，7·21 (3H，m)，6·96 (4H，m), 4·48 (2H，d，J=6.3)。ESIMS (M+H+): 476·卜 實例3(i)N_呋喃-2_基甲基-2-[3-((E)々_吡啶基_乙稀 基）-1Η-吲唑-6-基胺基卜苯甲醯胺
將2-[3-(2-°比咬-2-基-乙烯基）-1Η-σ弓卜坐冬基胺基]_苯甲酸 (50.0¾克’ 0.084¾莫耳）、C -咬喃-2-基-甲胺（19微升，〇·ΐ7 毫莫耳）、三乙胺（58微升，0.42毫莫耳）溶解於DMF (0.8毫 升）之溶液以HATU (48毫克，0· 13毫莫耳）處理。將混合物攪 拌隔夜，而後以逆相HPLC純化而得到標題化合物45毫克 (85%)為 TFA鹽（1·5 H20，1.5 TFA，有效MW=633.52)。4 NMR (DMSO-d6): δ 9.82 (1H，s)，9·05 (1H，t，J=2.6)，8·73 (1H, d，J=3.7)，8·13 (4H，m)，7.73 (1H，d，J=6.8)，7·57 (2H，m)，7.26 (lH,s)，7·03 (1H, d，J=7.5)，6·40 (1H，m)，6·28 (1H，m)5 4.48 (2H，d，J=6.5) o ESIMS (M + H+): 436.1 o 實例3(j)N_環丁基_2-[3_((E)-2·吡啶-2_基_乙烯基）-lH-吲唑 O:\90\90027.DOC -70- 200424193 -6_基胺基]-苯甲醯胺 將2-[3-(2_吡啶-2-基-乙烯基）_1H^|唑_6_基胺基苯甲酸 (50.0毫克，0.084毫莫耳）、環丁胺（18.2微升，〇17毫莫耳）、 二乙胺（58微升’ 0.42毫莫耳）溶解於dmf (0·8毫升）之溶液 以HATU (48毫克，〇· 13毫莫耳）處理。將混合物攪拌隔夜， 而後以逆相HPLC純化而得到標題化合物43 2毫克（92%)為 TFA 鹽（1·5 H20，1，1 tfa，有效 MW=561.92)。4 NMR (DMSO-d6): δ· 9.78 (1H，s)，8.72 (2H，m)，8.13 (4H，m)，7·7〇 (1H，d，J=7.1)，7·58 (2H，m)5 7.41 (2H，m)，7·27 (1H, s)，6·89 (1H，t”J=4.2)，2.84 (1H，m), 0.72 (2H，m)，0.56 (2H，m)。 ESIMS (M+H+): 396.1 〇 實例3(k)N_(2甲基-烯丙基n比咬冬基-乙缔 基）-1Η-吲唑-6-基胺基卜苯甲醯胺
將2-[3-(2-。比唆-2_基-乙稀基）-1Η-σ弓卜坐-6-基胺基]-苯曱酸 (5〇·〇毫克，0.084毫莫耳）、2-曱基-烯丙胺（1 6,4微升，〇 17 毫莫耳）、三乙胺（58微升，0.42亳莫耳）溶解於dMf (0.8毫 升）之溶液以HATU (48毫克，0·13毫莫耳）處理。將混合物授 拌隔夜，而後以逆相HPLC純化而得到標題化合物45毫克 〇；\9〇\9〇〇27D〇C -71 - 200424193 (91%)為 TFA鹽（1·6 H2〇，1·3 TFA，有效MW-586.53)。4 NMR (DMSO-d6): δ 9·78 (1H，s)，8.72 (2H，m)，8·13 (4H，m)， 7.70 (1H，d，J=7.1)，7·58 (2H，m)，7.41 (2H，m)，7.27 (1H，s)， 7·06 (1H，d，>7.1)，6·91 (1H，t，J=7.5)，4.42 (1H，m)，2.22 (2H，m)，2.08 (2H，m)，l·68 (2H，m)。ESIMS (M+H+)·· 41〇.；l。 實例3(1)6-硝基-3-吡啶基乙炔基-1-(2-三曱基矽烷基-乙 氧基甲基）-1Η-吲唑
將3_織-6-硝基-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲基）_ih_吲唑 (8 38¾克，2.0毫莫耳）、2-乙炔基-吡啶（242微升，2.4毫莫 耳）及二乙胺（6.0毫升）之混合物除氣並以氬氣沖洗，而後以 Cul (8 毫克，0·042 毫莫耳）及？(1 (pph3)2Cl2 (16 毫克，〇〇23 笔莫耳）處理。將形成的混合物於室溫授拌隔夜，此時Hplc 顯不已將所有起始物消耗。將混合物藉由高真空下去除可 揮發物，而後以醋酸乙酯沖提通過矽膠塞而純化。使用形 成的產物於下一步驟中無進一步純化。ESIMs (M+H+): 395·1 〇 實例3(m)3_吡啶_2_基乙炔基·1-(2三甲基矽烷基_乙氧基甲 基）-1Η-吲唑-6基胺
O:\90\90027.DOC -72- 200424193 將6-硝基-3-吡啶-2-基乙炔基-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧基 甲基）-1Η-吲唑（2毫莫耳）、SnCl2 (1.37克，6·0毫莫耳）、水 (0.5¾升）及MeOH (10毫升）之混合物於60它油浴中攪拌3〇 分鐘’此時HPLC顯示完全還原。將形成的混合物去除甲 醇’懸浮於EtOAc(50毫升）並以1 M NaOH (18毫升）稀釋。 將形成的乳液以EtOAc (10x25毫升）溫和萃取。將合併的有 機層以1 M Na2C〇3、鹽水萃取，經硫酸鎂乾燥，濃縮及以 EtOAc沖提通過矽膠塞過濾。兩步驟粗產物的產量為毫 克，96%質量回收。ESIMS (M+H+): 365.1。 實例3(n)2-[3-吡啶基乙炔基-i-(2_三甲基矽烷基_乙氧基 甲基）-1Η-吲唑-6基胺基卜苯甲酸甲酯
將3-吼唆-2-基乙炔基-i-p-三曱基矽烷基-乙氧基甲 基）-lH-吲唑-6基胺（560毫克，1.54毫莫耳）、2-溴甲基苯甲 酸酯（647.5微升，4.61毫莫耳）、聯苯—2-基-雙環己基·膦 (107.8毫克，〇·308毫莫耳）、Pd2(dba)3 (70.5毫克，〇.0768毫 莫耳）、K3P〇4(816毫克，3.844毫莫耳）及二甲氧化乙烷（17 毫升）之混合物以氮氣真空沖洗，而後於7〇〇c油浴中加熱24 小時。將黑色混合物以二氣曱烷稀釋，及過濾、濃縮、並 色層分析（20%至40%醋酸乙酯/己烷）。黃/橘色油之產量為 260毫克’三步驟產率總計35%。 O:\90\90027.DOC -73- 200424193 實例3(o)2-[3-吡啶-2-基乙炔基_ι_(2-三甲基矽烷基_乙氧基 甲基）-1Η-^弓丨唑-6基胺基卜苯甲酸
將2-[3-咄啶-2-基乙炔基三甲基矽烷基_乙氧基甲 基）-1Η-吲唑-6基胺基;μ苯曱酸甲酯（253毫克，〇.517毫莫耳） 加入氫氧化鈉（62毫克，ι·55毫莫耳）溶於THF (1.0毫升）、甲 醇（2.25¾升）及水（〇·5毫升）的溶液。將反應於室溫攪拌1小 時’此時HPLC顯示已將所有起始物消耗。將反應以1 NHC1 中和，以EtOAc萃取，而後將其以鹽水清洗並以硫酸鎂乾 燥。真空下濃縮後得到249毫克黃色固體（99%質量回收）。 使用此.材料而無進一步純化。ESIMS (M+tr): 483.0。 實例3(p)2-[3-吡啶-2_基乙炔基-1H-吲唑_6基胺基】·苯甲酸
將2-[3-吡啶-2-基乙炔基-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧基甲 基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯曱酸（231毫克，0.477毫莫耳）、1 M 氟化四丁銨於THF(3.8毫升，3.816毫莫耳）及乙二胺（127微 升，1.908毫莫耳）之溶液於80°C油浴攪拌6小時。以醋酸（218 微升，3.816毫莫耳）終止反應，以水稀釋，並以EtOAc (1〇 x50毫升）萃取。將合併的有機層以鹽水清洗並以硫酸鎂乾 燥。濃縮後固體形成，將其以磨碎，得到產物為黃 O:\90\90027.DOC -74- 200424193 色粉末（124毫克，73%)。ESIMS (M-H-): 353.0。 實例3(q)N-丙-2_炔基2]3·((Ε)_2_吡啶-2_基_乙烯基）_1Η_吲 唑-6基胺基卜苯甲醯胺
將2_[3·吼。疋-2-基乙炔基引。坐-6基胺基]-苯甲酸（41毫 克，0.117毫莫耳）、丙炔胺（24微升，〇·35毫莫耳）、三乙胺 (81被升’ 0.58¾莫耳）溶解於DMF (0.5毫升）之溶液以HATU (89毫克，0.233毫莫耳）處理。將混合物攪拌隔夜，而後以 逆相HPLC純化而得到標題化合物27毫克（59%)為黃色固 體。H NMR (DMSO-d6): δ 9·78 (1H，s)，8.99 (1H，m)，8.61 (1H? d5-J=2.1)? 7.88 (1H? s)? 7.72 (3H? m)5 7.43 (4H? m)9 7.29 (1H，s)，7.04 (1H，d，J=7.3)，6·91 (1H，t，J=5.2)，4·〇4 (2H，s)， 3·04 (1H，s) 〇 ESIMS (M+H+): 392.1。 實例4(a) · 2_漠_4,6-二甲基_n比咬
將 48%HBr (aq) (Aldrich，65毫升，1·2莫耳，10 當量）之 /奋液冷部至-5 C並以4,6-二甲基_吡啶基胺（Aldrich，15.0 克，0.12莫耳，ι·〇當量）處理。將黏稠白色鹽混合物以機械 攪拌器攪拌同時逐滴加入溴（Aldrich，19 7毫升，〇·38莫耳， 3· 1 § 1 )。將形成的紅色混合物以NaN〇2 (Aldrich，22·丄克， 0·32莫耳，2.6當量）之水溶液（32毫升水）於一小時期間處
O:\90\90027.DOC -75- 200424193 理。於亞硝酸鹽加入期間使溫度保持於5°C以下，而後於2 小時期間逐漸升溫至2〇t：。將反應混合物以NaOH (aq)調整 至pH14 ’並以MTBE萃取。將有機萃取液以水、鹽水清洗， 經硫酸鎭乾燥，過濾及減壓下濃縮。藉快速色層分析法（矽 膠，350克）及以2-7%醋酸乙酯-環己烷沖提將粗產物（29克紅 色油）純化，得到橘色油〇1·〇克，48%)。iHNME^DMSO-dh 300 MHz): δ 7.30 (1H，s)，7.13 (1H，s)5 2·39 (3H，s)，2.26 (3H，s)。13C NMR (DMS〇-d6, 75 MHz) δ 159.4, 151·3, 140·9, 125·7, 124.0, 23.7, 20.3。ESI m/z 186/188 (M+H)+。 實例4(b) : 3_[2-(4,6-二甲基比啶·2_基）-乙烯基卜硝基 -1-(四氫吡喃_2_基吲唑 將2-溴-4,6_二甲基吡啶（2.42克，13毫莫耳）、3-乙烯基-6- 硝基-1-(四氫-吡喃_2-基）-ih_吲唑（2.37克，8.67毫莫耳）、 醋酸鈀（0.145克，0.65毫莫耳）、三-鄰甲苯基膦（〇·791克， 2.6¾莫耳）及二異丙基乙基胺（2·4毫升，13·8毫莫耳）於 DMF水溶液（85%， 34·5毫升）之懸浮液以氬氣吹驅除氣$分 鐘，接著超音波震盪5分鐘，之後於微波裝置中加熱（3〇〇 瓦10 /°功率）於11 〇 C 40分鐘。冷卻後將混合物滴入冷水 中。將形成的黃色沉澱以過濾收集。#固體溶解於醋酸乙 酯，乾燥（硫酸鈉），及減壓濃縮。於矽膠上利用〇至2〇%醋 酸乙酉旨於氯仿及己糾··收合物中的梯度作為沖提液將歹;
O:\90\90027.DOC -76- 200424193 =:?Γ;由！層分析得到的產物_E/己烧研磨而得 。尹#為κ色固體。將母液以類似方式於矽膠上重新 純化接著研磨，而得到更多菸
更夕乾，尹產物，產率為68%NMR (CDCI3): δ 8.54 (1Η s) s 1 c /1 ττ h ， ， · 5 GH，d，>9.4 Ηζ)，8.08 (1Η， d，J=9.04，1·9 Hz)，7.87 (1H d J—1“ u、 V cl，J —16.6 Hz)，7.55 (1H，d， J-16.6 Hz)? 7.14 (1H9 S) 6 90 nu 、 )，6·9〇 (1H，s)，5·82 (1H，dd，J=9 〇, 3.0 Hz)，4.08-4.01 (ih 3 Q ^ ，），3.84-3.76 (1H，m)，2·56 (3H，s)， 2.62-2.54 (1H，m) 2 34 mu 、 λ (3H，S)，2.24-2.10 (2H，m)， 1.88-1.68 (3H，m)。 實例5 : Μ2·(4,6·二甲基κ2基)_乙婦基】小(四氮“比嗔 -2-基）-1Η_吲唑-6_基胺
將3-[2-(4,6-二曱基-吼唆_2_基）_乙烯基]_6_确基(四氯 吼喃-2-基坐（4.22克’ U.16毫莫耳）、鐵粉（2·71克， 48.51毫莫耳）及飽和NH4C1水溶液（25毫升）於乃毫升乙醇中 之懸ί予液於45 °C加熱18小時。將反應冷卻並經濾紙過濾， 以甲醇清洗。減壓下將溶劑去除並將水層以醋酸乙g旨萃取 (2x)。將合併的有機層以鹽水清洗，乾燥（硫酸鎂）及減壓濃 縮而得到4.02克（定量）赭色固體，使用而無進一步純化。 !H NMR (DMSO-d6) δ 7.79 (1H, s), 7.74 (1Η, d, J=l6.4 O:\90\90027.DOC -77- 200424193 Ηζ)，7·35 (1H，d，J=16.4 Ηζ)，7·29 (1H，s)，6·96 (1H，s)，6·63 (2H，m)，5.57 (1H，dd，J=2.4, 9·5 Hz)，5.44 (2H，broad s)， 3·88 (1H，m)，3·67 (1H，m)，2·45 (3H，s)，2·37 (1H，m)，2.29 (3H，s)，ι·99 (2H，m)，1·73 (1H，m)，1.57 (2H，m)。 實例6 : 2-[3·[2_(4,6-二甲基-吡啶_2-基）-乙烯基]-1-(四氫-吡喃-2_基）-1Η-吲唑-6-基胺基】_苯甲酸甲酯
將3-{2-(4,6-二甲基-吡啶-2-基）-乙烯基]-1-(四氫-吡喃 基）-1Η-吲唑—6-基胺（870毫克，2.5毫莫耳）、2-溴-苯甲酸甲 醋（〇.44毫升，3.12毫莫耳）、11-：6^八？（78毫克，0.125毫莫 耳）、Pd2(dba)3(29毫克，0.03毫莫耳）及碳酸铯（1.22克，3.75 毫莫耳）於曱苯（6毫升）之攪拌的懸浮液除氣，並於10(TC加 熱18小時。將反應混合物冷卻，倒入飽和NaHC03及以醋酸 乙酉旨萃取（2X)。將合併的有機層以鹽水清洗，乾燥（硫酸鎂） 及減壓濃縮。將殘餘物於矽膠上以5_1〇%Et〇Ac於ch2C12之 梯度沖提快速色層分析而得到964毫克（8〇%)黃色泡沫。 H NMR (DMS0-d6) δ 9·49 (1H，s)，8·13 (1H，d，J=8.7 Hz)，7.94 (1H，dd，8.0 Hz)，7·85 (1H，d，J=16.4 Hz)， 7.58 (1H，d，J=1.5 Hz), 7.48 (1H，d，J二 16.4 Hz)，7.47 (1H，
O:\90\90027.DOC -78- 200424193 m), 7.37 (1H, d, 1=1.1 Hz), 7.34 (1H, s), 7.19 (1H, dd, J=1.7, 8.7 Hz), 6.99 (1H, s), 6.89 (lH, t, Hz), 5.83 (lH, d, J=7.2HZ)，3.88(3H，S)，3.75(lH，m)，2.48(3H，s),2.41(2H, m),2.31(3H, s), 2.02 (2H, ^)^.75 (1H? m), m), C29H30N4O3.0.15 EtOAc之分析計算值：c，7i 7i; H, 6 34; N， 11.30。實測值：C，71.60; H，6.14;N，U 37。 實例7: 2-[3-[2-(4,6_二甲基“比咬士基）己烯基】小（四氮· 呢喃-2_基）-111_吲唑-6-基胺基】_苯甲酸
將2_[3_〇(4, 6_二曱基』比啶士基）_乙烯基]小（四氫_外匕喃 -2-基）-iH-吲唑-6-基胺基[笨甲酸甲酯（198克，411毫莫 =)於THF·· Me0H(12毫升，3:丨）的攪拌溶液加入溶於水（3 毛升）的氫氧化鉀（1.15克，20.5毫莫耳）。將反應s7(rc加熱 2小時，冷卻，減壓濃縮至約5毫升並以更多水稀釋。將溶 液以2 N HC1中和並將沈澱以過濾收集，以水清洗而得到 2·〇〇克（定量）亮黃色固體。iHNMRCDMSO-dd δ 13.12 (1H， broad s)，9.82 (1Η，s)，8·13 (1Η，d，J=8.7 Ηζ)，7.95 (1Η，dd， J==1.5, 8·〇 Hz)，7·89 (1H，d，J=16.4 Hz)，7.60 (1H，s)，7.50 (1H，d，J=i6.4 Hz)，7·46 (1H，d，J=6.9 Hz)，7·37 (1H，d， J=7.7 Hz)，7.20 (1H，d，J=8.7 Hz)，7·06 (1H，s)，6.86 〇H，t， O:\90\90027.DOC -79- 200424193 J=6.9 Ηζ)，5·85 (1H，d，卜7·3 Hz)，3.82 (2H，m)，2.50 (3H，s， obscured by dmso)，2·48 (2H，m)，2·34 (3H，s)，2.03 (2H，m)， 1.76 (1H，m)，1.59 (2H，m)。C28H28N4O3.0.5 KOH之分析計 算值·· C，67·72; Η, 5.79; N，11.28。實測值：C，67.65; H，5_88; N， 11.07 。 實例8 : 2-{3-[2-(4,6_二甲基-吡啶-2-基）-乙烯基】_111_吲唑 -6-基胺基卜苯甲酸對甲苯磺酸鹽
將2·[3-[2-(4,6-二曱基-吡啶-2-基）·乙烯基]四氫比喃 -2-基）-- 6-基胺基]-苯甲酸（2毫莫耳）及對甲苯石黃酸 (10毫莫耳）於甲醇水溶液（90%，20毫升）的混合物於7〇°C攪 拌1 8小時。冷卻後，將形成的黏稠黃色漿體過濾並將固體 以曱醇清洗而得到2-{3-[2_(4,6-二曱基_°比°定-2-基）_乙烯 基]-1H-吲唑-6-基胺基}•苯甲酸為對甲笨磺酸鹽’產率為 85% 呈淡黃色固體。1H NMR (DMSO-d6) δ 13·43 (1H，s)， 9.78 (1H，s)，8.24-8.19 (2H，m)，8·09 (lH，d，J=9·04 Hz)， 7·95 (1H，dd，J=7.9，1.1 Hz)，7.62-7.55 (2H，m)，7·49·7·38 (5H，m)，7.20 (1H，dd，J=9.0, 1·9Ηζ)，7·〇9 (2H，d，J=8.3 Hz)， 6·86 (1H，dt，J=7.9, 1·1 Hz)，2·67 (3H，s)，2.54 (3H，s)，2·27 (3H，s) 〇 O:\90\90027.DOC -80- 200424193 實例9 : N-[4_(三級丁基- ^ ^ 一甲基_發燒氧基）-丁 -2-执 基】-2-[3·[2-(4,6-二甲基—比啶 2炔 1贫、 f 基）_乙烯基】·1_(四氫-吡喃 2·基）-1Η·射-6·基胺基卜苯甲醜胺 虱比择
以2000年6月30日申缚夕、， 。月之果國專利申請案戽 09/609,335號中實例33(a)步驟f 序號弟 )乂驟~)說明的類似方式製備（將 其全文為所有目的以引用的方式併人本文中），除了利用 4-(三級丁基-二甲基-矽烷氧基）_ 丁 _2_炔胺及2_[3_[2_(4 6_ 二曱基^比啶-2-基）-乙烯基]-1-(四氫-吡喃，吐 -6-基胺基]-苯甲酸。1H NMR (DMSO_d6) δ 9.56 (1H，s)，9.01 (1H，t，J=5.7 Hz), 8.06 (1H，d，J=8.7 Hz)，7.81 (1H，d，J=16 4 Hz)，7.66 (1H，d，J=7.5 Hz)，7·41 (4H，m)，7.32 (1H，s)，7.09
(1H，dd，J=1.8, 8.7 Hz)，6.98 (1H，s)，6,89 (1H，t，J=8.〇 Hz)， 5.79 (1H，dd，J=2.4, 9.2 Hz)，4.28 (2H，s)，4·〇9 (2H，m)，3·86 (1H，m)，3.72 (1H，m)，2.46 (3H，s), 2·42 (1H，m)5 2.30 (3H s)，2·08 (2H，tn)，1.74 (1H，m)，1.57 (2H，m)，0·8〇 (9H，s)， 0.03 (6H，s)。C38H47N5O3Si*0.7 H2〇之分析計算值：c，6889· H，7.36; N，10.57。實測值：C，68·99; H，7.36; N，l〇.21。 實例10 : 2-{3-[(Ε)_2-(4,6·二曱基-吡啶-2-基）_乙稀基】_1H_ O:\90\90027.DOC -81 - 200424193 吲唾-6基胺基卜N-(4-羥基-丁-2-炔基）-苯甲醯胺
將N-[4-(三級丁基-二甲基-矽烷氧基> 丁 -2-炔 基]-2-[3-[2·(4,6-二曱基-。比唆-2-基）-乙烯基]-1_(四氳-ϋ比喃 . -2-基）-lH-吲唑-6-基胺基]-苯甲醯胺（737毫克，1.13毫莫耳） 一 及對甲苯磺酸（8·2毫升，12%於HOAc)之攪拌溶液於70°C加 馨 熱2小時。將反應冷卻，並小心地倒入飽和NaHC03中，以 EtOAc萃取（2x)。將合併的有機層以鹽水清洗（2x)，乾燥 (MgS04)及減壓濃縮。將殘餘物於矽膠以〇112<^12:丑沁八(：··
MeOH (1:1:〇·1)沖提快速色層分析而得到225毫克（44%)白 色固體‘。4 NMR (DMSO-d6) δ 12·91 (1H，s)，9·84 (s，1H)， 9·01 (1Η，t，J=5.3 Ηζ)，8.07 (1Η，d，J=8.7 Ηζ)，7.84 (1Η，d， J=16.4 Hz)，7.70 (1H，d，J=7.2 Hz)，7.43 (3H，m)，7.31 (1H， s)，7·26 (1H，s)，7.02 (1H，dd，J=1.6, 8·7 Hz)，6·97 (1H，s)， · 6.89 (1H，t，J=6.7 Hz)，5.12 (1H，t，J=5.8 Hz)，4.10 (2H，d， J=5.3 Hz)，4.07 (2H，d，J=5.8 Hz)，2·47 (3H，s)5 2.31 (3H，s)。 C27H25N5〇2.1.1 H20之分析計算值：c，68.80; H，5·82; N， 14.86。實測值：C，68.72; H，5.81; N，14.65。 實例11 : 4-(三級丁基-二甲基-梦烧氧基）-丁 快胺
-82-
O:\90\90027.DOC 200424193
(3.14克，15·7毫莫耳）於THF (5〇毫升）的冰冷攪拌溶液加入 DBU (2.6毫升，17·4毫莫耳）及DppA(38毫升，ΐ7·6毫莫 耳）。將溶液升溫至室溫並於惰性大氣中攪拌隔夜。將反應 倒入飽和NaHC〇3中並分層。將水層以Et〇Ac再萃取（2χ)， 將合併的有機層乾燥（NadCU)及真空濃縮。將三苯膦（4.61 克，17.6¾莫耳）加至此溶於THF (5〇毫升）的粗疊氮，之後 加入水（0.44晕升）。將形成的溶液於室溫攪拌隔夜，減壓濃 縮並將殘餘物混合於玢2〇/石油醚之丨：1混合物中。將固體 私除並將濾液濃縮，並藉矽膠以沖提快 速色層刀析純化而得到琥珀色油。1h Nmr (CDCl3) δ 4.19 (2Η’ t’ J 1·9 Ηζ)，3·33 (2Η，t，J=1.9 Ηζ)，0·79 (9Η，s)，〇·〇〇 (6Η，s)， 實例12 2丨3_[2_(4,6_二甲基K2-基）乙烯基]_1_(四氣-
以上述實例6說明 2-[3-[2-(4,6-二 ψ 基_吡 基）-imi唑基胺： (DMSO-d6) δ 9.87 (ifj 况明的類似方式製備，除了利用 基^比啶-2-基）-乙烯基]-1-(四氫-吡喃-2-基胺基]-苯曱酸及丙炔胺。1H NMR (1Ή，s)5 9.04 (1Η，t，J=5.8 Ηζ)，8.08 (1Η，
O:\90\90027.DOC -83 - 200424193 d，J=8.7 Ηζ)，7·83 (1H，d，J=16.4 Hz)，7.69 (1H，d，j二7·5
Hz)，7·44 (4H，m)，7.34 (1H，s)，7.12 (1H，dd，J=1.7, 8.7 Hz)， 6·99 (1H，s)，6·91 (1H，t，J二5·8 Hz)，5.81 (1H，dd，J=2.4, 9.2
Hz)，4.07 (2H，dd，J=2_5，5.7 Hz)，3·88 (1H，m)，3.74 (lH’ m)，3·12 (1H，t，J=2.5 Hz)，2·48 (3H，s)，2.43 (1H，m)，2·31 (3H，s)，2.01 (2H，m)，1.74 (1H，m)，1.58 (2H，m)。 C31H31N5CV1.1 Η2〇·〇·3 TBME之分析計算值：C，70.73; H’ 6.72; N，12.69。實測值：c，70.56; H, 6.45; N, 12.49。 實例 13 ·· N_(丙 _2-炔基）-2-{3-[(E)-2_(2,4-二甲基-吡啶 基）-乙烯基]·1Η-吲唑-6基胺基卜苯甲酿胺
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用n-(3-環两 基-丙-2-炔基）-2_[3-[2-(4,6-二甲基_ ^比σ定-2-基）-乙鄉 基]-1-(四氫-吼喃-2-基）-1Η-吲唑_6_基胺基]-苯甲醯胺取代 Ν-[4·(二級丁基-一甲基-石夕炫氧基）-丁 -2-炔 基]-2-[3-[2-(4,6-二甲基-吡啶-2-基）_乙烯基]-1-(四氫_吡喃 -2-基）-lH-吲唑-6-基胺基]-苯甲醯胺。iH NMR (DMS〇-d6) δ 12.90 (1Η，s)，9·78 (1Η，s)，9·〇ΐ (1Ή，t，J=5 3 Ηζ)，8 〇6 (m， d，J=8.3 Ηζ)，7·84 (1Η，d，J=l6.2 Ηζ)，7·68 (1Η，dd，J=7.9, 1.1 Hz)，7.45-7.36 (3H，m)，7.30 (1H，s)，7 25 (1H，d，J=1 5 O:\90\90027.DOC -84- 200424193 Ηζ)，7·01 (1H，dd，J=8.7, 1.9 Hz)，6·96 (1H，s)，6·88 (1H，dt5 J=6.8，1.9 Ηζ)，4·04 (2H，dd，J=5.6，2.6 Hz)，3·11 (1H，t5 J=2.6 Hz)，2·46 (3H，s)，2.29 (3H，s)。 實例14 : 2-[3_[2-(4,6_二甲基-吡啶-2-基）-乙烯基】-1_(四氳-叹喃-2-基）-1Η-吲唑-6基胺基】-N-(2-甲基·烯丙基）-苯曱醯 胺
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用 2-[3-[2-(4,6-二甲基-外匕唆-]-基）·乙稀基]-1_(四氮比哺-2-基）-lHr吲唑-6-基胺基]-苯甲酸及2-甲基-烯丙胺。1H NMR (DMSO-d6) δ 9.87 (1H? s)? 8.82 (1Η? t? J-5.8 Hz)5 8.07 (1H5 d，J=8.7 Hz)，7.82 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·74 (1H，d，J=7.3 Hz)，7·43 (4H，m)，7.33 (1H，s)，7.10 (1H，d，J=8.7 Hz)，6.99 (1H，s)，6·92 (1H，t5 J=7.8 Hz)，5.80 (1H，dd，J=2.2, 9.2 Hz)， 4.83 (2H，d，J=11.8 Hz)，3.83 (4H，m)，2·47 (3H，s)，2.44 (1H，m)，2·31 (3H，s)，2.00 (2H，m)，1·75 (1H，m)，1.73 (3H， s)，1.58 (2H，m)。 〇32Η35Ν5Ο2·1·09 H20之分析計算值：C，71·00; H，6·92; N， 12·94。實測值：C，71.40; H，6.89; N，12.54。 實例15 : 2-{3·[2_(4,6-二甲基-吡啶-2-基）-乙烯基】-1H-吲唑 -6基胺基}-N-(2-甲基-丙烯基）-苯甲醯胺 O:\90\90027.DOC -85- 200424193
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用N-(2-甲基-細丙基）-2-[3-[2-(4,6 -二甲基-。比°定-2-基）-乙稀基]_1-(四氮· 吡喃-2-基）-1Η-吲唑-6-基胺基]-苯曱醯胺取代N-[4-(三級丁 基-二甲基-矽烷氧基）-丁-2-炔基]-2-[3-[2-(4,6·二甲基-呢啶 -2-基）-乙烯基]-1-(四氫-啦喃-2-基）·1Η-吲唑-6-基胺基]-苯 甲醯胺。1H NMR (DMSO-d6) δ 12.89 (1Η，s)，9.75 (1Η，s)， 8·79 (1Η，t，J=5.6 Ηζ)，8·05 (1Η，d，J=8.7 Ηζ)，7·85 (1Η，d， J=16.2 Hz)，7.74 (1H，d，J=7.9 Hz)，7·45-7·33 (4H，m)，7·23 (1H，d，J=1.5 Hz)，7.00-6.97 (2H，m)，6.90 (1H，dt，J=7.9, 1.1 Hz)，4.81 (2H，d，J=11.3 Hz)，3.81 (2H，d，J=5.6 Hz)， 2.47 (3H，s)，2·30 (3H，s)，1.71 (3H，s)。 另一合成計晝
(1)Βυϋ Η ·-三·…(2) (CH2〇)n Cl THF HO ^^-<3
DPPA DBU 甲苯
PPh3, H20 THF <] H2N、 實例16(a):環丙基-丙-2·炔-1-醇 O:\90\90027.DOC -86- 200424193
至含有70毫升無水THF冷卻於_1(rc冰浴的圓底燒瓶中加 入65.6毫升己烧中1.6 M BiiLi (1〇5毫莫耳）。缓慢將弘氯一戊 -1炔（5·13克，50¾莫耳）加入同時維持溫度於至。將 混合物於氬氣下0 °C攪拌2小時。將多聚甲盤 (Paraformaldehyde) (3克，100毫莫耳）以固體加入。將混合 物逐漸升溫至室溫並於氬氣下攪拌隔夜。第二天，將水加 入並將約50名升IN HC1水溶液加入。將混合物以醋酸乙酯 萃取並將合併的有機層以鹽水清洗，經硫酸納乾燥，過濾 及濃縮。藉管柱以20%***於己烷沖提將粗產物純化，得 到3克為油的3-環丙基-丙-2-炔_1_醇（62%產率）。iH NMR (CDC13·) δ 4.22 (dd，2H，K04, 2.01 Hz)，1.46 (t，1H，J=6.04 Hz)，1.26 (m，1H)，0.77 (m，2H)，〇·7〇 (m，2H)。 實例16(b) ·· 3-環丙基-丙-2-炔疊氮
將3-環丙基-丙-2-炔-丨_醇（3·28克，341毫莫耳）溶解於4〇 毫升甲苯，將DPPA(11.26克，40·9毫莫耳）加入，之後加入 DBU(6.24克，40.9毫莫耳）同時以水浴持溫。將混合物於室 溫攪拌1小時，以100毫升己烷及15毫升CH2Cl2稀釋。將混 合物以水洗四次及鹽水洗一次，經硫酸鈉乾燥，過濾及以 冷水浴旋轉蒸發濃縮以去除大部分有機溶劑，留下一些甲 苯（產物可揮發）。使用殘餘的油於下步驟中。NMR
O:\90\90027.DOC -87- 200424193 (CDC13) δ 3·85 (s，2H)，1.26 (m，1Η)，0·80 (m，2H)，〇·72 (m 2H)。 m 實例16(c) : 3·環丙基-丙-2-炔胺
<3 將3-環丙基-丙_2_炔疊氮（約34毫莫耳）溶解於ι〇〇毫升 THF中，將1耄升水加入，之後加入白色固體之ρρ、（1 3 克，5 1宅莫耳）同時以水浴持溫。將混合物於室溫攪拌1巧 時。將150毫升1 n HC1水溶液加至混合物中。將混合物以 CHWl2清洗3次。將水層以5 N NaOH鹼化至ρΗΙΟ-12。將混 合物以酷酸乙酯萃取。水層以TLC染色以監測萃取胺至有 機層。將合併的有機層經硫酸納乾燥，過渡及濃縮而得到 1·62克所需產物（產物可揮發，含有殘餘Et〇Ac溶劑）（兩步驟 共計 50%產率）。4 NMR (CDC13) δ 3.37 (d，2H，J=2 Hz)， 1.22 (m，1H)，0.74 (m，2H)，0.65 (m，2H) 〇 實例17 · N-(3-環丙基_丙-2_快基）·2-[3-[2-(4,6-二甲基比咬 -2-基）_乙烯基】_ι_(四氫-吡喃基）-1Η-吲唑-6基胺基】·苯 甲醯胺
O:\90\90027.DOC -88- 200424193 2-[3-[2-(4,6-二甲基-吼啶-2-基）-乙烯基]-1-(四氫-。比喃-2-基）-1 Η-吲唑-6-基胺基]-苯甲酸E及3-環丙基-丙-2-炔胺。b NMR (CDC13) ·· δ 9.51 (1H，s)，7·97 (1H，d，J=8.7 Hz)，7.81 (1H，d，J=16.6 Hz)，7.51-7.42 (3H，m)，7.34-7.29 (2H，m)， 7.16 (1H，s)，7.11 (1H，dd，J=9.0, 1.9 Hz)，6.85 (1H，s)，6.81 (1H，dt，J=7.2, 1·1 Hz)，6·23 (1H，t，J=7.2 Hz)，5.61 (1H，dd， J=9.0, 2.6 Hz)，4.17 (2H，dd，J=5.3, 2.3 Hz)，4.07-4.00 (1H， m)，3.75-3·66 (1H，m)，2.63-2.50 (1H，m)，2·54 (3H，s)，2.32 i (3H，s)，2.20-2.02 (2H，m)，1.79-1.62 (3H，m)，1.29-1.19 - (1H，m)，0.77-0,67 (4H，m) 〇 實例 18 : N-(3-環丙基-丙-2-炔基）-2_{3_[(E)-2-(4,6-二甲基-吡啶-2-基）-乙烯基卜1H-吲唑·6基胺基卜苯甲醯胺
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用 2-[3-[2-(4,6 -二甲基-°比口定-2 -基）-乙細基]-1-(四氮-11比喃-2 · 基引ϋ坐-6 -基胺基]-Ν-丙-2 -快基苯甲酸胺取代Ν-[4-(三 級丁基-二甲基-矽烷氧基）-丁-2-炔基]-2-[3-[2-(4,6-二甲基-°比σ定-2 -基）-乙細基]-1-(四鼠-^比喃-2 -基）-1Η - °引σ坐-6 -基胺 基]-苯甲醯胺。1H NMR (DMSO-d6) ·· δ 12.90 (1Η，s)，9.79 (1Η，s)，8·91 (1Η，t，J=5.6 Ηζ)，8.06 (1Η, d，J=8.7 Ηζ)，7.83 O:\90\90027.DOC -89- 200424193 (1H, d, J=16.2 Hz), 7.68 (1H, dd, J=7.9, l.j Hz), 7.49-7.38 (3H，m)，7.29 (1ϊί，s), 7.25 (1H，d，J=1 9 Hz)，6 99 (ih，机 J=9.0, 2.3 Hz), 6.96 (1H, s), 6.88 (1H, dt, J=7.9, 1.5 Hz)! 4.00 (2H, dd, J=5.6, 1.9 Hz), 2.46 (3H, s), 2.29 (3H, s)! 1-31-1.23 (1H, m), 0.75-0.70 (2H, m), 0.57-0.52 (2H, m) 〇 ? 實例19(a) : 2-丁炔a，4·二醇，單醋酸醋
至2-丁炔-i，4_二醇克，58¾莫耳）於無水丁1^1?的溶液於 室溫分批加入氫化鈉（60%分散於油中，2·32克，58毫莫 耳）。4.3小時後，將乙醯氣（4.12毫升，58毫莫耳）加入。室 溫攪拌22小時後’將混合物減壓濃縮。將殘餘物由甲苯濃 縮兩次後，於石夕膠上以醋酸乙醋/二氯甲燒（1:3)作為沖提液 純化，得到為油的2-丁快-1，4-二醇，單醋酸酉旨（49%產率）。 ^ NMR (DMSO-d6) δ 5.23 (1Η, bs), 4.70 (2H, t, J=1.8 Hz) 4·09 (2H，s)，2.03 (3H，s)。 ’ 實例19(b):醋酸4_胺基-丁 炔醋 人 以上述實例8說明的類似方式· 一 、1備，除了利用2-丁炔-；ι，4_ 二醇，單醋酸酯取代4-(三級丁其_ >〆仔 $^二曱基-矽烷氧基）-丁 -2- 炔小醇。1H NMR (DMSO-d6) δ 4,,, U ό 4·77 (2Η，s)，4.20 (2Η，s)， O:\90\90027.DOC -9(Κ 200424193 2·04 (3H，s)。 實例2〇 ··醋酸4·(2-{3-[(Ε)-2_(4,6-二甲基吡啶-2-基）-乙烯 基】-1H-吲唑-6基胺基}•苯甲醯胺）-丁-2-炔基酯
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用2-[3-[2-(4， 6-二甲基-吡啶-2-基）-乙烯基]-1H-吲唑-6-基胺基]-苯甲酸 對曱苯磺酸鹽及醋酸4-胺基-丁 -2-炔酯。4 NMR (CD3CN) : δ 11.00 (1H，bs)，9·59 (1H，s)，7.99 (1H，d，J=8.6 Hz)，7·86 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·58 (1H，d，J=7.8 Hz)， 7.49-7.37 (4H，m)，7·32 (1H，s)，7.21 (1H，s)，7.06 (1H，dd， J=8.8，1·8 Hz)，6·96 (1H，s)，6.90 (1H，t，J=7.8 Hz)，4.63 (2H，s)，4.16 (2H，d，J=5.6 Hz)，2·49 (3H，s)，2·32 (3H，s)， 2.01 (3H，s) 〇 實例21 : 2_[3-[(E)_2-(4,6_二甲基-吡啶-2_基）-乙烯基】-1-(四 氫-吡喃-2-基）-1Η-吲唑_6基胺基卜菸鹼酸甲酯
以上述實例3說明的類似方式製備，除了利用2-溴-菸鹼 O:\90\90027.DOC -91 - 200424193 酸甲酯取代2-溴-苯甲酸甲酯。1H NMR (DMSO-d6) : δ 10.36 (1Η，s)，8·50 (1Η，dd，J=4.7, 1·9 Ηζ)，8·36 (1Η，d，J=1.4 Ηζ)， 8·30 (1H，dd，J=7.8，2·0 Hz)，8·08 (1H，d，J=8.8 Hz)，7.83 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·48 (1H，d，J=7.5 Hz)，7.44 (1H，s) 7.83 (1H，s)，6.98-6.93 (2H，m)，5.80 (1H，d，J=7.0 Hz)，2.93 (3H， s)，3.93-3.90 (1H，m)，3·80-3·75 (1H，m)，2.46 (3H，s)，2.30 (3H，s)，2.10-1.97 (2H，m)，1.89-1.60 (3H，m) 〇 實例22 : 2_[3-[(Ε)·2_(4,6·二甲基-吡啶-2_基）-乙烯基卜1·(四 氫-吡喃-2_基）_111-吲唑·6基胺基】-菸鹼酸
以上述實例4說明的類似方式製備，除了利用 2-[3-[(Ε)-2-(4,6-二甲基-〇比〇定-2-基）-乙稀基]-1-(四氯-〇比喃 -2-基）-1Η-吲唑-6基胺基]-菸鹼酸甲酯取代2-[3-[2-(4,6-二 甲基-σ比唆-2 -基）-乙細基]-1-(四鼠-ϋ比喃-2 -基）-1Η -。引σ坐-6基 胺基]-苯甲酸甲酯。4 NMR (DMSO-d6) : δ 10.73 (1Η，s)， 8·49 (1Η，d，J=1.9 Ηζ)，8.45 (1Η，s)，8·31 (1Η，dd，卜7.7, 1.8 Hz)，8.16-7.97 (3H，m)，7·70 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·50 (1H，d， J=8.6 Hz)，7·37 (1H，s)，6.96 (1H，dd，J=7.7, 4.8 Hz)，5.87 (1H，d，J=8.4 Hz)，3.95-3.90 (1H，m)，3.79-3.70 (1H，m)， 2·63 (3H，s)，2.47 (3H，s)，2.07-1.99 (2H，m)，1.81-1.62 (3H， O:\90\90027.DOC -92- 200424193 m) 0 實例23 . 2-{3·[(ε)_2-(4,6-二甲基“比咬_2_基）_乙稀基】_m_ 喷峻-6基胺基}_N•(續基_丁+炔基）_於驗醯胺
基）·2-[3_[2-(4,6- 將N-(4-羥基-丁 -2-炔 基乙烯基]小（四氫_Dtt喃_2_基）__丨唾_6基胺基]_於驗酿 胺及Ν-[4-(三級丁其 -田《· 欠丁基_ 一甲基-矽烷氧基）-丁 -2-炔 基]-2-[3-[2-(4,6_二曱基_0比。定_2·基乙烯基]小（四氫_吼喃 -2基）’1Η引唑_6_基胺基]_菸鹼醯胺之粗混合物以上述實 例6說明的類似方式由2-[3_[⑻-2-(4,6-二甲基_吼咬_2_基）_ 乙烯基]-1-(四氫“比喃_2_基）_1Η“引哇_6基胺基卜於鹼酸及 4-( 一:及丁基甲基·石夕院氧基）_ 丁 士快胺製備，及隨後以 上述實例7說明的類似方式轉變成2_{3_[⑻_2七，卜二曱基_ 吼咬-2·基）_乙烯基ΗΗ_6基胺基}_ν♦祕_丁^ 基）-於_胺，除了制叫4_縣·丁 _2•炔基）卻仆㈣ 二甲基-H2-基）_乙稀基]小（四氫m基）_m令坐_6 基胺基]姻酿胺及叫(三級丁基_二曱基_魏氧基）_丁 -2-炔基]、2_[3_[2_(4,6_二曱基_α比α定_2_基）_乙稀基]_l《四氣-t南-2-基）_lH-口引嗤_6_基胺基]终驗酿胺取代N例三級丁 基-二甲基-石夕烷氧基）-丁-2-炔基]二曱基、啶 O:\90\90027.DOC -93- 200424193 -2-基）-乙烯基]-1-(四氫-吼喃-2-基）-1H-吲唑-6-基胺基]-苯 甲醯胺。1H NMR (DMSO-d6) : δ 12.99 (1H，s)5 11.21 (1H，s)， 9·26 (1Η，t，J=5.3 Ηζ)，8.50 (1Η，d，J=1.9 Ηζ)，8·41 (1Η，dd， J二4.9，1.9 Hz)，8.16 (1H，dd，J=8.3，1.9 Hz)，8.04 (1H，d， J=9.0 Hz)，7.85 (1H，d，J=16.6 Hz)，7.42 (1H，d，J=16.6 Hz)， 7·31 (1H，s)，7.06 (1H，dd，J=8.7, 1.5 Hz)，6.96 (1H，s)，6.93 (1H，dd，J=7.5, 4.9 Hz)，5·14 (1H，t，J=5.6 Hz)，4·16 (2H，d， J=5_6 Hz)，4.08 (2H，d，J=7.2 Hz)，2·46 (3H，s)，2.30 (3H，s)。 實例24 : 2-{3-[2-(4,6-二甲基-吡啶-2-基）-乙烯基】-1H-吲唑 -6基胺基菸驗酸對甲苯磺酸鹽
以上述實例5說明的類似方式製備，除了利用 2-[3-[(E)-2-(4,6 -二甲基-°比唆-2-基）-乙細基]-1-(四氯-σ比喃 -2-基）-1Η-吲唑-6基胺基]_菸鹼酸取代2-[3-[^)-2-(4,6-二甲 基-°比°定-2 -基）-乙炸基]-1-(四鼠-π比喃-2 -基）-1Η -ϋ弓丨嗤-6基胺 基]-苯甲酸。 jH NMR (DMSO-d6) ： δ 13.49 (1Η, s)5 10.80 (1H5 s)5 8.63 (1H，d，J=1.5 Hz)，8.49 (1H，dd，J=4.8, 1.9 Hz)，8.31 (1H，dd， J=7.7，1.9 Hz)，8.24-8.19 (2H，m)，8.06 (1H，d，J=8.8 Hz)， 7.60-7.55 (2H，m)，7.46 (2H，d，J=8.1 Hz)，7.22 (1H，dd， O:\90\90027.DOC -94- 200424193 J=8.8, 1_7 Ηζ)，7·09 (2H，d，J二7.9 Ηζ)，6·95 (1H，dd，J=7.7, 4.7 Hz)，2.66 (3H5 s)，2.54 (3H，s)，2·27 (3H，s)。 實例 25 : N-(3-環丙基-丙-2-炔基）-2·{3_[(Ε)-2·(4,6-二曱基-吡啶-2-基）-乙烯基】-1Η-吲唑-6基胺基卜菸鹼醯胺
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用 2-{3-[2-(4,6-二甲基-吼啶·2_基）-乙烯基]-1H-吲唑-6-基胺 基}-菸鹼酸對甲苯磺酸鹽及3_環丙基·丙-2-炔胺。iH NMR (DMSO-d6) ·· δ 13.01 (1H，s)，11·20 (1Η，s)，9.19 (1H，bt)， 8.51 (1Η，s)，8·40 (1Η，d，J=4.9 Ηζ)，8.15 (1Η，d，J=7.5 Ηζ)， 8.05 (1H，d，J=8.7 Hz)，7.83 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·42 (1H，d， J=16.4 Hz)，7.31 (1H，s)，7.05 (1H，d，J=8.3 Hz)，6·96 (1H， s)，6.92 (1H，dd，J=7.5, 4·9 Hz)，4·06 (2H，d，J=4.14 Hz)， 2.46 (3H，s)，2.29 (3H，s)，1.33-1.28 (1H，m)，0.77-0.72 (2H， m)，0.60-0.55 (2H，m)。 實例26 : 4-甲基-2-乙烯基-吡啶
將2-溴-4-甲基』比啶（Aldrich，5.2克，30.5毫莫耳，1.0當 O:\90\90027.DOC -95 - 200424193 罝）、2,6-二-三級丁基-4 -曱基_S分（Aldrich ’ 67毫克，〇·3毫 莫耳，1莫耳％)、三丁基-乙烯基-錫（Aldrich，26.8毫升，91.5 毫莫耳，3.0當量）及肆（三苯膦）|巴（0)(Strem，1.8克，1.5毫 莫耳，5莫耳％)於甲苯（1〇〇毫升）之黃色混合物除氣並以氬 氣吹驅。在將混合物加熱至l〇(TC後得到琥珀色溶液。18 小時後加入1 ·0 M HC1將反應混合物終止反應。將酸性萃取 物以醚清洗，以碳酸氫鈉調整至pH 9，並以醋酸乙酯萃取。 將有機萃取液以鹽水清洗，經硫酸鎂乾燥，過濾及減壓下 濃縮。It快速色層分析法（石夕勝）及以〇-5 %醋酸乙@旨-二氯甲 烧沖提將粗產物（3 ·7克棕色油）純化，得到澄清油（1.9克， 53%)。A NMR (DMSO-d6, 300 ΜΗζ) δ 8·39 (1H，d，J=4.9 Hz)，7.33 (1H，s)，7·10 (1H，dd，J=5.0, 0.8 Hz)，6.77 (1H，dd， 17.5，10·8 Hz)，6.20 (1H，dd，J=17.5，1·7 Hz)，5·44 (1H, dd5 J=10.8，1.8 Hz), 2·31 (3H，s)。ESIMS m/z 120 (M+H)+。 實例27 : 3_[2_(4_甲基-吡啶_2_基）_乙烯基卜6-硝基四氫 -吡喃-2_基）-1Η-吲唑
將4-甲基-2-乙浠基-吡啶（實例23)(19克，ι5·97毫莫耳）、 6-硝基-1-(四氫-吡喃-2-基）-3_乙烯基_1Η•吲唑（4.96克，13·3 笔莫耳）、Pd(OAc)2(149毫克，〇66毫莫耳）、ρ(鄰·甲苯基）3 及DIEA(3.5^升，19.96¾莫耳）於除氣的DMF(5〇毫升）之懸 O:\90\90027.DOC -96- 200424193 浮液於氬氣下100°C加熱18小時。將反應混合物冷卻並將固 體藉過濾去除並以醋酸乙酯清洗。將濾液以EtOAc稀釋，並 以鹽水清洗（2x)，乾燥（硫酸鎂）及減壓下濃縮。將殘餘物於 矽膠上色層分析及以己烷：醋酸乙酯（3 : 1)沖提而得到3.40 克（70%)亮黃色固體。 'H NMR (CDC13) δ 8.56 (1H5 s)? 8.50 (1H? d5 J-5.0 Hz)5 8.11 (2H，m)，7.89 (1H，d，J=16.3 Hz)，7.61 (1H，s)，7.03 (1H，d，J=4.3 Hz)，5·83 (1H，dd，J=2.6, 9.0 Hz)，4.06 (1H， m)，3·82 (1H，m)，2·58 (1H，m)5 2.39 (3H，s)，2.18 (2H，m)， 1.78 (3H，m)。C2〇H2〇N403之分析計算值：c，65.92; H，5.53· N，15.38。實測值：C，65.80; Η, 5·52; N，15.15。 實例28 : 3_[2_(4_甲基·啦啶_2_基）_乙烯基]-l(四氫比味_2_ 基）-1Η-吲唑-6基胺基
以上述實例2說明的類似方式製備，除了利用[2-(4-甲基_ 吼啶-2-基）_乙烯基]-6-硝基(四氫_吡喃·吲唑 (實例24)代替3-[2-(4,6-二甲基^比啶_2_基> 乙烯基]硝基 -1-(四氫-吡喃-2-基）-lH-吲唑。iHNMR(DMS〇_d6) : δ 8·43 (1Η，d，JM.8 Hz)，7.79-7.73 (2H，m)，7 5〇 (1H，s)，7 % (ιη， d，J=16.4 Ηζ)，7.09 (1Η，d，J=4 8 ηζ)，6 64-6 62 (2Ή，m)， 5·57 (1H，dd，J=9.8, 2.5 Hz)，5 48 (2H，⑹，3 92_3 85 (⑴， O:\90\90027.DOC -97- 200424193 m)，3.72-3.64 (1H，m)，2.43-2.34 (1H，m)，2·33 (3H，s)， 2.07-2.00 (1Ή，m)，1.96-1.90 (1H，m)，1.79-1.66 (1H，m)， 1·60-1·53 (2H，m)。 實例29 · 2·[3-[2-(4_甲基-σ比咬-2_基）-乙婦基】-1_(四氮-σ比喃 -2-基）-1Η-吲唑-6基胺基】-苯甲酸甲酯
以上述實例3說明的類似方式製備，除了利用3-[2-(4-曱 基-σ比咬-2 -基）-乙細基]-1-(四氮-ϋ比喃-2 -基）-1Η -σ弓丨哇-6基胺 基代替3-[2-(4,6-二曱基-吼啶-2-基）-乙烯基]-1-(四氫·吼喃 -2-基）-1Η-，唑-6基胺基。1H NMR (DMSO-d6) : δ 9·48 (1H， s)，8·45 (1Η，d，J=4.9 Ηζ)，8.13 (1Η，d，J=8.7 Ηζ)，7·93 (1Η， dd5 J=8.3，1.9 Hz)，7.86 (1H，d，J=16.2 Hz)，7.58 (1H，d， J=1.9 Hz)，7.54-7.44 (3H，m)，7.36 (1H，d，J=7.5 Hz)，7·18 (1H，dd，J=8.7，1.9 Hz)，7.11 (1H，d，J=4.9 Hz)，6·87 (1H，t， J=8.3 Hz)，5·83 (1H，dd，J=9.4，2·3 Hz)，3·87 (3H，1H)， 3.93-3.84 (1H，m)5 3.77-3.69 (1H，m)，2.46-2.37 (1H，m)， 2·34 (3H，s)5 2.10-1.94 (2H，m)，1.81-1.53 (3H，m)。 實例30 : 2-[3_[2-(4•甲基-吡啶-2-基）-乙烯基卜1-(四氫-吡喃 -2-基）-1Η-吲唑-6基胺基】-苯甲酸 O:\90\90027.DOC -98-
200424193 以上述實例4說明的類似方式製備，除了利用2-[3-[2-(4- - 甲基-17比σ定-2 -基）_乙坤基]-1-(四氮-σ比喃-2 -基）-1Η -σ弓|嗤-6基 胺基]-苯曱酸甲酯代替2-[3-[2-(4,6-二甲基-吼啶-2-基）-乙 _ 稀基]-1 -(四氫-σ比喃-2-基）-1Η-吲唾-6基胺基]-苯甲酸甲酯 (實例 3)。4 NMR (DMSO-d6) δ 13.17 (1Η，broad s)，9.83 (1H，s)，8.51 (1H，d，J=5.2 Ηζ)，8·14 (1H，d，J=8.7 Hz)，7.95 (1H，d，.J=16.4 Hz)，7.94 (dd，1H，J=1.5, 8·0 Hz)，7.73 (1H， s)，7·60 (1H，d，J=1.5 Hz)，7·59 (1H，s)，7.54 (1H，s)，7.46 (1H，m)，7·37 (1H，d，J=7.6 Hz)，7.23 (2H，m)，6.86 (1H，t， J=6.9 Hz)，5.87 (1H，d，J=7.6 Hz)，3.90 (1H，m)，3.76 (1H， ^ m)，2·45 (1H, m)，2·41 (3H，s)，2·03 (2H，m)，1.77 (1H，m)， 1.59 (2H，m) 〇 實例31 · 2-[3-[2-(4_甲基-12比淀_ 2 _基）-乙稀基】-1_(四氮_11比喃 -2-基）-1Η-吲唑-6基胺基】丙-2-炔基-苯甲醯胺
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用丙炔胺及 O:\90\90027.DOC -99- 200424193 2 [3-[2-(4-甲基》 π比a定-2-基）-乙炸基]-1-(四鼠-呢喃-2-基）-1Η· π引唑-6基胺基 ρ笨甲酸。1H NMR (DMSO-d6) δ 9·87 (1Η，s)， 9·〇3 (1H，t，J=5.5 Ηζ)，8.46 (1Η，d，J=4.9 Ηζ)，8·08 (1Η，d， 卜8.7 Hz)，7.86 (1H, d，J=16.4 Hz)，7.69 (1H，d，J二7.3 Hz)， 7·53 (1H，s)，7·44 (4H，m)，7.13 (2H，m)，6·91 (1H，t，卜7.9 Hz)，5.81(lH，dd，J=2.2,9.6Hz)，4.07(2H，dd，J=2.5,5.5Hz)5 3·89 (1H, m)，3·75 (1H，m)，3.12 (1H，t，J=2.5 Hz)，2·42 (1H， m)，2.36 (3H，s)，2.00 (2H, m)，1·75 (1H，m)，1·58 (2H，m)。 C3〇H29N5(V〇.25 TMBE之分析計算值：c，73.07; H，6.28; N， 13.64。實測值：c，72·95; H，6.30; N，13.64。 實例32 : 2-{3_[(E)_2_(4_曱基-吡啶_2_基乙烯基卜1H-吲唑 6基胺基}-N-丙-2-快基-苯甲酿胺
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用2_[3_[2_(4_ 甲基-吡啶-2_基）-乙烯基]-1-(四氫_吡喃-2_基>1H_吲唑_6基 胺基；I-N-丙-2-炔基-苯曱醯胺取代N_[心（三級丁基_二甲基_ 矽烷氧基丁-2-炔基]-2-[3-[2-(4,6-二甲基比啶-2_基）_乙 烯基]-1-(四氫-吼喃_2_基）-ΐΗ_η弓丨唑_6-基胺基]-笨曱醯胺。 !H NMR (DMSO-d6) δ 12.93? s)5 9.79 (1H5 s)5 9.〇2 (1H t W.4 Hz)，8.45 (1H，d，卜4·9 Hz), 8·08 (1H，d，>δ·7 Hz)’ 7·88 (1H，d，J=16.4 Hz)，7.69 (1H，d，J二7·7 Hz)，7·45 (4ή O:\90\90027.DOC -100- 200424193 m)，7.27,（1H，s)，7·10 (1H，d，J=4.9 Ηζ)，7·03 (1H，d，J=8.8 Hz)，6.90 (1H，t，J=7.9 Hz)，4.06 (2H，dd，J=2.4, 5.4 Hz)， 3·12 (1H，t，J=2.4 Hz)，2·35 (3H，s)。 C25H21N5O0.35CH2Cl2之分析計算值：C，69.64; H，5.00; N， 16.02。實測值：C，69.65; H，5.15; N，15.80。 實例33 : N-(2-甲基-烯丙基）-2-[3-[2_(4-甲基-吡啶-2-基）-乙 稀基】-1·(四氮比味-2_基）-111-11引峻-6基胺基】-苯甲酿胺
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用2-曱基-烯 丙胺及2-[3_[2-(4-甲基比啶-2-基）-乙烯基]_1-(四氫-吡喃 -2-基）-1Η-。引唑-6 基胺基]-苯甲酸。1H NMR (DMSO-d6) δ 9.86 (1Η，s)，8.81 (1Η，t，J=5.5 Ηζ)，8.46 (1Η，d，J=4.9 Ηζ)， 8·07 (1H，d，J=8.9 Hz)，7·86 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·75 (1H，d， J = 7.7 Hz)，7·54 (1H，s)，7.50 (1H，d，J=16.4 Hz)，7.43 (3H， m)，7·11 (2H，m)，6.92 (1H，t，J=8.1 Hz)，5·81 (1H，dd，J=2.5, 9.8 Hz), 4·83 (2H，d，J=11.5 Hz)，3·81 (4H，m)，2.41 (1H，m)， 2·35 (3H，s)，2.00 (2H，m)，1.76 (1H，m)，1·73 (3H，s)，1.58 (2H，m)。C31H33N5O2.0.80 TBME之分析計算值：C，72.71; H， 7.43, N，12.11 ° 實測值：C. 72·43; H，7.57; N，12.02 ° 實例34 : N_(2-曱基-烯丙基）-2-{ [(E)-2-(4-曱基-口比啶-2-基）_ O:\90\90027.DOC -101 - 200424193 乙烯基】-1Η-吲唑_6基胺基卜笨甲酿胺
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用n_(2_甲基_ 烯丙基）·2-[3·[2-(4-甲基比啶-2-基）_乙烯基]小（四氫_吼喃 -2-基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲醯胺取代Ν-[4-(三級丁基-二 甲基-矽烷氧基）-丁-2-炔基]-2-[3-[2-(4,6-二甲基-吡啶·2-基）-乙烯基]-1-(四氫-吡喃-2-基）-1Η-吲唑-6-基胺基]-苯甲 醯胺。4 NMR (DMSO-d6) δ 12.90 (1Η，s)，9·76 (1Η，s)，8.80 (1Η，t，J=5.5 Ηζ)，8.45 (1Η，d，卜5·1 Ηζ)，8·07 (1Η，d，J=8.9 Hz)，7··88 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·75 (1H，d，J=7.9 Hz)，7.51 (1H，s)，7.48 (1H，J=16.4 Hz)，7·43 (2H，m)，7·24 (1H，s)， 7·1〇 (1H，d，J=4.9 HZ)，7.00 (1H，dd，J = 1.9, 8.9 Hz)，6.91 (1H，t，J=8.1 Hz)，4.82 (2H，d，J=11.3 Hz)，3.83 (2H，d，J=5.8
Hz)，2·35 (3H，s)，1·73 (3H，s)。 C26H25N5〇.〇.20H2〇之分析計算值：c，73 11; H，5 99; N， 16·40。實測值：C，73.13; H，6·03; N，16.13。 實例35 : N-(3_環丙基_丙_2_炔基）_2_[3气2-(4_甲基-吡啶_2- 基）·乙稀基】-1(四氫-吡喃-2-基）-1Η-吲唑-6基胺基卜苯甲醯 胺
O:\90\90027.DOC -102-
200424193 以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用2_[3-[2-(4-甲基-^比咬-2 -基）-乙細基]-1-(四鼠·σ比喃-2 -基）-1Η -π弓丨嗤-6基 胺基]-苯甲酸及3-環丙基-丙-2-炔胺。4 NMR (DMSO-d6): ' δ 9·88 (1H，bs)，893 (1H，bt)，8·46 (1H，d，J=4.9 Hz)，8.08 # (1H，d，J=8.7 Hz)，7·85 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·69 (1H，d， -J=7.6 Hz)，7.54-7.40 (5H，m)，7·14-7·11 (2H，m)，6.90 (1H，t， J=6.1 Hz)，5.81 (1H，d，J=7.5 Hz)，4.02 (2H，d，J=3.6 Hz)， 3.95-3.85 (1H? m)5 3.79-3.72 (1H5 m)? 2.49-2.35 (1H? m)? 2.35 (3H，s)，2.15-2.01 (2H，m)，1.87-1.55 (3H? m)9 1·30-1·25 (1H，m)，0.77-0.70 (2H，m)，0·59·0·54 (2H，m)。 實例36: N-(3_環丙基_丙_2_炔基）-2-{ 3_[(E)-2-(4•甲基-吡啶 -2-基）-乙烯基】-1H-吲唑-6基胺基卜苯甲醯胺 <
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用N-(3-環丙 基-丙-2 -快基）-2-[3-[2-(4 -甲基基）-乙稀基]-1-(四氮 -吡喃-2-基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲醯胺取代N-[4-(三級丁 基-二曱基-矽烷氧基）-丁-2-炔基]-2-[3-[2-(4,6-二甲基-吼啶 O:\90\90027.DOC -103- 200424193 -2-基）-乙稀基]-i-(四氫- π比喃-2-基引σ坐_6-基胺基]_苯 甲醯胺。1H NMR (DMSO-d6) : δ 12.91 (1Η，s)，9.79 (1Η s) 8·91 (1H，t，J=5.6 Hz)，8.44 (1H，d，J=：4.9 Hz)，8.06 (1H，d J=8.7 Hz)，7·87 (1H，d，J=16.6 Hz)，7.67 (1H，dd，J=7.9, i 5
Hz)，7.50-7.35 (4H，m)，7.24 (1H，d，9 Hz)，7 〇9 (1H，d J=4.9 Hz)，7·00 (1H，dd，J=8.7, 1.5 Hz)，6.88 (1H，dt，Jmj 1.5 Hz)? 4.00 (2H? dd? J=5.3? 1.9 Hz)? 2.34 (3H? s)5 1.31-1.23 (1H，m)，0.75-0.69 (2H，m)，0·56-0·52 (2H5 m)。 實例37 : 2·{3-[2-(4•甲基-吼啶-2_基）-乙烯基】-1Η吲唑_6基 胺基} - Ν _ w比咬-^ _基甲基·苯甲酿胺
以上述實例6及實例7說明的類似方式製備，除了利用 2-[3-[2_(4-甲基-0比°定-2-基）-乙烯基]-i-(四氫_。比喃_2_ 基）-1Η-吲嗤-6基胺基]-苯甲酸及-2-基-曱胺。1η NMR (DMSO-d6，300 MHz) δ 12·91 (1Η，s)，9.77 (1Η，s)， 9.19 (1Η，t, J=5.8 Ηζ)，8·50 (1Η，d，J=4.1 Ηζ)，8.45 (1Η，d， J=5.0 Ηζ)，8·06 (1Η，d，J=8.8 Ηζ)，7.88 (1Η，d，J=16.4 Ηζ)， 7.82-7.70 (2H5 m)，7·51-7·25 (7H，m)，7.10 (1H，d，J=4.6 Hz)，6·98 (1H，dd，J=8-8，1.8 Hz)，6.96-6.91 (1H，m)，4.58 (2H，d，J=5.9 Hz)5 2.35 (3H，s)。ESIMS m/z 461 (M+H)+。 O:\90\90027.DOC -104- 200424193 C28H24N6Ox0.3 MTBE之分析計算值：C，72·71; H，5.77; N， 17.25。實測值：C，72.38; H，5.80; N，16.88。 實例38 : 2-{3_【2-(4-甲基-吡啶-2-基）-乙烯基】-1H_吲唑-6基 胺基唆_4_基甲基-苯甲醯胺
以上述實例6及實例7說明的類似方式製備，除了利用 2-[3-[2-(4_甲基比啶-2-基）-乙烯基]_1_(四氫_ π比喃_2_ 基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲酸及〇_吡啶基-甲胺。 4 NMR (DMSO-d6, 300 ΜΗζ) δ 12.90 (1Η，s)，9·73 (1Η，s)， 9.21 (1Η，t, J=5.9 Ηζ)，8·49-8·44 (3Η，m)，8.06 (1Η，d，J=8.7 Hz)，7·88 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·81 (1H，d，J=7.5 Hz)， 7.51-7.40 (4H，m)，7.31 (2H，d，J=5.9 Hz)，7.24 (1H，s)，7.11 (1H5 d5 J=4.4 Hz)? 7.00 (iH? dd5 J=8.7? 1.7 Hz)? 6.97-6.92 (1H，m)，4.50 (2H，d，J-5.9 Hz)，2.35 (3H，s)。ESIMS m/z 461 (M+H)+ C28H24N6〇X〇.4 η2〇χ〇·7 MTBE之分析計算值： C，7L36; H，6.45; N，15.85。實測值：C，71·27; H，6.29; N， 15.53。 實例39 : N-(6-甲基-吡啶-2-基甲基）-2-{3-丨2·(4_甲基-吡啶 -2-基）-乙烯基]-1Η-吲唑_6基胺基卜苯甲醯胺 O:\90\90027.DOC -105- 200424193
以上述實例6及7說明的類似方式製備，除了利用 2-[3-[2-(4-甲基-σ比啶-2-基）-乙烯基]-1-(四氫-吼喃-2-基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲酸及C_(6-甲基-吡啶-2-基）-甲 胺。1H NMR (DMSO-d6, 300 ΜΗζ) δ 12.92 (1H，s)，9.76 (1H， s)，9·20 (1Η，t，J=5.8 Ηζ)，8·44 (1Η，d，J=4.9 Ηζ)，8.05 (1Η， d，J=8.6 Hz)，7·86 (1H，d，J=16.4 Hz)，7.81 (1H，d，J=7.7 Hz)，7.59 (1H，t，J=7.7 Hz)，7·49·7·37 (4H，m)，7.23 (1H，s)， 7.11-7.08 (3H，m)，6·99 (1H，dd5 J=8.7，1.6 Hz)，6.95-6.90 (1H，m)，4.51 (2H，d，J=5.9 Hz)，2·42 (3H，s)，2.33 (3H，s)。 ESIMS m/z 475 (M+H)+。C29H26N6Ox0.4 DCM之分析計算 值·· C，68·98; H，5·29; N，16.39。實測值·· c，68·84; H，5.42; Ν，16.20 〇
基胺基卜苯甲醜胺
以上述實例6說明的類似方式製備 除 了利用 2-{3-[2-(4-
O:\90\90027.DOC -106- 200424193 甲基♦定-2-基）-乙烯基]小（四氧_〇比喃_2_基）_旧_〇引唾_6基 胺基}-苯甲酸及叫’ 5-二甲基—坐_3_基）_甲胺。ς NMR(DMSO-d6)6 9.81(lH, s), 9.〇5 (1H? bt), 8.46 δ<7 Ηζ) 7.85(1H，d，J=16.4Hz)，7.71(1H d，j=7 5Hz), 7 54_74〇 7.11-7.09 (2H,m),6.9l(1H5t5j=6 9Hz) 5 94(iH5 s), 5.80 (1H, d, J=7.3 Hz), 4.45 (2H, d, j=5.5 Hz), 3.93-3.85 (1H? m)? 3.78-3.69 (1H m) ^ . ㈣，叫，3·73 (3H，s)，2·45-2·35 (m 2.35 (3H, s)? 2.07 (3H s) 2 1 ’ (，S)，2·06·1·95 (2H，m)5 1·85-1·53 (m 3H)o \ ， -2H-啦峻_3-基甲基）_ 基）-乙稀基】-ΙΗ-巧丨唾_6基胺 實例41 · n_(2,5-二甲基 2-{ 3_[(E)_2-(4-甲基“比啶 基卜苯甲醯胺
以上述實例7說 苴L， ^員似方式製備，除了利用N-(2,5- -甲 基-2H-口比唑 _3 # ~ τ 烯基]基）-2鲁H2-(4-f基-终2-基）_乙 虱-吡喃-2-基）-1Η-吲唑_6基胺基]_苯甲醯胺 代 N_[4-(三& 一、、及丁基-二甲基-矽烷氧基> 丁 -2一块 基]-2-[3-『24 ( 5 一曱基-σ比σ定-2-基）-乙稀基]-1-(四氮-σ比喃 -2_基引唑-6-基胺基]-苯甲醯胺。1H NMR (DMSO-d6) δ 12.90 (1H5 S)5 9.70 (ιη? s)5 9.03 (1Η5 t? J=6.0 Hz)? 8.44 (1H? d，J—4·9 Hz)，8.06 (1H，d，卜9.0 Hz)，7·87 (1H，d，J=16.2
O:\90\90027.DOC -107- 200424193 )’ 7’70 (1H，d，J=7·5 Hz)，7.50-7.38 (4H，m)，7.22 (1H，s), OH, d, J-5.6 Hz), 6.99 (1H, dd, J=8.7, 1.5 Hz), 6.90 (1H, ’ J 7·9’ h9 HZ)，5·91 (1H，s)，4.43 (2H, d, J=5.6 Hz), 3.72 (H，S)，2.34(3H, s),2.05 (3H，S)。 實例i-f基-m-苯并咪唑_2·甲醛肟 0：vn'oh \ 將匕甲基-m-苯并㈣I甲駿（98〇毫克，6·61毫莫耳）於 u〇毛升）之攪拌懸浮液加入醋酸納（3·25克，39·68毫莫耳） 及羥胺鹽酸鹽(1.38克，19·84毫莫耳)於1〇毫升水中的溶 液將反應於至溫攪拌2小時並將濃稠的沉澱藉過濾收集， 以水清.洗及於真空下乾燥而得到1〇2克（94%)白色固體。咕 NMR (DMSO-d6) δ 12·06 (1Η，S)，8.28 (1Η，S)，7·65 (1Η，d， J-7.5 Ηζ)，7·60 (1Η，d，J=6.8 Ηζ)，7·32 (1Η，t，J=7.2 Ηζ)， 7.23 (1H，t，J=6.8 Hz)，4·〇〇 (3h，s)。 C9H9N30之分析計算值：c，61·7〇; H，5.18; N，23·99。實測 值· C，61.80; H，5.23; N，23.98。 實例43 : C-(l-甲基-^-苯并咪唑基）_甲胺二鹽酸鹽
將巴氏（Parr)壓力瓶裝入曱基_1H-苯并咪唑_2_曱醛肟 M(267毫克，1.6毫莫耳）、1〇%pd/c(75毫克）、濃HC1(2滴） O:\90\90027.DOC >108- 200424193 及EtOH (25毫升）。將反應混合物於45 pSi氫氣下搖動2小 時’之後將觸媒過濾去除。將濾液減壓下濃縮並將殘餘物 以EhO磨碎而得到340毫克（9〇%)白色固體為二鹽酸鹽，無 進一步純化而使用之。1H NMR (DMSO-d6) : δ 8·87 (2H broad s)5 7.72 (2H? m)? 7.38 (2H? m)? 4.50 (2H5 s)5 3.89 (3H? s) 〇 實例44 ·· N-(l-甲基_1H-苯并咪唑_2_基甲基）_ 2]3-[2气仁甲 基-吡啶_2-基）-乙烯基】·1-(四氫·吡喃_2-基）-1H_吲唑_6基 胺基卜苯甲醯胺
P
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用C_(1_甲基 -1H-苯并咪唑-2-基）-甲胺鹽酸鹽2_[3_[2_(4_甲基-吡啶 -2-基）-乙烯基]-1-(四氫比喃-2-基）_1H_吲唑_6基胺基]_苯 甲酸。b NMR (DMSO-d6) δ 9.82 (1H，s)，9 2〇 (m, t，J=5 3
Hz)，8.46 (1H，d，J=4.9 Hz)，8.07 (1H，d，J=8 9 Hz )，7 85 (1H, d, J=16.4 Hz), 7.74 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.58 (1H, d, J=7.2 Hz), 7.50 (6H, m), 7.19 (4H, m), 6.92 (1H, t, J=8.1 Hz)，5.78 (1H, dd, J=2.5, 9.5 Hz)，4.79 (2H，d，J=5 5 Hz), 3.89 (m，m)，3.83 (3H，s)，3.71 (1H，m), 2 4l (m，邮 2 35 (3H，s)，2.00 (2H，m), 1.74 (1H，m), i 57 (2H, m)。 C36H35N7O2.0.65 己烧之分析計算值：c，73 3 1; H，"ο; N, O:\90\90027.DOC -109- 200424193 15.00。實測值：C，72.92; Η，6·90; Ν，14·71〇 實例45 : Ν·(1-甲基-1Η-苯并咪唑-2-基甲基）- 2-{ 3_[(E)_2_(4-甲基-π比唆-2_基）乙稀基】-1H-11弓丨嗤_6基胺 基卜苯甲醯胺
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用N-(l -甲基 -1Η-苯并咪唑-2-基甲基）-2-[3_[2-(4-甲基比啶-2-基）-乙烯 基]-1·(四氫-吼喃-2-基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲醯胺取代 Ν-[4-(三級丁基-二甲基-矽烷氧基）-丁 -2-炔 基]-2-[3-[2-(4,6 -二甲基-°比°定-2 -基）-乙稀基]-1-(四氯比口南 -2-基）'1Η-吲唑-6-基胺基]-苯甲醯胺。1H NMR (DMSO-d6) δ 12.93 (1Η，s)，9·73 (1Η，s)，9·19 (1Η，t，J=5.3 Ηζ)，8.45 (1Η， d，J=4.9 Hz)，8.06 (1H，d，J=8.5 Hz)，7.88 (1H，d，J=16.4 Hz)，7·74 (1H，d，J=7.9 Hz)，7.60-7.36 (6H，m)，7·29·7·14 (3H，m)，7·10 (1H，d，J=4.7 Hz)，7.04 (1H，dd，J=1.8，8·9 Hz)，6·91 (1H，t，J=7.3 Hz)，4.79 (2H，d，J = 5.3 Hz)，3·83 (3H，s)，2·35 (3H，s) 〇 C31H27N701.80H2〇.0.40CH2C12之分析計算值：C，65.02; H， 5·46; N，16.91 ° 實測值：C，64.97; H，5.82; N，17.09 〇 實例46 : 1-甲基-1H-咪唑-2-甲醛肟
O:\90\90027.DOC -110- 200424193 以上述實_例39說明的類似方式製備，除了利用1-甲基 -1H-咪唑-2-曱醛取代1-甲基-1H-苯并咪唑-2-甲醛。 巾 NMR (DMSO-d6)·· δ 11.50 (1H，s)，8.05 (1H，s)，7·28 (1H， s)，6·95 (1Η，s)，3·80 (3Η，s)。 C5H7N30之分析計算值：C，47.99; H，5·64; N，33.58。實測 值·· C，48·22; Η, 5.58; N，33.45 ° 實例47 ·· C-( 1-甲基-1H-咪唑-2-基）-甲胺二鹽酸鹽
以上述實例40說明的類似方式製備，除了利用1 -甲基 -1H-咪唑-2-甲醛肟取代1-曱基-1H-苯并咪唑-2-甲醛肟。1Η NMR (DMSO-d6) ·· δ 7.45 (1Η，s)，7.29 (1Η，s)，4·25 (21Η，s)5 3·79 (3H，s)。 實例48 ·· N-(l-甲基-1H-咪唑-2_基甲基）-2-[3_[2-(4-甲基-吡 咬-2-基）-乙稀基】-1-(四氮比嚼-2-基）-111-17弓丨唾-6基胺基卜 苯甲醯胺
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用C-(l-曱基 -11^咪唑-2-基）-甲胺鹽酸鹽及2-[3-[2-(4-曱基-吼啶-2-基）- O:\90\90027.DOC -111 - 200424193 乙烯基]-1-(四氫-吼喃-2-基）-1 Η-吲唑-6基胺基]-苯曱酸。1Η NMR (DMS0_d6) δ 9·83 (1Η，s)，9.03 (1Η，t，J=5.5 Ηζ)，8·45 (1Η，d，J=4.7 Ηζ)，8·09 (1Η，d，J=8.5 Ηζ)，7.85 (1Η，d， J=16.5 Hz)，8·67 (1H，d，J=7.3 Hz)，7·53-7·39 (4H，m)，7·11 (3H，m)，6.90 (1H，d，卜6.9 Hz)，6.86 (1H，s)，5.79 (1H，d， J=8.9 Hz)，5.75 (1H，s)，4.54 (1H，d，J=5.5 Hz)，3.85-3.70 · (2H, m)，3·66 (3H，s)，2·35 (3H，s)，2·10 (2H，m)，1.70 (2H， 、 m)，1·60 (3H，m)。C32H33N7O2W.0.8 CH2C12之分析計算值：_ C5 63·99; H，5.672; N，15·93。實測值：C· 63.95; H，5.72; N， — 16.01。 實例49 : N_(l-甲基-1H-咪唑-2-基甲基）-2_{ 3-[2-(4·甲基-吡啶-2-基）-乙烯基卜1Η-吲唑-6基胺基}-苯甲醯胺
以上述實例7說明的類似方式製備，除了利用N-(l-甲基 •1H-咪唑-2-基曱基）-2-[3-[2-(4-甲基-啦啶-2-基）-乙烯基] -1-(四氫-吡喃-2-基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯曱醯胺取代 N-[4-(二級丁基-二甲基-碎烧氧基）-丁 -2-快 基]-2-[3-[2-(4,6 -二甲基-^比^7定-2 -基）-乙稀基]-1-(四氮比喃 -2-基弓丨唑-6-基胺基]-苯曱醯胺。1H NMR (DMSO-d6) δ 12.89 (1Η，s)，9.72 (1Η，s) 8.99 (1Η，t，J = 5.6 Ηζ)，8.44 (1Η， d，J=4.9 Hz)，8.05 (1H，d，J=8.7 Hz)，7·86 (1H，d，J=16.4 O:\90\90027.DOC -112- 200424193 Ηζ)，7·66 (1H，d，J-6.7 Ηζ)，7·49-7·36 (4H，m)，7·24 (1H， m)，7.09 (2H，d，J=8.1 Hz)，7.02 (1H，d，J=8.8 Hz)，6.88 (1H， t，J=6.9 Hz)，6·81 (1H，s)，4·52 (2H，d，J=5.5 Hz)，3·29 (3H， s)，2·34 (3H，s)。C27H25N7O.0.35CH2C12之分析計算值：C， 66·59; H，5.25; N，19·88。實測值·· C，66.48; 5.65; N， 19·56 〇 實例50 : N-(4-羥基-丁-2_炔基）_ 2-[3-[2-(4-甲基-吡啶-2-基）-乙稀基】-1_(四風-11比味_2_基）-1Η_σ弓丨唾-6基胺基]•苯甲 醯胺
以上.述實例6說明的類似方式製備，除了利用2-[3-[2-(4-曱基-〇比。定-2 -基）-乙細基]-1-(四鼠-σ比喃-2 -基）-1Η -ϋ弓| 17坐-6基 胺基]-苯甲酸及4-(二級丁基-二甲基-砍：(:完氧基）-丁-2-快 胺。1H NMR (CDC13) : δ 9.48 (H，s)，8.46 (1Η，d，J=5.3 Ηζ)， 7.92 (1H，d，J=9.0 Hz)，7·83 (1H，d，J=16.2 Hz)，7·52 (1H，d， J=16.6 Hz)，7.46-7.41 (2H，m)，7.34-7.31 (3H，m)，7·12 (1H， dd，J=8.7, 1.9 Hz)，6·99 (1H，d，卜4·9 Hz)，6·81 (1H，t，J=6.8 Hz)，6·40 (1H，t，J=4.9 Hz)，5·62 (1H，dd，J=9.4, 3.0 Hz)， 4·28-4·23 (4H，m)，4.08-4.01 (1H，m)，3·76_3·67 (1H，m)， 2.63-2.49 (1H5 m)5 2.38 (3H? s)? 2.22-2.06 (2H? m)5 1·80-1·60 (3H，m)。 實例51 · 2·{3-[(Ε)·2-(4_甲基-σ比受-2 -基）-乙婦基]-1H - σ弓丨嗤 O:\90\90027.DOC -113 - 200424193 6基胺基卜N_(4-羥基-丁-2-炔基）_笨甲醯胺
烯基]-1_(四氫^比喃- 丁-2-快基]-2-[3_[2·(4_ 甲基 _吼啶 基）_乙 ’喃-2-基）-1Η-吲唑_6_基胺基苯甲醯胺的 此合物取代N-.[4-(三級丁基-二甲基-矽烷氧基）_ 丁 -2_炔 基]-2-[3_[2-(4,6-二曱基比啶-2-基）_乙烯基]-1-(四氫-π比喃 基）-1Η_吲唑-6-基胺基]_苯甲醯胺。iH nmr (DMSO-d6) : δ 12.92 (1H9 s)5 9.83 (1Η? s)? 9.00 (1Η5 t, J=5.3 Hz)，8.44 (1H，d，J=4.9 Hz)，8·〇6 (1H，d，J=9.〇 Hz)，7 87 (1H，d，J=16.6 Hz)，7·68 (1H，d，J=7 9 Hz)，7.50-7.38 (4H， m)，7·26 (1H，s)，7·09 (1H，d5 j=5.3 Hz)，7.01 (1H，dd，J=8.7, I5 Hz)，6.88 (1H，dt，卜6·8, u hz)，5.U (1H，t，J=3.〇 Hz)， 4·1〇=4·〇4 (4H，m)，2·34 (3H，s)。 實例52 : 2-[3_(吡咯-1基亞胺基甲基卜1-(2-三甲基矽烷基_ 乙氧化甲基）-1Η-吲唑_6基胺基卜苯甲酸甲酯
O:\90\90027.DOC '114. 200424193 以上述實例2及3說明的類似方式製備，除了以6“肖基 苯乙烯基-1-X2-三甲基矽烷基-乙氧化甲基）引唑取代6_ 峨-3-苯乙稀基-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧化甲基）_1Η_σ引唑 開始。將此材料以產物及2-胺基-苯甲酸甲酯的粗混合物進 行於下步驟中。 實例53 : 2-[3-(吡咯·1基亞胺基甲基广^^-三甲基矽烷基· 乙氧化甲基）-1Η-吲唑-6基胺基卜苯甲酸
s\C
以2Q00年6月30曰申請之美國專利申請案序號第 09/609,335號中實例η中類似方式製備（將其全文為所有目 的以引用的方式併入本文中），由Ν-[4-(三級丁基_二甲基-石夕烧氧基）U-炔基；μ2_[3十比洛」基亞胺基甲基）小(2_三 曱基石夕烧基_乙氧化甲基，吐·6基胺基笨甲酸胺及 TBAF反應的副產物分離而得。巾nmr (DMSO-d6) δ 13.19 (1Η，broad s)，ΐ〇·00 (1H，s)，9 (ih，s)，8 37 (1H，d，j=8 7
Hz)，8·06 (1H，d5 K5 Hz)，7.75 (1H，s)，7·64 (2H, t，J=2.3 HZ)，7·54 (2H，m)，7·35 (1H5 dd，卜 1.9, 8.7 Hz)，6·99 (1H， m)，6·33 (2H，t，J=2.3 Hz)，5.89 (2H，s)，3·68 (2H，t，J=8.1 HZ)，〇.94(2H5t，RlHz)5Q()()(9H，s)。 實例54 · N-(3-環丙基_丙_2_炔基）_ 2_[3_(吡咯j基亞胺基甲
O:\90\90027.DOC Ί15- 200424193 基）-1-(2-三 f疏脸 ™l /jjc 甲基梦炫基·乙氧化甲基）_1H•㈣·6基胺基】·苯
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用孓[3气吡咯 _1基亞胺基曱基）-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧化曱基）_ih_吲 唑-6基胺基]_苯甲酸及3_環丙基-丙_2_炔胺。咕nmr (DMSO-d6) δ 9.93 (1H，s)，8·99 (1H，s)，8·95 (1H，d，J==5 6 Hz)，8.20 (1H，d，J=8.9 Hz)，7.68 (1H，d，Hz)，7 51 (4H，m)，7.37 (1H，t，J=6.8 Hz)，7.14 (1H，d，㈣·〇 Hz)，6·91 (1H，t，J=7.5 Hz)，6·21 (2H，t，J=2.3 Hz)，5·74 (2H，s)，4·00 (2H? dd? J^2.〇? 5.6 Hz)? 3.55 (2H5 t5 J=7.9 Hz)? 1.26 (1^ m)? 0.82 (2H? t5 J^7.9 Hz)? 0.72 (2H5 m)? 0.54 (2H? m)5 .〇 12 (9H，s)。 ， · 實例55··Ν-(3-環丙基-丙-2-炔基）_2_[3-(吡咯_le基亞胺基甲 基）_ 1H-吲唑·6基胺基卜苯甲醯胺
以2000年6月30曰申請之美國專利申請案序號第
O:\90\90027.DOC -116- 200424193
全文為 -丙-2 - 除了使用環丙基 基）-1-(2-三甲基矽烷 -丙-2-炔基）-2-[3十比略]基亞胺基甲基三甲 基-乙氧化甲基）-lHH6基胺基笨甲龜胺取代 -Ν-{3·苯乙烯基小[2_三甲基涪垸基-乙氧化甲基]」 -6 基胺基卜苯 _1，3_ 二胺。NMR (DMs〇_dd δ n 本甲醯胺取代甲基 乙氧化甲基;μΐΗ-吲唑 。H NMR (DMS0_d6) δ 13 29 (1Η，
Ηζ)，7.43 (2Η，m)，7.29 (1Η，s)，7·07 (1Η，dd，J=1.9, 8.7 Hz), 6.91 (1H，t，J=7.4 Hz)，6.21 (2H，t，J=2.3 Hz)，4.01 (2H，dd5 J=1.7, 5·5 Hz)，1·27 (1H，m)，0.73 (2H，m)，〇·55 (2H，m)。 C25H22N6〇〇.〇5 己烷·0·30 H20之分析計算值：c，7〇·31· H， 5.43; N; 19.45。實測值：C，70.63; H，5.38; N，19.18。 實例56 : N_[4-(三級丁基-二甲基-發烷氧基）_丁1炔基卜 2-[3_(吡咯-1基亞胺基甲基）4-(2-三甲基矽烷基-乙氧化甲 基）-1Η-吲唑-6基胺基】-苯甲醯胺
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用2-[3-(吡咯 -1-基亞胺基曱基）-1-(2-三曱基矽烷基-乙氧化曱基）-1Η-吲 唑-6基胺基]-苯曱酸及4-(三級丁基-二曱基-矽烷氧基）_ 丁 O:\90\90027.DOC -117- 200424193 -2-炔胺。1H NMR (DMSO-d6) δ i〇 〇4 - s)5 9.16 (in J=5.3 Hz)，9·10 (1H，s)，8.31 (ih，d 7 、n，1 J=7.9 Hz), 7.67 (4H5 m)? 7.49 (ιΗ Ήζ)’ 7·78 UH，d， ，，〜8·5 Hz)，7 24 n tr dd? J=1.7? 8.7 Hz), 7.03 (1H5 t5 J-7 4 u λ (lH， •4Hz)，6.33 (2H t T、，
Hz)，5·85 (2H，s)，4·83 (2H，s)，4 19 “，>2·3 (，d，J=5.5 Hz) (2H，t，J=7.9 Hz)，0.94 (2H，m)，〇 8 z)，3.66 0·00 (9H，s)。 ’ S)，0·13 (6H5 s)5 實例57 : N_(4-羥基-丁-2-炔基丨i , ’ (吡咯 β胳好 基）-1Η-吲唑·6基胺基卜苯甲醯胺 丞兑胺基甲
以2000年6月30日申請之美國專利 09/609,335號中實例u中說明的 明案序號第 所有目的以引用的方式併入本文中= 製備(將其… 除了使用N-[4_(三級 丁基-二甲基-石夕烧氧基）_丁_2_块基]邮柳各小基亞胺基 甲土）1 (2 —甲基矽烷基_乙氧化〒基）引唾·6基胺基]_ 苯:醯胺取代Ν_甲基_Ν_{3_苯乙稀基小[2_三f基_石夕炫基_ 氧化甲基]-1H-吲哇基}_苯_l53_二胺。iH NMR (DMSO-d6) δ 13.3〇 (1H, S), 9.87 (1H, s), 9.04 (1H, t, J=5.3 ),8.99 (1H, S), 8.19 (1H, d, J=8.5 Hz), 7.70 (1H, d, J=7.3 Hz)? 7.46 (4H, m); 7.31 (1H, s), 7.08 (1H, dd, J=1.7, 8.7 Hz), 6.91 (1H’ t’ 1=7.3 Hz)，6 21 (2H，t，卜2 i Hz), $ μ (川，【，
O:\90\90027.DOC -118- 200424193 J二5·8 Ηζ)，4·1〇 (2H，d，J=5.5 Ηζ)，4·06 (2H，d, J=5.8 Hz)。 〇23Η20Ν6〇2·〇.35 己烷·0·20 H2〇之分析計算值：C，67·45; Η 5·86; Ν，18.81。實測值：C，67.70; Η，5.73; Ν，18.56。 實例58 : 2,5_二甲基_2η_吡唑-3-甲亞硝酸鹽
2，5 - —曱基-2 Η -σ比嗤-3 -甲亞硝酸鹽係由1，3 -二甲基。比嗤 -5-甲酸乙酿根據 Castellanos, Maria及 Montserrat，Llinas; JCS Perkins Trans I (1985) 1209-1215為 1-甲基-吡唑-5-甲亞 硝酸鹽發表的程序製備。NMR (CDC13) δ 6.52 (1H，s)， 3·96 (3H，s)，2.27 (3H，s)。 實例59 : C_(2,5_二甲基_2H_吡唑-3-基）-甲胺
將2,5-二甲基-2H-吡唑-3-曱亞硝酸鹽（654毫克，5.4毫莫 耳）及10%Pd/C(200毫克）於乙醇（15毫升）之懸浮液於巴氏氫 化裝置中於45 psi氫氣下搖動17小時。將混合物經矽藻土過 濾並將濾液減壓濃縮而得到608毫克油，使用之而無進一步 純化。4 NMR (CDC13) δ 5·91 (1H，s)，3.81，3·73 (2H，2s)， 3.75 (3H，s)5 2.21 (3H，s)。 實例60 : N-(2,5_二甲基_2H吡唑小基甲基）_2_[3-(吡咯一基 亞胺基甲基）-1-(2-三甲基矽烷基-乙氧化甲基>1H-吲唑_6 基胺基卜苯甲醯胺 200424193
述貫例6說明的類似方式製備，除了利用孓[3_(吡咯 小基亞胺基甲基）小（2_三甲基矽烷基_乙氧化甲基）扎吲 唑-6基胺基苯甲酸及匕(2,5_二甲基_2H_吡唑基）甲 胺。1HNMR(CDCl3)S9.56(1H，s) 8 68 (iH，s)83liH， d5 J=8.7 Hz)? 7.49 (1H? d5 J=8.3 Hz)3 7.43 (1H5 dd? J-7 9 1 5
Hz)? 7.36-7.31 (2H?m)?7.23(2H5t9 J=8.7，1.9 Hz)，6.83 (1H t 卜7 9 um 、，L 7·2 Hz)，6.32 (1H，bt)，6·29 (2H，t，J=2.3 Hz)，6·〇1 (ih s) s 、 s)，5·67 (2H，s)5 4.61 (2H d J=5.6 Hz)，3.60 (3H，s)，3·58 (2H "一"口、， ’ ’ 1 rt，t，J — 8·3 Hz), 2.22 (3H，s) 0·90 (2H，t，J=8.7 Hz), 0·06 (9H，s)。 ， 實例61 : N-(2,5-二甲基_2H_吡唾 丞甲基）-2_[3-(吡咯·1 基亞胺基甲基）_ ih-h6基胺基卜苯甲醯胺
0 以2000年ό月30日申請之美 ^ ^ y ®專利申請案序號第 09/609,335號中貫例1丨說明的類似 七 A ^ , 式衣備（將其全文為所 有目的以引用的方式併入本文中）， 除了使用N-(2,5-二曱基 O:\90\90027.DOC -120- 200424193 -2H j比唑-3-基甲基）_2_[3-(吡咯-；μ基亞胺基甲基）_K(2_i 甲基矽烷基-乙氧化甲基）-1 Η-吲唑-6基胺基]-苯甲醯胺取代 Ν-曱基-Ν-{3-本乙細基三甲基-梦烧基-乙氧化甲 基]-1Η-吲唑 _6基卜苯]，3_二胺。NMR (DMSO-d6) δ 13 27 (1Η，s)，9·72 (1Η，s)，9.05 (1Η，t，J=5.3 Ηζ)，8·97 (1Η，s) 8.16 (1H，d，J=8.7 Hz)，7·68 (1H，dd，J=8.3，1.9 Hz)，7 5〇 (2H，t，J=2.6 Hz)，7·46-7·38 (2H，m)，7.25 (1H，s)，7.05 (1Ji dd，J=8.7，1·9 Hz)，6·91 (1H，t，J=6.80 Hz)，6.20 (2H J=2.3 Hz)，5·91 (1H，s)，4.43 (2H，d，J=5.6 Hz)，3.71 (3Ή s) 2·04 (3H，s)。 ’ 實例62 : 2-[3-(吡咯-i-基亞胺基甲基卜1H_吲唑_6基胺基】 苯甲酸
OH 以2000年6月30曰申請之美國專利申請案序號第 09/609,335號中實例11說明的類似方式製備（將其全文為戶 有目的以引用的方式併入本文中）、，除了使用2^3气吡咯 基亞胺基曱基）-1-(2-三甲基矽烷基_乙氧化曱基 7 丄1 口坐 -6基胺基]-苯甲酸取代N_甲基_N_{3_苯乙烯基巧―^•三甲基 矽烷基-乙氧化甲基]-m-。引唑^基卜苯汔弘二胺。lH (DMSO-d6) δ 13.12 (1Η, s), l2.7〇 (1H, s), 8.94 (1H, s), 8 ^ (1H, d，J=8.7 Hz), 7.91 (1H，dd，J=1.7, 7.7 Hz)，7.50 (2h 5 t， O:\90\90027.DOC -121. 200424193 J=2.3 Ηζ)，7·36 (1H，d，J=7.9 Hz)，7.27 (1H5 d，J=1.5 Hz)， 7·16 (1H，t，J=7.5 Hz)，6·94 (1H，dd，J=1.7，8.7 Hz)，6.68 (1H，t，J=7.5 Hz)，6.19 (2H，t，J=2.3 Hz)。 實例63: N-丙-2-炔基-2-[3-(吡咯-1-基亞胺基甲基）-1Η-吲唑 -6基胺基卜苯甲醯胺
ό 以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用2-[3-(吡咯 -1-基亞胺基曱基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲酸及丙炔胺。1Η NMR (DMSO-d6) δ 13.30 (1Η，s)，9·82 (1Η，s)，9·04 (1Η，t， J=5.6 Ηζ)，8.98 (1Η，s)，8·19 (1Η，d，J=8.6 Ηζ)，7.69 (1Η，d， J=7.9 Hz)，7.45 (4H，m)，7·31 (1H，s)，7.08 (1H，d，J=8.6 Hz)，6.91 (1H，t，J=7.6 Hz)，6.21 (2H，s)， 4·05 (2H，s)， 3.13 (1H，s)。C22H18N600.40H200.05 己烷之分析計算 值·· C，67·97; H，5·01; N，21.33 〇 實測值：C，67.91; H，4·78; N，21.00 〇 實例64 : N_(4-羥基-丁-2_炔基）-2_[3-(2-吡啶_2基-乙烯 基）-1Η-吲唑-6-基胺基】-苯甲醯胺 O:\90\90027.DOC -122-
200424193 以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用2-[3·(2-吡 啶-2-基-乙烯基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲酸四丁基銨及4-胺基·丁-2-炔-1-醇。1H NMR (DMSO-d6) δ 12.95 (1Η，s)5 9.84 (1Η，s)，9·02 (1Η，t，J=5.6 Ηζ)，8.59 (1Η，d，J=4.9 Ηζ)， 8.08 (1H，d，J=8.7 Hz)，7·90 (1H，d，J=16.2 Hz)，7.80 (1H，t， J=7.2 Hz)，7.70-7.64 (2H，m)，7.51 (1H，d，J=16.2 Hz)， 7.45-7.36 (2H，m)，7.27·7·24 (2H，m)，7.02 (1H，d，J=9.0 Hz)，6.88 (1H，t，J=7.2 Hz)，5·13 (1H，t，J=5.6 Hz)，4.10-4.04 (4H, m)。 實例65 ·· N-(2,5-二甲基-2H-吡唑-3-基甲基）_2-[3_(2-吡啶-2 基-乙烯基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯甲醯胺
以上述實例6說明的類似方式製備，除了利用2-[3-(2-吡 啶-2-基-乙烯基）-1Η-吲唑-6基胺基]-苯曱酸四丁基銨及 C-(2,5-二曱基-2H-吡唑-3-基）-曱胺。4 NMR (DMSO-d6) δ 12·93 (1Η，s)5 9.70 (1Η，s)，9.04 (1Η，bt)，8·58 (1Η，d，J=4.0 O:\90\90027.DOC -123 - 200424193
Hz)，8.07 (1H，d，J=8.8 Hz)，7.88 (1H，d，J=16.4 Hz), 7.79 (1H，t，J=8.6 Hz), 7.71-7.64 (2H，m)，7.50 (1H，d，J=16.4 Hz)，7.44-7.39 (2H，m)，7.28-7.23 (2H，m)，7.00 (1H，d， Hz)，6.90 (1H，t，J二8.0 Hz)，5.91 (1H，s)，4.43 (2H，d， JU Hz)，3·71 (3H，s)，2.04 (3H，s)。 可將上述模範化合物利用下述測試法測試其活性。 生物測試：酵素分析 由生長因子如VEFG、FGF及其他刺激細胞增殖有賴於其 引發其各自受體的酪胺酸激酶之自磷酸化反應 (autophosphorylation)。所以，由抑制胜肽受質可測量蛋白 質激酶抑制劑阻止自磷酸化反應的能力。為了測量化合物 之蛋白質激酶抑制活性，設計下列構體。 分析用之VEGF-R2構想：此構體決定測試化合物抑制齡 胺酸激酶活性之能力。將缺少激酶***區塊68個基團之50 個中心基團之人類血管内皮生長因子受體2 (VEGF-R2)之 細胞質内區塊之構體（VEGF-R2A50)於桿狀病毒/昆蟲細胞 系統中表現。於全長VEGF_R2的1356個基團中， VEGF-R2A50含有基團806-939及990-1171，及同時一個點 突變（E990V)於相對於野生型VEGF-R2的激酶***區塊 内。藉由於 3 mM ATP及 40 mM MgCl2於 100 mM HEPES 中， 含有5%甘油及5 mM DTT存在下在4°C以4 μΜ濃度培養酵 素2小時，實施純化的構體之自鱗酸化反應。自構酸化反應 後，已證實此構體具有基本上相當於野生型自填酸化激酶 區塊構體之催化活性。見Parast等人，Biochemistry，37, O:\90\90027.DOC -124- 200424193 16788-16801 (1998)。 分析用之FGF-R1構體：利用桿狀病毒脊皿 勢栽體表現系統，根 據Mohammadi等人，Mol. Cell. Biol Ό， 977-989 (1996)的 基團編號系統由内生甲硫胺酸基團456至麩胺酸％^，將人 類FGF-R1之細胞内激酶區塊表現。此外，此構體也有下列 3個胺基酸置換：L457V、C488A、及C584S。 分析用之LCK構髏··將LCK絡胺酸激酶以Ν-端刪除（自胺 基酸基團223開始至蛋白質末端之基團509)表現於昆蟲細 胞中，並具有下列兩個胺基酸置換於Ν-端：Ρ233Μ及C224D。 分析用之CHK1構體：將C-端組胺酸標記的全長人類 CHKl(FL-CHKl)利用桿狀病毒/昆蟲細胞系統表現。其含有 6個組胺酸基團（6xHis-tag)於人類CHK1 C-端之第476個胺 基酸。將此蛋白質以習見色層分析技術純化。 分析用之CDK2/週期素A構體：利用已發表的方法 (Rosenblatt等人，J· Mol· Biol·，230, 1317-1319 (1993))自已 受桿狀病毒表現載體感染的昆蟲細胞純化CDK2。週期素A 係由表現全長重組週期素A的大腸桿菌純化，並將截短的週 期素A由限制性蛋白質水解及如前述純化而產生（Jeffrey等 人，Nature，376，3 13-320 (1995))。 分析用之CDK4/週期素D構體：利用傳統生化色層分析技 術由已以相對應桿狀病毒表現載體共同感染的昆蟲細胞純 化人類CDK4及週期素D3的複合物，或週期素D1及人類 CDK4及谷胱甘肽硫轉移酶之融合蛋白質（GST-CDK4)的 複合物。 O:\90\90027.DOC 125- 200424193 分析用之FAK構體··利用桿狀病毒表現系統表現人類 FAK的催化區塊（FAKcd409)。表現的280個胺基酸區塊包含 基團甲硫胺酸409至麩胺酸689。一個胺基酸置換存在 (P410T)相對於由 Whithey，G.S.等人，DNA Cell Biol，9， 823-30 (1993)發表的序列登錄號碼LI 3616。將此蛋白質利 用傳統色層分析技術純化。 ' 分析用之TIE-2(TEK)構體：將TIE-2酪胺酸激酶區塊以 ， N-端刪除（自胺基酸基團774開始至蛋白質末端之基團1124) # 表現於昆蟲細胞中。此構體也攜帶R774M突變，其作為轉 -譯中的起始甲硫胺酸基團。 VEGF-R2 分析 耦合的分光光度計（FLVK-P)分析法
將伴隨磷酸轉移之自ATP製造ADP利用磷酸烯醇丙酮酸 (PEP，phosphoenolpyruvate)柄合至NADH的氧化及具有丙 酉同酸激酶（PK，pyruvate kinase)及乳酸去氫酶（LDH, lactic dehydrogenase)之系統。NADH的氧化係由利用貝克曼DU 650 分光光度計追蹤於340 nm吸收度（e=6.22 cnT1 mlVT1)的減少 而監測。填酸化VEGF-R2A50的分析條件（於下表中以 FLVK_P代表）為如下·· 1 mM PEP; 250 μΜ NADH; 50單位 LDH/mL ; 20 單位 PK/mL ; 5 mM DTT ; 5.1 mM 聚（Ε4Υ!) ; 1 mM ATP ;及 25 mM MgCl2 於 200 mM HEPES，pH 7.5。無礙 酸化VEGF-R2A50的分析條件（於下表中以FLVK代表）為如 下·· 1 mM PEP ; 250 μΜ NADH ; 50單位 LDH/mL ; 20單位 PK/mL ; 5 mM DTT ; 20 mM 聚（Ε4Υι); 3 mM ATP ;及 60 mM O:\90\90027.DOC -126- 200424193
MgCl2及 2 mM MnCl2於 200 mM HEPES，pH 7.5。以 5 至 40 nM 酵素起始分析。藉由於測試化合物之不同濃度存在下測量 酵素活性決定Ki值。利用酵素動力學及科學繪圖軟體 (Kaleidagraph software)分析數據。 ELISA分析 利用生物素標記的胃激素（gastrin)胜肽（1-1 7)作為受質監 測磷酸化胃激素的形成。利用鏈黴菌抗生物素蛋白 (streptavidin)塗佈的96孔微量滴定盤將生物素標記的胃激 素固定，之後利用抗-磷酸化酪胺酸-抗體連結至辣根過氧化 S# 1貞測。利用2，2 ’ -連氮基-二-[3 -乙基苯弁σ塞哇琳石黃酸（6)] 二鏔鹽（ABTS，2，2’-azino-di-[3-ethylbenzathiazoline sulfonate(6)] diammonium salt)監測辣根過氧化酶之活性。典型分析溶液 含有：2 μΜ生物素標記的胃激素胜肽；5 mM DTT ; 20 μΜ ATP; 26 mM MgCl2及 2 mM MnCl2於 200 mM HEPES，pH 7.5。以0.8 nM填酸化VEGF-R2A50起始分析。利用1 〇 mM ABTS分析辣根過氧化酶之活性。辣根過氧化酶反應係由力口 入酸（硫酸）而終止之後於405 nm吸收度讀值。藉由於測試 化合物之不同濃度存在下測量酵素活性決定Ki值。利用酵 素動力學及科學繪圖軟體（Kaleidagraph software)分析數 據。 FGF-R分析 實施如上述VEGF-R2之分光光度計分析法，除了下列濃 度改變：FGF-R=50 nM，ATP=2 mM及聚（E4Y1)=15 mM。 LCK分析 O:\90\90027.DOC -127- 200424193 實施如上述VEGF-R2之分光光度計分析法，除了下列濃 度改變：LCK=60 nM，MgCl2=0 mM，聚（E4Y1)=20 mM。 CHK1分析
利用磷酸烯醇丙酉同酸（PEP，phosphoenolpyruvate)經由丙 酮酸激酶（PK，pyruvate kinase)及乳酸去氫酶（LDH，lactic dehydrogenase)之作用將伴隨磷酸轉移至合成受質胜肽 ' Syntide-2 (PLARTLSVAGLPGKK)之自 ATP 製造 ADP耦合至 · NADH的氧化。NADH的氧化係由利用HP8452分光光度計追 H 蹤於340 nm吸收度（e 340=6.22 cm·1 mM-1)的減少而監測。 — 典型反應溶液含有：4 mM PEP; 0.15 mM NADH; 28單位 LDH/mL;16 單位 PK/mL; 3mM DTT; 0.125 mM Syntide-2; 0.15 mM ATP; 25 mM MgCl2於 50 mM TRIS，pH 7·5 ;及 400 mM NaCl。以10 nM FL-CHK1起始分析。藉由於測試化合 物之不同濃度存在下測量酵素活性決定Ki值。利用酵素動 力學及科學緣圖軟體（1^1€丨(^8以卩]18 0尺\¥3代）分析數據。 CDK2/週期素A及CDK4/週期素D分析 ^ 藉由定量酵素催化、時間相關併入放射性磷原子由 [32P]ATP進入視網膜芽細胞瘤（retinoblastoma)的重組片段 内而測定週期素相關的激酶活性。除非另外指明，將分析 進行於總體積50微升的96孔盤中，於10 mM HEPES(N-[2-羥乙基]哌畊-Nf-[2-乙磺酸])(pH 7.4)，10 mM MgCl2，25 μΜ ATP，1毫克/毫升卵白蛋白（ovalbumin)，5微克/毫升亮抑酵 素肽（leupeptin)，1 mM二硫秀克糖醇，10 mM /3-甘油磷酸， 0· 1 mM飢酸納，1 mM氟化鈉，2.5 mM乙二醇-雙（/5-胺乙基 O:\90\90027.DOC -128- 200424193 醚）_N，N，N，，N，-四醋酸（EGTA， ethylene glycol-bis (/5-aminoethyl ether)- N，N，N’，N’-tetraacetic acid)，2% (v/v) 二甲基亞颯，及0.03-0.2 /^Ci[32p]ATP之存在中。受質（0.3-0.5 微克）為純化的重組視網膜芽細胞瘤蛋白質片段（Rb)(天然 視網膜芽細胞瘤蛋白質之基團386-928 ; 62.3 kDa，含有見 於天然106-kDa蛋白質中大部分磷酸化位置，以及為了純化 簡易之六個組胺酸基團之標記）。以CDK2 (150 nM CDK2/ 週期素A複合物）或CDK4(50 nM CDK4/週期素D3複合物）起 始反應，於30°C培養，並於20分鐘後藉加入乙二胺四醋酸 (EDTA，ethylenediaminetetraacetic acid)至 250 mM而終止。 而後將磷酸化的受質利用96孔過濾歧管留在硝化纖維素膜 上’並將未併入的放射線素藉反覆以0.85%磷酸清洗而去 除。藉·由暴露乾燥的硝化纖維素膜至磷光顯像分析儀 (Ph〇Sph〇rimager)將放射線定量。藉由分析不同化合物濃度 #在下的酵素活性及減去無酵素存在下測量的背景放射線 決定視Ki值。對各酵素於一般分析條件下藉由決定起始速 率相關於ATP濃度而測量動力學參數（kcat，ATP的Km)。利 用科學緣圖軟體（Kaleidagraph software)(Synergy軟體）將數 據符合至競爭性抑制的方程，或利用軟體KineTic (Bi〇Kin 公司）符合至競爭性緊密結合抑制的方程式。對CDK4及 CDK2已知抑制劑測量的幻值與發表的IC5{)值相符。cdK4 的專〜活性無論與全長週期素D3或截短的週期素D3構體 複合皆為相同；二複合物皆對特定抑制劑產生非常類似的 Ki值。
O:\90\90027.DOC -129- 200424193 FAK分析 FAK HTS利用由LJL Bio systems提供的螢光偏極化分析 法。激酶反應含有·· 100 mM Hepes pH 7.5，10 mM MgCl2， 1 mM DTT ’ 1 mM ATP及 1 毫克 / 毫升聚 Glu_Tyr (4:1)。以加 入5 nM FAKcd409起始反應。藉加入EDTA之後再加入氟-標記的胜肽及抗-磷酸化酪胺酸抗體（二者皆由LJL Biosystems提供）而將反應終止。將抑制結果讀取於分析者 (Analyst，LJL)谓測器上。 TIE-2分光光度計分析 將伴隨磷酸轉移至隨機共聚物聚（Glu4Tyr)之激酶催化的 自ATP製造ADP經由丙酮酸激酶（PK，pyruvate kinase)及乳 酸去氫酶（LDH, lactate dehydrogenase)的活性耦合至NADH 的氧化·。利用貝克曼DU650分光光度計監測於340 nm吸收 度（e=6.22 cm-1 mM·1)的減少而監測NADH轉變至NAD+ 〇典 型反應溶液含有ImM磷酸烯醇丙酮酸，0.24mMNADH， 40 mM MgCl2，5 mM DTT，2_9毫克/毫升聚（Glu4Tyr)，0.5 mM ATP，15 單位 / 毫升 PK，15 單位/mL LDH於 100 mM HEPES，pH 7.5中。以加入4至12 nM磷酸化的Tie-2(aa 775-1122)起始分析。於1 μΜ抑制劑濃度測定抑制百分比（三 重複）。 TIE-2 DELFIA分析 利用生物素標記的 p34cdc2 (aa6-20=KVEKIGEGTYGVVYK) 胜肽作為受質監測碟酸化酪胺酸的形成。利用NeutrAvidin™ 塗佈的96孔微量滴定盤將生物素標記的胜肽固定，之後利 O:\90\90027.DOC -130- 200424193 用抗-磷酸化酪胺酸-抗體（PY20)連結至銪N1螯合而偵測。 典型分析溶液含有：1 μΜ生物素標記的p34cdc2胜肽，150 μΜ ATP，5 mM MgCl2，1 mM DTT，0.01%BSA，5%甘油， 2%DMSO，25 mM HEPES pH 7.5。以 50 nM TIE2細胞内區 塊起始分析於NeutrAvidin盤中。激酶反應以50 mM EDTA 終止。而後將盤清洗，並加入銪抗體。培養後，將其再度 清洗，並加入DELFIA⑽增強溶液。將盤於標準銪時間分辨 設定（ex 340 nm，em 615 nm，延遲400微秒，視窗400微秒） 讀值。參考盤内孔已加DMSO而無化合物於DMSO，由實驗 及參考於加入酵素前已加入EDTA之盤内孔之控制組兩者 減去的背景，計算抑制百分比。 HUVEC增殖分析 此分浙決定測試化合物抑制生長因子刺激人臍靜脈内皮 細胞（HUVEC，human umbilical vein endothelial cells)增殖 之能力。於T75瓶中將HUVEC細胞（傳代3-4次，Clonetics 公司）解凍入EGM2培養基内（Clonetics公司）。24小時後將新 鮮EGM2培養基加至瓶中。四至五天後，將細胞置於另一培 養基中（F12K培養基補充10%胎牛血清（FBS，fetal bovine serum)，60微克/毫升内皮細胞生長補充（ECGS，endothelial cell growth supplement)及 0·1 毫克/毫升肝素（heparin))。使 用指數生長的HUVEC細胞於以下的實驗。將一萬至一萬二 千個HUVEC細胞植入100微升豐富的培養基（上述）中之96 孔盤。使細胞於此培養基内接觸24小時。而後藉抽吸將培 養基移除並將105微升飢餓培養基（F12K+1%FBS)加至各 O:\90\90027.DOC -131 - 200424193 孔24小柑後，將15微升溶於1°/〇DMSO於飢餓培養基的測 試藥劑或此媒介單獨加至各處理孔中；最終DMS〇濃度為 O.l/o 1小日守後，除了含有未處理控制組者，加入30微升 VEGF (30 ng/mL)於飢餓培養基於所有孔中；最終VEGF濃 度為6ng/mL。72小時後由MTT染料還原定量細胞增殖，於 此時將細胞暴露於4小時MTT (Promega公司）。由加入停止 溶液（Promega公司）將染料還原停止並於％孔分光光度計 盤讀取器上決定5 9 5 λ的吸收度。 由曲線符合Α反應對測試藥劑的不同濃度計算IC5〇 值，典型而吕，使用距離〇·5 1〇g之七個濃度，及於各濃度 二重複孔。為了篩選化合物資料庫盤，使用一或二個濃度 (每濃度一盤），抑制％由下式計算·· 抑制％ =(控制組-測試組H(控制組_饑餓） 其中 控制組=A595當VEGF存在而無測試藥劑 測試組=A595當VEGF存在且有測試藥劑 饑餓=A595當VEGF及測試藥劑皆不存在 鼠PK分析 利用下列貫驗分析藥物於㈡A ^ y、勿於亂中的樂物動力學（如吸收及 消除）。將測試化合物制也、卜、> > ^
观配衣為浴液或懸浮液於3〇 : 7〇(PEG 400:酸化的水）媒介或為矜、ί 义馬懸，于液於〇.5%CMC中。將此口服 (ρ·〇·)及腹腔注射（i.p )仏早τ η十丨曰 、P J、、a于不冋劑置至兩群不同（n=4)B6母 鼠。於時間點：〇小時（給藥前）、給藥後0.5小時、1.0小時、 2.0 J彳4.0 h日寸及7小時經由眼框採血收集血液樣本。由
O:\90\90027.DOC • 132 - 200424193
25 00 rpm離心5分鐘自各樣本得到血漿。藉有機蛋白質沉澱 法自血漿萃取測試化合物。對各採血時間，將50微升血漿 與1.0毫升乙腈合併，旋轉混合2分鐘，而後於4000 rpm離心 1 5分鐘以沉澱蛋白質並萃出測試化合物。接下來，將乙腈 上清液（含測試化合物的萃取液）倒入新的試管中，並於氮氣 流下在加熱板上（25°C)蒸發。至含有乾燥的測試化合物萃取 · 物之各試管加入125微升移動相（60 : 40，0.025 Μ 〜 ΝΗ4Η2Ρ04+2·5毫升/升TEA:乙腈）。藉旋轉混合將測試化合 · 物重新懸浮於移動相中並藉於4000 rpm離心5分鐘去除更 — 多蛋白質。將各樣本倒入HPLC小瓶中於具有UV偵測器之 HP 11 00系列HPLC對各測試化合物分析。由各樣本，將95 □ 1>注射入？11611〇111^1^又-?1'〇(11名7逆相(1；-18，150\3.2 111111管 柱並以45-50%乙腈梯度跑10分鐘。利用已知濃度測試化合 物自血漿樣本以上述方式萃取出的標準曲線（波峰面積對 濃度微克/毫升）決定測試化合物血漿濃度（微克/毫升）。伴隨 標準及未知，進行三組（n=4)之定量控制組（0.25微克/毫 I 升，1.5微克/毫升及7.5微克/毫升）以確定分析的一致性。標 準曲線有R2>0.99且定量控制組皆於其期望值的10%内。利 用科學繪圖軟體（Kalidagraph software)將定量的測試樣本 作圖顯示並利用WIN NONLIN軟體決定其藥物動力學參 數。實例1(a)提供下列結果：0.69(鼠pK，AUC，ip， /xg-h/ml);0.33(鼠 pK，AUC，po，jitg-h/ml)。 KDR(VEGFR2)磷酸化於PAE-KDR細胞分析 此分析決定測試化合物抑制豬主動脈内皮細胞（PAE， O:\90\90027.DOC -133- 200424193
porcine aorta endothelial)-KDR細胞的KDR自石粦酸化反應之 能力。使用過度耒現人類KDR的PAE細胞於此分析中。將細 胞培養於Ham，s F12培養基補充10%胎牛血清（FBS，fetal bovine serum)及400微克/毫升G41 8。將三萬個細胞植入於 75微升生長培養基中之96孔盤的各孔中並使其於37°C接觸 6小時。而後將細胞暴露於飢餓培養基（Ham4 F12培養基補 充0.1% FBS)16小時。饑餓時期結束後，將1〇微升溶於 5%DMSO於飢餓培養基的測試藥劑加至測試孔中並將1〇微 升媒介（5% DMSO於飢餓培養基）加至控制組孔中。於各孔 中最終DMSO濃度為0.5%。將盤於37°C培養1小時，而後將 細胞在2 mM Na3V04的存在下以500 ng/mL VEGF (可購自R & D系統）刺激8分鐘。將細胞以1 mM Na3V04於HBSS中清 洗一次並以加入每孔50微升分解緩衝液將細胞分解。而後 將100微升稀釋液加至各孔並將稀釋的細胞分解液轉移至 96孔羊抗-兔塗佈的盤（可購自Pierce)，其已預先塗佈兔子抗 -人抗-flk-1 C-20抗體（可購自SantaCruz)。將盤於室温培養 2小時並以1% Tween 20於PBS清洗7次。將HRP-PY20(可購 自Santa Cruz)稀釋並加至盤培養30分鐘。將盤再度清洗並 將TMB過氧化酶受質（可購自Kirkegaard & Perry)加入培養 10分鐘。將100微升0.09 N硫酸加至96孔盤的各孔以停止反 應。由分光光度計盤讀取450 nm評估雄酸化狀態。由利用 4-參數分析之曲線符合計算IC5G值。 PAE-PDGFR/S鱗酸化於PAE-PDGFRB細胞分析 此分析決定測試化合物抑制豬主動脈内皮細胞（PAE， O:\90\90027.DOC -134- 200424193 porcine aorta endothelial)- PDGFR/3細胞的 PDGFRjS 自石粦酸 化反應之能力。使用過度表現人類PDGFR /3的PAE細胞於
此分析中。將細胞培養於Ham’s F12培養基補充10%胎牛血 清（FBS，fetal bovine serum)及 400 微克/毫升 G418。將二萬 個細胞植入於50微升生長培養基中之96孔盤的各孔中並使 其於37°C接觸6小時。而後將細胞暴露於飢餓培養基（Ham’s F12培養基補充0.1%FBS) 16小時。饑餓時期結束後，將10 微升溶於5% DMSO於飢餓培養基的測試藥劑加至測試孔中 並將10微升媒介（5% DMSO於飢餓培養基）加至控制組孔 中。於各孔中最終DMSO濃度為0.5%。將盤於37°C培養1小 時，而後將細胞在2 mM Na3V〇4的存在下以1 /xg/mL PDGF-BB(R & D系統）刺激8分鐘。將細胞以1 mM Na3V04 於HBSS中清洗一次並以加入每孔50微升分解緩衝液將細 胞分解。而後將100微升稀釋液加至各孔並將稀釋的細胞分 解液轉移至96孔羊抗_兔塗佈的盤（Pierce)，其已預先塗佈兔 子抗-人PDGFRiS抗體（Santa Cruz)。將盤於室溫培養2小時並 以 1% Tween 20 於 PBS 清洗 7次。將 HRP-PY20 (Santa Cruz) 稀釋並加至盤培養30分鐘。將盤再度清洗並將TMB過氧化 酶受質（Kirkegaard & Perry)加入培養10分鐘。將1〇〇微升 0.09 N硫酸加至96孔盤的各孔以停止反應。由分光光度計 盤讀取450 nm評估磷酸化狀態。由利用4-參數分析之曲線 符合計算IC5G值。 人類肝臟微粒體（HLM，Human Liver Microsome)分析 由下列LC-MS分析法程序測量化合物於人類肝臟微粒體 O:\90\90027.DOC -135- 200424193 中的代謝。首先，將人類肝臟微粒體（HLM，Human Liver Micro some)解;東並以冷100 mlVU粦酸鉀緩衝液稀釋至5毫克/ 毫升。將適量磷酸鉀緩衝液、NADPH-再生溶液（含有 B-NADP、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-6-磷酸去氫酶及MgCl2) 及HLM於13x100 mm玻璃管中37°C預先培養10分鐘。（每測 試樣品3管一三重複）。將測試化合物（5口 Μ最終）加至各管 以起始反應並由溫和旋轉混合，之後於37°C培養。於t=0、 2小時，自各培養管中取出250微升樣品至含有1毫升冰冷乙 腈與0.05 μΜ蛇根驗（reserpine)的不同12x75 mm玻璃管。將 樣品於4000 rpm離心20分鐘以沉澱蛋白質及鹽類（Beckman Allegra 6KR，S/N ALK98D06, #634)。將上清液轉移至新的 12x75 mm玻璃管並以Speed-Vac離心真空蒸發器蒸發。將樣 品重新.配於200微升0.1%曱酸/乙腈（90/10)並劇烈旋轉混合 至溶解。而後將此樣品轉移至不同聚丙烯微量離心管並於 1400Oxg離心 10分鐘。（Fisher Micro 14，S/N M0017580)。對 各重複（#1-3)各時間點（〇及2小時），將定量各測試化合物樣 品併入單一 HPLC瓶***（6個總樣品）做LC-MS分析，將其說 明於下。 將合併的化合物樣品注入LC-MS系統，其由HP1100二極 體陣列HPLC及Micromass Quattro II三相四極矩式質譜儀 組成，以正電灑SIR模式操作（程式設定為專一地掃描各測 試化合物的分子離子）。各測試化合物波聲係於各時間點積 分。對於各化合物，將各時間點的波峰面積（n=3)平均’並 將於2小時的此平均波峰面積除以0小時時的平均波峰面積
O:\90\90027.DOC -136- 200424193 以得到2小時時剩餘的測試化合物百分比。 利用不同分析測試化合物的結果摘要於下表中，其中記 號「％@」代表於敘述的濃度之抑制百分比，「*」值代表 Ki (nM)或抑制％於化合物濃度*為1 μΜ或**為50nM，除非 另外指明。「NT」代表無顯著抑制或未測試。 表1
實例 # FLVK Ki%抑 制@50 nM FLVK- p料 LckP* %抑制@ ΙμΜ FGF-P %抑制@ ΙμΜ HUVEC IC50 (nM) HUVEC + 白蛋白 IC50 (nM) %剩餘 (HLM) PAE PDGFR 自磷酸化 IC50 (nM) PAE KDR IC50 nM 平均 bFGF HUVEC IC50 (nM) 平均 3(a) 98 NT 30 99 12.7 NT NT NT NT NT 3(b) 98 NT 27 96 5.7 NT 84@2h NT NT NT 3(c) 91 NT 9 83 0.43 9.2 [email protected] NT NT NT 3⑹ 89 NT 11 80 0.4 7.5 68_ 3.5 NT 147 3(f) 95 NT 41 60 NT >100 NT NT NT NT 3(g) 95 NT 28 72 1.1 NT 72_.5h NT NT NT 3(h) 96 NT 37 85 1.6 NT [email protected] 0.63 NT NT 3(i) 88 NT 22 45 0.2 NT NT 1.9 NT 1000 30 80 NT 17 43 1.7 NT [email protected] 4.7 NT NT 3(k) 74 NT 19 36 0.8 NT 75〇,0.5h 5 NT 1000 3(q) 47 NT 7 31 5 NT [email protected] 5.2 NT NT 2⑻ 84 NT NT 75 1.6 NT [email protected] 2.8 NT 70 l(k) 27 NT NT 12 >10 NT NT NT NT NT 2(g) 83 NT NT 79 0.71 NT [email protected] 10.5 NT 173 64 94 NT NT 39 0.15 NT [email protected] 5.5 NT 1250 65 3.11 nM NT NT NT 3.4 NT 8_0.5h 5.8 NT NT 61 65 NT NT 14 6.5 NT NT NT NT 662 41 45 NT NT 11 6.4 NT NT NT NT 3775 51 82 NT NT 52 NT NT NT NT NT NT 15 64 NT NT 29 1.5 NT NT 12.3 NT 1613 36 95 0.3nM NT 69 1.67 NT NT NT 1.62 935 13 80 NT NT 63 NT NT NT 6 NT NT 18 94 NT NT 59% NT NT NT NT NT 1882 20 91 NT NT 35% 0.084 NT NT NT NT NT 37 90 NT NT 45 NT NT NT NT 0.76 NT 38 75 NT NT NT NT 0.68 NT 2 NT NT 39 96 NT NT 76% NT NT NT 4.7 NT NT 32 78 NT NT 70% 0.61 NT 97_.5h 0.5 NT NT 55 97 NT NT 67% 0.2 NT NT 3.7 NT NT O:\90\90027.DOC -137- 200424193
實例 # FLVK Ki0/〇 抑 制@50 nM FLVK- p** LckP* %抑制@ ΙμΜ FGF-P %抑制@ ΙμΜ HUVEC IC50 (nM) HUVEC + 白蛋白 IC50 (nM) %剩餘 (HLM) PAE PDGFR 自磷酸化 IC50 (nM) PAE KDR IC50nM 平均 bFGF HUVEC IC50 (nM) 平均 57 91 NT NT 52% <1.8 NT NT 1.3 NT NT 63 85 NT NT 63% 0.1 NT NT 2.4 NT NT 34 72 NT NT NT NT NT NT 4.5 NT NT 10 76 6.07 NT 38， 197nM 0.67 NT [email protected] 21 NT NT 45 28 NT NT 24 NT NT NT NT NT NT 49 11 NT NT 36 NT NT NT NT NT NT 23 23 NT NT 56 NT NT NT 40 NT NT 25 64 NT NT 13 3 NT NT NT NT NT 活體内分析新生鼠的視網膜血管發育
鼠的視網膜血管發育發生自產後第1天至產後第14天 (P1-P14)。此過程有賴於VEGF的活性（J· Stone等人，J. Neurosci·，15, 473 8(1995))。先前工作已證實在早期血管發 育期間VEGF也作用為視網膜血管的生存因子（Alon等人， Nat. Med·，1，1024(1995))。為了評估特定化合物活體内抑 制VEGF活性的能力，將化合物配製於適當媒介中，通常為 5 0%聚乙二醇，平均分子量400，及50% 3 00 mM蔗糖於去離 子水中。通常，將2微升藥物溶液注入產後第8或9天的幼鼠 眼睛的中央玻璃體内。玻璃體内注射6天後，殺死動物並將 視網膜自剩餘的眼球組織取出。而後將分離的視網膜經過 組織化學染色步驟專一地染内皮細胞（Lutty及McLeod， Arch. Ophthalmol·，110，267 (1992))，顯示組織樣品内血管 化的程度。而後將個別視網膜平鋪於玻片上並檢視以決定 血管化的程度。有效的化合物抑制視網膜血管構造之進一 步發育且引發於視網膜内所有除了最大的血管之退化。使 用血管退化的量來評估活體内給予後化合物之相對功效。 -138-
O:\90\90027.DOC 200424193 將企管退化以主觀的刻度分級為一至三正，直中一正為可 偵物化-判定為大約25%或以下，二正為判斷為二 =;%退化’而二正給予視網膜幾乎完全退化(大約75%或 為了更定量分析退化，將ADP酶染色，平鋪視網膜的影 像以連接至解剖顯微鏡的數位相機拍攝。而後將視網膜夺 像輸入影像分析軟體（Image Pro Plus 4 〇, Me、仙
Cybernetics，Silver Spdng，勘）。利用軟體來決定含有毕色 的金管之視網膜面積比例。將實驗眼睛的此值與注入媒介 (相同動物對側眼睛）所測得的比較。而後將於接受到化合物 之眼中所見血管面積的減少與媒介注入的眼睛比較表示為 該樣品之「退化比例」。將退化百分比值對5_8個動物之族 群平均.。 經由顯微鏡觀察指出幾乎完全退化的樣品中，退化百分 比值通常測量為65-70%。此係由於染色沉殿於視網膜的： 摺内’而皺㈣由藥物注射用的媒介引發。影像分析軟體 解釋此等含染色的皺摺為血管。不嘗試校正此等皺摺因為 其每隻眼睛的情況不m，應注意報導的退化百分比 值係由準確地排列順序化合物之保守測量造成，但是低估 其絕對功效。 一 活體内分析新生鼠早產兒視網膜病變模型的視網臈血管發 來評估此 5 Invest. 使用VEGF相關視網膜新生血管之第二個模型 系列化合物之活性。於此模型中（Peim等人
O:\90\90027.DOC -139- 200424193
Ophthalmol· Vis· Sci·，36, 2063(1995))，將幼鼠（n=16)於其 母親置於電躺控制的籠内，調整氧的濃度。將動物置於5〇% 氧濃度下24小時，之後於1 〇%氧濃度下24小時。此交替高 血氧接著低血氧之循環重複7次，之後將動物移至室内空氣 (P14)。在移至室内空氣時將化合物經由玻璃體内注射給 予，6天後（P20)將動物殺死。而後將分離的視網膜分離， 染色裝置’並如上述於發育模型中分析。效果也如同發育 模型所述分級。 可將上述模範化合物根據下列實例配製於醫藥組合物 中0 實例1 :非口服組合物 為了製備適於由注射給予的非口服醫藥組合物，將1〇〇 笔克式.1化合物之水溶性鹽溶解於DMSO中而後與10毫升 〇·9 /〇無菌鹽水混合。將混合物併入適於注射給予的劑量單 位形式。 實例2 ·· 口服組合物 為了製備適於由口服傳遞的醫藥組合物，將1 00毫克式I 化。物舁750笔克乳糖混合。將混合物併入適於口服給予的 口服劑量單位，如硬明膠膠囊中。 實例3 :眼内組合物 為了製備眼内傳遞用之緩釋醫藥組合物，將式I化合物 懸浮於玻尿酸中性等張溶液（1.5%濃度）於鱗酸緩衝液（pH 7·4)以形成1%懸浮液。 …了解七述#明本質上為模範及解釋用，且用來舉例說
O:\90\90027.DOC -140- 200424193 明本發明及其較佳具體實施例。經由常規實驗，熟悉本技 藝者將知可做明顯修改及變化而不離本發明之精神。因 此，本發明不應受上述說明而限定，而是受下列申請專利 範圍及其相當者限定。 O:\90\90027.DOC -141

Claims (1)

  1. 200424193 拾、申請專利範圍： 1 · 一種化合物、。醫藥上可接受的前驅藥物、醫藥上有活性 的代謝物或醫藥上可接受的鹽，其係選自由下列化合物 組成的族群：
    O:\90\90027.DOC 200424193
    O:\90\90027.DOC -2- 200424193
    又 O:\90\90027.DOC 200424193
    O:\90\90027.DOC 2. 一種由下式代表的化合物
    或其醫藥上可接受的前驅藥 ^ 、殺# , +物、醫樂上有活性的代謝 物或西樂上可接受的鹽。 3. 一種用於治療哺乳類老年普 ，病雙之醫藥組合物，其包 各>口療有效量之如申請專利範 — ^ ㈤弟1或2項之化合物、醫 樂上可接受的前驅藥物、醫 朱上有活性的代謝物或醫藥 上可接受的鹽；及醫攀卜 /、 接文的載體、稀釋劑或其媒 介0 •一種用於治療哺乳類脈絡膜新生血管之醫藥組合物，盆 2治療有效量之如中請專利範圍第_項之化合物、、 :樂上可接雙的前驅藥物、醫藥上有活性的代謝物或醫 市上可接又的鹽；及醫藥上可接受的載體、稀釋劑或1 媒介。 、 5. 6· ▲種用於/σ療哺乳類視網膜病變之醫藥組合物，其包含 療有效里之如申請專利範圍第1或2項之化合物、醫藥 /接又的蝻驅藥物、醫藥上有活性的代謝物或醫藥上 可H的® ’及醫藥上可接受的載體、稀釋劑或其媒介。 _ 3專利範圍第5項之醫藥組合物，其中視網膜病變包 3糖展病視網膜病變、破璃體視網膜病變或早產兒視網 膜病變。 O:\90\90027.DOC 200424193 -種用於治療哺乳類視網膜炎之醫藥組合物，其包含治 療有效量^如申請專利範圍第1或2項之化合物、醫藥上 可接受的财驅藥物、醫藥上有活性的代謝物或醫藥上可 接受的鹽；及醫藥上可接受 8· 按又的載體、稀釋劑或其媒介。 如申請專利範圍第7項之醫藥 貝<西柰組合物，其中視網膜炎包含 有巨細胞病毒性視網膜炎。 9. -種用^療哺乳類黃斑水腫之醫藥組合物，其包含治 療有效里:如申睛專利範圍第丄或2項之化合物、醫藥上 可接受的前驅藥物、醫筚卜右 , W条上有^舌性的代謝物或醫藥上可 接党的鹽，及醫藥上可接受 按又的載體、稀釋劑或其媒介。 .一種用於治療哺乳類眼科疾病之醫藥組合物，其包含治 療有效量之如申請專利範圍第1或2項之化合物、醫藥上 可接受的前驅藥物、醫攀卜 ^ ^ +上有活性的代謝物或醫藥上可 接受的鹽；及醫藥上可接無 11 又々载體、稀釋劑或其媒介。 一種醫藥組合物，其包含： (a) 治療有效量之如φ 士主击 '申3月專利範圍第1或2項之化合物、 西樂上可接受的前驅藥物、 益L > / W本上有活性的代謝物或醫 樂上可接受的鹽；及 (b) 醫藥上可接受的養， 12 ㈣體、稀釋劑或其媒介。 —種用於治療由蛋白質激 &卩的哺錢疾病症狀之醫 +、、且a物，其包含治療右旦 ^放1之如申請專利範圍第1或2 員之化合物、醫藥上可接香， 丧又的耵驅藥物、醫荜上有活性 的代謝物或醫藥上可接受^ 西梁上有活14 體、稀釋劑、或其媒介。 及酉樂上可接受的載 O:\90\90027.DOC 200424193 13. 14. 15. 如申請專利範圍㈣項之醫藥組合物，其中哺乳類疾病 症狀係有關於腫瘤生長、細胞增殖或血管新生。 一種於活體外調控蛋白質激酶受體活性之方法，A包含 使激酶受體與有效量之如申 你殺一 T °月專利乾圍第1或2項之化合 物、醫樂上可接受的前 或醫筚上了垃> 物、醫冑上有活性的代謝物 袁酉条上可接受的鹽接觸。 如申請專利範圍第14項之方、、 VEGF受體。 法’其中蛋白質激酶受體為 O:\90\90027.DOC 200424193 柒、 指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明： 捌、 本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：
    O:\90\90027.DOC 200424193
    O:\90\90027.DOC -6 200424193
    人 O:\90\90027.DOC -7- 200424193
    O:\90\90027.DOC
TW092135955A 2002-12-19 2003-12-18 Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use TW200424193A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US43490202P 2002-12-19 2002-12-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW200424193A true TW200424193A (en) 2004-11-16

Family

ID=32682122

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW092135955A TW200424193A (en) 2002-12-19 2003-12-18 Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use

Country Status (37)

Country Link
US (2) US7053107B2 (zh)
EP (1) EP1585743B1 (zh)
JP (1) JP3814285B2 (zh)
KR (1) KR100730267B1 (zh)
CN (1) CN1747950A (zh)
AP (1) AP2005003341A0 (zh)
AR (1) AR042510A1 (zh)
AT (1) ATE362928T1 (zh)
AU (1) AU2003286321A1 (zh)
BR (1) BR0317548A (zh)
CA (1) CA2510850A1 (zh)
CO (1) CO5580767A2 (zh)
CR (1) CR7882A (zh)
DE (1) DE60314013T2 (zh)
DK (1) DK1585743T3 (zh)
EA (1) EA008501B1 (zh)
EC (1) ECSP055858A (zh)
GT (1) GT200300294A (zh)
HR (1) HRP20050559A2 (zh)
IS (1) IS7859A (zh)
MA (1) MA27570A1 (zh)
MX (1) MXPA05006676A (zh)
NL (1) NL1025073C2 (zh)
NO (1) NO20053486L (zh)
NZ (1) NZ540340A (zh)
OA (1) OA12977A (zh)
PA (1) PA8592901A1 (zh)
PE (1) PE20041006A1 (zh)
PL (1) PL377713A1 (zh)
PT (1) PT1585743E (zh)
RS (1) RS20050430A (zh)
SI (1) SI1585743T1 (zh)
TN (1) TNSN05164A1 (zh)
TW (1) TW200424193A (zh)
UY (1) UY28130A1 (zh)
WO (1) WO2004056806A1 (zh)
ZA (1) ZA200504339B (zh)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA89035C2 (ru) 2003-12-03 2009-12-25 Лео Фарма А/С Эфиры гидроксамовых кислот и их фармацевтическое применение
JPWO2005094823A1 (ja) * 2004-03-30 2007-08-16 協和醗酵工業株式会社 Ｆｌｔ−３阻害剤
US20060182783A1 (en) * 2004-04-30 2006-08-17 Allergan, Inc. Sustained release intraocular drug delivery systems
WO2006043172A1 (en) * 2004-10-19 2006-04-27 Pfizer Inc. Pharmaceutical compositions and methods for sub-tenon delivery
CN101044138A (zh) * 2004-11-02 2007-09-26 辉瑞有限公司 吲唑化合物的制备方法
US20060160863A1 (en) * 2005-01-05 2006-07-20 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Polymorphic and amorphous forms of 2-{3-[(E)-2-(4,6-dimethyl-pyridin-2-yl)-vinyl]-1H-indazol-6-ylamino}-N-(4-hydroxy-but-2-ynyl)benzamide
WO2006117666A2 (en) * 2005-04-29 2006-11-09 Pfizer Inc. Dosage forms, pharmaceutical compositions and methods for sub-tenon delivery
US7974856B2 (en) 2005-11-30 2011-07-05 The Invention Science Fund I, Llc Computational systems and methods related to nutraceuticals
US7927787B2 (en) 2006-06-28 2011-04-19 The Invention Science Fund I, Llc Methods and systems for analysis of nutraceutical associated components
US8068991B2 (en) * 2005-11-30 2011-11-29 The Invention Science Fund I, Llc Systems and methods for transmitting pathogen related information and responding
US10296720B2 (en) 2005-11-30 2019-05-21 Gearbox Llc Computational systems and methods related to nutraceuticals
US7827042B2 (en) 2005-11-30 2010-11-02 The Invention Science Fund I, Inc Methods and systems related to transmission of nutraceutical associated information
US8340944B2 (en) 2005-11-30 2012-12-25 The Invention Science Fund I, Llc Computational and/or control systems and methods related to nutraceutical agent selection and dosing
US8000981B2 (en) 2005-11-30 2011-08-16 The Invention Science Fund I, Llc Methods and systems related to receiving nutraceutical associated information
US8297028B2 (en) 2006-06-14 2012-10-30 The Invention Science Fund I, Llc Individualized pharmaceutical selection and packaging
WO2007091107A1 (en) * 2006-02-10 2007-08-16 Summit Corporation Plc Treatment of duchenne muscular dystrophy
JPWO2008020606A1 (ja) * 2006-08-16 2010-01-07 協和発酵キリン株式会社 血管新生阻害剤
WO2008128538A1 (en) * 2007-04-19 2008-10-30 Leo Pharma A/S Src family kinase inhibitors
MY161818A (en) 2007-04-20 2017-05-15 Acucela Inc Styrenyl derivate compounds for treating ophthalmic diseases and disorders
US20090081277A1 (en) * 2007-09-21 2009-03-26 Allergan, Inc. Pharmaceutical formulations and methods for treating ocular conditions
CA2734551A1 (en) 2008-08-27 2010-03-04 Leo Pharma A/S Pyridine derivatives as vegfr-2 receptor and protein tyrosine kinase inhibitors
CN103804349A (zh) * 2012-11-01 2014-05-21 杨子娇 一类治疗青光眼的化合物及其用途
JO3425B1 (ar) 2013-07-15 2019-10-20 Novartis Ag مشتقات البابيريدينيل-اندول واستخدامها كعامل متمم لمثبطات b
CN106458920B (zh) * 2014-03-31 2019-02-15 千寿制药株式会社 炔基吲唑衍生物及其用途
CN104744338A (zh) * 2015-03-31 2015-07-01 天津维智精细化工有限公司 一种6-氯羟吲哚的合成方法
US10519133B2 (en) * 2015-08-07 2019-12-31 Medshine Discovery Inc. Vinyl compounds as FGFR and VEGFR inhibitors
CN109942544B (zh) * 2017-12-21 2021-06-11 中国科学院合肥物质科学研究院 一类新型吲唑类衍生物激酶抑制剂
WO2024032584A1 (zh) * 2022-08-08 2024-02-15 苏州必扬医药科技有限公司 一种蛋白酪氨酸激酶抑制剂及其医疗用途

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8827305D0 (en) 1988-11-23 1988-12-29 British Bio Technology Compounds
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
AU675929B2 (en) 1992-02-06 1997-02-27 Curis, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5178635A (en) 1992-05-04 1993-01-12 Allergan, Inc. Method for determining amount of medication in an implantable device
US6177401B1 (en) 1992-11-13 2001-01-23 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis
US5455258A (en) 1993-01-06 1995-10-03 Ciba-Geigy Corporation Arylsulfonamido-substituted hydroxamic acids
US5443505A (en) 1993-11-15 1995-08-22 Oculex Pharmaceuticals, Inc. Biocompatible ocular implants
IL112248A0 (en) 1994-01-25 1995-03-30 Warner Lambert Co Tricyclic heteroaromatic compounds and pharmaceutical compositions containing them
ATE262902T1 (de) 1994-11-10 2004-04-15 Millennium Pharm Inc Verwendung von pyrazole verbindungen zur behandlung von glomerulonephritis, krebs, atherosklerose oder restenose
US5863949A (en) 1995-03-08 1999-01-26 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
CA2218503C (en) 1995-04-20 2001-07-24 Pfizer Inc. Arylsulfonyl hydroxamic acid derivatives
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
US5773019A (en) 1995-09-27 1998-06-30 The University Of Kentucky Research Foundation Implantable controlled release device to deliver drugs directly to an internal portion of the body
GB9520822D0 (en) 1995-10-11 1995-12-13 Wellcome Found Therapeutically active compounds
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
ATE225343T1 (de) 1995-12-20 2002-10-15 Hoffmann La Roche Matrix-metalloprotease inhibitoren
JP4464466B2 (ja) 1996-03-05 2010-05-19 アストラゼネカ・ユーケイ・リミテッド ４―アニリノキナゾリン誘導体
EP0888310B1 (en) 1996-03-15 2005-09-07 AstraZeneca AB Cinnoline derivatives and use as medicine
JPH11512750A (ja) 1996-06-27 1999-11-02 ファイザー インク． ２―（２―オキソ―エチリデン）―イミダゾリジン―４―オンの誘導体およびファルネシル蛋白質トランスフェラーゼ阻害物質としてのそれらの使用法
EP0818442A3 (en) 1996-07-12 1998-12-30 Pfizer Inc. Cyclic sulphone derivatives as inhibitors of metalloproteinases and of the production of tumour necrosis factor
HRP970371A2 (en) 1996-07-13 1998-08-31 Kathryn Jane Smith Heterocyclic compounds
ES2186908T3 (es) 1996-07-13 2003-05-16 Glaxo Group Ltd Compuestos heterociciclos condensados como inhibidores de pproteina-tirosina-quinasas.
TR199900048T2 (xx) 1996-07-13 1999-04-21 Glaxo Group Limited Protein tirozin kinaz inhibit�rleri olarak bisiklik heteroaromatik bile�ikler
HUP9903014A3 (en) 1996-07-18 2000-08-28 Pfizer Phosphinate derivatives having matrix metalloprotease inhibitor effect and medicaments containing the same
US6153609A (en) 1996-08-23 2000-11-28 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
ID18494A (id) 1996-10-02 1998-04-16 Novartis Ag Turunan pirazola leburan dan proses pembuatannya
CA2277100C (en) 1997-01-06 2005-11-22 Pfizer Inc. Cyclic sulfone derivatives
TR199901849T2 (xx) 1997-02-03 2000-02-21 Pfizer Products Inc. Arils�lfonilamino hidroksamik asit t�revleri.
CA2279863A1 (en) 1997-02-07 1998-08-13 Pfizer Inc. N-hydroxy-beta-sulfonyl-propionamide derivatives and their use as inhibitors of matrix metalloproteinases
NZ336836A (en) 1997-02-11 2001-02-23 Pfizer Arylsulfonyl hydroxamic acid derivatives suitable for a broad range of medicinal treatments
CA2289102A1 (en) 1997-05-07 1998-11-12 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
JP2002501532A (ja) 1997-05-30 2002-01-15 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド 新規血管形成阻害薬
US6658447B2 (en) * 1997-07-08 2003-12-02 Intel Corporation Priority based simultaneous multi-threading
ATE263147T1 (de) 1997-08-08 2004-04-15 Pfizer Prod Inc Derivate von aryloxyarylsulfonylamino hydroxyaminsäuren
ATE368665T1 (de) 1997-08-22 2007-08-15 Astrazeneca Ab Oxindolylchinazolinderivate als angiogenesehemmer
EP1017682A4 (en) 1997-09-26 2000-11-08 Merck & Co Inc NEW ANGIOGENESIS INHIBITORS
CN1280580A (zh) 1997-11-11 2001-01-17 辉瑞产品公司 用作抗癌药的噻吩并嘧啶和噻吩并吡啶衍生物
GB9725782D0 (en) 1997-12-05 1998-02-04 Pfizer Ltd Therapeutic agents
JPH11236333A (ja) 1997-12-30 1999-08-31 Pfizer Prod Inc 抗ガン剤として有用なイミダゾリン−４−オン誘導体
GB9800569D0 (en) 1998-01-12 1998-03-11 Glaxo Group Ltd Heterocyclic compounds
GB9800575D0 (en) 1998-01-12 1998-03-11 Glaxo Group Ltd Heterocyclic compounds
GB9801690D0 (en) 1998-01-27 1998-03-25 Pfizer Ltd Therapeutic agents
PA8469501A1 (es) 1998-04-10 2000-09-29 Pfizer Prod Inc Hidroxamidas del acido (4-arilsulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxilico
PA8469401A1 (es) 1998-04-10 2000-05-24 Pfizer Prod Inc Derivados biciclicos del acido hidroxamico
HUP0103617A2 (hu) 1998-05-29 2002-02-28 Sugen, Inc. Protein kinázt gátló, pirrolilcsoporttal helyettesített 2-indolszármazékok, e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények, valamint e vegyületek alkalmazása
UA60365C2 (uk) 1998-06-04 2003-10-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні ізотіазолу, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція та спосіб лікування гіперпроліферативного захворювання у ссавця
JP3495706B2 (ja) 1998-08-27 2004-02-09 ファイザー・プロダクツ・インク 抗癌薬として有用なアルキニル置換キノリン−２−オン誘導体
WO2000012498A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Pfizer Products Inc. Quinolin-2-one derivatives useful as anticancer agents
DK1004578T3 (da) 1998-11-05 2004-06-28 Pfizer Prod Inc 5-oxo-pyrrolidin-2-carboxylsyrehydroxamidderivater
EP1006113A1 (en) 1998-12-02 2000-06-07 Pfizer Products Inc. Derivatives of 2-(2-oxo-ethylidene)-imidazolidin-4-one and their use to inhibit abnormal cell growth
US6682736B1 (en) 1998-12-23 2004-01-27 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to CTLA-4
US6649645B1 (en) 1998-12-23 2003-11-18 Pharmacia Corporation Combination therapy of radiation and a COX-2 inhibitor for treatment of neoplasia
EP1140182A2 (en) 1998-12-23 2001-10-10 G.D. Searle & Co. Use of a matrix metalloproteinase inhibitor together with an antineoplastic agent, optionally also together with radiation, in the treatment of neoplasia
UA71945C2 (en) 1999-01-27 2005-01-17 Pfizer Prod Inc Substituted bicyclic derivatives being used as anticancer agents
JP3270834B2 (ja) 1999-01-27 2002-04-02 ファイザー・プロダクツ・インク 抗がん剤として有用なヘテロ芳香族二環式誘導体
EA200100766A1 (ru) 1999-02-11 2002-02-28 Пфайзер Продактс Инк. Хинолин-2-он замещенные гетероарильные производные, используемые в качестве противоопухолевых агентов
US6586447B1 (en) 1999-04-01 2003-07-01 Pfizer Inc 3,3-disubstituted-oxindole derivatives useful as anticancer agents
US6511993B1 (en) 1999-06-03 2003-01-28 Kevin Neil Dack Metalloprotease inhibitors
TWI262914B (en) * 1999-07-02 2006-10-01 Agouron Pharma Compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases
PE20010306A1 (es) * 1999-07-02 2001-03-29 Agouron Pharma Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa
EP1081137A1 (en) 1999-08-12 2001-03-07 Pfizer Products Inc. Selective inhibitors of aggrecanase in osteoarthritis treatment
JP2001121829A (ja) * 1999-10-26 2001-05-08 Sony Chem Corp 情報記録用シート
UA75055C2 (uk) 1999-11-30 2006-03-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні бензоімідазолу, що використовуються як антипроліферативний засіб, фармацевтична композиція на їх основі
PT1106612E (pt) 1999-11-30 2004-06-30 Pfizer Prod Inc Derivados de quinolina uteis para inibir a farnesil-proteina-transferase
YU54202A (sh) * 2000-01-18 2006-01-16 Agouron Pharmaceuticals Inc. Jedinjenja indazola, farmaceutske smeše i postupci za stimulisanje i inhibiranje ćelijske proliferacije
HN2000000266A (es) 2000-01-21 2001-05-21 Pfizer Prod Inc Compuesto anticanceroso y metodo de separacion de enantiomeros util para sintetizar dicho compuesto.
US6844357B2 (en) 2000-05-01 2005-01-18 Pfizer Inc. Substituted quinolin-2-one derivatives useful as antiproliferative agents
AR038957A1 (es) 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer

Also Published As

Publication number Publication date
NO20053486L (no) 2005-07-18
AP2005003341A0 (en) 2005-06-30
DK1585743T3 (da) 2007-09-17
UY28130A1 (es) 2004-07-30
IS7859A (is) 2005-05-23
ATE362928T1 (de) 2007-06-15
ECSP055858A (es) 2005-09-20
EA200500811A1 (ru) 2005-12-29
PL377713A1 (pl) 2006-02-06
PT1585743E (pt) 2007-07-12
US20040192735A1 (en) 2004-09-30
CR7882A (es) 2005-08-05
DE60314013D1 (de) 2007-07-05
NL1025073A1 (nl) 2004-06-22
BR0317548A (pt) 2005-11-22
EP1585743B1 (en) 2007-05-23
SI1585743T1 (sl) 2007-08-31
AR042510A1 (es) 2005-06-22
MXPA05006676A (es) 2005-08-16
JP3814285B2 (ja) 2006-08-23
DE60314013T2 (de) 2008-01-17
AU2003286321A1 (en) 2004-07-14
WO2004056806A1 (en) 2004-07-08
MA27570A1 (fr) 2005-10-03
PA8592901A1 (es) 2005-02-04
KR20050084439A (ko) 2005-08-26
CA2510850A1 (en) 2004-07-08
US20060160858A1 (en) 2006-07-20
NL1025073C2 (nl) 2005-02-01
CN1747950A (zh) 2006-03-15
RS20050430A (en) 2007-08-03
PE20041006A1 (es) 2004-12-24
TNSN05164A1 (fr) 2007-05-14
HRP20050559A2 (en) 2006-02-28
ZA200504339B (en) 2006-07-26
GT200300294A (es) 2004-07-27
JP2006515589A (ja) 2006-06-01
OA12977A (en) 2006-10-13
CO5580767A2 (es) 2005-11-30
NZ540340A (en) 2007-07-27
EP1585743A1 (en) 2005-10-19
KR100730267B1 (ko) 2007-06-20
EA008501B1 (ru) 2007-06-29
US7053107B2 (en) 2006-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW200424193A (en) Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use
KR101450356B1 (ko) 알츠하이머와 같은 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질과 관련된 질환의 치료를 위한 ｎ-(메틸)-1ｈ-피라졸-3-아민, ｎ-(메틸)-피리딘-2-아민 및 ｎ-(메틸)-티아졸-2-아민 유도체
KR102360699B1 (ko) 트리아진 화합물 및 그의 의약 용도
KR20180134849A (ko) 라이실 옥시다제의 할로알릴아민 인돌 및 아자인돌 유도체 억제제 및 이의 용도
KR20110059719A (ko) Ｎａｄｐｈ 옥시다아제 억제제로서 피라졸로 피리딘 유도체
JP2004501083A (ja) プロテインキナーゼを阻害するためのピラゾール
EA013748B1 (ru) Производные n-(гетероарил)-1-гетероарилалкил-1h-индол-2-карбоксамидов, их получение и их применение в терапии
EP1870099A1 (en) Protective agent for retinal neuronal cell comprising indazole derivative as active ingredient
CN108503650A (zh) 二噁烷并喹唑啉类化合物或其药用盐或其水合物及其作为酪氨酸激酶抑制剂的应用
JP2014512406A (ja) 新規のｒｏｃｋ阻害剤
EP4214197A1 (en) Substituted pyridine derivatives as sarm1 inhibitors
EP2751080A1 (en) Novel soft rock inhibitors
JP6205425B2 (ja) 新規のｒｏｃｋ阻害剤
JP2007529500A (ja) ２，５−ジメチル−２ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸｛２−フルオロ−５−［３−（（ｅ）−２−ピリジン−２−イル−ビニル）−１ｈ−インダゾール−６−イルアミノ］−フェニル｝−アミドの多形及び非結晶形
EP4183415A1 (en) Trpv4 inhibitor as therapeutic drug for eye disease
KR20230081959A (ko) Bet 단백질을 저해하는 신규한 카르복스아마이드 리독스 유도체 및 이를 이용한 안과질환 예방 및 치료용 조성물