KR20140027160A - 치환된 디아미노카르복스아미드 및 디아미노카르보니트릴 피리미딘, 그의 조성물, 및 그를 사용하는 치료 방법 - Google Patents
치환된 디아미노카르복스아미드 및 디아미노카르보니트릴 피리미딘, 그의 조성물, 및 그를 사용하는 치료 방법Info
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Abstract
하기 구조를 갖는 디아미노피리미딘 화합물 및 유효량의 디아미노피리미딘 화합물을 포함하는 조성물, 및 간 섬유화 장애 또는 JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다:
<화학식 I>
또는
<화학식 IB>
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 본원에 정의된 바와 같다.
<화학식 I>
또는
<화학식 IB>
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 본원에 정의된 바와 같다.
Description
특정 디아미노카르복스아미드 및 디아미노카르보니트릴 피리미딘 화합물, 유효량의 이러한 화합물을 포함하는 조성물, 및 유효량의 이러한 디아미노카르복스아미드 및 디아미노카르보니트릴 피리미딘 화합물을 간 섬유화 장애 또는 JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 간 섬유화 장애 또는 JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다.
비정상적 단백질 인산화 및 질환의 원인 또는 결과 사이의 연관성은 20년 넘는 동안 알려져 왔다. 따라서, 단백질 키나제는 약물 표적의 매우 중요한 군이 되었다. (문헌 [Cohen, Nature, 1:309-315 (2002), Gaestel et al. Curr.Med.Chem.14: 2214-223 (2007); Grimminger et al. Nat. Rev. Drug Disc. 9(12):956-970 (2010)] 참조). 다양한 단백질 키나제 억제제는 매우 다양한 질환, 예컨대 암 및 만성 염증성 질환, 예를 들어 류마티스 관절염 및 건선의 치료에서 임상적으로 사용되어 왔다. (문헌 [Cohen, Eur. J. Biochem., 268:5001-5010 (2001); Protein Kinase Inhibitors for the Treatment of Disease: The Promise and the Problems, Handbook of Experimental Pharmacology, Springer Berlin Heidelberg, 167 (2005)]).
JNK는 ERK (세포외-조절 키나제) 및 p38과 함께 미토겐-활성화 단백질 키나제 (MAPK)의 패밀리에 속하는 편재하여 발현되는 세린/트레오닌 키나제이다. (문헌 [Kyriakis JM, Sci. STKE (48):pe1 (2000); Whitmarsh AJ, et al. Sci. STKE (1):pe1 (1999); Schramek H, News Physiol. Sci.17:62-7 (2002); Ichijo H, Oncogene 18(45):6087-93 (1999)]). MAPK는 전사 인자를 비롯한 선택된 세포내 단백질의 인산화에 의해 외부 자극에 대한 세포에 의한 통합 반응을 생성하는 인산화 캐스케이드를 이용하는, 세포 표면으로부터 핵으로의 신호 전달의 중요한 매개자이다. 추가로, JNK는 또한 비-핵 단백질, 예를 들어, IRS-1 및 Bcl-2 패밀리 구성원을 인산화한다. (문헌 [Davis RJ, Trends Biochem. Sci. 9(11):470-473 (1994); Seger R et al., FASEB J.; 9(9):726-35 (1995); Fanger GR et al., Curr. Opin. Genet. Dev.; 7(1):67-74 (1997)]).
미토겐 활성화 단백질 (MAP) 키나제는 세포외 자극에 대한 반응에서 세포의 핵으로의 신호 전달에 참여한다. ERK p38 및 JNK 이소형으로부터의 MAP 키나제의 예는 미토겐-활성화 단백질 키나제 1 (ERK2), 미토겐-활성화 단백질 키나제 8 (JNK1), 미토겐-활성화 단백질 키나제 9 (MAPK9 또는 JNK2), 미토겐-활성화 단백질 키나제 10 (MAPK10 또는 JNK3) 및 미토겐-활성화 단백질 키나제 14 (MAPK14 또는 p38알파)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. MAP 키나제는 세포외 수용체 또는 열 쇼크, 삼투 스트레스, 반응성 산화제 종 (ROS) 또는 UV 방사선으로부터의 신호 전달을 매개하는 프롤린-지정 세린/트레오닌 키나제의 패밀리이다. (문헌 [Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000)] 참조). MAP 키나제는 MKK 및 MEKK 키나제를 비롯한 상류 이중-특이성 단백질 키나제에 의해 트레오닌 및 티로신의 인산화를 통해 활성화된다. 세포 증식 및 분화는 다중 MAP 키나제 캐스케이드의 조절 제어 하에 있는 것으로 나타났다. (문헌 [Sridhar et al., Pharmaceutical Research, 17:11 1345-1353 (2000)] 참조). 이와 같이, MAP 키나제 경로는 다수의 질환 상태에서 결정적인 역할을 수행한다. 예를 들어, MAP 키나제의 활성에서의 결손은 이상 세포 증식 및 발암의 원인이 되는 것으로 나타났다. (문헌 [Hu et al., Cell Growth Differ. 11:191-200 (2000); 및 Das et al., Breast Cancer Res. Treat. 40:141 (1996)] 참조). 더욱이, MAP 키나제 활성은 또한 제2형 당뇨병과 연관된 인슐린 저항성 (문헌 [Virkamaki et al., J. Clin. Invest. 103:931-943 (1999)] 참조) 및 비만과 관련이 있다. 인슐린 저항성에서의 변화는 간 섬유증으로 진행할 수 있는 지방증의 발병에 기여하는 간에서의 글루코스 및 지질의 대사에 직접적인 영향을 가질 수 있다 (문헌 [Vallerie et al. Science Translational Medicine 2(60):1-7 (2010)]).
지방증은 포화 또는 불포화 유리 지방산 (FFA)의 존재 하에 발병할 수 있다. FFA는 간에서 강건한 JNK 활성화를 촉진하고, FFA의 과다 농축은 간세포 아폽토시스를 유발할 수 있다. JNK2-/- 마우스는 포화 FFA (예를 들어, 스테아르산)에 의한 지방증 및 아폽토시스로부터 부분적으로 보호되지만, 그러나 불포화 FFA에 의한 것으로부터는 보호되지 않는 것으로 보고되었다 (문헌 [Malhi et al. J.Biol.Chem. 281:12093-12101 (2006)]). JNK1-/- 마우스는 FFA 유발 손상로부터 보호되지 않았다. JNK1 및 JNK2의 역할은 지방증으로부터 지방간염 내지 간 섬유증까지 진행된 CDAA-공급 마우스에서 연구된 바 있다 (문헌 [Kodama et al., Gastroenterology 137:1467-1477 (2009)]). JNK1-/- 및 JNK2-/- 마우스 둘 다가 지방증을 발병시키는 한편, JNK1-/- 마우스는 간염 및 섬유증으로의 진행에 대해 현저하게 저항성이었지만, JNK2-/- 마우스는 그렇지 않았다. 골수 세포에 제한된 JNK1-/- 결실을 갖는 키메라 마우스는 지방증을 지나는 질환 진행에 대한 주요 촉발자로서의 활성화된 쿠퍼(Kupffer) 세포와 연관된 간염 및 섬유증에 대해 유사하게 저항성이다. 사실상, JNK1-/- 대식세포는 LPS에 반응하여 IL-1, IL-6, TNF 및 NO를 발현하지 않고 (문헌 [Sanchez-Tillo et al., J Biol Chem. 282(17):12566-73 (2007)]), JNK1 -/- 마우스로부터 또는 야생형 마우스로부터 유래되고 JNK 억제제 SP600125로 치료된 쿠퍼 세포는 LPS에 반응하여 감소된 TNF, IL-6 및 IL-1 발현을 나타낸다 (문헌 [Kodama et al., Gastroenterology 137:1467-1477 (2009)]).
단백질 키나제 경로의 복잡성, 및 다양한 단백질 키나제 및 키나제 경로 사이의 관계 및 상호작용의 복합성의 설명은 다중 키나제 또는 다중 키나제 경로에 대해 유익한 활성을 갖는 단백질 키나제 조정제, 조절제 또는 억제제로서 작용할 수 있는 제약 작용제를 개발하는 것의 중요성을 강조한다. 따라서, 새로운 키나제 조정제 및 특히 JNK 조정제에 대한 필요가 남아있다.
본원의 섹션 2에서 임의의 참조문헌에 대한 인용 또는 확인은 그 참조문헌이 본원에 대한 선행 기술임을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
하기 화학식 I을 갖는 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 동위원소체, 입체이성질체 및 전구약물이 본원에 제공된다.
<화학식 I>
상기 식에서, R1 및 R2는 본원에 정의된 바와 같다.
하기 화학식 IB를 갖는 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 동위원소체, 입체이성질체 및 전구약물이 본원에 제공된다.
<화학식 IB>
상기 식에서, R3 및 R4는 본원에 정의된 바와 같다.
화학식 I 또는 화학식 IB의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 동위원소체, 입체이성질체 또는 전구약물 (각각 본원에서 "디아미노피리미딘 화합물"로서 지칭됨)은 본원에 기재된 바와 같이 간 섬유화 장애, 또는 간 섬유화 장애를 유발하는 당뇨병 및/또는 대사 증후군의 치료 또는 예방에 유용하다. 또 다른 측면에서, 디아미노피리미딘 화합물은 본원에 기재된 바와 같이 JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태의 치료 또는 예방에 유용하다.
한 측면에서, 본 개시내용, 예컨대, 예를 들어, 표 1, 2 및 3에 기재된 바와 같은 디아미노피리미딘 화합물이 본원에 제공된다.
한 측면에서, 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 디아미노피리미딘 화합물 및 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 비히클을 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 경구, 비경구, 점막, 경피 또는 국소 투여에 적합하다.
한 측면에서, 간 섬유화 장애, 예컨대 비-알콜성 지방간염, 지방증, 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 원발성 담즙성 간경변증, 간염, 간세포성 암종, 및 만성 또는 반복성 알콜 섭취와, 감염과, 간 이식과 또는 약물 유발된 간 손상과 병발된 간 섬유증의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 디아미노피리미딘 화합물; 및 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 비히클을 투여하는 것을 포함하는, 상기 간 섬유화 장애를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 또 다른 측면에서, 간 섬유화 장애, 예컨대 비-알콜성 지방간염, 지방증, 간염 또는 간경변증을 유발하는 당뇨병 또는 대사 증후군의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 당뇨병 또는 대사 증후군을 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 또한, JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 디아미노피리미딘 화합물; 및 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 비히클을 투여하는 것을 포함하는, 상기 상태를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다.
한 측면에서, 키나제, 예를 들어 JNK1, JNK2 또는 둘 다를 발현하는 세포를 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 디아미노피리미딘 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 세포에서 상기 키나제를 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 바와 같은 디아미노피리미딘 화합물을 제조하는 방법이 본원에 제공된다.
본 실시양태는 비제한적 실시양태를 예시하도록 의도되는 상세한 설명 및 실시예를 참조하여 더 완전히 이해될 수 있다.
정의
"알킬" 기는 1 내지 10개의 탄소 원자, 전형적으로 1 내지 8개의 탄소 또는 일부 실시양태에서, 1 내지 6개, 1 내지 4개 또는 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 포화, 부분 포화 또는 불포화 직쇄 또는 분지형 비-시클릭 탄화수소이다. 대표적인 알킬 기는 -메틸, -에틸, -n-프로필, -n-부틸, -n-펜틸 및 -n-헥실을 포함하는 한편; 포화 분지형 알킬은 -이소프로필, -sec-부틸, -이소부틸, -tert-부틸, -이소펜틸, -네오펜틸, tert-펜틸, -2-메틸펜틸, -3-메틸펜틸, -4-메틸펜틸, -2,3-디메틸부틸 등을 포함한다. 불포화 알킬 기의 예는 특히 비닐, 알릴, -CH=CH(CH3), -CH=C(CH3)2, -C(CH3)=CH2, -C(CH3)=CH(CH3), -C(CH2CH3)=CH2, -C≡CH, -C≡C(CH3), -C≡C(CH2CH3), -CH2C≡CH, -CH2C≡C(CH3) 및 -CH2C≡C(CH7CH3)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 본원에 기재된 알킬 기가 "치환된" 것으로 언급되는 경우에, 이들은 본원에 개시된 예시적 화합물 및 실시양태에서, 발견되는 것과 같은 임의의 치환기 또는 치환기들 뿐만 아니라 할로겐 (클로로, 아이오도, 브로모 또는 플루오로); 알킬; 히드록실; 알콕시; 알콕시알킬; 아미노; 알킬아미노; 카르복시; 니트로; 시아노; 티올; 티오에테르; 이민; 이미드; 아미딘; 구아니딘; 엔아민; 아미노카르보닐; 아실아미노; 포스포네이토; 포스핀; 티오카르보닐; 술포닐; 술폰; 술폰아미드; 케톤; 알데히드; 에스테르; 우레아; 우레탄; 옥심; 히드록실 아민; 알콕시아민; 아르알콕시아민; N-옥시드; 히드라진; 히드라지드; 히드라존; 아지드; 이소시아네이트; 이소티오시아네이트; 시아네이트; 티오시아네이트; B(OH)2 또는 O(알킬)아미노카르보닐로 치환될 수 있다.
"시클로알킬" 기는 1 내지 3개의 알킬 기로 임의로 치환될 수 있는 단일 시클릭 고리 또는 다중 축합된 또는 가교된 고리를 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 포화, 부분 포화 또는 불포화 시클릭 알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 3 내지 8개의 고리원을 갖는 한편, 다른 실시양태에서, 고리 탄소 원자 수는 3 내지 5개, 3 내지 6개 또는 3 내지 7개의 범위이다. 이러한 시클로알킬 기는, 예로서, 단일 고리 구조, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 1-메틸시클로프로필, 2-메틸시클로펜틸, 2-메틸시클로옥틸 등, 또는 다중 또는 가교된 고리 구조, 예컨대 1-비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.1.1]헥실, 비시클로[2.2.1]헵틸, 비시클로[2.2.2]옥틸, 아다만틸 등을 포함한다. 불포화 시클로알킬 기의 예는 특히 시클로헥세닐, 시클로펜테닐, 시클로헥사디에닐, 부타디에닐, 펜타디에닐, 헥사디에닐을 포함한다. 시클로알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 이러한 치환된 시클로알킬 기는, 예로서, 시클로헥산올 등을 포함한다.
"아릴" 기는 단일 고리 (예를 들어, 페닐) 또는 다중 축합된 고리 (예를 들어, 나프틸 또는 안트릴)를 갖는 6 내지 14개의 탄소 원자의 방향족 카르보시클릭 기이다. 일부 실시양태에서, 아릴 기는 기의 고리 부분에 6-14개의 탄소 및 다른 실시양태에서, 6 내지 12개 또는 심지어 6 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다. 특정한 아릴은 페닐, 비페닐, 나프틸 등을 포함한다. 아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 어구 "아릴 기"는 또한 융합된 고리, 예컨대 융합된 방향족-지방족 고리계 (예를 들어, 인다닐, 테트라히드로나프틸 등)를 함유한 기를 포함한다.
"헤테로아릴" 기는 헤테로방향족 고리계 내에 고리 원자로서 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 아릴 고리계이며, 여기서 나머지 원자는 탄소 원자이다. 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 기의 고리 부분에 3 내지 6개의 고리 원자 및 다른 실시양태에서, 6 내지 9개 또는 심지어 6 내지 10개의 원자를 함유한다. 적합한 헤테로원자는 산소, 황 및 질소를 포함한다. 특정 실시양태에서, 헤테로아릴 고리계는 모노시클릭 또는 비시클릭이다. 비제한적 예는 기, 예컨대 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 벤즈이속사졸릴 (예를 들어, 벤조[d]이속사졸릴), 티아졸릴, 피롤릴, 피리다지닐, 피리미딜, 피라지닐, 티오페닐, 벤조티오페닐, 푸라닐, 벤조푸라닐, 인돌릴 (예를 들어, 인돌릴-2-오닐 또는 이소인돌린-1-오닐), 아자인돌릴 (피롤로피리딜 또는 1H-피롤로[2,3-b]피리딜), 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴 (예를 들어, 1H-벤조[d]이미다졸릴), 이미다조피리딜 (예를 들어, 아자벤즈이미다졸릴 또는 1H-이미다조[4,5-b]피리딜), 피라졸로피리딜, 트리아졸로피리딜, 벤조트리아졸릴 (예를 들어, 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸릴), 벤족사졸릴 (예를 들어, 벤조[d]옥사졸릴), 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 이속사졸로피리딜, 티아나프탈레닐, 퓨리닐, 크산티닐, 아데니닐, 구아니닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐 (예를 들어, 3,4-디히드로이소퀴놀린-1(2H)-오닐), 테트라히드로퀴놀리닐, 퀴녹살리닐 및 퀴나졸리닐 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"헤테로시클릴"은 고리 탄소 원자 중 1 내지 4개가 독립적으로 O, S 및 N으로 이루어진 군으로부터의 헤테로원자로 대체된 것인 방향족 (또한 헤테로아릴로서도 지칭됨) 또는 비-방향족 시클로알킬이다. 일부 실시양태에서, 헤테로시클릴 기는 3 내지 10개의 고리원을 포함하는 한편, 다른 이러한 기는 3 내지 5개, 3 내지 6개 또는 3 내지 8개의 고리원을 갖는다. 헤테로시클릴은 또한 임의의 고리 원자 (즉, 헤테로시클릭 고리의 임의의 탄소 원자 또는 헤테로원자)에서 다른 기에 결합될 수 있다. 헤테로시클로알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 헤테로시클릴 기는 불포화, 부분 포화 및 포화 고리계, 예컨대, 예를 들어, 이미다졸릴, 이미다졸리닐 및 이미다졸리디닐 (예를 들어, 이미다졸리딘-4-온 또는 이미다졸리딘-2,4-디오닐) 기를 포함한다. 어구 헤테로시클릴은 융합된 방향족 및 비-방향족 기를 포함하는 것들을 비롯한 융합된 고리 종, 예컨대, 예를 들어, 1- 및 2-아미노테트랄린, 벤조트리아졸릴 (예를 들어, 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸릴), 벤즈이미다졸릴 (예를 들어, 1H-벤조[d]이미다졸릴), 2,3-디히드로벤조[l,4]디옥시닐 및 벤조[l,3]디옥솔릴을 포함한다. 어구는 또한 헤테로원자를 함유하는 가교된 폴리시클릭 고리계, 예컨대 퀴누클리딜을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 헤테로시클릴 기의 대표적인 예는 아지리디닐, 아제티디닐, 아제파닐, 옥세타닐, 피롤리딜, 이미다졸리디닐 (예를 들어, 이미다졸리딘-4-오닐 또는 이미다졸리딘-2,4-디오닐), 피라졸리디닐, 티아졸리디닐, 테트라히드로티오페닐, 테트라히드로푸라닐, 디옥솔릴, 푸라닐, 티오페닐, 피롤릴, 피롤리닐, 이미다졸릴, 이미다졸리닐, 피라졸릴, 피라졸리닐, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 벤즈이속사졸릴 (예를 들어, 벤조[d]이속사졸릴), 티아졸릴, 티아졸리닐, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴, 옥사디아졸릴, 피페리딜, 피페라지닐 (예를 들어, 피페라진-2-오닐), 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 테트라히드로피라닐 (예를 들어, 테트라히드로-2H-피라닐), 테트라히드로티오피라닐, 옥사티아닐, 디옥실, 디티아닐, 피라닐, 피리딜, 피리미딜, 피리다지닐, 피라지닐, 트리아지닐, 디히드로피리딜, 디히드로디티이닐, 디히드로디티오닐, 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐, 호모피페라지닐, 퀴누클리딜, 인돌릴 (예를 들어, 인돌릴-2-오닐 또는 이소인돌린-1-오닐), 인돌리닐, 이소인돌릴, 이소인돌리닐, 아자인돌릴 (피롤로피리딜 또는 1H-피롤로[2,3-b]피리딜), 인다졸릴, 인돌리지닐, 벤조트리아졸릴 (예를 들어, 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸릴), 벤즈이미다졸릴 (예를 들어, 1H-벤조[d]이미다졸릴 또는 1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-오닐), 벤조푸라닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤족사디아졸릴, 벤족사지닐, 벤조디티이닐, 벤족사티이닐, 벤조티아지닐, 벤족사졸릴 (즉, 벤조[d]옥사졸릴), 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조[l,3]디옥솔릴, 피라졸로피리딜 (예를 들어, 1H-피라졸로[3,4-b]피리딜, 1H-피라졸로[4,3-b]피리딜), 이미다조피리딜 (예를 들어, 아자벤즈이미다졸릴 또는 1H-이미다조[4,5-b]피리딜), 트리아졸로피리딜, 이속사졸로피리딜, 퓨리닐, 크산티닐, 아데니닐, 구아니닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐 (예를 들어, 3,4-디히드로이소퀴놀린-1(2H)-오닐), 퀴놀리지닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 프테리디닐, 티아나프탈레닐, 디히드로벤조티아지닐, 디히드로벤조푸라닐, 디히드로인돌릴, 디히드로벤조디옥시닐, 테트라히드로인돌릴, 테트라히드로인다졸릴, 테트라히드로벤즈이미다졸릴, 테트라히드로벤조트리아졸릴, 테트라히드로피롤로피리딜, 테트라히드로피라졸로피리딜, 테트라히드로이미다조피리딜, 테트라히드로트리아졸로피리딜, 테트라히드로피리미딘-2(1H)-온 및 테트라히드로퀴놀리닐 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 대표적인 비-방향족 헤테로시클릴 기는 융합된 방향족 기를 포함한 융합된 고리 종을 포함하지 않는다. 비-방향족 헤테로시클릴 기의 예는 아지리디닐, 아제티디닐, 아제파닐, 피롤리딜, 이미다졸리디닐 (예를 들어, 이미다졸리딘-4-오닐 또는 이미다졸리딘-2,4-디오닐), 피라졸리디닐, 티아졸리디닐, 테트라히드로티오페닐, 테트라히드로푸라닐, 피페리딜, 피페라지닐 (예를 들어, 피페라진-2-오닐), 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 테트라히드로피라닐 (예를 들어, 테트라히드로-2H-피라닐), 테트라히드로티오피라닐, 옥사티아닐, 디티아닐, 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐, 호모피페라지닐, 퀴누클리딜 또는 테트라히드로피리미딘-2(1H)-온을 포함한다. 대표적인 치환된 헤테로시클릴 기는 일치환 또는 1회 초과 치환될 수 있고, 예컨대 이에 제한되지는 않지만 다양한 치환기, 예컨대 하기 열거된 것들로 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-치환된 또는 이치환된, 피리딜 또는 모르폴리닐 기일 수 있다.
"시클로알킬알킬" 기는 화학식: -알킬-시클로알킬의 라디칼이며, 여기서 알킬 및 시클로알킬은 상기 정의된 바와 같다. 치환된 시클로알킬알킬 기는 알킬, 시클로알킬, 또는 기의 알킬 및 시클로알킬 부분 둘 다에서 치환될 수 있다. 대표적인 시클로알킬알킬 기는 메틸시클로프로필, 메틸시클로부틸, 메틸시클로펜틸, 메틸시클로헥실, 에틸시클로프로필, 에틸시클로부틸, 에틸시클로펜틸, 에틸시클로헥실, 프로필시클로펜틸, 프로필시클로헥실 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"아르알킬" 기는 화학식: -알킬-아릴의 라디칼이며, 여기서 알킬 및 아릴은 상기 정의된다. 치환된 아르알킬 기는 알킬, 아릴, 또는 기의 알킬 및 아릴 부분 둘 다에서 치환될 수 있다. 대표적인 아르알킬 기는 벤질 및 페네틸 기 및 융합된 (시클로알킬아릴)알킬 기, 예컨대 4-에틸-인다닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"헤테로시클릴알킬" 기는 화학식: -알킬-헤테로시클릴의 라디칼이며, 여기서 알킬 및 헤테로시클릴은 상기 정의된다. 치환된 헤테로시클릴알킬 기는 알킬, 헤테로시클릴, 또는 기의 알킬 및 헤테로시클릴 부분 둘 다에서 치환될 수 있다. 대표적인 헤테로시클릴알킬 기는 4-에틸-모르폴리닐, 4-프로필모르폴리닐, 푸란-2-일 메틸, 푸란-3-일 메틸, 피리딘-3-일 메틸, 테트라히드로푸란-2-일 에틸 및 인돌-2-일 프로필을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"할로겐"은 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘이다.
"히드록시알킬" 기는 1개 이상의 히드록시 기로 치환된 상기 기재된 바와 같은 알킬 기이다.
"알콕시" 기는 -O-(알킬)이며, 여기서 알킬은 상기 정의된다.
"알콕시알킬" 기는 -(알킬)-O-(알킬)이며, 여기서 알킬은 상기 정의된다.
"아미노" 기는 화학식: -NH2의 라디칼이다.
"알킬아미노" 기는 화학식: -NH-알킬 또는 -N(알킬)2의 라디칼이며, 여기서 각각의 알킬은 독립적으로 상기 정의된 바와 같다.
"카르복시" 기는 화학식: -C(O)OH의 라디칼이다.
"아미노카르보닐" 기는 화학식: -C(O)N(R#)2, -C(O)NH(R#) 또는 -C(O)NH2의 라디칼이며, 여기서 각각의 R#은 독립적으로 본원에 정의된 바와 같은 치환 또는 비치환된 알킬, 시클로알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클릴 또는 헤테로시클릴 기이다.
"아실아미노" 기는 화학식: -NHC(O)(R#) 또는 -N(알킬)C(O)(R#)의 라디칼이며, 여기서 알킬 및 R#은 각각 독립적으로 상기 정의된 바와 같다.
"술포닐아미노" 기는 화학식: -NHSO2(R#) 또는 -N(알킬)SO2(R#)의 라디칼이며, 여기서 알킬 및 R#은 각각 상기 정의된다.
"우레아" 기는 화학식: -N(알킬)C(O)N(R#)2, -N(알킬)C(O)NH(R#), -N(알킬)C(O)NH2, -NHC(O)N(R#)2, -NHC(O)NH(R#) 또는 -NH(CO)NHR#의 라디칼이며, 여기서 알킬 및 R#은 각각 독립적으로 상기 정의된 바와 같다.
알킬 기를 제외한 본원에 기재된 기가 "치환된다"고 언급되는 경우에, 이들은 임의의 적절한 치환기 또는 치환기들로 치환될 수 있다. 치환기의 예시적인 예는 본원에 개시된 예시적인 화합물 및 실시양태에서, 발견되는 것들 뿐만 아니라 할로겐 (클로로, 아이오도, 브로모 또는 플루오로); 알킬; 히드록실; 알콕시; 알콕시알킬; 아미노; 알킬아미노; 카르복시; 니트로; 시아노; 티올; 티오에테르; 이민; 이미드; 아미딘; 구아니딘; 엔아민; 아미노카르보닐; 아실아미노; 포스포네이토; 포스핀; 티오카르보닐; 술포닐; 술폰; 술폰아미드; 케톤; 알데히드; 에스테르; 우레아; 우레탄; 옥심; 히드록실 아민; 알콕시아민; 아르알콕시아민; N-옥시드; 히드라진; 히드라지드; 히드라존; 아지드; 이소시아네이트; 이소티오시아네이트; 시아네이트; 티오시아네이트; 산소 (=O); B(OH)2, O(알킬)아미노카르보닐; 모노시클릭 또는 융합된 또는 비-융합된 폴리시클릭일 수 있는 시클로알킬 (예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실), 또는 모노시클릭 또는 또는 모노시클릭 또는 융합된 또는 비-융합된 폴리시클릭일 수 있는 헤테로시클릴 (예를 들어, 피롤리딜, 피페리딜, 피페라지닐, 모르폴리닐 또는 티아지닐); 모노시클릭 또는 융합된 또는 비-융합된 폴리시클릭 아릴 또는 헤테로아릴 (예를 들어, 페닐, 나프틸, 피롤릴, 인돌릴, 푸라닐, 티오페닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피라졸릴, 피리딜, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 아크리디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 피리미딜, 벤즈이미다졸릴, 벤조티오페닐 또는 벤조푸라닐) 아릴옥시; 아르알킬옥시; 헤테로시클릴옥시; 및 헤테로시클릴 알콕시이다.
본원에 사용된 용어 "디아미노피리미딘 화합물"은 화학식 I 및 화학식 IB의 화합물 뿐만 아니라 본원에 제공된 추가 실시양태를 지칭한다. 한 실시양태에서, "디아미노피리미딘 화합물"은 표 1, 2 및 3에 기재되어 있는 화합물이다. 용어 "디아미노피리미딘 화합물"은 본원에 제공된 화합물의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 동위원소체, 입체이성질체 및 전구약물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염(들)"은 무기 산 및 염기 및 유기 산 및 염기를 비롯한 제약상 허용되는 비-독성 산 또는 염기로부터 제조된 염을 지칭한다. 화학식 I의 화합물의 적합한 제약상 허용되는 염기 부가염은 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연으로부터 제조된 금속 염, 또는 리신, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민 (N-메틸-글루카민) 및 프로카인으로부터 제조된 유기 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 적합한 비-독성 산은 무기 및 유기 산, 예컨대 아세트산, 알긴산, 안트라닐산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포르술폰산, 시트르산, 에텐술폰산, 포름산, 푸마르산, 푸로산, 갈락투론산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 글리콜산, 브로민화수소산, 염산, 이세티온산, 락트산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 뮤신산, 질산, 파모산, 판토텐산, 페닐아세트산, 인산, 프로피온산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 술파닐산, 황산, 타르타르산 및 p-톨루엔술폰산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정한 비-독성 산은 염산, 브로민화수소산, 말레산, 인산, 황산 및 메탄술폰산을 포함한다. 특정한 염의 예는 따라서 히드로클로라이드 및 메실레이트 염을 포함한다. 다른 것들이 당업계, 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990) 또는 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th eds., Mack Publishing, Easton PA (1995)]에 널리 공지되어 있다.
달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "전구약물"은 생물학적 조건 (시험관내 또는 생체내) 하에 가수분해되거나, 산화되거나 또는 달리 반응하여 활성 화합물, 특히 디아미노피리미딘 화합물 또는 화학식 I의 화합물을 제공할 수 있는 디아미노피리미딘 화합물을 의미한다. 전구약물의 예는 생가수분해성 모이어티, 예컨대 생가수분해성 아미드, 생가수분해성 에스테르, 생가수분해성 카르바메이트, 생가수분해성 카르보네이트, 생가수분해성 우레이드 및 생가수분해성 포스페이트 유사체를 포함하는 디아미노피리미딘 화합물의 유도체 및 대사물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 카르복실 관능기를 갖는 화합물의 전구약물은 카르복실산의 저급 알킬 에스테르이다. 카르복실레이트 에스테르는 편리하게는 분자 상에 존재하는 임의의 카르복실산 모이어티를 에스테르화함으로써 형성된다. 전구약물은 전형적으로 널리 공지된 방법, 예를 들어 문헌 [Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) 및 Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh)]에 기재된 방법을 이용하여 제조될 수 있다.
달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "입체이성질체" 또는 "입체이성질체적으로 순수한"은 화합물의 다른 입체이성질체가 실질적으로 없는 디아미노피리미딘 화합물의 하나의 입체이성질체를 의미한다. 예를 들어, 1개의 키랄 중심을 갖는 입체이성질체적으로 순수한 화합물은 화합물의 반대 거울상이성질체가 실질적으로 없을 것이다. 2개의 키랄 중심을 갖는 입체이성질체적으로 순수한 화합물은 화합물의 다른 부분입체이성질체가 실질적으로 없을 것이다. 전형적인 입체이성질체적으로 순수한 화합물은 약 80 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성질체 및 약 20 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체를 포함하거나, 약 90 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성질체 및 약 10 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체를 포함하거나, 약 95 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성질체 및 약 5 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체를 포함하거나, 또는 약 97 중량% 초과의 화합물의 하나의 입체이성질체 및 약 3 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체를 포함한다. 디아미노피리미딘 화합물은 키랄 중심을 가질 수 있고, 라세미체, 개별 부분입체이성질체 또는 부분입체이성질체 및 그의 혼합물로서 발생할 수 있다. 이러한 모든 이성질체 형태는 그의 혼합물을 비롯하여 본원에 기재된 실시양태 내에 포함된다.
이러한 디아미노피리미딘 화합물의 입체이성질체적으로 순수한 형태의 사용, 뿐만 아니라 그러한 형태의 혼합물의 사용은 본원에 개시된 실시양태에 포함된다. 예를 들어, 특정한 디아미노피리미딘 화합물의 거울상이성질체의 동량 또는 비-동량을 포함하는 혼합물은 본원에 개시된 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 이러한 이성질체는 비대칭적으로 합성되거나 또는 표준 기술, 예컨대 키랄 칼럼 또는 키랄 분할제를 사용하여 분할된다. 예를 들어, 문헌 [Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); 및 Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972)]을 참조한다.
또한 디아미노피리미딘 화합물이 E 및 Z 이성질체 또는 그의 혼합물 및 시스 및 트랜스 이성질체 또는 그의 혼합물을 포함할 수 있다는 것을 주목해야 한다. 특정 실시양태에서, 디아미노피리미딘 화합물은 E 또는 Z 이성질체로서 단리된다. 다른 실시양태에서, 디아미노피리미딘 화합물은 E 및 Z 이성질체의 혼합물이다.
"호변이성질체"는 서로 평형 상태인 화합물의 이성질체 형태를 지칭한다. 이성질체 형태의 농도는 화합물이 발견되는 환경에 따라 달라질 것이며, 예를 들어 화합물이 고체인지 또는 유기 용액 또는 수용액 중에 있는지에 따라 상이할 수 있다. 예를 들어, 수용액 중에서, 피라졸은 서로의 호변이성질체로서 지칭되는 하기 이성질체 형태를 나타낼 수 있다.
당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 매우 다양한 관능기 및 다른 구조는 호변이성질현상을 나타낼 수 있고, 화학식 I의 화합물의 모든 호변이성질체는 본 발명의 범주 내에 있다.
또한 디아미노피리미딘 화합물이 원자 중 1개 이상에서 원자 동위원소의 비천연 비율을 함유할 수 있음을 주목해야 한다. 예를 들어, 화합물은 방사성 동위원소, 예컨대 예를 들어 삼중수소 (3H), 아이오딘-125 (125I), 황-35 (35S) 또는 탄소-14 (14C)로 방사선 표지될 수 있거나, 또는 예컨대 중수소 (2H), 탄소-13 (13C) 또는 질소-15 (15N)로 동위원소 농축될 수 있다. 본원에 사용된 "동위원소체"는 동위원소 농축 화합물이다. 용어 "동위원소 농축"은 그 원자의 천연 동위원소 조성 이외의 동위원소 조성을 갖는 원자를 지칭한다. "동위원소 농축"은 또한 그 원자의 천연 동위원소 조성 이외의 동위원소 조성을 갖는 1개 이상의 원자를 함유하는 화합물을 지칭할 수 있다. 용어 "동위원소 조성"은 주어진 원자에 대해 존재하는 각각의 동위원소의 양을 지칭한다. 방사성표지된 및 동위원소 농축 화합물은 치료제, 예를 들어, 암 및 염증 치료제, 연구 시약, 예를 들어, 결합 검정 시약 및 진단제, 예를 들어 생체내 영상화제로서 유용하다. 본원에 기재된 바와 같은 디아미노피리미딘 화합물의 모든 동위원소 변형은 방사성이든지 또는 방사성이 아니든지 본원에 제공된 실시양태의 범주 내에 포함되도록 의도된다. 일부 실시양태에서, 디아미노피리미딘 화합물의 동위원소체가 제공되고, 예를 들어, 동위원소체는 중수소, 탄소-13 또는 질소-15 농축 디아미노피리미딘 화합물이다.
"JNK"는 JNK1, JNK2 또는 JNK3 유전자에 의해 발현되는 단백질 또는 그의 이소형을 의미한다 (문헌 [Gupta, S., Barrett, T., Whitmarsh, A.J., Cavanagh, J., Sluss, H.K., Derijard, B. and Davis, R.J. The EMBO J. 15:2760-2770 (1996)]).
본원에 사용된 "치료하는"은, 전체적으로 또는 부분적으로, 장애, 질환 또는 상태, 또는 장애, 질환 또는 상태와 연관된 증상 중 하나 이상의 완화, 또는 추가 진행 또는 그러한 증상 악화의 저속화 또는 중단, 또는 장애, 질환 또는 상태 자체의 원인(들)의 완화 또는 근절을 의미한다. 한 실시양태에서, 장애는 간 섬유화 장애, 예컨대 비-알콜성 지방간염, 지방증 (즉, 지방간), 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 원발성 담즙성 간경변증, 간염, 간세포성 암종, 또는 만성 또는 반복성 알콜 섭취 (알콜성 간염)와, 감염 (예를 들어, 바이러스 감염, 예컨대 HCV)과, 간 이식과 또는 약물 유발된 간 손상 (예를 들어, 아세트아미노펜 독성)과 병발된 간 섬유증이다. 일부 실시양태에서, "치료하는"은, 전체적으로 또는 부분적으로, 장애, 질환 또는 상태, 또는 간 섬유화 장애, 예컨대 비-알콜성 지방간염, 지방증 (즉, 지방간), 간염 또는 간경변증을 유발하는 당뇨병 또는 대사 증후군과 연관된 증상의 완화, 또는 추가 진행 또는 그러한 증상 악화의 저속화 또는 중단을 의미한다. 한 실시양태에서, 증상은 황달이다. 또 다른 실시양태, "치료하는"은, 전체적으로 또는 부분적으로, 장애, 질환 또는 상태, 또는 JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태와 연관된 증상의 완화를 의미한다.
본원에 사용된 "예방하는"은, 전체적으로 또는 부분적으로, 장애, 질환 또는 상태의 발병, 재발 또는 확산을 지연시키고/거나 방지하거나; 장애, 질환 또는 상태의 획득으로부터 대상체를 제외시키거나; 또는 대상체의 장애, 질환 또는 상태의 획득 위험성을 감소시키는 방법을 의미한다. 한 실시양태에서, 장애는 상기 기재된 바와 같은 간 섬유화 장애, 또는 간 섬유화 장애를 유발하는 당뇨병 또는 대사 증후군, 또는 그의 증상이다. 또 다른 실시양태에서, 장애는 JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태이다.
디아미노피리미딘 화합물과 관련된 용어 "유효량"은 본원에 개시된 장애, 질환 또는 상태, 또는 그의 증상을 치료 또는 예방할 수 있는 양을 의미한다.
용어 "대상체"는 이에 제한되지는 않지만 소, 원숭이, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼 또는 기니 피그와 같은 동물을 비롯한 동물을 포함하고, 한 실시양태에서, 포유동물, 또 다른 실시양태에서, 인간을 포함한다. 한 실시양태에서, 대상체는 간 섬유화 장애, 또는 간 섬유화 장애를 유발하는 당뇨병 또는 대사 증후군, 또는 JNK 경로의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태, 또는 그의 증상을 앓고 있거나 앓을 위험이 있는 인간이다.
디아미노피리미딘 화합물
하기 화학식 I을 갖는 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 입체이성질체, 거울상이성질체, 동위원소체 및 전구약물이 본원에 제공된다.
<화학식 I>
상기 식에서,
R1은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴이며, 단, R1은 1-아미노시클로헥실이 아니고;
R2는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 포화 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은
2-(2-아미노에틸아미노)-4-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
2-(2-아미노-2-옥소에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
2-(2-아미노에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
(S)-2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
(R)-2-(1-아미노-3-메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-4-(시클로부틸아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드
4-(시클로펜틸아미노)-2-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
또는 2-(1-아세틸피페리딘-4-일아미노)-4-(시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
가 아니다.
한 실시양태에서, R1은
예를 들어,
화학식 I의 화합물의 일부 실시양태에서, R1은 분지형 C1-8 알킬이고, 예를 들어, R1은 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 2-메틸펜틸 또는 tert-펜틸이다. 다른 실시양태에서, R1은 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 2,3-디메틸부틸, 이소펜틸, 2-메틸펜틸, 네오펜틸, tert-펜틸 또는 3-메틸펜틸이다. 다른 실시양태에서, R1은 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸 또는 비시클로[2.2.2]옥틸이다. 다른 실시양태에서, 시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.2.1]헵틸 또는 비시클로[2.2.2]옥틸이다. 일부 이러한 실시양태에서, 시클로알킬은 1개 이상의 할로겐, -(C1-4 알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 예를 들어, 시클로알킬은 1개 이상의 메틸, 에틸, t-부틸, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3으로 치환된다. 다른 실시양태에서, 시클로알킬은 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"는 독립적으로 C1-6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화된다. 예를 들어, 시클로알킬은 1개 이상의 메틸, 에틸, t-부틸, 시클로프로필, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(시클로프로필), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R1은 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 예를 들어, 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐 또는 피페리딜이다. 다른 실시양태에서, 비-방향족 헤테로시클릴은 옥세타닐, 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐 또는 피페리딜이다. 일부 이러한 실시양태에서, 피페리딜은 -C(O)R' 또는 -C(O)OR'로 치환되고, 여기서 R'는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 다른 실시양태에서, R1은 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 예를 들어, (C1-3 알킬)시클로프로필, (C1-3 알킬)시클로부틸, (C1-3 알킬)시클로펜틸 또는 (C1-3 알킬)시클로헥실이다. 일부 이러한 실시양태에서, R1은 -(CH2)시클로프로필, -(CH2)시클로부틸, -(CH2)시클로펜틸, -(CH2)시클로헥실, -CH(CH3)시클로프로필, -CH(CH3)시클로부틸, -CH(CH3)시클로펜틸 또는 -CH(CH3)시클로헥실이다. 다른 실시양태에서, R1은 -(CH2)시클로프로필, -CH(CH3)시클로프로필, -CH(CH3)시클로부틸, -CH(CH3)시클로헥실 또는 -C(CH3)2시클로프로필이다. 또 다른 실시양태에서, R1은 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴, 예를 들어, -(C1-4 알킬)테트라히드로푸라닐, -(C1-4 알킬)디옥솔라닐, (C1-4 알킬)푸라닐, (C1-3 알킬)티오페닐 또는 -(C1-3 알킬)피리딜이다.
화학식 I의 화합물의 일부 실시양태에서, R1은 분지형 C1-8 알킬,
로부터 선택되고,
식 중,
R3'는 할로겐, -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'이고;
R4'는 -C(O)R' 또는 -C(O)OR'이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
각각의 R"는 독립적으로 C1-6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화되고;
n은 0-2이다.
일부 이러한 실시양태에서, R3'는 메틸, 에틸, t-부틸, 시클로프로필, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(시클로프로필), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3이다.
일부 실시양태에서, R2는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, tert-펜틸, 이소펜틸 또는 2-메틸펜틸이다. 다른 실시양태에서, R2는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 3-메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 3,3-디메틸부틸, 2,3,3-트리메틸부틸, tert-펜틸, 이소펜틸, 3-펜틸, 3-메틸펜틸, 2-메틸펜틸 또는 2,4-디메틸펜틸이다. 일부 이러한 실시양태에서, R2는 1개 이상의 -(C1-4 알킬), -(C0-3 알킬)OR, -C(O)NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 예를 들어, R2는 1개 이상의 -OH 또는 -CH3으로 치환된다. 다른 실시양태에서, R2는 1개 이상의 -OH, -OCH3 또는 -CH3으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 치환 또는 비치환된 시클로알킬이고, 예를 들어, R2는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 또는 시클로옥틸이다. 일부 이러한 실시양태에서, R2는 1개 이상의 -(C1-4 알킬), -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 다른 실시양태에서, R2는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.1.1]헥실 또는 비시클로[2.2.1]헵틸이다. 일부 이러한 실시양태에서, R2는 1개 이상의 -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화된다. 일부 이러한 실시양태에서, R2는 1개 이상의 메틸, 에틸, 이소프로필, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3으로 치환된다. 다른 실시양태에서, R2는 1개 이상의 메틸, 에틸, 이소프로필, -시클로프로필, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 예를 들어, 치환 또는 비치환된 (C1-3 알킬)시클로프로필, (C1-3 알킬)시클로부틸, (C1-3 알킬)시클로펜틸 또는 (C1-3 알킬)시클로헥실이다. 예를 들어, R2는 -(CH2)시클로프로필, -(CH2)시클로부틸, -CH(CH3)시클로프로필, -CH(CH3)시클로부틸, -CH(CH2CH3)시클로프로필, -C(CH3)2시클로프로필 또는 -CH2CH2시클로부틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 예를 들어, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페리디노닐 또는 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐이다. 다른 실시양태에서, R2는 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페리디노닐 또는 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐이다. 일부 이러한 실시양태에서, R2는 1개 이상의 -(C1-4 알킬), -(C0-3 알킬)OR 또는 -C(O)R'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다.
화학식 I의 화합물의 일부 실시양태에서, R2는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬,
이고,
식 중,
R5'는 -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'이고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화되고;
R6'는 H 또는 -C(O)R'이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
n은 0-2이다.
일부 이러한 실시양태에서, R5'는 메틸, 에틸, 이소프로필, -시클로프로필, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3이다. 일부 실시양태에서, R6'는 H, 또는 -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2 또는 -C(O)CH2CH(CH3)2이다.
R2의 일부 이러한 실시양태에서, R1은 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 임의로 치환된 시클로알킬이고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"는 독립적으로 C1-6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화된다.
본원에 제공된 추가 실시양태는 상기 기재된 특정한 실시양태 중 하나 이상의 조합을 포함한다.
대표적인 화학식 I의 화합물은 표 1에 기재된다.
일부 실시양태에서, 화합물은 표 2로부터 선택된다.
하기 화학식 IB를 갖는 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 입체이성질체, 거울상이성질체, 동위원소체 및 전구약물이 본원에 제공된다.
<화학식 IB>
상기 식에서,
R3은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬-(비-방향족 헤테로시클릴)이고;
R4는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이다.
한 실시양태에서, 화합물은
4-(이소펜틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
(2S,2'S)-디메틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)-비스(4-메틸펜타노에이트)
(2S,2'S)-디에틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)-비스(3-메틸부타노에이트)
4-(시클로헵틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴
4-(4-메틸시클로헥실아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴
2-(3-(디에틸아미노)프로필아미노)-4-(4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
이 아니다.
화학식 IB의 화합물의 한 실시양태에서, R3은 분지형 C1-8 알킬이고, 예를 들어, R3은 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 2-메틸펜틸 또는 tert-펜틸이다. 다른 실시양태에서, R3은 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 2,3-디메틸부틸, 이소펜틸, 2-메틸펜틸, 네오펜틸, tert-펜틸 또는 3-메틸펜틸이다. 일부 실시양태에서, R3은 tert-부틸이다. 다른 실시양태에서, R3은 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸 또는 비시클로[2.2.2]옥틸이다. 일부 이러한 실시양태에서, R3은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.2.1]헵틸 또는 비시클로[2.2.2]옥틸이다. 일부 실시양태에서, R3은 시클로부틸 또는 시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, 시클로알킬은 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"는 독립적으로 C1-6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화된다. 예를 들어, 시클로알킬은 1개 이상의 메틸, 에틸, t-부틸, 시클로프로필, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(시클로프로필), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3으로 치환된다. 다른 실시양태에서, 시클로알킬은 1개 이상의 할로겐, -(C1-4 알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 예를 들어, 시클로알킬은 1개 이상의 메틸, 에틸, t-부틸, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(시클로프로필), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3으로 치환된다. 일부 실시양태에서, 시클로알킬은 1개 이상의 메틸, -F, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -C(CH3)2C(O)N(CH3)2로 치환된다. 다른 실시양태에서, R3은 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 예를 들어, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐 또는 피페리딜이다. 일부 실시양태에서, 비-방향족 헤테로시클릴은 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페리디노닐 또는 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐이다. 일부 실시양태에서, R3은 테트라히드로피라닐이다. 일부 실시양태에서, 피페리딜은 -C(O)R' 또는 -C(O)OR'로 치환되고, 여기서 R'는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 일부 실시양태에서, R3은 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 예를 들어, (C1-3 알킬)시클로프로필, (C1-3 알킬)시클로부틸, (C1-3 알킬)시클로펜틸 또는 (C1-3 알킬)시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, R3은 -(CH2)시클로프로필, -(CH2)시클로부틸, -(CH2)시클로펜틸, -(CH2)시클로헥실, -CH(CH3)시클로프로필, -CH(CH3)시클로부틸, -CH(CH3)시클로펜틸 또는 -CH(CH3)시클로헥실이다. 다른 실시양태에서, R3은 -(CH2)시클로프로필, -CH(CH3)시클로프로필, -CH(CH3)시클로부틸, -CH(CH3)시클로헥실 또는 -C(CH3)2시클로프로필이다. 일부 실시양태에서, R3은 치환 또는 비치환된 알킬-(비-방향족 헤테로시클릴), 예를 들어, -(C1-4 알킬)테트라히드로푸라닐 또는 -(C1-4 알킬)디옥솔라닐이다.
화학식 IB의 화합물의 일부 실시양태에서, R3은 분지형 C1-8 알킬,
로부터 선택되고,
식 중,
R3'는 할로겐, -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'이고;
R4'는 -C(O)R' 또는 -C(O)OR'이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
각각의 R"는 독립적으로 C1 -6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화되고;
n은 0-2이다.
일부 실시양태에서, R3'는 메틸, 에틸, t-부틸, 시클로프로필 -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(시클로프로필), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3이다.
화학식 IB의 화합물의 일부 실시양태에서, R3은 분지형 C1-8 알킬,
로부터 선택되고,
식 중,
R3'는 할로겐, -(C1-4 알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
n은 0-2이다.
일부 이러한 실시양태에서, R3'는 메틸, 에틸, t-부틸, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3이다.
화학식 IB의 화합물의 일부 실시양태에서, R4는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 2-메틸펜틸 또는 tert-펜틸이다. 일부 실시양태에서, R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 3-메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 3,3-디메틸부틸, 2,3,3-트리메틸부틸, tert-펜틸, 이소펜틸, 3-펜틸, 3-메틸펜틸, 2-메틸펜틸 또는 2,4-디메틸펜틸이다. 일부 실시양태에서, R4는 이소프로필, 이소부틸, 이소펜틸, tert-부틸 또는 tert-펜틸이다. 일부 이러한 실시양태에서, R4는 1개 이상의 -(C1-4 알킬), -(C0-3 알킬)OR, -C(O)NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 예를 들어, R4는 1개 이상의 -OH 또는 -CH3으로 치환된다. 일부 다른 실시양태에서, R4는 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.1.1]헥실 또는 비시클로[2.2.1]헵틸이다. 일부 실시양태에서, R4는 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 또는 비시클로[1.1.1]펜틸이다. 일부 실시양태에서, R4는 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화된다. 예를 들어, R4는 1개 이상의 메틸, 에틸, 이소프로필, -시클로프로필, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R4는 1개 이상의 할로겐, -(C1-4 알킬), -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다. 일부 이러한 실시양태에서, R4는 1개 이상의 F, 메틸, 에틸, 이소프로필, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)NHCH3, -CH2C(O)N(CH3)2, -CH(CH3)C(O)NH2, -CH(CH3)C(O)NHCH3, -CH(CH3)C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)NH2, -C(CH3)2C(O)NHCH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R4는 1개 이상의 메틸, 에틸, -F, -CH2OH 또는 -OH로 치환된다. 일부 실시양태에서, R4는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 예를 들어, 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페리디노닐 또는 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐이다. 일부 실시양태에서, R4는 테트라히드로푸라닐 또는 테트라히드로피라닐이다. 일부 이러한 실시양태에서, R4는 1개 이상의 -(C1-4 알킬), -(C0-3 알킬)OR 또는 -C(O)R'로 치환되고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화된다.
화학식 IB의 화합물의 일부 실시양태에서, R4는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬,
이고,
식 중,
R5'는 -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'이고, 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화되고;
R6'는 H 또는 -C(O)R'이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
n은 0-2이다.
일부 이러한 실시양태에서, R5'는 메틸, 에틸, 이소프로필, -시클로프로필, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3이다. 일부 실시양태에서, R6'는 H, 또는 -C(O)CH3, -C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2 또는 -C(O)CH2CH(CH3)2이다.
화학식 IB의 화합물의 일부 실시양태에서, R4는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬,
이고,
식 중,
R5'는 할로겐, -(C1-4 알킬), -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고;
n은 0-2이다.
일부 이러한 실시양태에서, R5'는 F, 메틸, 에틸, 이소프로필, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)NHCH3, -CH2C(O)N(CH3)2, -CH(CH3)C(O)NH2, -CH(CH3)C(O)NHCH3, -CH(CH3)C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)NH2, -C(CH3)2C(O)NHCH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3이다. 일부 실시양태에서, R5'는 F, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCHF2, -OCH2CF3, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)N(CH3)2, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2이다.
일부 실시양태에서, R4는 치환 또는 비치환된 시클로알킬이고, R3은 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1-4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -NR2, -(C0-3 알킬)OR, -(C0-3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 임의로 치환된 시클로알킬이고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬은 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"는 독립적으로 C1-6 시클로알킬이고; 여기서 시클로알킬은 임의로 플루오린화된다.
본원에 제공된 추가 실시양태는 상기 기재된 특정한 실시양태 중 하나 이상의 조합을 포함한다.
화학식 IB의 대표적인 화합물은 표 3에 기재된다.
표 1, 표 2 및 표 3에 기재된 디아미노피리미딘 화합물은 본원에 기재된 JNK 억제제 검정에서 시험되었고, JNK 억제제로서 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 한 실시양태에서, 디아미노피리미딘 화합물은 본원에 기재된 바와 같은 화합물이며, 여기서 10 μM 농도에서 화합물은 JNK1을 적어도 약 50% 이상 억제한다.
디아미노피리미딘 화합물의 제조 방법
디아미노피리미딘 화합물은 종래 유기 합성 및 상업적으로 입수가능한 출발 물질을 이용하여 제조될 수 있다. 예로서 및 비제한적으로, 화학식 I의 디아미노피리미딘 화합물은 하기 나타낸 반응식 1-9 뿐만 아니라 본원에 기재된 실시예에 요약된 바와 같이 제조될 수 있다. 당업자가 목적하는 생성물에 도달하기 위해 예시된 반응식 및 실시예에 기재된 절차를 변형하는 방법을 알 것임을 주목해야 한다.
<반응식 1>
반응식 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 I의 화합물 (여기서, R1 및 R2는 본원에 정의된 바와 같음)은 적절하게 유도체화된 4-클로로-2-알킬티오피리미딘 카르복실레이트 에스테르 (여기서, 각각의 Rx는 독립적으로 C1-2 알킬임)로부터 출발하여, 승온 (예를 들어, 60-80℃)에서 유기 용매 (예를 들어, 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, THF, NMP, DMF, DMSO 또는 디옥산) 중에서 염기 (예를 들어, DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산세슘, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산칼륨 또는 인산칼륨)의 존재 하에 R2NH2로 처리함으로써 제조될 수 있다. 에스테르의 가수분해는 공용매, 예컨대 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, THF 또는 디옥산 중에서 수성 염기, 예컨대 예를 들어 수성 수산화나트륨, 수산화칼륨 또는 수산화리튬으로 처리함으로써 달성된다. 아미드 형성은 커플링제 (예컨대 예를 들어 HATU, CDI, HBTU, HOBt와 임의로 조합된 EDC, 또는 에틸 클로로포르메이트)의 존재 하에 유기 용매, 예컨대 NMP, DMF, DMSO, 디옥산, THF, DCM 또는 클로로포름 중에서 염기 (예컨대 DIEA, TEA 또는 탄산칼륨)의 존재 하에 NH4Cl과 반응시킴으로써 달성된다. 알킬티올 모이어티의 산화는 유기 용매 (예컨대 예를 들어, 아세톤, DCM, NMP, DMF 또는 클로로포름) 중에서 산화제, 예컨대 mCPBA, 옥손, 과산화수소 또는 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘으로 처리함으로써 달성된다. 생성된 술폰 (m = 1) 및 술폭시드 (m = 2)의 혼합물을 승온 (예를 들어, 80-100℃)에서 용매 (예컨대, 예를 들어, 디옥산, DMSO, NMP, DMF, THF 또는 물) 중에서 유기 염기, 예컨대 DIEA, TEA, N-메틸모르폴린 또는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔의 존재 하에 R1NH2로 처리하여 화학식 I의 화합물을 수득한다.
<반응식 2>
대안적으로, 화학식 I의 화합물은 반응식 2에 나타낸 바와 같이 제조될 수 있다 (여기서, R1, R2 및 Rx는 상기 정의된 바와 같음). 유기 용매 (예를 들어, THF, DCM 또는 디옥산) 중에서 촉매 (예를 들어, 트리에틸벤질암모늄 클로라이드, 테트라부틸암모늄 클로라이드 또는 테트라부틸암모늄 브로마이드)의 존재 하에 냉각시키면서 (예를 들어, -10℃에서) 2,4-디클로로피리미딘-5-카르복실레이트 알킬 에스테르를 NaSRx로 처리하여 티오알킬 유도체의 혼합물을 수득한다. 승온 (예를 들어, 80℃)에서 유기 용매 (예를 들어, 디옥산, THF, NMP, DMF, DMSO, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올) 중에서 염기 (예를 들어, DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산세슘, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산칼륨 또는 인산칼륨)의 존재 하에 R1NH2로의 후속적 처리로 R1 측쇄를 혼입한다. 상기와 같은 알킬 에스테르의 가수분해, NH4Cl과의 커플링 및 산화는 술폰 (m = 1) 및 술폭시드 (m = 2) 유도체의 혼합물을 제공하고, 이를 용매 (예컨대 디옥산, NMP, DMF, DMSO, THF 또는 물) 중에서 유기 염기 (예컨대 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 또는 N-메틸모르폴린)의 존재 하에 승온 (예를 들어, 80- 110℃)에서 R2NH2로 처리하여 화학식 I의 화합물을 수득한다.
<반응식 3>
화학식 I의 화합물은 또한 반응식 3에 나타낸 바와 같이 제조될 수 있다. 용매 (예를 들어, 에틸 에테르, THF, DCM, 톨루엔 또는 메틸 tert-부틸 에테르) 중에서 염기 (예를 들어, DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨)의 존재 하에 저온 (예를 들어, -70℃)에서 2,4-디클로로피리미딘-5-카르복실레이트 알킬 에스테르를 R2NH2로 처리하여 R2 측쇄의 도입을 제공한다. 위치이성질체 혼합물의 분리, 및 샘플 중 남아있는 염소의 수소화는 R2 측쇄 혼입의 위치이성질체적 배열을 고려한다. 목적하는 위치이성질체 화합물은 이어서 추가로 유도체화된다. 유기 용매 (예를 들어, THF, NMP, DMF, DMSO, 디옥산, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올) 중에서 염기 (예를 들어, DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨)의 존재 하에 승온 (예를 들어, 70℃)에서 R1NH2로의 후속적 처리는 R1 측쇄의 도입을 제공한다. 상기와 같은 알킬 에스테르의 가수분해 및 NH4Cl과의 커플링으로 화학식 I의 화합물을 수득한다.
<반응식 4>
화학식 I의 화합물의 합성을 위한 대안적 방법은 반응식 4에 나타낸다. 유기 용매 (예를 들어, 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 또는 THF) 중에서 염기 (예를 들어, DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨)의 존재 하에 저온 (예를 들어, -60℃)에서 2,4-디클로로피리미딘-5-카르보니트릴을 R2NH2로 처리하여 R2 측쇄의 도입을 제공한다. 상기와 같이 남아있는 염소의 수소화는 R2 혼입의 위치이성질체적 배열을 고려한다. 유기 용매 (예를 들어, 1-부탄올, THF, NMP, DMF, DMSO, 디옥산, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올) 중에서 염기 (예를 들어, 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 인산칼륨, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, DIEA 또는 TEA)의 존재 하에 승온 (예를 들어, 120℃)에서 R1NH2로의 후속적 처리는 R1 측쇄의 도입을 제공한다 (일부 예에서 R1 = R3 및 R2 = R4인 경우에는, 화학식 IB의 화합물을 제공함). 강한 수성 염기, 예컨대 수산화나트륨 또는 수산화칼륨의 존재 하에 용매, 예컨대, 예를 들어, DMSO, NMP, DMF, 에탄올 또는 메탄올 중에서, 예를 들어 촉매적 퍼옥시드를 사용한 니트릴 모이어티의 전환으로 화학식 I의 화합물을 수득한다.
<반응식 5>
화학식 I의 화합물의 합성을 위한 또 다른 방법은 반응식 5에 나타낸다. 유기 용매 (예를 들어, n-부탄올, NMP, DMF, DMSO, 디옥산 또는 에탄올) 중에서 염기 (예컨대 예를 들어, DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨)의 존재 하에 50℃ 내지 90℃의 온도에서 4-클로로-2-(알킬티오)피리미딘-5-카르보니트릴을 R1NH2로 처리하여 R1 측쇄를 도입한다. 예를 들어 용매 (예컨대 예를 들어, DMSO, NMP, DMF, 에탄올 또는 메탄올) 중에서 염기 (예컨대 수산화나트륨 또는 수산화칼륨)의 존재 하에 퍼옥시드 (H2O2)로의 처리, 및 산화 (예를 들어, 용매, 예컨대 DCM, NMP, DMF 또는 DMA 중에서 mCPBA, 옥손, 과산화수소 또는 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘을 사용함)에 의한 카르보니트릴의 아미드로의 전환은 상기와 같은 술폰 (m=1) 및 술폭시드 (m = 2)의 혼합물을 제공하고, 이를 용매 (예컨대 디옥산, DMSO, NMP, DMF, THF 또는 n-부탄올) 중에서 염기 (예컨대 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 또는 N-메틸모르폴린)의 존재 하에 임의로 승온 (예를 들어, 실온 내지 130℃)에서 R2NH2로 처리하여 화학식 I의 화합물을 수득할 수 있다.
<반응식 6>
화학식 I의 화합물은 또한 반응식 6에 나타낸 바와 같이 수득될 수 있다. 유기 용매 (예를 들어, n-부탄올, NMP, DMF, DMSO, 디옥산 또는 에탄올) 중에서 염기 (예컨대 예를 들어, DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로-[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨)의 존재 하에 80℃ 내지 100℃의 온도에서 5-브로모-2-클로로-4-(알킬티오)피리미딘을 R1NH2로 처리하여 R1 측쇄를 도입한다. 카르보니트릴 모이어티의 도입은 용매 (예컨대 DMF, DMSO, NMP 또는 DMA) 중에 촉매, Pd(O)의 존재 하에 승온 (예를 들어, 80℃ - 100℃)에서 아연 및 디시아노아연으로의 처리에 의해 달성된다. 상기와 같이, 퍼옥시드로의 처리에 의한 아미드 모이어티로의 전환, 이어서 술폰/술폭시드로의 산화, 및 R2NH2로의 처리로 화학식 I의 화합물을 수득한다. 대안적으로, 알킬티오 모이어티를 먼저 산화시키고, 이어서 R2 측쇄를 도입하고 (일부 예에서 R1 = R3 및 R2 = R4인 경우에는, 화학식 IB의 화합물을 제공함), 아미드 모이어티로 전환시켜 화학식 I의 화합물을 수득한다.
대안적으로, 화학식 IB의 디아미노피리미딘 화합물 (여기서, R3 및 R4는 본원에 정의된 바와 같음)은 하기 나타낸 반응식 7, 8 및 9 뿐만 아니라 본원에 기재된 실시예에 요약된 바와 같이 제조될 수 있다. 당업자가 목적하는 생성물에 도달하기 위해 예시된 반응식 및 실시예에 기재된 절차를 수정하는 방법을 알 것임을 주목해야 한다.
<반응식 7>
반응식 7에 나타난 바낸 같이, 유기 용매 (예를 들어, 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 또는 THF) 중에서 염기 (예를 들어, DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨)의 존재 하에 2,4-디클로로피리미딘-5-카르보니트릴을 R4NH2로 처리하여 R4 측쇄의 도입을 제공한다. 유기 용매 (예를 들어, 1-부탄올, THF, NMP, DMF, DMSO, 디옥산, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올) 중에서 염기 (예를 들어, 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 인산칼륨, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, DIEA 또는 TEA)의 존재 하에 승온 (예를 들어, 50℃ 내지 90℃)에서 R3NH2로의 후속적 처리로 화학식 IB의 화합물을 수득한다.
<반응식 8>
대안적으로, 반응식 8에 나타낸 바와 같이, R3 치환기를 먼저 도입하고, 이어서 본질적으로 동일한 방법에 의해 R4 치환기를 도입한다. 일부 실시양태에서, R4NH2와의 커플링은 실온 내지 110℃의 온도에서 수행된다.
<반응식 9>
제3의 접근법에서, 화학식 IB의 화합물은 적절하게 유도체화된 4-클로로-2-알킬티오피리미딘-카르보니트릴 (여기서 각각의 Rx는 독립적으로 C1 -2 알킬임)로부터 출발하여, 승온 (예를 들어, 50℃ - 90℃)에서 유기 용매 (예를 들어, n-부탄올, NMP, DMF, DMSO 또는 디옥산) 중에서 염기 (예를 들어, DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨)의 존재 하에 R4NH2로의 처리에 의해 제조될 수 있다. 알킬티올 모이어티의 산화는 유기 용매 (예컨대 예를 들어, DCM, NMP, DMF 또는 DMA) 중에서 산화제, 예컨대 mCPBA, 옥손, 과산화수소 또는 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘으로의 처리에 의해 달성된다. 생성된 술폰 (m = 1) 및 술폭시드 (m = 2)의 혼합물은 실온 또는 승온 (예를 들어, 25℃ - 110℃)에서 용매 (예컨대 예를 들어, 디옥산, DMSO, NMP, DMF, THF 또는 n-부탄올) 중에서 유기 염기, 예컨대 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린의 존재 하에 R3NH2로 처리하여 화학식 IB의 화합물을 수득한다.
한 측면에서, 화학식 Ia의 화합물을 용매 중에서 유기 염기의 존재 하에 R1NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법이 본원에 제공된다.
<화학식 I>
<화학식 Ia>
상기 식에서,
R1은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴이며, 단, R1은 1-아미노시클로헥실이 아니고;
R2는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 포화 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이고;
Rx는 C1-2 알킬이고;
m은 1 또는 2이다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 2-(2-아미노에틸-아미노)-4-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노-2-옥소에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; (S)-2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; (R)-2-(1-아미노-3-메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 4-(시클로펜틸아미노)-2-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 또는 2-(1-아세틸피페리딘-4-일아미노)-4-(시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드가 아니다.
한 실시양태에서, 용매는 디옥산, DMSO, NMP, DMF, THF 또는 물이다. 또 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 또는 N-메틸모르폴린이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 80℃ 내지 약 100℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 Ib의 화합물을 용매 중에서 mCPBA, 옥손, 과산화수소 또는 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘으로부터 선택된 산화제로의 처리에 의해 산화시키는 것을 포함하는, 화학식 Ia의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 Ia>
<화학식 Ib>
한 실시양태에서, 용매는 아세톤, DCM, NMP, DMF 또는 클로로포름이다. 일부 실시양태에서, 방법은 약 0℃ 내지 약 20℃의 온도에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 Ic의 화합물을 용매 중에서 커플링제 및 염기의 존재 하에 NH4Cl과 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 Ib의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 Ib>
<화학식 Ic>
일부 실시양태에서, 용매는 NMP, DMF, DMSO, 디옥산, THF, DCM 또는 클로로포름이다. 다른 실시양태에서, 커플링제는 HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt 또는 에틸 클로로포르메이트이고, 염기는 DIEA, TEA 또는 탄산칼륨이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 Id의 화합물을 공용매 중에서 수성 염기와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 Ic의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 Ic>
<화학식 Id>
일부 실시양태에서, 수성 염기는 수성 수산화나트륨, 수산화칼륨 또는 수산화리튬이다. 다른 실시양태에서, 공용매는 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, THF 또는 디옥산이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 Ie의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R2NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 Id의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 Id>
<화학식 Ie>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, THF, NMP, DMF, DMSO 또는 디옥산이다. 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산세슘, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산칼륨 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 60℃ 내지 약 80℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 If의 화합물을 용매 중에서 염기의 존재 하에 퍼옥시드와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 Ib의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 Ib>
<화학식 If>
일부 실시양태에서, 용매는 DMSO, NMP, DMF, 에탄올 또는 메탄올이다. 다른 실시양태에서, 염기는 수산화나트륨 또는 수산화칼륨이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 Ig의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R2NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 If의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 If>
<화학식 Ig>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 n-부탄올, NMP, DMF, DMSO, 디옥산 또는 에탄올이다. 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 50℃ 내지 약 90℃에서 수행된다.
화학식 IIa의 화합물을 용매 중에서 유기 염기의 존재 하에 R2NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법이 추가로 제공된다.
<화학식 I>
<화학식 IIa>
상기 식에서,
R1은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴이며, 단, R1은 1-아미노시클로헥실이 아니고;
R2는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 포화 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이고;
Rx는 C1-2 알킬이고;
m은 1 또는 2이다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 2-(2-아미노에틸-아미노)-4-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노-2-옥소에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; (S)-2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; (R)-2-(1-아미노-3-메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 4-(시클로펜틸아미노)-2-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 또는 2-(1-아세틸피페리딘-4-일아미노)-4-(시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드가 아니다.
한 실시양태에서, 용매는 디옥산, DMSO, NMP, DMF, THF 또는 물이다. 또 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 또는 N-메틸모르폴린이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 80℃ 내지 약 110℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIb의 화합물을 용매 중에서 mCPBA, 옥손, 과산화수소 또는 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘으로부터 선택된 산화제로의 처리에 의해 산화시키는 것을 포함하는, 화학식 IIa의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIa>
<화학식 IIb>
한 실시양태에서, 용매는 아세톤, DCM, NMP, DMF 또는 클로로포름이다. 일부 실시양태에서, 산화는 저온, 예를 들어, 약 0℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIc의 화합물을 용매 중에서 커플링제 및 염기의 존재 하에 NH4Cl과 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIb의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIb>
<화학식 IIc>
일부 실시양태에서, 용매는 NMP, DMF, DMSO, 디옥산, THF, DCM 또는 클로로포름이다. 다른 실시양태에서, 커플링제는 HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt 또는 에틸 클로로포르메이트이고, 염기는 DIEA, TEA 또는 탄산칼륨이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IId의 화합물을 공용매 중에서 수성 염기와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIc의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIc>
<화학식 IId>
일부 실시양태에서, 수성 염기는 수성 수산화나트륨, 수산화칼륨 또는 수산화리튬이다. 다른 실시양태에서, 공용매는 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, THF 또는 디옥산이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIe의 화합물을 유기 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R1NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IId의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IId>
<화학식 IIe>
한 실시양태에서, 유기 용매는 디옥산, THF, NMP, DMF, DMSO, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올이다. 또 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산세슘, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산칼륨 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 80℃ 내지 약 100℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIf의 화합물을 유기 용매 중에서 촉매의 존재 하에 NaSRx와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIe의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIe>
<화학식 IIf>
한 실시양태에서, 용매는 THF, DCM 또는 디옥산이다. 한 실시양태에서, 촉매는 트리에틸벤질암모늄 클로라이드, 테트라부틸암모늄 클로라이드 또는 테트라부틸암모늄 브로마이드이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 냉각, 예를 들어 -10℃ 하에 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIg의 화합물을 용매 중에서 염기의 존재 하에 퍼옥시드와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIb의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIb>
<화학식 IIg>
일부 실시양태에서, 용매는 DMSO, NMP, DMF, 에탄올 또는 메탄올이다. 다른 실시양태에서, 염기는 수산화나트륨 또는 수산화칼륨이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIh의 화합물을 용매 중에서 촉매의 존재 하에 아연 및 디시아노아연과 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIg의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIg>
<화학식 IIh>
일부 실시양태에서, 촉매는 Pd(0)이다. 일부 실시양태에서, 용매는 DMF, DMSO, NMP 또는 DMA이다. 다른 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어 약 80℃ 내지 약 100℃의 온도에 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIi의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R1NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIh의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIh>
<화학식 IIi>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 n-부탄올, NMP, DMF, DMSO, 디옥산 또는 에탄올이다. 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로-[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어 약 80℃ 내지 약 100℃의 온도에서 수행된다.
또한, 화학식 IIIa의 화합물을 용매 중에서 커플링제 및 염기의 존재 하에 NH4Cl와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다.
<화학식 I>
<화학식 IIIa>
상기 식에서,
R1은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴이며, 단, R1은 1-아미노시클로헥실이 아니고;
R2는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 포화 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 2-(2-아미노에틸-아미노)-4-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노-2-옥소에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; (S)-2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; (R)-2-(1-아미노-3-메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 4-(시클로펜틸아미노)-2-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 또는 2-(1-아세틸피페리딘-4-일아미노)-4-(시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드가 아니다.
일부 실시양태에서, 용매는 NMP, DMF, DMSO, 디옥산, THF, DCM 또는 클로로포름이다. 다른 실시양태에서, 커플링제는 HATU, CDI, HBTU, EDC/HOBt 또는 에틸 클로로포르메이트이고, 염기는 DIEA, TEA 또는 탄산칼륨이다.
일부 이러한 실시양태에서, 방법은 화학식 IIIb의 화합물을 공용매 중에서 수성 염기와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIIa의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIIa>
<화학식 IIIb>
상기 식에서, Rx는 C1-2 알킬이다.
일부 실시양태에서, 수성 염기는 수성 수산화나트륨, 수산화칼륨 또는 수산화리튬이다. 다른 실시양태에서, 공용매는 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, THF 또는 디옥산이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIIc의 화합물을 유기 용매 중에서 유기 염기의 존재 하에 R1NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIIb의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIIb>
<화학식 IIIc>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 THF, NMP, DMF, DMSO, 디옥산, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올이다. 다른 실시양태에서, 유기 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 70℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIId의 화합물을 용매 중에서 유기 염기의 존재 하에 R2NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IIIc의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IIIc>
<화학식 IIId>
일부 실시양태에서, 용매는 에틸 에테르, THF, DCM, 톨루엔 또는 메틸 tert-부틸 에테르이다. 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 저온, 예를 들어 -70℃에서 수행된다.
또한, 화학식 IVa의 화합물을 용매 중에서 강한 수성 염기의 존재 하에 촉매적 퍼옥시드와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다.
<화학식 I>
<화학식 IVa>
상기 식에서,
R1은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴이며, 단, R1은 1-아미노시클로헥실이 아니고;
R2는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 포화 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 2-(2-아미노에틸-아미노)-4-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노-2-옥소에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 2-(2-아미노에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; (S)-2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, (R)-2-(1-아미노-3-메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 4-(시클로펜틸아미노)-2-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 또는 2-(1-아세틸피페리딘-4-일아미노)-4-(시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드가 아니다.
일부 실시양태에서, 용매는 DMSO, NMP, DMF, 에탄올 또는 메탄올이다. 다른 실시양태에서, 강한 수성 염기는 예컨대 수산화나트륨 또는 수산화칼륨이다.
일부 이러한 실시양태에서, 방법은 화학식 IVb의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R1NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IVa의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IVa>
<화학식 IVb>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 1-부탄올, THF, NMP, DMF, DMSO, 디옥산, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올이다. 다른 실시양태에서, 염기는 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 인산칼륨, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, DIEA 또는 TEA이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 120℃에서 수행된다.
일부 이러한 실시양태에서, 방법은 화학식 IVc의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R2NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IVb의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IVb>
<화학식 IVc>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 또는 THF이다. 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 저온, 예를 들어 -60℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IVd의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R2NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IVa의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IVa>
<화학식 IVd>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 DCM, NMP, DMF 또는 DMA이다. 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 또는 N-메틸모르폴린이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 실온 내지 약 130℃의 온도에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 IIg의 화합물을 용매 중에서 mCPBA, 옥손, 과산화수소 또는 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘으로부터 선택된 산화제로의 처리에 의해 산화시키는 것을 포함하는, 화학식 IVd의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 IVd>
<화학식 IIg>
한 실시양태에서, 용매는 DCM, NMP, DMF 또는 DMA이다. 일부 실시양태에서, 산화는 약 0℃ 내지 약 실온의 온도에서 수행된다.
또한, 화학식 Va의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R3NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IB의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다.
<화학식 IB>
<화학식 Va>
상기 식에서,
R3은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬-(비-방향족 헤테로시클릴)이고;
R4는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이다.
한 실시양태에서, 화합물은 4-(이소펜틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; (2S,2'S)-디메틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(4-메틸펜타노에이트); (2S,2'S)-디에틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(3-메틸부타노에이트); 4-(시클로헵틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; 4-(4-메틸시클로헥실아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; 또는 2-(3-(디에틸아미노)프로필아미노)-4-(4-메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴이 아니다.
일부 실시양태에서, 유기 용매는 1-부탄올, THF, NMP, DMF, DMSO, 디옥산, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올이다. 다른 실시양태에서, 염기는 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 인산칼륨, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, DIEA 또는 TEA이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 50℃ 내지 약 90℃에서 수행된다.
일부 이러한 실시양태에서, 방법은 화학식 Vb의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R4NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 Va의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 Va>
<화학식 Vb>
일부 실시양태에서, 유기 용매는 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 또는 THF이다. 다른 실시양태에서서 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 저온, 예를 들어, 약 -70℃ 내지 약 20℃에서 수행된다.
또한, 화학식 VIa의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R4NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IB의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다.
<화학식 IB>
<화학식 VIa>
상기 식에서,
R3은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬-(비-방향족 헤테로시클릴)이고;
R4는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이다.
한 실시양태에서, 화합물은 4-(이소펜틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; (2S,2'S)-디메틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(4-메틸펜타노에이트); (2S,2'S)-디에틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(3-메틸부타노에이트); 4-(시클로헵틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; 4-(4-메틸시클로-헥실아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; 또는 2-(3-(디에틸아미노)프로필아미노)-4-(4-메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴이 아니다.
일부 실시양태에서, 유기 용매는 1-부탄올, NMP, DMF, DMSO 또는 디옥산이다. 다른 실시양태에서, 염기는 탄산세슘, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 인산칼륨, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, DIEA 또는 TEA이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 25℃ 내지 약 110℃에서 수행된다.
일부 이러한 실시양태에서, 방법은 화학식 Vb의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R3NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 VIa의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 VIa>
<화학식 Vb>
일부 이러한 실시양태에서, 유기 용매는 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 또는 THF이다. 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 저온, 예를 들어, 약 -70℃ 내지 약 20℃에서 수행된다.
화학식 VIIa의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R3NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 IB의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다.
<화학식 IB>
<화학식 VIIa>
상기 식에서,
R3은 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬-(비-방향족 헤테로시클릴)이고;
R4는 치환 또는 비치환된 C1-8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이고;
Rx는 C1-2 알킬이고,
m은 1 또는 2이다.
한 실시양태에서, 화합물은 4-(이소펜틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; (2S,2'S)-디메틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(4-메틸펜타노에이트); (2S,2'S)-디에틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(3-메틸부타노에이트); 4-(시클로헵틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; 4-(4-메틸시클로-헥실아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; 또는 2-(3-(디에틸아미노)프로필아미노)-4-(4-메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴이 아니다.
한 실시양태에서, 용매는 디옥산, DMSO, NMP, DMF, THF 또는 n-부탄올이다. 또 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, N-메틸모르폴린이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 25℃ 내지 약 110℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 VIIb의 화합물을 용매 중에서 mCPBA, 옥손, 과산화수소 또는 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘으로부터 선택된 산화제로의 처리에 의해 산화시키는 것을 포함하는, 화학식 VIIa의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 VIIa>
<화학식 VIIb>
한 실시양태에서, 용매는 DCM, NMP, DMF 또는 DMA이다. 일부 실시양태에서, 산화는 저온, 예를 들어, 약 0℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학식 VIIc의 화합물을 유기 용매 중에서 염기의 존재 하에 R4NH2와 접촉시키는 것을 포함하는, 화학식 VIIb의 화합물을 제조하는 것을 추가로 포함한다.
<화학식 VIIb>
<화학식 VIIc>
한 실시양태에서, 유기 용매는 n-부탄올, NMP, DMF, DMSO 또는 디옥산이다. 또 다른 실시양태에서, 염기는 DIEA, TEA, N-메틸모르폴린, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 탄산세슘 또는 인산칼륨이다. 일부 실시양태에서, 접촉은 승온, 예를 들어, 약 50℃ 내지 약 90℃에서 수행된다.
사용 방법
디아미노피리미딘 화합물은 동물 또는 인간에서 상태를 치료하거나 예방하거나 개선하기 위한 제약으로서 유용성을 갖는다. 추가로, 디아미노피리미딘 화합물은 단백질 키나제, 특히 JNK1 및/또는 JNK2에 대해 활성이다. 따라서, 상기 기재된 질환의 치료 또는 예방을 비롯한 디아미노피리미딘 화합물의 여러 가지 용도가 본원에 제공된다. 본원에 제공된 방법은 유효량의 하나 이상의 디아미노피리미딘 화합물(들)을 그를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
한 측면에서, 키나제를 발현하는 세포를 유효량의 디아미노피리미딘 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 세포에서 상기 키나제를 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 한 실시양태에서, 키나제는 JNK1, JNK2, 또는 그의 돌연변이체 또는 이소형, 또는 그의 조합이다. 예를 들어, 디아미노피리미딘 화합물은 표 1, 2 또는 3으로부터의 화합물이다.
또 다른 측면에서, 간 섬유화 장애, 예컨대 비-알콜성 지방간염, 지방증 (즉, 지방간), 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 원발성 담즙성 간경변증, 간염, 간세포성 암종, 및 만성 또는 반복성 알콜 섭취 (알콜성 간염)와, 감염 (예를 들어, 바이러스 감염, 예컨대 HCV)과, 간 이식과 또는 약물 유발된 간 손상 (예를 들어, 아세트아미노펜 독성)과 병발된 간 섬유증의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 간 섬유화 장애를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 일부 이러한 측면에서, 간 섬유화 장애, 예컨대 비-알콜성 지방간염, 지방증 (즉, 지방간), 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 원발성 담즙성 간경변증 및 간염을 유발하는 당뇨병 또는 대사 증후군의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 당뇨병 또는 대사 증후군을 치료 또는 예방하기 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 간질성 폐 섬유증, 전신 경화증, 경피증, 만성 동종이식편 신병증, 항체 매개 거부증 또는 루푸스로부터 선택된 하나 이상의 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 장애의 치료 또는 예방 위한 방법이 본원에 제공된다. 일부 이러한 실시양태에서, 루푸스는 홍반성 루푸스 (예컨대 원판상 홍반성 루푸스 또는 피부 홍반성 루푸스) 또는 전신 루푸스이다.
또 다른 측면에서, JNK1 및/또는 JNK2의 억제에 의해 치료가능하거나 예방가능한 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 상태를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 이러한 상태의 예는 류마티스 관절염; 류마티스 척추염; 골관절염; 천식, 기관지염; 알레르기성 비염; 만성 폐쇄성 폐 질환; 낭성 섬유증; 염증성 장 질환; 과민성 장 증후군; 점액성 결장염; 궤양성 결장염; 크론병; 헌팅톤병; 간염; 췌장염; 신염; 다발성 경화증; 홍반성 루푸스; 제II형 당뇨병; 비만; 아테롬성동맥경화증; 혈관성형술 후 재협착; 좌심실 비대증; 심근경색; 졸중; 심장, 폐, 소화관, 신장, 간, 췌장, 비장 및 뇌의 허혈성 손상; 급성 또는 만성 기관 이식 거부; 이식용 기관의 보존; 기관 부전 또는 사지 손실 (예를 들어, 허혈-재관류 손상, 외상, 육안적 신체상 손상, 자동차 사고, 압궤 손상 또는 이식 실패로부터 유발되는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않음); 이식편 대 숙주 질환; 내독소 쇼크; 다발성 기관 부전; 건선; 화재, 화학물질 또는 방사선에 대한 노출로부터의 화상; 습진; 피부염; 피부 이식편; 허혈; 수술 또는 외상성 손상 (예를 들어, 교통 사고, 총상 또는 사지 압궤)과 연관된 허혈성 상태; 간질; 알츠하이머병; 파킨슨병; 박테리아 또는 바이러스 감염에 대한 면역학적 반응; 악액질; 혈관신생 및 증식성 질환; 고형 종양; 및 다양한 조직, 예컨대 결장, 직장, 전립선, 간, 폐, 기관지, 췌장, 뇌, 두부, 경부, 위, 피부, 신장, 자궁경부, 혈액, 후두, 식도, 구강, 인두, 방광, 난소 또는 자궁의 암을 포함한다.
제약 조성물 및 투여 경로
디아미노피리미딘 화합물은 통상의 제제 형태, 예컨대 캡슐, 마이크로캡슐, 정제, 과립, 분말, 트로키, 환제, 좌제, 주사, 현탁액, 시럽, 패치, 크림, 로션, 연고, 겔, 스프레이, 용액 및 에멀젼으로 경구로, 국소적으로 또는 비경구로 대상체에게 투여될 수 있다. 적합한 제제는 통상의 유기 또는 무기 첨가제, 예컨대 부형제 (예를 들어, 수크로스, 전분, 만니톨, 소르비톨, 락토스, 글루코스, 셀룰로스, 활석, 인산칼슘 또는 탄산칼슘), 결합제 (예를 들어, 셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시메틸셀룰로스, 폴리프로필피롤리돈, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴, 아라비아 검, 폴리에틸렌글리콜, 수크로스 또는 전분), 붕해제 (예를 들어, 전분, 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필전분, 저치환된 히드록시프로필셀룰로스, 중탄산나트륨, 인산칼슘 또는 시트르산칼슘), 윤활제 (예를 들어, 스테아르산마그네슘, 광 무수 규산, 활석 또는 나트륨 라우릴 술페이트), 향미제 (예를 들어, 시트르산, 멘톨, 글리신 또는 오렌지색 분말), 보존제 (예를 들어, 벤조산나트륨, 중아황산나트륨, 메틸파라벤 또는 프로필파라벤), 안정화제 (예를 들어, 시트르산, 시트르산나트륨 또는 아세트산), 현탁화제 (예를 들어, 메틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리클론 또는 스테아르산알루미늄), 분산화제 (예를 들어, 히드록시프로필메틸셀룰로스), 희석제 (예를 들어, 물) 및 베이스 왁스 (예를 들어, 코코아 버터, 백색 페트롤라툼 또는 폴리에틸렌 글리콜)를 통상적으로 사용하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 제약 조성물 중 유효량의 디아미노피리미딘 화합물은 목적하는 효과를 발휘할 수준; 예를 들어, 경구 및 비경구 투여 둘 다를 위해 약 0.005 mg/kg 대상체 체중 내지 약 10 mg/kg 대상체 체중의 단위 투여량으로 존재할 수 있다.
대상체에게 투여되는 디아미노피리미딘 화합물의 용량은 다소 폭넓게 가변적이고, 건강-관리 진료의의 판단에 따라 적용될 수 있다. 일반적으로, 디아미노피리미딘 화합물은 약 0.005 mg/kg 대상체 체중 내지 약 10 mg/kg 대상체 체중의 용량으로 1일 1 내지 4회 투여될 수 있으나, 상기 투여량은 대상체의 연령, 체중 및 의학적 상태, 및 투여 유형에 따라 적절히 변할 수 있다. 한 실시양태에서, 용량은 약 0.01 mg/kg 대상체 체중 내지 약 5 mg/kg 대상체 체중, 약 0.05 mg/kg 대상체 체중 내지 약 1 mg/kg 대상체 체중, 약 0.1 mg/kg 대상체 체중 내지 약 0.75 mg/kg 대상체 체중, 또는 약 0.25 mg/kg 대상체 체중 내지 약 0.5 mg/kg 대상체 체중이다. 한 실시양태에서는, 하나의 용량이 1일에 제공된다. 임의의 주어진 경우에, 투여되는 디아미노피리미딘 화합물의 양은 활성 성분의 용해도, 사용되는 제제 및 투여 경로와 같은 인자에 따라 달라질 것이다. 한 실시양태에서, 국소 농도의 적용은 세포내 노출 또는 농도 약 0.01 - 10 μM을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 약 0.375 mg/일 내지 약 750 mg/일, 약 0.75 mg/일 내지 약 375 mg/일, 약 3.75 mg/일 내지 약 75 mg/일, 약 7.5 mg/일 내지 약 55 mg/일, 또는 약 18 mg/일 내지 약 37 mg/일의 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 약 1 mg/일 내지 약 1200 mg/일, 약 10 mg/일 내지 약 1200 mg/일, 약 100 mg/일 내지 약 1200 mg/일, 약 400 mg/일 내지 약 1200 mg/일, 약 600 mg/일 내지 약 1200 mg/일, 약 400 mg/일 내지 약 800 mg/일, 또는 약 600 mg/일 내지 약 800 mg/일의 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 400 mg/일, 600 mg/일 또는 800 mg/일의 디아미노피리미딘 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 약 1 mg 내지 200 mg, 약 35 mg 내지 약 1400 mg, 약 125 mg 내지 약 1000 mg, 약 250 mg 내지 약 1000 mg, 또는 약 500 mg 내지 약 1000 mg의 디아미노피리미딘 화합물을 포함하는 단위 투여 제제가 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 약 100 mg 또는 400 mg의 디아미노피리미딘 화합물을 포함하는 단위 투여 제제가 본원에 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 30 mg, 35 mg, 50 mg, 70 mg, 100 mg, 125 mg, 140 mg, 175 mg, 200 mg, 250 mg, 280 mg, 350 mg, 500 mg, 560 mg, 700 mg, 750 mg, 1000 mg 또는 1400 mg의 디아미노피리미딘 화합물을 포함하는 단위 투여 제제가 본원에 제공된다.
디아미노피리미딘 화합물은 1일 1회, 2회, 3회, 4회 또는 그 초과로 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 600 mg 이하의 용량이 1일 용량으로서 투여되고, 600 mg 초과의 용량이 전체 1일 용량의 1/2과 동일한 양으로 1일 2회 투여된다.
디아미노피리미딘 화합물은 편의성의 이유로 경구로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 경구로 투여되는 경우에, 디아미노피리미딘 화합물은 식사 및 물과 함께 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 디아미노피리미딘 화합물은 물 또는 주스 (예를 들어, 사과 주스 또는 오렌지 주스) 중에 분산되고, 현탁액으로서 경구로 투여된다.
디아미노피리미딘 화합물은 또한 피내로, 근육내로, 복강내로, 경피로, 정맥내로, 피하로, 비강내로, 경막외로, 설하로, 뇌내로, 질내로, 경피로, 직장으로, 점막으로, 흡입에 의해, 또는 귀, 코, 눈 또는 피부에 국소적으로 투여될 수 있다. 투여 방식은 건강-관리 진료의의 판단에 따르고, 부분적으로 의학적 상태의 부위에 의존적일 수 있다.
한 실시양태에서, 추가의 담체, 부형제 또는 비히클 없이 디아미노피리미딘 화합물을 함유하는 캡슐이 본원에 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 유효량의 디아미노피리미딘 화합물 및 제약상 허용되는 담체 또는 비히클을 포함하며, 여기서 제약상 허용되는 담체 또는 비히클이 부형제, 희석제 또는 그의 혼합물을 포함할 수 있는 것인 조성물이 본원에 제공된다. 한 실시양태에서, 조성물은 제약 조성물이다.
조성물은 정제, 츄어블 정제, 캡슐, 용액, 비경구 용액, 트로키, 좌제 및 현탁액 등의 형태일 수 있다. 조성물은 단일 정제 또는 캡슐 또는 편리한 부피의 액체일 수 있는 투여 단위에 1일 용량 또는 1일 용량의 편리한 분획을 함유하도록 제제화될 수 있다. 한 실시양태에서, 용액은 수용성 염, 예컨대 히드로클로라이드 염으로부터 제조된다. 일반적으로, 모든 조성물은 제약 화학에서 공지된 방법에 따라 제조된다. 캡슐은, 디아미노피리미딘 화합물을 적합한 담체 또는 희석제와 혼합하고 적절한 양의 혼합물을 캡슐에 채움으로써 제조될 수 있다. 통상의 담체 및 희석제는 불활성 분말화 물질, 예컨대 많은 다양한 종류의 전분, 분말화 셀룰로스, 특히 결정질 및 미세결정질 셀룰로스, 당, 예컨대 프룩토스, 만니톨 및 수크로스, 곡물 가루 및 유사한 식용 분말을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
정제는 직접 압축에 의해, 습식 과립화에 의해 또는 건식 과립화에 의해 제조될 수 있다. 이들의 제제는 통상적으로 희석제, 결합제, 윤활제 및 붕해제 뿐만 아니라 화합물을 혼입한다. 전형적 희석제는 예를 들어 다양한 유형의 전분, 락토스, 만니톨, 카올린, 인산칼슘 또는 황산칼슘, 무기 염, 예컨대 염화나트륨 및 분말화 당을 포함한다. 분말화 셀룰로스 유도체가 또한 유용하다. 전형적 정제 결합제는 물질, 예컨대 전분, 젤라틴, 및 당, 예컨대 락토스, 프룩토스, 글루코스 등이다. 천연 및 합성 검이 또한 편리하며, 아카시아, 알기네이트, 메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리딘 등을 포함한다. 폴리에틸렌 글리콜, 에틸셀룰로스 및 왁스가 또한 결합제의 역할을 할 수 있다.
윤활제는 정제 및 펀치가 염료 중에 점착되는 것을 방지하기 위해 정제 제제에서 필요할 수 있다. 윤활제는 미끈거리는 고체, 예컨대 활석, 스테아르산마그네슘 및 스테아르산칼슘, 스테아르산 및 수소화 식물성 오일로부터 선택될 수 있다. 정제 붕해제는 습윤화시 팽윤되어 정제를 해체하고 화합물을 방출하는 물질이다. 이들은 전분, 점토, 셀룰로스, 알긴 및 검을 포함한다. 보다 구체적으로, 예를 들어 옥수수 및 감자 전분, 메틸셀룰로스, 한천, 벤토나이트, 목재 셀룰로스, 분말화 천연 스폰지, 양이온-교환 수지, 알긴산, 구아 검, 시트러스 펄프 및 카르복시메틸 셀룰로스 뿐만 아니라 나트륨 라우릴 술페이트가 사용될 수 있다. 정제는 향미제 및 실란트로서의 당으로, 또는 정제의 용해 특성을 개질시키기 위한 필름-형성 보호제로 코팅될 수 있다. 조성물은 또한, 예를 들어, 제제 중에 만니톨과 같은 물질을 사용함으로써 츄어블 제제로서 제제화될 수 있다.
디아미노피리미딘 화합물을 좌제로서 투여하는 것이 바람직한 경우에, 전형적 베이스가 사용될 수 있다. 코코아 버터는 통상의 좌제 베이스이며, 이는 왁스의 첨가에 의해 개질되어 그의 융점을 약간 상승시킬 수 있다. 특히 다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 수혼화성 좌제 베이스가 폭넓게 사용된다.
디아미노피리미딘 화합물의 효과는 적절한 제제에 의해 지연되거나 연장될 수 있다. 예를 들어, 디아미노피리미딘 화합물의 저속 가용성 펠릿을 제조하여, 정제 또는 캡슐에 또는 저속-방출 이식가능한 장치로서 혼입시킬 수 있다. 기술은 또한 여러 다양한 용해 속도의 펠릿을 제조하고 캡슐을 펠릿의 혼합물로 채우는 것을 포함한다. 정제 또는 캡슐은 예측가능한 시간 기간 동안 용해를 방지하는 필름으로 코팅될 수 있다. 심지어 비경구 제제는 디아미노피리미딘 화합물을 혈청 중에서 서서히 분산되게 하는 유성 또는 에멀젼화 비히클 중에 용해 또는 현탁시킴으로써 장기-작용성으로 만들 수 있다.
실시예
하기 실시예는 예시에 의해 제시되고, 비제한적인 것이다. 화합물은 화학 구조에 대한 체계적인 명칭을 생성하는 켐드로우 울트라(Chemdraw Ultra) 9.0 (캠브리지소프트(Cambridgesoft))에서 제공되는 자동 명칭 생성 도구를 이용하여 명명되며, 이는 입체화학에 대한 칸-인골드-프렐로그(Cahn-Ingold-Prelog) 규칙을 지지한다. 당업자는 예시적인 실시예에 기재된 절차를 변형하여 목적 생성물에 도달할 수 있다.
사용된 약어:
화합물 합성
실시예 1: 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
4-클로로-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 무수 에탄올 (10 mL) 중 2,4-디클로로-피리미딘-5-카르보니트릴 (1.2 g, 6.93 mmol) 및 무수 에탄올 (10 mL) 중 (1r,4r)-4-메톡시시클로헥산아민 (893 mg, 6.93 mmol)을 -60℃에서 혼합한 다음, DIEA (1.34 g, 10.4 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 -60℃에서 1.5시간 동안 및 이어서 실온에서 밤새 교반하였다. 휘발성 분획을 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 (석유 에테르 중 9.1%-25% 에틸 아세테이트 및 DCM 중 3.2%-4.7% 메탄올로 용리함)을 사용하여 정제하여 2종의 이성질체 (상기 기재된 바와 같이 확인됨), 즉 4-클로로-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴 (560 mg, 2.10 mmol, 수율 30%)을 백색 고체로서, 그리고 2-클로로-4-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (227 mg, 0.85 mmol, 수율 12%)을 백색 고체로서 수득하였다.
2종의 이성질체의 확인을 탈할로겐화 중간체의 특정화에 의해 달성하였다. 2개 분획에 대한 탈할로겐화는 다음과 같이 달성하였다. THF (10 mL) 및 수성 암모니아 (1 mL)의 공용매 중 4-클로로-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (50 mg, 0.18 mmol) 및 라니(Raney) 니켈을 수소 풍선 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시키고, 역상 정제용 HPLC (10% → 40% 아세토니트릴 + 0.005% 암모니아 용액)에 의해 정제하여 5-(아미노메틸)-N-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실)피리미딘-2-아민 (25 mg, 0.10 mmol, 수율 58%)을 수득하였다.
유사하게, THF (10 mL) 및 수성 암모니아 (1 mL)의 공용매 중 2-클로로-4-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (50 mg, 0.18 mmol) 및 라니 니켈을 수소 풍선 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시키고, 역상 정제용 HPLC (10% → 40% 아세토니트릴 + 0.005% 암모니아 용액)에 의해 정제하여 5-(아미노메틸)-N-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실)피리미딘-4-아민 (30 mg, 0.12 mmol, 수율 66%)을 수득하였다.
B. 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 무수 n-부탄올 (20 mL) 중 4-클로로-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (236 mg, 0.88 mmol), (1R,3R)-3-아미노시클로헥산올 (151 mg, 1.32 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨) 및 탄산세슘 (573 mg, 1.76 mmol)의 혼합물을 질소 하에 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 DCM 사이에 분배하였다. 유기 층을 합하고, 농축시키고, 실리카 겔 (석유 에테르 중 16%-50% 에틸 아세테이트 및 DCM 중 3.2%-4.7% 메탄올을 사용하여 용리함)에 의해 정제하여 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴 (140 mg, 0.40 mmol, 수율 46%)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (140 mg, 0.40 mmol)을 DMSO (10 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 수산화나트륨 용액 10 방울 및 수성 과산화수소 용액 (30%) 10 방울을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 DCM-이소프로판올 (5:1) 사이에 분배하였다. 유기 층을 합하고, 농축시키고, 실리카 겔 (석유 에테르 중 50%-75% 에틸 아세테이트 및 DCM 중 4.76%-9.1% 메탄올을 사용하여 용리함)에 의해 정제하여 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드 (103 mg, 0.28 mmol, 수율 70%)를 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 2: 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 무수 n-부탄올 (20 mL) 중 4-클로로-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (236 mg, 0.88 mmol, 상기 기재된 합성), (1S,3S)-3-아미노시클로헥산올 (209 mg, 1.33 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15: 2051-2056 (2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨) 및 탄산세슘 (573 mg, 1.76 mmol)의 혼합물을 질소 하에 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 DCM 사이에 분배하였다. 유기 층을 합하고, 농축시키고, 실리카 겔 (석유 에테르 중 16%-50% 에틸 아세테이트 및 DCM 중 3.2%-4.7% 메탄올을 사용하여 용리함)에 의해 정제하여 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (140 mg, 0.40 mmol, 수율 46%)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (140 mg, 0.40 mmol)을 DMSO (10 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 수산화나트륨 용액 10 방울 및 수성 과산화수소 용액 (30%) 10 방울을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 DCM-이소프로판올 (5:1) 사이에 분배하였다. 유기 층을 합하고, 농축시키고, 실리카 겔 (석유 에테르 중 50%-75% 에틸 아세테이트 및 DCM 중 4.76%-9.1% 메탄올을 사용하여 용리함)에 의해 정제하여 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (102 mg, 0.28 mmol, 수율 70%)를 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 3: 2-((1r,4S)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실카르바메이트. 디옥산 (200 mL) 중 (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 히드로클로라이드 (25 g, 217 mmol)의 현탁액에 실온에서 물 (150 mL) 중 수산화나트륨 (8.7 g, 217 mmol)의 용액을 첨가한 다음, 디-tert-부틸-디카르보네이트 (47 g, 270 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 소모되면, 휘발성 물질을 제거하고, 잔류물을 물로 희석하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실-카르바메이트 (33 g, 0.15 mol, 수율 92%)를 백색 고체로서 수득하였다.
B. tert-부틸 (1r,4r)-4-에톡시시클로헥실카르바메이트. 무수 THF (100 mL) 중 tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실카르바메이트 (20 g, 93 mmol)의 용액에 질소 하에 0℃에서 수소화나트륨 (4 g, 100 mmol, 광유 중 60%)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 30분 동안 교반하였다. 무수 THF (50 mL) 중 아이오도에탄 (16 g, 102 mmol)의 용액을 혼합물에 0℃에서 적가하고, 생성된 혼합물을 60℃로 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 빙수 (100 mL)에 부었다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL x 3)로 추출하고, 유기 상을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (석유 에테르 중 5% → 30% 에틸 아세테이트로 용리함)을 사용하여 정제하여 tert-부틸 (1r,4r)-4-에톡시시클로헥실카르바메이트 (3.7 g, 15 mmol, 수율 16%)를 수득하였다.
C. (1r,4r)-4-에톡시시클로헥산아민 히드로클로라이드. 메탄올성 히드로클로라이드 용액 (2 M, 20 mL) 중 tert-부틸 (1r,4r)-4-에톡시시클로헥실카르바메이트 (3.7 g, 15 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시켜 (1r,4r)-4-에톡시시클로헥산아민 히드로클로라이드 (2.7 g, 수율 100%)를 수득하였다.
D. (1S,2S)-2-아미노시클로펜탄올 히드로클로라이드. 메탄올 (100 mL) 중 (1S,2S)-2-(벤질옥시)시클로펜탄아민 (4.5 g, 22 mmol) 및 염산 (0.5 mL)의 용액에 활성탄상 10 wt% 팔라듐 (500 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 (40 psi) 하에 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 (1S,2S)-2-아미노시클로펜탄올 히드로클로라이드 (2.14 g, 15 mmol, 수율 93%)를 백색 고체로서 수득하였다.
E. 에틸 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (20 mL) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (1.4 g, 6.0 mmol), (1S,2S)-2-아미노시클로펜탄올 히드로클로라이드 (0.7 g, 6.9 mmol) 및 DIEA (1.0 g)의 혼합물을 60℃에서 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 용액을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (석유 에테르 중 0~10% 에틸 아세테이트로 용리함)을 사용하여 정제하여 에틸 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (1.3 g, 4.37 mmol, 수율 73%)를 백색 고체로서 수득하였다.
F. 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 에탄올 (15 mL) 중 에틸 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (1.3 g, 4.37 mmol)의 용액에 수성 수산화나트륨 용액 (15 mL, 2 N)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 소모되면, 반응 혼합물을 포화 수성 시트르산 용액으로 중화시켰다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (1.0 g, 3.7 mmol, 수율 85%)을 백색 고체로서 수득하였다.
G. 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (10 mL) 중 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실산 (1.0 g, 3.7 mmol), 염화암모늄 (0.989 g, 18.5 mmol), HATU (2.25 g, 5.92 mmol), DIEA (2.39 g, 18.5 mmol) 및 1-HOBt (0.80 g, 5.92 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (15 mL)로 희석하고, 수성 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 (석유 에테르 중 30~50% 에틸 아세테이트로 용리함)을 사용하여 정제하여 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피라미딘-5-카르복스아미드 (800 mg, 2.98 mmol, 수율 81%)를 백색 고체로서 수득하였다.
H. 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. 아세톤 (10 mL) 중 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (800 mg, 2.98 mmol)의 혼합물에 물 (10 mL) 중 칼륨 퍼옥시모노술페이트 (4.66 g, 7.45 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 소모되면, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)와 물 (15 mL) 사이에 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켜 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (700 mg, 2.3 mmol, 수율 78%)를 고체로서 수득하였다.
I. 2-((1r,4S)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1S,2S)-2-히드록시-시클로펜틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 디옥산 (10 mL) 중 4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (700 mg, 2.3 mmol), (1r,4r)-4-에톡시시클로헥산아민 히드로클로라이드 (668 mg, 4.66 mmol) 및 DIEA (600 mg, 4.66 mmol)의 용액을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (20 mL) 중에 용해시켰다. 유기 용액을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 역상 정제용 HPLC (물 중 40-75% 아세토니트릴 + 0.05% 수산화암모늄, 7.5분)에 의해 정제하여 2-((1r,4S)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1S,2S)-2-히드록시시클로펜틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (320 mg, 0.88 mmol, 수율 38%, m.p. 126.0~126.6℃)를 고체로서 수득하였다.
실시예 4: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1R,4R)-4-(메틸카르바모일)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 에틸 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트. 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (4.38 g, 18.82 mmol) 및 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (2.276 g, 19.76 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨)을 에탄올 (75 mL) 중에 용해시키고, 그 후 DIEA (4.93 ml, 28.2 mmol)를 첨가하고, 60℃로 가열하였다. 2시간 후, LCMS는 목적 생성물 질량이 우세한 피크를 형성함을 나타내었다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 농축시켰다. 조 물질을 340G SNAP 바이오타지(Biotage) 칼럼 (헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 4-((1R,3S)-3-히드록시-시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (5 g, 16.06 mmol, 85 % 수율)를 백색 발포체로서 수득하였다.
B. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 에틸 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트 (5 g, 16.06 mmol)를 에탄올 (50 mL) 중에 용해시킨 후, 실온에서 수산화나트륨 용액 (물 중 2 M, 20 mL, 40.0 mmol)을 첨가하고 교반하였다. 30분 후, LCMS는 대부분 목적 생성물 질량을 나타내었다. 반응 혼합물을 포화 수성 시트르산 용액의 첨가에 의해 중화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 건조시켜 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (4.5 g, 15.88 mmol, 99 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (4.5 g, 15.88 mmol) 및 HATU (9.06 g, 23.82 mmol)를 DMF (75 mL) 중에 용해시키고, 5분 동안 실온에서 교반되도록 한 후, 염화암모늄 (4.25 g, 79 mmol) 및 DIEA (13.87 mL, 79 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. LCMS가 목적 생성물 질량을 우세한 피크로서 나타낸 후, 반응물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 1회 세척한 후, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 건조시킨 후, 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드 (4.19 g, 14.84 mmol, 93 % 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
D. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드 (302 mg, 1.070 mmol)를 DCM (10 mL) 및 아세톤 (10 mL) 중에 현탁시켰다. 이어서, mCPBA (479 mg, 2.139 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반하였다. 90분 후, LCMS는 목적 생성물 질량을 우세한 피크로서 나타내었다. 반응물을 10% 수성 티오황산나트륨 용액 10 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 5분 동안 교반한 후, 반응물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 이어서, 유기 층을 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 세척한 후, 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 건조시킨 후, 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드 (259 mg, 0.824 mmol, 77 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
E. (1R,4R)-4-아미노-N-메틸시클로헥산카르복스아미드. tert-부틸 (1R,4R)-4-(메틸카르바모일)시클로헥실카르바메이트 (0.411 g, 1.603 mmol)를 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, TFA (5.56 mL, 72.1 mmol)로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 감소시킨 후, 잔류물을 아세토니트릴 중에 용해시키고, 페노메넥스(Phenomenex) 스트라다(Strada)-X-C 고체 상 추출 칼럼 상에 로딩하고, 아세토니트릴 300 mL로 플러싱하였다. 목적 화합물을 메탄올 중 2 M 암모니아를 사용하여 칼럼으로부터 방출시켰다. 목적 화합물을 함유하는 용액을 진공 하에 감소시켜 (1R,4R)-4-아미노-N-메틸시클로헥산카르복스아미드 (0.230 g, 1.475 mmol, 92 % 수율)를 수득하였다.
F. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1R,4R)-4-(메틸-카르바모일)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3S)-3-히드록시-시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.231 g, 0.736 mmol), (1R,4R)-4-아미노-N-메틸시클로헥산카르복스아미드 (0.230 g, 1.472 mmol), DIEA (0.514 mL, 2.94 mmol) 및 DMSO (4 mL)를 합하고, 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 최소량의 메탄올 중에 용해시키고, 실리카 겔 칼럼 상에 로딩하고, 정제하여 (DCM 중 0-15% 암모니아 포화 메탄올) 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1R,4R)-4-(메틸카르바모일)-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.106 g, 0.271 mmol, 36.9 % 수율)를 백색 분말로서 수득하였다.
실시예 5: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(메틸아미노)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 히드로클로라이드
A. tert-부틸 (1R,4R)-4-(5-카르바모일-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)피리미딘-2-일아미노)시클로헥실(메틸)카르바메이트. 4-((1R,3S)-3-히드록시-시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.397 g, 1.264 mmol; 본원에 기재된 합성), tert-부틸 (1R,4R)-4-아미노시클로헥실-(메틸)카르바메이트 (0.577 g, 2.53 mmol), DIEA (0.883 mL, 5.05 mmol) 및 DMSO (4 mL)를 합하고, 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 최소량의 메탄올 중에 용해시키고, 실리카 겔 칼럼 상에 로딩하고, 정제하여 (DCM 중 0-15% 암모니아 포화 메탄올) tert-부틸 (1R,4r)-4-(5-카르바모일-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-2-일아미노)시클로헥실-(메틸)카르바메이트 (0.210 g, 0.455 mmol, 36 % 수율)를 백색 분말로서 수득하였다.
B. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1R,4R)-4-(메틸-아미노)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 히드로클로라이드. tert-부틸 (1R,4r)-4-(5-카르바모일-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-2-일아미노)-시클로헥실(메틸)카르바메이트 (0.150 g, 0.324 mmol)를 DCM (2 mL) 중에 용해시키고, TFA (2 mL, 26.9 mmol)를 적가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (5-40% 아세토니트릴/물, 20mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물을 상응하는 TFA-염으로서 수득하였다. 목적 화합물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 염화수소 (디옥산 중 4N; 3 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 감압 하에 농축시키고, 이 절차를 2회 반복하여 4-((1R,3S)-3-히드록시-시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(메틸아미노)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 히드로클로라이드 (0.063 g, 0.158 mmol, 48.7 % 수율)를 수득하였다.
실시예 6: 2-(4,4-디플루오로시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (478 mg, 1.521 mmol; 본원에 기재된 합성), 4,4-디플루오로시클로-헥산아민 히드로클로라이드 (522 mg, 3.04 mmol), DIEA (1.062 mL, 6.08 mmol) 및 DMSO (8 mL)를 둥근 바닥 플라스크 내에서 합하고, 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 진공 하에 응축시켰다. 조 물질을 100G SNAP 바이오타지 칼럼 (DCM 중 2-12% 암모니아 포화 메탄올)에 의해 정제하였다. 피크 분획을 합하고, 증발시켰다. 고진공 하에 건조시킨 후, 2-(4,4-디플루오로시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (325 mg, 0.880 mmol, 58%)를 미황색 분말로서의 수득하였다.
실시예 7: 4-((3S,5R)-5-히드록시테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((3R,5S)-5-히드록시-테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((3S,5S)-5-히드록시테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((3R,5R)-5-히드록시-테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
A. 6-히드록시-2H-피란-3(6H)-온. 푸란-2-일메탄올 (17.67 mL, 204 mmol)을 DCM (500 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시킨 후, 3-클로로퍼옥시벤조산 (68.5 g, 306 mmol)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응물을 천천히 6시간에 걸쳐 실온으로 가온되도록 하고, 그 시간 동안 고체 m-클로로벤조산은 용액으로부터 침전되었다. 용액을 -78℃로 15분 동안 냉각시키고, 고체를 여과하였다. 여과물을 응축시켜 황색 고체를 수득하였다. 조 물질을 340G SNAP 바이오타지 칼럼 (헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 피크 분획을 합하고, 증발시켜 6-히드록시-2H-피란-3(6H)-온 (15.8 g, 138 mmol, 67.9 % 수율)을 연황색 오일로서 수득하였다.
B. 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2H-피란-3(6H)-온. 6-히드록시-2H-피란-3(6H)-온 (9 g, 79 mmol)을 DCM (250 mL) 중에 용해시키고, 질소 분위기 하에 두고, -78℃로 냉각시켰다. 이어서, 2,6-루티딘 (13.78 mL, 118 mmol)을 한 번에 첨가한 다음, t-부틸디메틸실릴트리플루오로메탄술포네이트 (21.74 mL, 95 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응물을 4시간에 걸쳐 0℃로 천천히 가온되도록 하였다. 반응물을 물 ~20 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 용액은 켄칭에 따라 연황색으로 변하였다. 분리 깔때기로 옮긴 후, 유기 상을 10% 시트르산 및 염수로 연속적으로 세척하였다. 이어서, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켜 황색 오일을 수득하였다. 조 물질을 340G SNAP 바이오타지 칼럼 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2H-피란-3(6H)-온 (9.90 g, 43.4 mmol, 55.0 % 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
C. 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3,6-디히드로-2H-피란-3-올. 메탄올 (173 mL) 중 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2H-피란-3(6H)-온 (9.9 g, 43.4 mmol) 및 염화세륨(III) 7수화물 (16.15 g, 43.4 mmol)의 냉각된 (-20℃) 용액에 수소화붕소나트륨 (1.640 g, 43.4 mmol)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 첨가시 격렬한 버블링이 관찰되었다. 혼합물을 -20℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 아세톤 (~20 mL)으로 켄칭하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 대부분의 휘발성 용매를 증발시켰다. 염수를 첨가하고, 슬러리를 분리 깔때기로 옮겼다. 혼합물을 DCM (농후한 에멀젼 형성)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켜 조 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3,6-디히드로-2H-피란-3-올 (5.6 g, 24.31 mmol, 56.1 % 수율)을 황갈색 오일로서 수득하였다.
D. 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3,6-디히드로-2H-피란-3-일 아세테이트. DCM (200 mL) 중 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3,6-디히드로-2H-피란-3-올 (13.3 g, 57.7 mmol) 및 TEA (16.09 mL, 115 mmol)의 용액에 아세트산 무수물 (27.2 mL, 289 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 메탄올 (~3 mL)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반한 후, 물을 첨가하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 조 물질을 340G SNAP 바이오타지 칼럼 (헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3,6-디히드로-2H-피란-3-일 아세테이트 (13.6 g, 49.9 mmol, 86 % 수율)를 연황색 오일로서 수득하였다.
E. 3,6-디히드로-2H-피란-3-일 아세테이트. 6-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3,6-디히드로-2H-피란-3-일 아세테이트 (13.6 g, 49.9 mmol)를 DCM (250 mL) 중에 용해시키고, 질소 분위기 하에 놓고, -30℃ (드라이아이스/아세톤, 온도에 도달할 때까지)로 냉각시켰다. 이어서, 트리에틸실란 (15.95 mL, 100 mmol)을 시린지를 통해 천천히 첨가한 다음, 삼플루오린화붕소 에테레이트 (7.59 mL, 59.9 mmol)를 적가하였다. 반응물을 질소 하에 유지하고, 천천히 가온되도록 하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨의 첨가에 의해 켄칭하였다. 분리 깔때기에 옮긴 후, 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 조 물질을 340G SNAP 바이오타지 칼럼 (헥산 중 0-80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 깨끗한 분획을 증발시켜 3,6-디히드로-2H-피란-3-일 아세테이트 (5.5 g, 38.7 mmol, 77 % 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.
F. 3,6-디히드로-2H-피란-3-올. 메탄올 (130 mL) 중 3,6-디히드로-2H-피란-3-일 아세테이트 (5.5 g, 38.7 mmol)의 용액에 메탄올 중 25% 나트륨 메톡시드 10 방울을 첨가하였다. 용액을 실온에서 교반되도록 하였다. 30분 후, TLC (헥산 중 10% 에틸 아세테이트; 과망가니즈산염 염색)는 출발 물질 대 생성물의 ~1:1 비를 나타내었다. 메탄올 중 25% 나트륨 메톡시드 추가 10 방울을 첨가하였다. 30분 후, TLC는 생성물 대 출발 물질의 ~3:1 비를 나타내었다. 메탄올 중 25% 나트륨 메톡시드 추가 10 방울을 첨가하였다. 추가 30분 후, TLC는 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 앰버리스트(Amberlist) 15를 첨가하고, 교반을 15분 동안 계속한 후, 여과하였다. 용매를 증발시켜 3,6-디히드로-2H-피란-3-올 (3.8 g, 38.0 mmol, 98 % 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
G. 2H-피란-3(6H)-온. 3,6-디히드로-2H-피란-3-올 (2.44 g, 24.37 mmol)을 DCM (100 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시킨 후, 데스-마르틴(Dess-Martin) 퍼아이오디난 (10.34 g, 24.37 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온으로 5시간에 걸쳐 천천히 가온되도록 하였다. 이어서, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시킨 후, 조 물질을 100G SNAP 바이오타지 칼럼 (헥산 중 0-80% 에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 2H-피란-3(6H)-온 (2.33 g, 23.75 mmol, 97 % 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
H. 벤질 5-옥소테트라히드로-2H-피란-3-일카르바메이트. 2H-피란-3(6H)-온 (2.33 g, 23.75 mmol), 벤질 카르바메이트 (4.31 g, 28.5 mmol) 및 DCM (2.375 mL)을 작은 바이알에 첨가하고, 격렬히 교반하였다. 농후한 시럽에 질산비스무트(III) 5수화물 (1.728 g, 3.56 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 캡핑하고, 반응물을 밤새 격렬히 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 응축시키고, 100G SNAP 바이오타지 칼럼 (헥산 중 10-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 벤질 5-옥소테트라히드로-2H-피란-3-일카르바메이트 (4.35 g, 17.45 mmol, 73.5 % 수율)를 연황색 오일로서 수득하였다.
I. 벤질 5-히드록시테트라히드로-2H-피란-3-일카르바메이트. 벤질 5-옥소테트라히드로-2H-피란-3-일카르바메이트 (4.35 g, 17.45 mmol) 및 염화세륨(III) 7수화물 (6.50 g, 17.45 mmol)를 메탄올 (100 mL) 중에 용해시킨 후, 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 수소화붕소나트륨 (0.660 g, 17.45 mmol)을 천천히 첨가하였다. 격렬한 버블링이 관찰되었다. 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반되도록 한 후, 아세톤 (~3 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 실온에서 추가 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 증발 건조시켰다. 물질을 DCM와 물 사이에 분배하고, 수성 층을 DCM (5x)으로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켜 불순한 벤질 5-히드록시테트라히드로-2H-피란-3-일카르바메이트 (2.5 g, 9.95 mmol, 57.0 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
J. 5-아미노테트라히드로-2H-피란-3-올. 벤질 5-히드록시테트라히드로-2H-피란-3-일카르바메이트 (2.5 g, 9.95 mmol)를 DCM (20 mL) 및 메탄올 (20.00 mL) 중에 용해시킨 후, 촉매 (탄소상 10% 팔라듐)를 로딩하고, t-조인트로 캡핑하였다. 플라스크를 배기시키고, 수소 (3x)로 플러싱하고, 풍선으로 수소 분위기를 유지하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 물질이 모두 생성물로 전환되면 (LCMS에 의해 결정된 바와 같음), 반응물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, DCM 및 메탄올로 철저하게 세척하였다. 여과물을 응축시켜 조 5-아미노테트라히드로-2H-피란-3-올 (1.13 g, 9.65 mmol, 97 % 수율)을 황갈색 검으로서 수득하였다.
K. 에틸 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트. (1r,4r)-4-메톡시시클로헥산아민 (4.39 g, 34.0 mmol), 에틸 2-클로로-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (3.95 g, 16.98 mmol), DIEA (5.93 mL, 34.0 mmol) 및 1,4-디옥산 (100 mL)을 합하고, 80℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 응축시켰다. 조 물질을 바이오타지 (헥산 중 20-80% 에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 에틸 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (3.1 g, 9.53 mmol, 56 % 수율)를 연황색 고체로서 수득하였다.
L. 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 에틸 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (3.1 g, 9.53 mmol)를 에탄올 (60 mL) 중에 용해시킨 후, 실온에서 수성 수산화나트륨 용액 (2 M, 23.81 mL, 47.62 mmol)을 첨가하고 교반하였다. 30분 후, LCMS는 대부분 목적 생성물 질량을 나타내었다. 반응 혼합물을 포화 수성 시트르산 용액의 첨가에 의해 중화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 건조시켜 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실산 (2.76 g, 9.28 mmol, 97 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
M. 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (2.66 g, 8.94 mmol) 및 HATU (5.10 g, 13.42 mmol)를 DMF (35 mL) 중에 용해시키고, 5분 동안 실온에서 교반되도록 한 후, 염화암모늄 (2.392 g, 44.7 mmol) 및 DIEA (7.81 mL, 44.7 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 하였다. LCMS는 우세한 목적 생성물 질량을 나타내었고, 반응물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 1회 세척한 후, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 건조시킨 후, 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (2.54 g, 8.57 mmol, 96 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
N. 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (3 g, 10.12 mmol)를 NMP (30 mL) 중에 용해시켰다. 0℃에서, mCPBA (2.268 g, 10.12 mmol)를 이어서 조금씩 나누어 첨가하고, 반응물을 교반하면서, 반응 온도를 실온으로 천천히 상승시켰다. 30분 후, 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고, 10분 동안 교반하고, 생성된 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드를 NMP 중 투명한 미황색 용액 (~25mL)으로서 수득하였다. 이 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
O. 4-((3S,5R)-5-히드록시테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((3R,5S)-5-히드록시-테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((3S,5S)-5-히드록시테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((3R,5R)-5-히드록시-테트라히드로-2H-피란-3-일아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (25 mL) 중 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)-피리미딘-5-카르복스아미드 (3.1 g, 9.92 mmol)에 NMP (20 mL) 중 용액으로서 조 5-아미노테트라히드로-2H-피란-3-올 (1.15 g, 9.82 mmol)을 첨가하였다. 현탁액에 DIEA (8.57 mL, 49.1 mmol)를 첨가하고, 반응물을 100℃로 밤새 가열하였다. 대부분의 NMP를 70℃에서 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 DCM으로 희석하고, 340G SNAP 바이오타지 칼럼 (DCM 중 0-15% 메탄올, 2000 mL에 걸침) 상에서 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 물질 2.8 g (78%)을 수득하였으며, 이는 ~85% 순도였다. 물질을 DCM 중에 용해시키고, 340G SNAP 바이오타지 칼럼 (디클로로메탄 중 2-15% 암모니아 포화 메탄올) 상에서 재정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 4가지 생성물의 혼합물 (2종의 부분입체이성질체 및 그의 상응하는 거울상이성질체; 1.95 g)을 >99% 순도로 수득하였다. 조 물질을 AD-H 칼럼을 이용하는 키랄 SFC에 의해 분리하여 피크 1 내지 피크 4로 표지된 4가지 화합물을 수득하였으며, 피크 1은 제1 용리 화합물이고, 피크 4는 가장 마지막 용리 화합물이었다.
실시예 8: 4-(3-히드록시-3-메틸부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (2 mL) 중 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.200 g, 0.675 mmol; 본원에 기재된 합성)의 교반된 무색 용액에 mCPBA (0.151 g, 0.675 mmol)를 0℃에서 조금씩 나누어 첨가하였다. 이어서, LCMS에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료시까지 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.211 g, 100% 수율)를 백색 점착성 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 4-(3-히드록시-3-메틸부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-메톡시-시클로-헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (2 mL) 중 2-((1r,4r)-4-메톡시-시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.211 g, 0.675 mmol) 및 DIEA (0.236 mL, 1.351 mmol)의 용액에 실온에서 4-아미노-2-메틸부탄-2-올 (0.105 g, 1.013 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0% - 15% 암모니아 포화 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 4-(3-히드록시-3-메틸부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드 (0.143 g, 60.2 % 수율, 95.8% 순도)를 연황색 고체로서 수득하였다.
실시예 9: 4-((1R,2S)-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1S,2R)-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 에틸 4-(시스-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (85 mL) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트 (5.00 g, 21.49 mmol) 및 시스-(2-아미노시클로펜틸)-메탄올 (2.60 g, 22.56 mmol)의 교반 용액에 DIEA (5.61 mL, 32.2 mmol)를 첨가하고, 60℃로 2.5시간 동안 가열하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응물을 가열로부터 제거하고, 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (0-80% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 목적 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 에틸 4-(시스-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (6.4 g, 96 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
B. 4-(시스-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실산. 에탄올 (100 mL) 중 에틸 4-(시스-2-(히드록실-메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (6.4 g, 20.55 mmol)의 교반 용액에 실온에서 수성 수산화나트륨 용액 (1 M, 51.4 mL, 51.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 농축시키고, 물 (100 mL)로 희석한 다음, 교반하면서 수성 시트르산 용액 (2 M, 51.4 mL, 103 mmol)으로 중화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 물 (2 x 50 mL)로 세척하고, 건조시켜 4-(시스-2-(히드록시메틸)-시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (5.6 g, 96 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. 4-(시스-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드. 4-(시스-2-(히드록시메틸)-시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (5.6 g, 19.76 mmol) 및 HATU (11.27 g, 29.60 mmol)의 백색 현탁액을 DMF (79 mL) 중에 용해시키고, 5분 동안 실온에서 교반한 후, 염화암모늄 (5.29 g, 99 mmol) 및 DIEA (17.26 mL, 99 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 물 (200 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류 DMF를 200 mL 물 및 200 mL 헥산 중에 백색 현탁액을 현탁시킴으로써 제거하였다. 2상 혼합물을 30분 동안 격렬히 교반하고, 여과하고, 헥산으로 세척하여 4-(시스-2-(히드록실-메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (4.50 g, 81 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
D. 4-(시스-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. DCM (62 mL) 및 아세톤 (62 mL) 중 4-(시스-2-(히드록시메틸)-시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (3.5 g, 12.40 mmol)의 교반 현탁액에 mCPBA (5.56 g, 24.79 mmol)를 첨가하고, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 10% 수성 티오황산나트륨 용액 75 mL의 첨가에 의해 켄칭하고, 5분 동안 교반한 후, 대부분의 휘발성 용매를 증발시켰다. 물질을 에틸 아세테이트 (200 mL)와 물 (200 mL) 사이에 분배하고, 합한 유기 층을 포화 중탄산나트륨 용액 및 이어서 염수로 세척하였다. 이어서, 합한 수성 층을 에틸 아세테이트 (3x)로 세척하고, 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 고진공 하에 건조시킨 후, 4-(시스-2-(히드록시메틸)시클로펜틸-아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (1.2 g, 3.82 mmol, 30.8 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
E. 4-((1R,2S)-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1S,2R)-2-(히드록시메틸)-시클로펜틸아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 디옥산 (40 mL) 중 4-(시스-2-(히드록시메틸)시클로펜틸아미노)-2-(메틸-술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (1.2 g, 3.82 mmol) 및 (1r,4r)-4-메톡시시클로-헥산아민 히드로클로라이드 (1.90 g, 11.46 mmol)의 교반 현탁액에 DIEA (4 mL, 22.92 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 100℃에서 48시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0% - 15% 암모니아 포화 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물 분획은 불순하였고, 목적 생성물을 침전시키고, DCM, 메탄올 및 물을 사용하여 합한 분획으로부터 여과하여 2종의 거울상이성질체의 혼합물로서의 표제 화합물 (0.420 g, 30.3 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 조 물질을 AD-H 칼럼을 사용하는 키랄 SFC에 의해 분리하여, 피크 1 및 피크 2로 표지된 2가지 화합물을 수득하였으며, 여기서 피크 1은 제1 용리 화합물이고, 피크 2는 제2 용리 화합물이었다.
실시예 10: 4-((1R,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. (1S,3R)-3-(디벤질아미노)시클로헥산올. 에탄올 (100 mL) 중 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (5 g, 43.4 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15: 2051-2056 (2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨) 및 중탄산나트륨 (12.03 g,143 mmol)의 현탁액에 실온에서 (클로로메틸)벤젠 (15.01 mL, 130 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 밤새 가열하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 DCM (250 mL) 중에 용해시키고, 수성 수산화나트륨 용액 (1 N, 2 x 100 mL) 및 염수 (1x 100 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0% - 80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)시클로헥산올 (11.70g, 91%)을 농후한 황색 오일로서 수득하였다.
B. (R)-3-(디벤질아미노)시클로헥사논. 옥살릴 클로라이드 (2.70 mL, 30.9 mmol)를 건조 DCM (150 mL) 중에 용해시키고, -78℃로 냉각시켰다. 건조 DCM (20 mL) 중 DMSO (4.78 mL, 67.3 mmol)를 반응 혼합물에 적가하고, 반응물을 -78℃에서 15분 동안 교반하였다. 다음에, 건조 DCM (100 mL) 중 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)시클로헥산올 (8.287 g, 28.1 mmol)을 첨가 깔때기를 사용하여 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, TEA (19.55 mL, 140 mmol)를 첨가하고, 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 드라이아이스 조를 제거하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 염수 (100 mL)로 세척하고, 유기 층을 분리하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 디에틸 에테르를 잔류물에 천천히 첨가하면 불순물이 침전되었고, 이를 여과로 분리하였다. 디에틸 에테르를 여과물에 첨가함에 따라, (R)-3-(디벤질아미노)시클로헥사논 (6.05g, 74%)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 여과에 의해 수집하고, 건조시켰다.
C. (3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올. 건조 디에틸 에테르 (300 mL) 중 (R)-3-(디벤질아미노)시클로헥사논 (5.697g, 19.42 mmol)의 투명한 무색 용액에 3 M 메틸마그네슘 브로마이드의 용액 (8.09 mL, 24.27 mmol)을 0℃에서 천천히 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반한 다음, 빙조를 제거하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 흐린 용액을 염화암모늄의 포화 수용액 (250 mL)에 천천히 부었다. 에테르 층을 분리하고, 수성 층을 에테르 (250 mL)로 재추출하였다. 합한 에테르 층을 황산마그네슘 상에 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0% - 80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올 (이성질체 1 및 이성질체 2)의 2종의 부분입체이성질체 이성질체를 수득하였다. 이성질체 1 (2.704g, 45%)을 백색 고체로서 및 이성질체 2 (1.866g, 31%)를 무색 오일로서 수득하였으며, 이들은 여전히 소량의 불순물을 함유하였다. 이성질체 2를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
D. (3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올. 에탄올 (50 mL) 중 이성질체 1 (2.704 g, 8.74 mmol)의 용액을 탄소 상 수산화팔라듐으로 처리하고, 수소 기체로 채운 풍선 하에 밤새 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 (3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올의 하나의 부분입체이성질체적 이성질체 (이성질체 3, 0.856g, 76%)를 농후한 황색 오일로서 수득하였다.
에탄올 (25 mL) 중 이성질체 2 (1.823 g, 5.89 mmol)를 사용하는 상기 기재된 바와 동일한 절차를 이용하여 소량의 불순물을 함유하는 (3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올의 또 다른 부분입체이성질체적 이성질체 (이성질체 4, 0.162 g, 21%)로 접근하였다. 이성질체 4를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
E. 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (2 mL) 중 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.250 g, 0.843 mmol; 본원에 기재된 합성)의 교반 무색 용액에 mCPBA (0.189 g, 0.843 mmol)를 0℃에서 조금씩 나누어 첨가하였다. 이어서, LCMS에 의해 나타난 바와 같은 반응의 완료시까지, 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.263 g, 100% 수율)를 백색 점착성 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
F. 4-((1R,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (3 mL) 중 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.263 g, 0.842 mmol) 및 DIEA (0.294 mL, 1.684 mmol)의 용액에 실온에서 이성질체 3 (0.163 g, 1.263 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0% - 20% 암모니아 포화 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 4-((1R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로-헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드의 하나의 부분입체이성질체 이성질체 (이성질체 5, 0.265 g, 83 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
NMP (3 mL) 중 이성질체 4 (0.163 g, 1.263 mmol), 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.263 g, 0.842 mmol) 및 DIEA (0.294 mL, 1.684 mmol)를 사용하여 상기 기재된 바와 동일한 절차를 이용하여 백색 고체로서의 4-((1R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드의 또 다른 부분입체이성질체 이성질체 (이성질체 6, 0.043 g, 14 % 수율)로 접근하였다.
개별 이성질체의 입체화학은 (1S,3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올 (본원에 기재된 바와 같이 제조됨)을 사용하는 합성을 반복한 후에 결정될 수 있고, 이는 이성질체 6, 즉 4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드를 제공하였다. 따라서, 이성질체 5는 4-((1R,3R)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드이다.
실시예 11: 2-((1r,4R)-4-아세트아미도시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. tert-부틸 (1r,4r)-4-아세트아미도시클로헥실카르바메이트. 에틸 아세테이트 (30 mL) 중 tert-부틸 (1r,4r)-4-아미노시클로헥실카르바메이트 (1.0 g, 4.67 mmol)의 교반 용액에 아세트산 무수물 (0.485 mL, 5.13 mmol)을 한 번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 추가의 아세트산 무수물 (0.162 mL, 1.71 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 추가 50 mL로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액 및 포화 수성 염화나트륨 용액 각각 50 mL로 세척하였다. 수성 층을 합하고, 50 mL 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (1r,4r)-4-아세트아미도시클로헥실카르바메이트 (1.04 g, 4.06 mmol, 87 % 수율)를 고체로서 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
B. N-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)아세트아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트. DCM (25 mL) 중 tert-부틸 (1r,4r)-4-아세트아미도시클로헥실카르바메이트 (1.04 g, 4.06 mmol)의 교반 용액에 TFA (25 mL)를 한 번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 디에틸 에테르로 연화처리하여 고체를 수득하였으며, 이를 여과하고, 추가의 디에틸 에테르로 헹군 다음, 진공 하에 건조시켜 N-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)아세트아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (1.07 g, 3.96 mmol, 98 % 수율)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
C. 2-((1r,4R)-4-아세트아미도시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (3 mL) 중 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (190 mg, 0.604 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 N-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)-아세트아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (245 mg, 0.907 mmol)의 교반 용액에 DIEA (0.317 mL, 1.813 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-15% 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 2-((1r,4R)-4-아세트아미도시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (102 mg, 0.261 mmol, 43.2 % 수율)를 고체로서 수득하였다.
실시예 12A: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시-시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로-헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1S,3R)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드
A. tert-부틸 3-옥소시클로헵틸카르바메이트. DCM (245 mL) 중 시클로헵트-2-에논 (26.96 g, 245.0 mmol) 및 tert-부틸 카르바메이트 (28.7 g, 245 mmol)의 교반 혼합물에 질산비스무트 5수화물 (22.79 g, 47.0 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 (500 mL) 및 물 (300 mL)로 희석하고, 2상 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하였다. 셀라이트 층을 에틸 아세테이트 및 물로 잘 세척하고, 여과물 층을 분리하였다. 유기 층을 오일로 농축시키고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 농축시켜 표제 화합물 (31.09 g, 137 mmol, 55.9 % 수율)을 수득하였다.
B. tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트, tert-부틸 (1R,3R)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트, tert-부틸 (1S,3S)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트, tert-부틸 (1S,3R)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트. 메탄올 (454 mL) 중 tert-부틸 3-옥소시클로헵틸-카르바메이트 (31.09 g, 137 mmol)의 용액에 수소화붕소나트륨 (15.52 g, 410 mmol)을 ~ 10분에 걸쳐 혼합하면서 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 물 (200 mL)로 희석하였다. 메탄올을 진공 하에 제거하고, 생성된 수성 혼합물을 500 mL 에틸 아세테이트 및 100 mL 포화 수성 중탄산나트륨으로 추가 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 2 x 1000 mL 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시키고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 농축시켜 tert-부틸 3-히드록시시클로헵틸카르바메이트 (21.1 g, 92 mmol, 67.3 % 수율)를 수득하였다.
상기 2개 반응을 반복하여 시클로헵트-2-에논 9.52 g으로 출발하여 tert-부틸 3-히드록시시클로헵틸카르바메이트 9.27 g을 수득하였다. 이어서, tert-부틸 3-히드록시시클로헵틸카르바메이트의 2개 배치를 합하였다. 합한 물질 29.2 g을 일련의 3개의 별개 칼럼 상에서 다중 주사를 이용하는 정제용 키랄 SFC에 의해 4종의 구성성분 입체이성질체 (2종의 부분입체이성질체 및 그의 상응하는 거울상이성질체)로 분리하였다. 제1 칼럼: 키랄팩(ChiralPak) IC-H, 250x30 mm I.D., CO2 중 등용매 15% 에탄올, 38℃. 제2 칼럼: 키랄셀(ChiralCel) OJ-H, 250x30 mm I.D., CO2 중 등용매 10% 이소프로판올, 38℃. 제3 칼럼: 키랄팩 AD-H, 250x50 mm I.D., CO2 중 등용매 20% 이소프로판올, 38℃. 분리된 이성질체를 분석 규모 페노메넥스 룩스(Lux) 아밀로스-2 칼럼, 250x4.6 mm I.D., CO2 중 등용매 15% 에탄올 (10분 실행 시간) 상에서 특성화하고, 중간체 1 내지 중간체 4로서 표지하였다.
중간체 1: 5.4 g (23.55 mmol, 18.5 % 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 4.065분.
중간체 2: 5.5 g (23.98 mmol, 18.8 % 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 3.019분.
중간체 3: 7.2 g (31.34 mmol, 24.6 % 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 3.675분.
중간체 4: 4.7 g (20.50 mmol, 16.1 % 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 3.263분.
C. (1S,3R)-3-아미노시클로헵탄올, (1R,3R)-3-아미노시클로헵탄올, (1S,3S)-3-아미노시클로헵탄올, (1R,3S)-3-아미노시클로헵탄올. 단계 B로부터의 중간체 1 내지 중간체 4에 상응하는 각각의 물질 75 mg (0.327 mmol)을 DCM (11.25 mL) 및 TFA (3.75 mL) 중에 개별적으로 용해시켰다. 각각의 반응물을 주위 온도에서 밤새 교반되도록 하였다. 각각의 반응 용매를 진공 하에 제거한 다음, 각각을 디옥산 중 4N 염산 (5 mL) 및 메탄올 (5 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 각각의 반응물을 밤새 주위 온도에서 혼합하였다. 각각의 4가지 반응 혼합물 (각각 개별 3-아미노시클로헵탄올 이성질체를 함유함)을 감압 하에 농축시키고, 추가 정제 없이 사용하였다. 각각에 대해 
. 중간체 1 내지 중간체 4의 명명법은 추적 목적을 위해 유지하였다.
D. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1S,3R)-3-히드록시시클로헵틸-아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 단계 C로부터의 각각의 농축물 (중간체 1 내지 중간체 4)에 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (53.7 mg,.1635 mmol), NMP (2 mL) 및 DIEA (0.286 mL, 1.635 mmol)를 첨가하였다. 생성된 4가지 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 개별적으로 응축시키고, 생성물을 역상 정제용 HPLC (물 중 5-80% 아세토니트릴 + 0.1% 트리플루오로아세트산 + 0.1% 트리플루오로아세트산, 30분에 걸침)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 개별적으로 재용해시키고, TFA 제거 (0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스(Varian StratoSpheres) HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 피크 1 내지 피크 4로서 수득하였다. 개별 이성질체 (피크 1 내지 피크 4)를 분석 규모 키랄팩 AD-H 칼럼, 250 x 4.6 mm I.D., CO2 중 등용매 40% 메탄올 + 0.1% 디에틸아민 (10분 실행 시간) 상에서 특성화하였다.
상기 제시된 1H NMR 데이타에서, 피크 1 및 피크 3에서 ~ 4.2 ppm에 있는 양성자의 화학적 이동 대 피크 2 및 4에서 ~ 3.94 ppm에 있는 양성자의 화학적 이동, 및 또한 피크 1 및 피크 3에서 ~ 9.02 ppm에 있는 양성자의 화학적 이동 대 피크 2 및 4에서 ~ 8.95 ppm에 있는 양성자의 화학적 이동으로부터, 하기 배열이 만들어졌다. 피크 1 및 피크 3은 거울상이성질체이다. 피크 2 및 피크 4는 거울상이성질체이다.
대안적으로, 하기 기재된 키랄 합성 경로를 이용하였다.
실시예 12B: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 시클로헵트-2-에놀. 메탄올 (45.5 mL) 중 시클로헵트-2-에논 (10 g, 91 mmol) 및 염화세륨(III) 7수화물 (33.8 g, 91 mmol)의 용액에 수소화붕소나트륨 (3.43 g, 91 mmol)을 수조 중에서 냉각시키면서 10분 기간에 걸쳐 조금씩 나누어 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (45 mL)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, 펜탄 (4 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (8.30 g, 74.0 mmol, 82 % 수율)을 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 시클로헵트-2-에닐 메틸 카르보네이트. DCM (227 ml) 및 피리딘 (35.9 ml, 444 mmol) 중 시클로헵트-2-에놀 (8.3 g, 74.0 mmol)의 용액에 T < 10℃인 이러한 속도로 빙조에서 냉각시키면서 메틸 클로로포르메이트 (14.24 ml, 185 mmol)를 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 반응물을 혼합하고, 주위 온도로 밤새 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 2 x 150 mL 1N 수성 염산으로 세척하였다. 합한 세척물을 100 mL DCM으로 역추출하였다. 이어서, 합한 DCM 층을 수성 포화 중탄산나트륨 용액 150 mL로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (11.95 g, 70.2 mmol, 95 % 수율)을 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
C. (R)-2-(시클로헵트-2-에닐)이소인돌린-1,3-디온. 프탈이미드 칼륨 염 (19.59 g, 106 mmol), 알릴팔라듐 클로라이드 이량체 (0.477 g, 1.322 mmol), (1S,2S)-(-)-1,2-디아미노시클로헥산-N,N'-비스(2'-디페닐포스피노벤조일) (2.74 g, 3.97 mmol), 테트라헥실암모늄 브로마이드 (50.6 g, 116 mmol) 및 DCM (212 mL)을 둥근 바닥 플라스크 내에서 합하였다. 플라스크를 질소로 플러싱한 다음, 초음파처리 조에 10분 동안 두었다. 이어서, 시클로헵트-2-에닐 메틸 카르보네이트 (9.00 g, 52.9 mmol)를 플라스크에 한번에 첨가하고, 생성된 혼합물을 주위 온도에서 질소 분위기 하에 밤새 교반하였다. 반응물을 50 mL 물의 첨가에 의해 켄칭한 다음, 3 x 100 mL 디에틸 에테르로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시키고, 이는 밤새 천천히 고체화되었다. 고체를 메탄올 (50 mL)로 연화처리하고, 여과하여 조 생성물 7.6 g을 수득하였다. 조 고체 생성물을 메탄올로부터 재결정화하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (6.70 g, 27.8 mmol, 52.5 % 수율)을 고체로서 수득하였으며, 이는 분석용 키랄 SFC 크로마토그래피 (페노메넥스 룩스 셀룰로스-4, 250 x 4.6 mm I.D., CO2 중 5-50 % 이소프로판올, 13분 구배)에 의해 97.2의 % e.e. (S 이성질체는 (1R,2R)-(-)-1,2-디아미노시클로헥산-N,N'-비스(2'-디페닐포스피노벤조일) 리간드를 사용하여 표준과 유사하게 제조됨)를 갖는 것으로 결정되었다.
D. 2-((1R,2S,3S)-2-브로모-3-히드록시시클로헵틸)이소인돌린-1,3-디온. 클로로포름 (40.0 ml) 및 에탄올 (1.400 mL) 중 (R)-2-(시클로헵트-2-에닐)이소인돌린-1,3-디온 (4.00 g, 16.58 mmol)의 용액에 고체로서의 N-브로모숙신이미드 (3.78 g, 21.22 mmol)를 실온에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 추가 부분의 N-브로모숙신이미드 (1.9 g)에 이어서 에탄올 1.4 mL를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 질소 분위기 하에 계속 교반되도록 하였다. 제3 부분의 N-브로모숙신이미드 (1.0 g) 및 추가 1.4 mL의 에탄올을 혼합물에 첨가하고, 이것을 실온에서 제3일 밤 동안 질소 분위기 하에 다시 혼합하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 새로운 클로로포름 25 mL로 연화처리하였다. 고체를 여과하고, 클로로포름으로 헹구고, 여과물을 감압 하에 농축 건조시켰다. THF (40 mL) 및 1N 염산 (수성) (10 mL)을 농축 여과물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 용액을 감압 하에 농축시켜 THF를 제거하였다. 농축물을 에틸 아세테이트 125 mL 및 물:포화 수성 중탄산나트륨의 1:1 혼합물 75 mL로 희석하였다. 층을 분리하고, 수층을 에틸 아세테이트 75 mL로 역추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 고체로서의 표제 화합물 (3.9 g, 11.53 mmol, 69.6 % 수율)로 농축시켰다.
COSY NMR 실험 및 상기 보고된 1H NMR 데이터를 이용하여 브로모히드린 위치화학을 확인하였다. NOE (NOESY 실험을 통함)가 아미노 기 탄소 상의 양성자와 히드록실 기 탄소 사이에서 관찰되었다. 이것은 이들 2개의 관능기 사이의 시스 관계를 입증하였다 (트랜스 관계는 이러한 공간적 근접성이 없으므로 이러한 효과를 나타내지 않을 것임).
E. 2-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸)이소인돌린-1,3-디온. 톨루엔 (69 mL) 및 메탄올 (6.9 mL) 중 2-((1R,2S,3S)-2-브로모-3-히드록시시클로헵틸)이소인돌린-1,3-디온 (4.2 g, 12.42 mmol)의 용액에 트리부틸주석 히드라이드 (4.34 mL, 16.14 mmol)를 시린지를 통해 10분에 걸쳐 질소 하에 첨가한 다음, 2,2'-아조비스(2-메틸프로판니트릴) (0.204 g, 1.242 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 이어서, 반응물을 질소 분위기 하에 밤새 환류로 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축 건조시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (2.6 g, 10.03 mmol, 81 % 수율)을 고체로서 수득하였다.
E. (1S,3R)-3-아미노시클로헵탄올. 2-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸)-이소인돌린-1,3-디온 (1800 mg, 6.94 mmol)을 메탄올 (86.80 mL) 중에 용해시켰다. 히드라진 1수화물 (0.354 mL, 7.29 mmol)을 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 환류 하에 밤새 교반하였다. 히드라진 추가 0.2 당량 (0.067 mL)을 첨가하고, 혼합물을 제2 밤 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 약간의 밀리리터의 부피로 농축시키고, 여과하였다. 고체를 DCM 및 클로로포름 각각 50 mL로 헹구고, 생성된 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (174 mg, 1.347 mmol, 19.40 % 수율)을 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
F. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. (1S,3R)-3-아미노시클로헵탄올 (87 mg, 0.672 mmol) 및 DIEA (0.235 mL, 1.344 mmol)를 NMP (1 mL) 중 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실-아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (105 mg, 0.336 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃로 4시간 동안 가열한 다음, 밤새 주위 온도로 냉각되도록 하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 응축시키고, 잔류물을 역상 정제용 HPLC (물 중 5-80% 아세토니트릴 + 0.1% TFA + 0.1% TFA, 30분에 걸침)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시키고, TFA 제거 (0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴로 연화처리하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (67 mg, 0.177 mmol, 52.8 % 수율)을 고체로서 수득하였다.
키랄팩 AD-H 칼럼 (250 x 4.6 mm I.D., CO2 중 등용매 40% 메탄올 + 0.1% 디에틸아민, 10분 실행 시간)을 이용하는 분석용 키랄 SFC를 이용하여 이 키랄 경로에서 수득된 단일 이성질체와 모든 4종의 입체이성질체의 상기 제조의 이성질체 간의 관계를 확립하였다. 이 키랄 경로에서 제조된 물질은 실시예 12A에서의 피크 2와 동일한 체류 시간 (3.848분)을 갖는 것으로 밝혀졌으며, 따라서:
피크 2 = 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
1H NMR에 근거하여, 피크 2 및 피크 4는 실시예 12A에서의 거울상이성질체 쌍인 것으로 밝혀졌으며, 따라서:
피크 4 = 4-((1S,3R)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
또한, 그 후에 실시예 12A에서 피크 2를 만드는데 사용된 중간체 2는 이어서 tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트로서 배정될 수 있고, 실시예 12A에서 피크 4를 만드는데 사용된 중간체 4는 이어서 tert-부틸 (1S,3R)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트로서 배정될 수 있다.
실시예 12A에서 중간체 1 및 중간체 3의 절대 입체화학 (및 이에 따른 피크 1 및 피크 3의 절대 입체화학)을 확인하기 위해 하기 실험을 수행하였다.
tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트를 수득하기 위한 tert-부틸 (1R,3R)-3-히드록시시클로헵틸-카르바메이트의 미츠노부(Mitsunobu) 반응.
A. tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트. 실시예 12A에서 단계 B로부터의 중간체 3을 THF (31.700 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 빙조에서 질소 분위기 하에 0℃로 냉각시키고, 클로로아세트산 (261 mg, 2.76 mmol)에 이어서 트리페닐포스핀 (723 mg, 2.76 mmol)을 둘 다 한 번에 첨가하였다. 디에틸 아조디카르복실레이트 용액 (0.437 mL, 2.76 mmol)을 황색이 사라질 때까지 기다리면서 적가한 후에, 다음 방울을 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 용액을 질소 분위기 하에 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 오일을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시킨 다음, 메탄올 (16 mL) 중에 재용해시켰다. 탄산나트륨 (186 mg, 1.755 mmol)을 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 물:포화 수성 중탄산나트륨의 1:1 혼합물 50 mL 및 DCM 75 mL로 희석하였다. 층을 분리하고, 수층을 50 mL DCM으로 역추출하였다. 합한 DCM 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜, 분석용 SFC에 의해 실시예 12A에서 단계 B로부터의 중간체 2와 동일한 체류 시간을 갖는 물질, 또는 tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트 (417 mg, 1.818 mmol, 72.5 % 수율)를 고체로서 수득하였다.
따라서 실시예 12A에서 단계 B로부터의 중간체 3은 tert-부틸 (1R,3R)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트로서 배정된다. 실시예 12A에서 중간체 3으로부터 유래된 단계 D로부터의 피크 3은 따라서 4-((1R,3R)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정된다.
피크 1 및 피크 3이 실시예 12A에 기재된 바와 같은 1H NMR에 의해 거울상이성질체이기 때문에, 피크 1은 4-((1S,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정될 수 있다. 그 후, 실시예 12A의 단계 D에서 피크 1을 제조하기 위해 사용되는 실시예 12A에서 단계 B로부터의 중간체 1은 tert-부틸 (1S,3S)-3-히드록시시클로헵틸카르바메이트로서 배정될 수 있다.
실시예 13: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시) 시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1s,4S)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로-에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로-헥실아미노)-2-((1s,4S)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (6.964 mL) 중 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (440 mg, 1.400 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 비스-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)-시클로헥산아민 트리히드로클로라이드 (529 mg, 2.099 mmol)의 교반 용액에 DIEA (0.978 mL, 5.60 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반되도록 하였다. 조 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (0-10% 메탄올/디클로로메탄)에 의해 정제한 다음, 역상 실리카 겔 크로마토그래피 (메탄올/물, 0.1% 포름산 개질제 함유)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 중화시키고, 농축시켜 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (135 mg, 0.313 mmol, 22.36 % 수율)를 2종의 입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다. 
이 혼합물을 키랄 초-유체 크로마토그래피 (AD-H 칼럼)을 이용하여 분리하여 87.8 mg (0.203 mmol)의 단일, 보다 빠른 용리 입체이성질체 (피크 1) 및 24.2 mg (0.056 mmol)의 제2 단일, 보다 느린 용리 입체이성질체 (피크 2)를 수득하였다.
후속적으로 동일한 반응 순서를 (1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥산아민을 사용하여 반복하였고, 다음과 같이 제조하였다.
(1r,4r)-4-(벤질아미노)시클로헥산올. 메탄올 (2 L) 중 (1r,4r)-4-아미노-시클로헥산올 (230 g, 2 mol), 벤즈알데히드 (212 g, 2 mol) 및 4Å 분자체의 혼합물을 질소 분위기 하에 3시간 동안 환류하였다. 혼합물을 빙수조를 이용하여 냉각시키고, 수소화붕소나트륨 (72 g, 2 mol)을 소량씩 조심스럽게 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 디클로로메탄 (2 L)과 물 (1 L) 사이에 분배하였다. 디클로로메탄 층을 분리하고, 포화 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 후속 단계에 직접 사용하였다.
벤질 벤질((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)카르바메이트. 이전 단계에서 수득된 (1r,4r)-4-(벤질아미노)시클로헥산의 디클로로메탄 용액에 포화 수성 중탄산나트륨 (1.5 L)을 첨가하고, 이 2상 시스템에 벤질 클로로포르메이트 (358.2 g, 2.1 mol)를 0℃에서 천천히 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응물을 실온에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 유기 상을 분리하고, 증발시켰다. 농축 후, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (400 g, 1.18 mol, 59% 수율, 2 단계)을 무색 액체로서 수득하였다. 단계 둘 다를 반복하여 벤질 벤질((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)카르바메이트 전체 800 g을 수득하였다.
벤질 벤질((1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실)카르바메이트. 클로로포름 (2 L) 중 벤질 벤질((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)카르바메이트 (400 g, 1.18 mol)의 용액에 플루오로붕산 50% 수용액 (20 mL) 및 디아조트리플루오로에탄의 스트림 (트리플루오로에탄아민 히드로클로라이드 (1.6 kg, 11.8 mol) 및 NaNO2 (814 g, 11.8 mol)를 물 (3 L) 중에 혼합한 다음, 이를 상기 반응 용액 내로 버블링시킴으로써 새로 제조됨)을 첨가하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하고, 완료 후, 탄산칼륨의 포화 수용액 (300 mL)을 첨가하였다. 클로로포름 층을 분리하고, 감압 하에 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 벤질 벤질 ((1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실)카르바메이트 (192 g, 0.456 mol, 38% 수율)를 수득하였다. 이 반응을 반복하고, 또 다른 배치의 벤질 벤질 ((1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실)카르바메이트 (185 g, 0.439 mol)를 수득하였다.
(1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥산아민. 에틸 아세테이트 (2 L) 중 벤질 벤질((1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실)카르바메이트 (377 g, 0.89 mol)의 용액에 탄소 상 20% 수산화팔라듐 (50 g)을 첨가하고, 혼합물을 55 psi 수소 분위기 하에 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 2N 염산 (1.5 L) 중에 용해시키고, 용액을 메틸 t-부틸 에테르 (300 mL x 5)로 세척하였다. 고체 탄산칼륨을 첨가하여 pH를 10 초과로 조정하였다. 생성물을 디클로로메탄 (500 mL x 5)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 10-30% 메탄올)에 의해 정제하여 (1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥산아민 (115 g, 0.584 mol, 66% 수율)을 수득하였다.
상기 중간체를 사용하여, 피크 1로서 수득된 물질은 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드에 상응하는 한편, 피크 2로서 수득된 물질은 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1s,4S)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드에 상응함을 나타내었다.
피크 1: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
피크 2: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1s,4S)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
실시예 14: 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 메틸 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복실레이트. THF (85 mL) 중 메틸 2,4-디클로로피리미딘-5-카르복실레이트 (4.00 g, 19.32 mmol)의 교반 용액에 DIEA (3.37 mL, 19.32 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이아이스/아세톤 조에서 -78℃로 냉각시켰다. 40 mL THF 중 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (2.448 g, 21.25 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056(2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨)의 용액을 온도가 -78℃에서 유지되도록 하는 이러한 속도로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 에틸 아세테이트 200 mL 및 물 및 수성 포화 중탄산나트륨 용액의 1:1 혼합물 75 mL로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 100 mL 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 포화 수성 염화나트륨 용액 50 mL로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시켰으며, 이는 정치시 고체화되었다. 고체를 디에틸 에테르 (5 mL)로 연화처리하고, 여과하고, 디에틸 에테르 (5 mL)로 헹구고, 진공 하에 건조시켜 메틸 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복실레이트 (3.7 g, 12.95 mmol, 67% 수율)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
B. (1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥산올. 트랜스-4-아미노시클로헥산올 히드로클로라이드 (25 g, 217 mmol)를 아세토니트릴 (500 mL) 중에 현탁시켰다. 벤질 브로마이드 (54.2 mL, 456 mmol) 및 탄산칼륨 (120 g, 868 mmol)을 현탁액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 격렬히 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 플러그를 통해 여과하고, 플러그를 아세토니트릴로 완전히 세척하였다. 여과물을 응축시켜 백색 고체를 수득하였다. 조 고체를 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 (1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥산올 (25 g, 85 mmol, 39.0 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. (1r,4r)-N,N-디벤질-4-(디플루오로메톡시)시클로헥산아민. (1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥산올 (5 g, 16.93 mmol) 및 아이오딘화구리(I) (0.645 g, 3.39 mmol)을 170 mL 아세토니트릴 중에 용해시키고, 질소 분위기 하에 45℃로 가열하였다. 이 혼합물에 30 mL 아세토니트릴 중 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세트산 (3.50 mL, 33.9 mmol)의 용액을 10분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 혼합물을 질소 분위기 하에 45℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 30 mL 아세토니트릴 중 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세트산 (2.86 mL, 27.7 mmol) 시약의 추가의 부분을 10분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 45℃에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 휘발성 성분을 증발을 통해 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 175 mL 및 물 및 포화 수성 중탄산나트륨의 1:1 혼합물 75 mL로 희석하였다. 고체를 함유하는 생성된 2상 혼합물을 소결 유리 부흐너(Buchner) 깔때기를 통해 여과하였다. 여과물 층을 분리하고, 수성 층을 50 mL 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 포화 염화나트륨 및 물의 1:1 혼합물 50 mL로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시켰다. 조 오일을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 (1r,4r)-N,N-디벤질-4-(디플루오로메톡시)시클로헥산아민 (3.12 g, 9.03 mmol, 53.4 % 수율)을 오일로서 수득하였으며, 이는 회백색 고체로 고체화되었다.
D. (1r,4r)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥산아민. (1r,4r)-N,N-디벤질-4-](디플루오로메톡시)시클로헥산아민 (1.6 g, 4.63 mmol)을 파르 진탕기 플라스크 내에서 에탄올 (23 mL) 중에 용해시키고, 탄소 상 20 wt% 수산화팔라듐 (0.650 g, 0.926 mmol)을 첨가하였다. 용기를 배기시키고, 파르 진탕기 장치에 넣고, 50 psi 수소 분위기 하에 밤새 진탕시켰다. 수산화팔라듐을 미리-습윤화된 (에탄올로) 셀라이트 층을 통해 여과 제거하였다. 필터 케이크를 에탄올로 잘 헹구었다. 여과물을 오일로 농축시키고, 이를 100 mL 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 고체화되는 오일로 농축시켜, (1r,4r)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥산아민 (0.621 g, 3.76 mmol, 81 % 수율)을 수득하였다.
E. 메틸 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3 히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복실레이트. DMSO (5mL) 중 메틸 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복실레이트 (300 mg, 1.050 mmol) 및 (1r,4r)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥산아민 (260 mg, 1.575 mmol)의 교반 혼합물에 DIEA (0.550 mL, 3.15 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 메틸 2-((1r,4R)-4-(디플루오로-메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복실레이트 (165 mg, 0.398 mmol, 37.9 % 수율)를 수득하였다.
F. 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3 히드록시시클로헥실아미노) 피리미딘-5-카르복실산. 메탄올 (10 mL) 중 메틸 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로-헥실아미노)-피리미딘-5-카르복실레이트 (170 mg, 0.410 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨의 수용액 (1 M, 3.075 mL, 3.075 mmol)을 한 번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2일 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 메탄올을 제거하고, 추가의 물 (10 mL)로 희석하고, 시트르산의 수용액 (2 M, 4.10 mL, 8.20 mmol)을 천천히 첨가하였다. 생성된 침전물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 여과한 다음, 고체를 물로 잘 세척하였다. 고체를 진공 하에 건조시켜 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복실산 (117 mg, 0.292 mmol, 71.2 % 수율)을 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
G. 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (2 mL) 중 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복실산 (117 mg, 0.292 mmol) 및 HATU (167 mg, 0.438 mmol)의 교반 현탁액에 염화암모늄 (78 mg, 1.461 mmol) 및 DIEA (0.255 mL, 1.461 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시켜 휘발성 성분을 제거한 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 10-90% 에틸 아세테이트 (10% 암모니아 포화 메탄올 함유))에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (35.3 mg, 0.088 mmol, 30.2 % 수율)를 고체로서 수득하였다.
실시예 15: 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헥실카르바메이트. 디옥산 (8.04 mL) 중 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (1.0 g, 8.68 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨)의 교반 용액에 디-tert-부틸-디카르보네이트 (2.369 g, 10.85 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 염화나트륨 (0.507 g, 8.68 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 물 (20 mL) 및 헥산 (20 mL)으로 희석하였다. 현탁액을 20분 동안 격렬히 교반한 다음, 여과하고, 고체를 헥산으로 헹구고, 진공 하에 건조시켜 tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헥실카르바메이트 (1.7836 g, 8.28 mmol, 95 % 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
B. tert-부틸 (1R,3S)-3-메톡시시클로헥실카르바메이트. 무수 THF (8 mL) 중 tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시시클로헥실카르바메이트 (1.78 g, 8.27 mmol)의 용액에 질소 하에 0℃에서 수소화나트륨 (0.230 g, 9.09 mmol)을 부분씩 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 30분 동안 교반하였다. 무수 THF (4 mL) 중 아이오도메탄 (0.824 mL, 13.23 mmol)의 용액을 혼합물에 0℃에서 적가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 조 혼합물을 물 (50 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0 - 50 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 tert-부틸 (1R,3S)-3-메톡시시클로헥실카르바메이트 (1.0686 g, 4.66 mmol, 56.4 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
C. (1R,3S)-3-메톡시시클로헥산아민 트리플루오로아세테이트. 무수 DCM (18.64 mL) 중 tert-부틸 (1R,3S)-3-메톡시시클로헥실카르바메이트 (1.0686 g, 4.66 mmol)의 용액에 TFA (3.59 mL, 46.6 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 에틸 에테르 (2 x 50mL)로 연화처리하여 (1R,3S)-3-메톡시시클로헥산아민 트리플루오로아세테이트 (1.133 g, 4.66 mmol, 100 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
D. 에틸 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (18.63 mL) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트 (1.084 g, 4.66 mmol) 및 (1R,3S)-3-메톡시시클로헥산아민 트리플루오로아세테이트 (1.133 g, 4.66 mmol)의 교반 용액에 DIEA (2.434 mL, 13.97 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃로 17시간 동안 가열하였다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-25% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 에틸 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (1.4284 g, 4.39 mmol, 94 % 수율)를 투명한 오일로서 수득하였다.
E. 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 에탄올 (12.54 mL) 중 에틸 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (1.4284 g, 4.39 mmol)의 교반 용액에 수성 수산화나트륨 용액 (1 N, 8.78 mL, 8.78 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 물 (50mL)로 희석한 다음, 수성 시트르산 용액 (2 M, 5.49 mL, 10.97 mmol)으로 교반하면서 중화시켰다. 침전물을 여과한 다음, 물 (2 x 50 mL)로 세척하고, 건조시켜 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (1.1679 g, 3.93 mmol, 89% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
F. 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (1.1662 g, 3.92 mmol) 및 HATU (2.237 g, 5.88 mmol)를 DMF (7.84 mL) 중에서 5분 동안 실온에서 교반한 다음, 염화암모늄 (1.049 g, 19.61 mmol) 및 DIEA (3.42 mL, 19.61 mmol)를 교반하면서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 50mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL), 염수 (25 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류 DMF를 100 mL 물 및 100 mL 헥산 중에 유성 잔류물을 현탁시킴으로써 제거하였다. 2상 현탁액을 30분 동안 격렬히 교반하고, 여과하고, 헥산으로 세척하여 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (1.1081 g, 3.74 mmol, 95 % 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
G. 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. 실온에서 DCM (18.69 mL) 및 아세톤 (18.69 mL) 중 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (1.1081 g, 3.74 mmol)의 용액에 mCPBA (1.676 g, 7.48 mmol)를 5개 배치로 2분에 걸쳐 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물에 10% 수성 티오황산나트륨 용액 (35 mL)을 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 휘발성 용매를 증발시켰다. 물질을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배한 다음, 유기 층을 포화 수성 중탄산나트륨 용액에 이어서 염수로 세척하였다. 이어서, 합한 수성 층을 에틸 아세테이트 (3x)로 세척하고, 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 고진공 하에 건조시킨 후, 4-((1R,3S)-3-메톡시-시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.9887 g, 3.01 mmol, 81 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
H. 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (0.914 mL) 중 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.3 g, 0.914 mmol) 및 (1r,4r)-4-메톡시시클로헥산아민 (0.236 g, 1.827 mmol)의 교반 용액에 DIEA (0.637 mL, 3.65 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 17시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 4-((1R,3S)-3-메톡시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드 (0.155 g, 0.411 mmol, 44.9 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 16: 2-((1r,4R)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. (1r,4r)-4-아미노-1-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드. 500 mL 파르 용기에 들은 메탄올 (137 mL) 및 에틸 아세테이트 (137 mL) 중 (1r,4r)-4-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올 (15.3 g, 49.4 mmol; PCT 국제 출원 공개 WO2010/027500에 따라 제조됨)의 용액을 용액을 통해 5분 동안 버블링시킴으로써 탈기시켰다. 용액에 탄소 상 수산화팔라듐 (6.94 g, 4.94 mmol)을 첨가하고, 용기를 파르 진탕기 내에서 6일 동안 3 atm에서 두었다. 용기를 파르 진탕기로부터 제거한 다음, 현탁액을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 50 mL 메탄올 중에 용해시키고, 수성 염산 용액 (6 M, 9.06 mL, 54.4 mmol)을 사용하여 산성화시키고, 농축시켜 (1r,4r)-4-아미노-1-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (8.31 g, 50.2 mmol, 101 % 수율)를 회백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트. 수성 수산화나트륨 용액 (1 N, 100 mL, 100 mmol) 중 (1r,4r)-4-아미노-1-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (8.31 g, 50.2 mmol)의 교반 용액에 디-tert-부틸-디카르보네이트 (13.68 g, 62.7 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켰다. 물질이 LCMS에 의해 나타난 바와 같이 ~50% 목적 생성물을 함유하므로, 물질을 실리카 겔 상에서 이동상으로서의 헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트를 사용하여 2회 재정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트 (2.2 g, 9.59 mmol, 19.13 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
C. (1r,4r)-4-아미노-1-메틸시클로헥산올 트리플루오로아세테이트. DCM (44 mL) 중 tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트 (2.04 g, 8.90 mmol)의 교반 용액에 TFA (13.71 mL, 178 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 22시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 잔류물을 에틸 에테르로 2회 연화처리하여 (1r,4r)-4-아미노-1-메틸시클로헥산올 트리플루오로아세테이트 (2.106 g, 8.66 mmol, 97 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
D. 2-((1r,4R)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 디옥산 (2.75 mL) 중 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.432 g, 1.374 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 (1r,4r)-4-아미노-1-메틸시클로-헥산올 트리플루오로아세테이트 (0.435 g, 1.786 mmol)의 교반 용액에 DIEA (0.718 mL, 4.12 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 110℃에서 23시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 HPLC (물 중 20-100% 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시키고, 잔류물을 아세토니트릴로 연화처리하였다. 생성된 침전물을 수집하여 2-((1r,4R)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.0483 g, 0.133 mmol, 9.67 % 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
실시예 17: 4-((1S,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 4-((1S,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드; 4-((1R,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-((1s,4s)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온. 0℃에서 물 (155 mL) 중 (1s,4s)-4-아미노-1-메틸시클로헥산올 (10 g, 77 mmol; PCT 국제 출원 공개 WO2010/027500에 기재된 바와 같이 제조됨) 및 탄산칼륨 (18.72 g, 135 mmol)의 교반 용액에 N-카르브에톡시프탈이미드 (18.66 g, 85 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 미세 현탁액을 여과하고, 100 mL 물 중에 재현탁시키고, 재여과하여 2-((1s,4s)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 (11.413 g, 44.0 mmol, 56.9 % 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
B. 2-(4-메틸시클로헥스-3-에닐)이소인돌린-1,3-디온. 2-((1s,4s)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 (4.6568 g, 17.96 mmol) 및 황산수소칼륨 (4.89 g, 35.9 mmol)을 합하고, 140℃로 20분 동안 가열하였다. 반응이 더이상 관찰되지 않으면, 물 (11.22 mL) 및 황산 (7.66 mL, 144 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃로 2시간 동안 가열하였다. 조 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 200 mL 분쇄된 빙수에 부은 다음, 30분 동안 격렬히 교반한 다음, 여과하여 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 백색 고체를 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하고, 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 2-(4-메틸시클로헥스-3-에닐)이소인돌린-1,3-디온 (3.33 g, 13.80 mmol, 77 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. 4-메틸시클로헥스-3-엔아민. 메탄올 (163 mL) 및 DCM (54.3 mL) 중 2-(4-메틸시클로헥스-3-에닐)이소인돌린-1,3-디온 (5.24 g, 21.72 mmol)의 교반 현탁액에 히드라진 수화물 (3.69 mL, 76 mmol)을 첨가하고, 반응물을 15시간 동안 교반하였다. 조 현탁액에 400 mL 물을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, DCM (4 x 400mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시킨 다음, 농축시켜 4-메틸-시클로헥스-3-엔아민 (2.415 g, 21.72 mmol, 100 % 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
D. tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트. 0℃에서 DCM (43.4 mL) 중 4-메틸시클로헥스-3-엔아민 (2.415 g, 21.72 mmol) 및 TEA (3.33 mL, 23.89 mmol)의 교반 용액에 디-tert-부틸-디카르보네이트 (7.11 g, 32.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트 (1.65 g, 7.81 mmol, 36.0 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
E. tert-부틸 3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트. 0℃에서 THF (94 mL) 중 tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트 (1.5844 g, 7.50 mmol)의 교반 용액에 1M 보란 THF 착체 (33.7 mL, 33.7 mmol)를 첨가하였다. 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 매우 천천히 물 (40.5 mL, 2249 mmol)로 켄칭하고, 에탄올 (39.8 mL, 682 mmol)로 희석하고, 수성 수산화나트륨 용액 (5 N, 37.5 mL, 187 mmol)으로 염기성화시켰다. 교반하는 2상 혼합물에 과산화수소 (38.3 mL, 375 mmol)를 천천히 첨가하고, 생성된 혼합물을 45℃로 20시간 동안 가열하였다. 조 반응물을 포화 수성 아황산나트륨 용액 (70 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3 x 100mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 tert-부틸 3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트의 4종의 이성질체 (3-히드록시 및 4-메틸 모이어티 사이의 트랜스 관계)의 혼합물 (0.9608 g, 4.19 mmol, 55.9 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
F. 5-아미노-(트랜스)-2-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드. 0℃에서 격렬히 교반하는 메탄올 (10.47 mL)에 아세틸 클로라이드 (0.893 mL, 12.57 mmol)를 첨가하였다. 용액을 30분 동안 교반한 다음, tert-부틸 3-히드록시-4-메틸시클로헥실-카르바메이트 (0.9608 g, 4.19 mmol)를 첨가하고, 교반을 실온에서 22시간 동안 계속하였다. 조 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 에틸 에테르 (2 x 50 mL)로 연화처리하여 5-아미노-(트랜스)-2-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (0.694 g, 4.19 mmol, 100 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
G. 2-(트랜스-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 0℃에서 NMP (12.30 mL) 중 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드 (1.24 g, 4.18 mmol; 본원에 기재된 합성)의 용액에 mCPBA (0.938 g, 4.18 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하면서, 천천히 실온에 도달하도록 하였다. 반응 혼합물을 물 (120 mL)로 희석하고, 10분 동안 교반하고, 생성된 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여과물을 30℃ 미만에서 진공 하에 농축시켜 2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (1.307 g, 4.18 mmol, 100 % 수율)를 NMP (~10 mL) 중 백색 현탁액으로서 수득하였다. 이 조 현탁액을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
H. 4-((1S,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1S,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((1R,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (10 mL) 중 (2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (1.31 g, 4.19 mmol)의 조 반응 혼합물에 NMP (15.00 mL) 중 용액으로서의 조 5-아미노-(트랜스)-2-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (0.695 g, 4.19 mmol)를 첨가하였다. 현탁액에 DIEA (3.65 mL, 20.97 mmol)를 첨가하고, 반응물을 100℃로 46시간 동안 가열하였다. NMP를 70℃에서 증발 제거하고, 잔류물을 DCM으로 희석하고, 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-15% 메탄올)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-10% 메탄올)에 의해 재정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 4종의 생성물 (2종의 부분입체이성질체 및 그의 상응하는 거울상이성질체)의 혼합물 (1.665 g)을 수득하였다.
혼합물의 NMR:
조 물질을 AD-H 칼럼을 이용하는 키랄 SFC에 의해 분리하여 피크 1 내지 피크 4로 표지된 4종의 화합물을 수득하였으며, 여기서 피크 1은 제1 용리 화합물이고, 피크 4는 가장 마지막 용리 화합물이다. 피크 1 내지 4의 입체화학은 당업자들에게 공지된 방법에 의해 결정되었다.
피크 1: 4-((1S,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
피크 2: 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
피크 3: 4-((1S,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
피크 4: 4-((1R,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드.
실시예 18: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-시클로헥스-2-에닐-이소인돌-1,3-디온. DMF (2000 mL) 중 3-브로모-시클로헥센 (500 g, 3.12 mmol)의 용액에 칼륨 프탈이미드 (580 g, 3.12 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1000 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하고 (3회), 합한 유기 층을 농축시켜 2-시클로헥스-2-에닐-이소인돌-1,3-디온 (520 g, 2.30 mol)을 회색 고체로서 수득하였다.
B. 2-(2-브로모-3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온. 2-시클로헥스-2-에닐-이소인돌-1,3-디온 (520 g, 2.30 mol) 및 N-브로모숙신이미드 (416 g, 2.35 mol)를 클로로포름 (3000 mL) 및 에탄올 (120 mL)의 공용매 중에서 혼합하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. HPLC가 출발 물질이 소모되었음을 나타내면, 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 히드로클로라이드 용액 (450 mL, 2.0 mol) 및 THF (2000 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 에탄올로 세척하여 (2회) 2-(2-브로모-3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온 (400 g, 1.23 mol)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. 2-(3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온. 트리-n-부틸주석 히드라이드 (430 g, 1.48 mol)를 톨루엔 (4000 mL) 및 메탄올 (400 mL) 중 2-(2-브로모-3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온 (400 g, 1.23 mol) 및 2,2'-아조비스(2-메틸프로피오니트릴) (20 g)의 교반 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 64시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 석유 에테르 및 에틸 아세테이트 (1:1)로 세척하여 2-(3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온 (240 g, 0.98 mol)을 백색 고체로서 수득하였다.
D. (1S,3R)-2-(3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온 및 (1R,3S) 아세트산 3-(1,3-디옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일)-시클로헥실 에스테르. THF (3000 mL) 중 2-(3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온 (240 g, 0.98 mol) 및 리파제(Lipase) B (87 g)의 용액을 질소 하에 실온에서 1~2시간 동안 교반하였다. 이어서, 아세트산 비닐 에스테르 (252 g, 2.88 mol)를 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3~5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 (석유 에테르/에틸 아세테이트 =10:1로 용리함)을 사용하여 정제하여 (1S,3R)-2-(3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온 (Rf=0.6, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1, 90 g, 0.37 mol, 수율: 39%)을 백색 고체로서 수득하였다.
(1R,3S)아세트산 3-(1,3-디옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일)-시클로헥실 에스테르 (Rf=0.2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1, 110 g, 0.38 mol, 수율: 39%)를 백색 고체로서 수득하였다.
E. (1S,3R)-3-아미노-시클로헥산올. 에탄올 (1500 mL) 중 (1S,3R)-2-(3-히드록시-시클로헥실)-이소인돌-1,3-디온 (90 g, 0.37 mol)의 용액에 히드라진 (90 g, 1.8 mol)을 첨가하고, 반응 용액을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하고, 여과물을 농축시켜 (1S,3R)-3-아미노-시클로헥산올 (25 g, 0.21 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
F. 에틸 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (75 ml) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복실레이트 (4.38 g, 18.82 mmol) 및 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (2.276 g, 19.76 mmol)의 교반 용액에 DIEA (4.93 ml, 28.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 60℃로 가열하고, 가열로부터 제거하고, 농축시킨 다음, 실리카 겔 크로마토그래피 (20-100% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 목적 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 에틸 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (5 g, 16.06 mmol, 85 % 수율)를 백색 발포체로서 수득하였다.
G. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 에탄올 (50 ml) 중 에틸 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (5 g, 16.06 mmol)의 교반 용액에 2M 수산화나트륨 (20 ml, 40.0 mmol)을 첨가하였다. 교반을 실온에서 1시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 포화 시트르산의 첨가에 의해 중화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 건조시켜 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (4.5 g, 15.88 mmol, 99 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
H. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (4.5 g, 15.88 mmol) 및 HATU (9.06 g, 23.82 mmol)를 DMF (75 ml) 중에 용해시키고, 5분 동안 실온에서 교반되도록 한 후, 염화암모늄 (4.25 g, 79 mmol) 및 DIEA (13.87 ml, 79 mmol)를 첨가하였다. 반응물은 염기의 첨가에 따라 황색으로 변화하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반되도록 한 다음, 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 1회 세척한 후, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (4.19 g, 14.84 mmol, 93 % 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
I. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드. DCM (10 ml) 및 아세톤 (10 ml) 중 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (302 mg, 1.070 mmol)의 교반 현탁액에 3-클로로퍼옥시벤조산 (479 mg, 2.139 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 10% 티오황산나트륨 용액 10 mL의 첨가에 의해 켄칭하고, 5분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트 (3x50mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (259 mg, 0.824 mmol, 77 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
J. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로-헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (1.132 ml) 중 4-((1R,3S)-3-히드록시-시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.178 g, 0.566 mmol) 및 (1r,4r)-4-메톡시시클로헥산아민 (0.146 g, 1.132 mmol)의 교반 용액에 DIEA (0.395 ml, 2.265 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 17시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (0-15% 메탄올/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드 (0.08 g, 0.220 mmol, 38.9 % 수율)를 밝은 황갈색 고체로서 수득하였다.
실시예 19: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. 4-클로로-2-((1R,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴. (1r,4r)-4-메톡시시클로헥산아민 (6.37 g, 49.3 mmol), 2,4-디클로로피리미딘-5-카르보니트릴 (6 g, 34.5 mmol) 및 DIEA (9.03 mL, 51.7 mmol)를 THF (180 mL) 중 -10℃ (염 빙조)에서 혼합하고, 동일한 온도에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 밤새 추가로 교반하면서, 온도를 천천히 실온으로 상승시켰다. LC/MS에 의한 반응 혼합물의 분석은 약 3:7 비의 생성물의 형성을 나타내었다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 물 (100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 건조제를 여과에 의해 제거하고, 용액을 농축시켰다. 생성된 조 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-클로로-2-((1R,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
을 백색 고체로서 및 2-클로로-4-((1R,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
을 백색 고체로서 수득하였다.
분리된 이성질체의 위치화학을 하기 실험으로 확인하였다.
메탄올 (1 mL) 중 4-클로로-2-((1R,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (50 mg, 0.187 mmol), 디아세톡시팔라듐 (42.1 mg, 0.187 mmol) 및 포름산암모늄 (59.1 mg, 0.937 mmol)을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (DCM 중 0-15% 메탄올)로 처리하여 2-((1R,4R)-4-메톡시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르보니트릴을 백색 고체로서 수득하였다.
상기 기재된 동일한 방법을 2-클로로-4-((1R,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴에 적용하여 4-((1R,4R)-4-메톡시-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴을 백색 고체로서 수득하였다.
B. (1S,3R)-3-아미노시클로헵탄올 히드로클로라이드. 0℃에서 격렬히 교반하는 메탄올 (60 mL)에 아세틸 클로라이드 (5.11 mL, 72.0 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 30분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 (1R,3S)-3-히드록시-시클로헵틸카르바메이트 (5500 mg, 23.98 mmol; 본원에 기재된 합성)를 첨가한 다음, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 오일로 농축시키고, 이를 에틸 에테르 (100 mL)로 밤새 연화처리하였다. 고체를 여과하고, 디에틸 에테르로 헹구고, 감압 하에 몇 시간 동안 건조시켜 (1S,3R)-3-아미노시클로헵탄올 히드로클로라이드 (3780 mg, 22.82 mmol, 95 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
C. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. DMF (4 mL) 중 4-클로로-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (200 mg, 0.750 mmol) 및 (1S,3R)-3-아미노시클로헵탄올 히드로클로라이드 (186 mg, 1.125 mmol)의 교반 용액에 DIEA (0.458 mL, 2.62 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 밤새 주위 온도로 냉각되도록 하였다. DMF를 감압 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중, 0-50% 에틸 아세테이트 + 메탄올 중 10% 7 N 암모니아)를 이용하여 정제하여 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-메톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (210 mg, 0.584 mmol, 78 % 수율)을 수득하였다.
실시예 20: 2-((1r,4R)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. (1r, 4r)-4-(트리틸아미노)시클로헥산올. DCM (250 mL) 중 (1r, 4r)-4-아미노시클로헥산올 (10 g, 87 mmol) 및 TEA (11.2 g, 112 mmol)의 냉각된 (0℃) 용액에 트리틸 클로라이드 (24.2 g, 87 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 포화 수성 중탄산나트륨 용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 50 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (24.8 g, 70 mmol, 80 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. (1r,4r)-4-에톡시-N-트리틸시클로헥산아민. DMF (100 mL) 중 (1r,4r)-4-(트리틸아미노)시클로헥산올 (15.0 g, 42 mmol)의 냉각된 (0℃) 용액에 0℃에서 수소화나트륨 (3.4 g, 84 mmol, 광유 중 60 %) 및 에틸 아이오다이드 (7.2 g, 46 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 포화 수성 암모니아 클로라이드 용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (11.9 g, 31 mmol, 79 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. (1r,4r)-4-에톡시시클로헥산아민. DCM (10 mL) 중 (1r, 4r)-4-에톡시-N-트리틸시클로헥산아민 (13.1 g, 34 mmol)의 냉각된 (0℃) 용액에 0℃에서 트리플루오로아세트산 (18 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물은 암적색이었다. 트리에틸실란 (5 mL)을 생성된 혼합물이 무색이 될 때까지 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 추가 15분 동안 교반하였다. 진공 하에 모든 휘발성 물질을 제거한 후, 잔류물을 추가로 고진공 하에 2시간 동안 건조시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 및 수성 히드로클로라이드 용액 (150 mL, 0.25 mol/L) 중에 용해시켰다. 유기 층을 제거하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 세척하였다. 수성 층을 고진공 하에 농축시켜 목적 아민 (6.1 g, 34 mmol, 100 % 수율)의 조 히드로클로라이드 염을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
D. 4-클로로-2-((1r,4r)-4-에톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. THF (115 mL) 중 (1r,4r)-4-에톡시시클로헥산아민 (6.82 g, 37.9 mmol) 및 2,4-디클로로피리미딘-5-카르보니트릴 (6 g, 34.5 mmol)의 냉각된 (-60℃) 용액에 DIEA (15.02 mL, 86 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 밤새 가온되도록 하였다. 생성된 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 14 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 농축시켜 2-클로로-4-((1r,4r)-4-에톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴 (3.33 g, 11.86 mmol, 34.4 % 수율) 및 4-클로로-2-((1r,4r)-4-에톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (5.5 g, 19.59 mmol, 56.8 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
주요 이성질체의 위치화학을 4-클로로-2-((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴 (본원에 기재된 합성)의 양성자 스펙트럼과 비교함으로써 확인하였다.
E. (1S,3R)-3-(디벤질아미노)시클로헥산올. 에탄올 (100 mL) 중 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (5 g, 43.4 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15 (2004) 2051-2056]에 기재된 바와 같이 제조됨) 및 중탄산나트륨 (12.03 g,143 mmol)의 현탁액에 실온에서 (클로로메틸)벤젠 (15.01 mL, 130 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 밤새 가열하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 DCM (250 mL) 중에 용해시키고, 수성 수산화나트륨 용액 (1N, 2 x 100mL) 및 염수 (2 x 100 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0%-80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)시클로헥산올 (11.70 g, 91%)을 농후한 황색 오일로서 수득하였다.
F. (R)-3-(디벤질아미노)시클로헥사논. 옥살릴 클로라이드 (3.81 mL, 43.6 mmol)를 건조 DCM (150 mL) 중에 용해시키고, -78℃로 냉각시켰다. 건조 DCM (20 mL) 중 DMSO (6.75 mL, 95.0 mmol)를 반응 혼합물에 적가하고, 반응물을 -78℃에서 15분 동안 교반하였다. 다음에, 건조 DCM (100 mL) 중 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)-시클로헥산올 (11.7 g, 39.6 mmol)을 첨가 깔때기를 이용하여 적가하고, 반응물을 -78℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, TEA (27.6 mL, 198 mmol)를 첨가하고, 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 드라이아이스 조를 제거하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 염수 (5 x 500 mL)로 세척하고, 유기 층을 분리하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 (R)-3-(디벤질아미노)시클로헥사논 (10.2 g, 88%)을 황갈색 고체로서 수득하였다.
G. (3R,5R)-N,N-디벤질-1-옥사스피로[2.5]옥탄-5-아민 및 (3S,5R)-N,N-디벤질-1-옥사스피로[2.5]옥탄-5-아민. 건조 DMSO (260 mL) 중 (R)-3-(디벤질아미노)시클로헥사논 (10.2 g, 34.8mmol) 및 트리메틸술포늄 아이오다이드 (14.90 g, 73.0 mmol)의 황색 용액에 질소 분위기 하에 실온에서 나트륨 tert-부톡시드 (6.68 g, 69.5 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응의 완료에 따라, 반응물을 물 1 L로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 x 800 mL)로 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시키고, 건조시켜 (3R,5R)-N,N-디벤질-1-옥사스피로[2.5]옥탄-5-아민 및 (3S,5R)-N,N-디벤질-1-옥사스피로[2.5]옥탄-5-아민의 혼합물 (10.6g, 99%)을 황색 고체로서 수득하였다. 혼합물을 추가 정제 없이 후속 단계에 그대로 사용하였다.
H. (1R,3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올 및 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올. THF (230 mL) 중 고체 수소화알루미늄리튬 (95% LAH, 3.47 g, 87 mmol)의 혼합물에 THF (230 mL) 중 (3R,5R)-N,N-디벤질-1-옥사스피로[2.5]옥탄-5-아민 및 (3S,5R)-N,N-디벤질-1-옥사스피로[2.5]옥탄-5-아민 (10.69 g, 34.8 mmol)의 상기 기재된 혼합물의 투명한 연황색 용액을 0℃에서 질소 하에 매우 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온이 되도록 한 다음, 질소 하에 65℃에서 밤새 가열하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 둥근 바닥 플라스크에 옮긴 다음, THF (100 mL)로 희석하고, 0℃로 냉각시키고, 교반하면서 수성 황산나트륨의 포화 용액을 반응이 버블링을 정지할 때까지 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 거친 소결 깔때기 내에서 셀라이트를 통해 둥근 바닥 플라스크 내로 여과하였다. 필터 케이크를 THF로 완전히 세척하고, 무색 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 조 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0%-60% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 보다 빠른 용리 이성질체 (1R,3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올
을 백색 오일로서, 이어서 보다 느린 이성질체 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올
을 농후한 황색 오일로서 수득하였다. COSY NMR 실험 및 상기 보고된 1H NMR 데이터를 이용하여 아미노 알콜의 위치화학을 확인하였다. 보다 느리게 용리하는 이성질체에 대한 NOE (NOESY 실험을 통함)가 아미노 기 시클로헥실-탄소 상의 양성자와 메틸 기 탄소 사이에서 관찰되었다. 이것은 이들 2개의 관능기 사이의 시스 관계를 입증하며 (트랜스 관계는 이러한 공간적 근접성이 없으므로 이러한 효과를 나타내지 않을 것임), 결국 상기 이성질체가 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올이 되었음을 확인하였다.
I. (1S,3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올. 에탄올 (150 mL) 중 (1S,3R)-3-(디벤질아미노)-1-메틸시클로헥산올 (5.0 g, 16.16 mmol)의 용액을 탄소 상 수산화팔라듐으로 처리하고, 수소 기체로 채운 풍선 하에 밤새 교반하였다. LCMS에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 (1R,3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올 (1.3g, 62%)을 농후한 황색 오일로서 수득하였다.
J. 2-((1r,4R)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 4-클로로-2-((1r,4r)-4-에톡시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (350 mg, 1.247 mmol), (1S,3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올 (242 mg, 1.870 mmol) 및 DIEA (0.327 mL, 1.870 mmol)를 스크류-캡핑된 바이알 내 DMF (3.5 mL) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료 후, 반응 혼합물을 응축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 2-((1r,4R)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.356 g, 76 % 수율, 98.0% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 21: 2-((1r,4R)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 및 4-클로로-2-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 무수 에탄올 (5 mL) 중 2,4-디클로로피리미딘-5-카르보니트릴 (900 mg, 5.17 mmol) 및 무수 에탄올 (5 mL) 중 (1R,3S)-3-아미노-시클로헥산올 (624 mg, 5.43 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15 (2004) 2051-2056]에 기재된 바와 같이 제조됨)을 -60℃에서 혼합한 다음, DIEA (1.0 g, 7.75 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. 휘발성 분획을 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 (석유 에테르 중 9.1%-33% 에틸 아세테이트를 사용하여 용리함)에 의해 정제하여 4-클로로-2-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴 (600 mg, 2.38 mmol, 수율 46%)을 백색 고체로서 및 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴을 백색 고체로서 수득하였다.
부차적 위치이성질체의 위치화학을 하기 단계 B에서 결정하였다.
B. (1S,3R)-3-(5-(아미노메틸)피리미딘-4-일아미노)시클로헥산올. 에탄올 (4 mL) 중 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (70 mg, 0.277 mmol) 및 수산화암모늄 (500 μl, 12.84 mmol)의 혼합물에 라니 니켈 (16.26 mg, 0.277 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 배기시킨 다음, 대기압 및 주위 온도에서 밤새 수소 풍선 하에 교반하였다. 에탄올을 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 역상 정제용 HPLC (물 중 5-80% 아세토니트릴 + 0.1% TFA + 0.1% TFA, 30분에 걸침)를 이용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시키고, TFA 제거 (0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 오일로서 수득하였으며, 이를 단지 NMR 목적을 위해서만 사용하였다. 위치화학은 1H NMR 스펙트럼에서 2개의 구분되는 방향족 피크의 존재, 및 NOESY 스펙트럼에서 C5 메틸렌 수소들 및 이들 방향족 피크 중 단 1개 사이의 NOE 신호의 관찰에 의해 확인되었다.
C. 2-((1r,4R)-4-에톡시시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 무수 n-부탄올 (10 mL) 중 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (270 mg, 1.07 mmol), (1r,4r)-4-에톡시시클로헥산아민 히드로클로라이드 (289 mg, 1.60 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 탄산세슘 (698 mg, 2.14 mmol)의 혼합물을 80℃에서 1일 동안, 이어서 120℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 DCM 사이에 추출하였다. 유기 층을 합하고, 농축시키고, 실리카 겔 (석유 에테르 중 9.1%-33% 에틸 아세테이트를 사용하여 용리함)에 의해 정제하여 2-((1r,4R)-4-에톡시시클로헥실-아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (202 mg, 0.56 mmol, 수율 52%)을 백색 분말로서 수득하였다.
실시예 22: 2-(시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴
A. 2-(시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. DMSO (5 mL) 중 시클로헥산아민 (0.181 mL, 1.583 mmol), 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴 (0.200 g, 0.791 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 DIEA (0.276 mL, 1.583 mmol)의 용액을 70℃에서 밤새 가열하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 농축시켰다. 생성된 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0% - 70% 에틸 아세테이트 (10% 암모니아 포화 메탄올을 함유)의 구배를 사용하여 정제하였다. 목적 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 2-(시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르보니트릴 (0.220 g, 88 % 수율, 98.1% 순도)을 연황색 고체로서 수득하였다.
실시예 23: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. DMF (3 mL) 중 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.4 g, 2.155 mmol) 및 (1S,3R)-3-아미노시클로헵탄올 히드로클로라이드 (0.428 g, 2.59 mmol; 본원에 기재된 합성)의 교반 용액에 DIEA (1.126 mL, 6.46 mmol)를 첨가하고, 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)에 부었다. 현탁액을 5분 동안 교반한 다음, 여과하여 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.404 g, 1.451 mmol, 67.4 % 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
B. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (381 mg, 1.369 mmol)을 NMP (7 mL) 중에 용해시켰다. 0℃에서, mCPBA (675 mg, 3.01 mmol)를 이어서 조금씩 나누어 첨가하고, 반응물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 (1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥산아민 (0.405 g, 2.054 mmol) (본원에 기재된 바와 같이 제조됨) 및 DIEA (0.956 mL, 5.48 mmol)를 첨가하고, 실온에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 30분 동안 추가로 교반하고, 그 후에 LCMS은 반응의 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 정치시켰고, 그 동안 목적 생성물이 침전되었다. 생성물을 여과하고, 수집된 고체를 물에 이어서 헥산으로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1R,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.444 g, 1.039 mmol, 76 % 수율)을 황갈색 고체로서 수득하였다.
실시예 24: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르보니트릴. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (457 mg, 1.642 mmol; 본원에 기재된 합성)을 NMP (10 mL) 중에 용해시켰다. 0℃에서, mCPBA (736 mg, 3.28 mmol)를 이어서 조금씩 나누어 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질의 소모 및 술폰 중간체의 형성을 나타내었다. 이 반응물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 상기 단계의 반응 혼합물에 (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 히드로클로라이드 (0.374 g, 2.465 mmol) 및 DIEA (1.435 mL, 8.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM 중 0-10% 암모니아 포화 메탄올)에 의해 정제하여 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헵틸아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.250 g, 0.724 mmol, 44.0 % 수율)을 황갈색 고체로서 수득하였다.
실시예 25: 2-(4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-일아미노)-4-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 디메틸 시클로헥산-1,4-디카르복실레이트. 무수 메탄올 (800 mL) 중 시클로헥산-1,4-디카르복실산 (100 g, 0.58 mol)의 교반 용액에 0℃에서 아황산 디클로라이드 (208 g, 1.75 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 용액을 농축시키고, 잔류물을 물에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 감압 하에 농축시켜 디메틸 시클로헥산-1,4-디카르복실레이트 (105 g, 0.53 mol, 90.5 % 수율)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 디메틸 1-(2-클로로에틸)시클로헥산-1,4-디카르복실레이트. 무수 THF (500 mL) 중 디이소프로필아민 (88 mL, 0.62 mol)의 용액에 n-부틸 리튬 (240 mL, 0.6 mol, 헥산 중 2.5 M 용액)을 -78℃에서 20분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 무수 THF (800 mL) 중 디메틸 시클로헥산-1,4-디카르복실레이트 (100 g, 0.5 mol) 및 헥사메틸포스포르아미드 (360 mL, 2 mol)의 혼합물에 리튬 디이소프로필아민 (상기 새로 제조됨)을 -40℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 이 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 1-브로모-2-클로로에탄 (42 mL, 0.5 mol)을 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 수성 염산 (3 N, 420 mL)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발에 의해 제거하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 추출하고, 합한 추출물을 염수 (2 x 300 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 감압 하에 농축시켜 디메틸 1-(2-클로로에틸)시클로헥산-1,4-디카르복실레이트 (116 g, 88 % 수율)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
C. 디메틸 비시클로[2.2.2]옥탄-1,4-디카르복실레이트. 무수 THF (500 mL) 중 디이소프로필아민 (77 mL, 0.54 mol)의 용액에 n-부틸 리튬 (210 mL, 0.53 mol, 헥산 중 2.5 M 용액)을 -78℃에서 20분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 질소 하에 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 무수 THF (800 mL) 중 디메틸 1-(2-클로로에틸)시클로헥산-1,4-디카르복실레이트 (116 g, 0.44 mol) 및 헥사메틸포스포르아미드 (317 ml, 1.7 mol)의 혼합물에 리튬 디이소프로필아민 (상기 새로 제조됨)을 -40℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 밤새 교반하여 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물에 포화 수성 염화암모늄 (200 mL)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발에 의해 제거하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 염수 (2 x 300 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (58 g, 0.25 mol, 50 % 수율, 2 단계)을 수득하였다.
D. 4-(메톡시카르보닐)비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산. 메탄올 (600 mL) 중 디메틸 비시클로[2.2.2]옥탄-1,4-디카르복실레이트 (58.0 g, 0.25 mol)의 용액을 환류 하에 가열하였다. 이 용액에 메탄올 (100 mL) 및 물 (12 mL) 중 수산화칼륨 (9.8 g, 0.175 mol)의 용액을 30분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 환류하였다. 이어서, 용매를 제거하고, 잔류물을 물로 희석하였다. 수용액을 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하여 출발 물질 (22.0 g)을 회수하고, 수성 층을 염산을 첨가함으로써 pH 3으로 산성화시켰다. 침전물이 형성되고, 이를 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 생성물 (30.0 g, 0.14 mol, 55 % 수율)을 수득하였다.
E. 메틸 4-브로모비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트. 아세톤 (80 mL) 중 4-(메톡시카르보닐) 비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산 (11.0 g, 51.8 mmol)의 현탁액에 1 M 수성 수산화나트륨 용액 (51.8 mL, 51.8 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 물 (10 mL) 중 질산은 (8.8 g, 51.9 mol)의 용액을 첨가하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물, 아세톤 및 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에 115℃에서 4시간 동안 건조시켰다. 수득된 (4-(메톡시카르보닐)-비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르보닐옥시)은 (15.3 g, 47.9 mmol)을 헥산 (125 mL) 중에 현탁시킨 다음, 브로민 (7.7 g, 48.1 mmol)을 반응 혼합물에 실온에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 반응 혼합물을 실온에서 추가 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하여 고체를 제거하고, 필터 케이크를 헥산 (4 x 150 mL)으로 세척하였다. 합한 유기 여과물을 포화 중탄산나트륨 (2 x 150 mL) 및 염수 (200 mL)로 세척한 다음, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (4.2 g, 0.17 mol, 33 % 수율, 2 단계)을 수득하였다.
F. 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산. 메틸 4-브로모비시클로 [2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트 (17.0 g, 69.0 mol)를 수성 수산화나트륨 용액 (1500 mL, 1 %) 중에서 24시간 동안 환류하였다. 냉각시킨 후, 반응 용액을 염산 (6 N, 100 mL)을 사용하여 산성화시키고, 디에틸 에테르 (6 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 에테르 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 (10.4 g, 61.1 mmol, 89 % 수율)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
G. 벤질 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-일카르바메이트. 디옥산 (150 mL) 중 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산 (10.4 g, 61.1 mmol)의 용액에 DIEA (11.8 g, 91.5 mmol), 디페닐 포스포릴 아지드 (25 g, 91.5 mmol) 및 벤질 알콜 (131 g, 1.22 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응물을 감압 하에 농축시켜 디옥산 및 벤질 알콜 (100℃, 2 mm Hg)을 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5 % 메탄올)에 의해 정제하여 표제 생성물 (15.4 g, 54 mmol, 수율 91%)을 수득하였다.
H. 4-아미노비시클로[2.2.2]옥탄-1-올 히드로클로라이드. 메탄올 (200 mL) 중 벤질 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-일카르바메이트 (14.8 g, 53 mmol)의 용액에 목탄 상 팔라듐 (0.5 g, 10%)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 (50 Psi) 하에 50℃에서 밤새 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 메탄올 중 염산 (10%, 50 mL)에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 다시 농축시키고, THF (20 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 침전물을 수집하고, 건조시켜 표제 생성물 (6.7 g, 36 mmol, 70 % 수율)을 수득하였다.
I. 에틸 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (140 mL) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (10 g, 43.0 mmol), 프로판-2-아민 (4.21 mL, 49.4 mmol) 및 DIEA (9.76 mL, 55.9 mmol)의 혼합물을 60℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에 농축시키고, 물을 첨가하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 합한 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 에틸 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (10.10 g, 39.5 mmol, 92 % 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.
J. 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 둥근 바닥 플라스크에서, 에틸 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (10.97 g, 43.0 mmol)를 에탄올 (150 mL) 중에 용해시킨 다음, 수성 수산화나트륨 용액 (1M, 129 ml, 129 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 수성 시트르산 용액 (2M, 129 ml, 258 mmol)을 천천히 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 고체를 물 (2 x 50 mL)로 2회 세척한 다음, 진공 오븐 내 45℃에서 밤새 건조시켜 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (8.38 g, 36.9 mmol, 86 % 수율)을 수득하였다.
K. 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (8.38 g, 36.9 mmol) 및 HATU (21.03 g, 55.3 mmol)를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에서 합하고, 이어서 DMF (92 mL)를 첨가하였다. 암모니아 히드로클로라이드 (9.86 g, 184 mmol) 및 DIEA (32 mL, 184 mmol)를 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 물 (150 mL)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 물로 세척하고, 밤새 고진공하에 건조시켜 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (8 g, 35.4 mmol, 96 % 수율)를 수득하였다.
L. 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (6 mL) 중 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (641 mg, 2.8 mmol)의 용액에 0℃에서 mCPBA (852 mg, 4.2 mmol, 85% 순도)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 물 (25 mL)을 첨가하고, 단지 짧은 시간 동안 현탁액을 용해시켜 또 다른 농후한 침전물을 형성하고, 이를 여과하였다. 생성된 여과물을 감압 하에 농축시켜 NMP 중 표제 혼합물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
M. 2-(4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-일아미노)-4-(이소프로필아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. NMP 중 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸술피닐)-피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (이전 단계로부터, 2.8 mmol)의 용액에 4-아미노비시클로[2.2.2]옥탄-1-올 히드로클로라이드 (500 mg, 2.8 mmol), DIEA (1.1 g, 8.4 mmol)를 첨가하고, 3일 동안 100℃에서 가열하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종 생성물 (74.1 mg, 8.2 % 수율)을 수득하였다.
실시예 26: 4-(tert-부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 에틸 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (20 mL) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (3 g, 12.89 mmol), 2-메틸프로판-2-아민 (1.565 mL, 14.83 mmol) 및 DIEA (2.93 mL, 16.76 mmol)의 혼합물을 60℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에 농축시키고, 물을 첨가하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 합한 유기 상을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 에틸 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (3.20 g, 11.86 mmol, 92% 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.
B. 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 둥근 바닥 플라스크에서, 에틸 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (3.2 g, 11.88 mmol)를 에탄올 (40 mL) 중에 용해시킨 다음, 1M 수성 수산화나트륨 용액 (35.6 mL, 35.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 2M 수성 시트르산 용액 (35.6 mL, 71.3 mmol)을 천천히 첨가한 후, 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 고체를 물 (2 x 50 mL)로 2회 세척하고, 진공 오븐 내 45℃에서 밤새 건조시켜 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (2.83 g, 11.73 mmol, 99% 수율)을 수득하였다.
C. 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (2.83 g, 11.73 mmol) 및 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로-포스페이트(V) (6.69 g, 17.59 mmol)을 250 mL 둥근 바닥 플라스크에서 합하고, 이어서 DMF (29 mL)를 첨가하였다. 암모니아 히드로클로라이드 (3.14 g, 58.6 mmol) 및 DIEA (10.21 mL, 58.6 mmol)를 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 물 (150 mL)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 물로 세척하고, 고진공 하에 밤새 건조시켜 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드 (2.54 g, 10.57 mmol, 90% 수율)를 수득하였다.
D. 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (5 mL) 중 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.6 g, 2.497 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 mCPBA (0.839 g, 3.74 mmol)를 첨가하고, 교반을 실온에서 1시간 동안 계속하였다. LCMS는 목적 생성물로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응 혼합물을 후속 반응에 추가 정제 없이 사용하였다.
E. 4-(tert-부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. 상기 단계로부터의 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드의 용액에 DIEA (2.181 mL, 12.49 mmol) 및 (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 히드로클로라이드 (0.568 g, 3.75 mmol)를 첨가하고, 반응물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 생성된 잔류물을 역상 정제용 HPLC (물 중 0-50% 아세토니트릴 + 0.1% TFA + 0.1% TFA, 30분에 걸침)를 이용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시키고, TFA 제거 (0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 4-(tert-부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.350 g, 1.139 mmol, 45.6% 수율)를 수득하였다.
실시예 27: 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. DMF (2.4 mL) 중 4-클로로-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르보니트릴 (310 mg, 1.670 mmol) 및 (1R,2R,5R)-5-아미노-2-메틸시클로-헥산올 히드로클로라이드 (304 mg, 1.837 mmol; 본원에 기재된 합성)의 교반 용액에 DIEA (0.873 mL, 5.01 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응 완료를 나타내었다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 150 mL 에틸 아세테이트 및 50 mL 물로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 상을 75 mL 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수 (2 x 50 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 정치시 고체화되는 오일로 농축시켜 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (418 mg, 1.503 mmol, 90% 수율)을 수득하였다.
B. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴. 0℃에서 NMP (5 mL) 중 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (400 mg, 1.437 mmol)의 용액에 mCPBA (805 mg, 3.59 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
C. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 상기 단계로부터의 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴 (446 mg, 1.437 mmol)의 용액에 프로판-2-아민 (0.367 mL, 4.31 mmol) 및 DIEA (1.004 mL, 5.75 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 주위 온도로 냉각되도록 하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-90% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (381 mg, 1.317 mmol, 92% 수율)을 수득하였다.
D. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸-시클로헥실아미노)-2-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.38 g, 1.313 mmol)을 DMSO (5 mL) 중에 용해시켰다. 이 용액에 50% 수성 수산화나트륨 용액 (0.103 ml, 1.970 mmol) 및 30% 수성 과산화수소 용액 (0.101 ml, 0.985 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 빙수 (15 mL)에 붓고, 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하여 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.210 g, 0.683 mmol, 52% 수율)를 수득하였다.
실시예 28: 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. NMP (5 mL) 중 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴 (446 mg, 1.437 mmol; 본원에 기재된 합성)의 용액에 비시클로[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드 (258 mg, 2.155 mmol; 문헌 [Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)]에 따라 제조됨) 및 DIEA (1.255 mL, 7.18 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 주위 온도로 냉각되도록 하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 중 0-90% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (381 mg, 1.216 mmol, 85% 수율)을 수득하였다.
B. 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.38 g, 1.213 mmol)을 DMSO (26.9 mL) 중에 용해시키고, 이 용액에 50% 수성 수산화나트륨 용액 (0.097 ml, 1.213 mmol) 및 30% 수성 과산화수소 용액 (0.137 mL, 1.213 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이것을 빙수 50 mL에 부었다. 백색 침전물을 여과지 상에서 수집하고, 물로 2회 세척하였다. 침전물을 건조시켜 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드 (0.269 g, 0.812 mmol, 67% 수율)를 수득하였다.
실시예 29: 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. DMF (8 mL) 중 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (750 mg, 4.0 mmol)의 용액에 2-시클로프로필프로판-2-아민 (400 mg, 4.0 mmol) 및 DIEA (1560 mg, 12.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0-30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (665 mg, 2.68 mmol, 66% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (4 mL) 중 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (665 mg, 2.68 mmol)의 교반 용액에 수성 과산화수소 용액 (0.162 mL, 30%) 및 수성 수산화나트륨 (2.2 mL, 6 mol/L) 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 12분 동안 교반한 다음, 물을 첨가하였다. 목적 생성물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 조 생성물 (392 mg, 1.47 mmol, 55% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
C. 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. THF (6 mL) 중 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (390 mg, 1.46 mmol)의 냉각된 (0℃) 용액에 mCPBA (447 mg, 2.2 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (메탄올 중 2.5%-10% DCM)에 의해 정제하여 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 (382 mg, 1.32 mmol, 90% 수율)을 수득하였다.
D. 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-((2-시클로프로필프로판-2-일)아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 (191 mg, 0.66 mmol), (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 (114 mg, 0.99 mmol), DIEA (256 g, 1.98 mmol) 및 NMP (5 mL)를 합하고, 100℃에서 밤새 가열하였다. 생성된 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 HPLC (물 중 5-95% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물 (129.5 mg, 0.39 mmol, 59% 수율)을 수득하였다.
실시예 30: 4-시클로부틸아미노-2-(((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. DMF (10 mL) 중 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (2 g, 10.8 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 DIEA (4.2 g, 32.4 mmol) 및 시클로부탄아민 (2.3 g, 32.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화나트륨에 붓고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 고체 (1.7 g, 7.7 mmol, 71% 수율)로서 수득하였다.
B. 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르보니트릴 및 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴. 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (1.7 g, 7.7 mmol)을 DCM (30 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 이 혼합물에, mCPBA (4.6 g, 23 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액에 부었다. 수성 층을 DCM으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-(시클로부틸-아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르보니트릴 및 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸-술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴의 혼합물 (1.6 g 조 물질)을 황색 농후한 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
C. 4-(시클로부틸아미노)-2-(((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 상기 단계로부터의 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르보니트릴 및 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴의 혼합물 (1.6 g, 조 물질)에 (1r,4r)-4-메톡시시클로헥산아민 (0.96 g, 7.4 mmol), 1,4-디옥산 (100 mL) 및 DIEA (4.3 g, 33.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 감압 하에 모든 휘발성 용매를 제거한 후, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 33.3% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.3 g, 57% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
D. 4-(시클로부틸아미노)-2-(((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (8 mL) 중 4-(시클로부틸아미노)-2-(((1r,4r)-4-메톡시시클로헥실)-아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (700 mg, 2.3 mmol)의 혼합물에 수성 과산화수소 용액 (1.3 g, 30%, 11.5 mmol)에 이어서 수성 수산화나트륨 용액 (2 mL, 6 mol/L, 11.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 물 (30 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 수집하고, 건조시켜 목적 화합물 (400 mg, 1.25 mmol, 54% 수율)을 수득하였다.
실시예 31: 4-(시클로부틸아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르보니트릴 및 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴. 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (889 mg, 4.04 mmol; 본원에 기재된 합성)을 DCM (20 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 이 혼합물에, mCPBA (2.1 g, 12.1 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액에 부었다. 수성 층을 DCM으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르보니트릴 및 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴의 혼합물 (893 mg 조 물질)을 황색 농후한 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 4-(시클로부틸아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 상기 단계로부터의 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르보니트릴 및 4-(시클로부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴 (424 mg, 약 1.93 mmol)의 혼합물에 (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 (244 mg, 2.12 mmol), 1,4-디옥산 (50 mL) 및 DIEA (1.2 g, 9.65 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 감압 하에 모든 휘발성 용매를 제거한 후, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 고체 (305 mg, 1.06 mmol, 55.4% 수율)로서 수득하였다.
C. 4-(시클로부틸아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (6 mL) 중 4-(시클로부틸아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)-아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (305 mg, 1.06 mmol)의 용액에 수성 과산화수소 용액 (600.1 mg, 30%, 5.3 mmol)에 이어서 수성 수산화나트륨 용액 (1 mL, 6 mol/L, 5.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 표제 화합물 (248.2 mg, 0.81 mmol, 76.6% 수율)을 수득하였다.
실시예 32: 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드
A. (R)-tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트 및 (S)-tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트. 0℃에서 에틸 에테르 (498 mL) 중 (R)-4-메틸시클로헥스-3-엔아민 및 (S)-4-메틸시클로헥스-3-엔아민의 혼합물 (40.2973 g, 359 mmol; 문헌 [J. Org. Chem. 1992, 57, 3454 - 3462]에 기재된 바와 같이 제조됨)의 교반 용액에 에틸 에테르 (100 mL) 중 디-tert-부틸-디카르보네이트 (81 g, 362 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 천천히 실온으로 4시간에 걸쳐 가온되도록 한 다음, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 헥산 (500 mL)으로 연화처리한 다음, 5분 동안 0℃에서 교반한 다음, 여과하고, 헥산 (50 mL)으로 세척하여 생성물의 제1 수확물 (~55 g)을 수득하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 헥산으로 연화처리하고, 침전물을 여과하여 생성물의 제2 수확물 (~15 g)을 수득하였다. 이를 반복하여 생성물의 제3 수확물 (4.25 g)을 수득하였다. 3개의 수확물을 합하여 (R)-tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트 및 (S)-tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트의 혼합물 (74.25 g, 351 mmol, 98% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. tert-부틸 (1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트, tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트, tert-부틸 (1S,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트, tert-부틸 (1S,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트. 0℃에서 THF (780 mL) 중 (R)-tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트 및 (S)-tert-부틸 4-메틸시클로헥스-3-에닐카르바메이트의 혼합물 (13 g, 61.6 mmol)의 교반 용액에 1 M 보란 THF 착체 (277 mL, 277 mmol)를 첨가하였다. 용액을 0℃에서 교반하고, 1시간에 걸쳐 실온에 도달하게 한 다음, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (330 mL)로 매우 천천히 켄칭하고, 에탄올 (326 mL)로 희석하고, 5 N 수성 수산화나트륨 (308 mL, 1.54 mol)으로 염기성화시켰다. 교반하는 2상 혼합물에 30% 과산화수소 (316 mL, 3.08 mol)를 천천히 첨가하고, 생성된 혼합물을 45℃로 20시간 동안 가열하였다. 조 반응물을 포화 수성 아황산나트륨 (573 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (4 x 1 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 상기 반응을 5회 반복하였다 (3 x 13 g 및 2 x 11 g 출발 물질 사용). 모든 6개 반응으로부터 합한 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 tert-부틸 (1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트, tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실-카르바메이트, tert-부틸 (1S,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트 및 tert-부틸 (1S,3S,4S)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트의 혼합물 (55 g, 242 mmol, 72% 수율)을 고체로서 수득하였다. 4종의 구성성분 입체이성질체를 일련의 3개의 별개 칼럼 상에서 다중 주사를 이용하여 정제용 키랄 SFC에 의해 분리하였다. 제1 칼럼: 키랄팩 AD-H, 250x50 mm I.D., CO2 중 등용매 35% 메탄올. 제2 칼럼: 키랄팩 AD-H, 250x50 mm I.D., CO2 중 등용매 25% 메탄올. 제3 칼럼: 키랄팩 AD-H, 250x50 mm I.D., CO2 중 등용매 15% 에탄올. 분리된 이성질체를 분석 규모 키랄팩 AD-3 칼럼, 150x4.6 mm I.D., CO2 중 5-40% 메탄올 (0.05% 디에틸아민 포함) (15분 실행 시간) 상에서 특성화하고, 중간체 1 내지 중간체 4로서 표지하였다.
중간체 1: 2.0 g (8.72 mmol, 3.6% 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 4.77분.
중간체 2: 1.5 g (6.54 mmol, 2.7% 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 5.08분.
중간체 3: 16.0 g (69.78 mmol, 29.1% 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 5.48분.
중간체 4: 18.5 g (80.68 mmol, 33.6% 수율, SFC 정제로부터). 체류 시간: 7.79분.
소분자 X선 결정 구조를 중간체 3에 대해 해결하였고, 구조는 tert-부틸 (1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트인 것으로 입증되었다. X선 구조는 다음과 같이 해결하였다. 단결정 X선 회절 연구는 Cu Kα 방사선 (λ = 1.5478)을 갖춘 브루커 카파(Bruker Kappa) APEX CCD 회절계를 상에서 수행하였다. 대상체 화합물의 결정은 헥산의 헥산/THF 용액 내로의 증기 확산에 의해 성장하였다. 0.21 x 0.05 x 0.03 mm 무색 침상을 파라톤(Paratone) 오일과 함께 크리오루프(Cryoloop) 상에 탑재하였다. 데이터를 φ 및 ω 스캔을 이용하는 120(2) K에서 질소 기체 스트림으로 수집하였다. 결정에서 검출기까지의 거리는 60 mm이었고, 스캔폭 1.0°를 갖는 θ에 따라 가변성 노출 시간 (2s-20s)를 이용하였다. 데이터 수집은 θ에서 68.00°로 97.0% 완료하였다. 총 9000 반사는 다음 색인을 포함하도록 수집되었다. -33<=h<=32, -31<=k<=30, -6<=l<=5. 2554 반사는 대칭 비의존성으로 밝혀졌고, 여기서 Rint는 0.0602이었다. 색인화 및 단위 셀 정밀화는 마름모 6 각형 격자를 나타내었다. 공간군은 R3인 것으로 밝혀졌다. 데이터를 브루커 세인트(Bruker SAINT) 소프트웨어 프로그램을 이용하여 통합하고, SADABS 소프트웨어 프로그램을 이용하여 등급화하였다. 직접 방법 (SHELXS)에 의한 해결은 tert-부틸 (1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트의 구조와 일치하는 완전한 위상화 모델을 생성하였다.
모든 비-수소 원자는 전체-행렬 최소-제곱법 (SHELXL-97)에 의해 이방성으로 정밀화되었다. 모든 수소 원자를 라이딩 모델을 이용하여 위치시켰다. 그의 위치는 SHELXL-97에서 적절한 HFIX 명령을 이용하여 이들의 모분자에 대해 제약을 받았다.
C. (1R,2R,5R)-5-아미노-2-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드. 0℃에서 격렬히 교반하는 메탄올 (149 mL)에 아세틸 클로라이드 (15.87 mL, 223 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 이 용액에 tert-부틸 (1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실카르바메이트 (17.08 g, 74.5 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 22시간 동안 교반하였다. 조 반응물을 농축시킨 다음, 에틸 에테르 (2 x 300 mL)로 연화처리하여 (1R,2R,5R)-5-아미노-2-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (12.2 g, 73.6 mmol, 99% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
D. 5-브로모-N-tert-부틸-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민. 디옥산 (12.53 mL) 중 5-브로모-2-클로로-4-(메틸티오)피리미딘 (3 g, 12.53 mmol)에 2-메틸프로판-2-아민 (7.93 mL, 75 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 용기 내에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 100 mL 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 인산수소나트륨의 1M 수용액 50 mL로 세척하였다. 수성 층을 50 mL 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 5-브로모-N-tert-부틸-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민 (3.4 g, 12.31 mmol, 98% 수율)을 고체로서 수득하였다.
E. 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. 5-브로모-N-tert-부틸-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민 (3400 mg, 12.31 mmol), 아연 분진 (201 mg, 3.08 mmol), 시안화아연 (940 mg, 8.00 mmol), 1,1'-비스-(디페닐포스피노)-페로센 (552 mg, 0.985 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (564 mg, 0.616 mmol) 및 DMF (20.5 mL)를 합하고, 질소 하에 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 125 mL 에틸 아세테이트 및 50 mL 물로 희석한 다음, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물 층을 분리하고, 수성 층을 75 mL 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 2 x 50 mL 염수로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 오일로 농축시켰다. 조 오일을 실리카 겔 크로마토그래피 (0-30% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (2.26 g, 10.17 mmol, 83% 수율)을 수득하였다.
F. 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (7 mL) 중 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.6 g, 2.70 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 6M 수성 수산화나트륨 용액 (2.249 mL, 13.49 mmol) 및 30% 수성 과산화수소 (1.530 mL, 13.49 mmol) 용액을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 50℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (40 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5% 메탄올)에 의해 정제하여 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.462 g, 1.922 mmol, 71.2% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
G. 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 클로로포름 (12 mL) 중 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.1 g, 0.416 mmol)의 교반 용액에 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘 (0.130 g, 0.499 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성된 연황색 용액을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 에틸 아세테이트 (1 mL)를 첨가하고, 슬러리를 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.092 g, 0.359 mmol, 86% 수율)를 수득하였다.
H. 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (2 mL) 중 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.092 g, 0.359 mmol) 및 (1R,2R,5R)-5-아미노-2-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (0.065 g, 0.395 mmol)의 교반 현탁액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.157 mL, 0.897 mmol)을 첨가하고, 반응물을 90℃로 밤새 가열하였다. 조 반응 혼합물을 감압 하에 농축시킨 다음, 빙냉수 (20 mL)를 잔류물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 격렬히 1시간 동안 교반한 다음, 생성물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.074 g, 0.230 mmol, 64.1% 수율)를 수득하였다.
실시예 33: 2-(시클로프로필아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-(시클로프로필아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로-헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. NMP (5.832 mL) 중 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴 (362 mg, 1.166 mmol; 본원에 기재된 합성)의 용액에 시클로프로판아민 (0.485 mL, 7.00 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 밀봉된 용기 내에서 5시간 동안 교반한 다음, 밤새 주위 온도로 냉각되도록 하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 오일로 농축시키고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (0-60% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 2-(시클로프로필아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (265 mg, 0.922 mmol, 79% 수율)을 고체로서 수득하였다.
B. 2-(시클로프로필아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로-헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 2-(시클로프로필아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (265 mg, 0.922 mmol)을 DMSO (9.222 mL) 중에 용해시켰다. 용액에 50% 수성 수산화나트륨 10 방울에 이어서 30% 수성 과산화수소 10 방울을 실온에서 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 빙수 60 mL에 천천히 첨가하였다. 생성된 침전물을 30분 동안 교반하고, 여과하고, 물로 세척하였다. 고체를 진공 오븐 내 밤새 45℃에서 건조시켜 2-(시클로프로필아미노)-4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (229 mg, 0.750 mmol, 81% 수율)를 수득하였다.
실시예 34: 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4,4-디메틸시클로헥스-2-에놀. 수소화붕소나트륨 (5.03 g, 133 mmol)을 수조 내 메탄올 (403 mL) 중 4,4-디메틸시클로헥스-2-에논 (15.0 g, 121 mmol)의 교반 용액에 조금씩 나누어 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 용액을 질소 분위기 하에 실온에서 3시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 물 (150 mL)로 희석하고, 대부분의 메탄올을 감압 하에 제거하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 오일로 농축시켜 4,4-디메틸시클로헥스-2-에놀 (13.4 g, 106 mmol, 88% 수율)을 수득하였다.
B. 2-(4,4-디메틸시클로헥스-2-에닐)이소인돌린-1,3-디온. 수지 지지된 트리페닐포스핀 (32.7 g, 106 mmol), 이소인돌린-1,3-디온 (17.19 g, 117 mmol) 및 4,4-디메틸시클로헥스-2-에놀 (13.4 g, 106 mmol)을 합하고, THF (197 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 0℃로 냉각시킨 다음, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (21.09 mL, 107 mmol)를 2분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 교반하고, 천천히 주위 온도로 밤새 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 여과한 다음, 감압 하에 황색 고체로 농축시켰다. 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하고, 생성된 고체를 다시 여과하였다. 에틸 아세테이트 여과물을 물 (100 mL)로 세척하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시키고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (0-20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 2-(4,4-디메틸시클로헥스-2-에닐)이소인돌린-1,3-디온 (11.59 g, 45.4 mmol, 42.8% 수율)을 오일로서 수득하였다.
C. 2-((1R,2S,3S)-2-브로모-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온, 2-((1S,2R,3R)-2-브로모-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온, 2-((1R,2R,3R)-3-브로모-2-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온, 2-((1S,2S,3S)-3-브로모-2-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온의 혼합물. 클로로포름 (110 mL) 및 에탄올 (3.83 mL) 중 2-(4,4-디메틸시클로헥스-2-에닐)이소인돌린-1,3-디온 (11.59 g, 45.4 mmol)의 용액에 고체로서의 N-브로모숙신이미드 (10.34 g, 58.1 mmol)를 주위 온도에서 몇분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 반응 혼합물을 질소 하에 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 티오황산나트륨의 1 M 수용액 (100 mL)으로 세척하였다. 수성 층을 클로로포름 (100 mL)으로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시켰다. 이 오일에 150 mL THF (150 mL) 및 염산의 1N 수용액 (30 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. THF를 감압 하에 제거하고, 나머지 수성 층을 에틸 아세테이트 (150 mL) 및 1:1 물:포화 수성 중탄산나트륨 용액 혼합물 75 mL로 희석하였다. 층을 분리하고, 수층을 에틸 아세테이트 (75 mL)로 역추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시키고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (0-25% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 2-((1R,2S,3S)-2-브로모-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온, 2-((1S,2R,3R)-2-브로모-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온, 2-((1R,2R,3R)-3-브로모-2-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 및 2-((1S,2S,3S)-3-브로모-2-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온의 혼합물 (11.4 g, 32.4 mmol, 71.3% 수율)을 수득하였다.
D. 혼합물 2-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 및 2-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온. 2-((1R,2S,3S)-2-브로모-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온, 2-((1S,2R,3R)-2-브로모-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온, 2-((1R,2R,3R)-3-브로모-2-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 및 2-((1S,2S,3S)-3-브로모-2-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온의 혼합물 (5.7 g, 16.18 mmol)을 톨루엔 (90 mL) 및 메탄올 (9 mL) 중에 용해시켰다. 용액에 트리부틸주석 히드라이드 (5.66 mL, 21.04 mmol)를 10분에 걸쳐 시린지를 통해 질소 하에 첨가한 다음, 아조비스이소부티로니트릴 (0.266 g, 1.618 mmol)을 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 질소 분위기 하에 밤새 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (0-50% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 2-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 및 2-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온의 혼합물 (0.9 g, 3.29 mmol, 20.35% 수율)을 수득하였다.
생성물 혼합물의 위치화학을 소분자 X선 결정 회절에 의해 확인하였다. X선 구조를 다음과 같이 해결하였다. 단결정 X선 회절 연구는 Mo Kα 방사선 (λ = 0.71073 Å)을 갖춘 브루커 카파 APEX-II CCD 회절계를 상에서 수행하였다. 결정은 펜탄의 DCM 용액 내로의 증기 확산에 의해 성장하였다. 0.25 x 0.20 x 0.05 mm 무색 판을 파라톤 오일과 함께 크리오루프 상에 탑재하였다. 데이터를 φ 및 ω 스캔을 이용하는 90(2) K에서 질소 기체 스트림으로 수집하였다. 결정에서 검출기까지의 거리는 60 mm이었고, 노출 시간은 스캔폭 0.5°를 이용하여 프레임당 20초였다. 데이터 수집은 θ에서 25.00°로 100% 완료하였다. 총 10827 반사는 다음 색인을 포함하도록 수집되었다. -21<=h<=12, -7<=k<=8, -28<=l<=29. 2892 반사는 대칭 비의존성으로 밝혀졌고, 여기서 Rint는 0.0821이었다. 색인화 및 단위 셀 정밀화는 단순 사방 격자를 나타내었다. 공간군은 Pbcn인 것으로 밝혀졌다. 데이터를 브루커 세인트 소프트웨어 프로그램을 이용하여 통합하고, SADABS 소프트웨어 프로그램을 이용하여 등급화하였다. 직접 방법 (SHELXS)에 의한 해결은 거울상이성질체 쌍 2-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 및 2-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온의 혼합물의 제안된 구조와 일치하는 완전한 위상화 모델을 생성하였다.
모든 비-수소 원자는 전체-행렬 최소-제곱법 (SHELXL-97)에 의해 이방성으로 정밀화되었다. 모든 수소 원자는 라이딩 모델을 이용하여 위치시켰다. 그의 위치는 SHELXL-97에서 적절한 HFIX 명령을 이용하여 이들의 모분자에 대해 제약을 받았다.
E. (1R,5R)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 및 (1S,5S)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드의 혼합물. 에탄올 (50 mL) 중 2-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 및 2-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 (1.1 g, 4.02 mmol)의 혼합물에 히드라진 수화물 (0.195 mL, 4.02 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 환류 하에 밤새 질소 분위기 하에 교반되도록 하였다. 반응물을 주위 온도로 냉각시킨 다음, 진한 수성 염산의 첨가를 통해 pH를 < 2로 조정하였다. 침전물을 여과하고, 에탄올로 헹군 다음, 생성된 여과물을 감압 하에 20 mL로 농축시켰다. 동등한 부피의 물을 첨가하고, 이 혼합물을 주위 온도에서 15분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 물로 헹구고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 고체를 수득하였으며, 이를 진공 오븐 내 몇 시간 동안 건조시켜 (1R,5R)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 및 (1S,5S)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드의 혼합물 (835 mg, 4.65 mmol, 115% 수율)을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
F. 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-(tert-부틸아미노)-4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (4.877 mL) 중 2-(tert-부틸아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (375 mg, 1.46 mmol) 및 (1R,5R)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 및 (1S,5S)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드의 혼합물 (342 mg, 1.902 mmol)의 교반 현탁액에 DIEA (0.767 mL, 4.39 mmol)를 첨가하고, 반응물을 90℃로 밤새 가열하였다. 조 반응 혼합물을 감압 하에 농축시킨 다음, 역상 세미-정제용 HPLC (5-80% 아세토니트릴 + 물 중 0.1% TFA + 0.1% TFA, 30분에 걸침)를 이용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (125 mL) 및 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (50 mL)의 혼합물 중에 재용해시켰다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (75 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시키고, TFA 제거 (0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르로 연화처리하고, 재농축시켜 고체를 수득하였다. 고체를 진공 오븐 내 45℃에서 몇 시간 동안 건조시켜 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-(tert-부틸아미노)-4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 (373 mg, 1.112 mmol, 76% 수율)을 수득하였다.
G. 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-(tert-부틸아미노)-4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 혼합물의 SFC 분리. 거울상이성질체 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-(tert-부틸아미노)-4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 (373 mg)을 키랄팩 AD-H 250x30mm I.D. 칼럼, CO2 중 등용매 32% 에탄올 + 0.1% 수산화암모늄 구배, 50 mL/분을 이용하는 정제용 키랄 SFC에 의해 분리하였다. 보다 빠른 용리 이성질체를 피크 1로서 나타내었고, 155 mg (0.462 mmol)을 수득하였다. 보다 느린 용리 이성질체를 피크 2로서 나타내었고, 170.0 mg (0.502 mmol)을 수득하였다.
본원에 제공된 공지된 절대 입체화학의 유사한 화합물과의 SAR 효능 비교에 의해, 피크 1은 2-(tert-부틸아미노)-4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정되었다. 피크 2는 2-(tert-부틸아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정되었다.
실시예 35: 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 에틸 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (12 L) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (900 g, 3.87 mol), DIEA (876 mL, 5.05 mol) 및 이소프로필아민 (379 mL, 4.45 mol)을 합하고, 주위 온도에서 4시간 동안 혼합하였다. 추가량의 이소프로필아민 (50 mL, 0.59 mol)을 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 조 생성물을 물 (2 L)로 희석하였다. 수성 층을 클로로포름 (2 x 3 L)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 에틸 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (1042 g, 4.08 mol, >100% 수율, 미량의 DIEA로 오염됨)를 연갈색 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 에틸 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (1042 g, 4.08 mol, >100%, 미량의 DIEA로 오염됨)를 에탄올 (10 L) 중에 용해시키고, 생성된 용액에 2M 수성 수산화나트륨 용액 (3.87 L, 7.74 mol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 물 2 L로 희석한 다음, 메틸 t-부틸 에테르 (2 x 1.2 L)로 세척하였다. 수성 층의 pH를 2N 수성 염산 용액을 사용하여 pH 4.2-4.5로 조정하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (2 L) 및 헥산 (2 L)으로 세척한 다음, 진공 오븐 내 45℃에서 밤새 건조시켜 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (848 g, 96.5% 수율, 2 단계)을 회백색 고체로서 건조시켰다.
C. 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 무수 THF (6.9 L) 중 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (180 g, 0.792 mol) 및 HOBt (123 g, 0.911 mol)의 용액에 아세토니트릴 (3.7 L) 중 EDC (174.6 g, 0.911 mol)의 혼합물을 주위 온도에서 적가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 수성 수산화암모늄 용액 (989 mL, 28-30% 농축, 10 eq)을 30분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 온화한 환류로 3시간 동안 가열한 다음, 감압 하에 농축시켯다. 나머지 잔류물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (5 L)으로 희석한 다음, 에틸 아세테이트로 2회 (각각 9 L 및 2 L) 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (4 L), 물 (4 L)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드 (171.2 g, 95.5% 수율)를 고체로서 수득하였다.
D. 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 클로로포름 (22 L) 중 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (170 g, 0.751 mol)의 교반 용액에 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘 (235.6 g, 0.902 mol)을 조금씩 나누어 첨가하고, 생성된 용액을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 추가량의 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘 (19.6 g, 0.075 mol)를 첨가한 다음, 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 고체를 에틸 아세테이트 (1.5 L)로 주위 온도에서 1시간 동안 연화처리하고, 여과하고, 에틸 아세테이트 (250 mL)로 세척하고, 45℃에서 진공 오븐 내에서 밤새 건조시켜 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (167.7 g, 92% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
E. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(이소프로필아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 (262.4 g, 2.278 mol) 및 무수 DMF (79 mL)의 혼합물을 100℃로 가열하였다. 이 혼합물에 4-(이소프로필아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (157.7 g, 0.651 mol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 DMF를 제거하였다. 나머지 잔류물에 물 (2 L)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 2 L)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2 x 2 L)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 나머지 부피가 500 mL에 도달할 때까지 감압 하에 농축시켰다. 생성된 물질을 여과하고, 에틸 아세테이트 (800 mL)로 세척하였다. 생성물을 진공 오븐 내에서 밤새 45℃에서 건조시켰다. 생성물을 물 (2.1 L)로 4.5시간 동안 50℃에서 연화처리하고, 여과한 다음, 진공 오븐 내에서 밤새 45℃에서 건조시켜 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(이소프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (134 g, 70% 수율)를 수득하였다.
실시예 36: (1R,4r)-4-(5-시아노-4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드
A. tert-부틸 (1r,4r)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실카르바메이트. NMP (60 mL) 중 (1r,4r)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)시클로헥산카르복실산 (7.5 g, 30.8 mmol), EDC (20.09 g, 105 mmol), HOBt (16.05 g, 105 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 디메틸아민의 용액 (46.2 mL, 92 mmol) (THF 중 2.0 M)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2일 동안 교반하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하고, 상을 분리하였다. 유기 상을 포화 수성 탄산칼륨 용액에 이어서 1M 수성 염화수소 용액 및 염수로 2회 세척하였다. 유기 상을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 목적 생성물 (5.8 g, 19.3 mmol, 96% 수율)을 수득하였다.
B. (1r,4r)-4-아미노-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 히드로클로라이드. tert-부틸 (1r,4r)-4-(디메틸카르바모일)시클로헥실카르바메이트 (8.27 g, 30.6 mmol)를 디옥산 (110 mL) 중에 용해시키고, 염산 (38.5 mL, 1267 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 톨루엔을 첨가하고, 용매를 증발시켜 생성물 (6.0 g, 29.0 mmol, 95% 수율)을 수득하였다.
C. (1r,4r)-4-(5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드. 에탄올 (7.5 mL) 중 5-브로모-2-클로로-4-(메틸티오)피리미딘 (1.5 g, 6.26 mmol)의 교반 현탁액에 (1r,4r)-4-아미노-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 히드로클로라이드 (1.618 g, 7.83 mmol) 및 DIEA (3.28 mL, 18.79 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 에탄올을 감압 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-90% 에틸 아세테이트)를 이용하여 정제하여 (1r,4r)-4-(5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 (1085 mg, 2.91 mmol, 46.4% 수율)를 수득하였다.
D. (1r,4r)-4-(5-시아노-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드. (1r,4r)-4-(5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 (500 mg, 1.339 mmol), 아연 분진 (21.90 mg, 0.335 mmol), 시안화아연 (102 mg, 0.871 mmol), 1,1'-비스-(디페닐포스피노)-페로센 (60.0 mg, 0.107 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (61.3 mg, 0.067 mmol) 및 N,N-디메틸아세트아미드 (2.178 mL)를 합하고, 생성된 혼합물을 혼합하고, 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (125 mL) 및 물 (50 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (75 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였다. 오일을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-10% 메탄올)를 이용하여 정제하여 (1r,4r)-4-(5-시아노-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 (400 mg, 1.252 mmol, 93% 수율)를 고체로서 수득하였다.
E. (1r,4r)-4-(5-시아노-4-(메틸술포닐)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드. 0℃에서 NMP (6.261 mL) 중 (1r,4r)-4-(5-시아노-4-(메틸티오)-피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 (400 mg, 1.252 mmol)의 용액에 mCPBA (702 mg, 3.13 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 이어서, 용액을 후속 단계에 추가 정제 없이 직접 사용하여 이론적 수율의 (1r,4r)-4-(5-시아노-4-(메틸술포닐)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 (440 mg, 1.25 mmol, 100% 수율)를 수득하였다.
F. (1R,4r)-4-(5-시아노-4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)-피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드. NMP (6.261 mL) 중 (1r,4r)-4-(5-시아노-4-(메틸술포닐)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸시클로헥산카르복스아미드 (440 mg, 1.252 mmol)의 용액에 (1S,3R)-3-아미노-1-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (259 mg, 1.565 mmol) 및 DIEA (1.312 mL, 7.51 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 4시간 동안 교반한 다음, 주위 온도로 밤새 냉각시켰다. 조 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 역상 세미-정제용 HPLC (5-60% 아세토니트릴 + 물 중 0.1% TFA + 0.1% TFA, 30분에 걸침)를 이용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시키고, TFA 제거 (튜브당 0.9 mmol 중탄산염 등가)을 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시키고, 감압 하에 농축시키고, 진공 오븐 내 45℃에서 밤새 건조시켜 (1R,4r)-4-(5-시아노-4-((1R,3S)-3-히드록시-3-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-2-일아미노)-N,N-디메틸-시클로헥산카르복스아미드 (138 mg, 0.345 mmol, 27.5% 수율)를 수득하였다.
실시예 37: 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-(메틸티오)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (500 mg, 2.69 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 용해시키고, 2-메틸부탄-2-아민 (0.378 mL, 3.24 mmol) 및 DIEA (1.411 mL, 8.08 mmol)를 첨가하고, 반응물을 70℃에서 밤새 가열하였다. LCMS는 목적 생성물 질량을 우세한 피크로서 나타내었고, 출발 물질이 전혀 남아있지 않았다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 1회 세척한 후, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 응축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피 (1650 mL 초과의 헥산 중 0-80% 에틸 아세테이트; 40 mL/분)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 2-(메틸티오)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (359 mg, 1.519 mmol, 56.4% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. 2-(메틸술포닐)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 2-(메틸티오)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (350 mg, 1.481 mmol)을 NMP (5 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시킨 후, mCPBA (664 mg, 2.96 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 유지하고, 실온으로 천천히 가온되도록 하였다. 2시간 후, LCMS는 목적 생성물을 우세한 피크로서 나타내었고, 출발 물질이 전혀 존재하지 않았다. 조 반응 혼합물을 후속 단계에 직접 사용하여 이론적 수율의 술폰을 수득하였다.
C. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 상기 단계로부터의 조 반응 혼합물에 (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 히드로클로라이드 (269 mg, 1.775 mmol) 및 DIEA (1.034 mL, 5.92 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응물을 70℃에서 밤새 가열하였다. LCMS는 목적 생성물을 우세한 피크로서 나타내었고, 출발 물질이 전혀 남아있지 않았다. 반응물을 가열로부터 제거한 다음, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 1회 세척한 후, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 물질을 세미-정제용 HPLC (5-80% 아세토니트릴 + 물 중 0.1% TFA + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 감압 하에 부피 <5 mL로 농축시켰다. 이어서, 물질을 포화 중탄산나트륨으로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 고체를 메탄올 중에 용해시키고, 메탄올로 용리하면서 스트라토스피어스 SPE PL-HCO3 MP-수지 칼럼을 통해 세척하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (200 mg, 0.659 mmol, 45% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
D. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (141 mg, 0.465 mmol)을 DMSO (3 mL) 중에 용해시키고, 50% 수성 수산화나트륨 10 방울 및 30% 수성 과산화수소 10 방울을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응물을 50℃에서 가열하였다. 30분 후, LCMS는 목적 생성물을 우세한 피크로서 나타내었고, 출발 물질이 전혀 남아있지 않았다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 빙수 ~50 mL에 천천히 첨가하였다. 생성된 물질을 3시간 동안 혼합되도록 한 후, 여과하고, 고진공 하에 60℃에서 밤새 건조시켰다. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(tert-펜틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (125 mg, 0.389 mmol, 84% 수율)를 수득하였다.
실시예 38: 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-((1R,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 에틸 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트. 에탄올 (2.4 L) 중 에틸 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (200 g, 0.86 mol), 비시클로[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드 (171 g, 1.11 mol; 문헌 [Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)]에 따라 제조됨) 및 DIEA (278 g, 2.15 mol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 완료 후, 용매를 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 물 (1 L)로 희석하였다. 수성 층을 클로로포름 (2 x 1 L)으로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 증발시켜 목적 화합물 (231 g, 0.83 mol, 96% 수율)을 연갈색 오일로서 수득하였으며, 이는 미량의 DIEA로 오염되었다. 이 생성물을 후속 반응에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산. 에틸 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실레이트 (120 g, 0.43 mol)를 에탄올 (1.5 L) 중에 용해시킨 다음, 수성 수산화나트륨 용액 (530 mL, 1.06 mol, 2M)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 (<42℃ 조 온도) 하에 증발시켰다. 혼합물을 물 500 mL로 희석하고, tert-부틸 메틸 에테르 (2 x 500 mL)로 세척하였다. 수성 층을 수성 염산 용액 (2N)으로 pH 4.2-4.5까지 처리하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집한 다음, 물 (500 mL) 및 헥산 (500 mL)으로 세척하였다. 습윤 케이크를 밤새 감압 하에 45℃에서 건조시켜 목적 화합물 (108 g, 0.43 mol, 100% 수율)을 회백색 고체 (116 mg, 0.365 mmol, 54.7% 수율)로서 수득하였다.
C. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 무수 THF (4 L) 중 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (108 g, 0.43 mol) 및 HOBt (67 g, 0.49 mol)의 교반 용액에 아세토니트릴 (2 L) 중 EDC (94 g, 0.49 mol)의 혼합물을 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 수성 수산화암모늄 (600 mL, 28-30% 농축, 10 eq)을 30분에 걸쳐 적가한 다음, 혼합물을 온화한 환류로 3시간 동안 가열하였다 (60±5℃). 모든 용매를 감압 하에 제거한 후, 잔류 페이스트/고체를 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (2 L)으로 희석하고, 생성된 현탁액을 여과하여 목적 화합물 (100 g, 0.4 mol, 93% 수율)을 회백색 솜털모양의 고체로서 수득하였다.
D. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 클로로포름 (7 L) 중 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (76 g, 0.304 mol)의 교반 용액에 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘 (143 g, 0.547 mol, 1.8 당량)를 첨가하고, 생성된 연황색 용액을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 에틸 아세테이트 (1.5 L)로 희석하고, 슬러리를 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 목적 화합물 (73 g, 0.274 mol, 90% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
E. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 (151.4 g, 1.314 mol) 및 무수 DMF (500 mL)의 혼합물을 ~100℃에서 가열하였다. 이 혼합물에 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (100 g, 0.376 mol)를 질소 분위기 하에 조금씩 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 110℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 ~45℃로 냉각시키고, DMF를 감압 하에 제거한 다음, 물 (500 mL) 및 에틸 아세테이트 (500 mL)를 첨가하였다. 생성된 백색 슬러리를 여과하고, 에틸 아세테이트 (50 mL)로 세척하였다. 고체를 진공 하에 55℃에서 48시간 동안 건조시켜 조 생성물 100 g을 수득하였다. 미량의 유기 용매를 제거하기 위해, 조 생성물을 물 (1 L) 중에 현탁시키고, 4.5시간 동안 교반하면서 내부 온도를 50±1℃에서 유지하였다. 슬러리를 45-50℃에서 여과하고, 물 (50 mL)로 헹구었다. 습윤 케이크를 48시간 동안 45-50℃에서 진공 하에 건조시켜 목적 화합물 (92 g, 0.289 mol, 77% 수율)을 수득하였다.
실시예 39: 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. (1r,4r)-4-(5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)-시클로헥산올. 3-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 J-KEM 온도 제어기, 기계식 교반기 및 질소 유입구를 장착하였다. 플라스크에 5-브로모-2-클로로-4-(메틸티오)피리미딘 (100 g, 417.5 mmol), (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 (76.4 g, 663.4 mmol) 및 에탄올 (1 L)을 채웠다. DIEA (109 mL, 626.3 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 밤새 환류로 가열하였다. TLC (1:1 헥산/에틸 아세테이트) 분석은 20시간 후 반응 완료를 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 물 (300 mL)을 첨가하고, 침전물이 서서히 형성되었다. 고체를 여과하고, 물로 세척하여 백색 고체 111.7 g을 수득하였다. 여과물을 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 반고체로 농축시켰다. 반고체를 1:1 헥산/에틸 아세테이트로 슬러리로 만들고, 여과하여 추가로 백색 고체 12.1 g을 수득하였다. 두 배치를 합하여 (1r,4r)-4-(5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)시클로헥산올 123.8 g (93%)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. 2-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 J-KEM 온도 제어기, 기계식 교반기 및 질소 유입구를 장착하였다. 플라스크에 질소 하에 (1r,4r)-4-(5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-일아미노)시클로헥산올 (123.8 g, 389 mmol), 시안화아연 (29.2 g, 249 mmol), 아연 분진 (6.36 g, 97 mmol) 및 N,N-디메틸아세트아미드 (478 mL)를 채웠다. 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (17.8 g, 0.05 당량) 및 1,1'-비스-(디페닐포스피노)-페로센 (17.25 g, 0.08 당량)을 첨가하고, 혼합물을 질소로 퍼징하였다. 반응물을 100℃로 밤새 가열하였다. TLC (2:1 에틸 아세테이트/헥산) 분석은 17시간 후 반응 완료를 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 에틸 아세테이트 (2 L)로 희석하였다. 혼합물을 짧은 셀라이트-패드를 통해 여과하고, 패드를 에틸 아세테이트 (3 x 400 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 물 (1 L) 및 염수 (400 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜 대부분의 용매를 제거하고, 베이지색 침전물이 형성되었다. 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 세척하여 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실-아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴을 베이지색 고체 55 g (54%)으로서 수득하였다.
C. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)-피리미딘-5-카르보니트릴 및 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴. NMP (10 mL) 중 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.700g, 2.65 mmol)의 교반 무색 용액에 0℃에서 mCPBA (1.306 g, 5.83 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 LCMS에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료시까지 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
D. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로프로필-아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 상기 단계로부터의 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르보니트릴 및 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴의 반응 혼합물에 DIEA (2.78 mL, 15.89 mmol) 및 1-메틸시클로프로판아민 히드로클로라이드 (0.627 g, 5.83 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 농축시키고, 헥산 중 0% - 80% 에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 2-((1s,4s)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.147g, 19% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다.
E. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로프로필-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.225 g, 0.783 mmol)을 DMSO (15 ml) 중에 용해시켰다. 수산화나트륨 (50% wt, 175 μL, 0.78 3 mmol) 및 30% 과산화수소 (175 μL, 1.543 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙수 300 mL에 부었다. 수성 층을 클로로포름 중 20% 이소프로판올 (x3)로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 혼합물을 역상 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 물 중 0% - 90% 메탄올의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 농축시켜 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.181 g, 76% 수율)를 수득하였다.
실시예 40: 4-((R)-1-시클로프로필에틸아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 2-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 J-KEM 온도 제어기, 기계식 교반기 및 질소 유입구를 장착하였다. 플라스크에 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (54 g, 204.3 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 DMSO (270 mL)를 채우고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. 수산화나트륨 용액 (170 mL, 1021 mmol, 물 중 6 M) 및 과산화수소 용액 (99 mL, 1021 mmol, 물 중 35%)을 반응 혼합물에 천천히 첨가하였다. 30℃로의 발열이 관찰되었다. 반응물을 50℃로 15분 동안 가열하였다. TLC (10% 메탄올/에틸 아세테이트) 분석은 반응 완료를 나타내었다. 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 물 (800 mL)로 희석하고, 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하여 조 고체 18 g을 수득하였다. 추가의 생성물을 회수하기 위해, 여과물을 에틸 아세테이트 (18 x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (75 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 고체 33 g을 수득하였다. 조 고체를 합하고, 실리카 겔 상에서 0-15% 메탄올/에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 회백색 고체 26 g을 수득하였다. 고체를 아세토니트릴 중에 슬러리화하고, 여과하여 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 19.5 g (33%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
B. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (5 mL) 중 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.400 g, 1.42 mmol)의 교반 황색 용액에 0℃에서 mCPBA (0.635 g, 2.83 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 LCMS에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료시까지 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
C. 4-((R)-1-시클로프로필에틸아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. 상기 반응으로부터의 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드의 반응 혼합물에 DIEA (1.56 mL, 8.95 mmol) 및 (R)-1-시클로프로필에탄아민 (0.254 g, 2.98 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료된 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 물 중 0% - 90% 메탄올의 구배를 사용하여 역상 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 목적 분획을 DCM 중 암모니아로 포화된 0% - 15% 메탄올의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 다시 정제한 다음, 역상 세미-정제용 HPLC (0-50% 아세토니트릴 + 물 중 0.1% TFA + 0.1% TFA, 30분에 걸침)로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시키고, TFA 제거 (튜브당 0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 4-((R)-1-시클로프로필에틸아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.104 g, 22% 수율)를 수득하였다.
실시예 41: 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 5-브로모-N-(1-메틸시클로프로필)-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민. 에탄올 (6.0 mL) 중 5-브로모-2-클로로-4-(메틸티오)피리미딘 (1.0 g, 4.18 mmol)의 교반 현탁액에 1-메틸시클로프로판아민 히드로클로라이드 (0.674 g, 6.26 mmol) 및 DIEA (2.188 mL, 12.53 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 농축시키고, 헥산 중 0% - 20% 에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 5-브로모-N-(1-메틸시클로프로필)-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민 (0.665g, 58% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. 5-브로모-N-(1-메틸시클로프로필)-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민 (0.665 g, 2.425 mmol), 아연 (0.040 g, 0.606 mmol), 시안화아연 (0.185 g, 1.577 mmol), 1,1'-비스-(디페닐포스피노)-페로센 (0.109 g, 0.194 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.111 g, 0.121 mmol) 및 N, N'-디메틸아세트아미드 (6 mL)의 흑색 현탁액을 질소로 플러싱하고, 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타는 바와 같이 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 125 mL 에틸 아세테이트 및 물 50 mL로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 75 mL로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 2 x 50 mL 염수로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시켰다. 조 오일을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 헥산 중 0% - 30% 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.449 g, 84% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다.
C. 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴. NMP (6 mL) 중 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸티오)-피리미딘-5-카르보니트릴 (0.449 g, 2.04 mmol)의 교반 무색 용액에 0℃에서 mCPBA (1.142 g, 5.10 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 LCMS에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료시까지 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
D. 4-((3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필-아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 상기 단계로부터의 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르보니트릴의 반응 혼합물에 DIEA (2.14 mL, 12.22 mmol) 및 (1R,2R,5R)-5-아미노-2-메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 (0.371 g, 2.241 mmol; 본원에 기재된 합성)를 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 농축시키고, 헥산 중 0% - 60% 에틸 아세테이트의 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켜 4-((3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.185g, 30% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다.
E. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.181 g, 0.601 mmol)을 DMSO (6 mL) 중에 용해시켰다. 50% 수성 수산화나트륨 10 방울 (0.047 mL, 0.901 mmol) 및 30% 수성 과산화수소 10 방울을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 빙수 300 mL에 부었다. 수성 층을 20% iPrOH/클로로포름 (x3)으로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 조 혼합물을 역상 세미-정제용 HPLC (물 중 0-50% 아세토니트릴 + 0.1% TFA + 0.1% TFA, 30분에 걸침)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시킨 다음, TFA 제거 (튜브당 0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브 상에 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.069 g, 36% 수율)를 수득하였다.
실시예 42: 4-(tert-부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온. 톨루엔 (250 mL) 및 DMF (250 mL) 중 이소벤조푸란-1,3-디온 (90 g, 0.6 mol) 및 (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 (70 g, 0.6 mol)의 교반 용액을 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가하고, 생성물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다 (119 g, 0.48 mol, 수율: 81%).
B. 2-((1r,4r)-4-(비닐옥시)시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온. 에톡시에텐 (500 mL) 중 아세트산팔라듐 (11 g, 0.048 mol)을 0℃에서 15분 동안 교반한 다음, 에톡시에텐 (1000 mL) 중 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 (118 g, 0.48 mol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 3일 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 생성된 여과물을 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 16.7% - 25% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (80 g, 0.29 mol, 수율: 61%)로서 수득하였다.
C. 2-((1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온. 디에틸 에테르 (100 mL) 및 수산화칼륨 (2.5 N, 50 mL)의 교반 혼합물에 0℃에서 1-니트로소우레아 (38 g, 0.37 mol)를 첨가하였다. 15분 후, 에테르 상을 수집하고, 디에틸 에테르 (100 mL) 및 DCM (100 mL) 중 2-((1r,4r)-4-(비닐옥시)시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 (10 g, 36.9 mmol) 및 아세트산팔라듐 (826 mg, 3.69 mmol)의 혼합물에 조심스럽게 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 생성 절차 및 디아조메탄의 에테르성 용액의 첨가를 3회 반복하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물 중 고체를 여과하고, 여과물을 수집하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 25% 에틸 아세테이트에 이어서 석유 에테르 중 33% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 2-((1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 (9.3 g, 32.6 mmol, 수율: 88%)을 수득하였다.
D. (1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥산아민. 메탄올 (600 mL) 중 2-((1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥실)이소인돌린-1,3-디온 (30 g, 0.10 mol) 및 히드라진 수화물 (18.9 g, 0.31 mol)의 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 여과물을 수집하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 3.33% 메탄올)에 의해 정제하여 (1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥산아민을 황색 오일 (10 g, 64.5 mmol, 수율: 61%)로서 수득하였다.
E. 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (6 mL) 중 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.500 g, 2.081 mmol; 본원에 기재된 합성)의 교반 용액에 0℃에서 mCPBA (0.933 g, 4.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 LCMS에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료시까지 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
F. 4-(tert-부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. 상기 단계로부터의 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸술포닐)-피리미딘-5-카르복스아미드의 반응 혼합물에 DIEA (1.5 mL, 8.33 mmol) 및 (1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥산아민 (0.485 g, 3.12 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 및 TLC에 의해 나타난 바와 같은 반응 완료에 따라, 반응 혼합물을 빙수 ~70 mL에 천천히 첨가하였다. 이 생성물을 여과하고, 물에 이어서 최소량의 에탄올 및 디에틸 에테르로 세척한 다음, 건조시켜 표제 화합물 4-(tert-부틸아미노)-2-((1r,4r)-4-시클로프로폭시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.214g, 30% 수율)를 수득하였다.
실시예 43: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (240 mg, 0.950 mmol; 본원에 기재된 합성), (1R,4R)-4-아미노시클로헥산올 히드로클로라이드 (216 mg, 1.425 mmol) 및 탄산세슘 (619 mg, 1.899 mmol)을 1,4-디옥산 (10 mL) 중에 현탁시키고, 80℃에서 3시간 동안 가열하였다. LCMS는 목적 생성물 질량을 우세한 피크로서 나타내었고, 출발 물질이 전혀 남아있지 않았다. 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 10-100% 에틸 아세테이트에 이어서 DCM 중 0-15% 메탄올)에 의해 정제하여 표제 화합물 (159 mg, 0.480 mmol, 50.5% 수율)을 수득하였다.
실시예 44: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4R)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. DMSO (6.0 mL) 중 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (113 mg, 0.447 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 (1r,4r)-4-(2,2,2-트리플루오로에톡시)시클로-헥산아민 (150 mg, 0.761 mmol; 본원에 기재된 합성)의 교반 용액에 DIEA (0.156 mL, 0.895 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 3일 동안 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중, 0-40% 에틸 아세테이트 + 메탄올 중 10% 7 N 암모니아)를 이용하여 정제하여 표제 화합물 (156 mg, 0.378 mmol, 84.6% 수율)을 수득하였다.
실시예 45: 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴
A. 2-((1r,4R)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥실아미노)-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로-헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴. DMSO (4.0 mL) 중 2-클로로-4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴 (100 mg, 0.396 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 (1r,4r)-4-(디플루오로메톡시)시클로헥산아민 (131 mg, 0.791 mmol; 본원에 기재된 합성)의 교반 용액에 DIEA (0.138 mL, 0.791 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중, 5-40% 에틸 아세테이트 + 10% 암모니아 포화 메탄올)를 이용하여 정제하여 표제 화합물 (130 mg, 0.340 mmol, 86.0% 수율)을 수득하였다.
실시예 46: 4-(tert-부틸아미노)-2-(4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 시클로펜탄-1,3-디카르복실산. 22-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, J-KEM 온도 제어기 및 질소 유입구를 장착하였다. 플라스크에 노르보르넨 (200 g, 2.123 mol), 에틸 아세테이트 (1.95 L) 및 아세토니트릴 (1.95 L)을 채웠다. 반응 혼합물을 아세톤/드라이아이스 조를 이용하여 5℃로 냉각시켰다. 삼염화루테늄 (9.69 g, 46.72 mmol)을 한 번에 첨가한 다음, 물 (2.925 L) 중 과아이오딘산나트륨 (1.816 kg, 8.707 mol)의 현탁액을 30분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 반응은 천천히 발열하기 시작하고, 10℃ 내지 15℃의 온도에서 유지되도록 모니터링하였다. 90분 후, 반응 혼합물이 교반이 어려워지는 지점까지 갑자기 농후해지고, 39℃까지 빠르게 발열하였다 (대량의 드라이아이스를 냉각조에 첨가하여 발열을 제어함). 반응 혼합물을 20℃로 냉각되도록 하고, 드라이아이스/아세톤 조를 제거하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 고체를 셀라이트 패드를 통한 여과에 의해 제거하고, 여과물을 고체로 농축시키고, 이를 헥산 (2 L)으로 연화처리하고, 여과하고, 헥산 (2 x 500 mL)으로 헹구어 시클로펜탄-1,3-디카르복실산 195 g (58%)을 수득하였다.
B. 디메틸 시클로펜탄-1,3-디카르복실레이트. 5-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, J-KEM 온도 제어기 및 환류 응축기를 장착하였다. 플라스크에 시클로펜탄-1,3-디카르복실산 (357 g, 2.262 mol) 및 메탄올 (1.75 L)을 채웠다. 용액을 빙수조를 이용하여 7℃로 냉각시켰다. 진한 황산 (70 mL)을 30분에 걸쳐 적가하여 12℃까지의 발열을 생성하였다. TLC 분석 (10 % 메탄올/에틸 아세테이트)이 반응 완료를 나타내면, 반응 혼합물을 16시간 동안 환류로 가열하고 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 메틸 tert-부틸 에테르 중에 재용해시키고, 포화 수성 중탄산나트륨 (2 x 150 mL) 및 염수 (2 x 150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성된 투명한 오일을 헥산 (2 L) 중에 용해시키고, 2 N 수성 수산화나트륨 용액 (950 mL)으로 pH ~ 10까지 처리하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 헥산 (4 x 1 L)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 디메틸 시클로펜탄-1,3-디카르복실레이트 360 g (100%)을 투명한 오일로서 수득하였다.
C. 디메틸 비시클로[2.2.1]헵탄-1,4-디카르복실레이트. 22-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 J-KEM 온도 제어기, 기계식 교반기, 질소 유입구 및 첨가 깔때기를 장착하였다. 플라스크를 질소로 플러싱한 다음, 무수 THF (5 L) 및 디이소프로필아민 (731 mL, 5.219 mol)을 채웠다. 용액을 드라이아이스/아세톤 조를 이용하여 -20℃로 냉각시켰다. 교반 혼합물을 헥산 중 1.6 M n-부틸리튬 (3.02 L, 4.833 mol)으로 캐뉼라를 통해 1시간에 걸쳐 천천히 처리하여 온도를 -20℃ 내지 -27℃에서 유지하였다. 반응 혼합물을 -40℃로 냉각시키고, 헥사메틸포스포르아미드 (2.7 L, 16.317 mol)를 첨가 깔때기를 통해 40분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -73℃로 냉각시키고, 무수 THF (2 L) 중에 용해시킨 디메틸 시클로펜탄-1,3-디카르복실레이트 (360 g, 1.933 mol)를 첨가 깔때기를 통해 2시간에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -10℃로 가온하고, 그 온도에서 30분 동안 교반한 다음, -70℃로 냉각시키고, 1-브로모-2-클로로에탄 (267 mL, 3.209 mol)으로 첨가 깔때기를 통해 4시간에 걸쳐 처리하였다. 반응 혼합물을 12시간에 걸쳐 실온으로 천천히 가온되도록 한 다음, 포화 수성 염화암모늄 (2 L)으로 90분에 걸쳐 켄칭하였다. 반응 혼합물을 헥산 (2 L)으로 희석하고, 층을 분리하고, 수성 층을 헥산 (3 x 2 L)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2 x 1 L)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 갈색 오일로 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 정제 (0-10 % 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 거의 농축 건조시키고, 헥산으로 희석하였다. 생성된 결정질 고체를 여과하고, 헥산 (200 mL)으로 세척하여 순수한 생성물을 투명한 결정질 고체로서 수득하였다. 생성물의 추가 배치를 유사한 방식으로 여과물로부터 수득하였다. 모든 생성물 배치를 합하여 디메틸 비시클로[2.2.1]헵탄-1,4-디카르복실레이트 208 g (51%)을 투명한 결정질 고체로서 수득하였다.
D. 4-(메톡시카르보닐)비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산. 12-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, J-KEM 온도 제어기 및 250 mL 첨가 깔때기를 장착하였다. 플라스크에 디메틸 비시클로[2.2.1]헵탄-1,4-디카르복실레이트 (208 g, 980 mmol) 및 THF (6.7 L)를 채웠다. 생성된 용액을 빙수조를 이용하여 15℃로 냉각시켰다. 수산화나트륨 펠릿 (39.2 g, 980 mmol)을 메탄올 (400 mL) 중에 용해시키고, 교반 용액에 30분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 백색 고체가 침전되기 시작하였다. TLC 분석 (100% 에틸 아세테이트)이 약 90% 전환율을 나타내면, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 헥산 (2 L) 중에 슬러리화시키고, 여과하고, 헥산 (2 x 400 mL)으로 세척하였다. 생성된 나트륨 카르복실레이트 염을 기계식 교반기가 장착된 3-L, 3구 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 물 (1 L) 중에 용해시키고, 2 N 수성 염산 (430 mL)으로 10℃에서 pH ~ 4까지 천천히 처리하였다. 농후한 현탁액을 에틸 아세테이트 (1 L)로 희석하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 500 mL)로 추가로 추출하고, 염수 (200 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 4-(메톡시카르보닐)비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 170 g (87%)을 수득하였다.
E. 4-(벤질옥시카르보닐아미노)비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산. 2-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, J-KEM 온도 제어기, 환류 응축기 및 질소 유입구를 장착하였다. 플라스크에 4-(메톡시카르보닐)비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 (100 g, 0.504 mol) 및 무수 톨루엔 (500 mL)을 채웠다. 플라스크를 10℃로 냉각시키고, DIEA (175 mL, 1.008 mol)를 5분에 걸쳐 천천히 첨가하여, 14℃까지 온화한 발열을 생성하였다. 디페닐포스폰산 아지드 (130 mL, 0.605 mol)를 반응 혼합물에 천천히 첨가하였다. 기체-배출이 시작되면, 혼합물을 약 60℃로 가열하였다. 반응물이 신속하게 다량의 기체를 생성하고, 환류 하에 발열되었다. 반응물을 환류 (110℃) 하에 2시간 동안 교반한 다음, 50℃로 냉각시키고, 벤질 알콜 (104 mL, 1.008 mol)로 5분에 걸쳐 천천히 처리하였다. 반응물을 110℃로 다시 가열하고, 40시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 오일로 농축시키고, 에틸 아세테이트 (2 L) 중에 용해시키고, 염수 (500 mL)로 세척하고, 염수 층을 에틸 아세테이트 (2 x 400 mL)로 추출하였다. 합한 유기부를 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 조 오일로 농축시키고, 이를 기계식 교반기, J-KEM 온도 제어기 및 질소 유입구가 장착된 5-L, 3구 둥근 바닥 플라스크로 옮겼다. 플라스크에 메탄올 (2 L)을 채웠다. 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 2N 수산화나트륨 (500 mL)으로 5분에 걸쳐 처리하여 16℃까지 발열을 생성하였다. TLC 분석 (20% 메탄올/에틸 아세테이트)이 반응 완료를 나타내면, 반응물을 60℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 메탄올을 진공 하에 제거하였다. 냉각시키면서, 반응 혼합물을 2 N 염산 (480 mL)을 사용하여 pH 2-3으로 산성화시켰다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 L, 이어서 500 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (400 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 갈색 오일로서 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (20-100% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 4-(벤질옥시카르보닐아미노)-비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 132 g (91%)을 수득하였다.
F. 4-아미노비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산. 2-L 파르 병에 4-(벤질옥시카르보닐아미노)비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 (105 g, 363 mmol), 메탄올 (500 mL), 0.8 N 염산 (500 mL) 및 탄소 상 10% 팔라듐 (38.6 g, 18.15 mmol, 50% wet, 물 함유)을 채웠다. TLC 분석 (10% 메탄올/에틸 아세테이트)이 반응 완료를 나타내면, 반응 혼합물을 파르 진탕기 상에서 30 gpsi 수소 하에 10시간 동안 반응시켰다. 촉매를 셀라이트의 짧은 플러그를 통한 여과에 의해 제거하고, 플러그를 물 (4 x 100 mL)로 완전히 세척하였다. 여과물을 농축시켜 4-아미노비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 (56.3 g, 100%)을 습윤 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
G. 4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산. 2-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, 환류 응축기, J-KEM 온도 제어기 및 질소 유입구를 장착하였다. 플라스크에 4-아미노비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 (56.3 g, 363 mmol) 및 10% 수성 아세트산 (340 mL)을 채웠다. 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 물 (125 mL) 중 아질산나트륨 (75.0 g, 1.088 mol)을 첨가 깔때기를 통해 45분에 걸쳐 천천히 처리하였다. 상당한 양의 기체 발생이 관찰되었고, 반응 혼합물을 65℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 5℃로 냉각시키고, 메탄올 (400 mL) 중 수산화칼륨 (183 g, 3.265 mol)으로 첨가 깔때기를 통해 30분 동안 천천히 처리하였다. TLC 분석 (10% 메탄올/에틸 아세테이트)이 반응 완료를 나타내면, 반응물을 65℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 메탄올을 제거하고, 나머지 수성 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 x 400 mL)로 추출하였다. 수성 층을 빙수조 중에서 냉각시키면서 진한 염산 (210 mL)을 사용하여 pH 3으로 산성화시켰다. 생성된 고체 (불순물)를 여과하고, 물 (2 x 30 mL)로 세척하였다. 여과물을 에틸 아세테이트 (10 x 400 mL)로 추출하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축 건조시켜 4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 53 g (94%)을 수득하였다.
H. 벤질 4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-일카르바메이트. 3-L, 3구 둥근 바닥 플라스크에 기계식 교반기, J-KEM 온도 제어기, 질소 유입구 및 125 mL 첨가 깔때기를 장착하였다. 플라스크를 질소로 플러싱하고, 4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-카르복실산 (53 g, 339 mmol) 및 무수 톨루엔 (350 mL)을 채웠다. 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 벤질 알콜 (175 mL, 1.695 mol)로 처리하였다. 이어서, 반응 혼합물을 DIEA (118 mL, 678 mmol) 및 디페닐포스폰산 아지드 (87.7 mL, 407 mmol)로 천천히 처리하였다. 기체-배출이 시작되면, 반응 혼합물을 50℃로 천천히 가열하였다. 가열 맨틀을 제거하고, 반응 혼합물은 상당한 기체를 배출하면서 75℃까지 천천히 발열되었다. TLC 분석 (10% 메탄올/에틸 아세테이트)이 반응 완료를 나타내면, 반응물을 110℃로 가열하고 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 용매를 제거하고, 에틸 아세테이트 (1.2 L)와 염수 (700 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 (20-60% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하여 벤질 4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-일카르바메이트 61 g (69%)을 수득하였다.
I. 4-아미노비시클로[2.2.1]헵탄-1-올 히드로클로라이드. 2-L 파르 병에 벤질 4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-일카르바메이트 (61 g, 233 mmol), 메탄올 (400 mL) 및 물 (200 mL)을 채웠다. 파르 병을 질소로 플러싱하고, 탄소 상 10 % 팔라듐 (25 g, 11.65 mmol, 50% wet, 물 함유)을 채웠다. TLC 분석 (15% 메탄올/DCM, 2% 수산화암모늄 함유)이 반응 완료를 나타내면, 반응을 30 gpsi 수소 하에 파르 진탕기 상에서 3시간 동안 수행하였다. 반응물을 셀라이트 플러그를 통해 여과하고, 농축시켜 메탄올을 제거하였다. 생성된 수성 혼합물을 이것이 pH 1-2에 도달할 때까지 2 N 염산 (115 mL)으로 처리하였다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트 (5 x 400 mL)로 추출하여 불순물을 제거하였다. 수성 혼합물을 농축 건조시키고, 진공 오븐 내 40℃에서 밤새 건조시켜 4-아미노비시클로[2.2.1]헵탄-1-올 히드로클로라이드 36.91 g (97%)을 수득하였다.
J. 4-(tert-부틸아미노)-2-(4-히드록시비시클로[2.2.1]헵탄-1-일아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.165 g, 0.606 mmol; 본원에 기재된 합성), 4-아미노비시클로[2.2.1]헵탄-1-올 히드로클로라이드 (0.105 g, 0.644 mmol) 및 DIEA (0.337 mL, 1.931 mmol)를 DMF (8 mL) 중에서 혼합하고, 90℃에서 밤새 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. (41 mg, 0.127 mmol, 21 %).
실시예 47: 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-카르복실산. 디에틸 에테르 (26 mL) 중 1-아이오도-3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄 (1.62 g, 7.79 mmol; 문헌 [Eur. J. Org. Chem. 1137-1155 (2000)]에 따라 제조됨)의 용액에 tert-부틸리튬 용액 (9.16 mL, 15.57 mmol, 펜탄 중 1.7 M)을 -78℃에서 40분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 이산화탄소 기체를 반응 혼합물을 통해 5분 동안 버블링한 다음, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 5% 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 추출하였다. 합한 수성 상을 0℃에서 진한 염산을 사용하여 pH 2- 3으로 산성화시키고, 염화나트륨으로 포화시키고, 디에틸 에테르로 추출하였다. 합한 유기 상을 건조시키고, 감압 하에 용매를 증발시킨 후, 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-카르복실산 (0.5 g, 3.96 mmol, 50.9 % 수율)을 수득하였다.
B. tert-부틸 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-일카르바메이트. 디페닐포스폰산 아지드 (0.340 mL, 1.577 mmol)를 건조 tert-부탄올 (6 mL) 중 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-카르복실산 (0.199 g, 1.577 mmol) 및 TEA (0.220 mL, 1.577 mmol)의 용액에 적가하였다. 용액을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 24시간 동안 환류로 가열하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 tert-부틸 메틸 에테르로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 여과하고 용매를 감압 하에 증발시킨 후, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-5% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-일카르바메이트 (0.111 g, 0.563 mmol, 35.7 % 수율)를 수득하였다.
C. 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드. 에틸 아세테이트 (10 mL) 중 tert-부틸 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-일카르바메이트 (0.1 g, 0.507 mmol)의 용액에 실온에서 염산 (0.760 mL, 3.04 mmol, 디옥산 중 4M)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 생성된 고체를 디에틸 에테르로 세척하고, 생성된 현탁액을 여과하여 3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드 (0.04 g, 0.299 mmol, 59.1 % 수율)를 수득하였다.
D. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (3 mL) 중 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.25 g, 0.838 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 3-메틸비시클로-[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드 (0.123 g, 0.922 mmol)의 교반 현탁액에 DIEA (0.366 mL, 2.095 mmol)를 첨가하고, 반응물을 80℃로 밤새 가열하였다. 조 반응 혼합물을 감압 하에 농축시킨 다음, 빙냉수 (20 mL)를 잔류물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 격렬히 교반한 다음, 형성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(3-메틸비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.222 g, 0.670 mmol, 80 % 수율)를 수득하였다.
실시예 48: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(4-메틸테트라히드로-2H-피란-4-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(4-메틸테트라히드로-2H-피란-4-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.740 g, 2.354 mmol; 본원에 기재된 합성), 4-메틸테트라히드로-2H-피란-4-아민 히드로클로라이드 (0.892 g, 5.88 mmol), DIEA (1.645 mL, 9.42 mmol) 및 NMP (20 mL)를 합하고, 마이크로웨이브에서 180℃에서 1시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(4-메틸테트라히드로-2H-피란-4-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (88 mg, 0.252 mmol, 10.70 % 수율)를 수득하였다.
실시예 49: 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4r)-4-[(2H3)메틸옥시]-시클로헥실아미노) 피리미딘-5-카르복스아미드
A. (1r,4r)-4-[(2H3)메틸옥시]-N-트리틸시클로헥산아민. 건조 THF (15 mL) 중 (1r,4r)-4-(트리틸아미노)시클로헥산올 (2.34 g, 6.55 mmol)의 용액에 0℃에서 수소화나트륨 (524 mg, 13.1 mmol, 광유 중 60 %)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 0℃에서 질소 분위기 하에 교반한 후, THF (5 mL) 중 아이오도(2H3)메탄 (1.0 g, 6.89 mmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반한 다음, 빙수에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.0 g, 5.35 mmol, 83 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. (1r,4r)-4-[(2H3)메틸옥시]시클로헥산아민. DCM (10 mL) 중 (1r,4r)-4-[(2H3)메틸옥시]-N-트리틸시클로헥산아민 (2.0 g, 5.35 mmol)의 냉각된 (0℃) 용액에 0℃에서 TFA (3 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물은 암적색이었다. 트리에틸실란 (0.4 mL)을 생성된 혼합물이 무색으로 될 때까지 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 추가 15분 동안 교반하였다. 진공 하에 모든 휘발성 용매를 제거한 후, 잔류물을 고진공 하에 2시간 동안 추가 건조시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 수성 히드로클로라이드 용액 (20 mL, 0.25 mol/L)을 첨가하였다. 유기 층을 제거하고, 무기 층을 에틸 아세테이트로 2회 세척하였다. 수성 암모니아 용액 (2 mL)을 무기 층에 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 백색 고체 (706 mg, 5.35 mmol, 100% 수율)로서 수득하였다.
C. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-((1r,4r)-4-[(2H3)메틸옥시]시클로헥산아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (160 mg, 0.5 mmol; 본원에 기재된 합성), (1r,4r)-4-[(2H3)메틸옥시]-시클로헥산아민 (132 mg, 1.0 mmol), DIEA (194 mg, 1.5 mmol) 및 NMP (1 mL)의 혼합물을 합하고, 80℃에서 밤새 가열하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 0-15% 메탄올)에 의해 정제하여 목적 생성물을 백색 분말 (120 mg, 0.33 mmol, 63 % 수율)로서 수득하였다.
실시예 50: 4-(tert-부틸아미노)-2-((1s,4s)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4--(tert-부틸아미노)-2-((1s,4s)-4-히드록시-4-메틸시클로헥실-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.110 g, 0.404 mmol; 본원에 기재된 합성), (1s,4s)-4-아미노-1-메틸시클로헥산올 (0.055 g, 0.429 mmol; PCT 국제 출원 공개 번호 WO 2010027500에 따라 제조됨) 및 DIEA (0.225 mL, 1.287 mmol)를 DMF (5 mL) 중에서 혼합하고, 90℃에서 밤새 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 중 0-10% 메탄올)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. (37 mg, 0.115 mmol, 27%).
실시예 51: 4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (8 mL) 중 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.653 g, 2.96 mmol, 본원에 기재된 합성)의 교반 용액에 0℃에서 6N 수성 수산화나트륨 (2.470 mL, 14.82 mmol) 용액 및 30% 수성 과산화수소 용액 (1.873 mL, 16.52 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 50℃에서 20분 동안 교반한 다음, 100 mL 에틸 아세테이트 및 30 mL 물로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 50 mL 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 고체로 농축시키고, 이를 진공 오븐 내 45℃에서 건조시켜 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (305 mg, 1.280 mmol, 43.2 % 수율)를 수득하였다.
B. 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 클로로포름 (25.6 mL) 중 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드 (305 mg, 1.280 mmol)의 교반 용액에 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘 (502 mg, 1.920 mmol)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성된 연황색 용액을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 에틸 아세테이트 (10 mL)를 첨가하고, 슬러리를 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 진공 오븐 내에서 몇 시간 동안 건조시켜 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (242 mg, 0.952 mmol, 74.4 % 수율)를 수득하였다.
C. 4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (4.543 mL) 중 2-(1-메틸시클로프로필아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (242 mg, 0.952 mmol) 및 (1R,5R)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 및 (1S,5S)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드의 혼합물 (222 mg, 1.237 mmol, 본원에 기재된 합성)의 교반 현탁액에 DIEA (0.499 mL, 2.85 mmol)를 첨가하고, 반응물을 90℃로 밤새 가열하였다. 조 반응 혼합물을 빙수 50 mL에 부었다. 생성된 고체를 ~1시간 동안 슬러리화시키고, 여과하고, 물로 헹구고, 몇 시간 동안 진공 오븐 내 45℃에서 건조시켜 4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 (169 mg, 0.507 mmol, 53.3 % 수율)을 수득하였다. 이 물질을 키랄팩 AD-H, 250x30 mm I.D. 칼럼, CO2 중 등용매 40% 에탄올 + 0.1% 수산화암모늄 구배, 60 mL/분 유량을 사용하여 38℃에서 정제용 키랄 SFC에 의해 분리하였다. 보다 빠른 용리 이성질체를 피크 1로서 나타내었고, 49 mg (0.147 mmol)을 수득하였다. 보다 느린 용리 이성질체를 피크 2로서 나타내었고, 51 mg (0.153 mmol)을 수득하였다.
공지된 절대 입체화학의 유사한 화합물과의 SAR 효능 비교에 의해, 피크 1은 4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸-시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정되었다. 피크 2는 4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)-2-(1-메틸시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정되었다.
실시예 52: 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-2-일아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-페닐비시클로[1.1.1]펜탄-2-올. 벤젠 800 ml 중 시클로부틸(페닐)메타논 (3.0 g, 18.8 mmol)의 교반 용액을 질소 분위기 하에 48시간 동안 실온에서 1000 W 수은 arc 램프로 조사시켰다. 용액을 농축시키고, 잔류물 (3.1 g)을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10%-25% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (0.9 g, 5.6 mmol, 수율: 30%)을 백색 고체로서 수득하였다.
B. 2-페닐비시클로[1.1.1]펜탄-2-일 아세테이트. 0℃에서 피리딘 (15 mL) 중 2-페닐비시클로[1.1.1]펜탄-2-올 2.7 g (16.8 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 아세틸 클로라이드 (1.5 mL, 21.0 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 및 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 얼음에 붓고, 디에틸 에테르 50 mL로 2회 추출하였다. 합한 디에틸 에테르 용액을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 및 포화 수성 황산구리 용액으로 세척하였다. 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 후, 용액을 농축시키고, 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 0-5% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (2.7 g, 13.4 mmol, 수율: 80%)을 수득하였다.
C. 2-페닐비시클로[1.1.1]펜탄. 무수 에테르 50 mL 중 2-페닐-비시클로[1.1.1]펜탄-2-일 아세테이트 (2.7 g, 13.4 mol)의 용액을 3구 플라스크에 넣었다. 플라스크를 -78℃로 냉각시키고, 액체 암모니아 150 mL를 첨가하였다. 교반 혼합물에 나트륨 (0.62 g, 27.0 mmol)을 작은 조각으로 10분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 청색이 사라질 때까지 교반을 계속하였다. 반응물을 포화 수성 염화암모니아 용액 (5 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 용매를 밤새 증발되도록 하였다. 펜탄 (40 mL)을 잔류물에 첨가하고, 용액을 30 mL 포화 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음, 농축시켰다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (100% 펜탄)에 의해 정제하여 목적 화합물 (1.8 g, 12.5 mmol, 수율: 93%)을 무색 액체로서 수득하였다.
D. 비시클로[1.1.1]펜탄-2-카르복실산. 2-페닐비시클로[l.l.l]펜탄 (2.8 g, 19.4 mmol), 산화루테늄(IV) (0.1 g, 0.75 mmol), 과아이오딘산나트륨 (41.5 g, 194 mmol), 물 (155 mL), 퍼클로로메탄 (110 mL) 및 아세토니트릴 (110 mL)의 혼합물을 4일 동안 교반하였다. DCM (200 mL)을 혼합물에 첨가하고, 고체를 여과에 의해 제거하였다. 모액을 수성 수산화나트륨 용액 (1 M)을 사용하여 알킬리화시키고, 유기 용매를 감압에 의해 제거하였다. 잔류물 무기 층을 디에틸 에테르 (100 mL x 2)로 추출하고, 수상을 수성 염산 (2 M)을 사용하여 pH < 3으로 산성화시킨 다음, 디에틸 에테르 (100 mL x 5)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 농축시켜 조 산을 황색 액체로서 수득하였다. 이어서, 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 400 mg (3.57 mmol, 수율: 18 %)을 수득하였다.
E. 비시클로[1.1.1]펜탄-2-아민 히드로클로라이드. 무수 톨루엔 (25 mL) 및 2-메틸프로판-2-올 (5 mL) 중 비시클로[1.1.1]펜탄-2-카르복실산 (1.0 g, 8.9 mmol)의 교반 용액에 DIEA (2.3 g, 17.8 mmol) 및 디페닐 포스포르아지데이트 (2.9 g, 10.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 질소 분위기 하에 16시간 동안 가열하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 조 tert-부틸 비시클로[1.1.1]펜탄-2-일카르바메이트를 수득하였다. 조 생성물을 15 mL 염산 용액 (메탄올 중 1 M) 중에 용해시키고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 농축시키고, 잔류물을 디에틸 에테르 50 mL 중에 현탁시켰다. 혼합물을 15분 동안 교반하고, 침전물을 수집하고, 건조시켜 표제 화합물 (350 mg, 수율: 33%)을 수득하였다.
F. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-2-일아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (3 mL) 중 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (300 mg, 0.95 mmol; 본원에 기재된 합성), 비시클로[1.1.1]펜탄-2-아민 히드로클로라이드 (220 mg, 1.84 mmol) 및 DIEA (300 mg, 2.33 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 정제용 고성능 액체 크로마토그래피 (물 중 5-80 % 아세토니트릴)에 의해 2회 정제하여 조 생성물 (105 mg)을 수득하였으며, 이를 클로로포름으로부터 재결정화하여 목적 화합물 (85.2 mg, 0.27 mmol, 수율: 28%)을 수득하였다.
실시예 53: 2-((S)-sec-부틸아미노)-4-(((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (0.335 g, 1.203 mmol; 본원에 기재된 합성)을 DMSO (3 mL) 중에 용해시켰다. 이어서, 수성 수산화나트륨 용액 (1.003 mL, 6 M, 6.02 mmol) 및 수성 과산화수소 용액 (0.682 mL, 6.02 mmol, 30 %)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이것을 빙수 100 mL에 부었다. 백색 침전물을 수집하고, 물로 2회 세척하였다. 고체를 건조시켜 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸-시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.260 g, 0.877 mmol, 72.9 % 수율)를 수득하였다.
B. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (315 mg, 1.063 mmol)를 NMP (4 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시킨 후, mCPBA (476 mg, 2.126 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 1시간 후, 빙냉수 75 mL를 반응 혼합물에 직접 첨가하고, 슬러리를 2시간 동안 교반되도록 한 후, 백색 침전물을 여과하였다. 이어서, 여과물을 감압 하에 응축시켜 물을 제거하였다. NMP 용액을 후속 단계에 직접 사용하여 목적 생성물로의 정량적 전환을 수득하였다.
C. 2-((S)-sec-부틸아미노)-4-(((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (3 mL) 중 4-((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.2 g, 0.609 mmol)의 교반 현탁액에 (S)-(+)-sec-부틸아민 (0.305 mL, 3.05 mmol)을 첨가하고, 반응물을 90℃로 밤새 가열하였다. 조 반응 혼합물을 감압 하에 농축시킨 다음, 역상 세미-정제용 HPLC (5-75% 메탄올 + 물 중 0.1% 포름산 + 0.1% 포름산, 26분에 걸침)를 이용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 메탄올 (5 mL) 중에 재용해시킨 다음, 포름산 제거 (0.9 mmol 중탄산염 등가)를 위해 배리안 스트라토스피어스 HCO3 수지 SPE 튜브를 통해 통과시킨 다음, 감압 하에 농축시켜 2-((S)-sec-부틸아미노)-4-(((1R,3R,4R)-3-히드록시-4-메틸시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.129 g, 0.402 mmol, 66 % 수율)를 수득하였다.
실시예 54: 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로부틸-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (18 mL) 중 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실-아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실-아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 (총 1.414 mmol; 본원에 기재된 합성)에 1-메틸시클로부탄아민 히드로클로라이드 (0.189 g, 1.556 mmol) 및 DIEA (0.988 mL, 5.66 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 100℃에서 밤새 가열하였다. 에틸 아세테이트 및 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성된 층을 분리하였다. 에틸 아세테이트 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 오일로 농축시키고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-20% 메탄올)에 의해 정제하여 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(1-메틸시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (0.193 g, 0.604 mmol, 42.7% 수율)를 수득하였다.
실시예 55: 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-메틸비시클로[2.2.1]헵탄-2-올. 디에틸 에테르 (250 mL) 중 비시클로[2.2.1]헵탄-2-온 (25 g, 0.23 mol)의 용액에 THF 중 메틸마그네슘 브로마이드의 용액 (3 mol/L, 90 mL, 0.27 mol)을 0℃에서 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물이 실온으로 가온되면, 이것을 추가 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 40 mL 포화 수성 염화암모늄 용액으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 디에틸 에테르 (3 x 80 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 농축시켜 목적 생성물 (26 g, 0.205 mol, 수율: 90%)을 수득하였다.
B. 1-메틸비시클로[2.2.1]헵탄-2-올. 아세트산 (50 g, 0.83 mol) 중 2-메틸-비시클로[2.2.1]헵탄-2-올 (26 g, 0.20 mol)의 용액에 1 mL 황산을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 환류한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 100 mL 물에 부었다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하고, 합한 추출물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 1-메틸-비시클로[2.2.1]헵탄-2-일 아세테이트 (31 g, 0.173 mol, 수율: 89%)를 무색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1-메틸비시클로[2.2.1]헵탄-2-일 아세테이트 (31 g, 0.17 mol) 및 수성 수산화나트륨 용액 (5%, 250 mL)의 혼합물을 2시간 동안 환류하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 디에틸 에테르 (3 x 100 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 목적 화합물 (21g, 0.167 mol, 수율: 82%)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
C. 메틸렌비시클로[2.2.1]헵탄-1-일 트리플루오로메탄술포네이트. DCM (300 mL) 중 옥살릴 디클로라이드 (31.75 g,0.25 mol)의 용액에 DMSO (19.5 g, 0.25 mol), DCM (50 mL) 중 1-메틸비시클로[2.2.1]헵탄-2-올 (21g, 0.167 mol)의 용액 및 이어서 트리에틸아민 (50 g, 0.5 mol)을 연속 순서로 -78℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 200 mL 물에 부었다. 생성된 혼합물을 DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 추출물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 감압 하에 농축시켜 조 메틸비시클로[2.2.1]헵탄-2-온을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 이 화합물 12.4 g (0.10 mol, 수율: 60%)을 수득하였다.
DCM (300 mL) 중 메틸비시클로[2.2.1]헵탄-2-온 (26 g, 0.209 mol) 및 2,6-디-tert-부틸-4-메틸-피리딘 (64 g, 0.315 mol)의 용액에 DCM (50 mL) 중 트리플루오로메탄술폰산 무수물 (88 g, 0.315 mol)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물에 붓고, DCM (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 추출물을 10% 염산 용액 (3 x 100 mL), 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (100% n-펜탄)에 의해 정제하여 목적 생성물 (7.6 g, 0.03 mol, 14%)을 수득하였다.
D. 2-옥소비시클로[2.2.1]헵탄-1-일 트리플루오로메탄술포네이트. 메탄올 (100 mL) 중 메틸렌비시클로[2.2.1]헵탄-1-일 트리플루오로메탄술포네이트 (7.6 g, 0.03 mol)의 용액을 -40℃로 냉각시키고, 오존 스트림을 반응 혼합물을 통해 통과시켰다. 혼합물의 색상이 청색으로 변하면, 아르곤 스트림을 10분 동안 용액을 통해 통과시킴으로써 오존을 제거하였다. 디메틸 술피드 (5 mL)를 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 생성된 혼합물을 물에 붓고, DCM (2 x 40 mL)으로 추출하였다. 합한 추출물을 염수 (100mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (4.6 g, 18.1 mmol, 수율: 60%)을 황색빛 오일로서 수득하였다.
E. 비시클로[2.1.1]헥산-1-카르복실산. 600 mL 에탄올/물 (60% w/w) 중 2-옥소비시클로[2.2.1]헵탄-1-일 트리플루오로메탄술포네이트 (4.6 g,18.1 mmol) 및 TEA (3.7 g, 36.2 mmol)의 혼합물을 130℃에서 100시간 동안 가열하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 수성 염산 용액 (1 mol/L, 150 mL)에 붓고, 디에틸 에테르 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.00 g, 8.09 mmol, 수율: 45 %)을 수득하였다.
F. 벤질 비시클로[2.1.1]헥산-1-일카르바메이트. 디옥산 (20 mL) 중 비시클로[2.1.1]헥산-1-카르복실산 (1.0 g, 8.09 mmol)의 용액에 DIEA (2.5g, 12.4 mmol), 디페닐포스포릴아지드 (3.1 g, 11.2 mmol) 및 페닐메탄올 (1.5 g, 14.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 밤새 교반하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (1.2 g, 5.2 mmol, 수율: 65 %)을 수득하였다.
G. 비시클로[2.1.1]헥산-1-아민 히드로클로라이드. 메탄올 (30 mL) 중 벤질 비시클로[2.1.1]헥산-1-일카르바메이트 (1.2 g, 5.2 mmol)의 용액에 목탄 상 팔라듐 (10%, 0.1 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 (50 Psi) 하에 50℃에서 밤새 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물에 염산 용액 (메탄올 중 10%, 20 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 THF (20 mL) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 수집하고, 건조시켜 목적 생성물 (550 mg, 4.13 mmol, 수율: 79 %)을 수득하였다.
H. 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. 1,4-디옥산 (10 mL) 중 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (427 mg, 2.3 mmol)의 교반 용액에 DIEA (890 mg, 6.9 mmol) 및 비시클로[2.1.1]헥산-1-아민 히드로클로라이드 (320 mg, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염수 용액에 부은 다음, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 15 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (502 mg, 2.0 mmol, 89% 수율)을 수득하였다.
I. 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (5 mL) 중 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (502.0 mg, 2.0 mmol)의 용액에 0℃에서 수성 과산화수소 용액 (1.2 g, 30%, 10.2 mmol) 및 수성 수산화나트륨 용액 (1.7 mL, 6 mol/L, 10.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 15분 동안 교반한 다음, 물 (30 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 형성된 고체를 수집하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물 (500 mg, 1.9 mmol, 93% 수율)을 수득하였다.
J. 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 0℃에서 THF (10 mL) 중 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르복스아미드 (500 mg, 1.9 mmol)의 용액에 mCPBA (490 mg, 2.8 mmol)를 조금씩 나누어 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 조 물질을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5-10% 메탄올)에 의해 정제하여 목적 혼합물 510 mg을 수득하였다.
K. 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(((1r,4r)-4-히드록시시클로-헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (10 mL) 중 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(비시클로[2.1.1]헥산-1-일아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (200 mg, 약 0.71 mmol) 및 (1r,4r)-4-아미노시클로헥산올 (123.3 mg, 1.02 mmol)의 혼합물에 DIEA (183.0 mg, 1.42 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 (187.3 mg, 0.56 mmol, 72% 수율)을 수득하였다.
실시예 56: 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 에틸 시클로펜트-3-엔카르복실레이트. 무수 에탄올 (30 mL) 중 시클로펜트-3-엔카르복실산 (10 g, 89.3 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 아황산 디클로라이드 (15.9 g, 134 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 물에 부었다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 2.5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (6.7 g, 47.9 mmol, 수율 = 54%)을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 에틸 1-에틸시클로펜트-3-엔카르복실레이트. 무수 THF (50 mL) 중 디이소프로필아민 (10 mL, 72 mmol)의 용액에 n-부틸 리튬 (29 mL, 72 mmol, 헥산 중 2.5 M 용액)을 -78℃에서 20분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 새로 제조된 리튬 디이소프로필아미드를 무수 THF (50 mL) 중 에틸 시클로펜트-3-엔카르복실레이트 (6.7 g, 47.9 mmol)의 혼합물에 20분에 걸쳐 -78℃에서 첨가하였다. 이 온도에서 추가 1시간 후, 아이오도에탄 (11.2 g, 72 mmol)을 20분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 포화 수성 염화암모늄 용액으로 켄칭하였다. 수성 층을 에테르 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 희석된 염산 (1 N)으로 세척한 다음, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 농축시켜 표제 화합물 (7 g 조 물질)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
C. 1-에틸시클로펜트-3-엔카르복실산. 메탄올 (30 mL) 중 에틸 1-에틸시클로펜트-3-엔카르복실레이트 (3.5 g, 20.8 mmol) 및 수성 수산화나트륨 용액 (20.8 mL, 2 mol/L)의 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 물에 붓고, 에테르 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 수층을 4 mol/L 수성 염산 용액을 사용하여 pH < 3으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.9 g, 13.6 mmol, 65.5 % 수율)을 수득하였다.
D. 벤질 (1-에틸시클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트. 디옥산 (30 mL) 중 1-에틸시클로펜트-3-엔카르복실산 (1.9 g, 13.6 mmol)의 용액에 DIEA (5.3 g, 41 mmol), 디페닐 포스포릴 아지드 (4.5 g, 16.3 mmol) 및 벤질알콜 (2.2 g, 20.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 밤새 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 2.5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 생성물을 수득하였다. (1.3 g, 5.3 mmol, 수율: 39 %).
E. 1-에틸시클로펜탄아민 히드로클로라이드. 메탄올 (20 mL) 중 벤질 (1-에틸시클로펜트-3-엔-1-일)카르바메이트 (1.3 g, 5.3 mmol)의 용액에 목탄 상 팔라듐 (130 mg, 10 %)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 하에 50℃에서 밤새 교반하였다. 염산 용액 (20 mL, 메탄올 중 1 mol/L)을 반응물에 첨가하고, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물 (900 mg)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
F. 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. DMSO (10 mL) 중 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (984 mg, 5.3 mmol)의 교반 용액에 DIEA (2.1 g, 15.9 mmol) 및 1-에틸시클로펜탄아민 히드로클로라이드 (900 mg 조 물질)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (830 mg, 3.2 mmol, 53.5 % 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
G. 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (10 mL) 중 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르보니트릴 (830 mg, 3.2 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 수성 과산화수소 (1.8 g, 30%, 16 mmol) 및 수성 수산화나트륨 용액 (2.7 mL, 6 mol/L, 16 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 15분 동안 교반하고, 물로 희석하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5 % 메탄올)에 의해 정제하여 목적 생성물 (800 mg, 2.9 mmol, 90% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
H. 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 0℃에서, mCPBA (873 mg, 4.3 mmol)를 THF (30 mL) 중 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (800 mg, 2.9 mmol)의 용액에 조금씩 나누어 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 생성된 조 물질을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5 % 메탄올)에 의해 정제하여 목적 생성물 (800 mg, 2.56 mmol, 90% 수율)을 수득하였다.
I. 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (10 mL) 중 4-(1-에틸시클로펜틸아미노)-2-(메틸-술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (200 mg, 0.64 mmol) 및 (1r,4r)-4-아미노-시클로헥산올 (115 mg, 1 mmol)의 혼합물에 DIEA (255 mg, 1.98 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 (117.0 mg, 0.34 mmol, 수율 51%)을 수득하였다.
실시예 57: 4-(((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실)아미노)-2-((4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 디메틸 1-(2-클로로에틸)시클로헥산-1,4-디카르복실레이트. 무수 메탄올 (800 mL) 중 시클로헥산-1,4-디카르복실산 (100 g, 0.58 mol)의 교반 용액에 0℃에서 아황산 디클로라이드 (208g, 1.75 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물에 부었다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 농축시켜 조 디메틸 시클로헥산-1,4-디카르복실레이트 (105 g, 0.53 mol, 수율 90.5%)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
무수 THF (500 mL) 중 디이소프로필아민 (88 mL, 0.62 mol)의 용액에 n-부틸 리튬 (240 mL, 0.6 mol, 헥산 중 2.5 M 용액)을 -78℃에서 20분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 0℃에서 30분 동안 교반하였다.
무수 THF (800 mL) 중 조 디메틸 시클로헥산-1,4-디카르복실레이트 (100 g, 0.5 mol) 및 헥사메틸포스포르아미드 (360 mL, 2 mol)의 상기 기재된 혼합물에 새로 제조된 리튬 디이소프로필아미드 용액 (상기 기재된 제조예)을 30분에 걸쳐 -40℃에서 첨가하였다. 이 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 1-브로모-2-클로로에탄 (42 mL, 0.5 mol)을 1에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 실온에서 교반 밤새 교반하였다. 반응물을 수성 염산 용액 (3 N, 420 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 추출물을 염수 (2x300 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 농축시켜 표제 화합물 (116 g, 수율 88%)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 디메틸 비시클로[2.2.2]옥탄-1,4-디카르복실레이트. 무수 THF (500 mL) 중 디이소프로필아민 (77 mL, 0.54 mol)의 용액에 n-부틸 리튬 (210 mL, 0.53 mol, 헥산 중 2.5 M 용액)을 -78℃에서 20분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 0℃에서 30분 동안 교반하였다.
무수 THF (800 mL) 중 디메틸 1-(2-클로로에틸)시클로헥산-1,4-디카르복실레이트 (116 g, 0.44 mol) 및 헥사메틸포스포르아미드 (317 mL, 1.7 mol)의 혼합물에 새로 제조된 리튬 디이소프로필아미드 (상기 기재된 제조예)를 30분에 걸쳐 -40℃에서 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 밤새 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물에 포화 수성 염화암모늄 용액 (200 mL)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 휘발성 용매를 감압 하에 증발에 의해 제거하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 추출하고, 합한 추출물을 염수 (300 mL x 2)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (58.0 g, 0.25 mol, 수율 50%, 2 단계)을 수득하였다.
C. 4-(메톡시카르보닐)비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산. 메탄올 (600 mL) 중 디메틸 비시클로[2.2.2]옥탄-1,4-디카르복실레이트 (58.0 g, 0.25 mol)의 용액을 환류로 가열한 다음, 메탄올 (100 mL) 및 물 (12 mL) 중 수산화칼륨 (9.8 g, 0.175 mol)의 용액을 30분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 환류하고 농축시켰다. 잔류물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (200 mL x 2)로 추출하여 일부 출발 물질 (22.0 g)을 회수하였다. 생성된 수성 층을 염산의 첨가에 의해 pH = 3으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (300 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 생성물 (30.0 g, 0.14 mol, 수율 55%)을 수득하였다.
D. 메틸 4-브로모비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트. 아세톤 (80 mL) 중 4-(메톡시카르보닐)비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산 (11.0 g, 51.8 mmol)의 현탁액에 수성 수산화나트륨 용액 (1 M, 51.8 mL, 51.8 mmol) 및 물 (10 mL) 중 질산은 (8.8 g, 51.9 mol)의 용액을 첨가하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물, 아세톤 및 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에 115℃에서 4시간 동안 건조시켰다. 수득된 ((4-(메톡시카르보닐)-비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르보닐)옥시)은 (15.3 g, 47.9 mmol)을 헥산 (125 mL) 중에 현탁시킨 다음, 브로민 (7.7 g, 48.1 mmol)을 30분에 걸쳐 실온에서 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 반응 혼합물을 실온에서 추가 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하여 고체를 제거하고, 필터 케이크를 헥산 (150 mL x 4)으로 세척하였다. 합한 유기 여과물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (150 mL x 2) 및 염수 (200 mL)로 세척한 다음, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 5 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물 (4.2 g, 0.17 mol, 33 % 수율, 2 단계)을 수득하였다.
E. 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산. 메틸 4-브로모비시클로 [2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트 (17.0 g, 69.0 mmol)를 1% 수성 수산화나트륨 용액 1.5 L 중에서 24시간 동안 환류하였다. 냉각시킨 후, 반응 용액을 염산 (6N, 100 mL)을 사용하여 산성화시키고, 디에틸 에테르 (6 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 (10.4 g, 61.1 mmol, 수율: 89 %)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
F. 메틸 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트. 메탄올 (300 mL) 중 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산 (14 g, 82.4 mmol)의 용액에 진한 황산 (1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10시간 동안 환류한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 물 (100 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 수성 탄산수소나트륨 용액 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 농축시켜 표제 화합물 (14.5 g, 수율 96%)을 수득하였다.
G. 메틸 4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트. -78℃에서 무수 THF (150 mL) 중 메틸 4-히드록시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트 (8.9 g, 48 mmol)의 용액에 n-부틸 리튬 (23 mL, 57.5 mmol, 헥산 중 2.5 M 용액)을 30분에 걸쳐 첨가한 다음, 아이오도메탄 (14 g, 98 mmol)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하고, 포화 수성 염화암모늄 용액 (50 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 생성된 용액을 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (150 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시킨 다음, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 생성물 (6.5 g, 67%)을 수득하였다.
H. 4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산. 메틸 4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실레이트 (6.5 g, 33 mmol)를 수성 수산화나트륨 용액 (5%, 150 mL) 중에서 2시간 동안 환류하였다. 냉각시킨 후, 반응 용액을 염산 용액 (6 N, 50 mL)을 사용하여 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 (5.9 g, 32 mmol, 수율 97%)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
I. 벤질 (4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)카르바메이트. 디옥산 (80 mL) 중 4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-카르복실산 (5.9 g, 32 mmol)의 용액에 DIEA (8.3 g, 64.2 mmol), 디페닐 포스포릴 아지드 (13.2 g, 48 mmol) 및 페닐메탄올 (17.3 g, 160 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 밤새 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5 % 메탄올)에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. (9 g, 31 mmol, 수율 96%).
J. 4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-아민 히드로클로라이드. 메탄올 (150 mL) 중 벤질 (4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-일)카르바메이트 (9 g, 31 mmol)의 용액에 목탄 상 팔라듐 (0.5 g, 10%)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 (50 psi) 하에 50℃에서 밤새 교반한 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 염산 용액 (메탄올 중 10%, 50 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 THF (20 mL) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 침전물을 수집하고, 건조시켜 목적 생성물 (3.8 g, 20 mmol, 수율: 68%)을 수득하였다.
K. 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(4-메톡시-비시클로[2.2.2]옥탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (12 mL) 중 4-((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (1.2 g, 3.8 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 4-메톡시비시클로[2.2.2]옥탄-1-아민 히드로클로라이드 (600 mg, 3.1 mmol)의 용액에 DIEA (1.03 g, 8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 130℃에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 역상 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물 (230 mg, 0.6 mmol, 15.5 % 수율)을 수득하였다.
실시예 58: 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(3-(트리플루오로메틸)비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(3-(트리플루오로메틸)-비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. (2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (445 mg, 1.416 mmol))의 NMP 용액 5 mL에 3-(트리플루오로메틸)비시클로[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드 (266 mg, 1.416 mmol) 및 DIEA (0.494 mL, 2.83 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응물을 90℃에서 밤새 가열하였다. LCMS는 목적 생성물 질량을 우세한 피크로서 나타내었다. 조 반응물을 반정제용 HPLC (방법: 5-80% 아세토니트릴 + 물 중 0.1% TFA + 0.1% TFA) 상에서 직접 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 감압 하에 부피 <5 mL로 증발시켰다. 이어서, 물질을 포화 중탄산나트륨으로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성된 고체를 메탄올 중에 용해시키고, 메탄올로 용리하면서 스트라토스피어스 SPE PL-HCO3 MP-수지 칼럼을 통해 세척하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실아미노)-4-(3-(트리플루오로메틸)비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드를 수득하였다. 물질을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-10% 메탄올, 1650 mL에 걸침; 40 mL/분)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고 증발 건조시켜 2-((1r,4r)-4-히드록시시클로헥실-아미노)-4-(3-(트리플루오로메틸)비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 (135 mg, 0.35 mmol, 24.8% 수율)를 수득하였다.
실시예 59: 4-(tert-부틸아미노)-2-(((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-(tert-부틸아미노)-2-(((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실)-아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (10 mL) 중 4-(tert-부틸아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (250 mg, 0.918 mmol; 본원에 기재된 합성) 및 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (138 mg, 1.2 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨)의 혼합물에 DIEA (374 mg, 2.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 (212.2 mg, 0.69 mmol, 수율 75%)을 수득하였다.
실시예 60: 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. DMSO (20 mL) 중 4-클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (3.0 g, 16 mmol)의 교반 용액에 DIEA (6.2 g, 48 mmol) 및 비시클로[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드 (1.9 g, 16 mmol; 문헌 [Org. Lett., 13(17): 4746-4748 (2011)]에 따라 제조됨)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 물에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10 % 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 목적 생성물 (3.5 g, 14.9 mmol, 93 % 수율)을 수득하였다.
B. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (15 mL) 중 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)-피리미딘-5-카르보니트릴 (3.45 g, 14.9 mmol)의 용액에 0℃에서 수성 과산화수소 용액 (8.4 g, 30%, 74.5 mmol) 및 수성 수산화나트륨 용액 (12.4 mL, 6 mol/L, 74.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 15분 동안 교반한 다음, 물 (30 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 형성된 고체를 수집하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물 (3.5 g, 14.0 mmol, 94% 수율)을 수득하였다.
C. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. mCPBA (4.3 g, 21 mmol)를 THF (40 mL) 중 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (3.5 g, 14 mmol)의 용액에 0℃에서 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응물을 박층 크로마토그래피에 의해 모니터링하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5 % 메탄올)에 의해 정제하여 표제 혼합물 3.1 g을 수득하였다.
D. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-((테트라히드로-2H-피란-4-일)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (10 mL) 중 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드, 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (300 mg) 및 테트라히드로-2H-피란-4-아민 히드로클로라이드 (181.5 mg, 1.32 mmol)의 혼합물에 DIEA (426 mg, 3.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 (221.3 mg, 0.73 mmol, 수율 67 %)을 황색 분말로서 수득하였다.
실시예 61: 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(((1R,3S)-3-히드록시시클로헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 3-클로로벤조퍼옥시산 (4.27 g, 21 mmol)을 THF (40 mL) 중 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (3.50 mg, 14 mmol, 본원에 기재된 합성)의 용액에 0℃에서 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 1시간 동안 혼합한 다음, 감압 하에 오일로 농축시키고, 이를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 5 % 메탄올)에 의해 정제하여 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 310 mg을 황색 고체로서 수득하였다.
B. 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(((1R,3S)-3-히드록시시클로-헥실)아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. NMP (10 mL) 중 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 및 4-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-2-(메틸술포닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (300 mg) 및 (1S,3R)-3-아미노시클로헥산올 (152 mg, 1.32 mmol; 문헌 [Tetrahedron: Asymmetry 15:2051-2056 (2004)]에 기재된 바와 같이 제조됨)의 혼합물에 DIEA (426 mg, 3.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 (230.2 mg, 0.73 mmol, 수율 66 %)을 수득하였다.
실시예 62: 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드
A. N-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일)-5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민. NMP (10.0 mL) 중 5-브로모-2-클로로-4-(메틸티오)피리미딘 (1.0 g, 4.18 mmol)의 교반 용액에 비시클로[1.1.1]펜탄-1-아민 히드로클로라이드 (749 mg, 6.26 mmol, 문헌 [Org. Lett.9, 13(17): 4746-4748 (2011)]에 따라 제조됨) 및 DIEA (2.19 mL, 12.53 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 100 mL 에틸 아세테이트 및 50 mL 1M 인산수소나트륨 수용액으로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 50 mL 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 N-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일)-5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민 (1250 mg, 4.37 mmol, 105 % 수율)을 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
B. 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴. N-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일)-5-브로모-4-(메틸티오)피리미딘-2-아민 (1250 mg, 4.37 mmol), 아연 분진 (71.4 mg, 1.092 mmol), 시안화아연 (333 mg, 2.84 mmol), 1,1'-비스-(디페닐포스피노)-페로센 (196 mg, 0.349 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (200 mg, 0.218 mmol) 및 DMA (8.35 mL)를 합하고, 밤새 90℃에서 질소 분위기 하에 가열하였다. 반응 혼합물을 125 mL 에틸 아세테이트 및 50 mL 물로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물의 층을 분리하고, 수성 층을 75 mL 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 2 x 50 mL 염수로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축시켰다. 조 오일을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 0% - 30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (566 mg, 2.436 mmol, 55.8 % 수율)을 고체로서 수득하였다.
C. 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드. DMSO (7 mL) 중 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르보니트릴 (566 mg, 2.436 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 6 M 수성 수산화나트륨 용액 (2.030 mL, 12.18 mmol) 및 30% 수성 과산화수소 용액 (1.381 mL, 12.18 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 50℃에서 30분 동안 교반한 다음, 빙수 (50 mL)에 부었다. 형성된 고체를 빙조 중에서 30분 동안 교반하고, 여과하고, 물로 세척한 다음, 45℃에서 진공 오븐 밤새 중에서 건조시켜 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (410 mg, 1.638 mmol, 67.2 % 수율)를 수득하였다.
D. 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드. 클로로포름 (39.0 mL) 중 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 (410 mg, 1.638 mmol)의 교반 용액에 3-페닐-2-(페닐술포닐)-1,2-옥사지리딘 (514 mg, 1.965 mmol)을 조금씩 나누어 첨가하였다. 생성된 연황색 용액을 질소 하에 주위 온도에서 2일 밤 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 에틸 아세테이트 (15 mL)를 이들 고체에 첨가하고, 슬러리를 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 진공 오븐 내에서 몇 시간 동안 건조시켜 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (397 mg, 1.491 mmol, 91 % 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
E. 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드. DMF (4.88 mL) 중 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-(메틸술피닐)피리미딘-5-카르복스아미드 (397 mg, 1.491 mmol) 및 (1R,5R)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드 및 (1S,5S)-5-아미노-2,2-디메틸시클로헥산올 히드로클로라이드의 혼합물 (348 mg, 1.938 mmol, 본원에 기재된 합성)의 교반 현탁액에 DIEA (0.78 mL, 4.47 mmol)를 첨가하고, 반응물을 90℃로 밤새 가열하였다. 조 반응 혼합물을 빙수 60 mL에 부었다. 생성된 고체를 ~ 1시간 동안 슬러리화하고, 여과하고, 물로 헹구고, 몇 시간 동안 진공 오븐 내 45℃에서 건조시켜 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸-시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드 및 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드의 혼합물 (481 mg, 1.392 mmol, 93 % 수율)을 수득하였다. 이 물질을 키랄팩 AD-H, 250x30mm I.D. 칼럼, CO2 중 등용매 40% 에탄올 + 0.1% 수산화암모늄 구배, 120 mL/분 유량을 사용하여 38℃에서 정제용 키랄 SFC에 의해 분리하였다. 보다 빠른 용리 이성질체를 피크 1로서 나타내었고, 132 mg (0.382 mmol)를 수득하였다. 보다 느린 용리 이성질체를 피크 2로서 나타내었고, 120 mg (0.349 mmol)을 수득하였다.
본원에 기재된 공지된 절대 입체화학의 유사한 화합물과의 SAR 효능 비교에 의해, 피크 1은 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1S,3S)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정되었다. 피크 2는 2-(비시클로[1.1.1]펜탄-1-일아미노)-4-((1R,3R)-3-히드록시-4,4-디메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드로서 배정되었다.
검정
생화학적 검정
A. 시간 분해 형광 검정
JNK1 검정. 384-웰 시간 분해 형광 검정을 JNK1 활성을 모니터링하기 위해 이용하였다. JNK1 검정을 하기 검정 완충제 중에서 진행하였다: 50 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT 및 0.01% 트윈(Tween) 20. 반응을 개시하기 위해, 유라이트(ULight)™-표지된 4EBP1 펩티드 (퍼킨-엘머(Perkin-Elmer)) 100 nM 및 ATP 5 μM을 JNK1 (카르나 바이오사이언시스(Carna Biosciences)) 500 pM과 혼합하여, 각 웰에서 전체 검정 부피 20 μL가 되게 하였다. 검정을 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하고, 각 웰에 정지 용액 20 μL를 첨가함으로써, 30 mM EDTA 및 4 nM Eu-항-4EBP1의 혼합물을 사용하여 종결시켰다. 플레이트를 퍼킨-엘머 엔비전(Perkin-Elmer Envision) 판독기 상에서 판독하였다.
JNK2 검정. 384-웰 시간 분해 형광 검정을 JNK2 활성을 모니터링하기 위해 이용하였다. JNK2 검정을 하기 검정 완충제 중에서 진행하였다: 50 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT 및 0.01% 트윈 20. 반응을 개시하기 위해, 유라이트™-표지된 4EBP1 펩티드 (퍼킨-엘머) 100 nM 및 ATP 5 μM을 JNK2 (카르나 바이오사이언시스) 500 pM과 혼합하여, 각 웰에서 총 검정 부피 20 μL가 되게 하였다. 검정을 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였고, 각 웰에 정지 용액 20 μL를 첨가함으로써, 30 mM EDTA 및 4 nM Eu-항-4EBP1의 혼합물을 사용하여 종결시켰다. 플레이트를 퍼킨-엘머 엔비전 판독기 상에서 판독하였다.
B. Z'-LYTE® 캐스케이드 검정
JNK1 검정. JNK1 Z'-LYTE® 캐스케이드 키나제 검정을 하기 완충제 중에서 진행하였다: 50 mM HEPES pH 7.5, 0.01% 브리즈(BRIJ)-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA 및 1 mM DTT. 10 μL 키나제 반응 혼합물을 1.81 - 7.25 ng JNK1, 25 ng 불활성 MAPKAPK2, 100 μM ATP 및 2 μM Ser/Thr 04 펩티드를 함유하도록 제조하였다. 검정을 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 다음에, 발색 시약 A (인비트로젠(Invitrogen), PV3295)의 1:512 희석액 5 μL를 반응 혼합물에 첨가하고, 추가 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이어서, 데이터를 형광 플레이트 판독기 상에서 판독하고 분석하였다.
JNK2 검정. JNK2 Z'-LYTE® 캐스케이드 키나제 검정을 하기 완충제 중에서 진행하였다: 50 mM HEPES pH 7.5, 0.01% 브리즈-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT. 10 μL 키나제 반응 혼합물을 0.38 - 1.5 ng JNK2, 100 ng 불활성 MAPKAPK2, 100 μM ATP 및 2 μM Ser/Thr 04 펩티드를 함유하도록 제조하였다. 검정을 1시간 동안 실온에 인큐베이션하였다. 다음에, 발색 시약 A (인비트로젠, PV3295)의 1:512 희석액 5 μL를 반응 혼합물에 첨가하고, 추가 1시간 동안 실온에 인큐베이션하였다. 이어서, 데이터를 형광 플레이트 판독기 상에서 판독하고 분석하였다.
C. 방사성 검정
JNK1 검정. 방사성 JNK 키나제 검정을 최종 부피 100 μL에서 96-웰 플레이트 포맷으로 수행하였다. 최종 검정 농도는 6.6 μM ATP (3배 ATP Km), 2.64 내지 5 μg/mL JNK1 및 100 μg/mL cJUN이었다. JNK1을 하기 희석 완충제 (20 mM HEPES pH 7.6, 0.1 mM EDTA, 2.5 mM MgCl2, 0.004%(w/v) 트리톤(Triton) X100, 2 μg/ml 류펩틴, 20 mM B-글리세롤 포스페이트, 0.1 mM Na3VO4 디티오트레이톨) 중에 희석하고, 이어서 기질 용액 완충제 (20 mM HEPES pH 7.6, 50 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 2.5 mM MgCl2, 0.05%(w/v) 트리톤 X100) 중에 희석된 cJun과 미리 혼합하였다. JNK1/cJun 믹스 (85μl)를 100% DMSO 중에 희석된 억제제 (5 μl)에 첨가하여 최종 DMSO 검정 농도 5%(v/v)를 얻었다. 효소, 기질 및 억제제 혼합물을 15분 동안 실온에서 평형을 이루도록 하였다. 반응을 키나제 완충제 (130 mM MgCl2, 6 mM 디티오트레이톨, 150 mM 파라-니트로페닐 포스페이트, 100 μCi/ml γ-[33P]-ATP) 중 10X ATP 10μL를 첨가함으로써 시작하였다. 반응이 60분 동안 진행되도록 한 후에, 트리클로로아세트산 (최종 7.2% TCA)을 통해 단백질을 침전시켰다. TCA와 함께 30분 인큐베이션 후에, 반응 생성물을 팩커드 필터메이트(Packard Filtermate)를 이용하여 유리 마이크로필터 96-웰 플레이트 (밀리포어(Millipore) MAHF CIH60) 상에 수집하였다. 침전물을 포스페이트 완충 염수로 세척하고, cJun에 혼입된 포스페이트의 양을 팩커드 탑카운트(Packard Topcount)-NXT를 이용하는 섬광 계수 카운팅에 의해 정량화하였다. 모든 검정은 포스페이트 혼입이 시간 및 효소 농도에 대해 선형인 조건 하에 수행하였다. IC50 값은 c-Jun 인산화를 대조군 값의 50%로 감소시킨 억제제의 농도로서 계산하였다.
JNK2 검정. 검정을 최종 부피 100 μL에서 96-웰 플레이트 포맷으로 수행하였다. 최종 검정 농도는 6.6 μM ATP (3배 ATP Km), 0.2 내지 0.53 μg/mL JNK2 및 100 μg/mL cJUN이었다. JNK2를 하기 희석 완충제 (20 mM HEPES pH 7.6, 0.1 mM EDTA, 2.5 mM MgCl2, 0.004%(w/v) 트리톤 X100, 2 μg/ml 류펩틴, 20 mM B-글리세롤 포스페이트, 0.1 mM Na3VO4 디티오트레이톨) 중에 희석하고, 이어서 기질 용액 완충제 (20 mM HEPES pH 7.6, 50 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 2.5 mM MgCl2, 0.05%(w/v) 트리톤 X100) 중에 희석된 cJun과 미리 혼합하였다. JNK2/cJun 믹스 (85 μl)를 100% DMSO 중에 희석된 억제제 (5 μl)에 첨가하여 최종 DMSO 검정 농도 5%(v/v)를 얻었다. 효소, 기질 및 억제제 혼합물을 15분 동안 실온에서 평형을 이루도록 하였다. 반응을 키나제 완충제 (130 mM MgCl2, 6 mM 디티오트레이톨, 150 mM 파라-니트로페닐 포스페이트, 100 μCi/ml γ-[33P]-ATP) 중 10X ATP 10μL를 첨가함으로써 시작하였다. 반응이 60분 동안 진행되도록 한 후에, 트리클로로아세트산 (최종 7.2% TCA)을 통해 단백질을 침전시켰다. TCA와 함께 30분 인큐베이션 후에, 반응 생성물을 팩커드 필터메이트를 이용하여 유리 마이크로필터 96-웰 플레이트 (밀리포어 MAHF CIH60) 상에 수집하였다. 침전물을 포스페이트 완충 염수로 세척하고, cJun에 혼입된 포스페이트의 양을 팩커드 탑카운트-NXT를 이용하는 섬광 계수 카운팅에 의해 정량화하였다. 모든 검정은 포스페이트 혼입이 시간 및 효소 농도에 대해 선형인 조건 하에 수행하였다. IC50 값은 c-Jun 인산화를 대조군 값의 50%로 감소시킨 억제제의 농도로서 계산하였다.
세포 검정
RAW264.7 포스포-cJun 전세포 검정. RAW264.7 세포를 아메리카 티슈 컬쳐 콜렉션(American Tissue Culture Collection)으로부터 구입하고, 90% 고글루코스 둘베코 변형 이글 배지 (인비트로젠), 10% 태아 소 혈청 (하이클론(Hyclone)) 및 2 mM L-글루타민 (인비트로젠)으로 이루어진 성장 배지 중에서 유지하였다. 모든 세포를 95% 공기 및 5% CO2 중 37℃에서 배양하였다. 세포를 96-웰 플레이트에서 성장 배지 120 μL 중 웰당 1.0 x 105개 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 디아미노피리미딘 화합물 원액 (30 mM)을 DMSO 중에 연속 희석하고, 성장 배지 중에 추가로 희석하고, 15 μL 부피의 10x 농축 용액으로서 각 웰에 첨가하고, 혼합하고, 세포와 함께 인큐베이션되도록 하였다. 화합물 비히클 (DMSO)을 모든 웰에서 최종 농도 0.2%에서 유지하였다. 30분 후에, 세포를 최종 농도 25 ng/mL의 리포폴리사카라이드 (알렉시스 바이오케미칼스(ALEXIS Biochemicals))로 활성화시켰다. 리포폴리사카라이드를 성장 배지 중에 10x 농축 용액으로서 첨가하고, 웰당 15 μL의 부피로 첨가하였다. 세포 플레이트를 1시간 동안 배양하고, 그 후에 세포 배지를 제거하였다. 세린 63에서 인산화된 c-Jun 단백질의 수준을 전세포 용해물 키트-포스포-c-Jun (Ser 63) 검정 (메조 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery))에 대한 제조업체의 지침에 따라 측정하되, 단, 용해 완충제 중 NaCl의 농도는 최종 농도 350 mM로 증가시켰다. IC50 값은 인산화된 c-Jun 단백질의 수준을 신호 윈도우의 50%로 감소시킨 디아미노피리미딘 화합물의 농도로서 계산하였다. 표 1, 2 및 3의 특정 화합물은 본 검정에서 0.01 - 30 μM 범위의 IC50 값을 가졌다.
저캣(Jurkat) T-세포 IL-2 생산 검정. 저캣 T 세포 (클론 E6-1)를 아메리카 티슈 컬쳐 콜렉션으로부터 구입하고, 10% 태아 소 혈청 (하이클론) 및 페니실린/스트렙토마이신과 함께 2 mM L-글루타민 (미디어테크(Mediatech))를 함유하는 RPMI 1640 배지로 구성된 성장 배지 중에서 유지하였다. 모든 세포를 95% 공기 및 5% CO2 중 37℃에서 배양하였다. 세포를 96-웰 플레이트에서 배지 120 μL 중 웰당 1 x 105개 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 디아미노피리미딘 화합물 원액 (20 mM)을 성장 배지 중에 희석하고, 15 μL 부피의 10 x 농축 용액으로서 각 웰에 첨가하고, 혼합하고, 세포와 함께 30분 동안 사전-인큐베이션되도록 하였다. 화합물 비히클 (디메틸술폭시드)을 모든 웰에서 최종 농도 0.2%에서 유지하였다. 30분 후에, 세포를 PMA (포르볼 미리스테이트 아세테이트; 최종 농도 50 ng/mL) 및 PHA (피토헤마글루티닌; 최종 농도 1 μg/mL)로 활성화시켰다. PMA 및 PHA를 성장 배지 중 제조된 10 x 농축 용액으로서 첨가하고, 웰당 15 μL의 부피로 첨가하였다. 세포 플레이트를 6시간 동안 배양하였다. 세포를 원심분리에 의해 펠릿화시키고, 배지를 제거하고, -20℃에서 저장하였다. 배지 분취액을 인간 IL-2 조직 배양 키트 (메조 스케일 디스커버리)에 대한 제조업체 지시에 따라 분석하였다. IC50 값은 IL-2 생산을 신호 윈도우의 50%로 감소시킨 디아미노피리미딘 화합물의 농도로서 계산하였다. 표 1, 2 및 3의 특정 화합물은 본 검정에서 0.01 - 10 μM 범위의 IC50 값을 가졌다.
동물 모델
래트 또는 마우스 생체내 LPS-유발 TNF-α 생산 및 pcJun 검정. 찰스 리버 래보러토리즈(Charles River Laboratories)로부터 구입한 각각 7주령 또는 체중 20 g의 수컷 CD 래트 또는 C57Bl/6 마우스를 사용 이전에 1주 동안 적응하도록 하였다. 래트에서, 측면 꼬리 정맥을 간단한 이소플루란 마취제 및 20 μg LPS (이. 콜라이(E. Coli) 055:BS) 하에 22-케이지 초과-니들 카테터로 피하로 캐뉼레이팅하고, 카테터를 주사가능한 생리 염수 2.5 mL/kg으로 플러싱하였다. 마우스에서, 염수 중 1 mg/kg LPS (이. 콜라이 055:BS)를 200 μl의 부피로 복강내로 투여하였다. 동물은 LPS 주사 전 15 내지 180분에 경구 위관영양에 의해 디아미노피리미딘 화합물을 투여받았다. 각각 래트 및 마우스에 대한 LPS 챌린지 후 90분 및 2시간에 혈액을 심장 천공을 통해 수집하고, 간 및 부고환 지방을 메조스케일 디스커버리 플랫폼을 이용하여 pcJun 분석을 위해 단리하였다. 혈장을 리튬 헤파린 분리 튜브를 이용하여 준비하고, 분석시까지 -80℃에서 동결시켰다. TNF-α 수준은 래트 또는 마우스 특이적 TNF-α ELISA 키트 (메조스케일 디스커버리)를 이용하여 결정하였다. 간 및 부고환 지방을 메조스케일 용해 완충제 중에 균질화시키고 초음파처리하고, 단백질 함량을 결정하고 (BCA 단백질 결정 키트), pcJun 수준을 측정하였다 (메조스케일 디스커버리). ED50 값은 TNF-α 또는 pcJun 수준을 대조군 값의 50%로 감소시킨 디아미노피리미딘 화합물의 용량으로서 계산하였다. 표 1, 2 및 3의 특정 화합물은 본 검정에서 30-100 mg/kg 범위의 ED50 값을 갖는 것으로 나타났거나 또는 나타날 것이다.
래트에서 콜린 결핍 아미노산 보충제 유발 비-알콜성 지방간염 (NASH) 모델. 찰스 리버 래보러토리즈로부터 구입한 7주령의 수컷 위스타(Wistar) 래트를 사용 이전에 1주 동안 적응하도록 하였다. 래트에게 최대 12주 동안 콜린 결핍 L 아미노산 보충 (CDAA) 식이 (다이에츠 인크(Dyets Inc))를 공급하였다. 래트는 2 내지 12주 동안 상기 식이로의 도입 시간을 시작하면서 디아미노피리미딘 화합물을 1일 1 또는 2회 경구 위관영양에 의해 투여받았다. 연구 종료시 혈액을 심장 천공을 통해 수집하고, 간 및 부고환 지방을 단리하였다. 간 조직을 조직학을 위해 처리하고, 지방증 또는 섬유증의 양을 H&E (헤마톡실린 및 에오신) 또는 피크로 시리우스 레드(picro Sirius red) 염색 후에 정량화하였다. 간 기능을 혈장 또는 혈청 중의 간 효소, 예를 들어, ALT 및 AST의 분석에 의해 평가하였다. 또한, 간에서 포스포-cJun의 수준을 문헌 [Ma F. et al. Lab Invest.; 89(4):470-84 (2009)]에 기재된 바와 같이 IHC에 의해 정량화하였다. ED50 값은 섬유증, 지방증, 간 효소 및/또는 p-cJun 수준을 대조군 값의 50%로 감소시키는 디아미노피리미딘 화합물의 용량으로서 계산하였다. 표 1, 2 및 3의 특정 화합물은 본 검정에서 10-100 mg/kg 범위의 ED50 값을 갖는 것으로 나타났거나 또는 나타날 것이다.
섬유증의 담관 라이게이션 모델. 수컷 BALB/c 마우스 (22-24g)를 찰스 리버 래보러토리즈로부터 구입하고, 수술 이전에 1주 동안 적응하도록 하였다. IP 전달되는 케타민 (80-100 mg/kg)/크실라진 (8mg/kg) 마취제를 담관 라이게이션 외과적 절차에 사용되었다. 복부 절개부는 담관으로의 접근을 제공하고, 담관을 장과 연결되는 담관 문측의 위치에서 2개의 6.0 실크 봉합사로 라이게이션하였다. 3-0 비크릴 봉합사를 사용하여 복벽 및 피부를 봉합하였다. 수술 후에, 마우스에게 1 mL의 락테이트 링커 용액을 매일 피하로 투여하였을 뿐만 아니라 습식 사료를 연구 지속기간 동안 투여하였다. 시험 화합물을 수술 후 1일에 시작하여 경구 위관영양에 의해 투여하였다. 연구는 담관 라이게이션 후 14일에 종결하였다. 혈액을 심장 천공을 통해 수집하고, 혈청을 간 기능 (ALT, AST 및 빌리루빈)의 임상 화학 분석을 위해 단리하였다. 간 조직을 조직학적으로 수집하고 처리하고, H&E (헤마톡실린 및 에오신) 또는 피크로 시리우스 레드로 염색하고, 이를 사용하여 담관 라이게이션 외과적 절차에 의해 유발된 염증, 문맥주위 증식증, 괴사 및 섬유증의 양을 평가하였다. 또한 문헌 [Ma F. et al. Lab Invest.; 89(4):470-84 (2009)]에 기재된 바와 같이, 간에서의 포스포-cJun의 수준을 IHC에 의해 정량화하였다. 표 1, 2 및 3로부터의 특정 화합물은 10-300 mg/kg QD 또는 BID의 용량 수준에서 염증, 문맥주위 증식증, 괴사, 섬유증 및/또는 포스포-cJun 수준의 통계적으로 유의한 억제를 나타내거나 또는 나타낼 것이다.
섬유증의 사염화탄소 모델. 도착시 체중 22-24g의 하를란(Harlan)으로부터 입수한 수컷 C57Bl/6 마우스를 사용 이전에 1주 동안 적응하도록 하였다. 섬유증은 미네랄 오일 중 CCl4 (0.75 mL/kg) (미네랄 오일 중 15% v/v CCl4)의 주 3회 복강내 주사를 통해 달성되었다. 동물은 최초 CCl4 주사 전 1시간에 디아미노피리미딘 화합물을 경구 위관영양에 의해 투여받았고, 이어서 이후 28일의 연구 종료 전체에 걸쳐 매일 또는 1일 2회 투여받았다. 연구 종결시 혈액을 심장 천공을 통해 수집하고, 간을 적출하였다. 간 조직을 조직학을 위해 처리하고, 지방증 또는 섬유증의 양을 H&E (헤마톡실린 및 에오신) 또는 피크로 시리우스 레드 염색 후에 정량화하였다. 간 기능을 혈장 또는 혈청에서 간 효소, 예를 들어, ALT 및 AST의 분석에 의해 평가하였다. 또한, 문헌 [Ma F. et al. Lab Invest.; 89(4):470-84 (2009)]에 기재된 바와 같이, 간에서 포스포-cJun의 수준을 IHC에 의해 정량화하였다. 표 1, 2 및 3으로부터의 특정 화합물은 10-300 mg/kg QD 또는 BID의 용량 수준에서 염증, 문맥주위 증식증, 괴사, 섬유증 및/또는 포스포-cJun 수준의 통계적으로 유의한 억제를 나타내거나 또는 나타낼 것이다
피부 블레오마이신 모델: 도착시 체중 22-24g의 수컷 또는 암컷 DBA/2 마우스를 하를란으로부터 입수하고, 사용 이전에 1주 동안 적응하도록 하였다. 피부 섬유증은 상배부의 규정된 영역에서 6주 동안 격일로 블레오마이신 (0.5 mg/ml, 총 부피 100 μL)의 피내 주사에 의해 유발하였다. 동물은 최초 블레오마이신 주사 전 1시간에 디아미노피리미딘 화합물을 경구 위관영양에 의해 투여받았고, 이후 3 또는 6주의 연구 종료 전체에 걸쳐 매일 또는 1일 2회 투여받았다. 연구 종결시 혈액을 심장 천공을 통해 수집하고, 피부를 적출하였다. 피부를 조직학을 위해 처리하고, 피부 두께는 H&E (헤마톡실린 및 에오신) 염색 후에 정량화하였다. 표 1, 2 및 3로부터의 특정 화합물은 10-300 mg/kg QD 또는 BID의 용량 수준에서 피부 두께의 통계적으로 유의한 억제를 나타낼 것이다.
폐 블레오마이신 모델: 수컷 C57Bl/6 마우스를 찰스 리버 래보러토리즈로부터 입수하고, 동물을 적어도 5일 동안 적응하도록 하였다. 동물을 12-시간 명/암 주기에 유지시켰고, 연구의 초기에 대략 8주령이었다. 마우스를 이소플루란으로 가볍게 마취시키고, 기관을 노출시켰다. 제0일에, 블레오마이신 (30 μL; 0.05U)을 기관에 주사하였다. 블레오마이신의 주사 후에, 상처 클립을 이용하여 상처를 봉합하고, 동물이 회복되도록 하였다. 프레드니솔론 (양성 대조군, 복강내로 투여됨), 비히클 (경구로 투여됨) 또는 디아미노피리미딘 화합물 (경구로 투여됨)을 블레오마이신 투여 전 30분 내지 2시간에 (예방 모델) 또는 블레오마이신 투여 후 4일에 (치료 모델) 투여하였다. 비히클 또는 디아미노피리미딘 화합물을 투여하는 것은 모든 연구 전체에 걸쳐 1일 2회 수행하였고, 프레드니솔론을 투여하는 것은 1일 1회 수행하였다. 체중에 대한 작용을 비롯하여, 시험 물품 투여로부터의 부작용에 대해 마우스를 매일 모니터링하였다. 마우스를 제13일에 안락사시켰다. 기관지폐포 세척을 1 mL 포스페이트 완충 염수 (PBS)를 이용하여 수행하였고, 전체 WBC 카운트를 평가하였다. 결과는 회수된 전체 세포로서 표현하였다. 대식세포, 호산구, 호중구 및 림프구를 BALF 샘플 중에서 정량화하였다. 폐엽을 H&E (헤마톡실린 및 에오신), 트리크롬(Trichrome) 또는 튜넬(TUNEL) 염색을 이용하여 조직학을 위해 처리하였다. 트리크롬 절편을 이전에 기재된 바와 같이 섬유증 중증도를 위해 점수화하였다 (문헌 [Ashcroft et al. J. Clin. Pathol. 41:467-470 (1988)]). 표 1, 2 및 3로부터의 특정 화합물은 10-300 mg/kg QD 또는 BID의 용량 수준에서 폐 섬유증의 통계적으로 유의한 억제를 나타낼 것이다.
루푸스 모델: 도착시 4-12주령의 암컷 NZB/NZW F1 마우스를 잭슨 래보러토리즈(Jackson Laboratories)로부터 입수하고, 사용 이전에 1주 동안 적응하고 자발적 SLE-유사 질환이 발병하도록 하였다. 동물은 연구 개시에서 디아미노피리미딘 화합물을 경구 위관영양에 의해 매일 투여받았고, 이어서 이후 최대 6개월의 연구 종료 전체에 걸쳐 매일 또는 1일 2회 투여받았다. 혈액을 연구 전체에 걸쳐 수집하고, 혈청을 단리하여 표준 ELISA 방법을 통해 dsDNA의 발생을 측정하고, 단백뇨를 소변 중에서 측정하였다. 표 1, 2 및 3로부터의 특정 화합물은 10-300 mg/kg QD 또는 BID의 용량 수준에서 단백뇨 또는 dsDNA의 통계적으로 유의한 억제를 나타낼 것이다.
신장 섬유증의 UUO 모델: 체중 대략 150 - 160 g의 수컷 CD-IGS 래트를 찰스 리버 래보러토리즈로부터 입수하고, 연구의 개시 이전에 1주 동안 적응하도록 하였다. 래트를 케타민/크실라진을 이용하여 마취시키고, 수술 부위를 70% 에탄올 및 베타딘으로 소독하였다. 정중선 절개가 이루어진 후에 요관을 노출시키고, 5.0 실크 봉합사를 이용하여 1 cm 떨어진 위치에서 2회 라이게이션하고, 라이게이션 사이를 절단하였다. 절개부를 3.0 실크 봉합사를 사용하여 봉합하고, 동물이 회복되도록 하였다. 동물은 요관 라이게이션 1시간 전에 경구 위관영양에 의해 디아미노피리미딘 화합물을 투여받았고, 이어서 이후 7일의 연구 종료 전체에 걸쳐 매일 또는 1일 2회 투여받았다. 연구 종결시 혈액을 심장 천공을 통해 수집하고, 신장을 적출하였다. 신장을 조직학 및 형태학을 위해 처리하고, 섬유증의 양을 H&E (헤마톡실린 및 에오신), 피크로 시리우스 레드 또는 알파-평활근 액틴 염색 후에 정량화하였다. 표 1, 2 및 3로부터의 특정 화합물은 10-300 mg/kg QD 또는 BID의 용량 수준에서 섬유증 또는 알파-평활근 액틴 염색의 통계적으로 유의한 억제를 나타낼 것이다.
활성 표
표 1, 2 및 3에서의 각각의 화합물은 JNK1 생화학적 검정 중 하나 이상에서 시험되었고, 거기서 활성을 갖는 것으로 밝혀졌으며, 여기서 모든 화합물은 검정에서 10 μM 미만의 IC50을 갖고, 일부 화합물은 200 nM 미만의 IC50 (활성 수준 D)을 갖고, 일부는 200 nM 내지 800 nM의 IC50 (활성 수준 C)을 갖고, 일부는 800 nM 내지 1μM의 IC50 (활성 수준 B)을 갖고, 다른 것들은 1 μM 내지 10 μM의 IC50 (활성 수준 A)을 가졌다.
<표 1>
<표 2>
<표 3>
수많은 참고문헌이 인용되었으며, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로서 포함된다.
Claims (59)
- 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 입체이성질체, 거울상이성질체, 동위원소체 및 전구약물.
<화학식 I>
상기 식에서,
R1은 치환 또는 비치환된 C1 -8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴이며, 단, R1은 1-아미노시클로헥실이 아니고;
R2는 치환 또는 비치환된 C1 -8 알킬, 치환 또는 비치환된 포화 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이며;
단, 화합물은
2-(2-아미노에틸아미노)-4-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드,
2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드,
2-(2-아미노-2-옥소에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드,
2-(2-아미노에틸아미노)-4-(시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르복스아미드,
(S)-2-(2-아미노프로필아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드,
(R)-2-(1-아미노-3-메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-4-(시클로부틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드,
4-(시클로펜틸아미노)-2-(메틸아미노)피리미딘-5-카르복스아미드, 또는
2-(1-아세틸피페리딘-4-일아미노)-4-(시클로프로필아미노)피리미딘-5-카르복스아미드가 아니다. - 제1항에 있어서, R1이 분지형 C1 -8 알킬인 화합물.
- 제2항에 있어서, R1이 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 2,3-디메틸부틸, 이소펜틸, 2-메틸펜틸, 네오펜틸, tert-펜틸 또는 3-메틸펜틸인 화합물.
- 제1항에 있어서, R1이 치환 또는 비치환된 시클로알킬인 화합물.
- 제4항에 있어서, 시클로알킬이 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.2.1]헵틸 또는 비시클로[2.2.2]옥틸인 화합물.
- 제4항에 있어서, 시클로알킬이 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1 -4 알킬), -(C1 -6 시클로알킬), -NR2, -(C0 -3 알킬)OR, -(C0 -3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 치환되고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"가 독립적으로 C1-6 시클로알킬이고, 여기서 C1 -6 시클로알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제4항에 있어서, 시클로알킬이 1개 이상의 메틸, 에틸, t-부틸, 시클로프로필, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(시클로프로필), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3으로 치환된 것인 화합물.
- 제1항에 있어서, R1이 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴인 화합물.
- 제8항에 있어서, 헤테로시클릴이 옥세타닐, 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐 또는 피페리딜인 화합물.
- 제9항에 있어서, 피페리딜이 -C(O)R' 또는 -C(O)OR'로 치환되고, 여기서 R'가 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제1항에 있어서, R1이 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬인 화합물.
- 제11항에 있어서, R1이 (C1 -3 알킬)시클로프로필, (C1 -3 알킬)시클로부틸, (C1 -3 알킬)시클로펜틸 또는 (C1 -3 알킬)시클로헥실인 화합물.
- 제11항에 있어서, R1이 -(CH2)시클로프로필, -CH(CH3)시클로프로필, -CH(CH3)시클로부틸, -CH(CH3)시클로헥실 또는 -C(CH3)2시클로프로필인 화합물.
- 제1항에 있어서, R1이 치환 또는 비치환된 알킬헤테로시클릴인 화합물.
- 제14항에 있어서, R1이 -(C1 -4 알킬)테트라히드로푸라닐, -(C1 -4 알킬)디옥솔라닐, (C1 -4 알킬)푸라닐, (C1 -3 알킬)티오페닐 또는 -(C1 -3 알킬)피리딜인 화합물.
- 제1항에 있어서, R2가 치환 또는 비치환된 C1 -8 알킬인 화합물.
- 제16항에 있어서, R2가 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 3-메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 3,3-디메틸부틸, 2,3,3-트리메틸부틸, tert-펜틸, 이소펜틸, 3-펜틸, 3-메틸펜틸, 2-메틸펜틸 또는 2,4-디메틸펜틸인 화합물.
- 제16항에 있어서, R2가 1개 이상의 -(C1 -4 알킬), -(C0 -3 알킬)OR, -C(O)NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제16항에 있어서, R2가 1개 이상의 -OH, -OCH3 또는 -CH3으로 치환된 것인 화합물.
- 제1항에 있어서, R2가 치환 또는 비치환된 시클로알킬인 화합물.
- 제20항에 있어서, R2가 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.1.1]헥실 또는 비시클로[2.2.1]헵틸인 화합물.
- 제20항에 있어서, R2가 1개 이상의 -CF3, -(C1 -4 알킬), -(C1 -6 시클로알킬)-(C0-3 알킬)OR, -(C0 -3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 여기서 시클로알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제20항에 있어서, R2가 1개 이상의 메틸, 에틸, 이소프로필, -시클로프로필, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3으로 치환된 것인 화합물.
- 제1항에 있어서, R2가 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬인 화합물.
- 제24항에 있어서, R2가 치환 또는 비치환된 (C1 -3 알킬)시클로프로필, (C1 -3 알킬)시클로부틸, (C1 -3 알킬)시클로펜틸 또는 (C1 -3 알킬)시클로헥실인 화합물.
- 제24항에 있어서, R2가 -(CH2)시클로프로필, -(CH2)시클로부틸, -CH(CH3)시클로프로필, -CH(CH3)시클로부틸, -CH(CH2CH3)시클로프로필, -C(CH3)2시클로프로필 또는 -CH2CH2시클로부틸인 화합물.
- 제1항에 있어서, R2가 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴인 화합물.
- 제27항에 있어서, R2가 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페리디노닐 또는 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐인 화합물.
- 제27항에 있어서, R2가 1개 이상의 -(C1 -4 알킬), -(C0 -3 알킬)OR 또는 -C(O)R'로 치환되고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제20항에 있어서, R1이 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1 -4 알킬), -NR2, -(C0 -3 알킬)OR, -(C0 -3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 임의로 치환된 시클로알킬이고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"가 독립적으로 C1 -6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제1항에 있어서, 10 μM의 농도에서 JNK1을 약 50% 이상 억제하는 화합물.
- 제1항에 있어서, 표 1로부터 선택된 화합물.
- 표 2로부터 선택된 화합물.
- 하기 화학식 IB의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 입체이성질체, 거울상이성질체, 동위원소체 및 전구약물.
<화학식 IB>
상기 식에서,
R3은 치환 또는 비치환된 C1 -8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환된 알킬시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 알킬-(비-방향족 헤테로시클릴)이고;
R4는 치환 또는 비치환된 C1 -8 알킬, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, 또는 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴이며;
단, 화합물은
4-(이소펜틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴;
(2S,2'S)-디메틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(4-메틸펜타노에이트);
(2S,2'S)-디에틸 2,2'-(5-시아노피리미딘-2,4-디일)비스(아잔디일)비스(3-메틸부타노에이트);
4-(시클로헵틸아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴;
4-(4-메틸시클로헥실아미노)-2-(3-(2-메틸피페리딘-1-일)프로필아미노)피리미딘-5-카르보니트릴; 또는
2-(3-(디에틸아미노)프로필아미노)-4-(4-메틸시클로헥실아미노)피리미딘-5-카르보니트릴이 아니다. - 제34항에 있어서, R3이 분지형 C1 -8 알킬인 화합물.
- 제35항에 있어서, R3이 이소프로필, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 2,3-디메틸부틸, 이소펜틸, 2-메틸펜틸, 네오펜틸, tert-펜틸 또는 3-메틸펜틸인 화합물.
- 제34항에 있어서, R3이 치환 또는 비치환된 시클로알킬인 화합물.
- 제37항에 있어서, 시클로알킬이 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.2.1]헵틸 또는 비시클로[2.2.2]옥틸인 화합물.
- 제37항에 있어서, 시클로알킬이 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1 -4 알킬), -(C1-6 시클로알킬), -NR2, -(C0 -3 알킬)OR, -(C0 -3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -(C0-3 알킬)C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 치환되고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"가 독립적으로 C1 -6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제37항에 있어서, 시클로알킬이 1개 이상의 메틸, 에틸, t-부틸, 시클로프로필, -CF3, -F, -OH, -OCH3, -OCHF2, -OCF3, -OCH2CH3, -OCH2CH2F, -OCH2CF3, -O(시클로프로필), -CH2OH, -CH2OCH3, -C(CH3)2OH, -NH2, -NH(CH3), -NHC(O)CH3, -C(CH3)2C(O)N(CH3)2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2 또는 -NHSO2CH3으로 치환된 것인 화합물.
- 제34항에 있어서, R3이 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴인 화합물.
- 제41항에 있어서, 헤테로시클릴이 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페리디노닐 또는 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐인 화합물.
- 제34항에 있어서, R4가 치환 또는 비치환된 C1 -8 알킬인 화합물.
- 제43항에 있어서, R4가 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 3-메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 3,3-디메틸부틸, 2,3,3-트리메틸부틸, tert-펜틸, 이소펜틸, 3-펜틸, 3-메틸펜틸, 2-메틸펜틸 또는 2,4-디메틸펜틸인 화합물.
- 제34항에 있어서, R4가 치환 또는 비치환된 시클로알킬인 화합물.
- 제45항에 있어서, R4가 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 비시클로[1.1.1]펜틸, 비시클로[2.1.1]헥실 또는 비시클로[2.2.1]헵틸인 화합물.
- 제45항에 있어서, R4가 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1 -4 알킬), -(C1 -6 시클로알킬), -(C0 -3 알킬)OR, -(C0 -3 알킬)C(O)NR2, -NR2 또는 -NRCOR'로 치환되고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 여기서 시클로알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제45항에 있어서, R4가 1개 이상의 메틸, 에틸, 이소프로필, -시클로프로필, -CF3, -CH2OH, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)NH2, -NHC(O)CH3 또는 -NHC(O)CH2CH3으로 치환된 것인 화합물.
- 제34항에 있어서, R4가 치환 또는 비치환된 비-방향족 헤테로시클릴인 화합물.
- 제49항에 있어서, R4가 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페리디노닐 또는 1,4-디옥사스피로[4.5]데카닐인 화합물.
- 제45항에 있어서, R3이 1개 이상의 할로겐, -CF3, -(C1 -4 알킬), -NR2, -(C0 -3 알킬)OR, -(C0 -3 알킬)OR", -NRC(O)R', -C(O)R', -C(O)NR2, -C(O)OR' 또는 -NRS(O)2R'로 임의로 치환된 시클로알킬이고, 여기서 각각의 R이 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R'가 독립적으로 C1 -4 알킬이고, 여기서 알킬이 임의로 플루오린화되고, 각각의 R"가 독립적으로 C1 -6 시클로알킬이고, 여기서 시클로알킬이 임의로 플루오린화된 것인 화합물.
- 제34항에 있어서, 10 μM의 농도에서 JNK1을 약 50% 이상 억제하는 화합물.
- 제34항에 있어서, 표 3으로부터 선택된 화합물.
- 유효량의 제1항, 제32항, 제33항, 제34항 및 제53항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 동위원소체, 입체이성질체 또는 전구약물, 및 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 비히클을 포함하는 제약 조성물.
- 키나제를 발현하는 세포를 유효량의 제1항, 제32항, 제33항, 제34항 및 제53항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 호변이성질체, 동위원소체, 입체이성질체 또는 전구약물과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 세포에서 키나제를 억제하는 방법.
- 제55항에 있어서, 키나제가 JNK1 또는 JNK2 중 하나 이상인 방법.
- 간 섬유화 장애, 또는 간 섬유화 장애를 유발하는 당뇨병 또는 대사 증후군의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항, 제32항, 제33항, 제34항 및 제53항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 간 섬유화 장애, 또는 간 섬유화 장애를 유발하는 당뇨병 또는 대사 증후군을 치료 또는 예방하기 위한 방법.
- 제57항에 있어서, 간 섬유화 장애가 비-알콜성 지방간염, 지방증, 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 원발성 담즙성 간경변증, 간염, 간세포성 암종, 또는 만성 또는 반복성 알콜 섭취와, 감염과, 간 이식과 또는 약물 유발된 간 손상과 병발된 간 섬유증인 방법.
- 제57항에 있어서, 간 섬유화 장애가 비-알콜성 지방간염, 지방증, 간염 또는 간경변증인 방법.
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