KR101139557B1 - 질환 및 상태의 치료 및 예방을 위한 플루오로 치환오메가-카르복시아릴 디페닐 우레아 - Google Patents

Abstract

화학식 I의 화합물, 그의 염, 그의 프로드럭, 대사체, 상기 화합물을 함유하는 제약 조성물, 및 raf, VEGFR, PDGFR, p38 및 flt-3 매개 질환을 치료하기 위한 상기 화합물 및 조성물의 용도.

오메가-카르복시아릴 디페닐 우레아, ras 신호전달 경로

Description

질환 및 상태의 치료 및 예방을 위한 플루오로 치환 오메가-카르복시아릴 디페닐 우레아{Fluoro substituted omega-carboxyaryl diphenyl urea for the treatment and prevention of diseases and conditions}

본 발명은 신규 화합물, 이 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 단독으로 또는 항암제와 함께 비정상적인 VEGFR, PDGFR, raf, p38 및(또는) flt-3 키나아제 신호전달에 의해 매개되는 질환 및 상태를 치료하기 위한 이들 화합물 또는 조성물의 용도에 관한 것이다.

ras 신호전달 경로의 활성화는 세포의 증식, 분화 및 형질전환에 대해 지대한 영향을 미치는 일련의 사건들을 일으킨다. ras의 하류 이펙터인 raf 키나아제는 세포 표면 수용체로부터 세포핵으로 이들 신호를 전달하는 핵심 매개자로서 인식된다 ([Lowy, D.R., Willumsen, B.M. Ann. Rev. Biochem. 1993, 62,851], [Bos, J. L. Cancer Res. 1989, 49, 4682]). raf 키나아제에 대한 불활성 항체를 투여하거나 우성 음성 raf 키나아제 또는 raf 키나아제의 기질인 우성 음성 MEK을 공발현시킴으로써 raf 키나아제 신호전달 경로를 억제하는 것에 의한 활성 ras 효과의 억제는 형질전환 세포의 정상 성장 표현형으로의 복귀변이를 초래하는 것으로 나타났다(문헌 [Daum et al. Trends Biochem. Sci. 1994,19, 474-80], [Fridman et wal. J. Biol. Chem. 1994, 269, 30105-8] 참조). 문헌 [Kolch et al., Nature 1991, 349, 426-28]에서 저자들은 나아가 안티센스 RNA에 의해 raf 발현을 억제하면 막-관련 암유전자에서의 세포 증식을 차단한다는 것을 보인 바 있다. 유사하게, (안티센스 올리고데옥시뉴클레오티드에 의한) raf 키나아제의 억제는 시험관내 그리고 생체내에서 인간의 다양한 형태의 종양의 성장을 억제하는 것과 관련이 있다([Monia et al., Nat. Med. 1996, 2, 668-75]).

진행중인 종양이 1-2mm³ 이상의 크기로 자라도록 하기 위해서는, 종양 세포가 섬유아세포, 평활근세포, 내피세포, 세포외 기질 단백질 및 수용성 인자들로 구성되는 지지구조인 기능성 간질을 필요로 한다는 것이 인식되었다([Folkman, J., Semin. Oncol. 2002. 29 (6 Suppl 16), 15-8]). 종양은 PDGF 및 형질전환 성장 인자-베타(TGF-β)와 같은 수용성 성장 인자들의 분비를 통해 간질 조직의 형성을 유도하며, 이어서 섬유아세포 성장 인자(FGF), 표피 성장 인자(EGF) 및 혈관 내피세포 성장 인자(VEGF)와 같은 숙주 세포에 의한 보조인자의 분비를 자극한다. 이들 자극 인자들은 새로운 혈관의 형성 또는 혈관신생을 유도하는데, 이로 인해 종양에 산소와 영양소가 전달되고 종양이 자라도록 하여 전이를 위한 경로가 제공된다. 간질 형성을 억제하는 일부 요법이 다양한 유형의 조직으로부터 상피세포 종양의 성장을 억제할 것으로 믿어지고 있다([George, D. Seimin. Oncol. 2001. 28 (5 Suppl 17), 27-33], [Shaheen, R. M., et al., Cancer Res. 2001, 61 (4), 1464-8], [Shaheen, R.M., et al. Cancer Res. 1999, 59(21), 5412-6]). 그러나, 혈관 신생 과정과 종양 진행에 수반되는 복잡한 성질과 다양한 성장 인자들 때문에, 한 가지 경로를 표적으로 삼는 제제는 제한된 효능을 갖게 될 수 있다. 종양이 숙주 간질에서 혈관신생합성을 유도하는데에 사용되는 다수의 핵심 신호전달 경로에 대한 치료가 제공되는 것이 바람직하다. 이들에는 강력한 간질 형성 자극인자인 PDGF([Ostman, A. and C. H. Heldin, Adv. Cancer Res. 2001, 80, 1-38]), 섬유아세포와 내피세포에 대한 화학적 유인물질 및 세포분열 인자인 FGF 및 혈관생성의 강력한 조절인자인 VEGF가 포함된다.

PDGF는 간질 형성의 핵심 조절인자이며, 다수의 종양에 의해 측분비 방식 (paracrine fashion)으로 분비되고, 간질 형성과 혈관신생합성을 촉진하면서 섬유아세포, 평활근 및 내피세포의 성장을 촉진하는 것으로 믿어진다. PDGF는 유인원 육종 바이러스 (simian sarcoma virus)의 v-sis 암유전자 산물로서 원래 확인되었다([Heldin, C.H., et al., J. Cell. Sci. Suppl. 1985, 3, 65-76]). 성장 인자는 두 개의 펩티드 사슬로 이루어져 있으며, 각각 A 또는 B 사슬로 불리는데 서로 1차 아미노산 서열에 있어서 60%의 상동성을 공유한다. 사슬들은 디술파이드 가교 결합되어 AA, BB 또는 AB의 동형이합체 또는 이형이합체로 구성되는 30kDa의 성숙 단백질을 형성한다. PDGF는 혈소판에서 높은 수준으로 발견되며, 내피세포와 혈관 평활근 근세포에서 발현된다. 또한, PDGF의 생성은 혈관이 잘 생성되지 않은 종양 조직에서처럼 산소가 낮은 조건에서 촉진된다([Kourembanas, S., et al., Kidney Int. 1997, 51(2), 438-43]). PDGF는 1106 아미노산 124kDa 막횡단 티로신 키나아제 수용체인 PDGF 수용체에 높은 친화력으로 갖고 결합한다([Heldin, C.H., A. Ostman, and L. Ronnstrand, Biochim. Biophys. Acta 1998, 1378(1), 79-113]). PDGFR은 동형 또는 이형이합체 사슬로서 발견되며, 두 사슬은 아미노산 서열에 있어 전반적으로 30%의 상동성, 키나아제 도메인에 있어 64%의 상동성을 보인다([Heldin, C.H., et al.. Embo J. 1988, 7(5), 1387-93]). PDGFR은 VEGFR-2(KDR), VEGFR-3(flt-4), c-kit 및 flt-3을 포함하는 분리된 키나아제 도메인을 갖는 티로신 키나아제 수용체 계열의 일종이다. PDGF 수용체는 주로 섬유아세포, 평활근 근세포 및 혈관주위세포에서 발현되며, 신경세포, 신장의 혈관사이 세포, 레이디히 세포 및 중추신경계의 슈반세포에서 약간 발현된다. PDGF는 수용체에 결합하고 나서, 수용체의 이합체 형성을 유도하고 티로신 잔기의 자가인산화와 인산전달반응을 수행하여 수용체의 키나아제 활성을 높이고 SH2 단백질 결합 도메인의 활성화를 통해 하류 이펙터를 불러들이게 된다. PI-3-키나아제, 포스포리파아제 C-γ, src 및 GAP(p21-ras에 대한 GTPase 활성화 단백질)를 포함하는 다수의 신호전달 분자들이 활성화된 PDGFR과 복합체를 형성한다([Soskic, V., et al. Biochemistry 1999, 38(6), 1757-64]). PI-3-키나아제의 활성화를 통해, PDGF는 세포 운동과 이동을 포함하는 Rho 신호전달 경로를 활성화시키고 GAP의 활성화를 통해 p21-ras와 MAPK 신호전달 경로의 활성화를 통한 세포분열을 유도한다.

성인에서, PDGF의 주된 기능은 상처 치유를 용이하게 하여 그 속도를 증가시키고, 혈관의 항상성을 유지하는 것으로 믿어진다([Baker, E.A. and D.J. Leaper, Wound Repair Regen. 2000, 8(5), 392-8], [Yu, J., A. Moon, and H.R. Kim, Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001, 282(3), 697-700]). PDGF는 혈소판에서 고 농도로 발견되며, 섬유아세포, 평활근 근세포, 중성구 및 대식세포에 대한 강력한 화학적 유인물질이다. 상처 치유에 관한 역할 이외에도, PDGF는 혈관의 항상성을 유지시키는데 도움을 주는 것으로 알려져 있다. 새로운 혈관이 발달하는 동안, PDGF는 혈관의 구조적 일체성에 필요한 혈관주위세포와 평활근 근세포를 불러들인다. PDGF는 종양의 신생혈관 합성 동안에도 유사한 역할을 수행하는 것으로 생각된다. 혈관신생합성 동안 수행하는 역할의 일부로서 PDGF는 간질액의 압력을 제어하여, 결합조직 세포들과 세포외 기질 사이의 상호작용을 조절함으로써 혈관의 투과성을 조절한다. PDGFR의 활성을 억제하면 간질액의 압력을 낮출 수 있고, 세포독성 약물의 종양으로의 유입을 촉진시켜 이들 약물의 항암 효능을 향상시킬 수 있다([Pietras, K., et al. Cancer Res. 2002, 62(19), 5476-84], [Pietras, K., et al. Cancer Res. 2001, 61(7), 2929-34]).

PDGF는 직접적으로 간질 세포 또는 종양 세포 상의 PDGFR 수용체의 측분비 또는 자가분비 자극을 통해, 또는 수용체의 증폭 또는 재조합에 의한 수용체의 활성화를 통해 종양의 성장을 촉진할 수 있다. 과발현된 PDGF는 아마도 PDGF의 간질 형성과 혈관신생합성 유도에 대한 직접적인 효과에 의해, PDGF 수용체를 발현하지 않는 2가지 세포 유형인 사람의 흑색종양 세포와 각질형성세포를 형질전환시킬 수 있다([Forsberg, K., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993, 90 (2),393-7], [Skobe, M. and N. E. Fusenig, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998, 95(3), 1050-5]). 이러한 종양 간질에 대한 측분비 자극은 대장암, 폐암, 유방암 및 전립선암에서도 관찰되는데([Bhardwaj, B., et al. Clin. Cancer Res. 1996,2 (4), 773- 82], [Nakanishi, K., et al. Mod. Pathol. 1997, 10 (4), 341-7], [Sundberg, C., et al. Am. J Pathol. 1997, 151 (2), 479-92], [Lindmark, G., et al. Lab. Invest. 1993, 69 (6), 682-9], [Vignaud, J. M., et al. Cancer Res. 1994, 54 (20), 5455-63]), 이들 종양에서는 PDGF는 발현되지만 그 수용체는 발현되지 않는다. 분석된 다수의 종양들에서 PDGF 리간드와 그 수용체가 모두 발현되는 종양 세포 성장의 자가분비 자극이 교모세포종([Fleming, T. P., et al. Cancer Res. 1992, 52 (16), 4550-3]), 연부 조직 육종([Wang, J., M. D. Coltrera, and A. M. Gown, Cancer Res. 1994, 54 (2), 560-4]) 및 난소암([Henriksen, R., et al. Cancer Res. 1993, 53 (19), 4550-4]), 전립선암([Fudge, K., C. Y. Wang, and M. E. Sterns, Mod. Pathol. 1994, 7(5), 549-54]), 췌장암([Funa, K., et al. Cancer Res. 1990, 50 (3), 748-53]) 및 폐암([Antoniades, H. N., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992, 89(9),3942-6])에서 보고된 바 있다. 리간드와 무관한 수용체의 활성화는 염색체의 전좌로 인해 Ets-유사 전사인자 TEL과 PDGF 수용체 사이에서 융합 단백질이 만들어지는 만성 골수단핵구성 백혈병에서 적게나마 보고된 바 있다. 또한, PDGFR의 돌연변이의 활성화가 c-kit의 활성화가 수반되지 않는 위장관 간질 종양에서 발견된 바 있다([Heinrich, M. C., et al., Science 2003,9, 9]).

배아 발생과 일부 혈관신생 의존적인 질환들 모두에 있어 또다른 혈관신생과 혈관 형성의 주된 조절인자는 혈관 내피세포 성장 인자(VEGF; 혈관 투과성 인자라고도 지칭됨)이다. VEGF는 선택적 RNA 스플라이싱으로 인해 동형이합체 형태로 존 재하는 세포분열 인자의 일군의 이소형을 의미한다. VEGF 이소형들은 혈관 내피세포에 대해 매우 특이적이다(검토를 위해 문헌 [Farrara et al. Endocr. Rev. 1992, 13, 18], [Neufield et al. FASEB J, 1999, 13, 9] 참조).

VEGF 발현은 인터루킨-1, 인터루킨-6, 표피 성장 인자 및 형질전환 성장 인자(transforming growth factor)와 같은 다양한 시토킨과 성장 인자들 뿐 아니라 저산소증에 의해서도 유도된다([Shweiki et al. Nature 1992, 359, 843]). 현재까지, VEGF 및 VEGF 군의 구성원들은 3 종의 막횡단 수용체 티로신 키나아제([Mustonen et al. J. Cell Biol. 1995, 129, 895]), VEGF 수용체-1(flt-1(fms-유사 티로신 키나아제-1)으로도 알려짐), VEGF 수용체-2(키나아제 삽입 도메인 함유 수용체(KDR)로도 알려짐; 쥐의 VEGFR-2 동족체는 태아 간 키나아제-1(flk-1)으로 알려져 있음) 및 VEGFR-3(flt-4로도 알려짐) 중 하나 또는 그 이상과 결합하는 것으로 보고되고 있다. VEGFR-2와 flt-1은 서로 다른 신호전달의 특성을 갖고 있는 것으로 보여진 바 있다([Waltenberger et al. J. Biol. Chem. 1994, 269, 26988], [Park et al. Oncogene 1995, 10, 135]). 따라서 VEGFR-2는 무상 세포에서 강한 리간드-의존적 티로신 인산화를 수행하는 반면, flt-1은 약한 반응을 보인다. 따라서, VEGFR-2에의 결합은 전 스펙트럼의 VEGF-매개 생물학적 반응을 유도하는데 중요한 필요 조건인 것으로 믿어진다.

생체 내에서, VEGF는 혈관형성에 있어 중심적인 역할을 수행하며, 혈관신생과 혈관의 투과화를 유도한다. 하향 조절된 VEGF 발현은 비정상적인 혈관신생 및(또는) 과투과 과정을 특징으로 하는 다수의 질환들의 발달에 기여한다. VEGF-매개 신호전달 연속단계의 몇 가지 약물을 통한 조절은 비정상적인 혈관신생 및(또는) 과투과 과정에 대한 유용한 조절을 제공한다. 종양의 저산소 영역 내의 종양생성 세포들은 VEGF 생성의 자극에 반응하며, 이는 휴지기의 내피세포들을 활성화시켜 새로운 혈관 형성을 자극한다([Shweiki et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. 1995, 92, 768]). 또한, 혈관신생이 일어나지 않는 종양 영역 내에서의 VEGF 합성은 ras 신호 전달경로를 통해 진행될 수 있다([Grugel et al. J. Biol. Chem. 1995, 270, 25915], [Rak et al. Cancer Res. 1995, 55, 4575]). 계내(in situ) 혼성화 연구들은 VEGF mRNA가 혈관육종([Hashimoto et al. Lab. Invest.1995, 73, 859])과 몇 가지 두개내 종양([Plate et al. Nature 1992, 359, 845], [Phillips et al. Int. J. Oncol. 1993, 2, 913], [Berkman et al. J. Clin. Invest. 1993, 91, 153]) 뿐 아니라 폐암([Mattern et al. Br. J. Cancer 1996, 73, 931]), 갑상선암([Viglietto et al. Oncogerae 1995, 11, 1569]), 유방암([Brown et al. Human Pathol. 1995, 26, 86]), 위장관암([Brown et al. Cancer Res. 1993, 53, 4727], [Suzuki et al. Cancer Res. 1996, 56, 3004]), 신장암과 방광암([Brown et al. Am. J Pathol. 1993, 143Ⅰ, 1255]), 난소암([Olson et al. Cancer Res. 1994, 54, 1255]) 및 자궁암([Guidi et al. J. Nat'l Cancer Inst. 1995, 87, 12137])을 포함한 광범위의 다양한 사람의 암에서 매우 상향조절된다는 것을 보여주었다. VEGFR-2에 대한 모노클로날 항체의 중화가 종양의 혈관신생을 차단하는데 효능이 있다는 것이 보여진 바 있다([Kim et al. Nature 1993, 362, 841], [Rockwell et al. Mol. Cell. Differ. 1995, 3, 315]).

예를 들어 극심한 저산소 상태 하에서 과발현된 VEGF는 안구내 혈관신생을 유도할 수 있고, 혈관의 과다증식을 야기하여, 결국 실명으로 이끌 수 있다. 그러한 일련의 사건들은 당뇨병성 망막병증, 허혈성 망막정맥 폐쇄증과 미숙아 망막병증([Aiello et al. New Engl. J. Med. 1994, 331, 1480], [Peer et al. Lab. Invest. 1995, 72, 638]), 및 노화성 황반변성(AMD)([Lopez et al. Invest. Opththalmol. Vis. Sci. 1996, 37, 855])을 포함하는 다수의 망막병증에서 관찰되었다.

류마티스성 관절염(RA)에서, 혈관 판누스(pannus)의 내증식은 혈관신생 인자의 생성에 의해 매개될 수 있다. RA 환자의 활액 내 면역반응성 VEGF의 양은 높은 반면, 퇴행성 관절 질환을 갖는, 다른 형태의 관절염 환자의 활액에서는 VEGF의 양이 낮다 ([Koch et al., J. Immunol. 1994, 152, 4149]). 혈관신생 억제제인 AGM-170은 래트(rat)의 콜라겐 관절염 모델에서 관절의 신생혈관증식을 막는 것으로 보여졌다([Peacock et al. J. Exper. Med. 1992, 175, 1135]).

수포성 유천포창, 다형 홍반 및 헤르페스성 피부염과 같은 표피하 수포 형성과 관련된 수포성 질환 뿐 아니라 건선성 피부에서도 VEGF의 발현이 증가되는 것으로 보여진다([Brown et al. J. Invest. Dermatol. 1995, 104, 744]).

혈관 내피세포 성장 인자(VEGF, VEGF-C, VEGF-D)와 이들의 수용체(VEGFR-2, VEGFR-3)는 종양의 혈관신생 뿐 아니라 림프혈관신생의 핵심적인 조절인자이다. VEGF, VEGF-C 및 VEGF-D는 대부분의 종양에서 주로 종양 성장 기간 동안, 종종 크게 증가되게 발현된다. VEGF 발현은 저산소 상태, 시토킨, ras와 같은 암유전자에 의해, 또는 종양 억제 유전자의 불활성화에 의해 자극받는다([McMahon, G. Oncologist 2000, 5(Suppl.1), 3-10], [McDonald, N. Q.;Hendrickson, W. A. Cell 1993, 73, 421-424]).

VEGF의 생물학적 활성은 그들의 수용체와의 결합을 통해 매개된다. VEGFR-3(flt-4라고도 지칭됨)는 정상 성인 조직의 림프 내피세포에서 주로 발현된다. VEGFR-3의 작용은 새로운 림프관 형성을 위해 필요하지만, 이미 존재하는 림프관의 유지에는 필요하지 않다. VEGFR-3는 또한 종양에서의 혈관 내피세포 상에서 상향조절을 받는다. 최근에 VEGFR-3의 리간드인 VEGF-C 및 VEGF-D가 포유동물에서 림프 혈관신생의 조절인자로서 확인되었다. 종양과 관련된 림프 혈관신생 인자들에 의해 유도되는 림프 혈관신생은 종양 내부로의 새로운 혈관의 성장을 촉진하고, 종양 세포들이 전신의 순환계에 접근할 수 있도록 한다. 림프관에 침입한 세포들은 가슴관을 통해 혈류 안으로 들어갈 수 있다. 종양 발현 연구들은 VEGF-C, VEGF-D 및 VEGFR-3의 발현과 1차성 종양이 퍼지는 능력(예를 들어, 림프절 침범, 림프선 침범, 2차성 전이, 및 무병생존)과 직결된 임상병리 인자들과의 직접적인 비교를 가능하게 하였다. 많은 경우에 있어, 이러한 연구들은 림프혈관신생 인자들의 발현과 1차성 종양 덩어리가 전이할 수 있는 능력 사이의 통계적 상관관계를 보여준다([Skobe, M. et al. Nature Med. 2001, 7 (2), 192-198], [Stacker, S. A. et al., Nature Med. 2001, 7 (2), 186-191], [Makinen, T. et al. Nature Med. 2001, 7 (2), 199-205], [Mandriota, S. J. et al. EMBO J. 2001, 20(4), 672- 82], [Karpanen, T. et al. Cancer Res. 2001, 61 (5), 1786-90], [Kubo,H. et al. Blood 2000, 96 (2), 546-53]).

저산소증은 악성 세포의 VEGF 합성에 대한 중요한 자극으로 보인다. p38 MAP 키나아제의 활성화는 저산소증에 반응하여 종양 세포가 VEGF를 유도하는데 필요하다([Blaschke, F. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002, 296, 890-896], [Shemirani, B. et al. Oral Oncology 2002, 38, 251- 257]). p38 MAP 키나아제는 VEGF 분비 조절을 통해 혈관신생에 관련되어 있을 뿐 아니라, 악성 세포의 침범, 그리고 콜라게나제 활성 및 유로키나아제 플라스미노겐 활성인자 발현의 조절을 통한 서로 다른 유형의 종양의 이동을 촉진한다([Laferriere, J. et al. J. Biol. Chem. 2001, 276, 33762-33772], [Westermarck, J. et al. Cancer Res. 2000, 60, 7156-7162], [Huang, S. et al. J. Biol. Chem. 2000, 275, 12266-12272], [Simon, C. et al. Exp. Cell Res. 2001, 271, 344-355]).

세포분열 인자에 의해 활성화되는 단백질 키나아제(MAPK) p38의 억제는 시험관 내 및(또는) 생체 내에서 시토킨 생성(예를 들어, TNF, IL-1, IL-6, IL-8) 및 단백질 분해 효소 생성(예를 들어, MMP-1, MMP-3) 모두를 억제하는 것으로 보여졌다. 세포분열 인자에 의해 활성화 되는 단백질(MAP) 키나아제 p38은 IL-1과 TNF 신호전달 경로에 관련된다([Lee, J. C.; Laydon, J. T.; McDonnell, P. C.; Gallagher, T. F.; Kumar, S.; Green, D.; McNulty, D.; Blumenthal, M. J.; Heys, J. R.; Landvatter, S. W.; Stricker, J. E.; McLaughlin, M. M.; Siemens, I. R.; Fisher, S. M.; Livi, G. P.; White, J. R.; Adams, J. L. ; Yound, P. R. Nature 1994, 372, 739]).

임상 연구들은 종양 괴사 인자(TNF) 생성 및(또는) 신호전달을 류마티스성 관절염을 포함하는 많은 질환에 연결시켰다([Maini. J. Royal, Coll. Physicians London 1996, 30, 344]). 또한, TNF의 과다량은 급성 류마티스열([Yegin et al. Lancet 1997, 349, 170]), 뼈 흡수([Pacifici et al. J. Clin. Endocrinol. Metabol. 1997, 82, 29]), 폐경후 골다공증([Pacifici et al. J. Bone Mineral Res. 1996, 11, 1043]), 패혈증([Blackwell et al. Br. J Anaesth. 1996, 77, 110]), 그람 음성균 패혈증([Debets et al. Prog. Clin. Biol. Res. 1989, 308, 463]), 패혈성 쇼크([Tracey et al. Nature 1987, 330, 662], [Girardin et al. New England J. Med. 1988, 319, 397]), 내독소성 쇼크([Beutler et al. Science 1985, 229, 869], [Ashkenasi et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1991, 88, 10535]), 독성 쇼크 증후군([Saha et al. J. Immunol. 1996, 157, 3869], [Lina et al. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1996, 13, 81]), 전신 염증성 반응 증후군([Anon. Crit. Care Med. 1992, 20, 864]), 크론병([van Deventer et al. Aliment. Pharmacol. Therapeu. 1996, 10(Suppl. 2), 107], [van Dullemen et al. Gastroenterology 1995, 109, 129]) 및 궤양성 대장염([Masuda et al. J. Clin. Lab. Immunol. 1995, 46, 111])을 포함하는 염증성 장질환([Stokkers et al. J. Inflamm. 1995-6, 47, 97]), 야리시-헤륵스하이머 반응([Fekade et al. New England J. Med. 1996,335, 311]), 천식([Amrani et al. Rev. Malad. Respir. 1996, 13, 539]), 성인성 호흡 곤란 증후군([Roten et al. Am. Rev. Respir. Dis. 1991, 143, 590], [Suter et al. Am. Rev. Respir. Dis. 1992, 145, 1016]), 급성 폐섬유성 질환(Pan et al. Pathol. Int. 1996, 46, 91]), 폐사르코이드증([Ishioka et al. Sarcoidosis Vasculitis Diffuse Lung Dis. 1996,13, 139]), 알레르기성 호흡기병([Casale et al: Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996, 15, 35]), 규소폐증([Gossart et al. J Immunol. 1996, 156, 1540], [Vanhee et al. Eur. Respir. J. 1995, 8, 834]), 광부 진폐증([Borm et al. Am. Rev. Respir. Dis. 1988, 138, 1589]), 폐포 손상([Horinouchi et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996, 14, 1044]), 간부전([Gantner et al. J. Pharmacol. Exp. Therap. 1997, 280, 53]), 급성 염증 동안의 간 질환([Kim et al. J. Biol. Chem. 1997, 272, 1402]), 중증 알코올성 간염([Bird et al. Ann. Intern. Med. 1990, 112, 917]), 열대열원충 말라리아([Perlmann et al. Infect. Immunit. 1997, 65, 116]) 및 뇌 말라리아([Rudin et al. Am. J. Pathol. 1997, 150, 257])를 포함하는 말라리아([Grau et al. Immunol. Rev. 1989,112, 49], [Taverne et al. Parasitol. Today 1996, 12, 290]), 인슐린 비의존성 당뇨병(NIDDM)([Stephens et al. J. Biol. Chem. 1997, 272, 971], [Ofei et al. Diabetes 1996, 45, 881]), 울혈성 심부전([Doyama et al. Int. J. Cardiol. 1996, 54,217], [McMurray et al. Br. Heart J. 1991, 66, 356]), 심장 질환 이후의 손상([Malkiel et al. Mol. Med. Today 1996, 2, 336]), 죽상경화증([Parums et al. J. pathol. 1996, 179, A46]), 알츠하이머병([Fagarasan et al. Brain Res. 1996, 723, 231], [Aisen et al. Gerontology 1997, 43, 143]), 급성 뇌염([Ichiyama et al. J. Neurol. 1996, 243, 457]), 뇌 손상([Cannon et al. Crit. Care Med. 1992, 20, 1414], [Hansbrough et al. Surg. Clin. N. Am. 1987, 67, 69], [Marano et al. Surg. Gynecol. Obstet. 1990, 170, 32]), 다발성경화증에서의 희소돌기아교세포 소실 및 탈수초([Brosnan et al. Brain Pathol. 1996, 6, 243])를 포함하는 다발성 경화증([M. S.; Coyle. Adv. Neuroimmunol. 1996, 6, 143], [Matusevicius et al. J. Neuroimmunol. 1996, 66, 115]), 진행성 암([MucWierzgon et al. J. Biol. Regulators Homeostatic Agents 1996, 10, 25]), 악성 림프종([Levy et al. Crit. Rev. Immunol. 1996, 16, 31]), 급성 췌장염시의 전신 합병증([McKay et al. Br. J. Surg. 1996, 83, 919])을 포함하는 췌장염([Exley et al. Gut 1992, 33, 1126]), 감염, 염증, 및 암에서의 상처 회복력의 손상([Buck et al. Am. J. Pathol. 1996, 149, 195]), 골수형성이상증후군([Raza et al. Int. J. Hematol. 1996, 63, 265]), 전신 홍반 루푸스([Maury et al. Arthritis Rheum. 1989, 32, 146]), 담즙성 간경변([Miller et al. Am. J. Gasteroenterolog. 1992, 87, 465]), 장 괴사([Sun et al. J. Clin. Invest. 1988, 81, 1328]), 건선([Christophers. Austr. J Dermatol. 1996, 37, S4]), 방사선 손상([Redlich et al. J. Immunol. 1996, 157, 1705]), 및 OKT3와 같은 모노클로날 항체 투여 후의 독성([Brod et al. Neurology 1996, 46, 1633])을 포함하는 다양한 염증성 및(또는) 면역조절 질환에 수반되어 있다. TNF의 양 또한 허혈재관류손상([Colletti et al. J. Clin. Invest. 1989, 85, 1333]), 및 신장([Maury et al. J. Exp. Med. 1987, 166, 1132]), 간 ([Imagawa et al. Transplantation 1990, 50, 219]), 심장([Bolling et al. Transplantation 1992, 53, 283]), 및 피부([Stevens et al. Transplantation. Proc. 1990,22, 1924])에서의 동종이식 거부반응, 만성 폐 동종이식 거부반응(폐색성 기관지염)([LoCicero et al. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 1990, 99, 1059])을 포함하는 폐 동종이식 거부반응(Grossman et al. Immunol. Allergy Clin. N. Am. 1989, 9, 153)을 포함하는 동종이식 거부반응 뿐 아니라 인공 고관절 전치환술에 기인한 합병증([Cirino et al. Life Sci. 1996, 59, 86])을 포함하는 숙주편대이식 반응([Piguet et al. Immunol. Ser. 1992, 56, 409])에도 관련되어 있다. TNF는 또한 결핵([Rook et al. Med. Malad. Infect. 1996, 26, 904]), 소화 궤양병 중의 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pyroli) 감염([Beales et al. Gastroenterology 1997, 112, 136]), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi) 감염으로부터 야기되는 샤가병([Chandrasekar et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996, 223, 365]), 대장균 감염으로부터 야기되는 시가양독소독소 효과([Harel et al. J. Clin. Iinvest. l992, 56, 40]), 포도상구균 감염으로부터 야기되는 장독소 A 효과([Fischer et al. J Immunol. 1990, 144, 4663]), 수막구균 감염([Waage et al. Lancet 1987, 355], [Ossege et al. J. Neurolog. Sci. 1996, 144, 1]), 및 보렐리아 부르그도페리(Borrelia burgdorferi)([Brandt et al. Infect. Immunol. 1990, 58, 983]), 트레포네마 팰리덤(Treponema pallidum)([Chamberlin et al. Infect, Immunol. 1989, 57, 2872]), 사이토메갈로바이러스(CMV)([Geist et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1997, 16, 31]), 인플루엔자 바이러스([Beutler et al. Clin. Res. 1986, 34, 491a]), 센다이 바이러스([Goldfield et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1989, 87, 1490]), 테일러씨 뇌척수염 바이러스(Theiler's encephalomyelitis virus)([Sierra et al. Immunology 1993, 78, 399]), 및 인간 면역결핍 바이러스(HIV)([Poli. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 1990, 87, 782], [Vyakaram et al. AIDS 1990, 4, 21], [Badley et al. J. Exp. Med. 1997, 185, 55])로부터의 감염을 포함하는 감염성 질환(검토: [Beutler et al. Crit. Care Med. 1993, 21, 5423], [Degre. Biotherapy 1996, 8, 219])에도 연결되어 있다.

다수의 질환들은 과량의 또는 원치 않는 기질-분해 금속성 단백질분해효소(MMP) 활성에 의해 또는 MMP 대 금속성 단백질분해효소의 조직 억제제(TIMP) 비의 불균형에 의해 매개되는 것으로 생각된다. 이러한 질환에는 골관절염([Woessner et al. J. Biol. Chem. 1984, 259, 3633]), 류마티스성 관절염([Mullins et al. Biochim. Biophys. Acta 1983, 695, 117], [Woolley et al. Arthritis Rheum. 1977, 20, 1231], [Gravallese et al. Arthritis Rheum. 1991, 34, 1076]), 패혈성 관절염([Williams et al. Arthritis Rheum. 1990, 33, 533]), 종양 전이([Reich et al. Cancer Res. 1988, 48, 3307], [Matrisian et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci., USA 1986, 83, 9413]), 치주 질환([Overall et al. J. Periodontal Res. 1987, 22, 81]), 각막 궤양([Burns et al. Invest. Opthalmol. Vis. Sci. 1989, 30, 1569]), 단백뇨([Baricos et al. Biochem. J. 1988, 254, 609]), 죽상경화판 파열로부터의 관상동맥 혈전증([Henney et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci., USA 1991, 88, 8154]), 대동맥류 질환 ([Vine et al. Clin. Sci. 1991, 81, 233]), 수태 조절([Woessner et al. Steroids 1989, 54, 491]), 이영양성 수포성 표피 박리증(dystrophobic epidermolysis bullosa)([Kronberger et al. J. Invest. Dermatol 1982, 79, 208]), 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골 손실, MMP 활성에 의해 매개되는 골감소증, 악관절 질환, 및 신경계의 탈수초성 질환([Chantry et al. J. Neurochem. 1988, 50, 688])이 포함된다.

p38 억제는 MMP 생성 및 TNF 생성의 억제를 유도하므로, 세포분열 인자에 의해 활성화되는 단백질(MAP) 키나아제 p38 효소의 억제가 골다공증 및 류마티스성 관절염, COPD([Badger, A. M.; Bradbeer, J. N.; Votta,B.; Lee, J. C.;Adams,J. L.; Griswold, D.E. J. Pharm. Exper. Ther. 1996, 279, 1453])와 같은 염증성 장애를 포함하는 상기에서 나열한 질환들의 치료에 대한 접근법을 제시할 수 있다고 믿어진다.

저산소증은 악성 세포의 VEGF 생성에 대한 중요한 자극으로 보인다. p38 키나아제의 활성화는 저산소증에 반응하여 종양 세포가 VEGF를 유도하는데 필요하다([Blaschke, F. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002, 296, 890-896], [Shemirani, B. et al. Oral Oncology 2002, 38, 251- 257]). p38 키나아제는 VEGF 분비 조절을 통한 혈관신생에 관련되어 있을 뿐 아니라, 악성 세포 침범, 및 유로키나아제 플라스미노겐 활성인자의 발현 및 콜라게나제 활성 조절을 통한 서로 다른 유형의 종양의 이동을 촉진한다([Laferriere, J. et al. J. Biol. Chem. 2001, 276, 33762-33772], [Westermarck, J. et al. Cancer Res. 2000, 60, 7156-7162], [Huang, S. et al. J. Biol. Chem. 2000, 275, 12266-12272], [Simon, C. et al. Exp. Cell Res. 2001, 271, 344-355]). 따라서, p38 키나아제의 억제는 혈관신생과 악성 세포 침입이 모두 관련되어 있는 신호전달 연속단계를 방해함으로써 종양 성장에 또한 영향을 줄 것으로 기대된다.

특정 우레아는 세린-트레오닌 키나아제 및(또는) 티로신 키나아제 억제제로서의 활성을 갖는 것으로 기재되어 있다. 특히, 암, 혈관신생 장애, 염증성 장애의 치료를 위한 제약 조성물 중의 활성성분으로서의 특정 우레아의 유용성이 기재되어 있다.

암과 혈관신생에 관해서는, 다음 문헌을 참조:

염증성 장애를 포함하는 p38 매개 질환에 관해서는 다음 문헌을 참조:

오메가-카르복시아릴 디페닐 우레아는 2000년 7월 20일에 공개된 WO 00/42012, 2000년 7월 20일에 공개된 WO 00/41698, 이하의 공개된 미국 출원:

이하의 동시계류중인 미국 출원에 개시되어 있다:

2-플루오로-4-(2-(N-메틸카르바모일)-4-피리딜옥시)페닐렌기가 우레아에 결합해 있는, 하기 화학식 I의 오메가-카르복시아릴 디페닐 우레아는 암을 포함하여 골다공증, 염증성 장애, 과다증식성 장애, 및 혈관신생 장애를 치료하고 예방하기 위한 원하는 모든 분자 표적인 raf 키나아제, VEGFR 키나아제, p38 키나아제, 및 PDGFR 키나아제의 강력한 억제제이다.

본 발명은 예를 들어 다음의 사항들을 제공한다.

(ⅰ) 화학식 I의 새로운 화합물, 그의 염, 프로드러그, 및 대사체

(ⅱ) 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및

(ⅲ) 단독 약제로 또는 세포독성 요법과 병행하여 raf, VEGFR, PDGFR, flt-3, 및 p38에 의해 매개되는 질환 및 상태를 치료하기 위한 상기 화합물 또는 조성물의 용도.

하기의 화학식 I의 화합물, 그의 염, 프로드러그 및 대사체는 총체적으로 "본 발명의 화합물"로서 언급된다. 화학식 I은 하기와 같다.

본 발명의 화합물의 대사체는 하나 이상의 우레아 질소가 히드록시기로 치환된 화학식 I의 산화 유도체를 포함한다. 본 발명의 화합물의 대사체는 또한 화학식 I의 메틸아미드 기가 히드록시화된 다음 대사 분해과정에 의해 탈메틸화된 동족체들을 포함한다. 본 발명의 화합물의 대사체는 나아가, 피리딘 질소 원자가 N-옥시드 형태(예를 들어 히드록시 치환기를 갖는다)가 이어서 당업계에서 1-옥소-피리딘 및 1-히드록시-피리딘으로 불리는 구조가 되는 산화 유도체를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 화합물들, 염들 등과 같은 복수 형태는 단일 화합물, 염 등을 의미하기도 한다.

화학식 I의 화합물의 제약학상 허용되는 염의 용도 역시 본 발명의 권리범위 내에 있다. 용어 "제약학상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 비교적 무독성인 무기산 또는 유기산 부가 염을 의미한다. 예로는, 문헌 [S. M. Berge, et al. "Pharmaceutical Salts," J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19]을 참조한다.

본 발명의 화합물의 대표적인 염들은 예를 들어, 당업계에서 공지된 방법에 의해 무기산 또는 유기산들로부터의 통상적인 무독성 염들을 포함한다. 예를 들어, 그러한 산 부가 염에는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 바이술페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 신나메이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 이타코네이트, 락테이트, 말레에이트, 만델레이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 술포네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 토실레이트, 및 운데카노에이트가 포함된다.

화학식 I의 화합물의 염들 또는 프로드러그들은 하나 또는 그 이상의 비대칭 중심을 함유할 수 있다. 비대칭 탄소 원자들은 (R) 또는 (S) 배위, 또는 (R, S) 배위로 존재할 수 있다. 고리상의 치환기는 또한 시스 또는 트랜스 형태로 존재할 수 있다. 모든 그러한 배위들(거울상이성질체 및 부분입체이성질체들을 포함)은 본 발명의 권리범위 안에 포함되도록 의도되었다. 바람직한 이성질체들은 더욱 바람직한 생물학적 활성을 발휘하는 배위를 갖는 이성질체들이다. 본 발명의 화합물의 분리된 순수한 또는 부분적으로 정제된 이성질체 또는 라세미 혼합물들 또한 본 발명의 권리범위 안에 포함된다. 상기 이성질체의 정제와 상기 이성질체 혼합물의 분리는 당업계에서 공지된 표준 기술에 의해 이루어질 수 있다.

본 발명의 실시태양에 이용되는 화합물을 제조하는데 이용될 특정 과정은 실시예 1에 기재된다. 화학식 I의 화합물의 염 형태들은 실시예 2, 3 및 4에 기재된다.

이용 방법

본 발명은 raf, VEGFR, PDGFR, p38 및(또는) flt-3 키나아제를 수반하는 하나 또는 그 이상의 신호전달 경로를 조절할 수 있는 화합물들을 제공한다. Raf는 세포 성장, 세포 생존 및 세포 침범을 포함하는 많은 핵심적인 세포의 과정을 조절하는 데에 수반되는 중요한 신호전달 분자이다. 이것은 ras/raf/MEK/ERK 경로의 구성원이다. 이 경로는 대부분의 종양 세포에 존재한다. VEGFR, PDGFR, 및 flt-3는 막횡단 수용체 분자로서, 적당한 리간드에 의해 자극받으면 ras/raf/MEK/ERK 세포 신호전달 경로를 촉발시켜 일련의 세포내 사건들을 일어나게 한다. 이들 수용체 분자 각각은 티로신 키나아제 활성을 갖는다.

VEGFR 수용체들은 혈관 내피세포 성장 인자(VEGF)에 의해 자극받으며, 내피세포의 발달과 기능을 조절하는 중요한 작용점이 된다. PDGF-β 수용체는 중간엽 세포를 포함하는 다수의 형태의 세포에서 세포 증식과 세포 생존을 조절한다. Flt-3는 FL 리간드에 대한 수용체이다. 이것은 구조적으로 c-kit와 유사하며, 전형성능 (pluripotent)을 가진 조혈세포의 성장을 조절하여 T 세포, B 세포 및 수지상세포의 발달에 영향을 준다.

야생형과 돌연변이형을 모두 포함하는 raf, VEGFR, PDGFR, p38 및(또는) flt-3의 임의의 유전자 또는 이소형들은 본 발명에 따라 조절될 수 있다. raf 또는 raf-1 키나아제는 적어도 3종류의 구성원, 즉 a-raf, b-raf, 및 c-raf 또는 raf-1을 포함하는 일군의 세린/트레오닌 키나아제이다. 예를 들어, 문헌 [Dhillon and Kolch, Arch. Biochem. Biophys. 2002, 404, 3-9]를 참조할 수 있다. c-raf와 b-raf는 본 발명의 화합물의 바람직한 표적들이다. b-raf 돌연변이(예를 들어, V599E 돌연변이)의 활성화는 흑색종을 포함한 다양한 암에서 확인되었고, 여기서 기재된 화합물들은 그러한 활성을 억제하기 위하여 이용될 수 있다.

"조절 (modulate)"이라는 용어는 경로 (또는 경로의 구성원)의 기능적 활성이 그 화합물이 없을 때 나타나는 정상적인 활성과 비교하여 변화한다는 것을 의미한다. 이러한 효과는 모든 질적 또는 양적인 조절작용을 포함하는 것으로서, 증가, 작동 (agonizing), 증대 (augmenting), 강화 (enhancing), 촉진 (facilitating), 자극 (stimulating), 감소 (decreasing), 차단 (blocking), 억제 (inhibiting), 절감 (reducing), 축소 (diminishing), 길항 (antagonizing) 등을 포함한다.

본 발명의 화합물은 또한 세포 성장(예를 들어 분화, 세포 생존 및(또는) 증식을 포함), 종양 세포 성장(예를 들어 분화, 세포 생존 및(또는) 증식을 포함), 종양 축소, 내피세포 성장(예를 들어 분화, 세포 생존 및(또는) 증식을 포함), 혈관신생(혈관 성장), 림프 혈관신생(림프관 성장) 및(또는) 조혈(예를 들어 T 세포와 B 세포의 발달, 수지상세포의 발달 등)을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는 같은 과정 중 하나 또는 그 이상을 조절할 수도 있다.

어떠한 작용 이론이나 기전에 얽매이지 않고, 본 발명의 화합물은 키나아제 활성을 조절하는 능력을 보유하고 있음이 발견되었다. 하지만, 본 발명의 방법은 특정 기전이나 화합물이 치료 효과를 얻는 특정 방식에 국한되지는 않는다. "키나아제 활성"이라는 용어는 아데노신 트리포스페이트(ATP)로부터의 γ-인산이 단백질 기질의 아미노산 잔기(예를 들어 세린, 트레오닌, 또는 티로신)로 전달되는 촉매 활성을 의미한다. 화합물은 예를 들어, 키나아제의 ATP-결합 주머니를 놓고 ATP와 직접 경쟁하거나, 활성에 영향주도록(예를 들어, 생물학적으로 활성인 3차원 구조를 파괴시킴으로써) 효소 구조의 형태변화를 야기함으로써 키나아제 활성을 조절, 예를 들면 억제할 수 있다.

키나아제 활성은 통상적인 분석법을 이용하여 일상적으로 결정될 수 있다. 키나아제 분석법는 전형적으로 키나아제 효소, 기질, 완충액, 및 검출 시스템 성분을 포함한다. 전형적인 키나아제 분석법은 단백질 키나아제가 펩티드 기질 및 ³²P- ATP와 같은 ATP와 반응하여 인산화된 최종 생성물(예를 들어 펩티드 기질이 사용된 경우에는 인단백질)을 얻는 반응을 수반한다. 얻어진 최종 생성물은 임의의 적당한 방법을 이용하여 검출될 수 있다. 방사성 ATP가 사용된 경우에는, 방사성 표지가 붙은 인단백질이 친화 막 또는 겔 전기영동을 사용하여 미반응 γ-³²P-ATP로부터 분리된 다음, 자기방사법을 이용하여 겔 상에서 시각화되거나 또는 섬광계측기를 이용하여 검출될 수 있다. 비방사성 방법 역시 이용될 수 있다. 이러한 방법들은 인산화된 기질을 인식하는 항체, 예를 들어 항-포스포티로신 항체를 이용할 수 있다. 예를 들어, 키나아제 효소를 ATP와 키나아제 완충액 존재 하에서 효소가 기질을 인산화시키는데 효과적인 조건 하에서 기질과 인큐베이션시킬 수 있다. 반응 혼합물은 예를 들어, 전기영동에 의해 분리될 수 있고, 이어서 기질의 인산화는 예를 들어, 항-포스포티로신 항체를 이용한 웨스턴 블럿팅을 통해 측정될 수 있다. 항체에는 검출가능한 표지, 예를 들어 HRP, 아비딘 또는 바이오틴과 같은 효소, 화학발광 시약 등을 붙일 수 있다. 다른 방법들은 ELISA 포맷의 분석, 친화 막 분리, 형광 편광 분석법, 발광 분석법 등을 이용할 수 있다.

방사성 포맷 분석에 대한 대안으로는, 시간분해 형광 공명 에너지 전달(TR-FRET) 방법이 있다. 이 방법은 예를 들어 바이오티닐화 폴리(GluTyr)과 같은 기질이 ATP 존재 하에서 단백질 키나아제에 의해 인산화되는 표준 키나아제 반응을 따른다. 최종 생성물은 나중에 유로퓸 킬레이트 인산특이적 항체(항-포스포티로신 또는 포스포세린/트레오닌), 및 바이오티닐화된 기질과 결합하는 스트렙타비딘-APC 에 의해 감지될 수 있다. 이들 두 성분은 결합하게 되면, 공간적으로 함께 모이게 되고, 인산특이적 항체로부터 수용체(SA-APC)로 에너지가 전달되어 동질의 포맷으로 되어 있는 형광 판독정보를 만들어낸다.

본 발명의 화합물은 raf, VEGFR, PDGFR, p38 및(또는) flt-3 키나아제를 수반하는 하나 또는 그 이상의 세포내 신호전달 경로에 의해 매개되는 모든 질환 또는 상태를 치료 및(또는) 예방하기 위하여 사용될 수 있다. "치료"라는 용어는 통상적으로 예를 들어, 질환 또는 장애와 같은 상태를 근절, 감소, 경감, 개선하기 위한 목적의 대상의 관리 또는 돌봄을 의미한다. 화합물들은 또한 신호전달 분자들에 의해 매개되는 질환 및(또는) 상태를 예방 및(또는) 치료하기 위해 사용되는 것으로서 기재될 수도 있다. "매개"라는 용어는 예를 들어, 그 신호전달 분자가 질환 및(또는) 상태에서 비정상적이 되거나 흐트러진 경로의 일부가 된 경우를 의미한다.

치료될 수 있는 질환과 상태는 위, 아래에서 언급된 모든 것, 및 다음을 포함한다.:

raf 관련 질환에는 예를 들어, 세포-증식 장애, 암, 종양 등이 포함된다.

VEGFR-2 관련 질환에는 예를 들어, 암, 종양 성장, 염증성 질환, 류마티스성 관절염, 망막병증, 건선, 사구체신염, 천식, 만성 기관지염, 죽상경화증, 이식 거부반응, 혈관신생을 수반하는 상태들 등이 포함된다.

VEGFR-3 관련 질환에는 예를 들어, 암, 각막 질환, 염증 각막(예를 들어, [Hamrah,Am. J. Path. 2003, 163, 57-68]), 각막 이식([Cursiefen et al., Cornea 2003, 22, 273-81]), 림프 과다형성, 림프 혈관신생을 수반하는 상태들 등이 포함된다.

PDGFR-β 관련 질환에는 예를 들어, 세포 증식, 세포 기질 생성, 세포 이동 및(또는) 세포외 기질 생성을 특징으로 하는 질환 또는 상태들을 포함한다. 특이적인 예로는 예를 들어, 종양, 악성종양, 암, 전이, 만성 골수성 백혈병, 염증, 신장 질환, 당뇨병성 신장질환, 혈관간세포 증식성 사구체신염, 섬유증 상태, 죽상동맥경화증, 재협착, 고혈압 관련 동맥경화증, 정맥 우회이식성 동맥경화증, 피부경화증, 간질성 폐질환, 활액 장애, 관절염, 백혈병, 림프종 등이 포함된다.

Flt-3 관련 질환에는 예를 들어, 면역 관련 장애, 혈구 장애, 조혈세포 발달(예를 들어 T 세포, B 세포, 수지상세포)을 수반하는 상태들, 암, 빈혈, HIV, 후천성 면역결핍 증후군 등이 포함된다.

p38 관련 질환에는 염증성 장애, 면역조절 장애, 및 비정상적인 시토킨 생성 특히 TNF-α 또는 비정상적인 MMP 활성과 관련되어 있는 다른 장애들이 포함된다. 이들 장애들에는 류마티스성 관절염, COPD, 골다공증, 크론병 및 건선이 포함되지만, 이들에 국한되지는 않는다.

뿐만 아니라, 본 발명의 화합물들은 미국 특허번호 제 6,316,479호에 개시된 상태 및 장애, 예를 들어, 사구체 경화증, 간질성 신장염, 간질성 폐섬유증, 죽상동맥경화증, 상처의 반흔 형성 및 피부경화증을 치료하기 위해 이용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 염증성 상태, 관상동맥 재협착, 종양 관련 혈관신생, 죽상동맥경화증, 자가면역 질환, 염증, 사구체 또는 혈관간세포의 증식과 관련 있는 특정 신장 질환, 망막 혈관 증식과 관련있는 안질환, 건선, 간경변, 당뇨병, 죽상동맥경화증, 재협착, 혈관 이식성 재협착, 스텐트 내 협착증, 혈관신생, 안질환, 폐섬유증, 폐색성 기관지염, 사구체성 신염 및 류마티스성 관절염과 같은 광범위한 질환들의 진행을 치료 또는 방지할 광범위한 치료 활성을 가지기도 한다.

본 발명은 또한 예를 들어, 다음에 나오는 인간 및(또는) 다른 포유동물의 상태 중 하나 이상에 대한 치료, 예방, 조절 등을 제공한다: 당뇨병성 망막병증, 허혈성 망막정맥 폐쇄증, 미숙아 망막병증 및 노화성 황반변성을 포함하는 망막병증; 류마티스성 관절염, 건선, 또는 수포성 유천포창, 다형 홍반, 또는 헤르페스성 피부염을 포함하는 표피하 수포 형성과 관련된 수포성 장애, 류마티스열, 뼈 흡수, 폐경후 골다공증, 패혈증, 그람 음성균 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 전신 염증성 반응 증후군, 염증성 장질환(크론병 및 궤양성 대장염), 야리시-헤륵스하이머 반응, 천식, 성인성 호흡곤란 증후군, 급성 폐섬유성 질환, 폐사르코이드증, 알레르기성 호흡기병, 규소폐증, 광부 진폐증, 폐포 손상, 간부전, 급성 염증 동안의 간질환, 중증 알코올성 간염, 말라리아(열대열원충 말라이아와 뇌 말라리아), 인슐린 비의존성 당뇨병(NIDDM), 울혈성 심부전, 심장 질환 이후의 손상, 죽상경화증, 알츠하이머병, 급성 뇌염, 뇌 손상, 다발성 경화증(다발성 경화증에서의 탈수초 및 희소돌기아교세포 손실), 진행성 암, 악성 림프종, 췌장염, 감염, 염증 및 암에서의 상처 회복력의 손상, 골수형성이상증후군, 전신 홍반 루푸스, 담즙성 간경변, 장 괴사, 모노클로날 항체 투여 후에 나타나는 방사선 손상/독성, 숙주편대이식 반응(허혈재관류손상과 신장, 간, 심장 및 피부의 동종이식 거부반응), 폐 동종이식 거부(폐색성 기관지염), 또는 인공 고관절 전치환술에 기인한 합병증, 결핵, 소화궤양병 중의 헬리코박터 파일로리 감염, 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi) 감염으로부터 야기되는 샤가병, 대장균 감염으로부터 야기되는 시가양독소 효과, 포도상구균 감염으로부터 야기되는 장독소 A 효과, 수막구균 감염, 및 보렐리아 부르그도페리, 트레포네마 펠리덤, 사이토메갈로바이러스, 인플루엔자 바이러스, 테일러씨 뇌척수염 바이러스(Theiler's encephalomyelitis virus), 및 인간 면역결핍 바이러스(HIV)로부터의 감염; 유두종, 교모세포종, 카포시육종, 흑색종, 폐암, 난소암, 전립선암, 편평상피암, 성상세포종, 두경부암, 방광암, 유방암, 결장직장암, 갑상선암, 췌장암, 위암, 간세포암, 백혈병, 림프종, 호지킨병, 버킷병, 관절염, 류마티스성 관절염, 당뇨병성 망막병증, 혈관신생, 재협착, 스텐트 내 재협착, 혈관 이식성 재협착, 폐섬유증, 간경변, 죽상동맥경화증, 사구체신염, 당뇨병성 신장 질환, 혈전성 미세혈관병 증후군, 이식 거부반응, 건선, 당뇨병, 상처 치유, 염증, 퇴행성 신경질환, 과다면역 장애, 혈관종, 심근 혈관신생합성, 관상동맥과 대뇌 측부의 혈관증식, 허혈, 각막 질환, 피부홍조, 신생혈관성 녹내장, 황반변성, 미숙아 망막병증, 상처 치유, 궤양성 헬리코박터 관련 질환, 골절, 자궁내막증, 당뇨병 상태, 고양이 찰상열, 갑상선 비대증, 천식 또는 화상 이후의 부종, 외상, 만성 폐 질환, 뇌졸중, 용종, 낭종, 활액막염, 만성 및 알레르기성 염증, 난소 과자극 증후군, 폐 및 대뇌 부종, 켈로이드(keloid), 섬유증, 간경변, 팔목터널 증후군, 성인성 호흡 곤란 증후군, 복수, 안구의 상태, 심혈관 상태, 크로우-푸카스(Crow-Fukase)(POEMS) 질환, 크론병, 사구체신염, 골관절 염, 다발성 경화증, 이식 거부반응, 라임 질환, 패혈증, 폰힙펠 린도우병, 유천포창, 파제트병, 다낭성 신장 질환, 사르코이드증, 갑상선염, 과다점성 증후군, 오슬러-웨버-렌두씨병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 방사선, 저산소증, 전자간증, 불규칙 과다월경, 자궁내막증, 단순헤르페스 감염, 허혈성 망막병증, 각막 혈관신생합성, 대상포진, 인간 면역결핍 바이러스, 파라폭스 바이러스(parafoxvirus), 원생동물 감염, 톡소포자충증, 및 종양과 관련된 삼출과 부종.

본 발명의 화합물은 언급한 활성 중 하나 이상을 가질 수 있으며, 따라서 다수의 신호전달 경로를 표적으로 삼을 수 있다. 그러므로, 이들 화합물들은 정상적인 상황에서는 다른 종류의 화합물들을 조합하여 사용하여야만 얻을 수 있는 치료 및 예방 효과를 이룰 수 있다. 예를 들어, 한 가지 화합물을 이용하여, 새로운 혈관의 생성(예를 들어, VEGFR-2와 VEGFR-3의 기능과 관련)(예를 들면, 혈액 및(또는) 림프)과 세포 증식(예를 들어, raf와 PDGFR-β의 기능과 관련) 모두를 억제할 수 있는 능력은 암 및 신생혈관증식에 의해 촉진되는 다른 세포-증식성 장애들의 치료에 있어 특히 유리하다. 그러므로, 본 발명은 특별히 적어도 항-세포증식과 항-혈관신생(즉, 혈관신생을 억제) 활성을 갖는 화합물들에 관한 것이다. 혈관 성장과 세포 증식을 억제함으로써 이로울 수 있는 모든 장애 또는 상태들은 본 발명에 따라 치료될 수 있다. 단일 화합물을 사용하는 것은 또한 활성을 나타내는 범위가 더욱 정확하게 정의될 수 있기 때문에 유리하다.

상기에서 보인대로, 본 발명은 질병 및 상태들을 치료 및(또는) 예방하고; 및(또는) raf, VEGFR, PDGFR, p38 및(또는) flt-3과 관련된 하나 또는 그 이상의 경로, 폴리펩티드, 유전자, 질환, 상태 등을 조절하는 방법에 관한 것이다. 이들 방법들은 일반적으로 유효량의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 유효량은 원하는 결과를 얻기에 유용한 화합물의 양이다. 아래에서 더욱 상세히 논의되는 바와 같이, 화합물들은 모든 효과적인 경로를 통해 모든 효과적인 형태로 투여될 수 있다.

방법들은 세포 증식 억제를 포함하는 종양 세포 증식 조절을 포함한다. 후자의 것은 종양 세포의 성장 및(또는) 분화가 줄어들고, 축소되고, 감소되고, 느려지는 것 등을 나타낸다. "증식"이라는 용어는 세포 성장과 분열과 관련된 모든 과정을 포함하며, 분화와 사멸을 포함한다. 상기에서 논의한 대로, raf 키나아제는 세포 증식, 분화, 및 사멸에 수반되는 세포질 내 신호전달 연속단계의 활성화에 있어 중요한 역할을 수행한다. 예를 들어, 연구들에 의하면 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 c-raf를 억제시키면 세포 증식이 차단될 수 있다는 것이 발견되었다(상기를 참조). 임의의 양의 억제가 치료적인 것으로 고려된다.

염들, 프로드러그들, 대사산물들(산화 유도체)을 포함하여, 상기에서 기재된 화합물(화학식 I의 화합물) 및 이들의 조성물들을 포유동물의 과다-증식성 장애들을 치료하기 위해 사용하는 방법은 본 발명의 방법에 포함되어 있으며, 상기 방법은 필요로 하는 사람 환자를 포함하여 포유동물에게 장애를 치료하는데 효과적인 양의 본 발명의 화합물, 제약학상 허용되는 염, 프로드러그, 대사산물(산화 유도체), 및 이들의 조성물을 투여하는 것으로 구성된다. 과다-증식성 장애들로는 유방, 호흡기, 뇌, 생식기관, 소화관, 요도, 눈, 간, 피부, 두경부, 갑상선, 부갑상 선 및 이들로부터 멀리 전이된 곳의 암과 같은 충실성 종양이 포함되지만 이들에 국한되지는 않는다. 그러한 장애들은 또한 림프종, 육종, 및 백혈병들을 포함한다.

raf, ras 및(또는) flt-3, 및 이들이 일부분을 구성하는 신호전달 경로의 상류 또는 하류 구성원에서 하나 또는 그 이상의 돌연변이를 갖는 암을 포함하지만 이들에 국한되지는 않는 임의의 종양 또는 암도 치료될 수 있다. 먼저 논의한대로, 암을 그의 원인이 되는 메커니즘과 무관하게 본 발명의 화합물로 치료할 수 있다. 대장, 췌장, 유방, 전립선, 뼈, 간, 신장, 폐, 고환, 피부, 췌장, 위, 결장직장암, 신장 세포 암, 간세포 암, 흑색종 등의 암을 포함하지만 이들에 국한되지는 않는 임의의 기관에서의 암도 치료될 수 있다.

유방암의 예는, 침윤성 유관암, 침윤성 소엽암, 관상피내암, 및 소엽상피내암을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

기도암의 예는, 기관지 선종 및 흉막 모세포종 뿐 아니라, 소세포성 폐암 및 비소세포성 폐암도 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

뇌암의 예는, 뇌종양 및 송과체 종양 뿐 아니라 뇌줄기교종 및 시상하부 교종, 소뇌 및 대뇌 성상세포종, 수모세포종, 상의세포종을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

남성 생식 기관의 종양은, 전립선암 및 고환암을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 여성 생식 기관의 종양은, 자궁의 육종 뿐 아니라 자궁내막암, 자궁경부암, 난소암, 질암, 및 외음부암을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

소화관의 종양은, 항문암, 결장암, 직결장암, 식도암, 담낭암, 위암, 췌장암, 직장암, 소장암, 및 타액선암을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

요도의 종양은, 방광암, 음경암, 신장암, 신우암, 요관암, 및 요도암을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

눈암은, 안내 흑색종 및 망막 모세포종을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

간암의 예는, 간세포암종 (섬유층판의 변형이 있는 또는 없는 간 세포 암종), 담관암종 (간내담즙암종), 및 혼합 간세포성 담관상피암종을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

피부암은, 피부편평세포암, 카포시 육종, 악성 흑색종, 머켈 셀 피부암, 및 비흑색종 피부암을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

두경부암은, 후두암, 하인두암, 비인두암 및(또는) 고인두암, 그리고 구순암 및 구강암을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

림프종은, AIDS와 관련된 림프종, 비호지킨 림프종, 피부의 T-세포 림프종, 호지킨씨 병, 및 중추신경계의 림프종을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

육종은, 연조직의 육종, 골육종, 악성 섬유종 조직구종, 림프육종, 및 황문근육종을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

백혈병은, 급성 골수종 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 및 모상 세포 백혈병을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.

종양 세포의 증식을 억제하는 것 외에, 본 발명의 화합물은 또한 종양의 축소, 예를 들어, 종양의 크기의 감소, 또는 체내에서 암의 범위의 감소를 일으킬 수 있다.

본 발명은 또한 여기에 기재된 화합물 유효량을 시스템으로 투여하는 것을 포함하는 세포를 포함하는 시스템 내에서 혈관신생 및(또는) 림프 혈관신생을 조절하는 방법과 관련이 있다. 세포를 구성하는 시스템은 환자에 있는 종양, 적출 장기, 조직, 또는 세포와 같은 생체 내 시스템 일 수도 있고, 시험관 내 분석 시스템 (CAM, BCE, 등), 동물 모델 (예를 들어, 생체 내, 피하의, 암모델), 치료를 필요로 하는 숙주 (예를 들어, 암과 같은, 혈관신생 및(또는) 림프 혈관신생 성분을 가지는 질환을 앓는 숙주), 등 일 수도 있다.

혈관신생의 부적절한 발현과 이소성의 발현은 생물에 해로울 수 있다. 다수의 병적 상태는 외인성 혈관의 성장과 관련되어 있다. 이것들은, 예를 들면, 당뇨병성 망막병증, 신생혈관성 녹내장, 건선, 수정체후방의 섬유조직형성, 맥관섬유종, 염증, 등을 포함한다. 또한, 암성 조직 및 신생물성 조직과 관련된 증가된 혈액 공급은 성장을 촉진하여 빠른 종양 증대 및 전이를 야기시킨다. 게다가, 종양 내에서 새로운 혈액 및 림프 혈관의 성장은 변성 세포의 탈출 경로를 제공하는데, 이것은 암의 전이 및 암을 퍼뜨리는 결과를 촉진한다.

혈관신생 및(또는) 림프 혈관신생, 및 이의 억제를 측정하기 위한 유용한 시스템은, 예를 들면, 종양 외식의 신생 혈관(예, 미국특허 제5,192,744호; 제6,024,688호), 닭 융모뇨막 (CAM) 분석 (예, [Taylor and Follcman, Nature 1982, 297, 307-312]; [Eliceiri et al., J. CellBiol. 1998, 140, 1255-1263]), 소의 모세혈관 내피(BCE) 세포 분석 (예, 미국 특허 제6,024,688호, [Polverini, P. J.et al., Methods. Enzymol. 1991, 198, 440-450]), 이동분석, 및 HUVEC (인간배꼽정맥내피세포) 성장 억제 분석 (예, 미국 특허 제6,060,449호), 및 토끼 귀 모델의 사용 (예, [Szuba et al., FASEB J 2002, 16(14),1985-7])을 포함한다.

혈관신생의 조절은 또 다른 방법에 의해 결정될 수 있다. 예를 들면, 조직 혈관 분포 상태의 정도는 일반적으로 주어진 샘플에 존재하는 혈관의 수와 농도를 평가함으로써 결정되어진다. 예를 들면, 미세혈관 밀도(MVD)는 고배율 현미경의 시야에서 내피 덩어리의 수를 세거나, 또는 미세혈관의 내피에 특이적인 표지나 CD31 (혈소판-내피 세포 유착 분자 또는 PECAM으로 또한 알려져 있다)과 같이 성장하거나 고정된 혈관들에 대한 또다른 표지들을 검출함으로써 측정될 수 있다. CD31 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제6,017,949호, [Dellas et al., Gyn. Oricol. 1997, 67,27-33], 및 다른 것에 기재된 것처럼 종래의 면역조직학적인 방법에서 조직 부분을 면역염색(immunostain)을 하는데 사용될 수 있다. 혈관신생에 대한 다른 표지는 예를 들어, Vezfl (예, [Xiang et al., Dev. Bio. 1999, 206, 123-141]), 엔지오포이에틴(angiopoietin), Tie-1, 및 Tie-2 (예, [Sato et al., Nature 1995,376, 70-74])을 포함한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 화합물의 민감성을 결정하기 위해서 환자들을 선별하는 방법과 관련된다. 예를 들어, 본 발명은 어떤 상태가 여기에 나타난 화합물에 의해 조절될 수 있는지를 결정하는 방법과 관련되는데, 이것은 세포 또는 세 포 추출물을 포함하는 샘플에서 raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38, 및(또는) flt-3의 발현 또는 활성을 측정하는 것을 포함하며, 여기서 상술한 샘플은 상술한 상태를 지니는 피검자 또는 세포로부터 얻어질 수 있다. 결정의 결과가 언급된 유전자의 하나 또는 그 이상 (및(또는) 그들이 암호화한 폴리펩티드)이 정상 상태와 다르다는 것을 나타낼 때, 이것은 본 발명의 화합물에 의해 치료할 수 있는 상태임을 증명한다, 즉, 상술한 발현 또는 활성이 상술한 상태에서 표준 대조물와 비교하여 증가될 때 상술한 장애 또는 상태가 화합물에 의해 조절될 수 있다. 그 방법은 샘플에서의 발현을 표준 대조물, 또는 정상적이거나 영향을 받지 않는 조직으로부터 얻어진 샘플에서의 발현과 비교하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 비교하는 것은 전산화된 양식 등에 있는 규격을 사용하는 것과 달리 (예를 들어, 데이타베이스와 달리), 수동으로 할 수 있다. 표준 대조물은 분석에 의해 제공되어진 표준 샘플일 수 있고; 이것은 인접하지만, 영향을 받지않은 같은 환자의 조직으로부터 얻어질 수 있으며; 또는, 이것은 이미 결정되어진 수치, 등 일수도 있다. 유전자 발현, 단백질 발현 (예를 들어, 세포내에 풍부), 단백질 활성 (예를 들어, 키아나제 활성), 등이 결정되어질 수 있다.

예를 들어, 암환자로부터의 생검법으로 존재, 양, 및(또는) raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38, 및(또는) flt-3의 활성에 대해 분석할 수 있다. 이것들의 하나 또는 그 이상의 증가된 발현 또는 활성은 그 암이 본 발명의 화합물에 의한 치료에 목표가 될 수 있다는 것을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 아래 예에 기재한 것처럼, raf 활성은 ERK 인산화 (즉, raf/MEK/ERK))로 이어지는 연속단계들을 개시하여 포스포-ERK를 생성할 수 있는 능력에 의해 모니터될 수 있다. 암 표본에서 증가된 포스포-ERK의 수준은 그것의 raf 활성이 증가된 것을 보여주며, 이것은 본 발명의 화합물의 사용이 암을 치료한다는 것을 암시한다.

발현을 측정하는 것은 잠재해 있는 mRNA를 측정하는 것 뿐 아니라 세포내에 존재하거나 세포에 의해 탈피되는 폴리펩티드의 양을 결정하거나 검출하는 것을 포함하며, 여기서 존재하는 mRNA의 양은 세포에 의해 만들어진 폴리펩티드의 양을 반영하는 것으로 생각된다. 더욱이, raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38, 및(또는) Flt-3에 대한 유전자를 분석하여 변종된 발현 또는 폴리펩티드 활성의 책임이 있는 유전자 결함이 있는지를 결정할 수 있다.

폴리펩티드 검출은 임의의 이용가능한 방법, 예를 들면, 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA, 도트 블랏(dot blot), 면역침전법, RIA, 면역조직화학법, 등에 의해 수행될 수 있다. 예를 들면, 조직 부분을 준비하여 특이적 항체 (현미경으로 간접적으로 또는 직접적으로 볼 수 있다)로 표지할 수 있다. 폴리펩티드의 양은 예를 들면, 관심있는 샘플의 용해물을 준비한 다음, 조직의 단위량당 폴리펩티드의 양을 ELISA 또는 웨스턴으로 결정함으로써 시각화하지 않고도 정량화 될 수 있다. 항체와 다른 특이적 결합제도 사용될 수 있다. 검출이 어떻게 수행되는가에는 제한이 없다.

샘플에서 표적 핵산 (예를 들어, raf, VEGFR, PDGFR, p38, 및(또는) flt-3에 대한 유전자, mRNA, 등)의 정량화 및(또는) 존재/부재 검출을 가능케하는 분석이 사용되어질 수 있다. 분석은 단세포 수준, 또는 많은 세포를 포함하는 샘플에 서 수행될 수 있는데, 여기서 분석은 샘플에 존재하는 조직 및 세포의 전체적인 수집물에 걸쳐 발현을 "평균하는 것"이다. 어떠한 적당한 분석 형식이 사용되어 질 수 있는데, 이것은 예를 들어, 서던 블랏(Southern blot) 분석, 노던 블랏(Northern blot) 분석, 중합효소 연쇄반응법("PCR") (예,[Saiki. et al., Science 1988, 241, 53], 미국 특허 제4,683,195호, 제4, 683,202호, 및 제6,040,166호; PCR Protocol: [A Guide to Methods and Applications, Innis et al., eds., Academic Press, New York,1990]), 역전자 중합효소 연쇄반응법("RT-PCR"), 고정된 PCR법, cDNA 말단의 빠른증식법("RACE") (예, [Schaefer in Gene Cloning and Analysis: Current Innovations, Pages99-115, 1997]), 리가아제 연쇄반응법("LCR") (EP 320 308), 일방 PCR ([Ohara etal., Proc.Natl. Acad. Sci. 1989, 86, 5673-5677]), 색인이용 방법 (예, 미국 특허 제5,508,169호), 제자리 혼성화, 시차 디스플레이 (예, [Liang et al., Nucl. Acid. Res. 1993,21,3269 3275], 미국 특허 제5,262,311호, 제5,599,672호 및 제5,965,409호, W0 97/18454, [Prashar and Weissman, Proc. Natl. Acad. Sci., 93:659-663], 및 미국 특허 제6,010,850호 및 제5,712,126호, [Welsh et al., Nucleic Acid Res., 20: 4965-4970, 1992], 및 미국 특허 제5,487, 985) 및 또다른 RNA 지문 분석 기술법, 증폭에 기초를 둔 핵산 서열 분석법("NASBA") 및 증폭 시스템을 기초로 한 또다른 전사법 (예, 미국 특허 제5,409,818호 및 제5,554,527호, WO 88/10315), 폴리뉴클레오디드 어레이 (예, 미국 특허 제5,143,854호, 제5,424,186호, 제5,700, 637 호, 제5,874,219호, 및 제6,054,270호, PCT WO 92/10092, PCT WO 90/15070), Q베타 리폴리카제법 (PCT/US87/00880), 가닥치환증폭법 ("SDA"), 회복연쇄반응법 ("PCR"), 뉴클레아제 보호 분석법, 빼냄을 기초로 한 방법, 빠른 스캔법, 등이 포함되나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 또다른 유용한 방법은, 예를 들어, 주형을 기초로 한 증폭법, 경쟁적인 PCR (예, 미국 특허 제5,747,251호), 산화환원반응을 기초로 한 분석법 (예, 미국 특허 제5,871,918호), 타크만(Taqman)을 기초로 한 분석법 (예, [Holland et al., Proc. Natl. Acad, Sci. 1991, 88, 7276-7280], 미국 특허 제5,210,015호 및 제5,994,063호), 실시간 형광을 기초로 한 모니터법 (예, 미국 특허 제5,928,907호), 분자 에너지 전달 표지법 (예, 미국 특허 제5,348,853호, 제5,532,129호, 제5,565,322호, 제6,030,787호, 및 제6,117,635호, [Tyagi and Kramer, Nature Biotech.,14: 303-309,1996])을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 제자리 혼성화법, 면역세포화학법, MACS법, FACS법, 유속세포분석법, 등을 포함하여, 유전자 또는 단백질 발현에 대한 단일세포분석에 적절한 임의의 방법이 사용될 수 있다. 단일세포분석에 대해서, 발현 생성물은 항체, PCR, 또는 핵산증폭의 다른 형태 (예, [Brady et al., Methods Mol. & Cell. Biol. 1990, 2, 17-25], [Eberwine et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 1992,89, 3010-3014], 미국 특허 제5,723,290호)를 사용하여 측정할 수 있다. 이것들과 다른 방법들은 예를 들어, 언급된 간행물에 기재된 것처럼, 통상적으로 수행될 수 있다.

raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38, 및(또는) flt-3의 활성은 예를 들어, 아래 예에 기재되어 있는 것처럼, 또는 키나아제 활성을 위한 표준분석법을 사용하여, 통상적으로 평가될 수 있다.

본 발명은 또한 장애를 치료하는 데에 있어서 본 발명의 화합물의 효능을 평가하는 방법을 제공하는데, 이는 임의의 효과적인 순서로 다음 단계들 중 하나 이상을 포함하고, 예를 들어, 일정량의 화합물을 투여하고, raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38, 및(또는) flt-3의 발현 또는 활성을 측정하고 (상기참조), 상술한 발현 또는 활성에 미치는 상술한 화합물의 효과를 결정하는 것을 포함한다. 예를 들어, 생검법 샘플을 본 발명의 화합물로 치료받은 환자로부터 떼어낸 다음, 언급한 신호전달 분자들의 존재 및(또는) 활성에 대해 분석할 수 있다. 유사하게, 상기에서 논의되었듯이, 암 조직에서 포스포-ERK의 수준이 감소되는 것은 (예를 들어, 정상 조직 또는 치료 전과 비교하였을 때) 화합물이 생체내에서 효능 및 치료 효과를 발휘한다는 것을 가리킨다. 그 방법은 적절한 투여량과 투여 요법, 예를 들어, 화합물을 얼마만큼 투여하며 어떠한 주기로 투여해야 하는가를 결정하는데 사용될 수 있다. 조직내에서 신호전달 분자에 있어서 이것의 효과를 모니터함으로써, 임상의학자는 적절한 치료 지침과 예를 들어, 신호 형질도입 경로의 조절 또는 억제시에 그것이 원하는 효과를 달성하였는를 결정할 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 생물학적 물질을 포함하는 샘플에서, raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38, 및(또는) flt-3의 존재 및 양을 결정하는 표지로 사용될 수 있다. 이 화합물은 임의의 효과적인 순서로 다음 단계들 중 하나 이상을 포함한다: (i) 생물학적 물질을 포함하는 상술한 샘플과 본 발명의 화합물을 접촉하는 단계 및 (ii) 상술한 화합물이 상술한 물질에 결합하는지를 결정하는 단계. 그 화합물을 표지할 수 있으며, 또는 화합물은 표지된 ATP와 같은, 표지된 화합물 과 경쟁자로 사용될 수 있다.

발명은 또한 포유동물에서의 질환 및 상태의 치료, 예방, 조절, 등을 위한 방법을 제공하는데, 이는, raf, VEGFR, PDGFR, p38, 및(또는) flt-3을 포함하는 신호 형질도입 경로의 또다른 조절인자와 함께 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하나, 제한이 있는 것은 아니다. 이것들은 동일 조성물에 또는 별도의 제제나 투여 단위에 존재할 수 있다. 투여는 동일한 또는 상이한 경로로 할 수 있으며, 동시에 또는 순차적으로 할 수 있다.

다음의 간행물들은 VEGFR-3 조절과 관련되며 VEGFR-3에 의해 매개되는 질환 상태 및 상기 활성을 결정하는 분석에 대한 설명을 위해 본원에 인용되었다.

다음의 간행물들은 VEGFR-2 조절과 관련되며 VEGFR-2에 의해 매개되는 질환 상태 및 상기 활성을 결정하는 분석에 대한 설명을 위해 본원에 인용되었다.

다음의 간행물들은 fit-3 조절과 관련되며 flt-3에 의해 매개되는 질환 상태와 상기 활성을 결정하기 위한 분석에 대한 설명을 위해 본원에 인용되었다.

다음의 간행물들은 PDGF/PDGFR 조절과 관련되며 PDGFR-베타에 의해 매개되는 질환 상태 및 상기 활성을 결정하는 분석에 대한 설명을 위해 본원에 인용되었다.

PDGFR-베타

PDGFR-알파

본 발명의 화합물에 기초한 제약 조성물

본 발명은 또한 본 발명의 화합물 및 이의 제약학상 허용되는 염을 함유하는 제약 조성물에 관한 것이다. 이들 조성물은 필요로 하는 환자에게 투여하여 원하는 약리학적 효과를 달성하도록 이용될 수 있다. 본 발명의 목적을 위한 환자는 특정한 상태 또는 질환에 대해 치료가 필요한, 인간을 포함한 포유동물이다. 그러므로, 본 발명은 제약학상 허용되는 담체 및 본 발명의 화합물 또는 이의 염의 제약학상 유효량으로 이루어진 제약 조성물을 포함한다. 용어 "제약학상 허용되는 담체"는 담체에 의한 부작용이 활성 성분의 유익한 효과를 손상시키지 않도록 활성 성분의 효과적인 활성을 유지하는 농도에서 환자에게 상대적으로 무독성이고 독이 없는 임의의 담체를 의미한다. 화합물의 제약학상 유효량은 치료되고 있는 특정 상태에 성과를 나타내거나 영향을 미치는 양이다. 본 발명의 화합물은 경구로, 비경구로, 국소적으로, 코로, 눈으로, 시각으로, 설하로, 직장으로, 질 등으로, 기술분야에서 잘 알려진 제약학상 허용되는 담체와 함께 즉각적, 서방, 및 지연 방출 제제를 포함하는 효과적인 종래의 투여 단위 형태를 사용하여 투여할 수 있다.

경구 투여에 있어서, 화합물은 캡슐, 알약, 정제, 트로키제, 로젠지, 용해물, 분말약, 용액, 현탁액, 또는 유탁액과 같은 고체 또는 액체 제제로 제제화될 수 있으며, 제약 조성물의 제조 분야에서 알려진 방법에 따라 제조될 수 있다. 고체 단위 투여 형태는 예를 들어, 계면활성제, 윤활제, 그리고 락토오스, 수크로오스, 인산 칼슘, 및 옥수수 전분과 같은 불활성 충전제들을 함유하는 일반적인 경질 또는 연질 껍질을 가진 젤라틴 유형인 캡슐일 수 있다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤 라틴과 같은 결합제, 감자 전분, 알긴산, 옥수수 전분 및 구아검, 트라가칸트검, 아카시아와 같은 투여 후의 정제의 붕괴 및 용해를 보조하기 위한 붕해제, 정제 과립화의 흐름을 향상시키고 정제 다이 및 펀치 표면에 정제 물질이 유착되는 것을 막기 위한 윤활제, 예를 들어, 탈크, 스테아르산, 또는 스테아르산 마그네슘, 칼슘 또는 아연, 정제의 미적인 질을 향상시켜 환자가 정제를 더욱 받아들이기 쉽게 만드는 색소, 착색제, 및 페퍼민트, 윈터그린 오일, 또는 체리 향과 같은 향미제와 함께 락토오스, 수크로오스 및 전분과 같은 통상적인 정제 기재로 정제화될 수 있다. 경구 액체 투여 형태로 사용하기 위한 적당한 부형제는 제약학상 허용되는 계면활성제, 현탁제 또는 유화제를 첨가한 또는 첨가하지 않은, 디칼슘 포스페이트 및 알콜, 예를 들면, 에탄올, 벤질 알콜 및 폴리에틸렌 알콜과 같은 희석제를 포함한다. 다양한 다른 물질들이 코팅제로서 또는 그렇지 않다면 투여 단위의 물리적 형태를 변형하기 위해서 존재할 수도 있다. 예를 들면, 정제, 알약, 또는 캡슐은 쉘락, 당 또는 양쪽 모두에 의해 코팅될 수도 있다.

분산성 가루약과 과립은 수성 현탁액의 제조에 적합하다. 그것들은 분산제 또는 습윤제, 현탁제 및 하나 또는 그 이상의 방부제와 혼합물로 활성 성분을 제공한다. 적당한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 이미 상기에서 언급된 것들이 좋은 예가 된다. 추가의 부형제, 예를 들어, 상기에서 기재한 감미제, 향미제, 및 착색제 또한 존재할 수도 있다.

본 발명의 제약 조성물은 또한 수중유 유탁액의 형태로 있을 수도 있다. 유상은 액상 파라핀 또는 식물성 기름의 혼합물과 같은 식물성 기름일 수도 있다. 적당한 유화제는 (1) 아카시아 검 및 트라가칸트 검과 같이 천연 검, (2) 콩 및 레시틴과 같은 천연 포스파타이드, (3) 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 에스테르 또는 부분적 에스테르, 예을 들어, 소르비탄 모노올레에이트, (4)상기 부분적 에스테르와 에틸렌 산화물의 축합 생성물, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트일 수 있다. 유탁액은 감미제 및 향미제를 또한 포함할 수 있다.

유성 현탁액은, 예를 들어, 아라키스 오일, 올리브유, 참기름 또는 야자유와 같은 식물성 기름이나 액상 파라핀과 같은 광유에 활성 성분을 현탁하므로써 제제화할 수도 있다. 유상 현탁액은, 예를 들어, 밀랍, 경질 파라핀, 또는 세틸 알콜과 같은 증점제를 함유할 수도 있다. 현탁액은 또한 하나 또는 그 이상의 방부제, 예를 들어, 에틸 또는 n-프로필 p-히드록시벤조에이트; 하나 또는 그 이상의 착색제; 하나 또는 그 이상의 향미제; 및 하나 또는 그 이상의 수크로오스나 사카린과 같은 감미제를 포함할 수도 있다.

시럽제와 엘릭시르는 감미제, 예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 솔비톨 또는 수크로오스와 같은 감미제로 제제화 할 수도 있다. 이러한 제제는 또한 점활제, 그리고 메틸이나 프로필 파라벤과 같은 방부제, 및 항미제와 착색제를 포함할 수도 있다.

본 발명의 화합물은 또한 비경구로, 즉, 피하로, 정맥내로, 안내로, 활액내로, 근육내로, 또는 복강내로, 비누 또는 세정제 같은 제약학상 허용되는 계면활성제, 펙틴, 카르보머, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 또는 카르복시메틸셀룰로스와 같은 현탁제, 또는 유화제나 다른 제약학적 보조제를 첨가하거나 또 는 첨가하지 않고서, 물, 염수, 수용성 덱스트로스 및 관련된 당용액과 같은 무균 액체 또는 액체 혼합물, 에탄올, 이소프로판올, 또는 헥사데실 알콜과 같은 알콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜, 2,2-디메틸-1,1-디옥살란-4-메탄올과 같은 글리세롤케탈, 폴리(에틸렌 글리콜) 400과 같은 에테르, 오일, 지방산, 지방산 에스테르 또는, 지방산 글리세리드, 또는 아세틸화된 지방산 글리세리드일 수 있는 제약학상 담체와 함께 생리학적으로 허용될 수 있는 희석제 중의 화합물의 주사가능한 투여형으로서 투여될 수 있다.

본 발명의 비경구 제제에 사용될 수 있는 오일의 예는 원유, 동물성, 식물성, 또는 합성 기원의 오일, 예를 들면, 땅콩기름, 대두유, 참기름, 면실유, 옥수수유, 올리브유, 바셀린 및 광유이다. 적당한 지방산은 올레산, 스테아르산, 이소스테아르산 및 미리스트산을 포함한다. 적당한 지방산 에스테르는, 예를 들면, 에틸 올레이트 및 이소프로필 미리스테이트를 포함한다. 적당한 비누는 지방산 알칼리 금속, 암모늄, 및 트리에탄올아민 염을 포함하고 적당한 세정제는 양이온성 세정제, 예를 들어, 디메틸 디알킬 암모늄 할라이드, 알킬 피리디늄 할라이드, 및 알킬아민 아세테이트; 음이온성 세정제, 예를 들어, 알킬, 알릴, 및 올레핀 술포네이트, 알킬, 올레핀, 에테르 및 모노글리세리드 술페이트, 및 술포숙시네이트; 비이온성 세정제, 예를 들어, 지방 아민 산화물, 지방산 알칸올아미드; 그리고 폴리(옥시에틸렌-옥시프로필렌) 또는 에틸렌 산화물 또는 프로필렌 산화물 공중합체; 및 양쪽성 세정제, 예를 들어, 알킬-베타-아미노프로피오네이트 및 2-알킬이미다졸린 4급 암모늄 염 뿐 아니라 혼합물을 포함한다.

본 발명의 비경구적 조성물은 전형적으로 용액 중에 활성 성분 약 0.5중량% 내지 약 25중량%을 함유할 것이다. 방부제와 완충액이 또한 유익하게 사용될 수도 있다. 주사부위의 자극을 최소화하거나 없애기 위해서, 상기 조성물은 약 12에서 약 17 정도의 친수성-친유성비(HLB)를 가지는 비이온성 계면활성제를 함유할 수도 있다. 상기 제제 중의 계면활성제의 양은 약 5중량% 내지 약 15중량%의 범위이다. 계면활성제는 상기의 HLB를 가지는 단일 성분이거나 또는 원하는 HLB를 가지는 둘 또는 그 이상의 성분들의 혼합물일 수 있다.

비경구적 제제에 사용되는 일례의 계면활성제는 폴리에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르의 부류, 예를 들어, 소르비탄 모노올레에이트 및 프로필렌 옥사이드와 프로필렌 글리콜의 축합에 의해 형성된, 소수성 염기와 에틸렌 옥사이드의 고분자량 부가물이다.

제약 조성물은 무균의 주사가능한 수성 현탁액의 형태로 있을 수 있다. 상기 현탁액은 적당한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제, 예를 들어 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 소듐 알기네이트, 트라가칸트 검 및 아카시아 검; 분산제 또는 습윤제는 레시틴과 같은 천연 포스파타이드, 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알콜의 축합 생성물, 예를 들어, 헵타데카-에틸렌옥시세탄올, 에틸렌 옥사이드와 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트와 같은 헥시톨 및 지방산으로부터 유도된 부분적 에스테르와의 축합 생성물, 또는 에틸렌 옥사이드과 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분적 에스테르와의 축합 생성물, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 사용하는 공지 방법에 의하여 제제화할 수 있다.

무균의 주사가능한 제제는 또한 무독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 무균의 주사가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용되는 희석제와 용매는, 예를 들어, 물, 링거액, 등장성 염화 나트륨 용액 및 등장성 글루코오스 용액이다. 또한, 무균의 불휘발성유는 일반적으로 용매 또는 현탁 매질로 사용된다. 이 목적을 위하여, 합성 모노- 또는 디글리세라이드를 포함하는 자극성이 적은 불휘발성유가 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산은 주사가능물질의 제제에 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 약물의 직장 투여를 위한 좌제 형태로 투여될 수 있다. 이러한 조성물들은 약물에 일반적인 온도에서는 고체이지만 직장의 온도에서는 액상이여서 약을 방출하기 위해 직장에서 녹을 수 있는 적당한 비자극성 부형제를 혼합하므로써 제조될 수 있다. 그러한 물질은, 예를 들어, 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜이 있다.

본 발명의 방법에 있어서 사용되는 또다른 제제는 경피성 전달 장치("패치(patch)")를 사용한다. 이러한 경피성 패치는 조절된 양으로 본 발명의 화합물의 연속적 또는 비연속적 주입을 제공하는데 사용될 수 있다. 제약학적 약제의 전달을 위한 경피성 패치의 구조 및 용도는 당업계에 잘 알려져 있다(예, 미국 특허 제5,023,252호, 1991년 1월 11일에 등록됨, 참고문헌으로 본원에 인용됨). 그러한 패치는 연속적으로, 박동성으로, 또는 제약 제제의 전달 필요에 맞게 구성 될 수 있다.

비경구적 투여를 위한 방출을 조절하는 제제는 당 업계에 알려진 리포솜, 중합체적 미립구 및 중합체적 겔 제제를 포함한다.

제약 조성물을 기계적인 전달 장치를 통하여 환자에게 주입하는 것은 바람직하거나 필요할 수도 있다. 제약 제제의 전달을 위한 기계적인 수송 장치의 구조 및 용도는 당 업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 약을 직접 뇌로 직접 투여하는 직접적인 기술은 보통 혈액 뇌관문을 우회하도록 환자의 심실 시스템에 약물 전달 카테터를 배치하는 것과 관련된다. 체내의 특정한 해부학적 부분으로 약제를 수송하는데 사용되는 이식가능한 전달 시스템 중 하나가 1991년 4월 30일에 특허된 미국 특허 제 5,011,472호에 기재되어 있다.

본 발명의 조성물은 또한 또다른 통상적으로 일반적으로 담체 또는 희석제으로 지칭되는 제약학상 허용되는 배합 성분을 필요에 따라 또는 원한다면 포함할 수 있다. 적절한 투여 형태로 그러한 조성물을 제조하기 위한 종래의 방법이 사용될 수 있다. 그러한 성분과 순서는 본원에 참조문헌으로 도입된 다음의 참고문헌에 기재되어 있는 것들을 포함한다: [Powell, M.F. et al.,"Compendium of Excipients for Parenteral Formulations" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1998, 52 (5), 238-311], [Strickley, R. G "Parenteral Formulations of Small Molecule Therapeutics Marketed in the United States(1999)-Part-l" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1999, 53(6), 324-349] ; 및 [Nema, S. et al., "Excipients and Their Use inInjectable Products" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997, 51 (4), 166-171]. `

원하는 경로로 투여하기 위한 조성물들을 제제화하는데 적합하게 사용될 수 있는 일반적으로 사용되는 제약 성분은 다음을 포함한다:

● 산성화제 (예는 아세트산, 시트르산, 푸마르산, 염산, 질산을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 알칼리화제 (예는 암모니아 용액, 탄산암모늄, 디에탄올아민, 모노에탄올아민, 수산화칼륨, 붕산나트륨, 탄산나트륨, 수산화나트륨, 트리에탄올아민, 트롤아민을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 흡착제 (예는 분말로 된 셀룰로오스 및 활성탄을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 에어로졸 분사제 (예는 이산화탄소, CCl₂F₂, F₂ClC-CClF₂ 및 CC1F₃을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 공기 여과 장치 (예는 질소 및 아르곤을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 항진균성 방부제(예는 벤조산, 부틸파라벤, 에틸파라벤, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산나트륨을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 항균성 방부제 (예는 염화 벤즈알코늄, 염화 벤즈에토늄, 벤질 알콜, 염화 세틸피리디늄, 클로로부탄올, 페놀, 페닐에틸알콜, 페닐수은 질산염 및 티메로살을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 항산화제 (예는 아스코르브산, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 차인산, 모노티오글리테롤, 프로필 갈레이트, 소듐 아스코르베이트, 아황산 나트륨, 소듐 포름알데하이드 술폭실레이트, 소듐 메타비술파이트를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 결합 물질 (예는 블록 중합체, 천연 및 합성 검, 폴리아크릴레이트, 폴리우레탄, 실리콘, 폴리실록산 및 스티렌-부타디엔 공중합체를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 완충제 (예는 메타 인산칼륨, 인산이칼륨, 아세트산 나트륨, 시트르산나트륨 무수물 및 시트르산나트륨 이수화물을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 담체 (예는 아카시아 시럽, 방향족 시럽, 방향족 엘릭시르, 체리 시럽, 코코아 시럽, 오렌지 시럽, 시럽, 옥수수유, 광유, 땅콩기름, 참기름, 정균성 염화 나트륨 주사액 및 정균성 주사용수를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 킬레이트 (예는 에데테이트 디소듐 및 에데트산을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 착색제 (예는 FD & C 적색 번호 3호, FD & C 적색 번호 20호, FD & C 황색 번호 6호, FD & C 청색 번호 2호, D & C 녹색 번호 5호, D & C 주황색 번호 5호, D & C 적색 번호 8호, 카라멜 및 산화 제이철 적색을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 청징제 (예는 벤토나이트를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 유화제 (예는 아카시아, 세토마크로골, 세틸 알콜, 글리테릴 모노스테아레이트, 레시틴, 소르비탄 모노올레이트, 폴리옥시에틸렌 50 모노스테아레이트를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 캡슐화제 (예는 젤라틴 및 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 향미제 (예는 아니스유, 시나몬유, 코코아, 멘톨, 오렌지유, 페퍼민트유 및 바셀린을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 습윤제 (예는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 및 소르비톨을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 가루로 만드는 제제 (예는 광유 및 글리세린을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 오일 (예는 아라키스오일, 광유, 올리브유, 땅콩기름, 참기름 및 식물성 기름을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 연고 기재 (예는 라놀린, 친수성 연고, 폴리에틸렌 글리콜 연고, 바셀린, 친수성 바셀린, 백색 연고, 황색 연고, 및 장미향수 연고를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 침투 향상제 (경피성 전달) (예는 모노히드록시 또는 폴리히드록시 알콜, 일가-또는 다가 알콜, 포화 또는 불포화 지방 알콜, 포화 또는 불포화 지방 에스테르, 포화 또는 불포화 디카르복실산, 필수지방, 포스파티딜 유도체, 세팔린, 테르펜, 아미드, 에테르, 케톤 및 우레아를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 가소제 (예는 디에틸 프탈레이트 및 글리세롤을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 용매 (예는 에탄올, 옥수수유, 면실유, 글리세롤, 이소프로판올, 광유, 올레산, 땅콩기름, 정제수, 주사용수, 주사용 무균수 및 세척용 무균수를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 경화제 (예는 세틸 알콜, 세틸 에스테르 납, 미정질 납, 파라핀, 스테아릴 알콜, 백랍 및 황랍를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 좌제 가재 (예는 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜(혼합물)을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 계면활성제 (예는 염화 벤즈알코늄, 노녹시놀 10, 옥토시놀 9, 폴리소르메이트 80, 소듐 라우릴 술페이트 및 소르비탄 모노-팔미테이트를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 현탁제 (예는 한천, 벤토나이트, 카르보머, 카르복시메틸셀룰로오스 소듐, 히드록시에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 카올린, 메틸 셀룰로오스, 트라가칸트 검 및 비검을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 감미제 (예는 아스파탐, 덱스트로스, 글리세롤, 만니톨, 프로필렌 글리콜, 사카린 소듐, 소르비톨 및 수크로오스를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 정제 접착방지제 (예는 마그네슘 스테아레이트 및 탈크를 포함하나, 이들 로 제한되는 것은 아니다.);

● 정제 결합제 (예는 아카시아, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 소듐, 압축성 당, 에틸셀룰로오스, 젤라틴, 액상 글루코오스, 메틸셀룰로오스, 및 사전젤라틴화된 전분을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 정제 및 캡슐 희석제 (예는 이염기성 인산화 칼슘, 카올린, 락토오스, 만니톨, 미정질 셀룰로오스, 분말 셀룰로오스, 침전된 칼슘 카르보네이트, 소듐 카르보네이트, 소듐 포스페이트, 소르비톨 및 전분을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 정제 코팅제 (예는 액상 글루코오스, 히드록시에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트 및 쉘락을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 직접 정제 압축 부형제 (예는 이염기성 인산화 칼슘을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 정제 붕해제 (예는 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 미정질 셀룰로오스, 폴라크릴린 포타슘, 소듐 알기네이트, 소듐 전분 글리콜레이트 및 전분을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 정제 유동화제 (예는 콜로이드성 실리카, 전분 및 탈크를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.);

● 정제 윤활제 (예는 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 광유, 스 테아르산 및 아연 스테아레이트를 포함하나, 제한되는 것은 아니다);

● 정제/캡슐제 불투명화제 (예는 이산화티탄물을 포함하나, 제한되는 것은 아니다);

● 정제 연마제 (예는 카르나우바 납 및 백랍을 포함하나, 제한되는 것은 아니다);

● 증점제 (예는 밀랍, 세틸 알콜 및 파라핀을 포함하나, 제한되는 것은 아니다);

● 삼투제 (예는 덱스트로스 및 염화나트륨을 포함하나, 제한되는 것은 아니다);

● 점도증강제 (예는 알긴산, 벤토나이트, 카르보머, 카르복시메틸셀룰로오스 소듐, 메틸셀룰로오스, 소듐 알기네이트 및 트라가칸트 검를 포함하나, 제한되는 것은 아니다);

● 습윤제 (예는 헵타데카에틸렌 옥시세탄올, 레시틴, 소르비톨 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트 및 폴리옥시에틸렌 스테아레이트를 포함하나, 제한되는 것은 아니다);

본 발명에 따른 제약 조성물은 다음과 같이 예시될 수 있다 :

무균성 정맥내(IV) 용액: 본 발명의 바람직한 화합물의 5 mg/mL 용액은 무균의 주사용수를 사용하여 만들어지며, pH는 필요하다면 조정한다. 용액은 1-2 mg/mL로 투여하기 위하여 무균성 5% 덱스트로스로 희석하며 60분에 걸쳐 정맥내(IV) 주입액으로 투여된다.

정맥내(IV) 투여를 위한 동결건조된 분말: 무균성 제제는 (i) 동결건조된 분말로서의 본 발명의 바람직한 화합물 100-1000 mg, (ii) 32-327 mg/mL의 소듐 시트레이트, 및 (iii) 300-3000 mg의 덱스트란 40 으로 제조할 수 있다. 그 제제는 무균성의, 주사가능한 염수 또는 덱스트로스 5% 로 10 내지 20 mg/mL의 농도로 재구성할 수 있는데, 이것은 염수 또는 덱스트로스 5%로 0.2-0.4 mg/mL으로 추가로 희석할 수 있으며, 15-60분에 걸쳐 정맥내 일시주사(IV bolus)나 정맥내 주입액(IV infusion)로 투여될 수 있다.

근육내 현탁액: 다음 용액 또는 현탁액은 근육내 주사를 위해 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 수불용성 화합물 50 mg/mL

소듐 카르복시메틸셀룰로오스 5 mg/mL

트윈(Tween) 80 4 mg/mL

염화나트륨 9 mg/mL

벤질알콜 9 mg/mL

경질 쉘의 캡슐: 다수의 단위 캡슐을 표준화된 두조각의 경질 젤라틴 캡슐에 각각 분말 활성 성분 100 mg, 락토오스 150 mg, 셀룰로오스 50 mg 및 마그네슘 스테아레이트 6 mg을 충전하여 제조할 수 있다.

연질 젤라틴 캡슐: 대두유, 면실유 또는 올리브유와 같은 소화가능한 오일 중의 활성 성분의 혼합물을 제조하고 용량형 펌프를 이용하여 용융된 젤라틴 내로 주입하여 활성 성분 100 ㎎을 포함하는 연질 젤라틴 캡슐제를 형성한다. 캡슐제를 세척하고 건조시킨다. 활성 성분을 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린 및 소르비톨의 혼합물에 용해하여 수혼화성 의약 믹스를 제조할 수 있다.

정제: 다량의 정제를 투여 단위가 활성 성분 100 mg, 콜로이드성 이산화규소 0.2 mg, 마그네슘 스테아레이트 5 mg, 미정질 셀룰로오스 275 mg, 전분 11 mg 및 락토오스 98.8 mg이 되도록 통상적인 순서에 의해 제조한다. 적절한 수성 및 비수성 코팅은 기호도를 증가시키고, 정밀성과 안정성을 개선시키거나 흡수를 지연시키기 위해 사용될 수 있다.

즉시 방출되는 정제/캡슐제 : 이들은 통상적이고 새로운 공정에 의해 만들어진 고체 경구 투여 형태이다. 이들 단위들은 약제의 즉각적인 용해 및 전달을 위해 물 없이 경구로 섭취된다. 활성 성분은 당, 젤라틴, 펙틴 및 감미제와 같은 성분을 함유하는 액체와 혼합된다. 이 액체들은 동결건조나 고체 상태 추출 기술로 고체 정제 또는 케플릿(caplet)으로 고체화된다. 약물 화합물은 물의 필요 없이도 즉각적인 방출이 가능하도록 다공성 기질을 제조하기 위해 점탄성과 열적탄성 당 및 중합체 또는 비등성의 성분과 함께 압축할 수 있다.

본 발명의 제약 조성물의 투여량

전술한 장애의 치료에 유용한 화합물을 평가하는 것으로 알려진 표준 실험 기술에 기초를 두고, 표준 독성 시험과 포유동물에서 상기와 동일시되는 상태의 치료를 결정하기 위한 표준 약리학적 분석, 및 이러한 결과들을 이들 상태들을 치료하는데 사용되는 공지된 의약의 결과와 비교함으로써, 본 발명의 화합물의 효과적인 투여량은 각각의 원하는 징후의 치료를 위해 쉽게 결정될 수 있다. 이들 상 태 중 하나의 치료에서 투여된 활성 성분의 양은 특정한 화합물 및 사용된 투여 단위, 투여 방식, 치료 기간, 치료받은 환자의 나이 및 성별, 그리고 치료된 상태의 특성과 범위를 고려함에 따라서 매우 다양할 수 있다.

투여되는 활성 성분의 총 양은 하루에 체중 1 ㎏ 당 약 0.001 ㎎ 내지 약 200 ㎎, 바람직하게는 체중 1 ㎏ 당 약 0.1 ㎎ 내지 약 50 ㎎의 범위일 수 있다. 단위 투여량는 바람직하게는 활성 성분을 체중 1 kg 당 약 5 mg 내지 약 400 ㎎ 함유할 수 있으며, 하루에 한 번 또는 그 이상의 횟수로 투여할 수 있다. 경구 투여에 대한 하루 투여량은 체중 1 kg 당 0.1 내지 50 mg 까지가 바람직할 것이다. 정맥내, 근육내, 피하 및 비경구 주사, 그리고 주입 기술의 사용을 포함한 주사에 의한 투여의 하루 투여량은 체중 1 kg 당 0.1 내지 50 mg이 바람직할 것이다. 하루 직장 투여계획은 체중 1 kg 당 0.1 내지 50 mg이 바람직할 것이다. 하루 질 투여계획은 체중 1 kg 당 0.1 내지 10 mg이 바람직할 것이다. 하루 국소 투여계획은 하루에 한번에서 네 번 사이에서 체중 1 kg 당 0.1 내지 10 mg이 투여되는 것이 바람직할 것이다. 경피농도는 체중 1 kg 당 0.1 내지 10 mg까지의 하루 복용량을 유지하도록 하는 것이 바람직할 것이다. 하루 흡입 투여계획은 체중 1 kg 당 0.1 내지 10 mg이 바람직할 것이다. 다른 투여형과 양은 일상적으로 선택될 수 있다.

환자 개개인에 대한 특이적 초기 및 계속적인 투여계획은 환자를 본 진단자에 의해 결정된 상태의 특성과 심각성, 사용된 특정 화합물의 활성, 환자의 나이와 일반적인 상태, 투여 시간, 투여 경로, 약물의 배출 속도, 약물 조합물 등에 따라 다양할 것이다. 본 발명의 화합물 또는 그의 제약학상 허용되는 염 또는 에스테르 또는 조성물의 투여 횟수 및 바람직한 치료 방식은 통상적인 치료 시험을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물과 부가적인 활성 성분의 조합

본 발명의 화합물은 유일한 약제로서 또는 어떠한 용인될 수 없는 부작용도 일으키지 않는 조합을 통해 하나 또는 그 이상의 다른 약제와 함께 투여될 수 있다. 이것은 암과 같은 과증식성 질환의 치료를 위해서 특히 적합할 수 있다. 이 경우, 본 발명의 화합물은 알려진 세포독성 약제, 신호 형질도입 억제제 또는 다른 항암제 뿐 아니라 이들의 혼합물 및 조합물과 병용될 수 있다.

일 실시태양으로, 본 발명의 화합물은 세포 독성 항암제와 병용될 수 있다. 이러한 약제의 예는 문헌[11^th Edition of the Merck Index (1996)]에서 볼 수 있다. 이러한 약제는, 아스파라기나아제, 블레오마이신, 카보플라틴, 카무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 콜라스파아제, 시클로포스파마이드, 시타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신(아드리아아이신), 에피루비신, 엑토포사이드, 5-플루오로우라실, 헥사메틸멜라민, 히드록시우레아, 이포스파마이드, 이리노테칸, 류코보린, 로무스틴, 메클로레타민, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 미토마이신C, 미토크산트론, 프레드니솔론, 프레드니손, 프로카바진, 랄록시펜, 스트렙토조신, 타목시펜, 티오구아닌, 토포테칸, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 및 빈데신을 비제한적으로 포함한다.

본 발명의 화합물과 함께 사용하기에 적합한 다른 세포독성 약물은, Goodman and Gilman의 [The Pharmacological Basis of Therapeutics (Ninth Edition, 1996,McGraw-Hill)]에 기재된 신생물성 질환의 치료에 사용되기 위해 승인받은 화합물을 포함한다. 이러한 약제들은, 아미노글루테티마이드, L-아스파라기나아제, 아자티오프린, 5-아자시티딘 클라드리빈, 부술판, 디에틸스틸베스트롤, 2',2'-디플루오로데옥시시티딘, 도세탁셀, 에리트로히드록시노닐라데닌, 에티닐 에스트라디올, 5-플루오로데옥시우리딘, 5-플루오로데옥시우리딘 모노포스페이트, 플루다라빈 포스페이트, 플루옥시메스테론, 플루타마이드, 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 이다루비신, 인터페론, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 미토탄, 파클리탁셀, 펜토스타틴, N-포스포노아세틸-L-아스파테이트(PALA), 플리카마이신, 세무스틴, 테니포사이드, 테스토스테론 프로피오네이트, 티오테파, 트리메틸멜라민, 우리딘, 및 비노렐빈을 비제한적으로 포함한다.

본 발명의 화합물과 함께 사용하기에 적합한 다른 세포독성 항암제는 또한 옥살리플라틴, 겜시타빈, 카펙시타빈, 에포틸론 및 이것의 천연 또는 합성 유도체, 테모졸로마이드 ([Quinn et al., J. Clin. Oncology 2003, 21 (4), 646-651]), 토시투모맙(Bexxar), 트라베덱틴 ([Vidal et al., Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004,23, abstract 3181]), 및 카이네신 스핀들 단백질 Eg5의 억제제([Wood et al.,Curr. Opin. Pharmacol. 2001,1, 370-377])와 같은 새롭게 발견된 세포독성 주성분을 비제한적으로 포함한다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 다른 신호 형질도입 억제제와 병 용될 수 있다. 특별히 흥미로운 것은 EGFR, HER-2, 및 HER-4 ([Raymond et al., Drugs 2000, 60,(Suppl.l), 15-23], [Harari et al., Oncogene 2000, 19 (53), 6102-6114)], 및 그들 각각의 리간드들과 같은 EGRF 계열을 표적화 하는 신호 형질도입 억제제이다. 이러한 약제의 예는, 허셉틴(트라스투주맙), 에르비툭스(세툭시맙), 및 퍼투주맙과 같은 항체 치료를 비제한적으로 포함한다. 이러한 치료의 예는 또한 ZD-1839 / 이레사 ([Baselga et al., Drugs 2000, 60 (Suppl. 1), 33-40]), OSI-774/타르세바 ([Pollack et al.J. Pharm. Exp. Ther. 1999,291 (2),739-748]), CI-1033 ([Bridges, Cure. Med. Chem. 1999, 6,825-843]), GW-2016 ([Lackey et al.,92^nd AACR Meeting, New Orleans, Mnrch 24-28, 2001, abstract 4582]), CP-724,714 ([Jani et al., Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004,23, abstract3122]), HKI-272 ([Rabindran et al., Cancer Res. 2004, 64, 3958-3965]), 및 EKB-569 ([Greenberger et al., 11^th NCI-EORTC- 4ACR Symposium on New Drugs inCancer'Therapy, Amsterclcm, November 7-10,2000, abstract 388])와 같은 작은-분자 키나아제 억제제를 비제한적으로 포함한다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 분리된-키나아제 도메인 계열(VEGFR, FGFR, PDGFR, flt-3,c-kit, c-fins 등)의 수용체 키나아제 및 그들 각각의 리간드를 표적화 하는 또다른 신호 형질도입 억제제와 병용될 수 있다. 이러한 약제들은, 아바스틴 (베바시주마브)과 같은 항체를 비제한적으로 포함한다. 이러한 약제들은 또한, STI-571/글리벡([Zvelebil,Curr.Opin.Oncol.,Endocr.Metab. Invest. Dnxgs 2000,2(1), 74-82]), PTK-787 ([Wood et al., Cancer Res. 2000, 60 (8), 2178-2189]), SU-11248 ([Demetri et al., Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004,23, abstract 3001]), ZD-6474([Hennequin et al., 92^nd AACR Meeting, New Orleans, March 24-25, 2001, abstract 3152]), AG-13736 ([Herbst et al., ClinCancer Res. 2003, 9,16 (suppl 1), abstract C253]), KRN-951 ([Taguchi et al., 95th AACR Aleeting, Orlando, FL, 2004, abstract 2575]), CP-547,632 ([Beebe et al., Cancer Res. 2003,63, 7301-7309]), CP-673,451 ([Roberts et al., Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, abstract 3989]), CHIR-258 ([Lee et al., Proceedings of the A7nerican Association of Cancer Research 2004, 45, abstract 2130]), MLN-518 ([Shen et al., Blood 2003, 102, 11, abstract 476]), 및 AZD-2171 ([Hennequin et al., Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, abstract 4539])과 같은 작은-분자 억제제를 비제한적으로 포함한다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 raf/MEK/ERK 형질도입 경로 ([Avruch et al., Recent Prog.Horm. Res. 200 : 1, 56, 127-155]), 또는 PKB (akt) 경로 ([Lawlor et al., J Cell Sci. 2001, 114, 2903-2910])의 억제제와 병용될 수 있다. 이것들은, PD-325901 ([Sebolt-Leopold et al., Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, abstract 4003]), 및 ARRY-142886 ([Wallace et al., Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, abstract 3891])을 비제한적으로 포함한다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 히스톤 데아세틸라아제의 억제제와 병용될 수 있다. 이러한 약제들의 예는, 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA), LAQ-824 ([Ottmann et al., Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004,23, abstract3024]), LBH-589 ([Beck et al., Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004,23, abstract 3025]), MS-275 ([Ryan et al., Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, abstract 2452]), 및 FR-901228 ([Piekarz et al., Proceedingsof the American Society for Clinical Oncology 2004,23, abstract 3028])을 비제한적으로 포함한다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 프로테아솜 억제제, 및 m-TOR 억제제와 같은 또다른 항암제와 병용될 수 있다. 이것들은, 보르테조밉([Mackay et al., Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004,23, Abstract 3109]), 및 CCI-779 ([Wu et al., Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, abstract 3849])을 비제한적으로 포함한다.

일반적으로, 암 치료를 위해 본 발명의 화합물 또는 조성물과 결합한 세포독성 및(또는) 세포증식 억제제 항암제의 사용은 다음에 기여할 것이다:

(1) 약제 단독 투여와 비교하여 종양의 성장을 감소시키거나 또는 종양의 제거에 있어서도 더 나은 효능을 보인다,

(2) 투여되는 화학요법제의 더 적은 양의 투여를 제공한다,

(3) 단일한 약제 화학용법 및 특정 기타 병행 치료법의 경우에 관찰된 것보다 더 적은 해로운 약물학적 합병증을 보여 환자가 잘 적응하는 화학요법 치료를 제공한다,

(4) 포유동물, 특히 인간에 보다 광범위의 스펙트럼의 상이한 유형의 암 치료를 제공한다,

(5) 치료받은 환자 중에서 더욱 빠른 치료 속도를 제공한다,

(6) 표준 화학요법 치료와 비교하여 치료받은 환자 중에서 더욱 긴 생존 기간을 제공한다,

(7) 종양 진행을 위하여 더 시간을 진행한다, 및(또는)

(8) 다른 암 약제 조합물이 길항 효과를 생성하는 알려진 경우과 비교하여, 적어도 단독으로 사용된 약제만큼 좋은 효능 및 내약성 결과를 보인다.

이 명세서에서 사용된 약어는 다음과 같다.

HPLC 고압 액체 크로마토그래피

MS 질량 분석법

ES 전자분무법

DMSO 디메틸술폭시드

MP 녹는점

NMR 핵 공명 분광법

TLC 박층 크로마토그래피

rt 실온

4-아미노-3-플루오로페놀의 제조

아르곤으로 퍼징한 건조 플라스크에 10% Pd/C (80 mg)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (40 mL) 중의 3-플루오로-4-니트로페놀 (1.2 g, 7.64 mmol) 용액을 뒤에 첨가했다. 혼합물은 H₂ 대기 하에 4시간 동안 교반시켰다. 혼합물은 셀라이트 패드를 통과하여 여과시키고 용매는 감압 하에 증발시켜 목적 생성물을 황갈색 고체로 얻었다. (940 mg, 7.39 mmol; 97 % 수율); ¹H-NMR (DMSO-d₆) 4.38 (s, 2H), 6.29-6.35 (m, 1H), 6.41 (dd, J=2.5, 12.7, 1H), 6.52-6.62(m, 1H), 8.76 (s, 1H).

4-(4-아미노-3-플루오로페녹시)피리딘-2-카르복실산 메틸아미드의 제조

0℃로 냉각한 N,N-디메틸아세트아미드 (6 mL) 중의 4-아미노-3-플루오로페놀 (500 mg, 3.9 mmol) 용액을 포타슘 tert-부톡시드 (441 mg, 3.9 mmol)로 처리하고, 그 갈색 용액을 0℃에서 25분간 교반시켰다. 혼합물에 디메틸아세트아미드 (4 mL) 중의 4-클로로-N-메틸-2-피리딘카르복스아미드 (516 mg, 3.0 mmol) 용액을 첨가했 다. 반응을 100℃로 16시간 동안 가열했다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, H₂0 (20 mL)로 냉각하고, 에틸아세테이트 (4 x 40 mL)로 추출했다. 합한 유기물은 H₂0 (2 x 30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 증발시켜 적갈색 오일을 산출했다. ¹H-NMR은 잔류 디메틸아세트아미드의 존재를 나타냈고, 따라서 오일을 디에틸에테르 (50 mL) 중에 흡수시키고 염수 (5 x 30 mL)로 추가적으로 세척했다. 유기물층을 건조시키고 (MgSO₄) 농축하여 950 mg의 목적 생성물을 적갈색 고체로 얻었고, 이것은 다음 단계에서 정제 없이 사용했다.

4-클로로-N-메틸-2-피리딘카르복스아미드의 제조방법은 뱅크스톤 등(Bankston et al.)의 문헌[Org. Proc. Res. Dev. 2002, 6(6), 777-781]에 기재되어 있다.

실시예 1: 4{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-피리딘-2-카르복실산 메틸아미드의 제조

톨루엔 (3 mL) 중 4-(4-아미노-3-플루오로페녹시)피리딘-2-카르복실산 메틸아미드 (177 mg, 0.68 mmol) 용액에 4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐 이소시아네이트 (150 mg, 0.68 mmol)를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 72 시간 동안 교반시켰다. 반응은 감압하에 농축하고, 잔류물은 디에틸에테르와 함께 분쇄했다. 결과 고체는 여과에 의해 수집하고, 진공에서 4시간 동안 건조시켜 표제 화합물을 얻었다. (155 mg, 0.32 mmol; 47% 수율); ¹H-NMR (DMSO-d₆) 2.78 (d, J=4.9, 3H), 7.03-7.08(m, 1H), 7.16 (dd, J=2.6, 5.6, 1H), 7.32 (dd, J=2.7, 11.6, 1H), 7.39 (d, J=2.5, 1H), 7.60 (s, 2H), 8.07 - 8.18 (m, 2H), 8.50 (d, J=5.7, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.74-8.80 (m, 1H), 9.50 (s, 1H), MS (HPLC/ES) 483.06 m/z = (M + 1).

실시예 2: 4{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-피리딘-2-카르복실산 메틸아미드 히드로클로라이드의 제조

유리 염기 (2.0 g)로서 실시예 1의 화합물을 무수 테트라히드로푸란 (15 mL)중에 용해시키고, 4 M HCl/디옥산을 첨가하였다 (과량). 그 후, 용액을 진공에서 농축하여 2.32 g의 회백색의 고체를 얻었다. 조 염을 고온의 에탄올 (125 mL) 중에 용해시키고, 활성 탄소를 첨가하고, 혼합물은 15분간 가열 환류했다. 고온 현탁액을 셀라이트 521 패드를 통하여 여과시키고, 실온으로 냉각하였다. 플라스크는 냉동기에 밤새 두었다. 결정질 고체를 흡입 여과에 의하여 수집하고, 에탄올, 그 후 헥산로 세척하고, 공기-건조시켰다. 모액을 농축하고, 밤새 결정화 (냉동기에서)가 일어나도록 하였다. 고체의 제2 생성물을 수집하고, 제1 생성물과 합하였다. 무색 염을 진공 오븐 중에서 60℃에서 2 일에 걸쳐서 건조시켰다. 히드로클로라이드 염의 수율은 1.72 g (79%)였다.

녹는점: 215 ℃

원소 분석

실시예 3: 4{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-피리딘-2-카르복실산 메틸아미드 메실레이트의 제조

유리 염기 (2.25 g)로서 실시예 1의 화합물을 에탄올 (100 mL) 중에 용해시키고, 메탄술폰산 원액 (과량)을 첨가했다. 그 후, 용액을 진공에서 농축시켜 노란색 오일을 얻었다. 에탄올을 첨가하고 농축을 반복하여 2.41 g의 회백색 고체를 얻었다. 조 염을 고온의 에탄올 (~125 mL) 중에 용해시키고 그 후 결정화되도록 천천히 냉각시켰다. 실온에 도달한 후, 플라스크를 냉동고에 밤새 두었다. 무색 결정 물질을 흡입 여과에 의해 수집하고; 필터 케이크를 에탄올, 그 후 헥산으로 세척하고, 공기-건조시켜 2.05 g의 물질을 얻었고, 이를 60℃ 진공 오븐에서 밤새 건조시켰다.

녹는점: 231℃

원소 분석

실시예 4 : 4{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-피리딘-2-카르복실산 메틸아미드 페닐술포네이트의 제조

유리 염기 (2.25 g)로서 실시예 1의 화합물을 에탄올 (50 mL) 중에 현탁하고, 에탄올 (50 mL) 중에 녹인 벤젠술폰산 (0.737 g)을 첨가했다. 혼합물을 격렬하게 교반하며 가열했다. 모든 고체 물질이 녹아 붉은 색 용액이 되었다. 용액을 실온으로 냉각시키고 플라스크를 긁었다. 결정 형성은 달성하기 어려웠고, 몇몇 시드가 발견되어 용액에 첨가하여 냉동고에 밤새 두었다. 회갈색 고체가 플라스크에 형성되었고, 그 물질을 깨뜨려서 흡입 여과로 수집했다. 고체는 에탄올, 그 후 헥산으로 세척하고, 공기-건조시켰다. 결과물의 무게는 2.05 g, 69%의 수율이었다.

녹는점: 213℃

원소 분석

실시예 5: c-raf (raf-1) 생화학적 검정

c-raf 생화학적 검정은 Lck 키나아제에 의해 활성화된 (인산화된) c-raf 효소를 가지고 수행했다. Lck-활성화 c-raf (Lck/c-raf)는 폴리헤드린 프로모터의 조절하에 GST-c-raf (아미노산 302 번 내지 648 번) 및 Lck (전체 길이)를 발현하는 바큘로바이러스로 세포를 공감염시켜 Sf9 곤충 세포에서 생산하였다. 바큘로바이러스 양쪽 모두 감염다중도 2.5로 사용하였고, 세포는 감염 48시간 후에 수확했다.

MEK-1 단백질을 GST-MEK-1 (전체 길이) 융합 단백질을 발현하는 바큘로바이러스로 감염다중도 5로 세포를 감염시키고, 감염 48시간 후에 세포를 수확하여 Sf9 곤충세포에서 생산하였다. GST-c-raf 302-648 및 GST-MEK-1에 대해 유사한 정제 과정을 사용했다. 형질감염된 세포를 10 mM 인산 나트륨, 140 mM 염화 나트륨 pH 7.3, 0.5% 트리톤 X-100 및 프로테아제 억제제 혼합물을 함유하는 완충액 중에 mL 당 100 mg 세포 습성 생물량으로 현탁시켰다. 세포를 폴리트론 호모게나이저로 파괴시키고, 30,000 g로 30분간 원심분리했다. 30,000 g 상등액을 GSH-세파로즈에 가했다. 수지를 50 mM 트리스, pH 8.0, 150 mM NaCl 및 0.01% 트리톤 X-100을 함 유하는 완충액으로 세척했다. GST-표지 단백질을 100 mM 글루타티온, 50 mM 트리스, pH 8.0, 150 mM NaCl 및 0.01% 트리톤 X-100을 함유하는 용액으로 용리했다. 정제된 단백질은 20 mM 트리스, pH 7.5, 150 mM NaCl 및 20% 글리세롤을 함유하는 완충액에 투석했다.

실험 화합물은 저장 농축액에 3 배 희석액을 사용하여 DMSO 중에 순차적으로 희석하여, 대표적으로 50 μM로부터 20 nM 범위에 분포하게 했다. (검정에서 최종 농도는 1 μM로부터 0.4 nM에 분포했다.) c-Raf 생화학적 검정은 96-웰 코스타 폴리프로필렌 평판 (코스타 3365)에 방사능 필터매트 검정으로 수행하였다. 평판에 50 mM HEPES pH 7.5, 70 mM NaCl, 80 ng Lck/c-raf 및 1 μg MEK-1을 함유하는 용액 75 μL를 로딩했다. 그 후, 순차적으로 희석한 개개의 화합물 2 μL를 ATP 첨가에 앞서 반응에 첨가했다. 반응을 5 μM ATP 및 0.3 μCi [33P]-ATP를 함유하는 ATP 용액 25 μL로 개시시켰다. 평판을 밀봉하고, 32℃에서 1시간 동안 인큐베이션했다. 반응을 4% 인산 50 μL의 첨가로 냉각시키고, 월락 톰텍 포집기(Wallac Tomtec Harvester)를 사용하여 P30 필터매트 (페르킨엘머) 위에 수확했다. 필터매트를 1% 인산으로 먼저 세척하고, 두번째로 H₂O로 탈이온화했다. 필터를 전자레인지에서 건조시키고, 섬광액에 적시고, 월락 1205 베타플레이트 계수기 (미국 GA주 아틀란타 소재, 월락 사)로 읽었다. 결과는 억제 백분율로 나타냈다.

% 억제 = [100-(T_ib/T_i)] x 100

위의 식에서, T_ib = (억제제 존재 시 분 당 수)-(배경) 이고,

T_i = (억제제 부재 시 분 당 수)-(배경) 이다.

본 발명의 화합물은 이 검정에서 raf 키나아제의 강력한 억제를 보였다.

실시예 6: p38 키나아제 시험관 내 검정

정제 및 His-표지한 p38 α2 (대장균 중 발현됨)을 시험관 내에서 MMK-6에 의해 높은 고유활성도로 활성시켰다. 마이크로역가 형식을 사용하여, 모든 반응은 검정 완충액 (25 mM HEPES 7.4, 20 mM MgCl₂, 150 mM NaCI) 중에 0.05 μg/웰의 활성화 p38 α2 및 10 μg/웰의 미옐린 염기성 단백질을 산출하도록 희석된 시약을 가지고 100 μL 부피로 수행했다. 실험 화합물 (물 중 10% DMSO 용액 5 μL)을 제조하고, 최종 농도 범위가 5 nM로부터 2.5 μM을 포함하도록 검정 완충액 내에서 희석했다. 키나아제 검정은 최종 농도가 웰 당 저온 ATP 10 μM 및 [감마-³³P] ATP 0.2 μCi (200 내지 400 dpm/pmol의 ATP)가 되도록 ATP 혼합물 25 μL의 첨가로 개시시켰다. 평판을 32℃에서 35분간 인큐베이션하고, 반응을 1N HCl 수용액 7 μL로 냉각시켰다. 표본은 톰텍 1295 포집기 (월락 사)를 사용하여 P30 필터매트 (월락 사) 위에 수확하고, LKB 1205 베타플레이트 액체 섬광 계수기 (월락 사)에서 계수했다. 음성 대조군은 기질에 ATP 만을 포함했다. SW1353 세포 검정: SW1353 세포 (인간 연골육종)를 96-웰 평판에 접종시키고 (세포 1000 개/100 μL DMEM 10% FCS/웰) 밤새 인큐베이션했다. 배지 교체 후에, 세포를 1시간 동안 37℃에서 실험 화합물에 노출시키고, 이 때 인간 IL-1 (1 ng/mL, Endogen, Woburn, WA) 및 재조합 인간 TNF알파 (10 ng/mL)를 첨가했다. 배양은 48시간 동안 37℃에서 인큐베이션하 고, 그 후 상등액 IL-6 수치를 ELISA로 측정했다. 본 발명의 화합물은 현저한 p38 키나아제 억제를 보였다.

실시예 7: 바이오-플렉스 포스포-ERK 1/2 면역검정

레이져 유동 세포측정 (바이오-라드) 플랫폼을 사용한 96 웰 pERK 면역검정을 유방암 세포주 중 기저 pERK의 억제를 측정하기 위해 설계했다. MDA-MB-231 세포는 완전 성장 배지 중 96 웰 미량역가 평판에 웰 당 세포 50,000 개로 배양했다. 기저 pERK 1/2 억제에 대한 실험 화합물의 효과를 위해 배양한 다음날, MDA-MB-231 세포 0.1% BSA를 가진 DMEM으로 옮기고, 0.1% DMSO 중에 최종농도 3 μM 로부터 12 nM이 되도록 1:3으로 희석된 실험 화합물과 함께 인큐베이션했다. 세포를 실험 화합물과 함께 2시간 동안 인큐베이션하고, 세척하고 바이오-플렉스 전세포 용해 완충액 A 중에서 용해시켰다. 표본을 완충액 B로 1:1 (v/v)으로 희석하고, 즉시 검정 평판으로 옮기거나 또는 처리될 때까지 -80℃에서 냉동시켰다. 50 μL의 희석된 MDA-MB-231 세포 용해질은 항-ERK1/2 항체와 접합된 5 마이크론 바이오-플렉스 비즈 약 2000 개와 함께 실온의 진탕기에서 밤새 인큐베이션했다. 다음날, 비오틴화 포스포-ERK1/2 샌드위치 면역 검정을 수행하고, 비즈를 각 인큐베이션 동안 3번 세척하고, 그 후 50 μL의 PE-스트레파비딘을 현상 주약으로 사용했다. pERK1/2의 상대적 형광 단위는 높은 감도로 바이오-플렉스 유동 세포측정기 (프로브)에서 25 개의 비즈를 계수하여 탐지했다. IC50은 엑셀 스프레드시트 기반 프로그램을 사용하여 미처리 세포를 최대한으로, 세포가 없는 것 (비즈만 있음)을 배경으로 받아들여 계산했다. 본 발명의 화합물은 이 검정에서 현저한 억제를 보였다.

실시예 8 : Flk-1 (생쥐 VEGFR-2) 생화학적 검정

이 검정은 TR-FRET 형식으로 96-웰 불투명 평판 (코스타 3915)에서 수행했다. 반응 조건은 다음과 같다 : 10 μM ATP, 25 nM 폴리 GT-비오틴, 2 nM Eu-표지 포스포-Tyr Ab, 10 nM APC, 7 nM Flk-1 (키나아제 도메인), 1% DMSO, 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 0.1 mM EDTA, 0.015% BRIJ, 0.1 mg/mL BSA, 0.1% 메르캅토-에탄올. 반응을 효소의 첨가로 개시시켰다. 각 웰의 최종 반응 부피는 100 μL 였다. 반응 개시 약 1.5 내지 2.0시간 후에 퍼킨 엘머 빅터 V(Perkin Elmer Victor V) 멀티라벨 계수기에서 615 및 665 nM 양쪽에서 평판을 읽었다. 신호를 각 웰마다 다음과 같은 비율로 계산했다. (665 nm/ 615 nm)*10000. 본 발명의 화합물은 VEGFR2 키나아제의 현저한 억제를 보였다.

실시예 9: 생쥐 PDGFR FRET 생화학적 검정

이 검정을 96-웰 검정 평판 (코스타 3915)에 구성했다. 다음 시약을 사용했다: 유로피움-표지된 항-포스포티로신 항체 pY20 (페란드), 스트렙타비딘-APC; 폴리 GT-비오틴, 및 생쥐 PDGFR. 반응 조건은 다음과 같다 : 1 nM 생쥐 PDGFR을 검정 완충액 (50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 0.1 mM EDTA, 0.015% BRIJ 35, 0.1 mg/mL BSA, 0.1% 메르캅토에탄올) 중에 20 μM ATP, 7 nM 폴리 GT-비오틴, 1 nM pY20 항체, 5nM 스트렙타비딘-APC, 및 1% DMSO와 혼합했다. 반응을 효소의 첨가로 개시시켰다. 각 웰의 최종 반응 부피는 100 μL였다. 90분 후, 반응을 10 μL/웰의 5 μM 스타우로스포린의 첨가로 중지시켰다. 반응 중지 약 1 시간 후에 퍼킨 엘머 빅터 V 멀티라벨 계수기에서 615 및 665 nm 양쪽에서 평판을 읽었다. 신호는 각 웰에 대해 다음과 같은 비율로 계산했다 : (665 nm/615 nm) * 10000. 본 발명의 화합물은 PDGFR 키나아제의 현저한 억제를 보였다.

PDGFR 및 Flk-1 양쪽을 위한 IC₅₀ 생성을 위해, 화합물을 효소 개시 전에 첨가했다. 50 배 저장 평판을 50% DMSO/50% dH₂0 용액 중에 1:3으로 순차적으로 희석된 화합물로 만들었다. 검정에 원액을 2 μL 첨가하여 최종 화합물 농도를 1% DMSO 중에 10 μM로부터 4.56 nM가 되도록 했다. 자료는 억제 백분율로 나타냈다 : % 억제 = 100-((억제제 존재시 신호 - 배경)/ (억제제 부재시 신호 - 배경) ) * 100.

실시예 10: MDA-MB231 증식 검정

인간 유방 암종 세포 (MDA MB-231, NCI)를 37℃, 5% CO₂ (vol/vol) 하의 가습 인큐베이터 중 10% 가열-비활성화된 FBS로 보충된 표준 성장 배지 (DMEM)에서 배양했다. 세포를 96 웰 배양 접시에서 웰 당 90 μL 성장 배지 중에 웰 당 세포 3000개의 밀도로 배양했다. T_0h CTG 수치를 측정하기 위해서, 배양 24시간 후, 세포역가-Glo 발광 시약 (프로메가) 100 μL을 각 웰에 첨가하고, 실온에서 30분간 인큐베이션했다. 발광을 월락 빅터 II 기로 기록했다. 세포역가-Glo 시약은 존재하는 ATP 양에 비례하는 발광 신호의 생성 및 세포 용해를 야기하고, 이 신호는 다시 존재하는 세포 수에 직접적으로 비례한다.

실험 화합물은 10 mM 원액을 제조하기 위해 100% DMSO 중에 용해시켰다. 원 액은 0.25% DMSO 중 25 μM 실험 화합물의 실시 원액을 산출하기 위해 성장 배지 중에 1:400으로 추가적으로 희석했다. 실험 화합물을 모든 웰에서 일정한 DMSO 농도를 유지하기 위해 0.25% DMSO를 함유하는 성장 배지 중에 순차적으로 희석했다. 희석된 실험 화합물 60 μL를 각 배양 웰에 첨가하여 최종 부피를 180 μL가 되도록 했다. 개개의 실험 화합물 존재 및 부재 하의 세포를 72시간 동안 인큐베이션하고, ATP 의존 발광을 측정하여 상술한 바와 같이 T_72h 수치를 산출했다. 선택적으로, IC₅₀ 수치는 최소 제곱법 분석 프로그램으로 화합물 농도 대 억제 백분율을 사용하여 결정할 수 있다.

% 억제 = [l - (T_{72h test} - T_0h)/ (T_{72h ctrl} - T_0h)] x 100,

위의 식에서

T_{72h test} = 실험 화합물 존재 하에 72 시간에서의 ATP 의존 발광이고,

T_{72h ctrl} = 실험 화합물 부재 하에 72 시간에서의 ATP 의존 발광이고,

T_0h = 기준시점에서의 ATP 의존 발광이다.

본 발명의 화합물은 이 검정을 이용하여 증식의 현저한 억제를 보였다.

실시예 11: AoSMC 세포 중의 pPDGFR-베타 샌드위치 ELISA

100K P3-P6 대동맥 SMC를 12-웰 군집의 각 웰에서 표준 세포 배양 기술을 사용하여 1000 μL 부피 웰 SGM-2 중에 배양했다. 다음날, 세포를 1000 μL D-PBS로 한번 세척하고, 그 후 0.1 % BSA를 함유하는 500 μL SBM (평활근 세포 기초 배지) 중에 밤새 혈청 기아시켰다. 화합물은 10 배 희석 단계를 거쳐 DMSO 중에 10 μM으로부터 1 nM으로 분포하는 분량으로 희석했다 (최종 DMSO 농도 0.1%). 구 배지를 개수대에 빠르게 뒤집어서 제거하고, 그 후 37℃에서 1시간 동안 상응하는 웰의 세포에 각 희석액 100 μL을 첨가했다. 그 후 세포를 37℃에서 7분간 10 ng/mL PDGF-BB 리간드로 자극했다. 배지를 가만히 따르고 프로테아제 억제제 정(완전함, EDTA-없음) 및 0.2 mM Na 바나드산염이 있는 등장 용해 완충액 150 μL을 첨가했다. 세포를 저온실 중의 진탕기에서 4℃에서 15분간 용해시켰다. 용해질을 에펜도르프 튜브에 넣고 거기에 아가로스-접합된 항-PEGFT-베타 항체 15 μL를 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션했다. 다음날, 비즈를 PBS 50-부피 중에 세 번 세척하고, lx LDS 표본 완충액 중에 5분간 끓였다. 표본은 3 내지 8% 경사 트리스-아세테이트 젤에서 내리고, 니트로셀룰로스 위로 옮겼다. 막을 차단 완충액 중 항-포스포-PDGFR-b (857번 Tyr) 항체 (1:1000 희석) 중에서 1시간 동안 인큐베이션하기 전에, 1% BSA/TBS-T 중에 1시간 동안 차단시켰다. TBS-T 중에 세 번 세척한 후에, 막을 염소 항-토끼 HRP IgG (1:25000 희석) 중에 1시간 동안 인큐베이션했다. ECL 기질 첨가 전에 세 번 더 세척했다. 막을 하이퍼필름-ECL에 노출시켰다. 그 후, 막을 벗겨 PDGFR-베타 총량을 위해 항-PDGFR-베타 항체로 재탐침화했다.

표 1은 p38 키나아제, PDGFR 키나아제 및 VEGFR2 키나아제에 대한 시험관 내 키나아제 생화학적 검정 결과를 나타낸다. 이 세 키나아제 목표물은 모두 혈관신생으로 이어지고 종양 조직에 혈액을 공급하는 버팀질 활성 및 내피 세포 증식에 관여한다.

하기 표 2는 raf 키나아제 활성을 위한 두 개의 세포적 검정 결과, 즉 (i) MDA-MB231 세포 중 pERK 억제, raf 키나아제 활성의 기계적 판독, 및 (ii) MDA-MB231 세포의 증식 검정, raf 키나아제 활성의 기능적 검정 결과를 나타냈다. 또한, 표 2는 PDGFR 키나아제 억제의 기계적 판독인, 대동맥 평활근 세포에서의 PDGFR-베타의 PDGFR에 의한 인산화 결과를 나타낸다.

전체적으로, 본 발명의 화합물은 혈관신생 및 종양 세포 증식의 억제의 독특한 조합을 제공한다. 또한 모두 골다공증, 염증성 질환, 및 암을 포함하는 과증식성 질환 치료를 위한 흥미로운 분자적 목표물인, raf, p38, PDGFR 및 VEGFR-2와 같은 몇몇 핵심 키나아제 목표물에 대한 개선된 억제 효과를 가진다.

당업자는 선행 정보 및 당업계에서 입수가능한 정보를 이용하여 본 발명을 최대범위로 이용할 수 있다고 믿는다. 여기에 제시한 본 발명의 취지 또는 권리 범위를 벗어나지 않고 본 발명에 변화 및 변형을 가할 수 있다는 것은 보통의 기술을 가진 당업자에게 명백하다. 상기 및 하기에서 인용된 모든 공보, 출원 및 특허들은 여기에 참고자료로 넣었다.

상기 및 하기에 제시된 주제 제목들은 특정한 정보가 본 출원에서 발견될 수 있다는 것을 의미하나, 이러한 주제에 대한 정보가 발견될 수 있는 본 출원에서 유일한 출처일 것을 의미하는 것은 아니다.

Claims (54)

1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염 또는 단리된 입체이성질체.

   <화학식 I>

   
2. 제1항에 있어서,

   a) 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔 술폰산 (토실레이트 염), 1-나프탈렌 술폰산, 2-나프탈렌 술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 락트산, 옥살산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 벤조산, 살리실산, 페닐아세트산 또는 만델산인 유기산 또는 무기산의 염기성 염, 또는

   b) 알칼리 금속 양이온, 알칼리 토금속 양이온, 암모늄 양이온, 지방족 치환된 암모늄 양이온 또는 방향족 치환된 암모늄 양이온을 함유하는 유기 염기 또는 무기 염기의 산성 염인, 화학식 I의 화합물의 제약학상 허용되는 염.
3. 4-{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-피리딘-2-카르복실산 메틸아미드인 화합물 또는 그의 염.
4. 제3항에 있어서, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔 술폰산 (토실레이트 염), 1-나프탈렌 술폰산, 2-나프탈렌 술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 락트산, 옥살산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 벤조산, 살리실산, 페닐아세트산 또는 만델산과 같은 유기산의 염기성 염인, 화합물의 제약학상 허용되는 염.
5. N-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-N'-2-플루오로-(4-(2-(N-메틸카르바모일)-4-피리딜옥시)페닐) 우레아의 염산염, 벤젠술폰산염 또는 메탄술폰산염인 화합물.
6. 제1항의 화합물 및 생리학상 허용되는 담체를 포함하는, 암성 세포 성장의 치료를 위한 제약 조성물.
7. 제3항의 화합물 및 생리학상 허용되는 담체를 포함하는, 암성 세포 성장의 치료를 위한 제약 조성물.
8. 제1항의 화합물 및 생리학상 허용되는 담체를 포함하는, 종양 성장, 망막병증, 허혈성 망막-정맥 폐쇄증, 미숙아 망막병증, 노화성 황반 변성, 류마티스성 관절염, 건선, 수포성 유천포창, 다형 홍반, 또는 포진 피부염을 포함하는 표피하 수포 형성과 관련된 수포성 질환, 류마티스성 관절염, 골관절염, 패혈성 관절염, 종양 전이, 치주 질환, 각막 궤양, 단백뇨, 죽상경화판으로 인한 심장 혈전증, 동맥류성 대동맥, 수태 조절, 이영양성 수포성표피 박리증, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골 손실, MMP 활성 매개 골감소증, 악관절 질환 또는 탈수초성 신경계 질환의 치료를 위한 제약 조성물.
9. 제1항의 화합물 및 생리학상 허용되는 담체를 포함하는, 종양 성장, 망막병증, 허혈성 망막-정맥 폐쇄증, 미숙아 망막병증, 노화성 황반 변성, 류마티스성 관절염, 건선, 수포성 유천포창, 다형 홍반, 또는 포진 피부염을 포함하는 표피하 수포 형성과 관련된 수포성 질환을, 류마티스열, 뼈 흡수, 폐경후 골다공증, 패혈증, 그람 음성 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 전신 염증성 반응 증후군, 염증성 장질환 (크론병 및 궤양성 대장염), 야리시-헤륵스하이머 (Jarisch-Herxheimer) 반응, 천식, 성인성 호흡 곤란 증후군, 급성 폐섬유성 질환, 폐사르코이드증, 알레르기성 호흡기병, 규소폐증, 광부 진폐증, 폐포 손상, 간부전, 급성 염증 중의 간질환, 중증 알코올성 간염, 말라리아 (열대열원충 말라리아 및 뇌 말라리아), 인슐린 비의존성 당뇨병 (NIDDM), 울혈성 심부전, 심장 질환에 따르는 손상, 죽상경화증, 알츠하이머병, 급성 뇌염, 뇌 손상, 다발성 경화증 (다발성 경화증 중 탈수초화 및 희소돌기아교세포 손실), 진행성 암, 림프성 악성종양, 췌장염, 감염, 염증 및 암 중 악화된 상처 회복, 골수형성이상증후군, 전신 홍반 루푸스, 담즙성 간경변, 장 괴사, 모노클로날 항체의 투여에 따르는 방사선 손상/독성, 숙주 대 이식편 반응 (허혈성 관류 손상 및 신장, 간, 심장, 및 피부의 동종이식 거부), 폐 동종이식 거부 (폐색성 기관지염) 및 고관절 전치환으로 인한 합병증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 다른 상태와 함께 치료하기 위한 제약 조성물.
10. 제1항의 화합물 및 생리학상 허용되는 담체를 포함하는, 종양 성장, 망막병증, 당뇨성 망막병증, 허혈성 망막-정맥 폐쇄증, 미숙아 망막병증, 노화성 황반 변성, 류마티스성 관절염, 건선, 표피하 수포 형성, 수포성 유천포창, 다형 홍반 및 포진 피부염과 관련된 수포성 질환을, 결핵, 소화 궤양병 중의 헬리코박터 파일로리 (Helicobacter pylori) 감염, 트리파노소마 크루지 (Trypanosoma cruzi) 감염에 기인한 샤가(Chaga) 병, 대장균 감염에 기인한 시가양 독소의 효과, 포도상구균 감염에 기인한 장독소 A의 효과, 수막구균 감염, 및 보렐리아 부르그도페리 (Borrelia burgdorferi), 트레포네마 펠리덤 (Treponema pallidum), 시토메갈로바이러스, 인플루엔자 바이러스, 테일러씨 (Theiler's) 뇌척수염 바이러스 및 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)의 감염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 감염성 질환과 함께 치료하기 위한 제약 조성물.
11. 제6항에 있어서, N-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-N'-2-플루오로-(4-(2-(N-메틸카르바모일)-4-피리딜옥시)페닐) 우레아의 제약학상 허용되는 염 및 생리학상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
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21. 제1항의 화합물을 포함하는, 암의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물.
22. 제21항에 있어서, 1종 이상의 추가의 항암제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
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28. 제22항에 있어서, 추가의 항암제가 아스파라기나제, 블레오마이신, 카르보플라틴, 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 콜라스파제, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신 (아드리아마이신), 에피루비신, 에토포시드, 5-플루오로우라실, 헥사메틸멜라민, 히드록시우레아, 이포스파미드, 이리노테칸, 류코보린, 로무스틴, 메클로르에타민, 6-메르캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 미토마이신 C, 미톡산트론, 프레드니솔론, 프레드니손, 프로카르바진, 랄록시펜, 스트렙토조신, 타목시펜, 티오구아닌, 토포테칸, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 아미노글루테티미드, L-아스파라기나아제, 아자티오프린, 5-아자시티딘 클라드리빈, 부술판, 디에틸스틸베스트롤, 2',2'-디플루오로데옥시시티딘, 도세탁셀, 에리트로히드록시노닐 아데닌, 에티닐 에스트라디올, 5-플루오로데옥시우리딘, 5-플루오로데옥시우리딘 모노포스페이트, 플루다라빈 포스페이트, 플루옥시메스테론, 플루타미드, 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 이다루비신, 인터페론, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 미토탄, 파클리탁셀, 펜토스타틴, N-포스포노아세틸-L-아스파테이트 (PALA), 플리카마이신, 세무스틴, 테니포시드, 테스토스테론 프로피오네이트, 티오테파, 트리메틸멜라민, 우리딘, 및 비노렐빈, 옥살리플라틴, 젬시타빈, 카페시타빈, 에포틸론 및 그의 천연 또는 합성 유도체, 토시투모마브, 트라베덱틴, 및 테모졸로미드, 트라스투주마브, 세툭시마브, 베바시주마브, 페르투주마브, ZD-1839 (이레사), OSI-774 (타르세바), CI-1033, GW-2016, CP-724,714, HKI-272, EKB-569, STI-571 (글리벡), PTK-787, SU-11248, ZD-6474, AG-13736, KRN-951, CP-547,632, CP-673,451, CHIR-258, MLN-518, AZD-2171, PD-325901, ARRY-142886, 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA), LAQ-824, LBH-589, MS-275, FR-901228, 보르테조미브 및 CCI-779로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
29. 제22항에 있어서, 추가의 항암제가 DNA 토포이소머라아제 I 및 II 억제제, DNA 중간삽입물질, 알킬화제, 항대사체, 세포 주기 차단제, 미세관 분해제 및 Eg5 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포독성 제제인 제약 조성물.
30. 제22항에 있어서, 추가의 항암제가 성장 인자 수용체 신호의 억제제, 히스톤 데아세틸라아제 억제제, PKB 경로의 억제제, Raf/MEK/ERK 경로의 억제제, mTOR 경로의 억제제 및 프로테아좀 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
31. 제1항의 화합물을 포함하는, 포유동물의 류마티스열, 뼈 흡수, 폐경후 골다공증, 패혈증, 그람 음성 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 전신 염증성 반응 증후군, 염증성 장질환 (크론병 및 궤양성 대장염), 야리시-헤륵스하이머 반응, 천식, 성인성 호흡 곤란 증후군, 급성 폐섬유성 질환, 폐사르코이드증, 알레르기성 호흡기병, 규소폐증, 광부 진폐증, 폐포 손상, 간부전, 급성 염증 중의 간질환, 중증 알코올성 간염, 말라리아 (열대열원충 말라리아 및 뇌 말라리아), 인슐린 비의존성 당뇨병 (NIDDM), 울혈성 심부전, 심장 질환에 따르는 손상, 죽상경화증, 알츠하이머병, 급성 뇌염, 뇌 손상, 다발성 경화증 (다발성 경화증 중 탈수초화 및 희소돌기아교세포 손실), 진행성 암, 림프성 악성종양, 췌장염, 감염, 염증 및 암 중 악화된 상처 회복, 골수형성이상 증후군, 전신 홍반 루푸스, 담즙성 간경변, 장 괴사, 건선, 모노클로날 항체 투여에 따르는 방사선 손상/독성, 숙주 대 이식편 반응 (허혈성 관류 손상 및 신장, 간, 심장, 및 피부의 동종이식 거부), 폐 동종이식 거부 (폐색성 기관지염) 또는 고관절 전치환으로 인한 합병증 중 하나 이상의 상태의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물.
32. 제1항의 화합물을 포함하는, 포유동물의 결핵, 소화 궤양병 중의 헬리코박터 파일로리 감염, 트리파노소마 크루지 감염에 기인한 샤가 병, 대장균 감염에 기인한 시가양 독소의 효과, 포도상구균 감염에 기인한 장독소 A의 효과, 수막구균 감염, 및 보렐리아 부르그도르페리, 트레포네마 펠리덤, 사이토메갈로바이러스, 인플루엔자 바이러스, 테일러씨 뇌척수염 바이러스 및 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)의 감염 중 하나 이상의 상태의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물.
33. 유효량의 제1항의 화합물을 포함하는, 포유동물의 골다공증 또는 염증의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물.
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37. 유효량의 제1항 또는 제2항의 화합물을 포함하는, 대상체 또는 그의 세포에서 종양 퇴행을 일으키기 위한 제약 조성물.
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39. 제37항에 있어서, 림프혈관신생을 억제하기 위한 제약 조성물.
40. 제37항에 있어서, 혈관신생을 억제하기 위한 제약 조성물.
41. 제37항에 있어서, 림프혈관신생 및 혈관신생을 억제하기 위한 제약 조성물.
42. 제37항에 있어서, 조혈모세포의 증식을 자극하기 위한 제약 조성물.
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44. 소정 상태를 가진 대상 또는 세포로부터 분리된 세포 또는 세포 추출물을 포함하는 샘플에서 raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38 또는 flt-3의 발현 또는 활성을 측정하는 것을 포함하며, 상기 상태에서 발현 또는 활성이 정상 대조군과 비교하여 다른 경우에 상기 상태가 제1항의 화합물 또는 제2항의 염에 의해 조절될 수 있는 것으로 결정하는 것인, 상기 상태가 상기 화합물 또는 염으로 조절될 수 있는지 여부를 결정하는 데 필요한 정보를 제공하는 방법.
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46. 대상체로부터 분리된 샘플에서 raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38 또는 flt-3의 발현 또는 활성을 측정하고, 상기 발현 또는 활성에 대한 제1항의 화합물 또는 제2항의 염의 효과를 결정하는 것을 포함하는, 장애의 치료에 있어서 상기 화합물 또는 염의 효능을 평가하는 방법.
47. 대상체로부터 분리된 샘플에서 raf, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-베타, p38 또는 flt-3의 존재를 확인하고, 상기 샘플을 제1항의 화합물 또는 제2항의 염과 접촉시키고, 상기 화합물 또는 염이 상기 샘플에 결합하는지 여부를 확인하는 방법.
48. 제37항에 있어서, 종양 세포 증식 및 혈관신생을 억제하는 데 효과적인 양인 유효량의 상기 화합물을 포함하는, 치료가 필요한 대상체의 종양을 치료하기 위한 제약 조성물.
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52. 4-{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-피리딘-2-카르복실산 아미드,

    4-{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-1-히드록시-피리딘-2-카르복실산 메틸아미드, 또는

    4-{4-[3-(4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐)-우레이도]-3-플루오로페녹시}-1-히드록시-피리딘-2-카르복실산 아미드

    로부터 선택되는 화합물.
53. 제1항의 화합물을 포함하는, 류마티스성 관절염, COPD, 크론병 및 건선으로부터 선택되는 염증성 장애의 치료 또는 예방을 위한 제약 조성물.
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