JP3773120B2 - 酵素により活性化される改良プロドラッグ - Google Patents

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Description

【０００１】
本発明は、酵素的に切断可能な、低いミカエリス−メンテン定数（Ｋｍ）を有するプロドラッグに関する。
プロドラッグは、非毒性で薬動力学的に不活性であるが、インビボにおいて薬理学的に活性な薬物に変換可能な化合物と定義できる。
本発明は、インビボにおける薬物の部位特異的送達を取り扱う薬物標的化の分野に関するものである。部位特異的送達は好都合に、薬物の選択性を増大させ、それらの望ましくない副作用を低減させる。
【０００２】
部位特異的送達を達成するための一つの可能性あるアプローチには、その部位に予め局在する酵素、酵素から誘導されるムテイン、触媒抗体、抗体酵素接合体または融合蛋白質のようなプロドラッグ切断触媒を用いて細胞毒性薬物に部位特異的に活性化することができる、非毒性プロドラッグの適用がある。
このアプローチは、プロドラッグによる薬物送達の利点（すなわち、安定性の増大、溶解度の調整、投与経路の改良、より好ましい分布、薬物動力学的改良、バイパッシング抵抗性；T.A. Connors, Xenobiotica, 16, 975-988, 1986）と、触媒要素によって仲介される好ましい腫瘍特異的活性化とを兼備させる。プロドラッグの活性化のための外因性酵素またはポリクローナル抗体酵素接合体の使用は、Graffi（ドイツ特許公開明細書２２ １２ ０１４）およびPhilpottら（J. Immunol. 111, 921, 1973）によってはじめて開拓されたものである。
【０００３】
さらに最近になって、GraffiおよびPhilpottの最初の教示が、例証され、また、プロドラッグ活性化触媒としてのモノクローナル抗体酵素接合体（Bagshaweら，Brit. J. Cancer, 58, 700, 1988；Senterら，Bioconjugate Chem. 4,3-9, 1993）または融合蛋白質（Bossletら, Brit. J. Cancer, 65, 234-238, 1992；Goshornら, Cancer Res., 53, 2123-2127, 1993）の使用により改良された。
【０００４】
これらの改良にもかかわらず、これまでに記載されているシステムには、臨床的応用に際して、いくつかの重大な欠点がある。すなわち、
ａ） 化学的カップリングで製造されたモノクローナル抗体酵素接合体は、重大な欠点として、抗体残基と酵素の外来性起源によりヒトで強力な免疫原性を有する（Bagshaweら，Disease Markers, 9:233-238, 1991）。この高度な免疫原性の結果として、ヒトにおける反復適用はきわめて限られた程度においてのみ可能である。
ｂ） 組換えＤＮＡ技術によって製造された非人化結合残基および外来性酵素からなる融合蛋白質は同様に、ヒトに免疫原性で、反復適用が必要であれば、モノクローナル抗体酵素接合体の場合に匹敵する欠点を有する。
【０００５】
ｃ） 人化結合残基および外来性酵素からなる融合蛋白質は多分ヒトにそれほど免疫原性を示さず、ヒトにおける反復処置サイクルが許容される可能性は高いと思われる。しかしながら、ヒト融合蛋白質には２つの大きな欠点がある。すなわち高いターンオーバー速度（Ｖｍａｘ）と低いミカエリス−メントン定数（Ｋｍ）をもつ外来性酵素に比較して、ヒト酵素残基のかなり低いと思われるターンオーバー速度と有意な触媒効果を得るために必要なかなり高いプロドラッグ（基質）濃度である。
【０００６】
ヒト酵素残基のもつ固有の性質によってもたらされるるヒト融合蛋白質のこの限界（低いＶｍａｘおよび高いＫｍ）は、現在の技術水準における方法では、酵素の活性部位におけるランダムな突然変異誘発（Munirら，PNAS USA，90：4012-4016, 1993）によって、きわめて限られた程度（ファクター４）しか克服し得ないのである。
【０００７】
驚くべきことに、インビボにおけるプロドラッグの活性化に適用可能な大部分のヒト酵素の固有の性質である高いＫｍによる限界は、新規なプロドラッグによって克服できることが見出されたのである。
これらのプロドラッグは、式Ｉ
Ｓ−Ｚ−Ｗ (Ｉ)
（式中、Ｗは薬理学的に活性な物質であり、Ｚは自己破壊性スペーサーまたは結合を示し、Ｓは天然の酵素基質と比較して少なくとも２倍低いミカエリス−メンテン定数でＺ−Ｓ結合が酵素的に切断できるような残基である）の構造を有する。
【０００８】
本発明のプロドラッグは、酵素分析に用いられる天然もしくは標準基質または適当な現技術水準におけるプロドラッグ（ＷＯ ９２／１９６３９）の場合より有意に低いプロドラッグモル濃度において、酵素によって切断されるという共通の特性を有する。したがって、これらは低Ｋｍプロドラッグと命名する。
本発明のプロドラッグの他の共通の性質には、直接またはスペーサー残基(Ｚ)を介して薬理学的活性物質（Ｗ）に連結できる重要な構造成分として、修飾された競合的酵素活性阻害物質（Ｓ）を有する。スペーサーは自己破壊性であることが好ましく、Ｓ−Ｚ結合の酵素的切断後、薬理学的に活性な物質を発生させる。自己破壊性スペーサーとは、２つの結合で２つの分子に結合し、第一の分子との結合が切断された場合には、それ自体を第二の分子からも除去する残基と定義される。
【０００９】
好ましい低Ｋｍプロドラッグはヒトグリコシダーゼに対する基質であり、一般式II：
【化５】
Figure 0003773120
（式中、
Ｒは互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、ＣＨ2−ＣＯＯＨ、ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、ＰＯ3Ｈ2、ＣＨ2−ＰＯ3Ｈ2またはＣＨＯＨ−ＰＯ3Ｈ2であり、
ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、
ｍは０または１であり、
Ｚは自己破壊性スペーサーまたは結合を示し、
Ｗは薬理学的に活性な物質を意味する。
【００１０】
ただし、β−Ｄ−グルクロニド−Ｚ−アントラサイクリン化合物：
【化６】
Figure 0003773120
は包含しない）の構造を有する。
【００１１】
とくに好ましい低Ｋｍプロドラッグは、β−グルクロニダーゼに対する基質であり、一般式III
【化７】
Figure 0003773120
〔式中、
ＹはＣＯＯＨ、ＣＨ2−ＣＯＯＨ、ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、ＰＯ3Ｈ2、ＣＨ2−ＰＯ3Ｈ2またはＣＨＯＨ−ＰＯ3Ｈ2であり、
ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、
Ｒは互いに独立に、Ｆ、ＮＨ2、ＨまたはＯＨであり、
ｍは０または１であり、
【００１２】
Ｚは結合または自己破壊性スペーサー、好ましくは式
−Ｙ〔−Ｃ(＝Ｙ)−Ｘ−〕p−Ｖ(Ｒ)n−Ｘ−Ｃ(＝Ｙ)−
（式中、
Ｖは、芳香族基もしくはヘテロ芳香族基または共役二重結合を有する脂肪族基あるいはアミノ酸残基であって、グリコシル残基の切断後には循環し、好ましくは５〜２０個の炭素原子および０〜４個のヘテロ原子を有し、この場合ヘテロ原子はＮ、ＯまたはＳを意味し、Ｒで置換されていて、
Ｒは互いに独立にＨ、メチル、メトキシ、カルボキシ、メチルオキシカルボニル、ＣＮ、ヒドロキシ、ニトロ、フルオロ、クロロ、ブロモ、スルホニル、スルホンアミドまたはスルホン（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルアミドであり、
ｐは、０または１であり、
ｎは、０〜２５の整数、好ましくは１または２であり、
Ｘは、Ｏ、ＮＨ、メチレンオキシ、メチレンアミノまたはメチレン(Ｃ1〜Ｃ4)−アルキルアミノであり、
Ｙは、ＯまたはＮＨである）で示される残基であり、
【００１３】
Ｗは、薬理学的に活性な物質、好ましくは、ドキソルビシン、４′−エピ−ドキソルビシン、４−もしくは４′−デソキシ−ドキソルビシン、もしくはエトポシドのようなアントラサイクリン、Ｎ−ビス−（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシアニリン、４−ヒドロキシシクロホスファミド、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、テルフェナジン、テルブタリン、フェノテロール、サルブタモール、ムスカリン、オキシフェンブタゾン、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、５−フルオロウラシル、５−フルオロシチジン、５−フルオロウリジン、メトトレキセート、ジクロフェナック、フルフェナム酸、４−メチルアミノフェナゾン、テオフィリン、ニフェジピン、マイトマイシンＣ、マイトキサントロン、カンプトテシン、ｍ−ＡＭＳＡ、タキソール、ノコダキソール、コルヒチン、シクロホスファミド、ラケルマイシン、シスプラチン、メルファラン、ブレオマイシン、ナイトロジェンマスタード、ホスホラミドマスタード、ケルセチン、ゲニスタイン、エルブスタチン、トリホスチン、ロヒツキン誘導体（(−)−シス−５,７−ジヒドロキシ−２−（２−クロロフェニル）−８−〔４−（３−ヒドロキシ−１−メチル）−ピペリジニル〕−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；ＥＰ８９１１９７１０.５）、レチノイン酸、酪酸、ホルボールエステル、ＤＳＭＯ、アクラシノマイシン、プロゲステロン、ブセレリン、タモキシフェン、ミフェプリストン、オナプリストン、Ｎ−（４−アミノブチル）−５−クロロ−２−ナフタレンスルホンアミド、ピリジニルオキサゾール−２−オン、キノリル−、イソキノリル−オキサゾロン−２−オン、スタウロスポリン、エタノールアミン、ベラパミール、フォルスコリン、１,９−ジデオキシフォルスコリン、キニン、キニジン、レセルピン、１８−Ｏ−（３,５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンゾイル）レセルペート、ロニダミン、ブチオニン、スルフォキシミン、ジエチルジチオカルバメート、シクロスポリンＡ、アザチオプリン、クロラムブシル、Ｎ−（４−トリフルオロメチル）−フェニル−２−シアノ−３−ヒドロキシ−クロトン酸アミド（ＷＯ ９１／１７７４８）、１５−デオキシスペルグアリン、ＦＫ５０６、イブプロフェン、インドメタシン、アスピリン、スルファサラジン、ペニシラミン、クロロキン、デキサメサゾン、プレドニソロン、リドカイン、プロパフェノン、プロカイン、メフェナム酸、パラセタモール、４−アミノフェナゾン、ムスコシン、オルシプレナリン、イソプレナリン、アミロライド、ｐ−ニトロフェニルグアニジノベンゾアートまたはそれらのさらに１個もしくは２個以上のヒドロキシ、アミノもしくはイミノ基で置換され、ヒドロキシ、アミノもしくはイミノ基を介してＺに連結する誘導体である。
【００１４】
ただし、β−Ｄ−グルクロニド−Ｚ−アントラサイクリン化合物：
【化８】
Figure 0003773120
は包含しない〕の構造を有する。
【００１５】
本出願における酵素は、触媒抗体をも意味する。本明細書に記載された化合物は従来技術の方法によって製造できる。
ヒトβ−グルクロニダーゼに選択的な低Ｋｍプロドラッグは、以下の項に記載する。プロドラッグＡ（例１）は、競合的β−グルクロニダーゼ阻害物質、サッカロラクトン：
【化９】
Figure 0003773120
からの誘導体とみることもできる。
【００１６】
実施例１
プロドラッグＡ、Ｂ、Ｃ：
【化１０】
Figure 0003773120
プロドラッグＡ：Ｒ＝ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ
プロドラッグＢ：Ｒ＝ＣＨ2−ＣＯＯＨ
プロドラッグＣ：Ｒ＝ＣＯＯＨ
【００１７】
プロドラッグＡに関する実験操作：
１,２,５−トリ−Ｏ−アセチル−アルデヒド−Ｄ−グルクロノ−３,６−ラクトン（化合物７）の製造
【化１１】
Figure 0003773120
３,６−グルカロラクトン（化合物５）(４５ｇ）を乾燥ピリジン（２２５ml）とＡｃＯ2（１８５ml）の冷却（０〜５℃）混合物に徐々に加えた。添加時は内温を５℃に維持し、すべてのラクトンが溶解したのち、反応混合物をさらに２時間撹拌した。この無色の溶液をついで、水と砕氷の混合物３Ｌ中に注ぎ、約３時間激しく撹拌した。沈殿を集め、水で洗浄し、乾燥すると、固体が単離された。これは、αおよびβトリ−Ｏ−アセチル−グルクロノラクトン（化合物７）の混合物７０ｇを含有する。この混合物をそのまま次工程に使用した。
【００１８】
２,５−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルクロノ−３,６−ラクトン−α−フラノシルブロミド（化合物８）の製造
化合物７（７０ｇ，２３.３ミリモル）のジクロロメタン（２００ml）中溶液を撹拌しながら暗所窒素雰囲気下に保持し、これに臭化チタニウム（１６.６ｇ，４５ミリモル）を添加した。一夜撹拌後、さらにＴｉＢｒ4（８.３ｇ，２２ミリモル）を加えた。さらに２４時間後に反応混合物をジクロロメタン(１５０ml)で希釈し、有機溶液を砕氷−水中に注いだ。有機層を分離し、水で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発させた。化合物８（６５ｇ）が次工程に用いるのに十分純粋に得られた。
【００１９】
（２−ニトロ−４−ホルミルフェニル）−２,５−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロノ−３,６−ラクトンフラノシド（化合物９）の製造
化合物８（１５ｇ，５０ミリモル）と４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒドから、ＷＯ ９２／１９６３９に既に記載されている操作により製造された。この操作により、１２ｇ（６１.６％）の化合物９が得られた。
【００２０】
（２−ニトロ−４−ホルミルフェニル）−２,３,５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート（化合物１ａ）の製造
メタノール（１２５ml）中固体水酸化ナトリウム（５０mg）の溶液に、化合物９（１０ｇ）を加えた。この溶液を室温で４時間撹拌し、減圧下に蒸発させた。得られた粗製の混合物を直ちに無水ピリジン（５０ml）に溶解した。０℃に冷却したのち、無水酢酸（４０ml）を加え、続いて反応混合物をさらに１８時間撹拌した。ジクロロメタンで抽出し、以下慣用方法により後処理すると、化合物１ａ、６.６ｇ（総収率６５％）が得られた。
【００２１】
（２−ニトロ−４−ヒドロキシメチルフェニル）−２,３,５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート（化合物２ａ）の製造
化合物１ａ（６ｇ）を、ＷＯ ９２／１９６３９に既に記載されている操作に従い、水素化ホウ素ナトリウムで還元して製造された。これにより５.６ｇ（９５％）の化合物２ａが得られた。
【００２２】
４−(２,３,５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−メチルグルクロノフラノシル)−３−ニトロ−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボネート（化合物３ａ）の製造
【化１２】
Figure 0003773120
化合物２ａ（６ｇ）を、ＷＯ ９２／１９６３９に既に記載されている操作に従い、クロロギ酸４−ニトロフェニルエステルとカップリングさせて（収率７５％）製造した。
【００２３】
プロドラッグＡの製造：
プロドラッグＡは、化合物３ａとドキソルビシンから、メタノ−ル中ナトリウムメトキシドついで水酸化ナトリウムで処理して製造された（収率８３％）。
【００２４】
実施例２
４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５−ホスホニル−β−Ｄ−キシロピラノシド（１６）の製造：
【化１３】
Figure 0003773120
アリル６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２）。アリルα−Ｄ−グルコピラノシド（１）（R.E. Wing & J.N. BeMiller, Carbohydr. Res., 1969, 10, 441に従って製造）（１２.５ｇ，５６.８ミリモル）とトリフェニルメチルクロリド（２０.０ｇ，７１.７ミリモル）の乾燥ピリジン（１２０ml）中溶液を室温で１２時間、６０℃で１時間撹拌した。トリフェニルメチルクロリド（１２.０ｇ，４３.０ミリモル）の添加後、溶液を、出発原料がすべて消失するまで（３〜４時間）６０℃で１時間撹拌した。まだ温い溶液にＨ2Ｏ（１２０ml）を加えた。ＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を合せて、１Ｍ Ｈ2ＳＯ4水溶液および食塩水で抽出し、有機層を蒸発させ、ついで、ＦＣ（ＳｉＯ2、４００ｇ、トルエン／アセトン ２：１→トルエン／アセトン １：１）に付すと、２３.３ｇ（９０％）の２が灰色のガラス状物質として得られた。
【００２５】
アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド（３）。２（１５.９ｇ，３４.３ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（３９０ml）中溶液をＮａＨの懸濁液（６.９ｇ，約１５０ミリモル）により、室温で１０分間処理した。ＢｕＢｒ（２５.０ml，２１１ミリモル）およびＢｕ4ＮＩ（１.９ｇ，５.１ミリモル）を添加した。溶液を、ＴＬＣによって反応の完結が指示されるまで（約１２時間）還流下に加熱した。Ｅｔ2Ｏを加えて、溶液をシリカを通してろ過した。ろ液を蒸発させ、残留物をＦＣ（ＳｉＯ2，６００ｇ，Ｅｔ2Ｏ／ヘキサン １：９→Ｅｔ2Ｏ）に付すと、２１.４ｇ（８５％）の３が得られた。Rf（EtOAc／ヘキサン １：４）0.36。13C-NMR（75MHz，C6D6）：63.46(t)；68.49(t)；71.33(d)；72.96(t)；75.12(t)；75.74(t)；78.93(d)；81.40(d)；82.85(d)；86.95(s)；96.44(d)；117.21(t)；127.29〜129.32(d，数本)；134.73(d)；139.11(s)；139.32(s)；139.89(s)；144.78(s, ３倍の強度)。
【００２６】
アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（４）。ＭｅＣＮ（９０ml）中ＢＦ3・ＯＥｔ2（５.０ml，３９.８ミリモル）の溶液を、乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１５０ml）中３（１３.４ｇ，１８.３ミリモル）とＥｔ3ＳｉＨ（１４.５ml，９１.５ミリモル）の冷（０℃）溶液に滴加した。１０分後に、飽和ＮａＨＣＯ3（１００ml）およびＨ2Ｏ（２００ml）を添加した。混合物を激しく振盪し、水層をＣＨ2Ｃｌ2で抽出し、有機層を合せて食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、蒸発させた。ＦＣ（ＳｉＯ2，４００ｇ，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：５→ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）に付すと、８.３５ｇ（９３％）の４が得られた。Ｒf（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：２）０.２０。
【００２７】
アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラヌロニドtert−ブチルエステル（５）。ＤＭＦ／ＣＨ2Ｃｌ2 ４：１（１８０ml）ならびにピリジン（１１.０ml，１４２ミリモル）中ＣｒＯ3（６.８ｇ，６.８ミリモル）の溶液を予め室温で、３０分間激しく撹拌したのち、これに、４（８.３５ｇ，１７.０ミリモル）のＤＭＦ／ＣＨ2Ｃｌ2 ４：１（４５ml）中溶液を添加した。Ａｃ2Ｏ（１３.０ml，１１.８ミリモル）、およびtert−ＢｕＯＨ（３４.０ml，３６２ミリモル）を加えたのち、溶液を室温で９時間撹拌し、ついでメタノール（３０ml）を加えた。３０分後に，混合物の容量を１／４に濃縮して、Ｅｔ2Ｏ（２５０ml）で希釈した。Ｎａ2ＳＯ4およびＳｉＯ2（３００ｇ）を通してろ過し、Ｅｔ2Ｏで溶出し、蒸発させて、ＦＣ（ＳｉＯ2，３３０ｇ，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：９）に付すと、６.３０ｇ（６６％）の５が得られた。Rf（EtOAc／ヘキサン １：２）：0.63。13C-NMR（50MHz，CDCl3）：27.94（q，３倍の強度）；68.69(t)；71.44(d)；73.43(t)；75.89(t)；79.51(d)；79.73(d)；81.45(d)；82.12(s)；96.78(d)；118.83(t)；127.66〜128.50（d，数本）；133.56(d)；138.06(s)；138.21(s)；138.69(s)；168.84(s)。
【００２８】
アリル２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラヌロニド（６）。ＨＣＯＯＨ（１５０ml）中に５（６.５２ｇ，１１.１ミリモル）を溶解した液を３０分間室温で撹拌した。これをついで蒸発させるとクロマトグラフィー的に純粋な５.６０ｇ（９９％）の６が得られた。Rf（EtOAc／ヘキサン／HCOOH １：１：痕跡)：0.47。13C-NMR（75MHz，CDCl3）：68.88(t)；69.86(d)；73.40(t)；75.33(t)；75.06(t)；79.14(d)；79.26(d)；81.42(d)；96.13(d)；118.90(t)；127.77〜128.55(d，数本)；133.18(d)；137.47(s)；137.84(s)；138.46(s)；174.18(s)。
【００２９】
アリル（５Ｒ）−５−アセトキシ−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド（７）。Ｃ6Ｈ6（５０ml）およびピリジン（５ml）中６（５.６０ｇ，１１.１ミリモル）の溶液を撹拌しながら、窒素雰囲気下、６０℃において、Ｐｂ(ＯＡｃ)4（１６.８０ｇ，約３２ミリモル）により、２５分間処理した。ＳｉＯ2を通してろ過し、Ｅｔ2Ｏで溶出し、蒸発させ、ＦＣ（ＳｉＯ2，３００ｇ，ＡｃＯＥｔ／ヘキサン １：６）に付すと、４.１ｇ（７１％）の７が得られた。Rf（EtOAc／ヘキサン １：４）0.29。IR（CHCl3）：3089ｗ，3067ｗ，3008ｗ，2933ｗ，2874ｗ，1759ｓ，1497ｗ，1455ｍ，1367ｍ，1248ｗ，1161ｍ，1070ｓ，1028ｓ，937ｗ。13C-NMR（50MHz，CDCl3）：21.16(q)；68.78(t)；73.67(t)；75.47(t)；76.33(t)；79.50(d)；80.54(d)；81.37(d)；90.18(d)；95.35(d)；119.09(t)；128.05〜128.84(ｄ, 数本)；133.68(d)；138.36(s)；138.63(s)；139.01(s)；169.75(d)。
【００３０】
アリル（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド（８）。ＣＨ2Ｃｌ2（２０ml）中７（５５３mg，０.９６ミリモル）の溶液に、−７８℃で、ＤＩＢＡＨ（トルエン中２０％溶液２.８ml，約２.９ミリモル）を滴下した。１５分後に、ＮＨ4Ｃｌの飽和溶液（２ml）を添加した。混合物を室温まで加温し、Ｈ2ＯおよびＨ2ＳＯ4の１Ｍ溶液（１０ml）で希釈した。水層をＣＨ2Ｃｌ2（３×）で抽出し、有機層を合せて食塩水（２×）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、蒸発させると、４９９mg（９８％）の８の結晶が生成し、これはさらに精製しないで次工程に用いた。Rf（EtOAc／ヘキサン １：２）0.32。1H-NMR（300MHz，CDCl3）：2.92（br s，OH）；3.33（dd，J=9.2，7.8, H-C(4)）；3.60（dd，J=9.7，3.7，H-C(2)）；3.99（t，J=9.5，H-C(3)）；4.07（ddt，J=12.9，6.6, 1.2, 全O）；4.23（ddt，J=12.9，5.2，1.4，全O）；4.65（d，J=12.0）；4.79（d，J=12.0，PhCH2）；4.78（d，J=3.7，H-C(1)）；4.81（d，J=11.2）；4.89（d，J=11.9，PhCH2）；4.85（d，J=10.9）；4.93（d，J=10.9，PhCH2）；5.06（d，J=7.8，H-C(5)）；5.24（dq，J=10.3，1.5，全O）；5.34（dq，J=17.2，1.5，全O）；5.93（dddd，J=17.1，10.3，6.6，5.2，全O）；7.28〜7.42（m，15芳香族Ｈ）。
【００３１】
アリル（５Ｓ）−５−トリクロロアセトイミジルオキシ−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド（９）。粗製の８（２００mg，約０.４２ミリモル）とＣｌ3ＣＣＮ（０.６３ml，６.３ミリモル）の乾燥ＣｌＣＨ2ＣＨ2Ｃｌ（６ml）中溶液を冷却（−３０℃）し、これにＭＴＢＤ（６６μｌ，０.４６ミリモル）を添加した。１０分後に、溶液をＳｉＯ2を通してろ過し、ＳｉＯ2をＥｔ2Ｏで溶出し、ろ液を合せて蒸発させると、粗製の９が次工程に使用するのに十分純粋な形で（1Ｈ-ＮＭＲ，ＴＬＣ）得られた。Rf（EtOAc／ヘキサン １：２）0.53。
【００３２】
アリル（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド（１０）およびアリル（５Ｓ）−５−ジメチルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド（１１）。粗製の９（３５０mg）とＰ(ＯＭｅ)3（２４０μｌ，１.２６ミリモル）の乾燥ＭｅＣＮ（６ml）中溶液を冷却（−１７℃）し、これにＭＳＴＯＴｆ（８３μｌ，０.４６ミリモル）を添加した。溶液を０℃加温し、この温度に３時間保持し、ＳｉＯ2を通してろ過した。ＳｉＯ2をＥｔ2Ｏで溶出し、ろ液を合せて蒸発させた。残留物（３９６mg）をＦＣ（ＳｉＯ2，２２ｇ，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）に付すと、１０およびその（５Ｓ）異性体１１の混合物（１４７mg，７から６２％）が得られた。この混合物をＨＰＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：１）でさらに精製すると４９mg（７から２１％）の１０および５２mg（７から２２％）の１１が得られた。１０のデ−タ：Rf（EtOAc／ヘキサン １：１）0.12。1H-NMR（500MHz，CDCl3）：3.55（dd，J=9.6，3.6，H-C(2)）；3.69（d，J=10.8，OMe)；3.80（d，J=10.5，OMe)；3.81（dt，J=10.6，8.8，H-C(4)）；3.99（t，J=9.1，H-(3)）；4.00（ddt，J=12.8，6.6，1.2，全O）；4.05（dd，J=10.5，9.8，H-C(5)）；4.16（ddt，J=12.8，5.2，1.4，全O）；4.62（d，J=12.1）；4.77（d，J=12.1，PhCH2）；4.80（d，J=10.6）；4.89（d，J=10.3，PhCH2）；4.81（d，J=4.7，H-C(2)）；4.83（d，J=11.2）；4.97（d，J=10.9，PhCH2）；5.24（dq，J=10.3，1.1，全O）；5.33（dq，J=17.2，1.6，全O）；5.93（dddd，J=17.1，10.3，6.7，5.2，全O）；7.24〜7.35（m，15芳香族Ｈ）。13C-NMR（125MHz，CDCl3）：52.74（dq，J(P，C)=6.8）；53.88（dq，J(P，C)=6.5）；65.86（dd, J(C，P)=175.1)；68.73(t)；73.46(t)；75.26(t)；75.90(t)；78.40（dd，J(C，P)=2.7)；79.35（dd，J(C，P)=1.0）；82.01（dd，J(C，P)=17.9）；96.40（dd，J(C，P)=15.0）；118.66(t)；127.63〜128.49(d, 数本)；133.28(d)；138.00(s)；138.11(s)；138.63(s)。31P-NMR（203MHz，CDCl3)：24.60。
【００３３】
プロパ−１−エンイル（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド（１２）。１０（２５７mg，０.４５２ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（１０ml）中溶液を撹拌しながら、これに、乾燥ＴＨＦ（５ml）中活性化１,５−シクロオクタジエン−ビス〔メチルジフェニルホスフィン〕−イリジウムヘキサフルオロホスフェート（１５mg）を添加した。ＴＬＣが反応の完結を示した２時間後に、溶液を蒸発させると、５７mgの粗製の１２が得られ、これを精製することなく、次工程に使用した。Rf（EtOAc／ヘキサン ３：１）0.39。
【００３４】
（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノ−ス（１３）。粗製の１２（５７mg）および黄色ＨｇＯ（１１８mg，０.５４ミリモル）のＨ2Ｏ／アセトン １：１０溶液（１０ml）中溶液を撹拌しながら、これをＨ2Ｏ／アセトン １：１０（５ml）中ＨｇＣｌ2（１４８mg，０.５５ミリモル）の溶液で処理した。反応完了後、Ｅｔ2Ｏを加えた。Ｅｔ2Ｏ層をＫＩの半飽和溶液と食塩水で洗浄した。ＳｉＯ2（２ｇ）を加え、混合物を蒸発させ、ＦＣ（ＳｉＯ2，１５ｇ，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：１→ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ５：１）に付すと、２１６mg（１０から９０％）の１３が得られた。Rf（EtOAc／ヘキサン ３：１）：0.16。
【００３５】
Ｏ−〔（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−キシロピラノシド〕−トリクロロアセトイミデート（１４）。乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中、１３およびＣｌ3ＣＣＮ（１５当量）の溶液（０.０５Ｍ）に、−３０℃において、ＭＴＢＤ（１.１当量）を加えた。反応完了後、溶液をＳｉＯ2を通してろ過し、ＳｉＯ2をＥｔ2Ｏで溶出し、溶出液を合せて蒸発させると、粗製の１４が得られ、これを精製することなく、次工程に使用した。
【００３６】
４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル−２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−キシロピラノシド（１５）。乾燥ＭｅＣＮ（０.０５Ｍ）中粗製の１４（１当量）および４−メチルウンベリフェロン（２当量）の溶液を、−２０℃において、ＢＦ3ＯＥｔ2（１当量）で処理した。反応完了後、Ｈ2Ｏを加えた。水相をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、有機相を合せて食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、蒸発させた。残留物をＦＣに付すと、１５が得られた。
【００３７】
４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５−ジメチルホスホニル−β−Ｄ−キシロピラノシド（１６）。１５のＭｅＯＨ（０.０５Ｍ）中溶液を、Ｐｄ／Ｃ １：１０の存在下にＨ2で処理した〔K. Wallimann, Helv. Chim. Acta, 1990, 73, 1359〕。セライトを通してろ過し、蒸発させると粗製の１６が得られ、これをＦＣ（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）で精製した。
【００３８】
４−メチルウンベリフェリル（５Ｒ）−５−ホスホニル−β−Ｄ−キシロピラノシド（１７）。ＣＨ2Ｃｌ2中１６の溶液（０.０５Ｍ）をＮ2下０℃でＭｅ3ＳｉＢｒ（３０当量）により処理した〔C.E. McKenna，Tetrahedron Lettr., 1977, 155〕。反応完了後、ＭｅＯＨを加え混合物を真空中で濃縮し、残留物をＨ2Ｏに取り混合物を凍結乾燥した。残留物を陰イオン交換クロマトグラフィーによって精製すると（Dowex １×８(ＨＣＯＯ-)：０〜０.７Ｍ ＨＣＯＯＨ）〔K. Wallimann, Helv. Chim. Acta, 1990, 73, 1359〕、１７が得られ、これを直ちに陰イオン交換クロマトグラフィー（Dowex ５０Ｗ×４(Ｎａ+)）によってそのＮａ塩に変換した。
【００３９】
プロドラッグＤはＷＯ ９２／１９６３９の記載と同様にして合成した。
プロドラッグＤ：
【化１４】
Figure 0003773120
【００４０】
実施例３
抗体β−グルクロニダーゼ融合蛋白質に対する天然および改良基質のＫｍおよびＶｍａｘ値の比較
ＫｍおよびＶｍａｘの測定には、３′−Ｎ−〔４−（β−Ｄ−グルクロニルオキシ）−３−ニトロ−ベンジルオキシカルボニル〕−ドキソルビシンおよびプロドラッグＡを１００mMリン酸塩緩衝液＋１mg／ml ＢＳＡ，pH７.２中１０〜１０００μＭの範囲に希釈しなければならない。酵素的切断は、３７℃において、一定量の融合蛋白質を用いて実施する。切断はＨＰＬＣによってモニタリングできる。ＫｍおよびＶｍａｘ値は、ソフトウエアプログラムＧｒａＦｉｔ２０（Erithacus Software Ltd.）によって計算できる。
【００４１】
ＨＰＬＣ分析：
ＨＰＬＣ装置は、オートサンプラー（Abimed，２３１型）、Ｃ１８逆相シリカゲル含有ミニカートリッジ（Analytichem）装着自動サンプル抽出システム（AASP，Varian）、勾配ポンプ（Gynkotech，４８０型）、蛍光検出器（Shimazdu ＲＦ５３５，励起光：４９５nm，放射光：５６０nm）から構成された。サンプルの注入前に、ミクロカートリッジを２.５mlのメタノールおよび１.５mlのリン酸塩緩衝液pH６で予め調整した。逆相シリカゲル上に保持された被検物質をついで、バルブスイッチを操作してミニカートリッジを移動相に連結させることによって溶出した。クロマトグラフィーは逆相充填剤（Nucleosil Ｃ１８，粒子サイズ５μｍ，長さ１２０mm，I.D. ４.５mm）上、勾配溶出によって実施した。溶出は、２成分（Ａ：２０mMリン酸pH３，Ｂ：アセトニトリル）からなる勾配によって実施した。勾配の時間−濃度像は以下の通りとした。
０分：７５％Ａ、２５％Ｂ
２０分：２５％Ａ、７５％Ｂ
３０分：２５％Ａ、７５％Ｂ
次の試行を実施する前に、カラムは５分間、開始時条件に平衡化した。
【００４２】
【表１】
Figure 0003773120
【００４３】
実施例４
プロドラッグＡは、D. Papahadjopoulosら（ＰＮＡＳ，ＵＳＡ８８：１１４６０−１１４６４，１９９１）に従い、スチールスリポソーム中に封入することができる。ＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスに静脈内注射後、スチールスリポソーム中に封入されたプロドラッグＡの血漿クリアランスは、遊離プロドラッグＡの場合の約２０分から封入プロドラッグＡの場合の約４０時間に延長される。有意なｔ１／２β延長により、薬理学的有効性が改善される。

Claims (4)

  1. 下記式で表される化合物。
    Figure 0003773120
    （式中、Ｒは、ＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、ＣＨ2−ＣＯＯＨまたはＣＯＯＨである）
  2. 請求項１に記載の化合物および薬理学的に許容される担体を含有する医薬。
  3. 前記薬理学的に許容される担体は、リポソームである請求項２に記載の医薬。
  4. プレ標的化された酵素、触媒抗体、免疫毒素または免疫接合体をさらに含有する請求項２に記載の医薬。
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Families Citing this family (143)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5525606A (en) 1994-08-01 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Substituted 06-benzylguanines and 6(4)-benzyloxypyrimidines
DE19512484A1 (de) 1995-04-04 1996-10-17 Bayer Ag Kohlenhydratmodifizierte Cytostatika
ES2257756T3 (es) * 1996-03-12 2006-08-01 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Nuevos profarmacos para la terapia de tumores y enfermedades inflamatorias.
ATE365562T1 (de) * 1996-05-03 2007-07-15 Immunomedics Inc Zielgerichtete kombinations-immuntherapie für krebs
DE19631288A1 (de) * 1996-08-02 1998-02-05 Hoechst Ag Neue Inhibitoren der ß-Glucuronidase
JP2001501601A (ja) * 1996-09-12 2001-02-06 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド 前立腺ガンの治療において有用な共役体
DE19720312A1 (de) * 1997-05-15 1998-11-19 Hoechst Ag Zubereitung mit erhöhter in vivo Verträglichkeit
US6127333A (en) * 1997-07-10 2000-10-03 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6391305B1 (en) 1997-09-10 2002-05-21 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
ZA9810974B (en) * 1997-12-02 1999-06-03 Merck & Co Inc Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20040081659A1 (en) * 1997-12-02 2004-04-29 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
NZ504615A (en) * 1997-12-02 2003-05-30 Merck & Co Inc Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
CA2319836C (en) 1998-02-06 2010-11-23 De Montfort University Hydroxylation activated prodrugs
GB2334256A (en) 1998-02-12 1999-08-18 Univ Montfort Hydroxylation activated prodrugs
AU2531599A (en) * 1998-02-12 1999-08-30 De Montfort University Hydroxylation activated drug release
US6043367A (en) * 1998-09-30 2000-03-28 Roffler; Steve Proactive antitumor compounds
US6174858B1 (en) 1998-11-17 2001-01-16 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU772153B2 (en) * 1999-02-12 2004-04-08 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Matrices for drug delivery and methods for making and using the same
FR2791679B1 (fr) * 1999-03-31 2003-04-11 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Bioprecurseurs aptes a liberer un derive retinoique par mise a profit de l'activite enzymatique de la surface cutanee et compositions pharmaceutiques et/ou cosmetiques
US6703020B1 (en) * 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
DE19925810A1 (de) * 1999-06-07 2000-12-14 Paz Arzneimittelentwicklung Anwendung von Verapamil und Verapamilderivaten zur Herstellung von Arzneimitteln mit Glucuronidase hemmender Wirkung
US6734192B1 (en) 1999-08-23 2004-05-11 Mp-1 Inc. Treatment of viral infections
GB2355007A (en) * 1999-10-08 2001-04-11 Michael Francis Holick Tamoxifen analogue glycosides and use thereof
WO2002032400A1 (en) * 2000-10-16 2002-04-25 Neopharm, Inc. Liposomal formulation of mitoxantrone
AU2003230750A1 (en) * 2002-03-29 2003-10-13 Threshold Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating cancer
CA2490626A1 (en) * 2002-06-20 2003-12-31 Nippon Suisan Kaisha, Ltd. Prodrug, medicinal utilization thereof and process for producing the same
EP1537146B9 (en) 2002-07-15 2011-07-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibodies binding to anionic phospholipids and aminophospholipids and their use in treating viral infections
WO2004043396A2 (en) * 2002-11-09 2004-05-27 Nobex Corporation Modified carbamate-containing prodrugs and methods of synthesizing same
CA2506080A1 (en) 2002-11-14 2004-05-27 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
DE10256982A1 (de) 2002-12-05 2004-06-24 Schering Ag Neue Effektor-Konjugate, Verfahren zu Ihrer Herstellung und Ihre Pharmazeutische Verwendung
EP1581218A1 (en) * 2002-12-05 2005-10-05 Schering AG Epothilone analogs for site specific delivery in the treatment of proliferative diseases
AU2005216251B2 (en) * 2004-02-23 2011-03-10 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
EA016186B1 (ru) * 2005-09-26 2012-03-30 Медарекс, Инк. Человеческие моноклональные антитела к cd70 и их применение
EP1881000A1 (en) * 2006-07-17 2008-01-23 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Conjugates of 2-fluoro-2-deoxy-glucose and their uses as anti cancer agents
US8232254B2 (en) 2006-10-06 2012-07-31 Wisconsin Alumni Research Foundation Colchicine neoglycosides and methods for their synthesis and use
CA2672468A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
WO2008153394A2 (en) * 2007-06-14 2008-12-18 Academisch Medisch Centrum Novel anti-inflammatory pro-drugs
FR2920877B1 (fr) * 2007-09-10 2010-01-22 Commissariat Energie Atomique Substrats fluorescents saccharidiques, leur procede de procede de preparation et leurs utisations.
NZ586053A (en) 2007-11-09 2012-09-28 Peregrine Pharmaceuticals Inc Anti-vegf antibody compositions and methods
CA2716390C (en) 2008-02-25 2016-08-23 Eyegate Pharma S.A.S. Enhanced delivery of a therapeutic to ocular tissues through iontophoresis
CA2793890C (en) 2010-04-15 2017-08-15 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
FR2960153B1 (fr) 2010-05-20 2012-08-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux bras autoreactifs et prodrogues les comprenant
EP3812387A1 (en) 2011-07-21 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
EP2750713B1 (en) 2011-10-14 2015-09-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN104080811B (zh) 2011-11-04 2019-09-27 酵活有限公司 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计
BR112014016870A2 (pt) 2012-01-09 2017-06-27 Huesken Dieter composições orgânicas para tratar doenças relacionadas com beta-catenina
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
ES2703151T3 (es) 2012-10-12 2019-03-07 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos de pirrolobenzodiazepinas
EP2906253B9 (en) 2012-10-12 2019-04-10 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
CN105102004B (zh) 2012-10-12 2019-01-25 Adc疗法责任有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓-抗cd22抗体结合物
ME03486B (me) 2012-10-12 2020-01-20 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
PT2906296T (pt) 2012-10-12 2018-06-01 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo
JP6243918B2 (ja) 2012-10-16 2017-12-06 トレロ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｐｋｍ２調節因子およびそれらの使用方法
BR112015014669B1 (pt) 2012-12-21 2023-09-26 Medimmune Limited Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados compreendendo os mesmos e uso destes para tratar uma doença proliferativa
CN105246894A (zh) 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
EP2958907B1 (en) 2013-02-19 2018-02-28 Novartis AG Benzothiophene derivatives and compositions thereof as selective estrogen receptor degraders
EP2968596B1 (en) 2013-03-13 2019-03-06 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20160031887A1 (en) 2013-03-13 2016-02-04 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
BR112015021965B1 (pt) 2013-03-13 2022-05-03 Medimmune Limited Conjugados e compostos de pirrolobenzodiazepinas, composição farmacêutica, uso dos mesmos para o tratamento de uma doença proliferativa e método de síntese dos ditos compostos
CA2905993C (en) 2013-03-14 2022-12-06 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Substituted 4-amino-pyrimidinyl-2-amino-phenyl derivatives and pharmaceutical compositions thereof for use as jak2 and alk2 inhibitors
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2015092634A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Novartis Ag 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline compounds and compositions as selective estrogen receptor antagonists and degraders
JO3517B1 (ar) 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
ES2699351T3 (es) 2014-01-17 2019-02-08 Novartis Ag Derivados de 1-piridazin/triazin-3-il-piper(-azina)/idina/pirolidina y composiciones de las mismas para inhibir la actividad de SHP2
CN105899493B (zh) 2014-01-17 2019-03-29 诺华股份有限公司 用于抑制shp2活性的1-(三嗪-3-基/哒嗪-3-基)-哌(-嗪)啶衍生物及其组合物
EP3125943A4 (en) 2014-04-04 2017-12-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
EP3193940A1 (en) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
BR112017011111A2 (pt) 2014-11-25 2017-12-26 Adc Therapeutics Sa conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo
PE20171307A1 (es) 2014-12-23 2017-09-05 Novartis Ag Compuestos de triazolopirimidina y usos de los mismos
US10189813B2 (en) 2015-03-25 2019-01-29 Novartis Ag Formylated N-heterocyclic derivatives as FGFR4 inhibitors
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
JP6718889B2 (ja) 2015-06-19 2020-07-08 ノバルティス アーゲー Ｓｈｐ２の活性を阻害するための化合物および組成物
EP3310779B1 (en) 2015-06-19 2019-05-08 Novartis AG Compounds and compositions for inhibiting the activity of shp2
JP6878316B2 (ja) 2015-06-19 2021-05-26 ノバルティス アーゲー Ｓｈｐ２の活性を阻害するための化合物および組成物
WO2017062334A1 (en) 2015-10-05 2017-04-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Antibody peptide conjugates that have agonist activity at both the glucagon and glucagon-like peptide 1 receptors
EP3359194A4 (en) 2015-10-06 2019-04-24 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATE FOR ANTI-INFLAMMATORY APPLICATIONS
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US10869929B2 (en) 2016-01-29 2020-12-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphonate linkers and their use to facilitate cellular retention of compounds
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
WO2017149463A1 (en) 2016-03-01 2017-09-08 Novartis Ag Cyano-substituted indole compounds and uses thereof as lsd1 inhibitors
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
SI3452465T1 (sl) 2016-05-04 2021-04-30 Genoscience Pharma Substituirani derivati 2,4-diamino-kinolina za uporabo v zdravljenju proliferativnih bolezni
PL3468972T3 (pl) 2016-06-14 2020-11-16 Novartis Ag Związki i kompozycje do hamowania aktywności shp2
JP2019524872A (ja) 2016-06-20 2019-09-05 ノバルティス アーゲー 癌の治療に有用なイミダゾピリミジン化合物
JP2019522049A (ja) 2016-06-20 2019-08-08 ノバルティス アーゲー トリアゾロピリジン化合物及びその使用
EP3472168B1 (en) 2016-06-20 2024-01-10 Novartis AG Crystalline forms of triazolopyrimidine compound
WO2018005963A1 (en) * 2016-07-01 2018-01-04 Zoneone Pharma, Inc. Synthesis of new methylumbelliferone prodrugs and their incorporation into lipid-based drug delivery formulations
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
UA125198C2 (uk) 2017-02-08 2022-01-26 Ейдісі Терапьютікс Са Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло
WO2018146506A1 (en) * 2017-02-10 2018-08-16 Universitat Politècnica De València Therapeutic derivatives
ES2926144T3 (es) 2017-04-18 2022-10-24 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina
JP7408396B2 (ja) 2017-04-20 2024-01-05 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム 併用療法
WO2018229222A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc
UY37774A (es) 2017-06-19 2019-01-31 Novartis Ag Compuestos 5-cianoindol sustituidos y usos de los mismos
HRP20220311T1 (hr) 2017-08-18 2022-05-13 Medimmune Limited Konjugati pirolobenzodiazepina
TW201912639A (zh) 2017-09-11 2019-04-01 美商克魯松藥物公司 Ｓｈｐ２之八氫環戊烷并[c]吡咯別構抑制劑
CN108021787B (zh) * 2017-12-08 2021-10-15 华东理工大学 一种根据基元反应拓扑结构构建动态代谢网络的方法
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
KR20240033296A (ko) 2018-07-25 2024-03-12 어드밴스드 엑셀러레이터 어플리케이션즈 안정한 농축 방사성 핵종 복합체 용액
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
CN112512597A (zh) 2018-07-26 2021-03-16 大日本住友制药肿瘤公司 用于治疗与acvr1表达异常相关的疾病的方法以及用于此的acvr1抑制剂
US20200115389A1 (en) 2018-09-18 2020-04-16 Nikang Therapeutics, Inc. Fused tricyclic ring derivatives as src homology-2 phosphatase inhibitors
WO2020068867A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Black Diamond Therapeutics, Inc. Quinazoline derivatives as tyrosine kinase inhibitor, compositions, methods of making them and their use
JP2022502496A (ja) 2018-09-25 2022-01-11 ブラック ダイアモンド セラピューティクス，インコーポレイティド チロシンキナーゼ阻害剤組成物、作製方法、および使用方法
CN112867512A (zh) 2018-09-25 2021-05-28 意大利国际先进加速器应用有限公司 联合疗法
JP2022502385A (ja) 2018-09-29 2022-01-11 ノバルティス アーゲー Ｓｈｐ２の活性を阻害するための化合物の製造方法
KR20210146290A (ko) 2019-02-12 2021-12-03 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. 헤테로시클릭 단백질 키나제 억제제를 포함하는 제제
US11712433B2 (en) 2019-03-22 2023-08-01 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising PKM2 modulators and methods of treatment using the same
AU2020263959A1 (en) 2019-04-24 2021-11-25 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN114302878A (zh) 2019-07-03 2022-04-08 大日本住友制药肿瘤公司 酪氨酸激酶非受体1(tnk1)抑制剂及其用途
BR112022002518A2 (pt) 2019-08-15 2022-07-19 Black Diamond Therapeutics Inc Compostos de alquinila quinazolina
WO2021195206A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Black Diamond Therapeutics, Inc. Polymorphic forms and related uses
AR123185A1 (es) 2020-08-10 2022-11-09 Novartis Ag Compuestos y composiciones para inhibir ezh2
WO2022043256A1 (en) 2020-08-23 2022-03-03 Cobiores Nv Synergistic combinations of anticancer drugs linked to a tetrapeptidic moiety and immunotherapeutic agents
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
EP4204020A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Advanced Accelerator Applications International S.A. Method of treating psma-expressing cancers
WO2022043556A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Novartis Ag Stable radiopharmaceutical composition
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
JP2023554520A (ja) 2020-12-22 2023-12-27 コビオレス エヌヴイ テトラペプチド部分を含む化合物
AU2021409561A1 (en) 2020-12-22 2023-07-06 Nikang Therapeutics, Inc. Compounds for degrading cyclin-dependent kinase 2 via ubiquitin proteosome pathway
EP4277901A1 (en) 2021-01-13 2023-11-22 Monte Rosa Therapeutics, Inc. Isoindolinone compounds
WO2022170052A1 (en) 2021-02-05 2022-08-11 Black Diamond Therapeutics, Inc. Quinazoline derivatives, pyridopyrimidine derivatives, pyrimidopyrimidine derivatives, and uses thereof
WO2022167664A1 (en) 2021-02-07 2022-08-11 Cobiores Nv Compounds comprising a tetrapeptidic moiety
TW202309022A (zh) 2021-04-13 2023-03-01 美商努法倫特公司 用於治療具egfr突變之癌症之胺基取代雜環
EP4323349A1 (en) 2021-04-14 2024-02-21 Monte Rosa Therapeutics AG Isoindolinone amide compounds useful to treat diseases associated with gspt1
EP4323350A1 (en) 2021-04-14 2024-02-21 Monte Rosa Therapeutics AG Isoindolinone compounds
TW202317589A (zh) 2021-07-14 2023-05-01 美商尼坎醫療公司 作為ｋｒａｓ抑制劑的伸烷基衍生物
US20230303509A1 (en) 2022-03-28 2023-09-28 Nikang Therapeutics, Inc. Sulfonamido derivatives as cyclin-dependent kinase 2 inhibitors
US20230355792A1 (en) 2022-04-07 2023-11-09 Heidelberg Pharma Research Gmbh Methods of improving the therapeutic index
WO2023240024A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Nikang Therapeutics, Inc. Sulfamide derivatives as cyclin-dependent kinase 2 inhibitors

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2212014A1 (de) * 1971-04-21 1972-10-26 Deutsche Akademie der Wissenschaf ten zu Berlin, χ 1199 Berlin Verfahren zur fermentativen Spaltung von Transportformen von Chemotherapeutika, insbesondere Cancerostatica
WO1981001145A1 (en) * 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
NZ225599A (en) * 1987-08-04 1991-09-25 Bristol Myers Co Antibody-enzyme conjugates and combinations with prodrugs for the treatment of tumour cells
WO1990003188A1 (en) * 1988-09-30 1990-04-05 Neorx Corporation Cleavable linkers for the reduction of non-target organ retention of immunoconjugates
DE4106389A1 (de) * 1991-02-28 1992-09-03 Behringwerke Ag Fusionsproteine zur prodrug-aktivierung, ihre herstellung und verwendung
DE4002888A1 (de) * 1990-02-01 1991-08-08 Behringwerke Ag Anthracyclin-glycosyl-prodrugs, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung in kombination mit funktionalisierten tumorspezifischen enzymkonjugaten
FR2676058B1 (fr) * 1991-04-30 1994-02-25 Hoechst Lab Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers.

Also Published As

Publication number Publication date
AU678494B2 (en) 1997-05-29
DE69428957D1 (de) 2001-12-13
CA2131662A1 (en) 1995-03-10
AU7169994A (en) 1995-03-23
JPH07149667A (ja) 1995-06-13
ZA946920B (en) 1995-04-12
DK0642799T3 (da) 2002-02-25
KR100385830B1 (ko) 2003-08-19
NO943319D0 (no) 1994-09-08
CA2131662C (en) 2008-09-02
KR950007874A (ko) 1995-04-15
NO943319L (no) 1995-03-10
DE69428957T2 (de) 2002-06-06
US5621002A (en) 1997-04-15
EP0642799B1 (en) 2001-11-07
ES2167343T3 (es) 2002-05-16
EP0647450A1 (en) 1995-04-12
NO313126B1 (no) 2002-08-19
ATE208213T1 (de) 2001-11-15
PT642799E (pt) 2002-04-29
EP0642799A1 (en) 1995-03-15

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