FI80698C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara derivat av mitomycin a. - Google Patents

Description

1 80698

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten mitomysiini A-johdannaisten valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää uusien terapeut-5 tisesti käyttökelpoisten mitomysiini A-johdannaisten val mistamiseksi. Yhdisteitä käytetään eläinten kasvainsai-raustilojen hoidossa.

Hakijan nimissä olevat US-patenttijulkaisut 4 268 676, 4 460 599 ja 4 617 389 mainitaan tässä erityi-10 sesti viitteenä siinä määrin kuin ne voivat antaa tähän keksintöön liittyvää oleellista tai vähemmän tärkeää aineistoa.

Lyhyesti sanottuna mainitut US-patenttijulkaisut 4 268 676 ja 4 460 599 antavat taustatietoja meneillään 15 olevaan tutkimukseen, josa pyritään uusiin ja käyttökel

poisiin yhdisteisiin, jotka ovat rakenteellisesti mitomy-siinin sukulaisaineita, joilla on antibioottivaikutus ja alhainen myrkyllisyys sekä huomattava kasvainten vastainen vaikutus eläimillä. Tarkemmin ilmaistuna niissä kuvataan 20 uusia yhdisteitä, joilla on kaava I

0 ?

X" A / CH.OCNH^ I

30 jossa Y on vety tai alempi alkyyli; ja X on tiatsoliamino- radikaali, furfuraaliaminoradikaali tai radikaali, jolla on kaava R R1 35 -N-C-R1 R2 2 80698 jossa R, R1 ja R2 ovat samoja tai eri ryhmiä, joita ovat vety ja alempi alkyyli, ja R3 on alempi alkenyyli, alempi halogeenialkenyyli, alempi alkynyyli, alempi alkoksikar-bonyyli, tienyyli, formamyyli, tetrahydrofuryyli tai bent-5 seenisulfonamidi. Mainituissa US-patenttijulkaisuissa esi tetään myös uusia menetelmiä eläinten kasvainsairaustilo-jen hoitamiseksi, joissa menetelmissä annetaan terapeuttisesti vaikuttava määrä yhdistettä, jolla on kaava Ia 10 o 0 Ζ'Ύ\_/CH2°"™2

"3C

15 0 '- jossa Y on vety tai alempi alkyyli; ja Z on tiatsoliamino-radikaali, furfuryyliaminoradikaali, syklopropyyliaminora-dikaali, pyridyyliaminoradikaali tai radikaali, jolla on 20 kaava R4 R5 I i -N —C —R7 if 25 jossa R4, R5 ja R6 ovat samoja tai eri ryhmiä, joita ovat vety tai alempi alkyyli, ja R7 on alempi alkenyyli, alempi halogeenialkenyyli, alempi alkynyyli, alempi alkoksikarbo-nyyli, alempi halogeenialkyyli, alempi hydroksialkyyli, 30 pyridyyli, tienyyli, formamyyli, tetrahydrofuryyli, bents- yyli tai bentseenisulfonamidi.

US-patenttijulkaisussa 4 627 389 käsitellään myös yhdisteitä, joilla on huomattava kasvainten vastainen vaikutus eläimillä, ja joilla on kaava Ha

II

5 3 80698 0 1° z^JL_.ch2ocnh2 o I_U" 10 jossa Y on vety tai alempi alkyyli; ja Z on (alempi alkok- si)-substituoitu kinolinyyliaminoradikaali, syanosubsti-tuoitu pyratsolyyliaminoradikaali tai alemmalla alkyylillä mono- tai disubstituoitu tiatsoliaminoradikaali, tai typpeä sisältävä heterosyklinen radikaali, joka on 1-pyrro-15 linyyli, 1-indolinyyli, N-tiatsolidinyyli, N-morfolinyyli, 1-piperatsinyyli tai N-tiomorfolinyyli, tai syano-, fenyy-li-, karboksiamido- tai (alempi alkoksikarbonyyli)substi-tuoitu 1-atsiridinyyliradikaali, tai (alempi alkyyli)-, formyyli- tai asetyylifenyylisubstituoitu 1-piperatsinyy-20 liradikaali, tai hydroksi- tai piperidyylisubstituoitu 1-piperidyyliradikaali, tai (alempi alkoksi)-, amino- tai halogeenisubstituoitu pyridyyliaminoradikaali, tai karboksiamido-, merkapto- tai metyleenidioksisubstituoitu ani-liiniradikaali, tai radikaali, jolla on kaava 25

R

-N-R' jossa R on vety tai alempi alkyyli ja R' on typpeä sisäl-30 tävä heterosyklinen radikaali, joka on kinuklidinyyli, pyratsolyyli, 1-triatsolyyli, isokinolinyyli, indatsolyy-li, bentsoksatsolyyli, tiadiatsolyyli tai bentsotiadiat-solyyli tai niiden alemmalla alkyylillä tai halogeenilla substituoitu johdannainen, tai butyrolaktonyyliradikaali, 35 tai adamantyyliradikaali; tai alemmalla alkoksilla mono- substituoitu fenyyliradikaali, tai substituoitu alempi 4 80698 alkyyliradikaali, joka on alempi merkaptoalkyyli, alempi karboksialkyyli, mono-, di- tai tri(alempi alkoksi) (alempi alkyyli), (alempi alkyyli)tio(alempi alkyyli) tai niiden alemmalla alkoksikarbonyylillä substituoitu johdan-5 nainen, alempi syanoalkyyli, mono-, di- tai tri(alempi alkoksi)fenyyli(alempi alkyyli), (alempi-N-alkyyli)pyrro-lidinyyli(alempi alkyyli), N-morfolinyyli(alempi alkyyli) tai (alempi dialkyyliamino) (alempi alkyyli).

Tämän keksinnön taustaan liittyviä ovat myös seulo raavat viitteet:

Coluslich et ai., US-patenttijulkaisu 3 332 944;

Matsui et ai., US-patenttijulkaisu 3 410 867;

Nakano et ai., US-patenttijulkaisu 4 231 936;

Matsui et ai., US-patenttijulkaisu 3 429 894; 15 Remers, US-patenttijulkaisu 4 268 676;

Matsui et ai., US-patenttijulkaisu 3 514 452; ja Imai et ai., Gann. 71 (1980), ss. 560 - 562.

Tämä keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti käyttökelpoisten mitomysiini A-johdannaisten valmistami-20 seksi, joilla on kaava III

0 ? X JI/ch2ocnh2 I I L^OCH, I L_J> 1 2 3 4 5 6 li jossa Y on vety tai alempi alkyyli; ja X on hydroksisubs- 2 tituoitu 1-pyrrolidinyyliradikaali tai alemmalla alkyylil- 3 lä substituoitu piperidinyyliradikaali tai asetamido-, 4 asetyyli-, karbamido-, syaani-, karboksi(alempi alkyyli- 5 amino)-, di-(alempi alkoksi)-, nitro- tai sulfamyyli-subs- 6 tituoitu aniliiniradikaali tai radikaali, jolla on kaava 5 80698

R

-N-R1 jossa R ob vety tai alempi alkyyli ja R1 on typpeä sisältä-5 vä heterosyklinen radikaali, joka on aminosubstituoitu triatsolyyli, alemmalla alkyylillä substituoitu isotiat-solyyli, bentsotiatsolyyli tai bentsotiatsolyylin nitro-tai halogeenisubstituoitu johdannainen, tai R1 on substituoitu alempi alkyyliradikaali, joka on hydroksi(alempi 10 alkyyliamino) (alempi alkyyli), hydroksi(alempi alkoksi) (alempi alkyyli), imidatsolyyli(alempi alkyyli), (nitro-substituoitu imidatsolyyyli) (alempi alkyyli), (nitrosubs-tituoitu pyridyyliamino) (alempi alkyyli) tai piperatsin-yyli(alempi alkyyli).

15 Ellei toisin mainita, tarkoitetaan termillä "alem pi" sovellettuna "alkyyli"-radikaaleihin suoraketjuisia tai haaroittuneita radikaaleja, jotka sisältävät 1-6 hiiliatomia. "Alempi alkyyli" on esimerkiksi metyyli, etyyli, propyyli, butyyli, pentyyli tai heksyyli, samoin 20 kuin isopropyyli, t-butyyli tai vastaava. Samoin tarkoitetaan termillä "alempi" "alkoksin” yhteydessä radikaalia, jossa on 1-6 hiiliatomia.

Kaikki uudet kaavan III mukaiset antibioottiset mitomysiinijohdannaiset ovat käyttökelpoisia sovellettaes-25 sa uusia kasvainten vastaisia hoitomenetelmiä.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle mitomysiinijoh-dannaisten valmistamiseksi on tunnusomaista, että mitomysiini A tai N-alkyyli-mitomysiini A saatetaan reagoimaan amiinin kanssa, joka on 30 pyrrolidinoni, tai alempi alkyylipiperidiini, tai asetamino-, asetyyli-, karbamido-, syaani-, karbok-si(alempi alkyyliamino)- di(alempi alkoksi)-, nitro- tai sulfamyylisubstituoitu aniliini, tai 35 amiino tai sen (alempi alkyyli)substituoitu johdan nainen, joka on aminosubstituoitu triatsolyyliamiini, 6 80698 (alempi alkyyli)substituoitu isotiatsolyyliamiini, bentso-tiatsolyyliamiini tai nitro- tai halogeenisubstituoitu bentsotiatsolyyliamiini, hydroksi(alempi alkyyliamino) (alempi alkyyliamiini), hydroksi(alempi alkoksi) (alempi 5 alkyyliamiini), imidatsolyyli(alempi alkyyliamiini), nit- rosubstituoitu imidatsolyyli(alempi alkyyliamiini), nitro-substituoitu pyridyyliamino(alempi alkyyliamiini) tai pi-peratsinyyli(alempi alkyyliamiini), ja saatu tuote eristetään reaktioseoksesta.

10 N-alkyylimitomysiini A on valmistettu mitomysiini C:stä esimerkiksi menetelmällä, jota Cheng et ai. ovat kuvanneet yleisesti [J. Med. Chem. 20, n:o 6 (1977), ss. 767 - 770]. Valmistusreaktioissa saadaan yleensä haluttu tuote kiinteänä aineena, joka liukeneen hyvin alkoholiin. 15 Tämän keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdis teillä uskotaan olevan bakteerien vastainen vaikutus gram-positiivisia ja gram-negatiivisia mikro-organismeja vastaan samalla tavalla kuin luonnossa esiintyvillä mitomy-siineillä, ja nämä yhdisteet ovat siten mahdollisesti 20 käyttökelpoisia terapeuttisina aineina ihmisten ja eläinten bakteeri-infektioiden hoitoon.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden käyttökelpoisuuden kasvainten hoitomenetelmissä osoittavat tulokset, jotka saatiin in vivo kokeissa, joissa yhdistei-25 tä annetaan vahtelevina annoksina hiirille, joille on in dusoitu P388-leukemia. Kokeet tehtiin julkaisun Lymphocytic Leukemia P388 - Protocol 1.200 mukaisesti [Cancer Chemotherapy Reports, osa 3, ovi.3, n:o 2 (syyskuu 1972) s. 9]. Lyhyesti sanottuna, kokeissa annettiin tutkittavaa 30 yhdistettä CDF1-naarashiirille, jotka oli ennalta infek-toitu implatoimalla vatsakalvon sisäisesti 106 vesivatsaso-lua. Tutkittavia yhdisteitä annettiin vain kokeen ensimmäisenä päivänä, ja eläimistä seurattiin mm. niiden vitaliteettia 35 päivän aikana.

Il 7 80698

Esimerkkien 1-27 mukaisille yhdisteille saadut koetulokset esitetään taulukossa I. Annettuihin tietoihin sisältyy optimaalinen annos ("O.D."), so. se annos (mg eläimen painokiloa kohti), jolla saavutetaan parhaat hoi-5 tovaikutukset pysyvästi. Taulukossa annetaan myös keski- vertoelinaika ("MST") ilmaistuna luvulla (tutkittavien eläinten MST)/(vertailueläinten MST) x 100 ("% T/C"). Edellä mainitun in vivo-P388-menettelyn yhteydessä osoittaa % T/C, joka on 125 tai suurempi, merkittävää kasvain-10 ten vastaista hoitovaikutusta. Pienin annos (mg/painoki- loa), jolla saadaan % T/C-arvo 125, tunnetaan pienimpänä vaikuttavana annoksena ("MED"). Myös nämä annokset on annettu taulukossa I. On huomionarvoista, että P388-kokeis-sa, joiden tulokset ovat taulukossa I, saadut poikkeuksel-15 lisen suuret MST-arvot osoittavat myös, että yhdisteet eivät ole merkittävästi myrkyllisiä käytettyinä annoksina.

Taulukko I

8 80698

Esim. Annos MST MED

n:o_mg/kg % T/C_ 5 1 25,6 163 0,8 2 25,6 238 <0,2 3 25,6 >333 <0,2 4 25,6 231 0,2 5 6,4 167 0,4 10 6 25,6 194 1,6 7 3,2 150 0,8 8 12,8 172 <0,2 9 25,6 322 0,8 10 12,8 >333 0,2 15 11 6,4 161 0,4 12 3,2 172 >0,2 13 25,6 225 0,2 14 12,8 167 0,4 15 12,8 181 0,4 20 16 12,8 181 1,6 17 25,6 169 0,8 18 25,6 150 12,8 19 25,6 128 25,6 20 25,6 144 1,6 25 21 12,8 133 12,8 22 25,6 181 0,4 23 25,6 163 1,6 24 25,6 150 3,2 25 12,8 144 6,4 30 26 25,6 138 12,8 27 25,6 >375 0,2 9 80698

Keksinnön mukaisesti valmistettuhin kasvainten vastaisina aineina käytettäviin selvästi edullisimpiin yhdisteisiin kuuluvat ne, joilla saadaan aikaan elinajan pidentyminen, joka on 2 kertaa niin suuri kuin se, mitä pide-5 tään osoituksena merkittävästä hoitovaikutuksesta, so. yhdisteet, joiden MST % T/C-arvo on suurempi kuin 2 x 125. Esimerkkien 3, 9, 10 ja 27 mukaisten yhdisteiden nähdään kuuluvan tähän ryhmään.

Kuten taulukosta I ilmenee, oli jopa niin pienillä 10 alkuannoksilla kuin 0,2 mg/kg merkittävä pitkäaikainen kasvainten vastainen vaikutus. Siten voidaan antaa aktiivisina aineina toimivia yhdisteitä yksikköannoksina 0,001 - 5 mg, edullisesti 0,004 - 10 mg, soveltuvina farmaseuttisina valmisteina. Tällaisia valmisteita voidaan antaa 15 päivittäin 0,1 - 100 mg, edullisesti noin 0,2 - 51,2 mg painokiloa kohti kasvainsairaudesta kärsivälle eläimelle. On edullista antaa yhdisteet parenteraalisesti. Soveltuvat farmaseuttiset koostumukset voivat sisältää myös tunnettuja farmaseuttisesti hyväksyttäviä laimennus-, apu- ja/tai 20 kantaja-aineita, kuten lääketieteelliseen käyttöön soveltuvaa suolaliuosta.

Keksinnön mukaiset yhdisteet verrattuina US-patent-tijulkaisun 4 231 936 mukaisiin yhdisteisiin osoittavat ensin mainittujen olevan vähemmän myrkyllisiä. Esillä ole-25 van hakemuksen taulukko I antaa tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden kasvainten vastaisen terapian optimaaliset annokset. Nämä optimaaliset annokset, joilla saavutetaan optimaalinen hengissä säilyminen, ovat lähellä tai suurempia kuin US-patenttijulkaisun ilmoittamat LD50-30 arvot. LD50-arvo on siis se annos, joka aiheuttaa kuoleman 50 %:ille eläimistä. Tämä osoittaa esillä olevien yhdisteiden edut, eli sen, että ne ovat varmasti vähemmän myrkyllisiä.

Mainittakoon vielä US-patenttijulkaisun esimerkit 35 II ja III, eli taulukot 3 ja 4, joissa ilmoitetaan kas vainten vastaiset vaikutukset testatuissa eläimissä ver- 10 80698 rattuna vertailueläimiin ILS-%:ina (elinajan pidentämisen %:ina). Näitä arvoja voidaan verrata esillä olevan hakemuksen taulukon I ilmoittamaan keskivertoelinaikaan (MST), joka on ilmoitettu testattavien eläinten MST:nä verrattuna 5 vertailueläimiin x 100 (% T/C). Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä on poikkeuksellisen korkeat MST-arvot, mikä myös osoittaa yhdisteiden olevan suhteellisen myrkyttömiä US-patenttijulkaisun 4 231 936 mukaisiin yhdisteisiin verrattuna.

10 Muut tämän keksinnön edut käyvät ilmi seuraavista esimerkeistä 1-27, joissa kuvataan tiettyjen edullisten yhdisteiden valmistusta.

Ellei toisin mainita, kaikki reaktiot tehtiin huoneen lämpötilassa (20°C) lämmittämättä. Ellei toisin maini-15 ta, kaikissa ohutkerroskromatografisissä (TLC) kokeissa, joita käytettiin reaktion etenemisen seuraamiseen, käytettiin ennalta päällystettyjä silikageelilevyjä ja ajoliuok-sena metanolin ja kloroformin seosta tilavuussuhteessa 2:8.

20 Esimerkki 1 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyll-8a-metoksi-5-metyyli-6-(3-hydroksi-l-pyrrolidinyyll)-atslriini[2',3':3,4]pyrroli[l,2-a]indoll-4,7-dionikarbamaatti 25 Liuosta, jossa oli 50 mg mitomysiini A:ta vedettö mässä metanolissa (6 ml), käsiteltiin 3-pyrrolidinolilla (13 mg) typen alla huoneen lämpötilassa. Kun silikageeli-levyillä tehty ohutkerroskromatografia (ajoliuoksena metanolin ja kloroformin seos suhteessa 2:8) osoitti, ettei 30 lähtöainetta enää ollut läsnä, seos suodatettiin ja haih dutettiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin preparatii-visella ohutkerroskromatografialla käyttäen samaa liuotin-seosta. Täten saatiin 23 mg (saanto 40 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 82 - 85°C (hajosi), ja analyysitiedot 35 seuraavat: il 11 80698 NMR (DMSO-d6, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 1,6 - 2,2 (m, 2), 2,8 - 3,1 (leveä s, 5) ja 4,0 - 4,3 (m, 1).

Esimerkki 2 5 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a- metoksi-5-metyyli-6-(3-metyylipiperidinyyli)-atsiriini[2',3':3,4]pyrroll[1,2-a]indoli-4,7-dlonikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisella 10 menettelyllä. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja 3-metyylipipe- ridiinistä (200 mg) saatiin 46 mg (saanto 55 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 75 - 88°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puut-15 tuu ja spektrissä on uudet piikit 0,85 (d, 3), 1,10 - 2,15 (m, 5) ja 2,15 - 3,32 (m, 4).

Esimerkki 3 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyll-6-[4-(asetyyliamino)aniliini]-20 atsiriini^',3':3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7- dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin esimerkissä 1 kuvatulla menettelyllä. Mitomysiini A:sta (100 mg) ja ylimäärästä 4-(asetyyliamino)aniliinia saatiin 102 mg (saanto 76 %) ha-25 luttua tuotetta, jonka sp. oli 143 - 145°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 2,1 (s, 3), 7,4 (d,2), 7,6 (s,1) ja 8,9-9,3 (s,l).

30 Esimerkki 4 1, la, 2,8,8a, 8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-met-oksi-5-metyyli-6-[3-(asetyyliamino)aniliini]-atsi-riini[2',3 *:3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dioni-karbamaatti 35 Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mu kaisella tavalla, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää 12 80698 kaliumkarbonaattia. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja 3-(ase-tyyliamino)aniliinista (150 mg) saatiin 67 mg (saanto 72 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 140-143°C (hajoaa) ja analyysitiedot seuraavat: 5 NMR: (asetoni-d6, TS): <£-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 2,1 (s,3), 6,7 - 7,5 (m, 4), 8,0 (leveä s, 1) ja 9,3 (s,1).

Esimerkki 5 10 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydrokslmetyyli-8a- metoksi-5-metyyli-6-(4-asetyylianiliini)-atsi-riini[21,31:3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dioni-karbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti, 15 paitsi että lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkar bonaattia. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja 4-asetyylianilii-nista (50 mg) saatiin 25 mg (saanto 28 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 103 - 104°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 20 NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puut tuu ja spektrissä on uudet piikit 2,1 (s, 3), 6,6 (d, 2), 7,3 (d, 2) ja 7,0 - 7,3 (leveä s, 1).

Esimerkki 6 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-25 metoksi-5-metyyli-6-[4-(l-ureido)aniliini]-atsl- riini82*,3*:3,4]pyrrolo[l,2-a]indoli-4,7-dioni-karbamaatti Tämä karbamidosubstituoitu yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 4-(l-30 ureidoJaniliinista (227 mg) saatiin 49 mg (saanto 67 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 93 - 95°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (CDCI3, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 5,03 (s, 2), 6,9 (d, 2), 35 8,0 (s, 1) ja 8,4 (s, 1).

Il 13 80698

Esimerkki 7 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-(4-syanoaniliini)-atsiriini-[2',3':3,4] pyrrolo[l, 2-a] indoli-4, 7-dionikar-5 bamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkarbonaattia. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja 4-aminobentsonit-riilistä (472 mg) saatiin 23 mg (saanto 24 %) haluttua 10 tuotetta, jonka sp. oli 124 - 126°C (hajosi), ja analyysi-tiedot seuraavat: NMR (CDClj, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 6,6 (d, 2), 7,4 (d, 2) ja 7,0 - 7,3 (leveä s, 1).

15 Esimerkki 8 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-(3-syaanianiliini)-atsiriini-[2',3':3,4]pyrrolo[l,2-a]indoli-4,7-dionikarba-maattl 20 Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkarbonaattia. Mitomysiini A:sta (71 mg) ja 3-aminobentsonitriilistä (500 mg) saatiin 30 mg (saanto 34 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 97 - 98°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 25 NMR (CDC13, TS): δ-arvo (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 7,2 - 7,8 (m, 4).

Esimerkki 9 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydrokimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[4-(N-glysyyli)anlllini]-30 atsiriini^',3':3,4]pyrrolo[l,2-a]lndoli-4,7- dionikarbamaattl Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 4-(N-glysyyli)aniliinista (249 mg) saatiin 62 mg (saanto 90 %) haluttua tuotetta, 35 jonka sp. oli 83 - 85°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: ---- 14—___ i4 80698 NMR (DMSO-d6, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 3,1 (s, 2), 6,3 - 6,6 (leveä s, 2), 6,6 - 6,8 (leveä s, 2) ja 6,6 - 7,1 (leveä s, 2). Esimerkki 10 5 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a- metoksi-5-metyyli-6-(3,4-dimetoksianilinl)-atsi-riinl[21,3':3,4]pyrrolo[l,2-a]indoli-4,7-dioni-karbamaattl Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti. 10 Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 3,4 dimetoksianiliinista (229 mg) saatiin 61 mg (saanto 91 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 114 - 116°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 3,8 (s, 6), 6,3 - 6,9 15 (m, 3) ja 7,7 (s, 1).

Esimerkki 11 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyll-8a-metoksi-5-metyyli-6-(3,5-dlmetoksianiliinl)-atsiriini[2',3':3,4]pyrrolo[l,2-a]indoli-4,7-20 dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 3,5-dimetoksianiliinista (229 mg) saatiin 60 mg (saanto 88 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 98 - 100°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 25 NMR (CDCI3, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 3,8 (s, 6), 5,9 - 6,4 (leveä s, 3) ja 7,6 (s, 1).

Esimerkki 12 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-30 metoksi-5-metyyli-6-(4-nltroaniliini)-atsiriini- [2',3':3,4]pyrrolo[l,2-a]indoli-4,7-dionikarba-maatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkar-35 bonaattia. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja 4-nitroaniliinista (276 mg) saatiin 16 mg (saanto 9 %) haluttua tuotetta, is 80698 jonka sp. oli 132 - 134°C (hajosi), ja analyysitiedot seu-raavat: NMR (asetoni-d6, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 6,9 - 7,3 (d, 2), 5 7,4 - 7,9 (d, 2) ja 7,9 - 8,4 (leveä s, 1).

Esimerkki 13 1, la, 2, 8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6 - ( 4-sulfamyylianiliinl)-at-siriini-[2',3*:3,4]pyrrolo[l,2-a]indoli-4,7-dioni-10 karbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkarbonaattia. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja sulfaniiliamidista (688 mg) saatiin 25 mg (saanto 26 %) haluttua tuotetta, 15 jonka sp. oli 113 - 115°C (hajosi), ja analyysitiedot seu-raavat: NMR (DCC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 7,0 (d, 2), 7,5 (s, 1) ja 7,9 (d, 2).

20 Esimerkki 14 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-(4-metyylianiliini)-atsirii-ni[2',3':3,4]pyrrolo[l,2-a]indoli-4,7-dionikarba-maatti 25 Tämä yhdiste valmistettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Mitomysiini A:sta (60 mg) ja ylimäärästä 4-metyy-lianiliinia saatiin 63 mg (saanto 86 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 113 - 115°C (hajosi), ja analyysitiedot seu-raavat: 30 NMR (CDCI3, TS): 6-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puut tuu ja spektrissä on uudet piikit 2,3 (s, 3), 6,5 - 7,3 (leveä s, 4) ja 7,6 (leveä s, 1).

35 16 80698

Esimerkki 15 1,13,2,8,83,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyll-6-(3-metyyllanlllini)-atsirii-ni[2',31:3,4]pyrrolo[l,2-a]indoll-4,7-dioni-5 karbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja 3-metyylianiliinista (276 mg) saatiin 66 mg (saanto 78 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 89 - 91°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 10 NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puut tuu ja spektrissä on uudet piikit 2,4 (s, 3), 6,7 - 7,5 (m, 4) ja 7,8 (s, 1).

Esimerkki 16 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-15 metoksi-5-metyyli-6-[(5-amino-l,2,4-triatsol-3- yyli)amino]-atsiriini[21,31:3,4]pyrrolo[1,2-a]-indoli-4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkar-20 bonaattia. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 3,5-diamino-l,2,4-triatsolista (30 mg) saatiin 13 mg (saanto 5,5 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 117 - 120°C (hajosi), ja analyysi-tiedot seuraavat: NMR (DMSO-d6, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 25 puuttuu ja spektrissä on uusi piikki 5,37 (s, 3). Esimerkki 17 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-Same toksi-5-me tyyli- 6- [(3-metyyli-isotiatsol-5-yyll)amino]-atsiriini[2t,3':3,4]pyrrolo[l,2-a]-30 indoli-4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, mutta lisättiin 0,5 ml trietyyliamiinia. Mitomysiini A.sta (60 mg) ja 5-amino-3-metyyli-isotiat-solihydrokloridista (30 mg) saatiin 4,5 mg (saanto 8,5 %) 35 haluttua tuotetta, jonka sp. oli 87 - 90°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 11 17 80698 NMR (CDC13, TS) δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 2,3 (s, 3), 6,1 (s, 1) ja 6,4 (s, 1).

Esimerkki 18 5 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a- metoksi-5-metyyli-6-[(2-bentsotlatsolyyli)amino]-atsiriini[2',3':3,4]pyrrolo[l,2-a]indol-4-dioni-karbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mu-10 kaisesti, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkar bonaattia. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 2-aminobentsotiat-solista (25 mg) saatiin 12 mg (saanto 18 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 82 - 85°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 15 NMR (CDCI3, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uusi piikki 7,1 - 8,0 (m, 5). Esimerkki 19 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[(6-nitrobentsotiatsol-2-20 yyli)amino]-atsiriini[2',3':3,4]pyrroli[1,2-a]- indoli-4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkarbonaattia. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 2-amino-25 6-nitrobentsotiatsolista (30 mg) saatiin 20 mg (saanto 27 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 86 - 89°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (DMS0-d6, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 6,9 - 8,3 (m, 4).

30 Esimerkki 20 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[(4-klooribentsotiatsol-2-yyli)amino]-atsiriini[2,,3*:3,4]pyrroli[1,2-a]-indoli-4,7-dionikarbamaattl 35 Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mu kaisesti, mutta lisättiin pieni määrä kiinteää kaliumkar- ie 80698 bonaattla. Mitomysiini A:sta (150 mg) ja 2-aminokloori-bentsotiatsolista (27 mg) saatiin 30 mg haluttua tuotetta (saanto 14 %), jonka sp. oli 89 -91°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 5 NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puut tuu ja spektrissä on uusi piikki 7,1 - 8,0 (leveä s, 4). Esimerkki 21 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(2-hydroksietyyliamino) 10 etyyliamino]-atsiΓiini[2,,3':3,4]pyrroli[l,2-a]~ indoli-4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, mutta liuottimena käytettiin dikloorimetaania. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 2-82-aminoetyyliamino)etano-15 lista (18 mg) saatiin 35 mg (saanto 58 %) haluttua tuotet ta, jonka sp. oli 115 - 118°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (CDCI3, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 2,7 (leveä s, 7) ja 3,7 20 (t, 3).

Esimerkki 22 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(4-imidatsolyyli)etyyli-amino] -atsiriini [2 ^3^3,4] pyrroli [ 1,2-a] indoli -25 4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, muttaa liuottimena käytettiin dikloorimetaania. Mitomysiini A:sta (60 mg) ja 2-82-aminoetoksi)etanolista (20 mg) saatiin 30 mg (saanto 42 %) haluttua tuotetta, 30 jonka sp. oli 99 - 102°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat : NMR (CDCI3, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 3,3 - 3,9 (leveä s, 9) ja 6,4 - 6,8 (leveä s, 1).

35 19 80698

Esimerkki 23 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(4-imidatsolyyli)etyyli-βΜίηο]-βΐ8ίΓϋηί[2*,3’:3,4]pyrroli[l,2-a]-5 indoli-4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, mutta lisättiin 128 g natriummetok-sidia. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja histamiinihydroklori-dista (368 mg) saatiin 61 mg (saanto 71 %) haluttua tuo-10 tetta, jonka sp. oli 72 - 73°C (hajosi), ja analyysitiedot olivat seuraavat: NMR (DMS0-d6, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 3,0 - 3,27 (m, 4), 7,5 (s, 1), 8,0 - 8,7 (leveä s, 2) ja 8,1 (s, 1).

15 Esimerkki 24 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[(2-nitro-l-imidatsolyyli)-etyyliamino]-atsiriini[21,3':3,4]pyrroli[l,2-a]-indoli-4,7-dionlkarbamaatti 20 Tämä yhdiste valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti.

Mitomysiini A:sta (72 mg) ja ylimäärästä l-(2-aminoetyy-li)-2-nitroimidatsolia saatiin 60 mg (saanto 70 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 83 - 85°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: 25 NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puut tuu ja spektrissä on uudet piikit 3,4 (t, 2), 4,6 (t, 2), 7,3 (leveä s, 2) ja 7,6 (s, 1).

Esimerkki 25 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-30 metoksi-5-metyyli-6-{2- [5-nitro- (2-pyridyyli )ami- no]etyyliamino}-atsiriini[2 *,3 *:3,4]-pyrroli-[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, mutta liuottimena käytettiin dikloori-35 metaania. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja 2-(2-aminoetyyli-amino)-5-nitropyridiinistä (30 mg) saatiin 40 mg (saanto 20 8 0 6 9 8 56 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 76 - 79°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (CDC13, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 3,3 - 4,0 (m, 4), 6,2 -5 6,7 (leveä s, 2), 8,1 (d, 1), 8,2 (d, 1) ja 9,0 (s, 1).

Esimerkki 26 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(1-plperatslnyyli)etyyli-amlno]-atsiriini[21,3’:3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-10 4,7-dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin muuten esimerkin 1 mukaisesti, mutta liuottimena käytettiin dikloorimetaania. Mitomysiini A:sta (50 mg) ja N-(2-aminoetyyli)piperatsii-nista (20 mg) saatiin 23 mg (saanto 36 %) haluttua tuotet-15 ta, jonka sp. oli 138 - 141°C (hajosi), ja analyysitiedot seuraavat: NMR (CDCI3, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 1,6 - 2,1 (leveä s, 1), 2,2 - 2,6 (leveä s, 8), 2,6 - 2,8 (leveä s, 4) ja 6,9 20 (t, 1).

Esimerkki 27 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(2-pyridyyli)etyyliamino]-atsiriini^*,3':3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-25 dionikarbamaatti Tämä yhdiste valmistettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla. Mitomysiini A:sta (70 mg) ja 250 mg:n ylimäärästä 2-(2-aminoetyyli)-pyridiiniä saatiin 51 mg (saanto 56 %) haluttua tuotetta, jonka sp. oli 64 - 77°C (hajosi), ja 30 analyysitulos seuraava: NMR (CDClj, TS): δ-arvot (ppm): 6-metoksipiikki 4,02 puuttuu ja spektrissä on uudet piikit 2,8 (m, 4) 7,0 - 7,8 (m, 3) ja 8,5 (d, 1).

35

II

2i 80698

Edellä esitetyt esimerkit valaisevat seuraavia rakennemuutoksia : 1. Yhdisteet, joissa Z on hydroksisubstituoitu 1-pyrro-linyyliradikaali, ja joita edustaa esimerkki 1.

5 2. Yhdisteet, joissa Z on alemmalla alkyylillä substi- tuoitu piperidyyliradikaali, ja joita edustaa esimerkki 2.

3. Yhdisteitä, joissa Z on asetamino-, asetyyli-, karb-amido-, syaani-, karboksi(alempi alkyyli)-, di-(alempi alkoksi)-, nitro-, sulfamyyli- tai (alempi alkyyli)subs- 10 tituoitu aniliiniradikaali, edustavat vastaavasti esimer kit 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ja 15.

4. Yhdisteitä, joissa Z on radikaali, jolla on kaava

R

I .

-N-R1 15 ja joissa R1 on typpeä sisältävä heterosyklinen radikaali, joka on aminosubstituoitu triatsolyyli, alemmalla alkyylillä substituoitu isotiatsolyyli, bentsotiatsolyyli tai bentsotiatsolyylin nitro- tai halogeenisubstituoitu johdannainen, edustavat vastaavasti esimerkit 16, 17, 18, 19 20 ja 20.

5. Yhdisteitä, joissa Z on radikaali, jolla on kaava

R

I .

-N-R1 jossa R1 on substituoitu alempi alkyyliradikaali, joka on 25 hydroksi(alempi alkyyliamino) (alempi alkyyli), hydroksi- (alempi alkoksi) (alempi alkyyli), imidatsolyyli(alempi alkyyli), (nitrosubstituoitu pyridyyliamino) (alempi alkyyli), piperatsinyyli(alempi alkyyli) ja pyridyylietyyli, edustavat vastaavasti esimerkit 21, 22, 23, 24, 25, 26 ja 30 27.

Vaikka yksikään edellä esitetyistä esimerkeistä ei valaise yhdisteitä, joissa Y on muu kuin vety, kuuluvat yhdisteet, joissa Y on alempi alkyyli, kuitenkin keksinnön piiriin; tässä yhteydessä viitataan US-patenttijulkaisui-35 hin 4 268 676, 4 460 599 ja 4 617 387.

Claims (25)

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten mito-mysiini A-johdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava 5 III: ° o IJ^__^^CH2OCNH2 I H J___OCH3

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 20 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5- metyyli-6-(3-hydroksi-l-pyrrolidinyyli)atsiriini-[2',3’:3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 3-pyrrolidinolin kanssa.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,1a,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5--metyyli-6-(3-metyylipiperidyyli)atsiriini[2',3*:3,4]pyr-roli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan rea-30 goimaan 3-metyylipiperidiinin kanssa.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[4-(asetyyliamino)aniliini]atsiriini[2',3':3,4]-pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, 24 8 0 6 9 8 tunnettu siitä, että raitoraysiini A saatetaan reagoimaan 4-(asetyyliamino)aniliinin kanssa.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-5 metyyli-6-[3-(asetyyliamino)aniliini]atsiriini[2',3':3,4]-pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 3-(asetyyliamino)aniliinin kanssa.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 10 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5- metyyli-6-(4-asetyylianiliini)atsiriini[2',3’:3,4]pyrroli-[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 4-asetyylianiliinin kanssa.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[4-(1-ureido)aniliini]atsiriini[2',3':3,4]pyr-roli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan rea-20 goimaan 4-(1-ureidoJaniliinin kanssa.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-(4-syaanianiliini)atsiriini[2',3’:3,4]pyrroli-[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, 25 tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 4-aminobentsonitriilin kanssa.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-(3-syaanianiliini) *·atsiriini[2' ,3' :3,4]pyrroli-30 [1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 3-aminobentsonitriilin kanssa.

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-35 metyyli-6-[4-(N-glysyyli)aniliini]atsiriini[2',3':3,4]pyr- II 25 80698 roll[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 4-(N-glysyyli)aniliinin kanssa.

10 III H3C l| |_l^NY 15 jossa Y on vety tai alempi alkyyli; ja X on hydroksisubs-tituoitu 1-pyrrolidinyyliradikaali tai alemmalla alkyylil-lä substituoitu piperidyyliradikaali, tai asetamino-, ase-tyyli-, karbamido-, syaani, karboksi(alempi alkyyliami-no)-, di-(alempi alkoksi)-, nitro- tai sulfamyylisubstitu-20 oitu aniliiniradikaali tai radikaali, jolla on kaava: R -i-R1 25 jossa R on vety tai alempi alkyyli ja R1 on typpeä sisältävä heterosyklinen radikaali, joka on aminosubstituoitu triatsolyyli, alemmalla alkyylillä substituoitu isotiat-solyyli, bentsotiatsolyyli tai bentsotiatsolyylin nitro-30 tai halogeenisubstituoitu johdannainen, tai R1 on substituoitu alempi alkyyliradikaali, joka on hydroksi(alempi alkyyliamino) (alempi alkyyli), hydroksi(alempi alkoksi) (alempi alkyyli), imidatsolyyli(alempi alkyyli), (nitro-substituoitu imidatsolyyli) (alempi alkyyli), (nitrosubs-35 tituoitu pyridyyliamino) (alempi alkyyli) tai piperatsi- II 23 80698 nyyli (alempi alkyyli), tunnettu siitä mitomysiini A tai N-alkyyli-mitomysiini A saatetaan reagoimaan amiinin kanssa, joka on pyrrolidinoli, tai alempi alkyylipiperidiini, tai 5 asetamino-, asetyyli-, karbamido-, syaani-, kerh oksi (alempi alkyyliamino)-, di(alempi alkoksi)-, nitro-tai sulfamyylisubstituoitu aniliini, tai amiini tai sen (alempi alkyyli)substituoitu johdannainen, joka on aminosubstituoitu triatsolyyliamiini, 10 (alempi alkyyli)substituoitu isotiatsolyyliamiini, bent-sotiatsolyyliamiini tai nitro- tai halogeenisubstituoitu bentsotiatsolyyliamiini, hydroksi(alempi alkyyliamino) (alempi alkyyliamiini), hydroksi(alempi alkoksi) (alempi alkyyliamiini), imidatsolyyli(alempi alkyyliamiini), nit-15 rosubstituoitu imidatsolyyli(alempi alkyyliamiini), nitro-substituoitu pyridyyliamino(alempi alkyyliamiini) tai pi-peratsinyyli(alempi alkyyliamiini), ja saatu tuote eristetään reaktioseoksesta.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-5 metyyli-6-(3,4-dimetoksianiliini)atsiriini[2',3':3,4]pyr-roli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 3,4-dimetoksianiliinin kanssa.

12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 10 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5- metyyli-6-(3,5-dimetoksianiliini)atsiriini[2',3':3,4]pyr-roli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbaraaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 3,5-dimetoksianiliinin kanssa.

13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-(4-nitroaniliini)atsiriini[2 *,3':3,4]pyrroli-t1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan rea-20 goimaan 4-nitroaniliinin kanssa.

14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-(4-sulfamyylianiliini)atsiriini[2',3':3,4]pyr-roli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, 25 tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan sulfanilamidin kanssa.

15. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[(5-amino-l,2,4-triatsol-3-yyli)amino]atsiriini-30 [2',3':3,4]pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin val mistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 3,5-diamino-l,2,4-triatsolin kanssa.

16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5- 26 80698 metyyli-6-[(3-metyyli-isotiatsol-5-yyli)amino]atsiriini-[2',3':3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 5-amino-3-metyyli-isotiatsolin kanssa.

17. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-5 metyyli-6-[(2-bentsotiatsolyyli)amino]atsiriini[2',3’: 3,4]pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 2-aminobentsotiatsolin kanssa.

18. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 10 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5- metyyli-6-[(6-nitrobentsotiatsol-2-yyli)amino]atsiriini-[2’,3':3,4]pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 2-amino-6-nitrobentsotiatsolin kanssa.

19. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[(4-klooribentsotiatsol-2-yyli)amino]atsiriini-[2',3':3,4]pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A 20 saatetaan reagoimaan 2-aminoklooribentsotiatsolin kanssa.

20. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(2-hydroksietyy1iamino)etyy1iamino]atsiriini-[2',3':3,4]pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin val-25 mistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan 2-(2-aminoetyyliamino)etanolin kanssa.

21. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-30 metyyli-6-[2-(2-hydroksietoksi)etyyliamino]atsiriini- [2',3':3,4]pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A II 27 80698 saatetaan reagoimaan 2-(2-aminoetoksi)etanolin kanssa.

22. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,13,2,8,88,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(4-imidatsolyyli)etyyliamino]atsiriini- 5 [2',3':3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin val mistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan histamiinidihydrokloridin kanssa.

22 8 0 6 9 8

23. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-10 metyyli-6-[(2-nitro-l-imidatsolyyli)etyyliamino]atsiriini-[2',3':3,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan l-(2-aminoetyyli)-2-nitroimidatsolin kanssa.

24. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-{2-[(5-nitro-2-pyridyyli)amino]etyyliamino}atsi-riini[2',3':3,43pyrroli[1,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini 20 A saatetaan reagoimaan 2-(2-aminoetyyliamino)-5-nitropyri-diinin kanssa.

25. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 1,la,2,8,8a,8b-heksahydro-8-hydroksimetyyli-8a-metoksi-5-metyyli-6-[2-(1-piperatsinyyli)etyyliamino]atsiriini-25 [2',33,4]pyrroli[l,2-a]indoli-4,7-dionikarbamaatin val mistamiseksi, tunnettu siitä, että mitomysiini A saatetaan reagoimaan N-(2-aminoetyyli)piperatsiinin kanssa. 28 80698