DD144540A5

DD144540A5 - Verfahren zur herstellung von di-o-n-alkylglyzerinderivaten

Info

Publication number: DD144540A5
Application number: DD79212895A
Authority: DD
Inventors: Allen R Kraska
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1978-05-15
Filing date: 1979-05-15
Publication date: 1980-10-22
Also published as: NO791604L; PH15256A; IT1115217B; AU4701679A; NL175524C; CH639939A5; GT197957869A; PT69607A; DE2919514C2; SE7904216L; AT372678B; JPS5924974B2; BE876229A; US4173641A; CA1105935A; MY8500096A; JPS58131947A; FI69450C; SG65483G; YU41156B

Description

Verfahren zur Herateilung von Di-O-n-alkvlglyzerinderivaten

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung neuer 1,2- und l,3-(Di-0-n~alkyi)-»glyzerinderivaten, welche als nicht-spezifische Stimulanten von durch Zellen vermittelter Immunität bei warmblütigen Tieren vorteilhaft sind. Diese neuen Verbindungen und verwandte Verbindungen haben sich insbesondere als brauchbar bei der Stimulierung von Antitumoraktivität, insbesondere bei der Verbindung zusammen mit einer konventionellen, cytoreduzierenden Therapie, herausgestellt. Die erfindungsgemäß hergestellten Verbindungen sind ebenfalls als Hilfsstoffefür Vaecinen brauchbar» d,h, sie sind vorteilhaft in Verbindungen mit bekannte^ immunologischen Substanzen, um deren immunogenes Ansprechen zu induzieren oder zu verbessern.

ik^der bekannten;_mtechnischen Lösungen:.

Es ist bekannt, daß biologische Vaccinenwie Corynebacterium parvuin und BOG, ein lebensfähiger Stamm· von Hycobacteriura bovis, und das synthetische Le'vamisol als Immunstimulantien des Restikuloendotheliomsystems bräuchbar sind und daß sie in der Lage siad, die Widerstandsfähigkeit von warmblütigen Tieren gegenüber Tumoren zu erhohen. Jedoch war die Verwendung dieser Mittel wegen der Leber-lTieren-Ioxizität, der Granulonbildung, der Heutropenie und unstetigen, therapeutischen Effekten eingeschränkt. Daher besteht ein fortwährendes Interesse an der Entwicklung von nicht-biologischen, systemisch aktiven Immunstimulantien. Weiterhin ist die Ent» wicklung von Verbindungen von Interesse,, welche als Susatzstoffe oder Hilfsstoffe für Vaccine brauchbar sind, um die Effekte von konventionellen Vaeeinen zu induzieren oder zu fördern* Hinsichtlich einer Diskussion der Stimulierung von durch Zellen vermittelter Immunität und Antitumoraktivität wird auf die. folgenden Literaturstellen verwiesen?

Herberman, Adv. Cancer Res., H (1971), 207? Jordan und" Merigan, Ann. Rev, Pharmacol,, 1^(1975)·, 157» Levy und Wheelock, Adv. Cancer Res., 20 (1972), 131i und Sinkovics, Post Graduate Medicine, j^ '(19-76), 110.

In der US-PS 2 738 351 sind Verbindungen der allgemeinen Pormel (I), worin jeder der Reste R₁ und R₂ ein Alkylrest, nicht-substituierter oder substituierter Aryl- oder Ära!-* kylrest ist, jeder der Reste X, Y und Z Sauerstoff, Schwefel oder ein Sulfonylrest sein kann, AlK ein geradkettiger oder verzweigter Alkylenrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist, und B ein Di-(nieder)-alkylamino-, Piperidino-, Morpholino-, Pyrrolidino-, Niederalkylpyrrolidiono-, N^{-A1^.. kylpiperazinc- oder Pipecolinorest ist, als Lokalanaesthetika beschrieben«, Bei der Erläuterung von anderen Synthese wegen in dieser Patentschrift sind"'weiterhin Zwischenpro- ' dukte der zuvor angegebenen Pormel genannt, worin B ein ' "" - V ' '.. " : '.' ' ' ' ' ' ' . ., ' ^ " " Λ--3 -. ?&

Aminorest und Hiederalkylaminorest ist. Jedoch enthält keine der spezifisch in dieser Patentschrift genannten Verbindungen einen Alkylrest R₁ oder R₂,. der größer als 'der n-Pentylrest ist. Weiterhin sind bei keiner dieser Verbindungen die beiden Reste R₁ und R^Alkylresteund die beiden Reste X und Y Sauerstoffatome.

Insektizid und mitizid wirkende Verbindungen der allgemeinen formel II/worin die Reate R₁ und Rg jeweils unter anderem IJiederalkylthioreste, q = 0. bis 5 und A unter anderem ein 1-Piperidino- oder Di-niederalkylaminorest sein können, sind in der JP,-PS J7-6O42-177 beschrieben.

In der üS-Patentanmeldung 825 535 ßind unter anderem Verbindungen der Formeln (III), (IV) oder (V),worin R ein Wasserstoffatom oder ein Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist und R-j und Rg jeweils n-Alkylreste mit 12 bis 20 Kohlenstoffatomen sind. Diese Verbindungen sind als brauchbare Antivirusmittel bezeichnet.

ZJeI_n. der Erfindung:,

Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur Herstellung von Verbindungen der Formel (VI) oder (VII), ^orin R₁ und R₂ jeweils ein n-Alkylrest mit 8 bis 11 Kohlenstoffatomen und X ein Rest mit der Formel (VIII) oder (IX) ist, worin R ein Wasserstoffatom oder ein Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist, sowie die pharmazeutiisch annehmbaren Säureadditionssalze hiervon.

Bei einer Gruppe von interessierenden Verbindungen ist X der ^Aminomethyl-^phenyl-piperidinorest. Von solchen Verbindungen sind Verbindungen bevorzugt, worin R₁ und R₂ die gleiche Anzahl von Kohlenstoffatomen besitzen, und insbesondere Verbindungen, " worin R₁ und R₂ jeweils der n-Decyl»· rest sind. Am meisten bevorzugt von dieser Gruppe sind Ver~

bindungen der Formel (VI) ν

Weiterhin von Interesse sind solche Verbindungen, worin X der (l«-Hydroxy-2-alkylasiinoäthyl)-benziyloxyrest ist. Besonders bevorzugt sind solche Verbindungen, worin R-^ und R₂ die gleiche Anzahl von Kohlenstoffatomen besitzen, und insbesondere solche Verbindungen, worin R-, und R2 der n-Decylrest sindf Der Heat R ist vorzugsweise ein Nieder-n-alkvlrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, inabesondereder Ithvirest. Verbindungen der Formel (Vl). sind am meisten bevorzugt.

Ziel der Erfindung im weiteren Sinn ist die Bereitstellung von Mitteln für ein Verfahren zur Stimulierung der nichtspezifischen, durch Zellen vermittelten Immunität bei einem Y/äriablüter, wobei sich das Verfahren dadurch auszeichnet, daß dem Tier eine die Immunität stimulierende, wirksame Menge einer Verbindung einer der allgemeinen Formeln (X) oder'-(XI),-•worin R-j und R^ jeweils ein n-Alkylrest mit 8 bis 20 Kohlenstoffatomen sind, und Σ ein Rest der Formel (VIII) oder (21) ist, worin ein Wasserstoffatom oder ein Alfcylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist, oder eines der pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze hiervon appliziert wird. Be-" sonders bevorzugt ist ein Verfahren, bei welchem eine Verbindung appliziert wird,' in. der. der Rest X in der applizierten Verbindung der 4-Aminomethyl-4-phenyl-piperidino~ rest ist, und ,insbesondere solche Verbindungen, worin R^ und R₂ jeweils die gleiche Anzahl von Kohlenstoffatomen besitzen und insbesondere n-Decylre3t sind, wobei die Applikation von Verbindungen der Formel (X) am meisten bevorzugt ist. \ · '

. We sen S₁₁₁ der,, Erf indun^:,

Die neuen Verbinaungen sind Derivate von 1,2-(Di-O-n-alkyl)-glyzerinen oder l,-3-(Di-0-n-alkyl)-glyzerinen, und sie können in einfacher Weise aus solchen Verbindungen nach dem

Pächmann an sich bekannten Methoden hergestellt werden. Ausgangsmaterialien in Form von l,2-(Di-0-n-alkyl)-glyzerinen können entsprechend der Beschreibung von Kates et al., Biochemistry, 2 (I963), 394 hergestellt werden. Die Ausgangsmaterialien in Form von l,3~(Di-0-n-alk7l)-gl:yzerinen können nach der Methode von Damico" et al., J· Lipid Res*, (1967), 63» hergestellt werden. > ,»

Erfindungsgemäß herzustellende Verbindungen, worin der Rest X ein 4-Aminomethyl~4~plienyl~piperidinorest ist, können beispielsweise aus solchen 1,2- und 1,3~(Di-O-n-alleyl)~glyze~ rinen hergestellt worden, indem zunächst das Tosylderivat des Ausgangsmaterials durch Reaktion mit p-Toluolsulfonylchlorid unll Pyridin in einem reaktionsinerten Lösungsmittel

! 'O

wie Methylenchlorid bei einer Temperatur von etwa -10 G bis 4O⁰G und vorzugsweise von 1O⁰G bis 25° C hergestellt wird. Das Tosylderivat wird dann mit 4~Gyano-4~phenylpiperidin durch gemeinsames Erhitzen der Reaktionsteilnehmer auf etwa 75 ö bis 25O⁰C umgesetzt. Dies wird vorzugsweise ohne Zugabe eines Lösungsmittels durchgeführt, jedoch kann gegebenenfalls ein reaktionsinertes Lösungsmittel wie Dimethylformamid eingesetzt werden. Das erhaltene üitril wird dann zu dem gewünschten Amin reduziert, beispielsweise unter Verwendung von .Raney-Nickel und Y/asserstoff.

Verbindungen, in welchen der Rest X ein (l-Hydroxy-2-alkylaminoäthyl)»benzyloxyrest ist, können durch Umsetzung der -1,.2- oder r,3-(Di-0-n-alkyl)-glyzerin£i,uegangsmateria~ lien unter Bildung eines Gyanobenzylderivates hergestellt werden. Dies kann durch Umsetzung mit einem geeigneten Cyänobenzy!halogenid wie Oyanobenzylbromid in Anwesenheit eines Alkalimetallhydrids_r z.B. ITatriumhydrid, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, im allgemeineö einem Äther wie Tetrahydrofuran, unter einer" Stickstoffatmosphäre und bei einer Temperatur zwischen etwa 2O⁰G und 65⁰G durchgeführt vjerden. Das Cyänobenzy!derivat wird dann zu dem ent-

sprechenden Förmylbenzy!derivat mit einem Alky!aluminiumhydrid, wie Diisobuty!aluminiumhydrid, in Benzol unter Stickstoff bei etwa 15⁰Cbis 35⁰C reduziert. Das erhaltene Formalbensylderivat -wird dann zu"dem r,2-Epoxyäthylbenzyiderivat durch Reaktion mit einem in Dimethylsulfoxid Duspendierten AlkaliHietaXlhydrid ' in Anwesenheit von Trimethylsulfohiumjodid bei einer Temperatur von etwa -5 C bis 10⁰C umgewandelt« Wenn der Rest ein Alkylrest ist, •s?ird die gewünschte Verbindung durch Reaktion des 1,2- . Spoxyäthylbenzy!derivates mit einem Amin KWH bei einer Temperatur von etwa 75°C bie 135°Q gebildet. Wenn R ein Wasseratöffatom ist, wird das Epoxid durch Reaktion mit Uatriumazid in Dioxan bei Rückflußtemperatur geöffnet, dann folgt did Reduktion zum gewünschten Amin durch Inkontaktbringen mit einem Reduktionsmittel v*ie Lithiumaluminiumhydrod od,er Natriumaluminiumhydrid in Äther bei .einer Temperatur von etwa 20⁰C bis 35⁰C. ·

Faarmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze der entsprechend der zuvor gegebenen Beschreibung gebildeten Amine können nach konventionellen Methoden hergestellt werden, z.B. durch Vermischen des geeigneten Amino und der geeigneten Säure in einem inerten Lösungsmittel und Gewinnung des Salzes durch^: Eindampfen des Lösungsmitteis oder durch Aus- ; fällung des Salzes. Die Hydrochloridsalze können in einfacher V/eise durch Durchleiten von Chlorwasserstoffgas durch eine Lösung des Amins in einem inerten Lösungsmittel hergestellt werden. Die auf diese Weise erhaltenen Hydrochlerid-Dihydrochloridsalze neigen dazu, eine geringe Menge an Kristallisationswasser oder an eingeschlossener Wasser zu enthalten, Dies ist im Rahmen der.vorliegenden Erfindung nicht schädlich, solche Verbindungen können ohne weitere Entwässerung formuliert und appliziert werden. Die neuen Verbindungen umfassen- daher sGViohl die hydratisiferten als auch/ die nichthydratisierten. Verbindungen, Geeignete, ph'ärma-, ' · zeutisch annehmbare Säuresalze umfassen solche wasserlöa-

lichen und wasserunlöslichen Salze wie die Hydrochlorid-, Hydrobromid-, Phosphat-, Uitrat-, Sulfat-, Hexafluorphosphat-, Zitrat-, Glucdnat-^ Benzoat-* Propionat-, Butyrat-,+ SuIfosalicylat-, Maieat-, Laurat-, Malat-, Fumarat-, Succinat-, Oxalat-, Tartrat-, Amsonat-, ,(4>4'-Βχ3ΐηίήο-3ί-7ΐ^1η-Z₁ 2'-disulfonat)-, Pamoat-, (1,1 ·-Methylen-"bis-2-hydrox^-3-naphthoat)-, Stearat-, 3~Hvdroxy-2-naphthoat-, p-Toluolsstulfonat-, Me.thansiilfonat-, Lactat- und Suraminsalze.

Die durch die Formel (X) und (XI) wiedergegebenen Verbindungen, d.h. die erfindungagemäßen, neuen Verbindungen der Formeln (VI) und (VII) und die höheren Alkylätherhomologe, welche in der US-PA 825 535 beschrieben sind, haben sich als Mittel für die nichtspezifische Stimulierung der durch ZeI-,len vermittelten Immunität bei warmblütigen Tieren herausgestellt, und insbesondere sind sie bei der Stimulierung des RetiGuloendötheiiomsystema brauchbar. Die zuvor beschriebenen Verbindungen können bei einem warmblütigen Tier auf einer Vielzahl von konventionellen Wegen appliziert werden, insbesondere intravenös oder intraperitoneal, wobei Dosismengen. von etwa 0,5 bis 5 mg/kg Körpergewicht des zu behandelnden "Lebewesens geeignet sind, wenn die Applikation auf diesen Wegen erfolgt. Jedoch kann der Arzt die besondere, für'den einzelnen Patienten am meisten geeignete Dosierung bestimmen, wobei dies von dem zu behandelnden Lebewesen und der besonderen, eingesetzten Verbindung abhängig ist. Im all- ' gemeinen werden kleine Dosen,,zu Beginn appliziert und diese können allmählich gesteigert werden, um die optimale Dosierung für den b etreff enden Patienten festzulegen. Die Immunfähigkeit des Lebewesens wird im allgemeinen im Anschluß an die Applikation überwacht_s wobei konventionelle auf dem Fachgebiet angewandte Arbeitsweisen eingesetzt werden, beispielsweise Untersuchung© der Monocytenaktivierung und der Macrophagenaktivierung, die im folgenden noch näher erläutert werden. Typischerweise wird die maximale Aktivierung etwa 24 bis 48 Stunden nach der anfänglichen Appli-

-8

Nation beobachtet und "bei fehlender Applikation von weiteren Bosismengen niimnt die Aktivierung bis auf den Anfangender t während einer weiteren Periode von 24 bis 43 Stunden wieder ab. Daher hält eine Applikation einer zv?eiten Dosis ungefähr 24 bis 72 Stunden nach der Anfangsapplikation den gewünschten Wert der Imiaunfähigkeit aufrecht« Im allgemeinen werden 2 bis 4 Dosen auf diese Weise appliziert, und das Ansprechen des Lebewesens auf die Behandlung bestimmt. V/eitere Dosen können dann, falls erforderlich, entsprechend der zuvor gegebenen Beschreibung appliziert werden,

Die Verbindungen können in pharmazeutischen Präparationen oder Arzneimitteln zugesetzt werden, welche die "Verbindung. . oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon in Kombi~ nation mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel enthalten. Ein besonders bevorzugter Typ Von pharmazeutischem Träger für diesen Zweck ist ein Träger in Form eines sterilen Fettes oder einer Lipidemulsion. Der letztgenannte Trägertyp hat sich als besonders wirksam für die pärenterale und intravenöse Applikation herausgestellt, wodurch der therapeutische Index auf einen Wert von etwa 15 bia 25 erhöht wird, während bei Formulierungen mit einem grenzflächenaktiven Mittel (Tween 80) - Glyzerin-Wasser therapeutische Indices von etwa 3 bei Mäusen und Ratten in ersten Tests mit den Niederalkylä.thern gemäß der Erfindung beobachtet v/urden, beiepielsv«/eise mit 4-Aminomethyl~l-/~2.,3-di-n~Qctyloxy)~n-prpyl7--4~phenylpiperidin. Solche Vorteile wurden auch für andere Verbindungen, welche zusammen mit Fett-Emulsionsträgern verwendet wurden, berichtet, siehe beispielsweise Fortner et al., American Journal of Hospital Pharmacy j ^ (1975), 502 und Jeppsson et al., First International Conference on Pharmaceutical Technology, Faculty of Pharmacy, Paris-Süd, Juni 1977. Ein Beispiel eines besonders geeigneten Trägers ist eine auf Soo-abohnenöl basierende 10 %ige Fetteraulsion, die-im Handel erhältlich ist (Bezeichnung Intralipid von Cutter Laboratories, Berkelyj

Kalifornien, USA). Jedoch können auch andere ähnliche Träger geeignet sein, und sie können in einfacher Weise vom Facbsaann hergestellt werden^. _:

"Verbindungen der Formeln (X) und (XI) sind ebenfalls als Hilfsatoffe für Vaccines brauchbar, und sie können für dieselben Zwecke eingesetzt und nach denselben Methoden appliziert werden, wie bei derzeit bekannten Hilfsstoffen bzw. Zusatzstoffen, siehe z.B. die Literaturstelle "Immunological Adjuvants", World Health Organization, Technical Report Series, Uo, 595. Beispielsweise sind die erfindungögemäßea Verbindungen brauchbar mit Väccinen wie Vaccinen gegen Influenza, Maul- und Klauenseuche und Diphtherie, wobei dies' OedocÜ keine Beschränkung bedeutet. Die Verbindung kann in der ¥accinedosis in einer Menge von etwa 1 bis 20 mg pro Vaccxnedosis, vorzugsweise in einen pharmazeutisch annehmbaren' Träger eingegeben werden, beispielsweise einem Fett oder einer Mpidemulsioa oder Glyzerin. Die Dosis Vaccine-Hilfsstoff wird dann dem lebewesen in der für die besondere Vacciae konventionellen Weise appliziert, im allgemeinen als Einzeldosis, welche subkutan oder intramuskulär zugeführt wird. Alternativ kann der Hilfsstoff unabhängig von der Vaccine und entweder gleichzeitig oder vorzugsweise etwa 8 bis 24 Stunden vor der Applikation der Vaccine gegeben wer-' den.\ · · '.' '.-. .. .. ' ' . .. - .... '. .

Die äle Immunität stimulierende Aktivität und Antitumoraktivität der hier geschriebenen Verbindungen lcann nach, pharmäkologischen Tests bestimmt werden. Geeignete Tests umfassen die Bestimmung der peritonealen Makrophagenaktivierung, die Bestimmung der Tumorsiurückweisung (Sarcoma~180J-Mödell), die Bestimmung der verzögerten, kutanen Hypersensitivität und die Bestimmung der peripheren Monocytenaktivierung, Solche Tests werden im folgenden noch vollständiger beschrieben and anhand von Beispielen gezeigt, zusammen mit hierbei erzielten Ergebnissen für Verbindungen der vorliegenden Er-

findüng. Y/eiterhin werden noch geeignete Teats für die Bestimmung der Aktivität ala Vaccinehilfsstoff angegeben.

Ausführun^abeispielei!

Die Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele näher er läutert, wobei diese jedoch nur spezifische Ausführungsfor men betreffen.

Beispiel;, JL ' .· '.. .;.'. : ; ' ' .- · . _ ' ' . ' .. .;...

4-Cyano-l-_i/"*2,3-)di-rii-decyloxy)-n-propyl/-4-phen^l-piperadin

( '. - " -. .

20 g = 0,0189 moll,2-(Di-0-n-decyl)-3-0-(p-to8yl)-glyaerin, hergestellt aus l,2-Di-O-Cn-decyl)-glyzerinchlorid, aov/ie 4,5 g = 0,024 mol 4~Cyano-4~phenylpiperidin wurden zusammengegeben und 20 Minuten auf 18O⁰C erhitzt, Bs wurden 50ml · Wasser und 100 ml Äther zu dem abgekühlten Produkt zugesetzt« Die Ätherschicht wurde isoliert und mit gesättigter Hatriumbicarbonatlösung (2 χ 100 ml), 111 Salzsäure (lOO ml), Wasser (2 χ 100 ml), gesättigter Natriumbicarbonatlösung (100 ml) und Wasser (100 ml) gewaschen. Die Ätherlösung wurde dann über Magnesiumsulfat getrocknet, mit Aktivkphle behandelt, filtriert und zu 10 g eines Öles eingeengt. Das öl wurde auf Kieselerdegel absorbiert, dieses wurd dann mit Hexan (3 x 200 ml), Toluol (3 x 200 ml), Chloroform (3 x 200 ml) i|nd Äthylacetat (3 x 200 ml) gewaschen. Die Athylacetatfraktionen wurden eingeengt, wobei die reine Cyanoverbindung in Form eines Öles erhalten wurde

IR-Spektrum (Reinaubstanz) 2220 cm"¹.

Bglgp_iel__2. ·\^; ' ^; -^: · · . .· ' . ; v.' ' '. ' .

4-Aminoäthyl-l- £"2_t 3- (di-n^deoyloxy )-n-ⁱpropyl7-4~phenylpiperidin ^: -

M,-

1,2 β -0,0022 mol des in Beispiel 1 hergestellten Uitrxls wurden in 50 ml Äthanol aufgelöst und die Lösung wurde dann iriit, Ammoniäkgas gesättigt, Diese lösung wurde bei einem ;.-. Druck von 345 kPa während 3 Stunden unter Verwendung von 0,7 g Raney-Nickel als Katalysator hydriert. Sfach dem Abschluß der Reduktion wurde das Gemisch filtriert, und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck zu 1,1 g eines Öles eingeengt. Dieses wurde über Kieselerdegel unter Elution mit Benzol:Äthanol chromatografiert, in das Hydrochloride salz umgewandelt und aus Äthylacetat umkristallisiert, wobei 0,32 g (Ausbeute 24 %) des reinen Hydrochlorides mit F. 138-140⁰C erhalten wurden.

Analyse auf C₃₅H₆₄H₂O₂.2HGl.3/4H₂O:

berechne|i C - 66,59 H =10,78 H .= 4/44:^, ' gefunden: C = 66*46 H = 10,56 N/ = 4,43 %

4-Gyano-i-/~2,3-(di-n-hexadecyloxy)-n-propyl7-4-phenylpipe-,ridin. ' ...' . ' ' .- -.·.. ' ',. · ··. . ; "." ^:'·-

l,2~Di-0-(n-hexadecyl)-3-0-(p-tosyl)-glyzerin wurde durch Umsetzung von! 1,2-Di-O-(n-hexadecyl)-glyzerin mit p-Toluol-« sulfonylchlorid hergestellt. Die Reinigung wurde durch. Umkristallisation aus Äthylacetat durchgeführt. P* 53-55⁰C;· IR-Spektrum (CHCl₃) I36O und 1180 cm"¹ ,

ISin Gemisch aus 6,96 g = 10'.-'MJIoI l,2-Di-0-(n-hexadecyl)~3-O~(p~tosyl)-glyzerin, 2,23 g ^a 10 MiIoI 4-Cyano-4-phenylpiperidinhydrdchlorid, 2 ml Triäthylainin und 40 ml H_sn-Dimethy!formamid wurde It Stunden bei" 95⁰C bis 100⁰C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde dann abgekühlt, mit 200 ml V/asser verdünnt und mit Äthylacetat (3 .x' 150 ml) extrahiert. Der

vereinigte Xthylacetatextrakt vmrde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu 6 g eines ölea eingedampft. Dieses Öl wurde durch. Säulenchromatografie unter Slution mit Benzol :Äthyia<setat chroamtograflert. öl} IR-Spektrum CCHGl₃) 2220 cm"³·. - :

Beispiel 4 . , *' /: '-.'... .:. "'' ' ' .' ' ...·., . ^; ' "" .

4-Aminömethy1-1-2,3-(di-n~hexadecyloxy)-n-propyl-4-phenylpiperidin-dihydrochlorid "

Eine Lösung von 2,5 g =» 3,6 mmol 4-C^lya.no-l-/^'3-(di»n-hexadecyloxy)-n-propyl7-4-pheny!piperidin in 100 ml Äther wurde mit 0,4 g = 10,5 mmol Lithiumaluminiumhydrid behandelt, und dae erhaltene Gemisch wurde 4 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch Yiurde vorsichtig mit 100 ml \7asser behandelt und mit Xther (3. x 100 ml) extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Öl eingedampft. Dieses Öl -wurde mittels Kieselerdegelchrcmatografie unter Elution mit BenzdlsÄthanol gereinigt und dann in Chloroform aufgelöst. Diese Lösung wurde mit Chlorwasserstoffgas behandelt und dann im Vakuum unter Bildung eines Feststoffes eingedampft. Dieser Feststoff wurde auf Äthylacetat umkristallisiert, wobei 1,1 g Feststoff mit einer Ausbeute von 40 %_f der etvm 4/4 ^m°3- H₂O pro mol dee Verbindung enthielt, erhalten wurden

F.' 132 - 134⁰C. :."' ; ^Λ ;^: . ^:;.-"; ; ;. : ' , .\ . ; ,..> ^: .;.. . . .;,'

Slementaranalyse: :

berechnet: C « 70,60 H =11,53 N =3,50 % gefunden: C= 70,74 H= 11,34 1=3,40%

- 1

Beispiel _n 5

Unter Befolgung .der Arbeitsweise der Beispiele 1 bis .würden-Verbindungen der Formel (XII.) Hergestellt:

F. (⁰C)

Molekülforniel berechnet gefunden

O₁₆H₃₃ 40-42: C₄₇H₈₈O₂THCIrH₂O C 73,53 C 73,77

j _{: ;} . - H 11,94 H 11,77

; _; . · - H 3,64 Ii 3,85

115-117 C₅₁H₉₆O₂.2HCl

C 71,95 C 71,67. H 11,60 H 11,19 H 3*29 N- 3,38

C₁₄H₂₉ 140-142 C₄₃H₈₀O₂U₂.2HCl

C 69,46 C 69,45 H 11,25 H 11,00 N 3,75 H 3,45

C₈H₁₇ 176-178(d)

•2HCl'1/2H₂O

sowie der Formel (XIII)V

C 65,24 Ή 10,42 Ή 4,90

C 65,27 H 9,90

Ü 4,95

. (⁰C)

Molekülformel berechnet gefunden

<*) (S)

19P-192 O₃₅Ii₆₄U₂O₂.2HO1..3/4B₂O C 66,58 C 66,JO

H 10,78 H 10,20 ; H 4f43.U 4,27

In vergleichbarer Weise können v?eitere Verbinduhgen gemäß der Erfindung aus dem geeigneten 1*2-·.oder 1,.3-'(Μ"·η~0-alkyl)~glyzerin über die T.oay!derivate hergestellt werden·

-14

Beispiel .,6 ; · " · '...-.... \ .. λ'- ^{:: ; ;:} -; ^:. . Ij2-Di-O-{n-hexadecyl)-3-0-(3-cyanobenzyl)-glyzerin

1,056 g = 0,022 mol Natriumhydrid als 50 $ige Dispersion in Mineralöl wurden zu eiaer Lösung von l,2-M-0«n-hexadec:ylglyzerin in 150 ml Tetrahydrofuran zugesetzt und 20 Minuten unter Stickstoff gerührt. Es wurden 4,0 g = 0,020 mol m-Cyanobenzylbromid zu dem Gemisch hinzugegeben Und bei ' Zimmertemperatur über !facht reagieren gelassen. Dann wurden vorsichtig 200 ml Wasser zugesetzt, und das Aifäßrige Gemisch Yjurde mit Äthylacetat (3 χ 150 ml) extrahiert. Die Extrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt, wobei 12 g eines Öles erhalten wurden. Dieses Öl wurde über Kieselerdegel unter Blution mit Benzol/Hexan (8/2) chromatografiert, .wor bei 8,0 g reines l,2-Di~O-n-(n-hexadecyl)-3-0-(3-cyanobenzyl)-glyzerin in Form eines Öles erhalten wurden. IR«Spektrum (CHXl₃) 223C cm"¹· .

Beispiel,^ J

l,2-Di-O-(n-hexadecyl)-3-O-(3-f ormylbenzyD-glyzerin

5»Og = 7,6 mmoll,2-Di-O-(n-hexadecyl)-3-0-(3-cyanobenzyI)-glyzerin vyurden mit 1,17 g = 0,2 imol Diisobuty!aluminiumhydrid in 25 ml Benzol unter einer Stickstoffatmosphäre l6 Stunden bei Umgebungstemperatur reagieren gelassen. Das Eeaktionsgemisch wurde mit 4,22 ml Methanolund 2,5 ml Wasser behandelt und 30 Minuten gerührt, bis alles nicht umgesetzte Hydrid zersetz war. Das Gemisch wurde filtriert, mit Benzol (3 x 25 ml) extrahiert, und die vereinigten Benzolextrakte wurden mit Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Das"erhaltene Öl wurde mittels Kieselerdegelchromatografie unter Elution mit Benzol

~ 15 -

gereinigt, wobei reines 1,2-Di-O-(n-hexadeeyl)-3-O-(3-fojemalbenzyl)—glyaerin mit einer Ausbeute von 40 % als öl _t erhalten wurde. ' ,. _; --^ -. . ·',.„.· ... ... , :...· ' : -- ,.

Iß-Spektrum (GHCl₃) 1700 cm"¹; · ·:

ME-Speitrum (CDCIj) % 10,1 (s, 1, ArCHO)

1,2-Di-O- (nglyzerin

3,23 S= 0,067 mol Hatritsmhydrid in Porm einer 57 %igen Diapersion in Mineralöl wurden in 117 ml Diine thy loulf oxid suspendiert und auf 70 bis 75⁰C unter einer Stickstoffa'tmosphäre für etvia 45 lünuten erwärmt, bis die Wasseratoffentwicklung aufhörte. Eo wurden 88 ml Tetrahydrofuran zugegeben, und das Gemisch mirde auf 0 bis 5°C abgekühlt« Dana wurden 13,67 g = 0,067 mol Tirmehtylsulfoniumjodid in Portionen zugegeben, hieran achloß sich die rasche Zugabe von 7,0 g = 0,0106 mol l,2-.Di-0-.(n-hexade-cyl)-3-0-(3-formyl' ^ benzyl)-glyzerin in 58 ml Tetrahydrofuran an* Das Gemisch ; wurde dann bei Zimmertemperatur l6 Stunden gerührt, in ml Wasser gegossen und mit Äther (3 2c 180 ml) extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden mit Wasser (2 χ 100 ml) und gesättigter Hatriumchioridlösung (100 ml) gewaschen, über-Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck zu 7,0 g eines blaßgelben Öles eingeengt; Ausbeute 98 %· Dieses öl war nach der Dünnschichtchromatografie ausreichend rein für die v/eitere Reaktion, die in Beispiel 9 beschrieben ist. "

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Beispiel 9

1,2-Di-O- (n-hexadecyl)-3-O-/~3- ;(l-hydroxy-2-t-bUtylamino äthyl)-benzyl7-glyzerin-hydrochlorid ·

30 ml t-Butylamin und 2,0 g « 2,97 rn^öl l,2-Dl-0-(n-hexadeoyl)~3-0-^~3--(I>2-epoxyäthyl)-benzyl7"Sly^ze:i:1^ v/urden in eine Stahlbombe eingefüllt und 9 Stunden auf 100⁰C erhitzt, !lach dem Abkühlen des Reaktionsgemisches wurde das t-Butyl~ atnin unter vermihdertem Druck entfernt, und das erhaltene Öl wurde mittels Kieaelerdegelchromatogräfie unter Elution mit Benzol/Äthanol gereinigt* Die gewünschten Fraktionen wurden mit gasförmiger Chlorwasserstoffsäure gesättigt^ unter vermindertem Druck eingeengt und aus Äthylacetat umkristallisiertj wobei 63Ο mg (Ausbeute 27%) reines 1,2^Di-0-(n-hexadecyl)~3-0-^~3-(l-hydroxy-2--t-butylaminoäthyl)-benzyl7-glyzerin mit P· 49 - 51°0 erhalten wurden* MR-Spektrum (CDOl₃) 6 1,47 (s, 9, -C(CH₃)₃ ),

Beispiel 10 ..

1,3-Di-0-(n-decyl)->2~0-/""3- (l-hydrpxy~2-äthylatninoäthyl)-benzyl7-glyzerin--hydrociilorid ·

30 ml Ithylamin und 2,018 g = 4,13 mmol 1,3-Di-O-)n-decyl)-2-Ö-/ 3-(l}2-epoxyäthyl)-benzyl7-glyzerin wurden in eine Stahlbombe eingefüllt und l6 Stunden bei 965 kPa erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch aus der Bombe mit Äther herausgewaschen, und das Produkt wurde durch Entfernung des Lösungsmittels und überschüssigen Äthylamins unter vermindertem Druck isoliert.

Das erhaltene Öl, 2,4 g, wurde dann in Äther aufgelöst, mit 2 ^iger wäßriger Ammoniumhydroxidlösung, Wasser und gesättigter wäßriger Hatriumchloridlösung gewaschen, getrocknet und zu 1,8 g eines gelben Öles eingeengt, Das Produkt wurde mittels Ifeselerdegeiehromatografie unter Elution mit foluol/

- 17-

jlthanol -=. 12/1 gereinigt und in das Hydrochloridsalz umgewandelt. Es wurden. 0,794 S Produkt -mit einer Ausbeute voh 33 % und F. 55- 57⁰C erhalten. .

Uaffi-Spektrum (GDCl)₃ $ 0,87 (S, 6Hz-CH₃); 1,3 (S, 32H,

aliphatische Protonen)}1,45 (1, J=7Hz, 3H, -MHGH₃)J 3,15

' ' ^-^xT ^'^ " \ (q, J«7Hz, 2Hj^-MGH₂CH₃); 3,45

-3,58 (m, 11H, (-CH₂OCH₂)₂CH0R, GHOHCH₂M-) j 4,65 (S, 2H, Ar-CH₂O-) ;' 5,17-5,50 (m, IH, Ar-CHOH-) und 7,33 - : ^: ' ' ; ..: . ; „ /(S, 4H, Ar-H). ; ; '; ^; ;^

Beispiel 11

Befolgung der Arbeitsweisen der Beispiele-6 bia 10 wurden die Verbindungen der Formeln (XIV) und (XV) hergentellti :'. -' Formel (XIV):.

-OC₁₆H₃₃ Stellung

. (⁰C) Molekülformel

CH(CH.,),

C(CH₃) CH(CHo), CH

pvHο

2,3

1,3

Öl

53-55 C₄₇H₈₉0₄N.HC1.3/4H₂0

berechn. C, 72,17; H, 11,79; U, 1,79

gefunden C, 72,11; H, 11,55; .JT, 1,92

43-45 C₄₈H₉₁O₄^HCLH₂O

berechn. C, 71,99; H, 11,82; .iff, 1,75

gefundene, 72,06; H, 11,43; N, 1,71

Öl C₃₉H₇₃O₄]^HCI. 1/2H₂O

berechn. G, 70,39; H,. 10,21; U, 2,10

gefunden G, 70,36; H, 10,77; Π, 2,22

64-65 C₃₈H 0 HCl

berechn. Gj 71,04; H, 11,14; H, 2,18

gefunden C, 71,04; Ή, 10,99; .N,. 2,08

- is - χι τ

In ähnlicher V/eise können weitere der erfindungsgemäßen Verbindungen aus dem geeigneten Spoxid und Amin hergestellt werden.

Beispiel , 12 ' ... - ; . /..' ,. ^:. . ' .. " ^:. .. .'^ ·

Sareom-180J-Modeli für die Bestimmung derTumorZurückweisung .

6 weibliche CD-1-Mäuse von 20 bis 25 g pro Gruppe erhielten 106 Zellen von' S-180J, welche 5 bis S Tage alt waren durch intraperitoneale Applikation. Am folgenden Tag auf die Tumoreinimpfung erhielten die Mäuse 0,1 ml der in einem i ( L

Fettemuli'ionsträger (Bezeichnung Intralipid von Cutter boratories) formulierten Testverbindung in der gewünschten Dosis, und die Tiere wurden dann bis zum Eintritt des Todes oder für längstens 40 Tage beobachtet. Die Ergebnisse sind als erhöhte prozentuale Lebensspanne (%ILS) entsprechend der folgenden Definition angegeben:

Mittlere Überlebenszeit der mit cttα · Wirkatoff behandelten Mäuse „ _ΊηΛ

/oXXiO ss ''" ' ' ' ¹¹V""¹ '""" ~ "" . ' " «Μ.»·'·..,-«,· je χUU

Mittlere Überlebenszei.t der nicht behandelten Kontrollmäuse

Die bei dem zuvor beschriebenen Test erzielten Ergebnisse waren v?ie folgt:

Tabelle I (Formel SVI) 3* ^4 · Dosis (mg/kg)

· ' ^;' ' · ' QiMl ' ' λ" & i⁶ ' ~ Q-C₈H₁₇ . 113 109* 154(1) 192(4)

12? 139(1) 110 108

Tabelle I (Formel XVI) Forts. ^fi3»^R4

Dosis	(mg/kg)	133	-109
129(1)	116	104	127
110	105	98	109
119	158(2)

n-C_i8H₃₇ 5

Die Ergebnisse im zuvor beschriebenen Teat, erhalten mit erfindungagemäßen (l-Hydroxy-2-allcylaminoäthyl)-ben2iyloxyanalogen, formuliert in einem Gemisch aus grenzflächenaktivem Stoff (Tween 8O)-GIyzerin-Wasser sind in der folgenden Tabelle II zusammengestellt: ^; \ .

Tabelle II ,(Formel XI -°^C16^H

- 16^H33

, Stellung Dosis (mg/kg)

:·. .. · -'· : 1

₃)₂ ²»3 174(1) 135 147(1)

C(CH₃X₃ 2,3 166(2) 181(4) 182(4)

()₃ 1,3 159(1) 171(3) 157(2)

Die Zahlen in Klammern in den zuvor genannten Tabellen I und II'sind "die Anzahl der Tiere mit einer Überlebenszeit von 40 Tagen.

Bestimmung der peritonealen Macrophagenaktivierung

Mäusen wurde intraperitoneal 'Salzlösung.oder die Testverbindung injiziert. Die Macrophagen wurden 72Stunden später

- 20 -

durch intraperitoneale lajetkion von 3nil von 8 % fetalem Kalbsserum-92 %, HBlI-l64O-Medium (Grand Island Biological Go.₉ Έ.Ί.) (164Og₂ FCSg) plus 5 Einheiten/ml an Heparin geerntet, wobei die Temperatur aller Medien auf 37⁰C gehalten wurde, 1 bis 2 Minuten gespült, geöffnet und die gesamte perföneale Flüssigkeit wurde mit einer sterilen, mit Silikon überzogenen Pipette in ein 50~ml-Kunststoffrohr, das in Bis gehalten wurdo, abgesaugt. Die Macröphagen vmrden unter Verwendung eine3 Hämocytometers ausgezählt, und auf eine Konzentration von 1,5 χ 10 /ml mit der 164Oq₂-PCSg-Lösung eingestellt. Die Zellen wurden dann in Lochplätten, 1,5.2: 10 Zellen pro Loch angeordnet und 1 b is 2 Stunden bei 37°C in einer Atmosphäre mit 5 % Kohlendioxid inkubiert. Die Uberstehende Plüssigköit wurde verworfen, und die Zellen wurden eiümal mit dem Medium gewaschen, wobei die Macrophagen am Boden der Löcher hafteten, L-1210-Zellen, geerntet aus dem-Bauchwasser von DBA-Mäusea ungefähr 5 Tage nach der Impfung, in QXts Lösung 1^4Oq₂ ^CS« wurden dann augeaotat, und zwar 1 al mit 1 χ l(r Zellen/ml zu federn Loch, und bei 37⁰G für 24 bis 30 Stunden in einer Atmosphäre mit 5 % Kohlendioxid inkubiert·-'Die Zellen .wurden'dann mit H-Tdr (1,0 Ci/uil; Amersham/Searles) für 6 Stunden bei 37°C bestrahlt, die überstehende Flüssigkeit wurde unter Verwendung eines ZeI-lenerntegerätes, Reeve-Angel-Pilter, abgesaugt und fünfmal mit Salzlösung gewaschen. Die Filterscheiben wurden trocknen gelassen und in Szintillationsbehältern mit LSC-Szintillationsflüssigkeit (5,0 g PPO und 0,2 g POPOP/Liter Toluolj Yorktovm Research) angeordnet. Das Auszählen wurde während 2 Minuten unter Verwendung eines Beekman-LS-250-Zählers durchgeführt. Die bei dieser Arbeitsweise erhaltenen Ergebnisse waren wie folgt:

-21 -

Tabelle III (Formel· XVI)

RR	Dosis	(mg/kg)	=- fo Hemmung der
			. DIA-Syηthese
H-C₁₀H₂₃	1,	25	" ' '
n-C₁₀tI₂₁	/^V: 0,	625
H-C₁₀H₂₁		313	·. v' -'^:⁵⁶ - ' . . :,
H-C₁₄H₂₉	25
Beispiel Li-
Be Stimmung der	peripheren	Blutmonocytenaktivierung

Ratten wurde intravenös die Testverbindung oder Salzlösung bei den Kontrolltieren injiziert. Die Monocyten wurden 72 Stunden später durch Abziehen von 2 ml Blut in ein EDTA-Röhrchen und Verdünnen mit 2 ml Salzlösung geerntet. :D£e erhaltene Lösung wurde sorgfältig mit 3 ml LSM (lyinphocyten-Trennmedium - Bionetics) überschichtet und bei 800 Upm für Φ' Minuten bei Zimmertempteraur zentrifugiert. Zum Sammeln der getrübten, zentralen Schicht, welche die Monocyten und die Lymphocyten enthielt, vurde eine Pipette verwendet. Die Zellen wurden zweimal mit Hanks-Gleichgewichts-Salzlösung gewaschen, erneut In der Lösung 164Oq₂FCSq suspendiert, in Lochplatten angeordnet und bei 37 C in 50 Kohlendioxid für 1,5 Stunden inkubiert. Die Zellen wurden dann kräftig mit dem Medium zur' Entfernung von nicht-anhaftenden Zellen gewaschen.'/Die zurückbleibenden Monocyten wurden wieder mit dem Liedium veraetzt, und es wurden L1210-Zellen bei einem Verhältnis von wirksamen Zellen?Zielsellen von 15il zugesetzt, Unter Befolgung der- in Beispiel 13 beschriebenen Arbeitsweise wurden die Zellen mit 3H-Tdr gepulst und in einem Szintillationszähler ausgezählt«

.-- 22 -

Unter Anwendung dieser Arbeitsweise ergaben 1,25 mg/kg an 4-Jtoinometkyl-l-^

piperidin eine 8 %ige Hemmung der DIA-Synthese.

Test auf Vaccineverbesserung-Kämagglutinationsheinmung

Influenzavirus tritt mit roten Blutzellen unter Herbeiführung einer Agglutination in Wechselwirkung. Palis Antivirus-Antikörper in einer Serumprobe vorliegen, werden die 'Wechselwirkungen von Yirua-rotea-Zellen, welche zur Agglutination führen, verhindert. Daher zeigt das Fehlen einer Agglutina-' · tion von roten Blutzellen die Anwesenheit von Antivirus- ^f Antikörpern anj und die Bestiraniung des Hämagglutinationstiters, wie sie im folgenden noch beschrieben wird, ist daher ein Maß für den Gehalt an Antikörper,

Die Testverbindungen bei den gewünschten Dosierungsvferten wurden durch Auflösung in 0,3 ml Äthanol formuliert, hieran sehlo.ß sich die Zugabe von 0,1 ml grenzflächenaktiv em Mittel (Tween 80) an, und das erhaltene Gemisch wurde zu 4,6 ml eines Fettemulsionsträgers (Intralipid von Cutters Laboratories) zugesetzt. Entsprechende Träger ohne Testverbindung wurden ebenfalls hergestellt. Fluogen-Influenzavirus (Parke-Davis and Co.) wurde mit jedem Träger vermischt, um 250 OCA Antigen pro 0,5 ml Injektionsvolumen zu erhalten. Eine Gruppe von weiblichen Hartley-Meerschweinchen (Garnm Laboratories) erhielten eins intramuskuläre Injektion mit 0,5 ml des das Fluogen und die Testverbindung aafchaltenden Trägers. Eine Kontrollgruppe von Meerschweinchen erhielt eine Injektion mit das Pluogen jedoch keine Testverbindung enthaltenden Träger. 30 Tage nach· der primären Sensibiiierung wurden den Tieren eine weitere intramuskuläre Injektion des homologen Antigens, mit Welchem sie zu Beginn immunisiert wurden, gegeben. Den Tieren wur'de durch intra-

.^:. - ' . ' . ' „ · . - . ' . -- " .~ 23 — '

cardiale Punktur mehrere "Male nach der primären Sensibilisierung Blut abgenommen. Daa Serum wurde unter Anwendung eines COKVAC-S-integrierten Serumtrennrohra '(Corning Glass Works) ^getrennt und bei -20⁰C bia zur Tritation nach dem Hämagglutinationstest entsprechend der^; folgenden Beschreibung aufbewahrt.

Testseren, behandölt mit 0,01Bl Kaliumjodat zur Entfernung von nicht-spezifischen Serumfaktoren, welche die Agglutination hemmen, vmräen in zweifachen Reihenverdünnungen in 0,925 ml Volumina in Mikrotiter-Löcher (linbro Scientific Company, Hew' Haven, Conn., Typ IS-MRC-96), welche 0,025 ml an Ο,ΟΙΗ Phosphat gepufferter physiologischer Salzlösung » PBS enthielten, bei pH =7,2 verteilt. Die Testvirussuspension, \ielche HA-4-Einheiten pro 0,025 ml PjBS enthielt, wurde zu jedem Loch zugesetzt. Zellen (nur PBS) und Antigenkontrollen (PBS und Virusantigen) waren eingeschlossen. Mach dem Inkubieren der Platten bei Zimmertemperatur für 30 Minuten v/urden 0,05 ml an mit 0,5 %ige.r Salzlösung gewaschenen Hühnererythrocyten (Flow Laboratories, Rockville, Md.) in jedes Loch eingegeben. Die Inkubation wurde fortgeführt, bis die Zellkontrolle ein normales Absetzen zeigte« Die mit Perjodat behandelten Seren aus normalen Meerschweinchen waren eingeschlossen, um den Pegel an nicht-spezifischer Agglutination3inhibierung, welcher bei dan mit Kaliumjodat behandelten Testseren zurückblieb, zu bestimmen. Der Titerwert der Hämagglutinationshemmung wurde in Porm der höchsten Verdünnung an Serum definiert, weiche eine Hämagglutination vollatändig hemmte, berichtigt für nicht-spezifische Hemmung. '

Die bei den Tests von

n-propyl7~4-phenylpiperidin erhaltenden Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle TV zusammengestellt. Der höhere Harnagglutinationstiter, welcher nach der erneuten intramuskulären Injektion bei solchen Tieren, bei denen die Testver-

- . . . - . . . ν - 24 :r

bindung appliziert wurde, beobachtet viurde, zeigt die Aktivität der Verbindungen als Hilfsstoff.

Tabelle I?

Antigen	\ - ^:	' . . " Hämagglutinationstiter	⁰	44	75
appliziert am Tag:	{ :' ' I ·" . " '.' - '.. ' i . : .' ." . ' ^;	15^K		40	40 .
;. · , ; . :..-.. ,..· . .· "·· ·. '.· . ..- ·.	. ' . .* ' ' ' ' ' i ''· ··' ""' ·· ' ' ^: '		ο	160	80
		0	-9 '	40.	10
	Pluogen und 4-Aininometbyl-	- :'"/ o"^:\-		80	10
Fluogen	i-/~2,3-(di-a-decyloxy)-n-	10	0	80	80
	pro.pyl7-4-pheny !piperidin	io	10	l60	160
(5'^:iog) . ^: · ' ' V. ,;;.· ' ' " '" ..	10	10	80	1280
	10	40	64Ö	• 256O
	10	10	640	1280
." -..- , . .	10	20	640	1280
0	10	640	160
0	10	10	20
10	10	40	10
0	0	10	10
10	ο	10	10
10		- ; ' ·.'
0

Tag nach der primären Sensibilisierung erneute intramuskuläre Injektion des Hqmologen-Antigena 30 Tage nach, der primären Sensibilisierung.

Die Ergebnisse sind die bei jedem Tier in den jeweiligen Gruppen beobachteten Ergebnisse..-..'

- -2 5 -

R_rX-CH_z

CH-Z-ALi^B R_rY-CH_z

CH-(CHp-A

R₁O-CH₂

CH-O-CH₂ I R₂O-CH

R₁-O-CH

CHMHR

H₂HNR

RtO-CH₁ RrO-QH

ψ R₁O-CH

OH

m " . ,-"!-

Q-CH₁

Ph

CHNH,

CH₂NHR

R₃O-CH

ι

R_A 0"CH,

(Σ) ι CH-X

CHrCH-CH-N ! ² \ ²

(XE)

GH*— I

¹Z

R₄O-CH₂

(XM)

NHR

CH₂NHR

jOCH₂ R^O-CH / tH N

/-^i

CH^NH₂ Ph

CSSO

CH-y²-ι

Claims

B r f i η d u ng s a η s ρ r u c h

1. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel (ZVIi) und der pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalze davon, worin einer der Reste Y und Y die allgemeine Formel (VIU) hat und der andere OR-, ist, -wobei mit R-, und R2 jeweils ein n-Alkylrest mit 8 bis 11 Kohlenstoffatomen bezeichnet ist, gekennzeichnet dadurch, daß man

a) eine Verbindung der allgemeinen Formel

CH - Z²

CHpORp j

worin einer der Reste Z'und Z die Formel (XIX) aufweist und der andere OR-^ ist, reduziert und

b) falls gewünacht, die erhaltene Verbindung in ein pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz umwandelt»

2«, Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß als Reduktionsmittel Rane^-lTickel und Wasserstoff verwendet werden v- '

Verfahren nach Punkt 2, gekonnzeichnet dadurch, daß R-. und R₂ jeweils ein n-Decylrest ist.