PT1704145E - Inibidores de quinase seletivos - Google Patents

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PT1704145E
PT1704145E PT05700054T PT05700054T PT1704145E PT 1704145 E PT1704145 E PT 1704145E PT 05700054 T PT05700054 T PT 05700054T PT 05700054 T PT05700054 T PT 05700054T PT 1704145 E PT1704145 E PT 1704145E
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PT
Portugal
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alkyl
compound
leu
hetaryl
aryl
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PT05700054T
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Herbert Rudolf Treutlein
Christopher John Burns
Andrew Frederick Wilks
Michelle Leanne Styles
Jun Zeng
Marcel Robert Kling
Xianyong Bu
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Ym Biosciences Australia Pty
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Description

1
DESCRIÇÃO "INIBIDORES DE QUINASE SELETIVOS"
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se ao campo dos inibidores da família JAK das proteínas tirosina quinase nomeadamente o da proteína de tirosina-quinase.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
As proteínas quinases são uma família de enzimas que catalisam a fosforilação de resíduos específicos nas proteínas. Em geral as proteínas quinases pertencem a vários grupos; aqueles que preferencialmente fosforilar scrine e/ou resíduos de treonina, aqueles que preferencialmente fosforilam resíduos de tirosina e aqueles que fosforilam tanto tirosina e resíduos Ser/Thr. Proteínas quinases são, portanto, elementos-chave nas vias de transdução de sinal responsáveis pela transdução de sinais extracelulares, incluindo a ação das citocinas sobre os seus recetores, para os núcleos, para provocar vários eventos biológicos. Os vários papéis de quinases de proteína na fisiologia das células normais inclui o controlo do ciclo celular e do crescimento celular, a diferenciação, a apoptoaia, a mobilidade de células e a mitogenese.
As proteína-quinases incluem, por exemplo, mas não estão limitadas a, os membros da família da Proteína Tirosina-Quinase (PTKs), que por sua vez podem ser divididos nas PTKs citoplasmáticos e o recetor PTKs (RTKs) . Os PTKs citoplasmáticos incluem a família SRC, (incluindo: BLK; FGR; FYN; HCK; LCK; LYN; SRC; YES e YRK) ; a Família BRK (incluindo: BRK; FRK, SAD, e SRM) , a família CSK 2 (incluindo: CSK e CTK) ; a família BTK (incluindo BTK; ITK; TEC; MKK2 e TXK), a família Janus quinase, (incluindo: JAK1, JAK2, JAK3 e Tyk2), a família FAK (incluindo, FAK e PTK2); a família FES (incluindo FES e FER), a família ZAP70 (incluindo ZAP70 e SYK); a família ACK (incluindo ACK1 e ACK2); e a família Abl (incluindo ABL e ARG). A família RTK inclui a família EGF-receptor (incluindo, EGFR, HER2, HER3 e HER4); a família do recetor de insulina (incluindo INS-R e IGP1-R), a família PDGF-recetor (incluindo PDGFRa, PDGFRp, CSFIR, KIT, FLK2); a família VEGF-recetor (incluindo; FLT1, FLK1 e FLT4); a família FGF-recetor (incluindo PGFR1, FCFR2, FGFR3 e FGFR4); a família CCK4 (incluindo CCK4); a família de MET (incluindo MET e RON); a família TRK (incluindo TRKA, TRKB, e TRKC), a família AXL (incluindo AXL, MER, e SKY); a família TTE/TEK (incluindo TIE e TIE2/TEK); a família EPH (incluindo ETHA1, EPHA2, EPHA3, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPHB4, EPHB5, EPHB6); a família RYK (incluindo RYK); a família MCK (incluindo MCK e TYRO10); a família ROS (incluindo ROS); família RET (incluindo REI); a família LTK (incluindo LTK e ALK); a família ROR (incluindo R0R1 e R0R2); A família de Musk (incluindo Musk); a família LMR incluindo LMR1, LMR2 e LMR3); e a família SuRTKlOô (incluindo SuRTKlOô).
Similarmente, as serina/treonina quinases específicas compreendem um número de subfamílias distintas, incluindo; as quinases reguladas de sinal extracelular, (p42/ERK2 e p44/ERKI); a c-Jun NH2-terminal quinase (JNK); cAMP-responsivo, elemento de ligação de proteínas quinases (CREBK); cAMP-dependente quinase (CAPK); proteína quinase ativada de mitógeno de proteína-quinase ativada (MAPK e seus afins); proteína quinase ativada por tensão p38/SAPK2; 3 proteína quinases ativadas por mitogénio e por tensão (MSK); proteínas quinases, PKA, PKB e PKC inter alia.
Além disso, os genomas de um número de organismos patogénicos possuem genes que codificam proteínas quinases. Por exemplo, o parasita da malária Plasmodium faldpaium e os vírus tais como o HPV e os vírus da hepatite parecem ter genes relacionados com a quinase.
Inapropriadamente a alta atividade de proteína quinase tem sido implicada em muitas doenças resultantes de função celular anormal. Isto pode surgir, quer diretamente ou indiretamente, por exemplo, por falha dos mecanismos de controlo adequados para a quinase, relacionados, por exemplo, com a mutação, com a sobre-expressão ou com a ativaçãoação inapropriada da enzima, ou pela sobre ou sub-produção de citocinas ou fatores de crescimento também participa na transdução de sinais a montante ou a jusante da quinase. Em todos estes casos, a inibição seletiva da ação da quinase pode-se esperar que tenha um efeito benéfico. Doenças onde a atividade quinase aberrante têm sido implicados incluem: diabetes; reestenose, aterosclerose, fibrose do fígado e do rim, doenças oculares, doenças mielo- e linfoproliferativas; cancro, como o cancro da próstata, p cancro do cólon, o cancro de mama, o cancro de cabeça e pescoço, a leucemia e os linfomas; e, as doençasautoimunes, tais como a dermatite atópica, a asma, a artrite reumatoide, a doença de Crohn, a psoríase, o síndrome de Crouzon, a acondroplasia, e a displasia Tanatofórica. A família JAK de tirosina-quinases de proteína (PTKs) desempenha um papel central na regulação dependente da citocina da função de proliferação e de fim de vários tipos de células importantes do sistema imunitário. 4
Uma comparação direta dos quatro membros da família de mamíferos atualmente conhecidos JAK revela a presença de sete domínios altamente conservada (Harpur et al, 1992). Na busca de uma nomenclatura para os domínios altamente conservados característicos desta família de PTK, a classificação utilizada foi orientada pela abordagem de Pawson e colegas de trabalho (Sadowski et al, 1986) em seu tratamento da homologia SRC domínios (SH). Os domínios têm sido enumerados de acordo com a maioria do domínio C-terminal de homologia designado como Homologia JAK domínio 1 (JH1) . 0 domínio seguinte do terminal N para JH1 é o domínio relacionado com a quinase, designado aqui como domínio JH2. Cada domínio é então enumerado até ao JH7 localizados na extremidade N-terminal. 0 elevado grau de conservação destes domínios de homologia JAK (JH) sugere que eles são, cada um, suscetíveis de desempenhar um papel importante nos processos celulares em que estas proteínas operam. No entanto, as fronteiras dos domínios de homologia JAK são arbitrárias e podem, ou não, definir domínios funcionais. No entanto, a sua delineação é um dispositivo útil para auxiliar a consideração da semelhança estrutural global desta classe de proteínas. 0 traço mais caracterí stico da família JAK de PTKs é a posse de dois domínios relacionados com a quinase (JH1 e JH2) (Witks et al, 1991) . 0 domínio putativo de PTK JAK1 (JH1) contém motivos altamente conservados de domínios típicos de PTK, incluindo a presença de um resíduo de tirosina na posição 1022 localizados 11 resíduos C-terminal para o sub-domínio VII que é considerado como diagnóstico da presença da classe específica de tirosina de quinases de proteínas de Alinhamento do domínio humano JAK1 PTK (255 aminoácidos), com outros membros da classe PTK de proteínas revelou homologia com outros PTKs funcionais (por exemplo, 5 28% de identidade com c-fes (Wilks e Kurban, 1988) e 37% de homologia para TRK (Kozma et al, 1988)). Os domínios JHl de cada um dos membros da família JAK possuem uma idiossincrasia interessante com o motivo sub-domínio VIII altamente conservado (resíduos 1015 a 1027 em JAK2) que se acredita estar próximo do sítioativo, e definem a especificidade do substrato. Os resíduos de fenilalanina e tirosina que flanqueiam o triptofano conservado neste motivo são únicos para a família JAK de PTKs. Para além deste elemento, os domínios JHl de cada um dos membros da família JAK são domínios PTK típicos. Além disso, existe alta identidade de sequência na família JAK particularmente em e em torno do local de ligação ATP (Figura 1). O papel central desempenhado pela família JAK de proteína tirosina quinases na regulação dependente de citocinas da proliferação e da função final de vários tipos de células importantes significa que os agentes que inibem o JAK são úteis na prevenção e na quimioterapia de estados de doença dependentes destas enzimas. Os inibidores potentes e específicos de cada um dos quatro membros da família JAK atualmente conhecidos irão fornecer um meio de inibir a ação dessas citocinas que dirigem patologias imunes, tais como a asma e os agentes imunossupressores para, entre outros, transplantes de órgãos, lúpus, esclerose múltipla, artrite reumatoide, psoríase, diabetes do tipo I e as complicações da diabetes, cancro, dermatite atópica, doenças autoimunes datiroide colite ulcerativa, doença de Crohn, doença de Alzheimer, e leucemia/linforna.
0 caminho JAK/STAT O delineamento de uma transdução particularmente elegante do sinal a jusante dos recetores de citocinas de proteína não-tirosina quinase foi recentemente conseguido. Neste 6 caminho os componentes principais são os seguintes: (i) Uma cadeia do recetor de citocina, (ou cadeias), tais como o recetor de interleucina-4 ou o interferão recetory; (ii) um membro (ou membros) da familia JAK de PTKs; (iii) algum(ns) membro(s) da familia STAT de fatores de transcrição, e (iv) uma sequência de elemento ADN especifico ao qual o STAT ativado vai ligar-se.
Uma revisão da literatura de JAK/STAT oferece um forte apoio à ideia de que esta via é importante para o recrutamento e triagem da resposta imune do hospedeiro às agressões ambientais, como as infeções virais e bacterianas. Isto é bem ilustrado na Tabela 1 e na Tabela 2. A informação acumulada a partir das experiências de inativação de genes que sublinharam a importância dos membros da familia JAK para a sinalização intracelular desencadeada por um número de importantes citocinas reguladoras imunes. As possibilidades terapêuticas resultantes de inibição (ou reforço) da via JAK/STAT são, assim, em grande parte na esfera de modulação imunitária, e como tal são suscetíveis de ser drogas promissoras para o tratamento de uma gama de patologias nesta área. Para além das doenças indicadas nas Tabelas 1 e 2, os inibidores de JAKs poderiam ser utilizados como agentes imunossupressores para transplantes de órgãos e para doenças autoimunes tais como o lúpus, a esclerose múltipla, a artrite reumatoide, a diabetes tipo I, as doenças autoimunes da tiroide, a doença de Alzheimer e outras doenças autoimunes. Adicionalmente é indicado o tratamento de cancros tais como o cancro da próstata por inibidores JAK. 7Tabela 1 Ativação da via JAK/STAT em diversas patologias
Doença Tipo Tipos Celulares Envolvidos Características Atópica Asma alérgica Dermatite atópica Rinite alérgica (Células Mastócitas (Eosinófilos (Células T (Células B Ativação de células T seguido ativação de células-B mediada por IgE Ativação de residente mastócitos e eosinófilos Transplantação Re;jeiç:ão do transplante células T e células B ativação JAK ./ ST.AT Doença enxerto versus hospedeiro células T e células B ativação JAK / STAT Doenças Virais Epstein Barr Virus (EBV) Hepatite B Hepatite C HIV HTLV 1 Varicela-Zoster (VZV) Vírus papiloma humano (HPV), Linfócitos Hepatócitos Hepatócitos Linfócitos Linfócitos Fibroblastos Células epiteliais Ativação JAK / STAT Ativação JAK / STAT Inibição JAK / STAT Ativação JAK / STAT Ativação JAK / STAT Inibição JAK / STAT Inibição JAK / STAT Cancro Leucemia Linfoma Leucócitos Linfócitos (Produção de Citoquina Ativação JAK / STAT
Tabela 2: Doenças potencialmente tratáveis através de terapias de medicamentos de base JAK__
Doenças Alvo Citoquinas Membro da família JAK Força da Associação Asma IL-4 & IL-9 JAK1 & JAK3 +++ IL-13 JAK1 & JAK2 +++ IL-5 JAK2 +++ Eczema IL-4 JAK1 & JAK3 +++ IFN-ot JAK1 & JAK2 +++ Alergia alimentar IL-4 JAK1 & JAK3 +++ Doença Inflamatória Intestinal e doença de Crohn IL-4 JAK1 & JAK3 +++ Leucemia e Linfoma (IL-2) JAK3, JAK1 & JAK2 +++ Transplante Mutação das células B Proliferação das células T IL-4 IL-2 JAK1 & JAK3 JAK1 & JAK3 +++ +++ Inflamação Cutânea CM-CSF & IL-6 JAK1 & JAK3 +++ Imunossupressão por tumor sólido IL-10 JAK1 & TYK2 +++ Cancro da próstata IL-6 JAK1, JAK2 & Tyk2 +++
Sinalização Jak 3
Embora os outros membros da família Jak sejam expressos por praticamente todos os tecidos, a expressão JAK3 parece estar limitada a células hematopoéticas. Isto é consistente com o seu papel essencial na sinalização através dos recetores para IL-2, IL4, IL-7, IL-9 e IL-15 por associação não-covalente de JAK3 com a cadeia gama comum a estes recetores de cadeias múltiplas. Os machos com imunodeficiência combinada grave associada ao cromossoma X (XSCID) têm defeitos na cadeia gama comum de recetora de citocina (gama c) do gene que codifica um componente, partilhado essencial dos recetores de interleucina-2 (IL-2), IL-4, IL -7, IL-9 e IL-15. Uma síndrome de XSCID em que os pacientes com níveis quer mutados ou severamente reduzidos de JAK3 proteína foram identificados, sugerindo que a imunossupressão deverá resultar do bloqueio de sinalização através da via JAK3. Os estudos de supressão de genes em ratos têm sugerido que JAK3 não só desempenha um papel crítico na maturação dos linfócitos B e T, mas que JAK3 é constitutivamente necessário para manter a função das células T. Tomados em conjunto com a evidência bioquímica para o envolvimento de JAK3 em eventos de sinalização a jusante do recetor de IL-2 e de IL-4, estes estudos de mutação humana e de ratos sugerem que a modulação da atividade imune através da inibição da JAK3 pode ser útil no tratamento de desordens proliferativas de células T e de células B, tais como a rejeição de transplantes e as doenças autoimunes. A imunomodulação prolongada através da sinalização da inibição da JAK3 deve ter um grande potencial terapêutico enquanto a inibição JAK3 foi conseguida seletivamente e não acompanhada pela inibição de outros processos de sinalização dependentes da quinase. Em particular, o elevado grau de identidade de sequência mantido em comum 9 por membros da família de quinases JAK levanta a possibilidade de um composto que inibe a Jak3 também inibir outros membros da família com consequências prejudiciais a longo prazo. Por exemplo, a inibição prolongada da Jak2 é suscetível de conduzir a eritropenia e trombocitopenia, uma vez que os recetores tanto para a critropoietina e trombopoietina utilizam apenas JAK2 para a transmissão de sinais intracelulares.
Inibição seletiva e irreversível
Um PTK catalisa a transferência de um grupo fosfato a partir de uma molécula de ATP para um resíduo tirosina localizado sobre um substrato de proteína. Os inibidores conhecidos na técnica são geralmente competitivos, quer com o ATP quer com o substrato de proteína da quinase (Levitzki, 2000) . Dado que a concentração de ATP em uma célula é normalmente muito elevada (milimolar) , os compostos que são competitivos com o ATP podem ter falta de atividade in vivo uma vez que é improvável que os referidos compostos podem atingir as concentrações dentro da célula, que são necessárias para deslocar o ATP do seu local de ligação.
Uma abordagem alternativa que tem sido tentada em relação a ECFR é conceber ou selecionar compostos que se ligam a ECFR TK de uma maneira irreversível. Tais compostos são revelados na Fry 1998; Discafani 1999; Smaill 1999; Smaill 2000; Tsou 2001; Smaill 2001; Wissner 2003. Estes compostos funcionam como inibidores irreversíveis em virtude do facto de que eles podem formar ligações covalentes a resíduos de aminoácidos localizados no sítio ativo da enzima que resulta em potência melhorada dos compostos in vitro e na inibição do crescimento de tumores humanos em modelos in vivo de cancro. Um benefício adicional de tais inibidores irreversíveis quando comparados com os inibidores 10 reversíveis é que os inibidores irreversíveis podem ser usado na supressão prolongada da tirosina quinase, limitada apenas pela taxa normal de renovação do recetor. A elevada homologia entre os membros da família JAK das quinases torna a conceção de compostos com uma seletividade aceitável altamente desafiante. Acredita-se que a exploração das pequenas diferenças na sequência de aminoácidos entre os membros desta família pode permitir a identificação de inibidores seletivos. O alinhamento dos quatro membros da família JAK de proteínas de tirosina quinase revela que, dentro dos aminoácidos que compõem o bolso de ligação de ATP destas quinases há muito poucas diferenças de aminoácidos que podem ser utilizadas para atingir os inibidores potenciais para um membro da família ou para outra. Curiosamente, somente o JAK3 entre esta subfamília de quinases possui um resíduo de cisteína perto do rebordo frontal da cavidade de ligação de ATP. Foi desenvolvida a hipótese de que esta pode fornecer um meio para desenvolver inibidores irreversíveis altamente específicos JAK3 (Figura 2), focando esta cisteína com uma funcionalidade tendo um grupo de alquilação tal como um aceitador Michael.
RESUMO DA INVENÇÃO
Os presentes inventores descobriram que um grupo de compostos baseados em uma estrutura heterocíclica não substituída que inclui um grupo de alquilação tal como um aceitador de Michael são irreversíveis e inibidores seletivos da enzima de Janus Quinase 3 e aplicações em terapia como agentes imunossupressores para transplantes de órgãos, lúpus, esclerose múltipla, artrite reumatoide, psoríase, diabetes do tipo I e complicações da diabetes, asma, dermatite atópica, doenças autoimunes da tiroide, colite ulcerativa, doença de Crohn, e outras indicações 11 onde a imunossupressão seria desejável. Além disso, acredita-se que estes compostos podem encontrar aplicação nos tratamentos terapêuticos para doenças proliferativas e cancros tais como a leucemia e os linfomas onde JAK3 é hiper ativado e em doenças tais como a doença de Alzheimer.
Por conseguinte, num primeiro aspeto a presente invenção proporciona um composto de fórmula geral I
ou pró-fármacos, sais, hidratos, solvatos, formas cristalinas ou diastereómeros farmacologicamente aceitáveis dos mesmos, em que:
Xi, x2, X3, X4 são cada um de carbono, onde um é substituído com um 0 0) N resto independentemente com Y, ou um de X4, X2, X3, X4 é N e os outros são de carbono, onde um de carbono é substituído com Z e o resto independentemente com A é um anel selecionado de entre:
em que D é selecionado de H, Ci_4 alquilo, halogéneo, amino; Q é uma ligação, halogéneo, Ci-4 alquilo, 0, S, SO, SO2, CO, CS; W é: 12 (i) NR1R2, em que RI e R2 são independentemente H, C1-4 alquilo, C1-4 alquilo CF3, arilo, hetarilo, C1-4 alquilarilo, C1-4 alquilhetarilo, C3_8 cicloalquilo, C2_6 alcenilo, ciclohetalquilo C1-4 alquilcicloalquilo, C1-4 alquilo ciclohetalquilo, ou RI e R2 são unidos para formar um anel opcionalmente substituído com 3-8 membros otimamente contendo um átomo selecionado a partir de 0, S, NR3; e R3 é selecionado de H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, C1-4 alquilo arilo, C1-4 alquilo hetarilo, C0R4 onde R4 é selecionado a partir de H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, ou (ii) H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, C3_8 cicloalquilo, ciclohetalquilo, C1-4 alquilarilo, Ci-4 alquilohetarilo, C3-8 cicloalquilo, C1-4 alquilocicloalquilo, C1-4 alquilo ciclohetalquilo; Y é H, halogéneo, CN, CF3, nitro, OH, Ci_4 alquilo, C1-4 alquilo NR5R6, Ci_4 alquilohetarilo, OC1-4 alquilo, OC2_ 4alquiloOCi-4 alquilo, 0Ci-4 alquiloNR5R6, OC1-4 alquilohetarilo, OCi_4 alquilociclohetalquilo, SC1-4 alquilo, SC2-4-alquiloOCi_4 alquilo, SC1-4 alquiloNR5R6, NR5R6, NR5COR6, NR5S02R6, e R5 e R6 são cada um independentemente H, C1-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel opcionalmente substituído de 3-6 membros, contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR7 e R7 é selecionado a partir de H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, C1-4 alquilarilo, C1-4 alquilohetarilo; Z é selecionado a partir de: R8 R9^Ηγ^νηιι) n o RS _ R9
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onde R8 é selecionado de H, Ci-4 al*!111!0' R9 e RIO são independentemente Ci_4 alquilo, Ci_4 alquilohetarilo. Rll é selecionado a partir OH, selecionados a partir de H, c alquiloOR12, Ci_4 alquiloNRl2Rl3í w 4 OCl-4 alquil0' NR12R13; n é 0 - 4; onde R12 e R13 são independentemente selecionados a partir de H, ci-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel substituído facultativamente de 3-8 membros contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR14, e R14 é selecionado a partir H, C1-4 alquilo.
Num sequndo aspeto a presente invenção consiste em uma composição que compreende um transportador e pelo menos um composto do primeiro aspeto da invenção.
Num outro aspeto a presente invenção proporciona o uso de um composto do primeiro aspeto ou de uma composição do sequndo aspeto na preparação de um medicamento para o tratamento de um estado de doença selecionado de entre o grupo que consiste por atopia, hipersensibilidade de células mediadas, doenças reumáticas, transplantes, doença do hospedeiro, doenças virais, doenças proliferativas e cancro 14
Num aspeto adicional a presente invenção proporciona a utilização de um composto do primeiro aspeto ou de uma composição do segundo aspeto na preparação de um medicamento para o tratamento de um estado de doença selecionado do grupo que consiste pela doença de Alzheimer, asma, eczema, alergia alimentar, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, inflamações cutâneas, e supressão imunitária por tumor sólido.
Num outro aspeto adicional, a presente invenção proporciona a utilização de um composto do primeiro aspeto ou de uma composição do segundo aspeto na preparação de um medicamento para ser usado como agente imunossupressor.
BREVE DESCRIÇÃO DA FIGURAS A Figura 1 mostra o alinhamento da sequência de aminoácidos de Quinases JAK selecionadas A Figura 2 mostra um modelo da bolsa de ligação de quinase Jak3 ATP exibindo o resíduo de Cisteína.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Por conseguinte, num primeiro aspeto a presente invenção proporciona um composto da fórmula geral I
I ou pró-fármacos, sais, hidratos, solvatos, formas cristalinas ou diastereómeros farmacologicamente aceitáveis dos mesmos, em que:
Xi, X2, X3, X4 são cada um de carbono, onde um é substituído com Z e o resto o e independentemente com Y, ou um de Xi, 15 χ2, Χ3, Χ4 em Ν, e os outros são carbono onde um carbono é substituído com Z e o resto de forma independente com Y; A é um anel selecionado de entre:
em que D é selecionado de H, Ci_4alquilo, halogéneo, amino; Q é uma ligação, halogéneo, Ci_4 alquilo, 0, S, S0, S02, CO, CS; W é: (i) NRlR2 em que Rl e R2 são independentemente, H, Ci-i alquilo, Ci_4 alquiloCF3, arilo, hetarilo, Ci_4 alquilarilo, Ci-4 alquilohetarilo, C3-s cicloalquilo, C2-6 alcenilo, ciclohetalquilo, Ci_4 alquilcicloalquilo, Ci_4 alquilo ciclohetalquilo, ou Rl e R2 são unidos para formar um anel substituído facultativamente de 3-8 membros contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR3, e R3 é selecionado a partir W, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, C1-4 alquilo arilo, Ci_4 alquilo hetarilo, COR4 onde R4 é selecionado de H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, ou (ii) H, Ci-4 alquilo, arilo, hetarilo, C3-8 cicloalquilo, ciclohetalquilo, Ci_4 alquilarilo, Ci_4 alquilohetarilo, C3_5 cicloalquilo, Ci-4 alquilcicloalquilo, Ci_4 alquilo ciclohetalquilo; Y é H, halogéneo, CN, CF3, nitro, OH, C1-1 alquilo, Ci_4 alquiloNR5R6, C1-4 alquilohetarilo, OC1-4 alquilo, 0C2-4alquiloOCi_4 alquilo, OC1-4 alquiloNR5R6, OC1-4 alquilohetarilo, OC1-4 alquilociclohetalquilo, SC1-4 alquilo, SC2-4 alquiloOCi-4 alquilo, SCi_4 alquiloNR5R6, NR5R6, NR5COR6, NR5SO2R6, e R5 e R6 são cada um independentemente 16 . ι formar um anel de H, Ci-4 alquilo, ou podem ser unidos par 3-6 membros opcionalmente substi contendo um átomo selecionado a partir selecionado de H, Ci_4 alquilo, arl alquilarilo, C1-4 alquilohetarilo; tuídos RMG opcionalmente 0, S, NR7 e R7 e lo, hetarilo, C4-4 Z é selecionado a partir de: R8 R9 ' Γ O »
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R9 0 RS n o mo
RS onde R8 é selecionado de H, Ci-4 alquilo; R9 e RIO são independentemente selecionados a partir de H, Ci-4 alquilo, C4_4 alquiloNR12Rl3, C1-4 alquiloOR12, C4_4 alquilohetarilo
Rll é selecionado a partir OH, OC4-4 alquilo, NR12R13; n é 0 - 4; onde R12 e R13 são independentemente selecionados a partir de H, C2-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel de 3-8 membros substituído facultativamente contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR14, e R14 é selecionado de entre H, Ci_4 alquilo.
Numa forma de realização preferida, o composto é escolhido de compostos de fórmula geral II. 17
η ou pró-fármacos, sais, hidratos, solvatos, formas de cristal ou diastómeros farmacologicamente aceitáveis destes, em que: Χι, γ2, X3, X4 são cada um carbono, onde um é substituído com Z e o resto independentemente com Y; ou um de Χι, X2, X3, X4 é N, e os outros são carbono, onde um carbono é substituído com Z e o resto independentemente com Y; A é um anel selecionado de entre:
em que D é selecionado de H, C1-4 alquilo, halogéneo, amino; Q é uma ligação, halogéneo, Ci_4 alquilo, 0, S, SO, S02, CO, CS; W é: (i) NRlR2 em que RI e R2 são independentemente H, C1-4 alquilo, C1-4 alquiloCF3, arilo, hetarilo, C1-4 alquilarilo, C1-4 alquilohetarilo, C3-8 cicloalquilo, C2_6 alcenilo, ciclohetalquilo, C1-4 alquilcicloalquilo, C1-4 alquilo ciclohetalquilo, ou RI e R2 são unidos para formar um anel de 3-8 membros facultativamente substituído contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR3, e R3 é selecionado de H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, C1-4 alquilo arilo, C1-4 alquilo hetarilo, C0R4 onde R4 é selecionado de H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, ou (ii) W é H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, C3_8 cicloalquilo, ciclohetalquilo, C1-4 alquilarilo, Ci_4 alquilohetarilo, C3-8 18 cicloal quilo, C1-4 alquilcicloalquilo, Ci_4 alquilo ciclohetalquilo; Y é H, halogéneo, CN, CF3, nitro, OH, C4-4 alquilo, C4-4 alquiloNR5R6, Ci_4 alquilohetarilo, 0 Ci_4 alquilo, OC2_4- alquiloOCi_4 alquilo 0Ci_4 alquiloNR5R6, OC4-4 alquilohetarilo, OCi-4 alquilciclohetalquilo, SCi_4 alquilo, SC2-4-alquiloOCi_4 alquilo, S Ci_4 alquiloNR5R6, NR5R6, NR5COR6, NR5S02R6; e R5 e R6 são cada um independentemente H, C3_4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel de 3-6 membros opcionalmente substituído contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR7 e R7 é selecionado de H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, Ci_4 alquilarilo, C4_4 alquilohetarilo; Z é selecionado a partir de:
onde R8 é selecionado de H, C4_4 alquilo; R9 e RIO são independentemente selecionados de H, C4_4 alquilo, Ci_4 alquiloNR12R13, C4_4 alquiloORl2, C4_4 alquilohetarilo
Rll é selecionado a partir OH, 0Ci-4 alquilo, NR12R13; n é 0 - 4 ; onde: R12 e R13 são independentemente selecionados a partir de H, C4-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel de 3-8 membros facultativamente substituído opcionalmente contendo um átomo selecionado a partir de 0, S, NR14, e R14 é selecionado de H, Ci-4 alquilo.
Na descrição acima, será apreciado que:
Ci_4 alquilo significa uma cadeia alquilo linear ou ramificada não substituída ou opcionalmente substituído. 19
Arilo significa fenilo ou naftilo não substituído ou opcionalmente substituído.
Hetarilo significa um anel heteroaromático de 5 ou 6 membros não substituído ou opcionalmente substituído contendo um ou mais heteroátomos selecionados a partir de 0, N, S.
Cicloalquilo significa um anel saturado de 3-8 membros.
Ciclohetalquilo significa um anel de 3-8 membros saturado contendo 1-3 heteroátomos selecionados a partir de O, S, NRl5, em que R15 é H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo.
Substituintes são escolhidos a partir de halogéneo, Ci_4 alilo, CF3, CN, nitro, arilo hetarilo, OCF3, O C1-4 alquilo, OC2-5alquiloNRl617, Oarilo Ohetarilo, C02R16, CONR16R17, nitro, NR16R17, NR16COR17, NR16S02R17; e R16, R17 são cada um independentemente H, Ci_4alquilo, C1-4 alquilo cicloalquilo, C1-4 alquilo ciclohetalquilo, arilo, hetarilo, C1-4 alquilo arilo, C1-4 alquilo hetarilo, ou podem ser unidos para formar um anel de 3-8 membros opcionalmente substituído opcionalmente contendo um átomo selecionado a partir de 0, S, NR18; e R18 é selecionado de H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, C1-4 alquilo arilo, C1-4 alquilo hetarilo.
Os compostos de fórmula I podem inibir irreversivelmente JAK 3. Geralmente, a força de ligação de inibidores reversíveis de uma enzima é medida pelo valor IC50 que é um reflexo da constante de equilíbrio da interação entre o inibidor e o sítio ativo da enzima. Inibidores irreversíveis apresentam um IC50 aparente porque uma vez que o inibidor é ligado não vai deixar o sítio ativo e o 20 IC50 medido irá, por conseguinte, melhorar (isto é, o número irá diminuir) ao longo do tempo. Por exemplo, o composto do exemplo 20 apresentam um "IC50" de ~ 40nM após 20 minutos de incubação com a enzima (antes da adição de ATP) , enquanto que o "IC50" cai para 7nM após 90 min de pré-incubação.
De preferência, o composto de fórmula I inibe seletivamente JAK 3 com respeito a JAK 1 ou a JAK 2. O termo "inibe seletivamente" é definido como significando que o IC50 aparente do composto para JAK 3 é mais do que 10 vezes mais baixa (isto é, mais potente) do que o IC50 para a JAK 1 ou para JAK 2.
Os compostos da presente invenção incluem todos os isómeros conformacionais (por exemplo, isómeros cis e trans) . Os compostos da presente invenção têm centros assimétricos e por conseguinte existem em diferentes formas enantioméricas e diastercomericas. Esta invenção relaciona-se com o uso de todos os isómeros óticos e estereoisómeros dos compostos da presente invenção e suas misturas, e a todas as composições farmacêuticas e métodos de tratamento que os podem empregar ou conter. Os compostos de fórmula I podem também existir como tautómeros. Esta invenção diz respeito à utilização de todos os referidos tautómeros e suas misturas.
Esta invenção também abrange composições farmacêuticas contendo pró-fármacos de compostos da fórmula I. Os compostos de fórmula I tendo grupos livres amino ou hidroxi podem ser convertidos em pró-fármacos. Pró-fármacos incluem compostos em que um resíduo de aminoácido, ou uma cadeia polipeptídica de dois ou mais (por exemplo, dois, três ou quatro) resíduos de aminoácidos que estão covalentemente juntos através de ligações peptídicas a grupos livres amino ou hidroxi de compostos de fórmula 1. Os resíduos de 21 aminoácidos incluem os 20 aminoácidos de ocorrência natural vulgarmente designados por simbolos de três letras e também incluem, 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metilhistidina, norvlina, beta-alanina, ácido gama-aminobutírico, citrulina, homocisteina, homoserina, ornitina e metano sulfona. Os pró-fármacos também incluem compostos em que carbonatos, carbamatos, amidas e ésteres de alquilo que estão covalentemente ligados a os substituintes acima referidos de fórmula I através do pró-fármaco carbonilo carbono de cadeia lateral. Os pró-fármacos também incluem derivados de fosfato de compostos de fórmula 1 (tais como ácidos, sais de ácidos, ou ésteres) unidos através de uma ligação fósforo-oxigénio a um hidroxilo livre de compostos de fórmula 1.
Quando o composto possui um centro quiral, o composto pode ser utilizado como um isómero purificado ou como uma mistura de qualquer proporção de isómeros. No entanto, é preferido que a mistura compreenda pelo menos 70%, 80%, 90%, 95%, ou 99% do isómero preferido.
Numa forma de realização ainda mais preferida, o composto é selecionado a partir dos compostos estabelecidos nos Exemplos. Mais preferivelmente, o composto é selecionado a partir dos compostos definidos na Tabela 3.
Num segundo aspeto a presente invenção consiste em uma composição que compreende um transportador e pelo menos um composto do primeiro aspeto da invenção.
Num outro aspeto a presente invenção proporciona o uso dos compostos do primeiro aspeto ou das composições do segundo aspeto na preparação de um medicamento para o tratamento de um estado de doença selecionado de entre o grupo que consiste por atopia, tais como asma alérgica, dermatite 22 atópica (eczema), e rinite alérgica; Hipersensibilidade Mediada das Células, tal como a dermatite de contacto alérgico e Pneumonite de Hipersensibilidade; Doenças Reumáticas, como o Lúpus Eritematoso Sistémico (LES), artrite reumatoide, artrite juvenil, sindrome de Sjõgren, esclerodermia, polimiosite, a espondilite anquilosante, artrite psoriática; Outras doenças autoimunes como a diabetes do tipo I, doenças autoimunes da tireoide, e doença de Alzheimer, doenças virais, tais como Epstem Barr (EBV) , virus da Hepatite B, Hepatite C, HIV, HTLV 1, virus varicela-zoster (VZV), virus do papiloma humano (HPV), cancros, como a leucemia, o linfoma e o cancro da próstata.
Como aqui utilizado o termo "estado de doença relacionado com a tirosina quinase" refere-se a essas doenças que resultam da atividade de tirosina quinase aberrante, na atividade JAK particular e/ou que são aliviadas pela inibição de uma ou mais destas enzimas.
Num aspeto adicional a presente invenção proporciona a utilização dos compostos descritos na preparação de um medicamento para o uso como um agente imunossupressor.
De preferência, o agente imunossupressor é para o tratamento de estados de doença selecionados a partir de lúpus, esclerose múltipla, artrite reumatoide, psoriase, diabetes tipo I e complicações da diabetes, cancro, asma, dermatite atópica, doenças autoimunes da tiroide, colite ulcerativa, doença de Crohn, e doença de Alzheimer. A presente invenção proporciona composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um dos compostos de fórmula 1 ou II capaz de tratar uma desordem associada com JAK3 numa quantidade eficaz, e um veiculo ou diluente farmacologicamente aceitável. As composições da presente 23 invenção podem conter outros agentes terapêuticos, tal como descrito abaixo, e podem ser formuladas, por exemplo, empregando veiculos sólidos ou liquidos convencionais ou diluentes, bem aditivos farmacêuticos de um tipo apropriado para o modo de administração desejada (por exemplo, excipientes, ligantes, conservantes, estabilizantes aromas, etc.) de acordo com técnicas tais como as bem conhecidas na técnica da formulação farmacêutica.
Os compostos da fórmula I ou II podem ser administrados por qualquer meio adequado, por exemplo, por via oral, tais como sob a forma de comprimidos, cápsulas, grânulos ou pós; sublingualmente; bucalmente; parentericamente, tal como, por via subcutânea, intravenosa, intramuscular, ou injeção intersticial ou técnicas de infusão (por exemplo, como soluções injetáveis estéreis aquosas ou não-aquosas ou suspensões); nasalmente, tal como por pulverização de inalação; topicamente, tais como sob a forma de um creme ou unguento, ou por via retal, tais como sob a forma de supositórios; em formulações de dosagem unitárias contendo, veiculos ou diluentes farmacologicamente aceitáveis não-tóxicos. Os compostos podem, por exemplo, ser administrados numa forma adequada para libertação imediata ou para a libertação prolongada. A libertação imediata ou a libertação prolongada pode ser conseguida pelo uso de composições farmacêuticas adequadas compreendendo os presentes compostos, ou, nomeadamente no caso de libertação prolongada, o uso de dispositivos tais como implantes subcutâneos ou bombas osmóticas.
Para além de primatas, tais como seres humanos, uma variedade de outros mamíferos podem ser tratados de acordo com o método da presente invenção. Por exemplo, mamíferos, incluindo, mas não limitado a, vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, cobaias, ratos ou outros bovinos, 24 ovinos, equinos, canino, roedor, felino ou espécies de murideo podem ser tratadas. No entanto, o método também pode ser posto em prática em outras espécies, tais como espécies aviárias (ex. galinhas).
As doenças e as condições associadas com a inflamação e a infeção podem ser tratadas utilizando o método da presente invenção. A doença ou a condição pode ser uma em que as ações de eosinófilos e/ou de linfócitos devem ser inibidas ou promovidos, a fim de modular a resposta inflamatória.
Os indivíduos nos quais a inibição JAK3 é desejada, são mamíferos, incluindo mas não limitado a, vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, cobaias, ratos ou outros bovinos, ovinos, equinos, caninos, roedores, felinos ou espécies murina e, de preferência um ser humano, masculino ou feminino. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa a quantidade da composição em causa que vai provocar a resposta biológica ou médica de um tecido, sistema, animal ou humano que está a ser procurada pelo investigador, veterinário, médico ou outro clinico. 0 termo "composição" como é aqui utilizado, destina-se a englobar um produto que compreende os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, a partir de combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas. Por "farmacologicamente aceitável" pretende-se significar que o transportador, diluente ou excipiente deve ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não com o seu recipiente. 25
Os termos "administração de" e ou "administrando um" composto deve ser entendido como significando o proporcionar de um composto da invenção ao indivíduo em necessidade de tratamento.
As composições farmacêuticas para a administração dos compostos da presente invenção podem ser convenientemente apresentadas na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer dos métodos bem conhecidos na técnica da farmácia. Todos os métodos incluem o passo de levar o ingrediente ativo em associação com o transportador que constitui um ou mais dos ingredientes acessórios. Em geral, as composições farmacêuticas são preparadas colocando o ingrediente ativo em associação uniforme e próxima com um líquido transportador ou com um transportador sólido finamente dividido ou ambos, e depois, se necessário, moldando o produto na formulação desejada. Na composição farmacêutica o composto ativo objeto é incluído numa quantidade suficiente para produzir o efeito desejado sobre o processo ou condição de doença. Tal como aqui utilizado, o termo "composição" destina-se a englobar um produto que compreende os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, a partir de combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas.
As composições farmacêuticas contendo o ingrediente ativo podem estar numa forma adequada para utilização oral, por exemplo, na forma de comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersáveis, emulsões, duras ou moles ou xaropes ou elixires. As composições destinadas à utilização oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para o fabrico de composições farmacêuticas e tais 26 composições podem conter um ou mais agentes selecionados de entre o grupo consistindo de agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes, a fim para proporcionar preparações farmacologicamente elegantes e que podem ser ingeridas. Os comprimidos contêm o ingrediente ativo em mistura com excipientes não tóxicos farmacologicamente aceitáveis que são adequados para o fabrico de comprimidos. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegrantes, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes ligantes, por exemplo amido, gelatina ou agentes de acácia, e lubrificantes, por exemplo estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, assim, proporcionar uma ação sustentada durante um período mais longo. Por exemplo, um material para retardar, tal como o gliceril monostcarato ou o diestearato glicetilo podem ser empregues. Eles também podem ser revestidos para formar comprimidos terapêuticos osmóticos para libertação controlada.
Formulações para utilização oral podem também ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole em que o ingrediente ativo é misturado com água ou com um meio oleoso, por exemplo óleo de amendoim, parafina líquida, ou azeite.
As suspensões aquosas contêm os materiais ativos em mistura com excipientes adequados para o fabrico de suspensões 27 aquosas. Estes excipientes são agentes de suspensão, por exemplo carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxi-propilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinil-pirrolidona, goma de tragacanto e goma de acácia; agentes de dispersão ou agentes de humidificações podem ser um fosfatido de ocorrência natural, por exemplo lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos gordos, por exemplo estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecatilenoxicetanol de produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, tais como mono oleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo de mono oleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas podem também conter um ou mais conservantes, por exemplo etilo, ou n-propilo, p-hidroxibenzoato, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes, e um ou mais agentes edulcorantes, tais como a sacarose ou a sacarina.
As suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão do ingrediente ativo num óleo vegetal, por exemplo óleo de amendoim, azeite, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou num óleo mineral tal como a parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo cera de abelha, parafina dura ou álcool cetilico. Agentes edulcorantes tais como os estabelecidos acima, e agentes aromatizantes podem ser adicionados para proporcionar uma preparação oral palatável. Estas composições podem ser conservadas pela adição de um antioxidante tal como o ácido ascórbico. 28 Pós e grânulos dispersáveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água proporcionam o ingrediente ativo em mistura com um agente dispersante ou molhante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes dispersantes ou molhantes e agentes de suspensão são exemplificados pelos já acima mencionados. Excipientes adicionais, por exemplo edulcorantes, aromatizantes e agentes de coloração, podem também estar presentes.
As composições farmacêuticas da invenção podem também estar na forma emulsões de óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo azeite ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, por exemplo parafina liquida ou misturas destes. Agentes emulsionantes adequados podem ser gomas de ocorrência natural, por exemplo goma de acácia ou goma de tragacante, fosfatidos de ocorrência natural, por exemplo soja, lecitina, e ésteres ou éster parcial e derivados a partir de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo sorbitano e produtos de condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo mono-oleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões podem também conter agentes edulcorantes e aromatizantes.
Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes edulcorantes, por exemplo glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações podem também conter um demulcente, um conservante e agentes aromatizantes e corantes.
As composições farmacêuticas podem estar na forma de uma suspensão injetável estéril aquosa ou oleaginosa. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida utilizando os dispersantes ou molhantes adequados e os agentes de suspensão que foram acima mencionados. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução ou 29 suspensão injetável estéril num diluente ou solvente não-tóxico parentericamente aceitável, como por exemplo uma solução em 1, 3-butano diol. Entre os veiculos e solventes aceitáveis que podem ser empregues estão a água, a solução de Ringer e a solução isotónica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregues como solvente ou meio de suspensão. Para este fim qualquer óleo fixo brando pode ser empregue incluindo mono ou diglicéridos sintéticos. Além disso, ácidos gordos tais como ácido oleico encontram utilização na preparação de inj etáveis.
Os compostos da presente invenção podem também ser administrados sob a forma de supositórios para a administração retal do medicamento. Estas composições podem ser preparadas misturando o medicamento com um excipiente não irritante adequado que é sólido a temperaturas normais mas liquido à temperatura retal e portanto fundirão no reto para libertar o fármaco. Tais materiais são a manteiga de cacau e os polietilenoglicóis.
Para utilização tópica, são empregues cremes, pomadas, geleias, soluções ou suspensões, etc., que contêm os compostos da presente invenção. (Para os fins deste pedido, a aplicação tópica deverá incluir bochechos e gargarejos).
Os compostos da presente invenção também podem ser administrados sob a forma de lipossomas. Como é conhecido na técnica, os lipossomas são geralmente derivados de fosfolipidos ou outras substâncias lipídicas. Os lipossomas são formados por cristais liquidos mono ou multilamelares hidratados que são dispersos num meio aquoso. Qualquer lipido não tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável, capaz de formar lipossomas pode ser usado. As presentes composições na forma de lipossomas podem 30 conter, em adição a um composto da presente invenção, estabilizantes, conservantes, excipientes e afins. Os lipidos preferidos são os fosfolipidos e fosfatidil colinas, tanto naturais como sintéticos. Métodos para formar lipossomas são conhecidos na técnica. A composição farmacêutica e o método da presente invenção podem ainda compreender outros compostos terapeuticamente ativos como notado aqui que são normalmente aplicados no tratamento das condições patológicas acima mencionadas. A seleção dos aqentes adequados para utilização em terapia de combinação pode ser feita por um vulgar perito na técnica, de acordo com princípios convencionais de produtos farmacêuticos. A combinação de agentes terapêuticos podem atuar de um modo sinergético para efetuar o tratamento ou prevenção das várias desordens acima descritas. Utilizando esta abordagem, é possível atingir a eficácia terapêutica com doses mais baixas de cada agente, reduzindo assim o potencial para efeitos colaterais adversos.
Exemplos de outros agentes terapêuticos incluem os seguintes: ciclosporinas (por exemplo, ciclosporina A) , CTLA4-Ig, os anticorpos, tais como ICAM-3, anti-lL-2 recetor (Anti-Tac), anti-CD45RB, anti-CD2, anti-CD3 (OKT-3), anti-CD4, anti-CD80, anti-CD86, agentes de bloqueio da interação entre CD40 e gp39, tais como anticorpos específicos para CD40 e/ou gp39 (isto é, CD154), proteínas de fusão construídas a partir de CD40 e gp39 (CD401g e CD8gp39), inibidores, tais como os inibidores de translocação nuclear, de função NP-kappa B, tais como a desoxiespergualina (DSG), inibidores da biossíntese de colesterol tais como os inibidores da HMG CoA reductase (lovastatina e simvastatina), medicamentos anti-inflamatórios não-esteroidais (NSAIDs), tais como o ibuprofeno, a aspirina, acetaminofeno, leflunomida, os 31
inibidores da desoxiespergualina, azatioprina e ciclo-oxigenase tais como rofecoxib e celecoxib, esteroides tais como a prednisolona ou dexametasona, compostos de ouro, agentes antiproliferativos, tais como o metotrexato, Ek506 (tacrolimus, Proraf), micofenolato mofetil, medicamentos citotóxicos, tais como a azatioprina, VP-16, etoposide, fludarabina, cisplatina e ciclofosfamida, inibidores TNF-a tais como de tenidap, anticorpos anti-TNF ou recetor TNF solúvel e rapamicina (sirolimus ou Rapamune) ou os seus derivados.
Quando outros agentes terapêuticos são empregues em combinação com os compostos da presente invenção, eles podem ser utilizados por exemplo em quantidades como as indicadas no Physician Desk Reference (PDR), ou como de outro modo determinado por um comum perito na técnica.
No tratamento ou prevenção de condições que requerem a inibição da proteina tirosina quinase um nivel de dosagem apropriado será geralmente cerca de 0,01 a 500 mg por kg de peso corporal do paciente por dia que pode ser administrado em doses únicas ou múltiplas. De preferência, o nivel de dosagem será de cerca de 0,1 a cerca de 250 mg/kg por dia, mais preferivelmente cerca de 0,5 a cerca de 100 mg/kg por dia. Um nivel de dosagem adequada pode ser de cerca de 0,01 a 250 mg/kg por dia, de cerca de 0,05 a 100 mg/kg por dia, ou cerca de 0,1 a 50 mg/kg por dia. Dentro desta gama, a dosagem pode ser de 0,05 a 0,5, de 0,5 a 5 ou de 5 a 50 mg /kg por dia. Para a administração oral, as composições são de preferência fornecidas sob a forma de comprimidos contendo de 1,0 a 1000 miligramas do ingrediente ativo, particularmente 1,0, 5,0, 10,0, 15,0. 20,0, 25,0, 50,0, 75.0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600.0, 750,0, 800,0, 900,0 e 1000,0 miligramas do 32 ingrediente ativo para o ajuste sintomático da dosagem ao paciente a ser tratado. Os compostos podem ser administrados num regime de 1 a 4 vezes por dia, de preferência uma ou duas vezes por dia.
Será entendido, no entanto, que o nivel de dose especifica e a frequência da dosagem para qualquer paciente em particular pode ser variada e dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto especifico empregue, a estabilidade metabólica e duração da ação desse composto, a idade, peso corporal, estado geral de saúde, sexo, dieta, modo e tempo de administração, taxa de excreção, combinação de fármacos, a gravidade da condição particular, e o hospedeiro que está a ser sujeito a terapia. A fim de que a natureza da presente invenção possa ser mais claramente compreendida, formas preferidas da mesma serão agora descritas com referência aos seguintes exemplos não limitativos.
EXEMPLOS MATERIAIS E MÉTODOS: Síntese de compostos
Os compostos da fórmula geral I são geralmente preparados a partir de dihaloheterociclo.
Quando Q é uma ligação e W representa um grupo amino, a sintese pode começar com uma substituição nucleofilica aromática para gerar um intermediário monoamino-monohalo. A substituição nucleofilica aromática é tipicamente realizada por adição de uma amina ao heterociclo di- 33 halogenado num solvente tal como etanol, isopropanol, terc-butanol, dioxano, THF, DMP, tolueno ou xileno. A reação é tipicamente realizada a uma temperatura elevada na presença de excesso de amina ou de uma base não-nucleof ilica tal como a trietilamina ou a diisopropiletilamina, ou uma base inorgânica tal como o carbonato de potássio ou o carbonato de sódio.
Alternativamente, o substituinte amina pode ser introduzido através de uma reação de aminação do metal de transição catalisado. Os catalisadores típicos para esta transformação incluem Pd (OAc) 2/P (t-Bu) 3, Pd2 (dba) 3/BINAP e Pd(OAc)2/BINAP. Estas reações são tipicamente levadas a cabo em solventes tais como o tolueno ou o dioxano, na presença de bases tais como o carbonato de césio ou de sódio ou de potássio terc-butóxido a temperaturas que variam desde a temperatura ambiente até ao refluxo.
As aminas utilizadas no primeiro passo da síntese destes compostos são obtidas comercialmente ou são preparadas utilizando métodos bem conhecidos dos peritos na técnica.
Quando Q é uma ligação e W é arilo, hetarilo ou outros sistemas semelhantes ligados por átomos de carbono, a síntese geralmente começa com uma reação de ligação cruzada entre o dihaloheterociclo e um parceiro de ligação adequadamente funcionalizado. Parceiros de ligação típicos são os ácidos ou ésteres borónico (acoplamento Suzuki: ver, por exemplo Miyaura e Suzuki, 1995), stannanes (ligação Tille; ver, por exemplo Stille 1986), reagentes Grignard (ligação Kumada: Kumada, Tamao e Sumitani 1988) ou espécies organozinco (ligação Negishi: Negishi 2002) . A ligação de Suzuki é o método de ligação preferido e é tipicamente realizado num solvente tal como DME, THF, DMF, etanol, propanol, tolueno, ou 1,4-dioxano, na presença de uma base 34 tal como carbonato de potássio, hidróxido de lítio, carbonato de césio, hidróxido de sódio, fluoreto de potássio ou fosfato de potássio. A reação pode ser realizada a temperaturas elevadas e o catalisador de paládio empregue pode ser selecionado a partir de Pd(PPh3)4, Pd(OAc)2, [ PdC12 (dppf) ] , Pd2 (dba) 3/P (t-Bu) 3..
Em que Q é CO, a síntese começa com o necessário ácido hetarilo carboxílico tendo um grupo halo. Os derivados de amida do ácido podem ser prontamente formados por ligação de uma amina com o ácido utilizando reagentes de ligação tal como o diciclo-hexilcarbodiimida, 1-(3- dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida ou carbonildiimidazol em solventes tais como diclorometano, tetrahidrofurano ou 1,4-dioxano. Alternativamente, o ácido pode ser convertido para o cloreto de ácido correspondente com cloreto de tionilo, cloreto de oxalilo, cloreto bis(triclorometilo) carbonato ou cianúrico, ou para as espécies anidrido mistas utilizando, por exemplo, t-butilo cloroformiato, utilizando procedimentos bem conhecidos dos perito na técnica. Os derivados de cloreto de ácido ou de anidrido misto podem então ser feitos reagir com a amina desejada de preferência na presença de uma base tal como a trietilamina, a diisopropiletilamina ou equivalente em fase sólida num solvente tal como o diclorometano, o tetra-hidrofurano, o dioxano ou o acetato de etilo à temperatura ambiente ou elevada, para gerar a amida. 0 cloreto de ácido pode também reagir com a amina requerida sob condições aquosas de preferência na presença de uma base inorgânica tal como o hidróxido de sódio, o hidróxido de potássio ou o carbonato de sódio para gerar a amida desejada. 35
As tioamidas podem ser preparadas a partir das amidas acima formadas por métodos bem conhecidos dos peritos na técnica e incluem a reação da amida com o reagente de Lawesson num solvente tal como o tolueno a temperatura elevada. 0 segundo passo da síntese envolve uma reação de substituição nucleofilica aromática do intermediário monohalo com um benzimidazole ou azabenzimidazole. A reação é tipicamente realizada usando um sal do benzimidazole ou azabenzimidazole em solventes tais como THF, DMF, DMA, NMP, tolueno, ou xileno desde a temperatura ambiente até ao refluxo. 0 sal de benzimidazole ou de azabenzimidazole é preparado por reação com um hidreto de metal tal como um hidreto de sódio ou de potássio ou por reação com carbonato de césio. Alternativamente, uma reação de ligação de metal catalisado pode ser usada para introduzir a benzimidazole ou o anel de azabenzimidazole. Catalisadores metálicos típicos incluem Pd(OAc)2/dppf, PdCl2/dppe, Pd2(OAc)2/P (t-Bu)3, (CuOTf)2·PhH. A reação é tipicamente realizada utilizando uma base tal como carbonato de césio, carbonato de rubídio, carbonato de potássio, terc-butóxido de sódio ou fosfato de potássio num solvente tal como o xileno, o tolueno, ou DMF desde a temperatura ambiente até ao refluxo. Reagentes auxiliares tais como agentes de transferência de fase (por exemplo, brometo de cetiltrimetilamoina) ou agentes complexantes de cobre (por exemplo, fenantrolina) podem também ser empregues na reação.
Alternativamente, a sequência de reação acima descrita pode ser invertida a partir da ligação do benzimidazole ou azabenzimidazole com o dihaloheterociclo utilizando os métodos acima descritos, seguidos da introdução do segundo substituinte para o núcleo heterocíclico utilizando os procedimentos acima descritos. 36
Uma via alternativa para compostos de fórmula geral I envolve uma reação mediada por cobre entre um benzimidazole ou azabenzimidazole e um reagente organometálico (ver, por exemplo Finet, 2002). Reagentes organometálicos preferidos são os ácidos borónicos. A porção tiol reativa (representada como parte dos substituintes Z) presente em compostos da fórmula geral I da presente invenção pode estar já presente nas funcionalidades utilizadas nos processos de síntese acima descritos ou podem ser introduzidas na fase final do procedimento sintético. Por exemplo, a porção tiol reativa pode ser introduzida em compostos tendo um substituinte hidroxilo ou amino livre por acoplamento com um ácido adequado. Isto é tipicamente conseguido utilizando reagentes de ligação tais como diciclo-hexilcarbodiimida, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, diispropilcarbodiimida ou carbonildiimidazol em solventes tais como diclorometano, tetra-hidrofurano ou 1,4-dioxano. Alternativamente, espécies anidras adequadas mistas do ácido, formadas usando, por exemplo, t-butil cloroformato, usando procedimentos bem conhecidos dos peritos na técnica, ou um derivado de cloreto de ácido adequado, podem ser feitas reagir com a amina ou com a porção álcool na presença de uma base tal como a trietilamina, a diisopropiletilamina ou a fase sólida equivalente num solvente tal como o diclorometano, o tetrahidrofurano, o dioxano ou o acetato de etilo à temperatura ambiente ou elevada, para gerar o composto desejado.
Os peritos na técnica apreciarão que a ordem das reações descritas para as sínteses acima pode ser alterada em certas circunstâncias, e que certas funcionalidades podem precisar de ser derivadas (isto é protegidas) em certos 37 casos, para que as reações acima descritas procedam com rendimento e eficiência razoáveis. Os tipos de funcionalidade de proteção são bem conhecidos dos peritos na arte e estão descritos por exemplo em Greene (Greene, 1999) . Os produtos formados a partir das sequências de reação acima descritas podem ser ainda mais derivados utilizando técnicas bem conhecidas dos peritos na técnica. Sínteses representativas são relatadas abaixo.
Exemplo de Referência 1 6-Cloro-N-[(IR)-l-feniletilpirazina-2-amina
Uma solução de R-a-metilbenzilamina (0,57g, 4,7mmol) e 2, 6-dicloropirazine (0,6388g, 4,29 mmol) em dioxano (2,5 mL) foi aquecida até ao refluxo sob N2 durante 48 horas. 0 solvente foi removido e o produto cristalizado a partir de tolueno-hexano (0,8 2 g, 82%). χΗ-η .m. r. (CDC13) δ 1,58 (d, J= 6, 6Hz, 3H, CH3) , 4,88 (m, 1H, CH), 5,07 (d, 1H, NH), 7,24-7,36 (m, 5H, Ar-H), 7,61 (s,lH, piraz-H), 7,79 (s, 1H, piraz-H).
Exemplo de Referência 2 N- (terc-butil)-6-cloropirazina-2-amina
(14,9 g, 20 mmol), 2,6-, base de Hunig (10 mL) e
Uma mistura de terc-butilamina dicloropirazina (6,0 g, 40 mmol) 38 etoxietanol (6 mL) foi aquecida a 130° C num tubo vedado durante 18 horas. 0 solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi retomado em CH2CI2 (100 mL) e filtrado. 0 filtrado foi lavado com H20 (2 x 20 mL), salmoura (20 mL) e seco (Na2SC>4) . Cromatografia clut com CH2C12 separou o produto como um sólido branco (5,4 g, 72%). 1H-n .m. r. (CDC13) δ 1,44 (s, 9H, CH3) , 4,68 (br s, 1H, NH) , 7,71 (s, 1H, piraz-H), 7,72 (s, 1H, piraz-H).
Exemplo de Referência 3 6-Cloro-N-[(IR)-1-(3-metoxifenil)etilpirazina-2-amina
Num processo análogo ao do Exemplo 1, a reação de R-a-metilbenzilamina (1,0 g, 6,6 mmol) e 2,6-dicloropirazina (0,440g, 2,95mmol) forneceu o produto (517mg, 67%). 1H-n .m. r. (CDC13) δ 1,59 (d, J= 6, 9Hz, 3H, CH3) , 3,81 (s, 3H, OCH3) , 4,87 (m, 1H, CH) , 5,47 (br s, 1H, NH) , 6,79-7,30 (m, 4H, Ar-H), 7,66 (s, 1H, piraz-H), 7,79 (s, 1H, piraz-H) .
Exemplo de Referência 4 6-cloro-N-fenilpirazina-2-amina
Uma solução de 2,6-dicloropirazina (1 g, 6,7 mmol) e anilina (1,25 g, 13,4 mmol) em etoxietanol (20 mL) contendo DIPEA (2,5 mL, 13,4 mmol) foi aquecida a refluxo durante 3 dias sob N2. A solução foi concentrada sob pressão reduzida 39 e o resíduo foi dissolvido em EtOAc (50 mL) e lavada sucessivamente com H2O (50 mL) , HC1 1M (2 x 50 mL), H2O (50 mL) e salmoura (50 mL) . Após secagem (Na2S04) , o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi cromatografado clut com EtOAc-hexano (20:80-50:50) para separar o produto puro das frações inferiores (230 mg, 17%) . 1H-n .m. r. (CDC13) δ 6,62 (br s, 1H, NH) , 7,11-7,20 (m, 1H, ArH), 7,38 (br s, 2H, ArH), 7,40 (s, 2H, ArH), 7,98 (s, 1H, piraz-H), 8,11 (s, 1H, piraz-H).
Exemplo de Referência 5 6-cloro-N-[(IR)-1-(4-metilfenil)etilpirazina-2-amina
Num processo análogo ao Exemplo 1, a reação de oí-(R)-4-dimetilbenzilamina (250mg, 1,85 mmol) e 2,6-dicloropirazina (0,251g, l,67mmol) forneceu o produto (199,5mg, 48%). 1H-n .m. r (CDC13) δ 1,56 (d, 3H, J = 6, 9Hz, CH3) , 2,33 (s, 3H, CH3), 4,84 (m, 1H, CH), 5,05 (br s, 1H, NH) , 7,15(ΑΑ'ΧΧ',2H, Ar-H), 7,24 (ΑΑ'ΧΧ', 2H, Ar-H), 7,60 (s, 1H, piraz-H), 7,78 (s, 1H, piraz-H).
Exemplo de Referência 6 6-Cloro-N-(4-morfolin-4-ilfenil) pirazin-2-amina
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Num processo análogo ao Exemplo 1, a reação de 4-morfolinoanilina (2,15 g, 12,lmmol) e 2,6-dicloropirazina (0,756g, 5,03mmol) forneceu o produto (0,54g, 37%). 1H-n .m. r. (CDC13) δ 3,25 (br s, 4H, CH2) , 3,99 (br s, 4H, CH2), 7,05-7,17 (m, 2H, ArH), 7,42-7,54 (m, 2H, ArH), 7,94 (s,1H, piraz-H), 8,04 (s, 1H, piraz-H), 8,06 (s, 1H, NH) .
Exemplo de Referência 7 6-Cloro-N-(2-furilmetilo)pirazin-2-amina
Num processo análogo ao Exemplo 1, a reação de furfurilamina e 2,6-dicloropirazina forneceu o produto (98%) . 1H-n .m. r. (CDC13) 54,57 (d, J= 5,7 Hz, 2H, NCH2) , 5,01 (s, largo, 1H, NH), 6,30 (d, J = 3,3 Hz, 1H, furanilo-H), 6,35-6,33(m, 2H, furanilo-H), 7,81 (s, 1H, piraz-H), 7,84 (s, 1H, piraz-H).
Exemplo de Referência 8 6-Cloro-N-(piridina-3-ilmetil) pirazina-2-amina
Uma mistura de 2, 6-dicloropirazine (0,671 mmol) e 3-picolilamina (2,014 mmol) em xileno (25 ml) foi submetida a refluxo durante a noite. O resíduo obtido após evaporação do solvente foi suspenso entre CH2C12 (100 ml) e água (100 ml) . A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com CH2C12 (3 x 50 ml) . Os extratos orgânicos 41 combinados foram lavados com salmoura (1 x 100 ml) secos (Na2S04) e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi então purificado por cromatografia em coluna eluindo com uma mistura de hexano:gradiente de acetato de etilo para dar o produto desejado (93%). H-n .m. r. (CDC13) 54,61 (d, J= 5,7 Hz, 2 H, NCH2) , 5,29 (s
largo, 1H, NH), 7,27 (m, 1H, pirid.-H), 7,30 (m, 1H
pirid.-H), 7,71 (d, J = 7.8 Hz, 1H, pirid.-H), 7,85 (s, 1H pirid.-H), 8,54 (s, largo, 1H, piraz.-H), 8,61 (s, broad, 1H, piraz.-H).
Exemplo de Referência 9 N-Benzil-6-cloro-N-metilpirazina-2-amina
Num processo análogo ao Exemplo 1, a reação de N-metil benzilamina e 2,6-dicloropirazine forneceu o produto (70%). 1H-n .m. r. (CDC13) 53,11 (s, 3 H, NCH3) , 4,98 (s, 2H, ArCH2N) , 7,24 (d, J = 6, 9 Hz, 2 H, ArH) , 7,37-728 (m, 4H,
ArH), 7,81 (s, 1H, piraz.-H), 7,88 (s, 1H, piraz.-H).
Exemplo de Referência 10 lH-benzimidazol-5-amina
Uma solução de 5-nitrobenzimidazole (10,0 g, 61,3 mmol) em metanol (250 mL) foi hidrogenada na presença de 10% Fd/C (0,40 g) à pressão atmosférica durante 20 h. A mistura foi 42 filtrada através de Celite® e o solvente removido sob pressão reduzida para dar o produto puro (8,lg. 100%) . 1H=n.m. r. (CD3OD) 8 6, 75 (dd, 1H, J = 8,4 e 2,0 Hz, benzimid-H), 6,92 (d, 1H, J = 2,0 Hz, benzimid-H), 7,36 (d, 1H, J = 8,4 Hz, benzimid-H), 7,92 (s, 1H, benzimid-H).
Exemplo de Referência 11 1-[6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-5-amina e 1-[6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6- amina
Uma mistura de lH-benzimidazol-5-amina (2,93 g, 22 mmol), N-(terc-butil)-6-cloropirazin-2-amina (3,71g, 20 mmol) e carbonato de césio (9,12 g, 28 mmol) em DMF (20 mL) foi aquecida sob N2. durante 48 h. Após arrefecimento à RT a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi extraído, com CHCI3 e o solvente removido sob pressão reduzida. O residuo foi cromatografado usando CH2Cl2-MeOH (98:2 - 93:7) para dar a partir das frações menos polares 1-[ 6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-amina (1,38 g): 1H-n .m. r. (CDCI3) δ 1,51 (s, 9H, C(CH3)3), 3,80 (br s, 2H, NH2), 4,84 (br s, 1H, NH) , 6,74 (dd, 1H, J = 8,4, 2,2Hz, benzimid-H), 7,21 (d, 1H, J = 2,0Hz, benzimid-H), 7,62 (d, 1H, J= 9,2Hz, benzimid-H), 7,79 (s, 1H, piraz-H), 8,07 (s, 1H, piraz-H), 8,17 (s, 1H, benzimid-H). 43 e a partir das frações maia polares 1~[6-{terc-bufcilamin©} pira2Ín-2-il]-IH-benKimidasol-S-amina {1,54 g) : 1H-n .m. r. (CDC13) 51-51 (s, 9H, C (CH3) 3) , 3,48 (br s, 2H, NH2), 4,86 (s, 1H, NH) , 6,79 (dd, 1H, J = 8,6, 2.2Hz, benzimid-H) , 7,14 (d, 1H, J = 2,0Hz, benzimid-H) , 7,70 (d, 1H, J = 8,6Hz, benzimid-H), 7,78 (s, 1H, piraz-H), 8,07 (s, 1H, pyraz-H), 8,47 (s, 1H, benzimid-H).
Exemplo de Referencia 12 1- (6- ( [ (IS)-1-feniletil]amino/pirazin-2-il)-1H-benzimidazol-5-amina e 1-(6-([(IS)-1-feniletil] amino}pirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina
A uma solução agitada de 5-amino-benzimidazole (290 mg, 2,2 mmol) em DMF anidra (lOmL) sob N2 foi adicionado carbonato de césio (980mg). A mistura resultante foi agitada a 70°C durante 60 min. A isto foi adicionada uma solução de 6-cloro-N-[(IS)-l-feniletilpirazin-2-amina (470mg) em DMF (5 mL) e a mistura resultante foi então aquecida em refluxo durante 48h. O DMF foi removido sob pressão reduzida e o resíduo diluído com clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com Na2C03 aquoso, seca (Na2SC>4) e o solvente removido sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto. A cromatografia em coluna utilizando diclorometano-metanol (95:5 - 92:8) como eluente separarou duas frações 44 de material de partida que não reagiu. À maior fração Rf foi atribuído como o 6-isómero (276mg, 42%). 1H-n.m.r. (CDC13) 51.64 (d, 3H, J = 6,9Hz , ch3) , 2, 90 (br s 2H, NH2), 5,05 (m, 1H, CH) , 5,21 (d, 1H, NH) , 6,70 (dd, 1H II co , 2,1Hz, benz imid -H), 6,97 (d, r 1H, J = 1,8Hz benzimid- H) , 7,28- 7,43 (m, 5H, Ph-H), 7,58 (d, 1H, J 8,4Hz, benzimid-H) , 7, 84 (s, 1H, piraz -H) , 8,08 (s, 1H piraz-H), 8,21 (s, 1H, benz imid-H). m/z (ES) 331 (M++H). A fraçãomenor foi atribuída ao 5-isómero (170 mg, 26%), 1H-n.m.r. (CDC13) 51,64 (d, 3H, J = 6, 9Hz, CH3) , 2,85 (br s, 2H, NH2), 5,01 (m, 1H, CH) , 5,19 (d, 1H, NH) , 6,70 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1Hz, benzimid-H), 7,11 (d, 1H,J = 1,8Hz, benzimid-H) , 7,29-7,40 (m, 5H, Ph-H) , 7,51 (d, 1H, J = 8,7Hz, benzimid-H), 7,81 (s, 1H, piraz-H), 8,10 (s,lH, pyraz-H), 8.32 (s, 1H, benzimid-H). m/z (ES) 331 (M++H).
Exemplo de Referencia 13 1-(6-Cloropirazin-2il)-lH-benzimidazol-5-amina e l-(6-Cloropirazin-2il)-lH-benzimidazol-6-amina
Uma mistura de lH-benzimidazol-5-amina (0,8 g, 6 mmol), 2, 6-dicloropirazine (0,9 g, 6,0 mmol) e carbonato de césio (2,73 g, 8,4 mmol) em DMV (6 mL) foi aquecida sob N2 durante 6 h. Após arrefecimento até à RT, a mistura foi diluída com diclorometano-metanol (6:1, 30mL) e filtrada e o filtrado concentrado em vácuo. O resíduo foi cromatografado usando CH2CÍ2-McOH (98:2 - 94:6) para dar a 45 partir das frações menos polares 1-(6-cloropirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina (398 mg): 1H-n.m.r. (CDCI3) 56,74 (dd, 1H, J = 8,2, 2,2 Hz, benzimid-H), 7,40 (d, 1H, J = 2,2 Hz, benzimid-H), 7,51 (d, 1H, J = 8,2 Hz, benzimid-H), 8,40 (s, 1H, piraz-H) , 8,48 (s, 1H, piraz-H), 8,83 (s, 1H, benzimid-H). e a partir das frações mais polares 1-(6-cloropirazin 2-il)-lH-benzimidazol-5-amina (435 mg) 1H-n.m.r. (CDCI3) 56,79 (dd, 1H, J = 8,8, 2,2 Hz, benzimid-H) , 7,03 (d, 1H, J = 2,2 Hz, benzimid-H), 7,86 (d, 1H, J = 9,0 Hz, benzimid-H), 8,44 (s, 1H, piraz-H), 8,52 (s, 1H, piraz-H), 8,82 (s, 1H, benzimid-H).
Exemplo de Referencia 14 1—(6 —[(ciclopropilmetil)amino]pirazin-2-il]-1H-benzimidazol-6-amina
Uma solução de 1 - (6-cloropirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina (100 mg, 0,41 mmol.) e ciclopropilmetilamine (242, 4,1 μ]1 mmol) em etoxietanol (2 mL) contendo DIPEA (140 μ]1) foi aquecida até ao refluxo durante a noite sob N2. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e o residuo foi dissolvido em EtOAc (20 mL) e lavado sucessivamente com H20 (20 mL) , HC1 1M (2 x 20) ml) , H20 (20 mL) e salmoura (20 mL). Após secagem (Na2S04), o solvente foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi cromatografado, eluindo com diclorometano metanol (9:1 - 94:6) para separar o produto puro a partir das fações inferiores (98 mg) 46 1H-n.m •r. (CDCI3 ) 00,28-0,36 (m, 2H, CH2), 0,57- -0,66 (m, 2H ch2) , 1,08-1,22 (m, 1H, CH), 3,27-3, 34 (m, 2H, CH2) , 3,79 (brs, 2H, NH2), 5,02 (m, 1H, NH) , 6,74 (dd, 1H, J : 8, 6, 2,2 Hz, benzimid-H), 7,33 (d, 1H, J = 2,2 Hz benzimid-H), 7,61 (d, 1H, J = 9,2 Hz, benzimid-H), 7,84 (s, 1H, pyraz-H), 8,10 (s, 1H, piraz-H), 8,35 (s, 1H, benzimid-H) .
Exemplo de Referencia 15 1-[6-(isopropilamino) pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-amina
Uma solução de 1-(6-cloropirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina (100 mg, 0,41 mmol) e isoporpilamine (350 μΙ*, 4,1 mmol) em cloroxietanol (2 mL) contendo DIPEA (140 μΐυ foi aquecida num tubo selado durante a noite sob N2. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e o residuo foi dissolvido em EtOAc (20 mL) e lavada sucessivamente com H20 (20 mL) e salmoura (20 mL) . Após secagem (Na2S04) o solvente foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi cromatografado, eluindo com diclorometano-metanol (9: 1 - 94:6) para separar o produto puro das frações inferiores (102 mg) . 'íí-n . rri.r. (CJ )C 1 ) 1 X ··' — f 3; (d, 6H, J = 6,4 1 Iz, CH.3) , 3,7 9 i~> f H, NH2), 4,05- Λ O ^ f --· λ m., 1H, CH) f 4,72 V lil / J- i i f cl ' f s-- zxZj , NH) , 6,75 ( dd, li Λ f ‘.J = 8,6, 2,2 Hz ;, ben: zimid-H), 7,32 (d, 1H, u 2 , L ) Hz, ben zii riid-H) , 7,61 L (d, 1H, J = 8,4 Hz, benz imid-H), 7,79 (s, 11 i, piraz-I-I) , 8, 09 (s, 1H, piraz- dl) , 8,35 (s, H, benzi mi d- H)
Exemplo de Referência 16 47 1—[6 -(dietilamino) pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-amina
Uma solução de 1-(6-cloropirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina (100 mg, 0,41 mmol) e dietilamina (430 μ]1, 4,1 mmol) em etoxietanol (2 mL) contendo DIPEA (140 μ]1) foi aquecida num tubo selado durante a noite sob N2. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e o residuo foi dissolvido em EtOAc (20 mL) e lavado sucessivamente com H20 (20 mL) e salmoura (20 mL). Após secagem o solvente foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi cromatografado eluindo com diclorometano-metanol (9:1 - 94:6) para o produto puro separado a partir das frações inferiores (110 mg).
1H-r .m. n. (CDC13) 51,28 (t, 6H, J = 7,1 Hz, CH3) , 3,61 (q, 4H, J = 7,1 Hz, CH2), 3,78 (brs, 2H, NH2) , 6,74 (dd, 1H, J = 8,6, 2,2 Hz, benzimid-H), 7,32 (d, 1H, J = 24Hz, benzimid-H), 7,61 (d, 1H, J = 8,8 Hz, benzimid-H), 7,91 (s, 1H, piraz-H), 8,06 (s, 1H, piraz-H), 836 (s, 1H, benzimid- H) .
Exemplo de Referência 17 1-(6-piridina-4-ilpirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina
Sob uma atmosfera de azoto uma mistura de l—(6 — cloropirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina (50 mg, 0,20 mmol), ácido 4-piridilgorónico (30 mg, 0,24 mmol), tetraquis (trifenilfosfina) paládio (0) (23 mg, 0,02 mmol.) 48 em tolueno-n-propanol (2 mL, 3:1) foi tratada com solução aquosa de carbonato de sódio 2M (0,14 mL, 0,84 mmol). A mistura resultante foi agitada vigorosamente enquanto foi aquecida sob refluxo durante a noite. Após arrefecimento, a mistura foi diluida com acetato de etilo (10 mL) e lavou-se com H20 (1 x 10 mL). A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (10 mL) e as camadas orgânicas combinadas e lavadas com Na2C03 0,5 M, salmoura e depois secas (Na2S04) . A remoção do solvente sob vácuo, em seguida, produziu produto em bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna utilizando diclorometano-metanol (98:2-91:9) como eluente para fornecer o produto (32 mg).
2H n.m.r. (CDCI3) 53, 88 (s, largo, 2H, NH2) , 6,80 (dd, 1H, J = 8,6 e 2,0 Hz, benzimid-H) , 7,46 (d, 1H, J = 2,0 Hz, benzimid-H) , 7,67 (d, 1H, J = 8,6 Hz, benzimid-H), 7,98-8,01 (m, 2H, pirid-H), 8,49 (s, 1H, piraz-H), 8,84-8,87 (m , 2H, pirid-H), 8,99 (s, 1H, piraz-H), 9,05 (s, 1H, benzimid-H).
Exemplo 18 N-{1-[6-(terc-Butilamino)pirazin-2-il)]-lH-benzimidazol-6-il}-prop-2-inamide
A uma solução agitada de 1-[ 6-(terc-butilamino) pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-amina (70 mg, 0,25 mmol) em diclorometano anidro (2,5 mL) sob N2 adicionou-se trietilamina (86 μΐ), EDAC.HC1 (60 mg), 4-(1-pirrolidino)-piridina (4 mg) e ácido propiólico (18,5 μL) . A mistura resultante foi então agitada a RT durante a noite e foi diluída com o CH2C12 (lOmL) e lavada com H20 (2 x 10 mL) , 49 0,5M Na2C03 (10 mL) e seca (Na2S04) . O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando diclorometano-metanol (99:1 - 91:9) como eluente para separar o produto puro (1,8 mg) . 1H-n .m. r. (CDCI3) 51.52 (s, 9H, CH3) , 4,76 (brs, 1H, NH) , 5,78 (br s, 1H, CH) , 6,75 (dd, 1H, J = 8,4, 2,2 Hz, ArH) , 7,22 (d, 1H, J = 2,2 Hz, ArH), 7,63 (d, 1H, J = 8,0 Hz, Ar- H) , 7,79 (s, 1H, piraz-H), 8,08 (s, 1H, piraz-H) , 8,37 (s, 1H, benzimid-H).
Exemplo 19 N- [1- (6-{[(IS)-1-feniletilamino}pirazin-2-il)-1H-benzimidazol-6-il]acrilamida
A uma solução agitada de 1-(6 —{[(IS)-1-feniletil]amino} pirazin-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina (67 mg, 0,2 mmol) em THF anidro (2 mL) sob N2 adicionou-se trietilamina (67 μΗ, 0,48 mmol), EDAC.HC1 (46 mg, 0,24 mmol), 4-(1-pirrolidino)-piridina (cat.) e ácido acrílico (17 mg, 0,24 mmol). A mistura resultante é então agitada a RT durante a noite e diluída com H20 (10 mL) e a mistura extraída com EtOAc (2 x 10 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de Na2C03 aquosa, seca (Na2S04) e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna usando diclorometano-metanol (98:2 - 94:6) como eluente, para separar o produto puro (25 mg) ,
1H-r.m.n. (CDCI3) 51.62 (d, 3H, J - 6,8 Hz, CHS), 5,01-5,13 (m, 1H, CH) , 5,38 (d, 1H, J = 6,4 Hz, NH) , 5,78 (dd, 1H, J 50 -9,8, 20Hz, CH) , 6,24-6,52 6Η, ArΗ), 7,70-7,74 (m, 2Η, 8,11(3, 1Η, piraz-H) , 8,33 1H, CONH). (m, 2H, 2 x CH) , 72 9 -7, 4 4 (m Ar-tí) , 7,82 (s, iH, piraz-H) (s, 1H, benzimid -H) , 8,42 ís
Exemplo 20 N-{1- [6- (terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-il}acrilamida
r-' A uma solução agitada de 1-[ 6-(terc-butilamino) pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-amina (22 mg, 0,08 mmol) em diclorometano anidro (2 mL) sob N2 foi adicionada trietilamina (33 μ]0, 0,24 mmol), EDAC.HC1 (22 mg, 0,12 mmol), 4-(1-pirrolidino)-piridina (cat.) e ácido acrílico (8μ]0, 0,12 mmol) . A mistura resultante, foi em seguida, agitada a RT durante 3 dias e foi diluída com o H20 (10 mL) , a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com CH2C12 (10 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando diclorometano-metanol (98:2-93:7) como eluente, para separar o produto puro (10 mg). 1H-n. m. r. (CDC13) 51. 50 (s, 9H, CH3) , 4,89 (br s, 1H, NH) , 5, 77 (dd, 1H, J = 10 ,0, 2,0 Hz, CH) , 6,24- 6, 51 (m, 2H, 2 x CH) , 7,25 (dd, 1H , J = 8,6, 2,0 Hz, ArH) , 7,76 (d, 1H, J = 8,8 Hz, Ar-H) , 7,83 \—1 w piraz-H), 7,88 (br s , 1H, CONH), 8,13 (s, 1H, piraz-H) , 8,52 (s, \—1 benzimid-H) , 8,56 (s, 1H, ArH).
Exemplo 21 51 Ν-{1-[6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-5-il}acrilamida
A uma solução agitada de 1-[ 6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-5-amina (20 mg, 0,08 mmol) em diclorometano anidro (2 mL) sob N2 foi adicionado trietilamina (33 μ]1, 0,24 mmol), EDAC.HC1 (22 mg, 0,12 mmol), 4-(1-pirrolidino)-piridina (cat.) e ácido acrilico (8 μ]1, 0,12 mmol) . A mistura resultante foi, em seguida, agitada a RT durante 3 dias e foi diluída com H20 (10 mL) , a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com CH2C12 (10 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SC>4) e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna utilizando diclorometano-metanol (98:2 - 92:8) como eluente, para separar o produto puro (10 mg). 1H-n .m. r. (CDC13) 51,52 (s, 9H, CH3) , 4,87 (br s, 1H, NH) , 5,77 (dd, 1H, J= 9,8, 2.0Hz, CH) , 6,31 (dd, 1H, J= 16,6, 9, 8Hz, =CH (H) ) , 6,48 (dd, 1H, J = 16.6, 2,0Hz, =CH(H)), 7,73-7,81 (m, 2H, piraz-H + ArH) , 7,89 (d, 1H, J = 8,8Hz,
ArH) , 8,01 (s, 1H, ArH), 8,10 (s, 1H, piraz-H), 8.55 (s, 1H, benzimid-H).
Exemplo 22 N-{1-[6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-il}-2-metilacrilamida
52
Seguindo um procedimento idêntico ao do Exemplo 21 mas utilizando ácido metacrilico em vez de ácido acrílico, 1-[6- (terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-5-amina (57 mg) obteve-se N-{1-[ 6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6-il}-2-metilacrilamida (54mg). 1H-n .m. r. (CDC13 + d4-MeOD) 51,43 (s, 9H, CH3) , 2,00 (br s, 3H, ch3 ) , 5,42 (br s, 1H, = CH (H)), 5,77 (br s, 1H (H) ) , 7 ,32 (dd, 1H, J = 8,2, 2, 0 Hz, ArH), 7,67 (d, = 8 ,8 Hz, ArH), 7,74 (s, 1H, piraz-H), 7,99 (s, piraz), 8,38 (d, 1H, J = 2, 0 Hz, ArH) , 8,46 (ε benzimid-H).
Exemplo de Referência 23 1—[6 — { (2-metilfenil)-amino]pirazin-2-il}-lH-benzimidazol-6- amina
Uma solução do cloropirazina foi agitada (100 mg, 0,40 mmol) em tolueno (2 mL) foi adicionado o-toluidinc (0,1 mL, 0. 93 mmol), Pd [ P (t-Bu) 3] 2 (10 mg) e t-butóxido de sódio (58 mg, 0,6 mmol). A solução foi aquecida a 80° durante a noite e após arrefecimento até RT foi diluída com EtOAc (20 mL) . A camada orgânica foi recolhida e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (20 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, e secas (Na2SC>4) . A remoção do solvente sob pressão reduzida deu um resíduo oleoso que foi cromatografado usando CH2Cl2-MeOH (98:2 -> 94:6) para separar o produto desejado como um óleo amarelo pálido (52 mg, 41%). ΙΗ-r.m.n. (CDC13) 52,34 (s, 3H, CH3) , 3,70 (s, 2H, NH2) , 6,61 (s, 1H, NH) , 6,71 (dd, 1H, J = 8,6, 2,2 Hz, Ar-H) , 53 7,19-7,36 (m, 4H, Ar-H) , 7,53-7, 60 (m, 2H, Ar-H) , 7,99 (s, 1H, piraz-H) , 8,27 (s, 1H, piraz-H) , 8,36 (s, 1H, H- benzimid).
Exemplo 24 (2Z)-N-{1-[6-(terc-butilamino)pirazin-2-il]-1H-benzimidazol-6-il}-3-piridina-3-ilacrilamida
A uma solução agitada do alcino (30 mg, 0. 07 mmol) em etanol anidro (5 mL) foi adicionado catalisador de Lindlar (3 mg) . A mistura foi então purgada com gás hidrogénio e agitada sob H2 a pressão atmosférica durante 3 h. O catalisador foi removido por filtração através de Celite® e o solvente foi removido sob vácuo. A cromatografia flash utilizando EtOAc-MeOH (9: 1) separou o produto puro como um semissólido pegajoso (13 mg, 43%). 1H-r .m.n. (CDC13) õl,50 (s, 9H, C (CH3) 3), 4,93 (s, 1H, NH) , 6,26 (d, 1H, J = 12,6 Hz, C = CH) , 6,82 (d, 1H, J = 12,6 Hz, C = CH) , 7,14 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1 Hz, Ar-H), 7,25-7,29 (m, 1H, piridina-H) , 7,74 (d, 1H, J = 8,7 Hz, Ar-H), 7,82 (s, 1H, piraz-H), 8,07 (s largo, 1H, CONH), 8,09 (s, 1H, piraz-H), 8,13-8,16 (m, 1H, piridina-H), 8,47 (d, 1H, J = 1,8 Hz, piridina - H) , 8,50 (s, 1H, benzimid-H) , 8,51-8,53 (m, 1H, piridina-H), 8,63 (d, 1H, J = 2,1 Hz, Ar-H). m/z (EI) : 413 (M+) .
Exemplo de Referência 25 54 N- (terc-butil)-6-cloropirazina-2-carboxamida
Cloreto de tionilo (1 mL, 13,7 mmol) foi adicionado a uma suspensão do ácido (325 mg, 2 mmol) em tolueno (5 mL) . Uma gota de DMF foi então adicionada e após agitação RT durante 10 min. a mistura foi aquecida a refluxo durante lh. A reação foi arrefecida até à RT e o tolueno e o cloreto de tionilo em excesso foram removidos sob pressão reduzida. O tolueno (1 mL) foi então adicionado ao resíduo e este foi removido sob pressão reduzida. Este processo foi repetido e, em seguida CH2CI2 (10 mL) foi adicionada e a solução resultante arrefecida a 0o C t-butilamina (0,45 mL, 4,3 mmol) e trietilamina (1,1 ml, 8,0 mmol) foram então adicionados e a solução agitada RT durante a noite. A solução foi diluída com CH2CI2 (10 mL) e H20 (10 mL) e a camada orgânica foi recolhida e lavada com solução aq. de Na2CC>3 e, em seguida, secou-se (Na2S04) . O solvente foi removido sob vácuo e cromatografado em flash do resíduo usando CH2Cl2-MeOH (95:5) separado o produto puro como um óleo (290 mg, 68%). 1H-n .m. r. (CDC13) 51,49 (s, 9H, C(CH3)3), 7.48 (br s, 1H, NH) e 8.72 (s, 1H, piraz-H), 9.27 (s, 1H, piraz-H). m/z (EI) : 413 (M+) .
Exemplo de Referência 26 1-(6-Metoxipiridina-3-il)-5-nitro-lH-benzimidazol e 1—(6— methoxi piridina-3-il)-6-nitro-lH-benzimidazol 55
Uma mistura de 5-nitrobenzimidazole (650 mg, 4 mmol), 2- ácido metoxi-5-piridil borónico (420 mg, 2,6 mmol), acetato de cobre (II) (1,09 g, 6 mmol) e pó com um diâmetro de 4Â foi agitado vigorosamente em CH2C12 (40 mL) contendo piridina (0,65 mL) foi agitada ao ar ao longo de 3 dias. A mistura foi então filtrada através de Celite ® e a almofada do filtro foi lavada com CH2Cl2-MeOH (4:1). O filtrado e as lavagens foram combinados, concentrados sob vácuo e o resíduo cromatograf ado usando CH2Cl2-MeOH (100:0 -> 95:5) para separar o produto (como uma mistura 1:1 de regisómeros) como um sólido branco (272 mg, 37 %). m/z (El) : 270 (M+) .
Exemplo de Referência 27 1-(6-Metoxipiridina-3-il)-lH-benzimidazol-5-amina e 1—(6 — metoxipiridina-3-il)-lH-benzimidazol-6-amina
A mistura de regioisómeros derivados do Exemplo 26 (270 mg, 1 mmol) foi hidrogenada seguindo o procedimento descrito no Exemplo 10. O produto em bruto foi cromatografado, eluindo com CH2Cl2-MeOH (92:2 -> 95:5) para separar o 6-isómero (84 mg) a partir das frações menos polares e do 5-isómero das frações polares. (122 mg). 56 6-isómero: 1H-r.m.η. (CDC13) δ 3,88 (br s, 2H, NH2) , 4,01 (s, 3H, OCH3) , 6,64 (d, 1H, J = 2,1 Hz, benzimid-H) , 6,72 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1 Hz, benzimid-H), 6,92 (d, 1H, J = 9,0 Hz, benzimid-H). 7,61-7,68 (m, 2H, pir-H), 7,82 (s, 1H, benzimid-H), 8,30 (d, 1H, J = 2,7 Hz, pir-H). 5-isómero: 1H-r.m.n. (CDC13) 53,11 (s largo, 2H, NH2) , 4,01 (s, 3H, OCH3) , 6,75 (dd, 1H, J = 8,4, 2,1 Hz, benzimid-H), 6,92 (d, 1H, J = 8,7 Hz, benzimid-H), 7,15 (d, 1H, J = 2,1 Hz, benzimid-H), 7,18 (d, 1H, J = 8,7 Hz, pir-H), 7,68 (dd, 1H, J = 8,7, 2,7 Hz, pir-H), 7,91 (s, 1H, benzimid-H), 8,31 (d, 1H, J = 2,7 Hz, pir-H).
Exemplo 28 1 - (5-Bromopiridina-3-il)-lH-benzimidazol-6-amina e 7 - (5-bromopiridina-3-il)-lHbenzimidazol-5-amina
Uma solução de 3,5-dibromopiridina (2,37g, 10 mmol), 5-arninobenzimidazole (1,6Og, 12 mmol) e carbonato de césio (4,9g, 15 mmol) em DMSO (10 mL) foi aquecida a 150° durante 18 h . Após arrefecimento até RT, a solução foi diluida com CHC13 (40 mL) e filtrada através de Celite ® e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O residuo foi cromatografado (pré-adsorção de silica) eluindo com EtOAc-MeOH (100:0 -> 95:5) para separar, a partir das frações menos polares, o 6-isómero, e a partir das frações mais polares o 5-isómero. 6-isomeros: 57 1H-n.m.r. (CDCI3) δ 3,82 (br s, 2H, NH2, 6, 75-6, 78 (m, 2H) , 7,64 (d, 1H, J = 9,0 Hz, benzimid-H, 7,89 (s, 1H) , 8,01 (dd, 1H, J = 2,1 Hz, pir-H), 8,75 (br s, 2H). 5-isómeros: ΧΗ n.m.r. (CDC13) 53.74 (br s, 2H, NH2, 6,79 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1 Hz, bemimid-H) • 7, 15 (d, 1H, J = 2,1 Hz, benzimid- H) , 7,31 (d, 1H, J = 8,7 Hz, benzimid-H), 7,99 (s, 1H, benzimid- H) , 8,01 (dd, 1H, J = 2,1, 2,1 Hz, pir-H), 8,74- 8,77 (m, 2H, pir-H).
Exemplo de Referência 29 1-(6-Bromopiridina-2-il)-lH-benzimidazol-6-amina e l-(6-bromopiridina-2-il)-lH-benzimidazol-5-amina
Mz
Usando procedimentos idênticos aos descritos no Exemplo 28, a reaçãode 2,6-dibromopiridima com 5-aminobenzimidazole e carbonato de césio em DMSO a 150° proporcionou dois produtos regioisoméricos que foram separados por cromatografia. 6-isómero: ^-n.m.r. (CDC13) 5 3, 83 (br s, 2H, NH2) , 6,75 (dd, 1H J = 8,4, 2,1 Hz, benzimid.-H) , 7,42-7,47 (m, 3H) , 7,60 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,71 (dd, 1H, J = 7,8 Hz), 8,33 (s, 1H). 5-isómero: 1H-n.m.r. (CDCI3) 56,81 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1 Hz, benzimid-H) , 7,12 (d, 1H, J = 8,1 Hz, benzimid-H), 7,40-7, 48 (m, 58 2Η), 7,70 (dd, 1H, J = 7,8, 7,8 Hz, pir-H), 7,89 (d, 1H, J = 8,7 Hz, benzimid-H), 8,46 (s, 1H) .
Os compostos seguintes foram preparados utilizando procedimentos análogos aos descritos acima:
Estrutura
Componente N-[1- (6-
N-{1 - [6 - (4- metilpiperazin-1-il) pirazin-2 il]-1H- benzimidazol-6-i1} acrilamida N-{1 - [6 (Dietilamino)-2-pirazin il)-lH-benzimidazol-6-il acrilamida} N-{1 - [6 (metilamino) pirazin-2-il]
Data_ iH-n .m. r. (CDC13) 55.82 (dd, 1H, J = 9.8, 1.8Hz, =CH) , 6.24-6.54 (m, 2H,=CH2, 7.33 (dd, 1H, J = 8-8, 1.8Hz,ArM, 7.60 (br s, 1H, CONH), 7.80 (d, 1H. J = 8.4Hz, ArH) , 8.58 (s, 2H, piraz-H) , 8.73 (br s, 1H, ArH), 8.94(br s, 1H, ArH). iH. n .m. r. (CDC13) Õ2.34 (s7 3H,NCHa) , 2.55 (t, 4H, J = 5.1Hz, CH2) ,3.74 (t, 4H, J = 5.1Hz, CH2) , 5.72 (dd, 1H, J = 9.0, 2.6Hz, CH) , 6.25-6.48 (m, 211, =CH2, 7.14 (dd,1H, J = 8.4, 2.2Hz, ArH), 7.68 (d, 1H, J = 8.6Hz, ArH), 8.04 (s, 1H, piraz-H), 8.13 (s, 1H, piraz-H), 8.38 (br s,lH, CONH), 8.46 (s, 1H, ArH), 8.88(br s, 1H, ArH) ._ χΗ-η .m. r. (CDC13) 51.24 (d7 6H, J =7.0Hz, CH3) , 3.60 (q, 4H, J = 7.1Hz, CH2, 5.72 (dd,1 H, J 9.0, 2.7Hz,=CH), 6.25-6.49 (m, 2H, =CH2) , 7.20 (dd, 1H, J = 8.9, 2.0Hz, ArH), 7.71(d, 1H, J = 8.4Hz, ArH), 7.91 (s, 1H, piraz-H), 8.07 (s, 1H, piraz-H), 8.33 (br s, 1H, CONH), 8.49 (s, 1H,
ArH),8.76 (br s, 1H-n .m. r . (CDC13) 3H, J =5.0Hz, CH3) s, 1H, NH), 5.78
1H, ArH). 53.11 (d, , 4.9 (br (dd, 1H, J 59
60 pirAzin-2-iI)-IH-benz imidazo j 6-iI) acrilamide
N-{1 - [6 (isopropilamino) pirazin-2- il)-lH-benzimidazol-6 — i1] acrilamida
H-n.m.r. (CDCI3 51.32 (d, 6H, J =6.2Hz, CH3) , 4.13- 4.29 (m, 1H, CH),4.75 (d, 1H, J = 7.8Hz, NH) , 5.78 J = 9.8, 2.0Hz, 6.22-6.51 (m, 2H, 7.19 (dd, 1H, J = (dd,1H, =CH) , =CH2), 8.6,2.2Hz, ArH), 7.62 (br s,1H, CONH),7.76 (d, 1—> C-I = 8.8Hz, ArH), 7. 82 (s,1H, piraz-H), 8.13 (s, 1H, piraz-H),8.50 (s, 1H, ArH) , 8.74 (br s, lH,ArH). N-{1 - (6 ( [ (1,5)-1-metilpropil] amino} pirazin-2-il)- lHbenzimidazol-6-il acrilamida) "H-n m r. (CDCI3) 50.99 (t, N 3H, J = 7 . 2Hz, ch3) , 1.27 'Ò (d, 3H, J = 6.4Hz,CH3), 1.53 -1 .73 (m, 2H , CH2), . 95- NH 4.09 (m, 1H, CH) , 4.79 “A (d, 1H J= 8.0Hz, NH) , 5.76 / (dd, 1H, J = 9.6,2. 0Hz, =CH) r 6.23-6 .50 (m, 2H, = CH9, 7 .21 (dd, 1H, J = 8.6, 2.2Hz,ArH), 7.74 (d, 1H, J = 8.8Hz, ArH) , 7.82 (s, 1H, piraz-H), 7.84 (br s, 1H, CONH) , 8.11 (s, 1H, piraz-H), 8.49(s, 1H, ArH), 8.73 (br s 1H, ArH). N-[1 - (6 {[(IR)-1-metilpropil] amino} pirazin-2-il)- lHbenzimidazol-6-il acrilamida]
"H-n.m.r. (CDC13) 50.99 (t, 3H, J =7.2Hz, CH3) , 1.27 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH3) , 1.53-1.73 (m, 2H, CH2) , 3.95-4.08 (m, 1H, CH), 4.81 (d, 1H,J = 8.0Hz, NH), 5.75 (dd, 1H, J = 9.6,2.0Hz =CH), 6.23-6.50 (m. 2H,=CH2) , 7.22 (dd, 1H, J = 8.6, 2.2Hz,ArH), 7.73 (d, 1H, J = 8.8Hz, ArH),7.81 (s, 1H, piraz-H), 7.98 (br s, 1H, CONH) , 8.10 (s, 1H, piraz-H), 8.49(s, 1H, ArH), 8.73 (br s, 1H, ArH). N-{1 - (6- Anilinopirazin-2-il)- "H-n.m.r. (CDCl3+d4-MeOD) 55.9(dd, 1H, J = 9.0, 3.0Hz, =CH), 6.40(1H, d, /= 61
62 Ν-{1 - [6 (3,4,5- trimetoxifenil) pirazin-2-il]-ΙΗ-benzimidazol-6 il) acrilamida m/z (EI) 431 (M+) OMa
1-Metil-N-{1 [6 - (t- butilamino) pirazin-2-il]-1H benzimidazol-6-il} - 1,2,5,6- tetra- hidropiridina-3- carboxamida m/z (EI) 405 (M+)
NH ~b N-{1 - {6 (terc- butilamino)-2-pirazin il]-1H-benzimidazol-6-il}-but-2-enamida m/z (EI) 350 (M+)
N-{1 - [6 (terc- butilamino)-2-pirazin il-lH-benzimidazol-6-il} -but-2-inamide
H-n.m.r. (CDC13) 51.50 (s, 9H, C(CH3)3), 1.98 (s, 3H, CH3) , 4.93 (s,lH, NH) , 7.20 (dd, 1H, J=8.4, 2.0Hz,ArH), 7.76 (d, 1H, J = 8.8Hz, ArH),7.83 (s, 1H, piraz-H), 7.95 (br s, 1H,C0NH), 8.08 (s, 1H, piraz-H), 8.44(d, 1H, J = 2.0 Hz, ArH) , 8.49 (s, 1H,benzimid-H).m/z (EI): 348 (M+), N- (1 - {6 - [ (2- metilfenil)-amino] pirazin-2-il}-1H-benzimidazol-6-il) acrilamida
ΙΗ-n.m.r. CDC13/CD30D (v/v=19/l)52-3.5 (s, 3H, CH3) , 5.75-5.83 (m,1H, C=CH), 6.39-6.49 (m, 2H, 2 xC=CH), 7.19-7.34 (m, 3H, 3ArH),7.41(dd, 1H, J = 7.5, 1.4Hz, ArH),7.71 (d,1H, J = 8.7Hz, ArH), 7.92 (s,lH piraz-H), 8.25 (s, 1H, piraz-H),8.57 (s,lH, benzimid-H), 8.76 (d, 1H, J = 1.8Hz, ArH).m/z (Ei): 370 (M+) . N- (1 - {6 -cloro-2-metilfenil) H-n.m.r. CDC13/CD30D (v/v=l9/1)52.32 (s, 3H, CH3) , 5.77-5.81 (m, [ (5- 63 amino] pirazin-2-il}- lHbenzimidazol-6-il acrilamida) 0¾¾ JlT N NH Cl Oss/ 1H,C=CH), 6.33-6.49 (m, 2H, 2 x C=CH), 7.15 (dd, 1H, J = 8.1, 2.1Hz, ArH), 7.24 (d, 1H. J = 8.1Hz, ArH),7.39 (dd, 1H, J = 8.7, 1.8Hz, ArH),7.62 (d, 1H, J = 2.1Hz, ArH), 7.74 (d,1H, J = 8.7Hz, ArH), 7.98 (s, 1H, piraz-H) , 8.31 (9, 1H, piraz-H), 8.53 (s, 1H, benzimid-H), 8.77 (d, 1H, J =1.5Hz, ArH).m/z (EI): 404, 40 6 (ambos M+) . N-{1 - [6 (terc- butilamino)-2-pirazin il]-lH-benzimidazol-6-il]-3-piridin-3-il prop-2-ynamide H ’ ( S__ -Jí ,NH O 1H-n .m. r . CDC13/CD30D (v/v=19/l)51.50 (s, 9H, C(CH3) 3), 7.34-7.42 (m, 2H, ArH + piridina-H), 7.76 (d,1H, J = 8.7Hz, ArH), 7.82 (s, 1H, piraz-H), 7.90-7.94 (m, 1H, piridina-H) , 8.04 (s, 1H, piraz-H) , 8.48 (d, 1H, J = 2.1Hz, ArH), 8.49 (s,lH, benzimid-H) , 8.52-8.61 (m, 1H,piridine-H), 8.76-8.77 (m, 1H, piridina-H).m/z (EI). 411 (M+). N- (1 - {6 - [ (2-cloro-6-metilfenil) amino] pirazin-2-il}- lHbenzimidazol-6-il acrilamida) MH 7 "H-n.m.r. CDC13/CD30D (v/v=l 9/1 )52.33 (s,3H,CH3), 5.75-5.79 (m, 1H,C=CH), 6.32-6.48 (m, 2H, 2 xC=CH), 7.18-7.26 (m, 2H, 2ArH),7.36-7.39 (m, 2H, 2ArH, 7.63 (s, 1H, piraz-H) , 7.69 (d, 1 H, J = 8.7Hz,ArH), 8.27 (s, 1H, piraz-H), 8.49 (s,lH, benzimid-H), 8.69 (br s, 1H, ArH) .m/z (EI) : 404, 406 (ambos M+) . N-(1 - (6 - [ (3-metilpiridin-2-il) amino] pirazin-2-il]-lHbenzimidazol-6-il acrilamida) N NH ·} "H-n.m.r. CDC13/CD30D (ν/ν=19/1)δ2.44 (s,3H,CH3), 5.75-5.79 (m,1H,C=CH), 6.36-6.48 (m, 2H, 2 xC=CH), 6.97-7.01(m, 1H, piridina-H) , 7.37 (dd, 1H, J= 8.7, 2.1Hz, ArH),7.39-7.57 (m, 1H, piridina-H), 7.73 (d, 1H, J= 8.4Hz,ArH), 8.22-8.24 (m,1H, piridina-H), 8.47 (s, 1H, piraz-H), 8.58 (s, 1H, piraz-H), 64 Ν- (1 - {6 - [(3-metilpiridin-2-il) amino] pirazin-2-il]-lHbenzimidazol-6-il)-but-2-inamide
1H, piraz-H), 8.69 (br s, 1H, 8.90(d, 1H,J= 1.5Hz, ArH) , 9.44 (s,1H,benzimd-H).m/z (EI) : 371 (M+) . iH-n .m. r . CDCI3/CD3OD (v/v=4/l) 52.03 (s, 9H, C (CH3) 3) , 2.42 (s, 3H,CH3), 6.96-7.00 (m, 1H, piridina-H),7.34(d, 1H, J= 8.1Hz, ArH),7.54-7.56 (m, 1H, piridina-H),-7.69-7.72 (m,1H, piridina-H,8.22-8.24 (m, 1H, piridina-H), 8.45 (s, 1H, Piraz-H), 8.58 (s, 1H, piraz-H), 8.69 (br s, 1H, ArH), 9.45 N- (1 - {6 - [ (2- cloro-6-metilfenil) amino] pirazin-2-il}- lHbenzimidazol-6-il)-but-2-inamide (2E)-N-[1 - [6 -(terc-butilamino) pirazin-2-il]-lH-benzimidazol-6 — i1] - 3- piridin-3-il aclilamida N-(l - [6 [ (2,3- diclorofenil) amino] pirazi N-2-il [-lH- benzimidazol- 6-il) acrilamida
(s,1H,benzimid-H).m/z (El): 383 (M+) . "H-n.m.r. (CDC13) 52.08 (s7 3H, CH3) , 2.34 (s, 3H, CH3) , 6.57 (s, ΙΗ,ΝΗ), 7.30-7.32 (m, 2H, 2ArH),7.42-7.52 (m, 3H, 3ArH), 7.75 (d,1H,J= 8.7Hz, ArH), 7.84 (s, 1H, piraz-H), 8.06 (br s,lH, CONH), 8.35 (s,lH, piraz- H) , 8.48 (s,lH, benzimid- H) . m/z (EI): 416,418 (ambos M+) ._ 1H-n .m. r. (CDC13) 51.51 (s, 9H, C(CH3)3), 4.81 (s, 1H, NH), 6.66 ' (d,1H, J=15.6Hz, C=CH), 7.24- 733(m,2H, ArH + piridina-H) , 7.75 (d, 1H,J= 15.6Hz, C=CH), 7.78-7.81 (m,3H, 2ArH + CONH), 7.83 (s, 111, piraz-H), 8.15 (s, 1H, piraz-H), 8.52 (s, 1H, benzimid-H), 8.58-8.60 (m,2H, 2 3 piridina-H), 8.79 (br s, ΙΗ,ΑγΗ). m/z (EI) : 413 (M+) ._ 1H-n-m. r. CDCI3/CD3OD (v/v=9/l):5.75-5.79 (m,1H, C=CH), 6.34-6.46(m, 2H,2xC=CH),7.24-7.26 (m, 2H,2ArH), 7.28-7.38 (m, 1H, ArH), 7.72(d,1H, J= 8.7Hz, ArH), 7.96-7.99 (m,1H, ArH), 8.20 (s, 1H, piraz- H), 8.40 (s, 1H, piraz-H), 65 8.52 (s, 1H,benzimid-H), 8.72 (br s,lH, ArH) .m/z (EI): 424,426, 428 (todos N- (1 - {6 [ (2,5- diclorofenil) amino] pirazi N-2-ilj-lH-benzimidazol-6-il) acrilamida
M+) . iH-n .m. r. CDCI3/CD3OD (v/v= 9/1) : 5 .75-5.79 (m, 1H, C=CH) , 6. 40 -6.48(m, : 2H, 2 x C=CH) , 7. 06 (dd, 1H, J=8 .7, 2.4Hz , ArH) , 7.39-7. .45 (m, 2H,2ArH), 1 '.73 (d, 1H, J= 8.7Hz , ArH) ,8.21 (d, 1H , J = 2.4Hz, ArH), 8.30 (s, 1H, piraz -H) , 8.44 (s r 1H, piraz -H) , 8. 60 (s, 1H, N-{1 - [6 (terc-butilamino) pirazin-2- i1]— lH-benzimidazol-6-il}-3-piridin-3-il prop-2- inamide
benzimid-H), 8.71 (br S,1H, ArH) .m/z (El) : 424,426, 428 (todos M+) . iH-n.m.r.CDCl3/ CD3OD(v/v=19/l):2.33 (s, 3H, CH3) , 7.24-7.29 (m, 2H,2ArH), 7.36-7.42 (m, 2H, ArH +piridina-H), 7.51 (dd, 1H, J =8.7,1.8Hz, ArH), 7.73-7.75 (m, 2H,ArH + piraz-H, 7.91-7.95 (m, 1H, piridina-H), 8.29 (s,lH, piraz-H),8.43 (br s, 1H, ArH), 8.50 (s, lH,benzimid-H) , 8.62-8.64 (m. 1H, piridina-H), 8.80 (d,1H,J= 1.5Hz, piridina-H). m/z (EI): 479, 481 (ambos 6 - [6 -(acriloilamino)-lHbenzimidazol-1 — i1]-N-(terc-butil) pirazina-2-carboxamida 6 - [6 -(acriloilamino)-lHbenzimidazol-1 — i1]-N- isopropilpirazin a- 2-carboxamida
M+)_ ΙΗ-n.m.r. CDC13Õ1.56 (s, 9H, C(CH3)3), 5.76 (dd. 1H, J= 9.5, 1.7Hz,C=CH),6.31 (dd, 1H,J=16.9, 9.5Hz,C=CH),6.48 (dd, 1H, J=16.9, 1.8Hz,C=CH), 7.09 (dd,1H, J= 8.9,1.9Hz,ArH), 7.62 (br s, 1H, CONH).7.76-7.80 (m, 2H, 2ArH) , 8.51 (s, 1H, piraz-H), 9.10 (br s, 2H, piraz-H + CONH) , 9.38 (s, 1H, benzimid-H). m/z (EI) : 364 (M+) . CDCI3/CD3OD (v/v=9/l ) : 1.42 (d, 6H, 2 X CH3) , 4 .42 (m, 1H, CH), 5.7 5-5.81 (m, 1H, C=CH), 6. .35- •6-52 (m, 2H, 2 x C=CH), 7. .22 (dd, 1H, J= 9.0, 2. 4Hz , ArH), r 7.75 66
(d,1Η, J=8.8Hz, ArH), 8.77 (s, 1H, piraz-H), 9-2.5 (s, 1H, piraz-H), 9.34 (s, 1H, benzimid-H) , 9.39 (br s, 1H, ArH). m/z (EI) : 350 (M+) . 6 - [6 (acriloilamino)-lH-benzimidazol-1 — i1]-N,-N-dimetilpirazine 2-carboxamida
H-n.m.r. CDCI3 δ 3.23 (s, 6H, N(CH3)3), 5.79 (dd, 1H, J= 9.5, 2.3Hz,C=CH) , 6.33 (dd, 1H,J=16.9, 9.5Hz,C=CH),6.47 (dd, 1H, J=16.9, 2.1 Hz,C=CH), 7.22 (dd,1H, J=8.6, 2.2Hz,ArH), 7.72 (d, 1H, J = 8.6Hz, ArH) , 8.05 (br s, 1H, CONH), 8.52 (s, 1H, piraz-H), 8.75 (s, 1H, CONH), 8.87 (s, 1H, piraz-H, 9.02 (s, 1H, benzimid-H). m/z (EI) : 336 (M+) . 6 - [6 - (but-2- inoilamino)-lHbenzimidazol-1 — i1]-N, Ndimetilpirazina - 2-corboxamide
"H-n.m.r. CDC13 δ 2.04 (3, 3H, CH3) , 3.24,3.26 (cada s, 3H, NCH3) , 7.16 (dd, 1H, J= 8.8, 1.8Hz, ArH), 7.75 (brs, 1 H, CONH), 7.80 (d, 1H, J=8.8 Hz, . ArH), 8.54 (s, 1H, piraz-H),8.74 (d,1H, J= 1.8Hz, ArH), 8.91 (s,lH, piraz-H), 9.03 (s, 1H, benzimid-H). N-[1 - (6- metoxipiridina-3-il)- lHbenzimidazol-6-il acrilamida]
N-[1 - (6- metoxi-piridin- m/ z (EI) : 348 (M+) • "H-n .m. r. (CDC1J) δ4.01 (s, 3H, OCH3) , 5,74 (dd, 1H, J = 9 9 r J r 1,8 Hz, ' ΓΛ _ CH) , 6, 29 (dd , 1H, J = 16,8, 9, 9 Hz, C = CH), 6,43 (dd, 1H, J = 16, 8 , 1,8 Hz, C = CH) , 6, 91 (d, 1H, J = : 8,4 Hz, pir- H) , 7,11 (dd, 1H, J = 8,7, 2,1 Hz, benzimid- -H) , 7,70 (dd, 1H, J = 8,7 , 27 Hz, pir- H) , 7,74 (d, 1H, J = 8,4 Hz, benzimid- -H) , 7, 99 (s, 1H, benzimid- H) , 8,07 (br s, 1H, CONH), 8,26 (br s, 1H, benzimid- H) , 8,30 (d, 1H, , J = 2,1 Hz , pir -H) . m / z (El) : 294 (M 1 +) · "H.n .m. r. (CDC13) δΐ. 96 (s, 3H, CH3) , 4.01 (s, 3H, 67 3-il) - lHbenzimidazol-6 — i1] but-2-inamida jsaN M*° O ^ -“MI O OCH3) , 6.92 (d, 1H, J = 8.7Hz, pir-H), 7.12 (dd, 1H, J= 8.7,1.8Hz, benzimid-H), 7.69 (dd,1H, J= 8.7, 2.7Hz, pir-H), 7.76 (d,1H, J= 8.7Hz, benzimid-H), 7.99 (s,lH, benzimid-H), 8.04-8.05 (m, 2H,CONH + benzimid-H), 8.30 (d, 1H, J= 2.4Hz, Pir-H). m/z (EI) : 306 (M+) . N-{1 - [6 (terc-butilamino) pirazina-2- i1]— lH-benzimidazol-6 — i1] -4 - morf olin-4-il but-2-inamida /“λ* o PÍ^. \_/ O "THNMR (CDCI3/CD3OD, v/v=9/l)51.51 (s, 9H, t-Bu) , 2.65 (t, 4H, J =4.8 Hz, 2 x NCH2), 3.45 (s, 2H, NCH2) , 3.77 (t, 4H, J= 4.8 Hz, 2 xOCH2) , 7.33 (dd, 1H, J = 8.7, 1.8 Hz, benzimid-H), 7.75 (d, 1H, J = 8.7 Hz, benzimid-H), 7.82 (s, 1H, piraz-H),8.05(s, 1H, piraz-H), 8.45 (d,1H, J=1.8 Hz, benzimid-H), 8.52 (s, 1H,benzimid-H). m/z 4.33 (M+) , N-{1-[6-(terc-butilamino)piraz in-2-il}-1H-benzimidazol-6-yl} -4- (4-metilpiperazin-1-il)-but-2-inamida j-V ^____ 1HNMR (CDCI3) 51.52 W, 9H, t-Bu) ,2-51 (t, 4H, J= 5.1 Hz, 2 x NCH2) ,2.78 (s, 3H, NCH3) , 3.26 (t, 4H, J=5.1 Hz, 2 x NCH2), 3.50 (s, 2H,NCH2) , 4.86 (s, 1H, NH), 7.24 (dd,1H, J= 8.7,1.8 Hz, benzimid-H), 7.78(d, 1H, J = 8.7Hz, benzimid-H), 7.84(s, 1H, piraz-H), 8.11 (s,lH, piraz-H), 8.17 (br s, 1H, CONH), 8.46 (d,1H, J = 1.8 Hz, benzimid-H), 8.50 (s,lH, benzimid-H). m/z 44 6 (M+) . N-[l ~ (6 -(terc-butilamino) pirazina-2” íi)—1H— b snzi m i da z o1- 6-1.11 -4- (dietilamino)- OU f_. ~ .-:í ~ 1.1). c! ITI. 1. O.c! * -NH ..... UNMR (CDCI3) õl . 11 (Ο 6H, J = 7.2 Hz, 2 x CH3) , 1.53 (s, 9H, t-Bu), 2.62 (t, 4H, J= 7.2 Hz, 2 x NCH2), 3.59 (s,2H, NCH2) , 4.84 (s, 1H, NH) , 7.21(dd, 1H, J= 8.7, 1.8 Hz, benzimid-H) , 7.76 (br s, 1H CONH) , 7.79 (d, 1H, J = 8.7 Hz, benzimid-H), 7.85 (s, 1H, piraz-H), 8.12 (s, 1H, piraz-H), 8.45(d, 1H, J= 68 1.8 Hz, benzimid-H), N-{1 - [6 (terc-butilamino) pirimidin-4-il]-1H- benzimidazol-6-il acrilamida)
N-{1 - [4 (terc- butilamino)-pirimidin-2-il]-1H- benzimidazol-6-11} acrilamida
8.51 (s, 1H, benzimid-H). m/ z 419 (M+) . "H-NMR (CDC13) : 58.76 (b,1H), 8.65(s, 1H), 8.52 (s,1H), 7.75 (d, J =8. 9Hz, 1H) , 7.73 (b, 1H, amida NH) , 7.15 (dd, J= 8-6, 2 . 0Hz, 1H) , 6.58 (s, 1H) . 6.47 (dd, J = 16.9,1. 7Hz, 1H) , 6.30 (dd, J = 16, .9,9, . 6Hz, 1H) , 5.80(dd, J = 9.6,1. 7Hz, 1H) , 5.41 (b,1H, NH) , 1.52 (s, 9H) ppm. m/ z 336.3 1H-NMR (CDC13) : 58.93 (s, 2H) , 8.11(d, J =6 . 0Hz, 1H) , 7.78 (b, 1H , amida NH) , 7.74 (d, J= 8 . 6Hz, 1H) , 7.51(bm, 1H), 6.46 (dd, J = 16.9 ,1,6Hz,1H), 6 .32 (dd, J = 16 .9,10.0Hz , 1H),6.20 (d, J = 6.0Hz, 1H) , 5.75 (dd, J=10 .0,1.6Hz, 1H) , 5.09 (b, 1H, NH),1.51 (s, 9H) ppm. mlz 336.1 LC-MS: RT = 7.6min., N-{1-[6-(terc-butilamino)piraz in-2-il]-5-metoxi-lH-benzimidazol-6-il)acrilamide
o V 1HNMR (CDC13) 51.53 (s C(CH3)3), 4.00 (s, OCH3) , 4.78 (s, 1H, 5.78 (dd.lH, J= 1.8Hz,C=CH),6.33 (dd, J=16.8, 9.6Hz,C=CH), 9H; 3H, NH) , 9.6, 1H, 6.44 N- [ 1 - (5- bromopiridin-3-il)-1H benzimidazol- 6-il] acrilamida)
\Λ o (dd,1H, J=17.0, 1.8Hz,C=CH), 7.35 (s, 1H, ArH), 7.83 (s,lH, piraz-H), 8.09 (br s, 1H,CONH),8.19 (s, 1H, piraz-H), 8.49 (s, 1H,ArH), 9.12 (s,lH, benzimid-H). m/z (EI) : 366 (M+) ._ 1H-n .m. r. (CDC13) 5 5.79 (d, 1H, J=10.2Hz, C=CH), 6.27 (dd, 1H,J=16.8,10.2Hz, C=CH) , 6.45 (d, 1H, J = 16.8Hz, C=CH), 7.16 (dd, 1H, J=8.7, 2.1Hz, benzimid-H) , 7.52 (br S,1H, CONH), 7.80 (d,1H, J 8.4Hz,benzimid-H), 8.03- 8.05 (m, 2H),8.30 (br s, 1H, benzimid-H),8.77-8.80 69 (m, 2H, pir-H). m/z 342, 344 (M+) N-[1 - (6-bromopiridina-2-il)-1H benzimidazol- 6-il] acrilamida rV NH _:_o_ m/z 342,344 (M+)
RASTREIO
Diluição do Composto
Para fins de rastreio, os compostos foram diluidos em placas de 96 orifícios com uma concentração de 20 μΜ. As placas foram aquecidas a 37° C durante 30 minutos antes do ensaio.
Produção de Dominio de Tirosina Quinase JAK
Dominios de quinase JAK foram produzidos na seguinte forma; JAK1 0 domínio da quinase JAK1 de humanos foi amplificado a partir de U937mARN usando a reação em cadeia da polimerase com os seguintes primários: XHOI-Jl 5'-CCG CTC GAG ACT GAA GTG GAC CCC ACA CAT-3'
Jl-KPNT 5'-CGG GGT ACC TTA TTT TAA AAG TCC TTC AAA-3'
Os produtos JAK1 PCR foram clonados no vetor de expressão HTB pFastBac (Gibco), através dos locais Xho 1 e Kpnl. O plasmídeo Jakl foi então transformado em células competentes DHIOBac (Gibco) , e os baculovirus recombinantes produzidos foram preparados para operação em células Sf9 de insetos 70 JAK2 O domínio de quinase JAK2 de humanos foi amplificado a partir U937mARN utilizando a reação em cadeia da polimerase com os seguintes primários: SALi-j k2 5'-ACG CGT CGA CGG TGC CTT TGA AGA CCG GGA T-3' jk2-NOTI 5'-ATA GTT TAG CGG CCG CTC AGA ATG AAG GTC ATT T-3'
Os produtos JAK2 PCR foram clonados no vetor de expressão HTC pFastBac (Gibco) , através dos locais Sal I e Not i. O plasmídeo JAK2 foi então transformado em células competentes DHIOBac (Gibco), e os baculovírus recombinantes produzidos foram preparados para transfeção em Células Sf9 de insetos. JAK3 O domínio de quinase JAK3 de humanos foi amplificado a partir U937mARN utilizando a reação em cadeia da polimerase com os seguintes primários: XHOI-J3 5'-CCG CTC GAG TAT GCC TGC CAA GAC CCC ACG-3' J3-KPNI 5'-CGG GGT ACC CTA TGA AAA GGA CAC GGA GTG-3'
Os Produtos JAK3 PCR foram clonados no vetor de expressão HTB pFastBac (Gibco), através dos locais Xhol ele Kpn 1. O plasmídeo JAK3 foi então transformado em células competentes DHIOBac (Gibco), e os beculovirus recombinantes produzidos foram preparados para transfeção em Células Sf9 de insetos. TYK2 O domínio de quinase TYK2 de humanos foi amplificado a partir de A549 mARN usando a reação em cadeia da polimerase com os seguintes primários: 71 ΗΤ2ΕΚ 5'-GGA GCA CTC GAG ATG CTA GCA CAC AAC CAG GTG-3' ITY2.2R 5'-GGA GCA GGA ATT CCG GCG CTG CCG GTC AAA TCT GG-3'
Os produtos TYK2 PCR foram clonados em pBlueBacHis2A (Invitrogen) através do local EcoRT. Os baculovírus recombinantes TYK2 produzidos foram preparados para ser transfetados em células de insetos Sf9.
Domínios de Produção de Quinase em Grande Escala
As preparações de Baculovirus de cada um dos membros da família JAK foram infetados em cinco litros de células High Five (Invitrogen) cultivadas em meio de soro livre High Five (Invitrogen) com uma densidade celular de cerca de 1-2 x 106 células/ml. As células são infetadas com o vírus a uma MOI de 0,8-3,0. As células foram colhidas e lisadas. Os domínios de quinase JAK foram purificados por cromatografia de afinidade em uma coluna de afinidade de quelato de níquel (Invitrogen) Probond.
Os Ensaios de Protocolos
Os ensaios Quinase foram realizados tanto em um ensaio de ELISA de 96 orifícios de captura ou baseado em 384 orifícios Optiplates (Packard) utilizando um conjunto de Alphascreen Proteína de Tirosina Quinase. Em ambos os casos utilizando aproximadamente 1. 5 μρ de domínio de afinidade PTK purificado na presença de 50 mM HEPBS, pH 7,5, 10 mM
MgCl2, 150 mM NaCl e 10 μΜ-lmM de ATP. O substrato de biotina biotinilado -EGPWLEEEEEAYGWMDF-NH2 (concentração final 5 μΜ) foi utilizado como substrato. No ensaio de ELISA a fosforilação da tirosina foi quantificada a seguir à transferência para uma placa ELISA de avidina revestida usando um anticorpo PY2U anti-fosfo-tirosina ligado a peroxidase. No ensaio Alphascreen, as contas aceitadoras de Alphascreen seguidas de contas de dadores de estreptavidina 72 foram adicionadas sob iluminação moderada. As placas ELISA foram lidas num Fluorostar BMG, as placas de Alfascreen foram lidas num Packard Fusion Alpha. Os inibidores foram adicionados aos ensaios de quinze minutos antes da adição de ATP. Os inibidores foram adicionados em DMSO aquoso, com concentrações de DMSO nunca superiores a 1%.
Resultados A atividade dos compostos selecionados é mostrada na Tabela 3. Os compostos que exibiram uma capacidade para inibir 50% da atividade JAK a uma concentração de 2 0μΜ (medida em condições normais, ver Métodos), são designados como "+".
73
74
Ao longo desta memória descritiva, a palavra "compreender", ou variações como "compreende" ou "compreendendo", será entendida como implicando a inclusão de um elemento indicado inteiro, ou passo, ou grupo de elementos, inteiros ou passos, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, inteiro ou passo, ou grupo de elementos, inteiros ou passos.
Qualquer discussão de documentos, atos, materiais, aparelhos, artigos ou afins, que foi incluido na presente especificação destina-se exclusivamente para a finalidade de fornecer um contexto à invenção predefinida. Não é para ser tomada como uma admissão de que qualquer um ou todos estes assuntos formam parte da base da técnica anterior ou que eram de conhecimento geral comum na área relevante da presente invenção, tal como existia na Austrália ou em 75 outros lugares antes da data de prioridade de cada reivindicação do presente pedido.
Referências 1. Discafani CM, Carroll ML, Floyd MB Jr, Hollander IJ, Husain Z, Johnson BD, Kitchen D, May MK, Maio MS,Minnick AA Jr, Nilakantan R, Shen R, Wang YF, Wissner A, and Greenberger LM. (1999) Irreversible inhibition of epidermal growth factor receptor tyrosine kinases with in vivo activity by N—[4— [ (3 — bromophenyl)amino]-6-quinazolinyl]-2-butynamide (CL-387,785). Biochem Pharmacol. 57, 917-25. 2. Finet, J.-P., Fedorov, A.Y., Combes, S., and Buyer, G. (2002) Recent Advances in Ullmann Reaction :
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Hook KE, Keller PR, Leopold WR, Loo JA,McNamara Dj, Nelson JM, Sherwood V, Smaill JB, Trumpp-Kallmeyer S, and Dobrusin EM. (1998) Specific, irreversibleinactivation of the epidermal growth factor receptor and erbB2, by a new class of tyrosine kinase inhibitor. Proc Natl Acad Sei USA. 95, 12022-7. 4. Hovens CM, Stacker SA, Andrés AC, Harpur AG, Ziemiecki A, and Wilks AF. (1992) RYK, a receptor tyrosine kinase-related molecule with unusual kinase domain motifs. Proc Natl Acad Sei USA. 89, 11818-22. 5. Kozma SC, Redmond SM, Fu XC, Saurer SM, Groner B, and Hynes NE. (1988) Activation of the receptor kinase 76 domain of the trk oncogene by recombination with two different cellular sequences. EMBO J. 7, 147-54. 6. Kumada, M. ; Tamao, K.; Sumitani, K. (1988) Phosphine-
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Irreversible Inhibitors of the Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) and Human Epidermal Growth Factor Receptor (HER-2) Tyrosine Kinases with Enhanced Antitumor Activity J. Med. Chem., 44, 2719-2734. 18. Wilks AF, Harpur AG, Kurban RR, Ralph SJ, Zurcher G, Ziemiecki A. (1991) Two novel protein-tyrosine kinases, each with a second phosphotransferase-related catalytic domain, define a new class of protein kinase. Mol Cell Biol. 11, 2057-65. 19. Wilks AF, and Kurban RR (1988) Isolation and structural analysis of murine c-fes cDNA clones. Oncogene 3, 289-94 20. Wissner, A.; Overbeek, E.; Reich, M. F.; Floyd, Μ. B.;
Johnson, B. D.; Mamuya, N.; Rosfjord, E. C.; Discafani, C.; Davis, R.; Shi, X.; Rabindran, S. K.; Gruber, B. C.; Ye, F.; Hallett, W. A.; Nilakantan, R.; Shen, R.; Wang, Y.-F.F.; Greenberger, L. M.; and Tsou, H.-R (2003) Synthesis and Structure-Activity Relationships of 6,7-Disubstituted 4-
Anitinoquinoline-3-carbonitriles. The Design of an Orally Active, Irreversible Inhibitor of the Tyrosine Kinase Activity of the Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) and the Human Epidermal Growth Factor Receptor-2 (HER-2) J. Med. Chem. 46, 49-63.
LISTA DE SEQUÊNCIAS 79 <110> Cytopia Research Pty Ltd <120> Inibidores seletivos da quinase <130> N.97733 <140> EP 05700054.9 <141> 2005-01-12 <150> PCT/AU05/00022 <151> 2005-01-12 <150> AU 2004900103 <151> 2004-01-12 <160> 13 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> Primário XHOI-J1 <400> 1 ccgcfcegaga ctgaagtgga ccccacacat 30 <210> 2 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> Primário Jl-KPNI <400> 2 cggggtacct tattttaaaa gtgcttcaaa 30 <210> 3 80 <211> 31
<212> ADN <213> Artificial <220> <223> Primário SALI-jk2 <400> 3 acgcgtcgac ggtgcctttg aagaccggga t 31 <210> 4 <211> 34 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> Primário jk2-NOTI <400> 4 atagtttagc ggccgctcag aatgaaggtc attt 34 <210> 5 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> Primário XHOI-J3 <400> 5 ccgctcgagt atgcctgcca agaccccacg 30 <210> 6 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <220>
<223> Primário J3-KPNI 81 81 <400> <210> <211> <212> <213> <220> <223> <400> <210> <211> <212> <213> <220> <223> <400> <210> <211> <212> < 213 > <220> <223> <220> <221> <222> <220> <221> <222> <223> 6 c9999taccc tatgaaaagg acagggagtg 30 7 33
ADN
Artificial
Primário HT2EK 7 ggagcactcg agatggtagc acacaaccag gtg 33 8 35
ADN
Artificial
Primário ITY2.2R 8 ggagcaggaa ttccggcgct gccggtcaaa tctgg 35 9 18
PRT
Artificial
Substrato biotinilado amino (18)..(18) amino (18) .. (18) X = NH2 82 <400> 9
Glu Gly Pr© Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Aep 15 10 15
Pha Xaa
<210> 10 <211> 300 <212> PRT <213> JAK2 Quinase j2h <400> 10 83
Ser Gly Ala Phe Glu Asp Arg Asp Pro Thr Gin Phe Glu Glu Arg His 1 5 10 15
Leu Lys Phe Leu Gin Gin Leu Gly Lys Gly Aen Phe Gly Ser Vai Glu 20 25 30
Met Cys Arg Tyr Asp Pro Leu Gin Asp Asn Thr Gly Glu Vai Vai Ala 35 40 45
Vai Lys Lys Leu Gin His Ser Thr Glu Glu His Leu Arg Asp Phe Glu 50 55 60
Arg Glu Ile Glu Ile Leu Lys Ser Leu Gin His Asp Asn lie Vai Lys 65 70 75 80
Tyr Lys Gly Vai Cys Tyr Ser Ala Gly Arg Arg Asn Leu Lys Leu lie 85 90 95
Met Glu Tyr Leu Pro Tyr Gly Ser Leu Arg Asp Tyr Leu Gin Lys His 100 105 110
Lys Glu Arg lie Asp His Ile Lys Leu Leu Gin Tyr Thr Ser Gin lie 115 120 125
Cys Lys Gly Met Glu Tyr Leu Gly Thr Lys Arg Tyr Ile His Arg Asp 130 135 140
Leu Ala Thr Arg Asn Ile Leu Vai Glu Asn Glu Asn Arg Vai Lys Ile 145 150 155 160
Gly Asp Phe Gly Leu Thr Lys vai Leu Pro Gin Asp Lys Glu Tyr Tyr 165 170 175
Lys Vai Lys Glu Pro Gly Glu Ser Pro Ile Phe Trp Tyr Ala Pro Glu 180 185 190 84
Ser Leu Thr Glu Ser Lye Phe Ser Vai Ala Ser Asp Vai Trp Ser Phe 195 200 205
Gly Val Vai Leu Tyr Glu Leu Phe Thr Tyr Ile Glu Lys Ser Lys Ser 210 215 220
Pro Pro Ala Glu Phe Met Arg Met Ile Gly Asn Aep Lys Gin Gly Gin 225 230 235 240
Met Ile Val Phe His Leu Ile Glu Leu Leu Lys Asn Asn Gly Arg Leu 245 250 255
Pro Arg Pro Asp Gly Cys Pro Asp Glu Ile Tyr Met Ile Met Thr Glu 260 265 270
Cys Trp Asn Asn Asn Val Asn Gin Arg Pro Ser Phe Arg Asp Leu Ala 275 280 285
Leu Arg Val Asp Gin Ile Arg Asp Asn Met Ala Gly 290 295 300
<210> 11 <211> 295 <212> PRT <213> JAK2 Quinase jlh <400> 11
Lys Asn Gin Pro Thr Glu Val Asp Pro Thr His Phe Glu Lys Arg Phe 15 10 15
Leu Lys Arg Ile Arg Asp Leu Gly Glu Gly His Phe Gly Lys Val Glu 20 25 30
Leu Cys Arg Tyr Asp Pro Glu Asp Asn Thr Gly Glu Gin Val Ala Val 35 40 45
Lys Ser Leu Lys Pro Glu Ser Gly Gly Asn His Ile Ala Asp Leu Lys 50 55 60
Lys Glu Ile Glu ile Leu Arg Asn Leu Tyr His Glu Asn Ile Val Lys 85 65 70 75 80
Tyr Lys Gly Ile Cys Thr Glu Asp Gly Gly Asn Gly Ile Lys Leu Ile 85 90 95
Met Glu Phe Leu Pro Ser Gly Ser Leu Lys Glu Tyr Leu Pro Lys Asn 100 105 110
Lys Asn Lys Ile Asn Leu Lys Gin Gin Leu Lys Tyr Ala Vai Gin Ile 11S 120 12S
Cys Lys Gly Met Asp Tyr Leu Gly Ser Arg Gin Tyr Vai His Arg Asp 130 135 140
Leu Ala Ala Arg Asn Vai Leu Vai Glu Ser Glu His Gin Vai Lys Ile 145 150 155 160
Gly Asp Phe Gly Leu Thr Lys Ala Ile Glu Thr Asp Lys Glu Tyr Tyr 165 170 175
Thr Vai Lys Asp Asp Arg Asp Ser Pro Vai Phe Trp Tyr Ala Pro Glu 180 185 190
Cys Leu Met Gin Ser Lys Phe Tyr lie Ala Ser Asp Vai Trp Ser Phe 195 200 205
Gly Vai Thr Leu His Glu Leu Leu Thr Tyr Cys Asp Ser Asp Ser Ser 210 215 220
Pro Met Ala Leu Phe Leu Lys Met Ile Gly Pro Thr His Gly Gin Met 225 230 235 240
Thr Vai Thr Arg Leu Vai Asn Thr Leu Lys Glu Gly Lys Arg Leu Pro 245 250 255
Cys Pro Pro Asn Cys Pro Asp Glu Vai Tyr Gin Leu Met Arg Lys Cys 260 265 270
Trp Glu Phe Gin Pro Ser Asn Arg Thr Ser Phe Gin Asn Leu Ile Glu 86 275 280 285
Gly Phe Glu Ala Leu Leu Lys 290 295
<210> 12 <211> 299 <212> PRT <213> JAK2 Quinase j3h <400> 12
Ala Gin Leu Tyr Ala Cys Gin Asp Pro Thr Ile Phe Glu Glu Arg His 15 10 15
Leu Lys Tyr Ile Ser Gin Leu Gly Lys Gly Asn Phe Gly Ser Vai Glu 20 25 30
Leu Cys Arg Tyr Asp Pro Leu Ala His Asn Thr Gly Ala Leu Vai Ala 35 40 45
Vai Lys Gin Leu Gin His Ser Gly Pro Asp Gin Gin Arg Asp Phe Gin 50 55 60
Arg Glu Ile Gin Ile Leu Lys Ala Leu His Ser Asp Phe Ile Vai Lys 65 70 75 80
Tyr Arg Gly Vai Ser Tyr Gly Pro Gly Arg Pro Glu Leu Arg Leu Vai 85 90 95
Met Glu Tyr Leu Pro Ser Gly Cys Leu Arg Asp Phe Leu Gin Arg His 100 105 110
Arg Ala Arg Leu Asp Ala Ser Arg Leu Leu Leu Tyr Ser Ser Gin ile 115 120 125
Cys Lys Gly Met Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Arg Cys Vai His Arg Asp 130 135 140
Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Vai Glu Ser Glu Ala His Vai Lys ile 145 ISO 155 160 87
Ala Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Pro Leu Asp Lys Asp Tyr Tyr 165 170 175
Vai Vai Arg Glu Pro Gly Gin Ser Pro Ile Phe Trp Tyr Ala Pro Glu 180 185 190
Ser Leu Ser Asp Asn Ile Phe Ser Arg Gin Ser Asp Vai Trp Ser Phe 195 200 205
Gly Vai Vai Leu Tyr Glu Leu Phe Thr Tyr Cys Asp Lys Ser Cys Ser 210 215 220
Pro Ser Ala Glu Phe Leu Arg Met Met Gly Cys Glu Arg Asp Vai Pro 225 230 235 240
Ala Leu Cys Arg Leu Leu Glu Leu Leu Glu Glu Gly Gin Arg Leu Pro 245 250 255
Ala Pro Pro Ala Cys Pro Ala Glu Vai His Glu Leu Met Lys Leu Cys 260 265 270
Trp Ala Pro Ser Pro Gin Asp Arg Pro Ser Phe Ser Ala Leu Gly Pro 275 280 285
Gin Leu Asp Met Leu Trp Ser Gly Ser Arg Gly 290 295 <210> 13 <211> 296 <212> PRT <213> JAK2 Quinase tyk2 <400> 13
Asn Arg Asp Ser Pro Ala Vai Gly Pro Thr Thr Phe His Lys Arg Tyr 1 5 10 15
Vai Ser
Leu Lys Lys Ile Arg Asp Leu Gly Glu Gly His Phe Gly Lys 20 25 30 88 Leu Tyr Cys Tyr Asp Pro Thr Asn Asp Gly Thr Gly Glu Met vai Ala 35 40 45
Vai Lys Ala Leu Lys Ala Asp Cys Gly Pro Gin His Arg Ser Gly Trp 50 55 €0
Lys Gin Glu Ile Asp Ile Leu Arg thr Leu Tyr His Glu His lie Xle 65 70 75 80
Lys Tyr Lys Gly Cys Cys Glu Asp Gin Gly Glu Lys Ser Leu Gin Leu 85 50 95
Vai Met Glu Tyr Vai Pro Leu Gly Ser Leu Arg Asp Tyr Leu Pro Arg 100 105 110
His Ser Ile Gly Leu Ala Gin Leu Leu Leu Phe Ala Gin Gin Ile Cys 115 120 125
Glu Gly Met Ala Tyr Leu His Ala His Asp Tyr Ile His Arg Asp Leu 130 135 140
Ala Ala Arg Asn Vai Leu Leu Asp Asn Asp Arg Leu Vai Lys Ile Gly 145 150 155 160
Asp Phe Gly Leu Ala Lys Ala Vai Pro Glu Gly His Glu Tyr Tyr Arg 165 170 175
Vai Arg Glu Asp Gly Asp Ser Pro Vai Phe Trp Tyr Ala Pro Glu Cys 180 185 190
Leu Lys Glu Tyr Lys Phe Tyr Tyr Ala Ser Asp vai Trp Ser Phe Gly 195 200 205
Vai Thr Leu Tyr Glu Leu Leu Thr His Cys Asp Ser Ser Gin Ser Pro 210 215 220
Pro Thr Lys Phe Leu Glu Leu Ile Gly Ile Ala Gin Gly Gin Met Thr 225 230 235 240 89
Vai Leu Arg Leu Thr Glu Leu Leu Glu Arg Gly Glu Arg Leu Pro Arg 245 250 255
Pro Asp Lys Cys Pro Cys Glu Vai Tyr His Leu Met Lys Asn Cys Trp 260 265 270
Glu Thr Glu Ala Ser Phe Arg Pro Thr Phe Glu Asn Leu Ile Pro Ile 275 280 285
Leu Lys Thr Vai His Glu Lys Tyr 290 295
Lisboa, 28 de Agosto de 2012

Claims (16)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula geral I
ou pró-fármacos, sais, hidratos, solvatos, formas cristalinas ou diastereómeros farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que: Xi, X2, X3, X4 são cada um de carbono, onde um é substituído com um Z e 0 resto i ndependentemente com Y, ou um de Xi, X2, X3, X4 é N e os outros são de carbono, onde um de carbono é substituído com Z e o resto independentemente com Y; A é um anel selecionado de entre:
em que D é selecionado de H, Ci_4 alquilo, halogéneo, amino; Q é uma ligação, halogénio, C1-4 alquilo, 0, S, SO, S02, CO, CS; W é: (i) NR1R2, em que RI e R2 são independentemente H, C1-4 alquilo, C1-4 alquilo CF3, arilo, hetarilo, C1-4 alquilarilo, C1-4 alquilhetarilo, C3_8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, ciclohetalquilo C1-4 alquilcicloalquilo, C1-4 alquilo 2 ciclohetalquilo, ou RI e R2 são unidos para formar um anel opcionalmente substituído com 3-8 membros otimamente contendo um átomo selecionado a partir de 0, S, NR3; e R3 é selecionado de H, C4-4 alquilo, arilo, hetarilo, Ci-4 alquilo arilo, Ci_4 alquilo hetarilo, COR4 onde R4 é selecionado a partir de H, C4-4 alquilo, arilo, hetarilo, ou (ii) H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, C3-8 cicloalquilo, ciclohetalquilo, Ci_4 alquilarilo, Ci_4 alquilohetarilo, C3-8 cicloalquilo, Ci_4 alquilocicloalquilo, C4_4 alquilo ciclohetalquilo; Y é H, halogéneo, CN, CF3, nitro, OH, Ci_4 alquilo, C4-4 alquilo NR5R6, C4-4 alquilohetarilo, OCi_4 alquilo, OC2-4alquiloOCi_4 alquilo, OCi_4 alquiloNR5R6, OCi_4 alquilohetarilo, OC4_4 alquilociclohetalquilo, SCi-4 alquilo, SC2-4-alquiloOCi_4 alquilo, SCi_4 alquiloNR5R6, NR5R6, NR5COR6, NR5S02R6, e R5 e R6 são cada um independentemente H, Ci-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel opcionalmente substituído de 3-6 membros, contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de O, S, NR7 e R7 é selecionado a partir de H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, Ci_4 alquilarilo, Ci_4 alquilohetarilo; Z é selecionado a partir de:
o o
o o 3 onde R8 é selecionado de H, Ci_4 alquilo; R9 e RIO são independentemente selecionados a partir de H, Ci-4 alquilo, C1-4 alquiloNR12R13, C1-4 alquiloOR12, C1-4 alquilohetarilo. Rll é selecionado a partir OH, 0C1-4 alquilo, NR12R13; n é 0 - 4; onde R12 e R13 são independentemente selecionados a partir de H, ci-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel substituído facultativamente de 3-8 membros contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR14; e R14 é selecionado a partir H, C1-4 alquilo; e em que as referidas pro-drogas são selecionadas de entre: - compostos em que um residuo de aminoácido, ou uma cadeia polipeptidica de dois ou mais residuos de aminoácidos, está covalentemente ligada através de uma ligação peptídica a um grupo amino livre do referido composto de fórmula I; - compostos em que um éster de carbonato, carbamato, amida ou um grupo alquilo está covalentemente ligado a um amino livre ou a um grupo hidroxi do referido composto de fórmula I, por meio de uma pró-droga de carbono do carbonilo da cadeia lateral, e derivados de fosfato, em que a pró-droga da cadeia lateral está ligada através de uma ligação fósforo-oxigénio a um grupo hidroxilo livre do referido composto de fórmula 1.
2. Um composto de acordo com a reivindicação 1 em que o composto de fórmula I é um composto de fórmula II: 4
Π ou pró-fármacos, sais, hidratos, solvatos, formas de cristal ou diastómeros farmaceuticamente aceitáveis destes, em que: Xi, Y2, X3, X4 são cada um carbono, onde um é substituído com Z e o resto independentemente com Y; ou um de Xi, X2, X3, X4 é N, e os outros são carbono, onde um carbono é substituído com Z e o resto independentemente com Y; A é um anel selecionado de entre:
em que D é selecionado de H, C1-4 alquilo, haloqéneo, amino; Q é uma liqação, haloqénio, C1-4 alquilo, 0, S, SO, SO2, CO, CS; W é: (i)NRlR2 em que RI e R2 são independentemente H, C1-4 alquilo, C1-4 alquiloCF3, arilo, hetarilo, C1-4 alquilarilo, Ci_4 alquilohetarilo, C3_8 cicloalquilo, C2-6 alcenilo, ciclohetalquilo, C1-4 alquilcicloalquilo, C1-4 alquilo ciclohetalquilo, ou RI e R2 são unidos para formar um anel de 3-8 membros facultativamente substituído contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR3, e R3 é selecionado de H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, C1-4 alquilo arilo, C1-4 alquilo hetarilo, C0R4 onde R4 é selecionado de H, C1-4 alquilo, arilo, hetarilo, ou 5 (ii) W é H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, C3-s cicloalquilo, ciclohetalquilo, Ci_4 alquilarilo, Ci-4 alquilohetarilo, C3-8 cicloalquilo, Ci_4 alquilcicloalquilo, Ci_4 alquilo ciclohetalquilo; Y é H, halogéneo, CN, CF3, nitro, OH, Ci_4 alquilo, Ci_4 alquiloNR5R6, Ci-4 alquilohetarilo, 0 Ci-4 alquilo, OC2_4-alquiloOCi_4 alquilo, OCi_4 alquiloNR5R6, OCi_4 alquilohetarilo, OCi-4 alquilciclohetalquilo, SCi_4 alquilo, SC2-4-alquiloOCi_4 alquilo, S Ci_4 alquiloNR5R6, NR5R6, NR5COR6, NR5S02R6; e R5 e R6 são cada um independentemente H, C3-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel de 3-6 membros opcionalmente substituído contendo opcionalmente um átomo selecionado a partir de 0, S, NR7 e R7 é selecionado de H, Ci_4 alquilo, arilo, hetarilo, Ci_4 alquilarilo, C1-4 alquilohetarilo; Z é selecionado a partir de:
onde R8 é selecionado de H, Ci-4 alquilo; R9 e RIO são independentemente selecionados de H, Ci_4 alquilo, C1-4 alquiloNR12R13, Ci-4 alquiloOR12, Ci-4 alquilohetarilo Rll é selecionado a partir OH, 0Ci_4 alquilo, NR12R13; n é 0 - 4 ; onde: R12 e R13 são independentemente selecionados a partir de H, C1-4 alquilo, ou podem ser unidos para formar um anel de 3-8 membros facultativamente substituído opcionalmente contendo um átomo selecionado a partir de 0, S, NR14, e R14 é selecionado de H, C1-4 alquilo; e em que as referidas pro-drogas são selecionadas de entre: 6 - compostos em que um resíduo de aminoácido, ou uma cadeia polipeptídica de dois ou mais resíduos de aminoácidos, está covalentemente ligada através de uma ligação peptídica a um grupo amino livre do referido composto de fórmula I; - compostos em que um éster de carbonato, carbamato, amida ou um grupo alquilo está covalentemente ligado a um amino livre ou a um grupo hidroxi do referido composto de fórmula I, por meio de uma pró-droga de carbono do carbonilo da cadeia lateral, e derivados de fosfato, em que a pró-droga da cadeia lateral está ligada através de uma ligação fósforo-oxigénio a um grupo hidroxilo livre do referido composto de fórmula I.
3. Um composto de acordo selecionado a partir do grupo consistindo de:
7
9
4. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3 em que o composto inibe irreversivelmente JAK-3.
5. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, em que o composto inibe seletivamente JAK 3 com respeito a JAK 1 ou a JAK 2. 10
6. Uma composição compreendendo um transportador e pelo menos um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5.
7. Pelo menos um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5 ou uma composição de acordo com a reivindicação 6 para uso num método de tratamento de um estado de doença selecionada de entre o grupo consistindo de atopia, hipersensibilidade mediada por células, doenças reumáticas, transplantes, doença do enxerto versus hospedeiro, doenças virais, doenças proliferativas e cancro.
8. Um composto ou composição de acordo com a reivindicação 7, em que a atopia é selecionada a partir de asma alérgica, dermatite atópica e rinite alérgica.
9. Um composto ou composição de acordo com a reivindicação 7, em que a hipersensibilidade mediada por células é dermatite de contacto alérgico ou pneumonia de hipersensibilidade.
10. Um composto ou composição de acordo com a reivindicação 7, em que a doença reumática é selecionada a partir do grupo consistindo por lúpus eritematoso sistémico, artrite reumatoide, artrite juvenil, sindrome de Sjõgren, esclerodermia, polimiosite, espondilite anquilosante e artrite psoriática.
11. Um composto ou composição de acordo com a reivindicação 7, em que o transplante é a rejeição do transplante, maturação de células B ou proliferação de células T.
12. Um composto ou composição de acordo com a reivindicação 7, em que a doença virai é causada por um virus selecionado 11 a partir do grupo que consiste em virus de Epstein Barr, Hepatite B, Hepatite C, HIV, HTLV 1, virus Varicela-Zoster e virus do papiloma humano.
13. Um composto ou composição de acordo com a reivindicação 7, em que o cancro é leucemia, linfoma, ou cancro da próstata.
14. Pelo menos um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5 ou uma composição de acordo com a reivindicação 6 para uso num método de tratamento de um estado de doença selecionado de entre o grupo consistindo de doença de Alzheimer, asma, eczema, alergia alimentar, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, inflamação cutânea, e imunosupressão por tumor sólido.
15. Pelo menos um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5 ou uma composição de acordo com a reivindicação 6 para uso como agente imunossupressor.
16. Um composto ou composição de acordo com a reivindicação 15, em que o uso do agente imunossupressor se destina ao tratamento de estados de doença selecionados de entre o grupo consistindo de transplantes de órgãos, lúpus, esclerose múltipla, artrite reumatoide, psoríase, diabetes de Tipo I, complicações da diabetes, asma, dermatite atópica, distúrbios autoimunes da tireoide, colite ulcerativa e doença de Crohn. Lisboa, 28 de Agosto de 2012
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