JP5475643B2 - アミノ酸脂質およびその使用 - Google Patents

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Description

（発明の分野）
本発明は、種々の分子を細胞に送達するために有用な脂質を含む、新規な薬物送達増強剤に関する。本発明は、ある範囲の化合物、組成物、処方物、最終的には薬物送達に指向されるこのような薬剤の方法および使用、治療、ならびに疾患および状態（被験体における遺伝子発現もしくは遺伝子活性の調節に応答するものを含む）の診断および処置を提供する。より具体的には、本発明は、化合物、リポソーム、ラメラ小胞、エマルジョン、ミセル、懸濁物、粒子、溶液ならびに薬物増強組成物および処方物の他の形態、ならびに治療方法およびこれら送達物質のための使用に関する。
（背景）
被験体への治療化合物の送達は、上記化合物が標的細胞もしくは標的組織に達する能力が制限されていること、または細胞内への上記化合物の侵入もしくは行き来（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）の制限によって、妨げられ得る。治療物質の送達は、細胞の膜によって一般に制限されている。送達に対するこれらの障壁および制限は、結果を達成するために所望されるより遙かに高濃度の化合物を使用する必要性を生じ得、このことは、毒性効果および副作用の危険性をもたらす。
送達のための１つのストラテジーは、脂質もしくはポリマーキャリア分子を使用して、細胞への化合物の輸送を改善することである。これら物質は、細胞への選択的侵入のために存在する機構を利用し得る一方で、核酸およびタンパク質のような外因性分子をなお排除し得る。例えば、カチオン性脂質は、薬物因子と相互作用し得、細胞膜との接触を提供し得る。脂質分子はまた、薬物因子のためのキャリアとしてのリポソームもしくは粒子へと組織化され得る。リポソーム薬物キャリアは、薬物分子が分解するのから保護し得ると同時に、細胞によるその取り込みを改善し得る。また、リポソーム薬物キャリアは、特定の化合物を、静電的相互作用および他の相互作用によって包み得るかもしくは結合し得、そして負に荷電した細胞膜と相互作用して、膜を横切って輸送し得る。
調節性ＲＮＡの理解ならびにとりわけＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、ＲＮＡｉ治療、ＲＮＡ薬物、アンチセンス治療、および遺伝子療法の開発は、活性核酸薬剤を細胞に導入する有効な手段の必要性を増大させた。一般に、核酸は、細胞もしくは血漿中で制限された時間にわたってのみ安定である。しかし、核酸ベースの薬剤は、細胞送達のために分散され得る組成物および処方物中で安定であり得る。
本開示は、薬物および生物学的に活性な分子の全身送達および局所送達を改善するための化合物、組成物、方法および使用を提供する。とりわけ、本願は、生物学的に活性な分子の送達の効率を増す送達構造物およびキャリアを作製および使用するための新規な化合物および組成物を提供する。
（要旨）
本開示は、最終的には治療剤として使用するための薬物因子の細胞内送達およびインビボ送達のための、新規な化合物、組成物および処方物を提供する。本開示の化合物および組成物は、疾患状態もしくは表現型を変化させるために、選択された細胞、組織、器官もしくは区画への薬物因子の送達のために有用である。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
式Ｉに示される構造を含む化合物：
Ｒ ３ −（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ ４ 式Ｉ
およびその塩であって、ここで
Ｘａａは、式−ＮＲ Ｎ −ＣＲ １ Ｒ ２ −（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−アミノ酸残基もしくはＬ−アミノ酸残基、または式-｛ＮＲ Ｎ −ＣＲ １ Ｒ ２ −（Ｃ＝Ｏ）｝ ｎ −を有する
ｎ＝２〜２０のアミノ酸残基のペプチドであり、ここで
Ｒ １ は、独立して、各存在について、非水素、アミノ酸の、置換されたかもしくは置換されていない側鎖であり；
Ｒ ２ は独立して、各存在について、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなりかつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
Ｒ Ｎ は独立して、各存在について、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなりかつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
Ｒ ３ は独立して、天然に存在するかもしくは合成の脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性テイルであり、ここで該テイルは、ステロイド；または置換されているかもしくは置換されていないＣ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルを含み得；
Ｒ ４ は独立して、天然に存在するかもしくは合成の脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性テイルであり、ここで該テイルは、ステロイド；または置換されているかもしくは置換されていないＣ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルを含み得；
ここでＲ ３ およびＲ ４ のうちのいずれか一方は、上記のような親油性テイルであり、他方は、アミノ酸末端基であるか、またはＲ ３ およびＲ ４ の両方が親油性テイルであり；該アミノ酸末端基は、水素、ヒドロキシル、アミノ、もしくは有機保護基であり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ ２ Ｓ−、−ＣＨ ２ Ｓ（Ｏ）−、または水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機性リンカーである、化合物。
（項目２）
式Ｉに示される構造を含む化合物：
Ｒ ３ −（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ ４ 式Ｉ
およびその塩であって、ここで
Ｘａａは、式−ＮＲ Ｎ −ＣＲ １ Ｒ ２ −（Ｃ＝Ｏ）−を有するＤ−アミノ酸残基もしくはＬ−アミノ酸残基であり、ここで
Ｒ １ は、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
Ｒ ２ は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ Ｎ は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ ３ は独立して、置換されているかもしくは置換されていないＣ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
Ｒ ４ は独立して、置換されているかもしくは置換されていないＣ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、もしくは水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機性リンカーである、
化合物。
（項目３）
Ｘａａは、アルギニン、ホモアルギニン、ノルアルギニン、ノル−ノルアルギニン、オルニチン、リジン、ホモリジン、ヒスチジン、１−メチルヒスチジン、ピリジルアラニン、アスパラギン、Ｎ−エチルアスパラギン、グルタミン、４−アミノフェニルアラニン、これらのＮ−メチル化バージョン、およびこれらの側鎖改変誘導体から選択される、項目２に記載の化合物。
（項目４）
Ｘａａは、アルギニン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２に記載の化合物。
（項目５）
Ｘａａは、ノルアルギニン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２に記載の化合物。
（項目６）
Ｘａａは、リジン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２に記載の化合物。
（項目７）
Ｘａａは、ヒスチジン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２に記載の化合物。
（項目８）
Ｘａａは、ピリジルアラニン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２に記載の化合物。
（項目９）
Ｘａａはシステインもしくはセリンである、項目２に記載の化合物。
（項目１０）
Ｒ ２ は水素である、項目２に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ Ｎ は水素である、項目２に記載の化合物。
（項目１２）
Ｒ ３ およびＲ ４ は、Ｃ（６−２２）アルキルであり、かつ同じであるかもしくは異なっている、項目２に記載の化合物。
（項目１３）
Ｒ ３ およびＲ ４ は、Ｃ（６−２２）アルケニルであり、かつ同じであるかもしくは異なっている、項目２に記載の化合物。
（項目１４）
Ｒ ３ はＣ（６−２２）アルキルであり、Ｒ ４ はＣ（６−２２）アルケニルである、項目２に記載の化合物。
（項目１５）
Ｒ ４ は、Ｃ（６−２２）アルキルであり、Ｒ ３ は、Ｃ（６−２２）アルケニルである、項目２に記載の化合物。
（項目１６）
ＺはＮＨである、項目２に記載の化合物。
（項目１７）
ＺはＯである、項目２に記載の化合物。
（項目１８）
Ｘａａは、２〜２０個のアミノ酸残基のペプチドである、項目２に記載の化合物。
（項目１９）
Ｘａａは、５〜７．５のｐＫａを有する官能基を含む側鎖を有する、項目２に記載の化合物。
（項目２０）
Ｘａａは、３，５−ジヨード−チロシン、１−メチルヒスチジン、２−メチル酪酸、２−ｏ−アニシルプロパン酸、ｍｅｓｏ−酒石酸、４，６−ジメチルピリミジンアミンｐ−フタル酸、クレアチニン、酪酸、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−ナフチルアミン、ペンタン酸、４−メチルペンタン酸、Ｎ−メチルアニリン、１，１０−フェナントロリン、３−ピリジンカルボン酸、ヘキサン酸、プロパン酸、４−アミノ安息香酸、２−メチルプロパン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、シクロヘキサンカルボン酸、キノリン、３−キノリンアミン、２−アミノ安息香酸、４−ピリジンカルボン酸、ノナン酸、メラミン、８−キノリノール、トリメチル酢酸、６−メトキシキノリン、４−（メチルアミノ）安息香酸、ｐ−メチルアニリン、３−（メチルアミノ）安息香酸、リンゴ酸、Ｎ−エチルアニリン、２−ベンジルピリジン、３，６−ジニトロフェノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、２，５−ジメチルピペラジン、ｐ−フェネチジン、５−メチルキノリン、２−フェニルベンゾイミダゾール、ピリジン、ピコリン酸、３，５−ジヨードチロシン、ｐ−アニシジン、２−（メチルアミノ）安息香酸、２−チアゾールアミン、グルタル酸、アジピン酸、イソキノリン、イタコン酸、ｏ−フタル酸、ベンゾイミダゾール、ピペラジン、ヘプタン二酸、アクリジン、フェナントリジン、コハク酸、メチルコハク酸、４−メチルキノリン、３−メチルピリジン、７−イソキノリノール、マロン酸、メチルマロン酸、２−メチルキノリン、２−エチルピリジン、２−メチルピリジン、４−メチルピリジン、ヒスタミン、ヒスチジン、マレイン酸、ｃｉｓ−１，２−シクロヘキサンジアミン、３，５−ジメチルピリジン、２−エチルベンゾイミダゾール、２−メチルベンゾイミダゾール、カコジル酸、ペリミジン、クエン酸、イソクエン酸、２，５−ジメチルピリジン、パパベリン、６−ヒドロキシ−４−メチルプテリジン、Ｌ−チロキシン、３，４−ジメチルピリジン、メトキシピリジン、ｔｒａｎｓ−１，２−シクロヘキサンジアミン、２，５−ピリジンジアミン、ｌ−１−メチルヒスチジン、ｌ−３−メチルヒスチジン、２，３−ジメチルピリジン、キサントプテリン、１，２−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、アロキサン酸、２，６−ジメチルピリジン、Ｌ−カルノシン、２−ピリジンアミン、Ｎ−ｂ−アラニルヒスチジン、ピロカルピン、１−メチルイミダゾール、１Ｈ−イミダゾール、２，４−ジメチルピリジン、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、チロシンアミド、５−ヒドロキシキナゾリン、１，１−シクロプロパンジカルボン酸、２，４，６−トリメチルピリジン、ベロナール、２，３−ジクロロフェノール、１，２−エタンジアミン、１−イソキノリンアミン、およびこれらの組み合わせから選択される放出官能基を含む側鎖を有する、項目２に記載の化合物。
（項目２１）
項目１に記載の化合物のマルチマーを含む化合物であって、ここで２つ以上の項目１に記載の化合物が架橋されている、化合物。
（項目２２）
項目１に記載の化合物の結合体を含む化合物であって、ここでペプチドは、前記アミノ酸残基の側鎖に結合体化されている、化合物。
（項目２３）
オリゴマーフレームワークもしくはポリマーフレームワークに結合した項目１に記載の化合物を含む、化合物。
（項目２４）
薬学的薬物化合物に結合した項目１に記載の化合物を含む、化合物。
（項目２５）
（Ｃ１０アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１０アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１０アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、および（Ｃ１８アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）から選択される、項目１に記載の化合物。
（項目２６）
Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２である、化合物Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（ドデシルアミノ）ブタン−２−イル）ドデカンアミド。
（項目２７）
Ｃ１８（オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６である化合物Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（ヘキサデシルアミノ）ブタン−２−イル）オクタデカ−９−エナミド。
（項目２８）
（Ｃ１８オレイック）−（１−ＣＨ ３ −Ｈｉｓ）−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）である、化合物Ｎ−（３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソ−１−（ヘキサデシルアミノ）プロパン−２−イル）オクタデカ−９−エナミド。
（項目２９）
式Ｉに示される構造を含む化合物およびその塩：
Ｒ ３ −（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ ４ 式Ｉ
であって、ここで
Ｘａａは、式−ＮＲ Ｎ −ＣＲ １ Ｒ ２ −（Ｃ＝Ｏ）−を有するＤ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸残基であり、ここで
Ｒ １ は、置換されているかもしくは置換されていない、アミノ酸の塩基性側鎖であり；
Ｒ ２ は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ Ｎ は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ ３ は、独立して、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
Ｒ ４ は水素であり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、もしくは水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機性リンカーである；
化合物。
（項目３０）
Ｘａａ、アルギニン、ホモアルギニン、ノルアルギニン、ノル−ノルアルギニン、オルニチン、リジン、ホモリジン、ヒスチジン、１−メチルヒスチジン、ピリジルアラニン、アスパラギン、Ｎ−エチルアスパラギン、グルタミン、４−アミノフェニルアラニン、これらのＮ−メチル化バージョン、およびこれらの側鎖改変誘導体から選択される、項目２９に記載の化合物。
（項目３１）
Ｘａａは、アルギニン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２９に記載の化合物。
（項目３２）
Ｘａａは、ノルアルギニン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２９に記載の化合物。
（項目３３）
Ｘａａは、リジン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２９に記載の化合物。
（項目３４）
Ｘａａは、ヒスチジン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２９に記載の化合物。
（項目３５）
Ｘａａは、ピリジルアラニン、そのＮ−メチル化バージョン、もしくはその側鎖改変誘導体である、項目２９に記載の化合物。
（項目３６）
Ｘａａは、システインもしくはセリンである、項目２９に記載の化合物。
（項目３７）
Ｒ ２ は水素である、項目２９に記載の化合物。
（項目３８）
Ｒ Ｎ は水素である、項目２９に記載の化合物。
（項目３９）
Ｒ ３ は、Ｃ（６−２２）アルキルである、項目２９に記載の化合物。
（項目４０）
Ｒ ３ は、Ｃ（６−２２）アルケニルである、項目２９に記載の化合物。
（項目４１）
ＺはＮＨである、項目２９に記載の化合物。
（項目４２）
ＺはＯである、項目２９に記載の化合物。
（項目４３）
Ｘａａは、２〜２０アミノ酸残基のペプチドである、項目２９に記載の化合物。
（項目４４）
Ｘａａは、５〜７．５のｐＫａを有する官能基を含む側鎖を有する、項目２９に記載の化合物。
（項目４５）
Ｘａａは、３，５−ジヨード−チロシン、１−メチルヒスチジン、２−メチル酪酸、２−ｏ−アニシルプロパン酸、ｍｅｓｏ−酒石酸、４，６−ジメチルピリミジンアミン ｐ−フタル酸、クレアチニン、酪酸、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−ナフチルアミン、ペンタン酸、４−メチルペンタン酸、Ｎ−メチルアニリン、１，１０−フェナントロリン、３−ピリジンカルボン酸、ヘキサン酸、プロパン酸、４−アミノ安息香酸、２−メチルプロパン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、シクロヘキサンカルボン酸、キノリン、３−キノリンアミン、２−アミノ安息香酸、４−ピリジンカルボン酸、ノナン酸、メラミン、８−キノリノール、トリメチル酢酸、６−メトキシキノリン、４−（メチルアミノ）安息香酸、ｐ−メチルアニリン、３−（メチルアミノ）安息香酸、リンゴ酸、Ｎ−エチルアニリン、２−ベンジルピリジン、３，６−ジニトロフェノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、２，５−ジメチルピペラジン、ｐ−フェネチジン、５−メチルキノリン、２−フェニルベンゾイミダゾール、ピリジン、ピコリン酸、３，５−ジヨードチロシン、ｐ−アニシジン、２−（メチルアミノ）安息香酸、２−チアゾールアミン、グルタル酸、アジピン酸、イソキノリン、イタコン酸、ｏ−フタル酸、ベンゾイミダゾール、ピペラジン、ヘプタン二酸、アクリジン、フェナントリジン、コハク酸、メチルコハク酸、４−メチルキノリン、３−メチルピリジン、７−イソキノリノール、マロン酸、メチルマロン酸、２−メチルキノリン、２−エチルピリジン、２−メチルピリジン、４−メチルピリジン、ヒスタミン、ヒスチジン、マレイン酸、ｃｉｓ−１，２−シクロヘキサンジアミン、３，５−ジメチルピリジン、２−エチルベンゾイミダゾール、２−メチルベンゾイミダゾール、カコジル酸、ペリミジン、クエン酸、イソクエン酸、２，５−ジメチルピリジン、パパベリン、６−ヒドロキシ−４−メチルプテリジン、Ｌ−チロキシン、３，４−ジメチルピリジン、メトキシピリジン、ｔｒａｎｓ−１，２−シクロヘキサンジアミン、２，５−ピリジンジアミン、ｌ−１−メチルヒスチジン、ｌ−３−メチルヒスチジン、２，３−ジメチルピリジン、キサントプテリン、１，２−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、アロキサン酸、２，６−ジメチルピリジン、Ｌ−カルノシン、２−ピリジンアミン、Ｎ−ｂ−アラニルヒスチジン、ピロカルピン、１−メチルイミダゾール、１Ｈ−イミダゾール、２，４−ジメチルピリジン、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、チロシンアミド、５−ヒドロキシキナゾリン、１，１−シクロプロパンジカルボン酸、２，４，６−トリメチルピリジン、ベロナール、２，３−ジクロロフェノール、１，２−エタンジアミン、１−イソキノリンアミン、およびこれらの組み合わせから選択される放出官能基を含む塩基性側鎖を有する、項目２９に記載の化合物。
（項目４６）
項目２９に従う２つ以上の化合物が架橋されている、項目２９に記載の化合物のマルチマーを含む化合物。
（項目４７）
ペプチドは、前記アミノ酸残基の側鎖に結合体化されている、項目２９に記載の化合物の結合体を含む化合物。
（項目４８）
オリゴマー化合物フレームワークもしくはポリマーフレームワークに結合されている、項目２９に記載の化合物を含む化合物。
（項目４９）
薬学的薬物化合物に結合された、項目２９に記載の化合物を含む化合物。
（項目５０）
項目１〜４９のいずれか１項に従う１個以上のアミノ酸脂質および１つ以上の治療核酸を含む、組成物。
（項目５１）
前記治療核酸は、遺伝子抑制剤である、項目５０に記載の組成物。
（項目５２）
前記治療核酸は、ＲＮＡｉ誘導剤である、項目５０に記載の組成物。
（項目５３）
前記治療核酸は、二本鎖ＲＮＡである、項目５０に記載の組成物。
（項目５４）
前記治療核酸はｍｄＲＮＡである、項目５０に記載の組成物。
（項目５５）
前記治療核酸は、改変ヌクレオシドを含む、項目５０に記載の組成物。
（項目５６）
１種以上の非アミノ酸非カチオン性脂質もしくはステロールをさらに含む、項目５０に記載の組成物。
（項目５７）
コレステリルヘミスクシネートをさらに含む、項目５０に記載の組成物。
（項目５８）
１種以上の非アミノ酸カチオン性脂質をさらに含む、項目５０に記載の組成物。
（項目５９）
１種以上のｐｅｇ化脂質もしくはｐｅｇ化ステロールをさらに含む、項目５０に記載の組成物。
（項目６０）
前記核酸は、１種以上のアミノ酸脂質と複合体を形成する、項目５０に記載の組成物。
（項目６１）
前記組成物は、リポソームを含む、項目５０に記載の組成物。
（項目６２）
前記組成物は、エマルジョンである、項目５０に記載の組成物。
（項目６３）
前記組成物は、ミセル分散物である、項目５０に記載の組成物。
（項目６４）
項目１〜４９のいずれか１項に記載の１種以上のアミノ酸脂質化合物、および１種以上の薬物因子もしくは生物学的に活性な薬剤を含む、薬学的組成物。
（項目６５）
治療核酸を細胞に送達するための方法であって、該方法は、項目５０に記載の組成物を調製する工程、および細胞を該組成物で処理する工程を包含する、方法。
（項目６６）
細胞における遺伝子の発現を阻害するための方法であって、該方法は、項目５０に記載の組成物を調製する工程、および細胞を該組成物で処理する工程を包含する、方法。
（項目６７）
哺乳動物における遺伝子の発現を阻害するための方法であって、該方法は、項目５０に記載の組成物を調製する工程、および該哺乳動物に該組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目６８）
ヒトにおける疾患を処置するための方法であって、該疾患は、関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、敗血症、ならびに癌から選択され、該方法は、項目５０に記載の組成物を調製する工程、および該組成物を該ヒトに投与する工程を包含する、方法。
（項目６９）
関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、敗血症、ならびに癌を含む疾患を処置するための医薬の製造における、項目５０に記載の組成物の使用。
（項目７０）
関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、敗血症、ならびに癌から選択される疾患を処置するための、項目５０に記載の組成物の使用。
いくつかの局面において、本開示は、ＲＮＡ構造物を細胞に送達して、ＲＮＡ干渉、アンチセンス効果、もしくはゲノム発現の調節の応答を生じるための化合物、組成物および方法を提供する。
本発明は、薬物因子の送達および投与、ならびに薬物送達系において使用するための親油性化合物である、ある範囲のアミノ酸脂質を提供する。本開示のアミノ酸脂質は、アミノ酸残基および１つ以上の親油性テイルを含む分子である。
いくつかの局面において、本発明は、ある範囲の、式Ｉに示されるようなアミノ酸脂質化合物を提供する：
Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ４ 式Ｉ
ここで
Ｘａａは、式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸残基であるか、または式−｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎ−を有するｎ＝２〜２０アミノ酸残基のペプチドであり、
ここで
Ｒ１は独立して、各存在について、非水素、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない側鎖であり；
Ｒ２は独立して、各存在について、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなり、かつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
ＲＮは独立して、各存在について、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなり、かつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
Ｒ３は独立して、天然に存在するかもしくは合成の脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性テイルであり、ここで上記テイルは、ステロイド；または置換されているかもしくは置換されていないＣ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルを含み得；
Ｒ４は、独立して、天然に存在するかもしくは合成の脂質、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドから由来する親油性テイルであり、ここで上記テイルは、ステロイド；または置換されているかもしくは置換されていないＣ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルを含み得；
ここでＲ３およびＲ４のうちのいずれか一方は、上記で定義される親油性テイルであり、そして他方はアミノ酸末端基であるか、またはＲ３およびＲ４の両方が親油性テイルであり；上記アミノ酸末端基は、水素、ヒドロキシル、アミノ、もしくは有機保護基であり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）−、または水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機性リンカーである。
いくつかの点において、本発明は、ある範囲の式Ｉに示されるアミノ酸脂質化合物およびその塩を提供し：
Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ４ 式Ｉ
ここで
Ｘａａは、式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有するＤ−アミノ酸残基もしくはＬ−アミノ酸残基であり、
ここで
Ｒ１は、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
Ｒ２は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
ＲＮは、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ３は独立して、置換されているかもしくは置換されていないＣ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
Ｒ４は独立して、置換されているかもしくは置換されていないＣ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、もしくは水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機性リンカーである。
いくつかの実施形態において、上記アミノ酸脂質化合物は、アルギニン、ホモアルギニン、ノルアルギニン、ノル−ノルアルギニン、オルニチン、リジン、ホモリジン、ヒスチジン、１−メチルヒスチジン、ピリジルアラニン、アスパラギン、Ｎ−エチルアスパラギン、グルタミン、４−アミノフェニルアラニン、これらのＮ−メチル化バージョン、およびこれらの側鎖改変誘導体から選択されるＸａａを含み得る。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸脂質化合物は、システインおよびセリンから選択されるＸａａを含み得る。
特定の実施形態において、Ｒ３およびＲ４は、Ｃ（６−２２）アルキルであり得、そして同じであってもよいし、異なっていてもよい。いくつかの実施形態において、Ｒ３およびＲ４は、Ｃ（６−２２）アルケニルであり得、そして同じであってもよいし、異なっていてもよい。
特定の実施形態において、Ｘａａは、２〜２０アミノ酸残基のペプチドであり得る。
いくつかの実施形態において、Ｘａａは、５〜７．５のｐＫａを有する官能基を含む側鎖を有し得る。
いくつかの局面において、上記アミノ酸脂質化合物は、架橋される上記アミノ酸脂質化合物の２つ以上のマルチマーであり得る。
いくつかの実施形態において、上記アミノ酸脂質化合物は、上記アミノ酸残基の側鎖に結合体化されたペプチドを有する結合体であり得る。
特定の実施形態において、上記アミノ酸脂質化合物は、オリゴマーフレームワークもしくはポリマーフレームワークに結合され得る。
いくつかの実施形態において、上記アミノ酸脂質化合物は、薬学的薬物化合物に結合され得る。
いくつかの局面において、本発明は、ある範囲の式Ｉに示されるようなアミノ酸脂質化合物およびその塩を提供し：
Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ４ 式Ｉ
ここで
Ｘａａは、式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有するＤ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸残基であり、
Ｒ１は、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
Ｒ２は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
ＲＮは、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ３は独立して、置換されているかもしくは置換されていないＣ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
Ｒ４は水素であり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、もしくは水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機性リンカーである。
いくつかの点において、本開示は、１種以上のアミノ酸脂質化合物および１種以上の治療核酸を含む組成物を包含する。上記治療核酸は、遺伝子抑制剤、もしくはＲＮＡｉ誘導剤、もしくは二本鎖ＲＮＡ、もしくはｍｄＲＮＡであり得るか、または改変ヌクレオシドを含み得る。
いくつかの実施形態において、本開示は、１種以上のアミノ酸脂質化合物および１種以上のさらなる非アミノ酸脂質もしくはポリマー脂質を含む組成物を包含する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、コレステリルヘミスクシネートを含み得る。
いくつかの局面において、本開示は、１種以上のアミノ酸脂質化合物およびアミノ酸脂質と複合体を形成し得る１種以上の核酸を含む組成物を包含する。
特定の実施形態において、本開示は、リポソームを形成する１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物を包含する。
いくつかの局面において、本開示は、エマルジョンを形成する１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物を包含する。
いくつかの実施形態において、本開示は、ミセル分散物を形成する１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物を包含する。
特定の局面において、本開示は、１種以上のアミノ酸脂質化合物および１種以上の薬物因子もしくは生物学的に活性な薬剤を含む組成物を包含する。
いくつかの局面において、本開示は、治療核酸を細胞に送達するための方法を包含し、上記方法は、１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物を調製する工程および細胞を上記組成物で処理する工程によるものである。
いくつかの実施形態において、本開示は、細胞における遺伝子の発現を阻害するための方法を包含し、上記方法は、１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物を調製する工程および細胞を上記組成物で処理する工程を包含する。
特定の局面において、本開示は、哺乳動物における遺伝子の発現を阻害するための方法を包含し、上記方法は、１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物を調製する工程および上記組成物を上記哺乳動物に投与する工程を包含する。
いくつかの実施形態において、本開示は、ヒトにおける疾患を処置するための方法を包含し、上記疾患は、関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、ならびに癌から選択され、上記方法は、１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物を調製する工程および上記組成物を上記ヒトに投与する工程を包含する。
いくつかの局面において、本開示は、関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、ならびに癌を含む疾患を処置するための医薬の製造における、１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物の使用を包含する。
いくつかの実施形態において、本開示は、関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、ならびに癌から選択される疾患を処置するための、１種以上のアミノ酸脂質化合物を含む組成物の使用を包含する。
この要旨は、発明の詳細な説明、ならびに図面および添付の実施例および特許請求の範囲と一緒になって、全体として、本発明の開示を包含する。
本発明のリポソーム実施形態の代表的模式図。ここでアミノ酸脂質は、他の脂質とともに、二重層小胞１０を形成する。この実施形態において、上記リポソームの外側層は、上記脂質のうちの１つのヘッド基に結合されたポリエチレングリコール鎖２０によって保護されている。上記リポソームの外側層はまた、細胞もしくは組織の特異的標的化のためのリガンド３０を示す。上記リポソーム小胞は、この実施形態において、この実施形態においてプールされた、濃縮ＲＮＡナノ粒子４０、二本鎖ＲＮＡ二重鎖ペプチド結合体５０、三本鎖ｍｄＲＮＡ６０、ダイサー基質ＲＮＡ７０、長いオーバーハング付きｄｓＲＮＡ８０、および平滑末端付きｓｉＲＮＡ９０を含む活性干渉ＲＮＡ成分の搭載物（ｃａｒｇｏ）を含む。 アミノ酸脂質Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２で形成された球形の脂質二重層小胞粒子を示す本発明のリポソーム実施形態のＪＥＯＬ １２３０ ＴＥＭで得られる透過型電子顕微鏡写真。上記顕微鏡写真の長さのマーカーは、０．５μｍであり、そのサンプルをは、３％ ウラニルアセテートで染色された。上記リポソーム処方物の脂質部分は、総脂質のモル％として、それぞれ、［３０％／２０％／４９％／１％］の量の［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３ ＋Ｃｌ−）−Ｃ１２／ＤＳＰＣ／コレステロール／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００］であった。上記リポソームは、抗インフルエンザ活性ダイサー基質ｄｓＲＮＡ ＤＸ３０３０を含んだ。 図３において、Ａ５４９細胞におけるインビトロアッセイから得られたＰＰＩＢ遺伝子ノックダウン活性の例が示される。干渉ＲＮＡの２つのアミノ酸脂質処方物に対する正規化ＰＰＩＢ ｍＲＮＡ発現値の２５ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭのＲＮＡにおける濃度応答を、ＲＮＡＩＭＡＸの結果と比較した。式１は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＤＯＰＥ／ＣＨＯＬ（５０／３２／１８）］であり、式２は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＣＨＥＭＳ／ＤＬＰＥ（５０／３２／１８）］であった。本開示のアミノ酸脂質組成物中の干渉ＲＮＡによる上記ＰＰＩＢ遺伝子ノックダウンは、ＲＮＡＩＭＡＸで得られるものを上回り得る。 図４において、９Ｌ／ＬａｃＺ細胞におけるインビトロ活性から得られたＬａｃＺ遺伝子ノックダウン活性の例が示される。干渉ＲＮＡの２つのアミノ酸脂質処方物に対する正規化β−ガラクトシダーゼ発現値の２５ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．１ｎＭのＲＮＡにおける濃度応答を、ＲＮＡＩＭＡＸの結果と比較した。式１は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＤＯＰＥ／ＣＨＯＬ（５０／３２／１８）］であり、式２は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＣＨＥＭＳ／ＤＬＰＥ（５０／３２／１８）］であった。本開示のアミノ酸脂質組成物中の干渉ＲＮＡによる上記ＬａｃＺ遺伝子ノックダウンは、ＲＮＡＩＭＡＸで得られたものを上回り得る。 図５において、ＨｅｐＧ２細胞におけるインビトロアッセイから得られたＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン活性の例が示される。干渉ＲＮＡの３つのアミノ酸脂質処方物に対する正規化ＡｐｏＢ ｍＲＮＡ発現値の２５ｎＭ、２．５ｎＭ、および０．２５ｎＭ ＲＮＡにおける濃度応答が、示される。式１は、［非アミノ酸カチオン性脂質／ＤＳＰＣ／ｃｈｏｌ．／ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２ｋ（４０／１０／４８／２）］であった。式２および式３はともに、［Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６／ＣＨＥＭＳ／ＤＬＰＥ／ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２ｋ（５０／３２／１６／２）］であった。
（詳細な説明）
本開示は、一般に、薬物因子の送達のための新規な化合物、組成物およびその使用に関する。本開示の化合物および組成物は、選択された細胞、組織、器官もしくは被験体に治療剤を送達するために有用である。
本開示は、一般に、脂質の化学、ならびに脂質様構造および薬物送達を行うための物質の使用に関する。
本開示の化合物および組成物は、治療剤、予防剤、および新断罪（例えば、核酸、ポリヌクレオチド、ペプチド、タンパク質、および低分子化合物ならびに薬物）の送達のために有用である。
本開示の化合物および組成物は、リポソーム、ラメラ小胞、エマルジョン、ミセル、懸濁物、粒子、および溶液のような形態の治療剤の送達に有用である。これら形態は、種々の直径のナノ粒子を含み得る。
いくつかの点において、本開示の化合物および組成物は、リポソームにおいて治療剤を送達するために有用である。これら実施形態において、上記治療剤は、上記搭載物として言及され得る。例えば、図１は、本発明のリポソーム実施形態の模式的代表図を示す。この図において、アミノ酸脂質は、他の脂質とともに二重層小胞１０を形成する。この実施形態において、上記リポソームの外側層は、上記脂質のうちの１つのヘッド基に結合されたポリエチレングリコール鎖２０によって保護される。上記リポソームの外側層はまた、細胞もしくは組織の特異的標的化のためのリガンド３０を示す。上記リポソーム小胞は、この実施形態において、この実施形態においてプールされる、濃縮ＲＮＡナノ粒子４０、二本鎖ＲＮＡ二重鎖ペプチド結合体５０、三本鎖ｍｄＲＮＡ６０、ダイサー基質ＲＮＡ７０、長いオーバーハング付きｄｓＲＮＡ８０、および平滑末端付きｓｉＲＮＡ９０を含む活性干渉ＲＮＡ成分の搭載物を含む。治療搭載物の他の形態は、マイクロＲＮＡもしくはヘアピンＲＮＡの形態を含み得る。
いくつかの局面において、本開示の化合物および組成物は、放出可能な形態もしくは組成物中での治療剤の送達を提供し得る。放出可能な形態および組成物は、活性薬剤を結合および放出する分子、活性薬剤を結合しかつ上記薬剤の放出を補助する部分を解放する分子、活性薬剤を結合しかつその後に上記薬剤の放出を補助するために生物学的区画内形態において変化される分子、および放出メディエーター化合物と混合される活性薬剤を結合する分子を含む組成物を含む。
（アミノ酸脂質）
本発明は、薬物因子の送達および投与、ならびに薬物送達系において使用するための親油性化合物である、ある範囲のアミノ酸脂質を提供する。本開示のアミノ酸脂質は、アミノ酸残基および１つ以上の親油性テイルを含む分子である。
いくつかの実施形態において、アミノ酸脂質は、親水性部分および親油性部分を有する分子である。上記親水性部分は、アミノ酸残基によって提供され得る。上記親油性部分は、１つ以上の親油性テイルを含み得る。
いくつかの実施形態において、アミノ酸脂質は、疎水性アミノ酸残基および１つ以上の親油性テイルを含む親油性分子である。
いくつかの実施形態において、上記アミノ酸脂質は、比較的低い細胞傷害性を提供し、そして対応して、特定の他の脂質に対して細胞保護効果を提供する。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸脂質は、薬学的に受容可能であるか、生体分解性であるか、もしくは生体適合性である。
アミノ酸脂質は、送達増強テイルもしくは脂質様テイルを、アミノ酸のＮ末端もしくはＣ末端のいずれか、または両方の末端において置換することによって、形成され得る。いくつかの実施形態において、上記アミノ酸コアは、１種以上のアミノ酸を含み得るか、または２〜２０個のアミノ酸残基のペプチドであり得る。
アミノ酸脂質は、カチオン性もしくは非カチオン性であり得、ここで非カチオン性とは、中性もしくはアニオン性を包含する。本明細書において使用される場合、種の物理的状態もしくはイオン性とは、別段特定されなければ、約ｐＨ７を有する環境をいう。
本開示のアミノ酸脂質は、低細胞毒性を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示のアミノ酸脂質は、他の構造の脂質に対して細胞保護効果を提供し得る。
いくつかの局面において、本開示のアミノ酸脂質は、放出可能な形態において、治療剤の送達を提供し得る。放出可能な形態および組成物は、治療効果を提供するために、細胞による薬剤の十分な取り込みを提供するように設計される。
放出可能な形態は、活性薬剤を結合および放出するアミノ酸脂質を包含する。いくつかの実施形態において、上記活性薬剤の放出は、酸不安定性リンカーによって提供され得る。
酸不安定性リンカーの例としては、オルトエステル基、ヒドラゾン、ｃｉｓ−アセトニル、アセタール、ケタール、シリルエーテル、シラザン、イミン、シトラコン酸無水物（ｃｉｔｒｉｃｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、マレイン酸無水物、クラウンエーテル、アザクラウンエーテル、チアクラウンエーテル、ジチオベンジル基、ｃｉｓ−アコニット酸、ｃｉｓ−カルボン酸アルカトリエン、メタクリル酸、およびこれらの混合物を含むリンカーが挙げられる。
酸不安定性基およびリンカーの例は、米国特許第７，０９８，０３２号；同第６，８９７，１９６号；同第６，４２６，０８６号；同第７，１３８，３８２号；同第５，５６３，２５０号；および同第５，５０５，９３１号に与えられる。
本開示の化合物および組成物の放出可能な形態は、活性薬剤を結合しかつ上記薬剤の放出を補助する部分を解放する分子を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸脂質は、細胞への薬剤の送達を補助するエタノールのような低分子を放出する基を含み得る。アミノ酸脂質は、活性薬剤を結合して、その後、細胞と接触し得るか、またはその後、生理学的ｐＨより低い局所的ｐＨを有する生物学的区画内に輸送し、酸性環境において加水分解されて、上記薬剤の送達を補助するためにエタノールを放出し得る。いくつかの実施形態において、上記薬剤の送達を補助する、エタノールのような低分子は、脂質成分に結合され得る。
いくつかの実施形態において、アミノ酸脂質は、低分子（例えば、細胞への薬剤の送達を補助するエタノール）を放出する化合物と混合され得る。
本開示の化合物および組成物の放出可能な形態としては、活性薬剤を結合して、その後、細胞と接触し得るか、またはその後、生理学的ｐＨより低い局所的ｐＨを有する生物学的区画内に送達し、酸性環境においてカチオン性形態へと変化されて、上記薬剤の放出を補助し得るアミノ酸脂質を含む。
いくつかの実施形態において、アミノ酸脂質は、活性薬剤を結合し得、そして酸性環境においてカチオン性形態へと変化されて、活性薬剤の放出を補助し得る化合物と混合され得る。
加水分解可能かつ変化可能な基の例は、米国特許第６，８４９，２７２号；同第６，２００，５９９号；ならびにＺ．Ｈ．Ｈｕａｎｇ ａｎｄ Ｆ．Ｃ．Ｓｚｏｋａ，「Ｂｉｏｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｕｓｅ ｆｏｒ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，ｉｎ：Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ（編），Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，第３版（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ２００６）に示される。
いくつかの実施形態において、本開示の化合物および組成物の放出可能な形態としては、活性薬剤を結合し得、そして酸性環境において中性形態へと変化されて、活性薬剤の放出を補助し得る脂質もしくは化合物と混合され得るアミノ酸脂質を含む。上記酸性環境は、細胞と接触した後に、または生理学的ｐＨより低い局所的ｐＨを有する生物学的区画内に輸送された後に、侵入され得る。
アニオン性形態から中性形態へと変化可能な脂質の例としては、米国特許第６，８９７，１９６号；同第６，４２６，０８６号；および同第７，１０８，８６３号に記載されるようなコレステリルヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、本開示の化合物および組成物の放出可能な形態は、活性薬剤を結合し得、そしてｐＨ感受性ポリマー物質と混合され得るアミノ酸脂質を含む。
ｐＨ感受性ポリマー物質の例は、米国特許第６，８３５，３９３号に示される。
いくつかの実施形態において、上記活性薬剤の放出は、酵素切断可能なペプチドによって提供され得る。
いくつかの局面において、本発明は、式Ｉに示されるような、ある範囲のアミノ酸脂質およびその塩を提供し：
Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ４ 式Ｉ
ここで
Ｘａａは、式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−アミノ酸残基もしくはＬ−アミノ酸残基、または式−｛ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）｝ｎ−を有するｎ＝２〜２０アミノ酸残基のペプチドであり、
ここで
Ｒ１は独立して、各存在について、非水素、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない側鎖であり；
Ｒ２は独立して、各存在について、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなりかつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
ＲＮは独立して、各存在について、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなりかつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
Ｒ３は、天然に存在するかもしくは合成のリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性テイル；または置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキル；または任意の他の天然に存在するかもしくは合成の脂質の親油性テイル、または本明細書において以下に記載されるさらなる送達脂質のうちのいずれか１つの親油性テイルであり、ステロイドを含み得；
Ｒ４は、天然に存在するかもしくは合成のリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性テイル；または置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキル；または任意の他の天然に存在するかもしくは合成の脂質の親油性テイル、または本明細書において以下に記載されるさらなる送達脂質の親油性テイルであり、ステロイドを含み得；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）−、または水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機リンカーである。
いくつかの実施形態において、Ｒ３は独立して、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；Ｒ４は独立して、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルである。
上記残基Ｘａａは、Ｄ−立体中心もしくはＬ−立体中心であり得る。
いくつかの実施形態において、上記アミノ酸コアは、ペプチドのＮ末端およびＣ末端において親油性テイルを有する、２〜２０アミノ酸残基のペプチドであり得る。
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、非水素、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない側鎖であり、ここで側鎖の置換基は、水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機基である。
いくつかの実施形態において、Ｚは、アルキルもしくは有機リンカー合成ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール鎖（ＰＥＧ））、もしくはＰＥＧコポリマー（例えば、ＰＥＧ−ポリウレタンもしくはＰＥＧ−ポリプロピレン）である。例えば、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ，Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ） ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９２）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本発明は、上記式Ｉに示されるような、ある範囲のアミノ酸脂質を提供し：
Ｘａａは、一般式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸であり、ここで
Ｒ１は、非水素、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
Ｒ２は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
ＲＮは、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ３は、天然に存在するかもしくは合成のリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性テイル；または置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキル；または任意の他の天然に存在するかもしくは合成の脂質の親油性テイル、または本明細書において以下に記載されるさらなる送達脂質のうちのいずれか１つの親油性テイルであり、そしてステロイドを含み得；
Ｒ４は、天然に存在するかもしくは合成のリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性テイル；または置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキル；または任意の他の天然に存在するかもしくは合成の脂質の親油性テイル、または本明細書において以下に記載されるさらなる送達脂質のうちのいずれか１つの親油性テイルであり、そしてステロイドを含み得；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）−、または水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機リンカーである。
いくつかの実施形態において、本発明は、上記の式Ｉに示されるような範囲のアミノ酸脂質を提供し、ここで：
Ｘａａは、一般式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸であり、ここで
Ｒ１は、非水素、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
Ｒ２は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
ＲＮは、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ３は、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルであり；
Ｒ４は、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルであり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）−、または水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機リンカーである。
いくつかの実施形態において、本発明は、上記の式Ｉに示されるような範囲のアミノ酸脂質を提供し、ここで：
Ｘａａは、一般式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸であり、ここで
Ｒ１は、非水素、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
Ｒ２は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
ＲＮは、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ３は、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルであり；
Ｒ４は、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルであり；
ＺはＮＨである。
いくつかの実施形態において、本発明は、上記の式Ｉに示されるような範囲のアミノ酸脂質を提供し、ここで：
Ｘａａは、一般式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸であり、ここで
Ｒ１は、非水素、アミノ酸の、置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
Ｒ２は、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
ＲＮは、水素、もしくはＣ（１−５）アルキルであり、
Ｒ３は、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルであり；
Ｒ４は、置換されているかもしくは置換されていない、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキルであり；
ＺはＯである。
例えば、Ｘａａが塩基性側鎖を有するカチオン性アミノ酸脂質が、調製され得る。塩基性側鎖を有するアミノ酸の例としては、アルギニン（Ａｒｇ）、ホモアルギニン（ホモＡｒｇ）（側鎖−（ＣＨ２）４ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ノルアルギニン（ｎｏｒＡｒｇ）（側鎖−（ＣＨ２）２ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、ノル−ノルアルギニン（ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ）（側鎖−（ＣＨ２）ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２）、オルニチン、リジン、ホモリジン、ヒスチジン、１−メチルヒスチジン、ピリジルアラニン（Ｐａｌ）、アスパラギン、Ｎ−エチルアスパラギン、グルタミン、および４−アミノフェニルアラニン、ならびにこれらの側鎖改変誘導体が挙げられる。
本明細書において使用される場合、用語「ホモ」とは、アミノ酸に言及する場合、さらなる炭素がその側鎖に付加されていることを意味する一方で、用語「ノル」とは、アミノ酸に言及する場合、炭素が、その側鎖から除去されていることを意味する。従って、ホモリジンとは、側鎖−（ＣＨ２）５ＮＨ２に言及する。
例えば、Ｘａａがグルタミン酸もしくはアスパラギン酸であるアニオン性アミノ酸脂質が調製され得る。
上記アミノ酸側鎖がイオン化可能な基もしくは置換基を含む、カチオン性アミノ酸脂質およびアニオン性アミノ酸脂質がまた、調製され得る。
例えば、Ｘａａがロイシン、バリン、アラニン、もしくはセリンである非カチオン性アミノ酸脂質が調製され得る。
いくつかの実施形態において、Ｘａａは、ＮＧ−メチルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニン、ＮＧ−メチル−ホモアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジメチル−ホモアルギニン、ＮＧ−メチル−ノルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジメチル−ノルアルギニン、またはＮＧ−メチル−ノル−ノルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジメチル−ノル−ノルアルギニンである。
いくつかの実施形態において、Ｘａａは、ＮＧ−エチルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジエチルアルギニン、ＮＧ−エチル−ホモアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジエチル−ホモアルギニン、ＮＧ−エチル−ノルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジエチル−ノルアルギニン、またはＮＧ−エチル−ノル−ノルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジエチル−ノル−ノルアルギニンである。
特定の実施形態において、Ｘａａは、ＮＧ−アルキルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アルキル−ホモアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジアルキル−ホモアルギニン、ＮＧ−アルキル−ノルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジアルキル−ノルアルギニン、またはＮＧ−アルキル−ノル−ノルアルギニン、対称もしくは非対称のＮＧ，ＮＧ−ジアルキル−ノル−ノルアルギニンである。
いくつかの実施形態において、Ｘａａは、グアニジンもしくはアミジンを含有する側鎖を有するアミノ酸である。例えば、上記Ｘａａ残基の側鎖は、グアニド、アミジノ、ジヒドロイミダゾール、４−グアニド−フェニル、４−アミジノ−フェニル、Ｎ−アミジノ−ピペリジン、Ｎ−アミジノ−ピペラジン、４，５−ジヒドロイミダゾール、２−（Ｎ−アミジノ）−ピロリジニル、もしくは４−［（２−アミノピリミジニル）］エチルのような基を含み得る。
Ｘａａ側鎖の例としては、以下の構造およびそれらの塩形態が挙げられる：
アミノ酸脂質の放出可能な形態に適したアミノ酸の置換された側鎖の例としては、約５〜約７．５、または約６〜約７のｐＫａを有する放出官能基（ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｒｏｕｐ）が挙げられる。一般に、弱塩基である放出官能基は、ｐＫａより高い局所的ｐＨにおいて優れた中性形態を示し得、そしてｐＫａより低い局所的ｐＨにおいて優れたイオン性形態を示し得る。弱酸である放出官能基は、ｐＫａより高い局所的ｐＨにおいてイオン性形態を示し得、ｐＫａより低い局所的ｐＨにおいて中性形態を示し得る。例えば、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，（２００２）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、Ｘａａは、５〜７．５のｐＫａを有する官能基を含む側鎖を有し得る。
アミノ酸脂質の放出可能な形態に適したアミノ酸の置換された側鎖の例としては、１−メチルヒスチジンが挙げられる。
アミノ酸脂質の放出可能な形態に適したアミノ酸の置換された側鎖の例としては、３，５−ジヨード−チロシンが挙げられる。
アミノ酸脂質の放出可能な形態に適したアミノ酸の置換された側鎖の例としては、以下の構造が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造が挙げられる：
アミノ酸脂質の放出可能な形態に適したアミノ酸の側鎖上の置換基の例としては、以下に由来する放出官能基が挙げられる：３，５−ジヨード−チロシン、１−メチルヒスチジン、２−メチル酪酸、２−θ−アニシルプロパン酸、ｍｅｓｏ−酒石酸、４，６−ジメチルピリミジンアミン、ｐ−フタル酸、クレアチニン、酪酸、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−ナフチルアミン、ペンタン酸、４−メチルペンタン酸、Ｎ−メチルアニリン、１，１０−フェナントロリン、３−ピリジンカルボン酸、ヘキサン酸、プロパン酸、４−アミノ安息香酸（ａｎｉｍｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）、２−メチルプロパン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、シクロヘキサンカルボン酸、キノリン、３−キノリンアミン、２−アミノ安息香酸、４−ピリジンカルボン酸、ノナン酸（ｎｏｎａｎｉｃ ａｃｉｄ）、メラミン、８−キノリノール、トリメチル酢酸、６−メトキシキノリン、４−（メチルアミノ）安息香酸、ｐ−メチルアニリン、３−（メチルアミノ）安息香酸、リンゴ酸、Ｎ−エチルアニリン、２−ベンジルピリジン、３，６−ジニトロフェノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、２，５−ジメチルピペラジン、ｐ−フェネチジン、５−メチルキノリン、２−フェニルベンゾイミダゾール、ピリジン、ピコリン酸、３，５−ジヨードチロシン（ｄｉｉｏｄｉｔｙｒｏｓｉｎｅ）、ｐ−アニシジン、２−（メチルアミノ）安息香酸、２−チアゾールアミン、グルタル酸、アジピン酸、イソキノリン、イタコン酸、ｏ−フタル酸、ベンゾイミダゾール、ピペラジン、ヘプタン二酸、アクリジン、フェナントリジン、コハク酸、メチルコハク酸、４−メチルキノリン、３−メチルピリジン、７−イソキノリノール、マロン酸、メチルマロン酸、２−メチルキノリン、２−エチルピリジン、２−メチルピリジン、４−メチルピリジン、ヒスタミン、ヒスチジン、マレイン酸、ｃｉｓ−１，２−シクロヘキサンジアミン、３，５−ジメチルピリジン、２−エチルベンゾイミダゾール、２−メチルベンゾイミダゾール、カコジル酸、ペリミジン、クエン酸、イソクエン酸、２，５−ジメチルピリジン、パパベリン、６−ヒドロキシ−４−メチルプテリジン、Ｌ−チロキシン、３，４−ジメチルピリジン、メトキシピリジン、ｔｒａｎｓ−１，２−シクロヘキサンジアミン、２，５−ピリジンジアミン、ｌ−１−メチルヒスチジン、ｌ−３−メチルヒスチジン、２，３−ジメチルピリジン、キサントプテリン、１，２−プロパンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、アロキサン酸（ａｌｌｏｘａｎｉｃ ａｃｉｄ）、２，６−ジメチルピリジン、Ｌ−カルノシン、２−ピリジンアミン、Ｎ−ｂ−アラニルヒスチジン、ピロカルピン、１−メチルイミダゾール、１Ｈ−イミダゾール、２，４−ジメチルピリジン、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、チロシンアミド、５−ヒドロキシキナゾリン、１，１−シクロプロパンジカルボン酸、２，４，６−トリメチルピリジン、ベロナール、２，３−ジクロロフェノール、１，２−エタンジアミン、１−イソキノリンアミン、ならびにこれらの組み合わせ。
いくつかの実施形態において、ある範囲の、式Ｉに対応するアミノ酸脂質は、以下の構造によって表され：
および
ここでＲ１、Ｒ２、ＲＮ、Ｒ３、およびＲ４は、上記のとおりに定義される。
いくつかの実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、十分な親油性特徴もしくは親油性（例えば、水／オクタノール分配によって定義される）を付与して、膜を横断する送達もしくは細胞による取り込みを提供する選択された脂質様テイルである。これらテイルは、アミノ酸脂質構造において使用される場合、両親媒性分子を提供する。脂質様テイルは、とりわけ、リン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来し得、そしてステロイドを含み得る。
特定の実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、グリセロール骨格を有する脂質様テイルであり得る。
いくつかの実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１８アルキル、Ｃ１９アルキル、Ｃ２０アルキル、Ｃ２１アルキル、もしくはＣ２２アルキルであり得る。
いくつかの実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、以下の構造のうちの１つを有する親油性テイルであり得る：
上記の構造において、Ｘは、上記アミノ酸残基末端に直接結合され、かつ数字の名称（例えば、「１８：３」）における原子のうちの１つとして計数される、上記テイルの原子を表す。いくつかの実施形態において、Ｘは、炭素、窒素、もしくは酸素原子であり得る。
いくつかの実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、以下の構造のうちの１つを有する親油性テイルであり得る：
ここでＸは、上記で定義されるとおりである。
いくつかの実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、コレステロール、ステロール、もしくはステロイド（例えば、ゴナン、エストラン、アンドロスタン、プラグナン、コラン、コレスタン、エルゴスタン、カンペスタン、ポリフェラスタン、スチグマスタン、ゴルゴスタン、ラノスタン、シクロアルタン、および前述のうちのいずれかのステロール誘導体もしくは動物ステロール誘導体、ならびにそれらの生物学的中間体および前駆体）を含み得る選択された脂質様テイルであり、これらとしては、例えば、コレステロール、ラノステロール、スチグマスタノール、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステノール、デスモテロール、７−デヒドロコレステロール、ならびにこれらの混合物および誘導体が挙げられ得る。
特定の実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、脂肪酸様テイル（例えば、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）アルケニル、パルミチン酸（Ｃ１６：０）アルケニル、ステアリン酸（Ｃ１８：０）アルケニル、オレイン酸（Ｃ１８：１，炭素９において二重結合）アルケニル、リノール酸（Ｃ１８：２，炭素９もしくは炭素１２において二重結合）アルケニル、リノレン酸（ｌｉｎｏｎｅｎｉｃ ａｃｉｄ）（Ｃ１８：３，炭素９、炭素１２、もしくは炭素１５において二重結合）アルケニル、アラキドン酸（Ｃ２０：４，炭素５、炭素８、炭素１１、もしくは炭素１４において二重結合）アルケニル、およびエイコサペンタエン酸（Ｃ２０：５，炭素５、炭素８、炭素１１、炭素１４、もしくは炭素１７において二重結合）アルケニルに由来するテイル）に由来し得る。脂肪酸様テイルの他の例は、Ｄｏｎａｌｄ Ｖｏｅｔ ａｎｄ Ｊｕｄｉｔｈ Ｖｏｅｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第３版（２００５），ｐ．３８３に見いだされる。
いくつかの実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、イソプレノイドに由来し得る。
本明細書において使用される場合、用語「アミノ酸」とは、天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸を含む。従って、本発明のアミノ酸脂質は、遺伝的にコードされるアミノ酸、天然に存在する遺伝的にコードされていないアミノ酸、もしくは合成アミノ酸から製造され得る。
アミノ酸の例としては、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＶａｌが挙げられる。
アミノ酸の例としては、アゼチジン、２−アミノオクタデカン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、２，３−ジアミノ酪酸、２，４−ジアミノ酪酸、２−アミノイソ酪酸、４−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，２’−ジアミノピメリン酸、６−アミノヘキサン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、デスモシン、オルニチン、シトルリン、Ｎ−メチルイソロイシン、ノルロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、フェニルグリシン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルグリシン、サルコシン（ｓａｃｒｏｓｉｎｅ）、Ｎ−エチルグリシン、シクロヘキシルグリシン、４−オキソ−シクロヘキシルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、シクロヘキシルアラニン、ｔ−ブチルアラニン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、３−クロロアラニン、３−ベンゾチエニルアラニン、４−ハロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、ペニシラミン、２−チエニルアラニン、メチオニン、メチオニンスルホキシド、ホモアルギニン、ノルアルギニン、ノル−ノルアルギニン、Ｎ−アセチルリジン、４−アミノフェニルアラニン、Ｎ−メチルバリン、ホモシステイン、ホモセリン、ヒドロキシリジン、アロ−ヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、６−Ｎ−メチルリジン、ノルバリン、Ｏ−アリル−セリン、Ｏ−アリル−スレオニン、α−アミノヘキサン酸、α−アミノ吉草酸、ピログルタミン酸、およびこれらの誘導体が挙げられる。
本明細書において使用される場合、用語「アミノ酸」とは、α−アミノ酸およびβ−アミノ酸を含む。
アミノ酸残基の例は、Ｆａｓｍａｎ，ＣＲＣ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８９）において見いだされ得る。
一般に、化合物は、１個以上のキラル中心を含み得る。１個以上のキラル中心を含む化合物は、「異性体」、「立体異性体」、「ジアステレオマー」、「鏡像異性体」、「光学異性体」、もしくは「ラセミ混合物」として記載されるものを包含し得る。立体化学的命名法の約束ごとは、例えば、Ｃａｈｎ，ＩｎｇｏｌｄおよびＰｒｅｌｏｇの立体異性体命名規則、ならびに立体化学の決定および立体異性体の分離のための方法が、当該分野で公知である。例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ Ｂ． Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第５版，２００１を参照のこと。本開示の化合物および構造物は、特定された化合物もしくは構造物について存在すると理解される、全ての考えられる異性体、立体異性体、ジアステレオマー、鏡像異性体、および／もしくは光学異性体（その任意の混合物、ラセミ混合物もしくは他のものを包含する）を包含することを意味する。
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ａｒｇ−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここでＡｒｇは、Ｄ−アルギニンもしくはＬ−アルギニンであり、そしてＲ３およびＲ４は独立して、アルキルもしくはアルケニルである。
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここでｎｏｒＡｒｇは、Ｄ−ノルアルギニンもしくはＬ−ノルアルギニンであり、Ｒ３およびＲ４は独立して、アルキルもしくはアルケニルである。
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここでｎｏｒｎｏｒＡｒｇは、Ｄ−ノル−ノルアルギニンもしくはＬ−ノル−ノルアルギニンであり、Ｒ３およびＲ４は独立して、アルキル（例えば、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、およびウンデシル）である。
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここでホモＡｒｇは、Ｄ−ホモアルギニンもしくはＬ−ホモアルギニンであり、Ｒ３およびＲ４は独立して、アルキル（例えば、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、およびウンデシル）である。
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−４−ピリジルアラニン−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここで上記ピリジルアラニンは、Ｄ−ピリジルアラニンもしくはＬ−ピリジルアラニンであり、Ｒ３およびＲ４は独立して、アルキル（例えば、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、およびウンデシル）である。Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−ピリジルアラニン−ＮＨ−Ｒ４アミノ酸脂質の例は、薬学的に受容可能なピリジル塩（例えば、４−［Ｎ−メチルピリジル］アラニンクロリド）を含む。ピリジルアラニンアミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌｙｓ−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここでＲ３およびＲ４は独立して、アルキルもしくはアルケニルである。
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｈｉｓ−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここでＲ３およびＲ４は独立して、アルキルもしくはアルケニルである。Ｈｉｓアミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｏ−Ｒ４が挙げられ、ここでＲ３はアルキルであり、Ｒ４はスフィンゴイド（ｓｐｈｉｎｇｏｉｄ）である。
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−ＮＨ−Ｒ４が挙げられ、ここでＲ３およびＲ４は、アルキルもしくはアルケニルである。アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質の例としては、（Ｃ１０アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、および（Ｃ１８アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）が挙げられる。
一般に、名称「Ｃ１４−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１４」とは、例えば、（Ｃ１３アルキル）−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）をいい、これは、（Ｃ１４アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）と同じである。
アミノ酸脂質の例としては、（Ｃ１０アシル）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｄ−ホモＡｒｇ−Ｌ−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｄ−ホモＡｒｇ−Ｌ−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｄ−ホモＡｒｇ−Ｌ−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｄ−ホモＡｒｇ−Ｌ−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｄ−ホモＡｒｇ−Ｌ−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｄ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｄ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｄ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｄ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｄ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｄ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｄ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｄ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｄ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｄ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−Ｌ−ｎｏｒｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）が挙げられる。
アミノ酸脂質の例としては、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）が挙げられる。
アミノ酸脂質の例としては、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）が挙げられる。
アミノ酸脂質の例としては、（Ｃ１０アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−Ｐａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）が挙げられる。
アミノ酸脂質は、ポリマー種もしくはマルチマー種（例えば、ダイマー、トリマー、もしくはテトラマー）として調製され得る。上記ポリマー種もしくはマルチマー種は、単一のアミノ酸脂質から調製され得るか、または１種より多くの種から調製され得る。ポリマー種もしくはマルチマーのアミノ酸脂質種は、いくつかの実施形態において、上記アミノ酸の側鎖上にスルフヒドリル基もしくは他の架橋可能な基を、または連結されるかもしくは固定された（ｔｅｔｈｅｒｅｄ）アミノ酸構造物（例えば、デスモシンもしくはシトルリン）を提供することによって、調製され得る。他の実施形態において、ポリマーもしくはマルチマーのアミノ酸脂質種は、生体結合体リンカー化合物で調製され得る。
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
アミノ酸脂質は、上記アミノ酸側鎖に共有結合したペプチドもしくはポリマー鎖を有する結合体として調製され得る。上記ペプチドもしくはポリマー鎖は、上記アミノ酸側鎖の反応性基を使用して（例えば、システインもしくはメチオニンの、それぞれ、チオール基もしくはメチルメルカプタン基を、またはセリンのアルコール基、もしくはリジンのアミノ基）結合され得る。上記ペプチドもしくはポリマー鎖は、置換されたかもしくは改変されたアミノ酸側鎖の任意の反応性基を使用して結合され得る。種々のリンカー基（例えば、ＮＨＳ、マレイミド、ならびに生体結合体技術およびリンカー）が、使用され得る。
アミノ酸脂質は、オリゴマーフレームワークもしくはポリマーフレームワークに結合された構築物として調製され得る。例えば、アミノ酸脂質は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、オリゴヌクレオチドネットワークもしくは格子、ポリ（アミノ酸）、炭水化物、デキストラン、ヒドロゲル、またはデンプンに結合され得る。
アミノ酸脂質は、薬学的薬物化合物もしくは組成物、または生物学的に活性な薬剤に結合された構築物として調製され得る。例えば、アミノ酸脂質は、核酸薬物（例えば、調節性ＲＮＡもしくは干渉ＲＮＡ）に結合体化され得る。
アミノ酸脂質の例としては、以下の構造物が挙げられる：
ここでＲは、任意のアミノ酸側鎖である。
本開示の化合物および組成物は、可溶化もしくは官能化する基もしくは構造（ポリマー構造を含む）を組み込み得る。例えば、Ｒ．Ｌ．Ｄｕｎｎ ａｎｄ Ｒ．Ｍ．Ｏｔｔｅｎｂｒｉｔｅ，Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＡＣＳ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．４６９（１９９１）を参照のこと。アミノ酸脂質は、可溶性を増強するために（例えば、ジオールを結合するために、四級アンモニウムもしくは荷電した基を調製するために、ヒドロキシルもしくはアミン基（例えば、アルコール、ポリオール、もしくはポリエーテル）を結合するために、またはポリエチレンイミン、ポリエチレングリコールもしくはポリプロピレングリコールを結合するために）誘導体化され得る。結合されたポリマー成分（例えば、ポリエチレングリコール）の分子量は、任意の値（例えば、２００Ｄａ、３００Ｄａ、４００Ｄａ、５００Ｄａ、６００Ｄａ、７５０Ｄａ、１０００Ｄａ、１２５０Ｄａ、１５００Ｄａ、２０００Ｄａ、３０００Ｄａ、４０００Ｄａ、５０００Ｄａ、７５００Ｄａ、１０，０００Ｄａ、１５，０００Ｄａ、２０，０００Ｄａ、２５，０００Ｄａ、もしくは３０，０００Ｄａ以上）であり得る。例えば、ポリエチレングリコール鎖は、アミノ酸側鎖のアミノ基もしくは他の反応性基を介して結合され得る。
一般に、本明細書において使用される場合、一般的化学用語とは、別段特定されなければ、特定されたタイプのうちの全ての基（原子の任意の数およびタイプを有する基を含む）をいう。例えば、「アルケニル」とは、広義には、下記で定義されるように、２〜２２個の炭素原子を有するアルキルをいう一方で、（Ｃ１８：１）アルケニルとは、１８個の炭素原子および１個の二重結合を有するアルケニルをいう。
用語「アルキル」とは、本明細書において使用される場合、飽和、分枝もしくは非分枝の、置換されているかもしくは置換されていない、１〜２２個の炭素原子を含む脂肪族基をいう。この定義は、他の基（例えば、アルコキシ、アルカノイル、アラルキル、および以下に定義される他の基）のアルキル部分に適用される。用語「シクロアルキル」とは、本明細書において使用される場合、飽和の、置換されているかもしくは置換されていない、３〜１２個の炭素原子を含む環式アルキル基をいう。本明細書において使用される場合、用語「Ｃ（１−５）アルキル」とは、Ｃ（１）アルキル、Ｃ（２）アルキル、Ｃ（３）アルキル、Ｃ（４）アルキル、およびＣ（５）アルキルを含む。同様に、用語「Ｃ（３−２２）アルキル」とは、Ｃ（１）アルキル、Ｃ（２）アルキル、Ｃ（３）アルキル、Ｃ（４）アルキル、Ｃ（５）アルキル、Ｃ（６）アルキル、Ｃ（７）アルキル、Ｃ（８）アルキル、Ｃ（９）アルキル、Ｃ（１０）アルキル、Ｃ（１１）アルキル、Ｃ（１２）アルキル、Ｃ（１３）アルキル、Ｃ（１４）アルキル、Ｃ（１５）アルキル、Ｃ（１６）アルキル、Ｃ（１７）アルキル、Ｃ（１８）アルキル、Ｃ（１９）アルキル、Ｃ（２０）アルキル、Ｃ（２１）アルキル、およびＣ（２２）アルキルを含む。
用語「アルケニル」とは、本明細書において使用される場合、不飽和の、分枝もしくは非分枝の、置換されているかもしくは置換されていない、２〜２２個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有するアルキルもしくはシクロアルキルをいう。用語「アルキニル」とは、本明細書において使用される場合、不飽和の、分枝もしくは非分枝の、置換されているかもしくは置換されていない、２〜２２個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有するアルキルもしくはシクロアルキルをいう。
用語「アルコキシ」とは、本明細書において使用される場合、酸素原子に共有結合されたアルキル、シクロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基をいう。用語「アルカノイル」とは、本明細書において使用される場合、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキルをいい、これは、代わりに、「アシル」ともいわれ得る。用語「アルカノイルオキシ」とは、本明細書において使用される場合、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基をいう。用語「アルキルアミノ」とは、本明細書において使用される場合、基−ＮＲＲ’であって、ここでＲおよびＲ’は、各々、水素もしくはアルキルのいずれかであり、かつＲおよびＲ’のうちの少なくとも一方は、アルキルであるものをいう。アルキルアミノは、ピペリジノのような基を含み、ここでＲおよびＲ’は環を形成する。用語「アルキルアミノアルキル」とは、−アルキル−ＮＲＲ’をいう。
用語「アリール」とは、本明細書において使用される場合、各環中に４〜１２個の原子の任意の安定な単環式、二環式もしくは多環式の炭素環系であって、ここで少なくとも１個の環は、芳香族であるものをいう。アリールのいくつかの例としては、フェニル、ナフチル、テトラヒドロ−ナフチル、インダニル、およびビフェニルが挙げられる。アリール置換基が、二環式でありかつ一方の環が非芳香族である場合、結合は、上記芳香族環に対してであることが理解される。任意のアリールは、置換されていても、置換されていなくてもよい。
用語「ヘテロアリール」とは、本明細書において使用される場合、各環において４〜１２個の原子の任意の安定な単環式、二環式、もしくは多環式の炭素環系であって、ここで少なくとも一方の環が歩行族でありかつ酸素、窒素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含むものをいう。ヘテロアリールのいくつかの例としては、アクリジニル、キノキサリニル、ピラゾリル、インドリル、ベンゾトリアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、およびテトラヒドロキノリニルが挙げられる。ヘテロアリールとしては、窒素含有ヘテロアリールのＮ−オキシド誘導体が挙げられる。
用語「複素環」もしくは「ヘテロシクリル」とは、本明細書において使用される場合、５〜２２個の原子の芳香族もしくは非芳香族の環系であって、ここで上記環原子のうちの１〜４個が酸素、窒素、および硫黄から選択されるヘテロ原子であるものをいう。従って、複素環は、そのヘテロアリールまたはジヒドロもしくはテトラヒドロ（ｔｅｔｒａｔｈｙｄｒｏ）バージョンであり得る。
用語「アロイル」とは、本明細書において使用される場合、芳香族カルボン酸（例えば、置換された安息香酸）に由来するアリールラジカルをいう。用語「アラルキル」とは、本明細書において使用される場合、アルキル基に結合したアリール基（例えば、ベンジル基）をいう。
用語「カルボキシル」とは、本明細書において使用される場合、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨもしくは−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−の基を表す。用語「カルボニル」および「アシル」とは、本明細書において使用される場合、酸素原子が炭素原子に二重結合している基＞Ｃ＝Ｏをいう。用語「ヒドロキシル」とは、本明細書において使用される場合、−ＯＨもしくは−Ｏ−をいう。用語「ニトリル」もしくは「シアノ」とは、本明細書において使用される場合、−ＣＮをいう。用語「ハロゲン」もしくは「ハロ」とは、フルオロ（−Ｆ）、クロロ（−Ｃｌ）、ブロモ（−Ｂｒ）、およびヨード（−Ｉ）をいう。
用語「置換されている」とは、本明細書において使用される場合、１個以上の置換もしくは置換基を有する原子であって、上記置換もしくは置換基が同じであっても異なっていてもよく、かつ水素置換基を含み得るものに言及する。従って、用語、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ，アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アロイル、およびアラルキルとは、本明細書において使用される場合、置換されているバリエーションを含む基に言及する。置換されているバリエーションは、直鎖状の、分枝状の、および環式のバリエーション、ならびに上記基のうちの任意の炭素原子に結合された１個以上の水素を置換する置換基を有する基を含む。上記基のうちの炭素原子に結合され得る置換基としては、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルカノイルオキシ、アルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素環、アロイル、アラルキル、アシル、ヒドロキシル、シアノ、ハロ、ハロアルキル、アミノ、アミノアシル、アルキルアミノアシル、アシルオキシ、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、メルカプト、ニトロ、カルバミル、カルバモイル、および複素環が挙げられる。例えば、用語、エチルとしては、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨＦＣＨ３、−ＣＦ２ＣＨ３、−ＣＨＦＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦＣＨＦ２、−ＣＨＦＣＦ３、−ＣＦ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ２ＣＨＦ２、−ＣＦ２ＣＦ３、および上記の他のバリエーションが挙げられるが、これらに限定されない。一般に、置換基は、任意の原子もしくは原子の基でさらに置換され得る。
本発明のアミノ酸脂質もしくはその改変体は、当該分野で公知の方法によって合成され得る。
種々の有機基および保護基を調製するための方法は、当該分野で公知であり、それらの使用および改変は、一般に、当業者の能力の範囲内である。例えば、Ｓｔａｎｌｅｙ Ｒ．Ｓａｎｄｌｅｒ ａｎｄ Ｗｏｌｆ Ｋａｒｏ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ（１９８９）；Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９９６）；Ｌｅｒｏｙ Ｇ．Ｗａｄｅ，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ Ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８０）を参照のこと；保護基の例は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第３版．１９９１）において見いだされる。
十分に塩基性である本発明のペプチドおよびタンパク質組成物の薬学的に受容可能な塩は、例えば、無機酸もしくは有機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、クロロスルホン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、もしくは酒石酸）、およびアルカンスルホン酸もしくはアレーンスルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、クロロベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびカンファースルホン酸）との酸付加塩であり得る。
十分に酸性である本発明の終えもしくはタンパク質組成物の薬学的に受容可能な塩は、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩もしくはカリウム塩）、またはアルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩もしくはマグネシウム塩）、または亜鉛塩もしくはマンガン塩、またはアンモニウム塩もしくは生理学的に受容可能なカチオンを提供する有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン、ピペリジン、モルホリンもしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンとの塩）であり得、そしてアミノ酸の塩（例えば、アルギネート）、および有機酸（例えば、グルクロン酸もしくはガラクツロン酸）との塩を含む。例えば、Ｂｅｒｇｅら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９，１９７７を参照のこと。
他の成分の中でも干渉ＲＮＡ薬剤と、脂質、ペプチド、もしくはタンパク質とを含む本開示の組成物の塩もしくは薬学的に受容可能な塩は、上記干渉ＲＮＡ薬剤と、上記脂質、ペプチド、もしくはタンパク質との塩複合体を含み得る。上記干渉ＲＮＡ薬剤と、上記脂質、ペプチド、もしくはタンパク質との塩複合体は、干渉ＲＮＡ薬剤の薬学的に受容可能な塩から、または上記脂質、ペプチド、もしくはタンパク質の薬学的に受容可能な塩から、形成され得る。
本開示のいくつかの化合物は、上記化合物を塩基付加塩もしくは酸付加塩のいずれかへと作製させ得る塩基性官能基および酸性官能基の両方を含み得る。
本発明のいくつかの化合物、ペプチドおよび／もしくはタンパク質組成物は、１個以上のキラル中心および／もしくは幾何異性中心（Ｅ−異性体およびＺ−異性体）を有し得、そして本発明は、全てのこのような光学異性体、ジアステレオマー、幾何異性体、およびこれらの混合物を包含することが理解されるべきである。
本発明は、本明細書で開示される化合物、ペプチドおよび／もしくはタンパク質組成物の任意のおよび全ての、互変異形態、溶解しているかもしくは溶解していない形態、水和しているかもしくは水和していない形態、ならびに任意の原子同位体形態を包含する。
（さらなる送達脂質）
本発明のいくつかの局面において、アミノ酸脂質およびさらなる非アミノ酸脂質は、調節性ＲＮＡ成分、ＲＮＡアンタゴニスト、干渉ＲＮＡ、もしくは核酸の送達および投与のために使用され得る。より具体的には、本発明の組成物は、非アミノ酸カチオン性脂質および非アミノ酸非カチオン性脂質とともに、１種以上のアミノ酸脂質を含み得る。
非アミノ酸カチオン性脂質は、モノカチオン性であってもよいし、ポリカチオン性であってもよい。いくつかの非アミノ酸カチオン性脂質は、中性脂質および特定のｐＨにおいてほぼゼロの正味の電荷を有する脂質（例えば、双性イオン性脂質）を含む。非アミノ酸非カチオン性脂質はまた、アニオン性脂質を含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、ＲＮＡ成分と、アミノ酸脂質および非アミノ酸カチオン性脂質との混合物もしくは複合体である。いくつかの実施形態において、組成物は、１種以上の調節性ＲＮＡもしくは干渉ＲＮＡ薬剤と、１種以上のアミノ酸脂質および１種以上の非アミノ酸カチオン性脂質との混合物もしくは複合体であり得る。
本開示の化合物および組成物は、種々の標的化リガンドもしくは薬剤と混合もしくは結合されて、生物の細胞、組織、器官もしくは領域へと、活性薬剤を送達し得る。標的化剤の例としては、抗体、レセプターのリガンド、ペプチド、タンパク質、レクチン、（ポリ）サッカリド、ガラクトース、マンノース、シクロデキストリン、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アプタマー、およびポリアミノ酸を含む。
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ビス（ジミリストイルオキシ（ｄｉｍｙｒｓｔｏｙｌｏｘｙ））−３−３−（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＭＴＡＰ）；１，２−ジミリスチルオキシ（ｄｉｍｙｒｉｓｔｙｌｏｘｙ）プロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）；ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）；３−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）；３β−［Ｎ’，Ｎ’−ジグアニジノエチル−アミノエタン）カルバモイルコレステロール（ＢＧＴＣ）；２−（２−（３−（ビス（３−アミノプロピル）アミノ）プロピルアミノ）アセトアミド）−Ｎ，Ｎ−ジテトラデシルアセトアミド（ＲＰＲ２０９１２０）；これらの薬学的に受容可能な塩、およびこれらの混合物が挙げられる。
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、１，２−ジアルカノイル（ｄｉａｌｋｅｎｏｙｌ）−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＥＰＣ）（例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、これらの薬学的に受容可能な塩、およびこれらの混合物が挙げられる。
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、１，２−ジステアリルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎジメチル−３−アミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、および１，２−ジリノレニルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）が挙げられる。
非アミノ酸ポリカチオン性脂質の例としては、テトラメチルテトラパルミトイルスペルミン（ＴＭＴＰＳ）、テトラメチルテトラオレイルスペルミン（ＴＭＴＯＳ）、テトラメチルテトララウリルスペルミン（ＴＭＴＬＳ）、テトラメチルテトラミリスチルスペルミン（ＴＭＴＭＳ）、テトラメチルジオレイルスペルミン（ＴＭＤＯＳ）、これらの薬学的に受容可能な塩、およびこれらの混合物が挙げられる。
非アミノ酸ポリカチオン性脂質の例としては、２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジオクタデシルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ）；２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（Ｚ）−オクタデカ−９−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ−９−エン）；２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＬｉｎＧＳ）；３−β−（Ｎ４−（Ｎ１，Ｎ８−ジカルボベンゾキシスペルミジン）カルバモイル）コレステロール（ＧＬ−６７）；（９Ｚ，９’Ｚ）−２−（２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）ペンタンアミド）プロパン−１，３−ジイル−ジオクタデカ−９−エノエート（ＤＯＳＰＥＲ）；２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウム（ｐｒｏｐａｎａｍｉｎｉｕｍ）トリフルオロ−アセテート（ＤＯＳＰＡ）；これらの薬学的に受容可能な塩、およびこれらの混合物が挙げられる。
非アミノ酸カチオン性脂質の例としては、ＤＳ４０４−２８ ＢＧＴＣ（ＣＡＳ １８２０５６−０６−０）、ＤＯＳＰＥＲ（ＣＡＳ １７８５３２−９２−８）、ＧＬ−６７（１７９０７５−３０−０）、ＲＰＲ２０９１２０（ＣＡＳ ４３３２９２−１３−８）、ＤＯＧＳ（１２０５０−７７−７）、ＤＯＧＳ（９−ｅｎ，Ｃ１８：１）、ＤＬｉｎＧＳ（Ｃ１８：２）、およびＤＯＴＭＡ（１０４１６２−４８−３）が挙げられる。
非アミノ酸カチオン性脂質の例は、米国特許第４，８９７，３５５号；同第５，２７９，８３３号；同第６，７３３，７７７号；同第６，３７６，２４８号；同第５，７３６，３９２号；同第５，３３４，７６１号；同第５，４５９，１２７号；同第２００５／００６４５９５号；同第５，２０８，０３６号；同第５，２６４，６１８号；同第５，２７９，８３３号；同第５，２８３，１８５号；同第５，７５３，６１３号；および同第５，７８５，９９２号に記載されている。
いくつかの実施形態において、上記組成物は、ＲＮＡ成分と、アミノ酸脂質および非アミノ酸非カチオン性脂質との混合物もしくは複合体である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、１種以上のＲＮＡ成分と、１種以上のアミノ酸脂質および１種以上の非アミノ酸非カチオン性脂質との混合物もしくは複合体である。
非アミノ酸非カチオン性脂質としては、中性、双イオン性、およびアニオン性の脂質が挙げられる。従って、非カチオン性の双イオン性脂質は、カチオン性のヘッド基を含み得る。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＬＧ）；１，２−ジミルストイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＭＧ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＳＧ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＬＰＡ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＭＰＡ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＰＰＡ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ナトリウム塩；ＤＳＰＡ）；１，２−ジアラキドニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−０−エチル−３−ホスホコリン（クロリドもしくはトリフレート；ＤＰｅＰＣ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＬＰＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＭＰＧ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（アンモニウム塩；ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＤＰＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロ（ナトリウム塩；ＤＳＰＧ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（ナトリウム塩；ＤＳＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ナトリウム塩；ＤＰＰＳ）；１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＬｉｎｏＰＣ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ナトリウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（アンモニウム塩；ＰＯＰＧ）；１−パルミトイル−２−４ｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；１−ステアロイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；およびこれらの混合物が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ポリマー化合物およびポリマー−脂質結合体もしくはポリマー脂質（例えば、３００、５００、１０００、１５００、２０００、３５００、もしくは５０００の分子量のＰＥＧ領域を有するｐｅｇ化脂質（ポリエチレングリコール、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−２０００）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−５０００）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＭＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール ２０００）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール ５０００）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＰＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール ７５０）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−７５０）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール ２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−２０００）；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール ５０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ナトリウム塩；ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ−５０００）；コレステリル硫酸ナトリウム（ＳＣＳ）；これらの薬学的に受容可能な塩、およびこれらの混合物が挙げられる））が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ポリマー脂質（例えば、ＤＯＰＥ−ＰＥＧ、ＤＬＰＥ−ＰＥＧ、ＤＤＰＥ−ＰＥＧ ＤＬｉｎＰＥ−ＰＥＧ、およびジアシルグリセロール−ＰＥＧ−２０００もしくはジアシルグリセロール−５０００）が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ポリマー脂質（例えば、複数分枝のｐｅｇ化化合物（例えば、ＤＳＰＥ−ＰＴＥ０２０およびＤＳＰＥ−ＡＭ０５３０Ｋ））が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ポリマー脂質（例えば、ＤＳＰＥ−ＰＧ８Ｇポリグリセリン脂質）が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジフィタノイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰｈＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、および１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰｈＰＣ）が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、コレステロール、ステロール、およびステロイド（例えば、ゴナン、エストラン、アンドロスタン、プラグナン、コラン、コレスタン、エルゴスタン、カンペスタン、ポリフェラスタン、スチグマスタン、ゴルゴスタン、ラノスタン、シクロアルタン、ならびに前述のうちのいずれかのステロールもしくは動物ステロール誘導体、ならびにこれらの生物学的中間体および前駆体が挙げられ、これらとしては、例えば、コレステロール、ラノステロール、スチグマステロール、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステノール、デスモテロール、７−デヒドロコレステロール、ならびにこれらの混合物もしくは誘導体が挙げられ得る。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ｐｅｇ化コレステロール、およびコレスタン３−オキソ（Ｃ１−２２アシル）−誘導体（例えば、コレステリルアセテート、コレステリルアラキドネート、コレステリルブチレート、コレステリルヘキサノエート、コレステリルカプリレート、コレステリル ｎ−デカノエート、コレステリルドデカノエート、コレステリルミリステート、コレステリルパルミテート、コレステリルベヘネート、コレステリルステアレート、コレステリルネルボネート、コレステリルペラルゴネート、コレステリルｎ−バレレート、コレステリルオレエート、コレステリルエライデート、コレステリルエルケート、コレステリルヘプタノエート、コレステリルリノレライデート、コレステリルリノレエート、ならびにこれらの混合物および誘導体が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、植物ステロール（フィトステロール、β−シトステロール、カンペステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、δ−７−スチグマステロール、δ−７−アベナステロール、ならびにこれらの混合物および誘導体が挙げられる）に由来する化合物が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、胆汁酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、グリココール酸、タウ路コール酸、デオキシコール酸、リトコール酸、メチル−リトコール酸、ならびにこれらの混合物および誘導体が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ステロイド（グルココルチコイド、コルチゾール、ヒドロコルチゾン、コルチコステロン、Δ５−プレグネノロン、プロゲステロン、デオキシコルチコステロン、１７−ＯＨ−プレグネノロン、１７−ＯＨ−プロゲステロン、１１−ジオキシコルチゾール、デヒドロエピアンドロステロン、硫酸デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステンジオン、アルドステロン、１８−ヒドロキシコルチコステロン、テトラヒドロコルチゾール、テトラヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾン、６α−メチルプレドニゾン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｉｓｏｎｅ）、９α−フルオロ−１６α−ヒドロキシプレドニゾロン、９α−フルオロ−１６α−メチルプレドニゾロン、９α−フルオロコルチゾール、ならびにこれらの混合物および誘導体が挙げられる）に由来する化合物が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ステロイド（アンドロゲン（ａｄｒｏｇｅｎ）、テストステロン、ジヒドロテストステロン、アンドロステンジオール、アンドロステンジオン、アンドロステンジオン、３α，５α−アンドロスタンジオール、ならびにこれらの混合物および誘導体が挙げられる）に由来する化合物が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ステロイド（エストロゲン、エストリオール、エストロン、エストラジオール、ならびにこれらの混合物および誘導体が挙げられる）に由来する化合物が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、ルミステロールおよびビタミンＤ化合物に由来する化合物が挙げられる。
非アミノ酸非カチオン性脂質の例としては、Ｃ１０：０〜Ｃ２２：６に及ぶテイルを有する脂質（例えば、ＤＤＰＥ（Ｃ１０：０）（ＣＡＳ ２５３６８５−２７−７）、ＤＬＰＥ（Ｃ１２：０）（ＣＡＳ ５９７５２−５７−７）、ＤＳＰＥ（Ｃ１８：０）（ＣＡＳ １０６９−７９−０）、ＤＯＰＥ（Ｃ１８：１）（ＣＡＳ ４００４−０５−１）、ＤＬｉｎＰＥ（Ｃ１８：２）（ＣＡＳ ２０７０７−７１−５）、ＤＬｅｎＰＥ（Ｃ１８：３）（ＣＡＳ ３４８１３−４０−６）、ＤＡＲＡＰＥ（Ｃ２０：４）（ＣＡＳ ５６３４−８６−６）、ＤＤＨＡＰＥ（Ｃ２２：６）（ＣＡＳ １２３２８４−８１−１）、ＤＰｈＰＥ（１６：０［（ＣＨ３）４］）（ＣＡＳ ２０１０３６−１６−０））が挙げられる。
非アミノ酸アニオン性脂質の例としては、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル−ＤＬ−グリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルイノシトール（ｐｉ（４）ｐ，ｐｉ（４，５）ｐ２）、カルジオリピン（ナトリウム塩）、リゾホスファチド、水素化リン脂質、スフィンゴ脂質、ガングリオシド、フィトスフィンゴシン、スフィンガニン、これらの薬学的に受容可能な塩、およびこれらの混合物が挙げられる。
（調節性ＲＮＡおよびＲＮＡ干渉のための使用）
いくつかの局面において、本開示は、一般に、調節性ＲＮＡおよびＲＮＡ干渉、アンチセンス治療、ならびにＲＮＡ治療剤の送達の分野に関する。より具体的には、本発明は、リボ核酸のための組成物および処方物、ならびにこれらの医薬のための使用および治療剤としての送達のための使用に関する。本発明は、一般に、細胞における遺伝子発現の遺伝子特異的阻害のためのＲＮＡ干渉において、または疾患状態もしくは表現型を変化させるための哺乳動物において、リボ核酸を使用するための方法に関する。
ＲＮＡ干渉とは、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）といわれる二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によって媒介される配列特異的転写後遺伝子抑制の方法に関する。Ｆｉｒｅら，Ｎａｔｕｒｅ ３９１：８０６，１９９８およびＨａｍｉｌｔｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９５０−９５１，１９９９を参照のこと。ＲＮＡｉは、多様な叢（ｆｌｏｒａ）および種族（ｐｈｙｌａ）によって共有され、そして外来遺伝子の発現に対する、進化的に保存された細胞性防御機構であると考えられる。Ｆｉｒｅら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１５：３５８，１９９９を参照のこと。
ＲＮＡｉは、従って、小さな非コードＲＮＡを使用して、遺伝子発現を抑制（ｓｉｌｅｎｃｅ）する、遍在性の内因性機構である。Ｄｙｋｘｈｏｏｒｎ，Ｄ．Ｍ．およびＪ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．８：３７７−４０２，２００６を参照のこと。ＲＮＡｉは、細胞死、分化、および発生に関与する重要な遺伝子を調節し得る。ＲＮＡｉはまた、トランスポゾンおよびウイルスによってコードされる遺伝的要素を侵入させないようにゲノムを防御し得る。ｓｉＲＮＡが細胞に導入される場合、上記ｓｉＲＮＡは、上記内因性ＲＮＡｉ機構に結合して、相補的配列を含むｍＲＮＡの発現を高い特異性で破壊する。任意の疾患原因遺伝子および任意の細胞型もしくは組織は、潜在的に標的にされ得る。この技術は、遺伝子機能分析、ならびに薬物標的発見および確認のために迅速に利用されてきた。ＲＮＡｉの利用はまた、治療に非常に有望であるが、ｓｉＲＮＡをインビボで細胞へ導入することには、重大な障害が未だ残っている。
ＲＮＡｉの機構は、未だ完全には特徴づけられていないものの、標的ｍＲＮＡの切断を介している。上記ＲＮＡｉ応答は、ＲＮＡ誘導性抑制複合体（ＲＩＳＣ）として公知であるエンドヌクレアーゼ複合体を要し、このエンドヌクレアーゼ複合体は、上記ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に対して相補的な一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。上記標的ＲＮＡの切断は、上記ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に対して相補的な領域の中央部で起こる（Ｅｌｂａｓｈｉｒら，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５：１８８，２００１）。
ＲＮＡｉを行うための１つの方法は、細胞においてｓｉＲＮＡを導入するかまたは発現させることである。もう１つの方法は、ダイサーといわれる内因性リボヌクレアーゼＩＩＩ酵素を使用することである。ダイサーの１つの活動は、長いｄｓＲＮＡをｓｉＲＮＡへと処理することである。Ｈａｍｉｌｔｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９５０−９５１，１９９９；Ｂｅｒｓｔｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ ４０９：３６３，２００１を参照のこと。ダイサーから得られたｓｉＲＮＡは、代表的には、全体的な長さが約２１〜２３ヌクレオチドであり、約１９塩基対が二重鎖になっている。Ｈａｍｉｌｔｏｎら，前出；Ｅｌｂａｓｈｉｒら，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５：１８８，２００１を参照のこと。本質的に、長いｄｓＲＮＡは、ｓｉＲＮＡの前駆体として細胞へと導入され得る。
本発明は、脂質、アミノ酸脂質、および中性もしくは合成のポリマーを含む種々の成分と組み合わせて、調節性ＲＮＡ、干渉核酸もしくはその前駆体を含む、ある範囲の組成物、処方物および方法を提供する。
用語「ｄｓＲＮＡ」とは、本明細書において使用される場合、例えば、ＲＮＡ干渉（「ＲＮＡｉ」）もしくは配列特異的様式で遺伝子抑制を促進することによって、少なくとも１つのリボヌクレオチド分子を含みかつ遺伝子発現を阻害もしくはダウンレギュレートし得る任意の核酸分子をいう。本開示のｄｓＲＮＡは、ＲＮＡｉによる遺伝子抑制を媒介するために、ダイサーのためのまたはＲＩＳＣと会合するための適切な基質であり得る。上記ｄｓＲＮＡの一方のもしくは両方の鎖は、末端ホスフェート基（例えば、５’−ホスフェートまたは５’，３’−ジホスフェート）をさらに含み得る。本明細書において使用される場合、ｄｓＲＮＡ分子は、少なくとも１つのリボヌクレオチドに加えて、置換、化学的に改変されたヌクレオシド、および非ヌクレオチドをさらに含み得る。特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、上記ヌクレオチド位置の最大１００％までのリボヌクレオチドを含む。
ｄｓＲＮＡ分子の例は、例えば、米国特許出願第１１／６８１，７２５号、米国特許第７，０２２，８２８号および同第７，０３４，００９号、ならびにＰＣＴ国際出願公開ＷＯ／２００３／０７０８９７において見いだされ得る。
改変ヌクレオシドの例は、米国特許第６，４０３，５６６、同第６，５０９，３２０号、同第６，４７９，４６３号、同第６，１９１，２６６号、同第６，０８３，４８２号、同第５，７１２，３７８号、および同第５，６８１，９４０号において見いだされる。改変ヌクレオシドは、以下の構造を有し得る：
ここでＸは、ＯもしくはＣＨ２であり、ＹはＯであり、そしてＺはＣＨ２であり；Ｒ１は、アデニン、シトシン、グアニン、ヒポキサンチン、ウラシル、チミン、および複素環の群から選択され、ここで上記複素環は、置換された１，３−ジアジン、置換されていない１，３−ジアジン、および置換されていない７Ｈ イミダゾ［４，５］１，３ジアジンの群から選択され；そしてＲ２、Ｒ３は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＤＭＴＯ、ＴＢＤＭＳＯ、ＢｎＯ、ＴＨＰＯ、ＡｃＯ、ＢｚＯ、ＯＰ（ＮｉＰｒ２）Ｏ（ＣＨ２）２ＣＮ、ＯＰＯ３ Ｈ、ジホスフェート、およびトリホスフェートの群から選択され、ここでＲ２およびＲ３は一緒になって、ＰｈＣＨＯ２、ＴＩＰＤＳＯ２もしくはＤＴＢＳＯ２であり得る。本明細書において使用される場合、略語「Ａｃ」とは、アセチルをいう；略語「Ｂｎ」とは、ベンジルをいう；略語「Ｂｚ」とは、ベンゾイルをいう；略語「ＤＭＴ」とは、ジメトキシトリチルをいう；略語「ＴＨＰ」とは、テトラヒドロピラニルをいう；略語「ＴＢＤＭＳ」とは、ｔ−ブチルジメチルシリルをいう；略語「ＴＩＰＤＳ」とは、テトライソプロピルジシリルをいう；そして略語「ＤＴＢＳ」とは、ジ（ｔ−ブチル）シリルをいう。
さらに、本明細書において使用される場合、用語「ｄｓＲＮＡ」、「ＲＮＡｉ誘導剤」、および「ＲＮＡｉ薬剤」とは、配列特異的ＲＮＡｉを誘導し得る核酸分子（ｍｅｒｏｄｕｐｌｅｘ ＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）、ニック形成（ｎｉｃｋｅｄ）ｄｓＲＮＡ（ｎｄｓＲＮＡ）、ギャップ形成（ｇａｐｐｅｄ）ｄｓＲＮＡ（ｇｄｓＲＮＡ）、短い干渉核酸（ｓｉＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、短い干渉オリゴヌクレオチド、短い干渉置換オリゴヌクレオチド、短い干渉改変オリゴヌクレオチド、化学改変ｄｓＲＮＡ、および転写後遺伝子抑制ＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）、ならびに上記のうちのいずれかの前駆体が挙げられる）を媒介し得る核酸分子を記載するために使用される他の用語と同義であることを意味する。
用語「大きな二本鎖（ｄｓ） ＲＮＡ」とは、約４０塩基対（ｂｐ）〜約１００ｂｐ以上、特に、約３００ｂｐ〜約５００ｂｐまでより長い任意の二本鎖ＲＮＡをいう。大きなｄｓＲＮＡの配列は、ｍＲＮＡのセグメントもしくはｍＲＮＡ全体を表し得る。二本鎖構造は、自己相補性核酸分子によって、もしくは２つ以上の別個の相補的核酸分子鎖のアニーリングによって形成され得る。
いくつかの局面において、ｄｓＲＮＡは、第１鎖（アンチセンス）および第２鎖（センス）を含む２つの別個のオリゴヌクレオチドを含み、ここで上記アンチセンス鎖およびセンス鎖は、自己相補的（すなわち、各鎖は、二重鎖もしくは二本鎖構造を形成する他方の鎖および２つの別個の鎖中のヌクレオチド配列に対して相補的であるヌクレオチド配列を含む）であり、例えば、ここで上記二本鎖領域は、約１５〜約２４塩基対もしくは約２６〜約４０塩基対であり；上記アンチセンス鎖は、標的核酸分子もしくはその一部分（例えば、ヒトｍＲＮＡ）におけるヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む；そして上記センス鎖は、上記標的核酸配列もしくはその一部分に対応する（すなわち、相同な）ヌクレオチド配列（例えば、約１５〜約２５ヌクレオチドもしくは約２６〜約４０ヌクレオチドのセンス鎖は、上記標的核酸もしくはその一部分に対応する）を含む。
いくつかの実施形態において、上記ｄｓＲＮＡは、単一のオリゴヌクレオチドから組み立てられ得る。ここで上記ｄｓＲＮＡの自己相補的センス鎖およびアンチセンス鎖は、核酸ベースのリンカーもしくは非核酸ベースのリンカーによって一緒に連結される。いくつかの実施形態において、上記ｄｓＲＮＡ分子の第１（アンチセンス）鎖および第２（センス）鎖は、本明細書において記載されかつ当該分野で公知のヌクレオチドリンカーもしくは非ヌクレオチドリンカーによって共有結合される。いくつかの実施形態において、第１のｄｓＲＮＡ分子は、当該分野で公知のヌクレオチドリンカーもしくは非ヌクレオチドリンカーによって、少なくとも１つの第２のｄｓＲＮＡ分子に共有結合され、ここで上記第１のｄｓＲＮＡ分子は、同じであるかもしくは異なり得る複数の他のｄｓＲＮＡ分子、またはこれらの任意の組み合わせに連結され得る。いくつかの実施形態において、上記連結されたｄｓＲＮＡは、上記連結されたｄｓＲＮＡとｍｅｒｏｄｕｐｌｅｘを形成する第３の鎖を含み得る。
いくつかの点において、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡ分子は、３本以上の鎖（例えば、「Ａ」（第１のもしくはアンチセンス）鎖、「Ｓ１」（第２の）鎖、および「Ｓ２」（第３の）鎖、ここで上記「Ｓ１」鎖および「Ｓ２」鎖は、上記「Ａ」鎖の重複しない領域と相補的でありかつ塩基対（ｂｐ）を形成する（例えば、ｍｄＲＮＡは、Ａ：Ｓ１Ｓ２の形態を有し得る））を有するｍｅｒｏｄｕｐｌｅｘ ＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）を形成する。上記Ｓ１、Ｓ２、もしくはより多くの鎖は一緒に、上記「Ａ」鎖に対するセンス鎖を本質的に含む。上記「Ｓ１」鎖および「Ａ」鎖のアニーリングによって形成される上記二本鎖領域は、上記「Ｓ２」鎖および「Ａ」鎖のアニーリングによって形成される二本鎖慮頤右機と異なりかつ重複しない。ｍｄＲＮＡ分子は、「ギャップ形成」分子であり、これは、０ヌクレオチドから最大約１０ヌクレオチドまでの範囲に及ぶ「ギャップ」を意味する。いくつかの実施形態において、上記Ａ：Ｓ１二重鎖は、上記Ａ：Ｓ１二重鎖と上記Ａ：Ｓ２二重鎖との間に位置する、上記「Ａ」鎖において少なくとも１つの対形成していないヌクレオチド（最大約１０個までの対形成していないヌクレオチド）から生じ、上記「Ａ」鎖、「Ｓ１」鎖、もしくは「Ｓ２」鎖のうちの１対状の３’末端において任意の１つ以上の対形成していないヌクレオチドとは異なるるギャップによって、上記Ａ：Ｓ２二重鎖から分離される。いくつかの実施形態において、上記Ａ：Ｓ１二重鎖は、上記Ａ：Ｂ２二重鎖から、上記Ａ：Ｓ１二重鎖と、上記Ａ：Ｓ２二重鎖との間でゼロヌクレオチドのギャップ（すなわち、２つのヌクレオチドの間のホスホジエステル結合のみが上記ポリヌクレオチド分子において破壊されているかもしくは失われているニック）によって隔てられている（これはまた、ニック形成ｄｓＲＮＡ（ｎｄｓＲＮＡ）とも言及され得る）。例えば、Ａ：Ｓ１Ｓ２は、合計約１４塩基対〜約４０塩基対を合わせた少なくとも２つの二本鎖領域を有するｄｓＲＮＡから構成され得、上記二本鎖領域は、約０〜約１０ヌクレオチド（必要に応じて、平滑末端を有する）のギャップによって分離されるか、またはＡ：Ｓ１Ｓ２は、最大１０個までのヌクレオチドのギャップによって分離された少なくとも２つの二本鎖領域を有するｄｓＲＮＡを含み得、ここで上記二本鎖領域のうちの少なくとも一方は、約５塩基対〜１３塩基対を含む。
本明細書において記載されるように、３本以上の鎖を含むｄｓＲＮＡ分子は、「ｍｅｒｏｄｕｐｌｅｘ」ＲＮＡ（ｍｄＲＮＡ）と言及され得る。ｍｄＲＮＡ分子の例は、米国仮特許出願第６０／９３４，９３０号および同第６０／９７３，３９８号において見いだされ得る。
ｄｓＲＮＡもしくは大きなｄｓＲＮＡは、置換もしくは改変を含み得、ここで上記置換もしくは改変は、ホスフェート骨格結合、糖、塩基、もしくはヌクレオシドにおいて存在し得る。このようなヌクレオシド置換は、天然の標準でないヌクレオシド（例えば、５−メチルウリジンもしくは５−メチルシチジンもしくは２−チオリボチミジン）を含み得、このような骨格、糖、もしくはヌクレオシド改変は、アルキルもしくはヘテロ原子置換または付加（例えば、メチル、アルコキシアルキル、ハロゲン、窒素もしくは硫黄）、または当該分野で公知の他の改変を含み得る。
さらに、本明細書において使用される場合、用語「ＲＮＡｉ」とは、配列特異的ＲＮＡ干渉（例えば、転写後遺伝子抑制、翻訳阻害、もしくはエピジェネティクス）を記載するために使用される他の用語と等価であることを意味する。例えば、本開示のｄｓＲＮＡ分子は、転写後レベルもしくは転写前レベルまたはこれらの任意の組み合わせにおいて、遺伝子をエピジェネティクス的に（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ）抑制するために使用され得る。
いくつかの局面において、本発明は、１種以上の送達成分とともに、１種以上の遺伝子もしくは標的転写物に対して標的化される１つ以上のＲＮＡｉ誘導薬剤を含む組成物を提供する。送達成分の例としては、脂質、ペプチド、ポリマー、ポリマー脂質、およびこれらの結合体が挙げられる。
本開示の組成物および処方物は、インタクトな哺乳動物被験体（ヒトを含む）における細胞へのＲＮＡｉ誘導実体（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｄＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、もしくはＲＮＡｉ誘導ベクター）の送達のために使用され得、そしてまた、培養物中の細胞へのこれら薬剤の送達のために使用され得る。
本開示はまた、哺乳動物の身体内の細胞、器官および組織への、１種以上のＲＮＡ誘導薬剤もしくは実体の送達のための方法を提供する。いくつかの点において、ＲＮＡｉ誘導実体を含む組成物は、身体内に輸送されるべき種々の経路によって導入され得、そして標的転写物の発現が変えられる１つ以上の器官もしくは組織における細胞によって取り込まれ得る。
一般に、本開示は、種々の異所性のプロセスによって特徴づけられる疾患もしくは障害を予防および処置するために有用な治療剤であるＲＮＡ誘導薬剤を包含する。例えば、哺乳動物に感染するウイルスは、宿主細胞の細胞性機構を管理することによって、複製し得る。例えば、Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）を参照のこと。従って、ｄｓＲＮＡは、ウイルス生成もしくは複製を制御するウイルス経路を破壊するために有用である。
本開示は、標的ウイルスの系統に対して広いスペクトルの効力を有する１種以上の治療的ＲＮＡ誘導薬剤を使用することによって、被験体におけるウイルス感染を処置もしくは予防するための方法を包含する。本発明のＲＮＡ誘導薬剤は、公知の改変系統もしくはウイルスの改変体におけるウイルス遺伝子の配列に標的化去れ得、これら改変体の標的化されたウイルス遺伝子の配列特異的遺伝子抑制を示し得る。例えば、ＲＮＡ誘導薬剤は、インフルエンザの季節性系統、およびインフルエンザの改変系統に対して標的化され得、そしてこれらに対する効力を示し得る。
本開示の組成物および処方物は、インビトロで、種々の細胞へ薬物因子もしくは生物学的に活性な薬剤を送達するために使用され得る。インビトロ送達が包含される細胞の例としては、上皮細胞（例えば、Ａ５４９）、不死化細胞株（例えば、ＨｅＬａ）、肝癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、ラット神経膠肉腫細胞（例えば、９Ｌ／ＬａｃＺ）、ヒト単球（例えば、ＴＨＰ−１）、Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、種々の線維芽細胞株、およびとりわけ、種々の血清の存在もしくは非存在下で培養されている初代細胞が挙げられる。
本開示の組成物および処方物は、インビトロで、種々の細胞、組織もしくは器官に薬物因子もしくは生物学的に活性な薬剤を送達するために使用され得る。インビボで薬剤を送達するためのモダリティーとしては、局所経路、経腸経路、および非経口経路が挙げられる。薬剤をインビボで送達するためのモダリティーの例としては、粒子もしくは小滴の吸入、経鼻液滴もしくは経鼻−咽頭（ｐｈａｒｎｇｙｌ）液滴の送達、粒子、または懸濁物、経皮的および経粘膜経路、ならびに筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、心臓内、鞘内、骨内、腹腔内、および硬膜外経路による注射もしくは注入が挙げられる。
いくつかの実施形態において、薬剤は、哺乳動物被験体に由来する細胞、組織もしくは器官への直接曝露によって、エキソビボで投与され得る。
本開示の組成物もしくは処方物を使用して送達されるべき薬物因子もしくは生物学的に活性な薬剤は、任意の形態（例えば、純粋な形態、結晶形態、固体形態、ナノ粒子、濃縮形態、複合体化形態、もしくは結合体化形態が挙げられる）において見いだされ得る。
本発明はまた、哺乳動物の身体内の器官および組織への１種以上のＲＮＡｉ誘導実体の送達のための方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉ誘導実体、１種以上のアミノ酸脂質、および１種以上のさらなる脂質成分を含む組成物は、種々の経路によって導入されて、上記身体内に輸送されかつ１種以上の器官もしくは組織中の細胞によって取り込まれ、ここで標的転写物の発現が、変化させられる。
本開示は、核酸および遺伝子抑制ＲＮＡの治療的送達に有用な種々の脂質を含む薬学的に受容可能な核酸組成物を提供する。特に、本発明は、標的核酸配列の翻訳もしくは遺伝子の発現を低下させるか、ダウンレギュレートするか、または抑制するために、ｄｓＲＮＡｓのインビトロおよびインビボでの送達のための組成物および方法を提供する。これら組成物および方法は、哺乳動物における疾患の予防および／もしくは処置のために使用され得る。本発明の例示的方法において、リボ核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ）は、細胞もしくは被験体（例えば、哺乳動物）へ投与され得る組成物を処方するために、アミノ酸脂質と接触させられる。いくつかの実施形態において、本発明は、核酸含有組成物と、細胞とを接触させることによって、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡを細胞内に送達するための方法を提供する。
例示的実施形態において、本発明は、アミノ酸脂質、およびポリマー脂質と混合もしくは複合体化されて、核酸分子（例えば、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、もしくは短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））の細胞内送達を増強する組成物を提供する、上記核酸分子を含む組成物を包含する。いくつかの実施形態において、本発明の送達組成物は、ｄｓＲＮＡおよび１つ、２つもしくはそれ以上のアミノ酸脂質を含み得、このアミノ酸脂質は、カチオン性であってもよいし、非カチオン性であってもよい。いくつかのバリエーションにおいて、送達組成物は、ｄｓＲＮＡ、アミノ酸脂質、および１種以上のポリマー脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、送達組成物は、ｄｓＲＮＡ、アミノ酸脂質、１種以上のさらなる脂質、および１種以上のポリマー脂質を含み得る。本発明の組成物は、干渉ＲＮＡ薬剤としてｄｓＲＮＡを組み込み得る安定な粒子を形成し得る。本発明の組成物および処方物は、さらなる送達増強成分もしくは賦形剤を含み得る。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約５ｎｍ〜約４００ｎｍの直径を有する安定なＲＮＡ−脂質粒子を含む。いくつかの実施形態において、上記粒子は、約１０ｎｍ〜約３００ｎｍの均一な直径を有し得る。いくつかの実施形態において、上記粒子は、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍの均一な直径を有し得る。
本発明の例示的な組成物において、二本鎖ＲＮＡは、アミノ酸脂質と混合もしくは複合体化されて、標的細胞と裸のｄｓＲＮＡとを接触させることに比較して、上記ｄｓＲＮＡの細胞内送達を増強する組成物を形成し得る。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１種以上のアミノ酸脂質を含み得、上記アミノ酸脂質は、脂質および送達増強成分（任意のポリマー成分を含むが、上記ＲＮＡ成分は含まない）の総量の約０．５％〜約７０％（ｍｏｌ％）である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約１０％〜約５５％の１種以上のアミノ酸脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約１５％〜約３５％の１種以上のアミノ酸脂質を含み得る。
特定の実施形態において、本発明の組成物は、１種以上の非アミノ酸非カチオン性脂質を含み得、ここで上記非アミノ酸非カチオン性脂質は、脂質および送達増強成分（任意のポリマー成分を含むが、上記ＲＮＡ成分は含まない）の総量の約２％〜約９５％（ｍｏｌ％）である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約２０％〜約７５％、もしくは約４５％〜約７５％、もしくは約４５％〜約５５％の１種以上の非カチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約１０％〜約５０％の１種以上の非カチオン性脂質を含み得る。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１種以上のポリマー脂質を含み得、ここで上記ポリマー脂質は、脂質および送達増強成分（任意のポリマー成分を含むが、上記ＲＮＡ成分は含まない）の総量の約０．２％〜約２０％（ｍｏｌ％）である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、約０．５％〜約１０％の１種以上のポリマー脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、上記組成物の約１％〜約５％の１種以上のポリマー脂質を含み得る。
（核酸治療剤の組成物および使用）
いくつかの実施形態において、本発明は、哺乳動物被験体における疾患もしくは障害を処置するための方法を提供する。干渉ＲＮＡ、アミノ酸脂質、非アミノ酸非カチオン性脂質、ポリマー脂質、および１種以上の送達増強成分もしくは賦形剤を含む本発明の組成物の治療上有効な量は、上記組成物によって減少され得るか、低下され得るか、ダウンレギュレートされ得るか、または抑制され得る遺伝子の発現もしくは過剰発現と関連する疾患もしくは障害を有する被験体に、投与され得る。
本発明は、上記被験体に治療上有効量の組成物を投与することによって、肺の疾患（例えば、呼吸窮迫、喘息、嚢胞性線維症、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎、もしくは気腫）を処置するための方法を包含する。
本発明は、関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、ウイルス疾患（肝炎およびインフルエンザが挙げられる）、もしくは癌を処置するための方法を包含する。
リポソームを作製するための方法は、例えば、Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９８４），Ｍ．Ｊ．Ｏｓｔｒｏ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ １９８７）；Ｓｕｂｈａｓｈ Ｃ．Ｂａｓｕ ａｎｄ Ｍａｎｊｕ Ｂａｓｕ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（２００２）に示される。
上記核酸成分、アミノ酸脂質、および任意のさらなる成分は、適切な培地（例えば、細胞培養培地）中で一緒に最初に混合され得、その後、１種以上のさらなる脂質もしくは化合物が、上記混合物に添加され得る。あるいは、上記アミノ酸脂質は、適切な培地（例えば、細胞培養培地）中で一緒に最初に混合され得、その後、上記核酸成分が、添加され得る。
本発明の特定の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、１種以上のアミノ酸脂質、または１種以上のアミノ酸脂質および非アミノ酸非カチオン性脂質の組み合わせと混合される。
いくつかの実施形態において、アミノ酸脂質トランスフェクション／送達処方物は、乾燥調製物の再水和によって調製され得る。上記脂質は、ＣＨＣｌ３中に可溶化され得、窒素下で乾燥させられ得、そしてｐＨ７．４の１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５％ デキストロース中に再水和され得、例えば、超音波処理されて、リポソームを形成し得る。リポソームは、ＨＥＰＥＳデキストロース中で希釈され得る。上記ｄｓＲＮＡは、０．０００８μｍｏｌ／ｍＬで、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５％ デキストロース，ｐＨ７．４中で希釈される。１容積のリポソームは、１容積のｄｓＲＮＡに添加され得、そしてボルテックスされ得（自己アセンブリ）、１００ｎＭ〜６．２５ｎＭ ｄｓＲＮＡの最終ｄｓＲＮＡ濃度を提供する。この混合物は、細胞培養培地の存在下で、１〜４倍に希釈され得る。
上記干渉ＲＮＡ薬剤はまた、アミノ酸脂質もしくはポリマー脂質と複合体化され得るか、または結合体化され得、１種以上の非アミノ酸非カチオン性脂質、または１種以上の非アミノ酸非カチオン性と非アミノ酸カチオン性脂質との組み合わせと混合され得る。
干渉ＲＮＡ薬剤およびアミノ酸脂質は、一緒に最初に混合され得、続いて、１種以上の非アミノ酸非カチオン性脂質が添加されるか、または非アミノ酸非カチオン性脂質と非アミノ酸カチオン性脂質との組み合わせが、適切な培地（例えば、細胞培養培地）に添加され得る。あるいは、上記アミノ酸脂質および非アミノ酸脂質成分は、最初に混合され得、続いて、適切な培地中に上記ＲＮＡ薬剤が添加される。
いくつかの実施形態において、本開示は、アミノ酸脂質および分散剤と混合もしくは複合体化されて、薬物もしくは活性薬剤の細胞内送達を提供する組成物を形成する上記薬物もしくは活性薬剤を含むミセル分散組成物を包含する。
特定の実施形態において、本開示の分散組成物は、１種以上の薬物もしくは活性薬剤、１種以上のアミノ酸脂質、および１種以上の分散剤を含み得る。いくつかのバリエーションにおいて、送達組成物は、薬物もしくは活性薬剤、分散剤、アミノ酸脂質、および選択肢的なポリマー脂質を含み得る。本開示の分散組成物は、上記薬物もしくは活性薬剤を組み込み得る安定な粒子を形成し得る。
いくつかの局面において、本開示の分散組成物は、約５ｎｍ〜約４００ｎｍの直径を有する安定な核酸分散粒子を含み得る。いくつかの実施形態において、上記粒子は、約１０ｎｍ〜約３００ｎｍの均一な直径を有し得る。いくつかの実施形態において、上記粒子は、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍの均一な直径を有し得る。
ミセル分散物を使用して処方され得、そして薬物もしくは活性薬剤（ＲＮＡｉ治療剤が挙げられる）のバイオアベイラビリティーを改善し得る。従来の脂質−薬物複合体は、親水性コアもしくは水性コアを維持する脂質二重層もしくはリポソーム構造を含み得る一方で、ミセル分散物は、疎水性油コア様を有する分散液滴もしくはナノ粒子を提供し得る。上記分散ナノ粒子は、連続水相に懸濁され得る。分散構造は、活性薬剤を送達するためにリポソーム構造を使用することにおいて特有のいくつかの欠点を回避し得、そして上記親油性コアが原因で、送達における利点を提供し得る。
本開示は、薬物もしくは医薬のために、およびＲＮＡ薬剤の送達および投与のために、脂質および分散剤を含むある範囲のミセル分散組成物を提供する。
分散剤の例としては、合成化合物（ポリオキシグリセリド（例えば、ポリグリコール化（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌａｔｅｄ）カプリルグリセリド）、エトキシジグリコール、ｐｅｇ化脂肪グリセリド、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、およびこれらの混合物が挙げられる）が挙げられる。分散剤の例としては、ＬＡＢＲＡＦＩＬ、ＬＡＢＲＡＳＯＬ、ＡＲＬＡＴＯＮＥ、ＴＲＡＮＳＣＵＴＯＬ、およびこれらの混合物が挙げられる。分散剤の例としては、合成化合物（例えば、アルキルホスホ−Ｎ−メチルエタノールアミンおよびアルコキシサルコシン（ａｌｋｏｙｌｓａｒｃｏｓｉｎｅ））が挙げられる。分散剤の例としては、ＦＯＳ−ＭＥＡおよびＣＲＯＤＡＳＩＮＩＣが挙げられる。
いくつかの実施形態において、本開示の送達組成物は、薬物もしくは活性薬剤、１種以上の油、１種以上のアミノ酸脂質、ならびに乳化剤および安定化脂質（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ ｌｉｐｉｄ）を含み得る。いくつかのバリエーションにおいて、送達組成物は、薬物もしくは活性薬剤、油、脂質乳化剤、アミノ酸脂質、非カチオン性脂質、およびポリマー脂質を含み得る。
本開示の組成物は、薬物もしくは活性薬剤を組み込み得る安定な粒子を形成し得る。いくつかの局面において、本開示の組成物は、約５ｎｍ〜約４００ｎｍの直径を有する、安定な薬物もしくは活性薬剤のエマルジョン粒子を含む。いくつかの実施形態において、上記粒子は、約１０ｎｍ〜約３００ｎｍの均一な直径を有し得る。いくつかの実施形態において、上記粒子は、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍの均一な直径を有し得る。
本開示の例示的な組成物において、薬物もしくは活性薬剤は、油、乳化剤、アミノ酸脂質、およびポリマー安定化脂質と混合もしくは複合体化されて、上記薬物もしくは活性薬剤の細胞内送達を増強する組成物を形成し得る。
水中油エマルジョンが使用されて処方され得、薬物もしくは活性薬剤（ＲＮＡｉ治療剤が挙げられる）のバイオアベイラビリティーを改善し得る。
従来の脂質−薬物複合体は、親水性もしくは水性コアを維持する脂質二重層もしくはリポソーム構造を含み得る一方で、水中油エマルジョンは、疎水性の油コアを囲んでいる脂質層を有するエマルジョン液滴もしくはナノ粒子を提供し得る。上記エマルジョン液滴もしくはナノ粒子は、連続水相において懸濁され得る。エマルジョン構造は、活性薬剤の送達のためにリポソーム構造を使用することにおいて特有のいくつかの欠点を回避し得、そして上記親油性コアが原因で、送達における利点を提供し得る。
ある範囲の新規なエマルジョン組成物は、油、乳化剤、および脂質成分と干渉ＲＮＡ薬剤との新規な組成物および使用を含む、本開示において提供される。
油の例としては、合成油、プロピレングリコールの脂肪酸エステル、エチレングリコールのエーテル、グリセリル油、コレステリル油、植物性油、堅果油（ｎｕｔ ｏｉｌ）、精油、鉱油、脂溶性化合物（例えば、トコフェロールおよびビタミンＥ）、およびこれらの混合物が挙げられる。油の例としては、合成油（例えば、ＣＡＰＲＹＯＬ ９０（プロピレングリコールモノエステル）、ＣＡＰＲＹＯＬ ＰＧＭＣ（プロピレングリコールモノエステル）、ＬＡＢＲＡＦＡＣ ＰＣ（プロピレングリコールモノエステル）、ＬＡＢＲＡＦＡＣ ＰＧ（プロピレングリコールジエステル）、ＬＡＵＲＯＧＬＹＣＯＬ ９０（プロピレングリコールモノエステル）、ＬＡＵＲＯＧＬＹＣＯＬ ＦＣＣ（プロピレングリコールモノエステル）、ＰＬＵＲＯＬ ＯＬＥＩＱＵＥＣＣ ４９７（プロピレングリコールモノエステル）、ＬＡＢＲＡＦＡＣ ＬＩＰＯＰＨＩＬＥ ＷＬ １３４９（トリグリセリド）、ＰＥＣＥＯＬ（グリセリルモノエステル）、ＭＡＩＳＩＮＥ ３５−１（グリセリルモノエステル）、およびこれらの混合物）が挙げられる。
（ＲＮＡ治療剤のための組成物および方法）
本発明は、調節性ＲＮＡを使用して（例えば、ＲＮＡ干渉によって）、遺伝子発現を変化させるための組成物および方法を提供する。本発明の組成物は、リボ核酸薬剤を、ＲＮＡｉの応答を生じ得る細胞へと送達し得る。本発明にとって有用な核酸薬剤の例としては、二本鎖核酸、改変もしくは分解耐性核酸、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、ＲＮＡアンタゴニスト、一本鎖核酸、ＤＮＡ−ＲＮＡキメラ、アンチセンス核酸、およびリボザイムが挙げられる。本明細書において使用される場合、用語、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡは、それぞれ、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡの前駆体を含む。例えば、用語ｓｉＲＮＡは、ダイサー酵素の基質として適切である、ＲＮＡもしくは二本鎖ＲＮＡを含む。
本発明にとって有用なリボ核酸薬剤は、種々の遺伝子に標的化され得る。標的として適したヒト遺伝子の例としては、とりわけ、ＴＮＦ、ＦＬＴ１、ＶＥＧＦファミリー、ＥＲＢＢファミリー、ＰＤＧＦＲファミリー、ＢＣＲ−ＡＢＬ、およびＭＡＰＫファミリーが挙げられる。標的およびそれに対する核酸配列として適したヒト遺伝子の例としては、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３３３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３３９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３４０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３４１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３５７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３６９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３７８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５３８６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５０５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５１９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５２４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５２６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５２７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５３２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５３３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５４２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５４８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５５６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５６０、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５６３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５９７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５５９９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０３、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６０８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６１８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６２２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６２５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６２７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６３１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６３５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６４４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６４９、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６５１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６６２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６７２、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６７６、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６７８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６９５、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６９７、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５６９８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０１、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０４、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０８、ＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７０９、およびＰＣＴ／ＵＳ０８／５５７１１に開示されているものが挙げられる。
本開示の送達されるべきＲＮＡは、ウイルス遺伝子の領域に相補的な配列を有し得る。例えば、本発明のいくつかの組成物および方法は、インフルエンザウイルスのウイルスゲノムの発現を調節するために有用である。いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＮＡ干渉によってインフルエンザの発現および感染活動を変化させるための組成物および方法を提供する。インフルエンザの発現および／もしくは活動は、例えば、インフルエンザのＲＮＡポリメラーゼサブユニットの領域に相補的な配列を有する短い干渉ＲＮＡ分子を細胞に送達することによって変化させられ得る。インフルエンザウイルスに標的化されるＲＮＡの例は、米国特許出願公開第２００７０２１３２９３ Ａ１号に示される。
いくつかの実施形態において、本発明は、被験体に、有効量のＲＮＡｉ誘導化合物（例えば、短い干渉オリゴヌクレオチド分子、もしくはその前駆体）を含む組成物を投与することによって、被験体における標的転写物の発現を阻害するための組成物および方法を提供する。ＲＮＡｉは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡｓ）を標的化しかつ翻訳を減少させるために、小さな干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用する。本発明において使用される場合、ｓｉＲＮＡは、ダイサープロセシングのための前駆体（例えば、ｓｉＲＮＡに処理される長いｄｓＲＮＡ）であり得る。本発明は、標的転写物の発現または上記標的転写物によってコードされるペプチドもしくはタンパク質の活性と関連する疾患もしくは状態を処置もしくは予防するための方法を提供する。
ＲＮＡｉに基づく治療ストラテジーは、ウイルスもしくは微生物の増殖もしくは機能を妨げることによって、および上記疾患の経路における内因性遺伝子産物の機能を妨げることによって、広い範囲の疾患を処置するために使用され得る。
いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＮＡｉ誘導実体（例えば、短い干渉オリゴヌクレオチド分子、およびその前駆体）の送達のための新規な組成物および方法を提供する。特に、本発明は、被験体の細胞、組織、および／もしくは器官の１種以上の転写物に標的化されるＲＮＡｉ誘導実体を含む組成物を提供する。
ｓｉＲＮＡは、長さが相補性約１９ヌクレオチドの領域を有する２つのＲＮＡ鎖であり得る。ｓｉＲＮＡは、必要に応じて、１つまたは２つの一本鎖突出部もしくはループを含む。
ｓｈＲＮＡは、自己相補性の領域を有する単一のＲＮＡ鎖であり得る。上記単一のＲＮＡ鎖は、ステムおよびループを有し、必要に応じて、上記ＲＮＡの５’部分および／もしくは３’部分において１つ以上の対形成していない部分を有するヘアピン構造を形成し得る。
上記活性治療薬剤は、インビボでのヌクレアーゼ分解に対して改善された耐性、および／もしくはＲＮＡｉ活性を維持する改善された細胞取り込みを有する、化学的に改変されたＲＮＡであり得る。
本発明のｓｉＲＮＡ薬剤は、標的遺伝子の領域に相補的な配列を有し得る。本発明のｓｉＲＮＡは、２９〜５０塩基対（例えば、標的遺伝子の領域に相補的な配列を有するｄｓＲＮＡ）を有し得る。あるいは、二本鎖核酸は、ｄｓＤＮＡであり得る。
特定の実施形態において、上記活性薬剤は、遺伝子性生物の発現を変化させ得る短い干渉核酸（ｓｉＲＮＡ）、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、もしくは短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）であり得る。
被験体における特定の疾患状態と関連する１種以上の異なる遺伝子（発現が、上記選択された疾患状態と関連する原因因子もしくは寄与因子として異所性に増大されることが公知である多数の遺伝子のうちのいずれかを含む）の発現を標的とする匹敵する方法および組成物が、提供される。
本発明のＲＮＡｉ誘導化合物は、疾患状態のための他の公知の処置とともに投与され得る。
いくつかの実施形態において、本発明は、送達増強化合物と混合もしくは複合体化されるか、または結合体化される小さな核酸分子（例えば、短い干渉核酸、短い干渉ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、もしくは短いヘアピンＲＮＡ）を含む組成物を特徴とする。
本明細書において使用される場合、用語「調節性ＲＮＡ」、「短い干渉核酸」、「ｓｉＲＮＡ」、「短い干渉ＲＮＡ」、「短い干渉オリゴヌクレオチド分子」、および「化学的に改変された短い干渉核酸分子」とは、配列特異的様式においてＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）もしくは遺伝子抑制を媒介することによって、遺伝子発現、もしくは例えば、ウイルス複製を調節、阻害もしくはダウンレギュレートすることができる任意の核酸分子をいう。調節性ＲＮＡは、一本鎖ＲＮＡアンタゴニストを含む。
いくつかの実施形態において、上記ｓｉＲＮＡは、自己相補性のセンス領域およびアンチセンス領域を含む二本鎖ポリヌクレオチド分子であり、ここで上記アンチセンス領域は、発現、もしくはその一部をダウンレギュレートするための標的リボ核酸分子におけるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、そして上記センス領域は、上記標的リボ核酸配列もしくはその一部に対応する（すなわち、上記標的リボ核酸配列もしくはその一部に配列において実質的に同一である）ヌクレオチド配列を含む。
本明細書において使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」とは、比較的短い二本鎖核酸である小さい干渉リボ核酸、または必要に応じてその長い方の前駆体を意味する。本発明の範囲内の有用なｓｉＲＮＡの長さは、いくつかの実施形態において、約２０〜５０ｂｐの長さであることが好ましい。しかし、有用なｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡを含む）の長さに特定の限定はない。例えば、ｓｉＲＮＡは、存在するｓｉＲＮＡの最終的もしくはプロセシングされた形態とは実質的に異なる前駆体形態にある細胞へと最初に示され得、送達する際に、もしくは送達後に標的細胞へと、遺伝子抑制活性を発揮し得る。ｓｉＲＮＡの前駆体形態は、例えば、送達時にもしくは送達した後にプロセシング、分解、改変もしくは切断されて、遺伝子抑制を媒介するために細胞内で活性であるｓｉＲＮＡを生じる前駆体配列要素を含み得る。いくつかの実施形態において、有用なｓｉＲＮＡは、上記標的細胞内で活性なプロセシングされたｓｉＲＮＡを生じる、例えば、約１００〜２００塩基対、もしくは５０〜１００塩基対、もしくは約５０塩基対未満の前駆体長を有する。他の実施形態において、有用なｓｉＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡ前駆体は、約１０〜４９ｂｐ、もしくは１５〜３５ｂｐ、もしくは約２１〜３０ｂｐの長さである。
本発明の特定の実施形態において、ポリヌクレオチド送達増強ポリペプチドは、核酸分子（ｓｉＲＮＡの大きな核酸前駆体を含む）の送達を容易にするために使用され得る。例えば、本明細書中の方法および組成物は、所望のｓｉＲＮＡに「前駆体」を示すより大きな核酸の送達を増強するために使用され得、ここで上記前駆体アミノ酸は、切断され得るかまたは別の方法で標的細胞への送達前、送達の間もしくは送達後にプロセシングされて、標的細胞内での遺伝子発現を変化させるために活性なｓｉＲＮＡを形成し得る。
例えば、ｄｓＲＮＡ前駆体ポリヌクレオチドは、２つ以上のループ構造、ならびに自己相補的なセンス領域およびアンチセンス領域を含むステムを有する環状の一本鎖ポリヌクレオチドとして選択され得、ここで上記アンチセンス領域は、標的核酸分子もしくはその一部分におけるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、そして上記センス領域は、上記標的核酸配列もしくはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有し、ここで上記環状ポリヌクレオチドは、ＲＮＡｉを誘導し得る活性なｄｓＲＮＡ分子を生成するためにインビボもしくはインビトロでプロセシングされ得る。
本発明のｓｉＲＮＡ分子、特に非前駆体形態は、３０塩基対未満、もしくは約１７〜１９ｂｐ、もしくは１９〜２１ｂｐ、もしくは２１〜２３ｂｐであり得る。
ｓｉＲＮＡは、哺乳動物系において選択的遺伝子抑制を媒介し得る。短いループおよびステム中んい１９〜２７塩基対を有するヘアピンＲＮＡはまた、上記二本鎖ステム中の配列に相補的な遺伝子の発現を選択的に抑制する。哺乳動物細胞は、短いヘアピンＲＮＡをｓｉＲＮＡへと変換して、選択的遺伝子抑制を媒介し得る。
ＲＩＳＣは、上記ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する。標的ＲＮＡの切断は、上記ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域内で起こる。２１ヌクレオチドのｓｉＲＮＡ二重鎖は、代表的には、２つのヌクレオチド３’突出部を含む場合に最も活性である。
２−ヌクレオチド３’突出部を有する２１マーｓｉＲＮＡ二重鎖の上記３’突出セグメントを、デオキシリボヌクレオチドと置換することは、ＲＮＡｉ活性に対して有害な効果を有さなくてもよい。上記ｓｉＲＮＡの各鎖の最大４ヌクレオチドまでを、デオキシリボヌクレオチドで置換することは、許容され得る。
あるいは、ｓｉＲＮＡは、単一もしくは複数のｓｉＲＮＡをコードし、標的細胞内のそれらの発現を指向するポルヌクレオチドベクターによって発現される単一もしくは複数の転写生成物として送達され得る。これらの実施形態において、上記標的細胞内で発現されるべき上記ｓｉＲＮＡの最終転写生成物の二本鎖部分は、例えば、１５〜４９ｂｐ、１５〜３５ｂｐ、もしくは約２１〜３０ｂｐの長さであり得る。
本発明のいくつかの実施形態において、２つの鎖が対形成されるｓｉＲＮＡの二本鎖領域は、突出もしくはミスマッチ部分、またはその両方を含み得る。２つの鎖が対形成されるｓｉＲＮＡの二本鎖部分は、完全に対形成されたヌクレオチドセグメントに限定されず、例えば、ミスマッチ（対応するヌクレオチドが相補的でない）、突出（一方の鎖で対応する相補的ヌクレオチドを欠いている）、または突出部に起因して、対形成していない部分を含み得る。対形成していない部分は、これらがｓｉＲＮＡ形成を干渉しない程度にまで含まれ得る。いくつかの実施形態において、「突出（ｂｕｌｇｅ）」とは、１〜２個の対形成していないヌクレオチドを含み得、２つの鎖が対形成するｓｉＲＮＡの二本鎖領域が、約１〜７個、もしくは約１〜５個の突出を含み得る。さらに、ｓｉＲＮＡの上記二本鎖領域に含まれる「ミスマッチ」部分は、約１〜７、もしくは約１〜５の数で存在し得る。最も頻繁に、ミスマッチの場合に、上記ヌクレオチドのうちの１つは、グアニンであり、他方はウラシルである。このようなミスマッチ形成は、例えば、センスＲＮＡをコードする対応するＤＮＡ中のＣからＴへの変異、ＧからＡへの変異、またはこれらの混合物に起因し得るが、他の原因もまた、企図される。
本発明のｓｉＲＮＡの末端構造は、上記ｓｉＲＮＡが、標的遺伝子の発現を抑制するためにその活性を保持する限りにおいて、平滑もしくは粘着性（突出性）かのいずれかであり得る。上記粘着性（突出性）末端構造は、３’突出部に制限されないが、遺伝子抑制を誘導するための滑精を保持する限りにおいて、５’突出構造を含む。さらに、突出するヌクレオチドの数は、２ヌクレオチドもしくは３ヌクレオチドに制限されないが、遺伝子抑制を誘導するための活性を保持する限りにおいて、任意のヌクレオチド数であり得る。例えば、突出部は、１〜約８ヌクレオチド、もしくは２〜４ヌクレオチドを含み得る。
突出末端構造を有するｓｉＲＮＡの長さは、対形成された二重鎖部分および各末端の任意の突出部分について表され得る。例えば、２−ｂｐ ３’アンチセンス突出部を有する２５／２７マーｓｉＲＮＡ二重鎖は、２５マーセンス鎖および２７マーアンチセンス鎖を有し、ここで上記対形成された部分は、２５ｂｐの長さを有する。
任意の突出部の配列は、標的遺伝子に対して低い特異性を有し得、そして上記標的遺伝子配列に対して相補的（アンチセンス）でなくてもよいし、同一（センス）でなくてもよい。上記ｓｉＲＮＡが遺伝子抑制についての活性を保持している限りにおいて、上記ｓｉＲＮＡは、突出部分において、低分子量構造（例えば、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、もしくは人工ＲＮＡ分子のような天然のＲＮＡ分子）を含み得る。
上記ｓｉＲＮＡの末端構造は、上記二本鎖核酸のうちの一方側の末端がリンカー核酸（例えば、リンカーＲＮＡ）によって接続されているステム−ループ構造を有し得る。上記二本鎖領域（ステム部分）の長さは、例えば、１５〜４９ｂｐ、もしくは１５〜３５ｂｐ、もしくは約２１〜３０ｂｐの長さであり得る。あるいは、標的細胞において発現されるべきｓｉＲＮＡの最終的な転写性生物である上記二本鎖領域の長さは、例えば、約１５〜４９ｂｐ、もしくは１５〜３５ｂｐ、もしくは約２１〜３０ｂｐの長さであり得る。
上記ｓｉＲＮＡは、標的核酸分子におけるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、もしくはその一部分を有する一本鎖ポリヌクレオチドを含み得、ここで上記一本鎖ポリヌクレオチドは、末端ホスフェート基（例えば、５’−ホスフェート（例えば、Ｍａｒｔｉｎｅｚら，Ｃｅｌｌ．１１０：５６３−５７４，２００２、およびＳｃｈｗａｒｚら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ １０：５３７−５６８，２００２を参照のこと）または５’，３’−ジホスフェート）を含み得る。
本明細書において使用される場合、用語ｓｉＲＮＡは、天然に存在するＲＮＡもしくはＤＮＡのみを含む分子に限定されないが、化学的に改変されたヌクレオチドおよび非ヌクレオチドもまた包含する。いくつかの実施形態において、本発明の短い干渉核酸分子は、２’−ヒドロキシ（２’−ＯＨ）含有ヌクレオチドを欠いている。いくつかの実施形態において、短い干渉核酸は、ＲＮＡｉを媒介するための２’−ヒドロキシ基を有するヌクレオチドの存在を要せず、よって、本発明の短い干渉核酸分子は、必要に応じて、いかなるリボヌクレオチド（例えば、２’−ＯＨ基を有するヌクレオチド）をも含まない。しかし、ＲＮＡｉを補助するためにｓｉＲＮＡ分子内にリボヌクレオチドの存在を要しないｓｉＲＮＡ分子は、２’−ＯＨ基を有する１つ以上のヌクレオチドを含む結合されたリンカーもしくは他の結合もしくは会合された基、部分、もしくは鎖を有する。ｓｉＲＮＡ分子は、上記ヌクレオチド位置の少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、もしくは５０％においてリボヌクレオチドを含み得る。
本明細書において使用される場合、用語ｓｉＲＮＡは、配列特異的ＲＮＡｉを媒介し得る核酸分子（例えば、とりわけ、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子、マイクロＲＮＡ分子、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子、短い干渉オリゴヌクレオチド分子、短い干渉核酸分子、短い干渉改変オリゴヌクレオチド分子、化学的に改変されたｓｉＲＮＡ分子、および転写後遺伝子抑制 ＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）分子）を包含する。
いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、別個のセンス配列もしくは領域およびアンチセンス配列もしくは領域を含み、ここで上記センス領域およびアンチセンス領域は、ヌクレオチドリンカー分子もしくは非ヌクレオチドリンカー分子によって共有結合されるか、またはイオン性共有結合、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、および／もしくは積み重ね（ｓｔａｃｋｉｎｇ）相互作用によって、非共有結合的に連結される。
「アンチセンスＲＮＡ」は、標的遺伝子ｍＲＮＡに結合することによってＲＮＡｉを誘導し得る、上記標的遺伝子ｍＲＮＡに相補的な配列を有するＲＮＡ鎖である。
「センスＲＮＡ」は、アンチセンスＲＮＡに相補的な配列を有するＲＮＡ鎖であり、その相補的アンチセンスＲＮＡにアニールして、ｓｉＲＮＡを形成する。
本明細書において使用される場合、用語「ＲＮＡｉ構築物」もしくは「ＲＮＡｉ前駆体」とは、ＲＮＡｉ誘導化合物（例えば、小さな干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ヘアピンＲＮＡ、およびインビボで切断されて，ｓｉＲＮＡを形成し得る他のＲＮＡ種をいう。ＲＮＡｉ前駆体はまた、本明細書において、細胞においてｄｓＲＮＡもしくはヘアピンＲＮＡを形成する転写物および／またはインビボでｓｉＲＮＡを生じ得る転写物を生じ得る発現ベクター（ＲＮＡｉ発現ベクターともいう）を含む。
ｓｉハイブリッド分子は、ｓｉＲＮＡに類似の機能を有する二本鎖核酸である。二本鎖ＲＮＡ分子の代わりに、ｓｉハイブリッドは、ＲＮＡ鎖およびＤＮＡ鎖から構成される。好ましくは、上記ＲＮＡ鎖は、標的ｍＲＮＡに結合するアンチセンス鎖である。上記ＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖のハイブリダイゼーションによって作り出された上記ｓｉハイブリッドは、ハイブリダイズした相補的部分および好ましくは、少なくとも１つの３’突出末端を有する。
本発明において使用するためのｓｉＲＮＡは、２つの別個のオリゴヌクレオチドから組み立てられ得、ここで一方の鎖はセンス鎖であり、他方はアンチセンス鎖であり、上記アンチセンス鎖およびセンス鎖は、自己相補性である（すなわち、各鎖は、他方の鎖におけるヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む；例えば、上記アンチセンス鎖およびセンス鎖が二重鎖もしくは二本鎖構造を形成する（ここで例えば、上記二本鎖領域が、約１９塩基対である））。上記アンチセンス鎖は、標的核酸分子もしくはその一部分におけるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、そして上記センス鎖は、上記標的核酸配列もしくはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含み得る。あるいは、上記ｓｉＲＮＡは、単一のオリゴヌクレオチドから組み立てられ得、ここで上記ｓｉＲＮＡの自己相補性のセンス領域およびアンチセンス領域は、核酸ベースのリンカーもしくは非核酸ベースのリンカーによって連結される。
いくつかの実施形態において、細胞内送達のためのｓｉＲＮＡは、自己相補性のセンス領域およびアンチセンス領域を有する二重鎖、非対称二重鎖、ヘアピンもしくは非対称ヘアピン二次構造を有するポリヌクレオチドであり得、ここで上記アンチセンス領域は、別個の標的核酸分子もしくはその一部分におけるヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、そして上記センス領域は、上記標的核酸配列もしくはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含む。
ｓｉＲＮＡにおいて行われ得る化学的改変の例としては、ホスホロチオエートヌクレオチド間連結、２’−デオキシリボヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチド、「ユニバーサル塩基」ヌクレオチド、「非環式」ヌクレオチド、５−Ｃ−メチルヌクレオチド、ならびに末端グリセリルおよび／もしくは逆方向（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）デオキシ脱塩基（ａｂａｓｉｃ）残基組み込みが挙げられる。
ｓｉＲＮＡ分子の上記アンチセンス領域は、上記アンチセンス領域の３’−末端においてホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み得る。上記アンチセンス領域は、上記アンチセンス領域の５’−末端において約１〜約５個のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み得る。ｓｉＲＮＡ分子の上記３’末端ヌクレオチド突出部は、核酸の糖、塩基、もしくは骨格において化学的に改変されている、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドを含み得る。上記３’末端ヌクレオチド突出部は、１種以上のユニバーサル塩基リボヌクレオチドを含み得る。上記３’−末端ヌクレオチド突出部は、１つ以上の非環式ヌクレオチドを含み得る。
例えば、化学的に改変されているｓｉＲＮＡは、１つの鎖において１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、もしくはそれ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を有し得るか、または各鎖において１〜８個もしくはそれ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を有し得る。上記ホスホロチオエートヌクレオチド間連結は、上記ｓｉＲＮＡ二重鎖の一方もしくは両方のオリゴヌクレオチド鎖に、例えば、上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、もしくはその両方の鎖に、存在し得る。
ｓｉＲＮＡ分子は、上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、もしくは両方の鎖の、上記３’末端、上記５’末端、または上記３’末端および５’末端の両方において１個以上のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み得る。例えば、例示的ｓｉＲＮＡ分子は、上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、またはその両方の鎖の５’末端において１個、２個、３個、４個、５個、もしくはそれ以上の連続するホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み得る。
特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、またはその両方の鎖において、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくはそれ以上のピリミジンホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む。
いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、またはその両方の鎖において、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくはそれ以上のプリンホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含む。
ｓｉＲＮＡ分子は、環状核酸分子を含み得、ここで上記ｓｉＲＮＡは、約３８〜約７０ヌクレオチド、例えば、約３８ヌクレオチド、４０ヌクレオチド、４５ヌクレオチド、５０ヌクレオチド、５５ヌクレオチド、６０ヌクレオチド、６５ヌクレオチド、もしくは７０ヌクレオチドの長さであり、約１８〜約２３塩基対、例えば、約１８塩基対、１９塩基対、２０塩基対、２１塩基対、２２塩基対、もしくは２３塩基対を有し、ここで上記環状オリゴヌクレオチドは、約１９塩基対を有するダンベル形構造および２つのループを形成する。
環状ｓｉＲＮＡ分子は、２つのループモチーフを含み得、ここで上記ｓｉＲＮＡ分子の一方もしくは両方のループ部分は生分解性である。例えば、環状ｓｉＲＮＡ分子の上記ループ部分は、３’末端突出部（例えば、約２ヌクレオチドを含む３’末端ヌクレオチド突出部）を有する二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を生じるように、インビボで変換され得る。
ｓｉＲＮＡ分子における改変ヌクレオチドは、上記アンチセンス鎖、上記センス鎖、もしくはその両方に存在し得る。例えば、改変ヌクレオチドは、ノーザンコンフォメーション（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（例えば、ノーザン疑回転サイクル（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｐｓｅｕｄｏｒｏｔａｔｉｏｎ ｃｙｃｌｅ）；例えば、Ｓａｅｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ編，１９８４を参照のこと）を有し得る。ノーザンコンフォメーションを有するヌクレオチドの例としては、ロックされた（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ、４’−Ｃ−メチレン−（Ｄ−リボフラノシル）ヌクレオチド）、２’−メトキシエトキシ（ＭＯＥ）ヌクレオチド、２’−メチル−チオ−エチル，２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−クロロヌクレオチド、２’−アジドヌクレオチド、および２’−Ｏ−メチルヌクレオチドが挙げられる。
化学的に改変されているヌクレオチドは、ヌクレアーゼ分解に対して耐性であり得ると同時に、ＲＮＡｉを媒介する能力を維持し得る。
二本鎖ｓｉＲＮＡ分子の上記センス鎖は、上記センス鎖の３’末端、５’末端、もしくは３’末端および５’末端の両方において、末端キャップ部分（例えば、逆方向デオキシ脱塩基部分）を有し得る。
結合体の例としては、Ｖａｒｇｅｅｓｅら，米国特許出願第１０／４２７，１６０号（２００３年８月３０日出願、図面を含め、その全体が本明細書に参考として援用される）に記載される結合体およびリガンドが挙げられる。
本発明のいくつかの実施形態において、上記結合体は、上記化学的に改変されているｓｉＲＮＡ分子に、生分解性リンカーを介して共有結合され得る。例えば、上記結合体分子は、上記化学的に改変されているｓｉＲＮＡ分子の上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、もしくはその両方の鎖のいずれかの３’末端において結合され得る。
特定の実施形態において、上記結合体分子は、上記化学的に改変されているｓｉＲＮＡ分子の上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、もしくはその両方の鎖のいずれかの５’末端において結合される。いくつかの実施形態において、上記結合体分子は、上記化学的に改変されているｓｉＲＮＡ分子の上記センス鎖、上記アンチセンス鎖、もしくはその両方の鎖のいずれかの３末端および５’末端の両方、またはこれらの組み合わせに結合される。
いくつかの実施形態において、結合体分子は、化学的に改変されているｓｉＲＮＡ分子を生物学的系（例えば、細胞）へと送達するのを容易にする分子を含む。
いくつかの実施形態において、上記化学的に改変されているｓｉＲＮＡ分子に結合された結合体分子は、ポリエチレングリコール、ヒト血清アルブミン、または細胞取り込みを媒介し得る細胞レセプターのリガンドである。化学的に改変されているｓｉＲＮＡ分子に結合され得る、本発明によって企図される具体的結合体分子の例は、Ｖａｒｇｅｅｓｅら，米国特許出願公開第２００３０１３０１８６号および同第２００４０１１０２９６号に記載されている。
ｓｉＲＮＡは、上記ｓｉＲＮＡの上記センス領域を、上記ｓｉＲＮＡの上記アンチセンス領域につなぐヌクレオチドリンカー、非ヌクレオチドリンカー、もしくは混合したヌクレオチド／非ヌクレオチドリンカーを含み得る。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドリンカーは、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、もしくは１０ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの実施形態において、上記ヌクレオチドリンカーは、核酸アプタマーであり得る。本明細書において使用される場合、用語「アプタマー」または「核酸アプタマー」は、標的分子に特異的に結合する核酸分子を包含し、ここで上記核酸分子は、その天然の状況において、上記標的分子によって認識される配列を含む。あるいは、アプタマーは、標的分子に結合する核酸分子であって、上記標的分子が核酸に天然には結合しないものであり得る。
例えば、上記アプタマーは、タンパク質のリガンド結合ドメインに結合し、それによって、天然に存在するリガンドと、上記タンパク質との相互作用を妨げるするために使用され得る。例えば、Ｇｏｌｄら，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６４：７６３，１９９５；Ｂｒｏｄｙ ａｎｄ Ｇｏｌｄ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：５，２０００；Ｓｕｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：１００，２０００；Ｋｕｓｓｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７，２０００；Ｈｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｐａｔｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：８２０，２０００；およびＪａｙａｓｅｎａ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４５：１６２８，１９９９を参照のこと。
非ヌクレオチドリンカーは、脱塩基ヌクレオチド、ポリマー、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、脂質、ポリ炭化水素（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ）、または他のポリマー化合物（例えば、２〜１００の間のエチレングリコール単位を有するもののようなポリエチレングリコール）であり得る。具体的な例としては、Ｓｅｅｌａ ａｎｄ Ｋａｉｓｅｒ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：６３５３，１９９０、およびＮｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：３１１３，１９８７；Ｃｌｏａｄ ａｎｄ Ｓｃｈｅｐａｒｔｚ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：６３２４，１９９１；Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ａｎｄ Ｓｃｈｅｐａｒｔｚ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：５１０９，１９９１；Ｍａら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１：２５８５，１９９３、およびＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１７５１，１９９３；Ｄｕｒａｎｄら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：６３５３，１９９０；ＭｃＣｕｒｄｙら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １０：２８７，１９９１；Ｊａｓｃｈｋｅら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３４：３０１−３０４，１９９３；Ｏｎｏら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：９９１４，１９９１；Ａｒｎｏｌｄら，国際公開番号ＷＯ ８９／０２４３９；Ｕｓｍａｎら，国際公開番号ＷＯ ９５／０６７３１；Ｄｕｄｙｃｚら，国際公開番号ＷＯ ９５／１１９１０、ならびにＦｅｒｅｎｔｚ ａｎｄ Ｖｅｒｄｉｎｅ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：４０００，１９９１によって記載されるものが挙げられる。
「非ヌクレオチドリンカー」とは、糖および／もしくはホスフェート置換のいずれかを含み、その残りの塩基がそれらの酵素活性を示すことを可能にする、１つ以上のヌクレオチド単位の代わりに核酸鎖へ組み込まれ得る基もしくは化合物をいう。上記基もしくは化合物は、例えば、上記糖のＣ１位において、一般に認識されるヌクレオチド塩基（例えば、アデノシン、グアニン、シトシン、ウラシルもしくはチミン）を含まない点において脱塩基性であり得る。
いくつかの実施形態において、改変ｓｉＲＮＡ分子は、ホスフェート骨格改変を有し得、上記改変は、１つ以上のホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、モルホリノ、アミデートカルバメート、カルボキシメチル、アセトアミデート、ポリアミド、スルホネート、スルホンアミド、スルファメート、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、および／もしくはアルキルシリル置換を含む。オリゴヌクレオチド骨格改変の例は、Ｈｕｎｚｉｋｅｒ ａｎｄ Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｉｎ Ｍｏｄｅｒｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ＶＣＨ，ｐｐ．３３１〜４１７，１９９５、およびＭｅｓｍａｅｋｅｒら，Ｎｏｖｅｌ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＡＣＳ，ｐｐ．２４−３９，１９９４に示されている。
ｓｉＲＮＡ分子（これは、化学的に改変されてい得る）は、（ａ）上記ｓｉＲＮＡ分子の２つの相補鎖の合成；および（ｂ）上記２つの相補鎖を、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を得るのに適した条件下で一緒にアニールすることによって合成され得る。いくつかの実施形態において、上記ｓｉＲＮＡ分子の相補性部分の合成は、固相オリゴヌクレオチド合成によって、または固相直列オリゴヌクレオチド合成によってである。
オリゴヌクレオチド（例えば、特定の改変されたオリゴヌクレオチドまたはリボヌクレオチドを欠いているオリゴヌクレオチドの一部）は、例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２１１：３−１９，１９９２；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９９／５４４５９；Ｗｉｎｃｏｔｔら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２６７７−２６８４，１９９５；Ｗｉｎｃｏｔｔら，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．７４：５９，１９９７；Ｂｒｅｎｎａｎら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．６１：３３−４５，１９９８；およびＢｒｅｎｎａｎ，米国特許第６，００１，３１１号に記載されているように、当該分野で公知のプロトコルを使用して合成される。ＲＮＡ（本発明の特定のｓｉＲＮＡ分子を含む）の合成は、例えば、Ｕｓｍａｎら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：７８４５，１９８７；Ｓｃａｒｉｎｇｅら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：５４３３，１９９０；およびＷｉｎｃｏｔｔら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２６７７−２６８４，１９９５；Ｗｉｎｃｏｔｔら，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．７４：５９，１９９７に記載されるように、一般的手順に従う。
「非対称ヘアピン」とは、本明細書において使用される場合、アンチセンス領域、ヌクレオチドもしくは非ヌクレオチドを含み得るループ部分、および上記アンチセンス領域より少ない（センス領域が上記アンチセンス領域と塩基対して、得ループを有する二重鎖を形成するに十分相補的なヌクレオチドを有する程度にまで）ヌクレオチドを含むセンス領域を含む直鎖状のｓｉＲＮＡ分子である。
「非対称二重鎖」とは、本明細書において使用される場合、センス領域およびアンチセンス領域を含む２つの別個の鎖を有するｓｉＲＮＡ分子であって、ここで上記センス領域は、上記アンチセンス領域と塩基対形成して、二重鎖を形成するに十分相補的なヌクレオチドを有する程度にまで、上記アンチセンス領域より少ないヌクレオチドを含むものである。
「中程度の遺伝子発現」とは、本明細書において使用される場合、細胞に存在するｍＲＮＡレベルの、またはｍＲＮＡ翻訳の、または標的遺伝子によってコードされるタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの合成の、アップレギュレーションもしくはダウンレギュレーションを含み得る、上記標的遺伝子の発現をアップレギュレートするかダウンレギュレートすることである。
用語「阻害する」、「ダウンレギュレートする」、もしくは「発現を減少させる」とは、本明細書において使用される場合、上記遺伝子の発現、または１種以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードするＲＮＡ分子もしくは等価なＲＮＡ分子のレベル、または標的遺伝子によってコードされる１種以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットのレベルもしくは活性が、本発明の核酸分子（例えば、ｓｉＲＮＡ）の非存在下で認められるものより低く低下することを意味する。
「遺伝子抑制」とは、本明細書において使用される場合、細胞における遺伝子発現の部分的もしくは完全な阻害をいい、そして「遺伝子ノックダウン」ともいわれ得る。遺伝子抑制の程度は、当該分野で公知の方法によって決定され得、上記方法のうちのいくつかは、国際公開番号ＷＯ ９９／３２６１９にまとめられている。
本明細書において使用される場合、用語「リボ核酸」および「ＲＮＡ」とは、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子をいう。リボヌクレオチドは、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’部分においてヒドロキシル基を有するヌクレオチドである。これら用語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離されたＲＮＡ（例えば、部分的に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え生成ＲＮＡ、ならびに１もしくは数個のヌクレオチドの付加、欠失、置換、改変、および／もしくは変化だけ天然に存在するＲＮＡとは異なる、改変および変化させたＲＮＡを包含する。ＲＮＡの変化は、非ヌクレオチド物質を（例えば、ｓｉＲＮＡの末端に対してまたは内部に（例えば、ＲＮＡの１個以上のヌクレオチドにおいて））付加することを包含し得る。
ＲＮＡ分子中のヌクレオチドは、標準的でないヌクレオチド（例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチド）を含む。これら変化させられたＲＮＡは、アナログといわれ得る。
「高度に保存された配列領域」とは、標的遺伝子中の１つ以上の領域のヌクレオチド配列が、一方の世代から他方の世代へ、または一方の生物学的系から他方の生物学的系へ顕著に変動していないことを意味する。
「センス領域」とは、ｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス領域に対して相補性を有する上記ｓｉＲＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。さらに、ｓｉＲＮＡ分子の上記センス領域は、標的核酸配列と相同性を有する核酸配列を含み得る。
「アンチセンス領域」とは、標的核酸配列に対して相補性を有するｓｉＲＮＡ分子のヌクレオチド配列を意味する。さらに、ｓｉＲＮＡ分子の上記アンチセンス領域は、上記ｓｉＲＮＡ分子のセンス領域に対して相補性を有する核酸配列を含み得る。
「標的核酸」とは、発現もしくは活性が変化させられるべき任意の核酸配列を意味する。標的核酸は、ＤＮＡもしくはＲＮＡであり得る。
「相補性」とは、伝統的なワトソン−クリックもしくは他の非伝統的な結合モデルのいずれかによって、核酸が別の核酸配列と水素結合を形成し得ることを意味する。
用語「生分解性リンカー」とは、本明細書において使用される場合、一方の分子を別の分子に（例えば、生物学的に活性な分子をｓｉＲＮＡ分子もしくはｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖に）つなぐための生分解性リンカーとして示される、核酸リンカー分子もしくは非核酸リンカー分子をいう。上記生分解性リンカーは、その安定性が特定の目的（例えば、特定の組織もしくは細胞型への送達）のために変化させられ得るように示される。核酸ベースの生分解性リンカー分子の安定性は、例えば、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、および化学的に改変されているヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、２’−アミノ、２’−Ｏ−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−Ｏ−アリル、および他の２’−改変もしくは塩基改変ヌクレオチド）の組み合わせによって、種々に変化させられ得る。上記生分解性核酸リンカー分子は、ダイマー、トリマー、テトラマーもしくはそれより長い核酸分子であり得る（例えば、約２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、もしくは２０ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドは、リンベースの結合（例えば、ホスホルアミデートもしくはホスホジエステル結合）を有する単一のヌクレオチドを含み得る）。上記生分解性核酸リンカー分子はまた、核酸骨格、核酸糖、もしくは核酸塩基の改変を含み得る。
本明細書に記載されるような２’−改変ヌクレオチドとの連結において、「アミノ」とは、改変され得るかもしくは非改変であり得る２’−ＮＨ２もしくは２’−Ｏ−ＮＨ２を意味する。このような改変された基は、例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，米国特許第５，６７２，６９５号およびＭａｔｕｌｉｃ−Ａｄａｍｉｃら，米国特許第６，２４８，８７８号に記載されている。
本発明において使用するために核酸分子を送達するための補助的もしくは補完的方法は、例えば、Ａｋｈｔａｒら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２：１３９，１９９２；「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ａｋｈｔａｒ編，１９９５，Ｍａｕｒｅｒら，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．１６：１２９−１４０，１９９９；Ｈｏｆｌａｎｄ ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１６５−１９２，１９９９；およびＬｅｅら，ＡＣＳ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．７５２：１８４−１９２，２０００に記載される。Ｓｕｌｌｉｖａｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／０２５９５は、酵素性核酸分子の送達のための一般的方法をさらに記載する。
核酸分子は、１種以上のさらなる成分（例えば、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤、アジュバント、乳化剤、緩衝化剤、安定化剤、もしくは保存剤）を含む処方物内で投与され得る。
本明細書において使用される場合、用語「キャリア」とは、薬学的に受容可能な固体もしくは液体希釈剤、溶媒、充填剤、または封入物質（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｎｇ ｍａｔｅｒｉａｌ）を意味する。キャリアの例としては、生理食塩水、生物学的および薬学的緩衝系、および生物学的に受容可能な媒体を含む。水含有液体キャリアは、薬学的に受容可能な添加剤（例えば、酸性化剤、アルキル化剤、抗微生物性保存剤、抗酸化剤、緩衝化剤、キレート化剤、錯化剤、可溶化剤、湿潤剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、溶媒、懸濁剤および／もしくは増粘剤、張性剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）、湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、もしくは他の生物適合性の物質を含み得る。上記分類の成分の例は、Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，１９９０，ｐｐ．１８５７−１８５９、ならびにＲａｙｍｏｎｄ Ｃ．Ｒｏｗｅら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第５版，２００６、および「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」，第２１版，２００６，編者Ｄａｖｉｄ Ｂ．Ｔｒｏｙにおいて見いだされ得る。
保存剤の例としては、フェノール、メチルパラベン、パラベン、ｍ−クレゾール、チオメルサール（ｔｈｉｏｍｅｒｓａｌ）、塩化ベンザルコニウム、およびこれらの混合物が挙げられる。
界面活性剤の例としては、オレイン酸、ソルビタントリオレエート、ポリソルベート、レシチン、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、種々の長鎖ジグリセリドおよびリン脂質、ならびにこれらの混合物が挙げられる。
リン脂質の例としては、ホスファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、およびホスファチジルエタノールアミン、ならびにこれらの混合物が挙げられる。
分散剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸が挙げられる。
気体の例としては、窒素、ヘリウム、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、ヒドロフルオロカーボン（ＨＦＣ）、二酸化炭素、空気、およびこれらの混合物が挙げられる。
特定の実施形態において、上記ｓｉＲＮＡおよび／もしくは上記ポリペプチドは、リポソーム中に包まれ得るか、またはリポソームに対して内部もしくは外部のいずれかに存在し得るか、またはリポソーム層内に存在し得るか、またはイオン導入法によって投与され得るか、または他のビヒクル（例えば、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノ粒子、生体接着性ミクロスフェア、もしくはタンパク質性ベクター）に組み込まれ得る。例えば、Ｏ’Ｈａｒｅ ａｎｄ Ｎｏｒｍａｎｄ，ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ００／５３７２２を参照のこと。あるいは、核酸組成物は、直接注射によって、もしくは注入ポンプの使用によって、局所的に送達され得る。本発明の核酸分子の直接注射は、皮下、筋肉内、もしくは皮内であろうと、標準的な針およびシリンジの方法を使用して、またはニードルレス技術（例えば、Ｃｏｎｒｙら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５：２３３０−２３３７，１９９９、およびＢａｒｒｙら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／３１２６２に記載されているもの）によって行い得る。
本発明の組成物は、薬学的因子として有効に使用され得る。薬学的因子は、患者における疾患状態もしくは他の有害な状態の発生もしくは重篤度を予防させるか、変化させるか、または患者における疾患状態もしくは他の有害な状態の発生もしくは重篤度を処置する（検出可能なもしくは測定可能な程度にまで１つ以上の症状を緩和する）。
いくつかの実施形態において、本発明は、脂質と組み合わせるか、複合体化させるか、または結合体化され、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、希釈剤、安定化剤、もしくは緩衝剤）とともにさらに処方され得る１種以上のポリ核酸（代表的には、１種以上のｓｉＲＮＡ）の存在もしくは投与を特徴とする薬学的組成物および方法を提供する。
代表的には、上記ｓｉＲＮＡは、上記被験体の疾患状態もしくは有害な状態と関連する原因因子もしくは寄与因子として、上昇したレベルで発現される遺伝子を標的とする。この文脈において、上記ｓｉＲＮＡは、１種以上の関連する疾患症状の重篤度もしくは再発を予防するか、緩和するか、または低下させるレベルにまで、遺伝子の発現を効率的にダウンレギュレートする。あるいは、上記標的遺伝子の発現が疾患もしくは他の有害な状態の結果もしくは結末として必ずしも上昇するわけではない種々の異なる疾患モデルについて、にもかかわらず、上記標的遺伝子のダウンレギュレーションは、遺伝子発現を低下させる（すなわち、上記標的遺伝子の選択されたｍＲＮＡおよび／もしくはタンパク質生成物のレベルを低下させる）ことによって、治療的結果を生じる。あるいは、本発明のｓｉＲＮＡは、ある遺伝子の発現を低下させるために標的化され得、上記遺伝子は、発現が上記標的遺伝子の生成物もしくは活性によって負に調節される「下流」遺伝子のアップレギュレーションを生じ得る。
本開示のこのｓｉＲＮＡは、任意の形態において、例えば、経皮的にもしくは局所注射によって（例えば、乾癬を処置するための乾癬斑（ｐｓｏｒｉａｔｉｃ ｐｌａｑｕｅ）での、または感染性関節炎もしくはＲＡに罹患している患者の関節への局所投与）投与され得る。より詳細な実施形態において、本発明は、ＴＮＦ−αのｍＲＮＡに対して指向される治療上有効量のｓｉＲＮＡ（これは、上記ＴＮＦ−α ＲＮＡを効率的にダウンレギュレートし、それによって、１つ以上のＴＮＦ−α関連炎症状態を低下もしくは予防する）を投与するための処方物および方法を提供する。匹敵する方法および組成物はが提供され、これらは、動物被験体における選択された疾患状態と関連する１種以上の異なる遺伝子（発現が、上記選択された疾患状態と関連する原因因子もしくは寄与因子として異所性に増大されることが公知である多数の遺伝子のうちのいずれかを含む）の発現を標的とする。
本発明の組成物はまた、経口投与のための錠剤、カプセル剤もしくはエリキシル剤、直腸投与のための坐剤、注射用投与のための滅菌液剤、懸濁物、および当該分野で公知の他の形態として処方および使用され得る。
薬理学的組成物もしくは処方物は、細胞もしくは患者（例えば、ヒトを含む）への投与（例えば、全身投与）に適した形態にある組成物もしくは処方物をいう。適切な形態は、一部は、用途もしくは侵入経路（例えば、経口、経皮、経上皮、または注射によって）に依存する。このような形態は、上記組成物もしくは処方物が標的細胞（すなわち、負に荷電した核酸が送達に望ましい細胞）に達しないように妨げない。例えば、上記血流に注射された薬理学的組成物は、可溶性であるはずである。他の因子は、当該分野で公知であり、毒性のような考慮事項を含む。
「全身投与」とは、血流における薬物のインビボの全身吸収もしくは蓄積、続いて、身体全体への分布を意味する。全身吸収をもたらす投与経路は、静脈内、皮下、腹腔内、吸入、経口、肺内、および筋肉内が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の核酸分子を有する処方物に適した薬剤の例としては、以下が挙げられる：ＣＮＳへの薬物の侵入を増強し得るＰ−糖タンパク質インヒビター（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ８５）（Ｊｏｌｌｉｅｔ−Ｒｉａｎｔ ａｎｄ Ｔｉｌｌｅｍｅｎｔ，Ｆｕｎｄａｍ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３：１６−２６，１９９９）；脳内移植後の徐放性送達のための生分解性ポリマー（例えば、ポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）ミクロスフェア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，Ｄ．Ｆ．ら，Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ８：４７−５８，１９９９，Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）；および血液脳関門を超えて薬物を送達し得かつ神経取り込み機構を変化させ得る装填されたナノ粒子（例えば、ポリブチルシアノアクリレートから製造されたもの）（Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２３：９４１−９４９，１９９９）。本発明の核酸分子の送達ストラテジーの他の例としては、Ｂｏａｄｏら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８７：１３０８−１３１５，１９９８；Ｔｙｌｅｒら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４２１：２８０−２８４，１９９９；Ｐａｒｄｒｉｄｇｅら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．９２：５５９２−５５９６，１９９５；Ｂｏａｄｏ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１５：７３−１０７，１９９５；Ａｌｄｒｉａｎ−Ｈｅｒｒａｄａら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２６：４９１０−４９１６，１９９８；およびＴｙｌｅｒら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．９６：７０５３−７０５８，１９９９に記載される物質が挙げられる。
本発明はまた、薬学的に有効な量の望ましい化合物を薬学的に受容可能なキャリアもしくは希釈剤中に含む、貯蔵もしくは投与のために調製された組成物を含む。治療的使用のための受容可能なキャリアもしくは希釈剤は、薬学分野で周知であり、そして例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編．１９８５）に記載されている。例えば、保存剤、安定化剤、色素および矯味矯臭剤が提供され得る。これらとしては、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられる。さらに、抗酸化剤および懸濁剤が使用され得る。
薬学的に有効な用量は、ある程度の疾患状態にまで、症状の発生を予防、阻害、または症状を緩和するために必要とされる用量である。活性核酸の０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の量は、投与されるべきである。
水性懸濁物は、水性懸濁物の製造に適した賦形剤と混合した状態で、活性な物質を含む。このような賦形剤は、懸濁剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピル−メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアガムである；分散剤もしくは湿潤剤は、天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン、もしくはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）もしくはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）もしくはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、またはエチレンオキシドと脂肪酸由来の部分エステルおよびヘキシトール無水物との縮合生成物（例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエート）であり得る。上記水性懸濁物はまた、１種以上の保存剤（例えば、安息香酸エチル、もしくはｎ−プロピルベンゾエート、ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１種以上の着色剤、１種以上の矯味矯臭剤、および１種以上の甘味剤（例えば、スクロースもしくはサッカリン）を含み得る。
油性懸濁物は、上記活性成分を、植物性油（例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ごま油もしくはココナツ油）中で、または鉱油（例えば、流動パラフィン）中で懸濁することによって処方され得る。上記油性懸濁物は、濃化剤（例えば、蜜蝋、固形パラフィンもしくはセチルアルコール）を含み得る。甘味剤および矯味矯臭剤は、好ましい経口処方物を提供するために添加され得る。これら組成物は、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）の添加によって保存され得る。
水を添加することによって水性懸濁物の調製に適した分散性の粉末および顆粒は、分散剤もしくは湿潤剤、懸濁剤および１種以上の保存剤と混合した状態で、上記活性成分を提供する。さらなる賦形剤（例えば、甘味剤、矯味矯臭剤および着色剤）もまた、存在し得る。
本発明の薬学的組成物はまた、水中油エマルジョンの形態で存在し得る。上記油相は、植物性油もしくは鉱油またはこれらの混合物であり得る。適切な乳化剤は、天然に存在するガム（例えば、アカシアガムもしくはトラガカントガム）、天然に存在するホスファチド（例えば、ダイズ、レシチン、および脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来するエステルもしくは部分エステル（例えば、ソルビタンモノオレエート））、およびエチレンオキシドとの上記部分エステルの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）であり得る。上記エマルジョンはまた、甘味剤および矯味矯臭剤を含み得る。
上記薬学的組成物は、滅菌注射用水性懸濁物もしくは滅菌注射用油性懸濁物の形態で存在し得る。上記懸濁物は、上記で言及した適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁剤を使用して、公知の技術に従って処方され得る。上記滅菌注射用懸濁物はまた、非毒性の非経口的に（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）受容可能な希釈剤もしくは溶媒中の、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液としての、滅菌注射用溶液もしくは懸濁物であり得る。使用され得る上記受容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル溶液、および等張性の塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌不揮発性油が、溶媒もしくは懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のために、任意の刺激の強くない不揮発性油が使用され得、上記不揮発性油としては、合成ものグリセリドもしくはジグリセリドが挙げられる。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）は、注射調製物中での使用が見いだされる。
上記ｓｉＲＮＡはまた、坐剤の形態で（例えば、薬物の直腸投与のために）投与され得る。これら組成物は、上記薬物と、常温で固体であるが、直腸温で液体であり、従って、直腸で溶解して、上記薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって、調製され得る。このような物質としては、カカオ脂およびポリエチレングリコールが挙げられる。
上記ｓｉＲＮＡは、ヌクレアーゼ耐性基（例えば、２’−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｈ）での改変によって安定性を増強するために広範囲に改変され得る。総説については、Ｕｓｍａｎ ａｎｄ Ｃｅｄｅｒｇｒｅｎ，ＴＩＢＳ １７：３４，１９９２；Ｕｓｍａｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．３１：１６３，１９９４を参照のこと。ｓｉＲＮＡ構築物は、一般的な方法を使用してゲル電気泳動によって精製され得るか、または高速液体クロマトグラフィーによって精製され得、そして水に再懸濁され得る。
改変（塩基、糖、および／もしくはホスフェート）を有する化学合成されている核酸分子は、血清リボヌクレアーゼによるそれらの分解を防止し得、それらの効力を増大させ得る。例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，国際公開番号ＷＯ９２／０７０６５；Ｐｅｒｒａｕｌｔら，Ｎａｔｕｒｅ ３４４：５６５，１９９０；Ｐｉｅｋｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３，３１４，１９９１；Ｕｓｍａｎ ａｎｄ Ｃｅｄｅｒｇｒｅｎ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１７：３３４，１９９２；Ｕｓｍａｎら，国際公開番号ＷＯ９３／１５１８７；およびＲｏｓｓｉら，国際公開番号ＷＯ９１／０３１６２；Ｓｐｒｏａｔ，米国特許第５，３３４，７１１号；ならびにＧｏｌｄら，米国特許第６，３００，０７４号を参照のこと。上記参考文献の全ては、本明細書に記載される核酸分子の塩基、ホスフェートおよび／もしくは糖部分に対して行われ得る種々の化学的改変を記載する。
ヌクレアーゼ安定性および効力において顕著な増強を有する、核酸分子へと導入され得る糖、塩基およびホスフェート改変を記載する当該分野のいくつかの例がある。例えば、オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性基（例えば、２’−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｈ、ヌクレオチド塩基改変）での改変によって、安定性を増強および／もしくは生物学的活性を増強するために改変される。総説については、Ｕｓｍａｎ ａｎｄ Ｃｅｄｅｒｇｒｅｎ，ＴＩＢＳ １７：３４，１９９２；Ｕｓｍａｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．３１：１６３，１９９４；Ｂｕｒｇｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５：１４０９０，１９９６を参照のこと。核酸分子の糖改変は、当該分野で広範囲に記載されている。Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，国際公開ＰＣＴ番号ＷＯ９２／０７０６５；Ｐｅｒｒａｕｌｔら Ｎａｔｕｒｅ ３４４：５６５−５６８，１９９０；Ｐｉｅｋｅｎら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：３１４−３１７，１９９１；Ｕｓｍａｎ ａｎｄ Ｃｅｄｅｒｇｒｅｎ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１７：３３４−３３９，１９９２；Ｕｓｍａｎら 国際公開ＰＣＴ番号ＷＯ９３／１５１８７；Ｓｐｒｏａｔ，米国特許第５，３３４，７１１号およびＢｅｉｇｅｌｍａｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２５７０２，１９９５；Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２６２７０；Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，米国特許第５，７１６，８２４号；Ｕｓｍａｎら，米国特許第５，６２７，０５３号；Ｗｏｏｌｆら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／１３５２６；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，Ｋａｒｐｅｉｓｋｙら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３９：１１３１，１９９８；Ｅａｒｎｓｈａｗ ａｎｄ Ｇａｉｔ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）４８：３９−５５，１９９８；Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６７：９９−１３４，１９９８；ならびにＢｕｒｌｉｎａら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５：１９９９−２０１０，１９９７を参照のこと。このような刊行物は、触媒作用を変化させることなく糖、塩基および／もしくはホスフェート改変などを核酸分子に組み込む位置を決定するための一般的な方法およびストラテジーを記載する。このような教示に鑑みると、類似の改変が、細胞におけるｓｉＲＮＡがＲＮＡｉを促進する能力が顕著に阻害されない限りにおいて、本発明のｓｉＲＮＡ核酸分子を改変するために本明細書に記載されるように使用され得る。
オリゴヌクレオチドヌクレオチド間連結の、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、および／もしくは５’−メチルホスホネート連結での化学的改変が安定性を改善する一方で、過剰な改変は、いくらかの毒性もしくは低下した活性を引き起こし得る。従って、核酸分子を示す場合に、これらヌクレオチド間連結の量は、最小化されるべきである。これら連結の濃度の低下は、毒性を低下させるべきであり、これら分子の増大した有効性およびより高い特異性を生じる。
いくつかの実施形態において、本発明は、１種以上のホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、モルホリノ、アミデートカルバメート、カルボキシメチル、アセトアミデート、ポリアミド、スルホネート、スルホンアミド、スルファメート、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、および／もしくはアルキルシリル置換を含むホスフェート骨格改変による改変ｓｉＲＮＡ分子を特徴とする。オリゴヌクレオチド骨格改変の総説については、Ｈｕｎｚｉｋｅｒ ａｎｄ Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｉｎ Ｍｏｄｅｒｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ＶＣＨ，１９９５，ｐｐ．３３１−４１７、およびＭｅｓｍａｅｋｅｒら，「Ｎｏｖｅｌ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」，ＡＣＳ，１９９４，ｐｐ．２４−３９を参照のこと。
核酸分子の送達のための方法は、Ａｋｈｔａｒら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２：１３９，１９９２；「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，編者Ａｋｈｔａｒ，１９９５；Ｍａｕｒｅｒら，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．１６：１２９−１４０，１９９９；Ｈｏｆｌａｎｄ ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１６５−１９２，１９９９；およびＬｅｅら，ＡＣＳ Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．７５２：１８４−１９２，２０００に記載されている。Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，米国特許第６，３９５，７１３号、およびＳｕｌｌｉｖａｎら，ＰＣＴ ＷＯ９４／０２５９５は、核酸分子の送達のための一般的方法をさらに記載する。これらプロトコルは、実質的に任意の核酸分子の送達のために利用され得る。核酸分子は、当業者に公知の種々の方法によって（リポソームによって、イオン導入法によって、または他のビヒクル（例えば、生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリン（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１０：１０６８−１０７４，１９９９；Ｗａｎｇら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／４７５１８およびＷＯ ０３／４６１８５を参照のこと）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）およびＰＬＣＡマイクロスフェア（例えば、米国特許第６，４４７，７９６号および米国特許出願公開第ＵＳ ２００２１３０４３０号を参照のこと）、生分解性ナノカプセル、ならびに生体接着性マイクロスフェア）への組み込みによって、あるいはタンパク質性ベクターによって（Ｏ’Ｈａｒｅ ａｎｄ Ｎｏｒｍａｎｄ，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５３７２２）、内部もしくは外部へ封入されることが挙げられるが、これらに限定されない）、細胞に投与され得る。あるいは、上記核酸／ビヒクル組み合わせは、直接注射によって、または注入ポンプの使用によって、局所的に送達される。本発明の核酸分子の直接注射は、皮下、筋肉内、または皮内であろうと、標準的な針およびシリンジ技術を使用して、またはニードルレス技術（例えば、Ｃｏｎｒｙら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５：２３３０−２３３７，１９９９、およびＢａｒｒｙら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９９／３１２６２において記載されるもの）によって、行い得る。本発明の分子は、薬学的因子として使用され得る。薬学的因子は、被験体における疾患状態の発生を予防させるか、変化させるか、または被験体における疾患状態を処置する（ある程度まで症状を緩和し、好ましくは、上記症状の全てを緩和する）。
「ＲＮＡ」とは、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を意味する。「リボヌクレオチド」とは、β−Ｄ−リボ−フラノース部分の２’位においてヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。この用語は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離されたＲＮＡ（例えば、部分的に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え生成されたＲＮＡ、ならびに１もしくは数個のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／もしくは変化だけ天然に存在するＲＮＡとは異なる変化したＲＮＡを包含する。このような変化は、例えば、上記ｓｉＲＮＡの末端に対して、または内部に（例えば、上記ＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドにおいて）、非ヌクレオチド物質を付加することを包含し得る。本発明のＲＮＡ分子中のヌクレオチドはまた、標準的ではないヌクレオチド（例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチド）を含み得る。これら変化させられたＲＮＡは、アナログもしくは天然に存在するＲＮＡのアナログとして言及され得る。
「キャップ構造」とは、上記オリゴヌクレオチドのいずれかの末端において組み込まれた化学的改変を意味する（例えば、Ａｄａｍｉｃら，米国特許第５，９９８，２０３号（本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。これら末端改変は、上記核酸分子がエキソヌクレアーゼ分解しないように保護し、細胞内の送達および／もしくは局在化を補助し得る。上記キャップは、５’末端（５’キャップ）もしくは３’末端（３’キャップ）において存在してもよいし、または両方の末端に存在していてもよい。非限定的な例において、上記５’キャップとしては、グリセリル、逆方向デオキシ脱塩基残基（部分）；４’，５’−メチレンヌクレオチド；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド；炭素環式ヌクレオチド；１，５−無水ヘキシトールヌクレオチド；Ｌ−ヌクレオチド；α−ヌクレオチド；改変塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート連結；スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−ｓｅｃｏヌクレオチド；非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；非環式３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆方向ヌクレオチド部分；３’−３’−逆方向脱塩基部分；３’−２’−逆方向ヌクレオチド部分；３’−２’−逆方向脱塩基部分；１，４−ブタンジオールホスフェート；３’−ホスホルアミデート；ヘキシルホスフェート；アミノヘキシルホスフェート；３’−ホスフェート；３’−ホスホロチオエート；ホスホロジチオエート；または架橋もしくは非架橋メチルホスホネート部分が挙げられるが、これらに限定されない。
上記３’キャップの例としては、グリセリル、逆方向デオキシ脱塩基残基（部分）、４’，５’−メチレンヌクレオチド；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド；５’−アミノ−アルキルホスフェート；１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート；３−アミノプロピルホスフェート；６−アミノヘキシルホスフェート；１，２−アミノドデシルホスフェート；ヒドロキシプロピル；１，５−無水ヘキシトールヌクレオチド；Ｌ−ヌクレオチド；α−ヌクレオチド；改変塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート；スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−ｓｅｃｏヌクレオチド；３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆方向ヌクレオチド部分；５’−５’−逆方向脱塩基部分；５’−ホスホルアミデート；５’−ホスホロチオエート；１，４−ブタンジオールホスフェート；５’−アミノ；架橋および／もしくは非架橋５’−ホスホルアミデート、ホスホロチオエートおよび／またはホスホロジチオエート、架橋もしくは非架橋メチルホスホネートならびに５’−メルカプト部分（より詳細については、Ｂｅａｕｃａｇｅ ａｎｄ Ｌｙｅｒ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９：１９２５，１９９３；本明細書に参考として援用される、を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。
用語「非ヌクレオチド」とは、糖および／もしくはホスフェート置換のいずれかを含み、そしてその残りの塩基が、それらの酵素活性を示すことを可能にする、１種以上のヌクレオチド単位の代わりに核酸鎖へ組み込まれ得る基もしくは化合物をいう。上記基もしくは化合物は、一般に認識されるヌクレオチド塩基（例えば、アデノシン、グアニン、シトシン、ウラシルもしくはチミン）を含まず、従って、１’位において塩基を欠いているという点で、脱塩基である。
「ヌクレオチド」とは、本明細書において使用される場合、天然の塩基（標準的）および当該分野で周知の改変塩基を含むことは当該分野で認識されているとおりである。このような塩基は、一般に、ヌクレオチド糖部分の１’位に位置する。ヌクレオチドは、一般に、塩基、糖、およびホスフェート基を含む。上記ヌクレオチドは、上記糖、ホスフェートおよび／もしくは塩基部分において改変されていなくてもよいし、改変されていてもよい（ヌクレオチドアナログ、改変ヌクレオチド、非天然のヌクレオチド、標準的でないヌクレオチドなどとして交換可能に言及される）；例えば、Ｕｓｍａｎ ａｎｄ ＭｃＳｗｉｇｇｅｎ，前出；Ｅｃｋｓｔｅｉｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０７０６５；Ｕｓｍａｎら，国際ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／１５１８７；Ｕｈｌｍａｎ＆Ｐｅｙｍａｎ，前出（全て本明細書に参考として援用される）を参照のこと。当該分野で公知の改変された核酸塩基のいくつかの例があり、Ｌｉｍｂａｃｈら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：２１８３，１９９４によってまとめられる。核酸分子に導入され得る塩基改変の非限定的な例のいくつかとしては、イノシン、プリン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、プソイドウラシル、２，４，６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５−アルキルシチジン（例えば、５−メチルシチジン）、５−アルキルウリジン（例えば、リボチミジン）、５−ハロウリジン（例えば、５−ブロモウリジン）または６−あざピリミジンもしくは６−アルキルピリミジン（例えば、６−メチルウリジン）、プロピンなどが挙げられる（Ｂｕｒｇｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５：１４０９０，１９９６；Ｕｈｌｍａｎ＆Ｐｅｙｍａｎ，前出）。この局面における「改変された塩基」とは、１’位のアデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルまたはその等価物以外のヌクレオチド塩基を意味する。
「標的部位」もしくは「標的配列」もしくは「標的化配列」とは、上記標的配列に相補的なそのアンチセンス領域内の配列を含むｓｉＲＮＡ構築物によって媒介される切断のために、「標的化」される標的核酸（例えば、ＲＮＡ）内の配列を意味する。
上記ｓｉＲＮＡ分子は、カチオン性脂質と複合体化され得るか、リポソーム内にパッケージされ得るか、または別の方法で標的細胞もしくは組織に送達され得る。上記核酸もしくは核酸複合体は、性愛ポリマー中への組み込みありまたはなしで、注射、注入ポンプもしくはステントを介して局所投与され得る。別の実施形態において、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、本発明のｓｉＲＮＡ化合物、ポリペプチドに、または両方に共有結合され得る。上記結合されたＰＥＧは、任意の分子量（好ましくは、約２，０００〜約５０，０００ダルトン（Ｄａ））であり得る。
上記センス領域は、リンカー分子（例えば、ポリヌクレオチドリンカーもしくは非ヌクレオチドリンカー）を介して、上記アンチセンス領域に接続され得る。
「逆方向反復（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｒｅｐｅａｔ）」とは、上記反復が転写された場合に二本鎖ｓｉＲＮＡを形成することができるように位置したセンス要素およびアンチセンス要素を含む核酸配列をいう。上記逆方向反復は、必要に応じて、上記反復の２つの要素の間に、リンカーもしくは異種配列（例えば、自己切断リボザイム）を含み得る。上記逆方向反復の上記要素は、二本鎖ＲＮＡを形成するに十分な長さを有する。代表的には、上記逆方向反復の各要素は、約１５〜約１００ヌクレオチドの長さ、好ましくは約２０〜３０塩基のヌクレオチド、好ましくは、約２０〜２５ヌクレオチドの長さ（例えば、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、もしくは３０ヌクレオチドの長さ）である。
「核酸」とは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドおよび一歩宇佐形態もしくは二本鎖形態のそれらのポリマーをいう。この用語は、公知のヌクレオチドアナログまたは改変骨格残基もしくは連結（これらは、合成、天然に存在する、および天然に存在しない、参照核酸として類似の結合特性を有し、上記参照ヌクレオチドに類似の様式で代謝される）を含む核酸を包含する。このようなアナログの例としては、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
「大きな二本鎖ＲＮＡ」とは、約４０ｂｐより大きい（例えば、１００ｂｐより大きい、またはより具体的には、３００ｂｐより大きい）サイズを有する任意の二本鎖ＲＮＡをいう。大きなｄｓＲＮＡの配列は、ｍＲＮＡのセグメントもしくはｍＲＮＡ全体を示し得る。上記大きなｄｓＲＮＡの最大サイズは、本明細書において限定されない。上記二本鎖ＲＮＡは、上記改変が上記ホスフェート糖骨格に対してもしくは上記ヌクレオシドに対してであり得る改変塩基を含み得る。このような改変は、窒素もしくは硫黄、ヘテロ原子もしくは当該分野で公知の任意の他の改変を含み得る。
上記二本鎖構造は、自己相補的ＲＮＡ鎖（例えば、ヘアピンもしくはマイクロＲＮＡについて存在する）によって、または２つの異なる相補的ＲＮＡ鎖のアニーリングによって、形成され得る。
「重複（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）」とは、２つのＲＮＡフラグメントが、一方の鎖上に複数のヌクレオチドによって重複する配列を有する場合、例えば、上記複数のヌクレオチド（ｎｔ）が２〜５ヌクレオチド程度の、もしくは５〜１０ヌクレオチドまで、またはそれ以上に達する場合をいう。
「１つ以上のｄｓＲＮＡ」とは、一次配列に基づいて互いに異なるｄｓＲＮＡをいう。
「標的遺伝子もしくはｍＲＮＡ」とは、任意の遺伝子もしくは目的のｍＲＮＡをいう。標的遺伝子もしくはｍＲＮＡは、発生的遺伝子および調節性遺伝子、ならびに代謝遺伝子もしくは構造遺伝子または酵素をコードする遺伝子を含み得る。上記標的遺伝子は、内因性であってもよいし、外因性であってもよい。上記標的遺伝子は、表現型が調査されている細胞において、もしくは生物において、表現型特徴に直接的もしくは間接的に影響を及ぼす様式において発現され得る。このような細胞としては、成体もしくは胚性動物もしくは植物の体（不死化細胞株または初代細胞培養物中に存在するような配偶子もしくは任意の単離された細胞を含む）の任意の細胞が挙げられる。
（抗敗血症効果のための使用）
いくつかの局面において、本開示は、一般に、敗血症の分野に関する。より具体的には、本発明は、アミノ酸脂質の組成物および処方物、ならびに医薬のためおよび治療剤としてのそれらの使用に関する。本発明は、一般に、敗血症、敗血性ショック、炎症性敗血症、敗血症、もしくは全身性炎症反応症候群を予防、処置、もしくは改善するために、アミノ酸脂質を使用するための方法に関する。
敗血症は、免疫系が損なわれているかまたは打ちのめされた場合に感染によって、または特定の化学療法剤に起因して、引き起こされ得る。例えば、グラム陰性細菌のエンドトキシンは、敗血性ショックを誘導し得る。グラム陰性敗血症は、集中治療中の死亡の主要な原因である。抗微生物治療単独は、敗血症症例における死亡を予防するには不十分であり得る。敗血症は、先天的免疫応答の広くなった活性化が付随し得、種々の炎症性メディエーターの制御されない生成がもたらされる。上記制御されない全身性炎症応答は、死亡を引き起こし得る。
本開示のアミノ酸脂質は、特定のエンドトキシン（例えば、リポポリサッカリド）に対して上記免疫応答を低下させることに関して活性であり得る。本開示のカチオン性の両親媒性アミノ酸脂質は、エンドトキシンを結合および中和し得、それによって、免疫応答を低下させ得る。従って、本開示は、敗血症、敗血性ショック、炎症性敗血症、敗血症、もしくは全身性炎症反応症候群を予防、処置もしくは改善するための医薬および方法におけるアミノ酸脂質の使用を企図する。
（活性薬剤の送達のための使用）
本発明の化合物および組成物は、上記のように、または当該分野で公知のように、任意の生理学的に活性な薬剤、ならびに活性薬剤の任意の組み合わせの送達のために使用され得る。上記活性薬剤は、望ましい生理学的効果もしくは改善効果を提供するに十分な量において、本発明の組成物および使用において存在し得る。
本発明の化合物および組成物は、哺乳動物被験体においてある範囲の薬物因子および生物学的に活性な薬剤（低分子化合物および薬物、ペプチド、タンパク質、およびワクチン因子が挙げられる）の送達を増強することに関する。
活性薬剤の例としては、ペプチド、タンパク質、核酸、二本鎖ＲＮＡ、増血剤、抗感染剤；抗痴呆剤；抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、解熱剤、鎮痛剤、抗炎症剤、抗潰瘍剤、抗アレルギー剤、抗鬱剤、向精神薬、強心剤、抗不整脈薬（ａｎｔｉａｒｒｙｔｈｍｉｃ）、血管拡張薬、抗高血圧薬、降圧利尿薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、コレステロール低下剤、骨粗鬆症のための治療剤、ホルモン、抗生物質、ワクチン、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、心血管因子、細胞接着因子、中枢神経系因子もしくは末梢神経系因子、体液性電解質因子（ｈｕｍｏｒａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ ｆａｃｔｏｒ）、血管の有機物質（ｈｅｍａｌ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）、骨増殖因子、胃腸因子、腎臓因子、結合組織因子、感覚器官因子、免疫系因子、呼吸器系因子、生殖器因子、アンドロゲン、エストロゲン、プロスタグランジン、ソマトトロピン、ゴナドトロピン、インターロイキン、ステロイド、細菌トキソイド、抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント、および免疫グロブリンが挙げられる。
活性薬剤の例としては、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、インスリン、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、インターフェロン、ヘパリン、ヒルゲン（ｈｉｒｕｇｅｎ）、ヒルロス、およびヒルジンが挙げられる。
活性薬剤の例としては、モルフィン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール（ｌｏｖｏｒｐｈａｎｏｌ）、レバロルファン、コデイン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン（ｎａｌｏｚｏｎｅ）、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、またはナルブフィン（ｎａｌｂｕｆｉｎｅ）、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、パラメタゾン（ｐａｒａｍｅｔｈｏｓｏｎｅ）、フルオシノロン、コルヒチン、アセトアミノフェン、非ステロイド性抗炎症剤 ＮＳＡＩＤ、アシクロビル、リババリン（ｒｉｂａｖａｒｉｎ）、トリフルオロチミジン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｔｈｙｒｉｄｉｎｅ）、Ａｒａ−Ａ アラビノフラノシルアデニン、アシルグアノシン、ノルデオキシグアノシン、アジドチミジン、ジデオキシアデノシン、ｄｉデオキシシチジン、スピロノラクトン、テストステロン、エストラジオール、プロゲスチン、ゴナドトロピン、エストロゲン、プロゲステロン、パパベリン、ニトログリセリン、血管作用性腸管ペプチド、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、サイプロヘプタジン、ドクサピン、イミプラミン、シメチジン、デキストロメトルファン、クロザリル、スーパーオキシドジスムターゼ、ニューロエンケファリナーゼ（ｎｅｕｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎａｓｅ）、アンフォテリシン Ｂ、グリセオフルビン、ミコナゾール、ケトコナゾール、チオコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、セファロスポリン、テトラサイクリン、アミノグルコシド、エリスロマイシン（ｅｒｙｔｈｒｏｍｉｃｉｎ）、ゲンタマイシン、ポリミキシン Ｂ、５−フルオロウラシル、ブレオマイシン、メトトレキサート、ヒドロキシウレア、ジデオキシイノシン、フロクスウリジン、６−メルカプトプリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン（Ｉ−ｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、タキソール、パクリタキセル、トコフェロール、キニジン、プラゾシン、ベラパミル、ニフェジピン、ジルチアゼム、組織プラスミノゲン活性化因子 ＴＰＡ、上皮増殖因子 ＥＧＦ、線維芽細胞増殖因子 ＦＧＦ−酸性もしくは塩基性、血小板由来増殖因子 ＰＤＧＦ、トランスホーミング増殖因子 ＴＧＦ−αもしくはβ、血管作用性腸管ペプチド、腫瘍壊死因子 ＴＮＦ、視床下部放出因子（ｈｙｐｏｔｈａｌｍｉｃ ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン ＴＳＨ、副腎皮質刺激ホルモン ＡＣＴＨ、副甲状腺ホルモン ＰＴＨ、濾胞刺激ホルモン ＦＳＦ、黄体形成ホルモン放出ホルモン ＬＨＲＨ、エンドルフィン、グルカゴン、カルシトニン、オキシトシン、カルベトシン、アルドエテコン（ａｌｄｏｅｔｅｃｏｎｅ）、エンケファリン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、α−メラニン細胞刺激ホルモン、リドカイン、スフェンタニル（ｓｕｆｅｎｔａｉｎｉｌ）、テルブタリン、ドロペリドール、スコポラミン、ゴナドレリン、シクロピロックス、ブスピロン、クロモリンナトリウム、ミダゾラム、シクロスポリン、リシノプリル、カプトプリル、デラプリル、ラニチジン、ファモチジン、スーパーオキシドジスムターゼ、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ リボヌクレアーゼ、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、ボンベシン、サブスタンスＰ、バソプレッシン、α−グロブリンｓ、トランスフェリン、フィブリノゲン、β−リポタンパク質、β−グロブリン、プロトロンビン、セルロプラスミン、α２−糖タンパク質、α２−グロブリン、フェチュイン、α１−リポタンパク質、α１−グロブリン、アルブミン、およびプレアルブミンが挙げられる。
活性薬剤の例としては、オピオイドもしくはオピオイドアンタゴニスト（例えば、モルフィン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン，レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、およびナルブフィン）；コルチコステロン（例えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、パラメタゾン、およびフルオシノロン）；他の抗炎症剤（例えば、コルヒチン、イブプロフェン、インドメタシン、およびピロキシカム）；抗ウイルス剤（例えば、アシクロビル、リババリン、トリフルオロチミジン、Ａｒａ−Ａ（アラビノフラノシルアデニン）、アシルグアノシン、ノルデオキシグアノシン、アジドチミジン、ジデオキシアデノシン、およびジデオキシシチジン）；抗アンドロゲン（例えば、スピロノラクトン）；アンドロゲン（例えば、テストステロン）；エストロゲン（例えば、エストラジオール）；プロゲスチン；筋弛緩剤（例えば、パパベリン）；血管拡張薬（例えば、ニトログリセリン、血管作用性腸管ペプチドおよびカルシトニン関連遺伝子ペプチド）；抗ヒスタミン剤（例えば、サイプロヘプタジン）；ヒスタミンレセプター部位ブロッキング活性を有する薬剤（例えば、ドクサピン、イミプラミン、およびシメチジン）；鎮咳薬（例えば、デキストロメトルファン）；神経弛緩薬（例えば、クロザリル）；抗不整脈薬；抗癲癇薬；酵素（例えば、スーパーオキシドジスムターゼおよびニューロエンケファリナーゼ）；抗真菌剤（例えば、アンフォテリシンＢ、グリセオフルビン、ミコナゾール、ケトコナゾール、チオコナゾール、イトラコナゾール、およびフルコナゾール）；抗細菌剤（例えば、ペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、アミノグルコシド、エリスロマイシン、ゲンタマイシン、ポリミキシンＢ）；抗癌剤（例えば、５−フルオロウラシル、ブレオマイシン、メトトレキサート、およびヒドロキシウレア、ジデオキシイノシン、フロクスウリジン、６−メルカプトプリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、タキソール、およびパクリタキセル）；抗酸化剤（例えば、トコフェロール、レチノイド、カロチノイド、ユビキノン、金属キレート化剤、およびフィチン酸）；抗不整脈薬（例えば、キニジン）；降圧剤（例えば、プラゾシン、ベラパミル、ニフェジピン、およびジルチアゼム）；鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェンおよびアスピリン）；モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（ヒト化抗体、および抗体フラグメントを含む）；アンチセンスオリゴヌクレオチド；ならびにＲＮＡ、調節性ＲＮＡ、干渉ＲＮＡ、ＤＮＡ、およびウイルスベクター（治療用ペプチドおよびタンパク質をコードする遺伝子を含む）が挙げられる。
（投与のための組成物および処方物）
本明細書において使用される場合、用語「投与する」および「投与」とは、化合物もしくは組成物を作用部位に直接的にもしくは間接的に送達するための全ての手段を包含する。本開示の化合物および組成物は単独で投与されてもよいし、本明細書で開示されていない他の化合物、組成物、もしくは治療剤と組み合わせて投与されてもよい。
本発明の組成物および方法は、種々の粘膜投与様式によって（経口、直腸、膣、経鼻、肺内、もしくは皮内送達によるもの、または眼、耳、皮膚もしくは他の粘膜表面への局所送達によるものが挙げられる）、被験体に投与され得る。本発明のいくつかの局面において、上記粘膜組織層は、上皮細胞層を含む。上記上皮細胞は、肺、気管、気管支、肺胞、鼻、口内、表皮、もしくは胃腸管のものであり得る。本発明の組成物は、従来の作動器（例えば、機械式スプレーデバイス、加圧式、電子作動式、もしくは他のタイプの作動器）を使用して、投与され得る。
本発明の組成物は、鼻スプレーもしくは肺スプレーとして水溶液中で投与され得、そして当業者に公知の種々の方法によって、スプレー形態で分与され得る。本発明の組成物の肺送達は、小滴、粒子、もしくはスプレー（これらは、例えば、エアロゾル化され得るか、霧状にされ得るか、または噴霧され得る）の形態において、上記組成物を投与することによって、達成され得る。肺送達は、上記組成物を、小滴、粒子、もしくはスプレーの形態において、鼻経路もしくは気管支経路を介して投与することによって、行われ得る。上記組成物、スプレー、もしくはエアロゾルの粒子は、液体形態もしくは固体形態のいずれかにおいて存在し得る。鼻スプレーとして液体を分与するために好ましいシステムは、米国特許第４，５１１，０６９号において開示されている。このような処方物は、本発明に従う組成物を水に溶解して、水溶液を生成し、そして上記溶液を滅菌することによって、従来通りに調製され得る。上記処方物は、複数用量容器において（例えば、米国特許第４，５１１，０６９号で開示されている密封分与システムにおいて）与えられ得る。他の適切な鼻スプレー送達システムは、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ，Ｙ．Ｗ．Ｃｈｉｅｎ編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５；および米国特許第４，７７８，８１０号において記載されている。さらなるエアロゾル送達形態としては、例えば、圧縮空気式ネブライザー、ジェットネブライザー、超音波式ネブライザー、および圧電式ネブライザーが挙げられ得、これらは、薬学的溶媒（例えば、水、エタノール、もしくはこれらの混合物）に溶解もしくは懸濁される上記生物学的に活性な薬剤を送達する。
本発明の鼻スプレー溶液および肺スプレー溶液は、代表的には、送達されるべき薬物を含み得、必要に応じて、表面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート−８０）、および１種以上の緩衝液とともに処方され得る。本発明のいくつかの実施形態において、上記鼻スプレー溶液は、プロペラントをさらに含む。上記鼻すぷれー溶液のｐＨは、約ｐＨ６．８〜７．２であり得る。上記使用される薬学的溶媒はまた、ｐＨ４〜６のわずかに酸性の水性緩衝液であり得る。他の成分は、化学的安定性を増強もしくは維持するために添加され得る（保存剤、界面活性剤、分散剤もしくはガスが挙げられる）。
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の組成物を含む溶液と、該、粘膜、もしくは鼻内スプレーもしくはエアロゾルのための作動器とを含む薬学的製品である。
本発明の組成物の投与形態は、液滴もしくはエマルジョンの形態の、またはエアロゾルの形態の、液体であり得る。
本発明の組成物の投与形態は固体であり得、この固体は、投与前に液体中で再構成され得る。上記固体は、散剤として投与され得る。上記固体は、カプセル剤、錠剤もしくはゲルの形態で存在し得る。
本発明の範囲内の肺送達のための組成物を処方するために、上記生物学的に活性な薬剤は、種々の薬学的に受容可能な添加剤もしくは送達増強成分、ならびに上記活性薬剤の分散のためのベース（ｂａｓｅ）もしくはキャリアと合わせられ得る。添加剤もしくは送達増強成分の例としては、ｐＨ制御薬剤（例えば、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸、およびこれらの混合物）が挙げられる。他の添加剤もしくは送達増強成分としては、局所麻酔剤（例えば、ベンジルアルコール）、等張剤（ｉｓｏｔｏｎｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔ）（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、吸着インヒビター（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０）、溶解度増強剤（例えば、シクロデキストリンおよびその誘導体）、安定化剤（例えば、血清アルブミン）、および還元剤（例えば、グルタチオン）が挙げられる。粘膜送達のための組成物が液体である場合、上記処方物の張性は、調和として採用される０．９％（ｗ／ｖ） 生理食塩水溶液の張性に関して測定される場合、代表的には、実質的な、不可逆的な組織損傷が投与部位の粘膜において誘導されない値に調節される。一般には、上記溶液の張性は、約１／３〜３、より代表的には、１／２〜２、およびもっとも頻繁には、３／４〜１．７の値に調節される。
上記生物学的に活性な薬剤は、ベースもしくはビヒクル中に分散され得、これらベースもしくはビヒクルは、上記活性薬剤を分散させる能力を有する親水性化合物および任意の望ましい添加剤を含み得る。上記ベースは、広い範囲の適切なキャリア（ポリカルボン酸もしくはその塩、カルボン酸無水物（例えば、マレイン酸無水物）と、他のモノマー（例えば、メチル（メタ）アクリレート、非環式の酸などとのコポリマー、親水性ビニルポリマー（例えば、ポリビニルアセテート、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン）、セルロース誘導体（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなど）、および天然のポリマー（例えば、キトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸、およびこれらの非毒性金属塩）が挙げられるが、これらに限定されない）から選択され得る。生分解性ポリマーは、ベースもしくはキャリア（例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）コポリマー、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）コポリマーおよびこれらの混合物）として選択され得る。代わりに、またはさらに、合成脂肪酸エステル（例えば、ポリグリセリン脂肪酸エステル、脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステルなど）は、キャリアとして使用され得る。親水性ポリマーおよび他のキャリアは単独で使用され得るか、または組み合わせて使用され得、そして増強された構造完全性は、部分的結晶化、イオン結合、架橋などによって、上記キャリアに付与され得る。上記キャリアは、種々の形態（流体もしくは粘性の溶液、ゲル、ペースト、散剤、マイクロスフェアおよび上記鼻粘膜への直接適用のためのフィルムが挙げられる）に適用され得る。この文脈において選択されるキャリアの使用は、上記生物学的に活性な薬剤の吸収の促進を生じ得る。
上記生物学的に活性な薬剤は、種々の方法に従って上記ベースもしくはキャリアと合わせられ得、上記活性薬剤の放出は、希釈、上記キャリアの分散、または水チャネルのエアロゾル化処方物によってであり得る。いくつかの状況において、上記活性薬剤は、適切なポリマー（例えば、イソブチル ２−シアノアクリレートから調製されたマイクロカプセル（マイクロスフェア）もしくはナノ粒子（ナノスフェア）に分散させされ（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３：１−５，１９９１を参照のこと）、そして鼻粘膜に適用される生体適合性分散媒体中に分散させられ、このことは、保護された時間にわたって維持された送達および生物学的活性を生じる。
粘膜送達、鼻送達、もしくは肺送達のための処方物は、ベースもしくは賦形剤として、親水性低分子量化合物を含み得る。このような親水性低分子量化合物は、通過媒体（ｐａｓｓａｇｅ ｍｅｄｉｕｍ）を提供し、この媒体を介して、水溶性活性薬剤（例えば、生理学的に活性なペプチドもしくはタンパク質）が、上記ベースを介して、上記活性薬剤が吸収される新体表面へと分散させられ得る。上記親水性低分子量化合物は、必要に応じて、上記粘膜もしくは上記投与雰囲気から水分を吸収し、そして上記水溶性活性ペプチドを溶解する。上記親水性低分子量化合物の分子量は、一般に、多くて１０，０００であり、好ましくは、多くて３０００である。親水性低分子量化合物の例としては、ポリオール化合物（例えば、オリゴ糖、二糖、および単糖（スクロース、マンニトール、ラクトース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−エリトロース、Ｄ−リボース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、ラクツロース、セロビオース、ゲンチビオース（ｇｅｎｔｉｂｉｏｓｅ）、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物が挙げられる））が挙げられる。親水性低分子量化合物のさらなる例としては、Ｎ−メチルピロリドン、アルコール（例えば、オリゴビニルアルコール、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコールなど）、およびこれらの混合物が挙げられる。
本発明の組成物は、代わりに、生理学的条件に近づけるために必要とされる場合、薬学的に受容可能なキャリア物質として、例えば、ｐＨ調節剤および緩衝化剤、張性調節剤、および湿潤剤（例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、およびこれらの混合物を含み得る。固体組成物については、従来の非毒性の薬学的に受容可能なキャリアが使用され得、上記キャリアとしては、例えば、製薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。
本発明の特定の実施形態において、上記生物学的に活性な薬剤は、時間放出処方物において（例えば、遅延放出ポリマーを含む組成物において）投与され得る。上記活性薬剤は、急速な放出に対して保護されるキャリア（例えば、制御放出ビヒクル（例えば、ポリマー、ミクロ封入送達系もしくは生体接着性ゲル）とともに調製され得る。上記活性薬剤の長期送達は、本発明の種々の組成物において、吸収を遅延させる組成物因子（例えば、アルミニウムモノステアレートヒドロゲルおよびゼラチン）中に含めることによって、もたらされ得る。
本発明の特定の実施形態において、組成物は、１種以上の天然もしくは合成界面活性剤を含み得る。特定の天然界面活性剤は、ヒト肺（肺界面活性剤）中に見いだされ、そして肺胞の空気−液体界面において単層を形成し、そして呼息時に表面張力をほぼゼロへと低下させ、肺胞虚脱を防止するリン脂質およびタンパク質の複合混合物である。肺界面活性剤のうちの９０％超（重量で）が、リン脂質から構成され、約４０〜８０％がＤＰＰＣであり、その残りが不飽和ホスファチジルコリン ＰＯＰＧ、ＰＯＰＣおよびホスファチジルグリセロールである。界面活性剤の残りの１０％（重量で）は、血漿タンパク質およびアポプロテイン（例えば、表面タンパク質（ＳＰ）−Ａ、ＳＰ−Ｂ、ＳＰ−ＣおよびＳＰ−Ｄ）から構成される。
本発明において使用され得る天然界面活性剤の例としては、ＳＵＲＶＡＮＴＡＴＭ（ベラクタント（ｂｅｒａｃｔａｎｔ））、ＣＵＲＯＳＵＲＦＴＭ（ポラクタントα（ｐｏｒａｃｔａｎｔ ａｌｆａ））およびＩＮＦＡＳＵＲＦＴＭ （カルファクタント（ｃａｌｆａｃｔａｎｔ））、およびこれらの混合物が挙げられる。
合成界面活性剤の例としては、シナプルチド（ｓｉｎａｐｕｌｔｉｄｅ）；ジパルミトイルホスファチジルコリン、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロールおよびパルミチン酸の混合物；ＳＵＲＦＡＸＩＮＴＭ（ルシナクタント（ｌｕｃｉｎａｃｔａｎｔ））；ならびにＥＸＯＳＵＲＦＴＭ（コルフォスセリル（ｃｏｌｆｏｓｃｅｒｉｌ））；チロキサポール、ＤＰＰＣ、およびヘキサデカノールを含み得る成分；ならびにこれらの混合物が挙げられる。
本発明の組成物は、当該分野で公知の方法によって調製され得る。上記脂質組成物を作製するための方法としては、エタノール注入法および規定された孔サイズの積層（ｓｔａｃｋｅｄ）ポリカーボネート膜フィルタを備えるＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｌｉｐｉｄｓ Ｌｉｐｅｘ Ｅｘｔｒｕｄｅｒシステムを用いる押し出し法が挙げられる。プローブチップおよびバス超音波処理器を使用する超音波処理は、均一なサイズの脂質粒子を生成するために使用され得る。均質かつ単分散性粒径は、上記核酸成分を添加することなく得られ得る。インビトロトランスフェクション組成物については、上記核酸成分は、上記トランスフェクション剤が作製され、さらなる緩衝剤成分によって安定化した後に、添加され得る。インビボ送達組成物については、上記核酸成分は、上記処方物の一部である。
本発明の組成物および処方物は、種々の経路によって、例えば、静脈内経路、非経口経路、もしくは腹腔内経路を介した全身送達をもたらすために投与され得る。いくつかの実施形態において、薬剤は、細胞内に、例えば、標的組織（例えば、肺もしくは肝臓）の細胞に、または炎症組織に送達され得る。被験体の細胞を取り出し、上記取り出された細胞に薬剤を送達し、そして上記細胞を被験体に再導入することによる、薬剤の送達のための組成物および方法が、本開示内に包含される。いくつかの実施形態において、本発明は、薬剤をインビボで送達するための方法を提供する。組成物は、被験体に、静脈内投与、皮下投与、もしくは腹腔内投与され得る。いくつかの実施形態において、本発明は、哺乳動物被験体の肺へ薬剤をインビボで送達するための方法を提供する。
（さらなる実施形態）
本明細書に引用される全ての刊行物、参考文献、特許、特許公開および特許出願は、各々その全体が本明細書に具体的に援用される。
本発明は、特定の実施形態に関連して記載し、多くの詳細が例示目的で示されてきたが、本発明がさらなる実施形態を包含し、そして本明細書に記載される詳細のうちのいくらかが、本発明から逸脱することなくかなり変動し得ることは、当業者にとって明らかである。本発明は、このようなさらなる実施形態、改変および等価物を包含する。特に、本発明は、種々の例示的成分および例の特徴、用語、もしくは要素の任意の組み合わせを包含する。
本発明および特許請求の範囲を記載するにあたって、用語「１つの、ある（ａ）」、「１つの、ある（ａｎ）」、「上記、この、その（ｔｈｅ）」および類似の用語の本明細書での使用は、単数形および複数形の両方を含むと解釈されるべきである。
用語「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、例えば、「〜を含む（〜が挙げられる）が、これらに限定されない」を意味する、開放系の用語として解釈されるべきである。従って、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」のような用語は、包括的であって、排他的ではないと解釈されるべきである。
本明細書中の値の範囲の記載は、上記範囲内の値のうちのいくつかが明確に記載されようとそうでなかろうと、本明細書に個々に記載されているかのように、上記範囲内に入る各々の値および任意の別個の値に個々に言及する。例えば、範囲「４〜１２」は、値５、５．１、５．３５、および４以上１２以下の任意の他の自然数、整数、分数、もしくは有理数を含むが、これらに限定されない。本明細書において使用される特定の値は、例示として理解され、本発明の範囲を限定するとは理解されない。
本明細書中の炭素原子数の範囲の記載は、上記範囲内の値のうちのいくつかが明確に記載されようとそうでなかろうと、本明細書に個々に記載されているかのように、上記範囲内に入る各々の値および任意の別個の値に個々に言及する。例えば、用語「Ｃ１−２２」とは、種Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、およびＣ２２を含むが、これらに限定されない。
本明細書において提供される技術用語の定義は、記載されていなくても、当業者に公知のこれらの用語と関連した意味を含むと解釈されるべきであって、本発明の範囲を限定するとは意図されない。本明細書において提供される技術用語の定義は、当該分野での別の選択肢的定義が本明細書に提供される定義と矛盾する場合は、上記選択肢的定義もしくは本明細書に参考として援用される定義に優先すると解釈されるものとする。
本明細書に示される実施例、および本明細書において使用される例示的な言葉は、例示目的に過ぎず、本発明の範囲を限定するとは意図しない。
例の列挙（例えば、本発明に適した化合物もしくは分子の列挙）が示される場合、上記列挙された化合物もしくは分子の混合物もまた適していることは、当業者に明らかである。
（実施例１：Ｃ１０−Ａｒｇ−Ｃ１０ Ｎ−（５−グアニジノ−１−オキソ−１−（デシルアミノ）ペンタン−２−イル）デカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、５．０６ｇ（１１．７ｍｍｏｌ，３当量）のＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６４８．８，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０４−１２−１１４５）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ，３．３当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間脱保護した。
Ｃ１０−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のデカン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２７．２７）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基が存在しない）。
Ｃ１０−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５８０．８３）を、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭ（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過する）によって上記樹脂から切断し、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１０−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｃ１０（Ｍｗ＝７２０．１３）。第２のカップリングを、溶液中で行った。前の反応からの油状残渣に、５０ｍｌのＤＭＦ中の２．３２ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１０−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１５７．３，ｄ＝０．７９２）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１０−Ａｒｇ−Ｃ１０（Ｍｗ＝４６７．８）。前の反応からの油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＡｃＣＮ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１に溶解し、Ｃ１８ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＲＰ，２５０×２１．２ｍｍ，Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．：２３４２３６−１，カラム容積８３ｍｌ）上でＲＰ＿Ａｋｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒによって精製し、３ ＣＶ内の移動相として、水を使用する０〜１００％ アセトニトリル勾配；Ｘ＝２１５ｎｍで溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、その生成物を凍結乾燥した。
（実施例２：Ｃ１０−Ｄ−Ａｒｇ−Ｃ１０ Ｎ−（５−グアニジノ−１−オキソ−１−（デシルアミノ）ペンタン−２−イル）デカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ 置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、５．０６ｇ（１１．７ｍｍｏｌ，３当量）のＦｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６６２．８，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０４−１２−１１４５）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ，３．３当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１０−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、そしてカップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のデカン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２７．２７）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、そして反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１０−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５９１．８４）を、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって上記樹脂から切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１０−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｃ１０（Ｍｗ＝７３２．１４）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＭＦ中の２．３２ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１０−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１５７．３，ｄ＝０．７９２）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１０−Ｄ−Ａｒｇ−Ｃ１０（Ｍｗ＝４６７．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＡｃＣＮ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１中に溶解し、そしてＣ１８ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＲＰ，２５０×２１．２ｍｍ，Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．：２３４２３６−１，カラム容積 ８３ｍｌ）上のＲＰ＿Ａｋｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒによって精製し、そして３ ＣＶ内の移動相として水を使用して、０〜１００％ アセトニトリル勾配；λ＝２１５ｎｍで溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、その生成物を凍結乾燥した。
（実施例３：Ｃ１２−Ａｒｇ−Ｃ１２ Ｎ−（５−グアニジノ−１−オキソ−１−（ドデシルアミノ）ペンタン−２−イル）ドデカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。２００ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、８．４３４ｇ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６４８．８，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０４−１２−１１４５）および２．２６ｍｌ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、５０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで２回、１５分間にわたって脱保護した。
Ｃ１２−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌのＤＭＦ中の１．９５ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のドデカン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２００．３２）、４．０３３（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１７．７）および１．７ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１２−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６０８．９）を、上記樹脂から、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１２−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝７７６．１３）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応工程からの油状残渣に、５０ｍｌのＤＣＭ中の１．２４６ｇ（６．５ｍｍｏｌ）のＥＤＣ＊ＨＣｌ（Ｍｗ＝１９１．７）、１．０６ｇ（７．１５ｍｍｏｌ，１．１当量）のＨＯＢｔ＊Ｈ２Ｏ（Ｍｗ＝１５３）、および５．６５ｍｌ（３１．５ｍｍｏｌ，５当量）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加して、−ＣＯＯＨを予め活性化し、続いて、１．３２ｇ（７．１５ｍｍｏｌ）のＣ１２−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１８５．３６）を２０分間後に添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。その生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器、４０ｇ 順相（ｎｏｒｍａｌ ｐｈａｓｅ）シリカゲルカラム、５ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭ、および１０ ＣＶに対して０〜５％ ＭｅＯＨ、検出２５４ ｎｍ、流速４０ｍｌ／分で精製した。
Ｃ１２−Ａｒｇ−Ｃ１２（Ｍｗ＝５２３．８）。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌの８５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後、溶媒をエバポレートした。その生成物を、０．５Ｍ ＨＣｌで沈澱させた。
（実施例４：Ｃ１２−Ａｒｇ−Ｃ１４ Ｎ−（５−グアニジノ−１−オキソ−１−（テトラデシルアミノ）ペンタン−２−イル）ドデカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。２００ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、８．４３４ｇ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６４８．８，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０４−１２−１１４５）および２．２６ｍｌ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、５０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで１５分間にわたって２回脱保護した。
Ｃ１２−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌのＤＭＦ中の１．９５ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のドデカン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２００．３２），４．０３３（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１７．７）および１．７ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１２−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６０８．９）を、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって上記樹脂から切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１２−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｃ１４（Ｍｗ＝８０４．１３）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の工程からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＣＭ中の１．２４６ｇ（６．５ｍｍｏｌ）のＥＤＣ＊ＨＣｌ（Ｍｗ＝１９１．７）、１．０６ｇ（７．１５ｍｍｏｌ，１．１当量）のＨＯＢｔ＊Ｈ２Ｏ（Ｍｗ＝１５３）、および５．６５ｍｌ（３１．５ｍｍｏｌ，５当量）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加して、−ＣＯＯＨを予め活性化し、続いて、１．５２ｇ（７．１５ｍｍｏｌ）のＣ１４−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２１３．４１）を２０分後に添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。その生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器、４０ｇ順相シリカゲルカラム、５ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜５％ ＭｅＯＨ、検出２５４ｎｍ、流速４０ｍｌ／分で精製した。
Ｃ１２−Ａｒｇ−Ｃ１４（Ｍｗ＝５５１．８）。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌの８５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後に、溶媒をエバポレートした。その生成物を、０．５Ｍ ＨＣｌで沈澱させた。
（実施例５）
実施例１〜４と類似の様式において、Ｃ１４−Ａｒｇ−Ｃ１４（収量：１．６ｇ）、Ｃ１６−Ａｒｇ−Ｃ１６、およびＣ１８−Ａｒｇ−Ｃ１８を作製した。
（実施例６：Ｃ１８（オレイック（ｏｌｅｉｃ））−Ａｒｇ−Ｃ１６ Ｎ−（５−グアニジノ−１−オキソ−１−（ヘキサデシルアミノ）ペンタン−２−イル）オクタデカ−９−エナミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。６０ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、８．４ｇ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６４８．８，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０４−１２−１１４５）および２．２６ｍｌ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、５０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで１５分間にわたって、２回脱保護した。
Ｃ１８オレイック−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌのＤＭＦ中の３．１ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８２．４７；ｄ＝０．８９１）、４ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および１．７ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８オレイック−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６９０．８３）を、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって上記樹脂から切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｃ１６ （Ｍｗ＝８５０．１３）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の工程からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＣＭ中の１．４３７ｇ（７．５ｍｍｏｌ）のＥＤＣ＊ＨＣｌ（Ｍｗ＝１９１．７）、１．１７８ｇ（７．７ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔ＊Ｈ２Ｏ（Ｍｗ＝１５３）、および６．５ｍｌ（３７．５ｍｍｏｌ，５当量）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加して、−ＣＯＯＨを脱保護し、続いて、１．８６ｇ（７．７ｍｍｏｌ）のＣ１６−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２４１．４６）を２０分後に添加した。一晩の反応後に、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＤＣＭ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。その生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器、４０ｇ順相シリカゲルカラム、５ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜５％ ＭｅＯＨ、検出２１５ｎｍ、流速４０ｍｌ／分で精製した。
Ｃ１８オレイック−Ａｒｇ−Ｃ１６（Ｍｗ＝６６１．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後に、溶媒をエバポレートした。生成物を０．５Ｍ ＨＣｌで沈澱させ、精製した。収量：１．８ｇ。
（実施例７：Ｃ８−ホモＡｒｇ−Ｃ８ Ｎ−（６−グアニジノ−１−オキソ−１−（オクチルアミノ）ヘキサン−２−イル）オクタンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、３．５７ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６１０．６９，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）および２．０４ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ，３．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ８−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．８５４ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ８酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１４４．２２，ｄ＝０．９１）、４．８４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ８−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５１４．６８）を、上記樹脂から、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ８−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ８（Ｍｗ＝６２５．９３）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＭＦ中の１．９３ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ８−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２９．２５，ｄ＝０．７８２）、４．８４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ８−ｈＡｒｇ−Ｃ８（Ｍｗ＝４２６．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１：１に溶解し、ＲＰ＿Ａｋｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒによって、Ｃ１８ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＲＰ，２５０×２１．２ｍｍ，Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．：２３４２３６−１，カラム容積８３ｍｌ）で精製し、３ ＣＶ内の移動相として水を使用して、５０〜１００％ アセトニトリル勾配；l＝２１５ｎｍで溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、その生成物を凍結乾燥した。
（実施例８：Ｃ１０−ホモＡｒｇ−Ｃ１０ Ｎ−（６−グアニジノ−１−オキソ−１−（デシルアミノ）ヘキサン−２−イル）デカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、３．５７ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６１０．６９，Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）および２．０４ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ，３．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１０−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のデカン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２７．２７）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１０−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５４１．７８）を、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって上記樹脂から切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１０−ｈＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１０（Ｍｗ＝６８２．０８）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＭＦ中の２．３２ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１０−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１５７．３，ｄ＝０．７９２）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１０−ｈＡｒｇ−Ｃ１０（Ｍｗ＝４８１．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＭｅＯＨ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１中に溶解し、Ｈ２Ｏで沈澱させた。
（実施例９：Ｃ１２−ホモＡｒｇ−Ｃ１２ Ｎ−（６−グアニジノ−１−オキソ−１−（ドデシルアミノ）ヘキサン−２−イル）ドデカンアミドの調製）
実施例８に類似の様式で、Ｃ１２−ホモＡｒｇ−Ｃ１２（収量：１ｇ）を作製した。
（実施例１０：Ｃ８−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ８ Ｎ−（３−グアニジノ−１−オキソ−１−（オクチルアミノ）プロパン−２−イル）オクタンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、２．５ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４２６．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−β−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸），ＡｎａＳｐｅｃ，２２１４０）および２．０３ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ，３．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｐ−（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ８−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．２３６ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ８酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１４４．２２，ｄ＝０．９１０），４．８４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ８−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝３３０．４９）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ８−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−Ｃ８（Ｍｗ＝４４１．７４）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＭＦ中の２．３２ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ８−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２９．２５，ｄ＝０．７８２）、４．８４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ８−Ｄａｐ−Ｃ８（Ｍｗ＝３４１．７４）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。
Ｃ８−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ８（Ｍｗ＝５８３．７４）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．２３ｇ（５．８５ｍＭ，１．５当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ８−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ８（Ｍｗ＝３８４．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１：１中に溶解し、ＲＰ＿Ａｋｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒによって、Ｃ１８ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＲＰ，２５０×２１．２ｍｍ，Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．：２３４２３６−１，カラム容積８３ｍｌ）上で精製し、３ ＣＶ内の移動相として水を使用して５０〜１００％ アセトニトリル勾配；l＝２１５ｎｍで溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、その生成物を凍結乾燥した。
（実施例１１：Ｃ１０−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１０ Ｎ−（３−グアニジノ−１−オキソ−１−（デシルアミノ）プロパン−２−イル）デカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、２．５ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４２６．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−β−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸），ＡｎａＳｐｅｃ，２２１４０）および２．０３ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ，３．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１０−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のデカン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１７２．２７）、４．８３ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１０−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝３５７．５４）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１０−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−Ｃ１０（Ｍｗ＝４９６．８４）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＭＦ中の２．３２ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１０−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１５７．３，ｄ＝０．７９２）、４．８３ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）に添加した。２時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１０−Ｄａｐ−Ｃ１０（Ｍｗ＝３９７．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１０−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１０（Ｍｗ＝６４０．８）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．２３ｇ（５．８５ｍＭ，１．５当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ１０−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１０（Ｍｗ＝４３９．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＡｃＣＮ／ＭｅＯＨ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１：１の溶解し、ＲＰ＿Ａｋｔａ ＥｘｐｌｏｒｅｒによってＣ１８ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＲＰ，２５０×２１．２ｍｍ，Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．：２３４２３６−１，カラム容積８３ｍｌ）上で精製し、３ ＣＶ内の移動相として水を使用して５０〜１００％ アセトニトリル勾配；l＝２１５ｎｍで溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、その生成物を凍結乾燥した。収量：１．６ｇ。
（実施例１２：Ｃ１２−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２ Ｎ−（３−グアニジノ−１−オキソ−１−（ドデシルアミノ）プロパン−２−イル）ドデカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、２．５ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４２６．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−β−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，β−ジアミノプロピオン酸），ＡｎａＳｐｅｃ，２２１４０）および２．０３ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ，３．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１２−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、そしてカップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の２．３４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１２−酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２００．３２）、４．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１２−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝３８６．５９）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１２−Ｄａｐ（Ｂｏｃ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝５５３．９５）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌのＤＭＦ中の２．１６８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１２−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１８５．３６）、４．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１２−Ｄａｐ−Ｃ１２（Ｍｗ＝４５３．９）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１２−ｎｏｒ−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝６９６．１３）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．２３ｇ（５．８５ｍＭ，１．５当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
（実施例１３：Ｃ８−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ８ Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（オクチルアミノ）ブタン−２−イル）オクタンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、２．５７７ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｂ（ジＢｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４４０．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−γ−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，γ−ジアミノ酪酸，ＡｎａＳｐｅｃ，２８２４６）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ，３．３当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ａｒｇ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ８−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ８酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１４４．２２，ｄ＝０．９１０）、４．８４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ８−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝３４４．４９）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ８−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｃ８（Ｍｗ＝４５５．７４）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の２．３２ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ８−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２９３２５，ｄ＝０．７８２）、４．８４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ８−Ｄａｂ−Ｃ８（Ｍｗ＝３５５．７４）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。
Ｃ８−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ８（Ｍｗ＝５９７．７４）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．２３ｇ（５．８５ｍＭ，１．５当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ８−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ８（Ｍｗ＝３９８．８）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＭｅＯＨ／ＡｃＣＮ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１：１に溶解し、ＲＰ＿Ａｋｔａ ＥｘｐｌｏｒｅｒによってＣ１８ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＲＰ，２５０×２１．２ｍｍ，Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．：２３４２３６−１，カラム容積 ８３ｍｌ）上で精製し、３ ＣＶ内の移動相として水を使用して５０〜１００％ アセトニトリル勾配；l＝２１５ｎｍで溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、その生成物を凍結乾燥した。収量：１．１ｇ。
（実施例１４）
実施例１３に類似の様式で、Ｃ１０−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１０（収量：１．２ｇ）、Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２（収量：２．９ｇ）、Ｃ１４−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１４（収量：６３０ｍｇ）、およびＣ１６−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６（収量：１．０ｇ）を作製した。
（実施例１５：Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２ Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（ドデシルアミノ）ブタン−２−イル）ドデカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。５００ｍｌ 固相合成用反応容器中、８ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、１００ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、５ｇ（１１．３５ｍｍｏｌ，１．２当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４４０．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−γ−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，γ−ジアミノ酪酸，ＡｎａＳｐｅｃ，２８２４６）および４ｍｌ（２２．７ｍｍｏｌ，２．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。振盪器上での振盪２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、５０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで１５分間にわたって２回脱保護した。
Ｃ１２−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、１００ｍｌのＤＭＦ中の４．５４ｇ（２２．７ｍｍｏｌ）のＣ１２−酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２００．３２）、９．４８ｇ（２２．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および４．５２ｍｌ（２６ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１２−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４００．５９）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、１０ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１２−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝５６７．９５）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の２．１６８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１２−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１８５．３６）、４．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．１Ｍ ＨＣｌ、３×５％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１２−Ｄａｂ−Ｃ１２（Ｍｗ＝４６７．９）。前の反応からの上記油状残渣に、１５０ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを濾過し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝７１０．１３）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９〜１０に調節した。９ｇ（２３ｍＭ）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、３時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。その生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器、１２０ｇ 順相シリカゲルカラム上で、５．４ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび６．３ ＣＶに対して０〜５％ ＭｅＯＨ、検出２１５ｎｍ、流速７０ｍｌ／分で精製した。
Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２（Ｍｗ＝５０９．９２）。前の反応からの上記残渣に、１５０ｍｌの７０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、０．５Ｍ ＨＣｌによって沈澱させた。
（実施例１６：Ｃ１８−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８ Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（オクタデシルアミノ）ブタン−２−イル）オクタデカンアミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、２．５７７ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４４０．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−γ−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，γ−ジアミノ酪酸，ＡｎａＳｐｅｃ，２８２４６）および２．０３ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ，３．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１８−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭ２で洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の２．２１ｇ（７．８ｍｍｏｌ）のＣ１８酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８４．４８）、３．３２ｇ（７．８ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および１．４９ｍｌ（８．５８ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５６８．５６）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｃ１８（Ｍｗ＝７３５．９５）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の２．１ｇ（７．８ｍｍｏｌ）のＣ１８−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２６９．５２）、３．３２ｇ（７．８ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および１．４９ｍｌ（８．５８ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１８−Ｄａｂ−Ｃ１８（Ｍｗ＝６３５．９）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、１時間後に、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１８（Ｍｗ＝８７２．１３）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．２３ｇ（５．８５ｍＭ，１．５当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ１８−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８（Ｍｗ＝６７７．９２）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後に、溶媒をエバポレートした。残渣を、ＡｃＣＮ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１の混合物によって沈澱させた。
（実施例１７：Ｃ１８（オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ８ Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（オクチルアミノ）ブタン−２−イル）オクタデカ−９−エナミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。５０ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、５．７２６ｇ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４４０．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−γ−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，γ−ジアミノ酪酸，ＡｎａＳｐｅｃ，２８２４６）および２．２６ｍｌ（１３ｍｍｏｌ，２．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、４０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで２回、３０分にわたって脱保護した。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌＤＭＦ中の３．７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８２．４７，ｄ＝０．８９１）、５．３７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．６２ｍｌ（１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５３８．５６）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｃ８（Ｍｗ＝５９４．０１）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の１．２２７ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＣ８−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２９．２５）、４．０３３ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および１．６９ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。４時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔ添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ−Ｃ８（Ｍｗ＝４９３．９２）。前の反応からの上記油状残渣に、７０ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、２０分後、溶媒を、減圧下で除去した。
Ｃ１８オレイック−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ８（Ｍｗ＝７３５．９５）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．５４３ｇ（６．５ｍＭ，１当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ８（Ｍｗ＝５３５．８９）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、２０分後、溶媒をエバポレートした。粗製生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器で、４０ｇ 順相シリカゲルカラム、３ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび７ ＣＶに対して０〜１５％ ＭｅＯＨ、検出２１４ｎｍ、流速４５ｍｌ／分を使用して精製した。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝９：１）。ＤＣＭ／ＭｅＯＨをエバポレートし、残渣を０．１Ｍ ＨＣｌによって沈澱させた。収量：０．７ｇ。
（実施例１８：Ｃ１８（オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２ Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（ドデシルアミノ）ブタン−２−イル）オクタデカ−９−エナミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。５０ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、５．７２６ｇ（１３ｍｍｏｌ， ２当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４４０．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−γ−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，γ−ジアミノ酪酸，ＡｎａＳｐｅｃ，２８２４６）および２．２６ｍｌ（１３ｍｍｏｌ，２．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、４０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで２回、３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌＤＭＦ中の３．７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８２．４７，ｄ＝０．８９１）、５．３７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．６２ｍｌ（１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５３８．５６）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝６５０．０３）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の１．７６ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＣ１２−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１８５．３６）、４．０３３ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および１．６９ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。４時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ−Ｃ１２（Ｍｗ＝５４９．９１）。前の反応からの上記油状残渣に、７０ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、２０分間後、溶媒を減圧下で除去した。
Ｃ１８オレイック−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝７９２．５）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．５４３ｇ（６．５ｍＭ，１当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２（Ｍｗ＝５９１．５５）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、２０分後に、溶媒をエバポレートした。粗製生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器で、４０ｇ 順相シリカゲルカラム、３ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜２０％ ＭｅＯＨ、検出２１４ｎｍ、流速４５ｍｌ／分を使用して、精製した。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝９：１）。ＤＣＭ／ＭｅＯＨをエバポレートし、残渣を０．１Ｍ ＨＣｌによって沈澱させた。
（実施例１９：Ｃ１８（オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６ Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（ヘキサデシルアミノ）ブタン−２−イル）オクタデカ−９−エナミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。５０ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、５．７２６ｇ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４４０．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−γ−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，γ−ジアミノ酪酸，ＡｎａＳｐｅｃ，２８２４６）および２．２６ｍｌ（１３ｍｍｏｌ，２．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、４０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで２回、３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌＤＭＦ中の３．７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８２．４７，ｄ＝０．８９１）、５．３７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．６２ｍｌ（１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５３８．５６）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｃ１６（Ｍｗ＝７０５．９５）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の２．３５４ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＣ１６−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２４１．４６）、４．０３３ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および１．６９ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。４時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ｄａｂ−Ｃ１６（Ｍｗ＝６０５．９）。前の反応からの上記油状残渣に、７０ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、２０分間後、溶媒を減圧下で除去した。
Ｃ１８オレイック−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１６（Ｍｗ＝８４２．１３）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．５４３ｇ（６．５ｍＭ，１当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６（Ｍｗ＝６４７．９２）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、２０分後に、溶媒をエバポレートした。粗製生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器で４８ｇ 順相シリカゲルカラム、３ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜２０％ ＭｅＯＨ、検出２１４ｎｍ、流速４５ｍｌ／分を使用して、精製した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨをエバポレートし、残渣を０．１Ｍ ＨＣｌによって沈澱させた。
（実施例２０：Ｃ１８（オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８ Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（オクタデシルアミノ）ブタン−２−イル）オクタデカ−９−エナミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。６０ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、５．７２６ｇ（１３ｍｍｏｌ，２当量）のＦｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝４４０．５，（Ｆｍｏｃ−（Ｎ−γ−Ｂｏｃ）−Ｌ−α，γ−ジアミノ酪酸，ＡｎａＳｐｅｃ，２８２４６）および２．２６ｍｌ（１３ｍｍｏｌ，２．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。３時間後に、上記残渣を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、５０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで２回、１５分間にわたって脱保護した。
Ｃ１８：１−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌＤＭＦ中の３．７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８２．４７，ｄ＝０．８９１）、５．３７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．６２ｍｌ（１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８：１−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｍｗ＝５６６．５６）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８：１−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−Ｃ１８：１（Ｍｗ＝７３４．９５）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の３．７２５ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のオレイルアミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２６７．４９，７０％）、４．０３３ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および１．６９ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。４時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。
Ｃ１８：１−Ｄａｂ−Ｃ１８（Ｍｗ＝６３５．９）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの８０％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、２０分後に、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ（ジＢｏｃ）−Ｃ１８：１（Ｍｗ＝８７４．１３）。上記残渣を、５０ｍｌのＤＣＭ中に溶解し、ｐＨをＴＥＡで９に調節した。２．３４８ｇ（６ｍＭ，１当量）の１，３−ジ−Ｂｏｃ−２−（トリフルオロメチルスルホニル）グアニジン（Ｍｗ＝３９１．３６，Ａｌｄｒｉｃｈ １５０３３）を添加し、４時間後に、ＤＣＭをエバポレートした。
Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１８：１（Ｍｗ＝６７４．１）。前の反応からの上記油状残渣に、１００ｍｌの９５％ ＴＦＡ／ＤＣＭ ２．５％ ＴＩＳを添加し、３時間後に、溶媒をエバポレートした。粗製生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器で、４８ｇ 順相シリカゲルカラム、３ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜２０％ ＭｅＯＨ、検出２１４ｎｍ、流速４５ｍｌ／分を使用して精製した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨをエバポレートし、残渣を０．１Ｍ ＨＣｌによって沈澱させた。収量：３．２ｇ。
（実施例２１：Ｃ１０−［４−Ｐａｌ（Ｎ−ＣＨ３）］−Ｃ１０ ４−（３−（デシルアミノ）−３−オキソ−２−デカンアミドプロピル）−１−メチルピリジニウムクロリドの調製）
Ｆｍｏｃ−４−Ｐａｌ−樹脂。３０ｍｌ 固相合成用反応容器中、３ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、２．２７ｇ（５．８５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−４−Ｐａｌ−ＯＨ（Ｆｍｏｃ−４−ピリジニルアラニン，Ｍｗ＝３８８．４２，Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ，ＦＸ４１４０）および２．０３ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ，３．０当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
４−Ｐａｌ−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、３０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで３０分間にわたって脱保護した。
Ｃ１０−４−Ｐａｌ−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、３０ｍｌのＤＭＦ中の１．４８ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のデカン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２７．２７）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１０−４−Ｐａｌ−ＯＨ（Ｍｗ＝３２０．４６）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１０−４−Ｐａｌ−Ｃ１０（Ｍｗ＝４５９．７６）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の２．３２ｍｌ（１１．７ｍｍｏｌ）のＣ１０−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１５７．３，ｄ＝０．７９２）、５．５４ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４７３．７）および２．２３ｍｌ（１２．８７ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。１時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。残渣を、ＡｃＣＮ／０．５Ｍ ＨＣｌ １：１中に溶解し、ＲＰ＿Ａｋｔａ Ｅｘｐｌｏｒｅｒによって、Ｃ１８ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＲＰ，２５０×２１．２ｍｍ，Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．：２３４２３６−１，カラム容積 ８３ｍｌ）で精製し、２ＣＶ内の移動相として水を使用して３０〜１００％ アセトニトリル勾配；l＝２１５ｎｍで溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、その生成物を凍結乾燥した。
Ｃ１０−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−Ｃ１０（Ｍｗ＝４７４．７６）。メチル化を溶液中で行った。２０ｍｌのＴＨＦ中に溶解した０．４ｇ（０．８７ｍＭ）のＣ１０−４−Ｐａｌ−Ｃ１０（Ｍｗ＝４５９．７６）に、８３μｌ（０．８７ｍｍｏｌ）の硫酸ジメチル（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２６．１３，ｄ＝１．３２５）を添加した。一晩の反応の後に、同量の硫酸ジメチルを添加し、１時間後に、その生成物を、０．５Ｍ ＨＣｌ／ＡｃＣＮ混合物で沈澱させた。
（実施例２２：Ｃ１２−［４−Ｐａｌ（Ｎ−ＣＨ３）］−Ｃ１２ ４−（３−（ドデシルアミノ）−３−オキソ−２−ドデカンアミドプロピル）−１−メチルピリジニウムクロリドの調製）
Ｆｍｏｃ−４−Ｐａｌ−樹脂。２００ｍｌ 固相合成用反応容器中、６．５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、７０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、３．５ｇ（９．０１ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−４−Ｐａｌ−ＯＨ（Ｆｍｏｃ−４−ピリジニルアラニン，Ｍｗ＝３８８．４２，Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ，ＦＸ４１４０）および３．１３２ｍｌ（１８ｍｍｏｌ，２．２当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
４−Ｐａｌ−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、７０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで１５分間にわたって２回脱保護した。
Ｃ１２−４−Ｐａｌ−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、７０ｍｌのＤＭＦ中の２．５４９ｇ（１２．６７５ｍｍｏｌ，１．５当量）のラウリン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２００．３２）、５．３ｇ（１２．６７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１７．７）および２．２ｍｌ（１２．６７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の１時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１２−４−Ｐａｌ−ＯＨ（Ｍｗ＝３４６．７）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×３０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１２−４−Ｐａｌ−Ｃ１２（Ｍｗ＝５１５．７）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、７０ｍｌのＤＣＭ中の２．３ｇ（１２ｍｍｏｌ）のＥＤＣ＊ＨＣｌ（Ｍｗ＝１９１．７）、１．８６ｇ（１２ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔ＊Ｈ２Ｏ（Ｍｗ＝１５３．１）および１０．４４ｍｌ（６０ｍｍｏｌ，５当量）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。予備活性化工程を２０分間行い、次いで、２．２２ｇ（１２ｍｍｏｌ）のＣ１２−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１８５．３６）を添加した。一晩の反応の後に、上記有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＤＣＭを無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。その生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器、４０ｇ 順相シリカゲルカラム、５ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜５％ ＭｅＯＨ、検出２５４ｎｍ、流速４０ｍｌ／分で精製した。
Ｃ１２−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−Ｃ１２（Ｍｗ＝５３０．８）。メチル化を溶液中で行った。５０ｍｌのＴＨＦに溶解した４ｇ（７．７５ｍＭ）のＣ１２−４−Ｐａｌ−Ｃ１２（Ｍｗ＝４１５．７）に、１．１ｍｌ（１１．６２５ｍｍｏｌ）の硫酸ジメチル（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝１２６．１３，ｄ＝１．３２５）を添加した。一晩の反応の後に、０．５ｍｌの硫酸ジメチルを添加し、１時間後に、上記溶媒をエバポレートし、その生成物を０．５Ｍ ＨＣｌで沈澱させた。
（実施例２３：Ｃ１８オレイック−［４−Ｐａｌ］−Ｃ１６ Ｎ−（１−オキソ−３−（ピリジン−４−イル）−１−（ヘキサデシルアミノ）プロパン−２−イル）オクタデカ−９−エナミドの調製）
Ｆｍｏｃ−４−Ｐａｌ−樹脂。５０ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、３．７８７ｇ（９．７５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−４−Ｐａｌ−ＯＨ（Ｍｗ＝３８８．４２，Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ）および１．７ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）に添加した。
４−Ｐａｌ−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、４０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで２回、１５分間にわたって脱保護した。
Ｃ１８オレイック−４−Ｐａｌ−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌＤＭＦ中の３．７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８２．４７，ｄ＝０．８９１）、５．３７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．６２ｍｌ（１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８オレイック−４−Ｐａｌ−ＯＨ（Ｍｗ＝４３０．６２）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−４−Ｐａｌ−Ｃ１６（Ｍｗ＝６５４．０６）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の２．３５４ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＣ１６−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２４１．４６）、４．０３３ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および１．６９ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。４時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。粗製生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器で、４８ｇ 順相シリカゲルカラム、３ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜２０％ ＭｅＯＨ、検出２１４ｎｍ、流速４５ｍｌ／分を用いて精製した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨをエバポレートし、残渣を０．１Ｍ ＨＣｌによって沈澱させた。収量：０．７５ｇ。
（実施例２４：（Ｃ１８オレイック）−（１−ＣＨ３−Ｈｉｓ）−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル） Ｎ−（３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソ−１−（ヘキサデシルアミノ）プロパン−２−イル）オクタデカ−９−エナミドの調製）
Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）−樹脂。６０ｍｌ 固相合成用反応容器中、１．７ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、３０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、１ｇ（２．５ｍｍｏｌ，１．２当量）のＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）−ＯＨ（Ｍｗ＝３９１．４３，ＣｈｅｍＩｍｐｅｘ）および０．４３５ｍｌ（２．５ｍｍｏｌ，１．２当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）−樹脂。２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、２回、５０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで１５分間にわたって脱保護した。
Ｃ１８オレイック−Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌＤＭＦ中の１．２４７ｇ（４．４ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２８２．４７；ｄ＝０．８９１）、１．８２ｇ（４．４ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および０．７６５ｍｌ（９．１ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。
反応の２時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックしたところ、陰性であった（遊離アミノ基はない）。
Ｃ１８オレイック−Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）−ＯＨを、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過した）、溶媒をエバポレートした。
Ｃ１８オレイック−Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）−Ｃ１６（Ｍｗ＝６５７．０７）。第２のカップリングを溶液中で行った。前の工程からの油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の０．６０４ｇ（２．５ｍｍｏｌ）のＣ１６アミン（Ｓｉｇｍａ）、１．０３４ｇ（２．５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および０．４３５ｍｌ（２．５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加した。一晩の反応の後に、有機層を、酢酸（ａｃｅｔｉｃ ａｃｅｔａｔｅ）で希釈し、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄した。ＡｃＯＥｔ層を、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートした。上記粗製生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器、４０ｇ 順相シリカゲルカラム、５ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜２０％ ＭｅＯＨ、検出２１４ｎｍ、流速４０ｍｌ／分で精製した。精製した生成物を、０．１Ｍ ＨＣｌで沈澱させた。収量：１ｇ。
（実施例２５：（Ｃ１８オレイック）−（３’，５’−ジヨード−Ｔｙｒ）−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）（Ｅ）−Ｎ−（１−（ヘキサデシルアミノ）−３−（４−ヒドロキシ−３，５−ジヨードフェニル）−１−オキソプロパン−２−イル）オクタデカ−９−エナミド）の調製）
（提唱される調製）
Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（３’，５’−ジＩ）−樹脂。５０ｍｌ 固相合成用反応容器中、５ｇの２−クロロトリチルクロリド樹脂と、５０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の１．３ｍｍｏｌ／ｇ置換（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，０１−６４−０１１４）に、６．３８８ｇ（９．７５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（３’，５’−ジＩ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６５５．２，ＡｎａＳｐｅｃ）および１．６９ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ，１．５当量）のＤＩＰＥＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加する。
Ｔｙｒ（３’，５’− ジＩ）−樹脂。３時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）、３×ＤＣＭ、２×ＤＭＦ、３×ＤＣＭで洗浄し、Ｆｍｏｃ基を、４０ｍｌの２０％ ピペリジン／ＤＭＦで２回、３０分間にわたって脱保護する。
Ｃ１８オレイック−Ｔｙｒ（３’，５’−ジＩ）−樹脂。Ｆｍｏｃ脱保護の後、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、カップリング反応のために、５０ｍｌＤＭＦ中の３．７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のオレイン酸（Ｓｉｇｍａ， Ｍｗ＝２８２．４７，ｄ＝０．８９１）、５．３７ｇ（１３ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および２．６２ｍｌ（１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加する。
反応の３時間後に、上記樹脂を、３×ＤＣＭ、２×ＭｅＯＨおよび３×ＤＣＭで洗浄し、反応の進行を、Ｋａｉｓｅｒ試験によってチェックする。
Ｃ１８オレイック−Ｔｙｒ（３’，５’−ジＩ）−ＯＨ（Ｍｗ＝６９７．４３）を、上記樹脂から１％ ＴＦＡ／ＤＣＭによって切断し（２分間にわたって５×５０ｍｌを、２ｍｌの１０％ ピリジン／ＭｅＯＨでフラスコへと濾過する）、溶媒をエバポレートする。
Ｃ１８オレイック−Ｔｙｒ（３’，５’−ジＩ）−Ｃ１６（Ｍｗ＝９２０．３８）。第２のカップリングを溶液中で行う。前の反応からの上記油状残渣に、５０ｍｌＤＭＦ中の２．３５４ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＣ１６−アミン（Ｓｉｇｍａ，Ｍｗ＝２４１．４６）、４．０３３ｇ（９．７５ｍｍｏｌ）のＨＣＴＵ（Ｍｗ＝４１３．７）および１．６９ｍｌ（９．７５ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（Ｍｗ＝１２９．２，ｄ＝０．７４）を添加する。４時間後に、１００ｍｌのＡｃＯＥｔを添加し、有機層を、分離漏斗中、３×０．５Ｍ ＨＣｌ、３×１０％ ＮａＣＯ３および３×ＮａＣｌで洗浄する。ＡｃＯＥｔ層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、エバポレートする。粗製生成物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ機器で、４８ｇ 順相シリカゲルカラム、３ ＣＶ（カラム容積）に対して１００％ ＤＣＭおよび１０ ＣＶに対して０〜２０％ ＭｅＯＨ、検出２１４ｎｍ、流速４５ｍｌ／分を使用して精製する。ＤＣＭ／ＭｅＯＨをエバポレートし、残渣を、ＡｃＣＮ／Ｈ２Ｏの混合物で沈澱させる。
（実施例２６：９Ｌ細胞におけるＬａｃＺ遺伝子発現ノックダウンの例示的インビトロアッセイ）
９Ｌ／ＬａｃＺは、細菌ガラクトシダーゼをコードするＬａｃＺ遺伝子を安定に発現するラット神経膠肉腫細胞株である。ＬａｃＺ遺伝子ノックダウン測定を、干渉ＲＮＡ送達処方物のための一次活性（ｐｒｉｍａｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ）ベースのインビトロアッセイとして使用され得る。
ＬａｃＺ遺伝子ノックダウン測定のために、９Ｌ／ＬａｃＺ細胞を、ＲＮＡｉ処方物でトランスフェクトし、β−ガラクトシダーゼアッセイを、トランスフェクション３日目で回収した細胞で行った。さらなるアッセイを、タンパク質濃度を定量するために行った。
９Ｌ／ＬａｃＺ細胞を、８０００細胞／ウェル（９６ウェル）でプレートし、培地中で一晩インキュベートした。トランスフェクション時のコンフルエンシーは、約１５〜２０％であった。トランスフェクション複合体を、干渉ＲＮＡを、ＯｐｔｉＭＥＭＴＭ培地に添加し、ボルテックスし、送達処方物を、ＯｐｔｉＭＥＭＴＭ培地に別個に添加し、ボルテックスし、そして最後に上記培地中の干渉ＲＮＡと、上記培地中の送達処方物とを混合して、上記トランスフェクション複合体を作製することによって、調製した。インキュベートした細胞のための培地を、新たな無血清培地（血清無しのＯｐｔｉＭＥＭＴＭ）で弛緩し、トランスフェクション複合体を、各ウェルに添加した。細胞を、５時間インキュベートし、次いで、１００μｌの完全培地（ＤＭＥＭ＋１０％ ウシ胎児血清）の添加後に、３７℃および５％ ＣＯ２で一晩インキュベートした。次の日に、トランスフェクションの２４時間後に、上記培地を新たな完全培地に交換して、上記細胞を、３７℃および５％ ＣＯ２でさらに４８時間インキュベートした。
ＬａｃＺ遺伝子ノックダウンのために、上記回収した９Ｌ／ＬａｃＺ細胞をＰＢＳ中で洗浄し、Ｍ−ＰＥＲＴＭ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）中で溶解し、室温で１５分間インキュベートした。溶解物を、Ｍｉｃｒｏ ＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でのタンパク質アッセイおよびＡｌｌ−ｉｎ−ＯｎｅＴＭ β−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）でのβ−ｇａｌアッセイのために、各ウェルから採取した。
（Ａ５４９細胞におけるＰＰＩＢ遺伝子発現ノックダウンのための例示的インビトロアッセイ）
サイクロフィリン Ｂ（ＰＰＩＢ）遺伝子ノックダウン測定を、干渉ＲＮＡ送達処方物のための一次活性ベースのインビトロアッセイとして使用し得る。サイクロフィリン Ｂ（ＰＰＩＢ）遺伝子発現ノックダウンを、Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮細胞において測定した。ＰＰＩＢ遺伝子ノックダウン測定のために、Ａ５４９細胞を、干渉ＲＮＡ処方物でトランスフェクトし、総ＲＮＡを、トランスフェクションの２４時間後に調製し、ＰＰＩＢ ｍＲＮＡを、ＲＴ−ＰＣＲによってアッセイした。３６Ｂ４（酸性リボソームホスホプロテインＰＯ） ｍＲＮＡ発現のＱＲＴ−ＰＣＲを、正規化のために行った。
Ａ５４９細胞を、７，５００細胞／ウェル（９６ウェル）で播種し、培地中で一晩インキュベートした。トランスフェクション時のコンフルエンシーは、約５０％であった。トランスフェクション複合体を、干渉ＲＮＡを培地（ＯｐｔｉＭＥＭＴＭ）に添加し、ボルテックスし、送達処方物を培地（ＯｐｔｉＭＥＭＴＭ）に別個に添加し、ボルテックスし、そして最後に、上記培地中の干渉ＲＮＡと、上記培地中の送達処方物とを混合し、室温で２０分間インキュベートして、上記トランスフェクション複合体を作製することによって、調製した。インキュベートした細胞のための培地を、新たなＯｐｔｉＭＥＭＴＭで置換し、トランスフェクション複合体を各ウェルに添加した。細胞を、５時間、３７℃および５％ ＣＯ２でインキュベートし、次いで、完全培地を、（最終ウシ胎児血清濃度１０％になるまで）添加し、インキュベーションを、トランスフェクションの２４時間後まで継続した。
ＰＰＩＢ遺伝子ノックダウンのために、細胞を溶解し、ＲＮＡを調製した（Ｉｎｖｉｓｏｒｂ ＲＮＡ Ｃｅｌｌ ＨＴＳ ９６−Ｋｉｔ／Ｃ，Ｉｎｖｉｔｅｋ，Ｂｅｒｌｉｎ、もしくはＲＮｅａｓｙ ９６ Ｋｉｔ，Ｑｉａｇｅｎ）。定量的ＲＴ−ＰＣＲを、ＤＮＡ Ｅｎｇｉｎｅ Ｏｐｔｉｃｏｎ２サーマルサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）でＯｎｅ−Ｓｔｅｐ ｑＲＴ−ＰＣＲキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行った。
ＰＰＩＢのために使用したプライマーは、以下であった：
（配列番号１）
５’−ＧＧＣＴＣＣＣＡＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＡＣ−３’（順方向）および
（配列番号２）
５’−ＣＣＴＴＣＣＧＣＡＣＣＡＣＣＴＣ−３’（逆方向）と、
（配列番号３）
上記プローブのために、５’−ＦＡＭ−ＣＴＡＧＡＴＧＧＣＡＡＧＣＡＴＧＴＧＧＴＧＴＴＴＧＧ−ＴＡＭＲＡ−３’。
３６Ｂ４については、プライマーは以下であった：
（配列番号４）
５’−ＴＣＴＡＴＣＡＴＣＡＡＣＧＧＧＴＡＣＡＡＡＣＧＡ−３’（順方向）および
（配列番号５）
５’−ＣＴＴＴＴＣＡＧＣＡＡＧＴＧＧＧＡＡＧＧＴＧ−３’（逆方向）と
（配列番号６）
上記プローブのための、５’−ＦＡＭ−ＣＣＴＧＧＣＣＴＴＧＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＣＧＧＡＴＴＡ−ＴＡＭＲＡ−３’。
（マウスにおけるインフルエンザウイルス力価ノックダウンのための例示的インビボアッセイ）
マウスにおけるインフルエンザウイルス力価ノックダウン測定を、干渉ＲＮＡアミノ酸脂質送達処方物についての効力のインビボ尺度として使用し得る。
このアッセイにおいて、代表的には、５０μＬのｄｓＲＮＡアミノ酸脂質処方物、もしくはコントロール群についてはＰＢＳを、ケタミン／キシラジンで麻酔した７〜９週齢のＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて経鼻的に投与した。毎日の投与を、−２日目、−１日目、および０日目に、連続３日間にわたって行った。最後の投与の４時間後に、感染を誘導した。
インフルエンザＡ／プエルトリコ／８／３４（ＰＲ８，サブタイプＨ１Ｎ１）でインフルエンザ感染を誘導した。感染のために、０．３％ＢＳＡ／１ＸＰＢＳ／ＰＳで希釈した５０μｌの２０ｐｆｕ ＰＲ８を、ケタミン／キシラジンで麻酔したマウスに経鼻的に投与した。感染の４８時間後に、その肺を採取し、６００μＬの０．３％ＢＳＡ／１ＸＰＢＳ／ＰＳ中でホモジナイズした。そのホモジネートを２回凍結融解して、上記ウイルスを遊離させた。ＴＣＩＤ５０アッセイ（Ｔｉｓｓｕｅ−Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｏｓｅ ５０）を行って、肺ホモジネート中のウイルスを力価測定した。平底９６ウェルプレートに、１ウェルあたり２×１０４ＭＤＣＫ細胞を播種し、２４時間後に、上記血清含有培地を取り除いた。３０μＬの肺ホモジネート（未希釈もしくは１０倍〜１０７倍（１０倍ずつ）に希釈のいずれか）を、四連のウェルに添加した。１時間のインキュベーションの後に、４μｇ／ｍｌ トリプシンを含む１７０μｌの感染培地（ＤＭＥＭ／０．３％ＢＳＡ／１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／ＰＳ）を、各ウェルに添加した。４８時間にわたって３７℃でインキュベートした後、上記培養上清中のウイルスの存在もしくは非存在を、ニワトリ赤血球の血球凝集によって決定した。上記ウイルス力価を、ＳｐｅａｒｍａｎとＫａｒｂｅｒの式を使用して概算した。
（ｓｉＲＮＡ濃度のための例示的ＳＹＢＲＴＭ Ｇｏｌｄアッセイ）
処方物中のｄｓＲＮＡの濃度を、ＳＹＢＲＴＭ Ｇｏｌｄアッセイによって、以下のように決定し得る：１０μｌのｄｓＲＮＡ処方物を１００μｌ ＭｅＯＨに添加し、５分間、５５℃でインキュベートする。５０μｌのヘパリン（２００ｍｇ／ｍｌ）を添加し、その溶液を、５分間、５５℃でインキュベートする。７９０μｌのＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）を添加し、そのサンプルを、遠沈管中で遠沈して、ペレットにする。上記ペレットのうちの９０μｌのサンプルを、１０μｌのＳＹＢＲＴＭ Ｇｏｌｄ試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）とインキュベートする。蛍光を、発光５３５ｎｍと励起４９５ｎｍで読み取る。
（例示的ＲＮＡ単離およびＡｐｏＢメッセージのノックダウンのための定量的ＲＴ−ＰＣＲアッセイ）
このハウスキーピング遺伝子プロトコル（肺もしくは全身）のために、１日目に、Ｃ５７／Ｂ６もしくはＢａｌｂ／Ｃ雌性マウス（８〜１０週齡）（マウス５匹／群）に、５０μｌもしくは２００μＬのｄｓＲＮＡ処方物を、それぞれ、鼻内投与経路もしくは静脈内投与経路によって、投与した。麻酔剤は、ケタミン／キシラジン（ＩＰ−０．２ｍｌ用量／マウス）であった。２日目に、肺モデルについては投与の１日後または連続３日間の投与の次の日のいずれかのマウスから全肺を単離し、全身モデルについては、肺、肝臓、腎臓、脾臓、心臓および／もしくは全血を単離した。組織を、２ｍｌのＲＮＡＬＡＴＥＲ ＲＮＡ Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｑｉａｇｅｎ ７６１０６）を含む２４ウェルプレートに配置した。プレートを、ドライアイス上に置いて、すぐに凍結し、ホモジネートを調製するまで−８０℃で保存した。
総ＲＮＡを、剖検時にＲＮＡＬＡＴＥＲ溶液中で保存した組織サンプルから抽出した。総ＲＮＡの単離を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＰＵＲＥＬＩＮＫ ９６ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用して、哺乳動物組織の単離のための製造業者のプロトコルに従って行った。次いで、これら総ＲＮＡ単離物を、ＮａｎｏＤｒｏｐ分光光度計を使用して定量し、次いで、質を、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ２１００システムを使用して確認して、ＲＮＡ完全性を測定した。上記総ＲＮＡの質および量を測定した後に、上記サンプルを等しい濃度に対して正規化し、５０〜１００ｎｇの総ＲＮＡを、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ａｒｃｈｉｖｅ Ｋｉｔを使用して、製造業者のプロトコルに従って、ｃＤＮＡへと合成した。次いで、上記ｃＤＮＡを、上記Ｎａｎｏｄｒｏｐを使用して濃度について再チェックし、次いで、ｑＲＴ−ＰＣＲ分析のために１：１０希釈した。
ｑＲＴ−ＰＣＲを使用する上記遺伝子発現分析を、上記ｃＤＮＡサンプル、および最終プライマー濃度２００ｎＭでのＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ技法を使用して行った。上記サンプルを、１０μＬの反応容積を使用するＱｕａｎｔａ ＰｅｒｆｅｃｔＣｔａ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＦａｓｔＭｉｘ，ＲＯＸを使用して、実施した。上記サンプルを、３８４ウェルプレート形式を使用して、迅速サイクリング条件を使用するＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７９００ＨＴプラットホームで行った。次いで、データを、閾値０．２を使用するＳＤＳ ２．３ソフトウェアからエクスポートした。これらを、ユーザーによってＥｘｃｅｌに入力されたアルゴリズムのＱＢＡＳＥソフトウェアを使用して、分析用にフォーマットした。内因性コントロールのために選択した遺伝子は、ｇｅＮｏｒｍ分析に基づいた。マウス肝臓については、サンプル ＧＡＰＤＨおよびＰＰＩＡおよびＴＢＰは、遺伝子発現分析のための非常に良好で安定な正規化群（ｎｏｒｍａｌｉｚｅｒ）であることが示された。
（血清コレステロールアッセイ）
このアッセイの目的は、ｄｓＲＮＡを投与して４８時間後のマウス血中の血清コレステロールレベルを確認することであった。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ａｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ｃａｔ＃ Ａ１２２１６）を使用した。マウス全血を採取し、Ｓｅｒｕｍ Ｓｅｐａｒａｔｏｒ Ｔｕｂｅｓ（ＳＳＴ−ＢＤ ｃａｔ ＃３６５９５６）に入れ、次いで、遠心分離して、血清と、上記血液の残りとを分離した。上記血清をＤＩ−Ｈ２Ｏ １：４０中に希釈し、次いで、上記Ａｍｐｌｅｘアッセイキットの１×反応緩衝液中でさらに１：５（合計１：２００）希釈した。標準を、２０μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、８μｇ／ｍｌ、６μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌの濃度で、コレステロール参照標準から作製し、上記キットに補充した。サンプル、標準物質およびブランクを、平底黒色９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ＃３９１６）に添加した。上記Ａｍｐｌｅｘアッセイ混合物を作製し、上記アッセイウェルに添加した。３７℃でのインキュベーションの少なくとも３０分後に、上記プレートを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５を使用して読み取った。「エンドポイント」プロトコルを選択し、励起範囲を、５３０〜５６０（好ましくは、５４４ｎＭ）に設定し、発光検出は、〜５９０ｎｍであった。一旦上記プレートが読み取った後、上記データをエクセルへとエクスポートし、ここでそのパーセントコントロール、パーセント低下および総血清コレステロール（μｇ／ｍｌ単位）で計算した。
（実施例２７）
本開示のいくらかの二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の構造を、表１に示す。
表１において、「ｍＵ」は、２’−Ｏ−メチルウリジンを表し、「ｍＣ」は、２’−Ｏ−メチルシチジンを表し、「ｓ」は、ホスホロチオエート連結を表す。
（実施例２８）
本開示の活性ＲＮＡ処方物を、干渉ＲＮＡを緩衝液もしくは細胞培養培地に溶解し、ボルテックスし、送達処方物と、緩衝液もしくは細胞培養培地とを別個に混合し、ボルテックスし、最後に、上記干渉ＲＮＡ混合物と、上記送達処方物混合物とを混合して、活性ＲＮＡｉトランスフェクション処方物を作製することによって、調製し得る。
送達処方物を調製するために、アミノ酸脂質を、他の脂質および／もしくは賦形剤とともに、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨに可溶化させ得、Ｎ２下で乾燥させ得、そして５％ デキストロースを含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）中で水和させ得る。上記混合物を、超音波処理し得るか、または押し出しし得るか、透析し得るか、そして／または接線流濾過（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ ｆｌｏｗ ｆｉｌｔｅｒ）され得る。
当該分野で公知の種々の希釈法はまた、本開示の活性ＲＮＡ処方物を調製するために使用され得る。
本開示の例示的干渉ＲＮＡ処方物を、表２に示す。この実施例において、Ｃ８−Ａｒｇ−Ｃ８という名称の上記アミノ酸脂質は、干渉ｓｉＲＮＡ治療剤の細胞内送達のための上記アミノ酸脂質自体の処方物を提供する。アミノ酸脂質の量は、送達成分（上記活性ＲＮＡ薬剤を含まない）のモル％として示される。名称「Ｃ１６−Ａｒｇ−Ｃ１４」とは、（Ｃ１５アルキル）−（Ｃ＝Ｏ）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）をいい、これは、（Ｃ１６アシル）−Ａｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）と同じである。
本開示の例示的干渉ＲＮＡ処方物を表３に示す。この実施例において、Ｃ１４−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１４と称される上記アミノ酸脂質は、干渉ｓｉＲＮＡ治療剤の細胞内送達のための上記アミノ酸脂質自体の処方物を提供する。アミノ酸脂質の量は、送達成分（上記活性ＲＮＡ薬剤を含まない）のモル％として示される。名称「Ｃ１４−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１４」とは、（Ｃ１３アルキル）−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）をいい、これは、（Ｃ１４アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）と同じである。
本開示の例示的ＲＮＡｉ処方物を表４に示す。この実施例において、Ｃ１０−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１０と称される上記アミノ酸脂質は、同時送達処方物中で非カチオン性脂質と合わされる。名称「Ｃ１０−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１０」とは、（Ｃ９アルキル）−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）をいい、これは、（Ｃ１０アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）と同じである。
本開示の例示的ＲＮＡｉ処方物を表５に示す。この実施例において、Ｃ１２−ホモＡｒｇ−Ｃ１２と称される上記アミノ酸脂質は、複数成分送達処方物中で、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、およびｐｅｇ化脂質と合わされる。名称「Ｃ１２−ホモＡｒｇ−Ｃ１２」とは、（Ｃ１１アルキル）−（Ｃ＝Ｏ）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）をいい、これは、（Ｃ１２アシル）−ホモＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）と同じである。
本開示の例示的干渉ＲＮＡエマルジョン組成物を表６に示す。この実施例において、上記カチオン性アミノ酸脂質は、Ｃ１４−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１４と称される。
本開示の例示的干渉ＲＮＡ分散組成物を表７に示す。この実施例において、上記カチオン性アミノ酸脂質は、Ｃ１４−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１４と称される。
（実施例２９）
本開示の干渉ＲＮＡ組成物の例示的リポソーム処方を、表８に示す。
（実施例３０：ＲＮＡ送達組成物の粒径）
リポソームアミノ酸脂質干渉ＲＮＡ処方物の例を表９に示す。表９の処方は、各々、１．８のＮ／Ｐを有し、約０．０８〜０．１９の分散値で１０６〜１３９ｎｍの粒径を示した。
アミノ酸脂質干渉ＲＮＡ処方物の例を表１０に示す。表１０の処方は、１．５〜１．９のＮ／Ｐ比を有し、約０．１８〜０．３０の分散値で１４０〜１４８ｎｍの粒径を示した。
ＪＥＯＬ １２３０ ＴＥＭで得た本発明のリポソーム実施形態の透過型電子顕微鏡、図２に示す。図２は、アミノ酸脂質Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２で形成された球形の脂質二重層小胞粒子を示す。上記顕微鏡写真の長さのマーカーは、０．５μｍであり、上記サンプルを、３％ 酢酸ウラニルで染色した。上記リポソーム処方物の脂質部分は、総脂質の％（ｗ／ｗ）として、それぞれ、［３０％／２０％／４９％／１％］の量の［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３ ＋Ｃｌ−）−Ｃ１２／ＤＳＰＣ／コレステロール／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−２０００］であった。上記リポソームは、上記抗インフルエンザ活性ダイサー基質ｄｓＲＮＡ ＤＸ３０３０を含んでいた。
（実施例３１：アミノ酸脂質ＲＮＡｉ２成分組成物についてのインビトロでのＬａｃＺ遺伝子ノックダウン活性）
アミノ酸脂質は、ＬａｃＺ活性ベースのインビトロアッセイによって、表１１に示されるような効率的干渉ＲＮＡ送達組成物を提供した。表１１の結果は、アミノ酸脂質組成物中の干渉ＲＮＡによる遺伝子ノックダウンが、ＲＮＡＩＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で得られるものを上回り得ることを示した。
表１１において、ｄｓＲＮＡの最終濃度は、１００ｎＭであり、Ｎ／Ｐ比は、各組成物について１．８であった。
（実施例３２：アミノ酸脂質ＲＮＡｉリポソーム組成物についてのインビトロでのＬａｃＺ遺伝子ノックダウン）
アミノ酸脂質は、ＬａｃＺ活性ベースのインビトロアッセイによって、表１２において示されるように、効率的な干渉ＲＮＡ送達組成物を提供した。
表１２の上記正規化ＬａｃＺノックダウンの結果は、少なくとも６０％ノックダウンが全てのアミノ酸脂質組成物について認められることを示した。表１２の結果は、アミノ酸脂質組成物中の干渉ＲＮＡによる遺伝子ノックダウンが、ＲＮＡＩＭＡＸで認められるものを上回り得ることを示した。
（実施例３３：アミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についてのインビトロでの遺伝子ノックダウン濃度応答）
いくつかの３成分のアミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についての遺伝子ノックダウン活性を、インビトロで決定した。
アミノ酸脂質は、Ａ５４９細胞におけるＰＰＩＢノックダウン活性ベースのインビトロアッセイによって、図３に示されるように効果的な干渉ＲＮＡ送達組成物を提供した。図３の結果は、アミノ酸脂質組成物中の干渉ＲＮＡによる遺伝子ノックダウンが、正規化ＰＰＩＢ値によって表されるように、ＲＮＡＩＭＡＸで得られるものを上回り得ることを示した。
図３において、ＲＮＡＩＭＡＸの結果と比較して、２つのアミノ酸脂質処方物についての上記正規化ＰＰＩＢ値の濃度応答が示される。図３における処方物１は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＤＯＰＥ／ＣＨＯＬ（５０／３２／１８）］であり、処方物２は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＣＨＥＭＳ／ＤＬＰＥ（５０／３２／１８）］であった。
アミノ酸脂質は、９Ｌ細胞におけるＬａｃＺノックダウン活性ベースのインビトロアッセイによって、図４に示されるように、効果的な干渉ＲＮＡ送達組成物を提供した。図４の結果は、アミノ酸脂質組成物中の干渉ＲＮＡによる遺伝子ノックダウンは、正規化β−ガラクトシダーゼ値によって表されるように、ＲＮＡＩＭＡＸで得られるものを上回り得ることを示した。
図４において、ＲＮＡＩＭＡＸについての結果と比較して、２つのアミノ酸脂質処方物についての上記正規化β−ガラクトシダーゼ値の濃度応答が示される。図４における処方物１は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＤＯＰＥ／ＣＨＯＬ（５０／３２／１８）］であり、処方物２は、［Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ（ＮＨ３Ｃｌ）−Ｃ１２／ＣＨＥＭＳ／ＤＬＰＥ（５０／３２／１８）］であった。
３つの脂質成分を含むいくつかのアミノ酸脂質処方物についてのインビトロでの上記遺伝子ノックダウン活性データを、表１３にまとめる。
表１３に示されるように、１０ｎＭ ｄｓＲＮＡの濃度で得られる結果は、Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２を含むこれら例示的アミノ酸脂質処方物が、ＲＮＡＩＭＡＸで得られる結果を上回るインビトロで遺伝子ノックダウン活性を提供することを示した。
血清（ウシ胎児血清）の存在ありまたはなしで得られた３つの脂質成分を含むいくつかのアミノ酸脂質処方物についてのインビトロでの上記遺伝子ノックダウン活性データを、表１４にまとめる。
表１４に示されるように、Ｃ１２−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１２を含む例示的アミノ酸脂質処方物は、血清の存在ありまたはなしで、インビトロで高いＰＰＩＢ遺伝子ノックダウン活性を提供した。これらアミノ酸脂質処方物を、種々の再水和および希釈法によって作製した。
３つおよび４つの脂質成分を含むいくつかのアミノ酸脂質処方物についてのインビトロでの上記遺伝子ノックダウン活性データを、表１５にまとめる。
表１５に示されるように、３つおよび４つの成分を含むいくつかのアミノ酸脂質処方物は、インビトロで高い９Ｌ／ＬａｃＺ遺伝子ノックダウン活性を提供した。高い９Ｌ／ＬａｃＺノックダウン活性を、アミノ酸脂質の混合物を使用する処方物およびさらなる脂質としてＣＨＥＭＳもしくはコレステロールを有する処方物について得た。
（実施例３４：アミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についてのインビトロでのＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン濃度応答）
いくつかの４成分のアミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についてのＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン活性を、インビトロで決定した。
図５において、ＨｅｐＧ２細胞におけるインビトロアッセイから得られたＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン活性の例を示す。干渉ＲＮＡの３つのアミノ酸脂質処方物について、正規化ＡｐｏＢ ｍＲＮＡ発現値の２５ｎＭ、２．５ｎＭ、および０．２５ｎＭ ＲＮＡの濃度応答を示す。処方物１は、［非アミノ酸カチオン性脂質／ＤＳＰＣ／ｃｈｏｌ．／ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２ｋ（４０／１０／４８／２）］であった。処方物２および３はともに、［Ｃ１８：１−ｎｏｒＡｒｇ−Ｃ１６／ＣＨＥＭＳ／ＤＬＰＥ／ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２ｋ（５０／３２／１６／２）］であった。
上記ＡｐｏＢ ｄｓＲＮＡは、ＤＸ４２２７（ＡｐｏＢ−２ Ｐ２０９８）であった。
濃度応答を、ＨｅｐＧ２細胞における％ＡｐｏＢ ｍＲＮＡ発現ノックダウンについて得た。ＨｅｐＧ２細胞スクリーンに関して、そのプロトコルは、以下の通りであった：１日目に、上記ＨｅｐＧ２細胞に、ＤＭＥＭ中で１０％ＦＢＳ、１×非必須アミノ酸、および０．１２５％ 炭酸水素ナトリウムを含む新たな増殖培地を補給した。２日目に、２５μＬの複合体を、ウェルに添加し、次いで、７５μＬのＯＰＴＩＭＥＭ中のＨｅｐＧ２単一細胞懸濁物をウェルに添加した（１５０００細胞／ウェル）。４時間後に、２０％ＦＢＳを含む１００μｌ ＤＭＥＭを、各ウェルに添加した。３日目に、２４時間で、上記細胞を溶解し、そのＲＮＡを調製し、ｑＲＴ−ＰＣＲを、ＡｐｏＢおよびｒＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡについて行った。
いくつかの４成分のアミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についてのＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン活性を、表１６にまとめる。
（実施例３５：アミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についてのインビボでのＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン）
３つおよび４つの成分のアミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についてのＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン活性を、インビボで、マウスで決定した。インビボでの上記ＡｐｏＢ ｍＲＮＡ低下活性を、表１７に示す。
インビボで、マウスでの上記ＡｐｏＢ遺伝子ノックダウン用量応答を、いくつかの４成分アミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物について得、マウス血清コレステロールレベルと比較した。インビボでの上記ＡｐｏＢ ｍＲＮＡ低下および対応する血清コレステロール低下を、表１８にまとめる。
（実施例３６：アミノ酸脂質ＲＮＡｉ組成物についての抗ウイルス効果）
４成分を有するアミノ酸脂質干渉ＲＮＡ処方物の例を、表１９に示す。表１９の処方物を使用して、マウスインフルエンザモデルにおいてインビボで抗ウイルス活性を決定した。
表１９の処方物は、各々、表２０に示されるように、１．８のＮ／Ｐを有し、約０．１〜０．３の分散値で、１２７〜１８３ｎｍの粒径（群７〜８を除いて）を示した。
表１９の処方物についてのウイルス力価低下の程度を、表２１に示される。ウイルス力価低下についての各値は、８匹のマウスについてのデータを反映する。
一般に、表２１の結果は、上記干渉ＲＮＡアミノ酸脂質処方物が上記干渉ＲＮＡをインビボで細胞に送達し、それによって、インフルエンザウイルス力価が、コントロールとしてのＰＢＳと比較して、約１６００倍以上まで低下することを示した。コントロール群は、Ｑｎｅｇを投与した＃２、４、６、８、および１０であった。

Claims (36)

  1. 式Ｉに示される構造を含む化合物：
    Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ４ 式Ｉ
    およびその塩であって、ここで
    Ｘａａは、式―ＮＲ Ｎ −ＣＲ １ Ｒ ２ −（Ｃ＝Ｏ）−を有するＤ−アミノ酸残基もしくはＬ−アミノ酸残基であって、そのアミノ酸はノルアルギニン、ピリジルアラニン又はそれらのＮ−メチル化バージョンであり、
    Ｒ １ は、前記アミノ酸の置換されているかもしくは置換されていない塩基性側鎖であり；
    Ｒ ２ は、水素であり；
    Ｒ Ｎ は、水素であり；
    Ｒ３は独立して、置換されているかもしくは置換されていないＣ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
    Ｒ４は独立して、置換されているかもしくは置換されていないＣ（６−２２）アルキルもしくはＣ（６−２２）アルケニルであり；
    Ｚは、ＮＨ、Ｏ、もしくは水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機性リンカーである、化合物。
  2. Ｘａａは、下記式：

    のいずれか１に示される構造を有するアミノ酸残基である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｘａａは、下記式：
    のいずれか１に示される構造を有するアミノ酸残基である、請求項１に記載の化合物。
  4. Ｒ３およびＲ４は、Ｃ（６−２２）アルキルであり、かつ同じであるかもしくは異なっている、請求項１に記載の化合物。
  5. Ｒ３およびＲ４は、Ｃ（６−２２）アルケニルであり、かつ同じであるかもしくは異なっている、請求項１に記載の化合物。
  6. Ｒ３はＣ（６−２２）アルキルであり、Ｒ４はＣ（６−２２）アルケニルである、請求項１に記載の化合物。
  7. Ｒ４は、Ｃ（６−２２）アルキルであり、Ｒ３は、Ｃ（６−２２）アルケニルである、請求項１に記載の化合物。
  8. ＺはＮＨである、請求項１に記載の化合物。
  9. ＺはＯである、請求項１に記載の化合物。
  10. Ｘａａは、５〜７．５のｐＫａを有する官能基を含む側鎖を有する、請求項１に記載の化合物。
  11. 請求項１に記載の化合物のマルチマーを含む化合物であって、ここで２つ以上の請求項１に記載の化合物が架橋されている、化合物。
  12. 請求項１に記載の化合物の結合体を含む化合物であって、ここでペプチドは、前記ノルアルギニンまたはピリジルアラニンの側鎖に結合体化されている、化合物。
  13. オリゴマーフレームワークもしくはポリマーフレームワークに結合した請求項１に記載の化合物を含む、化合物。
  14. 薬学的薬物化合物に結合した請求項１に記載の化合物を含む、化合物。
  15. （Ｃ１０アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１６アシル）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１０アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１８アシル）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）、（Ｃ１８オレイック）−４−Ｐａｌ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、（Ｃ１０アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１０アルキル）、（Ｃ１２アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）、（Ｃ１４アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１４アルキル）、（Ｃ１６アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）、および（Ｃ１８アシル）−４−Ｐａｌ（Ｍｅ）−ＮＨ−（Ｃ１８アルキル）から選択される、請求項１に記載の化合物。
  16. （Ｃ１２アルキル）−（Ｃ＝Ｏ）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１２アルキル）である、化合物Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（ドデシルアミノ）ブタン−２−イル）ドデカンアミド。
  17. Ｃ１８（オレイック）−ｎｏｒＡｒｇ−ＮＨ−（Ｃ１６アルキル）である化合物Ｎ−（４−グアニジノ−１−オキソ−１−（ヘキサデシルアミノ）ブタン−２−イル）オクタデカ−９−エナミド。
  18. 請求項１〜１７のいずれか１項に従う１個以上の化合物および１つ以上の治療核酸を含む、組成物。
  19. 前記治療核酸は、遺伝子抑制剤である、請求項１８に記載の組成物。
  20. 前記治療核酸は、ＲＮＡｉ誘導剤である、請求項１８に記載の組成物。
  21. 前記治療核酸は、二本鎖ＲＮＡである、請求項１８に記載の組成物。
  22. 前記治療核酸はｍｄＲＮＡである、請求項１８に記載の組成物。
  23. 前記治療核酸は、改変ヌクレオシドを含む、請求項１８に記載の組成物。
  24. １種以上の非カチオン性脂質もしくはステロールをさらに含む、請求項１８に記載の組成物。
  25. コレステリルヘミスクシネートをさらに含む、請求項１８に記載の組成物。
  26. １種以上のカチオン性脂質をさらに含む、請求項１８に記載の組成物。
  27. １種以上のｐｅｇ化脂質もしくはｐｅｇ化ステロールをさらに含む、請求項１８に記載の組成物。
  28. 前記核酸は、複合体を形成する、請求項１８に記載の組成物。
  29. 前記組成物は、リポソームを含む、請求項１８に記載の組成物。
  30. 前記組成物は、エマルジョンである、請求項１８に記載の組成物。
  31. 前記組成物は、ミセル分散物である、請求項１８に記載の組成物。
  32. 請求項１〜１７のいずれか１項に記載の１種以上の化合物、および１種以上の薬物因子もしくは生物学的に活性な薬剤を含む、薬学的組成物。
  33. 治療核酸を細胞に送達するための組成物であって、該組成物は、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物を１種以上の治療核酸とともに含む、組成物。
  34. 細胞における遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、該組成物は、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物を１種以上の核酸とともに含む、組成物。
  35. 関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、敗血症、ならびに癌を含む疾患を処置するための医薬の調製における、組成物の使用であって、該組成物は、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物を１種以上の治療核酸とともに含む、使用。
  36. 関節リウマチ、肝臓疾患、脳炎、骨折、心疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス疾患、敗血症、ならびに癌から選択される疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物を１種以上の治療核酸とともに含む、組成物。
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