FI108147B - Menetelmä proteiinituotteiden tuottamiseksi Aspergillus oryzaella ja promoottori käytettävksi Aspergilluksessa - Google Patents
Menetelmä proteiinituotteiden tuottamiseksi Aspergillus oryzaella ja promoottori käytettävksi Aspergilluksessa Download PDFInfo
- Publication number
- FI108147B FI108147B FI871144A FI871144A FI108147B FI 108147 B FI108147 B FI 108147B FI 871144 A FI871144 A FI 871144A FI 871144 A FI871144 A FI 871144A FI 108147 B FI108147 B FI 108147B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- gene
- amylase
- promoter
- sequence
- fragment
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
- C12N9/242—Fungal source
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6478—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
- C12N9/6481—Pepsins (3.4.23.1; 3.4.23.2; 3.4.23.3)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
1 no 1 ,\ 7 1 1 o i 't f
Menetelmä proteiinituotteiden tuottamiseksi Aspergillus ory-zaella ja promoottori käytettäväksi Aspergi11 uksessa
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää proteiinituotteiden ilmentämiseksi Aspergillus oryzaella, yhdistelmä-DNA-vekto-reita, promoottoria Aspergi11uksel1 e ja transformoidui11 e sienille.
Aikojen kuluessa on kehitetty lukuisia menetelmiä polypepti-dien tai proteiinien tuottamiseksi yhdistelmä-DNA-tekniikan avulla. Päämielenkiinto on keskittynyt bakteereihin ja hiivaan, esim., E. coli, Bacillus subtilis ja Saccharomyces ce-revisiae, jotka ovat hyvin ominaisuuksiltaan tunnettuja lajeja, mitä tulee esimerkiksi ilmenemis- ja vaiintasysteemeihi n.
Paitsi yllä mainitut mikro-organismit, rihmastolliset sienet, kuten Aspergillus niger, ovat houkuttelevia ehdokkaita isäntä-mikro-organismeina yhdistelmä-DNA-vektorei11 e, niiden ollessa hyvin ominaisuuksiltaan tunnettuja ja laajalti käytettyjä mikro-organismeja kaupalliseen entsyymien tuotantoon. Ponnistelut on erityisesti keskitetty transformaatiosysteemien kehittämiseen, joiden yhteydessä käytetään vaiintamarkkeria , ’ joka antaa mahdollisuuden valikoida transformantteja isäntä ni! kro-organi smei sta , joita ei ole transformoitu.
•
Muutamana viime vuonna on kuvailtu erilaisia vai i n tamarkke-reita Aspergillus nidulansin transformaatiota varten, ja menetelmiä on äskettäin kehitetty rihmastollisen sienen, Aspergillus nidulansin integroivaa transformaatiota varten tarkoi-tuksena tutkia geneettisiä ja mol ekul aari si a prosesseja, jotka säätelevät sienisolun erilaistumista.
2 1 ρο Ί / 7 I L U H / A. nidulansin transformaatio on näytetty toteen käyttämällä plasmideja, jotka sisältävät Neurospora crassan pyr-4-geem'n (Ballance, D.J. et ai., Biochem. Biophys. Res. Commun., 112 (1983) 284-289), A. nidulansin amdS-geenin (Tilburn, J.G. et ai., Gene 26_ (1983) 205-221), A. nidulansin trpC-geenin (Yelton, M.M. et ai., Proc. Natl . Acad. Sei. USA. JU (1984) 1470-1474) ja A. nidulansin argB-geenin (John, M.A. ja Pe-berdy J., Microb. Technol. 6 (1984) 386-389). Transformoivan DNA:n todettiin olevan yhdistynyt isäntägenomiin melko alhaisella esiintymistiheydellä (tyypillisesti < 1000 transfor-manttia/^ug DNA:ta).
Aivan äskettäin kuvailtiin Aspergillus nigerin transformaatiota A. nidulansin amdS- geenillä (Kelly, J.M. ja Hynes, M.J., EMBO Journal ^ (1985), 475-479), ja amdSrn osoitettiin olevan mahdollinen vaiintamarkkeri käytettäväksi Aspergillus nigerin transformaatiossa, joka ei pysty kasvamaan voimakkaasti asetamidin ainoana typenlähteenä. Äskettäin on kuvailtu myös Aspergillus nigerin transformaatiota käyttäen Aspergillus nidulansin argB-geeniä (Buxton, F.P. et ai., Gene 37_ (1985 ), 207-214).
Toistaiseksi ei ole kehitetty mitään systeemejä vieraiden proteiinien ilmentämiseksi rihmastollisissa Aspergillus ory- * zaesienissä, johtuen pääasiassa riittämättömästä tietämykses- »»«» « tä siitä, kuinka geenin ilmenemistä tässä sienessä säädellään, : ** ja johtuen sopivien valikoivien geneettisten markkereiden puuttumisesta kl oonausvektorei sta .
Esillä olevan keksinnön mukaisesti on nyt osoitettu, että edellä olevaa transformaatiotekniikkaa voidaan käyttää, jotta |\ saavutettaisiin heterol ogi Sten proteiinien suuri ilmenemisen . , taso, tai homologisten proteiinien lisääntynyt tuotanto As pergillus o ry z a e 11 a .
108147 3 Tässä yhteydessä käytettynä, ilmaisu "hetero!ogiset proteiinit" tarkoittaa proteiineja, joita A. oryzae ei tuota, kun taas "homologiset proteiinit" tarkoittavat proteiineja, joita A. oryzae tuottaa itse.
Erityisemmin on osoitettu, että A. oryzae -kantojen valikointi, jotka on transformoitu DNA:lla, joka koodaa haluttua proteiinituotetta, on mahdollista käyttämällä merkki geenejä, joita käytetään A. nigerin ja A. nidulansin transformaatioon. Näiden viimeksi mainittujen sienten ja A. oryzaen välisestä fylogeneettisestä etäisyydestä johtuen (Raper, K.B. ja Fennell, D.I. (1965) The Genus Aspergillus) tämä ei ollut mitenkään aavistettavissa.
Esillä olevan keksinnön mukaisen ensimmäisen näkökohdan mukaisesti annetaan käyttöön menetelmä proteiinituotteen ilmentämiseksi Aspergillus oryzaessa, käsittäen vaiheet: (a) yhdistelmä-DNA:n kloonausvektorisysteemi n tuottamisen, joka pystyy yhdistymään Aspergillus oryzae -isännän genomiin yhdessä tai useammassa kopiossa, ja joka käsittää: DNA-sek-venssejä, jotka koodaavat toimintoja, jotka helpottavat gee-nin ilmenemistä; sopivan markkerin transf ormantti en valikoi-miseksi; ja DNA-sekvenssin, joka koodaa haluttua proteiini- | tuotetta, (b) Aspergillus oryzae -isännän transformoinnin, joka A. ory- : *·* zae ei sisällä toiminnallista geeniä valittua vai i ntamarkkeri a varten, yhdi stel mä-DNA: n kl oonausvektori systeemi 11 ä vaiheesta a; ja (c) transformoidun Aspergillus oryzae -isännän viljelemisen sopivassa kasvualustassa.
• *
Esillä olevan keksinnön mukaisen toisen näkökohdan mukaisesti, annetaan käyttöön suuritehoinen promoottori proteiinituotteen .* · ilmentämiseksi Aspergi 11 uksessa, erityisesti Aspergillus ory zaessa ja Aspergillus nigerissä, jolle promoottorille on omi- 108147 4 naista se, että se on TAKA-amylaasi promoottori tai toiminnallisia osia siitä, jota valinnaisesti edeltävät aktivoivat, geenin yläpuoliset sekvenssit.
Esillä olevan keksinnön mukaisen kolmannen näkökohdan mukaisesti annetaan käyttöön menetelmä proteiinituotteen tuottamiseksi Aspergillus oryzaessa, jonka menetelmän mukaan Aspergillus oryzae -kantaa, joka transformoidaan yhdistelmä-DNA:n kloonausvektori systeemi 11ä, kuten edellä kuvailtiin, viljellään sopivassa kasvualustassa, ja tuote otetaan talteen kasvualustasta.
Esillä olevaa keksintöä valaistaan edelleen viittaamalla oheisiin p i i r r o k s i i n, joissa kuvio 1 esittää TAKA-amylaasi n promoottorin DNA-sekvenssiä, ja yläpuolisia promoottorialueita, TAKA-amylaasi n rakennegee-nin esi aluetta ja 5'-osaa.
kuvio 2 esittää plasmidin pTAKA17 endonukleaasirestriktio-karttaa, kuvio 3 valaisee plasmidin p285'proC konstruktiota, kuviot 4a ja 4b esittävät Rhizomucor miehein asparagiinihap-poproteinaasin cDNA:n prepro-aiueen DNA-sekvenssiä, yhdessä päätellyn aminohapposekvenssin kanssa, joka on esitetty kolmikirjaimisina lyhenteinä, ' kuvio 5 valaisee plasmidin pRMP konstruktiota, * * kuvio 6 esittää plasmidin pCAMG91 endonukleaasi restri kti o- : *·· karttaa, kuvio 7a valaisee plasmidin pICAMG/Term konstruktiota, kuvio 7b valaisee plasmidin p686 konstruktiota, kuvio 8 valaisee plasmidin pRMPAMGTerm konstruktiota,
Kuvio 9a valaisee plasmidin pB408,3konstruktiota, kuvio 9b valaisee plasmidin p778 konstruktiota, • «· " · kuvio 10 valaisee plasmidin p719 konstruktiota, kuvio 11 valaisee plasmidin p777 konstruktiota, kuvio 12 esittää Rhizomucor miehein li paasi n c D N A:n prepro-alueen sekvenssiä, yhdessä päätellyn aminohapposekvenssin , 108147 b kanssa, joka on esitetty kolmikirjaimisina lyhenteinä, kuvio 13a valaisee plasmidin pB544 konstruktiota, kuvio 13b valaisee plasmidin p787 konstruktiota, kuvio 14 esittää synteettisen kappaleen RHL5' DNA-sekvenssiä, kuvio 15a valaisee plasmidin pT0C51 konstruktiota ja kuvio 15b valaisee plasmidin pT0C56 konstruktiota.
Transformaatiotekniikka, jota käytettiin, oli menetelmä, joka oli sovellettu A. nidulansin transf orniaati omenetel mi stä (Ballance et ai., 13 iochem. B iophy s. Res. Commun ., 112 (1933), 284-289 ; Tilburn et ai., Gene 26 ( 1983 ), 205-221 , Yelton et ai. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 81 (1984), 1470-1474), ja joka oli samankaltainen kuin Buxtonin et ai. menetelmä (Gene 37 ( 1985 ), 207-214 ), A. nigerin transformoimi seksi. Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetelmässä Aspergillus oryzae transformoidaan vektori systeemi 11ä, joka sisältää valinta-markkerin, joka pystytään liittämään isäntäkannan genomiin, mutta jota ei esiinny i säntäkannassa ennen transf orniaati ota. Transformantit voidaan sitten valikoida ja eristää ei-trans-formanteista liitetyn vaiintamarkkerin perusteella.
Edullisia vai i ntamarkkerei ta ovat argB- (A. nidulans tai A. niger), trpC- (A. nidulans), amdS- (A. nidulans), tai pyr4-(Meurospora erässä) geenit, tai DMFR- (dihydrofoiaattireduk-. taasi tai sen mutantit) geeni. Edullisempia vai intamarkkereita * ovat argB- tai amdS-geenit. Villi tyy pin A. oryzae -kannat ovat • · 4* : ** normaalisti argB (so. argB-geeni on toiminnallinen A. ory-• · ·.*.· zaessa). Jos argB valitaan valintamarkkeriksi, on isäntä kantana käytettävä A. oryzaen argB-mutanttikantaa, jonka geenissä on virhe tämän markkerin suhteen. A. oryzaen argB-mutantteja voidaan valmistaa kuten kuvailivat F.P. Buxton et ai. (Gene f*·., 37. (1S35 ), 207-214 ). ArgB-mutantti määritellään rnutan ti k s i , joka sisältää virheen orni ti i ni transkarbamyl aasi geeni ssä . Toisaalta amdS-geeniä voidaan käyttää vaiintamarkkerina A.
; " oryzaen villi tyy pin transformaatioon, koska villi tyy pin kannat eivät sisällä tätä geeniä.
6 1 G 8147 DNA-sekvenssit, jotka koodaavat toimintoja, jotka helpottavat geenin ilmenemistä, ovat tyypillisesti promoottoreja, transk-riptioterminaattoreja ja polyadeny1aatiosignaaleja.
Promoottori, jota voisivat edeltää yläpuoliset aktivoivat sekvenssit ja tehostavat sekvenssit, kuten hyvin tiedetään alalla, voi olla mikä tahansa DNA-sekvenssi, joka voisi osoittaa voimakasta transkriptionaalista aktiivisuutta Aspergillus oryzaessa, ja se voi olla peräisin geeneistä, jotka koodaavat sekä ekstrasel1 ui aari si a että intrasel1 ui aari si a proteiineja, kuten amylaasit, glukoamylaasit, proteaasit, lipaasit, sellu-laasit ja glykolyyttiset entsyymit. Sopivat promoottorit voivat olla peräisin A. oryzaen TAKA-amylaasi n, Rhizomucor mie-hein asparagiinihappoproteinaasin, A. nigerin glukoamylaasi n, A. nigerin neutraalin ai fa-amylaasi n, A. nigerin happostabii-lin aifa-amy1 aasi n, ja Rhizomucor miehein lipaasin geeneistä. Esimerkkejä glykolyyttisiä entsyymejä koodaavien geenien promoottoreista ovat TPI, ADH ja PGK.
Edullinen promoottori esillä olevan keksinnön mukaisesti on A.
oryzaen TAKA-amylaasin promoottori. TAKA-amylaasi on hyvin tunnettu alfa-amylaasi (Toda et ai., Proc. Japan Acad. 58^
Ser. B (1982) 208-212). DMA, joka koodaa promoottorialuetta, saatiin TAKA-amylaasi n genomisesta kloonista. Promoottorin sekvenssi ja alueet promoottorista ylöspäin yhdessä TAKA- | ’ amylaasin rakennegeenin pre-alueen ja 5"-pään kanssa on ku- i ** vattuna kuviossa 1.
• · • · · • · · • ·
Kuten kuvaillaan yksityiskohtaisemmin esimerkissä 2, DNA-sekvenssi, joka koodaa TAKA-amylaasia, sisältäen pre-alueen ja promoottorin ja geenin yläpuoliset, aktivoivat sekvenssit, saatiin A. oryzaen rihmastosta ja liitettiin BamHIillä liuotettuun pBR322:een, jolloin saatiin plasmidi pTAKA 17 (katso kuvio 2). Plasmidissa pTAKA 17, A. oryzaesta saatu DNA on esitetty 5,5 kb:n BamHI/Sau 3AI-BamHI/Sau 3AI -kappaleena, promoottorin ja yläpuolisten aktivoivien sekvenssien esit- 108147 7 taessa 2,1 kb kappaletta lähtien asemasta 0. Promoottorin ja yläpuolisten aktivoivien sekvenssien selvitetty DNA-sekvenssi Dgl11-paikkaan saakka on esitetty kuviossa 1. Promoottori päättyy nukleotidin-1 kohdalla, joka edeltää TAKA-amylaasi n esi sekvenssin Met(1)-kodonia. Nukleotidi sekvenssi, joka koo-daa esi sekvenssiä, koostuu 63 nukleotidista, ja kehittynyt TAKA-amylaasi alkaa asemasta, joka vastaa nukleotidia 64.
Plasmidista TAKA 17 voidaan saada kokonainen promoottori sekvenssi, mukaan lukien sekvenssejä promoottorista ylöspäin, tai sen toiminnallisia osia, keinoilla, jotka ovat selviä henkilölle, joka tuntee alaa. Promoottori sekvenssi voidaan tuottaa Uittajien kanssa tarkoituksena tuottaa erityisiä katkaisu-paikkoja, jotka helpottavat promoottori sekvenssin liittämistä muuhun DNArhan, esimerkiksi geeniin, joka koodaa haluttua proteiinituotetta tai erilaisiin pre-alueisiin (signaalipeptidi t ) .
Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetelmässä, sekvenssiä nukleotidista -1144 (katso kuvio 1) (esittäen Sali-paikan lähtöä) nukleotidiin -10, on käytetty yhtenä esimerkkinä pro-moottori ai ueen hyvin toimivasta osasta. Esillä olevan keksin-
MM
.:. non mukaisessa toisessa suoritusmuodossa, nukleotidi sekvens- 77: siä nukleotidista -1176 nukleotidiin -1 edelsi vielä sekven- • * . toimeton 1,05 kb:n kappale plasmidista pTAKA 17. Henkilölle, 7 * joka tuntee alaa, on selvää, että erilaisia kappaleita voi-• · J ** daan käyttää.
• · ♦ · · • · « $ ·
Yhden keksinnön mukaisen suoritusmuodon mukaisesti sisältävät promoottori ja yläpuoliset aktivoivat sekvenssit seuraavan sekvenssin tai toiminnallisesti vastaavan nukleotidi sekvens- ·’· sin: « * · , · φ
GTCGACGC ATTCCGAATA CGAGGCCTGA TTAATGATTA CATACGCCTC
• )
·' ** CGGGTAGTAG ACCGAGCAGC CGAGCCAGTT CAGCGCCTAA AACGCCTTAT
; ACAATTAAGC AGTTAAAGAA GTTAGAATCT ACGCTTAAAA AGCTACTTAA
*
. AAATCGATCT CGCAGTCCCG ATTCGCCTAT CAAAACCAGT TTAAATCAAC
TGATTAAAGG TGCCGAACGA GCTATAAATG ATATAACAAT ATTAAAGCAT
« t 8 1C8147
TAATTAGAGC AATATCAGGC CGCGCACGAA AGGCAACTTA AAAAGCGAAA GCGCTCTACT AAACAGATTA CTTTTGAAAA AGGCACATCA GTATTTAAAG CCCGAATCCT TATTAAGCGC CGAAATCAGG CAGATAAAGC CATACAGGCA GATAGACCTC TACCTATTAA ATCGGCTTCT AGGCGCGCTC CATCTAAATG TTCTGGCTGT GGTGTACAGG GGCATAAAAT TACGCACTAC CCGAATCGAT AGAACTACTC ATTTTTATAT AGAAGTCAGA ATTCATAGTG TTTTGATCAT TTTAAATTTT TATATGGCGG GTGGTGGGCA ACTCGCTTGC GCGGGCAACT CGCTTACCGA TTACGTTAGG GCTGATATTT ACGTGAAAAT CGTCAAGGGA TGCAAGACCA AAGTAGTAAA ACCCCGGAAG TCAACAGCAT CCAAGCCCAA GTCCTTCACG GAGAAACCCC AGCGTCCACA TCACGAGCGA AGGACCACCT CTAGGCATCG GACGCACCAT CCAATTAGAA GCAGCAAAGC GAAACAGCCC AAGAAAAAGG TCGGCCCGTC GGCCTTTTCT GCAACGCTGA TCACGGGCAG CGATCCAACC AACACCCTCC AGAGTGACTA GGGGCGGAAA TTTAAAGGGA TTAATTTCCA CTCAACCACA AATCACAGTC GTCCCCGGTA TTGTCCTGCA GAATGCAATT TAAACTCTTC TGCGAATCGC TTGGATTCCC CGCCCCTAGT CGTAGAGCTT AAAGTATGTC CCTTGTCGAT GCGATGTATC ACAACATATA AATACTAGCA AGGGATGCCA TGCTTGGAGG ATAGCAACCG ACAACATCAC
ATCAAGCTCT CCCTTCTCTG AACAATAAAC CCCACAG esittäen sekvenssiä nukleotidista -1144 nukleotidiin -10 kuviossa 1.
;:· Li säsuori tusmuodon mukaisesti promoottori ja yläpuoliset ak- ·:·:' tivoivat sekvenssit sisältävät seuraavan sekvenssin tai toi- minnallisesti vastaavan nukleotidi sekvenssi n: • * 9 9
\ ' AGATCTGCCC TTATAAATCT CCTAGTCTGA TCGTCGACGC ATTCCGAATA
CGAGGCCTGA TTAATGATTA CATACGCCTC CGGGTAGTAG ACCGAGCAGC
CGAGCCAGTT CAGCGCCTAA AA.CGCCTTAT ACAATTAAGC AGTTAAAGAA
GTTAGAATCT ACGCTTAAAA AGCTACTTAA AAATCGATCT CGCAGTCCCG
ATTCGCCTAT CAAAACCAGT TTAAATCAAC TGATTAAAGG TGCCGAACGA
GCTATAAATG ATATAACAAT ATTAAAGCAT TAATTAGAGC AATATCAGGC
«
CGCGCACGAA AGGCAACTTA AAAAGCGAAA GCGCTCTACT AAACAGATTA
CTTTTGAAAA AGGCACATCA GTATTTAAAG CCCGAATCCT TATTAAGCGC
: " CGAAATCAGG CAGATAAAGC CATACAGGCA GATAGACCTC TACCTATTAA
ATCGGCTTCT AGGCGCGCTC CATCTAAATG TTCTGGCTGT GGTGTACAGG
GGCATAAAAT TACGCACTAC CCGAATCGAT AGAACTACTC ATTTTTATAT
AGAAGTCAGA ATTCATAGTG TTTTGATCAT TTTAAATTTT TATATGGCGG
GTGGTGGGCA ACTCGCTTGC GCGGGCAACT CGCTTACCGA TTACGTTAGG
108147 9
GCTGATATTT ACGTGAAAAT CGTCAAGGGA TGCAAGACCA AAGTAGTAAA
ACCCCGGAAG TCAACAGCAT CCAAGCCCAA GTCCTTCACG GAGAAACCCC
AGCGTCCACA TCACGAGCGA AGGACCACCT CTAGGCATCG GACGCACCAT
CCAATTAGAA GCAGCAAAGC GAAACAGCCC AAGAAAAAGG TCGGCCCGTC
GGCCTTTTCT GCAACGCTGA TCACGGGCAG CGATCCAACC AACACCCTCC
AGAGTGACTA GGGGCGGAAA TTTAAAGGGA TTAATTTCCA CTCAACCACA
AATCACAGTC GTCCCCGGTA TTGTCCTGCA GAATGCAATT TAAACTCTTC
TGCGAATCGC TTGGATTCCC CGCCCCTAGT CGTAGAGCTT AAAGTATGTC
CCTTGTCGAT GCGATGTATC ACAACATATA AATACTAGCA AGGGATGCCA
TGCTTGGAGG ATAGCAACCG ACAACATCAC ATCAAGCTCT CCCTTCTCTG
AACAATAAAC CCCACAGAAG GCATTT esittäen sekvenssiä nukleotidista -1176 nukleotidiin -1 kuviossa 1.
Esillä olevan keksinnön mukaisen 1isänäkökohdan mukaisesti jälkimmäistä sekvenssiä voi edeltää 1,05 kb:n sekventoimaton yläpuolinen alue plasmidista pTAKA 17 (asema 0-1,05 kuviossa 2).
Terminaattorit ja polyadenylaatiosekvenssit voivat olla peräisin samasta lähteestä kuin promoottorit. Tehostavia sekvenssejä voidaan myös liittää konstruktioon.
Ilmenevä tuote voi kiertyä solujen sisään, mikä vaatii solu-jen rikkomista tuotteen eristämiseksi. Jotta vältettäisiin ·:··; tämä prosessin lisävaihe ja minimoitaisiin ilmenevän tuotteen "... mahdollisen hajoamisen määrä soluissa, on edullista, että tuote erittyy soluista. Tätä tarkoitusta varten varustetaan # » ♦ halutun tuotteen geeni esi alueella, joka varmistaa ilmenevän tuotteen tehokkaan ohjaamisen solun eritysreiti 11 e . Tämä esialue (pre-alue), joka voisi olla luonnossa esiintyvä signaali- tai esipeptidi tai sen toiminnallisia osia tai syn-: ** teettinen sekvenssi, joka huolehtii eri ttymi sestä, lohkeaa yleensä halutusta tuotteesta erittymisen aikana, jättäen ke-: . liittyneen tuotteen valmiiksi eristämistä varten kasvul i emestä.
10 108147
Esialue voi olla peräisin minkä tahansa organismin erittyvien proteiinien geeneistä.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti esialue voi olla peräisin Aspergi11us-1ajin glukoamylaasi n tai amylaasin geenistä, Ba-cillus-lajin amylaasi geenistä, Rhizomucor mi ehei n li paasi n tai proteinaasin geenistä, S. cerecisiaen alfa-teki jän geenistä tai vasikan prokymosiinin geenistä. Edullisemmin esialue on peräisin A. oryzaen TAKA-amylaasi n geenistä, A. nige-rin neutraalin ai fa-amylaasi n geenistä, A. nigerin happokes-toisen ai fa-amylaasi n geenistä, B. 1icheniformiksen alfa-amylaasin geenistä, Bacilluksen NCIB 11837 maltogeenisen amylaasin geenistä, B. stearothermophi1uksen aifa-amylaasi n geenistä tai B. 1icheniformiksen subti1isiinin geenistä. Tehokkaita signaäl i sek venssejä ovat A. oryzaen signaali, Rhizornu-cor mieheinasparagiinihappoproteinaasin signaali ja Rhizomucor mi e h e i n 1 i p a a s i n signaali.
TAKA-amylaasi n signaali sisältää seuraavan sekvenssin
ATGATGGTCGCGTGGTGGTCTCTATTTCTGTACGGCCTTCAGGTCGCGGCACCT
MetiletValAlaTrpTrpSerLeuPheLeuTyrGlyLeuGlnValAlaAlaPro
;:· GCTTTGGCT
: · · A1 a L e u A1 a ;·. Halutun tuotteen geeni, joka on toiminnallisesti kytkeytynyt ’··. promoottori- ja termi naattor i sek venssei hi n, voidaan sijoittaa vektoriin, joka sisältää vaiintamarkkerin, tai se voidaan sijoittaa erilliseen vektoriin tai plasmidiin, jotka kykenevät yhdistymään isäntäkannan genomiin. Tässä yhteydessä käytettynä, ilmaisu "vektori systeemi" sisältää yksinkertaisen vekto-: *·· rin tai plasmidin, tai kaksi tai useampaa vektoria tai plas-midia, jotka yhdessä sisältävät DMA:n kokonai si nf ormaati on ;·. liitettäväksi isännän genomiin. Vektorit tai plasmidit voivat *- olla lineaarisia tai suljetun renkaan muotoisia molekyylejä.
Esillä olevan keksinnön mukaisen edullisen suoritusmuodon mu- 108147 11 kaisesti, A. oryzae yhteistransforrnoidaan kahdella vektorilla, toisen sisältäessä vaiintamarkkerin ja toisen käsittäessä muun osan isäntäkantaan liitettävästä vieraasta DNA:sta, mukaanlukien promoottori, halutun tuotteen geeni ja transkription terminaattori ja polyadenylaatiosekvenssit.
Tavallisesti A. oryzaen transformantit ovat pysyviä, ja niitä voidaan viljellä valintapaineiden poissa ollessa. Jos trans-formantit osoittautuvat pysymättömiksi, voidaan käyttää väli ntamarkkeri a valikointia varten kasvatuksen aikana. Transformoituja soluja viljellään sitten valintapaineen alaisina, joka vastaa kysymyksessä olevaa markkeria.
Esillä oleva keksintö tuo käyttöön menetelmän monien erilaisten polypeptidi- tai proteiinituotteiden tuottamiseksi suurina saantoina A. oryzaessa. A. oryzaeta on vuosikausia käytetty kaupallisessa mitassa esimerkiksi TAKA-amylaasi entsyymi n ja proteolyyttis ten entsyymien tuottamiseen, ja niin muodoin fermentointi tekno!ogia tämän mikro-organismin kohdalla on hyvin keh i ttyny ttä , ja mi k ro-organi sini hyväksytään käytettäväksi elintarviketeollisuudessa. Esillä olevan keksinnön mukai-sesti tarjotaan mahdollisuus A. oryzaen käyttämiseksi pe-riaatteessa minkä tahansa polypeptidi- tai proteiinituotteen ':": tuottamiseksi suurina määrinä. Esimerkkejä sellaisista tuot- teista ovat kymosiini tai prokymosiini ja muut juoksutteet, ·\φ proteaasit, amyl ogl ukosi daasi t, Aspergi 11 uk sen happokestoi set .·.*. amylaasit, sieni 1 i paasi t tai prokari ootti set lipaasit, ja 1ämpckestoiset bakteeri- ja sieniamylaasit.
Esillä olevaa keksintöä valaistaan prokymosiinin, khizomucor miehein asparagiinihappoproteinaasin, Rhizomucor mi ehei n TAKA- • · ' ** amylaasin ja lipaasin tuotannon avulla.
Näiden entsyymien geenit saatiin cDMA-kirjastoista tai geno-, „ mikirjastoista, kuten kuvaillaan yksityiskohtaisemmin seuraa- vassa.
12 108147
Esi merk i t
Seuraavissa esimerkeissä lähtöaineina käytettävät plasmidit ovat seuraavat: p2Ö5: (ATCC no 20681 ) pCAMG91: Boel et al. EMBO Journal 3 (1984), 1581-1585 pIC1 9R: Harsh et al . Gene 22_ (1984 ), 481-485 pSa 143: Berse et al . Gene 25 ( 1983 ), 109-117 John & Pe- berdy, Enzyme Microb. Technol . 6 ( 1904 ), 386-389 P 3 S R 2 : J.M. Kelly ja M.J. Hynes, EM80 Journal 4 ( 1985 ), 475-479 pBR322: Bolivar F. et al ., Gene 2_ ( 1977 ), 95-113 pBR327: Covarrubias L. et al., Gene 13 (1981 ), 25-35 pUC9, pUC13 , ja pUCIS: Vieira et al., Gene 19_ (1982 ), 259-268 ja Messing, lie th. in Enzymology 101 (1983 ), 20-27 .
Käytettävät kannat ovat seuraavat: A. niger: ATCC 1015, ATCC 10582 A. oryzae: ATCC 20423, IFO 4177, ATCC 1011, ATCC 9576, ATCC 14488-11491, ATCC 11601 ja ATCC 12892 E. col i : iiClOOO (Casabadan, li.J. ja Cohen, S.N., J.Mol.Biol.
138 , 179-207 ) (NCIB 11956 ) khizomucor ·*·.. mi ehei: CBS 370. 65 • « *
Esimerkki 1
Plasmidin 285'proC valmistaminen, joka sisältää prokymosiini- geenin__ ., Preprokymosiinigeeni eristettiin vasikan mahan c D N A:n kirjas- • · : " tosta ja sijoitettiin pBR322:n PstI- paikkaan G-C-lisäyksen avulla (päihin lisäyksen) (Chirgwin et al., Biochemistry LS (1979), 5294 ja Truelsen et al., Nucleic Acids Res. 1 (1879), 3061), jotta saataisiin pR26. pUC9 katkaistiin Sällillä ja täytettiin Klenow'n polymeraasi11 a ja liitettiin T 4 -1 i g a a s i n avulla. Muodostunut pl a sini di katkaistiin B am ill- 108147 13 E c o R1:11ä ja 2,7 kb:n suuri kappale liitettiin 0,47 kb:n BamHI-EcoRI -kappaleen kanssa pR26:sta, joka sisältää prokymo-siinigeenin N-terminaalisen pään, pUC9':n aikaan saamiseksi. pUC9' sisältää Hindl11-paikan H-terminaalisesti prokymosiini-geenin suhteen. pUC13 katkaistiin BamHI-Narl:11ä ja Narl-Xmal:llä, ja suurta kappaletta vastaavat pienet kappaleet liitettiin pR26:n 0,64 kb:n Xmal-Bcll kappaleen kanssa, joka sisältää prokymosiinigeenin C-terminaalisen pään, plasmidin pUC13' saamiseksi, pUC13 sisältää Xbal-paikan C-terminaali-sesti prokymosi i ni geeni n suuteen. pUCi0':n 0,06 kb: n λmaI -•UiöI -kappale liitettiin p’JC9': n 0,4 δ kb : n Hi ndl 11 -Xual -kappaleen ja p2dS:n 11 kb:n Xba I-M i rid 111 -kappaleen kanssa plas-niidin p205' proC aikaansaamiseksi, joka sisältää prokymosii-nigeeni n, kuten kuvataan kuviossa 3.
Esimerkki 2 A. oryzaen TAKA-amylaasi A-geenin kloonaus Osittaisen cDKA-klponin eristäminen A. oryzae:sta Hw 325, jota oli kasvatettu perunatärkkelyksel-lä, preparoitiin mRHA:ta Kaplanin et ai. mukaan, Biochem. J. 103 ( 1979 ) 101-184. Osittainen cDHA-klooni, joka sisälsi 1050 emäsparia TAKA-amyl aasi geeni stä , saatiin spesifisellä ':·· mlUiA: n synteesin aloituksella 14-meerisen oi i gonukl eoti di-•; · seoksen kanssa: • « !·.·. 5'GGATTATCATGATT 3' (NOR-168), • · ·
G G G G
joka oli TAKA-amylaasi n sisältämiä aminohappoja 295-2S9 koo-daavan sekvenssin vastinsekvenssi (Toda et ai., Proc. Japan » · : *·* Acad. £8, Sarja B, (1932 ) 208-212 ). K1 oonausmenettely oli ·.·.· Gubler δ Hoffmannin mukaan, Gene £5, (1983 ) 263-269. Sek- ventointi cDMA-kloonin päistä ja keskeltä osoitti sekvenssien läsnäolon, jotka vastaavat TAKA-amylaasi n aminohapposekvenssiä.
14 Ί 08147
Genomisten kloonien eristäminen A. oryzaen Hw 325 -rihmastoa kerättiin talteen ja käsiteltiin DNA:n preparoimiseksi A. nigerillä käytetyn menetelmän mukaisesti, jota kuvailivat Boel et ai. supra. 3-10 kb:n restrik-tiokappaleet, jotka oli muodostettu osittain liuottamalla Sau3A:n kanssa, liitettiin BamHI:llä liuotetun, defosforyloi-dun pBR322:n kanssa (New England Biolabs). 50 000 rekombi-nanttia seulottiin oligonukleotidikoettimen NOR-168 kanssa (katso edellä), ja 7 todettiin sisältävän DNA:ta, joka koodaa TAKA-amylaasia. Yksi klooni valittiin promoottorialueen jatkokäyttöä varten, joka sisälsi 2,1 kb mRNA-aloituskohdan yläpuolisesta. Plasmidin pTAKA 17 restriktiokartta on hahmoteltuna kuviossa 2. pTAKA, siirrettynä E. coli -kantaan, tallennettiin kokoelmaan Deutsche Sammlung von Mikro-organismen (DSM), Griesebachstrasse 8, D-3400, Gottingen, 23. helmikuuta, 1987, ja sille annettiin viitenumero DSM 4012, DSM:n ollessa kansainvälinen talletuspaikka, joka on hyväksytty vuoden 1977 Budapestin sopimuksen alaisena, säilyttää tallenteen pysyvästi ja sallii yleisön saada sen käsiinsä edellä olevan sopimuksen sisältämien sääntöjen 9 ja 11 mukaisesti, vastaavasti .
Esimerkki 3
Rhizomucor miehein cDNA-kiriaston konstruointi Fykomykeettisieni Rhizomucor miehei (tämän lajin morfologisen ja taksonomisen kuvauksen suhteen katso: Schipper, M.A.A. Suvut Rhizomucor ja Parasitella. Julkaisussa: Studies in mycology, Institute of the Royal Netherlands Academy of Sciences and Letters. No 17 (1978), 53-71) erittää hapanta proteinaasia (Rhizomucor miehein proteinaasi, seuraavassa lyhennettynä RMP), jota käytetään laajalti maidon juoksuttamiseen juustotuotannossa. Jotta saataisiin tämän proteiinin cDNA-rekombinanttiklooneja E. colissa, kokonaista RNA:ta uutettiin homogenoidusta R. miehei -rihmastosta, kuten kuvailevat Boel et ai. (EMBO J., 3: 1097-1102, 1984) ja Chirgwin et ai., (Biochemistry (Wash).), 18, 5294-5299, 1979). Po- 1C 3147 is ly (λ) : ta sisältävää RNA: ta saatiin kahciel 1 a af f i ni teetti kroma- to^rafiasyklillä oiiyo(dl) - sei 1 uioosal1 a, kuten kuvailevat Aviv ja Leder (PMAS, USA, 68, 1408-1412, 1S72). 01i g o-(ciT ): 11 ä aloitettua vasti n-OMA: ta syntetisoitiin ja tehtiin kaksijuosteiseksi Gublerin ja Hoffmanin mukaisesti {Gene, 25 , 2Ö3-2Ö9 , 1983 ). Kaksijuosteisen cDNA:n päitä kasvatettiin dCTP:n ja terminaalisen deoksinukl eotidyylitransferaasin kanssa, kuten kuvailevat Roychoudnury et ai. (Nucleic Acids Res, _3 lul-ΐϋΰ, 1976). Plasmidi p 13R3id7 tehtiin lineaariseksi P s 11:n kanssa, ja paita kasvatettiin d G T P:n kanssa. 01i -g o {ci C ) :11a päistä lisätty dscUUA liitettiin 1 ämpökäsi ttel e-mäl 1 a töfiän oi igo(ciG) :n kanssa päistä lisättyyn vektoriin, kuten kuvailevat Peacock et ai. (Biochim. Biophys. Acta, u5 S, 243-260, 1981) ja käytettiin transformoimaan hsdR , Γ, -johdannainen E. colista iiC 1000 (Casadaban ja Cohen, J. i ίο 1 . Biol ., 138, 179-207 , 1980 ) rekombi nanttiklooni en muodostamiseksi .
RiiP-spesi fi Sten cDHA-rekombi nantti en identifiointi 18 heptaciekameeri sten oi i godeoksi ri bonukl eoti di en seosta * y A _ „ _ n_ _ i\ A .
O Ci ( \.j O I C U, M HM TA TA ) ,
•; G O G G
i « t joista yksi on R li P miulAin vasti nsekvenssi alueella, joka koo- :·. daa Tyr-Tyr-Piie-Trp-Asp-Al a : aa (Cech ja Fol trnann , Neth-mi1 k « ·» ].t.( Dairy J . 35.: 275-280, 1981), syntetisoitiin Applied Biosys- t e m s , Inc.:n UiiA-synteesi 1 ai tteel 1 a ja puhdistettiin polyak-ryy1iami digeeli elektroforeesilla. Suunnilleen 10 000 l. co-liri rekombi nantti a Rhizomucor mi ehei n cDNA-ki r j as tosta siirrettiin Whatman 5n0-suodinpaperei11 e. Pesäkkeet liuotettiin * '·· ja inuiooil i soitiin, kuten kuvailevat Gergen et ai. (Nucleic : : Acids Res. 7_, 2115-2135, 1975). Suotimet hybri di soi ti i n ; Ji>-merki tyn RriP-spesi f i sen heptadekameeri seoksen kanssa, kuten Kuvailevat o o e 1 et ai. (EIs B ϋ J. 3, 1079-1102 , 1884 ).
1 6 | C 3147 o llybri di soi nti ja suotimien pesu tehtiin du C:ssa, jota seurasi autoradiografointi 24 tunnin ajan vahvistinvarjostimen kanssa. P i eni i, i tta i sta plasmidi-DUA:ta eristettiin hybridi-soivasta pesäkkeestä, pRiiPiöIu, standardi menettely! 1 a (3irn-boii.i ja holy, riucleic Acids K e s., Itl3-lb23, 19 73 ), ja cUNA-1 i i tännäisen DiiA-sek venssi osoitettiin naxamin ja Gilbertin mene tel mä n avulla (Methods Enzymol . (5ö , 499-560, 19 3 U ). P1 a sini di n p Ri-i P1U16 osoitettiin sisältävän osan i.iRNArn ei-luetusta ο'-päästä ja sitten ulottuvan kautta alueiden, jotka koouaavat i> v ami no'nappoa pitkää prepro-al uetta ja 3U0-ar.ii nohappoa , ihiP-protei i ni n kehittyneeksi osaksi. Koska pRl;P1016 ei sisältänyt mitään liitännäistä, joka vastaa RilP tnRUA: n täydellistä 3 '-pää tä , ciJNA-ki rjasto seulottiin uudel- dt ^
Teeri kloonin pRriPluic· P-nick -transl oidun 3 spesifisen restrik ti ok appaleen kanssa, minkä avulla klooni pRMP2931 eristettiin. Tämä klooni sisältää osan ei-luetusta 3'-aluees-ta ja avoimen lukukehyksen sisältäen 270 triplettiä, jotka koooaa vat R.iP-protei i ni n karbok si termi naalista osaa. pRUPlulO ja pi>;i'ίP2331 ovat sen vuoksi laajalti toisiaan peittäviä, ja näiden kahden Kloonin yhdistetty sekvenssi antaa R. mi ehei n preproKiiP eLhiA: n sek venssi n. Kaikkiaan 14 li.· nukleotidia sek-ventoi ti i n o:C- päiden välissä, jotka muodostui vat cDSiA: n /'·' kl oonausmenettel ys tä . Selvitetty GhA-sekvenssi esitetään ku-vioissa 4a ja 40 yhdessä rmR: n prekursori n päätellyn a mi no- * ^ · · ^ u e μ μ o s e ^ v e n s s i n (i ii s s 3 . Kuvioissa ίο ja 4 o vaakasuora viiva osoittaa cDhA-ki r j a ston seulontaan käytetyn synteettisen oli- ♦ * uoseok sen asemaa. iiuoli osoittaa asemaa, jossa prosessointi • · « tapahtuu natiivin Rmrtri kehittymisessä, nukleotidit on numeroitu lähtien ensimmäi sesta emäksestä ai oitus-Mel-kodonissa , ja ami noiiapot on numeroi tu ensimmäisestä tähteestä lähtien kehittyneessä PMP:ssä. Tästä cLRA-sek venssi s ta voidaan pää- • · S ” telia, että rh·; P synteti soi tuu 430 aminohappoa pitkänä prekur- sorina o 3 a. ;i nohappoa sisältävän propepti ci i n karissa. Oletettu siynaalipeptiPaasin prosessoi nti paikka (von Hei jne, Eur.j.-Lioche;·;. 133, 17-21, 1333) tässä prekursori ssa voisi sijaita välillä λ i a ( -4d) ja Arc(-H?), ja kehittynyt K;·; P on muodostu v a a u top r o Loo 1yj 11 i sen i»a 1 κ a i s u n Kautta v u 1 i 1 I a o i u — 1 ja 108147 17
Ala(+1). cDNArsta päätelty RMP:n aminohapposekvenssi sopii hyvin yhteen aikaisemmin julkaistun osittaisen aminohapposekvenssin kanssa (Bech ja Foltmann, Meth-Milk Dairy J: 35275-280, 1981).
Jatkokonstruktiotyön helpottamiseksi RMP cDNA:n kanssa, Hind- III-linkkeri liitettiin BanI-paikassa juuri 3'-kohdassa TAA-terminaatiokodoniin nähden, joka identifioitiin kloonissa pRMP2931 seuraavasti: 25^ug plasmidia pRMP2931 liuotettiin Pstl:lla, jotta saataisiin RMP cDNA-1iitännäinen. Tämä liitännäinen puhdistettiin 1 % agaroosigeelielektroforeesin avulla, el ektroel uoitiin geelistä, puhdistettiin fenoli- ja kloroformi uuttami si 11 a ja seostettiin liaClin ja etanolin kanssa. Tämä kappale, joka koodaa RMP:n 3'-puoliskoa, liuotettiin Banlrn kanssa, ja BanI kohesiiviset restriktiopaikan päät täytettiin neljän dNTP:n seoksen ja E. colin DMA-polymeraasin Klenow-kappaleen kanssa. Näihin täytettyihin päihin lisättiin Hind- 111-1 i i ttäj i ä T4-DNA-1i yaasi n reaktiossa. L i gaati oreakti o- seos uutettiin fenolin ja kloroformin kanssa, ja DNA saostet-+ ti in 4i'i NH -asetaatti/etanol i 11 a . Puhdistettu DNA liuotet- 4 tiin ylimäärällä Hindl 11-entsyymiä, ja 380 emäsparia sisältävä kappale puhdistettiin 6 % polyakryyliamidigeeli11 a. Tämä kappale, joka sisältää RliP:n avoimen lukukehyksen 3'-pään plus TAA-terminaatiokodonin, liitettiin HindIII:lla liuotet-( tuun ja alkalisella fosfataasi 11 a käsiteltyyn plasmidiin Γ·., p IC1 9 R. L i gaati oseosta käytettiin transf ormoimaan kompetent- teja (vastaanottokyky i si a ) E. coli-soluja, ja transf ormanti t valikoitiin ampisi 11iiniä sisältävillä agarmaljoi 11 a. Plasmi-di-DNA puhdistettiin transformantei sta, ja oikeat rekornbi nan-tit identifioitiin restrik tioendonukleaasi1iuotuksi11 a ja .. agaroosigeelielektroforeesi11 a. Yhdestä sellaisesta oikeasta » · rekornbi nanti sta, pRMP3':sta, eristettiin 210 bp:n Bglll/Hind-*·’* III-kappale 6 % polyakryyl iamidi geel i el ektroforeesi n avulla.
, Tämä kappale sisältää RMP cDNA:n 3'-pään Bgl 11-paikasta amino- , ; happojen 297-299 kohdalla ja ulottuen TAA-terminaatiokodonin kautta liitettyyn Hincl11-1iittäjään .
1 U b I 4 / 18 RMP cDfiA:n 5'~päa eristettiin plasmidista pRMP1016 997 bp:n HindIII/BglII -kappaleena 1 % agaroosigeelielektroforeesin avulla. Hindl11-paikk a sijaitsee RHP-DNA:ssa asemassa, joka vastaa tähteitä -36, -35 prosegmentissä. Tämä 997 bp:n 5'-kappale liitettiin 210 bp:n 3'-kappaleeseen HindII:lla liuotetussa ja fosfataasi11 a käsitellyssä plasmidissa pIC19R. Tällä ligaatioseoksella saatiin rekombinantteja E. colista, ja oikea plasmidi, pRMP, jossa RMP:n 5'-osa on yhdistynyt 3'-osaan, identifioitiin restriktioentsyymianalyysin avulla. pRMP:n konstruktiota valaistaan kuviossa 5. pRMP ei koodaa RHP:n esialuetta eikä prosegmentin 5'-puoliskoa .
Esimerkki 4
Aspergi11 uksen i1menemisvektorin konstruointi, joka vektori on tarkoitettu saamaan aikaan aktiivisen RMP:n erittyminen Tässä esimerkissä konstruoitiin plasmidi, joka oli suunniteltu RMP: n ilmenemistä varten gl ukoamyl aasin promoottori-, signaali- ja terminaattorisekvenssien säätelyn alaisena. Gluko-amylaasin promoottori- ja terminaattorisekvenssit olivat pern. räisin gl ukoamyl aasi n genomi sesta geenistä, joka oli kloonattu vektoriin pCAMG91. p C A li G 91 : n konstruointi a kuvailee Boel et _ ai. (EiiBO Journal 3_ (1984 ), 1581-1585 ), ja plasmidi n pCAMG91 . endonukleaasirestriktiokartta esitetään kuviossa 6.
• · • * • · : *’ pCAHGÖl liuotettiin restrikticendonuk1eaasei11 a Sali ja .sei. *-*.* Sellaisesta 1 i uotteesta eristettiin öSo bp : n kappale agaroosi geelillä. Tämä Sali-Pstl-kappale sisältää alueen, joka koodaa gl ukoamyl aasin mRiJArn ei-luettua, 140 bp : n 3'-osaa plus 54u bp:a poly(A)-additiopaikasta 3' suuntaan. Tätä 3'-·*·., kappaletta käsiteltiin T4-DiJA-polymeraasin kanssa katkaisu-paikkojen päiden "tasaamiseksi" ennen Xbal-l i i ttä jien lisäämistä ja liuotusta Xbal-restrikti oentsyymi11ä. Tämä glukoarny-; " 1 aasi geenin 3' -p ä ä liitettiin plasmi di i n p UC13 , joka oli 1i- neari soitu Xbal: 11 ä plasmidi n pAiiG/Term aikaansaamiseksi, jo- 108147 19 ka sisältää glukoamylaasi geeni n poly(A)-1isäämisaiueen . Plas-midin pAiiG/Term konstruktiota valaistaan kuviossa 7a.
A. nigerin glukoamylaasi geeni n 3'-pää saatiin 700 bp:n Xbal-kappaleena plasmidista pAHG/Term. Tämä terminaattorikappale liitettiin Xbal:llä liuotettuun ja fosfataasi11 a käsiteltyyn plasmidiin pIC19R. Tämän 1igaatioseoksen kanssa saatiin re-kombinantteja E. colista, ja oikea plasmidi, pICAHG/Term, jossa terminaattorikappal een 5'-pää on vastapäätä pIC19R-vek-torin multippelin kloonauspaikan HindllI-paikkaa, identifioitiin restriktioentsyymianalyysi n avulla. Plasmidin pICAMG/-Term konstruktiota valaistaan kuviossa 7a. Plasmidista pICAMG/Terni eristettiin gl ukoamyl aasi n termi naattori ai ue (AMG-terminaattori) 750 bp:n Hindlll/Clal-restriktiokappaleena 1 % agaroosigeelielektroforeesin avulla. Plasmidista pCAMG91 eristettiin glukoamylaasi n promoottori (AMG-promoottori) yhdessä alueiden kanssa, jotka koodaavat glukoamylaasi n signaa-lipeptidiä, heksapeptidi-prosegmenttiä ja pBR322:n ampisil-1iiniresistenssigeeniä (Amp) 3,5 kb:n Cl a I/BssHII-kappaleena 1 % agaroosigeelielektroforeesin avulla. Synteettistä BssHII/HindllI-1iittäjää valmistettiin kahdesta synteettises-·;. tä 31-meeri sestä oi i gonukl eotidi sta , jotka oli syntetisoitu Applied Biosystems Inc.:n DiiA-synteesi 1 ai tteel 1 a . Synteetti-,,.,; n e n 1 i i ttäjä sisältää s e u r a a v a n rakenteen: .! R V S K Q S E S K l) * «
CGCGTAAGTAAGCAGAGCGAGAGCAAGGATA
ATTCATTCGTCTCGCTCTCGTTCCTATTCGA
Tätä liittäjää käytettiin li gaati oreaktiossa 3,5 kl3:n gl ukoamyl aasipromoottorin sisältävän kappaleen ja 750 bp:n gluko-:*·.. aiiiyl aasi termi naattori n sisältävän kappaleen kanssa. Ligaatio- .y. seosta käytettiin transformoimaan E. coli, ja oikea rekombi- nantti, p673, identifioitiin restriktioendonukleaasi1iuotuk-• sen avulla. Eristetty p673 on Hindl11-kloonausvektori , johon voidaan liittää sopiva Hindll I cDNA -kappale glukoamylaasi n 20 100147 heksapeptidiprosegmentin ja glukoamylaasin transkriptioter-minaattorialueen väliin. Liitetty cDNA on oleva glukoamy-laasipromoottorin transkriptionaalisen säätelyn alainen, ja siirretyn fuusiotuotteen erittymistä ohjaavat glukoamylaasin signaalipeptidi plus glukoamylaasin heksapeptidiprosegmentti. p673 liuotettiin Hindlll:11a, käsiteltiin alkalisen fosfataa-sin kanssa ja liitettiin 1,2 kb:n Hindlll-kappaleeseen, joka oli puhdistettu pRMPrn liuotteesta.
Ligaatioseosta käytettiin E. colin transformoimiseksi, ja re-kombinantti, p686, jossa RMP cDNA oli sijoittunut oikeassa asemassa RMP:n ilmenemisen saavuttamiseksi, eristettiin ja karakterisoitiin restriktioendonukleaasiliuotusten avulla. p686 koodaa RMP:n prekursoria, jolla on seuraava rakenne: glukoamylaasin signaalipeptidi, glukoamylaasin heksapropepti-di, RMP:n propeptidin aminohapot -45 - -1, kehittyneen RMP:n 361 aminohappoa. Plasmidin p868 konstruktiota valaistaan kuviossa 7b.
Esimerkki 5
Esillä olevan keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaisesti preproRMP:n avoin lukukehys tulisi liittää ekspressioplasmi-diin A. nigerin glukoamylaasigeenin promoottorin säätelyn alaisena tai A. oryzaen TAKA-amylaasigeenin promoottorin säätelyn alaisena. Tämän tekemiseksi, BamHI-restriktioendonuk-leaasipaikka liitettiin juuri preproRMP:n signaalipeptidin metioniinialoituskodonin 5"'-puolelle seuraavien vaiheiden kautta. pRMP1016 liuotettiin Ddel:llä, joka katkaisee cDNA:ssa asemassa, joka vastaa aminohappotähteitä Ser(-66) ja Gln(-65), ja HindIII:lla, joka katkaisee cDNA:ssa asemassa, joka vastaa aminohappotähteitä Lys(-36) ja Leu(-35). Muodostunut 89 bp:n Ddel/Hindlll-kappale puhdistettiin 8 % polyak-ryyliamidigeelillä, elektroeluoitiin ja etanolisaostettiin fenoli- ja CHCl^-uuttamisten jälkeen. Synteettinen DNA-kap-pale, jolla on seuraava sekvenssi, syntetisoitiin kahtena oligonukleotidina Applied Biosystems Inc.:n DNA-synteesilait-teella: < -.: 14? 21
M L F S
GATCCACCATGCTGTTCTC oli go 697/698
GTGGTACGACAAGGAAGT
Tämä kappale sisältää BamHI-kohesiivisen pään aloitus-Met-kodonin 5' puolella ja Ddel kohesiivisen pään 3'-päässä. Kahta oiigonukleotidi a kinaasikäsi tel tiin ATP:n ja T4 polynuk-1eotidi-kinaasin kanssa, liitettiin lämmittäen toisiinsa, ja liitettiin sitten 89 bp:n Ddel/Hindlll R f ϊ P-k a p p a 1eeseen , joka oli puhdistettu pRMP1016:sta, BamHI/Hindl11:11 a liuotetussa pUC13 vektorissa. Ligaatioseosta käytettiin transformoimaan E. coli -soluja, ja oikeat rekombinantit identifioitiin pienen mittakaavan puhdistettujen plasmidien restriktioentsyymiliuo-tuksilla. Oikeat rekombi nantti pl asrni di t sek ven toi ti i n käytettyjen oiigonukleotidien sisältämän sekvenssin varmistamiseksi. Yksi sellainen oikea plasmidi, pRMP5' liuotettiin BamHI:11ä ja Hindi 11:11 a, ja 110 bp:n BamHI/Hindl11-kappale, joka sisälsi ai oitus-Het-kodonin, RMP-si gnaal i pepti di n ja osan RMP-prosegmentista, puhdistettiin 10 % polyakryyliamidigeel i-elektroforeesin avulla. Kappale elektroeluoitiin, uutettiin ··· fenolilla ja CHC1 :11a ja saostettiin etanolilla. Loput * 3 RMP:n avoimesta lukukehyksestä ja AMG-terminaattori sek venssi t saatiin plasmidista p686 liuotuksen jälkeen EcoRI:llä ja osittaisella Hindlll-liuotuksella. Käin vapautui 1,9 kb:n • « .. kappale, ja tämä kappale puhdistettiin agaroosigeelielektro- • · · ' foreesilla, elektroeluoinni11 a, fenoli- ja CHC1 -uuttami- • · - 3 '·*·’ sella ennen etanol i saostusta . Tämä 1,9 kb:n kappale liitettiin 110 b p : n BamHI/Hindl11-kappaleeseen pRMP5':sta vektorissa pUC13, joka oli liuotettu BamHI:llä ja EcoRI:llä. Ligaa-tioseosta käytettiin transformoimaan E. coli -soluja, ja oi-ί keat rekombi nanti t identifioitiin pienen mittakaavan puhdis- tettujen plasmidien restrikti oentsyyrni 1 i uotuksi 11 a . Yksi sellainen oikea rekombinantti oli pRMPAMGTerm. pRHPAHGTerm:in konstruktiota valaistaan kuviossa 8.
22 1 08 1 47
Esimerkki 6
Aspergi11 uksen ekspressiovektorin konstruointi, joka vektori on tarkoitettu saamaan aikaan aktiivisen RMP:n erittyminen A. oryzaessa Aspergillus nigerin glukoamylaasipromoottori n avul-1 a
Glukoamylaasi n promoottori eristettiin seuraavasti. 25 ug plasmidia pCAMG91 liuotettiin restriktioendonukleaasei(la
EcoRI ja BssHII. Tämän kaksoisliuotuksen jälkeen voitiin eristää 270 bp:n Li M A-kappale a g aroosi geeli elektroforeesi n avulla. Tämä kappale peittää osan promoottori aiueesta, ei- luetun 5'-alueen ja gl ukoamyl aasi geeni n (AMG-yeeni) signaali- peptidin. DNA:n elektroeluoinnin jälkeen agaroosigeelistä, kappale puhdistettiin fenoli- ja CHC1 -uuttamisilla ennen etanolisaostusta. 270 emäsparia pitkä kappale liuotettiin sitten SfaMI:llä. Tämä entsyymi sisältää katkaisupaikan juuri glukoamylaasi geeni n ATG metioniiniai oituskodonin 5' puolella.
Täydellisen liuottamisen jälkeen, DMA: ta käsiteltiin DliA- polymeraasi I:n suuren kappaleen (Klenow) ja kaikkien neljän di!TP:n kanssa tasaisten päiden muodostamiseksi DNA:han. Tähän
D f 1A:hän lisättiin Bgl11-1iittäjät DUA-ligaasin kanssa, ja DNA
··· liuotettiin Bgl 11 - restr i k ti oentsyymiy 1 i mää ra n kanssa. DfoA- kappaleiden erottamisen jälkeen 10 % polyakryyl i ami di geel i 1 1 ä , voitiin eristää 175 bp:n Bglll-kappale elektroeluoinnin a v u 1 - . la. Tämä kappale sisältää Bgl11-1iittäjän liitettynä asemaan, .. joka vastaa S fall I - retri k ti opa i kkaa juuri metioni i ni ai oi tusko- • · • donin 5' puolella. Tämä DHA-palanen liitettiin Bgl II :11a *··' liuotettuun, alkalisella fosfataasi 11 a käsiteltyyn pIC19R-vektoriin, ja 1igaatioseosta käytettiin transformoimaan E. coli -soluja. Muodostuneiden transformäntti en joukosta identifioitiin oikeat plasmidit pienimittaisten plasmidien rest-·*·.. r i k ti oentsyymi 1 i uotusten avulla. Yksi sellainen oikea plasmi- di pB404.1 liuotettiin i;sil:llä ja BglII:llä 0,16 kb:n kappaleen vapauttamiseksi, joka sisälsi glukoamylaasi geeni n ei-: " luetun 5'-alueen, yhdessä promoottorialueen 3'-osan suunnil leen 100 bp:n kanssa. Tämä kappale pundistettiin polyakryy-1 i a i.i i d i g e e 1 i e 1 e k t r o f o r e e s i 11 a , e 1 e k t r o e 1 u o i t i i n , uutettiin 23 1C 3147 fenolilla ja CHCl3:lla ja saostettiin etanolilla. Tämän kappaleen liittämiseksi glukoamylaasin promoottorialueen muuhun osaan pCAMG91:stä, seuraavat vaiheet suoritettiin. 25 μ9 pCAMG91:tä liuotettiin BssHII:lla, ja sitten vielä osittain liuotettiin Ndel:llä. Sen jälkeen kun kappaleen päät oli täytetty kaikkien neljän dNTP:n ja DNA-polymeraasin K1enow-kappaleen kanssa, eristettiin 1,4 kb:n DNA-kappale 1 % agaroosigeelillä. Tämä kappale sisälsi koko promoottorialueen yhdessä ei-luetun 5"-alueen ja signaalipeptidiä koodaavan alueen kanssa. Kappale elektroeluoi-tiin, uutettiin fenolilla ja CHClgilla ja saostettiin etanolilla DNA:n väkevöimiseksi. Liuotuksen jälkeen Nsil:llä, DNA ajettiin 1 % agaroosigeelillä, ja 1,2 kb:n Ndel-Nsil-kappale eristettiin elektroeluoinnilla. Tämän DNA:n pää oli tehty tasaiseksi Ndel-paikassa aikaisemmassa reaktiossa, ja se liitettiin nyt 0,16 kb::i Nsil-Bglll-kappaleeseen pB401.1:st'a' NruI-BglII:llä liuotetussa pIC19R-vektorissa. Ligaatioseosta käytettiin transformoimaan E. coli -soluja, ja muodostuneiden transformanttien joukosta identifioitiin oikeita rekombinantteja pienen mittakaavan plasmidien restriktioentsyymiliuotuksilla. Yksi sellainen oikea rekombinant-ti, pB408.3 liuotettiin HindIII:lla ja BglII:lla, ja glukoamylaasin (AMG) promoottori eristettiin 1,4 kb:n kappaleena 1 % agaroosigeelillä. Kappale elektroeluoitiin, uutettiin fenolilla ja CHCl3:Ila ja saostettiin etanolilla. Tämä glukoamylaasin promoot-torikappale liitettiin sitten 2,0 BamHI-EcoRI-kappaleeseen plas-midista pRMPAMGTerm (katso esimerkki 5) Hindlll-EcoRI:llä liuotetussa pUC19-vektorissa. Ligaatioseosta käytettiin transformoimaan E. coli -soluja, ja muodostuneiden transformanttien joukosta identifioitiin oikeita rekombinantteja pienen mittakaavan plasmidien restriktioentsyymiliuotuksilla. Yhtä sellaista oikeata re-kombinanttia, p778, kasvatettiin suuressa mitassa rekombinantti-plasmidin eristämiseksi, ja plasmidivalmiste puhdistettiin CsCl/etidiumbromidi-sentrifugoinnin avulla. Tämä plasmidi ohjaa RMP:n synteesiä glukoamylaasin promoottori- ja terminaattori-sekvenssien säätelyn alaisena. Plasimidin p408.3 konstruk- 24 τ 0 0 ·!47 ti ota valaistaan kuviossa 9 a, ja plasmidin p 7 7 o konstruktiota valaistaan kuviossa 9b.
Esimerkki 7
Aspergi11 uksen ekspressiovektorin konstruointi, joka vektori on tarkoitettu saamaan aikaan aktiivisen RMPin erittyminen Aspergillus oryzaen TAKA-amy1 aasi n promoottorin avulla 50^ug pl a sini di a p TAKAI 7 (katso esimerkki 2), joka sisältää Aspergillus oryzaen TAKA-amy!aasi n genomisen geenin, liuotettiin Sällillä. Tämä entsyymi sisältää restriktiopaikan geno-misessa DilAissa asemassa, joka vastaa kehittyneen TAKA-amy!aasin aminohappotähdettä 26. Toinen Sal I-restriktiopaikka sijaitsee suunnilleen 1300 nukleotidia tämän aseman yläpuolella, joka on 5'-päässä promoottorialueen yläpuolella. S a 11 -liuotuksen jälkeen tämä 1300 bp:n promoottorin sisältävä kappale puhdistettiin agaroosigeelielektroforeesin avulla, ja DNA puhdistettiin uuttamalla fenolilla ja CHC1 :11a, ja saostettiin etanolilla. DMA liuotettiin sitten eksonukleaasi 111 - puskuri i n ja liuotettiin eksonukleaasi Ulilla Henikoff, S. mukaan (Gene, 2_S :351 -35 9 , 1984 ). Reaktio lopetettiin, _ jotta saataisiin suunnilleen 130 bpin deleetiot DNAin kummas- ·; sakin päässä. Suunnilleen 130 bpin deleetio TAKA-amyl aasi gee-n i n koodaavan alueen Sali -paikasta antaa tällä tavalla m a n - ....: dollisuuden tuoda käyttöön mul ti ppel ei ta kl oonauspai kkal i i t- « · ;·. täjiä juuri metioniinialoituskodonin yläpuolella. Eksonuk- • · · *. . leaasi Ulilla käsiteltyä DiiAita liuotettiin Sl-nukl eaasi 11 a v·’ Henikoff, S. mukaan (Gene, 28: 351-359 , 1984 ) ja saostettiin etanolin kanssa fenoli- ja CHCl -uuttamisten jälkeen.
S1-nuk1eaasi11 a käsitellyn DMA:n korjaaminen (täydentäminen) 1 i i ttarni skel poi Sten tasaisten päiden saamiseksi, tehtiin i *·· kaikkien neljän diiTPin ja DMA-polymeraasi Iin Kl enow-kappa--Y: leen kanssa Henikoff, s. mukaan (Gene, 28_: 351-359 , 1984 ).
Dii A liuotettiin EcoRliliä, joka katkaisee kerran 1300 bpin Sali-kappaleessa, jolloin muodostuu kaksi kappale ry hmää. Toinen ryhmä oli noin 380 emäsparia (bp) pitkä ja edusti geenin 25 '! 08 1 47 yläpuolisia alueita, kun taas toinen ryhmä oli noin 620 emäs-paria pitkä ja sisälsi promoottorialueen. Nämä EcoRI-liuotus-tuotteita sisältävät ryhmät erotettiin agaroosigeelillä, ja suunnilleen 620 bp:tä pitkät DNA-kappaleet elektroeluoitiin ja liitettiin EcoRI/Smal:llä liuotettuun pUC19-vektoriin. Li-gaatioseosta käytettiin transformoimaan vastaanottokykyisiä E. coli -soluja, ja pienen mittakaavan plasmidi-DNA:ta eristettiin rekombinanteista. Näitä deleetiomutantteja karakterisoitiin restriktioentsyymiliuotusten avulla plasmidien iden-tifiomiseksi, joissa oli deleetion päätekohdat juuri metio-niinialoituskodonin 5" puolella. Muutama ehdokasplasmidi, joilla oli halutut ominaisuudet, sekventoitiin, ja mutantti (p9), josta puuttui 9 emäsparia ATG-metioniinissa olevan A:n 5"-puolelta, valittiin edelleenkonstruointia varten. p9 liuotettiin EcoRI:llä ja HindIII:lla, ja 645 bp:tä sisältävä TA-KA-amylaasin promoottorin sisältävä kappale eristettiin agaroosigeelielektroforeesin avulla, uutettiin fenolilla ja CHCl3:Ilä ja saostettiin etanolilla. pTAKA17 liuotettiin Sällillä ja EcoRI:llä, ja 510 bp:n kappale, joka sisälsi TAKA-amylaasipromoottorin yläpuoliset alueet, eristettiin agaroosigeelielektroforeesin avulla, uutettiin fenolilla ja CHCl3:Ila ja saostettiin etanolilla. Nämä kaksi promoottorialuetta liitettiin toisiinsa ja pIC19R-vektoriin, jota oli liuotettu Sällillä ja Hindlllilla. Ligaatioseosta käytettiin transformoimaan E. coli -soluja, ja oikeat rekombinantit identifioitiin plasmidien restriktioentsyymiliuotuksen avulla, joita oli uutettu miniskaalassa. Yhdessä sellaisessa re-kombinantissa, p719, TAKA-amylaasin promoottorialue Aspergillus oryzaesta havaitaan 1,1 kb:n siirrettävänä kappaleena, joka voidaan katkaista muutaman eri restriktioentsyymituotteen avulla. Plasmidin p719 konstruktiota valaistaan kuviossa 10.
pRMPAMGTerm:sta eristettiin preproRMP avoin lukukehys ja glu-koamylaasin terminaattorialue (AMGTerm) 2 kb:n kappaleena liuottamisen jälkeen BamHI:llä ja EcoRI:llä. Tämä kappale puhdistettiin agaroosigeelielektroforeesin avulla, uuttamalla 2b T 08 1 47 fenolilla ja CHCl :11a ja konsentroitiin sitten etanoli- 3 saostuksella. A. oryzaen TAKA-amyl aasi n promoottori eristettiin nyt 1,1 kb:n kappaleena, joka oli saatu plasmidin p719 liuotuksen jälkeen Sällillä ja BarnHIilla. Tama kappale puhdistettiin ayaroosigeelielektroforeesin avulla, uuttamalla fenolilla ja CHCl :11a ja saostettiin sitten etanolilla.
3 1,1 k b : n promoottori kappal e liitettiin 1 kb:n BarnHI/EcoRI -kappaleeseen pRiiPAMGTerm: sta pUC19-vektorissa, joka oli liuotettu Sällillä ja EcoRIilla. Ligaatioseosta käytettiin transformoimaan E. coli -soluja, ja muodostuneiden transformant-tien joukosta identifioitiin oikeita rekombiHantteja miniska a 1 an plasmidien restriktioentsyymi1iuotuksel1 a. Yhtä sellaista oikeata rekombinanttia, p777 , kasvatettiin suuressa mi tässä rekombinanttiplasmidi n eristämiseksi, ja plasmidi valmiste puhdistettiin CsCl/etidiumbromidi-sentrifugoinnin avulla. p 7 7 7 :n konstruktiota valaistaan kuviossa 11.
Esimerkki li A s μ e r g i11u k s e n ekspressiovektorin konstruointi, joka vektori on tarkoitettu saamaan aikaan Rhizomucor mi ehei n li paasi n erittyrninen Aspergillus oryzaen TAKA-amylaasi promoottori n · säätelyn alaisena_
Li paasi n cDMA-k 1 ooni n konstruointi ja identifiointi E. colis- . sa • * m * · - .... — - — — - .... .....
• · .. Jotta saataisiin informaatiota, jonka perusteella on mahdol- • » \ ** lista konstruoida spesifinen oiigonukleotidikoetin, suori tet-• · · *·*·* tiin Rhizomucor miel.ein lipaasin osittainen sekvenssin määri ty s ( m o s k o w i v jl , u · d . et ai., o · /·. - r i c · Food e o e m « , c. E (19//), 1146-i1Eö ). Seuraavassa tekstissä käytetään lyhennystä RmL K hi zomucor mi ehei π 11 p- aasille. Rhi zomucor mi ehei n kasvul iemen i ·.. supernatant Lii , josta liemestä oi i poistettu ri hmasto ja pie- nimol e^yyl i pai noi si a aineita, saatettiin ani oni nvai iitokroma- tCjrafiaan. Kolonnin 1ipolyyttisestä pääjakeesta poistettiin suola, ja se uitrasuodatettiin ennen lyofi1isoi nti a. Lyofili-soitu jauhe saatettiin sitten aifiniteettikromatografointiin .
27 1 C E 147
Kolonnista yhteenkerätyistä 1 ipaasijakeista poistettiin suola, ja ne konsentroitiin uitrasuodatuksel1 a. Tuma konsentraatti saatettiin sitten hydrofobisen vuorovai kutuksen kromatogra-fointiin (HIC), ja tilC-puhdi stuksesta saatua lipaasia käytettiin aviii nohapposek venssis.iääri tykseen . Sekvenssin määrittäminen suoritettiin sekä natiiveille entsyymeille (N-terminaali-nen sekvenssi) että valikoiduille kappaleille, joita saatiin li paasi n proteolyyttisen liuottamisen jälkeen Armi 11 aria mel-lean proteaasi11 a . Sekvenssin määrittäminen suoritettiin Gas Phase Sequencer -laitteella (Applied li i o sy s tein s Model 4 7 Q A) kuten Thim, L. et ai. kuvailevat i F E B S Lett. 1987 , painossa).
RHL liuotettiin Armi 11 aria mellean proteaasin kanssa, kuten Moody et ai. kuvailevat (FEES Lett. 172 (1984), 142-148) sillä ainoalla poikkeuksella, että entsyymin suhde substraattiin oli 1:40 (mooli:mooli). Saadut kappaleet erotettiin HPLC:n avulla, ja UV-absorptiota tarkkailtiin aallonpituuksissa 280 nm ja 214 nm. Sopivien kappaleiden identifiointi-tarkoituksessa oiigonukleotioi koetti mi en konstruointia varten, joissa suhde aallonpituuksien 280 nm ja 214 nm välillä oli suuri, sekventoitiin, koska nämä kappaleet sisältävät Trp:ia ·:· ja/tai Tyriia.
Seuraava h-termi naa 1 i nen sekvenssi havaittiin käyttämä!! ä na- ....: ti ivi a RiiL:ä.
* · • · • · " 5 10 15
1 I I
*·*· ‘ Ser-Ile-Asp-Gly-Gly-Ile-Arij-Äla-Ala-Thr-Ser-Gln-Olu-Ile-Äsn- 20 25
Glu-Leu-Thr-Tyr-Tyr-Thr-X-Leu-(Ser)-(/\la)-.
Yksi kappaleista, jotka eristettiin proteolyy tti sestä liuot-:Y: teestä, sisälsi sekvenssin: Arg-Thr-Val-11e-Pro-Gly-Ala-Thr-
Trp-Asp-X-Πe-Mis, ja tätä kappaletta käytettiin spesifisen *\ oiigonukleotidi koetti men synteesiin.
28 1Γ8147
Riii zomucor mi ehei n cDHA-k i r j a s toa esimerkistä 3, joka oli konstruoitu tämän organismin asparayiinihappoproteinaasi ( RiiP)-rekombi nautti en eristämiseksi, käytettiin myös 1 i paasi spesi fi sten rekombinanttien identifiointiin. 01igonukleoti-dien seos syntetisoitiin Applied Biosystems Inc.:n DNA-synteesi1 aitteel1 a. Seos, jolla on oheinen rakenne: S'ATCCCÄNGTiJGCNCC 3' 430/431
G
oli vastakkainen Rr-iL niR,NA:n suhteen alueella, joka koodaa aminohappoja Gly-Ala-Thr-Trp-Asp. Tämä pentapeptidi identifioitiin aminohapposekvenssin segmenttinä, joka oli saatu puhdistetun RiiL-protei i ni n (katso edellä) proteolyyttisista kappaleista.
32
Rhizomucor miehein cDiiA-ki rjasto seulottiin P-kinaasikäsi- tel 1y π 1ipaasi oiigonukleotidi seoksen kanssa, kuten kuvailtiin seulomista RMP-spesi fi sen seoksen kanssa. Suodinten hybridi - o sointi ja alkupesu tehtiin 43 C:ssa. Autoradiografoinnin o jälkeen suotimia pestiin 47 C:s s a . Pesäkkeet, joissa esiin-··:' tyi voimakasta hyöri di soi tumi sta , eristettiin, ja liitetyt ,]!' c Li r-i Λ: t vastaavissa plasmideissa sek ventoi ti i n RliL-spesi f i sten rekombi nantti en identifioimiseksi. Kahdessa sellaisessa re-*:*·» kOhiDi nauti ssa , p3o3.7 ja p3t3.16, oli noin 1,2 kb: n insertti.
;’· näistä kaiidesta rekombi nauti sta saatu DNA-sekvenssi alkaa l'.\ signaali peptidi n keskeltä (katso kuvio 12) ja jatkuu poly A -päähän. Tällä alueella voitaisiin identifioida yksi pitkä avoin lukukehys. Koska kaksi rekombinanttia eivät sisältäneet sekvenssiä s i g n a a 1 i p e ρ t i u i n 5 ' - o s a 11 e , jossa pe p t i o i s s ä oli sen met ioniiniai oituskodoni, syntetisoitiin synteettinen oli- ♦ .
• ’* gonukl eoti di ( 584 ).
: * b CuAUAUUGGATGmGGLiGTGG 3 384 29 108147 Tämä oiigonukleotidi 584 sisältää RhL mRNA:n vastinsekvenssin alueella, joka koociaa aminohapposekvenssiä Pro-Pro-Leu-Π e-Pro-Ser-Arg, joka todettiin propeptidi aiueel1 a (katso kuvio 12). Sen jälkeen kun oli go 584 :ä ä oli käsitelty kinaasi 11a suureen spesifiseen aktiivisuuteen T4-polynuk1eotidi kinaasin ja Ρ-γ-ΑΤΡ:η kanssa, sitä käytettiin alukkeen jatkereak-tiossa Rhizomucor miehein m R M A: 11 a AMV-kaäntei skopi oi j an kanssa tunnettujen menetelmien mukaisesti (Boel, E. et ai., PNAS, USA, 80_, 2866-2860, 1983). Alukkeen jatke reaktion tuotteet elektroforesoitiin 10 * polyakryy1iamidi/urea -geelillä, ja kaksi cDiiA-tuotetta erotettiin. Nämä kaksi cDRA:ta, toinen 150 nukleotidia pitkä ja toinen 160 nukleotidia pitkä, elektroeluoitiin kumpikin ja sekventoitiin kemiallisella, DNA:n sekventointiin tarkoitetulla hajotusmenetelmal1ä. Kummastakin cOilAista saatiin luettava sekvenssi, joka ulottui ai ukeal ueel ta asemaan 9 nukleotidia 5' puolelle saakka raetio-niinialoituskodonista. Sekvenssi varmisti sekvenssin, joka saatiin lipaasin yhai stelmä-cDriA -pl asmi dei sta . Kahden aluke-jatkeisen cONA-tuotteen pituudet osoittavat, että lipaasin mRHA:n δ'-pää (CAP-paikka) on sijaitseva suunnilleen 5 tai 15 nukleotidia ensimmäisen A-nukleotidi n 5'-puolella, joka on esitetty kuviossa 12. Hi k roiieterogeeni syys sienten mRNA:n • 5'-pään sijainnissa on hyvin tavallista. Yhdistämällä sek- venssi, joka saatiin kahdesta kloonatusta cDN/\:sta, p353.7 ja p353.16, sekvenssin kanssa alukkeen j atkeanal yy si stä , voidaan • · ..t RML:n prekursorin aminohapposekvenssi osoittaa. RHL: n prekur- • · · . sorin uuA-sekvenssi ja vastaava aminohapposekvenssi on esi-• · « **’·* tettynä kuviossa 12. Kuviossa 12 vaakasuorat viivat osoittavat synteettisten oliyojen sijainnit, joita oligoja käytetään cDNA-synteesiin ja cDNA-kirjaston seulontaan, huoli osoittaa paikkaa, jossa natiiviri RML: n kehi ttymi sprosessi tapahtuu.
Γ·.. Nukleotidit numeroidaan lähtien ensimmäisestä emäksestä aloi-:Y; tus-Het-kodoni ssa, ja aminohapot numeroidaan ensimmäisestä i · tähteestä kehittyneessä, natiivissa RHL: ssa. RiiL:ää koodaa avoin lukukehys, joka ulottuu ai oitus-Met-kodonista jatkuen sitten 365 k o d o n i n kautta ennen kuin loppukodoni s a a v u t e ta a n .
30
KcU7 ϊ 3 s s 0 prekursori ssa ensi mmäi set 24 a mi nohappotahdetta tulevat muodostamaan tyypillisen hyurofobi sen si gnaal1peptidl n, von i i e i j n e n tuotannollisten ohjeiden να u k a i s e s t i ( E u r . J . B i o c h e m . 133, 17-21, 1D83), si ynaal i peptidi lohkeaisi seuraa vasta propeptidistä s i y n a a 1i pepti di d a a s i1 o h kai sun avulla Alaja Vai-tähteiden välistä asemissa -71 ja -70, vastaavasti.
Koska puhdistetun RHL:n ti-termi naal i nen aminohapposek venssi-analyysi, jota RHL : ää saaliin Rhi 2 ota uc or iniehei n viljelijän su-p e r n a t a n ·„ i s t a , osoitti oikeaksi jakson »> e r — 11 e — A s p - o 1 y — I i o -Ary aktiivisen Ri;L-entsyymi n n-päänä, RnLtn prekursorin pro-peoticii kositti s eu ra a vat 70 ami nohappotahuetta prekursor i ssa Lähtien tästä h-terin* naal i sesta Ser-tähteestä , kehittynyt RHL jatkuu äos tähteen kautta ennen kuin se saavuttaa lcpetusko-doni n . Tässä kehi ttyneessä k'jobu dal tönin entsyymissä li paasi n suDstraati n si toutuui spai kka sijaitsee tähteen Ser (14a) lähellä, joka konservoi luu muutamassa li paasi ssa. RrlL mRuA: n 3'-päässa 10*» nukleotidia paikal 1 i stetti i n ei-luettuna alueena ΤΛΛ-lopetuskudoni n ja poly(A}-pe&n välissä. ä3 nukleotidia tämän poly(A)-pään 5'-puolel 1 a todetti i n toistuva rakenne, . joka käsitti 7 AT~ei;.äsparia , vaikka mitään tyypillistä euka-rioottista polyadeny1aati osi gnaali a ei voitu i denti fi oi da .
Esillä olevan keksinnön mukai sessa edullisessa suoritusmuo- ‘ ' dossa toteutettiin joukko muutoksi a f’;i IL cdNA: ssa. ilämä muu- • · i *·· tokset käsittivät o:C-päi den poi stami sen , jotka oli lisätty cuu/u nan κ loonau^sen aikana, ja restn ktioendonukl eaasi pai k-kojen lisäämisen avoimen lukukehyksen S **- ja 3 **-puol e 11 e . Joukko sopivia res tr i k ti opa i kk o j a sijoitettiin myös cdiiA: n s i o n a a I i j> e p t i u i - ja p r o p e p t i e i a 1 u e ΐ 11 e .
• · » ·
yy4 pjoj.iw liuotettiin FnuUII:11ä, ja ood bp:n utiA-kappal e (RHL
ciiA\:n 3 - puu ) eristettiin aga roos i yeel i el ek trof oree s i n avul- 31 λ η ρ ι / 'V ! t ο 4 / la. Kappale el ektroeluoi ti in , uutettiin fenolilla ja
CiiCl :11a ja saostettiin etanolilla.
3 Täiiiä !<i!L cDHA:n 3'-pää liitettiin sitten pUCIS-vektori i n , joka oli liuotettu Sandilla ja käsitelty ai kali sei la fosfataa-silla. Liyaatioreaktioseosta käytettiin transformoimaan vastaanottokyky isia E. coli -soluja, ja muodostuneiden transfor-iiianttien joukosta identifioitiin oikeita rekombinantteja mini skaalan plasmidien restrik ti oentsyymi 1iuotuksen avulla. Yksi sellainen sopiva rekombinantti, p435,2, liuotettiin SanII:lla ja Hindl11:11 a, ja 0,6S kb:n kappale eristettiin agaroosigeelielektroforeesin avulla. Kappale elektroeluoitiin , uutettiin fenolilla ja CiiCl :11a ja saostettiin etanolilla. Tämä RliL cDHA -kappale sisälsi nyt pääosan multippelista pUCiö-kloonauspaikasta liittyneenä ei-luettuun 3'-aiueeseensa .
RiiL cDNA:» 5'-pää muotoiltiin uudelleen käyttämällä synteettisiä oi 1gonukleoti deja sopivien katkaisupaikkojen sijoittamista varten. Synteetti sen kappaleen DiiA-sek venssi (Ri-iL 6') esitetään kuviossa 14. Yksittäin syntetisoitujen oiigonukleo-ti di en sijoitettujen katkai supai kkojen ja yhteenl i i tty vi en paikkojen asemaa osoitetaan vaakasuorilla nimittäin pystysuo-ri 11 a/vaakasuori 11 a viivoilla, fiuoaostunut kappale ( RML 5') puiidi s cetti i n Ιου bp: n kappaleena 1 & agaroosi geel i 11 a , ‘ 1 e 1 ek t r o e 1u o i t i i n , uutettiin fenolilla ja C H C1 :11 a ja s a o s - 3 : ·· tettiin etanolilla ennen 1isäliyaatioreaktioita .
• * * • · · pJ63.7 liuotettiin 3anl: 11 ä ja BanI 1:11 a , ja 367 bp : n RiiL - kappale puhdistettiin 13 % polyakryyl i ami eli geel i el ektrofo- reesin avulla. Kappale elektroeluoitiin, uutettiin fenolilla ja CHC1 :1 la ennen etanolisaostusta, ja liitettiin sitten : ·· o .·,·. synteetti seen RiiL 6'-kappa! eeseen ja 0,69 kb : n BanI I/Hi ndl 11 - kappaleeseen p436.2 : sta DamHI/Hi ndl11:11ä liuotetussa pUC13-vektori ssa . Li gaati oreakti oseosta käytettiin transformoi maa n vastaanottokykyisiä L. coli -soluja, ja muodostuneiden trans-fermanttien joukosta identifioitiin oikeita rekombi nantteja 11 1 Γ: Ο ·1 .· , ! '-· e·· : -, ί Γ;ι i ni skaalan piasmi <11 en res tri k ti oentsyymi liuotuksilla. Yhdessä sellaisessa oikeassa rekoiiibi nanti ssa , p b ϋ 4 , synteettinen osa sekventoitiin odotetun rakenteen varmistamiseksi. pB544:n konstruktiota valaistaan kuviossa 13a. pB544:stä eristettiin prepro RiiL cDliA 1,1 kb: n SaruHI-kappaleena asaroosi geel ielekt-roforeesin avulla. Ekspressiovektori, joka perustuu Aspergillus oryzaen TAKA-amylaasi geeni n promoottoriin ja Aspergillus nigerin glukoamylaasi geeni n terminaattoriin, valmistettiin seuraavasti, p 71y (katso esimerkki 7) liuotettiin Sal 1:11 a ja B atm 1:11 ä . Muodostunut 1,1 kb: n TAKA-any 1 aasi promoottori -kappa! e puhdistettiin a garoosi geeli elektro forees in avulla. pICw>i; li/ Terin (katso esimerkki 4) liuotettiin BamHI :11a ja E c o K Ϊ: 11 ä . Muodostunut u,7o kb: n jl ukoa;.iy 1 aasi n termi naattori -kappale puhdistettiin agaroosigeelielektroforeesin avulla.
fenoli- ja CiiCl.-uuttami sten jälkeen nämä kaksi kappaletta ό
säestettiin etanolilla ja liitettiin Sal I/EcoRI:11ä liuotettuun pUClb'-vektori i n . Ligaatioreaktioseosta käytettiin trans-f or..ioi maan E. tuli -soluja, ja muodostu nei de n transformant-t i e n joukosta identifioitiin oikeita rekombi nantteja mi ni s κa a -1 a n μ i a s r,; i u i e n r e s t r i k t i u e n t s y y m i 1 i u o s t u s t e n avulla. Yksi sellainen oikea rekombi nantti , ρ 7 7 S, liuotettiin BamiiI :11a ja ’· käsiteltiin alkali sei 1 a fosfa taasi 11 a . l,i kb: n Bamiil K ML
prepro cDNA-kappale piib44 : sta liitettiin tähän p77b-vektori i n ja c r a n s f o r m o i t i i n E. coliin. nekombi nantti p/37, jonon oli 1 i i tettyn*, ;<mL prepro cii.iA oikein sijoittuneena promoottorin • ’ T" teräsi naat uori n viilissä, ioentirioitiin E. colin transfor- i.iän Lei sta uutettujen mini skaalan plasmidien restriktioentsyy-i.< i 1 i u o s tu s te n avulla. p7o7 pl asmi di-uUA: ta kasvatettiin suuressa mi tässä, ja plasmidi valmiste puhdistettiin CsCl/Eti-di umb romi ui - sentri f ugoi nni n avulla. p7i>7 : n konstruktiota va- ·. laistaan kuviossa 13b.
• ·
Esimerkki u
Aspergillus o ry z a e n trans formoin ti (yleinen menetelmä) : 1,1 ΥΡι,; tu (3 heraan et ai., methods in Yeast Genetics, : · · ’ ν,οΐυ j p r i n g oarocr Laboratory, idol) si i rrostetti i n n. o ry- 33 zaen, IFO 4177 tai sen argB-mutanttien itiöillä ja inkuboi- o tiin ravistellen 37 C:ssa noin 2 päivän ajan. Rihmasto korjattiin talteen suodattamalla mira-kankaan läpi ja pestiin 200 rnl :11a 0,0 ;; iigSO :a. Rihmasto suspendoi ti i n 15 ml: aan 4 i,2 il M g SO : a, 10 m M Naii PO.: a, pii = 5,3. Suspensio jäähdy-. ti 4 tettiin jään päällä, ja 1 ml puskuria, joka sisälsi 120 mg iiovozyiii 234:ää, erä 1637, lisättiin. Viiden minuutin kuluttua, 1 ml 12 mg/ml BSA:ta (Sigma tyyppi H25) lisättiin, ja inkuoointia jatkettiin lievästi sekoittaen 1,5-2,5 tuntia o/ o:ssa, kurines suuri joukko protopl aste ja tuli näkyviin näytteessä, jota tarkasteltiin mikroskoopilla.
Suspensio suodatettiin m i r a - k a n k a a n läpi, s u o d o s s i i r r e 11 i i n steriiliin putkeen ja peitettiin 5 ml:11 a 0,6 H sorbitolia, luu mi-'ί T r i s - H C1 : a, pH = 7,0. Sentri f ugoi nti suoritettiin 15 m in. aikana 1000 g:ssa, ja protoplastit kerättiin talteen ngSO -kerroksen pinnalta. Kaksi tilavuusosaa STC:tä (1,2 h soroi tel i u , le mj··; Tris — n C1 : a pii = 7,o, 10 mr; 0 a 01) lisättiin protoplastisuspensioon , ja seosta sentrifugoitiin 5 minuutin ajan 1000 g:ssa. Protoplasti pel 1etti suspendoitiin uu-delleen 3 ml: aan STC: ta ja pel 1 etoi ti i n uudelleen sentrifu-yoimall a. Tämä toistettiin. Lopuksi protoplastit suspendoi -ti in jälleen 0,2-1 ml: aan STC:tä.
.. ' 100 ui protopl asti suspensiota sekoitettiin 5-25 ug: n j · / / ; kanssa sopivaa DNA:ta 10 ul:ssa STCrtä. aryB-kantojen pro- *-V tcpl asuit sekoitettiin pSal43 DNA: n kanssa (A. riiciulansin + argB-geenin sisältävä plasmidi) ja aryli -kantojen protoplastit sekoitettiin p3S :n kanssa (A. nidulansin atadS-geenin sisältävä pl asmi di ). Seos jätettiin huoneen 1 ämpoti 1 aan 25 minuutiksi. 0,2 ml 00 % P£G-4oOD: ta (DOH 2^576 ), 10 m M CaCl :a ja 10 m M Tris-HCl :a pii = 7,5 lisättiin ja sekoitettiin huolellisesti (kahdesti), ja lopuksi 0,85 ml samaa liuosta lisättiin ja sekoitettiin huolellisesti. Seos jätettiin huoneen lämpötilaan 25 minuutin ajaksi,·sentrifugoitiin 25to g:ssa 15 minuuttia, ja pelletti suspendoi ti i n uudelleen 2 mlraan 1,2 Π sorbitolia. Vielä yhden sedimentoinnin jälkeen, 34 1 f' r- Λ ': c ? 4 7 protoplastit levitettiin sopiville maljoille, argB-kantojen protoni astit, jotka oli transformoitu pSal43:lla, levitettiin mi niuaal imal joi 11 e (Cove, Biochem. Biophys. Acta 1 13 ( 1966 ) 51-36) glukoosi ja urea hiilen ja typen lähteinä vastaavasti, ja sisältäen 1,2 m sorbitolia osmoottiseksi stabi loimi seksi.
+ aryli -kantojen protoplastit, jotka oli transformoitu p3Sk2:lla, levitettiin minimaa 1ima 1joi 11 e (Cove, Biochem. Biophys. Acta 113 (I960 ) 51-56), jotka sisälsivät i,U ii sakkaroosia, ρί! - 7,u, lu mii asetamidia typen lähteenä ja 2u m,: C sCl : a ta u s t a k a s v u n iiijiiuoii.ii seksi . I n k u b o i n ni n jalkeeri ^ ...... ..o .... . .
4-/ piiiviiu ά/ L: ssa itiöt poimittiin, suspencioitiin steriiliin veteen ja levitettiin e r i11i s pe s ä k ke i d e n saamiseksi. Tai.menettely toistettiin, ja eri 11 ispesäkkeen itiöt toisen eristämisen jälkeen varastoitiin määrättynä transformanttina.
esimerkki lu l AKA-amy 1 aasi n ilmeneminen A. o ry z a en villi tyypin kannassa P T Λ K Λ17 transf ormoi ti i n A. oryzae Irt! 4177: ään yhdessä p3$R2:n kanssa yhtei s transformaatio!1 a, joka p3SR2 sisältää a md S-geenin A. nioulansista, kuten on kuvailtu esimorkissä 9. Pro-toplasteja, joita oli valmistettu kuten kuvailtiin, inkuboi-tiin seoksen kanssa, jossa oli yhtä suuret määrät pTAKA17:ää ja p 3 5 i< 2 : t a , suunnilleen 5 uy kumpaakin käytettiin. 9 transfer ..,a n 11 i a , j o L κ a pystyivät käyttämään asetaiiiidia ainoa — • * : ·· na typen lanteena, eristettiin uudelleen kahdesti. Kolmen \· · päivän kasvatuksen jälkeen Y P u : 11 ä (Sherman et ai., 19ol), viljelmien supernatant!'t analysoitiin SuS-PAGE:n avulla. Geelit värjättiin coomassi e-bri1 Jäntti si ni sei 1ä H. Parhaat tra n s forman tit tuottivat 10-2u kertaa enemmän amyi aasia kuin transt ormoi ma ton IFO 41/7. Yksi transformantti valikoitiin * · · . lisätutkimuksia varten, ja sitä kasvatettiin 2 l:n Kieler- fermentorissa 4 % soi j apapu j auhol 1 a , ja glukoosia syötettiin kasvatu k sen aikana. V i 1 j e 1 m aa sekoitettiin v o i n:· a k k a a s t i fer-i.iC-n to i n n i n aikana, u«i s s a olosuhteissa IFO 4177 tuotti noin 1 >j/l dd transformantti noin 12 o /1 amylaasi a määritettynä entsyymi akti i vi suutena. Lntsyymiaktiivis uus mi tatti i n kykynä ha- 3b 108147 jottaa tärkkelystä (Cereal Chemistry, _16> (1939 ), 712-733).
Käytetty tärkkelys oli Merck Amylum liukeneva erg B.6, ja o määritys suoritettiin pH:ssä 4,7 ja 37 C:ssa. Yhtään ulkopuolista beeta-amylaasi a ei lisätty.
Esimerkki 11
RliP; n ilmeneminen A. oryzaessa P77 7 esimerkistä 7 tai p778 esimerkistä 6 transformoitiin IF0-4177:äan yhteistransformaatiol 1 a p3SR2:n kanssa menetelmällä, jota kuvailtiin esimerkissä 9. Transformantteja seulottiin ja eristettiin uudelleen kuten kuvailtiin esimerkissä 9.
Transformantteja kasvatettiin kolme päivää YPDtssä, ja super-natantit analysoitiin SDS-PAGE:11 a, jota seurasi Western-blottaus ja ELISA-mäari tys . Transformanttien supernatant! t sekä p777 :stä että p778:sta sisälsivät 50-150 mg/1 proteiinia, joka reagoi RMP:n vasta-aineen kanssa. Proteinaasi oli yli-glykolysoitunut verrattuna R. tai ehei n tuottamaan proteinaa-. siin Kaiita muotoa tavattiin, joista toisen oletetaan olevan esimuoto ja toisen käsitelty kehittynyt proteinaasi. Kahta p770-transformantti a ja kolmea p 7 7 7 - tran sf ortnan tti a kasvatettiin feruentorissa samalla tavalla kuin TAKA-amylaasi-trans-' ' formantteja, jota kuvailtiin edellä. Kaksi p 7 7 8 - transformant- : ’·· tia tuotti suunnilleen 0,2 g/1 ja 0,4 g/1 , ja kolme p777- ::: transformanttia tuotti suunnilleen 0,5 g/1, 2,4 g/1 ja 3,3 g/1 Ri-iP:tä määritettynä maidon koagul oi tumi sakti i vi suutena Kunitzin menetelmällä (Kunitz M., Jour. Gen. Physiol. L8 ( 1935 ), 459-466 ), olettamalla, että rekombinantti-RMP:n spe-sifinen aktiivisuus on sama kuin Rhizomucor mi ehei n entsyymin * ·« vastaava. (Tämä on myöhemmin vahvistettu). SDS-PAGE ja S0SPA-GE, jota seurasi Westerri-bl ottaus ja ELISA, osoittivat, että • '· vain yksi muoto R!iP:tä oli läsnä kasvatettaessa suuremmassa : mitassa. RHP oli yliglykolysoitunut myös näissä kasvuolosuh teissa. Geeleiltä tavattu proteiinimäarä korreloi hyvin määriin, jotka ennustettiinn entsyymiaktiivisuudesta.
1 f 8 1 4 7 36 -vw RHP punoi s tetti i n viljelmän supernatant! sta af fi ni teetti kro-rnatografian ja kokoeksk 1 uus i ok romatograf i an avulla.
Puhdistetun rekombinantti-RHP: n N-terminaal inen sekvenssi määritettiin käyttämällä Gas Phase Sequencer -laitetta kuten ovat kuvailleet Tn im et ai. (FEBS Lett, 1987 painossa).
Karita rekombinantti-RMP:n muotoa todettiin, mikä osoitti, että prosessointi K-terminaalisessa päässä oli heterogeenistä. Toisella muodolla oli li-terni naal inen sekvenssi: Ala-Asp-Gly-Ser-Val-Asp-Thr-Pro-Gly-Tyr-, ja toisella muodolla oli N-ter-ni naal i rien sekvenssi : Gly-Ser-Val -Asp-Thr-Pro-Gly-Tyr-Tyr-Asp-. Sellaista heterogeenista prosessointia N-päässä on myös kuvailtu Hucor mi ehei n natiiville R i: P:11 e (Paquet, D. et ai., Neth. i i 1 k . Dairy J ., 36_ (1981 ), 358-360 ). Koska rekombi -nantti-RiiP: n heterogeeninen prosessointi korreloi hyvin na-tiivin RiiP:n vastaavaan, A. o ry zaen on esillä olevan keksinnön mukaisesti osoitettu olevan kyvykäs prosessoimaan rekombi nantti -Ri-iP: tä oikealla alueella.
Esimerkki 12
Ekspressioyksiken konstruointi prokymosiinin tuottamista var- ten A. oryzaessa_ • · : *·· Konstruktio sisältää prokymosi i ni geeni n , jota välittömästi • * V#.· edeltää si gnaal ipeptidi sekvenssi A. oryzaen TAKA-amyl aasi geenistä, A. oryzaen TAKA-amylaa sin promoottori n säätelyn alaisena. Konstruktio sisältää edelleen terminaattorin A. nigerin ylukoamylaasi geenista plus E. col i -repi ikonin.
• · • · • *« . . Suunnilleen 43u bp:n B amH I / X ma I-kappal e pl asrui di sta p2b5' proC (katso esimerkki 1) ja seuraavan sekvenssin mukainen : ' o 1 i y o m e e r i 37 h r\ n i ··. ** s κ. q ; *, f
AATTCCAGCTGCCGCGGCCGAGATCACCAG
GGTCGäCGGCGCCGGCTCTAGTGGTCCTAG
liitettiin EcoKI-Xmal:11 G katkaistuun plasmidiin pUC19, mikä tuotti plasmidin pToC50a.
pToCSGa katkaistiin EcoRI-SacII:lla, ja suuri kappale, joka sisälsi pUC19:n ja prokymosiinigeeni n (prokymosiini') 5'-osan, eristettiin. Tämä kappale liitettiin ϋ,ΰ kb:n EcoRI-Banl-kappaleen kanssa plasmidista pTAKAl7, ja seuraavan synteettisen oligomeerin kanssa
GCACCTGCTTTGGC
GACGAAAC (KFR 280/281)
Transformaation jälkeen plasmidi pToC51, joka sisälsi proky-mosiinigeeni n (prokymosiini') 5'-osan yhtyneenä A. oryzaen TAKA-amylaasi geeni n (preTAKA) signaalisekvenssiin , ja jota edelsi suunnilleen 500 emäsparia TAKA-amylaasisekvenssin yläpuolella, eristettiin, pToC51:n konstruktiota valaistaan kuviossa 15a.
pR26 katkaistiin H i n f 1:11 a , sitä käsiteltiin DNA-polymeraasi I: m suuren kappaleen {K1 enow) ja neljän ci ΰ T P : n kanssa ja katkaistiin Xmal: 11 ci. 750 emäsparia sisältävä kappale, joka si- * · • '·· saisi prokymosi i ni geeni n 3'-paän, eristettiin. Tarkoituksella :Y: liittää Hindlll tämän kappaleen 3'-päässä, pUC9 katkaistiin
Xmal/Hincl1:11 a, ja suuri kappale liitettiin 750 bp:n kappaleeseen, joka sisälsi prokymosiinigeeni n 3'-pään.
5,G kb:n EcoRI-Cl ai-kappal e plasmidista pTAKA 17 eristettiin • · · ja liitettiin 2,G kb:n Cl ai-Hind111-kappaleen kanssa samasta *V‘ plasmidista plus 0,7 k b:n EcoRI-Hindl11-k appaleen kanssa plas-: * . mi di sta pICAMG/Term (katso esimerkki 4), joka sisältää A. ni - : gerin gl ukoamyl aasigeenin termi naattori n ja pol yA-pai kan .
Muodostunutta plasmidi a kuvataan kuviossa 15b plasi'.ii di na pToC52.
1 r ο ί ·, 7 < v υ . 7 / 3 υ pToC52 katkaistiin HindIII:lla ja osittain EcoRI:llä, ja 6,4 kb:n kappale eristettiin. Tämä liitettiin 0,9 kb:n EcoRI-XmaI-kappaleen kanssa pToC51:sta ja 0,7 kb:n XrnaI-Hindl11 -kappaleen kanssa plasmidista pUC'PC, joka sisälsi prokymosii-nigeenin ('prokymosiini) 3'-osan. Muodostunutta plasmidia nimitetään pToC5ö:ksi, ja sitä kuvataan kuviossa 15b.
Esi merkki 13
Vrokymosiinin ilmeneminen A. oryzaessa pToCSö transformoi tiin A. oryzae IFO 4177:ään tai sen argB-mutanttiin yhteistransformaatioi 1 a joko p3SR2:n (amdS-geeni ) tai p S a 14 3:n (argB-geeni) kanssa. Transformant!t, jotka kas-voivat selektiivisellä alustalla, eristettiin uudelleen kahdesti, kuten kuvaillaan esimerkissä 9.
T ransformantteja kasvatettiin k o1 me päivää Ypy:ssä, ja prokymos i luin määrä supernatantei sta analysoitiin ELISA:11 a Western bloteilta SDS-PÄGE:n jälkeen. Transformant!t tuottivat 1-10 mg/1 prokymosiinin kokoa olevaa i mmunoreakti i vista proteiinia supernatanteissa. Mitään muita immunoreaktiivisi a proteiineja ei havaittu supernatanteissa.
Esimerkki 14 * · • *·· p7b7 esimerkistä o transformoitiin IFG-4l/7:ään ynteistrans- • · ϊ.ϊ.ί f ormaati olla p3SR2:n Kanssa me ne tel mä 11 ä , jota kuvailtiin esimerkissä 9. Transformaritteja valikoitiin ja eristettiin uudelleen, kuten kuvailtiin esimerkissä 9.
:·. Transf υπ.lantti en YPL-vi 1 j e 1 mi e n supernatant! t, joita trans- * · * *· . formantteja oli kasvatettu kolme päivää, analysoitiin SDS- PAOErlla, jota seurasi Western blottaus ja ELISA. Paras trans for. tantti tuotti 2 mg/1 proteiinia, joka oli kehittyneen : ‘ iiiiLrn kokoista. Supernatantei ssa oleva 1 i paasi akti i vi suus r c -1 ,1 7 i ^ ' "1 /
3S
määritettiin kykynä katkaista tributyriinia ( NOV O-inenetel mä AF 95, 1/3-G8).
mittaus vahvisti, että 2 mg/1 aktiivista lipaasia oli läsnä supernatanteissa.
• · • ·· » · • » · k I I • ·
Claims (17)
1 C 8 7 4 7 AAGAAAAAGG TCGGCCCGTC GGCCTTTTCT GCAACGCTGA TCACGGGCAG CGATCCAACC AACACCCTCC AGAGTGACTA GGGGCGGAAA TTTAAAGGGA TTAATTTCCA CTCAACCACA AATCACAGTC GTCCCCGGTA TTGTCCTGCA GAATGCAATT TAAACTCTTC TGCGAATCGC TTGGATTCCC CGCCCCTAGT CGTAGAGCTT AAAGTATGTC CCTTGTCGAT GCGATGTATC ACAACATATA AATACTAGCA AGGGATGCCA TGCTTGGAGG ATAGCAACCG ACAACATCAC ATCAAGCTCT CCCTTCTCTG AACAATAAAC CCCACAG tai toiminnallisesti vastaavan nukleotidisekvenssin.
1. TTTAAATTTT TATATGGCGG GTGGTGGGCA ACTCGCTTGC GCGGGCAACT CGCTTACCGA TTACGTTAGG GCTGATATTT ACGTGAAAAT CGTCAAGGGA TGCAAGACCA AAGTAGTAAA ACCCCGGAAG TCAACAGCAT CCAAGCCCAA GTCCTTCACG GAGAAACCCC AGCCTCCACA TCACGAGCGA AGGACCACCT CTAGGCATCG GACGCACCAT CCAATTAGAA GCAGCAAAGC GAAACAGCCC < i
1. Menetelmä proteiinituotteen ilmentämiseksi Aspergillus oryzaessa, tunnettu siitä, että se käsittää vaiheet: (a) yhdistelmä-DNA:n kloonausvektorisysteemin tuottaminen, joka kykenee integroitumaan Aspergillus oryzae -isännän geno-miin yhdessä tai useammassa kopiossa, ja joka käsittää: DNA-sekvenssejä, jotka koodaavat toimintoja, jotka helpottavat geenin ilmenemistä; sopivan markkerin transformanttien valikoimiseksi; ja DNA-sekvenssin, joka koodaa haluttua proteiinituotetta; (b) Aspergillus oryzae -isännän transformointi, joka isäntä ei sisällä toiminnallista geeniä valitulle valintamarkkerille, vaiheesta a olevan yhdistelmä-DNA:n kloonausvetorisysteemin kanssa, ja (c) transformoidun Aspergillus oryzae -isännän viljeleminen sopivassa kasvualustassa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että DNA-sekvenssit, jotka koodaavat toimintoja, jotka helpot- (1'; tavat geenin ilmenemistä, käsittävät promoottorin, transkrip-tion (kopioinnin) alkamispaikat, ja transkription terminaat- ·;·, tori- ja polyadenylaatiotoiminnat.
^ « • « • 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, « * · · « I I *·*·* että promoottoria edeltävät geenin yläpuoliset aktivoivat sekvenssit .
• · .···. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, * että valintamarkkeri on peräisin A. nidulansin tai A. nigerin • « * argB-, A. nidulansin trpC-, A. nidulansin amdS-, Neurospora I ft crassaen Pyr4- tai DHFR-geenistä.
' ; 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valintamarkkeri on A. nidulansista tai A. nigeristä saatu ArgB-geeni tai A. nidulansista saatu amdS-geeni. 1C 8 147
6. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että promoottori ja geenin yläpuoliset aktivoivat sekvenssit saadaan geenistä, joka koodaa ekstrasellulaarista tai intra-sellulaarista proteiinia, kuten amylaasia, glukoamylaasia, proteaasia, lipaasia, sellulaasia tai glykolyyttistä entsyymiä.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että promoottori ja geenin yläpuoliset aktivoivat sekvenssit ovat peräisin A. oryzaen TAKA-amylaasi-, Rhizomucor miehein asparagiinihappoproteinaasi-, A. nigerin neutraalista alfa-amylaasi-, A. nigerin happokestoisesta alfa-amylaasi-, A. nigerin glukoamylaasi tai Rhizomucor miehein lipaasigeenistä.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että promoottori on A. oryzaen TAKA-amylaasin promoottori tai sen toiminnallisia osia.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että promoottori ja geenin yläpuoliset aktivoivat sekvenssit sisältävät seuraavan sekvenssin: GTCGACGC ATTCCGAATA CGAGGCCTGA TTAATGATTA CATACGCCTC CGGGTAGTAG ACCGAGCAGC CGAGCCAGTT CAGCGCCTAA AACGCCTTAT ACAATTAAGC AGTTAAAGAA GTTAGAATCT ACGCTTAAAA AGCTACTTAA AAATCGATCT CGCAGTCCCG ATTCGCCTAT CAAAACCAGT TTAAATCAAC • · i ’*· TGATTAAAGG TGCCGAACGA GCTATAAATG ATATAACAAT ATTAAAGCAT :V: TAATTAGAGC AATATCAGGC CGCGCACGAA AGGCAACTTA AAAAGCGAAA GCGCTCTACT AAACAGATTA CTTTTGAAAA AGGCACATCA GTATTTAAAG ·:··*; CCCGAATCCT TATTAAGCGC CGAAATCAGG CAGATAAAGC CATACAGGCA .··*. GATAGACCTC TACCTATTAA ATCGGCTTCT AGGCGCGCTC CATCTAAATG *;· TTCTGGCTGT GGTGTACAGG GGCATAAAAT TACGCACTAC CCGAATCGAT » * « ’···* AGAACTACTC ATTTTTATAT AGAAGTCAGA ATTCATAGTG TTTTGATCAT
10. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että promoottori ja geenin yläpuoliset aktivoivat sekvenssit sisältävät seuraavan sekvenssin: AGATCTGCCC TTATAAATCT CCTAGTCTGA TCGTCGACGC ATTCCGAATA CGAGGCCTGA TTAATGATTA CATACGCCTC CGGGTAGTAG ACCGAGCAGC CGAGCCAGTT CAGCGCCTAA AACGCCTTAT ACAATTAAGC AGTTAAAGAA GTTAGAATCT ACGCTTAAAA AGCTACTTAA AAATCGATCT CGCAGTCCCG ATTCGCCTAT CAAAACCAGT TTAAATCAAC TGATTAAAGG TGCCGAACGA GCTATAAATG ATATAACAAT ATTAAAGCAT TAATTAGAGC AATATCAGGC CGCGCACGAA AGGCAACTTA AAAAGCGAAA GCGCTCTACT AAACAGATTA CTTTTGAAAA AGGCACATCA GTATTTAAAG CCCGAATCCT TATTAAGCGC "1 CGAAATCAGG CAGATAAAGC CATACAGGCA GATAGACCTC TACCTATTAA ATCGGCTTCT AGGCGCGCTC CATCTAAATG TTCTGGCTGT GGTGTACAGG ' GGCATAAAAT TACGCACTAC CCGAATCGAT AGAACTACTC ATTTTTATAT AGAAGTCAGA ATTCATAGTG TTTTGATCAT TTTAAATTTT TATATGGCGG • · i '·· GTGGTGGGCA ACTCGCTTGC GCGGGCAACT CGCTTACCGA TTACGTTAGG 0!: GCTGATATTT ACGTGAAAAT CGTCAAGGGA TGCAAGACCA AAGTAGTAAA ACCCCGGAAG TCAACAGCAT CCAAGCCCAA GTCCTTCACG GAGAAACCCC ·:··: AGCGTCCACA TCACGAGCGA AGGACCACCT CTAGGCATCG GACGCACCAT CCAATTAGAA GCAGCAAAGC GAAACAGCCC AAGAAAAAGG TCGGCCCGTC GGCCTTTTCT GCAACCCTGA TCACGGGCAG CGATCCAACC AACACCCTCC :···: AGAGTGACTA GGGGCGGAAA TTTAAAGGGA TTAATTTCCA CTCAACCACA i « · AATCACAGTC GTCCCCGGTA TTGTCCTGCA GAATGCAATT TAAACTCTTC TGCGAATCGC TTGGATTCCC CGCCCCTAGT CGTAGAGCTT AAAGTATGTC CCTTGTCGAT GCGATGTATC ACAACATATA AATACTAGCA AGGGATGCCA TGCTTGGAGG ATAGCAACCG ACAACATCAC ATCAAGCTCT CCCTTCTCTG 10814: AACAATAAAC CCCACAGAAG GCATTT tai toiminnallisesti vastaavan nukleotidisekvenssin.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että patenttivaatimuksen 10 mukaista sekvenssiä edeltää 1,05 kb:n sekventoimaton yläpuolinen alue asemasta 0 asemaan 1,05 plasmidissa pTAKA 17 (DSM 4012).
12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vektorisysteemi käsittää edelleen esialueen, joka huolehtii ilmenevän tuotteen erittymisestä kasvualustaan.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että esialue on peräisin Aspergillus-lajin glukoamylaasi- tai amylaasigeenistä, Bacillus-lajin amylaasigeenistä, Rhizomucor miehein lipaasi- tai proteinaasigeenistä, S. cerevisiaen alfa-tekijän geenistä tai vasikan prokymosiinigeenistä.
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että esialue on peräisin A. oryzaen TAKA-amylaasi-, A. nigerin neutraalista alfa-amylaasi-, A. nigerin happokestoisesta alfa-amylaasi-, B. licheniformiksen alfa-amylaasi-, Bacilluksen NCIB 11837 maltogeenisestä amylaasi-, B. stearothermophiluksen '···_ alfa-amylaasi- tai B. licheniformiksen subtilisiinigeenistä. i » « * 4
·;" 15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että esialue on TAKA-amylaasin esialue, jossa on seuraava sek- • venssi * · · • · ATGATGGTCGCGTGGTGGTCTCTATTTCTGTACGGCCTTCAGGTCGCGGCACCT • · ># MetMetValAlaTrpTrpSerLeuPheLeuTyrGlyLeuGlnValAlaAlaPro « • ♦ · GCTTTGGCT • · · • M t i i AlaLeuAla
’ 16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vektorisysteemi käsittää kaksi vektoria, joista toinen sisältää valintamarkkerin, ja toinen sisältää DNA-sekvenssejä, jotka koodaavat toimintoja, jotka helpottavat geenin ilmene- : ' - 1 4 7 mistä ja DNA-sekvenssin, joka koodaa haluttua proteiinituotetta.
17. Menetelmä proteiinituotteen tuottamiseksi Aspergillus oryzaessa, tunnettu siitä, että menetelmässä Aspergillus ory-zae -kantaa, joka transformoidaan yhdistelmä-DNA:n kloonaus-vektorisysteemillä, kuten on kuvailtu patenttivaatimuksessa 1, viljellään sopivassa kasvualustassa ja tuote otetaan talteen kasvualustasta.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DK122686A DK122686D0 (da) | 1986-03-17 | 1986-03-17 | Fremstilling af proteiner |
DK122686 | 1986-03-17 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI871144A0 FI871144A0 (fi) | 1987-03-16 |
FI871144A FI871144A (fi) | 1987-09-18 |
FI108147B true FI108147B (fi) | 2001-11-30 |
Family
ID=8102403
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI871144A FI108147B (fi) | 1986-03-17 | 1987-03-16 | Menetelmä proteiinituotteiden tuottamiseksi Aspergillus oryzaella ja promoottori käytettävksi Aspergilluksessa |
FI20011797A FI112376B (fi) | 1986-03-17 | 2001-09-12 | TAKA-amylaasipromoottori |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI20011797A FI112376B (fi) | 1986-03-17 | 2001-09-12 | TAKA-amylaasipromoottori |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
EP (3) | EP0489718B1 (fi) |
JP (4) | JPH0665316B2 (fi) |
AT (2) | ATE282093T1 (fi) |
CA (1) | CA1341593C (fi) |
DE (2) | DE3788524T3 (fi) |
DK (1) | DK122686D0 (fi) |
ES (1) | ES2061446T5 (fi) |
FI (2) | FI108147B (fi) |
IE (2) | IE63169B1 (fi) |
Families Citing this family (980)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5198345A (en) * | 1985-04-15 | 1993-03-30 | Gist-Brocades N.V. | Vectors in use in filamentous fungi |
ATE117020T1 (de) * | 1985-08-29 | 1995-01-15 | Genencor Int | Expression von heterologen polypeptiden in filamentösen pilzen, verfahren zu deren herstellung und vektoren zu deren herstellung. |
US6004785A (en) * | 1985-08-29 | 1999-12-21 | Genencor International Inc. | Heterologous polypeptides expressed in filamentous fungi, processes for making same, and vectors for making same |
US5364770A (en) * | 1985-08-29 | 1994-11-15 | Genencor International Inc. | Heterologous polypeptides expressed in aspergillus |
US5536661A (en) * | 1987-03-10 | 1996-07-16 | Novo Nordisk A/S | Process for the production of protein products in aspergillus |
US5766912A (en) | 1986-03-17 | 1998-06-16 | Novo Nordisk A/S | Humicola lipase produced in aspergillus |
US5447862A (en) * | 1987-02-04 | 1995-09-05 | Ciba-Geigy Corporation | Pectin lyase genes of aspergillus niger |
ATE125865T1 (de) * | 1987-08-28 | 1995-08-15 | Novo Nordisk As | Rekombinante humicola-lipase und verfahren zur herstellung von rekombinanten humicola-lipasen. |
US5292448A (en) * | 1988-05-10 | 1994-03-08 | Lever Brothers Company, Division Of Conopco, Inc. | Enzymatic detergent composition |
CA1341226C (en) * | 1988-08-16 | 2001-05-01 | Wim Van Hartingsveldt | Gene replacement as a tool for the construction of aspergillus strains |
JP2757945B2 (ja) * | 1989-09-08 | 1998-05-25 | キッコーマン株式会社 | アルカリプロテアーゼプロモーター、同ターミネーター及びこれらからなる遺伝子発現用ユニット、並びにアルカリプロテアーゼのゲノム遺伝子 |
JPH05505308A (ja) * | 1990-03-13 | 1993-08-12 | ハワイ・バイオテクノロジー・グループ・インコーポレイテツド | アオパンカビ発現システム |
DE4009676A1 (de) * | 1990-03-26 | 1991-10-02 | Rhein Biotech Proz & Prod Gmbh | Dna-sequenz, umfassend ein fuer xylosereduktase und/oder xylitoldehydrogenase codierendes strukturgen |
JPH04121194A (ja) * | 1990-09-11 | 1992-04-22 | Tax Adm Agency | アスペルギルスオリゼの新規プロモーター |
NZ242074A (en) * | 1991-03-22 | 1993-08-26 | Novo Nordisk As | Extracellular production of a heterologous heme protein in a filamentous fungus; dna construct therefor |
DE69202858T2 (de) * | 1991-03-22 | 1996-02-22 | Novonordisk As | Herstellungsverfahren für chymosin. |
US5914306A (en) | 1991-05-01 | 1999-06-22 | Novo Nordisk A/S | Stabilized enzymes |
WO1993000426A1 (en) * | 1991-06-25 | 1993-01-07 | Novo Nordisk A/S | Mammalian pancreatic lipase and variant thereof |
ZA932568B (en) * | 1992-04-24 | 1993-11-12 | Baylor College Midecine A Non | Production of recombinant human lactoferrin |
DK39693D0 (da) † | 1993-04-02 | 1993-04-02 | Novo Nordisk As | Enzym |
DK47493D0 (da) * | 1993-04-27 | 1993-04-27 | Novo Nordisk As | Fremgangsmaade til fremstilling af ost |
AU7807494A (en) | 1993-10-08 | 1995-05-04 | Novo Nordisk A/S | Amylase variants |
EP1707624A3 (en) | 1993-10-08 | 2007-01-03 | Novozymes A/S | Amylase variants |
BE1009488A4 (fr) * | 1994-06-17 | 1997-04-01 | Solvay | Systeme d'expression, vecteur d'integration et cellule transformee par ce vecteur d'integration. |
BE1008737A3 (fr) * | 1994-01-28 | 1996-07-02 | Solvay | Systeme d'expression, vecteur d'integration et cellule transformee par ce vecteur d'integration. |
BE1008267A3 (fr) * | 1994-01-28 | 1996-03-05 | Solvay | Systeme d'expression, vecteur d'integration et cellule transformee par ce vecteur d'integration. |
ES2251717T3 (es) | 1994-03-08 | 2006-05-01 | Novozymes A/S | Nuevas celulasas alcalinas. |
MX196038B (es) | 1994-03-29 | 2000-04-14 | Novo Nordisk As | Amilasa de bacillus alcalino. |
AU2733895A (en) * | 1994-06-17 | 1996-01-15 | Novo Nordisk A/S | A fungus wherein the area gene has been modified and an area gene from aspergillus oryzae |
GB9413419D0 (en) * | 1994-07-04 | 1994-08-24 | Danisco | Amylase enzyme |
US6051431A (en) * | 1994-07-22 | 2000-04-18 | Dsm N.V. | Selection marker gene free recombinant strains: a method for obtaining them and the use of these strains |
US5935836A (en) * | 1994-07-29 | 1999-08-10 | Rohm Enzyme Finland Oy | Actinomadura xylanase sequences and methods of use |
US7816129B2 (en) | 1994-07-29 | 2010-10-19 | Ab Enzymes Gmbh | Production and secretion of proteins of bacterial origin in filamentous fungi |
US6300114B1 (en) | 1994-07-29 | 2001-10-09 | Rohm Enzyme Finland Oy | Sequences of xylanase and xylanase expression vectors |
JPH10507639A (ja) * | 1994-10-26 | 1998-07-28 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 酵素界面活性剤組成物 |
US6127142A (en) * | 1994-12-21 | 2000-10-03 | Chr. Hansen A/S | Microbially derived enzymes having enhanced milk clotting activity and method of producing same |
AR000862A1 (es) | 1995-02-03 | 1997-08-06 | Novozymes As | Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del |
CN1182451A (zh) | 1995-03-17 | 1998-05-20 | 诺沃挪第克公司 | 新的内切葡聚糖酶 |
DE69628642T2 (de) * | 1995-03-30 | 2004-05-13 | Novozymes A/S | Alkalisches lypolitsches enzym |
US5919746A (en) * | 1995-03-30 | 1999-07-06 | Novo Nordisk A/S | Alkaline lipolytic enzyme |
US6936289B2 (en) | 1995-06-07 | 2005-08-30 | Danisco A/S | Method of improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products |
CA2224203C (en) | 1995-06-07 | 2003-08-12 | Jorn Borch Soe | A method for improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products |
PL183149B1 (pl) | 1995-09-08 | 2002-05-31 | Novozymes As | Sposób wytwarzania zlokalizowanych zmian gęstości barwy na powierzchni wybarwionej tkaniny celulozowej i środek celulozowy |
CN1160465C (zh) * | 1995-12-15 | 2004-08-04 | 诺沃奇梅兹有限公司 | 其中areA、pepC和/或pepE基因已被灭活的真菌 |
DK0877801T3 (da) | 1996-01-19 | 2005-08-29 | Novozymes Biotech Inc | Morfologiske mutanter af trådsvampe |
CN1246455C (zh) | 1996-04-30 | 2006-03-22 | 诺沃奇梅兹有限公司 | α-淀粉酶变体 |
AU3382097A (en) * | 1996-06-10 | 1998-01-07 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Aspergillus oryzae 5-aminolevulinic acid synthases and nucleic acids encoding same |
ATE307828T1 (de) | 1996-07-05 | 2005-11-15 | Novozymes As | Alpha-amylase transkriptionsfaktor |
EP0948610B1 (en) | 1996-11-04 | 2011-05-25 | Novozymes A/S | Subtilase variants and compositions |
US6300116B1 (en) | 1996-11-04 | 2001-10-09 | Novozymes A/S | Modified protease having improved autoproteolytic stability |
ES2183113T5 (es) | 1996-12-09 | 2010-03-31 | Novozymes A/S | Reduccion de componentes con contenido en fosfolipidos en aceites comestibles conteniendo una cantidad elevada de fosforo no hidratable con el uso de una fosfolipasa, de una fosfolipasa de un hongo filamentoso que presenta actividad de fosfolipasa a y/o b. |
US5821102A (en) * | 1997-01-21 | 1998-10-13 | Novo Nordisk Biotech Inc. | Nucleic acids encoding polyeptides having absidia lipase activity |
US5891669A (en) | 1997-03-17 | 1999-04-06 | Novo Nordisk A/S, Novoalle, | Methods for producing polypeptides in respiratory-deficient cells |
EP0981630B1 (en) | 1997-05-16 | 2008-11-19 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having prolyl pipeptidyl aminopeptidase activity and nucleic acids encoding same |
EP2388267A1 (en) | 1997-10-30 | 2011-11-23 | Novozymes A/S | Alpha-amylase mutants |
ES2287989T3 (es) * | 1997-12-22 | 2007-12-16 | Dsm Ip Assets B.V. | Clonacion de expresion en hongos filamentosos. |
CN100494363C (zh) | 1997-12-22 | 2009-06-03 | 诺维信公司 | 糖氧化酶及其在焙烤中的用途 |
DK2316929T3 (en) | 1998-02-27 | 2016-07-25 | Novozymes As | Maltogenic alpha-amylase variants |
WO1999064619A2 (en) | 1998-06-10 | 1999-12-16 | Novozymes A/S | Novel mannanases |
EP1098988B9 (en) | 1998-07-21 | 2007-10-24 | Danisco A/S | Foodstuff |
DE69932345T2 (de) | 1998-10-26 | 2007-07-19 | Novozymes A/S | Erstellung und durchmusterung von interessierenden dna-banken in zellen von filamentösen pilzen |
TR200101497T2 (tr) | 1998-11-27 | 2001-11-21 | Novozymes A/S | Lipolitik enzim varyantları |
US7220542B2 (en) | 2000-07-17 | 2007-05-22 | Van Den Brink Johannes Maarten | Expression cloning in filamentous fungi |
WO2000056900A2 (en) | 1999-03-22 | 2000-09-28 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Promoter sequences derived from fusarium venenatum and uses thereof |
EP2290060B1 (en) | 1999-03-30 | 2016-12-07 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
ES2322426T3 (es) | 1999-03-31 | 2009-06-22 | Novozymes A/S | Polipeptidos con actividad alfa-amilasa y acidos nucleicos que codifican a los mismos. |
CA2365446C (en) | 1999-03-31 | 2012-07-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having alkaline alpha-amylase activity and nucleic acids encoding same |
JP4526638B2 (ja) | 1999-06-01 | 2010-08-18 | 月桂冠株式会社 | タンパク質の高発現システム |
EP1200566A2 (en) | 1999-07-09 | 2002-05-02 | Novozymes A/S | Glucoamylase variant |
NZ531394A (en) | 1999-08-31 | 2005-10-28 | Novozymes As | Residual protease II (RPII) and variants thereof useful in detergent compositions |
AR026433A1 (es) | 1999-11-10 | 2003-02-12 | Novozymes As | Variantes de alfa-amilasa tipo fungamyl |
ES2327606T3 (es) | 2000-01-10 | 2009-11-02 | Maxygen Holdings Ltd | Conjugados de g-csf. |
US6350599B1 (en) | 2000-01-12 | 2002-02-26 | Novozymes A/S | Pullulanase variants and methods for preparing such variants with predetermined properties |
DE60138364D1 (de) | 2000-02-11 | 2009-05-28 | Bayer Healthcare Llc | Gerinnungsfaktor vii oder viia konjugate |
CN100482790C (zh) | 2000-03-08 | 2009-04-29 | 诺维信公司 | 具有改变的特性的变体 |
DE60142226D1 (de) | 2000-03-14 | 2010-07-08 | Novozymes As | Pilz transkriptionsaktivator zur verwendung in verfahren zur herstellung von polypeptiden |
EP2287296A1 (en) | 2000-06-26 | 2011-02-23 | Novozymes A/S | Lipolytic enzyme |
CA2416967C (en) | 2000-08-01 | 2014-02-18 | Novozymes A/S | Alpha-amylase mutants with altered properties |
AU2001285719B2 (en) | 2000-09-05 | 2007-08-23 | Novozymes A/S | Manganese lipoxygenase |
EP1975229A3 (en) | 2000-10-13 | 2009-03-18 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variant with altered properties |
ATE432288T1 (de) | 2001-02-27 | 2009-06-15 | Maxygen Aps | Neue interferon-beta-ähnliche moleküle |
PL371800A1 (en) | 2001-03-22 | 2005-06-27 | Novo Nordisk Health Care Ag | Coagulation factor vii derivatives |
DE60234822D1 (de) | 2001-04-20 | 2010-02-04 | Novozymes As | Lipoxygenase-varianten und ihre verwendung |
EP1950305A1 (en) | 2001-05-09 | 2008-07-30 | Monsanto Technology, LLC | Tyr a genes and uses thereof |
ATE449840T1 (de) | 2001-05-15 | 2009-12-15 | Novozymes As | Alpha-amylasevariante mit veränderten eigenschaften |
AU2002339115B2 (en) | 2001-05-18 | 2007-03-15 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Method of preparing a dough with an enzyme |
EP1399543B1 (en) | 2001-06-06 | 2014-08-13 | Novozymes A/S | Endo-beta-1,4-glucanase |
EP2295544B1 (en) | 2001-06-26 | 2016-06-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase I activity and polynucleotides encoding same |
US7063962B2 (en) | 2001-07-20 | 2006-06-20 | Novozymes A/S | DNA sequences for regulating transcription |
ES2376694T3 (es) | 2001-09-27 | 2012-03-16 | Novo Nordisk Health Care Ag | Polipã‰ptidos del factor vii de coagulaciã“n humano. |
US7955829B2 (en) | 2001-12-19 | 2011-06-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for the inactivation of amylase in the presence of protease |
AU2002358179A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-09 | Dsm Ip Assets B.V. | New rennets |
JP4495904B2 (ja) | 2002-03-01 | 2010-07-07 | 天野エンザイム株式会社 | 改変プロモーター |
AU2003231028A1 (en) | 2002-04-22 | 2003-11-03 | Novozymes Biotech, Inc. | Methods for increasing homologous recombination of a nucleic acid sequence |
DK1499733T3 (da) | 2002-04-22 | 2010-07-12 | Novozymes Inc | Fremgangsmåder til fremstilling af varianter af en DNA-sekvens i trådformige svampe |
EP2216405A1 (en) | 2002-05-03 | 2010-08-11 | Monsanto Technology LLC | Speed specific USP promoters for expressing genes in plants |
WO2003100048A1 (en) | 2002-05-29 | 2003-12-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for the purification of microbial protease |
WO2004020612A1 (en) | 2002-08-30 | 2004-03-11 | Novozymes Biotech, Inc. | Methods for producing mammalian trypsins |
WO2004031378A2 (en) | 2002-10-01 | 2004-04-15 | Novozymes A/S | Family gh 61 polypeptides |
JP2004141029A (ja) | 2002-10-23 | 2004-05-20 | Amano Enzyme Inc | イソマルトース生成酵素の遺伝子が欠損した、真菌類に属する微生物 |
DK1585822T3 (da) | 2002-11-18 | 2012-05-14 | Novozymes Inc | Promotorvarianter til ekspression af gener i en fungal celle |
JP4851093B2 (ja) | 2002-12-11 | 2012-01-11 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 洗剤組成物 |
DK1576152T3 (da) | 2002-12-17 | 2007-04-10 | Novozymes As | Varmestabile alfa-amylaser |
US7348168B2 (en) | 2002-12-20 | 2008-03-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase II activity and polynucleotides encoding same |
MXPA05007653A (es) | 2003-01-17 | 2005-09-30 | Danisco | Metodo. |
US7955814B2 (en) | 2003-01-17 | 2011-06-07 | Danisco A/S | Method |
JP4778887B2 (ja) | 2003-01-17 | 2011-09-21 | ダニスコ エイ/エス | 脂質アシルトランスフェラーゼの使用 |
US20050196766A1 (en) | 2003-12-24 | 2005-09-08 | Soe Jorn B. | Proteins |
WO2004074419A2 (en) | 2003-02-18 | 2004-09-02 | Novozymes A/S | Detergent compositions |
US7001369B2 (en) | 2003-03-27 | 2006-02-21 | Scimed Life Systems, Inc. | Medical device |
US7303877B2 (en) | 2003-03-31 | 2007-12-04 | Novozymes, Inc. | Methods for producing biological substances in enzyme-deficient mutants of Aspergillus |
WO2004097012A2 (en) | 2003-04-28 | 2004-11-11 | Novozymes A/S | Phospholipase and method of producing it |
ATE471370T1 (de) | 2003-05-02 | 2010-07-15 | Novozymes Inc | Varianten von beta-glukosidasen |
DE602004027376D1 (de) | 2003-06-19 | 2010-07-08 | Novozymes As | Proteasen |
EP1639107B1 (en) | 2003-06-19 | 2013-08-14 | Novozymes A/S | Improved proteases and methods for producing them |
WO2005003311A2 (en) | 2003-06-25 | 2005-01-13 | Novozymes A/S | Enzymes for starch processing |
WO2005001064A2 (en) | 2003-06-25 | 2005-01-06 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polypeptides encoding same |
DK2336308T3 (da) | 2003-06-25 | 2014-11-10 | Novozymes As | Enzymer til forarbejdning af stivelse |
DK2377931T3 (da) | 2003-08-25 | 2013-07-08 | Novozymes Inc | Varianter af glycosidhydrolase |
CN101870729A (zh) | 2003-09-09 | 2010-10-27 | 诺和诺德医疗保健公司 | 凝固因子ⅶ多肽 |
EP1678296B1 (en) | 2003-10-23 | 2011-07-13 | Novozymes A/S | Protease with improved stability in detergents |
EP1682656B1 (en) | 2003-10-28 | 2013-09-18 | Novozymes Inc. | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
MXPA06004463A (es) | 2003-10-28 | 2006-06-27 | Novozymes North America Inc | Enzimas hibridas. |
US8846340B2 (en) | 2003-10-30 | 2014-09-30 | Novozymes A/S | Carbohydrate-binding modules of a new family |
DK1694847T3 (da) | 2003-11-19 | 2012-09-03 | Danisco Us Inc | Serinproteaser, nucleinsyrer kodende for serinenzymer og vektorer og værtsceller omfattende disse. |
US7985569B2 (en) | 2003-11-19 | 2011-07-26 | Danisco Us Inc. | Cellulomonas 69B4 serine protease variants |
JP5697294B2 (ja) | 2003-12-24 | 2015-04-08 | デュポン ニュートリション バイオサイエンシーズ エーピーエス | 糖脂質アシル基転移酵素変異体及びその製造方法 |
US7718408B2 (en) | 2003-12-24 | 2010-05-18 | Danisco A/S | Method |
US7906307B2 (en) | 2003-12-24 | 2011-03-15 | Danisco A/S | Variant lipid acyltransferases and methods of making |
GB0716126D0 (en) | 2007-08-17 | 2007-09-26 | Danisco | Process |
WO2008090395A1 (en) | 2007-01-25 | 2008-07-31 | Danisco A/S | Production of a lipid acyltransferase from transformed bacillus licheniformis cells |
EP1709165B1 (en) | 2004-01-06 | 2014-04-23 | Novozymes A/S | Polypeptides of alicyclobacillus |
ES2391826T3 (es) | 2004-01-30 | 2012-11-30 | Novozymes, Inc. | Polipéptidos con actividad de mejora celulolítica y polinucleótidos que los codifican |
CN101389645B (zh) | 2004-02-12 | 2016-08-03 | 诺维信股份有限公司 | 具有木聚糖酶活性的多肽和编码它的多核苷酸 |
ES2531753T3 (es) | 2004-02-25 | 2015-03-18 | Novozymes A/S | Enzima de degradación de la pared celular fúngica |
GB0405637D0 (en) | 2004-03-12 | 2004-04-21 | Danisco | Protein |
ES2314646T3 (es) | 2004-03-22 | 2009-03-16 | Solvay Pharmaceuticals Gmbh | Composiciones farmaceuticas por via de productos que contienen lipasa , en particular de pancreatina, que contienen tensioactivos. |
WO2005100582A2 (en) | 2004-03-25 | 2005-10-27 | Novozymes Inc. | Methods for degrading or converting plant cell wall polysaccharides |
WO2005100573A2 (en) | 2004-04-16 | 2005-10-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Fungal promoters for expressing a gene in a fungal cell |
US7148404B2 (en) | 2004-05-04 | 2006-12-12 | Novozymes A/S | Antimicrobial polypeptides |
US7413887B2 (en) | 2004-05-27 | 2008-08-19 | Genecor International, Inc. | Trichoderma reesei glucoamylase and homologs thereof |
WO2005117756A2 (en) | 2004-05-27 | 2005-12-15 | Genencor International, Inc. | Acid-stable alpha amylases having granular starch hydrolyzing activity and enzyme compositions |
CA2565888C (en) | 2004-05-27 | 2014-10-14 | Novozymes, Inc. | Methods for transforming and expression screening of filamentous fungal cells with a dna library |
WO2005121333A1 (en) | 2004-06-14 | 2005-12-22 | Novozymes A/S | Signal peptide for producing a polypeptide |
WO2005123915A1 (en) | 2004-06-21 | 2005-12-29 | Novozymes A/S | Stably maintained multiple copies of at least two orf in the same orientation |
WO2005123911A2 (en) | 2004-06-21 | 2005-12-29 | Novozymes A/S | Proteases |
CN104195123A (zh) | 2004-06-29 | 2014-12-10 | 诺维信股份有限公司 | 具有α-葡糖苷酶活性的多肽及编码其的多核苷酸 |
EP4269684A3 (en) | 2004-07-05 | 2024-02-21 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants with altered properties |
KR101226156B1 (ko) | 2004-07-16 | 2013-01-24 | 듀폰 뉴트리션 바이오사이언시즈 에이피에스 | 효소적 오일-탈검 방법 |
CN103182387B (zh) | 2004-09-10 | 2016-01-06 | 诺维信北美公司 | 防止、去除、减少或破坏生物膜的方法 |
WO2006039541A2 (en) | 2004-09-30 | 2006-04-13 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
EP1809747B1 (en) | 2004-10-04 | 2016-12-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having phytase activity and polynucleotides encoding same |
AU2005290934C1 (en) | 2004-10-04 | 2013-05-09 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Citrobacter freundii phytase and homologues |
AR050895A1 (es) | 2004-10-04 | 2006-11-29 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de fitasa y polinucleotidos que los codifican |
GB0422052D0 (en) | 2004-10-04 | 2004-11-03 | Dansico As | Enzymes |
GB0423139D0 (en) | 2004-10-18 | 2004-11-17 | Danisco | Enzymes |
GB0424940D0 (en) | 2004-11-11 | 2004-12-15 | Danisco | Transcription factors |
WO2006053565A2 (en) | 2004-11-19 | 2006-05-26 | Novozymes A/S | Polypeptides having antimicrobial activity and polynucleotides encoding same |
JP5452869B2 (ja) | 2004-12-22 | 2014-03-26 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | デンプン加工法 |
DE602006020837D1 (de) | 2005-01-10 | 2011-05-05 | Novozymes As | Verfahren zur herstellung von fettsäurealkylestern aus triglyceriden und alkoholen unter verwendung einer kombination zweier lipolytischer enzyme |
EP2410048B1 (en) | 2005-01-24 | 2016-08-10 | DSM IP Assets B.V. | Method for producing a compound of interest in a filamentous fungal cell |
EP1700907A1 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-13 | Unilever N.V. | Liquid bleaching composition |
EP1700904A1 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-13 | Unilever N.V. | Liquid detergent composition |
DE602006015444D1 (de) | 2005-03-22 | 2010-08-26 | Novozymes As | Polypeptide und nukleinsäuren, die diese codieren |
AR053066A1 (es) | 2005-04-26 | 2007-04-18 | Novozymes As | Arabinofuranosidasas |
DK1877551T4 (da) | 2005-04-27 | 2014-03-31 | Novozymes Inc | Polypeptider, der har endoglucanaseaktivitet, og polynukleotider, der koder for samme |
EP2377884A1 (en) | 2005-05-10 | 2011-10-19 | Neoloch Aps | Neuritogenic peptides |
RU2413532C2 (ru) | 2005-07-29 | 2011-03-10 | Зольвай Фармасьютиклз Гмбх | Способ получения стерилизованного порошкообразного панкреатина |
US9198871B2 (en) | 2005-08-15 | 2015-12-01 | Abbott Products Gmbh | Delayed release pancreatin compositions |
US11266607B2 (en) | 2005-08-15 | 2022-03-08 | AbbVie Pharmaceuticals GmbH | Process for the manufacture and use of pancreatin micropellet cores |
EP1920052A2 (en) | 2005-08-16 | 2008-05-14 | Novozymes A/S | Polypeptides of strain bacillus sp. p203 |
EP1754781B1 (en) | 2005-08-19 | 2013-04-03 | The Procter and Gamble Company | A solid laundry detergent composition comprising anionic detersive surfactant and a calcium-augmented technology |
EP1922333B1 (en) | 2005-08-26 | 2010-03-31 | Novozymes Adenium Biotech A/S | Polypeptides having antimicrobial activity and polynucleotides encoding same |
JP2009507497A (ja) | 2005-09-12 | 2009-02-26 | ノボザイムス ノース アメリカ,インコーポレイティド | 油の酵素的エステル交換 |
US20090055942A1 (en) | 2005-09-14 | 2009-02-26 | Novo Nordisk Healthcare A/G | Human Coagulation Factor VII Polypeptides |
US7855279B2 (en) | 2005-09-27 | 2010-12-21 | Amunix Operating, Inc. | Unstructured recombinant polymers and uses thereof |
EP2385110A3 (en) | 2005-09-30 | 2011-11-16 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
US7858360B2 (en) | 2005-10-17 | 2010-12-28 | Novozymes A/S | Use of fungal mutants for expression of antibodies |
WO2007053619A2 (en) | 2005-11-01 | 2007-05-10 | Bio-Cat, Inc. | A composition with a fungal (yeast) lipase and method for treating lipid malabsorption in cystic fibrous as well as people suffering from pancreatic lipase insufficiency |
US20080280328A1 (en) | 2005-11-18 | 2008-11-13 | Novozymes A/S | Glucoamylase Variants |
WO2007062936A2 (en) * | 2005-11-29 | 2007-06-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Dna binding site of a transcriptional activator useful in gene expression |
US8618060B2 (en) | 2006-02-14 | 2013-12-31 | University Of Tasmania | Metallothionein-derived peptide fragments |
ES2368608T3 (es) | 2006-03-20 | 2011-11-18 | Novozymes, Inc. | Polipéptidos con actividad endoglucanasa y polinucleótidos codifcando los polipéptidos. |
BRPI0710217A2 (pt) | 2006-03-30 | 2011-08-02 | Novozymes Inc | polipeptìdeo, polinucleotìdeo, construção de ácido nucleico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir o polipeptìdeo, para produzir um mutante a partir de uma célula precursora, para produzir uma proteìna, para produzir um polinucleotìdeo, para degradar ou converter um material celulósico, para produzir uma substáncia e para inibir a expressão de um polinucleotìdeo em uma célula, célula mutante, planta transgênica, parte de planta ou célula de planta, e, molécula de rna de filamento duplo |
WO2007113241A1 (en) | 2006-03-31 | 2007-10-11 | Novozymes A/S | A stabilized liquid enzyme composition |
EP2001999B1 (en) | 2006-04-04 | 2012-05-16 | Novozymes A/S | Phytase variants |
US10072256B2 (en) | 2006-05-22 | 2018-09-11 | Abbott Products Gmbh | Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample |
ES2534282T3 (es) | 2006-06-29 | 2015-04-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Un método para lograr la expresión polipeptídica mejorada |
WO2008008950A2 (en) | 2006-07-14 | 2008-01-17 | Novozymes, Inc. | Methods for producing secreted polypeptides having biological activity |
EP2044203B1 (en) | 2006-07-14 | 2013-10-09 | Novozymes, Inc. | Methods for increasing expression of genes in a fungal cell |
BRPI0714870A2 (pt) | 2006-07-21 | 2013-05-28 | Novozymes Inc | mÉtodo para produzir um polipeptÍdeo secretado tendo atividade biolàgica, proteÍna de fusço isolada, polinucleotÍdeo isolado, construÇço de proteÍna de fusço, vetor de expressço, cÉlula hospedeira féngica, mÉtodos para degradar ou conventer um material celulàsico e para produzir uma substÂncia |
EP2195423A1 (en) | 2007-10-09 | 2010-06-16 | Danisco US Inc. | Glucoamylase variants with altered properties |
JP5568307B2 (ja) | 2006-10-10 | 2014-08-06 | ダニスコ・ユーエス・インク、ジェネンコー・ディビジョン | 修飾された性質を有するグルコアミラーゼ変異体 |
EP2089524B1 (en) | 2006-11-30 | 2012-10-10 | Novozymes A/S | Dnase expression in recombinant host cells |
EP2092113A2 (en) | 2006-12-18 | 2009-08-26 | Danisco US, INC., Genencor Division | Laccase mediators and methods of use |
KR20090101193A (ko) | 2006-12-21 | 2009-09-24 | 다니스코 유에스 인크. | 바실러스 종 195 의 알파-아밀라아제 폴리펩티드에 대한 조성물 및 용도 |
US8143046B2 (en) | 2007-02-07 | 2012-03-27 | Danisco Us Inc., Genencor Division | Variant Buttiauxella sp. phytases having altered properties |
US20080220498A1 (en) | 2007-03-06 | 2008-09-11 | Cervin Marguerite A | Variant Buttiauxella sp. phytases having altered properties |
EA018840B1 (ru) * | 2007-02-15 | 2013-11-29 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Рекомбинантная клетка-хозяин для получения соединения, представляющего интерес |
JP5485705B2 (ja) | 2007-02-20 | 2014-05-07 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 洗濯用酵素フォーム処理 |
BRPI0808513A2 (pt) | 2007-03-09 | 2014-08-19 | Danisco Us Inc Genencor Div | Variantes de alfa-amilase de espécies de bacillus alcalifílico, composições compreendendo variantes de alfa-amilase e métodos de uso |
CA2680273C (en) | 2007-03-09 | 2017-02-28 | Novozymes A/S | Thermostable asparaginases |
MX2009009692A (es) | 2007-03-14 | 2010-03-03 | Danisco Us Inc Genencor Div | Alfa-amilasa de trichoderma reesei que es una enzima maltogenica. |
MX289945B (es) | 2007-03-26 | 2011-09-05 | Novozymes As | Fitasa de hafnia. |
DE102007016139A1 (de) | 2007-03-30 | 2008-10-02 | Jenabios Gmbh | Verfahren zur regioselektiven Oxygenierung von N-Heterozyklen |
DK2147107T3 (da) | 2007-05-09 | 2011-10-24 | Novozymes As | Fremgangsmåde til ekspressionskloning, som er egnet til selektion af bibliotekskloner, der producerer et polypeptid af interesse |
EP2147104B1 (en) | 2007-05-21 | 2015-09-09 | Danisco US Inc. | Use of an aspartic protease (nsp24) signal sequence for heterologous protein expression |
SG148934A1 (en) | 2007-06-11 | 2009-01-29 | Novozymes As | A process for combined biopolishing and bleach clean-up |
US9808595B2 (en) | 2007-08-07 | 2017-11-07 | Boston Scientific Scimed, Inc | Microfabricated catheter with improved bonding structure |
WO2009019314A1 (en) | 2007-08-08 | 2009-02-12 | Novozymes A/S | Transferrin variants and conjugates |
GB0715751D0 (en) * | 2007-08-13 | 2007-09-19 | Tmo Renewables Ltd | Thermophilic micro-organisms for ethanol production |
EP2193195B1 (en) | 2007-09-18 | 2014-12-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having tyrosinase activity and polynucleotides encoding same |
US8592194B2 (en) | 2007-10-09 | 2013-11-26 | Danisco Us Inc. | Glucoamylase variants with altered properties |
US7618801B2 (en) | 2007-10-30 | 2009-11-17 | Danison US Inc. | Streptomyces protease |
CA2704791A1 (en) | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Danisco Us Inc. | Variants of bacillus sp. ts-23 alpha-amylase with altered properties |
WO2009061379A2 (en) | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Danisco Us Inc., Genencor Division | Alpha-amylase variants with altered properties |
JP2009118783A (ja) * | 2007-11-15 | 2009-06-04 | Gekkeikan Sake Co Ltd | 糸状菌タンパク質分泌生産の改善 |
DK2222842T3 (en) | 2007-11-20 | 2015-01-19 | Danisco Us Inc | Glucoamylasevarianter with changed properties |
BRPI0820552A2 (pt) | 2007-11-27 | 2014-10-14 | Novozymes As | Polipetídeo isolado, polinucleotídeo isolado, construção de ácido nucléico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir o polipeptídeo, para produzir uma proteína, e para degradar ou converter um material de biomassa, planta, parte vegetal ou célula vegetal transgêncica, método, composição, e. uso do polipeptídio. |
ES2490608T3 (es) | 2007-12-06 | 2014-09-04 | Novozymes A/S | Polipéptidos con actividad de esterasa de acetilxilano y polinucleótidos que codifican los mismos |
SG162265A1 (en) | 2007-12-13 | 2010-07-29 | Danisco Us Inc | Compositions and methods for producing isoprene |
CA2709490A1 (en) | 2007-12-19 | 2009-07-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
CN102978258A (zh) | 2008-01-02 | 2013-03-20 | 丹尼斯科美国公司 | 应用嗜糖假单胞菌g4-淀粉酶和其变体获得乙醇的无葡糖淀粉酶的方法 |
US20110034367A1 (en) | 2008-02-01 | 2011-02-10 | Novozymes A/S | Liquid Enzyme Composition |
CA2713582C (en) | 2008-02-04 | 2017-02-21 | Danisco Us Inc. | Ts23 alpha-amylase variants with altered properties |
CN107090014B (zh) | 2008-03-26 | 2023-04-25 | 诺维信公司 | 稳定化的液体酶组合物 |
DK2283124T3 (en) | 2008-04-18 | 2016-09-05 | Danisco Us Inc | BUTTIAUXELLA SP. PHYTASE VARIANTS |
SG165884A1 (en) | 2008-04-23 | 2010-11-29 | Goodyear Tire & Rubber | Isoprene synthase variants for improved microbial production of isoprene |
EP2123772A1 (en) | 2008-04-29 | 2009-11-25 | DSM IP Assets B.V. | Beta-lactam antibiotic producing strains |
BRPI0910547A2 (pt) | 2008-04-30 | 2015-08-04 | Danisco Us Inc | Variante quiméricas de alfa-amilase |
EP2281034B1 (en) | 2008-04-30 | 2015-10-21 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Process using Pseudoglucanobacter saccharoketogenes alcohol dehydrogenase |
EP2291536A4 (en) | 2008-05-15 | 2013-02-27 | Selexys Pharmaceuticals Corp | ANTI-PSGL-1 ANTIBODIES AND METHODS OF IDENTIFICATION AND USE THEREOF |
CA2726803A1 (en) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Danisco Us Inc. | Variant alpha-amylases from bacillus subtilis and methods of use, thereof |
EP2447361B1 (en) | 2008-06-06 | 2014-10-08 | Danisco US Inc. | Geobacillus stearothermophilus alpha-amylase (AMYS) variants with improved properties |
EP2698434A1 (en) | 2008-06-06 | 2014-02-19 | Danisco US Inc. | Uses of an alpha-amylase from Bacillus subtilis |
JP2011521661A (ja) | 2008-06-06 | 2011-07-28 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | ファミリー44キシログルカナーゼのバリアント |
JP2011524166A (ja) | 2008-06-06 | 2011-09-01 | ダニスコ・ユーエス・インク | 変異体微生物プロテアーゼを含む組成物及び方法 |
US9040279B2 (en) | 2008-06-06 | 2015-05-26 | Danisco Us Inc. | Saccharification enzyme composition and method of saccharification thereof |
CA2729801A1 (en) | 2008-07-02 | 2010-01-07 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods for producing isoprene free of c5 hydrocarbons under decoupling conditions and/or safe operating ranges |
ES2569913T3 (es) | 2008-07-07 | 2016-05-13 | Basf Se | Composición de enzima que comprende partículas poliméricas que contienen enzima |
SG169641A1 (en) | 2008-09-15 | 2011-04-29 | Danisco Us Inc | Systems using cell culture for production of isoprene |
US8470581B2 (en) | 2008-09-15 | 2013-06-25 | Danisco Us Inc. | Reduction of carbon dioxide emission during isoprene production by fermentation |
WO2010031076A2 (en) | 2008-09-15 | 2010-03-18 | Danisco Us Inc. | Conversion of prenyl derivatives to isoprene |
EP2334788A1 (en) | 2008-09-15 | 2011-06-22 | Danisco US Inc. | Increased isoprene production using the archaeal lower mevalonate pathway |
WO2010036515A1 (en) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylase blends and methods for using said blends |
BRPI0919314A2 (pt) | 2008-09-26 | 2015-08-11 | Novozymes As | Fitase, métodos para produzir um variante de fitase e um produto de fermentacao, para melhorar o valor nutricional de uma ração animal, e para o tratamento de proteínas vegetais, sequência isolada de ácidos nucleicos, construto de acido nucleico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, microorganismo transgênico, ou produtos, ou elementos destes, composição, processo para reduzir níveis de fitato em extrume de animal, e, uso da fitase. |
CN104293751B (zh) | 2008-11-11 | 2018-11-27 | 丹尼斯科美国公司 | 包含丝氨酸蛋白酶变体的组合物和方法 |
RU2011123745A (ru) | 2008-11-11 | 2012-12-20 | ДАНИСКО ЮЭс ИНК. | Композиции и способы, включающие вариант субтилизина |
CN106399280B (zh) | 2008-11-11 | 2020-12-22 | 丹尼斯科美国公司 | 包含一种或多种可组合的突变的芽孢杆菌属枯草杆菌蛋白酶 |
US8183024B2 (en) | 2008-11-11 | 2012-05-22 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods comprising a subtilisin variant |
EP2358878B1 (en) | 2008-11-20 | 2014-10-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having amylolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
CA2745760A1 (en) | 2008-12-04 | 2010-06-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2010068800A1 (en) | 2008-12-12 | 2010-06-17 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having aspartic endopeptidase activity and polynucleotides encoding same |
EP2376527A1 (en) | 2008-12-12 | 2011-10-19 | Novozymes Inc. | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
WO2010074972A1 (en) | 2008-12-15 | 2010-07-01 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having catalase activity and polynucleotides encoding same |
WO2010074955A1 (en) | 2008-12-16 | 2010-07-01 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having carboxypeptidase activity and polynucleotides encoding same |
US20110271407A1 (en) | 2008-12-16 | 2011-11-03 | Novozymes, Inc. | Polypeptides Having Alpha-Mannosidase Activity And Polynucleotides Encoding Same |
CN102325889A (zh) | 2008-12-19 | 2012-01-18 | 诺维信股份有限公司 | 增加纤维素材料水解的方法 |
WO2010080527A1 (en) | 2008-12-19 | 2010-07-15 | Novozymes, Inc. | Methods for determining cellulolytic enhancing activity of a polypeptide |
EP2379712B1 (en) | 2008-12-19 | 2017-02-22 | Novozymes Inc. | Methods for increasing hydrolysis of cellulosic material in the presence of cellobiose dehydrogenase |
EP2379732A2 (en) | 2008-12-19 | 2011-10-26 | Novozymes Inc. | Methods for increasing enzymatic hydrolysis of cellulosic material in the presence of a peroxidase |
EP3037528B1 (en) | 2008-12-23 | 2018-08-29 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Polypeptides |
US8349325B2 (en) | 2008-12-23 | 2013-01-08 | Abbott Laboratories | Soluble FMS-like tyrosine kinase-1 (sFLT-1) antibody and related composition, kit, methods of using, and materials and method for making |
CN102333866B (zh) | 2008-12-30 | 2015-04-29 | 丹尼斯科美国公司 | 生产异戊二烯和共同产物的方法 |
CA2749353A1 (en) | 2009-01-21 | 2010-07-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having esterase activity and nucleic acids encoding the same |
US8604277B2 (en) | 2009-01-28 | 2013-12-10 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
WO2010088463A2 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having expansin activity and polynucleotides encoding same |
WO2010088447A1 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
EP2393828B1 (en) | 2009-02-03 | 2016-10-12 | Amunix Operating Inc. | Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same |
EP2393834B1 (en) | 2009-02-06 | 2013-04-17 | Novozymes Biopharma DK A/S | Purification process |
WO2010091221A1 (en) | 2009-02-06 | 2010-08-12 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
US9493545B2 (en) | 2009-02-11 | 2016-11-15 | Albumedix A/S | Albumin variants and conjugates |
JP2010183885A (ja) * | 2009-02-13 | 2010-08-26 | Kobe Univ | タンパク質の製造方法およびそれに用いる発現ベクター |
WO2010099431A2 (en) | 2009-02-27 | 2010-09-02 | Monsanto Technology Llc | Hydroponic apparatus and methods of use |
CN102341495A (zh) | 2009-03-10 | 2012-02-01 | 丹尼斯科美国公司 | 巨大芽孢杆菌菌株DSM90相关的α-淀粉酶及其使用方法 |
EA201101311A1 (ru) | 2009-03-11 | 2012-04-30 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Получение альфа-кетопимелиновой кислоты |
US8563268B2 (en) | 2009-03-17 | 2013-10-22 | Novozymes A/S | Polypeptide having tyrosinase activity |
US20120028318A1 (en) | 2009-03-18 | 2012-02-02 | Danisco Us Inc. | Fungal cutinase from magnaporthe grisea |
EP2411510A2 (en) | 2009-03-23 | 2012-02-01 | Danisco US Inc. | Cal a-related acyltransferases and methods of use, thereof |
BRPI1013483B1 (pt) | 2009-03-24 | 2019-04-24 | Novozymes A/S | Construção de ácido nucleico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira microbiana transgênica, métodos para produzir o polipeptídeo, para degradar um xilano acetilado e para produzir um produto de fermentação, e, composição |
CN102378813B (zh) | 2009-04-01 | 2014-05-14 | 丹尼斯科美国公司 | 包含具有改变的性质的α-淀粉酶变体的组合物和方法 |
CN102388131B (zh) | 2009-04-08 | 2014-04-30 | 丹尼斯科美国公司 | 盐单胞菌属菌株WDG195相关α-淀粉酶及其使用方法 |
AU2010241099A1 (en) | 2009-04-22 | 2011-10-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for the production of a recombinant polypeptide of interest |
AU2010238770A1 (en) | 2009-04-23 | 2011-11-03 | Danisco Us Inc. | Three-dimensional structure of isoprene synthase and its use thereof for generating variants |
EP2248893A1 (en) | 2009-05-06 | 2010-11-10 | Novozymes A/S | DFPase Enzymes from Octopus Vulgaris |
MX2011012313A (es) | 2009-05-19 | 2011-12-12 | Danisco | Uso. |
WO2010133644A2 (en) | 2009-05-19 | 2010-11-25 | Danisco A/S | Amylase polypeptides |
CA2763031A1 (en) | 2009-05-29 | 2010-12-02 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
US8278507B2 (en) | 2009-06-02 | 2012-10-02 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
TWI434921B (zh) | 2009-06-17 | 2014-04-21 | Danisco Us Inc | 從生物異戊二烯組合物製造燃料成分之方法及系統 |
TWI427149B (zh) | 2009-06-17 | 2014-02-21 | Danisco Us Inc | 使用dxp及mva途徑之改良之異戊二烯製造 |
CA2766009A1 (en) | 2009-06-25 | 2010-12-29 | Danisco A/S | Variant lipolytic enzymes with improved expression, functionality and/or activity |
EP2451957B1 (en) | 2009-07-07 | 2017-11-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP3395828A1 (en) | 2009-07-17 | 2018-10-31 | Rigshospitalet | Inhibitors of complement activation |
EP2456872B1 (en) | 2009-07-22 | 2017-08-30 | DSM IP Assets B.V. | Improved host cell for the production of a compound of interest |
JP2013500004A (ja) | 2009-07-24 | 2013-01-07 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 炭水化物オキシダーゼ |
WO2011014458A1 (en) | 2009-07-28 | 2011-02-03 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having phytase activity and polynucleotides encoding same |
CA2771071C (en) | 2009-08-07 | 2020-03-10 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylase blend for starch processing and method of use thereof |
WO2011015633A1 (en) | 2009-08-07 | 2011-02-10 | Novozymes A/S | Method of producing a sweet protein |
CA2770607C (en) | 2009-08-19 | 2019-02-26 | Danisco A/S | Variants of glucoamylase |
CN102712915B (zh) | 2009-08-19 | 2014-12-10 | 丹尼斯科美国公司 | 具有改良比活和/或热稳定性的葡糖淀粉酶的组合变体 |
WO2011020910A1 (en) | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having isoamylase activity and polynucleotides encoding same |
WO2011028229A1 (en) | 2009-08-24 | 2011-03-10 | Amunix Operating Inc. | Coagulation factor ix compositions and methods of making and using same |
DK2478096T3 (en) | 2009-09-17 | 2017-08-28 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES WITH CELLULOLYTIC IMPROVING ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
EP2478095A1 (en) | 2009-09-18 | 2012-07-25 | Novozymes Inc. | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
CN102648273B (zh) | 2009-09-25 | 2017-04-26 | 诺维信公司 | 枯草蛋白酶变体 |
CN104946427A (zh) | 2009-09-25 | 2015-09-30 | 诺维信公司 | 蛋白酶变体的用途 |
WO2011041405A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
BR112012006982B1 (pt) | 2009-09-29 | 2021-12-21 | Novozymes, Inc. | Célula hospedeira microbiana transgênica, métodos para produzir um polipeptídeo, para produzir um mutante de uma célula precursora, para inibir a expressão de um polipeptídeo, para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, para fermentar um material celulósico, construções de ácido nucleico, vetor de expressão, polipeptídeo isolado tendo atividade intensificadora celulolítica, polinucleotídeo isolado que codifica o mesmo, e, composição detergente |
EP2483296B1 (en) | 2009-09-30 | 2015-07-29 | Novozymes Inc. | Polypeptides derived from thermoascus crustaceus having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2011039319A1 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
BR112012006873A2 (pt) | 2009-10-23 | 2015-09-08 | Novozymes Inc | variante isolada, polinucleotideo isolado, metodo para produzir uma variante, planta transgenica, parte de planta ou celula d eplanta, e, metodos para degradar ou converter um materialcelulósico, para produzir um produto de fermentação, e, para fermentar um material celulósico. |
CA2778471A1 (en) | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Danisco Us Inc. | Methods for reducing blue saccharide |
WO2011059740A1 (en) | 2009-10-29 | 2011-05-19 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
EP2496692B1 (en) | 2009-11-06 | 2016-03-16 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
CA2780179A1 (en) | 2009-11-06 | 2011-05-12 | Novozymes, Inc. | Compositions for saccharification of cellulosic material |
WO2011057086A1 (en) | 2009-11-06 | 2011-05-12 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
GB0920089D0 (en) | 2009-11-17 | 2009-12-30 | Danisco | Method |
DK2507370T3 (en) | 2009-11-30 | 2015-05-11 | Novozymes As | Polypeptides with glucoamylase activity and polynucleotides encoding them |
CA2782154C (en) | 2009-11-30 | 2018-10-16 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
US8557541B2 (en) | 2009-12-01 | 2013-10-15 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
WO2011067283A1 (en) | 2009-12-01 | 2011-06-09 | Novo Nordisk A/S | Novel peptidyl alpha-hydroxyglycine alpha-amidating lyases |
US20130023028A1 (en) | 2009-12-03 | 2013-01-24 | Novozymes South Asia Pvt. Ltd. | Variants Of A Polypeptide With Lipolytic Activity and Improved Stability |
WO2011070101A1 (en) | 2009-12-09 | 2011-06-16 | Novozymes A/S | Methods of producing gh8 xylanase variants |
DK2510094T3 (en) | 2009-12-09 | 2017-03-13 | Danisco Us Inc | COMPOSITIONS AND METHODS OF COMPREHENSIVE PROTEASE VARIETIES |
CN102753680B (zh) | 2009-12-11 | 2015-05-13 | 诺维信公司 | 蛋白酶变体 |
US8741609B2 (en) | 2009-12-21 | 2014-06-03 | Danisco Us Inc. | Detergent compositions containing Geobacillus stearothermophilus lipase and methods of use thereof |
US20120258900A1 (en) | 2009-12-21 | 2012-10-11 | Danisco Us Inc. | Detergent compositions containing bacillus subtilis lipase and methods of use thereof |
CN102712879A (zh) | 2009-12-21 | 2012-10-03 | 丹尼斯科美国公司 | 含有褐色喜热裂孢菌脂肪酶的洗涤剂组合物及其使用方法 |
WO2011080267A2 (en) | 2009-12-29 | 2011-07-07 | Novozymes A/S | Polypetides having detergency enhancing effect |
CN102918149A (zh) | 2010-01-04 | 2013-02-06 | 诺维信公司 | α-淀粉酶 |
US8617856B2 (en) | 2010-01-07 | 2013-12-31 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Fatty acid-producing hosts |
EP2357220A1 (en) | 2010-02-10 | 2011-08-17 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition comprising amylase variants with high stability in the presence of a chelating agent |
US9896673B2 (en) | 2010-02-10 | 2018-02-20 | Novozymes A/S | Compositions of high stability alpha amylase variants |
CA2789301A1 (en) | 2010-02-11 | 2011-08-18 | Dsm Ip Assets B.V. | Host cell capable of producing enzymes useful for degradation of lignocellulosic material |
EP2536832B1 (en) | 2010-02-18 | 2015-02-25 | Danisco US Inc. | Amylase from nesterenkonia and methods of use thereof |
WO2011104284A1 (en) | 2010-02-25 | 2011-09-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having antimicrobial activity |
JP5833576B2 (ja) | 2010-02-25 | 2015-12-16 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | リゾチームの変異体及びそれをコードするポリヌクレオチド |
EP2542673A2 (en) | 2010-03-03 | 2013-01-09 | Novozymes, Inc. | Xylanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2011107591A1 (en) | 2010-03-05 | 2011-09-09 | Rigshospitalet | Chimeric inhibitor molecules of complement activation |
US20110229921A1 (en) | 2010-03-18 | 2011-09-22 | Abbott Laboratories | METHODS OF ASSAYING URINARY NEUTROPHIL GELATINASE-ASSOCIATED LIPOCALIN (uNGAL) IN THE PROGNOSIS OF CADAVERIC KIDNEY TRANSPLANT FUNCTION IN A PATIENT, INCLUDING A PATIENT DIAGNOSED WITH DELAYED GRAFT FUNCTION (DGF), A METHOD OF ASSAYING uNGAL IN THE ASSESSMENT OF RISK OF DGF IN A PATIENT DIAGNOSED WITH EARLY GRAFT FUNCTION (EGF), AND RELATED KITS |
WO2011114251A1 (en) | 2010-03-18 | 2011-09-22 | Danisco A/S | Foodstuff |
CA2794113A1 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | Novozymes A/S | Thermostable phytase variants |
BR112012020503A2 (pt) | 2010-03-31 | 2015-09-15 | Novozymes Inc | variante isolado de celobioidrolase precursor, polipeptídeo isolado, construção de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, método de produzir um variante de celobioidrolas precursor, métodos para obter o variante, para degradar variante de celobioidrolase precursor, métodos para obter o variante, para degradar ou converter um material celulósico, poara produzir um produto de fermentação e de fermentar um material celulósico, e, composição de enzima. |
MX338068B (es) | 2010-04-14 | 2016-04-01 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de glucoamilasa y polinucleotidos que codifican los mismos. |
AR080886A1 (es) | 2010-04-15 | 2012-05-16 | Danisco Us Inc | Composiciones y metodos que comprenden proteasas variantes |
PL2566960T3 (pl) | 2010-05-06 | 2017-08-31 | The Procter And Gamble Company | Produkty konsumenckie z odmianami proteaz |
AR081423A1 (es) | 2010-05-28 | 2012-08-29 | Danisco Us Inc | Composiciones detergentes con contenido de lipasa de streptomyces griseus y metodos para utilizarlas |
DK2576606T3 (en) | 2010-06-04 | 2015-02-23 | Novozymes Inc | Preparation of C4 dicarboxylic acid in filamentous fungi |
US8835604B2 (en) | 2010-06-12 | 2014-09-16 | Adenium Biotech Aos | Antimicrobial peptide variants and polynucleotides encoding same |
US8933282B2 (en) | 2010-06-17 | 2015-01-13 | Danisco Us Inc. | Fuel compositions comprising isoprene derivatives |
DK2769985T3 (da) | 2010-06-21 | 2018-01-29 | Novozymes Inc | Polypeptider fra Aspergillus aculeatus med C4-dicarboxylsyre-transportøraktivitet samt polynukleotider, som koder for samme |
EP2582829B1 (en) | 2010-06-21 | 2016-11-30 | Novozymes, Inc. | Methods for improved c4-dicarboxylic acid production in filamentous fungi |
WO2011161206A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Novozymes A/S | Polynucleotides having leader sequence function |
CN103068988A (zh) | 2010-06-25 | 2013-04-24 | 诺维信公司 | 具有启动子活性的多核苷酸 |
EP2585601A1 (en) | 2010-06-25 | 2013-05-01 | Novozymes A/S | Polynucleotides having promoter activity |
US9551714B2 (en) | 2010-06-25 | 2017-01-24 | Abbott Laboratories | Materials and methods for assay of anti-hepatitis C virus (HCV) antibodies |
DK2588604T3 (en) | 2010-06-30 | 2016-09-26 | Novozymes Inc | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding them |
CA2803222A1 (en) | 2010-07-01 | 2012-01-05 | Dsm Ip Assets B.V. | A method for the production of a compound of interest |
GB201011513D0 (en) | 2010-07-08 | 2010-08-25 | Danisco | Method |
EP2598629B1 (en) | 2010-07-30 | 2020-04-08 | Cleanvantage LLC | Aspergillus containing beta-glucosidase, beta-glucosidases and nucleic acids encoding the same |
EP2603594B1 (en) | 2010-08-12 | 2018-04-25 | Novozymes, Inc. | Compositions comprising a polypeptide having cellulolytic enhancing activity and a bicyclic compound and uses thereof |
DK2606114T3 (en) | 2010-08-17 | 2015-07-13 | Novozymes As | Method of brewing |
US20130224757A1 (en) | 2010-08-19 | 2013-08-29 | Novozymes A/S | Induced sporulation screening method |
WO2012028483A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | A concentrated soak wash |
US20130212746A1 (en) | 2010-08-30 | 2013-08-15 | Novoyzmes A/S | Polypeptides Having Hemicellulolytic Activity And Polynucleotides Encoding Same |
EP2611901B1 (en) | 2010-08-30 | 2016-05-11 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
US8624082B2 (en) | 2010-08-30 | 2014-01-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030844A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
KR20130102537A (ko) | 2010-08-30 | 2013-09-17 | 노보자임스 에이/에스 | 두 번 불림 세탁 |
WO2012030811A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
EP3470514A1 (en) | 2010-08-30 | 2019-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2012031910A2 (en) | 2010-09-10 | 2012-03-15 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for preparing alpha-ketopimelic acid by c1-elongation |
EP2616483A1 (en) | 2010-09-16 | 2013-07-24 | Novozymes A/S | Lysozymes |
JP5759132B2 (ja) * | 2010-09-21 | 2015-08-05 | 月桂冠株式会社 | 糸状菌ペプチダーゼの生産方法 |
JP2012075369A (ja) * | 2010-09-30 | 2012-04-19 | Toyota Motor Corp | シス作用エレメント及びその利用 |
ES2594528T3 (es) | 2010-09-30 | 2016-12-20 | Novozymes, Inc. | Variantes de polipéptidos con actividad de mejora celulolítica y polinucleótidos que las codifican |
MX2013003237A (es) | 2010-09-30 | 2013-05-30 | Novozymes Inc | Variantes de polipeptidos que tienen actividad potenciadora celulolitica y polinucleotidos que codifican a los mismos. |
EP2622071B1 (en) | 2010-10-01 | 2015-12-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having endopeptidase activity and polynucleotides encoding same |
BR112013004256A2 (pt) | 2010-10-01 | 2016-08-02 | Novozymes Inc | variante de beta-glicosidase,polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir uma variante, para degradar um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, e para fermentar um material celulósico, e, formulação de caldo total ou composição de cultura de células. |
US20130260423A1 (en) | 2010-10-26 | 2013-10-03 | Novozymes North America, Inc. | Methods of Saccharifying Sugar Cane Trash |
JP2014502148A (ja) | 2010-10-27 | 2014-01-30 | ダニスコ・ユーエス・インク | イソプレン生産の向上を目的としたイソプレン合成酵素変異体 |
BR112013010379A2 (pt) | 2010-10-29 | 2016-08-02 | Novozymes As | complexo proteico isolado, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucléico ou vetor de expressão, e, célula hospedeira recombinante |
CA2810903A1 (en) | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Novozymes A/S | Recombinant n-propanol and isopropanol production |
BR112013010008B1 (pt) | 2010-11-02 | 2020-09-08 | Novozymes, Inc. | Métodos para degradar e para fermentar um material celulósico, e para produzir um produto de fermentação |
US9212354B2 (en) | 2010-11-04 | 2015-12-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activitiy and polynucleotides encoding same |
DK2637515T3 (da) | 2010-11-08 | 2017-11-27 | Novozymes As | Polypeptider med glucoamylaseaktivitet og polynukleotider, som koder for dem |
US9732332B2 (en) | 2010-11-08 | 2017-08-15 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
US20120115244A1 (en) | 2010-11-09 | 2012-05-10 | Abbott Laboratories | Materials and methods for immunoassay of pterins |
DK2638153T3 (en) | 2010-11-12 | 2017-10-16 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES WITH ENDOGLUCANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
BR122020023911B1 (pt) | 2010-11-12 | 2022-02-15 | Novozymes A/S | Construto de ácido nucleico, célula microbiana hospedeira recombinante, e, método de produção do polipeptídeo |
DK2640833T3 (en) | 2010-11-18 | 2016-11-28 | Novozymes Inc | Chimeric polypeptides having cellulolytic enhancing ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING THEM |
CN105420267A (zh) | 2010-11-30 | 2016-03-23 | 诺维信股份有限公司 | 用于在真菌细胞中表达基因的启动子 |
US8927235B2 (en) | 2010-12-06 | 2015-01-06 | Novozymes A/S | Methods of hydrolyzing oligomers in hemicellulosic liquor |
MX2013006455A (es) | 2010-12-07 | 2013-10-25 | Vnomics Corp | Sistema y metodo para medir y reducir el desperdicio de combustible del vehiculo. |
CN103261420B (zh) | 2010-12-16 | 2016-01-20 | 诺维信股份有限公司 | 用于在真菌细胞中表达基因的启动子 |
CA2822610C (en) | 2010-12-21 | 2019-09-03 | Selexys Pharmaceuticals Corporation | Use of anti-p-selectin antibodies |
BR112013016264A2 (pt) | 2010-12-22 | 2018-06-19 | Danisco Us Inc | produção biológica de açúcares de pentose com o uso de células recombinantes |
BR112013018316A2 (pt) | 2010-12-22 | 2018-09-11 | Danisco Us Inc | composições e métodos para produção aprimorada de isopreno usando dois tipos de enzimas ispg |
EP2665812B1 (en) | 2011-01-20 | 2016-09-14 | Novozymes A/S | Expression of plant peroxidases in filamentous fungi |
WO2012103322A1 (en) | 2011-01-26 | 2012-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
EP2668268B1 (en) | 2011-01-26 | 2017-05-31 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012103350A1 (en) | 2011-01-26 | 2012-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012103288A1 (en) | 2011-01-26 | 2012-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
CN103517985B (zh) | 2011-01-26 | 2016-12-07 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸 |
CN103459605B (zh) | 2011-01-31 | 2016-08-24 | 诺维信北美公司 | 用于酶法精制经预处理的纤维素材料以供糖化的工艺 |
CN103384678B (zh) | 2011-02-23 | 2017-01-18 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维素水解增强活性的多肽及其编码多核苷酸 |
US20140051146A1 (en) | 2011-02-23 | 2014-02-20 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Method |
CN103492551A (zh) | 2011-02-28 | 2014-01-01 | 诺维信股份有限公司 | 用于生产c4-二羧酸的微生物 |
EP3339442B1 (en) | 2011-03-09 | 2022-05-11 | Novozymes A/S | Methods of increasing the cellulolytic enhancing activity of a polypeptide |
US9409958B2 (en) | 2011-03-10 | 2016-08-09 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
DK2683732T3 (en) | 2011-03-11 | 2016-12-12 | Dsm Ip Assets Bv | Vector-host-system |
DK2689011T3 (en) | 2011-03-25 | 2018-01-22 | Novozymes As | PROCEDURE FOR DEGRADATION OR CONVERSION OF CELLULOSE-SUBSTANCING MATERIAL |
US9410136B2 (en) | 2011-03-31 | 2016-08-09 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
US20140080182A1 (en) | 2011-03-31 | 2014-03-20 | Novozymes, Inc. | Cellulose Binding Domain Variants and Polynucleotides Encoding Same |
US20140031272A1 (en) | 2011-04-08 | 2014-01-30 | Danisco Us Inc. | Compositions |
US9926547B2 (en) | 2011-04-28 | 2018-03-27 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
US20140135252A1 (en) | 2011-04-29 | 2014-05-15 | Danisco Us Inc. | Detergent compositions containing geobacillus tepidamans mannanase and methods of use thereof |
AR086214A1 (es) | 2011-04-29 | 2013-11-27 | Danisco Us Inc | Composiciones detergentes que contienen mananasa de bacillus agaradhaerens y sus metodos de uso |
US9624518B2 (en) | 2011-04-29 | 2017-04-18 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
US20140073548A1 (en) | 2011-04-29 | 2014-03-13 | Danisco Us Inc. | Detergent compositions containing bacillus sp. mannanase and methods of use thereof |
EP2705145B1 (en) | 2011-05-05 | 2020-06-17 | The Procter and Gamble Company | Compositions and methods comprising serine protease variants |
TR201901382T4 (tr) | 2011-05-05 | 2019-02-21 | Danisco Inc | Serin proteaz varyantlarını içeren bileşimler ve yöntemler. |
WO2012159009A1 (en) | 2011-05-19 | 2012-11-22 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins |
EP2710132A1 (en) | 2011-05-19 | 2014-03-26 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins |
EP2527432A1 (en) | 2011-05-23 | 2012-11-28 | Novozymes A/S | Bi-directional cytosine deaminase-encoding selection marker |
EP2527448A1 (en) | 2011-05-23 | 2012-11-28 | Novozymes A/S | Simultaneous site-specific integrations of multiple gene-copies in filamentous fungi |
US20140206594A1 (en) | 2011-06-24 | 2014-07-24 | Martin Simon Borchert | Polypeptides Having Protease Activity and Polynucleotides Encoding Same |
BR112013033524A2 (pt) | 2011-06-30 | 2017-02-07 | Novozymes As | método para rastrear alfa-amilases, método para selecionar variantes de uma alfa-amilase genitora, polipeptídeo e alfa-amilase variantes, variante, composição detergente, e, utilização de uma alfa-amilase variante |
US9434932B2 (en) | 2011-06-30 | 2016-09-06 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
WO2013006756A2 (en) | 2011-07-06 | 2013-01-10 | Novozymes A/S | Alpha amylase variants and polynucleotides encoding same |
GB201112091D0 (en) | 2011-07-14 | 2011-08-31 | Gt Biolog Ltd | Bacterial strains isolated from pigs |
EP2732033A1 (en) | 2011-07-15 | 2014-05-21 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
DK2734633T3 (da) | 2011-07-22 | 2019-06-11 | Novozymes North America Inc | Fremgangsmåder til forbehandling af celluloseholdigt materiale og forbedring af hydrolyse deraf |
CN108823184B (zh) | 2011-08-04 | 2022-04-05 | 诺维信公司 | 具有木聚糖酶活性的多肽及其编码多核苷酸 |
DK2739728T3 (en) | 2011-08-04 | 2017-10-16 | Novozymes As | Polypeptides with endoglucanase activity and polynucleotides encoding them |
EP2742060B1 (en) | 2011-08-10 | 2017-03-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
CN103827297B (zh) | 2011-08-10 | 2018-06-22 | 诺维信公司 | 具有过氧化酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸 |
WO2013021059A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013021062A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
EP2742130B1 (en) | 2011-08-10 | 2017-11-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013021065A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013021064A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
US9000138B2 (en) | 2011-08-15 | 2015-04-07 | Novozymes A/S | Expression constructs comprising a Terebella lapidaria nucleic acid encoding a cellulase, host cells, and methods of making the cellulase |
WO2013026796A1 (en) | 2011-08-19 | 2013-02-28 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity |
CN103917649A (zh) | 2011-08-19 | 2014-07-09 | 诺维信股份有限公司 | 用于生产c4-二羧酸的重组微生物 |
BR112014004190A2 (pt) | 2011-08-24 | 2017-03-01 | Novozymes Inc | método para construir uma cepa fúngida filamentosa, cepa fúngida filamentosa, método para produzir múltiplos polipeptídeos recombinantes, e, construto em tandem |
CN103890169A (zh) | 2011-08-24 | 2014-06-25 | 诺维信股份有限公司 | 烟曲霉纤维素分解酶组合物及其用途 |
BR112014004188A2 (pt) | 2011-08-24 | 2017-03-21 | Novozymes Inc | método para obter transformantes positivos de uma célula hospedeira fúngica filamentosa, célula hospedeira fúngica filamentosa, método para produzir múltiplos polipeptídeos recombinantes, e, construto em tandem |
WO2013028928A1 (en) | 2011-08-24 | 2013-02-28 | Novozymes, Inc. | Cellulolytic enzyme compositions and uses thereof |
CA2846690A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-03-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
EP2748315B1 (en) | 2011-09-06 | 2017-11-15 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
US9994834B2 (en) | 2011-09-09 | 2018-06-12 | Novozymes A/S | Polynucleotides encoding polypeptides having alpha-amylase activity and methods of making the same |
JP6206972B2 (ja) | 2011-09-12 | 2017-10-04 | アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド | グルカゴン様ペプチド−2組成物およびその作製法および使用法 |
WO2013039776A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Novozymes North America, Inc. | Methods of hydrolyzing and fermenting cellulosic material |
WO2013043910A1 (en) | 2011-09-20 | 2013-03-28 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
ES2628190T3 (es) | 2011-09-22 | 2017-08-02 | Novozymes A/S | Polipéptidos con actividad de proteasa y polinucleótidos que codifican los mismos |
CN103930438A (zh) | 2011-09-30 | 2014-07-16 | 诺维信股份有限公司 | 具有β-葡糖苷酶活性的嵌合多肽和对其进行编码的多核苷酸 |
EP2751261B1 (en) | 2011-09-30 | 2018-08-29 | Novozymes, Inc. | Dehydrogenase variants and polynucleotides encoding same |
US20150031091A1 (en) | 2011-09-30 | 2015-01-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
KR20140090992A (ko) | 2011-10-04 | 2014-07-18 | 유니버시티 오브 플로리다 리서치 파운데이션, 인크. | D-락테이트 탈수소효소 활성을 가지는 글리세롤 탈수소효소 변이체 및 이의 용도 |
GB201117313D0 (en) | 2011-10-07 | 2011-11-16 | Gt Biolog Ltd | Bacterium for use in medicine |
EP2766476B1 (en) | 2011-10-11 | 2017-05-31 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
CA2852603A1 (en) | 2011-10-17 | 2013-04-25 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
CA2852601C (en) | 2011-10-17 | 2023-05-23 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
US20140287477A1 (en) | 2011-10-28 | 2014-09-25 | Danisco Us Inc. | Variant Maltohexaose-Forming Alpha-Amylase Variants |
CA2851308A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-10 | Bp Corporation North America Inc. | Use of mammalian promoters in filamentous fungi |
CA2851855A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-10 | Bp Corporation North America Inc. | Use of plant promoters in filamentous fungi |
US10308921B2 (en) | 2011-10-31 | 2019-06-04 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2780449B1 (en) | 2011-11-18 | 2018-04-11 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
BR112014012165A2 (pt) | 2011-11-21 | 2020-06-23 | Novozymes, Inc. | Variante de um polipeptídeo gh61, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, método para produção de uma variante de um polipeptídeo gh61, processos para degradação ou conversão de um material celulósico, para produção de um produto de fermentação, e para fermentação de um material celulósico, composição enzimática, formulação de caldo completo, ou composição de cultura celular, composição detergente, e método de limpeza ou lavagem de uma superfície dura ou roupa. |
DK2782998T3 (en) | 2011-11-22 | 2018-04-16 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES WITH BETA-XYLOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
DK2782592T3 (en) | 2011-11-25 | 2017-06-19 | Novozymes As | Polypeptides with lysozyme activity and polynucleotides encoding them |
DK2785732T3 (en) | 2011-12-01 | 2017-06-19 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES WITH BETA-XYLOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
WO2013079533A1 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013079531A2 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
EP2791330B1 (en) | 2011-12-16 | 2017-07-26 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having laccase activity and polynucleotides encoding same |
BR112014014697A2 (pt) | 2011-12-19 | 2020-10-27 | Novozymes, Inc. | polipeptídeo isolado, composição, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir um polipeptídeo e uma proteína, para gerar oxigênio molecular, e para remover peróxido de hidrogênio do tecido, processos para degradar ou converter um material celulósico, e para produzir um produto de fermentação, e, formulação de caldo integral ou composição de cultura de células |
CA2878019A1 (en) | 2011-12-20 | 2013-06-27 | Novozymes, Inc. | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
BR112014015421A2 (pt) | 2011-12-22 | 2019-09-24 | Danisco Us Inc | alfa-amilases variantes e métodos de uso das mesmas |
EP2798062B1 (en) | 2011-12-28 | 2018-02-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity |
US8993248B2 (en) | 2011-12-31 | 2015-03-31 | Abbott Laboratories | Truncated human vitamin D binding protein and mutation and fusion thereof and related materials and methods of use |
CN104350149A (zh) | 2012-01-26 | 2015-02-11 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽在动物饲料和洗涤剂中的用途 |
ES2794644T3 (es) | 2012-02-03 | 2020-11-18 | Novozymes As | Variantes de lipasa y polinucleótidos que las codifican |
PL2623586T3 (pl) | 2012-02-03 | 2018-01-31 | Procter & Gamble | Kompozycje i sposoby dla obróbki powierzchniowej za pomocą lipaz |
JP6517018B2 (ja) | 2012-02-09 | 2019-05-22 | ヴァー2・ファーマシューティカルズ・アンパルトセルスカブVAR2 Pharmaceuticals ApS | コンドロイチン硫酸グリカンのターゲティング |
RS63870B1 (sr) | 2012-02-15 | 2023-01-31 | Bioverativ Therapeutics Inc | Sastavi faktora viii i postupci za pravljenje i upotrebu istih |
HUE043537T2 (hu) | 2012-02-15 | 2019-08-28 | Bioverativ Therapeutics Inc | Rekombináns VIII faktor fehérjék |
WO2013123871A1 (en) | 2012-02-20 | 2013-08-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
US9909109B2 (en) | 2012-04-02 | 2018-03-06 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
CN104245929A (zh) | 2012-04-23 | 2014-12-24 | 诺维信公司 | 具有α-葡糖醛酸糖苷酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸 |
DK2841570T3 (en) | 2012-04-23 | 2018-03-12 | Novozymes As | POLYPEPTIDES WITH GLUCURONYL STERASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
WO2013163590A2 (en) | 2012-04-27 | 2013-10-31 | Novozymes, Inc. | Gh61 polypeptide variants and polynucleotides encoding same |
US9163263B2 (en) | 2012-05-02 | 2015-10-20 | The Goodyear Tire & Rubber Company | Identification of isoprene synthase variants with improved properties for the production of isoprene |
AR090971A1 (es) | 2012-05-07 | 2014-12-17 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de degradacion de xantano y polinucleotidos que los codifican |
MX2014013402A (es) | 2012-05-11 | 2014-11-26 | Danisco Inc | Uso de alfa-amilasa de aspergillus clavatus para sacarificacion. |
EP2855659A1 (en) | 2012-05-31 | 2015-04-08 | Novozymes A/S | Improved selection in fungi |
US9512413B2 (en) | 2012-05-31 | 2016-12-06 | Novozymes A/S | Polypeptides having organophosphorous hydrolase activity |
EP2854836B1 (en) | 2012-06-05 | 2018-04-04 | The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University | Ncam peptide mimetic for use in treating major depression disorder |
CN104379737B (zh) | 2012-06-08 | 2018-10-23 | 丹尼斯科美国公司 | 对淀粉聚合物具有增强的活性的变体α淀粉酶 |
EP2861714A1 (en) | 2012-06-19 | 2015-04-22 | DSM IP Assets B.V. | Promoters for expressing a gene in a cell |
AU2013279440B2 (en) | 2012-06-20 | 2016-10-06 | Novozymes A/S | Use of polypeptides having protease activity in animal feed and detergents |
MX2015000312A (es) | 2012-07-12 | 2015-04-10 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad lipasa y polinucleotidos que los codifican. |
CN105308171B (zh) | 2012-07-19 | 2019-03-08 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | Agse缺陷菌株 |
CA2878988A1 (en) | 2012-08-16 | 2014-02-20 | Danisco Us Inc. | Method of using alpha-amylase from aspergillus clavatus and pullulanase for saccharification |
TR201809053T4 (tr) | 2012-08-16 | 2018-07-23 | Bangladesh Jute Res Institute | Macrophomina phaseolina'dan elde edilen pektin parçalama enzimleri ve bunların kullanımları. |
WO2014026630A1 (en) | 2012-08-16 | 2014-02-20 | Novozymes A/S | Method for treating textile with endoglucanase |
US9765315B2 (en) | 2012-08-16 | 2017-09-19 | Bangladesh Jute Research Institute | Cellulose and/or hemicelluloses degrading enzymes from Macrophomina phaseolina and uses thereof |
US9598698B2 (en) | 2012-08-17 | 2017-03-21 | Novozymes A/S | Methods for co-silencing expression of genes in filamentous fungal strains and uses thereof |
US9828595B2 (en) | 2012-08-17 | 2017-11-28 | Novozymes A/S | Thermostable asparaginase variants and polynucleotides encoding same |
CN104619838A (zh) | 2012-08-22 | 2015-05-13 | 诺维信公司 | 来自微小杆菌属的金属蛋白酶 |
MX2015002099A (es) | 2012-08-22 | 2015-05-11 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Variantes que tienen actividad glucoamilasa. |
US9315791B2 (en) | 2012-08-22 | 2016-04-19 | Novozymes A/S | Metalloproteases from alicyclobacillus |
BR112015004701B1 (pt) | 2012-09-05 | 2022-06-14 | Novozymes A/S | Composição, uso de um polipeptídeo isolado, polinucleotídeo isolado, construção de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira de expressão recombinante, métodos para produção de um polipeptídeo, para melhorar o valor nutricional de uma ração animal, e para tratamento de proteínas, composição de ração animal, aditivo de ração animal, e, ração animal |
US20140073022A1 (en) | 2012-09-10 | 2014-03-13 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Production of polyhydroxyalkanoates with a defined composition from an unrelated carbon source |
EP2898068A2 (en) | 2012-09-19 | 2015-07-29 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
US9951339B2 (en) | 2012-09-19 | 2018-04-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Cell modification method using essential genes as markers and optionally recycling these |
DK2903412T3 (da) | 2012-10-08 | 2019-12-16 | Novozymes As | Polypeptider med cellulolyseforbedrende aktivitet og polynukleotider, som koder for dem |
CN104718286B (zh) | 2012-10-12 | 2018-10-30 | 诺维信公司 | 具有过氧合酶活性的多肽 |
EP2906688B1 (en) | 2012-10-12 | 2018-08-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
WO2014056920A2 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
WO2014056919A2 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
US9458435B2 (en) | 2012-10-12 | 2016-10-04 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
WO2014056917A2 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
EP2906686B1 (en) | 2012-10-12 | 2018-08-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
CN104704118A (zh) | 2012-10-15 | 2015-06-10 | 诺和诺德保健Ag(股份有限公司) | 凝血因子vii多肽 |
EP2909230B1 (en) | 2012-10-19 | 2019-05-22 | Danisco US Inc. | Stabilization of biomimetic membranes |
US20150275194A1 (en) | 2012-10-24 | 2015-10-01 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same |
JP2015533294A (ja) | 2012-10-31 | 2015-11-24 | ダニスコ・ユーエス・インク | ニューロスポラ・クラッサ(Neurosporacrassa)由来のβ−グルコシダーゼ |
CN104812895A (zh) | 2012-10-31 | 2015-07-29 | 丹尼斯科美国公司 | 组合物及使用方法 |
JP2015533292A (ja) | 2012-10-31 | 2015-11-24 | ダニスコ・ユーエス・インク | マグナポルテ・グリセア(Magnaporthegrisea)由来のβ−グルコシダーゼ |
WO2014071410A1 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-08 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods comprising thermolysin protease variants |
WO2014076232A2 (en) | 2012-11-19 | 2014-05-22 | Novozymes A/S | Isopropanol production by recombinant hosts using an hmg-coa intermediate |
WO2014081622A1 (en) | 2012-11-20 | 2014-05-30 | Danisco Us Inc. | Amylase with maltogenic properties |
US9624270B2 (en) | 2012-11-29 | 2017-04-18 | Mississippi State University | Engineering the production of a conformational variant of occidiofungin that has enhanced inhibitory activity against fungal species |
WO2014086659A2 (en) | 2012-12-06 | 2014-06-12 | Ahmedabad Textile Industry's Research Association | Method for enzymatical preparation of textiles |
WO2014088940A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods of use |
ES2614039T3 (es) | 2012-12-07 | 2017-05-29 | Danisco Us Inc. | Composiciones y métodos de uso |
EP2929028A1 (en) | 2012-12-07 | 2015-10-14 | Novozymes A/S | Method for generating site-specific mutations in filamentous fungi |
CN104884464B (zh) | 2012-12-11 | 2021-02-02 | 诺维信公司 | 具有磷脂酶c活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
US9765373B2 (en) | 2012-12-14 | 2017-09-19 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2931911A1 (en) | 2012-12-14 | 2015-10-21 | Danisco US Inc. | Method of using alpha-amylase from aspergillus fumigatus and isoamylase for saccharification |
WO2014099653A1 (en) | 2012-12-17 | 2014-06-26 | Novozymes A/S | Alpha-amylases and polynucleotides encoding same |
WO2014099798A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancinc activity and polynucleotides encoding same |
WO2014100018A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Danisco Us Inc. | Novel mannanase, compositions and methods of use thereof |
EP2904105A1 (en) | 2012-12-20 | 2015-08-12 | Danisco US Inc. | Method of using alpha-amylase from aspergillus terreus and pullulanase for saccharification |
US9551042B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-01-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
WO2014099525A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Danisco Us Inc. | Paenibacillus curdlanolyticus amylase, and methods of use, thereof |
EP3354728B1 (en) | 2012-12-21 | 2020-04-22 | Danisco US Inc. | Alpha-amylase variants |
WO2014101753A1 (en) | 2012-12-24 | 2014-07-03 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2014106593A1 (en) | 2013-01-03 | 2014-07-10 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
KR102134498B1 (ko) | 2013-02-04 | 2020-07-16 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 탄수화물 분해 폴리펩티드 및 이의 용도 |
MX2015010078A (es) | 2013-02-06 | 2016-01-25 | Novozymes As | Uso de polipeptidos con actividad proteasa en alimentos para animales. |
EP2964760B1 (en) | 2013-03-08 | 2021-05-12 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
ES2676895T5 (es) | 2013-03-11 | 2022-04-27 | Danisco Us Inc | Variantes combinatorias de alfa-amilasa |
EA035489B1 (ru) | 2013-03-15 | 2020-06-24 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Применение термофильных нуклеаз для разрушения нуклеиновых кислот в клетках-хозяевах |
WO2014145768A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Bp Corporation North America Inc. | Use of non-fungal 5' utrs in filamentous fungi |
CN105073985A (zh) | 2013-03-21 | 2015-11-18 | 诺维信公司 | 具有磷脂酶a活性的多肽与对其进行编码的多核苷酸 |
US9631164B2 (en) | 2013-03-21 | 2017-04-25 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
US20160060660A1 (en) | 2013-04-05 | 2016-03-03 | Université Du Luxembourg | Biotechnological production of itaconic acid |
GB201306536D0 (en) | 2013-04-10 | 2013-05-22 | Gt Biolog Ltd | Polypeptide and immune modulation |
US10131864B2 (en) | 2013-04-18 | 2018-11-20 | Novozyme A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
ES2835313T3 (es) | 2013-04-30 | 2021-06-22 | Novozymes As | Variantes de glucoamilasa y polinucleótidos que las codifican |
WO2014177541A2 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
CA2910239A1 (en) | 2013-05-10 | 2014-11-13 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
MY192746A (en) | 2013-05-14 | 2022-09-06 | Novozymes As | Detergent compositions |
CN105209613A (zh) | 2013-05-17 | 2015-12-30 | 诺维信公司 | 具有α淀粉酶活性的多肽 |
WO2014194054A1 (en) | 2013-05-29 | 2014-12-04 | Danisco Us Inc. | Novel metalloproteases |
EP3004314B1 (en) | 2013-05-29 | 2018-06-20 | Danisco US Inc. | Novel metalloproteases |
JP2016526880A (ja) | 2013-05-29 | 2016-09-08 | ダニスコ・ユーエス・インク | 新規メタロプロテアーゼ |
JP6367930B2 (ja) | 2013-05-29 | 2018-08-01 | ダニスコ・ユーエス・インク | 新規メタロプロテアーゼ |
EP3004315A2 (en) | 2013-06-06 | 2016-04-13 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
WO2014200657A1 (en) | 2013-06-13 | 2014-12-18 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylase from streptomyces xiamenensis |
WO2014200658A1 (en) | 2013-06-13 | 2014-12-18 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylase from promicromonospora vindobonensis |
WO2014200656A1 (en) | 2013-06-13 | 2014-12-18 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylase from streptomyces umbrinus |
WO2014204596A1 (en) | 2013-06-17 | 2014-12-24 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylase from bacillaceae family member |
WO2014202624A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202622A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202620A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202621A1 (en) | 2013-06-20 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Carbohydrate degrading polypeptide and uses thereof |
WO2015000969A2 (de) | 2013-07-03 | 2015-01-08 | Basf Se | Verwendung einer gelförmigen polymerzusammensetzung, erhältlich durch polymerisation eines säuregruppenhaltigen monomers in gegenwart einer polyetherverbindung in formulierungen für die maschinelle geschirrreinigung |
US20160152925A1 (en) | 2013-07-04 | 2016-06-02 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Anti-Redeposition Effect and Polynucleotides Encoding Same |
CN105339492A (zh) | 2013-07-09 | 2016-02-17 | 诺维信公司 | 具有脂肪酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 |
WO2015007639A1 (en) | 2013-07-17 | 2015-01-22 | Novozymes A/S | Pullulanase chimeras and polynucleotides encoding same |
US11981942B2 (en) | 2013-07-23 | 2024-05-14 | International N&H Denmark Aps | Xylanases for solubilizing arabinoxylan-containing material |
US10548953B2 (en) | 2013-08-14 | 2020-02-04 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof |
WO2015022429A1 (en) | 2013-08-15 | 2015-02-19 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-1,3-galactanase activity and polynucleotides encoding same |
JP6678108B2 (ja) | 2013-09-12 | 2020-04-08 | ダニスコ・ユーエス・インク | Lg12−系統群プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 |
WO2015050723A1 (en) | 2013-10-03 | 2015-04-09 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylases from exiguobacterium, and methods of use, thereof |
WO2015050724A1 (en) | 2013-10-03 | 2015-04-09 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylases from a subset of exiguobacterium, and methods of use, thereof |
WO2015059133A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-30 | Novozymes A/S | Cellobiose dehydrogenase variants and polynucleotides encoding same |
SG11201601344PA (en) | 2013-10-25 | 2016-05-30 | Novozymes As | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
CN105722989B (zh) | 2013-10-28 | 2020-12-18 | 丹尼斯科美国公司 | 发酵中的海藻糖酶 |
WO2015066667A1 (en) | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Danisco Us Inc. | Proteases in wheat processing |
WO2015066669A1 (en) | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Danisco Us Inc. | Proteases in corn processing |
WO2015077126A1 (en) | 2013-11-20 | 2015-05-28 | Danisco Us Inc. | Variant alpha-amylases having reduced susceptibility to protease cleavage, and methods of use, thereof |
WO2015081139A1 (en) | 2013-11-26 | 2015-06-04 | Novozymes A/S | Enzyme compositions and uses thereof |
EP2876156A1 (en) | 2013-11-26 | 2015-05-27 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | New enzymes and method for preparing hydroxylated L-lysine or L-ornithine and analogs thereof |
CN105793418A (zh) | 2013-11-29 | 2016-07-20 | 诺维信公司 | 过氧合酶变体 |
MX370305B (es) | 2013-12-02 | 2019-12-09 | Dsm Ip Assets Bv | Proteína estructurante de hielo. |
CN105829530A (zh) | 2013-12-04 | 2016-08-03 | 丹尼斯科美国公司 | 包含β-葡萄糖苷酶多肽的组合物及其使用方法 |
US9951299B2 (en) | 2013-12-11 | 2018-04-24 | Novozymes A/S | Cutinase variants and polynucleotides encoding same |
DK3080262T3 (da) | 2013-12-13 | 2019-05-06 | Danisco Us Inc | Serinproteaser af bacillus-arter |
EP3910057A1 (en) | 2013-12-13 | 2021-11-17 | Danisco US Inc. | Serine proteases of the bacillus gibsonii-clade |
EP2886656A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-24 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | New enzyme and method for preparing 4-hydroxyl benzyl alcohol and derivatives thereof |
EP3083936B1 (en) | 2013-12-19 | 2018-07-04 | Danisco US Inc. | Use of hydrophobins to increase gas transfer in aerobic fermentation processes |
WO2015094809A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Danisco Us Inc. | Chimeric fungal alpha-amylases comprising carbohydrate binding module and the use thereof |
WO2015094714A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Danisco Us Inc. | Proteases in grain processing |
US10030239B2 (en) | 2013-12-20 | 2018-07-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
HUE056192T2 (hu) | 2014-01-22 | 2022-01-28 | Novozymes As | Pullulanázvariánsok és azokat kódoló polinukleotidok |
US10208297B2 (en) | 2014-01-22 | 2019-02-19 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same for cleaning |
GB201401648D0 (en) | 2014-01-31 | 2014-03-19 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Protein |
BR112016017349A2 (pt) | 2014-01-31 | 2017-10-17 | Danisco Us Inc | métodos para melhorar os subprodutos de processos de fermentação usando xilanase |
WO2015123063A1 (en) | 2014-02-13 | 2015-08-20 | Danisco Us Inc. | Strategy for sucrose reduction and generation of insoluble fiber in juices |
WO2015134729A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Novozymes A/S | Compositions and methods for improving properties of non-cellulosic textile materials with xyloglucan endotransglycosylase |
WO2015134737A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Novozymes A/S | Compositions and methods for improving properties of cellulosic textile materials with xyloglucan endotransglycosylase |
MX2016011413A (es) | 2014-03-05 | 2017-02-28 | Novozymes As | Formulaciones que comprenden xiloglucano polimérico como portador para agentes agronómicamente beneficiosos. |
WO2015134773A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Novozymes A/S | Compositions and methods for functionalizing and linking materials |
US10123535B2 (en) | 2014-03-05 | 2018-11-13 | Novozymes A/S | Compositions and methods for improving post-harvest properties of agricultural crops |
EP3117001B1 (en) | 2014-03-12 | 2019-02-20 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
CN106170546A (zh) | 2014-03-21 | 2016-11-30 | 丹尼斯科美国公司 | 芽孢杆菌属的丝氨酸蛋白酶 |
EP3126479A1 (en) | 2014-04-01 | 2017-02-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha amylase activity |
WO2015157656A1 (en) | 2014-04-10 | 2015-10-15 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
US9901706B2 (en) | 2014-04-11 | 2018-02-27 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Catheters and catheter shafts |
DK3129457T3 (en) | 2014-04-11 | 2018-09-17 | Novozymes As | detergent |
US10030215B2 (en) | 2014-04-15 | 2018-07-24 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
AR100606A1 (es) | 2014-05-27 | 2016-10-19 | Novozymes As | Variantes de lipasas y polinucleótidos que las codifican |
EP3878957A1 (en) | 2014-05-27 | 2021-09-15 | Novozymes A/S | Methods for producing lipases |
WO2015183710A1 (en) | 2014-05-30 | 2015-12-03 | Novozymes A/S | Variants of gh family 11 xylanase and polynucleotides encoding same |
CN115975994A (zh) | 2014-06-06 | 2023-04-18 | 诺维信公司 | 酶组合物及其用途 |
US10370682B2 (en) | 2014-06-25 | 2019-08-06 | Novozymes A/S | Xylanase variants and polynucleotides encoding same |
EP3183339A1 (en) | 2014-08-20 | 2017-06-28 | Novozymes A/S | Xyloglucan endotransglycosylase variants and polynucleotides encoding same |
BR112017004251A2 (pt) | 2014-09-05 | 2017-12-12 | Novozymes As | variantes de módulos de ligação a carboidrato e polinucleotídeos que os codificam |
WO2016054194A1 (en) | 2014-09-30 | 2016-04-07 | 1/1Danisco Us Inc | Compositions comprising beta-mannanase and methods of use |
EP3201330A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-08-09 | Danisco US Inc. | Compositions comprising beta mannanase and methods of use |
EP3201331A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-08-09 | Danisco US Inc. | Compositions comprising beta mannanase and methods of use |
EP3201333A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-08-09 | Danisco US Inc. | Compositions comprising beta-mannanase and methods of use |
EP3201332A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-08-09 | Danisco US Inc. | Compositions comprising beta-mannanase and methods of use |
US20170233710A1 (en) | 2014-10-17 | 2017-08-17 | Danisco Us Inc. | Serine proteases of bacillus species |
EP3209788B1 (en) | 2014-10-23 | 2019-06-05 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
CN107075534A (zh) | 2014-10-24 | 2017-08-18 | 丹尼斯科美国公司 | 使用三肽基肽酶制备醇的方法 |
CA2965423A1 (en) | 2014-10-24 | 2016-04-28 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Proline tolerant tripeptidyl peptidases and uses thereof |
EP3212662B1 (en) | 2014-10-27 | 2020-04-08 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
DK3212781T3 (da) | 2014-10-27 | 2019-12-16 | Danisco Us Inc | Serinproteaser |
CN107148472A (zh) | 2014-10-27 | 2017-09-08 | 丹尼斯科美国公司 | 芽孢杆菌属物种的丝氨酸蛋白酶 |
WO2016069541A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-05-06 | Danisco Us Inc | Compositions and methods related to beta-glucosidase |
EP3212782B1 (en) | 2014-10-27 | 2019-04-17 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
EP3212783B1 (en) | 2014-10-27 | 2024-06-26 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
US10287562B2 (en) | 2014-11-20 | 2019-05-14 | Novoszymes A/S | Alicyclobacillus variants and polynucleotides encoding same |
US10781428B2 (en) | 2014-12-02 | 2020-09-22 | Novozymes A/S | Laccase variants and polynucleotides encoding same |
EP4067485A3 (en) | 2014-12-05 | 2023-01-04 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
WO2016096996A1 (en) | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Novozymes A/S | Polypeptides having n-acetyl glucosamine oxidase activity |
US20170362621A1 (en) | 2014-12-18 | 2017-12-21 | Danisco Us Inc. | Engineered multifunctional enzymes and methods of use |
DK3234143T3 (da) | 2014-12-19 | 2023-09-04 | Novozymes As | Sammensætninger omfattende polypeptider med xylanaseaktivitet og polypeptider med arabinofuranosidaseaktivitet |
WO2016100910A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Novozymes A/S | Recombinant host cells for the production of 3-hydroxypropionic acid |
EP3400953A1 (en) | 2014-12-23 | 2018-11-14 | 4D Pharma Research Limited | Pirin polypeptide and immune modulation |
KR102523805B1 (ko) | 2014-12-23 | 2023-04-20 | 4디 파마 리서치 리미티드 | 면역 조정 |
US11396665B2 (en) | 2015-01-06 | 2022-07-26 | Dsm Ip Assets B.V. | CRISPR-CAS system for a filamentous fungal host cell |
WO2016126970A1 (en) | 2015-02-04 | 2016-08-11 | Abbvie Inc. | Pharmaceutical compositions and methods of use thereof to treat pancreatic enzyme insufficiency |
WO2016138167A2 (en) | 2015-02-24 | 2016-09-01 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
EP3262161B1 (en) | 2015-02-27 | 2021-06-30 | Novozymes A/S | Mutant host cells for the production of 3-hydroxypropionic acid |
DK3268482T3 (da) | 2015-03-09 | 2020-03-09 | Novozymes As | Fremgangsmåder til indføring af en flerhed af ekspressionskonstruktioner i en eukaryot celle |
EP3268471B1 (en) | 2015-03-12 | 2019-08-28 | Danisco US Inc. | Compositions and methods comprising lg12-clade protease variants |
EP3280817A2 (en) | 2015-04-07 | 2018-02-14 | Novozymes A/S | Methods for selecting enzymes having enhanced activity |
CN107864658A (zh) | 2015-04-07 | 2018-03-30 | 诺维信公司 | 用于选择具有脂肪酶活性的酶的方法 |
EP3872174B1 (en) | 2015-05-13 | 2023-03-01 | Danisco US Inc. | Aprl-clade protease variants and uses thereof |
US9920102B2 (en) | 2015-05-15 | 2018-03-20 | Albert Einstein College Of Medicine, Inc. | Fusion tags for protein expression |
CN107636151B (zh) | 2015-05-22 | 2023-04-04 | 杜邦营养生物科学有限公司 | 乙酰乳酸脱羧酶 |
CN116676293A (zh) | 2015-05-27 | 2023-09-01 | 国投生物科技投资有限公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
US20180160695A1 (en) | 2015-06-02 | 2018-06-14 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of ice structuring protein afp19 expressed in filamentous fungal strains for preparing food |
WO2016201040A1 (en) | 2015-06-09 | 2016-12-15 | Danisco Us Inc. | Water-triggered enzyme suspension |
DK3307427T3 (da) | 2015-06-09 | 2023-11-06 | Danisco Us Inc | Osmotisk sprængnings-kapsler |
WO2016201069A1 (en) | 2015-06-09 | 2016-12-15 | Danisco Us Inc | Low-density enzyme-containing particles |
MA41010B1 (fr) | 2015-06-15 | 2020-01-31 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
MA41060B1 (fr) | 2015-06-15 | 2019-11-29 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
DK3206700T3 (da) | 2015-06-15 | 2019-08-05 | 4D Pharma Res Ltd | Sammensætninger omfattende bakteriestammer |
PT3240554T (pt) | 2015-06-15 | 2019-11-04 | 4D Pharma Res Ltd | Blautia stercosis e wexlerae para uso no tratamento de doenças inflamatórias e autoimunes |
PT3307288T (pt) | 2015-06-15 | 2019-10-17 | 4D Pharma Res Ltd | Composições compreendendo estirpes bacterianas |
US10858637B2 (en) | 2015-06-16 | 2020-12-08 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
JP7015695B2 (ja) | 2015-06-17 | 2022-02-03 | ダニスコ・ユーエス・インク | バチルス・ギブソニイ(Bacillus gibsonii)クレードセリンプロテアーゼ |
WO2016205127A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products |
CA2987164C (en) | 2015-06-26 | 2023-09-19 | Novozymes A/S | Method for producing a coffee extract |
WO2016210395A1 (en) | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Aminopeptidases for protein hydrlyzates |
WO2016206621A1 (en) | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Novozymes A/S | Biofinishing system |
WO2016207373A1 (en) | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
CA3175255A1 (en) | 2015-07-01 | 2017-01-05 | Novozymes A/S | Methods of reducing odor |
MX2017016811A (es) | 2015-07-02 | 2018-04-24 | Novozymes As | Metodos para mejorar el rendimiento del animal. |
EP3317293A4 (en) | 2015-07-02 | 2019-03-20 | Novozymes A/S | ANIMAL FOOD COMPOSITIONS AND USES THEREOF |
EP3320089B1 (en) | 2015-07-06 | 2021-06-16 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
JP6709591B2 (ja) | 2015-07-16 | 2020-06-17 | 本田技研工業株式会社 | タンパク質生産用システム及びタンパク質の製造方法 |
WO2017010107A1 (en) * | 2015-07-16 | 2017-01-19 | Honda Motor Co., Ltd. | Base sequence for protein expression and method for producing protein using same |
JP6709590B2 (ja) * | 2015-07-16 | 2020-06-17 | 本田技研工業株式会社 | タンパク質生産用システム及びタンパク質の製造方法 |
BR112018001041A2 (pt) | 2015-07-24 | 2018-09-11 | Novozymes Inc | polipeptídeo isolado, composição, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, célula hospedeira recombinante, métodos para produção de um polipeptídeo e para produção de uma proteína, planta, parte de planta ou célula de planta transgênica, e, processos para degradação de um material celulósico ou hemicelulósico, para produção de um produto de fermentação e para fermentação de um material celulósico ou hemicelulósico. |
WO2017019491A1 (en) | 2015-07-24 | 2017-02-02 | Novozymes Inc. | Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
EP3331608A4 (en) | 2015-08-03 | 2019-05-01 | Bioverativ Therapeutics Inc. | FUSION XI FUSION PROTEINS AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME |
EP3341475A1 (en) | 2015-08-24 | 2018-07-04 | Novozymes A/S | Beta-alanine aminotransferases for the production of 3-hydroxypropionic acid |
KR20180043365A (ko) | 2015-09-02 | 2018-04-27 | 듀폰 뉴트리션 바이오사이언시즈 에이피에스 | 글리코시드 하이돌라제 및 동물에서의 병원성 감염의 예방 및/또는 치료에서 이의 용도 |
EP3344761A1 (en) | 2015-09-04 | 2018-07-11 | Novozymes A/S | Methods of inhibiting aa9 lytic polysaccharide monooxygenase catalyzed inactivation of enzyme compositions |
CA2991114A1 (en) | 2015-09-17 | 2017-03-23 | Novozymes A/S | Polypeptides having xanthan degrading activity and polynucleotides encoding same |
CN108350044B (zh) | 2015-09-22 | 2022-05-24 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
EP3359658A2 (en) | 2015-10-07 | 2018-08-15 | Novozymes A/S | Polypeptides |
WO2017064269A1 (en) | 2015-10-14 | 2017-04-20 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
US20180171318A1 (en) | 2015-10-14 | 2018-06-21 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Protease Activity and Polynucleotides Encoding Same |
WO2017070219A1 (en) | 2015-10-20 | 2017-04-27 | Novozymes A/S | Lytic polysaccharide monooxygenase (lpmo) variants and polynucleotides encoding same |
EP3368674A1 (en) | 2015-10-30 | 2018-09-05 | Novozymes A/S | Polynucleotide constructs for in vitro and in vivo expression |
EP4141113A1 (en) | 2015-11-05 | 2023-03-01 | Danisco US Inc | Paenibacillus sp. mannanases |
US20180320158A1 (en) | 2015-11-05 | 2018-11-08 | Danisco Us Inc. | Paenibacillus and bacillus spp. mannanases |
KR101914245B1 (ko) | 2015-11-20 | 2018-11-02 | 4디 파마 리서치 리미티드 | 박테리아성 균주를 함유한 조성물 |
GB201520497D0 (en) | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
GB201520638D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
GB201520631D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
CN108473974A (zh) | 2015-11-24 | 2018-08-31 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸 |
CN108431217B (zh) | 2015-12-01 | 2022-06-21 | 诺维信公司 | 用于产生脂肪酶的方法 |
JP2019500338A (ja) | 2015-12-02 | 2019-01-10 | アンスティテュー・ナシオナル・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・アグロノミクInstitut National De La Recherche Agronomique | 抗菌活性を有する新規ペプチド及びペプチド中におけるl型残基をd型アミノ酸に変換することができる新規酵素 |
US11208649B2 (en) | 2015-12-07 | 2021-12-28 | Zymergen Inc. | HTP genomic engineering platform |
JP6605042B2 (ja) | 2015-12-07 | 2019-11-13 | ザイマージェン インコーポレイテッド | Htpゲノム操作プラットフォームによる微生物株の改良 |
CA3007635A1 (en) | 2015-12-07 | 2017-06-15 | Zymergen Inc. | Promoters from corynebacterium glutamicum |
US9988624B2 (en) | 2015-12-07 | 2018-06-05 | Zymergen Inc. | Microbial strain improvement by a HTP genomic engineering platform |
US20180362946A1 (en) | 2015-12-18 | 2018-12-20 | Danisco Us Inc. | Polypeptides with endoglucanase activity and uses thereof |
JP2019505204A (ja) | 2015-12-30 | 2019-02-28 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 酵素変異体およびこれをコードするポリヌクレオチド |
US20210171927A1 (en) | 2016-01-29 | 2021-06-10 | Novozymes A/S | Beta-glucanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2017140807A1 (en) | 2016-02-16 | 2017-08-24 | Monaghan Mushrooms Group | Fungal polypeptides having lysozyme activity |
US20190048413A1 (en) | 2016-02-23 | 2019-02-14 | Novozymes A/S | Improved next-generation sequencing |
CN109415712A (zh) | 2016-03-02 | 2019-03-01 | 诺维信公司 | 纤维二糖水解酶变体和编码它们的多核苷酸 |
MA42560B1 (fr) | 2016-03-04 | 2019-07-31 | 4D Pharma Plc | Compositions comprenant des souches bactériennes de blautia pour le traitement de l'hypersensibilité viscérale |
GB201612191D0 (en) | 2016-07-13 | 2016-08-24 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
US11965189B2 (en) | 2016-03-24 | 2024-04-23 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
WO2017173324A2 (en) | 2016-04-01 | 2017-10-05 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylases, compositions & methods |
WO2017173190A2 (en) | 2016-04-01 | 2017-10-05 | Danisco Us Inc. | Alpha-amylases, compositions & methods |
CN109312333A (zh) | 2016-04-07 | 2019-02-05 | 诺维信公司 | 选择具有蛋白酶活性的酶的方法 |
US10550398B2 (en) | 2016-04-19 | 2020-02-04 | Novozymes A/S | RlmA-inactivated filamentous fungal host cell |
EP3693449A1 (en) | 2016-04-29 | 2020-08-12 | Novozymes A/S | Detergent compositions and uses thereof |
CA3022875A1 (en) | 2016-05-03 | 2017-11-09 | Danisco Us Inc | Protease variants and uses thereof |
WO2017191160A1 (en) | 2016-05-03 | 2017-11-09 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding the same |
EP3845642B1 (en) | 2016-05-05 | 2023-08-09 | Danisco US Inc. | Protease variants and uses thereof |
EP3455352A1 (en) | 2016-05-09 | 2019-03-20 | Novozymes A/S | Variant polypeptides with improved performance and use of the same |
EP3246401A1 (en) | 2016-05-20 | 2017-11-22 | Commissariat À L'Énergie Atomique Et Aux Énergies Alternatives | New fatty acid decarboxylase and its uses |
WO2017202979A1 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-galactosidase activity and polynucleotides encoding same |
BR112018073875A2 (pt) | 2016-05-24 | 2019-02-26 | Novozymes As | polipeptídeo isolado, composição, grânulo, aditivo de ração animal, formulação líquida, ração animal, métodos para liberar galactose de material à base de planta, para melhorar um ou mais parâmetros de desempenho de um animal e o valor nutricional de uma ração animal, para preparar uma ração animal e para produzir o polipeptídeo, uso, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, e, célula hospedeira recombinante. |
EP3464580A1 (en) | 2016-05-24 | 2019-04-10 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having galactanase activity and polypeptides having beta-galactosidase activity |
US10927359B2 (en) | 2016-05-24 | 2021-02-23 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having galactanase activity and polypeptides having beta-galactosidase activity |
WO2017205535A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
JP2019523645A (ja) | 2016-05-31 | 2019-08-29 | ダニスコ・ユーエス・インク | プロテアーゼ変異体およびその使用 |
WO2017211803A1 (en) | 2016-06-07 | 2017-12-14 | Novozymes A/S | Co-expression of heterologous polypeptides to increase yield |
JP7152319B2 (ja) | 2016-06-17 | 2022-10-12 | ダニスコ・ユーエス・インク | プロテアーゼ変異体およびその使用 |
US10421951B2 (en) | 2016-06-22 | 2019-09-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Gene construct encoding mutant thioesterase, mutant thioesterase encoded thereby, transformed host cell containing the gene construct, and method of using them to produce medium-chain fatty acids |
US20190330612A1 (en) | 2016-06-30 | 2019-10-31 | Danisco Us Inc | Aspartic proteases |
EP3478845A4 (en) | 2016-06-30 | 2019-07-31 | Zymergen, Inc. | METHODS OF PRODUCING A GLUCOSE PERMEASE BANK AND USES THEREOF |
US10544390B2 (en) | 2016-06-30 | 2020-01-28 | Zymergen Inc. | Methods for generating a bacterial hemoglobin library and uses thereof |
ES2868781T3 (es) | 2016-06-30 | 2021-10-21 | Fornia Biosolutions Inc | Nuevas fitasas y usos de las mismas |
WO2018002261A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | Novozymes A/S | Detergent compositions |
MX2019000133A (es) | 2016-07-05 | 2019-04-22 | Novozymes As | Variantes de pectato liasa y polinucleotidos que las codifican. |
US20190185847A1 (en) | 2016-07-06 | 2019-06-20 | Novozymes A/S | Improving a Microorganism by CRISPR-Inhibition |
US20190256884A1 (en) | 2016-07-07 | 2019-08-22 | Novozymes A/S | Methods of producing a fermentation product in trichoderma |
BR112019000125A2 (pt) | 2016-07-08 | 2019-07-09 | Novozymes As | grânulo, polipeptídeo isolado, composição, aditivo de ração animal, ração animal peletizada, métodos de aprimoramento de um ou mais parâmetros de desempenho de um animal, de preparação de uma ração animal, para aprimorar o valor nutricional de uma ração animal, de solubilização de xilana a partir do material à base de planta e de produção do polipeptídeo, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, e, uso do grânulo |
AR108861A1 (es) | 2016-07-08 | 2018-10-03 | Novozymes As | Variantes de xilanasa y polinucleótidos que las codifican |
WO2018007573A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Novozymes A/S | Detergent compositions with galactanase |
TW201821093A (zh) | 2016-07-13 | 2018-06-16 | 英商4D製藥有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
WO2018011276A1 (en) | 2016-07-13 | 2018-01-18 | The Procter & Gamble Company | Bacillus cibi dnase variants and uses thereof |
US11326152B2 (en) | 2016-07-18 | 2022-05-10 | Novozymes A/S | Lipase variants, polynucleotides encoding same and the use thereof |
CN109477083B (zh) | 2016-07-20 | 2023-06-06 | 诺维信公司 | 热稳定性宏基因组碳酸酐酶及其用途 |
US11891645B2 (en) | 2016-07-21 | 2024-02-06 | Novozymes A/S | Serine protease variants and polynucleotides encoding same |
CN109642225A (zh) | 2016-07-21 | 2019-04-16 | 诺维信公司 | 丝氨酸蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 |
DK3487873T3 (da) | 2016-07-22 | 2021-05-25 | Novozymes As | Forbedret filamentøs svampevært |
WO2018015444A1 (en) | 2016-07-22 | 2018-01-25 | Novozymes A/S | Crispr-cas9 genome editing with multiple guide rnas in filamentous fungi |
WO2018026868A1 (en) | 2016-08-01 | 2018-02-08 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2018037061A1 (en) | 2016-08-24 | 2018-03-01 | Novozymes A/S | Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same |
EP3504313A1 (en) | 2016-08-24 | 2019-07-03 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising gh9 endoglucanase variants i |
WO2018037064A1 (en) | 2016-08-24 | 2018-03-01 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Detergent compositions comprising xanthan lyase variants i |
EP3504330A1 (en) | 2016-08-24 | 2019-07-03 | Novozymes A/S | Gh9 endoglucanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2018050666A1 (en) | 2016-09-15 | 2018-03-22 | Novozymes A/S | Genomic integration of dna fragments in fungal host cells |
BR112019004988A2 (pt) | 2016-09-16 | 2019-06-04 | Dupont Nutrition Biosci Aps | variantes de decarboxilase de acetolactato que tem atividade específica aprimorada |
CA3037875A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Use of low ph active alpha-1,4/1,6-glycoside hydrolases as a feed additive for ruminants to enhance starch digestion |
EP3532592A1 (en) | 2016-10-25 | 2019-09-04 | Novozymes A/S | Detergent compositions |
WO2018085524A2 (en) | 2016-11-07 | 2018-05-11 | Danisco Us Inc | Laundry detergent composition |
EP3541954A1 (en) | 2016-11-21 | 2019-09-25 | Novozymes A/S | Yeast cell extract assisted construction of dna molecules |
GB201621123D0 (en) | 2016-12-12 | 2017-01-25 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
CN110312794B (zh) | 2016-12-21 | 2024-04-12 | 丹尼斯科美国公司 | 吉氏芽孢杆菌进化枝丝氨酸蛋白酶 |
WO2018118815A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Methods of using thermostable serine proteases |
CN110312795A (zh) | 2016-12-21 | 2019-10-08 | 丹尼斯科美国公司 | 蛋白酶变体及其用途 |
MX2019007902A (es) | 2017-01-04 | 2019-09-09 | Novozymes As | Composiciones para el tratamiento de seres humanos. |
CN106754838B (zh) * | 2017-01-20 | 2020-06-09 | 上海绿农饲料科技有限公司 | 一种提高黑曲霉产蛋白酶能力的方法 |
EP4276179A3 (en) | 2017-02-01 | 2024-05-22 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
CA3051426C (en) | 2017-02-01 | 2023-10-17 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising amylase variants |
BR112019017271A2 (pt) | 2017-02-20 | 2020-04-14 | Novozymes As | enzima lipolítica para uso em panificação |
BR112019018381A2 (pt) | 2017-03-06 | 2020-04-07 | Dupont Nutrition Biosci Aps | fucosidases fúngicas e seu uso na prevenção e/ou no tratamento de uma infecção patogênica em um animal |
WO2018166943A1 (en) | 2017-03-13 | 2018-09-20 | Dsm Ip Assets B.V. | Zinc binuclear cluster transcriptional regulator-deficient strain |
EP3583210B1 (en) | 2017-03-15 | 2021-07-07 | Danisco US Inc. | Trypsin-like serine proteases and uses thereof |
US20200015499A1 (en) | 2017-03-15 | 2020-01-16 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Trypsin-like serine proteases and uses thereof |
EP3596211B1 (en) | 2017-03-15 | 2021-06-02 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Methods of using an archaeal serine protease |
WO2018167153A1 (en) | 2017-03-17 | 2018-09-20 | Novozymes A/S | Improved filamentous fungal host cell |
WO2018172155A1 (en) | 2017-03-23 | 2018-09-27 | Novozymes A/S | Improved filamentous fungal host cells |
CN107353327A (zh) | 2017-03-30 | 2017-11-17 | 南京百斯杰生物工程有限公司 | 植酸酶在黑曲霉中表达 |
US11208639B2 (en) | 2017-03-31 | 2021-12-28 | Novozymes A/S | Polypeptides having DNase activity |
WO2018178061A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Novozymes A/S | Polypeptides having rnase activity |
EP3601549A1 (en) | 2017-03-31 | 2020-02-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having dnase activity |
EP3606936B1 (en) | 2017-04-03 | 2021-10-20 | Novozymes A/S | Recovery process |
WO2018185181A1 (en) | 2017-04-04 | 2018-10-11 | Novozymes A/S | Glycosyl hydrolases |
EP3607039A1 (en) | 2017-04-04 | 2020-02-12 | Novozymes A/S | Polypeptides |
WO2018185152A1 (en) | 2017-04-04 | 2018-10-11 | Novozymes A/S | Polypeptide compositions and uses thereof |
WO2018202846A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Novozymes A/S | Compositions comprising lipase and sulfite |
WO2018206300A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
EP3401385A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-14 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising polypeptide comprising carbohydrate-binding domain |
CA3058095A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2018206535A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Carbohydrate-binding domain and polynucleotides encoding the same |
TW201907928A (zh) | 2017-05-22 | 2019-03-01 | 英商4D製藥研究有限公司 | 包含細菌品系之組成物 |
MA41708A (fr) | 2017-05-24 | 2020-04-08 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
WO2018226810A1 (en) | 2017-06-06 | 2018-12-13 | Zymergen Inc. | High throughput transposon mutagenesis |
KR20200015606A (ko) | 2017-06-06 | 2020-02-12 | 지머젠 인코포레이티드 | 사카로폴리스포라 스피노사를 개량하기 위한 고 처리량(htp) 게놈 공학 플랫폼 |
KR20200026878A (ko) | 2017-06-06 | 2020-03-11 | 지머젠 인코포레이티드 | 균류 균주를 개량하기 위한 htp 게놈 공학 플랫폼 |
MA49425A (fr) | 2017-06-14 | 2020-04-22 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
ES2841902T3 (es) | 2017-06-14 | 2021-07-12 | 4D Pharma Res Ltd | Composiciones que comprenden cepas bacterianas |
US11499144B2 (en) | 2017-06-22 | 2022-11-15 | Novozymes A/S | Xylanase variants and polynucleotides encoding same |
EP4015524A1 (en) | 2017-06-28 | 2022-06-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity and polynucleotides encoding same |
JP2020527339A (ja) | 2017-06-30 | 2020-09-10 | ダニスコ・ユーエス・インク | 低凝集の酵素含有粒子 |
JP7391827B2 (ja) | 2017-07-24 | 2023-12-05 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 湿式製粉におけるgh5及びgh30 |
US10081800B1 (en) | 2017-08-03 | 2018-09-25 | Fornia Biosolutions, Inc. | Lactonase enzymes and methods of using same |
CN111094562A (zh) | 2017-08-08 | 2020-05-01 | 诺维信公司 | 具有海藻糖酶活性的多肽及其在产生发酵产物的方法中的用途 |
US20210130744A1 (en) | 2017-08-24 | 2021-05-06 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Detergent composition comprising xanthan lyase variants ii |
EP3673056A1 (en) | 2017-08-24 | 2020-07-01 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent compositions comprising gh9 endoglucanase variants ii |
CA3071078A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-28 | Novozymes A/S | Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same |
CN111278971A (zh) | 2017-08-24 | 2020-06-12 | 诺维信公司 | Gh9内切葡聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸 |
WO2019046703A1 (en) | 2017-09-01 | 2019-03-07 | Novozymes A/S | METHODS OF ENHANCING GENOME EDITION IN FUNGI |
US20200196633A1 (en) | 2017-09-01 | 2020-06-25 | Novozymes A/S | Animal Feed Additives Comprising Polypeptide Having Protease Activity and Uses Thereof |
AR112955A1 (es) | 2017-09-01 | 2020-01-08 | Novozymes As | Aditivos de alimento animal que comprenden polipéptidos que tienen actividad proteasa y usos de los mismos |
EP3676362A1 (en) | 2017-09-18 | 2020-07-08 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Riboflavinase enzymes and their use to prevent off flavor in brewing |
US11286443B2 (en) | 2017-09-27 | 2022-03-29 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising lipases |
CA3073362A1 (en) | 2017-09-27 | 2019-04-04 | Novozymes A/S | Lipase variants and microcapsule compositions comprising such lipase variants |
US11732221B2 (en) | 2017-10-02 | 2023-08-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having mannanase activity and polynucleotides encoding same |
US11746310B2 (en) | 2017-10-02 | 2023-09-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having mannanase activity and polynucleotides encoding same |
JPWO2019069977A1 (ja) * | 2017-10-03 | 2020-12-24 | キッコーマン株式会社 | アルカリホスファターゼの製造方法及びそれを用いて得られるアルカリホスファターゼ、並びにその製造のためのベクター及び形質転換体 |
US10781408B2 (en) | 2017-10-27 | 2020-09-22 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising polypeptide variants |
US11441136B2 (en) | 2017-10-27 | 2022-09-13 | Novozymes A/S | DNase variants |
DE102017125558A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine i enthalten |
DE102017125560A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine iii enthalten |
DE102017125559A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine ii enthalten |
EP3707252A1 (en) | 2017-11-10 | 2020-09-16 | Novozymes A/S | Temperature-sensitive cas9 protein |
CN111989400B (zh) | 2017-11-14 | 2024-05-24 | 丹尼斯科美国公司 | α-淀粉酶、组合物和方法 |
WO2019096903A1 (en) | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Novozymes A/S | New galactanases (ec 3.2.1.89) for use in soy processing |
CN111373039A (zh) | 2017-11-29 | 2020-07-03 | 丹尼斯科美国公司 | 具有改善的稳定性的枯草杆菌蛋白酶变体 |
WO2019110462A1 (en) | 2017-12-04 | 2019-06-13 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
AU2018387151B2 (en) | 2017-12-19 | 2024-05-02 | International N&H Denmark Aps | Improved enzymatic modification of phospholipids in food |
BR112020009981A2 (pt) | 2017-12-20 | 2020-11-10 | Société des Produits Nestlé S.A. | processo para a preparação de partículas de "pickering" formadoras de emulsão por derivatização de fibras dietárias ricas em celulose com enzimas e emulsões preparadas |
US20210222148A1 (en) | 2017-12-21 | 2021-07-22 | Danisco Us Inc. | Enzyme-containing, hot-melt granules comprising a thermotolerant desiccant |
US20210017544A1 (en) | 2017-12-22 | 2021-01-21 | Novozymes A/S | Counter-Selection by Inhibition of Conditionally Essential Genes |
CN111868239A (zh) | 2018-02-08 | 2020-10-30 | 诺维信公司 | 脂肪酶、脂肪酶变体及其组合物 |
BR112020016068A2 (pt) | 2018-02-08 | 2020-12-08 | Danisco Us Inc. | Partículas cera termicamente resistente matriz para encapsulamento de enzima |
EP3749760A1 (en) | 2018-02-08 | 2020-12-16 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions thereof |
WO2019165063A1 (en) | 2018-02-23 | 2019-08-29 | Novozymes A/S | Long non-coding rna-expression in fungal hosts |
EP3530744A1 (en) | 2018-02-23 | 2019-08-28 | University of Limerick | A polypeptide having xylanase and/or cellulase activity |
WO2019185535A1 (en) | 2018-03-26 | 2019-10-03 | Novozymes A/S | Fungal chaperone proteins |
US11535837B2 (en) | 2018-03-29 | 2022-12-27 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2019197318A1 (en) | 2018-04-09 | 2019-10-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
US11661592B2 (en) | 2018-04-19 | 2023-05-30 | Novozymes A/S | Stabilized endoglucanase variants |
US11566239B2 (en) | 2018-04-19 | 2023-01-31 | Novozymes A/S | Stabilized cellulase variants |
US11028401B2 (en) | 2018-06-06 | 2021-06-08 | Zymergen Inc. | Manipulation of genes involved in signal transduction to control fungal morphology during fermentation and production |
US20210214703A1 (en) | 2018-06-19 | 2021-07-15 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants |
US20210363470A1 (en) | 2018-06-19 | 2021-11-25 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants |
WO2020002575A1 (en) | 2018-06-28 | 2020-01-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having pectin lyase activity and polynucleotides encoding same |
CN112654703A (zh) | 2018-07-06 | 2021-04-13 | 杜邦营养生物科学有限公司 | 用于基于谷类的动物饲料的含木聚糖酶饲料添加剂 |
EP3821244A1 (en) | 2018-07-13 | 2021-05-19 | Varct Diagnostics ApS | Isolation of circulating cells of fetal origin using recombinant malaria protein var2csa |
EP3830258A1 (en) | 2018-07-31 | 2021-06-09 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Proline specific endopeptidases |
WO2020025357A1 (en) | 2018-08-02 | 2020-02-06 | Novozymes A/S | Preparation of combinatorial libraries of dna constructs using introns |
EP3844255A1 (en) | 2018-08-30 | 2021-07-07 | Danisco US Inc. | Enzyme-containing granules |
US11473076B2 (en) | 2018-08-31 | 2022-10-18 | Novozymes A/S | Animal feed additives and compositions comprising an S8 serine protease |
CA3108944A1 (en) | 2018-09-11 | 2020-03-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
MX2021002870A (es) | 2018-09-11 | 2021-09-08 | Dsm Ip Assets Bv | Composicion de alimento animal y uso de la misma. |
MX2021002787A (es) | 2018-09-11 | 2021-05-31 | Dsm Ip Assets Bv | Composiciones de alimento animal y usos de las mismas. |
US20210337828A1 (en) | 2018-09-11 | 2021-11-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
EP3849338A2 (en) | 2018-09-11 | 2021-07-21 | DSM IP Assets B.V. | Animal feed composition comprising muramidase and use thereof |
US20220033737A1 (en) | 2018-09-27 | 2022-02-03 | Danisco Us Inc | Compositions for medical instrument cleaning |
WO2020070199A1 (en) | 2018-10-03 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-mannan degrading activity and polynucleotides encoding same |
US11434475B2 (en) | 2018-10-09 | 2022-09-06 | Novozymes A/S | Modified filamentous fungal host cell for encoding a secreted polypetide of interest |
US20220010305A1 (en) | 2018-10-31 | 2022-01-13 | Novozymes A/S | Genome Editing by Guided Endonuclease and Single-stranded Oligonucleotide |
WO2020099491A1 (en) | 2018-11-14 | 2020-05-22 | Novozymes A/S | Oral care composition comprising a polypeptide having dnase activity |
JP2022513085A (ja) | 2018-11-20 | 2022-02-07 | デュポン ニュートリション バイオサイエンシス エーピーエス | 改変ロバスト高Tm-フィターゼ分岐群ポリペプチド及びその断片 |
US20220025423A1 (en) | 2018-11-28 | 2022-01-27 | Novozymes A/S | Modified Filamentous Fungal Host Cells |
CN113166211A (zh) | 2018-11-28 | 2021-07-23 | 诺维信公司 | 改善的丝状真菌宿主细胞 |
WO2020112599A1 (en) | 2018-11-28 | 2020-06-04 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants having improved stability |
BR112021011384A2 (pt) | 2018-12-12 | 2022-05-17 | Novozymes As | Polipeptídeo isolado, composição de enzimas, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, método de produção de um polipeptídeo, planta, parte da planta ou célula da planta transgênica, e, processos para degradação de um material celulósico ou hemicelulósico, para produção de um produto de fermentação e de fermentação de um material celulósico ou hemicelulósico |
EP3894565A1 (en) | 2018-12-12 | 2021-10-20 | Novozymes A/S | Methods for increasing the productivity of a filamentous fungal cell in the production of a polypeptide |
CN113366103A (zh) | 2018-12-21 | 2021-09-07 | 诺维信公司 | 具有肽聚糖降解活性的多肽以及编码其的多核苷酸 |
US20220073898A1 (en) | 2018-12-21 | 2022-03-10 | Novozymes A/S | Tandem Protein Expression |
BR112021016727A2 (pt) | 2019-02-25 | 2021-11-03 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Hidrolisados de proteína com rendimento aumentado de aminoácido n-terminal |
WO2020173817A1 (en) | 2019-02-28 | 2020-09-03 | Novozymes A/S | Calcite binding proteins |
CN113490740A (zh) | 2019-03-18 | 2021-10-08 | 诺维信公司 | 适合用于液化中的具有普鲁兰酶活性的多肽 |
US10995325B2 (en) | 2019-03-21 | 2021-05-04 | Fornia Biosolutions, Inc. | Additional phytase variants and methods |
JP2020162549A (ja) | 2019-03-29 | 2020-10-08 | 味の素株式会社 | 制御装置、制御方法およびプログラムならびに有機化合物の製造方法 |
MX2021011981A (es) | 2019-04-03 | 2021-11-03 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de beta-glucanasa, polinucleotidos que los codifican y usos de los mismos en composiciones de limpieza y de detergente. |
EP3953462A1 (en) | 2019-04-10 | 2022-02-16 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
EP3953463A1 (en) | 2019-04-12 | 2022-02-16 | Novozymes A/S | Stabilized glycoside hydrolase variants |
EP3969576A1 (en) | 2019-05-15 | 2022-03-23 | Novozymes A/S | Temperature-sensitive rna-guided endonuclease |
WO2020242858A1 (en) | 2019-05-24 | 2020-12-03 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants and methods of use |
CN114174486A (zh) | 2019-06-06 | 2022-03-11 | 丹尼斯科美国公司 | 用于清洁的方法和组合物 |
WO2020249706A1 (en) | 2019-06-14 | 2020-12-17 | Basf Se | Aqueous polymer dispersions suitable as opacifiers in liquid formulations |
CN114040972A (zh) | 2019-06-24 | 2022-02-11 | 宝洁公司 | 包含淀粉酶变体的清洁组合物 |
WO2020260223A1 (en) | 2019-06-24 | 2020-12-30 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
EP3990629A1 (en) | 2019-06-25 | 2022-05-04 | Novozymes A/S | Counter-selection by inhibition of conditionally essential genes |
EP3994255A1 (en) | 2019-07-02 | 2022-05-11 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions thereof |
EP4004211A1 (en) | 2019-07-25 | 2022-06-01 | Novozymes A/S | Filamentous fungal expression system |
EP4004187A1 (en) | 2019-07-26 | 2022-06-01 | Novozymes A/S | Modified filamentous fungal host cell |
EP4031661A1 (en) | 2019-09-16 | 2022-07-27 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2021064068A1 (en) | 2019-10-03 | 2021-04-08 | Novozymes A/S | Polypeptides comprising at least two carbohydrate binding domains |
EP4055170A1 (en) | 2019-11-04 | 2022-09-14 | DSM IP Assets B.V. | Low volume transfection |
US20230009832A1 (en) | 2019-11-20 | 2023-01-12 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Thermostable phytase variants |
EP4076002A1 (en) | 2019-12-19 | 2022-10-26 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Diet formulations |
KR20220116504A (ko) | 2019-12-19 | 2022-08-23 | 바스프 에스이 | 정밀 화학물의 제조에서 공시 수율, 탄소-전환-효율 및 탄소 기질 적응성의 증가 |
BR112022012105A2 (pt) | 2019-12-19 | 2022-12-13 | Novozymes As | Variantes de xilanase e polinucleotídeos codificando as mesmas |
US20230041211A1 (en) | 2019-12-20 | 2023-02-09 | Basf Se | Decreasing toxicity of terpenes and increasing the production potential in micro-organisms |
WO2021123307A2 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having proteolytic activity and use thereof |
US20230242960A1 (en) | 2020-01-24 | 2023-08-03 | Novozymes A/S | Mutants of a filamentous fungal cell having increased productivity in the production of a polypeptide |
EP4097226A1 (en) | 2020-01-31 | 2022-12-07 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
JP2023511739A (ja) | 2020-01-31 | 2023-03-22 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | マンナナーゼバリアント及びそれをコードするポリヌクレオチド |
US20230235367A1 (en) | 2020-02-10 | 2023-07-27 | Novozymes A/S | Process for producing ethanol from raw starch using alpha-amylase variants |
EP4103709A2 (en) | 2020-02-10 | 2022-12-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
EP4103703A2 (en) | 2020-02-10 | 2022-12-21 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
US20230220366A1 (en) | 2020-02-26 | 2023-07-13 | Novozymes A/S | Polypeptide Variants |
BR112022017034A2 (pt) | 2020-02-28 | 2022-12-13 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Composições de ração |
WO2021183622A1 (en) | 2020-03-12 | 2021-09-16 | Novozymes A/S | Crispr-aid using catalytically inactive rna-guided endonuclease |
EP3892708A1 (en) | 2020-04-06 | 2021-10-13 | Henkel AG & Co. KGaA | Cleaning compositions comprising dispersin variants |
JP2023520312A (ja) | 2020-04-08 | 2023-05-17 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 炭水化物結合モジュールバリアント |
WO2021211331A1 (en) | 2020-04-13 | 2021-10-21 | Abbott Point Of Care Inc. | METHODS, COMPLEXES AND KITS FOR DETECTING OR DETERMINING AN AMOUNT OF A ß-CORONAVIRUS ANTIBODY IN A SAMPLE |
WO2021214059A1 (en) | 2020-04-21 | 2021-10-28 | Novozymes A/S | Cleaning compositions comprising polypeptides having fructan degrading activity |
US20230183759A1 (en) | 2020-05-20 | 2023-06-15 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Cells and methods for producing methyl ketones |
US11479779B2 (en) | 2020-07-31 | 2022-10-25 | Zymergen Inc. | Systems and methods for high-throughput automated strain generation for non-sporulating fungi |
US20220043000A1 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | Abbott Laboratories | Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample |
CN116322625A (zh) | 2020-08-24 | 2023-06-23 | 诺维信公司 | 包含果聚糖酶的口腔护理组合物 |
JP2023538740A (ja) | 2020-08-25 | 2023-09-11 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | ファミリー44キシログルカナーゼの変異体 |
EP4204553A1 (en) | 2020-08-27 | 2023-07-05 | Danisco US Inc. | Enzymes and enzyme compositions for cleaning |
JP2023538773A (ja) | 2020-08-28 | 2023-09-11 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 改善された溶解性を有するプロテアーゼバリアント |
EP4213632A1 (en) | 2020-09-21 | 2023-07-26 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Combination of nonmaltogenic exoamylase and glucoamylase for improving bread resilience and reducing amount of added sugars |
CN116529375A (zh) | 2020-10-13 | 2023-08-01 | 诺维信公司 | 用于提高蛋白质产量的糖基转移酶变体 |
AU2021360228A1 (en) | 2020-10-15 | 2023-05-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Methods of modulating gastrointestinal metabolites |
EP4237552A2 (en) | 2020-10-29 | 2023-09-06 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions comprising such lipase variants |
US20230399632A1 (en) | 2020-11-02 | 2023-12-14 | Novozymes A/S | Glucoamylase Variants and Polynucleotides Encoding Same |
CN116583534A (zh) | 2020-11-02 | 2023-08-11 | 诺维信公司 | 前导肽和编码其的多核苷酸 |
EP4026900A3 (en) | 2020-12-17 | 2022-10-05 | Fornia BioSolutions, Inc. | Xylanase variants and methods |
EP4023757A1 (en) | 2020-12-29 | 2022-07-06 | The Protein Brewery B.V. | Methods for generating selection marker-free transformants of heterokaryotic organisms |
WO2022147147A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | Abbott Laboratories | Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample |
CN116997642A (zh) | 2021-01-29 | 2023-11-03 | 丹尼斯科美国公司 | 清洁组合物及其相关的方法 |
WO2022175440A1 (en) | 2021-02-18 | 2022-08-25 | Novozymes A/S | Inactive heme polypeptides |
EP4305146A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
EP4060036A1 (en) | 2021-03-15 | 2022-09-21 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
US20240060061A1 (en) | 2021-03-15 | 2024-02-22 | Novozymes A/S | Dnase variants |
CN116615536A (zh) | 2021-03-15 | 2023-08-18 | 宝洁公司 | 含有多肽变体的清洁组合物 |
EP4307915A1 (en) | 2021-03-16 | 2024-01-24 | DSM IP Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
EP4071763A1 (en) | 2021-04-08 | 2022-10-12 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | A method for measuring galactooligosaccharides |
WO2022251056A1 (en) | 2021-05-27 | 2022-12-01 | Novozymes A/S | Transcriptional regulators and polynucleotides encoding the same |
CN118043454A (zh) | 2021-06-18 | 2024-05-14 | 国际N&H丹麦有限公司 | 用于啤酒浑浊减少的蛋白酶 |
EP4359518A1 (en) | 2021-06-23 | 2024-05-01 | Novozymes A/S | Alpha-amylase polypeptides |
WO2023278297A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Danisco Us Inc | Variant lipases and uses thereof |
WO2023288294A1 (en) | 2021-07-16 | 2023-01-19 | Novozymes A/S | Compositions and methods for improving the rainfastness of proteins on plant surfaces |
WO2023039270A2 (en) | 2021-09-13 | 2023-03-16 | Danisco Us Inc. | Bioactive-containing granules |
WO2023114936A2 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2023114939A2 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2023114932A2 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2023152220A1 (en) | 2022-02-10 | 2023-08-17 | Novozymes A/S | Improved expression of recombinant proteins |
WO2023168234A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Danisco Us Inc. | Enzymes and enzyme compositions for cleaning |
WO2023170177A1 (en) | 2022-03-08 | 2023-09-14 | Novozymes A/S | Fusion polypeptides with deamidase inhibitor and deamidase domains |
EP4242303A1 (en) | 2022-03-08 | 2023-09-13 | Novozymes A/S | Fusion polypeptides with deamidase inhibitor and deamidase domains |
WO2023194388A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Novozymes A/S | Fusion proteins and their use against eimeria |
WO2023209070A1 (en) | 2022-04-29 | 2023-11-02 | Novozymes A/S | Production of fatty acid alkyl esters |
WO2023225459A2 (en) | 2022-05-14 | 2023-11-23 | Novozymes A/S | Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections |
WO2023250301A1 (en) | 2022-06-21 | 2023-12-28 | Danisco Us Inc. | Methods and compositions for cleaning comprising a polypeptide having thermolysin activity |
WO2023247664A2 (en) | 2022-06-24 | 2023-12-28 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions comprising such lipase variants |
WO2024003143A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Novozymes A/S | Mutanases and oral care compositions comprising same |
WO2024012912A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Novozymes A/S | Polypeptides having deamidase inhibitor activity |
WO2024015974A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Improved enzymatic modification of phospholipids in food |
WO2024050339A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Mannanase variants and methods of use |
WO2024050346A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Detergent compositions and methods related thereto |
WO2024050343A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods related thereto |
WO2024056643A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Novozymes A/S | Fungal signal peptides |
WO2024102698A1 (en) | 2022-11-09 | 2024-05-16 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2024118901A2 (en) | 2022-11-30 | 2024-06-06 | Novozymes A/S | Carbonic anhydrase variants and polynucleotides encoding same |
WO2024120767A1 (en) | 2022-12-05 | 2024-06-13 | Novozymes A/S | Modified rna polymerase activities |
WO2024121070A1 (en) | 2022-12-05 | 2024-06-13 | Novozymes A/S | Protease variants and polynucleotides encoding same |
WO2024124013A1 (en) | 2022-12-09 | 2024-06-13 | International N&H Denmark Aps | Feed formulations comprising a phytase for dairy ruminant animals |
WO2024126483A1 (en) | 2022-12-14 | 2024-06-20 | Novozymes A/S | Improved lipase (gcl1) variants |
EP4389865A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-26 | Novozymes A/S | Recombinant protease for cell detachment |
EP4273249A3 (en) | 2023-07-07 | 2024-05-22 | Novozymes A/S | Improved expression of recombinant proteins |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE117020T1 (de) * | 1985-08-29 | 1995-01-15 | Genencor Int | Expression von heterologen polypeptiden in filamentösen pilzen, verfahren zu deren herstellung und vektoren zu deren herstellung. |
CZ289014B6 (cs) * | 1989-09-27 | 2001-10-17 | Dsm N. V. | Vyčiątěná a izolovaná sekvence DNA kódující fungální fytázu, konstrukt pro expresi, vektory a transformované hostitelské buňky a způsob produkce fytázy |
-
1986
- 1986-03-17 DK DK122686A patent/DK122686D0/da unknown
-
1987
- 1987-03-16 AT AT92104421T patent/ATE282093T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-03-16 AT AT87103806T patent/ATE98993T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-03-16 EP EP92104421A patent/EP0489718B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-16 ES ES87103806T patent/ES2061446T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-16 FI FI871144A patent/FI108147B/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-03-16 IE IE68287A patent/IE63169B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-03-16 DE DE3788524T patent/DE3788524T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-16 EP EP04026492A patent/EP1502952A3/en not_active Withdrawn
- 1987-03-16 IE IE940343A patent/IE940343L/xx unknown
- 1987-03-16 EP EP87103806A patent/EP0238023B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-16 DE DE3752379T patent/DE3752379T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-17 CA CA000632180A patent/CA1341593C/en active Active
- 1987-03-17 JP JP62060276A patent/JPH0665316B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-01-26 JP JP6007137A patent/JP3005618B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-12-25 JP JP35675997A patent/JP3903165B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-09-12 FI FI20011797A patent/FI112376B/fi not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-09-11 JP JP2002265161A patent/JP2003153696A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI871144A0 (fi) | 1987-03-16 |
FI871144A (fi) | 1987-09-18 |
EP0489718A1 (en) | 1992-06-10 |
DE3788524T2 (de) | 1994-05-11 |
JPS62272988A (ja) | 1987-11-27 |
DE3788524D1 (de) | 1994-02-03 |
JPH0665316B2 (ja) | 1994-08-24 |
EP1502952A3 (en) | 2005-05-11 |
JPH10276787A (ja) | 1998-10-20 |
JP2003153696A (ja) | 2003-05-27 |
DE3752379D1 (de) | 2004-12-16 |
EP0238023B1 (en) | 1993-12-22 |
DE3752379T2 (de) | 2005-10-20 |
CA1341593C (en) | 2009-04-21 |
ATE282093T1 (de) | 2004-11-15 |
FI112376B (fi) | 2003-11-28 |
FI20011797A (fi) | 2001-09-12 |
EP1502952A2 (en) | 2005-02-02 |
ES2061446T3 (es) | 1994-12-16 |
IE63169B1 (en) | 1995-03-22 |
JP3005618B2 (ja) | 2000-01-31 |
JPH0751067A (ja) | 1995-02-28 |
EP0238023B2 (en) | 2002-10-02 |
EP0489718B1 (en) | 2004-11-10 |
ATE98993T1 (de) | 1994-01-15 |
EP0238023A3 (en) | 1989-02-22 |
ES2061446T5 (es) | 2003-04-01 |
DK122686D0 (da) | 1986-03-17 |
EP0238023A2 (en) | 1987-09-23 |
IE870682L (en) | 1987-09-17 |
IE940343L (en) | 1987-09-17 |
JP3903165B2 (ja) | 2007-04-11 |
DE3788524T3 (de) | 2003-04-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI108147B (fi) | Menetelmä proteiinituotteiden tuottamiseksi Aspergillus oryzaella ja promoottori käytettävksi Aspergilluksessa | |
US7517668B1 (en) | Process for the production of protein products in aspergillus | |
US5863759A (en) | Process for the production of protein products in aspergillus | |
US5874558A (en) | Nucleic acid encoding a recombinant humicola sp. lipase | |
KR0181179B1 (ko) | 피치아 파스토리스 산성 인산효소 유전자의 디앤에이 단편 및 이를 사용하는 방법 | |
DK175460B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et pattedyrpolypeptid | |
FI90352C (fi) | Menetelmä heterologisten proteiinien tuottamiseksi Yarrowia lipolytica -transformanttien avulla, menetelmä Yarrowia lipolytica -transformanttien valmistamiseksi ja toteamiseksi sekä menetelmä transformanttien valmistamiseen käyttökelpoisten plasmidien valmistamiseksi | |
FI110693B (fi) | Menetelmä Aspergillus-kantojen rakentamiseksi geenikorvauksen avulla | |
US5102789A (en) | Production of epideramal growth factor in pichia pastoris yeast cells | |
CZ284251B6 (cs) | Způsob výroby heterologního proteinu v transformované buňce | |
JPH06500470A (ja) | メチロトローフ酵母細胞におけるインスリン様成長因子の産生 | |
GB2137208A (en) | The use of the gal1 promoter | |
KR101348530B1 (ko) | 프로테아제 저해자 및 그 변이체의 사상균 내에서의 발현 | |
JP4927281B2 (ja) | 共通翻訳開始配列を用いるポリペプチドの産生方法 | |
FI104637B (fi) | Uudet yhdistelmä-DNA-molekyylit sekä bakteeri- ja sieni-isännät yhdistelmäinterferonien ja pektiinilyaasien tuottamiseksi | |
AU625392B2 (en) | Methods of regulating protein glycosylation | |
CA2178007A1 (en) | Aspergillus expression system | |
DK169134B1 (da) | Fremgangsmåde til ekspression af et proteinprodukt i aspergillus og fremgangsmåde til fremstilling af proteinprodukter i aspergillus oryzae | |
EP0994955B1 (en) | Increased production of secreted proteins by recombinant yeast cells | |
DK170118B1 (da) | Promotor til anvendelse i aspergillus | |
HU216104B (hu) | In vitro eljárás fúziós proteinek feldolgozására | |
SU1364241A3 (ru) | Способ конструировани рекомбинантных векторов УСR р 2,УСR р 3 и УСR р 4 | |
WO1992016633A1 (en) | A process for producing chymosin |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Owner name: NOVOZYMES A/S |
|
MA | Patent expired |