EA009441B1 - Пиразолпиридины и способы их получения и применения - Google Patents

Abstract

Соединения формулы (I) обладают неожиданно высоким сродством к Alk5 и/или Alk4 и могут быть использованы в качестве их антагонистов для профилактики и/или лечения многочисленных заболеваний, включая фиброзные расстройства. В одном из воплощений изобретение представляет собой соединение формулы (I)

Description

Соединения формулы (I) являются неожиданно мощными антагонистами рецепторов семейства ΤΟΕβ типа I, А1к5 и/или А1к4. Таким образом, соединения формулы (I) могут быть применены для предотвращения и/или лечения заболеваний, таких как фиброзы (например, почечный фиброз, легочный фиброз и печеночный фиброз), прогрессирующие раковые опухоли, или других заболеваний, для которых является желательным уменьшение сигнальной активности семейства ΤΟΕβ.

- 1 009441

В первом варианте реализации, изобретение представляет собой соединение формулы

где любой из Χι, Х₂, Х₃ и Х₄ независимо является СК^Х или N при условии, что только два из числа Х_ь Х₂, Х₃ и Х₄ могут быть N одновременно;

каждый из Υι и Υ₂ независимо представляет собой СК^У или Ν, при условии, что по крайней мере один из Υι и Υ₂ должен являться Ν. Другими словами, кольцо, содержащее кольцевые атомы Υ₁ и Υ₂, может быть пиримидинилом или пиридилом;

каждый из К¹ независимо представляет собой одну из следующих групп: алкил, алкенил, алкинил, алкокси, ацил, галоген, гидрокси, амино, нитро, циано, гуанидино, амидино, карбокси, сульфо, меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, аминокарбонил, алкилкарбониламино, алкилсульфониламино, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, мочевину, тиомочевину, сульфамоил, сульфамид, карбамоил, циклоалкил, циклоалкокси, циклоалкилсульфанил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкокси, гетероциклоалкилсульфанил, арил, арилокси, арилсульфанил, ароил, гетероарил, гетероарилокси, гетероарилсульфанил или гетероароил;

каждый из К² независимо представляет собой одну из следующих групп: алкил, алкенил, алкинил, ацил, галоген, гидрокси, -ΝΗ₂, -КН(алкил), ^-(алкил)₂. -ΝΙ Цциклоалкил), -Ν(алкил)(шжлоалкил), -КН(гетероциклоалкил), -ΝΙ Цгетероарил), -ΝΗ-алкилгетероциклоалкил, -ΝΗ-алкилгетероарил, -ΝΙ Царалкил), циклоалкил, (циклоалкил)алкил, арил, аралкил, ароил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, гетероарил, гетероаралкил, гетероароил, нитро, циано, гуанидино, амидино, карбокси, сульфо, меркапто, алкокси, циклоалкокси, циклоалкилалкокси, арилокси, арилалкокси, гетероциклоалкокси, (гетероциклоалкил)алкокси, гетероарилокси, гетероарилалкокси, алкилсульфанил, циклоалкилсульфанил, (циклоалкил)алкилсульфанил, арилсульфанил, аралкилсульфанил, гетероциклоалкилсульфанил, (гетероциклоалкил)алкилсульфанил, гетероарилсульфанил, гетероарилалкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, аминокарбонил, аминосульфонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, (циклоалкил)алкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, (гетероциклоалкил)карбониламино, (гетероциклоалкил)алкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, алкоксикарбониламиноалкиламино, (гетероарил)арилкарбониламиноалкиламино, гетероаралкилкарбониламиноалкиламино, (гетероарил)арилсулфониламиноалкилкарбониламиноалкиламино, арилсульфониламиноалкиламино, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, мочевину, тиомочевину, сульфамоил, сульфамиде или карбамоил;

т имеет значение 0, 1, 2, 3 или 4; если ш>2, то две соседние группы К¹ могут объединяться с образованием 4-8-членного необязательно замещенного циклического фрагмента;

η имеет значение 0, 1, 2 или 3; если п>2, то две соседние группы К² могут объединятся с образованием 4-8-членного необязательно замещенного циклического фрагмента. См. примеры 4-8-членного необязательно замещенного циклического фрагмента ниже;

каждый из К^Х и К^У независимо представляет собой одну из следующих групп: водород, алкил, алкенил, алкинил, алкокси, ацил, галоген, гидрокси, амино, нитро, циано, гуанидино, амидино, карбокси, сульфо, меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, циклоалкилкарбонил, (циклоалкил)алкилкарбонил, ароил, аралкилкарбонил, гетероциклоалкилкарбонил, (гетероциклоалкил)ацил, гетероароил, (гетероарил)ацил, аминокарбонил, алкилкарбониламино, (амино)аминокарбонил, алкилсульфониламинокарбонил, алкилсульфониламино, циклоалкилкарбониламино, циклоалкилсульфониламино, (циклоалкил)алкилкарбониламино, (циклоалкил)алкилсульфониламино, арилкарбониламино, арилсульфониламино, аралкилкарбониламино, аралкилсульфониламино, (гетероциклоалкил)карбониламино, (гетероциклоалкил)сульфониламино, (гетероциклоалкил)алкилкарбониламино, (гетероциклоалкил)алкилсульфониламино, гетероарилкарбониламино, гетероарилсульфониламино, гетероаралкилкарбониламино, гетероаралкилсульфониламино, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамиде, карбамоил, циклоалкил, циклоалкокси, циклоалкилсульфанил, (циклоалкил)алкил, (циклоалкил)алкокси, (циклоалкил)алкилсульфанил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилокси, гетероциклоалкилсульфанил, (гетероциклоалкил)алкил, (гетероциклоалкил)алкокси, (гетероциклоалкил)алкилсульфанил, арил, арилокси, арилсульфанил, аралкил, аралкокси, аралкилсульфанил, арилалкенил, арилалкинил, гетероарил, гетероарилокси, гетероарилсульфанил, гетероаралкил, (гетероарил)алкокси или (гетероарил)алкилсульфанил.

Как определено выше, если ш>2, две соседние группы К¹ могут объединяться с образованием 4-8-членного необязательно замещенного циклического фрагмента. Т.е. 2-пиридильное кольцо может объединиться с 4-8-членным циклическим фрагментом, с образованием такого фрагмента, как

- 2 009441

7Н-[1]пиридинил, 6,7-дигидро-5Н-[1]пиридинил, 5,6,7,8-тетрагидро-хинолинил, 5,7-дигидрофуро[3,4Ь]пиридинил или 3,4-дигидро-1Н-тиопирано[4,3-с]пиридинил. Конденсированный циклический фрагмент может являться необязательно замещенным одним или несколькими заместителями такими как алкил (включая карбоксиалкил, гидроксиалкил, и галогеналкилы, такие как трифторметил; см. определение «алкила» ниже), алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, алкокси, арил, гетероарил, арилокси, гетероарилокси, аралкилокси, гетероарилалкокси, ароил, гетероароил, амино, нитро, карбокси, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, циклоалкилалкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, гетероциклоалкилкарбониламино, гетероциклоалкилалкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, циано, галоген, гидрокси, ацил, меркапто, алкилсульфанил, сульфокси, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, оксо или карбамоил.

Аналогично, в том случае, если η>2, две соседние группы К² могут объединяться с образованием 4-8-членного необязательно замещенного циклического фрагмента, формируя тем самым кольцо, сконденсированное с пиридильной или пиримидинильной группой. Некоторые примеры таких фрагментов показаны ниже

N

4-8-членные циклические фрагменты, образованные двумя соседними группами К², могут являться необязательно замещенными такими заместителями, как алкил (включая карбоксиалкил, гидроксиалкил и галогеналкилы, такие как трифторметил; см. определение «алкила» ниже), алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, алкокси, арил, гетероарил, арилокси, гетероарилокси, аралкокси, гетероарилалкокси, ароил, гетероароил, амино, нитро, карбокси, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, циклоалкилалкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, гетероциклоалкилкарбониламино, гетероциклоалкилалкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, циано, галоген, гидрокси, ацил, меркапто, алкилсульфанил, сульфокси, мочевину, тиомочевину, сульфамоил, сульфамид, оксо или карбамоил.

В одном из воплощений каждый из Х₁, Х₂, Х₃ и Х₄ независимо представляет собой СК^Х. В одном из воплощений, каждый из Х₂, X₃ и X₄ независимо представляет собой -СН-, -С(СН₃)-, -С(ОН)-, -С(ЫН₂)-, -С(СО-ЫН₂)-, -С(СО-ХНОН)-, -С(ЫН(незамещенный алкил))-, -С(ЫН(арил))-, -С(ХН(аралкил))-, -С(ХН(гетероарил))-, -С(ХН(гетероарилалкил))-, -С(ХН-СО-(незамещенный алкил))-, -С(ЯН-СО-(арил))-, -С(хН-СО-(гетероарил))-, -С(ХН-СО-(аралкил))-, -С(ХН-СО-(гетероарилалкил))-, -С(ЫН-зО₂(незамещенный алкил))-, -С(ЫН-8О₂-(арил))-, -С(ЫН-8О₂-(гетероарил))-, -С(ХН-8О₂-(аралкил))-, -С(ХН-8О₂-(гетероарилалкил))-, -С(ЫН-8О₂-ХН(незамещенный алкил))-, -С(ХН-8О₂-ЫН(арил))-, -С(хН-8О₂-ХН(гетероарил))-, -С(ХН-8О₂-ЫН(аралкил))-, -С(ХН-8О₂-ЫН(гетероарилалкил))-,

-С(гидроксиалкил)- или -С(карбокси)- и Х1 представляет собой -СН-.

В одном из воплощений, как Υ₁, так и Υ₂ представляют собой N.

В одном из воплощений т имеет значение 0, 1 или 2 (например, т равно 1). В одном из воплощений К¹ замещено по 5 или по 6 положениям (например, К¹ может быть монозамещенным или по 5, или по 6 положениям либо К¹ может быть дизамещенным и по 5, и по 6 положениям). В одном из воплощений К¹ является одной из следующих групп: С_1-4алкил, С_1-4алкокси, С_1-4алкилтио, галоген, амино, аминокарбонил или алкоксикарбонил.

В одном из воплощений η имеет значение 1 или 2 (например, η равно 1).

В одном из воплощений каждый К¹ независимо представляет собой одну из следующих групп: незамещенный алкил (например, 6-метил, 6-этил, 6-н-пропил или 6-изопропил), гидроксиалкил, галогеналкил (например, 6-трифторметил), аминоалкил, арилоксиалкил, гетероаралкилоксиалкил, незамещенный алкенил (например, 6-винил), алкокси, ацил, галоген, гидрокси, карбокси, циано, гуанидино, амидино, амино, (например, -ΝΒ₂, моноалкиламино, диалкиламино, моногетероциклоалкиламино, моногетероариламино, моно(гетероциклоалкил)амино, моно(аралкил)амино или моно(гетероаралкил)амино), карбокси, меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, аминокарбонил (например, -СОNН₂, -СОNН(алкил), СО-№(алкил)₂), алкилкарбониламино (например, -ΝΒ-СО-алкил или ^(алкил)-СОалкил), алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, алкилсульфонил, сульфамоил (например, -8О₂-NН₂, -8О₂-NН(алкил) или -8О₂-№(алкил)₂), циклоалкил (например, 6-циклопропил), гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, гетероарил или гетероаралкил.

В одном из воплощений каждый К², независимо от остальных, представляет собой одну из следующих групп: незамещенный алкил, гидроксиалкил, галогеналкил, аминоалкил (например, аминометил), арилоксиалкил, гетероаралкилоксиалкил, алкокси, ацил, галоген, гидрокси, карбокси, циано, гуанидино,

- 3 009441 амидино, -ΝΗ₂, моноалкиламино, диалкиламино, моноциклоалкиламино, моногетероциклоалкиламино (например, -ΝΗ-пиперидинил или -ΝΗ-морфолино), моногетероариламино (например, -ΝΗ-тетразолил, -ΝΗ-пиразолил или -ΝΗ-имидазолил), моно((гетероциклоалкил)алкил)амино (например, -ΝΗ(ΟΗ₂)_1-3пиперидинил или -МЩСИ^^морфолино), моно(гетероаралкил)амино (например, -NΗ(СΗ₂)_1-3тетразолил, -МЩСИЭ^-пиразолил или -МЩСИЭ^-имидазолил), -Х-(алкил)(циклоалкил), меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, -ί.ΌΝΗ₂. -СОЯЩалкил), -СО-Ы-(алкил)₂, -ΝΗ-СО-алкил, -Ν(алкил)-СО-алкил, -СО₂-алкил, -О-СО-алкил, -8Ο₂-ΝΗ₂, -ЗО^ХЩалкил), -8О₂-Ы-(алкил)₂,

-ΝΗ-ЗО^алкил, -Ы-(алкил)-8О₂-алкил, -NΗ-СΟ-NΗ(алкил), ХДалкилкСО-ХЩалкил), -ΝΗ-ЗО^

ЫЩалкил), -ЫДалкилкЗО^ХЩалкил), гетероциклоалкил или гетероарил (например, имидазолил, пиразолил, тетразолил или пиридил). Например, В² находится в положении 3 и представляет собой одну из следующих групп: гуанидино, амидино, -ΝΗ₂, моноалкиламино, диалкиламино, моноциклоалкиламино, моногетероциклоалкиламино, моногетероариламино, моно((гетероциклоалкил)алкил)амино, моно(гетероаралкил)амино, -NΗ-СΟ-NΗ(алкил), -ЫДалкилкСО-ЫЩалкил), -NΗ-8Ο₂-NΗ(алкил), -ЫДалкилкЗО^ХЩалкил), гетероциклоалкил или гетероарил.

В одном из воплощений каждый В^х, независимо от остальных, является одной из следующих групп: водородом, незамещенным алкилом, гидроксиалкилом (например, гидроксиС_1-4алкилом, таким как гидроксиэтил), галогеналкилом (например, трифторметилом), аминоалкилом, арилоксиалкилом, гетероаралкилоксиалкилом, алкокси (например, С_1-4алкокси, таким как метокси или С_1-4галогеналкокси, например, -ОСР₃), галогеном (например, хлором или бромом), гидрокси, карбокси, циано, гуанидино, амидино, амино (например, -ΝΗ₂, -ЫЩалкил), -Ы(алкил)₂, -ХЩгетероциклоалкил), -ХЩгетероарил),

-ЫЩгетероциклоалкилалкил), -ХЩаралкил) или -ХЩгетероаралкил)), карбокси, (гетероарил)ацилом, аминокарбонилом (например, -СО-ΝΗ^ -СΟ-NΗ(СΗ₂)ο_-3-СΟΟΗ, -СΟ-NΗ(СΗ₂)ο_-3-ОН, -^-ΝΗ^Η)^ гетероарил (например, -СΟ-NΗ(СΗ₂)_0-3тетразолил, -СΟ-NΗ(СΗ₃)_0-3пиразолил или -^-ΝΗ^Η)^ имидазолил), -СΟ-NΗ(СΗ₂)_0-3гетероциклоалкил (например, -СΟ-NΗ(СΗ₂)_0-3пиперидинил или -СΟ-NΗ(СΗ₂)_0-3морфолино) или -^-ΝΗ^Η^^^ (например, -СΟ-NΗ(СΗ₂)_0-3фенил), гетероарилкарбонил амино, (гетероциклоалкил)алкокси, (гетероарил)алкокси, (гетероарил)алкилсульфанилом, гетероциклоалкилом (например, морфолино, пиразинил или пиперидинил), (гетероциклоалкил)алкилом (например, морфолиноС_1-4алкил, пиразинилС_1-4алкил или пиперидинилС_1-4алкил), гетероарилом (например, имидазолил, пиразолил, тетразолил или пиридил) или гетероаралкилом (например, имидазолилС_1-4алкил, пиразолилС_1-4алкил, тетразолилС_1-4алкил или пиридилС_1-4алкил).

Отдельными примерами групп -ЫЩалкил) являются:

-ХЩгалогеналкил), например -NΗСΡ₃, -ХЩкарбоксиалкил), например -NΗ(СΗ₂)_1-3СΟΟΗ, -ХЩгидроксиалкил), например -^(^2)1^^ Отдельными примерами групп -ΝΗ( гетероарил) являются: -NΗ(тетразолил), -ИЩпиразолил), -ИЩимидазолил).

Отдельными примерами групп -ЫЩгетероциклоалкилалкил) являются: -ХЩпиперазинилалкил), например -NΗ(СΗ₂)_1-3пиперизин, -НЩморфолиноалкил), например -NΗ(СΗ₂)_1-3морфолин.

Отдельными примерами групп -ΝΗ( гетероаралкил) являются: -NΗ(тетразолилалкил), например -NΗ(СΗ₂)_1-3тетразол, -НЩпиразолилалкил), например -NΗ(СΗ₂)_0-3пиразол, -ХЩимидазолилалкил), например -NΗ(СΗ₂)_0-3имидазол.

В одном из воплощений, В^у представляет собой одну из следующих групп: водород, незамещенный алкил, гидроксиалкил, галогеналкил (например, трифторметил), аминоалкил, арилоксиалкил, гетероаралкилоксиалкил, алкокси, галоген, гидрокси, карбокси, циано, гуанидино, амидино, амино (например, -ΝΗ₂, -НЩалкил), -Ы-(алкил)₂, -НЩциклоалкил), -НЩгетероциклоалкил), -НЩгетероарил),

-НЩгетероциклоалкилалкил), -ЛЩаралкил) или -НЩгетероаралкил)), карбокси, (гетероарил)ацил, аминокарбонил, гетероарилкарбониламино, (гетероциклоалкил)алкокси, (гетероарил)алкокси, (гетероарил)алкилсульфанил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, гетероарил или гетероаралкил.

В одном из воплощений Х₁ является Ν. Например, Х₁ представляет собой Ν, и каждый из Х₂, Х₃ и Х₄, независимо от остальных, представляет собой СВ^Х.

В одном из воплощений Х2 является Ν. Например, Х2 представляет собой Ν, и каждый из Х1, Х3 и Х₄, независимо от остальных, представляет собой СВ^Х.

В одном из воплощений Х₃ является Ν. Например, Х₃ представляет собой Ν, и любой из Х₁, Х₂ и Х₄ независимо от остальных, представляет собой СВ^Х.

В одном из воплощений Х₄ является Ν. Например, Х₄ представляет собой Ν, и любой из Х₁, Х₂ и Х₃, независимо от остальных, представляет собой СВ^Х.

- 4 009441

В качестве некоторых примеров соединения формулы (I) могут быть приведены следующие вещества:

4-(2-пиридин-2-ил-пиразоло [1,5-а]пиридин-3-ил)пиримидин-2-иламин, 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]пиримидин-2-иламин, 2-(6-метилпиридин-2-ил)-3 -(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)пиразоло [1,5-а] пиридин, 4-[2-(6-хлорпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-с]пиримидин-3-ил]пиримидин-2-иламин, 2-(6-метилпиридин-2-ил)-3 -(2-морфолин-4-ил-пиримидин-4-ил)пиразоло [1,5-с] пиримидин, 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиразин-3-ил]пиримидин-2-иламин, 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил]пиримидин-2-иламин и 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-с]пиримидин-3-ил]пиримидин-2-иламин.

Ν-оксопроизводные или фармацевтически приемлемые соли любого из соединений формулы (I) также находятся в объеме данного изобретения. Например, атом азота имидазольного кольца или азотсодержащий гетероциклический заместитель могут образовывать оксид в присутствии подходящего окислителя, такого как метахлорпербензойная кислота или перекись водорода.

Соединение формулы (I), которое является кислотным по своей природе (например, имеющее в составе карбоксил или фенольную гидроксигруппу), может образовывать фармацевтически приемлемые соли таких металлов, как натрий, калий, кальций, или соли золота. В объем данного изобретения также входят соли, образованные с фармацевтически приемлемыми аминами, такими как аммиак, алкиламины, гидроксиалкиламины и Ν-метилгликамины. Соединение формулы (I) может быть обработано кислотами с образованием кислотно-аддитивных солей. Примеры таких кислот включают в себя следующие кислоты: соляную, бромисто-водородную, иодисто-водородную, серную, метилсульфоновую, фосфорную, парабромфенилсульфоновую, угольную, янтарную, лимонную, бензойную, щавелевую, малоновую, салициловую, яблочную, фумаровую, аскорбиновую, малеиновую, уксусную кислоту и другие минеральные и органические кислоты, хорошо известные специалистам в данной области. Кислотно-аддитивные соли могут быть получены при обработке соединений формулы (I) в форме свободного основания достаточным количеством кислоты (например, соляной кислоты) для того, чтобы образовалась кислотноаддитивная соль (например, гидрохлорид). Кислотно-аддитивная соль может быть превращена обратно в форму свободного основания, посредством обработки ее разбавленным водным раствором подходящего основания (например, гидроксида натрия, бикарбоната натрия, карбоната калия или аммиака). Соединения формулы (I) могут также находиться, например, в форме ахиральных соединений, рацемических смесей, оптически активных соединений, чистых диастереомеров или смеси диастереомеров.

Соединения формулы (I) проявляют неожиданно высокое сродство к семейству рецепторов ΤΟΡβ типа I, А1к5 и/или А1к4, например значение КТ, менее 10 мкмоль, при условиях, описанных ниже в примерах 2 и 3. Некоторые соединение формулы (I) показывают значение Κ''₅₀ менее 0,1 мкмоль.

Соединения формулы (I) также могут быть модифицированы путем придания им подходящих функциональных свойств, чтобы улучшить биологическую селективность. Подобные модификации известны в технике, и они дают возможность, в том числе, повысить биологическое проникание в данную биологическую систему (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), увеличить пероральную доступность, повысить растворимость, чтобы сделать возможным введение лекарства путем инъекции, изменить метаболизм и/или изменить скорость выведения. Примеры таких модификаций включают (но не ограничиваются этим) этерификацию полиэтиленгликолями, образование производных с пивалатами или остатками жирных кислот, превращение в карбаматы, гидроксилирование ароматических колец или замена углерода гетероатомами в ароматических кольцах.

В другом варианте реализации, данное изобретение представляет собой фармацевтический состав, включающий соединения формулы (I) (или комбинацию двух или более соединений формулы (I)) и фармацевтически приемлемый носитель. В представленное изобретение также включается медикаментозный состав, содержащий любое из соединений формулы (I), по отдельности или в виде комбинации, вместе с соответствующим наполнителем.

В следующем варианте реализации изобретение представляет собой способ ингибирования семейства рецепторов ΤΟΡβ типа (I), А1к5 и/или А1к4 (например, значение Ю₅₀ менее 10 мкмоль, предпочтительнее менее 1 мкмоль, еще более предпочтительно менее 0,1 мкмоль) в клетке, включая стадию приведения в контакт с клеткой эффективного количества одного или нескольких соединений формулы (I). Также в рамках данного изобретения находится способ ингибирования сигнального пути ΤΟΡβ и/или активина в клетке или в организме (например, млекопитающего, такого, как человек), включая стадию приведения в контакт с клеткой или введения в организм эффективного количества одного или нескольких соединений формулы (I).

Также в рамках данного изобретения находится способ лечения организма или защита организма от расстройств, являющихся результатом повышенного уровня ΤΟΡβ и/или активности активина (например, из-за чрезмерной выработки ΤΟΡβ). Способ включает стадию введения в организм эффективного количества одного или нескольких соединений формулы (I). Условия включают накопление избытка внеклеточного матрикса, фиброзные состояния (например, склеродермия, волчаночный нефрит, заболевания

- 5 009441 соединительной ткани, заживление ран, хирургическое рубцевание, повреждение спинного мозга, повреждение ЦНС, острые поражения легких, легочные фиброзы неясного происхождения, хроническое обструктивное заболевание легких, синдром расстройства дыхания у взрослых, острое поражение легких, лекарственное поражение легких, гломерулонефриты, диабетическая нефропатия, нефропатия, вызванная перенапряжением, печеночные и желчные фиброзы, цирроз печени, первичные желчные циррозы, жировое перерождение печени, первичный склерозирующий холангит, рестенозы, сердечные фиброзы, глазные рубцы, фибросклерозы, фибротический рак, фиброиды, фиброма, фиброаденомы, фибросаркомы, трансплантационная артериопатия и ожоговый рубец); демиелизацию нейронов, рассеянный склероз; болезнь Альцгеймера; церебральную ангиопатию и ΤΟΕβ-индуцированные метастазы опухолевых клеток и карцином (например, раковых опухолей чешуйчатых клеток, множественных миелом, меланом, глиом, глиобластом, лейкемии и раковых опухолей легких, грудных желез, яичников, шейки матки, печени, желчных путей, желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы, простаты, головных и шейных отделов).

В контексте данного изобретения термин «алкил» означает насыщенную алифатическую углеводородную группу, включающую 1-8 (например, 1-6 или 1-4) углеродных атома. Алкильная группа может являться линейной или разветвленной. Примеры алкильных групп включают в себя (но не ограничиваются указанным): метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, н-гептил и 2-этилгексил. Алкильная группа может быть необязательно замещена одним или несколькими заместителями, такими как алкокси, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, арилокси, гетероарилокси, аралкокси, гетероарилалкокси, амино, нитро, карбокси, циано, галоген, гидрокси, сульфо, меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, циклоалкилалкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, гетероциклоалкилкарбониламино, гетероциклоалкилалкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, алкоксикарбонил или алкилкарбонилокси.

В контексте данного изобретения термин «алкенил» означает алифатическую углеродную группу, которая содержит 2-8 (например, 2-6 или 2-4) углеродных атомов и по меньшей мере одну двойную связь. Как и алкильная группа, алкенильная группа может быть линейной или разветвленной. Примеры алкенильных групп включают в себя (но не ограничиваются указанным): аллил, изопренил, 2-бутенил и 2-гексенил. Алкенильная группа может быть необязательно замещена одним или несколькими заместителями, такими как алкокси, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, арилокси, гетероарилокси, аралкокси, гетероарилалкокси, амино, нитро, карбокси, циано, галоген, гидрокси, сульфо, меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, циклоалкил-алкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, гетероциклоалкилкарбониламино, гетероциклоалкилалкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, алкоксикарбонил или алкилкарбонилокси.

В контексте данного изобретения термин «алкинил» означает алифатическую углеродную группу, которая содержит 2-8 (например, 2-6 или 2-4) углеродных атомов и по меньшей мере одну тройную связь. Алкинильная группа может быть линейной или разветвленной. Примеры алкинильных групп включают в себя (но не ограничиваются указанным) пропаргил и бутинил. Алкинильная группа может быть необязательно замещена одним или несколькими заместителями, такими, как: алкокси, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, арилокси, гетероарилокси, аралкокси, гетероарилалкокси, амино, нитро, карбокси, циано, галоген, гидрокси, сульфо, меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, циклоалкилалкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, гетероциклоалкил, карбониламино, гетероциклоалкилалкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, алкоксикарбонил или алкилкарбонилокси.

В контексте данного изобретения под «амино» группой подразумевается -ΝΚ^ΧΚ^Υ, где каждый из К' и К^у независимо является водородом, гидроксилом, алкилом, алкоксилом, циклоалкилом, (циклоалкил)алкилом, арилом, аралкилом, гетероциклоалкилом, (гетероциклоалкил)алкилом, гетероарилом или гетероаралкилом. В том случае, когда «амино» группа не является терминальной (например, алкилкарбониламиногруппа), она представлена в виде -ΝΚ^Χ-, где К^х имеет те же значения, что указаны выше.

В контексте данного изобретения термином «арил» обозначается фенил, нафтил или бензоконденсированная группа, состоящая из 2-3 колец. Например, бензоконденсированная группа может включать фенил, конденсированный с одним или двумя С_4-8карбоциклическими фрагментами, как например, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, инданил или флуоренил. Арил может быть необязательно замещен одним или несколькими заместителями, такими как алкил (включая карбоксиалкил, гидроксиалкил и галогеналкил, такой как трифторметил), алкенил, алкинил, циклоалкил, (циклоалкил)алкил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, арил, гетероарил, алкокси, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, арилокси, гетероарилокси, аралкилокси, гетероаралкилокси, ароил, гетероароил, амино, нитро, карбокси, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, (циклоал- 6 009441 кил)алкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, (гетероциклоалкил)карбониламино, (гетероциклоалкил)алкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, циано, галоген, гидрокси, ацил, меркапто, алкилсульфанил, сульфокси, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, оксо или карбамоил.

В контексте данного изобретения под термином «аралкил» понимается алкильная группа (например, С_1-4алкильная группа), замещенная арильной группой. Как «алкил», так и «арил» были определены выше. Примером аралкильной группы является бензил.

В контексте данного изобретения под термином «циклоалкил» подразумевается алифатическое карбоциклическое кольцо, состоящее из 3-10 (например, 4-8) атомов углерода. В число примеров циклоалкильных групп включаются: циклопропил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, адамантил, норборнил, кубил, октагидроинденил, декагидронафтил, бицикло[3.2.1]октил, бицикло[2.2.2]октил, бицикло[3.3.1]нонил и бицикло [3.2.3]нонил. Под циклоалкенильной группой в рамках данного изобретения подразумевается неароматическое карбоциклическое кольцо, состоящее из 3-10 (например, 4-8) атомов углерода и включающее одну или несколько двойных связей. Примеры циклоалкенильных групп включают циклопентил, 1, 4-циклогексадиенил, циклогептенил, циклооктенил, гексагидроинденил, октагидронафтил, бицикло[2.2.2]октенил и бицикло [3.3.1] ноненил. Группа циклоалкил или циклоалкенил может быть необязательно замещена одним или несколькими заместителями, такими как алкил (включая карбоксиалкил, гидроксиалкил и галогеналкил, такой как трифторметил), алкенил, алкинил, циклоалкил, (циклоалкил)алкил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, арил, гетероарил, алкокси, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, арилокси, гетероарилокси, аралкилокси, гетероаралкилокси, ароил, гетероароил, амино, нитро, карбокси, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, (циклоалкил)алкилкарбонил амино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, (гетероциклоалкил)карбониламино, (гетероциклоалкил)алкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, циано, галоген, гидрокси, ацил, меркапто, алкилсульфанил, сульфокси, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, оксо или карбамоил.

В контексте данного изобретения термин «гетероциклоалкил» подразумевает 3-10-членную (например, 4-8-членную) насыщенную кольцевую структуру, в которой один или несколько атомов кольца являются гетероатомами, например Ν, О или 8. Примеры гетероциклоалкильных групп включают: пиперидинил, пиперазинил, тетрагидропиранил, тетрагидрофурил, диоксоланил, оксазолидинил, изооксазолидинил, морфолинил, октагидробензофурил, октагидрохроменил, октагидротиохроменил, октагидро-индолил, октагидропиридинил, декагидрохинолинил, октагидробензо[Ь]тиофенил, 2-окса-бицикло[2.2.2]октил, 1-аза-бицикло[2.2.2]октил, 3-аза-бицикло [3.2.1] октил и

2,6-диокса-трицикло[3.3.1.0^3,7]нонил.

Под термином «группа гетероциклоалкенил» в рамках данного изобретения подразумевается 3-10членная (например, 4-8-членная) неароматическая кольцевая структура, имеющая одну или несколько двойных связей, где один или несколько кольцевых атомов представляют собой гетероатомы, например Ν, О или 8. Группа гетероциклоалкил или гетероциклоалкенил может быть необязательно замещена одним или несколькими заместителями, такими как алкил (включая карбоксиалкил, гидроксиалкил и галогеналкил, такой, как трифторметил), алкенил, алкинил, циклоалкил, (циклоалкил)алкил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, арил, гетероарил, алкокси, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, арилокси, гетероарилокси, аралкилокси, гетероаралкилокси, ароил, гетероароил, амино, нитро, карбокси, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, (циклоалкил)алкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, (гетероциклоалкил)карбониламино, (гетероциклоалкил)алкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, циано, галоген, гидрокси, ацил, меркапто, алкилсульфанил, сульфокси, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, оксо или карбамоил.

Под термином группа «гетероарил» в настоящем изобретении понимают моноциклическую, бициклическую или трициклическую кольцевую систему, имеющую 5-15 кольцевых атомов, в числе которых один или несколько атомов представляют собой гетероатомы, например Ν, О или 8, причем одно или несколько колец в бициклической или трициклической структуре является ароматическим. Отдельными примерами гетероарилов являются: пиридил, фурил, пирролил, тиенил, тиазолил, оксазолил, имидазолил, индолил, тетразолил, бензофурил, бензтиазолил, ксантин, тиоксантин, фенотиазин, дигидроиндол и бензо[1,3]диоксол. Гетероарил может быть необязательно замещен одним или несколькими заместителями, такими как алкил (включая карбоксиалкил, гидроксиалкил и галогеналкил, такой как трифторметил), алкенил, алкинил, циклоалкил, (циклоалкил)алкил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, арил, гетероарил, алкокси, циклоалкокси, гетероциклоалкокси, арилокси, гетероарилокси, аралкилокси, гетероаралкилокси, ароил, гетероароил, амино, нитро, карбокси, алкоксикарбонил, алкилкарбонилокси, аминокарбонил, алкилкарбониламино, циклоалкилкарбониламино, (циклоалкил)алкилкарбониламино, арилкарбониламино, аралкилкарбониламино, (гетероциклоалкил)карбониламино, (гетероциклоалкил)алкилкарбониламино, гетероарилкарбониламино, гетероаралкилкарбониламино, циано, галоген, гидрокси, ацил, меркапто, алкилсульфанил, сульфокси, мочевина, тиомочевина, сульфамоил, сульфамид, оксо или карбамоил.

- 7 009441

Под термином группа «гетероаралкил» в настоящем изобретении понимают алкильную группу, (например, группа С_1-4алкил), которая замещена группой гетероарил. Оба термина «алкил» и «гетероарил» были определены выше.

Под термином «циклический фрагмент» в настоящем изобретении подразумеваются циклоалкил, гетероциклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкенил, арил или гетероарил, причем каждый из этих терминов был определен выше.

Под термином «ацил» в настоящем изобретении подразумевается формильная группа или алкилС(=О)-, причем термин «алкил» был определен выше. Ацетил и пивалоил являются примерами ацильных групп.

В настоящем изобретении под термином «карбамоил» понимают группу, имеющую структуру -О-СО-ЛК^хК.^у или -ЛК^х-СО-О-К.², где К^х и К^у были определены выше и К² представляет собой алкил, циклоалкил, (циклоалкил)алкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, гетероарил или гетероаралкил.

В настоящем изобретении термины «карбокси» и «сульфо» группа относятся к группам -СООН и -8О₃Н соответственно.

В настоящем изобретении термин «алкокси» группа относится к группе алкил-О-, где термин «алкил» был определен выше.

В настоящем изобретении термин «сульфокси» группа относится к -О-8О-К.^х или -8О-О-К''. где К'' был определен выше.

В настоящем изобретении термин «галоген» или «гало» группа относится к группе фтор, хлор, бром или йод.

В настоящем изобретении термин «сульфамоил» группа относится к одной из структур -8О₂-ЛК^хВ^у или -ЛК^х-8О₂-В², где К^х, К^у и К² были определены выше.

В настоящем изобретении термин «сульфамид» группа относится к структуре -ЛК^х-8(О)₂-НВ^уВ², где К', К^у и Κ^ζ были определены выше.

В настоящем изобретении термин «мочевина» относится к структуре -ЛК^х-СО-ЛК^уК.², и термин «тиомочевина» относится к структуре -ЛК^х-С8-ЛК^уК.², где К^х, К^у и К² были определены выше.

Под термином «эффективное количество» в данном изобретении понимают количество, которое требуется, чтобы получить терапевтический эффект при приеме пациентом, и это количество обычно определяется в зависимости от возраста, площади поверхности (тела), веса и состояния пациента. Взаимосвязь дозировок для животных и людей (основанная на миллиграммах на квадратный метр поверхности тела) описана Егсйс1с11 е1 а1. Сапсег Сйешо1ег. Кер., 50: 219 (1966). Площадь поверхности тела может быть предварительно определена на основании роста и веса пациента. См., например, 8с1епйПс ТаЫек, Сещу РйагтасеийсаН, АгбНеу, Лете Уогк, 537 (1970).

Под термином «пациент» в настоящем изобретении понимают млекопитающее, включая человека.

Антагонист представляет собой молекулу, которая соединяется с рецептором без активации последнего. Он конкурирует с эндогенным лигандом(ами) или субстратом(субстратами) за область(области) связывания рецептора и, таким образом, ингибирует способность рецептора передавать внутриклеточный сигнал в виде ответной реакции на связывание эндогенного лиганда.

Поскольку соединения формулы (I) являются антагонистами рецепторов Τ0Ρβ3 типа I (А1к5) и/или активиновых рецепторов типа I (А1к4), эти соединения могут быть использованы для ингибирования последствий сигнальной трансдукции ΤΟΡβ и/или активина, таких как образование внеклеточного матрикса (например, коллагена или фибронектина), дифференциации стромальных клеток в миофибробласты и стимуляция и миграция воспалительных клеток. Следовательно, соединения формулы (I) ингибируют патологическое воспаление и ответные фибротические реакции и обладают терапевтической применимостью при лечении/профилактике расстройств или болезней, при которых является желательным уменьшение активности ΤΟΡβ и/или активина (например, различные типы фиброзов или прогрессирующих раковых опухолей).

Если не указано иначе, технические и научные термины, используемые в настоящем изобретении, имеют то же значение, в котором они обычно понимаются в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Все публикации, заявки на патенты, патенты и другие ссылки, упоминаемые в настоящем изобретении, включены сюда во всей полноте посредством ссылки. В дополнение к этому, материалы, способы и примеры являются лишь иллюстративными и не предназначены быть ограничивающими.

Остальные отличительные особенности и преимущества настоящего изобретения будут ясны из нижеследующего подробного описания и формулы изобретения.

- 8 009441

Подробное описание изобретения

В общем, изобретение относится к соединениям формулы (I), которые демонстрируют неожиданно высокое сродство к А1к 5 и/или А1к 4 рецепторам типа I семейства ΤΟΡβ.

Синтез соединений формулы (I).

Соединения формулы (I) могут быть синтезированы при помощи ряда известных способов из коммерчески доступных или известных исходных соединений. По одному способу соединения формулы (I), синтезируют в соответствии со схемой 1, приведенной ниже. В частности, соединения формулы (II), где каждый из Х₁, Х₂, Х₃ и Х₄ был определен выше, могут подвергаться диполярному циклоприсоединению с ацетиленом формулы (III) в инертном растворителе (например, СН₂С1₂) в присутствии соответствующего основания (например, КОН) с образованием промежуточного соединения формулы (IV), как показано ниже. Промежуточное соединение может вступать в реакцию с амином формулы (V), где К^А является низшим алкилом (например, С1-4алкилом, таким как метил) и К^в является подходящей уходящей группой (например, С1-4алкокси, такой как этокси), с образованием дальнейшего промежуточного соединения формулы (VI). Последующая реакция этого промежуточного соединения с такими реагентами, как необязательно замещенный гуанидин (где К, показанный на схеме 1, может представлять собой водород, алкил, циклоалкил, арил, гетероциклоалкил или гетероарил) или тиомочевина приводят к соединениям формулы (I).

С другой стороны, промежуточное соединение формулы (IV) может быть алкилировано посредством реакции с диэтоксикетоном в полярном растворителе (например, в диоксане) при повышенной температуре (например, 90°С) с образованием еще одного промежуточного соединения формулы (VII). Это промежуточное соединение может затем взаимодействовать с карбонатом гуанидиния при повышенной температуре (например, 100°С) с образованием соединения формулы (I) с аминопиримидиновым заместителем. Это соединение формулы (I) может быть в дальнейшем превращено в другие соединения формулы (I) (например, превращением аминопиримидинового заместителя в диаминопиримидиновый заместитель, как показано на схеме 1).

Схема 1

- 9 009441

Некоторые другие методы получения производных соединений формулы (I) показаны на схеме 2.

Схема 2

Схема 3 показывает еще один способ получения соединений формулы (I). В частности, соединения формулы (II) могут циклизоваться с ацетиленом формулы (VIII), образуя промежуточное соединение формулы (IX). Взаимодействие этого промежуточного соединения с гидроксидом натрия с последующей обработкой бромирующим реагентом (Ν-бромсукцинимидом) приводит к соединению формулы (X). Последующая реакция соединения формулы (X) с реагентом формулы (XI) или формулы (XII) приводит к образованию соединений формулы (I). См. для справки 81Ше, Лпдете. С'Ъет. Ь. Еб. Еп§1. 25, 508 (1996) и 8ιιζιιΙ<ί е1 а1. 8уп111. Соттип. 11, 513 (1981).

Схема 3

Ацетилены формулы (III) и формулы (VIII), являющиеся исходными соединениями для процедур синтеза, представленных на схемах 1 и 3 соответственно, могут быть получены в соответствии со схемой 4, приведенной ниже. В частности, 2-галогенпиридин(XIII) может, в первую очередь, реагировать с триметилсилилацетиленом с образованием триметилсиланилэтинилзамещенного пиридина (XIV), защитную группу которого впоследствии удаляют при помощи основания (например, ΝαΟΗ, К₂СО₃ или фторида тетрабутиламмония), в результате чего получают 2-этинилпиридин формулы (XV). Дальнейшее взаимо- 10 009441 действие этого соединения с уксусным ангидридом и метилхлорформиатом приводит к образованию соединений формул (III) и (VIII) соответственно.

Далее, соединения формулы (I) могут быть синтезированы в соответствии со схемой 5, приведенной ниже. В частности, диарилацетилен формулы (XVI) или кетон формулы (XVII) могут циклизоваться с аминирующим реагентом (например, О-(мезитилсульфонил)гидроксиламином), приводя к образованию соединения формулы (XVIII), которое можно бромировать (например, Ν-бромсукцинимидом) с образованием соединения формулы (X). Последующее взаимодействие соединения формулы (X) с реагентом формулы (XI) или реагентом формулы (XII) приводит к образованию соединений формулы (I).

- 11 009441

Исходное соединение формулы (XVII) может быть синтезировано в соответствии со способом, аналогичным показанному выше на схеме 4, например, при соединении подходящего пиридилацетилена с

2-галогенпиридином. См. для справки Уатаиаке е1 а1. СНст.РНагт.Ви11. 1890 (1988). Соединения формулы (XVII) также могут быть синтезированы в соответствии с известными способами, см., например, Сак814у е1 а1. 1. Огд. СНет. 2286 (1978).

В дополнение к схеме 2 соединения формулы (I) могут быть превращены в другие соединения формулы (I) в соответствии с нижеприведенными схемами 6 и 7. Отметим, что К^С представляет собой алкил, циклоалкил, (циклоалкил)алкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, (гетероциклоалкил)алкил, гетероарил или гетероаралкил.

Схема 6

(НзС)2Н

Схема 7

Для специалиста в данной области техники будет очевидно, что некоторые промежуточные соединения могут нуждаться в защите, прежде чем они будут подвергнуты синтетическим превращениям, в соответствии с описанным выше. Для того чтобы ознакомиться с подходящими защитными группами, см., например, ТЛУ.Сгеепе. РгсИесЙуе Отоирк ίη Отдашс §уи!йе8Щ, Ιοίιη ΧνίΚν & 8ои5, [пс.. Иете Уогк (1981).

Применения соединений формулы (I).

Как описано выше, гиперактивность сигнальных путей семейства ΤΟΡβ может приводить к отложению внеклеточного матрикса, повышать уровень воспалительной реакции, что может затем вести к фиброзам в тканях и органах (например, в легких, почках и печени) и, в конце концов, приводит к отказу работы органа. См., например, Вогбег, XV.А. и КиоНайб Ε. 1. С1ш. Шуей. 90: 1-7 (1992) и Вотбет, \ν.Λ. и ИоЫе, Ν.Α. N. Еид1. 1. Меб. 331: 1286-1292 (1994). Исследования показали, что синтез ΤΟΡβ и/или матричной РНК активина и уровень ΤΟΡβ и/или активина повышаются у пациентов страдающих от различных фиброзных расстройств, например фиброзной болезни легких, алкогольных и аутоиммунных печеночных фиброзов, миелофиброзов, легочных фиброзов, вызванных блеомицином и легочных фиброзов неясного происхождения.

Соединения формулы (I), которые являются антагонистами рецепторов А1к5 и/или А1к4 семейства ΤΟΡβ типа I и ингибируют сигнальные пути ΤΟΡβ и/или активина, являются, следовательно, пригодными для лечения и/или профилактики расстройств и заболеваний, опосредуемых повышенным уровнем активности ΤΟΡβ и/или активина. Как это понятие используется в настоящем изобретении, соединение ингибирует сигнальный путь семейства ΤΟΡβ, когда оно связывается (например, со значением Κ.'₅₀ менее 10 мкмоль, более предпочтительно менее 1 мкмоль, еще более предпочтительно менее 0,1 мкмоль) с рецептором пути (например, А1к5 и/или А1к4), конкурируя, таким образом, с эндогенным лигандом(лигандами) или субстратом (субстратами) за сайт связывания рецептора и уменьшая способность рецептора преобразовывать внутриклеточный сигнал в виде ответной реакции на связывание эндогенного лиганда или субстрата. Вышеупомянутые расстройства и заболевания включают любые состояния (а), отмеченные присутствием чрезмерно высокого уровня ΤΟΡβ и/или активина; и/или (Ь) избыточного накопления внеклеточного матрикса; и/или (с) повышенного количества и синтетической активности миофибробластов. Эти расстройства и заболевания включают (но не ограничиваются ими) фиброзные состояния, такие как склеродермия, легочные фиброзы неясного происхождения, гломерулонефриты, диабетическая нефропатия, волчаночный нефрит, нефропатия, вызванная гипертензией, рубцы ротовой полости и роговицы, печеночные и желчные фиброзы, острое поражение легких, легочные фиброзы, пост

- 12 009441 инфарктные кардиофиброзы, фибросклерозы, фибротические раковые опухоли, фиброиды, фиброму, фиброаденомы и фибросаркомы.

Другие фиброзные состояния, для которых может быть терапевтически полезной профилактика при помощи соединений формулы (I), включают в себя: фиброзы, вызванные радиационной терапией, фиброзы, вызванные, химиотерапией, хирургические рубцы, включая операционные спайки, ламнэктомию и коронарный рестеноз.

Было также найдено, что повышенная активность ΤΟΡβ явно проявляется у пациентов с прогрессирующими раковыми заболеваниями. Исследования показали, что на поздних стадиях различных раковых заболеваний и опухолевые, и стромальные клетки с опухолями в целом вырабатывают повышенное количество ΤΟΡβ. Это ведет к стимуляции ангиогенеза и клеточной подвижности, подавлению иммунной системы и увеличивает взаимодействие опухоли с внеклеточным матриксом. См., например, Но_)о, М. е! а1. №1Шгс 397: 530-534 (1999). В результате опухолевые клетки становятся более инвазивными и дают метастазы в удаленных органах. См., например, Маейага, Υ. е! а1. 1. Сйп. Опсо1. 17: 607-614 (1999) и Исой, А. е! а1. Сапсег Ер1бетю1. Вютаткетк Ртеу. 7: 497-504 (1998).

Таким образом, соединения формулы (I), которые являются антагонистами рецептора типа I ΤΟΡβ и ингибируют сигнальный путь ΤΟΡβ, также являются полезными для лечения и/или профилактики различных раковых заболеваний на поздних стадиях, которые приводят к повышенной выработке ΤΟΡβ. Такие поздние стадии раковых заболеваний включают опухоли легких, груди, печени, желчного тракта, пищеварительного тракта, головных и шейных отделов, поджелудочной железы, простаты, шейки матки, а также множественную миелому, меланому, глиому и глиобластому.

Важно отметить, что из-за хронической и, в некоторых случаях, локализованной природы расстройств и заболеваний, которым содействует избыточный уровень ΤΟΡβ и/или активина, использование в лечебных целях небольших молекул (таких как в настоящем изобретении) является предпочтительным для долговременного лечения.

Соединения формулы (I) оказываются полезными не только при лечении расстройств и болезней, которые опосредованы повышенным уровнем активности ΤΟΡβ и/или активина, эти соединения также могут быть использованы для профилактики указанных расстройств и заболеваний. Известно, что полиморфизмы, ведущие к повышенному содержанию ΤΟΡβ и/или выработке активина, были соотнесены с фиброзами и гипертензией. Действительно, высокие уровни ΤΟΡβ в сыворотке крови кореллируют с развитием фиброзов у пациентов с раком груди, которые получали радиационную терапию, с хронической реакцией «трансплантат против хозяина», с идиопатической интерстициальной пневмонией, с облитерирующим эндофлебитом у реципиентов трансплантатов и с перитонеальным фиброзом у пациентов, подвергающихся непрерывному амбулаторному перитонеальному диализу. Таким образом, уровни ΤΟΡβ и/или активина в сыворотке крови и уровни ΤΟΡβ и/или информационной РНК активина в ткани могут быть измерены и использованы как диагностические и прогностические признаки расстройств и заболеваний, которые опосредованы сверхэкспрессией ΤΟΡβ и/или активина, и полиморфизмы в гене для ΤΟΡβ, который определяет выработку ΤΟΡβ и/или активина, также могут быть использованы в предсказании предрасположенности к подобным расстройствам и заболеваниям. См., например, В1оЬе, Ο.Ο е! а1. N. Еп§1. 1. Меб. 342 (18) 1350-1358 (2000); Майше, Τ. е! а1. Ат. 1., Векрп-.СеП Мо1 Вю1. 13: 17-24 (1995); Й1оие. 8. е! а1. Вюсйет. Вюрйук. Век. Сотт. 205: 441-448 (1994); Майше, Τ. е! а1. Ат. 1. Ра!йо1. 148: 707713 (1996); Эе В1е8ег е! а1. Нера!о1оду 26: 905-912 (1997); Ра^1отек1, ТЕ. е! а1. 1. С1т. Й1уе51. 100: 639-648 (1997); апб 8идуата, М. е! а1. Οа8!^оеп!е^о1оду. 114: 550-558 (1998).

Введение соединений формулы (I) в организм.

Как определено выше, эффективное количество представляет собой такое количество, которое необходимо, чтобы вызвать терапевтический эффект у пациента. Для соединений формулы (I) эффективное количество может заключаться в пределах приблизительно от 1 до приблизительно 150 мг/кг (например, приблизительно от 1 до приблизительно 100 мг/кг). Как признается специалистами в данной области техники, эффективные дозы также будут варьироваться в зависимости от способа введения в организм, использования наполнителей и возможности совместного применения с другими видами терапевтического лечения, включая использование других терапевтических средств и/или радиационной терапии.

Соединения формулы (I) могут вводиться в организм любым способом, пригодным для введения фармацевтических веществ. Эти способы включают (но не ограничиваются этим): пилюли, таблетки, капсулы, аэрозоли, медицинские свечи, жидкие препараты для приема внутрь или инъекций, или для использования в качестве глазных или ушных капель, диетические добавки и препараты местного действия. Фармацевтически приемлемые составы включают водные растворы активного вещества, изотонические солевые растворы, 5% глюкозу или другой хорошо известный фармацевтически приемлемый наполнитель. Солюбилизирующие агенты, такие как циклодекстрины, или другие солюбилизирующие агенты, хорошо известные специалистам в данной области, могут быть использованы в качестве фармацевтических наполнителей для передачи фармацевтических веществ. Что касается путей введения в организм, лекарственные составы могут вводиться перорально, интраназально, трансдермально, внутрикожно, вагинально, внутриушным, внутриглазным, внутриротовым (защечно) способами, ректально, че

- 13 009441 рез слизистые оболочки, через ингаляцию, путем имплантации (например, хирургически) или внутривенно.

Лекарственные составы могут вводиться животным (например, млекопитающим, таким как человек, иные (кроме человека) приматы, лошадь, собака, корова, свинья, овца, коза, кошка, мышь, крыса, морская свинка, кролик, хомяк, песчанка, хорек, а также ящерицам, рептилиям или птицам).

Соединения формулы (I) необязательно могут вводиться в сочетании с одним или несколькими средствами, которые ингибируют сигнальный путь ΤΟΕβ или лечат соответствующие патологические расстройства (например, фиброзы или прогрессирующие раковые заболевания) при помощи другого механизма действия. Примеры таких средств включают ферментные ингибиторы, преобразующие ангиотензин, нестероидные, стероидные противовоспалительные средства, химеотерапию или радиацию, а также средства, являющиеся антагонистами связывания лигандов или активации рецепторов ΤΟΕβ, например, анти-ΤΟΕβ, антитела антирецепторов ΤΟΕβ или антагонисты рецепторов ΤΟΕβ типа II.

Настоящее изобретение в дальнейшем будет описано в следующих примерах, которые не ограничивают область изобретения, описанную в формуле изобретения.

Синтетические процедуры, проиллюстрированные в вышеприведенных схемах 1 и 2, были применены для синтеза соединений, приведенных ниже в заголовках.

Пример 1. 4-[2-(6-Метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]пиримидин-2иламин.

Синтез соединения, указанного в заголовке, описан ниже в частях (а)-(Г).

a) 2-Метил-6-триметилсиланилэтинилпиридин.

Обезвоженный триэтиламин (45 мл), Р6С1₂(РРй₃)₂ (0,48 ммоль) и йодид меди (I) (1,45 ммоль) добавляют к раствору 6-бром-2-метилпиридина (48,2 ммоль) в безводном ДМФА (110 мл). К образовавшемуся оранжевому раствору добавляют по каплям (триметилсилил)ацетилен (62,6 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь концентрируют в вакууме и разбавляют 100 мл эфира, 100 мл гексана и 100 мл воды. Образовавшуюся эмульсию фильтруют через целитовую пробку, промывая эфиром. Отделенную органическую фазу промывают водой (1х), сушат над Мд§0₄ и концентрируют в вакууме. Получают 8,86 г темно-коричневого масла, идентифицируемого, как 2-метил-6-триметилсиланилэтинилпиридин.

Ή-ЯМР (СОС1₃, 400 МГц): 0,24 (с, 9Н), 2,53 (с,3Н), 7,06 (д, 1=7,78 Гц, 1Н), 7,26 (д, 1=7,64 Гц, 1Н), 7,50 (дд, 1=7,75, 7,74 Гц, 1Н);

МС(Е8Р+) 190,09(М+1).

b) 2-Этинил-6-метилпиридин.

Раствор 2-метил-6-триметилсиланилэтинилпиридина (46,8 ммоль) в насыщенном растворе карбоната калия в метаноле (115 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, концентрируют в вакууме, растворяют в 200 мл эфира, промывают водой (2x100 мл), сушат над Мд§0₄ и концентрируют в вакууме. Получают 4,8 г темно-коричневого масла, идентифицируемого как 2-этинил-6-метилпиридин.

Ή-ЯМР (СОС1₃, 400 МГц): 2,53 (с, 3Н), 3,10 (с, 1Н), 7,10 (д, 1=7,81 Гц, 1Н), 7,27 (д, 1=7,67 Гц, 1Н), 7,52 (дд, 1=7,75, 7,74 Гц, 1Н);

МС(+/-) нет молекулярного иона.

c) 4-(6-Метилпиридин-2-ил)бут-3 -ин-2-он.

Раствор 2-этинил-6-метилпиридина (41,00 ммоль) в 30 мл безводного ТГФ прибавляют по каплям к 1,0 молярному раствору этилмагнийбромида/ТГФ (61,5 ммоль) в безводном ТГФ (30 мл) при 0°С в атмосфере азота при выделении газа. После перемешивания в течение 30 мин раствор переливают по трубке в раствор уксусного ангидрида (82,0 ммоль) в безводном ТГФ (30 мл) при 0°С в атмосфере азота. Через 45 мин реакцию гасят насыщенным раствором хлорида аммония. После того как реакционная смесь нагреется до комнатной температуры, ее разбавляют водой. Водную фазу экстрагируют эфиром (2x100 мл). Объединенные органические фракции промывают насыщенным раствором хлористого аммония (2х), сушат/обесцвечивают над Мд§0₄/активированным углем и концентрируют в вакууме. Получают 6,54 г коричневого масла, идентифицируемого как 4-(6-метилпиридин-2-ил)бут-3-ин-2-он.

Ή-ЯМР (СОС1₃, 400 МГц): 2,45 (с, 3Н), 2,56 (с, 3Н), 7,19 (д, 1=7,83 Гц, 1Н), 7,38 (д, 1=7,58 Гц, 1Н), 7,59 (дд, 1=7,76, 7,76 Гц, 1Н);

МС(+/-) нет молекулярного иона.

6) 1-[2-(6-Метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]этанон.

1-Аминопиридиний йодид (82 ммоль) добавляют к раствору 4-(6-метилпиридин-2-ил)бут-3-ин-2она (41 ммоль) в 60 мл хлористого метилена при комнатной температуре. После охлаждения до 0°С, прибавляют раствор гидроксида калия (106,6 ммоль) в 60 мл воды и двухфазную смесь энергично перемешивают. Через 5 мин реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры. Через 3,5 ч реакционную смесь разбавляют 120 мл смеси хлористого метилена с водой (1:1) и доводят рН до 7 концентрированной соляной кислотой. Водную фазу тщательно экстрагируют хлористым метиленом. Объединенные органические фракции промывают водой, сушат над Мд§0₄ и концентрируют в вакууме. Получают темно-коричневое твердое вещество. Это твердое вещество растворяют в этилацетате (200 мл) и экстрагируют разбавленной 1н. соляной кислотой. Объединенные водные фракции промывают этилаце

- 14 009441 татом (1 х), доводят рН до 8 при помощи твердого бикарбоната и экстрагируют этилацетатом (3х). Объединенные органические фракции промывают водой (1х), насыщенным раствором соли (1х), сушат/обесцвечивают над Мд§О₄/активированным углем и концентрируют в вакууме. Получают 5,24 г желтовато-коричневого твердого вещества, идентифицированного как 1-[2-(6-метилпиридин-2ил)пиразоле[1,5-а]пиридин-3-ил]этанон.

Ή-ЯМР (СИС1₃, 300 МГц): 2,26 (с, 3Н), 2,64 (с, 3Н), 7,01 (дд, 1=6,90, 6,90 Гц, 1Н), 7,29 (д, 1=7,80 Гц,

1Н), 7,47 (дд, 1=7,20, 8,70 Гц, 1Н), 7,56 (д, 1=7,50 Гц, 1Н), 7,77 (дд, 1=6,60, 7,80 Гц, 1Н), 8,40 (д, 1=9,00 Гц,

1Н), 8,51 (д, 1=6,60 Гц, 1Н);

МС(+/-) нет молекулярного иона.

е) 3-Диметиламино-1-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]пропенон.

Раствор 1-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]этанона (20,85 ммоль) в 80 мл диэтилацеталя Ν,Ν-диметилформамида нагревают до 135°С в атмосфере азота. Через три дня реакционную смесь концентрируют в вакууме до достижения неизменной массы и идентифицируют как

3-диметиламино-1-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло [1,5-а]пиридин-3-ил]пропенон.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆, 300 МГц): 2,47 (с, 9Н), 4,96 (д, 1=12,6 Гц, 1Н), 7,07 (ддд, 1=1,50, 6,90, 6,90 Гц, 1Н), 7,30 (д, 1=7,78 Гц, 1Н), 7,38-7,41 (м, 1Н), 7,40 (д, 1=12,3 Гц, 1Н), 7,44 (д, 1=7,50 Гц, 1Н), 7,76 (дд, 1=7,50, 7,80 Гц, 1Н), 8,19 (дд, 1=0,90, 8,25 Гц, 1Н), 8,71 (дд, 0,90, 6,45 Гц, 1Н);

МС(Е8Р+) 307,12(М+1).

1) 4-[2-(6-Метилпиридин-2ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3ил ]пиримидин-2-иламин.

21% раствор (по весу) этилата натрия в этаноле (48,99 ммоль) добавляют к суспензии гидрохлорида гуанидина (48,99 ммоль) в безводном изопропиловом спирте (50 мл). Немедленно выпадает осадок хлорида натрия. К этой суспензии добавляют раствор 3-диметиламино-1-[2-(6-метилпиридин-2ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]пропенона (20,85 ммоль) в безводном изопропиловом спирте (50 мл). Темную суспензию кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Теплую реакционную смесь выливают на лед (130 г), колбу промывают водой и добавляют эту воду к ледяной суспензии. Суспензию перемешивают 1,5 ч, фильтруют, промывают холодной водой и сушат на воздухе. Получают 2,63 г желтовато-коричневого твердого вещества, идентифицированного как 4-[2-(6-метилпиридин-2ил)пиразоле[1,5-а]пиридин-3-ил]пиримидин-2-иламин. Жидкий маточный раствор концентрируют в вакууме, суспендируют в изопропиловом спирте, фильтруют, промывают изопропиловым спиртом, водой, хлористым метиленом и сушат на воздухе. Получают 1,25 г желтовато-коричневого порошка, идентифицированного как 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]пиримидин-2-иламин. Обе порции объединяют, еще раз суспендируют в хлористом метилене, твердое вещество отфильтровывают, сушат на воздухе и получают 3, 62 г желтовато-коричневого твердого вещества.

Ή-ЯМР (ДМСО-бе, 300 МГц): 2,44 (с, 3Н), 6,24 (д, 1=5,40 Гц, 1Н), 6,50 (ушир. с, 2Н), 7,06 (ддд, 1=1,40, 6,75, 6,90 Гц, 1Н), 7,31 (д, 1=7,80 Гц, 1Н), 7,41 (ддд, 1=1,05, 6,75, 7,80 Гц, 1Н), 7,51 (д, 1=7,50 Гц, 1Н), 7,79 (д, 1=7,50, 7,80 Гц, 1Н), 7,94 (д, 1=5,40 Гц, 1Н), 8,55 (дд, 1=1,05, 9,15 Гц, 1Н), 8,75 (дд, 1=0,90, 6,45 Гц, 1Н);

МС(Е8Р+) 303,12(М+1).

Ингибиторная активность соединений формулы (I) в отношении ΤΟΡβ или активина может быть оценена посредством методов, описанных в следующих примерах.

Пример 2. Бесклеточный анализ для оценки ингибрования аутофосфорилирования рецептора ΤΟΡβ типа I.

Активность ΤΟΡβ рецептора типа I серин-треонин-киназы измеряют как активность аутофосфорилирования цитоплазматического домена рецептора, содержащего Ν-концевой полигистидин, метку сайта расщепления ТЕУ (вирус табачной гравировки), например гистидин-ΤΟΡβΚΙ. Домены помеченного гистидином рецептора цитоплазмической киназы выделяют очищением из клеточных культур инфицированных насекомых с использованием системы экспрессирования бакуловируса О1Ьсо-ВКГ Рак1Вас ΗΤΒ.

В 96-луночный никелевый радиационный планшет (ΝΕΝ ЫГе 8с1епсе, Реткш Е1тег) добавляют 20 мкл раствора ΑΤΡ с активностью ³³Р-АТФ 1,25 мкКи/25 мкмоль АТР в аналитическом буферном растворе (50 ммоль Нерек (№2-гидроксиэтилпиперазин-М-2-этансульфоновая кислота), 60 ммоль №С1, 1 ммоль МдС1₂, 2 ммоль ΌΤΤ (Дитиотреитол), 5 ммоль МпС1₂, 2% глицерин и 0,015% Вту 35). 10 мкл тестовых соединений формулы (I), приготовленных в виде 5% раствора ДМСО, добавляют в радиационный планшет. Затем пробу инициируют добавлением 20 мкл испытательного буферного раствора, содержащего 12,5 пмоль гистидин-ΤΟΡβΚΙ, в каждую ячейку. Планшет инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре и после этого останавливают реакцию одноразовым промыванием ΤΒ8 (раствор Трисбуфера). Радиоактивность каждой ячейки измеряют считыванием с помощью Τορί,'οιιηΙ (Раскатб). Общее связывание (не ингибирование) определяют как отсчеты, измеренные в присутствии раствора ДМСО, не содержащего тестируемого соединения, а неспецифическое связывание определяют как отсчеты, измеренные в присутствии ЭДТА или контрольного образца, не содержащего киназы.

По альтернативному варианту реакцию, проведенную с использованием вышеперечисленных реагентов и условий инкубации, но в пробирке для микроцентрифуги, анализируют при помощи сепариро

- 15 009441 вания на 4-20% геле 8Ό8-ΡΆ6Ε (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия), причем включение радиоактивной метки в полосу гистидин-ΤΟΡβΚΙ в 40 кДа (килоДальтон) на 8Ό8ΡΆ6Ε количественно анализируют на приборе 81огш Р1юкр1юшищег (Мо1еси1аг Оупаписк).

Соединения формулы (I), как правило, демонстрируют значение Ю₅₀, не превышающее 10 мкмоль; некоторые демонстрируют значение ТС₅₀, не превышающее 0,1 мкмоль;

Пример 3. Бесклеточный анализ для оценки ингибрования активности киназы рецептора активина типа I киназы.

Ингибирование активности аутофосфорилирования киназы рецептора активина типа I (А1к4) тестовым соединением формулы (I) определяют способом, аналогичным описанному выше в примере 2, за исключением того, что вместо гистидин-ТСРЗК1 аналогичным образом используют меченную гистидином форму А1к4 (Н1к-А1к4).

Пример 4. Анализ для оценки клеточного ингибирования сигнальной активности и цитотоксичности ΤΟΡβ.

Биологическую активность соединений формулы (I) определяют, измеряя их способность ингибировать индуцированную ΤΟΡβ активность репортеров РАЕ люциферазы (РА [-ингибитор активатора плазминогена) в клетках НерО2.

НерО2 клетки устойчиво трансфицируют репортером РАЕлюциферазы, выращенного в среде ΌΜΕΜ (среда Игла, модифицированная по Дульбеко), содержащей 10% РВ8 (фатальная коровья сыворотка), пенициллин (100 ед./мл), стрептомицин (100 мкг/мл), Ь-глутамин (2 ммоль), натриевую соль пировиноградной кислоты (1 ммоль) и аминокислоты, не являющиеся незаменимыми (1х). Трансфицированные клетки затем помещают в 96-луночный планшет при концентрации 2,5х10⁴ клеток/лунку и истощают в течение 3-6 ч в среде с 0,5% РВ8 при 37°С в инкубаторе с 5% СО₂. После этого клетки активируют лигандом или 2,5 нг/мл ΤΟΡβ в беспитательной среде, содержащей 1% ДМСО и содержащей или не содержащей тестируемое вещество формулы (I), и инкубируют, как описано выше, в течение 24 ч. На следующий день вымывают реакционную среду и определяют активность репортеров люциферазы, используя набор ЬисЕйе Ьисйегаке Веропег Оепе Аккау кН (Раскагб, са1. по. 6016911) в соответствии с рекомендациями. Ячейки считывают при помощи планшет-ридера \Уа11ас М1сгоЬе!а, считывание ячеек используют для определения значений Κ.'₅₀ соединений формулы (I) для ингибирования ΤΟΡβиндуцированной активности репортера РАЕ люциферазы в клетках НерО2. Соединения формулы (I), как правило, демонстрируют значения ГС50, не превышающие 10 мкмоль.

Цитотоксичность определяют, используя условия клеточной культуры, аналогичные описанным выше. В частности, жизнеспособность клеток определяют после инкубации в течение ночи с помощью набора Су!оЬйе се11 У1аЬ11йу кй (Раскагб, са!.по. 6016901). Соединения формулы (I), как правило, демонстрируют значения ЕЭ₂₅, превышающие 10 мкмоль.

Пример 5. Анализ для оценки клеточного ингибирования сигнальной активности активина

Клеточное ингибирование сигнальной активности активина тестовыми соединениями формулы (I) определяют способом, аналогичным описанному выше в примере 4, за исключением того, что вместо 2,5 нг/мл ΤΟΡβ добавляют к клеткам в бессывороточной среде 100 нг/мл активина.

Пример 6. Анализ ΤΟΡβ-индуцированной экспрессии коллагена.

Получение иммортализованных клеток, экспрессирующих зеленый флуоресцирующий белок под контролем промотора.

Фибробласты получают из кожи взрослых трансгенных мышей, экспрессирующих зеленый флуоресцирующий белок (ΟΡΡ) под контролем промотора 1А1 коллагена (см. Кгетреп, К. е! а1. Οеηе Ехр. 8: 151-163 (1999)). Клетки иммортализуют при помощи температурно-чувствительного большого Т-антигена, который является активным при 33°С. Клетки обрабатывают при температуре 33 °С, а затем температуру повышают до 37°С для инактивации Т-антигена (см. Xи, 8. е! а1. Ехр. Се11 Век. 220: 407-414 (1995)). По прошествии приблизительно 4 дней и одного деления клетки прекращают размножение. Клетки затем замораживают в виде аликвот, достаточных для заполнения одного 96-луночного планшета.

Анализ ΤΟΡβ-индуцированной экспрессии коллагена-ΟΡΡ.

Клетки размораживают, разводят в полной среде ΌΜΕΜ (содержит аминокислоты, не являющиеся незаменимыми, 1 ммоль пировинограднокислого натрия и 2 ммоль Ь-глутамина) с 10% фетальной телячьей сыворотки и инкубируют в течение ночи в атмосфере 5% СО₂ при 37°С. На следующий день клетки трипсинизируют и переносят в 96-луночный формат по 30000 клеток в лунку в полной среде ΌΜΕΜ, содержащей 2% фетальную телячью сыворотку, но без фенолового красного. Клетки инкубируют при 37°С в течение 3-4 ч, чтобы дать им прилипнуть к планшету, затем добавляют в тройном повторе растворы, содержащие тестируемые соединения формулы (I), как без ΤΟΡβ, так и с содержанием 1 нг/мл ΤΟΡβ. В каждую лунку добавляют также ДМСО до конечной концентрации 0,1%. Через 48 ч после добавления раствора, содержащего тестируемые вещества, измеряют флуоресцентную эмиссию ΟΡΡ при длине волны 530 нм, следующую за возбуждением при длине волны 485 нм, при помощи микропланшетридера Су^Цот (Рег8ерйуе Вюкук!етк). Затем данные выражают в виде отношения данных для ΤΟΡβиндуцированных лунок к неиндуцированным для каждого тестируемого образца.

- 16 009441

Другие воплощения изобретения

Следует понимать, что, хотя изобретение было приведено в сочетании с его детальным описанием, предшествующее описание имеет целью иллюстрировать, но не ограничить область изобретения, которая ограничена объемом прилагаемой формулы изобретения. Прочие аспекты, преимущества и модификации находятся в рамках нижеследующей формулы изобретения.

Claims (45)

1. Соединение следующей формулы:

где каждый из Х₁, Х₂, Х₃ и Х₄ независимо представляет собой СК^Х или Ν; при условии, что только два из числа Х₁, Х₂, Х₃ и Х₄ могут быть N одновременно;

каждый из Υ₁ и Υ₂ независимо представляет собой СК^У или Ν; при условии, что по крайней мере один из Υ₁ и Υ₂ должен являться Ν;

каждый из К¹ независимо представляет собой одну из следующих групп: алкил, алкенил, алкинил, алкоксил, галоген, гидрокси, амино, нитро, циано, меркапто или циклоалкил;

каждый из К² независимо представляет собой одну из следующих групп: алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидрокси, -ΝΗ₂, -М1(алкил), -^алкил)₂, -ΝΙ 1(циклоалкил), -^алкил)(циклоалкил), ^Н(гетероциклоалкил), -ΝΙ 1( гетероарил), -ΝΗ-алкилгетероциклоалкил, -ΝΗ-алкилгетероарил, -ΝΙ 1(аралкил), циклоалкил, (циклоалкил)алкил, циано, сульфо, меркапто, алкокси, циклоалкокси, циклоалкилалкокси, арилокси, арилалкокси, гетероциклоалкокси, (гетероциклоалкил)алкокси, гетероарилокси, гетероарилалкокси, алкилсульфанил, циклоалкилсульфанил, (циклоалкил)алкилсульфанил, арилсульфанил, аралкилсульфанил, гетероциклоалкилсульфанил, (гетероциклоалкил)алкилсульфанил, гетероарилсульфанил, гетероарилалкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил или аминосульфонил;

т представляет собой 0, 1, 2, 3 или 4; при условии, что когда ш>2, две соседние группы К¹ могут объединяться с образованием 4-8-членного необязательно замещенного циклического остатка;

η представляет собой 0, 1, 2 или 3; при условии, что когда п>2, две соседние группы К² могут объединяться с образованием 4-8-членного необязательно замещенного циклического остатка; и каждый из К^Х и К^У независимо представляет собой водород или алкил;

где следующие термины, относящиеся к группам/радикалам, как сами по себе, так и в составе других групп/радикалов, имеют следующие значения:

«алкил» означает линейную или разветвленную насыщенную алифатическую углеводородную группу, включающую 1-8 углеродных атомов, необязательно замещенную одним или несколькими заместителями;

«алкенил» означает линейную или разветвленную алифатическую углеродную группу, которая содержит 2-8 углеродных атомов и по меньшей мере одну двойную связь, где данная группа необязательно замещена одним или несколькими заместителями;

«алкинил» означает линейную или разветвленную алифатическую углеродную группу, которая содержит 2-8 углеродных атомов и по меньшей мере одну тройную связь, где данная группа необязательно замещена одним или несколькими заместителями;

«амино» группа означает конечную группу -ΝΚ^χΚζ где каждый из К^Х и К^У независимо является водородом, гидроксилом, алкилом, алкоксилом, циклоалкилом, (циклоалкил)алкилом, арилом, аралкилом, гетероциклоалкилом, (гетероциклоалкил)алкилом, гетероарилом или гетероаралкилом, а также группу -ΝΚ^χ-, где К^Х имеет те же значения, что указаны выше;

«арил» означает фенил, нафтил или бензоконденсированную группу, состоящую из 2-3 колец, где данный арил необязательно замещен одним или несколькими заместителями;

«аралкил» означает алкильную группу, замещенную арильной группой, где «алкил» и «арил» определены выше;

«циклоалкил» означает алифатическое карбоциклическое кольцо, состоящее из 3-10 атомов углерода, необязательно замещенное одним или несколькими заместителями;

«гетероциклоалкил» означает 3-10-членную насыщенную кольцевую структуру, в которой один или несколько атомов кольца являются гетероатомами, например Ν, О или 8, и которая необязательно замещена одним или несколькими заместителями;

«гетероарил» означает моноциклическую, бициклическую или трициклическую кольцевую систему, имеющую 5-15 кольцевых атомов, в числе которых один или несколько атомов представляют собой гетероатомы, например Ν, О или 8, причем одно или несколько колец в бициклической или трицикличе

- 17 009441 ской структуре являются ароматическими, где данный гетероарил может быть необязательно замещен одним или несколькими заместителями;

«гетероаралкил» означает алкильную группу, которая замещена группой гетероарил, где «алкил» и «гетероарил» определены как указано выше;

«сульфо» означает группу -8О₃Н;

«алкокси» означает группу алкил-Ο-, где термин «алкил» определен как указано выше;

«галоген», или «гало», означает группу фтор, хлор, бром или йод;

или фармацевтически приемлемые соли или Ν-оксиды указанных соединений.

2. Соединение по п.1, в котором каждый из XI, X₂, X₃ и X независимо представляет собой СК^Х.

3. Соединение по п.2, в котором каждый из К^х независимо представляет собой водород, незамещенный алкил, гидроксиалкил, галогеналкил или аминоалкил.

4. Соединение по п.2, в котором каждый из К^х независимо представляет собой водород, незамещенный алкил, гидроксиалкил или трифторметил.

5. Соединение по п.2, в котором каждый из К^х независимо представляет собой водород.

6. Соединение по п.2, в котором каждый из Уг, X₃ и У₄ независимо представляет собой -СН- или -С(СН₃)- и X! представляет собой -СН-.

7. Соединение по п.2, в котором т представляет собой 0, 1 или 2.

8. Соединение по п.7, в котором каждый К¹ независимо представляет собой незамещенный алкил, гидроксиалкил, галогеналкил, аминоалкил, арилоксиалкил, незамещенный алкенил, алкокси, галоген, гидрокси, циано, амино или меркапто.

9. Соединение по п.7, в котором т представляет собой 1 и К¹ представляет собой 6-алкил, 6-алкенил, 6-циклоалкил.

10. Соединение по п.7, в котором и Υ₁ и Υ₂ представляют собой Ν.

11. Соединение по п.10, в котором п представляет собой 1 или 2 и каждый из К² независимо представляет собой одну из следующих групп: незамещенный алкил, гидроксиалкил, галогеналкил, аминоалкил, алкокси, галоген, гидрокси, циано, -ΝΗ₂, моноалкиламино, диалкиламино, моноциклоалкиламино, моногетероциклоалкиламино, моногетероариламино, моно((гетероциклоалкил)алкил)амино, моно(гетероаралкил)амино, -Ы(алкил)(циклоалкил), меркапто, алкилсульфанил, алкилсульфинил или алкилсульфонил.

12. Соединение по п.11, в котором п=1, К² является замещенным в положении 3 и представляет со- бой одну из следующих групп: -ΝΗ2, моноалкиламино, диалкиламино, моноциклоалкиламино, моногетероциклоалкиламино, моногетероариламино, моно((гетероциклоалкил)алкил)амино, моно(гетероаралкил)амино.

13. Соединение по п.12, в котором т представляет собой 1 и К¹ представляет собой 6-метил, 6-этил, 6-пропил, 6-трифторметил, 6-винил или 6-циклопропил.

14. Соединение по п.1, в котором т представляет собой 0, 1 или 2.

15. Соединение по п.14, в котором К¹ является замещенным по положению 5 или 6.

16. Соединение по п.15, в котором К¹ представляет собой одну из следующих групп: С1_-4алкил, С1-4алкокси, С1-4алкилтио, галоген или амино.

17. Соединение по п.14, в котором каждый К¹ независимо представляет собой одну из следующих групп: незамещенный алкил, гидроксиалкил, галогеналкил, аминоалкил, незамещенный алкенил, алкокси, галоген, гидрокси, циано, -ΝΗ2, моноалкиламино, диалкиламино, моноциклоалкиламино, -М(алкил)(циклоалкил), меркапто или циклоалкил.

18. Соединение по п.17, в котором т представляет собой 1 и К¹ представляет собой одну из следующих групп: 6-метил, 6-этил, 6-пропил, 6-трифторметил, 6-винил или 6-циклопропил.

19. Соединение по п.1, в котором и Υι и Υ₂ представляют собой Ν.

20. Соединение по п.19, в котором п представляет собой 1 или 2 и каждый из К² независимо представляет собой одну из следующих групп: незамещенный алкил, гидроксиалкил, галогеналкил, аминоалкил, арилоксиалкил, гетероаралкилоксиалкил, алкокси, галоген, гидрокси, циано, -ΝΗ₂, моноалкиламино, диалкиламино, моноциклоалкиламино, моногетероциклоалкиламино, моногетероариламино или меркапто.

21. Соединение по п.20, в котором п представляет собой 1 и каждый К² независимо представляет собой одну из следующих групп: -ΝΗ2, моноалкиламино, диалкиламино, моноциклоалкиламино, моногетероциклоалкиламино или моногетероариламино.

22. Соединение по п.21, в котором К² является замещенным в положении 3.

23. Соединение по п.1, в котором каждый из X₂, X₃ и X₄ независимо представляет собой -СН-.

24. Соединение по п.1, в котором XI представляет собой -СН-.

25. Соединение по п.1, в котором XI представляет собой Ν.

26. Соединение по п.1, в котором X₂ представляет собой Ν.

27. Соединение по п.1, в котором X₃ представляет собой Ν.

28. Соединение по п.1, в котором X₄ представляет собой Ν.

29. Соединение по п. 1, например следующие соединения:

- 18 009441

4-(2-пиридин-2-илпиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил)пиримидин-2-иламин, 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил]пиримидин-2-иламин, 2-(6-метилпиридин-2-ил)-3 -(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)пиразоло [1,5-а] пиридин, 4-[2-(6-хлоропиридин-2-ил)пиразоло[1,5-с]пиримидин-3-ил]пиримидин-2-иламин, 2-(6-метилпиридин-2-ил)-3 -(2-морфолин-4-илпиримидин-4-ил)пиразоло [1,5-с]пиримидин, 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло [1,5-а]пиразин-3 -ил]пиримидин-2-иламин, 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил]пиримидин-2-иламин и 4-[2-(6-метилпиридин-2-ил)пиразоло[1,5-с]пиримидин-3-ил]пиримидин-2-иламин или фармацевтически приемлемые соли или Ν-оксиды этих соединений.

30. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

31. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.29 и фармацевтически приемлемый носитель.

32. Способ ингибирования сигнального пути ΤΟΕβ в организме, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.1.

33. Способ ингибирования сигнального пути ΤΟΕβ в организме, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.29.

34. Способ ингибирования рецепторов ΤΟΕβ типа 1 в клетке, включающий стадию приведения упомянутой клетки в контакт с эффективным количеством соединения по п.1.

35. Способ ингибирования рецепторов ΤΟΕβ типа 1 в клетке, включающий стадию приведения упомянутой клетки в контакт с эффективным количеством соединения по п.29.

36. Способ снижения накопления избыточного внеклеточного матрикса в организме, вызываемого ΤΟΕβ, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.1.

37. Способ снижения накопления избыточного внеклеточного матрикса в организме, вызываемого ΤΟΕβ, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.29.

38. Способ лечения или профилактики фиброзных состояний в организме, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.1.

39. Способ лечения или предотвращения фиброзных состояний в организме, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.29.

40. Способ по п.38 или 39, где фиброзные состояния выбраны из группы, включающей следующие заболевания: склеродермия, волчаночный нефрит, заболевания соединительной ткани, заживление ран, хирургическое рубцевание, повреждение спинного мозга, повреждение ЦНС, легочные фиброзы неясного происхождения, хронические обструктивние заболевания легких, синдром расстройства дыхания у взрослых, острое поражение легких, лекарственное поражение легких, гломерулонефриты, диабетическая нефропатия, нефропатия, вызванная гипертензией, печеночные и желчные фиброзы, цирроз печени, почечный фиброз, первичные желчные циррозы, жировое перерождение печени, первичный склерозирующий холангит, рестенозы, сердечные фиброзы, глазные рубцы, фибросклерозы, фибротические раковые опухоли, фиброиды, фиброма, фиброаденомы, фибросаркомы, трансплантационную артериопатию, фиброзы, вызванные радиотерапией, фиброзы, вызванные химиотерапией, и ожоговый рубец.

41. Способ подавления метастазирования опухолевых клеток в организме, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.1.

42. Способ подавления метастазирования опухолевых клеток в организме, включающий введение в упомянутый организм эффективного количества соединения по п.29.

43. Способ лечения расстройств и заболеваний, опосредуемых избыточным выделением ΤΟΕβ, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по п.1.

44. Способ лечения расстройств и заболеваний, опосредуемых сверхэкспрессией ΤΟΕβ, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по п.29.

45. Способ по п.43 или 44, где указанное заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из следующих заболеваний: разрушение миелинового слоя нейронов при рассеянном склерозе, болезнь Альцгеймера, церебральная ангиопатия, раковые заболевания чешуйчатых клеток, множественная миелома, меланома, глиома, глиобластомы, лейкемия и раковые опухоли (карциномы) легких, груди, яичников, шейки матки, печени, желчного тракта, пищеварительного тракта, поджелудочной железы, простаты, головных и шейных отделов.