CZ20003889A3 - Polypeptidy specifické pro CD19XCD3 a jejich použití - Google Patents
Polypeptidy specifické pro CD19XCD3 a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20003889A3 CZ20003889A3 CZ20003889A CZ20003889A CZ20003889A3 CZ 20003889 A3 CZ20003889 A3 CZ 20003889A3 CZ 20003889 A CZ20003889 A CZ 20003889A CZ 20003889 A CZ20003889 A CZ 20003889A CZ 20003889 A3 CZ20003889 A3 CZ 20003889A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- polypeptide
- cell
- cells
- polypeptides
- antibody
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 178
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 170
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 168
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 118
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 61
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 61
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 54
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 48
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 14
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 70
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 45
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 37
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 36
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 18
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 16
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 15
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 14
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 claims description 13
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 claims description 9
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 6
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000037914 B-cell disorder Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N (2s)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- 241001104043 Syringa Species 0.000 claims 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 claims 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims 1
- 230000009919 sequestration Effects 0.000 claims 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 42
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 23
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 23
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 22
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 16
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 16
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 14
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 13
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 10
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 9
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 9
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 9
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 8
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 7
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 7
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 6
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 5
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 5
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 4
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 4
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 4
- AQIXAKUUQRKLND-UHFFFAOYSA-N cimetidine Chemical compound N#C/N=C(/NC)NCCSCC=1N=CNC=1C AQIXAKUUQRKLND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- -1 radioisotopes Substances 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 3
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 3
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 3
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 3
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 3
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMGQWSIVQFOFOQ-YKVZVUFRSA-N clemastine fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.CN1CCC[C@@H]1CCO[C@@](C)(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=CC=C1 PMGQWSIVQFOFOQ-YKVZVUFRSA-N 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 3
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 3
- 229940106721 tagamet Drugs 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 206010008531 Chills Diseases 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XADCESSVHJOZHK-UHFFFAOYSA-N Meperidine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(C(=O)OCC)CCN(C)CC1 XADCESSVHJOZHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 240000008881 Oenanthe javanica Species 0.000 description 2
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 description 2
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 2
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- YTCZZXIRLARSET-VJRSQJMHSA-M beraprost sodium Chemical compound [Na+].O([C@H]1C[C@@H](O)[C@@H]([C@@H]21)/C=C/[C@@H](O)C(C)CC#CC)C1=C2C=CC=C1CCCC([O-])=O YTCZZXIRLARSET-VJRSQJMHSA-M 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000012867 bioactive agent Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- IHEHEFLXQFOQJO-UHFFFAOYSA-N piritramide Chemical compound C1CC(C(=O)N)(N2CCCCC2)CCN1CCC(C#N)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 IHEHEFLXQFOQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001286 piritramide Drugs 0.000 description 2
- FKKAEMQFOIDZNY-CODXZCKSSA-M prednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 FKKAEMQFOIDZNY-CODXZCKSSA-M 0.000 description 2
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010024223 Adenine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029457 Adenine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N Ala-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- CTWCFPWFIGRAEP-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CTWCFPWFIGRAEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 description 1
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100030886 Complement receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CUXIOFHFFXNUGG-HTFCKZLJSA-N Cys-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N CUXIOFHFFXNUGG-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000736355 Euthyroides Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000727061 Homo sapiens Complement receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001431 Hyperuricemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N Ile-Leu-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- QUYCUALODHJQLK-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QUYCUALODHJQLK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- MHQXIBRPDKXDGZ-ZFWWWQNUSA-N Met-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 MHQXIBRPDKXDGZ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 101100261636 Methanothermobacter marburgensis (strain ATCC BAA-927 / DSM 2133 / JCM 14651 / NBRC 100331 / OCM 82 / Marburg) trpB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000009869 Neu-Laxova syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 229940122060 Ornithine decarboxylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 101100124346 Photorhabdus laumondii subsp. laumondii (strain DSM 15139 / CIP 105565 / TT01) hisCD gene Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 229940126530 T cell activator Drugs 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000000479 TCF Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010016283 TCF Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- SLLKXDSRVAOREO-KZVJFYERSA-N Val-Ala-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SLLKXDSRVAOREO-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- HQYVQDRYODWONX-DCAQKATOSA-N Val-His-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N HQYVQDRYODWONX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N allopurinol Chemical compound OC1=NC=NC2=C1C=NN2 OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003459 allopurinol Drugs 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000776 antibody secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 235000015241 bacon Nutrition 0.000 description 1
- LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N benzenecarboximidamide;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NC(=[NH2+])C1=CC=CC=C1 LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- CFOYWRHIYXMDOT-UHFFFAOYSA-N carbimazole Chemical compound CCOC(=O)N1C=CN(C)C1=S CFOYWRHIYXMDOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001704 carbimazole Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 230000005792 cardiovascular activity Effects 0.000 description 1
- 230000009084 cardiovascular function Effects 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013098 chemical test method Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001380 cimetidine Drugs 0.000 description 1
- YNNUSGIPVFPVBX-NHCUHLMSSA-N clemastine Chemical compound CN1CCC[C@@H]1CCO[C@@](C)(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=CC=C1 YNNUSGIPVFPVBX-NHCUHLMSSA-N 0.000 description 1
- 229960002881 clemastine Drugs 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 231100000294 dose-dependent toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- VLCYCQAOQCDTCN-UHFFFAOYSA-N eflornithine Chemical compound NCCCC(N)(C(F)F)C(O)=O VLCYCQAOQCDTCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005095 gastrointestinal system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002980 germ line cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 1
- 101150113423 hisD gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000013198 immunometric assay Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 229960000381 omeprazole Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000002818 ornithine decarboxylase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229960000482 pethidine Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 108010045647 puromycin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 101150081616 trpB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150111232 trpB-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Description
Polypeptidy specifické pro CD19XCD3 a jejich použití
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nových jednořetězcových multifunkčních polypeptidů obsahujících alespoň dvě vazebná místa specifická pro antigeny CD19 a CD3, v uvedeném pořadí. Předkládaný vynález se dále týká polypeptidů, kde výše popsaný polypeptid obsahuje alespoň jednu další doménu, s předem danou funkcí. Kromě toho, předkládaný se týká polynukleotidů kódujících uvedené i vektorů obsahujících uvedené dále hostitelských buněk jimi výhodně vynález polypeptidy, jakož polynukleotidy, a transformovaných a uvedených jejich použití ve výrobě polypeptidů. Navíc, předkládaný vynález se týká přípravků, výhodně farmaceutických a diagnostických přípravků, obsahujících kterýkoliv z výše popsaných polypeptidů, polynukleotidů nebo vektorů. Dalším předmětem předkládaného použití výše uvedených polypeptidů, a vektorů pro přípravu farmaceutických imunoterapii, výhodně proti malignitám pocházejícím z B lymfocytů jako jsou například nehodgkinské lymfomy.
vynálezu je polynukleotidů přípravků pro
Dosavadní stav techniky
V celém textu tohoto popisu je citováno několik dokumentů. Každý z těchto zde uvedených dokumentů (včetně všech popisů výrobce, instrukcí, atd.) je tedy zahrnut do odkazů, to ale neznamená, že citovaný dokument je opravdu dřívějším stavem techniky předkládaného vynálezu.
Navzdory zdravotní závažnosti, výzkum nemocí zprostředkovaných B lymfocyty, jako jsou například nehodgkinské lymfomy, přinesl pouze nevelký počet klinicky použitelných dat a obvyklé přístupy k léčbě podobných chorob zůstávají obtížné a nepříjemné a/nebo mají vysoké riziko relapsu. Například, ačkoli chemoterapie vysokými dávkami jako primární léčba nehodgkinských lymfomů vysokého stupně malignity může prodloužit celkové přežití, přibližně 50 % pacientů na tuto nemoc stále umírá (2-4). Kromě toho nehodgkinské lymfomy s nízkým stupněm malignity jako chronická lymfatická leukémie a lymfom buněk marginální zóny lymfatických uzlin jsou stále nevyléčitelné. To stimulovalo výzkum alternativních léčebných strategií, jako je například imunoterapie Protilátky namířené proti molekulám buněčného povrchu definovaným CD antigeny představují jedinečnou možnost ve vývoji léčiv. Exprese určitých CD antigenů je vysoce omezena na specifickou linii lymfohemopoetických buněk a v uplynulých několika letech byly protilátky namířené proti antigenům specifickým pro lymfoidní tkáň používány pro vývoj. léčby, která byla účinná buď in vitro nebo ve zvířecích modelech (5-13). Z tohoto hlediska se ukázal být jako velmi užitečný cíl antigen CD19. CD19 je exprimován v celé linii B lymfocytů od pre-B lymfocytů do stádia zralého B lymfocytů, jeho exprese se neztrácí, je jednotně exprimován na všech lymfomových buňkách, a na kmenových buňkách se nevyskytuje (8, 14) . Zajímavý postup je použití bispecifické protilátky s jednou specifitou pro CD19 a druhou pro CD3 antigeny T lymfocytů. Ale bispecifické protilátky, které jsou zatím dostupné, mají nízkou cytotoxicitu pro T lymfocyty a potřebují současně stimulující agens, aby projevily uspokojivou biologickou aktivitu.
Základním technickým problémem předkládaného vynálezu bylo tedy poskytnout přípravky a způsoby použitelné pro léčení nemocí zprostředkovaných B lymfocyty jako jsou například různé formy nehodgkinských lymfomů. Řešení • · · · ··»·· • I · · · ······ ·<· · · · · · · • · »*· ··«··» ·« * · uvedeného odborného problému je dosaženo provedením vynálezu, který je definován v patentových nárocích.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález se týká jednořetězcového multifunkčního polypeptidů obsahujícího (a) první doménu obsahující vazebné místo imunoglobulinového řetězce nebo protilátky specificky rozpoznávající antigen CD19, a (b) druhou doménu obsahující vazebné místo imunoglobulinového řetězce nebo protilátky specificky rozpoznávající antigen CD3.
Termíny první doména a druhá doména podle předkládaného vynálezu znamenají, že jedno vazebné místo je namířeno proti obecnému markéru B lymfocytů CD19, který je jednotně exprimován na převážné většině maligních B lymfocytů, a druhé vazebné místo je namířeno proti CD3 antigenu lidských T lymfocytů.
Termín vazebné místo, jak je používaný podle předkládaného vynálezu, je označením pro doménu obsahující trojrozměrnou strukturu schopnou specifické vazby k epitopu, jako nativní protilátky, volné scFv fragmenty nebo jeden z jejich odpovídajících imunoglobulinových řetězců, výhodně řetězec VH. Tedy, uvedená doména může zahrnovat VH a/nebo VL doménu protilátky nebo imunoglobulinového řetězce, výhodně alespoň doménu VH. Na druhé straně, uvedená vazebná místa obsažená v polypeptidů podle vynálezu mohou zahrnovat alespoň jednu oblast určující komplementaritu (CDR) protilátky nebo imunoglobulinového řetězce rozpoznávající antigeny CD19 a CD3. Domény vazebných míst přítomné v polypeptidů podle vynálezu mohou být odvozeny nejen z protilátek, ale také z jiných proteinů vázajících CD19 nebo CD3, jako jsou • · • · • · • · přirozeně se vyskytující povrchové receptory nebo ligandy. Podle vynálezu je uvedené vazebné místo obsažené v doméně.
Termín multifunkční polypeptid, jak je používaný v tomto textu, je označením pro polypeptid obsahující alespoň dvě aminokyselinové sekvence pocházející z různých zdrojů, tj . ze dvou různých molekul, volitelně pocházejících z různých živočišných druhů, kde alespoň dva z uvedených zdrojů určují vazebná místa. Uvedená vazebná místa tedy určují funkce nebo alespoň některé funkce uvedeného multifunkčního peptidu. Takové polypeptidy zahrnují například bispecifické jednořetězcové (bsc) protilátky.
Termín jednořetězcový, jak je používaný podle předkládaného vynálezu, znamená, že uvedená první a druhá doména polypeptidu jsou kovalentně spojeny, výhodně ve formě souvislé lineární aminokyselinové sekvence kódované molekulou nukleové kyseliny.
CD19 označuje antigen, který je exprimován v řadě B, jako například v pre-B lymfocytech a zralých B lymfocytech, neztrácí expresi, je jednotně exprimován na všech lymfomových buňkách a chybí na kmenových buňkách (8, 14).
CD3 označuje antigen, který je exprimován na T lymfocytech jako část multimolekulárního komplexu receptoru T lymfocytu a který se skládá ze tří různých řetězců CD3s, CD35 a CD3y. Shlukování CD3 na T lymfocytech, např.
imobilizovaných anti-CD3-protilátek, . vede lymfocytu podobné zapojení receptoru
T lymfocytu, ale nezávislé na specifitě typické pro jeho klon. Ve skutečnosti většina anti-CD3-protilátek rozpoznává řetězec CD3s.
Protilátky, které specificky rozpoznávají CD19 nebo CD3 antigen, jsou popsány ve stavu techniky, např. ve (24), (25) a (43), v daném pořadí, a mohou být tvořeny obvyklými způsoby v oboru známými.
prostřednictvím k aktivaci T
Již bylo ukázáno, že bispecifické CD19XCD3 protilátky, které nemají jednořetězcovou strukturu, vykonávají T-buněčnou cytotoxicitu na lymfomových buňkách způsobem nezávislým na MHC, jsou účinné in vitro (5, 6, 9-11, 13, 43), na zvířecích modelech (7, 28), jakož i v některých pilotních klinických
12, 29, 30). Doposud tyto protilátky byly tvořeny zkouškách pomocí metod kovalentní vazbou hybrid-hybridom, monoklonálních protilátek (31) nebo technikou vzniku tzv. diabody (43) . Rozsáhlejší klinické studie byly limitované skutečností, že tyto protilátky mají nízkou biologickou aktivitu, takže muselo být použito vysoké dávkování, a že používání těchto protilátek samotných neposkytovalo užitečný léčebný účinek. Kromě toho byla omezena dostupnost materiálu klinické úrovně.
Bez vazby na konkrétní teorii, má se za to, že při použití struktury bispecifické protilátky, jak je definována výše, takto vytvářené polypeptidy, jako například bispecifické protilátky CD19XCD3, jsou obvykle schopné ničit CD19-pozitivní cílové buňky prostřednictvím doplňování cytotoxických T lymfocytů bez potřeby předběžné stimulace a/nebo současné stimulace T lymfocytů. To je v ostrém protikladu ke všem známým bispecifickým CD19XCD3 protilátkám vyráběných podle jiných molekulových struktur a obvykle nezávisí na specifitě konkrétních CD19 nebo CD3 protilátek použitých pro konstrukci, např. bispecifické jednořetězcové protilátky. Nezávislost na předběžné stimulace a/nebo současné stimulace T lymfocytů může značně přispět k výjimečně vysoké cytotoxicitě zprostředkované polypeptidem podle vynálezu, jak je doloženo příkladem konkrétní CD19XCD3 bispecifické protilátky popsané v příkladech.
Další výhodná vlastnost polypeptidů podle vynálezu je ta, že jeho malou, poměrně kompaktní strukturu je snadné produkovat a purifikovat, tím se obejdou problémy nízké
výtěžnosti, výskyt nejasně vymezených vedlejších produktů, nebo těžkopádné purifikační postupy (15-19) publikované pro CD19XCD3 specifické protilátky doposud vyrobené z hybridhybridomů, pomocí chemické vazby nebo prostřednictvím renaturace z bakteriálních inkluzních tělísek. V následujícím textu budou výhodné a neočekávané vlastnosti polypeptidu podle vynálezu diskutovány bez omezení, doprovázené připojenými příklady včetně některých výhodných provedení vynálezu, na která se odkazuje níže, která objasní obsáhlé pojetí předkládaného vynálezu.
Podle předkládaného vynálezu byl použit eukaryotický expresní systém, který byl vyvinutý pro produkci rekombinantních bispecifických jednořetězcových protilátek (1), aby vytvářel rekombinantní bispecifickou CD19XCD3 jednořetězcovou protilátku prostřednictvím exprese v buňkách CHO. Plně funkční protilátka byla snadno purifikována ze supernatantu tkáňové kultury pomocí své histidinové značky na C-konci na chromatografické koloně Ni-NTA. Specifická vazba na CD19 a CD3 byla dokázána prostřednictvím FACS analýzy. Výsledná molekula bscCD19xCD3 (bispecifická jednořetězcová CD19XCD3) podle vynálezu prokázala některé neočekávané vlastnosti:
- navodila vysokou cytotoxicitu proti lymfomům namířenou na T lymfocyty in vitro a in vivo. Dokonce i při velmi nízkých koncentracích 10-100 pg/ml a nízkém poměru E (efektor) : T (cíl) 5:1 a 2,5:1 byla pozorována významná specifická lýze lymfomových buněčných linií. Kromě toho, 3 pg až 10 pg molekuly bscCD19xCD3 podle vynálezu při soucitném podání ukázalo zřetelné a významné zlepšení zdravotního stavu. Ve srovnání s až doposud publikovanými CD19XCD3 protilátkami vyrobenými prostřednictvím metody hybriduhybridomu nebo pomocí přístupu s diabody (které také představují různou strukturu), které vykazovaly cytotoxickou pg/ml, mnohem (totiž žádná předběžná poměr E:T) významnou aktivitu v rozmezí několika ng/ml nebo dokonce bscCD19xCD3 protilátka podle vynálezu se jeví účinnější (5-7, 27, 43) jak doloženo např. v připojených příkladech 4, 5 a 7.
- dokonce i nízké koncentrace bscCD19xCD3 podle vynálezu byly schopny navodit rychlou cytotoxicitu namířenou proti lymfomu (po 4 hodinách) při nízkém poměru E:T bez potřeby jakékoliv předběžné stimulace T lymfocytů. Na rozdíl od toho obvyklá CD19XCD3 bispecifická protilátka (5-7, 27) nevykázala v těchto podmínkách stimulace T lymfocytů, nízký cytotoxickou aktivitu dokonce i při vysokých koncentracích až 3000 ng/ml. Ačkoli indukce cytotoxické aktivity bez předběžné stimulace byla také publikovaná v případě jiné konvenční CD19XCD3 protilátky, byl tento účinek dosažen pouze při vysokých koncentracích a vysokém poměru E:T (100 ng/ml, 27:1) (9) ve srovnání s bscCD19xCD3 podle vynálezu (100 pg/ml, 2,5:1). Kromě toho byl cytotoxický účinek této konvenční protilátek pozorovaný pouze po 1 dni předběžné stimulace s bispecifickou protilátkou samotnou, kdežto bscCD19xCD3 indukovala cytotoxicitu namířenou proti 4 hodinách. Co se týče znalostí původců podle vynálezu lymfomu již po vynálezu, taková rychlá a specifická cytotoxická aktivita takových popsána u nestimulováných koncentracích a bispecifických nízkých j iných Ačkoli
T lymfocytů při poměru E: T nebyl protilátkách doposud používaných nedávno bylo ukázáno, že anti-pl85HER2/anti-CD3 bispecifická F(ab)2 protilátka indukovala cytotoxickou aktivitu v podobných koncentracích jako bscCD19xCD3 podle vynálezu, tato protilátka vyžadovala 24 hodinovou předběžnou stimulaci s IL-2 (32) . Tudíž, bscCD19xCD3 protilátka podle vynálezu projevila jedinečné cytotoxické vlastnosti, které tuto • · molekulu odlišují od jiných bispecifických protilátek, které byly popsány.
BscCD19xCD3 podle vynálezu zprostředkovává cytotoxické účinky, které jsou specifické pro antigen, což je dokázáno fakty
- že tato protilátka selhala při lýze plasmacytomových buněčných linií NC1 a L363, což jsou buněčné linie B řady neexprimující CD19 antigen, a že cytotoxicita proti lymfomovým buňkám může být blokována základní anti-CD19 protilátkou HD37. (HD37 protilátka je odvozená z HD37 hybridomu (22) ) .
Blokování metabolické dráhy perforinu prostřednictvím deprivace vápníku s EGTA zcela zastavilo bscCD19xCD3 zprostředkovanou cytotoxicitu, což svědčí pro to, že specifický lýze je spíše účinek zprostředkovaný T lymfocyty než přímý účinek protilátky samotné.
Souhrnem, bscCD19xCD3 protilátka konstruovaná podle nauky vynálezu vyniká nad až dosud popsané CD19XCD3 bispecifické protilátky vzhledem ke značně vyšší biologické aktivitě, jakož i možnosti rychlé a snadné produkce, čímž je poskytnuto dostačující množství klinického materiálu vysoké j akosti.
Proto se očekává, že bscCD19xCD3 molekuly podle vynálezu jsou vhodným kandidátem pro průkaz terapeutického prospěchu bispecifických protilátek v léčení nemocí zprostředkovaných B lymfocyty, jako například nehodgkinské lymfomy, v klinických zkouškách.
Ve výhodném provedení polypeptidu podle vynálezu jsou uvedené domény spojeny polypeptidovou spojkou. Uvedená spojka je umístěna mezi uvedenou první a uvedenou druhou doménu, kde uvedená polypeptidová spojka výhodně zahrnuje několikeré, hydrofilní, peptidem vázané aminokyseliny a spojuje
• · « · · * · • a · « * · a * • a a · · a a >*··»· • · · · » » ···«··· · · 44
N-koncovou část uvedené první domény a C-koncovou část uvedené druhé domény.
V dalším výhodném provedení vynálezu uvedená první a/nebo druhá doména výše popsaného polypeptidu napodobuje nebo odpovídá oblastem VH a VL přirozené protilátky. Protilátka poskytující vazebné místo pro polypeptid podle vynálezu může být např. monoklonální protilátka, polyklonální protilátka, chimérická protilátka, humanizovaná protilátka, bispecifická protilátka, syntetická protilátka, fragment protilátky, jako například Fab, Fv nebo scFv fragmenty atd., nebo chemický modifikovaný derivát kterékoliv z nich. Monoklonální protilátky mohou být připraveny například metodami, jak byly původně popsány v Kóhler a Milstein (Nátuře, 256, 495, 1975) a Galfré (Meth. Enzymol., 73, 3,
1981), které zahrnují fúze myších myelomových buněk s buňkami sleziny pocházejících z . imunizovaných savců s modifikacemi v oboru vyvinutými. Kromě toho, protilátky nebo jejich fragmenty proti dříve uvedeným antigenům mohou být získány použitím metod, které jsou popsány např. v Harlow a Lané (Antibodies, Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988). Protilátky mohou pocházet z několika druhů, včetně člověka. Když jsou deriváty uvedených protilátek získány metodou vystavování na fágu (fágový displej), může být ke zvýšení účinnosti fágových protilátek, které se vážou k epitopu CD19 nebo antigenu CD3 použita povrchová plasmonová rezonance, jak využívána systémem BIACORE (Schier, Human Antibodies Hybridomas 7, 97-105, 1996, Malmborg, J. Immunol.
Methods 183, 7-13, 1995). Produkce chimérických protilátek je popsána například v mezinárodní patentové přihlášce WO 89/09622. Způsoby produkce humanizovaných protilátek jsou popsány v např. v přihláškách EP-A1 0 239 400 a WO 90/07861. Další zdroj protilátek používaných podle předkládaného vynálezu jsou takzvané xenogenní protilátky. Obecný princip • · · » · 4····· ··· ·· » · « ·
0· · · · ·····« « « · · pro produkci xenogenních protilátek, jako například lidských protilátek v myších, je popsaný např. v přihláškách WO 91/10741, WO 94/02602, WO 96/34096 a WO 96/33735.
Protilátky použité podle vynálezu nebo jejich odpovídající imunoglobulinový řetězec(řetězce) mohou být dále modifikovány s použitím obvyklých metod v oboru známých, například s použitím delece aminokyseliny(aminokyselin), inzerce (i), substituce(i), adice(í), a/nebo rekombinace(í) a/nebo každé jiné modifikace(í) v oboru známé buď samotné nebo v kombinaci. Metody pro zavedení takové modifikace do sekvence DNA určující aminokyselinovou sekvenci imunoglobulinového řetězce jsou odborníkovi známy (viz např. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory N.Y., 1989). Uvedené modifikace jsou výhodně prováděny na úrovni nukleové kyseliny.
V dalším výhodném provedení vynálezu je alespoň jedna z uvedených domén ve výše popsaném polypeptidů jednořetězcový fragment variabilní oblasti protilátky.
Jak je dobře známo, Fv, nejmenší protilátkový fragment, který obsahuje kompletní místo pro rozpoznávání a vazbu antigenů, se skládá z dimeru variabilních domén jednoho těžkého a jednoho lehkého řetězce (VH a VL) nekovalentně spojených. V této konfiguraci, která odpovídá konfiguraci nalezené u nativních protilátek, vzájemně interagují tři oblasti určující komplementaritu (CDRs) každé variabilní domény, čímž definují místo vázající antigen na povrchu dimeru VH-VL. Souhrnně, šest CDRs propůjčí protilátce vazebnou specifitu pro antigen. Rámce (FRs) ohraničující CDRs mají terciární strukturu, která je v podstatě uchována v nativních imunoglobulinech živočišných druhů tak různorodých jako člověk a myš. Tyto FRs slouží k tomu, aby udržovaly CDRs v jejich příslušné orientaci. Konstantní domény nejsou vyžadované pro vazebnou funkci, ale mohou napomáhat při «· a · ·« · · * ·
• a « ·· · · · » a a · a a ······· ·♦ · · stabilizaci interakce VH-VL. Dokonce i jediná variabilní doména (nebo polovina Fv obsahující pouze tři CDRs specifické pro antigen) má schopnost rozpoznat a vázat antigen, ačkoli obvykle při nižší afinitě než celé vazebné místo (Painter, Biochem., 11, 1327-1337, 1972). Proto uvedená doména vazebného místa polypeptidu podle vynálezu může být dvojice domén VH-VL, VH-VH nebo VL-VL buď stejných nebo odlišných imunoglobulinů. Uspořádání domén VH a VL v polypeptidovém řetězci není pro předkládaný vynález rozhodující, uspořádání domén dané výše může být obráceno obvykle bez ztráty funkce. Avšak je důležité, že domény VH a VL jsou uspořádány tak, že místo vázající antigen se může správně prostorově uspořádat (folding) .
Ve výhodném provedení polypeptidů podle vynálezu uvedené domény jsou uspořádány v pořadí VlCD19-VhCD19-VhCD3-VlCD3, kde VL a VH znamená lehký a těžký řetězec variabilní domény specifických anti-CD19 a anti-CD3 protilátek.
Jak bylo již pojednáno výše, uvedená vazebná místa jsou výhodně spojena flexibilní spojkou, výhodně polypeptidovou spojkou umístěnou mezi uvedenými doménami, přičemž uvedená polypeptidová spojka zahrnuje peptidem vázané aminokyseliny k překlenutí vzdálenosti mezi z uvedených domén obsahující a N-koncovou částí druhé z uvedených domén obsahující uvedené vazebné místo, když polypeptid podle vynálezu přijme strukturu vhodnou pro vazbu při umístění ve vodném roztoku. Výhodně se uvedená polypeptidová spojka skládá z velkého množství glycinových, slaninových a/nebo serinových zbytků. Je dále výhodné, že uvedená polypeptidová spojka se skládá z velkého množství konsekutivních kopií aminokyselinové sekvence. Obvykle se polypeptidová spojka skládá z 1 až 15 aminokyselin, ačkoli polypeptidová spojka o více než 15 několikeré, o délce
C-koncovou hydrofilni, postačuj ící částí jedné uvedené vazebné místo aminokyselinách se může také osvědčit. Ve výhodném provedení vynálezu se uvedená polypeptidová spojka skládá z 1 až 5 aminokyselinových zbytků.
V obzvláště výhodném provedení předkládaného vynálezu polypeptidová spojka v polypeptidu podle vynálezu obsahuje 5 aminokyselin. Jak je ukázáno v připojených příkladech, uvedená polypeptidová spojka se výhodně skládá z aminokyselinové sekvence Gly Gly Gly Gly Ser.
V dalším mimořádně výhodném provedení uvedená první doména polypeptidu podle vynálezu obsahuje alespoň jednu CDR VH a VL oblasti zahrnující aminokyselinovou sekvenci kódovanou DNA sekvencí ukázanou na obrázku 8 od nukleotidu 82 do nukleotidu 414 (VL) a nukleotidu 460 až 831 (VH) a/nebo uvedená druhá doména obsahuje alespoň jednu CDR, výhodněji dvě, nej výhodněj i tři CDRs VH a VL oblasti obsahující aminokyselinovou sekvenci kódovanou DNA sekvencí zobrazenou na obrázku 8 od nukleotidu 847 až nukleotidu 1203 (VH) a nukleotidu 1258 až 1575 (VL), volitelně v kombinaci s rámcem oblastí, které se vyskytují zároveň s uvedenými CDRs v základních protilátkách. CDRs obsažené ve variabilních oblastech zobrazených na obrázku 8 mohou být určeny například podle autora Kabat („Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, třetí vydání, 1983, čtvrté vydání, 1987, páté vydání, 1990). Odborník hned ocení, že vazebné místo nebo alespoň jedna CDR z něj vycházející mohou být použity pro konstrukci polypeptidu podle vynálezu. Výhodně uvedený polypeptid zahrnuje aminokyselinovou sekvenci kódovanou DNA sekvencí, jak je ukázána na obrázku 8, od nukleotidu 82 až 1575. Odborník hned ocení, že vazebné místo polypeptidu podle vynálezu může být konstruováno podle metod v oboru známých, např. jak byly popsány v Evropských patentech EP-A1 0 451 216 a EP-A1 0 549 581.
• ·
Domény vazebných míst polypeptidu podle vynálezu výhodně mají specifitu alespoň v podstatě identickou s vazebnou specifitou např. protilátky nebo imunoglobulinového řetězce, od kterého jsou odvozeny. Takové domény vazebného místa mohou mít vazebnou afinitu alespoň 105M_1, výhodně ne vyšší než Í07M_1 pro antigen CD3 a výhodně až 10loM_1 nebo vyšší pro antigen CD19.
Ve výhodném provedení polypeptidu podle vynálezu (a) uvedené vazebné místo první domény má afinitu alespoň přibližně 10’7M, výhodně alespoň přibližně 109M a nej výhodně ji alespoň přibližně 10_11M, a/nebo (b) uvedené vazebné místo druhé domény má afinitu menší než přibližně 10_7M, výhodně menší než přibližně 1O’°M a nej výhodněji řádově 10~sM.
Ve shodě s výhodnými provedeními uvedenými výše je výhodné, jestliže vazebné místo rozpoznávající antigen CD19 má vysokou afinitu, aby byly s vysokou účinností zachyceny cílové buňky, které mají být zničeny. Na druhé straně, vazebná afinita vazebného místa rozpoznávajícího antigen CD3 by měla být řádově taková, jako je afinita přirozeného receptoru CD3 nebo receptoru obvykle nalézaného při interakci T-buněčného receptoru se svým ligandem, to jest peptidovým komplexem MHC na povrchu cílové buňky.
V jiném výhodném provedení vynálezu je polypeptid popsaný výše bispecifická jednořetězcová protilátka.
Předkládaný vynález se dále týká polypeptidu obsahující alespoň jednu další doménu, uvedené domény jsou spojené prostřednictvím kovalentních nebo nekovalentních vazeb.
Vazba může být založena na genetické fúzi podle metod v oboru známých a výše popsaných nebo může být provedena prostřednictvím, např. chemického zesítění (crosslinking), jak bylo popsáno například v patentové přihlášce WO 94/04686. Další doména přítomná v polypeptidu podle vynálezu může být hydrofilní, postačuj ící částí jedné o délce C-koncovou výhodně spojena flexibilní spojkou, výhodně polypeptidovou spojkou k jedné z domén vazebného místa, kde uvedená polypeptidová spojka zahrnuje několikeré, peptidem vázané aminokyseliny k překlenutí vzdálenosti mezi z uvedených domén a N-koncovou částí druhé z uvedených domén, když uvedený polypeptid přijme strukturu vhodnou pro vazbu při umístění ve vodném roztoku. Výhodně uvedená polypeptidová spojka je polypeptidová spojka, jak popsáno v provedeních výše. Polypeptid podle vynálezu může dále obsahovat štěpitelnou spojku nebo štěpné místo pro proteinázy, jako například enterokinázy, viz také připojené příklady.
Kromě toho uvedená další doména může mít předem definovanou specifitu nebo funkci. Například literatura obsahuje velké množství odkazů na způsoby cílení bioaktivních látek, jako například léků, toxinů a enzymů, na specifická místa v organismu za účelem zničit nebo lokalizovat maligní buňky nebo indukovat lokalizovaný lék nebo enzymatické působení. Bylo navrženo, jak dosáhnout tohoto účinku pomocí konjugace bioaktivní látky k monoklonálními protilátkám (viz, např., N.Y. Oxford University Press, a Ghose, J. Nati. Cancer Inst. 61, 657-676, 1978).
V této souvislosti se také rozumí, že polypeptidy podle vynálezu mohou být dále modifikovány prostřednictvím obvyklých metod v oboru známých. To umožňuje konstrukce chimérických proteinů obsahujících polypeptid podle vynálezu a další funkční aminokyselinové sekvence, např. jaderné lokalizační signály, transaktivační domény, DNA-vazebné domény, hormony vázající domény, proteinové značky (GST, GFP, peptid h-myc, FLAG, peptid HA) , které mohou být odvozeny z heterologních proteinů. Jak je popsáno v připojených příkladech, polypeptid podle vynálezu výhodně obsahuje značku FLAG dlouhou přibližně 8 aminokyselin, viz obrázek 8.
··· ·· ··»· • · « · · ···«··· ·« · »
Polypeptidy podle vynálezu mohou být používány léčebně u pacientů trpících chorobami B lymfocytů, jako lymfom pocházející z lymfocytů B, chronická lymfatická leukémie typu B (B-CLL) a/nebo u pacientů majících autoimunitní choroby se vztahem k B lymfocytům, jako například myasthenia gravis, Basedowova nemoc, Hashimotova thyreoiditis nebo Goodpastureův syndrom. Taková léčba může být uskutečněna například pomocí podávání polypeptidů podle vynálezu. Toto podávání může použít polypeptidy neoznačené i označené.
Například polypeptidy podle vynálezu mohou být podávány značené léčebným přípravkem. Tyto přípravky mohou být spojeny buď přímo nebo nepřímo s protilátkám nebo antigeny podle vynálezu. Jeden příklad nepřímé vazby je použití distanční skupiny (spacer). Tyto distanční skupiny mohou být střídavě buď nerozpustné nebo rozpustné (Diener, Science, 231, 148, 1986) a mohou být vybrány tak, aby umožnily uvolnění léku od antigenů v cílovém místě. Příklady terapeutických přípravků, které mohou být spojeny s polypeptidy podle vynálezu pro imunoterapii, jsou léky, radioizotopy, lektány a toxiny. Léky, které mohou být konjugovány s polypeptidy podle vynálezu, zahrnují sloučeniny, které se klasický přiřazují k lékům, jako například mitomycin C, daunorubicin a vinblastin.
Při použití polypeptidů podle vynálezu konjugovaných s radioizotopy pro např. imunoterapii jsou určité izotopy vhodnější než jiné, v závislosti na takových faktorech jako je distribuce leukocytů, stejně jako stabilita a emise. Co se týče autoimunitní reakce, některé zářiče mohou být vhodnější než jiné. Obecně vzato v imunoterapii jsou upřednostňovány radioizotopy emitující částice a a β. Výhodné jsou a zářiče krátkého dosahu a vysoké energie, jako například 212Bi. Příklady radioizotopů, které mohou být vázány na polypeptidy podle vynálezu pro léčebné účely, 212Bi, 212At, 211Pb, 47Sc, 109Pd a 188Re.
jsou 125I,
131 i, 90Y,
Cu,
Lektiny jsou proteiny obvykle izolované z rostlinného materiálu, které se vážou na specifické sacharidové skupiny. Mnoho lektinů je také schopno aglutinovat buňky a stimulovat lymfocyty. Ricin je toxický lektin, který byl používaný imunoterapeuticky. To je prováděno vazbou a-peptidového řetězce ricinu, který je odpovědný za toxicitu, k polypeptidu, aby se umožnilo místně specifické toxické působení.
Toxiny jsou jedovaté látky produkované rostlinami, zvířaty nebo mikroorganismy, které jsou v přiměřené dávce často smrtelné. Difterický toxin je látka tvořena Corynebacterium diphtheria, která může být používána léčebně. Tento toxin se skládá z podjednotek a a β, které mohou být odděleny ve vhodných podmínkách. Toxická složka A může být navázána k polypeptidu podle vynálezu a může být použita pro místně specifické podání k interagujícím B a T lymfocytům, které byly přivedeny do její těsné blízkosti pomocí vazby k polypeptidu podle vynálezu.
Další léčebné přípravky, jako ty popsané výše, které mohou být připojovány k polypeptidu podle vynálezu, jakož i odpovídající ex vivo a in vivo léčebné protokoly, jsou známy nebo mohou být odborníkem snadno zjištěny. Kdekoliv je to vhodné, může odborník použít polynukleotid podle vynálezu níže popsaný, který kóduje kterýkoliv z výše popsaných polypeptidů nebo místo samotného proteinového materiálu mohou být použity odpovídající vektory.
Odborník tedy hned ocení, že polypeptid podle vynálezu může být použit pro konstrukci dalších polypeptidů požadované specifity a biologické funkce. Očekává se, že polypeptidy podle vynálezu budou mít důležitou léčebnou a vědeckou úlohu zvláště ve zdravotnictví, například při vývoji nových • · · · · · · léčebných přístupů k chorobám se vztahem k B lymfocytům, jako například určité formy karcinomu a autoimunitních nemocí, nebo jako zajímavé nástroje pro analýzu a modulaci odpovídajícího buněčného signálu transdukčních metabolických drah.
V dalším výhodném provedení vynálezu obsahuje uvedená alespoň jedna další doména molekulu vybranou ze skupiny skládající se z efektorových molekul s konformací vhodnou pro biologickou aktivitu, aminokyselinových sekvencí schopných sekvestrovat iont a aminokyselinových sekvencí selektivní vazby na pevný podklad nebo antigenů.
Uvedená další doména obsahuje výhodně enzym, toxin, receptor, vazebné místo, vazebné místo pro biosyntetickou protilátku, růstový faktor, buněčný diferenciační faktor, lymfokin, cytokin, hormon, vzdáleně detekovatelnou skupinu, antimetabolit, radioaktivní atom nebo antigen. Uvedený antigen může být např. nádorový antigen, virový antigen, mikrobiální antigen, alergen, autoantigen, virus, mikroorganismus, polypeptid, peptid nebo velké množství nádorových buněk.
Kromě toho uvedená sekvence schopná sekvestrovat iont je výhodně vybrána z kalmodulinu, metalothioneinu, jejich funkčního fragmentu nebo aminokyselinové sekvence bohaté na přinejmenším jednu z kyselin, a to kyseliny glutamové, kyseliny asparagové, lysinu a argininu.
Kromě toho uvedená polypeptidová sekvence schopná selektivní vazby k pevnému podkladu může být pozitivně nebo negativně nabitá aminokyselinová sekvence, aminokyselinová sekvence obsahující cystein, avidin, streptavidin, funkční fragment proteinu Staphylococcus A, GST, značka His, značka FLAG nebo Lex A. Jak je popsáno v připojených příkladech, polypeptid podle vynálezu vysvětlený na příkladu schopných k předem vybranému jednořetězcové protilátky byl také exprimován s N-koncovou značkou FLAG a/nebo C-koncovou značkou His, které umožnily snadnou purifikaci a detekci. Značka FLAG používaná v příkladu obsahuje 8 aminokyselin (viz obrázek 8) a je tak výhodně použita podle předkládaného vynálezu. Ale jsou také vhodné značky FLAG skládající se ze zkrácených verzí FLAG používaných v připojených příkladech, jako například aminokyselinová sekvence Asp-Tyr-Lys-Asp.
Efektorové molekuly a aminokyselinové sekvence popsané výše mohou být přítomné v polotovaru nebo prekurzoru (proforma), který samotný je buď aktivní nebo neaktivní, a které mohou být odstraněny, když např. vstoupí do určitého buněčného prostředí.
V nejvýhodnějsím provedení podle vynálezu je uvedený receptor současně stimulující povrchová molekula důležitá pro aktivaci T lymfocytů nebo obsahuje místo vázající epitop nebo místo vázající hormon.
V dalším nejvýhodnější provedení vynálezu, uvedená současně stimulující povrchová molekula je CD80 (B7-1) nebo CD86 (B7-2) .
V ještě dalším provedení se předkládaný vynález týká polynukleotidů, které při expresi kódují výše popsané polypeptidy. Uvedené polynukleotidy mohou být fúzovány k vhodné expresní kontrolní sekvenci v oboru známé, aby zajistily vlastní transkripci a translaci polypeptidu.
Uvedený polynukleotid může být např. DNA, cDNA, RNA nebo synteticky vyrobená DNA či RNA nebo rekombinantně vyrobená chimérická molekula nukleové kyseliny zahrnující jakýkoliv z polynukleotidů buď samotný nebo v kombinaci. Uvedený polynukleotid je výhodně část vektoru. Takové vektory mohou zahrnovat další geny, jako například markerové geny, které umožní selekci uvedeného vektoru ve vhodné hostitelské buňce a ve vhodných podmínkách. Výhodně je polynukleotid podle vynálezu operativně připojen k expresní kontrolní sekvenci umožňující expresi v prokaryotických nebo eukaryotických buňkách. Exprese uvedený polynukleotid zahrnuje transkripci polynukleotidu do translatovatelné mRNA. Regulační prvky zajišťující expresi v eukaryotických buňkách, výhodně savčích buňkách, jsou dobře odborníkovi známy. Obvykle zahrnují regulační sekvence zajišťující začátek transkripce a volitelně poly-A signály zajišťující ukončení transkripce a stabilizaci transkriptu. Další regulační prvky mohou zahrnovat transkripční stejně jako translační zesilovače, a/nebo přirozeně přidružené nebo heterologní promotorové regulační prvky připouštějící expresi hostitelských buňkách zahrnují např. trp nebo tac v E. coli, a příklady oblasti. Možné v prokaryotických promotor PL, lac, regulačních prvků umožňujících expresi v eukaryotických hostitelských buňkách jsou promotory A0X1 nebo GAL1 ve kvasinkách nebo promotor CMV, SV40, RSV (Rous sarcoma virus), zesilovač CMV, zesilovač SV40 nebo globinový intron v buňkách savců a dalších zvířat počátek transkripce,
Kromě prvků, které jsou odpovědné za mohou tyto regulační prvky také zahrnovat transkripční terminační signály, jako například místo SV40-polyA nebo místo tk-poly-A, po směru transkripce od polynukleotidu. Kromě toho v závislosti na použitém expresním systému mohou být ke kódující sekvenci polynukleotidu podle vynálezu přidány vedoucí sekvence schopné směrování polypeptidu k buněčnému kompartmentu nebo sekrece polypeptidu do média a jsou v oboru dobře známy, viz také např. připojené příklady. Vedoucí sekvence je (jsou) sestaveny ve vhodné fázi s translačními, iniciačními a terminačními sekvencemi a výhodně vedoucí sekvencí schopnou řízené sekrece translatovaného proteinu nebo jeho části do periplazmatického .prostoru nebo extracelulárního média. Heterologní sekvence mohou volitelně kódovat fúzní protein
včetně N-koncového identifikačního peptidu propůjčujícího požadované vlastnosti, např. stabilizaci nebo zjednodušenou purifikaci exprimovaného rekombinantního produktu, víz výše. V této souvislosti, vhodné expresní vektory jsou v oboru známy, jako například cDNA expresní vektor pcDVl podle Okayamy-Berga (Pharmacia), pCDM8, pRc/CMV, pcDNAl, pcDNA3 (In-Vitrogene) nebo pSPORTl (GIBCO BRL).
Expresní kontrolní sekvence jsou výhodně eukaryotické promotorové systémy ve vektorech schopných transformovat nebo transfekovat eukaryotické hostitelské buňky, ale kontrolní sekvence pro prokaryotické hostitele mohou být také použity. Jakmile byl vektor zaveden do vhodného hostitele, je hostitel udržován v podmínkách vhodných pro vysokou expresi nukleotidové sekvence, a je-li žádoucí, může následovat sběr a purifikace polypeptidů podle vynálezu, viz např. připojené příklady.
Jak bylo popsáno výše, polynukleotid podle vynálezu může být použit samotný nebo jako část vektoru pro expresi polypeptidů podle vynálezu v buňkách pro např. genovou terapii nebo diagnostiku nemocí se vztahem k B lymfocytům. Polynukleotidy nebo vektory obsahující DNA. sekvence kódující jakýkoliv z výše popsaných polypeptidů jsou zavedeny do buněk, které dále produkují požadovaný polypeptid. Genová terapie, která je založena na zavedení terapeutických genů do buněk prostřednictvím ex vivo nebo in vivo metod, je jednou z nejdůležitějších aplikací genového přenosu. Vhodné vektory, metody nebo systémy pro podávání genů pro in vitro nebo in vivo genovou terapii jsou popsány v literatuře a jsou odborníkovi známy (viz např. Giordano, Nátuře Medicine, 2, 534-539, 1996, Schaper, Circ. Res., 79, 911-919, 1996, Anderson, Science, 256, 808-813, 1992, Verma, Nátuře, 389, 239, 1994, Isner, .Lancet, 348, 370-374, 1996, Muhlhauser, Circ. Res., 77, 1077-1086, 1995, Onodera, Blood, 91, 30-36,
1998, Verma, Gene Ther., 5, 692-699, 1998, Nabel, Anna. N.Y. Acad. Sci., 811, 289-292, 1997, Verzeletti, Hurn. Gene Ther., 9, 2243-51, 1998, Wang, Nátuře Medicine, 2, 714-716, 1996, WO 94/29469, WO 97/00957, US 5,580,859, US 5,589,466, nebo Schaper, Current Opinion in Biotechnology, 7, 635-640, 1996, a odkazy v nich citované). Polynukleotidy a vektory podle vynálezu mohou být navrženy pro přímé zavedení nebo pro zavedení prostřednictvím lipozomy nebo virové vektory (např. adenovirové, retrovirové) do buňky.
Uvedená buňka je výhodně buňka zárodečné linie, embryonální buňka nebo vajíčko nebo buňka z nich pocházející, nejvýhodněji uvedená buňka je kmenová buňka. Příklad embryonální kmenové buňky může být, inter alia, kmenová buňka jak je popsaná v práci autora Nagy (Proč. Nati. Acad. Sci.
USA, 90, 8424-8428, 1993).
Podle výše uvedeného se předkládaný vynález týká vektorů, zejména plazmídů, kozmidů, virů a bakteriofágů obvykle používaných v genetickém inženýrství, které obsahují polynukleotid kódující polypeptid podle vynálezu. Uvedený vektor je výhodně expresní vektor a/nebo vektor pro genový přenos nebo cílící (targeting) vektor. Expresní vektory odvozené z virů, například retrovirů, viru vakcinie, adeno-asociovaných virů, herpetických virů nebo viru bovinního papilomu, mohou být použity pro dodání polynukleotidů nebo vektoru podle vynálezu do populací cílových buněk. Metody, který jsou odborníkovi dobře známy, mohou být používány ke konstrukci rekombinantní vektorů, viz například metody popsané v práci Sambrooka a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory N.Y., 1989, a Ausubela a kol., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y., 1989). Nebo mohou být polynukleotidy a vektory podle vynálezu pro dodání k cílovým buňkám rekonstituovány do lipozomů. Vektory obsahující polynukleotidy podle vynálezu mohou být přeneseny do hostitelské buňky prostřednictvím známých metod, které se mění v závislosti na typu buněčného hostitele. Například transfekce chloridem vápenatým je obvykle použita pro prokaryotické buňky, zatímco ošetření fosfátem vápenatým nebo elektroporace mohou být použity pro jiné buněčné hostitele, viz Sambrook, výše. Jakmile jsou exprimovány, mohou být polypeptidy podle předkládaného vynálezu purifikovány podle v oboru standardního postupu, včetně precipitace sulfátem amonným, na afinitních kolonách, sloupcovou chromatografií, gelovou elektroforézou apod. (viz Scopes, Protein Purification, Springer-Verlag, N.Y., 1982). Pro farmaceutické použití jsou výhodné v podstatě čisté polypeptidy s homogenitou alespoň 90 až 95 %, nejvýhodnější jsou s homogenitou 98 až 99% nebo více, Jakmile jsou jednou purifikovány, částečně nebo na požadovanou homogenitu, mohou být polypeptidy pak používány léčebně (včetně mimotělního přístupu) nebo při vývoji a provádění testů.
V ještě další provedení se předkládaný vynález týká buňky obsahující polynukleotid nebo vektor popsaný výše. Když se uvažuje o léčebných použitích polypeptidu, je uvedená buňka výhodně eukaryotická, nejvýhodněji savčí buňka. Ovšem kvasinky a méně výhodné prokaryotické např. bakteriální buňky mohou také posloužit, zejména jestliže produkovaný polypeptid je používán jako diagnostický prostředek.
Polynukleotid nebo vektor podle vynálezu který je přítomný v hostitelské buňce, může být buď integrovaný do genomu hostitelské buňky nebo může být udržován extrachromozomálně.
Termín prokaryotický je chápán tak, že zahrnuje všechny baktérie, - které mohou být transformovány nebo transfekovány molekulami DNA nebo RNA pro expresi polypeptidu • 4 podle vynálezu. Prokaryotičtí hostitelé zahrnují Gram-negativní jakož i Gram-pozitivní baktérie jako například E. coli, S. typhimurium, Serratia marcescens a Bacillus subtilis. Termín eukaryotický je chápán tak, že zahrnuje kvasinky, vyšší rostliny, hmyz a výhodně savčí buňky. V závislosti na hostiteli použitém v postupu rekombinantní produkce mohou být polypeptidy podle předkládaného vynálezu glykosylovány nebo mohou být bez glykosylace. Polypeptidy podle vynálezu mohou také zahrnovat počáteční aminokyselinový zbytek methionin. Polynukleotid kódující polypeptid podle vynálezu může být použitý pro transformaci nebo transfekci hostitele s použitím jakékoliv z metod odborníkovi obecně známých. Obzvláště výhodné je použití plazmidu nebo viru obsahujícího kódující sekvenci polypeptid podle vynálezu, ke které je navíc geneticky fúzovaná N-koncová značka FLAG a/nebo C-koncová značka His. Délka uvedené značky FLAG je výhodně přibližně 4 až 8 aminokyselin, nejvýhodněji 8 aminokyselin. Metody pro přípravu fúzovaných, operativně spojených genů a exprimujících se v např. savčích buňkách a baktériích jsou v oboru známy (Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989). Genetické konstrukty a metody popsané zde mohou být využity pro expresi polypeptidů podle vynálezu v eukaryotických nebo prokaryotických hostitelích. Obecně vzato, ve spojení s hostitelem jsou používány expresní vektory obsahující promotorové sekvence, které usnadní účinnou transkripci vloženého polynukleotidu. Expresní vektor typicky obsahuje počátek replikace, promotor a terminátor, jakož i specifické geny, které jsou schopné zajistit fenotypovou selekci transformovaných buněk. Kromě toho pro rozsáhlou produkci polypeptidů podle vynálezu mohou být používána transgenní zvířata, výhodně savci, obsahující buňky podle vynálezu.
V dalším provedení se předkládaný vynález tedy týká postupu pro přípravu polypeptidu popsaného výše zahrnující kultivaci buněk podle vynálezu v podmínkách vhodných pro expresi polypeptid a izolaci polypeptidu z buňky nebo kultivačního média.
Transformovaní hostitelé mohou růst ve fermentoru a mohou být pěstováni podle metod v oboru známých tak, aby bylo dosaženo optimálního růstu buněk. Polypeptid podle vynálezu může pak být izolován z růstového média, buněčného lyzátu nebo frakcí buněčných membrán. Izolace a purifikace např. mikrobiálně exprimovaných polypeptidů podle vynálezu se může provádět jakýmikoliv obvyklými prostředky jako například separace preparativní chromatografií a imunologická separace zahrnující například použití monoklonálních nebo poiyklonálních protilátek namířených např. proti značce na polypeptidu podle vynálezu nebo jak je popsáno v připojených příkladech.
Předkládaný vynález tudíž umožní rekombinantní produkcí polypeptidů obsahujících vazebná místa s afinitou a specifitou pro epitopy antigenů CD19 a CD3, podle pořadí, a volitelně další funkční doménu. Jak vysvítá z již uvedeného, vynález poskytne velkou rodinu polypeptidů obsahujících tato vazebná místa pro jakékoliv použití v léčebných a diagnostických postupech. Odborníkovi je zřejmé, že polypeptidy podle vynálezu mohou být dále spojeny s dalšími skupinami, jak popsáno výše, pro např. cílení léku a použití pro zobrazovací metody. Tato vazba může být provedena po expresi polypeptidů chemickým způsobem k místu připojení nebo produkt obsahující vazbu může být konstruován v polypeptidu podle vynálezu již na úrovni DNA. DNA je pak exprimována ve vhodném hostitelském systému a exprimované proteiny jsou soustředěny a renaturovány, je-li to nezbytné. Jak popsáno výše, vazebná místa jsou výhodně odvozena » ·· ·· • « < · 9 • 9 · · « * · ·« » rf z variabilní oblasti protilátek. Po této stránce, technologie hybridomu umožní produkci buněčných linií secernujících protilátky proti téměř každé požadované látce, která vyvolává imunitní reakci. Z cytoplazmy hybridomu pak může být získána RNA kódující imunoglobulinové lehké a těžké řetězce. 5' koncová část mRNA může být použita pro přípravu cDNA, která bude použita ve způsobu podle předkládaného vynálezu. DNA kódující polypeptidy podle vynálezu může být postupně exprimována v buňkách, výhodně savčích buňkách.
V závislosti na hostitelské buňce mohou být pro dosažení správné konformace požadovány renaturační metody. Je-li to nutné, mohou být v DNA vytvořeny bodové substituce vyhledané pro optimalizaci vazby, s použitím obvyklé kazetové mutageneze nebo jiné metody proteinového inženýrství, například jak je popsána na tomto místě. Příprava polypeptidů podle vynálezu může také záviset na znalosti aminokyselinové sekvence (nebo odpovídající sekvence DNA či RNA) bioaktivních proteinů, jako například enzymů, toxinů, růstových faktorů, buněčných diferenciačních faktorů, receptorů, antimetabolitů, hormonů nebo různých cytokinů nebo lymfokinů. Takové sekvence jsou publikované v literatuře a dosažitelné prostřednictvím počítačových databank. Například polypeptid podle vynálezu může být konstruovaný tak, že se z jednořetězcového Fv fragmentu e lidského současně stimulujícího proteinu připojeného prostřednictvím spojky (Gly4Serl)l stimulující protein patří do rodiny Ig.
glykosylovaný protein o 262 aminokyselinách, popis byl publikován v práci Freeman (J. Immunol 2722, 1989) . Stabilní exprese může být provedena v např. DHFR deficitních CHO buňkách, jak popsáno v práci Kaufmann (Methods Enzymol. 185, 537-566, 1990). Protein může pak být purifikován díky své značce His připojené na C-koncové části napr.
extracelulární
CD8 0 skládá části (B7-1)
CD80 současně Je to silně Podrobněj ší 143, 2714c · • · · · · · <
s použitím kolony Ni-NTA (Mack, Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 92, 7021-7025, 1995).
Navíc předkládaný vynález poskytuje sloučeniny obsahující výše uvedený polypeptid, polynukleotid nebo vektor podle vynálezu.
Předkládaný vynález se výhodně týká přípravků, které jsou farmaceutické přípravky zahrnující výše uvedený polypeptid(y) , polynukleotid(y) nebo vektor(y) podle vynálezu.
Farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu může dále zahrnovat farmaceuticky přijatelný nosič. Příklady vhodných farmaceutických nosičů jsou v oboru dobře známy a zahrnují fyziologické roztoky pufrované fosfáty, vodu, emulze, jako například emulze olej/voda, různé druhy smáčedel, sterilní roztoky, atd. Přípravky zahrnující tyto nosiče mohou být formulovány pomocí dobře známých obvyklých metod. Tyto farmaceutické přípravky mohou být podávány pacientovi ve vhodné dávce. Podávání vhodných přípravků se může provádět různými způsoby např. prostřednictvím intravenózního, intraperitoneálního, subkutánního, intramuskulárního, lokálního nebo intradermálního podávání. Dávkovači režim bude určen ošetřující lékařem a klinickými faktory. Jak je v lékařských oborech dobře známo, dávkování pro každého pacienta závisí na mnoha faktorech, včetně velikosti pacienta, tělesného povrchu, věku, konkrétní sloučenině, která má být podávána, pohlaví, času a způsobu podávání, obecném zdravotním stavu a dalších lécích, které jsou podávány současně. Obecně dávkování při pravidelném podávání farmaceutického přípravku by mělo být v rozmezí 1 pg až 10 mg jednotek za den. Jestliže léčebný režim je ve formě souvislé infúze, mělo by být dávkování také v rozmezí 1 pg až 10 mg jednotek na kilogram tělesné hmotnosti za minutu. Ale výhodnější dávkování pro kontinuální infúzi by mohlo být ·· ♦ 4 • * i * • » » v · • * · · «· a t· · · · v rozmezí 0,01 pg až 10 mg jednotek na kilogram tělesné hmotnosti za hodinu. Obzvláště výhodná dávkování jsou uvedena níže. Pokrok může být monitorován periodickým vyšetřováním. Dávka bude kolísat, ale výhodné dávkování pro intravenózní podávání DNA je přibližně 106 až 1012 kopií molekuly DNA. Přípravky podle vynálezu mohou být podávány lokálně nebo systémově. Podávání je většinou parenterální např. intravenózní, DNA může být také podávána namířena na cílové místo např. biolistickou metodou na vnitřní nebo vnější místo určení nebo prostřednictvím katétru na místo v tepně. Přípravky pro parenterální podávání zahrnují sterilní vodné nebo roztoky jiné než vodné, suspenze a emulze. Příklady rozpouštědel jiných než vodných jsou propylenglykol, polyetylenglykol, rostlinné oleje jako olivový olej a organické estery vhodné pro injekci jako například etyloleát. Vodné nosiče zahrnují vodu, alkoholové/vodné roztoky, emulze nebo suspenze, včetně fyziologického roztoku a pufrovaných médií. Parenterální vehikula zahrnují roztok chloridu sodného, Ringerovu dextrózu, dextrózu a chlorid sodný, Ringerův roztok s laktátem nebo pevné oleje. Intravenózní vehikula zahrnují tekuté a výživné doplňky, elektrolytové doplňky (jako ty založené na Ringerově dextróze) apod. Mohou být také přítomny konzervační prostředky a další aditiva jako například antimikrobiální činidla, antioxidační činidla, chelatotvorná činidla a inertní plyny apod. Navíc, farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu může zahrnovat proteinové nosiče, jako např. sérový albumin nebo imunoglobulin, výhodně lidského původu. Kromě toho je doporučeno, aby farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahoval další biologicky činný přípravek podle zamýšleného použití farmaceutického přípravku. Takové agens může být lék působící na gastrointestinální systém, lék působí jako
I cytostatikum, lék zabraňující hyperurikémii a/nebo molekuly současně stimulující T lymfocyty nebo v oboru známé cytokiny.
Předkládaný vynález předpokládá, že různé polynukleotidy a vektory podle vynálezu jsou podávány buď samotně nebo v jakékoliv kombinaci s použitím standardních vektorů a/nebo systémů pro podávání genů, a volitelně spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo excipientem. Po podání mohou být uvedené polynukleotidy nebo vektory trvale integrovány do genomu pacienta.
Naproti tomu mohou být používány virové vektory, které jsou specifické pro určité buňky nebo tkáně a v uvedených buňkách perzistují. Vhodné farmaceutické nosiče a excipienty jsou v oboru dobře známy. Farmaceutické přípravky připravené podle vynálezu mohou být používány pro prevenci nebo léčbu nebo oddálení různých chorob týkajících se imunodeficitů a malignit se vztahem k B lymfocytům.
Kromě toho je možné použít farmaceutický přípravek podle vynálezu, který obsahuje polynukleotid nebo vektor podle vynálezu v genové terapii. Vhodné systémy pro podávání genů zahrnují lipozomy, systémy pro podávání zprostředkované receptory, nechráněnou DNA a virové vektory, jako jsou například herpes viry, retroviry, adenoviry a adeno-asociované viry. Dodání nukleových kyselin na specifické místo v organismu při genové terapii může být také uskutečněno použitím biolistického systému pro přenos nukleové kyseliny, jako například systém popsaný autorem Williams (Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88, 2726-2729, 1991). Další metody pro podávání nukleových kyselin zahrnují genový přenos zprostředkovaný částicemi, jak popsáno např. autorem Verma (Gene Ther., 15, 692-699, 1998). Rozumí se, že zavedené polynukleotidy a vektory exprimují genový produkt po zavedení do uvedené buňky a v tomto stavu výhodně zůstávají po dobu života uvedené buňky. Například, buněčné linie, které trvale
Γ · · • · • · exprimují polynukleotid při řízení vhodnou regulační sekvencí, mohou být konstruovány podle metod odborníkovi dobře známých. Spíše než použitím expresních vektorů obsahujících virové počátky replikace, jsou hostitelské buňky transformovány polynukleotidem podle vynálezu a markérem pro selekci, buď ve stejném nebo samostatném plazmidů. Po zavedení cizorodé DNA jsou zkonstruované buňky pěstovány po dobu 1-2 dny v obohacených médiích, a pak jsou přemístěny na selektivní média. Markér pro selekci v rekombinantním plazmidů propůjčí resistenci a umožní selekci buněk s trvale integrovaným plazmidem do svých chromozomů, které rostou a tvoří ložiska, která mohou být dále klonována a rozšířena do buněčných linií. Takto zkonstruované buněčné linie jsou také použitelné zejména pro screening a detekci sloučenin zapojených do např. interakcí B a T lymfocytů.
Může být použita celá řada selekčních systémů včetně např. thymidinkinázy viru herpes simplex (Wigler, Cell, 11, 223, 1977), hypoxantin-guanin fosforibosyltransferázy (Szybalska, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 48, 2026, 1962) a adeninfosforibosyltransferázy (Lowy, Cell, 22, 817, 1980) v tk-, hgprt- nebo aprt- buňkách, v daném pořadí, aniž by tento výčet byl omezující. Také může být používána rezistence k antimetabolitu, jako základ selekce s dhfr, který propůjčuje resistenci na metotrexát (Wigler, Proč. Nati. A.cad. Sci. USA, 77, 3567, 1980, CGHare, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 78, 1527, 198), gpt, který propůjčuje resistenci na kyselinu mykofenolovou (Mulligan, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 78, 2072, 1981), neo, který propůjčuje resistenci na aminoglykosid G-418 (Colberre-Garapin, J. Mol. Biol., 150, 1, 1981), hygro, který propůjčuje resistenci na hygromycin (Santerre, Gene, 30, 147, 1984), nebo puromycin (pat, puromycin N-acetyltransferáza). Byly popsány další geny pro selekci, například trpB, který umožňuje buňkám využívat indol
I · · « · · « místo tryptofanu, hisD, histinol místo histidinu USA, 85, 8047, 1988), a
V dalším diagnostického který umožňuje buňkám zužitkovat (Hartman, Proč. Nati. Acad. Sci.
ODC (ornitindekarboxyláza), která propůjčuje resistenci na inhibitor ornitindekarboxylázy,
2-(difluorometyl)-DL-ornitin, DUMO (McCologue, v: Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory ed., 1987).
provedení se předkládaný vynález týká přípravku obsahujícího kterýkoliv z výše popsaných polypeptidů, polynukleotidů nebo vektorů podle vynálezu a volitelných vhodných prostředků pro detekci.
Polypeptidy podle vynálezu jsou také vhodné pro použití v imunotestech, ve kterých mohou být použity v tekuté fázi nebo navázány na pevný nosič. Příklady imunotestů, které mohou používat polypeptid podle vynálezu, jsou kompetitivní a nekompetitivní imunotesty buď přímé nebo nepřímé. Příklady takových imunotestů jsou radioimunotest (RIA), sendvičový test (imunometrický test) a testování pomocí westernového přenosu (western blot).
Polypeptidy podle vynálezu mohu být vázány k mnoha různým nosičům a použity k izolaci buněk specificky navázaných na uvedený polypeptidy. Příklady známých nosičů zahrnují sklo, polystyren, polyvinylchlorid, polypropylen, polyetylén, polykarbonát, dextran, nylon, amylózy, přirozenou a modifikovanou celulózu, koloidní kovy, polyakrylamidy, agarózu a magnetit. Pro účely vynálezu může být nosič buď rozpustný nebo nerozpustný.
Odborníkovi je známo mnoho různých značek a metod značení. Příklady značek, které mohou být použity v předkládaném vynálezu, zahrnují enzymy, radioizotopy, koloidní kovy, fluorescenční sloučeniny, chemiluminiscenční sloučeniny a bioluminiscenční sloučeniny, viz také provedení projednaná výše.
• 9 • tl • 99 9 · · 9 · « * · · ·*9·· • > · * 9 ··«··>· «·· · · 9 f · 9 «9 999 9999999 · · 9«
Předkládaný vynález se také týká použití polypeptidu, polynukleotidu a vektoru podle vynálezu popsaných výše pro přípravu farmaceutického přípravku pro léčení malignit B lymfocytů, autoimunitních chorob se vztahem k B lymfocytům nebo deplece B lymfocytů.
Nedávné klinické studie s přesměrovanou cytotoxickou aktivitou lidských T lymfocytů pomocí bispecifických protilátek prokázaly slibné výsledky v léčení refrakterní Hodgkinovy nemoci (33), karcinomu prsu a vaječníků (34-37) a maligního gliomu (38). S danými fakty
- že bsc protilátky díky své nízké molekulové hmotnosti usnadňují penetraci do nádoru (jak bylo prokázáno pro fragmenty Fab nebo Fv) (39), a že se očekává, že bsc protilátky sníží toxicitu závisející na dávce a dávku omezující, tato toxicita je způsobena systémovým uvolněním cytokinů zprostředkovaným Fc částmi obvyklých bispecifických protilátek (40), a
- že dokonce intaktní monoklonální protilátka (namířená proti CD20) vedla k regresi nádoru v pokročilých stadiích NHL (41, 42), se očekávalo - a skutečně bylo ukázáno - že polypeptidy podle vynálezu jsou zajímavé molekuly, které přispívají k dalšímu terapeutickému pokroku.
Ve výhodném provedení je tedy farmaceutický přípravek podle vynálezu používaný pro léčení nehodgkinských lymfomů.
Rozmezí dávek při podávání polypeptidů, polynukleotidů a vektorů podle vynálezu je dost velké, aby vyvolalo žádoucí účinek, při kterém jsou zmírněny symptomy nemocí se vztahem k B lymfocytům. Dávkování by nemělo být tak velké, aby způsobilo podstatné nepříznivé vedlejší účinky, jako nežádoucí křížové reakce, anafylaktické reakce apod. Obecně, dávkování se bude měnit podle věku, stavu, pohlaví a stadia nemoci pacienta a může být určeno odborníkem. Není-li žádná »· · · ·· ·» · φ φ ··· ·· φ * « · · « • ·· X .····!
• · · · * ···»·* «<·· · · «··· •« «· · ····«·· ·· ·· kontraindikace, může být dávkování upraveno jednotlivým lékařem. Předpokládá se, že rozmezí uvedené dávky je stanoveno např. 0,01 pg až 10 mg polypeptidů podle vynálezu. Obzvláště výhodné dávkování je 0,1 pg až 1 mg, ještě výhodnější je 1 pg až 100 pg a nej výhodněj ší je dávkování 3 pg až 10 pg jak je např. ukázáno v připojeném příkladu 7.
Kromě toho se vynález týká způsobu pro rozpoznání sloučenin aktivujících nebo současně stimulujících T lymfocyt nebo pro rozpoznání inhibitorů aktivace a stimulace T lymfocytů, způsob zahrnuje (a) pěstování CD19 pozitivních buněk (výhodně B lymfocytů) a T lymfocytů v přítomnosti polypeptidů podle vynálezu a, volitelně, v přítomnosti složky schopné poskytnout detekovatelný signál jako odpověď na aktivaci T lymfocytů testovanou sloučeninou v podmínkách umožňujících interakci sloučeniny s buňkami, a (b) detekce přítomného nebo nepřítomného signálu vznikajícího interakcí sloučeniny s buňkami.
Toto provedení je obzvláště užitečné pro testování kapacity sloučenin coby současně stimulujících molekul.
V tomto způsobu CD19 pozitivní buňka/B lymfocyt poskytne primární aktivační signál pro T lymfocyty, tudíž se vyhne klonotypovému receptoru T lymfocytů. Pak může být podle vynálezu určeno, která testovaná sloučenina je ještě potřebná pro skutečnou aktivaci T lymfocytů. Ve způsobu podle vynálezu CD19 pozitivní buňka/B lymfocyt působí jako stimulační buňka, která spojuje bispecifické molekuly, které jsou vázány k CD3 komplexům na povrchu stejného T lymfocytů. Biologické způsoby pro pěstování, detekci a volitelně i testování jsou odborníkovi jasné.
Termín sloučenina ve způsobu podle vynálezu zahrnuje jednu látku nebo -velké množství látek, které mohou nebo nemusí být totožné.
být např. přidáno do kultivačního media buňky. Jestliže vzorek obsahující identifikován způsobem podle vynálezu, izolovat sloučeninu z původního vzorku, ··· 0 · » · · · • 0 0« · « · · · · «··· • · · · · ····«·· ·» *» ·
Uvedená sloučenina(y) může být například obsažena ve vzorcích např. buněčných extraktů z např. rostlin, zvířat nebo mikroorganismů. Kromě toho uvedené sloučeniny mohou být v oboru známy, ale až dosud nebylo zřejmé, že jsou schopné inhibovat aktivaci T lymfocytu nebo že jsou použitelné jako současně stimulující faktor T lymfocytu. Mnoho sloučenin může nebo vstříknuto do sloučeninu(y) je pak je buď možné když je určeno, že obsahuje příslušnou sloučeninu nebo původní vzorek může být dále rozdělen, například jestliže se skládá z velkého množství různých sloučenin, aby se zredukoval počet různých látek ve vzorku a způsob se dále opakuje s částmi původního vzorku. Jestli uvedený vzorek nebo sloučenina projevují požadované vlastnosti pak může být určeno pomocí metod v oboru známých, jako například popsaných zde a v připojených příkladech. V závislosti na složitosti vzorků mohou být výše popsané kroky provedeny několikrát, výhodně až dokud vzorek určovaný způsobem podle vynálezu obsahuje pouze omezený počet látek nebo pouze jednu látku. Uvedený vzorek výhodně zahrnuje látky podobných chemických a/nebo fyzikálních vlastností a nejvýhodněji jsou uvedené látky totožné. Způsoby podle předkládaného vynálezu mohou být docela dobře prováděny a navrženy odborníkem například ve shodě s jinými testy založenými na buňkách, které jsou popsány ve stavu techniky nebo použitím a modifikací metod, jak je popsáno v připojených příkladech. Kromě toho odborník hned pozná, které další sloučeniny a/nebo buňky mohou být použity pro provádění způsobů podle vynálezu, například interleukiny nebo enzymy, bude-li to nezbytné, které konvertují určitou sloučeninu na prekurzor, který dále stimuluje nebo potlačuje aktivaci T lymfocytu. Takové adaptace způsobu podle vynálezu jsou ve schopnostech odborníka a mohou být prováděny bez nadbytečného experimentování.
Sloučeniny, které mohou být použity ve shodě se způsobem podle předkládaného vynálezu, zahrnují peptidy, proteiny, nukleové kyseliny, protilátky, malé organické molekuly, ligandy, peptidomimetika, PNA apod. Uvedené sloučeniny mohou také být funkčními deriváty nebo analogy známých aktivátorů nebo inhibitorů T lymfocytů. Způsoby přípravy chemických derivátů a analogů jsou odborníkovi dobře známy a jsou popsány například autorem Beilstein (Handbook of Organic Chemistry, Springer edition New York lne., 175 Fifth Avenue, New York, N.Y. 10010 U.S.A. and Organic Synthesis, Wiley, New York, USA) . Kromě toho uvedené deriváty a analogy mohou být testovány na své působení podle způsobů v oboru známých nebo jak je popsáno například v připojených příkladech. Mimoto mohou být použita peptidomimetika a/nebo počítačem navržené vhodné aktivátory nebo inhibitory aktivace T lymfocytů například podle způsobů popsaných níže. Mohou být použity vhodné počítačové programy pro identifikaci interaktivních míst předpokládaného inhibitoru a antigenu podle vynálezu při vyhledávání komplementárních strukturálních motivů prostřednictvím počítače (Fassina, Immunomethods, 5, 114-120, 1994) . Další vhodné počítačové systémy pro návrhy proteinů a peptidů pomocí počítače jsou popsány ve stavu techniky například autory Berry (Biochem. Soc. Trans., 22, 1033-1036, 1994), Wodak (Ann. N.Y. Acad. Sci., 501, 1-13, 1987), Pabo (Biochemistry, 25, 5987-5991, 1986). Výsledky získané z výše popsaných počítačových analýz mohou být použity v kombinaci se způsobem podle vynálezu pro např. optimalizaci známých
T lymfocytů. Vhodná identifikována syntézou aktivátorů nebo inhibitorů peptidomimetika mohou také být peptidomimetických - kombinatorický knihoven prostřednictvím postupné chemické modifikace a testování výsledných sloučenin např. podle metody popsané na tomto místě a v připojených příkladech. Způsoby pro tvoření a použití peptidomimetických kombinatorických knihoven jsou popsány ve stavu techniky například autory Ostresh (Methods in Enzymology, 267, 220234, 1996) a Dorner (Bioorg. Med. Chem., 4, 709-715, 1996). Kromě toho trojrozměrné a/nebo krystalografické struktury inhibitorů nebo aktivátorů interakce B lymfocyt/T lymfocyt mohou být použity pro návrh peptidomimetických inhibitorů nebo aktivátorů aktivace T lymfocytu, které jsou testovány způsobem podle vynálezu (Rose, Biochemistry, 35, 12933-12944, 1996, Rutenber, Bioorg. Med. Chem., 4, 1545-1558, 1996) .
Stručně řečeno, předkládaný vynález poskytuje způsoby identifikace sloučenin, které jsou schopné modulovat imunitní reakce zprostředkované B lymfocytem/T lymfocytem.
Sloučeniny, u kterých je zjištěno, že aktivují reakce zprostředkované B lymfocytem/T lymfocytem, mohou být použity pro léčení karcinomů a příbuzných nemocí. Navíc může být také možné specificky inhibovat virové choroby, a tím zabránit virové infekci nebo síření viru. Sloučeniny identifikované jako supresory aktivace nebo stimulace T lymfocytu mohou být použity při orgánové transplantaci, aby zabránily rejekci štěpu, viz také výše.
Je tudíž očekáváno, že sloučeniny identifikované nebo získané způsobem podle předkládaného vynálezu budou velice užitečné pro diagnostiku a především pro léčebné aplikace. Proto se v dalším provedení vynález týká způsobu produkce farmaceutického přípravku obsahujícího formulaci sloučenin identifikovaných v kroku (b) výše popsaného způsobu podle vynálezu ve farmaceuticky přijatelné formě. Kromě toho se předpokládá, že uvedená složka může být modifikovaná pomocí peptidomimetika. Způsoby tvoření a použití peptidomimetických kombinatorických knihoven jsou popsány ve stavu techniky například autoři Ostresh (Methods in Enzymology, 267, 210-
234, 1996), Dorner (Bioorg. Med. Chem., 4, 709-715, 1996), Beeley (Trends Biotechnol., 12, 213-216, 1994) nebo al-Obeidi (Mol. Biotech., 9, 205-223, 1998).
Léčebně použitelné sloučeniny identifikované způsobem podle vynálezu mohou být pacientovi podávány prostřednictvím jakéhokoliv vhodného způsobu pro konkrétní sloučeninu např. perorálně, intravenózně, parenterálně, transdermálně, přes sliznice nebo pomocí chirurgického zákroku nebo implantátu (např. sloučenina je ve formě pevné nebo polotuhé biologicky kompatibilní a resorbovatelné matrix) v místě, kde je žádoucí působení sloučeniny nebo blízko tohoto místa. Příslušné léčebné dávky jsou určeny odborníkem, viz výše.
Kromě toho předkládaný vynález poskytuje způsob pro léčení malignit B lymfocytů, autoimunitních chorob se vztahem k B lymfocytům nebo deplece B lymfocytů a/nebo způsob oddalující patologický stav, který je vyvolaný poruchami B lymfocytů, tento způsob zahrnuje zavedení polypeptidu, polynukleotidu nebo vektoru podle vynálezu do savce postiženého uvedenou malignitou, nemocí a/nebo patologickým stavem. Kromě toho je výhodný, že uvedený savec je člověk.
Toto a další provedení jsou popsána a obsažena v popisu a příkladech předkládaného vynálezu. Další literatura týkající se jakékoliv protilátky, způsobu, použití a sloučenin pro použití podle předkládaného vynálezu, může být vyhledána ve veřejných knihovnách a databázích, s použitím například elektronických zařízení. Například může být využita veřejná databáze Medline, která je dosažitelná na Internetu například pod adresou:
http://www.nebi.nlm.nih.gov/ PubMed/medline.html.
Další databáze a adresy, jako například: http://www.nebi.nlm.nih.gov/, http://www.infobiogen.fr/, http://www.fmi.ch/biology/research_tools.html, • · · · · · • · ··· ······· http://www.tigr.org/, jsou odborníkovi známy a mohu také být získány použitím např. http://www.lycos.com.
Přehled patentových informací v biotechnologii a přehled důležitých zdrojů patentových informací použitelných pro retrospektivní hledání a pro přehled o současných znalostech je podán v práci autora Berks (TIBTECH, 12, 352-364, 1994).
Popis obrázků
Obrázek 1: SDS-PAGE: barvení Coomassie modří purifikovaného bscCD19xCD3 fragmentu s různými množstvími proteinu. Molekulová hmotnost (kD) standardu je vyznačená nalevo.
Obrázek 2: FACS-analýza s bscCD19xCD3 (200 pg/ml) v různých CD19-pozitivních B buněčných liniích (BJAB, SKW6.4, Blin-1, Daudi, Ráji), v CD19-negativní B buněčné linii BL60 a s CD3pozitivními buňkami Jurkat a primárními lidskými PBMC. Přerušované čáry označují negativní kontroly.
Obrázek 3: Cytotoxicita bscCD19xCD3 v testu uvolňování 51Cr s nestimulovanými lidskými PBMC a různými B buněčnými liniemi. Poměr efektor:cílová buňka (poměr E:T) byl 10:1, doba inkubace 4 hodiny. Směrodatná odchylka ve všech trojích opakováních byla pod 7%.
Obrázek 4: Test cytotoxicity pomocí uvolňování chrómu s nestimulovanými primárními lidskými PBL proti plasmacytomovým buněčným liniím L363 a NCI a lymfomové buněčné linii Daudi, poměr E:T 20:1, doba inkubace 8 hodin.
Obrázek 5: Inhibice cytotoxicity bscCD19xCD3 základní antiCD19 protilátkou v testu uvolňování chrómu, doba inkubace 8 hodin, poměr E:T 20:1, koncentrace bscCD19xCD3 1 ng/ml.
Obrázek 6: Test cytotoxicity s nestimulovanými PBMC proti buňkám Daudi po přidávání stoupajícího množství EGTA, poměr E:T 10:1, doba inkubace 4 hodiny.
Obrázek 7: cytotoxicita bscCD19xCD3 v testu uvolňování 51Cr s nestimulovanými lidskými PBMC a buňkami Blin-1 jako cílovými buňkami při různých poměrech E:T, doba inkubace 4 hodiny, koncentrace konvenční bispecifické protilátky 3 pg/ml, koncentrace bsc 17-lAxCD3 100 ng/ml, E:T poměr jak uvedeno.
Obrázek 8: DNA sekvence a proteinová sekvence bscCD19xCD3 protilátky (varianta obsahující značku FLAG). Čísla udávají pozice nukleotidů (nt), odpovídající aminokyselinová sekvence je zobrazena pod nukleotidovou sekvencí. DNA sekvence kódující bispecifickou protilátku začíná v pozici 1 a končí v pozici 1593. Prvních šest nt (pozice -10 až -5) a posledních šest nt (pozic 1596 až 1601) obsahuje štěpná místa restrikčních enzymů EcoRI a Sáli, v tomto pořadí. Nukleotidy 1 až 57 specifikují vedoucí sekvenci, nukleotidy 82 až 414 a 460 až 831 kódují VLCD19 a VHCD19, v tomto pořadí, nukleotidy 847 až 1203 a 1258 až 1575 kódují VHCD3 a VLCD3, v tomto pořadí, a nukleotidy 1576 až 1593 kódují značku His.
Obrázek 9: Deplece primárních (maligních) CD19+ B lymfocytů odváděním autologních primárních T lymfocytů prostřednictvím bscCD19xCD3.
A) výchozí-bod (t = 0) : n = 3 x 106 PBL/jamku bylo vyseto na 24-jamkovou tkáňovou kultivační misku v objemu 1 ml
média RPMI 1640, doplněného 10% FCS. Je ukázáno počáteční procento CD19+ B lymfocytů, jakož i CD4+- a CD8+ T lymfocytů.
B-G) relativní počty B a CD4+- a CD8+ T lymfocytů po t = 5 dnech inkubace v 37°C/5% CO2 v nepřítomnosti (B-C) nebo přítomnosti (D-G) bscCD19xCD3 (koncentrace jsou ukázány) se 60 U/ml IL-2 nebo bez něj. Negativní kontroly obsahovaly buď bispecifickou jednořetězcovou protilátku (17-lAxCD3) s irelevantní specifitou pro cílovou buňku nebo neobsahovaly žádnou bispecifickou protilátkou (C).
Obrázek 10: Purifikační kroky pro bscCD19xCD3.
Obrázek 11: SDS-PAGE analýza čistoty bscCD19xCD3. Je ukázán SDS-polyakrylamidový gel s 4-12% gradientem barvený koloidní Coomassie modří. Dráhy 1 a 6, standardy molekulové velikosti, dráha 2, supernatant buněčné kultury, dráha 3, aktivní frakce z kationtové výměnné chromatografie, dráha 4, aktivní frakce z afinitní chromatografie s cheláty kobaltu, dráha 5, aktivní frakce z gelové filtrace. Bylo analyzováno stejné množství proteinu (2 pg) ze supernatantu buněčné kultury a různé frakce z kolon. Velikost standardů molekulové hmotnost v kD je ukázána napravo. Šipka ukazuje pozici bscCD19xCD3.
Obrázek 12: Kationtová výměnná chromatografie bscCD19xCD3. Koncentrace proteinu byla měřena pomocí absorpce ve 280 nm (mAU, vlevo). Eluční profil proteinu je ukázán plnou čarou. Profil stupňovitého gradientu NaCl je vyznačen přímou plnou čarou (%B, vpravo) a sebrané frakce jsou označeny přerušovanými čarami. bscCD19xCD3 byla detekována ve frakci F6.
Obrázek 13: Afinitní chromatografie s cheláty kobaltu bscCD19xCD3. Koncentrace proteinu byla měřen pomocí absorpce ve 280 nm (mAU, vlevo). Eluční profil proteinu je ukázán plnou čarou. Imidazolový gradient je vyznačen přímou plnou čarou (%B, vpravo) a sebrané frakce jsou označeny přerušovanými čarami. bscCD19xCD3 byla detekována ve frakci F7 .
Obrázek 14: Gelová filtrace anti-CD19XANTI-CD3. Koncentrace proteinu byla měřen pomocí absorpce ve 280 nm (mAU, vlevo). Eluční profil proteinu je ukázán plnou čarou. Přerušované čáry označují sebrané frakce. bscCD19xCD3 byla nalezena ve frakci F7 odpovídající molekulové velikosti přibližně 60 kD.
Obrázek 15: Hladiny gamaglutamyltransferázy (GGT) v krvi jako reakce na ošetření s bscCD19xCD3. GGT hodnoty byly určeny standardní klinickou biochemickou metodou a jsou vyjádřeny v jednotkách/1. Časová osa ukazuje dny (d) od začátku prvního podání léku a hodiny (h) po jednotlivých dalších podáních léku, začínajíc nulou. Šipky označují časové body podávání léku.
Obrázek 16: Ultrazvukové měření sleziny pacienta A-B.
A: Určení velikosti sleziny datované 12. dubna, 1999, před léčbou bscCD19xCD3. Obrázek ukazuje zvětšenou slezinu (velikost 146 mm x 69,2 mm), což je zaviněno infiltrací maligními B lymfocyty.
B: Určení velikosti sleziny datované 16. dubna, 1999, po léčbě 3 pg 14. dubna, následovanými 10 pg 15. dubna. Obrázek ukazuje zmenšování sleziny na velikost 132 mm x 58,9 mm způsobené systémovou léčbou s bscCD19xCD3. Nesrovnalosti jednotlivých měření velikosti ukázaných v tabulce 1 jsou vysvětlené určováním velikosti orgánu v různých prostorových rovinách na základě ultrazvukového vyšetření. Tyto dva rozměry jsou označeny (+) a (x).
• · · · · » · • · · ····»·· ·· ··
Obrázek 17: Počty leukocytů v krvi jako odpověď na léčbu s bscCD19xCD3. Počet leukocytů je uveden v 109/litr. Časová osa ukazuje dny (d) od začátku prvního podání léku a hodiny (h) po jednotlivých dalších podáních léku, začínajíc nulou. Šipky označují časové body podávání léku.
Obrázek 18: Hladiny C-reaktivního proteinu (CRP) v krvi jako odpověď na léčbu s bscCD19xCD3. CRP hodnoty byly určeny standardní klinickou biochemickou metodou a jsou vyjádřeny v mg/dl. Časová osa ukazuje dny (d) od začátku prvního podání léku a hodiny (h) po jednotlivých dalších podáních léku, začínajíc nulou. Šipky označují časové body podávání léku.
Obrázek 19: Hladiny nádorového nekrotického faktoru-alfa (TNF) v krvi jako odpověď na léčbu s bscCD19xCD3. TNF hodnoty byly určeny pomocí testu ELISA a jsou vyjádřeny v ng/ml. Časová osa ukazuje dny (d) od začátku prvního podání léku a hodiny (h) po jednotlivých dalších podáních léku, začínajíc nulou. Šipky označují časové body podávání léku.
Obrázek 20: Hladiny interleukinu-6 (IL-6) v krvi jako odpověď na léčbu s bscCD19xCD3. IL-β hodnoty byly určeny pomocí testu ELISA a jsou vyjádřeny v pg/ml. Časová osa ukazuje dny (d) od začátku prvního podání léku a hodiny (h) po jednotlivých dalších podáních léku, začínajíc nulou. Šipky označují časové body podávání léku.
Obrázek 21: Hladiny interleukinu-8 (IL-8) v krvi jako odpověď na léčbu s bscCD19xCD3. IL-8 hodnoty byly určeny pomocí testu ELISA a jsou vyjádřeny v pg/ml. Časová osa ukazuje dny (d) od začátku prvního podání léku a hodiny (h) po jednotlivých dalších podáních léku, začínajíc nulou. Šipky označují časové body podávání léku.
Obrázek 22: hladiny alfa řetězce rozpustného receptoru interleukinu-2 (IL-2R) v krvi jako odpověď na léčbu s bscCD19xCD3. IL-2R hodnoty byly určeny pomocí testu ELISA a jsou vyjádřeny v jednotkách/ml. Časová osa ukazuje dny (d) od začátku prvního podáni léku a hodiny (h) po jednotlivých dalších podáních léku, začínajíc nulou. Šipky označují časové body podávání léku.
Vynález bude nyní podrobněji popsán a vysvětlen prostřednictvím následujících biologických příkladů, které jsou pouze ilustrující a rozsah předkládaného vynálezu nijak neomezuj 1.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Klonování variabilních (V) imunoglobulinových domén
Domény V lehkého řetězce(VL) a V těžkého řetězce (VH) z hybridomu HD37 (22) byly klonovány podle standardní PCR (polymerázová řetězová reakce) metody (23). cDNA syntéza byla prováděna s oligo-dT primery a Taq polymerázou.
Seznam primerů
5' LI:
GAAGCACGCGTAGATATCKTGMTSACCCAA [sekvence id. č. 1]
3' K:
GAAGATGGATCCAGCGGCCGCAGCATCAGC [sekvence id. č. 2] • ·
5' Hl:
CAGCCGGCCATGGCGCAGGTSCAGCTGCAG [sekvence id. č. 3]
3' G:
ACCAGGGGCCAGTGGATAGACAAGCTTGGG [sekvence id. č. 4]
5' VLB5RRV:
AGGTGTACACTCCATATCCAGCTGACCCAG [sekvence id. č. 5]
3' VLGS15:
GGAGCCGCCGCCGCCAGAACCACCACCTTT [sekvence id. č. 6]
5' VHGS15:
GGCGGCGGCGGCTCCGGTGGTGGTGGTTCTCAGGTSMARCTGCAGSAGTCWGG [sekvence id. č. 7]
3' VHBspEl:
AATCCGGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCCT [sekvence id. č. 8]
Pro amplifikaci V domén prostřednictvím PCR byly použity primery 5' LI a 3' K, ohraničující doménu VL, a 5' Hl a 3' G pro těžký řetězec založený na primerech popsaných Dubel et al. (24) .
CDNA anti-CD3 scFv fragmentu laskavě poskytl A. Traunecker (25).
Příklad 2
Konstrukce bispecifických a eukaryotická exprese j ednořetězcových fragmentů
Aby byl získán anti-CD19 scFv-fragment, odpovídající VLa VH-oblasti klonované do samostatných plazmidových vektorů sloužily jako templáty pro VL- a VH-specifickou PCR používající páry oligonukleotidových primerů 5' VLB5RRV/3'
VLGS15 a 5' VHGS15/3 vloženy překrývající produktů, které byly spojeny za vzniku kódující sekvence
VHBspEl, v tomto pořadí. Tím byly se komplementární sekvence do PCR • ··· · · · 0 0 0· ·
15-aminokyselinové (Gly4Seri)3 spojky během následující fúzní PCR. Tento amplifikační krok byl proveden s párem primerů 5' VLB5RRV/3' VHBspEI a výsledný fúzní produkt (nebo spíše antiCD19 scFv-fragment) byl štěpen restrikčními enzymy EcoRV a BspEI, a tak klonován do vektoru BluescriptKS- (Stratagene) obsahujícím buď (EcoRI/SalI-klonovanou) kódující sekvenci anti-17-lA/anti-CD3 bispecifické jednořetězcové protilátky s N-koncovou značkou FLAG [1] nebo sekvenci modifikované verze bez epitopů FLAG (21), čímž byla nahrazena anti-17-ΙΑspecifita specifitou anti-CD19 a uchována 5 aminokyselinová (Gly4Seri)i spojka spojující C-koncový anti-CD3 scFv fragment, v daném pořadí. Pak byly DNA fragmenty kódující obě verze anti-CD19/anti-CD3 bispecifických jednořetězcových protilátek s uspořádáním domény VLcdi9-VHcdi9-VHcd3-VLCd3 subklonovány EcoRI/SalI do popsaného expresního vektoru pEF-DHRF [1], podle pořadí. Výsledné plazmidové DNA byly transfekovány do DHFR-deficitních CHO lymfocytů pomocí elektroporace: selekce, genová amplifikace a produkce proteinu byla prováděna jako popsáno [1]. V následujících příkladech jsou vysvětlené výsledky získané s verzí bscCD19xCD3 obsahující FLAG.
Purifikace bscCD19xCD3 ze supernatantu transfekovaných CHO buněk poskytla 4 mg na litr tkáňového supernatantu. Bsc-Ab byla purifikovaná prostřednictvím své C-koncové histidinové značky pomocí afinitní chromatografie na koloně Ni-NTA, jak je popsáno [1]. Bsc-Ab byla eluována z kolony Ni-NTA jako zřetelný vrchol při imidazolu v 200mM koncentraci. SDS-PAGE byla prováděna podle Laemmli (26) s 12% gelem, a pak následovalo barvení Coomassie briliantovou modří R250 pro analýzu purifikace bsc-Ab. Výsledky analýzy SDS-PAGE (obr. 1) ukazují předpokládanou velikost bsc-Ab (60 kD).
• ·
Příklad 3
Vazebné vlastnosti bsc-AbCD19xCD3
Vazebné specifity bsc-Ab pro CD3 a CD19 byly prokázány pomocí analýzy průtokovou cytometrií na CD3-pozitivních buňkách Jurkat, lidských PBMC a několika různých CD19pozitivních buněčných liniích lymfomů z B lymfocytů, včetně Blin I, SKW6.4, Daudi, BJAB a Ráji. CD19-pozitivní B buněčné linie Daudi, Ráji, BJAB (Burkittův lymfom), SKW6.4 (lidské B lymfocyty transformované EBV) a Blin-1 (linie pre-B lymfocytů) byly použity pro analýzu průtokovou cytometrií a testy uvolňování chrómu. Jurkat je CD3-pozitivní buněčná linie T lymfocytů, BL60 a plasmocytomové buněčné linie NCI a L363 jsou negativní na obě povrchové molekuly, CD3 a CD19. Buněčné linie byly pěstovány v kompletním RPMI 1640 (Biochrom) s 10% FCS (GIBCO).
χ 106 buněk bylo promyto PBS, resuspendováno ve 200 μΐ PBS s 10 % Vernimmun (Centeon, Marburg, Německo) a 0,1 % NaN3 a inkubováno 3 0 minut ve 4°C. Po centrifugací (100 x g, 5 minut) byly buňky inkubovány v 50 μΐ bscCD19xCD3 (200 pg/ml v PBS s 10 % Venimmun a 0,1 % NaN3) 3 0 minut ve 4°C. Buňky byly dvakrát promyty PBS. Pro detekci bsc-Ab byla použita protilátka proti značce His (Dianova
Jako negativní kontroly sloužily
17-lAxCD3, produkovaná pomocí stejného expresního systému jako bscCD19xCD3, nebo protilátka proti samotné značce His. Průtoková cytometrie byla prováděna na přístroji Becton Dickinson FACScan. U buněk BL60, které neexprimují ani CD19 ani CD3, nebyla zjištěna žádná vazba (obr. 2).
konjugovaná s FITC. irelevantní bsc-Ab • ·
Příklad 4
Cytotoxická aktivita bsc-AbCD19xCD3 proti CD19-pozitivním lymfomovým buňkám buněčné linie periferní krve izolovány náhodných
V testu uvolňování 51Cr se ukázalo, že protilátka bscCD19xCD3 je vysoce cytotoxická pro některé lymfomové ) obrázek 3) . Lidské mononukleární buňky (PBMC), jakožto efektorové buňky, byly z čerstvě sražených leukocytů („buffy coat) dárců gradientovou centrifugaci s použitím Lymphoprep™ (Nycomed) s následující centrifugaci 100 x g pro odstranění trombocytů. CDl9-pozitivní B lymfocyty byly odčerpány použitím Dynabeads® M-450 CD19 (Dynal). Ochuzené buněčné populace byly analyzovány pomocí průtokové cytometrie (Becton Dickinson), která ukázala 99% depleci CD19pozitivních buněk. PBMC byly inkubovány přes noc ve 37 °C, 5% CO2, jako cílové buňky byly použity CD19-pozitivní B buněčné linie (Ráji, Blin I, Daudi, BJAB, SKW6.4).
Cytotoxicita byla měřena ve standardním testu uvolňování chrómu na 96-jamkových destičkách s kulatým dnem (Nunc) s použitím kompletního média RPMI 1640 (Biochrom) s 10% FCS (GIBCO).
Nestimulované PBMC byly přidány v objemu 80 μΐ média do každé jamky obsahující 20 μΐ bsc-Ab v různých koncentracích. Pak bylo přidáno 100 μΐ cílových buněk (1 x 104) značených JlCr, destičky byly stočeny 3 minuty v 100 x g a inkubovány 4 hodiny ve 37 °C, 5 % CO2. Po další centrifugaci bylo odstraněno 50 μΐ supernatantu a testováno na uvolněný 51Cr v počítači gama impulzů (TopCount, Canberra Packard).
Spontánní uvolňování bylo měřeno pomocí inkubace cílových buněk bez efektorových buněk nebo protilátek a maximální uvolňování bylo určováno pomocí inkubace cílových • « • ·
9 • · « 9
9 9 9 9
9 999999· cytotoxicity během předběžné stimulace buněk s 10% TritonX-100. Inkubace cílových buněk s bscAb bez efektorových buněk neměla za následek měřitelnou lýzi buněk. Procento specifické lýze bylo vypočítáno takto: nespecifické uvolňování (%)=[(cpm, experimentální uvolňování) - (cpm, spontánní uvolňování)]/[(cpm, maximální uvolňování) - (cpm, spontánní uvolňování)] x 100. Všechny pokusy byly prováděny ve trojím opakování (triplikátech). SD mezi triplikáty byla ve všech experimentech pod 6%. Aby byly přiblíženy podmínky in vivo použili původci vynálezu jakožto efektorové buňky nestimulované PBMC od zdravých dárců. Rychlá indukce 4 hodin byla pozorována bez žádné T lymfocytů. Kontrolní bsc-protilátka s odlišnou nádorovou specifitou (bscl7-lAxCD3), ale vytvářena stejným systémem jako protilátka bscCD19xCD3, vykázala lyzační aktivitu nevýznamně vyšší než médium coby pozadí. Kromě toho nebyla pozorována žádná cytotoxické aktivita při použití plasmocytomových buněčných linií NCI a L363, které neexprimují CD19, jako cílových buněk (obrázek 4). V kompetitivních testech používajících stoupající množství CD19-specifické základní monoklonální protilátky HD37 byla cytotoxické aktivita bscCD19xCD3 téměř úplně blokována (obrázek 5). Tyto kontroly ukazují, že cvtotoxický účinek zprostředkovaný bscCD19xCD3 je antigen-specifický. Pro získání více informací o molekulárním mechanismu, kterým bscCD19xCD3 protilátka ničí CD19-pozitivní cílové buňky, zkoušeli původci vynálezu blokovat cytotoxicitu zprostředkovanou bscCD19xCD3 prostřednictvím EGTA. Jak ukázáno na obrázku 6, cytotoxické aktivita bscCD19xCD3 může být úplně zablokována prostřednictvím EGTA, což ukazuje, že specifická lýze je spíše účinek zprostředkovaný T lymfocyty (pravděpodobně přes metabolickou dráhu perforinu) než přímé působení protilátky - samotné (např. indukce apoptózy) .
• *
Při použití nestimulovaných T lymfocytů byl pozorován významný cytotoxický účinek proti buňkám Blin I dokonce při koncentracích protilátky pod 1 ng/ml (obrázek 7). Dokonce při poměrně nízkém poměru E:T (5:1, 2,5:1) a při velmi nízké koncentraci protilátky 10 až 100 pg/ml, protilátka bscCD19xCD3 rychle indukovala specifickou cytotoxickou aktivitu nestimulovaných T lymfocytů (obrázek 7) . Na rozdíl od toho, konvenční bispecifické protilátka CD19XCD3 vytvořená pomocí techniky hybridu-hybridomu (5-7, 27) nevykázala v těchto podmínkách významnou cytotoxickou aktivitu ani při koncentracích až 3000 ng/ml (obrázek 7). Tato konvenční bispecifické protilátka vyžadovala další předběžnou stimulaci T lymfocytů a vysoké koncentrace protilátek přibližně 100 ng/ml, aby indukovala cytotoxicitu specifickou pro T lymfocyty (neukázáno), což je v souhlase s literaturou (5-7, 27) .
Příklad 5
Deplece primárních (maligních) B lymfocytů prostřednictvím autologních T lymfocytů přes cytotoxickou aktivitu bscCD19xCD3
Aby se určila cytotoxické aktivita bscCD19xCD3 na primární maligní B lymfocyty, mononukleární buňky periferní krve (PBMC) pacienta nemocného B CLL (chronická lymfatická leukémie typu B) byly izolovány pomocí centrifugace na hustotním gradientu Ficollu. Tyto buňky byly nepřetržitě pěstovány v přítomnosti nebo nepřítomnosti bscCDl9xCD3 po dobu 5 dnů ve 37°C/5% CO2 v médiu RPMI 1640 doplněném 10% FCS a, volitelně, 60 U/ml IL-2. Analýza průtokovou cytometrií odhalila, že lymfocyty periferní krve (PBL) tohoto konkrétního pacienta (který byl později systémově léčen • ·
s bscCD19xCD3, viz příklad 7) s NHL (nehodgkinský lymfom) obsahovaly 92,6 % CD19-pozitivních B lymfocytů (=cílové buňky) a 7,4 % CD3-pozitivních T lymfocytů (=efektorové buňky) při poměru T lymfocytů CD4/CD8 2,6 : 4,8. Převážná většina těchto CD19-pozitivní B lymfocytů se skládala z maligních buněk. Na 24-jamkové tkáňové kultivační destičky byl vyseto 3xl06 PBL/ml na jamku v objemu 1 ml. Jako negativní kontroly sloužilo kultivační médium plus IL-2 a kultivační médium plus IL-2 s irelevantní bispecifickou jednořetězcovou protilátkou bscl7-lAxCD3 (1) v koncentraci 0,5 pg/ml. Jak je ukázáno na obrázku 9, po 5 dnech inkubace nebyla v těchto podmínkách zjištěna deplece CD19-pozitivních buněk. Ale když byla přidána bscCD19xCD3 v koncentracích pg/ml byly
CD19-pozitivní B lymfocyty. Pěstované buňky se tehdy skládaly převážně z T lymfocytů s poměrem T lymfocytů CD4/CD8 asi 1:2 až 1:3. To ukázalo mimořádnou cytotoxicitu bscCD19xCD3 pro CD19-pozitivní B lymfocyty, protože úplná deplece primárních B lymfocytů autologními T lymfocyty byla indukována v koncentraci pouze 50 ng/ml při velmi nepříznivém počátečním poměru efektorových a cílových buněk (méně než 1:10), dokonce bez další stimulace T lymfocytů IL-2 nebo jiným druhem stimulace.
0,5 pg/ml nebo 0,05 nepřítomnosti IL-2), (buď v přítomnosti nebo zničeny skoro všechny
Příklad 6
Purifikace bscCD19xCD3 pro léčebné použití bscCD19xCD3 byla produkována v buňkách vaječníků čínského křečka (CHO) trvale transfekovaných expresním vektorem (pEF-DHFR, viz příklad 2) kódujícím bscCD19xCD3 a kromě toho hexahistidin a značku FLAG. Buňky byly pěstovány t · • · sodným (SDS) Bis/Tris IPAGE) používající v médiu bez séra (Rencyte) v reaktoru s dutými vlákny (Unisyn). Pět set ml supernatantu buněčné kultury bylo odebráno a sterilováno filtrací přes 0,2 pm filtr (AcroCap, Pall Gelman).
bscCD19xCD3 byla detekována a kvantifikována pomocí westernová přenosu s použitím myšího anti-FLAG IgG (Sigma) a kozího anti-myšího IgG konjugovaného s alkalickou fosfatázou (Sigma). Detekce byla prováděna pomocí chemiluminiscence s použitím systému BCIP/ NBT (Devitron). Koncentrace proteinu byly určeny pomocí Bradfordova testu (Biorad), s použitím bovinního IgG (Biorad) jako proteinového standardu. Čistota frakcí z kolon byla hodnocena redukující elektroforézou s dodecylsulfátem polyakrylamidovým gelem s gradientem 4-12! systém s MOPS pufrem (Novex).
Purifikace bscCD19xCD3 do homogenity vyžaduje kationtovou výměnnou chromatografii, afinitní chromatografii s cheláty kobaltu a, jako závěrečný stupeň, gelovou filtraci. Tyto purifikační kroky byly prováděny s použitím standardních protokolů (viz níže). Proudové schéma purifikačního postupu je ukázáno na obrázku 10.
Kationtová výměnná chromatografie: Supernatant buněčné kultury z CHO buněk byl smíchán se dvěma objemy pufru C (3 0mM morfolinoetansulfonová kyselina [MES], 20 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0,3 mM benzamidinhydrochlorid, pH 5,5) a puštěn přes 7 0 ml kationtovou výměnnou kolonu SP Sepharose Fast Flow (Pharmacia) při průtokové rychlosti 20 ml/minutu. Kolona byla ekvilibrována pufrem A (20 mM MES, 20 mM NaCl, pH 5,8) . Po promytí 5 objemy kolony pufrem A byla bscCD19xCD3 eluována s gradientem 45% pufru B (20 mM MES, 1 M NaCl, pH 5,8) v pufru A. K eluátu bylo přidáno 0,045 objemu 1M Tris/HCL, pH 8,5, obsahujícího 47mM imidazolu a byl pak sterilován filtrací (0,2 pm, AcroCap). Typický eluční profil kationtové kobaltu: Eluát při průtoková s 33 objemy 400mM NaCl, výměnné chromatografie je ukázán na obrázku 12. bscCD19xCD3 byla obsažena ve frakci 6.
Afinitní chromatografie s cheláty z kationtové výměnné kolony byl puštěn rychlosti 2,5 ml/minutu přes 10 ml kolonu Chelating Sepharose Fast Flow (Pharmacia) ekvilibrovanou pufrem AO (50 mM Na2HPO4, 400 mM NaCl, pH 8,0). Kolona byla předem ekvilibrována s roztokem 0,lM chloridu kobaltu. Po promytí kolony pufrem AO, pufrem A (50mM Na2HPO4,
2mM imidazol, pH 6,4) a gradientem od 0 do 12 % pufru B (50mM Na2HPO4, 400mM NaCl, 500mM imidazol, pH 6,4) v pufru A, byla bscCD19xCD3 eluována v jednom kroku 30 ml 100% pufru B. Eluát byl sterilován filtrací, po které následovala přibližně 10 násobná koncentrace v přístroji MacroSep (Pall Gelman, limit propustnosti 10 kD). Typický eluční profil afinitní chromatografie s cheláty kobaltu je ukázán na obrázku 13. bscCD19xCD3 byla detekována ve frakci číslo 7.
Gelová filtrace: Koncentrovaný eluát z kolony pro afinitní chromatografii s cheláty kobaltu byl nanesen při průtokové rychlosti 0,75 ml/minutu na 124 ml kolonu High Load Superdex 200 (Pharmacia, preparativní stupeň) ekvilibrovanou fyziologickým roztokem pufrovaným fosfáty (Gibco). bscCD19xCD3 byla eluována ve frakci s molekulovou velikostí odpovídající přibližně 55 kD (obrázek 14, frakce číslo 7) . Frakce gelové filtrace obsahující bscCD19xCD3 byla doplněna 5% lidským sérovým albuminem (Behring) a pak následovala sterilizace filtrací přes 0,1 pm filtr (Millex, Millipore).
Velké množství bscCD19xCD3 v supernatantu buněčné kultury a různých aktivních frakcích z kolon, jak bylo analyzováno pomocí bscCD19xCD3 byl v supernatantech
SDS-PAGE, hlavní buněčných je ukázáno na obrázku 11. proteinový pás detekovaný kultur (dráha 2). Vysoce • »
purifikovaný anti-CD19xanti-CD3, který byl použit pro léčení lidí, nevykázal zjistitelné nečistoty (obr. 11, dráha 5).
Příklad 7
Klinické použití bscCD19xCD3 u pacienta s lymfomem pocházejícím z lymfocytů B
V soucitném použití byl pacient (A-B, žena, narozena 1937) trpící chronickou lymfatickou leukémií typu B (B CLL) léčen bispecifickou jednořetězcovou protilátkou bscCD19xCD3.
Pacientova anamnéza a zdůvodnění:
U pacienta byla diagnostikována B CLL v r. 1992. V době počáteční diagnózy nemoc postihla různé oblasti lymfatických uzlin a slezinu, kromě toho byla pozorována hemolytická anémie autoimunitního původu a deficit imunoglobulinů. Pacient má struma nodosa, která je dobře kontrolována a pacient je v eutyreoidním stavu díky léčení karbimazolem v dávce 2,5 mg/den.
Pacient byl od r. 1992 do r. 1994 léčen mnohonásobnými chemoterapeutickými cykly chlorambucilem a prednizonem. Po progresi nemoci byla léčba změněna na cyklofosfamid, doxorubicin, vinkristin a prednizon (CHOP, 8 cyklů) a bylo dosaženo remise trvající déle než jeden rok. Po novém relapsu pacient obdržel dalších 6 cyklů CHOP, následovanými léčbou chlorambucilem a prednizonem a jednu kúru samotným chlorambucilem, která nezpůsobila ústup nemoci. V prosinci 1998 bylo provedeno ozáření sleziny, aby se potlačila postupující splenomegalie pacienta. Pacient prodělal vážné snížení aktivity kostní dřeně s četnými infekčními komplikacemi. Pacientova anémie a trombocytopenie vyžadovala časté transfúze červených krvinek a substituci destiček.
U tohoto pacienta nebyla indikována útočnější chemoterapie nebo léčba vysokými dávkami pro pokročilý stupeň choroby a zhoršenou funkci kostní dřeně. Léčení s protilátkou anti-CD20 rituximabem nebylo vhodné, protože účinnost rituximabu u B CLL nebyla doposud jasně prokázána.
Analýza FACS odhalila, že 95 % buněk periferní krve pacienta byly CD19-pozitivní buňky, zatímco 77 buněk exprimovalo antigen CD20. Inkubace buněk periferní krve pacienta s bscCD19xCD3 ukázala výraznou depleci CD19pozitivních B lymfocytů (viz příklad 5) . Proto lékaři rozhodli léčit pacienta s novou bscCD19xCD3 (soucitné použití). Pacient byl podrobně informován o novosti sloučeniny a o možném riziku a užitku této léčby. Pacient plně rozuměl vysvětlení a vyjádřil písemně informovaný souhlas s tímto soucitným použitím.
Popis klinického podávání:
Před začátkem léčby pacient podstoupil klinické vyšetření a četné diagnostické procedury, aby byl ověřen stupeň nemoci a aby byly vyloučeny jakékoliv další rizikové faktory. Pacient byl v dobrém klinickém stavu, co se týče anémie, trombocytopenie a ztráty hmotnosti, ale bez jakékoliv kardiovaskulární poruchy nebo jiných komplikací zabraňujících použití bscCD19xCD3. Během noci před prvními dny léčby měl pacient migrénu. Při podávání bscCD19xCD3 byl pacient hospitalizován na nemocničním oddělení v podmínkách intenzivní péče, aby bylo zajištěno rychlé léčení jakékoliv náhlé příhody, která by mohla nastat. Pro prevenci akutní cytokinové reakce a komplikací z lýze nádorových buněk dostal pacient profylaktické i.v. dávky 2 mg klemastinu (Tavegil®) a 200 mg cimetidinu (Tagamet®) , jakož i 300 mg alopurinolu a 20 mg omeprazolu (Antra®).
• ·
V průběhu léčení a období dalšího sledování byla prováděna alkalizace a heparinizace. Kromě toho pacient dostával veškerou potřebnou symptomatickou léčbu.
Před podáváním léku a v průběhu léčení byly odebírány vzorky krve pro sledování biochemických, hematologických a imunologických ukazatelů.
První podávání bscCD19xCD3 (14. dubna 1999):
Pacient dostal první dávku 3 pg bscCD19xCD3 jako minutovou infúzi v izotonickém fosfátovém pufru obsahujícím 5% lidský sérový albumin (HSA). Během infúze pacient nepociťoval žádné nepříznivé účinky. Přibližně 1 hodinu po infúzi měl pacient přibližně 5 minut třesavku, po které následovalo pocení, mírný pokles krevního tlaku o přibližně 10 mmHg a mírný vzestup tělesné teploty (+ 0,5 °C) po dobu několika hodin. Kromě toho se nepatrně zhoršily bolesti hlavy. Pacient byl léčen dalšími 2 mg Tavegilu® a 200 mg Tagametu®, 250 mg prednizolonu (Solu-Decortin®) a 50 mg pethidinu (Dolantin®). Všechny příznaky vymizely tentýž den bez následků.
Druhé podávání bscCD19xCD3 (15. dubna 1999):
Druhá dávka 10 pg bscCD19xCD3 byla podána den později za stejných podmínek. Přibližně 1 hodinu po infúzi měl pacient nápadnou třesavku, horečku (39,2 °C) , mírnou hyperventiiaci a hypotenzní reakci. Pacient byl léčen 2 mg Tavegilu, 200 mg Tagametu a 300 mg Solu-Decortinu a 15 mg piritramidu (Dipidolor®). Pro stabilizaci kardiovaskulárních funkcí dostal pacient infúzi dopaminu a objemovou substituci. Po této léčbě se příznaky výrazně zmenšily. Nicméně přesto byl pacient přemístěn přes noc na kardiologické oddělení, aby bylo zajištěno řádné sledování životních funkcí a v případě nutnosti okamžitá zákrok. Druhý den ráno byl pacient • ·
• * přemístěn na normální nemocniční pokoj bez dalších komplikací.
Během dalších 3 dnů pacientovi přetrvávala subfebrilní teplota (přibližně 37,2 °C) a den později po druhé dávce se objevil menší pleurální výpotek (16. duben 1999) a mírný edém dolních končetin (duben 18. 1999). Kardiovaskulární činnost zůstala stabilní a laboratorní vyšetření neodhalilo mimořádné změny vzhledem k bezpečnému podání léku kromě zvýšení γ-glutamyltransferázy po druhé dávce bscCD19xCD3 (obrázek 15).
Protože bscCD19xCD3 byla pacientem tolerovaná a nepříznivé účinky byly zvládnuty symptomatickou léčbou, bude u tohoto pacienta pokračovat podávání nové bscCD19xCD3.
Klinická a imunolouická účinnost bscCD19xCD3:
Klinické výsledky:
Ultrazvukové vyšetření sleziny a pěti abdominálních a axilárních lymfatických uzlin bylo provedeno jeden a čtyři dny po podávání druhé dávky bscCD19xCD3. Již jeden den po dávce 10 pg (16. dubna 1999) vykázaly lymfatícké uzliny, a také slezina, zmenšení přibližně o 20 % ve srovnání s výchozím hodnocením. Toto pozorování bylo potvrzeno při druhém ultrazvukovém vyšetření 19. dubna 1999. Hmotnost sleziny se zmenšila o 350 g (z 1630 g při výchozím hodnocení na 1280 g 19. dubna 1999) (tabulka 1, obrázek 16).
Hematologické výsledky:
Počet bílých krvinek, který zahrnoval z největší části maligní B lymfocyty, během léčebné kúry a ve dnech dalšího sledování klesl (tabulka 2, obrázek 17). C-reaktivní protein (CRP) je protein akutní fáze, který odráží aktivaci T lymfocytů a účinek prozánětlivých cytokinu. Po podání 10 pg
• * bscCD19xCD3 se jeho hodnoty nápadně zvýšily, a pak během dalších 3 dnů pozorování následoval kontinuální pokles (tabulka 2, obrázek 18).
Imunologické výsledky:
Hladina sérových cytokinů, které odráží akutní imunologickou reakci na podávání sloučeniny, byla měřena před podáváním nové sloučeniny a v různých intervalech po podávání. Sérové hladiny cytokinů a rozpustného receptoru IL-2 byly měřeny kvantitativním testem ELISA podle instrukcí výrobce.
Nádorový nekrotický faktor TNF-α významně vzrostl způsobem závislým na dávce během první hodiny po podávání bscCD19xCD3 (obrázek 19).
Interleukin 6 (IL-6) a interleukin 8 (IL-8) také vykázaly významné zvýšení závislé na dávce. Jejich maximální hladiny byly pozorovány 2 až 4 hodiny po podávání bscCD19xCD3 (obrázky 20, 21). Všechny cytokiny se vrátily na výchozí hladinu během několika hodin.
Rozpustný receptor IL-2 byl zvýšený již při výchozím vyšetření, což může být vysvětleno tím, že masa maligních B lymfocytů exprimuje receptor IL-2. Po podávání nové bscCD19xCD3 bylo pozorováno zvýšení rozpustného receptoru IL-2, což ukazuje aktivaci efektorových buněk (obrázek 22).
Závěr:
Nová bscCD19-CD3 byla podávána bezpečně pacientovi trpícímu refrakterní B CLL. Snášenlivost bscCD19xCD3 v dávkách 3 pg a 10 pg byla přijatelná a může být dobře kontrolována pomocí profylaktických opatření a symptomatické léčby.
Nová bscCD19xCD3 způsobila zmenšení již předtím zvětšené sleziny a lymfatických uzlin pacienta, jak ukázáno při vyšetření ultrazvukem. Protože zvětšení sleziny a lymfatických uzlin je způsobeno infiltrací maligními B lymfocyty, zmenšení odráží zničení maligních B lymfocytů jako následek podávání bscCD19xCD3.
V ostrém protikladu ke každé jiné bispecifické protilátce CD19XCD3 v oboru známé, bispecifická protilátka CD19XCD3 podle vynálezu (bscCD19xCD3) se projevila klinicky účinná u nehodgkinského lymfomu pocházejícího z B lymfocytů, jak měřeno zmenšením lymfoidních orgánů infiltrovaných maligními B lymfocyty. Ukázalo se, že bscCD19xCD3 je klinicky účinná výhodně v překvapivě nízkých dávkách, které jsou při systémovém podávání dobře tolerovány. Tudíž klinická účinnost bscCD19xCD3 potvrdila její výjimečnou cytotoxickou aktivitu, jak byla zjištěna in vitro.
Tabulka 1
Účinek bscCD19xCD3 na velikost lymfatických uzlin a sleziny pacienta s lymfomem pocházejícím z lymfocytů B.
Ultrazvuková měření | 12.4.1999 | 16.4.1999 | 19.4.1999 |
lymfatické abdominální 1 54x29x14 mm | 42x30x13 mm | 42x30x14 mm | |
uzliny | 2 56x33x18 mm | 43x33x18 mm | 43x30x16 mm |
3 46x32x27 mm | 46x31x22 mm | 47x32x23 mm | |
axilární | vlevo 36x24x16 mm | 34x22x15 mm | 30x22x14 mm |
vpravo 37x24x13 mm | 33x20x11 mm | 32x23x14 mm | |
slezina | 270x146x69 mm | 265x132x64 mm | 265x128x63 mm |
1630 g | 1340 g | 1280 g |
Velikost tří abdominálních lymfatických uzlin, jedné levé a jedné pravé axilární lymfatické uzliny a sleziny byla určena a měřena ultrazvukovým vyšetřením s použitím přístroje • · • ·
Toshiba SSA100. Velikosti jsou uvedeny ve třech rozměrech a v mm. Hmotnost sleziny byla vypočítána z rozměrů a ultrazvukové hustoty.
Tabulka 2
Hladiny vybraných ukazatelů v krvi jako reakce na léčení s bscCD19xCD3.
14.4. 1999 | 15.4. 1999 | 16.4 | 1999 | 17.4. 1999 | 18.4. 1999 | 19.4. 1999 | ||
j ednotky | ||||||||
GGT | U/l | 22 | 24 (ráno) - (večer) | 124 107 | (6,00) (12,00) | 96 | 89 | 87 |
LDH | U/l | 618 | 536 (ráno) 773 (večer) | 548 | 697 | 551 | 539 | |
Leukocyty | Gpt/1 | 46, 8 | 43.3 (ráno) 22.3 (večer) | 36, 9 | 37,0 | 28,3 | 36,6 | |
Lymfocyty | % | 85 | 58,8 (ráno) 82,0 (večer) | 60, 9 | 64,4 | 65,5 | 88 | |
CRP | mg/ dl | < 0,4 | 1,0 (ráno) 0,7 (večer) | 5,2 | 2,5 | 2, 0 | 0,7 |
Hladiny gamaglutamyltransferázy (GGT), laktátdehydrogenázy (LDH) a C-reaktivního proteinu (CRP) v krvi byly určovány standardními metodami klinické biochemie a jsou vyjádřeny jako jednotky/ml (U/ml) (GGT), jednotky/1 (U/ml) (LDH) a mg/dl (CRP). Počet leukocytů je vyjádřen v 109/l a počet lymfocytů je uvedený jako procento ze všech leukocytů. Výchozí hladiny 14. dubna 1999 před léčbou jsou udány na prvním řádku. Reakce na 3 pg bscCD19xCD3 15. dubna (která byla podána 14. dubna) je ukázána na druhém řádku. Reakce na druhé podání 10 pg sloučeniny tentýž den je ukázána na třetím řádku. Hladiny vyvolených ukazatelů čtyři dny po ošetření lékem jsou uvedeny na posledních čtyřech řádcích.
SEZNAM LITERATURY
1. Mack, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 92, 7021-5, 1995.
2. Gianni, N Engl. J. Med. 336, 1290-7, 1997.
3. Urba, J. Nati. Cancer Inst. Monogr., 29-37, 1990.
4. Fisher, Cancer, 1994.
5. Bohlen, Blood, 82, 1803-121, 1993.
6. Bohlen, Cancer Res, 53, 18:4310-4, 1993.
7. Bohlen, Cancer Res, 57,1704-9, 1997.
8. Haagen, Clin Exp Immunol, 90, 368-75, 1992.
9. Haagen, Cancer Immunol Immunother., 39, 391-6, 1994.
10. Haagen, Blood, 84, 556-63, 1994.
11. Haagen, Blood, 85, 3208-12, 1995.
12. Weiner, Leuk Lymphoma, 16, 199-207, 1995.
13. Csoka, Leukemia, 10, 1765-72, 1996.
14. Uckun, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 85, 8603-7, 1988.
15. Staerz, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 83, 1453-7, 1986.
16. Lanzavecchia, Eur J Immunol, 17, 105-11, 1987.
17. Mallender, J Biol Chem, 269, 199-206, 1994.
18. Gruber, J Immunol, 152, 5368-74, 1994.
19. Kostelny, J Immunol, 148, 1547-53, 1992.
20. Mack, J Immunol, 158, 3965-70, 1997.
21. Kufer, Cancer Immunol Immunother, 45, 193-7, 1997.
22. Pezzutto, J Immunol, 138, 2793-9, 1987.
23. Orlandi, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 86, 3833-7, 1989.
24. Dubel, J Immunol Methods, 175, 89-95, 1994.
25. Traunecker, Embo J, 10, 3655-9, 1991.
26. Laemmli, Nátuře, 227, 680-5, 1970.
27. Bohlen, J Immunol Methods, 173, 55-62, 1994.
28. Demanet, Int J Cancer Suppl, 7, 67-8, 1992.
29. De, J Hematother, 4, 433-7, 1995.
30. Haagen, Leuk Lymphoma, 19, 381-93, 1995.
31. Anderson, Blood, 80, 2826-34, 1992.
• 9
Zhu, Int J Cancer, 62, 319-24, 1995.
Hartmann, Blood, 89, 2042-7, 1997.
Valone, J Clin Oncol, 13, 2281-92, 1995.
Valone, J Hematother, 4, 471-5, 1995.
Bolhuis, Int J Cancer Suppl, 7, 78-81, 1992. Canevari, J Nati Cancer Inst, 87, 1463-9, 1995. Nitta, Lancet, 335, 368-71, 1990.
Yokota, Cancer Res, 52, 3402-8, 1992.
Weiner, J Immunol, 152, 2385-92, 1994.
Maloney, Blood 84, 2457-66, 1994.
Reff, Blood 83, 435-45, 1994.
Kipriyanov, Int. J. Cancer, 77, 763-772, 1998.
t « ·
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 36 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = oligonukleotid (iii) HYPOTETICKÁ: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
GAAGCACGCG TAGATATCKT GMTSACCCAA WCTCCA 36 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = oligonukleotid (iii) HYPOTETICKÁ: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
GAAGATGGAT CCAGCGGCCG CAGCATCAGC 30 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 33 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché • ·
(D) | TOPOLOGIE | 62 : lineární | • · ·: · : : :: : : : ’· · · · · · ······· ·· ·· |
(ii) TYP | MOLEKULY: | jiná nukleová | kyselina |
(A) | POPIS: | /desc = oligonukleotid |
(iii) HYPOTETICKÁ: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
CAGCCGGCCA TGGCGCAGGT SCAGCTGCAG SAG 33 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 39 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = oligonukleotid (iii) HYPOTETICKÁ: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
ACCAGGGGCC AGTGGATAGA CAAGCTTGGG TGTCGTTTT 39 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 36 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = oligonukleotid (iii) HYPOTETICKÁ: ano • · (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
AGGTGTACAC TCCATATCCA GCTGACCCAG TCTCCA 36 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 48 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc - oligonukleotid (iii) HYPOTETICKÁ: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
GGAGCCGCCG CCGCCAGAAC CACCACCTTT GATCTCGAGC TTGGTCCC 48 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
(i) CHARAKTERISTIK?. SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 48 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = oligonukleotid (iii) HYPOTETICKÁ: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
GGCGGCGGCG GCTCCGGTGG TGGTGGTTCT CAGGTACTGC AGAGTCGG • · • · (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:
(i) CHARAKTERIŠTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 39 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: jiná nukleová kyselina (A) POPIS: /desc = oligonukleotid (íii) HYPOTETICKÁ: ano (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:
AATCCGGAGG AGACGGTGAC CGTGGTCCCT TGGCCCCAG 39 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 1611 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: double (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) MOLECULE TYP: cDNA (íii) HYPOTETICKÁ: ne (íx) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: CDS (B) POZICE : 11..1603 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
GAATTCCACC ATG GGA TGG AGC TGT ATC ATC CTC TTC TTG GTA GCA ACA 4 9
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr
10
GCT ACA GGT GTC CAC TCC GAC TAC AAA GAT GAT GAC GAT AAG GAT ATC Ala Thr Gly Val His Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Ile
Claims (31)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Jednořetězcový multifunkční polypeptid, který obsahuje (a) první doménu obsahující vazebné místo imunoglobulinového řetězce nebo protilátky specificky rozpoznávající CD19 antigen, a (b) druhou domény obsahující vazebné místo imunoglobulinového řetězce nebo protilátky specificky rozpoznávající lidský CD3 antigen.
- 2. Polypeptid podle nároku 1, kde dvě domény jsou spojeny prostřednictvím polypeptidové spojky.
- 3. Polypeptid podle nároku 1 nebo 2, kde první a/nebo druhá doména napodobuje nebo odpovídá VH a VL oblasti přirozeně protilátky.
- 4. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde protilátka je monoklonální protilátka, syntetická protilátka nebo humanizovaná protilátka.
- 5. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, kde alespoň jedna z domén je jednořetězcový fragment variabilní oblasti protilátky.
- 6. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde domény jsou uspořádány v pořadí VLCD19-VHCD19-VHCD3-VLCD3 .
- 7. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 2 až 6, kde polypeptidová spojka obsahuje množství zbytků glycínu, alaninu a/nebo šeřinu.9 9
- 8. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 2 až 7, kde polypeptidová spojka obsahuje množství po sobě následujících kopií aminokyselinové sekvence.
- 9. Polypeptid podle polypeptidová spojka zbytků.kteréhokoliv z nároků 2 až 8, kde obsahuje 1 až 5 aminokyselinových
- 10. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 2 až 9, kde polypeptidová spojka obsahuje aminokyselinovou sekvenci Gly Gly Gly Gly Ser.
- 11. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kde první doména obsahuje alespoň jednu CDR z VH a VL oblasti zahrnující aminokyselinovou sekvenci kódovanou DNA sekvencí zobrazenou na obrázku 8 od nukleotidu 82 do 414 (VL) a nukleotidu 460 až 831 (VH) a/nebo kde druhá doména obsahuje alespoň jednu CDR z VH a VL oblasti zahrnující aminokyselinovou sekvenci kódovanou DNA sekvencí zobrazenou na obrázku 8 od nukleotidu 847 do 1203 (VH) a nukleotidu 1258 až 1575 (VL) .
- 12. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 11, kde (a) vazebné místo první domény má afinitu přinejmenším 10'7M, a/nebo (b) vazebné místo druhé domény má afinitu menší než10'7M.
- 13. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12, který je bispecifická jednořetězcová protilátka.
- 14. Polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 13, který obsahuje alespoň jednu další doménu.• ·
- 15. Polypeptid podle nároku 14, kde další doména je připojená prostřednictvím kovalentní nebo nekovalentní vazby.
- 16. Polypeptid podle nároku 14 nebo 15, kde alespoň jedna další doména obsahuje efektorovou molekulu mající konformaci vhodnou pro biologickou aktivitu, schopnou sekvestrace iontu nebo selektivní vazby na pevný podklad nebo k předem vybrané determinantě.
- 17. Polynukleotid, který při expresi kóduje polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 16.
- 18. Vektor obsahující polynukleotid podle nároku 17.
- 19. Buňka transfekovaná polynukleotidem podle nároku 17 nebo vektorem podle nároku 18.
- 20. Způsob přípravy polypeptidu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 16, vyznačující se tím, že obsahuje kultivaci buňky podle nároku 19 a izolaci polypeptidu z tkáňové kultury.
- 21. Přípravek vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 1 až 16, polynukleotid podle nároku 17 nebo vektor podle nároku 18.
- 22. Přípravek podle nároku 21, vyznačující se tím, že je farmaceutický přípravek volitelně dále obsahující farmaceuticky přijatelný nosič.
- 23. Přípravek podle nároku 21, vyznačujíce se tím, že je diagnostický přípravek volitelně dále obsahující prostředky vhodné pro detekci.
- 24. Použití polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 16, polynukleotidu podle nároku 17 nebo vektoru podle nároku 18 pro výrobu farmaceutického přípravku pro léčení malignit B lymfocytů, autoimunitních chorob se vztahem k B lymfocytům nebo deplece B lymfocytů.
- 25. Použití podle nároku 24, kde malignita B lymfocytů je nehodgkinský lymfom.
- 26. Použití polynukleotidu podle nároku 17 nebo vektoru podle nároku 18 pro výrobu přípravků pro genovou terapii.
- 27. Způsob pro identifikaci aktivátorů nebo inhibitorů aktivace nebo stimulace T lymfocytů vyznačuj ící se t í m, že obsahuje (a) pěstování T lymfocytů a CD19 pozitivních buněk, výhodně B lymfocytů, v přítomnosti polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 16 a volitelně v přítomnosti složky schopné poskytnout detekovatelný signál jako odpověď na aktivaci T lymfocytů testovanou sloučeninou v podmínkách umožňujících aktivaci T lymfocytů, a (b) detekci přítomnosti nebo nepřítomnosti signálu vzniklého interakcí sloučeniny s buňkami.
- 28. Způsob výroby farmaceutického přípravku vyznačující se tím, že obsahuje kroky způsobu podle nároku 27 a formulaci sloučenin podle kroku (b) do farmaceuticky přijatelné lékové formy.
- 29. Způsob podle nároku 28 nebo 29 vyznačující se tím, že sloučenina podle kroku (b) je modifikovaná pomocí peptidomimetik.• ·
- 30. Způsob léčení malignit B lymfocytů, autoimunitních chorob se vztahem k B lymfocytům nebo deplece B lymfocytů vyznačující se tím, že obsahuje zavedení polypeptidu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 16, polynukleotidu podle nároku 17 nebo vektoru podle nároku 18 do lidského jedince postiženého uvedenou malignitou nebo i nemocí.
- 31. Způsob pro oddálení patologického stavu, který je způsoben chorobou B lymfocytů, vyznačující se tím, že obsahuje zavedení polypeptidu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 16, polynukleotidu podle nároku 17 nebo vektoru podle nároku 18 do lidského jedince postiženého uvedeným patologickým stavem.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP98107269 | 1998-04-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ20003889A3 true CZ20003889A3 (cs) | 2001-03-14 |
CZ302070B6 CZ302070B6 (cs) | 2010-09-29 |
Family
ID=8231795
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20003889A CZ302070B6 (cs) | 1998-04-21 | 1999-04-21 | Jednoretezcový multifunkcní polypeptid, polynukleotid, vektor obsahující tento polynukleotid, bunka transfekovaná tímto polynukleotidem, prostredek obsahující tento polypeptid, polynukleotid nebo vektor a jejich použití a zpusob identifikace aktiváto |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7112324B1 (cs) |
EP (2) | EP1071752B1 (cs) |
JP (1) | JP4169478B2 (cs) |
KR (1) | KR100508289B1 (cs) |
CN (1) | CN1302103C (cs) |
AT (1) | ATE244758T1 (cs) |
AU (1) | AU761587B2 (cs) |
BR (1) | BRPI9909860B8 (cs) |
CA (1) | CA2326389C (cs) |
CU (1) | CU23252B7 (cs) |
CZ (1) | CZ302070B6 (cs) |
DE (1) | DE69909459T2 (cs) |
DK (1) | DK1071752T3 (cs) |
ES (1) | ES2203141T3 (cs) |
HK (1) | HK1037674A1 (cs) |
HR (1) | HRP20000714B1 (cs) |
HU (1) | HU229039B1 (cs) |
ID (1) | ID27512A (cs) |
IL (2) | IL138857A0 (cs) |
NO (1) | NO326523B1 (cs) |
NZ (1) | NZ507381A (cs) |
PL (1) | PL199747B1 (cs) |
PT (1) | PT1071752E (cs) |
RU (1) | RU2228202C2 (cs) |
SI (1) | SI1071752T1 (cs) |
SK (1) | SK286683B6 (cs) |
TR (1) | TR200003087T2 (cs) |
WO (1) | WO1999054440A1 (cs) |
ZA (1) | ZA200005866B (cs) |
Families Citing this family (406)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4169478B2 (ja) * | 1998-04-21 | 2008-10-22 | マイクロメット アーゲー | Cd19×cd3特異的ポリペプチドおよびその使用 |
PL200134B1 (pl) | 1999-05-07 | 2008-12-31 | Genentech Inc | Zastosowanie przeciwciała anty-CD20 |
US8383081B2 (en) | 1999-05-10 | 2013-02-26 | Immunomedics, Inc. | Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use |
US8119101B2 (en) | 1999-05-10 | 2012-02-21 | The Ohio State University | Anti-CD74 immunoconjugates and methods of use |
US7829064B2 (en) | 1999-05-10 | 2010-11-09 | Immunomedics, Inc. | Anti-CD74 immunoconjugates and methods |
ES2331644T3 (es) | 1999-06-09 | 2010-01-12 | Immunomedics, Inc. | Inmunoterapia de trastornos autoinmunes usando anticuerpos cuya diana son celulas b. |
EP1543839B1 (en) * | 1999-06-09 | 2017-09-20 | Immunomedics, Inc. | Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target B-cells |
DE19962583A1 (de) * | 1999-12-23 | 2001-06-28 | Mueller Hermelink Hans Konrad | Antikörper gegen Plasmazellen |
WO2002077029A2 (en) * | 2000-11-07 | 2002-10-03 | City Of Hope | Cd19-specific redirected immune cells |
US20080260731A1 (en) * | 2002-03-01 | 2008-10-23 | Bernett Matthew J | Optimized antibodies that target cd19 |
US20160279239A1 (en) | 2011-05-02 | 2016-09-29 | Immunomedics, Inc. | Subcutaneous administration of anti-cd74 antibody for systemic lupus erythematosus and autoimmune disease |
US9770517B2 (en) | 2002-03-01 | 2017-09-26 | Immunomedics, Inc. | Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof |
US7425618B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-09-16 | Medimmune, Inc. | Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations |
US9453251B2 (en) | 2002-10-08 | 2016-09-27 | Pfenex Inc. | Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens |
US7820166B2 (en) | 2002-10-11 | 2010-10-26 | Micromet Ag | Potent T cell modulating molecules |
DE602004025101D1 (de) | 2003-05-31 | 2010-03-04 | Micromet Ag | Humane anti-humane cd3-bindungsmoleküle |
JP2008501621A (ja) * | 2003-05-31 | 2008-01-24 | マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト | B細胞関連疾患を処置するための二重特異性抗cd3、抗cd19抗体構築物を含む薬学的組成物 |
CA2528549A1 (en) | 2003-06-06 | 2005-06-02 | Medimmune, Inc. | Use of epha4 and modulator of epha4 for diagnosis, treatment and prevention of cancer |
US7902338B2 (en) | 2003-07-31 | 2011-03-08 | Immunomedics, Inc. | Anti-CD19 antibodies |
EP1648512A4 (en) * | 2003-07-31 | 2009-01-21 | Immunomedics Inc | ANTI-CD19 ANTIBODIES |
DK1673398T3 (da) | 2003-10-16 | 2011-04-18 | Micromet Ag | Multispecifikke, deimmuniserede CD3-bindere |
DK1691833T3 (da) | 2003-11-28 | 2010-05-03 | Micromet Ag | Præparater der omfatter polypeptider |
US7235641B2 (en) | 2003-12-22 | 2007-06-26 | Micromet Ag | Bispecific antibodies |
US8883160B2 (en) | 2004-02-13 | 2014-11-11 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dock-and-lock (DNL) complexes for therapeutic and diagnostic use |
US9550838B2 (en) | 2004-02-13 | 2017-01-24 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dock-and-lock (DNL) complexes for therapeutic and diagnostic use |
MXPA06009253A (es) | 2004-02-16 | 2007-04-18 | Micromet Ag | Moleculas de enlace menos inmunogenicas. |
CA2574953A1 (en) | 2004-07-26 | 2006-02-09 | Dow Global Technolgies Inc. | Process for improved protein expression by strain engineering |
AU2005299355A1 (en) | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Medimmune, Llc | Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens |
US9707302B2 (en) | 2013-07-23 | 2017-07-18 | Immunomedics, Inc. | Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer |
US20160355591A1 (en) | 2011-05-02 | 2016-12-08 | Immunomedics, Inc. | Subcutaneous anti-hla-dr monoclonal antibody for treatment of hematologic malignancies |
US10058621B2 (en) | 2015-06-25 | 2018-08-28 | Immunomedics, Inc. | Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers |
US8349332B2 (en) | 2005-04-06 | 2013-01-08 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multiple signaling pathways induced by hexavalent, monospecific and bispecific antibodies for enhanced toxicity to B-cell lymphomas and other diseases |
US8475794B2 (en) | 2005-04-06 | 2013-07-02 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy with anti-CD74 antibodies provides enhanced toxicity to malignancies, Autoimmune disease and other diseases |
PL1874819T3 (pl) | 2005-04-18 | 2015-10-30 | Amgen Res Munich Gmbh | Przeciwciała neutralizujące ludzki czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów |
ES2417065T3 (es) | 2005-04-26 | 2013-08-05 | Trion Pharma Gmbh | Combinación de anticuerpos con glucocorticoides para el tratamiento del cáncer |
AU2006262232A1 (en) | 2005-06-20 | 2007-01-04 | Medarex, Inc. | CD19 antibodies and their uses |
AU2006283532B2 (en) * | 2005-08-19 | 2012-04-26 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobin and uses thereof |
CA2625440C (en) | 2005-10-11 | 2023-06-13 | Micromet Ag | Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof |
DK1976886T3 (en) * | 2005-12-16 | 2015-03-02 | Amgen Res Munich Gmbh | Means and methods for the treatment of tumor diseases |
DK1976880T3 (en) | 2005-12-21 | 2016-09-26 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Pharmaceutical compositions with resistance to soluble cea |
PT1989544E (pt) * | 2006-03-02 | 2011-09-26 | Antitope Ltd | Ensaios com células t |
SI2059536T1 (sl) | 2006-08-14 | 2014-06-30 | Xencor, Inc. | Optimirana protitelesa, ki ciljajo CD19 |
KR101456728B1 (ko) * | 2006-09-08 | 2014-10-31 | 메디뮨 엘엘씨 | 인간화 항-cd19 항체, 및 이것의 종양학, 이식 및 자가면역 질환의 치료에서의 용도 |
CA2682626A1 (en) * | 2007-04-03 | 2008-10-09 | Micromet Ag | Cross-species-specific bispecific binders |
KR101589759B1 (ko) | 2007-04-03 | 2016-01-29 | 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 | 종간 특이적 cd3―입실론 결합 도메인 |
JP2010524851A (ja) † | 2007-04-03 | 2010-07-22 | マイクロメット アーゲー | 種間特異的結合ドメイン |
CN101688213A (zh) | 2007-04-27 | 2010-03-31 | 陶氏环球技术公司 | 用于快速筛选微生物宿主以鉴定某些在表达异源蛋白质方面具有改善的产量和/或质量的菌株的方法 |
US9580719B2 (en) | 2007-04-27 | 2017-02-28 | Pfenex, Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
US20090053786A1 (en) * | 2007-07-09 | 2009-02-26 | Yung-Hsiang Kao | Prevention of disulfide bond reduction during recombinant production of polypeptides |
CN101952415B (zh) * | 2007-07-31 | 2017-06-27 | 生命扫描有限公司 | 人胚胎干细胞的分化 |
US20090155275A1 (en) | 2007-07-31 | 2009-06-18 | Medimmune, Llc | Multispecific epitope binding proteins and uses thereof |
EP2211904B1 (en) * | 2007-10-19 | 2016-08-17 | Seattle Genetics, Inc. | Cd19 binding agents and uses thereof |
EP2225275A4 (en) * | 2007-11-28 | 2013-04-03 | Medimmune Llc | PROTEIN FORMULATION |
NZ591134A (en) | 2008-10-01 | 2012-08-31 | Micromet Ag | Cross-species-specific (human and primate) bispecific single chain antibody that binds both cd3 (epsilon) epitope and prostate specific membrane antigen (pmsa) |
US10981998B2 (en) | 2008-10-01 | 2021-04-20 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody |
US9260522B2 (en) | 2008-10-01 | 2016-02-16 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Bispecific single chain antibodies with specificity for high molecular weight target antigens |
RU2547600C2 (ru) * | 2008-10-01 | 2015-04-10 | Эмджен Рисерч (Мьюник) Гмбх | Pscaxcd3, cd19xcd3, c-metxcd3, эндосиалинxcd3, epcamxcd3, igf-1rxcd3 или fap-альфаxcd3 биспецифическое одноцепочечное антитело с межвидовой специфичностью |
NO2918604T3 (cs) * | 2008-11-07 | 2018-05-19 | ||
EP2982696B1 (en) * | 2008-11-07 | 2019-03-27 | Amgen Research (Munich) GmbH | Treatment of acute lymphoblastic leukemia |
WO2010084160A1 (en) | 2009-01-21 | 2010-07-29 | Oryzon Genomics S.A. | Phenylcyclopropylamine derivatives and their medical use |
US9676845B2 (en) * | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
US20110002931A1 (en) | 2009-06-23 | 2011-01-06 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific antibodies that bind to complement proteins |
US9493578B2 (en) | 2009-09-02 | 2016-11-15 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
MX338041B (es) | 2009-09-25 | 2016-03-30 | Oryzon Genomics Sa | Inhibidores de demetilasa-1 especificos de lisina y su uso. |
EP2486002B1 (en) | 2009-10-09 | 2019-03-27 | Oryzon Genomics, S.A. | Substituted heteroaryl- and aryl- cyclopropylamine acetamides and their use |
CN107227335A (zh) | 2009-10-27 | 2017-10-03 | 安进研发(慕尼黑)股份有限公司 | 用于施用CD19xCD3双特异性抗体的给药方案 |
CA2781682A1 (en) | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods |
WO2011079283A1 (en) * | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Bioalliance C.V. | Anti-epcam antibodies that induce apoptosis of cancer cells and methods using same |
US9186337B2 (en) | 2010-02-24 | 2015-11-17 | Oryzon Genomics S.A. | Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with Hepadnaviridae |
US9616058B2 (en) | 2010-02-24 | 2017-04-11 | Oryzon Genomics, S.A. | Potent selective LSD1 inhibitors and dual LSD1/MAO-B inhibitors for antiviral use |
TWI653333B (zh) | 2010-04-01 | 2019-03-11 | 安進研究(慕尼黑)有限責任公司 | 跨物種專一性之PSMAxCD3雙專一性單鏈抗體 |
KR101794020B1 (ko) | 2010-04-19 | 2017-11-06 | 오리존 지노믹스 에스.에이. | 라이신 특이적 디메틸라아제-1 억제제 및 이의 용도 |
WO2011139985A1 (en) | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
US8980933B2 (en) | 2010-05-05 | 2015-03-17 | Universitat Bayreuth | Combretastatin analogs for use in the treatment of cancer |
CN102250245B (zh) * | 2010-05-27 | 2014-05-14 | 四川大学 | 抗b细胞淋巴瘤的双特异性抗体及其用途 |
WO2012013725A1 (en) | 2010-07-28 | 2012-02-02 | Medizinische Universität Wien | Vinylogous chalcone derivatives and their medical use |
CA2806252C (en) | 2010-07-29 | 2019-05-14 | Xencor, Inc. | Antibodies with modified isoelectric points |
US9181198B2 (en) | 2010-07-29 | 2015-11-10 | Oryzon Genomics S.A. | Arylcyclopropylamine based demethylase inhibitors of LSD1 and their medical use |
WO2012013727A1 (en) | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Oryzon Genomics S.A. | Cyclopropylamine derivatives useful as lsd1 inhibitors |
WO2012045883A1 (en) | 2010-10-08 | 2012-04-12 | Oryzon Genomics S.A. | Cyclopropylamine inhibitors of oxidases |
ES2563439T5 (es) | 2010-10-27 | 2022-02-04 | Amgen Res Munich Gmbh | Medios y métodos para tratar LDCBG |
EP2637670B2 (en) | 2010-11-10 | 2024-03-13 | Amgen Research (Munich) GmbH | Prevention of adverse effects caused by cd3 specific binding domains |
EP3974453A3 (en) * | 2010-11-16 | 2022-08-03 | Amgen Inc. | Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression |
WO2012072713A2 (en) | 2010-11-30 | 2012-06-07 | Oryzon Genomics, S.A. | Lysine demethylase inhibitors for diseases and disorders associated with flaviviridae |
EP2712315B1 (en) | 2011-02-08 | 2021-11-24 | Oryzon Genomics, S.A. | Lysine demethylase inhibitors for myeloproliferative disorders |
CA2827170A1 (en) | 2011-02-11 | 2012-08-16 | David M. Hilbert | Monovalent and multivalent multispecific complexes and uses thereof |
CA2832360C (en) | 2011-04-28 | 2022-05-03 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Dosage regimen for administering a cd19xcd3 bispecific antibody to patients at risk for potential adverse effects |
UA117072C2 (uk) | 2011-05-21 | 2018-06-11 | Макродженікс, Інк. | Cd3-зв'язувальна молекула, здатна до зв'язування з cd3 людини, і cd3, що не є людським |
CN103857699B (zh) | 2011-05-24 | 2016-08-31 | 泽恩格尼亚股份有限公司 | 多价和单价多特异性复合物及其用途 |
DK2718320T3 (en) | 2011-06-10 | 2018-03-26 | Medimmune Ltd | ANTI-PSEUDOMONAS-PSL BINDING MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF |
KR20200058583A (ko) * | 2011-08-16 | 2020-05-27 | 모르포시스 아게 | 항-cd19 항체 및 질소 머스타드를 사용한 조합 요법 |
DE202012012998U1 (de) | 2011-08-31 | 2014-06-13 | Daniel Elias | Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels |
JP2014533929A (ja) | 2011-09-23 | 2014-12-18 | アムゲン リサーチ (ミュンヘン) ゲーエムベーハー | 5t4およびcd3に対する二重特異的結合性分子 |
US10851178B2 (en) | 2011-10-10 | 2020-12-01 | Xencor, Inc. | Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications |
CN107266345B (zh) | 2011-10-20 | 2021-08-17 | 奥瑞泽恩基因组学股份有限公司 | 作为lsd1抑制剂的(杂)芳基环丙胺化合物 |
RS58475B1 (sr) | 2011-10-20 | 2019-04-30 | Oryzon Genomics Sa | Jedinjenja (hetero)aril ciklopropilamina kao lsd1 inhibitori |
ES2859323T3 (es) | 2011-11-07 | 2021-10-01 | Medimmune Ltd | Terapias de combinación que usan moléculas de unión anti-Psl y PcrV de Pseudomonas |
TWI679212B (zh) | 2011-11-15 | 2019-12-11 | 美商安進股份有限公司 | 針對bcma之e3以及cd3的結合分子 |
US9757458B2 (en) | 2011-12-05 | 2017-09-12 | Immunomedics, Inc. | Crosslinking of CD22 by epratuzumab triggers BCR signaling and caspase-dependent apoptosis in hematopoietic cancer cells |
CA2853138A1 (en) | 2011-12-05 | 2013-06-13 | Immunomedics, Inc. | Therapeutic use of anti-cd22 antibodies for inducing trogocytosis |
US10633451B2 (en) * | 2012-02-03 | 2020-04-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific antibody molecules with antigen-transfected T-cells and their use in medicine |
JP2015513399A (ja) | 2012-02-22 | 2015-05-14 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | 癌の治療のために有用なt細胞の存続的集団を作製するための組成物および方法 |
GB201203442D0 (en) | 2012-02-28 | 2012-04-11 | Univ Birmingham | Immunotherapeutic molecules and uses |
CA2864177C (en) | 2012-03-01 | 2019-11-26 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Prolonged half-life albumin-binding protein fused bispecific antibodies |
CN103382223B (zh) | 2012-04-01 | 2015-06-10 | 上海益杰生物技术有限公司 | 针对表皮生长因子受体隐蔽表位和t细胞抗原的多功能抗体多肽 |
WO2014004549A2 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | Amgen Inc. | Anti-mesothelin binding proteins |
US9765156B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-09-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Enhancing activity of CAR T cells by co-introducing a bispecific antibody |
US10131712B2 (en) | 2012-08-14 | 2018-11-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy with T-cell redirecting bispecific antibodies and checkpoint inhibitors |
US9382329B2 (en) | 2012-08-14 | 2016-07-05 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells |
US20150231241A1 (en) | 2012-08-14 | 2015-08-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
US9682143B2 (en) | 2012-08-14 | 2017-06-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
EP3586874A1 (en) | 2012-08-14 | 2020-01-01 | IBC Pharmaceuticals, Inc. | T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease |
JOP20200236A1 (ar) | 2012-09-21 | 2017-06-16 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها |
AR093297A1 (es) | 2012-10-31 | 2015-05-27 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Formulacion liquida que comprende un compuesto neutralizante de gm-csf |
US9833410B2 (en) | 2012-10-31 | 2017-12-05 | Takeda Gmbh | Lyophilized formulation comprising GM-CSF neutralizing compound |
CN103833852A (zh) * | 2012-11-23 | 2014-06-04 | 上海市肿瘤研究所 | 针对磷脂酰肌醇蛋白多糖-3和t细胞抗原的双特异性抗体 |
US10206918B2 (en) | 2012-12-13 | 2019-02-19 | Immunomedics, Inc. | Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers |
US10744129B2 (en) | 2012-12-13 | 2020-08-18 | Immunomedics, Inc. | Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2 |
EP4035689A1 (en) | 2012-12-13 | 2022-08-03 | Immunomedics Inc. | Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity |
US9492566B2 (en) | 2012-12-13 | 2016-11-15 | Immunomedics, Inc. | Antibody-drug conjugates and uses thereof |
US9107960B2 (en) | 2012-12-13 | 2015-08-18 | Immunimedics, Inc. | Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker |
US9931417B2 (en) | 2012-12-13 | 2018-04-03 | Immunomedics, Inc. | Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker |
US10413539B2 (en) | 2012-12-13 | 2019-09-17 | Immunomedics, Inc. | Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132) |
US10137196B2 (en) | 2012-12-13 | 2018-11-27 | Immunomedics, Inc. | Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity |
US9701759B2 (en) | 2013-01-14 | 2017-07-11 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
CN110981964B (zh) | 2013-01-14 | 2023-09-15 | Xencor股份有限公司 | 新型异二聚体蛋白 |
US10968276B2 (en) | 2013-03-12 | 2021-04-06 | Xencor, Inc. | Optimized anti-CD3 variable regions |
US10487155B2 (en) | 2013-01-14 | 2019-11-26 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US9605084B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-03-28 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US10131710B2 (en) | 2013-01-14 | 2018-11-20 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
US11053316B2 (en) | 2013-01-14 | 2021-07-06 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
AU2014207549B2 (en) | 2013-01-15 | 2018-12-06 | Xencor, Inc. | Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies |
CN103965359B (zh) * | 2013-01-24 | 2016-08-03 | 上海市肿瘤研究所 | 抗上皮细胞粘附分子和t细胞抗原的双特异性抗体 |
JO3519B1 (ar) | 2013-01-25 | 2020-07-05 | Amgen Inc | تركيبات أجسام مضادة لأجل cdh19 و cd3 |
WO2014114801A1 (en) | 2013-01-25 | 2014-07-31 | Amgen Inc. | Antibodies targeting cdh19 for melanoma |
US9486475B2 (en) | 2013-02-08 | 2016-11-08 | Amgen Research (Munich) Gmbh | PPS for the prevention of potential adverse effects caused by CD3 specific binding domains |
JO3529B1 (ar) | 2013-02-08 | 2020-07-05 | Amgen Res Munich Gmbh | مضاد التصاق خلايا الدم البيض من أجل التخفيف من الاثار السلبية الممكنة الناتجة عن مجالات ارتباط cd3- المحدد |
WO2014138306A1 (en) | 2013-03-05 | 2014-09-12 | Baylor College Of Medicine | Engager cells for immunotherapy |
JP2016512199A (ja) | 2013-03-05 | 2016-04-25 | ベイラー カレッジ オブ メディスンBaylor College Of Medicine | 腫瘍溶解性ウイルス |
US10858417B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-12-08 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
AU2014232416B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-09-28 | Xencor, Inc. | Modulation of T Cells with Bispecific Antibodies and FC Fusions |
WO2014140368A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Antibody constructs for influenza m2 and cd3 |
AR095374A1 (es) | 2013-03-15 | 2015-10-14 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Moléculas de unión para bcma y cd3 |
US10106624B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-10-23 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
EP2968547B1 (en) * | 2013-03-15 | 2019-08-07 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Multimerization technologies |
ES2753950T3 (es) | 2013-03-15 | 2020-04-15 | Amgen Res Munich Gmbh | Moléculas de unión monocatenarias que comprenden ABP del extremo N |
US20140302037A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-10-09 | Amgen Inc. | BISPECIFIC-Fc MOLECULES |
US9561291B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-02-07 | Imre Kovesdi | Methods of targeting T-cells to tumors |
US10519242B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-12-31 | Xencor, Inc. | Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins |
CA2907181C (en) | 2013-03-15 | 2023-10-17 | Viktor Roschke | Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses |
CN107460201A (zh) * | 2013-05-08 | 2017-12-12 | 科济生物医药(上海)有限公司 | 编码gpc‑3嵌合抗原受体蛋白的核酸及表达gpc‑3嵌合抗原受体蛋白的t淋巴细胞 |
EP3415534A1 (en) * | 2013-05-10 | 2018-12-19 | Numab Therapeutics AG | Bispecific constructs and their use in the treatment of various diseases |
TR201904121T4 (tr) * | 2013-07-09 | 2019-04-22 | The Government Of The United States As Represented By The Secretary Of The Dept Of Health And Human | İnsan bispesifik egfrviii antikoru birleştirme molekülleri. |
US11253606B2 (en) | 2013-07-23 | 2022-02-22 | Immunomedics, Inc. | Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer |
CN104342453A (zh) * | 2013-08-06 | 2015-02-11 | 深圳先进技术研究院 | 含基因工程抗体基因表达盒的微环dna重组母质粒、含该表达盒的微环dna及应用 |
US10745475B2 (en) | 2013-08-30 | 2020-08-18 | Takeda Gmbh | Antibodies neutralizing GM-CSF for use in the treatment of rheumatoid arthritis or as analgesics |
AR097648A1 (es) | 2013-09-13 | 2016-04-06 | Amgen Inc | Combinación de factores epigenéticos y compuestos biespecíficos que tienen como diana cd33 y cd3 en el tratamiento de leucemia mieloide |
MX2016003744A (es) | 2013-10-11 | 2016-08-11 | Us Health | Anticuerpos tem8 y su uso. |
CN104623637A (zh) | 2013-11-07 | 2015-05-20 | 健能隆医药技术(上海)有限公司 | Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用 |
WO2015103549A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use |
AU2015219495B2 (en) * | 2014-02-21 | 2019-11-21 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells |
CN106029098A (zh) | 2014-02-25 | 2016-10-12 | 免疫医疗公司 | 人源化rfb4抗cd22抗体 |
TWI754319B (zh) | 2014-03-19 | 2022-02-01 | 美商再生元醫藥公司 | 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物 |
KR102497443B1 (ko) | 2014-03-28 | 2023-02-08 | 젠코어 인코포레이티드 | Cd38 및 cd3에 결합하는 이중특이적 항체 |
RU2577226C2 (ru) * | 2014-04-10 | 2016-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью, "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") | Способ получения биспецифических антител против cd3*cd19 формата флексибоди в клетках млекопитающих |
RU2568910C2 (ru) * | 2014-04-18 | 2015-11-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") | Фармацевтические композиции на основе флексибоди против cd3*cd19 для лечения в-клеточных заболеваний |
CN105017422A (zh) * | 2014-04-30 | 2015-11-04 | 山东百因制药技术有限公司 | 一种抗cd3/抗cd19双特异性抗体及其应用 |
BR112016025126B1 (pt) | 2014-05-07 | 2024-02-15 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Composição aquosa compreendendo anticorpo neutralizante de gmcsf, e uso da mesma |
WO2015172341A1 (zh) * | 2014-05-14 | 2015-11-19 | 上海市肿瘤研究所 | 针对磷脂酰肌醇蛋白多糖-3和t细胞抗原的双特异性抗体 |
EP2947460A1 (en) | 2014-05-22 | 2015-11-25 | Medizinische Universität Wien | Personalized therapy of inflammation-associated cancer using methods of assessing the susceptibility of a subject to the treatment with EGFR inhibitors/antagonists |
LT3149480T (lt) | 2014-05-30 | 2019-04-25 | Amgen Research (Munich) Gmbh | B ląstelių pirmtakų ūmia limfoblastine leukemija (all) sergančių pacientų rizikos stratifikacijos būdas |
BR112016030740A2 (pt) | 2014-07-01 | 2018-02-20 | Pfizer Inc. | diacorpos heterodiméricos biespecíficos e seus usos |
BR112017001579A2 (pt) | 2014-07-25 | 2017-11-21 | Cytomx Therapeutics Inc | anticorpos anti-cd3, anticorpos anti-cd3 ativáveis, anticorpos anti-cd3 multiespecíficos, anticorpos anti-cd3 ativáveis multiespecíficos e métodos de uso dos mesmos |
WO2016016415A1 (en) | 2014-07-31 | 2016-02-04 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Bispecific single chain antibody construct with enhanced tissue distribution |
AR101669A1 (es) | 2014-07-31 | 2017-01-04 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Constructos de anticuerpos para cdh19 y cd3 |
TW201609812A (zh) | 2014-07-31 | 2016-03-16 | 安美基研究(慕尼黑)公司 | 最佳化之跨物種特異性雙特異性單鏈抗體構築體 |
WO2016030510A1 (en) | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Medizinische Universität Wien | Heteroaromatic chalcone derivatives and their medical use |
EP3875481A1 (en) | 2014-11-14 | 2021-09-08 | The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use |
EP3699198A1 (en) | 2014-11-17 | 2020-08-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for tumor treatment using cd3xcd20 bispecific antibody |
PE20171103A1 (es) | 2014-11-26 | 2017-08-07 | Xencor Inc | Anticuerpos heterodimericos que se unen a cd3 y cd38 |
US10259887B2 (en) | 2014-11-26 | 2019-04-16 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens |
CA2967426A1 (en) | 2014-11-26 | 2016-06-02 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens |
EP3029067A1 (en) | 2014-12-01 | 2016-06-08 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Use of blocking-reagents for reducing unspecific T cell-activation |
US20160168237A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating a complement mediated disorder caused by an infectious agent in a patient |
US10428155B2 (en) | 2014-12-22 | 2019-10-01 | Xencor, Inc. | Trispecific antibodies |
EP4039710A3 (en) | 2015-01-23 | 2022-10-19 | Sanofi | Anti-cd3 antibodies, anti-cd123 antibodies and bispecific antibodies specifically binding to cd3 and/or cd123 |
WO2016135140A1 (en) | 2015-02-23 | 2016-09-01 | Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh | 4-aminoquinazoline derivatives as mth1 inhibitors for the therapy of cancer |
WO2016135137A1 (en) | 2015-02-23 | 2016-09-01 | Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh | Substituted 4-(phenylamino)quinoline derivatives as mth1 inhibitors for the therapy of cancer |
BR112017017825A2 (pt) | 2015-02-23 | 2018-04-10 | Seagull Therapeutics Sas | semaforinas 3 não naturais e seu uso médico |
WO2016135138A1 (en) | 2015-02-23 | 2016-09-01 | Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh | Oxoquinoline derivatives as mth1 inhibitors for the therapy of cancer |
WO2016135139A1 (en) | 2015-02-23 | 2016-09-01 | Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh | 2,3-dihydrocyclopenta[b]quinoline derivatives as mth1 inhibitors for the therapy of cancer |
CA2977687C (en) | 2015-02-24 | 2024-02-13 | Hwai Wen Chang | Conditionally active proteins |
KR20170140180A (ko) | 2015-02-24 | 2017-12-20 | 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 | 중동 호흡기 증후군 코로나 바이러스 면역원, 항체 및 그 용도 |
US10227411B2 (en) | 2015-03-05 | 2019-03-12 | Xencor, Inc. | Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions |
EP3064507A1 (en) | 2015-03-06 | 2016-09-07 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Fusion proteins comprising a binding protein and an interleukin-15 polypeptide having a reduced affinity for IL15ra and therapeutic uses thereof |
SI3271389T1 (sl) | 2015-03-20 | 2020-09-30 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Nevtralizirajoča protitelesa proti GP120 in njihova uporaba |
WO2016164558A1 (en) * | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions relating to an embryonic stem cell-based tumor model |
MX2017013348A (es) | 2015-04-17 | 2018-08-01 | Amgen Res Munich Gmbh | Construcciones de anticuerpos biespecificos contra cdh3 y cd3. |
CN107428837A (zh) | 2015-04-22 | 2017-12-01 | 免疫医疗公司 | 循环trop‑2阳性癌细胞的分离、检测、诊断和/或鉴定 |
EP3285753A1 (en) | 2015-04-22 | 2018-02-28 | CeMM - Forschungszentrum für Molekulare Medizin GmbH | Combination of an antiandrogen with a vitamin k antagonist or with a gamma -glutamyl carboxylase inhibitor for the therapy of androgen receptor positive cancer |
RS59376B1 (sr) | 2015-05-13 | 2019-11-29 | Ablynx Nv | Polipeptidi koji regrutuju t-ćelije na bazi tcr-alfa/beta reaktivnosti |
EP3294319B1 (en) | 2015-05-13 | 2024-04-24 | Ablynx NV | T cell recruiting polypeptides based on cd3 reactivity |
EP3302555A4 (en) | 2015-05-29 | 2018-07-11 | Amphivena Therapeutics, Inc. | Methods of using bispecific cd33 and cd3 binding proteins |
WO2016196975A1 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use |
US10195175B2 (en) | 2015-06-25 | 2019-02-05 | Immunomedics, Inc. | Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors |
CN106349391A (zh) * | 2015-07-17 | 2017-01-25 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | Hbv特异性双靶向抗体及其制备方法和应用、含该双靶向抗体表达盒的微环dna及应用 |
TW202346349A (zh) | 2015-07-31 | 2023-12-01 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | Dll3及cd3抗體構築體 |
TWI796283B (zh) | 2015-07-31 | 2023-03-21 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | Msln及cd3抗體構築體 |
TWI717375B (zh) | 2015-07-31 | 2021-02-01 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | Cd70及cd3抗體構築體 |
TWI744242B (zh) | 2015-07-31 | 2021-11-01 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | Egfrviii及cd3抗體構築體 |
TWI829617B (zh) | 2015-07-31 | 2024-01-21 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | Flt3及cd3抗體構築體 |
JO3620B1 (ar) | 2015-08-05 | 2020-08-27 | Amgen Res Munich Gmbh | مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم |
WO2017040344A2 (en) | 2015-08-28 | 2017-03-09 | Amunix Operating Inc. | Chimeric polypeptide assembly and methods of making and using the same |
WO2017044811A1 (en) | 2015-09-11 | 2017-03-16 | Bruce Andrien | Recombinant glycosylated eculizumab and eculizumab variants |
MA44909A (fr) | 2015-09-15 | 2018-07-25 | Acerta Pharma Bv | Association thérapeutique d'un inhibiteur du cd19 et d'un inhibiteur de la btk |
AR106188A1 (es) | 2015-10-01 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización |
CN108026177B (zh) | 2015-10-02 | 2021-11-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 双特异性抗cd19xcd3 t细胞活化性抗原结合分子 |
EP3359566A1 (en) | 2015-10-07 | 2018-08-15 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | A method for treating age-related macular degeneration in a patient |
US10392441B2 (en) | 2015-10-07 | 2019-08-27 | United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia |
US11472876B2 (en) | 2015-11-02 | 2022-10-18 | Bioatla, Inc. | Conditionally active polypeptides |
EP4011911A1 (en) | 2015-11-03 | 2022-06-15 | The United States of America as represented by The Secretary Department of Health and Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 gp41 and their use |
CN105296421B (zh) * | 2015-11-24 | 2019-01-29 | 高岱清 | 一种双特异性抗体活化的t细胞及制备方法与应用 |
RU2651776C2 (ru) * | 2015-12-01 | 2018-04-23 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") | Биспецифические антитела против cd3*cd19 |
CN108699136B (zh) | 2015-12-07 | 2022-03-18 | Xencor股份有限公司 | 结合cd3和psma的异二聚抗体 |
IL259864B (en) | 2015-12-09 | 2022-07-01 | Univ Wien Med | Monomaleimide-functionalized platinum compounds for cancer therapy |
SG11201804839WA (en) | 2015-12-14 | 2018-07-30 | Macrogenics Inc | Bispecific molecules having immunoreactivity with pd-1 and ctla-4, and methods of use thereof |
CN114716557A (zh) | 2016-02-03 | 2022-07-08 | 安进研发(慕尼黑)股份有限公司 | Psma和cd3双特异性t细胞接合抗体构建体 |
EA039859B1 (ru) | 2016-02-03 | 2022-03-21 | Эмджен Рисерч (Мюник) Гмбх | Биспецифические конструкты антител, связывающие egfrviii и cd3 |
MA43955B1 (fr) | 2016-02-03 | 2022-02-28 | Amgen Inc | Anticorps anti-bcma et anti-cd3 bispécifiques de format bite |
US20170224837A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-10 | Immunomedics, Inc. | Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers |
MX2018009870A (es) | 2016-02-15 | 2018-11-29 | Cemm Forschungszentrum Fuer Molekulare Medizin Gmbh | Inhibidores de taf1 para la terapia del cancer. |
EP3216458A1 (en) | 2016-03-07 | 2017-09-13 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Modified vascular endothelial growth factor a (vegf-a) and its medical use |
KR20230148844A (ko) | 2016-03-29 | 2023-10-25 | 유니버시티 오브 써던 캘리포니아 | 암을 표적하는 키메라 항원 수용체 |
WO2017167350A1 (en) * | 2016-03-30 | 2017-10-05 | Horst Lindhofer | Multispecific antibodies for use in the treatment of a neoplasm of the urinary tract |
JP7038353B2 (ja) * | 2016-04-13 | 2022-03-18 | ヴィヴィア バイオテック,エス.エル | エクスビボのbite活性化t細胞 |
US11510966B2 (en) | 2016-04-15 | 2022-11-29 | Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd | Use of IL-22 in treating necrotizing enterocolitis |
JOP20170091B1 (ar) | 2016-04-19 | 2021-08-17 | Amgen Res Munich Gmbh | إعطاء تركيبة ثنائية النوعية ترتبط بـ cd33 وcd3 للاستخدام في طريقة لعلاج اللوكيميا النخاعية |
WO2017189279A1 (en) | 2016-04-27 | 2017-11-02 | Immunomedics, Inc. | Efficacy of anti-trop-2-sn-38 antibody drug conjugates for therapy of tumors relapsed/refractory to checkpoint inhibitors |
WO2017192589A1 (en) | 2016-05-02 | 2017-11-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification |
CN105906720A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-08-31 | 武汉汉密顿生物科技股份有限公司 | 靶向性嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其制备方法和应用 |
RU2022104399A (ru) | 2016-06-14 | 2022-05-05 | Ксенкор, Инк. | Биспецифические антитела-ингибиторы контрольных точек |
US10669338B2 (en) | 2016-06-17 | 2020-06-02 | Immunomedics, Inc. | Anti-PD-1 checkpoint inhibitor antibodies that block binding of PD-L1 to PD-1 |
AU2017290086A1 (en) | 2016-06-28 | 2019-01-24 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2 |
AU2017290828A1 (en) | 2016-06-30 | 2019-01-24 | Virogin Biotech Canada Ltd | Pseudotyped oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides |
TWI790206B (zh) | 2016-07-18 | 2023-01-21 | 法商賽諾菲公司 | 特異性結合至cd3和cd123的雙特異性抗體樣結合蛋白 |
JP6994018B2 (ja) | 2016-07-26 | 2022-01-14 | バイオマリン ファーマシューティカル インコーポレイテッド | 新規アデノ随伴ウイルスキャプシドタンパク質 |
US10793632B2 (en) | 2016-08-30 | 2020-10-06 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
WO2018049261A1 (en) | 2016-09-09 | 2018-03-15 | Icellhealth Consulting Llc | Oncolytic virus expressing immune checkpoint modulators |
WO2018057915A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | The Regents Of The University Of Michigan | Engineered lymphocytes |
CN110214148A (zh) | 2016-10-14 | 2019-09-06 | Xencor股份有限公司 | 含有IL-15/IL-15Rα Fc融合蛋白和PD-1抗体片段的双特异性异源二聚体融合蛋白 |
EP3529618B1 (en) | 2016-10-19 | 2020-12-02 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | A method of quantitating unbound c5 in a sample |
AU2017359288A1 (en) | 2016-11-14 | 2019-05-30 | Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh | Combination of a BRD4 inhibitor and an antifolate for the therapy of cancer |
CA3043515A1 (en) | 2016-11-16 | 2018-05-24 | Ablynx Nv | T cell recruiting polypeptides capable of binding cd123 and tcr alpha/beta |
JP2020503015A (ja) * | 2016-12-13 | 2020-01-30 | カースゲン セラピューティクス リミテッドCarsgen Therapeutics Limited | 抗cd19のヒト化抗体及びcd19を標的とする免疫エフェクター細胞 |
CN108264557B (zh) * | 2016-12-30 | 2021-08-24 | 惠和生物技术(上海)有限公司 | 一种结合cd3和t细胞负共刺激分子的双功能分子及其应用 |
CN108264566B (zh) * | 2016-12-30 | 2021-05-14 | 惠和生物技术(上海)有限公司 | 一种融合抗cd3抗体结构域和t细胞正共刺激分子配体的双特异性分子及其应用 |
JOP20190189A1 (ar) | 2017-02-02 | 2019-08-01 | Amgen Res Munich Gmbh | تركيبة صيدلانية ذات درجة حموضة منخفضة تتضمن بنيات جسم مضاد يستهدف الخلية t |
CN110944651A (zh) | 2017-02-08 | 2020-03-31 | 蜻蜓疗法股份有限公司 | 用于自然杀伤细胞激活的多特异性结合蛋白及其治疗癌症的治疗性用途 |
WO2018148660A1 (en) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use |
WO2018152496A1 (en) | 2017-02-17 | 2018-08-23 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of zika virus infection |
CA3054079A1 (en) | 2017-02-20 | 2018-08-23 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | Proteins binding her2, nkg2d and cd16 |
AU2018224094A1 (en) | 2017-02-24 | 2019-09-19 | Macrogenics, Inc. | Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof |
RU2758234C2 (ru) | 2017-03-27 | 2021-10-26 | Иммьюномедикс, Инк. | ЛЕЧЕНИЕ ТРИЖДЫ НЕГАТИВНОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩЕГОСЯ ЭКСПРЕССИЕЙ Trop-2, С ПОМОЩЬЮ САЦИТУЗУМАБА ГОВИТЕКАНА И ИНГИБИТОРА Rad51 |
CN108659112B (zh) * | 2017-03-30 | 2021-01-26 | 上海市同济医院 | 一种非对称双特异性抗体 |
EP3606964A4 (en) | 2017-04-03 | 2020-12-09 | Immunomedics, Inc. | SUBCUTANE ADMINISTRATION OF ANTIBODY DRUG CONJUGATES FOR CANCER THERAPY |
EP4230649A3 (en) | 2017-04-25 | 2023-10-25 | The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Antibodies and methods for the diagnosis and treatment of epstein barr virus infection |
MY201065A (en) | 2017-04-26 | 2024-02-01 | Eureka Therapeutics Inc | Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof |
CA3060856A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Amgen Inc. | Pharmaceutical composition comprising bispecific antibody constructs for improved storage and administration |
WO2018224441A1 (en) | 2017-06-05 | 2018-12-13 | Numab Innovation Ag | Novel anti-cd3 antibodies |
JP7474193B2 (ja) | 2017-06-25 | 2024-04-24 | システィミューン, インク. | 多重特異性抗体とその作製及び使用方法 |
MA49517A (fr) | 2017-06-30 | 2020-05-06 | Xencor Inc | Protéines de fusion fc hétérodimères ciblées contenant il-15/il-15ra et domaines de liaison à l'antigène |
WO2019018629A1 (en) | 2017-07-19 | 2019-01-24 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | ANTIBODIES AND METHODS FOR DIAGNOSING AND TREATING INFECTION WITH HEPATITIS B VIRUS |
EP3661954B1 (en) | 2017-08-03 | 2022-02-09 | Amgen Inc. | Interleukin-21 muteins and methods of treatment |
AU2018328291B2 (en) | 2017-09-08 | 2022-10-27 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Constrained conditionally activated binding proteins |
ES2928576T3 (es) | 2017-09-08 | 2022-11-21 | Amgen Inc | Inhibidores de KRAS G12C y métodos de uso de los mismos |
MA50239A (fr) | 2017-09-15 | 2020-07-22 | Amgen Inc | Procédé de formulation pharmaceutique lyophilisée d'une protéine thérapeutique |
CA3185107A1 (en) | 2017-10-12 | 2019-04-18 | Immunowake Inc. | Vegfr-antibody light chain fusion protein |
US20200262919A1 (en) | 2017-10-13 | 2020-08-20 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Compositions and methods for treating diffuse large b cell lymphoma |
US11472889B2 (en) | 2017-10-14 | 2022-10-18 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Antibodies, activatable antibodies, bispecific antibodies, and bispecific activatable antibodies and methods of use thereof |
CN107739410B (zh) * | 2017-10-18 | 2021-07-30 | 南京鼓楼医院 | CD3单链抗体-iRGD融合蛋白、制备及其作为抗肿瘤药物的应用 |
KR20200074201A (ko) | 2017-11-02 | 2020-06-24 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | Alk-1 및 bmpr-2에 결합하는 이중특이적 항체 |
JP2021502100A (ja) | 2017-11-08 | 2021-01-28 | ゼンコア インコーポレイテッド | 新規抗pd−1配列を用いた二重特異性および単一特異性抗体 |
US10981992B2 (en) | 2017-11-08 | 2021-04-20 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
BR112020011627A2 (pt) | 2017-12-11 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | processo de fabricação contínuo para produtos de anticorpos biespecíficos |
AU2018385409A1 (en) | 2017-12-12 | 2020-07-02 | Macrogenics Inc. | Bispecific CD 16-binding molecules and their use in the treatment of disease |
JP2021506291A (ja) | 2017-12-19 | 2021-02-22 | ゼンコア インコーポレイテッド | 改変されたil−2 fc融合タンパク質 |
UY38041A (es) | 2017-12-29 | 2019-06-28 | Amgen Inc | Construcción de anticuerpo biespecífico dirigida a muc17 y cd3 |
WO2019133847A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Oncorus, Inc. | Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides |
EP3724223A1 (en) | 2018-01-02 | 2020-10-21 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use |
CN107987169B (zh) * | 2018-01-05 | 2021-10-08 | 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 | 一种以ROBO1为靶点的双特异性抗体scFv及其制备和应用 |
CR20210319A (es) | 2018-01-12 | 2021-07-27 | Amgen Inc | ANTICUERPOS ANTI-PD-1 Y MÉTODOS DE TRATAMIENTO (Div. 2020-330) |
PE20220278A1 (es) | 2018-02-08 | 2022-02-25 | Dragonfly Therapeutics Inc | Dominios variables de anticuerpos que se dirigen al receptor nkg2d |
JP7337079B2 (ja) | 2018-02-15 | 2023-09-01 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | 変異型cd3結合ドメイン、及び疾患の治療のための併用療法におけるその使用 |
WO2019165122A1 (en) | 2018-02-21 | 2019-08-29 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use |
AU2019228128A1 (en) | 2018-03-02 | 2020-09-03 | Cdr-Life Ag | Trispecific antigen binding proteins |
WO2019177011A1 (ja) * | 2018-03-13 | 2019-09-19 | 国立大学法人大阪大学 | 腫瘍免疫賦活剤 |
US20190284288A1 (en) | 2018-03-19 | 2019-09-19 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for t-cell and cytokine activation |
CN112469477A (zh) | 2018-04-04 | 2021-03-09 | Xencor股份有限公司 | 与成纤维细胞活化蛋白结合的异源二聚体抗体 |
EP3781599A1 (en) | 2018-04-18 | 2021-02-24 | Xencor, Inc. | Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof |
CN112437777A (zh) | 2018-04-18 | 2021-03-02 | Xencor股份有限公司 | 包含IL-15/IL-15RA Fc融合蛋白和TIM-3抗原结合结构域的靶向TIM-3的异源二聚体融合蛋白 |
WO2019207051A1 (en) | 2018-04-25 | 2019-10-31 | Università Degli Studi Di Torino | Medical use of combinations of non-natural semaphorins 3 and antimetabolites |
EP3788071A1 (en) | 2018-05-02 | 2021-03-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department of Health and Human Services | Antibodies and methods for the diagnosis, prevention, and treatment of epstein barr virus infection |
SG11202010830WA (en) | 2018-05-09 | 2020-11-27 | Biomarin Pharm Inc | Methods of treating phenylketonuria |
TW202005978A (zh) | 2018-05-14 | 2020-02-01 | 美商拜奧馬林製藥公司 | 新穎肝靶向腺相關病毒載體 |
EP3806888B1 (en) | 2018-06-12 | 2024-01-31 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy |
SG11202013138RA (en) | 2018-07-02 | 2021-01-28 | Amgen Inc | Anti-steap1 antigen-binding protein |
TW202021616A (zh) | 2018-07-30 | 2020-06-16 | 美商安進公司 | 結合至cd33和cd3的雙特異性抗體構建體之延長投與 |
TW202019477A (zh) | 2018-07-31 | 2020-06-01 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | BCMAxCD3抗體構建體之給藥方案 |
MX2021001353A (es) | 2018-08-03 | 2021-04-13 | Amgen Res Munich Gmbh | Constructos de anticuerpos para cldn18.2 y cd3. |
JP2021535142A (ja) | 2018-08-31 | 2021-12-16 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. | Cd3/c20二重特異性抗体のサイトカイン放出症候群を軽減する投与戦略 |
US11066476B2 (en) | 2018-09-14 | 2021-07-20 | Shanghai tongji hospital | Asymmetric bispecific antibody |
CN110590955B (zh) * | 2018-09-17 | 2021-05-18 | 北京盛诺基医药科技股份有限公司 | 一种双特异性抗体 |
MA53724A (fr) | 2018-09-24 | 2021-12-29 | Amgen Inc | Systèmes et procédés de dosage interventionnel |
EP3856781A1 (en) | 2018-09-28 | 2021-08-04 | Amgen Inc. | Antibodies against soluble bcma |
US11358999B2 (en) | 2018-10-03 | 2022-06-14 | Xencor, Inc. | IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins |
US20210395298A1 (en) | 2018-10-11 | 2021-12-23 | Amgen Inc. | Downstream processing of bispecific antibody constructs |
CA3115296A1 (en) | 2018-10-23 | 2020-04-30 | Amgen Inc. | Automatic calibration and automatic maintenance of raman spectroscopic models for real-time predictions |
WO2020106886A1 (en) | 2018-11-20 | 2020-05-28 | Cornell University | Macrocyclic complexes of radionuclides and their use in radiotherapy of cancer |
WO2020132214A2 (en) | 2018-12-20 | 2020-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof |
TW202043253A (zh) | 2019-01-28 | 2020-12-01 | 美商安進公司 | 藉由將藥物物質和藥物產品過程整體化的生物製劑製造之連續製造過程 |
WO2020172293A1 (en) | 2019-02-20 | 2020-08-27 | Amgen Inc. | Methods of determining protein stability |
CA3132185A1 (en) | 2019-03-01 | 2020-09-10 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3 |
CN114390938A (zh) | 2019-03-05 | 2022-04-22 | 武田药品工业有限公司 | 受约束的条件性活化的结合蛋白 |
CA3133459A1 (en) | 2019-03-27 | 2020-10-01 | Amgen Inc. | Methods of fingerprinting therapeutic proteins via a two-dimensional (2d) nuclear magnetic resonance technique at natural abundance for formulated biopharmaceutical products |
EP3962948A1 (en) | 2019-04-30 | 2022-03-09 | Amgen Research (Munich) GmbH | Means and methods of treating burkitt lymphoma or leukemia |
WO2020227228A2 (en) | 2019-05-03 | 2020-11-12 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use |
US20230085439A1 (en) | 2019-05-21 | 2023-03-16 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use |
JP2022535060A (ja) | 2019-06-07 | 2022-08-04 | アムジエン・インコーポレーテツド | 選択的に切断可能なリンカーを有する二重特異性結合構築物 |
MX2021014644A (es) | 2019-06-13 | 2022-04-06 | Amgen Inc | Control de perfusion basado en biomasa automatizado en la fabricacion de productos biologicos. |
CA3142833A1 (en) | 2019-07-02 | 2021-01-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies that bind egfrviii and their use |
CN110623921B (zh) * | 2019-08-15 | 2020-10-30 | 北京东方百泰生物科技股份有限公司 | 一种抗cd3和抗cd19的双特异性抗体注射制剂 |
RU2738802C1 (ru) * | 2019-08-21 | 2020-12-17 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный Биотехнологический Центр "Генериум" | Определяющие комплементарность участки для связывания cd3 и содержащая их биспецифическая антигенсвязывающая молекула |
GB201912681D0 (en) | 2019-09-04 | 2019-10-16 | Eth Zuerich | Bispecific binding agent that binds to cd117/c-kit and cd3 |
WO2021050640A1 (en) | 2019-09-10 | 2021-03-18 | Amgen Inc. | Purification method for bispecific antigen-binding polypeptides with enhanced protein l capture dynamic binding capacity |
CA3151704A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Domain Therapeutics | Prostaglandin e2 (pge2) ep4 receptor antagonists |
EP3808741A1 (en) | 2019-10-16 | 2021-04-21 | CeMM - Forschungszentrum für Molekulare Medizin GmbH | Compounds for targeted degradation of carrier proteins and uses thereof |
WO2021074418A1 (en) | 2019-10-16 | 2021-04-22 | Cemm - Forschungszentrum Für Molekulare Medizin Gmbh | Carbazole-type cullin ring ubiquitin ligase compounds and uses thereof |
IL292153A (en) | 2019-10-16 | 2022-06-01 | Cemm Forschungszentrum Fur Molekulare Medizin Gmbh | Oxazole and thiazole choline ubiquitin ligase ring compounds and uses thereof |
EP4054590A1 (en) | 2019-11-04 | 2022-09-14 | Amgen Inc. | Methods for treating leukemia |
EP3819312A1 (en) | 2019-11-10 | 2021-05-12 | Amgen, Inc | Dosing regimen for anti-dll3 agents |
EP3819007A1 (en) | 2019-11-11 | 2021-05-12 | Amgen Research (Munich) GmbH | Dosing regimen for anti-bcma agents |
US20220396599A1 (en) | 2019-11-13 | 2022-12-15 | Amgen Inc. | Method for Reduced Aggregate Formation in Downstream Processing of Bispecific Antigen-Binding Molecules |
US20230093169A1 (en) | 2020-01-22 | 2023-03-23 | Amgen Research (Munch) Gmbh | Combinations of antibody constructs and inhibitors of cytokine release syndrome and uses thereof |
US20230348624A1 (en) | 2020-01-30 | 2023-11-02 | Umoja Biopharma, Inc. | Bispecific transduction enhancer |
WO2021158469A1 (en) | 2020-02-03 | 2021-08-12 | Amgen Inc. | Multivariate bracketing approach for sterile filter validation |
TW202140561A (zh) | 2020-02-14 | 2021-11-01 | 日商協和麒麟股份有限公司 | 與cd3結合之雙特異性抗體 |
KR20220148209A (ko) | 2020-02-28 | 2022-11-04 | 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. | 항cd137 작제물 및 그 용도 |
CN115151573A (zh) | 2020-02-28 | 2022-10-04 | 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 | 抗cd137构建体、多特异性抗体及其用途 |
US11896619B2 (en) | 2020-03-10 | 2024-02-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods for immunotherapy of NPM1c-positive cancer |
WO2021183861A1 (en) | 2020-03-12 | 2021-09-16 | Amgen Inc. | Method for treatment and prophylaxis of crs in patients comprising a combination of bispecifc antibodies binding to cds x cancer cell and tnfalpha or il-6 inhibitor |
WO2021188851A1 (en) | 2020-03-19 | 2021-09-23 | Amgen Inc. | Antibodies against mucin 17 and uses thereof |
US11919956B2 (en) | 2020-05-14 | 2024-03-05 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3 |
EP4153633A1 (en) | 2020-05-19 | 2023-03-29 | Amgen Inc. | Mageb2 binding constructs |
MX2022014902A (es) | 2020-05-29 | 2023-01-04 | Amgen Inc | Administracion mitigadora de efectos adversos de un constructo biespecifico que se une a cd33 y cd3. |
CA3185858A1 (en) | 2020-06-02 | 2021-12-09 | Dynamicure Biotechnology Llc | Anti-cd93 constructs and uses thereof |
CN116529260A (zh) | 2020-06-02 | 2023-08-01 | 当康生物技术有限责任公司 | 抗cd93构建体及其用途 |
CA3184351A1 (en) | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Amgen Inc. | Bispecific binding constructs |
CA3190328A1 (en) | 2020-07-29 | 2022-02-03 | Dynamicure Biotechnology Llc | Anti-cd93 constructs and uses thereof |
KR102607909B1 (ko) | 2020-08-19 | 2023-12-01 | 젠코어 인코포레이티드 | 항-cd28 조성물 |
CN116322763A (zh) | 2020-08-27 | 2023-06-23 | 学校法人顺天堂 | 抗切断型突变calr-cd3双特异性抗体及医药组合物 |
EP4210748A1 (en) | 2020-09-11 | 2023-07-19 | Amgen Inc. | Materials and methods to reduce protein aggregation |
AU2021345124A1 (en) | 2020-09-16 | 2023-03-30 | Amgen Inc. | Methods for administering therapeutic doses of bispecific T-cell engaging molecules for the treatment of cancer |
WO2022060878A1 (en) | 2020-09-16 | 2022-03-24 | Amgen Inc. | Methods for treating prostate cancer |
JP2023545588A (ja) | 2020-10-16 | 2023-10-30 | ツェーエムエム-フォルシュングスツェントルム フュア モレクラレ メディツィン ゲーエムベーハー | ヘテロ環式カリンringユビキチンリガーゼ化合物及びその使用 |
BR112023008629A2 (pt) | 2020-11-06 | 2023-10-03 | Amgen Inc | Construtos de polipeptídeos que se ligam seletivamente a cldn6 e cd3 |
CN116323671A (zh) | 2020-11-06 | 2023-06-23 | 安进公司 | 具有增加的选择性的多靶向性双特异性抗原结合分子 |
BR112023008670A2 (pt) | 2020-11-06 | 2024-02-06 | Amgen Inc | Construtos polipeptídicos ligados à cd3 |
TW202233678A (zh) | 2020-11-06 | 2022-09-01 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | 具有增強的剪切特徵的多肽 |
TW202233682A (zh) | 2020-11-10 | 2022-09-01 | 美商安進公司 | 用於投與BCMAxCD3結合分子之方法 |
EP4255931A1 (en) | 2020-12-03 | 2023-10-11 | Amgen Inc. | Immunoglobuline constructs with multiple binding domains |
WO2022132904A1 (en) | 2020-12-17 | 2022-06-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2 |
MX2023007299A (es) | 2020-12-18 | 2023-07-04 | Ablynx Nv | Polipeptidos de reclutamiento de celulas t basados en la reactividad de tcr alfa/beta. |
JP2024504390A (ja) | 2021-01-22 | 2024-01-31 | バイワンキュア セラピューティクス, インコーポレイテッド | 抗her-2/trop-2構築物及びその使用 |
KR20230157315A (ko) | 2021-01-28 | 2023-11-16 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 사이토카인 방출 증후군을 치료하기 위한 조성물 및 방법 |
US20240117019A1 (en) | 2021-02-09 | 2024-04-11 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens |
IL304955A (en) | 2021-02-09 | 2023-10-01 | Us Health | Antibodies targeting the spike protein of a coronavirus |
WO2022171121A1 (zh) | 2021-02-10 | 2022-08-18 | 同润生物医药(上海)有限公司 | ***的方法和组合 |
CA3212665A1 (en) | 2021-03-09 | 2022-09-15 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6 |
KR20230154311A (ko) | 2021-03-10 | 2023-11-07 | 젠코어 인코포레이티드 | Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체 |
WO2022191971A1 (en) | 2021-03-10 | 2022-09-15 | Amgen Inc. | Parallel chromatography systems and methods |
JP2024509877A (ja) | 2021-03-10 | 2024-03-05 | アムジエン・インコーポレーテツド | 組換えタンパク質の精製方法 |
EP4314049A1 (en) | 2021-03-25 | 2024-02-07 | Dynamicure Biotechnology LLC | Anti-igfbp7 constructs and uses thereof |
CN112794916B (zh) * | 2021-04-08 | 2021-08-10 | 正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司 | 三特异性抗原结合构建体及构建方法和应用 |
CN117279947A (zh) | 2021-05-06 | 2023-12-22 | 安进研发(慕尼黑)股份有限公司 | 用于在增殖性疾病中使用的靶向cd20和cd22的抗原结合分子 |
EP4355785A1 (en) | 2021-06-17 | 2024-04-24 | Amberstone Biosciences, Inc. | Anti-cd3 constructs and uses thereof |
WO2023044272A1 (en) | 2021-09-17 | 2023-03-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies |
CA3235228A1 (en) | 2021-10-15 | 2023-04-20 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Subcutaneous administration of cd19-binding t cell engagers |
TW202326113A (zh) | 2021-10-27 | 2023-07-01 | 美商安進公司 | 使用光譜學進行的基於深度學習的預測 |
EP4180035A1 (en) | 2021-11-15 | 2023-05-17 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Novel beta-lactone inhibitors of hydrolytic enzymes and their medical and non medical uses |
WO2023110918A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-22 | Cdr-Life Ag | Dual mhc-targeting t cell engager |
WO2023154824A1 (en) | 2022-02-10 | 2023-08-17 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses |
WO2023164474A1 (en) | 2022-02-23 | 2023-08-31 | Amgen Inc. | Cancer treatment targeting dll3 |
WO2023192881A1 (en) | 2022-03-28 | 2023-10-05 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use |
WO2023201226A1 (en) | 2022-04-11 | 2023-10-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for universal tumor cell killing |
WO2023203172A1 (en) | 2022-04-20 | 2023-10-26 | Proxygen Gmbh | Heterocyclic cullin ring ubiquitin ligase compounds and uses thereof |
TW202346368A (zh) | 2022-05-12 | 2023-12-01 | 德商安美基研究(慕尼黑)公司 | 具有增加的選擇性的多鏈多靶向性雙特異性抗原結合分子 |
US20240117062A1 (en) | 2022-05-27 | 2024-04-11 | Sanofi | Anti-bcma antibodies |
US20240109965A1 (en) | 2022-06-14 | 2024-04-04 | Ablynx N.V. | Immunoglobulin single variable domains targeting t cell receptor |
WO2024030829A1 (en) | 2022-08-01 | 2024-02-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase |
WO2024054822A1 (en) | 2022-09-07 | 2024-03-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth |
US20240091262A1 (en) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | Cdr-Life Ag | Mage-a4 peptide dual t cell engagers |
WO2024059675A2 (en) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | Amgen Inc. | Bispecific molecule stabilizing composition |
WO2024064826A1 (en) | 2022-09-22 | 2024-03-28 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use |
WO2024068944A1 (en) | 2022-09-30 | 2024-04-04 | Sanofi | Anti-cd28 antibodies |
WO2024077044A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-04-11 | Amgen Inc. | Combination therapies comprising t-cell redirecting therapies and agonistic anti-il-2r antibodies or fragments thereof |
WO2024092033A1 (en) | 2022-10-26 | 2024-05-02 | Amgen Inc. | Multispecific molecules for clearance of immunoglobulins in the treatment of autoantibody-induced diseases |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5239062A (en) * | 1986-03-20 | 1993-08-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Blocked lectins, methods and affinity support for making same using affinity ligands, and method of killing selected cell populations having reduced nonselective cytotoxicity |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
CA2063035A1 (en) * | 1991-03-27 | 1992-09-28 | Klaus Karjalainen | Chimaeric antibodies containing the ligand domain of cd4 |
US5637481A (en) * | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
AU8124694A (en) * | 1993-10-29 | 1995-05-22 | Affymax Technologies N.V. | In vitro peptide and antibody display libraries |
WO1996036360A1 (en) | 1995-05-17 | 1996-11-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Immunoconjugates comprising single-chain variable region fragments of anti-cd-19 antibodies |
DE19531348A1 (de) * | 1995-08-25 | 1997-02-27 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Antikörper mit zwei oder mehr Spezifitäten zur selektiven Eliminierung von Zellen in vivo |
JP4169478B2 (ja) * | 1998-04-21 | 2008-10-22 | マイクロメット アーゲー | Cd19×cd3特異的ポリペプチドおよびその使用 |
JP2008501621A (ja) * | 2003-05-31 | 2008-01-24 | マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト | B細胞関連疾患を処置するための二重特異性抗cd3、抗cd19抗体構築物を含む薬学的組成物 |
-
1999
- 1999-04-21 JP JP2000544772A patent/JP4169478B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-21 CZ CZ20003889A patent/CZ302070B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-04-21 PL PL344016A patent/PL199747B1/pl unknown
- 1999-04-21 SK SK1579-2000A patent/SK286683B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-04-21 US US09/673,735 patent/US7112324B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-21 EP EP99924816A patent/EP1071752B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-21 HU HU0102535A patent/HU229039B1/hu unknown
- 1999-04-21 CN CNB99805240XA patent/CN1302103C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-21 WO PCT/EP1999/002693 patent/WO1999054440A1/en active IP Right Grant
- 1999-04-21 NZ NZ507381A patent/NZ507381A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-04-21 TR TR2000/03087T patent/TR200003087T2/xx unknown
- 1999-04-21 RU RU2000128668/15A patent/RU2228202C2/ru active
- 1999-04-21 PT PT99924816T patent/PT1071752E/pt unknown
- 1999-04-21 CA CA002326389A patent/CA2326389C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-21 AT AT99924816T patent/ATE244758T1/de active
- 1999-04-21 DE DE69909459T patent/DE69909459T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-21 EP EP03015037A patent/EP1348715A3/en not_active Withdrawn
- 1999-04-21 IL IL13885799A patent/IL138857A0/xx active IP Right Grant
- 1999-04-21 DK DK99924816T patent/DK1071752T3/da active
- 1999-04-21 AU AU41352/99A patent/AU761587B2/en not_active Expired
- 1999-04-21 ES ES99924816T patent/ES2203141T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-21 SI SI9930335T patent/SI1071752T1/xx unknown
- 1999-04-21 KR KR10-2000-7011396A patent/KR100508289B1/ko active Protection Beyond IP Right Term
- 1999-04-21 BR BRPI9909860A patent/BRPI9909860B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-04-21 ID IDW20001963D patent/ID27512A/id unknown
-
2000
- 2000-10-04 IL IL138857A patent/IL138857A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-10-20 HR HR20000714A patent/HRP20000714B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-10-20 ZA ZA200005866A patent/ZA200005866B/en unknown
- 2000-10-20 CU CU20000223A patent/CU23252B7/es not_active IP Right Cessation
- 2000-10-20 NO NO20005296A patent/NO326523B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-12-05 HK HK01108522A patent/HK1037674A1/xx unknown
-
2006
- 2006-05-05 US US11/418,058 patent/US7575923B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2228202C2 (ru) | Cd19xcd3-специфические полипептиды и их применение | |
CN113412117A (zh) | 嵌合抗原和t细胞受体及使用的方法 | |
JP2014533929A (ja) | 5t4およびcd3に対する二重特異的結合性分子 | |
KR20210089179A (ko) | Cll1을 표적으로 하는 항체 및 이의 응용 | |
Guo et al. | Humanized CD30-targeted chimeric antigen receptor t cells exhibit potent preclinical activity against Hodgkin’s lymphoma cells | |
US20050163770A1 (en) | Immunological reagent specifically interacting with the extracellular domain of the human zeta chain | |
JP2005525792A (ja) | 免疫関連疾患および他の疾患に用いる治療的抗tirc7抗体 | |
TW201206472A (en) | IL-18 Receptor as a novel target of regulatory T cells in cancer | |
US20030180799A1 (en) | Antibodies against plasma cells | |
WO2023125975A1 (zh) | 一种新型靶向人flt3的嵌合抗原受体修饰的t细胞的构建及应用 | |
MXPA00010245A (en) | CD19xCD3 SPECIFIC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF | |
BG65066B1 (bg) | CD19 x CD3 СПЕЦИФИЧНИ ПОЛИПЕПТИДИ И ТЯХНОТО ИЗПОЛЗВАНЕ | |
CN114829399A (zh) | 使用双特异性抗体消除患者中的造血干细胞/造血祖细胞(hsc/hp)的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK4A | Patent expired |
Effective date: 20190421 |