RU2129018C1 - Иммуноконьюгат, способ получения иммуноконьюгата и фармацевтическая композиция - Google Patents
Иммуноконьюгат, способ получения иммуноконьюгата и фармацевтическая композиция Download PDFInfo
- Publication number
- RU2129018C1 RU2129018C1 RU94045281A RU94045281A RU2129018C1 RU 2129018 C1 RU2129018 C1 RU 2129018C1 RU 94045281 A RU94045281 A RU 94045281A RU 94045281 A RU94045281 A RU 94045281A RU 2129018 C1 RU2129018 C1 RU 2129018C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- mab
- fragment
- immunoconjugate
- cells
- Prior art date
Links
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 title claims abstract description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 70
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 35
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 33
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 23
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 20
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 20
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 15
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 5
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 5
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 claims description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims 1
- 230000004044 response Effects 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 31
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 24
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 24
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 23
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 14
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 14
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 13
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 13
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 11
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 11
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 210000003810 lymphokine-activated killer cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- -1 for example Proteins 0.000 description 4
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 4
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 3
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 3
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 3
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 3
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 101150083678 IL2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000009215 host defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 108010086662 phytohemagglutinin-M Proteins 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000009941 weaving Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5406—IL-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5418—IL-7
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к новым слитым белкам, и может быть использовано при лечении опухолевых заболеваний. Иммуноконьюгат представляет собой моноклональное антитело или его фрагмент, соединенный с биологически активным лигандом. Антитело или его фрагмент направлены против опухолевой клетки, несущей антигенный эпитон рецептора эпидермального фактора роста. В качестве биологически активного лиганда использован цитокин. Для получения иммуноконьюгата используют слияние ДНК-последовательности, кодирующей антитело или его фрагмент, и ДНК-последовательности, кодирующей биологически активный лиганд. Полученную конструкцию вводят в вектор экспрессии. Вектор экспрессии культивируют в хозяйских клетках. Изобретение может быть использовано для лечения любых видов опухолей. 3 с. и 10 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл.
Description
Изобретение относится к новым слитым белкам, которые включают в себя опухолеассоциированный и направленный против клетки-мишени элемент, предпочтительно моноклональное антитело или его фрагмент, распознающие молекулу, экспрессирующуюся преимущественно на опухолевых клетках человека, например, такую, как рецептор эпидермального фактора роста (EGFR); и биологически активный лиганд, например, такой, как фактор роста и/или фактор дифференцировки. Полученный гибридный белок может быть использован для доставки биологически активного лиганда к специфическим клеткам-мишеням или тканям-мишеням. Новые иммуноконъюгаты могут быть использованы для лечения опухолевых заболеваний.
Для лечения раковых заболеваний было разработано множество различных терапевтических методов. В последние годы были проведены клинические испытания с использованием моноклональных антител, которые обладают способностью к специфическому или преимущественному распознаванию молекул клеточной поверхности, экспрессируемых на злокачественных клетках. Целью описанной методики является индукция антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) или комплект опосредованной цитотоксичности (CDC) для удаления опухолевых клеток. Второй способ, разработанный за последнее время, заключается в цитокин-опосредованной активации иммунного ответа. Такая цитокин-индуцированная противоопухолевая активность может быть опосредована:
1) прямым цитотоксическим/цитостатическим воздействием цитотоксина на рост опухоли%
2) "опухоль-антиген" - неспецифическими механизмами, такими, как LAK-активность, или моноцит/макрофаг-опосредованная цитотоксичность;
3) "опухоль-антиген" - специфическими иммунными реакциями, опосредованными CD4 и CD8-положительными T-клетками. В этом случае системный иммунитет против опухолей наблюдался на моделях животных.
1) прямым цитотоксическим/цитостатическим воздействием цитотоксина на рост опухоли%
2) "опухоль-антиген" - неспецифическими механизмами, такими, как LAK-активность, или моноцит/макрофаг-опосредованная цитотоксичность;
3) "опухоль-антиген" - специфическими иммунными реакциями, опосредованными CD4 и CD8-положительными T-клетками. В этом случае системный иммунитет против опухолей наблюдался на моделях животных.
К сожалению, токсичность цитокинов таких, как ШД-2 или TNFα , не позволяет широко использовать их для системного введения (Rubin, Cancer Inverst., II, 460-172, 1990, Balkwill Nature 361: 206-207, 1993). Для обеспечения достаточной концентрации цитокинов в месте локализации опухоли их необходимо вводить в довольно высоких дозах, и эти дозы, как правило, превышают предельно допустимые дозы. Отсюда очевидно, что негативный эффект применения обусловлен, в основном, их системным введением; однако возможность использования цитокинов при лечении опухолей не вызывает сомнений. На моделях животных было проиллюстрировано, что присутствие in situ цитокина, обусловленное либо внутриопухолевой инъекцией, либо секрецией трансфецированных опухолевых клеток, может приводить к регрессии опухоли (Носок и др., PNAS, 90: 2774 - 2778, 1993; Colombo и др., Cancer Res. 52: 4853 - 4857, 1992; Mcbride и др., Cancer Res. 52: 3931 - 3937, 1992; Tepper и др., Science 287: 548 - 551, 1992; Mullen и др., Cancer Res. 52: 6020 - 6024, 1992; Blankenstein и др., J.Exp. Med. 173: 1047 - 1052, 1991; Gansdbacher и др. J.Exp Med. 172: 1217 - 1224, 1990). В этих системах цитокины не ослабляют опухолевую пролиферацию, но активируют и сильную антиопухолевую реакцию. Поэтому, физическая комбинация эффекторной молекулы и элемента, направленного против мишени, должна способствовать снижению периферического количества биологически активного лиганда и увеличению его количества внутри опухоли. Кроме того, эти молекулы могут быть также направлены на одиночные опухолевые клетки или микро-метастазы.
Указанный биологически активный лиганд, обеспечивающий антитело-направленную доставку конъюгата к клеткам-мишеням, должен индуцировать деструкцию клетки-мишени либо непосредственно, либо посредством создания условий, летальных для клетки-мишени. Таким биологически активным лигандом может быть цитокин, например, IL-1, LI-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-13, IFN, TNFα, или CSF. Было показано, что эти цитокины обладают либо непосредственным противоопухолевым действием, либо способностью активировать защитные механизмы хозяина (Mire-Sluis TIBTECH 11:74-77, 1993; Colombo и др., Cancer Res. 52: 4853-4857, 1992; Thomas $ Balkwill, Pharmac Ther. 52:307.
Например, IL-2 является, как предполагают, центральным медиатором иммунного ответа. Было показано, что IL-2 стимулирует пролиферацию T-клеток и NK-клеток (природных киллеров), а также индуцирует лимфокин-активированные клетки-киллеры (LAK). IL-2 индуцируют пролиферацию T-лимфоцитов, вызывающих инфильтрацию опухоли. Кроме того, IL-2 усиливают цитотоксичность T-клеток и моноцитов. IL-2 индуцируют каскад цитокинов, секретируемых T-клетками, NK-клетками и моноцитами, что способствует дополнительному потенцированию иммунной реакции.
TNFα находит широкое применение в опухолевой терапии, главным образом, благодаря своей непосредственной цитотоксичности в отношении некоторых опухолевых клеток, и способностью индуцировать геморрагический регресс опухоли. Помимо этого, TNFα способствует усилению иммунного ответа, поскольку он является костимулирующим фактором пролиферации T-клеток, и индуцирует экспрессию антигенов ГКС класса I и класса II, а также секрецию TNFα , IFN и IL-1 макрофагами. IL-4 был первоначально описан как фактор роста B-клеток. В последующих исследованиях было показано, что IL-4 стимулирует антиген-специфические цитотоксические T-клетки, и оказывает специфическое воздействие на T-клетки, подобные LAK-клеткам, а не на NK-клетки, подобные LAK-клеткам. IL-4 ингибирует рост клеток меланомы человека и усиливает экспрессию их ГКС класса I и класса II. Факт индуцирования макрофаг-опосредованного противоопухолевого действия IL-4 остается пока спорным.
IL-7 представляет собой фактор роста пре-B-клеток, а также периферических CD4- и CD8-положительных T-клеток. IL-7 непосредственно увеличивает цитотоксичность CЭ8-положительной субпопуляции T-клеток. помимо этого, IL-7 способствует продуцированию IL-1, IL-6 и TNFα периферическими моноцитами. in vitro, противоопухолевая активность моноцитов/макрофагов может быть стимулирована вышеуказанным фактором IL-7, и возможно опосредована цитокинами, такими, как TNFα .
Эпидермальный фактор роста (EGF) представляет собой полипептидный гормон, который является митогенным для эпидермальных и эпителиальных клеток. При взаимодействии EGF с чувствительными клетками, он связывается с мембранными рецепторами (EGFP). EGFP представляет собой трансмембранный гликопротеин (около 170 кДа), и является генным продуктом c-evb-B протоонкогена.
Было обнаружено, что мышиное моноклональное антитело MAb 425, продуцируемое против клеточной линии карциномы А 431 человека (АТСС CPI 1555), связывается с эпитопом полипептида на внешнем домене EGFP. Как было установлено, это антитело ингибирует связывание EGF, опосредует in vitro - цитотоксичность по отношению к опухолям, и подавляет опухолевый рост in vitro клеточных линий, происходящих от эпидермальной и колоректальной карциномы (Rodeck и др. , 1987, Cancer Res. 47, 3692). Гуманизированные и химерные варианты MAb 425 описаны в WO 92/15683.
В литературе были описаны иммуноконъюгаты "антитело-цитокин" в различных комбинациях, предназначенных для направленной доставки активных белков к тканям-мишеням. Il-2 был объединен со специфическим антителом против карциномы человека L6 (Fell и др., 1991, J. Immunol. 146: 2446 - 2452, EP-OS-0439095), или с антителом против ганглиозида CD2 (Gillies и др., 1992, PN AS 89: 1428-1432, WO 92/08495). Были также генерированы иммуноконъюгаты, состоящие из антиданзилового антитела и IGFI, и обеспечивающие направленную доставку гормонов к тканям-мишеням (Shin & Morrison 1990, PNAS 87: 5322-5326, WO 91/14438).
Таким образом, целью настоящего изобретения является продуцирование антител или их фрагментов, содержащих (I) эпитоп, направленный против EGFP - антигена на поверхности опухолевой клетки, и (2) биологически активной лиганд, обладающий высокой степенью способности индуцировать цитотоксичность, и тем самым, интенсифицировать противоопухолевый эффект in situ.
Настоящее изобретение относится к иммуноконъюгатам, включающим в себя часть моноклонального антитела, или, по крайней мере, его сайт распознавания антигена, либо полное моноклональное антитело; и биологически активный лиганд. Конструкции, кодирующие указанные иммуноконъюгаты, получают с использованием техники рекомбинантных ДНК. Эти иммуноконъюгата содержат вариабельную область тяжелой цепи антитела и СР1-домен константой области (антитело-СР1-конъюгат), или CH1- и СР2-домены контактной области (антитело-CH2-конъюгат), или CH1-, CH2- или CH3-домены контактной области (антитело-CH3-конюъгат), связанные с биологически активным лигандом. Кроме того, могу быть генерированы иммуноконъгаты, которые содержат соответствующую легкую цепь, и которые направлены на антиген-несущие клетки и способны обеспечивать доставку активного лиганда к контрольному участку организма (фиг. 1 a-c).
С помощью имммуноконъюгатов настоящего изобретения могут быть обнаружены и подвергнуты успешному лечению такие опухоли, как меланома, глиома и карцинома.
В соответствии с этим, целью настоящего изобретения является получение иммуноконъюгата, состоящего из (I) моноклонального антитела или его фрагмента, направленного против опухолевой клетки, несущей антигенную детерминанту (эпитоп) рецептора эпидермального фактора роста (EGFR); и (2) биологически активный лиганд, предпочтительно, цитокин, который сцеплен с указанным антителом или его фрагментом, и обладает цитотоксической способностью специфически лизировать опухолевую клетку in situ, или индуцировать опухолеспецифический иммунный ответ.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, цитокины выбирают из TNFα , IL-2, IL-4 и IL-7.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, антитело или его фрагмент происходит от мышиного, гумманизированного или химерного MAb 425.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, иммуноконъюнгатами является MAb 425-CH1-INF, MAb 425-CH2-INF и MAb 425-CH3-INF, MAb 425-CH1-IL2 и MAb 425-CH2-IL2, MAb 425-CH3-IL-7, MAb 425-CH2-IL-7 и MAb 425-CH3-IL-7.
Кроме того, целью настоящего изобретения является разработка способа получения иммуноконъюгата, определенного выше и в нижеприведенной формуле изобретения, который осуществляют с использованием организма-хозяина, и который заключается в том, что: получают гибридную конструкцию, содержащую ДНК-последовательность, кодирующую антитело или его фрагмент, и биологически активный лиганд; полученную конструкцию вставляют в экспрессирующий вектор, которым трансформируют указанный хозяйский организм; хозяйские клетки культивируют в питательном растворе; и гибридный белок экспрессируют.
А предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используется технология, в которой ДНК-последовательности, кодирующие антитело или его фрагмент, и биологически активный лиганд, сливают на одноцепочечной ДНК с использованием олигонуклеотида, комплеменатарного ДНК-последовательности нужной для слияния.
Кроме того, целью настоящего изобретения является получение фармацевтической композиции, содержащей по крайней мере один иммуноконъюгант, определенный выше и в формуле изобретения, и физиологически приемлемый носитель.
И наконец, еще одной целью настоящего изобретения является использование иммуноконъюгатов, определенных выше и в формуле изобретения, для изготовления противоопухолевого лекарственного средства.
Было обнаружено, что в случае использования иммуноконъюгатов "антитело-CH2" и "антилтело-CH3", например, таких, как МAb 425-CH2-TNFα и MAb 425-CH3-TNFα , наблюдается особенно высокая степень индукции клеточной цитотоксичности по сравнению с неконъюгированным TNFα . Этот факт, вероятно, обусловлен сочетанием связывающих свойств, индуцирования ACC (антитело-зависимой клеточной цитотоксичности) константными областями моноклонального антитела, и активности цитокинов.
Преимущество конъюгатов "антитело-CH1" настоящего изобретения заключается в небольшом размере из молекулы, а также в их способности экспрессироваться в прокариотах. Малый размер молекулы облегчает проникновение конъюгата в ткани (опухоль).
Кроме того, иммуноконъюгаты настоящего изобретения обнаруживают хорошую способность к связыванию и пролиферации по сравнению с моноклональным антителом (предпочтительно MAb 425) как таковым или его фрагментами.
Материалы и методы.
Моноклональные антитела.
MAb 425 представляет собой мышиное моноклональное антитело IoG1, продуцируемое против клеточной линии карциномы А431 человека (АТСС CPL 1555). MAb 425 связывается с полипептидным эпитопом внешнего домена EGF-рецептора человека и конкурирует за связывание с EGF. Было обнаружено, что MAb 425 опосредует опухолевую цитотоксичность in vitro, и подавляет in vitro рост клеток эпидермальной и колоректальной карциномы (Rodeck и др., 1987, Cancer Res 47:3692). Гуманизированные и химерные варианты MAb 425 были описаны в WO 92/15683.
Цитокины.
Цитокинкодирующие кДНК поставлялись от фирмы British Biotechnology Limited (Herrmann Biermann GMBH, Ban Nauheim FRG:
чел. IL -2 BBG30, чел. IL-4 BBG15, чел. IL-7 BBG 43, чел. TNF BBG 18). В коммерчески доступных кДРК отсутствует сигнальная последовательность, необходимая для выделения белка. Цитокин-кодирующие кДНК могут быть генерированы из мРНК, выделенной из цитокин-продуцирующих клеток.
чел. IL -2 BBG30, чел. IL-4 BBG15, чел. IL-7 BBG 43, чел. TNF BBG 18). В коммерчески доступных кДРК отсутствует сигнальная последовательность, необходимая для выделения белка. Цитокин-кодирующие кДНК могут быть генерированы из мРНК, выделенной из цитокин-продуцирующих клеток.
Векторы.
pUC19 является одним из серии родственных мультикопийных E.coli-плазмидных векторов клонирования и содержит части pBP322 и M13 mp19. pUC19 содержит индуцибельный lac-бактериальный промотор-оператор и расположенный за ним множественный клонирующий сайт (Yanisch-Perron и др., Gene 33: 103-109, 1985). Векторы pUC являются коммерчески доступными (например, New England Biolahs). Фазмидные векторы pBlue script KS/SK + и KS/SK - происходит от p C19. Эти векторы являются коммерчески доступными (Stratagene).
Эукариотический экспрессирующий вектор pHCM V (Gil Lies и др., 1983, Cell 33:717) содержит сайт инициации репликации обезьяньего вируса 40 (SV40) и область промотора и энхансера цитомегаловируса человека. Указанная область просмотра/энхансера расположена за сайтом мультиклонирования (mcs) для введения экспрессируемых генов. В этом векторе для генерирования гибридного белка с тяжелой цепью MAb 425 были объединены химерная форма вариабельной области тяжелой цепи m AB425 и области C γ Δ Sac 11, сцепленная с эффекторной молекулой в конце домена CH1, CH2 или CH3, соответственно. Гибридная цепь Ig может быть включена в иммуноконьюгат путем ее объединения с соответствующей легкой цепью, в результате чего образуется моновалентная область связывания с антигеном, которая может быть затем использована для продуцирования иммуноконьюгата, специфического для антигена-мишени (фиг. 1). Конструкция с тяжелой и легкой цепью могут быть введены в тот же самый или в разные векторы.
Вектор для экспрессии в прокариотах получают на основе вектора pSW1 (Ward и др., Nature 341:544-546, 1989), который происходит от вектора pUC19. pSW1 содержит последовательность, колирующую лидерный пептид бактериального peIB-гена от Erwinia carotovra (Lei и др., J. Bact 169: 4379 - 4383, 1987). Чужеродные ДНК могут быть введены с сохранением рамки считывания ниже лидерной последовательности peIB для регулирования экспрессии белка в периплазме.
Краткое описание чертежей и таблиц.
Таблица I. PCP-праймеры, используемые для генерирования MAb 425-цитокин-гибридных белков (зукариотическая экспрессия).
* Обратный праймер, гибридизирующийся с векторами (Stratagene) SR+/- и KS+/- (коммерческий продукт);
** Этот праймер гибридизируется с константной областью CgL, включая уникальный Sac 11-сайт;
*** Обратный праймер, гибридизирующийся с векторами, происходящими из М13 (коммерческий продукт).
** Этот праймер гибридизируется с константной областью CgL, включая уникальный Sac 11-сайт;
*** Обратный праймер, гибридизирующийся с векторами, происходящими из М13 (коммерческий продукт).
Таблица II. PCR-праймеры, используемые для генерирования MAb 425-цитокин-гибридных белков (прокариотическая экспрессия)
Фиг. 1. Модель иммуноконьюгатов "антитело-цитокин"
C = цитокин; VH = вариабельная область тяжелой цепи; VL = вариабельная область легкой цепи; CH = константная область тяжелой цепи; CL = константная область легкой цепи. (а) конъюгат "антитело-CHI"; (b) конъюгат "антитело-CH2"; (c) конъюгат "антитело-CH3".
Фиг. 1. Модель иммуноконьюгатов "антитело-цитокин"
C = цитокин; VH = вариабельная область тяжелой цепи; VL = вариабельная область легкой цепи; CH = константная область тяжелой цепи; CL = константная область легкой цепи. (а) конъюгат "антитело-CHI"; (b) конъюгат "антитело-CH2"; (c) конъюгат "антитело-CH3".
Фиг. 2. Связывание иммуноконъюгатов с EGF-рецептором (EGFR) в EGFR- специфическом ELISA - анализе.
Супернатанты кратковременно трансфицированных клеток CO S-7 анализировали на содержание иммуноконъюгата. Вертикальная ось:% оптической плотности при 490 нм; горизонтальная ось: разведение супернатанта (log.2).
MAb 425 CHI-TNFα (заштрихованные (cilled) кружочки), MAb 425 CH2-TNFα (заштрихованные квадраты), MAb 425 CH3-TNFα (заштрихованные треугольники), MAb 425-контроль (заштрихованные ромбы); MAb 425 FAb-контроль (перевернутый заштрихованный треугольник); MAb 425 F(ab')2 в своей первоначальной форме (очищенный белок) (заштрихованный шестиугольник).
Фиг. 3А. IL-2-активность иммуноконъюгата "MAb 425-CHI-IL-2", экспрессированного в клетках COS-7.
Клетки CTLL-2 использовали в качестве индикаторной клеточной линии, пролиферативная активность серийно разведенного COS-супернатанта, содержащего MAb 425-CHI-II-2, показана на левой панели (заштрихованные кружки). В качестве контроля использовали COS-супернатант, содержащий MAb 425 Fab-контроль (незаштрихованные кружки). Пролиферативный ответ клеток CTLL-2 на активацию рекомбинантным коммерческим IL-2-белком или без IL-2 (KO) показан на правой панели.
Фиг. 3B. IL-2-активность иммуноконъюгата "MAb 425-CHI-IL-2", экспрессированного в E.coli.
Клетки CTLL-2 использовали в качестве индикаторной клеточной линии. Пролиферативная активность серийно разведенного иммуноконъюгата MAb 425-CHI-IL-2, экспрессированного в E.coli, и аффинноочищенного на идиотипической колонке против MAb 425, показана на левой панели (заштрихованные треугольники). В качестве контроля использовали COS-супернатант, содержащий MAb 425-CHI-IL-2 (зачерненные (closed)кружки). Буфер для диализа - зачерненные квадраты. Для того, чтобы убедиться, что буфер не влияет на IL-2-активность, буфер для диализа титровали в присутствии постоянной концентрации IL-2 (I ед. /мл) (заштрихованные перевернутые треугольники). Пролиферативный ответ клеток CTLL.2 на активно коммерчески рекомбинантным белкам с IL-2 или при отсутствии IL-2 (КО) показан на правой панели.
Фиг. 3C. Индуцирование TIL-пролиферация с помощью иммуноконъюгата MAb 425-CHI-IL-2.
Лимфоциты, вызывающие инфильтрацию меланомы, культивировали в отсутствии (КО) или в присутствии серийно разведенных COS-супернатантов, содержащих иммуноконъюгат 425-CHI-IL-2 (левая панель). Пролиферативный ответ TII на активацию рекомбинантным коммерческим IL-2 показан на правой панели.
Фиг. 4. Индуцирование HPBL-пролиферации с помощью иммуноконъюгата MAb 425-IL-4
PHA - активированные HPBL культивировали в присутствии серийно разведенных COS - супернатантов, содержащих MAb 425-CH2-IL-4 (зачерненные кружочки), MAb 425-CH3-IL-4 (зачерненные треугольники) - гибридные белки. Супернатанты, содержащие MAb 425 (зачерненные квадраты), IL -4 (зачерненный ромб), и векторный контроль (зачерненный перечеркнутый треугольник), использовали в качестве контроля. Пролиферативный ответ HPBL на активацию рекомбинатным коммерческим IL-4 и при отсутствии фактора роста (КО) показан на правой панели.
PHA - активированные HPBL культивировали в присутствии серийно разведенных COS - супернатантов, содержащих MAb 425-CH2-IL-4 (зачерненные кружочки), MAb 425-CH3-IL-4 (зачерненные треугольники) - гибридные белки. Супернатанты, содержащие MAb 425 (зачерненные квадраты), IL -4 (зачерненный ромб), и векторный контроль (зачерненный перечеркнутый треугольник), использовали в качестве контроля. Пролиферативный ответ HPBL на активацию рекомбинатным коммерческим IL-4 и при отсутствии фактора роста (КО) показан на правой панели.
Фиг. 5. Цитотоксичность иммуноконъюгата MAb 425-TNFL по отношению к клеткам EHI 164
Клеточную линию TNFL-чувствительной мышиной фибросаркомы WEHI 164 культивировали 48 часов в присутствии серийно разведенных COS-супернатантов (левая панель), содержащих 425-CHI-TNFα-иммуноконъюгат (заштрихованные квадраты) или 425-CH2-TNFα-иммуноконъюгат (заштрихованные треугольники), или MAb 425Fab-контроль (заштрихованные кружки). Ингибирование роста индикаторных клеток, индуцированного коммерчески рекомбинантным TNFα-человека, проиллюстрировано на правой панели.
Клеточную линию TNFL-чувствительной мышиной фибросаркомы WEHI 164 культивировали 48 часов в присутствии серийно разведенных COS-супернатантов (левая панель), содержащих 425-CHI-TNFα-иммуноконъюгат (заштрихованные квадраты) или 425-CH2-TNFα-иммуноконъюгат (заштрихованные треугольники), или MAb 425Fab-контроль (заштрихованные кружки). Ингибирование роста индикаторных клеток, индуцированного коммерчески рекомбинантным TNFα-человека, проиллюстрировано на правой панели.
Фиг. 6. Цитолиз опухолевых клеток лимфоцитами периферической крови, опосредованной MAb 425 - TNFL-иммуноконъюгатом
Неактивированные лимфоциты периферической крови (PBMC) использовали в качестве эффекторных клеток и культивировали вместе с аллогенными EGF-R-положительными 51Cr-меченными клетками-мишенями C8161 в отношении эффектор/мишень = 30:1. Процент специфического лизиса вычисляли после 18-часового совместного культивирования в отсутствие или в присутствии серийно разведенных COS-супернатантов, содержащих иммуноконъюгат MAb 425-CH3-TNFα (заштрихованные столбцы). Рекомбинатный TNFα (Genzym) был экспрессирован в E.coli как 36 кДа-димер (точечные столбцы).
Неактивированные лимфоциты периферической крови (PBMC) использовали в качестве эффекторных клеток и культивировали вместе с аллогенными EGF-R-положительными 51Cr-меченными клетками-мишенями C8161 в отношении эффектор/мишень = 30:1. Процент специфического лизиса вычисляли после 18-часового совместного культивирования в отсутствие или в присутствии серийно разведенных COS-супернатантов, содержащих иммуноконъюгат MAb 425-CH3-TNFα (заштрихованные столбцы). Рекомбинатный TNFα (Genzym) был экспрессирован в E.coli как 36 кДа-димер (точечные столбцы).
Другие микроорганизмы, клеточные линии, плазмиды, промоторы маркеры резистентности, сайты инициации репликации, рестрикционные сайты или другие фрагменты векторов, которые упоминаются в настоящем описании, являются коммерчески доступными, либо они могут быть продуцированы стандартными методами. Если это не оговорено особо, то все указанные элементы могут быть использованы лишь в иллюстрированных целях, и в основном, не относятся к настоящему изобретению, причем, они могут быть заменены другими подходящими элементами и биологическими материалами, соответственно.
Способы, относящиеся к настоящему изобретению, подробно описаны ниже. Другие способы, которые являются стандартными и достаточно хорошо известными специалистам и которые упоминаются в настоящем описании, более подробно описываются в цитируемых работах, патентных заявках и в специальной литературе (см. , например, "Antibodies, A Laboratory Manual, Harlon, Lane, Cold Spring Harbor, 1988).
Экспрессия гибридных белков в эукариотических клетках.
Конструирование экспрессирующих векторов для эукариотической экспрессии Fab 425-цитокин-гибридного белка.
Слияние MAb 425 и цитокинов с использованием техники выпетливания.
Генерирование TNFα-конструкций.
Sac11/Xba1-фрагмент Sac11-cγ1- клона вставляли в вектор Bluescript SK+, содержащий цитокин-кодирующие последовательности, такие, как TNFα-кДНК.
TNFα-кДНК вводили между сайтами Smal и EcoRI. Эту конструкцию получали в виде одноцепочечной ДНК путем добавления соответствующего фага-хелпера. Домен CH2 или CH3 сливали с сохранением рамки считывания к 5'-концу TNFα-колирующей последовательности. Олигонуклеотиды
являются гомологичными 3'-концу CH2-домена и CH3-домена, соответственно, и 5'-концу TNA α-кодирующей последовательности. Одноцепочечные ДНК-последовательности соединяли друг с другом посредством олигонуклеотида, а нежелательные последовательности, расположенные между ними, из конструкции удаляли. Олигонуклеотиды имели противоположную ориентацию, поскольку верхнюю цепь продуцировали как одноцепочечную ДНК.
являются гомологичными 3'-концу CH2-домена и CH3-домена, соответственно, и 5'-концу TNA α-кодирующей последовательности. Одноцепочечные ДНК-последовательности соединяли друг с другом посредством олигонуклеотида, а нежелательные последовательности, расположенные между ними, из конструкции удаляли. Олигонуклеотиды имели противоположную ориентацию, поскольку верхнюю цепь продуцировали как одноцепочечную ДНК.
К полученной ДНК достраивали вторую цепь с помощью секвеназы-полимеразы. Этот фермент не подвержен ошибкам, как ДНК-полимераза Amplitag, а поэтому была определена лишь ДНК-последовательность области соединения выделенных клонов. Клоны с правильной последовательностью были лигированы с последовательностями, необходимыми для генерирования полного 425-гибридного белка, и клонированы в вектор pHCMV для экспрессии в эукариотических клетках.
Генерирование IL-4-конструкций.
Для генерирования указанных конструкций, полный ΔSac11-cγ1-клон вставляли в Bluescript RS+ в качестве Kpnl/Sall -фрагмента. IL-4 клонировали как Hind 111/EcoRL -фрагмент в тот же самый вектор. Генерирование гибрида осуществляли так же, как и для TNF-конструкций, но с использованием следующих олигонуклеотидов:
для слияния с CH2- и CH3-доменом, соответственно.
для слияния с CH2- и CH3-доменом, соответственно.
Клоны с правильной последовательностью объединяли с последовательностями, необходимыми для генерирования полного mab 425-гибридного белка, и клонировали в вектор pHCM для экспрессии в эукариотических клетках.
Получение гибрида "MAb 425-цитокины" с помощью PCP-технологии.
ДНК-полимераза Amplitag подвержена ошибкам, и во избежании возможных ошибок, были определены последовательности вышеуказанных фрагментов, амплифицированных с помощью PCR-технологии. Праймеры, использованные в этих экспериментах, систематизированы в табл. 1.
Генерирование CHI-гибридных белков.
Плазмида pUH5 содержат последовательности фрагмента FAb 425 тяжелой цепи для прокариотической экспрессии и N-концевой pelB-лидерной последовательности, происходящей из Erwinia carotovora (Lei и др., J/Bact 169: 4379-4383, 1987), и обеспечивающей секрецию белка. Hind 111/Not1-фрагмент субклонировали в вектор Bluescript KS+. Цитокины IL-4 и IL-7 были амплифицированы с помощью PCP-технологии и введены в рестрикционные 5' Ncol и 3' Bam H1-сайты, соответственно. IL-2 и TNFα уже содержали 5' Hcol и 3' BamH1-сайты рестрикции. Все цитокины были клонированы в качестве Ncol/Bam H1 - фрагментов позади CHI-домена. В этих конструкциях, последовательности цитокинов были введены без сохранения рамки считывания. Поэтому, между Sall- и Ncol- сайтами рестрикции был введен адаптор (5'TGGACAAGAAAG 3'). В полученных конструкциях тяжелая цепь и цитокин были экспрессированы как гибридный белок с одной дополнительной аминокислотой (AIa), введенной последовательностью адаптора. Dra 111/BamH1-фрагменты были клонированы в экспрессирующий вектор pHCM, содержащий полный кДНК-клон тяжелой цепи MAb 425. В этой конструкции, pelB-лидерная последовательность была замена на лидерную последовательность кДНК тяжелой цепи MAb 425.
Генерирование CH2- и CH3-гибридных белков.
Sac11-cγ1-ДНК была амплифицирована с помощью PCR-технологии в двух отдельных реакциях с использованием CH2-3'-концевых праймеров, которые перекрывались (с сохранением рамки считывания) с 5'-концом соответствующего цитокина, такого, как IL-2 и IL-7. IL-2 и IL-7-кДНК-клоны были также амплифицированы с помощью PCR. Для облегчения субклонирования в SK+-вектор, а затем в экспрессирующий вектор pHCMV, в IL-2-конструкцию (у 3'-конца) были введены уникальные Not1- и Sa11-сайты, а в IL-7-конструкцию был введен уникальный Xot1-сайт. Генерирование гибрида IL-2- и IL-7-PCP-продуктов с полной ΔSac11-cγ1-областью осуществляли путем PCR-рекомбинации. Полученный BamH1/Not1-фрагмент ΔSac11-cγ'-CH2-IL-2 субклонировали в SK+, содержащий вариабельную область тяжелой цепи MAb 425. Sac11/Xba1-фрагмент ΔSa11-CH-2-IL-7 субклонировали в вектор SK+, содержащий вариабельную область тяжелой цепи MAb 425 и Sac11-cγ1-область до Sa11-сайта. В результате этой процедуры были генерированы полные MAb425-CH2-IL-2- и IL-7-гибридные гены, соответственно. Аналогичным образом был генерирован полный MAb 425-CH3-IL-2-гибридный ген за тем лишь исключением, что ΔSa11-c γ1 был амплифицирован из уникального Sac11-сайта в качестве 5'-конца. Sac11/Pst/-фрагмент MAb 425-CH2-IL-2 в SK+, содержащем CH2-IL-2-гибрид, затем заменяли Sac11/Pst-фрагментом, содержащим CH3-IL-2-гибрид. После этого полные MAb 425-гибридные гены клонировали в вектор pHCMV для экспрессии в аукариотических клетках.
Экспрессия иммуноконъюгатов.
Введение векторных конструкций в хозяйские клетки для экспрессии моновалентного иммуноконъюгата, содержащего лишь CH1-домен, или дивалентных иммуноконъюгатов, содержащих CH2-и CH2- плюс CH3-домены, может быть осуществлено путем электропорации, методами с использованием DEAE-декстрана, кальцийфосфата, липофектина, или путем слияния протопластов. При этом, может быть использован любой тип клетки-хозяина, при условии, что рекомбинантные ДНК-последовательности, кодирующие иммуноконъюгат и соответствующую легкую цепь, правильно транскрибируются в мРНК в клетках этого типа. Такими клетками-хозяевами могут быть клетки мышиной миеломы, которые не продуцируют иммуноглобулин, например, Sp2/0-AG14 (ATCC CPL 1581), P3X63Ag8.653 (ATCC CPL 1580), или клетки хомячка, такие, как CHO-K1 (ATCC CCL 61), или CHO/dhF - (ATCC CPL 9096), или ВНК-21 (ATCC CCL 10). Для кратковременной экспрессии могут быть использованы COS-1 (ATCC CPL 1650) или COS-7 (ATCC CPL 1651).
Кратковременная экспрессия иммуноконъюгатов.
Экспрессирующий вектор pHCMV содержит сайт инициации репликации обезьяньего вируса 40 (SV 40). Клеточная линия COS-7 происходит от обезьяньей клеточной линии CV-1, которая была трансформирована вирусом SV40, не содержащим точки инициации репликации. Поэтому, для улучшения продуцирования иммуноконъюгатов, амплифицировали плазмиды, содержащие точку инициации репликации вируса SV40. Через 72 часа, супернатанты собирали и анализировали на связывание с EGF-рецептором и на концентрацию цитокина.
Постоянная экспрессия иммуноконъюгатов.
Векторы, содержащие рекомбинантные конструкции, и предназначенные для экспрессии иммуноконъюгатов, вводили в соответствующие клетки-хозяева. Конструкции, содержащие тяжелую и легкую цепи могут быть введены в тот же самый вектор или в разные векторы. В последнем случае оба вектора могут нести идентичные селективные маркеры, такие, как резистентность к неомицину, или dhFr, либо два различных селективных маркера для отбора на присутствие этих векторов. Отбор на dhFR-маркер может быть осуществлен лишь в dhFr-отрицательных клеточных линиях, таких, как CHO/dhFr. Клоны анализировали на экспрессию иммуноконъюгатов с помощью EGFP-специфического анализа ELISA. Отобранные клоны подвергали дополнительной очистке путем клонирования методом серийных разведений.
Конструирование векторов для экспрессии MAb 425-CH1-цитокин-гибридного белка в прокариотах.
ДНК-последовательности, кодирующие легкую цепь MAb 425 и Fd-фрагмент тяжелой цепи, вводили в сайт множественного клонирования вектора pSWl. Перед последовательностью, кодирующей зрелую легкую цепь, и последовательностью, кодирующей зрелую тяжелую цепь, находился лидерный пептид pelB-бактериального гена. Последовательность, кодирующая тяжелую цепь, содержала 3'Ncol-сайт. Цитокин-кодирующие кДНК были модифицированы посредством PCR для введения рестрикционных Ncol (5'-конец) и Not (3'-конец)-сайтов. Гены цитокина сливали с сохранением рамки считывания непосредственно с CH1-доменом тяжелой цепи. Праймеры, используемые в этих экспериментах. Систематизированы в таблице II.
Эти векторы способны к эффективной экспрессии функциональных FAb-цитоксин-гибридных белков в E.coli. Белок-гибрид, содержащий легкую и тяжелую цепь и цитокин, локализован на дицистронной мРНК, находящейся под контролем индуцибельного Iac-промотора (Skerra и Pluckthun Science 242: 1038 - 104, 1988). Поэтому, экспрессия FAb-гибридного белка может быть индуцирована в соответствии с требуемыми условиями культивирования. Трансляция обоих белков с дицистронной мРНК способствует синтезу равных количеств Fd-IL-2-гибридного белка и легкой цепи, повышая, тем самым, вероятность правильной сборки функциональных Fab-гибридных белков. Эти два полипептида выделяются в периплазму E. coli, где происходит укладка, образование дисульфидных связей и сборка функционального FAb 425 CH1-гибридного белка. При продолжительном культивировании бактерий, белки выделяются в культуральную среду.
Экспрессия MAb 425-CH1-IL-2-гибридного белка в E. coli и его очистка.
Штаммы E. coli, подходящие для экспрессии белка, трансформировали экспрессирующими плазмидами. Клетки культивировали до уровня оптической плотности ОП580 = 0,5, и индуцировали с использованием IPTG (1 мМ). Эти клетки культивировали в течение ночи, после чего супернатанты и клетки собирали. Супернатант наносили антиидиотипическую колонку против MAb 425. Эту колонку промывали забуференным фосфатом 0,5 м NaCl, и связанные белки элюировали 100 мМ глицина 0,5 М NaCl, pH 2,5. Элюат сразу нейтрализовали 2,5 М - Трисом, pH 8. Фракции, содержащие MAb 425-CH1-IL-2, объединяли, концентрировали и диализовали против PBS.
Связывающие свойства MAb 425-иммуноконъюгатов.
Способность MAb 425 к связыванию определяли с помощью EGF-рецептор-специфического ELISA-анализа. В общих чертах, эту процедуру проводили следующим образом: планшеты для микротитрования покрывали (4oC, в течение ночи) очищенным EGF-рецептором, и промывали для удаления несвязанного белка. Затем планшеты инкубировали с супернатантами, содержащими гибридный белок, или с супернатантами, содержащими неконъюгированные MAb, или Fab-фрагменты, или белки в очищенной форме. Планшеты промывали и инкубировали с козьими античеловечьими IgG и IgM (тяжелая и легкая цепь), конъюгированными с пероксидазой. Затем добавляли субстрат, и путем измерения при 450 нм (фиг. 2) определяли количество связанного EGFR-специфического белка. Концентрацию цитокина определяли с помощью коммерческого набора для ELISA, специфического для каждого цитокина, в соответствии с инструкциями изготовителей (данные не приводятся).
Пролиферация лейкоцитов.
Опухолеспецифические эффекторные клетки.
Одноядерные лейкоциты периферической крови и опухолеинфильтрующие лимфоциты (TIL), полученные от пациентов, страдающих меланомой, культивировали вместе с облученными (30Gy) аутологичными опухолевыми клетками в среде RPMI 1640 (1% пенициллин/стрептомицин, 1% глутамин, 20 мМ Hepes, 50 мМ β-меркаптоэтанола, 10% околоплодной сыворотки теленка, 20 ед./мл IL-2, 20 ед. /мл IL-4). Иммунореактивные клетки были слегка стимулированы аутологичными опухолевыми клетками.
Оценка пролиферации.
Цитокин-опосредованная пролиферация может быть определена с помощью:
(a) соответствующих индикаторных клеточных линий. В случае IL-2, может быть использована IL-2-зависимая мышиная клеточная линия CTLL-2 (ATCC TIB 241) (фиг. 3A) или другие IL-2 зависимые клеточные линии;
(b) in vitro - развивающихся опухолеинфильтрующих лимфоцитов (фиг. 3B);
(c) свежевыделенных одноядерных клеток, предварительно обработанных РНА-М (Sigma). В этом случае, эксперимент проводили с MAb 425-IL-4-гибридными белками (фиг. 4).
(a) соответствующих индикаторных клеточных линий. В случае IL-2, может быть использована IL-2-зависимая мышиная клеточная линия CTLL-2 (ATCC TIB 241) (фиг. 3A) или другие IL-2 зависимые клеточные линии;
(b) in vitro - развивающихся опухолеинфильтрующих лимфоцитов (фиг. 3B);
(c) свежевыделенных одноядерных клеток, предварительно обработанных РНА-М (Sigma). В этом случае, эксперимент проводили с MAb 425-IL-4-гибридными белками (фиг. 4).
Свежевыделенные лейкоциты периферической крови человека, полученные от здоровых доноров или от пациентов с меланомой, либо TIL, полученные от пациентов с меланомой, культивировали in vitro (см. выше). Для оценки гибридных белков, лимфоциты культивировали в 96-луночных плоскодонных планшетах для микротитрования при плотности 1 • 105 клеток на лунку в конечном объеме 200 мкл. Затем клетки инкубировали с супернатантами, содержащими гибридный белок, или с супернатантами, содержащими неконъюгированные MAb, или с супернатантами, содержащими неконъюгированные цитокины, или белки в очищенной форме. Через 72 часа, клетки подвергали импульсному мечению с использованием 0,5 мкКи 3H-тимидина. Введение радиоактивной метки определяли после ночного инкубирования путем β-счета подложки в жидком сцинтилляторе. Результаты выражали как среднее число импульсов в минуту.
Определение цитотоксичности MAb 425-TNFα-иммуноконъюгатов
Определение TNFα-опосредованной цитотоксичности
Известно, что TNFα обладает прямой цитотоксичностью в отношении некоторых клеток, включая, ряд опухолевых клеток. Непосредственное цитотоксическое действие TNFα может быть определено с использованием мышиных фибробластов L929 (ATCC CCL 1)/ или EH1 164 (ATCC CPL 1751), или других TNFα-чувствительных клеточных линий, описанных в литературе (Flick & Gifford 1984, J. Immunol Meth 68 : 167). На фиг. 4 цитотоксическое действие MAb 425 CH1-TNFα и MAb 425 CH2-TNFα проиллюстрировано на клетках WEH1 164, используемых в качестве индикаторной клеточной линии.
Определение TNFα-опосредованной цитотоксичности
Известно, что TNFα обладает прямой цитотоксичностью в отношении некоторых клеток, включая, ряд опухолевых клеток. Непосредственное цитотоксическое действие TNFα может быть определено с использованием мышиных фибробластов L929 (ATCC CCL 1)/ или EH1 164 (ATCC CPL 1751), или других TNFα-чувствительных клеточных линий, описанных в литературе (Flick & Gifford 1984, J. Immunol Meth 68 : 167). На фиг. 4 цитотоксическое действие MAb 425 CH1-TNFα и MAb 425 CH2-TNFα проиллюстрировано на клетках WEH1 164, используемых в качестве индикаторной клеточной линии.
Определение TNFα-индуцированной цитотоксичности.
В качестве клеток-мишеней для цитолиза, опосредованного аллогенными опухолеинфильтрующими лимфоцитами или свежевыделенными лимфоцитами периферической крови человека, полученными от пациентов с меланомой или от здоровых доноров, могут быть использованы EGF-рецептор-положительные клеточные линии, такие, как в высокой степени инвазивная и спонтанно метастатическая EGFR-положительная клеточная линия С8161 (Welch и др., 1991, Int. J. Cancer 47: 227, и работы, цитированные выше). Условия культивирования опухолевых клеток и TIL были описаны ранее (Shimizu и др., 1991, Cancer Res. 51: 6153).
In vitro - анализ на цитотоксичность осуществляли с использованием 51Cr-меченных опухолевых клеток-мишеней. Эти клетки-мишени подвергали мечению в течение 1 ч с использованием 51Cr (100 мкКИ / 107 клеток), а затем промывали в три стадии для удаления избыточного 51Cr. После этого клетки-мишени (2 • 103 клеток на лунку) инкубировали вместе с эффекторными клетками в 96-луночных планшетах для микротитрования в присутствии супернатантов, содержащих слитый белок, или супернатантов, содержащих неконъюгированные MAb, или супернатантов, содержащих неконъюгированные цитокины (контроль), или белков в очищенной форме. Супернатанты или очищенные белки серийно разводили в культуральной среде и анализировали в трех дубликатах. Планшеты инкубировали в течение 4 ч при 37oC в атмосфере 10% CO2. Затем клетки удаляли путем центрифугирования, а радиоактивность в супернатантах оценивали с помощью γ-счетчика. Процент специфического 51Cr-высвобождения вычисляли по следующей формуле:
Терапевтическое использование иммуноконъюгатов.
Терапевтическое использование иммуноконъюгатов.
Иммуноконъюгаты настоящего изобретения могут быть введен человеку для проведения терапии. Поэтому, целью настоящего изобретения является получение фармацевтических композиций, которые, в качестве активного ингредиента, содержат, по крайней мере, один слитый белок, определенный выше или в формуле изобретения, в сочетании с одним или несколькими фармацевтическими приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями.
Иммуноконъюгаты настоящего изобретения, в основном, вводят путем внутривенной инъекции или другими парентеральными способами. Дозы вводимых иммуноконъюгатов должны быть достаточными для получения желаемого эффекта подавления опухоли и лизиса опухолевых клеток. Диапазон вводимых доз зависит от возраста, состояния здоровья, пола и степени тяжести заболевания пациента, и может варьироваться от 0,1 до 200,0 мг/кг, а предпочтительно от 0,1 до 100,0 мг/кг на одну или несколько доз в день, которые могут быть введены в течение одного или нескольких дней.
Препараты для парентерального введения могут быть изготовлены в виде стерильных водных или безводных растворов, суспензий и эмульсий. Примерами безводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие, как оливковое масло, инъецируемые органические сложные эфиры, такие, как этилолеат, и другие растворители, которые обычно используются специалистами в этих целях. Иммуноконъюгаты настоящего изобретения могут быть введены в композиции, содержащие физиологически приемлемый носитель. Примерами таких носителей являются физиологический раствор, PBS, раствор Рингера, или лактатсодержащий раствор Рингера. В указанных фармацевтических препаратах могут также присутствовать консерванты, и другие добавки, такие, как антибиотики, антиоксиданты, и хелатообразующие агенты.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть использованы для лечения любых видов опухолей, включая меланомы, глиомы, и карциномы, а также опухоли крови и твердые опухоли.
Claims (13)
1. Иммуноконьюгат, содержащий моноклональное антитело или его фрагмент и биологически активный лиганд, соединенный с антителом или его фрагментом, причем антитело или его фрагмент направлены против опухолевой клетки, несущей антигенный эпитон рецептора эпидермального фактора роста, а в качестве биологически активного лиганда использован цитокин, обладающий способностью к специфическому in situ - лизису опухолевой клетки или к возбуждению опухолеспецифического иммунного ответа.
2. Иммуноконьюгат по п. 1, отличающийся тем, что цитокин выбран из группы, содержащей TNFα, JL-2, JL-4 и JL-7.
3. Иммуноконьюгат по п.1 или 2, отличающийся тем, что в качестве антитела использован Fab-фрагмент или F(ab')2-фрагмент, содержащий вариабельную область тяжелой цепи антитела, СН1-домен постоянной области и соответствующую легкую цепь.
4. Иммуноконьюгат по п.1 или 2, отличающийся тем, что использован фрагмент антитела, содержащий вариабельную область тяжелой цепи антитела, СН1- и СН2-домены постоянной области и соответствующую легкую цепь.
5. Иммуноконьюгат по п.1 или 2, отличающийся тем, что использован фрагмент, включающий вариабельную область тяжелой цепи антитела, СН1-, СН2- и СН3-домены постоянной области и соответствующую легкую цепь.
6. Иммуноконьюгат по любому из пп.1 - 5, отличающийся тем, что антитело или его фрагмент происходят из мышиного гуманизированного или химерного МАв 425.
7. Иммуноконьюгат по п.6, отличающийся тем, что он выбран из группы, содержащей МАв 425-СН1-TNFα, МАв 425-СН2-TNFα,, МАв 425-СН3-TNFα, МАв 425-СН1-JL-2, МАв 425-СН2-JL-2 и МАв 425-СН3-JL-2.
8. Иммуноконьюгат по любому из пп.1 - 7, отличающийся тем, что его используют в качестве противоопухолевого препарата.
9. Способ получения иммуноконьюгата по любому из пп.1 - 7, включающий слияние ДНК-последовательности, кодирующей антитело или фрагмент антитела, с ДНК-последовательностью, кодирующей биологически активный лиганд, введение полученной конструкции в вектор экспрессии, введение вектора экспрессии в хозяйстве клетки и культивирование указанных клеток в питательной среде с экспрессией слитого белка, отличающийся тем, что используют антитело или фрагмент антитела, направленные на опухолевые клетки, содержащие детерминанту рецептора эпидермального фактора роста, а в качестве биологически активного лиганда используют цитокин, способный специфически лизировать опухолевые клетки in situ или индуцировать опухолеспецифический ответ.
10. Способ по п.8, отличающийся тем, что слияние ДНК-последовательностей, кодирующих антитело или его фрагмент и биологически активный лиганд, осуществляют на одноцепочечной ДНК-последовательности, необходимой для слияния.
11. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что осуществляют экспрессию иммуноконьюгатов по п.3 в E.coli, используемой в качестве хозяина.
12. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что осуществляют экспрессию иммуноконьюгатов по п.3 или 4 в эукартиотическом хозяине.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая активный компонент и физиологически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента использован иммуноконьюгат по любому из пп.1 - 7.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93120865.6 | 1993-12-24 | ||
| EP93120865 | 1993-12-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94045281A RU94045281A (ru) | 1996-11-10 |
| RU2129018C1 true RU2129018C1 (ru) | 1999-04-20 |
Family
ID=8213530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94045281A RU2129018C1 (ru) | 1993-12-24 | 1994-12-23 | Иммуноконьюгат, способ получения иммуноконьюгата и фармацевтическая композиция |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6979726B1 (ru) |
| EP (1) | EP0659439B1 (ru) |
| JP (2) | JPH07223968A (ru) |
| KR (1) | KR950016781A (ru) |
| AT (1) | ATE207366T1 (ru) |
| AU (1) | AU688817B2 (ru) |
| CA (1) | CA2138928C (ru) |
| CZ (1) | CZ289099B6 (ru) |
| DE (1) | DE69428764T2 (ru) |
| DK (1) | DK0659439T3 (ru) |
| ES (1) | ES2166368T3 (ru) |
| HU (1) | HU219680B (ru) |
| NO (1) | NO315903B1 (ru) |
| PL (1) | PL178793B1 (ru) |
| PT (1) | PT659439E (ru) |
| RU (1) | RU2129018C1 (ru) |
| SK (1) | SK283494B6 (ru) |
| UA (1) | UA41888C2 (ru) |
| ZA (1) | ZA9410282B (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2451521C2 (ru) * | 2006-06-16 | 2012-05-27 | Онкотерапи Сайенс, Инк. | Sparc-производные антигенные пептиды отторжения опухоли и лекарственные средства, содержащие их |
| RU2663795C2 (ru) * | 2013-06-26 | 2018-08-09 | Шанхай Цзюньши Биосайенсиз Инк. | Антитело к pd-1 и его применение |
| RU2701341C2 (ru) * | 2014-04-03 | 2019-09-25 | Селлектис | Cd33-специфические химерные антигенные рецепторы для иммунотерапии рака |
| RU2746021C2 (ru) * | 2015-02-18 | 2021-04-06 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Иммуноконъюгаты для специфической индукции цитотоксичности т-клеток против клеток-мишеней |
Families Citing this family (165)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU22545A1 (es) * | 1994-11-18 | 1999-03-31 | Centro Inmunologia Molecular | Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico |
| AU4208897A (en) * | 1996-09-16 | 1998-04-02 | Merck Patent Gmbh | Oligocistronic expression system for the production of heteromeric proteins |
| EP1189641B1 (en) | 1999-06-25 | 2009-07-29 | Genentech, Inc. | HUMANIZED ANTI-ErbB2 ANTIBODIES AND TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES |
| PT1585966E (pt) | 2002-07-15 | 2012-02-20 | Hoffmann La Roche | Tratamento de cancro com o anticorpo anti-erbb2 rhumab 2c4 |
| KR101520209B1 (ko) | 2003-11-06 | 2015-05-13 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물 |
| CA2551915C (en) | 2003-12-30 | 2015-06-23 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung | Il-7 fusion proteins |
| US8017321B2 (en) | 2004-01-23 | 2011-09-13 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Gefitinib sensitivity-related gene expression and products and methods related thereto |
| JP4969440B2 (ja) | 2004-04-08 | 2012-07-04 | デビッド， ビー． エイガス， | 疼痛治療のためのＥｒｂＢアンタゴニスト |
| CA2567293C (en) | 2004-05-27 | 2017-05-16 | The Regents Of The University Of Colorado | Methods for prediction of clinical outcome to epidermal growth factor receptor inhibitors by cancer patients |
| NZ551180A (en) | 2004-06-01 | 2009-10-30 | Genentech Inc | Antibody drug conjugates and methods |
| EP1791565B1 (en) | 2004-09-23 | 2016-04-20 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
| JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
| EP3698807A1 (en) | 2005-01-21 | 2020-08-26 | Genentech, Inc. | Fixed dosing of her antibodies |
| AU2006216732C1 (en) | 2005-02-23 | 2017-07-20 | Genentech, Inc. | Extending time to disease progression or survival in cancer patients using a HER dimerization inhibitor |
| AR053272A1 (es) | 2005-05-11 | 2007-04-25 | Hoffmann La Roche | Determinacion de responsivos a la quimioterapia |
| JP2009521912A (ja) | 2005-12-30 | 2009-06-11 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 低減された免疫原性を有する抗ｃｄ１９抗体 |
| PT1966238E (pt) | 2005-12-30 | 2012-07-31 | Merck Patent Gmbh | Uso de hsp70 como um regulador de atividade enzimática |
| CA2662236A1 (en) | 2006-09-12 | 2008-03-20 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for the diagnosis and treatment of cancer |
| WO2008109440A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Genentech, Inc. | Predicting response to a her dimerisation inhibitor based on low her3 expression |
| WO2008154249A2 (en) | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Genentech, Inc. | Gene expression markers of tumor resistance to her2 inhibitor treatment |
| TWI472339B (zh) | 2008-01-30 | 2015-02-11 | Genentech Inc | 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物 |
| ES2572728T3 (es) | 2009-03-20 | 2016-06-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos anti-HER biespecíficos |
| US9345661B2 (en) | 2009-07-31 | 2016-05-24 | Genentech, Inc. | Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof |
| JP5764127B2 (ja) * | 2009-08-17 | 2015-08-12 | ロシュ グリクアート アーゲー | 標的化イムノコンジュゲート |
| EP2507381A4 (en) | 2009-12-04 | 2016-07-20 | Hoffmann La Roche | PLURISPECIFIC ANTIBODIES, ANTIBODY ANALOGUES, COMPOSITIONS AND METHODS |
| CN102712640A (zh) | 2010-01-12 | 2012-10-03 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 三环杂环化合物、其组合物和应用方法 |
| JP5981853B2 (ja) | 2010-02-18 | 2016-08-31 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | ニューレグリンアンタゴニスト及び癌の治療におけるそれらの使用 |
| US8617557B2 (en) | 2010-03-12 | 2013-12-31 | The Regents Of The University Of California | Antibody fusion with IL-12 proteins with disrupted heparin-binding activity |
| EP2547338A2 (en) | 2010-03-17 | 2013-01-23 | F. Hoffmann-La Roche AG | Imidazopyridine compounds, compositions and methods of use |
| MX2012011887A (es) | 2010-04-16 | 2012-11-30 | Genentech Inc | Foxo 3a como biomarcador predictivo para la eficacia del inhibidor de la via de quinasa pi3k/akt. |
| WO2011146568A1 (en) | 2010-05-19 | 2011-11-24 | Genentech, Inc. | Predicting response to a her inhibitor |
| SG10201408229WA (en) | 2010-08-31 | 2015-02-27 | Genentech Inc | Biomarkers and methods of treatment |
| BR112013006016A2 (pt) | 2010-09-15 | 2016-06-07 | Hoffmann La Roche | compostos de azabenzotiazol, composições e métodos de uso |
| UY33679A (es) | 2010-10-22 | 2012-03-30 | Esbatech | Anticuerpos estables y solubles |
| EP2632947A4 (en) | 2010-10-29 | 2015-03-18 | Immunogen Inc | NON-ANTAGONIST MOLECULES BINDING TO THE EGF RECEPTOR AND IMMUNOCONJUGATES THEREOF |
| CN103298489A (zh) | 2010-10-29 | 2013-09-11 | 伊缪诺金公司 | 新型egfr结合分子及其免疫偶联物 |
| US9309322B2 (en) | 2010-11-12 | 2016-04-12 | Scott & White Healthcare (Swh) | Antibodies to tumor endothelial marker 8 |
| WO2012066061A1 (en) | 2010-11-19 | 2012-05-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pyrazolopyridines and pyrazolopyridines and their use as tyk2 inhibitors |
| WO2012085176A1 (en) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tricyclic pyrazinone compounds, compositions and methods of use thereof as janus kinase inhibitors |
| WO2013007765A1 (en) | 2011-07-13 | 2013-01-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fused tricyclic compounds for use as inhibitors of janus kinases |
| WO2013007768A1 (en) | 2011-07-13 | 2013-01-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Tricyclic heterocyclic compounds, compositions and methods of use thereof as jak inhibitors |
| CN103889976A (zh) | 2011-08-12 | 2014-06-25 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 吲唑化合物、组合物及使用方法 |
| MX2014001766A (es) | 2011-08-17 | 2014-05-01 | Genentech Inc | Anticuerpos de neuregulina y sus usos. |
| CA2845409A1 (en) | 2011-09-20 | 2013-03-28 | Yingjie Lai | Imidazopyridine compounds, compositions and methods of use |
| KR20140105765A (ko) | 2011-11-21 | 2014-09-02 | 이뮤노젠 아이엔씨 | EGfr 항체 세포독성제 접합체에 의한 EGfr 치료에 내성을 나타내는 종양의 치료 방법 |
| CA2857114A1 (en) | 2011-11-30 | 2013-06-06 | Genentech, Inc. | Erbb3 mutations in cancer |
| JP2015514710A (ja) | 2012-03-27 | 2015-05-21 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | Ｈｅｒ３阻害剤に関する診断及び治療 |
| JP2016509045A (ja) | 2013-02-22 | 2016-03-24 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | がんを治療し、薬剤耐性を防止する方法 |
| US9925240B2 (en) | 2013-03-06 | 2018-03-27 | Genentech, Inc. | Methods of treating and preventing cancer drug resistance |
| CN105980386B (zh) | 2013-03-13 | 2021-08-13 | 基因泰克公司 | 吡唑并化合物及其用途 |
| EP2968540A2 (en) | 2013-03-14 | 2016-01-20 | Genentech, Inc. | Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use |
| CA2905070A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance |
| MX2015011899A (es) | 2013-03-15 | 2016-05-05 | Genentech Inc | Metodos para el tratamiento de cáncer y prevención de resistencia a los fármacos para el cáncer. |
| SI2968588T1 (sl) * | 2013-03-15 | 2019-05-31 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Formulacije konjugatov protitelo proti-EGFR zdravilo |
| WO2015035062A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-12 | Genentech, Inc. | Antiproliferative compounds |
| TW201605857A (zh) | 2013-10-03 | 2016-02-16 | 赫孚孟拉羅股份公司 | Ｃｄｋ８之醫療性抑制劑及其用途 |
| MX2016004802A (es) | 2013-10-18 | 2016-07-18 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-r-espondina (anti-rspo) y metodos de uso. |
| EP3083692B1 (en) | 2013-12-17 | 2020-02-19 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Methods of treating her2-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-her2 antibodies |
| CA2934028A1 (en) | 2013-12-17 | 2015-06-25 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
| BR112016021383A2 (pt) | 2014-03-24 | 2017-10-03 | Genentech Inc | Método para identificar um paciente com câncer que é susceptível ou menos susceptível a responder ao tratamento com um antagonista de cmet, método para identificar um paciente apresentando câncer previamente tratado, método para determinar a expressão do biomarcador hgf, antagonista anti-c-met e seu uso, kit de diagnóstico e seu método de preparo |
| EP3632934A1 (en) | 2014-03-31 | 2020-04-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-ox40 antibodies and methods of use |
| WO2015153514A1 (en) | 2014-03-31 | 2015-10-08 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists |
| WO2016036873A1 (en) | 2014-09-05 | 2016-03-10 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and uses thereof |
| EP3193866A1 (en) | 2014-09-19 | 2017-07-26 | Genentech, Inc. | Use of cbp/ep300 and bet inhibitors for treatment of cancer |
| EP3204379B1 (en) | 2014-10-10 | 2019-03-06 | Genentech, Inc. | Pyrrolidine amide compounds as histone demethylase inhibitors |
| CA2966523A1 (en) | 2014-11-03 | 2016-05-12 | Genentech, Inc. | Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof |
| CN114381521A (zh) | 2014-11-03 | 2022-04-22 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于ox40激动剂治疗的功效预测和评估的方法和生物标志物 |
| RU2017119428A (ru) | 2014-11-06 | 2018-12-06 | Дженентек, Инк. | Комбинированная терапия, включающая применение агонистов, связывающихся с ох40, и ингибиторов tigit |
| MA40943A (fr) | 2014-11-10 | 2017-09-19 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines |
| MA40940A (fr) | 2014-11-10 | 2017-09-19 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines |
| JP6639497B2 (ja) | 2014-11-10 | 2020-02-05 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | ブロモドメインインヒビターおよびその使用 |
| WO2016081384A1 (en) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
| EP3224258B1 (en) | 2014-11-27 | 2019-08-14 | Genentech, Inc. | 4,5,6,7-tetrahydro-1h-pyrazolo[4,3-c]pyridin-3-amine compounds as cbp and/or ep300 inhibitors |
| ES2764299T3 (es) | 2014-12-09 | 2020-06-02 | Inst Nat Sante Rech Med | Anticuerpos monoclonales humanos contra AXL |
| RU2710735C2 (ru) | 2014-12-23 | 2020-01-10 | Дженентек, Инк. | Композиции и способы лечения и диагностики резистентного к химиотерапии рака |
| EP3240908A2 (en) | 2014-12-30 | 2017-11-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods and compositions for prognosis and treatment of cancers |
| CN107406429B (zh) | 2015-01-09 | 2021-07-06 | 基因泰克公司 | 哒嗪酮衍生物及其在治疗癌症中的用途 |
| CN107406414B (zh) | 2015-01-09 | 2022-04-19 | 基因泰克公司 | 作为用于治疗癌症的组蛋白脱甲基酶kdm2b的抑制剂的(哌啶-3-基)(萘-2-基)甲酮衍生物 |
| JP6889661B2 (ja) | 2015-01-09 | 2021-06-18 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | ４，５−ジヒドロイミダゾール誘導体およびヒストンジメチラーゼ（ｋｄｍ２ｂ）インヒビターとしてのその使用 |
| JP2018501322A (ja) | 2015-01-12 | 2018-01-18 | チルドレンズ メディカル センター コーポレーション | トール様受容体４アンタゴニストの炎症促進性およびアジュバント機能 |
| WO2016123391A1 (en) | 2015-01-29 | 2016-08-04 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and uses thereof |
| WO2016123387A1 (en) | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and uses thereof |
| MA41598A (fr) | 2015-02-25 | 2018-01-02 | Constellation Pharmaceuticals Inc | Composés thérapeutiques de pyridazine et leurs utilisations |
| WO2016135041A1 (en) | 2015-02-26 | 2016-09-01 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis |
| CN107709364A (zh) | 2015-04-07 | 2018-02-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有激动剂活性的抗原结合复合体及使用方法 |
| ES2835866T3 (es) | 2015-05-12 | 2021-06-23 | Hoffmann La Roche | Procedimientos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer |
| KR20180012753A (ko) | 2015-05-29 | 2018-02-06 | 제넨테크, 인크. | 암에 대한 치료 및 진단 방법 |
| CA2988420A1 (en) | 2015-06-08 | 2016-12-15 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists |
| EP3303399A1 (en) | 2015-06-08 | 2018-04-11 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies |
| MX2017016353A (es) | 2015-06-17 | 2018-05-02 | Genentech Inc | Metodos para tratar canceres de mama metastasicos o localmente avanzados con antagonistas de union al eje de pd-1 y taxanos. |
| DK3341376T3 (da) | 2015-08-26 | 2021-03-29 | Fundacion Del Sector Publico Estatal Centro Nac De Investigaciones Oncologicas Carlos Iii F S P Cnio | Kondenserede tricykliske forbindelser som proteinkinase-inhibitorer |
| CN113999249A (zh) | 2015-12-16 | 2022-02-01 | 基因泰克公司 | 用于制备三环pi3k抑制剂化合物的方法及用其治疗癌症的方法 |
| MX2018008347A (es) | 2016-01-08 | 2018-12-06 | Hoffmann La Roche | Metodos de tratamiento de canceres positivos para ace utilizando antagonistas de union a eje pd-1 y anticuerpos biespecificos anti-ace/anti-cd3. |
| CN109196121B (zh) | 2016-02-29 | 2022-01-04 | 基因泰克公司 | 用于癌症的治疗和诊断方法 |
| WO2017180864A1 (en) | 2016-04-14 | 2017-10-19 | Genentech, Inc. | Anti-rspo3 antibodies and methods of use |
| CN109072311A (zh) | 2016-04-15 | 2018-12-21 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的诊断和治疗方法 |
| ES2850428T3 (es) | 2016-04-15 | 2021-08-30 | Hoffmann La Roche | Procedimientos de monitorización y tratamiento del cáncer |
| JP2019515670A (ja) | 2016-04-15 | 2019-06-13 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | がんをモニタリングし治療するための方法 |
| EP3454863A1 (en) | 2016-05-10 | 2019-03-20 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Combinations therapies for the treatment of cancer |
| CN109476663B (zh) | 2016-05-24 | 2021-11-09 | 基因泰克公司 | 用于治疗癌症的吡唑并吡啶衍生物 |
| CN109476641B (zh) | 2016-05-24 | 2022-07-05 | 基因泰克公司 | Cbp/ep300的杂环抑制剂及其在治疗癌症中的用途 |
| EP3469099A1 (en) | 2016-06-08 | 2019-04-17 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
| EP3494139B1 (en) | 2016-08-05 | 2022-01-12 | F. Hoffmann-La Roche AG | Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use |
| JP7250674B2 (ja) | 2016-08-08 | 2023-04-03 | エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | がんの治療及び診断方法 |
| AU2017339517B2 (en) | 2016-10-06 | 2024-03-14 | Foundation Medicine, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
| EP3532091A2 (en) | 2016-10-29 | 2019-09-04 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Anti-mic antibidies and methods of use |
| TW201837467A (zh) | 2017-03-01 | 2018-10-16 | 美商建南德克公司 | 用於癌症之診斷及治療方法 |
| CA3056600A1 (en) * | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Ignacio Moraga GONZALEZ | Synthekine compositions and methods of use |
| AU2018250875A1 (en) | 2017-04-13 | 2019-10-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | An interleukin-2 immunoconjugate, a CD40 agonist, and optionally a PD-1 axis binding antagonist for use in methods of treating cancer |
| WO2019033043A2 (en) | 2017-08-11 | 2019-02-14 | Genentech, Inc. | ANTI-CD8 ANTIBODIES AND USES THEREOF |
| CA3073073A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
| JP2021502066A (ja) | 2017-11-06 | 2021-01-28 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | がんの診断及び療法 |
| WO2019165434A1 (en) | 2018-02-26 | 2019-08-29 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
| AU2019275404A1 (en) | 2018-05-21 | 2020-12-03 | Nanostring Technologies, Inc. | Molecular gene signatures and methods of using same |
| WO2019246557A1 (en) | 2018-06-23 | 2019-12-26 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor |
| CA3104147A1 (en) | 2018-07-18 | 2020-01-23 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent |
| JP2021535169A (ja) | 2018-09-03 | 2021-12-16 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Ｔｅａｄモジュレーターとして有用なカルボキサミドおよびスルホンアミド誘導体 |
| AU2019342099A1 (en) | 2018-09-19 | 2021-04-08 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer |
| EP4249917A3 (en) | 2018-09-21 | 2023-11-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic methods for triple-negative breast cancer |
| MX2021004348A (es) | 2018-10-18 | 2021-05-28 | Genentech Inc | Procedimientos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer de riñón sarcomatoide. |
| CN112166122A (zh) * | 2018-12-13 | 2021-01-01 | 丁邦 | 抗体-肿瘤坏死因子α融合蛋白及其制法和应用 |
| CN113396230A (zh) | 2019-02-08 | 2021-09-14 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 癌症的诊断和治疗方法 |
| CN113710706A (zh) | 2019-02-27 | 2021-11-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于抗tigit抗体和抗cd20抗体或抗cd38抗体治疗的给药 |
| JP2022522185A (ja) | 2019-02-27 | 2022-04-14 | エピアクシス セラピューティクス プロプライエタリー リミテッド | Ｔ細胞機能を評価して治療法に対する応答を予測するための方法および薬剤 |
| WO2020223233A1 (en) | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for colorectal cancer |
| AU2020270376A1 (en) | 2019-05-03 | 2021-10-07 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer with an anti-PD-L1 antibody |
| CN112300279A (zh) | 2019-07-26 | 2021-02-02 | 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 | 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物 |
| MX2022002738A (es) | 2019-09-04 | 2022-06-27 | Genentech Inc | Agentes de union a cd8 y uso de los mismos. |
| CR20220127A (es) | 2019-09-27 | 2022-05-27 | Genentech Inc | Administración de dosis para tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-tigit y anti-pd-l1 |
| US20230024096A1 (en) | 2019-10-29 | 2023-01-26 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bifunctional compounds for the treatment of cancer |
| US20220389103A1 (en) | 2019-11-06 | 2022-12-08 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers |
| CA3155989A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Jason Robert ZBIEG | Therapeutic compounds and methods of use |
| PE20221511A1 (es) | 2019-12-13 | 2022-10-04 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-ly6g6d y metodos de uso |
| AU2020408562A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-06-23 | Erasca, Inc. | Tricyclic pyridones and pyrimidones |
| WO2021194481A1 (en) | 2020-03-24 | 2021-09-30 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
| WO2021177980A1 (en) | 2020-03-06 | 2021-09-10 | Genentech, Inc. | Combination therapy for cancer comprising pd-1 axis binding antagonist and il6 antagonist |
| CN115698717A (zh) | 2020-04-03 | 2023-02-03 | 基因泰克公司 | 癌症的治疗和诊断方法 |
| EP4143345A1 (en) | 2020-04-28 | 2023-03-08 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy |
| EP3915576A1 (en) | 2020-05-28 | 2021-12-01 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Chimeric antigen receptors specific for p95her2 and uses thereof |
| KR20230025691A (ko) | 2020-06-16 | 2023-02-22 | 제넨테크, 인크. | 삼중 음성 유방암을 치료하기 위한 방법과 조성물 |
| EP4168118A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | Genentech, Inc. | Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists |
| CN115843335A (zh) | 2020-06-30 | 2023-03-24 | 国家医疗保健研究所 | 用于预测患有实体癌的患者在术前辅助治疗和根治性手术后复发和/或死亡风险的方法 |
| EP4172621A1 (en) | 2020-06-30 | 2023-05-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for predicting the risk of recurrence and/or death of patients suffering from a solid cancer after preoperative adjuvant therapies |
| EP3939999A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-19 | Fundación del Sector Público Estatal Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas Carlos III (F.S.P. CNIO) | Interleukin 11 receptor alpha subunit (il11ra) neutralizing antibodies and uses thereof |
| US11787775B2 (en) | 2020-07-24 | 2023-10-17 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and methods of use |
| JP2023536602A (ja) | 2020-08-03 | 2023-08-28 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | リンパ腫のための診断及び治療方法 |
| EP4196612A1 (en) | 2020-08-12 | 2023-06-21 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
| CN116406291A (zh) | 2020-10-05 | 2023-07-07 | 基因泰克公司 | 用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药 |
| US20230107642A1 (en) | 2020-12-18 | 2023-04-06 | Erasca, Inc. | Tricyclic pyridones and pyrimidones |
| PE20231505A1 (es) | 2021-02-12 | 2023-09-26 | Hoffmann La Roche | Derivados de tetrahidroazepina biciclicos para el tratamiento del cancer |
| AU2022280025A1 (en) | 2021-05-25 | 2023-12-07 | Erasca, Inc. | Sulfur-containing heteroaromatic tricyclic kras inhibitors |
| WO2022266206A1 (en) | 2021-06-16 | 2022-12-22 | Erasca, Inc. | Kras inhibitor conjugates |
| WO2023018699A1 (en) | 2021-08-10 | 2023-02-16 | Erasca, Inc. | Selective kras inhibitors |
| US20230203062A1 (en) | 2021-11-24 | 2023-06-29 | Genentech, Inc. | Therapeutic compounds and methods of use |
| WO2023097195A1 (en) | 2021-11-24 | 2023-06-01 | Genentech, Inc. | Therapeutic indazole compounds and methods of use in the treatment of cancer |
| EP4253418A1 (en) | 2022-03-29 | 2023-10-04 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Immune cells expressing chimeric antigen receptors and bispecific antibodies and uses thereof |
| WO2023191816A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| WO2023219613A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| WO2023240058A2 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for cancer |
| WO2024015897A1 (en) | 2022-07-13 | 2024-01-18 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| WO2024020432A1 (en) | 2022-07-19 | 2024-01-25 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
| WO2024033388A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
| WO2024033389A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
| WO2024033457A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives |
| WO2024033458A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bicyclic tetrahydroazepine derivatives |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5470571A (en) * | 1988-01-27 | 1995-11-28 | The Wistar Institute | Method of treating human EGF receptor-expressing gliomas using radiolabeled EGF receptor-specific MAB 425 |
| IE63847B1 (en) * | 1989-05-05 | 1995-06-14 | Res Dev Foundation | A novel antibody delivery system for biological response modifiers |
| CA2066428C (en) * | 1989-09-08 | 2000-11-28 | Bert Vogelstein | Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas |
| US5314995A (en) * | 1990-01-22 | 1994-05-24 | Oncogen | Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins |
| EP0574395B1 (en) * | 1990-11-09 | 2002-06-12 | GILLIES, Stephen D. | Cytokine immunoconjugates |
| JP3854306B2 (ja) * | 1991-03-06 | 2006-12-06 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | ヒト化及びキメラモノクローナル抗体 |
| JPH06509563A (ja) * | 1991-07-05 | 1994-10-27 | セラゲン・インコーポレイテッド | 炎症性関節炎の治療用の表皮細胞成長因子受容体を標的とする分子 |
| DK0586002T3 (da) * | 1992-08-18 | 2000-06-19 | Centro Inmunologia Molecular | Monoklonale antistoffer, som genkender epidermisvækstfaktor-receptoren, celler og fremgangsmåder heraf og præparater indeho |
| DK139193D0 (da) | 1993-09-24 | 1993-12-13 | Hartmann As Brdr | Rektangulaer aegbakke |
| PT699237E (pt) * | 1994-03-17 | 2003-07-31 | Merck Patent Gmbh | Fvs de cadeia anti-egfr e anticorpos anti-egfr |
-
1994
- 1994-12-14 AT AT94119712T patent/ATE207366T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 ES ES94119712T patent/ES2166368T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 PT PT94119712T patent/PT659439E/pt unknown
- 1994-12-14 EP EP94119712A patent/EP0659439B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 DE DE69428764T patent/DE69428764T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 DK DK94119712T patent/DK0659439T3/da active
- 1994-12-19 SK SK1562-94A patent/SK283494B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-12-20 AU AU81593/94A patent/AU688817B2/en not_active Ceased
- 1994-12-21 UA UA94129229A patent/UA41888C2/ru unknown
- 1994-12-22 ZA ZA9410282A patent/ZA9410282B/xx unknown
- 1994-12-22 CA CA002138928A patent/CA2138928C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-22 JP JP6320978A patent/JPH07223968A/ja active Pending
- 1994-12-22 PL PL94306474A patent/PL178793B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-12-22 NO NO19944980A patent/NO315903B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 KR KR1019940036168A patent/KR950016781A/ko not_active Application Discontinuation
- 1994-12-23 US US08/362,951 patent/US6979726B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-23 RU RU94045281A patent/RU2129018C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 HU HU9403784A patent/HU219680B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-27 CZ CZ19943306A patent/CZ289099B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-06-28 JP JP2006178409A patent/JP2006298936A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2451521C2 (ru) * | 2006-06-16 | 2012-05-27 | Онкотерапи Сайенс, Инк. | Sparc-производные антигенные пептиды отторжения опухоли и лекарственные средства, содержащие их |
| RU2663795C2 (ru) * | 2013-06-26 | 2018-08-09 | Шанхай Цзюньши Биосайенсиз Инк. | Антитело к pd-1 и его применение |
| RU2701341C2 (ru) * | 2014-04-03 | 2019-09-25 | Селлектис | Cd33-специфические химерные антигенные рецепторы для иммунотерапии рака |
| RU2746021C2 (ru) * | 2015-02-18 | 2021-04-06 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Иммуноконъюгаты для специфической индукции цитотоксичности т-клеток против клеток-мишеней |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69428764D1 (de) | 2001-11-29 |
| NO944980L (no) | 1995-06-26 |
| UA41888C2 (ru) | 2001-10-15 |
| EP0659439A3 (en) | 1996-12-04 |
| DE69428764T2 (de) | 2002-06-20 |
| SK156294A3 (en) | 1995-07-11 |
| ES2166368T3 (es) | 2002-04-16 |
| RU94045281A (ru) | 1996-11-10 |
| CZ330694A3 (en) | 1995-10-18 |
| US6979726B1 (en) | 2005-12-27 |
| PT659439E (pt) | 2002-04-29 |
| KR950016781A (ko) | 1995-07-20 |
| CZ289099B6 (cs) | 2001-11-14 |
| CA2138928C (en) | 2009-02-17 |
| AU688817B2 (en) | 1998-03-19 |
| PL178793B1 (pl) | 2000-06-30 |
| CA2138928A1 (en) | 1995-06-25 |
| ATE207366T1 (de) | 2001-11-15 |
| EP0659439A2 (en) | 1995-06-28 |
| AU8159394A (en) | 1995-06-29 |
| NO315903B1 (no) | 2003-11-10 |
| PL306474A1 (en) | 1995-06-26 |
| HU9403784D0 (en) | 1995-02-28 |
| NO944980D0 (no) | 1994-12-22 |
| SK283494B6 (sk) | 2003-08-05 |
| HUT70471A (en) | 1995-10-30 |
| JP2006298936A (ja) | 2006-11-02 |
| HU219680B (hu) | 2001-06-28 |
| DK0659439T3 (da) | 2002-01-14 |
| EP0659439B1 (en) | 2001-10-24 |
| ZA9410282B (en) | 1995-08-29 |
| JPH07223968A (ja) | 1995-08-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2129018C1 (ru) | Иммуноконьюгат, способ получения иммуноконьюгата и фармацевтическая композиция | |
| AU702184B2 (en) | Immunoconjugates II | |
| RU2263118C2 (ru) | Комплексы антител с несколькими цитокинами | |
| Gillies et al. | Antibody-IL-12 fusion proteins are effective in SCID mouse models of prostate and colon carcinoma metastases | |
| EP0574395B1 (en) | Cytokine immunoconjugates | |
| JP6925431B2 (ja) | Ｉｌ２及びｔｎｆ突然変異体のイムノコンジュゲート | |
| JP2002511432A (ja) | 新脈管形成インヒビターの同時投与による抗体−サイトカイン融合タンパク質媒介性免疫応答の増強 | |
| CN1152877A (zh) | 一种修饰的超抗原和一种寻找靶物化合物的缀合物和该缀合物的用途 | |
| EP3660039A1 (en) | Il2 immunoconjugates | |
| EP1731531B1 (en) | Multiple cytokine-antibody complexes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101224 |