JP2018501322A - トール様受容体4アンタゴニストの炎症促進性およびアジュバント機能 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2015年1月12日に出願された米国特許仮出願第62/102,245号、発明の名称「Pro−Inflammatory and Adjuvant Functions of Toll−Like Receptor 4 Antagonists」に対する米国特許法第119条(e)に基づく優先権の利益を主張する国際特許出願である。この文献は、その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本研究は、国立衛生研究所国立アレルギー感染病研究所により授与されたグラント番号AI103082−01A1に基づく支援により行われた。連邦政府は、本発明にある権利を有する。
用語「oxPAPC」または「酸化PAPC」は、本明細書で使用される場合、1−パルミトイル−2−アラキドニル−sn−グリセロ−3−ホスホリルコリン(PAPC)の酸化により生成される脂質を指す。酸化により、断片化または全長のいずれかの酸素化sn−2残基を含む酸化リン脂質の混合物がもたらされる。十分に特徴付けられている酸化的断片化種は、オメガ−アルデヒド基またはオメガ−カルボキシル基を担持する五炭sn−2残基を含む。また、アラキドン酸残基の酸化は、エステル化イソプロスタンを含むリン脂質を生成する。oxPAPCは、oxPAPCに存在する他の酸化産物の中でも、HOdiA−PC種、KOdiA−PC種、HOOA−PC種、およびKOOA−PC種を含む。
自然免疫系は、古典的には、DCが、適応免疫を促進する炎症応答を開始するかまたは開始しないかのいずれかであるという、全か無かの様式で作用するとみなされてきた。したがって、DCにより発現されるTLRは、そうした細胞の免疫原能力決定に非常に重要であると考えられている。哺乳類免疫系は、微生物の検出、感染を封じ込める防御応答の活性化に関与する。このタスクの中心となるのは、樹状細胞であり、樹状細胞は、微生物を感知した後、T細胞活性化を促進する。樹状細胞は、あらゆる伝染の脅威を評価し、それに釣り合った応答を指図することができることが示唆されているが(Blander,J.M.(2014).Nat Rev Immunol 14,601−618;Vance,R.E.et al.,(2009)Cell host&microbe 6,10−21)、こうした免疫調節活性が生じ得る機序は不明である。
トール様受容体(TLR)は、昆虫とヒトとの間で進化的に保存されているI型膜貫通受容体である。これまで10個のTLR(TLR1〜10)が確立されている(Sabroe,I.et al.,(2003)Journal of Immunology 171(4):1630−5)。TLRファミリーのメンバーは、同じような細胞外および細胞内ドメインを有し、細胞外ドメインは、ロイシン豊富な反復配列を有することが示されており、細胞内ドメインは、インターロイキン1型受容体(IL−1R)の細胞内領域と類似している。TLR細胞は、免疫細胞および他の細胞(血管上皮細胞、脂肪細胞、心筋細胞、および腸上皮細胞を含む)で発現が異なる。TLRの細胞内ドメインは、その細胞質領域にIL−1Rドメインを同様に有するアダプタータンパク質Myd88と相互作用し、サイトカインのNF−KB活性化をもたらすことができる。このMyd88経路は、サイトカイン放出がTLR活性化により達成される1つの経路である。TLRは、抗原提示細胞(例えば樹状細胞、マクロファージ等)等の細胞タイプで主に発現される。1つのそのようなTLRは、自然免疫系の活性化に関与し、グラム陰性菌の成分であるリポポリサッカリド(LPS)を認識するTLR4である。TLR4は、リンパ球抗原96、Myd88(ミエロイド分化一次応答遺伝子88)、およびTOLLIP(トール相互作用タンパク質)と相互作用することが示されている。
本明細書にて、DC活性化の2つの状態を特定した。第1の活性化状態は、TLRリガンド等の微生物産物との遭遇により媒介された。こうしたリガンドは、TLRを活性化してサイトカインを放出し、共刺激分子を上方制御し、MHC媒介性抗原提示を促進した。これらは全て、T細胞活性化にとって重要だった。しかしながら、こうしたTLRリガンドは、病原体および非病原体に共通していたため、宿主に対する脅威の評価には使用することができない。DCの第2の状態は、「過剰活性」であると考えられ、微生物産物および組織損傷部位で豊富に存在していた酸化リン脂質との同時遭遇により媒介された。TLRリガンドおよび酸化脂質(例えば、oxPAPC)の一致検出は、古典的活性化状態により誘発される全ての活性を促進し、T細胞の強力な活性化因子であるIL−1βのインフラマゾーム媒介放出を誘導した。TLRリガンドもoxPAPCも単独では、IL−1β放出を誘導する能力を持たなかった、この観察は、自然免疫系が一致検出の原理を使用してDCの過剰活性状態を誘導するという正式な実験的証拠を提供した。
本発明のアジュバントを含む免疫原性組成物は、標的抗原に対する治療的または予防的免疫応答を対象に誘導するのに有効な量の選択免疫原が対象で産出されるように、任意の既知ワクチン形態、例えば、弱毒化ウイルス、タンパク質、核酸等のワクチンを使用して対象に投与することができる。対象は、ヒト対象であってもよく、または非ヒト対象であってもよい。動物対象としては、限定ではないが、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ(馬)、反芻動物(例えば、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ラクダ、アルパカ、ラマ、シカ)、ブタ、鳥類(例えば、ニワトリ、シチメンチョウ ウズラ)、げっ歯動物、およびキロドプテラ(chirodoptera)が挙げられる。対象は、限定ではないが、防御免疫応答の誘発、または他の目的のために収集および使用するための抗体(またはB細胞)の産生を含む、任意の目的で処置することができる。
ある実施形態では、本発明は、本明細書で特定されている免疫原およびアジュバント脂質を含む医薬組成物を提供する。免疫賦活組成物は、好適に製剤化され、そのような送達のために認識されている任意の手段により対象または細胞の環境へと導入することができる。
本明細書内で引用されている出願および特許の各々、ならびにそうした出願および特許の各々で引用されている各書類または文献(各付与特許の手続き中のもの;「出願引用書類」を含む)、ならびにそうした出願および特許のいずれかに対応しおよび/またはいずれかから優先権を主張するPCTおよび外国出願または特許の各々、ならびに出願引用書類の各々に引用または言及されている文献の各々は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。より一般的には、書類または文献が、本明細書内で、特許請求の範囲の前の文献リストまたは本明細書自体のいずれかに記載されており、これら書類もしくは文献の各々(「本明細書の引用文献」)ならびに本明細書の引用文献の各々で引用されている各書類または文献の各々(製造業者の仕様書、説明書等を全て含む)は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先するものとする。加えて、物質、方法、および例は、説明のために過ぎず、限定は意図されていない。
マウス系統および細胞培養
C57BL/6J(Jax 000664)、C57BL/6NJ(Jax 005304)、CD14 KO(Jax 003726)、カスパーゼ−1/−11 dKOマウス(Jax 016621)、TLR4突然変異体(C3H/HeJ、Jax 000659)およびTLR4突然変異体の野生型対照(C3H/HeSNJ、Jax 000661)を、Jackson Labs社から購入した。NLRP3 KOおよびASC KOマウスは、ハーバード公衆衛生大学院のT.Horng博士の好意により提供された。カスパーゼ−11 KOマウスは、ハーバード医学部大学院のJunying Yuan博士の好意により提供された。カスパーゼ−1シングルKOマウスは、Thirumala−Devi Kanneganti氏(セントジュード病院)の好意により提供された。DCを、IMDM(Gibco)、10%B16−GM−CSF由来上清、2μMの2−メルカプトエタノール、および10%FBS中で骨髄から分化させ、培養の6日後に使用した。DCの純度を、フローサイトメトリーにより評価したところ、通常は90%超だった。MΦを、DMEM(Gibco)、30%L929上清、および10%FBS中で骨髄から分化させた。不死化MΦを、10%L929上清および10%FBSで補完されたDMEM中で培養した。脾臓DCを、以前に記載のように精製した(Zanoni et al.,2012)。刺激の前に、培養細胞を洗浄し、10%FBSで補完されたDMEM中に、100μl最終容積中1×106細胞/mlの濃度で再播種した。全カスパーゼ阻害剤を使用した実験のために、インフラマソーム活性化刺激付加の前に、細胞を、zVADfmk(20μM)で30分間処理した。刺激投与時にシクロヘキシミド(50ng/ml)を添加した。DOTAPによる形質移入を、製造業者の説明書に従って実施した。手短に言えば、375ngのDOTAPを、FBSを含まない最終容積10μlのDMEM中5μgのLPSまたは10μgのoxPAPCに添加した。30分後、DOTAP/LPS複合体またはDOTAP/oxPAPC複合体を、培養に添加した。FuGENEを以前に記載されているように使用して(Kayagaki,N.et al.(2013)Science 341,1246−1249)、表示濃度のLPSおよびoxPAPCを形質移入した。
Qiashedder(Qiagen社)およびGeneJET RNA精製キット(Life Technologies社)を使用して、RNAを、細胞培養から単離した。精製したRNAの遺伝子発現を、TaqMan RNA−to−CT 1ステップキット(Applied Biosystems社)を使用して、CFX384リアルタイムサイクラー(Bio−rad社)で分析した。Life Technologies社から購入した、以下のものに特異的なプローブを用いた:viperin(Mm00491265_m1)、IFNb1(Mm00439552_s1)、IL6(Mm00446190_m1)、カスパーゼ−1(Mm00438023_m1)、カスパーゼ−11(Mm00432307_m1)、Nlrp3(Mm00840904_m1)、Asc(Mm00445747_g1)、TBP(Mm00446971_m1)、またはGAPDH(Mm99999915_g1)。Mouse Ready−SET−Go ELISAキット(eBioscience社)を使用して、IL−1β、IL−2、IL−17、IL−18、TNFα、およびIFNγのELISAを実施した。分泌サイトカインを測定するために、上清を収集し、遠心分離により清澄化し、−20℃で保管した。細胞結合サイトカインを以下のように測定した:96−ウエルプレートを遠心分離し、上清を廃棄した。250μlのPBSを、各ウエルに添加した。細胞を、−80℃で2回凍結解凍し、その後更なる分析のために−20℃で保管した。
大腸菌LPS(血清型O55:B5−TLRgrade(商標))をEnzo社から購入した。OxPAPCおよびPam3CSK4を、Invivogen社から購入した。酸化PAPE−N−ビオチン(ビオチン−oxPAPC)およびPEIPC中に富化されたoxPAPCを、以前に記載されているように生成した(Springstead、J.R.et al.,(2012)J Lipid Res 53,1304−1315)。KOdiA−PCおよびDMPCは、それぞれCayman Chemical社製およびAvanti Polar Lipids社製だった。以下の抗体を使用した:HA(Roche社;3F10)、MyD88(R&D社;AF3109)、アクチン(Sigma社;5441)、ASC(Millipore社、クローン2EI−7)、カスパーゼ−11(Biolegend社、クローンCas11.17D9)、カスパーゼ−3(Santa Cruz社、H−277)、viperin(Biolegend社)、phospho−Stat−1(Cell Signaling社、クローン58D6)。IRAK4抗体は、Shizuo Akira氏(大阪大学)から贈与された。フローサイトメトリーに基づくアッセイでは、フルオロフォア結合抗体を、以下のように使用した:PE抗TLR4(Biolegend社;クローンSa15−21)、PE/Cy7抗TLR4/MD2(Biolegend社;クローンMTS510)、FITC抗CD14(eBioscience社;クローンSa2−8)、APC抗CD14(ebioscience社;クローンSa−28)。PE抗MHCクラスII、およびAPC抗CD40抗体は、eBioscience社製だった。アネキシンVおよび7−AAD生存能染色液を、BioLegend社から購入した。不完全フロイントアジュバント(F5506)およびシクロヘキシミド(C1988)を、Sigma社から購入した。DOTAPをRoche社製から購入した。FuGENE 2000を、Promega社製だった。エンドトキシン非含有OVAを、Hyglos/Biovendor社から購入した。組換えIFNβは、R&D Systems社製だった。Pierce LDH細胞毒性アッセイキットを、Life Technologies社から購入した。
カスパーゼ−11に対するoxPAPCの直接結合を測定する研究では、タンパク質およびSPR分析を、記載のように実施した(Shi,J.,et al.,(2014b)Nature)。手短に言えば、全長組換え触媒性突然変異体カスパーゼ−11(C254A)およびカスパーゼ−11ΔN59(C254A)を、Sf−900(商標)II SFMで72時間28℃にて培養したP3バキュロウイルス感染SF−21昆虫細胞から精製した。細胞を、1%Triton X−100、50mM Tris−HCl(pH7.6)、300mM NaCl、50mMイミダゾール、および5mM 2−メルカプトエタノールを含有する溶解緩衝液で溶解した。Ni−NTAビーズ(Qiagen社)を使用して、Hisタグ付タンパク質を溶解物から精製した。タンパク質を、50mM Tris−HCl(pH7.6)、250mMイミダゾール、および300mM NaClを含有する溶出緩衝液でビーズから放出させた。イミダゾールを透析で除去した。タンパク質を、HiTrap QカラムおよびSuperdex G200カラム(GE Healthcare Life Sciences社製)で、更に精製した。
iMΦのS100画分を以下のように調製した。完全DMEM培地で培養したコンフルエントiBMDMを、EDTA(0.4mM)入りの氷冷PBSで回収した。その後、細胞を、完全プロテアーゼ阻害剤錠剤(Roche社製)で補完した均質化緩衝液(HB)(20mM HEPES/KOH、pH7.9、250mMスクロース、0.5mM EGTA)で1回洗浄した。細胞を、Wheaton(商標)Dounce Dura−Grind(商標)組織粉砕器で20回の加圧にかけることにより、機械的に溶解した。細胞溶解の程度は、トリパンブルー染色でモニターし、80%を超える細胞が溶解されたことを確認した。その後、粗溶解物を、4℃にて10分間800×gで遠心して、未破壊細胞および核成分を除去した。核除去後の上清を、4℃にて10分間13,000×gで収集および遠心して、大型細胞器官および膜を除去した。最後に、清澄化溶解物を、Beckman社製ポリカーボネート超遠心分離チューブ(343778)に移し、4℃にて1時間100,000×gで遠心して、残留膜成分を除去した。得られたS100上清(可溶性細胞質タンパク質を含有する)を、2mg/mLのタンパク質濃度で−80℃にて保管したか、またはビオチン化脂質により捕捉する内因性カスパーゼの供給源として使用した。1mgのS100上清を、15μgのビオチン−oxPAPCと共に、旋回装置で12〜16時間4℃にてインキュベートした。ストレプトアビジンアガロースレジン(Pierre,P.et al.,(1997)Nature 388,787−792)を使用し、旋回装置で1〜2時間4℃にて、ビオチン化oxPAPC(1反応当たり20μLベッド体積レジンを用いて)と結合した内因性タンパク質複合体を捕捉した。その後、レジンにより捕捉されたタンパク質複合体を、界面活性剤含有洗浄緩衝液(50mM Tris−HCl、pH7.5、150mM NaCl、10%グリセロール、1%NP−40)で4回洗浄し、65℃にて20分間、60μLのSDSローディング緩衝液と共にインキュベートすることにより更に溶出した。溶出液の3分の1を、SDS−PAGEで分離し、指定の抗体を使用して、ビオチン−oxPAPCにより保持された内因性カスパーゼを、ウエスタンブロッティングにより検出した。
脂質(LPS、oxPAPC、およびDMPC)を含むかまたは含まない5μM His−カスパーゼ−11を、Corning(登録商標)96ウエル半面黒色平底マイクロプレート中の50mM HEPES(pH7.5);10%(v/v)グリセロール;10mM DTT;1.0mM EDTA;0.2%(w/v)BSAを含有する反応緩衝液でのカスパーゼ活性アッセイに使用した。反応は、基質YEVD−AMCを10μMの終濃度で添加することにより開始させた。データは、455nmの自動カットオフフィルターと共に、385nmでの励起および460nmでの発光を使用して、SpectraMax M5eマルチモードマイクロプレートリーダ(Molecular Devices社)で収集した。
iMΦ、一次骨髄由来MΦ、および表示遺伝子型のDCまたは脾臓DC(0.5×106)を、37℃にて表示の時間にわたって大腸菌LPS、oxPAPC、または化学阻害剤で処理した。その後、細胞を、1mLの冷却PBSで洗浄し、氷上で20〜30分間適切な抗体で染色した。抗体の非特異的結合を低減するために、2%マウス血清またはラット血清をブロッキング試薬として使用した。その後、染色した細胞を、1mL冷却PBSで洗浄し、200μL PBSに再懸濁した。表面受容体の染色を、BD FACSCanto IIで分析した。未刺激細胞または刺激細胞に由来するCD14、TLR4の平均蛍光強度(MFI)を記録した。表示の時点での表面受容体染色パーセント(刺激細胞で測定されたMFI値の、未刺激細胞で測定されたMFI値に対する比)を、受容体エンドサイトーシスの効率を反映するようにプロットした。TLR4/MD−2二量体化の程度を測定するために、TLR4/MD2二量体のパーセントを、TLR4/MD−2単量体のパーセントを100%として算出した。TLR4/MD−2単量体のパーセントは、刺激細胞のMFI値(MTS510抗体染色で得られた)の、未刺激細胞のMFI値に対する比により決定した。細胞を、抗MHCクラスIIまたは抗CD40抗体で染色した。
ウエスタンブロッティングのために、iMΦ(5×106)を、表示の期間にわたってリガンドで刺激し、その後、1%NP−40、50mM Tris−HCl(pH7.4)、150mM NaClを含有する700μLの溶解緩衝液で溶解した。プロテアーゼ阻害剤およびホスファターゼ阻害剤を、細胞溶解の直前に添加した。標準的分子生物学技法を使用して免疫ブロットを実施した。
インフラマソーム誘導刺激負荷の前に、BMDC細胞を、LPS(1μg/mL)で3時間処理した。生存または透過性実験のために、製造業者の説明書に従ってMitotTacker CMX−ROS(Life Technologies社)またはZombie Red(BioLegend社)染料を使用し、その後4%パラホルムアルデヒドで固定した。0.1%Triton X−100 0.2%BSA−PBSを使用した透過処理ステップの後、細胞を、2%BSA−PBSでブロックし、ウサギ抗ASC pAb(AL177、Adipogen社)およびマウス抗カスパーゼ−1 mAb(Casper−1、Adipogen社)と共にインキュベートし、その後ブロッキング緩衝液で希釈したAlexa Fluor488結合ニワトリ抗ウサギIgG(Life Technologies社)およびAlexa Fluor568結合ヤギ抗マウスIgG(Life Technologies社)と共にインキュベートした。核は、DAPI(Life Technologies社)またはDRAQ5(BioLegend社)で対比染色した。Zeiss社製Axiovert 200M共焦点顕微鏡またはオリンパス社製BX41蛍光顕微鏡を使用して、画像を得た。
BMDCまたはBMMを、底部が透明な黒色96ウエル組織培養プレートに播種し、3時間の予備刺激で処理した。PBSで穏やかに洗浄した後、100μlの予加温染色溶液(5μM PI、5%FBS、20mM HEPES、フェノールレッドを含まないMgCl2およびCaCl2 HBSS)を、各ウエルに添加し、37℃ 5%CO2で5分間インキュベートした。測定直前に、PIを含まず、2×インフラマソーム誘導性刺激を含有する100μLの染色溶液を、適切なウエルに添加した。0.1%Triton X−100を、最大透過性の正の対照として使用した。蛍光強度の増加を、FLUOstarオメガマイクロプレートリーダ(BMG labtech社)を使用し、544nmでの励起および620−10nmの発光フィルターを用いて、37℃で3時間にわたって連続して記録した。
WT C57BL/6NJおよびカスパーゼ−1/−11 dKO C57BL/6NJマウスを、不完全フロイントアジュバントに乳化した150μg/マウスの無エンドトキシンOVAおよび7μg/マウスのLPSで、または不完全フロイントアジュバントに乳化した150μg/マウスの無エンドトキシンOVAおよび65μg/マウスのoxPAPCおよび7μg/マウスのLPSのいずれかで、背面上部(各肩からの注射)に免疫した。CD4+ T細胞を、抗CD4ビーズ(Miltenyi Biotech社)を用いて磁気細胞選別により、免疫処置の7または40日後に流入領域リンパ節から単離した。細胞を、100,000個DCのおよび1mg/mlから開始したOVAの系列希釈の存在下で、1ウエル当たり100,000個細胞の濃度で96ウエルプレートに接種した。IFNγ、IL−17、およびIL−2の分泌を、5日後にELISAで測定した。
マウスは、組織内およびNIHの動物実験ガイドラインに従って飼育し、手順は全てハーバード医学部大学院の組織内動物実験委員会の承認を受けた。表示のマウス系統を、イソフルランチャンバーで麻酔し、その後ケタミン(3.7mg/マウス)およびキシラジン塩酸塩(0.5mg/マウス)を腹腔内注射した。角膜に傷をつけ、以前に記載のように感染を実施した(Cliffe,A.R.et al.,(2009)Journal of virology 83,8182−8190)。目におけるウイルス増幅を測定するために、最初の5dpiは無菌ポリエステルアプリケータ(Puritan社)を使用して涙液膜のスワブを収集し、目に由来する涙液中のウイルスを、以前に記載のようにベロ細胞で滴定した(Coen,D.M.et al.,(1989)Proc Natl Acad Sci U S A 86,4736−4740)。
仮説は、単一対比較の両側t検定で試験した。Excel(マイクロソフト社)で計算したp値は、アスタリスクでコード化されている:<0.05(*)、<0.01(**)、<0.001(***)。
oxPAPC等の酸化リン脂質には、複雑な歴史があり、炎症の活性化因子または阻害因子のいずれとしても作用することが報告されている。幾つかの研究では、oxPAPCが、LPSにより誘導されるTLR4依存性炎症性サイトカインの発現を、濃度依存的な様式で阻害することができることが示されているが(Bochkov,V.N.et al.,(2002)Nature 419,77−81;Erridge,C.et al.,(2008)The Journal of biological chemistry 283,24748−24759;Oskolkova,O.V.et al.(2010)J Immunol 185,7706−7712)、他の研究では、oxPAPCが、TLR4依存性炎症応答の活性化因子であることが報告されている(Imai,Y.et al.(2008)Cell 133,235−249;Shirey,K.A.et al.(2013)Nature 497,498−502)。
上記の例は、oxPAPCが炎症活性化因子ではなかったことを示したが、幾つかの研究では、これら脂質の炎症促進性機能が示されている(Imai,Y.et al.(2008)Cell 133,235−249;Shirey,K.A.et al.(2013)Nature 497,498−502)。幾つかのDAMPは、未感作細胞から炎症促進性反応を誘発させることができなかったが、以前に微生物産物と接触させた細胞からのサイトカイン放出を誘導することができたと考えられた。例えば、細胞外ATPは、TLRリガンドで予備刺激した細胞からのインフラマソーム依存性IL−1β放出を活性化したと記載されている(Petrilli,V.et al.,(2007)Current opinion in immunology 19,615−622)。
(1)特定の修飾PC(DMPCではなくPAPC)が、インフラマソーム活性化を誘導した。
(2)PAPC依存性だが、ATP依存性ではないインフラマソーム活性化は、細胞タイプ特異的だった(MacではなくDC)。
(3)PAPCによるインフラマソーム活性化はCD14を必要としたが、ATPではCD14を必要としなかった。
(4)PAPCによるインフラマソーム活性化はカスパーゼを必要としたが、ATPではカスパーゼ−11を必要としなかった。
(5)ATPはDCのピロトーシスを誘導したが、PAPCは誘導しなかった。
(6)PAPCは、CD14非依存的な様式でDC生存を促進した。
(7)PAPCは、予備刺激と同時投与すると、インフラマソーム活性化を誘導すると特定されたが、ATPはそうではなかった。
試験した詳細に明らかにされているインフラマソーム活性化因子は全て、MΦからのIL−1β放出を促進した。oxPAPCが、この能力を有していたか否かを調査するために、上述のものと同様の実験を、一次骨髄由来MΦで実施した。興味深いことには、oxPAPCは、MΦで検討したいずれの条件下でも、IL−1β放出を誘発することはできなかったが(図45E)、ATPは、これら細胞からの効率的なIL−1β放出を用量依存的な様式で促進した(図51A)。これらのデータにより、oxPAPCがインフラマソーム活性の細胞タイプ特異的活性化因子であることが特定された。
カスパーゼ−11は、細胞質LPSに結合し、非標準インフラマソームの構築およびIL−1βの放出を促進する既知のプロテアーゼである(Hagar,J.A.et al.,(2013)Science 341,1250−1253;Kayagaki,N.et al.(2013)Science 341,1246−1249;Shi,J.et al.,(2014a)Nature 514,187−192)。oxPAPCは、LPSを模倣し、CD14エンドサイトーシスを活性化することができるため、カスパーゼ−11依存性応答を活性化する能力についても、oxPAPCを評価した。注目すべきことには、oxPAPC媒介性IL−1β放出は、カスパーゼ−11 KO DCでは大部分が消失した(図46A)。予想通り、ATP媒介性IL−1β放出は、カスパーゼ−11 KO細胞では完全なままだった(図46A)。全ての場合で、TNFα分泌は、影響を受けなかった(図46B)。カスパーゼ−11依存性IL−1β放出におけるoxPAPCとATPとのこの相違は、oxPAPCの活性が、細胞からのATPの間接放出により媒介されたという可能性を排除した。
oxPAPCは、カスパーゼ−11依存性応答を活性化する能力を有することが示されている。これは、これら分子間に相互作用があることを示している。以前に記載されているように(Shi,J.,et al.,(2014b)Nature)、内因性カスパーゼ−11は、ビオチン化LPSとの相互作用により細胞溶解物から単離することができる(図46D)。興味深いことには、ビオチン−oxPAPCも、内因性カスパーゼ−11と複合体を形成した(図46D)。対照的に、いずれの脂質も、内因的なカスパーゼ−3を捕捉しなかった(図46D)。oxPAPCが、カスパーゼ−11と直接結合したか否かを決定するために、in vitroタンパク質−脂質相互作用研究を実施した。図46Eに示されているように、oxPAPCは、表面プラズモン共鳴(SPR)において、固定した触媒的に不活性なカスパーゼ−11(C254A)との用量依存的な共鳴シグナルを示した。対照的に、DCからのIL−1β放出を促進しなかったDMPCは(図46E)、カスパーゼ−11に対して検出可能な結合を示さず、oxPAPCは、SPRではIgGに対する結合を示さなかった(図46E)。カスパーゼ−11とoxPAPCとの間の解離定数(Kd)は、1.3×10−6Mと計算された。こうしたSPRデータは、カスパーゼ−11が、LPSに加えて、自己コード脂質(oxPAPC)と複合体を形成し、その両方に応答してIL−1β放出を促進したことを示した。
CD14内の同じ残基が、LPSおよびoxPAPCに結合することが必要であったため、LPS結合CARDがoxPAPCとの相互作用に必要だったか否かを調査した。予想通り(Shi et al.,2014b)、ビオチン−LPSが293T細胞で産生されたカスパーゼ−11タンパク質を捕捉する能力により評価したところ、カスパーゼ−11 CARD内の特定のリジン残基の突然変異が、LPSとの相互作用を妨げた(図52G)。興味深いことには、これらリジン残基は、ビオチン−oxPAPCとの相互作用を妨げなかった(図52G)。更に、そのCARD全体を欠如し、そのC末端触媒ドメインのみを含んでいた突然変異体カスパーゼ−11は、ビオチン−oxPAPCと複合体を形成する能力を保持した(図52G)。こうした結果は、SPR分析により検証された。oxPAPCとカスパーゼ−11(ΔN59と表記する)の触媒ドメインとの相互作用のKdは、全長カスパーゼ−11との相互作用について計算されたものとほとんど同一だった(図46E)。予想通り、LPSは、カスパーゼ−11の触媒ドメインに結合する能力を示さなかった。したがって、こうしたデータにより、CD14とは異なり、カスパーゼ−11内の別々のドメインが、LPSおよびoxPAPCとの接触を形成することが確立された。
上記の研究は、oxPAPCが、以下の2つの活性を有していたことを示した:1)oxPAPCは、CD14エンドサイトーシスを促進した;および2)oxPAPCは、カスパーゼ−11依存性非標準インフラマソーム活性化を促進した。これら活性間の関係性を決定するために、oxPAPC誘導性IL−1β放出のためのCD14の必要性を調査した。細胞を、LPSで3時間予備刺激した。これは、新たに合成されたCD14を有する原形質膜の再増殖を可能にするのに十分であった(Tan,Y.et al.,(2015).Immunity 43,909−922)。細胞を、ATPまたはoxPAPCのいずれかで刺激した。興味深いことには、CD14 KO DCは、LPS/oxPAPCまたはPam3CSK/oxPAPC処理に応答してIL−1βを放出しなかったため、oxPAPC誘導性IL−1β放出にはCD14が必要だった(図47A)。インフラマソームの作用により放出される別のサイトカインであるIL−18の分泌は、同様のパターンに従っていた(図53A)。WT、CD14、またはカスパーゼ−11 KOマウスの脾臓から最初に単離した刺激DCを調査したところ、同様の結果が得られた。これら細胞は、LPS/oxPAPCに応答して、CD14およびカスパーゼ−11依存性IL−1β放出を示したが、TNFα分泌、ならびにMHC−IIおよび共刺激分子の上方制御は、CD14またはカスパーゼ−11欠損による影響を受けなかった(図47Bおよび図53B)。また、LPS/ATP処理に対する脾臓DCの応答は全て、CD14またはカスパーゼ−11欠損による影響を受けなかった(図47B)。
IL−β放出の促進に加えて、インフラマソーム活性化は、典型的には、細胞死の誘導と関連付けられている(Aachoui,Y.,(2013b).Current opinion in microbiology 16,319−326)。理論により束縛されることは望まないが、非標準インフラマソームによる細胞死は、少なくとも2つのタンパク質、ガスデルミン dおよびパネキシン−1を切断するはずである、カスパーゼ−11の酵素活性に依存すると考えられる(Kayagaki,N.et al.,(2015)Nature 526,666−671;Shi,J.et al.,(2015)Nature 526,660−665;Yang,D.et al.,(2015)Immunity 43,923−932)。oxPAPCは、IL−11放出を促進するためにカスパーゼ−11の触媒活性を必要としなかったため、oxPAPCは細胞を死滅させなかったのだろうと想定された。この可能性を直接的に評価するために、LPS予備刺激DCでのoxPAPC投与後またはLPS形質移入後のピロトーシス誘導を測定した。ピロトーシスは、原形質膜保全の急速な喪失が特徴であり、細胞体から細胞質タンパク質(および細胞器官)が放出されるはずである。上清でのLDH放出を使用して、ピロトーシス中の細胞集団の膜透過性を評価した。LPS/ATPで処理した細胞は、処理の4時間後からLDHを放出し始めた(図48A)。この組み合わせは、インフラマソーム媒介性細胞死の詳細に明らかにされている活性化因子だった(Aachoui,Y.,(2013b).Current opinion in microbiology 16,319−326)。LPSで形質移入した細胞は、LPS予備刺激とは関わりなく、ATPで処理した細胞よりも後の時点で死滅した(図48A)。興味深いことには、カスパーゼ−11を活性化した条件は全て(例えば、LPS形質移入またはoxPAPC処理)、上清中に同じ様な量のIL−11をもたらしたが(図48B)、LPS形質移入のみが、LDH放出を引き起こした(図48A)。こうしたデータにより、oxPAPCが、生細胞からのIL−11放出を促進したことが示された。
カスパーゼ−11は、急性ウイルス感染の制御に寄与したが(図52F)、oxPAPCがDC生存およびIL−1β放出を促進する二重の能力は、oxPAPCが、DC媒介性適応免疫応答も促進する可能性があることを示唆した。実際、カスパーゼ−11活性化の産物であるIL−1βは、これら細胞に制御性T細胞抑制に対する耐性を付与することを含む(Schenten,D.et al.(2014).Immunity 40,78−90)、T細胞活性化を促進する幾つかの活性を有すると特徴付けられている(Sims,J.E.,and Smith,D.E.(2010)Nat Rev Immunol 10,89−102)。oxPAPC/LPS混合物を、in vivoで強力なアジュバント活性を示す能力について調査した。
当業者であれば、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態には多数の均等物あることを、単なる日常的な実験作業を使用して、認識するかまたは確認することができるだろう。そのような均等物は、添付の特許請求の範囲により包含されることが意図されている。
Claims (25)
- 免疫原に対する免疫応答を誘発するための組成物であって、免疫原および非標準インフラマソーム活性化脂質を含む組成物。
- 前記非標準インフラマソーム活性化脂質が、oxPAPCである、請求項1に記載の組成物。
- 前記非標準インフラマソーム活性化脂質が、PAPCである、請求項1に記載の組成物。
- 前記非標準インフラマソーム活性化脂質が、oxPAPCの1つまたは複数の種からなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- 前記非標準インフラマソーム活性化脂質が、HOdiA−PC、KOdiA−PC、HOOA−PC、およびKOOA−PCの1つまたは複数からなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- 前記非標準インフラマソーム活性化脂質が、Rhodo LPSである、請求項1に記載の組成物。
- 前記非標準インフラマゾーム活性化脂質が、前記組成物を対象に投与した際に、前記非標準インフラマゾーム活性化脂質を欠如する組成物と比較して、前記免疫原に対する免疫応答を増強する、請求項1に記載の組成物。
- 前記免疫原および脂質が、前記組成物を対象に投与した際に、樹状細胞(DC)活性化を誘導するのに十分な濃度で存在する、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物が、対象に投与した際に、マクロファージ炎症応答を誘発しない、請求項1に記載の組成物。
- 前記免疫原が、ヒトパピローマウイルス抗原、単純ヘルペス抗原または帯状疱疹抗原等のヘルペスウイルス抗原、ヒト免疫不全ウイルス1型抗原またはヒト免疫不全ウイルス2型抗原等のレトロウイルス抗原、肝炎ウイルス抗原、インフルエンザウイルス抗原、ライノウイルス抗原、RSウイルス抗原、サイトメガロウイルス抗原、アデノウイルス抗原、マイコプラズマ・ニューモニエ抗原、サルモネラ属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、エンテロコッカス属、クロストリディウム属、エシェリヒア属、クレブシェラ属、ビブリオ属、ミコバクテリウム属の細菌の抗原、アメーバ抗原、マラリア原虫抗原、およびトリパノソーマ・クルージ抗原からなる群から選択される抗原を含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物が、凍結乾燥されている、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物が、前記非標準インフラマゾーム活性化脂質と組み合わせた前記免疫原から本質的になる、請求項1に記載の組成物。
- 請求項1に記載の組成物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
- 前記担体が、水性担体である、請求項13に記載の医薬組成物。
- 前記担体が、固形担体である、請求項13に記載の医薬組成物。
- 対象の樹状細胞に炎症応答を誘導するための方法であって、請求項1に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
- 免疫原に対する対象の防御免疫応答を増強するための方法であって、前記免疫原および非標準インフラマゾーム活性化脂質を、その防御免疫応答を増強するのに有効な量で、対象に投与することを含み、前記非標準インフラマゾーム活性化脂質が、アジュバント有効量で投与される方法。
- 前記免疫原および前記非標準インフラマゾーム活性化脂質が、前記対象に同時投与される、請求項17に記載の方法。
- 対象の免疫応答を誘導するための方法であって、免疫原および非標準インフラマゾーム活性化脂質を、その免疫応答を生成するのに有効な量で前記対象に同時投与すること含む方法。
- 前記対象がヒトである、請求項16〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫原および前記非標準インフラマゾーム活性化脂質が、一般的な医薬担体と同時投与される、請求項16〜20のいずれか一項に記載の方法
- 前記免疫原および前記非標準インフラマゾーム活性化脂質が、非経口投与で投与される、請求項16〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫応答が、予防的免疫応答である、請求項17〜22のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫応答が、治療的免疫応答である、請求項17〜22のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫応答が、液性免疫応答を含む、請求項17〜24のいずれか一項に記載の方法。
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH04503363A (ja) * | 1989-07-12 | 1992-06-18 | ウイスコンシン アラムナイ リサーチ フオンデーシヨン | 新規リピドa誘導体およびその用途 |
Family Cites Families (19)
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US4522811A (en) | 1982-07-08 | 1985-06-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides |
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DE69838460T3 (de) | 1998-11-03 | 2014-04-30 | De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur | LPS mit reduzierter Toxizität von genetisch modifizierten Gram-Negativen Bakterien |
AU2003243806A1 (en) * | 2002-07-15 | 2004-02-02 | Bernd Binder | Lipid oxidation products for inhibiting inflammation |
US20060257359A1 (en) | 2005-02-28 | 2006-11-16 | Cedric Francois | Modifying macrophage phenotype for treatment of disease |
US8961982B2 (en) * | 2005-12-16 | 2015-02-24 | The Regents Of The University Of California | Modulation of developmental immune programming and protection against cardiovascular disease, diabetes, infectious diseases, and cancer |
JP2010505883A (ja) * | 2006-10-12 | 2010-02-25 | ザ ユニバーシティー オブ クイーンズランド | 免疫応答を調節するための組成物および方法 |
CN102473730B (zh) | 2009-07-27 | 2015-09-16 | 株式会社神户制钢所 | 布线构造及其制造方法、以及具备布线构造的显示装置 |
WO2011136828A1 (en) | 2010-04-27 | 2011-11-03 | The Johns Hopkins University | Immunogenic compositions and methods for treating neoplasia |
WO2012177624A2 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-27 | The Johns Hopkins University | Focused radiation for augmenting immune-based therapies against neoplasms |
CN104066706B (zh) * | 2011-12-12 | 2017-12-19 | 脉管生物生长有限公司 | 炎症的治疗 |
WO2014164699A1 (en) * | 2013-03-11 | 2014-10-09 | The Regents Of The University Of California | Herpes virus vaccines and treatments |
US10253294B2 (en) | 2013-12-18 | 2019-04-09 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Galactose oxidase treatment of dendritic cells to improve their immunogenicity |
AU2016206965B2 (en) * | 2015-01-12 | 2021-03-04 | Children's Medical Center Corporation | Pro-inflammatory and adjuvant functions of toll-like receptor 4 antagonists |
CN108697778B (zh) | 2016-02-16 | 2023-10-03 | 哈佛学院院长等 | 病原体疫苗及其生产和使用方法 |
CA3028654A1 (en) | 2016-06-27 | 2018-01-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Therapeutic antitumor combination of a tlr4 ligand with other treatments |
WO2018067302A2 (en) | 2016-09-19 | 2018-04-12 | North Western University | Therapeutic effects of cellular delivery of small molecules and macromolecules with liposomal spherical nucleic acids |
JP7355394B2 (ja) | 2018-05-03 | 2023-10-03 | エル.イー.エー.エフ. ホールディングス グループ エルエルシー | カロテノイド組成物およびその使用 |
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Patent Citations (1)
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JPH04503363A (ja) * | 1989-07-12 | 1992-06-18 | ウイスコンシン アラムナイ リサーチ フオンデーシヨン | 新規リピドa誘導体およびその用途 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
FRUHWIRTH, G. O. ET AL., BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA - MOLECULAR BASIS OF DISEASE, vol. 1772, no. 7, JPN6019040159, 2007, pages 718 - 736, ISSN: 0004331869 * |
GUNDACKER, N.C. ET AL., JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH, vol. 8, no. 6, JPN6019040156, 2009, pages 2799 - 2811, ISSN: 0004331868 * |
青枝大貴ら, DRUG DELIVERY SYSTEM, vol. 27, no. 1, JPN6019040157, 2012, pages 19 - 27, ISSN: 0004331867 * |
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